Brevet FR2906144A1 — publié le 20080328

Page- 2 - La présente invention a pour objet une nouvelle composition chimique, les préparations qui la contiennent et ses applications dans le traitement des désordres métaboliques et inflammatoires des cellules de l'épiderme Dans les domaines de la cosmétologie et de la dermatologique, de plus en plus d'efforts ont été engagés pour permettre de préserver les cellules constituant le derme ,et l'épiderme afin de permettre à la peau de remplir ses fonctions naturelles que sont : le maintien de l'hydratation du corps humain, le milieu d'échange avec l'extérieur, ses fonctions d'élimination par la sudation et son rôle primaire de protection contre les infections bactériennes. Ces recherches sont motivées par deux phénomènes fondamentaux que sont l'allongement de la durée moyenne de vie et l'accumulation de plus en plus importante de stress extérieurs. L'accumulation de stress extérieurs tels que la pollution, les rayons solaires, le tabagisme, de même que les stress psychologiques sont autant de facteurs qui conduisent à un vieillissement prématuré de la peau. On distingue, en général, quatre grandes catégories d'agression (stress exogènes) qui sont : les radiations lumineuses (UVA et UVB), les agressions chimiques (détergents, pollution), les agressions mécaniques (frottements chocs) et les agressions thermiques (air conditionné, brusques variations de température). Les réactions inflammatoires provoquées par les différents types de stress rencontrés au cours de la vie quotidienne conduisent toutes à un vieillissement prématuré des cellules 25 exposées et donc à une mort cellulaire. En effet, les stress exogènes vont entraîner une production de médiateurs intracellulaires de l'inflammation, lesquelles substances, si elles sont produites en trop forte quantité, deviennent toxiques pour la cellule qui les a synthétisés. La cellule va donc chercher à les excréter dans le milieu extracellulaire et ces médiateurs, produits à l'origine en tant que 30 système de défense d'une cellule, deviennent alors toxiques pour des cellules saines : c'est le processus de propagation de l'effet inflammatoire. Ainsi, il apparaît clairement que la stratégie thérapeutique idéale du traitement d'un effet inflammatoire est d'agir à la fois au niveau des cellules agressées mais aussi de bloquer les médiateurs de l'inflammation afin qu'ils n'aillent pas contaminer des cellules saines. 2906144 Page- 3 - L'objet de la présente invention est une nouvelle composition permettant de bloquer les réactions inflammatoires intracellulaires et d'empêcher la propagation dans le milieu extracellulaire des médiateurs de l'inflammation en empêchant ainsi la contamination des 5 cellules saines. La demanderesse a maintenant trouvé de manière surprenante une nouvelle composition dénommée DRC-4G (Damage Repairing Complex 4G) agissant à la fois sur les processus intracellulaires des réactions inflammatoires mais aussi en bloquant la progression de ces réactions vers les autres cellules du tissu conjonctif. 10 La présente invention a pour objet une nouvelle composition contenant dans des proportions bien définies un mélange d'acides gras polyinsaturés en o)-3 (DHA : Acide docosahexanoique et EPA : Acide Eicosapentanoique) ; de Polyuronides (hétéropolysaccharides extraits de Prunus Amygdalus var dulcis, de Limun Usitatissimum et d'Althea officinalis) ; de Polysaccharides ([3- glucans extraits de Saccharomyces 15 cerevisiae) et d'a- tocophérol sous forme d'acétate de tocophéryl. La demanderesse a également trouvé de manière surprenante que les effets observés étaient très largement supérieurs aux effets obtenus avec chacun des constituants pris séparément prouvant ainsi une synergie positive des effets. Les épidermes ayant subi des stress exogènes développent une réaction de type 20 inflammatoire avec libération de médiateurs de l'inflammation tels que les cytokines, histamine, PGE2 (prostaglandine E2), LDH (lactate DeHydrogénase), Il l a (Interleukine 1-a.) lesquels se propagent à d'autres cellules en créant une véritable réaction en chaîne laquelle s'accompagne d'une vasodilatation réactionnelle et donc un oedème par exfiltration de plasma au travers des parois des vaisseaux sanguins. La composition du DRC-4G, grâce à ses constituants, limite les réactions inflammatoires tout en renforçant l'architecture cellulaire et en établissant un réseau protecteur autour des cellules. Enfin le DRC-4G favorise la communication cellulaire et stimule le métabolisme intracellulaire (biosynthèses cellulaires, activation des défenses cutanées et régénération de la peau). Enfin dans sa composition, le DRC4G contient des antioxydants puissants qui s'associent entre eux de manière synergique (potentialisation) afin de lutter efficacement contre les radicaux libres créés lors de stress de type oxydatifs, lesquels radicaux libres, entités 2906144 Page- 4 - chimiques fugaces et extrêmement réactives vont se fixer par liaison covalente sur des protéines, et particulièrement le collagène, pour entraîner une dénaturation et une destruction des dites protéines : le DRC-4G possède donc une activité anti-glycation. 5 Le DRC-4G, objet de la présente invention trouve donc ses applications dans des situations pathologiques impliquant un processus inflammatoire consécutif à des stress oxydatifs exogènes donc dans des désordres dermatologiques tels que les brûlures, les expositions prolongées au soleil, plus généralement tout type de stress aboutissant à la création d'une réaction inflammatoire locale pouvant à terme et après répétition quotidienne aboutir à une 10 destruction des tissus. Ainsi l'objet de la présente invention correctement formulé selon les pratiques de l'Homme de l'Art peut trouver ses applications données à titre indicatif et non limitatif, dans le traitement des brûlures légères et superficielles, l'amélioration des processus de cicatrisation, l'atténuation des rides, ... La présente invention concerne également les préparations cosmétiques et 15 pharmaceutiques contenant le DRC-4G seul ou formulé de façon connue avec des excipients notoires permettant une application sur le derme en l'absence de toute réaction de type allergique. Ainsi les préparations également objet de l'invention peuvent également contenir de façon indicative mais non limitative des excipients tels que les agents complexants, les gélifiants, les solvants, les parfums, les charges, les agents bactéricides, 20 les absorbeurs d'odeurs, les matières colorantes ou matifiantes. Les exemples ci après de composition selon l'invention sont donnés à titre d'illustration et sans caractère limitatif. Les quantités sont données en poids par rapport au poids total de la solution ou de la suspension sauf mention contraire. 25 Exemple 1 : Composition selon l'invention : Les pourcentages en masse des solutions ou suspensions de la composition du DRC-4G composition sont donnés à titre indicatif et sans caractère limitatif . Acides gras polyinsaturés en w-3 30 DHA : Acide docosahexanoique : 0,018% EPA : Acide Eicosapentanoique) : 0,027% Polyuronides hétéropolysaccharides Extrait de Prunus Amygdalus var. dulcis : 0,007% Extrait de Linum Usitatissimum : 0,067% 2906144 Page- 5 - Extrait d'Althea officinalis : 0,007% Polysaccharides ((3- glucans extraits de Saccharomyces cerevisiae) : 0, 05% a- tocophérol (sous forme d'acétate de tocophéryl) :0,002% 5 Exemple 2 : Effet de la solution de DRC-4G sur la protection cellulaire et sur la régénération cellulaire sur un modèle de peau humaine reconstituée ex vivo en culture. (Modèle LES : Living Skin Equivalent de TESTSKIN ORGANOGENESISUSA). 10 Méthodologie : La peau vivante est présentée sous la forme d'un kit prêt à l'emploi composé d'une couche dermique sur laquelle sont apposés des kératinocytes qui vont générer un épiderme multicouches différencié. La couche dermique est obtenue préalablement par l'interaction entre les fibroblastes et des fibres de collagène formées après coulage initial d'une matrice cellulaire de peau humaine (350.000 à 500.000 15 fibroblastes par matrice). La peau ainsi reconstituée répond de façon complexe et sensible à l'irradiation UV, aux produits chimiques appliqués, aux agressions ou aux stimulants : synthèse de collagène, synthèse d'interleukines et de prostaglandines d'acide hyaluronique, régulation de la respiration mitochondriale. 20 La viabilité cellulaire se mesure par la respiration mitochondriale grâce au réactif MTT (conversion de la couleur jaune en couleur bleue par l'enzyme déhydrogénase dont l'activité dépend directement de cellules vivantes). L'efficacité de la solution de DRC-4G telle que définie dans l'exemple 1 a été testée sur une culture de peau humaine reconstituée comparativement à un placebo et aux autres 25 substances de la composition pris isolément. Deux expériences ont été réalisées selon ce modèle . Dans une première étude, après avoir appliqué les substances à étudier, on mesure leur pouvoir protecteur respectif par rapport à une agression chimique constituée par une application de triéthanolamine à 30%. Dans une deuxième étude, après avoir appliqué préalablement une solution de triéthanolamine à 30 30%, qui entraîne une mortalité importante des cellules, on applique les solutions à étudier et on mesure leur pouvoir régénérant cellulaire. Ainsi, dans la première étude, on peut mettre en évidence le pouvoir protecteur de la solution de DRC-4G et dans la seconde son effet sur le blocage de la propagation des effets inflammatoires. 2906144 Page- 6 - Les solutions testées dans ce protocole expérimental ont été les suivantes : Placebo : eau Témoin : solution de triéthanolamine à 30% sans addition d'agents protecteurs Sol 1 :DRC-4G : 3% 5 Sol 2 : Solution d'acide polyinsaturés : EPA : 2% et DHA : 2% Sol 3 : Acétate de tocophéryl : 2% Sol 4 : Polysaccharides extraits de Saccharomyces cerevisiae : 2% Sol 5 : Polyuronides hétéropolysaccharides Extrait de Prunus Amygdalus var. dulcis 1% 10 Extrait de Linum Usitatissimum 1% Extrait d'Althea officinalis : 1% Après un test de viabilité des cellules ainsi mises en culture, les deux études ont été conduites selon le protocole suivant : Etude de protection : les solutions a tester sont déposées en premier lieu sur la peau 15 reconstituée et après cinq minutes de pénétration, la solution d'agent agressif (triéthanolamine à 30 %) est appliquée. Les cultures sont alors placées en étuve pendant 2 heures à 37 C et après rinçage du milieu de survie, le réactif MTT (bromure de (3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,-diphényltetrazolium ) est appliqué. Les cultures sont alors placées en étuve pendant 3 heures à 37 C puis transférées dans un bain d'isopropanol acidifié. 20 Après 24 heures à température ambiante, les résultats de la réaction colorée sont lus au spectrophotomètre à 570nm. Etude de régénération : Inversement par rapport à la précédente expérience, la solution de triéthanolamine à 30% est appliquée préalablement pendant 30 minutes à 37 C en étuve sur la peau LSE puis 25 rincée plusieurs fois à l'eau. Après remise en culture dans le milieu de survie, les solutions à étudier sont ajoutées et les échantillons ont placées en étuve à 37 C pendant 2 heures. Après rinçage du milieu de culture, application du réactif MTT. Les cultures sont alors placées en étuve pendant 3 heures à 37 C puis transférées dans un bain d'isopropanol acidifié. Après 24 heures à température ambiante, les résultats de la réaction colorée sont 30 lus au spectrophotomètre à 570nm. Résultats : Les résultats sont exprimés en pourcentage de survie cellulaire c'est à dire par le nombre de cellules survivantes. Test de Protection : Placebo : 100% 2906144 Page- 7 - Témoin négatif : 47% Sol 1 DRC-4G : 82% Sol 2 : Solution d'acides polyinsaturés :53% Sol 3 : Acétate de tocophéryl :49% 5 Sol 4 : Polysaccharides extraits de Saccharomyces cerevisiae : 63% Sol 5 : Polyuronides hétéropolysaccharides :56% Test de régénération : Placebo : 100% 10 Témoin négatif solution de triéthanolamine 30% : 0% Sol 1 DRC-4G : 49% Sol 2 : Solution d'acide polyinsaturés :8% Sol 3 : Acétate de tocophéryl :12% Sol 4 : Polysaccharides extraits de Saccharomyces cerevisiae : 5% 15 Sol 5 : Polyuronides hétéropolysaccharides :0% Les résultats obtenus dans les deux tests montrent que les résultats obtenus avec la solution de DRC-4G sont largement supérieurs aux résultats obtenus avec les constituants pris séparément et testés dans des conditions strictement identiques et à des concentrations 20 comparables. Cette potentialisation des effets est due à une complémentarité des mécanismes d'action mis en jeu de chacune des substances utilisées. En effet, les Polysaccharides extraits de saccharomyces cerevisiae ainsi que les polyuronides agissent plus sur la protection cellulaire directe tandis que les acides 25 polyinsaturés sont des substances anti inflammatoires agissant au niveau des prostaglandines (cascade arachidonique) par un mécanisme d'action compétitif vis à vis de la cyclooxygénase. Exemple 3 : Exemple de formulation pharmaceutique ou cosmétique de DRC-4G. 30 Cet exemple est donné à titre indicatif et sans caractère limitatif. Les pourcentages de la composition sont donnés en poids par rapport au poids total. Principe actif : DRC-4G : 5,60 % tel que défini dans l'exemple 1 2906144 Page- 8 - Excipients sans effets notoires (en % de masse) Eau purifiée : 54,34 Butylène glycol dicarprylate/dicarpate : 5,48 5 Butyrospermum Parkii (Beurre de Karité) :5,00 Petrolatum : 4,37 Acide stéarique : 3,5 Esters cétyliques : 3,5 Propylène glycol dicaprylate/dicarpate : 3,50 10 Hexyldecyl stéarate : 3,00 Isostéaryl neopentanoate : 2,4 Dimethicone : 1,2 Phényl diméthicone :1,2 Stéaryl alcohol : 1,00 15 Glyceryl stéarate : 1,00 PEG 100 stéarate : 1,00 Cetyl Alcohol : 1,00 Triethanolamine : 0,9 Phenoxyethanol : 0,56 20 Xylitol : 0,45 Parfum : 0,3 Methylparaben : 0,195 Acrylates/C 10-30 : 0, 18 Butylparaben : 0,095 25 Insaponifiables de beurre de Karité : 0,067 Ethylparaben : 0,042 Laureth -3 : 0,03 Propylparaben : 0,021 Isobutylparaben : 0,021 30 Alcool dénaturé : 0,018 Sodium hyaluronate : 0,01 Zea Mais Oil Insaponifiables : 0,002 Xanthan gum :0,0005 Yeast Extract /FAEX : 0,0005 REVENDICATIONS 1- Composition chimique caractérisée en ce qu'elle contient les constituants dans les proportions suivantes : des Acides gras o9-3 polyinsaturés (DHA : 0,018% et EPA : 10 0,027%) d'un mélange de Polyuronides hétéropolysaccharides extraits de Prunus Amygdalus var. dulcis : 0,007%, de Linum Usitatissimum 0,067% et d'Althea officinalis :0,007% ; des Polysaccharides extraits de Saccharomyces cerevisiae : 0, 05% et d'a- tocophérol sous forme d'acétate de tocophéryl : 0,002%. 15 2- Formulation pharmaceutique et cosmétique caractérisée en ce qu'elle contient la composition chimique selon la revendication 1 en association avec des excipients pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptables 3- Utilisation de la composition chimique selon la revendication 1 pour la fabrication d'une 20 formulation pharmaceutique et cosmétique pour le traitement préventif et curatif en particulier des désordres d'origine inflammatoire des cellules de l'épiderme.