Brevet FR2886153A1 — publié le 20061201

COMPOSITION DESTINEE AU TRAITEMENT DE LA SCLEROSE EN PLAQUES La présente invention concerne une composition pour maîtriser l'évolution de la sclérose en plaques, comprenant des molécules endogènes greffées à la Poly-Lysine, dites aussi conjugués de Poly-Lysine. L'invention se rapporte également à l'utilisation de cette composition. La sclérose en plaques est une maladie auto-immune, chronique, évolutive qui provoque d' importants handicaps. Parmi les processus pathogéniques, l'inflammation et l'activation du système immunitaire conduisent à la destruction de la myéline, enveloppe qui entoure le nerf et participe à la conduction de l'influx nerveux. Cette démyélinisation inflammatoire se traduit par l'apparition de lésions réparties singulièrement en plaques multiples, disséminées dans le système nerveux central, pouvant toucher n'importe quelle structure cérébrale. Chez la majorité des malades atteints de sclérose en plaques, la maladie prend d'abord une forme dite rémittente, puis évolue de façon progressive pour aboutir à des handicaps, qui, s'ils n'influencent pas le pronostic vital, altèrent notablement la qualité de vie. On parle alors de phase secondairement progressive. Il existe également des formes progressives d'emblée, dites primitivement progressives, qui sont souvent plus sévères. Pour évaluer le niveau de handicap des patients atteints de sclérose en plaques il existe une échelle dite EDSS (Expanded Disability Status Scale) qui fait référence aux fonctions atteintes. Cette échelle est cotée de 0 à 10, 0 correspondant à un examen normal c'est à dire pas de handicap, et 10 correspondant au décès lié à la SEP. La forme rémittente de la maladie est caractérisée par des phases de poussées et de rémissions. Les poussées correspondent à des attaques de myéline et sont marquées par une inflammation sévère. Les périodes de rémission sont liées à la réparation et à la réorganisation de la myéline, et se traduisent par un retour partiel ou total au niveau clinique correspondant à un niveau au moins inférieur à 3-4 de l'échelle EbSS habituellement. Dans la forme dite progressive de la maladie, les périodes d'aggravation sont le résultat d'une réparation peu efficace de la myéline et de l'apparition de scléroses, lésions irréversibles. Le niveau de handicap sur l'échelle EbSS augmente et le niveau 7 atteint, le malade se déplace essentiellement en fauteuil roulant. Actuellement il n'existe aucun traitement capable d'enrayer l'évolution de la sclérose en plaques. On dispose néanmoins de médicaments susceptibles de soulager les malades en diminuant l'intensité et la fréquence des poussées handicapantes. C'est le cas en particulier des anti-inflammatoires, généralement des corticoïdes qui, administrés à forte doses, réduisent la durée des poussées. Il existe également d'autres médicaments qui agissent en tant qu'immunomodulateurs ou immunosuppresseurs. Les immunomodulateurs sont classiquement utilisés pour les formes rémittentes. On connaît notamment les interférons bêta qui diminuent le nombre et l'intensité de poussées. Pour les formes avancées on utilise plutôt des immunosuppresseurs qui ralentissent un peu la pente évolutive de la maladie. Tous ces médicaments agissent sur une faible part des mécanismes responsables de la démyélinisation mais ne permettent pas de la traiter et encore moins de la stopper. be plus, leur administration demande généralement l'intervention de professionnels et nécessite une hospitalisation et un suivi particulier, lourd et coûteux pour les malades. Par contre ces médicaments sont tous dotés d'effets secondaires limitant fortement leur prescription, en particulier à long terme. Ils sont donc inappropriés pour le traitement à long terme d'une maladie chronique telle que la sclérose en plaques. Ainsi, il existe un besoin pour un traitement de la sclérose en plaques, capable de maîtriser la progression de la maladie, facile d'administration et susceptible d'être utilisé à long terme. C'est ce à quoi répond la présente invention en proposant une composition pour maîtriser l'évolution de la sclérose en plaques, comprenant au moins: - un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un acide gras, et - un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un anti-oxydant, et - un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un dérivé d'acide aminé. Par anti-oxydants, on entend les antioxydants et les piégeurs de radicaux libres connus. Une telle composition permet d'interrompre la destruction de la myéline, de favoriser la remyélinisation des zones atteintes, de faire disparaître l'inflammation et d'éviter la formation de nouvelles plaques de sclérose. En conséquence elle stoppe la progression de la maladie, et si le niveau de handicap atteint n'est pas trop important, elle permet également une récupération et une diminution du score sur l'échelle EMS. On sait que la sclérose en plaques est une maladie auto-immune qui se déclenche par un agent causal non connu à ce jour chez des personnes ayant des prédispositions génétiques. Elle débute par l'entrée dans le corps de facteurs exogènes de type virus ou bactéries par exemple, qui activent le système immunitaire et qui entraînent l'ouverture ou la rupture physique de la barrière hématoencéphalique. L'ouverture de cette barrière, qui normalement filtre le passage et la diffusion dans le système nerveux central de toute substance circulant dans le sang, autorise donc le passage de molécules dans le système nerveux central et notamment des molécules et cellules du système immunitaire activées par les facteurs externes. Il s'ensuit une cascade d'activations induites par les cellules et les molécules qui conduisent à la destruction des gaines de myéline et des oligodendrocytes, cellules productrices de myéline. Un objectif de l'invention est donc d'éviter l'induction des processus qui ont lieu dans le système nerveux central, en inhibant le déclenchement de la réponse immunitaire induite par les facteurs exogènes et en bloquant la barrière hématoencéphalique. Pour cela la composition selon l'invention contient notamment des acides gras greffés à la Poly-Lysine, capables d'être reconnus par les mêmes cellules et molécules du système immunitaire que celles qui se lient aux bactéries et virus responsables de la maladie et/ou de la chronicité, sans toutefois engendrer la réponse immunitaire normalement déclenchée par ces mêmes bactéries et virus. Ainsi, les acides gras de la composition selon l'invention entrent en compétition avec les facteurs exogènes et provoquent une diminution de la réponse du système immunitaire. Les acides gras greffés à la Poly-Lysine ont un effet de leurre. Par ailleurs, les acides gras greffés à la Poly-Lysine contenus dans la composition selon l'invention bloquent la barrière hémato-encéphalique, ce qui empêcherai les cellules activées du système immunitaire d'entrer dans le système nerveux central qui se trouve ainsi protégé. Outre la destruction directe de la myéline du système nerveux central, l'activation du système immunitaire par les facteurs externes provoque en parallèle la libération, en excès, d'espèces oxygénées réactives (ROS) responsables de modifications de composés endogènes alors appelés néoantigènes. Ces radicaux libres montrent des effets cytotoxiques directs et dénaturent aussi les protéines endogènes, ce qui augmente l'auto-immunité. Parmi ces ROS, on peut citer notamment le monoxyde d'azote (NO) dont la production est aussi augmentée par les lipopolysaccharides présents à la surface des facteurs externes inducteurs de la maladie, notamment des bactéries gram négatif. Le NO serait impliqué dans l'ouverture de la barrière hématoencéphalique et aurait également une action néfaste sur les oligodendrocytes, empêchant ainsi la formation de nouvelle myéline. Un autre objectif de la présente invention est donc de contrôler les processus oxydatifs induits, de manière à réduire l'auto-immunité, à inhiber l'ouverture de la barrière hémato-encéphalique et à diminuer les effets cytotoxiques sur le système nerveux central. Un tel contrôle permettrait également de retrouver des oligodendrocytes fonctionnels, cellules productrices de la myéline. De fait, la composition selon l'invention contient des anti-oxydants conjugués à la Poly-Lysine qui piègent les espèces oxygénées et inhibent les processus oxydatifs pathogènes. Pour lutter encore plus efficacement contre la sclérose en plaques, il convient également que le traitement administré ait une action neurotrophique. Ainsi, la composition selon l'invention contient des dérivés d'acides aminés greffés à la Poly-Lysine capables d'assurer une protection neuronale. En outre ces dérivés d'acides aminés greffés à la Poly-Lysine présentent également un effet immunomodulateur et permettent de maîtriser les réponses auto-immunes. Enfin, une des caractéristiques principales de la sclérose en plaques étant l'inflammation, la composition selon l'invention a également une action anti-inflammatoire directe notamment grâce à la présence d'acides gras greffés à la Poly-Lysine. Ceci montre les effets synergiques de la composition selon l'invention. La composition selon la présente invention permet donc de lutter contre la sclérose en plaques, à la fois: - en diminuant la réponse immunitaire induite par les facteurs exogènes, grâce à la présence d'acides gras capables d'entrer en compétition avec ceux-ci au niveau des molécules et cellules spécifiques du système immunitaire, - en bloquant la barrière hémato-encéphalique, grâce à la présence d'acides gras et d'anti-oxydants, ces derniers étant capables de piéger le NO impliqué dans l'ouverture de la barrière et la formation de néoantigènes, - en piégeant les espèces oxygénées réactives responsables de nombreux dégâts, grâce à la présence d'anti-oxydants, ce qui permet notamment la réparation myélinique par recolonisation de lésions par les oligodendrocytes, - en assurant une protection neuronale par des dérivés d'acides aminés, - en régulant les réponses auto-immunes, grâce à la présence de dérivés d'acides aminés, et - en diminuant directement l'inflammation, grâce à la présence d'acides gras présentant une activité anti-inflammatoire. Ainsi, les trois types de molécules endogènes contenues dans la composition selon l'invention ont des actions complémentaires et potentialisatrices qui permettent d'agir sur les différents aspects de la sclérose en plaques. Néanmoins, pour être efficaces ces molécules ne peuvent être utilisées non liées car elles seraient rapidement métabolisées, n'atteindraient pas leur cible et n'auraient aucune activité thérapeutique. De fait, selon l'invention, ces molécules endogènes sont greffées à un vecteur particulier: la Poly-Lysine. Ce vecteur particulier, permet: d'éviter la dégradation métabolique des molécules endogènes, - de permettre le passage des molécules endogènes à travers la barrière hématoencéphalique, - de faire atteindre leurs cibles aux molécules endogènes, et - de donner aux molécules endogènes une activité thérapeutique qu'elles n'ont pas sans ce greffage, notamment pour les acides gras. Par ailleurs, la Poly-Lysine présente également l'avantage d'être inerte, non allergisante, non immunogénique et d'avoir une demi-vie assez longue. Avantageusement, la composition selon l'invention ne contient que des substances endogènes c'est à dire connues pour être naturellement présentes dans le vivant. Elle ne présente aucune toxicité, ni d'effets secondaires et peut être administrée à long terme. La composition selon l'invention peut être incorporée dans différents types de préparations pharmaceutiques présentées sous toutes formes galéniques. Parmi les formes galéniques des préparations pharmaceutiques susceptibles d'inclure le principe actif selon la présente invention on peut citer notamment la forme sublinguale, pratique d'utilisation et équivalente en efficacité à une administration sous cutanée. D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description des exemples de composition selon l'invention qui vont suivre, non limitative, en regard des dessins annexés sur lesquels les différentes figures représentent - figure 1, une représentation graphique de l'effet d'une solution de chlorure de sodium (NaCl) sur une crise EAE (encéphalite allergique expérimentale) induite chez des rates Lewis et de l'effet d'une solution d'acides gras conjugués à la Poly-L-Lysine (solution 1) sur cette même crise EAE. - figure 2, une représentation graphique de l'effet d'une solution de NaCl sur une crise EAE induite chez des rates Lewis et de l'effet d'une solution d'acides gras conjugués à la Poly-L-Lysine (solution 2) sur cette même crise EAE. - figure 3, une représentation graphique de l'effet d'une solution de NaCl sur une crise EAE induite chez des rates Lewis et de l'effet d'une solution d'antioxydants conjugués à la Poly-L-Lysine (solution 3) sur cette même crise EAE. - figure 4, une représentation graphique de l'effet d'une solution de NaCl sur une crise EAE induite chez des rates Lewis et de l'effet d'une solution d'antioxydants conjugués à la Poly-L-Lysine et d'acides gras conjugués à la Poly-LLysine (solution 4) sur cette même crise EAE. -figure 5, une représentation graphique de l'effet d'une solution NaCl sur une crise EAE de rats et de l'effet d'une solution d'anti-oxydants conjugués à la Poly-L-Lysine, d'acides gras conjugués à la Poly-L-Lysine et d'acides aminés conjugués à la Poly-L-Lysine (solution 5) sur cette même crise EAE, et - figure 6, une représentation graphique de l'effet d'une solution de NaCl sur une crise EAE induite chez des rates Lewis et de l'effet d'une solution d'antioxydants conjugués à la Poly-L-Lysine, d'acides gras conjugués à la Poly-L-Lysine et d'acides aminés conjugués à la Poly-L-Lysine (solution 6) sur cette même crise EAE. 1. EXEMPLE DE COMPOSISTION ADAPTEE A LA FORME SECONDAIREMENT PROGRESSIVE Parmi les compositions selon l'invention, on peut citer une composition contenant les conjugués de Poly-L-Lysine suivants: - Acide Azéldique Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - Poly-L- Lysine Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Linoléique Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique Trans,trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique 2886153 9 - Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L-Lysine - Acide Ascorbique Poly-L-Lysine - L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly- L-Lysine L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Taurine Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Histamine - Acide Glutarique-PolyL-Lysine - L-Histidine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine - 5méthoxytryptamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine Une telle composition est particulièrement adaptée au traitement de la forme 10 secondairement progressive de la sclérose en plaques, et notamment pour des malades dont le handicap est inférieur à 7 sur l'échelle EbS5. Cette composition peut être conditionnée sous une seule forme (Cl), comprenant les constituants suivants - alcool éthylique 96% - eau purifiée - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azéldique Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L- Cystéine Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-LLysine - Acide Thioctique - Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique Acide Linoléique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans,trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L-Lysine - Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine 2886153 10 - L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit Poly-L-Lysine - L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L- Lysine Taurine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Histamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine - L-Histidine - Acide Glutarique- Poly-L- Lysine - 5-méthoxytryptamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine Selon une variante, la composition de l'exemple 1 peut être conditionnée sous deux formes correspondant à 2 préparations pharmaceutiques distinctes. Cette variante permet une optimisation de l'administration par une prise en deux fois de la composition selon l'invention. Selon cette variante, la première forme (C2) comprend les constituants suivants - alcool éthylique 96% - eau purifiée - Acide Azéldique - Poly-LLysine - Acide Oléique - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - Poly-L- Lysine Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Linoléique Poly-L-Lysine Selon cette variante, la seconde forme (C3) comprend les constituants suivants: - alcool éthylique 96% - eau purifiée - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azéldique -PolyL-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine -Poly-LLysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - PolyL-Lysine - Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique - Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique -Acide Linoléique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique Trans,trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L-Lysine - Acide Ascorbique Poly-L-Lysine - L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly- L-Lysine L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Taurine Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Histamine - Acide Glutarique-PolyL-Lysine - L-Histidine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine - 5méthoxytryptamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine 2. EXEMPLE DE COMPOSITION ADAPTEE A LA FORME REMITTENTE Un autre exemple de composition selon l'invention contient les conjugués de Poly-L-Lysine suivants: Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azéldique - PolyL-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - PolyL-Lysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-LLysine - Acide Thioctique 2886153 12 - Cholestérol - Poly-L-Lysine -Acide Oléique - Acide Linoléique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Poly-LLysine - Acide Palmitoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Rétinoïque - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - CoEnzyme Q10 - AlphaTocophérol succinate - Poly-L-Lysine - Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - L-Cystéine Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Taurine - Glutaraldéhyde réduit Poly-L-Lysine - 5-méthoxytryptamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine Une telle composition est particulièrement adaptée au traitement de la forme rémittente de la sclérose en plaques. Cette composition peut être conditionnée dans une préparation pharmaceutique 15 sous une seule forme (C4), comprenant les constituants suivants - alcool éthylique 96% - eau purifiée - Acide Azéldique - Poly-LLysine - Acide Oléique - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - Poly-L- Lysine Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Linoléique Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Rétinoïque - Acide Oléique Poly-L-Lysine - CoEnzyme Q10 - Alpha-Tocophérol succinate -Poly- L-Lysine - Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine - L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine Taurine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - 5-méthoxytryptamine Acide Glutarique- Poly-L-Lysine 3. EVALUATION DE L'EFFICACITE DE LA COMPOSITION SELON L'INVENTION 3.1 Etudes sur modèle animal EAE Le modèle expérimental utilisé pour ces études est l'encéphalite allergique expérimentale (EAE). C'est un modèle animal dont la crise mime la poussée de la sclérose en plaques. 3.1.1 Effets des molécules endogènes greffées à la Poly-Lysine Cette étude a pour objectif d'évaluer chez l'animal en crise les effets complémentaires des différents types de molécules présentes dans la composition selon l'invention conjuguées à la Poly-L-Lysine. Le modèle EAE est réalisé sur des rats femelles Lewis âgées de 7 semaines par injection de protéine basique de myéline et de Mycobacterium Tuberculosis en émulsion. L'évaluation clinique est réalisée selon l'échelle de signes neurologiques suivante - 0: aucun signe - 0,5: activité faible et perte de poids - 1: hypotonie de la queue - 2: faiblesse des membres arrières - 3: hémiparésie - 4: tétraplégie, état moribond 2886153 14 Le protocole consiste à injecter par voie sous-cutanée une fois par jour pendant 30 jours 0,5ml de solution à tester ou de NaCl (témoin), 9 jours après l'induction de I'EAE. Les solutions testées sont composées comme suit: - solution 1: -Acide Oléique - Poly-L-Lysine, - Acide Palmitique - Poly-L-Lysine, et -Acide Myristique - Poly-L-Lysine. - solution 2: - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine, - Acide Myristique Poly-L-Lysine, - Acide Palmitique - Poly-L-Lysine, - Acide Palmitoléique Poly-L-Lysine, et - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine -Poly-L-Lysine. - solution 3: - L-Cystéine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine, HomoCystéine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine, - L-Méthionine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine, - Taurine- Acide Glutarique- Poly-L-Lysine, Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L-Lysine, - L-Cystéine - Glutaraldéhyde - Poly-L-Lysine, - HomoCystéine - Glutaraldéhyde - Poly-L-Lysine, - LMéthionine - Glutaraldéhyde - Poly-L-Lysine, - Taurine - Glutaraldéhyde Poly-L-Lysine, et - Vitamine C - Poly-L-Lysine. - solution 4: - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine, - Acide Palmitoléique Poly-L-Lysine, - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine, - Acide Oléique- Poly-L-Lysine, - Acide Palmitique - Poly-L-Lysine, - Acide Myristique - Poly-L-Lysine, - solution 6 25 2886153 15 -L-Cystéine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine, - Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L- Lysine, - Taurine - Glutaraldéhyde - Poly-L-Lysine, et - Vitamine C Poly-L-Lysine. -Acide Azélciique - Poly-L-Lysine, - Acide Palmitoléique - Poly-L-Lysine, - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine, - Acide Oléique Poly-L-Lysine, - Acide Palmitique - Poly-L-Lysine, - Acide Myristique Poly-L-Lysine, - Acide Rétinoïque - Poly-L-Lysine, - L-Méthionine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine, - Taurine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine, Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L-Lysine, -L-Cystéine - Glutaraldéhyde Poly-L-Lysine, - L-Methionine - Poly-L-Lysine, - Taurine - Poly-L-Lysine, - Vitamine C - Poly-L-Lysine, -Tryptophane-Anhydride-Glutarique - PolyLLys i ne, - Cholesterol-Anhydride-Glutarique - Poly-L-Lysine, Tryptophane - Glutaraldéhyde -Poly-L-Lysine, et - GABA - Glutaraldéhyde Poly-L-Lysine. : - Acide Azélciique - Poly-L-Lysine, - Acide Palmitoléique - Poly-LLysine, - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine, - Acide Oléique - Poly-L-Lysine, - Acide Palmitique - Poly-L-Lysine, - Acide Myristique - Poly-L-Lysine, - HomoCystéine - Glutaraldéhyde - Poly-LLysine, - Taurine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine, - Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L-Lysine, - L-Cystéine - Glutaraldéhyde - Poly-L-Lysine, - L-Methionine-Glutaraldéhyde - Poly-L-Lysine, - Vitamine C - Poly-LLysine, - HydroxyTryptophane-Glutaraldéhyde - Poly-LLys i ne, 5méthoxytryptamine - Glutaraldéhyde - Poly-LLysine, et - Tyrosine Glutaraldéhyde - Poly-L-Lysine. Les résultats récapitulés sur les figures 1 à 6 montrent dans un premier temps que des acides gras conjugués à la Poly-Lysine seuls n'ont pas un effet suffisant pour contrôler la crise. On constate au contraire, qu'en ajoutant à ces acides gras conjugués à la Poly-Lysine, des anti-oxydants conjugués à la Poly-Lysine, on obtient un effet bénéfique. Enfin, si on ajoute à ces acides gras et anti-oxydants conjugués à la Poly-Lysine, des acides aminés conjugués à la Poly-Lysine, on parvient à inhiber complètement la crise. Ainsi, les trois types de composés contenus dans la composition selon l'invention agissent en synergie. 3.1.2 Evaluation de l'effet de la composition sur l'infiltration des leucocytes dans le cerveau L'objectif de cette étude est de voir si la composition selon l'invention aide à la réduction de la perméabilité de la barrière hématoencéphalique en énumérant par immunocytochimie les structures du système nerveux central (5NC) infiltrées par les leucocytes activés après induction d'une EAE. Le modèle EAE est réalisé sur des rats femelles Lewis par injection de protéine basique de myéline et de Mycobacterium tuberculosis en émulsion. L'évaluation clinique est réalisée selon l'échelle de signes neurologiques suivante: - 0: aucun signe - 0,5: activité faible et perte de poids - 1: hypotonie de la queue - 2: faiblesse des membres arrières - 3: hémiparésie - 4: tétraplégie, état moribond Le protocole consiste à injecter par voie sous-cutanée une fois par jour pendant 30 jours la solution à tester ou du NaCl (témoin), 9 jours après l'induction de l'EAE. Les solutions testées sont: - solution 1: la préparation Cl de l'exemple 1 - solution 2: la préparation C2 de l'exemple 1 - solution 3: la préparation C3 de l'exemple 1 Les tests immunocytochimiques se font à l'aide de l'anticorps anti-Cb 45 sur des coupes de cerveaux de rats fixés au paraformaldéhyde. L'analyse immunocytochimique permet de montrer le nombre de structures cérébrales infiltrées. Les résultats sont présentés dans le tableau suivant: NaCl Cl C2 C3 Nombre de structures 28 5 6 5 du 5NC infiltrées Ces résultats montrent que la composition selon l'invention réduit fortement l'infiltration leucocytaire dans le système nerveux central. La composition selon l'invention réduit donc la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique et joue un rôle immunomodulateur. 3.2 Etudes de toxicité 3.2.1 Etude de toxicité par administration unique Cette étude consiste à injecter la préparation Cl, C2 ou C3 de l'exemple 1 selon l'invention à des rats par voie intraveineuse à une dose unique équivalente à 750 fois la dose thérapeutique humaine (bTH). L'observation clinique est réalisée le jour de l'administration 30 minutes, 1 heure, 2 heures, 3 heures et 4 heures après l'administration puis au moins une fois par jour pendant 14 jours. Cette observation clinique montre que la dose létale 0 (DLO) et la dose létale 50 (DL50) pour Cl, C2 et C3 (à 2.10-5M) sont supérieures à 10ml/kg chez le rat (soit 10 mg par kg de Cl, C2 ou C3). 3.2.2 Etude de toxicitéaiguë Pour réaliser cette étude, on administre C2 et C3 de l'exemple 1 selon l'invention à des rats Sprague-bawley par injection sous-cutanée. Les animaux reçoivent une injection de 2 ml de C2 ou de C3 trois fois par jour le premier jour puis 1 ml pendant 3 à 7 jours. La dose injectée est 500 fois supérieure à la bTH. On observe 0% de mortalité. Tous les animaux survivent aux doses injectées et présentent un bon état général. Aucune modification n'est observée ni dans l'évolution pondérale, ni dans le comportement des animaux. 3.2.3 Etude de toxicité chronique L'étude est réalisée sur des rats de souche Srague-bawley, âgés de 4 à 8 semaines. Les rats traités sont d'abord traités en toxicité aigue, puis reçoivent une injection sous-cutanée de 0,5ml de C2 ou de C3 par jour durant 150 à 180 jours. Cette dose est 10 à 40 fois supérieure à celle préconisée en pathologie humaine. Les rats témoin reçoivent une administration de NaCl pendant cette même période. Les résultats obtenus révèlent qu'il n'y a aucune modification dans l'évolution pondérale, ni aucun effet adverse. Tous les animaux sont vivants et ont un développement pondéral homogène et régulier, superposable à celui des témoins. Ainsi, la composition selon l'invention ne présente aucun caractère de toxicité apparente. 3.2.4 Immunotoxicité L'objectif de cette étude est de vérifier, par la production d'anticorps contre les conjugués Poly-L-Lysine, la présence ou l'absence de réaction sensibilisante à ces composés suite à l'injection régulière et prolongée de solutions à visée thérapeutique. La production d'anticorps est évaluée à l'aide de tests immunologiques ELISA. Dans les sérums de rats, la technique ELISA directe permet de mettre en évidence l'absence d'anticorps dirigés contre l'un des conjugués éventuellement présents dans les solutions. L'étude est réalisée sur des rats males Sprague-bawley âgés de 8 semaines. Les tests sont effectués pendant 6 mois chez: - des rats ne recevant aucune injection (rats témoins), - des rats recevant une injection de 0, 5m1 par jour, 5 jours par semaines, d'une solution proche de la préparation C2 de l'exemple 1 selon l'invention, et - des rats recevant une injection de 0,5ml par jour, 5 jours par semaine, de NaCl. Les résultats obtenus pour cette étude révèlent qu'il n'y a aucune réponse immunologique significative contre chacun des composés testés dans les sérums des rats ayant reçu une injection de solution proche de C2 pendant 6 mois. En outre, la dose injectée rapportée au poids de l'animal est 200 à 300 fois supérieure à la bTH. La composition selon l'invention ne présente donc aucune immunotoxicité. Les différentes études de toxicité réalisées sur la composition selon l'invention montrent qu'elle est non toxique et qu'elle peut donc être préconisée en traitement chronique à long terme. Bien entendu, l'invention n'est évidemment pas limitée aux exemples de compositions représentés et décrits ci-dessus, mais en couvre au contraire toutes les variantes, notamment en ce qui concerne les acides gras, les anti-oxydants et les dérivés d'acides aminés utilisés, ainsi que les préparations susceptibles d'inclure la composition. 2886153 21 REVENDICATIONS 1. Composition utile pour la préparation d'un médicament destiné à maîtriser l'évolution de la sclérose en plaques, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins: - un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un acide gras, et - un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un antioxydant, et - un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un dérivé d'acide aminé. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend les conjugués de Poly-L-Lysine suivants: - Acide Azélâique Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azélaiique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - Poly-L- Lysine Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Linoléique Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique Trans,trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L-Lysine - Acide Ascorbique Poly-L-Lysine - L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly- L-Lysine L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 2886153 22 - Taurine Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Histamine - Acide GlutariquePoly-L-Lysine - L-Histidine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine 5-méthoxytryptamine - Acide Glutarique- Poly-L.-Lysine. 5 3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle est conditionnée sous une seule forme comprenant les constituants suivants: - alcool éthylique 96% - eau purifiée - Acide Azélaique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - PoIy-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L- Lysine Acide Myristique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Linoléique Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique - Cholestérol Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Linoléique - Poly-L- Lysine - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - AlphaTocophérol succincte - Poly-L-Lysine - Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - L-Cystéine Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Taurine - Glutaraldéhyde réduit Poly-L-Lysine - Histamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine - L-Histidine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine - 5-méthoxytryptamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine. 25 4. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle est conditionnée sous deux formes, la première forme comprenant les constituants suivants: - alcool éthylique 96% - eau purifiée - Acide Azélci que - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azélciique - Poly-LLysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-LLysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - PolyL-Lysine - Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique - Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Linoléique - Poly-L-Lysine, et la seconde forme comprenant les constituants suivants: - alcool éthylique 96% - eau purifiée - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azéldique - Poly-LLysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-LLysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - PolyL-Lysine - Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique - Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Linoléique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique 2886153 24 - Trans,trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-LLysine - Acide Palmitique - Alpha-Tocophérol succinate - Poly-L-Lysine Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine - L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit Poly-L-Lysine - L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine Taurine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Histamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine - L-Histidine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine - 5-méthoxytryptamine - Acide Glutarique- Poly-L-Lysine 5. Composition selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisée en ce qu'elle est adaptée au traitement de la forme secondairement progressive de la sclérose en plaques. 6. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle 15 comprend les conjugués de Poly-L-Lysine suivants: - Acide Azélciique Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Azéldique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique - Trans, trans-Farnésyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique - Acide Oléique - Poly-L- Lysine Acide Linoléique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - Acide Linoléique Poly-L.-Lysine - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Rétinoïque - Acide Oléique Poly-L-Lysine - CoEnzyme Q10 - Alpha-Tocophérol succinate -Poly- L-Lysine - Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine - L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine Taurine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - 5-méthoxytryptamine Acide Glutarique- Poly-L-Lysine 7. Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle est adaptée au traitement de la forme rémittente de la sclérose en plaques. 8. Utilisation de la composition selon l'une quelconque des revendications précédentes pour la fabrication d'un médicament destiné à maîtriser l'évolution de la sclérose en plaques. 9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que la composition permet de diminuer la réponse immunitaire induite par les facteurs exogènes responsables de la sclérose en plaques. 10. Utilisation selon la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce que la composition est capable de réduire la perméabilité de la barrière hématoencéphalique, notamment en piégeant le monoxyde d'azote impliqué dans l'ouverture de ladite barrière. 11. Utilisation selon la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce que la composition est capable de piéger les espèces oxygénées réactives. 12. Utilisation selon la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce que la composition permet la réparation myélinique par recolonisation de lésions par les oligodendrocytes, assure une protection neuronale et régule les réponses auto-immunes. 13. Utilisation selon la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce que la 25 composition diminue l'inflammation.