Brevet FR2888506A1 — publié le 20070119

La présente invention est relative à l'utilisation de la 4-(3,4-dichloro- phényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine ou de l'un de ses énantiomères pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées au traitement du cancer, ainsi qu'au traitement et à la prévention des métastases. Le nombre annuel de nouveaux cas de cancers a considérablement augmenté au cours des vingt dernières années. Le traitement des cancers est donc de fait un véritable problème de santé publique. Quel que soit le type de cancer, un traitement par chimiothérapie est généralement préconisé, ne serait-ce qu'en traitement adjuvant. Il existe donc un besoin permanent de développer de nouvelles molécules pour la chimiothérapie. Les inventeurs ont étudié la 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalèn-1-ylamine et ses énantiomères, et ont montré que ces composés possèdent une activité cytotoxique spécifique des cellules tumorales, et qu'ils peuvent être utilisés dans la prévention ou le traitement des cancers, et notamment le cancer du sein. La présente invention concerne donc l'utilisation de la 4-(3,4-dichlorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine ou d'un de ses énantiomères choisi parmi ((1S,4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine, (1S,4R) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine, (1 R,4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine, et (1 R,4R) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3, 4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine), pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement du cancer, ainsi qu'au traitement et à la prévention des métastases Par 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine , on entend le mélange racémique des quatre susdits énantiomères. Par traitement du cancer ou des métastases, on entend selon la présente invention essentiellement la capacité pour un composé de détruire sélectivement les cellules tumorales sans atteindre sensiblement les cellules saines, étant entendu que cette sélectivité peut être variable en fonction de la condition du patient et du type de cancer traité. Comme on le constatera dans les exemples ci-après, les composés selon la présente invention présentent une remarquable sélectivité et surtout une très grande capacité de destruction des cellules tumorales, en particulier les résultats se sont révélés particulièrement impressionnants sur des cellules de type leucémique et sur des cellules de cancer du sein. Selon la présente invention, ledit cancer est, ou lesdites métastases sont issues d'un cancer choisi dans le groupe constitué par le cancer de la prostate, les ostéosarcomes, le cancer du poumon, le cancer du poumon non à petites cellules, le cancer du sein, le cancer de l'endomètre ou le cancer du côlon, la leucémie chronique ou aiguë, les tumeurs solides de l'enfant, les lymphomes lymphocitaires, le cancer du pancréas, le cancer de la peau, le mélanome cutané ou intraoculaire, le cancer de la tête et du cou, le cancer de l'utérus, le cancer de l'ovaire, les tumeurs gynécologiques, la maladie de Hodgkin, le cancer des os, le cancer du rectum, le cancer de la région anale, le cancer de l'estomac, le cancer de l'oesophage, le cancer de l'intestin grêle, le cancer du système endocrinien, les sarcomes des parties molles, le cancer de l'urètre, le cancer du pénis, le cancer de la vessie, le cancer du rein, le cancer de l'uretère, les tumeurs malignes pédiatriques, et les tumeurs du système nerveux central. De manière préférée, ledit cancer est, ou lesdites métastases sont issues d'un cancer du sein. D'une autre manière préférée, ledit cancer est une leucémie. En outre, les inventeurs ont montré que la 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3, 4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine ou l'un de ses énantiomères, administré(e) en combinaison avec au moins un alcaloïde, préférentiellement un alcaloïde de vinca, par exemple la vincristine ou la vinblastine, présente une synergie de l'activité cytotoxique spécifique à l'encontre des cellules tumorales. Un autre aspect de l'invention concerne donc l'utilisation de la 4-(3,4dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine ou de l'un de ses énantiomères et d'au moins un alcaloïde pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement du cancer, ainsi qu'au traitement et à la prévention des métastases. De manière préférée, l'alcaloïde est un alcaloïde de vinca. De manière plus préférée, l'alcaloïde de vinca est choisi dans le groupe constitué par: la vinblastine, la vincristine, la vindésine, et la vinorelbine, de préférence la vincristine et/ou la vinblastine. Par alcaloïde de vinca on entend désigner selon la présente invention les alcaloïdes de la pervenche, Vinca rosea, et leurs dérivés obtenus par modification chimique. Ils ont pour cible la tubuline du fuseau achromatique de la mitose dont ils inhibent la polymérisation. Cette tubuline constituant aussi les fibres nerveuses, les alcaloïdes de vinca ont une toxicité nerveuse, surtout sensitive, et induisent une tendance dépressive. Un autre aspect de l'invention concerne des produits comprenant de la 4(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-l-ylamine ou l'un de ses énantiomères et au moins un alcaloïde, en tant que produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie anticancéreuse. De manière préférée, l'alcaloïde choisi est un alcaloïde de vinca. De manière plus préférée, l'alcaloïde de vinca est choisi dans le groupe constitué par: la vinblastine, la vincristine, la vindésine, et la vinorelbine, de préférence la vincristine et/ou la vinblastine. Les compositions pharmaceutiques et/ou les produits de combinaison selon la présente invention peuvent être administrés par voie orale, intraveineuse, entérale, parentérale, intramusculaire, intranasale, souscutanée ou topique. De façon générale, on préférera utiliser les voies injectables, notamment pour le traitement des tumeurs. Les dosages journaliers devront tenir compte de l'état du malade mais également du cancer traité, de son stade et de sa progression. Les exemples ci-dessous ne sont mentionnés qu'à titre illustratif et ne peuvent pas être considérés comme limitant l'enseignement de la présente description. LEGENDE DES FIGURES ET DU TABLEAU: Figure 1: détermination de CI 50 pour la (1S, 4S) 4-(3,4-dichlorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine sur les cellules MDA-MB231 Figure 2: détermination de CI 50 pour la (1S, 4S) 4-(3,4-dichlorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine sur les cellules U937 Figure 3: détermination de la synergie entre la (1S, 4S) 4(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine combinée avec la vincristine ou la vinblastine Tableau 1: détermination de CI50 pour la (1S, 4R) 4-(3,4-dichlorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-l- ylamine et pour la 4-(3,4-dichloro- phényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn- 1-ylamine sur les cellules MDA-MB231 et U937. EXEMPLES: Exemple 1: Détermination de la CI 50 (Concentration d'inhibition nécessaire pour réduire la croissance cellulaire in vitro de 50 %) de la (1 S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-l-ylamine sur des cellules de type leucémiques U937 et des cellules de cancer du sein MDA-MB231. Des cellules de type leucémique U937 et des cellules de cancer du sein MDA-MB231 sont traitées pendant une période de 6 jours avec différentes concentrations de (Sl, S4) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalèn-1-ylamine. La viabilité des cellules en culture après traitement est basée sur la quantification du niveau d'ATP. La quantité d'ATP est directement proportionnelle au nombre de cellules présentes dans la culture. L'ATP est quantifié avec le test d'analyse luminescente de viabilité de cellules CellTiter- G1oTM fourni par Promega. Les résultats sont tracés en courbe sigmoïde et la valeur CI 50 est calculée en utilisant l'équation suivante: Equation de Richards: Y = A/((l+B*exp (1*C*x))^(1/D)) Paramètres: A = valeur minimum de y B = facteur de gain C = facteur de décalage D = facteur de pente Données: Valeurs x = valeurs x connues de concentration de (1 S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine exprimées en Moles Valeurs y = valeurs y connues, % de survie des cellules après traitement. Méthode: Des cellules de type leucémique U937 et des cellules de cancer du sein MDA-MB231 sont implantées dans des plaques de 96 puits blanches, non transparentes (fluoronunc 96F Nunclon Delta). Les cellules U937 sont implantées à raison de l00gl/puits à une 20 concentration de 2,5 104 cellules/ml dans un milieu RPMI1640 Cambrex + 10% FBS + 1% L-Glutamine + 4011g/ml de Gentamycine. Les cellules MDA-MB231 sont implantées à raison de 100 l/puits à une concentration de 1,25 104 cellules/ml dans un milieu complet E-MEM Cambrex + 10% FBS, + 1% d'acides aminés non essentiels + 1% Napyruvate + 1% L-Glutamine + 40 g/ml de Gentamycine. La (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-lylamine a été diluée dans 1.10-2 M de DMSO puis diluée à 1.10-4 M, 5.10-5 M, 2,5. 105 M, 1,3.10-5 M, 6,3.10-6 M, 3,1.10-6 M, 1,6.10-6 M et 7,8.10-' M dans un milieu correspondant à la lignée cellulaire utilisée. Après 6 jours d'incubation, les cellules étant subconfluentes, la quantité de cellules a été déterminée par le test d'analyse luminescente de viabilité de cellules CellTiter-GloTM fourni par Promega Corporation selon les instructions du fournisseur. Les plaques ont été lues sur un lecteur Victor2 fourni par Perkin Elmer et les données ont été tracées sur la courbe sigmoïde en utilisant l'équation 5 précédemment décrite. Résultats: Les valeurs de CI 50 pour la (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine sont de 4,48.10-6M sur les cellules MDA-MB231 (Figure 1) et de 3,80.10-6 M sur les cellules U937 (Figure 2). La méthode ci-dessus a été reproduite dans le cadre d'une expérience indépendante réalisée d'une part avec la 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4tétrahydro-naphtalèn-l-ylamine et d'autre part avec la (1S,4R)-4-(3,4dichlorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-l-ylamine, sur des cellules leucémiques U937 et sur des cellules de cancer du sein MDA-MB231. Ces résultats sont résumés dans le Tableau 1 ci-dessous. Tableau 1. CI50 (1S-4R)-4-(3,4-dichloro- 4-(3,4-dichloro-phényl)-phényl)-1,2,3,4tétrahydro- 1,2,3,4-tétrahydro- naphtalèn-1-ylamine naphtalèn-1-ylamine U937 4,00 M 4,80 M MDA-MB23 1 6,00 M 6,20 M Ces résultats montrent que le mélange racémique et les énantiomères (1S, 4S) et (1S, 4R) possèdent des activités antitumorales équivalentes dont on peut déduire que chacun des énantiomères de la 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4tétrahydro-naphtalèn-l-ylamine possède une activité antitumorale comparable. Exemple 2: quantification de la synergie de la (1S, 4S) 4-(3,4-dichlorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-l-ylamine combinée avec la vincristine et de la synergie de la (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2, 3,4-tétrahydro-naphtalèn-l-ylamine combinée avec la vinblastine. Des cellules de type leucémique U937 et des cellules de cancer du sein MDA-MB231 ont été traitées pendant une période de 6 jours avec 36 concentrations différentes de la combinaison (1S, 4S) 4-(3,4-dichlorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine/Vincristine ou de la combinaison (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3, 4-tétrahydronaphtalèn-1-ylamine/Vinblastine. La viabilité des cellules en culture après le traitement a été basée sur la quantification de l'ATP. La quantité d'ATP est directement proportionnelle au nombre de cellules présentes en culture. L'ATP a été quantifié avec le test d'analyse luminescente de viabilité de cellules CellTiter-GIoTM fourni par Promega Corporation. Les résultats sont présentés sous forme de (i) pourcentage d'inhibition, (ii) excédent par rapport à la valeur la plus élevée d'un agent seul (HSA) et (iii) excédent par rapport à l'additivité Bliss . Le pourcentage d'inhibition présente l'inhibition de la croissance avec 36 concentrations différentes de la combinaison de la (1S, 4S) 4-(3,4dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine avec la vincristine ou avec la vinblastine comparée à la culture non traitée. Dans la colonne de gauche, le pourcentage d'inhibition de la vincristine ou de la vinblastine seule est indiquée, et dans la rangée du bas, le pourcentage d'inhibition de la (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine seule est donnée. (i) 25 (ii) L'excès par rapport à la valeur la plus élevée d'un seul agent actif présente l'augmentation de l'inhibition produite par la combinaison des deux produits par rapport à leur inhibition quand ils sont utilisés comme seul agent actif à la même concentration que dans la combinaison. (iii) Pour différencier l'addition des effets, de la synergie, le pourcentage d'inhibition est exprimé comme un excès par rapport à l'additivité Bliss . Le modèle Bliss prédit une réponse combinée C pour deux agents actifs ayant un effet donné A et B selon la formule: C = A + B - AB avec A et B exprimés en fraction entre 0 et 1. Méthode: quantification de la synergie. Des cellules de type leucémique U937 et des cellules de cancer du sein 15 MDA-MB231 sont implantées dans des plaques de 96 puits blanches, non transparentes (fluoronunc 96F Nunclon Delta). Les cellules U937 sont implantées à raison de l00gl/puits à une concentration de 2,5 104 cellules/ml dans un milieu RPMI1640 Cambrex + 10% FBS + 1% L-Glutamine + 40 g/ml de Gentamycine. Les cellules MDA-MB231 sont implantées à raison de 100gl/puits à une concentration de 1,25 104 cellules/ml dans un milieu complet E-MEM Cambrex + 10% FBS, + 1% d'acides aminés non essentiels + 1% Napyruvate + 1% L-Glutamine + 40gg/ml de Gentamycine. Tous les agents actifs ont été dilués dans 1mM de DMSO puis dilués dans un milieu correspondant à celui utilisé pour la lignée cellulaire. La vinblastine, la vincristine et la (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3, 4-tétrahydro-naphtalèn-l-ylamine ont toutes été diluées dans une solution 4XC. En diluant 50gl d'agent actif dans un volume final de 200 1, les concentrations finales suivantes ont été obtenues pour la vinblastine et la vincristine: 4000, 1000, 250, 63, et 16 picomolaire (pM) et pour la (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)- 10 1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1ylamine: 25, 13, 6,3, 3,1 et 1,6 micromolaire ( 1V1). Après 6 jours d'incubation, les cellules étant subconfluentes, la quantité de cellules a été déterminée par le test d'analyse luminescente de viabilité de cellules CellTiter-GloTM fourni par Promega selon les instructions du constructeur. Les plaques ont été lues sur un lecteur Victor2 fourni par Perkin Elmer et les données ont été relevées comme pourcentages d'inhibition pour chacune des 36 combinaisons d'agents actifs. L'excès par rapport à la valeur la plus élevée d'un seul agent actif et l'additivité Bliss ont été calculés. Résultats L'incubation des cellules MDA-MB231 avec différentes combinaisons de concentrations de (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3, 4-tétrahydro- naphtalèn-1-ylamine/ Vinblastine (Figure 3A) conduit à une synergie entre les deux agents actifs. Ceci peut être observé en utilisant 1000 pm de Vinblastine avec la (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine à une concentration comprise entre 1,6 et 3,1 M. Une nette augmentation de 54% de l'inhibition a été observée quand les deux agents actifs sont combinés ensemble. Quand la (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalèn-1-ylamine est combinée avec la Vincristine, une synergie de 23% peut être observée en utilisant 1000 pM de Vincristine avec la (1S, 4S) 4-(3,4dichlorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine à une concentration comprise entre 3,1 et 6,3 M (Figure 3B). Une synergie entre les agents actifs a été également trouvée sur les cellules U937, à l'exception du fait que la synergie a été trouvée avec une concentration 4 fois moindre de vinblastine et de vincristine. La synergie a été observée pour les deux agents actifs vincristine (Figure 3D) et vinblastine (Figure 3C) utilisés à 250 pM en combinaison avec la (1S, 4S) 4-(3,4-dichloro-phényl)- 1,2,3,4-tétrahydro-naphtalèn-1-ylamine à une concentration de 3,1 M. Cette synergie conduit à une nette augmentation de 35 et 52% d'inhibition pour respectivement la vinblastine et la vincristine, comparée à l'inhibition des agents actifs utilisés comme agent actif seul, à la concentration donnée. 11 REVENDICATIONS 1. Utilisation de la 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalèn1-ylamine ou d'un de ses énantiomères pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement du cancer, ainsi qu'au traitement et à la prévention des métastases. 2. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que la composition pharmaceutique contient en outre au moins un alcaloïde. 3. Utilisation selon la revendication 2 caractérisée en ce que l'alcaloïde est un alcaloïde de vinca. 4. Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que l'alcaloïde de vinca est choisi dans le groupe constitué par: la vinblastine, la vincristine, la vindésine, la vinorelbine, ou leurs mélanges, de préférence la vincristine et/ou la vinblastine. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ledit cancer est, ou lesdites métastases sont issues d'un cancer choisi dans le groupe constitué par le cancer de la prostate, les ostéosarcomes, le cancer du poumon, le cancer du poumon non à petites cellules, le cancer du sein, le cancer de l'endomètre ou le cancer du côlon, la leucémie chronique ou aiguë, les tumeurs solides de l'enfant, les lymphomes lymphocitaires, le cancer du pancréas, le cancer de la peau, le mélanome cutané ou intraoculaire, le cancer de la tête et du cou, le cancer de l'utérus, le cancer de l'ovaire, les tumeurs gynécologiques, la maladie de Hodgkin, le cancer des os, le cancer du rectum, le cancer de la région anale, le cancer de l'estomac, le cancer de l'oesophage, le cancer de l'intestin grêle, le cancer du système endocrinien, les sarcomes des parties molles, le cancer de l'urètre, le cancer du pénis, le cancer de la vessie, le cancer du rein, le cancer de l'uretère, les tumeurs malignes pédiatriques,et les tumeurs du système nerveux central. 6. Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que ledit cancer est le cancer du sein, ou lesdites métastases sont issues d'un cancer du sein. 7. Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que ledit cancer est une leucémie. 8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7 caractérisée en ce que la composition pharmaceutique est administrée par voie orale, intraveineuse, entérale, parentérale, intramusculaire, intranasale, souscutanée ou topique. 9. Produit comprenant de la 4-(3,4-dichloro-phényl)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalèn-1-ylamine ou au moins un de ses énantiomères et au moins un alcaloïde, en tant que produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie anti-cancéreuse. 10. Produit selon la revendication 9 caractérisés en ce que l'alcaloïde est un alcaloïde de vinca. 11. Produit selon la revendication 10 caractérisés en ce que l'alcaloïde de vinca est choisi dans le groupe constitué par: la vinblastine, la vincristine, la vindésine, la vinorelbine, ou leurs mélanges, de préférence la vincristine et/ou la vinblastine.