Brevet FR2906036A1 — publié le 20080321

DISPOSITIF ET PROCEDE D'ETALONNAGE DE PERTES DE SOLVANT D'UN CALORIMETRE DIFERENTIEL A BALAYAGE A MODULATION ARRIERE-PLAN Domaine de l'invention La présente invention est relative à des instruments d'analyse thermique et à des procédés d'utilisation de ceux-ci. Plus particulièrement, des formes de réalisations de la présente invention concernent l'utilisation de la calorimétrie à balayage différentiel de température à modulation pour tenir compte de pertes de 1 o solvant pendant des analyses réalisées à l'aide de calorimètres ouverts. Arrière-plan de l'invention Les calorimètres différentiels à balayage (CDB) servent à déterminer des propriétés physiques d'un échantillon en analysant la réponse de l'échantillon à un programme de température appliquée. Pendant son fonctionnement, un CDB mesure 15 les différences de température entre un étalon et un échantillon à analyser en présence d'un profil de température à la fois pour l'étalon et pour l'échantillon. Certaines propriétés de l'échantillon à analyser peuvent être déterminées au moyen de la différence de température. Deux types généraux de profils de température peuvent être utilisés pendant 20 des expériences menées avec un CDB. Un premier type de programme de température est linéaire. Le second type de programme de température, ordinairement appelé programme de température modulée, ajoute une modulation à un programme de température linéaire. Les CDB utilisant le second type de programme de température sont ordinairement appelés CDB à température modulée. 25 Des CDB à température modulée sont décrits dans les brevets US n 5 224 775 et US 6 561 692, lesquels sont incorporés ici dans leur intégralité. Des expériences avec des CDB peuvent être menées en utilisant des calorimètres ouverts ou fermés. Les calorimètres ouverts sont ceux qui ont une cellule à échantillon ouverte. Une cellule à échantillon ouverte permet d'ajouter 30 facilement des réactifs dans des cellules d'un calorimètre à l'aide de pipettes automatisées. De façon générale, les CDB ouverts ont de multiples cellules de calorimètre disposées sous la forme d'une matrice. De la sorte, de nombreuses expériences peuvent être menées parallèlement. Du fait de la facilité avec laquelle des réactifs peuvent être ajoutés dans des cellules d'un calorimètre et de la disposition 35 en matrice, les calorimètres ouverts sont utiles dans des applications à grand débit. 2906036 2 Les expériences menées avec des CDB ouverts impliquent ordinairement la mise en place d'un échantillon dans une cellule à échantillon de la matrice, puis l'apport d'un ou de plusieurs réactifs dans l'échantillon. Par exemple, un certain nombre de protéines de type de types différents peuvent être placées dans une 5 matrice de cellules de calorimètre sous la forme de suspensions dans de l'eau en utilisant une série de pipettes automatisées à commande robotique. Une quantité régulée d'une solution de ligand est ajoutée dans chaque cellule à l'aide de pipettes automatisées à commande robotique. En contrôlant des signaux de puissance issus des cellules du calorimètre en réponse à un profil de température appliquée, l'interaction de caractéristiques des diverses paires composées d'une protéine et d'un ligand peut être rapidement évaluée. Cette architecture composée de multiples cellules à échantillon permet de mener de nombreuses expériences d'une manière rapide et efficace. L'utilisation d'un système de calorimètre ouvert lors d'expériences menées avec un CDB présente un gros inconvénient. Cet inconvénient est dû à la méconnaissance des pertes de solvant, qui contribuent de manière supplémentaire et non maîtrisée au signal de mesure du calorimètre et, de la sorte, induisent une incertitude dans les mesures du calorimètre. Une solution potentielle à ce problème consiste à mener une expérience différentielle à l'aide d'un échantillon contenant des paires composées d'une protéine et d'un ligand, et un étalon contenant seulement un volume identique de solvant et en supposant que les pertes de solvant sont les mêmes dans les cellules à échantillon et les cellules à étalon. De la sorte, une simple soustraction pourrait supprimer la contribution inconnue due aux pertes de solvant. Malheureusement, cela ne résout pas le problème, car la présence de l'échantillon peut modifier la vitesse d'évaporation du solvant dans l'échantillon par rapport à l'étalon. Ainsi, un système différentiel avec seulement une soustraction ne résout pas le problème. Ce qui complique encore la question, c'est que la contribution non maîtrisée au flux de chaleur provoqué par l'évaporation rend difficile l'évaluation des enthalpies, car choisir la bonne ligne de base est problématique. De même, lors de l'examen de la cinétique, la contribution du flux de chaleur résultant du processus concerné ne peut pas être distinguée de la contribution du flux de chaleur résultant des pertes de solvant. 2906036 3 Résumé de l'invention Des formes de réalisation de la présente invention tiennent compte du flux de chaleur dû aux pertes de solvant lors d'expériences de calorimétrie à balayage différentiel. Par exemple, des calorimètres différentiels à balayage selon des formes 5 de réalisation de la présente invention produiront une ligne de base bien meilleure à partir de laquelle peuvent être déduites les vraies caractéristiques thermiques de la cellule à échantillon. Selon un premier aspect de la présente invention, il est proposé un calorimètre différentiel à balayage (CDB) comprenant une cellule de CDB pour t o échantillon contenant un échantillon composé d'un solvant et d'un spécimen à analyser, et une cellule de CDB pour étalon contenant une solution étalon ou ne contenant pas d'échantillon. Le CDB selon la première forme de réalisation comprend également un premier élément chauffant pour appliquer un programme de température modulée à l'échantillon et à l'étalon. En outre, le CDB selon la première 15 forme de réalisation comprend un premier capteur pour mesurer une température de l'échantillon et un second capteur pour mesurer une température de l'étalon. De plus, la première forme de réalisation comprend un ordinateur pour saisir les températures mesurées et calculer une capacité thermique de l'échantillon du fait de la température modulée appliquée, et pour déterminer la quantité de flux de chaleur imputable à 20 l'évaporation de solvant depuis la cellule de CDB pour échantillon. Selon le premier aspect de la présente invention, on peut également avoir recours à une ou plusieurs des dispositions suivantes : - le calorimètre différentiel à balayage est un CDB à flux de chaleur ; - le calorimètre différentiel à balayage est un CDB à compensation de 25 puissance ; - les premier et second éléments chauffants modulent la température suivant une onde sinusoïdale ou une onde carrée ou une onde en dents de scie ou une onde triangulaire ou toute combinaison de celles-ci, d'une manière périodique ou aléatoire ; 30 - le CDB est étalonné à l'aide d'une cellule de CDB ne contenant du solvant que pour déterminer les paramètres nécessaires à l'obtention d'une ligne de base du fait de l'évaporation de solvant ; - la ligne de base est soustraite d'un flux de chaleur mesuré ; et/ou - le CDB comprend une matrice de cellules de CDB. 2906036 4 Selon un deuxième aspect de la présente invention, il est proposé un calorimètre différentiel à balayage (CDB) qui comprend un boîtier isolé fermé, une matrice composée d'une multiplicité de cellules destinées à contenir un ou plusieurs échantillons et un ou plusieurs étalons, un ou plusieurs capteurs pour mesurer la 5 température de base de l'échantillon et les températures dans les diverses cellules, un dispositif de chauffage pour soumettre les échantillons et les étalons à un programme de température modulée, et un ordinateur pour utiliser un signal reçu des cellules de CDB afin de calculer la capacité thermique indépendamment de tout processus cinétique qui survient, et de déterminer quelle partie du signal reçu est due à la perte 1 o de solvant. Selon le deuxième aspect de la présente invention, on peut aussi avoir recours à une ou plusieurs des dispositions suivantes : - chaque cellule peut être chauffée simultanément par une plusieurs sources de chaleur ; 15 - chaque cellule peut être chauffée indépendamment par une ou plusieurs sources de chaleur ; - la matrice de cellules peut être chargée à l'aide d'un moyen automatisé ; - la matrice de cellules peut être chargée à l'aide d'un moyen manuel ; - la matrice de cellules permet de modifier les dimensions des cellules ; 20 - un dispositif de chauffage est employé pour réguler la température dans le boîtier ; et/ou - le signal de sortie du dispositif est automatiquement appliqué à un dispositif informatique qui calcule et enregistre automatiquement les mesures. Selon un troisième aspect de la présente invention, il est proposé un procédé 25 pour tenir compte des pertes de solvant dans un calorimètre différentiel à balayage (CDB), comprenant des étapes consistant à déposer dans une cellule de CDB pour échantillon un échantillon composé d'un solvant et d'un spécimen à analyser, déposer un solvant dans une cellule de CDB pour étalon, chauffer la cellule à échantillon à l'aide d'un premier élément chauffant suivant un profil de température modulée, 30 chauffer la cellule pour étalon à l'aide d'un second élément chauffant suivant un profil de température modulée, calculer la manière dont un flux de chaleur dû à des pertes de solvant est lié à des variations de la capacité thermique mesurées d'après la modulation à partir de la cellule pour étalon, et utiliser ces informations pour calculer une ligne de base due à l'évaporation de solvant depuis la cellule de CDB pour 2906036 5 échantillon, et ajuster une mesure de flux thermique de CDB due à l'échantillon en fonction de la ligne de base calculée. Selon le troisième aspect de la présente invention, on peut également avoir recours à une ou plusieurs des dispositions suivantes : 5 - étalonner le CDB pour déterminer la ligne de base ; - faire fonctionner le CDB avec une cellule pour CDB contenant seulement un solvant ; - moduler la température suivant une onde sinusoïdale ou une onde carrée ou une onde en dents de scie ou une onde triangulaire, d'une manière périodique ou 1 o aléatoire ; - régler la mesure du flux thermique du CDB en soustrayant de la mesure du flux thermique du CDB la ligne de base calculée due aux pertes de solvant ; -utiliser une matrice de cellules de CDB ; et/ou - utiliser une matrice de cellules de CDB appariées, une première cellule de 15 la paire étant destinée à un échantillon et l'autre cellule de CDB de la paire étant destinée à un étalon. Selon un quatrième aspect de la présente invention, il est proposé un procédé pour tenir compte des pertes par évaporation depuis une solution placée dans une cellule de CDB pour échantillon, comprenant des étapes consistant à étalonner la 20 cellule de CDB pour déterminer le flux thermique provoqué par les pertes de solvant lors d'une expérience antérieure utilisant uniquement un solvant, puis soustraire du signal obtenu par l'expérience avec un échantillon la composante de flux thermique due aux pertes de solvant, la vitesse de pertes de solvant étant déterminée en mesurant le changement de capacité thermique de la solution d'après l'amplitude de 25 la modulation, et régler le flux thermique mesuré d'après la relation déterminée entre le flux thermique, les pertes de solvant et la capacité thermique mesurée par la modulation. Selon un cinquième aspect de la présente invention, il est proposé un procédé pour déterminer, dans un CDB, des caractéristiques thermiques d'un 30 échantillon disposé dans un solvant, comprenant des étapes consistant à réaliser une mesure modulée par CDB sur l'échantillon disposé dans le solvant afin d'obtenir une courbe de flux thermique d'un échantillon expérimental ; réaliser une déconvolution de la courbe de flux thermique pour obtenir une courbe du flux thermique s'inversant et une courbe du flux thermique total ; calculer une dérivée de la courbe de capacité 35 thermique s'inversant d'après la mesure modulée de l'échantillon par le CDB ; 2906036 r 6 multiplier la dérivée de la courbe de capacité thermique s'inversant par une constante d'étalonnage pour obtenir une vraie ligne de base représentant le flux thermique dû aux pertes de solvant lorsque l'échantillon est disposé dans le solvant, la constante d'étalonnage, lorsqu'elle est appliquée à une dérivée de courbe de capacité thermique 5 du solvant, amenant la dérivée de courbe de capacité thermique du solvant à recouvrir une courbe de puissance due aux pertes de solvant ; et soustraire la vraie ligne de base du flux thermique sans inversion et/ou du flux thermique total. Selon une variante du cinquième aspect de la présente invention, la dérivée de courbe de capacité thermique du solvant est déterminée en effectuant une mesure 10 modulée par le CDB sur un solvant disposé dans une cellule de CDB ; en déterminant une courbe de capacité thermique pour le solvant à l'aide d'un signal de mesure modulée dérivé de la mesure modulée faite par le CDB ; et en calculant la dérivée de la courbe de capacité thermique d'après la courbe de capacité thermique. Brève description des figures 15 La Fig. lA est une illustration schématique représentant un CDB selon une forme de réalisation de la présente invention ; La Fig. 1B est une illustration schématique représentant le remplissage automatique de cellules de CDB à l'aide de pipettes ; La Fig. 2 est un graphique illustrant un exemple de courbe de mesure 204 à 20 partir d'une expérience avec un CDB selon une forme de réalisation de la présente invention ; La Fig. 3 est une représentation graphique de plusieurs courbes servant à calculer une constante d'étalonnage selon une forme de réalisation de la présente invention ; 25 La Fig. 4 est un organigramme qui illustre des exemples d'étapes comprises dans un procédé pour déterminer une constante d'étalonnage, selon une forme de réalisation de la présente invention ; et La Fig. 5 est un organigramme qui illustre des exemples d'étapes incluses dans un procédé pour calculer la vraie ligne de base pour une mesure d'échantillon au 30 cours de laquelle ont lieu des pertes de solvant, selon une forme de réalisation de la présente invention. Description détaillée Un CDB selon une forme de réalisation de la présente invention emploie une modulation de température dans un CDB ouvert pour vérifier quelle partie du 35 flux de chaleur dans une cellule donnée est due à l'évaporation ou à des pertes de 2906036 7 solvant. En calculant quelle partie du flux de chaleur est due à une évaporation non maîtrisée de solvant, la part du flux de chaleur qui résulte d'autres processus (normalement, le sujet concerné) peut être mesurée avec plus de précision. Une fois que la quantité de flux de chaleur due à l'évaporation de solvant présent dans les 5 cellules pour étalons et pour échantillons est prise en compte, l'utilisateur peut alors acquérir une compréhension plus précise du flux de chaleur dû au phénomène thermique en cours de mesure. Les expressions "CDB à modulation de température", "CDB modulé en température", "CDB modulé" et "CDB à modulation" sont utilisées ici de façon interchangeable pour évoquer une expérience, un procédé ou un 10 dispositif faisant intervenir un CDB et comprenant la superposition d'une perturbation de température à variation périodique pendant un traitement thermique d'un échantillon, notamment une température d'échantillon à augmentation linéaire. Ainsi, une courbe d'un CDB à modulation de température peut être une courbe à variation sinusoïdale de température, dont la température moyenne augmente avec le 15 temps. Dans un CDB classique, il y a une ou plusieurs cellules, également appelées puits, dans lesquelles des réactifs ou des substances concernées peuvent être déposées. Les termes "cellules" et "puits" sont utilisés de façon interchangeable dans la présente description. Dans un dispositif de CDB à cellules ouvertes, chaque cellule 20 est découverte. Les cellules peuvent se présenter comme des éléments d'un plateau plus grand qui contient un grand nombre de ces cellules ouvertes disposées en matrice. Un exemple d'une telle matrice est constitué par une microplaque disponible auprès de Vivactis, à Louvain, en Belgique. Une conception à cellules ouvertes permet d'ajouter rapidement et commodément des substances dans les cellules. Par 25 exemple, des ordinateurs, des robots ou autres structures de dépôt automatisées de substances peuvent déposer des substances dans les cellules avec un grand rendement, par exemple à l'aide de pipettes automatisées. A l'aide de ces techniques automatisées, une matrice du type pour CDB ouvert permet de mener parallèlement un nombre relativement élevé d'expériences tout en réduisant les coûts liés à de 30 multiples expériences, ou la main d'oeuvre humaine nécessaire pour le dépôt manuel. De plus, la conception à cellules ouvertes permet une plus grande souplesse de conception des expériences du fait de la multiplicité de configurations possibles des cellules. Il reste possible de procéder par dépôts manuels dans l'esprit et le cadre de la présente invention. 2906036 8 Les cellules individuelles d'un CDB peuvent être de n'importe quelles dimensions appropriées, dont ce qu'on appelle les "micro" ou "nano" cellules. De plus, la matrice peut comporter n'importe quel nombre de cellules, et une seule matrice peut employer des cellules de diverses dimensions. Dans une forme de 5 réalisation de la présente invention, chaque cellule a la possibilité d'être chauffée individuellement par la mise en marche de n'importe quel nombre de dispositifs de chauffage appropriés. Par exemple, chaque cellule peut avoir son propre élément chauffant individuel. Ces éléments chauffants individuels peuvent faire partie de la matrice de cellules ou peuvent faire partie d'un boîtier qui contient la matrice de 10 cellules pendant l'expérience. Dans une autre forme de réalisation, il peut y avoir moins d'un élément chauffant par cellule, car chaque élément chauffant peut être apte à appliquer un signal de température modulée à plus d'un puits. Pour assurer des mesures précises, les éléments chauffants peuvent, d'une manière bien connue, être étalonnés conformément à des normes d'étalonnage avant de servir pour des 15 analyses. La Fig. lA est une illustration schématique représentant un CDB selon une forme de réalisation de la présente invention. Ordinairement, un CDB selon une forme de réalisation de la présente invention comprend un boîtier 102. Dans une forme de réalisation de la présente invention, le boîtier 102 est une structure isolée, 20 fermée, similaire à une étuve, apte à loger une matrice 103 de cellules de CDB, tandis qu'un programme de température est appliqué à une ou plusieurs cellules du CDB. Par exemple, sur la Fig. 1, des cellules 104a, 104b, 104c et 104d de CDB sont représentées. Les cellules de CDB peuvent être chauffées de diverses manières. Par exemple, dans une forme de réalisation de la présente invention, chaque cellule du 25 CDB a un élément chauffant correspondant pouvant appliquer de la chaleur à la cellule de CDB conformément à un profil de température modulée. Par exemple, comme représenté sur la Fig. 1, l'élément chauffant 106a fournit de la chaleur à la cellule 104a de CDB, l'élément chauffant 106b fournit de la chaleur à la cellule 104b de CDB, l'élément chauffant 106c fournit de la chaleur à la cellule 104c de CDB et 30 l'élément chauffant 106d fournit de la chaleur à la cellule 104d de CDB. D'une façon générale, lors d'expériences menées à l'aide d'un CDB, les cellules des CDB sont appariées. Dans chaque paire de cellules de CDB, une première cellule est utilisée pour un étalon et l'autre cellule est utilisée pour l'échantillon à analyser. Par exemple, sur la Fig. 1 A, la cellule 104a de CDB peut être 35 appariée avec la cellule 104b de CDB, la cellule 104a de CDB peut être utilisée pour 2906036 9 un échantillon et la cellule 104b de CDB peut être utilisée pour un étalon correspondant. De même, la cellule 104c de CDB peut être appariée avec la cellule 104d de CDB. La cellule 104c de CDB peut être utilisée pour un échantillon et la cellule 104d de CDB peut être utilisée pour un étalon correspondant. 5 Le fonctionnement du CDB est commandé à l'aide d'un ordinateur 110. L'ordinateur 110 peut être n'importe quel ordinateur personnel, microprocesseur, séquenceur ou autre dispositif informatique bien connu apte à être programmé pour commander des dispositifs de chauffage, amener des données fournies par des capteurs à être saisies et mémorisées et à commander le remplissage automatique de 10 cellules de CDB. De tels ordinateurs sont bien connus. La Fig. 1B est une illustration schématique représentant le remplissage automatique de cellules de CDB à l'aide de pipettes. Les pipettes 150a, 150b, 150c et 150d servent à remplir de manière automatique des cellules respectives 152a, 152b, 152c et 152d de CDB. Les pipettes 150a, 150b, 150c et 150d sont commandées par 15 un ordinateur tel que l'ordinateur 110. Durant le fonctionnement, les pipettes sont remplies de manière manuelle ou automatique (sous le contrôle d'un ordinateur) avec un échantillon ou un étalon, selon le souhait. Sous le contrôle de l'ordinateur, les pipettes sont placées au-dessus de la matrice de cellules de CDB. L'ordinateur 110 amène ensuite les pipettes à vider leur contenu dans les cellules de CDB au-dessus 20 desquelles elles sont placées. Dans l'exemple représenté sur la Fig. 1B, les cellules de CDB se présentent sous la forme de paires pour échantillons et étalons. La pipette 150a est placée au-dessus d'une cellule 152a de CDB et remplit une cellule 152a de CDB avec un échantillon 153a (contenant, par exemple, un solvant et un ligand sur protéine à 25 étudier). Un dispositif de chauffage 150a chauffe l'échantillon 153a conformément à un profil de température sous le contrôle de l'ordinateur 110. Un capteur 156a détecte la température de l'échantillon 153a et fournit à l'ordinateur 110 la température absolue détectée ou une température différentielle (en fonction du capteur 156b). Une cellule 152b de CDB est utilisée pour l'étalon, d'une manière 30 correspondant à la cellule 152a de CDB pour échantillon. La pipette 150b est placée audessus de la cellule 152b de CDB et remplit la cellule 152b de CDB avec un étalon 153b (contenant, par exemple, uniquement un solvant). Un dispositif de chauffage 154b chauffe l'étalon 153b conformément à un profil de température, sous le contrôle de l'ordinateur 110. Un capteur 156b détecte la température de l'étalon 2906036 10 153b et fournit à l'ordinateur 110 la température absolue détectée ou une température différentielle (en fonction du capteur 156a). La pipette 150c est placée au-dessus d'une cellule 152c de CDB et remplit la cellule 152c de CDB avec un échantillon 153c (contenant, par exemple, un solvant et 5 un ligand sur protéine à étudier). Un dispositif de chauffage 154c chauffe l'échantillon 153c conformément à un profil de température, sous le contrôle de l'ordinateur 110. Un capteur 156c détecte la température de l'échantillon 153c et fournit à l'ordinateur 110 la température absolue détectée ou une température différentielle (en fonction du capteur 156d). 10 Une cellule 152d de CDB est utilisée comme cellule pour étalon d'une manière correspondant à la cellule 152c de CDB pour échantillon. La pipette 150d est placée au-dessus d'une cellule 152d de CDB et remplit la cellule 152d de CDB avec un étalon 153d (contenant, par exemple, uniquement un solvant). Un dispositif de chauffage 154d chauffe l'étalon 153d conformément à un profil de température, 15 sous le contrôle de l'ordinateur 110. Un capteur 156d détecte la température de l'étalon 153d et fournit à l'ordinateur 110 la température absolue détectée ou une température différentielle (en fonction du capteur 156c). Dans une autre forme de réalisation de la présente invention, le boîtier comporte une étuve qui peut être commandée pour chauffer l'intérieur du boîtier 102, 20 par exemple, le dispositif de chauffage 114, conformément à un programme de température modulée. Ce chauffage amène chacun des éléments du CDB à être soumis sensiblement au même programme de température modulée. Dans une autre forme de réalisation de la présente invention, le boîtier peut contenir un élément chauffant, tel que le dispositif de chauffage 114, capable de 25 chauffer l'ensemble du boîtier 102, et chacune des cellules de CDB peut avoir des éléments chauffants correspondants afin de chauffer leurs cellules de CDB correspondantes, par exemple les dispositifs de chauffage 106a, 106b, 106c et 106d. Dans une telle forme de réalisation, l'élément chauffant 114 est commandé par l'ordinateur 110 pour chauffer le boîtier conformément à un programme de 30 température linéaire, et chacun des éléments chauffants 106a, 106b, 106c et 106d du CDB est commandé par l'ordinateur 110 pour chauffer leurs cellules de CDB correspondantes conformément à un programme de température oscillante. De cette manière, chacune des cellules du CDB est efficacement chauffée conformément à un programme de température modulée. 2906036 11 Les éléments chauffants sont couplés à un ordinateur tel que l'ordinateur 110, par l'intermédiaire d'un port d'entrée/sortie (E/S), par exemple le porte E/S 112. L'ordinateur 110 est programmé à l'aide d'un programme de température pour commander les dispositifs de chauffage afin de soumettre les échantillons et les 5 étalons à des profils de températures requis tels que des profils de températures modulées. Les éléments chauffants peuvent être ceux ordinairement utilisés dans les instruments de CDB, dont par exemple des dispositifs de chauffage à triac ou des dispositifs de chauffage résistif. Les CDB des formes de réalisation selon la présente invention peuvent être 1 o soit des CDB à flux de chaleur, soit des CDB à compensation de puissance. Dans des CDB à flux de chaleur, la température des cellules de CDB pour étalons et échantillons est mesurée et sert à déterminer un flux de chaleur. La capacité thermique peut être obtenue d'après le flux de chaleur mesuré. Dans les CDB à compensation de puissance, la puissance différentielle nécessaire pour maintenir 15 constante la température des cellules de CDB pour échantillons et étalons est mesurée. La puissance différentielle est une mesure directe de la capacité thermique de l'échantillon. A chaque cellule de CDB correspond également un capteur. Par exemple, comme représenté sur la Fig. 1, le capteur 108a correspond à la cellule 104a de CDB, 20 le capteur 108b correspond à la cellule 104b de CDB, le capteur 108c correspond à la cellule 104c de CDB et le capteur 108d correspond à la cellule 104d de CDB. Les capteurs peuvent être n'importe quels capteurs employés dans des analyses classiques par CDB, dont, par exemple, des thermocouples. Comme on le sait, certains dispositifs de chauffage pour CDB peuvent assumer la fonction de capteurs ainsi que 25 chauffer le CDB conformément à un programme de température. Chaque capteur est couplé à l'ordinateur 110 par l'intermédiaire d'une carte E/S. L'ordinateur 110 saisit et mémorise les données détectées par les détecteurs pour leur faire subir une nouvelle analyse décrite ici. Les mesures qui résultent de l'application d'un programme de température 30 modulée aux cellules de CDB pour échantillons et étalons servent à mesurer les capacités thermiques de chaque échantillon et étalonindépendamment de tout processus cinétique qui peut autrement survenir. La vitesse de changement de la capacité thermique (c'est-à-dire la dérivée de la capacité thermique) peut servir à mesurer la vitesse des pertes de solvant depuis une cellule de CDB. D'après 2906036 12 l'enthalpie d'évaporation du solvant, le flux de chaleur résultant de l'évaporation peut être calculé d'après la vitesse de changement de la capacité thermique. La Fig. 2 est un graphique illustrant un exemple de courbe de mesure 204 d'après une expérience menée avec un CDB selon une forme de réalisation de la 5 présente invention. Une courbe 201 de "vraie ligne de base" est calculée à l'aide de la dérivée de la capacité thermique mesurée pendant une séquence d'étalonnage (décrite plus loin). La courbe 201 représente un exemple de flux de chaleur dû à l'évaporation d'un solvant. La réponse souhaitée est la différence entre le signal mesuré et la ligne de base calculée (c'est-à-dire la courbe 204 moins la courbe 201). Une information 10 supplémentaire, l'instant de l'apport de réactif, peut également être déterminée comme point 206 en comparant la courbe de mesure 204 et la courbe de ligne de base 201. La courbe 201 de "vraie ligne de base" peut être déterminée par une procédure d'étalonnage selon une forme de réalisation de la présente invention, 15 pendant laquelle le CDB fonctionne en utilisant seulement un solvant. La Fig. 3 est une représentation graphique de plusieurs courbes servant à calculer une constante d'étalonnage selon une forme de réalisation de la présente invention. La courbe 304 est un exemple de capacité thermique mesurée en appliquant un profil de température modulée à une cellule de CDB contenant seulement un solvant. La capacité 20 thermique mesurée lors d'une telle expérience est une mesure directe de la quantité de solvant dans la cellule. De ce fait, le changement de capacité thermique en fonction du temps (c'est-à-dire la dérivée de la capacité thermique mesurée) représente la vitesse de perte de solvant (par exemple, de l'évaporation) à partir de la cellule de CDB. La courbe 305 est la dérivée de la courbe 304 de capacité thermique 25 mesurée selon une forme de réalisation de la présente invention. Cette courbe est la même que la courbe de puissance 310 (en pointillés) due aux pertes de solvant multipliées par une certaine constante. De la sorte, lorsqu'elle est multipliée par une constante d'étalonnage appropriée, la dérivée de capacité thermique (c'est-à-dire la vitesse de la perte de solvant) recouvre la courbe de puissance due aux pertes de 30 solvant. Ce produit (la dérivée de la capacité thermique par une constante d'étalonnage) est illustré par la courbe 308 (en traits mixtes) qui recouvre la courbe de puissance due à des pertes de solvant, la courbe 306. La courbe de puissance due à des pertes de solvant est le signal total lors d'une expérience isotherme ou du flux de chaleur sans inversion au cours d'une expérience à balayage. 2906036 13 La Fig. 4 est un organigramme servant à déterminer la constante d'étalonnage selon une forme de réalisation de la présente invention. Lors de l'étape 402, une cellule de CDB est remplie uniquement de solvant. Lors de l'étape 404, un programme de température modulée est appliqué à la cellule de CDB contenant 5 seulement du solvant et un signal de mesure est recueilli. Lors de l'étape 406, la capacité thermique est déterminée d'après le signal de mesure. Au cours d'une expérience avec un CDB à modulation, le signal de mesure peut subir une déconvolution pour produire, parmi d'autres grandeurs, une capacité thermique s'inversant. 10 Lors de l'étape 408, la dérivée de la capacité thermique s'inversant est calculée. Lors de l'étape 409, la courbe représentant la puissance due aux pertes de solvant est calculée. La puissance due aux pertes de solvant est le signal total au cours d'une expérience isotherme ou du flux de chaleur s'inversant au cours d'une 15 expérience à balayage. Le flux de chaleur sans inversion peut également être obtenu en mesurant le signal de flux de chaleur du solvant au cours d'une expérience avec un CDB à modulation et en réalisant une déconvolution du signal. Lors de l'étape 410, la constante nécessaire pour amener la dérivée calculée de la capacité thermique à recouvrir la puissance due à la courbe des pertes de 20 solvant est calculée. Cela peut se faire par n'importe quelle technique parmi un certain nombre de techniques d'ajustement de courbes. Lors de l'étape 412, la constante déterminée est mémorisée comme constante d'étalonnage. Dans une autre forme de réalisation de l'invention, les étapes illustrées sur la 25 Fig. 4 peuvent être exécutées à l'aide d'un CDB à modulation de température en travaillant sur un solvant en présence d'une ou de plusieurs autres substances. Cependant, un tel système ne doit induire aucun autre processus pendant le traitement thermique, en dehors de l'évaporation du solvant. De la sorte, il est préférable que le procédé selon la Fig. 4 soit exécuté comme indiqué lors de l'étape 30 402, dans lequel uniquement du solvant est utilisé dans la cellule du CDB. La constante d'étalonnage déterminée selon le procédé illustré sur la Fig. 4 sert à calculer une "vraie ligne de base", comme représenté sur la Fig. 2. La Fig. 5 est un organigramme qui illustre des exemples d'étapes incluses dans un procédé pour tenir compte des pertes de solvant lors d'une expérience menée 35 avec un CDB, selon une forme de réalisation de la présente invention. 2906036 14 Lors de l'étape 502, une expérience est menée avec un CDB en appliquant une température modulée à un échantillon disposé dans un solvant afin d'obtenir un signal de flux de chaleur. Lors de l'étape 504, le signal de flux de chaleur est soumis à une déconvolution pour calculer une capacité thermique s'inversant, ainsi que le 5 flux de chaleur total. Lors de l'étape 506, la dérivée de la capacité thermique s'inversant est calculée. Lors de l'étape 508, la dérivée calculée de la capacité thermique s'inversant est multipliée par la constante d'étalonnage calculée lors de l'étape 410 pour obtenir le flux de chaleur dû aux pertes de solvant, et qui peut servir de vraie ligne de base à soustraire de courbes expérimentales obtenues avec le CDB. 1 o Lors de l'étape 510, le flux de chaleur dérivé dû aux pertes de solvant est soustrait des courbes représentant le flux de chaleur total ou sans inversion (qui peut être également déterminé d'après la déconvolution de l'étape 504), selon le cas utile. En résumé, selon des formes de réalisation de la présente invention, une constante d'étalonnage obtenue pendant le chauffage d'un solvant pur peut être 15 utilisée conjointement avec une mesure de capacité thermique à partir d'une expérience menée avec un CDB à modulation de température sur un échantillon disposé dans le solvant, dans le but de calculer la "vraie ligne de base", de la manière représentée, par exemple, sur la Fig. 2. Pendant le déroulement d'une analyse, le "vraie ligne de base" est soustraite, selon le cas utile, du flux de chaleur total (pour 20 les expériences isothermes) ou sans inversion (pour les expériences à balayage ou non isothermes) dans le but de déterminer le flux de chaleur dû à l'événement thermique à analyser. La température modulée provoquée par l'élément chauffant individuel peut être de n'importe quel type approprié. Par exemple, la modulation peut être une onde 25 carrée, une onde sinusoïdale, une onde triangulaire, une onde en dents de scie, n'importe quelle combinaison de celles-ci d'une manière périodique ou aléatoire, ou n'importe quel autre signal modulé approprié. La modulation peut être périodique ou apériodique. Un spécialiste ordinaire de la technique doit comprendre que les étapes du 30 procédé peuvent se dérouler dans un ordre différent. REVENDICATIONS 1. Calorimètre différentiel à balayage (CDB), caractérisé en ce qu'il comprend : une cellule (104a) de CDB pour échantillon contenant un échantillon composé d'un solvant et d'un spécimen à analyser ; une cellule (104b) de CDB pour étalon contenant une solution étalon ; un premier élément chauffant (106a) pour appliquer un programme de température modulée à l'échantillon ; un second élément chauffant (106b) pour appliquer un programme de température modulée à l'étalon ; un premier capteur (108a) pour mesurer une température de l'échantillon ; un second capteur (108b) pour mesurer une température de l'étalon ; et un ordinateur (110) pour saisir les températures mesurées et calculer une capacité thermique de l'échantillon d'après la température modulée appliquée ; et pour déterminer la quantité de flux de chaleur imputable à l'évaporation de solvants à partir de la cellule de CDB pour échantillon. 2. Calorimètre différentiel à balayage selon la revendication 1, caractérisé en ce que le calorimètre différentiel à balayage est un CDB à flux de chaleur. 3. Calorimètre différentiel à balayage selon la revendication 1, caractérisé en ce que le calorimètre différentiel à balayage est un CDB à compensation de puissance. 4. Calorimètre différentiel à balayage selon la revendication 1, caractérisé en ce que les premier et second éléments chauffants modulent la température, d'une manière périodique ou aléatoire, conformément à une onde sinusoïdale ou une onde carrée ou une onde en dents de scie ou une onde triangulaire ou n'importe quelle combinaison de celles-ci, d'une manière périodique ou aléatoire. 5. Calorimètre différentiel à balayage selon la revendication 1, caractérisé en ce que le CDB est étalonné à l'aide d'une cellule du CDB contenant seulement un solvant afin de déterminer les paramètres nécessaires pour produire une ligne de base due à l'évaporation du solvant. 6. Calorimètre différentiel à balayage selon la revendication 5, caractérisé en ce que la ligne de base est soustraite d'un flux de chaleur mesuré. 7. Calorimètre différentiel à balayage selon la revendication 1, caractérisé en ce que le CDB comprend une matrice de cellules de CDB. 15 2906036 16 8. Procédé pour tenir compte des pertes de solvant dans un calorimètre différentiel à balayage (CDB), comprenant les étapes consistant à : déposer, dans une cellule de CDB pour échantillon, un échantillon composé d'un solvant et d'un spécimen à analyser ; 5 déposer un étalon dans une cellule de CDB pour étalon ; chauffer la cellule pour échantillon à l'aide d'un premier élément chauffant conformément à un profil de température modulée ; chauffer la cellule pour étalon à l'aide d'un second élément chauffant conformément au profil de température modulée ; 10 calculer une ligne de base due à l'évaporation du solvant depuis la cellule de CDB pour échantillon ; et ajuster une mesure de flux de chaleur du CDB due à l'échantillon conformément à la ligne de base calculée. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comprend une 15 étape consistant à étalonner le CDB pour déterminer la ligne de base. 10. Procédé selon la revendication 9, comprenant en outre une étape consistant à faire fonctionner le CDB avec une cellule de CDB contenant uniquement un solvant. 11. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la température est 20 modulée conformément à une onde sinusoïdale ou une onde carrée ou une onde en dents de scie ou une onde triangulaire, d'une manière périodique ou aléatoire. 12. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'étape d'ajustement de la mesure du flux de chaleur du CDB consiste à soustraire la ligne de base calculée, due aux pertes de solvant, de la mesure du flux de chaleur du CDB. 25 13. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comprend une étape consistant à utiliser une matrice de cellules de CDB. 14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il comprend une étape consistant à utiliser une matrice de cellules de CDB appariées, une première cellule de la paire étant destinée à un échantillon et l'autre cellule de CDB de la paire 30 étant destinée à un étalon. 15. Calorimètre différentiel à balayage (CDB) qui tient compte du flux de chaleur dû à des pertes de solvant, caractérisé en ce qu'il comprend : un boîtier isolé fermé (102) ; une matrice (103) constituée d'une multiplicité de cellules (104a-d) 35 destinées à contenir un ou plusieurs échantillons et un ou plusieurs étalons ; 2906036 17 un ou plusieurs capteurs (108a-d) servant à mesurer la température de base du calorimètre et les températures dans les diverses cellules ; un dispositif de chauffage (106a-d) servant à soumettre les échantillons et les étalons à un programme de température modulée ; et 5 un ordinateur (110) afin d'utiliser un signal reçu des cellules du CDB pour calculer la capacité thermique indépendamment de tout processus cinétique survenant et de déterminer quelle partie du signal reçu est due à des pertes de solvant. 16. CDB selon la revendication 15, caractérisé en ce que chaque cellule peut 10 être chauffée simultanément par une ou plusieurs sources de chaleur (106a-d). 17. CDB selon la revendication 15, caractérisé en ce que chaque cellule (104a-d) peut être chauffée indépendamment par une ou plusieurs sources de chaleur. 18. CDB selon la revendication 15, caractérisé en ce que la matrice (103) de cellules peut être chargée à l'aide d'un moyen automatisé. 15 19. CDB selon la revendication 15, caractérisé en ce que la matrice (103) de cellules peut être chargée à l'aide d'un moyen manuel. 20. CDB selon la revendication 15, caractérisé en ce que la matrice (103) de cellules permet de modifier les dimensions des cellules. 21. CDB selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'un dispositif de 20 chauffage est utilisé pour réguler la température à l'intérieur du boîtier. 22. CDB selon la revendication 15, caractérisé en ce que le signal de sortie du dispositif est automatiquement fourni à un dispositif informatique qui calcule et enregistre automatiquement les mesures. 23. Procédé pour tenir compte des pertes par évaporation depuis une 25 solution dans une cellule de CDB pour échantillon, comprenant les étapes consistant à: étalonner la cellule de CDB afin de déterminer les paramètres nécessaires au calcul d'une ligne de base due à des pertes de solvant ; mesurer une capacité thermique de la solution ; et 30 ajuster la capacité thermique ou le flux thermique mesuré conformément à la ligne de base déterminée. 24. Procédé pour déterminer, dans un CDB, des caractéristiques thermiques d'un échantillon disposé dans un solvant, comprenant les étapes consistant à : 2906036 18 effectuer une mesure avec le CDB à modulation sur l'échantillon disposé dans le solvant afin d'obtenir une courbe de flux thermique d'échantillon expérimental ; réaliser une déconvolution de la courbe de flux de chaleur pour obtenir une 5 courbe de flux de chaleur s'inversant et une courbe de flux de chaleur total ; calculer une dérivée de la courbe de capacité thermique s'inversant d'après la mesure de l'échantillon faite par le CDB à modulation ; multiplier la dérivée de la courbe de capacité thermique s'inversant par une constante d'étalonnage pour obtenir une vraie ligne de base représentant le flux de 1 o chaleur dû à des pertes de solvant lorsque l'échantillon est disposé dans le solvant, la constante d'étalonnage, lorsqu'elle est appliquée à une dérivée de courbe de capacité thermique du solvant, amène la dérivée de courbe de capacité thermique du solvant à recouvrir une courbe de puissance due aux pertes de solvant ; et soustraire la vraie ligne de base du flux de chaleur sans inversion et du flux 15 de chaleur total. 25. Procédé selon la revendication 24, caractérisé en ce que la dérivée de courbe de capacité thermique du solvant est déterminée en : effectuant une mesure, à l'aide du CDB à modulation, sur un solvant disposé dans une cellule du CDB ; 20 déterminer une courbe de capacité thermique pour le solvant à l'aide d'un signal de mesure modulée dérivée de la mesure faite avec le CDB à modulation ; et calculer la dérivée de la courbe de capacité thermique d'après la courbe de capacité thermique.