Brevet FR2910324A1 — publié le 20080627

La présente invention concerne le cancer gastrique, et plus particulièrement un nouveau traitement pour lutter contre ce cancer. Le cancer de l'estomac est le deuxième cancer le plus fréquent dans le monde, comptant environ 10% des cas de cancer. Les personnes les plus susceptibles de contracter cette pathologie ont pour la plupart une alimentation riche en amidon, faible en gras, en protéines, en fruits et en légumes frais. Le sel, l'alcool et la consommation excessive d'aliments fumés sont aussi impliqués. Une infection due à 1' Helicobacter pylori est aussi souvent mise en cause. Au début, le cancer de l'estomac ne provoque que peu de symptômes, qui sont souvent peu caractéristiques, ce qui rend le diagnostic précoce encore plus difficile. Lorsqu'il existe, le symptôme le plus fréquent est une douleur située à la partie haute et médiane du ventre. Parfois, le patient est sujet a un amaigrissement, des vomissements, une anémie, la présence de sang dans les selles. Le diagnostic est généralement effectué par endoscopie ou fibroscopie, qui permettent de détecter les petites tumeurs cancéreuses à un stade précoce, des tumeurs parfois bénignes ou d'autres lésions présentes sur la muqueuse gastrique. Le traitement à visée curative est généralement une gastrectomie partielle ou totale. Dans le cas de cancer en stade précoce ( chronic atrophic gastritis ), l'éradication de H. Pylori est également importante. Il n'existe actuellement pas de protocole de chimiothérapie faisant l'objet d'un consensus. L'amélioration obtenue sur la survie et sur la qualité de vie par rapport à un simple traitement symptomatique est modérée. Il est donc important d'un point de vue clinique de proposer de nouvelles alternatives de traitement au clinicien. La présente invention se propose de résoudre les inconvénients de l'état de la technique en présentant de nouveaux outils biologiques pour améliorer le diagnostic et le traitement d'un patient contre le cancer gastrique. Les inventeurs ont mis en évidence que l'interleukine 17 F (IL17 F), tout comme l'interleukine 17 A (IL17 A), joue un rôle très important dans le cancer gastrique. 2910324 2 A ce titre l'invention concerne l'utilisation d'au moins un inhibiteur de l'interleukine 17 et/ou d'au moins un inhibiteur d'un récepteur de l'IL17, pour la préparation d'un médicament destiné à l'inhibition, la prévention ou le traitement d'un cancer gastrique. 5 Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'interleukine 17 est l'interleukine 17 A (IL17A) ou l'interleukine 17F (IL17F). Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, ledit récepteur de l'IL17 est le récepteur A de l'IL17 ou le récepteur C de l'IL17. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'inhibiteur de l'interleukine 17 est un 10 anticorps dirigé contre l'IL17, lréférentiellement contre l'IL17A ou F et/ou l'inhibiteur dudit récepteur de l'IL17 est un anticorps dirigé contre le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'IL17. Selon un autre mode préféré de réalisation de l'invention, l'inhibiteur de l'interleukine 17 est un ARN interférent avec IL 17, préférentiellement contre l'IL17A ou F et/ou l'inhibiteur 15 dudit récepteur de l'IL17 est un ARN interférent avec le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'IL17. L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant à titre de substance active au moins un inhibiteur de l'interleukine 17 et/ou d'au moins un inhibiteur d'un récepteur de l'IL17 en association avec un véhicule pharmaceutiquement approprié. 20 Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'interleukine 17 est l'interleukine 17 A (IL17A) ou l'interleukine 17F (IL17F). Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, ledit récepteur de l'IL17 est le récepteur A de l'IL17 ou le récepteur C de l'IL17. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'inhibiteur de l'interleukine 17 est un 25 anticorps dirigé contre l'IL17, préférentiellement contre l'IL17A ou F et/ou l'inhibiteur dudit récepteur de l'IL17 est un anticorps dirigé contre le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'IL17. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'inhibiteur de l'interleukine 17 est un ARN interférent avec IL17, préférentiellement contre l'IL17A ou F et/ou l'inhibiteur dudit 2910324 3 récepteur de l'IL17 est un ARN interférent avec le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'IL17. L'invention concerne également l'utilisation de la composition pharmaceutique telle que définie ci dessus pour l'inhibition, la prévention et/ou le traitement d'un cancer gastrique. 5 Les définitions suivantes permettront de mieux comprendre l'invention. Par récepteur de l'IL17, on entend une molécule de la famille des récepteurs IL-17, ceux-ci étant définis par leur apparenté avec le récepteur IL-17RA (Moseley T.A. Et al., 2003, Cytokine Growth Factor Rev, 14(2) : 155-74) Préférentiellement, ledit récepteur de l'IL17 10 est le récepteur A de l'IL17 ou le récepteur C de l'IL17. Par récepteur IL-17RA on entend h molécule initialement découverte pour son implication dans l'activité inflammatoire et/ou immunostimulante de l'IL-17A (Yao Z. et al., 1997, Cytokine, 9(11) : 794-800) Par récepteur IL- 17RC, on entend une molécule apparentée au récepteur IL- 17RA 15 (Haudenschild D. et al., 2002, J Biol Chem, 277 : 4309-4316) Par inhibiteur de l'interleukine 17F, on entend une molécule (ou un ensemble de molécules) qui bloque l'activité inflammatoire et/ou immunostimulante de l'IL17F. L'inhibiteur peut être notamment un anticorps dirigé contre l'IL17F, ou un ARN interférent avec l'IL17. 20 Par inhibiteur d'un récepteur de l'IL17, on entend une molécule qui bloque l'action d'un récepteur de l'IL17. L'inhibiteur peut être notamment un anticorps, dirigé contre le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'IL17. L'inhibiteur peut être également un ARN interférent avec le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C 25 de l'IL17. Par cancer gastrique, on entend tout cancer de l'estomac. Par anticorps, on entend tant un anticorps entier qu'un fragment d'anticorps. Les anticorps recombinants peuvent être obtenus selon des procédés classiques connus de l'homme du métier, à partir d'organismes procaryotes, tels que bactéries, ou à partir 2910324 4 d'organismes eucaryotes, tels que levures, cellules de mammifères, de plantes, d'insectes ou d'animaux, ou par des systèmes de production extra-cellulaire. Les anticorps monoclonaux peuvent être préparés selon les techniques classiques connues de l'homme du métier telles que la technique des hybridomes dont le principe général est 5 rappelé ci-après. Dans un premier temps, on immunise un animal, généralement une souris, (ou des cellules en culture dans le cadre d'immunisations in vitro) avec un antigène cible d'intérêt, dont les lymphocytes B sont alors capables de produire des anticorps contre ledit antigène. Ces lymphocytes producteurs d'anticorps sont ensuite fusionnés avec des cellules 10 myélomateuses "immortelles" (murines dans l'exemple) pour donner lieu à des hybridomes. A partir du mélange hétérogène des cellules ainsi obtenu, on effectue alors une sélection des cellules capables de produire un anticorps particulier et de se multiplier indéfiniment. Chaque hybridome est multiplié sous la forme de clone, chacun conduisant à la production d'un anticorps monoclonal dont les propriétés de reconnaissance vis-à-vis de l'antigène 15 d'intérêt pourront être testées par exemple en ELISA, par immunotransfert en une ou deux dimensions, en immunofluorescence, ou à l'aide d'un biocapteur. Les anticorps monoclonaux ainsi sélectionnés, sont par la suite purifiés notamment selon la technique de chromatographie d'affinité. Des fragments d'anticorps peuvent par exemple être obtenus par protéolyse. Ainsi, ils 20 peuvent être obtenus par digestion enzymatique, résultant en des fragments de type Fab (traitement à la papaïne ; Porter RR, 1959, Biochem. J., 73 : 119-126) ou de type F(ab)'2 (traitement à la pepsine ; Nisonoff A. et al., 1960, Science, 132 : 1770-1771). Ils peuvent également être préparés par voie recombinante (Skerra A., 1993, Curr. Opin. Immunol., 5 : 256-262). Un autre fragment d'anticorps qui convient aux fms de l'invention comprend un 25 fragment Fv qui est un dimère constitué de l'association non covalente du domaine variable léger (VL) et du domaine variable lourd (VH) du fragment Fab, donc de l'association de deux chaînes polypeptidiques. Afin d'améliorer la stabilité du fragment Fv due à la dissociation des deux chaînes polypeptidiques, ce fragment Fv peut être modifié par génie génétique en insérant un lien peptidique adapté entre le domaine VL et le domaine VH 2910324 5 (Huston P. et al., 1988, Proc. Natl.Acad. Sci.USA, 85 : 5879-5883). On parle alors de fragment scFv ( single chain Fragment variable ) car il est constitué d'une seule chaîne polypeptidique. L'utilisation d'un lien peptidique composé préférentiellement de 15 à 25 acides aminés permet de relier l'extrémité C terminale d'un domaine à l'extrémité N- 5 terminale de l'autre domaine, constituant ainsi une molécule monomérique dotée de propriétés de liaison similaires à celles de l'anticorps sous sa forme complète. Les deux orientations des domaines VL et VH conviennent (VL-lien-VH et VH-lien-VL) car elles présentent des propriétés fonctionnelles identiques. Bien entendu, tout fragment connu de l'homme du métier et présentant les caractéristiques immunologiques défmies ci- dessus 10 convient aux fins de l'invention. Préférentiellement, l'anticorps est dirigé contre l'IL17A ou F ou contre le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'IL17. Par ARN interférent, on entend un acide ribonucléique qui bloque l'expression d'un gène prédéterminé (Dallas A. et al., 2006, Med Sci Monit, 12(4) : RA67-74). 15 Préférentiellement, l'ARNi interfère avec IL17, préférentiellement l'IL17A ou F ou avec le récepteur de l'IL17, préférentiellement le récepteur A ou C de l'IL17. Par médicament ou composition pharmaceutique, on entend toute substance ou composition présentée comme possédant des propriétés curatives ou préventives à l'égard des maladies humaines ou animales, ainsi que tout produit pouvant être administrée à 20 l'homme ou à l'animal en vue d'établir un diagnostic médical ou de restaurer, corriger ou modifier leurs fonctions organiques. Par substance active, on entend un composant reconnu comme possédant des propriétés thérapeutiques. Dans les compositions pharmaceutiques selon l'invention, pour l'administration orale, 25 sublingale, sous cutanée, intra musculaire, intra veineuse, topique, intratrachéale, rectale, transdermique, les substances actives peuvent être administrées sous formes unitaires d'administration ou en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, et destinés à une administration par voie orale, par exemple sous la forme d'un comprimé, d'une gélule, d'une solution buvable, etc, ou par voie rectale, sous la forme d'un suppositoire, par 2910324 6 voie parentérale, en particulier sous la forme d'une solution injectable, notamment par voie intraveineuse, intradermique, sous cutanée, etc, selon des protocoles classiques bien connus de l'homme du métier. Pour l'application topique, on peut utiliser les substances actives dans des crèmes, pommades, lotions. 5 Lorsqu'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange les substances actives avec un excipient pharmaceutquement acceptable également nommé véhicule pharmacoutquement approprié, tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose, d'un dérivé cellulosique, ou d'autres matières appropriées. On peut 10 également les traiter de telles sortes qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédeterminée de substances actives. On peut également obtenir une préparation en gélules en mélangeant les substances actives avec un diluant et en versant le mélange dans des gélules molles ou dures. On peut également obtenir une préparation sous forme de sirop ou pour l'administration sous forme de 15 gouttes, dans laquelle les substances actives sont présents conjointement avec un édulcorant, un antiseptique, tel que notamment du méthylparaben et du propylparaben, ainsi qu'un agent donnant du goût ou un colorant approprié. Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir les substances actives en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, bien connus 20 de l'homme du métier. Pour une administration parentérale, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion, des mouillants pharmacologiquement compatibles, tels que notamment le propyléneglycol ou le butylèneglycol. Le médicament cu la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre en 25 outre un agent d'activation qui induit les effets d'une médication ou renforce ou complète les effets de la médication principale, en augmentant notamment la biodisponibilité de la médication principale. La posologie dépend de la gravité de l'affection. Dans le cas d'une composition pharmaceutique comprenant un anticorps, l'administration peut être notamment 2910324 7 administrée une fois toutes les 2 à 8 semaines, de préférence de 50 à 100 mg de d'anticorps, en combinaison avec un excipient pharmaceutiquement acceptable. Dans le cas d'une composition pharmaceutique comprenant un ARN interférent, l'administration peut être notamment administrée une fois toutes les 2 à 8 semaines, de préférence de 1 à 5 10 mg/Kg d'ARN interférent, en combinaison avec un excipient pharmaceutiquement acceptable. L'invention concerne également un procédé in vitro pour déterminer, à partir d'un échantillon biologique, le diagnostic précoce d'un cancer gastrique caractérisé en ce qu'on 10 détermine l'expression du gène codant l'IL-17A, l'IL-17F, l'IL-17RA et/ou l'IL- 17RC. La mesure de l'expression du gène codant l'IL-17A, l'IL-17F, l'IL-17RA et/ou l'IL-17RC comprend les étapes suivantes : a. on extrait du matériel biologique de l'échantillon biologique, b. on met en contact le matériel biologique avec au moins un réactif spécifique 15 du gène codant l'IL17-A, l'IL17-F, l'IL17-RA et/ou l'IL17RC; c. on détermine l'expression du gène codant l'IL17-A, l'IL17-F, l'IL17-RA et/ou l' IL 17RC Le matériel biologique extrait lors de l'étape a) peut comprendre des acides nucléiques ou des protéines. 20 Ledit réactif spécifique de l'étape b) peut comprendre une sonde d'hybridation ou un anticorps spécifique du gène codant l'IL-17A, l'IL-17F, 1' IL-17RA et/ou l'IL- 17RC. L'invention concerne également l'utilisation d'au moins réactif spécifique du gène codant l'IL-17A, l'IL-17F, l'IL-17RA et/ou l'IL-17RC pour déterminer le diagnostic précoce d'un cancer gastrique. 25 L'invention concerne également un kit de diagnostic précoce d'un cancer gastrique comprenant au moins un réactif spécifique du gène codant l'IL-17A, l'IL-17F, l'IL-17RA et/ou l'IL-17RC. 2910324 8 L'analyse de l'expression des gènes de l'IL-17A, l'IL-17F, l'IL-17RA et/ou l'IL-17RC permet alors de disposer d'un outil pour le diagnostic d'un cancer gastrique. On peut par exemple analyser l'expression du gène cible chez un patient susceptible de développer un cancer gastrique, et comparer avec des valeurs d'expression moyenne connues du gène 5 cible de patients atteints d'un cancer gastrique et des valeurs d'expression moyenne connues du gène cible de patients sains. Au sens de la présente invention, on entend par échantillon biologique, tout échantillon prélevé chez un patient, et susceptible de contenir un matériel biologique tel que défini ci 10 après. Cet échantillon biologique peut être notamment un échantillon de sang, de sérum, de tissu, du patient. On dispose de cet échantillon biologique par tout type de prélèvement connu de l'homme du métier. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'échantillon biologique prélevé chez le patient est un échantillon sanguin. Lors de l'étape a) du procédé selon l'invention, on extrait le matériel biologique de 15 l'échantillon biologique par tous les protocoles d'extraction et de purification d'acides nucléiques ou de protéines connus de l'homme du métier. Au sens de la présente invention, on entend par matériel biologique, tout matériel permettant de détecter l'expression d'un gène cible. Le matériel biologique peut comprendre notamment des protéines, ou des acides nucléiques tels que notamment les 20 acides desoxyribonucléiques (ADN) ou les acides ribonucléiques (ARN). L'acide nucléique peut être notamment un ARN (acide ribonucléique). Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, le matériel biologique extrait lors de l'étape a) comprend des acides nucléiques, préférentiellement, des ARN, et encore plus préférentiellement des ARN totaux. Les ARN totaux comprennent les ARN de transfert, les ARN messagers (ARNm), 25 tel que les ARNm transcrits du gène cible, mais également transcrit de tout autre gène et les ARN ribosomaux. Ce matériel biologique comprend du matériel spécifique d'un gène cible, tel que notamment les ARNm transcrits du gène cible ou les protéines issues de ces ARNm mais peut comprendre également du matériel non spécifique d'un gène cible, tel que 2910324 9 notamment les ARNm transcrits d'un gène autre que le gène cible, les ARNt, les ARNr issus d'autres gènes que le gène cible. A titre indicatif, l'extraction d'acides nucléique peut être réalisée par : - une étape de lyse des cellules présentes dans l'échantillon biologique, afin de 5 libérer les acides nucléiques contenus dans les cellules du patient. A titre d'exemple, on peut utiliser les méthodes de lyse telles que décrites dans les demandes de brevet WO 00/05338, WO 99/53304, WO 99/15321. L'homme du métier pourra utiliser d'autres méthodes de lyse bien connues, telles que les chocs thermiques ou osmotiques ou les lyses chimiques par des agents chaotropiques tels 10 que les sels de guanidium (US 5,234,809). - une étape de purification, permettant la séparation entre les acides nucléiques et les autres constituants cellulaires relargués dans l'étape de lyse. Cette étape permet généralement de concentrer les acides nucléiques, et peut être adaptée à la purification d'ADN ou d'ARN. A titre d'exemple, on peut utiliser des particules 15 magnétiques éventuellement revêtues d'oligonucléotides, par adsorption ou covalence (voir à ce sujet les brevets US 4,672,040 et US 5,750,338), et ainsi purifier les acides nucléiques qui se sont fixés sur ces particules magnétiques, par une étape de lavage. Cette étape de purification des acides nucléiques est particulièrement intéressante si l'on souhaite amplifier ultérieurement lesdits acides 20 nucléiques. Un mode de réalisation particulièrement intéressant de ces particules magnétiques est décrit dans les demandes de brevet: WO-A-97/45202 et WO-A-99/35500. Un autre exemple intéressant de méthode de purification des acides nucléiques est l'utilisation de silice soit sous forme de colonne, soit sous forme de particules inertes ou magnétiques. D'autres méthodes très répandues reposent sur 25 des résines échangeuses d'ions en colonne ou en format particulaire paramagnétique. Une autre méthode très pertinente mais non exclusive pour l'invention est celle de l'adsorption sur support d'oxyde métallique. Dans le cas de l'extraction de protéines, la première étape consiste généralement, comme pour les acides nucléiques en la lyse des cellules. Un choc osmotique peut suffire à briser la 2910324 10 membrane cellulaire de cellules fragiles, qui peut être réalisé en présence d'un détergent. Une action mécanique peut aussi être ajoutée au processus (homogénéisateur à piston par exemple). La lyse peut être induite également par ultrasons, par une lyse mécanique utilisant des billes de verre. L'extraction des protéines d'intérêt peut s'effectuer ensuite par 5 chromatographie, telle que notamment sur colonne de chromatographie sur gel, remplie d'une résine consistant en des billes creuses et poreuses. La taille des pores de ces billes est telle que les protéines sont séparées en fonction de leur taille. On peut citer également la chromatographie sur colonne à échange d'ions, qui permet l'extraction de protéines selon leur affinité électrostatique à des groupements chargés de la résine. 10 Lors de l'étape b), et au sens de la présente invention, on entend par réactif spécifique, un réactif qui, lorsqu'il est mis en contact avec du matériel biologique tel que défini précédemment, se lie avec le matériel spécifique dudit gène cible. A titre indicatif, lorsque le réactif spécifique et le matériel biologique sont d'origine nucléique, la mise en contact du réactif spécifique et du matériel biologique permet 15 l'hybridation du réactif spécifique avec le matériel spécifique du gène cible. Par hybridation, on entend le processus au cours duquel, dans des conditions appropriées, deux fragments nucléotidiques se lient avec des liaisons hydrogènes stables et spécifiques pour former un complexe double brin. Ces liaisons hydrogènes se forment entre les bases complémentaires Adénine (A) et thymine (T) (ou uracile (U)) (on parle de liaison A-T) ou 20 entre les bases complémentaires Guanine (G) et cytosine (C) (on parle de liaison G-C). L'hybridation de deux fragments nucléotidiques peut être totale (on parle alors de fragments nucléotidiques ou de séquences complémentaires), c'est à dire que le complexe double brin obtenu lors de cette hybridation comprend uniquement des liaisons A-T et des liaisons C-G. Cette hybridation peut être partielle (on parle alors de fragments 25 nucléotidiques ou de séquences suffisamment complémentaires), c'est à dire que le complexe double brin obtenu comprend des liaisons A-T et des liaisons C-G permettant de former le complexe double brin, mais également des bases non liées à une base complémentaire. L'hybridation entre deux fragments nucléotidiques dépend des conditions opératoires qui sont utilisées, et notamment de la stringence. La stringence est défmie 2910324 11 notamment en fonction de la composition en bases des deux fragments nucléotidiques, ainsi que par le degré de mésappariement entre deux fragments nucléotidiques. La stringence peut également être fonction des paramètres de la réaction, tels que la concentration et le type d'espèces ioniques présentes dans la solution d'hybridation, la nature et la 5 concentration d'agents dénaturants et/ou la température d'hybridation. Toutes ces données sont bien connues et les conditions appropriées peuvent être déterminées par l'homme du métier. En général, selon la longueur des fragments nucléotidiques que l'on souhaite hybrider, la température d'hybridation est comprise entre environ 20 et 70 C, en particulier entre 35 et 65 C dans une solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M. Une 10 séquence, ou fragment nucléotidique, ou oligonucléotide, ou polynucléotide, est un enchaînement de motifs nucléotidiques assemblés entre eux par des liaisons ester phosphoriques, caractérisé par la séquence informationnelle des acides nucléiques naturels, susceptibles de s'hybrider à un fragment nucléotidique, l'enchaînement pouvant contenir des monomères de structures différentes et être obtenu à partir d'une molécule d'acide 15 nucléique naturelle et/ou par recombinaison génétique et/ou par synthèse chimique. Un motif est dérivé d'un monomère qui peut être un nucléotide naturel d'acide nucléique dont les éléments constitutifs sont un sucre, un groupement phosphate et une base azotée ; dans l'ADN le sucre est le désoxy-2-ribose, dans l'ARN le sucre est le ribose ; selon qu'il s'agisse de l'ADN ou l'ARN, la base azotée est choisie parmi l'adénine, la guanine, 20 l'uracile, la cytosine, la thymine ; ou bien le monomère est un nucléotide modifié dans l'un au moins des trois éléments constitutifs ; à titre d'exemple, la modification peut intervenir soit au niveau des bases, avec des bases modifiées telles que l'inosine, la méthyl-5désoxycytidine, la désoxyuridine, la diméthylamino-5désoxyuridine, la diamino-2,6-purine, la bromo-5désoxyuridine ou toute autre base modifiée capable d'hybridation, soit 25 au niveau du sucre, par exemple le remplacement d'au moins un désoxyribose par un polyamide, soit encore au niveau du groupement phosphate, par exemple son remplacement par des esters notamment choisis parmi les diphosphates, alkyl- et arylphosphonates et phosphorothioates. 2910324 12 Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, le réactif spécifique comprend au moins une amorce d'amplification. Au sens de la présente invention, on entend par amorce d'amplification, un fragment nucléotidique comprenant de 5 à 100 motifs nucléiques, préférentiellement de 15 à 30 motifs nucléiques permettant l'initiation d'une polymérisation 5 enzymatique, telle que notamment une réaction d'amplification enzymatique. Par réaction d'amplification enzymatique, on entend un processus générant de multiples copies d'un fragment nucléotidique par l'action d'au moins une enzyme. De telles réactions d'amplification sont bien connues de l'homme du métier et on peut citer notamment les techniques suivantes : 10 - PCR (Polymerase Chain Reaction), telle que décrite dans les brevets US 4,683,195, US 4,683,202 et US 4,800,159, - LCR (Ligase Chain Reaction), exposée par exemple dans la demande de brevet EP 0 201 184, - RCR (Repair Chain Reaction), décrite dans la demande de brevet WO 15 90/01069, - 3SR (Self Sustained Sequence Replication) avec la demande de brevet WO 90/06995, - NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification) avec la demande de brevet WO 91/02818, et 20 - TMA (Transcription Mediated Amplification) avec le brevet US 5,399,491. Lorsque l'amplification enzymatique est une PCR, le réactif spécifique comprend au moins 2 amorces d'amplification, spécifiques du gène cible, afm de permettre l'amplification du matériel spécifique du gène cible. Le matériel spécifique du gène cible comprend alors préférentiellement un ADN complémentaire obtenu par transcription inverse d'ARN 25 messager issu du gène cible (on parle alors d'ADNc spécifique du gène cible) ou un ARN complémentaire obtenu par transcription des ADNc spécifiques d'un gène cible (on parle alors d'ARNc spécifique du gène cible). Lorsque l'amplification enzymatique est une PCR réalisée après une réaction de transcription reverse, on parle de RT-PCR. 2910324 13 Selon un autre mode préféré de réalisation de l'invention, le réactif spécifique de l'étape b) comprend au moins une sonde d'hybridation. Par sonde d'hybridation, on entend un fragment nucléotidique comprenant au moins 5 motifs nucléotidiques, tel que de 5 à 100 motifs nucléiques, notamment de 10 à 35 motifs 5 nucléiques, possédant une spécificité d'hybridation dans des conditions déterminées pour former un complexe d'hybridation avec le matériel spécifique d'un gène cible. Dans la présente invention, le matériel spécifique du gène cible peut être une séquence nucléotidique comprise dans un ARN messager issu du gène cible (on parle alors d'ARNm spécifique du gène cible), une séquence nucléotidique comprise dans un ADN 10 complémentaire obtenu par transcription inverse dudit ARN messager (on parle alors d'ADNc spécifique du gène cible), ou encore une séquence nucléotidique comprise dans un ARN complémentaire obtenu par transcriptiondudit ADNc tel que décrit précédemment (on parlera alors d'ARNc spécifique du gène cible). La sonde d'hybridation peut comprendre un marqueur permettant sa détection. Par détection, on 15 entend soit une détection directe par une méthode physique, soit une détection indirecte par une méthode de détection à l'aide d'un marqueur. De nombreuses méthodes de détection existent pour la détection des acides nucléiques. [Voir par exemple Kricka et al., Clinical Chemistry, 1999, n 45(4), p.453-458 ou Keller G.H. et al., DNA Probes, 2nd Ed., Stockton Press, 1993, sections 5 et 6, p.173-249]. Par marqueur, on entend un traceur 20 capable d'engendrer un signal que l'on peut détecter. Une liste non limitative de ces traceurs comprend les enzymes qui produisent un signal détectable par exemple par colorimétrie, fluorescence ou luminescence, comme la peroxydase de raifort, la phosphatase alcaline, la beta galactosidase, la glucose-6-phosphate déshydrogénase; les chromophores comme les composés fluorescents, luminescents ou colorants ; les 25 groupements à densité électronique détectables par microscopie électronique ou par leurs propriétés électriques comme la conductivité, par les méthodes d'ampérométrie ou de voltamétrie, ou par des mesures d'impédance ; les groupements détectables par des méthodes optiques comme la diffraction, la résonance plasmon de surface, la variation 2910324 14 d'angle de contact ou par des méthodes physiques comme la spectroscopie de force atomique, l'effet tunnel, etc. ; les molécules radioactives comme 32P, 35S ou 125I. Au sens de la présente invention, la sonde d'hybridation peut être une sonde dite de détection. Dans ce cas, la sonde dite de détection est marquée au moyen d'un marqueur tel 5 que défini précédemment. La sonde de détection peut être notamment une sonde de détection molecular beacons telle que décrite par Tyagi & Kramer (Nature biotech, 1996, 14 :303-308). Ces "molecular beacons" deviennent fluorescentes lors de l'hybridation. Elles possèdent une structure de type tige-boucle et contiennent un fluorophore et un groupe "quencher". La fixation de la séquence de boucle spécifique avec 10 sa séquence complémentaire d'acide nucléique cible provoque un déroulement de la tige et l'émission d'un signal fluorescent lors de l'excitation à la longueur d'onde qui convient. Pour la détection de la réaction d'hybridation, on peut utiliser des séquences cibles marquées, directement (notamment par l'incorporation d'un marqueur au sein de la séquence cible) ou indirectement (notamment par l'utilisation d'une sonde de détection telle 15 que définie précédemment) la séquence cible. On peut notamment réaliser avant l'étape d'hybridation une étape de marquage et/ou de clivage de la séquence cible, par exemple en utilisant un désoxyribonucléotide triphosphate marqué lors de la réaction d'amplification enzymatique. Le clivage peut être réalisé notamment par l'action de l'imidazole et de chlorure de manganèse. La séquence cible peut aussi être marqué après l'étape 20 d'amplification, par exemple en hybridant une sonde de détection selon la technique d'hybridation sandwich décrite dans le document WO 91/19812. Un autre mode particulier préférentiel de marquage d'acides nucléiques est décrit dans la demande FR2 780 059. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, la sonde de détection comprend un flurophore et un quencher. 25 La sonde d'hybridation peut être également une sonde dite de capture. Dans ce cas, h sonde dite de capture est immobilisée ou immobilisable sur un support solide par tout moyen approprié, c'est-à-dire directement ou indirectement, par exemple par covalence ou adsorption. Comme support solide, on peut utiliser des matériaux de synthèse ou des matériaux naturels, éventuellement modifiés chimiquement, notamment les polysaccharides 2910324 15 tels que les matériaux à base de cellulose, par exemple du papier, des dérivés de cellulose tels que l'acétate de cellulose et la nitrocellulose ou le dextrane, des polymères, des copolymères, notamment à base de monomères du type styrène, des fibres naturelles telles que le coton, et des fibres synthétiques telles que le nylon ; des matériaux minéraux tels que 5 la silice, le quartz, des verres, des céramiques ; des latex ; des particules magnétiques ; des dérivés métalliques, des gels etc. Le support solide peut être sous la forme d'une plaque de microtitration, d'une membrane comme décrit dans la demande WO-A-94/12670, d'une particule. Ces étapes d'hybridation sur support peuvent être précédées d'une étape de réaction d'amplification enzymatique, telle que définie précédemment, pour augmenter la 10 quantité de matériel génétique cible. A titre indicatif, lorsque le réactif spécifique et le matériel biologique sont d'origine protéique, la mise en contact du réactif spécifique et du matériel biologique permet la formation d'un complexe dit antigène-anticorps entre le réactif spécifique et matériel 15 spécifique du gène cible. Lors de l'étape c) la détermination de l'expression du gène cible peut être réalisée par tous les protocoles connus de l'homme du métier. D'une manière générale, l'expression d'un gène cible peut être analysée par la détection 20 des ARNm (ARN messagers) qui sont transcrits du gène cible à un instant donné ou par la détection des protéines issues de ces ARNm. L'invention concerne préférentiellement la détermination de l'expression d'un gène cible par la détection des ARNm issus de ce gène cible. Lorsque le réactif spécifique comprend une ou des amorces d'amplification, on peut, lors 25 de l'étape c) du procédé selon l'invention, déterminer l'expression d'un gène cible de la manière suivante: 1) après avoir extrait comme matériel biologique, les ARN totaux (comprenant les ARN de transfert (ARNt), les ARN ribosomaux (ARNr) et les ARN messagers (ARNm)) d'un échantillon biologique tel que présenté précédemment, on réalise une étape de transcription 2910324 16 reverse afin d'obtenir les ADN complémentaires (ou ADNc) desdits ARNm. A titre indicatif, cette réaction de transcription reverse peut être réalisée à l'aide d'une enzyme reverse transcriptase qui permet d'obtenir, à partir d'un fragment d'ARN, un fragment d'ADN complémentaire. On peut utiliser notamment l'enzyme reverse transcriptase 5 provenant de l'AMV (Avian Myoblastosis Virus) ou de MMLV (Moloney Murine Leukaemia Virus). Lorsque l'on souhaite plus particulièrement obtenir uniquement les ADNc des ARNm, on réalise cette étape de transcription reverse en présence de fragments nucléotidiques comprenant uniquement des bases thymine (polyT), qui s'hybrident par complémentarité sur la séquence polyA des ARNm afm de former un 10 complexe polyT-polyA qui sert alors de point de départ à la réaction de transcription reverse réalisée par l'enzyme reverse transcriptase. On obtient alors des ADNc complémentaires des ARNm issus d'un gène cible (ADNc spécifique du gène cible) et des ADNc complémentaires des ARNm issus d'autres gènes que le gène cible (ADNc non spécifique du gène cible). 15 2) on met en contact la ou les amorces d'amplification spécifiques d'un gène cible avec les ADNc spécifique du gène cible et les ADNc non spécifique du gène cible. La ou les amorces d'amplification spécifiques d'un gène cible s'hybrident avec les ADNc spécifique du gène cible et on amplifie spécifiquement une région prédéterminée, de longueur connue, des ADNc provenant des ARNm issus du gène cible. Les ADNc non spécifiques du gène 20 cible ne sont pas amplifiés, alors qu'on obtient alors une grande quantité d'ADNc spécifiques du gène cible. Au sens de la présente invention, on parle indifféremment d d'hybridation. La détection peut être réalisée par la mise en contact du support sur lequel sont hybridées les sondes de capture spécifiques du gène cible avec l'ARNc spécifique du gène cible avec une sonde 15 dite de détection, marquée par un marqueur, et on détecte le signal émis par le marqueur. Lorsque l'ARNc spécifiques du gène cible a été préalablement marqué par un marqueur, on détecte directement le signal émis par le marqueur. L'utilisation d'ARNc est particulièrement avantageuse lorsqu'on utilise un support de type biopuce sur lequel est hybridé un grand nombre de sondes. 20 Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, les étapes B et C sont effectuées en même temps. Ce mode préféré peut être notamment mise en oeuvre par NASBA en temps réel qui regroupe en une étape unique la technique d'amplification NASBA et la détection en temps réel qui fait appel à des "molecular beacons". La réaction NASBA 25 intervient dans le tube, produisant de l'ARN simple brin avec lequel les "molecular beacons" spécifiques peuvent s'hybrider simultanément pour donner un signal fluorescent. La formation des nouvelles molécules d'ARN est mesurée en temps réel par contrôle continu du signal dans un lecteur fluorescent. 2910324 20 A titre indicatif, lorsque le réactif spécifique et le matériel biologique sont d'origine protéique, l'étape c) peut être notamment effectue par Western Blot ou ELISA, ou toute autre méthode connue de l'homme du métier. A titre indicatif, la technique ELISA est une technique biochimique de référence utilisée en 5 immunologie pour détecter la présence d'un anticorps ou d'un antigène dans un échantillon. La technique utilise deux anticorps, l'un d'entre eux étant spécifique à l'antigène et l'autre étant couplé à une enzyme. A titre indicatif, la technique Western Blot est un test pour détecter une protéine spécifique dans un échantillon à l'aide d'un anticorps spécifique de cette protéine comprenant les 10 étapes suivantes : La première étape est une électrophorèse sur gel, qui permet de séparer les protéines de l'échantillon selon leur taille Les protéines dans le gel sont alors transférées sur une membrane (nitrocellulose, PVDF...) par pression ou par application d'un courant électrique, les protéines se fixant à 15 la membrane grâce à des interactions hydrophobes et ioniques. Après saturation des sites d'interactions non spécifiques, un premier anticorps, spécifique de la protéine a étudier (anticorps primaire) est incubé avec la membrane. La membrane est ensuite rincée afin d'enlever les anticorps primaires non liés, puis incubée avec des anticorps dits secondaires, qui vont se lier aux anticorps primaires. Cet anticorps 20 secondaire est habituellement lié à une enzyme qui permet l'identification visuelle de la protéine étudiée sur la membrane. Comme pour les techniques ELISA, l'ajout d'un substrat de l'enzyme engendre une réaction colorée qui est visible sur la membrane. 25 Les figures permettront de mieux comprendre l'invention. La figure 1 présente les effets de l' IL-17A et IL-17F sur la sécrétion d'IL- 8 de cellules AGS. Les cellules AGS étaient cultivées en présence ou en l'absence de 50ng/ml de rhIL-17A ou rhIL- 17F pendant 6, 12 ou 24h. La quantité d'IL8 dans le surnageant était 2910324 21 mesurée par ELISA. Les résultats sont présentés par la moyenne SEM sur 4 séries d'expérience. * P REVENDICATIONS 1) Utilisation d'au moins une molécule qui bloque l'activité inflammatoire et/ou immunostimulante de l'interleukine 17 et/ou d'au moins une molécule qui bloque l'action d'un récepteur de l'IL17, pour la préparation d'un médicament destiné à l'inhibition, la prévention ou le traitement d'un cancer gastrique. 2) Utilisation selon la revendication 1 selon laquelle l'interleukine 17 est l'interleukine 17 A (IL17A) ou l'interleukine 17F (IL17F). 3) Utilisation selon la revendication 1 ou 2 selon laquelle ledit récepteur de l'IL17 est le récepteur A de l'1L17 ou le récepteur C de l'1L17. 4) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 a 3 selon laquelle ladite 15 molécule qui bloque l'activité inflammatoire et/ou immunostimulante de l'interleukine 17 est un anticorps dirigé contre l'IL17, préférentiellement contre l'IL17A ou F et/ou ladite molécule qui bloque l'action dudit récepteur de l'IL17 est un anticorps dirigé contre le récepteur de l'1L17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'1L17. 20 5) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 a 3 selon laquelle ladite molécule qui bloque l'activité inflammatoire et/ou immunostimulante de l'interleukine 17 est un ARN interférent avec IL17, préférentiellement contre l'ILI7A ou F et/ou ladite molécule qui bloque l'action dudit récepteur de l'ILl7 est un ARN 25 interférent avec le récepteur de l'1L17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'1L17. 6) Composition pharmaceutique comprenant à titre de substance active au moins une molécule qui bloque l'activité inflammatoire et/ou immunostimulante de 30 l'interleukine 17 et/ou d'au moins une molécule qui bloque l'action d'un récepteur de l'IL17 en association avec un véhicule pharmaceutiquement approprié. 2910324 27 7) Composition selon la revendication 6 caractérisé en ce que l'interleukine 17 est l'interleukine 17 A (IL 17A) ou l'interleukine 17F (IL 17F). 5 8) Composition selon la revendication 6 ou 7 caractérisé en ce que ledit récepteur de l' IL 17 est le récepteur A de l'IL17 ou le récepteur C de l'IL17. 9) Composition selon l'une quelconque des revendications 6 a 8 caractérisé en ce que ladite molécule qui bloque l'activité inflammatoire et/ou immunostimulante de l'interleukine 17 est un anticorps dirigé contre l'IL17, préférentiellement contre l'IL17A ou F et/ou ladite molécule qui bloque l'action dudit récepteur de l'IL17 est un anticorps dirigé contre le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'IL17. 10) Composition selon l'une quelconque des revendications 8 a 12 caractérisé en ce que ladite molécule qui bloque l'activité inflammatoire et/ou immunostimulantede l'interleukine 17 est un ARN interférent avec IL17, préférentiellement contre l'IL17A ou F et/ou ladite molécule qui bloque l'action dudit récepteur de l'IL17 est un ARN interférent avec le récepteur de l'IL17, préférentiellement contre le récepteur A ou C de l'1L17. 11) Utilisation de la composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 6 a 10 pour l'inhibition, la prévention ou le traitement d'un cancer gastrique.25