Brevet FR2894967A1 — publié le 20070622

La presente invention est relative a 1'obtention d'ARNs interferents capables d'inhiber la replication de morbillivirus, et a leur utilisation pour la prophylaxie ou la therapie d'infections a morbillivirus, notamment pour 1'obtention de vaccins. Le genre des Morbillivirus appartient a la famille des Paramyxoviridae (Ordre des Mononegavirales) et regroupe notamment le PPRV (virus de la peste des petits ruminants), le RPV (Rinderpest virus ou virus de la peste bovine), le MV (ou MeV) (Measles virus ou virus de la rougeole), le CDV (canine distemper virus ou virus de la maladie de Carre), le DMV (dolphin morbillivirus ou morbillivirus du dauphin) et le PDV (phocine distemper virus ou virus du phoque veau marin). Le genome des morbillivirus est constitue d'un ARN monocatenaire non segmente, de polarite negative. Sa structure est schematisee sur la Figure 1. Cet ARN monocatenaire comprend 6 genes : N, P, M, F, H et L. Les produits des genes N (Nucleoproteine), P (Phosphoproteine) et L (proLeine Large ; ARN polymerase ARN dependante) s'associent avec 1'ARN genomique viral pour former la nucleocapside, qui protege le genome viral, et constitue un complexe polymerasique permettant la replication et la transcription du virus. Les produits des genes F (proteine de Fusion) et H (Hemagglutinine) font partie de 1'enveloppe virale. La glycoproteine H permet 1'attachement du virus a la cellule cible, et la glycoproteine F intervient dans la fusion de 1'enveloppe virale et de la membrane cellulaire. Le produit du gene M (proteine de Matrice) assure 1'interface entre la nucleocapside et 1'enveloppe virale. L'interference ARN est un mecanisme biologique conserve au cours de 1'evolution, qui induit 1'extinction specifique de genes par degradation specifique des ARNs messagers et/ou arret de leur traduction. Elie a ete observee initialement chez Caenorhabditis elegans : 1'injection chez ce nematode d'ARN double-brin inhibe 1'expression du gene qui contient la sequence de la molecule injectee. I1 a ensuite ete montre (FIRE et al., Nature, 391, 806, 1998) que c'etait 1'ARN double-brin qui etait a 1'origine de ce mecanisme. Dans la cellule, cet ARN double-brin est rapidement segmente par une endonuclease de type ARNase III, appelee DICER, en petits ARN de 21 a 28 nucleotides : les o small interfering ARN siARN (ZAMORE et al., Cell, 101, 25, 2000). Les siARNs sont incorpores dans un complexe enzymatique nomme RISC pour >. Le complexe RISC dissocie les brins des siARNs, et guide 1'appariement des brins antisens avec leurs sequences-cibles complementaires. Les ARNs messagers contenant ces sequences-cibles sont alors clives au niveau du duplex ainsi forme ou leur traduction par les ribosomes est bloquee. Chez les mammiferes, la presence d'ARN doublebrin de taille superieure a 30pb clans une cellule induit egalement une reponse mediee par 1'interferon, qui se traduit par une degradation des ARN messagers, non specifique de sequence. I1 a ete montre (ELBASHIR et al., Nature, 411, 494, 2001) que 1'utilisation de siARNs dans des cellules de mammiferes n'induisait pas cette reponse de type interferon, et permettait d'inhiber specifiquement 1'expression des genes contenant les sequences complementaires de ces siARNs. L'interference ARN a ete largement utilisee vis-a-vis de virus de diverses families, pour cibler differents genes dans le but d'etudier leur fonction, et/ou a des fins de therapie anti-virale. En ce qui concerne les virus a ARN monocatenaire negatif non segmente, les premieres experimentations ont ete effectuees chez un pneumovirus, le virus respiratoire syncitial (RSV) (BITKO & BARIK, BMC Microbiol, 1, 34, 2001). Un siARN ciblant le gene de la proteine P (sous-unite de 1'ARN polymerase ARN dependante), a permis d'obtenir une reduction de 90a de 1'expression de cette proteine, s'accompagnant d'une diminution drastique de 1'expression de 1'ensemble des proteines virales, et d'une reduction du titre viral ; un siARN ciblant le gene de la proteine F induit une reduction specifique de la synthese de cette proteine, sans affecter celle des autres proteines virales, et inhibe la formation de syncitia. La Demande PCT WO2005/056021 decrit 1'utilisation d'un siARN pour cibler et inactiver le gene codant pour une pro-Leine non-structurelle du RSV, la pro-Leine NS1, et augmenter ainsi la reponse interferon vis-a-vis du RSV. Une publication recente de S. BARIK (BARIK, Virus Res, 102, 27, 2004) passe en revue les differentes approches utilisees pour controler la replication de virus a ARN monocatenaire negatif non segmente a 1'aide de siARN. Le ciblage des genes codant les proteines P ou L, qui constituent des sous-unites essentielles du complexe polymerasique viral, conduit a une disparition quasi-totale de la synthese de 1'ARN viral ; le ciblage de genes non essentiels a la synthese de 1'ARN viral, mais impliques dans les interactions du virus avec la cellule-hote produit des resultats plus variables. L'interference ARN represente potentiellement un 20 outil particulierement intereenant pour la prophylaxie et/ou le traitement des infections virales. Cependant, malgre tout l'interet theorique de cette approche, sa mise en pratique pour obtenir une activite antivirale efficace pose differents problemes, 25 concernant notamment le choix des sequences-cibles utilisees dans les siARNs. On utilise ici le terme de > pour designer un gene dont on cherche a obtenir 1'extinction, et celui de >, pour designer une portion de 30 1'ARNm d'un gene-cible reconnue par un siARN particulier. L'un des problemes relatifs au choix de sequences-cibles decoule de la frequence des mutations, qui est generalement tres elevee chez les virus. Une mutation intervenant dans la sequence-cible d'un siARN peut permettre 35 au virus mutant d'echapper a la reconnaissance. Il est donc souhaitable de choisir une sequence-cible conservee entre differents virus, ou des mutations sont moms susceptibles d'apparaitre. D'autre part, meme s'il est relativement aise, pour un gene cible donne, de definir des siARNs permettant d'obtenir une certaine attenuation de 1'expression de ce gene, it est beaucoup plus problematique d'obtenir des siARNs permettant de parvenir a un niveau d'extinction du gene-cible suffisant pour inhiber la replication virale. Il est en effet connu que 1'efficacite de 1'interference ARN peut varier considerablement d'un siARN a 1'autre. De tres nombreux facteurs apparaissent impliques dans cette variabilite, relatifs notamment a la sequencecible elle-meme (par exemple la teneur en G/C, la presence de certaines bases a certaines positions), a la position de cette sequence-cible dans le gene cible, et a la presence de structures secondaires de 1'ARNm pouvant diminuer 1'accessibilite de la sequence-cible pour le siARN. Differentes methodes ont ete proposees pour tenter de predire 1'efficacite des siARNs (GILMORE et al., J Drug Target, 12, 315, 2004 ; UI-TEI & SAIGO, Tanpakushitsu Kakusan Koso, 49, 2662, 2004 ; AMARZGUIOUI & PRYDZ, Biochem Biophys Res Commun, 316, 1050, 2004 ; HEALE et al., Nucleic Acids Res, 33, e30, 2005 ; REYNOLDS et al., Nat Biotechnol, 22, 326, 2004 ; ARZIMAN et al., Nucleic Acids Res, 33, W582, 2005 ; HUESKEN et al., Nat Biotechnol, 23, 995, 2005). Cependant, malgre les progres effectues dans la rationalisation des criteres de choix des sequences-cibles optimales, ce choix demeure en grande partie empirique, et ses resultats aleatoires. Les Inventeurs ont emis 1'hypothese que 1'extinction du gene codant pour la proteine N des morbillivirus pourrait permettre d'obtenir 1'inhibition de la replication virale, et ont entrepris de rechercher si cette extinction pouvait etre obtenue a 1'aide de siARNs ciblant des regions de ce gene conservees entre les morbillivirus. Its sont parvenus a definir, dans 1'une de ces regions conservees, un locus contenant une sequence-cible permettant de definir des siARNs capables d'inhiber 1'expression de la proteine N, cette inhibition induisant une inhibition de la replication des morbillivirus. Au sens de la presente invention, on entend par inhibition de 1'expression d'un gene, une diminution d'au moins 85%, de preference au moms 90o du niveau d'expression d'un gene par rapport a son niveau normal. On entend par inhibition de la replication virale, une diminution d'au moins 95%, de preference au moins 98% de la quantite de virus par rapport a celle produite dans des conditions normales de replication. La presente invention a en consequence pour objet un procede pour inhiber la replication d'un morbillivirus, caracterise en ce qu'il comprend 1'inhibition du gene N d'un morbillivirus, a 1'aide d'un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant le motif defini par la sequence generale suivante : RRWYNNRHUGGUUHGARA (SEQ ID NO: 1) Bans laquelle : A = Adenine C = Cytosine G = Guanine U = Uracile R = A ou G Y = C ou U W = A ou U H = A ou C ou U N= A ou C ou G ou U. La sequence generale SEQ ID NO: 1 a ete etablie a partir de 1'alignement des sequences des genes N des morbillivirus PPRV, RPV, MV, CDV, DMV, et PDV, represents sur la Figure 2. La presente invention a egalement pour objet des ARNs interferents utilisables pour la mise en oeuvre du procede conforme a 1'invention, a savoir des ARNs interferents diriges contre la region du gene N d'un morbillivirus contenant le motif defini par la sequence generale SEQ ID NO: 1. Par exemple, pour inhiber 1'expression du gene N du virus de la rougeole, on choisira un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GGUUCGGAUGGUUCGAGA (SEQ ID NO: 2) ; pour inhiber 1'expression du gene N du RPV, on choisira un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : AGUCUUACUGGUUUGAGA (SEQ ID NO: 3) ; pour inhiber l'expression du gene N du PPRV, on choisira un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GGAUCAACUGGUUUGAGA (SEQ ID NO: 4) ; pour inhiber 1'expression du gene N du CDV, on choisira un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : AAUUAGGCUGGUUAGAAA (SEQ ID NO: 5) ; pour inhiber 1'expression du gene N du PDV, on choisira un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : AAAUGGGCUGGUUAGAAA (SEQ ID NO: 6) ; pour inhiber 1'expression du gene N du DMV, on choisira un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GAACCCAUUGGUUUGAGA (SEQ ID NO : 7). Typiquement, un ARN interferent conforme a 1'invention comprend une portion de 19 a 29 pb, de preference de 19 a 23 pb, d'une sequence antisens du gene N d'un morbillivirus, ladite portion contenant un motif defini par la sequence generale UYUCDAACCADYNNRWYY (SEQ ID NO: 8), dans laquelle A, C, G, U, R, Y, W, et N sont tels que definis ci-dessus et D = G, A ou U. La sequence SEQ ID NO: 8 represente la sequence antisens de la sequence-cible SEQ ID NO: 1 definie cidessus. Par exemple, dans le cas du virus de la rougeole, un ARN interferent conforme a 1'invention contient au moins la sequence suivante : UCUCGAACCAUCCGAACC (SEQ ID NO: 9) ; dans le cas du RPV, un ARN interferent conforme a 1'invention contient au moins la sequence suivante : UCUCAAACCAGUAAGACU (SEQ ID NO: 10) ; dans le cas du PPRV, un ARN interferent conforme a 1'invention contient au moins la sequence suivante : UCUCAAACCAGUUGAUCC (SEQ ID NO: 11) ; dans le cas du CDV, un ARN interferent conforme a 1'invention contient au moins la sequence suivante : UCUCUAACCAGCCUAAUU (SEQ ID NO: 12) ; dans le cas du PDV, un ARN interferent conforme a 1'invention contient au moms la sequence suivante : UUUCUAACCAGCCCAUUU (SEQ ID NO: 13) ; dans le cas du DMV, un ARN interferent conforme a 1'invention contient au moms la sequence suivante : UCUCAAACCAAUGGGUUC (SEQ ID NO : 14). Le cas echeant, un ARN interferent conforme a 1'invention peut etre utilise en combinaison avec un ou plusieurs autres ARN interferents ciblant d'autres regions du genome de morbillivirus, et notamment d'autres regions du gene N. Dans ce cadre, on peut notamment utiliser, en combinaison avec un ARN interferent conforme a 1'invention : - un ARN interferent dirige contre une region de 1'ARNm du gene N contenant un motif defini par la sequence generale suivante : GSMGRUUYAUGGUVKCDYU (SEQ ID NO : 15), dans laquelle A, C, G, U, R, Y, et D sont tels que definis ci dessus et M = A ou C, K = G ou U, S = G ou C, V = G, A ou C, et/ou - un ARN interferent dirige contre une region de 1'ARNm du gene N contenant un motif defini par la sequence generale suivante : GCHYUDGGNYUDCAYGARU (SEQ ID NO : 16) dans laquelle A, C, G, U, R, Y, D, H, et N sont tels que definis ci-dessus. Les sequences generales SEQ ID NO: 15 et SEQ ID NO: 16 ont ete etablies a partir de 1'alignement des sequences des genes N des morbillivirus PPRV, RPV, MV, CDV, DMV, et PDV, represents sur la Figure 2. Par exemple : - pour inhiber 1'expression du gene N du virus de la rougeole, on peut utiliser, en combinaison avec un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence GGUUCGGAUGGUUCGAGA (SEQ ID NO: 2), un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GCCGAUUCAUGGUCGCUCU (SEQ ID NO: 17) et/ou un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GCUCUUGGACUGCAUGAAU (SEQ ID NO : 18); - pour inhiber 1'expression du gene N du RPV, on peut utiliser, en combinaison avec un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence AGUCUUACUGGUUUGAGA (SEQ ID NO: 3) un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GCAGAUUUAUGGUGGCAUU (SEQ ID NO: 19) et/ou un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GCACUGGGCCUGCAUGAAU (SEQ ID NO 20) - pour inhiber 1'expression du gene N du PPRV, on peut utiliser, en combinaison avec un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence GGAUCAACUGGUUUGAGA (SEQ ID NO: 4) un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GGCGGUUCAUGGUAUCUCU (SEQ ID NO: 21) et/ou un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GCAUUAGGCCUUCACGAGU (SEQ ID NO : 22); - pour inhiber 1'expression du gene N du CDV, on peut utiliser, en combinaison avec un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence AAUUAGGCUGGUUAGAGA (SEQ ID NO: 5) un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GGCGAUUCAUGGUGGCGCU (SEQ ID NO: 23) et/ou un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GCUCUUGGGUUGCAUGAGU (SEQ ID NO 24) - pour inhiber 1'expression du gene N du PDV, on peut utiliser, en combinaison avec un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence AAAUGGGCUGGUUAGAAA (SEQ ID NO: 6) un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GGCGAUUUAUGGUGGCAUU (SEQ ID NO: 25) et/ou un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GCACUUGGUCUACAUGAGU (SEQ ID NO 26) - pour inhiber 1'expression du gene N du DMV, on peut utiliser, en combinaison avec un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence GAACCCAUUGGUUUGAGA (SEQ ID NO : 7) un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GGAGAUUCAUGGUGGCAUU (SEQ ID NO : 27) et/ou un ARN interferent ciblant la region de 1'ARNm dudit gene contenant la sequence suivante : GCCUUAGGGUUGCAUGAAU (SEQ ID NO : 28). Un ARN interferent dirige contre une region de 1'ARNm du gene N contenant un motif defini par la sequence SEQ ID NO : 15 comprend une portion de 19 a 29 pb, de preference de 19 a 23 pb, d'une sequence antisens du gene N d'un morbillivirus, ladite portion contenant la sequence generale ARHGMBACCAURAAYCKSC (SEQ ID NO: 29), dans laquelle A, C, G, U, R, Y, M, H, K et S sont tels que definis ci- dessus, et B = G, U ou C. Un ARN interferent dirige contre une region de 1'ARNm du gene N contenant un motif defini par la sequence SEQ ID NO : 16 comprend une portion de 19 a 29 pb, de preference de 19 a 23 pb, d'une sequence antisens du gene N d'un morbillivirus, ladite portion contenant la sequence generale AYUCRUGHARNCCHARDGC (SEQ ID NO: 30), dans laquelle A, C, G, U, R, Y, H, et N sont tels que definis ci-dessus. Les sequences SEQ ID NO: 29 et SEQ ID NO : 30 representent respectivement les sequences antisens des sequence-cible SEQ ID NO: 15 et SEQ ID NO : 16 definies cidessus. Par exemple, dans le cas du virus de la rougeole, un ARN interferent conforme a 1'invention contenant au moms la sequence UCUCGAACCAUCCGAACC (SEQ ID NO: 9) peut titre utilise en combinaison avec un ARN interferent contenant au moms la sequence suivante : AGAGCGACCAUGAAUCGGC (SEQ ID NO: 31) et/ou avec un ARN interferent contenant au moms la sequence suivante : AUUCAUGCAGUCCAAGAGC (SEQ ID NO : 32); dans le cas du RPV, un ARN interferent conforme a 1'invention contenant au moms la sequence UCUCAAACCAGUAAGACU (SEQ ID NO: 10) peut titre utilise en combinaison avec un ARN interferent contenant au moms la sequence suivante : AAUGCCACCAUAAAUCUGC (SEQ ID NO: 33) et/ou avec un ARN interferent contenant au moms la sequence suivante : AUUCAUGCAGGCCCAGUGC (SEQ ID NO : 34) ; dans le cas du PPRV, un ARN interferent conforme a 1'invention contenant au moms la sequence UCUCAAACCAGUUGAUCC (SEQ ID NO: 11) peut titre utilise en combinaison avec un ARN interferent contenant au moms la sequence suivante : AGAGAUACCAUGAACCGCC (SEQ ID NO: 35) et/ou avec un ARN interferent contenant au moms la sequence suivante : ACUCGUGAAGGCCUAAUGC (SEQ ID NO : 36) ; dans le cas du CDV, un ARN interferent conforme a 1'invention contenant au moins la sequence UCUCUAACCAGCCUAAUU (SEQ ID NO: 12) peut etre utilise en combinaison avec un ARN interferent contenant au moins la sequence suivante : AGCGCCACCAUGAAUCGCC (SEQ ID NO: 37) et/ou avec un ARN interferent contenant au moins la sequence suivante : ACUCAUGCAACCCAAGAGC (SEQ ID NO : 38) ; dans le cas du PDV, un ARN interferent conforme a 1'invention contenant au moins la sequence UUUCUAACCAGCCCAUUU (SEQ ID NO: 13) peut etre utilise en combinaison avec un ARN interferent contenant au moins la sequence suivante : AAUGCCACCAUAAAUCGCC (SEQ ID NO: 39) et/ou avec un ARN interferent contenant au moins la sequence suivante : ACUCAUGUAGACCAAGUGC (SEQ ID NO : 40) ; dans le cas du DMV, un ARN interferent conforme a 1'invention contenant au moins la sequence UCUCAAACCAAUGGGUUC (SEQ ID NO : 14) peut etre utilise en combinaison avec un ARN interferent contenant au moins la sequence suivante : AAUGCCACCAUGAAUCUCC (SEQ ID NO: 41) et/ou avec un ARN interferent contenant au moins la sequence suivante : AUUCAUGCAACCCAAAAGC (SEQ ID NO : 42). Les differents ARNs interferents definis ci-25 dessus peuvent se presenter sous diverses formes. I1 peut s'agir d'un ARN antisens simple-brin, capable de s'integrer dans le complexe RISC, et de s'apparier avec la sequence cible, induisant son clivage (TIJSTERMAN et al., Science, 295, 694, 2002 ; MARTINEZ et 30 al., Cell, 110, 563, 2002 ; BARIK, Virus Res, 102, 27, 2004). Cependant it s'agira de preference d'un ARN contenant a la fois la sequence-cible et la sequence antisens correspondante, sous forme de siARN, ou le cas 35 echeant de sh( >)ARNs (YU et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 99, 6047, 2002 ; PADDISON et al., Genes Dev, 16, 948, 2002 ; SIOLAS et al., Nat Biotechnol, 23, 227, 2005), qui est transforms dans la cellule en siARN. Les siARNs ont generalement une longueur de 21 a 25 nucleotides ; ils contiennent une portion double-brin, generalement de 19 a 21 nucleotides, constituee de la sequence cible et de la sequence antisens correspondante ; 1'un ou 1'autre brin, ou les deux, comporte(nt) generalement a 1'extremite 3' une extension simple-brin de 2 ou 3 nucleotides ; le plus souvent (mais non obligatoirement), it s'agit d'un dinucleotide, de sequence TT. Les shARNs sont constitues d'un seul brin, d'une longueur de 50 a 70 nucleotides, qui peut se replier pour former une structure en epingle a cheveux, contenant une portion double-brin d'une longueur de 19 a 29 nucleotides, constituee par la sequence cible et la sequence antisens correspondante, et une boucle de 5 a 10 nucleotides. Its peuvent comprendre egalement, a 1'extremite 3', une extension simple-brin de 2 ou 3 nucleotides. Les ARN interferents peuvent etre aussi utilises sous forme de precurseurs de microARNs (pre-miARN). Les microARNs (miARN) sont des ARNs d'environ 22 nucleotides, constitues d'un seul brin et qui se fixent sur 1'extremite 3' non codante de 1'ARNm, ce qui a pour effet de reprimer 1'expression de cet ARNm sans le degrader (contrairement aux siARNs ou shARNs). Les miARNs sont des molecules importantes pour la regulation naturelle >> de 1'expression des genes dans les cellules eucaryotes. Les miARNs sont produits dans le cytoplasme des cellules a partir de precurseurs nucleaires d'environ 70 nucleotides en forme d'epingle a cheveux, appeles pre-miARNs, olives en miARNs par le complexe DICER. La sequence d'un pre-miARN, identifie dans les conditions naturelles dans une cellule eucaryote, peut etre modifiee pour y introduire une sequence siARN, qui, liberee par le DICER ira alors degrader un autre ARNm. Ce pre-miARN modifie sert alors de > pour le siARN d'interet, ce qui a pour resultat d'augmenter 1'efficacite de 1'interference. La possibilite d'utiliser des pre-miARNs modifies pour inhiber la replication virale a ete demontree par BODEN et al. (Nucleic Acids Res., 13, 1154, 2004) pour HIV-1. Dans ce cas, 1'efficacite de 1'interference peut etre superieure de 80o a celle conferee par le siARN equivalent. Ces ARNs interferents peuvent titre obtenus par des methodes classiques de preparation des acides nucleiques (pour revue cf. par exemple AMARZGUIOUI et al., FEBS Lett, 579, 5974, 2005). Its peuvent ainsi titre prepares par exemple par synthese chimique, ou bien par genie genetique. Dans ce dernier cas on utilisera un vecteur d'expression contenant une sequence d'ADN pouvant titre transcrite en un ARN interferent conforme a 1'invention, placee sous controle d'un promoteur approprie. Generalement, ledit promoteur est un promoteur viral, par exemple le promoteur T3, T7, SP6, pCMV ou un promoteur reconnu par la polymerase III, par exemple le promoteur du petit ARN U6, ou celui de 1'ARN HI (MIYAGISHI & TAIRA, Nucleic Acids Res Suppl, 113, 2002) ; des promoteurs reconnus par la polymerase II sont toutefois egalement utilisables. Les vecteurs d'expression definis ci-dessus font egalement partie de 1'objet de la presente invention. De tres nombreuses methodes pour introduire des ARNs interferents dans des cellules ou des organismes dans lesquelles on souhaite obtenir 1'extinction de 1'expression d'un gene-cible sont connues en elles-memes. Dans le cas ou 1'on souhaite obtenir une extinction temporaire de 1'expression du gene-cible, on peut administrer directement 1'ARN interferent, preferablement associe a un vehicule approprie, permettant de faciliter son entree dans la cellule et/ou de le pro-Leger de la degradation. A titre d'exemples de vehicules utilisables, on citera notamment des liposomes ou des nanoparticules. Pour obtenir une extinction a plus long terme de 1'expression du gene-cible, notamment dans le cas des cellules de mammiferes, on utilise un vecteur permettant d'exprimer 1'ARN interferent dans la cellule. De tres nombreux vecteurs utilisables dans ce but sont connus en eux-memes. On citera notamment des vecteurs derives de retrovirus, de lentivirus, ou d'adenovirus (BARTON & MEDZHITOV, Proc Natl Acad Sci U S A, 99, 14943, 2002 ; TISCORNIA et al., Proc Natl Acad Sci USA, 100, 1844, 2003; XIA et al., Nat Biotechnol, 20, 1006, 2002 ; SHEN et al., FEBS Lett, 539, 111, 2003). La presente invention a egalement pour objet 1'utilisation d'un ARN interferent ou d'un vecteur d'expression conforme a 1'invention pour 1'obtention d'un medicament destine au traitement ou a la prevention d'une infection a morbillivirus, et notamment au traitement ou a la prevention de la rougeole, de la peste bovine, de la peste des petits ruminants, de la maladie de Carre, de la peste des phoques ou d'une infection au DMV. La presente invention a egalement pour objet une composition pharmaceutique comprenant un ARN interferent ou un vecteur d'expression conforme a 1'invention. Avantageusement, ladite composition pharmaceutique est un vaccin. La presente invention sera mieux comprise a 1'aide du complement de description qui va suivre, qui se refere a des exemples illustrant 1'obtention d'un ARN interferent conforme a 1'invention, et son utilisation pour bloquer la replication des morbillivirus PPRV et RPV. LEGENDE DES FIGURES Figure 1 : Representation schematique du genome des morbillivirus. Figure 2 : Alignement multiple des sequences d'ADNc du gene N de differents morbillivirus, PPRV (X74443), RPV (X98291), MV (Z66517), CDV (NC001921), DMV (AJ608288) et PDV (X75717) par le logiciel Vector NTI (Informax Inc). Les nucleotides identiques a ceux de la sequence consensus indiquee en bas de 1'alignement sont representes par un point ; les nucleotides qui different de la sequence consensus sont indiques. Les regions encadrees, ou tous les nucleotides sont indiques, representent les sequences-cibles des siARNs NRP1 et 2 sur la sequence de RPV, et des siARNs NPPR1 et 3 et des siARNs NPPR5 a 10 sur la sequence de PPRV. Les codons > et > sont en caracteres gras et soulignes. Figure 3 : Effet des siARNs sur 1'effet cytopathique (ECP) induit par le virus de la peste des petits ruminants sur des cellules VERO. Ordonnees echelle de pourcentages d'inhibition de 1'ECP. Abscisses : concentration des siARNs en nM. --•-- : siARN NPPR1 ; ù ^ . siARN NPPR2 ; : siARN NPPR3 ; ùAù siARN NPPR10 ; ùIù :siARN GAPDH ; - - cellules non-infectees; - -- . cellules infectees non transfectees. Figure 4 : Effet des siARNs sur 1'expression de la proteine N du virus PPRV dans les cellules VERO. (a) Abscisses fluorescence nee a 1'expression de la proteine N ; Ordonnees : nombre de cellules fluorescentes ; siARN1 siARN NPPR1 ; siARN2 : siARN NPPR2 ; cellules non .infectees : controle negatif ; cellules infectees controle positif. (b) Abscisses : concentration (en nM) des siARNs. Ordonnees : pourcentage de cellules fluorescentes ; ^ : siARN NPPR1 ; : siARN GAPDH. Figure 5 : effet des siARNs NPPR1, 2 et 3 sur la synthese d'ARN viraux mesuree par RT-PCR quantitative en temps reel (QRT-PCR). Representation de deux essais independants. Figure 6 : effet des siARNs NPPR1 (hachures verticales), NPPR2 (blanc), NPPR3 (grise), NPPR10 (noir) et GAPDH (hachures diagonales) sur la replication virale mesuree par le titre viral dans les tapis cellulaires infectes. EXEMPLES : MATERIEL ET METHODES 1) Virus et sequences d'interet Le virus PPRV utilise est la souche Nigeria 75/1 (DIALLO et al. Rev Elev Med Vet Pays Trop 42, 311, 1989), attenuee par passages en serie sur cellules (SK/l, BK/1 et Vero/55). Il s'agit d'une souche vaccinale. La sequence complete du genome de cette souche est disponible sur 30 Genbank (numero d'accession X74443) Le virus RPV utilise est la souche RBOK (PLOWRIGHT et FERRIS, Res. Vet. Sci, 3, 172, 1962), souche vaccinale a virus attenue par passages en serie sur cellules (BK/98 et Vero/2). La sequence complete du genome de cette 35 souche est disponible sur Genbank (numero d'accession Z30697) Les virus PPRV et RPV sont multiplies sur cellules VERO (ATCC) entretenues en monocouche en presence de milieu complet soit, milieu essentiel de Eagle MEM avec sels de Earle (Eurobio, Courtaboeuf, France), 10o de serum de foetus de bovin (Eurobio, Courtaboeuf, France) et 2 mM de L-glutamine (Gibco, Mife Technologies, UK). 2) Culture cellulaire, transfection et infection virale Des cellules VERO adherentes sont decollees a 1' aide d' une solution contenant de la trypsine et de 1' EDTA (Sigma-Aldrich, Lyon, France) puis resuspendues dans du milieu MEM (Minimum Eagle Medium) complet a raison de105 cellules/ ml et distribuees dans des puits de plaque 24 puits. Les plaques sont incubees a 37 C et 5% CO2. Par la suite, toutes les incubations de cellules ont lieu a 37 C en presence de 5% de CO2. Lorsque le tapis cellulaire atteint 70-80o de confluence, le milieu est elimine, puis les cellules sont incubees 30 minutes dans du milieu MEM depourvu de serum de foetus de bovin. Pour la transfection, le milieu est elimine et remplace par de la LIPOFECTAMINETM 2000 (Invitrogen) a raison de 500 ng dans 200 pl de milieu de transfection OPTI-MEM I Invitrogen) contenant les siRNA a differentes concentrations (de 6,5 a 100 nM final dans le melange de transfection). L'incubation suivante a lieu pendant trois heures. Pour 1'infection virale, le milieu de transfection est elimine et remplace par du MEM et 5% de 25 serum de foetus de bovin. Les cellules sont incubees 24 30 heures puis multiplicite cellule, en cytopathique sur 50o des contact, le milieu MEM, bovin est observees infectees avec le virus PPRV ou RPV a une d'infection de 0,1 dose cytopathique 50o par milieu sans serum de fetus de bovin, la dose 50o etant la quantite de virus induisant un ECP tapis cellulaires infectes. Apres une heure de tapis cellulaire est rince deux fois avec du puis du milieu MEM avec 5% de serum de fetus de ajoute sur les cellules. Les cellules sont quotidiennement et 1'evolution de 1'effet 35 cytopathique (ECP) du au virus est evaluee selon une grille de pourcentages (echelle allant de 0%, pas d'ECP a 100%, ECP maximal). L'effet des siARN est exprime en pourcentage d'inhibition de 1'ECP. Quatre a cinq jours apres infection, le surnageant de culture cellulaire d'une part, et les cellules d'autre part sont recueillis pour analyse en titrage viral et en expression d'antigenes viraux par cytometrie en flux. Des controles consistant en des cellules non transfectees et non infectees et des cellules infectees et non transfectees sont inclus dans chaque serie de tests des siARNs. 4) Titrage viral Les surnageants de culture cellulaire ou les cellules elles-memes sont conserves a -70 C jusqu'a utilisation pour titrage. Le titrage viral est effectue sur culture cellulaire (VERO) a partir d'une serie de dilutions de raison 10 de la suspension virale a titrer. Le titre est determine selon la methode de REED et MUENCH (Am J Trop Med Hyg, 127, 493, 1938) et exprime en dose cytopathique 50 (DCP50) par ml. 5) Mesure de 1'expression d'antigenes viraux L'expression des proteines de nucleocapside (N) et de matrice (M) virales a ete mesuree par cytometrie en flux en utilisant des anticorps monoclonaux specifiques : anticorps 38-4 specifique de la proteine N du PPRV ; anticorps IVB2-4 specifique de la proteine N du RPV ; anticorps 19-6 specifique de la proteine M du PPRV et de la proteine M du RPV (LIBEAU et al., Revue d'Elevage et de Medecine Veterinaire des Pays Tropicaux, 50, 181-190, 1997), et anticorps 11/295/33 specifique de la molecule CD8 lymphocytaire de porc (SAALMULLER et al., Vet Immunol Immunopathol, 43, 249, 1994) utilise comme controle isotypique de specificite du marquage. Les cellules adherentes sont decollees du plastique par incubation avec une solution contenant de la trypsine et de 1'EDTA pendant 5 minutes a 37 C. Les cellules sont lavees dans du tampon phosphate PBS, 0,1% d'azide de sodium, 5% de serum de cheval et 0,0062% de saponine (poids/volume). Elles sont denombrees et distribuees a raison de 106 de cellules par puits d'une plaque 96 puits. Tous les marquages sont effectues en plaque. Apres sedimentation des cellules par centrifugation et elimination du surnageant, 100 1 d'une dilution 1'anticorps monoclonal anti-N, anti-M ou ajoutes et les cellules re-suspendues m&canique. Les cellules sont incubees 30 Elles sont ensuite lavees deux fois dans phosphate, puis incubees 30 minutes a +4 C, dilution appropriee d'un anticorps anti-anticorps de souris, conjugue a la fluorescenne (BIORAD, France). Les cellules sont lavees deux fois puis fixes 15 minutes a temperature ambiante avec 100 !Al d'une solution de paraformaldehyde. Les cellules sont resuspendues clans 400 l de PBS FACS FLOW (Becton Dickinson, USA). L'analyse des cellules s'effectue au FACsort (Becton Dickinson, USA). Les debris cellulaires sont elimines de 1'analyse au FACS par un fenetrage place sur FSCxSSC (FSC : Forward SCatter ; SSC : Side SCatter), puis la fluorescence est mesuree sur 20 000 cellules. 6) Mesure quantitative de la synthese des ARN viraux Les cellules et le surnageant de culture sont recolt&s 96 heures apres infection et congeles a -70 C. L'ARN total est extrait a partir de 100 l de cette suspension cellulaire melanges a la solution de lyse du kit RNeasy, selon les instructions du fabricant (Qiagen, Courtaboeuf, France). La suite du protocole correspond au manuel d'instruction du fabricant. L'ARN extrait est conserve a -70 C. L'ARN est quantifie par QRT-PCR en une &tape (Brilliant SYBR Green QRT-PCR Master Mix, 1 step, Stratagene). Les amorces utilisees sont NP3bis = 5'-GTCTCGGAAATCGCCTCACAG-3' (sens) (SEQ ID NO : 43) et NP4bis = 5'-CCTCCTCCTGGTCCTCCAGAA-3' (antisens) (SEQ ID NO : 44). Ces amorces ont ete derivees des amorces pr&cedemment d&crites (COUACY-HYMANN et al., J Virol Methods, 100, 17, 2002) par addition d'un G en 5' de NP3bis et deletion de quatre bases en 3' et deletion de trois bases en 3' de NP4bis. Ces amorces amplifient un fragment de 351 bases. Une solution reactionnelle principale constitu&e de 12,5 l SYBR Green Master mix (2x), 2,5 l de 1 M de chaque amorce, 0,0625 l de Stratascript Reverse Transcriptase RT et 2,4375 l d'eau est deposee dans un microtube, puis 5 [Al de 1'ARN appropriee de isotypique sont par agitation minutes a +4 C. le meme tampon dans 50 l d'une extrait sont ajoutes. La QRT-PCR est mise en oeuvre sur un appareil Mx3000P (Stratagene, Amsterdam, NL) selon le protocole suivant : transcription inverse a 50 C pendant 30 minutes - denaturation a 95 C pendant 10 minutes amplification avec 35 cycles [95 C, 30 secondes ; 55 C, 1 minute ; 72 C, 30 secondes] dissociation avec un cycle [95 C, 1 minute ; 55 C, 30 secondes ; 95 C, 30 secondes] L'etalon standard pour la quantification est constitue du gene de la pro-Leine N du PPRV insere dans un plasmide pBluescript KS+ (COUACY-HYMANN et al., 2002, precite). Pour la quantification, le plasmide est linearise, purifie par precipitation a 1'alcool et dilue de fagon serielle de 10 en 10. La quantite d'ARN detectee dans les echantillons soumis a analyse est ramenee au nombre de copies de gene N incorporees dans la serie de dilutions de 1'etalon standard. EXEMPLE 1 : SELECTION ET SYNTHESE DE siARNs Les zones conservees du gene N ont ete localisees par un alignement multiple des sequences correspondantes issues de differents morbillivirus a 1'aide d'un logiciel d'analyse de sequences (Vector NTI package, Informax Inc). Cet alignement multiple de sequences a ete effectue sur les sequences des genes N des morbillivirus PPRV (souche vaccinale Nigeria 75/1; GenBank X74443), RPV (GenBank Z30697), MV (GenBank Z66517), CDV (GenBank NC 001921), DMV (GenBank AJ608288) et PDV (GenBank X75717). Dans les regions presentant le plus fort degre d'homologie, 7 sequences-cibles ont ete definies pour le virus PPRV. Les siARNs derives du gene N du virus PPRV, et contenant des sequences identiques aux sequences-cibles definies dans ce gene, sont denommes NPPR1, et NPPR5 a 10 ; un siARN denomme NPPR2, ne presentant au mieux que 58% d'identite avec la sequence du gene N du virus PPRV (en positions.256-274, 751-769, et 850-869 de la sequence d'ADNc), et un siARN denomme NPPR3, derive de la meme sequence cible que le siARN NPPR10, mais presentant une difference d'une base avec ladite sequence-cible (C dans la sequence cible remplace par G a 1'extremite 5' du brin sens du siRNA NPPR3) ont egalement ete synthetises. Pour le virus RPV, 2 sequences cibles ont ete definies au niveau du locus correspondant a la sequencecible du siARN-NPPR1. Les siARNs correspondants sont denommes NRP1 et NRP2. Tous les siARNs mentionnes ci-dessus ont ete 10 synthetises chimiquement par la societe Ambion (Europe) (Cambridgeshire, UK). Pour tester la specificite de 1'interference, un siARN ciblant la sequence de la Glyceraldehyde-3-phosphate deshydrogenase (GAPDH) a ete utilise : la sequence et le 15 siARN sont disponibles chez Ambion (Europe) (SilencerTM GAPDH siARN (Human) Control 4605). Toutes les sequences siARNs identifiees ont ete soumises a une recherche d'homologie dans Genbank a 1'aide du logiciel Blast. Le maximum d'identite observe entre le 20 siARN-GAPDH et la sequence codant pour la pro-Leine N du virus PPRV est de 72%. Les sequences des brins sens et antisens des differents siARNs mentionnes ci-dessus, ainsi que leur position par rapport a la sequence du gene N et par rapport 25 a la sequence du cadre de lecture dudit gene, sont indiquees dans le Tableau I ci-apres. Les positions des sequences cibles des siARNs NPPR1, NPPR3, NPPR5 a NPPR10, et NRP1 et NRP2 sont indiquees sur la Figure 2. EXEMPLE 2 : EFFET DES siARNs NPPR1, 2, ET 3 ET DU siRNAGAPDH SUR L'EFFET CYTOPATHIQUE DU VIRUS DE LA PESTE DES PETITS RUMINANTS. Des cellules VERO ont ete transfectees avec differentes doses des siARNs NPPR1, 2, et 3 ou du siARN-GAPDH, puis infectees par le PPRV, selon le protocole decrit daps la section > ; 1'effet cytopathique a ete evalue 4 jours apres infection, independamment par deux personnes differentes. La Figure 3 illustre les resultats observes : Parmi les siARNs testes, le siARN NPPR1 est celui qui inhibe le plus 1'ECP, quelle que soft la dose utilisee. A la dose de 100 nM, on observe une inhibition TABLEAU I Sequence Nom du siARN Position dans I'ADNc / dans le cadre de lecture siARN-NPPR1 sens : 5'-GGAUCAACUGGUUUGAGAAtt -3' (SEQ ID NO : 45) (position 480-498/428-446) antisens : 5'-UUCUCAAACCAGUUGAUCCtt û 3' (SEQ ID NO : 46) siARN-NPPR2 sens : 5'-GCUCACCUUCAUUCUUUUCtt -3' (SEQ ID NO:47) (seulement 63% d'homologie) antisens : 5'-GAAAAGAAUGAAGGUGAGCtc -3' (SEQ ID NO: 48) siARN-NPPR3 Sens : 5'-GGCCAGUUUCAUUCUUACUtt -3' (SEQ ID NO : 49) (position 850-868/798-816) antisens : 5'-AGUAAGAAUGAAACUGGCCtc -3' (SEQ ID NO : 50) siARN-NPPR5 sens: 5'- GAGAACUCAAUUCAGAACAtt -3'(SEQ ID NO:51) (position 1001-1019/949-968) antisens : 5'- UGUUCUGAAUUGAGUUCUCtt -3' (SEQ ID NO: 52) siARN-NPPR6 sens : 5'- GGCGGUUCAUGGUAUCUCUtt -3' (SEQ ID NO: 53) (position 741-759/689-707) antisens : 5'- AGAGAUACCAUGAACCGCCtt -3' (SEQ ID NO : 54) siARN-NPPR7 sens : 5'- GCAUUAGGCCUUCACGAGUtt -3' (SEQ ID NO : 55) (position 869-917/847-865) antisens : 5'- ACUCGUGAAGGCCUAAUGCtt -3' (SEQ ID NO : 56) siARN-NPPR8 sens : 5'- GUAUCAACAGCUAGGAGAGtt -3' (SEQ ID NO : 57)(position 958-976/906-924) antisens : 5'- CUCUCCUAGCUGUUGAUACtt -3' (SEQ ID NO : 58) siARN-NPPR9 sens:5'-GAACUUUGGCAGGUCAUAUtt -3'(SEQ ID No:59)(position 1102-1120/1050-1068) antisens : 5'- AUAUGACCUGCCAAAGUUCtt -3' (SEQ ID NO : 60) siARN-NPPRIO sens : 5'- CGCCAGUUUCAUUCUUACUtt -3' (SEQ ID NO: 61) (position 850-868/798-816) antisens : 3'- AGUAAGAAUGAAACUGGCGtt -3' (SEQ ID NO: 62) siARN-NRP 1 sens : 5'-GCAGUCUUACUGGUUUGAGtt -3' (SEQ ID NO: 63) (position 478-496/426-444) antisens : 5'-CUCAAACCAGUAAGACUGCtt -3' (SEQ ID NO : 64) siARN-NRP2 sens : 5'-CAGUCUUACUGGUUUGAGAtt -3' (SEQ ID NO: 65) (position 479-497/427-445) antisens : 5'-UCUCAAACCAGUAAGACUGtc -3' (SEQ ID NO: 66) siARN-GAPDH sens : 5'-AAGGUCAUCCAUGACAACUtt -3' (SEQ ID NO: 67) antisens : 5'-AGUUGUCAUGGAUGACCUUtt -3' (SEQ ID NO : 68) complete de 1'ECP. Le siARN NPPR3, dont la sequence varie d'un nucleotide par rapport a la sequence cible definie sur le virus (cf. Exemple 1) inhibe 1'ECP de fagon moins marquee que NPPR1. Le siARN NPPR10, qui dirige contre la meme sequence-cible que le siARN NPPR3, mais qui, contrairement a ce dernier est parfaitement complementaire de ladite sequence-cible, inhibe egalement 1'ECP de fawn moins marquee que NPPR1 (resultats non-montres) Comme attendu, le siARN-NPPR2 ainsi que le 10 siARN-GAPDH ne produisent aucune neutralisation de 1'ECP. EXEMPLE 3 : EFFET DES siARN SUR L'EXPRESSION DE LA PROTEINE N ET DE LA PROTEINE M DU PPRV ET DU RPV. Des cellules VERO ont ete transfectees avec differentes doses du siARN NPPR1, du siARN NPPR2 ou du siARN 15 GAPDH, puis infectees par le PPRV, comme decrit clans la section > ; 4 a 5 jours apres infection, la production de la proteine N dans les cellules est mesuree par cytometrie en flux, comme decrit dans la section >. 20 La figure 4 (a) illustre les resultats observes dans des cellules transfectees avec 100 nM du siARN NPPR1 ou du siARN NPPR2, ainsi que dans des cellules non-infectees et non transfectees, et dans des cellules non-transfectees et infectees, utilisees a titre de controle. On observe une 25 tres forte inhibition de 1'expression de la pro-Leine N dans les cellules infectees transfectees avec le siARN NPPR1, alors que dans celles transfectees avec le siARN NPPR2, le profil d'expression de la proteine N est tres similaire a celui observe avec les cellules infectees non-transfectees, 30 bien qu'une certaine diminution de 1'expression soit observee. La figure 4 (b) illustre les resultats observes dans des cellules transfectees avec differentes doses du siARN NPPR1 ou du siARN GAPDH. On observe une diminution 35 tres significative du pourcentage de cellules exprimant la proteine N a partir de 12,5 nM de siARN NPPR1. Dans une seconde serie d'experimentations, 1'expression de la pro-Leine N et de la pro-Leine M a ete mesuree : - Bans des cellules VERO transfectees avec la dose optimale pour chacun des siARNs testes, a savoir 100 nM pour les siARNs NPPR1, 2, 3, ou 5 a 9, ou 25 nM pour le siARN NPPR10 , puis infectees avec PPRV ou avec RPV; - dans des cellules VERO transfectees avec 100 nM de Pun des siARNs NRP1 ou NRP2, puis infectees avec PPRV ou avec RPV. La mesure de 1'expression de la pro-Leine M permet de verifier que 1'inhibition de 1'expression de la pro-Leine N entraine une inhibition des autres proteines virales, ce qui traduit un effet sur la replication du genome viral. Les resultats sont resumes par le Tableau II ciapres. TABLEAU II Inhibition de Inhibition de Inhibition de Inhibition de I'expression de ('expression de la ('expression de la I'expression Ia proteine de nucleoproteine de la nucleoproteine matrice PPRV (en RPV proteine de PPRV (en %) %) (en %) matrice RPV (en %) siARN-NPPR1 (100 nM) 90 89 0 0 siARN-NPPR2 (100 nM) 25 11 nt nt siARN-NPPR3 (100 nM) 40 30 nt nt siARN-NPPR5 (100 nM) 16 nt nt nt siARN-NPPR6 (100 nM) 68 nt nt nt siARN-NPPR7 (100 nM) 63 nt nt nt siARN-NPPR8 (100 nM) 34 nt nt nt siARN-NPPR9 (100 nM) 35 nt nt nt siARN-NPPR10 (25 nM) 60 55 nt nt siARN-NRP1 (100 nM) 0 nt 35 31 siARN- NRP2 (100 nM) 0 nt 97 92,5 siARN-GAPDH (100 nM) 0 5 13 3 nt : non teste Quatre des siARN testes (siARNs NPPR1, 6, 7 et 10) ont un effet significatif sur le PPRV. Parmi ceux-ci, seul le siARN NPPR1 permet d'atteindre un pourcentage de 90% d'inhibition de 1'expression de la pro-Leine N (les autres siRNAs ne permettent pas d'atteindre 70o d'inhibition de 1'expression) et un pourcentage de 89% d'inhibition de 1'expression de la pro-Leine M. En ce qui concerne le RPV, seul le siARN NRP2 possede un effet significatif. Le siARN NRP1, qui ne Nature du siARN (concentration optimale) contient pas la totalite de la sequence cible, a un effet tres amoindri. Ces resultats montrent que le locus reconnu par les siARNS NPPR1, et NRP2 constitue une cible particulierement interessante pour 1'extinction du gene de la proteine N des morbillivirus. Cette cible est tres circonscrite, puisqu'une base manquante diminue considerablement les effets obtenus. EXEMPLE 4 : EFFET INHIBITEUR DU siARN NPPR1 SUR LA SYNTHESE 10 DES ARN VIRAUX. L'effet du siARN NPPR1 sur la replication virale a ete evalue en quantifiant la synthese de 1'ARN viral, comme decrit dans la section >, dans des cellules VERO infectees par PPRV, non-transfectees, ou 15 transfectees avec 100 nM de l'un des siARNs NPPR1, NPPR3, NPPR2 ou GAPDH, ainsi que dans des cellules VERO noninfectees. Les resultats sont illustres par la figure 5. Dans les cellules infectees non-transfectees, la 20 replication virale se traduit par une quantite d'ARN viral 100 fois superieure a celle apportee par 1'inoculum initial. La transfection avec les siARNs NPPR2 et GAPDH n'a pas d'effet significatif sur la replication virale. Dans les cellules transfectees avec NPPR3, la quantite d'ARN viral 25 demeure plus de 10 fois superieure a celle apportee par 1'inoculum initial. En revanche, dans les cellules transfectees avec NPPR1, la quantite d'ARN viral correspond a celle apportee par 1'inoculum initial, ce qui confirme que ce siARN inhibe la replication virale. 30 EXEMPLE 5 : EFFET INHIBITEUR DU siARN NPPR1 SUR LA REPLICATION VIRALE MESUREE PAR LE TITRE VIRAL L'effet du siARN NPPR1 sur la replication virale a ete evalue en mesurant le titre viral, comme decrit dans Materiels et Methodes >>, 4 jours apres 1'infection par 35 PPRV de cellules VERO transfectees avec 6,25, 12,5, 25, 50 ou 100 nM de l'un des siARNs NPPR1, NPPR2, NPPR3, NPPR10 ou GAPDH. Les resultats sont illustres par la figure 6. Pour les cellules transfectees par l'un des siARNs NPPR2, NPPR3 et NPPR10, on observe une Legere diminution du titre viral par rapport au controle (cellules transfectees par le siARN GAPDH), qui ne varie pas significativement en fonction de la concentration testee. Pour les cellules transfectees par NPPR1, le titre viral diminue tres significativement a partir de 12,5 nM de siARN. A 100 nM de siARN, on observe une inhibition totale de la replication virale. REVENDICATIONS 1) ARN interferent, caracterise en ce qu'il est dirige contre une region de 1'ARNm du gene N codant pour la nucleoproteine d'un morbillivirus, ladite region contenant le motif defini par la sequence generale suivante : RRWYNNRHUGGUUHGARA (SEQ ID NO: 1) dans laquelle : A = Adenine C = Cytosine G = Guanine U = Uracile R = A ou G Y = C ou U W = A ou U H = A ou C ou U N = A ou C ou G ou U. 2) ARN interferent selon la revendication 1, caracterise en ce que ledit motif est defini par une sequence cible choisie parmi : - la sequence GGUUCGGAUGGUUCGAGA (SEQ ID NO: 2) - la sequence AGUCUUACUGGUUUGAGA (SEQ ID NO: 3) - la sequence GGAUCAACUGGUUUGAGA (SEQ ID NO: 4) - la sequence AAUUAGGCUGGUUAGAGA (SEQ ID NO: 5) - la sequence AAAUGGGCUGGUUAGAAA (SEQ ID NO: 6) ; - la sequence GAACCCAUUGGUUUGAGA (SEQ ID NO: 7) 3) ARN interferent selon la revendication 1, caracterise en ce qu'il comprend une portion de 19 a 29 pb d'une sequence antisens de celle du gene N d'un morbillivirus, ladite portion contenant un motif defini par 30 la sequence generale UYUCDAACCADYNNRWYY (SEQ ID NO: 8), dans laquelle A, C, G, U, R, Y, W et N sont tels que definis ci-dessus, et D = G, A ou U. 4) ARN interferent selon une quelconque des revendications 1 a 3, caracterise en ce qu'il est choisi 35 parmi les siARNs, les shARNs et les pre-miARNs. 5) Vecteur d'expression contenant une sequence d'ADN pouvant titre transcrite en un ARN interferent selon 15 20 25une quelconque des revendications 1 a 4, placee sous controle d'un promoteur approprie. 6) Utilisation d'un ARN interferent selon une quelconque des revendications 1 a 4 pour 1'obtention d'un medicament destine au traitement ou a la prevention d'une infection a morbillivirus. 7) Utilisation selon la revendication 6, caracterisee en ce que ledit ARN interferent est utilise en combinaison avec au moins un autre ARN interferent choisi parmi : - un ARN interferent dirige contre une region de 1'ARNm du gene N contenant un motif defini par la sequence generale GSMGRUUYAUGGUVKCDYU (SEQ ID NO : 15), dans laquelle A, C, G, U, R, Y, et D sont tels que definis ci dessus et M = A ou C, K = G ou U, S = G ou C, V = G, A ou C ; - un ARN interferent dirige contre une region de 1'ARNm du gene N contenant un motif defini par la sequence generale GCHYUDGGNYUDCAYGARU (SEQ ID NO : 16) Bans laquelle A, C, G, U, R, Y, D, H, et N sont tels que definis ci- dessus. 10) Utilisation selon une quelconque des revendications 6 ou 7, caracterisee en ce que ledit morbillivirus est choisi dans le groupe constitue du virus de la rougeole (NV), du virus de la peste bovine (RPV), du virus de la peste des petits ruminants (PPRV), du virus de la maladie de Carre (CDV), du virus de la peste des phoques (PDV), et du morbillivirus du dauphin (DMV). 11) Composition pharmaceutique comprenant un ARN interferent selon une quelconque des revendications 1 a 4. 10) Composition pharmaceutique selon la revendication 9, caracterisee en ce qu'elle comprend en outre au moins un ARN interferent tel que defini dans la revendication 7. 11) Composition pharmaceutique selon une quelconque des revendications 9 ou 10, caracterisee en ce qu'il s'agit d'un vaccin.