Brevet FR2904558A1 — publié le 20080208

--> Le facteur VII (FVII) est une glycoprotéine vitamine K-dépendante qui, sous sa forme activée (FVIIa) , participe au processus de coagulation en activant le facteur X et le facteur IX en présence de calcium et du facteur tissulaire. Le FVII est sécrété sous la forme d'une chaîne peptidique unique de 406 résidus, dont la masse moléculaire est d'environ 50 kDa. Le FVII comporte quatre domaines structuraux distincts : le domaine γ-carboxylique (Gla) N-terminal, deux domaines "epidermal growth factor (EGF)-like", ainsi qu'un domaine serine protease. L' activation du FVII en FVIIa est caractérisée par la coupure de la liaison Argι 52 -Ilei 53 (Arginine 152- Isoleucine 153). Le FVIIa est donc composé d'une chaîne légère de 152 acides aminés de masse moléculaire d'environ 20 kDa et d'une chaîne lourde de 254 acides aminés de masse moléculaire d'environ 30 kDa liées entre elles par un seul pont disulfure (Cys 135 -C s 262 ) Le FVIIa plasmatique (FVIIa, p) comporte plusieurs modifications post-traductionnelles : les dix premiers acides glutamiques sont γ-carboxylés, l'Asp 63 (acide aspartique) est partiellement hydroxylé, la Ser 52 (Serine 52) et la Ser 60 (Sérine 60) sont O-glycosylées et portent respectivement les motifs Glucose (Xylose) 0-2 et Fucose, l'Asn 145 (Asparagine 145) et l'Asn 322 (Asparagine 322) sont N-glycosylées majoritairement par des formes glycanniques complexes biantennées bisialylées . Le FVII est utilisé dans le traitement des patients atteints d'hémophilie, présentant un déficit en facteur VIII (hémophilie de type A) ou en facteur IX (hémophilie de type B) , ainsi que des patients présentant d'autres déficiences des facteurs de coagulation, par exemple un déficit héréditaire en FVII. Le FVII est également préconisé dans le traitement d'accidents vasculaires cérébraux. Il est -->donc nécessaire de disposer de concentrés de FVIIa injectables . La méthode la plus ancienne d'obtention de concentrés de FVIIa a consisté en la purification du FVIIa à partir de protéines plasmatiques issues du fractionnement . Le document EP 0 346 241 décrit à cet effet la préparation d'une fraction enrichie en FVIIa, obtenue après adsorption puis élution d'un sous-produit du fractionnement de protéines plasmatiques contenant le FVII et le FVIIa et d'autres protéines telles les facteurs IX (FIX) , X (FX) et II (Fil) , notamment le prééluat du PPSB (P = prothrombine ou Fil, P proconvertine ou FVII, S = facteur de Stuart ou FX et B = facteur antihémophilique B ou FIX) . L'inconvénient de ce procédé est que le FVII obtenu contient encore quelques traces d'autres facteurs de coagulation. De même, le document EP 0 547 932 décrit un procédé de fabrication d'un concentré de FVIIa de haute pureté essentiellement dépourvu des facteurs vitamine K dépendants et du FVIII. Le FVII obtenu par ce procédé, malgré sa pureté, présente une activité thrombogénique résiduelle . L'un des inconvénients majeurs de ces procédés est qu'ils ne permettent d'obtenir que de faibles quantités de produits. Par ailleurs, il demeure difficile d'obtenir un produit totalement dépourvu d'autres protéines présentes dans le plasma. Enfin, bien que de nombreuses précautions soient prises à tous les stades de l'élaboration des facteurs plasmatiques de la coagulation pour assurer leur sécurité virale et bactérienne (suivis des donneurs de sang, tests pour détecter les contaminants viraux et bactériens connus, traitements rigoureux de purification et d' inactivation virale pour réduire au maximum le risque de -->transmission d'agents pathogènes véhiculés par le sang) , tout risque de contamination par des agents pathogènes n'est pas écarté. De plus, l'émergence de la nouvelle variante de la maladie de Creutzfeldt-Jakob a fait resurgir les craintes de transmission d'agents pathogènes non conventionnels par les produits issus du sang. En outre, le volume de plasma collecté auprès des donneurs de sang reste limité. C'est pourquoi, dés les années 1980, l'ADN codant pour le facteur VII humain a été isolé (Hagen et al. (1986) ; Proc. Natl. Acad. Sci . USA ; Apr 83 (8) : 2412 -6) et la protéine correspondante exprimée dans les cellules de mammifères BHK (Baby Hamster Kidney) (document EP 0 200 421). La demande de brevet FR 06 04872 déposée par la Demanderesse décrit également la production de FVIIa dans un animal transgénique. Ces méthodes de production permettent d'obtenir des protéines sécurisées en terme de contamination par des virus ou d'autres agents pathogènes. De plus, de tels procédés permettent d'obtenir des protéines dont la séquence primaire, c'est-à-dire un enchaînement identique entre les différents acides aminés, est identique à la séquence primaire humaine. Toutefois, le FVII plasmatique humain possède des modifications posttraductionnelles complexes : les dix premiers acides glutamiques sont γ-carboxylés, l'Asp 63 est partiellement hydroxylé (acide aspartique 63), la Ser 52 (Serine 52) et la Ser 60 (Serine 60) sont O-glycosylées et portent respectivement les motifs Glucose (Xylose) 0 - 2 e Fucose, l'Asn 145 (Asparagine 145) et l'Asn 322 (Asparagine 322) sont N-glycosylées majoritairement par des formes de type complexe, biantennées et bisialylées. Notamment, l'addition des N-glycannes (glycannes liés à 1 ' asparagine) est particulièrement importante pour le repliement correct de la protéine, la stabilité in vi tro et in vivo, la bio-activité et les propriétés -->pharmaco-cinétiques (bio-disponibilité par exemple) de la protéine hétérologue produite. Ainsi, des variations de tout ou partie des modifications posttraductionnelles exposent d'une part au risque que la protéine ne soit pas active, et d'autre part au risque qu'elle soit immunogène . Or les FVII recombinants ou transgéniques existants peuvent présenter, de par leur expression dans des systèmes différents des systèmes humains, une glycosylation qui diffère de la glycosylation du FVII plasmatique humain. Les préparations commerciales de FVIIa recombinant (FVIIa, r) humain actuellement disponibles sont vendues sous l'appellation NovoSeven ® (NovoNordisk™) . Pour ce type de produit, des doses relativement élevées, ainsi que des administrations fréquentes, par voie intraveineuse, sont nécessaires pour atteindre et conserver l'effet thérapeutique ou prophylactique désiré. Ces traitements, très contraignants pour les patients, altèrent de manière marquée leur qualité de vie . II existe donc un besoin de compositions thérapeutiques ou prophylactiques de FVIIa, dont la posologie ou la fréquence des administrations soit moins contraignante pour les patients . C'est pourquoi la Demanderesse a cherché à mettre au point une composition de FVII, de préférence activé, recombinant ou transgénique, dont les caractéristiques pharmacocinétiques permettent d'envisager une meilleure qualité de vie pour les patients, c'est-à-dire des administrations moins fréquentes, ainsi que des doses moins élevées. -->Ainsi, l'invention se rapporte à une composition de facteur VII recombinant ou transgénique, chaque molécule de facteur VII de la composition comportant des formes glycanniques liées aux sites de Nglycosylation, caractérisé en ce que, parmi toutes les molécules de facteur VII de ladite composition, les formes glycanniques biantennées, bisialylées et non fucosylées sont majoritaires par rapport à toutes les formes glycanniques liées aux sites de N-glycosylation du facteur VII de la composition. La Demanderesse a découvert de manière surprenante qu'une composition de FVII recombinant ou transgénique, dont les formes biantennées, bisialylées et non fucosylées sont majoritaires, présente une biodisponibilité augmentée, une clairance diminuée et une stabilité accrue par rapport à une composition de FVII recombinant ou transgénique dont le taux de formes bisialylées est moindre. Par biodisponibilité, on désigne le pourcentage de FVII administré diffusant dans la circulation sanguine et donc susceptible en particulier de parvenir au site hémorragique . Par clairance, on désigne la fraction .d'un volume théorique totalement épuré, c'est-à-dire ne contenant plus le FVII par unité de temps. Autrement dit, ceci correspond à la quantité hypothétique de fluide qui serait complètement débarrassée de la substance dans un intervalle unitaire de temps. Par stabilité, on désigne l'aptitude du FVII à conserver ses propriétés chimiques, physiques, microbiologiques et biopharmaceutiques dans des limites spécifiques pendant toute sa durée de validité. -->Par formes glycanniques biantennées, bisialylées et non fucosylées, on désigne les formes ci-dessous : Forme A2 (biantennée, bisialylée et non fucosylée) A : Acide sialique Galactose N-acétylglucosamine (GlcNAc) :Mannose Ces formes glycanniques sont liées aux sites de Nglycosylation constitués par l' asparagine 145 (Asnl45) et l'asparagine 322 (Asn322). En effet, le FVII de l'invention comporte, comme le FVII humain, deux sites de N-glycosylation, en position 145 et 322, et 2 sites de O-glycosylation, en position 52 et 60. Sur un site de N-glycosylation, les chaînes d' oligosaccharides sont liées à une asparagine (N-liées) . Sur un site de 0glycosylation, les chaînes dOligosaccharides sont liées à une serine. Chaque molécule de FVII de -->l'invention comporte donc deux chaînes d' oligosaccharides N-liées. Toutefois, les molécules de FVII de la composition ne présentent pas une glycosylation homogène, c'est-à-dire que toutes les chaînes d' oligosaccharides N-liées ne sont pas identiques entre elles. Il s'agit d'un mélange de différentes formes glycanniques. En effet, tout FVII, qu'il soit plasmatique, recombinant ou transgénique, se présente sous forme d'un mélange de plusieurs protéines de FVII, ces protéines se différenciant entre elles notamment par leur glycosylation et autrement appelées glycoformes . Cette glycosylation est due à une maturation posttraductionnelle effectuée par les organites cellulaires au cours du transfert de la protéine de FVII entre les différents compartiments cellulaires. Cette modification biochimique modifie profondément la protéine, de telle sorte que la protéine finale est parfaitement structurée et donc à la fois active et bien tolérée par l'organisme. Cette modification chimique contribue à la régulation de l'activité de la protéine, ainsi qu'à sa localisation. On peut donc quantifier, pour la totalité de la composition, et donc pour la totalité des chaînes d' oligosaccharides N-liées de la composition, le taux de chaque forme glycannique ou de chaque sucre présent dans la composition. Les pourcentages des différents glycannes donnés dans la présente demande ne tiennent pas compte de la O-glycosylation. Par composition de FVII on désigne une composition dont la seule entité moléculaire est le FVII, de préférence activé. Chaque molécule de FVII de la composition présente la même séquence primaire, mais une glycosylation variant d'une molécule à l'autre. Le terme composition de FVII désigne donc un mélange de -->molécules de même séquence primaire, caractérisé par ses teneurs en formes glycanniques. Aux fins de l'invention, les expressions FVII et composition de FVII sont équivalentes. La composition de FVII de l'invention est une composition de FVII dont les formes glycanniques biantennées, bisialylées et non fucosylées sont majoritaires. Ceci signifie que parmi l'ensemble des oligosaccharides N-liées de la composition, c'est-àdire toutes les formes glycanniques liées aux sites de N-glycosylation du facteur VII, les formes biantennées, bisialylées et non fucosylées sont les plus représentées . Les taux d'espèces sialylées peuvent être déterminés empiriquement par les analyses en HPCE-LIF (Electrophorèse capillaire haute performancefluorescence induite par laser) et/ou NP-HPLC (Chromatographie Liquide Haute Performance de Partage Classique) avec quantification par mesure de l'aire des pics correspondants aux différents glycannes, ou par toute autre méthode connue de l'homme du métier. La composition de FVII de l'invention peut comporter également des formes minoritaires biantennées monosialylées , et triantennées , ainsi que des formes neutres, ne présentant pas d'acides sialiques. Par FVII recombinant ou transgénique , on désigne tout FVII issu du génie génétique et présentant les caractéristiques de glycosylation énoncées. Ainsi, le FVII de l'invention est issu de la transcription puis de la traduction d'une molécule d'ADN codant pour le FVII dans un hôte cellulaire ou par un animal transgénique. Le FVII recombinant ou transgénique de l'invention peut être obtenu au moyen -->de techniques standards, bien connues de l'homme du métier, permettant l'expression d'une protéine dans un système biologique. Plus particulièrement, on entend par FVII recombinant tout FVII obtenu par recombinaison génétique et exprimé par une lignée cellulaire mise en culture. A titre d'exemple, on peut citer les lignées suivantes : BHK (Baby Hamster Kidney) et notamment BHK tk " tsl3 (CRL 10314, Waechter and Baserga, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 79:1106-1110, 1982), CHO (ATCC CCL 61), COS-1 (ATCC CRL 1650), HEK293 (ATCC CRL 1573; Graham et al., J. Gen . Virol . 36:59-72, 1977), Rat Hep I (Rat hepatoma; ATCC CRL 1600) , Rat Hep II (Rat hepatoma; ATCC CRL 1548) , TCMK (ATCC CCL 139) , Human lung (ATCC HB 8065), NCTC 1469 (ATCC CCL 9.1) and DUKX cells (CHO cell line) (Urlaub and Chasin, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216-4220, 1980), cellules 3T3 , cellules Namalwa, ou des cellules BHK adaptées à la culture sans sérum (Document US 6,903,069). De plus, on entend plus particulièrement par FVII transgénique tout FVII obtenu par recombinaison génétique et exprimé par un tissu vivant, animal ou végétal . Le taux de formes bisialylées de l'invention peut être atteint de différentes manières. Dans un mode de réalisation particulier, le FVII de l'invention est exprimé dans un micro-organisme, plante ou animal conférant les caractéristiques de glycosylation énoncées, c'est-à-dire une majorité de formes biantennées, bisialylées et non fucosylées. Dans un autre mode de réalisation, le FVII de l'invention est exprimé dans un micro-organisme, plante ou animal ne permettant pas d'obtenir une composition de FVII présentant une majorité de formes biantennées bisialylées et non fucosylées, la sialylation étant -->réalisée par la suite in vi tro, au moyen d'une ou de plusieurs enzymes permettant de conférer la sialylation désirée, c'est-à-dire que les formes biantennées et bisialylées deviennent majoritaires et que les formes triantennées deviennent trisialylées . A titre d'exemple, on peut faire agir une sialyltransférase, in vi tro, sur une composition de FVII choisie pour ses propriétés avantageuses, dans des conditions appropriées pour permettre la sialylation souhaitée. Ainsi, la composition de FVII de l'invention est susceptible d'être obtenue en faisant agir une sialyltransférase sur une composition de FVII partiellement sialylée (composition de FVII de départ) . Avantageusement, la composition de FVII de départ présente des formes glycanniques biantennées, monosialylées majoritaires. L'action de la sialyltransférase permet de greffer un acide sialique supplémentaire sur les formes monosialylées, les faisant passer à une forme bisialylée. Avantageusement, ces formes biantennées, monosialylées sont présentes dans la composition de FVII de départ à un taux d'au moins 40%. Avantageusement, au moins certains des acides sialiques de la composition de départ impliquent des liaisons α2-6. Avantageusement, tous les acides sialiques de la composition de départ impliquent des liaisons 2-6. D'une manière particulièrement avantageuse, la composition de FVII de départ est choisie pour son caractère peu immunogène . Avantageusement, la composition de départ est la composition de FVII décrite dans le document FR 06 04872 dont le contenu est considéré comme inclus dans le présent document. Avantageusement, le FVII de l'invention est un polypeptide dont la séquence peptidique peut être celle -->du FVII humain naturel, c'est-à-dire la séquence présente chez les humains ne présentant pas de troubles liés au FVII. Une telle séquence peut être codée par exemple par la séquence 1b décrite dans le document EP 0 200 421. Avantageusement, la séquence du FVII de l'invention est la séquence de SEQ ID NO : 1. Dans un autre mode de réalisation, le FVII de l'invention peut être un variant du FVII humain naturel, dans la mesure où ce variant n'est pas plus immunogène que le FVII naturel. Ainsi, la séquence peptidique de ce variant peut posséder au moins 70% d'identité, et de manière avantageuse au moins 80% ou 90%, et de manière encore plus avantageuse au moins 99% d'identité avec la séquence du FVII humain naturel, un tel variant possédant essentiellement la même activité biologique que le FVII naturel. Par ailleurs, le FVII de l'invention désigne également toute séquence de FVII modifiée de manière à ce que l'activité biologique de la protéine soit réduite par rapport au FVII naturel humain. A titre d'exemple, on peut citer le FVII humain .recombinant inactivé FFR-FVIIa, utilisé pour le traitement ou la prévention des thromboses (Holst et al, Eur. J.Vasc.Endovasc.Surg. , 1998 Jun, 15(6) : 515-520). De tels FVII sont des polypeptides présentant une séquence en acides aminés qui diffère de la séquence du FVII naturel par l'insertion, la délétion ou la substitution d'un ou de plusieurs acides aminés. L'activité biologique du FVII de l'invention peut être quantifiée en mesurant la capacité d'une composition de FVII à induire la coagulation sanguine au moyen d'un plasma déficient en FVII et de la -->thromboplastine, comme par exemple décrit dans le brevet US 5,997,864. Dans le test décrit dans le brevet US 5,997,864, l'activité biologique est exprimée par une réduction du temps de coagulation par rapport à l'échantillon contrôle, et est convertie en unités de FVII par comparaison avec un standard.de sérum humain (pool) contenant 1 unité/ml d'activité de FVII. La composition de FVII de l'invention présente des caractéristiques de glycosylation se rapprochant de celle du FVII plasmatique. En effet, la forme des Nglycannes majoritaire du FVII plasmatique (ou composition de FVII plasmatique) est également la forme biantennée, bisialylée. Avantageusement, le taux de formes biantennées, bisialylées est supérieur ou égal à 30%, ou à 40% ou à 50%. De manière particulièrement avantageuse, le taux de formes biantennées, bisialylées est supérieur à 60%, ou à 70%, ou à 80% ou bien encore à 90 ; -δ . Avantageusement, le taux de fucose de la composition de FVII de l'invention est compris entre 20% et 50%. Ce taux correspond au taux de fucose mesuré parmi toutes les formes glycanniques du .FVII de la composition. Cette caractéristique est l'un des avantages du FVII de l'invention. En effet, le FVII recombinant disponible dans le commerce (NovoSeven ® ) présente un taux de fucosylation de 100%, alors que le FVII plasmatique possède un taux de fucosylation de 16% environ. Ainsi, la fucosylation du FVII de l'invention est proche de celle du FVII plasmatique, ce qui confère un avantage au FVII de l'invention en terme d'innocuité. -->Avantageusement, au moins certains des acides sialiques de la composition de facteur VII de l'invention impliquent des liaisons α2-6. La composition de FVII de l'invention comporte donc un taux non nul d'acide sialique impliquant des liaisons α2-6. Ceci est un avantage par rapport au FVII recombinant commercial, qui ne comporte que des acides sialiques impliquant des liaisons α2-3, alors que le FVII plasmatique en comporte. Dans un mode particulier de réalisation de l'invention, tous les acides sialiques de la composition de FVII de l'invention impliquent des liaisons a2 - 6 . De façon particulièrement préférée, tous les acides sialiques impliquent des liaisons 2,6, c'est-àdire que tous les acides sialiques sont liés au galactose par une liaison α2 , 6 , et, en particulier, au moins 90% des acides sialiques du FVII impliquent des liaisons .2 , 6. La composition de FVII selon l'invention peut en outre comprendre des acides sialiques de liaisons α2-3. Le fait que des acides sialiques du FVII de la composition impliquent des branchements .2 , 6 est un des avantages du FVII de l'invention. En effet, les acides sialiques du FVII recombinant disponible dans le commerce impliquent uniquement des liaisons α2 , 3. Or, le FVII plasmatique est un mélange de ces deux isomères. Un tel FVII plasmatique contient par exemple 40% d'isomères a.2 , 3 et 60% d'isomères a2 , 6 . Toutefois, ce dernier comporte plus de liaisons oι2 , 6 , ce qui rapproche encore le FVII de l'invention du FVII plasmatique . Dans un autre mode de réalisation, certains acides sialiques de la composition de FVII de l'invention impliquent des liaisons α2-3. -->Avantageusement, la composition de FVII de l'invention est susceptible d'être produite par un mammifère non humain transgénique. Dans ce mode de réalisation la composition de FVII de l'invention sera donc qualifiée de transgénique . Par mammifère transgénique, on entend tout mammifère à l'exception de l'être humain, manipulé génétiquement pour exprimer une protéine exogène. La protéine exogène est le FVII, de préférence le FVII humain. Le mammifère non humain transgénique peut, en plus du FVII, exprimer une enzyme exogène de manière à conférer la sialylation désirée à la composition de FVII transgénique. Dans un mode particulier de réalisation de l'invention, le FVII transgénique de l'invention est exprimé dans les glandes mammaires du mammifère transgénique et produit dans son lait . Avantageusement, la composition de FVII de l'invention est susceptible d'être produite par une lapine transgénique, ladite composition étant ensuite soumise à une sialylation in vi tro de manière à ce que les formes biantennées, bisialylées deviennent majoritaires. Le lapin est une espèce particulièrement avantageuse pour la production de protéines thérapeutiques car le lapin ne semble pas sensible aux prions, notamment à 1 ' encéphalopathie spongiforme subaiguë transmissible, qui constitue un problème de santé publique majeur. De plus, la barrière d'espèce entre le lapin et l'homme est importante. A l'inverse, la barrière d'espèce entre l'homme et le hamster, qui est le système biologique dans lequel est produit le FVII recombinant disponible dans le commerce, est moins importante . -->Ainsi, la production du FVII dans le lapin est avantageuse en terme de sécurité quant à la transmission d'agents pathogènes, y compris d'agents pathogènes non conventionnels de type prions. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le FVII de l'invention est produit dans les glandes mammaires de lapines transgéniques . La sécrétion par les glandes mammaires de la protéine d'intérêt, permettant sa sécrétion dans le lait du mammifère transgénique est une technique bien connue de l'homme du métier, qui implique le contrôle de l'expression de la protéine recombinante de manière tissus-dépendante . Le contrôle tissulaire de l'expression est effectué grâce à des séquences permettant l'expression de la protéine vers un tissu particulier de l'animal. Ces séquences sont notamment les séquences promoteur, ainsi que les séquences peptides signal. Des exemples de promoteurs permettant l'expression d'une protéine d'intérêt dans les glandes mammaires sont le promoteur WAP (whey acidic protein) , le promoteur de la caséine, le promoteur de la βlactoglobuline, cette liste n'étant pas limitative. Une méthode de production d'une protéine recombinante dans le lait d'un animal transgénique peut comporter les étapes suivantes : une molécule d'ADN synthétique comprenant un gène codant pour le FVII humain, ce gène étant sous le contrôle d'un promoteur d'une protéine sécrétée naturellement dans le lait, est intégrée dans un embryon d'un mammifère non humain. L'embryon est ensuite placé dans une femelle de mammifère de la même espèce. Une fois que le mammifère issu de l'embryon s'est suffisamment développé, la lactation du mammifère est induite, puis le lait -->collecté. Le lait contient alors le FVII transgénique d'intérêt. . ' Un exemple de procédé de préparation de protéine dans le lait d'une femelle de mammifère autre que l'être humain est donné dans le document EP 0 527 063, dont l'enseignement peut être repris pour la production de la protéine d'intérêt de l'invention. Un plasmide contenant le promoteur WAP est fabriqué par introduction d'une séquence comportant le promoteur du gène WAP, ce plasmide étant réalisé de manière à pouvoir recevoir un gène étranger placé sous la dépendance du promoteur WAP. Le gène codant pour le FVII humain est intégré, et placé sous la dépendance du promoteur WAP. Le plasmide contenant le promoteur et le gène codant pour la protéine d' intérêt sont utilisés pour obtenir des lapines transgéniques, par microinjection dans le pronucléus mâle d'embryons de lapins. Les embryons sont ensuite transférés dans l'oviducte de femelles hormonalement préparées. La présence des transgènes est révélée par la technique de Southern à partir de l'ADN extrait des lapereaux transgéniques obtenus. Les concentrations dans le lait des animaux sont évaluées à l'aide de tests radioimmunologiques spécifiques. La composition de FVII de lapine se caractérise en ce que au moins certains des acides sialiques du facteur VII impliquent des liaisons α2-6. De façon particulièrement préférée, tous les acides sialiques impliquent des liaisons ct2 , 6 , et, en particulier, au moins 90% des acides sialiques du FVII impliquent des liaisons .2 , 6 . La composition de FVII selon l'invention peut en outre comprendre des acides sialiques de liaisons 2-3. -->Parmi les formes glycanniques biantennées, monosialylées de la composition de FVII de lapine, les formes glycanniques majoritaires sont non fucosylées. Avantageusement, ces formes glycanniques biantennées, monosialylées non fucosylées sont présentes dans le FVII de cette composition à un taux au moins supérieur à 20%. Avantageusement, ce taux est au moins supérieur à 25%, ou encore à au moins 40%. Dans un mode de réalisation de l'invention, le taux de fucosylation du FVII de cette composition de l'invention est compris entre 20% et 50%. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, ce taux peut être inférieur à 15%. Le FVII transgénique de lapine comporte plusieurs modifications post-traductionnelles : les neuf ou dix premiers acides glutamiques N-terminaux sont y carboxylés, l'Asp 63 (Asparagine63 ) est partiellement hydroxylé, la Ser 52 (Serine 52) et la Ser 60 (Serine 60) sont O-glycosylées et portent respectivement les motifs Glucose (Xylose) 0-2 et Fucose, l'Asnι 5 et l'Asn 322 sont Nglycosylées majoritairement par des formes glycanniques complexes biantennées monosialylées. Une telle composition de FVII produite par les glandes mammaires de lapine est décrite dans le document FR 06 04872, dont le contenu est incorporé dans le présent enseignement. Le FVII produit dans le lait par des mammifères transgénique peut être purifié à partir du lait par des techniques connues de l'homme du métier. Par exemple, une méthode de purification d'une protéine d'intérêt à partir de lait, telle que décrite dans le brevet US 6,268,487, peut comprendre les étapes suivantes consistant à : a) soumettre le lait à une filtration tangentielle sur une membrane de porosité suffisante pour former un rétentat et un perméat , le perméat contenant la protéine exogène, b) soumettre le -->perméat à un appareil de capture par chromatographie de manière à déplacer la protéine exogène et obtenir un effluent, c) combiner l'effluent et le rétentat, d) répéter les étapes a) à c) jusqu'à ce que le FVII soit séparé des lipides, des micelles de caséines, et que le FVII soit récupéré à au moins 75%. Une autre technique de purification du FVII produit dans le lait d'un mammifère transgénique est décrite dans la demande de brevet FR 06 04864 déposée par la Demanderesse, dont le contenu est incorporé par référence. Ce procédé d'extraction et de purification du FVII contenu dans du lait d'un animal transgénique, comprend les étapes suivantes consistant à : a) extraire le FVII à partir du lait, le facteur VII étant lié aux sels et/ou complexes organiques et/ou inorganiques de calcium dudit lait, par la précipitation de composés de calcium obtenue par ajout dans le lait d'un sel soluble, dont l'anion est choisi pour son aptitude à former lesdits composés de calcium insolubles pour ainsi libérer le facteur VII desdits sels et/ou complexes, le facteur VII étant présent dans une phase liquide, b) séparer la phase liquide enrichie en la protéine du précipité de composés de calcium, ladite phase liquide étant en outre séparée en une phase lipidique et une phase aqueuse non lipidique comprenant la protéine, c) soumettre la phase aqueuse non lipidique à une étape de chromatographie d'affinité, en utilisant un tampon d' élution à base d'un sel de phosphate à une concentration prédéterminée, et -->d) soumettre l'éluat de facteur VII, obtenu selon l'étape c) , à deux ou trois étapes de chromatographie sur des colonnes échangeuses d'anions de type base faible utilisant des tampons appropriés pour des élutions successives du facteur VII retenu sur lesdites colonnes. En effet, la Demanderesse a constaté de manière surprenante que le FVII, même placé sous le contrôle d'un promoteur d'une protéine naturellement produite dans le lactosérum, comme le promoteur WAP par exemple, est néanmoins susceptible de se trouver associé aux ions calcium du lait, et donc aux micelles de caséines. C'est pourquoi ce procédé d'extraction et de purification du FVII, susceptible de capter cette protéine qu'elle soit associée dans des complexes du lactosérum ou engagée dans des micelles de caséines, le FVII présentant une affinité pour les ions calcium du lait. Lorsque la composition de FVII est produite par une lapine transgénique, elle est soumise à une sialylation in vi tro de manière à ce que les formes biantennées, bisialylées deviennent majoritaires. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la sialylation est effectuée au moyen d'une sialyltransférase, par exemple I'α2,6-(N)sialyltransférase (ou -D-Galactosyl- βl , 4-N-acétyl- βD-glucosamine-o;2 , 6-sialyltransférase) , ou la Gai bêta l,3GalNAc alpha 2 , 3-sialyltransférase, ou la Gai bêta 1,3(4) GlcNAc alpha 2,3 sialyltransférase, ou GalNAc alpha-2, 6-sialyltransférase I. Préférentiellement , la sialyltransférase utilisée est une sialyltransférase permettant de transférer des acides sialiques via une liaison . 2 , 6 . En effet, il est avantageux que la composition de FVII de l'invention présente des acides sialiques impliquant -->des liaisons α2-6, car cet isomère est plus représenté dans le FVII plasmatique. La sialylation peut être effectuée avec un substrat donneur d'acide sialique. Selon un mode de réalisation de l'invention, si l'enzyme est 1 ' α2 , 6- (N) -sialyltransférase, le substrat est l'acide cytidine-5 ' -monophospho-Nacétylneuraminique, dans un milieu reactionnel approprié pour permettre le transfert de l'acide sialique du groupement donneur d'acide sialique au FVII, les formes biantennées, bisialylées devenant majoritaires . Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le substrat peut être synthétisé dans le milieu reactionnel en incluant dans ce milieu une CMP-sialique acide synthetase, de l'acide sialique, du CTP (cytidine triphosphate) et un taux suffisant d'un cation métallique divalent . Quel que soit le mode de réalisation de la sialylation de la composition de FVII, la réaction est toujours effectuée pendant un temps suffisant et des conditions appropriées pour permettre l'augmentation des formes bisialylées de manière suffisante pour qu'elles deviennent majoritaires. Avantageusement, le FVII de la composition de l'invention est activé (FVIIa) . A ce titre, le FVIIa peut présenter une activité coagulante 25 à 100 fois supérieure à celle du FVII (non activé) lorsque ce dernier interagit en lieu et place du premier avec le facteur tissulaire (FT) . L' activation du FVII résulte, in vivo, du clivage du zymogène par différentes protéases (FIXa, FXa, FVIIa) en deux chaînes réunies par un pont disulfure. Le FVIIa seul a très peu d'activité enzymatique, mais complexé avec son cofacteur, le facteur tissulaire (FT) , il déclenche le processus de la coagulation en activant le FX et le FIX. Le FVIIa est le facteur de la coagulation -->responsable de l'hémostase chez les hémophiles ayant des anticorps circulants par exemple. D'une manière particulièrement avantageuse, le FVII de l'invention est totalement activé. Avantageusement, le FVIIa de l'invention comporte plusieurs modifications posttraductionnelles : les neuf ou dix premiers acides glutamiques N-terminaux sont γ -carboxylés, l'Asp 63 est partiellement hydroxylé, la Ser 52 et la Ser 6 o sont Oglycosylées et portent respectivement les motifs Glucose (Xylose) 0-2 et Fucose, l'Asnι 45 et l'Asn 32 2 sont Nglycosylées majoritairement par des formes complexes biantennées, bisialylées et non fucosylées. L' activation du FVII peut également résulter d'un procédé réalisé in vi tro, par exemple lors de la purification du FVII de l'invention (cf. exemple 2) . Le FVIIa de l'invention est donc composé d'une chaîne légère de 152 acides aminés de poids moléculaire d'environ 20 kDa et d'une chaîne lourde de 254 acides aminés de poids moléculaire d'environ 30 kDa) liées entre elles par un seul pont disulfure (Cysι 35 -Cys 262 ) . Ainsi, le FVII de l'invention est un FVII activé possédant une activité et une structure proche du FVII plasmatique . Le FVIIa présente une activité coagulante 25 à 100 fois supérieure à celle du FVII lorsqu'ils interagissent avec le facteur tissulaire (FT) . Dans un mode de réalisation de l'invention, le FVII peut être activé in vi tro par les facteurs Xa, Vlla, lia, IXa et Xlla. Le FVII de l'invention peut également être activé pendant son procédé de purification. Un autre objet de l'invention est une composition de FVII de l'invention, pour son utilisation comme médicament . -->Un autre objet de l'invention est l'utilisation d'une composition de facteur VII selon l'invention, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des patients atteints d'hémophilie. Un autre objet de l'invention est l'utilisation d'une composition de facteur VII selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des traumatismes hémorragiques multiples. Un autre objet de l'invention est l'utilisation d'une composition de facteur VII selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des hémorragies dues à un surdosage en anticoagulants. Un autre objet de l'invention est une composition pharmaceutique comprenant le facteur VII selon l'invention et un excipient et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptables. Un autre objet de l'invention est un procédé de préparation d'une composition de facteur VII recombinant ou transgénique, dont chaque molécule de facteur VII de la composition comporte des formes glycanniques liées aux sites de N-glycosylation et dans laquelle parmi toutes les molécules de facteur VII de ladite composition, les formes glycanniques biantennées, bisialylées sont majoritaires, comprenant une étape de sialylation par mise en contact d'une composition de facteur VII transgénique ou recombinant partiellement sialylé avec un substrat donneur d'acide sialique et une sialyltrasférase, dans un milieu reactionnel approprié pour permettre l'activité de la sialyltransférase, pendant une durée suffisante et des conditions appropriées pour permettre un transfert de l'acide sialique du substrat donneur d'acide sialique -->au FVII et une augmentation des formes bisialylées de manière suffisante. On entend par partiellement sialylé une composition de FVII dont les formes glycanniques liées en N ne sont pas toutes bisialylées, c'est-à-dire dont certaines formes sont monosialylées. Avantageusement, la sialyltransférase est l'α2,6(N) -sialyltransférase (ou -D-Galactosyl- 31,4-Nacétyl- /3-D-glucosamine-α;2 , 6-sialyltransférase) , ou la Gai bêta l,3GalNAc alpha 2 , 3 -sialyltransférase, ou la Gai bêta 1,3(4) GlcNAc alpha 2,3 sialyltransférase, ou GalNAc alpha-2 , 6-sialyltransférase I. Préférentiellement , la sialyltransférase utilisée est une sialyltransférase permettant de transférer des acides sialiques via une liaison a.2 , 6. En effet, il est avantageux que le FVII de la composition de l'invention présente des acides sialiques impliquant des liaisons α2-6, car cet isomère est plus représenté dans le FVII plasmatique. La sialylation peut être effectuée avec tout substrat donneur d'acide sialique. Selon un mode de réalisation, si l'enzyme est 1 ' α2 , 6- (N) -sialyltransférase, le substrat est l'acide cytidine-5 ' -monophospho-N-acétylneuraminique', dans un milieu reactionnel approprié pour permettre le transfert de l'acide sialique du groupement donneur d'acide sialique au FVII, les formes biantennées, bisialylées devenant majoritaires. Le milieu reactionnel peut être à base d'un mélange d'un tensioactif, tel que le Tween ® 80 ou le Triton ® X-100 à une concentration de 0,01% à 0,2%, d'un cation métallique divalent, tel que les cations Ca 2+ , Mn 2+ , Mg 2+ ou Co 2+ , Ca 2+ étant le préféré, à une concentration comprise entre 5 mM et 10 mM. Ce milieu reactionnel peut en outre comprendre des agents d'ajustement de la force ionique et participant au -->maintien du pH du milieu, tel que le cacodylate de sodium, l'acide morpholino-3 propanesulfonique, le Tris et NaCl à des concentration variant de 40 mM à 60 mM. Les valeurs de pH sont typiquement comprises entre 6 et 7,5. Selon un autre mode de réalisation, le substrat peut être synthétisé dans le milieu reactionnel en mettant dans ce milieu une CMP-sialique acide synthetase, de l'acide sialique, du CTP (cytidine triphosphate) et un taux suffisant d'un cation métallique divalent, dont des exemples sont donnés plus haut . Quel que soit le mode de réalisation de la sialylation de la composition de FVII, la réaction est toujours effectuée pendant un temps suffisant et des conditions appropriées pour permettre l'augmentation des formes bisialylées de manière suffisante pour qu'elles deviennent majoritaires. Lorsque le procédé met en oeuvre une enzyme immobilisée, la durée de la réaction est de préférence comprise entre 0,5 à 3 heures à une température avantageusement comprise entre 4 et 37°C, de préférence entre 4°C et 20°C. Lorsque le procédé met en oeuvre une réaction en batch, la durée de la réaction est de. préférence comprise entre 1 à 6 heures à une température avantageusement comprise entre 4 et 37°C, de préférence entre 4°C et 20°C. De préférence, le procédé de l'invention est un procédé pour améliorer la biodisponibilité de la composition de facteur VII transgénique ou recombinant partiellement sialylé. Cette amélioration de la biodisposibilité est obtenue par la mise en contact de ladite composition avec un substrat donneur d'acide sialique et une sialyltrasférase, tel que mentionnée plus haut . -->Par amélioration de la biodisponibilité , on entend une augmentation d'au moins 5%, ou d'au moins 10%, ou avantageusement d'au moins 30% ou 50%, et de manière préférentielle d'au moins 80% ou 90% de la biodisponibilité de la composition de FVII par rapport à la même composition de FVII dont la sialylation n'a pas été modifiée. Dans un autre mode de réalisation particulier, il est effectué préalablement à l'étape de sialylation une étape de galactosylation. Cette étape a pour but de greffer un galactose sur des formes déficientes en galactose, c'est-à-dire les formes agalactosylées et monogalactosylées . Le galactose se fixe à la GlcNAc, et sera susceptible de pouvoir fixer un résidu d'acide sialique lors de l'étape ultérieure de sialylation. Cette étape de galactosylation peut être effectuée au moyen d'une galactosyltransférase, dans un milieu reactionnel incluant de l'UDP-gal uridine (5'diphosphogalactose) , connu de l'homme du métier. Avantageusement, les formes glycanniques majoritaires de la composition de FVII partiellement sialylé sont de type complexe, biantenné, monosialylé. De telles formes glycanniques sont représentées cidessous : 2 $ I ï et -->Acide sialique Galactose N-acétylglucosamine (GlcNAc) :Mannose Dans un mode particulier de réalisation de l'invention, la composition de FVII partiellement sialylé comprend également des formes complexes biantennées non sialylées (fucosylées ou non) , trianténnées nonsialylées (fucosylées ou non) , et bisialylées (fucosylées ou non) . Avantageusement, parmi les formes glycanniques biantennées, monosialylées de ladite composition de FVII partiellement sialylé, les formes glycanniques majoritaires sont non fucosylées. Avantageusement, la composition de FVII partiellement sialylé présente au moins certains des acides sialiques impliquant des liaisons α2-6. De préférence, le procédé comporte en outre, préalablement à l'étape de sialylation, une étape de production de la composition de FVII trangenique partiellement sialylé par des lapines transgéniques. Cette étape est mise en oeuvre comme indiqué précédemment . Cette étape peut également être mise en oeuvre avant l'étape de galactosylation. -->Avantageusement, le FVII de la composition de FVII partiellement sialylé est activé. Le procédé de l'invention permet d'obtenir, parmi toutes les molécules de facteur VII de ladite composition, un taux formes biantennées, bisialylées majoritaires . Avantageusement, le groupement donneur d'acide sialique est l'acide cytidine-5 ' -monophospho-Nacétylneuraminique et la sialyltransférase est l ' a.2 , 6 (N) -sialyltransférase. Une telle composition de FVII partiellement sialylé peut être une composition de FVII transgénique produite dans les glandes mammaires d'une lapine transgénique . D'une manière particulièrement avantageuse, la composition de FVII partiellement sialylé est la composition décrite dans le document FR 06 04872, dont le contenu est considéré comme inclus dans le présent document . D'autres aspects et avantages de " l'invention seront " décrits dans les exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et ne limitent pas l'étendue de l'invention. Abbréviations MALDI-TOF : Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation - Time of Flight HPCE-LIF : High Performance Capillary ElectrophoresisLaser Induced Fluorescence (Electrophorèse capillaire haute performance-fluorescence induite par laser) ESI-MS : Spectrométrie de masse-Ionisation Electrospray . -->LC-ESIMS : Chromatographie liquide- Spectrométrie de masse- Ionisation Electrospray NP-HPLC : Chromatographie Liquide Haute Performance de Partage Classique PNGase F : Peptide : N-glycosidase F Description des figures Figure 1 : Extraction et purification de la composition de FVII obtenue dans l'exemple 1. Figure 2 : Spectres de masse ESI déconvolués des peptides porteurs des sites de N-glycosylation. Figure 3 : Electrophérogrammes HPCE-LIF après déglycosylation du FVII par la PNGase F ; Légende : électrophérogramme du haut : FVIIa, p ; les deux electrophérogrammes du milieu : FVII-Tg ; électrophérogramme du bas : FVIIa, r. Figure 4 : Caractérisation du FVII par NP-HPLC ; Légende : chromâtogramme du haut : FVIIa, ; chromâtogramme du milieu : FVII-Tg ; chromatogramme du bas : FVIIa, r. Figure 5 : Identification des formes glycanniques majoritaires du FVII-Tg par MALDI-TOFMS. Figure 6 : Identification des formes glycanniques majoritaires du FVIIa, r par MALDI-TOFMS. Figure 7 : Analyses HPCE-LIF de la resialylation in vi tro : (bas) carte oligosaccharidique du FVII-Tg natif ; (haut) carte oligosaccharidique du FVII-Tg après resialylation. -->Figure 8 : Cinétique de sialylation du FVII-Tg selon le pourcentage de formes A2 et A2F au cours du temps. Figure 9 : Résultats de l'étude préliminaire PK comparative chez le lapin, FVII transgénique non resialyle (FVIITgNRS) par rapport au FVII transgénique resialyle (FVIITgRS) : courbes d'élimination semi-log. Exemples Exemple 1 : Production de lapines transgéniques produisant une protéine de FVII humain dans leur lait On prépare tout d'abord un plasmide pi en introduisant la séquence Bam Hl-Hind III (fragment 6,3 Kb) du gène WAP (décrite dans le document Devinoy et al., Nucleic Acids Research, vol. 16, no. 16, 25 août 1988, p. 8180) dans le polylinker du vecteur p-poly III-I (décrit dans le document Lathe et al., Gène (1987) 57, 193-201) , entre les séquences Bam Hl et Hind III. Au cours de ce clonage, le site Bam Hl a été supprimé et remplacé par le site Cla I qui figure dans le vecteur pi. Le vecteur pi est donc un plasmide capable de recevoir un gène étranger placé sous la dépendance du promoteur WAP 6,3 Kb. L'introduction du gène étranger peut se faire par exemple dans le site Sal I du poly linker. Les inserts contenant la totalité du promoteur et des gènes étrangers peuvent être isolés du plasmide après une coupure aux deux sites Not 1 qui sont aux extrémités du poly linker du plasmide p-poly III-I. Le plasmide p2 , obtenu à partir du plasmide pi, contient le promoteur du gène de la WAP de lapin (6,3 Kb) et le gène du FVII humain. Le fragment utilisé pour obtenir les lapines transgéniques est compris entre les deux sites Notl . -->Un site Hind III a été introduit dans la séquence de tête du gène (leader) par mutagénèse dirigée pour servir de site de clonage. Les lapines transgéniques ont été obtenues par la technique classique de microinjection (Brinster et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 82, 4438-4442). 1-2 pi contenant 500 copies du gène ont été injectés dans le pronucleus mâle d'embryons de souris. Les constructions ont été réalisées dans le vecteur p-poly III-I (Lathe et al., Gène (1987) 57, 193-201). Les fragments Not 1 - Not 1 de ce vecteur contenant les gènes recombinés ont été microinjectés. Les embryons ont ensuite été transférés dans l'oviducte de femelles adoptives hormonalement préparées. Environ 10% des embryons manipulés ont donné naissance à des lapereaux et 2-5 % des embryons manipulés à des lapereaux transgéniques. La présence des transgènes a été révélée par la technique de transfert de Southern à partir de l'ADN extrait des queues des lapins. Les concentrations de FVII dans le sang et dans le lait des animaux ont été évaluées à l'aide de tests radioimmunologiques spécifiques . L'activité biologique du FVII a été évaluée en ajoutant du lait au milieu de culture de .cellules ou d'expiants mammaires de lapin. La technique utilisée pour l'obtention de lapines transgéniques produisant dans leur lait le FVII de l'invention est décrite plus en détails dans le document EP 0 527 063. Exemple 2 : Extraction et purification du FVII obtenu a) Extraction du FVII -->On considère 500 ml de lait brut non écrémé qui sont dilués par 9 volumes de tampon phosphate de sodium 0,25 M, pH 8,2. Après 30 minutes d'agitation à température ambiante, la phase aqueuse enrichie en FVII est centrifugée à 10 000g durant 1 heure à 15°C (centrifugeuse Sorvall Evolution RC - 6700 tours/min rotor SLC-6000) . 6 pots d'environ 835 ml sont nécessaires . Après centrifugation, trois phases sont présentes : une phase lipidique en surface (crème) , une phase aqueuse non lipidique claire enrichie en FVII (phase majoritaire) et une phase blanche solide en culot (précipités de caséines non solubles et de composés de calcium) . La phase aqueuse non lipidique FVII est collectée à la pompe péristaltique jusqu'à la phase crémeuse. La phase crémeuse est collectée à part. La phase solide (précipité) est éliminée. La phase aqueuse non lipidique, comprenant toutefois encore de très faibles quantités de lipides, est filtrée sur une séquence de filtres (Pall SLK7002U010ZP - préfiltre en fibres de verre de taille de pores de 1 μm - puis Pall SLK7002NXP - Nylon 66 de taille de pores de 0,45 μm) . En fin de filtration, la phase lipidique est passée sur cette séquence de filtration qui retient complètement les globules lipidiques du lait, et le filtrat est clair. La phase aqueuse non lipidique filtrée est ensuite dialysée sur membrane d' ultrafiltration (Millipore Biomax 50 kDa - 0,1 m 2 ) pour la rendre compatible avec la phase de chromatographie. Le FVII de poids moléculaire d'environ 50 kDa ne filtre pas à travers la membrane, contrairement aux sels, sucres et peptides du lait. Dans un premier temps, la solution (environ 5 000 ml) est concentrée à 500 ml, puis une -->dialyse par ultrafiltration en maintenant le volume constant permet d'éliminer les électrolytes et de conditionner la matière biologique pour l'étape de chromatographie. Le tampon de dialyse est un tampon phosphate de sodium 0,025M, pH 8,2. On peut assimiler cette phase aqueuse non lipidique comprenant le FVII à du lactosérum enrichi en FVII-Tg. Cette préparation est stockée à -30°C avant la poursuite du procédé. Le rendement global de récupération du FVII par cette étape est très satisfaisant : 90% (91% extraction au phosphate + 99% Dialyse/concentration) . La phase aqueuse non lipidique comprenant le FVII à l'issue de cette étape est parfaitement limpide et est compatible avec les étapes chromatographiques qui font suite. Environ 93 000 UI de FVII-Tg sont extraites à ce stade. La pureté en FVII de cette préparation est de l'ordre de 0,2%. b) Purification du FVII 1. Chromatographie sur gel d' hydroxyapatite Une colonne Amicon 90 (9 cm de diamètre - 64 cm 2 de section) est remplie avec du gel BioRad Ceramic Hydroxyapatite type I (CHT-I) . Le gel est équilibré en tampon A constitué d'un mélange de phosphate de sodium 0,025 M et de chlorure de sodium 0,04 M, pH 8,0. La totalité de la préparation conservée à -30°C est décongelée au bainmarie à 37°C jusqu'à dissolution complète du glaçon puis est injectée sur le gel (débit linéaire 100 cm/h, soit 105 ml/min) . La fraction non-retenue est éliminée -->par passage d'un tampon constitué de phosphate de sodium 0,025 M et de chlorure de sodium 0,04 M, pH 8,2, jusqu'au retour à la ligne de base (RLB) . L' élution de la fraction contenant le FVII-Tg se fait par le tampon B constitué de phosphate de sodium 0,25 M et de chlorure de sodium 0,4 M, pH 8,0. La fraction êluée est collectée jusqu'au retour à la ligne de base. Cette chromatographie permet de récupérer plus de 90% du FVII-Tg, tout en éliminant plus de 95% des protéines lactiques. L'activité spécifique (A. S.) est multipliée par 25. Environ 85 000 UI de FVII-Tg de pureté de 4% sont disponibles à ce stade. 2. Filtration tangentielle 100 kDa et concentration/dialyse 50 kDa La totalité de l'éluat de l'étape précédente est filtrée en mode tangentiel sur une membrane d'ultrafiltration 100 kDa (Pall OMEGA SC 100K - 0,1 m 2 ) . Le FVII est filtré à travers la membrane 100 kDa, alors que les protéines de poids moléculaire supérieur à 100 kDa ne sont pas filtrables. La fraction filtrée est ensuite concentrée à environ 500 ml, puis dialysée sur 1 ' ultrafiltre 50 kDa déjà décrit à l'Exemple 1. Le tampon de dialyse est du chlorure de sodium 0,15 M. A ce stade du procédé, le produit est stocké à 30°C avant passage en chromatographie d'échange d' ions . Cette étape a permis de réduire la charge en protéines de poids moléculaire supérieur à 100 kDa et -->en particulier des pro-enzymes. Le traitement membranaire 100 kDa permet de retenir environ 50% des protéines dont les protéines de haut poids moléculaire, tout en filtrant 95% du FVII-Tg, soit 82 000 UI de FVII-Tg. Ce traitement permet de réduire les risques d'hydrolyse protéolytique lors des étapes avales. 3. Chromatographies sur gel Q-Sepharose ® FF Ces trois chromatographies successives sur gel échangeur d'ions Q-Sepharose ® Fast Flow (QSFF) sont réalisées pour purifier le principe actif, permettre l' activation du FVII en FVII activé (FVIIa) et finalement concentrer et formuler la composition en FVII. 3.1 Etape Q-Sepharose ® FF 1 - élution High Calcium Une colonne de 2,6 cm de diamètre (5,3 cm 2 de section) est remplie de 100 ml de gel Q-Sepharose ® FF (GE Healthcare) . Le gel est équilibré en tampon Tris 0,05 M, pH 7,5. La totalité de fraction conservée à -30°C est décongelée au bain-marie à 37°C jusqu'à dissolution complète du glaçon. La fraction est diluée au }_ [v/v] avec le tampon d'équilibrage avant injection sur le gel (débit 13 ml/min, soit débit linéaire de 150 cm/h) , puis la fraction non retenue est éliminée par passage du tampon jusqu'au RLB. Une première fraction protéique à faible teneur en FVII est éluée à 9 ml/min (soit 100 cm/h) par un tampon de Tris 0,05 M et de chlorure de sodium 0,15 M, pH 7,5, et est ensuite éliminée. -->Une deuxième fraction protéique riche en FVII est éluée à 9 ml/min (soit 100 cm/h) par un tampon de Tris 0,05 M, de chlorure de sodium 0,05 M et de chlorure de calcium 0,05 M, pH 7,5. Cette deuxième fraction est dialysée sur 1 ' ultrafiltre 50 kDa déjà décrit à l'Exemple 1. Le tampon de dialyse est du chlorure de sodium 0,15 M. Cette fraction est conservée à +4°C durant une nuit avant le 2 erae passage en chromatographie d'échange d' anions . Cette étape permet de récupérer 73% du FVII (soit 60000 UI de FVII-Tg) , tout en éliminant 80% des protéines accompagnantes. Elle permet également 1' activation du FVII en FVIIa. 3.2 Etape Q-Sepharose ® FF 2 - élution Low Calcium Une colonne de 2,5 cm de diamètre (4,9 cm 2 de section) est remplie de 30 ml de gel Q-Sepharose ® FF (GE Healthcare) . Le gel est équilibré en tampon Tris 0,05 M, pH 7,5. La fraction éluée précédente (deuxième - fraction) , conservée à +4°C, est diluée avant injection sur le gel (débit 9 ml/min, soit débit linéaire de 100 cm/h) . Une fraction contenant du FVII de très haute pureté est éluée à 4,5 ml/min (soit 50 cm/h) en tampon de Tris 0,05 M, de chlorure de sodium 0,05 M et de chlorure de calcium 0,005 M, pH 7 , 5. Environ 23 000 UI de FVII-Tg ont été purifiées, soit 12 mg de FVII-Tg. Cette étape permet d'éliminer plus de 95% des protéines accompagnantes (protéines du lait de lapine) . -->Cet éluat, de pureté supérieure à 90%, présente des caractéristiques structurales et fonctionnelles proches des molécules naturelles du FVII humain. Il est concentré et formulé par le troisième passage en chromatographie d'échanges d'ions. 3.3 Etape Q-Sepharose ® FF 3 - élution Sodium Une colonne de 2,5 cm de diamètre (4,9 cm 2 de section) est remplie de 10 ml de gel Q-Sepharose ® FF (GE Healthcare) . Le gel est équilibré en tampon Tris 0,05 M, pH 7,5. La fraction éluée purifiée de l'étape précédente est diluée cinq fois avec de l'eau purifiée pour injection (PPI) avant injection sur le gel (débit 4,5 ml/min, soit débit linéaire de 50 cm/h) . Le FVII-Tg est ensuite élue à un débit de 3 ml/min (soit 36 cm/h) par le tampon de Tris 0,02 M et de chlorure de sodium 0,28 M, pH 7,0. Une composition de FVII-Tg sous forme de concentré a été préparée dont la pureté est supérieure à 95%. Le produit est compatible avec une injection par voie intraveineuse. Le procédé a un rendement cumulé de 22%, ce qui permet de purifier au moins 20 mg de FVII par litre de lait mis en œuvre. Le Tableau A résume les étapes du procédé selon une mise en œuvre préférée de l'invention pour fournir la composition de FVII de l'invention, et fournit les différents rendements, la pureté et les activités spécifiques obtenus à chaque étape. -->Le FVII-Tg de la composition est ensuite soumis à différentes analyses structurales, telles que développées dans les exemples qui suivent. Exemple 3 : Caractérisation des sites de glycosylation et des glycopeptides par ESI-MS Les sites de N-glycosylation du FVII-Tg, du FVIIa, p (FVII plasmatique) et du FVIIa, r (FVII recombinant NovoSeven ® , Novo Nordisk™) ont été identifiés par LCESIMS(/MS), confirmés par MALDI-TOFMS, et les proportions relatives des différents glycannes présents sur chaque site ont été déterminées par LC-ESIMS. La figure 2 représente les spectres ESI déconvolués des glycopeptides contenant les deux résidus Asn glycosylés. La localisation des sites de glycosylation a été confirmée par MALDI-TOF (/TOF) ainsi que par séquençage d'Edman. L'analyse des spectres de masse des glycopeptides [Dι 23 -Rι 52 ] et [K 3 ι. 6 -R 3 5 3 ] du FVIIa, p, présentant respectivement les sites de N-glycosylation Asn 145 et Asn 322 , révèle la présence d'une forme biantennée, bisialylée non fucosylé (A2) (masse observée du glycopeptide contenant l'Asn 145 : 5563,8 Da) et fucosylée (A2F) (masse observée pour le glycopeptide avec l'Asn 145 : 5709,8 Da) . On note également pour l'Asn 14S la présence d' oligosaccharides triantennés, trisialylés non fucosylés (A3) (masse obs . 6220,0 Da) et fucosylés (A3F) (masse obs. 6366,1 Da) . Pour le FVIIa, r, l'Asnι 4S est modifiée par des glycannes de type A2F, A1F et "A1F", celui-ci correspondant à une forme monosialylée avec un GalNAc en position terminale sur l'autre antenne. On note la présence de glycannes A3F. Pour le FVII-Tg, l'analyse des spectres de masse des glycopeptides [D 123 -Rι 52 ] et [K 31.6 -R 353 ] du FVII-Tg, présentant respectivement les sites de N-glycosylation -->Asnι 45 et Asn 322 , révèle la présence de formes biantennées, bisialylées non fucosylées (A2) (masse observée du glycopeptide contenant l'Asnι 45 : 5563,8 Da) et fucosylées (A2F) (masse observée : 5709,7 Da) . On note également la présence majoritaire d' oligosaccharides, situés sur l'Asn 1 5 , monosialylés non fucosylés (Al) (masse observée : 5272,3 Da) et fucosylés (A1F) (masse observée : 5418,7 Da) . Les formes triantennées sont peu représentées. Il est à noter qu'aucune forme monosialylee avec un GalNAc en position terminale sur l'autre antenne n'est présente. Concernant les glycoformes majoritaires de l'Asn 322 , on observe les mêmes structures glycanniques dans des proportions différentes. La figure 1 révèle la présence de formes moins matures (moins antennées et sialylées) que sur l'Asnι 45 . Par exemple, les formes triantennées sont moins représentées sur Asn 32 que sur Asnι 4S pour le produit plasmatique et absentes sur les FVIIa, r et FVII-Tg. Il faut noter également que les Asn 145 et 322 sont glycosylées à 100%. Bien qu'uniquement semi-quantitatifs, ces résultats sont en accord avec les données quantitatives obtenues par HPCE-LIF et NPHPLC. Exemple 4 : Quantification des N-glycannes par HPCE-LIF Les glycannes du FVIIa, p sont majoritairement de type biantennés bisialylés (A2) , et biantennés bisialylés fucosylés (A2F) . Les profils glycanniques des FVII-Tg révèlent la présence de formes biantennées, monosialylées, fucosylées ou non (A1F, Al) , et biantennées, bisialylées, fucosylées ou non (A2 , A2F) . La répartition entre ces différentes formes varie entre les deux lots. Le FVIIa, r présente des formes glycaniques biantennées sialylées - fucosylées avec des formes A2F -->majoritaires, et biantennées monosialylées fucosylées (A1F) . On note des temps de migration atypiques pour les formes A2F et A1F par rapport aux temps de migration habituellement rencontrés pour ces structures . Les profils glycaniques de deux lots (A et B) de FVII-Tg (cf figure 3 -les deux electrophérogrammes du milieu) révèlent la présence de formes biantennées, monosialylées, fucosylées ou non (A1F, Al), et biantennées, bisialylées, fucosylées ou non (A2 , A2F) . Tableau 1. Récapitulatif du pourcentage des formes sialylées issues des échantillons natifs de différents lots de FVII. Pourcentages FVIIa,p FVII-Tg FVII-Tg FVIIa, r Lot A Lot B Natif A2 41.9 19.3 13.9 A2F 8.9 14.8 21.5 44.8 Al 2.6 38.4 25.2 _ A1F _ 11.7 22.2 16.5 Total A2+A2F 50.8 34.1 35.4 44.8 Total A1+A1F 2.6 50.1 47.4 - 16.5 L'analyse quantitative des différentes formes glycanniques (Tableau 1) montre, pour le FVIIa, p, la prédominance de formes sialylées avec 51% de glycannes bisialylées (A2 et A2F) , et 30% de formes triantennées sialylées (G3 et G3F) (résultats non montrés) . Le FVIITg (lots A et B) est moins sialylé que le FVIIa, p avec 35% de formes biantennées bisialylées, et seulement 6 % de formes triantennées sialylées (résultats non montrés) . Les formes majoritaires sont monosialylées avec 50% de structures Al et A1F. Le FVIIa, r est également moins sialylé que le FVIIa, p avec 45% de -->structures A2F et seulement 6% de glycannes triantennés sialylés (résultats non montrés) . On note pour le FVIIa, r l'absence de formes non fucosylées. Tableau 2. Taux de fucosylation des différents FVII FVIIa, p FVII-Tg FVII-Tg FVIIa, r Lot A Lot B Taux de 16.2 23.6 41.8 100 fucosylation (%) Les résultats montrent le faible taux de fucosylation du FVIIa, p (16%) , un taux de fucosylation de 24 à 42% pour le FVII-Tg et une fucosylation de 100% pour le FVIIa, r. Exemple 5 : Quantification des N-glycannes par NP-HPLC L'analyse qualitative et quantitative de la Nglycosylation des FVIIa, p, FVIIa, r et FVII-Tg a été étudiée par NP-HPLC (cf. figure 4) . Le profil chromatographique du FVIIa, p montre que les glycannes majoritaires sont de type biantennés bisialylés (A2 ) avec un taux de 39 %. On observe également en plus faibles quantités des formes biantennées bisialylées fucosylées (A2F) , monosialylées (Al) et trisialylées fucosylées et non fucosylées (A3 et A3F) . L'analyse par NP-HPLC réalisée sur le FVII-Tg confirme la présence d' oligosaccharides majoritairement de type Al, à un taux de 27%. Les formes A1F, A2 et A2F sont moins représentées et les formes triantennées sont présentes à l'état de traces. Cela met en évidence une différence de sialylation entre le FVIIa, p et le facteur FVII-Tg (lot B) , moins sialylé. La même analyse réalisée sur un facteur FVIIa, r révèle des formes majoritaires de type A2F présente à -->un taux de 30%. Les formes A1F sont moins représentées et les formes triantennées sont présentes à l'état de traces. L'analyse du FVIIa, r montre également un important décalage du temps de rétention des formes A1F et A2F suggérant des formes différentes de celles présentes dans le FVIIa, p et dans le FVII-Tg. L'ensemble de ces résultats est cohérent avec ceux obtenus en HPCE-LIF. Exemple 6 : Identification par MALDI-TOFMS Afin d'identifier les formes glycanniques présentes dans le FVII-Tg et le FVIIa, r, des analyses MALDI-TOF MS ont été réalisées à partir de fractions d' élution issus de NP-HPLC préparative. L'analyse MALDI-TOF du FVII-Tg a permis de confirmer l'identification des glycannes séparés par NP-HPLC, à savoir des formes majoritairement monosialylées Al et des formes minoritaires de type A1F, A2F et A2. Cette étude a permis également d'identifier les formes minoritaires de type triantennées bisialylées et trisialylées, des formes hybrides et oligomannoses de type Man5 et Man6-P-HexNAc (cf. figure 5) . L'analyse MALDI-TOF MS effectuée sur le FVIIa, r a révélé la présence des formes glycanniques présentées à la figure 6. Le facteur FVIIa, r est presque totalement fucosylé, contrairement au FVII-Tg qui ne l'est que partiellement . On note que la forme glycannique majoritaire est A2F avec un taux quantifié en NPHPLC à 30%. Des formes biantennées monosialylées fucosylées (A1F) et comportant un GalNAc en position terminale sur l'autre antenne sont identifiées ainsi que des formes neutres biantennées fucosylées avec des motifs Hex-NAc -->HexNAc sur une et/ou deux antennes. On note également la présence de glycannes de type triantennés trisialylés et fucosylés. Les formes non fucosylées sont présentes à l'état de trace. Exemple 7 : Analyse HPCE-LIF de la liaison des acides sialiques - galactose Des analyses ont montré que le FVIIa, r possède des formes glycanniques biantennées sialylées fucosylées avec des formes A2F majoritaires, et biantennées monosialylées fucosylées (AlF) . On note des temps de migration atypiques pour ces structures A2F et AlF par rapport aux temps de migration habituellement rencontrés pour ces formes. Notamment, ces formes oligosaccharidiques sialylées présentent des temps de migration atypiques en HPCE-LIF et NP-HPLC par rapport à ceux du FVII-Tg. D'autre part, l'analyse de la composition en monosaccharides n'a pas révélé d'acide sialique particulier autre que Neu5Ac et les outils de spectrométrie de masse révèlent des glycannes de masse conforme à des types bisialylés. Enfin, la désialylation des glycannes du FVIIa, r permet de retrouver des comportements chromatographique et electrophorétique équivalents à ceux des oligosaccharides du FVII-Tg. Ces différences de comportements electrophorétique et chromatographique peuvent donc s'expliquer par un branchement différent des acides sialiques. Cette hypothèse a été évaluée par les différentes approches d' HPCE-LIF et de MS . Les résultats sont résumés dans le Tableau 3 cidessous . -->Tableau 3 : branchements des acides sialiques sur les différents lots de FVII. Sialylation (%) α2-3 (%) α2-6 (%) α2-8 (%) FVIIa, r 91 100 0 0 FVII-Tg Lot C 96 0 100 0 Les résultats montrent des isoméries distinctes au niveau des acides sialiques entre les deux FVII. En effet, les acides sialiques du FVIIa, r impliquent des liaisons α;2-3 alors que le FVII-Tg présente des branchements α2 - 6. Les différences de comportements en HPCE-LIF et en NP-HPLC observés pour les glycannes du FVIIa, r par rapport au FVII-Tg sont liées à ces différences d'isomérie au niveau des acides sialiques. Exemple 8 : Resialylation in vitro du FVII-Tg La littérature fait mention du fait qu'une sialylation plus complète d'une glycoprotéine contribue à de meilleures stabilités in vi tro et in vivo . L'objectif de cette étude est donc de démontrer la faisabilité d'une sialylation in vi tro . La resialylation a été réalisée à l'aide d'une 2 , 6- (N) -sialyltransférase (rat, Spodotera frugiperda, AS > 1 unité/mg, 41 kDa, Calbiochem) et du substrat acide cytidine-5 ' -monophospho-N-acétylneuraminique (Calbiochem) . Ces deux réactifs sont stockés à -80°C du fait de leur instabilité. Le tampon reactionnel utilisé est 50 mM (acide morpholino-3 propanesulfonique) , 0,1% Tween ® 80, 0,1 mg/ml BSA (bovine sérum albumine), ajusté à pH 7,4 (réactifs Sigma) . Le Tableau 4 ci-dessous résume les conditions expérimentales . -->Tableau 4 : résumé des conditions expérimentales FVII natif témoin FVII resialyle FVII (μg) 50 50 Tampon reactionnel 200 200 (μl) CMP-Neu5Ac (μl) - 2 A2,6-NST (μl) 20 20 Incubation Toute la nuit Toute la nuit L' électrophérogramme du FVII-Tg natif (figure 7, profil du bas) , montre la forme bianténnée monosialylee Al majoritaire (42%) et les structures A2 , A2F et AlF moins représentées. Après resialylation (figure 7, profil du haut) la forme monosialylee ne représente plus que 6% au profit de la forme bisialylée qui est devenue très majoritaire (52%) . La quantification des glycannes avant et après resialylation est présentée dans le Tableau 5 cidessous . Tableau 5 : quantification des structures oligosaccharidiques avant et après sialylation — — — ___ FVII-Tg natif FVII-Tg resialyle A2 19,8 52,4 A2F 15,5 25,1 Al 42,1 6,4 AlF 13,6 11,6 Neutres 9,0 4,5 % sialylation 91,1 95,5 Taux de bisialylés 35,3 77,5 La cinétique de la sialylation transgénique est illustrée avec la figure 8. du FVII -->Cette étude montre l'efficacité de la resialylation in vi tro avec un taux de formes bisialylées augmenté de plus de 100%. Exemple 9 : Etude pharmacocinétique comparative chez le lapin d'un FVII transgénique non resialyle (FVII Tg NRS) par rapport au FVII transgénique resialyle (FVII Tg RS, obtenu à l'issue de l'exemple 8) Cette étude a pour objectif de comparer les profils pharmacocinétiques du FVII-TgRS par rapport au FVII-TgNRS chez le lapin néo-zélandais mâle vigile. La dose testée est 200 μg/kg par animal, ce qui correspond à 2 fois la dose thérapeutique chez l'homme décrite pour le FVII recombinant NovoSeven ® . Les prélèvements sanguins ont lieu à J-4 (4 jour avant l'injection du produit) et à Jl (jour de l'injection du produit) à T0,17h, T0,33h, Tlh, T3h, T6h, T8h. Les dosages du FVII :Ag (antigène FVII) sont réalisés par ELISA (kit Asserachrom) . Les résultats des dosages du FVII :Ag dans le plasma de lapin permettent de déterminer d'une part, les profils d'élimination, d'autre part, les paramètres pharmacocinétiques. Les posologies et groupes expérimentaux figurent dans le Tableau 6. --> Tableau 6 : posologies et groupes expérimentaux Groupe Produit Nombre Dose à Taux Volume expérimen administré animaux/ Jl protéine/ injecté tal poids FVII Ag Groupe 1 FVII-Tg RS 3 Lapins 200 143 μg/mL 1/4 (1 à 3) μg/kg protéines mL/kg 2,315 ± FVII:Ag = 0,124 kg 253,7 ± 5,8 U/ml Groupe 2 FVII-Tg NRS 3 Lapins 200 145 μg/mL 1,4 (4 à 6) μg/kg protéines mL/kg 2,352 ± FVII:Ag = 0,130 kg 263,7 ± 2,9 U/ml Groupe 3 NaCl 0,9% 3 Lapins NA NA 1,4 (7 à 9) mL/kg Les courbes d'élimination sont représentées à la figure 9. Les résultats sont retranscrits dans le Tableau 7. Tableau 7 Résultats Paramètres Dose Tl/2 MRT Cmax Recov AUC Cl Vd PK (U) (h) (h) (mU/ ery (h x (ml/h (ml) ml) (%) mU/m ) 1) FVII-TgRS 822 1,85 2,93 2060 20 ± 2563 320 ± 856 ± ± 44 ± ± ± 4 ± 46 151 0, 08 0,09 394 335 FVII-Tg 868 1,76 2,81 1797 17 ± 1863 479 ± 1216 NRS ± 48 ± ± ± 4 ± 103 ± 288 0,08 0,03 389 346 -->Aux doses administrées, la demi -vie d'élimination, le temps de présence moyen (MRT) , la concentration maximale (Cmax) et le taux de récupération ( recovery ) sont comparables dans les 2 groupes expérimentaux . Le FVII-TgRS possède un profil cinétique différent de celui du FVII-TgNRS. La resialylation du FVII-Tg améliore de façon non marquée la demi-vie, le temps de présence moyen (MRT) , la Cmax et la recovery . Une différence est observée au niveau des paramètres AUC (aire du pic) , Cl (clairance) et volume de distribution (Vd) suggérant une élimination du FVIITgRS de la circulation sanguine moins importante. La resialylation du FVII-Tg induit une augmentation de la biodisponibilité du produit d'environ 30%. --> --> Revendications 1. Composition de facteur VII recombinant ou transgénique, chaque molécule de facteur VII de la composition comportant des formes glycanniques liées aux sites de N-glycosylation, caractérisé en ce que, parmi toutes les molécules de facteur VII de ladite composition, les formes glycanniques biantennées, bisialylées et non fucosylées sont majoritaires par rapport à toutes les formes glycanniques liées aux sites de N-glycosylation du facteur VII de la composition. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisé en ce que le taux de formes biantennées, bisialylées est supérieur ou égal à 30%. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que, parmi toutes les molécules de facteur VII de ladite composition, le taux de fucose est compris entre 20% et 50%. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'au moins certains des acides sialiques du facteur VII impliquent des liaisons α2-6. 5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que tous les acides sialiques du facteur VII impliquent des liaisons α2-6. β. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre des acides sialiques de liaisons α2-3. -->7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à β, caractérisée en ce que ledit FVII est activé. 8. Composition revendications 1 médicament . selon l 'une quelconque des à 7, pour son utilisation comme 9. Utilisation d'une composition de facteur VII selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des patients atteints d'hémophilie. 10. Utilisation d'une composition de facteur VII selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des traumatismes hémorragiques multiples. 11. Utilisation d'une composition de FVII selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 , pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des hémorragies dues à un surdosage en anticoagulants . 12. Composition pharmaceutique comprenant un FVII tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, et un excipient et/ou un véhicule phar aceutiquement acceptables. 13. Procédé de préparation d'une composition de facteur VII recombinant ou transgénique, dont chaque molécule de facteur VII de la composition comporte des formes glycanniques liées aux sites de N-glycosylation et dans laquelle parmi toutes les molécules de facteur VII de ladite composition, les formes glycanniques biantennées, bisialylées sont majoritaires, comprenant -->une étape de sialylation par mise en contact d'une composition de facteur VII transgénique ou recombinant partiellement sialylé avec un substrat donneur d'acide sialique et une sialyltransférase, dans un milieu reactionnel approprié pour permettre l'activité de la sialyltransférase, pendant une durée suffisante et des conditions appropriées pour permettre un transfert de l'acide sialique du substrat donneur d'acide sialique au FVII et une augmentation des formes bisialylées de manière suffisante pour que lesdites formes bisialylées deviennent majoritaires. 14. Procédé selon la revendication 13, dans le quel il est effectué, préalablement à l'étape de sialylation, une étape de galactosylation pour greffer un galactose sur des formes déficientes en galactose représentant les formes agalactosylées et monogalactosylées du FVII. 15. Procédé selon l'une des revendications 13 et 14, caractérisé en ce que ladite composition de FVII partiellement sialylé présente des formes glycanniques biantennées, monosialylées majoritaires. 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisée en ce que, parmi les formes glycanniques biantennées, monosialylées de ladite composition de FVII partiellement sialylé, les formes glycanniques majoritaires sont non fucosylées. 17. Procédé selon l'une quelconque des revendications 13 à 16, caractérisé en ce que ladite composition de FVII partiellement sialylé présente au moins certains des acides sialiques impliquant des liaisons α2-6. 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 13 à 17, caractérisé en ce qu'il comporte en outre, préalablement à l'étape de sialylation, une étape de -->production de la composition de FVII transgénique partiellement sialylé par des lapines transgéniques. 19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 13 à 18, caractérisée en ce que le FVII de ladite composition de FVII partiellement sialylee est activé. 20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 13 à 19, caractérisé en ce que ladite sialyltransférase est l'α2 , 6- (N) -sialyltransférase, et en ce que ledit groupement donneur d'acide sialique est l'acide cytidine-5 ' -monophospho-N-acétylneuraminique .