Brevet FR2896991A1 — publié le 20070810

DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se rapporte au domaine de la préparation de composés organiques possédant d'excellentes activités pharmaceutiques préventives ou curatives. ART ANTERIEUR Il existe un besoin constant d'amélioration des traitements thérapeutiques préventifs ou curatifs chez l'homme ou l'animal, par rapport aux traitements actuellement disponibles pour le public, à l'égard d'une grande variété d'affections ou de maladies. Notamment, il existe un besoin pour accroître l'efficacité thérapeutique préventive ou curative de principes actifs connus. L'amélioration de l'efficacité thérapeutique préventive ou curative de principes actifs connus inclut (i) l'obtention d'une activité thérapeutique préventive ou curative optimale avec des quantités de principes actifs réduites, par rapport aux quantités du même principe actif couramment employées, (ii) l'obtention d'un effet thérapeutique préventif ou curatif optimal accompagné d'effets indésirables réduits ou inexistants, (iii) l'amélioration de la stabilité des principes actifs, soit en accroissant leur stabilité durant le temps de stockage, soit en accroissant leur temps de demi-vie une fois qu'ils sont administrés dans l'organisme, (iv) l'accroissement de l'accessibilité des principes actifs vis-à-vis de leurs sites biologiques cibles dans l'organisme, par exemple en permettant à certains principes actifs d'atteindre des sites biologiques localisés au niveau des neurones, ce qui implique leur passage au travers de la barrière hématoencéphalique. Les besoins ci-dessus englobent la recherche d'une efficacité thérapeutique curative ou préventive accrue pour les principes actifs tels que les acides aminés. De nombreux acides aminés sont connus pour leur activité biologique et sont utilisés, en tant que substance active, dans diverses thérapies, y compris des thérapies préventives ou curatives de pathologies liées à une dérégulation de certaines voies de signalisation du système nerveux central, telles que l'épilepsie ou la maladie de Parkinson. Les acides aminés d'intérêt thérapeutique englobent l'acide gammaaminobutyrique, aussi désigné GABA, qui est un neurotransmetteur important 35 qui est largement distribué au sein du système nerveux central (SNC), au niveau duquel ce neurotransmetteur possède généralement une activité inhibitrice. La biosynthèse du GABA et les récepteurs pour ce neurotransmetteur sont connus depuis longtemps. Il existe deux classes principales de récepteurs au GABA, respectivement (i) les récepteurs désignés GABAA et GABAc, qui sont des récepteurs ionotropiques, et (ii) les récepteurs désignés GABAB, qui sont des récepteurs métabotropiques. La stimulation des récepteurs au GABA et la transduction subséquente du signal de stimulation de ces récepteurs impliquent des voies métaboliques appelées GABAergiques. La stimulation des voies GABAergiques est recherchée dans de nombreuses indications médicales, y compris pour traiter l'épilepsie, les troubles de l'humeur et plus récemment des indications médicales de neuroprotection. Ainsi, le GABA, qui est le neurotransmetteur inhibiteur majeur du système nerveux central, et qui inhibe la libération pré-synaptique des neurotransmetteurs en modifiant la polarisation des canaux chlore à l'intérieur des cellules nerveuses, pourrait potentiellement être utilisé comme substance active d'un médicament sédatif ou anxiolytique. Malheureusement, le Gaba en solution obtenu à partir du Gaba commercial est un solide qui cristallise dans le système monoclinique. Cet acide aminé ne peut pas traverser les membranes biologiques, en particulier la barrière hémato-encéphalique. En conséquence, aujourd'hui, un acide aminé potentiellement thérapeutiquement actif comme le GABA est inutilisable comme substance active d'un médicament. Cet aspect du comportement physico-chimique du GABA a notamment été rapporté par BAC et al. (1998, The Journal of Neuroscience, vol.18(11):4363-4373). Ces auteurs ont montré que le GABA, qui ne possède aucune activité dans un modèle expérimental de crise audiogénique induite chez la souris déficiente en magnésium (test"MDDAS", pour Magnésium Deficiency-Dependent Audiogenic Seizures), exerce une activité anticonvulsive, dans ce même modèle expérimental murin, lorsque les souris développent en outre des lésions dans la barrière hémato-encéphalique. Plus généralement, le potentiel thérapeutique d'un composé dépend à la fois (i) des cibles biologiques avec lesquelles ce composé peut interagir et (ii) de l'accès in vivo de ce composé aux récepteurs cibles cellulaires avec lesquels il se lie. Un défaut d'accessibilité in vivo d'un composé pour sa cible peut représenter un élément limitant de l'activité biologique de ce composé et peut constituer la cause de l'inefficacité thérapeutique d'un composé possédant pourtant des propriétés intéressantes in vitro. Afin de surmonter les inconvénients liés à l'impossibilité pour les acides aminés d'intérêt thérapeutique de traverser les membranes biologiques, comme notamment la barrière hémato-encéphalique, on propose, dans l'état de la technique, d'administrer aux patients des précurseurs des acides aminés actifs, lesquels précurseurs sont capables de traverser les membranes biologiques, lesdits précurseurs étant ensuite métabolisés en l'acide aminé thérapeutiquement actif. Par exemple, de tels précurseurs de substance active thérapeutique zwitterionique ont été synthétisés pour le GABA. On peut citer notamment le composé désigné Progabide (4-(4'-chloro-5-fluoro-2-hydroxybenzhydrylidène amino) butyramide, qui est un composé non zwitterionique à l'état solide, et qui est capable de traverser la barrière hématoencéphalique, puis de se décomposer en la molécule active de GABA, à proximité des récepteurs cibles sur les cellules nerveuses. De même, on a montré qu'un composé zwitterion hydrophile, tel que le composé L-767,679 (MERCK Research Laboratories), après administration orale, passait difficilement la barrière intestinale pour rentrer dans le flux sanguin, contrairement à un composé précurseur, le pro-médicament L-775,318 (Merck Research Laboratories), non zwitterionique, (Prueksaritanont et al. , 1998, Drug Metab. Dispos., vol.26, 6) :520-527). Toutefois, la synthèse de précurseurs de composés organiques thérapeutiquement actifs, y compris d'acides aminés thérapeutiquement actifs, nécessite des recherches longues et coûteuses, en particulier en vue de s'assurer que de tels précurseurs de substances actives seront efficaces et seront métabolisés effectivement en la substance active d'intérêt. En outre, les quantités de substances actives finalement biodisponibles pour les récepteurs cellulaires cibles ne sont pas précises, notamment du fait de l'hétérogénéité des conditions physiologiques des différents tissus visés, et en conséquence de la grande variabilité dans l'activité de métabolisation du précurseur de substance active en la substance active thérapeutiquement active. De plus, par définition, les composés précurseurs de substance active sont plutôt instables pour une conservation à long terme du médicament, ce qui représente un inconvénient technique supplémentaire. DESCRIPTION DES FIGURES La figure 1 illustre le diagramme de diffraction aux rayons X du GABA de référence sous forme monoclinique (Figure 1 A) et du GABA sous forme tétragonale obtenu selon le procédé de l'invention ( Figure 1B). En ordonnée : intensité relative, exprimée en % de la valeur du pic de plus grande intensité. En abscisse : angle (8) de diffraction. La figure 2 illustre les résultats de calorimétrie différentielle à balayage obtenue respectivement avec un GABA commercial de référence (courbe supérieure) et un GABA obtenu par le procédé selon l'invention (courbe inférieure). En abscisse, les valeurs de température, exprimées en degré celsius. En ordonnée, le signal de flux de chaleur, exprimé en milliwatts (mW). La figure 3 illustre le cycle thermodynamique expérimental et le diagramme d'état P = f(T) du Gaba physique du GABA transformé selon le procédé de l'invention. En abscisse, la température, exprimée en degré celsius. En ordonnée, la pression, exprimée en Pascal (Pa). La figure 4 illustre l'activité catalytique comparée de la GABase en utilisant comme substrat (i) un GABA obtenu par le procédé de l'invention 25 (figure 4A) et (ii) un GABA commercial de référence ( figure 4B). En abscisse, le temps d'incubation du substrat GABA avec l'enzyme GABase exprimée en minute. En ordonnée, la différence d'absorbance à 340 nanomètres (AA340), exprimée en différence de densité optique (D.O.). Dans la figure 4A et dans la figure 4B, les deux courbes inférieures 30 représentent les résultats obtenus en utilisant des quantités de GABA de 160 nanomoles et 400 nanomoles, l'incubation ayant été réalisée en l'absence d'akétoglutarate. La courbe médiane représente les résultats obtenus en utilisant une quantité de 160 nanomoles de GABA en présence de 1000 nanomoles d'akétoglutarate. La courbe supérieure représente les résultats obtenus en utilisant 400 nanomoles de GABA en présence de 1000 nanomoles d'a-kétoglutarate. La figure 5 illustre les résultats d'étude cinétique sur les activités GABase obtenues pour une solution préparée à partir de Gaba commercial (monoclinique) et d'une solution obtenue à partir de Gaba tétragonal sur les formes solvatées d'un GABA commercial de référence et d'un GABA obtenu par le procédé selon l'invention. La figure 5A illustre les vitesses de réaction enzymatique en fonction des concentrations de GABA . En abscisse, on représente la concentration du substrat GABA, exprimée en millimolaires (mM). En ordonnée, la vitesse de la réaction enzymatique, exprimée en nanomoles par minute. La figure 5B illustre le résultat de représentation de courbes de Lineweaver-burk obtenues à partir des résultats représentés sur la figure 5A. En abscisse, l'inverse de la concentration en substrat GABA,exprimée en mM-' En ordonnée, l'inverse de la vitesse de réaction enzymatique, exprimée en nmol-'.min. La figure 6 illustre une comparaison des propriétés anti-convulsives d'un GABA commercial de référence et d'un GABA obtenu par le procédé selon l'invention, dissous dans une solution saline de NaCl à 0,9% (P/P). En ordonnée, le pourcentage d'animaux ayant manifesté des convulsions. L'histogramme vide à gauche de la figure 6 représente les résultats obtenus avec une formulation saline témoin ne contenant pas de GABA. Sur la partie droite de la figure 6, sont représentés trois groupes d'histogrammes représentant les résultats obtenus avec respectivement 25 mg/kg, 50 mg/kg et 100 mg/kg de GABA. Dans chaque groupe l'histogramme de droite représente les résultats obtenus avec un GABA préparé selon le procédé de l'invention ; l'histogramme de gauche représente les résultats obtenus par administration d'un GABA commercial de référence. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Les divers problèmes techniques liés, notamment, à la biodisponibilité d'une substance active, notamment d'une substance active naturellement zwitterionique à l'état solide, pour les sites ou récepteurs cibles cellulaires correspondants, ont été résolus selon l'invention. On a montré selon l'invention que l'activité de composés organiques d'intérêt thérapeutique pouvait être modifiée par traitement de ces composés organiques par un procédé comprenant une étape de sublimation du composé de départ à l'état solide, puis de condensation du composé organique sublimé afin de récupérer, à la fin du procédé, ledit composé organique à l'état solide, le produit final du procédé possédant, une fois remis en solution, une activité biologique modifiée par rapport au composé organique de départ. Plus précisément, on a montré selon l'invention que le traitement d'un composé organique d'intérêt thérapeutique par un tel procédé permettait de modifier le spectre d'activité biologique du composé organique de départ, en général en accroissant ses propriétés préventives ou curatives à l'égard de divers troubles ou de diverses pathologies. L'invention a pour objet un procédé pour préparer, à partir d'un composé organique de départ cristallisé à l'état solide et possédant une ou plusieurs propriétés biologiques, un composé organique cristallisé à l'état solide et ayant une ou plusieurs propriétés biologiques modifiées par rapport au composé organique de départ, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) fournir le composé organique de départ à l'état solide ; b) sublimer à l'état vapeur ledit composé organique de départ et condenser le composé sublimé à l'état vapeur sur la surface d'un support maintenu à température ambiante ; c) récupérer le composé organique à l'état solide obtenu à la fin de l'étape b), 25 à partir dudit support. Comme cela sera précisé plus loin dans la description ainsi que dans les exemples, le traitement d'un composé organique de départ à l'état solide par le procédé ci-dessus a permis de préparer divers composés organiques à l'état solide, de même formule chimique que le composé de départ, et qui possèdent 30 des propriétés biologiques modifiées, par rapport aux composés organiques à l'état solide de départ. Par propriété biologique modifiée , on entend, aux fins de la présente description, que le composé final obtenu par le procédé possède, par rapport au composé de départ : (i) la même activité biologique connue que le composé de départ, cette activité biologique étant accrue, ou inversement réduite, par rapport à celle du composé de départ ; et/ou (ii) une ou plusieurs activités biologiques que ne possède pas le composé de départ. Ainsi, avec le procédé de l'invention, le composé organique de départ et le produit final du procédé ont tous les deux la même formule chimique brute à savoir la même composition qualitative et quantitative en atomes. A titre illustratif, le traitement par le procédé ci-dessus d'un acide y-aminobutyrique conventionnel du commerce de formule brute C4H9NO2 aboutit à la préparation d'un acide y-aminobutyrique ayant des propriétés biologiques modifiées mais possédant la même formule brute C4H9NO2 comme cela peut être montré par une analyse des spectres de résonance magnétique nucléaire (RMN) du proton et du carbone 13. Aux fins de la présente description, le produit final du procédé ci-dessus, qui possède la même formule chimique que le composé organique de départ à l'état solide, et qui possède des propriétés biologiques modifiées, par rapport au composé de départ, peut être également appelé produit redéposé . Ainsi, on a montré selon l'invention, dans un modèle expérimental de crises audiogènes convulsives induites par une déficience en magnésium (MDDAS), que le GABA conventionnel du commerce n'avait aucun effet sur ces troubles intra-cérébraux, alors que le GABA redéposé obtenu en tant que produit final du procédé ci-dessus, permettait de réduire, et même de bloquer, la survenue de crises audiogènes dans ce modèle expérimental chez la souris. Egalement, on a montré selon l'invention que la dopamine redéposée avait un effet majeur sur le système nerveux central (SNC), dans un modèle expérimental d'induction de convulsions chez des souris traitées avec une dose non convulsivante et non létale de cocaïne, alors que la dopamine conventionnelle non traitée ne possède pas cette activité. Egalement, on a montré selon l'invention qu'un acide valproïque redéposé possédait des propriétés d'inhiber, et même de bloquer, des crises audiogènes convulsives dans le modèle expérimental MDDAS, alors que l'acide valproïque conventionnel du commerce était inactif aux mêmes doses. On a aussi montré selon l'invention qu'un antibiotique redéposé comme le fusidate de sodium redéposé, conservait le spectre d'activité antibactérien du fusidate de sodium conventionnel du commerce, mais acquérait des propriétés additionnelles anti-inflammatoires. Ainsi, le procédé de l'invention permet la préparation de composés organiques à l'état solide, de même formule chimique que le composé organique de départ, mais qui possèdent, après leur remise en solution, des propriétés biologiques modifiées, et en particulier des activités thérapeutiques améliorées, par rapport aux composés de départ. Selon un premier aspect préféré du procédé ci-dessus, la sublimation du composé organique de départ à l'état vapeur est réalisée, à l'étape b) par 10 chauffage sous pression réduite. Préférentiellement, l'étape b) de sublimation est réalisée à une température allant de 18 C à 25 C et à une pression réduite allant de 0,5 10-3 à 2 10-3 Pa. Selon une caractéristique avantageuse du procédé ci-dessus, on dépose 15 tout d'abord une quantité choisie entre 200 et 500mg du composé organique de départ à l'état solide dans un conteneur, de préférence un creuset de molybdène, ledit conteneur étant relié à un moyen de chauffage contrôlable. Le moyen de chauffage contrôlable comprend préférentiellement une ou plusieurs résistances électriques reliées à un moyen de contrôle de l'intensité électrique. 20 Le conteneur est placé dans une enceinte étanche dans laquelle on peut pratiquer un vide poussé. La même enceinte comprend, placée verticalement au-dessus du conteneur, une surface support, par exemple un portesubstrat rotatif, qui est située à une distance préférentielle allant de 10 à 20 cm, verticalement au- 25 dessus dudit conteneur. Puis, on provoque la sublimation du composé organique de départ à l'état solide en composé organique à l'état vapeur en pratiquant un vide poussé, compris entre 0,5 10-3 Pa et 2 10-5 Pa, par exemple de 0,5 10-3 à 3.10-4 Pa, y compris de 0,5 10-3 Pa à 2 10-3 Pa, dans l'enceinte, à une température de 30 sublimation entre 160 C et 180 C. Puis, le composé organique à l'état vapeur obtenu ci-dessus est condensé sur la surface d'un support, de préférence le porte-substrat rotatif ci-dessus. La température de chauffage du conteneur, est adaptée de manière à contrôler la vitesse de déposition du composé organique de départ à l'état solide sur la surface du support. De manière préférée, la température de chauffage du conteneur est adaptée de façon à obtenir une vitesse de déposition du composé final à l'état solide allant de 0,1 à 5 nanomètres par seconde, de préférence de 0,2 à 2 nanomètres par seconde et encore plus préférentiellement de 0,3 à 1 nanomètre par seconde, par exemple à une vitesse de déposition de 0,5 nanomètre par seconde. Préférentiellement, le porte-substrat rotatif est constitué d'un disque de verre Pyrex . Pour la mise en oeuvre du procédé ci-dessus, l'homme du métier peut avantageusement avoir recours à un dispositif évaporateur du type AUTO 306, commercialisé par la Société Edwards High Vaccum International (Manor Royal, Crawley, West Sussex, RH 10 2 LW, UK). Ainsi, à l'étape b) du procédé ci-dessus, on condense le composé organique à l'état vapeur en une forme finale dudit composé organique à l'état solide. Ce qui est réalisé est un dépôt du composé organique à l'état solide sur la surface du support, de préférence le porte-substrat rotatif, par condensation de la phase gazeuse à une température du porte-substrat qui est comprise entre 15 C et 25 C. On réalise ainsi un dépôt d'une épaisseur choisie du composé organique à l'état solide, allant de 0,1 pm à 10 pm. L'augmentation de la tension de vapeur par élévation de la température du conteneur, par exemple un creuset, permet de contrôler la sublimation du composé organique de départ à l'état solide. L'analyse du composé organique final à l'état solide qui est obtenu à la fin de l'étape c) du procédé ci-dessus montre que ce composé peut avoir subi des modifications physico-chimiques détectables ou mesurables, sans changement de la formule chimique brute du produit de départ. Comme cela est détaillé ultérieurement dans la description, y compris dans les exemples, le GABA redéposé produit final du procédé de l'invention peut être distingué du GABA commercial de référence par diverses caractéristiques physiques et diverses caractéristiques d'activité biologique. Le GABA redéposé obtenu selon le procédé de l'invention, qui est un GABA de structure cristalline tétragonale, qui peut être aussi appelée structure cristalline quadratique, avait déjà été décrit antérieurement par Dobson et Gerkin (1996, Acta Cryst., Vol. C52 : 3075-3078). Toutefois, selon le procédé utilisé par Dobson et Gerkin, le GABA tétragonal était obtenu par (i) dissolution d'un GABA commercial monoclinique dans de l'eau, puis (ii) par évaporation lente de la solution aqueuse. Le procédé décrit par Dobson et Gerkin permettait exclusivement la préparation de quelques monocristaux de GABA tétragonal, ce qui était suffisant pour une étude ultérieure de ces cristaux par diffraction aux rayons X. Toutefois, le procédé décrit par Dobson et Gerkin serait totalement inadapté pour préparer du GABA tétragonal dans des quantités suffisantes pour tester ses éventuelles activités biologiques. De plus, il s'avère que le procédé tel qu'il a été décrit dans la publication de Dobson et Gerkin n'est pas reproductible. Au contraire, le procédé de l'invention possède l'avantage technique d'être reproductible et de permettre la préparation de quantités de GABA redéposé d'au moins de l'ordre de 10 mg, avec un dispositif de sublimation de laboratoire. Ainsi, avec un dispositif de sublimation adapté, on peut réaliser le procédé de l'invention de manière à produire aisément des quantités importantes de GABA redéposé, par exemple de plusieurs kilogrammes. Le procédé ci-dessus est préférentiellement mis en oeuvre avec des composés organiques de faible poids moléculaire, avantageusement avec des composés organiques de départ ayant un poids moléculaire inférieur à 1000 g.mol-1, et de préférence avec des composés organiques de départ ayant un poids moléculaire inférieur à 600 g.mol-1. A titre illustratif, le GABA, qui possède la formule chimique brute C4H9NO2 a un poids moléculaire de 103,12 g.mol-1. La dopamine, qui possède la formule chimique brute C8H11NO2, a un poids moléculaire de 153,18 g.mol-1. L'acide valproïque, qui a la formule chimique brute C8H16O2, a un poids moléculaire de 144,21 g.mol-1. L'acide fusidique, qui possède la formule chimique brute C31H48O6, a un poids moléculaire de 516,72 g.mol-1. Ainsi, dans certains modes de réalisation du procédé ci-dessus, le composé organique de départ a un poids moléculaire inférieur à 550 g.mol-1. Dans d'autres modes de réalisation du procédé ci-dessus, le composé organique de départ a un poids moléculaire inférieur à 300 g.mol-1. Dans d'autres modes de réalisation du procédé ci-dessus, le composé organique de départ a un poids moléculaire inférieur à 200 g.mol-l. Préférentiellement, le composé organique de départ comprend au moins un groupe choisi parmi les groupes hydroxyle, carboxyle et amino. En particulier, les composés organiques de départ préférés englobent les acides aminés, qui comprennent au moins un groupe carboxyle et au moins un groupe amino, comme c'est le cas par exemple du GABA. A titre illustratif, la dopamine comprend deux groupes hydroxyle et un groupe amino. L'acide valproïque comprend un groupe carboxyle. L'acide fusidique comprend deux groupes hydroxyle et un groupe carboxyle. Dans un mode particulier de réalisation du procédé ci-dessus, le composé organique de départ consiste en l'acide y-aminobutyrique ou GABA sous forme monoclinique. Dans un autre mode de réalisation du procédé ci-dessus, le composé organique de départ consiste en la dopamine. Dans encore un autre mode de réalisation du procédé ci-dessus, le composé organique de départ consiste en l'acide valproïque, ou un sel de l'acide valproïque, y compris le sel de sodium. Dans encore un autre mode de réalisation du procédé ci-dessus, le composé organique de départ consiste en l'acide fusidique, ou un sel de l'acide fusidique, y compris le sel de sodium. Comme cela est illustré dans les exemples, un composé organique obtenu en tant que produit final du procédé ci-dessus, bien qu'il possède une formule chimique brute identique au composé organique de départ, peut avoir subi des changements conformationnels susceptibles de conférer au produit final du procédé des propriétés biologiques modifiées par rapport au composé organique de départ. Ainsi, une analyse du GABA redéposé par diffraction aux rayons X a permis de montrer que le GABA redéposé consistait en un GABA de type tétragonal, c'est-à-dire un GABA possédant une conformation dans l'espace distincte du GABA conventionnel du commerce utilisé comme produit de départ, ce dernier étant un GABA ayant une structure cristalline monoclinique. Notamment, on a montré dans les exemples que le GABA redéposé, qui se présente sous la forme d'un GABA ayant une structure cristalline tétragonale, possède le groupe d'espace : 141cd. On a aussi montré que le GABA ayant une structure cristalline tétragonale obtenu en tant que produit final du procédé de l'invention possède les paramètres de cristal suivants, obtenus par analyse des résultats de diffraction aux rayons X : (i) a = 1196,3 pm, (ii) c = 1528,2 pm, (iii) Z = 16 , et (iv) p = 1, 253 Mg.m-3 tels que mesurés à une température comprise entre 20 C et 25 C. Egalement, le GABA redéposé produit final du procédé de l'invention peut être distingué du GABA conventionnel du commerce par les caractéristiques de son spectre infrarouge. Ainsi, le GABA redéposé produit final du procédé ci-dessus, possède un spectre infrarouge avec les bandes d'absorption infrarouge suivantes, exprimées en cm-1, ayant les valeurs suivantes : 1647, 1569, 1554, 1532, 1474, 1447, 1437, 1428, 1396, 1382, 1360, 1339, 1305, 1283, 1267, 1240, 1163, 1124, 1063, 1028, 1007, 995, 949, 902, 867, 779, 754, 656. Les valeurs des bandes de spectre infrarouge qui constituent des caractéristiques techniques du GABA redéposé produit final du procédé ci-dessus, peuvent varier, pour une bande d'absorption infrarouge donnée, selon les essais, de +1- 4 cm-1. Egalement, le GABA tétragonal redéposé obtenu par le procédé de l'invention se distingue du GABA conventionnel sous forme monoclinique par ces propriétés de capacité thermique (cp) mesurée entre 303 Kelvins et 363 kelvins comme illustré dans les exemples, en utilisant l'équation (1) suivante : cp = A0+ A1T (1), dans laquelle : - cp est la valeur de capacité thermique (ou chaleur spécifique) à pression constante , exprimée en J.K-'.mol-1 ; - Ao= 27,423 exprimée en J.K-'.mole-l; - A~ = 0,3936 JK2 mol-' est exprimée en J.K-' ; - T est exprimé kelvin. On a montré, selon l'invention, que la capacité thermique, qui est une caractéristique technique distinctive du GABA redéposé, est définie par une valeur de Ao = 78,834 J.K-'.mol-1 et une valeur de AI de 0,2575 J.K-'.mol-l. Une autre caractéristique technique distinctive du GABA redéposé obtenu selon le procédé de l'invention consiste en son point de fusion, qui est de 216 +1- 1 C. Une caractéristique technique distinctive additionnelle du GABA redéposé consiste en son enthalpie de fusion qui est de 1147 +/- 28 J.g-1, ce qui correspond à 118,28 +/- 3 kJ.mol-'. Les résultats d'analyse de calorimétrie réalisée avec un composé organique redéposé obtenu par le procédé de l'invention, y compris le GABA redéposé, peuvent être effectués par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment la technique décrite par B. Legendre et al. (Thermochemica Acta 400, (2003) 213-219; J.of Thermal Analysis and Calorimetry vol 76, (2004) 255-264 ). Lorsque le GABA tétragonal redéposé est dissout dans une solution de NaOH à la concentration de 0,1 N, une autre caractéristique technique distinctive du GABA redéposé consiste en son spectre d'absorption ultraviolet. Le spectre d'absorption UV d'une solution préparée extemporanément à partir du GABA redéposé à l'état solide se caractérise par (i) le pic d'absorption le plus important localisé à la longueur d'onde de = 217 nm avec une valeur d'absorbance à cette longueur d'onde A = 0,058 6 = 0,0017 unités de D.O. et par (ii) un coefficient d'extinction de e= 0,5644 = 0,0556. Le GABA conventionnel du commerce et le GABA redéposé obtenu par le procédé de l'invention se distinguent également par diverses propriétés 20 biologiques, aussi bien in vitro qu'in vivo. ln vitro, le GABA redéposé, tout comme le GABA conventionnel du commerce, sont tous les deux des bons substrats pour la GABase, qui est une combinaison enzymatique préparée à partir de Pseudomonas fluorescens contenant une GABA amino-transférase et une SSAL déhydrogénase 25 ( succinic semialdéhyde déhydrogénase ), qui est commercialisée notamment par la Société BOEHRINGER (Allemagne) ou encore par la Société Aldrich/Sigma (France). On a montré selon l'invention que le GABA redéposé se distingue du GABA conventionnel du commerce par sa constante d'affinité apparente vis-à- 30 vis de la GABase, en particulier par la valeur du Km apparent du GABA redéposé pour la GABase, qui est de 0,48 mM +/-0,05. Comme cela a déjà été mentionné précédemment le GABA redéposé se distingue également par ses propriétés in vivo et en particulier par sa capacité à inhiber ou à bloquer la survenue de crises convulsives audiogènes, dans un modèle expérimental de crises audiogènes induites par une déficience en magnésium (MDDAS) chez la souris. Le GABA redéposé obtenu en tant que produit final du procédé de l'invention consiste en un GABA tétragonal qui est métastable et qui conserve ses spécificités physiques et biologiques pendant plusieurs jours, lorsqu'il se présente à l'état solide sous la forme d'une poudre. En revanche, la nature métastable du GABA redéposé ne permet pas de conserver cette forme physique du GABA plus de 24 heures après sa dissolution dans une solution liquide, préférentiellement une solution aqueuse. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, le demandeur pense que le GABA redéposé pourrait également avoir une affinité plus faible que le GABA conventionnel pour d'autres enzymes que la GABAse et être ainsi dégradé moins rapidement que le GABA conventionnel, lorsqu'il est administré à un organisme humain ou animal. Cette hypothèse pourrait expliquer, du moins en partie, l'effet du GABA redéposé qui a été observé au niveau du système nerveux central, dans des situations physiologiques dans lesquelles le GABA conventionnel n'a pas d'effet. De même, on a observé un changement de certaines caractéristiques physico-chimiques d'autres composés organiques d'intérêt thérapeutique, après traitement de ceux-ci par le procédé de l'invention, sans changement de la formule chimique brute de ceux-ci. Ainsi, par exemple, la dopamine, qui se présente naturellement sous la forme d'une poudre blanche de composé zwitterion à l'état solide, est retrouvée comme produit final du procédé de l'invention sous la forme d'une poudre brune de dopamine non ionisée à l'état solide. Pour le fusidate de sodium, on a montré que le fusidate de sodium redéposé peut être distingué du fusidate de sodium conventionnel au moins par ses propriétés de solublité dans des solutions aqueuses. Notamment, le fusidate de sodium redéposé est insoluble à la concentration finale de 25 mg/ml dans du tampon PBS, alors que le fusidate de sodium utilisé comme produit de départ est soluble dans le mêmes conditions. Egalement, le fusidate de sodium redéposé est modérément soluble à des concentrations finales de 2,5 mg/ml dans une solution aqueuse d'eau purifiée contenant une concentration finale de 1 mg/ml d'acide citrique monohydraté, de 19,6 mg/ml de phosphate disodique dihydraté et de 0,5 mg/ml d'édétate disodique, alors que le fusidate de sodium utilisé comme produit de départ est soluble, y compris à la concentration finale de 50 mg/ml, dans la même solution aqueuse. Egalement, le fusidate de sodium redéposé est soluble à la concentration finale de 0,2 mg/ml d'acide citrique monohydraté, alors que le fusidate de sodium utilisé comme produit de départ précipite en solution, dans des conditions identiques. Aussi bien pour le GABA que pour la dopamine obtenus sous forme non ionisée à l'état solide après traitement par le procédé de l'invention, on observe une modification de la capacité de ces deux produits redéposés à agir au niveau du système nerveux central. Comme cela est montré dans les exemples, alors que le GABA naturel à l'état solide ne possède aucune activité anticonvulsivante, du fait que les sites ou récepteurs cellulaires cibles, respectivement le récepteur GABAA et le récepteur GABAB, sont présents à la surface des cellules nerveuses protégées de la circulation sanguine générale par la barrière hémato-encéphalique, le GABA redéposé obtenu selon le procédé de l'invention possède une activité anticonvulsivante du même ordre que celle qui avait été observée antérieurement par BAC et al. (J. Neurosci.1998, 18, 4363-4373) dans un modèle expérimental murin dans lequel des lésions de la barrière hématoencéphalique avaient été expérimentalement provoquées. Comme cela est illustré dans les exemples, le GABA traité selon le procédé de l'invention, dans le modèle expérimental MDDAS décrit par BAC et al. (1998) possède une ED50, c'est-à-dire une dose efficace capable de protéger 50% des animaux traités contre les crises convulsives dites audiogéniques, égale à 25 mg/kg. Des résultats similaires ont été obtenus avec la dopamine redéposée, comme cela est décrit dans les exemples. Ainsi, dans un modèle expérimental murin de test de toxicité de la cocaïne, on a montré que la dopamine naturelle zwitterion à l'état solide, injectée à des souris auxquelles avait préalablement été administrée une dose de 4 mg/kg de cocaïne, n'entraînait aucun changement mesurable dans la survenue de convulsions, par rapport au lot de souris témoins n'ayant reçu que la dose prescrite de cocaïne. En revanche, on observe que la dopamine redéposée obtenue selon le procédé de l'invention entre en synergie avec la cocaïne, dans le même modèle expérimental murin, entraînant la mort de 100% des souris traitées. Du fait de l'observation d'une potentialisation des convulsions provoquées par la cocaïne, on a montré que la dopamine redéposée exerce son activité biologique sur les sites récepteurs cibles des cellules nerveuses. Comme cela est illustré dans les exemples, le procédé de l'invention a aussi permis de préparer du fusidate de sodium redéposé possédant un spectre antibactérien identique au fusidate de sodium utilisé comme produit de départ et possédant des propriétés biologiques additionnelles, telles que des propriétés anti-inflammatoires. Les propriétés anti-inflammatoires du fusidate de sodium redéposé sont notamment illustrées par une activité inhibitrice de l'activation des macrophages et une inhibition de l'expression membranaire des molécules ICAM-I ainsi que des antigènes majeurs d'histocompatibilité de Classe II, tels que les antigènes I-A du MHC, par des macrophages préalablement activés, par exemple par le LPS. Il ressort de ce qui précède que la possibilité, grâce au procédé de l'invention, d'obtenir notamment des composés à l'état solide, de structure ou de propriétés physico-chimiques modifiées par rapport au composé de départ de même formule chimique, permet pour la première fois d'utiliser ces composés à des fins thérapeutiques sans nécessiter de synthèse préalable de molécules précurseurs. Après traitement par le procédé de l'invention, le GABA peut être désormais utilisé directement pour exercer ses diverses activités thérapeutiques, notamment en tant que substance active anxiolytique, en tant que substance active hypnotique, en tant qu'agent anti-convulsivant, en tant qu'agent neuroprotecteur ou encore en tant que agent myorelaxant. De même, la dopamine non ionisée à l'état solide, qui peut être obtenue comme produit final du procédé de l'invention, peut être utilisée, par exemple pour son effet positif, par exemple pour réduire les symptômes de la maladie de Parkinson. De même, l'acide valproïque non ionisé à l'état solide, qui peut être obtenu par le procédé de l'invention, peut être utilisé directement de manière efficace, notamment pour traiter l'épilepsie. De même, l'acide fusidique redéposé, ou l'un quelconque de ses sels, y compris son sel de sodium, qui peut être obtenu par le procédé de l'invention, peut être utilisé de manière efficace comme antibactérien possédant des propriétés anti-inflammatoires. Ainsi, grâce au procédé de l'invention, de nombreux composés organiques à l'état solide peuvent être transformés en composés redéposés à l'état solide afin de potentialiser, ou même de démasquer, leur activité biologique d'intérêt thérapeutique. On a montré selon l'invention que l'obtention d'un composé non ionisé à l'état solide permettait d'accroître la biodisponibilité de ce composé vis-à-vis de son ou ses récepteurs cibles cellulaires. Ainsi, un composé organique redéposé, qui peut être préparé selon le procédé de l'invention, est utile en tant que substance active d'un médicament, notamment d'un médicament anticancéreux, antibiotique, antiparasitaire, antiviral, antiathéromateux ou neurologique. Les composés visés englobent les acides aminés. De plus, on peut améliorer le profil cinétique et la pharmacologie qui caractérisent un composé organique de départ à l'état solide, en utilisant un composé redéposé à l'état solide en tant que substance active d'une composition pharmaceutique. Dès lors, tout procédé capable d'induire ou d'améliorer l'accès d'un composé à son récepteur cible représente une innovation thérapeutique décisive, aussi importante que la découverte d'un nouveau composé actif. L'invention fournit donc des moyens originaux afin de réduire les différences qui peuvent exister, pour un composé d'intérêt thérapeutique donné, entre une activité biologique importante in vitro et son inefficacité thérapeutique in vivo. En d'autres termes, l'impact thérapeutique de l'utilisation d'un composé organique, d'intérêt thérapeutique traité par le procédé de l'invention à l'état solide est notamment : - d'améliorer l'activité thérapeutique de toute substance active actuellement utilisée en thérapie curative ou préventive ; -d'améliorer l'impact thérapeutique de composé d'intérêt thérapeutique non retenu à un moment quelconque du développement d'essais cliniques, par exemple du fait d'une mauvaise cinétique, ou d'une faible activité pharmacologique ; - de permettre l'utilisation, en tant que substance active, d'un composé doté de propriétés biologiques in vitro, mais dénué de tout effet thérapeutique in vivo. Un autre objet de l'invention consiste en une composition pharmaceutique comprenant, à titre de substance active, un composé organique redéposé susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention, en combinaison avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. Un autre objet de l'invention consiste en une composition pharmaceutique comprenant, à titre de substance active, un composé d'acide aminé non ionisé à l'état solide, composé final obtenu par le procédé de l'invention, en association avec un ou plusieurs excipient physiologiquement compatibles. En particulier, l'invention a pour objet une composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, au moins l'acide y-aminobutyrique ou GABA susceptible d'être obtenu par le procédé ci-dessus ledit acide yaminobutyrique ou GABA étant caractérisé en ce qu'il consiste en un GABA sous la forme d'une structure cristalline tétragonale possédant le groupe d'espace suivant : 141 cd. Plus particulièrement, ledit GABA redéposé est aussi caractérisé en ce qu'il possède les paramètres de cristallographie suivants : (i) a= 1196,3 pm, (ii) c= 1528,2 pm, (iii) Z=16 et (iv) p=1, 253 Mg.m-3 ; tels que mesurés à une température comprise entre 20 C à 25 C, en combinaison avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. De manière générale une telle composition pharmaceutique est utile pour la prévention ou le traitement de pathologies pour lesquelles la forme 30 monoclinique du GABA est active. Une telle composition pharmaceutique est également utile pour la prévention ou le traitement des pathologies liées à un déficit en gamma-décarboxylase. Selon différents aspects, une telle composition pharmaceutique est 35 destinée à la prévention ou au traitement des pathologies suivantes : a) pour le récepteur GABAA : - l'épilepsie ; - la chorée de Huntington ; - les dyskinésies, comme ladite maladie de Parkinson ou l'hémiballisme (altérations de l'équilibre entre les systèmes dopaminergiques, cholinergiques et GABAergiques striataux) ; - l'anxiété et les troubles du sommeil ; b) pour le récepteur GABAb : - les états de spasticité, tels que ceux rencontrés notamment dans les infirmatés motrices cérébrales ; c) les indications du GABA non ionisé à l'état solide en tant que facteurs neuroprotecteurs : - en général, le traitement de toute pathologie aiguë ou chronique associée à une atteinte neurologique menaçant l'intégrité du système nerveux central et/ou périphérique, telles que les pathologies suivantes : - épilepsie (p.ex. phase post-ictique epileptique) ; - déficit de la fonction cardio-vasculaire et/ou respiratoire pouvant engendrer une ischémie/anoxie du système nerveux central (p.ex. arrêt cardiorespiratoire, insuffisance vasculaire faisant suite à un infarctus) ; - maladies neurologiques chroniques dégénératives, en particulier la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la chorée de Huntington, la sclérose en plaque, la sclérose latérale amyotrophique ; - accidents vasculaires cérébrales (ABC) et accidents ischémiques transitoires (AIT) ; - neurotoxicité centrale induite au cours du SIDA ; - tout autre facteur de toxicité cérébrale. L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant, en tant que substance active, une dopamine non ionisée à l'état solide, en association avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. Elle est également relative à une composition pharmaceutique comprenant, à titre de substance active, un acide fusidique, ou un sel d'acide fusidique y compris un sel de sodium non ionisé à l'état solide, en association avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. Elle est également relative à une composition pharmaceutique comprenant, à titre de substance active, une acide fusidique, ou un sel d'acide fusiqique, y compris un sel de sodium, non ionisé à l'état solide, en association avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. L'invention est également relative à l'utilisation d'un composé organique redéposé à l'état solide pour la fabrication d'un médicament destiné à prévenir ou traiter un ou plusieurs troubles, pathologies ou maladies déterminées L'invention concerne aussi l'utilisation de l'acide y-aminobutyrique ou GABA caractérisé en ce qu'il possède le groupe d'espace 141cd, ou les paramètres de cristallographie suivants : (i) a= 1196,3 pm, (ii) c= 1528,2 pm, (iii) Z=16 et (iv) p=1,253 Mg.m-3, tels que mesurés à une température comprise entre 20 C à 25 C, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique pour la prévention ou le traitement d'une maladie choisie parmi l'épilepsie, la chorée de Huntington, les dyskinésies, l'anxiété ou les troubles du sommeil. L'invention a aussi pour objet l'utilisation de l'acide y-aminobutyrique ou GABA caractérisé en ce qu'il possède le groupe d'espace 141cd, ou les paramètres de cristallographie suivants : (i) a= 1196,3 pm, (ii) c= 1528,2 pm, (iii) Z=16 et (iv) p=1,253 +/- 0.010 Mg.m-3, tels que mesurés à une température comprise entre 20 C et 25 C, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique pour la prévention ou le traitement des états de spasticité. Pour formuler une composition pharmaceutique selon l'invention, l'homme du métier pourra avantageusement se référer à la dernière édition de la Pharmacopée Européenne ou de la pharmacopée des Etats-Unis d'Amérique (USP). L'homme du métier pourra notamment avantageusement se référer à la 4eme édition 2002 de la Pharmacopée Européenne, ou encore à l'édition USP 25-NF20 de la pharmacopée américaine (U.S. Pharmacopeia). Avantageusement, une composition pharmaceutique telle que définie est adaptée pour une administration orale ou parentérale quotidienne d'une quantité d'un composé redéposé à I état solide comprise entre 1 pg et 10 mg et de préférence entre 1 pg et 1 mg par kilo de poids du patient. Lorsque la composition selon l'invention comprend au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable, il s'agit en particulier d'un excipient approprié pour une administration de la composition par voie topique, d'un excipient approprié pour une administration de la composition par voie orale et/ou d'un excipient approprié pour une administration de la composition par voie parentérale. Dans un mode préférentiel de réalisation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, le composé organique redéposé se présente sous la forme d'une poudre, le cas échéant en combinaison avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables, placée dans un conteneur scellé, dans ces conditions de vide partiel, par exemple à une pression comprise entre 10- 2 et 10-4 Pa, c'est-à-dire à une pression pour laquelle la forme métastable dudit composé organique redéposé peut être conservée pendant une longue période de temps. Enfin, faisant en particulier référence à l'étude d'activité biologique ci- après, la présente invention a encore pour objet un composé non ionisé à l'état solide tel que décrit ci-dessus, pour son utilisation en tant que principe thérapeutiquement actif dans un médicament. L'invention a aussi pour objet une méthode pour prévenir ou traiter une pathologie chez un patient, ladite méthode comprenant une étape au cours de laquelle on administre au patient une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé organique redéposé à l'état solide ou d'une composition pharmaceutique contenant un composé redéposé à l'état solide tel que décrit ci-dessus, qui peut être préparé par le procédé selon l'invention. Le composé non ionisé à l'état solide ou la composition pharmaceutique contenant le composé non ionisé à l'état solide peut être administré par voie orale, par voie parentérale ou encore être appliqué de manière topique, localement sur la peau d'un patient. Le GABA redéposé est préférentiellement utilisé par administration par voie systémique, de préférence par voie intra-veineuse. Les exemples suivants sont destinés à illustrer la présente invention et ne doivent en aucun cas être interprétés comme pouvant en limiter la portée. EXEMPLES : EXEMPLES 1 à 9 A. MATERIEL ET METHODES DES EXEMPLES 1 à 9 10 A.1 Préparation du GABA redéposé. Le GABA redéposé a été préparé par sublimation d'une poudre de GABA commerciale monoclinique commercialisée par la Société SIGMA (Réf.: SIGMA ULTRA) dans un vide partiel à la pression de 10-3 Pa, en utilisant un 15 dispositif d'évaporation d'Edwards (auto 306). La poudre de GABA commercial a été introduite dans un creuset de molybdène qui a été chauffée sous vide ; puis la vapeur produite par sublimation du GABA a été recueillie sur un support de verre Pyrex en rotation, le support étant maintenu à température ambiante 20 5 C. 20 A.2. Analyse de diffraction aux rayons X Le GABA redéposé a été étudié par analyse de diffraction aux rayons X, en utilisant un diffractomètre commercialisé par la Société PHILIPS (référence PHILIPS 1050) et un générateur de rayon X commercialisé par la Société PH ILIPS (référence PHILIPS 1729). 25 Pour la mesure et l'analyse des résultats de diffraction aux rayons X, on a utilisé un ordinateur chargé avec les programmes Gonio et Rayon (B : Fraisse : Thèse 1995 Université des Sciences et Techniques du Languedoc, Montpellier). Pour réaliser la diffraction aux rayons X, on a utilisé une anode CuKa1 (X 30 = 1,54051 Â) commercialisé par la Société Philips (France). Les mesures ont été réalisées à température du laboratoire.5 A.3. Mesure de densité massique Les mesures de masse volumique ont été réalisées avec un pycnomètre commercialisé par la Société Micrometrics (référence : AccuPyc 1330) sous atmosphère d'hélium à la température de 24,7 +1- 0,2 C. Les données de masse volumique sont exprimées comme la valeur moyenne de trois séries de dix mesures pour le GABA commercial, et comme la valeur moyenne de neuf séries de dix mesures pour le GABA redéposé. A.4 Mesure du spectre de transmission des infrarouqes (FTIR) Les mesures du spectre infrarouge ont été réalisée avec un spectromètre commercialisé par la Société PERKIN ELMER (référence : Spectrum 2000 A.T.R. Diamond). Les résultats concernant les bandes d'absorption inrarouge sont exprimées en cm-1, avec une résolution de 4 cm-1. A.5 Mesure de calorie différentielle . L'analyse thermique a été réalisée sur un dispositif commercialisé par la Société Perkin Elmer (référence DSC 7) qui a été calibré en température et énergie sur la base des points de fusion établis (i) pour l'indium 5N de 156,634 C et de 231,9681 C (données normalisées par le NIST [ National Institute of Standard and Technology ]) et de l'étain 5N de 231,9681 C (Kochlight). Pour l'enthalpie de fusion, le dispositif a été calibré sur la base des données relatives à l'indium (28,44Jg-') et à l'étain (59,22 Jg-l). Ce sont les données recommandées par l'American Society for Materials [ASM] pour la température du point de fusion de l'indium de l'étain, et les données recommandées par Bulletin of Alloy Phase Diagram vol 7, 6 (1986) p 601 pour les points de fusion et d'enthalpie de l'indium et de l'étain. Une calibration a été réalisée pour chaque régime de chauffage. On a utilisé des creusets en alliage d'aluminium et pourvus de couvercles comprenant des orifices permettant de maintenir une pression constante. Toutes les expériences ont été réalisées sous atmosphère d'azote gazeux sec, à une valeur de flux gazeux de 2 10-2 L.min-l. A.6.Essais de calorimétrie Les mesures de capacité thermique (Cp) ont été réalisées avec le calorimètre C80 commercialisé par la Société SETARAM (Caluire, France entre 303K et 363K, selon la méthode décrite par B. Legendre et al. Thermochemica Acta 400, (2003) 213-219 et J. of Thermal Analysis and Calorimetry vol 76, (2004) 255-264 ). A.7 Mesure de spectroscopie ultraviolet. Le GABA commercial (SIGMA) et le GABA redéposé ont été dissous dans une solution aqueuse de NaOH à la concentration finale de 0,1N. Puis on a réalisé la spectroscopie UV à la température de 20 C, à l'aide du spectroscope Jasco-V550, commercialisé par la Société Bioserv (Thiais, France). A.8 Déterminations biochimiques Pour la détermination des affinités respectives du GABA commercial (SIGMA) et du GABA redéposé, on a utilisé une préparation enzymatique de GABase commercialisée par la Société ALDRICH/SIGMA (Fallavier, France). Les deux composés ont été ajoutés à la préparation de GABase en présence ou en absence de 1 mM d'a-cétoglutarate dans une cuve de 1 mL contenant également 80 mM de tampon TRIS commercial à pH 8,1, de 0,4 mg de GABase commerciale et de 1 mM de NADP+. La température d'incubation était de 37 C et les valeurs d'absorbance ont été suivies à la longueur d'onde de 340 nanomètres. Pour chacun des composés de GABA de référence et de GABA redéposé, les différences entre les deux plateaux des courbes, c'est-à-dire les différences obtenues avec les incubations respectives en présence ou absence d'a-cétoglutarate, ont permis la titration du composé. B. RESULTATS DES EXEMPLES 1 à 9. EXEMPLE 1: Identité des formules chimiques brutes du GABA commercial de référence et du GABA redéposé. On a montré que la formule moléculaire du GABA redéposé était identique à la formule moléculaire du GABA commercial de référence commercialisé par la Société SIGMA/ALDRICH. Les résultats d'analyse RMN présentés dans les tableaux A et B 5 indiquent que les deux composés ont la même formule chimique qui correspond bien à celle du GABA. Spectres RMN du proton et du carbone. 10 La RMN du proton et du carbone 13 a été réalisée dans de l'eau deutérée avec un appareil BRUCKER à 200 MHz (AC-200). Les résultats obtenus en RMN du proton et en RMN du carbone 13 ne montrent aucune différence entre le GABA témoin et le GABA redéposé. Les principales caractéristiques des spectres RMN du proton et des spectres RMN du Carbone 13, respectivement pour le GABA témoin monoclinique et le GABA redéposé, sont présentés dans les Tableaux 1 et 2 ci-dessous. Tableau 1 : RMN du proton 8 (ppm) Nombre protons Multiplicité J (Hz) Attribution 4.80 3 singulet NH3+ 3.08 2 triplet 7.2 CH2 (4) 2.35 2 triplet 7.2 CH2 (2) 1.96 2 quintuplet 7.2 CH2 (3) Tableau 2 : RMN du carbone 13 8 (ppm) Multiplicité Attribution 181.37 C quaternaire COO- 39.22 CH2 CH2 (4) 15 20 34.30 CH2 CH2 (2) 23.50 CH2 CH2 (3) De plus, comme cela sera illustré à l'exemple 9, le GABA commercial de référence et le GABA redéposé constituent tous les deux des substrats de la GABase. EXEMPLE 2 : Le GABA redéposé consiste en du GABA tétraqonal Les résultats de diffraction aux rayons X présentés dans la figure 1 et dans le tableau 3 confirment que le GABA commercial de référence consiste en du GABA monoclinique et que le GABA redéposé consiste en du GABA tétragonal. Dans la figure 1, on compare les données de diffraction aux rayons X, et plus particulièrement les angles de diffraction 0 respectives des deux composés. Dans le tableau 3, on compare les valeurs d'espacement interplanaire (d) 15 entre les deux composés. Dans les résultats présentés dans le tableau 3, les distances intraréticulaires mesurées entre les plans du réseau cristallin sont exprimées en 10-10 mètres (Â) et leur intensité est exprimée en pourcentage par rapport à l'intensité la plus forte. 20 Les deux structures de cristal démontrent que les deux formes de GABA arborent une conformation zwitterionique. Il est important de souligner que les données de diffraction aux rayons X montrent des différences entre les deux formes solides de GABA et indiquent que le GABA redéposé qui est dérivé du GABA commercial sous forme 25 monoclinique, consiste en un GABA tétragonal. Chacune de ces formes de GABA a déjà été caractérisée dans la littérature (Dobson et Jerkin, 1996, Acta Cryst., vol. C52 :3075-3078 ; Tomita et al., 1973, Bull. Chem. Soc. Japan, vol. 46 : 2199-2204). A la connaissance du demandeur, l'existence de la forme tétragonale 30 solide du GABA a été décrite antérieurement une seule fois, la forme tétragonale du GABA ayant été obtenue par un procédé ne permettant pas sa production dans des quantités supérieures à celles permettant son analyse cristalline (Dobson et Jerkin, 1996). Pour le GABA monoclinique, les paramètres crystallographiques connus sont, respectivement : a = 719,3pm; b = 1012,0pm; c = 826,0 pm ; (3=1111,05; Z=4; 6 = 1,226 Mg.m-3 (Tomita et al., 1973). Pour le GABA tétragonal, les paramètres crystallographiques ont été : a=1196,3pm; c = 1528,2 pm ; Z = 16, 6 = 1,253 Mg.m-3 (donnée calculée). Le GABA commercial sous forme de poudre est connu pour être du GABA sous forme monoclinique. Des données de diffraction aux rayons X sur la poudre de GABA commercial ont été décrites antérieurement ( J. Visser, 1987, Technisch Physische Dienst, Delf, Netherland ICDD Grant in Aid, (1987), Fiche ASTM 38-1739 ; Tomika, K., Higashi, H., Fujiwara, T. (1973) Bull. Chem. Soc. Jpn, 46, 2199-2204). EXEMPLE 3 : Masse volumique et spectres infrarouqe et RMN du GABA commercial de référence et du GABA redéposé. Masse volumique On a mesuré les masses volumiques du GABA monoclinique de référence et du GABA tétragonal. Pour le GABA monoclinique, on a mesuré une masse volumique de 1,2243 +/- 0,0005 Mg.m-3, pour une valeur théorique de 1,226 Mg.m-3. Pour le GABA tétragonal redéposé, on a mesuré une masse volumique de 1,2437 +/- 0,006 Mg.-3 pour une valeur théorique calculée de 1,253 mg/m3. Spectre I.R. 1) Le spectre I.R. du GABA monoclinique commercial comprend les bandes suivantes : 1660,21, 1638,70, 1574,89, 1505,56, 1448,52, 1425,77, 1398,14, 1384,85, 1338,37, 1306,88, 1281,64, 1170,33, 1124,02, 1060,43, 1005,82, 994,42, 887,00, 868,45, 787,84, 778,02, 645,79. Le spectre I.R. du GABA tétragonal redéposé comprend les bandes suivantes 1646,53, 1568,70, 1554,20, 1531,74, 1473,55, 1447,26, 1436,87, 1427,65, 1395,84, 1381,97, 1360,00, 1338,72, 1304,94, 1282,55, 1266,59, 1240,39, 1162,95, 1123,59, 1063,05, 1027,88, 1006,79, 994,89, 948,52, 902,29, 866,66, 779,04, 753,84, 655,79. 2) Les spectres infra-rouges du GABA témoin et du GABA redéposé ont été tracés avec un spectrophotomètre infra-rouge BRUCKER Vector 22. Les spectres ont été réalisés en réflectance sur les produits purs. Les résultats obtenus (Tableau 4) montrent que les spectres obtenus pour le GABA témoin et le GABA redéposé sont quasiment identiques et que dans les deux cas le GABA est sous sa forme zwitterionique (pas de bandes caractéristiques du COOH et du NH2, en revanche on retrouve les bandes caractéristiques du NH3+ et du COO-). Les seules différences obtenues entre le GABA témoin et le GABA redéposé concernent les bandes suivantes : - la bande correspondant à la vibration de valence asymétrique du groupement carboxylate (vas COO-) est à 1574 cm-1 pour le GABA témoin et à 1577 cm-1 pour le GABA redéposé. - les bandes à 1385 et 1398 cm-1, correspondant à la vibration de valence symétrique du groupement carboxylate (vs COO-), présentent des rapports d'intensité différents pour le GABA témoin et le GABA redéposé. - deux faibles bandes présentes pour le GABA témoin à 695 et 940 cm-1 sont inexistantes pour le GABA redéposé. Ces bandes correspondent peut-être à des vibrations de déformation du squelette de la molécule. Les caractéristiques principales des spectres Infra-Rouge respectifs du GABA monoclinique et du GABA redéposé sont résumées dans le Tableau 4 ci-dessous. Tableau 4 : principales bandes infra-rouge pour le GABA témoin et le GABA redéposé Nombre d'ondes v (cm-') Vibration GABA témoin GABA redéposé Vibration d'élongation NH3+ 3020 à 1950 Vibration d'élongation asymétrique COO 1574 1577 Vibration d'élongation symétrique COO 1398 et 1385 Vibration de déformation symétrique 1505 (cisaillement) NH3+ Vibration de déformation (rocking) NH3+ 1124 Vibration de déformation (rocking) COO 788 Au vu des résultats ci-dessus, le GABA tétragonal redéposé obtenu par le procédé de l'invention peut donc être distingué du GABA commercial de référence également par son spectre infrarouge. EXEMPLE 4: Capacité thermique du GABA commercial de 10 référence et du GABA tétraqonal redéposé. On a mesuré la capacité thermique (Cp) du GABA monoclinique commercial de référence et du GABA tétragonal redéposé obtenu par le procédé de l'invention, entre 303K et 363K, en utilisant l'équation (1) suivante : 15 Cp = Ao + A1.T (dans laquelle cp est mesuré comme une fonction de la température et est exprimée en J.K-'.mol-l). On a déterminé les valeurs respectives de Ao et de AI du GABA monoclinique commercial de référence et du GABA tétragonal redéposé. Les valeurs obtenues pour le GABA monoclinique commercial de 20 référence sont : Ao = 27,423 et Al= 0,3936, ce qui est en accord avec les données de la littérature [(Skoulika et Sabbah, 1983, Thermochemica Acta, vol.61 :203-214. Les valeurs obtenues pour le GABA tétragonal redéposé sont : Ao = 72,834 et Al= 0,2575. 25 Les résultats ci-dessus indiquent que le GABA tétragonal redéposé obtenu par le procédé de l'invention peut également être distingué du GABA monoclinique commercial de référence par ses caractéristiques de capacité thermique. EXEMPLE 5 : Spectre U.V. du GABA commercial de référence et du GABA 5 redéposé. Les résultats sont présentés dans le tableau 5. Les résultats présentés dans le tableau 5 sont exprimés comme les valeurs moyennes (+1-les déviations standard) de dix mesures successives. Les valeurs de longueur d'onde et d'absorbance ont été déterminées par mesure expérimentale directe. 10 Les valeurs de coefficient d'extinction ont été calculées à partir des valeurs d'absorbance expérimentale déterminées par spectrophotométrie et à partir des poids de poudre de GABA ajoutée dans les solutions de soude à 0,1 N, puis transférées dans les cuves de spectrophotométrie. Il faut noter que pour les mesures immédiates réalisées sur la solution 15 préparée à partir de GABA tétragonal, on a observé une variation dans la longueur d'onde du pic d'absorbance maximale de 18,5 nanomètres à 217 nanomètres. On a aussi noté une variation concomitante de la valeur d'absorbance de 0,0455 à 0,062, respectivement. Les formes solides en poudre de GABA monoclinique commerciale et de 20 GABA tétragonal obtenues par le procédé de l'invention ont été dissoutes dans une solution aqueuse de NaOH à 0,1 N. Les solutions contenant le GABA ont été soumises à une analyse par spectroscopie UV soit immédiatement, soit 40 heures après la mise en solution du GABA. Les résultats sont représentés sur le tableau 3. 25 Les essais ont montré des différences significatives dans le spectre d'absorption UV du GABA commercial et du GABA redéposé immédiatement après dissolution dans la solution aqueuse de soude 0,1N, ce qui indique la présence d'un conformère gauche pour le GABA commercial et trans pour le GABA redéposé obtenu par le procédé de l'invention. 30 On peut également noter que la solution obtenue à partir du Gaba tétragonal évolue avec le temps, jusqu'à l'obtention de l'équilibre thermodynamique, c'est-à-dire jusqu'à l'obtention d'une solution identique à celle obtenue à partir du Gaba monoclinique. Après 40 heures en solution, le GABA redéposé ne peut pas, du point de vue de son spectre UV, être distingué 35 du GABA monoclinique commercial. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, le demandeur pense que le conformère trans du GABA redéposé se relaxe vers le conformère gauche. EXEMPLE 6 : Résultats comparés de calorimétrie du GABA monoclinique commercial de référence et du GABA tétraqonal redéposé, sous forme de poudre à l'état solide, ou sous forme solvatée à l'état liquide. 6.1 point de fusion et résultats de mesure de calorimétrie différentielle à 10 balayage. Les résultats sont présentés sur la figure 2. Seul un phénomène endothermique a été observé entre 205 C et 245 C. Pour chacun des deux GABA sous forme solide utilisés comme produit de départ, on a détecté deux pics rapprochés, le premier pic correspondant au 15 point de fusion du GABA considéré, et le second pic correspondant à son point de vaporisation. Il est important de noter que, pour le GABA monoclinique de référence, le premier pic est moins intense que le second. Au contraire, pour le GABA tétragonal redéposé, le premier pic est plus intense que le second pic. Les 20 résultats de la figure 2 correspondent à la valeur moyenne de cinq mesures. Pour le GABA monoclinique de référence, le début du premier pic a été détecté à 212,6 +1- 0,5 C. Pour le GABA tétragonal redéposé, le début du premier pic a été observé à 216 +1- 1 C. Pour le GABA monoclinique de référence, la variation d'enthalpie est de 25 1188 +1- 8 Jg-' (ce qui correspond à 122,5+1- 0,8 kJ mol-'). Pour le GABA tétragonal redéposé, la variation d'enthalpie a été de 1147 +1- 28 Jg-' (ce qui correspond à 118,28 +/- 3 kJmol-'). La différence entre ces deux valeurs est principalement due à la différence entre les enthalpies de fusion des deux formes solides de GABA 30 testées. Lorsqu'on néglige la différence entre la valeur de capacité thermique (cp) de la phase liquide et la capacité thermique (cp) de la phase monoclinique entre 212 C et de 216 C, on peut estimer que la différence entre les deux valeurs d'enthalpie de fusion est de l'ordre de 4,2 kJ mol-'. La température de fusion de la phase métastable est supérieure à celle de la phase stable, ce qui , bien qu'exceptionnelle, n'est pas impossible d'un point de vue thermodynamique. D'autres expériences de calorimétrie différentielle à balayage ont été réalisées à différentes pressions, de 0,1 MPa à 350 MPa, au cours desquelles aucune transition de phase n'a été observée. Dans ces conditions plus drastiques, on a pu noter une décomposition de la molécule. 6.2 Etude calorimétrique La solubilisation des formes solides du GABA monoclinique de référence et du GABA tétragonal redéposé a été réalisée dans une solution aqueuse saline à 0,9% de NaCl ou 9g de NaCl pour 1000 g de solution. Le phénomène de solubilisation de chacun des GABA sous forme solide est le résultat de deux processus distincts qui peuvent se recouvrir, respectivement (i) la rupture des liaisons intermoléculaires suivie par la solvatation du cristal suivie par (ii) la fusion des molécules individuelles dans le milieu de solvatation. En d'autres termes, les interactions intermoléculaires et intramoléculaires des molécules de GABA au sein du cristal sont éliminées et remplacées par les interactions du GABA avec le solvant, c'est-à-dire dans le cas présent par les interactions du GABA avec l'eau et du GABA avec les ions Na+ ou Cl-. En ce qui concerne l'enthalpie de dissolution dans le solvant salin (0,9% massique de NaCl ou 9g de NaCl pour1000g de solution H2O), la solvatation de la forme solide de chacun des GABA induit, dans des conditions expérimentales similaires, des variations de température du milieu de solvatation distincte. On a mesuré les enthalpies de dissolution dans la solution aqueuse saline dans un calorimètre de type C80 (SETARAM, Caluire, France) à 36.3 0.3 C. Avec le GABA monoclinique commercial de référence, on a obtenu les valeurs calorimétriques suivantes : Aso1H= -34,1 +/- 0,1Jg-' (ce qui correspond à -3516,4 Jmol-'). En utilisant le GABA tétragonal redéposé comme produit de départ, on a obtenu les résultats suivants : Oso,H = - 49,4 +/- 1 Jg-' (ce qui correspond à -- 5094,1 Jmol-' ). Les résultats ci-dessus indiquent que l'enthalpie nécessaire pour transformer le GABA monoclinique de référence en GABA tétragonal redéposé à 37 C est d'environ 1574 Jmol-'. 6.3 Enthalpie de sublimation L'enthalpie de sublimation a une température T est régie par l'équation (2) suivante : A ubH (T) = A bH (298 K) + 129 8T (cpg ù cps) dT (2) dans laquelle : AsupH 298 = 140 kJmol-'. Les valeurs de cp données dans la littérature (Skoulika et Sabbah, 1983, Thermochemica Acta, vol. 61 : 203 û 214) sont de (i) 153,8 JK-' mol-' entre 298 K et 350K et de (ii) 158,1 JK-' mol-' entre 350K et 485K, pour la phase gazeuse. Pour la phase solide monoclinique, les valeurs cp sont de (i) 133,6 JK-' mol-' et de (ii) 182 JK-'mol-', pour les mêmes gammes de température. A partir de ces valeurs, on a calculé l'enthalpie de sublimation aux alentours de la température de fusion, qui est de 137 kJmol-'. L'enthalpie de sublimation autour du point triple est égale à la somme des enthalpies de fusion et de vaporisation. Cependant, lorsqu'on utilise la valeur mesurée pour la capacité thermique (cp) de la phase solide qui a été extrapolée à la valeur du point de fusion, la valeur de l'enthalpie de sublimation est égale à 128,5 kJ.mol-1, qui est une valeur similaire à la valeur mesurée expérimentalement de 122,5 kJmol-. EXEMPLE 7: Cycle thermodynamique caractérisant le processus de formation du GABA tétraqonal redéposé. Le cycle thermodynamique permettant de comprendre la formation du GABA tétragonal redéposé est schématisé sur la figure 3. On a schématisé sur la figure 3 le diagramme d'état hypothétique du GABA, chaque forme de GABA correspondant aux conditions de température et de pression illustrées sur la figure 3. On a également illustré sur la figure 3, sous la forme d'un cycle fléché, le cycle thermodynamique qui est effectué pour obtenir expérimentalement la forme solide du GABA tétragonal redéposé à partir du GABA commercial monoclinique à l'état solide. Le GABA sous forme monoclinique à l'état solide passe tout d'abord de la pression atmosphérique de 1,013 Pa (a) à des conditions de vide partiel de 10-3Pa (b). La première étape est réalisée à température constante du laboratoire à environ 20 C Dans une seconde étape qui est effectuée à pression constante de 10-3Pa, le GABA monoclinique à l'état solide est chauffé entre 160 et 180 C et passe de la forme solide (b) à l'état gazeux (c) par sublimation. Dans une troisième étape, qui est effectuée également à la pression constante de 10-3Pa, et qui dans la pratique se recouvre avec la seconde étape, le GABA gazeux (c) est instantanément transformé en poudre à l'état solide (d) à température du laboratoire. Lors de cette étape, les vapeurs de GABA qui sont produites durant la seconde étape se déposent sur un support de verre Pyrex , qui est en rotation et est maintenu à la température du laboratoire. Lors de la quatrième étape, on récupère la poudre (e). Lors de cette quatrième étape, qui est réalisée à la température du laboratoire , la pression passe de 10-3 Pa (d) à la pression atmosphérique (e). On peut noter que si l'on fait varier seulement la pression, en partant de la pression atmosphérique vers une pression de vide partiel à 10-3 Pa, sans faire varier simultanément la température, le GABA tétragonal sous forme solide n'est pas produit. A la température du laboratoire et à pression atmosphérique, la phase stable du GABA consiste en la phase monoclinique, alors qu'à faible pression, la phase stable consiste en le GABA tétragonal. Le processus amenant à la phase tétragonale métastable du GABA peut être divisé en plusieurs étapes. La première étape est effectuée dans le dispositif de sublimation lorsque les conditions de vide sont obtenues ; la phase monoclinique du GABA à l'état solide est amenée à faible pression mais le GABA n'est pas transformé en phase solide tétragonal pour des raisons de cinétique. Dans une seconde étape, cette phase est vaporisée par chauffage. Dans une troisième étape, le GABA est déposé sur un support de verre froid, à la température du laboratoire, la vapeur se solidifiant dans la phase tétragonale du GABA. Lorsque le vide est rompu, la phase solide tétragonale du GABA peut être récupérée. La cinétique de transformation du GABA de la phase tétragonale vers la phase monoclinique est trop lente pour être réalisée durant l'étape de rupture du vide. Ce cycle thermodynamique, qui permet de passer du GABA commercial monoclinique à l'état solide au GABA tétragonal à l'état solide est illustré sur la figure 3. EXEMPLE 8 : Diaqramme d'état du GABA Comme cela résulte de l'exemple 7 ci-dessus, le diagramme d'état du GABA a été établi sur la base du protocole expérimental utilisé pour produire le GABA redéposé et sur la base de l'identification du GABA redéposé comme consistant en du GABA tétragonal à l'état solide. De plus, les points de fusion ont été déterminés expérimentalement . Ils sont, pour une pression de 1,013.105 Pa, de 216 +1- 1 C pour le GABA tétragonal redéposé. Ces données contribuent également à élaborer le diagramme d'état du GABA qui est illustré sur la figure 3. Il existe deux formes solides du GABA, respectivement la forme monoclinique et la forme tétragonale. Chacune de ces formes est favorisée d'un point de vue thermodynamique pour une combinaison de conditions de pression et de température. Le GABA sous forme monoclinique à l'état solide est la forme thermodynamique qui est favorisée à la température du laboratoire et à pression atmosphérique. La forme tétragonale du GABA est la forme qui est favorisée d'un point de vue thermodynamique dans des conditions de pression plus basses et de températures plus élevées. Les formes solides du GABA monoclinique et du GABA tétragonal deviennent liquides à une température supérieure à leurs points de fusion respectifs, c'est-à-dire à des températures supérieures à 212,6 C et 216 C, respectivement. Après sublimation sous un vide de 10-3 Pa du GABA (passage d'une phase solide à la phase gazeuse), la phase gaz se dépose sur la paroi froide (température du laboratoire) sous la forme solide tétragonale. La descente en température est importante et rapide, puisque la température du GABA à ce moment passe instantanément de 250 C à 20 C lorsque le GABA se dépose sur le support de verre maintenu à température du laboratoire. Du fait que, dans ce protocole expérimental, la descente en température est importante et rapide, la forme tétragonale à l'état solide adoptée par le GABA est conservée, du fait de l'absence d'une durée suffisante pour que le GABA sous forme tétragonale se convertisse à nouveau en la forme monoclinique. La récupération ultérieure de la poudre à pression atmosphérique consiste donc en une récupération de GABA tétragonal à l'état solide. EXEMPLE 9: GABA monoclinique du commerce et GABA tétraqonal redéposé, comme substrat de la GABase. Les résultats d'expérience représentés sur la figure 4 montrent que le GABA monoclinique commercial de référence et le GABA tétragonal redéposé sont tous les deux des substrats de la GABase, qui est une combinaison d'enzymes comprenant la GABA transaminase (GABA-T, classée EC 2.6.1.19 selon la nomenclature internationale) et la succinique semi-aldéhyde déhydrogénase NADP±dépendante (SSDH, classée EC1.2.1.16, selon la nomenclature internationale) de Pseudomonas fluorescens. On rappelle que la GABase peut être utilisée pour tester la présence de GABA dans un échantillon. Les résultats présentés sur la figure 4 montrent que la production de NADPH obtenue avec les préparations des deux formes de GABA dans les gammes micromolaires / millimolaires sont strictement dépendantes de la présence d'a-cétoglutarate, ce qui indique de manière certaine que c'est le GABA, et non par exemple le semi-aldéhyde succinique, qui est le substrat qui génère le NADPH formé par le système GABase. A partir des résultats de mesure des concentrations de GABA en utilisant le test mettant en oeuvre la GABase, qui sont représentés sur la figure 4, on a pu noter que le plateau de production de NADPH, qui atteste que tout le GABA a été consommé par la GABase, était atteint, avec le GABA tétragonal redéposé, plus tard que le plateau atteint avec le GABA commercial monoclinique. Cette investigation a été poursuivie par des études de cinétique avec les deux formes de GABA dans le système GABase. Les résultats sont représentés sur la figure 5. Dans la figure 5A, sont représentés les résultats de mesure des vitesses de réaction enzymatique en fonction des concentrations de GABA La courbe supérieure représente les vitesses de réaction enzymatique obtenues avec le GABA monoclinique commercial. La courbe inférieure représente les résultats de mesure de la vitesse de réaction enzymatique avec le GABA tétragonal redéposé. Sur la figure 5B, les résultats de la figure 5A ont été représentés conformément à la représentation de Lineweaver-Burk. Ainsi, sur la figure 5, les vitesses initiales de réaction enzymatique de la GABase ont été mesurées comme les vitesses initiales de réduction du NADP+, ont été représentée en fonction des concentrations finales de GABA dans le milieu de test. Sur la figure 5, les vitesses de réduction du NADP+ mesurées à la longueur d'onde de 340 nanomètres (v) ont été exprimées en fonction des concentrations finales de GABA (S). Sur la figure 5B, on a représenté l'inverse de la valeur des vitesses 20 initiales (1/v) en fonction de l'inverse des concentrations en substrat (1/S) selon une représentation de Lineweaver-burk. Les valeurs calculées pour le Km apparent du système GABase pour le GABA monoclinique du commerce en solution étaient de 0,12 mM. Les valeurs calculées pour le Km apparent du système GABase pour le GABA tétragonal 25 redéposé en solution était de 0,48 mM. Les différences dans les constantes d'affinité (Km) des deux formes de GABA peuvent être raisonnablement attribuées à l'étape GABA-T de la GABase, le semialdéhyde succinique étant un produit commun aux deux formes de GABA. 30 Les études cinétiques réalisées avec les deux formes de GABA dans le système GABase soulignent les différences majeures dans les vitesses avec laquelle chacune des formes de GABA peut être catabolisée. On peut noter que, comparé à la forme de GABA monoclinique solvatée du commerce, le GABA tétragonal redéposé en solution est relativement résistant à la catalyse 35 par le système GABase. En conclusion, on peut donc noter les différences marquées dans les capacités des deux formes de GABA à être catabolisées par le système GABase, ce qui est une caractéristique qui pourrait induire une meilleure stabilité, en particulier un temps de demi-vie plus grand, du GABA tétragonal redéposé, lorsque ce GABA est exposé à des enzymes de dégradation du GABA, par rapport à la forme de GABA monoclinique conventionnel commercial. En particulier, cette propriété de résistance du GABA tétragonal redéposé en solution vis-à-vis d'enzymes de dégradation du GABA pourrait induire un temps de demi-vie intracérébral du GABA tétragonal redéposé plus long que celui du GABA monoclinique conventionnel. Ces propriétés du GABA tétragonal redéposé pourraient, du moins en partie, expliquer les résultats d'activité in vivo du GABA tétragonal redéposé qui sont présentés dans l'exemple 10, lesquels permettent sérieusement d'envisager l'utilisation du GABA tétragonal redéposé pour traiter des troubles neurologiques affectant le système nerveux central, tels que l'épilepsie, des troubles de l'humeur et des attaques cérébrales, des troubles paniques, la maladie d'Alzheimer ainsi que des pathogénèses du développement, incluant le syndrome de Rett, la maladie d'Angelman et l'autisme. EXEMPLE 10 : Activité biologique in vivo comparée du GABA naturel zwitterion à l'état solide et du GABA non ionisé solide selon l'invention. A. MATERIEL ET METHODE Pour cette expérimentation, on a utilisé des souris OF1 femelle (IFFA CREDO) carencées pendant 42 jours en magnésium (milieu carencé à 50 ppm de Mg2+). Les animaux témoins non traités reçoivent un régime UAR à 1500 ppm en Mg2+. A.2. Sélection des souris audio-sensibles : A la fin de la période de carence, les animaux sont soumis au stimulus audiogène ; seuls les animaux présentant des convulsions sont utilisés pour la suite de l'expérimentation. A.3. Paramètre de la stimulation audioqène. Comme décrit dans la publication de BAC et al. (1998, J. Neuroscience, vol. 18(11) :4363-4373). A.4. Molécule utilisée On a utilisé du GABA Sigma (Réf. A 5835). Une partie du GABA est soumis au procédé de redéposition et est désigné sous le nom de GABA redéposé. A.5 Traitement L'injection en intra-péritonéale (IP) de GABA ou de GABA redéposé est faite 45 minutes avant le test audiogène. A.6. Paramètre observé On a déterminé le nombre de souris qui présentent des convulsions audiogènes complètes (course folle, crise clonique et crises toniques), selon la technique décrite par Bac et al. (1998, J. Neuroscience, vol. 18 (11) : 4363-4373). B. RESULTATS B.1. Détermination du nombre de crises audioqènese Les résultats obtenus sont représentés dans le tableau 6 ci-dessous. Tableau 6 n Nb de crises audiogènes Témoins 12 12 GABA 25 mg/kg IP 20 18 GABA redéposé 25 mg/kg IP 20 9 GABA 50 mg/kg IP 30 28 GABA redéposé 50 mg/kg IP 30 9 GABA 100 mg/kg IP 20 19 GABA redéposé 100 mg/kg IP 20 0 (n = nombre d'animaux utilisés pour chaque expérimentation). Les chiffres indiquent le nombre d'animaux ayant présenté des crises convulsives audiogènes. Les résultats montrent que seul le GABA redéposé est capable de supprimer totalement les crises convulsives audiogènes. 10 B.2. Détermination du pourcentaqe d'animaux avant des crises convulsivantes. Les résultats sont présentés sur la figure 6. Comme cela est enseigné par Bac et al. (1998), des crises audiogènes 15 dépendantes du déficience en magnésium (MDDAS) offrent une bonne réponse aux composés anti-convulsivants et neuroprotecteurs. Ce modèle in vivo a été utilisé pour tester les effets comparés du GABA monoclinique commercial et du GABA tétragonal redéposé obtenu par le procédé de l'invention. 20 Comme cela est illustré sur la figure 6, le GABA monoclinique commercial, lorsqu'il est administré par voie intrapéritonéale jusqu'à des doses de 100 mg/kg, ne provoque aucune protection des animaux à l'encontre du MDDAS. En revanche, lorsqu'on utilise du GABA tétragonal redéposé par voie 25 intrapéritonéale, on observe une activité protectrice anticonvulsivante dans le modèle MDDAS, ce qui atteste bien que les différences physiques observées entre le GABA monoclinique commercial et le GABA tétragonal redéposé5 entraînent également des propriétés biologiques distinctes, à la fois in vitro comme cela est illustré à l'exemple 9 et in vivo comme cela est illustré dans le présent exemple. EXEMPLE 11 : Activité biologique comparée de la dopamine naturelle à l'état solide et de la dopamine produit final du procédé de l'invention. A. Introduction La cocaïne, inhibiteur de la recapture de la dopamine, induit, chez la souris selon la dose utilisée des convulsions clonico-toniques et une mortalité.(M. (Hummel et al. J. Cell. Physiol. 2002, 17-27). L'halopéridol antagoniste des récepteurs D2 de la dopamine naturelle à l'état solide et de la dopamine redéposée (en solution), diminue le nombre de convulsions induites par la cocaïne, les effets létaux de la cocaïne sont supprimés par un antagoniste Dl (SCH 23390). (Kazuaki Shimosato et al. Pharmacol. Biochem. Behav. 1995, 51, 781-788). Tous ces effets toxiques sont le fait d'une augmentation, par inhibition de la recapture, des taux synaptiques de dopamine. Le but de cet exemple est de : 1 û démontrer que la dopamine redéposée, selon notre procédé, en 20 franchissant la BHE, augmente les effets toxiques de la cocaïne. 2 û démontrer l'effet du GABA naturel et du GABA redéposé sur la toxicité à la cocaïne. A. MATERIEL ET METHODE 25 Pour cette expérimentation, on a utilisé des souris OF1 femelles (20 3g) (IFFACREDO). A.1. Molécules utilisées. Cocaïne (Sigma), Dopamine (Sigma, réf. H 85 02). Une partie de la dopamine Sigma est soumise au procédé de redéposition et est désignée sous 30 le nom de DA redéposé, la dopamine naturelle est désignée par DA. GABA Sigma (Réf. A-5835). Une partie du GABA est soumise au procédé de redéposition et est désignée sous le nom de GABA redéposé. A.2. Traitement La dopamine (DA ou DA redéposée) est administrée en intrapéritonéale (IP) 30 minutes avant la cocaïne. Nous avons utilisé deuxdoses de DA ou DA redéposée (100 mg/kg, 50 mg/kg). Le GABA (GABA naturel ou GABA redéposé) est administré en intrapéritonéale (IP) 30 minutes avant la cocaïne. La cocaïne a été injectée (IP) à la dose de 40, 60 ou 100 mg/kg. Chaque lot d'animaux ne reçoit qu'une seule injection de cocaïne ou de dopamine (naturelle ou redéposée). A.3. Paramètres observés Nombre d'animaux qui présentent des convulsions cloniques et toniques. Nombre de souris mortes en 24 heures. Pour la dose de 100 mg/kg de cocaïne nous avons également déterminé la latence aux convulsions (en secondes). B. RESULTATS B.1. Effet de la dopamine redéposée selon notre procédé, sur les effets toxiques de la cocaïne. A dose non convulsivante et non létale de cocaïne (40 mg/kg) seule la dopamine redéposée (100 ou 50 mg/kg) induit des convulsions sur un grand nombre d'animaux (tableau 7). A dose convulsivante mais non létale de cocaïne (60 mg/kg) seule la dopamine redéposée induit une mortalité chez la quasi totalité des animaux (tableau 7). A dose convulsivante et létale de cocaïne (100 mg/kg) la dopamine redéposée diminue la latence aux convulsions et à la mortalité (tableau 8). Tableau 8 Latence (en secondes) aux convulsions et à la mortalité induite par 100 mq/kq de cocaïne. Convulsions Mortalité Témoins 147 + 21 260 + 40 DA 50 mg/kg 138 24 265 38 DA 100 mg/kg 157 21 249 + 33 DA redéposé 50 mg/kg 26 6 70 15 DA redéposé 100 mg/kg 15 3 51 10 Conclusion: La toxicité de la cocaïne est augmentée uniquement par l'administration de dopamine redéposée. 2 ù Effet du GABA naturel et du GABA redéposé sur la toxicité de la cocaïne Tableau 9 Cocaïne N 100 mg/kg Convulsions Mortalité Témoins 20 20 20 GABA 100 mg/kg 20 20 19 GABA redéposé 20 3 0 100 mg/kg 15 (n = nombre d'animaux utilisés pour chaque expérimentation). Les chiffres indiquent le nombre d'animaux ayant présenté des convulsions ou le nombre d'animaux morts en 24 heures. CONCLUSION 20 Seul le GABA redéposé selon notre invention supprime la mortalité induite par une forte dose de cocaïne et diminue de manière importante le nombre de convulsions. Une application potentielle serait le traitement des 10 surdoses de cocaïne chez l'homme (Maciej Gasior et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999, 290, 1148-1156). EXEMPLE 12 : Activité bioloqique comparée de l'acide valproïque naturel à l'état solide et de l'acide valproïque à l'état liquide selon l'invention. A û MATERIEL ET METHODE Pour cette expérimentation on a utilisé des souris OF1 femelle (IFFA CREDO) carencées pendant 42 jours en magnésium (milieu carencé à 50 ppm de Mg") les animaux témoins non traités reçoivent un régime UAR à 1500 ppm en Mg++ A-1. Sélection des souris audio- sensibles : A la fin de la période de carence les animaux sont soumis au stimulus audiogène, seuls les animaux présentant des convulsions sont utilisés pour la suite de l'expérimentation. A-2 Paramètre de la stimulation audioqène : Voir publication jointe. (P. Bac et al. J. Neurosc. 1998, 18, 4363-4373). A-3 Molécule utilisée. On a utilisé l'acide valproïque Sigma. Une partie de l'acide valproïque est soumise au procédé de redéposition et est désignée sous le nom de valproïque 25 redéposé. A-4 Traitement. L'injection en intra-péritonéale (IP) d'acide valproïque ou d'acide valproïque redéposé est faite 45 minutes avant le test audiogène. A-5 Paramètre observé. On a déterminé le nombre de souris qui présentent des convulsions audiogènes complètes (P. Bac et al. J. Neurosc. 1998, 18, 4363-4373) (course folle, crises cloniques et crises toniques). 30 B. RESULTATS Les résultats sont représentés sur le tableau 10 ci-après. Tableau 10 N Nombre de crises audiogènes convulsives Témoins 10 10 Valproïque 25 mg/kg 10 10 Valproïque 50 mg/kg 10 7 Valproïque redéposé 25 10 1 mg/kg Valproïque redéposé 50 10 0 mg/kg (n = nombre d'animaux utilisés pour chaque expérimentation). Les chiffres indiquent le nombre d'animaux ayant présenté des convulsions audiogènes. 10 Conclusion : L'acide valproïque redéposé semble avoir une plus grande efficacité sur la protection des animaux dans le MDDAS test. EXEMPLE 13: Activité bioloqique comparée in vitro du fusidate de 15 sodium naturel et du fusidate de sodium selon l'invention. 13.1 Caractéristiques qénérales du fusidate de sodium. Le fusidate de sodium est un antibiotique de structure stéroïdienne de la famille des fusidanines. Du point de vue chimique, c'est le sel de sodium de l'acide acétoxy 1613- 20 dihydroxy 3a,1 1a-diène 17 (20), 24 (25)- fusida-oïque û 21. Il ne possède pas les groupements qui seraient responsables de l'activité anti-inflammatoire des glucocorticoïdes. Il se présente sous la forme d'une poudre blanche. Sa masse moléculaire est de 538,7 g.mol-'. La molécule est liposoluble et hydrosoluble. 25 C'est un antistaphylococcique majeur qui exerce son effet bactériostatique par inhibition de la synthèse protéique après pénétration dans5 la bactérie et fixation sur le complexe d'élongation EF-G couplé au système énergétique GTP-GDP-GTPase. Le fusidate de sodium exerce une action élective sur les staphylocoques, notamment S. aureus, qu'ils soient ou non producteurs de pénicillinase (CMI de 0,06 à 0,12 mg/I), y compris les souches résistantes à la méticilline (CMI90 Le fusidate de sodium ne possède aucune activité hormonale. 13.2 Solubilité du fusidate de sodium 13. 2-1-Fusidate : - solubilité instantanée à 10 mg/ml en tampon phosphate salin pH 7,2 (PBS) réalisant un pH final de 7,5 et dans l'eau pour préparation injectable ; - solubilité instantanée à 50 mg/ml dans de l'eau purifiée contenant 1 mg/ml d'acide citrique monohydraté, 19,6 mg/ml de phosphate disodique dihydraté et 0,5 mg/ml d'EDTA disodique ; - précipitation instantanée dans de l'eau distillée à 0,2% mg/ml d'acide citrique monohydraté réalisant un pH final de 7,3. 13.2-2 Fusidate redéposé : - insolubilité à 10 mg/ml en PBS, en eau pour préparation injectable ; - solubilité modérée à 2,5 mg/ml dans le solvant contenant l'acide citrique, le phosphate disodique dihydraté et l'edétate disodique, nécessitant l'utilisation d'un broyeur Potter et réalisant un pH final de 7,0 ; - solubilité en eau purifiée à 0,2 mg/ml d'acide citrique. 13.3- Activité antibactérienne in vitro 13.3-1- Matériel et méthode 20 25 30 Les concentrations minimales inhibitrices (CMI) de l'antibiotique ont été déterminées vis-à-vis de 6 souches bactériennes isolées en clinique et d'une souche ATCC, par la méthode standardisée officielle de microdilution en milieu liquide en microplaques, à l'aide de dilutions réalisées de 2 en 2. L'étalon d'acide fusidique commercialisé pour réalisation des CMI a été inclus dans les déterminations. Les résultats des CMI sont exprimés en mg/I selon les normes officielles. 13.3-2-Résultats Les CMI de fusidate de sodium et de fusidate redéposé (fusidate R) ont été déterminées sur 3 souches de Staphylococcus isolées en clinique, une souche de S. aureus ATCC, ainsi que sur 3 souches de bacilles à gram négatif isolées en clinique : Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae et Proteus mirabilis. Tableau 11 Souche CMI en mg/I Fusidate Fusidate R Staphylococcus aureus ATCC 0,25 0,25 Staphylococcus aureus sauvage 0,25 0,25 Staphylococcus haemolyticus sauvage 0,5 0,5 Staphylococcus epidermidis sauvage 8 8 Escherichia coli sauvage >32 >32 Klebsiella pneumoniae sauvage >32 >32 Proteus mirabilis sauvage >32 >32 Les résultats des CMI montrent que l'activité bactériostatique du fusidate 20 n'est pas modifiée après redéposition. 13.4- Activité inhibitrice de l'activation des macrophaqes de souris in vitro. On a étudié l'effet du fusidate de sodium sur la vitalité des macrophages 25 après 24 heures de culture en présence de LPS (lipopolysaccharide bactérien extrait d'E.coli) comme agent de stimulation. Le choix de cet activateur des macrophages est dicté par l'utilisation du fusidate de sodium comme antibactérien en clinique. On a donc choisi de reproduire in vitro un stimulus bactérien pour les macrophages, de façon à mimer au mieux la situation rencontrée en clinique. 13.4-1 Matériel et méthodes Macrophages péritonéaux récoltés par trois lavages (2 ml de milieu RPMI complet additionné de 10% de sérum de veau foetal) de la cavité péritonéale de souris C57BL/6 euthanasiées 2 jours après injection infra- péritonéale de 2 ml de bouillon nutritif ; les liquides d'aspiration sont rassemblés, centrifugés à 300g pendant 10 minutes à +4 C ; les macrophages péritonéaux contenus dans les liquides sont dénombrés et la vitalité évaluée par coloration au bleu trypan. Mise en culture des macrophages (1x106/ml) dans des plaques stériles 15 de 24 puits (dans un volume final de 2 ml) en présence de LPS (10 pg/ml) et de fusidate de sodium à différentes concentrations (0 à 50 pg/ml). Après 24 heures à + 37 C en atmosphère à 5% de CO2, les surnageants de culture sont prélevés et centrifugés, puis congelés à -80 C par aliquots pour dosages ultérieurs de médiateurs de l'inflammation ; le culot cellulaire est 20 conservé. Les cellules sont récupérées dans les puits par pipettage-refoulement à l'aide de milieu complet, lavées puis isolées par centrifugation. La moitié des cellules récupérées est utilisée immédiatement pour l'analyse phénotypique en cytométrie de flux après marquage, l'autre moitié (environ 1x106 cellules) sera 25 utilisée pour la détermination quantitative des ARNm des médiateurs de l'inflammation : les cellules sont conservées congelées à -80 C dans 400pl de RNAzoI, solution qui lyse les cellules et protège les ARNm de la dégradation enzymatique. Avant la mise en culture et après les 24 heures de culture, l'analyse 30 phénotypique des cellules est réalisée pour évaluer les cellules apoptotiques et nécrotiques par double marquage à l'annexine V et à l'iodure de propidium. L'annexine V conjuguée à l'isothiocyanate de fluorescéine se fixe sur les résidus de phosphatidylsérine qui sont exposés à la surface des cellules apoptotiques ou nécrotiques. L'iodure de propidium pénètre à l'intérieur des 35 cellules nécrotiques seules et se fixe sur l'ADN : les cellules doublement marquées sont des cellules nécrotiques, alors que les cellules colorées seulement par l'annexine V sont des cellules apoptotiques. Les résultats sont exprimés en pourcentage de cellules positives. L'expression membranaire de la molécule d'adhérence ICAM-1 (CD54) et des antigènes de classe II est accrue après activation des macrophages. Elle est recherchée par marquages respectifs par un anticorps monoclonal de souris anti-CD54 murin conjugué à l'isothiocyanate de fluorescéine et par un anticorps de souris anti-I-Ab (molécule de classe II de la lignée murine C57BL/6) conjugué à de la biotine, puis révélation par de la streptavidine conjuguée à de l'isothiocyanate de fluorescéine. Les résultats sont exprimés en pourcentages de cellules positives et en intensité moyenne de fluorescence Les données de fluorescence sont acquises dans une fenêtre de 10 000 cellules sélectionnées en fonction de la taille et de la granulométrie, dans un cytomètre FACScan (Becton Dickinson) avec un faisceau laser à argon de X= 488 nm. L'analyse des données est réalisée à l'aide du logiciel Lysis II. La production de TNFa par les cellules activées en culture est dosée dans les surnageants après 24 heures de culture par ELISA (Quantikine M MURINE, mouse TNFa, R&D Systems). La sensibilité de détection est inférieure à 5,1 pg/ml. La gamme de linéarité est de 23 à 1500 pg/ml. 13. 4-3 Résultats A- Viabilité des macrophaqes après 24 heures de culture. Elle est évaluée en pourcentages de cellules vivantes par le dénombrement des macrophages en présence de bleu trypan : les macrophages colorés en bleu sont des cellules mortes. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 12. Tableau 12 Concentration (pg/ml) % macrophages vivants Fusidate Fusidate R 0 61 73 1.56 71 - 3.12 69 - 6,25 63 48 12,50 81 14 25.00 56 0 50.00 74 0 Contrairement au fusidate, le fusidate redéposé exerce un effet toxique dose-dépendant sur les macrophages en culture, la DL50 étant observée entre 6 et 12 pg/ml. B- Apoptose et nécrose des macrophaqes après 24 heures de culture. Ces deux paramètres sont évalués par la double coloration à l'annexine V et à l'iodure de propidium. Les résultats sont exprimés en pourcentages de cellules apoptotiques et nécrotiques. Les résultats sont présentés dans le tableau 13 ci-dessous. Tableau 13 Concentration (pg/ml Fusidate Fusidate redéposé apoptose % nécrose % apoptose % nécrose 0 50 40 28 24 1,56 52 40 - - 3,12 44 37 -6,25 50 38 27 38 12,50 51 40 31 59 25,00 49 43 16 82 50,00 43 50 7 90 La stimulation des macrophages en culture par le LPS induit, après 24 heures, l'apoptose moyenne de 50% et la nécrose moyenne de 40% des macrophages ; le fusidate n'induit ni apoptose ni nécrose supplémentaire et ne protège pas non plus les macrophages des effets de l'activation. En revanche, le fusidate redéposé exerce un effet toxique dose-dépendant sur les macrophages stimulés en culture, avec augmentation progressive du pourcentage de cellules nécrosées, la DL50 étant observée à une concentration voisine de 6 pg/ml. C-Expression membranaire des molécules ICAM-1 et I-Ab L'expression de ces molécules, induite par la stimulation des macrophages, est exprimée à la fois par le pourcentage de cellules positives (%), qui permet d'évaluer l'induction de l'expression de ces molécules sur des cellules ne les exprimant pas au repos, et par la moyenne d'intensité de fluorescence (ImF). Cette dernière donnée permet d'évaluer les variations de l'intensité de l'expression de ces molécules, donc de leur nombre, à la surface d'une même population de cellules. Les résultats sont présentés dans le tableau 14. Tableau 14 Concentration (pg/ml) Fusidate Fusidate redéposé ICAM û 1 I-Ab ICAM-1 I-Ab ImF % ImF % ImF % ImF Avant 43 7,5 50 87 13 138 10 48 0 89 47 78 63 57 147 41 1013 1,56 86 40 83 50 - - - - 3,12 86 41 84 49 - - - -6,25 89 41 86 58 29 52 53 108 12,50 87 46 62 106 22 29 66 82 25,00 89 44 79 59 28 43 67 85 50,00 86 39 58 110 33 47 70 63 L'expression des molécules ICAM-1 et I-Ab est accrue sur les macrophages après 24 heures d'activation en culture par le LPS, tant en terme de pourcentages de cellules les exprimant que de leur densité membranaire. Le fusidate n'exerce aucun effet sur l'expression de ces molécules. En revanche, le fusidate redéposé inhibe fortement l'expression membranaire de ICAM-1 et des molécules de classe II. D- Production de TNFa par les macrophaqes après 24 heures de stimulation par le LPS en culture. Les résultats sont exprimés en pg/ml dans le tableau 15 ci-dessous. Tableau 15 Concentration (pg/ml) Production de TNFa (pg/ml) Fusidate Fusidate R 0 407 112 1,56 433 - 3,12 426 - 6,25 418 20 12,50 398 72 25,00 424 13.5 Conclusion qénérale concernant les résultats obtenus à 20 l'exemple 13. Ces résultats démontrent que le fusidate de sodium a acquis de nouvelles propriétés après redéposition, tout en conservant intégralement son activité antibactérienne initiale. Alliant désormais une activité anti-inflammatoire démontrée in vitro sur la 25 cellule-clé de l'inflammation, à une activité anti-staphylococcique majeure, cet antibiotique a acquis un potentiel clinique considérable. 3 Tableau 3 GABA monoclinique de GABA tétragonal redéposé Référence d À I/I (%) d À I/1 (%) 6.6613 4 5.3744 8 6.1457 2 5.0576 2 5.3486 10 4.7765 2 4.2347 100 4.2507 100 3.9938 15 4.0368 5 3.8569 7 3.8048 8 3.7416 5 3.3933 4 3.3731 9 3.3140 5 3.3043 7 3.1486 5 3.1486 13 3.0153 8 3.0074 12 2.8429 4 2.7945 2 2.7877 4 2.6711 2 2.5362 5 2.5307 5 2.3422 3 2.4505 4 2.2651 3 2.3052 2 2.2564 4 2.1811 5 2.1338 3 2.1148 3 2.0491 2 2.0111 2 1.9270 5 15 Tableau 5 Matériau solide de depart utilise pour la Solvation en NaOH 0.1N GABA monoclinique GABA tétragonal Mesures réalisées immédiatement après 215,5 217,0 Solvatation Longueur d'onde 6 = 0.24 nm 6 = 0.70 (1) d'absorbance 0,08 0,058 UV de valeur la plus grande 6 = 0,017 6 = 0.09 Valeur 0.7956 g-'L d'absorbance (A) 0.5644 g-1 L Coefficient d'extinction (c) Mesures réalisées 215,0 6 = 0 215,0 6 = 0 après 40 heures de mise en solution Longueur d'onde (1) d'absorbance 0,115 o = 0,.0162 0,119 6 = 0,09 UV de valeur la plus grande (X) Valeur d'absorbance (A) 1,083 6 = 0,016 1.061 6 = 0,089 Coefficient d'extinction (c) Tableau 7: Effet de la dopamine naturelle ou de la dopamine redéposée sur la toxicité induite par la cocaïne. Cocaïne n 40mg/kg P 60 mg/kg Convulsions Mortalité Mortalité Con Témoins 30 0 0 0 DA 100 mg/kg 30 2 0 2 DA redéposé 30 26 6 28 100 mg/kg DA 50 mg/kg 30 0 1 1 DA redéposé 50 30 24 4 22 mg/kg (n = nombre d'animaux utilisés pour chaque expérimentation) Les chiffres indiquent le nombre d'animaux ayant présenté des convulsions ou le nombre d' en 24 heures. REVENDICATIONS 1. Procédé pour préparer, à partir d'un composé organique de départ cristallisé à l'état solide et possédant une ou plusieurs propriétés biologiques, un composé organique cristallisé à l'état solide et ayant une ou plusieurs propriétés biologiques modifiées par rapport au composé organique de départ, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) fournir le composé organique de départ à l'état solide ; b) sublimer à l'état vapeur ledit composé organique de départ et condenser le composé sublimé à l'état vapeur sur la surface d'un support maintenu à température ambiante ; c) récupérer le composé organique à l'état solide obtenu à la fin de l'étape b), à partir dudit support. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la sublimation dudit composé organique de départ à l'état vapeur est réalisée, à l'étape b), par chauffage sous pression réduite. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'étape b) de sublimation est réalisée à une température allant de 18 C à 25 C et à une pression réduite allant de 0,5 10-3 à 2 10-5 Pa. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le composé organique de départ consiste en un composé organique ayant un poids moléculaire inférieur à 1000 g.mol-', de préférence inférieur à 600 g.mol-'. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le composé organique de départ comprend au moins un groupe choisi parmi les groupes hydroxyle, carboxyle et amino. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le composé organique de départ à l'état solide consiste en l'acide yaminobutyrique ou GABA sous forme monoclinique. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le composé organique de départ consiste en la dopamine. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce 5 que le composé organique de départ consiste en l'acide valproïque. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le composé organique de départ consiste en l'acide fusidique. 10 10. Composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, au moins l'acide y-aminobutyrique ou GABA susceptible d'être obtenu par le procédé selon rune quelconque des revendications 1 à 6, ledit acide y-aminobutyrique ou GABA étant caractérisé en ce qu'il consiste en un GABA sous la forme d'une structure cristalline tétragonale possédant le groupe d'espace suivant : 141cd. 15 11. Composition pharmaceutique selon la revendication 10, caractérisée en ce que le GABA sous forme cristalline tétragonale possède les paramètres de cristallographie suivants : (i) a= 1196,3 pm, 20 (ii) c= 1528,2 pm, (iii) Z=16 , et (iv) p=1,253 Mg.m"3 ; en combinaison avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. 25 12. Composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, au moins un composé organique non ionisé à l'état solide susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une des revendications 1 à 6 et choisi parmi la dopamine, l'acide valproïque et l'acide fusidique, en combinaison avec un ou plusieurs 30 excipients pharmaceutiquement acceptables. 13. Utilisation de l'acide y-aminobutyrique ou GABA caractérisé en ce qu'il consiste en un GABA sous la forme d'une structure cristalline tétragonale possédant le groupe d'espace 141cd, pour la fabrication d'une composition 35 pharmaceutique pour la prévention ou le traitement d'une maladie choisie parmil'epilepsie, la chorée de Huntington, les dyskinésies, l'anxiété ou les troubles du sommeil. 14. Utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce que le GABA sous forme cristalline tétragonale possède les paramètres de cristallographie suivants : (i) a= 1,196,3 pm, (ii) c= 1528,2 pm, (iii) Z=16 et (iv) p=1, 253 Mg.m"3. 15. Utilisation de l'acide y-aminobutyrique ou GABA caractérisé en ce qu'il consiste en un GABA sous la forme cristalline tétragonale possédant le groupe d'espace 141cd, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique pour la prévention ou le traitement des états de spasticité. 16. Utilisation selon la revendication 15, caractérisée en ce que le GABA est sous forme cristalline tétragonale possède les paramètres de cristallographie suivants : (i) a = 1,196,3 pm, (ii) c = 1528,2 pm, (I) Z=16 et (ii) p = 1,253 Mg.m-3