Brevet FR2908408A1 — publié le 20080516

NOUVEAUX DERIVES DE LA TRIPHENYLAMINE UTILES COMME FLUOROPHORES EN BIOLOGIE, NOTAMMENT POUR LA MICROSCOPIE BIPHOTONIQUE DESCRIPTION DOMAINE TECHNIQUE La présente invention se rapporte à de nouveaux dérivés de la triphénylamine utiles comme fluorophores en biologie, notamment pour la microscopie biphotonique. Elle se rapporte également à des compositions comprenant ces dérivés, à l'utilisation de ces compositions ainsi que des dérivés eux-mêmes pour le marquage de molécules biologiques (ou "biomolécules") du type acides nucléiques, oligonucléotides, protéines, polypeptides, plasmides, etc, en vue de leur observation notamment par microscopie biphotonique, et à des biomolécules marquées par lesdits dérivés. La présente invention trouve application dans tous les domaines d'utilisation des techniques d'imagerie biologique et médicale comme, par exemple, la recherche fondamentale pour l'étude structurelle ou fonctionnelle des systèmes biologiques, la recherche appliquée à visée clinique ou thérapeutique, ou encore le diagnostic et le dépistage médical. ETAT DE LA TECHNIQUE ANTERIEURE La microscopie de fluorescence est un outil couramment utilisé par les biologistes en raison de ce qu'elle permet de détecter, de quantifier et de fournir 2908408 2 des images aussi bien des composants naturels des systèmes biologiques que d'éléments étrangers à ces systèmes. Elle repose sur l'aptitude que présentent 5 certains composés d'émettre un rayonnement spécifique lorsqu'ils sont excités par un rayonnement électromagnétique incident d'une longueur d'onde particulière. Ainsi, l'absorption d'un photon incident par le composé lui permet de passer d'un état non excité à un état 10 excité. Le composé retourne ensuite à l'état non excité soit par désexcitation non radiative, auquel cas il n'y a pas de fluorescence, soit par désexcitation radiative avec émission d'un photon fluorescent qui peut être détecté. 15 Peu de composés naturellement présents chez les êtres vivants ont des propriétés intrinsèques de fluorescence susceptibles d'être exploitées à des fins analytiques car l'intensité du rayonnement émis est généralement trop faible et la coloration trop peu 20 sélective. C'est la raison pour laquelle les biologistes utilisent des colorants particuliers, dotés de propriétés fluorescentes les fluorophores ou fluorochromes. On parle alors de fluorescence secondaire. 25 Certains fluorophores ont la particularité de se fixer spécifiquement sur des biomolécules . ainsi, par exemple, le 4,6-diaminido-2-phénylindole (ou DAPI), qui fluoresce dans le bleu lorsqu'il est excité par une lumière violette, se fixe spécifiquement sur 30 l'ADN. D'autres fluorophores n'ont pas cette aptitude et nécessitent d'être préalablement greffés sur une 2908408 3 molécule spécifique de celle que l'on cherche à détecter. C'est le cas, par exemple, de la rhodamine et de la fluorescéine que l'on peut utiliser soit pour détecter un antigène, auquel cas on les greffe sur un 5 anticorps spécifique de cet antigène, soit comme traceurs de lignage cellulaire, auquel cas on les greffe sur une molécule pourvue d'une bonne stabilité dans les milieux biologiques comme le dextran. En l'espace de quelques décennies, la 10 microscopie de fluorescence s'est considérablement développée grâce à l'arrivée de nouvelles technologies optiques dont la microscopie confocale à balayage laser et, plus récemment, la microscopie de fluorescence par excitation à deux photons, encore appelée microscopie 15 biphotonique. Actuellement, la microscopie biphotonique est, de toutes les techniques de microscopie de fluorescence, celle qui se développe le plus dans le domaine de la biologie. Son principe consiste à 20 apporter simultanément deux photons d'énergie identique à un composé pour produire une excitation équivalente à celle qu'aurait entraînée un photon unique de haute énergie. Pour que le procédé soit efficace, il est nécessaire que les photons parviennent au composé dans 25 un intervalle de temps très réduit, d'environ 10-15 secondes, ce qui a été rendu possible par l'utilisation de sources de lumière laser produisant des impulsions ultra-brèves et très intenses. La microscopie biphotonique présente de 30 nombreux avantages. En effet, les processus de photo-blanchiment et de phototoxicité, souvent limitants en 2908408 4 microscopie monophotonique, sont ici limités au maximum. De plus, les photons d'excitation, qui sont typiquement situés dans l'infrarouge proche (750-900 nm), sont moins énergétiques que les photons 5 employés en microscopie monophotonique. Il en résulte que le rayonnement d'excitation est moins destructeur pour des échantillons biologiques et qu'il pénètre plus profondément dans les tissus jusqu'à 0,5 mm environ. Enfin, la microscopie biphotonique a une résolution 10 spatiale aussi bonne que celle de la microscopie confocale à balayage laser, c'est-à-dire de l'ordre du micromètre. Il est à noter que le principe d'une excitation à plusieurs photons ne se limite pas à une 15 excitation biphotonique et que des expériences de microscopie triphotonique ont déjà été réalisées avec succès. Actuellement, les fluorophores utilisés en microscopie biphotonique sont les mêmes que ceux 20 utilisés en microscopie monophotonique. Or, ces fluorophores ont de médiocres propriétés de fluorescence à deux photons, notamment en termes de section efficace d'absorption, ce qui limite l'étendue des applications de la microscopie biphotonique en 25 biologie. Il serait donc souhaitable de pouvoir disposer de fluorophores mieux adaptés à la fluorescence biphotonique et, en particulier, à une utilisation de cette technique pour l'observation des 30 systèmes biologiques. 2908408 5 Au cours de ces dernières années, les propriétés d'absorption à deux photons des dérivés de la triphénylamine ont fait l'objet d'un certain nombre de travaux et des résultats notables ont été obtenus en 5 milieux organiques pour des applications concernant le domaine des matériaux et l'optoélectronique. On peut ainsi citer : ^ les travaux de Chung et al. (J. Phys. Chem. B 1999, 103, 10741-10745 [1]) portant sur trois 10 dérivés obtenus en fonctionnalisant respectivement un, deux ou les trois groupes phényles de la triphénylamine par un enchaînement de trois cycles aromatiques dont un cycle oxadiazole, via un groupe vinylique ; ^ ceux de Porrès et al. (Organic Letters 15 2004, 6(1), 47-50 [2]) portant sur une série de dérivés issus de la fonctionnalisation des trois groupes phényles de la triphénylamine par un groupe fortement électro-attracteur, via un groupe acétylénique ; ^ ceux de Yang et al. (Organic Letters 20 2004, 6(9), 1389-1392 [3]) portant sur trois dérivés obtenus en fonctionnalisant les trois groupes phényles de la triphénylamine par un ou plusieurs noyaux aromatiques, via un groupe éthylénique ; et enfin ^ ceux de Yan et al. (J. of Molecular 25 Structure 2005, 733, 83-87 [4]) portant sur les propriétés spectrales d'un dérivé obtenu par fonction- nalisation des trois groupes phényles de la triphénylamine par des groupes pyridinyles, via un groupe vinylique. 30 Toutefois, tous ces dérivés présentent un certain nombre de caractéristiques qui s'opposent à 2908408 6 leur utilisation comme marqueurs de systèmes biologiques, en particulier une taille élevée de nature à perturber le comportement des biomolécules, une insolubilité dans l'eau et l'absence de fonctionnalités 5 propres à permettre leur greffage sur des biomolécules pour un usage en fluorescence secondaire. Les Inventeurs se sont donc fixé pour but de développer des fluorophores qui soient parfaitement adaptés à l'utilisation de la fluorescence biphotonique 10 dans le domaine de la biologie. EXPOSÉ DE L'INVENTION Ce but et d'autres sont atteints par la présente invention qui propose, en premier lieu, des composés dérivés de la triphénylamine, utiles comme 15 marqueurs soit en fluorescence directe, soit en fluorescence secondaire et qui répondent à la formule générale (I) ci-après : 20 dans laquelle : R4 représente un atome d'hydrogène ou un groupe lieurgroupe lieur, auquel cas : 1) si R4 représente un atome d'hydrogène, alors (I) 2908408 7 • R1 représente un groupe lieur ou un groupe de formule (II) ci-après : ù(A)aù B ù Qi dans laquelle : 5 * Q1 représente : un groupe hétérocyclique de formule ci-après : R8 10 où R5 représente un groupe hydrocarboné ; l'un quelconque de R6 à R10 représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B, tandis que les autres de R6 à R10 représentent, indépendamment les 15 uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné ; ou un groupe hétérocyclique de formule (ii) ou (iii) ci-après ( i (i) 20 2908408 8 où R5 représente un groupe hydrocarboné ; l'un quelconque de R11 à R17 représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B, tandis que les autres 5 de R11 à R17 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, R12, R14 et R16 pouvant aussi former, respectivement avec R11 et/ou R13r R13 et/ou R15r et avec R15 et/ou R17r un 10 groupe pontant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (iv) ci-après . où l'un quelconque de R18 à R25 représente 15 une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B, tandis que les autres de R18 à R25 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, R19, R21, R23 et R25 20 pouvant aussi former, respectivement avec R18 et/ou R20, R20 et/ou R22, R22 et/ou R24r et avec R24 et/ou R18r un groupe pontant ; ou un groupe hétérocyclique de formule v) ci-après . 9 2908408 R29 5 10 15 (v) 28 R27 où R5 représente un groupe hydrocarboné ; W représente un atome d'oxygène ou de soufre ou un groupe -N (R31) - où R31 est un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, ou un groupe -C (R3i) (R32) - où Rai et R32 sont, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné ; Rio représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B, tandis que R26 à R29 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, R27 pouvant aussi former avec R26 et/ou R28 un groupe pontant, R28 pouvant lui-même former avec R29 un groupe pontant ; * a vaut 0 (auquel cas A est absent) ou 1 (auquel cas A est présent) ; * A et B représentent les groupes ci-après R33 R36 dans lesquels R33 à R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, R33 et (B) R36 2908408 10 R36 pouvant aussi former chacun avec R34 et/ou R35 un groupe pontant ; • lorsque R1 représente un groupe de formule (II) ci-avant, alors R2 représente également un groupe 5 de formule (II) ci-avant tandis que, lorsque R1 représente un groupe lieur, alors R2 représente un groupe de formule (III) ci-après ù(A)aù B ù Q2 dans laquelle : 10 * Q2 représente : un groupe hétérocyclique répondant à l'une quelconque des formules (i) à (v) ci-avant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (vi) ci-après . R8 où R6 à R10 ont la même signification que dans la formule (i) ci-avant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (vii) ou (viii) ci-après R17 R16 R17 15 20 (vi) R16 R14 R13 R11 2908408 11 où R11 à Rn ont la même signification que dans les formules (ii) et (iii) ci-avant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (ix) ci-après . R29 R26 28 R27 où W, R26 à Rio ont la même signification que dans la formule (v) ci-avant ; * a, A et B ont la même signification que précédemment ; • lorsque R1 représente un groupe lieur, alors R3 représente un groupe de formule (III) ci-avant tandis que, lorsque R1 représente un groupe de formule (II) ci-avant, alors R3 représente un 15 atome d'hydrogène ou d'halogène, un groupe hydro- carboné ou un groupe de formule (II) ci-avant ; 2) si R4 représente un groupe lieur, alors R1 et R2 représentent un groupe de formule (III) ci-avant tandis que R3 représente un atome d'hydrogène ou 20 d'halogène, un groupe hydrocarboné ou un groupe de formule (III) ci-avant ; dans laquelle le groupe lieur est un groupe fonctionnel apte à permettre le greffage par réaction chimique du composé sur une biomolécule, ou un groupe hydrocarboné 25 comprenant un tel groupe fonctionnel, et dans laquelle chacun des groupes hydrocarbonés sus-mentionnés peut 5 10 2908408 12 être substitué par un ou plusieurs substituants, identiques ou différents, et comprendre un ou plusieurs hétéroatomes. L'invention a aussi pour objet les isomères 5 de ces composés ainsi que les sels d'addition de ces composés et de leurs isomères. L'expression "l'un quelconque de R6 à R10 représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B" utilisée ci-avant signifie que le 10 groupe hétérocyclique en question est relié directement à B par une liaison covalente impliquant l'un quelconque des atomes de carbone du cycle qui le constitue. De manière similaire, les expressions "l'un 15 quelconque de R11 à R17 représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B" et "l'un quelconque de R18 à R25 représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B" utilisées ci-avant signifient que les groupes hétérocycliques 20 concernés sont reliés directement à B par une liaison covalente impliquant l'un quelconque des atomes de carbone des cycles qui les constituent. Conformément à l'invention, les groupes hydrocarbonés susceptibles d'être utilisés pour R5 à R36 25 dans les groupes de formules (II) et (III) ci-avant ainsi que pour R3 peuvent être des groupes saturés, mono- ou polyinsaturés, aliphatiques (c'est-à-dire linéaires ou ramifiés), mono- ou polycycliques. Comme précédemment mentionné, ces groupes 30 peuvent, d'une part, être substitués par un ou plusieurs substituants, identiques entre eux ou 2908408 13 différents les uns des autres, et, d'autre part, comprendre un ou plusieurs hétéroatomes, auquel cas ce ou ces hétéroatomes peuvent aussi bien former pont dans lesdits groupes hydrocarbonés qu'être portés par eux 5 sous la forme de substituants. Dans le cadre de la présente invention, on entend par "hétéroatome", tout atome autre que de carbone ou d'hydrogène comme, par exemple, un atome d'oxygène, d'azote, de soufre, d'halogène, de 10 phosphore, de bore ou encore de silicium, les atomes d'oxygène, d'azote, de soufre et d'halogène (fluor, iode, chlore, brome) étant les préférés. Ainsi, les groupes hydrocarbonés susceptibles d'être utilisés pour R5 à R36 et pour R3 15 peuvent notamment être : • des groupes alkyle, linéaires ou ramifiés, comme, par exemple, des groupes méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle, tert-butyle, pentyle, isopentyle ou hexyle ; 20 • des groupes alcényle ou alcynyle, linéaires ou ramifiés, comme, par exemple, des groupes éthényle ou éthynyle, propényle ou propynyle, isopropényle ou isopropynyle, butényle ou butynyle, isobutényle ou isobutynyle, sec-butényle ou sec- 25 butynyle, tert-butényle ou tert-butynyle, pentényle ou pentynyle, isopentényle ou isopentynyle ; • des groupes cycloalkyle comme, par exemple, des groupes cyclopentyle ou cyclohexyle ; • des groupes cycloalcényle ou cyclo- 30 alcynyle comme, par exemple, des groupes cyclopentényle 2908408 14 ou cyclopentynyle, un groupe cyclohexényle ou cyclohexynyle ; • des groupes aromatiques à un ou plusieurs cycles fusionnés comme, par exemple, des 5 groupes cyclopentadiényle, phényle, naphtyle, pyrényle ou anthracényle ; • des groupes hétéroaromatiques à un ou plusieurs cycles fusionnés comme, par exemple, des groupes furanyle, pyrrolyle, thiophényle, oxazolyle, 10 pyrazolyle, triazolyle, imidazolyle, triazolyle, pyridinyle, pyranyle, quinolinyle, isoquinolinyle, pyrazinyle ou pyrimidinyle ; ou encore • des groupes dérivés des groupes susmentionnés par une ou plusieurs substitutions, cette 15 ou ces substitutions correspondant, de préférence, à des atomes d'halogène ou à des groupes aliphatiques comprenant au moins un hétéroatome comme, par exemple, un groupe -COOR", -CHO, -OR", -SR", -SCOR", -SO2R", -NR"R", -CONR"R", -C(Hal)3, -OC(Hal)3, -C(0)Hal ou -CN 20 dans lesquels R" et R" représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, tandis que Hal représente un atome d'halogène, de préférence de fluor, de chlore ou de brome. Pour éviter que les composés ne souffrent 25 d'un encombrement stérique, on préfère que les groupes hydrocarbonés susceptibles d'être utilisés pour R5 à R36 ne comportent pas plus de 10 atomes de carbone (substituant(s) inclus) et soient, si possible, des groupes en Cl à C6 et, mieux encore, des groupes en Cl à 30 C4, dans le cas de groupes aliphatiques, ou bien des 2908408 15 groupes à un seul cycle à 5 ou 6 membres dans le cas de groupes cycliques. De manière particulièrement préférée, les groupes hydrocarbonés susceptibles d'être utilisés pour 5 R5 à R36 sont des groupes alkyle en Cl à C4, en particulier méthyle ou éthyle. Conformément à l'invention, les groupes pontants susceptibles d'être formés par : • R12, R14 et R16r respectivement avec Rn 10 et/ou R13r R13 et/ou R15r et avec R15 et/ou R17r dans les groupes de formules (ii), (iii), (vii) et (viii) ; • R19, R2i, R23 et R25 pouvant aussi former, respectivement avec R18 et/ou R20, R20 et/ou R22, R22 et/ou R24r et avec R24 et/ou R18, dans les groupes de 15 formule (iv) ; • R27 avec R26 et/ou R28 et par R28 avec R29 dans les groupes de formules (v) et (ix) ; et par • R33 et R36 avec R34 et/ou R35 dans les groupes A et B ; 20 sont des groupes divalents formés par l'enchaînement de n atomes choisis parmi les atomes de carbone, d'azote, d'oxygène et/ou de soufre et dans lesquels n est avantageusement choisi de sorte que la formation de ces groupes pontants se traduise par la formation de cycles 25 ou d'hétérocycles à 5 ou 6 membres. Ainsi . * les groupes pontants susceptibles d'être formés par R13 avec R14 dans les groupes de formules (ii) et (vii), par R12 avec R13 et par R16 avec Riz dans 30 les groupes de formules (iii) et (viii), par R18 avec R25 et par Rn avec R22 dans le groupe de formule (iv), 2908408 16 par R33 et R36 avec R34 et/ou R35 dans les groupes A et B sont, de préférence, des groupes formés par l'enchaînement de 2 ou 3 atomes ; tandis que * tous les autres groupes pontants 5 susceptibles d'être formés dans les groupes de formules (ii) à (ix), sont, de préférence, des groupes formés par l'enchaînement de 3 ou 4 atomes. Par ailleurs, ces groupes pontants sont, de préférence, des groupes insaturés dont les insatu- 10 rations correspondent typiquement à des doubles liaisons. De préférence, ces doubles liaisons forment, entre elles et/ou avec les autres doubles liaisons présentes dans les composés, un système de doubles liaisons conjuguées. 15 Au surplus, les groupes pontants peuvent être substitués par un ou plusieurs substituants, identiques ou différents, dès lors que l'enchaînement d'atomes qui les forme comprend un ou plusieurs atomes de carbone et/ou d'azote. Ce ou ces substituants 20 correspondent, de préférence, à des atomes d'halogène, à des groupes aliphatiques comprenant au moins un hétéroatome comme, par exemple, des groupes -COOR", - CHO, -OR", -SR", -SCOR", -SO2R", -NR"R", -CONR"R", - C(Hal)3, -OC(Hal)3, -C(0)Hal ou -CN dans lesquels R", 25 R" et Hal ont la même signification que précédemment, ou encore à des groupes neutres comme des groupes alkyle, par exemple méthyle ou éthyle. Pour une utilisation en fluorescence directe, les composés selon l'invention répondent 30 typiquement à la formule générale (I) dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène, R1 représente un 2908408 17 groupe de formule (II) telle que précédemment définie, R2 représente un groupe de formule (II) identique à R1r tandis que R3 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène, un groupe hydrocarboné tel que précédemment 5 défini ou encore un groupe de formule (II) identique à R1 et R2. De tels composés comportent au moins deux atomes d'azote chargés positivement dont les charges sont contrebalancées par des anions. Ces anions peuvent 10 notamment être des ions halogénures comme I-, Cl-, Br-, F-, des ions nitrates, des ions phosphates comme PO43-ou PF6-, des ions carbonates, des ions carboxylates comme CH3COO , des ions sulfites comme 5032 ou HSO3 , des ions sulfates comme 5042- ou HSO4-, des ions 15 sulfonates comme CF3SO3- ou alkyle-SO3-, ou encore des ions BF4-. Pour que ces composés aient une bonne solubilité dans l'eau, le groupe de formule (II) constituant R1 20 préférence, un groupe dans lequel a vaut 0, ce qui signifie que A est absent, tandis que R35 et R36 de B et R2, et éventuellement R3, est, de représentent des alkyle en C1 à C4, atomes d'hydrogène ou des groupes avantageusement méthyle ou éthyle. Bien que, représenter dans ce groupe de formule (II), Q4 l'un quelconque des groupes 25 puisse hétérocycliques de formules (i) à (v) ci-avant, on préfère toutefois qu'il représente soit un groupe de formule (i) telle que précédemment définie, soit un groupe de formule (v) telle que précédemment définie. 2908408 18 Des groupes de formule (II) répondant à ces critères sont typiquement : (a) des groupes de formule (II-1) ci-après R5 R6 R7 5 dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle, tandis que R6 à R9, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; 10 (b) des groupes de formule (II-2) ci-après : R6 dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle, tandis que R6 à R8, R10, Ras et R36 représentent, indépendamment les 15 uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; 2908408 19 (c) des groupes de formule (II-3) ci-après R9 Rio R5 dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle, tandis que R6, 5 R-7, R9, R10r R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à Co, de préférence méthyle ou éthyle ; et (d) des groupes de formule (II-4) ci-après dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle, tandis que R26 à R29, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe 15 alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle. Dans le cadre de leurs travaux, les Inventeurs ont constaté que les composés de formule générale (I) dans laquelle au moins R1 et R2 représentent un groupe de formule (II-5) ci-après : 10 20 2908408 20 (II-5) dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à Co, de préférence méthyle ou éthyle, et qui correspond à la formule (II-3) ci-avant où R6 = R7 = R9 = Rio = R35 = R36 5 = H, présentent un ensemble de propriétés rarement réunies par les fluorophores classiquement utilisés en biologie, à savoir : ^ une bonne solubilité dans l'eau et, donc, dans les milieux biologiques ; 10 ^ une excellente résistance aux effets des irradiations lumineuses (ni photoblanchiment, ni photo-dégradation) ; ^ une fluorescence dans le rouge qui, d'une part, ne risque pas d'interférer avec les signaux 15 émis dans le vert par les composants cellulaires qui fluorescent naturellement et, d'autre part, est moins nocive pour les cellules que des fluorescences dans le bleu et le vert ; ^ une grande section efficace d'absorption 20 à deux photons ; et surtout, ^ une affinité particulièrement élevée pour l'ADN dans des conditions analogues aux conditions physiologiques, se manifestant par une forte exaltation de leur fluorescence en présence de cette biomolécule 25 et conférant à ces composés un intérêt tout particulier pour le marquage de l'ADN. Aussi, ces composés sont-ils particulièrement préférés pour une utilisation en fluorescence directe. 2908408 SP 2964 SL 21 Il s'agit notamment de ceux dans lesquels R1 et R2 sont tous deux un groupe de formule (II-5) où Rb représente un groupe méthyle, tandis que R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe de formule (II-5) 5 identique à R: et R2. A titre d'exemples de tels composés, on peut citer les halogénures et, en particulier, les iodures de bis-[4-(2-N-méthyl-pyridinium-4-yl-vinyl)-phényl]phénylamine et de tris-[4-(2-N-méthylpyridinium- 10 4-yl-vinyl)phényl]amine. Pour une fluorescence secondaire, les composés selon l'invention répondent typiquement à la formule générale (I) dans laquelle : • soit R4 représente un atome d'hydrogène, 15 auquel cas R1 représente un groupe lieur, R2 représente un groupe de formule (III) telle que précédemment définie et R3 représente un groupe de formule (III) identique à R, • soit R4 représente un groupe lieur, 20 auquel cas R, représente un groupe de formule (III) telle que précédemment définie, R2 représente un groupe de formule (III) identique à R1i tandis que R3 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène, un groupe hydrocarboné tel que précédemment défini ou 25 encore un groupe de formule (III) identique à R1 et R2. Les Inventeurs ayant constaté que la nature du groupe lieur n'a pas ou que très peu d'incidence sur les propriétés de fluorescence des composés selon l'invention, le groupe lieur ou le groupe fonctionnel 30 que comporte le groupe lieur lorsque ce dernier est un groupe hydrocarboné peut être choisi parmi de très 2908408 22 nombreux groupes fonctionnels, pour autant qu'ils soient capables de réagir chimiquement avec un groupe fonctionnel appartenant à la ou aux biomolécules qu'il entend marquer par ces composés. 5 Une liste exhaustive des groupes lieurs susceptibles d'être utilisés ne peut donc être donnée, mais un homme du métier saura parfaitement choisir un groupe lieur approprié. Ainsi, par exemple, il saura que, pour 10 favoriser la solubilité dans l'eau des composés, le groupe lieur devra, de préférence, être un groupe très hydrophile comme un polyalcool, un polyol, un polyéthylène glycol ou une polyamine. Il saura également que, pour greffer les 15 composés sur un acide nucléique, un groupe lieur de type polyéthylène glycol conviendra particulièrement bien comme décrit par Mac Laughin et al. (J. Org. Chem. 1997, 62(3), 523-529 [5]). De la même maniere il saura que 20 l'utilisation d'un polyol comme un saccharide (galactose par exemple), outre d'augmenter la solubilité, minimise aussi l'agrégation en milieu aqueux (Zongren et al., Org. Lett. 2004, 6, 2067-2070 [6]). 25 Il saura encore que, pour greffer les composés sur une protéine ou un polypeptide et, notamment, sur un anticorps ou un antigène, par l'intermédiaire d'un groupe fonctionnel d'un acide aminé, un groupe lieur constitué par ou comportant un 30 groupe acide carboxylique, un groupe dérivé d'acide carboxylique (par exemple, un halogénure d'acide ou un 2908408 23 anhydride d'acide), un ester activé (par exemple, un ester de N-hydroxysuccinimidyle, de pentafluorophényle ou de para-nitrophényle), un groupe amine primaire ou encore un groupe partant du type halogénure, tosylate, 5 mésylate, maléimide, etc, pourra être utilisé. Conformément à l'invention, lorsque R4 représente le groupe lieur, alors celui-ci se trouve, de préférence, en a du groupe R. Par ailleurs, lorsque, dans le groupe de 10 formule (III) constituant R2 et R3 quand R4 est un atome d'hydrogène, ou R1r R2, et éventuellement R3, quand R4 est un groupe espaceur, Q2 est un groupe hétérocyclique répondant à l'une quelconque des formules (i) à (v), alors les composés comportent au moins deux atomes 15 d'azote chargés positivement dont les charges sont, là également, contrebalancées par des anions tels que ceux précédemment cités. Le groupe de formule (III) constituant R2 et R3 quand R4 est unatome d'hydrogène, ou R1r R2, et 20 éventuellement R3, quand R4 est un groupe espaceur, est, de préférence, un groupe dans lequel a vaut 0, tandis que R35 et R36 de B représentent des atomes d'hydrogène ou des groupes alkyle en Cl à C4, avantageusement méthyle ou éthyle. 25 Par ailleurs, dans ce groupe de formule (III), Q2 représente, de préférence, soit un groupe de formule (vi) telle que précédemment définie, soit un groupe de formule (ix) telle que précédemment définie. 2908408 24 Des groupes de formule (III) répondant à ces critères sont typiquement : (a) des groupes de formule (III-1) ci-après R6 R7 5 dans laquelle R6 à R9, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; (b) des groupes de formule (III-2) ci-après : Rio dans laquelle R6 à R8r R1 R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; 15 (c) des groupes de formule (III-3) ci-après : R9 Rio 10 2908408 25 dans laquelle R6r R7, R9, Rio, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; et 5 (d) des groupes de formule (III-4) ci-après : dans laquelle R26 à R29, Ras et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, de 10 préférence méthyle ou éthyle. Pour une utilisation en fluorescence secondaire, on préfère plus particulièrement les composés de formule générale (I) dans laquelle R4 est un groupe lieur, tandis que Ri, R2 et R3 représentent 15 tous . * soit un groupe de formule (III-5) ci-après . / \N (qui correspond à un groupe de formule (III-3) ci-avant 20 où R6 = R7 = R9 = Rio = Ras = R36 = H) ; * soit un groupe de formule (III-6) ci-après . 2908408 26 (qui correspond à un groupe de formule (III-4) ci-avant dans laquelle R26 = R27 = Rza = R29 = R35 = R36 = H). Des exemples de tels composés sont notamment . 5 - le 4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-yl) -vinyl]phényl) amino] -2- [ (E) -2- (1, 3-benzothiazol-2-yl)-vinyl]phénoxy}butanoate d'éthyle ; - l'acide 4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-yl) vinyl] phényl)amino] -2- [ (E) -2- (1, 3-benzo- 10 thiazol-2-yl)vinyl]phénoxy}butanoïque ; - le 4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-yl) vinyl] phényl)amino] -2- [ (E) -2- (1, 3-benzothiazol-2-yl)vinyl]phénoxy}butanoate de succinimidyle ; la (3-(8-bromooctyloxy)-{4-[(E)-2(benzo-thiazol-2-yl)vinyl]}-N,N-bis-{4-[(E)-2-(benzothiazol-2-yl)vinyl] phényl}aniline ; - la (3-(8-(2,5-dioxo-1-aza)cyclopent-3-ényl)-octyloxy)-{4-[(E)-2(benzothiazol-2-yl)vinyl]}-N,N-bis-{4-[(E)-2-(benzothiazol-2-yl)vinyl] phényl}- 20 aniline ; - la (3-(9-bromononyloxy)-4-{4-[(E)-2-(pyridin-4-yl)vinyl]phényl}-N,N-bis-{4-[ (E)-2-(pyridin-4-yl)-vinyl]phényl}aniline ; - la tris-méthiodure de 3-(9-bromononyl- 25 oxv) -4, 4', 4"-tris (2- ( -pyri in-4-yl) vincr,l) triphényl-amine - le 4- (N,N-bis- (4- (2- (pyridin-4-yl) -vinyl))phényl)aminobenzoate de méthyle ; et - le 4-(N,N-bis-(4-(2-(benzothiazol-2-yl)- 30 vinyl))phényl)aminobenzoate de méthyle. 2908408 27 Les composés selon l'invention peuvent être préparés par des voies de synthèse à la portée de l'homme du métier, de nombreux procédés permettant de dérivatiser la triphénylamine ayant, en effet, été 5 décrits dans la littérature comme, par exemple, dans les références [1] à [4] précitées. Le composé de départ est généralement une triphénylamine mono-, di- ou trisubstituée par un atome d'halogène, par exemple de brome ou d'iode, ou un 10 aldéhyde que l'on soumet à une ou plusieurs réactions successives de couplage pour greffer sur les noyaux phényles les groupes constituant respectivement R1r R2, R3 et/ou R4 dans les composés de formule générale (I). Ces réactions de couplage comme, par 15 exemple, la réaction de Heck ou de Wittig-Hêrner qui permet de greffer des composés vinylés sur des noyaux phényle, sont des réactions couramment utilisées en synthèse organique. Le couplage peut conduire parfois à des 20 produits comportant un à plusieurs substituants qu'il est possible de séparer par purification. L'utilisation d'une chromatographie sur gel de silice est alors recommandée. Selon l'objectif de l'utilisateur, il est 25 possible de procéder en plusieurs étapes. Si R1 à R3 sont identiques alors, à partir d'un composé de départ comportant par exemple des fonctions -Br, I ou -CHO, il suffit de faire réagir un composé comportant une fonction de type alcène, phosphonate ou phosphonium en 30 proportions au moins stoechiométriques. Dans le cas où R3 est différent de R1 et R2 ou bien dans le cas où R1 2908408 28 est différent de R2 et R3, il est possible de procéder de la même manière à condition que R3 dans le premier cas ou R1 dans le second cas ne réagisse pas lors du couplage. Bien entendu, il est également possible de 5 recourir à l'utilisation de groupes protecteurs pour protéger une ou plusieurs fonctions susceptibles de réagir afin d'orienter les réactions de couplage et de favoriser ces réactions dans un sens particulier. L'invention a, aussi, pour objet une 10 composition qui comprend au moins un composé répondant à la formule générale (I) telle que précédemment définie, en solution dans un solvant. Elle a, également, pour objet l'utilisation d'au moins un composé répondant à la formule générale 15 (I) telle que précédemment définie, ou d'une composition comprenant un tel composé pour le marquage de biomolécules. Compte tenu des propriétés de fluorescence à deux photons présentées par les composés selon 20 l'invention, ce marquage sera, de préférence, réalisé en vue de l'observation desdites biomolécules par microscopie biphotonique. Ceci étant, il est également possible d'utiliser les composés selon l'invention comme marqueurs de biomolécules comme des protéines 25 dans d'autres applications comme, par exemple, en microscopie par épifluorescence ou en microscopie confocale. L'invention a, encore, pour objet une biomolécule marquée par au moins un composé répondant à 30 la formule générale (I) telle que précédemment définie, cette biomolécule étant, de préférence, un acide 2908408 29 nucléique ou un fragment d'un acide nucléique (oligonucléotide par exemple), une protéine, un polypeptide ou un fragment d'une protéine ou d'un polypeptide. 5 L'invention sera mieux comprise à la lumière du complément de description, qui se réfère à des exemples de réalisation de composes selon l'invention et de démonstration de leurs propriétés. Bien entendu, ces exemples ne sont donnés 10 qu'à titre d'illustrations de l'invention et n'en constituent en aucun cas une limitation. BRÈVE DESCRIPTION DES DESSINS La figure 1 illustre le schéma de synthèse d'un premier composé selon l'invention (TP-2Py). 15 La figure 2 illustre le schéma de synthèse d'un autre composé selon l'invention (TP-3Py). La figure 3 illustre l'influence de la présence d'ADN sur le spectre d'absorption (densité optique (DO) en fonction de la longueur d'onde (X)) 20 d'un composé selon l'invention (TP-2Py) en solution (5 M) dans un tampon cacodylate de sodium (10 mM, pH 7,0) ; sont représentés sur cette figure, le spectre d'absorption du composé tel qu'obtenu en l'absence d'ADN (^) et ses spectres d'absorption tels qu'obtenus 25 en présence de 0,5 équivalent (A), 1 équivalent (0), 2 équivalents (X) et 5 équivalents (0) d'ADN. La figure 4, qui est une figure analogue à la figure 3, illustre l'influence de la présence d'ADN sur le spectre d'absorption (densité optique (DO) en 30 fonction de la longueur d'onde (X)), d'un autre composé 2908408 30 selon l'invention (TP-3Py), également en solution (5 M) dans un tampon cacodylate de sodium (10 mM, pH 7,0) ; là également, sont représentés sur cette figure, le spectre d'absorption du composé tel qu'obtenu en 5 l'absence d'ADN (^) et ses spectres d'absorption tels qu'obtenus en présence de 0,5 équivalent (A), 1 équivalent (0), 2 équivalents (X) et 5 équivalents (0) d'ADN. La figure 5 illustre l'influence de la 10 présence d'ADN sur le spectre d'émission (intensité de fluorescence (Ifiuo), exprimée en coups par seconde (cps), en fonction de la longueur d'onde X), d'un composé selon l'invention (TP-3Py) en solution (3 M) dans un tampon cacodylate de sodium (10 mM, pH 7,0) et 15 pour une excitation à 474 nm ; sont représentés sur cette figure, le spectre d'émission du composé en l'absence d'ADN (courbe A) et celui obtenu en présence d'l équivalent d'ADN (courbe B). La figure 6 illustre l'influence de la 20 présence d'ADN sur l'intensité de la fluorescence émise par deux composés selon l'invention (TP-2Py (^) et TP-3Py (•)) en solution (1 M) dans un tampon cacodylate de sodium (10 mM, pH 7,0) et respectivement pour une excitation à 474 nm et 478 nm ; sont 25 représentées sur cette figure, les variations de l'intensité de fluorescence (Ifi , exprimée en unités arbitraires, en fonction du nombre d'équivalents d'ADN. La figure 7 représente les variations de l'intensité de fluorescence (Ifi , exprimée en unités 30 arbitraires, en fonction du temps, exprimé en secondes, telles que mesurées pour un composé selon l'invention 2908408 31 (TP-3Py (•)) et pour le T0-PRO-3 (A)), au cours d'une irradiation par une lampe xénon-mercure de 150 W. La figure 8 représente les variations de la section efficace d'absorption à deux photons 8, 5 exprimée en GOppert-Mayer, en fonction de la longueur d'onde (nm) telles que mesurées pour deux composés selon l'invention (TP-2Py (^) et TP-3Py (•)), pour un composé qui leur est structurellement très proche, la tris-[4-(2-pyridin-4-yl-vinyl)phényl]amine (•), et pour 10 la fluorescéine (A), la fluorescéine étant en solution dans l'eau (pH > 10), TP-2Py et TP-3Py étant en solution dans le glycérol et la tris-[4-(2-pyridin-4- yl-vinyl)phényl]amine étant en solution dans le dichlorométhane. 15 La figure 9 représente les résultats d'un test analogue à celui dont les résultats sont présentés sur la figure 8, mais qui a été réalisé en utilisant les deux composés selon l'invention (TP2Py (^) et TP-3Py (•)) en solution dans un tampon cacodylate de 20 sodium (10 mM, pH 7,3) additionné de 5 équivalents d'ADN de testicule de hareng. Les figures 10A et 10B correspondent à des images, prises en microscopie d'épifluorescence, de cellules CHO K1 traitées avec un mélange d'un composé 25 selon l'invention (TP-3Py 2 M) et de DAPI (3 !AM) ; ces images ont été prises au maximum d'émission de fluorescence du composé selon l'invention dans le cas de la figure 10A et au maximum d'émission de fluorescence du DAPI dans le cas de la figure 10B. La 30 figure 10C correspond à la superposition (overlapping), effectuée par un traitement informatique, des figures 2908408 32 10A et 10B qui montre la colocalisation des marqueurs dans le noyau. Les figures 11A et 11B correspondent à des images, prises en microscopie d'épifluorescence, de 5 cellules CHO K1 traitées avec un mélange d'un autre composé selon l'invention (TP-2Py 2 M), et de DAPI (3 M) ; ces images ont été prises au maximum d'émission de fluorescence du composé selon l'invention dans le cas de la figure 11A et au maximum d'émission 10 de fluorescence du DAPI dans le cas de la figure 11B. La figure 11C correspond à la superposition (overlapping), effectuée par un traitement informatique, des figures 11A et 11B qui montre la colocalisation des marqueurs dans le noyau. 15 Les figures 12A, 12B, 12C, 12D, 12E et 12F correspondent à des images, prises en microscopie à contraste de phase (figures 12A et 12D) et en microscopie confocale (figures 12B et 12E) et en couplant ces deux méthodes (figures 12C et 12F), de 20 cellules CHO K1 se trouvant à deux stades de mitose différents, ces cellules ayant été préalablement traitées par un composé selon l'invention (TP-3Py 2 M) ; ces images ont été prises au maximum d'émission de fluorescence du composé selon l'invention. 25 Les figures 13 à 15 illustrent les schémas de synthèse d'autres composés selon l'invention. 2908408 SP 296.54 SL 33 EXPOSÉ DÉTAILLÉ D'EXEMPLES DE RÉALISATION Exemple 1 : Composés utiles en fluorescence directe 1.1. Iodure de bis-[4-(2-N-méthylpyridinium-4-yl-5 vinyl)phényl]phénylamine Le composé titre ou composé TP-2Py, qui correspond au composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = R3 = H, R1 = R2 = groupe de formule (II-5) où R5 = -CH3, est synthétisé en partant de la 10 4,4'-diiododiphénylamine ou composé 1, selon le schéma montré sur la figure 1. La 4,4'-diiodophénylamine a préalablement été obtenue comme décrit par Kajigaeshi dans Bull. Chem. Soc. Jpn. 1998, 61(2), 600-602 [7]. 15 Synthèse de la 4,4'-diiodotriphénylamine ou composé 2 Dans de l'acétonitrile sec (6 mL), on dissout de la 4,4'-diiododiphénylamine (406 mg, 1 éq.) et du 2-(triméthylsilyl)benzène trifluorométhane- 20 sulfonate (244 uL, 602 mg, 1,04 éq.). Après 1 minute d'agitation, du CsF finement broyé est ajouté (295 mg, 2,01 éq.) et la suspension résultante est agitée pendant 3 jours à l'abri de la lumière. Puis la solution est évaporée, reprise dans le n-hexane et 25 filtrée sur silice. Après évaporation des eaux-mères, on isole le composé 2 sous la forme d'une fine poudre blanche (Rdt : 86ô). 2908408 SP 29654 SL 34 Synthèse de la 4,4'-bis(2-((E)-pyridin-4-yl)vinyl)- tri.phénylamine ou composé 3 Le composé 2 (108 mg, 220 pmol), de l'acétate de palladium (6 mg, 12%) et de la 5 tris-(o-tolyl)phosphine (15 mg, 22%) sont introduits dans un réacteur sec qui est ensuite purgé avec de l'azote. Puis 70 pl de 4-vinylpyridine (660 pmol) et 3 mL d'un mélange triéthylamine/diméthylformamide (TEA/DMF 2/1, v/v) dégazé sont ajoutés 10 successivement. Le mélange est agité à 85-900C, sous azote pendant 3 heures. Puis, sa température est ramenée à la température ambiante et les solvants sont évaporés sous vide poussé. Le résidu huileux est dilué avec du dichlorométhane et lavé avec de l'eau plusieurs 15 fois. Puis la phase organique est séchée et concentrée. Le résidu huileux est purifié par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane/méthanol 100/0 à 95/5, v/v). On obtient ainsi 79 mg composé 3 sous la forme d'une poudre 2C 80%). Synthèse de TP-2Py Le composé 3 (37 mg, 82 pmol) est dissous dans 3 mL d'un mélange d'iodométhane/méthanol. (200 mmol) du orange (Rdt : 25 (2/1, v/v) et la solution ainsi obtenue est reflux pendant 24 heures. Puis le brut est repris à l'éther et filtré. Le solide rouge chauffée à concentré, obtenu est lavé plusieurs fois à l'éther et au pentane pour donner 52 mg (71 mol) de TP-2Py sous la forme d'une poudre 30 rouge foncé (Rdt : 87%). 2908408 'SP 2964 SL R.beT 1H (DMSO-d6, 300 MHz) S : 8,80 (d, 6,6 Hz, 4H) ; 8,17 (d, 6,6 Hz, 4H) ; 7,97 (d, 16,2 Hz, 2H) ; 7,70 (d, 8,7 Hz, 4H) ; 7,35-7,46 (m, 4H) ; 7,08-7,28 (m, 7H) 4,23 (s, 6H). 5 RMN 13C (DMSO-d6, 75 MHz) 6 : 153,1 ; 148,8 ; 146,2 145,4 ; 140,6-; 130,6 ; 130,2 ; 126,6 ; 125,8 ; 123,6 ; 123,5 ; 122,0 ; 47,2. 1.2. Iodure de tris-[4-(2-N-méthylpyridinium-4- 10 yl-vinyl) phényl] amine Le composé titre ou composé TP-3Py, qui correspond au composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = H, R, = R2 = R3 = groupe de formule (II-5) où R5 = -CH3i est synthétisé en partant de la 15 tris-(4-bromophényï)amine ou composé 4, qui est disponible commercialement, selon le schéma montré sur la figure 2. Synthèse de la tris-[4-(2-pyridin-4-yl-vinyl)phényl]amine ou composé 5 Le composé 4 (1 g, 2,07 mmol, 1 éq.), de l'acétate de palladium (23 mg, 0,104 mmol, 0,05 éq.) et de la tris-o-tolylphosphine (95 mg, 0,311 mmol, 0,15 éq.) sont introduits dans un réacteur sec qui est 25 ensuite purgé avec de l'azote. Un mL de 4-vinylpyridine (0,98 g, 9,32 mmol, 4,5 éq.) et 5,4 mL d'un mélange TEA/DMF (2/1, v/v) sont ajoutés successivement. Le mélange est agité à 85-90 C, sous azote pendant 25 heures. Puis, sa température est ramenée à la 30 température ambiante et les solvants sont éliminés sous vide poussé. Le produit est dilué avec 120 mL de 2908408 36 dichlorométhane, lavé avec 3 x 30 mL d'une solution de carbonate de sodium saturée puis séché. Le volume de dichlorométhane est réduit et le produit est précipité par addition d'hexane et refroidissement à 4 C. 5 On obtient ainsi 0,943 g du composé 5 sous la forme d'une poudre orange (Rdt : 85,5%). Synthèse de TP-3Py De l'iodométhane en large excès (1,5 mL) 10 est ajouté à une suspension du composé 5 (64 mg, 0,115 mmol) dans 1,5 mL de méthanol. On laisse le mélange, qui prend immédiatement une couleur rouge profond, toute une nuit sous agitation. Le produit est ensuite précipité par addition d'éther diéthylique et 15 filtré. On obtient ainsi 0,103 g de TP-3Py sous la forme d'un solide rouge (Rdt : 91%). Formule brute : C42H39N43+, 3I- M : 980,5 20 RMN 1H (DMF d7) (ppm) : 4,50 (s, 9H, Me) ; 7,28 (d, J = 8,4Hz, 6H) ; 7,64 (d, J = 16,2Hz, 3H) ; 7,90 (d, J = 8,7Hz, 6H) ; 8,20 (d, J = 16,2Hz, 3H) ; 8,40(d, J = 6,6Hz, 6H) ; 9,06 (d, J = 6,6Hz, 6H). RMN 13C (DMF d7) (ppm) : 47,0 ; 122,3 ; 123,7 ; 25 124,6 ; 130,1 ; 131,3 ; 140,5 ; 145,3 ; 148,3 ; 153,4 MS (ESI+) : 363,11 ([C42H39N41]2+/2, 10%) ; 199,75 ([C42Hs9N4] 3+/3, 100%). 2908408 37 Exemple 2 : Propriétés de TP-2Py et de TP-3Py 2.1. Solubilité dans l'eau TP-2Py et TP-3Py présentent une solubilité 5 dans l'eau élevée puisque des solutions aqueuses de ces composés 0,5 à 1 mM ont pu être obtenues sans que ne se forme un quelconque précipité. Cette solubilité aqueuse est un réel avantage, notamment pour des applications biologiques, puisqu'elle permet de travailler en milieu 10 aqueux et de ne pas utiliser de solvant organique comme le DMSO qui, bien que classiquement employé dans ce domaine, est délétère pour les membranes cellulaires. De plus, contrairement aux marqueurs couramment utilisés en biologie comme les dérivés des 15 cyanines (thiazole orange par exemple) qui forment des agrégats en milieu aqueux, les solutions aqueuses de TP-2Py et TP-3Py suivent la loi de Beer-Lambert, au moins jusqu'à une concentration de 50 M. A titre comparatif, le thiazole orange se trouve, dans les 20 conditions où il est classiquement employé, c'est-à-dire à une concentration de 36 M et à une température de 20 C, sous forme de dimères (Kubista et al., Biopolymers 1998, 46, 39-51 [8]). 25 2.2. Propriétés d'absorption monophotonique et d'émission L'étude des propriétés d'absorption mono-photonique de TP-2Py et TP-3Py a mis en évidence que ces deux composés présentent une forte absorption dans 30 le domaine visible et que leurs coefficients d'extinction molaire (s) sont, dans le glycérol, de 2908408 38 37400 L/mol.cm (à 474 nm) pour la TP-2Py et de 66000 L/mol.cm (à 474 nm) pour la TP-3Py. Les longueurs d'onde maximales d'absorption de ces deux composés se situent dans la gamme de 5 450-500 nm et sont donc parfaitement compatibles avec l'utilisation des lasers Titane:Saphir que l'on emploie en microscopie biphotonique et qui sont généralement accordables dans la gamme spectrale de 750-900 nm. Par ailleurs, des mesures de fluorescence 10 réalisées sur TP-2Py et TP-3Py en solution dans un milieu aqueux (cacodylate de sodium 10 mM, pH 7,0) ont montré que la présence d'ADN dans ce milieu se traduit par un fort hypochromisme, d'environ 20%, de TP-2Py et de TP-3Py et par un déplacement vers le rouge de leurs 15 spectres d'absorption, ce déplacement étant d'autant plus prononcé que la concentration en ADN des milieux est plus élevée. Ces résultats, qui sont illustrés sur les figures 3 et 4, lesquelles représentent les spectres 20 d'absorption, respectivement de TP-2Py et de TP-3Py, obtenus à partir de solutions 5 M de ces composés, avant et après que ne leur soit ajouté un ADN duplex de 26 paires de bases de séquence autocomplémentaire (ci-après "ds26"), à des teneurs allant de 0,5 à 5 25 équivalents, indiquent une forte affinité de TP-2Py et TP-3Py pour l'ADN dans des conditions analogues aux conditions physiologiques. La présence d'ADN dans un milieu aqueux contenant TP-2Py et TP-3Py s'est révélée avoir aussi 30 pour effet d'exalter fortement les propriétés de 2908408 39 fluorescence de ces composés à leur maximum d'émission de fluorescence, c'est-à-dire vers 660-680 nm. Cet effet d'exaltation est illustré sur la figure 5 qui représente les spectres d'émission obtenus 5 à partir d'une solution 3 M de TP-3Py, avant et après que ne lui soit ajouté 1 équivalent de ds26, pour une excitation à 474 nm, ainsi que sur la figure 6 qui représente les variations de l'intensité de fluorescence (Ifiuo) obtenues à partir de solutions 3 M 10 de TP-lPy (A), TP-2Py (^) et TP-3Py (•), également pour une excitation à 474 nm, en fonction du nombre d'équivalents de ds26 ajouté. Cette dernière figure montre que l'intensité de la fluorescence émise par ces composés 15 peut augmenter jusqu'à 20 fois en fonction du nombre d'équivalents d'ADN. Des études de fluorescence analogues mais réalisées dans du glycérol, ont montré une exaltation encore plus prononcée des propriétés de fluorescence de 20 TP-2Py et de TP-3Py, de l'ordre de 100 fois. Il est à noter qu'une telle affinité vis-à-vis de l'ADN est rare chez les marqueurs classiquement utilisés en biologie, ce qui confère un grand intérêt à des composés tels que TP-2Py et TP-3Py, cette affinité 25 garantissant a priori un niveau élevé de luminescence moléculaire dans un contexte cellulaire. L'affinité de TP-2Py et de TP3Py pour l'ADN a été déterminée par titration fluorométrique dans des conditions stringentes (tampon cacodylate de 30 sodium cacodylate de sodium 10 mM, pH 7,0 additionné de NaCl 100 mM) et en utilisant ds26 comme ADN. Pour les 2908408 deux composés, une constante de dissociation Kd de l'ordre du micromolaire a été obtenue, confirmant leur très forte affinité pour l'ADN. 5 2.3. Photostabilité L'aptitude de TP-3Py à résister aux effets d'une irradiation a été testée et comparée à celle d'un fluorophore classiquement utilisé comme marqueur de l'ADN en microscopies à épifluorescence et confocale, à 10 savoir le T0-PRO-3 (iodure de 1-(N,N,N-triméthylaminopropyl)-4-{2-[3-méthyl-2, 3-dihydro-(benzo-1,3-thiazole) -2-éthylidène]-vinyl}-quinolinium). Comme illustré par la figure 7, qui représente les variations de l'intensité de 15 fluorescence (If1uo) , exprimée en unités arbitraires, en fonction du temps, exprimé en secondes, telles que mesurées pour le TP-3Py et le T0-PRO-3 au cours d'une irradiation par une lampe xénon-mercure de 150 W d'une trentaine de minutes, l'émission de fluorescence de 20 TP-3Py est peu modifiée par l'irradiation, alors que celle du T0-PRO-3 chute de plus de 40%. 2.4. Propriétés d'absorption biphotonique Les propriétés d'absorption biphotonique 25 des composés selon l'invention ont été appréciées en utilisant la technique de fluorescence induite par deux photons (TPIF pour "Two-Photon-Induced Fluorescence) et au moyen d'une source laser femtoseconde Titane:Saphir à impulsions de 90 fs à 76 MHz pouvant être accordée à 30 750-840 nm. 2908408 41 Les intensités TPIF relatives des composés selon l'invention ont été mesurées relativement à un marqueur classique de référence, la fluorescéine, ainsi qu'à un composé structurellement très proche de TP-2Py 5 et TP-3Py, la tris-[4-(2-pyridin-4-yl-vinyl)phényl]- amine. Dans un premier temps, les mesures ont été effectuées en utilisant TP-2Py et TP-3Py dans du glycérol, la fluorescéine et la tris-[4-(2-pyridin-4- 10 yl-vinyl)phényl]amine étant, elles, respectivement dans de l'eau (pH > 10) et dans du dichlorométhane. Comme le montre la figure 8, qui représente les variations de la section efficace d'absorption à deux photons 8, exprimée en GOppert-Mayer, en fonction 15 de la longueur d'onde (nm) telles qu'obtenues pour TP-2Py (^), TP-3Py (•), la tris-[4-(2-pyridin-4-ylvinyl)phényl]amine (•) et la fluorescéine (A), on observe un maximum relatif aux alentours de 820 nm pour TP-2Py et TP-3Py. Le maximum d'absorption à 2 photons 20 se situe donc à une longueur d'onde inférieure à deux fois la longueur d'onde d'absorption à 1 photon (2 x 474 nm = 950 nm) ce qui indique que d'autres états excités, plus hauts en énergie participent au processus d'absorption à deux photons. 25 Puis, les mesures ont été effectuées en utilisant TP-2Py et TP-3Py dans un tampon cacodylate de sodium (10 mM, pH 7,3) additionné de 5 équivalents d'ADN de testicule de hareng. Comme le montre la figure 9, les spectres obtenus pour TP-2Py et TP-3Py en 30 présence d'ADN sont identiques à ceux précédemment 2908408 42 observés dans le glycérol et ce, pour toutes les longueurs d'onde d'excitation. Les propriétés optiques de TP-2Py et TP-3Py sont résumées dans le tableau I ci-après, dans lequel 5 correspond au coefficient d'extinction molaire, exprimé en L/mol.cm, (DF correspond au rendement quantique de fluorescence et 8 correspond à la section efficace d'absorption à deux photons, exprimée en GOppert-Mayer (GM). 2908408 43 TABLEAU I (L/mol. cm) Xabs. !dém. cbF b (nm) (nm) (GM) 37400 491 656 0,112 315 (glyc.) (glyc.) (glyc.) (glyc.) (glyc.) 39800 474 TP- (cacodyl. (cacodyl. 665 0,07 200 2Py de Na) de Na) 31400 509 (ADN) (ADN) (ADN) (ADN) (ADN) 66000 491 665 0,123 700 (glyc.) (glyc.) (glyc.) (glyc.) (glyc.) 59000 474 TP- (cacodyl. (cacodyl. 684 0,021 700 3Py de Na) de Na) 51000 499 (ADN) (ADN) (ADN) (ADN) (ADN) Il apparaît que TP-3Py presente une 5 importante section efficace d'absorption à deux photons puisque celle-ci atteint une valeur de 700 GM dans le glycérol et de 700 GM et en présence d'ADN. Cette 2908408 44 valeur est très nettement supérieure à celles obtenues pour le DAPI (0,16 GM), pour la fluorescéine (38 GM) et pour la rhodamine 6G (100 GM) qui est pourtant considérée comme l'un des meilleurs fluorophores pour 5 la microscopie bi-photonique. Il y a lieu de noter que la tris-[4-(2-pyridin-4-yl-vinyl)phényl]amine, qui est structurellement très proche de TP-3Py, présente comme cette dernière un maximum d'excitation vers 820 nm mais la 10 valeur de sa section efficace d'absorption à deux photons n'est que de 58 GM selon la littérature et de 90 GM selon les mesures effectuées par les Inventeurs. 2.5. Etude en microscopie 15 Afin de mettre en évidence les potentialités des composés selon l'invention pour l'imagerie de l'ADN, des cellules CHO K1 (Chinese Ovarian Hamster Kl) ont été traitées respectivement par TP-2Py, TP-3Py, du DAPI et des mélanges TP-2Py/DAPI et 20 TP-3Py/DAPI, puis observées en microscopie par épi- fluorescence et en microscopie confocale laser. Les cellules CHO-Kl, préalablement cultivées dans des puits, sur des supports de verre recouverts de polyornithine, renfermant un milieu de 25 culture standard disponible commercialement, ont été fixées en utilisant une solution de formaldéhyde (4%) dans le PBS. Les cellules ont ensuite été incubées, à température ambiante et pendant 20 minutes, en présence 30 des marqueurs ou mélanges de marqueurs à tester (en solution aqueuse), puis lavées au tampon PBS (NaCl 2908408 13mM, KC1 0, 27 mM, KH2PO4 0,15 mM, Na2HPO4 0,8 mM, pH 7,4) pour éliminer l'excès de marqueur. Les concentrations de TP-2py et de TP-3Py ont été fixées à 2 pM, tandis que celle du DAPI a été fixée à 3 pM. Les 5 cellules ont ensuite été préparées de façon conventionnelle pour les observations microscopiques. Les observations par microscopie par épifluorescence ont été réalisées avec un microscope Nikon, Eclipse E 800, muni d'un objectif 60x (1.4) et 10 d'un appareil numérique Nikon, DXM 1200, tandis que celles par microscopie confocale ont été réalisées avec un microscope Leica DM6000 comportant une unité SP2 équipée d'un objectif 63x (1.4) et d'un laser HeNe pour l'excitation des marqueurs. 15 Comme le montrent les figures 10A, 10B et 10C, qui correspondent à des images de cellules ayant été traitées par unmélange de TP-3Py et de DAPI, prises en microscopie d'épifluorescence au maximum d'émission de fluorescence du TP-3Py dans le cas de la 20 figure 10A, au maximum d'émission de fluorescence du DAPI dans le cas de la figure 10B et en superposant ces images par un traitement informatique dans le cas de la figure 10C, on observe une intense fluorescence (dans le rouge) due au traitement au TP-3Py et cette 25 fluorescence est localisée exclusivement au niveau du noyau, ce qui démontre encore une fois l'affinité remarquable que présente ce composé vis-à-vis de l'ADN. S'agissant du cytoplasme, un très grand contraste est obtenu et aucun bruit de fond n'a été détecté. Par 30 ailleurs, considérant l'intensité lumineuse au point 2908408 46 focal de l'objectif du microscope, il ressort de l'observation que TP-3Py est très stable. Des résultats analogues ont été obtenus pour les cellules traitées avec un mélange TP-2Py/DAPI 5 comme en témoignent les figures 11A, 11B et 11C. D'autre part, comme le montrent les figures 12A à 12F, qui correspondent à des images de cellules ayant été traitées par TP-3Py, prises en microscopie à contraste de phase (figures 12A et 12D), en microscopie 10 confocale (figures 12B et 12E) et en superposant ces deux méthodes (figures 12C et 12F), au maximum d'émission de fluorescence de TP-3Py, ce dernier a permis d'obtenir, par couplage des microscopies à contraste de phase et confocale, des images de 15 chromosomes en anaphase d'une très grande netteté et de haute résolution, avec une définition très claire des limites de la cellule. Ainsi, en dépit du fait que les rendements quantiques obtenus in vitro pour TP-2Py et TP-3Py 20 soient relativement moyens, il s'avère que, grâce à leur grande section efficace d'absorption à deux photons et leur faible rendement quantique à l'état libre, ces composés offrent un contraste important. Ces composés émettent dans le rouge, ce qui 25 est un net avantage sur les fluorophores émettant dans le bleu ou le vert car, non seulement l'utilisation de ces derniers s'accompagne d'interférences dues aux composants cellulaires qui fluorescent naturellement dans le vert, mais de surcroît la lumière bleu-vert est 30 susceptible de causer des dommages aux cellules. Pour 2908408 47 ces raisons, une meilleure détection peut être obtenue car la diffusion dans le milieu est plus limitée. Exemple 3 : Composés utiles en fluorescence secondaire 5 3.1. 4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-yl)-vinyl]phényl)amino]-2-[(E)-2(1,3-benzothiazol-2-yl)-vinyl]phénoxy}butanoate d'éthyle Le composé titre ou composé 12, qui 10 correspond au composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = groupe lieur -O (CH2) 3C (0) OC2H5r R1 = R2 = R3 = groupe de formule (III-6), est synthétisé à partir du 2-méthoxy-4-aminobenzoate de méthyle ou composé 6, qui est disponible commercialement, selon le schéma montré 15 sur la figure 13. Synthèse du 2-méthoxy-4-(N,N-bis(4-méthoxycarbonyl- phényl)amino)benzoate de méthyle ou composé 7 Dans 30 mL de toluène sec et dégazé, on 20 introduit de l'acétate de palladium (186 mg, 828 }mol, 5%) de la tris-tert-butylphosphine (7,7 mL, 2,48 mmol, 15% ; solution à 10% dans l'hexane (m/m)). Après 15 minutes d'agitation, on ajoute du 4-bromobenzoate de méthyle (10,7 g, 49,7 mmol, 3 éq.), le composé 6 25 (3,0 g, 16,6 mmol, 1 éq.) et du carbonate de césium (13,5 g, 41,4 mmol, 2,5 éq.). La solution est chauffée à reflux pendant 17 heures, puis refroidie et diluée avec du dichlorométhane (100 mL). La solution est filtrée sur Celite, évaporée et purifiée par 30 chromatographie (élution avec un gradient de n-hexane/dichlorométhane 2/1, v/v, à dichlorométhane) 2908408 48 pour donner 6,35 g du composé 7 sous la forme d'une poudre jaune clair (Rdt : 89%). Synthèse du (4-{bis[4-(hydroxyméthyl)phényl]amino}-2- 5 méthoxyphényl)méthanol ou composé 8 A une suspension d'hydrure d'aluminium et de lithium (LiAlH4r 1,7 g, 45 mmol, 15 éq.) dans du tétrahydrofurane (THF) sec (30 mL) à -78 C, on ajoute au goutte-à-goutte une solution du composé 7 (1,35 g, 10 3 mmol) dans 20 mL de THF. On laisse la température du milieu revenir à température ambiante puis la réaction est chauffée au reflux sous agitation. Après 1 heure, la solution est refroidie à -78 C et diluée par du dichlorométhane, puis on verse lentement de l'eau 15 (10 mL). Le solide obtenu est filtré et lavé au dichlorométhane. Les eaux-mères sont lavées à l'eau et à la saumure puis séchées et concentrées pour donner 1,05 g (2, 88 mmol) d'un composé pâteux (Rdt : 97%). 20 Synthèse du 4-[bis(4-formylphényl)amino]-2-méthoxybenzaldéhyde ou composé 9 A une solution du composé 8 (27 mg, 74 }mol) dans du dichlorométhane (2 mL), on ajoute du MnO2 (40 mg, 444 }mol). La suspension obtenue est 25 agitée pendant 48 heures à température ambiante puis elle est filtrée. Le solide obtenu est lavé au dichlorométhane. Les eaux-mères sont ensuite concentrées pour donner 25 mg du composé 9 sous la forme d'un solide jaune (Rdt : 91%) 30 2908408 49 Synthèse du 4-[bis(4-formylphényl)amino]-2-hydroxybenzaldéhyde ou composé 10 A une suspension de chlorure d'aluminium (A1C13r 575 mg, 4,31 mmol, 5 éq.) dans du 5 dichlorométhane (10 mL) à -10 C, on ajoute au goutte-à-goutte une solution du composé 9 (310 mg, 860 }mol) dans du dichlorométhane (5 mL). Le mélange est agité à reflux pendant 24 heures. Il est ensuite versé dans un mélange d'eau et de glace, puis il est vigoureusement 10 agité 10 minutes. Il est extrait au dichlorométhane. La phase organique est lavée à l'eau et à la saumure, séchée et concentrée pour donner un solide que l'on triture dans de l'hexane pour donner 260 mg (754 mol) du composé 10 sous la forme d'une poudre jaune (Rdt : 15 87%). Synthèse du 4-{5-[bis(4-formylphényl)amino]-2-formyl- phénoxy}butanoate d'éthyle ou composé 11 A une solution du composé 10 (280 mg, 20 810 }mol) dans du DMF sec (12 mL), on ajoute du K2CO3 (1,1 g, 8,0 mmol, 10 éq.). La réaction est agitée pendant 15 minutes et du bromobutanoate d'éthyle (175 pL, 1,22 mmol, 1,5 éq.) est lentement ajouté. Le mélange est agité pendant 24 heures à température 25 ambiante puis concentré. Le résidu est repris dans du dichlorométhane et de l'eau. Le mélange biphasique est décanté, et la phase organique est lavée plusieurs fois à l'eau. Après séchage et concentration, on obtient un solide qu'on purifie par chromatographie (élution avec 30 un gradient de méthanol de 0 à 1% dans du dichlorométhane) pour donner 275 mg (530 }mol) du 2908408 composé 11 sous la forme d'une poudre orange (Rdt . 75%). Synthèse du composé 12 5 A une suspension d'hydrure de sodium (dispersion à 60%, 51 mg, 1,26 mmol, 3,60 éq.) et de (2-méthylbenzothiazole)phosphonate de diéthyle (328 mg, 1,15 mmol, 3,3 éq.) dans du THF sec (10 mL), on ajoute au goutte-à-goutte le composé 11 (160 mg, 348 }mol) en 10 solution dans du THF (12 mL). Le mélange est agité à température ambiante pendant 3 jours, puis il est dilué par du dichlorométhane, lavé à l'eau et à la saumure. La phase organique est séchée et concentrée. Le résidu obtenu est trituré dans le pentane pour donner 220 mg 15 (257 }mol) du composé 12 (Rdt : 74%). RMN 1H (CDC13, 300 MHz) 5 : 1,27 (t, 6,9, 3H) ; 2,24 (quint, 6,9 Hz, 2H) ; 2,60 (t, 6,9 Hz, 2H) ; 4,00 (t, 6,9 Hz, 2H) ; 4,19 (q, 6,9 Hz, 2H) ; 6,72 (d, 1,8 Hz, 20 1H) ; 6,79 (dd, 1,8 Hz, 8,4 Hz, 1H) ; 7,22 (d, 8,4 Hz, 4H) ; 7,33-7,65 (mult, 16H) ; 7,83 (d, 16,2 Hz, 1H) ; 7,89 (mult, 3H) ; 8,01 (d, 8,4 Hz, 1H) ; 8,03 (d, 8,4 Hz, 2H). RMN 13C (CDC13, 75 MHz) 5 : 14,2 ; 24,5 ; 30,8 ; 60,6 ; 25 67,5 ; 108,0 ; 117,1 ; 120,3 ; 121,0 ; 121,4 ; 121,5 ; 122,5 ; 122,7 ; 122,8 ; 124,6 ; 125,1 ; 125,3 ; 126,2 ; 126,3 ; 128,7 ; 130,8 ; 132,4 ; 134,3 ; 136,8 ; 147,6 ; 148,8 ; 154,0 ; 154,1 ; 157,8 ; 167,1 ; 168,2 ; 173,0. 2908408 51 3.2. Acide 4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-yl)vinyl]phényl)amino]-2-[(E)-2-(1, 3-benzothiazol-2-yl)vinyl]phénoxy} butanoïque Comme visible sur la figure 13, le composé 5 titre ou composé 13, qui correspond au composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = groupe espaceur -O (CH2) 3COOH, R1 = R2 = R3 = groupe de formule (III-6), peut être synthétisé à partir du composé 12 tel qu'obtenu au point 3.1. ci-dessus. 10 Pour ce faire, le composé 12 (60 mg, 0,070 mmol) est dissous dans du THF (2 mL). On y ajoute 2 mL d'une solution aqueuse saturée en LiOH, et le mélange biphasique obtenu est vigoureusement agité pendant 24 heures. Puis le mélange est acidifié jusqu'à 15 pH 2 et dilué par du dichlorométhane. Après décantation, la phase organique est séparée, lavée à l'eau puis à la saumure, séchée et concentrée pour donner un résidu qu'on triture dans l'éther et le pentane. On obtient ainsi 53 mg (63 }mol) du composé 13 20 (Rdt : 90%). RMN 1H (CDC13, 300 MHz) 5 : 2,32 (br, 2H) ; 2,59 (br, 2H) ; 4,01 (t, 6.0 Hz, 2H) ; 6,67 (d, 1.8 Hz, 1H) ; 6,75 (dd, 1,8 Hz, 8,4 Hz, 1H) ; 7,21 (d, 8,4 Hz, 4H) ; 25 7,30-7,65 (mult, 16H) ; 7,86-7,91 (mult, 3H) ; 8,01-8,04 (mult, 3H) ; 8,14 (d, 15.0 Hz, 1H). RMN 13C (CDC13, 75 MHz) 5 : 25,0 ; 32,0 ; 68,6 ; 107,5 ; 116,9 ; 119,4 ; 120,1 ; 121,0 ; 121,5 ; 122,2 ; 122,8 ; 124,6 ; 125,0 ; 125,2 ; 126,5 ; 128,5 ; 128,7 ; 130,9 ; 30 132,8 ; 134,1 ; 134,3 ; 137,0 ; 147,5 ; 149,0 ; 153,1 ; 153,9 ; 158,1 ; 167,2 ; 168,7. 2908408 52 3.3. 4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-yl)vinyl]phényl)amino]-2-[(E)-2-(1, 3-benzothiazol-2-yl)vinyl]phénoxy}butanoate de succinimidyle 5 Comme visible sur la figure 13, le composé titre ou composé 14, qui correspond au composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = groupe espaceur -0 (CH2) 3C (0) 0-succinimidyle, R1 = R2 = R3 = groupe de formule (III-6), peut être synthétisé à partir du 10 composé 13 tel qu'obtenu au point 3.2. ci-dessus. Pour ce faire, le composé 13 (40 mg, 50 }mol), du N-hydroxysuccinimide (9 mg, 78 }mol) et du DCC (11 mg) sont dissous dans du dichlorométhane (1 mL) et le mélange est agité pendant 24 heures. Puis le 15 milieu est évaporé, repris dans un minimum de dichlorométhane. La suspension laiteuse est filtrée, l'opération est répétée plusieurs fois. Les eaux-mères sont évaporées à sec pour donner le composé 14 sous la forme d'une poudre jaune orangée. 20 RMN 1H (CDC13, 300 MHz) 5 : 2,34 (quint, 6,3 Hz, 2H) ; 2,83 (s, 4H) ; 2,93 (t, 6,3Hz, 2H) ; 4,06 (t, 6,0 Hz, 2H) ; 6,73 (d, 1,8 Hz, 1H) ; 6,80 (dd, 1,8 Hz, 8,4 Hz, 1H) ; 7,22 (d, 8,4 Hz, 4H) ; 7,35-7,65 (mult, 16H) ; 25 7,83 (d, 16,5 Hz, 1H) ; 7,90 (mult, 3H) ; 8,00 (d, 8,4 Hz, 2H) ; 8,02 (d, 8,4 Hz, 1H). RMN 13C (CDC13, 75 MHz) 5 : 22,7 ; 25,6 (3C) ; 66,8 ; 108,0 ; 117,3 ; 120,2 ; 121,0 ; 121,4 ; 121,5 ; 122,7 ; 122,8 ; 124,6 ; 125,1 ; 125,3 ; 126,2 ; 126,4 ; 128,5 ; 30 128,7 ; 130,8 ; 132,3 ; 134,3 ; 138,9 ; 147,6 ; 148,8 ; 153,9 ; 154,0 ; 157,4 ; 167,2 ; 168,2 ; 168,3 ; 169,0. 2908408 53 3.4. (3-(8-bromooctyloxy)-{4-[(E)-2-(benzothiazol-2-yl)vinyl]}-N,N-bis-{4-[(E) -2-(benzothiazol-2yl)vinyl]phényl}aniline 5 Comme visible sur la figure 13, le composé titre ou composé 16, qui correspond au composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = groupe espaceur -O (CH2) 3Br, R1 = R2 = R3 = groupe de formule (III-6), peut être synthétisé à partir du composé 10 tel 10 qu'obtenu au point 3.1. ci-dessus. Synthèse du 2-(8-bromooctyloxy),4-[N,N-bis(4-formyl- phényl)]aminobenzaldéhyde ou composé 15 Dans de l'acétone sèche (10 mL), on dissout 15 le composé 10 (100 mg, 290 }mol), du 1,8-dibromooctane (800 pL, 1,18 g, 4,34 mmol, 15 éq.) et du carbonate de potassium (100 mg, 723 }mol, 2,5 éq.). La suspension blanche est agitée à 45 C pendant 24 heures. Puis, on ajoute de l'éther et le mélange est filtré et lavé à 20 l'éther. Après réunion et concentration des eaux-mères, le résidu est purifié par chromatographie sur colonne (élution dichlorométhane/n-hexane 1/1 à 4/1, v/v, puis dichlorométhane et dichlorométhane/méthanol 99,5/0,5, v/v). Le composé 15 est obtenu sous forme 25 d'un solide jaune (Rdt : 84%). Synthèse du composé 16 Du diéthyl(2-méthylbenzothiazole)phospho- nate (186 mg, 652 }mol, 3,5 éq.) est dissous dans du 30 THF sec (5 mL). On ajoute de l'hydrure de sodium (dispersion à 60%, 25 mg, 625 }mol, 3,3 éq.). Après 2908408 54 environ 15 minutes, le composé 15 (100 mg, 186 }mol) en solution dans du THF sec (5 mL) est ajouté au goutte-à-goutte. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est évaporé à sec et le résidu 5 purifié par chromatographie (élution avec un gradient de méthanol de 0 à 0,5% dans le dichlorométhane) pour donner, après évaporation, 98 mg (106 }mol) du composé 16 sous la forme d'une poudre orangée (Rdt : 57%). 10 RMN 1H (CDC13, 300 HMz) b : 1,30-1,60 (br, 8H) ; 1,88 (br, 4H) ; 3,41 (t, 6,9 Hz, 2H) ; 3,94 (t, 6,3 Hz, 2H) ; 6,72 (br, 1H) ; 6,77 (d, 8,4 Hz, 1H) ; 7,22 (d, 8,4 Hz, 4H) ; 7,35-7,58 (mult, 16 H) ; 7,84 (d, 16,5 Hz, 1H) ; 7,90 (mult, 3H) ; 8,01 (d, 7,6 Hz, 1H) ; 8,03 15 (d, 7,6 Hz, 2H). RMN 13C (CDC13, 75 MHz) 5 : 26,1 ; 28,1 ; 28,7 ; 29,0 ; 29,2 ; 32,8 ; 33,9 ; 68,6 ; 108,1 ; 116,9 ; 120,3 ; 121,0 ; 121,4 ; 121,5 ; 122,8 ; 122,9 ; 124,6 ; 125,1 ; 125,3 ; 126,2 ; 126,4 ; 128,6 ; 129,0 ; 130,8 ; 132,8 ; 20 134,3 ; 134,4 ; 138,8 ; 147,7 ; 148,8 ; 154,0 ; 154,1 ; 158,2 ; 167,1 ; 168,3. 3.5. (3-(8-(2,5-dioxo-1-aza)cyclopent-3-ényl)-octyloxy)-{4-[(E)-2(benzothiazol-2-yl)vinyl]}-N,N-bis{4-[(E)-2-(benzothiazol-2-yl)vinyl]phényl}aniline Comme visible sur la figure 13, le composé titre ou composé 17, qui correspond au composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = groupe lieur - (CH2) 8-succinimidyle, R1 = R2 = R3 = groupe de formule 30 (III-6), peut être synthétisé à partir du composé 16 tel qu'obtenu au point 3.4. ci-dessus. 2908408 Dans 50 pL de DMF sec, on dissout le composé 16 (24 mg, 25.8 }mol), du rac-7-oxabicyclo-[2.2.1]-heptène-2,3-dicarboxylic imide (5 mg, 28,4 }mol, 1,1 éq.) et du K2CO3 (18 mg, 129 }mol, 5 éq.). La suspension 5 blanche obtenue est agitée à 55 C pendant 24 heures. L'avancement de la réaction est suivie par CCM. Une fois la disparition du produit de départ constatée, le mélange est dilué par du dichlorométhane et lavé plusieurs fois à l'eau. La phase organique est séchée 10 et concentrée. Le résidu est remis en solution par 5 mL d'anisole et chauffé à reflux pendant 2 heures. Puis l'anisole est chassé sous vide et le résidu est purifié par CCM préparative. On obtient ainsi 11 mg (12 }mol) du composé 17 sous la forme d'une poudre orange (Rdt : 15 47%). RMN 1H (CDC13, 300 MHz) 5 : 1,30-1,60 (br, 10H) ; 1,85 (quint, 2H) ; 3,52 (t, 7,2 Hz, 2H) ; 3,93 (t, 6,3 Hz, 2H) ; 6,67 (s, 4H) ; 6,72 (d, 1,8 Hz, 1H) ; 6,77 (dd, 20 1,8 Hz, 8,4 Hz, 1H) ; 7,22 (d, 8,4 Hz, 4H) ; 7,33-7,60 (mult, 16 H) ; 7,84 (d, 16,2 Hz, 1H) ; 7,90 (mult, 3H) ; 8,01 (d, 7,6 Hz, 1H) ; 8,03 (d, 7,6 Hz, 2H). RMN 13C (CDC13, 75 MHz) 5 : 26,1 ; 26,6 ; 28,5 ; 29,0 ; 29,1 ; 29,2 ; 37,9 ; 68,6 ; 108,0 ; 116,9 ; 120,4 ; 25 121,0 ; 121,4 ; 121,5 ; 122,7 ; 122,9 ; 124,4 ; 125,0 ; 125,2 ; 126,3 ; 126,4 ; 128,7 ; 128,9 ; 130,6 ; 132,7 ; 134,0 ; 134,4 (2C) ; 136,8 ; 147,6 ; 148,9 ; 153,9 ; 154,0 ; 158, 1 ; 167,3 ; 168,6 ; 171,0. 2908408 56 3.6. (3-(9-bromononyloxy)-4-{4-[(E)-2-(pyridin-4-yl)vinyl]phényl}-N,N-bis-{4- [ (E) -2- (pyridin-4-yl) - vinyl]phényl}aniline Le composé titre ou composé 22, qui correspond au 5 composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = groupe lieur -O (CH2) 9Br, R1 = R2 = R3 = groupe de formule (III-5), est synthétisé à partir de la 3-méthoxytriphénylamine ou composé 18, qui est disponible commercialement, selon le schéma montré sur 10 la figure 14. Synthèse de l'acétate de 3-(N,N-diphénylamino)phényle ou composé 19 A une solution de composé 18 (1,012 g, 15 3,67 mmol) dans du dichlorométhane sec (10 mL) refroidi à -78 C, on ajoute goutte-à-goutte une solution molaire de BBr3 (5,5 mL, 5,5 mmol, 1,5 éq.) sur 45 minutes. La suspension ambrée résultante est agitée pendant 1 heure à température ambiante. Le milieu réactionnel est 20 évaporé, redissous dans un mélange pyridine/anhydride acétique (6/4,5, v/v) et chauffé à reflux pendant 1 heure. Après refroidissement à température ambiante, le mélange est dilué par du dichlorométhane et lavé par de l'acide chlorhydrique 10 mM jusqu'à acidification de 25 la phase aqueuse, Na2CO3 2% (m/v) et de l'eau. La phase organique est séchée sur Na2SO4r réduite à 5 mL et filtrée sur un peu de silice. Après séchage, on obtient 1,046 g (3,45 mmol) du composé 19 sous la forme d'une huile incolore (Rdt : 94%). 30 2908408 57 Synthèse de l'acétate de 2-iodo-5-(N,N-bis-(4-iodo- phényl)amino)phényle ou composé 20 A une solution de composé 19 (77 mg, 254 }mol) dans du dichlorométhane, on ajoute de l'iode 5 (449 mg, 1,77 mmol, 7 éq.) puis de l'oxyde de mercure rouge (384 mg, 1,77 mmol, 7 éq.), et la suspension obtenue est agitée à température ambiante pendant 3 jours. Puis la suspension est filtrée sur Celite et les eaux-mères lavées par une solution de Na2S2O3 et de 10 l'eau. Les eaux-mères sont filtrées une seconde fois sur silice puis évaporées à sec pour donner 153 mg du composé 20 sous la forme d'une poudre blanche (Rdt . 88%). 15 Synthèse de la 3-hydroxy-4-{4-[(E)-2-(pyridin-4-yl)-vinyl]phényl}-N,N-bis-{4-[(E)-2(pyridin-4-yl)vinyl]-phényl}aniline ou composé 21 Dans 3 mL d'un mélange TEA/DMF sec (2/1, v/v), on dissous de l'acétate de palladium (5 mg, 20 22 }mol) et de la tris o-tolylphosphine (20 mg, 66 }mol). Après 10 minutes d'agitation, on ajoute de la 4-vinylpyridine (150 pl, 1,39 mmol, 5 éq.) et le composé 20 (278 }mol, 1 éq.) et le mélange est chauffé pendant 3 heures à 85 C sous atmosphère inerte. Puis le 25 milieu est évaporé à sec, et l'huile rouge obtenue est lavée au pentane puis à l'éther. Le résidu pâteux rouge résiduel est purifié sur colonne de silice (élution avec un gradient dichlorométhane à dichlorométhane/ méthanol 97/3, v/v) pour donner une poudre ocre 30 correspondant au composé 21 (Rdt : 61%). 2908408 58 Synthèse du composé 22 Le composé 21 (103 mg, 1 éq.), du 1,9-dibromononane (730 pl, 20 éq.) et du carbonate de potassium (125 mg, 5 éq.) sont agités pendant 3 heures 5 à température ambiante dans du DMF (1 mL). Puis, le brut réactionnel est versé dans un grand volume d'éther (100 mL) et filtré sur silice. La silice est abondamment lavée à l'éther. Puis elle est lavée par un mélange dichlorométhane/méthanol (95/5, v/v) et les 10 eaux-mères sont concentrées et purifiées sur colonne de silice (élution avec un gradient dichlorométhane à dichlorométhane/méthanol 97/3, v/v) pour donner, après évaporation, environ 30 mg du composé 22 sous la forme d'une poudre rouge. 15 3.7. Tris-méthiodure de 3-(9-hromonon Ioxy)4, 4', 4"-tris (2- ((E) -p ridin-4-y1) vin l) triphény1amine Comme visible sur la figure 14, le composé titre ou composé 23, qui répond à la formule générale 20 (I) dans laquelle R4 = groupe lieur -0 (CH2) 9Br, R1 = R2 = R3 = groupe de formule (II-5) où R5 est -CH3, peut être synthétisé à partir du composé 22 tel qu'obtenu au point 3.6. ci-dessus. Pour ce faire, le composé 22 (30 mg) es.. 25 dissous dans mL d'un mélange méth ano-/ioda J méthane (1/1, i\ le tout est chauffé à reflux pendant 18 heures. Le brut est ensuite évaporé et repris dans un minimum de méthanol. Une grande quantité d'éther est ajouté. Le précipité résultant est filtré et lavé à 30 l'éther puis au pentane pour .~ . donner le composé 23 sous a forme d'une poudre rouge (Rdt: 82%). 2908408 59 3.8. 4- (N,N-bis- (4- (2(pyridin-4-yl)vinyl)) -phényl)aminobenzoate de méthyle Le composé titre ou composé 27, qui 5 correspond au composé de formule générale (I) dans laquelle R4 = H, R1 = groupe espaceur -COOCH3, R2 = R3 = groupe de formule (III-5), est synthétisé à partir du 4-aminobenzoate de méthyle ou composé 24, qui est disponible commercialement, selon le schéma montré sur 10 la figure 15. Synthèse du 4-(N,N-diphénylamino)benzoate de méthyle ou composé 25 A une solution de composé 24 (500 mg, 15 3,31 mmol) dans du toluène sec (20 mL), du carbonate de césium (1,6 g, 4,91 mmol), de l'acétate de palladium (50 mg, 0,22 mmol), de la tris-tert-butylphosphine (300 pl, à 10% dans de l'hexane, 0,15 mmol) et du bromobenzène (440 pl, 657,4 mg, 4,91 mmol) sont ajoutés 20 sous azote. Le milieu réactionnel est chauffé à reflux pendant 18 heures, puis les mêmes quantités de réactifs (carbonate de césium, palladium et phosphine) sont de nouveau ajoutées et le mélange est à nouveau chauffé pendant 18 heures. A la fin de la réaction, le brut est 25 filtré sur Celite et dilué à l'acétate d'éthyle. Les eaux-mères sont lavées à la saumure puis à l'eau et enfin séchées sur sulfate de sodium. Le résidu obtenu est purifié sur colonne de gel de silice (élution avec un mélange n-hexane/AcOEt 85/15, v/v). On obtient ainsi 30 le composé 25 sous la forme d'une huile jaune qui cristallise après refroidissement à -4 C (Rdt : 91%). 2908408 Synthèse du 4-(N,N-bis-(4-bromophényl)amino)benzoate de méthyle ou composé 26 A une solution de composé 25 (550 mg, 5 1,81 mmol) dans le chloroforme, du N-bromosuccinimide est ajouté (708 mg, 3,98 mmol). La réaction est chauffée pendant 2 heures puis refroidie à température ambiante. Le brut réactionnel est alors lavé à l'eau puis à la saumure et séché sur sulfate de magnésium. Le 10 résidu obtenu est purifié sur colonne de gel de silice (élution avec un mélange n-hexane/AcOEt 85/15, v/v). On isole le composé 26 sous la forme d'une poudre jaune (Rdt : 98%). 15 Synthèse du composé 27 A une solution de composé 26 (138 mg, 0,30 mmol) dans 15 mL d'un mélange TEA/DMF (2/1) sec et dégazé, on ajoute de la 4-vinylpyridine (94,6 mg, 0,90 mmol), de l'acétate de palladium (10 mg, 20 0,04 mmol) et de la tris o-tolylphosphine (40,7 mg, 0,13 mmol) sous azote. Le milieu réactionnel est chauffé à reflux pendant 18 heures. A la fin de la réaction, le brut est filtré sur Celite et dilué à l'acétate d'éthyle. Les eaux-mères sont lavées à la 25 saumure puis à l'eau et enfin séchées sur sulfate de sodium. Le résidu obtenu est purifié sur colonne de gel de silice (élution avec un mélange dichlorométhane/ méthanol 95/5, v/v). Le composé 27 est obtenu sous la forme d'une poudre orange (Rdt : 59%). 30 2908408 61 3. 9. 4- (N,N-bis- (4- (2- (benzothiazol-2-yl)vinyl)) phényl)aminobenzoate de méthyle Comme visible sur la figure 15, le composé titre ou composé 29, qui correspond au composé de 5 formule générale (I) dans laquelle R4 = H, R1 = groupe espaceur -COOCH3, R2 = R3 = groupe de formule (III-6), peut être synthétisé à partir du composé 25 tel qu'obtenu au point 3.7. ci-dessus. 10 Synthèse du 4-(N,N-bis-(4-formylphényl)amino)benzoate de méthyle ou composé 28 Du DMF (2,9 ml, 37,5 mmol) est refroidi à 0 C et du trichlorure de phosphoryle (POC13, 3,7 ml, 40 mmol) est ajouté goutte-à-goutte sous atmosphère 15 d'azote. Le mélange est agité pendant 1 heure à 0 C. A ce mélange, on ajoute le composé 25 (500 mg, 1,6 mmol) lentement et le mélange est agité vigoureusement à 95 C pendant 4 heures. Après refroidissement, le mélange réactionnel est versé dans de la glace et neutralisé 20 par addition de soude concentrée. Le mélange obtenu est extrait plusieurs fois au dichlorométhane. La phase organique est lavée à la saumure puis à l'eau et enfin séchée sur sulfate de sodium. Le résidu obtenu est purifié sur colonne de gel de silice (élution avec un 25 mélange n-hexane/AcOEt 75/25). Le composé 28 est obtenu sous la forme d'une poudre orange (Rdt : 35%). Synthèse du composé 29 Dans du THF sec (10 ml), on dissout du 30 (benzothiazol-2-yl)méthyl)]phosphonate de diéthyle (comme décrit dans J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 2908408 62 7192-7198 [9] ; 175 mg, 0,61 mmol), du NaH (50 mg, 1,25 mmol, dispersion à 60%) et une goutte d'éther-couronne 18-C-6. La solution rouge résultante est refroidie à 0 C et une solution de composé 28 (100 mg, 5 0,28 mmol) dans du THF sec (5 ml) est ajoutée au goutte-à-goutte. Le mélange est agité pendant 24 heures à température ambiante. Puis, la réaction est arrêtée par ajout d'eau (2 mL) et diluée par du dichlorométhane. Les phases organiques sont lavées à la saumure 10 puis à l'eau et enfin séchées sur sulfate de sodium. Le résidu obtenu est purifié sur colonne de gel de silice (élution avec un mélange AcOEt/AcOH, 99/1). Le composé 29 est obtenu sous la forme d'une poudre jaune (Rdt : 41%). 15 Exemple 4 : Fonctionnalisation d'oligonucléotides 4.1. Fonctionnalisation par le composé 16 : Un oligonucléotide présentant une fonction 20 terminale, en position 3' ou 5', de type thiophosphate et comportant des contre-ions de type ammonium (NH4) est dissous dans une solution d'éther-couronne 18-C-6 dans le méthanol (préalablement traité par une résine chélatante) à hauteur approximativement de 20 DO par 25 mL. Le composé 16 (environ 2 mg) est ajouté, et le mélange est vortexé puis agité à 35 C pendant 6 heures. Le mélange est ensuite soumis à une procédure de purification en suivant le mode opératoire ci-après : le mélange est tout d'abord évaporé, repris 30 par de l'eau (1 mL) et extrait plusieurs fois au dichlorométhane puis à l'acétate d'éthyle jusqu'à ce 2908408 63 que les phases organiques restent incolores. Le solvant non-aqueux résiduel est chassé sous vide, et la solution aqueuse est diluée par NaCl 1M dans un mL mélange eau/acétonitrile 5/1 (v/v). Cette solution est 5 purifiée sur colonne d'exclusion stérique (exclusion 1000 Da) et la première fraction éluante colorée est récupérée. Si nécessaire, la fraction obtenue est purifiée par HPLC selon les procédures habituelles. Classiquement, la purification se fait en employant une 10 colonne de type phase inverse (RP-18) et un système d'élution eau/acétonitrile ou eau/méthanol, de pH proche de 7 et comprenant un sel dissous (environ 0,1M) de type acétate de (trialkyl)ammonium. Les fractions isolées sont lyophilisées trois fois au minimum. 15 4.2. Fonctionnalisation par le composé 14 : Un oligonucléotide comportant une fonction amine primaire est dissous dans un tampon NaHCO3 à 0,5% à pH 9.5 à hauteur de 10 DO pour 500 pL. Le composé 14 20 (environ 1 à 2 mg) en solution dans du DMF (environ 300 pL, préalablement purifié des impuretés aminées) est ajouté. Le mélange est agité pendant 24 heures à 35 C. Le mélange est ensuite soumis à une 25 procédure de purification identique à celle décrite au point 4.1. ci-dessus. 2908408 64 DOCUMENTS CITES [1] Chung et al., J. Phys. Chem. B 1999, 103, 5 10741-10745 [2] Porrès et al., Organic Letters 2004, 6(1), 47-50 [3] Yang et al., Organic Letters 2004, 6(9), 1389-1392 [4] Yan et al., J. of Molecular Structure 2005, 733, 8387 10 [5] Mac Laughin et al., J. Org. Chem. 1997, 62(3), 523-529 [6] Zongren et al., Org. Lett. 2004, 6, 2067-2070 [7] Kajigaeshi, Bull. Chem. Soc. Jpn. 1998, 61(2), 600-602 15 [8] Kubista et al., Biopolymers 1998, 46, 39-51 [9] J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 7192-7198 REVENDICATIONS 1. Composé répondant à la formule générale (I) ci-après . R3 (I) dans laquelle : R4 représente un atome d'hydrogène ou un groupe lieur, auquel cas . 1) si R4 représente un atome d'hydrogène, alors : R1 représente un groupe lieur ou un groupe de formule (II) ci-après : ù(A)aù B ù Qi dans laquelle : * Q1 représente : un groupe hétérocyclique de formule ci-après . R8 où R5 représente un groupe hydrocarboné ; l'un quelconque de R6 à R10 représente une 20 liaison covalente reliant ledit groupe ( i (i) 5 2908408 66 hétérocyclique à B, tandis que les autres de R6 à R10 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné ; ou un groupe hétérocyclique de formule (ii) ou (iii) ci-après R14 R13 (ii) (iii) où R5 représente un groupe hydrocarboné ; 10 l'un quelconque de R11 à R17 représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B, tandis que les autres de R11 à R17 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un 15 groupe hydrocarboné, R12, R14 et R16 pouvant aussi former, respectivement avec R11 et/ou R13r R13 et/ou R15r et avec R15 et/ou R17r un groupe pontant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (iv) 20 ci-après : R22 R21 (iv) 5 10 2908408 67 où l'un quelconque de R18 à R25 représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B, tandis que les autres de R18 à R25 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, R19, R21, R23 et R25 pouvant aussi former, respectivement avec R18 et/ou R2o, R2o et/ou R22, R22 et/ou R24r et avec R24 et/ou R18r un groupe pontant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (v) ci-après . R29 (v) 15 25 où R5 représente un groupe hydrocarboné ; W représente un atome d'oxygène ou de soufre ou un groupe -N (R31) - où R31 est un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, ou un groupe -C(R3) (R32) - où R31 et R32 sont, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné ; Rio représente une liaison covalente reliant ledit groupe hétérocyclique à B, tandis que R26 à R29 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, R27 pouvant aussi former avec R26 et/ou R28 un groupe pontant, 2908408 68 R28 pouvant lui-même former avec R29 un groupe pontant ; * a vaut 0 (auquel cas A est absent) ou 1 (auquel cas A est présent) ; 5 * A et B représentent les groupes ci-après R33 R35 (A) R36 (B) dans lesquels R33 à R36 représentent, 10 indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe hydrocarboné, R33 et R36 pouvant aussi former chacun avec R34 et/ou R35 un groupe pontant ; • lorsque R1 représente un groupe de formule (II) 15 ci-avant, alors R2 représente également un groupe de formule (II) ci-avant tandis que, lorsque R1 représente un groupe lieur, alors R2 représente un groupe de formule (III) ci-après : ù(A)aù B ù Q2 20 dans laquelle : * Q2 représente : un groupe hétérocyclique répondant à l'une quelconque des formules (i) à (v) ci-avant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (vi) ci-après : 5 2908408 69 R8 où R6 à R10 ont la même signification que dans la formule (i) ci-avant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (vii) ou (viii) ci-après (vi) R15 R12 R14 R13 (vii) (viii) R11 R11 10 où R11 à Rn ont la même signification que dans les formules (ii) et (iii) ci-avant ; ou un groupe hétérocyclique de formule (ix) ci-après . R29 R26 28 R27 où W, R26 à R30 ont la même signification que dans la formule (v) ci-avant ; 15 * a, A et B ont la même signification que précédemment ; • lorsque R1 représente un groupe lieur, alors R3 représente un groupe de formule (III) ci-avant 2908408 70 tandis que, lorsque R1 représente un groupe de formule (II) ci-avant, alors R3 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène, un groupe hydrocarboné ou un groupe de formule (II) 5 ci-avant ; 2) si R4 représente un groupe lieur, alors R1 et R2 représentent un groupe de formule (III) ci-avant tandis que R3 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène, un groupe hydrocarboné ou un groupe de 10 formule (III) ci-avant ; dans laquelle le groupe lieur est un groupe fonctionnel apte à permettre le greffage par réaction chimique du composé sur une biomolécule, ou un groupe hydrocarboné comprenant un tel groupe fonctionnel, et dans laquelle 15 chacun des groupes hydrocarbonés sus-mentionnés peut être substitué par un ou plusieurs substituants, identiques ou différents, et comprendre un ou plusieurs hétéroatomes. 20 2. Composé selon la revendication 1, qui répond à la formule générale (I) dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène, R1 et R2 sont identiques et représentent un groupe de formule (II), tandis que R3 représente un atome d'hydrogène ou 25 d'halogène, un groupe hydrocarboné ou un groupe de formule (II) identique à R1 et R2. 3. Composé selon la revendication 2, dans lequel le groupe de formule (II) constituant R1 et R2 est un groupe où a vaut 0, R35 et R36 de B représentent des atomes d'hydrogène ou des groupes alkyle en Cl à C4, 2908408 71 de préférence méthyle ou éthyle, tandis que Q1 a la même signification que précédemment. 4. Composé selon la revendication 3, dans 5 lequel le groupe de formule (II) constituant R1 et R2 est un groupe où Q1 est un groupe de formule (i) dans laquelle R5 à R10 ont la même signification que précédemment, ou bien un groupe de formule (v) dans laquelle R5, W et R26 à R30 ont la même signification que 10 précédemment. 5. Composé selon la revendication 4, dans lequel le groupe de formule (II) constituant R1 et R2 est choisi parmi : 15 (a) les groupes de formule (II-1) ci-après : R7 dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à C4 et, de préférence, méthyle ou éthyle, tandis que R6 à R9, R35 et R36 représentent, indépendamment les 20 uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; (b) les groupes de formule (II-2) ci-après : R6 2908408 72 dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à Co, de préférence méthyle ou éthyle, tandis que R6 à R3r R10r R35 et R36 représentent, indépendamment les 5 uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe groupe alkyle en Cl à Co, de préférence méthyle ou éthyle ; (c) les groupes de formule (II-3) ci-après R9 Rio R5 10 dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à Co, de préférence méthyle ou éthyle, tandis que R6, R-7, R9, Rio, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à Co, de préférence méthyle ou 15 éthyle ; et (d) les groupes de formule (II-4) ci-après : (II-4) dans laquelle R5 représente un groupe alkyle en Cl à 20 Co, de préférence méthyle ou éthyle, tandis que R26 à R29, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à Co, de préférence méthyle ou éthyle. R36 R28 R29 2908408 296 4 SL 73 6. Composé selon la revendication 5, dans lequel le groupe de formule (II) constituant Ri et R2 est un groupe de formule (II-5) ci- après où R5 représente un groupe alkyle en C, à C4, de préférence méthyle ou éthyle. 10 7. Composé selon la revendication 5 , qui répond à la formule générale (I) dans laquelle RI et R2 représentent un groupe de formule (II-5) où R5 représente un groupe méthyle, tandi-s que R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe de formule (II-5) 15 identique à R1 et R2. 8. Composé selon la revendication 7, qui est choisi parmi les halogénures et, de préférence, les iodures de bis-[4-(2-N-méthyl-pyridinium-4-yl-vinyl)- 20 phényl]phénylamine et de tris-[4-(2-N-méthylpyridinium- 4-yl-vinyl)phényl]amine. 9. Composé selon la revendication 1, dans lequel : 25 • soit R4 représente un atome d'hydrogène, auquel cas R1 représente un groupe lieur, R2 et R3 sont identiques et représentent un groupe de formule (III) telle que précédemment définie ; 5 2908408 74 • soit R4 représente un groupe lieur, auquel cas R1 et R2 représentent un groupe de formule (III) telle que précédemment définie, tandis que R3 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène, un 5 groupe hydrocarboné ou encore un groupe de formule (III) identique à R1 et R2. 10. Composé selon la revendication 9, dans lequel, lorsque R4 représente le groupe lieur, alors 10 celui-ci se trouve en a du groupe R. 11. Composé selon la revendication 9 ou la revendication 10, dans lequel le groupe de formule (III) constituant R2 et R3 lorsque R4 est un atome 15 d'hydrogène, ou R1 et R2 lorsque R4 est un groupe lieur, est un groupe où a vaut 0, R35 et R36 de B représentent des atomes d'hydrogène ou des groupes alkyle en Cl à C4, avantageusement méthyle ou éthyle, tandis que Q2 a la même signification que précédemment. 20 12. Composé selon la revendication 11, dans lequel le groupe de formule (III) constituant R2 et R3 lorsque R4 est un atome d'hydrogène, ou R1 et R2 lorsque R4 est un groupe lieur, est un groupe où Q2 représente 25 un groupe de formule (vi) dans laquelle R6 à R10 ont la même signification que précédemment, ou un groupe de formule (iv) dans laquelle W, R26 à R30 ont la même signification que précédemment. 30 13. Composé selon la revendication 12, dans lequel le groupe de formule (III) constituant R2 et R3 2908408 75 lorsque R4 est un atome d'hydrogène, ou R1 et R2 lorsque R4 est un groupe lieur, est choisi parmi : (a) les groupes de formule (III-1) ci-après : R6 R7 5 dans laquelle R6 à R9, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; (b) les groupes de formule (III-2) ci-après : Rio dans laquelle R6 à Rio, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; 15 (c) les groupes de formule (III-3) ci-après R9 Rio dans laquelle R7 , R9, Rio, R35 et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un 10 2908408 76 atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle ; et (d) les groupes de formule (III-4) ci-après : 5 dans laquelle R26 à R29, Ras et R36 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, de préférence méthyle ou éthyle. 10 14. Composé selon l'une quelconque des revendications 9 à 13, dans lequel R4 est un groupe lieur, tandis que R1r R2 et R3 représentent tous un groupe de formule (III-5) ou (III-6) ci-après : 15 (III-5) 15. Composé selon la revendication 14, qui est choisi parmi les composés suivants : û 4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-20 yl) -vinyl]phényl) amino] -2- [ (E) -2- (1, 3-benzothiazol-2-yl)-vinyl]phénoxy}butanoate d'éthyle ; acide 4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-yl) vinyl] phényl)amino] -2- [ (E) -2- (1, 3-benzothiazol-2-yl)vinyl]phénoxy}butanoïque ; 2908408 77 -4-{5-[bis(4-[(E)-2-(1,3-benzothiazol-2-yl) vinyl] phényl) amino] -2- [ (E) -2- (1, 3-benzothiazol-2-yl)vinyl]phénoxy}butanoate de succinimidyle ; -(3- (8-bromooctyloxy) -{4- [ (E) -2- (benzo- 5 thiazol-2-yl)vinyl]}-N,N-bis-{4-[(E)-2-(benzothiazol-2-yl)vinyl]phényl} aniline ; - (3-(8-(2,5-dioxo-1-aza)cyclopent-3-ényl)-octyloxy)-{4-[(E)-2(benzothiazol-2-yl)vinyl]}-N,N-bis-{4-[(E)-2-(benzothiazol-2-yl)vinyl] phényl}- 10 aniline ; - la (3-(9-bromononyloxy)-4-{4-[(E)-2-(pyridin-4-yl)vinyl]phényl}-N,N-bis-{4-[ (E)-2-(pyridin-4-yl)-vinyl]phényl}aniline ; - la tris-méthiodure de 3-(9-bromononyl- 15 oxy)-4, ris (2- ((E) -pyL idin-4 yl) _nyl) t.._iphénylamine - le 4- (N,N-bis- (4- (2- (pyridin-4-yl) -vinyl))phényl)aminobenzoate de méthyle ; et - le 4-(N,N-bis-(4-(2-(benzothiazol-2-yl)- 20 vinyl))phényl)aminobenzoate de méthyle. 16. Composition comprenant au moins un composé de formule générale (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, en solution dans un solvant. 17. Utilisation d'au moins un composé de formule générale (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 15 pour le marquage d'une biomolécule. 25 30 2908408 78 18. Utilisation d'une composition selon la revendication 16 pour le marquage d'une biomolécule. 19. Biomolécule marquée par au moins un 5 composé de formule générale (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 15. 20. Biomolécule selon la revendication 19, qui est un acide nucléique, une protéine, un 10 polypeptide ou un fragment de ceux-ci.