Brevet FR2896803A1 — publié le 20070803

NOUVEAUX COMPOSÉS SILANES ET LEUR UTILISATION POUR FONCTIONNALISER DES SUPPORTS SOLIDES ET IMMOBILISER SUR CES SUPPORTS DES MOLÉCULES BIOLOGIQUES DESCRIPTION DOMAINE TECHNIQUE La présente invention a trait à de nouveaux composés silanes utilisables pour fonctionnaliser des supports solides, à des supports fonctionnalisés par lesdits composés silanes et à leurs utilisations pour l'immobilisation de molécules biologiques, telles que des acides nucléiques, des polypeptides, des lipides, des carbohydrates et des hormones. Les supports porteurs de molécules biologiques immobilisées sont avantageusement utilisés pour la détection et la reconnaissance d'espèces biologiques, mais également d'autres applications, telles que la séparation et la purification de molécules biologiques. Pour ce faire, il est essentiel de disposer de supports solides fonctionnalisés présentant les caractéristiques suivantes : - permettre l'immobilisation reproductible des molécules biologiques d'intérêt ; - permettre l'immobilisation des molécules biologiques d'intérêt de façon sensible, la sensibilité d'un support solide fonctionnalisé dépendant du taux d'immobilisation et de la méthode de détection d'un signal mais aussi du niveau du bruit fond ; - être réutilisables. L'immobilisation de molécules biologiques d'intérêt sur des supports solides s'effectue généralement en deux étapes : - une première étape de fonctionnalisation des supports qui consiste en une modification chimique de leur surface par greffage d'agents de couplage qui vont assurer la fixation des molécules biologiques sur le support ; une deuxième étape d'immobilisation consistant à établir une interaction entre les molécules biologiques et les agents de couplage greffés sur le support, l'interaction pouvant consister en la formation d'une liaison covalente entre la molécule biologique et l'agent de couplage ou de liaisons plus faible (telles que des interactions électrostatiques, des liaisons datives). Les agents de couplage se greffent à la surface des supports par réaction avec des fonctions - OH ou hydrure du support et des fonctions réactives de l'agent, pour former de fortes interactions ioniques ou covalentes entre l'agent de couplage et le support et s'organisent à la surface du support généralement sous forme d'une monocouche dense et organisée à la surface, par exemple, par formation de liaisons du type Van der Waals entre les molécules d'agents de couplage greffées. Des agents de couplage pour fonctionnaliser des supports, en particulier des supports à base de silicium sont des organosilanes, comprenant au moins un groupe organique R apte à réagir avec une extrémité fonctionnelle des molécules à immobiliser et au moins un groupe X apte à réagir avec les fonctions -OH ou hydrure du support pour former une liaison ionocovalente voire covalente. Les inventeurs se sont fixé comme but de proposer de nouveaux composés silanes aptes à être greffés à la surface d'un support solide et comprenant des groupes permettant l'immobilisation de molécules biologiques, soit par formation de liaisons covalentes, soit par formation d'interactions de plus faible énergie que la liaison covalente (interactions électrostatiques, complexation...) EXPOSE DE L'INVENTION Ainsi, l'invention a trait, selon un premier objet, à un composé silane répondant à la formule (I) suivante . A-E-X (I) X représente un groupe silylé apte à créer une liaison covalente après réaction avec les fonctions hydroxyle ou hydrure d'un support ; E représente un groupe espaceur organique ; - A représente un groupe choisi parmi les groupes de formules suivantes : (a) (b) /CO2Z10 ùCH\ /ùCO2Z11 N \ùCo2Z9 \-0O2Z12 /-CO2Z6 N o oz13 (e) dans lesquelles : - Z1 à Z5 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un atome d'halogène ; - Z6 et Z7 représentent un groupe protecteur de la fonction acide phosphonique, un atome d'hydrogène ou un cation monovalent ; - Z8 à Z12 représentent indépendamment un groupe 10 protecteur de la fonction acide carboxylique, un atome d'hydrogène ou un cation monovalent ; - Z13 représente un groupe imidazole, N-hydroxysuccinimide, nitrophényl, pentafluorophényl ou anhydride d'acide. 15 Selon l'invention, le groupe E est un groupe espaceur organique, sa fonction essentielle étant de conférer des propriétés particulières au film résultant du greffage des composés silanes à la surface d'un support. Ce groupe E est généralement un groupe hydrocarboné, comprenant, par exemple, de 2 à 24 atomes de carbone, et comprenant éventuellement une ou plusieurs insaturations et/ou un ou plusieurs groupes aromatiques et/ou un ou plusieurs hétéroatomes. A titres d'exemples, le groupe E peut être un groupe alkylène, c'est-à-dire un enchaînement du type -CH2-, comprenant, par exemple, de 8 à 24 atomes de carbone. Ce type de groupe confère aux composés silanes, une fois greffés sur un support, une capacité à interagir entre eux, par création d'interactions interchaînes et ainsi contribue à l'obtention de monocouches organisées. Le groupe E peut être un groupe fluoroalkylène comprenant de 3 à 24 atomes de carbone. Ces groupes contribuent à conférer au film résultant du greffage des composés silanes les comprenant, des propriétés permettant leur utilisation en chromatographie et en électrophorèse. Le groupe E peut être un groupe hydrocarboné comprenant une ou plusieurs insaturations, par exemple, du type acétylénique. Un exemple d'un tel groupe peut être un groupe alkylène tel que défini ci-dessus interrompu par une ou plusieurs insaturations acétyléniques. Lorsque le groupe E comporte au moins deux insaturations, il peut conférer aux composés silanes, une fois greffés sur un support, une capacité à se réticuler. Le groupe E peut être également un groupe 30 hydrocarboné comprenant un ou plusieurs groupes aromatiques. On peut citer, par exemple, un groupe comprenant des groupes aromatiques conjugués avec des groupes linéaires insaturés, tel qu'un groupe résultant de l'enchaînement d'un motif phénylène-vinylène ou phénylène-acétylène. Ces groupes contribuent à conférer au film résultant du greffage des composés silanes les comprenant, des propriétés optiques non linéaires. On peut citer, par exemple, un groupe comprenant des motifs pyrrole, thiophène. Ces groupes contribuent à conférer au film résultant du greffage des composés silanes les comprenant, des propriétés de conduction électronique. On peut citer, par exemple, un groupe comprenant un ou plusieurs aromatiques substitués par un ou plusieurs groupes hétéroatomiques, tel qu'un groupe comprenant un enchaînement de motifs quinones ou de motifs diazoïques. Ces groupes contribuent à conférer au film résultant du greffage des composés silanes les comprenant, des propriétés de photo/électroluminescence. Selon l'invention, X représente un groupe silylé permettant la fixation covalente du composé silane sur les fonctions hydroxyle ou hydrure d'un support, lequel support peut être, par exemple, un support solide en silicium, en ITO (oxyde d'indium et d'étain) ou en titane. Ce groupe X peut être par exemple un groupe trihalogénosilane (tel qu'un groupe trifluorosilane, un groupe trichlorosilane) ; un groupe trihydrogénosilane ; un groupe trialcoxysilane -Si(OR)3 avec R représentant un groupe alkyle saturé en Cl à C6, linéaire ou ramifié, un groupe phényle (tel qu'un groupe triméthoxysilane, un groupe triéthoxysilane, un groupe triisopropoxysilane) ; un groupe triaminoalcoxyamine -Si (NR1R2) 3, avec les R1 et R2 représentant indépendamment un groupe alkyle saturé en Cl à C6, linéaire ou ramifié, un groupe phényle ; un groupe organométallique (tel qu'un groupe organomagnésien, un groupe organolithien) ; un groupe hydrolysable. Les groupes Z8 à Z12 représentant un groupe protecteur de la fonction acide carboxylique peuvent être choisis parmi les groupes décrits dans Protective Groups in organic synthesis (T.W. Greene et al., 2nd Edition, Wiley Interscience) tels que, par exemple, un 15 radical alkyle en C1-C4 ou un radical cyclique (tel qu'un groupe phényle). Parmi les radicaux alkyle en C1-C4r on peut notamment citer les radicaux méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, le groupe tertiobutyle étant 20 particulièrement préféré. Les groupes Z6 et Z7 représentant un groupe protecteur de la fonction acide phosphonique peuvent être choisis parmi les groupes tels que, par exemple, un radical alkyle en C1-C4r un radical cyclique 25 aromatique (tel qu'un groupe phényle), un radical silylé (tel qu'un groupe -Si(CH3)3) et un groupe aminé. Parmi les radicaux alkyle en C1-C4r on peut citer notamment les radicaux méthyle, éthyle. Des composés particuliers conformes à 30 l'invention répondent aux formules (II), (III), (IV), (V) et (VI) suivantes : NZO S (a) 8 8089682 Les composés de l'invention peuvent être préparés par des méthodes classiques de synthèse accessibles à un technicien spécialisé en synthèse organique. A titre d'exemple, pour obtenir des composés porteurs à une de leurs extrémités d'un groupe (a), (b), (c), (d) et à l'autre extrémité d'un groupe X du type trialcoxysilane, la préparation peut s'envisager en deux étapes, en partant d'un composé précurseur porteur à une de ses extrémités d'un atome d'halogène et à l'autre extrémité d'un groupe vinylique, selon le schéma réactionnel suivant : 1) Formation du groupe A à partir du composé précurseur15 Z802Cù\ Nzn Z902c Z1002C\ Z1102C-\ CHI= N Z1202C-/ P / Z7ùO Haies- + CO2Z12 O ùZ6 ROùP\ O ùZ7 HO HN \ cO2Z9 CO2Z10 H2C\ /-CO2Z11 N Cette réaction consiste en une substitution nucléophile de l'atome d'halogène Hal. 2) Les composés obtenus à l'issue de l'étape 1 sont ensuite soumis à une réaction d'hydrosilylation avec un réactif du type HSi (OR) 3 en présence d'un catalyseur de Karstedt Pt [Si (CH3) 2HC=CH2] 20. Pour obtenir le groupe E (e), il suffit de remplacer le composé précurseur mentionné ci-dessus par un composé comportant à une de ses extrémités un groupe -COHal au lieu d'un groupe -Hal et de faire réagir sur ce composé un réactif de formule HO-Z13, la deuxième étape étant identique à celle mentionnée ci-dessus. L'homme du métier adaptera ces schémas réactionnels en fonction des composés silanes qu'il souhaite obtenir. Comme mentionné précédemment, les composés silanes de l'invention sont susceptibles de se greffer à la surface d'un support, en raison de la présence du groupe X apte à réagir avec des fonctions hydroxyles ou hydrures (présentes sur le support) pour former des liaisons covalentes. Ainsi, l'invention a trait selon un second objet, à un procédé de fonctionnalisation d'un support solide comportant en surface des fonctions hydroxyle ou hydrure, comprenant une étape de mise en contact d'une solution comprenant au moins un composé silane tel que défini ci-dessus avec ledit support. Ce procédé peut comprendre préalablement un étape de traitement de la surface du support afin de créer sur ladite surface les fonctions hydroxyles ou hydrures nécessaires au greffage. Ainsi, pour un support en silicium 100 (par exemple, du type wafer), il est préférable, avant fonctionnalisation, de traiter celui-ci en le mettant en contact avec une solution de soude afin d'engendrer une réaction d'hydroxylation. Les supports pouvant être fonctionnalisés selon le procédé de l'invention peuvent être des supports organiques (par exemple en matériaux plastiques), des supports inorganiques, par exemple des supports en oxyde métallique (par exemple, silice et ses dérivés comme le verre, le quartz, oxyde d'indium et d'étain...), des supports métalliques (tels que des supports en titane) ou des supports en silicium, l'essentiel étant que ces supports soient susceptibles (éventuellement avec l'étape de traitement préalable mentionnée ci-dessus) de présenter des fonctions hydroxyles ou hydrures pour le greffage des composés silanes de l'invention. L'invention a également pour objet le support solide fonctionnalisé susceptible d'être obtenu par le procédé de l'invention. De part la nature du groupe A, les composés silanes greffés ont la capacité d'interagir avec des molécules biologiques pour les immobiliser. La présente invention a donc également pour objet un procédé d'immobilisation de molécules biologiques sur support solide fonctionnalisé comprenant les étapes suivantes : a) une étape de mise en oeuvre du procédé de fonctionnalisation du support tel que défini ci-dessus ; c) une étape de mise en contact du support obtenu à l'étape a) avec une solution comprenant la (les) molécule(s) biologique(s) à immobiliser. Les molécules à immobiliser peuvent être des oligonucléotides, des acides nucléiques, des polypeptides (protéines, enzymes), des lipides, des carbohydrates ou des hormones. Au sens de la présente invention et dans ce qui suit, on entend par acides nucléiques aussi bien des oligonucléotides que des ADN ou des ARN, ou encore des acides nucléiques au squelette ou aux bases modifiées, tels que les acides nucléiques peptidiques (correspondant à l'acronyme PNA pour Peptide Nucleic Acids ) qui font intervenir des liaisons peptidiques à la place des liaisons phosphodiesters. Selon la nature de la molécule biologique à isoler et la nature du composé silane greffé, l'immobilisation peut se faire selon différents mécanismes, tels que l'immobilisation par formation de liaisons n-n, par interactions ioniques ou encore par complexation avec des ions métalliques. Ainsi, avec des supports fonctionnalisés avec des composés silanes comprenant un groupe A de formule . (a) il se forme à la surface des supports fonctionnalisés, lorsque Z1 à Z6 représentent des atomes d'halogène, des liaisons n-n entre les cycles aromatiques des molécules de composés silanes adjacentes. Les molécules biologiques comprenant des cycles aromatiques peuvent se trouver piégées aisément par les complexes résultant de la formation desdites liaisons n-n, telles que les molécules biologiques comprenant des acides aminés aromatiques (phénylalanine, tryptophane, tyrosine). La formation de ces liaisons n-n s'explique par la forte électronégativité des atomes d'halogène, qui engendre une délocalisation de charges dans la molécule du composé silane, augmentant ainsi un effet donneur-accepteur et favorisant de façon significative la formation d'une liaison H-H entre deux molécules adjacentes. Avec des supports fonctionnalisés avec des composés silanes comprenant un groupe A de formule : O (b) l'immobilisation se fait par interaction ionique, sous réserve de libérer la fonction acide phosphonique (par exemple par traitement avec du iodotriméthylsilane), laquelle fonction va à son tour réagir avec une solution aqueuse de soude pour donner la fonction phosphonate, laquelle fonction phosphonate est apte à créer des interactions ioniques avec des molécules biologiques chargées (par exemple, des protéines), tels que cela est souvent le cas à des pH physiologiques. Avec des supports fonctionnalisés avec des composés silanes comprenant un groupe A de formule : CO2Z10 /-CO2Z8 ùCH /ùCOzZ11 N `CO2Z9 `CO2Z12 l'immobilisation des molécules biologiques peut se faire par complexation, sous réserve de libérer la 25 fonction acide iminodiacétique, par exemple, par hydrolyse acide, puis de traiter le support avec une solution contenant un élément métallique (tel que Nie-P, Zn2+, Col-P, Cul-P, Gai+) pour permettre la complexation de cet élément, lequel élément pourra voir sa sphère de coordination complétée par des doublets libres de la molécule biologique à immobiliser. C'est le cas notamment des protéines portant une séquence Histidine-Tag. La fonction histidine est apte à se chélater avec le site de coordination libre d'un ion métallique lui- même chélaté à un groupement acide iminodiacétique ou acide nitrilodiacétique. Les composés silanes conformes à l'invention comportant de tels groupements peuvent être donc être utilisés pour la séparation et la purification de protéines comprenant une telle séquence. Pour certains silanes (ceux comportant des groupes A de formules (b), (c) et (d)), le procédé de l'invention peut comporter avant l'étape de mise en contact avec la molécule à immobiliser, une étape de déprotection afin de libérer les fonctions acide phosphonique et acide carboxyliques et pour ceux comportant un groupe A de formule (c) ou (d), une étape subséquente de complexation avec un élément métallique, c'est-à-dire après l'étape de déprotection. Les composés silanes comprenant un groupe A de formule : o oz13 (e) avec Z13 représentant un groupe imidazole, N- hydroxysuccinimide, nitrophényl, pentafluorophényl, sont des composés silane-esters activés, dans la mesure où ils vont permettre un couplage direct entre leur fonction ester et une fonction amine présente sur une molécule biologique. Ces composés silanes une fois greffés sur un support vont donc pouvoir être avantageusement utilisés pour immobiliser des molécules biologiques porteuses de fonctions amine telles que des protéines ou encore des oligonucléotides. L'invention a également pour objet les supports solides obtenus en mettant en oeuvre le procédé d'immobilisation conforme à l'invention, c'est-à-dire les supports solides sur lesquels sont immobilisés par fixation covalente les molécules biologiques d'intérêt. Ces supports solides peuvent ainsi être utilisés comme outils d'analyse (par exemple, pour un diagnostic, un séquençage) ou comme outils de synthèse pour réaliser par exemple des revêtements. Les supports trouvent donc des applications dans de nombreux domaines, tels que la synthèse sur supports solides, la séparation et la purification de molécules (électrophorèse et chromatographie), les biocapteurs. L'utilisation de supports solides fonctionnalisés selon la présente invention permet d'immobiliser différents types de molécules biologiques et donc de préparer différents types de puces comme des puces à acides nucléiques telles que des puces à ADN, des puces à polypeptides telles que des puces à protéines. L'utilisation de supports solides modifiés selon la présente invention est particulièrement avantageuse pour la préparation de puces à ADN, à savoir de supports sur lesquels sont fixés, de façon covalente, des oligo- ou polynucléotides de séquences connues. De telles puces à ADN permettent, par hybridation des oligo- ou polynucléotides immobilisés sur le support avec des acides nucléiques ou des oligonucléotides cibles, de déterminer la séquence de ces molécules cibles et de suivre l'expression des gènes. La présente invention a donc pour objet également une puce à acides nucléiques ou à polypeptides, obtenues par le procédé d'immobilisation de l'invention mentionné ci-dessus. L'invention va maintenant être décrite en référence aux exemples suivants donnés à titre illustratif et non limitatif. EXPOSE DE MODES DE REALISATION PARTICULIERS EXEMPLE 1 Cet exemple illustre la préparation d'un composé silane conforme à l'invention : le 11-pentafluorophénylétherundécyltriméthoxysilane selon le schéma réactionnel suivant : La fonction pentafluorophényléther est obtenue par réaction du 11-bromoundécène avec le pentafluorophénol en présence de carbonate de potassium. Ensuite, l'incorporation du groupement silylé s'effectue par une réaction d'hydrosilylation en présence d'un catalyseur de Karstedt. Cet exemple illustre également la silanisation d'un support en silicium par le composé silane (II) a) Etape 1 : Synthèse du 11-pentafluorophénylétherundéc-1-ène 1715 A une solution de pentafluorophénol (3,77g; 21 mmol; 1 éq.) dissous dans 75 mL de DMF, sont additionnés du 11-bromoundécène (95%) (5,02g; 4,7 mL; 21 mmol) et du carbonate de potassium (2,83g; 21 mmol; 1 éq.). La réaction s'effectue à reflux durant 3 heures. Après évaporation du DMF et reprise au dichlorométhane, le mélange réactionnel est lavé successivement avec de l'eau permutée (à deux reprises) et avec une solution saturée de chlorure de sodium, séché sur du sulfate de magnésium anhydre puis concentré pour donner un liquide incolore. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . Masse obtenue : 5,79 g Rendement : 84% RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 1,35 (12H; m; H9-14) ; 1,79 (2H; m; H8) ; 2,08 (2H; m; H15) ; 4,19 (2H; t; H7' 3JH-H=6, 5 Hz) ; 5 (2H; m; H17) ; 5,86 (1H; m; H16) RMN 13C (200 MHz; CDC13) : 25,16; 29,23; 29,28; 29,42; 29,49; 29,63; 33,72; 34,18; 76,16 (t; C7' 3Jc_c= 3,4 Hz) ; 114,55 (C17) ; 134,46 (C4) ; 138,22 (2c; C3+5 ; 3Jc_F= 259 Hz) ; 139,51 (C16) , 139,75 (Cl); 142,38 (2c; C2+6' 3Jc-F= 243 Hz). b) Etape 2 : Synthèse du 11-pentafluorophénylétherundécyltriméthoxysilane (22) Le pentafluorophénylétherundéc-1-ène (5,79g; 17 mmol) est mélangé avec du triméthoxysilane (90%) (3g; 3,1 mL; 22 mmol; 1,3 éq.). Le catalyseur de 10 Karstedt (0,04g; 0,04 mmol; 0,0025 éq.) est additionné très lentement. La réaction se déroule à température ambiante durant 12 heures. Le brut réactionnel est purifié par distillation pour donner un liquide incolore. 15 Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . Masse obtenue : 5,69 g Point d'ébullition : 130-135 C à 0,5 mbar Rendement : 72% 20 RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 0,64 (2H; m; H17) ; 1,27 (16H; m; H9-16) ; 1,75 (2H; m; H8) ; 3,56 (9H; s; H18) ; 4,13 (2H; t; H7; 3JH-H= 6,5 Hz) 25 RMN 13C (200 MHz; CDC13) : 9,45 (Cu); 22,94; 25,85; 29,57; 29,6; 29,83 (2C) ; 29,89; 30,17; 33,48; 50,67 (3C; Cu); 76,16 (t; C7 ; 3Jc_c= 3,4 Hz) ; 134,46 (C4) ;5 21 138, 22 (2C; C3+5 ; 3Jc_F= 259 Hz) ; 139,51 (C16) , 142,38 (2C; C2+6' 3Jc_F= 243 Hz) RMN Si (200 MHz; CDC13) :-41,29 (s) c) Silanisation d'un support en silicium par le composé(22) Préalablement, le support en silicium, recouvert d'une couche d'oxyde thermique de 5000 Â 10 d'épaisseur, est soumis à une hydroxylation par mise en contact avec une solution de soude 3,5 M pendant deux heures. Une solution comprenant le composé silane préparé ci-dessus à une concentration de 10-2M dans du 15 trichloroéthylène anhydre est utilisée, et les réactions de silanisation sont effectuées à une température contrôlée de 2 C pendant 24 heures. Le support greffé se présente sous la configuration suivante : 20 Si EXEMPLE 2 Cet exemple illustre la préparation d'un composé silane conforme à l'invention : le 11- (diéthylphosphonate) undécyltriméthoxysilane (III) selon le schéma réactionnel suivant : r 22 P(OEt)3 180 C HSi(OMe)3 Cat. de Karstedt La fonction acide phosphonique est protégée sous la forme diéthylphosphonate après réaction du 11- bromoundécène avec du triéthylphosphate à chaud. Ensuite, l'incorporation du groupement silylé s'effectue par une réaction d'hydrosilylation en présence d'un catalyseur de Karstedt. Cet exemple illustre également la silanisation d'un support en silicium par le composé silane (III). a) Etape 1 : Synthèse du 11-(Diéthylphosphonate)undéc-1-ène 10 12 14 3 Le 11-bromoundécène (95%) (12,64g; 11,8mL; 52 mmol) est mélangé avec du triéthylphosphate (98%) (17,24g; 17,8 mL; 102 mmol; 2éq.). La solution est chauffée à 170 C durant 24 heures puis le brut réactionnel est purifié par distillation pour donner un liquide incolore. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . Masse obtenue : 13,55g Point d'ébullition : 115-120 C à 0,5 mbar Rendement : 91 % RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 1,29 (12H; m; H7-12) ; 1,32 (6H; t; H1+3; 3JH-H=7, 1 Hz) ; 1,51-1,94 (4H; m; HS) ; 2,04 (2H; 20 m; H13) ; 4,09 (4H; m; H2+4) ; 4,97 (2H; m; H15) ; 5,81 (1H; m; H14 ) RMN 13c (200 MHz; CDC13) : 16,75 (2C; d; C1+3; 3J=6,2 Hz) ; 21,25; 22,69 (d; C7; 3Jc_P=5, 4Hz) ; 24,58-27,37 (d; 25 C5; Jc_P=140, 3Hz) ; 29,20; 29,37; 29,60; 29, 69; 30, 88 (d; C6; 2Jc_P=16, 9 Hz) ; 34,09; 61,60 (2C; d; C2+4; 2Jc p=5, 9Hz) ; 114,43 (C15) ; 139,35 (C14) b) Etape 2 : Synthèse du 11-(diéthylphosphate) undécyltrilméthoxysilane(III) 6 14 10 12 15 Le 11-(diéthylphosphonate)undéc-lène (4,99g; 17 mmol) est mélangé avec du triméthoxysilane (90%) (3,3g; 3,3mL; 23 mmol; 1,3 éq.). Le catalyseur de Karstedt (0,04g; 0,04 mmol; 0,0025 éq.) est additionné très lentement. La réaction se déroule à température ambiante durant 16 heures. Le brut réactionnel est purifié par distillation pour donner un liquide incolore Les caractéristiques du produit obtenu sont 15 les suivantes : Masse obtenue : 4,22 g Point d'ébullition : 165-170 C à 0,5 mbar Rendement : 60 % 20 RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 0,65 (2H; m; H15) ; 1,26 (16H; m; H7-14) ; 1,32 (6H; t; H1+3; 3JH H=7Hz) ; 1,53-1,81 (4H; m; H5+6) ; 3,56 (9H; s; H16) ; 4,09 (4H; m; H2+4) RMN 13C (200 MHz; CDC13) : 9,52 (C15) ; 16,87 (2C; d; C1+3; 25 3Jc_P=6, 1 Hz) ; 22,74; 22,91 (d; C7; 3Jc_P=6, 1Hz) ; 24,69- 27,47 (d; C5; 1Jc_P=140, 3 Hz) ; 29,48; 29, 63; 29,76; 29,86; 29, 97; 31,01 (d; C6; 2Jc_P=17 Hz) ; 33,53; 50,87 (3C; C16) ; 61,74 (2C; d; C2+4; 2Jc_p=6, 2 Hz). c) Silanisation d'un support en silicium par le composé (III) Préalablement, le support en silicium, recouvert d'une couche d'oxyde thermique de 5000 Â d'épaisseur, est soumis à une hydroxylation par mise en contact avec une solution de soude 3,5 M pendant deux heures. Une solution comprenant le composé silane décrit ci-dessus à une concentration de 10-2M dans du trichloroéthylène anhydre est utilisée, et les réactions de silanisation sont effectuées à une température contrôlée de 2 C pendant 24 heures. Le support greffé se présente sous la configuration suivante : o P(OEt)3 si Si Si o P(OEt)3 Le support greffé est ensuite mis en contact avec une solution d'iodotriméthylsilane afin de libérer la fonction acide phosphonique, qui va à son tour réagir avec une solution aqueuse de soude pour donner la fonction phosphonate souhaitée selon la schéma réactionnel suivant : o P(OEt)3 Si 26 si Si o P(OEt)3 o P(OSi(CH3)3)2 Si NaOH O,1N Si Si Si o lO- Na+ Na+ Le support ainsi chargé peut être utilisé pour adsorber de façon spécifique des protéines chargées (telles que des marqueurs protéiques) par interaction ionique. EXEMPLE 3 Cet exemple illustre la préparation d'un composé silane conforme à l'invention : l'ester méthylique de l'acide triméthoxysilanylundécyl-l0- iminodiacétique (IV) selon le schéma réactionnel suivant . r O O NH O HC1 K2CO3 DMF HSi(OMe)3 Cat de Karstedt - O" - O ,N" v v v v v Si(OMe)3 O La fonction amine est incorporée par une réaction du type Williamson entre le diméthyliminodiacétate et le 11-bromoundécène en présence de carbonate de potassium. Ensuite, l'incorporation du groupement silylé s'effectue par une réaction d'hydrosilylation en présence de catalyseur de Karstedt. Cet exemple illustre également la silanisation d'un support en silicium par le composé silane (IV). 27 O a) Etape 1 : Synthèse de l'ester méthylique de l'acide undéc-1-ène-iminodiacétique A une solution de diméthyliminodiacétate (hydrochloré) (8,53g; 43 mmol; 1 éq) dissous dans 250 mL de DMF, sont additionnés de la triéthylamine (4,35g; 10 6 mL; 43 mmol; 1 éq), du 11-bromundécène (95%) (10,53g; 9,9mL; 43 mmol) et du carbonate de potassium (5,95g; 43 mmol; 1 éq). La réaction est chauffée à 80 C durant 36 heures. Après évaporation du DMF et reprise à l'acétate d'éthyle, le mélange réactionnel est lavé 15 successivement avec de l'eau permutée (à double reprise) et avec une solution saturée de chlorure de sodium, séché sur du sulfate de magnésium anhydre. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle (75/25)) pour 20 donner un liquide incolore. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . Masse obtenue : 6 g Rendement : 84 % 25 RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 1,28 (12H; m; H6-12) ; 1,59 (2H; m; H5) ; 2,03 (2H; m; H12) ; 3,74 (6H; s; Hl); 4,09 (4H;5 t; H3+4; 3JH-H=6, 8 Hz) ;4,16 (2H; s; H3) ; 4,97 (2H; m; H14) ; 5,81 (1H; m; H6) RMN 13C (200 MHz; CDC13) : 26,14; 29,20; 29,29; 29,48; 5 29,59; 29,77; 29,84; 34,18; 49,51 (C3) ; 52,54 (Cl); 66,89 (C4) ; 114,52 (C14) ; 139,57 (C13) ; 170,40 (C2). b) Etape 2 : Synthèse de l'ester méthylique de l'acide triméthoxysilanylundécyl-10-iminodiacétique L'ester méthylique de l'acide undéc-1-èneiminodiacétique (6g; 19 mmol) est mélangé avec du 15 triméthoxysilane (90%) (3,57g; 3,7 mL; 26 mmol; 1,4 éq.). Le catalyseur de Karstedt (0,05g; 0,05 mmol; 0,0025 éq.) est additionné très lentement. La réaction se déroule à température ambiante durant 16 heures. Le brut réactionnel est purifié par distillation pour 20 donner un liquide incolore. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . Masse obtenue : 3,83 g Point d'ébullition : 185-190 C à 0,5 mbar 25 Rendement : 46% RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 0,65 (2H; m; H14) ; 1,26 (16H; m; H6-13) ; 1,60 (2H; m; H5) ; 3,57 (9H; s; H15) ; 3,74 (6H; s; H1) ; 4,09 (4H; t; H3+4; 3JH-H=6, 8 Hz) ; 4,16 (2H; s; H3) 10 RMN 13C (200 MHz; CDC13) : 9, 42 (C14) ; 22, 95; 26,12; 29,18; 29,54; 29,61; 29,88 (2C) ' ; 29, 92; 33,49; 49,49 (C3) ; 50,83 (3C; C15) ; 52,50 (Cl); 66,86 (C4) ; 170,29 (C2) ; RMN Si (200 MHz; CDC13) : -41,27 (s) c) Silanisation d'un support en silicium par le composé (IV) Préalablement, le support en silicium, recouvert d'une couche d'oxyde thermique de 5000 Â d'épaisseur, est soumis à une hydroxylation par mise en contact avec une solution de soude 3,5 M pendant deux heures. Une solution comprenant le composé silane préparé précédemment à une concentration de 10-2M dans du trichloroéthylène anhydre est utilisée, et les réactions de silanisation sont effectuées à une température contrôlée de 2 C pendant 24 heures. Le support greffé se présente sous la configuration suivante : OMe OMe o Si o / OMe Si N` OÇOMe La fonction acide iminodiacétique est ensuite libérée par réaction du support modifié avec HC1 12N puis le support ainsi traité est mis à réagir avec une solution aqueuse de sulfate de cuivre pour permettre la complexation de cuivre selon le schéma réactionnel suivant : Si o Si / OMe o Si n n n n n N_ ~~OMe o O HC1 12N CuSO4 50 mmol_1 O Cu HO" Un tel complexe peut être avantageusement utilisé pour assurer la rétention d'une protéine comprenant une séquence dite Histidine-Tag . L'histidine-Tag est une séquence correspondant à un o Si Si Si o enchaînement consécutif de 5 à 6 histidines placée en position C ou N terminale d'une protéine et comprenant une fonction imidazole dans sa chaîne latérale. Cette fonction est apte à se chélater avec le site de coordination libre d'un ion métallique lui-même chélaté à un groupement acide iminodiacétique ou acide nitrilodiacétique (en l'occurrence dans notre cas, l'ion métallique est Cu"). Des ions métalliques également envisageables peuvent être Ni", Znz+, Coz+ Les composés silanes greffés décrits ci-dessus peuvent donc être utilisés pour l'isolement et la purification de protéines portant la séquence Histidine-Tag. EXEMPLE 4 Cet exemple illustre la préparation d'un composé silane conforme à l'invention : le 4-nitrophénylundécyltriméthoxysilane ester (V) selon le schéma réactionnel suivant : 34 Si(OMe)3 o cl 02N 02N (V) La fonction ester est synthétisée par réaction entre le chlorure d'undécénoyle et le 4-5 nitrophénol. Ensuite, l'incorporation du groupement silylé s'effectue par une réaction d'hydrosilylation en présence de catalyseur de Karstedt. 10 a) Etape 1 : Synthèse du 4-nitrophénylundéc-1-ène ester 2 A une solution de 4-nitrophénol (3,25g; 23 15 mmol; 1 éq.) dissous dans 50 mL d'éther anhydre, est additionné de la pyridine (1,85g; 1,9 mL; 23 mmol; 1 02N éq.). la solution est chauffée à reflux de l'éther et le chlorure d'undécénoyle (97%) (4,9g; 5,2 mL; 23 mmol; 1 éq.) est ajouté très lentement (sur une période d'environ 1 heure). La réaction se poursuit à reflux de l'éther durant 1 heure. Le mélange réactionnel est filtré puis le filtrat est concentré pour donner un liquide jaunâtre. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . Masse obtenue : 7,1 g Rendement : 100% RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 1,33 (10H; m; H10-14) ; 1,74 (2H; m; H9) ; 2, 04 (2H; m; H15) ; 2, 60 (2H; t; H8) ; 3JH_ H=7,5 Hz) ; 4,98 (2H; m; H17) ; 5,80 (1H; m ; H16) ; 7,27 (2H; d; H3+5; 3JH-H=9, 2 Hz) ; 8,27 (2H; d; H2 6; 3JH-H=9, 2 Hz) RMN 13C (200 MHz; CDC13) : 25,13; 29,28; 29,43 (2C) ; 29,56; 29, 66; 34,17; 34,73; 114,61 (C17) ; 122,84 (2C; C3+5) ; 125,59 (2C; C2+6) ; 139,52 (C16) ; 145,66 (Cl); 155,96 (C4) ; 171,73 (C7) . b) Etape 2 : Synthèse du 4 25 Nitrophénylundécyltriméthoxysilane ester (V) 2 02N (V) Le 4-Nitrophénylundéc-1-ène ester (7,54g; 25 mmol) est mélangé avec du triméthoxysilane (90%) (4,25g; 4,5 mL; 31 mmol; 1,3 éq.). Le catalyseur de Karstedt (0,06g; 0,06 mmol; 0,0025 éq.) est additionné très lentement et l'ensemble est chauffé à 140 C sous argon durant 24 heures. Le brut réactionnel est purifié par distillation pour donner un liquide jaunâtre. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . Masse obtenue : 5,02 g Point d'ébullition : 170-175 C à 0,5 mbar Rendement : 48% RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 0,65 (2H; m; H17) ; 1,33 (10H; m; H1 -16) ; 1,74 (2H; m; H9) ; 2,60 (2H; t; H8' 3JH_H=7, 5 Hz) ; 3,57 (9H; s; H18) ; 7,28 (2H; d; H3+5 3JH_H=9, 2 Hz) ; 8,25 (2H; d; H2+6 ; 3JH-H=9, 2 Hz) RMN 13C (200 MHz; CDC13) 9,48 (Cu); 22,95; 25,07; 29,39; 29,57 (2C) ; 29,78 (2C) ; 33,46; 34,59; 50,78 (3C; Cu); 122,82 (2C; c'5); 125,47 (2C; C2 6) ; 145,53 (Cl) 155,91 (C4) ; 171,62 (C7) RMN Si (200 MHz; CDC13) : -41,22 (s) c) Silanisation d'un support en silicium par le composé (V) Préalablement, le support en silicium, recouvert d'une couche d'oxyde thermique de 5000 Â 30 d'épaisseur, est soumis à une hydroxylation par mise en25 contact avec une solution de soude 3,5 M pendant deux heures. Une solution comprenant le composé silane préparé ci-dessus à une concentration de 10-2M dans du trichloroéthylène anhydre est utilisée, et les réactions de silanisation sont effectuées à une température contrôlée de 2 C pendant 24 heures. d) Immobilisation d'un oligonucléotide sur le support greffé- Hybridation et analyse Des dépôts d'une solution d'oligonucléotides de séquence suivante : 5' TTT TTGATA AAC CCC 3' modifiée en 5' par une fonction amine et des dépôts d'une solution d'oligonucléotides de séquence suivante : 5' TTT TTGATA AAC CCC 3' non modifiée sont effectués sur le support obtenu conformément à ce qui est décrit au paragraphe c), ces dépôts étant effectués manuellement à raison de 0,2 pL. La concentration en oligonucléotides des solutions utilisées est de 10 pM dans un tampon NaCl 0,1 M. Après un temps d'incubation de 16 heures en chambre humide, les supports sont hybridés avec une solution de cibles complémentaires de séquence suivante : 5' CAT AGA GTG GGT TTA TCC A 3'30 de concentration 0,05 pM, marqués par un groupement fluorescent Cy3. Il est procédé à une mesure des signaux de fluorescence sur un scanner vendu sous la dénomination 5 GenePix par la société AXON. Les résultats montrent que les supports greffés conformément à l'invention permettent de réaliser l'immobilisation d'oligonucléotides comportant une fonction amine et d'oligonucléotides non modifiés, 10 c'est-à-dire porteur d'une fonction -OH libre. EXEMPLE 5 Cet exemple illustre la préparation d'un composé silane conforme à l'invention : le 15 pentafluorophénylundécyltriméthoxysilane ester (VI) selon le schéma réactionnel suivant : o et Si(OMe)3 La fonction ester est synthétisée par réaction entre le chlorure d'undécénoyle et le pentafluorophénol. Ensuite, l'incorporation du groupement silylé s'effectue par une réaction d'hydrosilylation en présence de catalyseur de Karstedt. a) Etape 1 : Synthèse du pentafluorophénylundéc-1-ène ester A une solution de pentafluorophénol (6,51g; 35 mmol, 1 éq.) dissous dans 60 mL d'éther anhydre, est 15 additionné de la pyridine (2,8g; 2,9 mL; 35 mmol; léq.). La solution est chauffée à reflux de l'éther et le chlorure d'undécénoyle (97%) (7,4g; 7,8 mL; 35 mmol; 1 éq.) est ajouté très lentement (sur une période d'environ 1 heure). La réaction se poursuit à reflux 20 de l'éther durant 1 heure. Le mélange réactionnel est filtré puis le filtrat est concentré pour donner un liquide incolore. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . 25 Masse obtenue : 12,36 g Rendement : 100% 17 RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 1,37 (10H; m; H10-14) ; 1,8o (2H; m; H9) ; 2,09 (2H; m; H15) ; 2,70 (2H; t; H8 ; 3JH_ H=7, 4 Hz) ; 5,01 (2H; m; H17) ; 5,85 (1H; m; H16) RMN 13C (200 MHz; CDC13) : 25,16; 29,23; 29,28; 29,42; 29,49; 29, 63; 33,72; 34,18; 114,55 (C17) ; 135,78-140,77 (2C; m; C3+5; 1Jc+F=251 Hz) ; 137,29-142,31 (2C; m; C2+6; Je-F=253 Hz) ; 138,99 (C4) ; 139,51 (C16) , 144,07 (Cl); 10 169,97 (C7) RMN F (400 MHz; CDC13) :-153,38 (2F; d; F3+4, 3JF-F=17, 1 Hz) ; -158,82 (t; F1` 3JF-F=16, 8 Hz). 3JF-F=21, 6 Hz; -163,02 (2F; t; F2+5; 15 b) Etape 2 : Synthèse du pentafluorophénylundécyltriméthoxysilane ester (VI) 20 Le pentafluorophénylundéc-1-ène ester (10,86g; 31 mmol) est mélangé avec du triméthoxysilane (90%) (5,65g; 5,9 mL; 42 mmol; 1,4 éq.). Le catalyseur de Karstedt (0,07g; 0,08 mmol; 0,0025 éq.) est 25 additionné très lentement. La réaction se déroule à température ambiante durant 16 heures. Le brut réactionnel est purifié par distillation pour donner un liquide incolore. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes . Masse obtenue : 10,69 g Point d'ébullition : 135-140 C à 0,5 mbar Rendement : 73% RMN 1H (200 MHz; CDC13) : 0,68 (2H; m; H17) ; 1,32 (14H; m; H1 -16) ; 1,80 (2H; m; H9) ; 2,69 (2H; t; H8' 3Jc_H=7, 4 Hz) ; 3,60 (9H; m; H18) RMN 13C (200 MHz; CDC13) : 9,52 (C17) ; 22, 99; 25,16; 29,25; 29,51; 29,60; 29,78 (2C) ; 33,51; 33,75; 50,84 (3C; Cu); 135,73-140,76 (2C; m; C3+5' 1JC-F= 253 Hz) ; 137,27-142,25 (2C; m; 144,06 (Cl); 169,95 (C7) C2+6 1Jc_F=251 Hz) ; 138, 98 (C4) ; RMN F (400 MHz; CDC13) : -153,31 (2F; d; F3+4' 3JF-F=17, 4 20 Hz=; -158,76 (t; F1' 3JF_F=21, 7 Hz) ; -162,98 (2F ;t ; Fz+s ; 3JF-F= 16,4 Hz) RMN Si (200 MHz; CDC13) : -41,22 (s). 25 c) Silanisation d'un support en silicium par le composé (VI) Préalablement, le support en silicium, recouvert d'une couche d'oxyde thermique de 5000 Â d'épaisseur, est soumis à une hydroxylation par mise en 30 contact avec une solution de soude 3,5 M pendant deux heures. Une solution comprenant le composé silane préparé ci-dessus à une concentration de 10-2M dans du trichloroéthylène anhydre est utilisée, et les réactions de silanisation sont effectuées à une température contrôlée de 2 C pendant 24 heures. e) Immobilisation d'un oligonucléotide sur le support greffé- Hybridation et analyse Des dépôts d'une solution d'oligonucléotides de séquence suivante : 5' TTT TTGATA AAC CCC 3' modifiée en 5' par une fonction amine et des dépôts d'une solution d'oligonucléotides de séquence suivante : 5' TTT TTGATA AAC CCC 3' non modifiée sont effectués sur le support obtenu conformément à ce qui est décrit au paragraphe c), ces dépôts étant effectués soit manuellement à raison de 0,2 pL, soit à l'aide d'un robot à éjection piézoélectrique vendu sous la dénomination BCA1 par la société Perkin Elmer, à raison de 300 pL. La concentration en oligonucléotides des solutions utilisées est de 10 pM dans un tampon NaCl 0,1 M ou un tampon Na2HPO4 0,3 M + 6% glycérol + 4% de butanol. Après un temps d'incubation de 16 heures en chambre humide ou en chambre sèche, les supports sont hybridés avec une solution de cibles complémentaires de séquence suivante : 5' CAT AGA GTG GGT TTA TCC A 3' de concentration 0,05 pM, marqués par un groupement fluorescent Cy3. Il est procédé à une mesure des signaux de fluorescence sur un scanner vendu sous la dénomination GenePix par la société AXON. Les résultats montrent que les supports greffés conformément à l'invention permettent de réaliser l'immobilisation d'oligonucléotides comportant une fonction amine et d'oligonucléotides non modifiés, c'est-à-dire porteurs d'une fonction -OH libre. f) Immobilisation de la streptavidine Cy3 Sur un support obtenu conformément à ce qui est décrit au paragraphe c), des dépôts d'une solution streptavidine sont effectués manuellement à raison de 0,2 pL. La concentration en protéines des solutions utilisées est de 0,001 mg/mL dans un tampon PBS (tampon phosphate salin) 0,01 M. Après un temps d'incubation de 16 heures en chambre humide, les supports sont analysés avec un scanner vendu sous la dénomination GenePix par la société Axon. Les résultats montrent que les supports 25 modifiés permettent de réaliser l'immobilisation de cette protéine. REVENDICATIONS 1. Composé silane répondant à la formule (I) suivante : A-E-X (I) dans laquelle : - X représente un groupe silylé apte à 10 créer une liaison covalente après réaction avec les fonctions hydroxyle ou hydrure d'un support ; E représente un groupe espaceur organique ; - A représente un groupe choisi parmi les 15 groupes de formules suivantes ; (a) (b) /-0O2Z8 N CO2Z12 (c) (d) o oz13 (e) dans lesquelles : /CO2Z10 ùCH /ù0O2Z11 N \ù0O2Z9- Z1 à Z5 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un atome d'halogène ; - Z6 et Z7 représentent un groupe protecteur 5 de la fonction acide phosphonique, un atome d'hydrogène ou un cation monovalent ; - Z8 à Z12 représentent indépendamment un groupe protecteur de la fonction acide carboxylique, un atome d'hydrogène ou un cation monovalent ; 10 - Z15 représente un groupe imidazole, N-hydroxysuccinimide, nitrophényl, pentafluorophényl ou anhydride d'acide. 2. Composé selon la revendication 1, dans 15 lequel X représente un groupe trihalogénosilane ; un groupe trihydrogénosilane ; un groupe trialcoxysilane - Si(OR)3 avec R représentant un groupe alkyle saturé en Cl à C6, linéaire ou ramifié, un groupe phényle ; un groupe triaminoalcoxyamine -Si (NR1R2) 3, avec les R1 et R2 20 représentant indépendamment un groupe alkyle saturé en Cl à C6, linéaire ou ramifié, un groupe phényle ; un groupe organométallique. 3. Composé selon la revendication 1 ou 2, 25 dans lequel E représente un groupe hydrocarboné, comprenant éventuellement une ou plusieurs insaturations et/ou un ou plusieurs groupes aromatiques et/ou un ou plusieurs hétéroatomes. 4. Composé selon la revendication 3, dans lequel le groupe hydrocarboné comprend de 2 à 24 atomes atomes de carbone. 5. Composé selon la revendication 4, dans lequel le groupe hydrocarboné est un groupe alkylène comprenant de 8 à 24 atomes de carbone. 6. Composé de formule (II) suivante : F 15 7. Composé de formule (III) suivante : 8. Composé de formule (IV) suivante : (IV) 9. Composé de formule (V) suivante :N 47 (V) 10. Composé de formule (VI) suivante : 3 F 11. Procédé de fonctionnalisation d'un support solide comportant en surface des fonctions hydroxyle ou hydrure, ledit procédé comprenant une étape de mise en contact avec ledit support d'une solution comprenant au moins un composé silane tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 10. 12. Procédé selon la revendication 11, comprenant, avant l'étape de mise en contact, un étape de traitement de la surface du support afin de créer sur ladite surface les fonctions hydroxyles ou hydrures nécessaires au greffage. 13. Procédé selon la revendication 11 ou 12, dans lequel le support solide est un support organique ou un support inorganique. 14. Procédé selon la revendication 13, dans lequel le support inorganique est en oxyde métallique, en métal ou en silicium. 15. Support solide susceptible d'être obtenu par le procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 11 à 14. 16. Procédé d'immobilisation de molécules 10 biologiques sur un support solide comprenant successivement : a) une étape de mise en oeuvre du procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 11 à 14 ; 15 b) une étape de mise en contact du support obtenu à l'étape a) avec une solution comprenant la (les) molécule(s) biologique(s) à immobiliser. 20 17. Procédé d'immobilisation selon la revendication 16, dans lequel la molécule biologique à immobiliser est choisie parmi les acides nucléiques, les polypeptides, les lipides, les carbohydrates ou les hormones. 25 18. Procédé d'immobilisation selon la revendication 16 ou 17, comprenant, en outre, entre l'étape a) et b), pour les composés comportant des groupes A de formules (b), (c) et (d) tels que définis 30 à la revendication 1, une étape de déprotection afin de libérer les fonctions acide phosphonique ou acide 510carboxylique et pour ceux comportant un groupe A de formule (c) ou (d), une étape subséquente de complexation avec un élément métallique. 19. Support solide susceptible d'être obtenu par un procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 16 à 18. 20. Support solide selon la revendication 19, dans lequel les molécules biologiques immobilisées sont des acides nucléiques ou des polypeptides et qu'il constitue une puce à acides nucléiques ou à polypeptides. 15