Brevet FR2910322A1 — publié le 20080627

UTILISATION D' OLIGO-R-(1,3)-GLUCANES MODIFIES POUR LE TRAITEMENT DE MALADIES DU SYSTEME IMMUNITAIRE, OLIGO-13- (1,3)-GLUCANE-(1,3)- MANNOSE, OLIGO-13-(1,3)-GLUCANE-(1,3)- MANNITOL ET LEURS DERIVES, LEURS PROCEDES DE PREPARATION ET MEDICAMENTS LES CONTENANT. La présente invention porte sur l'utilisation d'oligo-P-(1,3)-glucanes modifiés de formule (I) ou (II) ci-dessous pour la préparation de médicaments utiles dans les traitements basés sur la stimulation du système immunitaire. Les glucanes, qui sont des produits naturels, ont été longuement étudiés et les propriétés immunostimulantes de certains glucanes sont connues. Cependant, tous les glucanes naturels ne sont pas actifs. La Société Demanderesse a montré, notamment dans W003/045414 que la Laminarine, qui est un polysaccharide extrait de l'algue brune Laminaria digitata présentait des activités d'immunostirnulation. La Laminarine est un polysaccharide de faible poids moléculaire constitué d'une chaîne principale linéaire [3-(1,3)-glucane, de 20 à 30 unités glucose faiblement ramifié en position 6, qui présente à l'extrémité terminale ou bien une entité glucose (chaîne G) ou bien une entité mannitol (chaîne M). Bien que l'activité immunostimulante de la Laminarine ait été reconnue, un inconvénient majeur de son utilisation à des fins thérapeutiques est son origine naturelle. En effet, la composition de la Laminarine n'est pas constante et dépend notamment de son lieu de ramassage, de l'époque de ramassage, etc. Il existe donc un réel besoin en des produits de synthèse présentant les propriétés thérapeutiques de la Laminarine. Les présents inventeurs se sont plus particulièrement tournés vers les oligosaccharides du groupe M présents dans la Laminarine. Dans la littérature, il est mentionné que ces oligosaccharides présentent une liaison de configuration entre le carbone 1 de l'entité terminale du glucane et un carbone primaire du résidu mannitol, et peuvent être représentés de la façon suivante : 2910322 O OH OH Hp OH HO -OH Ils ont cherché à synthétiser ces molécules de façon à mettre à la disposition notamment de l'industrie pharmaceutiques, des molécules dont la caractérisation est complète et la structure tout à fait élucider, évitant ainsi les difficultés inhérentes à 5 l'utilisation de produits naturels en tant que produits pharmaceutiques. De façon inattendue et surprenante, les présents inventeurs ont trouvé que les oligosaccharides de formule (I) ou (II) ci-dessous, qui eux présentent une liaison 13 entre le carbone 1 de l'entité terminale glucose et un carbone secondaire de l'entité terminale mannose ou mannitol, présentaient des activités immunostimulantes. 10 Un premier objet de l'invention porte donc sur l'utilisation d'au moins un oligo-(3-(1,3)-glucane modifié de formule (I) ou (II) HO HO HO RI O OH OH OH \ OH 15 n (II) dans lesquelles RI représente H ou OH et n est un entier de 2 à 10, de préférence de 2 à 7, et plus préférentiellement encore égal à 3, 4 ou 5, pour la préparation d'une composition destinée au traitement de maladies choisies dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie 20 bactérienne, maladie fongique, maladie du système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de l'immunostimulation, chez des êtres humains et animaux à sang chaud. L'action des composés de formule (I) ou (II) est liée à la présence de récepteurs spécifiques de ces composés à la surface des macrophages et plus généralement des différentes populations de leucocytes. Cette activité est attribuée 25 à la stimulation de cellules immunocompétentes de l'organisme et est mesurée à travers : û l'activation des cellules NK, des lymphocytes T, et du facteur nucléaire KB(NFKB); 2 OH OH (I) OH 2910322 3 l'activité phagocytaire ; la sécrétion de cytokines telles que les interleukines (IL), le TNF-a, ou encore l'interféron 7 ; la production d'espèces oxydantes réactives comme l'anion superoxyde ou le 5 peroxyde d'hydrogène. Avantageusement, lorsque dans le composé de formule (II), RI représente OH, le groupe terminal est un mannitol. Les mécanismes d'interaction de nombreux glucanes ont été largement décrits, mais ont montré des résultats souvent contradictoires, empêchant de prédire quel glucane est 10 le meilleur immunomodulateur. Les effets liés à des modifications fonctionelles ou structurelles sont quant à eux totalement imprévisibles. Conformément à l'invention, la composition utilisée conformément à l'invention peut être administrée au patient par voie intraveineuse, intrapéritonéale ou orale. Les doses de composés de formule (I'), (II') sont fonction de la pathologie à 15 traiter et du mode d'administration retenu. Elles sont de façon générale de 25 à 70 UI/kg de poids corporel par jour, plus préférentiellement de 35 à 45 UI/kg de poids corporel par jour. Des médicaments utiles par voie orale sont des comprimés, granules, sirop, gélules, gel. 20 Selon un autre mode de réalisation, la composition utilisée conformément à l'invention, peut également comprendre un agent chimiothérapeutique. L'agent chimiothérapeutique est choisi dans le groupe comprenant le cisplatine, vinblastine, paclitaxel, le taxol et ses dérivés, les anticorps monoclonaux tels que notamment Rituximab et Cituximab. 25 Lorsque la composition comprend un agent chimiothérapeutique et /ou un potentiateur, conformément à l'invention, elle peut être utilisée de façon séquencée, c'est-à-dire que le composé de formule (I) ou (II) est administré à un certain moment et l'agent chimiothérapeutique est administré à un autre moment éventuellement avec le potentiateur. 30 La présente invention porte également sur certains des dérivés de formule (I) et (II) ci-dessus qui sont des composés nouveaux. Ces nouveaux composés sont des oligo-(3-(1,3) -glucane-(1,3)-mannose et oligo-(3-(1,3) -glucane-(1,3)-mannitol et leurs dérivés désoxy en position 4, qui présentent respectivement la formule générale (I') ou la formule générale (II') : 2910322 5 In (II') dans lesquelles RI représente H ou OH et n est un entier de 2 à 10, de préférence de 2 à 7, et plus préférentiellement encore égal à 3, 4 ou 5. Plus particulièrement, de tels composés sont les composés suivants : 10 (3-D-glucopyranosyl-(lù*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1--*3)-(a,(3) -D-manmopyranose ; (3-D-glucopyranosyl-(1ù+3)-33-D-glucopyranosyl-(1ù>3) -J3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-(3-D-mannopyranose ; (3-D-glucopyranosyl-(1ù+3)-(3-D-glucopyranosyl-(1 X3)-4-désoxy-(a,(3)-D-désoxymannopyranose ; 15 (3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-mannitol ; (3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-4-désoxymannitol ; 3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-mannitol ; (3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-(3D-glucopyranosyl-(1ù>3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-4-désoxy-(a,(3) -D-mannopyranose ; (3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)(3-D-glucopyranosyl-(1- *3)-4-désoxy-mannitol. Ces nouveaux composés sont utiles en tant que composés pharmaceutiques. 25 L'invention a donc également pour objet des médicaments comprenant ces composés nouveaux avec au moins un excipient choisi en fonction du mode d'administration retenu et du dosage. Ces médicaments peuvent être des médicaments destinés à une administration par voie orale, par voir intraveineuse ou par voie intrapéritonéale. HO HO Q' O O OH OH n 4 2910322 5 Les doses de composés de formule (I'), (II') sont fonction de la pathologie à traiter et du mode d'administration retenu. Elles sont de façon générale de 25 à 70 UI/kg de poids corporel par jour, plus préférentiellement de 35 à 45 UI/kg de poids corporel par jour. 5 Des médicaments utiles par voie orale sont des comprimés, granules, sirop, gélules, gel. Ces médicaments peuvent également comprendre au moins un agent chimiothérapeutique choisi dans le groupe comprenant le cisplatine, vinblastine, paclitaxel, le taxol et ses dérivés, les anticorps monoclonaux tels que notamment 10 Rituximab et Cituximab. En particulier, ces composés sont utiles en tant qu'agents immunomodulateurs. Un autre objet de l'invention est relatif à l'utilisation d'au moins un composé de formule (I') ou (II') pour le traitement d'une maladie choisie dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie bactérienne, maladie fongique, maladie du 15 système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de l'immunostimulation, chez des animaux à sang chaud et des êtres humains. Ces composés présentent une structure originale puisque la partie glucanique est reliée au résidu mannitol par l'un de ces hydroxyles secondaires par l'intermédiaire d'une liaison de configuration 13. La présence des molécules de formule (I') et (II') dans 20 lesquelles RI représente -OH a été mise en évidence dans la Laminaria digita. Aucune méthode de préparation n'a été décrite. La préparation par voie chimique des nouveaux composés de formule (I') ou (II') repose principalement sur une épimérisation de l'entité réductrice terminale de type D-glucose en résidu de type D-mannose. Ceci implique la singularisation de l'entité 25 réductrice par rapport aux autres unités glucose de l'oligossaccharide et la singularisation de l'hydroxyle 2 de cette entité par rapport aux autres fonctions de l'unité réductrice. Deux voies de synthèse différentes sont envisagées, une synthèse itérative et une synthèse par épimérisation de l'entité terminale. Selon le premier mode de réalisation, le procédé de préparation des nouveaux 30 composés comprend une réaction entre un donneur de glycosyle de formule (D) ci-dessous et un accepteur de glycosyle de formule (A) ci-dessous : R4 0 R3'0 O SR Rz OBz m (D) 6 2910322 OBn (A) dans lesquelles 5 m est un entier de 1 à 9, de préférence de 1 à 6, et plus préférentiellement encore égal à 2,3ou4; p est un entier de 0 à 9, de préférence de 0 à 6, et plus préférentiellement encore égal à 2,3ou4; R représente alkyle tel que éthyle, méthyle, propyle ou butyle, ou aryle tel que phényle 10 ou tolyle ; R2 représente allyle, méthylnaphtyle, benzyle, paraméthoxybenzyle, halogénoacétyle (chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle) ; R3 et R4 d'une part et R3' et R4' d'autre part forment ensemble un radical éthylidyle, isopropylidyle, hexafluoroisopropylidyle, cyclopentylidyle, cyclohexylidyle, 15 cycloheptylidyle, butylidyle, 1-tertiobutyléthylidyle, benzylidyle, méthoxybenzylidyle, 1-phénylbenzylidyle ou R3, R4, R3' et R4' représentent chacun indépendamment l'un de l'autre un benzyle, chlorobenzyle, nitrobenzyle, allyle, triarylméthyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, ester tel que acétyle, chloroacétyle, benzoyle, pivaloyle ; 20 R5 représente H, un groupe lévulinoyle, acétyle, chloroacétyle, fluorénylméthyloxycarbonyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, de préférence un groupe lévulinoyle, à la condition que aucun de R3, R4, R3', R4' ne soit identique à R5, Dans la présente demande les abréviations suivantes sont utilisées : 25 Bn : benzyle, NAP : 2-méthylnaphtyle, Bz : benzoyle, X : halogène, SEt :Ethylthio-, Ac : acétyle, Lev : levulinoyle. De façon avantageuse, le composé de formule (A) est OBn De façon avantageuse, le composé de formule (D) est 2910322 O O SEt NAP OBz m Cette étape du procédé peut s'inclure dans une synthèse itérative qui diffère de celle décrite dans FR2804684 par la nécessaire utilisation d'un premier accepteur 5 comportant en position 2 un groupement protecteur orthogonal de tous les autres groupements présents sur les oligomères synthétisés après élongation de la chaîne, ce qui rend possible 1'épimérisation régiosélective. Cette synthèse itérative peut être décrite selon le schéma réactionnel (schéma réactionnel 1) tel que donné ci-après : 7 2910322 8 OBn OBn OR5 OR5 O Bz 2 4 3 'g' R40 OBn R30 H 1b 1 SEt O Bz \ R.0~1 Rz ` OBz 1 OR5 OBn Id 1 5 OBz \ OR5 3-0- Déprotection sélective OBn Ihi OBn HOH H OH O H OH n OH Le schéma réactionnel 1 ci-dessus comprend dans l'ordre suivant : 5 la préparation [a'] à partir d'un composé 1 tel qu'obtenu dans FR2804694, d'un composé 2 dont le groupement -SEt a été remplacé par un groupement ûOBn ; la substitution [a] en position 2 de -OBz par ûOR5, R5 étant de préférence lévulinoyle, et la déprotection [b] sélective de l'hydroxyle en position 3 ; - la réaction entre le donneur 1 et l'accepteur 4 [c] , ou glycosylation; 2910322 9 - éventuellement la déprotection [d] sélective en position 3 de l'hydroxyle et la glycosylation entre le composé 1 et le composé 6, ces deux étapes pouvant être réitérées jusqu'à l'obtention du nombre n d'unités glucose souhaité ; clivage [e] sélectif du groupe levulinoyle (Lev) ; de façon avantageuse ce clivage se 5 fait avec NH2NH2 dans AcOH. - oxydation [f], de préférence avec le periodinane de Dess-Martin; réduction épimérisante [g] ; avantageusement avec le L-sélectride ; - déprotection [h] de tous les groupements ester, avantageuse avec McONa/MeOH; clivage [i] de tous les groupes hydrogénolysables, avantageuse avec H2, Pd(OAc)2 ; 10 éventuellement réduction [j] du mannose en mannitol correspondant, avantageusement avec NaBH4 dans MeOH. Il est également possible d'envisager la synthèse en mettant en oeuvre un schéma réactionnel plus convergent, tel que défini ci-après (schéma réactionnel 2). 15 Dans ce schéma réactionnel, le donneur D est un disaccharide, ou un oligosaccharide supérieur, que l'on fait réagir avec un accepteur A qui est également un disaccharide ou qui est un oligosaccharide supérieur : tri-, tétra-, penta-, tel qu'obtenu en tant que composé 6 selon le schéma réactionnel 1. 2910322 10 o(\ /cci, ~NH + 20 OBn OBn OBn OBn le"J Dans ce second schéma réactionnel, de préférence R' est Ac, Bz ou pivaloyle et R5 est Lev. Ce second schéma réactionnel comprend dans l'ordre suivant : 5 la réaction [a"] entre un disaccharide donneur de glycosyle (20) tel qu'obtenu dans FR2804694, et un accepteur de glycosyle tel que préparé selon le premier schéma réactionnel, avantageusement en présence de TMSOTf (acide trifluorométhanesulfonique); clivage [b"] sélectif du groupe levulinoyle (Lev), avantageusement avec NH2NH2 10 dans AcOH ; Oxydation [c"], avantageusement avec le peridionane de Dess-Martin; réduction épimérisante [d"], avantageusement avec le L-selectride ; 2910322 11 déprotection [e"] complète, avantageusement par McONa1MeOH, réaction suivie de H2, Pd(OAc)2. Selon un second mode de réalisation, le procédé de préparation des nouveaux composés comprend une étape d'épimérisation en position 2 du chaînon terminal. Cette 5 voie de synthèse permet également d'obtenir les composés désoxygénés en position 4. Le schéma réactionnel 3 ci-dessous illustre ce mode de réalisation : IA I OH OR IB1 C 1E 1 OR8 HO HO HO H OH O O n IH Dans le schéma réactionnel 3, R7 est un ester, notamment acétyle, benzoyle, 10 pivaloyle, de préférence Bz, et R8, un groupement orthogonal à tous les autres groupements protecteurs, peut être Bn, NAP, p-méthoxybenzyle, p-méthoxyphényle, allyle, et de préférence Bn, X est de préférence un brome. Ce troisième schéma réactionnel comprend dans l'ordre suivant : la réaction [A] de protection de tous les groupes OH, de préférence le groupe 15 protecteur est Bz et la réaction est alors conduite avec du BzCl dans la pyridine, halogénation sélective [B], avantageusement bromation par HBr dans AcOH; - élimination [C], avantageusement avec DBU diazabicylcoundécène; - addition [D], avantageusement avec N-bromosuccinimide dans MeOH 2910322 12 substitution en position anomérique et élimination du groupe hydroxy protégé en position 4 de l'entité terminale [E], avantageusement avec Ph3PO ou un acide de Lewis tel que le triflate d'argent clans l'alcool benzylique ou tout autre alcool parmi lesquels le naphthalèneméthanol, l'alcool p-méthoxybenzylique, le p- 5 méthoxyphénol, l'alcool allylique; réduction épimérisante [F], avantageusement avec le L-sélectride ; déprotection [G] sélective des groupes protecteurs R7, avantageusement dans McONa/MeOH ; déprotection [H] sélective du groupe protecteur R8, avantageusement avec H2 10 Pd(OAc)2 lorsque le groupement est hydrogénolysable; réduction [I] du désoxy-mannose en désoxy-mannitol, avantageusement avec NaBH4 dans EtOH/H2O. Les intermédiaires de synthèse utilisés dans les procédés décrits ci-dessus sont des produits nouveaux. L'invention a donc également pour objet, les composés de 15 formules (III), (IV) , (V) et (VI) : (IV) 20 dans lesquelles : p est un entier de 0 à 9, de préférence de 0 à 6, et plus préférentiellement encore égal à 2,3ou4; 2910322 13 R2 représente hydrogène, allyle, méthylnaphtyle, benzyle, paraméthoxybenzyle, halogénoacétyle (chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle) ; R3 et R4 d'une part et R'3 et R'4 d'autre part, forment ensemble un radical éthylidyle, isopropylidyle, hexafluoroisopropylidyle, cyclopentylidyle, cyclohexylidyle, 5 cycloheptylidyle, butylidyle, 1-tertiobutyléthylidyle, benzylidyle, méthoxybenzylidyle, 1 -phénylbenzylidyle, ou R3, R4, R3' et R4' représentent chacun indépendamment l'un de l'autre un benzyle, chlorobenzyle, nitrobenzyle, allyle, triarylméthyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, ester tel que acétyle, chloroacétyle, 10 benzoyle, pivaloyle ; R5 représente H, un groupe lévulinoyle, acétyle, chloroacétyle, fluorénylméthyloxycarbonyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, de préférence un groupe lévulinoyle, à la condition que aucun de R3, R4, R3', R4' ne soit identique à R5 ; 15 R7 représente un ester, notamment acétyle, benzoyle, pivaloyle, de préférence Bz ; R8, un groupement orthogonal à tous les autres groupements protecteurs, qui peut être choisi parmi Bn, NAP, p-méthoxybenzyle, p-méthoxyphényle, allyle, et de préférence R8 représente Bn, R9 représente OR8 ou X. 20 Les composés de formule (III) sont les composés accepteurs A tels que définis précédemment. L'invention sera encore mieux comprise à l'aide du complément de description qui suit et des exemples qui ne sont nullement limitatifs mais correspondent à des modes de réalisation avantageux. 25 EXEMPLES Les Exemples 1 à 7 illustrent les procédés de synthèse des produits de l'invention, et les exemples 8 à 11 montrent l'activité biologique des composés de l'invention. EXEMPLE 1: Préparation de selon le schéma réactionnel 1 du R-D-30 glucopyranosyl-(1-->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-(a,(3) -D-mannopyranose (produit Al) 2910322 14 Les produits 1 et 2 sont préparés selon le procédé décrits dans FR 2 804 684 et Jamois, F.; Ferrières, V.; Guégan, J.-P.; Yvin, J.-C.; Plusquellec, D.; Vetvicka, V. Glycobiology 2005, 15, 393-407. [a]- Préparation de 4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-2-O-levulinoyl-R-D-5 glucopyranoside de benzyle (produit 3) Ph~O la 1 PhôO NAP~OBn~ NAPO_-OBn OBz OLev Le composé 2 (1 g, 2,006 mmol) est mis en solution dans 50 mL de dichlorométhane puis additionné de DMAP (50 mg, 4,093 mmol), d'acide levulinoïque (250 L, 2,441 10 mmol) et de DCC (500 mg, 2,423 rnmol). Après 5 heures d'agitation à température ambiante, la DCU est éliminée par filtration, puis le milieu est repris par 50 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse à 10% d'acide chlorhydrique, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage sur MgSO4 de la phase organique et 15 concentration, le composé est purifié sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)] pour conduire de manière quantitative à 1,2 g du composé recherché 3. Produit 3 : solide blanc ; Pf ( C) 133 ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,4 ; [a1 -37,4 (c=1,0, CH2C12). RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,83-7,74 (m, 4H, H arom.) ; 7,53-7,28 (m, 20 13H, H arom.) ; 5,61 (s, 1H, H7) ; 5,01 (d, 1H, H9, JH9_H9' = 12,4 Hz) ; 4,87 (d, 1H, H9') ; 4,86 (d, 1H, H8, JH84H8' = 12,4 Hz) ; 4,60 (d, 1H, H8') ; 2,58 (t, 2H, H12, JH, ,-Hi2 = 6,6 Hz) ; 2,44 (t, 2H, H11) ; 2,09 (s, 3H, H14) et tableau la. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 206,2 (C13) ; 171,3 (C10) ; 137,1, 136,9, 25 135,6, 133,1, 132,9 (5C, C quat. arom.) ; 129,0, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,9, 127,8, 127,7, 127,6, 126,8, 126,1, 126,0, 125,8 (C arom.) ; 101,3 (C7) ; 74,1 (C9) ; 70,7 (C8) ; 37,7 (C12) ; 29,8 (C14) ; 27,8 (Cl1) et tableau lb. Analyse élémentaire (C36H3608) : Théorique : C = 72,47 %, H = 6,08 % ; Mesurée : C = 72,05 %, H = 6,12 %. 30 HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C36H36NaO8 : m/z théorique : 619,2308, m/z mesurée 619,2308 ; [M+K]+ C36H36KO8 : m/z théorique: 635,2047, m/z mesurée: 635,2050. 2910322 15 [b] Préparation de 4,6-O-benzylidène-2-O-levulinoyl-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 4) b Ph 0 KAPO PO OBn OLev OLev OBn 4 5 Dans 50 mL d'un mélange dichlorométhane/méthanol (4:1 ; v/v) sont introduits le monosaccharide 3 (1,1 g, 1,844 mmol) et la 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ) (810 mg, 3,568 mmol) à température ambiante. Après 5 heures de réaction, le 10 milieu est dilué avec 50 mL de dichlorométhane et lavé 2 fois avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique, le résidu est purifié sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)]. On obtient ainsi 690 mg du produit recherché 4 avec un rendement de 82%. 20 Produit 4 : solide blanc ; Pf ( C) 12'.2 ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,2 ; [ab -62,2 (c=1,0, 15 CH2C12). RMN 'H (CDC13, 400 MHz) (ppm) : 7,50-7,48 (m, 2H, H arom.) ; 7,38-7,28 (m, 8H, H arom.) ; 5,55 (s, 1H, H7) ; 4,89 (d, 1H, H8, JH8418' = 12,3Hz) ; 4,62 (d, 1H, H8') ; 3,05 (s, 1H, OH3) ; 2,79-2,73 (m, 2H, H11) ; 2,59-2,51 (m, 2H, H10) ; 2,09 (s, 3H, H14) ; 2,16 (s, 3H, H13) et tableau la. 20 RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 207,1 (C12) ; 172,0 (C9) ; 136,9 (2C, C quat. arom.) ; 129,2, 128,4, 128,3, 127,9, 1127,7, 126,3 (C arom.) ; 101,9 (C7) ; 70,8 (C8) ; 38,1 (Cl l) ; 29,8 (C13) ; 28, 0 (C10) et tableau lb. Analyse élémentaire (C25H2808) : Théorique : C = 65,78 %, H = 6,18 % ; Mesurée : C = 66,04 %, H = 6,23 %. 25 HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C25H28NaO8 : m/z théorique: 479,1682, m/z mesurée 479,1682 ; [M+K]+ C25H28KO8 :m/z théorique : 495,1421, m/z mesurée : 495,1395. [c] Préparation de 2-O-benzoyl••4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)(3-D-glucopyranosyl-(1--3)-4,6-O-benzylidène-2-O-levulinoyl(3-D-glucopyranoside de 30 benzyle (Produit 5) 16 2910322 Ph O O HO OBn OLev 4 Ph S O c 1 NAPO SEt c OBn Dans un ballon sont introduits le donneur 1 (1,73 g, 3,108 mmol) et l'accepteur 4 (1,29 g, 2,826 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à -60 C, en présence de tamis moléculaire 4À. Le milieu est alors additionné de N-iodosuccinimide (NIS) (763 mg, 5 3,390 mmol) et de triflate de triméthylsilyle (50 L, 0,283 mmol). Après 3 heures de réaction, le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [toluène/acétate d'éthyle (9:1 ; v/v)], 2,51 g du produit recherché 5 est obtenu avec un rendement de 94%. Produit 5 : solide blanc ; Pf ( C) 178-179 ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,2 ; [ar - 21,0 10 (c=1,0, CH2Cl2). RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,90-7,86 (m, 2H, H arom.) ; 7,70-7,67 (m, 1H, H arom.) ; 7,60-7,21 (m, 24H, H arom.) ; 5,53 (s, 1H, H7b) ; 5,28 (s, 1H, H7a) ; 4,94 (d, 1H, H8b, JH8b-H8'b = 12,1 Hz) ; 4,84 (d, 1H, H8'b) ; 4,80 (d, 1H, H8a, JH8a-HS'a = 12,2 Hz) ; 4,52 (d, 1H, H8'a) ; 2,66-2,46 (ni, 2H, H10a) ; 2,40-2,27 (m, 2H, Hl la) ; 2,08 (s, 15 3H, H 13 a) et tableau 2a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 206,4 (C12a) ; 171,1 (C9a) ; 165,0 (OCOPh) ; 137,3, 137,0, 136,7, 135,3, 133,1, 133,0 (7C, C quat. arom.) ; 132,8, 129,7, 129,4, 128,9, 128,3, 128,2, 127,9, 127,8, 127,7, 127,5, 126,7, 126,1, 126,0, 125,8, 125,6 (C arom.) ; 101,7 (C7b) ; 100,9 (C7a) ; 73,4 (C8b) ; 70,6 (C8a) ; 37,8 (Cl 1 a) ; 29,7 20 (C13a) ; 27,5 (ClOa) et tableau 2b. Analyse élémentaire (C56H54014) : Théorique : C = 70,72%, H = 5,72% ; Mesurée : C = 70,89%, H = 5,72%. HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C56H54NaO14, m/z théorique : 973,3411 ; m/z mesurée : 973,3412. 25 2910322 17 [d]- Préparation de 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranosyl-(1--3)-4, 6-O-benzylidène-2-O-levulinoyl-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 6) La 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (820 mg, 3,600 mmol) est ajoutée à une 5 solution du composé 5 (1,71 g, 1,800 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol (4:1 ; v/v). Après 16 heures de réaction, le milieu est dilué au dichlorométhane, lavé par une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et à l'eau. La phase organique est séchée (MgSO4), évaporée et le produit recherché 6 est obtenu après purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] 10 (1,325 g, Rdt = 91%). 20 Produit 6 : solide blanc ; Pf ( C) 214 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,3 ; MD - 43,0 (c=1,0, CH2C12). RMN 'H (CDCl3, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,06-8,01 (m, 2H, H arom.) ; 7,63-7,23 (m, 19H, H arom.) ; 5,57 (s, 1H, H7b) ; 5,31 (s, 1H, H7a) ; 4,83 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 12,2 15 Hz) ; 4,55 (d, 1H, H8'a) ; 2,72 (s, 1Hä OH3b) ; 2,65-2,49 (m, 2H, H10a) ; 2,37-2,25 (m, 2H, Hl la) ; 2,12 (s, 3H, H13a) et tableau 2a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 206,4 (C12a) ; 171,1 (C9a) ; 165,7 (OCOPh) ; 137,0, 136,9, 136,7 (3C, C quat. arom.) ; 133,3, 129,8 (C arom.) ; 129,5 (C quat. arom.) ; 129,3, 129,1, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 127,8, 127,6, 126,2, 126,0 (C arom.) ; 20 101,6 (C7b) ; 101,5 (C7a) ; 70,6 (C8a) ; 37,7 (Cl la) ; 29,7 (C13a) ; 27,5 (ClOa) et tableau 2b. Analyse élémentaire (C45H46014) : Théorique : C = 66,66%, H = 5,72% ; Mesurée : C = 66,53%, H = 5,80%. HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C45H46NaO14 : m/z théorique : 833,2785 ; m/z mesurée : 25 833,2785 ; [M+K]+ C45H46K014 : m/z théorique : 849,2525, m/z mesurée : 849,2530. [c]- Préparation de 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranosyl(1 ù>3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-4, 6-O-benzylidène-2-O-levulinoyl-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 7) Dans un ballon sont introduits le donneur 1 (226 mg, 0,406 mmol) et l'accepteur 6 (300 mg, 0,370 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à -80 C, en présence de tamis moléculaire 4À. Le milieu est ensuite additionné de N-iodosuccinimide (100 mg, 0,444 mmol) et de triflate de triméthylsilyle (6,7 L, 0,037 mmol). Après 2 heures d'agitation, 30 2910322 18 la réaction est terminée et le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [toluène/acétate d'éthyle (9:1 ; v/v)], 328 mg trisaccharide attendu 7 sont obtenus avec un rendement de 68%. 20 5 Produit 7 : solide blanc ; Pf ( C) 115 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,5; MD +4,7 (c=1,0, CH2C12). RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,95-7,86 (m, 4H, H arom.) ; 7,70-7,13 (m, 33H, H arom.) ; 5,51 (s, 1H, H7) ; 5,43 (s, 1H, H7) ; 4,94 (d, 1H, H8c, JH8c-H8'c = 12,2 Hz) ; 4,83 (d, 1H, H8'c) ; 4,78 (d, 1H, H8a, JH8c-H8'a = 12,4 Hz) ; 4,50 (s, 1H, H7) ; 4,49 10 (d, 1H, H8'a) ; 2,69-2,47 (m, 2H, H10a) ; 2,40-2,21 (m, 2H, Hl la) ; 1,95 (s, 3H, H13a) et tableau 3a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 206,6 (C12a) ; 171,1 (C9a) ; 165,0, 164,8 (2C, OCOPh) ; 137,3, 137,1, 137,0, 135,4 (C quat. arom.) ; 133,3, 133,1 (C arom.) ; 133,0, 132,8 (C quat. arom.) ; 129,8, 129,7 (C arom.) ; 129,4 (C quat. arom.) ; 129,4, 128,9, 15 128,7, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,8, 127,7, 127,6, 127,5, 126,6,126,4, 126,1, 126,0, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 102,1 (C7) ; 101,1 (C7) ; 100,9 (C7) ; 73,8 (C8c) ; 70,4 (C8a) ; 37,7 (Cl la) ; 29,3 (C13a) ; 27,6 (Cl0a) et tableau 3b. Analyse élémentaire (C76H72020) : Théorique : C = 69,93 %, H = 5,56 % ; Mesurée : C = 69,89 %, H = 5,63 %. 20 HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C76H72NaO20 : m/z théorique : 1327,4515, m/z mesurée 1327,4522 ; [M+K]+ C76H72KO20 : m/z théorique : 1343,4254, m/z mesurée 1343,4206. [e]-Préparation de 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-R-D-25 glucopyranosyl-(1ù*3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranosyl(1ù*3)-4,6-O-benzylidène-[i-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 12) 7,6 mL d'une solution 1M d'hydrazine dans un mélange pyridine/acide acétique (3:2, v/v) sont additionnés goutte à goutte à une solution du trisaccharide 7 (500 mg, 0,383 mmol) dans la pyridine (7,6 mL). Après 3 heures d'agitation, la réaction est stoppée par 30 ajout de 2,1 mL de 2,4-pentane-dione et le milieu est concentré sous pression réduite. Le résidu est ensuite repris par 50 mL de dichlorométhane et lavé par une solution d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration, le produit est purifié par chromatographie sur gel de silice 2910322 19 [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] pour conduire à 377 mg du composé 12 avec un rendement de 82%. Produit 12 : solide blanc ; Pf ( C) 136 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,5 ; [ar +13,4 (c=1,0, CH2C12). 5 RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,94-7,90 (m, 4H, H arom.) ; 7,68-7,66 (m, 1H, H arom.) ; 7,58-7,19 (m, 32H, H arom.) ; 5,54 (s, 1H, H7) ; 5,52 (s, 1H, H7) ; 4,95 (d, 1H, H8c, JH8c-H8'c = 12,4 Hz) ; 4,88 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 11,6 Hz) ; 4,83 (d, 1H, H8'c) ; 4,77 (s, 1H, H7) ; 4,53 (d, 1H, H8'a) et tableau 3a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 165,1, 164,7 (2C, OCOPh) ; 137,3, 137,2, 10 136,9, 135,3, 133,0, 132,8, 129,2 (8C, C quat. arom.) ; 133,4, 133,0, 129,8, 129,7, 129,3 (C arom.) ; 129,2 (C quat. arom.) ; 129,0, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,9, 127,8, 127,5, 126,7, 126,4, 126,1, 126,0, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 102,0 (C7) ; 101,2 (C7) ; 100,5 (C7) ; 73,8 (C8c) ; 71,2 (C8a) et tableau 3b. Analyse élémentaire (C71H66O18) : Théorique : C = 70,64 %, H = 5,51 % ; Mesurée : C 15 =70,49%,H=5,54%. HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C71H66NaO18 : m/z théorique : 1229,4147 ; m/z mesurée: 1229,4149 ; [M+K]+ C71H66KO18 : m/z théorique : 1245,3886: m/z mesurée : 1245,3944 ; [M-H+2Na]+ C71H65Na2O18 : m/z théorique : 1251,3966 ; m/z mesurée: 1251,4040. 20 [fi- Préparation de 2-O-benzoyl•-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)(3-D-glucopyranosyl-(1--->3)-2-O-benzoyl-4, 6-O-benzylidène-P-D-glucopyranosyl-(1--*3)-4,6-0-benzylidène[i-D-glucopyranos-2-uloside de benzyle (Produit 15a) 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranosyl(1-*3)-2-O-benzoyl-4, 6-O-benzylidène-(3-D- glucopyranosyl-(1 -*3)-4,6-0-benzylidène-2-C- 25 hydroxyl-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 15b) Le composé déprotégé 12 (330 mg, 0.,273 mmol) est additionné de 9 mL d'un mélange DMSO/acide acétique (2:1, v/v). Après 48 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué par 50 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par de l'eau. Après concentration et plusieurs co- 30 évaporation au toluène, le milieu est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)], pour conduire à 180 mg du produit oxydé 15a (Rdt=55%) en mélange 2:1 avec sa forme hydratée 15b. Produit 15a : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,3. 2910322 20 RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,95-7,91 (m, 4H, H arom.) ; 7,67-7,60 (m, 1H, H arom.) ; 7,57-7,10 (m, 32H, H arom.) ; 5,53 (s, 1H, H7) ; 5,41 (s, 1H, H7) ; 5,40 (dd, 1H, H2c, JHlc-H2c = 7,8 Hz, JH2c-H3c = 8,4 Hz) ; 5,32 (d, 1H, H1c) ; 5,27 (dd, 1H, H2b, JHIb-H2b = 2, 4 Hz, /H2b-H3b = 1,6 Hz) ; 5,19 (d, 1H, Hlb) ; 4,94 (d, 1H, H8c, JH8c-H8'c -- 5 11,7 Hz) ; 4,82 (d, 1H, H8'c) ; 4,82 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 12,0 Hz) ; 4,64 (s, 1H, Hla) ; 4,61 (d, 1H, H8'a) ; 4,42 (s, 1H, H7) ; 4,35 (d, 1H, H3a, JH3a-H4a = 10,4 Hz) ; 4,35 (t, 1H, H6a, JH5a-H6a = /H6a-H6'a = 5,5 Hz) ; 4,28 (dd, 1H, H6c, JH8c-H6c = 4,9 Hz, JH6c-H6'c = 10,4 Hz) ; 4,24 (dd, 1H, H4b, JH3b-H4b = 7,5 Hz, JH4b-H5b = 10,6 Hz) ; 4,11 (dd, 1H, H6b, JH5b-H6b = 4,8 Hz, JH6b-H6'b = 10,2 Hz) ; 4,01 (dd, 1H, H3b) ; 3,95 (t, 1H, H3c, JH3c- 10 Hoc = 8,4 Hz) ; 3,91 (t, 1H, H4c, JH4c-H5c = 8,4 Hz) ; 3,77 (t, 1H, H6'c, JH5c-H6'c = 10,4 Hz) ; 3,72 (ddd, 1H, H5b, JH5b-H6'b = 10,2 Hz) ; 3,63 (ddd, 1H, H5c) ; 3,56 (t, 1H, H6'a, JH5a-H6'a = 5,5 Hz) ; 3,55 (dt, 1H, H5a, JH4a-H5a = 9,0 Hz) ; 3,41 (t, 1H, H6'b) ; 2,98 (dd, 1H, H4a). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 165,2, 165,0 (2C, OCOPh) ; 137,3, 137,2, 15 136,8, 135,9, 135,4 (C quat. arom.) ; 133,5, 133,3 (C arom.) ; 133,0, 132,8 (C quat. arom.) ; 129,8, 129,7, 129,3, 129,2 (C arom.) ; 129,0 (C quat. arom.) ; 129,0, 128,9, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 127,5, 126,7, 126,4, 126,2, 126,1, 126,0, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 101,6 (C7) ; 101,2 (C7) ; 100,6 (C7) ; 98,6 (Cl a) ; 97,6 (Clc) ; 96,1 (Clb) ; 81,6 (C4c) ; 79,9 (C4a) ; 78,1 (C3c) ; 77,4 (C4b) ; 75,9 20 (C3a) ; 75,8 (C3b) ; 73,9 (C8c) ; 73,1 (C2c) ; 71,8 (C2b) ; 70,3 (C8a) ; 68,9 (C6b) ; 68,7 (C6c) ; 68,3 (C6a) ; 66,4 (C5a) ; 66,2 (C5c) ; 64,9 (C5b). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C71H64NaO18 : m/z théorique : 1227,3990 ; m/z mesurée : 1227,3988 ; [M+Na+CH3OH]+ C72H68NaO19 : m/z théorique : 1259,4252, m/z mesurée : 1259,4245. 25 Produit 15b : RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques à 5,24 (d, 1H, H3a, JH3a-H4a = 2,9 Hz) ; 4,30 (s, 1H, Hla). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm.) : Signaux caractéristiques à 100,4 (Cl a) ; 93,4 (C2a). 30 [g]- Préparation de 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranosyl(1--->3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-11-D-glucopyranosyl-(1-*3)-4, 6-0-benzylidène-(i-D-mannopyranoside de benzyle (Produit 18) 2910322 21 Le composé oxydé 15a/15b (180 mg, 0,149 mmol) est solubilisé dans un mélange dichlorométhane / THF (1:1, v/v) puis additionné à - 78 C de LSélectride (1M dans THF ; 150 L, 0,150 mmol). Après 45 minutes à - 78 C, la réaction est supposée terminée et neutralisée par ajout de quelques gouttes d'acide acétique. Une fois le milieu 5 revenu à température ambiante, 30 rnL de dichlorométhane sont ajoutés et la phase organique est lavée par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et pour finir par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. 180 mg du composé réduit mannoside souhaité 18 sont ainsi obtenus après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique. [a]2D 10 Produit 18 : solide blanc ; Pf ( C) 180 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,2 ; a n -4,4 (c=1,0, CH2C12). RMN 'H (CDCl3, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,85-7,83 (m, 2H, H arom.) ; 7,73-7,67 (m, 3H, H arom.) ; 7,62-7,17 (m, 32H, H arom.) ; 5,50 (s, 1H, H7) ; 5,42 (s, 1H, H7) ; 5,21 (s, 1H, H7) ; 4,90 (d, 1H, H8c, JH8c-H8'c = 12,4 Hz) ; 4,87 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 12,2 Hz) ; 15 4,80 (d, 1H, H8'c) ; 4,59 (d, 1H, H8'a) et tableau 3'a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 164,8, 164,8 (2C, OCOPh) ; 137,2, 137,1, 136,5, 135,2 (C quat. arom.) ; 133,2 (C arom.) ; 132,9, 132,8 (C quat. arom.) ; 132,8, 129,7, 129,6 (C arom.) ; 129,4, 129ä1 (C quat. arom.) ; 129,0, 128,9, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8, 127,5, 126,7, 126,4, 126,3, 126,1, 126,0, 20 125,7, 125,6 (C arom.) ; 101,5 (C7) ; 101,1 (2 C, C7) ; 73,5 (C8c) ; 70,4 (C8a) et tableau 3'b. [h]- Préparation de 4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-fi-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-4, 6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-4,6-O-benzylidène-(3-D-25 mannopyranoside de benzyle (Produit 19) Le composé 18 (170 mg, 0,141 mmol) est dissous dans 15 mL d'un mélange méthanol/dichlorométhane (2:1, v/v) puis additionné de 2 équivalents de méthylate de sodium (0,1M dans MeOH, 3 mL, 0,300 mmol). Après 6 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est neutralisé par ajout de résine Amberlite IR120-H+, 30 filtré puis concentré sous pression réduite. Après chromatographie [dichlorométhane/méthanol (99:1 ; v/v)], le composé 19 est obtenu avec un rendement de 72% (126 mg). 2910322 22 zo Produit 19 : solide blanc ; Pf ( C) >230 ; Rf (CH2C12/MeOH, 97:3) 0,4 ; [a r - 43.5 (c=1,0, CH2C12). RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) (ppm) : 7,70-7,19 (m, 27H, H arom.) ; 5,47 (s, 1H, H7) ; 5,44 (s, 1H, H7) ; 5,42 (s, 1H, H7) ; 4,96 (d, 1H, H8c, JH8c-H8'c = 12,0 Hz) ; 4,88 (d, 1H, 5 H8'c) ; 4,84 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 11,9 Hz) ; 4,56 (d, 1H, H8'a) et tableau 3'a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 137,1, 137,0, 136,9, 136,2, 135,8, 133,1, 132,8 (7C, C quat. arom.) ; 129,0, 128,9, 128,8, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 127,6, 127,5, 127,4, 126,8, 126,5, 126,2, 126,1, 126,0, 125,9, 125,8, 125,7 (C arom.) ; 101,6 (C7) ; 101,2 (C7) ; 100,7 (C7) ; 74,4 (C8c) ; 70,7 (C8a) et tableau 3'b. 10 HRMS (ESI) : [M+Na]+ C57H58NaO16 : m/z théorique : 1021,3623, m/z mesurée :1021,3624 ; [M+K]+ C57H58K016 : m/z théorique :1037,3362, m/z mesurée 1037,3370 ; [M-H+2Na]+ C57H57Na2016 : m/z théorique : 1043,3442, m/z mesurée 1043,3463. 15 [i]-[3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-fi-D-glucopyranosyl-(1-*3)-(a,(3) -D-mannopyranose (Produit Al) Dans 10 mL d'un mélange acétate d"éthyle/méthanol/dichlorométhane (2:2:1 ; v/v/v) sont introduits le trisaccharide 18 (90 rng, 0,090 mmol), puis l'acétate de palladium (60 mg, 0,267 mmol). Le milieu est alors agité vigoureusement à température ambiante sous 20 atmosphère d'hydrogène pendant 7 jours. Après filtration sur célite, la phase hydroorganique est extraite au dichlorométhane, puis est mise à sec par coévaporation azéotropique avec de l'éthanol absolu pour conduire de manière quantitative au composé déprotégé (45 mg, 0,090 mmol). 25 mg du composé formé sont ensuite purifiés par chromatographie d'exclusion sur gel Sephadex G-10 (éluant : eau) et les 25 fractions recueillies sont lyophilisées afin d'obtenir le produit recherché qui se présente sous la forme d'une mousse blanche. RMN IH (D20, 400 MHz) 5 (ppm) : 5,13 (d, 1H, Hlaa, JHIa-H2a =1,8 Hz) ; 4,67 (d, 1H, Hic, JHIc-H2c =7,7 Hz) ; 4,53 (d, 1H, H1b, JHIb-H2b= 8,0 Hz) ; 4,03 (dd, 1H, H2a, JH2a-H3a = 3,1 Hz) ; 3,96 (dd, 1H, H3a, JH3a-H4a = 9,5 Hz) ; 3,90-3,80 (m, 3H, H6a, H6b, H6c) ; 30 3,80-3,73 (m, 1H, H4a) ; 3,72-3,55 (m, 5H, H5a, H6'a, H3b, H6'b, H6'c) ; 3,53-3,36 (m, 5H, H2b, H64b, H5b, H3c, H5c) ;; 3,32 (t, 1H, H4c, JH3c-H4c = JH4c-H5c = 9,7 Hz) ; 3,27 (dd, 1H, H2c, JH2c_H3c= 9,3 Hz). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 (ppm) : 103,1 (Cl c) ; 100,5 (C l b) ; 94,1 (C l aa) ; 84,5 (C3b) ; 78,5 (C3a) ; 76,3 (C5c) ; 75,9 (2C, C3c, C5b) ; 75,8 (C2c) ; 73,1 (C2b) ; 72,7 5 2910322 23 (C4a) ; 69,9 (C4c) ; 68,6 (C2a) ; 68,4 (C4b) ; 65,5 (C5a) ; 61,2, 61,0 (3C, C6a, C6b, C6c). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C18H32NaO16 : m/z théorique : 527,1588, m/z mesurée: 527,1587 ; [M+K]+ C18H32K016 : m/z théorique : 543,1327, m/z mesurée : 543,1343. EXEMPLE 2: Synthèse de différents intermédiaires: Ph~p Ph'p---\ Ph NAPO OBn NAP OBn OBz OLev SEt OLev OBn 2 4 c OBz Glycosylation NAP OBz \ OLev Ph ô p 0 o p OBn H OBz OLev d 3-O•Déprotection n 6: n 1 sélective 8: n=2 OBn 3: n=0 5: n=1 7: n=2 9: n=3 OBn l0: n=0 Il: n=1 12: n=2 h OBn g 2910322 24 2.1/ 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranosyl-(1ù3)-2-O-benzoyl-4, 6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranosyl-(i ù*3)-4,6-0-benzylidène-2-O-levulinoyl-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 8) O h\---o o o 0OBn OBz OLev 2 5 La 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (176 mg, 0,774 mmol) est ajoutée à une solution du composé trisaccharidique 7 (337 mg, 0,258 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol (4:1 ; v/v). Après 16 heures d'agitation à température ambiante, la réaction est terminée et le milieu est dilué au dichlorométhane, lavé par une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium puis à l'eau. La phase organique est 10 séchée sur MgSO4, concentrée et le produit recherché 8 est obtenu après purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] (185 mg, Rdt = 72%). Produit 8 : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,2. RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,01-7,95 (m, 2H, H arom.) ; 7,90-7,84 (m, 2H, H arom.) ; 7,53-7,18 (m, 24H, H arom.) ; 7,15-7,09 (m, 2H, H arom.) ; 5,39 (s, 1H, 15 H7) ; 5,37 (s, 1H, H7) ; 4,74 (d, 1H, I-18a, JH8a-H8'a = 12,2 Hz) ; 4,47 (s, 1H, H7) ; 4,45 (d, 1H, H8'a) ; 2,66 (s, 1H, OH3c) :, 2,66-2,44 (m, 2H, H10a) ; 2,36-2,20 (m, 2H, Hl la) ; 1,91 (s, 3H, H13a) et tableau 3a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 206,1 (C12a) ; 171,1 (C9a) ; 165,7, 164,8 (2C, OCOPh) ; 137,3, 137,0, 136,9, 133,5, 133,2 (6C, C quat. arom.) ; 129,9, 129,7, 129,5, 20 129,4, 129,2, 128,7, 128,4, 128,3, 128,2, 127,9, 127,8, 127,7, 127,6, 126,4, 126,2, 126,0 (C arom.) ; 102,1, 101,7, 100,4 (3C, C7) ; 70,4 (C8a) ; 37,7 (Cl la) ; 29,3 (C13a) ; 27,7 (C l Oa) et tableau 3b. 2.2/ 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranosyl25 (1ù*3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3) -2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-4, 6-O-benzylidène-2-O-levulinoyl-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 9) Ph~O Dans un ballon sont introduits le donneur 1 (26 mg, 0,047 mmol) et l'accepteur 30 trisaccharidique 8 (50 mg, 0,043 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à 0 C, en NAP O O Br 2910322 25 présence de tamis moléculaire 4À. Après addition de N-iodosuccinimide (NIS) (50 mg, 0,051 mmol) et de triflate de triméthylsilyle (0,65 L, 0,004 mmol), le mélange est laissé sous forte agitation pendant 30 minutes. La réaction terminée, le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après purification par 5 chromatographie sur gel de silice [toluène/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)], 24 mg de tétrasaccharide souhaité 9 sont obtenus avec un rendement de 34%. 20 Produit 9 : solide blanc ; Pf ( C) 138 ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,3 ; a n +8,4 (c=1,0, CH2C12). RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 6 (ppm) : 7,94-7,74 (m, 6H, H arom.) ; 7,58-7,17 (m, 10 41H, H arom.) ; 5,48 (s, 1H, H7) ; 5,44 (s, 1H, H7) ; 5,33 (dd, 1H, H2d, JHId-H2d = 6,9 Hz, JH2d-H3d = 8,2 Hz) ; 5,21 (t, 1H, H2c, JHIc-H2c = JH2c-H3c = 5,8 Hz) ; 5,06 (d, 1H, Hic) ; 4,97 (d, 1H, H l b, JH l b-H2b = 5,8 Hz) ; 4,96 (d, 1H, H l d) ; 4,96 (s, 1H, H7) ; 4,90 (d, 1H, H8d, JH8d-H8'd = 12,4 Hz) ; 4,82 (t, 1H, H2b, JH2b-H3b = 5,8 Hz) ; 4,80 (d, 1H, H8'd) ; 4,79 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 12,4 Hz) ; 4,68 (dd, 1H, H2a, JHIa-H2a = 8,0 Hz, 15 JH2a4i3a = 8,6 Hz) ; 4,63 (s, 1H, H7) ; 4,51 (d, 1H, H8'a) ; 4,35 (d, 1H, Hl a) ; 4,31 (dd, 1H, H6a, JH5a-H6a = 4,9 Hz, JH6a-H6'a = 10,6 Hz) ; 4,21 (dd, 1H, H6d, JH5a-H6d = 4,9 Hz, JH6a-H6'd = 10,4 Hz) ; 4,16 (dd, 1H, H6c, JH5c_H6c = 5,6 Hz, JH6c_H6'c = 10,4 Hz) ; 4,11 (dd, 1H, H6b, JHSb-H6b = 5,3 Hz, JH6b-H6'b = 9,1 Hz) ; 4,08 (dd, 1H, H3c, JH3c-H4c = 8,8 Hz) ; 4,01 (dd, 1H, H3b, JH3b-H4b = 8,4 Hz) ; 3,98 (t, 1H, H4c, JH4c-H5c = 8,8 Hz) ; 3,90 (dd, 20 1H, H4d, JH3d-H4d = 8,2 Hz, JH4d-H5d = 9,1 Hz) ; 3,90 (dd, 1H, H3a, JH3a-H4a = 9,1 Hz) ; 3,82 (t, 1H, H3d) ; 3,73 (t, 1H, H6'd, JH5d_H6'd = 10,4 Hz) ; 3,67 (t, 1H, H6'a, JH5a-H6'a = 10,6 Hz) ; 3,62-3,58 (m, 2H, H5c, H6'c) ; 3,61 (dd, 1H, H4b, JH4b_H5b = 9,1 Hz) ; 3,50 (t, 1H, H6'b, JH5b_H6'b = 9,1 Hz) ; 3,48 (dt, 1H, H5b) ; 3,44 (ddd, 1H, H5d) ; 3,34 (ddd, 1H, H5a, JH4a4i5a = 9,1 Hz) ; 3,16 (t, 1H, H4a) ; 2,64-2,50 (m, 2H, H10a) ; 2,36-2,21 (m, 2H, 25 Hl la) ; 2,00 (s, 3H, H13a). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 206,0 (C12a) ; 171,1 (C9a) ; 164,9, 164,8, 164,5 (3C, OCOPh) ; 137,3, 137,1, [36,9, 135, 3 (C quat. arom.) ; 133,3, 133,2 (C arom.) ; 133,0, 132,8 (C quat. arom.) 129,7 (C arom.) ; 129,4 (C quat. arom.) ;129,4, 128,9, 128,8, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,9, 127,8, 127,7, 127,5, 126,6, 30 126,4, 126,2, 126,0, 125,9, 125,7, 125,6 (C arom.) ; 102,0 (C7) ; 101,1 (C7) ; 100,8 (2C, C7) ; 99,7 (Cla) ; 99,3 (Cld) ; 97,8 (Clb) ; 96,8 (Clc) ; 81,1 (C4d) ; 78,8 (C4a) ; 78,5 (C4c) ; 78,1 (C3d) ; 77,4 (C4b) ; 77,2 (C3c) ; 74,3 (2C, C3a, C3b) ; 73,6 (2C, C8d, C2a) ; 73,4 (C2d) ; 73,2 (C2b) ; 72, 8 (C2c) ; 70,5 (C8a) ; 68,7 (3C, C6b, C6c, C6d) ; 2910322 26 68,5 (C6a) ; 66,3 (C5a) ; 65,9 (C5d) ; 65,7 (C5c) ; 65,3 (C5b) ; 37,7 (Cl la) ; 29,5 (C13a) ; 27,6 (Cl0a). Analyse élémentaire (C96H90026) : Théorique : C = 69,47 %, H = 5,47 % ; Mesurée : C = 69,57 %, H = 5,58 %. 5 HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C96H90NaO26 : m/z théoriqu e: 1681,5618, m/z mesurée : 1681,5619 ; [M+K]+ C96H90KO26 : m/z théorique : 1697,5357, m/z mesurée : 1697,5398. 2.3/ 4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranoside de benzyle 10 (Produit 10) Ph~~O NAPCh~-'OBn OH A une solution de 3 (5 g, 8,296 mmol) dans le méthanol anhydre (150 mL) est ajouté le sodium (0,7 g, 30,435 mmol). Le mélange est agité à 50 C jusqu'à complète consommation du produit de départ. Le milieu est alors refroidi, neutralisé par addition 15 d'une quantité stoechiométrique d'acide acétique et concentré. Le résidu est ensuite dissous dans le dichlorométhane (250 mL), extrait 3 fois par 50 mL d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO4 puis concentrée. La purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)] permet d'obtenir 3,7 g du composé débenzoylé 10 avec un rendement de 83%. zo 20 Produit 10 : solide blanc ; Pf ( C) 148 ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,7 ; [a r - 48,1 (c=1,0, CH2C12). RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,86-7,80 (m, 2H, H arom.) ; 7,78-7,72 (m, 1H, H arom.) ; 7,52-7,30 (m, 14H, H arom.) ; 5,60 (s, 1H, H7) ; 5,10 (d, 1H, 1-19, JH9-H9' = 12,0 Hz) ; 4,98 (d, 1H, H9') ; 4,94 (d, 1H, H8, JH8_H8' = 11,8 Hz) ; 4,65 (d, 1H, H8') ; 25 2,46 (s, 1H, OH) et tableau la. RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) 8 (ppm) : 137,2, 136,8, 135,7, 133,2, 133,0 (5C, C quat. arom.) ; 129,0, 128,5, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,6, 126,8, 126,2, 126,1, 126,0, 125,9, 125,8, 125,4, 125,1 (C arom.) ; 101,4 (C7) ; 74,6 (C9) ; 71,4 (C8) et tableau lb. 30 Analyse élémentaire (C31H3006) : Théorique : C = 74,68 %, H = 6,07 % ; Mesurée : C = 74,76 %, H = 6,04 %. 2910322 27 HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C31H30Na06 : m/z théorique : 521,1940, m/z mesurée : 521,1948 ; [M+K]+ C31H30KO6 : m/z théorique: 537,1679, m/z mesurée : 521,1999. 2.4/ 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranosyl-5 (1-->3)-4,6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 11) O Bn 200 L d'une solution 1M d'hydrazine dans un mélange pyridine/acide acétique (3:2, v/v) sont additionnés goutte à goutte à une solution du disaccharide 5 (11 mg, 0,011 mmol) dans la pyridine (0,2 mL). Après 1 heure d'agitation, la réaction est stoppée par 10 ajout de 50 L de 2,4-pentane-dione et le milieu est concentré sous pression réduite. Le résidu est ensuite repris par 20 mL de dichlorométhane et lavé par une solution d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage de la phase organique sur MgSO4 et évaporation du solvant, le produit est purifié par 15 chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] pour conduire à 6 mg du composé 11 avec un rendement de 61%. Produit 10 : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,6. RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 6 (ppm) : 7,93-7,89 (m, 2H, H arom.) ; 7,70-7,23 (m, 25H, H arom.) ; 5,54 (s, 1H, H7b) ; 5,45 (s, 1H, H7a) ; 4,95 (d, 1H, H8b, JHSb-HS'b = 12,9 20 Hz) ; 4,86 (d, 1H, H8'b) ; 4,85 (d, 1H, H8a, JHSa_HS'a = 11,7 Hz) ; 4,56 (d, 1H, H8'a) et tableaux 2a et 2b. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 165,5 (OCOPh) ; 137,2, 137,1, 136,7, 135,2, 133,1, 132,8 (7C, C quat. arom.) ; 133,0, 129,8, 129,7, 129,1, 129,0, 128,5, 128,4, 128,2, 128,0, 127,9, 127,8, 127,6, 126,9, 126,1, 126,0, 125,8, 125,7 (C arom.) ; 102,0 25 (C7b) ; 101,3 (C7a) ; 74,0 (C8b) ; 71,3 (C8a) et tableau 2c. HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C51H48NaO12 : m/z théorique : 875,3044, m/z mesurée : 875,3040 ; [M+K]+ C51H48KO12 : m/z théorique : 891,2783, m/z mesurée : 891,2748 2.5/ 4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranos-2-uloside de benzyle (13a) 30 4,6-O-benzylidène-2-C-hydroxyl-3-O-(2-méthylnaphtyl)-fi-D-glucopyranoside de benzyle (13b) 2910322 28 Ph~O H O PANû' OBn OH n Le composé 10 (43,5 mg, 0,087 mmol) est mis en solution dans 1 mL d'un mélange DMSO/anhydride acétique (2:1 ; v/v). Après 20 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est repris par 50 mL d'acétate d'éthyle et lavé par une solution 5 aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique, le composé est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)] pour conduire à l'obtention de 33 mg d'un mélange 5:1 du composé recherché 13a et du composé hydraté 13b, avec un rendement de 76%. 10 Solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,3. Produit 13a : RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,75-7,66 (m, 3H, H arom.) ; 7,57-7,54 (m, 1H, H arom.) ; 7,43-7,20 (m, 13H, H arom.) ; 5,49 (s, 1H, H7) ; 5,03 (d, 1H, H9, JH9-H9' _ 12,7 Hz) ; 4,84 (d, 1H, H8, JH84H8' = 12,0 Hz) ; 4,80 (d, 1H, H9') ; 4,72 (s, 1H, H1) ; 15 4,62 (d, 1H, H8') ; 4,35 (dd, 1H, H6, JHS-H6 = 4,8 Hz, JH54H6' = 10,4 Hz) ; 4,13 (d, 1H, H3, JH3_H4 = 10,2 Hz) ; 3,90 (t, 1H, H4, JH4_H5 = 10,2 Hz) ; 3,77 (t, 1H, H6', JH5-H6' _ 10,4 Hz) ; 3,58 (ddd, 1H, H5). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 196,7 (C2) ; 136,8, 135,9, 134,6, 133,1, 133,0 (5C, C quat. arom.) ; 129,2, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,6, 127,1, 126,7, 20 126,1, 126,0, 125,9, 125,7 (C arom.) ; 101,2 (C7) ; 99,0 (Cl) ; 82,0 (C4) ; 81,8 (C3) ; 73,1 (C9) ; 70,5 (C8) ; 68,5 (C6) ; 66,4 (C5). Produit 13b : RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 6 (ppm) : 7,75-7,66 (m, 3H, H arom.) ; 7,63-7,59 (m, 1H, H arom.) ; 7,43-7,20 (m, 13H, H arom.) ; 5,49 (s, 1H, H7) ; 4,97 (d, 1H, H9, JH9-H9' _ 25 11,9 Hz) ; 4,94 (d, 1H, H9') ; 4,84 (d, 1H, H8, JH8-H8' = 11,7 Hz) ; 4,58 (d, 1H, H8') ; 4,38 (s, 1H, Hl) ; 4,28 (dd, 1H, H6, JH5-H6 = 4,8 Hz, JH6-H6' = 10,4 Hz) ; 3,84 (t, 1H, H4, JH3-H4 = JH4-H5 = 9,9 Hz) ; 3,80 (dd, 1H[, H6', JH5_H6' = 9,7 Hz) ; 3,62 (d, 1H, H3) ; 3,34 (ddd, 1H, H5) ; 1,97, 1,95 (2s, 2H, OH2). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 136,9, 136,1, 134,8, 133,1, 133,0 (5C, C quat. 30 arom.) ; 129,0, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,6, 127,1, 126,7, 126,2, 126,0, 125,9, 125,7 (C arom.) ; 101,4 (C7) ; 100,5 (Cl) ; 93,9 (C2) ; 79,9 (C4) ; 79,8 (C3) ; 74,9 (C9) ; 71,5 (C8) ; 68,5 (C6) ; 66,5 (C5). OBn + 2910322 29 2.6/ 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidèn.e-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranosyl(1--3)-4,6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranos-2-uloside de benzyle (Produit 14a) 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(i-D-glucopyranosyl(1 ù>3)- 5 4,6-O-benzylidène-2-C-hydroxyl-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 14b) Ph'-\-' 0 O~ yOBn 0 OBn OBz NAP OBz OH O Le composé 11 (6 mg, 0,007 mmol) est mis en solution dans 1 mL d'un mélange DMSO/anhydride acétique (2:1 ; v/v). Après 20 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est repris par 50 mL d'acétate d'éthyle et lavé par une solution 10 aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (M:gSO4) et concentration de la phase organique, le composé est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)] pour conduire à l'obtention de 6 mg d'un mélange 1:5 du composé recherché 14a et du composé hydraté 14b, avec un rendement quantitatif. 15 Solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,3. Produit 14a : RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signal caractéristique à 192,2 (C2a). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C51H46NaO12 : m/z théorique : 873,2887 ; m/z mesurée : 873,2886 ; [M'+Na]+ C51H48NaO13 : m/z théorique : 891,2993, m/z mesurée: 891,2982. 20 Produit 14b : RMN 'H (CDC13, 400 MHz) (ppm) : 7,92-7,88 (m, 2H, H arom.) ; 7,73-7,22 (m, 25H, H arom.) ; 5,56 (s, 1H, H7) ; 5,50 (s, 1H, H7) ; 5,38 (t, 1H, H2b, JH1b_H2b = JH2b-H3b = 8,0 Hz) ; 4,96 (d, 1H, H8b, JHSb-H8'b = 12,4 Hz) ; 4,90 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 12,0 Hz) ; 4,89 (d, 1H, H8'b) ; 4,86 (d, 1H, Hlb) ; 4,58 (d, 1H, H8'a) ; 4,34 (dd, 1H, H6b, 25 JH5b-H6b = 4,9 Hz, JH6b-H6'b = 10,6 Hz) ; 4,30 (s, 1H, Hla) ; 4,27 (dd, 1H, H6a, JH5a-H6a = 5,1 Hz, J116a_H6'a = 10,6 Hz) ; 3,99-3,76 (m, 5H, H4a, H6'a, H3b, H4b, H6'b) ; 3,75 (d, 1H, H3a, JH3a-H4a = 9,5 Hz) ; 3,48 (dt, 1H, H5b, JH4b-H5b = JH5b-H6'b = 9,5 Hz) ; 3,36 (dt, 1H, H5a, JH4a-H5a = JH5a-H6'a = 10,0 Hz),. 137,1, 136,1, 135,1, RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 166,3 (OCOPh) ; 137,2, 30 132,9 (C quat. arom.) ; 133,3, 133,0, 129,9, 129,5, 129,1, 129,0, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,6, 127,0, 126,3, 126,2, 126,1, 125,9, 125,8 (C arom.) ; 103,0 (Clb) ; 101,2, 101,0 (C7) ; 100,4 (Cla) ; 93,4 (C2a) ; 81,9 (C3a) ; 81,0 + 2910322 30 (C4b) ; 78,1 (C4a) ; 77,6 (C3b) ; 74,4 (C2b) ; 73,9 (C8b) ; 71,4 (C8a) ; 68,6 (C6a) ; 68,4 (C6b) ; 66,8 (C5a) ; 65,9 (C5b). 2.7/ 4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-mannopyranoside de benzyle (Produit 16) Ph~O H O 5 NAP--O OBn A une solution du mélange 13a/13b (33 mg, 0,067 mmol) dans le THF (0,5 mL) est additionné, à -80 C, un équivalent de L-Sélectride (1M dans THF ; 70 L, 0,070 mmol). Après 15 minutes d'agitation à -80 C, le milieu est dilué par 10 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, par une 10 solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage sur MgSO4 et évaporation du solvant, le composé est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:1 ; v/v)] pour conduire à l'obtention de 28 mg du composé mannosidique recherché 16 avec un rendement de 85%. 15 Produit 16 : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 3:1) 0,3. RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,85-7,79 (m, 3H, H arom.) ; 7,73-7,71 (m, 1H, H arom.) ; 7,55-7,30 (m, 13H, H arom.) ; 5,65 (s, 1H, H7) ; 4,99 (d, 1H, H9, JH9419' _ 12,7 Hz) ; 4,96 (d, 1H, H9') ; 4,94 (d, 1H, H8, JH8_H8' = 12,0 Hz) ; 4,65 (d, 1H, H8') ; 4,52 (d, 1H, H1, JH1_H2 = 1,0 Hz) ; 4,37 (dd, 1H, H6, JH5_H6 = 5,1 Hz, JH6_H6' = 10,4 Hz) ; 20 4,21 (t, 1H, H4, JH3_H4 = JH4-H5 = 9,4 Hz) ; 4,14 (dd, 1H, H2, JH2_H3 = 3,3 Hz) ; 3,94 (t, 1H, H6', JH5-H6' = 10,4 Hz) ; 3,66 (dd, 1H, H3) ; 3,33 (ddd, 1H, H5). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 137,4, 136,5, 135,3, 133,1, 133,0 (5C, C quat. arom.) ; 129,2, 129,0, 128,6, 128,5, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,6, 126,7, 126,2, 126,1, 125,9, 125,7 (C arom.) ; 101,6 (C7) ; 98,6 (Cl; 1Jci4ui =158 Hz) ; 78,4 (C4) ; 25 76,4 (C3) ; 72,4 (C9) ; 70,7 (C8) ; 70,0 (C2) ; 68,6 (C6) ; 66,9 (C5). 2.8/ 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-3-O-(2-méthylnaphtyl)-(3-D-glucopyranosyl(1-*3)-4,6-O-benzylidène-(3-D-mannpyranoside de benzyle (Produit 17) O Bn NAP OBz 30 Le composé 14a/14b (5 mg, 0,006 mmol) en solution dans 1 mL de THF est additionné à -90 C de L-Sélectride (solution 1 M dans THF ; 6 L, 0,006 mmol). Après 1 heure d'agitation à basse température, le milieu est neutralisé par de l'acide acétique, dilué par 2910322 31 20 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse à 10% d'acide chlorhydrique, par une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique, 5 mg du composé recherché 17 (0,006 mmol) sont 5 obtenus avec un rendement quantitatif. Produit 17 : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 2:1) 0,3. RMN 'H (CDCI3, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,90-7,20 (m, 20H, H arom.) ; 5,55 (s, 1H, H7) ; 5,48 (s, 1H, H7) ; 5,35 (t, 1H, H2b, JHIb-H2b = JH2b-H3b = 7,5 Hz) ; 4,94 (d, 1H, H8b, Ju8b-H8'b = 12,2 Hz) ; 4,86 (d, 1H, H8'b) ; 4,81 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 11,9 Hz) ; 4,79 (d, 1H, 10 Hlb) ; 4,56 (d, 1H, H8'a) ; 4,37 (d, 1H, Hl a, JHIa-H2 = 0,9 Hz) ; 4,35-4,17 (m, 2H, H6a, H6b) ; 4,07 (t, 1H, H4b, JH3b-H4b = JH4b-H5b = 9,3 Hz) ; 3,94 (t, 1H, H3a, JH2a-H3a = JH3a- H4a = 9,0 Hz) ;3,90-3,68 (m, 5H, H2a, Hoa, H3b, H6'a, H6'b) ; 3,56-3,24 (m, 2H, H5a, H5b). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 166,3 (OCOPh) ; 137,2, 135,1, 133,2 (C quat. 15 arom.) ; 129,9, 129,8, 129,7, 129,0, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 127,5, 127,0, 126,3, 126,1, 126,0, 125,9, 125,8, 125,7 (C arom.) ; 101,2, 101,0 (C7) ; 100,4 (Clb) ; 98,3 (Cla) ; 81,8 (C3a) ; 80,9 (C4b) ; 78,4 (C4a) ; 77,7 (C3b) ; 74,0 (C2b) ; 73,7 (C8b) ; 70,5 (C8a) ; 69,4 (C2a) ; 68,6, 68,5 (C6a, C6b) ; 67,0 (C5a) ; 66,3 (C5b). 20 EXEMPLE 3: Préparation de (3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-fi-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-f -D-glucopyranosyl-(1ù*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-(3-D-glucopyranosyl(1-+3)-P-D-mannopyranose (Produit A2) 25 Le produit souhaité a été préparé selon un protocole comparable à celui décrit pour le produit Al en appliquant au produit 9 les étapes successives [d], [c], [d], [c], puis [e] à On a ainsi obtenu le produit A2 qui se présente sous la forme d'une mousse blanche ; Rf (AcOEt/iPrOH/H20, 3:2:2) 0,2. 30 RMN 'H (D20, 400 MHz) 8 (ppm) : 5,19 (d, 1H, Hlaa, JHIa-H2a = 2,2 Hz). Autres signaux : 2910322 32 RMN 'H (D20, 400 MHz) 8 (ppm) : 4,75 (d, 3H, 3 H1, JH1-H2 = 8,0 Hz) ; 4,71 (d, 2H, 2 H1, JHl_H2 = 7,8 Hz) ; 3,93-3,81 (m, 8H, H3a, H4a, H6a, H6b, H6c, H6d, H6e, H6t) ; 3,80-3,63 (m, 11H, H2a, H3b, H3c, H3d, H3e, H6'a, H6'b, H6'c, H6'd, H6'e, H6'f) ; 3,55-3,40 (m, 11H, H2b, H2c, H2d, H2e, H3f, H4b, H4c, H4d, H4e, H5a, H5b, H5c, 5 H5d, H5e, H5f) ; 3,36 (t, 1H, H4f, JH3f H4f = JH4f H5f = 9,3 Hz) ; 3,31 (dd, 1H, H2f, JHIf H2f = 8, 0 Hz, JH2f-H3f = 9,3 Hz). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C36H62NaO31 : m/z théorique : 1013,3173, m/z mesurée 1013,3172 ; [M+K]+ C36H62KO31 : m/z théorique : 1029,2912, m/z mesurée 1029,2920. 10 EXEMPLE 4 : Préparation du (i D-glucopyranosyl-(1-*3)-f -D-glucopyranosyl-(1-*3)-mannitol (produit Bi) selon le schéma réactionnel 1 Dans 10 mL d'un mélange méthanol/eau (4:1 ; v/v) est introduit le trisaccharide 1.5 déprotégé Al (25 mg, 0,049 mmol). Le borohydrure de sodium (19 mg, mmol) est ajouté à température ambiante et le milieu est laissé sous agitation pendant 10 jours. Le milieu est alors neutralisé par ajout de quelques gouttes d'acide acétique puis mis à sec par coévaporation avec un mélange méthanol/acide acétique (9:1, v/v), puis par coévaporation avec du méthanol. Après lyophilisation, le composé est purifié par 20 chromatographie de perméation de gel Sephadex G-10 (éluant : eau) et les fractions recueillies sont lyophilisées afin d'obtenir le produit recherché B1 qui se présente sous la forme d'une mousse blanche. RMN 1H (D2O, 400 MHz) 8 (ppm) : 4,82 (d, 1H, Hlc, JH1c_H2c =8,0 Hz) ; 4,65 (d, 1H, Hlb, JHlb-H2b= 8,1 Hz) ; 4,09-3,90 (m, 7H, Hl a, H2a, H3a, H5a, H6a, H6b, H6c) ; 3,86- 25 3,66 (m, 6H, H1'a, H4a, H6'a, H3b, H6'b, H6'c) ; 3,64-3,38 (m, 7H, H2b, H4b, H5b, H2c, H3c, H4c, H5c). RMN 13C (D2O, 100 MHz) 8 (ppm) : 103,1 (Cl c) ; 102,5 (Clb) ; 84,4 (C3b) ; 77,3 (C3a) ; 76,3 (C5c) ; 75,8 (C3c) ; 75,5 (C5b) ; 73,7 (C2c) ; 73,4 (C2b) ; 70,9, 70,8 (2C, C2a, C5a) ; 69,9 (C4c) ; 69,6 (C4a) ; 68,8 (C4b) ; 63,4 (C6a) ; 62,6 (Cl a) ; 61,2, 61,0 30 (2C, C6b, C6c). 2910322 33 Exemple 5: Préparation du produit Al selon le schéma réactionnel 2. OBn 20 OBz \ OLev ~a" ( I 4:n=0 NH 6: n=1 Ph OAc A OAc + 5.1/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-acétyl-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-2,4,6-tri-O-acétyl(3-D-glucopyranosyl-(1- *3)-4,6-0-benzylidène-2-O-levulinoyl-(3-D- 5 glucopyranoside de benzyle (Produit 21) Dans un ballon sont introduits le donneur 20 [Blattner, R.; Furneaux, R. H.; Pakulski, Z. Carbohydr. Res. 2006, 341, 2115-2125.] (50 mg, 0,064 mmol) et l'accepteur 4 (27 mg, 0,058 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à -50 C, en présence de tamis moléculaire 4À. Le triflate de triméthylsilyle (0,53 L, mmol) est 10 alors additionné et le mélange est agité vigoureusement pendant 2 heures. La réaction terminée, le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après 2910322 34 purification par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (2:1 ; v/v)], 22 mg du trisaccharide attendu 21 sont obtenus avec un rendement de 35%. Produit 21 : solide blanc amorphe ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,2. RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,46-7,43 (m, 2H, H arom.) ; 7,37-7,27 (m, 8H, 5 H arom.) ; 5,53 (s, 1H, H7a) ; 5,10 (t, 1H, H3c, JH2c-H3c = JH3c-H4c = 9,3 Hz) ; 5, 04 (t, 1H, H4c, JH4c4i5c = 9,3 Hz) ; 5,02 (t, 1H, H2a, JHIa-H2a = 7,7 Hz, JH2a-H3a = 9,5 Hz) ; 4,95 (dd, 1H, H2b, JHIb-H2b = 8,2 Hz, JH2b-H3b = 6,0 Hz) ; 4,93 (dd, 1H, H4b, JH3b-H4b = 7,3 Hz, JH4b-H5b = 9,7 Hz) ; 4,87 (dd, 1H, H2c, JHIc-H2c = 8,2 Hz) ; 4,86 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 12,2 Hz) ; 4,62 (d, 1H, Hlc) ; 4,57 (d, 1H, H8'a) ; 4,55 (d, 1H, Hlb) ; 4,50 (d, 1H, 10 Hl a) ; 4,34 (dd, 1H, H6c, JH5c-H6c = 2,0 Hz, JH6c-H6'c = 12,4 Hz) ; 4,33 (dd, 1H, H6a, JHSa-H6a = 4,6 Hz, JH6a-H6'a = 10,4 Hz) ; 4,15-4,01 (m, 3H, H6b, H6'b, H6'c) ; 3,93 (t, 1H, H3a, JH3a-H4a = 9,5 Hz) ; 3,91 (dd, 1H, H3b) ; 3,79 (t, 1H, H6'a, JH5a-H6'a = 10,4 Hz) ; 3,69 (t, 1H, H4a, JH4a-H5a = 9,5 Hz) ; 3,69 (ddd, 1H, H5c, JH5c-H6'c = 4,0 Hz) ; 3,54 (ddd, 1H, H5b, JH5b4i6b = 2,4 Hz, JH5b-H6'b = 4,0 Hz) ; 3,40 (ddd, 1H, H5a) ; 2,87-2,80 15 (m, 1H, H 10a) ; 2,70-2,62 (m, 2H, Hl 0'a, H u a ) ; 2,50-2,42 (m, 1H, Hl l'a) ; 2,20 (s, 3H, H13a) ; 2,04, 1,99, 1,97, 1,96, 1,94 (6 s, 21H, OCOCH3). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 206,1 (C12a) ; 171,0 (C9a) ; 170,8, 170,5, 170,4, 169,3, 169,2, 169,1 (7C, OCOCH3) ; 137,0, 136,8 (2C, C quat. arom.) ; 129,0, 128,5, 128,4, 128,3, 128,1, 128,0, 12 7,9, 127,8, 125,9 (C arom.) ; 100,9 (C7a) ; 100,7 20 (Clc) ; 100,1 (Clb) ; 99,8 (Cla) ; 78,7 (C3b) ; 78,6 (C4a) ; 77,7 (C3a) ; 73,8 (C2a) ; 73,0 (C3c) ; 72,6 (C2b) ; 71,5 (C5b) ; 71,4 (C5c) ; 70,9 (C2c) ; 70,7 (C8a) ; 68,5 (C6a) ; 68,1 (C4c) ; 68,0 (C4b) ; 66,5 (C5a) ; 62,2 (C6b) ; 61,6 (C6c) ; 37,6 (Cl la) ; 30,1 (C13a) ; 27,6 (Cl Oa) ; 21,0, 20,9, 20,7, 20,6, 20,5, 20,4 (7C, OCOCH3). 25 5.2/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-acétyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-tri-O-acétyl(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène(3-D-glucopyranosyl-(1--->3)-4,6-O-benzylidène-2-O-levulinoyl(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 22) Dans un ballon sont introduits le donneur disaccharidique 37 (106 mg, 0,136 30 mmol) et l'accepteur 71 (100 mg, 0,123 mmol) dans le dichlorométhane anhydre à -50 C, en présence de tamis moléculaire 4À. Le triflate de triméthylsilyle (1,1 L, 0,006 mmol) est additionné et la réaction est agitée pendant 60 minutes. Le milieu est neutralisé par de la triéthylamine, filtré puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1:1 ; v/v)], 146 mg 2910322 de l'orthoester tétrasaccharidique sont obtenus avec un rendement de 83%. Le composé ainsi obtenu est directement engagé dans une réaction de réarrangement intramoléculaire en présence de triflate de triméthylsilyle (2,5 L, 0, 014 mmol) dans le dichlorométhane à 0 C. Après 3 heures d'agitation, le milieu est neutralisé par de la 5 triéthylamine, puis concentré. Après purification par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1:1 ; v/v)], 101 mg du produit attendu 22 sont obtenus avec un rendement de 69%. Produit 22 : solide blanc ; Pf ( C) 119 ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,3. RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,02-7,99 (m, 2H, H arom.) ; 7,61-7,12 (m, 18H, 10 H arom.) ; 5,59 (s, 1H, H7b) ; 4,83 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 12,2 Hz) ; 4,57 (s, 1H, H7a) ; 4,56 (d, 1H, H8'a) ; 2,73-2,65 (m, 1H, H10a) ; 2,63-2,51 (m, 1H, H10'a) ; 2,48-2,40 (m, 1H, Hl la) ; 2,35-2,26 (m, 1H, Hl lb) ; 2,08 (s, 3H, H13a) ; 2,08, 2,04, 2,01, 2,00, 1,97, 1,94 (7s, 21H, OCOCH3) et tableau 4a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 206,0 (C12a) ; 171,2 (C9a) ; 170,8, 170,5, 15 170,3, 169,4, 169,3, 169,1, 168,7 (6C, OCOCH3) ; 165,0 (OCOPh) ; 137,3, 136,9, 136,7 (3C, C quat. arom.) ; 133,3, 129,8, 129,7 (C arom.) ; 129,6 (C quat. arom.) ; 129,5, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 127,9, 127,8, 126,5, 126,0, 125,8 (C arom.) ; 102,2 (C7b) ; 99,7 (C7a) ; 70,7 (C8a) ; 37,6 (Cl la) ; 29,4 (Cl3a) ; 27,7 (Cl 0a) ; 21,0, 20,9, 20,6, 20,5, 20,4, 20,3 (7C, OCOCH3) et tableau 4b. 20 HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C71H80NaO31 : m/z théorique : 1451,4581, m/z mesurée : 1451,4579 ; [M+K]+ C71H80KO31 : m/z théorique : 1467,4321, m/z mesurée : 1467,4346. 5.3/ 2,3,4,6-tétra-O-acétyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù+3)-2,4,6-tri-O-acétyl(3-D-25 glucopyranosyl-(1-*3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-fi-D-glucopyranosyl(1ù*3)-4, 6-O-benzylidène-(3-D-glucopyranoside de benzyle (Produit 23) Le tétrasaccharide 22 (430 mg, 0,301 mmol) est mis en solution dans 6 mL de pyridine puis est additionné goutte à goutte de 6 mL d'une solution 1M d'hydrazine dans un mélange pyridine/acide acétique (3:2, v/v). Après 3 heures d'agitation, la 30 réaction est stoppée par ajout de 1,7 mL de 2,4-pentane-dione et concentrée sous pression réduite. Le milieu est repris par 50 mL de dichlorométhane et lavé par une solution d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Après séchage (MgSO4) et concentration, le produit est purifié par 2910322 36 chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1:1 ; v/v)] pour conduire à 260 mg du composé déprotégé 23 avec un rendement de 65%. 20 Produit 23 : solide blanc ; Pf ( C) 136 ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,3 ; [ab -29,6 (c=1,0, CH2C12). 5 RMN I H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm): 8,11-8,09 (dd, 2H, H arom.) ; 7,67-7,17 (m, 18H, H arom.) ; 5,61 (s, 1H, H7) ; 5,08 (s, 1H, H7) ; 4,92 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 11,7 Hz) ; 4,61 (d, 1H, H8'a) ; 2,09, 2,03, 2,01, 2,00, 1,99 (7s, 21H, OCOCH3) et tableau 4a. RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 170,8, 170,5, 170,2, 169,3, 169,2, 169,0, 168,6 (7C, OCOCH3) ; 165,1 (OCOPh) ; 137,1, 137,0, 136,5 (3C, C quat. arom.) ; 133,3 (C 10 71,3 (C8a) ; 20,6, 20,5, 20,4, 20,3, 20,2 (7C, OCOCH3) et tableau 4b. 5.4/ Préparation de 2,3,4,6-tétra.-O-acétyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-triO-acétyl-fi-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-4,6-O-benzylidène-fi-D-glucopyranos-2-uloside de benzyle (Produit 24a) et de 2,3,4,6-tétra-O-acétyl-(i-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2,4,6-tri-O-acétyl(3-D-glucopyranosyl-(1 ù*3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène-ii-D-glucopyranosyl-(1-*3)-4, 6-O-benzylidène-2-C-hydroxyl-(3-D-glucopyranoside de 20 benzyle (Produit 24b) A une solution du produit 23 (260 mg, 0,195 mmol) dans 5 mL de dichlorométhane anhydre sont ajoutés la pyridine (0,5 mL) et le périodinane de Dess-Martin (2,6 mL d'une solution à 15%). Après 24 h à température ambiante, le milieu est additionné d'éther éthylique. Le précipité résultant est filtré sur célite et le filtrat 25 concentré sous pression réduite. Le résidu est enfin purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1:1 ; v/v)], pour conduire à 208 mg du produit oxydé 24a (Rdt=80%) en mélange (1:1) avec sa forme hydratée 24b. 24a/24b : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,2. Produit 24a : RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 5,25 (s, 30 1H, Hl a). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 196,6 (C2a) ; 96,8 (Cla) ; 70,6 (C8a). Produit 24b : RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 4,87 (s, 1H, Hia). arom.) ; 129,5 (C quat. arom.) ; 129,7, 129,1, 128,9, 128,8, 128,7, 128,5, 128,4, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 126,0, 125,8, 125,2 (C arom.) ; 101,4 (C7) ; 100,4 (C7) ; 2910322 37 RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 98,8 (Cla) ; 93,7 (C2a) ; 71,4 (C8a). Autres signaux (24a/24b) : RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,08-8,03 (m, 2H, H arom.) ; 7,67-7,45 (m, 8H, 5 H arom.) ; 7,40-7,10 (m, 30H, H arom) ; 5,65 (s, 1H, H7) ; 5,59 (s, 1H, H7) ; 5,26-5,18 (m, 2H, 2 H2b) ; 5,14-4,80 (m, 14H, H2c, 2 H2d, 2 H3d, 2 H4a, 2 H4b, 2 H8a, 2 H1) ; 4,73 (d, 1H, H8a, .JH8a-H8'a = 11,9 Hz) ; 4,66-4,48 (m, 6H, H3a, H8'a, 2 H1, H6, H7) ; 4,42-4,26 (m, 6H, H3a, Hl, H7, 3 H6) ; 4,20-3,40 (m, 28H, 2 H3b, 2 H3c, 2 H4c, 2 H4d, 2 H5a, 2 H5b, 2 H5c, 2 H5d, 2 H6'a, 2 H6'b, 2 H6'c, 2 H6'd, 4 H6) ; 2,08, 2,06, 10 2,04, 2,01, 2,00, 1,99, 1,98, 1,97, 1,96, 1,95(14 s, 42H, OCOCH3). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 170,8, 170,5, 170,3, 169,4, 169,3, 169,2, 169,1, 168,8 (laC, OCOCH3) ; 165,3 (2C, OCOPh) ; 137,1, 137,0, 136,6, 136,0, 135,6 (6C, C quat. arom.) ; 133,7, 133,6, 129,9, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 128,8, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 127,9, 127,7, 126,4, 126,2, 125,9, 125,8 (C arom., 2 C quat. 15 arom.) ; 101,8, 101,6, 100,4, 100,2 (4C, C7) ; 100,9, 100,8, 100,6, 99,2, 98,8, 96,8 (8C, Cl) ; 80,6, 79,8, 79,3, 79,0, 78,7, 78,1, 77,8, 77,4, 77,2, 77,1 (10C, C3a, C3b, C3c, C4a, C4b) ; 74,8 (2C, C2b) ; 73,3, 73,0, 72,8, 72,3 (4C, C2c, C3d) ; 71,6, 71,5 (4C, C5c, C5d) ; 71,0, 70,8 (2C, C2d) ; 68,7, 68,6, 68,4 (4C, C6a, C6b) ; 68,0, 67,9 (4C, C4c, C4d) ; 67,0, 66,8 (2C, C5a) ; 65,6, 65,1 (2C, C5b) ; 62,0 (2C, C6d) ; 61,6 (2C, C6c); 20 21,1, 20,7, 20,6, 20,5, 20,4, 20,3 (14C, OCOCH3). 5.5/ 2,3,4,6-tétra-O-acétyl-(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-2,4,6-tri-O-acétyl(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidène(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-4,6-O-benzylidène-(3-D-mannopyranoside de benzyle (Produit 25) 25 Le produit 24a/24b (66 mg, 0,050 mmol) en solution dans un mélange dichlorométhane/THF est additionné à -90 C de L-Sélectride (solution 1 M dans THF ; 150 L, 0,150 mmol). Après 2 heures d'agitation à basse température, le milieu est neutralisé par ajout d'acide acétique, dilué par 20 mL de dichlorométhane et lavé par une solution aqueuse saturée d'acide chlorhydrique, une solution aqueuse saturée 30 d'hydrogénocarbonate de sodium et par de l'eau. Après séchage sur MgSO4 et concentration, le milieu est purifié par chromatographie sur gel de silice [dichlorométhane/méthanol (98:2 ; v/v)], pour conduire au produit réduit souhaité 25 (66 mg, 0,050 mmol) avec un rendement quantitatif. Produit 25 : solide blanc ; Rf (CH2C12/MeOH, 98:2) 0,2. 2910322 38 RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,08-8,03 (m, 2H, H arom.) ; 7,67-7,10 (m, 18H, H arom.) ; 5,62 (s, 1H, H7) ; 5,22 (m, 1H, H2b, JHIb-H2b = JH2b-H3b = 5,1 Hz) ; 5,04 (t, 1H, H3d, JH2d-H3d = JH3d-H4d = 8,0 Hz) ; 5,03-4,91 (m, 5H, Hlb, H2c, H4c, H4d, H7) ;4,90 (d, 1H, H8a, JH8a-H8'a = 11,9 Hz) ; 4,84 (dd, 1H, H2d, JH1d-H2d = 8,2 Hz) ; 4,67 5 (d, 1H, Hl c, JHtc-H2c = 8,0 Hz) ; 4,63 (d, 1H, H8'a) ; 4,47 (d, 1H, Hl a, JHIa-H2a 3)-1,2,4, 6-tétra-O-benzoyl-(a,(3)-D-glucopyranose (Produit 2a) L'oligosaccharide la (150 mg, 0,181 mmol) est dissous dans la pyridine (15 mL). Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 C puis additionné de chlorure de benzoyle (4,2 mL, 36 mmol). Après 2 jours d'agitation à température ambiante, le milieu est évaporé, 10 dissous dans du dichlorométhane puis lavé avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution saturée de chlorure de sodium jusqu'à neutralité. La phase organique est alors séchée sur MgSO4 et évaporée. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)] pour donner le dérivé perbenzoylé 15 2a sous la forme d'un mélange d'anomères a/13 :1/1 avec un rendement de 94% (444 mg, 0,170 mmol). Produit 2a : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,4. 2910322 RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques pour 2a^ 6,65 (d, 1H, Hia, JHIa_H2a = 3,6 Hz) ; 5,47 (t, 1H, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 9,4 Hz) ; 4,64 (t, 1H, H3 a, JH2a-H3a = 9,4 Hz). Signaux caractéristiques pour 2a06,07 (d, 1H, Hl a, JHIa-H2a = 7,1 Hz) ; 5,57 (t, 1H, H4a, JH3a-114a = JH4a-H5a = 8,9 Hz) ; 4,25 (dt, 1H, H5a, JH5a-H6a = 4,3 Hz, 5 JH5a-H6'a = 8,9 Hz). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques pour 2a^ 87,7 (C1a) ; 76,3 (C3a) ; 72,4 (C2a) ; 70,3 (C5a) ; 67,6 (C4a). Signaux caractéristiques pour 2a^ 89,7 (Cl a) ; 78,4 (C3a) ; 72,4 (2C, C2a, C5a) ; 67,6 (C4a) ; 62,0 (C6a). Autres signaux : 10 RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,08-7,92 (m, 68H, H arom.) ; 7,61-7,09 (m, 102H, H arom.) ; 5,45-5,37 (m, 3H, H2a(3, H3e) ; 5,26-5,18 (m, 5H, H2aa, H2e, H4e) ; 5,11-4,83 (m, 14H, Hlb, H2b, H4b, H2c, H4c, H2d, H4d) ; 4,61-4,35 (m, 10H, H343, H5aa, H6aP, H6'a[3, Hl c, Hld, Hl e) ; 4,20-3,86 (m, 26H, H6aa, H6'aa, H3b, H6b, H6'b, H3c, H6c, H6'c, H3d, H6d, H6'd, H5e, H6e, H6'e) ; 3,80-3,65 (m, 6H, H5b, H5c, 15 H5d). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 166,0, 165,9, 165,8, 165,7, 165,6, 165,4, 164,9, 20 100,7 (8C, Clb, Clc, Cld, Cl e) ; 78,1, 77,5, 77,4, 77,2 (6C, C3b, C3c, C3d) ; 73,4, 73,3, 73, 2 (4C, 2 C2) ; 72,7, 72,6, 72, 5, 72,4 (4C, C3e, C2) ; 71,8, 71,7, 71,6, 71,5 (8C, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 71,3 (2C, C2e) ; 70,3, 70,2 (6C, C4b, C4c, C4d) ; 69,8 (2C, C4e) ; 63,5, 63,4, 63,1, 62,7 (9C, C6aa, C6b, C6c). 25 6.2/ Préparation du bromure de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-gluco pyranosyl-(1ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4, 6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-2,4, 6-tri-O-benzoyl-u-D-glucopyranosyle (Produit 3a) 30 L'oligosaccharide perbenzoylé 2a (444 mg, 0,170 mmol) est mis en solution dans le dichlorométhane (10 mL), puis additionné, à 0 C, d'acide bromhydrique à 33% wt dans l'acide acétique (0,6 mL, 3,417 mmol). Après 3,5 heures d'agitation, le milieu est dilué avec du dichlorométhane puis lavé avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4 et 164,8, 164,7, 164,6, 164,5, 164,3, 164,1, 163,8, 163,6, 163,5 (OCOPh) ; 133,3, 132,7, 130,0, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,9, 128,7 (C quat. arom.) ; 133,8, 133,6, 133,4, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,8, 132,6, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,4, 101,3, 101,0, 100,8, 2910322 41 concentrée sous pression réduite pour conduire de manière quantitative à 435 mg de composé bromé 3a. Produit 3a : huile incolore. RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 6,55 (d, 1H, Hl a, JHIa_ 5 H2a = 4,1 Hz) ; 5,35 (t, 1H, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 9,9 Hz) ; 4,24 (dd, 1H, H6'a, JHSa-H6'a = 4,6 Hz, JH6a-H6'a = 12,4 Hz). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 87,7 (Cl a) ; 76,3 (C3a) ; 73,4 (C2a) ; 72,6 (C5a) ; 67, 6 (C4a) ; 62,0 (C6a). Autres signaux : 10 RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,92-7,61 (m, 22H, H arom.) ; 7,48-6,93 (m, 58H, H arom.) ; 5,27 (t, 1H, H3e, JH2e-H3e = JH3e-H4e = 9,7 Hz) ; 5,09 (dd, 1H, H2e, JHIe-H2e = 7,9 Hz) ; 5,08 (t, 1H, H4e, JH4e-H5e = 9,7 Hz) ; 4,93-4,86 (m, 3H, 2 H2, H4) ; 4,80-4,70 (m, 4H, H2a, Hl, 2 H4) ; 4,50-4,33 (m, 6H, H3a, H5a, H6a, Hle, 2 Hl) ; 4,08-3,94 (m, 3H, H5e, H3, H6) ; 3,87-3,70 (m, 9H, 2 H3, 7 H6) ; 3,65-3,53 (m, 3H, H5b, H5c, 15 H5d). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,8, 164,7, 164,6, 164,5, 164,3, 163,8, 163,5 (16C, OCOPh) ; 133,8, 133,4, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,8, 132,6, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,0, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,3, 101,0, 100,8, 20 100,7 (4C, Clb, Clc, Cld, Cle) ; 78.4, 78,1, 77,4 (3C, C3b, C3c, C3d) ; 73,3, 73,2, 72,7 (3C, C2b, C2c, C2d) ; 72,5 (C3,e) ; 71,8, 71,7, 71,6, 71,5 (4C, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 71,3 (C2e) ; 70,2 (3C, C4b, C4c, C4d) ; 69,8 (C4e) ; 63,4, 63,1 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e). 25 6. 3/ Préparation du 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù+3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1 ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-P-D-glucopyranosyl-(1-*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1 ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-2-D-gluhex-1-enopyranose (Produit 4a) Le brut précédemment obtenu (3a : 435 mg, 0,170 mmol) est dissous dans le 30 dichlorométhane (10 mL) puis additionné de 1,8-diazabicyclo[5,4,0]undec-7-ène (40 L, 0,270 mmol). Après 5,5 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué avec du dichlorométhane, lavé avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, puis avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. La phase organique est séchée 2910322 42 (MgSO4), évaporée et le produit recherché est obtenu après purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)]. Le composé cible 4a (343 mg) est alors isolé avec un rendement de 81%. Produit 4a : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 3:2) 0,4. 5 RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 6,63 (s, 1H, Hl a) ; 5,77 (d, 1H, H3 a, JH3a-H4a = 3,3 Hz) ; 4,73 (dd, 1H, H6a, JH5a-H6a = 9,0 Hz, JH6a-H6'a = 12,6 Hz) ; 4,40 (dd, 1H, H6'a, JH5a_H6'a = 3,1 Hz). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 138,2 (Cl a) ; 74,1 (C5a) ; 72,3 (C4a) ; 68,7 (C3a) ; 61,6 (C6a). 10 Autres signaux : RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,14-7,70 (m, 26H, H arom.) ; 7,63-7,03 (m, 54H, H arom.) ; 5,38 (t, 1H, H3e, JH2e.H3e = JH3e-H4e = 9,5 Hz) ; 5,21 (dd, 1H, H2e, JHte_ H2e = 8,0 Hz) ; 5,20 (t, 1H, H4e, JH4e-H5e = 9,5 Hz) ; 5,17 (t, 1H, H2b, JHIb-H2b = JH2b-H3b = 8,8 Hz) ; 5,12 (t, 1H, H4b, JH3b-H4b = JH4b-H5b = 10,5 Hz) ; 5,05-4,97 (m, 2H, H4c, 15 H2d) ; 4,94 (d, 1H, Hlb) ; 4,94-4,88 (m, 2H, H2c, H4d) ; 4,71 (d, 1H, Hl c, JHIc_H2c _ 6, 7 Hz) ; 4,59 (d, 1H, Hl e, JHIe_H2e = 8,0 Hz) ; 4,58-4,53 (m, 3H, H4a, H5a, Hld) ; 4,46 (dd, 1H, H6b, JH5b-H6b = 3,1 Hz, JH6b-H6'b = 12,2 Hz) ; 4,31 (dd, 1H, H3b) ; 4,25 (dd, 1H, H6'b, JH5b-H6'b = 6,6 Hz) ; 4,15-3,87 (m, 9H, H5b, H3c, H6c, H6'c, H3d, H6d, H6'd, H6e, H6'e) ; 3,80 (dt, 1H, H5d, JH5d-H6a = 4,9 Hz, JH5a-H6'd = 9,3 Hz) ; 3,76-3,68 (m, 2H, 20 H5c, H5e). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 165,3, 165,1, 165,0, 164,8, 164,7, 164,6, 163,9, 163,7 (16C, OCOPh) ; 133,3, 133,2, 133,0, 132,9, 132,7, 130,1, 130,0, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,3, 129,2, 129,1, 128,9, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8 (C2a, C arom.) ; 101,2 (Clb) ; 100,9 25 (Clc) ; 100,8 (Cl e) ; 100,7 (Cld) ; 78,2, 78,0, 77,7 (3C, C3b, C3c, C3d) ; 73,5 (C2c) ; 73,2 (C2b) ; 72,8 (C2d) ; 72,7 (C5b) ; 72,6 (C3e) ; 72,1 (C5d) ; 71,6 (2C, C5c, C5e) ; 71,3 (C2e) ; 70,3 (C4c) ; 70,0 (C4d) ; 69,9, 69,8 (2C, C4b, C4e) ; 63,5, 63,4, 63,2 (3C, C6c, C6d, C6e) ; 63,1 (C6b). 30 6.5/ Préparation du bromure de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1 ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4, 6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-4,6-di-O-benzoyl-a-D-glucopyranos-2-ulosyle (Produit 5a) 2910322 43 Le composé 5a précédemment décrit (48 mg, 0,019 mmol) en solution dans le dichlorométhane (0,5 mL) est additionné de méthanol (1,6 L, 0,040 mmol). Après 10 minutes d'agitation à température ambiante, le N-bromosuccinimide (10,8 mg, 0,060 mmol) est ajouté à 0 C. Une fois la réaction terminée, le milieu est dilué avec du 5 dichlorométhane puis lavé avec une solution aqueuse saturée glacée de thiosulfate de sodium et avec de l'eau glacée. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4 et concentrée sous pression réduite pour conduire à 5a avec un rendement quantitatif (47 mg, 0,019 mmol).. Produit 5a : huile incolore. 10 RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm.) : Signaux caractéristiques 6,25 (s, 1H, Hl a) ; 5,44 (t, 1H, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 10,1 Hz) ; 5,17 (d, 1H, H3 a). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 191,5 (C2a) ; 83,8 (Cl a) ; 76,3 (C3a) ; 72,6 (C5a) ; 69,0 (C4a) ; 61,7 (C6a). Autres signaux : 15 RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,06-7,71 (m, 20H, H arom.) ; 7,61-7,12 (m, 55H, H arom.) ; 5,39 (t, 1H, H3e, JH2e_H3e = JH3e_H4e = 9,5 Hz) ; 5,22 (dd, 1H, H2e, JHIe_ H2e = 8,0 Hz) ; 5,21 (t, 1H, H4e, JH4e-H5 = 9,5 Hz) ; 5,10 (dd, 1H, H2b, JHIb-H2b = 8,2 Hz, JH2b_H3b = 9,3 Hz) ; 5,06-4,98 (m, 4H, H1b, H4b, H4c, H2d) ; 4,89 (t, 1H, H4d, JH3d-H4d = JH4d-H5d = 9,5 Hz) ; 4,88 (dd, 1H, H2c, JHIc-H2c = 7,7 Hz, JH2c-H3c = 8,6 Hz) ; 4,74 (d, 20 1H, Hl c, JHIc_H2c = 8,2 Hz) ; 4,69 (d, 1H, Hl e) ; 4,66-4,55 (m, 3H, H5a, H6a, Hl d) ; 4,39-4,26 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,24-4,10 (m, 3H, 3 H6) ; 4,05-3,86 (m, 8H, H5b, H3c, H3d, 5 H6) ; 3,82-3,70 (m, 3H, H5c, H5d, H5e). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 167,1, 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6, 164,3, 164,1, 163,9, 163,6 (15C, OCOPh) ; 133,6, 133,3, 133,2, 133,1, 133,0, 25 132,9, 132,8, 132,7, 130,3, 130,0, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,8, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8, 127,6 (C arom.) ; 101,0, 100,9, 100,7, 100,6 (4C, Clb, Cl c, Cl d, Cle) ; 78,2, 78,0, 77,7 (3C, C3b, C3c, C3d) ; 73,6, 73,1, 72,8 (3C, C2b, C2c, C2d) ; 72,6 (C3e) ; 71,9, 71,6 (4C, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 71,3 (C2e) ; 70,1, 69,9, 69,8 (4C, C4b, C4c, C4d, C4e) ; 63,5, 30 63,4, 63,1 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e). 6.6/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-2910322 44 (1--*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl- Ji-D-gluco pyranosyl-(1-33)-6-O-benzoyl-4-désoxy(3-D-gluco-hex-3-enopyranos-2-uloside de benzyle (Produit 6a) Mode opératoire 1 : L'alcool benzylique (7 L, 0,068 mmol) et le bromure d'ulosyle 5a (82 mg, 5 0,034 mmol) sont mis en solution dans le dichlorométhane (1,5 mL) en présence de tamis moléculaire. Après 5 minutes d'agitation vigoureuse, l'oxyde de triphénylphosphine (19 mg, 0,068 mmol) est additionné rapidement au mélange. Après 4 jours d'agitation à température ambiante, le milieu est filtré sur célite et concentré sous pression réduite. Le produit recherché 6a (69 mg ; 0,029 mmol) est obtenu après 10 purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)] avec un rendement de 85% en mélange avec sa forme hydratée. Produit 6a : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,5. RMN 1H (CDCl3, 400MHz) S (ppm) : Signaux caractéristiques 6,26 (d, 1H, H4a, JH4a-H5a = 3,6 Hz) ; 4,87 (s, 1H, Hl a) ; 4,83 (d, 1H, H7a, JH7a-HTa = 11,7 Hz) ; 4,68-4,61 (m, 15 1H, H5a) ; 4,60 (d, 1H, H7'a). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 183,5 (C2a) ; 144,9 (C3a) ; 126,2 (C4a) ; 97,7 (Cl a) ; 71,0 (C5a) ; 70,6 (C7a) ; 66,1 (C6a). Mode opératoire 2 : A une solution du donneur 5a (50 mg, 0,020 mmol) et d'alcool benzylique (4, 4 20 L, 0,040 mmol) dans le dichlorométhane (0,75 mL) est ajouté à 0 C le triflate d'argent (5,2 mg, 0,020 mmol). Après 3 heures d'agitation, le milieu réactionnel est neutralisé par ajout de triéthylamine, les sels d'argent sont filtrés sur célite et le filtrat est concentré sous vide. La purification sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)] permet d'obtenir 38 mg (0,016 mmol) du composé désoxy 6a avec 25 un rendement de 75%. Autres signaux : RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,10-7,70 (m, 20H, H arom.) ; 7,60-7,12 (m, 55H, H arom.) ; 5,39 (t, 1H, H3e, JH2e-H3e = JH3e-H4e = 9,7 Hz) ; 5,28-5,17 (m, 5H, Hlb, H2b, H4b, H2e, H4e) ; 5,09-5,02 (m, 4H, H2c, H4c, H2d, H4d) ; 4,95 (d, 1H, Hlc, JHIC_ 30 H2c = 8,0 Hz) ; 4,63 (d, 1H, Hld, JHId-H2d = 7,9 Hz) ; 4,61 (d, 1H, Hl e, JHie H2e = 8,0 Hz) ; 4,53-4,40 (m, 3H, H6a, 2 H6) ; 4,38-4,32 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,25-4,18 (m, 2H, H6'a, H3) ; 4,15-3,90 (m, 8H, H5b, H3, H5, 5 H6) ; 3,80-3,70 (m, 2H, H5e, H5). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) (ppm) : 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,6, 164,5, 163,9, 163,8 (14C, OCOPh) ; 136,1 (C quat. arom. OCH2Ph) ; 133,3, 133,2, 133,1, 133,0, 2910322 132,9, 132,7, 129,9, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,0, 128,8, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8 (C arom.) ; 100,9 (2C, Cld, Cl e) ; 100,1 (Cl c) ; 98,3 (Clb) ; 78,3, 78,0 (2C, C3c, C3d) ; 76,8 (C3b) ; 73,7 (2C, C2c, C2d) ; 73,0 (C2b) ; 72,8 (C5b) ; 72,6 (C3e) ; 72,1 (1C, C5) ; 71,6 (C2e) ; 71,3 (2C, 5 C5e, C5) ; 69,9, 69,8 (3C, C4c, C4d, C4e) ; 69,3 (C4b) ; 63,4 (2C, C6e, C6) ; 63,1 (2C, C6b, C6). HRMS (ESI) : [M+Na]+ C135H11NaO39 m/z théorique: 2377,6522 m/z mesurée: 23 77,6516 6. 7/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-R-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-triO-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl(1ù+3)-6-O-benzoyl-4-désoxy-(3-D-manno-hex-3-enopyranosyle de benzyle (Produit 7a) Le composé 6a (69 mg, 0,029 mmol) est solubilisé dans le THF (0,7 mL) puis additionné à -78 C de L-Sélectride (solution à 1M dans THF ; 28 L, 0,028 mmol). 15 Après 90 minutes à -78 C, la réaction est supposée terminée et neutralisée par ajout de quelques gouttes d'acide acétique. Une fois le milieu revenu à température ambiante, du dichlorométhane est ajouté et la phase organique est lavée par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, par une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. Le composé 7a 20 souhaité est ainsi obtenu après séchage (MgSO4) et concentration de la phase organique (68 mg ; 0,029 mmol ; 100%). Produit 7a : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,5. RMN 'H (CDC13, 500 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 4,94 (d, 1H, H4a, JH4a-H5a = 1,1 Hz) ; 4,86 (d, 1H, H7a, JH7a-H7,a = 12,0 Hz) ; 4,59 (d, 1H, H7'a) ; 4,44 (d, 1H, 25 Hla, JHIa-12a = 2,2 Hz) ; 4,25-4,20 (m, 2H, H5a, H6a). RMN '3C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 151,4 (C3a) ; 104,1 (C4a) ; 97,1 (Cl a) ; 70,4 (C5a) ; 70,1 (C7a) ; 66,2 (C6a) ; 65,1 (C2a). Autres signaux : RMN 'H (CDC13, 500 MHz) 8 (ppm) : 8,03-7,70 (m, 20H, H arom.) ; 7,61-7,13 (m, 30 55H, H arom.) ; 5,39 (t, 1H, H3e, JH2e-H3e = JH3e-H4e = 9,6 Hz) ; 5,30 (t, 1H, H4b, JH3b-H4b = JH4b-H5b = 8,3 Hz) ; 5,22 (dd, 1H, H2e, JHIe4H2e = 7,9 Hz) ; 5,20 (t, 1H, H4e, JH4e-H5e = 9,6 Hz) ; 5,18-5,16 (m, 2H, Hlb, H2b) ; 5,07-4,98 (m, 4H, H2c, H4c, H2d, H4d) ; 4,85 (d, 1H, Hlc, JHlc-H2c = 7,9 Hz) ; 4,62 (d, 2H, Hld, Hle, JH1d_H2d = 7,9 Hz) ; 4,51 (dd, 1H, H6, JH54H6 = 3,8 Hz, JH6-1-6' = 12,3 Hz) ; 4,36-4,30 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,20-4,14 (m, 2910322 46 2H, H6'a, H3) ; 4,12-3,90 (m, 10H, H2a, H5b, H3, H5, 6 H6) ; 3,77-3,70 (m, 2H, H5e, H5). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 166,1, 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,3, 163,9, 163,8 (14C, OCOPh) ; 136,6 (C quat. arom. OCH2Ph) ; 133,4, 133,2, 5 133,1, 133,0, 132,9, 132,7, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,0, 128,8, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8 (C arom.) ; 100,9 (2C, Cld, Cl e) ; 100,6 (Cl c) ; 97,3 (Clb) ; 78,3, 77,9 (2C, C3c, C3d) ; 77,4 (C3b) ; 73,5 (1C, C2) ; 72,9 (2C, C2b, C2) ; 72,6 (C3e) ; 72,0 (C5b) ; 71,6 (3C, C5e, 2 C5) ; 71, 3 (C2e) ; 70,4 (2C, C4c, C4d) ; 69,8 (C4e) ; 69,3 (C4b) ; 63,5, 63,3, 63,1 (4C, C6b, C6c, 10 C6d, C6e). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C135H112NaO39 m/z théorique: 2379,6678 m/z mesurée: 23 79, 6667 [M+K]+ C135H112KO39 m/z théorique: 2395,6418 m/z mesurée: 2395,6542 15 6.8/ Préparation de (3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-D-D-glucopyranosyl(1-*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-4-désoxy(3-D-manno-hex-3-enopyranosyle de benzyle (Produit 8a) Dans un ballon sont introduits successivement le composé 7a (65 mg, 0,028 mmol) dans un mélange méthanol/dichlorométhane (2:1, v/v) puis le méthylate de 20 sodium (solution à 1M dans THF ; 0,56 mL, 0,056 mmol). Après 6 heures d'agitation à température ambiante, le milieu est neutralisé par ajout de résine Amberlite IR120-H+, filtré puis concentré sous pression réduite. Le composé débenzoylé 8a est obtenu après chromatographie [dichlorométhane/méthanol (99:1 ; v/v)] avec un rendement quantitatif (25 mg ; 0,028 mmol). 25 Produit 8a : huile incolore. RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) (ppm) : Signaux caractéristiques 5,06 (d, 1H, H4a, JH4a-H5a = 1,5 Hz) ; 4,82 (d, 1H, H7a, JH7a-H7'a = 12,2 Hz) ; 4,60 (d, 1H, H7'a) ; 4,49 (d, 1H, Hl a, JHIa-H2a = 1,8 Hz) ; 4,12-4,08 (m, 1H, H5a) ; 3,87 (d, 1H, H2a). RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 153,5 (C3a) ; 103,8 30 (C4a) ; 99,8 (Cl a) ; 71,2 (C7a) ; 67,2 (C2a) ; 65,6 (C6a). Autres signaux : RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,35-7,16 (m, 5H, H arom.) ; 4,71 (d, 1H, Hlb, JHIb-H2b = 7,5 Hz) ; 4,54 (d 1H, Hl, JHI-H2 = 8,0 Hz) ; 4,53 (d, 1H, Hl, JHI-H2 = 7,8 Hz) ; 4,46 (d, 1H, Hl e, JH1e4i2e = 7,8 Hz) ; 3,80-3,73 (m, 4H, 4 H6) ; 3,60-3,43 (m, 10H, H6a, 2910322 47 H6'a, H2b, 3 H3, 4 H6) ; 3,40-3,32 (m, 2H, H2c, H2d) ; 3,30-3,17 (m, 8H, H3e, 3 H4, 4 H5) ; 3,16 (dd, 1H, H2e, JH2e-H3e = 9,3 Hz) ; 3,15 (t, 1H, H4e, JH3e.414e = JH4e-H5e = 9,8 Hz). RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) 8 (ppm) : 138,9 (C quat. arom. OCH2Ph) ; 129,6, 129,4, 5 128,9 (C arom.) ; 105,1, 104,6 (3C, Clc, Cld, Cle) ; 100,5 (Clb) ; 87,4, 87,2, 87,1 (3C, C3b, C3c, C3d) ; 78,1, 77,8, 77,7 (5C, C3e, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 75,5 (C2e) ; 75,0, 74,9 (3C, C5a, C2c, C2d) ; 74,0 (C2b) ; 71,5 (C4e) ; 70,0, 69,9 (3C, C4b, C4c, C4d) ; 62,6, 62,5 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e). 10 6.9/ Préparation de (3-D-glucopyranosyl-(1->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1--*3)(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1->3)-4-désoxy-(a, (3)-D- mannopyranose (Produit Ca) Après dissolution du composé 8a (24 mg, 0,027 mmol) dans le méthanol, de l'acétate de palladium (25 mg, 0,111 mmol) est additionné au milieu. Après 7 jours 15 d'agitation sous atmosphère d'hydrogène à température ambiante, le milieu est filtré puis concentré sous pression réduite. Le composé Ca est obtenu après purification par exclusion stérique Sephadex G-10 (éluant : eau) et lyophilisation des fractions récoltées (21 mg ; 0,027 mmol ; 100%). Ca : mousse blanche ; Rf (AcOEt/iPrOH/H20, 3:2:2) 0,2. 20 RMN 'H (D20, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 5,12 (m, 1H, Hlaa) ; 1,72-1,60 (m, 2H, H4a, H4'a). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 96, 0 (Cl a) ; 67,2 (C2a) ; 61,0 (C6a) ; 28,8 (C4a). Autres signaux : 25 RMN 'H (D20, 400 MHz) 6 (ppm) : 4,68 (d, 2H, 2 H1, JHI_H2 = 8,2 Hz) ; 4,64 (d, 2H, 2 Hl, JHl-H2 = 8,0 Hz) ; 3,86-3,73 (m, 5H, H6a, H6b, H6c, H6d, H6e) ; 3,71-3,56 (m, 10H, H2a, H5a, H6'a, H3b, H6'b, H3c, H6'c, H3d, H6'd, H6'e) ; 3,55-3,33 (m, 13H, H3a, H5a, H2b, H4b, H5b, H2c, H4c, H5c, H2d, H4d, H5d, H3e, H5e) ; 3,31 (t, 1H, H4e, JH3e_114e = JH4e_H5e = 9,3 Hz) ; 3,24 (dd, 1H, H2e, JHIe4H2e = 8,0 Hz, JH2e_H3e = 9,3 30 Hz). 2910322 48 RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 (ppm) : 103,1, 102,8 (4C, Clb, C1c, Cld, Cl e) ; 84,5, 84,4 (4C, C3a, C3b, C3c, C3d) ; 76,3, 75,9, 75,8 (6C, C5a,C5b, C5c, C5d, C3e, C5e) ; 73,8, 73,6 (5C, C2a, C2b, C2c, C2d, C2e) ; 69,9 (C4e) ; 64,4 (3C, C4b, C4c, C4d) ; 61,0 (4C, C6b, C6c, C6d, C6e). 5 HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C30H52NaO25 m/z théorique: 835,2695 m/z mesurée: 835,2694 EXEMPLE 7: Le produit lb est préparé selon le mode opératoire décrit dans la demande de brevet 10 FR2804684, selon le mode opératoire de l'exemple 6. 7.1/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-2,4, 6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1 ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1--3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl(1ù>3)-1,2,4,6-tétra-O-benzoyl-(a,(3)-D-glucopyranose (Produit 2b) 15 L'oligosaccharide 2a (200 mg, 0,202 mmol) est dissous dans la pyridine (20 mL). Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 C puis additionné de chlorure de benzoyle (5,2 mL, 44,4 mmol). Après 2 jours d'agitation à température ambiante, le milieu est évaporé, dissous dans du dichlorométhane puis lavé avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 10%, avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate 20 de sodium et par une solution saturée de chlorure de sodium jusqu'à neutralité. La phase organique est alors séchée sur MgSO4 et évaporée. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (1:1 ; v/v)] pour donner le dérivé perbenzoylé 2a sous la forme d'un mélange d'anomères a/13 :1/1 avec un rendement de 85% (545 mg, 0,178 mmol). 25 Produit 2b : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,4. RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques pour 2ba 6,60 (d, 1H, Hl a, JHIa-H2a = 3,8 Hz) ; 5,42 (t, 1H, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 9,8 Hz) ; Signaux caractéristiques pour 24 6,02 (d, 1H, Hla, JHia_H2a = 7,1 Hz) ; 5,52 (t, 1H, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 9,0 Hz) ; 4,23-4,18 (m, 1H, H5a). 30 RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques pour 2ba 89,7 (Cla) ; 76,3 (C3a) ; 72,7 (C2a) ; 70,2 (C5a) ; 68,8 (C4a) ; Signaux caractéristiques pour 2113 92,0 (Cl a) ; 78,3 (C3a) ; 72,9 (C5a) ; 72,5 (C2a) ; 68,8 (C4a) ; 62,7 (C6a). Autres signaux : 2910322 49 RMN 'H (CDCI3, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,01-7,65 (m, 60H, H arom.) ; 7,55-7,01 (m, 140H, H arom.) ; 5,36-5,30 (m, 3H, H2a[3, H3f) ; 5,20-5,12 (m, 5H, H2aa, H2f, H4f) ; 5,07-4,89 (m, 8H, 2 H2, 2 H4) ; 4,88-4,72 (m, 10H, Hlb, 2 H2, 2 H4) ; 4,61-4,30 (m, 13H, H3aa, H3a[3, H5aa, H6a[3, H6'a(3, Hlc, Hld, Hle, Hlf) ; 4,12-3,78 (m, 32H, 5 H6aa, H6'aa, H3b, H6b, H6'b, H3c, H:6c, H6'c, H3d, H6d, H6'd, H3e, H6e, H6'e, H5f, H6f, H6'f) ; 3,73-3,56 (m, 8H, H5b, H5c, H5d, H5e). RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) 8 (ppm) : 166,0, 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6, 164,4, 164,3, 164,1, 163,8, 163,6, 163,5 (OCOPh) ; 133,5, 133,2, 133,1, 133,0, 132,8, 132,6, 130,0, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 10 128,9, 128,7; 128,6, 128,5, 128,4, 128,2, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,4, 101,0, 100,9, 100,8, 100,7 (10C, Clb, Clc, Cld, Cle, Clf) ; 78,3, 78,2, 78,1, 77,9 (8C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 73,3, 73,2, 73,1 (6C, 3 C2) ; 72,9 (2C, C2) ; 72,5 (C3f) ; 72,1 (C5f) ; 71,7, 71,6 (8C, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 71, 3 (:2C, C2f) ; 70,2 (4C, 2 C4) ; 70,0 (4C, 2C4) ; 69,8 (2C, C4f) ; 63,7, 63,4, 63,1 (11C, C6aa, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). 15 HRMS (ESI) : [M+Na]+ C176H,42NaO51 m/z théorique: 3093,8416 m/z mesurée: 3093,8418 [M+K]+ C176H142KO51 m/z théorique: 3109,8155 m/z mesurée: 3109,8119 7.2/ Préparation du bromure de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl(1--*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2,4, 6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1 ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù+3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-a-D-glucopyranosyle (Produit 3b) La bromation du composé 2b (643 mg, 0,209 mmol) est réalisée comme décrit 25 pour 3a dans le dichlorométhane (15 rnL) en présence d'acide bromhydrique (1,1 mL, 6,364 mmol) pour donner de manière quantitative 633 mg de composé bromé 3b. Produit 3b : huile incolore. RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 6,68 (d, 1H, Hl a, JHIa-H2a = 3,8 Hz) ; 5,48 (t, 1H, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 9,7 Hz) ; 4,82 (dd, 1H, H2a, JH2a_H3a 30 = 9,7 Hz) ; 4,61 (t, 1H, H3a) ; 4,60 (dd, 1H, H6a, JHSa-H6a = 3,8 Hz, JH6a-H6'a = 12,2 Hz) ; 4,55-4,51 (m, 1H, H5a) ; 4,37 (dd, 1H, H6'a, JH5a-H6'a = 4,2 Hz). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 87,7 (Cl a) ; 76,3 (C3a) ; 73,4 (C2a) ; 72,7 (C5a) ; 67,6 (C4a) ; 62,0 (C6a). Autres signaux : 2910322 RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,00-7,71 (m, 26H, H arom.) ; 7,61-7,03 (m, 69H, H arom.) ; 5,39 (t, 1H, H3f, JH2f-H3f = JH3f-H4f = 9,7 Hz) ; 5,22 (dd, 1H, H2f, JHlf_H2f = 7,8 Hz) ; 5,21 (t, 1H, H4f, JH4fH5f = 9,7 Hz) ; 5,05-4,97 (m, 4H, 3 H2, H4) ; 4,94 (t, 1H, H4, JH4-H5 = 9,3 Hz) ; 4,88 (d, 1H, H1, JH1-H2 = 8,2 Hz) ; 4,87-4,77 (m, 3H, H2, 2 5 H4) ; 4,55 (d, 1H, Hl f) ; 4,49 (d, 1H, H1, JH1-H2 = 7,7 Hz) ; 4,42 (d, 1H, H1, JHl-H2 = 7,5 Hz) ; 4,40 (d, 1H, H1, JH1-H2 = 7,5 Hz) ; 4,19-4,12 (m, 2H, H3, H6) ; 4,08-3,81 (m, 12H, 3 H3, 9 H6) ; 3,77-3,71 (m, 1H, H5f) ; :3,71-3,60 (m, 4H, H5b, H5c, H5d, H5e). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,8, 164,7, 164,6, 164,5, 164,3, 163,8, 163,5 (19C, OCOPh) ; 133,8, 133,4, 133,2, 133,1, 133,0, 10 132,8, 132,6, 129,9, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,9, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9 (C arom.) ; 101,3, 101,0, 100,8, 100,7 (5C, Clb, Clc, Cld, Cle, Clf) ; 78,4, 78,1, 77,8, 77,4 (4C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 73,3, 73,2, 72,9 (4C, C2b, C2c, C2d, C2e) ; 72,5 (C3f) ; 71,8, 71,6 (5C, C5b, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 71,3 (C2f) ; 70,2 (4C, C4b, C4c, C4d, C4e) ; 69,8 (C4f) ; 63,5, 15 63,4, 63,1 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). 7.3/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1---3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1-*3) -2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-20 glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-2-D-glu-hex-l-enopyranose (Produit 4b) Le composé 3b (550 mg, 0,181 mmol) est engagé dans une réaction d'élimination suivant le même mode opératoire que celui décrit pour 4a dans le dichlorométhane (10 mL) en présence de DBU (35 L, 0,235 mmol). La purification sur colonne de gel de silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)] permet d'obtenir 25 458 mg du produit souhaité 4b avec un rendement de 85%. 4b : solide blanc ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,5. RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 6,54 (s, 1H, Hl a) ; 5,69 (d, 1H, H3a, JH3a-H4a = 1,6 Hz) ; 4,64 (dd, 1H, H6a, JHSa-H6a = 8,8 Hz, JH6a-H6'a = 12,4 Hz) ; 4,32 (dd, 1H, H6'a, JH5a_H6'a = 2,4 Hz). 30 RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 138,2 (Cl a) ; 74,1 (C5a) ; 72,3 (C4a) ; 68,6 (C3a) ; 61,6 (C6a). Autres signaux : RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,95-7,62 (m, 25H, H arom.) ; 7,51-6,93 (m, 70H, H arom.) ; 5,29 (t, 1H, H3f, JH2fH3f = JH3f-H4f = 9,7 Hz) ; 5,12 (dd, 1H, H2f, JHIfH2f 2910322 51 = 8,0 Hz) ; 5,11 (t, 1H, H4f, JH4f4H5f = 9,7 Hz) ; 5,10-5,12 (m, 1H, H2b, H4b) ; 4,96-4,80 (m, 4H, H1, 2 H2, H4) ; 4,78-4,71 (rn, 3H, H2, 2 H4) ; 4,60 (d, 1H, H1, JHl-H2 = 8,0 Hz) ; 4,52-4,44 (m, 3H, H4a, H5a, Hl) ; 4,42-4,35 (m, 3H, 2 H1, H6, JH1-H2 = 8,0 Hz) ; 4,07-4,01 (m, 1H, H5b) ; 3,98 (dd, 1H, H6, JH5-H6 = 3,5 Hz, JH6-H6' = 11,9 Hz) ; 3,93- 5 3,75 (m, 1H, 3 H3c, 8 H6) ; 3,74-3,55 (m, 4H, H5c, H5d, H5e, H5f). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) S (ppm) : 165,8, 165,7, 165,4, 165,2, 165,1, 164,9, 164,7, 164,6, 163,8, 163,7, 163,6 (19C, OC'OPh) ; 133,3, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,8, 132,7, 132,6, 129,9, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,8, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,7 (C2a, C arom.) ; 10 101,2 (Clb) ; 100,9, 100,8 100,7 (4C, Cl c, Cld, Cle, Cl f) ; 78,2, 78,0 (4C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 73,3 (1C, C2) ; 73,1 (C2b) ; 73,0 (C2) ; 72,7 (C5b) ; 72,6 (2C, C3f, C2) ; 72,0, 71,8, 71,6 (4C, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 71,3 (C2f) ; 70,2, 70,1, 69,8, 69,7 (5C, C4b, C4c, C4d, C4e, C4f) ; 63,5, 63,3, 63,1 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C169H136NaO49 m/z théorique: 2971,8048 15 m/z mesurée: 2971,8034 [M+K]+ C169H136KO49 m/z théorique: 2987,7787 m/z mesurée: 2987,7811 7.4/ Préparation de bromure de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-fi-D-glucopyranosyl(1ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2,4, 6-tri-O-benzoyl-fi-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-p-D-glucopyranosyl-(1ù> 3)-4,6-di-O-benzoyl-u-D-glucopyranos-2-ulosyle (Produit 5b) Le composé 5b a été obtenu suivant le même mode opératoire que celui décrit 25 pour la préparation de 5a à partir de 4b (124 mg, 0,042 mmol) dans 1,5 mL de dichlorométhane, de NBS (22,4 mg, 0,126 mmol) et de méthanol (3,4 L, 0,084 mmol) avec un rendement quantitatif (123 mg, 0,042 mmol). Produit 5b : huile incolore. RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 6,25 (s, 1H, Hl a) ; 30 5,44 (t, 1H, H4a, JH3a-H4a = JH4a-H5a = 10,2 Hz) ; 5,16 (d, 1H, H3a). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (pprn) : 1 Signaux caractéristiques 91,5 (C2a) ; 83,9 (Cl a) ; 76,3 (C3a) ; 72,6 (C5a) ; 69,0 (C4a) ; 61,7 (C6a). Autres signaux : 2910322 52 RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,09-7,70 (m, 25H, H arom.) ; 7,60-6,84 (m, 65H, H arom.) ; 5,37 (t, 1H, H3f, JH2f-H3f = JH3f-H4f = 9,7 Hz) ; 5,20 (dd, 1H, H2f, JHIf-H2f = 8,0 Hz) ; 5,19 (t, 1H, H4f, JH4f-H5f = 9,7 Hz) ; 5,10 (dd, 1H, H2b, JHIb-H2b = 8,1 Hz, JH2b-H3b = 9,1 Hz) ; 5,07-4,96 (m, 4H, Hlb, H2, 2 H4) ; 4,92-4,78 (m, 4H, 2 H2, 2 H4) ; 5 4,73 (d, 1H, H1, JH1_H2 = 8,0 Hz) ; 4,66 (d, 1H, H1, JHI-H2 = 8,0 Hz) ; 4,65-4,57 (m, 2H, H5a, H6) ; 4,54 (d, 1H, Hl, JH1_H2 = 8,0 Hz) ; 4,49 (d, 1H, Hl, JHI-H2 = 7,7 Hz) ; 4,47-4,41 (m, 1H, H6) ; 4,35 (dd, 1H, H6, JH5-H6 = 4,9 Hz, JH6_H6' = 12,4 Hz) ; 4,28 (t, 1H, H3b, JH3b-H4b = 9,1 Hz) ; 4,19 (dd, 1H, H6, JH5_H6 = 3,5 Hz, JH6-H6' = 12,2 Hz) ; 4,12 (dd, 1H, H6, JH5-H6 = 6,2 Hz, JH6-H6' = 12,2 Hz) ; 4,05-3,81 (m, 11H, H5b, H3c, H3d, H3e, 7 10 H6) ; 3,80-3,62 (m, 4H, H5c, H5d, H5e, H5f). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6, 164,3, 163,8, 163,6 (18C, OCOPh) ; 133,6, 133,3, 133,2, 133,1, 133,0, 132,9, 132,6, 130,0, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,8, 128,6, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9 (C arom.) ; 101,0, 100,9, 100,7, 100,6 (5C, Clb, Clc, 15 Cl d, Cl e, Cl f) ; 78,3, 78,2, 78,1, 78,0 (4C, C3b, C3 c, C3d, C3e) ; 73,5, 73,1, 73,0, 72,8 (4C, C2b, C2c, C2d, C2e) ; 72,6 (C3f) ; 71,9, 71,8, 71,6 (5C, C5b, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 71,3 (C2f) ; 70,2, 70,1, 70,0, 69,8 (5C, C4b, C4c, C4d, C4e, C4f) ; 63,6, 63,5, 63,4, 63,3, 63,2 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). 20 7.5/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1ù+3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1 ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1 ù>3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù-3) -6-O-benzoyl-4-désoxy-(3-D-gluco-hex-3-enopyranos-2-uloside de benzyle (Produit 6b) 25 L'alcool benzylique (7 L, 0,068 mmol) et le bromure d'ulosyle 5b (183 mg, 0,063 mmol) sont mis en solution dans le dichlorométhane (1,5 mL) en présence de tamis moléculaire. Après 5 minutes d'agitation vigoureuse, l'oxyde de triphénylphosphine (19 mg, 0,068 mmol) est additionné rapidement au mélange. Après 4 jours d'agitation à température ambiante, le milieu est filtré sur célite, concentré sous 30 pression réduite et purifié par chromatographie sur silice [éther de pétrole/acétate d'éthyle (3:2 ; v/v)]. Après évaporation des solvants, le brut ainsi obtenu est dissous dans le benzène (8 mL), puis additionné d'eau (200 L, 11,1 mol) et d'hydrogénocarbonate de sodium (200 mg, 2,381 mmol). Le milieu est ensuite porté à 80 C pendant 1,5 heure. Après retour à température ambiante, la suspension est séchée 2910322 53 sur MgSO4, filtrée et concentrée sous vide pour conduire au produit 6b (120 mg ; 0,029 mmol) avec un rendement global de 67%. Produit 6b : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,5. RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 6,26 (d, 1H, H4a, JH4a-5 H5a = 3,5 Hz) ; 4,87 (s, 1H, Hla) ; 4,83 (d, 1H, H7a, JH7a-H7'a = 11,7 Hz) ; 4,71-4,65 (m, 1H, H5a) ; 4,60 (d, 1H, H7'a). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 183,6 (C2a) ; 144,9 (C3a) ; 126,3 (C4a) ; 97,7 (Cl a) ; 71,0 (C5a) ; 70,6 (C7a) ; 66,1 (C6a). Autres signaux : 10 RMN 1H (CDC13, 400 MHz) 8 (ppm) : 8,06-7,71 (m, 25H, H arom.) ; 7,60-7,12 (m, 65H, H arom.) ; 5,37 (t, 1H, H3f, JH2fH3f = JH3ex4f = 9,5 Hz) ; 5,30-5,16 (m, 5H, Hlb, H2b, H2f, H4b, H4f) ; 5,07-4,94 (m, 6H, H2c, H2d, H2e, H4c, H4d, H4e) ; 4,90 (d, 1H, Hl c, JHIc-H2c = 8,0 Hz) ; 4,57 (d, 1H, H1, JHI-H2 = 8,2 Hz) ; 4,55 (d, 2H, H1, JHI-H2 = 8,0 Hz) ; 4,54-4,43 (m, 3H, H6a, 2 H6) ; 4,38-4,32 (m, 2H, H3b, H6) ; 4,24-4,20 (m, 2H, 15 H3, H6'a) ; 4,16-4,04 (m, 4H, H6'a, H3, H5, H6) ; 4,02-3,82 (m, 8H, H3, 2 H5, 5 H6) ; 20 100,8 (3C, Cld, Cle, Cl f) ; 100,2 (C 1c) ; 98,4 (Clb) ; 78,3, 78,2, 78,1 (3C, C3c, C3d, C3e) ; 77,6 (C3b) ; 73,3, 73,0, 72,9 (5C, C2b, C5b, C2c, C2d, C2e) ; 72,6 (C3f) ; 72,1, 72,0, 71,8 (3C, C5) ; 71,6 (C2f) ; 71,3 (2C, C5f, C5) ; 70,1, 70,0 (3C, C4c, C4d, C4e) ; 69,8 (C4f) ; 69,3 (C4b) ; 63,5, 63,4 (3C, C6f, 2 C6) ; 63,2, 63,1 (2C, C6b, C6). 25 HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C162HI32NaO47 m/z théorique: 2851,7837 m/z mesurée: 2852,7830 [M+K]+ C162H132KO47 m/z théorique: 2867,7576 m/z mesurée: 2867,7508 7.6/ Préparation de 2,3,4,6-tétra-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-2,4,6-tri-Obenzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1 ù*3)-2,4,6-tri-O-benzoyl-(3-D-glucopyranosyl-(1ùj3)-2,4,6-tri-O-benzoyl(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-6-O-benzoyl-4-désoxy(3-D-manno-hex-3-enopyranosyle de benzyle (Produit 7b) 3,76-3,64 (m, 3H, H5f, 2 H5). RMN 13C (CDC13, 100 MHz) (ppm) : 165,9, 165,8, 165,7, 165,4, 164,9, 164,7, 164,6, 164,4, 163,8, 163,6 (15C, OCOPh) ; 136,1 (C quat. arom. OCH2Ph) ; 133,3, 133,1, 133,0, 132,9, 132,6, 130,0, 129,8, 129,7, 129,6, 129,5, 129,4, 129,3, 129,2, 129,1, 129,0, 128,8, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,2, 128,1, 128,0 (C arom.) ; 101,0, 100,9, 2910322 54 La réduction du composé 6b (104 mg, 0,036 mmol) est réalisée suivant le même mode opératoire que celui décrit pour 7a en présence de L-Sélectride (solution à 1M dans THF ; 50 L, 0,050 mmol) dans le THF (1 mL). Le composés 7b (105 mg ;0,036 mmol) est ainsi obtenu après traitements de manière quantitative. 5 Produit 7b : huile incolore ; Rf (EP/AcOEt, 1:1) 0,5. RMN 'H (CDC13, 400 MHz) S (ppm) : Signaux caractéristiques 4,96 (d, 1H, H4a, JH4a-H5a 3) -P-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-4-désoxy-(3-D-manno-hex-3-enopyranosyle de benzyle (Produit 8b) Le composé 7b (105 mg, 0,036 mmol) est engagé dans une réaction de 5 débenzoylation suivant le même mode opératoire que celui décrit pour 8a dans un mélange dichlorométhane / méthanol (3:2 ; v/v) (2, 5 mL) en présence MeONa (solution à 0,1 M dans MeOH ; 0,71 mL, 0,71 mmol). La purification sur colonne de gel de silice [acétate d'éthyle/méthanol (3:2 ; v/v)] permet d'obtenir 8b (38 mg) avec un rendement quantitatif. 10 Produit 8b : huile incolore. RMN 'H (CD3OD, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 5,06 (d, 1H, H4a, JH4a-H5a = 1,6 Hz) ; 4,82 (d, 1H, H7a, JH7a-H7'a = 11,9 Hz) ; 4,60 (d, 1H, H7'a) ; 4,49 (d, 1H, Hla, JHIa-H2a = 1,8 Hz) ; 4,12-4,08 (m, 1H, H5a) ; 3,88 (d, 1H, H2a). RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) (ppm) : Signaux caractéristiques 153,5 (C3a) ; 103,9 15 (C4a) ; 99,8 (Cl a) ; 71,2 (C7a) ; 67,2 (C2a) ; 65,6 (C6a). Autres signaux : RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) 8 (ppm) : 7,30-7,17 (m, 5H, H arom.) ; 4,71 (d, 1H, Hlb, JHIb-H2b = 7,7 Hz) ; 4,55 (d, 3H, Hl c, Hld, Hle, JHI-H2 = 7,8 Hz) ; 4,47 (d, 1H, Hl f, JHIf-H2f = 8,0 Hz) ; 3,81-3,72 (m, 5H, 5 H6) ; 3,62-3,44 (m, 12H, H6a, H6'a, H2b, 3 H3, 5 20 H6) ; 3,40-3,34 (m, 3H, H2c, H2d, H2e) ; 3,32-3,14 (m, 12H, H2f, H3f, H4f, 4 H4, 5 H5). RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) 8 (ppm) : 138,9 (C quat. arom. OCH2Ph) ; 129,4, 129,3, 128,9, 128,7 (C arom.) ; 105,2, 104,7 (4C, Clc, Cld, Cle, Clf) ; 100,5 (Clb) ; 87,4, 87,3, 87,1 (4C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 78,1, 77,8 (6C, C3f, C5b, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 25 75,5 (C2f) ; 75,0, 74,9 (4C, C2c, C2d, C2e, C5a) ; 74,0 (C2b) ; 71,5 (C4f) ; 70,0, 69,9 (4C, C4b, C4c, C4d, C4e) ; 62,6, 62,5 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). 7.8/ Préparation de R-D-glucopyranosyl-(1ù>3)-(3-D-glucopyranosyl-(1--*3)(1-D-glucopyranosyl-(1ù/3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù>3)(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-4-30 désoxy-(a,(3)-D-mannopyranose (Produit Cb) Le composé 8b (60 mg, 0,056 mmol) est réduit et débenzylé suivant le même mode opératoire que celui décrit pour Ca, à savoir par hydrogénolyse en présence d'acétate de palladium (60 mg, 0,267 mmol). La purification sur colonne Sephadex G-10 conduit de 2910322 56 manière quantitative au produit souhaité Cb en mélange a/(3 où le composé a est très largement majoritaire. Produit Cb : mousse blanche. RMN 'H (D20, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 5,14 (d, 1H, Hlaa, JHIa- 5 H2a = 3,3 Hz) ; 1,75-1,60 (m, 2H, H4a). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 96,0 (Clac) ; 61,0 (C6a) ; 26,0 (C4a). Autres signaux : RMN 'H (D20, 400 MHz) 8 (ppm) : 4,70 (d, 3H, H1, JHI-H2 = 8,0 Hz) ; 4,66 (d, 2H, 10 H1, JH1-H2 = 8,2 Hz) ; 3,86-3,78 (m, 6H, H6a, H6b, H6c, H6d, H6e, H6f) ; 3,73-3,60 (m, 11H, H3a, H3b, H3c, H3d, H3e, H6'a, H6'b, H6'c, H6'd, H6'e, H6'f) ; 3,50-3,36 (m, 16H, H2a, H2b, H2c, H2d, H2e, H3f, H4b, H4c, H4d, H4e, H5a, H5b, H5c, H5d, H5e, H5f) ; 3,31 (t, 1H, H4f, JH3f H4f = JH4fH5f = 9,3 Hz) ; 3,26 (dd, 1H, H2f, JHIf H2f = 8,0 Hz, JH2f-H3f = 9, 0 Hz). 15 RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 (ppm) : 103,1, 102,8 (5C, Clb, Clc, Cld, Cle, Clf) ; 84,5, 84,3 (5C, C3a, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 76,3, 75,9(6C, C3f, C5a, C5b, C5c, C5d, C5e, C5f) ; 73,8, 73,6 (6C, C2a, C2b, C2c, C2d, C2e, C2f) ; 69,9 (C4f) ; 68,4 (4C, C4b, C4c, C4d, C4e) ; 61,0 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C36H62NaO3o m/z théorique: 997,3224 m/z mesurée: 997,3201 20 7.9/ Préparation de (3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3)-fi-D-glucopyranosyl(1ù+3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù+3)-(3-D-glucopyranosyl-(1ù*3) -4-désoxy-D-mannitol (Produit Db) 25 Le composé Cb (40 mg, 0,041 mmol) est dissous dans un mélange méthanol/eau (4:1, v/v) puis additionné de 10 équivalents de borohydrure de sodium (15,5 mg, 0,411 mmol). Après une semaine d'agitation à température ambiante, le milieu est neutralisé par ajout de quelques gouttes d'acide acétique, concentré sous pression réduite, coévaporé 3 fois avec 10 mL d'un mélange méthanol/acide acétique (9:1, v/v) et pour 30 finir avec 3 fois 10 mL de méthanol. Le composé Db est obtenu après purification sur colonne de perméation de gel (Sephadex G-10, éluant : eau) et lyophilisation des fractions récoltées. Produit Db : mousse blanche. 2910322 57 RMN 1H (D20, 400 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 3,97-3,90 (m, 1H, H3a) ; 1,70-1,40 (m, 2H, H4a). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 (ppm) : Signaux caractéristiques 76,3 (C3a) ; 71,0 (C2a, C5a) ; 66,1 (C6a) ; 63,0 (Cl a) ; 25,3 (C4a). 5 Autres signaux : RMN 1H (D20, 400 MHz) 8 (ppm) : 4,70 (d, 3H, H1, JHI-H2 = 8,0 Hz) ; 4,66 (d, 2H, H1, JHI-H2 = 8,0 Hz) ; 3,87-3,76 (m, 9H, Hl a, H2a, H5a, H6a, H6b, H6c, H6d, H6e, H6f) ; 3,72-3,51 (m, 12H, Hl'a, H3a, H3b, H3c, H3d, H3e, H6'a, H6'b, H6'c, H6'd, H6'e, H6'f) ; 3,50-3,36 (m, 14H, H2b, H2c, H2d, H2e, H3f, H4b, H4c, H4d, H4e, H5b, 10 H5c, H5d, H5e, H5f) ; 3,31 (t, 1H, H4f, JH3f-H4f = JH4f-H5f = 9,3 Hz) ; 3,26 (dd, 1H, H2f, JHIf--H2f = 8,0 Hz, JH2f-H3f = 9,3 Hz). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 (ppm) : 103,1, 102,8 (5C, Clb, Clc, Cld, Cle, Cl f) ; 84,5, 84,3 (4C, C3b, C3c, C3d, C3e) ; 76,3 (C5f) ; 75,9 (5C, C3f, C5a, C5b, C5c, C5d, C5e) ; 73,8, 73,6 (5C, C2b, C2c, C2d, C2e, C2f) ; 69,9 (C4f) ; 68,4, 68,2 (4C, C4b, C4c, 15 C4d, C4e) ; 61,0 (5C, C6b, C6c, C6d, C6e, C6f). HRMS (ESI+) : [M+Na]+ C36H644NaO30 m/z théorique: 999,3380 m/z mesurée: 999,3411 20 Les exemples 8 à 1l montrent les activités biologiques de composés de l'invention. Dans ces exemples, les composés testés sont : LAM5 : laminaripentaose, LAM7 : laminariheptaose, 25 A2 est le composé préparé selon l'exemple 3, A0 représente le composé suivant: Le témoin utilisé est le PBS. Les dosages utilisés sont de 100 g/souris. 30 EXEMPLE 8: Effet de LAM5, LAM7, A2 et A0 sur la phagocytose de cellules de sang périphérique: 2910322 58 On a injecté, par voie péritonéale, chez un groupe de souris Balb/c (Jackson laboratory, Bar Harbor, ME, USA) l'un ou l'autre de un témoin, LAM5, LAM7, A0 ou A2. 24 heures après l'injection les souris ont été sacrifiées. On a récupéré le sang périphérique à partir du plexus orbital clans de l'héparine (5 IU/ml) (Sigma). 5 Après comptage, un essai de phagocytose de particles de HEMA (microsphères synthétiques préparées à partir de copolymère de 2-hydroxyéthylméthacrylate) a été réalisé comme décrit dans: Rembaum et al. , 1976, Vetvicka et al. 1982, Bilej et al. , 1989. 0,1 ml of sang frais hépariné a été ajouté à 0,05 ml de particules de HEMA diluées (5x108/ml) et incubé pendant 60 minutes à 37 C sous agitation modérée 10 occasionnelle. A la fin de l'incubation, la suspension de cellules a été frottée sur des lamelles de microscope. Les frottis ont été évalués sous microscope optique après coloration Giemsa. Les cellules englobant au moins trois particules ont été considérées comme 15 positives. Les résultats moyens sont représentés graphiquement sur la figure 1. Ils montrent clairement que aussi bien A0 que A2 stimulent fortement la phagocytose dans les monocytes et les granulocytes. 20 EXEMPLE 9: Effet des oligosaccharides sur la phagocytose de cellules issues de la cavité péritonéale: On a injecté par voie intrapéritonéale un groupe de souris Balb/c (Jackson laboratory, Bar Harbor, ME, USA) avec l'un ou l'autre de un témoin, LAM7, LAM5, AO ou A2. 25 Après 24 h, les souris ont été sacrifiées, les cellules péritonéales ont été recueillies dans un milieu Hanks (Sigma). Après comptage des cellules dans un hémocytomètre, les cellules péritonéales ont été diluées tolxl07 dans un milieu RPMI 1640 (Sigma) avec 5% de sérum de veau foetal (Hyclone, Logan, UT, USA). 30 2x106 cellules dans 0,2 ml de milieu RPMI 1640 additionné de 5% de serum de veau foetal ont été mélangées avec le même volume de particules HEMA (5x108/ml). La suspension a été incubée pendant 60 minutes at 37 C sous agitation modérée occasionnelle. L'incubation a été terminée par centrifugation (150 g pendant 5 minutes) et la boulette a été remise en suspension. 2910322 59 Les macrophages avec des particules ingérées ont été comptés sous microscope optique dans des frottis colorés par Accustain (colorant Wright modifié, Sigma). Les cellules englobant au moins six particules ont été considérées comme étant positives. 5 Les résultats moyens sont représentés graphiquement sur la Figure 2.Ils montrent qu'aussi bien A0 que A2 stimulent fortement la phagocytose à la fois dans les monocytes et les granulocytes de macrophages péritonéaux. EXEMPLE 10: Effet de A0 et A2 sur un dénombrement différentiel dans le sang 10 En utilisant les mêmes groupes expérimentaux que dans l'exemple 8, deux lamelles microscopiques supplémentaires à partir de chaque échantillon expérimental ont été préparées. Après coloration Giemsa, on a évalué au microscope optique, pour chaque lamelle la présence de types individuels de cellules, i. e. monocytes, lymphocytes et granulocytes. 15 Les résultats moyens sont représentés graphiquement sur la Figure 3. Ils montrent que à la fois A0 et A2 augmentent le nombre de monocytes et de granulocytes dans le sang périphérique. 20 EXEMPLE 11: Effet de A0 et A2 sur un dénombrement différentiel dans les cellules péritonéales En utilisant les mêmes groupes expérimentaux que dans l'exemple 8, deux lamelles microscopiques supplémentaires à partir de chaque échantillon expérimental ont été préparées. Après coloration Giemsa, on a évalué au microscope optique, pour 25 chaque lamelle la présence de types individuels de cellules, i. e. macrophages, lymphocytes et mastocytes. Les résultats moyens sont représentés graphiquement sur la Figure 4. Ils montrent que à la fois A0 et A2 augmentent le nombre de monocytes et de granulocytes dans la cavité péritonéale. 30 5 Tableau 1a: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 1H des monosaccharides répondant à la formule : Ph s OBn Composé VI\ S / (Ppm) JHn-Hn+1 n R1 R2 H-1 / J1,2 H-2 I J2,3 H-3 I J3,4 H-4 / ,14,5 H-5 I J5,6 H-6 / J6,6' H-6' I J6',5 3 Lev NAP 4,51/ 8,1 5,12/ 9,1 3,76/ 9,1 3,83/ 9,1 3,44/ 5,1 4,39/ 10,4 3,85/ 10,4 4 Lev H 4,56/ 8,0 4,99/ 9,1 3,61/ 9,1 3,86/ 9,1 3,42/ 5,1 4,36/ 10,4 3,80/ 10,4 10 H NAP 4,50/ 7,6 3,70/ 8,9 3,72/ 8,9 3,76/ 9,9 3,45/ 5,1 4,38/ 10,2 3,84/ 10,2 Tableau 1 b: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 13C des monosaccharides répondant à la formule : Ph Ç'--o---0 R20 Composé (ppm) n R' R2 C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 3 Lev NAP 100,1 73,2 78,1 81,5 66,2 68,6 4 Lev H 99,8 74,5 72,0 80,5 66,2 68,5 10 H NAP 102,2 74,5 80,0 81,3 66,5 68,7 OBn 61 Tableau 2a: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 1 H des monosaccharides répondant à la formule : Ph OBn Composé (ppm)Imultiplicité Unité (b) Unité (a) n 1 2 H-1 / H-21 H-3 / H-41 H-51 H-6 / J6,6, H-6'1 H-1 / H-2 / H-3 / H-41 H-5 / H-6 / J6,6' H-6' I R R J12 J2,3 J3,4 J4,5 J5,6 6',5 z J2,3 J3.4 Jas J5.6 Js'.s j e.5 5 Lev NAP 4,93/7,1 5,26/7,1 3,85/9,1 3,95/9,1 3,43/4,9 4,13/10,4 3,68/10,4 4,45/7,8 5,06/8,9 3,97/8,9 3,80/8,9 3,43/4,9 4,35/10,4 3,81/10,4 6 Lev H 5,02/6,8 5,14/7,1 3,99/9,3 3,75/9,3 3,46/5,1 4,18/10,6 3,70/10,6 4,49/7,5 5,09/8,4 4,04/9,1 3,78/9,1 3,49/4,8 4,39/10,6 3,82/10,6 11 H NAP 4,95/7,1 5,36/7,5 3,96/9,1 3,75/9,1 3,38/4,9 4,19/10,4 3,62/10,4 4,37/7,8 3,50/8,6 3,88/9,0 3,77/9,0 3,45/5,1 4,32/10,6 3,78/10,6 5 Tableau 2b: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 13C des monosaccharides répondant à la formule : PhPh OBn Composé i5 (ppm) Unité (b) Unité (a) n R1 R2 C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 5 Lev NAP 100,1 74,0 78,1 80,7 65,9 68,6 99,8 72,9 77,5 79,7 66,3 68,6 6 Lev H 100,0 75,6 72,5 80,5 65,8 68,6 99,7 72,9 77,6 79,6 66,2 68,6 11 H NAP 101,1 74,0 77,8 81,3 66,0 68, 6 102,1 74,1 79,2 81,1 66,5 68,7 Ni O W Ni Ni 62 Tableau 3a: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 1H des monosaccharides répondant à la formule : Ph- O OBn Composé 5 (ppm)lmultiplicité Unité (c) Unité (b) n R1 R2 H-1 / H-2/ H-3 / H-4 / H-5 / H-61 I H-6' 1 H-1 / H-2 / H-3 / H-4 / H-5 / H-6 I H-6' I J1,2 J2,3 J3,4 J4,5 J5,6 J6,6' J6',5 J1,2 J2.3 J3,4 J4,5 J5,6 J6,6' J6'.5 3,98- 3,62- 5,16- 4,15- 3,98- 3,69- 4,15- 5,14/ 5,39/ 4,05/ 4,27/ 3,76/ 5,12/ 3,49/ 7 Lev NAP 7 5 8 2 8 0 3,87/ 3,52/ 10,6 10,6 4,2 5,11/ 4,08/ 3,87/ 3,60/ 4,08/ 10,4 nd 5,1 nd nd nd nd 10,4 5,14- 4,09- 4,09- 3,66- 4,09- 8 Lev H 5,14/ 5,20/ 3,94/ 3,62/ 3,49/ 4,19/ 3,66/ 5,11/ 5,10/ 4,03/ 4,03/ 3,57/ 4,03/ 3 44/ 7,8 7,8 7,8 7,8 4,9 10,4 10,4 4,0 nd nd nd nd 10,0 10,0 12 H NAP 512/ 5,40/ 3,92/ 3,95/ 3,53/ 4,29/ 3,79/ 5,13/ 5,18/ 4,02/ 4,21/ 3,64/ 4,09/ 3,52/ 8,0 8,0 9,0 9,0 4,9 10,4 10,4 4,2 4,2 8,0 10,2 4,6 10,0 10,0 Composé b (ppm)/multiplicité Unité (a) n R1 R2 H-1 I H-2 / H-3 / H-4 / H-5 / H-6 / H-6' 1 J1,2 J2.3 J3,4 J4,5 J5.6 J6,6' J6'.5 7 Lev NAP 4,33/ 4,60/ 3,92/ 3,02/ 3.31/ 4,27/ 3,58/ 8,0 8,8 9,3 9,3 5,1 10,4 10,4 8 Lev H 4,29/ 4,64/ 3,89/ 2,98/ 3,27/ 4,23/ 3,53/ 7,8 9,2 9,2 9,2 4,9 10,4 10,4 3,39- 3,39- 12 H NAP 4 27/ 2,85/ 3, 73/ 3,32/ 3,32/ 4,32/ 3,75/ 8,0 8,0 8,8 nd 3,8 11,0 11,0 5 5 63 Tableau 3b: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN 13C des monosaccharides répondant à la formule : Ph OBn Composé S (ppm) Unité (c) Unité (b) n R1 R2 C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 7 Lev NAP 98,0 73,2 76,1 81,4 66,1 68,7 97,3 72,2 77,6 78,1 65,1 68,7 8 Lev H 97,8 74,6 72,4 80,8 66,0 68,6 97,4 72,3 76,2 78,7 65,1 68,7 12 H NAP 98,6 73,3 78,2 81,3 66,1 68,6 99,6 73,5 77,9 77,6 65,1 68,7 Composé b (ppm) Unité (a) n R1 R2 C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 7 Lev NAP 99,6 73,8 73,5 78,7 66,2 68,5 8 Lev H 99,6 73,7 73,7 77,6 66,2 68,5 12 H NAP 102,0 74,7 76,7 78,8 66,6 68,6 64 Tableau 3'a: Déplacements chimiques et multiplicité en RMN'H des monosaccharides répondant à la formule : Ph OH OBn 5 Composé (ppm)/multiplicité Unité (c) Unité (b) n R' H-11 H-2/ H-31 H-4/ H-51 H- 61 H-6' I H-11 H-21 H-31 H-41 H-51 H-61 H-6' l J1,2 J2.3 J3,4 J4,5 J5,6 J6, 6' J6',5 J1,2 J2.3 J3,4 J4,5 J5,6 J6,6' J6',5 18 Bz 4,97/ 5,34/ 4,11 / 3,94/ 3,48/ 4,24/ 3,74/ 4,84/ 5,26/ 3,82/ 4,05/ 3,55/ 4,18/ 3,74/ 7,5 7,5 9,3 9,3 4,8 10,4 10,4 6,2 6,2 9,5 nd 4,6 10,2 10,2 19 H 4,57 / 3'68 3,83/ 3, 66 / 3,38 / 4,30 / 3,75 / 4,57/ 3'68 / 3,79- 3,79- 3,38 / 4,30 / 3,76 / 7,7 9 5 9,5 9,5 4,8 10,4 10,4 5,1 nd 3,68/m 3,68/m 4,8 10,4 10,4 Composé b (ppm)Imultiplicité Unité (a) n R1 H-11 H-21 H-31 H-41 H-51 H-61 H-6'1 J1,2 J2,3 J3.4 J4.5 J5.6 J6,6' J6'.5 18 Bz 4,35 / 3,82 / 3,70 / 3,94 / 3,25 / 4,32 / 3,76 / 0,7 10,2 9,3 9,3 4,8 10,4 10,4t 92 H 4,59/ 4,19/ 3,92/ 4,12/ 3,45/ 4,37/ 3,92/ REVENDICATIONS 1. Utilisation d'au moins un composé de formule (I) ou (II) HO H HO RI OH OH dans lesquelles RI représente H ou OH et n est un entier de 2 à 10, de préférence de 2 à 7, et plus préférentiellement encore égal à 3, 4 ou 5, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de maladies choisies dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie bactérienne, maladie 10 fongique, maladie du système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de l'immunostimulation, chez des êtres humains et animaux à sang chaud. 2. Oligo-13-(1,3)ùglucane-(1,3)-mannose et oligo-P-(1,3) -glucane-(1,3)-mannitol et leurs dérivés désoxy en position 4 de formule générale (I') ou de formule générale (II') : HO HO H O O OH OH n HO RHO OH HO ô OH H OH n (II') dans lesquelles RI représente H ou OH et n est un entier de 2 à 10, de préférence de 2 à 7, et plus préférentiellement encore égal à 3, 4 ou 5. OH (1) OH 15 20 3. (3-D-glucopyranosyl-( 1 ù*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-(a,(3)-D-mannopyranose ; 2910322 67 13-D-glucopyranosyl-(1-43)-(3-D-glucopyranosyl-(1-*3 )-f3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1->3)(3-D-glucopyranosyl-(1->3)-f3-D-mannopyranose ; f3-D-glucopyranosyl-(1->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1 X3)-4-désoxy-(a,(3)-D-désoxymannopyranose ; (3-D-glucopyranosyl-(1->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-mannitol ; (3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1->3)-4-désoxymannitol ; f 3-D-glucopyrano syl-(1--43)-(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-f 3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1-+ 3)-(3-D-glucopyranosyl-(1--*3)-mannitol ; f 3-D-glucopyranosyl-(1 -> 3 )f3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-(3-D-glucopyranosyl-(1-*3)-[3-D-glucopyranosyl(1->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-4-désoxy-(a,(3) -D-mannopyranose ; (3-D-glucopyranosyl-(1-->3)-(3-D-glucopyranosyl-(1->3)(3-D-glucopyranosyl-(1-*3 ).. 3-D-glucopyranosyl-(1->3 )-(3-D-glucopyranosyl-(1 -*3)-4-désoxy-mannitol. 4. Procédé de préparation de composés selon la revendication 2 ou la revendication 3, comprenant une réaction entre un donneur de glycosyle de formule (D) ci-dessous et un accepteur de glycosyle de formule (A) ci-dessous : R4O R3'0 0 SR R2 OBz m (D) R4O R4O R3'O O 0 O OBz OR6 OBn ' P (A) dans lesquelles m est un entier de 1 à 9, de préférence de 1 à 6, et plus préférentiellement encore égal à 2,3ou4; p est un entier de 0 à 9, de préférence de 0 à 6, et plus préférentiellement encore égal à 25 2, 3 ou 4 ; R représente alkyle tel que éthyle, méthyle, propyle ou butyle, ou aryle tel que phényle ou tolyle ; R2 représente allyle, méthylnaphtyle, benzyle, paraméthoxybenzyle, halogénoacétyle (chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle) ; 2910322 68 R3 et R4 d'une part et R3' et R4' d'autre part forment ensemble un radical éthylidyle, isopropylidyle, hexafluoroisopropylidyle, cyclopentylidyle, cyclohexylidyle, cycloheptylidyle, butylidyle, 1-tertiobutyléthylidyle, benzylidyle, méthoxybenzylidyle, 1-phénylbenzylidyle ou R3, R4, R3' et R4' représentent chacun indépendamment l'un de 5 l'autre un benzyle, chlorobenzyle, nitrobenzyle, allyle, triarylméthyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, ester tel que acétyle, chloroacétyle, benzoyle, pivaloyle ; R5 représente H, un groupe lévulinoyle, acétyle, chloroacétyle, fluorénylméthyloxycarbonyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, 10 tertiobutyldiméthylsilyle, de préférence un groupe lévulinoyle, à la condition que aucun de R3, R4, R3', R4' ne soit identique à R5, 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que le composé de formule (A) est OBn 15 6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que le composé de formule (D) est Ph~0 O o SEt NAP OBz m 20 7. Procédé de préparation de composés selon la revendication 2 ou la revendication 3, comprenant une étape d'épimérisation en position 2 de l'entité terminale. 8. Composés de formule les composés de formules (III), (IV), (V) et (VI) OBn 69 2910322 (IV) 5 p est un entier de 0 à 9, de préférence de 0 à 6, et plus préférentiellement encore égal à 2,3ou4; R2 représente hydrogène, allyle, rnéthylnaphtyle, benzyle, paraméthoxybenzyle, halogénoacétyle (chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle) ; R3 et R4 d'une part et R'3 et R'4 d'autre part, forment ensemble un radical éthylidyle, 10 isopropylidyle, hexafluoroisopropylidyle, cyclopentylidyle, cyclohexylidyle, cycloheptylidyle, butylidyle, 1-tertiobutyléthylidyle, benzylidyle, méthoxybenzylidyle, 1 -phénylb enzyl i dyl e, ou R3, R4, R3' et R4' représentent chacun indépendamment l'un de l'autre un benzyle, chlorobenzyle, nitrobenzyle, allyle, tri.arylméthyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, 15 tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, ester tel que acétyle, chloroacétyle, benzoyle, pivaloyle ; R5 représente H, un groupe lévulinoyle, acétyle, chloroacétyle, fluorénylméthyloxycarbonyle, trialkylsilyle tel que triéthylsilyle, tri-isopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle, de préférence un groupe lévulinoyle, 20 à la condition que aucun de R3, R4, R3', R4' ne soit identique à R5 ; R7 représente un ester, notamment acétyle, benzoyle, pivaloyle, de préférence Bz ; R8, un groupement orthogonal à tous les autres groupements protecteurs, qui peut être choisi parmi Bn, NAP, p-méthoxybenzyle, p-méthoxyphényle, allyle, et de préférence R8 représente Bn, R9 représente OR8 ou X. 2910322 70 9. Médicaments comprenant les composés tels que définis à la revendication 2 ou 3. 10. Utilisation d'au moins un composé tel que défini à la revendication 2 ou 3, comme immunomodulateur. 5 11. Utilisation d'au moins un composé tel que défini à la revendication 2 ou 3 pour le traitement d'une maladie choisie dans le groupe consistant en tumeur, cancer, maladie virale, maladie bactérienne, maladie fongique, maladie du système immunitaire, maladie auto-immune ou maladie liée à une déficience de l'immunostimulation, chez des animaux à sang chaud et des êtres humains. 10 15