Brevet FR2902799A1 — publié le 20071228

La présente invention concerne la préparation d'un échantillon pour l'analyse microbiologique d'un liquide. On sait qu'il existe des liquides susceptibles de contenir différents types de micro-organismes parmi lesquels l'analyse microbiologique ne doit porter que sur un seul ou plusieurs types. Ces liquides existent par exemple au bout d'une chaîne de fabrication d'anticorps monoclonaux. En effet de tels liquides, chargés des cellules eucaryotes qui ont permis de produire les anticorps, sont éventuellement contaminés par des bactéries et/ou des virus. La présence des cellules eucaryotes peut gêner l'analyse microbiologique des bactéries et des virus soit en libérant des toxines pouvant nuire à la croissance des micro-organismes dans le cas d'une détection classique sur un milieu de culture gélosé (détection de faux négatifs) soit en perturbant la lecture des résultats dans le cas d'une détection rapide (détection de faux positifs) par luminescence, fluorescence, par amplification ou hybridation ou par toute autre méthode d'analyse des acides nucléiques de ces micro-organismes. Afin de réaliser une analyse fiable de ce genre de liquides, il convient donc de préparer un échantillon dans lequel ont été sélectionnés uniquement les micro-organismes (les bactéries et/ou les virus dans l'exemple donné ci-dessus) appartenant aux types de micro-organismes que l'on souhaite détecter. On connaît déjà des procédés de préparation d'un échantillon pour l'analyse d'un liquide dans lequel on sélectionne les micro-organismes à détecter en exploitant les différences de caractéristiques morphologiques (physiques et/ou chimiques) entre les différents types de micro-organismes. On connaît déjà plus particulièrement un procédé de préparation comportant une étape de sélection consistant à ajouter dans le liquide à analyser un réactif adapté à effectuer une lyse spécifique des micro-organismes appartenant aux types de micro-organismes que l'on ne souhaite pas conserver dans l'échantillon puis à filtrer le liquide sur une membrane de façon à recueillir sur cette membrane un échantillon contenant uniquement les micro-organismes à détecter et qui n'ont pas réagi spécifiquement avec l'agent de lyse (ceux ayant subi la lyse étant détruits et ayant traversé la membrane). L'échantillon ainsi recueilli est ensuite récupéré pour être analysé selon des techniques d'analyse microbiologique classiques ou rapides. Une autre solution également pour former l'échantillon consiste à séparer par centrifugation à basse vitesse les micro-organismes à conserver des 5 autres grâce à leurs différences de masse. L'invention vise à préparer un échantillon selon un procédé similaire mais tout en étant à la fois plus performant et plus simple et commode à mettre en oeuvre. Elle propose à cet effet un procédé de préparation d'un échantillon pour 10 l'analyse microbiologique d'un liquide susceptible de contenir des micro-organismes de plusieurs types différents ayant chacun des caractéristiques morphologiques prédéterminées, lequel procédé comporte l'étape d'effectuer une sélection des micro-organismes parmi lesdits différents types de micro-organismes, caractérisé en ce que ladite étape d'effectuer une sélection 15 comporte : - l'étape de se procurer une unité de préparation dudit échantillon comportant un corps globalement tubulaire à l'intérieur duquel sont fixées une première et une deuxième membrane, ledit corps présentant une ouverture d'introduction dudit liquide, un premier compartiment entre ladite ouverture 20 d'introduction et ladite première membrane, un deuxième compartiment entre lesdites première et deuxième membranes et un troisième compartiment du côté de ladite deuxième membrane opposé à ladite première membrane, ladite première membrane ayant un premier diamètre de pores prédéterminé et ladite deuxième membrane un deuxième diamètre de pores prédéterminé inférieur audit 25 premier diamètre de pores prédéterminé de ladite première membrane ; - l'étape de faire passer un volume prédéterminé dudit liquide du premier au deuxième compartiment au travers de ladite première membrane ; - l'étape de faire passer l'ensemble du filtrat, ainsi parvenu au deuxième compartiment, du deuxième au troisième compartiment au travers de 30 ladite deuxième membrane afin de recueillir ledit échantillon sur ladite deuxième membrane avec lesdits micro-organismes sélectionnés parmi lesdits différents types de micro-organismes qui sont ceux dont la taille est inférieure au diamètre de pores prédéterminé de ladite première membrane et supérieure au diamètre de pores prédéterminé de ladite deuxième membrane ; et - l'étape de récupérer ledit échantillon ainsi recueilli sur ladite deuxième membrane. Dans le procédé selon l'invention, l'échantillon formé des micro-organismes à analyser (bactéries et/ou virus par exemple) est recueilli sur la deuxième membrane après avoir été séparé des micro-organismes non souhaités (par exemple des cellules eucaryotes) de trop grande taille pour traverser la première membrane. Une telle sélection des micro-organismes en fonction de leurs différences de taille est particulièrement efficace, souvent davantage que dans les procédés de l'art antérieur susmentionnés. Une explication de ceci semble être que, dans le cas de la centrifugation, une partie des micro-organismes à recueillir est entrainée par la force centrifuge avec les micro-organismes à éliminer ; et, dans le cas de la lyse chimique, que l'agent de lyse n'est jamais parfaitement sélectif de sorte qu'une proportion faible mais non nulle des micro-organismes à recueillir subit la lyse et n'est donc pas recueillie sur la membrane, alors que dans le procédé selon l'invention (sélection par la taille), de tels effets marginaux sont négligeables, voire inexistants. Selon des caractéristiques préférées, pour des raisons de simplicité et de commodité tant à la fabrication qu'à l'utilisation : - l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner une unité de préparation dont le corps comporte une première portion à laquelle est fixée ladite première membrane et une deuxième portion à laquelle est fixée ladite deuxième membrane, lesdites portions étant détachables l'une de l'autre, et l'étape de récupérer ledit échantillon comporte l'étape de détacher ladite deuxième portion dudit corps de ladite première portion dudit corps ; et/ou - l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner une unité de préparation dans le corps de laquelle est ménagée une ouverture auxiliaire débouchable communiquant avec ledit deuxième compartiment et l'étape de récupérer ledit échantillon comporte l'étape de déboucher ladite ouverture, l'étape de déposer un agent de lyse desdits micro- organismes sélectionnés sur ladite deuxième membrane par ladite ouverture auxiliaire puis l'étape de faire passer le lysat ainsi formé du deuxième au troisième compartiment au travers de ladite deuxième membrane. Il est ainsi possible, soit grâce à un corps formé en deux portions détachables, soit grâce à un orifice ménagé dans ce corps d'avoir accès à la deuxième membrane et plus particulièrement à la face de la deuxième membrane sur laquelle a été recueilli l'échantillon. Selon d'autres caractéristiques préférées, pour les mêmes raisons que celles indiquées ci-dessus : - les étapes de faire passer ledit liquide au travers desdites membranes sont réalisées en mettant en dépression ledit troisième compartiment ; - les étapes de faire passer ledit liquide au travers desdites membranes sont réalisées en mettant en surpression ledit premier compartiment ; - les étapes de faire passer ledit liquide au travers desdites membranes sont réalisées par centrifugation de ladite unité de préparation ; - l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner comme dite première membrane une membrane de diamètre de pores supérieur à 1 m ; - l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner comme dite deuxième membrane une membrane de diamètre de pores inférieur à 0,65 m ; et/ou -l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner comme dite deuxième membrane une membrane de diamètre de 25 pores inférieur à 0,1 m. L'invention vise également, sous un deuxième aspect, une unité de préparation d'un échantillon convenant à la mise en oeuvre du procédé tel qu'exposé ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle comporte un corps globalement tubulaire à l'intérieur duquel sont fixées une première et une deuxième membrane, 30 ledit corps présentant une ouverture d'introduction dudit liquide, un premier compartiment entre ladite ouverture d'introduction et ladite première membrane, un deuxième compartiment entre lesdites première et deuxième membranes et un troisième compartiment du côté de ladite deuxième membrane opposé à ladite première membrane, ladite première membrane ayant un premier diamètre de pores prédéterminé et ladite deuxième membrane un deuxième diamètre de pores prédéterminé inférieur audit premier diamètre de pores prédéterminé de ladite première membrane, ladite unité étant adaptée à faire passer un volume prédéterminé dudit liquide du premier au deuxième compartiment par ladite première membrane puis à faire passer l'ensemble du filtrat, ainsi parvenu au deuxième compartiment, du deuxième au troisième compartiment au travers de ladite deuxième membrane afin de recueillir ledit échantillon sur ladite deuxième membrane ; ledit corps comportant également des moyens pour récupérer ledit échantillon ainsi recueilli sur ladite deuxième membrane. L'unité de préparation est ainsi conçue pour permettre, d'une part, de faire passer l'ensemble du volume prédéterminé au travers des deux membranes (à l'exception bien entendu des parties retenues par les membranes) et, d'autre part, d'avoir accès à l'échantillon grâce aux moyens pour récupérer l'échantillon. On notera qu'une simple unité de filtration à plusieurs étages, par exemple une unité de clarification de solution, ne pourrait pas servir d'unité de préparation selon l'invention, puisqu'une telle unité de filtration n'est pas réalisée avec des membranes, ne serait pas adaptée à faire passer l'ensemble du filtrat parvenu dans un compartiment intermédiaire au travers du deuxième étage (il resterait toujours un filtrat résiduel) et/ou serait dépourvue de moyens pour récupérer l'échantillon. Selon des caractéristiques préférées, pour des raisons de simplicité et de commodité tant à la fabrication qu'à l'utilisation, ladite première membrane est perméable à l'air à l'état mouillé. De cette façon, lorsque le liquide a entièrement été vidé du premier compartiment et que la première membrane vient au contact de l'air du côté qui est tourné vers ce compartiment, cette membrane, grâce à la taille suffisante de ses pores, reste perméable à l'air (pas de phénomène de point de bulle) de sorte que de l'air peut pénétrer par cette membrane dans le deuxième compartiment pour permettre au liquide qu'il contient d'être évacué. Selon d'autres caractéristiques préférées, pour les mêmes raisons que celles indiquées ci-dessus : - les pores de ladite première membrane sont de diamètre supérieur à - les pores de ladite deuxième membrane sont de diamètre inférieur à - les pores de ladite deuxième membrane sont de diamètre inférieur à - ledit corps comporte une première portion à laquelle est fixée ladite première membrane et une deuxième portion à laquelle est fixée ladite deuxième membrane et lesdits moyens de récupération sont des moyens de détachement 10 de ladite deuxième portion de ladite première portion ; -lesdits moyens de récupération comportent une ouverture débouchable ménagée dans ledit corps et communiquant avec ledit deuxième compartiment ; - ledit corps comporte un godet délimitant ledit troisième 15 compartiment ; et/ou - ledit godet est détachable. Les caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description qui suit, donnée à titre d'exemple préféré, mais non limitatif, en référence aux dessins annexés, sur lesquels : 20 - la figure 1 est une vue en coupe d'une unité de préparation selon l'invention ; - la figure 2 est une vue de cette unité similaire à la figure 1 mais dans laquelle les deux portions d'un corps de cette unité ont été désemboîtées ; - la figure 3 est une vue similaire à la figure 1 d'un second mode de 25 réalisation de l'unité de préparation ; et - la figure 4 est une vue similaire à la figure 1 d'un troisième mode de réalisation de l'unité de préparation. L'unité de préparation 1 illustrée en figure 1 comporte un corps globalement tubulaire 2 à l'intérieur duquel sont fixés une membrane 3, une 30 membrane 4 et deux supports poreux 5 et 6. Les membranes 3 et 4 sont en polyvinylidène fluoride (PVDF), la membrane 3 présentant des pores de diamètre égal à 5 m et la membrane 4 des pores de diamètre égal à 0,4 m.5 Le corps 2 est formé d'une portion 9 et d'une portion 10 emboîtées l'une dans l'autre. La portion 9 présente une ouverture 7 d'introduction du liquide tandis que la portion 10 présente une ouverture de vidange 8 de ce liquide. La portion 9 présente une première partie cylindrique 15 délimitant l'ouverture 7 d'un côté et se rattachant du côté opposé à une seconde partie 16 également cylindrique de diamètre inférieur à celui de la partie 15, ces parties 15 et 16 étant reliées l'une à l'autre par une paroi annulaire transversale 17. Au niveau de cette paroi transversale 17 est fixé le support poreux 5 et scellée la membrane 3, laquelle est en appui par sa face 12 contre ce support poreux 5 du côté de l'ouverture 7 (figure 1). La portion 10 comporte une première partie cylindrique 20 de diamètre sensiblement égal au diamètre de la partie cylindrique 15, une deuxième partie cylindrique 21 de diamètre sensiblement égal au diamètre de la partie cylindrique 16, et une troisième partie cylindrique 22 de diamètre inférieur au diamètre de la partie 21 et délimitant l'ouverture 8. Les portions 20 et 21 sont reliées l'une à l'autre par une paroi annulaire transversale 23 tandis que les portions 21 et 22 sont reliées l'une à l'autre par une paroi annulaire transversale 24. Au niveau de la paroi annulaire 23, est fixé le support poreux 6 et scellée la membrane 4, laquelle est en appui par sa face 14 contre le support poreux 6, la face 13 de cette membrane regardant le support poreux 5 (figure 1). La portion 9 délimite avec la membrane 3 un compartiment d'admission 26 du liquide à filtrer, les portions 9 et 10 à l'état emboîté délimitent avec les membranes 3 et 4 un compartiment intermédiaire 27 tandis que la portion 10 délimite avec la membrane 4 un compartiment d'évacuation 28 du liquide. A l'état emboîté de la portion 9 dans la portion 10 du corps 2, la surface de la partie cylindrique 16 tournée vers l'extérieur regarde la surface intérieure de la partie cylindrique 20 en prenant appui par déformation élastique l'une contre l'autre de façon à maintenir solidaires entre elles les portions 9 et 10. On va maintenant décrire les différentes étapes de préparation d'un échantillon à partir d'un liquide à analyser susceptible de contenir des cellules eucaryotes et des bactéries dont on souhaite détecter la présence parmi ces cellules. Lors d'une première étape, l'opérateur raccorde la partie cylindrique 22 à une source de vide (une pompe à vide par exemple) pour mettre en dépression le compartiment 28 et déverse un volume prédéterminé (par exemple 10 ml) de liquide dans le compartiment 26. La mise en dépression du compartiment 28 entraîne la mise en dépression du compartiment 27 de sorte que le volume prédéterminé de liquide est aspiré et traverse la membrane 3 et le support 5 pour occuper le compartiment 27. Les pores de la membrane 3 sont dimensionnés de sorte que seuls les micro-organismes de plus grande taille, ici les cellules eucaryotes sont retenues par cette membrane, tandis que les autres micro-organismes, ici les bactéries, passent au travers de celle-ci et du support poreux 5 pour se retrouver dans le filtrat occupant le compartiment 27. De plus, la taille importante des pores de la membrane 3 fait que même lorsque cette membrane est mouillée, celle-ci reste perméable à l'air (absence de phénomène de point de bulle) de sorte que l'air peut pénétrer dans le compartiment 27 par la membrane 3. Cette membrane laissant passer l'air, le filtrat contenu dans le compartiment 27 s'écoule alors au travers de la membrane 4 et du support 6 pour occuper le compartiment 28 puis sortir du corps 2 par l'ouverture de vidange 8. Les pores de la membrane 4 sont dimensionnés de façon à retenir les bactéries que l'on souhaite détecter. Une fois ces opérations réalisées, l'opérateur déconnecte la source de vide de la partie cylindrique 22. Il désolidarise ensuite les portions 9 et 10 en faisant coulisser la portion 9 par rapport à la portion 10 de sorte qu'elles se désengagent l'une de l'autre comme illustré en figure 2. La membrane 4 et en particulier la face 13 de cette membrane sur laquelle a été recueillie l'échantillon est ainsi rendue accessible. II est alors possible de prélever cette membrane pour la mettre au contact d'un milieu de culture gélosé puis pour disposer cet ensemble dans une étuve pour mettre les bactéries à incuber. Une autre solution consiste à traiter cette membrane (après l'avoir extraite ou non de la portion 10) en déposant sur celle-ci du côté de sa face 13 un réactif révélant la présence de I'ATP des bactéries par luminescence ou bien encore un réactif permettant d'identifier les bactéries par fluorescence. Une autre solution encore consiste à analyser l'ADN des bactéries recueillies sur la membrane 4 par une méthode classique (type PCR par exemple). Il est également possible, si l'on souhaite récupérer l'échantillon indépendamment de la membrane, de déposer sur cette membrane un agent de lyse des bactéries. En raccordant de nouveau l'unité à une source de vide, le lysat contenant le matériel biologique des bactéries traverse alors la membrane 4 puis le compartiment 28 pour être recueilli dans un récipient disposé au-delà de l'ouverture 8. Le liquide récupéré dans ce récipient peut alors être analysé par une méthode de détection microbiologique rapide (par luminescence par exemple). L'utilisation conjointe de l'unité selon l'invention avec des méthodes de détection rapide des micro-organismes permet de contrôler dans des délais courts et à grande échelle toutes sortes d'échantillons liquides susceptibles de contenir plusieurs types de micro-organismes. Un autre mode de réalisation de l'unité de préparation est représenté en figure 3. D'une manière générale, on a employé pour les éléments similaires les mêmes références, additionnées du nombre 100. L'unité de préparation 101 est adaptée à être disposée dans une 25 centrifugeuse de façon à faire s'écouler le liquide au travers des deux membranes sans avoir à mettre en dépression cette unité de préparation. Dans ce mode de réalisation, les parties annulaire 24 et cylindrique 22 ont été supprimées tandis que la partie cylindrique 121 est rallongée par rapport à la partie 21 du mode de réalisation précédent de sorte qu'il est possible d'y 30 emboîter un godet 130 appartenant au corps 102 pour prélever le second filtrat lorsque le liquide sort de l'ouverture 108 ou encore pour récupérer un lysat dans ce godet, une fois le second filtrat vidé, lorsque l'on souhaite récupérer l'échantillon indépendamment de la membrane 4 (en déposant un agent de lyse sur cette membrane). Ce godet est ainsi adapté à être désolidarisé de la portion 110 (en glissant le long de la partie cylindrique 121) soit pour vider le second filtrat soit pour avoir accès au lysat afin de réaliser une détection microbiologique rapide de ce lysat, par exemple en rajoutant dans ce godet un réactif révélant la présence d'ATP par luminescence. Un autre mode de réalisation est représenté en figure 4. Dans ce mode de réalisation, l'unité de préparation 201 présente une structure similaire à l'unité de préparation 101 si ce n'est qu'une ouverture 232, obturée de façon étanche par un bouchon retirable 233, est ménagée latéralement dans la partie cylindrique 220 de la portion 210 du corps 202. Cette ouverture, une fois l'échantillon préparé et le bouchon 233 retiré, permet si besoin d'accéder au compartiment 227 et en particulier à la face 13 de la membrane 3, par exemple pour y déposer un agent de lyse, sans avoir à désolidariser les portions 209 et 210 du corps 202, le matériel biologique des micro-organismes étant ensuite récupéré dans le godet 230. Dans une variante, les pores de la membrane 4 sont de diamètre inférieur à 0.1 lam de façon à recueillir sur la membrane des bactéries et/ou des virus. Dans une autre variante encore, on fait passer le liquide au travers des membranes 3 et 4 en mettant en surpression la chambre d'admission 26 par exemple à l'aide d'un piston engagé dans la partie cylindrique 15 en laissant entre le piston et le liquide un volume d'air. Le piston lorsqu'il est actionné entraîne le déplacement du volume de liquide ainsi que du volume d'air comprimé entre le piston et liquide, de sorte que le compartiment 26 est mis en suppression. Le liquide pénètre ainsi dans le compartiment 27 puis est chassé par l'air poussé par le piston, air qui pénètre à son tour dans le compartiment 27 au travers de la membrane 3 qui reste perméable à l'air. Dans une autre variante encore, les micro-organismes à détecter ne sont pas des bactéries ou des virus mais des levures (de taille suffisamment petite pour ne pas être retenues par la première membrane) ou des moisissures par exemple. Dans une autre variante encore, le liquide à analyser ne contient pas de cellules eucaryotes mais d'autres types de micro-organismes (à séparer des micro-organismes à détecter) comme par exemple des levures ou encore des champignons filamentaires. Dans encore une autre variante, les deux portions du corps de l'unité de préparation sont encliquetées l'une à l'autre et la désolidarisation des portions s'opère par exemple en cassant des pattes d'encliquetage. Dans encore une autre variante, les deux portions sont d'une seule pièce et sont reliées par une zone frangible à sectionner pour les détacher l'une de l'autre. Dans encore une autre variante la membrane recueillant l'échantillon n'est pas scellée au corps de l'unité de préparation mais pressée contre un joint torique et/ou les membranes sont réalisées en polyéthersulfone (PEF), en polycarbonate, en polyesther ou bien encore en esther de cellulose. La présente invention n'est pas limitée au mode de réalisation décrit et représenté mais englobe toute variante d'exécution. REVENDICATIONS , 1. Procédé de préparation d'un échantillon pour l'analyse microbiologique d'un liquide susceptible de contenir des micro-organismes de plusieurs types différents ayant chacun des caractéristiques morphologiques prédéterminées, lequel procédé comporte l'étape d'effectuer une sélection des micro-organismes parmi lesdits différents types de micro-organismes, caractérisé en ce que ladite étape d'effectuer une sélection comporte : - l'étape de se procurer une unité de préparation (1 ; 101 ; 201) dudit échantillon comportant un corps (2 ; 102 ; 202) globalement tubulaire à l'intérieur duquel sont fixées une première (3) et une deuxième (4) membrane, ledit corps (2 ; 102 ; 202) présentant une ouverture d'introduction dudit liquide (7 ; 107 ; 207), un premier compartiment (26 ; 126 ; 226) entre ladite ouverture d'introduction (7 ; 107 ; 207) et ladite première membrane (3), un deuxième compartiment (27 ; 127 ; 227) entre lesdites première (3) et deuxième (4) membranes et un troisième compartiment (28 ; 128 ; 228) du côté de ladite deuxième membrane (4) opposé à ladite première membrane (3), ladite première membrane (3) ayant un premier diamètre de pores prédéterminé et ladite deuxième membrane (4) un deuxième diamètre de pores prédéterminé inférieur audit premier diamètre de pores prédéterminé de ladite première membrane (3) ; - l'étape de faire passer un volume prédéterminé dudit liquide du premier (26 ; 126 ; 226) au deuxième (27 ; 127 ; 227) compartiment au travers de ladite première membrane (3) ; - l'étape de faire passer l'ensemble du filtrat, ainsi parvenu au deuxième compartiment (27 ; 127 ; 227), du deuxième (27 ; 127 ; 227) au troisième (28 ; 128 ; 228) compartiment au travers de ladite deuxième membrane (4) afin de recueillir ledit échantillon sur ladite deuxième membrane (4) avec lesdits micro-organismes sélectionnés parmi lesdits différents types de micro-organismes qui sont ceux dont la taille est inférieure au diamètre de pores prédéterminé de ladite première membrane (3) et supérieure au diamètre de pores prédéterminé de ladite deuxième membrane (4) ; et -l'étape de récupérer ledit échantillon ainsi recueilli sur ladite deuxième membrane (4). 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner une unité de préparation (1 ; 101) dont le corps (2 ; 102) comporte une première portion (9 ; 109) à laquelle est fixée ladite première membrane (3) et une deuxième portion (10 ; 110) à laquelle est fixée ladite deuxième membrane (4), lesdites portions étant détachables l'une de l'autre, et en ce que l'étape de récupérer ledit échantillon comporte l'étape de détacher ladite deuxième portion (10 ; 110) dudit corps de ladite première portion (9 ; 109) dudit corps. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner une unité de préparation (201) dans le corps (202) de laquelle est ménagée une ouverture auxiliaire débouchable (232) communiquant avec ledit deuxième compartiment (227) et en ce que l'étape de récupérer ledit échantillon comporte l'étape de déboucher ladite ouverture (232), l'étape de déposer un agent de lyse desdits micro-organismes sélectionnés sur ladite deuxième membrane (4) par ladite ouverture auxiliaire (232) puis l'étape de faire passer le lysat ainsi formé du deuxième (227) au troisième (228) compartiment au travers de ladite deuxième membrane (4). 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les étapes de faire passer ledit liquide au travers desdites membranes (3, 4) sont réalisées en mettant en dépression ledit troisième compartiment (28). 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les étapes de faire passer ledit liquide au travers desdites membranes (3, 4) sont réalisées en mettant en surpression ledit premier compartiment (26). 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les étapes de faire passer ledit liquide au travers desdites membranes (3, 4) sont réalisées par centrifugation de ladite unité de préparation (1 ; 101 ; 201). 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'étape de se procurer une unité de préparation (1 ; 101 ; 201) comporte l'étape de sélectionner comme dite première membrane (3) une membrane de diamètre de pores supérieur à 1 m. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner comme dite deuxième membrane (4) une membrane de diamètre de pores inférieur à 0,65 m. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'étape de se procurer une unité de préparation comporte l'étape de sélectionner comme dite deuxième membrane une membrane de diamètre de pores inférieur à 0,1 m. 10. Unité de préparation d'un échantillon convenant à la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle comporte un corps (2 ; 102 ; 202) globalement tubulaire à l'intérieur duquel sont fixées une première (3) et une deuxième (4) membrane, ledit corps (2 ; 102 ; 202) présentant une ouverture d'introduction (7 ; 107 ; 207) dudit liquide, un premier compartiment (26 ; 126 ; 226) entre ladite ouverture d'introduction (7 ; 107 ; 207) et ladite première membrane (3), un deuxième compartiment (27 ; 127 ; 227) entre lesdites première (3) et deuxième (4) membranes et un troisième compartiment (28 ; 128 ; 228) du côté de ladite deuxième membrane (4) opposé à ladite première membrane (3), ladite première membrane (3) ayant un premier diamètre de pores prédéterminé et ladite deuxième membrane (4) un deuxième diamètre de pores prédéterminé inférieur audit premier diamètre de pores prédéterminé de ladite première membrane (3), ladite unité étant adaptée à faire passer un volume prédéterminé dudit liquide du premier au deuxième compartiment par ladite première membrane (3) puis à faire passer l'ensemble du filtrat, ainsi parvenu au deuxième compartiment (27 ; 127 ; 227), du deuxième au troisième compartiment au travers de ladite deuxième membrane (4) afin de recueillir ledit échantillon sur ladite deuxième membrane (4) ; ledit corps comportant également des moyens (16, 20 ; 116, 120 ; 232) pour récupérer ledit échantillon ainsi recueilli sur ladite deuxième membrane (4). 11. Unité selon la revendication 10, caractérisée en ce que ladite première membrane (3) est perméable à l'air à l'état mouillé. 12. Unité selon la revendication 11, caractérisée en ce que les pores de ladite première membrane (3) sont de diamètre supérieur à I lam. 13. Unité selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, caractérisée en ce que les pores de ladite deuxième membrane (4) sont de diamètre inférieur à 0,65 pm. 14. Unité selon la revendication 13, caractérisée en ce que les pores de ladite deuxième membrane (4) sont de diamètre inférieur à 0,1 pm. 15. Unité selon l'une quelconque des revendications 10 à 14, caractérisée en ce que ledit corps (2 ; 102) comporte une première portion (9 ; 109) à laquelle est fixée ladite première membrane (3) et une deuxième portion (10 ; 110) à laquelle est fixée ladite deuxième membrane (4) et en ce que lesdits moyens de récupération sont des moyens de'détachement (16, 20 ; 116, 120) de ladite deuxième portion (10 ; 110) de ladite première portion (9 ; 109). 16. Unité selon l'une quelconque des revendications 10 à 14, caractérisée en ce que lesdits moyens de récupération comportent une ouverture débouchable (232) ménagée dans ledit corps (202) et communiquant avec ledit deuxième compartiment (227). 17. Unité selon l'une quelconque des revendications 10 à 16, caractérisée en ce que ledit corps (102 ; 202) comporte un godet (130 ; 230) délimitant ledit troisième compartiment (128 ; 228). 18. Unité selon la revendication 17, caractérisée en ce que ledit godet 20 (130 ; 230) est détachable.