Brevet FR2909383A1 — publié le 20080606

" Nouveaux oligonucléotides et utilisation d'oligonucléotides interagissant avec le gène codant pour la tyrosinase related protein-1 (TRP-1) pour en moduler son expression comme agents dépigmentants " La présente invention concerne un oligonucléotide anti-gène s'hybridant spécifiquement avec le gène codant pour la tyrosinase related protein-1 (TRP-1) humaine par appariement Hoogsteen entre les bases complémentaires, ledit oligonucléotide formant une structure en triple hélice avec le gène de la tyrosinase related protein-1 humaine. L'invention concerne également l'utilisation dudit oligonucléotide comme agent dépigrnentant ou blanchissant de la peau dans une composition cosmétique ou dans une composition dermatologique. Chez l'homme, la pigmentation résulte de la synthèse et de la distribution des pigments mélaniques dans la peau, les follicules pileux ou les yeux. La pigmentation est génétiquement prédéfinie mais elle est régulée par de nombreux facteurs internes ou externes. Le nombre de mélanocytes, leur activité tyrosinasique, les mélanines produites par les mélanocytes ainsi que, et leur capacité à exporter les mélanines vers les kératinocytes, la taille des :mélanosomes qui contiennent des grains de mélanine, vont conditionner la couleur de la peau humaine. Pour chaque individu, la couleur de la peau varie principalement en fonction de l'irradiation plus ou moins importante des rayons ultra-violets (UV). Autrement dit pour chaque individu, il existe une pigmentation cutanée de base lorsqu'il subit la plus faible irradiation UV, correspondant à sa couleur de peau la plus claire, et une pigmentation cutanée plus intense s'il reçoit une irradiation UV plus forte, allant jusqu'à une pigmentation maximum correspondant à sa couleur de peau la plus foncée lorsqu'il est exposé de manière prolongée à une irradiation UV intense. D'autre part, la population mondiale affiche une très grande diversité génétique quant à la pigmentation cutanée. Ainsi, selon les populations, la couleur de la peau correspondant à la pigmentation de base définie ci-dessus, présente une teinte plus ou moins claire se situant entre les deux extrêmes : très claire et très foncée. Egalement selon les populations, la différence de teinte de la peau entre la 2909383 2 pigmentation de base et la pigmentation maximum est plus ou moins importante. Ainsi, il est bien connu que les personnes appartenant à certaines populations à peau claire (pigmentation de base) réagissent rapidement et/ou de manière importante à l'action des UV et peuvent donc facilement présenter une peau de 5 teinte foncée, même lorsque ces personnes ne se sont pas exposées volontairement et de façon prolongée au soleil. Dans la suite du texte, ces personnes seront désignées par l'expression personnes très réactives aux UV . Il en est notamment ainsi de populations d'origine asiatique ou de certaines populations dites métisses. 10 Par ailleurs, des personnes voient apparaître sur leur peau, en particulier au niveau du visage ou des mains des zones et/ou des taches plus foncées et/ou plus colorées conférant à la peau une hétérogénéité de couleur. Ces taches sont dues à une concentration importante de mélanine dans les kératinocytes de l'épiderme résultant d'une activité mélanogénique mélanocytaire exacerbée. 15 Le mécanisme de formation de la pigmentation cutanée fait intervenir la synthèse des mélanines. Ce mécanisme est particulièrement complexe et fait intervenir schématiquement les principales étapes suivantes : Tyrosine )* Dopa i * Dopaquinone Dopachrome PD* Mélanines La tyrosinase et la tyrosinase-related-protein 1 (TRP-1) sont les enzymes 20 essentielles intervenant dans cette suite de réactions. La tyrosinase catalyse l'hydroxylation de la tyrosine en Dopa (Dihydroxyphénylalanine) et ] a réaction de transformation de la Dopa en Dopaquinone conduisant à la formation des pigments mélaniques. La TRP-1 joue aussi un rôle crucial dans la mélanogenèse. La TRP-1 est la protéine mélanosomal la plus abondante (Vijayasaradhi S. et al., 25 Exp. Cell. Res., 196, 233-240, 1991) et présente de 70 à 80% d'homologie de séquence nucléotidique et de 40 à 45% d'homologie de séquence d'acide aminés avec la tyrosinase. La TRP-1 est une protéine trans-membranaire recouvrant les mélanosomes impliquée dans la régulation de leur maturation. Chez l'homme, la TRP-1 ne possède pas d'activité DHICA oxydase contrairement à la souris 30 (Boissy R.E., et al., Exp. Dermatol., 7, 198-204, 1998). La tyrosinase et la TRP-1 forment un complexe enzymatique (blinder A. et al., Cell. Mol. Biol. Res., 40, 7- 8, 1994 ; Orlow SJ.et al., J. Invest. Dermatol., 103, 196-211, 1994.) et il a été 2909383 3 montré que l'activité de la tyrosinase est totalement dépendante et indissociable de la présence de la TRP-1 ( Zhao Y. et al., J. Invest. Dermatol., 106, 744-752, 1996 ; Wu H. et Park H-Y, Biochem. Biophys. Res. Comm., 311, 948-953, 2003). De plus, il a été récemment rapporté des variations ethniques d'expression de la 5 TRP-1 suggérant son rôle dans la régulation de la pigmentation cutanée in vivo. Ces éléments indiquent que la TRP-1 est une cible biologique de choix pour inhiber l'activité de la tyrosinase dans les mélanocytes humains et par conséquent moduler la pigmentation cutanée. Une molécule est reconnue comme dépigmentante si elle agit directement 10 sur les mélanocytes épidermiques en inhibant l'activité de ces cellules et/ou si elle bloque l'une des étapes de la biosynthèse des mélanines ou encore si elle dégrade la mélanine formée. C'est le cas notamment lorsque la molécule inhibe l'une des enzymes impliquées dans la mélanogénèse ou lorsqu'elle réagit avec les composés chimiques de la chaîne de synthèse des mélanines. 15 Les substances dépigmentantes connues sont notamment l'hydroquinone et ses dérivés, l'acide ascorbique et ses dérivés, l'acide kojique, l'arbutine, les iminophénols, l'association de carnitine et de quinone, les dérivés amides d'amino-phénol, et les dérivés de benzothiazole. Ces substances peuvent présenter certains inconvénients. Elles peuvent être instables, nécessiter une utilisation à des 20 concentrations élevées, manquer de spécificité quant à leur mode d'action, ou présenter un pouvoir cytotoxique ou irritant. L'utilisation topique de substances dépigmentantes efficaces et inoffensives est particulièrement recherchée en cosmétique et en dermatologie. On utilise notamment ces substances pour traiter des hyperpigmentations régionales 25 par hyper-activité mélanocytaire telles que les mélasmas idiopathiques, les hyperpigmentations localisées par hyper-activité mélanocytaire telles que les taches pigmentaires dites lentigos solaires et lentigos séniles, les hyperpigmentations accidentelles telles que la photosensibilisation ou la cicatrisation post-lésionnelle, ainsi que certaines leucodermies telles que le 30 vitiligo. Dans ces derniers cas, à défaut de pouvoir re-pigmenter la peau, on atténue la pigmentation de la périphérie des zones dépigmentées pour donner à la peau une couleur plus homogène. 2909383 4 Des substances dépigmentantes sont également utilisées en tant qu'agents de blanchiment de la peau par certaines personnes, en particulier celles désignées plus haut, qui sont très réactives aux UV, pour éclaircir leur teint, notamment celui de leur visage et de leurs mains, afin de conserver une couleur de peau la 5 plus claire et la plus homogène possible ou tout au moins de réduire les effets pigmentants des rayons UV. Le problème posé aux professionnels est donc la conception, la fabrication ou l'isolement de nouvelles substances dépigmentantes ou de nouveaux agents blanchissant de la peau humaine et/ou des poils ne présentant pas les 10 inconvénients des substances connues, c'est-à-dire qui soient non irritants, non toxiques et/ou non allergisants pour la peau et stables dans une composition. L'utilisation d'oligonucléotides antisens pour traiter un dysfonctionnement des mélanocytes, a été décrite dans la demande US 20040014700 Par ailleurs, certaines stratégies pour obtenir une dépigmentation consistent à bloquer la 15 synthèse de la tyrosinase par l'utilisation d'un oligonucléotide d'ARN double brin (FR 2840217). Dans les demandes précédentes, la cible biologique considérée est l'ARN messager. L'objet de la présente invention consiste à fournir un agent dépigmentant agissant sur le processus de la mélanogénèse, destiné d'une part, dans le cas d'une 20 pigmentation sensiblement homogène, au blanchiment de la peau et ou des poils, c'est-à-dire à diminuer leur pigmentation, et d'autre part, à lutter contre l'hyperpigmentation cutanée à savoir lorsque la peau présente une hétérogénéité de pigmentation. Les inventeurs de la présente invention ont trouvé que des oligonucléotides 25 pouvant s'hybrider avec le gène codant pour la tyrosinase related protein-1 et uniquement avec ce gène présentent une activité dépigmentante. Contrairement à la stratégie ciblant l'ARNm décrite plus haut, celle de la présente invention consiste donc à utiliser un oligonucléotide capable de s'hybrider avec le gène lui-même. Un avantage de ceci est que les 30 oligonucléotides de la présente invention peuvent s'hybrider avec le gène sous forme de double brin d'ADN, alors que les oligonucléotides décrits notamment dans les demandes US 20040014700 ou FR 2840217 n'ont pas cette capacité. Un 2909383 5 autre avantage de cette nouvelle stratégie est que le gène est une entité moins abondante que l'ARN messager ou la protéine pour lequel il code, puisque la plupart des gènes ont deux allèles dans les cellules diploïdes. De ce fait, cette activité existe même à très faible concentration, ce qui augmente l'intérêt de ces 5 oligonucléotides. De plus, les oligonucléotides selon l'invention ne présentent aucune cytotoxicité et peuvent être synthétisés, isolés avec un haut degré de pureté, caractérisés et ceci de façon industrielle. Les oligonucléotides selon l'invention interviennent donc très en amont des mécanismes de la mélanogénèse, en interagissant directement sur le gène de la 10 tyrosinase related protein-1 pour en moduler son expression et par conséquent inhibe l'expression de l'ARN messager codant pour la tyrosinase related protein-1. Il s'en suit une diminution du taux de tyrosinase related protein-1 dans les mélanocytes conduisant à la diminution de l'activité de la tyrosinase. Les oligonucléotides selon l'invention offrent une solution idéale aux problèmes posés 15 par les substances utilisées classiquement. Les substances connues qui inhibent l'activité de la tyrosinase présentent de multiples effets secondaires inacceptables du fait de leur faible spécificité. Parmi les différentes séquences testées, nous avons trouvé que la séquence SEQ II) No 2 décrite ci-après, forme chimérique de la séquence SEQ ID No 1 également décrite ci-après, résout les problèmes 20 rencontrés par les chercheurs antérieurs en modulant le plus en amont possible l'expression du gène de la tyrosinase related protein-1, et par conséquent la production de l'ARN messager codant pour la tyrosinase related protein-1 et donc de l'enzyme correspondante, au lieu d'inhiber directement la tyrosinase pour obtenir l'effet dépigmentant. 25 Description Ainsi, dans un premier aspect, l'invention porte sur un oligonucléotide anti-gène constitué d'une séquence de n nucléotides, n étant un nombre entier 30 valant de 10 à 25, caractérisé en ce que : - si n vaut de 10 à 16, alors ladite séquence de l'oligonucléotide est constituée de n nucléotides constitutifs de la séquence 5'- 2909383 6 CTTC*CTTTTTTTTC*TT-3' (SEQ ID No 1, C* désignant une 5-méthyl-cytosine), si n vaut de 17 à 25, ladite séquence de l'oligonucléotide comprend la séquence 5'-CTTC*CTTTTTTTTC*TT-3' (SEQ ID No 1, C* 5 désignant une 5-méthyl-cytosine), et ledit oligonucléotide s'hybride spécifiquement avec le gène codant pour la tyrosinase related protein-1 humaine par appariement Hoogsteen entre les bases complémentaires, et forme une structure en triple hélice avec le gène de la tyrosinase related protein1 humaine. 10 De préférence, le nombre de nucléotides n de cet oligonucléotide anti-gène vaut de 13 à 21, de préférence de 15 à 19, et de préférence encore, le nombre de nucléotides n est égal à 16. Ainsi, lorsque n est inférieur ou égal à 16, c'est-à-dire lorsque la taille de 15 l'oligonucléotide anti-gène selon l'invention est inférieure ou égale à la taille de la séquence SEQ ID No 1, alors l'oligonucléotide anti-gène selon l'invention est un fragment de n nucléotides de la séquence SEQ ID No 1 ou cette séquence elle-même. Lorsque n vaut de 17 à 25, c'est-à-dire lorsque la taille de l'oligonucléotide 20 anti-gène selon l'invention est strictement supérieure à la taille de la séquence SEQ ID No 1, alors l'oligonucléotide anti-gène selon l'invention comprend la séquence SEQ ID No 1, ainsi que d'autres nucléotides situés en 5' et/ou en 3' de SEQ ID No 1. Dans ce cas, lesdits autres nucléotides situés en 5' et/ou en 3' de SEQ ID 25 No 1 sont choisis de façon à maximaliser le degré de complémentarité, calculé tel que décrit ci-dessous, entre l'oligonucléotide anti-gène et les 2 brins du gène codant pour la tyrosinase related protein-1 humaine, permettant ainsi l'appariement Hoogsteen entre les bases complémentaires et la formation d'une structure en triple hélice entre l'oligonucléotide anti-gène et le gène de la 30 tyrosinase related protein-1 humaine. Dans le cadre de la présente invention, on entend par gène codant pour la tyrosinase related protein-1 , la séquence génomique du gène de la tyrosinase 2909383 7 related protein-1 (pour la séquence humaine, voir référence accession number AF001295 dans la base de données GenBanke, National Institute of Health, Etats-Unis). Les oligonucléotides selon l'invention s'hybrident directement au gène 5 sous forme double hélice d'ADN dans la cellule. Ils permettent ainsi de réaliser une modulation ultime de la quantité d'ARN messager codant pour la tyrosinase related protein-1 et donc de l'enzyme correspondante. A la différence des inventions décrites dans les documents US 20040014700 ou FR 2840217 qui sont basées sur des oligonucléotides formant 10 des liaisons hydrogènes selon de le schéma d'appariement de Watson-Crick pour former une structure en double hélice, dans le présent document, le terme "hybridation" est utilisé pour désigner la formation de liaisons hydrogènes, aussi connue comme appariement Hoogsteen ou reverse-Hoogsteen, entre d'une part les bases complémentaires, usuellement réparties sur deux brins d'acide nucléique 15 formant une double hélice selon le schéma de Watson-Crick, avec d'autre part un troisième brin pour former un triplex, structure en triple hélice. Le degré de complémentarité entre les séquences d'acide nucléique est déterminé en comparant, après alignement, la première séquence avec la séquence complémentaire de la seconde séquence. Le degré de complémentarité est calculé 20 en déterminant le nombre de positions complémentaires pour lesquelles le nucléotide est complémentaire entre les deux séquences ainsi comparées, en divisant ce nombre de positions complémentaires par le nombre total de positions et en multipliant le résultat obtenu par 100 pour obtenir le degré de complémentarité entre ces deux séquences exprimé en pourcentage. 25 Le terme "hybridation spécifique" signifie en particulier qu'il existe un degré de complémentarité suffisant pour éviter la fixation non spécifique de l'oligonucléotide sur une séquence non ciblée dans les conditions où la fixation spécifique est souhaitée. Les oligonucléotides selon l'invention s'hybrident de préférence spécifiquement avec le gène codant pour la tyrosinase related protein- 30 1. En particulier, les oligonucléotides de l'invention sont capables de s'hybrider uniquement avec l'ADN des gènes qui codent pour la tyrosinase related protein-1. 2909383 8 Les oligonucléotides selon l'invention comportent un nombre de nucléotides suffisant en identité et en nombre pour s'hybrider de façon spécifique. Dans le cadre de la présente invention, on entend par ADN qui codent pour la tyrosinase related protein-1 , aussi bien les exons que les introns, en 5 particulier les exons. La présente invention a aussi pour objet des oligonucléotides, comprenant une ou plusieurs modifications chimiques au niveau de leurs parties sucres, leurs parties nucléobases ou leur squelette internucléotidique qui confèrent des caractéristiques physico-chimiques souhaitables aux oligonucléotides selon 10 l'invention telles qu'une biodisponibilité accrue, l'augmentation de l'affinité pour les séquences cibles, l'augmentation de l'internalisation cellulaire ou une meilleure stabilité biologique ou l'augmentation de la stabilité en présence de nucléases cellulaires. A titre d'exemple, les modifications pouvant conférer ces caractéristiques 15 sont les Locked Nucleic acids (LNA), les Peptide Nucleic Acids (PNA), les dérivés 2'-O-alkyle et 2'-O-fluoro sur la partie sucre du nucléoside, et les dérivés phosphorothioates ou les dérivés méthylphosphonates au niveau du squelette internucléotidique ou encore des dérivés porteurs en 5' et ou 3' de groupement réactif type intercalant comme l'acridine ou permettant d'établir un pontage avec 20 la séquence cible comme le psoralène ou un groupement azide. Le terme "PNA" est connu de l'homme du métier et signifie une structure chimique similaire à celle de l'ADN mais dans laquelle le squelette est composé d'unités répétées de N-(2-aminoéthyl)-glycine reliées par des liaisons peptidiques. Les différentes bases purines et pyrimidines sont liées au squelette par des liaisons 25 methylène carbonyl. La structure est présentée ci-après : 2909383 9 L Base Base O" Le terme "LNA" est connu de l'homme du métier et désigne un analogue d'acide nucléique contenant un pont 2'-O, 4'-C methylène. Ce pont bloque la flexibilité du cycle ribofuranose en formant une structure bicyclique rigide. 5 La structure est présentée ci-après : HOQ Base C HO Monomère de LNA Dans le présent document, le terme "oligonucléotide" se réfère à des polynucléotides formés à partir de nucléobases naturelles et de groupements lo pentafuranosyles (sucre) formant des nucléosides qui sont reliés entre eux par liaisons phosphodiesters natives. Le terme "oligonucléotides" se réfère donc aux espèces naturelles ou aux espèces synthétiques formés à partir de sous unités naturelles ou de leurs homologues proches. Le terme "oligonucléotides" peut se référer aussi aux parties qui ont des 15 fonctions similaires aux oligonucléotides naturels mais qui peuvent présenter des portions non naturelles. Les oligonucléotides peuvent avoir des parties sucres, des 2909383 10 parties nucléobases ou des liaisons internucléotidiques modifiées. Comme indiquées ci-dessus, parmi les modifications possibles, les modifications préférées sont les Locked Nucleic acids (LNA) tels que décrits par Braasch DA et Corey DR (Chem. Biol.2001, 8, 1-7), les dérivés N3'-P5' phosphoramidates tels que 5 décrits par Faria M et Giovannangeli C.(J. Gene Med 2001, 3, 299-310), les Peptide Nucleic Acids (PNA) décrits par Wang G et Xu XS (Cell Fies. 2004, 14, 111-118), les dérivés 2'-O-alkyle sur la partie sucre, en particulier les dérivés 2'-O-éthyloxyméthyle ou 2'-O-méthyle, et/ou les phosphorothioates ou les méthylphosphonates pour le squelette internucléotidique ou encore des dérivés 10 porteurs en 5' et ou 3' de groupement réactif type intercalant comme 1'acridine ou permettant d'établir un pontage avec la séquence cible comme le psoralène ou un groupement azide. Les oligonucléotides chimériques sont compris dans les modifications préférentielles de l'invention. Les oligonucléotides contiennent au moins deux 15 régions chimiquement différentes, chacune comprenant au moins un nucléotide. Il s'agit en particulier d'une ou de plusieurs régions comprenant un nucléotide modifié qui confère une ou plusieurs propriétés bénéfiques comme par exemple une meilleure stabilité biologique, une biodisponiblité accrue, l'augmentation de l'internalisation cellulaire ou l'augmentation de l'affinité pour l'ADN cible. 20 De façon préférée, les oligonucléotides chimériques selon l'invention comprennent des locked nucleic acids (LNA), des dérivés N3'-P5' phosphoramidates, des peptide nucleic acids (PNA) ou des molécules avec un squelette internucléotidique qui peut être en tout ou partie phosphodiesters, ou phosphorothioates, ou méthylphosphonates ou des combinaisons de liaisons 25 phosphodiesters et/ou phosphorothioates et/ou méthylphosphonates. Avantageusement, les oligonucléotides chimériques selon l'invention comprennent des locked nucleic acids (LNA) ou des peptide nucleic acids (PNA), plus avantageusement des locked nucleic acids (LNA). Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, lorsque l'oligonucléotide chimérique 30 comprend des LNA, les nucléotides en positions 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 et 16 de SEQ ID No 1 sont des LNA, résultant ainsi dans la séquence 5'- 2909383 11 C+TT+C*C+TT+TT+TT+TT+C*T+T±3', (SEQ ID No 2, où C* désigne une 5- méthyl cytosine, C+ désigne une LNA-dC, et T+ désigne une LNA-T). Le terme " oligonucléotides " peut également se référer à des 5 oligonucléotides auxquels on a greffé un vecteur d'administration circulaire de type plasmidique ou un vecteur d'administration linéaire de type acide nucléique ou peptidique. La présente invention a aussi pour objet une composition cosmétique ou dermatologique contenant au moins un oligonucléotide décrit précédemment et au 10 moins un excipient ou véhicule cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. Une telle composition peut contenir en outre, un ou plusieurs principes actifs. Ce ou ces principes actifs visent éventuellement à venir en complément ou à renforcer les effets dépigmentants recherchés. La présente invention se rapporte également à l'utilisation 15 d'oligonucléotides capables de s'hybrider spécifiquement avec les gènes codant pour la tyrosinase related protein-1 comme agents cosmétiques, notamment pour dépigmenter et/ou blanchir la peau ou les poils, et/ou pour atténuer les taches pigmentaires de la peau humaine. En particulier, la présente invention comprend des compositions 20 cosmétiques utilisant ces oligonucléotides comme agents cosmétiques. Elles sont destinées notamment à éclaircir le teint, prévenir ou traiter la formation de taches pigmentaires dues à l'action du rayonnement solaire, à atténuer les taches pigmentaires de sénescence (lentigos séniles), notamment sur les mains, ou encore à éclaircir la pilosité du corps ou des membres. 25 La présente invention se rapporte également à l'utilisation des oligonucléotides décrits précédemment pour la fabrication d'un médicament dermatologique destiné au traitement ou à la prévention des maladies se traduisant par la surexpression et la suractivité de la tyrosinase, par voie topique. Ce médicament peut être destiné à traiter ou à prévenir des hyperpigmentations 30 régionales par hyper-activité mélanocytaire telles que les mélasmas idiopathiques, des hyperpigmentations accidentelles telles que la photosensibilisation ou dans 2909383 12 certains cas de cicatrisation post-lésionnelle, et pour l'atténuation des contrastes pigmentaires dans certaines leucodermies telles que le vitiligo. La présente invention a aussi pour objet une composition dépigmentante caractérisée en ce qu'elle contient, dans un milieu cosmétiquement et/ou 5 dermatologiquement acceptable, une séquence oligonucléotide dirigée contre le gène codant pour la tyrosinase related protein-1. La composition cosmétique et le médicament selon l'invention sont appropriés pour une utilisation topique et contiennent donc un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec l0 la peau. La séquence oligonucléotidique selon l'invention peut être présente en quantité allant de 0,0001% à 10% et de préférence de 0,003% à 3% du poids total de ces compositions. Les compositions de l'invention peuvent se présenter sous toutes les formes appropriées à une application topique notamment sous forme d'une 15 solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile, simple ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion aqueuse ou huileuse de particules solides, telles que des nanosphères ou des nanocapsules polymériques, ou encore d'une dispersion aqueuse de vésicules lipidiques de type ionique ou 20 non-ionique, tels que décrit dans le brevet français FR 2534487. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent éventuellement être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent également se présenter sous forme solide 25 pulvérulent ou non, par exemple sous forme stick. Elles peuvent encore se présenter sous la forme d'unidoses, de patchs, de crayons, ou d'applicateurs autorisant une application localisée sur les taches du visage ou des mains. La composition cosmétique notamment peut formulée pour être utilisée comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage. 30 De façon connue, les compositions de l'invention peuvent contenir également les adjuvants habituels dans les domaines cosmétique et dermatologique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs 2909383 13 hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres solaires, les pigments, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. Ces adjuvants, selon leur 5 nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse, dans les vésicules lipidiques et/ou dans les nanoparticules et/ou nanosphères. Lorsque la composition cosmétique ou dermatologique de l'invention est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 à 80% en poids, et de préférence de 5 à 50% en poids par rapport au poids total de la composition. 10 Les huiles, les émulsionnants et les co-émulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. L'émulsionnant et le co-émulsionnant sont présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3% à 30% en poids, et de préférence de 0,5% à 20% en poids par rapport au poids total de la composition. 15 Comme huiles utilisables en association avec les oligonucléotides selon l'invention, on peut citer les huiles minérales (huile de vaseline), les huiles d'origine végétale (huile d'avocat, huile de soja), les huiles d'origine animale (lanoline), les huiles de synthèse (perhydrosqualène), les huiles siliconées (cyclométhicone) et les huiles fluorées (perfluoropolyéthers). On peut aussi 20 utiliser comme matière grasses des alcools gras (alcool cétylique), des acides gras, des cires (cire de Carnauba, ozokérite). Comme émulsionnants et coémulsionnants utilisables en association avec les oligonucléotides selon l'invention, on peut citer par exemple les esters d'acide gras et de polyéthylène glycol tels que le stéarate de PEG-20 et les esters d'acide 25 gras et de glycérine tels que le stéarate de glycéryle. Comme gélifiants hydrophiles utilisables en association avec les oligonucléotides selon l'invention, on peut citer en particulier les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides, 30 les gommes naturelles et les argiles. Comme gélifiantslipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras, la silice hydrophobe et les polyéthylènes. 2909383 14 La présente invention a pour objet une composition cosmétique ou dermatologique contenant au moins un oligonucléotide décrit précédemment et un ou plusieurs autres agents actifs. La présente invention se rapporte également à un procédé cosmétique ou 5 dermatologique de dépigmentation et/ou de blanchiment de la peau humaine consistant à appliquer sur la peau pigmentée une composition cosmétique comprenant une séquence oligonucléotidique dirigée contre le gène codant pour la tyrosinase related protein-1. Plus particulièrement, l'invention vise un procédé de traitement cosmétique pour dépigmen.ter ou blanchir la peau caractérisé en ce qu'il 10 comprend l'application d'une composition définie ci-dessus sur une ou plusieurs zone(s) pigmentée(s) de la peau pendant une durée déterminée. Optionnellement il est possible de répéter l'opération, jusqu'à l'apparition de l'effet dépigmentant. Pour cette application cosmétique, la teneur en oligonucléotide est de préférence comprise entre 0,003% à 3% du poids total de la composition. 15 La présente invention concerne également l'utilisation d'un oligonucléotide tel que décrit précédemment pour la fabrication d'un médicament destiné à être administré de façon simultanée, séparée ou étalée dans le temps en association avec un ou plusieurs actifs. La composition cosmétique de l'invention peut comprendre en outre un ou 20 plusieurs principes actifs utilisables en cosmétique. Lesdits actifs, en association avec les oligonucléotides selon l'invention, sont utilisés purs ou provenant d'extraits renfermant ces actifs. Ils sont notamment sélectionnés parmi les composés suivants: l'acide ellagique et ses dérivés; le résorcinol et ses dérivés ; l'arbutine et ses dérivés, la vitamine C et ses dérivés; le pantothénate sulfonate et 25 ses dérivés; des molécules interférant directement ou indirectement avec l'alpha-mélanocyte stimulating hormone (a-MSH) ou son récepteur ou l'hormone adrénocorticotropique (ACTH) ; les polyols tels que la glycérine le glycol ou le propylène glycol ; les agents kératolytiques et/ou desquamants tels que l'acide salicylique et ses dérivés ; les alpha-hydroxyacides tels que l'acide lactique ou 30 l'acide malique, seuls ou greffés ; l'acide rétinoïque ; le rétinaldéhyde ; le rétinol et ses dérivés tels que le palmitate, le propionate ou l'acétate, en préparation liposomique ou non ; des agents antiglycations et/ou antioxydants pris seuls ou en 2909383 15 association tels que le tocophérol et ses dérivés, l'ergothionéine, la thiotaurine, l'hypotaurine, l'aminoguanidine, la thiamine pyrophosphate, la pyridoxamine, la lysine, l'histidine, l'arginine, la phénylalanine, la pyridoxine, l'adénosine triphosphate ; les agents anti-inflammatoires tels que le stéaryl glycyrrhétinate ; 5 les agents apaisants et leurs mélanges, un ou plusieurs filtres solaires chimiques ou physiques tels que le méthoxycinnamate d'octyle, le butyl-méthoxydibenzoylméthane, l'oxyde de titane et l'oxyde de zinc ; et les acides désoxyribonucléiques et/ou nucléiques. En cas d'incompatibilité entre ces actifs et les oligonucléotides de l'invention, les uns et/ou les autres peuvent être incorporés dans des 10 nanostructures, notamment des liposomes ou des vésicules formés de lipides amphiphiles ioniques ou non ioniques telles que décrites dans le brevet français FR 2534487 et/ou des nanoparticules et/ou des nanospheres et/ou des nanocapsules. Les exemples suivants illustrent la présente invention sans toutefois la 15 limiter. Dans les exemples qui suivent, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indications contraires. Description des dessins 20 Figure 1 : Etude de la séquence SEQ ID No 2 sur le taux de transcrits tyrosinase related protein-1 (TRP-1) dans des :mélanocytes humains normaux traités avec 500 nM d'oligonucléotides pendant 8 heures. Le symbole * représente une différence statistiquement significative (p EGF 17005-075 Invitrogen 5 ng/mL (3-FGF 13256-029 Invitrogen 10 ng/mL Tableau 4: Composition du milieu 1 Les ARN totaux (tous les ARN cellulaires donc comprenant les ARN 5 messagers de la tyrosinase related protein-1) sont extraits (Kit Rneasy, Qiagen, Courtaboeuf, France), dosés, et leur qualité vérifiée à l'aide du Bioanalyseur 2100 (Agilent Technologies, Massy, France). Ils sont ensuite traités avec de la DNAse, afin d'éliminer toute trace d'ADN génomique éventuellement résiduel. Pour procéder à la réaction de PCR quantitative en temps réel qui est une réaction 10 d'amplification d'ADN une réaction de transcription inverse par l'enzyme Superscript II (Qiagen), permet de générer les ADN complémentaires (ADNc) à partir des ARN. A l'aide de ce produit de transcription inverse obtenu, la PCR quantitative en temps réel sur LightCycler (Roche, Meylan, France) est ensuite effectuée selon le mélange réactionnel décrit dans le tableau 5 afin de quantifier 15 les ARN messagers d'intérêts présents dans la population cellulaire initiale. Concentration finale Volume en L SYBRGreen mix dilution 1/10 2 (dNTP, Taq. pol.) Amorce sens 0,5 gM 2 Amorce antisens 0,5 M 2 MgCl2 3,5 mM 2 H20 / 10 Tableau 5: Mélange réactionnel type utilisé pour la PCR quantitative en temps réel. 20 2909383 22 2 l du produit de la réaction de transcription inverse décrit: ci-dessus et contenant les ADNc cellulaires sont ajoutés au mélange réactionnel type utilisé pour la réaction de PCR quantitative en temps réel et décrit dans le tableau 5. Le taux de transcrits codant pour le gène tyrosinase related protein-1 mesuré pour un 5 échantillon est rapporté au taux de transcrits codant pour le gène invariant bêta-2-microglobuline. Les résultats obtenus pour ce rapport sont récapitulés dans le tableau 6 ci-dessous, et représentés sur les figures 1 et 2 annexées. La SEQ ID No 2 diminue significativement de 23 % le taux de transcrits du gène tyrosinase related protein-1. En revanche, les séquences ù SEQ ID No 3 à 6 ù ne présentent 10 pas d'activité significative sur l'inhibition de l'expression du gène de tyrosinase related protein-1, ni même les séquences SEQ ID No 7 et SEQ ID No 8 qui sont respectivement le contrôle inversé et le contrôle brouillé de la séquence SEQ ID No 2, qui possède seule cette activité. Traitements % d'inhibition SEQ ID No 2 23 SEQ ID No 3 NS SEQ ID No 4 NS SEQ ID No 5 NS SEQ ID No 6 NS SEQ ID No 7 NS SEQ ID No 8 NS Tableau 6: Récapitulatif de l'effet des séquences SEQ ID No 2 à SEQ ID No 8 sur le taux de transcrits codant pour le gène tyrosinase related protein-1 Exemple 4 : Etude de l'inhibition de l'expression du gène de la tyrosinase related protein-1 humaine sur mélanocytes humains normaux, par la mesure de l'activité de dopa-oxydase de la tyrosinase : 30 Les oligonucléotides selon l'invention figurant dans le tableau 1 de l'exemple 1 (SEQ ID No 2 à SEQ ID No 6) sont étudiés pour leur action sur la mélanogénèse, et donc sur leur capacité à moduler la production de pigments 15 20 25 2909383 23 mélaniques par les mélanocytes. A titre d'éléments de comparaison, les oligonucléotides contrôle inversé (SEQ ID No 7) et contrôle brouillé (SEQ ID No 8) sont également étudiés pour cette action. Il est rappelé qu'au cours du mécanisme réactionnel de la mélanogénèse, la 5 tyrosinase et la TRP-1 forment un complexe enzymatique qui catalyse la transformation de la L-dopa en dopaquinone puis en dopachrome (Kobayashi T. et al., J. Biol. Chem. 273, 31801-318055, 1998 ; Sarangarajan R., Boissy R.E., Pigment Cell Res., 16, 437-444, 2001). Il est à noter que la tyrosinase est également dénommée dopa-oxydase en raison de sa nature mufti- ro fonctionnelle. Elle possède une activité dopa-oxydase, catalysant l'oxydation de la tyrosine en dopa. Le principe du présent test est basé sur la mesure de la vitesse de la réaction catalysée par la dopa-oxydase dans la transformation de la L-dopa, utilisée comme substrat, en dopachrome. L'apparition de dopachrome est 15 quantifiée par mesure de densité optique à intervalles de temps déterminés, ce qui permet de calculer la vitesse de réaction de transformation de la L-dopa pour chacun des oligonucléotides testés et pour l'essai témoin. Sachant que la vitesse de cette réaction dépend de l'activité de l'enzyme disponible, il sera possible, à partir des résultats obtenus, de vérifier l'action inhibitrice des oligonucléotides 20 dirigés contre le gène de la tyrosinase related protein-1 sur l'activité de la tyrosinase. Une baisse de la vitesse de réaction par rapport à l'essai témoin correspondra à une diminution de l'activité enzymatique de la tyrosiinase, et par conséquent, à la réduction de la formation de la mélanine, et donc à un effet dépigmentant. 25 Les mélanocytes humains normaux sont ensemencés en microplaque 96 puits à raison de 10.000 cellules par puits en milieu 1 (tableau 4). Pour chacune des séquences SEQ ID No 2 à 8, une solution extemporanée est préparée consistant en du milieu 1 auquel a été ajouté la séquence complexée avec du Superfect (Qiagen, Courtabeeuf, France), à la concentration 500 nanomolaires. 30 Vingt quatre heures après l'ensemencement, les cellules sont traitées une fois, puis l'activité dopa-oxydase est mesurée après 72 heures de traitement par 2909383 24 spectrophotometrie à 450mn. Les résultats sont mentionnés dans le tableau 7 et représentés sur la figure 3 annexée. Traitements % de diminution de l'activité dopa-oxydase SEQ IDNo2 40% SEQ ID No 3 NS SEQ ID No 4 NS SEQ ID No 5 NS SEQ IDNo6 NS SEQ ID No 7 NS SEQ ID No 8 NS 5 Tableau 7: Récapitulatif de l'effet des séquences SEQ ID No 2 A SEQ ID No 8 sur l'activité dopa-oxydase de la tyrosinase de mélanocytes humains normaux. Le tableau 7 montre que l'activité DOPA-oxydase est inhibée significativement de 40% dans les mélanocytes humains normaux traités avec la SEQ ID No 2 à 500 10 nanomolaires . Comme observé dans l'exemple 3, les SEQ ID N 3 à SEQ ID N 6 rte présentent pas d'activité significative indiquant que les propriétés théoriques d'hybridation de ces séquences ne conditionnent pas systématiquement leur activité -biologique. Les SEQ ID No 7 et SEQ ID No 8 n'ont pas d'activité sur l'activité 15 DOPA-oxydase. Ceci montre que l'effet inhibiteur observé avec la séquence SEQ ID No 2 composée des bases LNA est spécifique de la séquence ciblée. Exemple 5 : Poudre cosmétique pour l'éclaircissement du teint du visage Microcellulose 20,00% Sodium lauryl sulfoacetate 15,00% Oligonucléotide SEQ ID No 2 1, 00% Parfum, colorants, conservateurs qs. Talc Qsp. 100% 5 2909383 25 Cette poudre présente une double action. Elle permet un nettoyage de la peau, et de plus elle permet, par un usage régulier durant quelques jours, d'éclaircir le teint. On peut l'appliquer sur la peau du visage une à deux fois par jour. Exemple 6 : Crème cosmétique de jour dépigmentante sous forme d'émulsion-gel Glycérine 5,00% triglycérides caprylique/caprique/succinique 5,00% Méthoxycinnamate d'octyle 1,00% Diméthicone copolyol 0,50% Acrylates / C 10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0,50% Oligonucléotide SEQ ID No 2 0,01 % Neutralisant qs. Conservateurs, parfum, colorants qs. Eau qsp. 100% 10 Certaines personnes soumises au rayonnement plus ou moins intense de la lumière du jour, voire du soleil directement, souhaitent conserver un teint clair et éviter l'apparition de taches pigmentées. L'utilisation de l'émulsion-gel ci-dessus permettra d'atteindre ce but. Cette composition s'applique sur le visage généralement le matin. Elle agit aussi bien de manière préventive que curative sur 15 la pigmentation, régulière ou non, du visage. 20 2909383 26 Exemple 7: Composition cosmétique fluide protectrice du rayonnement solaire (SPF 30) Pentacyclométhicone volatile 49,00% Dioxyde de titane 15,00% Méthoxycinnamate d'octyle 7,50% Glycérine 5,00% Phényltriméthicone 5,00% Diméthicone copolyol 3,00% Polyméthylméthacrylate 2,50% Butyl méthoxydibenzoyle méthane 1,00% Oligonucléotide SEQ ID No 2 0, 1% Neutralisant, Parfum, Conservateurs, antioxydants qs. Eau qsp. 100% 5 Cette composition est à utiliser avant l'exposition à un rayonnement solaire intense. Elle prévient l'apparition de taches pigmentaires, chez les personnes prédisposées à ce phénomène,. Il est à noter que la présence d'une concentration élevée en filtre solaire permet de compenser la diminution de la protection naturelle, conséquence de la baisse du taux de mélanine. 10 Exemple 8 : Crème dermatologique pour le traitement d'hyperpi ,mentations cutanées d'origine pathologique ou traumatique Glycéryl stéarate + Peg-100 stéarate 5,00% Polyisobutène hydrogéné 4,00% Magnésium ascorbyl phosphate 3,00% Tricaprylate /caprate de glycérol 3,00% Squalane 3,00% Glycérine 2,00% Cire d'abeille 1,50% Cétéaryl octanoate 1,50% 2909383 27 Alcool cétylique 1,00% Alcool stéarylique 1,00% Diméthicone 1,00 /~ Gomme xanthane 0,30% Acide éthylène diamine tétracétique 0,20% Acide citrique 0,10% Citrate de sodium 0,10% Oligonucléotide SEQ ID No 2 0,10% Neutralisant, Parfum, Conservateurs qs. Eau qsp. 100'/0 L'utilisation de cette crème permet d'atténuer les hyperpigmentations cutanées d'origine pathologique ou traumatique. Cette crème permet également d'atténuer les contrastes de couleur à la périphérie des zones dépigmentées en cas 5 de vitiligo. Exemple 9 : Lotion cosmétique visage pour éclaircir le teint Alcool éthylique 30,00% PPG-3 Myristyl éther 5, J0% Glycérine 2,00% Carbomer 0, 20% Polysorbate 20 0,20% Oligonucléotide SEQ ID No 2 0,01 % Neutralisant, Parfum, Conservateurs qs. Eau qsp. 100% 10 Cette lotion pour éclaircir le teint s'utilise après le démaquillage et le nettoyage de la peau. 10 2909383 28 Exemple 10 : Sérum cosmétique éclaircissant pour le visage Eau qsp 100% Glycerine 2% EDTA tetrasodique qsp pH 6,5 Acide citrique Citrate trisodique Gomme xanthane 0.25% Polyacrylamide, C13.14 isoparaffin, 0.5% laureth-7 Dimethicone copolyol 0.25% Oligonucléotide SEQ ID No 2 0.1% Parfum, colorant, conservateur qs Une goutte de cette composition très concentrée de sérum, s'applique sur 5 le visage généralement avant l'application d'une crème pour le visage. Ce sérum s'utilise habituellement par cures d'une à deux semaines pour obtenir ou entretenir un éclaircissement du teint. Exemple 11 : Lotion cosmétique pour éclaircir la pilosité corporelle Eau qsp 100% Alcool 50% Panthenylethyl ether 0.5% Acétate DL- a -tocopherol 0.2% Polysorbate 60 1 % Oligonucléotide SEQ ID No 2 0.01% Parfum 0.2% Glycérine 0.5% Colorant qs 2909383 29 Cette lotion s'applique sur les zones pileuses à éclaircir, notamment les bras, pendant la durée suffisante pour obtenir un éclaircissement progressif des poils. 5 Exemple 12 : Gel crème cosmétique anti-taches pour les mains Caprilic/capric diglyceryl succinate 6% Octyl octanoate 2.5% Methoxycinnamate d'octyle 6% Oligonucléotide SEQ ID No 2 0.001% Phenyltriméticone 2.5% Benzophenon-3 0.5% Hyaluronate de sodium 0.05% Gomme xanthane 0.2% Acrylates/C10.30 alkyl acrylate copolymer 0.5% Glycerine 2% PEG 150 3% Neutralisants, Colorants, parfum, conservateurs qs Eau purifiée qsp 100% Cette crème doit être appliquée directement sur les taches (lentigos solaires et/ou séniles) des mains, pour en atténuer la coloration. REVENDICATIONS 1. Oligonucléotide anti-gène constitué d'une séquence de n nucléotides, n étant un nombre entier valant de 10 à 25, caractérisé en ce que : si n vaut de 10 à 16, ladite séquence de l'oligonucléotide est constituée de n nucléotides constitutifs de la séquence 5'-CTTC*CTTTTTTTTC*TT-3' (SEQ ID No 1, C* désignant une 5-méthyl-cytosine), - si n vaut de 17 à 25, alors ladite séquence de l'oligonucléotide comprend la séquence 5'-CTTC*CTTTTTTTTC*TT-3' (SEQ ID No 1, C* désignant une 5-méthyl-cytosine), et ledit oligonucléotide s'hybride spécifiquement avec le gène codant pour la tyrosinase related protein-1 humaine par appariement Hoogsteen entre les bases complémentaires, et forme une structure en triple hélice avec le gène de la tyrosinase related protein-1 humaine. 2. Oligonucléotide selon la revendication 1, carcatérisé en ce que le nombre n vaut de 13 et 21, de préférence de 15 à 19, et de préférence encore le nombre n est égal à 16. 3. Oligonucléotide selon l'une des revendications 1 à 2, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un oligonucléotide chimérique comprenant au moins une modification chimique au niveau de la partie sucre, de la partie nucléobase et/ou du squelette internucléotidique. 25 4. Oligonucléotide selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il contient des LNA (Locked Nucleic acids) ou des PNA (Peptide Nucleic Acids). 5. Oligonucléotide selon la revendication 4, caractérisé en ce que les nucléotides 30 en positions 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 et 16 de SEQ ID No 1 sont des LNA. 2909383 31 6. Oligonucléotide selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comporte au moins une modification choisie dans le groupe des dérivés 2'-O-alkyle et 2'-O-fluoro sur la partie sucre du nucléoside, des dérivés phosphorothioates ou méthylphosphonates au niveau du squelette internucléotidique, des dérivés 5 porteurs en 5' et/ou 3' de groupement réactif type intercalant, notamment l'acridine, et des dérivés permettant d'établir un pontage avec la séquence cible, notamment le psoralène et un groupement azide. 7. Composition cosmétique ou dermatologique, caractérisée en ce qu'elle 10 comprend au moins un oligonucléotide selon l'une des revendications 1 à 6. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que l'oligonucléotide est présent en quantité allant de 0,0001% à 10% et de préférence de 0,003% à 3% du poids total de la composition. 15 9. Composition selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme appropriée à une application topique, notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile, simple ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit 20 anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion aqueuse ou huileuse de particules solides, telles que des nanosphères ou des nanocapsules polymériques, ou encore d'une dispersion aqueuse de vésicules lipidiques de type ionique ou non-ionique.. 10. Composition cosmétique selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisée en ce qu'elle est formulée pour être utilisée comme produit de soin cosmétique et/ou comme produit de maquillage. 11. Composition selon l'une des revendications 7 à 10, caractérisée en ce qu'elle 30 comprend en outre un ou plusieurs principes actifs utilisables en cosmétique, notamment un ou plusieurs filtres solaires chimiques ou physiques. 2909383 32 12. Procédé de traitement cosmétique pour dépigmenter ou blanchir la peau, caractérisé en ce qu'il comprend l'application d'une composition définie selon l'une des revendications 7 à 11 sur une ou plusieurs zone(s) pigmentée(s) de la peau pendant une durée déterminée, optionnellement répéter l'opération, jusqu'à 5 l'apparition de l'effet dépigmentant. 13. Procédé de traitement cosmétique pour dépigmenter ou blanchir les poils, caractérisé en ce qu'il comprend l'application d'une composition définie selon l'une des revendications 7 à 11 sur une ou plusieurs zone(s) pileuse(s) de la peau 10 pendant une durée déterminée, optionnellement répéter l'opération, jusqu'à l'apparition de l'effet dépigmentant. 14. Procédé de traitement cosmétique selon la revendication 12 ou 13, caractérisé en ce que la teneur en oligonucléotide est comprise entre 0,003% à 3% du poids 15 total de la composition. 15. Utilisation d'un oligonucléotide selon l'une des revendications l à 6 pour la fabrication d'un médicament par voie topique destiné au traitement ou à la prévention des maladies se traduisant par la surexpression et la suractivité de la 20 tyrosinase, notamment pour le traitement ou la prévention des hyperpigmentations régionales par hyper-activité mélanocytaire telles que les mélasmas idiopathiques, des hyperpigmentations localisées par hyper-activité et prolifération mélanocytaire bénigne telles que les taches pigmentaires de senescence (lentigos séniles) , des hyperpigmentations accidentelles telles que la photosensibilisation 25 ou la cicatrisation post-lésionnelle, et pour le traitement de leucodermies telles que le vitiligo.