Brevet FR2889700A1 — publié le 20070216

[FONC] [COLOR] [SOL] MARQUEURS, LEUR PROCEDE DE FABRICATION ET LEURS APPLICATIONS La présente invention a pour objet de nouveaux marqueurs utilisables pour le marquage de molécules cibles. L'invention concerne également un procédé pour l'obtention de ces marqueurs. Enfin, elle concerne l'application de ces nouveaux marqueurs pour la détection et/ou la quantification de molécules cibles. Le marquage d'une molécule cible et notamment de molécules biologiques par des marqueurs présente un grand intérêt dans le domaine de la biologie cellulaire et moléculaire, en particulier en cytologie/histologie, cytométrie de flux, pour le séquençage d'acides nucléiques. Dans le domaine de l'imagerie médicale, l'utilisation de marqueurs fluorescents permet entre autre la localisation de lésions ou de tumeurs. Les marqueurs fluorescents sont largement utilisés en biologie, biophysique, ou physiologie non seulement pour étudier les processus biologiques au niveau cellulaire et moléculaire ou quantifier des substances physiologiques à analyser mais également en médecine dans des techniques d'imagerie non invasives pour la surveillance ou le diagnostic. Quelques exemples spécifiques d'application de marqueurs fluorescents en biologie sont: - l'identification et la séparation de sous population de cellules dans des mélanges de cellules par les techniques de cytométrie de flux ou de microscopie, - la détermination de la concentration d'une substance qui se fixe sur une seconde espèce telle qu'un anticorps sur un antigène dans des techniques d'essai immunologique, le séquençage des acides nucléiques, la mise en évidence de l'appariement de séquences de nucléotides, 2889700 2 - la localisation de substances telles que l'ADN, les protéines dans des gels d'électrophorèse ou d'autres supports insolubles par des techniques de coloration fluorescente. Dans de nombreuses techniques, dont la microscopie optique en fluorescence, il est possible d'utiliser simultanément plusieurs marqueurs fluorescents capables d'émettre à des longueurs d'ondes différentes. Ce "multi-marquage" est réalisé sans qu'aucune confusion entre les signaux ne se produise lors de la détection. Le principe du multi-marquage est également utilisé dans la technique particulière du FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) qui exploite le transfert d'énergie de l'état excité d'un marqueur fluorescent donneur vers un deuxième marqueur fluorescent accepteur, ce transfert d'énergie n'étant possible que lorsque les deux marqueurs sont à proximité. Cette technique permet de mesurer les interactions (association ou dissociation) entre deux protéines, dont l'une est couplée à un marqueur fluorescent donneur et l'autre est couplée à un marqueur fluorescent accepteur. Toutefois, lors de ces multi-marquages, il faut tenir compte des problèmes de chevauchements partiels éventuels des spectres d'émission des marqueurs utilisés qui faussent la lecture des résultats. Par conséquent, lors du multi-marquage, il est primordial de limiter le phénomène de recouvrement des spectres, ce qui impose d'avoir accès à une large gamme de marqueurs dont les caractéristiques spectrales sont totalement maîtrisées. Le premier objet de la présente invention consiste en de nouveaux marqueurs composés de "colorants fonctionnalisés". Par "colorant" on entend toute substance colorée, naturelle, artificielle ou synthétique, absorbant la lumière dans le domaine de l'ultra-violet, le visible et0ou l'infrarouge. Dans le cadre de l'invention, les colorants peuvent être fluorescents. Par "colorants fluorescents", on désigne des colorants ayant la faculté d'être excités de façon transitoire par absorption d'une radiation lumineuse puis de revenir à leur état initial en émettant une radiation dont la longueur d'onde est plus élevée que celle de la radiation d'excitation. Par "colorants fonctionnalisés", on désigne des colorants possédant au moins une fonction chimique réactive permettant leur couplage à des molécules cibles et éventuellement au moins une fonction leur permettant d'être solubles dans des conditions d'utilisation. Les marqueurs de l'art antérieur peuvent être classés en trois catégories selon la façon dont leur fonction chimique réactive est liée à la structure cyclique du colorant. Les marqueurs de la première catégorie se définissent par le fait que leur fonction chimique réactive est reliée directement à un atome de carbone d'un cycle du squelette hydrocarboné du colorant. Ils ont été décrits dans US5,627,027. Cependant, l'inconvénient majeur de tels marqueurs vient du fait que la fonction chimique réactive se trouve à proximité immédiate d'un cycle de la molécule du colorant. Cette proximité entraîne un encombrement stérique important qui gêne fortement le couplage à des molécules cibles. D'autre part cette proximité affecte les spectres d'absorption et de fluorescence du colorant. Or le choix d'un colorant pour la synthèse d'un marqueur est dicté par ses propriétés spectrales. Par conséquent, l'obtention d'un marqueur dont la faculté de couplage est gênée par un encombrement stérique et dont les propriétés spectrales sont différentes de celles du colorant choisi n'est pas 2889700 4 particulièrement intéressante. Afin de remédier aux inconvénients précédemment cités, une deuxième catégorie de marqueurs a été développée. Les marqueurs de cette deuxième catégorie se définissent par le fait. que leur fonction chimique réactive est reliée indirectement par l'intermédiaire d'une chaîne alkyle à un atome qui appartient à la molécule du colorant initial, cet atome n'étant pas un atome de carbone. Il s'agit fréquemment d'un atome d'azote qui, le plus souvent, appartient à la structure cyclique de ce colorant. La fabrication de ces marqueurs de deuxième catégorie est limitée à l'utilisation de colorants constitués le plus souvent d'un ou plusieurs hétérocycles azotés. Chaque atome d'azote du colorant initial porte une chaîne qui influence fortement la solubilité du colorant: il s'agit souvent de chaînes sulfoalkyle si le colorant doit être solubilisé en milieu aqueux ou de chaînes alkyle si le colorant doit être solubilisé en milieu hydrophobe. La technique de réalisation des marqueurs de cette deuxième catégorie consiste à remplacer une ou plusieurs de ces chaînes alkyle ou sulfoalkyle par une chaîne hydrocarbonée portant la fonction chimique réactive. Néanmoins, cette technique a pour conséquence de réduire notablement la solubilité du marqueur relativement aux caractéristiques initiales du colorant. De plus, la fabrication des marqueurs de cette deuxième catégorie ne donne accès qu'à un nombre très limité d'entités car elle n'est applicable qu'à un nombre restreint de colorants qui comportent un ou plusieurs hétéroatomes. Par exemple, les brevets US 6,027,709 et US 6,224,644 divulguent des marqueurs de cette deuxième catégorie. Le brevet US 6,027,709 décrit des colorants de type carbocyanine dans lesquels une chaîne sulfoalkyle a été remplacée par une chaîne alkyle portant une fonction acide carboxylique (fonction chimique réactive à caractère électrophile). Le brevet US 6,224,644 décrit également des carbocyanines modifiées de façon similaire et destinées à être utilisées comme marqueurs de molécules biologiques. Toutefois, ces marqueurs se distinguent de ceux du brevet US 6,027,709 par le fait que la fonction chimique réactive n'est pas électrophile mais nucléophile (fonction hydroxyle, amine et thiol). Cette catégorie de marqueurs présente donc un intérêt limité car elle ne s'applique qu'à quelques colorants de type carbocyanine avec une réduction de solubilité du marqueur relativement à celle du colorant initial alors qu'il aurait été souhaitable d'augmenter cette solubilité pour faciliter le couplage avec un grand nombre de molécules cibles. Dans le cas où l'hydrosolubilité du marqueur est souhaitée, l'adjonction directe de groupements tels que NO2 et S03- sur les cycles aromatiques remédie à ce problème mais affecte les spectres d'absorption et de fluorescence du colorant initial. Une troisième catégorie de marqueurs, tels que décrits dans EP 1 209 205, est définie par le fait que leur fonction chimique réactive est reliée indirectement par l'intermédiaire d'une chaîne alkyle ou amidoalkyle à un atome de carbone, et non pas un atome d'azote, de la structure cyclique du colorant, ce qui évite la suppression d'une des chaînes sulfoalkyle ou alkyle qui conditionnent la solubilité du marqueur. Néanmoins, la fabrication des marqueurs de cette troisième catégorie donne accès à un nombre d'entités encore plus limité que ceux de la deuxième catégorie car ils ont l'inconvénient majeur d'être difficilement synt:hétisables. En effet, les précurseurs de synthèse de tels marqueurs ne sont pas couramment disponibles dans le 2889700 6 commerce et leur synthèse nécessite la mise en oeuvre de nombreuses étapes avec de faibles rendements finaux. A ce jour, la synthèse de colorants fonctionnalisés servant de marqueurs pour détecter et ou quantifier des molécules cibles est connue. Toutefois, les marqueurs de l'art antérieur ont au moins l'un des trois inconvénients fondamentaux suivants, qui limitent considérablement leur utilisation: la fonction chimique réactive de ces marqueurs est à proximité immédiate d'un cycle du colorant, ce qui entraîne un encombrement stérique et gêne fortement le couplage à des molécules cibles, les rendant ainsi peu utilisables. Par ailleurs, leurs propriétés spectrales sont différentes de celles des colorants à partir desquels ils sont obtenus, en raison des effets électroniques qui se produisent entre la fonction chimique réactive et les cycles aromatiques du colorant. Ces marqueurs sont difficilement solubles dans le milieu de couplage dont la nature est dictée par l'identité de la molécule cible. Ces marqueurs ne sont pas synthétisables à partir de réactifs facilement accessibles dans le commerce et selon des procédés de synthèse simples et rapides; de ce fait le nombre disponible de ces marqueurs est limité. La présente invention se propose quant à elle de préparer selon un procédé particulier des marqueurs d'une quatrième catégorie ne présentant aucun des inconvénients des marqueurs de l'art antérieur. Par ailleurs, à la connaissance de la demanderesse, il n'a jamais été décrit, dans l'art antérieur, un procédé permettant de fonctionnaliser aisément un très large panel de colorants. En effet, les procédés de l'art antérieur ne peuvent s'appliquer qu'à un nombre restreint de colorants alors qu'il existe un grand nombre de colorants ayant des caractéristiques spectrales spécifiques présentant un intérêt pour le marquage de molécules cibles. De plus, lors des multi-marquages, il est essentiel de tenir compte des éventuels problèmes de chevauchements partiels des spectres d'émission des marqueurs utilisés qui faussent la lecture des résultats. Dans le cadre de la présente invention, ce problème de recouvrement est minimisé dans la mesure où l'utilisateur dispose d'un large panel de marqueurs, éventuellement fluorescents ayant des propriétés spectrales différentes, c'est-à-dire des longueurs d'onde d'excitation et d'émission différentes couvrant une large région du spectre de détection. L'intérêt du procédé de l'invention est de permettre de sélectionner un colorant en fonction de ses caractéristiques spectrales particulières et de pouvoir aisément le fonctionnaliser sans altérer notablement ses caractéristiques spectrales ni ses caractéristiques de solubilité. Au regard de l'art antérieur, il est apparent qu'il existe un besoin pour une grande variété de marqueurs faciles à synthétiser à partir de colorants dont le choix est principalement dicté par leurs propriétés d'absorption et d'émission, lesdits marqueurs ayant non seulement sensiblement les mêmes propriétés spectrales que les colorants à partir desquels ils sont obtenus mais également une solubilité dans le milieu de couplage qui soit équivalente voire améliorée relativement au colorant initial. Les inventeurs, à l'issue de recherches approfondies, ont eu le mérite de trouver qu'il était possible d'obtenir un large panel de nouveaux marqueurs regroupant toutes les caractéristiques fonctionnelles et spectrales recherchées à partir d'un large panel de colorants ou d'intermédiaires couramment disponibles commercialement. Le premier objet de la présente invention concerne de nouveaux marqueurs susceptibles de former une liaison covalente ou non covalente avec une molécule cible, consistant en un colorant auquel est lié de façon covalente par un ou plusieurs carbones de sa structure chimique. un ou plusieurs groupe(s) [FONC], et éventuellement un ou plusieurs groupe(s) [SOL], ledit marqueur présentant la formule générale: [FONC] [COLOR] N [SOL] [COLOR] représentant le colorant; [FONC] représentant chacun indépendamment un groupe -X-A-Z, dans lequel: - X est choisi dans le groupe consistant en un atome d'oxygène, un atome de soufre, un groupe NR1R2, R1 et R2 étant chacun indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié en C1-C30, de préférence en C1-C18 et plus préférentiellement en C1-05; - A est choisi dans le groupe consistant en: - un groupe alkylène, -un groupe arylène, un groupe alkylène-arylène ou - un groupe arylène-alkylène; - Z est une fonction chimique réactive; [SOL] représentant chacun indépendamment un groupe - X'-A'-Z', dans lequel. - X' est choisi dans le groupe consistant en un atome d'oxygène, un atome de soufre, un groupe NR1R2r R1 et R2 étant chacun indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié en C1-C30, de préférence en C1-C18 et plus préférentiellement en C1-05; - A' est choisi dans le groupe consistant en: - un groupe alkylène, -un groupe arylène, - un groupe alkylène-arylène ou - un groupe arylène-alkylène; Z' est un groupement polaire ou apolaire. Par alkylène , on désigne une chaîne hydrocarbonée, cyclique, linéaire ou ramifiée, présentant deux liaisons libres, contenant de 1 à 30 atomes de carbone, de préférence de 1 à 18 atomes de carbone et plus préférentiellement encore de 1 à 5 atomes de carbone et pouvant être notamment une chaîne méthylène, éthylène, propylène, 2-méthylpropylène, nbutylène, i-pentylène, n-pentylène, hexylène. Par "arylène", on désigne un groupement aromatique, présentant deux liaisons libres, contenant un ou plusieurs cycles aromatiques, éventuellement substitué dont notamment un groupe cyclopentadiène ou phénylène pouvant être substitué ou non substitué. Par alkyle , on désigne une chaîne hydrocarbonée, cyclique, linéaire ou ramifiée, présentant une liaison libre, contenant de 1 à 30 atomes de carbone, de préférence de 1 à 18 atomes de carbone et plus préférentiellement encore de 1 à 5 atomes de carbone et pouvant être notamment une chaîne méthyl, éthyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, n-pentyl, 1-méthylbutyl, 2,2-diméthylbutyl, 2méthylpentyl, 2,2-diméthylpropyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, décyl, dodécyl. Par "molécule cible", on désigne une molécule biologique ou non biologique destinée à être couplée à un marqueur. Cette expression inclut mais n'est pas limitée à des molécules organiques, des polymères, des matériaux silicates, naturels ou synthétiques, des vésicules lipidiques, des acides aminés, des acides nucléiques, des nucléotides, des oligonucléotides, des peptides, des protéines, des carbohydrates, des oligosaccharides, des polysaccharides, des anticorps, des antigènes, des récepteurs cellulaires, des haptènes, des pectines, des cytokines, des hormones, des toxines, des bactéries, des virus, des cellules eucaryotes. Par l'expression "fonction chimique réactive", on désigne tout groupe fonctionnel capable de se lier par liaison covalente ou non covalente (électrostatique, hydrogène, coordinative, ionique ou complexe) directement ou après activation, avec au moins l'une des fonctions naturellement présentes ou artificiellement introduites sur une molécule cible. A titre d'exemples non limitatifs de fonctions chimiques réactives appropriées aux fins de l'invention, on peut citer notamment les fonctions acide carboxylique et ses sels, acide sulfonique et ses sels, anhydride d'acide, chlorure d'acide, ester (alkyl ester, p-nitrophényl ester, succinimidyl ester, sulfosuccinimidyl ester, etc...), azido (azoture d'acyle, azidonitrophényl, etc...), hydrazide, 3-acyl-1,3thiazolidine-2-thione, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, isocyanate, isothiocyanate, hydrazine, phtalimido, maléimide, haloacétamide, monochlorotriazine, dichlorotriazine, pyridine mono ou dihalogénée, diazine mono ou dihalogénée, aziridine, thiol, chlorure de suifonyle, vinylsulfone, disulfure, méthanethiosulfonate, hydroxyle, phosphoramidite, époxy, aldéhyde, carbonate, glyoxal, imidazolyle. Par l'expression "groupement polaire ou apolaire", on désigne tout groupe fonctionnel capable de faciliter la solubilisation d'un composé chimique dans les solvants polaires ou apolaires. A titre d'exemples non limitatifs de groupements polaires appropriés aux fins de l'invention, on peut citer notamment les groupes, acide carboxylique et ses sels, acide sulfonique et ses sels, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, carbohydrate, glycol, hydroxyle, nitro, phosphate. A titre d'exemples non limitatifs de groupements apolaires on peut citer notamment les groupes alkyle linéaire ou ramifié ayant de 1 à 30 atomes de carbone, aryle, cycloalkyle ayant de 3 à 14 atomes de carbone, alkyloxy ayant de 1 à 30 atomes de carbone, halogénoalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, hydroxyalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, alkylester ayant de 2 à 40 atomes de carbone, aryloxy, arylalkyle, arylalkyle substitué, halogénoaryle. Le marqueur conforme à l'invention est caractérisé par le fait que chacun des groupes [FONC] ou des groupes [SOL] est fixé à un carbone de la structure chimique du colorant par l'intermédiaire de son groupe respectif X ou X' tels que définis précédemment. De ce fait, les groupements hydrophiles ou hydrophobes initialement présents sur le colorant et qui peuvent être portés par les atomes d'azote ou par tout autre atome de la structure, ne sont pas modifiés. Des exemples particuliers mais non limitatifs de groupe [FONC] sont donnés ci-après (Su représente le groupement succinimidyl) : -X - (CH2) r- COOSu, -X- (CH2) r-COOSuSO3Na, -X- (CH2) r-000H, -X-' (CH2) r-SO3H, -X- (CH2) r-SO3Na, -X- (CH2) r-COO-C6H4-NO2, - X-' (C6H4) - (CH2) r-COOSu, -X- (CH2) r-NHCOCH2I, -X- (CH2) r-NCS, - X- (CH2) r-C6H4CH (CH3) -COOSu, -N (CH3) 2(CH2) r-SO3H, - X- (CH2) r-OP [N (iPr) 2] [CH2CH2CN] , X est tel que défini précédemment, r est un nombre entier de 1 à 18, de préférence de 2 à 10, et plus préférentiellement de 3 à 5. De façon générale, les conditions de réaction de couplage entre un marqueur et une molécule cible sont dictées par la nature de la molécule cible. Dans le cas du marquage de certaines molécules biologiques fragiles, notamment de protéines, il est préférable que la réaction de couplage se fasse en solution aqueuse pour éviter la dénaturation de celles-ci. A cet effet, il est intéressant que le marqueur soit doté d'un ou plusieurs groupes Z' lui conférant un caractère hydrosoluble dans le milieu de couplage non dénaturant pour la protéine. Par contre, pour d'autres molécules cibles des groupes hydrophobes ou non polaires sont préférables. Dans ce cas, le marqueur doit posséder préférentiellement au moins un groupe Z' lui conférant un caractère hydrophobe ou non polaire. Ces groupes hydrophiles ou lipophiles (Z') peuvent éventuellement être introduits de la même façon que la fonction chimique réactive Z. Des exemples particuliers mais non limitatifs de groupe [SOL] comportant un groupe Z', hydrophile ou lipophile, illustrant cette analogie structurelle sont donnés ci-après: - X- (CH2) r-SO3Na, -X-' (CH2) r-SO3H, - X- (CH2) r-CH3r X est tel que défini précédemment, r est un nombre entier de 1 à 18, de préférence de 2 à 10, et plus préférentiellement de 3 à 5. Les marqueurs de l'invention peuvent être fluorescents, lorsqu'ils sont réalisés à partir de colorants fluorescents, et présenter des caractéristiques spectrales fluorescentes pouvant aller de l'ultraviolet à -X- ( CH2) r06H3 ( NO2) 2 i l'infrarouge. Plus particulièrement, l'invention vise des marqueurs dérivant de colorants choisis dans le groupe comprenant les colorants suivants: les phtaléines, les carbocyanines, les mérocyanines, les porphyrines, les phtalocyanines. Dans la présente invention par "phtaléines" on entend les colorants présentant la structure(l) suivante: M4 M12 M ii [COLOR] = (1) par "carbocyanines" ort entend les colorants présentant la structure (2) suivante: [COLOR] = F3 pY (2) par "mérocyanines" on entend les colorants présentant la structure (3) suivante T 2\ V Z + Gi G2i N ('gli--g2\ !n Z3 14 (3) par "porphyrines" on entend les colorants présentant la structure (4) suivante: [COLOR]= (4) par phtalocyanines on entend les colorants présentant la structure (5) suivante: [COLOR]= (5) dans lesquelles: - M1 A M12, Q1 A Q12, D1 à D16, qui sont identiques ou différents les uns des autres, sont choisis dans le groupe comprenant les radicaux ou groupements suivants: hydrogène, hydroxyle, halogène, acétyle, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, phosphate, nitro, acide carboxylique et ses sels, acide sulfonique et ses sels, alkylcarboxy de 2 à 30 atomes de carbone, alkyle, linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 30 atomes de carbone, cycloalkyle ayant de 3 à 14 atomes de carbone, alkyloxy ayant de 1 à 30 atomes de carbone, halogénoalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, hydroxyalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, alkylester ayant de 2 à 40 atomes de carbone, nitroalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, carboxyalkyle ayant de 2 à 30 atomes de carbone, aminoalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, sulfoalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, aryle, aryloxy, arylalkyle, halogénoaryle, arylester, à la condition que l'un au moins parmi Q1 à Q12 représente H ou un cycle aromatique, à la condition que l'un au moins parmi D1 à D16 représente H; - Z1 et Z2 représentent chacun indépendamment l'un de l'autre les atomes nécessaires pour compléter un noyau indole, benzindole ou naphtindole; - Z3 représente O ou S; - V et W sont chacun indépendamment l'un de l'autre choisis parmi CR7R8, O, S, Se et NR9, où R7, R8 et R9 sont chacun indépendamment les uns des autres choisis parmi l'hydrogène et un groupe (CH2) mRio, ou m est un nombre entier de 1 à 18 et Rio est sélectionné parmi hydrogène, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, aldéhyde, halogène, cyano, aryl, heteroaryl, hydroxyl, amide, acide sulfonique et ses sels, acide carboxylique et ses sels; n est un nombre entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 7 et plus préférentiellement de 1 à 3; i est un nombre entier de 1 à n; - R3 A R6 représentent chacun indépendamment les uns des autres un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, linéaire ou ramifié en C1-C30, de préférence en C1-C16, plus préférentiellement en C1-05, cycloalkyle, aryle, aryloxy, nitroalkyle, alkylamine, alkylamine substituée, alkylammonium quaternaire, alkylphosphate, acide alkylsulfonique et ses sels; Ti A T8, G11, G2i et G3 représentent chacun indépendamment les uns des autres un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C30, de préférence en C1-C18, plus préférentiellement en C1-05, sulfoalkyle, cycloalkyle, aryle, aryloxy, nitro, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, phosphate, acide sulfonique et ses sels, OR11 avec R11 choisi parmi l'hydrogène et un groupe alkyle en C1-C30, de préférence en C1-C18r plus préférentiellement en C1-05, CO0R11 ou CONHR11 avec R11 tel que défini précédemment; - B11, B2i, B3 représentent chacun indépendamment les uns des autres un groupement méthine (=CH-), cycloalkyle mono ou di-insaturé de 4 à 8 atomes de carbone, arylecycloalkyle mono ou di-insaturé de 4 à 8 atomes de carbone, ou un des groupements suivants: chacun de ces groupes étant soit non substitué, soit 5 substitué par un ou plusieurs des groupes suivants. alkyle linéaire ou ramifié en C1-C18, de préférence C1- 05, halogène, sulfonate, sulfoalkyle, aryle, sulfoaryle, aryloxy, hydroxy, hydroxylate, cétone, nitro, amine, amine substituée, ammonium quaternaire; Y représente un contre-ion choisi parmi les ions suivants halogénure, p- toluènesulfonate, méthanesulfonate, trifluorométhane-sulfonate, perchlorate, acétate, sodium, potassium, calcium, magnésium, lithium, ammonium et trialkylammonium; p est un nombre entier de 0 à 8 nécessaire à la neutralité de la molécule. Le marqueur conforme à l'invention obtenu à partir d'une phtaléine, est un composé présentant la structure (6),, M.6 M'7 M'8 (6) dans laquelle: chacun de M' l à M'12, indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour M1 M12, ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi M'1 à M'12 représente [FONC]. Selon un mode de réalisation particulier du marqueur de structure (6), l'un au moins parmi M' 1, M'2, M'3 ou M'4 représente [FONC], et/ou l'un au moins parmi M'5, M'6, M'7 ou M'8 représente [FONC], et/ou l'un au moins parmi M'9, M' Io, M' 11 ou M'12 représente [FONC]. Le marqueur conforme à l'invention de type 15 carbocyanine est un composé présentant la structure (7) suivante dans laquelle Z1, Z2, R3, R4, B11, que définis précédemment, chacun de T' l à T'9, G' 1;., G' 2i, G'3, indépendamment l'un de B2i, B3, V, W, Y, i, n, et p sont tels l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour T1 A T8, Gli, G2i ou G3 ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi T'1 à T'8 ou G' 2i, G'3 représente [FONC]. Selon un mode de réalisation particulier du marqueur de structure (7), au moins l'un parmi T'1 A T'4 et/ou au moins l'un parmi T'5 à T'8 représente [FONC]. Selon un autre mode de réalisation particulier du 10 marqueur de structure (7), au moins l'un parmi G' 1n, G' 2n ou G'3 représente [FONC]. Le marqueur conforme à l'invention de type merocyanine est un composé présentant la structure (8) suivante: T' Hi V G' i Gai N ('B i' " " 62i-) 'B) Z3 1 n 3 nl F3 O pY (8) dans laquelle Z1, Z3, R3, R5, R6, Bli, B2i, B3, V, Y, i, n et p sont tels que définis précédemment, chacun de T' l à T'4, G' 2i et G'3 indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour T1 A T4, Gli, G21 ou G3 ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi T'1 à T'4, ou G' Ii, G' 2i, G'3 représente [FONC]. Selon un mode de réalisation particulier du marqueur de structure (8), au moins l'un parmi T'1 à T'4 représente [FONC]. Selon un autre mode de réalisation particulier du marqueur de structure (8), au moins l'un parmi G'1i, G'2i ou G'3 représente [FONC]. Le marqueur conforme à l'invention de type porphyrine est un composé présentant la structure (9) suivante: (9) dans laquelle chacun de Q'1 à Q'12 indépendamment l'un de l'autre peut avoir la définition donnée précédemment pour Q1, à Q12 ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et[FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins de Q'1 à Q'12 représente [FONC]. Le marqueur conforme à l'invention de type phtalocyanine est un composé présentant la structure (10) suivante: N (10) dans laquelle chacun de D1' à D16', indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour D1 à D16, ou peut représenter [FONC] ou [SOL], [FONC] et [SOL] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi D'1 à D'16 représente [FONC]. Selon un mode de réalisation de l'invention, le marqueur est hydrosoluble, de préférence à une concentration supérieure à 0,5% (m/v), plus préférentiellement à une concentration supérieure ou égale à 2% (m/v), et plus préférentiellement encore supérieure à 10% (m/v). Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le marqueur est liposoluble, de préférence à une concentration supérieure à 0,5% (m/v), plus préférentiellement à une concentration supérieure ou égale à 2% (m/v) , et plus préférentiellement encore supérieure à 10% (m/v). Le procédé de préparation des marqueurs de 25 l'invention tels que décrits précédemment, et en particulier l'introduction sur un atome de carbone de la structure du colorant, d'au moins un groupe [FONC], permettant de conjuguer lesdits marqueurs à une molécule cible dans un milieu de couplage donné, et éventuellement l'introduction d'au moins un groupe [SOL], constitue le second objet de l'invention. Le procédé conforme à l'invention grâce auquel il a été possible de synthétiser des marqueurs conformes à l'invention, est caractérisé par le fait qu'il comprend une réaction de substitution nucléophile entre. ou bien. Z-A-L et [COLOR']- Nu ou bien: [COLOR'']-L et Z-A-Nu Z et A étant tels que définis précédemment; L représentant un groupe partant; Nu représentant un groupe nucléophile choisi dans le groupe comprenant -OH, - SH ou -NR1R2, R1 et R2 étant chacun indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, en C1-C30, de préférence en C1-C18, plus préférentiellement en C1-05; [COLOR'] et [COLOR"] représentant [COLOR] ou un précurseur ou intermédiaire de synthèse de [COLOR], [COLOR] étant tel que défini précédemment. Par "groupe partant", on désigne un groupe qui peut être remplacé par un autre groupe lors d'une réaction de 30 substitution. Ledit groupe partant peut être notamment un halogène ou un groupe méthanesulfonate, para-toluènesulfonate ou un groupe diazonium. Cette liste n'est pas limitative. Le groupe partant permet donc la fixation de la chaîne portant soit la fonction chimique réactive soit la fonction polaire ou apolaire, sur un atome de carbone de la structure cyclique du colorant ou de son intermédiaire de synthèse. Selon un mode de réalisation particulier, la réaction de substitution nucléophile peut être réalisée par ouverture d'une molécule cyclique de formule. Selon un mode de réalisation particulier, la réaction de substitution nucléophile peut être une réaction de type Williamson, réalisée entre la molécule [COLOR']-Nu et la molécule Z - A - L, en présence d'une base. Ladite base peut être notamment l'hydroxyde de sodium, le carbonate de potassium, le t-butylate de potassium, l'hydrure de sodium, l'amidure de sodium. Cette liste n'est pas limitative. L'invention porte également sur les procédés de préparation de [COLOR']Nu et [COLOR'']-L. [COLOR']-Nu est obtenu par les réactions successives suivantes: 1. nitration de [COLOR']; 2. réduction du produit obtenu en étape 1; 3. éventuellement: ou bien alkylation du produit obtenu en étape 2, ou bien diazotation du produit obtenu en étape 2 pour l'obtention d'un sel de diazonium puis substitution nucléophile sur cette fonction diazonium. [COLOR "]-L est quant à lui obtenu par les réactions successives suivantes. 1'. nitration de [COLOR" ] ; 2'. réduction du produit obtenu en étape 1'; 3'. diazotation du produit obtenu en étape 2' pour l'obtention d'un sel de diazonium; 4'. éventuellement substitution nucléophile sur la fonction diazonium du produit obtenu en étape 3'. Selon un mode de réalisation particulier, [COLOR']-Nu 5 et [COLOR" ]-L représentent le colorant lui-même, c'est-à-dire [COLOR]. La nitration peut être réalisée par exemple par action de l'acide nitrique, du tétrafluoroborate de nitronium, du nitrate de sodium ou du nitrite de sodium en milieu acide. La réduction du dérivé nitré en amine peut être réalisée par hydrogénation catalytique, par transfert d'hydrogène en présence d'un catalyseur ou par action du chlorure stanneux en milieu acide par exemple. Cette fonction amine peut elle-même être utilisée comme groupe nucléophile ou peut être transformée en autre groupe nucléophile. Dans la mesure où il est préférable d'obtenir un autre groupe nucléophile, celui-ci peut facilement être obtenu par substitution du sel de diazonium correspondant. Dans ce cas, la fonction amine précédente est transformée en sel de diazonium par action du nitrite de sodium en milieu acide. Pour l'obtention d'une fonction hydroxy, le sel de diazonium est hydrolysé en milieu sulfurique dilué par exemple. Pour l'obtention d'une fonction thiol, le sel de diazonium est mis à réagir avec un composé soufré, par exemple un xanthate, puis clivé. Le moment dans la synthèse où l'introduction du groupe nucléophile Nu (ou du groupe partant L) puis la réaction de substitution avec la molécule ZA-L (ou Z-A-Nu) seront réalisées, c'est-à-dire le choix du précurseur [COLOR'] (ou [COLOR " ]), dépend bien entendu de la nature du colorant utilisé. L'homme du métier saura bien entendu choisir ce moment de façon à limiter les opérations de protection et déprotection de groupes fonctionnels sensibles. Dans le cas où la synthèse du colorant fonctionnalisé doit débuter avec l'un de ses intermédiaires de synthèse portant le groupe nucléophile Nu, il est recommandé de protéger préalablement ce groupement afin d'éviter les réactions secondaires non désirées. Ledit groupe nucléophile peut être protégé par un groupement protecteur, par exemple sous forme d'un éther (méthoxy...) pour un groupement hydroxy, d'un thioéther (benzylthio...) pour un groupement thiol, d'un amide ou un groupe de type uréthane par exemple un groupe t-butyloxycarbonyle ou un groupe benzyloxycarbonyle pour une amine. Après l'obtention du colorant ou de l'un de ses intermédiaires de synthèse, alors que les dernières étapes de synthèse ne risquent plus d'interférer avec la fonction chimique réactive, le groupe nucléophile est déprotégé sous l'action d'un acide, d'une base ou par réduction ou oxydation et est ensuite mis à réagir avec la molécule Z-A-L afin d'introduire la fonction chimique réactive Z. Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de la présente invention, peut comporter la fixation d'un ou plusieurs groupes [SOL] en utilisant une ou plusieurs des étapes de réactions chimiques précédemment définies pour la fixation du groupe [FONC]. Dans ce cas, la réaction de substitution nucléophile est réalisée en utilisant une molécule Z'-A'-L (ou Z'-A'-Nu) dans laquelle: Z', A', Nu et L sont tels que définis précédemment. Ainsi, le procédé peut comprendre une réaction de substitution nucléophile entre: ou bien. Z'-A'-L et [COLOR']- Nu ou bien. [COLOR " ]-L et Z'-A'-Nu Z' et A', L, Nu, [COLOR'] et [COLOR" ] étant tels que définis précédemment; - [COLOR' ] - Nu et [COLOR" ] -L étant préparés selon le procédé décrit précédemment. Le procédé de l'invention permet donc d'obtenir, à partir de colorants facilement accessibles de nouveaux dérivés fonctionnalisés dont les caractéristiques spectrales et les caractéristiques de solubilité sont particulièrement intéressantes pour le marquage des molécules cibles. Des exemples de schémas réactionnels de préparation de marqueurs à partir de carbocyanines (Schémas la et Ib), de phtaléines (Schéma II) et de porphyrines (Schéma III) sont donnés ci-après de façon non limitative. Dans ces schémas réactionnels, NHS représente la N-hydroxysuccinimide et DCC la dicyclohexylcarbodiimide. NaNO3 02N SnCl2.2H20 H2N H2SO4 N HCI 1) NaNO2/H2SO4 2) H2SO4/H20 HOOC(CH2) 50 1) Br(CHZ)S000Et / K2CO3 2) KOH HO NHS DCC 1) (CH2)4SO3 O(CH2)5COOH (CH2)4SO3Na O X (schéma Ia) H2N 1) NaNO2 / HCI 2) KSSCOEt 3) KOH HOOC(CH2)5S 1) Br(CH2) 5COOEt / K2CO3 -.a 2) KOH HS 2) 1) 1 + N W _ (CH2)4SO3 NHS DCC + N/ / / (CH2)4SO3 O (schéma Ib) COOH Br(CH2)5COOEt EtOOC(CH2)50 COO(CH2)5COOEt COO(CH2)5COOEt KOH COOH K2CO3 OH HO ZnCl2 OH HO HOOC(CH2)50 COOH COOH COON OH (schéma II) HNO3 É- AcOH NaBH4 BFà NaNO2 HBF4 H2SO4 H20 (CHZ)SCOON O (schéma III) L'application des marqueurs de l'invention, tels que décrits précédemment, à la détection et/ou la quantification de molécules cibles constitue le troisième objet de l'invention. Comme indiqué précédemment, les marqueurs de l'invention conviennent comme agents pour le marquage de molécules cibles, le marquage étant réalisé par couplage dudit marqueur par liaison covalente ou non covalente avec la molécule cible à doser ou à détecter. Ce couplage peut être réalisé selon des procédés classiques de couplage utilisés dans ce domaine. Selon un mode de réalisation particulier, la molécule cible est mise à réagir avec 1 à 200 équivalents, plus préférentiellement 3 à 20 équivalents du marqueur. Lorsque la molécule cible est hydrosoluble, la réaction a lieu dans une solution aqueuse de tampon, de préférence à base de phosphate, de carbonate ou de borate, dont le pH est compris entre 7,0 et 11,0. Lorsque la molécule cible est liposoluble, la réaction a lieu dans un solvant organique. La réaction de couplage peut également être réalisée en présence d'un agent de couplage peptidique, par exemple les réactifs de type carbodiimide comme la DCC (dicyclohexylcarbodiimide), le carbonyldiimidazole, la IDDQ (1-isobutyloxycarbonyl-2-isobutyloxy-1,2dihydroquinoline), les réactifs de type phosphonium comme le BOP (benzotriazol-l- yloxytris-(diméthylamino)phosphonium hexafluorophosphate) , les réactifs de type uronium comme le HBTu (obenzotriazolyltétraméthyluronium hexafluorophosphate) et le TBTu (obenzotriazolyltétraméthyluronium tétrafluoroborate), les réactifs de Woodward comme le N- éthyl-5-phénylisoxazolium-3'-sulfonate, les réactifs de Curtius (hydrazine et nitrite). La réaction de couplage est menée si nécessaire en présence d'une base organique et de diméthylsulfoxyde, ou de préférence de diméthylformamide. La molécule cible marquée est isolée du milieu réactionnel et purifiée par séparation sur gel de silice, par perméation de gel et/ou par ultrafiltration. L'invention concerne également une méthode de détection d'une molécule biologique ou non biologique comprenant le couplage d'un marqueur conforme à l'invention avec ladite molécule, et la détection proprement dite de ladite molécule couplée au marqueur par spectrométrie d'absorption, spectrométrie de fluorescence, spectrométrie infrarouge, électrophorèse, imagerie médicale dans l'infra-rouge ou le proche infra- rouge (NIRS, Near Infra-Red Spectroscopy). Cette liste n'est pas limitative. L'invention porte également sur des précurseurs de synthèse des marqueurs de l'invention, qui sont des produits nouveaux consistant en des molécules de formule générale. pY dans laquelle Z1, V, p, Y sont tels que définis précédemment, R'3 représente un doublet électronique ou représente R3 tel que défini précédemment; p est un nombre entier égal à 0 ou 1; R12 représente un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé en C1-C30, de préférence C1-C18iplus préférentiellement en C1-05, sulfoalkyle, cycloalkyle, aryle, aryloxy, de préférence un groupement méthyle, chacun de T'1 à T'4, indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour T1 à T4 ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi T'1 à T'4 représente [FONC]. Des exemples, non limitatifs de précurseurs sont donnés ci-après: EtOOC(CH2)50 HOOC(CH2)50 O(CH2)4SO3Na SO3Na O(CH2)50O0H SO3Na L'invention va être décrite de façon plus détaillée à l'aide des exemples suivants qui ne sont pas limitatifs mais relatifs à des modes de réalisation avantageux. EXEMPLES EXEMPLE 1 NaNO3 H2SO4 5-nitro-2,3,3-triméthyl-(3H)-indole (produit A) A un mélange de 6,4 g de 2,3,3-triméthyl-(3H)-indole et 50 ml d'acide sulfurique refroidi à 0-5 C est ajoutée, sans dépasser 5 C, une solution de 3,4 g de nitrate de sodium dans 100 ml d'acide sulfurique. Après une heure d'agitation à 0- 5 C, le milieu réactionnel est dilué dans 600 ml d'eau et neutralisé par ajout d'hydroxyde de sodium solide. Le précipité formé est filtré et solubilisé dans 200 ml d'acétate d'éthyle. Après lavage à l'eau, séchage sur sulfate de magnésium et évaporation, on obtient 8 g de produit A (Rendement: 97,9%). EXEMPLE 2 SnCl2.2H2O HCI 5-amino-2,3,3-triméthyl--(3H)-indole (produit B) Un mélange de 6,6 g de produit A, 43,7 g de chlorure stanneux dihydrate et 215 ml d'acide chlorhydrique est porté à reflux pendant deux heures. Après refroidissement à température ambiante et filtration, le solide recueilli est solubilisé dans 130 ml d'eau. Cette solution est neutralisée par ajout de soude 20%. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'eau et séché sous vide en présence d'anhydride phosphorique. On obtient 5,4 g de produit B (Rendement: 96%). EXEMPLE 3 1) NaNO2 / H2SO4 2) H2SO4 / H20 H2N HO 5-hydroxy-2,3,3-triméthyl-(3H)-indole (produit C) Un mélange de 3,5 g de produit B, 5 ml d'acide sulfurique et 25 ml d'eau est refroidi à 0 C. Une solution refroidie à 0-5 C de 1,6 g de nitrite de sodium dans 4 ml d'eau est ajoutée sans dépasser 5 C. Après agitation à 0-5 C pendant 10 mn, le milieu réactionnel est additionné lentement à un mélange de 15 ml d'acide sulfurique et 20 ml d'eau porté à 90 C. Après agitation à cette température pendant une heure puis refroidissement à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé par ajout de soude 20%. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'eau et séché sous vide en présence d'anhydride phosphorique. On obtient 2,6 g de produit C (Rendement: 74,3%). OMe \\,/ NaHSO4.H20 + O NHNH2 5-méthoxy-2,3,3-triméthyl-benz(e)indole (produit D) Un mélange de 35,4 g de 7-méthoxy-2-naphtylhydrazine et 65 g d'hydrogénosulfate de sodium monohydrate dans 180 ml d'eau est chauffé à 90 C pendant 15 min puis 23 g de 3-méthyl-2-butanone sont additionnés. Le milieu réactionnel est maintenu à 90 C pendant 7 heures, refroidi à température ambiante puis extrait par le dichlorométhane. La phase organique est lavée à l'eau puis évaporée sous vide. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol:10/0,2). On obtient 28,9 g de produit D (Rendement: 64,2%). EXEMPLE 5 OMe OH 5-hydroxy-2,3,3-triméthyl-benz(e)indole (produit E) 8,2 g de produit D sont introduits dans un tricol de 250 25 ml. 82 ml de HBr (33% dans l'acide acétique) sont ajoutés. EXEMPLE 4 OMe HBr/AcOH Le mélange est maintenu à 70 C pendant 7 heures puis refroidi à température ambiante. 2,5 litres d'eau puis 120 ml de soude 5M sont ajoutés au milieu réactionnel. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'eau et séché sous vide en présence de P205. On obtient 6,8 g de produit E (Rendement: 88,7%). EXEMPLE 6 + Br(CH2)5COOEt O(CH2)5COOEt K2CO3 acétone 5-[(5-carbethoxypentyl)oxy]-2, 3,3-trimethyl-benz(e)indole (produit F) Un mélange de 20 g de produit E, 21,7 g de 6-bromohexanoate d'éthyle et 13,5 g de carbonate de potassium dans 120 ml d'acétone est porté à reflux pendant 8 heures puis refroidi à température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré puis évaporé sous vide. Le résidu est dissout dans 400 ml d'éther éthylique et lavé trois fois à l'eau. Après évaporation et élimination de l'excès de 6bromohexanoate d'éthyle par distillation sous vide, on obtient 32,5 g de produit F (Rendement: 100%) sous forme d'une huile brune. EXEMPLE 7 HO K2CO3 EtOOC(CH2)50 acétone + Br(CH2)5COOEt 5-[(5-carbethoxypentyl)oxy]2,3,3-trimethyl-(3H)-indole (produit G) Un mélange de 23,1 g de produit C, 32,4 g de 6- bromohexanoate d'éthyle et 20,1 g de carbonate de potassium dans 180 ml d'acétone est porté à reflux pendant 8 heures puis refroidi à température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré puis évaporé sous vide. Le résidu est dissout dans 600 ml d'éther éthylique et lavé trois fois à l'eau. Après évaporation et élimination de l'excès de 6-bromohexanoate d'éthyle par distillation sous vide, on obtient 41,8 g de produit G (Rendement: 100%) sous forme d'une huile brune. EXEMPLE 8 O(CH2)5COOEt O(CH2)5COOH 5-[(5-carboxypentyl)oxy]-2,3,3-trimethyl-benz(e) indole 25 (produit H) 11,6 g de produit F dans 100 ml de KOH 1M sont chauffés à 80 C pendant 30 mn. Après refroidissement à température 1)KOH 2) HCI ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé par ajout d'acide chlorhydrique 1M. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'eau et séché sous vide en présence de P205. On obtient 9 g de produit H (Rendement: 84,2%). EXEMPLE 9 EtOOC(CH2)50 1) KOH HOOC(CH2)50 2) HCI 5-[(5-carboxypentyl)oxy]-2,3,3trimethyl-(3H)-indole (produit I) 4,2 g de produit G dans 45 ml de KOH 1M sont chauffés à 80 C pendant 30 mn. Après refroidissement à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé par ajout d'acide chlorhydrique 1M. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'eau et séché sous vide en présence de P205. On obtient 2,5 g de produit I (Rendement: 66,5%). EXEMPLE 10, O N 5-[(4-sulfobutyl)oxy]-2,3,3-trimethyl-benz(e)indole, sel de 5 sodium (produit J) EtOH Un mélange de 1,3 g de produit E, 0,9 g de 1,4-butane sultone et 0,3 g d'hydroxyde de sodium dans 10 ml d'éthanol est porté à reflux pendant deux heures. Après refroidissement à température ambiante, le milieu réactionnel est additionné à 100 ml d'acétone sous agitation. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'acétone et séché sous vide. On obtient 1,8 g de produit J très hygroscopique (Rendement: 81,2%). EXEMPLE 11, OH O(CH2)4SO3Na + \O NaOH 1 -- (CH,),SO; (CHz),SO,Na 2-[7-[8-(5carboxypentyloxy)-1,3-dihydro-1,1-diméthyl-3-(4-20 sulfobutyl)-benz(e) indol-2-ylidène]-1,3,5-heptatrienyl]-1,1-dimethyl-3-(4-sulfobutyl)-1Hbenz(e)indolium, sel interne, sel de sodium (produit K) Un mélange de 10, 2 g de produit H et 32,7 g de 1,4-butane 25 sultone est chauffé à 115 C pendant 16 heures puis refroidi à température ambiante. 120 ml de toluène sont ajoutés, puis le milieu est filtré pour récupérer la fraction insoluble. Le précipité est rincé à l'acétone et séché sous vide. 13,3 g de ce solide est mis à réagir avec 15,2 g de 2-(6-acétanilido-1,3,5hexatrienyl)-3,3-dimethyl-l-(4-sulf:obutyl)-benz(e) indolium, sel interne, dans 90 ml d'éthanol. 2,9 g de triéthylamine sont ajoutés progressivement et le mélange est porté à reflux pendant 5 minutes puis refroidi à température ambiante. 3,8 g d'acétate de sodium trihydrate sont ajoutés et le mélange est agité pendant 10 minutes. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'acétone et séché sous vide. On obtient 18, 5 g de produit K (Rendement: 72,8%). EXEMPLE 12 1) C? so N N 1 1 (CHz),SO; (CHz)0SO3Na 2- [5- [8- (5-carboxypentyloxy) -1, 3-dihydro-1, 1diméthyl-3- (4-sulfobutyl)-benz(e)indol-2-ylidène]-1,3-pentadienyl]-1,1dime:thyl-3-(4-sulfobutyl)-1H-benz(e)indolium sel interne, sel de sodium (produit L) Un mélange de 8,1 g de produit H et 26,2 g de 1,4- butane sultone est chauffé à 120 C pendant 12 heures puis refroidi à température ambiante. 80 ml de toluène sont ajoutés, puis le milieu est filtré pour récupérer la fraction insoluble. Le précipité est rincé à l'acétone et séché sous vide. 10,6 g de ce solide est mis à réagir avec 11,5 g de 2-(4acétanilido-1,3-butadienyl)-3,3-dimethyl-l-(4-sulfobutyl)-benz(e) indolium, sel interne, dans 75 ml d'éthanol. 2,2 g de triéthylamine sont ajoutés progressivement et le mélange est porté à reflux pendant 5 minutes puis refroidi à température ambiante. 3 g d'acétate de sodium trihydrate sont ajoutés et le mélange est agité pendant 10 minutes. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'acétone et séché sous vide. On obtient 15,2 g de produit L (Rendement: 75,2%). EXEMPLE 13 HOOC(CHz)30 N '- N 1 1 (CHZ),SO; (CHZ)4SO3Na O(CH2)5000H 2-[5-[6-(5carboxypentyloxy)-1,3-dihydro-1,1-diméthyl-3-(4-sulfobutyl) -indol-2ylidène]-1,3-pentadienyl]-1,1-dimethyl-3-(4-sulfobutyl)-1H-benz (e) indolium, sel interne, sel de sodium (produit M) Un mélange de 10,8 g de produit I et 40,8 g de 1,4- butane sultone est chauffé à 130 C pendant 8 heures puis refroidi à température ambiante. 80 ml de toluène sont ajoutés, puis le milieu est filtré pour récupérer la fraction insoluble. Le précipité est rincé à l'acétone et séché sous vide. 13,4 g de ce solide est mis à réagir avec 16,3 g du sel interne de 2- (4-acétanilido-1, 3-butadienyl) - 3,3-dimethyl-l-(4-sulfobutyl)-benz(e)indolium dans 175 ml d'éthanol. 3,2 g de triéthylamine sont ajoutés progressivement et le mélange est porté à reflux pendant 5 minutes puis refroidi à température ambiante. 4,3 g d'acétate de sodium trihydrate sont ajoutés et le mélange est agité pendant 10 minutes. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'acétone et séché sous vide. On obtient 18,2 g de produit M (Rendement: 69,6%). EXEMPLE 14 1) N N (CH2)4SO3 (CHZ)4SO3Na 2) 2-[7-[8-(5-carboxypentyloxy)-1,3-dihydro-1,1diméthyl-3-(4-sulfobutyl) -benz(e)indol-2-ylidène]-1,3,5-heptatrienyl]-1, 1--dimethyl-3-(4-sulfobutyl)-8-(4-sulfobutyloxy)-1H-benz(e)indolium, sel interne, sel de sodium (produit N) Un mélange de 0,6 g de produit J et 1, 7 g de 1,4-butane sultone est chauffé à 120 C pendant 16 heures puis refroidi à température ambiante. 5 ml de toluène sont ajoutés, puis le milieu est filtré pour récupérer la fraction insoluble. Le précipité est rincé à l'acétone et séché sous vide. 0,7 g de ce solide est mis à réagir avec 0,9 g de 2-(6-acétanilido-1,3,5-hexatrienyl)-5-(5carboxypentyloxy)-3,3-dimethyl-1-(4-sulfobutyl)-benz(e)indolium, sel interne, (obtenu à partir du sel interne de 5-(5-carboxypentyloxy)-1-(4sulfobutyl)-2,3,3-t:rimethyl-benz(e)indolium, dont la préparation est décrite dans les exemples 11 et 12, et de chlorhydrate de dianilide de l'aldéhyde glutaconique) dans 10 ml d'éthanol. 0,14 g de triéthylamine sont ajoutés progressivement et le mélange est porté à reflux pendant 5 minutes puis refroidi à température ambiante. 0,18 g d'acétate de sodium trihydrate sont ajoutés et le mélange est agité pendant 10 minutes. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'acétone et séché sous vide. On obtient 1,1 g de produit N (Rendement: 75,5%). EXEMPLE 15 aSOO O(CAHZ4SO3Na O 1) N N (CHZ)4SO3 (CHZ)4SO3Na O(CHASO,Na 2) 2-[7-[8-(4-sulfobutyloxy)-1,3-dihydro1,1-diméthyl-3-(4-sulfobutyl)-benz (e)indol-2-ylidène]-1,3,5-heptatrienyl] -1,1-dimethyl-3-(4-sulfobutyl)-8-(4-sulfobutyloxy)-1H-benz(e)indolium, sel interne, sel trisodique (produit 0) Un mélange de 0,6 g de produit J et 1,7 g de 1,4-butane sultone est chauffé à 120 C pendant 16 heures puis refroidi à température ambiante. 5 ml de toluène sont ajoutés, puis le milieu est filtré pour récupérer la fraction insoluble. Le précipité est rincé à l'acétone et séché sous vide. 0,7 g de ce solide est mis à réagir avec 0,97 g de 2-(6-acétanilido-1,3,5-hexatrienyl)-3,3-dimethyl-1-(4sulfobutyl)-5-(4-sulfobutyloxy)-benz(e)indolium, sel interne, sel de sodium, (obtenu à partir de 1-(4-sulfobutyl)-5-(4-sulfobutyloxy)-2,3,3trimethyl-30 benz(e)indolium, sel interne, sel de sodium, dont la préparation est décrite précédemment, et de chlorhydrate de diariilide de l'aldéhyde glutaconique) dans 10 ml d'éthanol. 0,14 g de triéthylamine sont ajoutés progressivement et le mélange est porté à reflux pendant 5 minutes puis refroidi à température ambiante. 0,18 g d'acétate de sodium trihydrate sont ajoutés et le mélange est agité pendant 10 minutes. Le précipité formé est filtré puis lavé à l'acétone et séché sous vide. On obtient 1,2 g de produit 0 (Rendement: 79,1%). EXEMPLE 16 o DCC produit K + N OH NaO,S OMF o 1 1 (CHi),SO, (CHz),SO,Na Sulfosuccinimidyl ester du produit K (produit P) 0,09 g de produit K sont solubilisés dans 5 ml de DMF. 0,11 g de 1-hydroxy-3-succinimide-sulfonate de sodium et 25 mg de DiCyclohexylCarbodi.imide sont ajoutés. Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 24 heures puis filtré. 100 ml d'éther éthylique sont additionnés au filtrat. Le précipité formé est filtré et séché sous vide. On obtient 105 mg de produit P (Rendement: 95,4%). EXEMPLE 17 o produit K + O O DCC DMF (CH2),SO; (CH2),SO,Na Succinimidyl ester du produit K (produit Q) 1,08 g de produit K sont solubilisés dans 50 ml de DMF. 0,69 g de Nhydroxysuccinimide et 0,31 g de DiCyclohexylCarbodiimide sont ajoutés. Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 24 heures puis filtré. 250 ml d'éther éthylique sont additionnés au filtrat. Le précipité formé est filtré et séché sous vide. On obtient 1,1 g de produit Q (Rendement: 91,7%). EXEMPLE 18 produit K + O,N II DCC O NO2 OH DMF (CH,),SO, (CH2),SO2Na p-nitrophenyl ester du produit K (produit R) 90 mg de produit K et 17 mg de p-nitrophénol sont solubilisés dans 2 ml de DMF. 25 mg de DiCyclohexylCarbodiimide sont ajoutés. Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 24 heures puis filtré. 100 ml d'éther éthylique sont additionnés au filtrat. Après filtration et séchage sous vide on obtient 101 mg de produit R (Rendement: 98%). EXEMPLE 19 o produit L + (iPr),NEt N I 1 DMF (CHz),SO, (CH2),SO3Na TSTU IIo. N O O O O Succinimidyl ester du produit L (produit S) 0,24 g de produit L et 0,12 g de TSTU (N,N,N',N'-tetramethyl-O-(N-succinimidyl)uronium tetrafluoroborate) sont solubilisés dans 5 ml de DMF. Après 10 minutes d'agitation, 64 mg de diisopropylethylamine sont additionnés. Après 2 heures d'agitation, 100 ml d'éther éthylique sont additionnés. Le précipité formé est filtré, lavé à l'éther éthylique et séché sous vide. On obtient 0,25 g de produit S (Rendement: 92,6%). EXEMPLE 20, O Succinimidyl ester du produit M (produit T) 83 mg de produit M et 40 mg de TSTU sont solubilisés dans 5 ml de DMF. Après 10 minutes d'agitation, 25 mg de diisopropylethylamine sont additionnés. Après 2 heures d'agitation, 100 ml d'éther éthylique sont additionnés. Le précipité formé est filtré, lavé à l'éther éthylique et produit M + N-OH. (iPrOEt o DMF o TSTU N N 1 1 (CH=),SO, (CH,),SO,Na séché sous vide. On obtient 90 mg de produit T (Rendement: 96,8%). EXEMPLE 21 o produit N + [ N OH (CHZ)4SO3 (CHZ)4SO3Na DCC DMF Succinimidyl ester du produit N (produit U) 10 1,08 g de produit N sont solubilisés dans 50 ml de DMF. 0,57 g de N-hydroxysuccinimide et 0,26 g de DiCyclohexylCarbodiimide sont ajoutés. Le milieu réactionnel est maintenusous agitation à température ambiante pendant 24 heures puis filtré. 250 ml d'éther éthylique sont additionnés au filtrat. Le précipité formé est filtré et séché sous vide. On obtient 0,99 g de produit U (Rendement: 84,2%). EXEMPLE 22 o I I (CH=),SO, (CHZ)4SO3Na H2N DMF 1 1 (CH2),SO, (CH2)4SO3Na Phenethyl amide du produit L (produit V) 93 mg de produit S et 39 mg de phenethylamine sont solubilisés dans 5 ml de DMF. Après 45 minutes d'agitation, 60 ml d'éther éthylique sont additionnés. Le précipité formé est filtré, lavé à l'éther éthylique et séché sous vide. On obtient 57 mg de produit V (Rendement: 61,3%). EXEMPLE 23, H3 [5-(4-((3-carbethoxypropyl)oxy)phenyl)-10,15,20-tris(4-15 tolvl)] porphyrin (produit W) CH3 KZCO3 / DMF OH Br(CH2)3COOEt O(CHZ),COOEt H3C 0,30 g de [5-(4-hydroxyphenyl)-10,15,20-tris(4-tolyl)] porphyrin, composé préparé selon Little, J. Heterocyclic Chem., 12, 343-349 (1975), sont solubilisés dans 20 ml de DMF. Après ajout de 1,24 g de carbonate de potassium et agitation pendant 15 minutes, 0,44 g de 4-bromobutyrate d'éthyle sont additionnés et le mélange est agité à température ambiante pendant 48 heures à l'abri de la lumière. Après évaporation à sec, le résidu est dissout dans du dichlorométhane et lavé à l'eau. Après séchage sur sulfate de magnésium et évaporation, le produit est purifié par chromatographie sur silice avec le dichlorométhane comme éluant. On obtient 0,35 g de produit W (Rendement quantitatif) sous forme d'un solide violet. EXEMPLE 24 CH3 CH3 1)KOH/DMF/EtOH O(CH2)3COOEt H3C 2) Ha H3C O(CHz)3COOH CH3 CH3 [5(4-((3-carboxypropyl)oxy)phenyl)-10,15,20-tris(4-tolyl)] porphyrin (produit X) Un mélange contenant 0,35 g de produit W, 10 ml de KOH 1M dans EtOH et 28 ml de DMF est chauffé à 90 C pendant une heure. Après refroidissement à température ambiante et évaporation à sec, 50 ml de dichlorométhane et 110 ml d'HCl 0,1N sont ajoutés. Après extraction, la phase organique est lavée avec 50 ml d'eau puis séchée sur sulfate de magnésium. Après évaporation, le produit est purifié par chromatographie sur silice avec le chloroforme comme éluant. On obtient 0,30 g de produit X (Rendement: 88%) sous forme d'un solide violet. EXEMPLE 25 O(CHZ)3COOH + O N-OH O CH3 DCC DMF Y H3C CH3 Succinimidyl ester du produit X (produit Y) Un mélange contenant 157 mg de produit X, 32 mg de N-hydroxysuccinimide, 49 mg de DiCyclohexylCarbodiimide et 7 ml de DMF est agité à température ambiante pendant une nuit. Après évaporation à sec, le résidu est chromatographié sur silice avec le chloroforme comme éluant. On obtient 164 mg de produit Y (Rendement: 91,1%) sous forme d'un solide violet. EXEMPLE 26 1) Ll0 / DMF HO N-OH / DCC I DMF HO, OH 2) OH HN 5-(2-carboxyethylamino)-fluorescein succinimidyl ester (produit Z) Un mélange contenant 174 mg de 5-aminofluorescein, 36 mg de (3-propiolactone et 5 ml de DMF est agité à 90 C pendant 4 heures. Après refroidissement à température ambiante, on ajoute 77 mg de N-hydroxysuccinimide et 118 mg de DiCyclohexylCarbodiimide. Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 24 heures puis filtré. 50 ml d'éther éthylique sont additionnés au filtrat. Le précipité formé est filtré et séché sous vide. On obtient 212 mg de produit Z (Rendement: 82, 2%). EXEMPLE 27 Marquage de protéines avec le produit S A une solution de 1 mg de protéine (poids moléculaire 150 kDa) dans 0,5 ml de solution tampon phosphate (0,1 M) on ajoute 1 ml de tampon carbonate-bicarbonate de sodium (0,1 M, pH 9,3) contenant 10% de diméthylformamide, puis 25 l d'une solution de 9,1 mg de produit S dans 2 ml de diméthylformamide sont additionnés goutte-à-goutte. Le mélange est agité pendant 30 minutes à température ambiante. 200 l de ce mélange sont élués en fractions de 0,5 ml avec du tampon phosphate (0,1 M, pH 7,4, 10% de diméthylformamide) sur une colonne Sephadex G25/PD-10 (Amersham Biosciences) préalablement équilibrée avec 25 ml du même tampon. Le colorant couplé à la protéine est séparé du colorant non couplé par perméation de gel: la première bande colorée (fractions 7 à 9) correspond au colorant couplé et la deuxième bande colorée (fractions 14 à 17) correspond au colorant libre. La lecture des densités optiques à 685 nm indique un taux de substitution moyen de 4,7 molécules de colorant par molécule d'anticorps. Le conjugué est conservé à 4 C à l'abri de la lumière. REVENDICATIONS 1. Marqueur susceptible de former une liaison covalente ou non covalente avec une molécule cible, consistant en un colorant auquel est lié de façon covalente par un ou plusieurs carbones de sa structure chimique: un ou plusieurs groupe(s) [FONC], et éventuellement un ou plusieurs groupe(s) [SOL] ledit marqueur présentant la formule générale: [FONC] [COLOR] [SOL] [COLOR] représentant le colorant; [FONC] représentant chacun indépendamment un groupe -X-A-Z, dans lequel: X est choisi dans le groupe consistant en un atome d'oxygène, un atome de soufre, un groupe NR1R2, R1 et R2 étant chacun indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, en C1-C30, de préférence en C1-C18 et plus préférentiellement en C1-Cs A est choisi dans le groupe consistant en: -un groupe alkylène, -un groupe arylène, -un groupe alkylène-arylène ou - un groupe arylène-alkylène; - Z est une fonction chimique réactive; [SOL] représentant chacun indépendamment un groupe -X'- A'-Z', dans lequel: - X' est choisi dans le groupe consistant en un atome d'oxygène, un atome de soufre, un groupe NR1R2, R1 et R2 étant chacun indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, en C1-C30, de préférence en C1-C18 et plus préférentiellement en C1-05; A' est choisi dans le groupe consistant en: - un groupe alkylène, -un groupe arylène, -un groupe alkylène-arylène ou - un groupe arylène-alkylène; - Z' est un groupement polaire ou apolaire. 2. Marqueur selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le groupe alkylène est une chaîne hydrocarbonée, cyclique, linéaire ou ramifiée, présentant deux liaisons libres, contenant de 1 à 30, de préférence de 1 à 18 et plus préférentiellement encore de 1 à 5 atomes de carbone et pouvant être notamment une chaîne méthylène, éthylène, propylène, 2-méthylpropylène, n-butylène, i-pentylène, npentylène, hexylène et le groupe arylène est un groupement aromatique, présentant deux liaisons libres, contenant un ou plusieurs cycles aromatiques, éventuellement substitué, dont notamment un groupe cyclopentadiène ou phénylène pouvant être substitué ou non substitué. 3. Marqueur selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait que la fonction chimique réactive Z est un groupe fonctionnel capable de se lier par liaison covalente ou non covalente (électrostatique, hydrogène, coordinative, ionique ou complexe) directement ou après activation, avec au moins l'une des fonctions naturellement présentes ou artificiellement introduites sur une molécule cible. 4. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que fonction chimique réactive Z est choisie dans le groupe comprenant les fonctions acide carboxylique et ses sels, acide sulfonique et ses sels, anhydride d'acide, chlorure d'acide, ester tel que alkyl ester, p-nitrophényl ester, succinimidyl ester, sulfosuccinimidyl ester, azido tel que azoture d'acyle, azidonitrophényl, hydrazide, 3-acyl-1,3thiazolidine-2- thione, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, isocyanate, isothiocyanate, hydrazine, phtalimido, maléimide, haloacétamide, monochlorotriazine, dichlorotriazine, pyridine mono ou dihalogénée, diazine mono ou dihalogénée, aziridine, thiol, chlorure de sulfonyle, vinylsulfone, disulfure, méthanethiosulfonate, hydroxyle, phosphoramidite, époxy, aldéhyde, carbonate, glyoxal, imidazolyle. 5. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que Z' est ou bien un groupement polaire choisi dans le groupe comprenant les groupes acide carboxylique et ses sels, acide sulfonique et ses sels, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, carbohydrate, glycol, hydroxyle, nitro, phosphate, ou bien un groupement apolaire choisi dans le groupe comprenant les groupes alkyle linéaire ou ramifié ayant de 1 à 30 atomes de carbone, cycloalkyle ayant de 3 à 14 atomes de carbone, alkyloxy ayant de 1 à 30 atomes de carbone, halogénoalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, hyd:roxyalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, alkylester ayant de 2 à 40 atomes de carbone, aryle, aryloxy, arylalkyle substitué, arylalkyle, halogénoaryle. 6. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que [FONC] est choisi parmi - X- (CH2) r-COOSu, -X- (CH2) rCOOSuSO3Na, -X- (CH2) r-COOH, - X- (CH2) r-SO3H, -X- (CH2) r-SO3Na, -X(CH2) r-COO-C6H4-NO2, -X- (C6H4) - (CH2) r-COOSu, -X- (CH2) r-NHCOCH2I, X- (CH2) r-NCS, - X- (CH2) r-C6H4CH (CH3) -COOSu, -N (CH3) 2-(CH2) r-SO3H, -X- (CH2) r-OP [N (iPr) 2] [CH2CH2CN], X est tel que défini précédemment, r est un nombre entier de 1 à 18, de préférence de 2 à 10, et plus préférentiellement de 3 à 5, Su représentant le groupement succinimidyle. 7. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé par le fait que [SOL] est choisi parmi -X- (CH2) r-SO3Na, -X-(CH2) r-SO3H, -X- (CH2) r-C6H3 (NO2) 2, -X- (CH2) r-CH3, X est tel que défini précédemment, r est un nombre entier de 1 à 18, de préférence de 2 à 10, et plus préférentiellement de 3 à 5. 8. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé par le fait que le colorant [COLOR] est choisi dans le groupe comprenant les phtaléines, les carbocyanines, les mérocyanines, les porphyrines, les phtalocyanines. 9. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé par le fait que le colorant [COLOR] est choisi parmi les colorants présentant l'une des structures (1)à (5) suivantes: (1) Z3 Q2 Q3 (5) 5 dans lesquelles: M1 A M12, Q1 à Q12, D1 à D16, qui sont identiques ou différents les uns des autres, sont choisis dans le groupe comprenant les radicaux ou groupements suivants: hydrogène, hydroxyle, halogène, acétyle, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, phosphate, nitro, acide carboxylique et ses sels, acide sulfonique et ses sels, alkylcarboxy de 2 à 30 atomes de carbone, alkyle, linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 30 atomes de carbone, cycloalkyle ayant de 3 à 14 atomes de carbone, alkyloxy ayant de 1 à 30 atomes de carbone, halogénoalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, hydroxyalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, alkylester ayant de 2 à 40 atomes de carbone, nitroalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, carboxyalkyle ayant de 2 à 30 atomes de carbone, aminoalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, sulfoalkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, aryle, aryloxy, arylalkyle, halogénoaryle, arylester, à la condition que l'un au moins parmi Q1 A Q12 représente H ou un cycle aromatique, à la condition que l'un au moins parmi D1 à D16 représente H; Z1 et Z2 représentent chacun indépendamment l'un de l'autre les atomes nécessaires pour compléter un noyau indole, benzindole ou naphtindole; Z3 représente 0 ou S; V et W sont chacun indépendamment l'un de l'autre choisis parmi CR-7R9, 0, S, Se et NR9, où R-7, R8 et R9 sont chacun indépendamment les uns des autres choisis parmi l'hydrogène et un groupe (CH2) mR10r ou m est un nombre entier de 1 à 18 et R10 est sélectionné parmi hydrogène, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, aldéhyde, halogène, cyano, aryl, hétéroaryl, hydroxyl, amide, acide sulfonique et ses sels, acide carboxylique et ses sels; n est un nombre entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 7 et plus préférentiellement de 1 à 3; i est un nombre entier de 1 à n; R3 A R6 représentent chacun indépendamment les uns des autres un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, linéaire ou ramifié en C1-C30, de préférence en C1-C18, plus préférentiellement en C1-05, cycloalkyle, aryle, aryloxy, nitroalkyle, alkylamine, alkylamine substituée, alkylammonium quaternaire, alkylphosphate, acide alkylsulfonique et ses sels; T1 à T8 et Gli, G2i, G3 représentent chacun indépendamment les uns des autres un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C30, de préférence en C1-C18, plus préférentiellement en C1-05, sulfoalkyle, cycloalkyle, aryle, aryloxy, nitro, amine, amine substituée, ammonium quaternaire, phosphate, acide sulfonique et ses sels, OR11 avec R11 choisi parmi l'hydrogène et un groupe alkyle en C1-C30, de préférence en C1-C18, plus préférentiellement en C1-05, C00R11 ou CONHR11 avec R11 tel que défini précédemment; B11, B2i, B3 représentent chacun indépendamment les uns des autres un groupement méthine (=CH-), cycloalkyle mono ou di-insaturé de 4 à 8 atomes de carbone, arylecycloalkyle mono ou di-insaturé de 4 à 8 atomes de carbone, ou un des groupements suivants: 3 C2H5 H3Ç \ 3 OOC2H5 chacun de ces groupes étant soit non substitué, soit substitué par un ou plusieurs des groupes suivants: alkyle linéaire ou ramifié en C1-C18, de préférence C1- 05r halogène, sulfonate, sulfoalkyle, aryle, sulfoaryle, aryloxy, hydroxy, hydroxylate, cétone, nitro, amine, amine substituée, ammonium quaternaire; - Y représente un contre-ion choisi parmi les ions suivants halogénure, p-toluènesulfonate, méthanesulfonate, trifluorométhane-sulfonate, perchlorate, acétate, sodium, potassium, calcium, magnésium, lithium, ammonium et trialkylammonium; p est un nombre entier de 0 à 8 nécessaire à la neutralité de la molécule. 10. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait qu'il est fluorescent. 11. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé par le fait qu'il est choisi dans le groupe comprenant, les molécules de structures (6) à (10) suivantes: M16 M'7 M18 (6) dans laquelle chacun de Mil à M' 12, indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour M1 A M12, ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi M'1 A M'12 représente [FONC] ; pY F4 (7) dans laquelle Z1, Z2, R3, R4, B1i, B21, B3, V, W, Y, n et p sont tels que 5 définis précédemment, chacun de T' l à T'8, G'21 et G'3, indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour T1 à T8, G1i, G21 ou G3 ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi T'1 à T'8, G' li, G'21 ou G'3 représente [FONC] ; Zl Z3 dans laquelle Z1, Z3, R3, R5, R6, (8) B11, B2i, B3, V, Y, n et p sont tels que définis précédemment, chacun de T' l à T'4, G' 2i et G'3 indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour T1 à T4, G1i, G21 ou G3 ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis la condition que l'un au moins parmi T'1 G'3 représente [FONC]; précédemment, et à A T'4 ou G'li, G 2i, (9) dans laquelle chacun de Q'1 à Q'12 indépendamment l'un de l'autre peut avoir la définition donnée précédemment pour Q1 à Q12 ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins de Q'1 à Q'12 représente 10 [FONC] ; (10) dans laquelle chacun de D'1 à D'16, indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour D1 à D16, ou peut représenter [FONC] ou [SOL], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi D' l à D'16 représente [FONC]. 12. Marqueur selon l'une des revendications 1 à 11 caractérisé par le fait qu'il est hydrosoluble, de préférence à une concentration (m/v), plus préférentiellement supérieure ou égale à 2% supérieure à 0,5% à une concentration (m/v), et plus préférentiellement encore supérieure à 10% (m/v). 13. Marqueur selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait qu'il est liposoluble, de préférence à une concentration supérieure à 0,5% 15 (m/v), plus préférentiellement à une concentration supérieure ou égale à 2% (m/v), et plus préférentiellement encore supérieure à 10% (m/v). 14. Marqueur selon l'une quelconque des revendications 20 1 à 13, caractérisé par le fait qu'il est choisi dans le groupe comprenant N N 1 1 (CH2)4SO3 (CH2)4SO3Na N N (CH2)4S03 (CHZ)4SO3Na ^ x,o, N O I I SO3Na (CH2)4SO3 O N O NO2 O o O, O v v I{ N O)1 0 ' N 0 O(CHZ)4SO3Na H3C CH3 HN 15. Procédé de préparation de marqueurs selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisé par le fait qu'il comprend une réaction de substitution nucléophile entre: ou bien. Z-A-L et [COLOR' ] - Nu ou bien. [COLOR" ] -L et Z-A-Nu Z et A étant tels que définis à la revendication 1 L représentant un groupe partant; Nu représentant un groupe nucléophile choisi dans le groupe comprenant -OH, -SH ou -NR1R2, R1 et R2 étant chacun indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié en HO OH C]-C30, de préférence en C1-C18; plus préférentiellement en C1-05; [COLOR'] et [COLOR " ] représentant [COLOR] ou un précurseur ou intermédiaire de synthèse de [COLOR], 5 [COLOR] étant tel que défini à la revendication 1. 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé par le fait que la réaction de substitution nucléophile est une réaction de Williamson en présence d'une base. 17. Procédé selon la revendications 15 ou la revendication 16, caractérisé par le fait que le groupe partant L est choisi dans le groupe comprenant notamment un halogène ou un groupe méthanesulfonate, paratoluènesulfonate ou un groupe diazonium. 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 17, caractérisé par le fait que [COLOR']-Nu est obtenu par les réactions successives suivantes: 1. nitration de [COLOR']; 2. réduction du produit obtenu en étape 1; 3. éventuellement: ou bien alkylation du produit obtenu en étape 2, ou bien diazotation du produit obtenu en étape 2 pour l'obtention d'un sel de diazonium puis 25 substitution nucléophile sur cette fonction diazonium. 19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 18, caractérisé par le fait que [COLOR" ]-L est obtenu par les réactions successives suivantes: 1'. nitration de [COLOR"]; 2'. réduction du produit obtenu en étape 1'; 3'. diazotation du produit obtenu en étape 2' pour l'obtention d'un sel de diazonium; 4'. éventuellement substitution nucléophile sur la fonction diazonium du produit obtenu en étape 3'. 20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 19, caractérisé par le fait qu'il comprend une réaction 5 de substitution nucléophile entre: ou bien. Z'-A'-L et [COLOR']- Nu ou bien. [COLOR" ] -L et Z'-A'-Nu - Z' et A' étant tels que définis à la revendication 1; L, Nu, [COLOR'] et [COLOR"] étant tel que définis précédemment à la revendication 15; [COLOR']- Nu et [COLOR"] -L étant préparés selon le procédé d'une quelconque des revendications 15 à 20. 21. ]Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 20 caractérisé par le fait que la réaction de substitution nucléophile est réalisée par ouverture d'une molécule cyclique de formule Z - A 22. Procédé de marquage d'une molécule cible avec un marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 ou préparé selon l'une quelconque des revendications 15 à 21. 23. Produits de formule: pY dans laquelle Z1, V, p, Y sont tels que définis précédemment, R'3 représente un doublet électronique ou représente R3 tel que défini précédemment; est un nombre entier égal à 0 ou 1; R12 représente un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé en C1-C30, de préférence C1-C18,plus préférentiellement en C1-05, sulfoalkyle, cycloalkyle, aryle, aryloxy, de préférence un groupement méthyle, chacun de T'1 à T'4, indépendamment l'un de l'autre, peut avoir la définition donnée précédemment pour T1 à T4 ou peut représenter [SOL] ou [FONC], [SOL] et [FONC] étant tels que définis précédemment, et à la condition que l'un au moins parmi T'1 à T'4 représente [FONC]. 24. Produits selon la revendication 23, de formule chimique. O(CH2)5000Et EtOOC(CH2)50 O(CH2)5COOH O(CH2)4SO 3Na O(CH2)4SO 3Na HOOC(CH2)50 ou SO3Na O(CH2)5COOH SO3Na 25. Utilisation d'un marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 ou préparé selon l'une des revendications 15 à 21 dans une méthode de marquage de molécules biologiques. 26. Utilisation d'un marqueur selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 ou préparé selon l'une des revendications 15 à 21 dans une réaction de couplage en présence d'un agent de couplage peptidique, tel que les réactifs de type carbodiimide comme la DCC (dicyclohexylcarbodiimide), le carbonyldiimidazole, la IDDQ (l-isobutyloxycarbonyl-2-isobutyloxy-1,2dihydroquinoline), les réactifs de type phosphonium comme le BOP (benzotriazol-1-yloxytris-(diméthylamino)phosphonium hexafluorophosphate), les réactifs de type uronium comme le HBTu (o- benzotriazolyltétraméthyluronium hexafluorophosphate) et le TBTu (obenzotriazolyltétraméthyluronium tétrafluoroborate), les réactifs de Woodward comme le N-éthyl-5-phénylisoxazolium-3'-sulfonate, les réactifs de Curtius (hydrazine et nitrite). 27. Utilisation selon la revendication 25 ou 26, caractérisée par le fait que la réaction de couplage est réalisée en présence de diméthylformamide. 28. Méthode de détection d'une molécule biologique ou non biologique comprenant le couplage d'un marqueur selon l'une des revendications 1 à 14 ou préparé selon l'une des revendications 15 à 21 avec ladite molécule, et la détection de ladite molécule couplée au marqueur par spectrométrie d'absorption, spectrométrie de fluorescence, spectrométrie infra-rouge, électrophorèse, imagerie médicale dans le proche infrarouge ou l'infrarouge.