Brevet FR2900154A1 — publié le 20071026

L'invention concerne un procédé pour la synthèse de composés C-glycosides gemdifluorés dérivés de la podophyllotoxine. Elle s'applique plus particulièrement, mais non exclusivement, à la préparation de composés utilisables notamment en oncologie pour le traitement du cancer. La podophyllotoxine 1 est un lignane isolé des racines de deux plantes Podophyllum peltatum (Amérique de Nord) et Podophyllum emodi (Asie). Elle possède une forte activité antimitotique en inhibant la polymérisation de la tubuline. Trop toxique pour 20 être utilisée en chimiothérapie, elle a donné naissance après modifications structurales à de nombreux composés antitumoraux. Parmi eux, des dérivés glycosylés, composés habituellement moins toxiques et plus hydrosolubles ont émergé. OH MeO/ OMe OMe Podophyllotoxine 1 R'=CH3 R2=H 2 Etoposide Ri= R2=H 3 Teniposide R'=CH3 R2=PO3H 4 Etopophos MeO OMe C'est le cas de l'étoposide 2 (ou VP-16) utilisé notamment dans le traitement du cancer du poumon à petites cellules, de la vessie, des testicules, des lymphomes, des 5 leucémies aiguës, des sarcomes de Kaposi. OH R= H2CN N GL331 6 NPF 7 Top-53 R= HN R= HN MeOOMe Des dérivés azotés de la podophyllotoxine comme le GL-331 5, le NPF 6 ou le TOP-l0 53 7 montrent également des activités très intéressantes. Toutes ces molécules dérivées de la structure déméthylépipodophyllotoxine sont des inhibiteurs de la topoisomérase II, enzyme qui catalyse la coupure puis la reformation des 2 brins de l'ADN. 15 Nous avons développé la synthèse de composés azotés de la podophyllotoxine, avec une fonction amide substitué par un glycoside gem-difluoré. L'intérêt du groupement CF2 est outre sa résistance face aux processus de dégradations biochimiques le fait qu'il constitue un excellent mime de l'oxygène. Il permet ainsi la synthèse de structures non hydrolysables. 20 -3 De tels composés seraient utilisables comme agents de chimiothérapie dans le traitement de différents types de cancer, soit seul ou en association avec d'autres chimiothérapies dans le cadre d'une multithérapie. Les molécules développées appartiennent à la série des analogues azotés de la podophyllotoxine, famille présentant une importante cytotoxicité. De plus la présence d'un glycoside est connue pour améliorer la solubilité dans les solvants aqueux., et diminuer la toxicité. L'utilisation d'analogues difluorés en position anomérique du glycoside renforce de plus leur stabilité face à des hydrolyses acido-basiques et surtout enzymatiques. A cet effet, l'invention propose un composé glycoconjugué gem-difluoré de formule générale I : R4 R 0 OR6 où R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, acétyle, benzoyle, RI et R2, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle, tertiobutyldiphénylsilyle ou un groupe acétal, du type CR'R", avec R'et R", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, benzyle, thiophène, R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle , tertiobutyldiphénylsilyle, R4 représente OR"', NGR'GR", N3, ou un phtalimide avec R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle, tertiobutyldiphénylsilyle, GR'et GR", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R5 représente un groupe hydroxyle libre ou protégé ou un halogène, R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, acétyle, benzyle, PO3H, PO3Na, ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat éventuellement pharmaceutiquement acceptable Plus précisément, un composé selon l'invention pourra avoir une formule générale II : 0 dans laquelle R, R', R2, R3, R4, R5 et R6 sont tels que définis dans la formule I , ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat éventuellement pharmaceutiquement acceptable. Les composés de formule I et II pourront être utilisés, par exemple par une réaction de réduction de la fonction amide, pour la synthèse des composés de formule III : F2 0-w""'i" R4 représente OR', NGR'GR", N3, ou un phtalimide avec R'" représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle, tertiobutyldiphénylsilyle, GR'et GR", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R5 représente un groupe hydroxyle libre ou protégé ou un halogène, R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, acétyle, benzyle, PO3H, PO3Na, ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat éventuellement pharmaceutiquement acceptable. Dans les formules I à IH, les groupes alkyles linéaires ou ramifiés pourront être des groupes possédant de 1 à 5 atomes de carbones. Les composés de formules générales I à III tels que définis précédemment c'est-à dire y compris leurs dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat éventuellement pharmaceutiquement acceptable pourront être présentés sous différentes formes galéniques adaptées à leur utilisation par exemple des solutions ou suspensions injectables. Un procédé de préparation de composés de formule I comprend une étape de 25 couplage entre un composé de formule IV : MeOOMe OR6 dans laquelle R6 est tel que défini dans la formule I 7 et un composé de formule V : CF2000H R dans laquelle R', R2, R3., R4, R5 sont tels que définis dans la formule I . Ledit composé de formule IV est obtenu par épimérisation puis substitution de la fonction alcool en position 4 par un groupe azido réduit ultérieurement en amine. Le composé de formule V est obtenu via un composé intermédiaire de formule VI : R 1 O, R20~Lt-,/ ~ O R30~ "OH R4 dans laquelle R'., R2, R3, R4 sont tels que définis dans la formule I. Lorsque dans le composé de formule V, R5 représente un groupe hydroxyle, la préparation dudit composé de formule V comprend, en outre, une oxydation en lactone du composé de fibrmule VI suivi d'une réaction de Reformatsky. L'invention a également pour objet un médicament contenant en tant que principe actif au moins un composé de formule I à III tel que défini précédemment. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins 20 un composé de formule générale I à II[ tel que défini précédemment pour la préparation de médicaments/compositions pour le traitement de cancers tels que, par exemple, le cancer du poumon à petites cellules, de la vessie, des testicules, des lymphomes, des leucémies aiguës, des sarcomes de Kaposi.15 -8- Un autre objet de l'invention se rapporte à une composition comprenant au moins un composé de formule I à III tel que défini précédemment. Bien entendu, la composition selon l'invention pourra comprendre les composés de 5 formule I à III tel que défini précédemment seuls ou en mélange et en toutes proportions. La composition selon l'invention pourra être destinée à un usage pharmaceutique. 10 Dans des compositions pharmaceutiques selon la présente invention pour l'administration par voir orale, sublinguale, inhalée, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, locale ou rectale, les principes actifs pourront être administrés sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports/véhicules pharmaceutiquement acceptables classiques. 15 Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration topique, les implants, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intranasale ou intraoculaire et les formes d'administration rectale. 20 Outre les excipients inertes, non toxiques et pharmaceutiquement acceptables, tels que l'eau distillée, le glucose, le lactose d'amidon, le talc, les huiles végétales, l'éthylène glycol..., les compositions ainsi obtenues pourront également contenir des agents de préservation. D'autres principes actifs pourront être ajoutés dans ces compositions. La quantité de composé selon l'invention et d'autres éventuels principes actifs dans de telles compositions pourra varier selon les applications, l'âge et le poids du 30 malade le cas échéant. Des exemples de préparation de composés selon l'invention seront décrits ci-après, à titre d'exemples non limitatifs, avec référence aux dessins annexés dans lesquels : 35 La figure 1 est une équation de réaction pour obtenir les composés 11 et 12 ; La figure 2 est une équation de réaction pour obtenir le composé 13 ; 25 La figure 3 est une équation de réaction pour obtenir le composé 14 ; La figure 4 est une équation de réaction pour obtenir le composé 15 ; La figure 5 est une équation de réaction pour obtenir le composé 16 ; La figure 6 est une équation de réaction pour obtenir le composé 17 ; La figure 7 est une équation de réaction pour obtenir le composé 19a ou 19b ; La figure 8 est une équation de réaction pour obtenir le composé 20a ou 20b ; La figure 9 est une équation de réaction pour obtenir le composé 21a ou 21b ; La figure 10 est une équation de réaction pour obtenir le composé 22a ou 22b; La figure 11 est une équation de réaction pour obtenir le composé 23a ou to 23b ; La figure 12 est une équation de réaction pour obtenir le composé 24a ou 24b ou 25a ou 25b ; La figure 13 est une équation de réaction pour obtenir le composé 26a ou 26b ou 27a ou 27b ; 15 La figure 14 est une équation de réaction pour obtenir le composé 28a ou 28b ou 29a ou 29b ; La figure 15 est une équation de réaction pour obtenir le composé 30a ; La figure 16 est une équation de réaction pour obtenir le composé 31a. 20 Les abréviations rencontrées sont définies ainsi : éq. : équivalent g : gramme Hz : Hertz mg : milligramme MHz : mégaHertz min.: minute mL: millilitre mmol: millimole mol: micromole 25 nmol : nanomole app : apparent Les caractéristiques des appareils utilisés pour effectuer les analyses de tous les composés décrits dans la présente demande sont indiquées ci-dessous : 30 Les spectres RMN 'H, 13C, 19F ont été enregistrés sur des spectromètres BRUKER DPX 300 et DPX 600. En RMN 'H et 13C, le tétraméthylsilane est utilisé comme référence interne. En RMN 19F, la référence externe est le fluorotrichlorométhane CFC13. Les déplacements chimiques sont exprimés en partie par million (ppm), les constantes de couplage J en Hertz (Hz). 35 Les abréviations suivantes ont été utilisées : s pour singulet, bs pour un large singulet, d pour doublet, t pour triplet, q pour quadruplet, m pour multiplet ou massif, dd pour doublet de doublet... -10- Les spectres de masse ont été obtenus sur un spectrophotomètre de type Micromass TOF-SPEC, E 20 kV, a-cyano. pour l'ionisation Maldi et JEOL AX500, 3 kV, Canon FAB JEOL, Xe, 4 kV, courant limite 10 A, Gly-NBA 50 :50 pour l'ionisation FAB. Les séparations par chromatographie sur colonne sont réalisées sous pression légère en suivant les techniques de chromatographie sur silice Kieselgel 60 (230-400 Mesh, Merck). Le suivi est assuré par chromatographie sur couches minces (CCM) avec des plaques Kieselgel 60E-254-0.25mm. On appelle rapport frontal (Rf) le rapport de la distance de migration d'un composé sur un support donné sur la distance de migration d'un éluant. Les figures ci-après décrivent la préparation de composés glycoconjugués gemdifluorés de formule 8 et des réactions les impliquant pour obtenir d'autres composés actifs : où R représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, X représente un groupe carbonyle ùC=0 ou un groupe -CH2, -11- R' et R2., identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe benzyle, R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe benzyle, R4 représente OR', avec R" représente un atome d'hydrogène ou un groupe benzyle, R5 représente un groupe hydroxyle libre, R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle. Les molécules cibles 8 sont obtenues par réaction de couplage entre deux synthons : l'unité glycosidique 10 et le motif aminoépipodophyllotoxine 9 : RIO R20, NH 5 n F 2 MeO OMe OR6 9 + OR' R5 CF2COOH R4 OR 10 L'aménagement de ces unités fonctionnelles est réalisé comme suit. En partant de la podophyllotoxine 1, on réalise les étapes d'épimérisation de l'OH en position 4, et la déméthylation de l'OMe en position 4' pour conduire à la déméthylépipodophyllotoxine 11, mais on observe également dans le milieu le produit épimérisé mais non déméthylé : l'épipodophyllotoxine 12 (Fig. 1). Sur ces deux composés le OH en position 4 est ensuite substitué par un groupe azido (Fig. 2 et 3) qui est ensuite réduit en amine (Fig. 4 et 5).20 -12- Synthèse de l' épipodophyllotoxine 12 et du 4'-déméthylépipodophyllotoxine 11 (Fig. 1) La podophyllotoxine 1 (1,00 g ; 2,29 mmol ; 1 éq.) est dissoute dans du dichlorométhane DCM sec (30 mL). L'iodure de sodium (1,03 g ; 6,88 mmol ; 3 éq.) est additionné et le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes. L'acide méthane sulphonique McSO3H (0,66 g ; 0,45 mL ; 6,88 mmol ; 3 éq.) est additionné lentement à 0 C et la mixture est alors réchauffée à température ambiante et agitée pendant une nuit. BaCO3 (0,54 g ; 2,75 mmol ; 1,2 éq.) et un mélange eau / acétone (25 mL) sont ajoutés dans le milieu à 0 C qui est alors agité pendant une heure à température ambiante. Une solution aqueuse à 10% de thiosulfate de sodium Na2S2O3 (30 mL) est additionnée à la réaction, qui est ensuite extraite avec du dichlorométhane (3 x 30 mL). Les phases organiques sont collectées et lavées avec une solution saturée de chlorure de sodium (50 mL), séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées sous pression réduite. Le solide rouge résultant est purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. L'épipodophyllotoxine 12 (0,17 g) et la 4'-déméthylépipodophyllotoxine 11 (0,44 g) sont isolées sous la forme de solides roses pâles avec un rendement pondéral de 20 66 %. Caractérisation de l'épipodophyllotoxine 12: 8 12 CCM 25 Rf = 0,38, éluant : DCM / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 1H (CDC1.3, 300MHz) OH 5 11 2'.~~ 6' 5 MeO' 4 OMe 7 7 OMe 13 -13- 2,77 (dddd, 1H, 3JH3_H2 14.1, 3JH341l 4.1, 3JH3-H4 3.3, 3JH3_H!1 1.8, H3) ; 3,21 (dd, 1H, 3JH2_H3 14.1, 3JH2_HI 5.1, H2) ; 3,67 (s, 6H, H7' x 6) ; 3,73 (s, 3H, H8' x 3) ; 4,28 (d, 1H, 3JHI1_H3 1.8, Hl 1) ; 4,31 (d, 1H, 3JH11-H3 4.1, H11) ; 4,54 (d, 1H, 3JHI4H2 5.1, H1) ; 4,79 (d, 1H, 3JH4-H3 3.3, H4) ; 5,91 (dd, 2H, 2JH13-H13 8.1, 1.3, H13) ; 6,21 (s, 2H, H2', H6') ; 6,48 (s, 1H, H8) ; 6,81 (s, 1H, H5). RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 38,1 (C3) ; 40,5 (C2) ; 43,8 (Cl) ; 56,1 (2C ; C7' x 2) ; 60,6 (C8') ; 66,6 (C4) ; 67,5 (C11) ; 101,5 (C13) ; 107,7 (2C ; C2' ; C6') ; 108,8 (C5) ; 110,4 (C8) ; 131,7 ; 131,8 ; 134,9 ; 137,0 ; 147,4 (C7) ; 148,4 (C6) ; 152,4 (2C ; C3' ; C5') ; 174,9 (C12). 10 Caractérisation de la 4'-déméthylépipodophyllotoxine 11: CCM 15 Rf = 0,23, éluant : DCM / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 1H (CDCl3, 300MHz) 2,75 (dddd, 1H, 3JH3412 14.1, 3JH3_H11 6.3, 3JH3-H11 3.8, 3JH3-H4 3.5, H3) ; 3,19 (dd, 1H, 3JH2- H3 14.1, 3JH2.HI 5.1, H2) ; 3,70 (s, 6H, H7' x 6) ; 4,27 (d, 1H, 3JH11_ 13 3.8, Hi l) 4,31 (d, 1H, 3JH11-H3 6.3, H11) ; 4,54 (d, 1H, 3JH1-H2 5.1, Hl) ; 4,79 (d, 1H, 3JH4-H3 3.5, 20 H4) ; 5,35 (s, 1H, OH) 5,92 (dd, 2H, 3JH13_H13 8.8, 1.3, H13) ; 6,22 (s, 2H, H2', H6') ; 6,48 (s, 1H, H8) ; 6,81 (s, 1H, H5). RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 67,2 (C4) ; 68,0 (C11) ; 101,9 38,6 (C3) ; 41,0 (C2) ; 44,1 (Cl) ; 56,8 (2C ; C7' x 2) ; (C13) ; 108,2 (2C ; C2' ; C6') ; 109,3 (C5) ; 110,9 (C8) ; 130,9 ; 132,2 ; 132,5 ; 25 134,4 ; 146, (2C :; C3' ; C5') ; 147,8 (C7) ; 148,9 (C6) ; 175,5 (C12). -14- Synthèse de la 40-azido-4-déoxy-4'-déméthylépipodophyllotoxine 13 (Fig. 2) Sur une solution contenant la 4'-déméthylépipodophyllotoxine 11 (1,65 g ; 4,1 mmol ; 1 éq.) et l'azoture de sodium NaN3 (1,4 g ; 21,0 mmol ; 5 éq.) dans le chloroforme CHC13 (15 mL), l'acide trifluoroacétique CF3COOH (4,5 mL ; 5,8 mmol ; 1,4 éq.) est additionné goutte à goutte et le milieu est agité pendant 2h à température ambiante. Une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 (10 mL) est ajoutée, le mélange est ainsi extrait au chloroforme (3 x 20 mL). Les phases organiques sont combinées, lavées avec de l'eau (40 mL), séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées pour donner le 4(3-azido-4-déoxy-4'-déméthylépipodophyllotoxine 13 sous la forme d'un solide jaune avec un rendement quantitatif. Le produit est suffisamment pur pour être utilisé pour la prochaine étape sans plus de purification. Caractérisation de 413-azido-4-déoxy-4'-déméthylépipodophyllotoxine 13 CCM Rf = 0,56, éluant : dichlorométhane / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 'H (CDC13, 300MHz) 2,86 (m, 1H, H3) ; 3,10 (dd, 1H, 3JH2-H3 13.8, 3JH2-H1 5.2, H2) ; 3,70 (s, 6H, H7' x 6) ; 4,23 (dapp, 2H, 3JH114H3 9.4, Hl1 x 2) ; 4,55 (d, 1H, 3JH1-H2 5.2, H1) ; 4,70 (d, 1H, 3JH4-H3 3.7, H4) ; 5,36 (s, 1H, -OH) ; 5,95 (dd, 2H, 3JH13-H13 6.3, 1.2, H13) ; 6,20 (s, 2H, H2', H6') ; 6,52 (s, 1H, H8) ; 6,73 (s, 1H, H5). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 35,8 (C3) ; 40,3 (C2) ; 42,5 (Cl) ; 55,5 (2C, C7' x 2) ; 58,2 (C4) ; 66,8 (Cl 1) ; 100,8 (C13) ; 106,8 (2C, C2'., C6') ; 107,6 (C5) ; 110,1 (C8) ; 125,8 ; 129,5 ; 131,3 ; 133,2 ; 145,4 (2C, C3', C5') ; 146,4 (C7) ; 147,9 (C6) ; 173,1 (C12). -15- Synthèse du 40-azido-4-déoxyépipodophyllotoxine 14 (Fig. 3) Dans une solution contenant l'épipodophyllotoxine 12 (670 mg ; 1,6 mmol ; 1 éq.) et l'azoture de sodium NaN3 (530 mg ; 8,1 mmol ; 5 éq.) dans le chloroforme CHC13 (8 mL), de l'acide trifluoroacétique CF3COOH (0,55 mL ; 2,2 mmol ; 1,4 éq.) est additionné goutte à goutte et le milieu est agité pendant deux heures à température ambiante. Une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 (10 mL) est ajoutée, le rnélange est ainsi extrait au chloroforme (3 x 15 mL). Les phases organiques sont combinées, lavées avec de l'eau (30 mL), séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées pour donner le 4(3-azido-4- déoxyépipodophyllotoxine 14 sous la forme d'un solide jaune avec un rendement quantitatif. Le produit est suffisamment pur pour être utilisé pour la prochaine étape sans plus de purification. Caractérisation de 4(3-azido-4-déoxyépipodophyllotoxine 14 CCM Rf = 0,86 ; éluant : dichlorométhane / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 20 2,84-2,91 (m, 1H, H3) ; 3,12 (dd, 1H, 3JH2-H3 13.8, 3JH2-H1 5.2, H2) ; 3,67 (s, 6H, 117' x 6) ; 3,73 (s, 3H, H8' x 3) ; 4,24 (d, 1H, 3JHI1-H3 2.5, Hi l) ; 4,26 (d, 1H, 3JHJ I_HII 0.6, 1111) ; 4,56 (d, 1H, 3JH1_H2 5.2, H1) ; 4,71 (d, 1H, 3JH4_H3 3.7, 114) ; 5,95 (dd, 2H, 3JHI3-H13 5.5, 1.3, H13) ; 6,19 (s, 2H, 112', H6') ; 6,52 (s, 1H, H8) ; 6,74 (s, 1H, H5). RMN 13C (CDCl3, 75MHz) 25 38,7 (C3) ; 43,0 (C2) ; 45,4 (Cl) ; 58,1 (2C, C7' x 2) ; 61,4 (C4) ; 62,5 (C8') ; 69,4 (Cl l) ; 103,8 (C13) ; 110,0 (2C, C2', C6') ; 110,6 (C5) ; 112,9 (C8) ; 128,6, 133,9 ; 136,8 ; 139,1 ; 149, 1 (C7) ; 150,8 (C6) ; 154,4 (2C, C3', C5') ; 175,9 (C12).15 -16- Synthèse du 40-amino-4-déoxy-4'-déméthylépipodophyllotoxine 15 (Fig. 4) Le 4(3-azido-4-déoxy-4'-déméthylépipodophyllotoxine 13 (354 mg ; 0,83 mmol) est dissous dans de l'acétate d'éthyle (25 mL) et du palladium sur charbon est additionné. Le milieu réactionnel est placé sous atmosphère d'hydrogène et agité pendant une nuit à température ambiante, Le mélange est filtré et concentré sous pression réduite pour donner un solide qui est purifié par flash chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux pour obtenir ainsi le 4(3-amino-4-déoxy-4'- 1 o déméthylépipodophyllotoxine 15 sous forme de solide blanc avec un rendement pondéral de 67%. Caractérisation de 4(3-amino-4-déoxy-4'-déméthylépipodophyllotoxine 15 13 15 15 CCM Rf = 0,21 ; éluant : chloroforme/ méthanol (19 : 1). RMN 1H (CDC13, 300MHz) 2,57-2,82 (m, 3H, H3, NH2) ; 3,21 (dd, 1H, 3JH2-H3 14.1, 3JH2-H1 5.2, H2) ; 3,69 (s, 20 6H, H7' x 6) ; 4,13 (d, 1H, 3JH4-H3 4.0, H4) ; 4,22 (dapp, 2H, 3JHI1-H3 9.6, H11 x 2) ; 4,48 (d, 1H, 3JHI..H2 5.2, Hl) ; 5,88 (dd, 2H, 3JHI3..HI3 7.7, 1.2, H13) ; 6,23 (s, 2H, H2', H6') ; 6,41 (s, 1H, H8) ; 6,74 (s, 1H, H5). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 38,3 (C3) ; 40,7 (C2) ; 44,1 (Cl) ; 49,3 (C4) ; 56,8 (2C, C7' x 2) ; 68,6 (C11) ; 101,8 25 (C13) ; 108,4 (2C, C2', C6') ; 109,4 (C5) ; 110,3 (C8) ; 131,5 ; 131,6 ; 134,3 ; 134,4 ; 146,8 (2C, C3', C5') ; 147,7 ; 148,0 ; 175,9 (C12). -17- Synthèse du 40-amino-4-déoxyépipodophyllotoxine 16 (Fig. 5) Le 4(3-azido-4-déoxyépipodophyllotoxine 14 (1150 mg ; 2,62 mmol) est dissous dans de l'acétate d'éthyle (25 mL) et du palladium sur charbon est additionné. Le milieu réactionnel est placé sous atmosphère d'hydrogène et agité pendant une nuit à température ambiante. Le mélange est filtré et concentré sous pression réduite pour donner un solide qui est purifié par flash chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux pour obtenir ainsi le 4p-amino-4-déoxyépipodophyllotoxine 16 sous forme de solide jaune pâle avec un rendement pondéral de 81%. Caractérisation de 45-amino-4-déoxyépipodophyllotoxine 16 CCM Rf = 0,29, éluant : CHC13 / méthanol (19 : 1). RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 2,21 (ls, 2H, -NH2) ; 2,75-2,85 (m, 1H, H3) ; 3,25 (dd, 1H, 3JH2-H3 14.1, 3JH2.H1 5.4, H2) ; 3,67 (s, 6H, H7' x 6) ; 3,72 (s, 3H, H8' x 3) ; 4,18 (d, 1H, 3JH4-H3 4.2, H4) ; 4,22 (dd, 1H, 3JH11-H3 88, 3JH11-H11 0.9, H11 x 2) ; 4,25 (s, 1H, H11) ; 4,49 (d, 1H, 3JH1-H2 5.4, Hl) ; 5,88 (cld, 2H, 3JH13-H13 6.4, 1.3, H13) ; 6,22 (s, 2H, H2', H6') ; 6,42 (s, 1H, H8) ; 6,77 (s, 1H, H5). RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 38,2 (C3) ; 40,6 (C2) ; 44,3 (Cl) ; 49,4 (C4) ; 56,6 (2C, C7' x 2) ; 61,1 (C8') ; 68,5 (Cl1) ; 101,8 (C13) ; 108,6 (2C, C2', C6') ; 109,1 (C5) ; 110,7 (C8) ; 131,6 ; 133,7 ; 25 136,0 ; 137,4, 147,8 (C7) ; 148,2 (C6) ; 152,9 (2C, C3', C5') ; 175,6 (C12). 16 3 11 3 MeO 4 OMe 7 7 OMe 8 -18- Synthèse de la N-méthyl-413-amino-4-déoxyépipodophyllotoxine 17 (Fig. 6) La 4(3-amino-4-•déoxy-4'-déméthylépipodophyllotoxine 15 (115 mg ; 0.29 mmol ; 1 éq.) est dissoute dans du tétrahydrofurane anhydre (5 mL) et est ajoutée lentement à une solution d'hydrure de sodium (21 mg ; 0.86 mmol ; 3 éq.) dans le tétrahydrofurane (2 mL). La solution est ainsi agitée pendant 30 minutes à température ambiante. L'iodure de méthyle (123 mg ; 0.86 mmol ; 3 éq.) est additionné à température ambiante et le mélange réactionnel est agité pendant la nuit. De l'eau (10 mL) est additionnée pour stopper la réaction. Le mélange est ensuite 1 o extrait avec du dichlorométhane (3 x 10 mL). Les phases organiques sont collectées et lavées avec une solution saturée de chlorure de sodium (20 mL), séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées sous pression réduite. L'huile jaune en résultant est purifiée par chromatographie sur gel de silice avec 100% d'acétate d'éthyle. La N-méthyl-épipodophyllotoxine 17 (54 mg) est isolée comme une huile 15 incolore avec un rendement de 44 % . Caractérisation de N-rnéthyl-4(3-amino-4-déoxyépipodophyllotoxine 17 CM Rf = 0.14, éluant : acétate d'éthyle. 20 RMN 1H (CDC13, 300MHz) 1.95 (1s, 1H, N-H), 2.50 (ls, 11-1, H2), 2.60-2.70 (dd, 1H, 2JH11_H11 9.4, 5.6, H3), 2.71 (s, 3H, H14 x 3), 3.59-3.65 (m, 2H, Hl 1 x 2), 3.76 (s, 6H, H7' x 6), 3.81 (s, 3H, H8' Me N"14 11 3' MeO'~ OMe OMe 7 7' s' 17 13 -19- x 3), 4. 09 (s, 1H, H4), 4.29 (s, 1H, Hl), 5.94 (dd, 2H, 2JH13-H13 12.7, 1.3, H13 x 2), 6.30 (s, 2H, H2', H6'), 6.48 (s, 1H, H8), 6.67 (s, 1H, H5). RMN 13C (CDCl3, 751VIHz) 27.6 (C14), 42.6 (C3), 45.9 (Cl), 51.0 (C2), 55.9 (2C, C7' x 2), 60.5 (C8'), 61.8 (Cl i), 61.8 (C4), 100.9 (C13), 105.7 (2C, C2', C6'), 107.0 (C5), 111.9 (C8), 128.8, 131.7, 136.4, 139.8, 145.4 (C7), 147.3 (C6), 152.8 (2C, C3', C5'), 175.2 (C12). Spectrométrie de masse : 428 (M + H)+, 414 (M + H ù Me)+. Les étapes de benzylation d'un sucre 18 (Fig. 7), d'hydrolyse acide de la position anomérique d'un composé 19 (Fig. 8), et d'oxydation d'un composé 20 (Fig. 9) conduisent à une lactone 21. Sur cette lactone 21, l'introduction du motif difluoroester sur un composé 22 est réalisée via une réaction de Reformatsky (Fig. 10). Cette fonction ester est ensuite saponifiée pour donner un composé 23 (Fig. 11) en vue de l'étape de couplage. Les résultats expérimentaux sont donnés en série glucose, les références des produits étant suivies de la lettre a, et galactose, les références des produits étant suivies de la lettre b :25 - 20 - Synthèse du 1-O-m ethyl-2,3,4,5,6-tetra-O-benzyl-D-glucopyranose 19a (Fig. 7) Dans un ballon sous atmosphère d'argon, le 1-O-méthyl-D-glucopyranose 18a (5 g ; 26 mmol ; 1 éq.) et de l'iodure de tetrabutylammonium nBu4NI (0,5 g ; 1,3 mmol ; 0,05 éq.) sont placés en solution dans du diméthyformamide DMF (250 mL). L'hydrure de sodium NaH (3,7 g ; 150 mmol ; 6 éq.) est introduit lentement. Le bromure de benzyle BnBr (18 mL ; 150 mmol ; 6 éq.) est ensuite additionné et la réaction est agitée pendant 24h à température ambiante. L'eau (200 mL) est additionnée lentement et la phase aqueuse est extraite avec de l'éther (3 x 150 mL). Les phases organiques sont collectées, séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées sous pression réduite. Le produit 19a est purifié par chromatographie sur colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle (9/1). Le produit 19a est isolé sous forme d'huile incolore avec un rendement pondéral de 15 83%. Caractérisation de 19a 3 o 19a 20 CCM Rf = 0,38, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (9 : 1). RMN 1H (CDC13, 300MHz) 3,29 (s, 3H, H7) ; 3,45-3,67 (m, 5H, H2, H3, H4, 2 x H6) ; 3,91 (t, 1H, 3JH5-H6 8.9, 25 H5) ; 4,36-4,92 (m, 9H, 4 x CH2Ph, H1) ; 7,04-7,31 (m, 20H, HAN). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 53,8 (C7) ; 67,1 ; 68,7 ; 72,1 ; 72,1 ; 73,7 ; 74, 4 ; 76,3 ; 78,5 ; 80,8 ; 96,9 (Cl) ; 126,3 ; 126,3 ; 126,4 ; 126,5 ; 126,6 (2C) ; 126,6 ; 126,8 ; 127,0 (2C) ; 127,1 ; 127,1 ; 136,6 ; 136,8 ; 136,9 ; 137,5. -21- Synthèse du 1-O-methyl-2,3,4,5,6-tetra-O-benzyl-D-galactopyranose 19b (Fig. 7) Dans un ballon sous atmosphère d'argon, le 1-O-méthyl-D-galactopyranose18b (5 g ; 26 mmol ; 1 éq.) et de l'iodure de tetrabutylammonium (0,5 g ; 1,3 mmol ; 0,05 éq.) sont placés en solution dans le DMF (250 mL). L'hydrure de sodium (3,7 g ; 150 mmol ; 6 éq.) est introduit lentement. Le bromure de benzyle (18 mL ; 150 mmol ; 6 éq.) est ensuite additionné et la réaction est agitée pendant 24h à température ambiante. L'eau (200 mL) est additionnée lentement et la phase aqueuse est extraite avec de l'éther (3 x 150 mL). Les phases organiques sont collectées, séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées sous pression réduite. Le produit 19b est purifié par chromatographie sur colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle (9/1). Le produit 19b est isolé sous forme d'huile incolore avec un rendement pondéral de 15 95%. Caractérisation de 19b \ 6 OOMe 5 2 20 CCM Rf = 0,48, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 1H (CDC13, 300MHz) 3,3 et 3,4 (2s, 3H, CH3) ; 3,4-3,5 (m , 2H6, H5, 0,5H3p) ; 3,7 (dd , 7,7-9,6, 0,5H, H2p) ;3,8-3,9 (m., 2H, 0,5H3a, H4); 4 (dd, 3,5_10,8, 0,5H, H2a) ;4,2 (d, 7,7, 0,5H, 25 Hlp) ; 4,6 (d, 3,5ä 0,5H, Hla) ; 4,3-4,9 (m, 8H, H2, 4OCH2Ph) ; 7,2 (m, 20H, H ar.) RMN 13C (CDCll3, 75,5MHz) 55,8 et 57,5 (CH3) ; 69,3 et 69,5 (C6) ; 69,6 (C5) ; 73,4 ; 73,7 ; 73,8 (C4); 73,9 ; 74,0 ; 74,8 ; 75,2 ; 75,6: 76,9 ; 79,5 et 80,1 (C2) ; 82,6 (C3) ; 99,2 et 105,4 (Cl) ; 127,9 -128 (Car.) ; 138- 139 (Car. quat.). 30 -22- Synthèse du 2,3,4,5,6-tetra-O-benzyl-D-glucopyranose 20a (Fig. 8) Dans un ballon contenant le 1-O-méthyl-2,3,4,5,6-tetra-O-benzyl-D-glucopyranose 19a (6,4 g ; 11,54 mmol) en solution dans de l'acide acétique (93 mL), une solution d'acide sulfurique 3M (13 mL) est additionnée et le mélange réactionnel est chauffé à 110 C pendant une heure. La réaction est refroidie à température ambiante. Un précipité blanc apparaît et celui-ci est filtré et séché à l'air ambiant. Le composé 20a est obtenu très pur sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 59% et est engagé directement dans la prochaine étape sans 10 purification. Caractérisation de 20a ( 6 i0 OH o o 15 CCM Rf = 0,35 ; éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (7 : 3). La RMN montre clairement deux anomères (a et [3) en RMN du carbone. RMN 1H (CDC13, 300MHz) 3,58-3,66 (m, 4H, H2, H3, 2 x H6) ; 3,94-4,06 (m, 2H, H4, H5) ; 4,44-4,96 (m, 8H, 4 20 x CH2Ph) ; 5,21 (d, 1H,3JH1_H23,5, Hl) ; 7,04-7,32 (m, 20H, HAr). RMN 13C (CDCl3, 75MHz) Anomère majoritaire : 69,0 (C6) ; 70,6 ; 73,6 ; 73,9 ; 75, 4 ; 76,1 ; 78,1 ; 80,4 ; 82,1 ; 91,7 (Cl) ; 128,0 ; 128,1 ; 128,1 ; 128,3 ; 128,4 ; 128,4 (2C) ; 128,5 ; 128,6 ; 128,8 (2C) ; 128,8 (2C) ; 128,9 ; 138,2 ; 138,3 ; 138,6 ; 139,1. 25 Anomère minoritaire : 69,3 (C6) ; 75,0 ; 75,2 ; 78,2 ; 83,5 ; 85,0 ; 97,9 (Cl) ; 138,1 ; 138,4 ; 138,7 ; 138,9. Point de fusion : Ptf= 151 C 30 - 23 - Synthèse du 2,3,4,5,6-tetra-O-benzyl-D-galactopyranose 20b (Fig. 8) Dans un ballon contenant le 1-O-méthyl-2,3,4,5,6-tetra-O-benzyl-D-galactopyranose 19b (6,4 g ; 11,54 mmol) en solution dans l'acide acétique (93 mL), une solution d'acide sulfurique 3M (13 mL) est additionnée et le mélange réactionnel est chauffé à 100 C pendant une heure. La réaction est refroidie à température ambiante. Le mélange est extrait quatre fois avec 100 mL de toluène. Les phases organiques sont rassemblées, puis lavées avec 100 mL d'une solution saturée d'hydrogénocarbonate t o de sodium NaHCO3 et enfin avec 100 mL d'eau. La phase organique est ensuite concentrée. Le produit brut ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de 8,5 pour 1,5. 15 Après concentration des fractions recueillies, le produit 20b se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 75%. Caractérisation de 20b 6OH 5 1 20 CCM Rf = 0,67, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (6 : 4). La RMN montre clairement deux anomères (a et (3) en RMN carbone. 25 15 - 24 - Synthèse de la lactone dérivée du glucose 21a (Fig. 9) Dans un ballon contenant le 2,3,4,5,6-tetra-O-benzyl-D-glucopyranose 20a (2,9 g ; 5,35 mmol) sous atmosphère inerte, du diméthylsulphoxyde DMSO (19 mL) est additionné avec de l' anhydride acétique (13 mL). Le mélange réactionnel est agité pendant une nuit à température ambiante. Une solution saturée de NaHCO3 (20 mL) est additionnée et la mixture est extraite deux fois avec de l'éther (20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et lavées avec de l'eau (10 mL) dix fois, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées. Le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Le produit désiré 21a est ainsi isolé sous forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 82%. Caractérisation de 21a o 6 2 CCM 20 Rf = 0,61, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 3,65 (dd, 1H, 3JH5-H6 3.3, 3JH6-H6 11.0, H6) ; 3,72 (dd, 1H, 3JH6-H5 2.4, 3JH6-H6 11.0, H6) ; 3,89-3,95 (m, 2H, H3, H4) ; 4,13 (d, 1H, 3JH2-H3 6.8, H2) ; 4,44-4,74 (m, 8H, CH2, H5) ; 4,96 (dapp, 1H, 3J 11.4) ; 7,15-7,34 (m, 20H, HAr). 25 RMN 13C (CDC13, 75MHz) 68,6 (C6) ; 73,8 ; 74,0 ; 74,1 ; 74,1 ; 76,4 ; 77,8 ; 78,5 ; 81,2 ; 128,2 ; 128,3 ; 128,3 ; 128,4 (2C) ; 128,5 ; 128,7 ; 128,2 (2C) ; 128,8 ; 137,4 ; 137,9 ; 137,9 ; 138,0 ; 166,9 (C 1). -25- nthèse de la lactone dérivée du galactose 21b (Fig. 9) Dans un ballon contenant le 2,3,4,5,6-tetra-O-benzyl-D-galactopyranose 20b (2,9 g ; 5,35 mmol) sous atmosphère inerte, du DMSO (19 mL) est additionné avec l'anhydride acétique (1:3 mL). Le mélange réactionnel est agité pendant une nuit à température ambiante. Une solution saturée de NaHCO3 (20 mL) est additionnée et la mixture est extraite deux fois avec de l'éther (20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et lavées avec de l'eau (10 mL) dix fois, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées. Le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Le produit désiré 21b est ainsi isolé sous forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 82%. Caractérisation de 21b 6 2 CCM Rf = 0,61, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 1H (CDC13, 300MHz) 3,6 (m, 2H, H6) ; 3,8 (dd, 2,1-9,6, 1H, H3) ; 4,1 (s, 1H, H4) ; 4,2 (m, 1H, H5) ; 4,4-5,1 (m ,9H, H2 ; 4OCH2Bn H6) ; 7,2 (m, 20H, H ar.) RMN 13C (CDC13, 75MHz) 67,4 (C6) ; 72,4 (C4) ; 72,6 (OCH2Bn) ; 73,5 (OCH2Bn) ; 74,6 (OCH2Bn) ; 75,1 25 (OCH2Bn) ; ; 77,1 (C5); 77,2 (C2) ; 79,9 (C3) ; 127,4 -128,3 (car.) ; 137,2 ; 137,3 ; 137,6 (Car. quat.) ; 169,8 (CO). 20 -26- Synthèse du gem-difluoroester dérivé du glucose 22a (Fig. 10) Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant du zinc (3,34 g ; 51 mmol ; 7 éq.) préalablement activé, du tétrahydrofurane THF (60 mL) est ajouté et le mélange est ainsi chauffé à reflux. Une solution constituée de la lactone dérivée du glucose 21a (3,94 g ; 7,3 mmol ; 1 éq.) et du bromodifluoroacétate d'éthyle (2,83 mL ; 22 mmol ; 3 éq.) dans du THF (60 mL) est lentement additionnée au mélange précédent. La réaction est agitée à reflux pendant trois heures. Le mélange est refroidi à température ambiante et une solution d'acide chlorhydrique HC1 1M (120 mL) est ajoutée, suivie de l'addition de dichlorarnéthane (120 mL). La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (100 mL) deux fois. Les phases organiques sont séchées sur sulfate de magnésium MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le résidu est purifié sur colonne chromatographique sur gel de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Le produit pur 22a est: isolé sous forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 75%. Caractérisation de 22a CCM Rf = 0,35, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN IH (CDC73, 300MHz) 1,30 (t, 3H, 3.44110 7.1, H10) ; 3,63-3,81 (m, 3H, H3, 2 x H6) ; 4,01-4,10 (m, 2H, 25 H4, H5) ; 4, 16 (s, 1H, H2) ; 4,29 (q, 2H, 3JH9-H10 7.1, 2 x H9) ; 4,50-4,81 (m, 4H) ; 4,85-4,92 (m, 4H) ; 7,21-7,38 (m, 20H, Hqr). RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 14,3 (C10) ; 63,7 (C9) ; 68,6 (C6) ; 73,0 (C2) ; 73,8 ; 75,5 ; 75,7 ; 76,4 ; 77,8 (C3) ; 78,6 (C4) ; 83,7 (C5) ; 96,5 (t ; 2Jc F 25,5 ; Cl) ; 128,0 (2C) ; 128,1 (2C) ; 128,1 ; O, OH 9 10 5 1C 2 7F2000CH2CH38 0, , " 'o 25 Caractérisation de 22b 5 1~CF20OOCH2CH3 2 7 8 ''0 - 27 - 128,2 ; 128,3 (2C) ; 128,6 ; 128,7 (2C) ; 128,8 (2C) ; 128,8 (2C) ; 128,9 (2C) ; 137,9 ; 138,3 ; 138,7 ; 138,7 ; 163,3 (t ; 2JC_F 30,3 ; C8). RMN 19F (CDC13, 282MHz) -117,7 (d, IF, 2JF_F 256.4) ; -120,1 (d, IF, 2JF_F 256.4). Synthèse du ,gem-difluoroester dérivé du galactose 22b (Fig. 10) Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant du zinc (3,34 g ; 51 mmol ; 7 éq.) 10 préalablement activé, du THF (60 mL) est ajouté et le mélange est ainsi chauffé à reflux. Une solution constituée de la lactone dérivée du galactose 21b (3,94 g ; 7,3 mmol ; 1 éq.) et du bromodifluoroacétate d'éthyle (2,83 mL ; 22 mmol ; 3 éq.) dans du THF (60 mL) est lentement additionnée au mélange précédent. La réaction est agitée à reflux pendant trois heures. Le mélange est refroidi à température ambiante 15 et une solution d'acide chlorhydrique HC1 1M (120 mL) est ajoutée, suivie de l'addition de dichlorométhane (120 mL). La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (100 mL) deux fois. Les phases organiques sont séchées sur sulfate de magnésium MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le résidu est purifié sur colonne chromatographique sur gel de silice avec comme 20 éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Le produit pur 22b est isolé sous forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 82%. CCM Rf = 0,35, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2). RMN 1H (CDC13, 300MHz)5 -28- 1,1 (t, 7,2, 3H, CH3); 3,4-3,5 (m, 2H, 116) ; 3,7-3,8 (dd, 2,5-9,5, 1H, H3); 3,8 (d, 2, 1H, H4) ; 4-4,1 (m, 3H, 1-15 ; CH2) ; 4,25-4,85 (m, 9H, H2 ; 4OCH2Bn) ; 7,2 (m, 20H, Har). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 14,2 (CH3) ; 63,6 (CI-12) ; 68,6 (C6) ; 71,7 (C5) ; 73,2 (OCH2Bn) ; 73,9 (OCH2Bn) ; 74,1 (C4) ; 74,9 (OCH:Bn) ; 75,1 (C2) ;75,8 (OCH2Bn) ; 81,2 (C3) ; 96,9 (t, 27Hz, Cl) ; 113 (t , 264Hz, CF2) ; 128,0 -128,9 (Car.) ; 138,2 ;138,3 ; 138,6 ; 139,1 (Car. quat.) ; 163,3 (t, 31Hz, CO2Et). RMN 19F (CDC13, 282MHz) -118,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,2 (d, JF_F=256Hz). Synthèse du gem-difluoroacide dérivé du glucose 23a (Fig. 11) Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le gem-difluoroester dérivé du glucose 22a (615 mg ; 0,93 mmol ; 1 éq.) en solution dans du THF (5 mL), une solution aqueuse de lithine (2M ; 2 éq.) est ajoutée et le mélange est agité pendant la nuit à température ambiante. Le milieu est concentré et dissous dans le dichlorométhane (5 mL), il est ensuite acidifié avec une solution d'acide chlorhydrique HCI 1M (50 mL). Le mélange est extrait avec du dichlorométhane (3 x 25 mL), et les phases organiques sont combinées, lavées avec une solution saturée de chlorure de sodium NaCl et concentrées directement. L'acide 23a est isolé avec un rendement pondéral de 90% sous la forme d'une huile incolore qui peut être utilisée directement pour la prochaine étape sans purification 25 supplémentaire. Caractérisation de 23a CCM 30 Rf = 0,50, éluant : dichlorométhane / méthanol (9 : 1). '--,/ 6 O OH v ] ~F2CgOOH 4 2 \/~0 . '"o 0 Cé - 29 - RMN 1H (CDCI3, 300MHz) 3,36-3,45 (m ; 2H ; H3 ; H6) ; 3,58-3,63 (m ; 1H ; H6) ; 3,88 (m ; 2H ; H4 ; H5) ; 4,00 (m ; 1H ; H2) ; 4.38 (m ; 8H) ; 6,06 (ls ; 2H ; OH ; COOH) ; 7,03-7,28 (m ; 20H ; HAr). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 68,0 (C6) ; 71,4 (C2) ; 73,0 ; 74,9 ; 75,1 ; 75,9 ; 77,2 (C3) ; 77,9 (C4) ; 82,1 (C5) ; 94,9 (t ; 2Jc_F 26,8 ; Cl) ; 126,6 ; 126,7 ; 126,9 ; 127,0 ; 127,0 ; 127,3 ; 127,3 ; 127,4 ; 127,5 ; 135,6 ; 136,2 ; 136,4 ; 137,1, RMN 19F (CDCI3, 282MHz) -117,2 (d, 1F, 2JF_F 258.6) ; -119,0 (d, 1F, 2JF_F 258.6). -30- Synthèse du jem-difluoroacide dérivé du galactose 23b (Fig. 11) Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le gem-difluoroester dérivé du galactose 22b (615 mg ; 0,93 mmol ; 1 éq.) en solution dans du THF (5 mL), une solution aqueuse de lithine LiOH (2M ; 2 éq.) est ajoutée et le mélange est agité pendant une nuit à température ambiante. Le milieu est concentré et dissous dans du dichlorométhane (5 mL), il est ensuite acidifié avec une solution d'acide chlorhydrique HCl 1M (50 mL). Le mélange est extrait avec du dichlorométhane (3 x 25 mL), et les phases organiques sont combinées, lavées avec une solution saturée de chlorure de sodium NaCl et concentrées directement. L'acide 23b est isolé avec un rendement quantitatif sous la forme d'une huile incolore qui peut être utilisée directement pour la prochaine étape sans purification supplémentaire. Caractérisation de 23b H 6O ,O 5 1 7F2CgOOH 2 "'O CCM Rf = 0,50, éluant : dichlorométhane / méthanol (9 : 1). RMN 'H (CDC13, 300MHz) 3,2 (dd, 4,5Hz et 9,8Hz ,1H, H6) ; 3,5 (dd, 7,7Hz et 9,8Hz, 1H, H6) ; 3,7 (d, 2Hz, 1H, H4) ; 3,8 (dd, 2,6Hz et 9,5Hz, 1H, H3); 4 (dd, 4,5Hz et 7,7Hz ;1H, H5) ; 4,3-4,9 (m, 9H, H2 ; 4OCH2Bn) ; 7,2 (m, 20H, Har). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 69,4 (C6) ; 71,7 (C5) ; 73,5 (OCH2Bn) ; 74,0 (OCH2Bn) ; 74,1 (C4) ; 75,0 (OCH2Bn) ; 75,1 (C2) ; 75,9 (OCH2Bn) ; 80,8 (C3) ; 95,4 (t, 27Hz, Cl) ; 112,5 (t , 260Hz, CF2) ; 127,8 -129,0 (Car.) ; 137,6 ;138,0 ; 138,1 (Car. quat.) ; 163,1 (t, 30Hz, CO2H). RMN 19F (CDC13, 282MHz) -117,3 (d, JF_F=259Hz) ; -119,0 (d, JF_F=259Hz)30 - 31 - Synthèse du composé 24a (Fig. 12) Sur une suspension du difluoroacide dérivé du glucose 23a (195 mg ; 0,307 mmol ; 1 éq.), de l'amine de la déméthylepipodophyllotoxine 15 (135 mg ; 0,338 mmol ; 1,1 éq.), de 1-hydroxybenzotriazol HOBT (45 mg ; 0,322 mmol ; 1,05 éq.), et de N-méthylmorpholine NMM (65 mg ; 0,629 mmol ; 2,05 éq.) dans du dichlorométhane (10 mL) sous atmosphère d'argon, du 1-(3-Diméthylamino-propyl)-3-éthylcarbodiimide hydrochloride EDCI (62 mg ; 0,322 mmol ; 1,05 éq.) est additionné. La réaction est agitée à température ambiante pendant trois jours. L'eau (10 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 15 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de chlorure de sodium NaCl (15 mL), séchées sur sulfate de magnésium Mg504 et concentrées sous vide pour donner un solide blanc. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Le produit désiré pur 24a est obtenu sous forme de solide blanc avec un rendement pondéral de 62 %. Caractérisation de 24a 20 CCM Rf = 0,68 ; éluant : dichlorométhane / acétate d'éthyle (80 : 20). RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 2,77-2,84 (m, 1H, H2) ; 2,85-2,94 (m, 1H, H3) ; 3,43-3,46 (dapp, 1H, J 10.7, H19) ; 3,55 (t, 1H, 3J 9.4, H16) ; 3,61-3,62 (m, 1H, H19) ; 3,66 (s, 6H, H7' x 6) ; 3,81-3,98 25 (m, 4H, H11, H115, H17, H18) ; 4,24-4,51 (m, 4H, H11, Hl) ; 4,66-4,84 (m, 6H) ; 5,16 (dd, 1H, 3JH4-H3 7.5, 3JH4-NH 4.2, H4) ; 5,49 (s, 1H, Ph-OH) ; 5,86 (dd, 2H, 2JH13-H13 7.3, 3J 1.1, H13 x 2) ; 6,19 (s, 2H, H2', 116') ; 6,40 (s, 1H, H8) ; 6,68 (s, 1H, H5) ; 6,98 (d, 1H, 3JNF1_H4 4.2, -NH) ; 7,00-7 ;28 (m, 20H). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 30 35,7 (C3) ; 40,3 (C2) ; 42,2 (Cl) ; 47,4 (C4) ; 55,1 (2C ; C7' x 2) ; 66,4 (C19) ; 67,2 (C l l) ; 70,7 (C15) ; 71,7 ; 73,7 ; 74,1 ; 74,7 ; 75,9 (C16) ; 76,6 (C17) ; 81,7 (C18) ; 94,9 (t ; 2Jc-F 27,5 ; C14) ; 100,4 (C13) ; 106,4 (2C ; C2' ; C6') ; 107,7 (C5) ; 108,8 - 32 - (C8) ; 126,0 ; 126,3 ; 126,4 ; 126,5 ; 126,6 ; 126,7 ; 127,1 ; 127,2 ; 128,7 ; 131,3 ; 131,5 ; 132,8 ; 135,9 ; 136,4 ; 136,4 ; 136,9 ; 145,2 (2C ; C3' ; C5') ; 146,4 (C7) ; 147,3 (C6) ; 162,0 (t ; 2Jc_F 26,8 ; C21) ; 172,7 (C12), RMN 19F (CDC13, 282MHz) -116,3 (d, 1F, 2JF_F 258.6); -120,6 (d, 1F, 2JF_F 258.6). OBn 24a 3 -33- Synthèse du composé 25a (Fig. 12) Sur une suspension du difluoroacide dérivé du glucose 23a (130 mg ; 0,205 mmol ; 1 éq.), de l'amine de l'épipodophyllotoxine 16 (93 mg ; 0,225 mmol ; 1,1 éq.), d'HOBT (30 mg ; 0,215 mmol ; 1,05 éq.), de NMM (43 mg ; 0,420 mmol ; 2,05 éq.) dans le dichlorométhane (10 mL) sous atmosphère d'argon, de 1'EDCI (42 mg ; 0,215 mmol ; 1,05 éq.) est additionné. La réaction est agitée à température ambiante pendant cinq jours. L'eau (15 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 15 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCl (20 mL), séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide blanc. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Le produit désiré pur 25a est obtenu sous forme de solide blanc avec un rendement pondéral de 50 A. Caractérisation de 25a CCM Rf = 0,88 ; éluant : DCM / AcOEt (80 : 20). RMN 1H (CDCl3, 300MHz) 2,84-2,90 (m ; 1H ; H2) ; 2,94-3,00 (m ; 1H ; H3) ; 3,51-3,72 (m ; 3H ; H19 x 2 ; H16) ; 3,75 (s ; 6H ; H7' x 6) ; 3,80 (s ; 3H ; H8' x 3) ; 3,95-4,04 (m ; 4H ; H11 ; H15 ; H18 ; H17) ; 4,35.4,53 (m ; 4H ; H11 ; H1) ; 4,77-4,88 (m ; 6H) ; 5,23 (dd, 1H, OBn ,OH O 15_ CI.2 3JH4_NH 7.3, 3.11144H3 4.5, H4) ; 5,96 (dd, 2H, 2JH13-H13 10.3, 3J 1.3, H13 x 2) ; 6,26 (s, 2H, H2', H6') ; 6,48 (s, 1H, H8) ; 6,76 (s, 1H, H5) ; 6,98 (d, 1H, 3JNH-H4 7.2, -NH) ; 7,01-7,26 (m, 20H). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 37,5 (C3) ; 42,0 (C2) ; 44,1 (Cl) ; 48,9 (C4) ; 56,6 (2C ; C7' x 2) ; 61,2 (C8') ; 68,2 (C19) ; 69,0 (Cl l) ; 72,5 (C15) ; 73,4 ; 75,4 ; 75,9 ; 76,4 ; 77,6 (C16) ; 78,3 (C17) ; 83,5 (C18) ; 96,6 (t ; 2JC_F 27,4 ; C14) ; 102,1 (C13) ; 108,5 (2C ; C2' ; C6') ; 109,5 (C5) ; 110,5 (C8) ; 127,7 ; 128,1 ; 128,1 ; 128,2 ; 128,2 ; 128,3 ; 128,4 ; 128,7 ; 128,8 ; 128,8 ; 128,9 ; 132,9 ; 135,0 ; 137,6 ; 137,7 ; 138,2 ; 138,6 ; 148,1 (C7) ; 149,1 (C6) ; 153,0 (2C :, C3' ; C5') ; 163,7 (t ; 2Jc_F 28,0 ; C21) ; 172,4 (C12), RMN 19F (CDC13, 282MHz) -116,6 (d, 1F, 2JF_F 258.6); -120,3 (d, 1F, 2JF- 258.6). Spectrométrie de masse : ESI+ 1068 (M+K)+, 1052 (M+Na)+, 1030 (M+H)+. Synthèse de 24b (Fig. 12) Sur une suspension du difluoroacide dérivé du galactose 23b (185 mg ; 0,291 mmol ; 1 éq.), de l'amine dérivé de la déméthylépipodophyllotoxine 15 (130 mg ; 0,321 mmol ; 1,1 éq.), d'HOBT (42 mg ; 0,316 mmol ; 1,05 éq.), d'NMM (61 mg ; 0,597 mmol ; 2,05 éq.) dans le DCM (8 mL) sous atmosphère d'argon, de l'EDCI (60 mg ; 0,306 mmol ; 1,05 éq.) est additionné. La réaction est agitée à température ambiante pendant quatre jours. L'eau (10 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 15 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCl (25 mL), séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide blanc. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / acétate d'éthyle dans des proportions de neuf pour un. Le produit désiré pur 24b est obtenu sous forme de solide blanc avec un rendement pondéral de 55 %. -35- Caractérisation de 241) MeO OMe 7 24b OH 3 OBn OHO 15-_ CF2 /21 OBn~ NH 11 O CCM Rf = 0,65 ; élua:nt : dichlorométhane / AcOEt (80 : 20). 5 RMN 1H (CDC13, 300MHz) 2,78-2,91 (m ; 2H ; H2 ; H3) ; 3,39-3,41 (m ; 2H ; H19 x 2) ; 3,67 (s ; 6H ; H7' x 6) ; 3,70-3,86 (m ; 4H ; H11 ; 1116 ; H17 ; H18) ; 4,02-4,08 (m ; 1H ; H15) ; 4,26-4,88 (m ; 10H ; Hl 1 ; H1) ; 5,06 (dd, 1H, 3JH4-H3 4.2, 3JH4-NH 7.1, H4) ; 5,86 (d, 2H, 2JH13-H13 7.2, 1113 x 2) ; 6,17 (s, 2H, H2', H6') ; 6,38 (s, 1H, H8) ; 6,63 (s, 1H, H5) ; 6,79 (d, 1H, 3JNH_H4 7.1, -NH) ; 7,00-7,28 (m, 20H). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 37,1 (C3) ; 41,9 (C2) ; 43,6 (Cl) ; 48,6 (C4) ; 56,5 (2C ; C7' x 2) ; 68,2 (C19) ; 68,8 (C l 1) ; 71,4 (C15) ; 73.0 ; 73, 3 ; 73,4 (C16) ; 74,4 (C17) ; 74,6 ; 75,6 ; 80,7 (C18) ; 96,5 (t ; 2Jc_F 26,3 ; C14) ; 101,7 (C13) ; 107,9 (2C ; C2' ; C6') ; 109,4 (C5) ; 110,2 (C8) ; 127,6 ; 127,6 ; 127,8 ; 127,9 ; 128,0 ; 128,0 ; 128,3 ; 128,4 ; 128,4 ; 128,5 ; 128,5 ; 128,6 ; 128,7 ; 130,2 ; 132,8 ; 134,2 ; 137,7 ; 137,8 ; 138,1 ; 138,4 ; 146,6 (2C ; C3' ; C5') ; 147,6 (C7) ; 148,6 (C6) ; 163,4 (t ; 2Jc_F 28,0 ; C21) ; 174,2 (C12), RMN 19F (CDC13, 282MHz) -118, 3 (d, 1F, 2JF_F 257.5); -119,6 (d, 1F, 2JF_F 257.5).20 -36- Synthèse de 25b (Fig. 12) Sur une suspension du difluoroacide dérivé du galactose 23b (105 mg ; 0,165 mmol ; 1 éq.), de l'amine dérivée de l'épipodophyllotoxine 16 (75 mg ; 0,181 mmol ; 1,1 éq.), d'HOBT (24 mg ; 0,173 mmol ; 1,05 éq.), d'NMM (35 mg ; 0,338 mmol ; 2,05 éq.) dans le dichlorométhane (10 mL) sous atmosphère d'argon, de l'EDCI (34 mg ; 0,173 mmol ; 1,05 éq.) est additionné. La réaction est agitée à température ambiante pendant cinq jours. L'eau (15 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 20 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCl (25 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide blanc. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Le produit désiré pur 25b est obtenu sous forme de solide blanc avec un rendement 15 pondéral de 27 '%. Caractérisation de 25b CCM 20 Rf = 0,90 ; éluant : DCM / AcOEt (80 : 20). RMN 'H (CDC13, 300MHz) 2,79-2,92 (m, 2H, H2, H3) ; 3,39 (dd, 3JH19-H19 7.7, 3JH19-H18 1.3, 21-1, H19 x 2) ; 3,67 (s, 6H, H7' x 6) ; 3,71 (s, 3H, H8' x 3) ; 3,68-3,87 (m, 3H, Hl 1, H16, H18) ; 4,02-4,10 (m, 1H, H15) ; 4,27-4,89 (m, 11H, Hl, H11, H17) ; 5,06 (dd, 1H, 3JH44H3 4.0, 25 3JH4_NH 7.3, H4) ; 5,87 (dd, 2H, 3JH13-H13 6.9, J 1.1, H13 x 2) ; 6,18 (s, 2H, H2', H6') ; 19 18 O 14 - 'OH 0 IS CF2 21 ë Bn - 20 NH 16 MeO 3' 4t OMe 7 OMe 7 25b 8' OBn 17 BnO BnO 11 3 2900154 - 37 - 6,40 (s, 1H, H8) ; 6,64 (s, 1H, H5) ; 6,74 (d, 1H, 3JNH-H4 7.3, -NH) ; 7,15-7,25 (m, 20H). RMN 13C (CDCl3, 75MHz) 36,9 (C3) ; 41,4 (C2) ; 43,4 (Cl) ; 48,2 (C4) ; 55,9 (2C ; C7' x 2) ; 60,5 (C8') ; 67,9 5 (C19) ; 68,4 (C 11) ; 71,1 (C15) ; 72,7 ; 73,0 ; 73,0 (C16) ; 74,0 (C17) ; 74,2 ; 75,2 ; 80,4 (C18) ; 96,1 (t ; `J.c_F 26,8 ; C14) ; 101,3 (C13) ; 107,9 (2C ; C2' ; C6') ; 109,0 (C5) ; 109,8 (C8) ; 127,2 ; 127,2 ; 127,4 ; 127,5 ; 127,6 ; 127,7 ; 128,0 ; 128,1 ; 128,1 ; 128,2 ; 128,2 ; 128,3 ; 132,3 ; 134,3 ; 137,0 ; 137,3 ; 137,4 ; 137,7 ; 138,0 ; 147,3 (C7) ; 148,3 (C6) ; 152,3 (2C ; C3' ; C5') ; 163,0 (t ; 2Jc F 28,0 ; C21) ; 178,8 10 (C12), RMN 19F (CDCl3, 282MHz) -118,4 (d, 1F, 2JF_F 258.6); -119,5 (d, 1F, 2JF_F 258.6). Synthèse du composé 26a (Fig. 13) Dans un ballon, le composé 24a (140 mg ; 0,138 mmol) est dissous dans du méthanol (7 mL) avec du palladium sur charbon et placé sous une atmosphère d'hydrogène. Le mélange est agité pendant une nuit à température ambiante. Le mélange réactionnel est filtré, concentré et purifié par colonne chromatographique sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / méthanol dans des proportions de neuf pour un. Le produit 26a est isolé sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 78 %.25 -38-Caractérisation de 26a CCM Rf = 0,35 ; éluant : DCM / méthanol (80 : 20). RMN 1H (MeOD, 300MHz) 2,96-3,11 (m, 1H, H3) 3,18-3,33 (m, 2H, H2) ; 3,57-3,71 (m, 5H, H18) ; 3,70 (s, 6H, H7' x 6) ; 3,97 (dd., 1H, 2JHII-H11 9.0, 3JHI1-H13 10.9, H11) ; 4,36 (tapp, 1H, 2JH11_ H 11 9.0, H 11) ; 4,58 (d, 1H, 3JH l -H2 5.1, Hl) ; 5,29 (d, 1H, 3JH4_H3 4.5, H4) ; 5,95 (d, 2H, 3JH13-H13 1.6, H13 x 2) ; 6,32 (s, 2H, H2', H6') ; 6,50 (s, 1H, H8) ; 6, 77 (s, 1H, H5). RMN 13C (MeOD, 75MHz) 30,7 (C3) ; 38,6 (C2) ; 42,8 (Cl) ; 44,9 (C4) ; 56,5 (2C ; C7' x 2) ; 61,7 (C19) ; 70,2 (Cl i) ; 70,6 ; 71,9 ; 74,7 ; 75,7 ; 97,7 (t ; 2JC_F 25,7 ; C14) ; 102,9 (C13) ; 109,3 (2C ; C2' ; C6') ; 110.,2 (C5) ; 110,9 (C8) ; 129,7 ; 131,7 ; 134,2 ; 135,8 ; 148,6 (2C ; C3' ; C5') ; 148,8 (C7) ; 149,7 (C6) ; 165,6 (t ; 2JC_F 29,1 ; C21) ; 177,1 (C12). RMN 19F (MeOD, 282MHz) -119,4 (d, 1F, 2JF_F 256.4); -120.7 (d, 1F, 2JF_F 256.4). Spectrométrie de masse : ESI+ 678 (M+Na)+. OH ,iOHO Ç ls/C20 21 OH NH O MeO" OMe 7' 7, OH 26a20 - 39 - Synthèse du composé 27a (Fig. 13) Dans un ballon, le composé 25a (100 mg ; 0,097 mmol) est dissous dans du méthanol (5 mL) avec du palladium sur charbon et placé sous une atmosphère d'hydrogène. Le mélange est agité pendant une nuit à température ambiante. Le mélange réactionnel est filtré, concentré pour ainsi donner le produit 27a désiré sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 90 %. Caractérisation de 27a OH 5 11 3 C O 8 MeO 3' 4 OMe OMe 7 10 27a 8' CCM Rf = 0,89 ; éluant : DCM / méthanol (80 : 20). RMN 1H (MeOD, 300MHz) 2,87-3,07 (m, 1H, H3) ; 3,13-3,28 (m, 2H, H2) ; 3,49-3,60 (m, 5H) ; 3,60 (s, 9H, H7' 15 x 6, H8' x 3) ; 3,90 (dd, 1H, 2JH11_H11 9.0, 3JH11_ 13 10.7, Hi l) ; 4,28 (tapp, 1H, 2JHu-u11 9.0, H11) ; 4,52 (d, 1H, 3.4412 5.2, H1) ; 5,22 (d, 1H, 3JH4_H3 4.6, H4) ; 5,87 (d, 2H, 3JH13-E113 1.0, H13 x 2) ; 6,28 (s, 2H, H2', H6') ; 6,42 (s, 1H, H8) ; 6,70 (s, 1H, H5). RMN 13C (MeOD, 75MHz) 20 RMN 19F (MeOD, 282MHz) 25 Anomère majo : -119,4 (d, 1F, 2JF_F 257.5) ; -120,6 (d, 1F, 2JF_F 256.4). 39,7 (C3) ; 43,7 (C2) ; 46,1 (Cl) ; 49,9 (C4) ; 57,6 (2C ; C7' x 2) ; 62,1 (C8') ; 62,8 (C19) ; 71,3 (C11) ; 71,6 ; 72,9 ; 75,8 ; 76,8 ; 97,1 (t ; 2JC_F 26,3 ; C14) ; 104,0 (C13) ; 110,5 (:2C ; C2' ; C6') ; 111,3 (C5) ; 111,9 (C8) ; 130,8 ; 134,9 ; 138,2 ; 139,2 ; 150,0 (C7) ; 150,9 (C6) ; 154,9 (2C ; C3' ; C5') ; 165,0 (t ; 2JC_F 28,6 ; C21) ; 178,0 (C12). -40- Anomère mino : -119,9 (d, 1F, 2JF_F 257.5) ; -121,1 (d, 1F, 2JF_F 256.4). Spectrométrie de masse : ESI+ 708 (M+K)+, 692 (M Na)+, 670 (M+H)+. Synthèse de 26b (Fig. 13) Dans un ballon, le composé 24b (95 mg ; 0,094 mmol) est dissous dans du méthanol (8 mL) avec du palladium sur charbon et placé sous une atmosphère d'hydrogène. Le 10 mélange est agité pendant une nuit à température ambiante. Le mélange réactionnel est filtré, concentré et purifié par colonne chromatographique sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / méthanol dans des proportions de huit pour deux. Le produit 26b est isolé sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral 15 de 89%. Caractérisation de 26b 20 RMN I H (MeOD, 300MHz) Anomère 1 : 2,93-3,09 (m ; 1H ; H3) ; 3,16-3,27 (m ; 2H ; H2) ; 3,51-3,61 (m ; 1H ; H19) ; 3,71 (s ; 6H ; H7' x 6) ; 3,70-3,78 (m ; 2H ; H19) ; 3,85-4,16 (m ; 3H ; H11) ; 4,32-4,36 (m ; 2H ; H11) ; 4,57 (d, 1H, 3JH1-H2 5.1, H1) ; 5,32 (d, 1H, 3JH4-H3 4.6, H4) ; 5,94 (s, 2H, H13 x 2) ; 6,33 (s, 2H, H2', H6') ; 6,49 (s, 1H, H8) ; 6,77 (s, 1H, 25 H5). OH MeO' OMe 7 26b OH >> O5 -41 - Anomère 2 : 5,26 (d, 1H, 3JH4_H3 4.5, H4); 6,85 (s, 1H, H5). RMN 13C (MeOD, 75MHz) 39,0 (C3) ; 43,2 (C2) ; 45,3 (Cl) ; 50,1 (C4) ; 56,9 (2C ; C7' x 2) ; 64,4 (C 19) ; 70,6 (Cl i) ; 72,4 ; 76,2 ; 77,7 ; 82,2 ; 103, 3 (C13) ; 109,7 (2C ; C2' ; C6') ; 110,5 (C5) ; 111,3 (C8) ; 130,2 ; 132,2 ; 134,7 ; 136,2 ; 149,0 (2C ; C3' ; C5') ; 149,2 (C7) ; 150,1 (C6) ; 177,6 (C12), RMN'9F (MeOD, 282MHz) Anomère 1 : -119,1 (d, 1F, 2JF_F 257.6); -120,3 (d, 1F, 2JF_F 257.6). Anomère 2 : -121,4 (d, 1F, 2JF_F 256.4); -123,1 (d, 1F, 2JF_F 256.4). Spectrométrie de masse : ESI+ 694 (M+K)+, 678 (M+Na)+, 656 (M+H)+. Synthèse du composé 27b (Fig. 13) Dans un ballonä le composé 25b (42 mg ; 0,041 mmol) est dissous dans du méthanol (5 mL) avec du palladium sur charbon et placé sous une atmosphère d'hydrogène. Le mélange est agité pendant une nuit à température ambiante. Le mélange réactionnel est filtré, concentré pour ainsi donner le produit 27b désiré sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 96 %. Caractérisation de 27b 19 18 MeO 4' OMe 7 OMe 7 27b 8' OH 8 O O 12 11 HO 17 3 C 2900154 - 42- CCM Rf = 0,70 ; éluant : dichlorométhane / méthanol (80 : 20). RMN 'H (MeOD, 300MHz) Anomère majoritaire : 2,92-3,09 (m, 1H, H3) ; 3,17-3,23 (m, 1H, H2) ; 3,51 (dd, 1H, 5 ZJH19-H19 7.1, 3JH19-H18 2.7, H19) ; 3,61 (dd, 1H, 2JH19-H19 7.1, 3JH19-H18 3.6, H19) ; 3,68 (s, 9H, H7' x 6, H8' x 3) ; 3,65-3,76 (m, 1H) ; 3,85-4,13 (m, 3H, Hi l) ; 4,31 (dapp, 2H, 2JH11-H11 7.7, Hl 1) ; 4,58 (d, 1H, 3JH1_H2 5.1, H1) ; 5,31 (d, 1H, 3JH4_H3 4.5, H4) ; 5,92 (s, 2H, H13 x 2) ; 6,34 (s, 2H, H2', H6') ; 6,46 (s, 1H, H8) ; 6, 75 (s, 1H, H5) ; 8,82 (d, 1H, 3JNH-H4 8.0, NH),. 10 Anomère minoritaire : 5,25 (d, 1H, 3JH4_H3 4.3, H4) ; 6,84 (s, 1H, H5), RMN 13C (MeOD, 75MHz) Anomère majoritaire : 39,1 (C3) ; 43,0 (C2) ; 45,5 (Cl) ; 50,0 (C4) ; 56, 9 (2C ; C7' x 2) ; 62,3 (C8') ; 64,4 (C19) ; 68,9 (C11) ; 72,4 ; 76,2 ; 77, 7 ; 82,2 ; 103,4 (C13) ; 109,8 (2C ; C2' ; C6') ; 110,6 (C5) ; 111,2 (C8) ; 130,2 ; 134,3 ; 137,6 ; 138,5 ; 149,3 15 (C7) ; 150,2 (C6) ; 154,2 (2C ; C3' ; C5') ; 176,2 (C12). Anomère minoritaire : 62,3 (C19) ; 68,8 ; 70,5 ; 72,7 ; 74,0 ; 111,6 (C5). RMN 19F (MeOD, 282MHz) Anomère majoritaire : -121,4 (dd, 1F, 2JF_F 256.4, 2JF_F 12.9) ; -123,0 (dd, 1F, 2JF-F 256.4, 2JF_F 12.6). 20 Anomère minoritaire : -119,1 (dd, 1F, 2JF-F 257.5, 2JF_F 12.6) ; -120,2 (dd, 1F, 2JF..F 257.5, 2JF-F 12.6). - 43 Synthèse du composé 28a (Fig. 14) Dans un ballon, le composé 26a (65 mg ; 0,10 mmol, 1 éq.) est dissous dans du nitrométhane McNO2 (3 mL) avec de l'acide paratoluène sulphonique APTS (5 mg ; 0,025 mmol ; 0,25 éq.) et du diméthoxyéthane (270 mg ; 3,0 mmol ; 30 éq.) à température ambiante sous atmosphère inerte. Le mélange réactionnel est agité pendant trois heures. De l'eau (10 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du chloroforme CHC13 (2 x 20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et lavées avec une solution saturée de chlorure de sodium NaCl (20 mL), séchées sur lo Na2SO4 et concentrées sous vide pour donner une huile jaune. Le brut réactionnel est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / méthanol dans des proportions de neuf pour un. Le produit 28a est isolé sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 95%. 15 Caractérisation de 28a 11 3 8 O MeO OMe 7' 7' OH 28a CCM 20 Rf = 0,50 ; éluant : dichlorométhane / méthanol (90 : 10). RMN I H (MeOD, 300MHz) 1,27 (d, 3H, 3JH21-1120 5.0, H21 x 3) ; 2,98-3,09 (m, 1H, H3) ; 3,11-3,32 (m, 2H, H2 + H18) ; 3,45-3,48 (m, 1H, H19) ; 3,71 (s, 6H, H7' x 6) ; 3,72-3,87 (m, 5H, H11, H15, H16, H17, H19) ; 4,33 (tapp, 1H, 2JH11-H11 7.7, H11) ; 4,57 (d, 1H, 3JH1-H2 4.9, H1) ; 25 4,74 (q, 1H, 3JH20-H21 5.0, H20) ; 5,31 (d, 1H, 3JH4-H3 4.5, H4) ; 5,94 (d, 2H, 3JH13-H13 1.4, H13 x 2) ; 6.,33 (s, 2H, H2', H6') ; 6,49 (s, 1H, H8) ; 6,75 (s, 1H, H5). L - 44 - RMN 13C (MeOD, 75MHz) 21,0 (C21) ; 38,8 (C3) ; 43,2 (C2) ; 45,3 (Cl) ; 49,8 (C4) ; 57,1 (2C ; C7' x 2) ; 65,3 ; 69,4 (C19) ; 70,4 (Cl 1) ; 72,9 ; 73,1 ; 81,6 (C18) ; 98,6 (t ; 2Jc_F 26,3 ; C14) ; 101,7 (C20) ; 103,4 (C13) ; 109,8 (2C ; C2' ; C6') ; 110,6 (C5) ; 111,4 (C8) ; 130,1 ; 132,1 ; 134,7 ; 136,2 ; 149,0 (2C ; C3' ; C5') ; 149,1 (C7) ; 150,1 (C6) ; 165,5 (t ; 2JC_ F 28,0 ; C23) ; 177,4 (C12). RMN 19F (MeOD, 282 MHz) -119,7 (d, 1F, 2JF_F 256.4); -122,3 (d, 1F, 2JF_F 257.5). Spectrométrie de masse : EST- 680 (M-H). -45- Synthèse du composé 29a (Fig. 14) Dans un ballon, le composé 27a (45 mg ; 0,07 mmol, 1 éq.) est dissous dans du nitrométhane (3 mL) avec de l'APTS (3 mg ; 0,016 mmol ; 0,25 éq.) et du diméthoxyéthane (170 mg ; 1,9 mmol ; 30 éq.) à température ambiante sous atmosphère inerte. Le mélange réactionnel est agité pendant trois heures. De l'eau (10 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du chloroforme CHC13 (2 x 20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et lavées avec une solution saturée de NaCl (20 mL), séchées sur Na2SO4 et concentrées sous vide pour donner une huile jaune. Le brut réactionnel est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / méthanol dans des proportions de neuf pour un. Le produit 29a est isolé sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 87%. Caractérisation de 29a CCM Rf = 0,45 ; éluant : dichlorométhane / méthanol (90 : 10). RMN 1H (MeOD, 300MHz) 1,28 (d, 3H, 3JH21-H2O 5.0, H21 x 3) ; 2,97-3,08 (m, 1H, H3) ; 3,15-3,31 (m, 2H, 112, H18) ; 3,44 (t, 1H, 3JH19-H18 10.1, H19) ; 3,71 (s, 9H, H7' x 6, H8' x 3) ; 3,70-3,96 (m, 4H, H11, H15, H16, H17, H19) ; 4,34 (tape, 1H, 2JHJ I H11 8.8, H11) ; 4,61 (d, 1H, 3JH 1-H2 5.2, Hl) ; 4,73 (q, 1H, 3JH20_H21 5.0, H20) ; 5,30 (d, 1H, 3JH4-H3 4.6, H4) ; 5,94 29a 21 - 46 - (dd, 2H, 3JH13-H13 3.2, J 1.0, H13 x 2) ; 6,35 (s, 2H, H2', H6') ; 6,50 (s, 1H, H8) ; 6,75 (s, 1H, H5). RMN 13C (MeOD, 75MHz) 21,0 (C21) ; 38,9 (C3) ; 43,0 (C2) ; 45,5 (Cl) ; 49,7 (C4) ; 59,9 (2C ; C7' x 2) ; 61, 4 s (C8') ; 65,2 (C19) ; 69,4 ; 70,4 ; 72,9 ; 73,1 ; 81,6 ; 98,6 (t ; 2Jc_F 30,0 ; C14) ; 101,1 (C20) ; 103,4 (C13) ; 109,8 (2C ; C2' ; C6') ; 110,6 (C5) ; 111,3 (C8) ; 130,2 ; 134,5 ; 137,5 ; 138,6 ; [49,3 (C7) ; 150,2 (C6) ; 154,2 (2C ; C3' ; C5') ; 165,5 (t ; 2JC_ F 33,7 ; C23) ; 177,2 (C12). RMN 19F (MeOD, 282MHz) 10 -119,8 (d, 1F, 2JF_F 257.5) ; -121,9 (d, 1F, 2JF_F 257.5). Spectrométrie de masse : ESI+ 734 (M+K)+, 718 (M+Na)+, 696 (M+H)+. 15 - 47 - Synthèse du composé 28b (Fig. 14) Dans un ballon, le composé 26b (45 mg ; 0,068 mmol ; 1éq.) est dissous dans du nitrométhane (3 mL) avec de l'APTS (4 mg ; 0.017 mmol ; 0,25 éq.) et du diméthoxyéthane (190 mg ; 2,1 mmol ; 30 éq.) à température ambiante sous atmosphère inerte. Le mélange réactionnel est agité pendant trois heures. De l'eau (10 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du CHC13 (2 x 20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et lavées avec une solution saturée de NaCl (20 mL), séchées sur Na2SO4 et concentrées sous vide pour laisser une huile jaune. Le Io brut réactionnel est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / méthanol dans des proportions de neuf pour un. Le produit 284 est isolé sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 59%. 15 Caractérisation de 28b 23 NH 11 O 21_ CCM Rf = 0,40 ; éluant : DCM / méthanol (90 : 10). 20 RMN 'H (MeOD, 300MHz) Anomère 1 : 1,29 (d, 3H, 3JH21-H20 4.9, H21 x 3) ; 2,94-3,09 (m, 1H, H3) ; 3,18-3,29 (m, 1H, H2) ; 3,71 (s, 6H, H7' x 6) ; 3,61-4,19 (m, 7H, H11, H15, H16, H17, H18, H19 x 2) ; 4,33 (tapp, 1H, 2JH11-Hil 8.3, H11) ; 4,57 (t, 1H, 3JH1-H2 5.6, H1) ; 4,76 (q, 1H, 3JH204H21 4.9, H20) ; 5,33 (d, 1H, 3JH4_H3 4.5, H4) ; 5,94 (s, 2H, H13 x 2) ; 6,33 (s, 25 2H, H2', H6') ; 6,50 (s, 1H, H8) ; 6,80 (s, 1H, H5). 2900154 - 48 - Anomère 2: 1,27 (d, 3H, 3JH214120 4.8, H21 x 3) ; 1,33 (d, 3H, 3JH21-H20 4.8, H21 x 3) ; 4,95 (q, 1H, 3JE120-H21 4.8, H20) ; 5,07 (q, 1H, 3JH20-H21 4.8, H20) ; 5,25 (d, 1H, 3JH4-H3 4.5, H4) ; 6,34 (s, 2H, H2', H6') ; 6,98 (s, 1H, H5). RMN 13C (MeOD, 75MHz) 5 Anomère 1 : 20,4 (C21) ; 39,1 (C3) ; 43,2 (C2) ; 45,3 (Cl) ; 49,4 (C4) ; 57,1 (2C ; C7' x 2) ; 65,9 ; 67,0 (C 11) ; 70,5 (C19) ; 71, 0 ; 77,4 ; 100,4 (C20) ; 103,3 (C13) ; RMN 19F (MeOD, 282MHz) Anomère 1 : -118,5 (d, 1F, 2JF_F 254.9) ; -121,8 (d, 1F, 2JF_F 256.4). Anomère 2 : -121,6 (d, 1F, 2JF_F 255.4) ; -123,5 (d, 1F, 2JF_F 255.4). Synthèse du composé 29b (Fig. 14) Dans un ballon, le composé 27b (25 mg ; 0,037 mmol ; léq.) est dissous dans du nitrométhane (3 mL) avec de l'APTS (2 mg ; 0,01 mmol ; 0,25 éq.) et du diméthoxyétharre (108 mg ; 1,2 mmol ; 30 éq.) à température ambiante sous atmosphère inerte. Le mélange réactionnel est agité pendant trois heures. De l'eau (10 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du CHC13 (2 x 20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et lavées avec une solution saturée de NaCl (20 mL), séchées sur Na2SO4 et concentrées sous vide pour laisser une huile jaune. Le brut réactionnel est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / méthanol dans des proportions de neuf pour un. Le produit 29b est isolé sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 58%. 109,7 (2C ; C2' ; C6') ; 110,5 (C5) ; 111,3 (C8) ; 130,2 ; 132,2 ; 134,7 ; 149,0 (2C ; C3' ; C5') ; 149,3 (C7) ; 150,1 (C6) ; 177,1 (C12). Anomère 2 : 20,6 (C21) ; 21,5 (C21) ; 67,4 (C 11) ; 70,7 (C19) ; 76,9 ; 77,1 ; 79,9 ; 82,4 ; 110,8 (C5). 30 -49-Caractérisation de 29b CCM Rf = 0,58 ; éluant : dichlorométhane / méthanol (90 : 10). RMN 1H (MeOD, 300MHz) Anomère 1 : 1,29 (d, 31-1, 3JH21-112O 5.0, H21 x 3) ; 3,00-3,06 (m, 1H, H3) ; 3,21-3,30 (m, 1H, H2) ; 3,71 (s, 9H, H7' x 6, H8' x 3) ; 3,59-4,20 (m, 7H, H11, H15, H16, H17, H18, H19 x 2) ; 4,29-4,38 (m, 1H, F111) ; 4,61 (tapp, 1H, 3JH1-H2 6.7, H1) ; 4,76 (q, 1H, 3JH2O-H21 5.0, H20) ; 5,26 (d, 1H, 3JH4-H3 4.5, H4) ; 5,95 (s, 2H, H13 x 2) ; 6,36 (d, 2H, J 2.9, H2', H6') 6,49 (s, 1H, H8) ; 6,89 (s, 1H, H5). Anomère 2 : 1,26 (d, 3H, 3JH21-H2O 4.7, H21 x 3) ; 4,96 (q, 1H, 3JH2O-H21 4.7, H20) ; 5,34 (d, 1H, 3JH4-H3 4.4, H4) ; 6,78 (d, 1H, J 2.6, H5). RMN 13C (MeOD, 75MHz) Anomère 1 : 21,5 (C21 ) ; 39,2 (C3) ; 43,0 (C2) ; 45,5 (Cl) ; 49,1 (C4) ; 56,9 (2C ; 15 C7' x 2) ; 61,4 (C8') ; 65,9 ; 67,0 ; 68,5 ; 69,9 ; 71,0 ; 77,2 ; 100,4 (C20) ; 103,3 (C13) ; 109,9 (2C ; C2' ; C6') ; 110,6 (C5) ; 111,2 (C8) ; 130,1 ; 134,3 ; 137,6 ; 138,6 ; 149,4 (C7) ; 150,2 (C6) ; 154,2 (2C ; C3' ; C5') ; 177,2 (C12), Anomère 2 : 20, 4 (C21) ; 20,6 (C21) ; 70,7 ; 76,6 ; 76,9 ; 77,4 ; 103,9 (C13) ; 109,8 (2C ; C6' ; C2') ; 110,8 (C5), 20 RMN 19F (MeOD, 282MHz) Anomère 1 : -119,6 (d, IF, 2JF-F 256.4) ; -121,7 (d, 1F, 2JF-F 257.5). Anomère 2 : -121,7 (d, 1 F, 2JF-F 257.4) ; -124,0 (d, 1F, 2JF-F 256.4). Spectrométrie de masse : ESI694 (M-H). 25 - 50 - Synthèse du composé 30a (Fig. 15) Le produit 25a (30 mg ; 0.051 mmol ; 1 éq.) est dissous dans 5 mL de THF. Le complexe BH3.THF 1M (0.10 mL ; 0.102 mmol ; 2 éq.) est additionné sur le mélange à température ambiante, et la réaction est portée à reflux pendant trois heures. On laisse le milieu réactionnel revenir à température ambiante. Une solution d'HCl 1N (10 n1L) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du DCM (3 x 10 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCl (15 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide blanc. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec un mélange DCM / AcOEt (90 : 10) comme éluant pour donner le produit désiré pur 30a sous forme de solide blanc avec un rendement pondéral de 46 %. Caractérisation de 30a CCM Rf = 0,66 ; éluant : DCM / AcOEt (90 : 10). RMN 1H (CDC13, 300MHz) 2,62-2,78 (m, 1H, H3) ; 3,07 (dd, 1H, 3J 5.2, 14.1, H2) ; 3,52-3,58 (m, 3H, H16, H19 x 2) ; 3,66 (s, 6H, H7' x 6) ; 3,72 (s, 3H, H8' x 3) ; 3,85-3,99 (m, 4H, H4, H15, H17, H18) ; 4,16-4,21 (m, 2H, H11 x 2) ; 4,38-4,53 (m, 4H, H1) ; 4,71-4,82 (m, 7H) ; 5,86 (d, 2H, 2J1313_,-113 14.7, H13 x 2) ; 6,17 (s, 2H, H2', H6') ; 6,38 (s, 1H, H8) ; 6,79 (s, 1H, H5) ; 7,12-7,31(m, 20H). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 19 18 0 OH BnO' 14 CF2 17 15 20 BnO" 16 ''OBn OBn O 13 O 12 O 7 OMe 7 8' 30a - 51 -39,0 (C3) ; 41,4 (C2) ; 44,1 (Cl) ; 56,6 (2C ; C7' x 2) ; 57,0 (C4) ; 61,1 (C8') ; 68,7 (C l 1) ; 68,9 (C19) ; 72,1 (C15) ; 73,5 ; 75,4 ; 75,7 ; 76,4 ; 78,0 (C16) ; 78,8 (C17) ; 83,8 (C18) ; 96,7 (t ; 2JC_F 9,1 ; C14) ; 101,6 (C13) ; 108,5 (2C ; C2' ; C6') ; 108,9 (C5) ; 110,3 (C8) ; 121,7 ; 127,8 ; 127,9 ; 128,0 ; 128,1 ; 128,2 ; 128,5 ; 128,5 ; 128,6 ; 128,7 ; 131,7 ; 135,6 ; 137,3 ; 137,7 ; 138,0 ; 138,3 ; 138,5 ; 147,5 (C7) ; 148, 1 (C6) ; 152,6 (2C ; C3' ; C5') ; 175,2 (C12). RMN 19F (CDC13, 282MHz) -115,5 (dtapp, IF, 2JF_F 252.2, 3JF_H 11.8) ; -117,2 (dtapp, IF, 2JF_F 252.2, 3JF_H 16.1). Synthèse du composé 31a (Fig. 16) Sur une suspension du difluoroacide dérivé du glucose 23a (48 mg ; 0.075 mmol ; 1.00 éq.), de l'amine de l'épipodophyllotoxine 17 (31 mg ; 0.082 mmol ; 1.10 éq.), d'HOBT (11 mg ; 0.079 mmol ; 1.05 éq.), de NMM (16 mg ; 0.154 mmol ; 2.05 éq.) dans le dichlorométhane (7 mL) sous atmosphère d'argon, de 1'EDCI (16 mg ; 0.079 mmol ; 1.05 éq.) est additionné. La réaction est agitée à température ambiante pendant 7 jours. L'eau (10 mL) est ajoutée, et la phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 10 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCl (10 mL), séchées sur sulfate de magnésium MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide blanc. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / acétate d'éthyle dans des proportions de 9 pour 1. Le produit désiré pur 31a est obtenu sous forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 29 %. CCM Rf = 0.48, éluant : DCM / AcOEt (80 : 20). RMN 1H (CDC13, 300MHz) 2.52 (s, 1H, H2)., 2.65 (s, 3H, H14 x 3), 2.83 (dd, 1H, 3JH3_H11 9.3, 5.0, H3), 3.53-3.80 (m, 3H, H19 x 2, H16), 3.75 (s, 6H, H7' x 6), 3.80 (s, 3H, H8' x 3), 3.88 (s, 1H, H4), 3.93-4.21 (m, 5H, H11 x 2, H15, H17, H18), 4.30 (s, 1H, H1), 4.32-4.88 (m, 8H), - 52 - 5.93 (dd, 2H, 2JH13_H13 6.3, J 1.2, H13 x 2), 6.29 (s, 2H, H2', H6'), 6.48 (s, 1H, H8), 6.61 (s, 1H, H5), 7.12-7.33 (m, 20H). RMN 13C (CDC13, 75MHz) 27.6 (C14), 40.3 (C3), 46.5 (Cl), 51.3 (C2), 56.7 (2C, C7' x 2), 61.2 (C8'), 62.4 (C4), 66.4 (C11), 68.5 (C19), 73.0 (C15), 73.7, 75.4, 75.6, 76.3, 77.7 (C16), 78.4 (C17), 83.1 (C18), 101.0 (C13), 105.8 (2C, C2', C6'), 107.1 (C5), 112.0 (C8), 127.3, 127.4, 127.6, 127.9, 128.1, 128.2, 128.2, 130.9, 136.8, 137.1, 137.6, 137.8, 137.9, 139.3, 145.6 (C7), 147.6 (C6), 153.1 (2C, C3', C5'), 174.3 (C12). RMN 19F (CDC13, 282MHz) -117.9 (d, 1F, 2JF_F 256.4), -119.7 (d, 1F, 2JF_F 256.4). Caractérisation de 31a 19 18 Q OH 0 BnO~ 14 ~ i CF2C 21 17 15 20 BnO` 16 'O13n OBn 13 Me N' 14 8' 31a -53 - Résultats préliminaires de cytotoxicité Les premiers tests de cytotoxicité ont été réalisés sur différentes lignées cellulaires telles que les cellules KB, PC3, MCF7 et MCF7R, SF268, HL60, HT29 ,A549 à des concentrations d[e 10-5M en triplicate. La podophyllotoxine 1 et l'étoposide 2 ont également été testés dans les mêmes conditions comme références. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de la croissance cellulaire. 1 2 26a 28a 27a 29a 26b 28b 27b 29b 30a 31a KB 90 84 43 54 91 66 12 15 12 0 94 22 PC3 65 47 10 31 63 8 8 6 8 3 - - MCF7 55 5;7 37 32 53 40 20 33 20 7 - - MCF7R 55 22 35 49 70 44 16 20 10 7 - SF268 74 82 7 28 65 11 7 17 7 6 - - HL60 74 75 17 43 79 17 19 12 19 0 -HT29 84 79 10 14 87 17 13 17 8 6 - - A549 83 65 23 21 78 6 7 10 6 1 - On observe que sur ce type de cellules le composé 27a possède une activité comparable à celle de l' étoposide et de la podophyllotoxine, et même meilleure sur certaines lignées cellulaires. De même, le composé 30a testé sur cellules KB présente une cytotoxicité voisine de l'étoposide et de la podophyllotoxine. Les valeurs d'IC50 sont exprimées en M sur cellules KB en duplicate et ont été réalisé pour les deux composés leader à savoir 27a et 30a en parallèle avec la podophyllotoxine. IC5o (liM) Podophyllotoxine 1 0,015 / 0,022 27a 3,45 / 2,55 30a 0,135 / 0,175 - 54 - On observe donc pour ces deux composés des valeurs intéressantes en terme de cytotoxicité et d'IC50 de l'ordre nanomolaire pour le composé 30a ce qui fait de ces composés de bons agents de chimiothérapie pour le traitement du cancer. Ces composés sont actuellement sujet à des tests in vivo. Revendications 1. où R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, acétyle, benzoyle, R' et R2. identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène 10 ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle, tertiobutyldiphénylsilyle ou un groupe acétal, du type CR'R", avec R'et R", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, 15 benzyle, thiophène, R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle , tertiobutyldiphénylsilyle, 1. Composé glycoconjugué gem-difluoré de formule générale I : RIO RO R3O R4 O-56- R4 représente OR"', NGR'GR", N_;, ou un phtalimide avec R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle, tertiobutyldiphénylsilyle, GR'et GR", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R5 représente un groupe hydroxyle libre ou protégé ou un halogène, R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, acétyle, benzyle, PO3H, PO3Na, ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat éventuellement pharmaceutiquement acceptable. OR6 dans laquelle R, RI, R2, R3, R4, R5 et R6 sont tels que définis dans la formule I , ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat éventuellement pharmaceutiquement acceptable. 2. Composé selon la revendication 1 de formule générale II : RIO O20-57- 3. Composé de formule générale III obtenu par réaction d'un composé selon la revendication 1 ou 2 : o-'\/"'"""I 4. Utilisation d'un composé selon la revendication 1 ou 2 pour la synthèse d'un composé de formule générale III : RIO OR6 où R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle., acétyle, benzoyle, R' et R2, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle, tertiobutyldiphénylsilyle ou un groupe acétal, du type CR'R",- 59 - avec R'et R", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, benzyle, thiophène, R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle , tertiobutyldiphénylsilyle, R4 représente OR"', NGR'GR", N_;, ou un phtalimide avec R"' représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, pivaloyle, trialkylsilyle, tertiobutyldiphénylsilyle, GR'et GR", identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R5 représente un groupe hydroxyle libre ou protégé ou un halogène, R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, acétyle, benzyle, PO3H, PO3Na, ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat éventuellement pharmaceutiquement acceptable. 5. Procédé de préparation d'un composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage entre un composé de formule IV : MeO/\\/\O M e o R6 25 dans laquelle R6 est tel que défini dans la formule I et un composé de formule V :- 60 - CF2COOH R4 dans laquelle R', R2, R3, R4, R5 sont tels que définis dans la formule I . 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que ledit composé de formule IV est obtenu par épimérisation puis substitution de la fonction alcool en position 4 par un groupe azido réduit ultérieurement en amine. 7. Procédé selon la revendication 5, 1 o caractérisé en ce que ledit composé de formule V est obtenu par un composé intermédiaire de formule VI : RO R30 ~, OH R4 dans laquelle R'., R2, R3, R4 sont tels que définis dans la formule I. 15 8. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que, lorsque dans le composé de formule V, R5 représente un groupe hydroxyle, il comprend, en outre, une oxydation en lactone du composé de formule VI suivi d'un réaction de Reformatsky. 20 9. Composition, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins un composé l'une des revendications 1 à3.- 61 - 10. Médicament contenant en tant que principe actif au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 3. 11. Utilisation d'au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 3 pour 5 la préparation de médicaments pour le traitement de cancers.