Brevet FR2905869A1 — publié le 20080321

La présente invention concerne une composition de colorant histofluorescente utilisée dans des diagnostics par endoscopie. Les techniques de diagnostic utilisant l'endoscopie sont couramment utilisées dans les diagnostics de maladies telles que, en particulier, les cancers, les ulcères gastro-intestinaux et la colite ulcérative, d'après l'examen endoscopique gastro-intestinal du tractus gastro-intestinal supérieur et du tractus gastro-intestinal inférieur. La détection d'anomalies (lésions) dans les tissus par un tel examen endoscopique fait intervenir généralement l'observation avec un endoscope à lumière visible à un grossissement d'environ 10 à 500 fois sans utiliser d'agent colorant. A ce propos, il existe un procédé désigné sous le nom de chromoendoscopie, dans lequel l'observation endoscopique est effectuée après étalement d'une solution contenant un colorant sur les surfaces d'un tissu. Puisqu'il est possible d'observer nettement la morphologie de la surface de la lumière gastro-intestinale par cette chromoendoscopie, des lésions même microscopiques peuvent être aisément découvertes par variation de la teinte de couleur. Des exemples d'endoscopes qui peuvent être utilisés pour la chromoendoscopie comprennent un endoscope à lumière visible et un endoscope à fluorescence. Des exemples du colorant utilisé principalement dans la chromoendoscopie comprennent le carmin indigo (Masahiro Tada, Akitada Iso, et al., (Clinical Gastroenterology, vol. 7, n 2, 1992)), qui est utilisé pour l'observation par le procédé de contraste, pour les colorations de la lumière gastro-intestinale en lumière visible ; l'acriflavine et la fluorescéine (Gastroenterology 2004, vol. 127, n 3, p. 706-713) pour la coloration fluorescente, et des colorants similaires. Dans le diagnostic du cancer ou de maladies similaires, il est important d'effectuer l'observation de la surface de tissus biologiques et également de la partie intérieure de tissus biologiques. En ce qui concerne le procédé d'observation de la partie intérieure de tissus biologiques, on utilise 2905869 2 généralement un procédé consistant à débiter en coupes une micropartie d'un tissu prélevée par biopsie ou un moyen similaire en laboratoire, et à colorer et observer cette micropartie. En ce qui concerne le procédé d'observation de 5 la partie intérieure de tissus biologiques in situ, par exemple, des procédés d'imagerie par résonance magnétique (IRM), de tomographie par émission de positrons (TEP), de CT et de radiographie avec des rayons X mous et des procédés similaires sont mis en œuvre pour l'observation de 10 l'organisme entier. En ce qui concerne l'endoscopie gastro-intestinale, des endoscopes faisant intervenir une réaction d'autofluorescence de tissus biologiques ont été commercialisés. Lorsqu'une lumière ayant une longueur d'onde spécifique est utilisée pour irradier un tissu 15 biologique, il se produit une auto-fluorescence de substances fluorescentes endogènes présentes dans le tissu et, ainsi, l'observation visuelle des zones normales et des zones lésées peut être rendue possible au moyen des différences d'intensité et des spectres. 20 Afin d'effectuer un diagnostic, par exemple, du cancer gastro-intestinal en utilisant un endoscope classique, il a été nécessaire de déterminer la zone lésée d'une manière empirique par observation, de prélever un échantillon de tissu de cette zone et d'effectuer un diagnostic au moyen 25 d'une coloration du tissu dans un laboratoire distinct. Cependant, il est à présent possible d'observer la partie intérieure d'un tissu sans prélever de tissu, au moyen d'un endoscope confocal, qui a été élaboré récemment. En général, un système d'imagerie confocal est basé 30 sur une technique d'obtention d'images nettes de la partie intérieure d'un tissu sans coupe mécanique, en effectuant une perforation en face du détecteur et en détectant la lumière réfléchie seulement par le plan focal à l'intérieur du tissu. Habituellement, le système d'imagerie confocal 35 comprend le balayage par de la lumière laser d'un tissu coloré avec une substance fluorescente et l'observation 2905869 3 d'une image fluorescente de ce tissu. Le système d'imagerie confocal nécessite généralement des agents de coloration fluorescents. Puisque l'endoscope confocal utilisant le système 5 d'imagerie confocal possède à la fois un système optique d'observation normal et un système optique d'observation confocal, il est utile à la fois pour permettre le dépistage de la zone lésée, et pour rendre l'observation des cellules moins invasive et également possible in situ, en débitant 10 en coupes optiques le tissu sans couper les cellules. Des endoscopes confocaux qui sont actuellement commercialisés utilisent de la lumière laser bleue ayant une longueur d'onde de 488 nm comme source de lumière pour l'excitation du colorant. Une propriété importante qui est requise pour 15 qu'un colorant fluorescent puisse être utilisé dans les endoscopes confocaux à usage médical consiste en le fait que le colorant fluorescent ne présente aucune toxicité ou mutagénécité vis-à-vis de l'organisme. En conséquence, dans le cas présent, le colorant fluorescent qui peut être 20 utilisé pour les endoscopes confocaux à des fins médicales est limité à la fluorescéine pour injection intraveineuse pour les angiographies du fundus, et l'acriflavine qui est utilisée comme substance antibiotique (Gastrointestinal Endoscopy Clin of N Am, 2C)05, vol. 12, p. 715-731). 25 En ce qui concerne la source de lumière utilisée pour les endoscopes confocaux, la diversification des longueurs d'ondes est prévue dans le futur. Par exemple, puisque une lumière dans la région de la lumière rouge au proche infra-rouge a une plus grande capacité de pénétration dans les 30 tissus biologiques que la lumière bleue, il est considéré qu'elle donne des images confocales à des positions plus profondes par rapport à la surface des tissus biologiques. Le vert d'indocyanine (Icg) est disponible comme composé fluorescent en infrarouge à des fins de diagnostic, qui a 35 été autorisé par l'administration à un organisme humain, et il est principalement utilisé pour l'examen de la fonction 2905869 4 hépatique et pour l'angiographie du fundus. Si le vert d'indocyanine est utilisé comme agent de coloration pour l'endoscopie confocale, il n'est pas possible d'obtenir un contraste net par comparaison avec, par exemple, la fluorescéine 5 décrite dans Gastroenterology 2004, vol. 127, n 3, p. 706-713. En outre, si le vert d'indocyanine doit être utilisé comme colorant fluorescent pour l'endoscopie, il pose un problème de grande toxicité, par comparaison avec la fluorescéine. En conséquence, un objectif de la présente invention 10 consiste à proposer une composition de colorant histofluorescente pour endoscopie, composition qui 1) a une faible biotoxicité, 2) confère un contraste pour souligner les irrégularités sur des tissus même sous une source de lumière blanche, 3) émet de la fluorescence et 4) présente une bonne capacité de 15 coloration fluorescente de la partie intérieure des tissus et est utile pour le diagnostic de lésions dans la partie intérieure de tissus. Les inventeurs de la présente invention ont étudié divers aspects tout en se focalisant sur la grande innocuité 20 d'un colorant et, en résultat, ont trouvé qu'un composé répondant à la formule (I) suivante, qui est représenté par le vert brillant, satisfait les impératifs décrits ci-dessus. En outre, ils ont également découvert qu'un tel composé est utile comme colorant fluorescent pour colorer sélectivement 25 la partie intérieure d'un tissu, en particulier puisque le composé n'émet pas de fluorescence dans une solution aqueuse, mais émet de la fluorescence seulement lors de son application à un tissu, en particulier à l'albumine, ce qui donne des images fluorescentes nettes de la partie intérieure 30 du tissu. Ainsi, les inventeurs ont mené à présent à bonne fin la présente invention d'après cette découverte. Ainsi, la présente invention consiste à proposer une composition de colorant histofluorescente pour endoscopie, comprenant un composé représenté par la formule (1) suivante : 2905869 5 dans laquelle RI et R2, qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un groupe alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone et X- représente un résidu anionique. 5 Un autre objectif de la présente invention consiste à proposer l'utilisation du composé représenté par la formule (1) pour la production d'un colorant histofluorescent pour endoscopie. Un objectif supplémentaire de la présente invention consiste à proposer une méthode de diagnostic avec un 10 endoscope en administrant une composition comprenant le composé représenté par la formule (1), et en observant le tissu coloré par la composition avec un endoscope. (1) Pour l'observation du tractus gastro-intestinal sous un endoscope classique en utilisant une source de lumière 15 blanche, le colorant histofluorescent de la présente invention, qui est un colorant bleu, a pour résultat un puissant contraste par comparaison avec des colorants rouges tels que la fluorescéine. (2) Pour l'observation avec un endoscope qui combine 20 un endoscope à lumière blanche et un endoscope confocal, le colorant de la présente invention confère un contraste bleu par rapport à la lumière blanche, tout en présentant une fluorescence spécifique du tissu par rapport à la lumière d'excitation rouge. Ainsi, lors de l'utilisation de l'endoscope 25 décrit ci-dessus, la découverte de zones lésées et l'obtention d'images confocales de ces zones peuvent être réalisées au moyen d'un colorant unique. (3) Le composé de formule (1) ne présente pas de fluorescence dans une solution aqueuse, mais présente une 30 fluorescence seulement lorsqu'il est appliqué à un tissu, en particulier à l'albumine. En conséquence, le composé ne 2905869 6 colore pas l'espace interstitiel entre les cellules et peut colorer spécifiquement la partie intérieure du tissu. (4) En conséquence, lorsque le colorant histofluorescent de la présente invention est utilisé, la visualisation de 5 la partie intérieure d'un tissu lésé peut être réalisée simultanément, sans extraire le tissu, dans des conditions d'observation par endoscopie en lumière visible, endoscopie par fluorescence et endoscopie confocale, et les images colorées sont nettes et claires. Ainsi, le colorant est 10 utile dans le diagnostic de maladies gastro-intestinales et de maladies similaires. DESCRIPTION BREVE DES DESSINS La figure 1 est un diagramme illustrant le spectre d'excitation (Abs.) et le spectre de fluorescence (émission) 15 du vert brillant ; la figure 2 est un diagramme illustrant le spectre d'excitation (Abs.) et le spectre de fluorescence (émission) de la Rhodamine B ; la figure 3 est un diagramme illustrant le spectre de 20 fluorescence d'un mélange liquide de vert brillant et d'albumine ; la figure 4 est un diagramme illustrant le spectre de fluorescence de l'albumine ; la figure 5 est une série de photographies 25 représentant les résultats de la coloration d'une zone de 35 m d'épaisseur à partir de la couche de surface luminale du côlon, qui a été colorée par fluorescence avec du vert brillant ; la figure 6 est une photographie représentant les 30 résultats de la coloration d'une zone de 10 m d'épaisseur à partir de la couche de surface luminale du côlon, qui a été colorée par fluorescence avec du vert brillant ; et la figure 7 est une photographie représentant les résultats de la coloration d'une zone de 15 m d'épaisseur à 35 partir de la couche de surface luminale du côlon, qui a été colorée par fluorescence avec du vert brillant. 2905869 7 DESCRIPTION DES FORMES DE REALISATION PREFEREES Des exemples de l'endoscopie conforme à la présente invention comprennent des endoscopies médicales telles que l'endoscopie gastro-intestinale, l'endoscopie respiratoire, 5 l'endoscopie vasculaire et la péritonéoscopie. Parmi celles-ci, l'endoscopie gastro-intestinale est particulièrement appréciée. Conformément à la présente invention, les endoscopes à lumière visible comprennent tous les endoscopes effectuant une observation en lumière visible, et comprennent également 10 des endoscopes classiques, des endoscopes grossissants et des chromoendoscopes effectuant l'observation en lumière visible. A ce propos, les endoscopes à fluorescence comprennent des endoscopes mesurant la fluorescence engendrée par irradiation d'une lumière d'excitation et comprennent également des 15 endoscopes à fluorescence grossissants. En outre, l'expression "endoscope confocal" désigne un endoscope équipé d'un système d'imagerie confocal. En outre, un endoscope confocal comprend classiquement un système optique d'observation normal et un système optique d'observation confocal. 20 La composition de colorant histofluorescente de la présente invention contient un composé représenté par la formule (1) décrite ci-dessus. Dans la formule (1), R1 et R2, qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un groupe alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone. Des 25 exemples de groupes alkyle comprennent des groupes méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, et des groupes similaires et, parmi ceux-ci, un groupe méthyle et un groupe éthyle sont préférés. En outre, il est particulièrement apprécié que RI et R2 représentent l'un et l'autre un 30 groupe éthyle. X- représente un résidu anionique et peut être illustré par HOS03- (ion sulfate), un ion halogéno ou un ion similaire. Parmi ceux-ci, HOS03- est particulièrement apprécié. 2905869 8 Comme exemple préféré spécifique du composé de formule (1), le vert brillant (R1 = R2 = C2H5, X- = HOSO3-) peut être inclus. Le vert brillant est couramment utilisé comme matière 5 colorante pour des produits cosmétiques. Il s'agit d'une matière colorante légale qui peut être utilisée dans des produits cosmétiques. L'innocuité de ce constituant a été établie. Cependant, il n'est pas parfaitement connu que ce composé émet de la fluorescence seulement lorsqu'il est lié 10 à une protéine telle que l'albumine, et on ne sait pas du tout que le composé présente des images fluorescentes nettes de la partie intérieure d'un tissu, seulement lors de son application à un tissu. Des produits disponibles dans le commerce du type du 15 vert brillant comprennent, par exemple, le vert brillant (B4014-25G) de Sigma-Aldrich Company. Il est également disponible sous différents noms tels que Pigment Green 1 et Basic Green et est indiqué par le numéro C.I. (numéro du Color Index) 42040. 20 La quantité du composé de formule (1) dans le colorant pour tissus de la présente invention est avantageusement de 0,01 à 70 % en poids, plus avantageusement de 0,01 à 50 % en poids, et de manière particulièrement préférable de 0,01 à 20 % en poids, du point de vue de la capacité de coloration 25 et de la netteté des images colorées. Le colorant pour tissus de la présente invention peut être utilisé sous n'importe quelle forme, tel qu'un liquide, des granules ou des comprimés. Dans le cas de l'étalement dans le tractus gastro-intestinal ou de l'administration 30 sous-muqueuse, un liquide est préféré, tandis que, dans le cas de l'administration orale, un liquide, des granules, des comprimés et des formes similaires sont préférés. Le colorant pour tissus de la présente invention peut comprendre divers constituants incorporés en fonction de la 35 forme (formulation). Par exemple, un agent de consistance, un agent épaississant, un agent tensioactif, un agent édulcorant, 2905869 9 un conservateur, un agent aromatisant, un agent d'ajustement du pH, de l'eau et des agents similaires peuvent être incorporés. L'agent d'ajustement du pH est un agent ajustant le pH 5 dans la plage de 5 à 9, et des exemples d'un tel agent comprennent l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique, l'acide citrique, l'acide malique, l'acide acétique et leurs sels, l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, le carbonate acide de sodium, le pyrrolate tétrasodique et des 10 composés similaires. En outre, l'éthanol, l'eau et des agents similaires peuvent être ajoutés comme solvant. Dans le cas de comprimés, des constituants qui sont connus en tant que constituants utilisés pour des comprimés, tels qu'un liant et un agent de délitement, peuvent être utilisés. 15 Puisque le colorant pour tissus de la présente invention peut colorer des tissus de manière à présenter une couleur bleue, le colorant est utile comme colorant pour tissus pour l'observation endoscopique classique en lumière blanche. L'endoscope utilisé dans ce cas est un endoscope classique 20 ou un endoscope grossissant et est utile pour l'observation endoscopique à un pouvoir grossissant de 10 à 500 fois. La capacité de coloration des tissus varie, de l'état des tissus normaux à l'état précancéreux ou à un état en présence d'une tumeur. Dans le cas de la coloration de 25 tissus normaux, la membrane cellulaire et le cytoplasme des cellules épithéliales sont colorés dans l'intestin grêle ou le gros intestin. D'autre part, lors de l'observation de tumeurs, les caractéristiques des cellules individuelles comprennent une augmentation du volume du noyau, une augmentation 30 de la quantité de chromatine nucléaire et un hyperchromatisme, et une augmentation du nombre de nucléoles, une anomalie du nombre ou de la forme des chromosomes, une coloration basophile des cellules et son association avec les propriétés de prolifération des cellules, et des caractéristiques 35 similaires. En outre, dans les cellules tumorales, un grand nombre de chromatines nucléaires s'assemblent à proximité 2905869 10 de la membrane nucléaire, ce qui provoque une simplification du réticulum endoplasmique. En outre, les mitochondries deviennent irrégulières et de dimensions non uniformes, et il existe une quantité accrue de structures filamenteuses 5 engendrées dans les cellules. La composition de colorant pour tissus de la présente invention s'est révélée, avant tout, effectuer une bonne coloration des cellules épithéliales et du cytoplasme tout en ne colorant pratiquement pas l'espace interstitiel, lors 10 de l'observation.. En conséquence, la morphologie des cellules dans le tissu ou les caractéristiques de la configuration cellulaire peuvent être détectées. La composition de colorant est extrêmement utile avec un endoscope utilisant la plage de longueurs d'ondes qui est adéquate pour la composition 15 de colorant, puisqu'une anomalie dans des tissus et des cellules est apte à l'observation par un système d'imagerie confocal. En outre, puisque le noyau cellulaire n'est pas coloré, la détermination peut être effectuée plus aisément dans le cas de l'état précancéreux décrit ci-dessus et dans 20 des cas similaires. En outre, la composition de colorant pour tissus de la présente invention a pour propriété d'émettre la fluorescence seulement pour des tissus liés et, ainsi, une information nécessaire peut être obtenue même sans lavage par écoulement 25 d'une solution. De ce point de vue, il est possible également de considérer que l'importance de l'information obtenue par le colorant de la présente invention est grande. De la manière indiquée par les exemples suivants, le composé de formule (1) est caractérisé en ce que, par 30 comparaison avec d'autres colorants, le composé n'émet pas de fluorescence à l'état de solution mais émet de la fluorescence lorsqu'il est étalé dans la lumière d'un organe, et en ce que le composé donne des images colorées fluorescentes nettes de la partie intérieure de tissus. En 35 conséquence, le colorant de la présente invention est très utile comme colorant histofluorescent pour endoscopie. 2905869 11 En outre, si l'endoscope utilisant un système optique confocal possède à la fois un système optique d'observation normal et un système optique d'observation confocal, il est possible de diagnostiquer la surface ainsi que la partie 5 intérieure de tissus sans prélever le tissu dans la zone de la lésion, en observant visuellement la zone de la lésion par observation en lumière normale et, après avoir atteint ensuite la lésion en question, en observant les images en coupe transversale colorées fluorescentes de la partie 10 intérieure du tissu (par exemple jusqu'à 250 m) avec un endoscope confocal. Cela signifie que la morphologie des cellules ou des noyaux d'un tissu biologique peut être observée à l'état vivant. En résultat, le diagnostic de maladies gastro-intestinales telles qu'un état précan- 15 céreux, le cancer, un ulcère et la colite ulcérative est rendu possible de manière sûre, rapide et faiblement invasive et le degré de précision est remarquablement amélioré. En ce qui concerne une telle observation endoscopique, 20 le colorant pour tissus de la présente invention peut être étalé directement dans la lumière gastro-intestinale ou peut être administré par administration sous-muqueuse, ou bien peut être administré par voie orale ou intraveineuse. EXEMPLES 25 La présente invention est décrite ensuite plus en détail par référence à des exemples, mais elle n'est pas destinée à être limitée par ces exemples. EXEMPLE 1 Du vert brillant (produit par Sigma-Aldrich Company, 30 B4014-25G) a été ajusté à une concentration de 0,001 mg/ml, avec de l'eau distillée, et l'absorbance de la lumière a été mesurée de manière continue sur une plage de longueurs d'ondes de 200 à 750 nm en utilisant un spectrophotomètre (produit par Shimadzu Corporation, BioSpec-1600) pour déterminer 35 la longueur d'onde à laquelle l'absorption était maximale. La longueur d'onde d'absorption maximale de 625 nm ainsi 2905869 12 obtenue a été utilisée pour l'irradiation comme longueur d'onde d'excitation, et la longueur d'onde de la lumière diffusée détectée dans la direction perpendiculaire à l'axe lumineux de la lumière d'excitation a été mesurée en 5 utilisant un spectrophotomètre à fluorescence (produit par Shimadzu Corporation, RF-1500), ce qui a permis d'obtenir une longueur d'onde de fluorescence maximale de 625 nm. La longueur d'onde d'excitation maximale mesurée au moyen de ce spectrophotomètre à fluorescence était égale à 627 nm. 10 La figure 1 représente la longueur d'onde d'excitation maximale et la longueur d'onde de fluorescence maximale mesurées avec le photomètre à fluorescence. En résultat, aucune fluorescence n'a été détectée à partir du colorant qui a été préparé sous forme de solution. 15 Le même test a été effectué en utilisant le colorant bleu brillant Blue FCF, qui est couramment utilisé comme colorant bleu comestible n 1 et, en résultat, il a été trouvé que le colorant bleu brillant Blue FCF a une longueur d'onde d'absorption maximale de 629 nm, une longueur d'onde 20 d'excitation maximale de 619 nm et une longueur d'onde de fluorescence maximale de 650 nm, ce qui met en évidence une nette différence d'intensité de fluorescence dans la même région de longueurs d'ondes. Le vert brillant s'est révélé n'émettre aucune fluorescence sous une source de lumière 25 dans la région des longueurs d'ondes de la lumière rouge. Lors de la mesure avec un photomètre à fluorescence, le vert brillant ne présente aucune différence entre la longueur d'onde d'absorption maximale et la longueur d'onde de fluorescence maximale. Cela implique que le composé 30 n'est pas soumis au processus d'excitation par une lumière d'irradiation et d'émission de fluorescence. Cependant, lorsqu'un tissu biologique provenant du gros intestin ou tissu similaire est coloré avec le vert brillant et est excité sous une certaine lumière laser, il est 35 possible d'effectuer une observation par fluorescence intense. 2905869 13 Par comparaison avec le vert brillant, le motif de longueur d'onde de la Rhodamine B, qui colore la partie intérieure des cellules dans la lumière du gros intestin ou un tissu similaire de la même manière que le vert brillant, 5 a été mesuré. Il a été possible de confirmer que la Rhodamine B présente une fluorescence intense même à l'état de solution, de la manière représentée sur la figure 2. EXEMPLE 2 Du vert brillant (produit par Sigma-Aldrich Company, 10 B4014-25G) a été préparé sous forme d'une solution à 0,1 mg/ml, en utilisant de l'eau distillée. De l'albumine (obtenue à partir de sérum bovin, sans globuline ; Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 013-15104) a été préparée sous forme d'une solution à 2,0 mg/ml en utilisant du sérum physiologique. 15 En utilisant une solution de tampon au phosphate 0,1 M (pH 5) et la solution à 2,0 mg/ml d'albumine préparée ci-dessus, un mélange liquide à 0,01 mg/ml de vert brillant et d'albumine a été préparé. La longueur d'onde d'absorption maximale du vert brillant égale à 625 nm a été utilisée 20 pour l'irradiation comme longueur d'onde d'excitation, et la longueur d'onde de la lumière diffusée détectée dans la direction perpendiculaire à l'axe lumineux de la lumière d'excitation a été mesurée en utilisant un spectrophotomètre (produit par Shimadzu Corporation, RF-1500). La longueur 25 d'onde de fluorescence maximale était égale à 651 nm. La figure 3 représente la longueur d'onde de fluorescence maximale mesurée par un photomètre à fluorescence. Comme comparaison avec le mélange liquide de vert brillant et d'albumine, la longueur d'onde de fluorescence 30 maximale d'une solution d'albumine a été mesurée en rapport avec une longueur d'onde d'excitation de 625 nm, de la manière représentée sur la figure 4. Puisque le spectre ne présente aucune différence entre la longueur d'onde d'excitation et la longueur d'onde de fluorescence, il a été trouvé que 35 l'albumine proprement dite n'a pas émis de fluorescence à une longueur d'onde d'excitation de 625 nm. 2905869 14 D'après ces résultats, il a été déterminé que, bien que le vert brillant n'émette pas de fluorescence à l'état de solution aqueuse, le vert brillant émet une fluorescence lorsqu'il est lié à l'albumine, sous une source de lumière 5 de la région de longueurs d'ondes de la lumière rouge. EXEMPLE 3 Du vert brillant (produit par Sigma-Aldrich Company, B4014-25G) a été préparé sous forme d'une solution en utilisant de l'eau distillée, et la concentration a été 10 ajustée à 1,0 mg/ml. Une souris (ddY, âgée de 13 semaines, mâle) a été soumise à une laparotomie sous anesthésie et le gros intestin a été extrait. Immédiatement après l'extraction, la solution préparée de vert brillant a été appliquée sur le gros 15 intestin, et l'observation de fluorescence de l'échantillon par un système d'imagerie confocal au moyen d'un microscope confocal (produit par Leica Corp., TCPSP2) été effectuée. Dans ce cas, la capacité de coloration, la capacité de pénétration et les propriétés de fluorescence du vert 20 brillant ont été étudiées. On a effectué une observation des coupes transversales à chaque distance de 5 m de la couche de surface luminale de l'échantillon de tissu du gros intestin extrait, dans la direction de l'épaisseur (figure 5). 25 Comme permet de le constater la figure 5, l'observation a pu être effectuée suffisamment jusqu'à une profondeur de 35 m. Ainsi, il a été également possible d'effectuer une observation dans la direction de l'épaisseur en ajustant les valeurs du gain et des valeurs similaires. 30 La figure 6 est une image en coupe transversale à un site à 10 m de profondeur par rapport à la couche de surface, et la figure 7 est une image en coupe transversale à un site à 15 gm de profondeur par rapport à la couche de surface. Le cytoplasme est bien coloré, tandis que l'espace 35 interstitiel a une couleur foncée de manière contrastée. 2905869 15 Ainsi, une très bonne observation de la morphologie ou de l'état des cellules peut être effectuée. Il va de soi que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et que de 5nombreuses modifications peuvent y être apportées sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une composition comprenant un composé représenté par la formule (1) . caractérisée en ce qu'elle est destinée à la production d'un colorant histofluorescent pour endoscopie, formule dans laquelle R1 et R2, qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un groupe alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone et X- représente un résidu anionique. 2. Utilisation suivant la revendication 1, caractérisée en ce que RI et R2 représentent chacun un groupe éthyle. 3. Utilisation suivant la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que X-représente un groupe HOSO3-. 4. Utilisation suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'endoscope est un endoscope confocal. 5. Utilisation suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le colorant histofluorescent est sous une forme appropriée à une administration orale, une administration directe dans le tractus gastro-intestinal ou une administration sous-muqueuse. 6. Utilisation suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le colorant histofluorescent pour endoscopie colore la surface de la lumière gastro-intestinale et/ou la partie intérieure des cellules de la lumière gastro-intestinale. 7. Composition de colorant histofluorescente pour endoscopie, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé représenté par la formule (1) suivante : 2905869 dans laquelle R1 et R2, qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un groupe alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone et X-représente un résidu anionique. 8. Composition de colorant histofluorescente suivant la revendication 7, caractérisée en ce que R1 et R2 représentent chacun un groupe éthyle. 9. Composition de colorant histofluorescente suivant la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce que X- représente un groupe HOSO3- . 10. Composition de colorant histofluorescente suivant l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisée en ce que l'endoscope est un endoscope confocal.