Brevet FR2896694A1 — publié le 20070803

UTILISATION D'INHIBITEURS DE 15-LIPDXYGENASES DANS LE TRAITEMENT DU SYNDROME METABOLIQUE La présente demande a pour objet le traitement des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique, notamment de l'obésité abdominale, et/ou de ses conséquences. Plus spécifiquement, la présente demande concerne l'utilisation d'inhibiteurs de la 15-lipoxygénase (LO) pour la préparation de médicaments utiles dans le traitement d'au moins une des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ses conséquences. INTRODUCTION Le syndrome métabolique est aujourd'hui reconnu comme l'un des problèmes majeurs de santé publique. En effet, les personnes présentant un syndrome métabolique sont exposées à un risque trois fois plus élevé d'infarctus du myocarde ou d'accident vasculaire cérébral et à un risque deux fois plus élevé d'en mourir par rapport aux personnes non atteintes. Actuellement, il n'existe pas de définition universelle du syndrome métabolique. Trois définitions sont communément utilisées: la définition de la NCEP ATPIII (National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III), la définition de l'OMS (Organisation Mondiale de la Santé) (Moller DE and Kaufman KD, 2005) et la définition de la FID (Fédération Internationale du Diabète) (Alberti KG et al., 2005). La définition du NCEP ATPIII repose sur les cinq paramètres suivants, la présence de trois critères suffisant à porter le diagnostic: - Cholestérol HDL _ 110 mg/dl (Hyperglycémie); - Tension artérielle ? 130-85 mm Hg (Hypertension) ; Surcharge pondérale caractérisée par un tour de taille > 102 cm pour les hommes et 88 cm pour les femmes (obésité abdominale). Pour l'OMS, le syndrome métabolique se caractérise par une glycémie à jeun supérieur à 110 mg/dl et/ou par une résistance à l'insuline, associée(s) à au moins 2 des symptômes suivants: Une obésité, principalement abdominale, définie par un Indice de Masse Corporelle (IMC) élevé (> 30 kg/m2) et/ou par un rapport taille-hanche élevé (> 0,9 chez les hommes et 0,85 chez les femmes) ; Un taux élevé de triglycérides (>_ 150 mg/dl) ; Un faible taux de HDL-cholestérol ( _ 140/90 mm Hg); Une microalbuminie (excrétion urinaire de l'albumine >_ 20 pg/min ou ratio albumine/créatinine >_ 30 mg/g ). Au sens de la présente invention, la définition du syndrome métabolique est celle de la FID caractérisée principalement par une obésité centrale (définie par un tour de taille élevé (variable en fonction des groupes ethniques) et/ou par un IMC 30 kg/m2) associé à l'un des facteurs suivants : Un taux élevé de triglycérides (>_ 150 mg/dl ou défini par l'existence d'un traitement spécifique) ; Un faible taux de HDL-cholestérol ( _ 85 mm Hg) ; Un taux élevé de glycémie veineuse (? 5,6 mmol/L à jeun ou défini par le diagnostique d'un diabète de type Il)ä Selon ces trois définitions, le syndrome métabolique se définit donc globalement comme une association de plusieurs perturbations métaboliques : l'obésité, en particulier l'obésité abdominale, une concentration anormale de lipides sanguins caractérisée par un taux élevé de triglycérides et/ou par un faible taux de cholestérol HDL (dyslipidémie), une glycémie élevée et/ou une résistance à l'insuline et une hypertension, susceptibles d'entraîner une augmentation du risque de survenue de maladies cardiovasculaires. II peut être également caractérisé par une albuminurie, des troubles de la coagulation ou du flux sanguin et des anomalies des structures vasculaires. Globalement, l'incidence du syndrome métabolique atteint un taux alarmant. Cependant, la prévalence exacte du syndrome reste inconnue. Selon l'OMS, sa prévalence est de l'ordre de 25 à 45 % chez les hommes âgés de plus de 40 ans. Si les tendances actuelles se confirment, les décès précoces et les incapacités résultant de ce syndrome paralyseront les budgets consacrés à la santé de nombreux pays développés et en développement. Ces données justifient donc l'adoption de mesures énergiques pour cerner le syndrome métabolique dans l'espoir de réduire significativement la morbidité et la mortalité cardio-vasculaires. Mais si on connaît les perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et le moyen de le dépister rapidement, les questions relatives au traitement sont encore nombreuses. La prise en charge repose tout d'abord sur une modification du mode de vie. En effet, des règles d'hygiène et de diététique restent les principales recommandations : plus d'exercice physique et une alimentation plus équilibrée. Mais de tels changements prennent beaucoup de temps et se caractérisent par un taux de récidive extrêmement important : le versant pharmacologique présente donc un intérêt majeur pour traiter les perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou de ses conséquences. La différenciation adipocytaire est le processus par lequel les cellules passent du stade de pré-adipocytes à celui d'adipocytes. Cette différenciation se fait en trois étapes : l'hyperplasie des préadipocytes (seules cellules à se multiplier), la différenciation des pré-adipocytes en adipocytes et enfin l'accumulation des triglycérides dans les adipocytes matures lors du processus d'hypertrophie. De manière générale, la différenciation adipocytaire est le plus souvent régulée aussi bien de façon positive que négative par des facteurs présents dans le milieu dans lequel se trouve les cellules, tels que des hormones, des cytokines (ou adipokines), des facteurs de croissance, des vitamines, etc. Certains auteurs ont mentionné le rôle des métabolites de l'acide arachidonique, issus de la voie des cyclooxygénases et des lipoxygénases, dans la différenciation adipocytaire (Shillabeer G et al., 1998). De plus, la différenciation adipocytaire est régulée de manière coordonnée par un réseau de facteurs de transcription. Elle est initiée par la sortie du cycle cellulaire et l'activation des facteurs C/EBPa, C/EBP8 (CCAAT/Enhancer-Binding Protein) et SREBP-1 qui induisent l'expression du récepteur nucléaire PPARy (Peroxisome Proliferator-Activated Receptors gamma) (Fajas L et al., 1998). Le Tissu Adipeux (TA) abdominal viscéral constitue un facteur de risque majeur dans la physiopathologie du syndrome métabolique. L'augmentation de la masse adipeuse chez les sujets obèses a lieu principalement au niveau du tronc dans les régions intra-abdominale et péri-viscérale: on parle alors de TA abdominal viscéral. L'augmentation de la masse du TA abdominal sous-cutané est marginale chez les sujets obèses. On observe alors une augmentation du rapport entre le TA abdominal viscéral et le TA abdominal sous-cutané. Même les individus non obèses mais développant une résistance à l'insuline présentent une augmentation du rapport entre le TA abdominal viscéral et le TA abdominal sous-cutané. Ce développement du TA abdominal viscéral est associé à une augmentation spectaculaire du risque de maladies cardio-vasculaires (Larsson B et al., 1984) et (Lapidus L et al., 1984). La diminution de la quantité de TA abdominal viscéral doit . constituer un objectif thérapeutique de première importance dans la prise en charge du sujet présentant un syndrome métabolique. En effet, une perte de poids dans la partie abdominale viscérale relativement modeste (5 à 10%) entraîne des effets bénéfiques sur la majorité des facteurs de risque des maladies cardio-vasculaires et du diabète de type 2. On observe une amélioration du profil lipidique, des indices de sensibilité à l'insuline, de l'hypertension artérielle et des variables associées au risque accru de thrombose et d'inflammation. L'approche médicamenteuse pour limiter ou empêcher le développement du TA met en jeu, soit l'effet anorexigène de molécules intervenant au niveau du système nerveux central, soit l'effet de molécules qui augmentent les dépenses énergétiques en augmentant la production de chaleur, soit la séquestration des lipides alimentaires dans la lumière intestinale. Toutefois, les approches médicamenteuses actuelles présentent le désavantage d'être accompagnées d'effets secondaires plus ou moins tolérables. La nécessité de trouver des stratégies thérapeutiques efficaces de traitement des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique, et notamment de l'obésité abdominale, et/ou de ses conséquences est donc devenue une urgence mondiale. Les lipoxygénases sont des enzymes, identifiées chez les plantes et les animaux, qui catalysent l'oxydation des acides gras poly-insaturés, incluant ceux trouvés dans les lipoprotéines, en dérivés hyctroperoxy (Kuhn H and Borngraber S, 1999). Chez l'homme, il existe 6 gènes codant pour des lipoxygénases : la e-LOX-3 (Epidermis-type lipoxygenase 3), la 5-LO (5-lipoxygenase), la 12-LO (12-lipoxygenase), 12(R)-LOX (12R-lipoxygenase), la 15-LO-1 (type réticulocyte û 15-lipoxygenase-1) et la 15-LO-2 (15-lipoxygenase-2). Ces différentes lipoxygénases sont nommées selon la spécificité de la position d'oxydation de l'acide arachidonique. Les 12-LO et les 15-LO transforment respectivement l'acide arachidonique en acide 12(S)-hydroxypéroxy-5,8,10,14(Z,Z,E,Z) éicosatétraénoïque (12(S)-HPETE) et en acide 15(S)-hydroxypéroxy-5,8,10,14(Z,Z,E,Z) éicosatétraénoïque (15(S)-HPETE). La réduction biochimique de la 12(S)-HPETE et 15(S)-HPETE conduit respectivement à la formation de 12(S)-HETE (acide 12-(S)- hydroxy-éicosatétraenoïque) et 15(S)-HETE (acide 15-(S)-hydroxy- éicosatétraenoïque) qui est le précurseur d'une classe de composés connus sous le nom de lipoxines (Kuhn H and Borngraber S, 1999). Alors que l'acide arachidonique est le substrat exclusif de la 15-LO-2 (Brash AR et al., 1997), la 15-LO-1 métabolise également, et de manière préférentielle, l'acide linoléique en acide 13(S)-hydroxyperoxy-9Z,11 E-octodécadiénoïque (13(S)-HODE) (Hsi LC et al., 2002). Certaines lipoxygénases peuvent également produire un mélange de produits dont les proportions relatives varient en fonction des espèces. Ainsi, la 15-LO-1 humaine produit, en plus du 15(S)-HETE, de petites quantités de 12(S)-HETE (5 à 10 % du produit final). Chez la souris, la 12/15-LO convertit l'acide arachidonique en 12(S)-HETE et en 15-(S)-HETE avec une proportion de 3 :1 (Kuhn H and Borngraber S, 1999). Il en est de même pour la 12-LO de rat (Watanabe T et al., 1993). Du fait de leurs caractéristiques biochimiques, les 12/15-LO de souris et la 12-LO de rat sont généralement considérées comme les équivalents fonctionnels de la 15-LO-1 humaine (on désignera par la suite dans le texte la 12/15-LO de souris et la 12-LO de rat sous la dénomination 12/15-LO). En plus de leur spécificité de substrat, la 15-LO-1 et la 15-LO-2 humaines diffèrent également dans leur distribution tissulaire. La 15-LO- 1 est constitutivement exprimée dans de nombreux types cellulaires et tissulaires avec des niveaux d'expression plus élevés dans les réticulocytes, les éosinophiles, les macrophages alvéolaires et les cellules épithéliales trachéo-bronchiques. De plus, la 15-LO-1 a été détectée dans les leucocytes polynucléaires, les tissus inflammés, les kératinocytes, les cellules épithéliales de la cornée, les. cellules endothéliales du système vasculaire, l'utérus, le placenta et différents types cellulaires du système reproductif masculin (Kuhn H and Borngraber S, 1999). La distribution tissulaire de la 15-LO-2 est plus limitée puisque ses transcrits sont détectés uniquement dans la prostate, le poumon, la peau, la cornée ainsi que dans les macrophages (Brash AR, Boeglin WE and Chang MS, 1997) (Rydberg EK et al., 2004). L'implication de la 15-lipoxygénase a déjà été décrite dans plusieurs pathologies dont l'athérosclérose (Harats D et al., 2000), l'asthme (Shannon VR et a/., 1993), le cancer (Shureiqi I et al., 2000, Shureiqi I et al., 2000), la glomérulonéphrite (Montero A and Badr KF, 2000) et l'ostéoporose (WO03/066048). L'utilisation d'inhibiteurs de la 15-LO a déjà été décrite pour le traitement de nombreuses pathologies, par exemple dans les brevets US2005070589, US2005070588 et US2005065198 pour le traitement de l'athérosclérose, de certains cancers ou des pathologies inflammatoires. Les inventeurs ont identifié l'expression transcriptionnelle très abondante de la 15-lipoxygénase-1 (15-LO-1) dans le TA abdominal viscéral par rapport au TA abdominal sous-cutané. Les travaux menés par les inventeurs permettent de montrer le rôle potentiel que la 15-lipoxygénase joue dans le développement des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et tout particulièrement dans la différenciation adipocytaire et dans le développement de l'obésité abdominale viscérale. Les inhibiteurs des 15-LO représentent donc un outil thérapeutique avantageux dans le traitement des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou de ses conséquences. La présente demande a ainsi pour objet le traitement des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique, notamment de l'obésité abdominale, et/ou de ses conséquences. Plus spécifiquement, la présente demande concerne l'utilisation d'inhibiteurs de la 15-lipoxygénase (LO) pour la préparation de médicaments utiles dans le traitement d'au moins une perturbation métabolique caractéristique du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ses conséquences. RESUME DE L'INVENTION Un objet de l'invention concerne l'utilisation d'au moins un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'au moins une des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ses conséquences. Un autre objet de l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO éventuellement en association avec un ou plusieurs principes actifs thérapeutiques et/ou cosmétiques. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Les inventeurs de la présente demande ont montré le rôle de la 15-LO dans le développement des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique, et tout particulièrement dans la différenciation adipocytaire et dans le développement de l'obésité abdominale viscérale. Un objet de l'invention concerne donc l'utilisation d'au moins un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'au moins une des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ses conséquences. Au sens de la présente invention, la 15-1.0 désigne la 15-LO-1 et/ou la 15-LO-2, préférentiellement le 15-LO-1. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, ledit agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO est un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO-1. 7 Au sens de la présente invention, la définition du syndrome métabolique est celle de la FID (ci-dessus). Les perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique désignent ainsi l'obésité, de préférence abdominale, les dyslipidémies (définies par un taux élevé de triglycérides et/ou un faible taux de HDL- cholestérol), un taux élevé de glycémie, une résistance à l'insuline et/ou une hypertension. Au sens de la présente invention, l'obésité se caractérise par un tour de taille élevé (obésité centrale définie par la FID) et/ou par un IMC supérieur ou égal à 30 kg/m2. Un IMC supérieur ou égal à 27 kg/m2 est le seuil à partir duquel on constate une forte augmentation du risque de maladies cardiovasculaires. Plus spécifiquement, l'invention a pour objet l'utilisation d'au moins un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement de chaque perturbation métabolique du syndrome métabolique prise isolément ou en combinaison, encore plus préférentiellement de l'obésité, et de manière plus préférée de l'obésité abdominale. Au sens de la présente invention, on entend par conséquences du syndrome métabolique le diabète de type 2 et/ou les maladies cardiovasculaires. Les agents inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO peuvent être des composés de nature, de structure et d'origine variées, notamment des composés biologiques, des facteurs nucléaires, des anticorps, des cofacteurs, des composés chimiques d'origine synthétique ou naturelle, etc. Il peut s'agir également de banques, notamment de chimiothèques ou de banques de protéines, de peptides ou d'acides nucléiques, etc. Au sens de la présente invention, l'inhibition de l'activité enzymatique se réfère à une activité mesurée plus faible, comparée à une activité contrôle mesurée sans traitement avec l'agent inhibant l'activité de la 15-LO. L'inhibition de l'expression se réfère quant à elle à une expression mesurée plus faible comparée à une expression contrôle mesurée sans traitement avec l'agent inhibant l'activité de la 15-LO. Dans la présente invention, l'inhibition de l'expression et/ou de l'activité de la 15-LO peut être partielle ou totale. L'inhibition totale de l'expression et/ou de l'activité de la 15-LO par un agent inhibiteur correspond à une expression et/ou activité de la 15-LO diminuée d'au moins 80% par rapport à une expression et/ou activité mesurée sans traitement par l'agent inhibiteur. L'inhibition partielle par un agent inhibiteur correspond à une diminution de l'expression et/ou de l'activité de la 15-LO inférieure à 80 % comparée à une expression et/ou activité mesurée sans traitement par l'agent inhibiteur. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO est un composé capable d'inhiber totalement ou partiellement l'activité de la 15-LO. L'invention a aussi pour objet l'utilisation d'au moins un composé capable d'inhiber partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'au moins une des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique, préférentiellement de l'obésité, de préférence abdominale, et/ou d'au moins une de ses conséquences. Encore plus préférentiellement, l'invention concerne l'utilisation d'un composé capable d'inhiber partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO pour inhiber la différenciation adipocytaire. Les termes composé capable d'inhiber l'activité de la 15-LO ou inhibiteur de la 15-LO désignent préférentiellement un composé inhibant la 15-LO avec une IC50 inférieure ou égale à 1 NM, préférentiellement inférieure ou égale à 100 nM. L'IC50 représente la concentration du composé étudié donnant une diminution de 50% de l'activité enzymatique maximale observée. L'IC50 peut être déterminée par des méthodes standard, connues de l'homme du métier. En particulier, un essai colorimétrique permet cette mesure : un inhibiteur potentiel de la 15-LO est pré-incubé avec la 15-LO pendant 10 minutes avant l'ajout de l'acide linoléique comme substrat pendant 10 minutes supplémentaires. La formation du produit 13(S)-HPODE est quantifiée par couplage de la réduction du lipide hydroperoxydé à l'oxydation du bleu N-benzoyl-leucomethylène en présence d'hemine à pH 5. L'absorbance du bleu de méthylène oxydé est directement proportionnelle à la quantité de 13(S)-HPODE formée par la 15-LC) (Auerbach BJ et al., 1992). L'homme du métier peut envisager d'autres essais, notamment des essais dans lesquels la réaction enzymatique initiale est déterminée par spectrophotométrie à 234 nm par la mesure de la formation de diène conjugué (Gan QF et al., 1996) ou un essai colorimétrique dans lequel l'oxydation de Fe21" couplée à la réduction du lipide hydroperoxydé dans des conditions faiblement acides est détectée grâce à la formation d'un chromophore avec le xylenol orange qui absorbe fortement à 560 nm (Jiang ZY et al., 1992). Préférentiellement, les composés utilisés dans la présente invention sont ceux qui inhibent partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO de manière sélective. Le terme "de manière sélective" désigne un composé qui inhibe l'activité de la 15-LO avec une IC50 plus faible d'au moins 5 fois, préférentiellement d'au moins 10 fois et encore plus préférentiellement d'au moins 100 fois, à celle observée pour les autres lipoxygénases et cyclooxygénases. Au sens de la présente invention, l'IC50 d'un inhibiteur sélectif de la 15-LO peut être supérieure ou égale à 1 NM. De manière préférée, l'inhibiteur de la 15-LO est sélectif et présente une IC50 20 inférieure ou égale à 1 NM. Plusieurs inhibiteurs de la 15-LO connus sont utilisables dans la présente invention. Ces inhibiteurs incluent notamment des molécules organiques synthétiques, des extraits de plantes et d'autres produits naturels ainsi que des 25 anticorps dirigés contre la 15-LO ou des molécules antisens. La littérature décrit de nombreux inhibiteurs de la 15-LO avec une IC50 inférieure ou égale à 1 pM. On peut citer par exemple les purines décrites dans (Brathe A et al., 2005), les indolizines décrites dans (Gundersen L et al., 2003) et 30 (Teklu S et al., 2005); les terpénoïdes décrits dans (Carroll J et al., 2001), dont le jaspaquinol, les inhibiteurs décrits dans (Cornicelli JA and Trivedi BK, 1999) et dans (Weinstein DS et ai., 2005), l'anadanthoflavone, l'aspénone, le lupénone, le lupéol, l'alpha-amyrine et l'aspigénine décrite dans (Gutierrez-Lugo MT et al., 2004), les analogues de l'acide caféique, le NDGA, le RG-6866 et l'esculétine décrits dans (Gleason MM et al., 1995), les organobromures décrits dans (Segraves EN et al., 2004), les phtalènes décrits dans (Malterud KE et al., 1999), les flavonoïdes polyméthoxylés décrits dans (Malterud KE and Rydland KM, 2000), l'ebselen, l'acide éicosatetranoïque et le 4-nitrocatechole décrits dans (Walther M et al., 1999), les sérotoninamides de l'acide arachidonique décrits dans (Bezuglov W et al., 1996), les flavonoïdes décrits dans (Lyckander IM and Malterud KE, 1992). dont la sinensétine, la tétraméthylscutellareine et la quercétine ou le butylhydroxyanisole, le NDGA (acide norhydroguairacétique), le nitrocatéchol, le salycil-hydroxamate, le naphtyl-hydroxamate, le 5,8,11,14-eicosatetraynoate (ETYA), le 8,11,14- eicosatrinoate décrits dans (Kuhn H and Borngraber S, 1999). La littérature brevets décrit aussi de nombreux inhibiteurs de la 15-LO tels que l'extrait de Glycine max (L.) fermenté décrit dans EP1512407, les composés inhibiteurs de la 15-LO décrits dans le document brevet WO01/96336, les composés de type imidazolyle, pyrazolyle, oxazolyle et thiazolyle décrits respectivement dans US2005070588, US2005070589 et US2005065198 ou les composés de type pyrazole décrits dans W02004080999, notamment les exemples 8, 14, 23 et 26. Préférentiellement, les inhibiteurs de la 15-LO utilisés dans le cadre de la présente invention présentent une IC50 inférieure ou égale à 1 NM. On peut citer notamment les composés de type indole et benzimidazole développés par Warner- Lambert et décrits dans WO01/96299, les composés de type isothiazolone tels que décrits dans W096/38144 (notamment les exemples 23, 24, 27 à 30, 33 et 35), les analogues du composé PD148104 développé par Wamer-Lambert tels que le composé UK-399276 (IC50=83nM) ainsi que les composés codés CP-65005, UK- 369997 et UK-370607, les composés de type -thiourée et benzamide tet que le 3-amino-N-(3,4-dichlorophenyl)-4-methoxy-benzamide (IC50=10nM) décrits dans W099/32433 et les 280 composés exemplifiés dont les IC50 Préférentiellement, l'inhibiteur utilisé dans le cadre de la présente demande est sélectif par rapport à la 15-LO. L'invention a ainsi pour objet l'utilisation des inhibiteurs sélectifs suivants pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'au moins une des anomalies caractéristiques du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ses conséquences: • Le composé PD146176 (6,11-dihydro-5-thia-11-aza-benzo[a]-fluorène) de Parke-Davis (maintenant Pfizer) décrit dans Bocan TM et al., 1998, dans Sendobry SM et al., 1997 et dans les brevets US 3,388,133, W097/123613 et US 5,972,980 (IC50=0,5-0,8 pM) • Les composés RP-27493, RP-64835, RP-64407, RP-65208 décrits dans Gleason MM, Rojas CJ, Learn KS, Perrone MH and Bilder GE, 1995 • L'aspigénine décrite dans Gutierrez-Lugo MT, Deschamps JD, Holman TR, Suarez E and Timmermann BN, 2004 • Les dérivés du NDGA décrits dans Whitman S et aL, 2002 • Les dioxines 4a et 4b décrites dans Segraves EN, Shah RR, Segraves NL, Johnson TA, Whitman S, Sui JK, Kenyon VA, Cichewicz RH, Crews P and Holman TR, 2004 • Les chomaroles A-D, la strongylophorine-2 et la strongylophorine-3 ainsi que les chromanes n 25, 26 et 27 décrits dans Cichewicz RH et aL, 2004 • Le 1-éthoxy-4-cyano-5-éthoxycarbonyl-3H-azuléno[1,2-c]pyran-3-one décrit dans Lin BB and Lin yS, 2004, Lin BB et al., 2004 • Les composés 26, 37c, 37f, 37h, 371, 40a et 40h décrits dans Weinstein DS, Liu W, Gu Z, Langevine C, Ngu K, Fadnis L, Combs DW, Sitkoff D, 20 25 30 Ahmad S, Zhuang S, Chen X, Wang FL, Loughney DA, Atwal KS, Zahler R, Macor JE, Madsen CS and Murugesan N, 2005, notamment le N-((4-n-pentylbenzène) sulfonyl)-2-(benzofuran-2-yl)tryptamine (composé 371) • Le squalène décrit dans Lin BB and Lin yS, 1992 • Le trans-phytol décrit dans Lin BB and Lin yS, 1993 • La diéranine décrite dans Cornicelfi JA and Trivedi BK, 1999. Encore plus préférentiellement, l'inhibiteur sélectif utilisé dans le cadre de la présente demande est le PD146176 ou leN-((4-n-pentylbenzène)sulfonyl)-2-10 (benzofuran-2-yl)tryptamine. Ces agents inhibant partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO incluent également les anticorps ayant une affinité pour la 15-LO, ou anticorps anti-15-LO. Préférentiellement, cet anticorps présente un pouvoir bloquant et inhibe totalement 15 ou partiellement l'activité de la 15-LO. L'invention concerne ainsi l'utilisation d'au moins un anticorps inhibant partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'au moins une des 20 perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique, préférentiellement de l'obésité, de manière plus préférée l'obésité abdominale, et/ou d'au moins une de ses conséquences. Les anticorps peuvent être des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, 25 obtenus par toute méthode connue de l'homme du métier. Lesdits anticorps monoclonaux peuvent être obtenus selon la méthode classique de fusion lymphocytaire et de culture d'hybridome ou par toute autre méthode de préparation d'anticorps monoclonaux connus. Lesdits anticorps polyclonaux peuvent être obtenus à partir de sérum d'un animal immunisé, notamment d'un vertébré et de 30 préférence d'un mammifère avec l'une quelconque des séquences polypeptidiques identifiées ou l'un de leurs fragments conservant l'immunogénicité de la protéine totale. Selon un autre aspect de l'invention, l'agent inhibant partiellement ou totalement l'activité et/ou l'expression de la 15-LO est un composé capable de d'inhiber partiellement ou totalement l'expression de la 15-LO en inhibant partiellement ou totalement la transcription du gène codant la 15-LO. L'invention a ainsi pour objet l'utilisation d'au moins un composé capable de d'inhiber partiellement ou totalement l'expression de la 15-LO pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'au moins une des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ses conséquences. Les différentes techniques d'inhibition de l'expression de gènes sont bien connues de l'homme du métier. Préférentiellement, les agents inhibant partiellement ou totalement l'expression de la 15-LO utilisés dans la présente demande sont les acides nucléiques antisens. Une thérapie antisens met généralement en oeuvre un vecteur, tel qu'un vecteur viral, qui porte la séquence antisens de l'ARNm codant la protéine dont l'expression est à inhiber, l'inhibition étant alors généralement stable puisque le vecteur va s'intégrer dans le génome. On peut également utiliser des oligonucléotides antisens, qui procurent une inhibition transitoire de l'expression. On peut également mettre à profit la technologie des ribozymes ou des ARNs interférents (siRNAs), qui empêchent un gène de produire une protéine fonctionnelle en détruisant l'ARN messager. Un autre objet de l'invention est une composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO tel que décrit ci-dessus, éventuellement en association avec un ou plusieurs autres principes actifs thérapeutiques et/ou cosmétiques. II s'agit avantageusement d'une composition pharmaceutique pour le traitement d'au moins une des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ces conséquences, ces perturbations désignant l'obésité, de préférence l'obésité abdominale, les dyslipidémies (définies par un taux élevé de triglycérides et/ou un faible taux de HDL- cholestérol), un taux élevé de glycémie et/ou une résistance à l'insuline et une hypertension. La composition pharmaceutique selon l'invention peut également être utilisée pour inhiber la différenciation adipocytaire. A titre d'exemple (et de manière non limitative), les autres agents thérapeutiques et/ou cosmétiques, commercialisés ou en développement, peuvent être choisis parmi: des anti-diabétiques, l'insuline, des molécules hypolipémiantes et/ou hypocholestérolémiantes, des agents anti-hypertenseurs et les agents hypotenseurs, des agents anti-plaquettaires, des agents anti-obésité, - des agents anti-inflammatoires, des agents anti-oxydants, des agents utilisés dans le traitement de l'insuffisance cardiaque, des agents utilisés pour le traitement de l'insuffisance coronaire, des anticancéreux, des anti-asthmatiques, des corticoïdes utilisés dans le traitement des pathologies de la peau, des vasodilatateurs et/ou des agents anti-ischémiques. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir ce ou ces éventuels autres 25 agents thérapeutiques, et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses de la composition selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention comprennent 30 avantageusement un ou plusieurs excipients ou véhicules, acceptables sur le plan pharmaceutique et bien connus de l'homme du métier. Les modes et voies d'administration ainsi que les doses peuvent être adaptés par l'homme du métier en fonction du patient et de la perturbation à traiter. Le niveau de dosage choisi dépendra de divers facteurs comprenant l'activité du composé particulier utilisé, du mode d'administration, de la durée de l'administration, du taux d'excrétion du composé particulier qui est utilisé, de la durée du traitement, d'autres médicaments, des composés et/ou des matériaux utilisés en combinaison avec l'agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO particulier utilisé, de l'âge, du sexe, du poids, de l'état, de la santé générale et de l'histoire médicale antérieure du patient qui est traité et autres facteurs bien connus dans le métier médical. L'homme du métier peut facilement déterminer et prescrire la quantité requise de la composition pharmaceutique. Par exemple, il peut démarrer avec des doses d'agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO dans la composition pharmaceutique à des niveaux inférieurs que ceux requis pour obtenir l'effet thérapeutique désiré et accroître progressivement le dosage jusqu'à ce que l'effet désiré soit obtenu. L'invention concerne enfin une méthode de traitement des pathologies associées au syndrome métabolique comprenant l'administration à un sujet, notamment humain, d'une quantité efficace d'au moins un composé ou d'une composition pharmaceutique tels que défini ci-avant. Au sens de l'invention le terme une quantité efficace se réfère à une quantité du composé suffisante pour produire le résultat biologique désiré, de préférence non toxique. Au sens de la présente invention le terme sujet signifie un mammifère et plus particulièrement un humain. Le terme traitement désigne le traitement curatif, symptomatique ou préventif. Les agents inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO utilisés dans la présente invention peuvent être utilisés chez des humains atteints d'une maladie déclarée, comprenant les stades. précoces et/ou tardifs de la maladie. Les agents inhibant, partiellement ou totalement l'expression et/ou de l'activité de la 15-LO utilisés dans la présente invention ne permettent pas nécessairement de guérir le patient atteint de la maladie, mais peuvent retarder ou ralentir la progression ou prévenir une progression plus en avant de la maladie, améliorant ainsi la condition des patients. Les agents inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO utilisés dans la présente invention peuvent aussi être administrés aux personnes non malades, mais qui pourraient développer normalement la maladie, ou qui ont un risque important de développer la maladie. Le traitement comprend aussi le retardement du développement de la maladie chez un individu qui développera la maladie ou qui risque de développer la maladie en raison de son âge, de son histoire familiale, d'anomalies génétiques ou chromosomiques, et/ou en raison d'un ou plusieurs marqueur(s) biologique(s) de la maladie, tel qu'une mutation génétique connue, dans des tissus ou fluides. Le traitement comprend aussi l'administration d'un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO utilisé dans la présente invention aux individus dont on pense qu'ils sont prédisposés à développer le syndrome métabolique. D'autres aspects et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent et des dessins en annexe, fournis à titre illustratif et non limitatif. LEGENDE DES FIGURES La Figure 1 est une photographie de gel montrant l'expression de la 15-L0-1, par RT-PCR, dans le Tissu Adipeux (TA) abdominal viscéral et sous-cutané d'une population de 10 hommes. SC : TA abdominal sous-cutané ; V : TA abdominal viscéral. La Figure 2A est un graphe montrant l'expression de la 15-LO-1 dans le TA abdominal viscéral et sous-cutané d'une population de 33 femmes : Résultat de RTQPCR en moyenne. La Figure 2B est un graphe montrant l'expression de la 15-LO-1 dans le TA abdominal viscéral et sous-cutané d'une population de 33 femmes : Résultats de QPCR par individu. La Figure 3A est une photographie de gel montrant l'expression de la 15-L0-1 par RT-PCR sur les fractions du TA abdominal viscéral d'un patient. PA : Pré-Adipocyte ; FA : Adipocyte Mature ; SV : Stroma Vasculaire ; MC : Matrice Cellulaire. La Figure 3B est un graphe représentant l'expression de la 15-LO-1 par RT-QPCR sur les fractions de TA d'un patient. La Figure 4A est une photographie de gel montrant l'expression de la 15-LO-1 au cours de la différenciation des pré-adipocytes (PA) viscéraux humains de Promocell (culture de PA n 1, passage 4) par RT-PCR. JO : confluence ; J0-J3 : incubation des cellules avec le milieu de différenciation ; J3-J21 : incubation des cellules avec le milieu de nutrition des adipocytes. La Figure 4B correspond à des graphes montrant l'expression de la 15-LO-1 au cours de la différenciation de 3 cultures différentes de PA viscéraux humains, Promocell (culture de PA n 1, passage 7) et Cambrex (culture de PA n 2, passage 2, et culture de PA n 3, passage 4) par RT-QPCR. La Figure 5A est une photographie de gel montrant l'expression du marqueur aP2 par RT-PCR au 3ème jour de différenciation d'une culture de PA viscéraux humains (culture de PA n 1, passage 7), en l'absence ou en présence de doses croissantes d'un inhibiteur sélectif de la 15-LO, le PD146176. La Figure 5B correspond à des graphes représentant l'expression du marqueur aP2 par RT-QPCR au 7ème jour de différenciation de 2 cultures de PA viscéraux humains (culture de PA n 2, passage 5 et culture de PA n 3, passage 4), en l'absence ou en présence de doses croissantes d'un inhibiteur sélectif de la 15-LO, le PD146176. La Figure 6A est un graphe montrant la sécrétion d'adiponectine au cours de la différenciation des PA abdominaux viscéraux (Culture de PA n 3, passage 4). La Figure 6B est un graphe montrant la sécrétion d'adiponectine au 7ème jour de différenciation en présence du PD146176 (Culture de PA n 3, passage 4). La Figure 7A est une photographie de gel montrant l'expression tissulaire de la 12/15-LO, équivalents fonctionnels chez les rongeurs de la 15-LO-1 humaine, chez le rat et la souris par RT-PCR. 1 :TA périrénal ; 2 : TA épididymal ; 3 : foie ; 4 : coeur ; 5 : muscle ; 6 : rein ; 7 : cortex ; 8 : cervelet ; 9 : rate ; 10 : testicule ; 11 : duodénum ; 12 : jejunum ; 13 : ileum ; 14 : poumon. La Figure 7B est un graphe représentant l'expression de la 12/15-LO dans les différents dépôts de TA chez le rat par RT-QPCR. 1 : TA sous-cutané dorsal ; 2 : TA sous-cutané abdominal ; 3 : TA omental ; 4 : TA mésentérique ; 5 : TA épididymal ; 6 : TA périrénal ; 7 : TA interscapulaire. La Figure 8A correspond à des photographies montrant l'effet du PD146176 sur la morphologie des cellules 3T3-L1 au cours de la différenciation adipocytaire. La Figure 8B est un graphe montrant l'effet du PD146176 sur l'accumulation de lipides par les cellules 3T3-L1 au cours de la différenciation adipocytaire : mesure Adipored. La Figure 8C est un graphe montrant l'effet du PD146176 sur l'accumulation de triglycérides par les cellules 3T3-L1 au cours de la différenciation adipocytaire. La Figure 8D correspond à des graphes représentant l'effet du PD146176 sur l'expression de l'aP2 et de la LPL (LipoProtein Lipase) par les cellules 3T3-L1 au cours de la différenciation adipocytaire. La Figure 9A correspond à des photographies montrant l'effet de l'acide caféique sur la morphologie des PA de rat au cours de la différenciation adipocytaire. La Figure 9B est une photographie de gel montrant l'effet de l'acide caféique sur l'expression de l'aP2 par les PA de rat au cours de la différenciation adipocytaire. EXEMPLES Exemple 1 : Mise en évidence de la sur-expression spécifique du gène 15-LO-1 dans le tissu adipeux (TA) abdominal viscéral humain par rapport au TA abdominal sous-cutané humain d'une population de 10 hommes par la technique de puces à ADN et par RT-PCR. Récolte des tissus Conformément à la loi Huriet sur la protection des personnes dans le cadre de la recherche biomédicale, des consentements éclairés signés ont été obtenus pour chaque patient avant la récupération des tissus. Des données démographiques et cliniques des patients ont également été collectées. Pour chaque patient, le TA abdominal viscéral (épiplon) et le TA abdominal sous-cutané sont récupérés lors d'opérations de chirurgie abdominale. La peau et les vaisseaux sanguins sont aussitôt retirés des tissus à l'aide de ciseaux chirurgicaux et les échantillons de TA ainsi obtenus, finement découpés, sont immédiatement congelés dans de l'azote liquide. Extraction des ARN totaux de TA L'extraction des ARN de TA est réalisée selon la méthode modifiée au thiocyanate guanidium. Les ARNs totaux obtenus sont traités par la DNase I pour éliminer toute trace d'ADN génomique contaminant, puis purifiés sur colonne Qiagen RNeasy comme indiqué par le fournisseur (Qiagen, Courtaboeuf, France). Puces à ADN Les puces à ADN sont réalisées de manière à comparer l'expression des ARNs du TA abdominal viscéral à l'expression des ARNs du TA abdominal sous-cutané de 10 hommes (voir le tableau 1 pour les données cliniques des patients). Tableau 1 Identification Age IMC Cholestérol CholestérolCholestérol-Triglycérides Patient total (g/I) LDL (g/I) HDL (g/I) totaux (g/I) 37 66 28,3 1,15 0,60 0,40 0,82 71 58 27,0 1,80 1,13 0,36 1,56 90 71 28,7 1,29 0,76 0,38 0,76 76 82 27,4 0,81 0,18 0,42 1,01 41 85 27,0 1,04 0,61 0,19 1,18 29 76 28,0 1,70 0,91 0,43 1,83 91 73 28,5 1,78 1,11 0,35 1,60 31 64 28,1 1,49 0,91 0,29 1,41 21 58 28,4 2,03 1,46 0,23 1,74 103 79 27,2 !1,19 0,59 0,46 0,72 Les ADN complémentaires (ADNc) double-brins sont synthétisés à partir de 10 pg d'ARN totaux avec la transcriptase inverse Superscript (SS) II, les tampons du système SS choice (Invitrogen, Cergy Pontoise, France) et des primers oligo-T- 7(dt)24 (MWG Biotech). La synthèse des ARN complémentaires (ARNc) biotinylés est réalisée à l'aide d'un kit de marquage ( RNA transcript labelling kit , Enzo, Farmingdale, NY). Les expériences de puces à ADN sont effectuées sur les puces Affymetrix U133A et U133B : l'hybridation, le lavage, le marquage et le scan des puces sont réalisés suivant les instructions du Manuel Technique Affymetrix (PIN 700222 rev.4). Les signaux sont visualisés et quantifiés avec le logiciel microarray analysis suite v4 software . Le modèle prédictif AIC ainsi que l'analyse prédictive BIC montre une corrélation positive entre l'expression de la 15-LO-1 et le TA abdominal viscéral. RT (Reverse-Transcription) 1 pg d'ARNs est reverse-transcrit par incubation pendant 1 heure à 37 C avec 200 ng d'hexanucléotides aléatoires et 200 unités d'enzyme MMLV (Sigma) en présence de 1.5 mM DU, 187 pM de dNTP et 30 unités d'inhibiteurs de Rnase. PCR (Polymerase Chain Reaction) L'ADNc 15-LO-1 est ensuite amplifié par PCR sur 1 pl des mélanges de RT ainsi obtenus avec 0,3 mM d'amorces spécifiques (voir le tableau 2 pour les amorces utilisées), 2,5 unités de l'enzyme PLATINIUM Pfx DNA polymerase (Invitrogen, 11708-039), 1 mM MgSO4 et 0,3 mM de chaque dNTP dans un volume final de 20 pI. Les conditions d'amplification sont 30s à 94 C (dénaturation), 30s à la température d'hybridation spécifique pour chaque paire d'amorces et 1 min/kb à 68 C pour l'extension. Les produits de PCR obtenus sont analysés par électrophorèse sur. gel d'agarose pour confirmer la présence d'un seul amplicon de la bonne taille et séquencés pour confirmer l'homologie au gène amplifié. Tableau 2 Gène Séquences des amorces (5' -> 3') Taille du Numéro produit de Genbank PCR (pb) 15-LO-1 Sens (SEQ ID NO:1) 202 M23892 GGCAAGGAGACAGAACTCAAGGTG Antisens (SEQ ID NO:2) CTTCAGGCAGGCTCAGGACG Cyclophilin Sens (SEQ ID NO:3) 129 AY739283 GGTGACTTCACACGCCATAATG Antisens (SEQ ID NO:4) TGTGTTGGGTCCAGCATTTG 18S Sens (SEQ ID NO:5) 206 X03255 CGGACACGGACAGGATTGACAG 20 Antisens (SEQ ID NO:6) AATCTCGGGTGGCTGAACGC 36B4 Sens (SEQ ID NO:7) 252 M17885 CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC Antisens (SEQ ID NO:8) GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG Résultats Les résultats de l'analyse des puces Affymetrix , présentés sur le tableau 3, montrent que la 15-LO-1 est préférentiellement exprimée dans le TA abdominal 5 viscéral par rapport au TA abdominal sous-cutané des 10 patients masculins, avec un ratio de 2,2 et une valeur p de 7,25 10-25 issus des analyses statistiques sur les données Affymetrixe. Tableau 3 : Résultats de puces à ADN Ratio Affymetrix 2.2 (TA abdominal viscéral / TA abdominal sous-cutané) valeur p 7.25 10-25 15 Les résultats de l'analyse RT-PCR, présentés sur la figure 1, confirment l'expression préférentielle de la 15-LO-1 dans le TA abdominal viscéral des patients par rapport au TA abdominal sous-cutané pour chaque patient étudié : en effet, à l'exception du patient 41, l'expression de la 15-LO- 1 est quasiment indétectable par 20 RT-PCR classique dans le TA abdominal sous-cutané alors qu'un amplicon est observé dans le TA abdominal viscéral de tous les patients. Exemple 2 : Confirmation de l'expression spécifique du gène 15-LO-1 dans le TA abdominal viscéral humain par rapport au TA abdominal sous-cutané 25 humain, par PCR quantitative sur une population de 33 femmes. Récolte des tissus et extraction des ARNs 105 Les résultats obtenus par la technique de puces à ADN ont été confirmés sur des TA abdominaux viscéraux et sous-cutanés d'une population de 33 femmes (voir le tableau 4 pour les données cliniques des patientes). Les tissus ont été prélevés et les ARNs extraits de la manière décrite dans l'exemple 1. Tableau 4 Identification IMC Cholestérol Cholestérol Cholestérol-Triglycérides Patient total (g/I) -LDL (g/I) HDL (g/I) totaux (g/I) 17 17,9 2,27 1,49 0,47 1,50 123 18,4 1,43 0,88 0,43 0,58 112 20,5 1,70 0,74 0,50 2,33 36 20,9 0,32 0,27 0,02 0,13 25 21,9 1,57 1,00 0,20 1,86 33 2:3,9 1,56 0,82 0,60 0,69 24 25,2 2,60 1,51 0,58 2,57 23 25,5 1, 45 0,89 0,27 1,42 44 25,7 1,98 1,00 0,62 1,81 74 29,1 1,68 1,02 0,56 0,50 47 30 1,65 1,06 0,37 1,09 107 30,4 1,67 1,01 0,47 0,97 77 32 1,46 0,90 0,35 1,06 117 32 1,30 0,80 0,36 0,70 86 33,2 0,24 0,29 0,01 0,29 16 33,3 1,42 0,71 0,42 1,41 46 34 1,34 0,72 0,06 2,78 119 37,9 1,63 0,97 0,48 0,87 83 41 1,55 0,95 0,25 1,80 104 42 1,60 0,83 0,41 1,81 93 44 1,29 0,63 0,27 1,94 92 44 1,53 1,02 0,30 1,08 102 46 1,97 1,29 0,43 1,23 Identification IMC Cholestérol Cholestérol Cholestérol- Triglycérides Patient total (g/1) -LDL (g/1) HDL (g/1) totaux (g/1) 88 46 1,55 0,94 0,41 1,00 81 49 1,51 0,68 0,53 1,52 110 49 1,47 0,89 0,33 1,21 95 52 1,33 0,72 0,48 0,66 . 94 52 1,79 1,03 0,42 1,70 97 55 1,74 0,93 0,22 2,95 101 58 1,54 1,02 0,35 0,86 84 60 1,56 0,75 0,58 1,15 87 61 1,33 0,71 0,23 1,97 78 65,4 1,48 0, 92 . 0,20 1,83 Il faut noter que la population étudiée de 33 femmes présente un large spectre d'IMC (de 17,9 à 65,4). Au sens de la présente invention, l'obésité se caractérise par un IMC supérieur ou égal à 30 kg/m2 et une forte augmentation du risque de maladies cardiovasculaires est constatée avec un IMC supérieur ou égal à 27 kg/m2. PCR quantitative (QPCR) Les QPCR sont réalisées par incorporation de Sybergreen suivant les instructions du fournisseur (SyberMix Biorad, Marnes la Coquette, France) et de l'appareil I-Cycler (Biorad). Pour chaque gène, l'utilisation des amorces (voir le tableau 2) a été optimisée en terme de spécificité et d'efficacité (>90%) via l'analyse des courbes standard et des courbes de fusion obtenues sur des dilutions sériées des échantillons de RT. Les produits de PCR obtenus ont été analysés par électrophorèse sur gel d'agarose pour confirmer la présence d'un seul amplicon de la bonne taille et séquencés pour confirmer l'homologie au gène amplifié. Une fois les optimisations réalisées, les QPCR sont réalisées sur 1 NI de RT de la manière décrite dans l'exemple 1 : l'expression relative de la 15-LO-1 est comparée à l'expression du gène de la cyclophilline, considéré comme témoin interne, par la méthode des L CT Analyses AIC et BIC Le modèle prédictif AIC ainsi que l'analyse prédictive BIC montre une 20 corrélation positive entre l'expression de la 15-LO-1 et le TA abdominal viscéral (tableau 5). Tableau 5 : corrélation aux données cliniques - résultats des analyses AIC et BIC. Gène AIC avec 18S carme référence (précictif) BIC avec 18S corrrne référence (e~licatif) 15-LO-1 Tissu`** Tissu* : valeur p Le modèle prédictif AIC ainsi que l'analyse prédictive BIC montre une corrélation positive entre l'expression de la 15-LO-1 et le TA abdominal viscéral. Exemple 3: L'expression de la 15-LO-1 est détectée dans les différentes fractions du TA humain, y compris dans les adipocytes et dans les pré-10 adipocytes, et apparaît comme majoritaire dans la fraction stroma-vasculaire. Isolement des différentes fractions du TA humain Les échantillons de TA sont prélevés comme décrits dans l'exemple 1. Après avoir retiré la peau et les vaisseaux sanguins, les morceaux de TA destinés au 15 fractionnement tissulaire sont immédiatement rincés dans une solution de PBS supplémentée par pan mélange pénicilline/streptomycine (100 U/100 pg/mI) à 37 C, puis incubés en tubes Falcon dans un tampon de digestion (tampon Krebs Ringer 9,5 g/I ; Hepes 25 mM ; sérumalbumine bovine 20 mg/ml ; 5 mM Glucose (Sigma) ; collagénase type 1 1,5 mg/ml, (Gibco)), pendant 45 minutes, à 37 C, sous agitation, 20 avec un ratio masse de TA/ tampon de digestion de lg/10 ml. Les lysats de digestion sont ensuite passés sur un filtre de nylon (pore de 200pm) afin de retirer les restes de tissus non digérés (= Matrice ou MC) puis la suspension cellulaire obtenue est centrifugée pendant 15 minutes à 800g pour séparer les adipocytes flottants (fA) qui sont récupérés dans le surnageant de la fraction Stroma-Vasculaire (SV) qui se 25 retrouve dans le culot. Afin d'éliminer les globules rouges de la fraction SV, le culot est remis en suspension dans 5ml de tampon de lyse érythrocytaire (NH4CI 131 mM Carlo-Erba; NH4CO3 9 mM, Prolabo Rectapur) et incubé 15 minutes sur glace dans cette solution. La suspension cellulaire est ensuite centrifugée 10 minutes à 800g et le culot est remis en suspension dans une solution de PBS supplémentée par un 30 mélange pénicilline/streptomycine (100 U/100 pg/mI). Une partie de cette suspension est récupérée pour extraire les ARNs (= ARNs de la fraction SV). L'autre partie de la suspension est incubée sur glace pendant 15-30 minutes, avec des microbilles magnétiques CD14 (CD14 MicroBeads, non-human primate : MicroBilles conjuguées à un anticorps monoclonal lgG2a anti-CD14 humain). La suspension cellulaire est ensuite chargée sur une colonne MACS afin de récolter les cellules CD14+ correspondant à la fraction monocytes/macrophages du TA, par utilisation d'une colonne magnétique MACS Separator. Les cellules CD14+ retenues magnétiquement sur la colonne sont ensuite éluées selon le protocole du fournisseur (Macs, Miltenyi Biotec, Paris, France). La fraction cellulaire non retenue par la colonne est appauvrie en cellules CD14+ et enrichie en pré-adipocytes et autres types cellulaires et sera considérée comme la fraction enrichie en pré-adipocytes (PA). Extraction des ARNs totaux des fractions tissulaires et des cellules Les ARNs totaux sont extraits des différentes fractions (MC, fA, SV, CD14+, PA) par homogénéisation directe en TRIzol suivant les recommandations du fournisseur (Gibco BRL, Life technologies), puis traités par la DNAse I et purifiés sur colonne selon la procédure décrite par Qiagen (Qiagen RNeasy procedure). Analyse de l'expression de la 15-LO-1 par RT-PCR et RT-QPCR L'expression relative de la 15-LO-1 est analysée selon les méthodes décrites dans les exemples 1 et 2. Résultats Les résultats de l'analyse de l'expression de la 15-LO-1 d'un patient, présentés sur la figure 3A, montrent que l'expression de la 15-LO-1 est retrouvée dans le pool de TA abdominal viscéral et que cette expression est détectée dans toutes les fractions du TA abdominal viscéral, avec une expression plus importante dans la fraction Stroma-Vasculaire (SV), qui contient les PA et les cellules CD4+ (macrophages), et une expression plus faible dans les adipocytes matures(fA). Ces résultats sont confirmés par l'analyse de l'expression de la 15-LO-1 par RT- QPCR sur les fractions de TA de 3 patients, dont les résultats sont présentés sur la figure 3B. Exemple 4 : L'expression de la 15-LO-1 est modulée lors de la différenciation des PA viscéraux humains en adipocytes matures. Différenciation des PA abdominaux viscéraux humains en adipocytes Les PA abdominaux viscéraux humains sont obtenus chez Promocell ou Cambrex (Human White pre-adipocytes (HWP), Promocell (Heidelberg, Germany), Cambrex (Paris, France)) et cultivés selon le protocole du fournisseur.30 Les HWP de Promocell sont maintenus dans un milieu de croissance pour PA (0,4% ECGS/H, 5% SVF, 10 ng/ml EGF, l pg/ml Hydrocortisone, 50 ng/ml Amphotericine B, 50 pg/ml Gentamic;ine) jusqu'à la confluence. A la confluence, les cellules sont différenciées pendant 3 jours avec un milieu de différenciation pour PA (8 pg/ml d- Biotine, 0,5pg/ml Insuline humaine recombinante, 400 ng/ml Dexamethasone, 44pg/ml IBMX, 9 ng/ml L-thyroxine, 3 pg/ml Ciglitazone, 50 ng/ml Amphotéricine B, 50 ng/ml Gentamycine), puis cultivées jusqu'au stade de différenciation terminale dans un milieu de nutrition d'adipocytes (3% SVF, 8pg/ml d-Biotine, 0,5 pg/ml Insuline humaine recombinante, 400 ng/ml Dexamethasone, 50 ng/ml Amphotéricine B, 50 pg/mI Gentamicine). Les PA de Cambrex sont maintenus dans un milieu de croissance pour PA (10 Ai SVF, 100 U/ml Pénicilline, 100pg/ml Streptomycine) jusqu'à la confluence puis le milieu est remplacé par un milieu de différenciation (10% SVF, 10 pg/mI insuline humaine recombinante,l pM Dexamethasone, 500 pM IBMX, 200 pM indométacine, 100 U/ml Pénicilline, 100 pg/ml Streptomycine) pendant tout le processus de différenciation. Extraction des ARNs et analyse de l'expression de la 15-LO-1 et du gène aP2 par RT-PCR et RT-QPCR Les ARNs totaux sont extraits des cellules à différents temps pendant la différenciation selon la méthode décrite dans l'exemple 3 et l'expression de la 15-LO-1 est analysée par RT-PCR et RT-QPCR selon les méthodes décrites dans les exemples 1 et 2. La cinétique d'expression du gène aP2 est utilisée comme témoin positif de la différenciation des cellules (voir le tableau 6). Pour les RT-QPCR, les expressions relatives de la 15-LO-1 et de l'aP2 sont rapportées par rapport au jour de confluence considéré comme JO et normalisées par rapport à l'expression de la cyclophilline. Tableau 6 Gène Séquences des amorces (5' -> 3') Taille du Numéro produit de Genbank PCR (pb) aP2 Sens (SEQ ID NO:9) 251 J02874 GGCCAGGAATTTGACGAAGTC Antisens (SEQ ID NO:10) ACAGAATGTTGTAGAGTTCAATGCGA Comme attendu, l'expression du marqueur aP2 (adipocyte lipid binding protein) est très faible à JO, augmente très fortement à J3 jusqu'à J7-J14, puis diminue à J21. Résultats L'analyse de l'expression de la 15-LO-1 au cours de la différenciation des PA de Promocell (culture de PA n 1, passage 4 - Les PA viscéraux ont été multipliés jusqu'au passage 4, puis différenciés à partir du passage 4) par RT-PCR, dont les résultats sont présentés sur le figure 4A, montrent que l'expression du marqueur aP2 (adipocyte lipid binding protein) est très faible à JO, augmente très fortement à J3 jusqu'à J7-J14, puis diminue à J21. Bien que l'état des cellules à JO ne puisse pas être comparé avec la fraction PA isolée à partir du TA, l'expression de la 15-LO-1 est quand même retrouvée à JO. L'expression de la 15-LO-1 augmente à J3, puis suit la même cinétique que celle du gène aP2 avec une augmentation de l'expression pendant la différenciation jusqu'à J14, puis une baisse à J21. A l'état d'adipocyte (J21), la 15-LO1 est toujours exprimée. De la même manière, la figure 4B montrent l'expression de la 15-LO-1 au cours de la différenciation de 3 cultures différentes de PA abdominaux viscéraux humains : la modulation de l'expression de la 15-LO-1 au cours de la différenciation adipocytaire est observée sur 3 cultures indépendantes, provenant de 3 patients différents (Les PA viscéraux ont été différenciés à partir du passage 7, 2 ou 4 selon les cultures de PA). Pour les 3 cultures, l'expression du marqueur aP2 augmente progressivement et très fortement au cours de la différenciation jusqu'à J7, puis diminue ensuite à J14, J21. L'expression de la 15-LO-1 augmente pendant le processus de différenciation mais de façon beaucoup plus faible. Le pic d'expression de la 15-LO-1 à J3 est retrouvé chez 2 patients. De façon intéressante, la même cinétique d'expression est retrouvée pour la culture n 1 à passage 4 (figure 4A) et à passage 7 (figure 4B). A l'état d'adipocyte, la 15-LO-1 est toujours exprimée. Exemple 5: Le PD146176, un inhibiteur sélectif de la 15-LO, inhibe la différenciation des PA viscéraux humains en adipocytes matures. Traitement des cellules par le PD146176 Des PA abdominaux viscéraux humains provenant de plusieurs donneurs sont différenciés comme indiqué dans l'exemple 4. Le PD146176, dilué dans du DMSO, est ajouté lorsque les PA atteignent la confluence (soit JO) et est maintenu pendant le processus de différenciation des PA en adipocytes. Du DMSO est ajouté à la concentration de 0,1% final dans le milieu de culture comme témoin négatif. Extraction des ARNs et analyse de l'expression du gène aP2 L'aP2 (adipocyte Iipid-binding protein) est, au même titre que l'adiponectine, un marqueur de la différenciation adipocytaire. Les ARNs totaux sont extraits des cellules à différents temps pendant la différenciation (J3, J7) selon la méthode décrite dans l'exemple 3 et l'expression du marqueur aP2 est analysée par RT-PCR ou RT-QPCR comme décrit dans les exemples 1 et 2. Les expressions relatives sont rapportées par rapport au jour de confluence considéré comme JO et normalisées par rapport à l'expression de la cyclophilline. Résultats L'analyse de l'expression du marqueur aP2 par RT-PCR au 3ème jour de différenciation d'une culture de PA (culture de PA n 1, passage 7), présentée sur la figure 5A, montre que, à JO, l'expression du marqueur aP2 est très faible puis qu'elle est augmentée fortement à J3 pour le contrôle DMSO. L'ajout du PD146176 dès le début de la différenciation (à JO), diminue l'expression du marqueur aP2 de façon dose-dépendante. L'analyse de l'expression du marqueur aP2 par RT-QPCR au 7ème jour de différenciation de 2 cultures de PA (culture de PA n 2, passage 5 et culture de PA n 3, passage 4) est présentée sur la figure 5B (l'expression du marqueur aP2 au 7ème jour de différenciation est fixée à 1 pour les cellules recevant le contrôle DMSO (culture n 2) ou pour les cellules ne recevant aucun traitement (culture n 3)) : les cellules incubées avec du PD146176 à 3pM dès JO montrent une expression d'aP2 très fortement inhibée par rapport aux cellules qui reçoivent le DMSO ou qui ne reçoivent aucun traitement. Ainsi, pour la culture n 2, le PD146176 abolit quasi-complètement l'expression de la 15-LO-1 et, pour la culture n 3, cette inhibition est de 90%. Les résultats, présentés sur les figures 5A et 5B, montrent que l'expression du marqueur aP2, analysée par RT-PCR et RT-QPCR au cours de la différenciation de cultures de PA, diminue de façon dose-dépendante suite à l'addition de PD146176. Exemple 6: Le PD146176, un inhibiteur sélectif de la 15-LO, diminue la sécrétion d'adiponectine pendant la différenciation des PA viscéraux humains. Traitement des PA par le PD146176 Des PA abdominaux viscéraux humains provenant de plusieurs donneurs sont différenciés comme indiqué dans l'exemple 4. Les PA ayant atteint la confluence (JO) sont incubés en présence du PD146176 comme décrit dans l'exemple 5. Analyse de la sécrétion d'adiponectine L'adiponectine est un facteur sécrété par les adipocytes et sert, au même titre qu'aP2, de marqueur de la différenciation adipocytaire dans nos cultures. La concentration d'adiponectine est déterminée dans les surnageants de culture à différents temps de différenciation, à l'aide du kit Quantikine human adiponectine/ACRP30 selon le protocole du fournisseur (R&D, Minneapolis, USA). Résultats La figure 6A montre que la sécrétion d'adiponectine dans le surnageant de 20 culture augmente au cours de la différenciation des PA abdominaux viscéraux humains, avec un pic de sécrétion à J7. Les cellules traitées par le PD146176 depuis JO montrent une sécrétion d'adiponectine dans le milieu de culture très fortement diminuée à J7 comme le montre la figure 6B. Ce résultat confirme l'inhibition du processus de différenciation 25 qui avait été observée par mesure de l'expression du gène aP2 au 7ème jour de différenciation (figure 5). Exemple 7: La 12/15-LO, équivalent fonctionnel de la 15-LO-1 chez les rongeurs, est principalement exprimée dans le TA chez le rat et la souris, et 30 son expression est plus forte dans les TA mésentérique, épididymal et périrénal que dans le TA abdominal sous-cutané. Extraction de tissus de rongeurs Les souris C57BI6 et les rats Sprague Dawley (Charles River laboratories) sont soumis à un cycle jour/nuit standard et nourris ad libitum par des aliments pour rongeurs. Les rats Sprague Dawley sont sacrifiés par injection de pentobarbital et les souris sont sacrifiées par dislocation cervicale après anesthésie à l'isoflurane Extraction des TA Les différents dépôts de TA sont prélevés (TA sous-cutané abdominal, TA sous-cutané dorsal, TA omental, TA mésentérique, TA périrénal, TA épididymal et TA interscapulaire), coupés en petits morceaux et directement transférés dans de l'azote liquide. Extraction des ARNs et analyse de l'expression de la 12/15-LO par RT-PCR et RTQPCR Les ARNs totaux des tissus autres que le TA sont extraits selon la méthode décrite dans l'exemple 3. Les ARNs totaux de TA sont extraits selon la méthode décrite dans l'exemple 1. Les RT sont réalisées comme décrit dans l'exemple 1 et l'expression de la 12/15-LO de rongeur (voir le tableau 7) est analysée par RT-PCR ou RT-QPCR comme décrit dans les exemples 1 et 2. Tableau 7 Gène Séquences des amorces (5' -> 3') Taille du produit Numéro de PCR (pb) Genbank r12/15-LO Sens (SSEQ ID NO:11) 182 NM 031010 G G GTCTACCTG Antisens (SEQ ID NO :12) AACCAGGCGTCATCCGTGAG m12/15-LO Sens (SEQ ID NO:13) 316 NM 009660 GGCTCCAACAACGAGGTCTACCTG Antisens (SEQ ID NO :14) GAGAGTCTTCAACCACGGTG Résultats Les résultats de l'analyse de l'expression tissulaire de la 12/15-LO chez le rat et la souris par RT-PCR, présentés sur la figure 7A, montrent une distribution tissulaire assez restreinte de la 12/15-LO chez le rat et la souris: l'expression est en20 effet retrouvée dans les poumons, dans la rate (chez le rat), dans le muscle (chez la souris) et dans le TA. L'analyse de l'expression de la 12/15Lox dans les différents dépôts de TA chez le rat montre, sur la figure 7B, que son expression est confirmée dans le TA. L'expression est arbitrairement fixée à 1 dans le TA abdominal sous-cutané dorsal. Comme chez l'homme, l'expression est moins importante dans le TA abdominal sous-cutané (abdominal et dorsal) par rapport aux dépôts de TA profonds comme le TA omental, le TA mésentérique, le TA épididymal et le TA périrénal. L'expression de la 12/15-LO est préférentielle du TA blanc puisqu'une faible expression dans le tissu TA brun (TA interscapulaire) est observée comparée aux autre dépôts. Exemple 8: Le PD146176, un inhibiteur de la 15-LO, inhibe la différenciation des cellules 3T3-L1 en adipocytes. Culture des cellules 3T3-L1 et différenciation en adipocytes La lignée cellulaire de PA 3T3-L1 (ATCC) de souris est maintenue en milieu DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's minimal essential Medium) supplémenté par 10% de SVF, de la L-glutamine et un mélange Pénicilline/Streptomycine. A confluence (JO), les cellules 3T3-L1 sont différenciées par un traitement de 2 jours avec un mélange dexamethasone (0,1 pM), isobutylmethylxanthine (0,25 mM) et insuline (0,4 pM), puis les cellules sont maintenues sous insuline pour 14 jours supplémentaires jusqu'à la différenciation complète. Des photographies sont prises à différents jours après la confluence et permettent de suivre visuellement le processus de différenciation. Traitement des cellules par le PD146176 Le PD146176 est ajouté lorsque les cellules 3T3-L1 atteignent la confluence (JO) et est maintenu pendant tout le processus de différenciation avec un changement tous les deux jours en même temps que l'insuline. Quantification de la différenciation par Adipored L'accumulation progressive de gouttelettes intracellulaires est également utilisée comme un marqueur fonctionnel de la différentiation en adipocytes. Pour quantifier cette accumulation, la différenciation des cellules 3T3-L1 est réalisée en plaques de 96 puits. Le jour de la lecture, les plaques sont retirées de l'incubateur pour permettre un retour à température ambiante. Le milieu est retiré, les cellules sont rincées avec précaution par 200p1 de PBS, puis 200p1 de PBS sont ajoutés dans chaque puits. 5pl de réactif Adipored (Cambrex, Paris, France) sont ajoutés dans chaque puits et les plaques sont mélangées avant lecture. La fluorescence est mesurée à l'aide d'un fluorimètre par excitation à 485 nm et émission à 535 nm. Dosaqe des triglycérides Pour le dosage des triglycérides intracellulaires, la différenciation des cellules 3T3-L1 est réalisée en plaque de 24 puits. Les cellules sont lavées 3 fois en PBS, puis 500pl d'un tampon d'homogénéisation (150 mM NaCl, Tris HCL pH=8, 0,1% Triton X-100) sont ajoutés dans chaque puits. Les cellules sont grattées, transférées dans un tube et lysées par sonication pendant 10 secondes à 40 watts. Le lysat obtenu est filtré sur filtre millipore 0,2pM. Le dosage est réalisé sur 125pl du lysat obtenu, à l'aide du kit Triglyceride L-type (Wako). Le dosage est normalisé par rapport à la quantité de protéines présente dans les lysats. Extraction des ARNs et analyse de l'expression de la LPL et de l'aP2 par RT-QPCR Les ARNs totaux sont extraits à différents temps de la différenciation selon la méthode décrite dans l'exemple 3 et les expressions des gènes aP2 et LPL (lipoprotéine lipase) sont analysées par RT-QPCR selon la méthode décrite dans l'exemple 2 (voir le tableau 8). Tableau 8 Gène Séquences des amorces (5' -> 3') Taille du Numéro produit de Genbank PCR (pb) mLPL Sens (SEQ ID NO:15) 240 16678709 ACTGCCACTTCAACCACAGC Antisens (SEQ ID NO:16) ACTCCTCCTCCATCCAGTTG maP2 Sens (SEQ ID NO:17) 240 NM- GTGATGCCTTTGTGGGAACCTG 024406 Antisens (SEQ ID NO:18) TCACCTTCCTGTCGTCTGCG m/rCyclophilin Sens (SEQ ID NO:19) 109 GI6679438 GGGTGGTGACTTTACACGCC Antisens (SEQ ID NO:20) GGACAAGATGCCAGGACCTG Résultats Le changement de morphologie des cellules 3T3-L1 au cours de la différenciation adipocytaire est présenté sur la figure 8A : on constate l'acquisition, au cours de la différenciation, de la morphologie d'adipocytes riches en gouttelettes lipidiques (avec apparition des gouttelettes dès J7). L'ajout du PD146176 à JO provoque une inhibition dose-dépendante de l'accumulation de lipides dans les cellules, les gouttelettes étant moins nombreuses et de plus petite taille. La figure 8B montre que, au cours de la différenciation, le marquage Adipored augmente progressivement jusqu'à 5000 RLU à J14, correspondant à l'accumulation de lipides par les 3T3-L1. L'ajout du PD146176 à JO diminue fortement le marquage Adipored de façon dose-dépendante dès le 3ème jour de différenciation. L'inhibition est toujours observée à J7 et est encore plus marquée après 14 jours de différenciation où les cellules ayant reçu 10pM de PD146176 ont un marquage Adipored correspondant à celui observé à JO. L'accumulation de triglycérides par les cellules 3T3-L1 au cours de la différenciation adipocytaire est présentée sur la figure 8C : au cours de la différenciation, les cellules 3T3-L1 se chargent progressivement en triglycérides. Cette augmentation suit exactement la même cinétique que celle observée avec l'Adipored (figure 8B). L'ajout du PD146176 à JO diminue cette accumulation de façon dose-dépendante avec une baisse de 80% à J10 par rapport au contrôle pour la dose la plus forte (10pM). Enfin, on constate sur la figure 8D que l'expression des marqueurs aP2 et LPL augmente progressivement au cours de la différenciation des cellules 3T3-L1 et que l'ajout du PD146176 à JO provoque une diminution de l'expression des ces deux marqueurs de façon dose-dépendante dès le 3ème jour de différenciation. Tous ces résultats montrent que le PD146176, un inhibiteur de la 15-LO, inhibe la différenciation des cellules 3T3-L1 en adipocytes. Ces résultats indiquent donc que la 15-LO est un facteur pro-adipogéniqûe et que l'inhibition de son activité entraîne une inhibition de la différenciation adipocytaire. Exemple 9 : L'acide caféique inhibe la différenciation de PA primaires de rat en adipocytes matures. Différenciation des PA de rat Les cellules de la fraction SV (la technique d'isolement de la fraction est identique à celle décrite dans l'exemple 3) sont ensemencées en plaques 6 puits à une densité de 80 000 cellules/cm2 dans le milieu 199 (Gibco) supplémenté par 10% de SVF et par un mélange Pénicilline/Streptomycine. Après 16 heures d'incubation pour l'adhérence des cellules, les puits sont délicatement rincés par du PBS afin de retirer ce qui n'a pas adhéré. Les cellules sont cultivées jusqu'à la confluence. A confluence (JO), le milieu 199 est retiré et remplacé par le milieu ITT (DME/Ham's F12, 15mM NaHCO3, 15mM Hepes, 33pM biotine, 17pM panthotenate, 0,5pM insuline humain, 0,2nM Triiodothyronine et antibiotiques) sans ajout de sérum. Les cellules sont maintenues dans ce milieu pour permettre la différenciation. Le milieu est changé tous les 2-3 jours pendant le processus de différenciation. Traitement des cellules par l'acide caféique L'acide caféique (2,2 pM) est ajouté lorsque les PA de rat atteignent la confluence (JO) et est maintenu pendant le processus de différenciation en adipocytes. A la concentration de 2,2 pM, l'acide caféique est considéré comme un inhibteur sélectif de la 15-LO (Shureiqi I, Chen D, Lee JJ, Yang P, Newman RA, Brenner DE, Lotan R, Fischer SM and Lippman SM, 2000). Du DMSO est ajouté à la concentration de 0,1% final dans le milieu de culture comme témoin négatif. Extraction des ARNs et analyse de l'expression du gène aP2 Les ARNs totaux sont extraits à différents temps de la différenciation selon la méthode décrite dans l'exemple 3 et les expressions des gènes aP2 et LPL sont analysées par RT-PCR quantitative selon la méthode décrite dans l'exemple 2 (voir le tableau 9). Tableau 9. Gène Séquences des amorces (5' -> 3') Taille du Numéro produit de Genbank PCR (pb) raP2 Sens (SEQ ID NO:21) 223 U75581 AACTCGTCTCCAGTGAGAAC Antisens (SEQ ID NO:22) ATGCTCTTCACTTTCCTGTC m/rCyclophilline Sens (SEQ ID NO:23) 109 GI6679438 GGGTGGTGACTTTACACGCC Antisens (SEQ ID NO:24) GGACAAGATGCCAGGACCTG Résultats La figure 9A montre les effets de l'acide caféique sur la morphologie des PA de rat au cours de la différenciation adipocytaire: comme pour les cellules 3T3-L1, les PA de rat changent progressivement de morphologie au cours du processus de différenciation adipocytaire pour acquérir une morphologie d'adipocytes riches en gouttelettes lipidiques (avec apparition des gouttelettes dès J5) et l'ajout l'acide caféique à la dose de 2,2pM à JO provoque une inhibition de l'accumulation de lipides dans les cellules (gouttelettes moins nombreuses et de plus petite taille). La figure 9B montre les effets de l'acide caféique sur l'expression de l'aP2 par les PA de rat au cours de la différenciation adipocytaire : comme cela avait été observé pour les PA humains ou les cellules 3T3-L1, l'expression de aP2 augmente au cours de la différenciation des PA de rat, ceci dès J3 (comparaison des points contrôle JO et J3) et l'ajout de l'acide caféique à la dose de 2,2pM dès JO diminue l'expression de l'aP2 à J3, corrélant avec les observations réalisées au microscope (figure 9A). BIBLIOGRAPHIE Alberti KG, et al., The metabolic syndrome--a new worldwide definition, Lancet, 2005, 366 (9491), 1059-62 Auerbach BJ, et al., A spectrophotometric microtiter-based assay for the detection of hydroperoxy derivatives of linoleic acid, Anal Biochem, 1992, 201 (2), 375-80 Bezuglov W, et al., Serotoninamide of arachidonic acids as an irreversible inhibitor of soybean lipoxygenase, Bioorganicheskaya Khimiya, 1996, 22 (10-11), 878-880 Bocan TM, et al., A specific 15-lipoxygenase inhibitor limits the progression and monocyte-macrophage enrichment of hypercholesterolemia-induced atherosclerosis in the rabbit, Atherosclerosis, 1998, 136 (2), 203-16 Brash AR, et al., Discovery of a second 15S-lipoxygenase in humans, Proc Natl Acad Sci U S A, 1997, 94 (12), 6148-52 Brathe A, et al., 6-substituted purines as inhibitors of 15-lipoxygenase; a structureactivity study, Arch Pharm (Weinheim), 2005, 338 (4), 159-66 Carroll J, et al., Probing sponge-derived terpenoids for human 15-lipoxygenase inhibitors, J Org Chem, 2001, 66 (21), 6847-51 Cichewicz RH, et al., Redox inactivation of .human 15-lipoxygenase by marinederived meroditerpenes and synthetic chromanes: archetypes for a unique class of selective and recyclable inhibitors, J Am Chem Soc, 2004, 126 (45), 14910-20 30 Cornicelli JA and Trivedi BK, 15-Lipoxygenase and its inhibition: a nove/ therapeutic target for vascular disease, Curr Pharm Des, 1999, 5 (1), 11-20 Fajas L, et al., Transcriptional control of adipogenesis, Curr Opin Cell Biol, 1998, 10 (2), 165-7325 Gan QF, et al., Defining the arachidonic acid binding site of human 15-lipoxygenase. Molecular modeling and mutagenesis, J Biol Chem, 1996, 271 (41), 25412-8 Gleason MM, et al., Characterization and inhibition of 15-lipoxygenase in human monocytes: comparison with soybean 15-lipoxygenase, Am J Physiol, 1995, 268 (5 Pt 1), C1301-7 Gundersen L, et al., Indolizines as nove/ potent inhibitors of 15-lipoxygenase., Bioorg 10 Med Chem, 2003, 11 (24), 5409-15 Gutierrez-Lugo MT, et al., Lipoxygenase inhibition by anadanthoflavone, a new flavonoid from the aerial parts of Anadenanthera colubrina, Planta Med, 2004, 70 (3), 263-5 Harats D, et al., Overexpression of 15-lipoxygenase in vascular endothelium accelerates early atherosclerosis in LDL receptor-deficient mice, Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2000, 20 (9), 2100-5 20 Hsi LC, et al., Opposing effects of 15-lipoxygenase-1 and -2 metabolites on MAPK signaling in prostate. Alteration in peroxisome proliferator-activated receptor gamma, J Biol Chem, 2002, 277 (43), 40549-56 Jiang ZY, et al., Ferrous ion oxidation in the presence of xylenol orange for detection 25 of lipid hydroperoxicte in low density lipoprotein, Anal Biochem, 1992, 202 (2), 384-9 Kuhn H and Borngraber S, Mammalian 15-lipoxygenases. Enzymatic properties and biological implications, Adv Exp Med Biol, 1999, 447 5-28 30 Lapidus L, et al., Distribution of adipose tissue and risk of cardiovascular disease and death: a 12 year follow up of participants in the population study of women in Gothenburg, Sweden, Br Med J (Clin Res Ed), 1984, 289 (6454), 1257-61 15 Larsson B, et al., Abdominal adipose tissue distribution, obesity, and risk of cardiovascular disease and death: 13 year follow up of participants in the study of men born in 1913, Br Med J (Clin Res Ed), 1984, 288 (6428.), 1401-4 Lin BB and Lin yS, Selective inhibition on 15-lipoxygenase of squalene isolated from prunus persica, Chemistry Express, 1992, 7 (4), 297-300 Lin BB and Lin ySä Selective inhibition on 15-lipoxygenase of trans-phytol isolated from oxalis corniculata L., Chemistry Express, 1993, 8 (1), 21-4 Lin BB and Lin yS, a facile synthesis of 1-ethoxy-4-cyano-5-ethoxycarbonyl-3H-azuleno[1,2-c]pyran-3-one, a selective 15-lipoxygenase inhibitor, Bioorganic and medicinal chemistryy letters, 2004, 14 (1), 63-5 15 Lin BB, et al., A facile synthesis of 1-ethoxy-4-cyano-5-ethoxycarbonyl-3H-azuleno[1,2-c]pyran-3-one, a selective 15-lipoxygenase inhibitor, Bioorg Med Chem Lett, 2004, 14 (1), 63-5 Lyckander IM and Malterud KE, Lipophilic flavonoids from Orthosiphon spicatus as 20 inhibitors of 15-lipoxygenase, Acta Pharmaceutica Nordica, 1992, 4 (3), 159-66 Malterud KE and Rydland KM, Inhibitors of 15-lipoxygenase from orange peel, J Agric Food Chem, 2000, 48 (11), 5576-80 25 Malterud KE, et al., Inhibition of 15-lipoxygenase by phthalate plasticizers, Bull Environ Contam Toxicol, 1999, 62 (3), 352-5 Moller DE and Kaufman KD, Metabolic syndrome: a clinicat and molecular perspective, Annu Rev Med, 2005, 56 45-62 Montero A and Badr KF, 15-Lipoxygenase in glomerular inflammation, Exp Nephrol, 2000, 8 (1), 149 30 Rydberg EK, et al., Hypoxia increases LDL oxidation and expression of 15-lipoxygenase-2 in human macrophages, Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2004, 24 (11), 2040-5 Segraves EN, et al., Probing the activity differences of simple and complex brominated aryl compounds against 15-soybean, 15-human, and 12-human lipoxygenase, J Med Chem, 2004, 47 (16), 4060-5 Sendobry SM, et al., Attenuation of diet-induced atherosclerosis in rabbits with a 10 highly selective 15-lipoxygenase inhibitor lacking significant antioxidant properties, Br J Pharmacol, 1997, 120 (7), 1199-206 Shannon VR, et al., Histochemical evidence for induction of arachidonate 15-lipoxygenase in airway disease, Am Rev Respir Dis, 1993, 147 (4), 1024-8 Shillabeer G, et al., Arachidonic acid metabolites of the lipoxygenase as well as the cyclooxygenase pathway may be involved in regulating preadipocyte differentiation, Metabolism, 1998, 47 (4), 461-6 20 Shureiqi I, et al., 15-LOX-1: a nove/ molecular target of nonsteroidal antiinflammatory drug-induced apoptosis in colorectal cancer cells, J Natl Cancer Inst, 2000, 92 (14), 1136-42 Shureiqi I, et al., 15-Lipoxygenase-1 mediates nonsteroidal anti-inflammatory drug-25 induced apoptosis independently of cyclooxygenase-2 in colon cancer cells, Cancer Res, 2000, 60 (24), 684650 Teklu S, et al., lndolizine 1-sulfonates as potent inhibitors of 15-lipoxygenase from soybeans, Bioorg Med Chem, 2005, 13 (9), 3127-39 Walther M, et al., The inhibition of mammalian 15-lipoxygenases by the antiinflammatory drug ebselen: dual-type mechanism involving covalent linkage and alteration of the iron ligand sphere, Mol Pharmacol, 1999, 56 (1), 196-203 15 30 Watanabe T, et al., Molecular cloning of a 12-lipoxygenase cDNA from rat brain, Eur J Biochem, 1993, 212 (2), 605-12 Weinstein DS, et al,, Tryptamine and homotryptamine-based sulfonamides as potent 5 and selective inhibitors of 15-lipoxygenase, Bioorg Med Chem Lett, 2005, 15 (5), 1435-40 Whitman S, et al., Structure-activity relationship studies of nordihydroguaiaretic acid inhibitors toward soybean, 12-human, and 15-human lipoxygenase, J Med Chem, 10 2002, 45 (12), 2659-61 REVENDICATIONS 1- Utilisation d'au rnoins un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'au moins une des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ses conséquences. 2- Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique sont choisies parmi l'obésité, un taux élevé de triglycérides, un faible taux de HDL-cholestérol, un taux élevé de glycémie et/ou une résistance à l'insuline et/ou une hypertension. 3- Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que la perturbation métabolique correspond à l'obésité, de préférence à l'obésité abdominale. 4- Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la conséquence du syndrome métabolique est le diabète de type 2 et/ou une maladie cardiovasculaire. 5- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la 15-LO est la 15-LO-1. 6- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'agent 25 inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO est un composé capable d'inhiber partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO. 7- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'agent inhibant partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO présente une IC50 30 inférieure ou égale 1 pM. 8- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l'agent inhibant partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO est sélectif de la 15-LO.20 9- Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que l'agent inhibant partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO est le composé PD146176. 10- Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que l'agent inhibant 5 partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO est le composé N-((4-npentylbenzène)sulfonyl)-2-(benzofuran-2-yl)tryptamine. 11- Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que l'agent inhibant partiellement ou totalement l'activité de la 15-LO est un anticorps anti-15-LO. 12- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO est un composé capable d'inhiber partiellement ou totalement l'expression de la 15-LO. 15 13- Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que l'agent inhibant partiellement ou totalement l'expression de la 15-LO est une molécule d'acide nucléique antisens. 14- Composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le 20 plan pharmaceutique, au moins un agent inhibant partiellement ou totalement l'expression et/ou l'activité de la 15-LO éventuellement en association avec un ou plusieurs autres principes actifs thérapeutiques et/ou cosmétiques. 15- Composition pharmaceutique selon la revendication 14, pour le traitement d'au 25 moins une des perturbations métaboliques caractéristiques du syndrome métabolique et/ou d'au moins une de ses conséquences. 10