Brevet FR2904113A1 — publié le 20080125

PROCEDES ET OUTILS POUR LA THERAPIE DE PATHOLOGIES NEURODEGENERATIVES La présente invention concerne des compositions et méthodes pour le traitement de pathologies neurodégénératives dans lesquelles les fonctions cognitives sont altérées, comme observé dans la maladie d'Alzheimer. Plus particulièrement, l'invention présente une stratégie pour suivre en clinique humaine l'activité et/ou l'efficacité de traitements neuro-protecteurs, basée sur le dosage biochimique de certains paramètres des plaquettes, et donc réalisable à partir de prélèvements sanguins. L'invention concerne également des méthodes, outils, constructions et compositions adaptées à la mise en oeuvre de ces stratégies. La maladie d'Alzheimer représente la principale cause de démence et la maladie neurodégénérative la plus fréquente. Cette maladie, d'évolution progressive, est caractérisée par la perte de mémoire et par une dégradation des aptitudes au langage, à l'orientation et au jugement. L'examen de cerveaux de patients atteints de cette maladie révèle une perte de neurones de l'hippocampe, centre important de la mémoire, et du cortex cérébral, impliqué dans le raisonnement, le langage et la mémoire. Les neurones cholinergiques sont particulièrement affectés par cette déplétion. Une anomalie majeure observée dans les cerveaux des malades atteints de la maladie d'Alzheimer est l'accumulation d'agrégats intracellulaires et extracellulaires de protéines. Des plaques séniles formées par agrégation intra et extracellulaire de peptide beta-amyloïde (A(3), résultant du clivage de l'APP (Amyloid Precursor Protein), caractérisent des régions d'altérations impliquant des neurones et des cellules gliales. D'autres agrégats intracellulaires, neurofibrillaires, de la protéine tau semblent bien corrélés avec la gravité de la démence. Les études génétiques menées sur les formes familiales ont montré que 4 gènes sont associés au développement de la maladie. L'APP, les présénilines 1 et 2 (PSI et PS2) et l'apolipoprotéine E (Apo E). Bien que des mutations ou polymorphismes dans chacun 2904113 2 de ces gènes aboutissent à une production accrue de peptide A(3, les mécanismes qui président aux pertes synaptiques et neuronales restent mal connus. Plusieurs hypothèses et mécanismes semblent ainsi coexister, qui impliquent des phénomènes tels que le stress oxydatif, qui peut être induit notamment par le peptide A(3, les phénomènes 5 inflammatoires et immunitaires ou encore les défauts d'hormones sexuelles, les défauts d'insuline et l'hypothyroïdisme. D'autres hypothèses soulignent le rôle des modifications des influx de calcium et de l'excitotoxicité. Toutefois, aucun élément ne permet de rentre compte de la vulnérabilité particulière des neurones cholinergiques. Les traitements actuellement disponibles, basés sur l'utilisation d'inhibiteurs 10 d'acétylcholinestérase, ne font qu'améliorer de façon transitoire les fonctions cognitives des patients et ne représentent pas une approche thérapeutique susceptible de ralentir la progression de la maladie d'Alzheimer et encore moins de la guérir. Si de récentes observations soulignent la possibilité d'intervenir pharmacologiquement 15 par des approches d'immunothérapie dirigée contre le peptide A(3, il est encore plus pertinent de cibler directement les sécrétases qui sont les protéases impliquées dans le métabolisme de l'APP et la production du peptide A(3. Le peptide A(3 est un fragment de 40/42 résidus qui est produit, dans la voie 20 amyloïdogénique, via un clivage séquentiel de la protéine APP par deux protéases appelées 13-secretase (BACE) et y-secretase (présénilines). La séquence du peptide A(3 est localisée à la jonction entre les domaines intramembranaire et extracellulaire de l'APP. Dans la voie non- amyloïdogénique, l'APP est clivé dans le domaine A(3 par une a-secretase entre les acides aminés 16(Lys) et 17(Leu) de la région A(3, générant la 25 partie APP soluble a (sAPPa, 105-125 kDa) relarguée dans le milieu extracellulaire et un fragment retenu à la membrane (contenant une partie du domaine transmembranaire et la partie intracellulaire C terminale) appelé C83 (10 kDa), lui-même clivé par la ysecrétase pour générer le peptide APP IntraCellular Domain (AICD) et le peptide P3 (3 kDa). L'action de l'a-secretase empêche donc non seulement la formation du peptide 30 amyloide, mais stimule aussi la génération du grand fragment extracellulaire N-terminal (ectodomaine) de l'APP. Les fragments solubles N-terminaux de l'APP générés par l'asecretase, ou sAPPa sont relargués de façon constitutive dans le lumen vésiculaire et à 2904113 3 la surface de la cellule. De telles espèces de l'APP sont sécrétées, in vitro, dans le milieu de culture conditionné par les cellules exprimant l'APP, et sont retrouvées in vivo dans le plasma et le liquide céphalorachidien. 5 Les approches décrites pour stimuler l'activité a-secretase, et augmenter les niveaux de sAPPa mettent en jeu l'activation de récepteurs couplés aux protéines G tels que les récepteurs aux nucléotides P2Y2, le récepteur au PACAP PAC1, ou les récepteurs de divers neurotransmetteurs comme les récepteurs muscariniques, le récepteur métabotropique au glutamate ou encore les récepteurs de la sérotonine (ref iii pour 10 revue). Les voies stimulées par les neurotransmetteurs mettent en jeu les systèmes protéine kinase C (PKC) et phospholipase C, ainsi que les MAP kinases, bien décrits dans la littérature comme modulateurs de la production de sAPPa, comme la stimulation de voies PKC-dépendantes par les esters de phorbol ou encore par des agonistes des récepteurs de la sérotonine 5-HT2a et 2c. D'autres voies mettent en jeu le 15 récepteur de la sérotonine 5-HT(4), connu pour jouer un rôle dans la cognition et la mémoire, via la production d'AMPc et le recrutement de la GTPase Racl ou encore des inhibiteurs d'acétylcholine agissant via la PKC et ou les MAP-kinases, les oestrogènes tels le 17 P oestradiol ou encore la testostérone. Certaines hormones et facteurs de croissance tels l'EGF et l'insuline sont également connus pour stimuler la production de 20 sAPPa via la PKC ou la PI3K, respectivement. D'autres agents pharmacologiques ont été récemment décrits comme stimulant la production de sAPPa, selon une voie cAMPProtéine kinase A (PKA) comme la forskoline, ou selon une voie PKC/MAP-kinase, comme les agents anti-inflammatoires non stéroïdiens tels les inhibiteurs des cyclooxygénase COX (Ibuprofen), les statines inhibiteurs de la HMG-CoA réductase 25 (lovastatine), les dérivés de la rasagiline ou encore les polyphénols tels le (-)-epigallocatechin-3-gallate. Mais toutes ces approches, si elles ont permis de valider la pertinence de la stratégie visant à stimuler la production de sAPPalpha à l'aide d'outils pharmacologiques, n'ont pas abouti à de nouveaux composés adaptés à la clinique humaine. 30 2904113 4 La présente invention fournit un rationnel à l'utilisation d'agents pharmacologiques comme des composés chimiques appartenant à la classe des pyrazolopyridines, dont l'étazolate, destinés à stimuler la production du fragment sAPPa. 5 La présente invention décrit également le lien entre l'augmentation de la production de sAPPalpha et la capacité de l'étazolate à inhiber les effets induits par les ROS ("Reactive Oxygen Species"), c'est-à-dire par le stress oxydatif. Ce phénomène de stress oxydatif joue un rôle essentiel dans plusieurs aspects de la 10 maladie d'Alzheimer : non seulement la dégénéresence neuronale et l'inflammation astrocytaire mais également l'activation et l'agrégation plaquettaire. Ces derniers phénomènes participent aux complications vasculaires de la maladie d'Alzheimer et sont à l'origine des démences vasculaires. 15 Il est par conséquent possible de suivre un effet inhibiteur de l'étazolate sur les voies initiées par le stress oxydatif au niveau de l'activation plaquettaire. Plus généralement, il est possible de suivre l'effet inhibiteur de composés neuroprotecteurs au niveau de l'activation plaquettaire. 20 Ainsi, la présente invention permet de proposer, pour la première fois, la mesure de tout phénomène biologique relié à l'activation ou à l'agrégation plaquettaire pour le suivi clinique ou thérapeutique de l'efficacité de composés neuroprotecteurs. La capacité de générer à partir de l'APP les peptides Abeta et sAPPalpha est partagée par le système nerveux et les plaquettes. Par conséquent, l'action inhibitrice de l'étazolate sur le stress 25 oxydatif se traduisant par une augmentation de la production de sAPPalpha, la présente invention fournit un rationnel pour suivre l'action de l'étazolate sur la maturation de l'APP à partir d'échantillons plaquettaires ou plus généralement d'échantillons sanguins. 30 La présente invention revendique également la mesure de tout phénomène biologique relié à l'activation ou à l'agrégation plaquettaire pour le suivi clinique ou thérapeutique de l'efficacité de tout composé de la famille des pyrazolopyridines. De plus, la présente 2904113 5 invention permet de revendiquer la mesure de toute modification de la maturation de l'APP dans le sang, notamment le dosage de la sAPPalpha, à partir d'échantillons de sang ou de préparations de plaquettes afin d'assurer le suivi clinique et thérapeutique de l'efficacité de tout composé de la famille des pyrazolopyridines. 5 Ainsi, un objet de l'invention réside dans une méthode pour évaluer ou suivre l'efficacité d'un traitement neuroprotecteur chez un mammifère, comprenant une étape de mesure (de préférence in vitro ou ex vivo) de la production de sAPPalpha dans un échantillon biologique du mammifère ayant reçu ledit traitement, ledit échantillon contenant des 10 plaquettes, la production de sAPPalpha étant une indication de l'efficacité du traitement. Traitement neuroprotecteur L'invention peut être utilisée pour évaluer ou suivre l'efficacité de tout traitement 15 neuroprotecteur chez un mammifère. Au sens de l'invention, on entend par traitement neuroprotecteur tout traitement utilisable ou utilisé dans le traitement des maladies affectant le système nerveux, notamment de maladies neurodégénératives. Dans ce contexte, on peut citer notamment les composés choisis parmi les pyrazolopyridines et les agents modulateurs des récepteurs GABA(A). 20 Au sens de l'invention, un composé de la famille des pyrazolopyridines désigne avantageusement tout composé de formule (I) suivante, qui peut être substitué ou non, sur l'une quelconque des positions. 25 Les composés de la famille des pyrazolopyridines utilisés dans la présente invention sont en particulier choisis parmi les composés suivants : 2904113 - L'étazolate de formule (II) suivante : 5 l'étazolate constituant un mode de mise en oeuvre préféré de l'invention, - Ester éthylique de l'acide 4-butylamino-l-ethyl-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique (tracazolate), 10 - Ester éthylique de l'acide 4-butylamino-l-ethyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, -1-(4-amino-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl)-[i-D-1-deoxy-ribofuranose 15 -Ester éthylique de l'acide 1-ethyl-4-(N'-isopropylidene-hydrazino)-1H-pyrazolo[3,4-b] pyridine-5-carboxylique (SQ 20009), -4-amino-6-methyl-l-n-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine 20 - Ester éthylique de l'acide 4-Amino-l-ethyl-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique (desbutyl tracacolate), -4-amino-1-pentyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxamide, 25 - Ester éthylique de l'acide 1-ethyl-6-methyl-4-methylamino-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 6 2904113 7 - Ester éthylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-propyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, -Ester éthylique de l'acide 1-ethyl-4-ethylamino-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine- 5 5-carboxylique, - Ester éthylique de l'acide 4-amino-l-butyl-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 10 -5-(4-amino-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl) -2-hydroxymethyl-tetrahydro-furan-3-ol, - ester allylique de l'acide 1-allyl-4-amino-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 15 -acide 4-amino-6-methyl-1-pentyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, ester éthylique de l'acide 4-amino-l-ethyl-3,6-dimethyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 20 - ester éthylique de l'acide 4-dimethylamino-l-ethyl-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b] pyridine-5 -carboxylique, - ester éthylique de l'acide 1-ethyl-6-methyl-4-propylamino-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, - ester éthylique de l'acide 4-amino-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, - ester éthylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pent-4-ynyl-lH-pyrazolo[3,4-30 b]pyridine-5-carboxylique, -4-amino-l-but-3-enyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-allylamide, 25 2904113 8 - 4-amino- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]p yri dine-5-isopropylamide, -4-amino- 1 -pentyl-N-n-propyl- 1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxamide, 5 - ester allylique de l'acide 4-amino-l-butyl-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, ester éthylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pent-3-ynyl-lH-pyrazolo[3,4-10 b]pyridine-5-carboxylique, - 4-amino- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-prop-2-ynylamide - ester allylique de l'acide 4-amino-l-(3-methyl-butyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-15 carboxylique, -4-amino- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-N-(2-propenyl)carboxamide, - ester allylique de l'acide 4-amino-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-20 carboxylique, - 4-amino1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-butyl amide, - ester allylique de l'acide 4 -amino- 1 -but-3 -ynyl-6-methyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine- 25 5-carboxylique, - ester allylique de l'acide 4-amino-l-but-3-enyl-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 30 - 4-amino-6-methyl- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5- allyl amide, 2904113 9 - ester allylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, -ester allylique de l'acide 4-amino-6-methyl-1-(3-methyl-butyl)-1H-pyrazolo[3,4- 5 b]pyri dine-5-carboxylique, - ester isobutylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 10 -4-amino-6-methyl- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-butylamide, -ester allylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-(3-methyl-but-2-enyl)-1H-pyrazolo[3,4-b] pyridine-5-carboxylique, 15 - 4- amino- 1 -p entyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]p yridine- 5-cyclopropyl amide, - ethyl 4- amino- 1 -pentyl- 1 H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-hydroxamate, - ester prop-2-ynylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4- 20 b]pyridine-5-carboxylique, -ester allylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pent-4-ynyl-lH-pyrazolo[3,4-b] pyridine-5-carboxylique, 25 - ester allylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pent-4-enyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, - 4-amino-1-pent-3-ynyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-propylamide, 30 -4-amino- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-cyclopropylmethyl -amide, 2904113 10 - ester 2-méthyl-allylique de l'acide 4-amino-6-methyl-1-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, -4-Amino-1-pent-3-ynyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-allylamide (ICI 190,622), 5 - 4- amino- 1 -pent-4-ynyl-N-2-propenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b] p yridine- 5-carb oxamide, - 4-amino- 1 -p ent-3- ynyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-prop-2-ynylamide, 10 - 4-amino- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine- 5 -but-2-ynylamide, - ester allylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pent-3-ynyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 15 - ester allylique de l'acide 4-amino-l-(2-cyclopropyl-ethyl)-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b] pyridine-5-carboxylique, - ester allylique de l'acide 4-amino-l-hex-5-ynyl-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 20 -4-amino-1-pent-3-ynyl-1H-pyrazolo[3,4-b] pyridine-5-cyclopropylmethyl-amide, - ester but-3-énylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 25 -ester cyclopropylméthylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, -4-butylamino- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-allylamide, 30 -ester 2-cyclopropyl-éthylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 2904113 11 - ester cyclopropylméthylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pent-3-ynyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, 5 - ester cyclopropylméthylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pent-4-ynyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, - ester éthylique de l'acide 4-amino-l-benzyl-6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, -4-amino- 1 -pentyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine- 5 -benzyl amide, -4-amino-1-pentyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-phenylamide, 15 - ester benzylique de l'acide 4-amino-6-methyl-l-pentyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-carboxylique, -4-Azido-1-13-D-ribofuranosylpyrazolo[3,4-b]pyridine, 20 -1-pent-3-ynyl-N-2-propenyl-4-propionamido-lH-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-carboxamide, -2-(4-amino-pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl) -5-hydroxymethyl-tetrahydro-furan-3 ,4-diol, 25 2-(6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-ylamino)-éthanol, -3 -(6-methyl1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-ylamino)-propan- 1 -ol, -ester propylique de l'acide 3-(6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-ylamino)-30 acétique, 10 2904113 12 - ester éthylique de l'acide 2-(6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-ylamino)-propionique, - ester éthylique de l'acide 2-(6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-ylamino)- 5 pentanoique, - ester éthylique de l'acide 2-(6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-ylamino)-benzoique, 10 - ester propylique de l'acide 3-(6-methyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-ylamino)-pentanoïque, -N-benzylidene-N-(3-methyl- 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-hydrazine, 15 - N-furan-2- ylmethyl ene-N- (3 -methyl1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-hydrazine, -N-(4-fluoro-benzylidene)-N-(3-methyl-1-phenyl-1H-pyrazolo[3,4-b] pyridin-4-yl)-hydrazine, - N-(3-furan-2-yl - allylidene) -N-(3 -methyl - 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-hydrazine, - N-(4-methoxy-b enzylidene)-N- (3 -methyl - 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-25 hydrazine, -4-[(3-methyl-1-phenyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-yl)-hydrazonomethyl] -benzonitrile, 30 - N-benzo [1,3 ] dioxol-5-ylmethylene-N -(3 -methyl- 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-hydrazine, 20 2904113 13 - N(3 -methyl- 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [ 3 ,4-b]pyridin-4-yl)-N-(4-nitro-benzylidene)-hydrazine, - N-(3-methyl- 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-N-(2-nitro-benz ylidene)-5 hydrazine, - N-(3 -methyl- 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-N-(4-trifluoromethylbenzylidene)-hydrazine, 10 - N-(3 -methyl- 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-N-( 5-nitro-furan-2-ylmethylene)-hydrazine, - N-(3 -methyl- 1 -phenyl1H-pyrazolo [3,4-b]pyridin-4-yl)-N-(2-trifluoromethylbenzylidene) -hydrazine, - N-(3 -methyl- 1 -phenyl- 1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridin-4-yl)-N-(6-nitro-b enzo [1,3 ]dioxol-5 -ylmethyl ene)-hydrazine, - Acide 4-(3-chloro-4-methoxy-benzylamino)-1-ethyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-520 carboxylique, - 4-(3-chloro-4-methoxy-b enzylamino)- 1 -ethyl- 1Hpyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5- (pyridin-4-ylmethyl)-amide, 25 -4-(3-chloro-4-methoxy-benzylamino)-1-ethyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5(tetrahydro-furan-2-ylmethyl)-amide, -4-(3-chloro-4-methoxy-benzylamino)-1-ethyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5(5-hydroxy-pentyl)-amide, -4-(3-chloro-4-methoxy-benzylamino)-1-ethyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-5[3-(2-oxo-pyrrolidin-1-yl)-propyl]-amide, 15 30 2904113 14 - ester éthylique de l'acide 4-tert-butylamino-l-(2-chloro-2-phenyl-ethyl)-1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine- 5- carboxylique, 5 - ester éthylique de l'acide 1-(2-chloro-2-phenyl-ethyl)-4-cyclopropylamino-lH-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine- 5-carboxylique, - ester éthylique de l'acide 1-(2-chloro-2-phenyl-ethyl)-4-propylamino-lH-pyrazolo [3,4-b]pyridine-5-carboxylique, - ester éthylique de l'acide 1-(2-chloro-2-phenyl-ethyl)-4-phenylamino-lH-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-carboxylique, - ester éthylique de l'acide 4-butylamino-l-(2-chloro-2-phenyl-ethyl)-1H-pyrazolo[3,4-15 b]pyridine-5-carboxylique, - ester éthylique de l'acide 1-(2-chloro-2-phenyl-ethyl)-4-(2-ethoxy-ethylamino)-1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-carboxylique, 20 - ester éthylique de l'acide 4-benzylamino-l-(2-chloro-2-phenyl-ethyl)-1H-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5 -carboxylique, - ester éthylique de l'acide 1-(2-chloro-2-phenyl-ethyl)-4-phenethylamino-lH-pyrazolo [3 ,4-b]pyridine-5-carboxylique. Ces composés peuvent être sous forme de sel, ester, racémique, isomère actif, etc. Dans un mode particulier de mise en oeuvre, le composé neuroprotecteur est choisi parmi l'étazolate, le tracazolate ou le cartazolate, plus préférentiellement l'étazolate. 30 L'agent modulateur du GABA(A) peut être tout composé chimique, d'origine naturelle ou synthétique, notamment une molécule organique ou inorganique, d'origine végétale, bactérienne, virale, animale, eucaryote, synthétique ou semi-synthétique, capable de 10 25 2904113 15 moduler l'expression ou l'activité des radicaux libres (ROS). A titre d'exemple particulier, on peut citer notamment les benzodiazépines. Les composés ou traitements utilisés dans le cadre de la présente invention peuvent être 5 formulés et administrés de différentes façons. L'administration peut être réalisée par toute méthode connue de l'homme du métier, de préférence par voie orale ou par injection, systémique ou locale. L'injection est typiquement réalisée par voie intraoculaire, intra-péritonéale, intra-cérébrale, intra-veineuse, intra-artérielle, sous-cutanée ou intra-musculaire. L' administration par voie orale ou systémique est préférée. Les 10 doses administrées peuvent être adaptées par l'homme de l'art. Typiquement, de 0,01 mg à 100 mg / kg environ sont injectés, pour des composés de nature chimique. Des dosages unitaires particuliers sont par exemple de 0,5 à 40 mg par dose administrée. Il est entendu que des injections répétées peuvent être réalisées, éventuellement en combinaison avec d'autres agents actifs ou tout véhicule acceptable sur le plan 15 pharmaceutique (ex., tampons, solutions saline, isotonique, en présence d'agents stabilisants, etc.). Le véhicule ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique peut être choisi parmi des solutés tampons, solvants, liants, stabilisants, émulsifiants, etc. Des solutés tampons 20 ou diluant sont notamment le phosphate de calcium, sulfate de calcium, lactose, cellulose, kaolin, mannitol, chlorure de sodium, amidon, sucre en poudre et hydroxy propyl méthyl cellulose (HPMC) (pour libération retard). Des liants sont par exemple l'amidon, la gélatine et des solutés de remplissage comme le sucrose, glucose, dextrose, lactose, etc. Des gommes naturelles ou synthétiques peuvent aussi être utilisées, comme 25 notamment l'alginate, la carboxyméthylcellulose, la méthylcellulose, la polyvinyl pyrrolidone, etc. D'autres excipients sont par exemple la cellulose et du stéarate de magnésium. Des agents stabilisants peuvent être incorporés aux formulations, comme par exemple des polysaccharides (acacia, agar, acide alginique, gomme guar et tragacanth, la chitine ou ses dérivés et des éthers de cellulose). Des solvants ou solutés 30 sont par exemple la solution Ringer, l'eau, l'eau distillée, des tampons phosphates, des solutions salines phosphatées, et autres fluides conventionnels. 2904113 Echantillon Pour la mise en oeuvre de la méthode décrite ci-dessus, il est possible d'utiliser tout échantillon contenant des plaquettes, provenant du sujet traité. L'invention montre en 5 effet que des composés neuroprotecteurs sont capables d'induire la production de sAPPalpha dans les plaquettes. Ainsi, l'efficacité du traitement peut être évaluée et suivie par un dosage de sAPPalpha dans tout échantillon contenant des plaquettes. Dans un mode particulier de mise en oeuvre, l'échantillon biologique est un échantillon 10 de sang ou dérivé de sang. On entend par échantillon "dérivé" de sang tout échantillon de sang traité, par exemple par dilution, filtration, purification, etc., afin par exemple d'enrichir l'échantillon en plaquettes, d'éliminer d'autres populations cellulaires, d'inactiver des pathogènes éventuels, de calibrer un dosage, etc. 15 La méthode ci-dessus est applicable chez tous mammifères, de préférence chez les humains, en particulier atteints de maladies neurodégénératives, telles que la maladie d'Alzheimer, de Parkinson, la SLA, la maladie de Huntigton, etc. Dosage de la sAPPalpha 20 Différentes techniques connues en soi de l'homme du métier peuvent être utilisées pour doser la sAPPalpha. Ainsi notamment, on peut mentionner des techniques immunologiques, basées sur l'utilisation d'anticorps spécifiques de la sAPPalpha. De tels anticorps sont disponibles dans la littérature (Exp. Neurol. 2003 Sep;183(1):74-80), 25 ou peuvent être produits par des techniques connues en soi de l'homme du métier. Ainsi, il est possible de produire de tels anticorps par immunisation d'un mammifère non humain avec la sAPPalpha ou tout épitope ou fragment de celle-ci, puis isolement et/ou sélection des anticorps polyclonaux ou monoclonaux capables de lier la sAPPalpha in vitro. La spécificité des anticorps peut ensuite être confirmée par détermination des tests 30 de liaison des anticorps à la protéine APP entière et/ou à d'autres peptides dérivés de la protéine APP, tels que le fragment C83, le peptide AICD et le peptide P3. De préférence, on utilise des anticorps capables de lier spécifiquement la sAPPalpha et 16 2904113 17 incapables de lier de manière spécifique le fragment C83, le peptide AICD et le peptide P3. La "spécificité" de liaison indique que la liaison à la sAPPalpha peut être discriminée d'une liaison éventuelle à d'autres protéines ou peptides. 5 La méthode de mesure de la production de sAPPalpha peut impliquer une technique ELISA, RIA, l'emploi de substrats revêtus d'anticorps spécifiques, de billes magnétiques, de colonnes, de plusieurs anticorps (anticorps de capture et anticorps de révélation), etc. De manière préférée, on utilise un test de type ELISA. 10 Typiquement, la production de sAPPalpha mesurée est comparée à un niveau de référence ou à une valeur mesurée avant le traitement, ou à un stade antérieur de traitement, chez ledit mammifère. Ainsi, il est possible déterminer si le niveau de production de la sAPPalpha évolue chez le patient consécutivement au traitement, ou au cours du traitement. Un maintien ou une augmentation du niveau de sAPPalpha 15 constitue une indication de l'efficacité du traitement. Applications thérapeutiques La mise en évidence inattendue que les traitements neuroprotecteurs définis ci-dessus 20 permettent d'induire ou de stimuler la production de sAPPalpha dans les plaquettes permet d'envisager de nouvelles utilisations thérapeutiques de ce type de composés. Ainsi, un objet de l'invention réside dans l'utilisation d'un composé choisi parmi les pyrazolopyridines et les agents modulateurs des récepteurs GABA (A) pour la 25 préparation d'un médicament pour stimuler ou induire la production de sAPPalpha par les plaquettes chez un mammifère. L'invention concerne également l'utilisation d'un composé choisi parmi les pyrazolopyridines et les agents modulateurs des récepteurs GABA (A) pour la 30 préparation d'un médicament pour diminuer le risque de formation de thrombus chez un mammifère. 2904113 18 L'invention concerne également l'utilisation d'un composé choisi parmi les pyrazolopyridines et les agents modulateurs des récepteurs GABA (A) pour la préparation d'un médicament pour réduire les complications vasculaires chez les patients atteints de maladies neurodégénératives. L'invention concerne encore l'utilisation d'un composé choisi parmi les pyrazolopyridines et les agents modulateurs des récepteurs GABA (A) pour la préparation d'un médicament pour inhiber l'agrégation plaquettaire chez un mammifère, en particulier chez les patients atteints de maladies neurodégénératives. 10 La présente invention sera décrite plus en détails à l'aide des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Légende des Figures 15 Fig. 1: L'étazolate stimule sur culture cellulaire laproduction de sAPPalpha Exemples 20 Exemple1 : L'étazolate stimule sur culture cellulaire la production de sAPPalpha Des cellules HEK293 transfectées de manière stable sur-exprimant la swAPP humaine portent la mutation "Swedish" (29) (swAPP-HEK293 cells) ont été maintenues dans du milieu Eagle Modifié contenant du sel Earle et supplémenté par 10% de sérum de veau 25 foetal (FBS), 2mM L-glutamine (Sigma, Lyon, France), 1X Acides Aminés Non Essentiels et des antibiotiques. Des cellules NIH3T3 (Lgc PromoChem) ont été cultivées en milieu DMEM à teneur élevée en glucose, contenant du Glutamax et supplémenté par 10% de sérum de nouveau né et des antibiotiques. Les cellules de glioblastome astrocytome humaines U87MG (ATCC # HTB-14) ont été cultivées à 30 37 C dans du DMEM contenant 1 mM glutamine, 10% FBS et des antibiotiques. Les cellules SH-SY5Y (ATCC # CRL-2266) ont été maintenues dans un milieu Eagle Modifié/F12K (1:1, v/v) supplémenté par 10% FBS, 2mM L-glutamine, IX Acides 5 2904113 19 Aminés Non Essentiels, 1X pyruvate de sodium et des antibiotiques. Les cellules Hela (ATCC # CCL 2) ont été cultivées dans du milieu Eagle Modifié supplémenté par 10% FBS et des antibiotiques. Les cellules ont été traitées 48 heures après étalement sur plaques de 10cm avec des concentrations variables des molécules indiquées, ou avec du 5 DMSO comme véhicule, pendant 16 ou 24 heures. Dans ce but, le milieu a été remplacé par 5 ml de milieu frais dans lequel les traitement ont été effectuées. La dilution totale de DMSO était de 1/1000 dans tous les cas. Les cellules ont été maintenues pour permettre la sécretion dans 5ml de milieu pendant 7 heures en présence de 1 M phosphoramidon. La sAPPalpha a été mesurée par test ELISA au moyen d'anticorps 10 disponibles dans le commerce. Les résultats obtenus sont présentés dans la figure 1 et montrent que l'étazolate induit une sécrétion de sAPPalpha dans les plaquettes. 15 REVENDICATIONS 1. Méthode pour évaluer ou suivre l'efficacité d'un traitement neuroprotecteur chez un mammifère, comprenant une étape de mesure in vitro ou ex vivo de la production de sAPPalpha dans un échantillon biologique du mammifère ayant reçu ledit traitement, ledit échantillon contenant des plaquettes, la production de sAPPalpha étant une indication de l'efficacité du traitement. 2. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que le traitement neuroprotecteur est un composé choisi parmi les pyrazolopyridines et les agents modulateurs des récepteurs GABA (A). 3. Méthode selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le mammifère est atteint d'une maladie neurodégénérative. 4. Méthode selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'échantillon biologique est un échantillon de sang ou dérivé de sang. 5. Méthode selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la production de sAPPalpha est mesurée par un test immunologique, de préférence de type ELISA. 6. Méthode selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la production de sAPPalpha mesurée est comparée à un niveau de référence ou à une valeur mesurée avant le traitement, ou à un stade antérieur de traitement, chez ledit mammifère.