Brevet FR2907463A1 — publié le 20080425

-1- r La présente invention décrit un procédé permettant d'ajouter des molécules actives dans un milieu de cultures pour micro-algues, afin de proposer des vecteurs de molécules permettant une diminution considérable des effets secondaires de la chimiothérapie tout en maintenant celle-ci à son plus haut niveau de biodisponibilité. En temps normal, les molécules cyto-toxiques comme les anti-métabolites qui agissent en empêchant la synthèse de différentes molécules impliquées dans le système DNA et les agents alkylants qui sont des molécules contenant des groupes akyls ainsi que les extraits de micro-organismes comme la daunorubicine entraînent l'apopthose des cellules cancéreuses ; malheureusement tous ces agents ne sont pas spécifiques de la cellule cancéreuse et des cellules dites normales sont considérablement touchées et en particulier la lignée des cellules sanguines. Ces vecteurs choisis sont des cyanobactéries. Les médicaments et les molécules ne sont pas associés mais ajoutés dans les micro-algues. Les molécules seront essentiellement des anti-cancéreux et parmi les anti-cancéreux choisis nous pouvons citer le taxoter, les inhibiteurs de kinases, le flavopiridol , la roscovitine, l'indoxan, la doxorubicine ou la ricine A etc.... Ces molécules actives par leur composition induisent un dysfonctionnement au niveau de la diffusion cellulaire du vecteur, ils ne peuvent donc être utilisés en tant que tel. Parmi les micro-algues choisis nous utiliseront essentiellement la spiruline (arthrospira platensis) qui a fait l'objet d'une autorisation de consommation en matière humaine et animale de la part 20 du conseil de l'hygiène publique en France. Cette cyanobactérie a elle seule a des actions connues sur l'organisme humain. Elle est très protéinée (65%), contient des vitamines, des minéraux, des polysaccharides, des peptides, des pigments. Par ailleurs elles ont des fonctions importantes notamment de pouvoir fixer naturellement des 25 molécules par des procédés ionisables ou chimiques, mais en ce qui concerne les molécules anticancéreuses elles ne peuvent induire ou fixer de telles molécules agressives, sans en avoir exprimé une éventuelle sélection de forme mutante de cyanobactérie et qui représente une résistance à ces molécules anticancéreuse. L'invention a pour objet de développer une sélection éventuelle de forme mutante dans les 30 cyanobactéries et notamment la spiruline (athrospira platensis) caractérisée en ce qu'il comprend une étape de culture des micro-algues dans un milieu de cultures alcalins contenant essentiellement un broyat de cellules néoplasiques ayant subies un choc thermique. La culture de la micro-algue se faisant de façon monoclonale jusqu'à l'obtention d'une biomasse utile les cellules néoplasiques venant d'humains ayant subis tous les claviers viraux existants 35 (HIV, hépatite B, hépatite C, herpès, mégalo-virus etc...). 2907463 -2- L'invention a plus particulièrement pour objet un procédé d'induction physiologique et de rajout et d'internalisation de molécules anti-cancéreuses caractérisées en ce qu'il comprend plusieurs étapes. Notamment après la culture de micro-algues en présence de cellules néoplasiques remises en 5 culture des dits cyanobactéries dans un milieu approprié de chlorure de sodium et de molécules anti-cancéreuses à une dilution de 1 à 5 millième. Ce procédé de rajout de molécules anticancéreuses spécifiques sera précédé de dilutions décroissantes dans le milieu de culture appropriée contenant une solution donc voici la composition en gr/litre : 10 o NaOHCO3 15,6 o K2HPO4 0,6 o NaNO3 2,1 o K2SO4 0,9 o NaCl 1,6 15 o MgSO4 8 o HO2 0,2 o CaC12 0,04 o FeSO4 7 o EDTA 0,08 o ZnS O4 7 o CuSO4 5 o Ni S O4 0,047 o Qsp eau physiologique Les molécules actives seront diluées dans cette solution, par exemple : 1/5000, 1/2500, 1/1250,1/625, 1/300, 1/100, 1/50, 1/10,1/5. La cyanobactérie en contact décroissant avec les molécules anti-cancéreuses lèvera une éventuelle sélection de forme mutante facilement vérifiable puisqu'elle acceptera ces dites molécules ou un gène de résistance vérifiable par comparaison ou par simple cariotypage. La cyanobactérie aura alors une charge utile et utilisable pour le traitement des maladies (médecine humaine ou vétérinaire). Les doses pourront être ajustées en fonction du poids du patient et de la gravité de la maladie. Le présente invention découle essentiellement du développement d'une éventuelle sélection de forme mutante spécifique et/ou d'un gène éventuel de résistance à un anti-mitotique donné ; car 2907463 -3- il ne peut y avoir d'intégration de molécules dits agressives sans avoir au préalable fait développer une éventuelle sélection de forme mutante. La protéine de la micro-algue ayant reconnue plusieurs fois la protéine néoplasique sera reconnaître spécifiquement les cellules cancéreuses qu'elle aura pour cible. Cela aura un effet 5 anti-corps récepteur. Ces protéines chargées d'anti-mitotiques feront imploser (en agissant sur les phases des différentes division cellulaire) les cellules cancéreuses sans atteindre (ou très peu) les autres cellules tout en évitant les pics plasmatiques et les effets secondaires dus à la chimiothérapie. CH2 CH2 NH OH 2 (Arg, ou R) H O I II --- !V C C --- o NH Phr `~Olüi~~,•, HO Exemple d'intégration d'une molécule active cyto-toxique comme le taxoter dans un acide 10 aminé. Pour faciliter cette intégration de la molécule anti-mitotique avec 1' acide aminé, on soumettra alors le milieu de culture à l'action d'un champ électromagnétique pulsé de haute fréquence (1 GHz) de quelques kV.cm-1 . Il s'en suivra que certaines portions de la molécule protéique vont 15 entrer en résonance et tourner librement (relaxation dite 8). Les niveaux d'énergie d'activation des liaisons chimiques étant alors compatibles les liaisons des macromolécules s'en trouvent fortement facilitées. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de culture des cyanobactéries, et en particulier d'Arthrospira platensis, chargées en molécules anti-cancéreuses et présentant une résistance aux molécules anti-cancéreuses, caractérisé en ce ledit procédé comprend (i) une étape de culture de cyanobactéries dans un milieu de culture approprié contenant des sels minéraux et un broyat de cellules cancéreuses permettant une biomasse suffisante, puis (ii) une étape d'ajout dans le milieu de cultures des molécules anti-cancéreuses. 2. Procédé de préparation de culture des cyanobactéries et en particulier d'Arthrospira platensis selon la revendication 1, caractérisé en ce que le milieu de culture approprié est un milieu alcalin. 3. Procédé de préparation de culture des cyanobactéries et en particulier d'Arthrospira platensis selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que lesdites cellules cancéreuses ont subi un choc thermique. 4. Procédé de préparation de culture des cyanobactéries et en particulier d'Arthrospira platensis selon la revendication 1 à 3, caractérisé en ce que l'ajout des molécules anticancéreuses est réalisé par une dilution successive des molécules anti-cancéreuses dans ledit milieu de culture ; afin d'exprimer une éventuelle sélection de forme mutante de cyanobactéries qui représente une résistance à ces molécules anti-cancéreuses. 5. Procédé de préparation de culture des cyanobactéries et en particulier d'Arthrospira platensis selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend en outre (iii) une étape d'exposition du milieu de culture dans un champ électromagnétique pulsé de haute fréquence. 6. Application d'une culture des cyanobactéries et en particulier d'Arthrospira platensis obtenue par le procédé selon l'une des revendications 1 à 5 à la préparation de compositions pharmaceutiques à usage humain ou vétérinaire.