Brevet FR2904557A1 — publié le 20080208

--> La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait d'Eucalyptus pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture des neuromédiateurs suivants : dopamine, sérotonine et noradrénaline; préfèrentiellement ledit extrait est enrichi en macrocarpal G. La présente invention concerne également l'utilisation du macrocarpal G pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture desdits neuromédiateurs. Avantageusement, ledit médicament est destiné à traiter et/ou à prévenir la dépression, l'état dépressif, l'anxiété, la démence, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie, les troubles de la mémoire, le sevrage tabagique, la migraine, l'obésité, le surpoids, la douleur, les reflux gastro-oesophagiens. Il existe de nombreuses espèces d'Eucalyptus (plus de 600) , la plupart native d'Australie et de Tasmanie, un petit nombre de la Nouvelle Guinée et de l'Est de la Malaisie. Les Eucalyptus appartiennent à la famille des yrtacées et trouvent l'origine de leur nom dans la forme caractéristique de leurs fleurs. En effet, le mot Eucalyptus signifie bien couvert faisant allusion à l'opercule (formés des pétales soudés) coiffant les étamines des fleurs. Ce sont généralement de beaux et grands arbres pouvant atteindre 80 à 100 m de hauteur dans leur pays d'origine (Australie), de 3 à 20 m sous des climats plus tempérés. Leur écorce, lisse, se détache en de longues bandes de couleur pâle à grisâtre. Ils sont généralement caractérisés par un dimorphisme foliaire. Dans le cas de l ' Eucalyptus globulus Labill, les jeunes feuilles sont ovales-oblongues, vert glauque, cerclées de bleu, embrassantes et sessiles tandis que les feuilles âgées sont -->falciformes, vert-grisâtre, pendantes, à pétiole tordu et orientées verticalement (équivalence des deux faces) . Les boutons floraux sont formés d'un calice, en forme de pyramide quadrangulaire, coiffé d'un opercule qui se soulève lors de la floraison laissant apparaître de nombreuses étamines à longs filets blancs et à anthères jaunes. Les fruits sont des capsules de 2 à 2,5 cm de diamètre renfermant des graines noires ou brunâtres. En phytothérapie, trois espèces sont principalement utilisées dans la pharmacopée européenne : 1 ' Eucalyptus globulus Labill, l ' E. polyhractea R.T. Baker et l ' Eucalyptus s i thii R.T. Baker. On utilise les feuilles des rameaux les plus âgés (falciformes et pétiolées) , l'huile essentielle et l'eucalyptol qui est issu de cette dernière. Les feuilles d'Eucalyptus sont traditionnellement utilisées par voies orale et locale pour traiter les affections du système respiratoire (bronchite, inflammation de la gorge, nez bouché, rhume...) ou en application pour soigner les blessures, les ulcères de la peau ... L'huile essentielle d'Eucalyptus et l'eucalyptol (ou 1,8cinéole) entrent dans de nombreuses préparations destinées à traiter les affections des voies respiratoires en raison de leurs activités antiseptique, mucolytique et expectorante. L'huile essentielle est utilisée comme répellent et en médecine vétérinaire. Les propriétés pharmacologiques connues de l'huile essentielle d'Eucalyptus sont à ce jour : les propriétés antimicrobienne (YAMAKOSHI Y. et al . , 1992 - Isolation and characterisation of Macrocarpals B-G, antibacterial compounds from Eucalyptus macrocarpa - Biosci . Biotech . Biochem . , 56 (10), 1570-1576), expectorante et béchique (WICHTL M. et ANTON R., 1999 - Plantes thérapeutiques 177-179) , anti-inflammatoire et anti-asthmatique (JUERGENS -->et al . , 2003 - Anti-inflammatory activity of 1,8-cineol (eucalyptol) in bronchial asthma : a double-bind placebo controlled trial - Respir. ed., 97 (3), 250-256), antidiabétique (SWANSTON et al . , 1990 - Traditional plant treatments for diabètes. Studies in normal and streptozotocin diabetics rats - Diabetologia, 33 (8) , 462464), anti-histaminique (IKAWATI Z. and al., 2001 Screening of several Indonesian medecinal plants for their inhibitory effect on histamine release from RBL-2H3cells J. Ethnopharmacol . , 75 (2-3), 248-256), anticancéreuse (TAKASAKI et al, 2000 - Cancer chemopreventive activity of euglobal-Gl from leaves of Eucalyptus grandis - Cancer Lett . , 155 (1) : 61-65), antivirale (TAKASAKI et al . , 1990 - Structures of euglobal-Gl, -G2 and G3 from Eucalyptus grandis, three new inhibitors of Epstein virus activation Chem. Pharm. Bull. 38 (5), 1444-1446) et anti-VIH (WICHTL M. et ANTON R., 1999 - Plantes thérapeutiques - 177-179). De façon inattendue et surprenante, la demanderesse a mis en évidence l'utilisation d'un extrait d'Eucalyptus pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture de neuromédiateurs ; préférentiellement ledit extrait est enrichi en macrocarpal G. La présente invention concerne également l'utilisation de macrocarpal G pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture de neuromédiateurs . De façon préférée, le traitement et/ou la prévention desdites affections ou pathologies consiste en une inhibition de la recapture des neuromédiateurs. -->Au sens de la présente invention, on entend par neuromédiateurs : la dopamine et/ou la sérotonine et/ou la noradrénaline . Avantageusement, ledit médicament est destiné à traiter et/ou à prévenir les affections ou pathologies choisies dans le groupe composé de la dépression, l'état dépressif, l'anxiété, la démence, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie, les troubles de la mémoire, le sevrage tabagique, la migraine, l'obésité, le surpoids, la douleur et les reflux gastro-oesophagiens. La présente invention concerne enfin un extrait d'Eucalyptus contenant une fraction massique de macrocarpal G comprise entre 5 et 90%, préférentiellement entre 5 et 50%, plus préférentiellement entre 5 et 40 %, et encore plus préférentiellement entre 5 et 20 % ; ainsi que son procédé de préparation. La demanderesse a montré l'influence d'un extrait d'Eucalyptus sur la recapture de la dopamine et/ou de la noradrénaline et/ou de la sérotonine. De par ses propriétés pharmacologiques d'inhibiteur de la recapture de ces neuromédiateurs, ledit extrait est particulièrement utile à la préparation d'un médicament destiné à traiter et/ou à prévenir de nombreuses affections ou pathologies nécessitant une telle inhibition. Parmi ces affections ou pathologies, il convient de citer à titre d'exemples illustratifs et non limitatifs: la dépression, notamment la dépression profonde, la dépression résistante, la dépression du sujet âgé, la dépression psychotique, la dépression induite par des traitements interféron, l'état dépressif, le syndrome maniaco-dépressif, les épisodes dépressifs saisonniers, les épisodes dépressifs liés à une condition médicale générale, les épisodes dépressifs liés à des substances agissant sur -->l'humeur, le syndrome bipolaire, la schizophrénie, l'anxiété généralisée, les états de morosité et de marasme, les maladies liées au stress, les attaques de panique, la phobie, notamment l'agoraphobie, les troubles obsessionnels compulsifs, les troubles de la conduite, les troubles oppositionnels, les syndromes de stress post- traumatiques, la dépression du système immunitaire, la fatigue et les syndromes de douleur qui l'accompagnent, le syndrome de fatigue chronique, la fibromyalgie, et autres pathologies de nature somatique fonctionnelle, l'autisme, les pathologies caractérisées par une absence d'attention dues à des conditions médicales générales, les troubles de l'attention dus à de 1 'hyperactivité, les troubles des conduites alimentaires, la névrose boulimique, la névrose anorexique, l'obésité, le surpoids, les désordres psychotiques, l'apathie, la migraine, la douleur, et notamment la douleur chronique, le syndrome du colon irritable, les reflux gastro-oesophagiens, les maladies cardio-vasculaires, et notamment le syndrome anxiodépressif dans l'infarctus du myocarde ou dans l'hypertension, les maladies neuro- dégénératives et les syndromes anxio-dépressifs associés (mémoire, démence, maladie d'Alzheimer, Chorée de Huntington, maladie de Parkinson) , les incontinences urinaires, notamment l'incontinence urinaire liée au stress et l'énurésie, la dépendance aux drogues, et notamment 1 ' anxio-dépendance au tabac, notamment à la nicotine, à l'alcool, aux stupéfiants, aux drogues, aux antalgiques lors du sevrage de ces états de dépendance. Dans le cadre de la présente invention, on entend par dépression, un ensemble de symptômes comprenant d'une part un aspect psychique constitué de troubles de l'humeur avec pessimisme, douleur morale, idées de mort et de suicide, inhibition psychique, et d'autre part un aspect physique -->d'inhibition motrice constitué notamment d'un ralentissement moteur, de troubles de l'appétit, de constipation, de troubles du sommeil et de la régulation du poids. La dépression correspond donc à un état psychique pathologique associant une modification pénible de l'humeur et un ralentissement de l'activité intellectuelle et motrice. On entend par état dépressif, un état mental caractérisé par un fléchissement du tonus neuropsychique, se manifestant par la lassitude, la fatigabilité, le découragement et la tendance au pessimisme et s ' accompagnant quelque fois d' anxiété . De façon avantageuse, ledit médicament se présente sous une forme orale. Avantageusement, la forme orale est choisie parmi le groupe composé de comprimé, gélule, sirop... Par Eucalyptus , on entend au sens de la présente invention les espèces appartenant de préférence aux sousgenres Eudesmia, Symphomyrtus et Corymbia et plus particulièrement les espèces suivantes : Eucalyptus globulus L., Eucalyptus pulvérulents Sims*, Eucalyptus kartzoffiana L. A. S. Johnson 1 Blaxell*, Eucalyptus macrocarpa Hook., Eucalyptus cinerea F. Muell.ex Benth., Eucalyptus dorrigoensis (Blakely) L.A.S. Johnson 1 K. D. Hill, Eucalyptus leptopoda Benth., Eucalyptus occidentalis Endl . , Eucalyptus viridis R. T. Baker, Eucalyptus polybractea R.T. Baker et Eucalyptus s i thii R.T. Baker. Ces exemples illustrent la présente invention sans toutefois en limiter la portée. De façon avantageuse, l'extrait d'Eucalyptus est obtenu à partir des feuilles, fleurs, fruits, tiges ou du tronc d'Eucalyptus ; et préférentiellement des feuilles d'Eucalyptus. -->Ledit extrait d'Eucalyptus est obtenu par un procédé d'extraction réalisé à partir d'étapes classiques connues de l'homme du métier. Par extrait d'Eucalyptus , on entend au sens de la présente invention un extrait d'Eucalyptus contenant de préférence une fraction massique de macrocarpal G comprise entre environ 0,1 et strictement inférieure à 5 %. Les feuilles, les fleurs, les fruits, les tiges ou le tronc d'Eucalyptus (Eucalyptus sp.) ou un mélange de ces parties sont broyées puis extraites avec un solvant organique pouvant être un alcane (pentane, hexane, heptane, octane, cyclohexane) , un éther oxyde (tétrahydrofurane, dioxane, diéthyl éther), un ester (acétate d'éthyle, acétate d' isopropyle) , un alcool (méthanol, éthanol , propanol , isopropanol, butanol, octanol) , une cétone (méthyléthylcétone, méthylisobutylcétone) , un hydrocarbure halogène (chloroforme, dichlorométhane) ou un mélange d'eau et de solvants organiques miscibles à l'eau (un mélange hydro-alcoolique par exemple) . L'extraction est réalisée dans un ratio plante/solvant compris entre environ l/l et environ 1/20 et peut être renouvelée 2 à 3 fois. La température du solvant d'extraction peut être égale à la température ambiante ou supérieure, pouvant atteindre la température d'ébullition du solvant engagé. Le temps de contact de la plante avec le solvant est compris entre environ 30 min et environ 72 heures . On procède ensuite à une séparation solide/liquide, la plante étant séparée du solvant par filtration ou centrifugation. Le filtrat obtenu peut être soit : mis à sec directement par évaporation totale du solvant d'extraction et constituer l'extrait final ; -->soit plus ou moins concentré. Dans le cas d'un solvant d'extraction mixte (mélange hydro-alcoolique par exemple) la concentration se poursuit jusqu'à l' évaporation du solvant organique présent. Dans le cas d'un solvant organique, une quantité d'eau est additionnée au concentrât obtenu. Une étape de purification liquide-liquide est réalisée en additionnant à la phase aqueuse un solvant non miscible pouvant être un alcane (de l'hexane par exemple) , un éther oxyde (diéthyl éther par exemple) , un ester (acétate d'éthyle par exemple), un alcool (butanol par exemple) , une cétone (méthyléthylcétone par exemple) ou un hydrocarbure halogène (chloroforme par exemple) . Une, deux ou trois extractions liquideliquide sont réalisées. Les phases organiques réunies peuvent être séchées sur sulfate de sodium avant la mise à sec. Les solutions obtenues sont concentrées sous vide et à une température comprise entre la température ambiante et la température d'ébullition. Le séchage de l'extrait final est réalisé par lyophilisation ou par des moyens de séchage plus classiques connus de l'homme du métier (nébulisation, étuve ...) . Préférentiellement, les températures de séchage ne dépassent pas 60°C environ. L'extrait peut être stabilisé par addition d'un antioxydant comme par exemple l'acide ascorbique, l'acide citrique à des quantités comprises entre environ 0,05 et environ 1 g pour 100 g d'extrait sec. Un point tout à fait remarquable de la présente invention réside dans le fait que les propriétés pharmacologiques d'inhibition de la recapture des neuromédiateurs de l'extrait d'Eucalyptus sont d'autant -->plus intéressantes que ledit extrait est enrichi en macrocarpal G. Par extrait d'Eucalyptus enrichi en macrocarpal G , on entend au sens de la présente invention un extrait d'Eucalyptus dont la fraction massique en macrocarpal G est comprise entre 5 et 90 %, préférentiellement entre 5 et 50 %, plus préférentiellement entre 5 et 40 % et encore plus préférentiellement entre 5 et 20 %. La présente invention couvre également ledit extrait enrichi d'Eucalyptus, ainsi que son procédé de préparation. Le procédé d'obtention dudit extrait consiste en les étapes suivantes : broyage de feuilles et/ou de fleurs et/ou de fruits et/ou de tiges et/ou de tronc d'Eucalyptus - au moins une extraction avec un solvant organique ou un mélange d'eau et de solvants organiques miscibles à 1 ' eau . L'extraction est réalisée dans un ratio plante/solvant compris entre environ 1/1 et environ 1/20 et peut être renouvelée 2 à 3 fois. La température du solvant d'extraction peut être égale à la température ambiante ou supérieure, pouvant atteindre la température d'ébullition du solvant engagé . Le temps de contact de la plante avec le solvant est compris entre environ 30 min et environ 72 heures. De façon préférée, le solvant est choisi dans le groupe composé un alcane (pentane, hexane, heptane, octane, cyclohexane) , un éther oxyde (tétrahydrofurane, dioxane, diéthyl éther) , un ester (acétate d'éthyle, acétate d' isopropyle) , un alcool (méthanol, éthanol , propanol , isopropanol, butanol, octanol) , une cétone (méthyléthylcétone, méthylisobutylcétone) , un hydrocarbure halogène -->(chloroforme, dichlorométhane) ou un mélange d'eau et de solvants organiques miscibles à l'eau (un mélange hydro-alcoolique par exemple) . Préférentiellement, le solvant d'extraction est du dichlorométhane ou de l'acétate d' isopropyle . Dans le cas d'un solvant d'extraction miscible avec de l'eau, le filtrat est mis à sec puis dissous dans un solvant non miscible à l'eau. Dans le cas d'un solvant non miscible avec l'eau, le filtrat est concentré. Séparation solide/liquide par des techniques connues de l'homme du métier. Dans un mode de réalisation préférée de l'invention, une ou plusieurs extractions liquide-liquide sont réalisées par addition d'une base, préférentiellement du carbonate de sodium (Na 2 C0 3 ) . Les phases aqueuses basiques réunies sont acidifiées par addition d'acide, préférentiellement l'acide chlorhydrique (HC1) puis extraites par une à plusieurs extractions liquide-liquide réalisées avec un solvant non miscible avec de l'eau. Avantageusement, l'acidification conduit à l'obtention d'un pH environ égal à 1. Les phases organiques réunies peuvent être séchées sur sulfate de sodium puis concentrées sous vide à une température variant de la température ambiante à celle d'ébullition. Le concentrât est séché par des moyens de séchage classiques (nébulisation, étuve ...) à des températures ne dépassant pas 60°C de préférence et constitue l'extrait enrichi en macrocarpal G. Cet extrait peut être stabilisé par addition d'un antioxydant comme par exemple l'acide ascorbique ou l'acide citrique à des quantités comprises entre 0,05 à 1 g pour 100 g d'extrait sec. -->Les résultats obtenus à partir d'un extrait d'Eucalyptus enrichi en macrocarpal G selon la présente invention montrent que les bénéfices de la présente invention peuvent être étendus à toute composition à base de macrocarpal G, que celui-ci soit obtenu par voie chimique, biochimique ou à partir d'un extrait végétal. La présente invention concerne donc également l'utilisation du macrocarpal G pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture des neuromédiateurs. De façon préférée, le traitement et/ou prévention desdites affections ou pathologies consiste en une inhibition de la recapture de neuromédiateurs . Des tests réalisés avec le macrocarpal G ont montré que ce composé agit sur l'inhibition de la recapture de la dopamine et/ou de la sérotonine et/ou de la noradrénaline. Le macrocarpal G selon la présente invention peut être obtenu par purification d'un extrait végétal ou par synthèse chimique ou biochimique tel que décrit dans Synthetic studies on macrocarpals / Tanaka, Tetsuaki; Mikamiyama, Hidenori, Maeda, Kimiya; Iwata, Chuzo; Ishida, Toshimasa Tennen Yuki Kagobutsu Toronkai Koehn Yoshishu 1997, 39th, 295-300. Le macrocarpal G peut être isolé de l'extrait d'eucalyptus ou de l'extrait enrichi en macrocarpal G . Les techniques permettant sa purification sont des techniques chromatographiques classiques pour l'homme de métier. Les extraits sont fractionnés sur colonne préparative ayant pour phase stationnaire une phase inverse, de préférence Symetry Shield ® , 5μm ( aters) et pour phase mobile, un mélange acétonitrile / eau / acide trifluoroacétique dans les proportions 95 /5 /0,1%. -->La pureté en macrocarpal G d'une telle fraction est supérieure à environ 90%. De façon avantageuse, les affections ou pathologies sont choisies dans le groupe constitué de : la dépression, notamment la dépression profonde, la dépression résistante, la dépression du sujet âgé, la dépression psychotique, la dépression induite par des traitements interféron, l'état dépressif, le syndrome maniaco-dépressif, les épisodes dépressifs saisonniers, les épisodes dépressifs liés à une condition médicale générale, les épisodes dépressifs liés à des substances agissant sur l'humeur, le syndrome bipolaire, la schizophrénie, l'anxiété généralisée, les états de morosité et de marasme, les maladies liées au stress, les attaques de panique, la phobie, notamment l'agoraphobie, les troubles obsessionnels compulsifs, les troubles de la conduite, les troubles oppositionnels, les syndromes de stress post- traumatiques, la dépression du système immunitaire, la fatigue et les syndromes de douleur qui l'accompagnent, le syndrome de fatigue chronique, la fibromyalgie, et autres pathologies de nature somatique fonctionnelle, l'autisme, les pathologies caractérisées par une absence d'attention dues à des conditions médicales générales, les troubles de l'attention dus à de 1 'hyperactivité, les troubles des conduites alimentaires, la névrose boulimique, la névrose anorexique, l'obésité, les désordres psychotiques, l'apathie, la migraine, la douleur, et notamment la douleur chronique, le syndrome du colon irritable, les maladies cardio-vasculaires, et notamment le syndrome anxio- dépressif dans l'infarctus du myocarde ou dans l'hypertension, les maladies neurodégénératives et les syndromes anxio-dépressifs associés (maladie d'Alzheimer, Chorée de Huntington, maladie de Parkinson) , les incontinences urinaires, notamment l'incontinence urinaire liée au stress et l'énurésie, la -->dépendance aux drogues, et notamment 1 ' anxio-dépendance au tabac, notamment à la nicotine, à l'alcool, aux stupéfiants, aux drogues et aux antalgiques lors du sevrage de ces états de dépendance. Ces affections ou pathologies sont citées à titre d'exemples illustratifs et non limitatifs. Préférentiellement, les affections ou pathologies sont choisies dans le groupe constitué de la dépression, l'état dépressif, l'anxiété, la démence, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie, les troubles de la mémoire, le sevrage tabagique, la migraine, l'obésité, le surpoids, la douleur et les reflux gastro-oesophagiens. De façon avantageuse, ledit médicament se présente sous forme orale. Avantageusement, la forme orale est choisie parmi le groupe composé de comprimé, gélule, sirop, teinture ... L'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples suivants, qui toutefois n'en limitent pas la portée. Exemple 1 : Préparation d'un extrait d 'Eucalyptus globulus Les feuilles d 'Eucalyptus globulus sont broyées puis extraites avec 5 volumes d'éthanol à température ambiante. Le temps de contact de la plante avec le solvant est de 48 heures . La plante est séparée du solvant par filtration. Le filtrat obtenu est séché sous vide à une température de 60°C. L'extrait ainsi obtenu sera utilisé pour les tests in vitro présentés à l'exemple 4. L'extrait obtenu contient environ lg de macrocarpal G pour 100g d'extrait sec. -->Exemple 2 : Préparation d'un extrait d 'Eucalyptus globulus Les feuilles d'Eucalyptus globulus sont broyées puis extraites 3 fois à reflux avec 5 volumes d'éthanol 50% v/v à reflux. Le temps de contact de la plante avec le solvant est d'1 heure environ. La plante est séparée du solvant par filtration. Le filtrat obtenu est concentré jusqu'à 0,5 volume. La purification liquide-liquide est réalisée en additionnant du dichlorométhane. Trois extractions liquide-liquide sont réalisées. Les phases organiques sont réunies et séchées sur sulfate de sodium. Le séchage de l'extrait final est réalisé à 60°C sous vide. L'extrait obtenu contient environ 2g de macrocarpal G pour 100g d'extrait sec. Exemple 3 : Préparation d'un extrait d'Eucalyptus globulus Les feuilles d 'Eucalyptus globulus sont broyées puis extraites à reflux 2 fois avec 5 volumes du mélange éthanol-eau 50% v/v pendant 1 heure environ. La plante est séparée du solvant par filtration. Le filtrat obtenu est concentré puis stabilisé par l'addition de 0,1 g pour 100 g d'extrait sec d'acide citrique. Le concentrât est congelé puis séché par lyophilisation. L'extrait obtenu contient environ 0,5g de macrocarpal G pour 100g d'extrait sec. Exemple 4 : Evaluation de l'extrait de feuilles '.Eucalyptus globulus sur la recapture de la sérotonine, dopamine et noradrénaline. Les tests de capture ont été réalisés in vi tro sur des synapses de rats. 1) Evaluation de la recapture de la sérotonine (ou 5-HT) -->Le protocole utilisé pour cette évaluation est celui décrit dans Perovic , S. and Muller W.E.G., 1995 - Pharmacological profile of hypericum extract : effect on serotonin uptake by postsynaptic receptors, Arznei -Forsch . Drug Res . , 45 : 1145-1148. Le principe en est le suivant : les synapses issues de cerveaux de rat sont mises à incuber pendant 15 min à 37°C avec 0,1 μCi [ 3 H] -sérotonine en présence ou en absence (contrôle) de l'extrait d' Eucalyptus globulus préparé selon l'exemple 1 ou de l'imipramine (référence) dans un tampon contenant 118 mM de NaCl, 5mM de KC1, 2.5 mM MgS0 4 , 1.2mM de NaH 2 P0 4 , 25 mM de NaHC0 3 , 11 mM de glucose, 10 μM d'EGTA et 50 μM d'acide ascorbique (PH=7.4). L'activité basale est déterminée en incubant le même mélange pendant 15 min à 37°C en présence de 10 μM d'imipramine pour bloquer la recapture. A la suite de l'incubation, les échantillons sont filtrés rapidement sous vide à travers des filtres en fibre de verre (GB/B, Packard) et rincés deux fois avec du tampon d'incubation glacé pour éliminer la [ 3 H] -sérotonine libre. Les filtres sont séchés et la radioactivité retenue est mesurée par un compteur de scintillation (Topcount, Packard) en utilisant un cocktail de scintillation (Microscint O, Packard) . Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de recapture de la [ 3 H] -sérotonine du contrôle (cf. tableau 1). 2) Evaluation de la recapture de la dopamine (ou DA) Le protocole utilisé pour cette évaluation est celui décrit dans Janowsky A. Berger P., Vocci F., Labarca R., Skolnick P., and Paul S.M., 1996 - Charcaterization of sodiumdependent [ 3 H] GBR-12935 binding in brain : a radioligand for sélective labelling of the dopamine transport complex, J " . Neurochem. , 46, 1272-1276. Le principe en est le suivant : -->le milieu synaptique (synapses de striatum de rat) est mis à incuber pendant 15 min à 37°C avec 0,1 μCi [ 3 H] -DA en présence ou en absence (contrôle) de l'extrait d'Eucalyptus globulus ou de GBR 12909 (référence) dans la solution tampon (cf. recapture de la sérotonine) . L'activité basale est déterminée en incubant le même mélange pendant 15 min à 37°C en présence de 10 μM de GBR 12909 pour bloquer la recapture. A la suite de l'incubation, les échantillons sont filtrés rapidement sous vide à travers des filtres en fibre de verre (GB/B, Packard) et rincés deux fois avec du tampon d'incubation glacé pour éliminer la [ 3 H] -sérotonine libre. Les filtres sont séchés et la radioactivité retenue est mesurée par un compteur de scintillation (Topcount, Packard) en utilisant un cocktail de scintillation (Microscint O, Packard) . Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de recapture de la [ 3 H] -dopamine du contrôle (cf. tableau 1) . 3) Evaluation de la recapture de la noradrénaline (ou NE) Le protocole utilisé pour cette évaluation est celui décrit dans Perovic , S. and Muller .E.G., 1995 - Pharmacological profile of hypericum extract : effect on serotonin uptake by postsynaptic receptors, Arzneim-Forsch . Drug Res . , 45 : 1145-1148. Le principe en est le suivant : le milieu synaptique (synapses d'hypothalamus de rat) est mis à incuber pendant 20 min à 37°C avec 0,1 μCi [ 3 H] -NE en présence ou en absence (contrôle) de l'extrait d' Eucalyptus globulus ou de la protriptylline (référence) dans la solution tampon (cf. recapture de la sérotonine) . L'activité basale est déterminée en incubant le même mélange pendant 20 min à 37 °C en présence de 10 μM de protriptylline pour bloquer la recapture. -->A la suite de l'incubation, les échantillons sont filtrés rapidement sous vide à travers des filtres en fibre de verre (GB/B, Packard) et rincés deux fois avec du tampon d'incubation glacé pour éliminer la [ 3 H] -NE libre. Les filtres sont séchés et la radioactivité retenue est mesurée par un compteur de scintillation (Topcount, Packard) en utilisant un cocktail de scintillation (Microscint O, Packard) . Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de recapture de la [ 3 H] -noradrénaline du contrôle (Cf. tableau 1) . 4) Résultats s Les résultats sont exprimés en pourcentage d' inhibition de recapture du neuromédiateur évalué (cf. tableau 1) . Concentrations % Test (μg d'extrait sec d' inhibition / ml de solution) 1 3 Recapture de la sérotonine 10 43 100 103 1 4 Recapture de la dopamine 10 91 100 102 1 -14 Recapture de la noradrénaline 10 11 100 101 Tableau 1 : Evaluation de l'extrait de feuilles d' Eucalyptus globulus sur la recapture de la sérotonine, dopamine et noradrénaline. -->On observe une inhibition significative de la recapture de la sérotonine et de la dopamine à 10 μg/ml et des trois neurotransmetteurs à 100 μg/ml. Exemple 5 : Evaluation d'un extrait d'Eucalyptus enrichi en macrocarpal G vs extrait d'Eucalyptus sans macrocarpal G et vs macrocarpal G pur Les feuilles d'Eucalyptus globulus sont broyées puis extraites par 5 volumes de dichlorométhane. L'extraction est réalisée deux fois à reflux pendant 1 heure. On procède ensuite à une filtration sous vide. Les filtrats réunis sont concentrés jusqu'à 2 volumes. Trois extractions liquide-liquide sont réalisées par addition d'un volume de carbonate de sodium (Na 2 C0 3 )à 0,1 M. La phase dichlorométhane épuisée est conservée. Après séchage sur sulfate de sodium, concentration et mise à sec sous vide à 60°C, le résidu obtenu constitue l'extrait sans macrocarpal (la fraction massique de macrocarpal G étant inférieure à 0,5 %) . Les phases aqueuses basiques réunies sont acidifiées par addition d'acide chlorhydrique (HCl) 1 M jusqu'à l'obtention d'un pH environ égal à 1 puis extraites par 3 extractions liquide-liquide avec du dichlorométhane. Les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium puis concentrées et mises à sec sous vide à 60 °C maximum. Le résidu sec obtenu constitue l'extrait enrichi en macrocarpal G . Ce dernier renferme une fraction massique de macrocarpal G de 7%. L'extrait enrichi est fractionné sur une colonne préparative ayant pour phase stationnaire une phase inverse, Symetry Shield ® , 5μm (Waters) et pour phase mobile, un mélange acétonitrile / eau / acide trifluoroacétique dans les proportions 95 /5 /0,1%. -->La pureté en macrocarpal G de la fraction obtenue est d'environ 97%. Le protocole ensuite utilisé est identique à celui de l'exemple 4 en ce qui concerne l'évaluation de la recapture de la sérotonine. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau 2 ci-dessous. Concentrations % Test (μg d'extrait d' /ml de solution) inhibition Extrait enrichi en macrocarpal G 15 101 Extrait enrichi sans macrocarpal G 15 37 Macrocarpal G 0,3 103.8 Tableau 2 : Comparaison de l'activité d'un extrait enrichi en macrocarpal G , d'un extrait sans macrocarpal G et d'une fraction enrichie en macrocarpal G sur la recapture de sérotonine. On observe que le pourcentage d'inhibition de recapture de la sérotonine est d'autant plus significatif que la teneur en macrocarpal G est élevée . Exemple 6 : Détermination de la concentration inhibitrice à 50% (CI 50 ) du macrocarpal G sur la recapture des neuromédiateurs comparativement à celle de 1 ' hyperforine . Les protocoles suivis sont ceux de l'exemple 4. Ils ont été répétés pour différentes concentrations en macrocarpal G et en hyperforine. Les courbes d'inhibition obtenues ont permis d'obtenir les valeurs CI 50 suivantes : -->CI 50 (μg d'extrait/ml de solution) Test Macrocarpal G Hyperforine Recapture de la sérotonine 1,4 0,89 Recapture de la noradrénaline 3,1 0,79 Recapture de la dopamine 0,35 0,23 Tableau 3 : Détermination de la concentration inhibitrice à 50% (CI 50 ) du macrocarpal G et de 1 ' hyperforine sur la recapture de la sérotonine, de la noradrénaline et de la dopamine --> REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un extrait d'Eucalyptus pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture de la dopamine et/ou de la sérotonine et/ou de la noradrénaline. 2. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que le traitement et/ou la prévention desdites affections ou pathologies consiste en une inhibition de la recapture de la dopamine et/ou de la sérotonine et/ou de la noradrénaline . 3. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que ledit extrait d'Eucalyptus contient une fraction massique de macrocarpal G supérieure ou égale à 0,1 et strictement inférieure à 5 %. 4. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'extrait d'Eucalyptus est enrichi en macrocarpal G, ledit extrait enrichi contenant une fraction massique de macrocarpal G comprise entre 5 et 90 %. 5. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'extrait est issu d'un Eucalyptus choisi parmi les espèces appartenant aux sous-genres Eudesmia , Symphomyrtus et Corymbia et les espèces suivantes : Eucalyptus globulus L. , Eucalyptus pulverulenta Sims*, Eucalyptus kartzoffiana L. A. S. Johnson 1 Blaxell*, Eucalyptus macrocarpa Hook. , Eucalyptus cinerea F . Muell.ex Benth., Eucalyptus dorrigoensis (Blakely) L.A.S. Johnson 1 K. D. Hill, Eucalyptus leptopoda Benth., Eucalyptus occidentalis Endl . , Eucalyptus viridis R. T. Baker, Eucalyptus polybractea R.T. Baker et Eucalyptus smi thii R.T. Baker. 6. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'extrait d'Eucalyptus est choisi parmi le groupe -->composé d'un extrait de feuilles, de fleurs, de fruits, de tiges et de tronc d'Eucalyptus. 7. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que la pathologie ou l'affection est sélectionnée dans le groupe composé de la dépression, l'état dépressif, l'anxiété, la démence, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie, les troubles de la mémoire, le sevrage tabagique, la migraine, l'obésité, le surpoids, la douleur et les reflux gastro-oesophagiens. 8. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que le médicament est sous forme orale. 9. Utilisation selon la revendication 8 caractérisée en ce que la forme orale est choisie parmi les comprimés, les gélules, les sirops et les teintures. 10. Utilisation du macrocarpal G pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture de la dopamine et/ou de la sérotonine et/ou de la noradrénaline. 11. Utilisation selon la revendication 10 caractérisée en ce que le traitement et/ou la prévention desdites affections ou pathologies consiste en une inhibition de la recapture de la dopamine et/ou de la sérotonine et/ou de la noradrénaline. 12. Utilisation selon la revendication 10 caractérisée en ce que le macrocarpal G est obtenu par synthèse chimique, biochimique ou à partir d'un extrait végétal. 13. Utilisation selon la revendication 10 caractérisée en ce que la pathologie ou l'affection est sélectionnée dans le groupe composé de la dépression, l'état dépressif, l'anxiété, la démence, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie, les troubles de la mémoire, le sevrage tabagique, la migraine, l'obésité, le surpoids, la douleur et les reflux gastro-oesophagiens. -->14. Utilisation selon la revendication 10 caractérisée en ce que le médicament est sous forme orale. 15. Utilisation selon la revendication 14 caractérisée en ce que la forme orale est choisie parmi les comprimés, les gélules, les sirops et les teintures. 16. Extrait d'Eucalyptus caractérisé en ce qu'il contient une fraction massique de macrocarpal G comprise entre 5 et 90%. 17. Extrait selon la revendication 16 caractérisé en ce qu'il contient une fraction massique de macrocarpal G comprise entre 5 et 50%. 18. Extrait selon la revendication 16 caractérisé en ce qu'il contient une fraction massique de macrocarpal G comprise entre 5 et 20%. 19. Procédé de préparation de l'extrait selon l'une quelconque des revendications 16 à 18 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : broyage de feuilles et/ou de fleurs et/ou de fruits et/ou de tiges et/ou de tronc d'Eucalyptus au moins une extraction avec un solvant organique ou un mélange d'eau et de solvants organiques miscibles à l'eau séparation solide/liquide enrichissement du filtrat. 20. Procédé selon la revendication 19 caractérisé en ce que le solvant organique est du dichlorométhane ou de l'acétate d' isopropyle. 21. Procédé selon la revendication 19 caractérisé en ce que l'étape d'enrichissement correspond en au moins une extraction liquide/liquide par ajout d'une base, une acidification puis d'au moins une extraction liquide/liquide par un solvant non miscible à l'eau.