Brevet FR2891131A1 — publié le 20070330

DOMAINE TECHNIQUE GENERAL La présente invention concerne un dispositif de mesure des propriétés physico-chimiques de la peau, notamment son pH et son état d'oxydation, comportant un multipotentiostat de génération, de régulation et de traitement de tensions électriques, relié à des moyens de mesure de propriétés de la peau. Elle concerne également un procédé d'utilisation du dispositif de 10 mesure. ETAT DE L'ART La peau fait partie des tissus en perpétuelle interaction avec l'environnement. Sa fonction principale est de protéger le corps humain contre les agressions extérieures d'origines chimique, mécanique, microbienne et lumineuse. Le vieillissement cutané est en grande partie lié, comme beaucoup d'autres processus dégénératifs, à l'accumulation d'agressions oxydantes. La peau a développé des systèmes de défense enzymatiques, comme par exemple la superoxyde dismutase (SOD), la glutathion peroxydase et la catalase, et non enzymatiques, comme par exemple les vitamines E et C, l'acide urique et le glutathion. Il est connu qu'une exposition au stress provoque une diminution des capacités antioxydantes de la peau. Généralement, le stress oxydant est considéré comme étant la résultante d'une rupture de l'équilibre antioxydants/prooxydants. Ce déséquilibre peut avoir plusieurs origines comme une carence en antioxydants ou en protéines porteuses directement d'une activité antioxydante. Par exemple, une irradiation de la couche cornée à des doses subérythémales entraîne une diminution d'a-tocophérol. Des carences en vitamine C ont également été rapportées suite à des expositions répétées à l'ozone. Cependant, une des questions majeures reste celle du lien entre le stress oxydant et les capacités réductrices de la surface cutanée. 2891131 2 De même, il est intéressant de connaître l'évolution des pH locaux sous l'influence de ou en réponse à ce stress. Des modifications de pH peuvent en effet traduire une possible régulation des enzymes antioxydantes de la fonction barrière. II n'existe pas de dispositif électrochimique permettant des mesures directes, localisées et simultanées du pH et de marqueurs des capacités antioxydantes de la peau afin d'étudier l'influence de l'environnement sur le potentiel antioxydant cutané. PRESENTATION DE L'INVENTION L'invention propose de pallier au moins un des inconvénients de l'art antérieur. A cet effet, on propose selon l'invention un dispositif de mesure des propriétés physico-chimiques de la peau, notamment son pH et son état d'oxydation, comportant un multipotentiostat de génération, de régulation et de traitement de tensions électriques, relié à des moyens de mesure de propriétés de la peau, caractérisé en ce que les moyens de mesure comportent au moins deux microélectrodes de travail et une microélectrode de référence, chaque microélectrode comportant un tube capillaire isolant électrique à l'intérieur duquel s'étend un fil métallique dont l'extrémité libre forme un disque apte à être mis en contact direct avec la peau lors des mesures. L'invention est avantageusement complétée par les caractéristiques suivantes, prises seules ou en une quelconque de leur combinaison techniquement possible: les moyens de mesure comportent quatre microélectrodes de travail; - le fil métallique des microélectrodes de travail est en platine, en or, en argent et en tungstène ou palladium respectivement, le fil métallique de la microélectrode de référence étant en argent; - les quatre électrodes de travail sont disposées selon un cercle, le centre du cercle étant occupé par la microélectrode de référence; - le cercle a un rayon de l'ordre de 1 cm, l'aire de mesure étant inférieure à 10"2 mm2; et 2891131 3 le diamètre extérieur moyen de l'extrémité libre de chaque microélectrode de travail est sensiblement égal à 120 pm, le diamètre intérieur moyen étant sensiblement égal à 50 pm. L'invention concerne également un procédé d'utilisation du dispositif de mesure. L'invention présente de nombreux avantages. On propose selon l'invention un dispositif analytique composé d'une série de microélectrodes électrochimiques pour l'analyse des propriétés acidobasiques et d'oxydo-réduction de la peau. Les mesures permettent simultanément de déterminer le pH et de détecter la présence d'espèces ioniques et de molécules antioxydantes, parmi lesquelles l'ion chlorure, l'acide ascorbique, l'acide urique et le glutathion. Les mesures s'effectuent à l'aide de microélectrodes de matériaux différents qui permettent des détections d'espèces et de molécules différentes simultanément. L'invention permet non seulement d'informer sur l'état redox global de la peau, mais également de détecter la présence de plusieurs antioxydants cutanés. L'invention utilise, pour les références de mesure, une seule et même microélectrode dite pseudo-électrode de référence. Ainsi, chaque circuit d'électrolyse n'est composé que de deux microélectrodes. La technologie utilisée est peu onéreuse. Les mesures sont réalisées directement à la surface de la peau, sans addition de solvant ou de gel et sans modification de surface des électrodes. Le procédé analytique est non invasif. Les microélectrodes sont simplement déposées à la surface de la peau et aucune biopsie n'est nécessaire. L'expérience est menée sur une surface de peau inférieure à 10-2 mm2. Toutes les électrodes sont miniaturisées; les fils métalliques ont un diamètre de 50 pm. Un dispositif selon l'invention permet de s'affranchir d'une macroélectrode de référence disponible dans le commerce. Le temps d'analyse est d'une à deux minutes. Les résultats sont obtenus en direct. Il n'existe quasiment pas de délai entre la mesure et le résultat. Ceci permet d'envisager de suivre la dynamique des processus métaboliques de la peau et d'enregistrer en temps réel la réponse du milieu cutané à diverses agressions. L'invention assure ainsi une très bonne résolution spatio-temporelle. PRESENTATION DES FIGURES D'autres caractéristiques, buts et avantages de l'invention ressortiront de la description qui suit, qui est purement illustrative et non limitative, et qui doit être lue en regard des dessins annexés sur lesquels: - la figure 1 est une représentation schématique d'un montage possible d'un dispositif de mesure selon l'invention; - la figure 2 est une représentation schématique d'une coupe longitudinale d'un mode de réalisation possible de microélectrode; -la figure 3 est une représentation schématique d'une coupe radiale d'un mode de réalisation de la figure 2; - la figure 4 est une représentation schématique de l'évolution au cours du 15 temps du potentiel à courant nul d'une microélectrode de tungstène ou palladium appliquée sur un avant- bras d'un patient; - les figures 5a, 5b et 5c sont des représentations schématiques de voltammogrammes cycliques obtenus avec les microélectrodes appliquées sur l'avant-bras d'un patient pour respectivement une microélectrode de platine, une microélectrode d'or et une microélectrode d'argent; - la figure 6 est une représentation schématique de l'évolution du potentiel à courant nul d'une microélectrode de tungstène ou palladium en fonction du pH à la surface de la peau mesurée grâce à une électrode à membrane de verre; - les figures 7a et 7b sont des représentations schématiques de voltammogrammes obtenus avec une microélectrode de platine déposée sur la peau saine (traits pointillés) et sur la peau traitée (traits pleins) respectivement avec une solution d'acide ascorbique 0,1 mol L-1 et avec une solution d'acide urique 0,1 mol L-' ; et - la figure 8 est une représentation schématique de voltammogrammes obtenus avec une microélectrode d'or déposée sur la peau saine (traits pointillés) et sur la peau traitée (trait plein) avec une solution de glutathion 0,1 mol L 1. 2891131 5 DESCRIPTION DETAILLEE La figure 1 est une représentation schématique d'un montage possible d'un dispositif 1 de mesure. Le dispositif 1 comporte principalement deux parties: une partie 2 est apte à effectuer les mesures sur une peau 8 d'un patient; une partie 3 comprend un multipotentiostat 9 apte à générer et à réguler des tensions électriques vers la partie 2. Le dispositif 1 comporte de plus des moyens d'acquisition et de traitement des résultats des mesures reçues de la partie 2. La partie 2 de mesure comporte deux éléments principaux: au moins une microélectrode de travail 4 et une microélectrode 56 utilisée comme pseudo-électrode de référence. La partie 2 comporte préférentiellement une pluralité de microélectrodes 4 de travail. La pluralité comporte préférentiellement une microélectrode 41 d'argent, et/ou une microélectrode 42 d'or, et/ou une microélectrode 43 de platine, et/ou une microélectrode 44 de tungstène ou de palladium, utilisées comme électrode 4 de travail. Chaque microélectrode 4 de travail comporte une extrémité libre 7 apte à être directement posée sur la peau d'un patient. La microélectrode 56 se présente sous la forme d'une microélectrode d'argent par rapport à laquelle tous les potentiels sont exprimés. Chaque microélectrode 4 de travail et la microélectrode 56 de référence sont reliées à la partie 3. La partie 3 comporte un multipotentiostat 9. Le multipotentiostat 9 permet d'appliquer une différence de potentiel variable AE entre chacune des microélectrodes 4 et la microélectrode 56. Le multipotentiostat 9 permet également de mesurer le courant I traversant chaque circuit formé par les microélectrodes 4 et la microélectrode 56. Lorsque l'on veut effectuer une mesure de pH et d'état d'oxydation, l'extrémité 7 de chaque microélectrode 4 est positionnée à la surface de la peau 8. Le positionnement des microélectrodes 4 est effectué préférentiellement à l'aide d'un micromanipulateur de précision non représenté sur la figure 1. Les microélectrodes 4 sont disposées selon un cercle de rayon 1 cm. La microélectrode 56 de référence est placée au centre du cercle formé par les microélectrodes 41 et/ou 42 d'or et/ou 43 et/ou 44. Lors d'une mesure, deux types d'expériences sont réalisés simultanément. Le premier type de mesure réside dans la mesure de la différence de potentiel LIE à courant I nul entre une microélectrode de travail 4 et la microélectrode 56. Préférentiellement, la microélectrode 4 est la microélectrode 44 de tungstène ou de palladium. Cette mesure est effectuée durant 150 secondes à 300 secondes. Un exemple de courbe obtenue par cette mesure est visible à la figure 4. La détermination du pH découle de la mesure du potentiel à courant nul mesuré entre la microélectrode 44 et la microélectrode 56. Sur la figure 6 est présentée l'évolution du potentiel à courant nul de la microélectrode 44 en fonction du pH à la surface de la peau. Le potentiel à courant nul de la microélectrode diminue lorsque le pH augmente. La relation donnant E en fonction du pH est par exemple: pH=-64. 91 4 E+117.93 Le graphe de la figure 6 est établi lors d'un calibrage préalable du dispositif de mesure. On construit cette courbe en corrélant la différence de potentiel AE à courant nul mesurée sur la peau de différents sujets, au pH de la peau mesuré par une électrode à membrane de verre connue en soi par l'homme du métier. Cette courbe est construite avec un grand nombre de pH en abscisse, auxquels correspondent des potentiels mesurés. Elle est ensuite mémorisée par des moyens compris dans le dispositif d'acquisition et de traitement des résultats des mesures. Ainsi, lors d'une utilisation postérieure de l'appareil, c'est-à-dire lors d'une mesure, l'appareil effectue la mesure de la différence de potentiel LIE à courant nul sur la peau afin d'obtenir la courbe selon la figure 4 (sur la figure 6, cette valeur est à peu près égale à -0,26V). A partir de la courbe de correspondance selon la figure 6, l'appareil donne à l'utilisateur la valeur du pH de la peau. Le deuxième type de mesure consiste à enregistrer un voltammogramme cyclique d'autres microélectrodes 4 pour des potentiels compris entre -0, 8V et 1,5V, à une vitesse de balayage comprise entre 10mV/s et 1 V/s. Préférentiellement, la vitesse de balayage est de 50 mV/s. Un voltammogramme est une courbe qui indique le courant I d'électrolyse traversant le circuit constitué d'une microélectrode de travail 4 et de la microélectrode 56, en fonction de la différence de potentiel AE appliquée. La détection des différentes espèces est effectuée par l'intermédiaire du potentiel de demi-vague ou du potentiel de pic du signal ampérométrique d'oxydation sur les voltammogrammes. Ce potentiel est caractéristique de chaque système oxydo-réducteur. Préférentiellement, pour la microélectrode 43 de platine on effectue un cycle de potentiel entre -0,4 V/Eref et 1,2 V/Eref. Un exemple d'une courbe obtenue est montré sur la figure 5a. L'acide ascorbique est détecté par la mesure du courant d'oxydation enregistré à la microélectrode 43 à un potentiel de demi-vague sensiblement autour de 0,4 V/Eref. Préférentiellement, la mesure quantitative est effectuée à 0,6 V/Eref. L'apparition d'une intensité d'oxydation débutant à environ 0,7V/Eref avec un plateau à 0,9V/Eref sur la microélectrode 43 de platine prouve la présence d'acide urique sur la peau. L'acide urique peut donc être détecté à un potentiel de demi-vague sensiblement autour de 0,8 V/Eref. Préférentiellement, la quantification de l'acide urique est effectuée par la mesure du courant d'oxydation enregistré à la microélectrode 43 de platine au potentiel de 0,9 V/Eref, après soustraction du courant d'oxydation au potentiel de 0,6 V/Eref correspondant à l'acide ascorbique. Les figures 7a et 7b sont des représentations schématiques de voltammogrammes obtenus avec une microélectrode 43 de platine déposée sur la peau saine (traits pointillés) et sur la peau traitée (traits pleins) respectivement avec une solution d'acide ascorbique 0,1 mol L-' (figure 7a) et avec une solution d'acide urique 0,1 mol L-1 (figure 7b). L'intensité du courant à 0,6V/Eref sur la microélectrode 43 de platine est reliée à la quantité d'acide ascorbique présent: plus celle-ci est importante, plus l'intensité d'oxydation est forte. De même, l'intensité du courant à 0,9V/Eref sur électrode de platine, après soustraction du courant à 0,6V/Eref, est reliée à la quantité d'acide urique présent sur la peau: plus celle-ci est importante, plus l'intensité d'oxydation est forte. Préférentiellement, pour la microélectrode 42 d'or on effectue un cycle de potentiel entre -0,2 V/Eref et 1,5 V/Eref. Un exemple d'une courbe obtenue est montré sur la figure 5b. Le glutathion est quantifié par la mesure du courant d'oxydation enregistré à la microélectrode 42 au potentiel de 1,2 V/ErefÉ La figure 8 est une représentation schématique de voltammogrammes obtenus avec une microélectrode 42 d'or déposée sur la peau saine (traits pointillés) et sur la peau traitée (traits pleins) avec une solution de glutathion 0,1 mol L-1. L'intensité du courant d'oxydation à 1,2V/Eref sur la microélectrode 42 15 d'or est reliée à la quantité de glutathion présent: plus celle-ci est importante, plus l'intensité d'oxydation est forte. Préférentiellement, pour la microélectrode 41 d'argent on effectue un cycle de potentiel entre -0,8 V/Eref et 0,6 V/Eref. Un exemple d'une courbe obtenue est montré sur la figure 5c. Les ions chlorures sont quantifiés par la mesure du courant d'oxydation enregistré avec la microélectrode 41 au potentiel de demi-vague de 0,2 V/ErefÉ A ce potentiel, l'argent seul ne peut s'oxyder. La présence d'un courant d'oxydation à un potentiel si bas nécessite obligatoirement la présence des ions chlorures. L'intensité du courant à 0,2V/Eref sur la microélectrode 41 d'argent est reliée à la quantité d'ions chlorures présents: plus celle-ci est importante, plus l'intensité d'oxydation est forte. La construction des voltammogrammes des courbes des figures 5a-c permet de détecter la présence et de quantifier la concentration d'acide 30 ascorbique, d'acide urique, de glutathion et d'ions chlorures. En absence d'une ou de l'autre des espèces, l'intensité d'oxydation correspondante est nulle. 2891131 9 Sur les figures 5a à 5c, on note la présence de flèches qui indiquent le sens d'obtention de la courbe lors du balayage à partir du potentiel -0,8V et 1,5V (partie haute de la courbe, trajet correspondant à l'oxydation) puis de 1,5V vers -0,8V (partie basse de la courbe, trajet correspondant à la réduction). Le procédé analytique permet d'effectuer directement des mesures à la surface de la peau, sans addition de solvant ni de gel, et sans modification de surface du capteur. On va maintenant décrire plus en détails les électrodes de la partie 2 10 du dispositif 1. La figure 2 est une représentation schématique d'une coupe longitudinale d'un mode de réalisation possible de microélectrode de travail 4 ou de référence 56. Sur la figure 2, la microélectrode comporte un capillaire 10 isolant, préférentiellement en verre, dans lequel s'étend un fil 20 de platine, d'argent, d'or, de tungstène ou de palladium en fonction de la microélectrode que l'on veut obtenir. Le capillaire 10 comporte une première partie 11 reliée à la partie 3 du dispositif, une autre partie 12 s'étendant à partir de la partie 11 vers 20 l'extrémité libre 7 de la microélectrode 4 ou 56. La partie 11 forme un tube à symétrie de révolution circulaire. Le diamètre externe 13 de la partie 11 est sensiblement égal à 1,2 mm par exemple. Le diamètre interne 14 est sensiblement égal à 0,7 mm par exemple. La partie 12 est également à symétrie de révolution, mais de section droite de plus en plus faible, à partir de la partie 11 vers l'extrémité libre 7. La figure 3 montre que le diamètre externe 15 de l'extrémité 7 est de l'ordre de 120 pm environ. Le diamètre externe du fil de platine 20 à l'extrémité 7 est de l'ordre de 50 pm. Les microélectrodes permettent de déterminer simultanément le pH et l'état d'oxydation sur une surface de peau inférieure à 10-2 mm2, pour un temps d'analyse inférieur à cinq minutes, par exemple compris entre une et deux minutes et préférentiellement inférieur à une minute. Il assure ainsi une très bonne résolution analytique dans l'espace et dans le temps. La composition du fil 20 est préférentiellement: Pt 90% - Ir 10% pour la microélectrode 43 de platine pour garantir une bonne résistance mécanique; - Au 99.99% pour la microélectrode 42 d'or; W ou Pd 99.95% pour la microélectrode 44 de tungstène ou de palladium; Ar 99.99% pour la microélectrode 41 ou 56 d'argent. Lors de la fabrication de la microélectrode, le fil 20 est introduit dans le tube 10 à section cylindrique de révolution. Le fil 20 est ensuite étiré à l'aide d'une microétireuse. L'extrémité 7 de la microélectrode 4 est alors chauffée de façon à parfaitement enrober le fil de platine de verre, ce qui donne la forme de la partie 12 de la microélectrode 4. L'extrémité 7 est ensuite poncée sur une résine diamantée de façon à obtenir un disque 17 de platine plan, le disque étant visible à la figure 3. La surface des disques de platine, d'or et d'argent est traitée avant chaque mesure en faisant subir aux microélectrodes des cycles répétés de potentiel à la vitesse de balayage de 50 mV/s comme suit. Pour la microélectrode 43 de platine: cycles de potentiel entre -0,6 V/Eref et 1,0 V/Eref dans une solution tamponnée de phosphate 0,1 mol L"' à pH=7,0. Pour la microélectrode 42 d'or: cycles de potentiel entre -0,5 V/Efef et 1,4 V/Eref dans une solution tamponnée de phosphate 0,1 mol L"' à pH=7,0. Pour la microélectrode 41 d'argent: cycles de potentiel entre -1,0 V/Eref et 0,4 V/Eref dans une solution de nitrate de potassium KNO3 / HNO3 0,1 mol L"' à pH=3,5. La surface du disque de tungstène ou de palladium est préparée en portant la microélectrode 44 au potentiel de 1,0 V/Eref dans une solution 30 tamponnée de phosphate 0,1 mol L-' à pH=7,0 pendant 2 minutes. Il se forme des oxydes de tungstène, en particulier WO3, ou des oxydes de palladium. La microélectrode 56 de référence est préparée en portant la microélectrode d'argent à une intensité de 30 nA dans une solution de chlorure de potassium NaCI 3 mmol.L-1, à pH=4, pendant 5 minutes. Il se forme un précipité de chlorure d'argent AgCI. 2891131 12 REVENDICATIONS 1- Dispositif (1) de mesure des propriétés physico-chimiques de la peau (8), notamment son pH et son état d'oxydation, comportant un multipotentiostat (9) de génération, de régulation et de traitement de tensions électriques, relié à des moyens (2) de mesure de propriétés de la peau, caractérisé en ce que les moyens de mesure comportent au moins deux microélectrodes (4) de travail et une microélectrode (56) de référence, chaque microélectrode comportant un tube capillaire (10) isolant électrique à l'intérieur duquel s'étend un fil métallique (20) dont l'extrémité libre (7) forme un disque (17) apte à être mis en contact direct avec la peau lors des mesures. 2- Dispositif selon la revendication précédente, dans lequel les moyens (2) 15 de mesure comportent quatre microélectrodes (41, 42, 43, 44) de travail. 3- Dispositif selon la revendication précédente, dans lequel le fil métallique (20) des microélectrodes (41, 42, 43, 44) de travail est en platine, en or, en argent et en tungstène ou palladium respectivement, le fil métallique (20) de la microélectrode (56) de référence étant en argent. 4- Dispositif selon l'une des deux revendications précédentes, dans lequel les quatre électrodes (41, 42, 43, 44) de travail sont disposées selon un cercle, le centre du cercle étant occupé par la microélectrode de référence (56). 5- Dispositif selon la revendication précédente, dans lequel le cercle a un rayon de l'ordre de 1 cm, l'aire de mesure étant inférieure à 10-2 mm2. 6- Dispositif selon l'une des revendications précédentes, dans lequel le diamètre extérieur moyen (15) de l'extrémité libre (7) de chaque microélectrode de travail (4) est sensiblement égal à 120 pm, le diamètre intérieur moyen (16) étant sensiblement égal à 50 pm. 2891131 13 7- Procédé de mesure des propriétés physico-chimiques de la peau, notamment son pH et son état d'oxydation, à l'aide d'un dispositif de mesure (1) comportant un multipotentiostat (9) de génération, de régulation et de traitement de tensions électriques, et étant relié à au moins deux microélectrodes (4) de travail et une microélectrode (56) de référence, chaque microélectrode comportant un tube capillaire (10) isolant électrique à l'intérieur duquel s'étend un fil métallique (20) dont l'extrémité libre (7) forme un disque (17) apte à être mis en contact direct avec la peau lors des mesures, caractérisé en ce qu'il comporte une étape de détermination des valeurs de pH et d'état d'oxydation en fonction de résultats obtenus par des étapes simultanées selon lesquelles: on mesure la différence de potentiel (DE) à courant (I) nul entre une microélectrode de travail (4) et la microélectrode de référence (56) ; on trace simultanément au moins un voltammogramme cyclique entre les potentiels compris entre -0,8V et 1,5V pour les autres microélectrodes, afin d'obtenir la courbe du courant (I) d'électrolyse traversant le circuit constitué de la microélectrode de travail (4) respective et la microélectrode de référence (56), en fonction de la différence de potentiel (LE) appliquée entre la microélectrode de travail (4) respective et la microélectrode de référence (56). 8- Procédé selon la revendication précédente, dans lequel on relie quatre microélectrodes (41, 42, 43, 44) de travail au multipotentiostat (9) et on trace simultanément un voltammogramme cyclique pour trois microélectrodes. 9- Procédé selon l'une des deux revendications précédentes, dans lequel on détermine la valeur du pH à partir de la différence de potentiel à courant nul mesurée entre une microélectrode de travail (44) de tungstène ou palladium et la microélectrode de référence (56), composée d'argent. 10- Procédé selon l'une des trois revendications précédentes, dans lequel on détecte la présence: - d'acide ascorbique et d'acide urique par la mesure d'un courant d'oxydation enregistré à une microélectrode de platine (43) ; - de glutathion par la mesure d'un courant d'oxydation enregistré à une microélectrode d'or (42); et - des ions chlorures par la mesure d'un courant d'oxydation enregistré à une microélectrode d'argent (41). 11- Procédé selon la revendication précédente, dans lequel on quantifie la présence: d'acide ascorbique par la mesure du courant d'oxydation enregistré à une microélectrode de platine (43) à un potentiel de 0,6 V/Eref. sur un voltammogramme tracé entre -0,4 V/Eref et 1,2 V/ErefÉ ; d'acide urique par la mesure du courant d'oxydation enregistré à la microélectrode (43) de platine au potentiel de 0,9 V/Eref, après soustraction du courant d'oxydation au potentiel de 0,6 V/Eref correspondant à l'acide ascorbique; de glutathion par la mesure du courant d'oxydation enregistré à une 20 microélectrode d'or (42) au potentiel de 1,2 V/Eref. sur un voltammogramme tracé entre -0,2 V/Eref et 1,5 V/Eref; et des ions chlorures par la mesure du courant d'oxydation enregistré à une microélectrode d'argent (41) au potentiel de 0,2 V/Eref sur un voltammogramme tracé entre -0,8 V/Eref et 0,6 V/Eref. 12- Procédé selon la revendication précédente, dans lequel, entre chaque mesure, on prépare les extrémités libres (7) des microélectrodes (41, 42, 43, 44, 56) de la façon suivante: - pour la microélectrode (43) de platine, on effectue des cycles de potentiel 30 à la vitesse de balayage de 50 mV/s entre -0,6 V/Eref et 1,0 V/Eref dans une solution tamponnée de phosphate 0,1 mol L-' à pH=7,0; - pour la microélectrode (42) d'or, on effectue des cycles de potentiel à la vitesse de balayage de 50 mV/s entre -0,5 V/Eref et 1,4 V/Eref dans une solution tamponnée de phosphate 0,1 mol L-' à pH=7,0. - pour la microélectrode (41) d'argent, on effectue des cycles de potentiel à la vitesse de balayage de 50 mV/s entre -1,0 V/Efef et 0,4 V/Eref dans une solution de nitrate de potassium KNO3 / HNO3 0,1 mol L-' à pH=3,5; - pour la microélectrode (44) de tungstène ou palladium, on porte au potentiel de 1,0 V/Efef dans une solution tamponnée de phosphate 0,1 mol L' à pH=7,0 pendant deux minutes; - pour la microélectrode (56) de référence, on porte à une intensité de 30 nA dans une solution de chlorure de potassium NaCI 3 mmol.L-1, à pH=4, pendant cinq minutes pour former un précipité de chlorure d'argent AgCI. 13- Procédé selon l'une des six revendications précédentes, dans lequel le 15 temps de mesure est inférieur à cinq minutes, préférentiellement inférieur à une minute.