Brevet FR2902605A1 — publié le 20071228

UTILISATION D'UN MODELE ANIMAL POUR LE CRIBLAGE DE MEDICAMENTS DESTINES AU TRAITEMENT OU A LA PREVENTION DE PATHOLOGIES LIEES ET / OU ASSOCIEES A L'ANXIETE La présente invention a pour objet l'utilisation d'un modèle animal pour le criblage de médicaments destinés au traitement ou à la prévention de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété. La présente invention a notamment pour objet l'utilisation de souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux pour le criblage de médicaments destinés au traitement ou à la prévention de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété. Les pathologies liées et / ou associées à l'anxiété touchent une grande partie de la population. Ainsi, selon l'étude de Lépine J-P (J. Clin. Psychiatry, 2002 ;63), environ un individu sur 4 souffre au moins une fois dans sa vie d'un trouble anxieux aux Etat-Unis. Les troubles anxieux ont tendance à devenir chroniques, notamment en l'absence de soins. Le système sérotoninergique central joue un rôle important dans la modulation des différents troubles psychiatriques comme l'anxiété, la dépression et l'agressivité (Gingrich and Hen, 2001). Parmi les différents sous-types de récepteurs sérotoninergiques, les sous-types lA et 1B de la sérotonine (5HT1A et 5HT1B) semblent plus fortement impliqués dans la médiation des troubles anxieux ainsi que dans la réponse aux antidépresseurs. L'efficacité de composés potentiellement actifs contre l'anxiété peut être mesurée en ayant recours à des modèles animaux. Les tests permettant d'évaluer l'efficacité des médicaments dans des modèles animaux sont généralement des tests comportementaux, tels que le test du champ ouvert, le test du labyrinthe en croix surélevée, ou des tests tels que le test des quatre plaques, le test d'alimentation supprimée par la nouveauté, le stress induisant une hyperthermie, les modèles de punition comme le test de punition après prise de boisson (ou punished drinking), le test de la peur engendrant le sursaut (ou fear-potentiated startle ), le test de la double enceinte éclairée, la batterie de test de défense (ou mouse defense test battery ), le test d'interaction sociale, qui sont effectués sur la souris sauvage, c'est-à-dire non anxieuse . En effet, le plus souvent, des souris de phénotype non anxieux sont utilisées pour tester les médicaments potentiellement actifs contre l'anxiété, ce qui n'est pas une solution adaptée. Les modèles animaux existant qui sont des lignées naturelles ou sélectionnées d'animaux, c'est-à-dire dont le génome n'a pas été modifié, regroupent généralement à la fois un phénotype dépressif et anxieux, ce qui ne constitue pas un modèle idéal pur le criblage de médicaments contre l'anxiété. Par exemple, Matsumoto K. et al. (Stress, 2005) décrivent des souris chez lesquelles un état dépressif, anxieux et agressif est induit par une isolation sociale des animaux à long terme. Il existe des modèles animaux de l'anxiété invalidés pour un gène, appelés modèles animaux knockout ou KO . Par exemple, des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A de la sérotonine montrent un phénotype anxieux (Parks et al. (1998, PNAS, 95, 10734-10739); Ramboz et al. (1998, PNAS, 95, 114476-14481) ; Heisler et al. (1998, PNAS, 95, 15049-15054)). Des souris invalidées pour le gène codant pour le transporteur de la sérotonine (SERT) (Lira et al. Biol. Psychiatry, 2003, 54(10), 960-71) montrent à la fois un phénotype anxieux dépressif Des souris invalidées pour le gène codant pour p53 ont des troubles de la mémoires et / ou des troubles comportementaux et /ou de l'anxiété (brevet US 6 921 845). Saudou et al. (1998, Science, 265, 1875-1878) ont produit des souris invalidées pour le récepteur 5HT1B et ont décrit un phénotype agressif de ces souris. Ces souris ne sont envisageables comme modèle de l'anxiété. La génération de souris invalidées pour le récepteur 5HT1A de la sérotonine par différentes équipes (Heisler et al., 1998; Parks et al., 1998; Ramboz et al., 1998) a permis de montrer le phénotype anxieux de ces animaux (Toth, 2003). Cependant, certaines souches de ces animaux ne répondent pas aux anxiolytiques classiques comme le diazépam, ce qui limite l'intérêt d'utiliser des souris invalidées pour le gène 5HT1A de la sérotonine pour cribler des médicaments destinés au traitement de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété. Bonaventure et al. (2002, J. Pharmacol. Exp. Ther., 302(1), 240-248) ont décrit des souris doublement invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique mixte. Le phénotype de ces souris n'est pas décrit, car cette étude porte sur la distribution du récepteur 5HT7, par une analyse du cerveau de souris de génotype 5HT1A (-/-) et de souris de génotype 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-). Ces souris ne sont donc pas envisagées comme modèles de l'anxiété. L'un des aspects de l'invention est de fournir un modèle d'animaux transgéniques approprié pour le criblage de médicaments impliqués dans le traitement de l'anxiété. Un autre aspect de l'invention est de fournir un modèle animal de fond génétique stable présentant un nouveau phénotype hyper anxieux. Les souris de phénotype anxieux et notamment hyper anxieux selon l'invention peuvent également être utilisées pour étudier l'activité des anxiolytiques / antidépresseurs et obtenir des informations complémentaires à celles fournies par une approche purement pharmacologique (avec des antagonistes des récepteurs). La présente invention a pour objet l'utilisation de souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine, pour le criblage de médicaments destinés au traitement ou à la prévention de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété. En obtenant des souris doublement invalidées pour les gènes codant pour les 10 récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine, (qualifiées de souris de génotype 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-)), les Inventeurs ont obtenu de manière surprenante des souris présentant un phénotype anxieux, notamment hyper anxieux. Par phénotype anxieux , on désigne un comportement anxieux de souris qui peut être mis en évidence par l'évaluation de l'intensité d'anxiété desdites souris dans des tests 15 comportementaux, tels que le test du champ ouvert (ou open field ), le test du labyrinthe en croix surélevée ou le test de l'alimentation supprimée par la nouveauté. En particulier, l'intensité d'anxiété est évaluée par le nombre d'entrées et le temps passé dans la zone centrale, ainsi que l'activité locomotrice dans le test du champ ouvert, par le nombre d'entrées et le temps passé dans les bras ouverts, ainsi que le temps passé dans les 20 bras fermés dans le test du labyrinthe en croix surélevée, et par la latence dans le test d'alimentation supprimée par la nouveauté. Une souris de phénotype anxieux, et notamment hyper anxieux, est caractérisée par : - une diminution du nombre d'entrées et du temps passé dans la zone centrale, et une diminution de l'activité locomotrice dans le test du champ ouvert, 25 - une diminution du nombre d'entrées et du temps passé dans les bras ouverts, et une augmentation du temps passé dans les bras fermés dans le test du labyrinthe en croix surélevée, - une augmentation de la latence dans le test d'alimentation supprimée par la nouveauté par rapport à une souris de phénotype non anxieux. 30 Les souris doublement invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine présentent un phénotype hyper anxieux, car dans les tests comportementaux, l'intensité d'anxiété mesurée chez ces souris est supérieure à celle de souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et l'intensité d'anxiété de ces souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A est elle-même supérieure à celle de souris non invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HTIB de la sérotonine. Par phénotype hyper anxieux , on désigne un comportement hyper anxieux des souris, mis en évidence par l'évaluation de l'intensité d'anxiété desdites souris dans des tests comportementaux tels que définis ci-dessus. L'intensité d'anxiété de souris de phénotype hyper anxieux est telle que ces souris présentent une augmentation significative de leur intensité d'anxiété, supérieure à l'intensité d'anxiété de souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A, par exemple dans le test du labyrinthe en croix surélevée ou dans le test du champ ouvert. Par significative ou significatif , on désigne des résultats significatifs obtenus par la mise en oeuvre d'un test statistique. Les résultats sont analysés par une ANOVA (Analyse de Variance) à un ou deux facteurs (le ou les facteurs étant le génotype et/ou le traitement) en fonction des tests réalisés. Si l'un des facteurs (ou les 2) ou si l'interaction (génotype x traitement) présente une valeur de p inférieure à 0,05, un test post hoc de Fisher est ensuite réalisé. Les souris de phénotype non anxieux, appelées également souris contrôle par la suite, sont des souris de génotype 5HT1A (+/+) HT1B (+/+) et de fond génétique identique à celui des souris de phénotype anxieux, notamment hyper anxieux testées. Ces souris de phénotype non anxieux expriment des récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine fonctionnels. Le récepteur 5HT1A a été le premier récepteur sérotoninergique entièrement séquencé. Les gènes codant pour le récepteur 5-HTIA humain et celui de rat, ont été isolés par criblage de banques génomiques humaines avec des séquences d'ADN homologues des a2-adrénorécepteurs, puis identifiés chez l'Homme et le Rat (Albert et al., 1990; Fargin et al., 1988). La séquence du récepteur 5HT1A humain présente 89% d'homologie avec celle du Rat. La séquence nucléique SEQ ID NO : 1 (référence ENSG00000178394 sur la base de données Ensembl) code pour le récepteur 5HT 1 A humain de la sérotonine représenté par la séquence SEQ ID NO : 2. Le récepteur 5HT1A de la sérotonine est impliqué dans de nombreux processus biologiques à différents niveaux (voir tableau 1, d'après Barnes et Sharp, 1999). Tableau 1 Niveau Réponse Mécanisme Cellulaire (-) Adénylate cyclase Postsynaptique Electrophysiologique Hyperpolarisation Postsynaptique Comportemental syndrome 5HT Postsynaptique Hypothermie Pré / Postsynaptique Anxiolyse Présynaptique (+) Comportement sexuel Pré / Postsynaptique Neurochimique (-) Libération de 5HT Présynaptique (+) Libération de noradrénaline Postsynaptique (+) Libération d'acétylcholine Postsynaptique (-) Libération de glutamate ND Neuroendocrinien (+) ACTH Postsynaptique (+) Prolactine Postsynaptique Le signe (+) indique un effet activateur, le signe (ù) indique un effet inhibiteur et le signe ND indique que l'effet n'est pas déterminé. L'actuelle classification des récepteurs sérotoninergiques distingue le récepteur 5HT1B de Rat du récepteur 5HT1B humain, anciennement 5-HTlDp, par les préfixes r pour Rat et h pour Homme (pour revue voir (Hoyer et al., 2002)). Ce récepteur a été isolé chez le Rat (Voigt et al., 1991) à partir d'une banque d'ADNc de cerveau antérieur et cloné chez la souris à partir d'une banque génomique (Maroteaux et al., 1992). Le récepteur 5HT1B humain est caractérisé par une homologie de 96% avec le récepteur 5HT1B de Rat (Jin et al., 1992). Les différences pharmacologiques entre ces deux homologues résident dans la mutation d'un seul acide aminé, l'acide aspartique (Asp'23) en arginine (Arg123). Chez le Rat, ces récepteurs ont pu être distingués des sites 5-HT1D par leur affinité élevée pour certains antagonistes des récepteurs (3- adrénergiques (pindolol, cyanopindolol) ou encore pour un agoniste, le CP 93129 (Barnes and Sharp, 1999). La séquence nucléique SEQ ID NO : 3 (référence ENSG00000135312 sur la base de données Ensembl) code pour le récepteur 5HT1B humain de la sérotonine représenté par la séquence SEQ ID NO : 4. Le récepteur 5-HT1B est impliqué dans des effets comportementaux et physiologiques 20 aussi variés que la modulation des concentrations de corticostérone plasmatique, de prolactine, 1'hypophagie, l'hypothermie, l'érection pénienne, l'analgésie, le sommeil, l'humeur, la vigilance, l'anxiété et la dépression (Clark et Neumaier, 2001 ; pour revue Barnes et Sharp, 1999 ; Moret et Briley, 2000) (voir tableau 2). L'anpirtoline, agoniste de ce sous-type de récepteur 5-HT a des propriétés aussi bien analgésiques chez l'Homme (Hummel et al., 1994) ou chez la Souris (Schlicker et al., 1992 ; Swedberg, 1994) qu'antidépressives chez les rongeurs (Schlicker et al., 1992). Plusieurs polymorphismes ont été identifiés pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B : un polymorphisme incluant 5 mutations antisens (T371G), un polymorphisme G861 C, et d'autres polymorphismes ont été décrits dans la région 5'UTR: G-511 T, T-261 G, - 184INS/DEL-183, 182INS/DEL-181, -1791NS/DEL-178, et A-161T. Tableau 2 Niveau Réponse Mécanisme Cellulaire (-) Adénylate cyclase Postsynaptique Électrophysiologique Inhibition du potentiel synaptique Présynaptique évoqué (hétérorécepteur) Comportemental (+) Locomotion/rotation Postsynaptique Hypophagie Présynaptique Hypothermie (Cochon d'Inde) ? Secousse musculaire (Cochon d'Inde) Neurochimique (-) Libération de 5HT Présynaptique (-) Libération d'acétylcholine (autorécepteur) Présynaptique (hétérorécepteur) Le signe (+) indique un effet activateur, le signe (ù) indique un effet inhibiteur et le 15 signe ND indique que l'effet n'est pas déterminé. Par récepteur 5HT1 A de la sérotonine fonctionnel , on désigne notamment un récepteur 5HT1A qui est capable de lier la sérotonine et d'induire la transduction du signal. Par récepteur 5HT1B de la sérotonine fonctionnel , on désigne un récepteur 5HT1B qui capable de lier la sérotonine et d'induire la transduction du signal. 20 La liaison de la sérotonine au récepteur 5HT1A ou 5HT1B peut être évaluée par un étude classique de la liaison ligand/ récepteur et détermination de la constante de dissociation Kd, ou de la constante d'inhibition KI. La transduction du signal peut être évaluée par un test GTP gamma S. Le [35S]GTPyS ou GTP gamma S est une molécule de Guanosine Tri-phosphate marquée au [35S] qui se fixe sur la petite protéine Ga lors de l'activation par un agoniste des récepteurs couplés aux protéines G. En bloquant le récepteur activé, cette technique permet d'obtenir une information anatomique et fonctionnelle sur le récepteur (DeLapp et al., 2004, The antibody-capture [(35)S]GTPgammaS scintillation proximity assay: a powerful emerging technique for analysis of GPCR pharmacology. ; Sovago et al., 2001, An overview on functional receptor autoradiography using [35S]GTPgammaS ). Les souris de phénotype anxieux, notamment de phénotype hyper anxieux présentent un évitement des situations aversives, par exemple des aires ouvertes ou suspendues. Ainsi, un intérêt majeur des souris de phénotype hyper anxieux par rapport aux souris 10 de phénotype anxieux est leur plus grande différence d'intensité d'anxiété avec les souris de phénotype non anxieux, ce qui permet d'obtenir des résultats hautement significatifs lors de l'évaluation de l'activité anxiolytique de médicaments potentiels. D'autres tests comportementaux peuvent être utilisés pour déterminer l'intensité de l'anxiété chez des souris, comme par exemple le stress induisant l'hyperthermie, le test des 15 quatre plaques, la séparation mère -souriceau, le test d'odeur du chat (ou Cat odor test ). Dans un mode de réalisation selon l'invention, la détermination de l'intensité de l'anxiété des souris par les tests comportementaux peut être complétée par la mesure de la concentration extracellulaire de sérotonine par microdialyse intracérébrale chez la souris éveillée (le test est décrit dans les exemples). La concentration extracellulaire de sérotonine 20 est plus élevée chez des souris de phénotype anxieux, et notamment hyper anxieux, par rapport à des souris de phénotype non anxieux. L'expression souris invalidées pour un gène désigne des souris dont ledit gène est invalidé. Les souris invalidées pour un gène sont également qualifiées de souris knock-out pour ce gène. 25 Un gène invalidé est un gène dont l'expression est abolie ou dont l'expression aboutit à un produit non fonctionnel. L'invalidation des gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine peut notamment être mise en évidence : - par RTPCR avec des amorces permettant d'amplifier le gène non invalidé et /ou le 30 gène invalidé, mais aboutissant à des produits de taille différente, et / ou un western-blot avec des anticorps spécifiques dirigés contre le récepteur 5HT1A ou 5HT1B à tester : l'absence de protéine révélée ou la présence d'une protéine d'une taille différente de celle du produit du gène non invalidé permet de vérifier l'invalidation du gène. Un gène invalidé pour le récepteur 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine ne permet pas l'expression de récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine fonctionnels. Plus particulièrement, les produits dudit gène invalidé ne peuvent pas se lier à la sérotonine (5HT) ni induire la transduction du signal. L'invalidation d'un gène est obtenue par les techniques classiques de biologie moléculaire et cellulaire. L'invalidation d'un gène peut notamment être obtenue : par introduction d'un codon stop dans la séquence du gène, ce qui empêche la synthèse du produit codée par ledit gène ou aboutit à une forme de ce produit non 10 fonctionnelle, ou - par introduction d'une séquence d'ADN dans la séquence dudit gène, ladite séquence d'ADN pouvant coder pour une protéine d'intérêt, ce qui aboutit à l'expression d'une protéine de fusion entre ladite séquence introduite et le produit du gène, laquelle protéine de fusion n'est pas fonctionnelle par rapport au produit du gène non invalidé. 15 Une protéine d'intérêt est par exemple un marqueur de sélection, comme un gène de résistance à un antibiotique, comme la néomycine. Par l'expression pathologies liées à l'anxiété , on désigne des pathologies qui découlent directement d'un trouble anxieux. Par l'expression pathologies associées à l'anxiété , on désigne des pathologies dont 20 les troubles ne sont pas essentiellement constitués par un trouble anxieux, mais qui sont associées à un trouble anxieux. Un traitement contre l'anxiété peut ainsi améliorer la condition du patient atteint d'une pathologie associée à l'anxiété et permettre d'augmenter l'efficacité du traitement destiné à la pathologie elle-même. La présente invention a notamment pour objet l'utilisation telle que définie ci-dessus, 25 dans laquelle les souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux, ont un fond génétique stable. Par souris de fond génétique stable , on désigne des souris dont un trait phénotypique, en particulier le phénotype anxieux, notamment hyper anxieux, est conservé au cours des générations. 30 Par conservé au cours des générations , on désigne le fait que les souris des générations successives possèdent toutes ledit trait phénotypique. Une souris est considérée comme étant de fond génétique stable lorsque le trait phénotypique d'intérêt est conservé dans sa descendance sur au moins trois générations successives, de préférence au moins quatre générations successives, de préférence au moins cinq générations successives. Par exemple, pour vérifier qu'une souris de phénotype anxieux et notamment hyper anxieux est de fond génétique stable, cette souris est croisée avec une souris consanguine pour obtenir des souris de première génération, puis les souris de première génération sont croisées entre elles pour obtenir les souris de deuxième génération. Une souris de phénotype anxieux et notamment hyper anxieux est de fond génétique stable si le rapport de l'intensité d'anxiété de ladite souris sur l'intensité d'anxiété de souris contrôle, ainsi que le rapport de l'intensité d'anxiété de sa descendance (souris de première génération et de deuxième génération) sur l'intensité d'anxiété de souris contrôle sont similaires. Par souris de fond génétique stable , on désigne également des souris dont au moins 96%, notamment au moins 98%, en particulier au moins 99% du génome est conservé sur au moins trois générations successives, de préférence au moins quatre générations successives, de préférence au moins cinq générations successives. Les souris de fond génétique stable sont des souris consanguines. Le terme fond génétique stable s'oppose au terme fond génétique mixte. Le génome d'une souris de fond génétique mixte est issu de génomes de différents fonds génétiques. Par souris de fond génétique mixte , on désigne des souris dont un trait 20 phénotypique, en particulier le phénotype anxieux, notamment hyper anxieux, est modifié au cours des générations. Par souris de fond génétique mixte , on désigne également des souris dont moins de 96% du génome est conservé sur au moins trois générations successives, de préférence au moins quatre générations successives, de préférence au moins cinq générations successives. 25 Il est avantageux de définir la dominante d'un fond génétique mixte : une souris de fond génétique mixte à dominante x, x étant un fond génétique donné, est une souris de fond génétique mixte dont la majorité du génome est issue du génome de fond génétique x. Des souris de fond génétique stable peuvent être obtenues pas dérivation sur le dit fond génétique stable. 30 La dérivation de souris sur un fond génétique stable consiste à croiser lesdites souris avec des souris dudit fond génétique, et de croiser les descendants obtenus en retour avec ces mêmes souris dudit fond génétique stable sur au moins 10 générations, notamment au moins 12 générations, et notamment au moins 15 générations. La dérivation est donc obtenue par la technique de croisement en retour ou backcross . Les souris obtenues par dérivation sur un fond génétique stable sont également qualifiées de souris congéniques. La souris dont les mutations des gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B sont transférées dans une autre lignée est qualifiée de souris donneuse . La souris de fond génétique stable qui est utilisée pour la dérivation de la souris donneuse est qualifiée de souris receveuse . La présente invention a particulièrement pour objet l'utilisation telle que définie ci- dessus, dans laquelle les pathologies liées et / ou associées à l'anxiété sont choisies parmi : l'anxiété généralisée, la dépression anxieuse, les crises de panique, les phobies, les 10 troubles obsessionnels compulsifs, les dépressions, les psychoses, la psychose maniaco-dépressive, les troubles bipolaires, 1'hyperactivité. L'anxiété généralisée est caractérisée par le fait que dans une situation donnée, la personne entretient psychologiquement plusieurs scénarios négatifs et devient hypervigilante 15 et très vulnérable aux stresseurs environnementaux. Au niveau diagnostique, l'anxiété généralisée est caractérisée par : une anxiété et des inquiétudes ou des soucis excessifs survenant, de façon générale, tous les jours au cours d'une période d'environ six mois à propos de certaines activités; une difficulté, de la part du malade, à contrôler cette anxiété et à oublier ces soucis; 20 l'anxiété et les soucis sont associés à au moins trois des six symptômes suivants; • agitation ou sensation d'être survolté ou à bout; • fatigabilité; • difficulté de concentration ou trous de mémoire; • irritabilité; 25 • tension musculaire; • perturbation du sommeil et, en particulier, difficulté d'endormissement et/ou réveils nocturnes, (dus à des pensés noires qui agissent inconsciemment lors du sommeil) • spasmes et douleurs au ventre pouvant être très violents et récurrents; 30 • perturbation de la nutrition due notamment aux maux de ventre et spasmes, pouvant entraîner une déshydratation; épuisement et fébrilité (si les troubles durent) laissant le champ libre à des maladies opportunistes telles que le rhume ou les états grippaux. Pour porter ce diagnostic, il faut s'assurer que cette anxiété n'est pas liée à un autre trouble anxieux et qu'elle entraîne une souffrance significative ou une altération du fonctionnement social du malade. La dépression est une pathologie plus diffuse, caractérisée par un manque d'élan, 5 d'énergie, un frein, une dévalorisation de soi. La crise de panique (également appelée attaque de panique, crise d'angoisse, ou trouble panique) est caractérisée par une période de peur et d'inconfort intenses, survenant typiquement de façon brutale et ne durant pas plus d'une trentaine de minutes. Les symptômes vont des frissons aux palpitations cardiaques en passant par des sueurs, nausées, le souffle 10 court, une hyperventilation, des sensations de picotement (paresthésie) et l'impression d'étouffer. Une crise de panique est un cercle vicieux, en ce que les symptômes mentaux et les symptômes physiques s'aggravent mutuellement. Un patient ayant connu une attaque de panique peut être sujet à des rechutes. On diagnostique chez les patients souffrant d'attaques de panique régulières un "trouble panique". 15 L'attaque de panique se distingue des autres formes d'anxiété par son caractère intense et brusque et sa nature épisodique. Les sujets souffrent souvent de troubles de l'anxiété autres, comme l'agoraphobie ou d'autres troubles psychologiques touchant à l'anxiété û encore que les attaques de panique ne soient pas un symptôme de maladie mentale. Environ 10% de la population connaît l'expérience d'une attaque de panique isolée par année, et une personne sur 20 60 environ est sujette à des troubles paniques pendant sa vie. Les symptômes de la crise d'angoisse qui survient en moins de 10 minutes sont : malaise intense, à la fois psychique et physique, -sentiment d'angoisse sans raison, - sensation de catastrophe imminente, 25 peur intense, peur de devenir fou ou de perdre le contrôle de soi, peur de se suicider, peur de mourir (d'un arrêt cardiaque, par exemple), diarrhée, 30 vomissements ou nausées, sueurs froides, bouffées de chaleur ou de froid, palpitations, sensation de coeur qui bat trop fort, douleur ou gêne dans la poitrine, tremblements, sensation d'étouffer, sensation d'étranglement, vertiges, sensation d'évanouissement, - sentiment d'irréalité (déréalisation), ou d'être détaché de soi (dépersonnalisation), sensations d'engourdissement ou de picotements. Ce qui caractérise une attaque de panique est sa brutalité : elle intervient sur une période de temps bien délimitée, de quelques minutes à quelques heures. Une attaque de panique peut être spontanée, "pour rien", voire même réveiller brutalement quelqu'un qui dormait, ou bien être déclenchée par la confrontation avec l'objet d'une phobie, ou encore être la conséquence de la prise de certaines drogues, ou de certains médicaments. Le trouble panique correspond à la répétition de ces attaques de panique ou à la crainte persistante de leur survenue. Concernant les phobies, le DSM IV (Diagnostic and Statistical Manual, revision 4) donne les critères de diagnostique suivants pour les phobies non spécifiques (classement 15 300.29) : crainte marquée et persistante, excessive ou peu raisonnable, déclenchée par la présence ou l'idée anticipative d'un objet ou d'une situation spécifique (par exemple : vol en avion, hauteurs,animaux, recevoir une injection, voir du sang) ; - l'exposition au stimulus phobique provoque presque invariablement une réponse 20 immédiate d'inquiétude, qui peut prendre la forme soit d'une crise de panique liée à la situation, soit, d'une prédisposition à une telle crise ; - la personne admet que la crainte est excessive ou peu raisonnable ; les situations phobiques sont évitées, ou bien, sont supportées avec une inquiétude ou une détresse intense ; 25 - l'évitement, l'anticipation anxieuse ou la détresse dans la situation redoutée interfère de manière significative avec le quotidien normal de la personne, avec son fonctionnement professionnel (ou scolaire), avec ses activités et rapports sociaux, ou il y a une détresse marquée due au fait d'être sujet à la phobie. Il faut que l'inquiétude, les crises de panique ou l'évitement phobique liées à l'objet ou 30 à la situation ne s'expliquent pas mieux par un autre trouble mental. Cet autre trouble pourrait être le Trouble Obsessionnel Compulsif (par exemple, crainte de la saleté de quelqu'un, avec une hantise de contamination), un trouble post traumatique (par exemple, l'évitement des stimuli liés à un facteur de stress), un trouble d'inquiétude de séparation (par exemple, évitement de l'école), une phobie sociale (par exemple, action d'éviter des situations sociales en raison de la crainte de l'embarras), une panique avec l'agoraphobie, de l'agoraphobie sans antécédent de panique. Les psychoses sont un ensemble de psychopathologies caractérisées par l'existence d' Les classifications officielles DSM-IV et la classification internationale des maladies (CIM 10) distinguent trois types de trouble bipolaire : * le trouble bipolaire 1 (alternance de périodes de manies, de dépressions majeures voire de troubles mixtes mêlant manie et dépression et d'intervalles libres), * le trouble bipolaire 2 (alternance de périodes d'exaltation modérée appelée 30 hypomanie, de dépressions majeures et d'intervalles libres) * et la cyclothymie (alternance de périodes à symptômes hypomaniaques et de périodes à symptômes dépressifs). Certains auteurs (Klerman, Akiskal) ont identifié d'autres types à partir de la notion de spectre bipolaire. L'association troubles anxieux - trouble hyperactivité avec déficit de l'attention concernerait environ 25 % des enfants présentant l'un ou l'autre de ces troubles, les troubles anxieux les plus fréquemment retrouvés associés au trouble de l'hyperactivité avec déficit de l'attention étant le trouble hyperanxiété et le trouble anxiété de séparation (Biederman et coll., 1992). Plusieurs travaux plaident en faveur d'une relation privilégiée entre déficit de l'attention et troubles anxieux, le problème s'avérant plus complexe lorsque s'y ajoute une hyperactivité (Lahey et coll., 1984, 1987, 1988 ; Pliszka, 1989). Pour Mouren-Siméoni et coll. (1993), l'inattention pourrait s'interpréter comme secondaire à l'anxiété, intrinsèquement liée à elle , tandis que l'hyperactivité pourrait représenter le versant moteur de l'anxiété, traduisant la fébrilité d'un sujet en permanence sur le qui-vive . Sur le plan psychopathologique, des auteurs ont suggéré que l'hyperactivité pourrait s'inscrire chez les enfants présentant un trouble anxiété de séparation dans une dimension provocatrice de l'adulte, l'agitation du corps intervenant comme un appel vers l'autre visant à maintenir la proximité du lien d'attachement (Bailly, 1995). La présente invention a également pour objet de fournir une méthode de criblage de médicaments destinés au traitement ou à la prévention de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété comprenant les étapes de : détermination de l'intensité d'anxiété d'une souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux, invalidée pour les gènes codant pour le récepteur 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine, notamment par au moins un test comportemental choisi parmi le test du champ ouvert, le test du labyrinthe en croix surélevée et le test de l'alimentation supprimée par la nouveauté, et éventuellement par la mesure de la concentration extracellulaire de sérotonine, administration d'un composé potentiellement actif à ladite souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux, pour obtenir une souris traitée, - détermination de l'intensité d'anxiété de ladite souris traitée, notamment par au moins un test comportemental choisi parmi le test du champ ouvert, le test du labyrinthe en croix surélevée et le test de l'alimentation supprimée par la nouveauté, et éventuellement par la mesure de la concentration extracellulaire de sérotonine, évaluation de l'efficacité du composé potentiellement actif par comparaison de l'intensité d'anxiété de ladite souris avant et après administration du susdit composé potentiellement actif. L'intensité d'anxiété d'une souris est déterminée en effectuant au moins un test comportemental, de préférence deux tests comportementaux, plus particulièrement trois tests comportementaux choisi parmi le test du champ ouvert, le test du labyrinthe en croix surélevée et le test de l'alimentation supprimée par la nouveauté. Dans un mode de réalisation avantageux selon l'invention, l'intensité d'anxiété d'une souris est déterminée en effectuant au moins un test comportemental et en mesurant la 5 concentration extracellulaire de sérotonine. Par composé potentiellement actif , on désigne toute composé susceptible d'avoir une activité anxiolytique. Les composés potentiellement actifs sont en particulier des molécules appartenant à la famille des benzodiazépines. 10 L'administration du composé potentiellement actif est effectuée en particulier par voie orale, par voie systémique (IV), u par voie intra-péritonéale (i.p.). De manière avantageuse, les composés potentiellement actifs sont administrés sous la forme d'une solution pour la voie systémique et intra-péritonéale, et sous forme solide, notamment sous forme de poudre, ou sous la forme d'une solution pour la voie orale. 15 En particulier, les composés potentiellement actifs sont administrés à des doses allant de 0,01 mg/kg à 300 mg/kg, notamment allant de 0,01 mg/kg à 30 mg/kg, notamment allant de 0,5 mg/kg à 10 mg/kg. L'efficacité du composé potentiellement actif est évaluée par comparaison de l'intensité d'anxiété de la souris avant administration et après administration (souris traitée) 20 du composé potentiellement actif. Le composé potentiellement actif est considéré comme utile dans le traitement de pathologies liées et /ou associées à l'anxiété lorsque l'intensité d'anxiété de la souris après traitement est diminuée de manière significative par rapport à son niveau d'anxiété avant traitement. 25 Dans un mode de réalisation avantageux, l'efficacité du composé potentiellement actif est évaluée par comparaison de l'intensité d'anxiété de ladite souris traitée avec le composé potentiellement actif avec l'intensité d'anxiété d'une autre souris non traitée ou ayant reçu un traitement placebo, ladite souris étant de génotype, phénotype et fond génétique stable identiques à la souris traitée. 30 Par traitement placebo , on désigne en particulier une solution qui est identique à la solution tampon dans laquelle est solubilisé le composé potentiellement actif. Il est particulièrement avantageux de comparer les intensités d'anxiété des souris exprimées en pourcentage de l'intensité d'anxiété de souris contrôle exprimant les récepteurs 5HTIA et 5HT1B (de génotype 5HT1A (+1+) 5HT1B (+/+)). Dans un mode de réalisation préféré, chacun des deux cas, souris traitée et souris non traitée , est représenté par un groupe constitué d'au moins 3 souris, notamment au moins 6 souris et de préférence au moins 9 souris, afin d'obtenir des résultats significatifs. Les moyennes obtenues dans chaque groupe de souris sont comparées entre elles. Selon un mode de réalisation avantageux, la présente invention a pour objet une méthode telle que définie ci-dessus, dans laquelle l'intensité d'anxiété de ladite souris traitée est comparée avec l'intensité d'anxiété de souris non traitées avec le susdit composé, exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris traitée, et / ou avec l'intensité d'anxiété de souris traitées avec ledit composé potentiellement actif et exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris traitée. Par l'expression exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HTIB de la sérotonine , on désigne des récepteurs 5HTIA et 5HTIB qui sont fonctionnels. Il est particulièrement avantageux de comparer les intensités d'anxiété des souris exprimées en pourcentage de l'intensité d'anxiété de souris contrôle exprimant les récepteurs 5HTIA et 5HT1B. Le composé potentiellement actif est considéré comme utile dans le traitement de pathologies liées et /ou associées à l'anxiété lorsque l'intensité d'anxiété de la souris après traitement est inférieure à l'intensité d'anxiété des souris contrôles non traitées et / ou traitées avec le susdit composé qui expriment les récepteurs 5HT1A et 5HT1B et sont de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris traitée, ou l'intensité d'anxiété de la souris après traitement est inférieure à 75%, notamment inférieure à 50 %, notamment inférieure à 30 %, notamment inférieur à 10% de l'écart entre l'intensité d'anxiété de la souris avant traitement et l'intensité d'anxiété d'une souris contrôle non traitées et / ou traitées avec le susdit composé, qui expriment les récepteurs 5HTIA et 5HTIB et sont de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris traitée. L'invention a particulièrement pour objet un ensemble de souris comprenant : - au moins une souris caractérisée par un phénotype anxieux, et notamment hyper anxieux, invalidée pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HTIB de la sérotonine et de fond génétique stable, et - au moins une souris exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris caractérisée par un phénotype anxieux, et notamment hyper anxieux et, ledit ensemble comprenant notamment les souris de génotype suivant : - doublement homozygotes 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-), et / ou -doublement hétérozygotes 5HT1A (-/+) / 5HT1B (-/+), et / ou -hétérozygotes pour un récepteur et homozygotes pour l'autre : 5HT1A(-/-) / 5HT1B(-/+) ou 5HT1A (-/+) / 5HT1B (-/-), et - doublement homozygotes 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+). La souris exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris caractérisée par un phénotype anxieux, et notamment hyper anxieux, sont particulièrement utiles comme souris contrôle pour établir l'intensité d'anxiété de base correspondant à des souris de phénotype non anxieux. En effet, les souris de génotype 5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+) selon l'invention ont un patrimoine génétique identique aux souris de phénotype anxieux et notamment hyper anxieux, à l'exception de : - l'invalidation des gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B sur les deux allèles pour les souris doublement homozygotes 5FIT1A (-/-) / 5HT1B (-/-), - l'invalidation des gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B sur un seul des deux allèles pour les souris doublement hétérozygotes 5HT1A (-1+) / 5HT1B (-/+), et - l'invalidation des gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B sur un seul allèle pour un des récepteurs, et sur les deux allèles pour l'autre récepteur, pour les souris hétérozygotes pour un récepteur et homozygotes pour l'autre (5HT1A(-/-) / 5HT1B(-/+) ou 5HT1A (-/+) / 5HT1B (-/-)). Ainsi, lorsque les souris dudit ensemble selon l'invention sont élevées dans des conditions d'élevage identiques, la différence entre l'intensité d'anxiété des souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B et celle des souris contrôle provient exclusivement de l'invalidation des deux gènes. Le rapport de l'intensité d'anxiété de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B sur l'intensité d'anxiété de souris contrôle ne dépend pas d'autres facteurs, tels que des facteurs environnementaux ou de fond génétique, et ce rapport est stable dans le temps. L'utilisation de cet ensemble pour le criblage de composés potentiellement actifs dans le traitement de pathologies liées et /ou associées à l'anxiété permet d'obtenir des résultats fiables et reproductibles. L'invention a également pour objet une souris caractérisée par un phénotype anxieux, et notamment par un phénotype hyper anxieux, ladite souris étant invalidée pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et étant de fond génétique stable. La présente invention a particulièrement pour objet une souris telle que définie ci-dessus, ladite souris étant invalidée pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un seul des deux allèles correspondant au gène de l'un des récepteurs et sur au moins un des deux allèles correspondant au gène de l'autre récepteur, ladite souris étant notamment choisie parmi les souris de génotype 5HT1A (-1+) / 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/+) ou 5HT1A (-/+) / 5HT1B (-/-). La présente invention a également pour objet une souris telle que définie ci-dessus, ladite souris étant invalidée pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur les deux allèles correspondant à chaque gène, ladite souris étant de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-). La présente invention a pour objet une souris telle que définie ci-dessus, caractérisée par un fond génétique stable choisi parmi les fonds génétiques suivants : C57BL/6 (en particulier C57BL6/J, C57BL/6NCrl), 129/Sv (en particulier 129S2/SvPasCrl, 12956/SvEvTac), BALB/c (en particulier BALB/cAnNCrl, BALB/cByJ), CD1, C3H (en particulier C3H/HeNCr1, C3H/HeOuJlco), DBA/2 (en particulier DBA/2J, DBAl2NCr1), FVB, SJL. Selon un mode de réalisation avantageux, la présente invention a pour objet un 25 procédé de préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique stable, comprenant : une étape de croisement d'une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A avec une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F1, 30 - une étape de croisement desdites souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération F l entre elles, pour obtenir des souris de génération F2, une étape de génotypage des souris de génération F2 pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), une étape de dérivation desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 obtenues à l'étape précédente sur un fond génétique stable, par - une étape de croisement desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HTIB (-/-) de la génération F2 avec des souris dudit fond génétique stable exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HTIB (-/+) de génération F3, - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération F3 avec des souris dudit fond génétique stable exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris de génération F4, - une étape de génotypage des souris de génération F4 pour sélectionner des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HTIB (-/+), - les deux étapes précédentes de croisement et de génotypage étant répétées n fois, n étant supérieur à 9, particulièrement supérieur à 11 et plus particulièrement supérieur à 14, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération Fn+3, et - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HTIB (-/+) de génération Fn+3 entre elles, pour obtenir des souris de génération Fn+4, une étape de génotypage des souris de génération Fn+4 pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HTIB (-/-), des souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HTIB (-/+), 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/+), 5HT 1 A (-/+) 5HT1B (-/-). Lors de l'étape de croisement d'une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HTlA avec une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, le choix de la souris mâle et femelle n'a aucune importance. Au cours de la dérivation, la souris de fond génétique stable utilisée pour les croisements en retour est une souris mâle ou femelle et il est possible d'alterner le sexe de ladite souris au cours des croisements. Il est avantageux d'effectuer le dernier croisement avec un mâle de fond génétique C57BL/6 et d'utiliser les animaux mâles issus de ce croisement pour créer l'élevage. Cela permet d'assurer la transmission du chromosome Y du fond génétique stable L'étape de génotypage consiste à déterminer le génotype d'une souris pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B. Le génotypage fait partie des techniques classiquement utilisées en biologie moléculaire et peut notamment être effectué par : PCR en utilisant des couples d'amorces qui permettent d'amplifier les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, puis séquençage des produits d'amplification et comparaison avec les séquences des gènes non invalidés et invalidées, PCR en utilisant des couples d'amorces qui permettent d'amplifier au moins une partie 5 des gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, mais qui donnent des produits d'amplification de taille différente selon qu'il s'agit de gènes non invalidés ou invalidés. Les souris de génération Fn+4 sont des souris de fond génétique stable. Selon un mode de réalisation avantageux, l'étape de génotypage des souris de génération Fn+4 permet également de sélectionner les souris homozygotes 5HT1A (+/+) 10 5HTIB (+/+) qui peuvent être utilisées comme souris contrôle dans les tests pour la détermination de l'intensité d'anxiété des souris. L'invention a particulièrement pour objet un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HTIB sont de fonds génétiques différents, et la souris 15 homozygote 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) obtenue en génération F2 est dérivée sur un fond génétique identique au fond génétique de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A ou à celui de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B. Ce mode de réalisation préféré selon l'invention est représenté par le cas II dans le 20 schéma ci-dessous et correspond au procédé d'obtention de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HTIB décrit dans l'exemple 1. Deux fonds génétiques sont dits identiques s'il s'agit de deux fonds génétiques stables identiques, ou de deux fonds génétiques mixtes à dominante identiques, ou d'un fond génétique stable identique et à dominante d'un fond génétique mixte. 25 Deux fonds génétiques sont dits différents s'il s'agit de deux fonds génétiques stables différents, ou de deux fonds génétiques à dominante différentes, ou d'un fond génétique stable différent de la dominante d'un fond génétique mixte. Le schéma de la figure 9 indique les quatre configurations possibles de dérivation selon l'invention. 30 L'invention a également pour objet un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HTIB sont de fond génétique identique, et la souris homozygote 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) obtenue en génération F2 est dérivée sur un fond génétique stable différent dudit fond génétique. Ce mode de réalisation est représenté par le cas I dans le schéma ci-dessus. L'invention a pour objet un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sont de fonds génétiques différents, et la souris homozygote 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) obtenue en génération F2 est dérivée sur un fond génétique différent du fond génétique de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et de celui de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B. Ce mode de réalisation est représenté par le cas III dans le schéma ci-dessus. L'invention a pour objet un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sont de fonds génétiques identiques, et la souris homozygote 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) obtenue en génération F2 est dérivée sur un fond génétique identique au susdit fond génétique. Ce mode de réalisation est représenté par le cas IV dans le schéma ci-dessus. L'invention a notamment pour objet un procédé de préparation tel que défini ci-dessus, dans lequel le fond génétique stable est choisi parmi les fonds génétiques suivants : C57BL/6 (en particulier C57BL6/J, C57BL/6NCrl), 129/Sv (en particulier 12952/SvPasCrl, 129S6/SvEvTac), BALB/c (en particulier BALB/cAnNCrl, BALB/cByJ), CD1, C3H (en particulier C3H/HeNCr1, C3H/HeOuJlco), DBA/2 (en particulier DBA/2J, DBA/2NCrl), FVB, SJL. L'invention a particulièrement pour objet un procédé de préparation tel que défini ci-dessus, dans lequel le fond génétique de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B est choisi parmi les fonds génétiques suivants : Swiss-Webster, C57BL/6 (en particulier C57BL6/J, C57BL/6NCr1), 129/Sv (en particulier 129S2/SvPasCrl, 129S6/SvEvTac), BALB/c (en particulier BALB/cAnNCrl, BALB/cByJ), CD1, C3H (en particulier C3H/HeNCr1, C3H/HeOuJlco), DBA/2 (en particulier DBA/2J, DBA/2NCrl), FVB, SJL. Le fond génétique de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B tel que défini ci-dessus est soit un fond génétique stable, soit un fond génétique mixte. L'invention a également pour objet un procédé de préparation tel que défini ci-dessus, dans lequel les souris de génotype 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/+) ou 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/-) sont identifiées par PCR, notamment en utilisant des amorces permettant d'amplifier au moins un partie des gènes codant pour les récepteurs 5HT1A ou 5HT1B. La PCR est réalisée sur de l'ADN génomique de la souris à tester ou sur de l'ADNc obtenu par RT-PCR à partir de l'ARNm de ladite souris. L'ADN génomique ou l'ARNm sont préparés selon les protocoles classiques de biologie moléculaires, notamment à partir d'un échantillon de sang ou de tissu de ladite souris. Deux couples d'amorces, l'un correspondant au gène codant pour le récepteur 5HT1A et l'autre au récepteur 5HT1B, peuvent être suffisants pour identifier les souris de génotype ci-dessus, si chaque couple d'amorce permet d'obtenir par PCR un produit amplifié de taille différente selon que le gène est invalidé ou non invalidé. Si les produits d'amplification correspondant aux deux gènes, invalidés ou non invalidés, sont de taille différents, il est possible de réaliser le génotypage d'une souris donné en une seule réaction de PCR en mettant les deux couples d'amorces en même temps. De manière avantageuse, plus de deux couples d'amorces sont nécessaires pour identifier le génotype de la souris. Par exemple, chaque couple d'amorces permet d'obtenir un produit amplifié correspondant à un gène invalidé, mais ne permet aucune amplification du gène non invalidé, ou vice versa. De manière avantageuse, au moins deux couples d'amorces sont utilisés pour identifier 20 les souris de génotype 5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+). Dans un mode de réalisation préféré, l'invention a pour objet un procédé tel que défini ci-dessus de préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique stable C57B1/6, comprenant : - une étape de croisement d'une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 25 5HT1A de fond génétique stable C57B1/6 avec une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B de fond génétique 129/sv, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F1, une étape de croisement desdites souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération Fl entre elles, pour obtenir des souris de génération F2, 30 une étape de génotypage des souris de génération F2 pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), une étape de dérivation desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 obtenues à l'étape précédente sur un fond génétique stable C57B1/6, par -une étape de croisement desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 avec des souris de fond génétique stable C57B1/6 exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F3, - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération F3 avec des souris de fond génétique stable C57B116 exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris de génération F4, - une étape de génotypage des souris de génération F4 pour sélectionner des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), - les deux étapes précédentes de croisement et de génotypage étant répétées n fois, n étant supérieur à 9, particulièrement supérieur à 11 et plus particulièrementsupérieur à 14, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération Fn+3, et - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération Fn+3 entre elles, pour obtenir des souris de génération Fn+4, une étape de génotypage des souris de génération Fn+4 pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), 5HT 1 A (-/-) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/-), de fond génétique stable C57B1/6. Concernant la préparation des souris simples mutantes 5HT1A (-/-) et des souris simples mutantes 5HT1B (-/-), l'invention a particulièrement pour objet un procédé tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes : - une étape d'introduction dans des souris porteuses, de blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires dans lesquelles a été introduit, notamment par électroporation, un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1A invalidé, pour obtenir des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A, une étape d'introduction dans des souris porteuses, de blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires dans lesquelles a été introduit, notamment par électroporation, un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1B invalidé, pour obtenir des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, et - éventuellement une étape de dérivation desdites souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et / ou desdites souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sur un fond génétique stable. L'expression cellules souches embryonnaires désigne des cellules provenant de la 5 masse cellulaire interne de l'embryon au stade blastocyste. Le fond génétique des cellules souches embryonnaires va déterminer celui des souris naissantes. Les cellules souches embryonnaires utilisées sont de préférence des cellules robustes, c'est-à-dire capables de supporter l'étape d'introduction du vecteur et leur implantation dans 10 le blastocyste. Les cellules souches embryonnaires utilisées pour préparer les souris simples mutantes 5HT1A (-/-) et les souris simples mutantes 5HT1B (-/-) sont notamment choisies parmi les cellules souches 129/Sv. Par le terme blastocyste , on désigne un embryon à un stade de développement 15 embryonnaire précoce au cours duquel coexistent les cellules périphériques à l'origine de du placenta et les cellules de la masse cellulaire interne. Le blastocyste utilisé est notamment choisi parmi les blastocystes d'origine C57BL6. Par le terme souris porteuse , on désigne la souris gestante dans l'utérus de laquelle est implanté le blastocyste. 20 La souris porteuse peut être n'importe quelle souris capable de gestation. Les souris porteuses préférées selon l'invention sont de fond génétique C57BL6. Par vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT 1 A invalidé , on désigne vecteur qui comporte le gène invalidé codant pour le récepteur 5HT1A et les éléments nécessaires à l'expression dudit gène invalidé dans une cellule, en particulier des promoteurs 25 et des éléments de contrôle de l'expression. Le vecteur est introduit dans les cellules embryonnaires notamment par des techniques physiques, telles que l'électroporation, la micro-injection, les canons à particules, ou par des techniques de transfert de gène non viral, par exemple avec des lipides cationiques, des liposomes, des polymères cationiques ou des précipités de phosphate de calcium. 30 La technique d'électroporation permet la transfection de cellules par l'application d'un champ électrique. Un avantage de l'électroporation est que, utilisée avec dans des conditions précises déterminées par l'homme de l'art, l'intégration de l'ADN dans le génome de la cellule transfectée est favorisée. Or, les cellules embryonnaires qui sont sélectionnées pour l'implantation dans le blastocyste sont des cellules qui ont intégré le vecteur au niveau du gène cible par recombinaison homologue. Dans un mode de réalisation préféré, le vecteur est linéarisé avant l'électroporation. La transfection désigne le transfert d'un acide nucléique dans une cellule. Les cellules embryonnaires qui comportent ledit vecteur sont sélectionnées, par exemple par culture dans un milieu de culture contenant un antibiotique, par exemple la néomycine, si le vecteur comporte un gène de résistance au dit antibiotique. Parmi les cellules embryonnaires sélectionnées, un criblage des cellules invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A ou 5HT1B, c'est-à-dire qui ont subi une 10 recombinaison homologue au niveau dudit gène à invalider, est effectué, par exemple par un Southern blot. Les cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A ou 5HT1B sont introduites dans un blastocyste par micro-injection. Concernant la préparation des souris simples mutantes 5HT1A (-/-) et des souris 15 simples mutantes 5HT1B (-/-), l'invention a également pour objet un procédé tel que défini ci- dessus, comprenant les étapes suivantes : une étape de préparation de cellules souches embryonnaires par introduction d'un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1A invalidé et de cellules souches embryonnaires par introduction d'un vecteur comportant un gène codant 20 pour le récepteur 5HT1B invalidé, pour obtenir des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, une étape de préparation de blastocystes par introduction desdites cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A dans les 25 blastocystes pour obtenir des blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A, et une étape de préparation de blastocystes par introduction desdites cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B dans lesdits blastocystes, pour obtenir des blastocystes contenant des cellules souches 30 embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, une étape d'implantation desdits blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A dans des souris porteuses, pour obtenir, à l'issue du développement du blastocyste et de la mise-bas, des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A, et une étape d'implantation desdits blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B dans des souris porteuses, pour obtenir, à l'issue du développement du blastocyste et de la mise-bas, et des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B. Des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HTIA sont des cellules souches embryonnaires qui n'expriment pas le récepteur 5HT1A ou qui expriment un récepteur 5HT1A non fonctionnel. Des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sont des cellules souches embryonnaires qui n'expriment pas le récepteur 5HT1B 10 ou qui expriment un récepteur 5HTlB non fonctionnel. L'invention a pour objet un procédé tel que défini ci-dessus de préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique stable, dans lequel : - les souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et les souris 15 invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sont obtenues par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant : une étape de préparation d'un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1A invalidé et d'un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1B invalidé, par introduction d'une cassette d'expression 20 permettant l'expression d'un marqueur de sélection à la place d'une partie de la région codante dudit récepteur, une étape d'introduction dudit vecteur, de préférence linéarisé, dans des cellules souches embryonnaires de souris, notamment de cellules souches embryonnaires d'origine 129/Sv, par micro-injection, transfert de gène non 25 viral, ou électroporation, pour obtenir des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, une étape d'introduction des cellules souches embryonnaires ci-dessus dans 30 des blastocystes, notamment des blastocystes d'origine C57/BL6, pour obtenir des blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et des blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, une étape d'implantation des susdits blastocystes dans des souris porteuses , pour obtenir, à l'issue du développement des blastocystes et de la mise-bas, des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, éventuellement un étape de dérivation des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A ou invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sur un fond génétique stable, ledit procédé de préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les 10 récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique stable comprenant : une étape de croisement d'une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A obtenue à l'étape précédente avec une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B obtenue à l'étape précédente, pour obtenir des souris 15 hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F1, une étape de croisement desdites souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération Fl entre elles, pour obtenir des souris de génération F2, une étape de génotypage des souris de la génération F2, pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), 20 une étape de dérivation desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 obtenues à l'étape précédente sur un fond génétique stable, par la mise en oeuvre d'un procédé comportant : -une étape de croisement desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 avec des souris dudit fond génétique stable exprimant les 25 récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F3, - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F3 avec des souris dudit fond génétique stable exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris de génération F4, 30 - une étape de génotypage des souris de la génération F4 pour sélectionner des souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+), - les deux étapes précédentes de croisement et de génotypage étant répétées n fois, n étant supérieur à 9, particulièrement supérieur à 11 et plus particulièrement supérieur à 14, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération Fn+3, et - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération Fn+3 entre elles, pour obtenir des souris de génération Fn+4, une étape de génotypage des souris de la génération Fn+4, pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/-). Le vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1A invalidé et le vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1B invalidé sont obtenus par clonage du gène codant pour le récepteur 5HT1A et de celui codant pour le récepteur 5HT1B dans ledit vecteur. Un ADN comprenant les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B est obtenu par PCR à partir de banques d'ADNc ou à partir d'ADN génomique extrait de cellules de souris, ou est obtenu par RT-PCR à partir de l'ARNm extrait de cellules de souris, selon les techniques classiques de biologie moléculaire. Ledit ADN est introduit dans le vecteur au niveau d'une cassette d'expression permettant l'expression dudit ADN. Le gène codant pour le récepteur 5HT1A ou le récepteur 5HT1B est invalidé par l'introduction d'un codon stop dans la séquence du gène, ou par l'introduction d'une séquence d'ADN codant notamment pour un marqueur de sélection dans la séquence du gène, ou par remplacement d'une partie du gène par une séquence d'ADN codant notamment pour un marqueur de sélection. Le marqueur de sélection est notamment choisi parmi les gènes de résistance aux antibiotiques, par exemple la néomycine. Ledit ADN peut également être invalidé avant l'introduction dans le vecteur. L'invention a pour objet une souris de fond génétique stable telle qu'obtenue selon l'un des procédés définis ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle a en commun avec sa descendance sur 2 générations successives au moins 96 %, de préférence au moins 98%, de préférence au moins 99% de son génome. L'invention a également pour objet un descendant d'une souris telle que définie ci-dessus, obtenu par croisement de ladite souris avec une souris de phénotype et / ou génotype identique ou différent de la susdite souris L'invention a également pour objet une lignée cellulaire ou culture de cellules primaires provenant d'une souris telle que définie ci-dessus ou de son descendant tel que défini ci-dessus. Par lignée cellulaire , on désigne une population de cellules pouvant être 5 multipliées à l'infini. Une lignée cellulaire est obtenue par immortalisation selon les techniques classiques de biologie cellulaire. Par cellules primaires , on désigne des cellules obtenues directement à partir de tissus d'un organisme. Les cellules primaires sont obtenues par mise en culture dudit tissu, dissociation des cellules du tissu mécaniquement ou par action enzymatique, puis mise en 10 culture des cellules. L'invention a notamment pour objet l'utilisation d'une souris, d'une lignée cellulaire ou culture de cellules primaires, telles que définies ci-dessus pour le criblage de composés utiles dans la prévention ou le traitement de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété. Les modèles animaux d'une pathologie donnée obtenus par l'invalidation de gènes 15 spécifiquement impliqués dans ladite pathologie sont des plus intéressants, car il est possible par la suite, après dérivation de la lignée transgénique présentant le phénotype de ladite pathologie sur un fond génétique stable, d'obtenir une lignée de cet animal homogène et stable dans le temps. En d'autres termes, les descendants de cette lignée sur plusieurs générations successives développent ladite pathologie et les résultats des tests de médicament 20 sur ces lignées sont plus reproductifs et plus fiables qu'avec les autres modèles animaux non transgéniques ou transgéniques, mais non stabilisés sur un fond génétique stable. Comme illustré ci-après par les exemples, l'invention permet de fournir un modèle animal répondant aux anxiolytiques classiques, comme le diazépam, contrairement à certaines souches de souris de génotype 5HT1A (-/-). 25 De plus, l'invention permet de fournir un modèle animal ne répondant pas à des tests dits de dépression, comme le test de la nage forcée (Porsolt et al., 1977), contrairement aux souris de génotype 5-HT1A (-/-) qui présentent un phénotype anxieux mais répondent aux traitements antidépresseurs dans ce test. Légende des figures Dans les figures, le symbole *** signifie p Figures 1A, 1B et 1C Comportement phénotypique de souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) par rapport à des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+1+) Les résultats obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) sont représentés en noir et ceux obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (+1+) / 5HT1B (+/+) en blanc. Figure lA : test de l'open-field. Le nombre d'entrées des souris dans la zone centrale est indiqué en A, le temps passé dans la zone centrale (en secondes) est indiqué en B et l'activité locomotrice totale (en cm) est indiquée en C. Figure 1B : test du labyrinthe en croix surélevée. Le nombre d'entrées des souris dans les bras 20 ouverts est indiqué en D, le temps passé dans les bras ouverts (en secondes) en E et le temps passé dans les bras fermés (en secondes) en F. Figure 1C: test d'alimentation supprimée par la nouveauté. La latence (en secondes) est indiquée en G et la consommation de nourriture en grammes est indiquée en H. 25 Figure 2 Effets d'un traitement aigu de paroxetine (8 mg/kg) sur le temps d'immobilité chez des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) et des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) Le temps d'immobilité est indiqué en secondes en ordonnées. Les résultats obtenus avec des 30 souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) sont représentés en noir et ceux obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) en blanc. Le temps d'immobilité des souris après administration de paroxetine (8 mg/kg), injectés en intra-péritonéal (i.p.), est comparé au temps d'immobilité des souris contrôles (contrôle) qui ont reçu une injection de solution tampon. Figures 3A, 3B et 3C Effets comportementaux d'un traitement aigu de paroxetine (4 mg/kg) ou de diazepam chez des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) et des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) dans le test du labyrinthe en croix surélevée Les résultats obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) sont représentés en noir et ceux obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) en blanc. Les résultats obtenus avec des souris après traitement aigu de paroxetine (4 mg/kg) en intrapéritonéal (i.p.) et ceux obtenus avec des souris après traitement aigu de diazepam (1 mg/kg) en intra-péritonéal (i.p.) sont comparés avec ceux obtenus avec des souris contrôles (contrôle) qui ont reçu une injection de solution tampon. Figure 3A : le nombre d'entrées dans les bras ouverts est indiqué en ordonnées. Figure 3B : le temps passé dans les bras ouverts (secondes) est indiqué en ordonnées. Figure 3C : le temps passé dans les bras fermés (secondes) indiqué en ordonnées. Figures 4A, 4B, 4C et 4D Effets comportementaux d'un traitement chronique de paroxetine chez des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) et des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+1+) dans différents tests d'anxiété et de dépression Les résultats obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) sont représentés en noir et ceux obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) en blanc. Les résultats obtenus avec des souris après un traitement chronique de paroxetine (16 mg/kg/ jour pendant 28 jours) (chronic Prx) sont comparés avec ceux obtenus avec des souris contrôles (contrôle) qui ont reçu une injection de solution tampon. Figure 4A : test d'alimentation supprimée par la nouveauté. La latence (en secondes) est indiquée en A et la consommation de nourriture en grammes est indiquée en B. Figure 4B : test du labyrinthe en croix surélevée. Le nombre d'entrées des souris dans les bras ouverts est indiqué en A, le temps passé dans les bras ouverts (en secondes) en B et le temps passé dans les bras fermés (en secondes) en C. Figure 4C : test de l'open-field. Le nombre d'entrées des souris dans la zone centrale est indiqué en A, le temps passé dans la zone centrale (en secondes) est indiqué en B et l'activité locomotrice totale (en cm) est indiquée en C. Figure 4D : test de la nage forcée (ou test de Porsol). Le temps d'immobilité (en secondes) est 5 indiqué en ordonnées. Figures 5A, 5B, 5C et 5D Effets d'une administration unique de paroxetine (4 mg/kg) sur les variations extracellulaires de sérotonine dans le cortex frontal et le noyau du raphé dorsal chez les 10 souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) et les souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+1+) Les figures 5A et 5B concernent les effets dans le cortex frontal et les figures 5C et 5D dans le noyau du raphé dorsal. Les souris 5HT1A (+1+) 5HT1B (+/+) et les souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) ont été traitées avec soit la solution tampon (contrôle) (respectivement O et •), 15 soit avec 4 mg/kg de paroxetine (respectivement ^ et ^) par voie intra-péritonéale (i.p.). Les souris contrôles ont reçu une injection de solution tampon. Figure 5A : Concentrations extracellulaires de sérotonine (5-HT) en femtomoles / 200 dans le cortex frontal en fonction du temps (en minutes). Le temps 0 correspond à l'injection de paroxétine (Prx) ou de la solution tampon (contrôle). 20 Figure 5B : Aire Sous la Courbe (ASC), 0 û 180 minutes en pourcentage des valeurs basales dans le cortex frontal. Les résultats obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) sont représentés en noir et ceux obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) en blanc. Figure 5C : Concentrations extracellulaires de sérotonine (5-HT) en femtomoles / 200 dans le 25 noyau du raphé dorsal en fonction du temps (en minutes). Le temps 0 correspond à l'injection de paroxétine (Prx) chez les souris (5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+), ^ et 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), ^) ou de la solution tampon (contrôle) (5HT1A (+1+) 5HT1B (+/+), 0, 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), •). Figure 5D : Aire Sous la Courbe (ASC), 0 û 180 minutes en pourcentage des valeurs basales 30 dans le noyau du raphé dorsal. Les résultats obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) sont représentés en noir et ceux obtenus avec des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) en blanc. Figure 6 : Comportement phénotypique de souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) par rapport à des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (+/+) et des souris de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) Test d'alimentation supprimée par la nouveauté : la latence (en secondes) est indiquée en ordonnées. Les résultats obtenus avec les souris doubles mutantes de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) sont indiqués en noir (1A/1B -/-), ceux obtenus avec les souris simples mutantes de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (+/+) sont indiqués en gris (lA -/-) et ceux obtenus avec les souris contrôles de génotype 5HT1A (+1+) / 5HT1B (+/+) en blanc (WT). Figure 7A et 7B Comportement phénotypique de souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) par rapport à des souris de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (+/+) et des souris de génotype 5HT1A (+1+) / 5HT1B (+/+) Test du champ ouvert : les résultats obtenus avec les souris doubles mutantes de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) sont indiqués en noir (1A/1B -/-), ceux obtenus avec les souris simples mutantes de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (+1+) sont indiqués en gris (lA -/-) et ceux obtenus avec les souris contrôles de génotype 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) en blanc (WT). Figure 7A : Le nombre d'entrées dans la zone centrale est indiqué en ordonnées. Figure 7B : Le temps passé dans la zone centrale (en secondes) est indiqué en ordonnées. Figure 8 Préparation de souris invalidées pour les deux gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine Les souris simples mutantes 5HT1A (-/-) de fond génétique stable C57BL/6 sont croisés avec des souris simples mutantes 5HT1B (-/-) de fond génétique 129/Sv pour obtenir des souris hétérozygotes de génotype 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération F1. Les souris de génération F 1 sont croisées entre elles pour obtenir des souris de génération F2 de fond génétique mixte C57BL/6 x 129/Sv, parmi lesquelles les souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) sont sélectionnées. Les souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) sont dérivées sur n+l générations avec des souris de génotype 5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+) de fond génétique stable C57BL/6, pour obtenir des souris hétérozygotes de génotype 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération Fn+3. Ces souris de génération Fn+3 sont croisées entre elles pour obtenir des souris de génération Fn+4 de fond génétique stable C57BL/6 et le génotype de ces souris est identifié par génotypage. Figure 9 Schéma représentant les différentes configurations possibles de croisement pour obtenir des souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B sur un fond génétique stable. Les numéros 1, 2 et 3 correspondent à des souris de fonds génétiques différents. La ligne supérieure indique le fond génétique des deux parents utilisés pour obtenir les souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HTlB (-1+) de la génération F1. Le fond génétique des deux parents peut être stable ou mixte. Dans le cas où il s'agit d'un fond génétique mixte, la dominante du fond génétique est indiquée. La ligne du milieu correspond aux souris obtenues à la génération F2. La ligne inférieure indique le fond génétique stable sur lequel les souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) sont dérivées. EXEMPLES Les expériences réalisées ont permis d'observer les effets d'une invalidation des gènes codant pour les récepteurs lA et 1B de la sérotonine et les effets d'un traitement aigu et chronique d'un antidépresseur, ainsi que d'un traitement aigu par un anxiolytique sur : -le comportement des animaux dans différents tests psychopharmacologiques, - les variations des concentrations extracellulaires en sérotonine dans les régions d'intérêt (noyau du raphé dorsal, cortex frontal) par la technique de microdialyse intracérébrale in vivo chez la souris éveillée. EXEMPLE 1: Préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine Matériel et Méthodes 1. Souris Les souris simples mutantes 5HT1A (-/-), notées également KO 5-HTIA -/- , ont été obtenues par le laboratoire de M. Toth (New York). Ces souris simples mutantes 5HT1A (-/-) ont été obtenues selon le protocole décrit dans l'article de Parks et al., 1998, puis par dérivation sur un fond génétique stable C57BL/6. Brièvement, un vecteur comportant le gène codant pour le récepteur 5HT1A invalidé et un gène de résistance à la néomycine a été introduit dans des cellules embryonnaires par électroporation. La séquence SEQ ID NO : 5 représente la séquence du gène de la néomycine (nucléotides 1 à 795) fusionné aux nucléotides 124-1266 de la séquence SEQ ID NO : 1 du gène codant pour le récepteur 5HT1A (nucléotides 796 à 1938). Les cellules embryonnaires contenant le vecteur ont été sélectionnées sur un milieu de culture comportant la néomycine et l'intégration du vecteur par recombinaison homologue a été vérifiée par Western Blot. Les cellules embryonnaires dont le gène codant pour le récepteur 5HT1A est invalidé ont été injectées dans des blastocystes. Les souris chimères obtenues ont été croisées avec des souris de fond Swiss-Webster pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+). Ces souris hétérozygotes ont été croisées entre elles et les souris homozygotes 5HT1A (-/-) issues de ce croisement ont été sélectionnées,puis dérivées sur un fond génétique stable C57BL/6. Les souris simples mutantes 5HTIB (-/-), notées également KO 5-HT1B -/- , ont été obtenues par le laboratoire de M. Hen (New York). Ces souris simples mutantes 5HTIB (-/-) ont été obtenues selon le protocole décrit dans l'article de Saudou et al., 1998. Brièvement, un vecteur comportant le gène codant pour le récepteur 5HT1B invalidé et un gène de résistance à la néomycine a été introduit dans des cellules embryonnaires par électroporation. Les cellules embryonnaires contenant le vecteur ont été sélectionnées sur un milieu de culture comportant la néomycine et l'intégration du vecteur par recombinaison homologue a été vérifiée par Western Blot. Les cellules embryonnaires dont le gène codant pour le récepteur 5HTIB est invalidé ont été injectées dans des blastocystes de souris de fond génétique C57BL/6. Les souris chimères obtenues ont été croisées avec des souris de fond génétique stable 129/Sv pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) sur un fond génétique mixte C57BL/6 x 129/Sv. Ces souris hétérozygotes ont été croisées entre elles et les souris homozygotes 5HT1A (-/-) issues de ce croisement ont été sélectionnées. Les souris de fond génétique stable C57BL/6 utilisées pour la dérivation ont été 15 obtenues chez Charles River. 2. Génotypage Afin d'identifier le génotype des souris 5HT1A (-/-), des souris 5HTIB (-/-), et des souris 5HT1A (-/-) 5HTIB (-/-), 5HT1A (+/+) 5HTIB (+/+), 5HT1A (-/+) 5HTIB (-/+), 20 5HT1A (-/-) 5HTIB (-/+), 5HT1A (-/+) 5HTIB (-/-), la technique de réaction en chaîne par polymérase (PCR) est utilisée. Les amorces permettant l'amplification des gènes cibles ont été commandées chez la société Eurogentec (Angers, France) et figurent dans le tableau 1. Les amorces 1 AJPEGDA et 1AJPEGFA ont été conçues par les Inventeurs et les autres amorces (1BJPEGDA, 25 1BJPEGFA et HenNeo) ont été choisies parmi les données de la littérature (Saudou et al., 1994 ; Knobelman et al., 2001). Tableau 1 N Nom Séquence (5'-3') Taille PM Tm (g/mol) ( C) 1 1AJPEGDA AACGTGACCTTCAGCTACC 19 5810 60 2 1AJPEGFA GTCCTTGCTGATGGTGCAC 19 5732 58 3 1BJPEGDA CCCATCAGCACCATGTACAC 20 5990 62 4 1BJPEGFA GACTTGGTTCACGTACACAG 20 6117 60 5 HenNEO CTTCTATCGCCTTCTTGACG 20 6009 60 La détection des gènes codant pour les récepteurs 5HTIA et 5HT1B est réalisée sur des gels différents. De même, le caractère homozygote ou hétérozygote des souris pour les gènes codant pour ces récepteurs est déterminé de façon indépendante. Cette technique, plus longue, limite cependant toute erreur d'interprétation des profils obtenus. La PCR est réalisée selon les cycles figurant dans le tableau 2. Tableau 2 Phase Température Durée (secondes) Dénaturation Initiale + 98 C 120 Dénaturation + 94 C 90 Hybridation + 58 C 120 Elongation + 72 C 120 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Nombre de cycles : 35 La caractérisation du gène codant pour le récepteur 5-HT1A est réalisée à l'aide des amorces 1 et 2. Aucune bande n'est obtenue pour un génotype 5HT1A (-/-) et une bande spécifique de même taille (489 paires de bases) est obtenue pour les génotypes 5HT1A (+/+) et 5HT1A (+/-). La présence du gène invalidé pour le récepteur 5HT1A est vérifiée à l'aide des amorces 1 et 5. Une bande de même taille (484 paires de bases) est obtenue pour les génotypes 5HT1A (-/-) et 5HT1A (+/-), et aucune bande n'est obtenue pour le génotype 5HT1A (+/+). En résumé, les profils de PCR obtenus selon le génotype du récepteur 5HT1A sont récapitulés dans le tableau 3 ci-après (-indique l'absence de bande et + la présence d'une 20 bande spécifique). Tableau 3 amorces 1 et 2 amorces 1 et 5 5HT 1 A (-/-) - + 5HT1A (-/+) + + 5HT1A (+/+) + - La caractérisation du gène codant pour le récepteur 5HT1B est réalisée à l'aide des amorces 3 et 4. Aucune bande n'est obtenue pour un génotype 5HT1B (-/-) et une bande spécifique de même taille (560 paires de bases) est obtenue pour les génotypes 5HT1B (+/+) et 5HT1B (+/-). La présence du gène invalidé pour le récepteur 5-HT1B est vérifiée à l'aide des amorces 3 et 5. Une bande de même taille est obtenue pour les génotypes 5HT1B (-/-) et 5HT 1B (+/-), et aucune bande n'est obtenue pour le génotype 5HT1B (+/+). En résumé, les profils de PCR obtenus selon le génotype du récepteur 5HT1B sont récapitulés dans le tableau 4 ci-après (-indique l'absence de bande et + la présence d'une bande spécifique). Tableau 4 amorces 3 et 4 amorces 3 et 5 5HT1B (-/-) - + 5HT 1 B(-/+) + + 5HT 1 B (+/+) + - Résultats La préparation des souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A 15 et 5HT1B et de leurs congénères non invalidées a été réalisée selon le processus suivant (voir schéma de la figure 8) : 6 couples contenant une souris (mâle ou femelle) KO 5-HTIA -/- de fond génétique stable C57BL/6j et une souris KO 5-HTIB -/- (du sexe opposé) de fond génétique 129Sv ont été créés (Fo). 20 Les souris issues de ces couples (génération FI) sont hétérozygotes pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A (HZ 5-HTIA +/-) et pour le récepteur 5HT1B (HZ 5-HT1B +/-) et sont notées HZ 5-HTIAnB +/-. 12 couples comprenant une souris mâle et une souris femelle HZ 5-HTIA/1B +1- (FI) ont été créés. La probabilité d'obtenir une souris homozygote de génotype 5HT1A (-/-) 25 5HT1B (-/-), notée également KO 5-HTINIB -/-, à partir de ces couples est de 1/16. Les souris double mutantes KO 5-HTIAvIB -/- sont sélectionnées par génotypage. Etant donné le très faible nombre de souris homozygotes KO 5-HTifvlB -/-obtenues (2 animaux, un mâle et une femelle, en 6 mois), un couple de souris KO 5-HTIA'IB -/- a été réalisé afin d'augmenter le nombre de souris homozygotes. Afin d'obtenir par dérivation des souris doubles mutantes KO 5-HTIfv1B -/- sur un fond génétique stable, les souris homozygotes KO 5-HTIfv1B -/- issues du couple ci-dessus ont 5 été croisées avec des souris (Wild-Type ou WT) de génotype 5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+), de fond génétique stable C57BL/6j. Les animaux obtenus en F3 sont donc des souris hétérozygotes HZ 5-HTIA'IB +/-. Les souris hétérozygotes HZ 5-HTIA'IB +/-obtenues en F3 ont été croisées avec des souris non mutantes WT de fond génétique stable C57BL/6j pour obtenir des souris de 10 génération F4. De ce croisement, seules les souris HZ 5-HTIA'IB +/- ont été sélectionnées par génotypage et conservées. Les souris HZ 5-HTIA'IB +/- de génération F4 ont ensuite été croisées avec les souris non mutantes WT de fond génétique stable C57BL/6j, et les souris HZ 5-HTIA/1B +/- de génération F5 obtenues ont été sélectionnées par génotypage et conservées. Cette opération 15 (croisement et sélection des souris) a été répétée 15 fois, afin d'obtenir des souris 5-HTIA11B +/- de fond génétique stable C57BL/6j de génération F20. Les souris hétérozygotes mutantes HZ 5-HTIA/1B +/- de fond génétique C57BL/6j ont été croisées entre elles pour obtenir en génération F21 des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) et 5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+), des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B 20 (-/+), 5HT 1 A(-/-) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/-). Les probabilités d'obtenir les différents génotypes à l'issue de chaque croisement sont les suivantes : - génération F1 : 100% de souris hétérozygotes 5HT1A (+/-) 5HT1B (+/-) [C57B1/6x129Sv] 25 - génération F2: les probabilités d'obtenir de souris [C57B1/6x129Sv] de chacun des différents génotypes sont les suivantes : 5-HT1A 5-HT1B Probabilité théorique +/+ +/+ 1/16 +/+ -/- 1/16 +/+ +/- 2/16 +/- +/+ 2/16 +/- -/2/165 +/- +/- 4/16 -/- +/+ 1/16 -/- -/- 1/16 -/- +/- 2/16 - F3 : 100 % de souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) [C57B1/6j x129Sv] - F4 à F20 : les probabilités d'obtenir de souris de chacun des différents génotypes sont les suivantes : 5-HT1A 5-HT1B Probabilité théorique +/+ +/+ 1/4 +/+ +/- 1 /4 +1- +/+ 1 /4 +/- +/- 1 /4 - F21 : à l'issue du croisement de souris 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de fond génétique stable C57B1/6 entre elles, les probabilités d'obtenir de souris de fond génétique stable C57B1/6j de chacun des différents génotypes sont les suivantes : 5-HT1A 5-HT1B Probabilité théorique +/+ +/+ 1/16 +/+ -/- 1/16 +/+ +/- 2/16 +/-+/+ 2/16 +/- -/- 2/16 +/- +/- 4/16 -/- +/+ 1/16 -/- -/- 1/16 -/- +/- 2/16 10 EXEMPLE 2 : Etude du comportement de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine Tests comportementaux Champ ouvert (Open Field) Le test de champ ouvert ou Open Field est l'un des plus utilisés en psychopharmacologie. Il est réalisé en plaçant l'animal dans une cage de 1600 cm', ouverte pendant 30 minutes. Les mouvements de l'animal sont mesurés par un système de suivi de l'animal par infrarouge (Activity Monitor, Sandown Scientific, United Kingdom) (Rocha et al., 1998). Le test du champ ouvert est aussi un modèle animal utilisé afin de prédire une activité de type anxiolytique. Pour cela, une aire virtuelle représentant un carré de 12,3 cm de coté est définie. En général, les animaux présentent un haut degré d'évitement de l'aire centrale par rapport à la périphérie. Les anxiolytiques, comme les benzodiazépines, augmentent le nombre d'entrées et le temps passé dans cette aire (Prut and Belzung, 2003). Au final, les variables mesurées dans le test du champ ouvert sont l'activité ambulatoire totale, le nombre d'entrées dans l'aire centrale, le temps passé dans le centre de l'arène, les redressements. Labyrinthe en croix surélevée (Elevated plus maze) Ce paradigme est également un test de mesure d'un comportement de type anxieux chez la souris (Malleret et al. 1999). Le labyrinthe est composé de 2 bras ouverts et 2 bras fermés reliés par une plateforme centrale, à 50 cm au dessus du sol et éclairé par une lampe de faible puissance (20 watts). Les souris sont placées individuellement sur la plateforme centrale, face à un bras ouvert et peuvent explorer l'ensemble du labyrinthe pendant 8 minutes. L'activité globale est mesurée par le nombre total d'entrées dans ces 4 bras. L'anxiété est mesurée en comparant le temps passé dans les bras ouverts par rapport au temps passé dans les bras fermés. Le test d'alimentation supprimée par la nouveauté ou Novelty-suppressed feeding Ce test induit une situation de motivations conflictuelles chez l'animal, entre celle dirigée vers la nourriture et la peur de s'aventurer au centre de l'enceinte fortement éclairée. Ce test a montré son aptitude à mettre en évidence des changements dans le comportement des rongeurs comme le rat et la souris, après un traitement anxiolytique (traitement aigu) et antidépresseur (traitement chronique) (Bodnoff et al., 1989; Santarelli et al., 2003). L'animal à jeun depuis 24 heures est placé dans une cage rectangulaire de 2500 cm2 (50x50x20 cm). Au centre de cette cage est disposé un cercle blanc éclairé dans lequel sont déposés 2 granulés de nourriture. L'animal est alors placé dans un coin du dispositif la tête face aux parois, un chronomètre était alors immédiatement démarré. La latence pour mordre manifestement le granulé (croquer dans le granulé en utilisant ses pattes avant) est enregistrée. Les animaux sont testés individuellement pendant une période de 5 minutes. On mesure le temps de latence mis par l'animal pour aller se nourrir. A la suite de ce test, l'animal est replacé dans sa cage et on mesure sa consommation de nourriture pour vérifier que les variations du temps de latence entre des animaux traités et des animaux non traités sont dues à l'activité anxiolytique/antidépresseur des molécules étudiées et non à ses effets sur l'appétence. Test de la nage Forcée (Forced Swim Test) Le test de la nage forcée (Porsolt et al. 1977) est un test prédictif de l'activité des antidépresseurs reconnu et fiable (Petit-Demouliere et al. 2005). Les souris sont placées dans des bocaux (diamètre : 10 cm, profondeur : 30 cm) remplis d'eau (25 C). Le test dure 6 minutes. Pendant les 4 dernières minutes du test, le temps d'immobilité des animaux est comptabilisé. Après une période de nage d'échappement, l'animal s'immobilise et adopte un comportement dit de désespoir. Les souris sous traitement antidépresseur ou certains animaux génétiquement modifiés présentent un temps d'immobilité réduit en comparaison des souris contrôles. Résultats Dans les tests du champ ouvert, le test du labyrinthe en croix surélevée et le test d'alimentation supprimée par la nouveauté, les animaux invalidés pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B présentent de manière significative un évitement des situations aversives, à savoir des aires ouvertes ou suspendues, correspondant à un phénotype hyper anxieux (Figures 1A, 1B et 1C). Le test de la nage forcée est utilisé en contrôle négatif pour vérifier que les souris de phénotype anxieux, et notamment hyper anxieux, ne répondent pas à un traitement anti- dépresseur. Dans le test de la nage forcée (Figure 2), les souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) présentent une activité basale modifiée par rapport aux animaux contrôles, i.e. une diminution de leur temps d'immobilité retrouvé dans d'autres modèles murins d'anxiété (Guilloux et al, 2006 ; Ramboz et al., 1998). Cependant, alors que les souris sauvages 5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+) répondent à un traitement antidépresseur aigu (Paroxetine), les souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) ne répondent pas à ce traitement. Dans le test du labyrinthe en croix surélevée, les animaux 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de phénotype hyper-anxieux ne répondent également pas à un traitement antidépresseur aigu de paroxetine, comme précédemment dans le test de la nage forcée, mais répondent à un 10 traitement anxiolytique (diazépam) (Figure 3A, 3B et 3C). Les antidépresseurs sont de plus en plus utilisés dans le traitement de l'anxiété généralisée. C'est pourquoi les Inventeurs ont testé les effets d'un traitement antidépresseur de paroxetine chronique (16 mg/kg/jour pendant 21 jours) chez ces animaux (Figures 4A, 4B, 4C et 4D). On observe qu'après traitement chronique avec un antidépresseur, les souris 15 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) présentent une diminution de leur phénotype hyper anxieux (dans le test du champ ouvert, le test d'alimentation supprimée par la nouveauté et le test du labyrinthe en croix surélevée). De plus, ces souris ne répondent pas au traitement antidépresseur dans le test de la nage forcée. 20 EXEMPLE 3 : Vérification de la stabilité du fond génétique des souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) Afin de vérifier la stabilité du fond génétique de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, l'intensité d'anxiété desdites souris est évaluée par les tests comportementaux décrits dans l'exemple 2, sur 5 générations successives 25 (obtenues par croisement de deux souris de génotype 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de même génération). Pour chaque génération, l'intensité d'anxiété de souris contrôle de génotype 5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+) est également évaluée. Les rapports entre l'intensité d'anxiété des souris pour chaque génération sur l'intensité d'anxiété de souris contrôles sont comparés. Des rapports du même ordre de 30 grandeur montrent la stabilité du fond génétique stable. La stabilité du fond génétique peut également être vérifiée en mesurant les concentrations extracellulaires de sérotonine comme décrit dans l'exemple 5 chez des souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B sur 5 générations successives. Pour chaque génération, les concentrations extracellulaires de sérotonine de souris contrôle de génotype 5HT1A (+/+) 5HT1B (+/+) sont également mesurées. Les rapports des concentrations obtenues chez les souris de génotype 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) sur les souris contrôle sont comparés. Des rapports de concentrations du même ordre de grandeur montrent la stabilité du fond génétique stable. EXEMPLE 4 : Mise en évidence du phénotype hyper anxieux des souris doubles mutantes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-I-) par rapport au phénotype anxieux de souris simples 10 mutantes 5HT1A (-/-) Les tests comportementaux utilisés sont ceux décrits dans l'exemple 2. Dans le test d'alimentation supprimée par la nouveauté (Figure 6), les souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) montrent un temps de latence supérieur aux souris 5HT1A (-/-), le temps de 15 latence des souris 5HT1A (-/-) étant lui-même supérieur au temps de latence des souris contrôles. Cependant, seul l'écart entre le temps de latence des souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) par rapport aux souris contrôles (WT) est statistiquement significatif. Des résultats similaires sont obtenus dans le test du champ ouvert (figures 7A et7B), les différences entre les valeurs obtenues avec les souris 5HT1A (-/-) et avec celles obtenues 20 avec les souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) étant statistiquement significatives. Ainsi, ces résultats montrent le caractère hyper anxieux des souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), par rapport au caractère anxieux des souris 5HT1A (-/-). 25 EXEMPLE 5 : Etude des variations des concentrations extracellulaires en sérotonine chez des souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine Matériel et méthodes 30 Microdialyse intracérébrale chez la souris éveillée La microdialyse intracérébrale chez la souris éveillée permet de mesurer les variations au cours du temps des concentrations extracellulaires des monoamines cérébrales avant et 20 après traitement antidépresseur. Les sondes concentriques sont réalisées par les Inventeurs (Bert et al. 2004; Guilloux et al. 2005) et implantées dans des régions d'intérêt impliquées dans les troubles de l'humeur (Hippocampe, Cortex Frontal, Noyaux du Raphé Dorsal). Les sondes sont implantées chez l'animal anesthésié selon un atlas stéréotaxique du cerveau de souris (Franklin and Paxinos, 1997) [coordonnées (en mm) pour le cortex frontal, A=+1.6, L=+1.3, V=û1.6; hippocampe : Aù3.4, L=+3.5, V=û4.1; noyau du raphé dorsal, A=û4.5, L=O, V= 4.0 (A, antériorité; L, latéralité; et V, ventralité)]. Le lendemain (environ 20 heures après la chirurgie), les sondes sont perfusées avec un liquide céphalorachidien de synthèse (composition en mM: NaCl 147, KC1 3.5, CaCl2 1.26, MgCl2 1.2, NaH2PO4 1.0, NaHCO3 25.0, pH 7.4+0.2) à un débit de 1.5 l/min via un pousse seringue CMA/100. Résultats Chez les animaux invalidés pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine, on observe une élévation des concentrations basales de 5-HT dans le cortex frontal ainsi que le noyau du raphé dorsal (tableau 5). Tableau 5 Concentrations basales de 5HT dans le Cortex Frontal (FCX) et le Noyau du Raphé Dorsal (DRN) chez les souris 5HT1A (+1+) / 5HT1B (+/+) et chez les souris 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) Souris 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+) Souris 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-) FCX 2,41 3,41*** (fmol / 20 l) (+ 0,16 ; n = 78) (+ 0,11 ; n = 109) DRN 13,50 19,64** (fmol / 10 l) (+ 0,88 ; n = 51) (+ 1,80 ; n = 54) Après administration unique de paroxetine, un inhibiteur sélectif de la recapture de sérotonine (ISRS), les souris 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) présentent une élévation des concentrations de sérotonine dans ces régions 3 à 4 fois plus importantes que chez les souris contrôle (Figures 5A, 5B, 5C et 5D). Revendications 1. Utilisation de souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la 5 sérotonine, pour le criblage de médicaments destinés au traitement ou à la prévention de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété. 2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle les souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux, ont un fond génétique stable. 10 3. Utilisation selon l'une des revendications 1 ou 2, dans laquelle les pathologies liées et / ou associées à l'anxiété sont choisies parmi : l'anxiété généralisée, la dépression anxieuse, les crises de panique, les phobies, les troubles obsessionnels compulsifs, 15 les dépressions, les psychoses, la psychose maniaco-dépressive, les troubles bipolaires, l'hyperactivité. 4. Méthode de criblage de médicaments destinés au traitement ou à la prévention de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété comprenant les étapes de : 20 détermination de l'intensité d'anxiété d'une souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux, invalidée pour les gènes codant pour le récepteur 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine, notamment par au moins un test comportemental choisi parmi le test du champ ouvert, le test du labyrinthe en croix surélevée et le test de l'alimentation supprimée par la nouveauté, et éventuellement par 25 la mesure de la concentration extracellulaire de sérotonine, administration d'un composé potentiellement actif à ladite souris de phénotype anxieux, et notamment de phénotype hyper anxieux, pour obtenir une souris traitée, détermination de l'intensité d'anxiété de ladite souris traitée, notamment par au moins un test comportemental choisi parmi le test du champ ouvert, le test du labyrinthe en 30 croix surélevée et le test de l'alimentation supprimée par la nouveauté, et éventuellement par la mesure de la concentration extracellulaire de sérotonine,évaluation de l'efficacité du composé potentiellement actif par comparaison de l'intensité d'anxiété de ladite souris avant et après administration du susdit composé potentiellement actif. 5. Méthode selon la revendication 4, dans laquelle l'intensité d'anxiété de ladite souris traitée est comparé avec l'intensité d'anxiété de souris non traitées avec le susdit composé, exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris traitée, et / ou avec l'intensité d'anxiété de souris traitées avec ledit composé potentiellement actif et exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris traitée. 6. Ensemble de souris comprenant : - au moins une souris caractérisée par un phénotype anxieux, et notamment hyper anxieux, invalidée pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et de fond génétique stable, et - au moins une souris exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et de fond génétique stable identique au fond génétique de ladite souris caractérisée par un phénotype anxieux, et notamment hyper anxieux et, ledit ensemble comprenant notamment les souris de génotype suivant : - doublement homozygotes 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-), et / ou - doublement hétérozygotes 5HT1A (-/+) / 5HT1B (-/+), et / ou -hétérozygotes pour un récepteur et homozygotes pour l'autre : 5HT1A(-/-) / 5HT1B(-/+) ou 5HT1A (-1+) / 5HT1B (-/-), et - doublement homozygotes 5HT1A (+/+) / 5HT1B (+/+). 7. Souris caractérisée par un phénotype anxieux, et notamment par un phénotype hyper anxieux, ladite souris étant invalidée pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine et étant de fond génétique stable. 8. Souris selon la revendication 7, ladite souris étant invalidée pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un seul des deux allèles30correspondant au gène de l'un des récepteurs et sur au moins un des deux allèles correspondant au gène de l'autre récepteur, ladite souris étant notamment choisie parmi les souris de génotype 5HT1A (-/+) / 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/+) ou 5HT1A (-/+) / 5HT1B (-/-). 9. Souris selon la revendication 7, ladite souris étant invalidée pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur les deux allèles correspondant à chaque gène, ladite souris étant de génotype 5HT1A (-/-) / 5HT1B (-/-). 10 10. Souris selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisée par un fond génétique stable choisi parmi les fonds génétiques suivants : C57BL/6 (en particulier C57BL6/J, C57BL/6NCr1), 129/Sv (en particulier 12952/SvPasCrl, 12956/SvEvTac), BALB/c (en particulier BALB/cAnNCrl, BALB/cByJ), CD1, C3H (en particulier 15 C3H/HeNCr1, C3H/HeOuJlco), DBA/2 (en particulier DBA/2J, DBAl2NCr1), FVB, SJL. 11. Procédé de préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique stable, comprenant : 20 une étape de croisement d'une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A avec une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F1, une étape de croisement desdites souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération F l entre elles, pour obtenir des souris de génération F2, 25 une étape de génotypage des souris de génération F2 pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), une étape de dérivation desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 obtenues à l'étape précédente sur un fond génétique stable, par - une étape de croisement desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) 30 de la génération F2 avec des souris dudit fond génétique stable exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération F3,5- une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération F3 avec des souris dudit fond génétique stable exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris de génération F4, - une étape de génotypage des souris de génération F4 pour sélectionner des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), - les deux étapes précédentes de croisement et de génotypage étant répétées n fois, n étant supérieur à 9, particulièrement supérieur à 11 et plus particulièrement supérieur à 14, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération Fn+3, et - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération Fn+3 entre elles, pour obtenir des souris de génération Fn+4, une étape de génotypage des souris de génération Fn+4 pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), des souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/-). 15 12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sont de fonds génétiques différents, et la souris homozygote 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) obtenue en génération F2 est dérivée sur un fond génétique identique au 20 fond génétique de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A ou à celui de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B. 13. Procédé selon la revendication 11, dans lequel la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 25 5HT1B sont de fond génétique identique, et la souris homozygote 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) obtenue en génération F2 est dérivée sur un fond génétique stable différent dudit fond génétique. 14. Procédé selon la revendication Il, dans lequel la souris invalidée pour le gène codant 30 pour le récepteur 5HT1A et la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sont de fonds génétiques différents, et la souris homozygote 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) obtenue en génération F2 est dérivée sur un fond génétique différent du 10fond génétique de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et de celui de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B. 15. Procédé selon la revendication 11, dans lequel la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sont de fonds génétiques identiques, et la souris homozygote 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) obtenue en génération F2 est dérivée sur un fond génétique identique au susdit fond génétique. 16. Procédé de préparation selon l'une des revendications 11 à 15, dans lequel le fond génétique stable est choisi parmi les fonds génétiques suivants : C57BL/6 (en particulier C57BL6/J, C57BL/6NCr1), 129/Sv (en particulier 12952/SvPasCrl, 129S6/SvEvTac), BALB/c (en particulier BALB/cAnNCrl, BALB/cByJ), CD1, C3H (en particulier C3H/HeNCr1, C3H/HeOuJlco), DBA/2 (en particulier DBA/2J, DBA/2NCrl), FVB, SJL. 17. Procédé de préparation selon l'une des revendications 11 à 16, dans lequel le fond génétique de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et de la souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B est choisi parmi les fonds génétiques suivants : Swiss-Webster, C57BL/6 (en particulier C57BL6/J, C57BL/6NCrI), 129/Sv (en particulier 12952/SvPasCrl, 12956/SvEvTac), BALB/c (en particulier BALB/cAnNCrl, BALB/cByJ), CD1, C3H (en particulier C3H/HeNCrI, C3H/HeOuJIco), DBA/2 (en particulier DBA/2J, DBA/2NCrI), FVB, SJL. 18. Procédé de préparation selon l'une des revendications 11 à 17, dans lequel les souris de génotype 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/+) ou 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/-) sont identifiées par PCR, notamment en utilisant des amorces permettant d'amplifier au moins une partie des gènes codant pour les récepteurs 5HT1A ou 5HT1B. 19. Procédé selon la revendication 11 de préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique stable C57B1/6, comprenant : une étape de croisement d'une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A de fond génétique C57B1/6 stable avec une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B de fond génétique 129/sv, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération F1, une étape de croisement desdites souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération F l entre elles, pour obtenir des souris de génération F2, une étape de génotypage des souris de génération F2 pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), une étape de dérivation desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 obtenues à l'étape précédente sur un fond génétique stable C57B1/6, par -une étape de croisement desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 avec des souris de fond génétique stable C57B1/6 exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F3, - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-1+) 5HT1B (-/+) de génération F3 avec des souris de fond génétique stable C57B1/6 exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris de génération F4, - une étape de génotypage des souris de génération F4 pour sélectionner des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), - les deux étapes précédentes de croisement et de génotypage étant répétées n fois, n étant supérieur à 9, particulièrement supérieur à 11 et plus particulièrement supérieur à 14, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-1+) de génération Fn+3, et - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération Fn+3 entre elles, pour obtenir des souris de génération Fn+4, une étape de génotypage des souris de génération Fn+4 pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/+), 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/-), de fond génétique stable C57B1/6. 20. Procédé selon l'une des revendications 11 à 19, comprenant les étapes suivantes : une étape d'obtention de souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A à partir de souris porteuses dans lesquelles des blastocystes ont été préalablement introduits, lesdits blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires dans lesquelles a été introduit, notamment par électroporation, un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1A invalidé, une étape d'obtention de souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B à partir de souris porteuses dans lesquelles des blastocystes ont été préalablement introduits, lesdits blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires dans lesquelles a été introduit, notamment par électroporation, un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1B invalidé, et éventuellement une étape de dérivation desdites souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et / ou desdites souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sur un fond génétique stable. 21. Procédé selon l'une des revendications 11 à 20, comprenant les étapes suivantes : une étape de préparation de cellules souches embryonnaires par introduction d'un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1A invalidé et de cellules souches embryonnaires par introduction d'un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1B invalidé, pour obtenir des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, une étape de préparation de blastocystes par introduction desdites cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A dans les blastocystes pour obtenir des blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A, et une étape de préparation de blastocystes par introduction desdites cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B dans lesdits blastocystes, pour obtenir des blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, une étape d'obtention de souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A à l'issue du développement de blastocystes préalablement introduits dans des souris porteuses et de la mise-bas, lesdits blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A, etune étape d'obtention de souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B à l'issue du développement de blastocystes préalablement introduits dans des souris porteuses et de la mise-bas, lesdits blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B. 22. Procédé selon l'une des revendications 11 à 21 de préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique stable, dans lequel : les souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et les souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sont obtenues par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant : une étape de préparation d'un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1A invalidé et d'un vecteur comportant un gène codant pour le récepteur 5HT1B invalidé, par introduction d'une cassette d'expression permettant l'expression d'un marqueur de sélection à la place d'une partie de la région codante dudit récepteur, une étape d'introduction dudit vecteur, de préférence linéarisé, dans des cellules souches embryonnaires de souris, notamment de cellules souches embryonnaires d'origine 129/Sv, par micro-injection, transfert de gène non viral, ou électroporation, pour obtenir des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, une étape d'introduction des cellules souches embryonnaires ci-dessus dans des blastocystes, notamment des blastocystes d'origine C57/BL6, pour obtenir des blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et des blastocystes contenant des cellules souches embryonnaires invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B, une étape d'obtention de souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A et de souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B à l'issue du développement des susdits blastocystes préalablement introduits dans des souris porteuses et de la mise-bas,éventuellement un étape de dérivation des souris invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A ou invalidées pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B sur un fond génétique stable, ledit procédé de préparation de souris invalidées pour les gènes codant pour les récepteurs 5HT1A et 5HT1B de la sérotonine sur un fond génétique stable comprenant : une étape de croisement d'une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1A obtenue à l'étape précédente avec une souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur 5HT1B obtenue à l'étape précédente, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F1, une étape de croisement desdites souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F l entre elles, pour obtenir des souris de génération F2, une étape de génotypage des souris de la génération F2, pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), une étape de dérivation desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 obtenues à l'étape précédente sur un fond génétique stable, par la mise en oeuvre d'un procédé comportant : - une étape de croisement desdites souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-) de la génération F2 avec des souris dudit fond génétique stable exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HTlB (-/+) de génération F3, - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération F3 avec des souris dudit fond génétique stable exprimant les récepteurs 5HT1A et 5HT1B, pour obtenir des souris de génération F4, - une étape de génotypage des souris de la génération F4 pour sélectionner des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), - les deux étapes précédentes de croisement et de génotypage étant répétées n fois, n étant supérieur à 9, particulièrement supérieur à 11 et plus particulièrement supérieur à 14, pour obtenir des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HTlB (-/+) de génération Fn+3, et - une étape de croisement des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+) de génération Fn+3 entre elles, pour obtenir des souris de génération Fn+4,une étape de génotypage des souris de la génération Fn+4, pour sélectionner des souris homozygotes 5HT1A (-/-) 5HT1B (-/-), des souris hétérozygotes 5HT1A (-/+) 5HT1B (-/+), 5HT 1 A(-/-) 5HT 1 B(-/+), 5HT 1 A(-/+) 5HT1B (-/-). 23. Souris de fond génétique stable telle qu'obtenue selon le procédé de l'une des revendications 11 à 22, caractérisée en ce qu'elle a en commun avec sa descendance sur 2 générations successives au moins 96 %, de préférence au moins 98%, de préférence au moins 99% de son génome. 24. Lignée cellulaire ou culture de cellules primaires provenant d'une souris selon l'une des revendications 7 à 10 ou 23. 25. Utilisation d'une souris selon l'une des revendications 7 à 10 ou 23, d'une lignée cellulaire ou culture de cellules primaires selon la revendication 24, pour le criblage de composés utiles dans la prévention ou le traitement de pathologies liées et / ou associées à l'anxiété.