Brevet FR2890829A1 — publié le 20070323

TRAITEMENT DE LA SENSIBILITE ALIMENTAIRE NON SPECIFIQUE CHEZ UN CHIEN OU UN CHAT La présente invention est relative à l'utilisation du microorganisme probiotique déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117, dans la fabrication d'une composition destiné au traitement de la sensibilité alimentaire non spécifique chez un chien ou un chat. La présente invention fournit aussi un procédé pour le traitement de la sensibilité alimentaire non spécifique chez le chien ou le chat, le procédé comprenant l'administration au chien ou au chat du microorganisme probiotique déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117. Les probiotiques sont utilisés depuis longtemps dans la nutrition des animaux domestiques. Différentes indications ont été données pour leur utilisation chez les animaux de compagnie chiens et chats de compagnie. La sensibilité non spécifique (NSS) chez les chiens et les chats peut apparaître en réponse à certains ingrédients alimentaires ou en réponse à des types spécifiques de régime alimentaire. Elle est caractérisée par des fèces de consistance molle. La NSS est un état pathologique reconnu chez les chiens et les chats et peut être définie comme étant un trouble intestinal, caractérisé par la production de fèces humides non formées, sans autre trouble de la santé. L'étiologie de l'état n'est pas clair, quoique le problème soit lié à des facteurs alimentaires. Elle ne semble pas cependant être limitée à un ingrédient spécifique. L'absence de consistance des fèces peut par exemple être reproduite par une alimentation avec des aliments du commerce ou cuits à la maison contenant des concentrations supérieures en sources de protéine d'origine animale. Le problème peut être associé à une réduction de la fonction d'absorption du côlon, étant donné que l'absorption d'eau, de sodium et de chlorure est inférieure et que la sécrétion de potassium est supérieure par rapport à celles d'individus non affectés. Dans la NSS, les aliments commerciaux en boîte posent plus de problèmes que l'alimentation pour animaux domestiques à base de croquettes sèches. Un effet direct exercé par des composants alimentaires sur la paroi intestinale ou une perturbation de la physiologie intestinale avec des répercutions consécutives sur la fonction intestinale d'absorption sont des causes possibles du trouble. Comme on connaît peu de choses sur la cause de la NSS chez les chiens ou les chats, on n'avait pas pensé auparavant que des probiotiques seraient utiles pour traiter ce trouble. La présente invention est relative à l'utilisation du microorganisme probiotique 35 déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117, dans la fabrication d'une composition pour le traitement de la sensibilité alimentaire non spécifique (NSS) chez un chien ou un chat. R:,Brescrs25800.25802--060919-Dcmande.doc - 19 septembre 2006 Le microorganisme probiotique a été déposé à l'institut de dépôt NCIMB Ltd conformément au Traité de Budapest sur la reconnaissance internationale du dépôt de microorganismes pour les besoins de la procédure de brevet. Lactobacillus acidophilus déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117, est un bacille Gram-positif, catalase-négatif, non sporulant. A l'échelle microscopique, les cultures sont des bâtonnets non motiles, de taille variable allant de bâtonnets courts à de longs filaments. Ces organismes appartiennent à la famille des bactéries d'acide lactique, ce qui fait référence à la production d'acide caractéristique pendant la croissance métabolique. Les lactobacilles sont cultivés dans des conditions anaérobies ou microaérophiles sur des milieux sélectifs comme l'agar M17 et MRS. La croissance de ces organismes en colonies visibles définies sur des plaques d'agar apparaît en 18 à 48 heures. Lactobacillus acidophilus NCIMB 41117 peut être récupéré à partir de préparations congelées par une culture standard sur des milieux sélectifs. En bref, les cellules bactériennes sont mises en suspension dans un petit volume (1 ml) de bouillon MRS (Oxoid) et des dilutions en série sont préparées jusqu'à une dilution de 10-8. Un aliquot de 50 l de chaque dilution est étalé sur des plaques d'agar MRS et les cultures sont incubées à 38 C dans des conditions anaérobies pendant 18 à 24 heures. Comme on connaît peu de choses en ce qui concerne la cause de la NSS chez les chiens ou les chats, l'identification du fait que le microorganisme probiotique déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117 exerce un effet bénéfique sur ces animaux, est particulièrement avantageuse. Dans la présente invention, les termes chien et chat signifient le chien domestique et le chat domestique, en particulier Felix domesticus et Canis domesticus. La composition de la présente invention est une quelconque composition que peut prendre un chat ou un chien. De préférence, la composition est une denrée alimentaire, en particulier il peut s'agir d'une denrée alimentaire sèche, humide ou semi-humide. L'expression de denrée alimentaire englobe des produits alimentaires standard ainsi que des en- cas alimentaires. La denrée alimentaire peut comprendre un produit principal à base de farine, un produit à base de céréales ou une confiserie telle que des barres d'en-cas, des biscuits et des produits sucrés. La denrée alimentaire peut englober un quelconque produit qu'un chien ou un chat est susceptible de consommer, en particulier dans son alimentation. La denrée alimentaire est de préférence un aliment sec pour animaux de compagnie. Ces R^Brcvets.25800 25802--060919-Demandedoc - 19 septembre 2006 aliments secs pour animaux de compagnie comprennent les croquettes sèches comprenant une source d'amidon cuit. La denrée alimentaire peut être un produit cuit. Elle peut incorporer de la viande ou des matières d'origine animale (telles que boeuf, poulet, dinde, agneau, plasma sanguin, os à moelle..., ou deux ou plusieurs de ceux-ci). La composition peut être dans une variante dépourvue de viande (comprenant de préférence un substitut de viande tel que du soja, du gluten de maïs ou un produit à base de soja). La composition peut contenir des sources de protéines supplémentaires telles qu'un concentré de protéines de soja, des protéines du lait, du gluten, etc. La composition peut contenir une source d'amidon telle qu'une ou plusieurs céréales (par exemple, blé, maïs, riz, avoine, orge, ...) ou peut être dépourvue d'amidon. Un aliment sec typique du commerce pour chien et chat contient environ 30% de protéines brutes, environ 10 à 20% de graisses et le restant étant des glucides, y compris des fibres alimentaires et des éléments minéraux. Un produit humide ou juteux typique contient (sur une base de matière sèche) environ 40% de graisses, 50% de protéines, le restant étant des fibres et des éléments minéraux. La présente invention est particulièrement pertinente pour une composition telle qu'elle est décrite ici, qui est vendue en tant que régime, denrée alimentaire ou supplément pour un chien ou un chat. De plus, la denrée alimentaire peut être sous la forme d'un produit à base de céréales, d'une barre énergétique, de céréales pour le petit déjeuner, d'une confiserie, d'un médicament, supplément alimentaire, ou d'une boisson ou de plusieurs d'entre eux. Le supplément peut être sous la forme d'une poudre séchée, d'un comprimé, d'une gélule, d'un liquide ou d'un gel. Le microorganisme probiotique peut être sous une forme quelconque, par exemple, une forme sèche pulvérulente ou sous forme de spores (pour les microorganismes qui forment des spores). L,e probiotique peut être encapsulé afin de le protéger de l'humidité. De plus, le microorganisme probiotique peut avoir subi un traitement pour accroître sa survie pendant un quelconque traitement. En conséquence, le microorganisme peut être enrobé ou encapsulé dans un polysaccharide, de la graisse, de l'amidon, une protéine ou dans une matrice de sucre. Le microorganisme probiotique peut être dans un revêtement (extérieur ou dans une couche), ou dans une garniture, ou il peut être mélangé à l'ensemble de la composition. 11 peut être préférable d'éviter de mettre le probiotique en contact avec la farine du fait que la farine contient des enzymes qui peuvent nuire à la viabilité du probiotique. Des techniques classiques d'encapsulation connues dans le domaine peuvent être utilisées et par exemple, de la façon qui est discutée dans le brevet US 6 190 591. R:\Brevets^25800\25802--060919-Dcmande.doc - 19 septembre 2006 La composition selon le premier aspect de l'invention peut comprendre le microorganisme probiotique à une quelconque concentration, de préférence à une concentration allant de 103 à 1015 cellules viables par gramme de la composition totale. Cette concentration de cellules fournit une concentration convenable pour une colonisation réussie du tractus gastrointestinal et fournit à l'animal les bénéfices optimum pour la santé. Une souche probiotique supplémentaire peut aussi être présente à une concentration de 103 à l015 cellules viables par gramme de la composition totale. Dans le présent texte, le terme traitement inclut un traitement prophylactique, c'est-à-dire la prévention de l'apparition d'une NSS. Le terme traitement comprend donc aussi le traitement prophylactique d'un animal présentant un risque de NSS, mais ne souffrant pas de ce trouble. La présente invention est particulièrement utile pour des animaux qui sont particulièrement sensibles à la NSS lesquels comprennent mais de façon non limitative, un ou plusieurs chiens des races suivantes: retriever à poil lisse, setter irlandais, setter anglais, épagneul de Munster, labrador, chien berger allemand, sloughi, retriever à poil bouclé, chien berger belge, dalmatien, pointer allemand à poil court, braque de Weimar, boxer, caniche (standard), lévrier afghan, colley, chien berger Old English, épagneul English Springer, briquet. Un second aspect de l'invention fournit un procédé pour le traitement de la NSS non spécifique chez un chat ou un chien, le procédé comprenant l'administration à un chat ou à un chien du microorganisme probiotique déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117. En ce qui concerne le second aspect de l'invention, les caractéristiques 25 préférées du premier aspect s'appliquent également. En particulier, le procédé peut comprendre la fourniture du probiotique en tant que partie d'une denrée alimentaire. Il peut en particulier comprendre la fourniture du microorganisme probiotique dans la denrée alimentaire pour y être présent dans une gamme de 103 à 1015 cellules viables par gramme de la denrée alimentaire. En outre, il peut comprendre la fourniture de la denrée alimentaire en tant que produit sec, humide ou semi-humide. Par ailleurs, dans le procédé, ladite administration est préférentiellement faite à un chien de l'une ou plusieurs des races suivantes: retriever à poil lisse, setter irlandais, setter anglais, épagneul de Munster, labrador, chien berger allemand, sloughi, retriever à poil bouclé, chien berger belge, dalmatien, pointer allemand à poil court, braque de Weimar, boxer, caniche (standard), lévrier afghan, colley, chien berger Old English, épagneul English Springer, briquet. R9Brevet s\25800A25802--060919-Demande. doc - I9 septembre 2006 Selon cette invention, L. acidophilus déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117 peut stabiliser les processus digestifs chez les chiens ou les chats souffrant de la NSS. L'amélioration observée de la consistance fécale a une importance pratique considérable, puisque les probiotiques L. acidophilus sont généralement considérés comme étant sans danger (statut GRAS) et en tant que tels sont acceptables pour une application à long terme. La présente invention fournit des effets bénéfiques du Lactobacillus acidophilus déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117 sur la tolérance alimentaire, les caractéristiques digestives et la microbiologie gastrointestinale chez 1 o un groupe de chiens ou chats ayant une sensibilité alimentaire non spécifique. La présente invention est maintenant décrite en référence à l'exemple suivant. EXEMPLE Matériaux et méthodes Modèle d'étude Le modèle d'étude comprend 3 stades consécutifs, commençant par une période témoin de 12 semaines, suivie d'une période expérimentale de 12 semaines (période probiotique) et d'une période témoin consécutive de 4 semaines. Animaux Six pointers à poil court allemands adultes (4 mâles, 2 femelles, poids corporel de 30,8 2, 0 kg) ayant des antécédents de sensibilité alimentaire non spécifique, sont identifiés pendant une procédure de criblage d'alimentation. Les chiens affectés produisent de façon uniforme des fèces de médiocre qualité (sans consistance ou médiocrement formées) et une faible teneur en matière sèche (MS; moyenne 26,2 1 0,93% de MS fécale) par rapport à des briquets non affectés recevant la même alimentation (moyenne 28,6 + 1, 8% de MS). Tous les chiens sont des chiens adultes (2 à 7 ans, moyenne de 4,5) et sont maintenus dans des conditions identiques dans un chenil. La biochimie du sérum est testée en tant que partie d'un programme de criblage de routine et est comprise dans les gammes physiologiques pour tous les chiens. Les parasites sont recherchés en routine sur des échantillons de selles et tous les chiens sont débarrassés de vers et vaccinés régulièrement. Régimes alimentaires Le régime alimentaire témoin et le régime alimentaire probiotique ont un profil identique de nutriments de base (seule la présence du probiotique diffère). Le régime alimentaire est une denrée alimentaire de croquettes sèches standard. Les principaux ingrédients sont de la farine de volaille, des céréales, du riz et des légumes. Lactobacillus acidophilus déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117 est ajouté au régime alimentaire expérimental à une concentration finale de 6x106 cfu/g R:\Brevets'25R00 25002--160919-Dcmande.doc - 19 septembre 2006 d'aliment sec pour chien. Tous les chiens sont habitués au régime expérimental pendant 3 semaines avant la prise initiale d'échantillon. Les rations alimentaires sont ajustées individuellement pour atteindre une constance de poids (500 à 600 g d'aliment sec/jour). De l'eau de boisson douce est offerte ad libitum. Evaluation de la qualité fécale La fréquence de défécation et la qualité fécale sont évaluées quotidiennement. Des évaluateurs entraînés notent les fèces sur une échelle de 1 à 5 et des notes moyennes de fèces sont calculées pour chaque période d'alimentation. Une note de 1 représente des fèces grumeleuses sèches et une note de 5 représente une diarrhée. La 1 o note 2 représente des fèces qui sont bien formées, faciles à ramasser et ne laissent pas de marques. La note 3 représente des fèces de bonne qualité qui sont légèrement humides et moins bien formées par rapport aux fèces de qualité 2, laissant une marque lorsqu'elles sont enlevées d'une surface sèche et ayant une texture moins ferme. Les fèces de qualité 4 sont de qualité médiocre, étant humides et médiocrement formées avec une consistance caractéristique de pâte ou de porridge. La matière sèche fécale est déterminée par séchage dans un four (103 C jusqu'à poids constant), tandis que l'eau fécale non liée est récupérée par centrifugation (centrifugeuse Sorvall RC 2B, Bad Homburg, Allemagne) de 5 g de fèces à 47.000 g pendant 30 mn. Evaluation de la microflore fécale Les effets de l'alimentation sur la microflore intestinale sont étudiés par culture d'échantillons de fèces pour déterminer C. perfringens, E. coli, Lactobacillus spp. et Bifidobacterium spp. En bref, on homogénéise 0,5 g de fèces fraîches dans 4,5 ml d'eau peptonée par agitation vigoureuse. On produit des séries de dilutions décuples et on cultive des volumes de 100 il sur des plaques d'agar sélectives incubées à 37 C, soit de façon aérobie pendant 24 heures pour E. coli (agar Mac Conkey (Oxoid, Hampshire, Angleterre), soit de façon anaérobie pendant 48 heures pour Lactobacillus spp. (agar ManRogosa-Sharp (Sigma-Aldrich, Steinheim, Allemagne)), C. perfringens (agar Tryptose Sulfite Cycloserin, (Sigma-Aldrich, Steinheim, Allemagne)) et Bifidobacterium spp (agar Tomato Juice Becton Dickinson and Company, Sparks, USA)). Les colonies bactériennes résultantes sont dénombrées et différenciées au niveau du genre. L'identification est conduite sur des colonies typiques par coloration Gram et morphologie cellulaire, pour E. coli la réaction à l'indole est utilisée en supplément, et Lactobacillus spp sont caractérisés par un profil de fermentation biochimique (ApiCHO50, BioMerieux Austria Gmb, Vienne, Autriche). Les réactions d'oxydase sont évaluées (DryOxidase-Slides, BBL Difco, Sparks, USA) et l'activité catalase est analysée avec le test au peroxyde d'hydrogène. Bifidobacterium spp et C. perfringens sont de plus caractérisés par les R:Brevet s\2580025802- 060919-Demandedoc - 19 septembre 2006 profils métaboliques biochimiques avec un kit de test du commerce (Rapid ID 32 A, BioMerieux Austria Gmb, Vienne, Autriche). Pour une étude supplémentaire de la composition bactérienne, une hybridation in situ est réalisée avec des sondes oligonucléotidiques (MWG Biotechn Ebersberg, Allemagne) pour E. coli (Ecol 1531, 5'-CY3-CAC CGT AGT GCC TCG TCA TCA-3'), pour le groupe Clostridium histolyticum (Chis 150, 5'-CY3-AAA GGA AGA TTA ATA CCG CAT AA-3'), pour Bildobacterium spp (Bif 164, 5'-CY3-CAT CCG GCA TTA CCA CCC-3') et pour Lactobacillus spp (Lacto 158, 5'-CY3-GGT ATT AGC AYC TTC CA-3'). En bref, les fèces fraîches sont diluées à 1:10 lo (poids/volume) dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Les cellules bactériennes (375 pi) dans la suspension sont stabilisées par addition de 1,125 ml de paraformaldéhyde à 4% (volume/volume). Après 24 heures, les cellules sont récoltées et lavées deux fois dans du PBS, la matière cellulaire est finalement remise en suspension dans 150 pl de PBS et 150 pl d'éthanol à 96% (volume/volume) . Un volume de 32 pl de la solution résultante est combiné avec 400 pl de tampon d'hybridation (0,9 M de NaCl, 20 mM de tris(hydroxyméthyl) aminométhane et 0,1% (poids/volume) de lauryl sulfate de sodium, pH 7,2) et 128 pl d'eau dépourvue de RNase. On ajoute 180 pl de la solution résultante à 20 pl de la sonde oligonucléotidique appropriée (50 ng/ l). L'hybridation est réalisée pendant 16 heures pour les sondes Chis-150, Ecol 1531 et Lacto 158 à 50 C et à 45 C pour la sonde Bif 164 dans un four d'hybridation (Grant Boekel HIS25, Grant Instruments Ltd., Cambridge, UK). Après l'hybridation, on ajoute 20 pl de dichlorhydrate de 4',6'diamidino-2-phénylindole (DAPI, 500 ng/ml) à un échantillon de 200 pl et 5 ml de tampon d'hybridation sans lauryl sulfate de sodium (0,9 M de NaCl, 20 mM de tris(hydroxyméthyl)aminométhane, pH 7,2) chauffé à 50 C pendant 30 mn pour la détermination de E.coli, C.histolyticum et des bifidobactéries. Pour l'analyse des lactobacilles, on incube 900 l d'échantillon hybridé avec 20 pl de DAPI pendant 30 mn à 50 C. Les échantillons sont analysés par filtration sous vide sur un filtre à membrane de 0,2 pm (Carbon Filter ISOPORE , Millipore Corporation, Bedford, MA, USA) et un kit du commerce (Light Antifade Kit SLOWFADE est utilisé pour la stabilisation de la fluorescence. Les membranes sont stockées sous verre à 4 C à l'obscurité jusqu'à l'étude par microscopie à fluorescence (Leitz Wetzlar, modèle 301-179-003, Wetzlar, Allemagne) dans un bain d'huile. Le comptage des cellules bactériennes est réalisé à l'aide d'un logiciel (CorelDraw 110 Corel, Unterschleissheim, Allemagne). Les nombres de bactéries par gramme de fèces sont calculés et exprimés en nombre log10 de fèces. Evaluation de la composition d'alimentation et digestibilité R:1Brevetst25800\25802--060919-Demande. doc - 19 septembre 2006 Les taux de nutriments bruts dans les régimes alimentaires et dans des échantillons fécaux sont analysés par analyse de Weende (Naumann K. Bassler R. Die chemische Untersuchung von Futtermitteln, VDLUFA- Methodebuch III, 5. Ergaenzungslieferung, Darmstadt: Verlag Neumann, 1993) , les éléments minéraux et les oligoéléments par spectrophotométrie d'absorption atomique (Slavin W. Atomic absorption spectroscopy. Chem Anal 1968; 25:87-90) et le phosphore par la méthode au molybdate vanadate (Gericke S. Kurmies B. Die kolorimetrische Phosphorbestimmung mit Ammonium-Vanadat-Molybdat und ihre Anwendung in der Pfanzenanalyze. Z. Pflanzenernahr Dung Bodenkd 1952; 59: 235-247). Des études de digestibilité sont conduites pendant 5 jours après un minimum de 7 jours d'adaptation. Analyse statistique Les données sont exprimées sous la forme de la moyenne écart type (SD). Une comparaison entre les périodes témoins et la période expérimentale est réalisée par ANOVA et le test t de Student. La distribution normale des données est confirmée par le test de Kolmogorov Smirnoff. Le test du Chi deux est utilisé pour comparer la distribution des données observées et attendues de notes fécales. Le niveau de significativité est de p RESULTATS Animaux Tous les chiens sont en bonne santé pendant l'étude. Les rations alimentaires quotidiennes sont facilement ingérées et aucun signe d'intolérance alimentaire n'est observé. Qualité fécale La fréquence de défécations est comprise dans la gamme de 2,1 à 2,6 par jour et est légèrement inférieure dans la période probiotique (Tableau 1). Les notes de consistance fécale moyennes sont comparables entre les périodes expérimentales. Cependant, le nombre d'échantillons de fèces ayant une consistance inacceptable (qualités 4 et 5) est réduit pendant la période probiotique et persiste à un plus faible taux pendant la période témoin 2 suivante (Figure 1). La matière sèche fécale moyenne est de 29,3 1,06% pendant la période probiotique par rapport à 26,2 0,93% pendant la première période témoin et de 26,1 1,61% dans la seconde période témoin. Le pourcentage d'eau fécale non liée est réduit pendant la période probiotique par rapport à la première période témoin (25,5 2,26 par rapport à 30,9 3,22%). Microflore fécale R:\Brevets\25800\25802--060919-Demande doc - 19 septembre 2006 Les concentrations fécales cultivables de C.perfringens, E. coli. Lactobacillus spp et Bifidobacterium spp (Tableau 2) sont similaires pendant toutes les périodes alimentaires. Les concentrations en lactobacilles et en bifidobactéries augmentent légèrement, mais pas de façon significative pendant la période probiotique par rapport aux deux périodes témoins. Les populations bactériennes fécales telles qu'elles sont déterminées par hybridation in situ (Tableau 3) sont supérieures par rapport aux données obtenues par culture fécale et les différences entre périodes alimentaires sont faibles. Cependant, l'augmentation de bifidobactéries cultivables observée pendant la période probiotique est confirmée par une hybridation in situ. ro Digestibilité apparente des régimes alimentaires expérimentaux Les digestibilités apparentes de la plupart des nutriments organiques sont supérieures lorsque le régime alimentaire expérimental est fourni par rapport à la période témoin L Une tendance vers des digestibilités apparentes supérieures est aussi observée pendant la période témoin 2 par rapport à la ligne de base (Tableau 4). Discussion Du point de vue biologique, les espèces carnivores sont intéressantes dans une certaine mesure en raison des conditions spécifiques régnant dans le tractus gastro-intestinal, qui diffèrent de la situation existant dans d'autres espèces monogastriques. La communauté bactérienne intestinale et ses activités métaboliques ont certaines particularités, comme des concentrations élevées en Clostridium spp dans le tractus gastro-intestinale supérieure et inférieure, et des nombres variables de bifidobactéries. Ces deux genres bactériens sont sujets à des fluctuations, qui dépendent de la composition du régime alimentaire. La présente invention démontre les effets bénéfiques du probiotique Lactobacillus chez les chiens ayant une NSS. L'ajout de L. acidophilus déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117 au régime alimentaire du commerce améliore considérablement la qualité des fèces comme cela est observé par la réduction significative de fèces de qualités 4 et 5 (diarrhée). Cette amélioration de la consistance fécale a une importance pratique importante, puisque les probiotiques Lactobacillus acidophilus sont sans danger et acceptables pour une application à long terme (statut GRAS). L'efficacité du probiotique L. acidophilus déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117 peut provenir d'une modification de la micro-écologie intestinale et de ses effets consécutifs sur les processus digestifs gastro- intestinaux. Cette théorie est reflétée par les digestibilités apparentes supérieures de matière organique pendant l'administration de probiotique. R:Brecei 25800'25802--060919-Demande.doc - 19 septembre 2006 lo En conclusion, l'application de la souche Lactobacillus acidophilus déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117 induit une réduction des fèces mal formées indésirables dans un groupe de chiens ayant une NSS. La présente invention est décrite en référence aux figures suivantes: La Figure 1 montre la fréquence relative des notes fécales de 1 à 5 pendant chaque période d'alimentation (témoin 1: 1322 échantillons, probiotique: 1107 échantillons, témoin 2: 213 échantillons) ; les fréquences observée diffèrent entre les périodes alimentaires avec p Carré vide: période témoin; carré barré : période expérimentale de 12 fo semaines (probiotique); carré plein: période témoin consécutive. Tableau 1 Nombre de défécations, consistance fécale, matière sèche fécale et eau fécale non liée chez les chiens expérimentaux au cours des 3 périodes d'alimentation (moyennes + SD) Alimentation Défécations/jour Consistance Matière sèche Eau fécale non fécale' fécale, % liée, % Période 2,6 0,58 3,5 0,15 26,2 0,93a 30,9 + 3,22a témoin Période 2,1 0,38 3,3 + 0,09 29,3 1,06b 25,5 2,26b prébiotique Témoin 2,4 + 0,28 3,4 + 0,16 26,1 1,61 a 27,5 2,18ab- consécutif Les fèces sont notées sur une échelle de 1 à 5, la qualité 1 représente des fèces grumeleuses sèches et la qualité 5 représente une diarrhée. Les moyennes à l'intérieur d'une colonne ne partageant pas un exposant commun sont significativement différentes avec p Tableau 2 Bactéries cultivables récupérées à partir des fèces (log,o cfu./g; moyennes SD) R:\Brevets\25800\25802--060919-Demande doc - 19 septembre 2006 Alimentation Clostridium Escherichia Lactobacillus Bif idobacterium perfringens coli spp spp Période 7,92 + 0,32 7,31 0,27 8,72 + 0,66 7,83 + 1,24 témoin Période 7,61 1,03 7,21 0,56 9,26 + 0,76 8,35 0,81 probiotique _ Témoin 7,98 0,31 6,72 + 0,69 8,91 0,95 8,00 0,41 consécutif Tableau 3 Nombres de bactéries dans les fèces tels que déterminés par hybridation in situ (loglo cfu/g; moyennes SD) Alimentation Groupe Escherichia Lactobacillus Bifidobacterium Clostridium coli,spp spp histolyticum Période 8,46 0,25 8,39 0,07 9,13 0,06 8,37 0,04 témoin Période 8, 34 0,05 8,58 t 0,06 9,28 0,07 8,75 + 0,05 probiotique Témoin 8,46 0, 06 8,57 f 0,09 9,43 f 0,07 8,26 0,03 consécutif Tableau 4 Digestibilités apparentes (% de la consommation) de matière sèche, matièreorganique et nutriments bruts chez les chiens expérimentaux au cours des 3 périodes 15 d'alimentation (moyennes SD) Digestibilités apparentes (% de la consommation) Matière Matière Protéine Graisse Fibre brute Extraits sèche organique brute brute sans azote Période 79,6 3,4a 84,5 2,5 78,1 + 3,5a 90,3 + 1,9a 7,1 16,0 90,1 2,0 témoin Période 84,1 2,8b 87,2 + 2,8 83,7 2,6b 93,2 1,4b 17,4 + 12,2 90,8 2,5 probiotique Témoin 83,3 d_ 2,1b 86,5 1,6 82,2 d_ 2,4b 92,3 + 0,6b 11,8 12,9 90,8 + 1,1 consécutif R:\Brevet s\25800\25802--060919-Demnnde.doc - 19 septembre 2006 Les moyennes à l'intérieur d'une colonne ne partageant pas un exposant commun sont significativement différentes avec p REVENDICATIONS 1. Utilisation du microorganisme probiotique déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117, dans la fabrication d'une composition pour le traitement de la sensibilité alimentaire non spécifique chez un chien ou un chat. 2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle le microorganisme probiotique est présent dans la composition dans une gamme de 103 à 1015 cellules 10 viables par gramme de la composition. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle la composition est une denrée alimentaire. 4. Utilisation selon la revendication 3, dans laquelle la denrée alimentaire est sèche, humide ou semi-humide. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle le chien est de l'une ou plusieurs des races suivantes: retriever à poil lisse, setter irlandais, setter anglais, épagneul de Munster, labrador, chien berger allemand, sloughi, retriever à poil bouclé, chien berger belge, dalmatien, pointer allemand à poil court, braque de Weimar, boxer, caniche (standard), lévrier afghan, colley, chien berger Old English, épagneul English Springer, briquet. 6. Procédé pour la prévention de la sensibilité alimentaire non spécifique chez un chat ou un chien, le procédé comprenant l'administration audit chat ou chien, du microorganisme probiotique déposé sous le numéro d'accès NCIMB 41117. 7. Procédé selon la revendication 6, comprenant la fourniture du probiotique en tant que partie d'une denrée alimentaire. 8. Procédé selon la revendication 7, comprenant la fourniture du microorganisme probiotique dans la denrée alimentaire pour y être présent dans une 35 gamme de 103 à 1015 cellules viables par gramme de la denrée alimentaire. 9. Procédé selon la revendication 7 ou 8, comprenant la fourniture de la denrée alimentaire en tant que produit sec, humide ou semi-humide. R:\Brcvets\25800'\25802--060919-Demande.doc - 19 septembre 2006 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, dans lequel ladite administration est faite à un chien de l'une ou plusieurs des races suivantes: retriever à poil lisse, setter irlandais, setter anglais, épagneul de Munster, labrador, chien berger allemand, sloughi, retriever à poil bouclé, chien berger belge, dalmatien, pointer allemand à poil court, braque de Weimar, boxer, caniche (standard), lévrier afghan, colley, chien berger Old English, épagneul English Springer, briquet. R:\Brevets\25800\25802--060919-Demande.doc - 19 septembre 2006