Brevet FR2892410A1 — publié le 20070427

O HO OR (I) RR1 1 NOUVEAUX HYDROXY-ACIDES GRAS INSATURES ET LEUR UTILISATION DERMO COSMETOLOGIQUE La présente invention a pour objet de nouveaux hydroxy-acides gras insaturés, ainsi que leur utilisation dermocosmétologique. De nombreux hydroxy-acides gras saturés sont connus et décrits dans la littérature pour leurs propriétés biologiques et plus particulièrement pour leurs propriétés cosmétiques et pharmacologiques. Par exemple, le principal constituant lipidique de la gelée royale des abeilles est un hydroxy-acide gras insaturé, à savoir l'acide hydroxy-10-décène 2(trans)oïque (Edward E. Smissman et al., 1964. JOU. 29 3517-3520). Différents documents de l'état de la technique décrivent des procédés de préparation des hydroxy-acides gras insaturés et de leurs esters (Lee et al., 1993, J. Org. Chem., vol. 58, pages 2918- 2919; Hurd et Saunders, 1952, J. Am. Chem. Soc., vol. 74, pages 5324-5328 ; Krishnamurthy et al., 1989, Indian J. Chem. Sect. A, vol. 28, pages 288-291 ; Plettner et al., 1995, J. Chem, Ecol., vol. 21, pages 1017-1030). Plus particulièrement, la présente invention concerne des hydroxy- acides gras insaturés répondant à la formule générale (I) : O dans laquelle : . Rn représentent indépendemment les uns des autres H ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant 25 éventuellement substitué par un atome d'halogène en particulier de fluor, . RI représente H, F, Cl, Br, CF3 ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant éventuellement substitué par un atome d'halogène en particulier de fluor, HO OR (I) 2 . R représente H ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant éventuellement substitué par un atome d'halogène en particulier de fluor, et .3sn 4 cutané et de divers troubles inflammatoires de la peau. En raison de leur activité anti-radicalaire, les hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) sont également utiles dans le traitement de diverses maladies tumorales de la peau. Les hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) peuvent être préparés : par la mise en oeuvre de la réaction de Wittig Horner par la réaction d'un phosphonate de formule (III) suivante : O O R2O P R20 OR4 R~ dans laquelle : • RI est tel que défini à propos de la formule (I) ; • R2 représente un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et est de préférence un groupe éthyle ou méthyle, lesdits groupes R2 pouvant former un cycle avec les atomes d'oxygène des groupes OR2 et l'atome de phosphore adjacent, et • R4 représente un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, et est de préférence un groupe éthyle. ou, lorsque RI = H, par la mise en oeuvre de la réaction de Doebner-Knoevenagel par la réaction d'un dérivé d'acide malonique de formule R400CCH2COOR, R étant tel que défini ci-dessus à propos de la formule (I), sur un lactol de formule (II) suivante : HOC Rn25 Rn et n étant tels que définis ci-dessus, afin d'obtenir un hydroxy-ester de formule (IV) suivante : O HO OR Rn R1 dans laquelle n, R et RI sont tels que définis ci-dessus, et éventuellement, lorsque R représente un groupe R4 tel que défini ci-dessus, 10 une réaction de saponification de l'hydroxy-ester de formule (IV) susmentionnée, pour obtenir un hydroxy-acide de formule (I) correspondante. La présente invention sera illustrée dans le cadre des exemples de synthèse donnés ci-après : 15 Exemple 1 Mode opératoire pour la synthèse du DHA 1. Etape 1 : préparation de l'Oxonan-2-one 43,5g (345 mmol) de cyclooctanone sont mis en solution dans 430m1 de dichloroéthane. 170g (985 mmol) d'acide meta-chloroperbenzoïque sont 20 ensuite ajoutés. Le milieu est chauffé à 80 C pendant 48 heures. A température ambiante, 400ml d'une solution saturée Na2S2O5 et NaHCO3 (1/1 v/v) sont ajoutés. Le milieu est agité vigoureusement pendant 18h. La phase organique est séparée et mise en présence de KI et H2O pendant 6h. La phase organique est séparée et lavée par une solution saturée de Na2S2O3, 25 par une solution saturée de NaCl, puis est séchée sur MgSO4, filtrée et concentrée sous vide pour donner un produit brut de 36g. La lactone est purifiée par empâtage dans le pentane (60m1), puis par filtration du précipité acide meta-chlorobenzoïque formé à froid, m=26,6g (54%). La lactone obtenue est un composé de formule : Caractérisation : CCM : Rf = 0,3 (heptane / acétate d'éthyle 7/3) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.42-1.49 (m, 4H), 1.65-1.75 (m, 6H), 2.30 (t, 10 J=5.4Hz, 2H), 4.30 (t, J=5.7Hz, 2H). 2. Etape de réduction partielle en lactol 26,6g (187,2 mmol) de lactone sont dilués dans 210m1 de toluène, sous atmosphère d'azote. Le milieu est refroidi à -78 C et 156,4m1 (189.1 mmol) de 15 Dibal-H en solution à 20% dans le toluène sont additionnés goutte à goutte, en maintenant la température à -78 C. Le mélange est agité pendant 2h à -78 C. 200ml d'une solution saturée de sels de Rozen sont ajoutés à -78 C. Après 18h d'agitation vigoureuse à température ambiante, le mélange biphasique est filtré sur célite, puis extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont 20 lavées avec une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide pour donner un brut de 26g (dont 25% de dérivé diol, soit un rendement estimé à 72%). Le lactol, en équilibre forme ouverte, forme cyclique, est utilisé ainsi, sans purification supplémentaire. Caractérisation : 25 CCM : Rf = 0,4 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.34-1.68 (m, 10H), 2.45 (t, J=5.4Hz, 2H), 3.66 (t, J=6.6Hz, 2H), 9.78 (t, J=1.8Hz, 1H). 30 7 3. Etape 3 : Réaction de Wittig-Horner 19g (131.8 mmol) de lactol sont dilués dans 250 ml d'éthanol. 31,4m1 (158,1 mmol) de triéthylphosphonacétate sont additionnés au milieu en présence de 27,3g (197,5 mmol) de carbonate de potassium. Le milieu réactionnel est chauffé à 40 C pendant 18 heures. A température ambiante, le milieu est hydrolysé par 200ml d'eau distillée et extrait avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont lavées par une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide pour donner un produit brut de 20g. L'ester obtenu est purifié par chromatographie avec une élution heptane / acétate d'éthyle 7/3 : 15g de produit sont obtenus (53% de rendement). L'ester obtenu est un composé de formule : O HO Caractérisation : CCM : Rf = 0,4 (heptane / acétate d'éthyle 7/3) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.24-1.38 (m, 9H), 1.43-1.50 (m, 2H), 1.51-1.57 (m, 2H), 2.15-2.21 (q, 2H), 3.60-3.64 (t, 2H), 4.14-4.20 (t, 2H), 5.77-5.82 (d, 20 J=15.6Hz, 1H), 6.91.-6.98 (dt, J=15.6Hz, 1H). 4. Etape 4 : Réaction de saponification 0.60g (2.81 mmol) d'hydroxy-ester sont solubilisés dans 10 volumes de tétrahydrofurane. Lentement, 3.4m1 (6.75 mmol) d'une solution de soude 2M 25 sont additionnés. Le milieu est chauffé à 65 C pendant 3h. Une fois la réaction terminée, le milieu est hydrolysé par l'ajout d'une solution d'acide chlorhydrique 3M, jusqu'à l'obtention d'un pH = 2. Le mélange est concentré à sec et la phase aqueuse est alors extraite par de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont lavées par une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, 30 filtrées et concentrées sous vide pour donner un produit brut de 0.6g. 8 L'hydroxy-acide insaturé attendu est obtenu, sous forme d'un solide blanc, par recristallisation dans l'acétonitrile à froid, m = 0.37g (71%). L'hydroxy-acide obtenu est un composé de formule : O HO OH Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.33-1.37 (m, 6H), 1.45-1.49 (m, 2H), 1.55-1.58 (m, 2H), 2.20-2.25 (q, 2H), 3.62-3.66 (t, 2H), 5.79-5.84 (d, J=15.6Hz, 1H), 7.03-7.10 (dt, J=15.6,Hz, 1H) Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 209 (calculé 186) Point de fusion : 62.5 C +_ 1 C Exemple 2 Mode opératoire pour la synthèse du DHA a-fluoré l'acide 10-Hydroxy-dec-2-fluoro-2-enoïque : (R1=F, n=6) Seule l'étape 3 est modifiée : à partir du lactol (0.89g, 7.7mmol), la réaction de Wittig-Horner est conduite en présence de Diéthylphosphonofluoroacétate de méthyle (2.1g, 9.2mmol) et de carbonate de potassium (1.6g, 11.5mmol) dans l'éthanol (9ml) à 40 C. L'étape 4 est conduite selon le protocole précédent. Le produit obtenu après recristallisation, est sous forme d'un mélange cis/trans. L'hydroxy-acide obtenu est un composé de formule : HO OH30 Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.36-1.62 (m, 20H), 2.27-2.30 (m, 2H, forme cis), 2.50-2.58 (m, 2H, forme trans), 3.69 (m, 4H), 6.05 (dt, J=21.6Hz, 1H, forme trans) et 6.25 (dt, J=40.8Hz, 1H, forme cis). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 227 (calculé 204) Exemple 3 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 9-hydroxv-nona-2tenoïque Le protocole de synthèse du DHA est appliqué à la cycloheptanone pour conduire à l'acide 9-hydroxy-nona-2t-enoïque. Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.36-1.61 (m, 8H), 2.22-2.27 (m, 2H), 3.67 (t, J=6.3Hz, 2H), 5.84 (dt, J=15.6Hz, 1H), 7.09 (dt, J=15.6Hz, 1H). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 195 (calculé 172) Exemple 4 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 11-hvdroxy-undeca-2t-20 enoïque Le protocole de synthèse du DHA est appliqué à la cyclononanone pour conduire à l'acide 1'I-hydroxy-undeca-2t-enoïque. Caractérisation : 25 CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.33-1.61 (m, 12H), 2.20-2.28 (m, 2H), 3.66 (t, J=6.0Hz, 2H), 5.84 (dt, J=15.9Hz, 1H), 7.09 (dt, J=15.9Hz, 1H). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 223 (calculé 200) 30 10 Exemple 5 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 12-hydroxy-dodeca-2tenoïque Le protocole de synthèse du DHA est appliqué à la cyclodecanone pour conduire à l'acide 12-hydroxy-dodeca-2t-enoïque. Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.35-1.56 (m, 14H), 2.20-2.27 (m, 2H), 3.55 (t, J=6.6Hz, 2H), 5.80 (dt, J=15.6Hz, 1H), 6.96 (dt, J=15.6Hz, 1H). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 237 (calculé 214) Exemple 6 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 12-hydroxy-dodeca-2-fluoro-2t-enoïque Le protocole de synthèse du DHA fluoré en position 2 (exemple 2) est 15 appliqué à la cyclodecanone pour conduire à l'acide 12-hydroxy-dodec-2-fluoro-2-enoïque sous forme d'un mélange cis/trans. Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 20 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.34-1.56 (m, 14H), 2.24-2.27 (m, 2H forme cis) ou 2.49-2.54 (m, 2H structure trans), 3.55 (t, J=6.6Hz, 2H), 5.97(dt, J=21.9Hz, 1H structure trans) ou 6.10 (dt, J=55.2Hz, 1H, forme cis). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 255 (calculé 232) 25 Exemple 7 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 13-hydroxy-tridec-2tenoïque Le protocole de synthèse du DHA est appliqué à l'oxacyclododecan-2-one pour conduire à !l'acide 13-hydroxy-tridec-2t-enoïque. 30 11 Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.27-1.63 (m, 16H), 2.21-2.28 (m, 2H), 3.64 (t, J=3.6Hz, 2H), 5.84 (dt, J=15.6Hz, 1H), 7.09 (dt, J=15.6Hz, 1H). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 251 (calculé 228) Exemple 8 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 14-hydroxy-tetradec-2t-enoïque Le protocole de synthèse du DHA est appliqué à l'oxacyclotridecan-2-10 one pour conduire à l'acide 14-hydroxy-tetradec-2t-enoïque. Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.29-1.35 (m, 14H), 1.46-1.61 (m, 4H), 2.21-15 2.29 (m, 2H), 3.66 (t, J=6.6Hz, 2H), 5.84 (dt, J=15.6Hz, 1H), 7.09 (dt, J=15.6Hz, 1H). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 265 (calculé 242) 20 Exemple 9 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 14-hydroxy-tetradec-2-fluoro- 2-enoïque Le protocole de synthèse du DHA fluoré en position 2 (exemple 2) est appliqué à l'oxacyclotridecan-2-one pour conduire à l'acide 14-hydroxytetradec-2-fluoro-2-enoïque sous forme d'un mélange cis/trans. 25 Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.29 (m, 28H), 1.42-1.62 (m, 8H), 2.27-2.31 (m, 2H, forme cis), 2.51-2.56 (m, 2H, forme trans), 3.68 (t, J=6.6Hz, 2H), 3.70 (t, 30 J=6.6Hz, 2H), 6.04 (dt, J=21.3Hz, 1H, forme trans), 6.27 (dt, J=33.0Hz, 1H, forme cis). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 283 (calculé 260) 12 Exemple 10 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 17-hydroxy-heptadec-2t-enoïque Le protocole de synthèse du DHA est appliqué au cyclopentadecanolide pour conduire à l'acide 17-hydroxy-heptadec-2t-enoïque. Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 81.27-1.32 (m, 20H), 1.46-1.61 (m, 4H), 2.20- 2.29 (m, 2H), 3.67 (t, J=6.6Hz, 2H), 5.84 (dt, J=15.6Hz, 1H), 7.08 (dt, J=15.6Hz, 1H). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 307 (calculé 284) Exemple 11 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 17-hydroxy-heptadec-2-fluoro-2-enoïque Le protocole de synthèse du DHA fluoré en position 2 (exemple 2) est appliqué au cyclopentadecanolide pour conduire à l'acide 17-hydroxyheptadec-2-fluoro-2-enoïque sous forme d'un mélange cis/trans. Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : 8 1.27 (m, 40H), 1.45-1.62 (m, 8H), 2.24-2.32 (m, 2H, forme cis), 2.50-2.58 (m, 2H, forme trans), 3.69 (t, J=6.6Hz, 4H), 6.05 (dt, J=21.6Hz, 1H, forme trans) et 6.26 (dt, J=40.8Hz, 1H, forme cis). Spectroscopie de Masse : [M-H]" 301 (calculé 302) Point de fusion : 77 C +_ 1 C30 13 Exemple 12 Mode opératoire pour la synthèse de l'acide 18-hydroxy-octadec-2t-enoïque : (R1=H, ri=14) Le protocole de synthèse du DHA est appliqué à l'hexacyclodecanolide pour conduire à l'acide 18-hydroxy-octadec-2t-enoïque. Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : S 1.27-1.65 (m, 26H), 2.19-2.39 (m, 2H), 3.67 (t, J=6.6Hz, 2H), 5.83 (dt, J=15.6Hz, 1H), 7.09 (dt, J=15.6Hz, 1H). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 321(calculé 298) Exemple 13 : caractérisation de l'acide 16-hydroxy-hexadec-2t-enoïque Caractérisation : CCM : Rf = 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 1H RMN (300MHz, CDCI3) : S 1.27-1.32 (m, 18H), 1.46-1.61 (m, 4H), 2.21-2.28 (m, 2H), 3.66 (t, J=6.6Hz, 2H), 5.85 (dt, J=15.6Hz, 1H), 7.09 (dt, J=15.6Hz, 1H). Spectroscopie de Masse : [M-Na]+ 293 (calculé 270). Exemple de réaction de Doebner-Knovenagel à partir de l'oxacyclotridecanol 1.4g (7.0 mmol) d'oxacyclotridecanol (obtenu selon le protocole de réduction partielle en lactol) sont mis en solution, sous flux d'azote, dans 4 volumes de pyridine, en présence de 1.09g (10.5 mmol) d'acide malonique et 0.11 ml de piperidline. Le milieu réactionnel est chauffé à 80 C pendant 1h30, puis au reflux pendant 2h. A température ambiante, la solution est versée sur une solution HCI 3M (50 ml). Le solide filtré est lavé par de l'eau puis est recristallisé dans l'acétonitrile (1.2g obtenu soit 70% de rendement). 14 Les Hydroxy-acides gras insaturés selon l'invention ont fait l'objet d'un certain nombre d'expémimentations qui ont démontré leur intérêt comme principe actif dans des compositions dermatologiques et/ou cosmétiques. Etude de l'effet anti-radicalaire sur espèces actives de l'oxygène (EAO) Durant le métabolisme cellulaire normal, lors d'exposition occasionnelle de la peau à des agents stressants ou au cours de pathologies dermatologiques, des espèces oxygénées réactives encore appelées Espèces Activées de l'Oxygène (EAO) sont générées (Y. M. W. Janssen et al, 1993). Ces EAO, décrites comme des métabolites très réactifs, jouent un rôle important dans bon nombre de processus tels que l'inflammation, le vieillissement et la promotion tumorale. Les EAO sont considérées comme les seconds messagers dans la signalisation cellulaire du stress oxydatif et donc comme les médiateurs 15 précoces de l'inflammation (A. Van Der Vliet and A. Bast, 1992). Leur surproduction induit d'importants dommages au sein de la cellule. Certains constituants cellulaires sont alors les cibles majeures d'un tel stress oxydatif : les composants lipidiques de la membrane plasmique (lipoperoxydation), les protéines (dénaturation et dégradation) et le matériel 20 génétique ou ADN (mutations) peuvent être altérés. Les cellules sont capables de limiter ces dommages oxydatifs grâce à différents systèmes de défense antiradicalaire (antioxydants enzymatiques et non enzymatiques) (B. P. Yu, 1994 ; H. Steiling et al, 1999). Cependant, dans certaines conditions, les EAO sont produites en 25 quantité telle que l'activité antioxydante cellulaire est insuffisante ; ces EAO deviennent alors des facteurs inducteurs de pathologies inflammatoires et du vieillissement tissulaire (Y. Miyachi et al, 1986 ; M. Kress et al, 1995). Il existe différents agents chimiques (ex : H2O2) ou physiques (ex : UVA) capables de générer in vitro un stress oxydatif. Ainsi les EAO produites vont 30 altérer diverses cibles cellulaires (Membranes, ADN ou Protéines) dont l'altération peut-être analysée par des méthodologies biochimiques largement 15 utilisées comme le dosage des TBARS pour la lipoperoxydation lipidique, ou le dosage in vitro des EAO intracellulaires à l'aide de la sonde H2DCF-DA. Nous avons mis en place un modèle d'étude in vitro du stress oxydatif induit par H2O2 / Fer, H2O2 qui génère massivement des EAO intracellulaires par une réaction en chaîne déclenchée par l'oxydation des lipides membranaires. Cette technique est basée sur l'utilisation d'une sonde fluorescente, la 6-carboxy-2',7'-dichlorodihydro fluorescein diacetate, di (acetoxymethyl ester) (H2DCF-DA), qui, une fois qu'elle a pénétré dans la cellule, est désacétylée par les estérases intracellulaires formant alors du H2DCF. Ce produit est oxydé par les EAO intracellulaires en un composé hautement fluorescent: la 2',7'-dichlorofluorescein (DCF) (Suematsu M et al., 1996, Free Radicals Pratical Approach, Punchard ed. p83-99). Les matériel et méthodes utilisés pour le dosage in vitro des EAO intracellulaires sont indiqués ci-après. a) Outil cellulaire: Lignée cellulaire de fibroblastes murins cutanés L929. b) Matériel: - Microplaque 96 puits à fond plat - Cytofluorimètre Cytofluor Il : Réf. PERSEPTIVE BIOSYSTEMS c) Réactifs : Réactifs de culture cellulaire : - Milieu de culture Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) - Sérum de veau foetal (SVF) - Tampon phosphate PBS pH 7,4 -Trypsine EDTA (1X) Sonde fluorescente : -6-carboxy-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, di(acetoxymethyl ester) (PM. 675,43)30 16 Produits de stimulation des cellules : - Peroxyde d'Hydrogène (H2O2) 3% : Réf. GIFRER (Laboratoire Gifrer Barbezat) - Ferrous Ammonium Sulfate (Fe2+) - Ferric Ammonium Sulfate (Fe3+) d) Produits testés : Les concentrations testées sont des concentrations non cytotoxiques. La cytotoxicité a été réalisée par la méthode du rouge neutre, après incubation du produit durant 3 heures. Le produit anti-radicalaire de référence est la vitamine E ou a tocophérol (PM : 430.7) (SIGMA, réf : T-1539) La solution mère est préparée à 400mg/ml dans du DMSO et conservée à -20 C. La solution de pré-traitement est préparée extemporanément à 400pg/mI dans du milieu de culture sans SVF. Pour l'évaluation des hydroxy-acides gras insaturés, les dilutions sont préparées dans du milieu de culture extemporanément, pour une gamme de concentrations de 0.02, 0.2, 2 et 20 ng/ml. e) Protocole : Ensemencement des cellules : Les cellules de la lignée de fibroblastes L929 sont ensemencées dans des microplaques de 96 puits à fond plat dans 100pI de DMEM supplémenté de 10% de SVF, puis elles sont incubées une nuit à 37 C en atmosphère humide à 5% de CO2. Le blanc de plaque sans cellules est évalué sur 6 puits. Pré-traitement des cellules : Les dilutions des produits à tester et molécule de référence sont réalisées dans le milieux de culture sans SVF, puis déposées dans 7 puits à raison de 100pl par puits. Les cellules sont alors incubées pendant 3 heures à 37 C en atmosphère humide à 5% de CO2. Les cellules. Témoin (fluorescence naturelle des cellules), Contrôle (production basale de EAO) et Stimulées (production de EAO après traitement oxydatif) sont recouvertes avec 100pl de DMEM. Les cellules Contrôle sont incubées avec la sonde mais ne sont ni prétraitées ni traitées. Les cellules Stimulées sont incubées avec la sonde et sont traitées mais pas prétraitées. Les cellules Témoin ne sont ni pré-traitées, ni incubées avec la sonde, ni traitées. Incubation des cellules avec la sonde et stress oxydatif : Les cellules sont rincées au PBS 1X à raison de 100p1 par puits. Puis elles sont mises à incuber 30 minutes à 37 C en atmosphère humide à 5% de 15 CO2 avec 50p1 de sonde H2DCF-DA à 5pM. Après 30 minutes au contact de la sonde seule, les cellules sont mises à incuber 30 minutes à 37 C en atmosphère humide à 5% de CO2 avec un ajout de 25p1 d'H202 à 800pM et 25p1 de solution de fer ferreux et ferrique à 8mM, pour avoir des concentrations finales de 200pM d'H202 et 2mM de fer 20 ferreux et ferrique. Les cellules sont ensuite rincées au PBS 1X à raison de 100p1 par puits, puis incubées 30 minutes à 37 C en atmosphère humide à 5% de CO2 avec 100pl de PBS 1X. 25 Ces 1 h 30 minutes d'incubation à 37 C permettent aux estérases intracellulaires de désacétyler la sonde en H2DCF, oxydable par les EAO intracellulaire en DCF : composé fluorescent dont la formation est proportionnelle à la quantité d'EAO intracellulaires. L'intensité de fluorescence est lue au cytofluorimètre à a,excitation = 30 485nm et démission = 530nm. Elle reflète la quantité d'EAO intracellulaires produite. Schéma du protocole d'étude : Incorporation sonde Stress Incubation Pré-traitement produit H2DCF-DA H2O2/Fer PBS I I I I 1 3h 30 min 30 min 30 min 18 to=0 to+3h to+3h30min to+4h to+4h30min Lecture Calcul du % de protection contre la production d'EAO intracellulaires Le rapport ci-dessous permet de calculer pour chaque concentration de produit testé le % de protection contre la production d'EAO intracellulaires (puisque l'Intensité de Fluorescence ou IF exprime la libération intracellulaire d'EAO). [IF Oxydant (H2O2/Fer) - IF (Oxydant + Produit)] x 100 IF Oxydant (H2O2/Fer) - IF Contrôle Les valeurs indiquées dans le tableau ci-après sont les pourcentages d'inhibition de production d'EAO intracellulaire suite à un stress oxydatif exogène, par rapport aux cellules témoin (100%) et aux cellules stimulé (0%). Les pourcentages moyens de protection, pour les 13 molécules testées à 4 concentrations sur la lignée L929 sont présentés dans le tableau I ci-dessous.20 Tableau I : Analyse de la Protection Contre la Production Intracellulaire d'EAO pour les '13 molécules hydroxyalcènes carboxyliques : Pourcentaqe d'inhibition de la production intracellulaire d'EAO Vit. E 400pg/ml 47 % Composés de formule I Doses n R Rn R1 0,02 0,2 2 20 ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml 3 H H F 3 -3 -32 -51 3 H H H 21 15 11 14 4 H H F 10 6 -4 -36 4 H H H 17 9 9 0 H H H 56 47 46 36 6 H H F 15 4 5 -9 6 H H H 33 9 H H H 9 10 6 -22 H H F 29 16 0 -19 10 H H H 11 4 -20 -34 13 H H F 36 28 14 -9 13 H H H 3 13 -1 -10 14 H H F 6 -17 -26 -42 5 Pré-incubation : 3h Nombre d'essais = 3 pour tous les composés Nombre d'essais = 18 pour la vit E In vitro, à l'échelle cellulaire, un stress exogène par le H2O2 /Fe2±Fe3+ est capable d'induire une production d'EAO intracellulaires détectés à l'aide de 10 la sonde fluorescente. En conclusion, les hydroxyalcènes carboxyliques à courtes chaînes (C9 et C10) et non fluorés semblent être plus particulièrement actifs dans la protection cellulaire anti-radicalaire. 20 Etude de l'effet anti-radicalaire. Analyse de la peroxydation lipidique Par ailleurs, durant le métabolisme cellulaire normal, lors d'exposition occasionnelle de la peau à des agents stressants ou au cours de pathologies dermatologiques, des espèces oxygénées réactives encore appelées Radicaux Libres Oxygénés (RLO) sont générées (Y. M. W. Janssen et al, 1993). Ces RLO, décrits comme des métabolites très réactifs, jouent un rôle important dans bon nombre de processus tels que l'inflammation, le vieillissement et la promotion tumorale. Les RLO sont considérés comme les seconds messagers dans la signalisation cellulaire du stress oxydatif et donc comme les médiateurs précoces de l'inflammation (A. Van Der Vliet and A. Bast, 1992). Leur surproduction induit d'importants dommages au sein de la cellule. Certains constituants cellulaires sont alors les cibles majeures d'un tel stress oxydatif : les composants lipidiques de lamembrane plasmique (lipoperoxydation), les protéines (dénaturation et dégradation) et le matériel génétique ou ADN (mutations) peuvent être altérés. Les cellules sont capables de limiter ces dommages oxydatifs grâce à différents systèmes de défense antiradicalaire (antioxydants enzymatiques et non enzymatiques) (B. P. Yu, 1994 ; H. Steiling et al, 1999). Cependant, dans certaines conditions, les RLO sont produits en quantité telle que l'activité antioxydante cellulaire est insuffisante ; ces RLO deviennent alors des facteurs inducteurs de pathologies inflammatoires et du vieillissement tissulaire (Y. Miyachi et al, 1986 ; M. Kress et al, 1995). Afin de valoriser l'activité anti-radicalaire des différents dérivés hydroxylés selon l'invention, nous avons analysé leur pouvoir protecteur vis à vis de l'altération des membranes cellulaires induite par un stress oxydatif (chimique), en comparaison avec un antioxydant de référence, la vitamine E. La membrane plasmique constitue la principale et la première cible des RLO et, étant riche en lipides, elle est le site d'une peroxydation accrue (A. W. Girotti, 1985). Les peroxydes générés au cours de cette oxydation lipidique sont aussi très réactifs et capables de dégrader le matériel protéique et génomique. Pour évaluer l'altération membranaire, nous avons mesuré la peroxydation lipidique par un dosage in vitro des complexes entre les produits d'oxydation lipidique et l'acide thiobarbiturique. Ces complexes sont appelés TBARS (pour Thiobarbituric Acid Reactive Substances) et donnent le nom au test : Test des TBARS. Afin de mimer un stress oxydatif chimique, nous avons traité la lignée de fibroblastes, L929, par un complexe composé de peroxyde d'hydrogène (H2O2) et de fer (Fe2+/Fe3+) reconstituant ainsi la réaction de Fenton, source de RLO et plus particulièrement de radical hydroxyle (OH ) (D.A Vessey et al, 1992): H2O2 + Fe2+ 4 OH +. OH- + Fe3+ Les produits ont été évalués sur la lignée de fibroblastes murins L929. Les cellules sont prétraitées avec les différentes concentrations de produits pendant 16 heures et sont ensuite stimulées avec le complexe H2O2-Fe2+/Fe3+ (200pM-1 mM) pendant 1 heure. Solutions mères : 100 mg/ml, éthanol, 4 C. Solutions finales : 0,02 ng/ml. La peroxydation des lipides membranaires est analysée en mesurant les TBARS (Protocole Réf. PLN 2, selon Morlière et al, 1991). Principe du test : En milieu acide, à 95 C, se forment des complexes, notés TBARS pour Thio Barbituric Acid Reactive Substance, entre les produits d'oxydation lipidiques (malondialdéhyde ou MDA) et l'acide thiobarbiturique (TBA) qui peuvent être dosés en fluorescence par rapport à une gamme étalon avec le MDA. Le dosage des TBARS est alors exprimé en pmole/pg de protéines. Les protéines et TSARS sont dosés dans le milieu intracellulaire. Calcul du pourcentage de protection des membranes cellulaires : A partir du calcul des TBARS en pmole/pg protéines, nous avons calculé l'efficacité protectrice des différents produits contre l'oxydation des lipides membranaires. % de protection : [TBARS Contrôle] -[TBARS (+produits)1 x 100 TBARS Contrôle Quatre expériences indépendantes ont été réalisées. Durant ces expériences, divers composés ont été évalués (le test ne permet pas d'évaluer plus de 10 molécules en même temps). Les composés évalués plusieurs fois ont été choisis en fonction des résultats obtenus dans l'autre test mesurant également une activité anti-radicalaire (test de dosage des espèces actives de l'oxygène, EAO). Le modèle utilisé dans cette expérience (réaction de Fenton) induit une peroxydation lipidique importante dans les fibroblastes L929. Cette décharge massive de radical hydroxyle OH génère donc un stress oxydatif au niveau cellulaire et notamment au niveau des membranes. Cependant, dans ce type de réaction oxydative, les produits issus de la peroxydation lipidique sont internalisés dans les cellules et les TBARS sont alors dosés dans le milieu intracellulaire. La vitamine E à 400pg/ml, diminue la peroxydation lipidique induite par le complexe H2O2-Fe2+/Fe3+, et protège très efficacement les membranes cellulaires. Dans le tableau Il, sont présentés les résultats des 4 expériences. Il apparaît clairement que ces dérivés hydroxylés ont une activité antioxydante stable et reproductible. II s'agit particulièrement de dérivés à chaîne courte de carbones. 30 Tableau Il: Protection des lipides membranaires par les différents dérivés hydroxylés % protection des lipides membranaires Molécules testées Nbre Moyenne Ecart Expérience type Vit E 400pg/ml 4 44,66 25,85 Composés de I formule N R Rn R1 6 H H H 3 52,91 8,81 6 H H F 3 40,65 16,83 4 H H F 3 36,54 41,69 13 H H H 1 22,10 3 H H F 1 38,14 13 H H F 3 7,39 16,23 10 H H H 1 27,18 4 H CH3 H 2 57,75 3,15 10 H H F 3 13,13 13,37 14 H H F 1 35,30 4 H H H 2 37,88 26,28 9 H H H 3 8,72 48,78 3 H H H 2 15,7 29,93 Le modèle in vitro présenté dans cette étude reflète les conséquences dues à un stress oxydatif majeur sur la principale cible cellulaire qu'est la membrane plasmique. Ainsi le dosage de la peroxydation lipidique constitue un bon marqueur du stress oxydatif et permet l'évaluation de l'action antioxydante, vis à vis du radical hydroxyle, de principes actifs au niveau de la membrane cellulaire 24 La Vitamine E, molécule antioxydante, permet la validation de ce modèle et protège efficacement les membranes cellulaires du stress oxydatif. Différenciation kératinocytaire Enfin, l'épiderme participe à la fonction principale de la peau, qui est de résister à l'environnement et de s'en protéger. C'est un épithélium stratifié cornifié squameux en perpétuel renouvellement. L'homéostasie et la régénération tissulaires reposent sur les cellules kératinocytaires, les cellules de soutien, les facteurs solubles, la proximité cellulaire favorisant les interactions des cellulles entre elles et avec les matrices extracellulaires. Le stratum cornéum, stade ultime de la différenciation épidermique, résulte de trois processus majeurs : formation des filaments de kératine, "cornification" du kér'atinocyte et formation du ciment lipidique intercellulaire organisé en structures lamellaires. Au sein de l'épiderme, la composition et la nature des lipides varient en fonction de l'état de différenciation dans lequel se trouvent les kératinocytes. Ainsi, lors du passage des assises basales aux cellules de la couche cornée, on observe une réduction importante des phospholipides qui, dans les couches vivantes sont responsables de l'intégrité des membranes plasmiques; parallèlement, on note une augmentation des lipides neutres (acides gras libres et triglycérides) et des stérols (cholestérol), ainsi qu'une très forte augmentation des sphingolipides et notamment des céramides. Au niveau de la couche cornée, sont retrouvés 40 à 50 % de sphingolipides, 20 à 27 % de cholestérol et 9 à 26 % d'acides gras libres. Les céramides interviennent de manière covalente avec les résidus glutamiques de l'involucrine, précurseur de l'enveloppe cornée. Les acides gras, grâce à leur caractère hydrophobe, participent au contrôle de l'imperméabilité cutanée, le cholestérol intervenant dans la fluidité membranaire. De nombreuses protéines spécifiques de la couche cornée ou stratum corneum, (couche conférant la fonction barrière à l'épiderme), sont produites au niveau de la couche granuleuse composée des derniers kératinocytes à 25 présenter une activité transcriptionnelle et traductionnelle avant la lyse nucléaire qui accompagne la cornification. Le programme de différenciation des kératinocytes est majoritairement axé sur l'évolution dle protéines de structure que sont les kératines et qui contribuent à l'intégrité architecturale de l'épiderme. Leur expression varie en fonction du degré de maturation des cellules épidermiques. Dans les couches suprabasales apparaissent la kératine 1 basique et la kératine 10 acide, dites kératines de différenciation terminale. Au voisinage cle la couche cornée, les kératines interagissent avec des protéines riches en histidine pour former un mélange relativement homogène qui remplit les cornéocytes. Ces protéines dérivent d'un précurseur, la profilaggrine qui est une grosse molécule ([PM]>450 kDa) stockée au niveau de la couche granuleuse. C'est une protéine dont les domaines N et C terminaux lient le calcium et dont la déphosphorylation et une protéolyse partielle donnent la fiilaggrine. Celle-ci catalyse la formation de ponts disulfures entre les filaments de kératines et contribue à leur intégration au sein de la matrice intracornéocytaire. D'autre part elle est la source, par protéolyse, d'un ensemble d'acides aminés et de dérivés peptidiques qui confèrent à la couche cornée certaines capacités de rétention hydrique. Dans la couche cornée, les cornéocytes contiennent essentiellement des filaments de kératine insérés dans une matrice dense, le tout entouré par une paroi protéique épaisse et résistante : l'enveloppe cornée. Les protéines précurseur de cette structure, apposées à la face interne de la membrane plasmique, sont synthétisées par les kératinocytes à partir de la couche épineuse, mais leurs pontages - sous l'action d'enzymes, les transglutaminases - s'effectue entre les couches épineuses et granuleuses. De nombreuses protéines cytosoliques, associées à la fraction membranaire des kératinocytes ou stockées dans les grains de kératohyaline, participent à l'élaboration de l'enveloppe cornée. On peut ainsi distinguer l'involucrine (68 kDa), riche en glutamine et en lysine. 26 L'imperméabilité de la couche cornée est due, en majeure partie, à un ciment intercellulaire lipidique hydrophobe qui réunit les cornéocytes. Le contenu lipidique de l'épiderme est le résultat final de la lipogenèse kératinocytaire et sébacée. Dans l'épiderme normal, un mélange de lipides neutres et polaires prédomine dans les couches profondes pour être progressivement rernplacé par un contenu plus apolaire, incluant des céramides. De nombreuses protéines participent à cette lipogénèse et donc à la synthèse des céramides. Parmi elles, la protéine DES2 (Sphingolipid C4-hydroxylase / delta-4 desaturase) a été mise en évidence : elle possède une activité dihydrocéramide hydroxylase qui intervient dans la synthèse des phytocéramides et son expression est induite avec la différenciation (MIZUTANI Y. et Al, 2004). Les lipides synthétisés par les kératinocytes sont acheminés à la surface par les corps lamellaires, les kératinosomes. Ils sont sécrétés dans les espaces intercellulaires et s'organisent en feuillets continus alignés parallèlement aux membranes cellulaires des cornéocytes. Cette réorganisation lipidique survenant au cours de la différenciation épidermique fait intervenir un certain nombre de transporteurs lipidiques de la famille des transporteurs ABC (Adenosine Triphosphate Binding Cassette transporter). Parmi ces transporteurs, certains voient leur expression induite au cours de la différenciation kératinocytaire (ABCB1, ABCC1, ABCC3, ABCC4, et ABCG1), d'autres voient leur expression réprimée (ABCB9 et ABCD1) et les autres ne subissent aucune régulation. Le rôle des transporteurs dont l'expression est induite a été mis en évidence : ABCG1 est par exemple impliqué dans la translocation du cholestérol dans les kératinocytes en différenciation. L'expression de certains membres d'une autre famille de transporteurs, celle des FATP (Fatty Acid Transport Protein), tels que FATP1, FATP3, FATP4 et FATP5 est induite au cours de la différenciation kératinocytaire. Ces transporteurs seraient impliqués dans la réorganisation du pool de lipides neutres (KI ELAR et Al, 2003).30 27 Les kératinocytes humains normaux (NHK) prolifèrent et se différencient in vitro, formant des couches stratifiées mimant l'organisation basale de la peau. Des concentrations extracellulaires en calcium supérieures à 0.1 mM initient une cascade d'événements génomiques et non génomiques qui conduit les kératinocytes d'une phase de prolifération vers une phase de différenciation. La différenciation des kératinocytes peut alors être évaluée par l'étude de l'expression de plusieurs marqueurs tels que les kératines 1 et 10, la transglutaminase 1, la désaturase DES2, l'involucrine, les transporteurs FATP4 et ABCG1. Nous avons ainsi évalué dans un modèle de culture in vitro l'effet de certains acides hydroxyalcène carboxyliques. Le plan de l'étude peut être schématisé comme suit : différenciation des NHK in vitro et prélèvements pour analyse Ensemencement Calcium 1.2 mM NHh, +/- Principe Actif J(-1) JO JI J2 Extraction ARN PCR quantitative Conditions de culture et de prélèvement Les Kératinocytes Humains Normaux (NHK) sont isolés à partir d'expiants de peau. Ils sont cultivés dans un milieu KSFM (Gibco) à faible teneur en calcium (0.1 mM) contenant 25 pg/mL de BPE (Bovin Pituitary Extract) et 1.5 ng/ml_ d'EGF (Epithelium Growth Factor). Vingt-quatre heures après ensemencement, la différenciation est induite par l'ajout de calcium (concentration finale 1.2 mM). Les principes actifs sont ajoutés ou non en même temps que le calcium à des concentrations de 100 et 1 pg/mL afin de déterminer s'ils ont un effet de potentialisation de la différenciation. Les cellules sont alors analysées 48h00 après l'ajout du calcium et des produits.30 Extraction des ARNs et RT-PCR en temps réel Les ARNs totaux sont extraits à froid à partir des kératinocytes. Après transcription inverse des ARNm en cDNA, les PCRs sont réalisées en plaque 96 puits (appareil à PCR quantitative iCycler, BioRad). L'expression des transcrits de la transglutaminase, de la désaturase (DES2), ABCG1 et FATP4 est normalisée par rapport à l'expression de gènes de référence (GAPDH, UBC, HPRT). Les niveaux d'expression des échantillons traités par le calcium et le principe actif sont comparés aux niveaux d'expression des échantillons traités uniquement par le calcium. Les résultats des effets des produits à 1 pg/mL sont consignés dans les tableaux ci-après : Composés de Facteur d'induction TG1 DES2 ABCG1 FATP4 formule I vs contrôle (CaCl2 1.2 mM) n R R~ R1 Vit. D3 1 pM 1.5 2.0 2.0 1.1 3 H H F 1.5 1.7 1.5 1.2 3 H H H 1.2 1.6 1.5 1.4 4 H H F 1.6 2.2 2.6 1.3 4 H H H 1.2 1.0 1.2 1.0 5 H H H 1.5 1.8 2.7 1.0 6 H H F 1.2 1.3 1.3 1.0 6 H H H 1.1 1.7 1.9 1.2 9 H H H 1.4 1.8 1.5 1.2 10 H H F 1.4 1.6 1.4 1.0 10 H H H 1.5 2.0 1.4 1.2 13 H H F 4.2 9.0 4.8 2.2 13 H H H 1.4 3. 0 3.0 1.4 14 H H F 1.7 2.8 4.0 1.0 29 A la dose de 1 pg/mL, l'ensemble des produits a un effet modéré sur l'expression des marqueurs de différenciation. Effets des produits à 100 pg/mL Composés de Facteur d'induction TG1 DES2 ABCG1 FATP4 formule I vs contrôle (CaCl2 1.2 mM) N R Rn R1 Vit. D3 10 pM 8.3 11.0 3.1 1.3 3 H H F 0.9 1.9 1.2 1.2 3 H H H 2.6 2.4 4.0 1.2 4 H H F 1.7 3.2 2.6 1.4 4 H H H 1.7 2.2 2.5 1.4 6 H H F 7.8 10.3 6.3 1.9 6 H H H 12.3 11.5 6.6 2.5 9 H H H 14.8 51.7 13.8 4.5 10 H H F 3.5 16.0 4.6 2.3 10 H H H 31.4 125.8 25.5 5.9 La vitamine D3 à 10 pM induit l'expression des transcrits de la transglutaminase 1, DES2, et ABCG1 d'un facteur 8.3, 11.1 et 3.1 respectivement, par rapport au témoin traité uniquement par le calcium. L'expression de FATF'4 par contre n'est pas modulée par le traitement vitamine D3. L'effet de potentialisation de la différenciation a donc été démontré à propos des hydroxy-acides gras insaturés selon l'invention. REVENDICATIONS 1. Hydroxy-acides gras insaturés répondant à la formule générale (I) : O dans laquelle : . Rn représentent indépendemment les uns des autres H ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant éventuellement substitué par un atome d'halogène en particulier de fluor, 10 . RI représente H, F, CI, Br, CF3 ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant éventuellement substitué par un atome d'halogène en particulier de fluor, . R représente H ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant éventuellement substitué par un atome d'halogène 15 en particulier de fluor, et .3n14 à la condition que, lorsque n = 10, les radicaux R, RI et Rn peuvent prendre indifféremment toutes les significations mentionnées ci-dessus, mais lorsque n ~ 10 l'un au moins des radicaux RI et Rn ne représente pas l'hydrogène. 20 2. Hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) selon la revendication 1, dans laquelle : . RI représente F, CI, Br, CF3 ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant éventuellement substitué par un atome d'halogène en particulier de fluor ; HO 5 OR (I) 25 . Rn = H 31 3. Hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) selon la revendication 1, dans laquelle : RI représente H, F, Cl, Br, CF3 ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant éventuellement substitué par un atome d'halogène en particulier de fluor, et au moins l'un des radicaux Rn représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone et étant éventuellement substitué par un atome d'halogène en particulier de fluor. 4. Hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I), selon les revendications 1 et 2caractérisés en ce que : .R1=F . Rn=H 5. Hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) selon la revendication 4, caractérisés en ce que : .R1=F .Rn=H .n=13 6. Hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) selon la revendication 2, caractérisés en ce que : 7. Hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) selon la revendication 3, caractérisés en ce que : 25 .R1=H 32 . un seul des radicaux Rä représente un groupe méthyle, les autres étant des atomes d'hydrogène, et, .n=4 8. Hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) selon la revendication 1, caractérisés en ce que : .R1=Rn = H et .n=10 9. Hydroxy-acides gras insaturés de formule générale (I) selon la revendication 2, caractérisés en ce que : . R1 = F Rn=H,et .n=10 10. Compositions dermocosmétologiques comprenant un hydroxy-acide gras insaturé de formule générale (I) selon l'une des revendications 1 à 9, associé à un excipient dermatologiquement acceptable. 11. Utilisation d'un hydroxy-acide gras insaturé de formule générale (I) selon l'une des revendications 1 à 9 pour la fabrication d'une composition dermocosmétologique anti-radicalaire, anti- inflammatoire et/ou destinée au traitement des troubles de la kératinisation. 12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que ladite composition est destinée au traitement du psoriasis et de la dermite atopique. 13. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que ladite composition est destinée au traitement du vieillissement cutané et de troubles inflammatoires de la peau.