Brevet FR2908659A1 — publié le 20080523

Vernis dentaire à libération prolongée d'antiseptique à l'aide d'une matrice comprenant au moins un polymère méthacrylique, en particulier pour patient neutropénique. Le domaine de l'invention est celui de la conception et/ou formulation de produits médicamenteux. Plus précisément, l'invention concerne un produit d'hygiène buco-dentaire, destiné en particulier à des patients neutropéniques. L'aplasie médullaire chimio-induite constitue une période d'une extrême dangerosité pour un patient traité pour hémopathie maligne. Au cours de cette période, le risque létal est considérablement augmenté, lié à une immuno-dépression de durée variable et aux éventuelles infections opportunistes. Parmi celles-ci, les infections à streptocoques alpha-hémolythiques figurent parmi les plus redoutées. Les patients en aplasie médullaire sont soignés dans des conditions tout à fait particulières que constitue une chambre stérile. L'examen d'un nombre important de ces patients met en évidence le réservoir buccal de bactéries occasionnant des septicémies souvent mortelles. Les hémopathies malignes appartiennent au groupe des sarcomes ou cancers atteignant les tissus d'origine mésodermique. Les cellules concernées peuvent présenter des anomalies telles que les corps d'Auer (leucémie aiguë myéloblastique LAM) ou une taille très importante avec un noyau bourgeonnant et des nucléoles géants (maladie de Hodgkin). Très souvent, des anomalies chromosomiques peuvent être mises en évidence. A titre d'exemple, une translocation est associée au lymphome de Burkitt. Ces translocations peuvent aboutir à la sous ou surexpression d'une protéine normale. Ce phénomène contribuerait à l'oncogénèse. Ces clones transloqués deviennent alors les marqueurs principaux de la malignité. En effet, il est relativement aisé de mettre en évidence une rechute lorsque ces anomalies cytogénétiques réapparaissent après une période de rémission. La prolifération maligne échappe aux processus normaux de l'homéostasie. 2908659 2 Le point de départ des hémopathies malignes est encore mal connu. Il peut être médullaire, thymique, ganglionnaire ou splénique selon la pathologie. Certaines étiopathogénies ont pu être mises en évidence. L'HIV 1 est largement mis en cause dans la survenue des lyrnphomes à cellules T de l'adulte. De même, 5 l'EBV, agent de la mononucléose infectueuse, est responsable du lymphome de Burkitt et son rôle est évoqué dans la maladie de Hodgkin. Parmi les agents physiques, les radiations ionisantes entraînent un grand nombre de leucémies (exemple : Hiroshima), de malformations de l'embryon chez la femme gravide. Des molécules telles que le benzène provoquent également des leucémies de type 10 aiguës lorsque les doses d'exposition sont élevées (LAM), ou de type chronique lorsque ces doses sont plus faibles (LLC). Les proto-oncogènes sont des gènes responsables de la transformation cellulaire. Ils peuvent conférer à certaines cellules un caractère malin. Ces séquences sont alors retrouvées au niveau du génome soit réarrangées ou 15 amplifiées (MYC), soit mutées (N-ras), soit transloquées (LMC, oncogène ABL). Ces oncogènes sont régulés par des gènes suppresseurs. Si ces derniers sont altérés, la régulation ne peut plus ou moins bien s'effectuer ou moins efficacement. Le processus malin peut alors s'enclencher. Les traitements anti-cancéreux, et en particulier les médications anti- 2.0 cancéreuses, sont multiples. L'objectif des médicaments anti-cancéreux est de freiner, voire d'éliminer les cellules tumorales. Ce sont donc des molécules cytotoxiques non spécifiques ayant pour cible l'ADN ou les protéines associées à la mitose. Elles peuvent être classées en 4 grandes catégories : 25 les alkylants (établissement des liaisons avec l'ADN) ; les intercalants (perturbent la réplication de l'ADN) ; - les anti-topo-isomérases (agissent sur la conformation spatiale de l'ADN) ; les anti-métabolites (inhibent les enzymes nécessaires à 30 l'élaboration des nucléotides). 2908659 5 10 15 2.0 25 30 3 On connaît notamment : l'amsacrine ; la bléomycine ; - le bulsufan ; la carmustine ; le chlorambucil - la chlorméthine ; le cisplatine ; le cyclophosphamide ; la cytarabine - la dacarbazine ; la daunurobucine ; la dexaméthasone ; la doxorubicine ; l'épirubicine - l'étoposide ; - la fludarabine ; - la gemcitabine ; - l'hudroxycarbamide ; - l'idarubicine - l'ifosfamide ; -l'imatinib ; - la lomustine ; - le melphalan ; - le méthotrexate ; - le mitoguazone ; le mitoxantrone ; la prédnimustine ; la prednisolone la procarbazine 2908659 4 la vinblastine la vincristine la vindésine ; Les effets secondaires de ces traitements sont variés et fréquents. On peut 5 citer notamment : les éruptions cutanées ; les vomissements ; - les diarrhées ; l'entérocolite nécrosante ; 1'hypertransaminasémie ; l'anémie ; l'anorexie ; les alopécies ; - les fibroses ; l'aménorrhée - les trombophlébites localisées ; la dermatite de contact ; l'eczéma ; les troubles cardiaques ; la leuco et/ou thrombopenie ; - la stomatite Parmi tous les effets secondaires précédemment cités, il en est un qui concerne particulièrement l'invention : la mucite chimio-induite. 25 Richard et coll. ont montré en 1995 que le réservoir des septicémies à streptocoques viridans était buccale. Bien qu'aucune corrélation statistique n'a été montrée entre l'état de la barrière muqueuse, l'état dentaire et le passage sanguin de ces bactéries, il est apparu à la Demanderesse que la mucite est largement incriminée dans ce 30 phénomène. 10 15 2.0 2908659 5 La multiplicité des chimiothérapies et les nombreux changements de traitement en fonction de la réponse de l'hôte ont fait qu'une thérapeutique se traduisant cliniquement pour l'odontologiste par une mucite de sévérité variable n'a pu être incriminée dans les épisodes infectieux. Cependant, Gonzalez-Barca 5 en 2001 met en évidence des facteurs prédisposant à une septicémie à Staphylococcus aureus tels qu'une leucémie aiguë et une mucite sévère. Ces complications digestives peuvent être à l'origine d'une limitation de la posologie des traitements anti-cancéreux. Le plus souvent buccale, la mucite peut s'accompagner d'une atteinte 10 oesophagienne. Elle survient généralement après 5 à 7 jours de chimiothérapie et se traduit par des aphtes isolés, de grande étendue. Sa surinfection par Candida la rend extrêmement douloureuse. Des surinfections par HSV ou bactéries peuvent également se voir. La gravité de la mucite dépend du ou des anti-cancéreux utilisés. 15 Chez les patients en aplasie médicamenteuse, la douleur est souvent très importante, empêchant toute alimentation, même molle, et implique l'utilisation de morphine afin de la calmer. Redding en 1999 préconise un gel d'hydroxypropylcellulose contenant de la benzocaïne pour réduire le phénomène douloureux pendant plus de 3 heures. 2,0 Les agents les plus abrasifs pour la muqueuse buccale sont : - le melphalan ; le cyclophosphamide l'ifosfamide ; la cytarabine ; le méthotrexate ; la fludarabine ; la vinblastine ; la daunorubicine ; la doxorubicine ; l'épirubicine ; 25 30 2908659 6 l'idarubicine ; le mitoxantrone ; la bléomycine ; l'hydroxyurée ; 5 la procarbazine ; la mitoguazone. Une relation entre l'intensité de la mucite et la profondeur et la durée de la neutropénie est retrouvée. Outre le phénomène douloureux, la mucite perturbe également la 10 salivation et la déglutition. La prophylaxie s'effectue grâce à un état des lieux réalisé par un odontologiste et une remise en état de la cavité buccale. Des bains de bouche à base de fungizone et de chlorhexidine sont préconisés plusieurs fois par jour, associés à du bicarbonate de sodium. 15 L'utilisation d'une brosse à dent très souple est autorisée sauf en cas de thrombopénie sévère. Des essais sur les lasers athermiques sont actuellement en cours dans cette indication. La palifermine ou KGF (keratinocyte growth factor) permet de stimuler la prolifération, la différenciation et la migration des cellules épithéliales de la 20 cavité buccale. In vivo, le pourcentage de mucite sévère est diminué d'un tiers par rapport à un placebo (63 % versus 98 %) et la durée raccourcie de 9 à 6 jours. On rappelle parallèlement que la chimiothérapie, associée ou non à la radiothérapie, induit une immuno-dépression le plus souvent extrêmement sévère. Plus les défenses de l'hôte sont compromises, plus la possibilité 2,5 d'infections microbiennes opportunistes est élevée, pouvant retentir de façon défavorable sur le pronostic vital du patient. Le risque infectieux est lié à la profondeur de la neutropénie, à sa rapidité d'installation et sa durée. Les infections bactériennes sont rares si les polynucléaires sont supérieurs à 500/mm3 alors qu'à un nombre inférieur à 100/mm3, elles sont fréquentes, sévères et à type 30 de septicémies. 2908659 7 Les risques infectieux peuvent avoir plusieurs origines parmi lesquels : les infections fungiques : leur survenue est directement proportionnelle à la durée de la neutropénie. L'administration d'antibiotiques, inactifs sur les champignons, et la corticothérapie 5 jouent un rôle favorisant. Les Candida et Aspergillus sont les deux principaux responsables d'infections chez le patient neutropénique. L'incidence de ces infections est d'environ 7% de tous les épisodes fébriles. les infections virales : essentiellement associées à un déficit de 10 l'immunité cellulaire, notamment à médiation lymphocytaire. Ce sont surtout les Herpes (HSV) et Cytomegalovirus (CMV) qui sont concernés, que ce soit lors d'infections primitives ou de réactivation, notamment dans les leucémies lymphoïde chroniques. les bactéries : les données épidémiologiques concernant les bactériémies sont, bien qu'assez nombreuses, très différentes d'un pays à l'autre, voire d'une ville à l'autre au sein d'un même pays. Toutefois, il apparaît qu'à partir de la fin des années 1970, les bacilles à Gram négatif cèdent le pas aux cocci à Gram positif, notamment les staphylocoques à coagulase négative (SCN) et streptocoques viridans (SV), avec des conséquences tout aussi graves pour le patient en aplasie. Devant la multiplicité et la gravité des épisodes infectueux chez le patient en aplasie médicamenteuse, la solution consiste souvent en une prévention empirique, basée sur des statistiques de survenue. 2;5 Ces traitements anti-infectieux sont bien évidemment réadaptés dès que les résultats biologiques sont disponibles. Les micro-organismes pouvant en être responsables sont nombreux et variés d'un point de vue de résistance, ce qui explique les nombreuses tentatives de prophylaxie et les efforts des cliniciens pour évaluer un risque infectieux, 30 localiser les portes d'entrées et surtout garder en vie leurs patients. 15 2:0 2908659 8 Différents prélèvements sont donc effectués : nez, gorge, selles, urines... Les bacilles à Gram négatif ont longtemps constitué un problème dramatique chez le patient immunodéprimé. Ce problème a été partiellement réglé par l'administration de quinolones (pefloxacine, norfloxacine, 5 ciprofloxacine...). Dans le secteur stérile du Service d'Hématologie de Nantes, une décontamination digestive est préconisée afin d'éliminer la menace des BGN. Cette décontamination s'effectue grâce à l'administration de gélules composées de gentamicine, polymyxine B et de vancomycine, auxquelles est adjointe de la fungizone. Des prélèvements de selles sont réalisés régulièrement 10 afin de vérifier l'efficacité de cette mesure. Donnelly, en 1992, préconise quant à lui l'utilisation de co-trimoxazole plus colistine, bien que des effets secondaires plus importants soient mis en évidence. Jansen, en 1994, compare l'efficacité de la ciprofloxacine à un 15 cocktail composé de néomycine, de polymyxine B et d'acide nalidixique. Il conclut que la ciprofloxacine est efficace et souligne cependant le fait que les épisodes de septicémies à cocci à Gram positif sont plus nombreux. L'administration de teicoplanine peut être préférée à la vancomycine, mieux tolérée sur le plan rénal et possédant moins d'effets secondaires. En cas de 2:0 fièvre supérieure à 38,5 C, des antibiotiques sont administrés en fonction des capacités rénales et hépatiques des patients. Parmi les nombreuses tentatives de réduction des septicémies à BGN, on citera seulement les monothérapies à la ceftazidine, à l'imipéneme, meropenem vs ceftazidine, cefepime vs ceftriaxone/amikacine, diverses associations telles 25 que ceftazidine/piperacilline, ceftazidine/tobramycine, imipénème/amikacine, vancomycine/ceftazidine/amikacine, amikacine/ceftriaxone, amikacine/ceftazidime, piperacilline/tazobactam/gentamicin, amoxicilline-acide clavulanique/ciprofloxacine, piperacilline/tazobactam/vancomycine. La plupart de ces études n'ont pas mis en évidence de résultats probants, 30 le nombre de bactériémies observées n'étant jamais nul. Dans tous les cas, 2908659 9 l'antibiothérapie doit être précoce ( 5,5 Eudragit S Anion Carboxyl pH indépendant Eudragit RL Neutre Ammonium Grande perméabilité pH indépendant Insoluble dans l'eau Eudragit RS Neutre Ammonium Faible perméabilité pH indépendant Insoluble dans l'eau Eudragit NE Neutre pH indépendant Soluble dans l'eau La plupart de ces substances étant en suspension aqueuse, les formes granules (RS 100 et RL 100) sont préférées afin de pouvoir utiliser un solvant 5 organique facilement évaporable en bouche. Les essais avec le RS 100 ne se sont pas avérés concluants. De ce fait, une matrice a été développée à partir d'une base de RL 100 dont la plus grande perméabilité permet de libérer une plus grande quantité de principe actif. La perméabilité du RL 100 est indépendante du pH en milieu aqueux. 10 La mise en solution est réalisée par le mélange de 8 parties chloroforme avec une partie de granules. La solution ainsi obtenue est un liquide légèrement trouble. Les Eudragit ont la particularité de gonfler et de devenir perméables en milieu humide. C'est l'association de ces deux phénomènes qui permet la libération du principe actif. La vitesse de diffusion de ces derniers est dépendante 15 de leur solubilité en milieu aqueux, de leur taille et de l'épaisseur du film. 2908659 16 L'HEC est adjoint à cette matrice afin d'obtenir une libération plus importante et plus rapide du principe actif. C'est la capacité du polymère hydrosoluble à se dissoudre en milieu aqueux qui est recherchée et non la formation d'un gel. 5 La disparition rapide de ce polymère permet d'augmenter les surfaces de contact matrice-eau (salive), et par conséquent favorise la libération de l'antiseptique. Une suspension de particules d'HEC est donc réalisée dans la solution de RL 100. Le pH buccal peut varier de 5 à 8, n'influant pas sur la viscosité de l 0 I' HEC. Ces manipulations sont réalisées sous hotte aspirante. La concentration du principe actif dans le vernis sous forme liquide est donc de 4,3% et de 13% en poids sec. La cavité buccale, par la présence de salive constamment déglutie, a 15 nécessité la mise au point d'une simulation. Les conditions de débit salivaire et de température proche du milieu dans lequel le vernis sera immergé ont du être déterminées. L'expérience clinique montre une diminution du débit salivaire chez le patient neutropénique, aggravée par la prise de morphiniques lors des épisodes 20 de mucite surinfectée. Un débit non stimulé moyen de 0,5 ml/min a été établi. Les conditions de température de la cavité buccale ont été reproduites par immersion partielle des béchers de 10 ml dans un bain-marie à 37 C. Afin de simuler une répartition homogène du principe actif dans le volume initial, les éprouvettes ont été placées sur un agitateur magnétique. 25 Des essais de libération de DACHX en NaCl à 9g/1 ont montré une dégradation du principe actif dans des conditions de stoclage à +4 C. Une phase mobile susceptible d'être stable tout en conservant l'intégrité du DACHX a été recherchée. La salive artificielle proposée par la South Glamoran Health Authority est 30 composée d'hydroxypropyl méthylcellulose (HPMC) E4M, de NaCl, de chlorure 2908659 17 de benzalkonium et d'autres éléments tels qu'arômes et colorants. Saformulation a été simplifiée de la façon suivante : Composants Quantité HPMCE4M 130g NaCl 10 g Chlorure de benzalkonium (50/50 w/w) 2 ml Eau distillée Qsp 101 Toutefois, le produit final pose de nombreux problèmes par son importante viscosité, tant sur le plan du dosage HPLC au niveau du pipetage que 5 sur le réglage du débitmètre du simulateur. Il a donc été choisi de diluer la salive artificielle au 1/5e afin de permettre un aliquotage et un réglage de débit aisés (10 gouttes par minutes = 0,5 ml/min). Pour la méthode de dosage, une colonne Kromasil Hichrom (marque déposée) a été utilisée. 10 Le pH de la phase mobile a été ajusté à 1,8. De nombreux essais ont été réalisés afin d'obtenir une gamme linéaire et reproductible. Longueur d'onde de détection, débit d'élution et pression ont été conservés à respectivement 259 nm, 1,5 ml/min et 2100 psi. La gamme d'étalonnage a été réalisée de 10 ng à 10 yr g/ml. 15 La spectrométrie à transformée de Fourier (FT-IR) a aussi été utilisée afin de déterminer si le DACHX conservait son intégrité au sein du mélange. Dans un deuxième temps, la microspectroscopie (FT-IRM) a permis d'évaluer sa répartition et de valider l'hypothèse d'un principe actif en suspension et non en solution. 2.0 Les spectres ont été enregistrés avec un spectrophotomètre Magma-IR 550 couplé à un microscope IR-plan Advantage (Spectra-Tech, Schelton, CT ; X15 Reflachromat Lens, marques déposées) et équipé d'un détecteur mercure, cadmium et tellurite (MCT) haute sensibilité. Le positionnement des échantillons a été réalisé à l'aide d'une platine 25 motorisée sous le contrôle d'un ordinateur. 2908659 18 Les données ont été acquises avec une résolution spatiale obtenue par une ouverture de 20 x 20 yem2, permettant de minimiser les artéfacts de diffraction associés à l'utilisation d'ouvertures plus petites et d'optimiser le rapport signal/bruit. 5 Les spectres infrarouges ont été obtenus avec une résolution de 4 cm-' (distance minimale entre deux pics permettant leur séparation) et 128 interférogrammes (nombre de passages). Les spectres ont été analysés par le logiciel Omnic (marque déposée) et les cartographies réalisées avec le logiciel Atlyrs (marque déposée). Les absorptions résiduelles de l'eau et du CO2 étaient 10 automatiquement soustraites. Les spectres de chaque composant du vernis ont été obtenus par simple spectroscopie IR en pastille de KBr (300 mg KBr + 1-2 mg de produit ; pression de 15 tonnes/cm2). Les spectres de vernis ont été réalisés à partir de coupes cryostat (Jung CM 3000, Leica, marques déposées) déposées sur une lamelle de 15 fluorure de calcium (CaF2). Des cartographies ont été effectuées afin d'analyser la taille et la répartition des grains de chlorhexidine à l'intérieur de régions du vernis de 200 x 200 pm2. L'intensité du pic (probablement dû aux noyaux aromatiques) de la chlorhexidine à 1581 cm-' (situé dans une région spectrale dans laquelle les 20 autres composants ne génèrent pas de bandes) a été utilisée afin de rechercher la répartition des grains de principe actif. De plus, la Microscopie à balayage Electronique a été utilisée comme technique d'observation afin d'évaluer l'état de surface du vernis. Un aspect rugueux pourrait entraîner des blessures des muqueuses adjacentes par 25 frottements. Il apparaît en conséquence, important de s'assurer de la noniatrogénicité du produit. Son adhésion à la surface de l'émail, avec ou sans mordançage à l'acide phosphorique à 37%, peut être étudiée par observation de l'interface émail-vernis. Une parfaite adhésion est recherchée afin d'éviter tout risque de décollement, et ainsi une perte d'efficacité par diminution des surfaces 30 d'échanges salive-vernis. 2908659 19 L'indication d'avulsion dentaire peut être posée dans certains cas de maladie parodontale au stade terrninal. Les dents ainsi extraites ont été conservées dans du glutaraldéhyde, puis nettoyées mécaniquement afin d'éliminer les dépôts organiques par brossage professionnel à l'aide d'un contre- 5 angle bague verte et d'une cupule caoutchouc, avec utilisation de pâte abrasive non fluorurée Zircate Prophy Paste (marque déposée). L'émail a été séparé de la dent par fraisage afin de faciliter son observation au MEB. Deux groupes de cinq échantillons amélaires ont été constitués. l0 Dans le premier groupe, aucune préparation acide n'a été réalisée. Les échantillons du groupe 2 ont subi un mordançage à l'acide phosphorique à 37% (3M Scotchbond Etchant, 3M Dental Products, marques déposées) pendant 20 secondes, puis ont été rincés abondamment à l'eau distillée et séchés sous pression d'air. 15 Une pellicule de vernis a été ajoutée au pinceau sur la surface amélaire de tous les échantillons et séchée également sous pression d'air jusqu'à évaporation du solvant (15 secondes environ). Les échantillons ainsi préparés ont pu être observés en MEB afin d'examiner leur état de surface. 20 Des fractures ont été ensuite réalisées afin d'observer la jonction émail- vernis. Une vérification de l'activité biologique de la chlorhexidine, et ce après sa libération de la matrice, a été réalisée. Pour cela, le principe actif à tester a été déposé dans un puit calibré en 25 milieu gélosé préalablement ensemencé par une souche bactérienne de référence (dont la sensibilité au produit-test est connue et importante), ce qui donne lieu à une zone circulaire périphérique dépourvue de toute croissance bactérienne : c'est la zone d'efficacité du principe actif, celui-ci ayant diffusé dans le milieu gélosé avec un gradient de concentration décroissant. 2908659 20 La multiplication bactérienne et par conséquent la présence de colonies signifie une absence d'activité du produit-test. Parallèlement, le produit est dosé par CLHP afin de connaître sa quantité totale présente dans l'aliquote. Le diamètre d'inhibition est comparé à une 5 gamme réalisée dans les mêmes conditions expérimentales et donne une concentration efficace. L'incertitude de la méthode étant importante (près de 20%), 20 dosages ont été réalisés grâce à deux souches de référence, montrant qu'au moins 90% de la chlorhexidine libérée restait active, et par conséquent efficace. 10 Staphylococcus aureus (SA) (ATCC 29213) et Micrococcus luteus (MCL) (ATCC 9341) ont été les deux souches de référence utilisées. 3 ml d'une suspension SA (0,1 McFarland, marque déposée) ou 4,5 ml de MCL (0,2 McFarland ) ont été incorporés à 120 ml de milieu gélosé (Antibiotic Medium n 2, Difco, marque déposée) chauffé à 50 C. 15 Le gel a ensuite été versé sur un plateau stérile en verre. Après solidification du gel grâce au retour à température ambiante, des puits de 10 mm de diamètre ont été réalisés par un emporte-pièce calibré. Les points de gamme et les aliquotes des suspensions ayant servis au dosage CLHP ont été placés de façon aléatoire dans ces puits. 20 Un échantillon constitué de 120 pl de salive artificielle seule a servi de témoin négatif, vérifiant l'absence d'effet antiseptique de cette solution. Le volume des aliquotes a été déterminé de façon à ce que 90% de la concentration dosée par chromatographie phase liquide se situe dans la gamme d'étalonnage (0 à 10 yrg/ml). 25 Les points de gamme ont été réalisés par dilution en cascade d'une solution-mère à lmg/ml. Les plaques ainsi préparées ont été laissées deux heures à température ambiante puis incubées à 37 C pendant 24 heures. Chaque point, gamme et échantillons, ont été testés en trois exemplaires. Les diamètres d'inhibition on pu ensuite être mesurés au pied à coulisse. 30 Les résultats obtenus sont les suivants. 2908659 21 Afin de faciliter l'utilisation de la FT-IRM et de la FT-IR, nous avons observé des coupes cryostat de 5 p m en lumière polarisée. Les grains de chlorhexidine apparaissent isolés et réfringents, au sein d'un tapis de polymère méthacrylé. Cette observation a permis de cibler le principe actif avec ses 5 liaisons caractéristiques et de réduire les interférences liées à l'importante réponse dans le spectre infra-rouge de l Eudragit RL 100. Ces coupes ont été ensuite utilisées pour la cartographie FT-IRM (figure 1). Des cartes en deux et trois dimensions du vernis ont été réalisées, ceci en isolant les grains de chlorexidine dans des zones de 200 sur 200 yim et en ciblant 10 l'analyse sur le pic à 1581 cm-'. Les grains de DACHX apparaissent dans les zones R au sein du mélange. La figure 1 montre des grains répartis dans les trois dimensions de l'espace, ce qui prouve l'hypothèse de suspension et non de solution. De même, la répartition verticale du principe actif permet de penser que sa libération hors 15 du vernis s'effectuera de façon prolongée graduelle et élimine l'hypothèse d'une libération massive et concentrée dans le temps. L'analyse FT-IR des composants montre que : (en référence à la figure 2) l'eau contenue dans l'HEC apparaît nettement à 3400 et 1660 cm-'. Les hydroxyles ne sont 20 cependant pas dissociables du pic à 3400 cm-'. Les groupements CH et CH2 forment un massif visible vers 2880, 1380 et 1300 cm-' alors que l'éther aliphatique (-CH2-O-CH2-) n'intervient que vers 1150 cm-'. Les vibrations du noyau pyrane, caractéristique de la cellulose, est visible à 1490 et 25 910 cm-', ainsi que la liaison glycosidique (-C-O-C-) à 880 cm-'. On notera l'absence d'absorbance dans la zone 1500-1650 cm-'. (en référence à la figure 3), le spectre de la chlorhexidine présente deux zones intéressantes : d'une part le large massif 30 entre 3500 et 2900 cm-' dû aux groupements amines (R-NH2 et 2908659 22 RI-NH-R2), et d'autre part les pics situés entre 1650 et 1400 cm-' relatifs aux double-liaisons et à certaines vibrations des aromatiques. L'une des particularités chimiques de la chlorhexidine est la présence de noyaux aromatiques situés en 5 bout de chaîne. Chacun de ces noyaux est mono-substitué par un atome de chlore. Ces aromatiques halogénés sont visibles à 1500 cm'. Nous pouvons également observer un pic à 1581 cm-', relatif à la vibration des double-liaisons carbone. Les vibrations des groupements CH2 forment un pic net à 1430 l0 cm"' alors que la liaison C=N intervient vers 1670 cm-'. (en référence à la figure 4), le spectre de l Eudragit RL 100 présente un large massif entre 3000 et 2950 cm' dû à la présence de nombreux groupements méthyl. Ces mêmes groupements apparaissent plus discrètement à 1385, 1450 et 15 1475 cm-'. De plus, on remarque le pic caractéristique du groupement carbonyle de la fonction ester (C=0) vers 1730 cm-'. La fonction ester dans sa totalité (RI-COO-R2) est visible à 1150, 1190, et 1240 û 1270 cm-'. On note, comme c'est le cas de l'hydroxyéthylcellulose, une zone 20 comprise entre 1500 et 1700 cm-' dépourvue de pics d'absorbance. L'analyse d'un film de vernis déposé sur une pastille de KBr ne montre que les pics caractéristiques de 1 Eudragit RL 100 . Ce résultat est sans doute lié aux faibles proportions des autres composés ou à leur enrobage au sein du polymère méthacrylé. 25 En superposant artificiellement les spectres des composants, un spectre théorique du mélange (figure 5) est obtenu. Les différences quantitatives apparaissant entre les deux spectres découlent du fait que le spectre fictif de l'addition des produits a été calculé sur la base de concentrations égales de DACHX et d Eudragit RL 100 , l'HEC 2908659 23 étant en très faibles concentrations et n'intervenant que pour faire varier la vitesse de libération. En réalité, la concentration du principe actif n'est que de 12,5 % en poids sec. Par ce biais, il a pu être déterminé que la longueur d'ondes de 1581cm-', 5 correspond aux vibrations des doubles-liaisons carbone des aromatiques du DACHX, était la seule exploitable afin de différencier le principe actif au sein du mélange. L'analyse des coupes réalisées au cryostat, ciblée sur un grain de DACHX, montre que l'intégrité chimique des différents composants est 10 préservée à l'intérieur du mélange. On note également l'absence de pics évoquant la création de nouvelles liaisons entre les composants, ce qui permet d'éliminer toute hypothèse d'altération du principe actif. Les essais ont également porté sur la cinétique de libération. Pour cela, il 15 a été procédé à l'application au pinceau de vernis prêt à l'emploi sur les deux faces de cinq lamelles de verre calibrées destinées à l'observation en microscopie optique des états-frais. Ces lamelles représentent une surface d'échange disponible de 308 mm2/lamelle, soit 3,08 cm2. La quantité de vernis déposée, mesurée par pesée, 20 donne une valeur moyenne de 21,42 rng avec un écart-type de 1,79. Le test du x2 montre que la méthode d'application du vernis est reproductible (p REVENDICATIONS 1. Vernis dentaire comprenant au moins un antiseptique, caractérisé en ce que ledit ou lesdits antiseptiques sont en suspension dans une matrice réalisée à base d'au moins un polymère méthacrylique. 2. Vernis dentaire selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite matrice comprend au moins un polymère hydrosoluble. 3. Vernis dentaire selon la revendication 2, caractérisé en ce que ledit polymère hydrosoluble est de l'hydroxyéthyl cellulose. 4. Vernis dentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ladite matrice est réalisée à base d'un copolymerisat d'esters neutres. 5. Vernis dentaire selon la revendication 4, caractérisé en ce que lesdits esters sont des esters d'acide méthacrylique et de diméthylaminoéthylméthacrylate. 6. Vernis dentaire selon les revendications 2 et 4, caractérisé en ce que la matrice comprend, en poids sec, environ 70 % dudit copolymerisat d'esters neutres et environ 30 % dudit polymère hydrosoluble. 7. Vernis dentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que ledit antiseptique comprend de la chlorexidine. 8. Vernis dentaire selon la revendication 7, caractérisé en ce que ledit antiseptique est un diacétate de chlorexidine. 9. Vernis dentaire caractérisé en ce qu'il antiseptiques. 10. Vernis dentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il est obtenu à l'aide d'un solvant, ledit solvant étant du chloroforme. 26 selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, comprend, en poids sec, environ 13% dudit ou desdits