Brevet FR2909286A1 — publié le 20080606

-1- L'invention concerne une méthode pour induire une protection contre les 4 sérotypes de la dengue chez un patient, comprenant : (a) une première administration d'un vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype (b) une deuxième administration d'un vaccin tétravalent comprenant des virus vaccinaux des 4 serotypes de la dengue, et dans laquelle la deuxième administration (b) est mise en oeuvre au moins 30 jours à au plus 12 mois après la première administration (a). Les maladies dengue sont causées par quatre virus du genre flavivirus de type sérologique proches mais distincts d'un point de vue antigénique (Gübler et al., 1988 In: Epidemiology of arthropod-borne viral disease. Monath TPM, editor, Boca Raton (FL): CRC Press: 223-60 ; Kautner et al., 1997, J. of Pediatrics, 131:516-524; Rigau-Pérez et al., 1998, Lancet; 352: 971-977 ; Vaughn et al., 1997, J Infect Dis; 176: 322-30). L'infection avec un sérotype de la dengue peut produire un spectre de maladie clinique allant d'un syndrome viral non spécifique jusqu'à une maladie sévère hémorragique fatale. La période d'incubation de la fièvre dengue après piqûre du moustique est d'environ 4 jours (allant de 3 à 14 jours). La fièvre dengue est caractérisée par une fièvre biphasique, des maux de tête, des douleurs dans différentes parties du corps, une prostration, des éruptions, et une lymphadénopathie, (Kautner et al., 1997, J. of Pediatrics, 131:516-524 ; Rigau-Pérez et al., 1998, Lancet; 352: 971-977). La période virémique est la même que la période fébrile (Vaughn et al., 1997, J. Infect. Dis.; 176: 322-30). La guérison de la fièvre dengue est acquise au bout de 7 à 10 jours, mais une asthénie prolongée est usuelle. Des baisses de la numération des leucocytes et des plaquettes sont fréquentes. La dengue hémorragique est une maladie fébrile sévère caractérisée par des anomalies de l'homéostasie et une augmentation de la perméabilité vasculaire qui peut conduire à une hypovolémie et à une hypotension (dengue avec syndrome de choc) souvent compliquée par des hémorragies internes sévères. Le taux de mortalité de la dengue hémorragique peut atteindre jusqu'à 10 % sans thérapie, mais est 1 % dans la plupart des centres ayant une expérience thérapeutique (WHO technical Guide, 1986. Dengue haemorrhagic 2909286 -2- fever: diagnosis, treatment and control, p1-2. World Health Organization, Geneva, Switzerland). Le diagnostic de routine en laboratoire de la dengue est basé sur l'isolation du virus et/ou la détection d'anticorps spécifiques du virus de la 5 dengue. La dengue est la deuxième maladie infectieuse tropicale la plus importante après la malaria, plus de la moitié de la population mondiale vivant dans des zones à risque de transmission épidémique. Chaque année, les cas de dengue sont estimés à 50-100 millions, les cas de patients hospitalisés pour 10 une dengue hémorragique à 500 000, et le nombre de morts à 25 000. La dengue est endémique en Asie, dans le Pacifique, en Afrique, en Amérique latine et dans les Caraïbes. Plus de 100 pays tropicaux sont endémiques pour les infections par le virus de la dengue et la dengue hémorragique a été documentée dans 60 de ces pays (Gubler, 2002, TRENDS in Microbiology. 15 10:100-103 ; Monath, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci.; 91: 2395-2400). Un certain nombre de facteurs bien décrits semblent être impliqués dans la dengue : la croissance de la population ; une urbanisation non planifiée et non contrôlée, en particulier en association avec la pauvreté ; une augmentation des voyages aériens ; le manque de contrôle effectif des moustiques et la détérioration des 20 infrastructures sanitaires et de santé publique (Gubler, 2002, TRENDS in Microbiology. 10:100-103). Les voyageurs et expatriés sont de plus en plus alertés contre la dengue (Shirtcliffe et al., 1998, J. Roy. Coll. Phys. Lond.; 32: 235-237). La dengue a constitué une des principales causes de maladies fébriles au sein les troupes américaines au cours de déploiements dans des 25 zones tropicales endémiques pour la dengue (DeFraites et al., 1994, MMWR 1994; 43: 845-848). Les virus sont maintenus dans un cycle qui implique les humains et Aedes aegypti, un moustique domestique piquant le jour, qui préfère s'alimenter sur l'homme. L'infection chez l'homme est initiée par l'injection du virus au cours 30 du repas de sang d'un moustique Aedes aegypti infecté. Le virus salivaire est déposé principalement dans les tissus extravasculaires. La première catégorie de cellules infectées après inoculation sont les cellules dendritiques, qui migrent ensuite vers les ganglions lymphatiques (Wu et al., 2000, Nature Med.; 7:816- 2909286 -3820). Après une réplication initiale dans la peau et dans les ganglions lymphatiques, le virus apparaît dans le sang au cours de la phase fébrile aiguë, généralement pendant 3 à 5 jours. Les monocytes et les macrophages sont, avec les cellules dendritiques, 5 parmi les premières cibles du virus de la dengue. La protection contre une réinfection homotypique est complète et dure probablement toute la vie, mais une protection croisée entre les différents types de dengue dure moins de quelques semaines à quelques mois (Sabin, 1952, Am. J. Trop. Med. Hyg.; 1: 30-50). En conséquence, un sujet peut subir une infection avec un sérotype 10 différent. Une seconde infection par la dengue est en théorie un facteur de risque de développer une maladie dengue sévère. Cependant, la dengue hémorragique est multifactorielle : ces facteurs incluent la souche du virus impliqué, ainsi que l'âge, le statut immun et la prédisposition génétique du patient. Deux facteurs jouent un rôle majeur dans la survenue de la dengue 15 hémorragique: une réplication virale rapide avec une virémie élevée (la sévérité de la maladie étant associée au niveau de la virémie ; Vaughn et al., 2000, J. Inf. Dis.; 181: 2-9) et une réponse inflammatoire importante avec la libération de niveaux élevés de médiateurs inflammatoires (Rothman and Ennis, 1999, Virology; 257: 1-6). Il n'y a aucun traitement spécifique contre la dengue. Le 20 traitement de la fièvre dengue est symptomatique avec un alitement, un contrôle de la fièvre et de la douleur avec des antipyrétiques et des analgésiques, et une prise de boisson adéquate. Le traitement de la dengue hémorragique nécessite l'équilibrage des pertes de liquide, le remplacement des facteurs de coagulation et la perfusion d'héparine. 25 Les mesures de prévention reposent actuellement sur le contrôle du vecteur et des mesures de protection personnelle qui sont difficiles à mettre en oeuvre et coûteuses. Aucun vaccin contre la dengue n'est approuvé pour le moment. Etant donné que les quatre sérotypes de la dengue sont en circulation dans le monde et comme ils ont été rapportés comme étant impliqués dans des 30 cas de fièvre hémorragique dengue, la vaccination devrait idéalement conférer une protection contre les quatre sérotypes du virus de la dengue. Lors de l'immunisation par un vaccin tétravalent, il peut arriver que la réponse soit induite de façon prépondérante contre seulement un ou au plus 3 2909286 -4- serotypes. Il existe donc un besoin d'une méthode permettant de réduire les interférences entre les différents sérotypes et permettant d'induire des anticorps neutralisant contre les 4 sérotypes de la dengue. Les inventeurs ont mis en évidence qu'il est possible de générer une 5 réponse immune comprenant des anticorps neutralisant les 4 sérotypes, lorsque la formulation vaccinale devant induire une réponse contre les 4 serotypes est administrée après une primo-immunisation par un vaccin vivant atténué d'un serotype seulement, la deuxième immunisation étant mise en oeuvre 30 jours à 12 mois après la première administration. 10 Les inventeurs ont en particulier montré qu'une immunisation tetravalente DEN-1,2,3,4 suivant une immunisation monovalente DEN-2 induit des réponses contre les quatre sérotypes chez tous les singes immunisés. A l'inverse, une immunisation tétravalente seule n'a permis d'induire une réponse satisfaisante que contre deux sérotypes sur 4, même après rappel. 15 La réponse immune générée par la méthode selon la présente invention est donc plus importante quantitativement et qualitativement (couvre tous les sérotypes). Selon un premier objet, la présente invention concerne donc une méthode permettant d'induire une réponse en anticorps neutralisants contre les 20 4 sérotypes de la dengue chez un patient, comprenant : (a) une première administration d'un vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype, (b) une deuxième administration d'un vaccin tétravalent comprenant des virus vaccinaux des 4 serotypes de la dengue, et 25 dans laquelle la deuxième administration (b) est mise en oeuvre au moins 30 jours à au plus 12 mois après la première administration (a). Selon un mode de réalisation particulier de la méthode d'immunisation selon l'invention, ledit virus vaccinal utilisé lors de la première administration (a) est sélectionné dans le groupe constitué des virus vaccinaux de la dengue de 30 sérotype 1 ou 2. Selon un autre mode de réalisation particulier de la méthode d'immunisation selon l'invention, ledit virus vaccinal utilisé lors de la première 2909286 -5administration (a) est sélectionné dans le groupe constitué des souches VDV1 et VDV2. Selon un autre mode de réalisation particulier de la méthode selon l'invention, les dits virus vaccinaux utilisés dans le vaccin tétravalent sont 5 sélectionnés dans le groupe constitué des ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 4. Selon un autre mode de réalisation particulier de la méthode selon l'invention, la quantité de virus vaccinaux de la dengue de sérotypes 1, 2, 3 et 4 est comprise dans une gamme allant de 103 à 106 DICC50. Selon un autre mode de réalisation particulier de la méthode selon 10 l'invention, le vaccin monovalent comprend 104 DICC50 de VDV1 ou VDV2 et le vaccin tétravalent comprend 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-4. Selon un autre mode de réalisation de la méthode selon l'invention, la deuxième administration (b) est mise en oeuvre 30 à 60 jours après la première 15 administration (a). La présente invention a également pour objet un kit d'immunisation contre le virus de la dengue comprenant un boitier contenant au moins (a) un premier récipient renfermant un composition ou vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal d'un premier sérotype de la dengue, (b) un deuxième récipient 20 renfermant une composition ou vaccin tétravalent comprenant des virus vaccinaux des 4 sérotypes de la dengue,. Selon un mode de réalisation, le kit selon l'invention comprend au moins: (a) un premier récipient contenant un vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal VDV1 ou VDV2 25 (b) un deuxième récipient contenant un vaccin tétravalent comprenant les 4 ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 4. Selon un mode de réalisation particulier ; le kit selon l'invention comprend un vaccin monovalent comprenant 104 DICC50 de VDV1 ou VDV2 et un vaccin tétravalent comprenant 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 105 DICC50 30 de ChimerivaxTM DEN-4. La présente invention concerne donc aussi l'utilisation de virus vaccinaux de la dengue pour la fabrication d'un vaccin monovalent et d'un vaccin 2909286 -6- tétravalent pour une immunisation contre le virus de la dengue dans laquelle le vaccin monovalent comprend un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype, le vaccin tétravalent comprend des virus vaccinaux des 4 sérotypes de la dengue et dans laquelle le vaccin tétravalent est administré au moins 30 5 jours à au plus 12 mois après l'administration du vaccin monovalent. L'invention va être décrite plus en détails dans la description qui suit. Définitions 10 Les virus de la dengue ou DEN sont des virus à ARN simple-brin, positif, appartenant au genre Flavivirus de la famille des flaviviridae. L'ARN génomique contient une coiffe de type 1 à l'extrémité 5' mais est dépourvu de queue poly-A à l'extrémité 3'. L'organisation génomique est constituée des éléments suivants : région non codante (NCR) 5', protéines structurales 15 (capside (C), pré-membrane/membrane (prM/M), enveloppe (E)) et protéines non structurales (NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5) et NCR 3'. L'ARN viral génomique est associé aux protéines de la capside pour former une nucléocapside. Comme pour les autres flavivirus, le génome viral DEN code une région codante ininterrompue qui est traduite en une polyprotéine unique. 20 Par virus vaccinal de la dengue on entend dans le cadre de la présente invention, toute forme virale du virus de la dengue capable d'induire une réponse immune spécifique comprenant des anticorps neutralisants, de préférence toute forme virale du virus de la dengue utilisable dans le cadre d'un programme d'immunisation chez l'homme contre une infection par un virus de la 25 dengue. Par virus vaccinaux de la dengue on entend donc les virus inactivés, les virus atténués, ou les protéines recombinantes telles que la protéine d'enveloppe du virus de la dengue. Un virus vaccinal est considéré comme inactivé s'il ne se réplique plus sur des cellules permissives. 30 Un virus vaccinal est considéré comme atténué si après croissance à 37 C ou 39 C sur cellule hépatique Huh-7, VERO et/ou C6/36, ledit virus vaccinal présente un titre maximal inférieur d'au moins 10 fois au titre maximal obtenu avec la souche parentale sauvage dans les mêmes conditions de culture 2909286 -7et tel que mesuré en utilisant la même méthode de titrage. Un virus vaccinal qui présente une croissance diminuée sur au moins l'un des trois types cellulaires identifiés ci-dessus est donc considéré comme atténué dans le cadre de la présente invention. 5 Un virus vaccinal utilisable chez l'homme présente un rapport bénéfices/risques positif, ledit rapport permet généralement de satisfaire aux exigences règlementaires pour l'obtention d'une autorisation de mise sur le marché. Un virus vaccinal de la dengue utilisé dans le cadre de la présente invention est de préférence un virus atténué de telle sorte qu'il n'induise pas la 10 maladie chez l'homme. Avantageusement, ledit virus vaccinal ne conduit qu'à des effets secondaires au plus d'intensité modérée (i.e. moyenne à faible, voire nulle) chez la majorité des sujets vaccinés tout en conservant sa capacité à induire une réponse anticorps neutralisante. On peut citer à titre d'exemples non limitatifs, de virus vaccinaux de la 15 dengue utilisable dans le cadre de la présente invention : les virus vaccinaux inactivés, les virus vaccinaux atténués tels que les souches atténuées VDV-1, VDV-2, les souches décrites par exemple dans les demandes : WO02/66621, WO0057904, WO0057908, WO0057909 ; WO0057910, WO02/0950075 et WO02/102828, ou les chimères. Les virus chimères ont la particularité de 20 présenter les caractéristiques des virus atténués tels que définis ci-dessus. Tout virus chimères exprimant la protéine d'enveloppe d'un virus dengue et induisant une réponse immune comprenant des anticorps neutralisant le sérotype dont est issue la protéine d'enveloppe peut donc être utilisé dans le cadre de la présente invention. On peut citer à titre d'exemples non limitatifs : les chimerivax 25 TMdengue tels que décrits par exemple dans la demande de brevet WO 98/37911, les chimères dengue/dengue tels que décrits par exemple dans les demandes de brevets WO9640933 et WO0160847. Le virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 peut être par exemple la souche vaccinale VDV1 ou un ChimerivaxTM DEN-1, en particulier un virus YF17D/DEN-1, ou encore une 30 souche DEN-1 16007/PDK13. Le virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 peut être par exemple la souche vaccinale VDV2 ou un ChimerivaxTM DEN-2, en particulier un virus YF17D/DEN-2, ou encore une souche DEN-2 16681/PDK53. Le virus vaccinal de la dengue de sérotype 3 peut être un ChimerivaxTM DEN-3, 2909286 -8- en particulier un virus YF17D/DEN-3. Le virus vaccinal de la dengue de sérotype 4 peut être un ChimerivaxTM DEN-4, en particulier un virus YF17D/DEN-4.. On pourra se reporter aux demandes identifiées ici pour un descriptif précis des souches mentionnées et de leur procédé d'obtention. 5 VDV ou vaccin dengue Vero désigne une souche virale dengue vivante atténuée adaptée sur cellule Vero et capable d'induire une réponse humorale spécifique, y compris l'induction d'anticorps neutralisants, chez les primates et en particulier chez l'homme. VDV-1 est une souche obtenue à partir d'une souche sauvage DEN-1 10 16007 ayant subi 11 passages sur cellules PDK (DEN-1 16007/PDK11) qui a ensuite été amplifiée sur cellules Vero à 32 C, et dont l'ARN a été purifié et transfecté dans des cellules Vero. La souche VDV-1 présente 14 mutations supplémentaires par rapport à la souche vaccinale DEN-1 16007/PDK13 (13 passages sur cellules PDKûPrimary Dog Kidney). La souche DEN-1 15 16007/PDK13, aussi appelée LAV1 , a été décrite dans la demande de brevet EP1159968 au nom de Mahidol University et a été déposée auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) sous le numéro 1-2480. La séquence complète de la souche VDV-1 est donnée à la séquence SEQ ID NO :1. Ladite souche peut être facilement reproduite à partir de ladite 20 séquence. Un procédé de préparation et la caractérisation de la souche VDV-1 a été décrit dans la demande de brevet internationale déposée aux noms de Sanofi-Pasteur et du Center for Disease Control and Prevention sous le numéro PCT/IB 2006/001313. VDV-2 est une souche obtenue à partir d'une souche sauvage DEN-2 25 16681 ayant subi 50 passages sur cellules PDK (DEN-2 16681/PDK50), purifiée par plaque et dont l'ARN a été extrait et purifié avant d'être transfecté dans des cellules Vero. La souche VDV-2 a ensuite été obtenue par purification par plaque et amplification sur cellules Vero. La souche VDV-2 présente 10 mutations supplémentaires par rapport à la souche vaccinale DEN-2 30 16681/PDK53 (53 passages sur cellules PDK), dont 4 mutations silencieuses. La souche DEN-2 16681/PDK53, aussi appelée LAV2 , a été décrite dans la demande de brevet EP1159968 au nom de Mahidol University et a été déposée auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) 2909286 -9- sous le numéro I-2481. La séquence complète de la souche VDV-2 est montrée dans la séquence SEQ ID NO :2. La souche VDV-2 peut être facilement reproduite à partir de ladite séquence. Un procédé de préparation et la caractérisation de la souche VDV-2 a été décrit dans la demande de brevet 5 internationale déposée aux noms de Sanofi-Pasteur et du Center for Disease Control and Prevention sous le numéro PCT/IB 2006/001513. Les souches VDV 1 et 2 sont préparées par amplification sur cellules Vero. Les virus produits sont récoltés et clarifiés des débris cellulaires par filtration. L'ADN est digéré par traitement enzymatique. Les impuretés sont 10 éliminées par ultrafiltration. Les titres infectieux peuvent être augmentés par une méthode de concentration. Après ajout d'un stabilisant, les souches sont stockées sous forme lyophilisée ou congelée avant utilisation puis reconstituées extemporanément. Par ChimeriVaxTM dengue ou CYD on désigne un virus de la fièvre 15 jaune (YF) chimère qui comprend le squelette d'un virus YF dans lequel les séquences codant pour les protéines de pré-membrane et d'enveloppe ont été remplacée par celles d'un virus DEN. On appelle ainsi CYD-1 ou CYD DEN1 un virus YF chimère contenant les séquences prM et E d'une souche dengue sérotype 1(DEN-1). On appelle CYD-2 ou CYD DEN2 un virus YF chimère 20 contenant les séquences prM et E d'une souche DEN-2. On appelle CYD-3 ou CYD DEN3 un virus YF chimère contenant les séquences prM et E d'une souche DEN-3. On appelle CYD-4 ou CYD DEN4 un virus YF chimère contenant les séquences prM et E d'une souche DEN-4. La préparation de ces ChimeriVaxTM dengue a été décrite en détails dans les demandes de brevet 25 internationales WO 98/37911 et WO 03/101397 auxquelles on peut se reporter pour un descriptif précis de leur procédé de préparation. Les chimères décrits dans les exemples ont été générés par utilisation des séquences prM et E issues des souches DEN 1 PUO359 (TYP1140), DEN2 PUO218, DEN3 PaH881/88 et DEN 4 1228 (TVP 980). Toute souche du virus de la dengue 30 pourrait être utilisée dans le cadre de la présente invention pour la construction des chimères. De préférence, le virus YF chimère comprend le squelette d'une souche de la fièvre jaune atténuée YF17D (Theiler M, and Smith HH (1937) J Exp. Med 2909286 -10- 65, p767-786.) (virus YF17D/DEN-1, YF17D/DEN-2, YF17D/DEN-3, YF17D/DEN-4). Des exemples de souches YF17D susceptibles d'être utilisées incluent YF17D204 (YF-Vax , Sanofi-Pasteur, Swifwater, PA, USA ; Stamaril , Sanofi-Pasteur, Marcy l'Etoile, France ; ARILVAXTM, Chiron, Speke, Liverpool, 5 UK ; FLAVIMUN , Berna Biotech, Bern, Switzerland ; YF17D-204 France (X15067,X15062) ; YF17D-204,234 US (Rice et al., 1985, Science, 229 :726-733), ou encore des souches apparentées YF17DD (Genbank numéro d'accès U17066), YF17D-213 (Genbank numéro d'accès U17067) et les souches YF17DD décrites par Galler et al. (1998, Vaccines 16(9/10) :1024-1028). Toute 10 autre souche de virus de la fièvre jaune atténuée utilisable chez l'homme peut être utilisée dans le cadre de la présente invention pour la construction des chimères. Selon un mode de réalisation particulier, les virus vaccinaux sont, pour chaque serotype utilisé dans les différentes administrations, présents 15 dans le vaccin à une quantité de 103 à 105 DICC50. Selon un mode de réalisation particulier, les virus vaccinaux VDV1 ou VDV2 sont présents dans le vaccin monovalent à raison de 104 DICC50. Selon un mode de réalisation particulier les ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 sont présents dans le vaccin tétravalent à raison de 105 DICC50 et le 20 ChimerivaxTM DEN-4 est présent dans le vaccin tétravalent à raison de 103 DICC50• Chaque virus vaccinal dengue monovalent ChimeriVaxTM (sérotypes 1, 2, 3 et 4) a été préparé par amplification de chaque sérotype sur cellules Vero. 25 Plus spécifiquement, les quatre virus sont produits séparément sur des cellules Vero adhérentes en milieu sans sérum. La récolte virale, clarifiée des débris cellulaires par filtration, est alors concentrée et purifiée par ultrafiltration et chromatographie pour enlever l'ADN des cellules hôtes. Après ajout d'un stabilisant, les souches vaccinales sont stockées sous forme congelée ou 30 lyophilisée avant utilisation puis reconstituées extemporanément. Le même procédé est appliqué pour les quatre chimères. Une dose, une composition ou un vaccin est monovalent lorsqu'il contient outre un excipient pharmaceutiquement acceptable un virus vaccinal 2909286 -11d'un seul sérotype de la dengue. Une dose, une composition ou un vaccin est tétravalent lorsqu'il contient des virus vaccinaux des quatre sérotypes de la dengue. Les compositions multivalentes sont obtenues par simple mélange des compositions monovalentes. 5 Par patient , on désigne une personne (enfant ou adulte) susceptible d'être infectée par la dengue, en particulier une personne à risque d'infection comme par exemple une personne voyageant dans des régions où la dengue est présente ou un habitant de ces régions. Ce terme englobe donc les personnes naïves ainsi que les personnes non-naïves pour le virus de la 10 dengue. Immunisation tétravalente suivant une primo-immunisation monovalente Selon un premier aspect, la présente invention a donc pour objet une méthode d'immunisation contre le virus de la dengue. 15 Les inventeurs ont en effet montré en particulier que l'administration des 4 sérotypes 30 jours à 12 mois après la première administration d'un vaccin monovalent permet d'obtenir une protection efficace contre les 4 sérotypes. La méthode selon la présente invention présente donc un intérêt tout particulier dans le cadre d'une stratégie d'immunisation contre la dengue. 20 Selon la présente invention, la première immunisation peut être pratiquée avec une composition ou vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal de l'un quelconque des 4 sérotypes de la dengue, , la deuxième administration étant réalisée avec l'ensemble des 4 sérotypes vaccinaux. Selon un mode de réalisation particulier un virus vaccinal de dengue de sérotype 1 ou 2, de 25 préférence de sérotype 2 est utilisé dans la première administration. Selon un mode de réalisation particulier , la souche VDV1 ou VDV2, de préférence la souche VDV2 est utilisée comme virus vaccinal dans la première administration. Des virus vaccinaux vivants atténués sont utilisés dans la deuxième administration, de préférence des virus chimères exprimant des antigènes des 30 quatre sérotypes du virus de la dengue, en particulier des ChimerivaxTM DEN1, 2, 3, et 4. Selon des modes de réalisation particuliers, la présente invention couvre donc les schémas suivants : 2909286 - 12- - (a) VDV1 (b) CYD DEN-1, 2, 3 et 4 - (ia VDV2 (b) CYD DEN-1, 2, 3 et 4. On entend par vaccin ou composition dans le cadre de la présente invention une composition comprenant une quantité immunoefficace du virus 5 vaccinal de la dengue, c'est-à-dire une quantité suffisante de virus vaccinal de la dengue pour induire une réponse immune spécifique comprenant des anticorps neutralisants, qui peut être mise en évidence par exemple par le test de séroneutralisation tel que décrit ci-dessous dans l'exemple 1. Un sérum est considéré comme positif pour la présence d'anticorps neutralisants lorsque le 10 titre d'anticorps neutralisants ainsi déterminé est supérieur ou égal à 1 :10 (unité : 1 /dilution). Les quantités de souche vaccinales sont exprimées communément en termes d'unité formant des plages virales (PFU) ou de dose infectant 50% de la culture tissulaire ou encore de dose infectant 50% de la culture cellulaire 15 (DICC50). Par exemple, les compositions selon l'invention peuvent contenir de 10 à 106 DICC50, en particulier de 103 à 105 DICC50 de virus vaccinal dengue de sérotype 1, 2, 3 ou 4 pour une composition monovalente ou tétravalente. Ainsi dans les compositions ou utilisation selon l'invention, les doses de virus vaccinaux de la dengue de sérotype 1, 2, 3 et 4 sont préférentiellement 20 comprises chacune dans une gamme allant de 10 à 106 DICC50, tels que 10, 102, 103, 104, 105 ou 106 DICC50 en particulier dans une gamme allant de 103 à 105 DICC50, Les virus vaccinaux peuvent être utilisés à des doses identiques ou différentes, qui peuvent être ajustées en fonction de la nature du virus vaccinal utilisé et de l'intensité de la réponse immunitaire obtenue. 25 Selon un mode de réalisation particulier de la méthode selon la présente invention, les quantités de virus vaccinaux vivants atténués dans les compositions ou vaccins monovalents et tétravalents sont de 103 à 105 DICC50. Selon un mode de réalisation particulier le vaccin monovalent comprend 104 DICC50 de VDV1 ou VDV2, de préférence VDV2. Selon un mode de réalisation 30 particulier le vaccin tétravalent comprend 105 DICC50 des ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 4. Selon un mode de réalisation avantageux, le vaccin tétravalent comprend 105 DICC50 des ChimerivaxTM DEN-1, 2 et 3 et 103 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-4 . 2909286 - 13 - Dans le cadre de la présente invention, la deuxième administration (b) est mise en oeuvre 30 jours à au plus 12 mois après l'administration (a). Selon un mode de réalisation avantageux, la deuxième administration est mise en oeuvre de 30 jours à 60 jours après la première administration (a). 5 La réponse anticorps neutralisante est avantageusement durable, c'est-à-dire qu'elle peut être détectée dans le sérum jusqu'à au moins 6 mois, après la deuxième administration. Les virus vaccinaux sont administrés sous formede compositions ou vaccins qui peuvent être préparés selon n'importe quelle méthode connue de 10 l'homme du métier. Habituellement, les virus, généralement sous forme lyophilisée, sont mélangés avec un excipient pharmaceutiquement acceptable, tel que de l'eau ou une solution saline tamponnée au phosphate, des agents mouillants ou stabilisants. Par excipient pharmaceutiquement acceptable , on entend tout solvant, milieu de dispersion, charge etc, qui ne produit pas de 15 réaction secondaire, par exemple allergique, chez l'humain ou l'animal. L'excipient est sélectionné en fonction de la forme pharmaceutique choisie, de la méthode et de la voie d'administration. Des excipients appropriés, ainsi que les exigences en matière de formulation pharmaceutique, sont décrites dans Remington : The Science & Practice of Pharmacy , qui représente un 20 ouvrage de référence dans le domaine. De préférence, les compositions vaccinales sont préparées sous forme injectable, et peuvent correspondre à des solutions liquides, des suspensions ou des émulsions. Les compositions peuvent en particulier comprendre une solution aqueuse tamponnée de manière à maintenir un pH compris entre 25 environ 6 et 9 (comme déterminé avec un pH-mètre à température ambiante). Bien qu'il ne soit pas nécessaire de rajouter un adjuvant, Les compositions peuvent néanmoins comprendre un tel composé, c'est-à-dire une substance qui augmente, stimule, ou renforce, la réponse immunitaire cellulaire ou humorale induite par le virus vaccinal administré simultanément. L'homme de 30 l'art est à même de sélectionner parmi les adjuvants classiquement utilisés dans le domaine vaccinal, un adjuvant qui puisse être approprié dans le cadre de la présente invention. 2909286 - 14- Les compositions ou vaccins selon l'invention peuvent être administrés selon n'importe quelle voie utilisée habituellement en vaccination, par exemple la voie parentérale (notamment intradermique, sous-cutanée, ou intramusculaire), avantageusement par voie sous-cutanée. De préférence, les 5 compositions ou vaccin sont des compositions injectables administrées par voie sous-cutanée, avantageusement au niveau de la région du deltoïde gauche ou du deltoïde droit. Le volume de composition ou vaccin administré dépend de la voie d'administration. Pour des injections sous-cutanées, le volume est généralement 10 compris entre 0,1 et 1,0 ml, de préférence environ 0,5 ml. La période optimale pour l'administration de la totalité des sérotypes 1 à 4, est d'environ 1 à 3 mois avant l'exposition au virus de la dengue. Les vaccins peuvent être administrés en tant que traitement prophylactique d'une infection par un virus de la dengue chez les adultes et les enfants. Les populations 15 ciblent incluent donc des personnes qui peuvent être naïves (i.e. non préalablement immunisés) ou non-naïves vis-à-vis du virus de la dengue. Des administrations de rappel des virus vaccinaux de la dengue de sérotypes 1 à 4 peuvent en outre être mises en oeuvre par exemple entre 6 mois et 10 ans, par exemple 6 mois, 1 ans, 3 ans, 5 ans ou 10 ans après 20 l'administration de la deuxième administration(b) selon l'invention. Les administrations de rappel vont être mises en oeuvre avantageusement en utilisant les mêmes composition ou vaccins (i.e. les mêmes virus vaccinaux) et de préférence dans les mêmes conditions d'administrations (sites anatomiques et voies d'administration) que celles utilisées pour la 2ème s administration (b). 25 Les phénomènes d'interférence peuvent s'expliquer par la dominance d'un ou plusieurs sérotypes par rapport à d'autres et sont donc indépendants de la technologie utilisée pour la fabrication du candidat vaccin (ex VDV ou ChimerivaxTM). La méthode selon la présente invention peut donc s'appliquer de façon générale à tout virus vaccinal de la dengue. 30 La présente invention entend donc couvrir également l'utilisation de virus vaccinaux de la dengue pour la fabrication d'un vaccin monovalent et d'un vaccin tétravalent pour une immunisation contre le virus de la dengue dans 2909286 - 15 - laquelle le vaccin monovalent comprend un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype, le vaccin tétravalent comprend des virus vaccinaux des 4 sérotypes de la dengue et dans laquelle le vaccin tétravalent est administré au moins 30 jours à au plus 12 mois après l'administration du vaccin monovalent. 5 Pour un descriptif des vaccins et conditions utilisables dans le cadre de l'utilisation selon la présente invention on peut se reporter au descriptif qui en est donné en relation avec la méthode d'immunisation selon l'invention. Selon un autre aspect, présente invention a pour objet un kit d'immunisation contre les quatre sérotypes du virus de la dengue. Le kit selon la 10 présente invention comprend les compositions ou vaccins tels que définis ci-dessus en relation avec la méthode d'immunisation proposée. Le kit selon l'invention comprend donc un boitier renfermant les différents récipients contenant les compositions ou vaccins et avantageusement une brochure explicative renfermant les informations utiles pour l'administration desdites 15 compositions ou vaccins. Selon un mode de réalisation, la présente invention a donc pour objet un kit d'immunisation contre le virus de la dengue un boitier contenant au moins (a) un premier récipient renfermant un vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal d'un premier sérotype de la dengue, et (b) un deuxième récipient 20 renfermant un vaccin tétravalent comprenant des virus vaccinaux des 4 sérotypes de la dengue,. Pour un descriptif des vaccins, compositions ou virus vaccinaux de la dengue utilisables dans le kit selon l'invention, on peut se référer à la description qui en est donnée ci-dessus en relation avec la méthode d'immunisation selon 25 l'invention. Selon un mode de réalisation particulier, le kit selon l'invention comprend au moins: (a) un premier récipient contenant un vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal VDV1 ou VDV2 et 30 (b) un deuxième récipient contenant un vaccin tétravalent comprenant les 4 ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 4. Selon un mode de réalisation particulier, le kit selon l'invention comprend au moins un vaccin monovalent comprenant 104 DICC50 de VDV1 ou VDV2 et 2909286 -16- un vaccin tétravalent comprenant 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-4. Les kits selon l'invention peuvent contenir un exemplaire unique ou plusieurs exemplaires des récipients tels que décrits ci-dessus. 5 Si les vaccins utilisés se présentent sous forme lyophilisée, le kit comprendra avantageusement au moins un récipient supplémentaire contenant le diluant permettant de reconstituer une dose vaccinale injectable. Tout diluant pharmaceutiquement acceptable peut être utilisé pour ce faire, classiquement, de l'eau ou une solution aqueuse tamponnée au phosphate. 10 L'invention est illustrée par l'exemple suivant. Exemple 1 : Immunisation contre les 4 sérotypes du virus de la dengue par injection successive d'une composition monovalente suivie 15 par une composition tétravalente chez le singe La virémie et l'immunogénicité ont été testées dans un modèle singe. La virémie, en particulier, a été identifiée comme l'un des facteurs associés avec la virulence et la sévérité de la maladie chez les hommes et constitue donc un paramètre important à prendre en considération. L'immunogénicité est quant à 20 elle un paramètre clé dans le cadre de l'évaluation de la protection conférée. 1.1 Matériels et méthodes : Les expériences chez les singes ont été menées selon les Directives européennes relatives à l'expérimentation animale. Les immunisations ont été 25 effectuées chez des singes cynomolgus (Macaca fascicularis) originaires de Mauritanie. Les singes ont été mis en quarantaine pendant six semaines avant immunisation. Les singes ont été immunisés par voie sous-cutanée dans les bras avec 0,5 ml de composition vaccinale. Après une légère anesthésie avec de la 30 kétamine (Imalgene, Merial), du sang a été collecté par ponction au niveau des veines inguinale ou saphène. Aux jours 0 et 28 suivant chaque immunisation, 5 ml de sang ont été échantillonnés pour évaluer les réponses anticorps, alors qu'entre les jours 2 et 10, 1 ml de sang était échantillonné pour évaluer la 2909286 - 17 - virémie. Le sang était collecté sur la glace et conservé sur la glace jusqu'à séparation du sérum. Pour ce faire, le sang a été centrifugé pendant 20 minutes à 4 C et le sérum collecté stocké à -80 C jusqu'au moment des tests. 5 Mesure de la virémie Les virémies post vaccinales ont été suivies par RT-PCT quantitative en temps réel (qRT-PCR). Deux jeux d'amorces et de sondes localisées dans le gène NS5 de des souches DEN1 et DEN2 ont été utilisés pour quantifier l'ARN de VDV-1 et VDV-2 respectivement. Un troisième jeu de 2 amorces et 1 sonde 10 localisées dans le gène NS5 du virus YF a été utilisé pour quantifier l'ARN du CYD. Enfin, 4 jeux d'amorces et de sondes spécifiques des différents sérotypes CYD, localisées à la jonction des gènes E (DEN) / NS1 (YF) ont été utilisés pour identifier le sérotype dans les échantillons positifs pour l'ARN NS5 YF (voir aussi tableau I). 7 plasmides contenant, sous le contrôle du promoteur T7, la région 15 ciblée par chaque PCR, ont été transcrits in vitro pour générer une série d'ARN synthétiques qui ont été inclus comme référence interne dans chaque essai de RT-PCT. Ces ARN synthétiques ont été dosés par spectrophotométrie, la quantité d'ARN obtenue a été convertie en nombre de copies d'ARN et exprimée en GEQ (équivalents génomiques). 20 0,140 ml de sérum de singe a été extrait à l'aide du kit d'extraction d'ARN Nucleospin 96 virusTM de Macherey Nagel, selon les instructions du fabriquant, puis l'ARN purifié a été élué avec 0,140 ml (0,090 ml, puis 0,05 ml) d'eau exempte de RNase. Pour éviter des cycles répétés de congélation/décongélation, une première quantification a été réalisée 25 immédiatement après l'extraction sur 5 I de ladite préparation d'ARN. Le volume restant a été congelé à 70 C. Les mélanges réactionnels contenaient, en plus des composants du kit de quantification RT-PCR Qiagen QauntitectTMprobes (Qiagen), 10 picomoles de chaque amorce, 4 picomoles de chaque sonde et 5 pi d'ARN, 30 dans un volume total de 25 pi. Dans le cas des ARN à tester, 5 pi de la préparation purifiée ont été directement introduits dans le mélange réactionnel, sans étape de dilution préalable. Les ARN synthétiques ont été dilués au 1/10 dans de l'eau exempte de RNAse, et 7 dilutions contenant approximativement 2909286 - 18 - 10 à 106 GEQ dans 5 pi ont été quantifiées en parallèle afin de générer la courbe étalon. Les réactions de quantification ont été réalisées par l'appareil ABIPrism 700TM d'Applied Biosystem, en utilisant le programme suivant : 50 C/30 min, 5 95 C/15 min, puis 40 cycles de 95 C/15 secû60 C/60 sec. La limite de quantification de l'ARN viral dans ce test est de 2,9 à 3,3 Iog1oGEQ/ml (800 à 2000 GEQ/ml; 4 à 10 GEQ/réaction), selon les cibles PCR (déviation standard : +/-0,3 logio) La corrélation entre le titre infectieux et la quantification d'ARN viral a été 10 établie parallèlement aux essais, par analyse de 0,140 ml d'échantillons de sérums de singe négatifs (DO) dans lesquels on a ajouté une quantité connue de particules infectieuses des virus ayant servi à l'immunisation (CYD ou VDV). Lesdits sérums contrôles ont été préparés à deux dilutions contenant environ 1 PFU et environ 100 PFU dans 5 l (2.3 and 4.3 Iog1oPFU/ml, respectivement). 15 Dans les tests utilisés dans les exemples la corrélation entre GEQ et PFU est la suivante :Ratio GEQ/PFU de 2.7 logio (soit : 1 PFU = 500 GEQ) pour les sera positifs en YF ou CYDs. Ratio GEQ/PFU de 2.5 log10 (soit : 1 PFU = 320 GEQ) pour les sera positifs en VDV1 ou VDV2. Les Limites de quantification étant amorces sens et anti-sens et la sonde. 2909286 -19-Tableau 1 sequence 5' GCACGGATGTAACAGACTGAAGA (23 bases) 5' CCAGGCCGAACCTGTCAT (18 bases) 5' Fam- CGACTGTGTGGTCCGGCCCATC -Tamra (22 bases) sens 5' CAT TOC AGT TGG CCT GGT AA (20 b) anti 5' CTT TGG CAA GAG AGA GCT CAA GT (23 b) 5' Fam-CCG ATC AAG GAT GCG CCA TCA-Tamra (21 b) sens 5' GTG GGA GTC GTG ACG CTG TA (20 b) anti 5' GÎT GAT GGC GCA TCC TTG ATC (21 b) 5' Fam-TGG GAG TTA TGG TGG GCG CCG-Tamra (21 b) 5' AAA ACA CTT CCA TGT CAT TTT CAT G (25b) 5' GÎT GAT GGC GCA TCC TTG ATC (21 b) 5F ar -TG CGATAGGAATTATCACACTCTATCTGGGAGC-Tamra (33b) 5' CTT A CT ATT GTG GAT TGG CAC GAA (24 b) 5' GCG CCA ACT GTG AAA CCT AGA (21 b) 5'-Fam-AGAAACACTTCAATGGC, ,ATGACGTGCAT-Tarnra (29 b) sens 5' TCG CAA CAG CCTTAA CAG C (19 b) anti 5' ACT ATC TCC CTC CCA TCC TTC (21 b) 5' Fam-TTC ACA CCA CTT CCA C-M GBINFQ (16 b) sens 5' AAT GAC AGA CAC GAC TCC (18 b) anti! 5' CCC AAA ACC TAC TAT CTT CAA C (22 b) 5' Fam-TGG AAG TCG GCA CGT GA-M GBINFQ (17 b) Mesure des anticorps neutralisants (test de seroneutralisation) (SN50)) 5 Classiquement, la mesure des anticorps Dengue est établie à l'aide du test PRNT50 (test de neutralisation par réduction à 50% du nombre de PFU). Ce test étant lourd et consommateur de matériel, nous avons développé le test SN50, basé sur la réduction à 50 % du nombre d'unités mesurées en test DICC50. 10 Dans une plaque de 96 puits, 0,120 ml de chaque sérum décomplémenté est ajouté à 0,480 ml de diluant (ISCOVE 4% SVF) par puits. Des dilutions en série d'un facteur 6 sont réalisées par transfert de 0,150 ml de sérum dans 0,450 ml de diluant. 450 l de dilution virale à 2,7 loglo DICC50/ml sont ajoutés dans chaque puits de façon à obtenir 25 DICC50/puits. La plaque est incubée à 15 37 C pendant 1 heure. 0.1 ml de chaque dilution est ensuite distribué dans 6 puits d'une plaque de 96 puits dans laquelle des cellules VERO ont été ensemencées 3 jours avant le début de l'expérience à une densité de 8000 cellules/puits, dans 0.1 ml de milieu ISCOVE 4% SVF,. Après 6 jours d'incubation à 37 C, en présence de 5% de CO2, les cellules sont fixées à l'aide 20 d'un mélange éthanol/acétone (70/30) à 4 C pendant 15 minutes, puis lavées à YF-NS5 sens YF NS5 anti >- YF-NS5 CYD1- > CYD1-o CYD1- cv CYD2->-- w CY D 2- o CYD2 ^ CYD3- • CYD3-CYD3-CYD4 >- w CYD4-o 0- i4 CYD4- VDV1-NS5 ^ V DV 1- N S 5 VDU'1-NS5 ^ VCN2-NS5 o VCN2-NS5 } VEN2-NS5 0 o sens. anti: sens anti: 2909286 - 20 - 3 reprises dans du PBS et incubées pendant l h à 37 C en présence de 0.05 ml d'une dilution au 1/2000 d'un anticorps monoclonal anti-flavivirus (mAb 4G2-obtenu à partir d'un hybridome ATCC H-B112). Les plaques sont ensuite lavées à 2 reprises et incubées 1H à 37 C en présence de 0.05 ml d'une dilution au 5 1/1000 d'une IgG anti-souris conjuguée à la phosphatase alcaline. Les plages de lyse sont révélées par addition de 0.05 ml d'un substrat coloré : BCIP/NBT. Les titres en anticorps neutralisants sont calculés en utilisant la formule de Karber telle que définie ci-dessous : 10 Iog1oSN50 = d + f/N (X + N/2), Dans laquelle: d : représente la dilution conduisant à 100% de neutralisation (soit 6 réplicats négatifs c'est-à-dire ne présentant pas de signe d'infection) 15 f : représente le facteur de dilution en Iog10 (e.g. facteur de dilution de 1:4, f = 0,6) N: représente le nombre de réplicats / dilution (N=6) X: nombre total de puits ne présentant aucun signe d'infection, à l'exception de la dilution d. 20 La limite de détection virale est de 10 SN50 (i .e. 1.0 IogioSN50). Les souches virales qui ont été utilisées pour la neutralisation sont les souches DEN1 16007, DEN2 16681, DEN3 16562 or DEN4 1036. Pour les contrôles, les dilutions virales initiales ont été re-titrées. La corrélation entre le titre neutralisant mesuré en test SN50 et le titre 25 neutralisant mesuré classiquement en test PRNT50 est : Iog1oPRNT50 = Iog1oSN50 + 0,2. 1.2 Evaluation des immunisations simultanées 2 groupes de 4 singes d'âge et poids équivalents ont été immunisés. (voir 30 tableau 2) L'immunisation a été effectuée par voie sous-cutanée dans le bras avec une aiguille 23G1, avec une quantité de 105 DICC50 pour chaque sérotype CYD 5 2909286 -21- DEN 1 à 4 pour le vaccin tétravalent et avec une quantité de dose 104 DICO50 pour le VDV-2 monovalent. Tableau 2 : Composition des groupes et protocole d'immunisation Singes Immunisations Groupes JO J56 Groupe 1 VDV 2 ChimeriVax monovalent Dengue Tétravalent 1234 Groupe 2 ChimeriVax ChimeriVax Dengue Dengue tétravalent Tétravalent 1234 1234 Les résultats d'immunogénicité obtenus après une immunisation (JO+28) et deux immunisations (J 56+28) sont présentés dans le tableau 3. Les résultats de virémie sont donnés dans le tableau 4. Tableau 3 : titre neutralisant SN50 (unités 1/dil) Singes J0+28 J56+28 DEN-1 I DEN-2 D EN-3 DEN-4 I DEN-1 I DEN-2 DEN-3 Immunisations ID J56 JO D EN-4 AM762 10 I 501 10 I 63 1005 33 AM839 802 80 1271 63 AM905 20 158 318 1010 :252 VDV 2 CYD 1234 AN011 13 1005 252 1271 319 200 504 506 1010 AM,. AM496 50 16 32 100 40 BO 252 63 AM645 1.3 31 16 AM766 CYD 1234 CYD 1234 80 32 20 25 13 63 13 63 20 AM813 ....... - : titre 3,42 3 55 ', 3,42 s4,43 7 Revendications : 1.- Utilisation de virus vaccinaux de la dengue pour la fabrication d'un vaccin monovalent et d'un vaccin tétravalent pour une immunisation contre le virus de la dengue comprenant : (a) une premeière administration d'un vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype, (b) une deuxième administration d'un vaccin tétravalent comprenant des virus vaccinaux des 4 sérotypes de la dengue et dans laquelle le vaccin tétravalent est administré au moins 30 jours à au plus 12 mois après l'administration du vaccin monovalent. 2.- Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle ledit virus vaccinal utilisé lors de la première administration (a) est sélectionné dans le groupe constitué des virus vaccinaux de la dengue de sérotype 1 ou 2. 3.- Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ledit virus vaccinal utilisé lors de la première administration (a) est sélectionné dans le groupe constitué des souches VDV1 et VDV2. 20 4.- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 dans laquelle les virus vaccinaux utilisés dans le vaccin tétravalent sont les ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 4. 5.- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans 25 laquelle la quantité de virus vaccinaux de la dengue de sérotypes 1, 2, 3 et 4 est comprise dans une gamme allant de 103 à 106 DICC50. 6.- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle le vaccin monovalent comprend 104 DICC50 de VDV1 ou VDV2 et le 30 vaccin tétravalent comprend 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 4. 7.- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle le vaccin monovalent comprend 104 DICC50 de VDV1 ou VDV2 et le 2909286 - 26 - vaccin tétravalent comprend 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 103 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-4. 8.- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans 5 laquelle la deuxième administration (b) est mise en oeuvre 30 à 60 jours après la première administration (a). 9.- Kit d'immunisation contre le virus de la dengue comprenant un boitier contenant au moins : 10 (a) un premier récipient renfermant un vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal d'un premier sérotype de la dengue, (b) un deuxième récipient renfermant un vaccin tétravalent comprenant des virus vaccinaux des 4 sérotypes de la dengue. 15 10.- Kit d'immunisation selon la revendication 9 comprenant au moins : (a) un premier récipient contenant un vaccin monovalent comprenant un virus vaccinal VDV1 ou VDV2 (b) un deuxième récipient contenant un vaccin tétravalent comprenant les 4 ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 4. 11.- Kit d'immunisation selon la revendication 10 dans lequel le vaccin monovalent comprend 104 DICC50 de VDV1 ou VDV2 et le vaccin tétravalent comprend 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 4. 12.- Kit d'immunisation selon la revendication 10 dans lequel le vaccin monovalent comprend 104 DICC50 de VDV1 ou VDV2 et le vaccin tétravalent comprend 105 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-1, 2, 3 et 103 DICC50 de ChimerivaxTM DEN-4.