Brevet FR2887892A1 — publié le 20070105

La présente invention concerne le domaine des polymères fluorescents. Plus particulièrement, la présente invention a pour objet de nouveaux polymères fluorescents solubles en solution aqueuse et obtenus, de préférence, par polymérisation radicalaire ou ionique vivante. L'invention est également relative au procédé de préparation de polymères fluorescents solubles en solution aqueuse. Le développement de polymères répondant aux besoins de nouvelles applications est l'un des enjeux de la recherche. Les polymères de synthèse ont été utilisés depuis longtemps aussi bien dans le domaine thérapeutique pour vectoriser des molécules actives ou des gènes, que dans le domaine du diagnostic. Dans ce dernier cas, des ligands biologiques sont fixés sur les polymères par complexation, par covalence ou par reconnaissance spécifique, et les conjugués ainsi formés sont utilisés dans des tests de détection de molécules cibles, essentiellement pour augmenter la sensibilité. L'immobilisation des ligands biologiques sur des polymères fluorescents permet d'améliorer la détection. Les polymères fluorescents peuvent également trouver des applications dans différentes méthodes de marquage, de détection, dans l'imagerie, notamment, par microscopie de fluorescence et microscopie confocale. Pour les applications dans le domaine diagnostique ou thérapeutique, il est particulièrement avantageux d'utiliser des polymères fluorescents solubles en solution aqueuse. De nombreux travaux se sont intéressés à la synthèse de polymères fluorescents. M. Pitschke et al., par exemple, dans Colloid Polym. Sci., 1995, 273, 740-752 décrit la synthèse d'un polymère hydrosoluble fluorescent obtenu par polymérisation de trois types de monomères: un dérivé styrène sulfonate pour la solubilité dans l'eau, un dérivé styrène coumarine fluorescent et un dérivé méthacrylate-PEG-OOOH pour le couplage covalent de protéines. Les polymères obtenus présentent une large polymolécularité (Ip). Un polymère de 38 000 g.morl porteur de 13 coumarines par chaîne et un polymère de 150 000 g.mori porteur de 60 coumarines par chaîne sont décrits. Le rendement quantique relatif de ces fluorophores immobilisés sur le polymère est de 0,67 (en relatif par rapport à la coumarine seule), ce qui correspond à un facteur d'amplification de la fluorescence de 9 pour le polymère de 38 000 g/mol, c'est-à-dire à un facteur d'amplification de la fluorescence rapporté à la masse molaire du polymère de 0,24 par Kg/mol de polymère, et à un facteur d'amplification de la fluorescence de 40 pour le polymère de 150 000 g/mol, c'est-à-dire à un facteur d'amplification de la fluorescence rapporté à la masse molaire du polymère de 0,27 par Kg/mol de polymère. Il apparaît donc, dans cette publication, qu' une amplification de la fluorescence, entraînant une meilleure sensibilité dans les applications visées, est directement liée à la longueur du polymère. De plus, des problèmes d'interactions hydrophobes sont rencontrés lors de l'utilisation en phase aqueuse de ces polymères, à caus e de la présence des coumarines hydrophobes. M. Chen et al. dans Macromolecules, 2004, 37, 5479-5481, ont décrit la synthèse d'un polymère fluorescent amphiphile, comportant un bloc hydrosoluble et un bloc hydrophobe, par le procédé de polymérisation radicalaire contrôlée dit RAFT. La polymérisation met en oeuvre un agent de transfert fluorescent porteur d'une coumarine et un monomère acénaphtylène fluorescent. Le polymère obtenu porte 22 fluorophores latéraux par chaîne et une coumarine à l'une des extrémités de la chaîne. Ce polymère présente un certain nombre d'inconvénients: il est soluble dans l'eau uniquement lorsqu'il est ionisé, dans l'exemple donné à pH 11, ce qui limite fortement son utilisation dans les milieux biologiques qui présentent un pH proche de 7; les fluorophores latéraux sont groupés sur le bloc hydrophobe, ce qui n'est pas favorable à une bonne fluorescence de ces fluorophores latéraux; les 22 fluorophores sont tous hydrophobes, ce qui entraîne une tendance du polymère à s'agréger en structure de type micelle: il n'est donc pas vraiment soluble dans l'eau mais dispersable dans l'eau; ce polymère n'est pas très fluorescent: seule la coumarine située en extrémité de chaîne émet de la fluorescence, les fluorophores latéraux servant d'antenne de stockage de la lumière. Différents polymères fluorescents hydrosolubles sont également proposés dans le Handbook of Fluorescent Probes, 9th Edition, 2002, 581-590 de Molecular Probes: différents dextrans fluorescents, par exemple de 3000 g/mol avec de 0,3 à 0,7 fluorophores par chaîne, de 10000 g/mol avec de 0, 5 à 2 fluorophores par chaîne, de 40000 g/mol avec de 2 à 4 fluorophores par chaîne, de 70000 g/mol avec de 3 à 6 fluorophores par chaîne, tous polydisperses en taille et en nombre de fluorophores par chaîne. Les rendements quantiques relatifs des fluorophores portés par de tels polymères ne sont pas indiqués. Cependant, même si l'on suppose que les rendements quantiques relatifs sont très élevés, l'amplification de la fluorescence obtenue, et en particulier, l'amplification de la fluorescence rapportée à la masse du polymère est faible. De plus, certains de ces polymères sont marqués à la fluorescéine et sont donc très sensibles au pH et peu photostables. Dans toutes ces techniques de l'art antérieur, les polymères présentent un facteur d'amplification de la fluorescence limité. De plus, les polymères sont, le plus souvent, obtenus par un procédé de polymérisation conduisant à une large distribution de taille des chaînes, ce qui nécessite de procéder à une purification par fractionnement, pour aboutir à une distribution de tailles étroite. La polydispersité en taille est, par exemple, un problème pour l'analyse de la communication intercellulaire et des phénomènes d'exclusion de taille comme la perméabilité de membranes. Or, pour répondre aux besoins sus mentionnés, la Demanderesse se propose de fournir de nouveaux polymères, solubles en solution aqueuse, qui présentent une fluorescence élevée. Dans ce contexte, la présente invention a pour objet un polymère fluorescent soluble en solution aqueuse qui est porteur d'au moins 5 fluorophores répartis sur le polymère, lesdits fluorophores présentant les propriétés suivantes: - les fluorophores sont hydrosolubles, - les fluorophores ne forment pas d'auto-association dans l'eau, jusqu'à une concentration de 10-4 mol/1, de préférence jusqu'à une concentration de 10-3 mol/1, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un coefficient d'extinction molaire supérieur à 1000 M l.cm 1, de préférence supérieur à 5000 M i.cm i, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un rendement quantique supérieur à 0,3, de préférence supérieur à 0,6. Le polymère selon l'invention présente un facteur d'amplification de la fluorescence supérieur ou égal à 0,35 par Kg/mol de polymère, de préférence supérieur à 0,45 par Kg/mol de polymère. De façon avantageuse, les polymères selon l'invention présentent une caractéristique ci-dessous ou une combinaison des caractéristiques ci dessous, lorsqu'elles ne s'excluent pas l'une l'autre: - les fluorophores comportent ou sont liés par l'intermédiaire d'un bras espaceur, comportant au moins un enchaînement CH2-CH2- situé entre la partie fluorescente du fluorophore et le polymère; - le polymère est obtenu en utilisant un procédé de polymérisation radicalaire contrôlée ou de polymérisation ionique vivante; - le polymère est obtenu en utilisant un procédé de polymérisation radicalaire contrôlée basé sur un transfert réversible de chaînes par addition/fragmentation (RAFT) ; - le polymère présente un indice de polymolécularité inférieur à 1,5, de préférence inférieur à 1,3; - les fluorophores comprennent au moins un groupe polaire ou ionisable en solution aqueuse; - le polymère présente moins de 2,4 Kg/mol, de préférence moins de 2 Kg/mol de polymère par fluorophore; - les dits fluorophores présentant un rendement quantique relatif de fluorescence au moins égal à 0,7, de préférence au moins égal à 0,75; - les fluorophores sont tous identiques; - les fluorophores sont choisis parmi: le N-(5-aminopentyl)-4-amino-3,6-disulfo-1,8-naphthalimide, le 3,6diamino-9- (2- méthoxycarbonyl)phényle, le 9- (2,4-disulfophényl) -2,3,6, 7,12,13,16,17- octahydro-1H,5H,11H,15H xanthéno[2,3,4-ij:5,6,7-i'j' ] diquinolizin- 18- ium, le 9- (2,4- disulfophényl)-3,6-bis(éthylamino)-2,7diméthyl-xanthylium, le 3,6-bis(diéthylamino)-9-(2,4-disulfophényl)xanthylium et leur dérivés; -les fluorophores sont identiques et sont le N-(5-aminopentyl)-4-amino-3,6-disulfo-1,8-naphthalimide; - les fluorophores sont insensibles aux variations de pH; - les fluorophores sont photostables; - le polymère se présente sous la forme d'un copolymère statistique, comportant au moins deux entités distinctes répétées, l'une porteuse du fluorophore et au moins une autre entité hydrophile; - le polymère comprend, à l'une de ses extrémités, un composé d'intérêt tel qu'un ligand biologique lié de façon covalente; de préférence, le composé d'intérêt est soit lié au polymère par une fonction thioether à son extrémité co, soit lié au polymère par une fonction amide à son extrémité a. Selon un autre de ses aspects, l'invention se propose de fournir des procédés de préparation de nouveaux polymères fluorescents, solubles en solution aqueuse, qui présentent une fluorescence élevée. L'invention a donc pour objet les procédés tels que définis aux revendications 20 à 52. L'invention a donc également pour objet un premier procédé de préparation de polymères fluorescents solubles en solution aqueuse et qui présentent un facteur d'amplification de la fluorescence supérieur ou égal à 0,35 par Kg/mol de polymère, de préférence supérieur à 0,45 par Kg/mol de polymère comportant les étapes suivantes: É une étape de polymérisation par homopolymérisation ou copolymérisation réalisée avec un monomère fonctionnalisé porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée, de façon à obtenir un polymère porteur d'au moins 5 fonctions réactives X1, éventuellement sous forme protégée, réparties sur ledit polymère, É une étape de couplage d'au moins 5 fluorophores sur au moins une partie des fonctions réactives X1, après déprotection desdites fonctions réactives si nécessaire, lesdits fluorophores présentant les caractéristiques suivantes: - les fluorophores sont hydrosolubles, - les fluorophores ne forment pas d'auto-association dans l'eau, jusqu'à une concentration de 10-4 mol/1, de préférence jusqu'à une concentration de 10-3 mol/1, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un coefficient d'extinction molaire supérieur à 1000 M-'.cm i, de préférence supérieur à 5000 M-1.cm i, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un rendement quantique supérieur à 0,3, de préférence supérieur à 0,6. L'invention a également pour objet un deuxième procédé de préparation ch polymères fluorescents solubles en solution aqueuse et qui présentent un facteur d'amplification de la fluorescence supérieur ou égal à 0,35 par Kg/mol de polymère, de préférence supérieur à 0,45 par Kg/mol de polymère mettant en oeuvre une étape de polymérisation par copolymérisation d'un monomère fonctionnalisé porteur d'un fluorophore, avec un monomère hydrophile, ou bien avec un monomère, qui après traitement, peut conduire à une entité hydrophile, lesdits fluorophores présentant les caractéristiques suivantes: - les fluorophores sont hydrosolubles, - les fluorophores ne forment pas d'auto-association dans l'eau, jusqu'à une concentration de 10-4 mol/1, de préférence jusqu'à une concentration de 10-3 mol/1, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un coefficient d'extinction molaire supérieur à 1000 M-'.cm i, de préférence supérieur à 5000 M-1.cm i, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un rendement quantique supérieur à 0,3, de préférence supérieur à 0,6. Dans ce cas, le monomère fonctionnalisé porteur d'un fluorophore pourra être obtenu par couplage d'un fluorophore, éventuellement, par l'intermédiaire d'un bras espaceur, sur un monomère fonctionnalisé porteur d'une fonction réactive Xl. De préférence, le monomère porteur d'une fonction réactive Xl est choisi parmi les monomères fonctionnels suivants: le N-acryloxysuccinimide, le Nméthacryloxysuccinimide, le méthacrylate de 2-hydroxyéthyle, le méthacrylate de 2-aminoéthyle, l' acrylate de 2-hydroxyéthyle, l' acrylate de 2- aminoéthyle, l'anhydride maléïque et, de préférence, parmi le N-acryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque, et plus particulièrement le N- acryloxysuccinimide (NAS). Ou bien le monomère porteur d'une fonction réactive Xl est choisi parmi les dérivés d'un sucre, de préférence, le 6-0-(2-vinyloxyethyl)-a-D- galactopyranose, le 6-O-acryloyl-a-D-galactopyranose, le 6- O- acryloylamino-6-désoxy -a-D-galactopyranose et le 6- 0- (8-acryloylamino3,6-dioxaoctyl)-a-D-galactopyranose. De façon avantageuse, les fluorophores utilisés dans ces procédés présentent les caractéristiques supplémentaires telles que définies cidessus pour les polymères. De plus, les variantes ci-dessous, éventuellement prises en combinaison lorsqu'elles ne s'excluent pas l'une l'autre, constituent des aspects préférés de l'un et/ou l'autre des procédés selon l'invention: - l'étape de couplage est réalisée de façon à ce que la partie fluorescente des fluorophores soit éloignée du polymère par un bras espaceur comportant au moins un enchaînement CH2-CH2- ; par exemple, les fluorophores comportent un bras espaceur, comportant au moins un enchaînement CH2- CH2-, situé entre la partie fluorescente du fluorophore et le polymère; - l'étape de polymérisation est réalisée par polymérisation radicalaire contrôlée ou polymérisation ionique vivante, préférentiellement, par un procédé de polymérisation radicalaire contrôlée basé sur un transfert réversible de chaînes par addition/fragmentation (RAFT) ; - le nombre de fluorophores fixés au polymère est ajusté, de façon à obtenir, moins de 2,4 Kg/mol, de préférence moins de 2 Kg/mol de polymère par fluorophore; - l'étape de polymérisation est réalisée par copolymérisation, de préférence statisitique, entre un monomère fonctionnalisé, éventuellement porteur d'un fluorophore, et un monomère hydrophile; préférentiellement, le monomère hydrophile est choisi parmi les dérivés hydrophiles d'acrylate, de méthacrylate, d' acrylamide, de méthacrylamide, de N-vinylpyrrolidone, les dérivés hydrophiles de monomères saccharidiques et, de préférence, parmi: la N-vinylpyrrolidone, le N,N-diméthylacrylamide et la N- acryloylmorpholine; - l'étape de polymérisation est réalisée par copolymérisation statistique entre un monomère porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée, et un monomère hydrophile à l'exception des monomères saccharidiques hydrophiles non protégés, ou bien un monomère qui, après traitement, peut conduire à une entité hydrophile; de préférence, on utilise un monomère porteur d'une fonction réactive X1, avantageusement choisi parmi les monomères fonctionnels suivants: le N-acryloxysuccinimide, le N- méthacryloxysuccinimide, le méthacrylate de 2-hydroxyéthyle, le méthacrylate de 2- aminoéthyle, l' acrylate de 2-hydroxyéthyle, 1' acrylate de 2-aminoéthyle, l'anhydride maléïque et, de préférence, parmi le N-acryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque, etc... et, plus particulièrement, le N-acryloxysuccinimide (NAS) ; après l'étape de couplage, on réalise, de façon avantageuse, un traitement des fonctions X1 restantes sur le polymère, soit par désactivation, soit par couplage avec des molécules hydrosolubles non fluorescentes; - l'étape de polymérisation est réalisée par copolymérisation statistique entre un monomère porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée, et un monomère hydrophile; de préférence on utilise un monomère hydrophile choisi parmi les dérivés hydrophiles d'acrylate, de méthacrylate, d'acrylamide, de méthacrylamide, de N-vinylpyrrolidone et, de préférence, parmi: la Nvinylpyrrolidone, le N,N-diméthylacrylamide et la N- acryloylmorpholine; l'étape de polymérisation est réalisée par homopolymérisation d'un monomère porteur d'une fonction réactive X1 sous forme protégée, ladite fonction étant déprotégée avant couplage des fluorophores; de préférence, le monomère porteur d'une fonction réactive Xl sous forme protégée est choisi parmi les dérivés d'un sucre, de préférence, le 1,2:3,4-di Oisopropylidène-6-O-(2-vinyloxyethyl)-a-D- galactopyrano se, le 6-Oacryloyl-1,2:3,4-di-O- isopropylidène-a- D-galactopyranose, le 6-Oacryloylamino-6-désoxy- 1,2:3,4-di-O-isopropylidène-a-D-galactopyranose et le 6-0-(8- acryloylamino-3,6-dioxaoctyl)-1,2:3,4-di O-isopropylidène-a- Dgalactopyrano se; - l'étape de polymérisation est réalisée par homopolymérisation d'un monomère porteur d'une fonction réactive X1, avantageusement choisi parmi les monomères fonctionnels suivants: le Nacryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, le méthacrylate de 2hydroxyéthyle, le méthacrylate de 2- aminoéthyle, l' acrylate de 2hydroxyéthyle, 1' acrylate de 2-aminoéthyle, l'anhydride maléïque et, de préférence, parmi le N-acryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque et, plus particulièrement, le N-acryloxysuccinimide (NAS) ; après l'étape de couplage des fluorophores, on réalise, de façon avantageuse, un traitement des fonctions X1 restantes sur le polymère, soit par désactivation, soit par couplage avec des molécules hydrosolubles non fluorescentes; - la fonction réactive X1 est choisie parmi les fonctions hydroxy, amine, aldéhyde, anhydride, acide carboxylique activé sous forme d'ester activé, par exemple de N- hydroxysuccinimide; la fonction acide carboxylique activé sous forme d'ester de N-hydroxysuccinimide étant préférée; - un composé d'intérêt, tel qu'un ligand biologique, est couplé de façon covalente à une fonction E réactive, présente en bout de chaîne du polymère fluorescent obtenu; dans le cas où le polymère est obtenu par procédé RAFT, le composé d'intérêt est couplé, à l'extrémité co du polymère, pour former une fonction thioether; les ligands biologiques sont choisis notamment parmi les polynucléotides, les antigènes, les anticorps, les polypeptides, les protéines, les haptènes, la biotine. La présente invention a également pour objet les polymères fluorescents solubles en solution aqueuse, susceptibles d'être obtenus par de tels procédés. Avant de décrire plus en détails l'invention, certains termes employés dans la description et les revendications, outre ceux indiqués précédemment, sont définis ci-après. On entend par masse molaire au sens de l'invention la masse molaire moyenne en nombre, Mn, des chaînes polymères formées. Dans le cas présent, elle est obtenue après analyse des échantillons par chromatographie d'exclusion stérique, en utilisant un détecteur de type réfractomètre couplé à un appareil de diffusion de lumière, ce qui permet d'avoir accès à des valeurs de masse molaire absolues. L'appareil de diffusion de lumière est un miniDawn (Wyatt Technology) et les masses molaires absolues sont déterminées avec le logiciel ASTRA (Wyatt Technology). L'indice de polymolécularité est l'indice de distribution des masses molaires bien connu de l'homme du métier. Ainsi l'indice de polymolécularité est Ip, avec Ip=Mw/Mn, Mn étant telle que définie cidessus et Mw étant la masse molaire moyenne en masse des chaînes polymères. Dans le cas présent, il a également été déterminé avec le logiciel ASTRA. Le terme copolymère doit être compris comme un polymère formé par au moins deux entités différentes répétées et, notamment, les copolymères à blocs et les copolymères statistiques. Le terme copolymère statistique désigne les polymères formés par au moins deux entités différentes répétées, dans lesquels soit les entités sont réparties statistiquement le long de la chaîne macromoléculaire, soit les entités se succèdent régulièrement selon une structure générale (Bn'Cm')p' dans laquelle n', m' et p' sont des nombres entiers identiques ou différents. Le terme copolymère statistique englobe donc les copolymères alternés. Par monomère, on entend une entité polymérisable. Par monomère fonctionnalisé, on entend un monomère porteur d'une fonction réactive Xl (monomère réactif), éventuellement sous forme protégée, ou d'un fluorophore (monomère fluorescent). Par polymère soluble en solution aqueuse, on entend un polymère qui, introduit dans une solution aqueuse à 25 C, à une concentration en poids égale à 1%, permet l'obtention d'une solution qui présente une valeur de transmittance maximale de la lumière, à une longueur d'onde à laquelle le polymère n'absorbe pas, à travers un échantillon de 1 cm d'épaisseur, d'au moins 70%, de préférence d'au moins 80%. Par fluorophore hydrosoluble, on entend un fluorophore qui, introduit à 25 C, dans une solution aqueuse jusqu'à une concentration de 10-3 mol/L au moins, conduit à une solution homogène et transparente. La solution aqueuse dans laquelle la solubilité du polymère ou des fluorophores peut être testée est, par exemple, de l'eau pure ou une solution tampon de pH compris entre 5 et 10. Le rendement quantique de fluorescence d'un fluorophore est le rapport entre le nombre de photons émis par ce fluorophore et le nombre de photons absorbés par ce fluorophore. Il est toujours inférieur ou égal à 1. Plus il est proche de 1, plus le fluorophore considéré a un rendement quantique élevé. Le rendement quantique de fluorescence relatif d'un fluorophore immobilisé sur un polymère est le rendement quantique de fluorescence du fluorophore immobilisé divisé par le rendement quantique de fluorescence du fluorophore libre en solution. On entend par facteur d'amplification de la fluorescence d'un polymère fluorescent, le produit du nombre de fluorophores immobilisés sur le polymère par leur rendement quantique relatif. Il est déterminé par la formule suivante: Facteur d'amplification de la fluorescence = nombre de LY/chaîne x ((DFLY immobilisé)/((DFLY libre) dans laquelle: LY = fluorophore (DFLY immobilisé = rendement quantique de fluorescence du fluorophore LY immobilisé sur le polymère (DFLY libre = rendement quantique de fluorescence du fluorophore LY libre en solution. Ce facteur d'amplification de la fluorescence est rapporté à la masse molaire du polymère en le divisant par la masse molaire du polymère exprimée en Kg/mol. Le rendement quantique d'un fluorophore libre en solution ou immobilisé sur un polymère est déterminé par une méthode utilisant comme standard une solution diluée de rhodamine 101 dans l'éthanol ayant un rendement quantique égal à 0,92 à 25 C. Les spectres de fluorescence du fluorophore libre en solution et du fluorophore immobilisé sur le polymère sont obtenus dans les mêmes conditions expérimentales (longueur d'onde d'excitation, largeur de bande des monochromateurs d'excitation et d'émission, géométrie optique) en utilisant un spectrofluorimètre SPEX Fluorolog F112A. Le nombre de fluorophores immobilisés sur une chaîne polymère, est déterminé en divisant le coefficient d'extinction molaire du polymère fluorescent par le coefficient d'extinction molaire du fluorophore libre en solution. Le coefficient d'extinction molaire E d'un fluorophore libre en solution (ou d'un polymère fluorescent) est déterminé à partir de la pente de la courbe représentant l'absorbance (densité optique ou DO) du fluorophore (ou du polymère respectivement) en fonction de la concentration (C) du fluorophore (ou du polymère) selon la loi bien connue de Beer-Lambert: DO =E xlxC avec 1 = largeur de la cuve (ou chemin optique) en cm C = concentration en mol/L ou M EenMi.cm L'absorbance est déterminée à la longueur d'onde d'absorbance maximale avec 20 un spectrophotomètre UV/Vis JASCO V-650. Le phénomène d'auto-association d'un fluorophore libre en solution aqueuse est déterminé à partir des spectres d'absorption UV de solutions de concentration croissante. La concentration à laquelle le phénomère d'auto-association se produit est déterminée comme étant la concentration où la courbe de Beer-Lambert dévie de la linéarité, et ceci pour une valeur d'absorbance inférieure à 1,0 en utilisant des cellules de chemin optique approprié (de 0,1 cm à 1cm selon la concentration en fluorophore). Dans le cadre de l'invention, le coefficient d'extinction molaire et le rendement quantique de fluorescence sont mesurés dans une solution aqueuse, dans des conditions, notamment de pH et force ionique, où ces paramètres prennent des valeurs maximales. Le plus souvent, la solution aqueuse utilisée est une solution tampon de pH compris entre 5 et 10. Par composé d'intérêt, on entend tout type de composé moléculaire ou macromoléculaire, ou support solide, qu'il est intéressant de coupler à l'extrémité d'un polymère, pour telle ou telle application, en particulier pour une application en biologie, thérapeutique ou diagnostic. A titre d'exemple de composés d'intérêt, on peut citer les ligands biologiques, les mono- ou disaccharides, les lipides, les molécules fluorescentes, les colorants, les chaînes polymères et les supports solides. La seule condition nécessaire pour le composé d'intérêt est qu'il porte une fonction réactive susceptible de réagir avec une fonction E présente, à l'une des extrémités du polymère ou, dans le cas du procédé RAFT, à l'une des extrémités de l'agent de transfert réversible de chaîne ou à l'une des extrémités du polymère. Dans le cas où le polymère est préparé par procédé RAFT, cette fonction E est une fonction thiol ou ester activé, comme détaillé plus loin dans la description. Dans ce cas, la fonction réactive est respectivement choisie à titre d'exemple parmi les fonctions maléïmide et iodoacétamide et parmi les fonctions amine, hydrazine, hydrazide, azide, alcoxyamine, hydroxy, thiol. Le composé d'intérêt peut être lié au polymère selon l'invention par l'intermédiaire d'un bras espaceur qui porte alors la fonction réactive. Par ligand biologique, on entend un composé qui possède au moins un site de reconnaissance lui permettant de réagir avec une molécule cible d'intérêt biologique. A titre d'exemple, on peut citer, comme ligands biologiques, les polynucléotides, les antigènes, les anticorps, les polypeptides, les protéines, les haptènes, la biotine... Le terme "polynucléotide" signifie un enchaînement d'au moins 2 désoxyribonucléotides ou ribonucléotides comprenant éventuellement au moins un nucléotide modifié, par exemple au moins un nucléotide comportant une base modifiée tel que l'inosine, la méthyl5-désoxycytidine, la diméthylamino-5-désoxyuridine, la désoxyuridine, la diamino-2,6- purine, la bromo-5-désoxyuridine ou toute autre base modifiée permettant l'hybridation. Ce polynucléotide peut aussi être modifié au niveau de la liaison internucléotidique comme par exemple les phosphorothioates, les Hphosphonates, les alkyl-phosphonates, au niveau du squelette comme par exemple les alpha-oligonucléotides (FR 2 607 507), ou les PNA (Egholm M. et al., J. Am. Chem, Soc., 1992, 114, 1895-1897), ai les 2-0-alkyl ribose, ou les LNA (de l'anglais Loked Nucleic Acids , décrits notamment dans lademande de brevet publiée sous le numéro WO 00/66 604). Chacune de ces modifications peut être prise en combinaison. Le polynucléotide peut être un oligonucléotide, un acide nucléique naturel ou son fragment comme un ADN, un ARN ribosomique, un ARN messager, un ARN de transfert, un acide nucléique obtenu par une technique d'amplification enzymatique. Par "polypeptide", on entend un enchaînement d'au moins deux acides aminés. Par acides aminés, on entend les acides aminés primaires qui codent pour les protéines, les acides aminés dérivés après action enzymatique comme la trans-4-hydroxyproline et les acides aminés naturels mais non présents dans les protéines comme la norvaline, la N- méthyl- Lleucine, la staline (Hunt S. dans Chemistry and Biochemistry of the amino acides, Barett G.C., ed., Chapman and Hall, London, 1985), les acides aminés protégés par des fonctions chimiques utilisables en synthèse sur support solide ou en phase liquide et les acides aminés non naturels. Le terme "haptène" désigne des composés non immunogènes, c'est-à-dire incapables par eux- mêmes de promouvoir une réaction immunitaire par production d'anticorps, mais capables d'être reconnus par des anticorps obtenus par immunisation d'animaux dans des conditions connues, en particulier par immunisation avec un conjugué haptène-protéine. Ces composés ont généralement une masse moléculaire inférieure à 3000 Da, et le plus souvent inférieure à 2000 Da et peuvent être par exemple des peptides glycosylés, des métabolites, des vitamines, des hormones, des prostaglandines, des toxines ou divers médicaments, les nucléosides et les nucléotides. Le terme "anticorps" inclut les anticorps polyclonaux ou monoclonaux, les anticorps obtenus par recombinaison génétique et des fragments d'anticorps. Le terme "antigène" désigne un composé susceptible d'être reconnu par un anticorps dont il a induit la synthèse par une réponse immune. Le terme "protéine" inclut les holoprotéines et les hétéroprotéines comme les nucléoprotéines, les lipoprotéines, les phosphoprotéines, les métalloprotéines et les glycoprotéines aussi bien fibreuses que globulaires. En tant que "monosaccharide", on peut citer, par exemple, le glucose, le galactose, le mannose, le fructose, et en tant que "disaccharide", par exemple, le saccharose, le cellobiose, le lactose, le maltose. En tant que "lipide", on peut citer, par exemple, le dip almitoylpho sphatidylcholine. En tant que "colorant", on peut citer le bleu de méthylène, le vert de bromocrésol, le rouge methyl, la safranine O. En tant que "molécules fluorescentes", on peut par exemple citer la fluorescéine, la rhodamine, le pyrène, le phénanthrène, l'anthracène, la coumarine. En tant que "chaîne polymère", on entend un polymère naturel ou de synthèse ayant été modifié afin de porter au moins une fonction réactive vis-à-vis de la fonction ester activé. Comme polymère naturel, on peut par exemple citer les polysaccharides comme la cellulose, le dextrane, le chitosane, les alginates. Comme polymère de synthèse, on peut, par exemple, citer le polyoxyde d'éthylène, le polyoxyde de propylène, le polychlorure de vinyle, les polyéthylènes, polypropylènes, polystyrènes, polyacrylates, polyacrylamides, polyamides, polyméthacrylates, polyméthacrylamides, polyesters, ou copolymères à base de monomères vinyle aromatique, alkylesters d'acides alpha-beta insaturés, esters d'acides carboxyliques insaturés, le chlorure de vinylidène, les diènes ou composés présentant des fonctions nitrile (acrylonitrile), les copolymères de chlorure de vinyle et de propylène, de chlorure de vinyle et acétate de vinyle, les copolymères à base de styrènes ou dérivés substitués du styrène Le terme "support solide" tel qu'utilisé ici inclut tous les matériaux permettant une utilisation dans des tests diagnostiques ou en thérapeutique, en chromatographie d'affinité et dans des processus de séparation. Des matériaux naturels, de synthèse, modifiés ou non chimiquement, peuvent être utilisés comme support solide, notamment des polymères tels que polychlorure de vinyle, polyéthylène, polystyrènes, polyacrylates, polyamides, polyméthacrylates, polyesters, ou copolymères à base de monomères vinyle aromatique, alkylesters d'acides alpha-beta insaturés, esters d'acides carboxyliques insaturés, chlorure de vinylidène, diènes ou composés présentant des fonctions nitrile (acrylonitrile) ; des copolymères de chlorure de vinyle et de propylène, de chlorure de vinyle et acétate de vinyle; copolymères à base de styrènes ou dérivés substitués du styrène; des fibres synthétiques telles que le nylon; des matériaux inorganiques tels que la silice, le verre, la céramique, le quartz; des latex; des particules magnétiques; des dérivés métalliques. Le support solide selon l'invention peut être, sans limitation, sous la forme d'une plaque de microtitration, d'une feuille, d'un cône, d'un tube, d'un puits, de billes, particules ou analogues, d'un support plan comme un wafer de silice ou silicium. Le matériau est soit hydrophile, soit hydrophobe intrinsèquement ou par suite d'une modification chimique comme par exemple un support hydrophile rendu hydrophobe. Les supports solides susceptibles de réagir par formation de liaison covalente avec une fonction thiol portée par le polymère, présentent avantageusement des fonctions maléimïde en surface. Par exemple, il est possible d'introduire chimiquement des fonctions maléïmide, en surface d'un wafer de silice par silanisation, en utilisant un aminoalkylsilane puis un bras espaceur hétérobifonctionnel portant une fonction Nhydroxysuccinimide à une extrémité (qui réagit sur la fonction amine) et une fonction maléïmide à son autre extrémité. Les supports solides susceptibles de réagir par formation de liaison covalente avec une fonction ester activé, par exemple, portée le polymère obtenu par mise en oeuvre du procédé RAFT, présentent avantageusement des fonctions amine en surface. Par exemple, il est possible d'introduire, chimiquement, des fonctions amine, en surface d'un wafer de silice par silanisation, en utilisant un aminoalkylsilane comme l' aminopropyldiméthylchlorosilane, l' aminopropylméthyl- dichlorosilane ou l'aminopropyltrichlorosilane. Dans le cas où le support solide est sous la forme de particules de latex de polystyrène, la fonctionnalisation par des fonctions amine peut être obtenue par copolymérisation de styrène avec de l' aminométhylstyrène ou avec du méthacrylate d' aminoéthyle. Par alkyle, on entend, lorsqu'il n'est pas donné plus de précision, un groupe hydrocarboné saturé, linéaire ou ramifié comportant de 1 à 18, avantageusement de 1 à 6, atomes de carbone. A titre d'exemples de groupe alkyle, on pourra citer les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, isobutyle, tert butyle, npentyle, n-hexyle et analogues. Par alcoxy, on entend un groupe 0-alkyle, alkyle étant tel que défini cidessus. Par halogène, on entend un atome de chlore, brome, iode ou fluor. Les termes alcényle et alcynyle correspondent à un groupe hydrocarboné de 2 à 18, et de préférence de 2 à 6 atomes de carbone, comprenant respectivement au moins une double ou une triple liaison. Les exemples de groupe alcényle ou alcynyle sont, par exemple, des groupes vinyle, allyle, isopropényle, 1, 2- ou 3-butényle, pentényle, hexényle, éthynyle, 2propynyle, butynyle. Le terme cycloalkyle, désigne un groupe alkyle, alcényle ou alcynyle, monocyclique ou polycyclique, par exemple bicyclique, comprenant de 3 à 10 atomes de carbone, par exemple cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle, des groupes cycloalkyle pontés tels que les groupes adamantyle, bicyclo [3.2.1] optanyle. Le terme hétérocycloalkyle désigne un cycloalkyle tel que ci-dessus défini, comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, sélectionnés parmi les atomes d'azote, oxygène et soufre. Les groupes aryle désignent des carbocycles mono-, bi- ou polycycliques comprenant au moins un groupe aromatique. Le terme hétéroaryle désigne un groupe aryle tel que défini ci-dessus comprenant au moins un atome choisi parmi les atome s d'azote, oxygène ou soufre. En tant qu'aryle ou hétéroaryle, on peut citer les groupes phényle, 1naphtyle, 2-naphtyle, indanyle, indényle, biphényle, benzocycloalkyle, c'est-à-dire bicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-triène, benzodioxolyle, tels que les groupes pyrrolyle, furanyle, thiényle, imidazolyle, pyrazolyle, thiazolyle, oxazolyle, isoxazolyle, pyridyle, pirazinyle, pyrimidyle, tétrazolyle, thiadiazolyle, oxadiazolyle, triazolyle, pyridazinyle, indolyle, pyrimidyle. Les termes utilisés pour la définition des groupements chimiques sont ceux usuellement reconnus par l'homme du métier. Par exemple, un groupe du type cycloalkylalkyle signifie que le groupe est constitué d'un groupe alkyle lui-même substitué par un groupe cycloalkyle. Inversement, un groupe du type alkylcycloalkyle signifie que le groupe est constitué d'un groupe cycloalkyle lui-même substitué par un groupe alkyle. Par groupe substitué, on entend un groupe porteur de un ou plusieurs substituants. Par substituants, on entend un groupe choisi parmi: les halogènes, cyano, alkyle, trifluoroalkyle, alcényle, alcynyle, cycloalkyle, aryle, hétérocycloalkyle, amino, alkylamino, dialkylamino, hydroxy, alcoxy, aryloxy, un groupe phényle éventuellement substitué, un groupe aromatique éventuellement substitué ou des groupes: alkoxycarbonyle ou aryloxycarbonyle (-COOR ), carboxy (-COOH), acyloxy (- O2CR ), carbamoyle (-CONR 2), isocyanato alkylcarbonyle, alkylarylcarbonyle, arylcarbonyle, arylalkylcarbonyle, phtalimido, maleïmido, succinimido, amidino, guanidino, allyle, époxy-SR , les groupes présentant un caractère hydrophile ou ionique tels que les sels alcalins d'acides carboxyliques, les sels alcalins d'acide sulfonique, les chaînes polyoxyde d'alkylène (POE, POP), les substituants cationiques (sels d'ammonium quaternaires) avec IV qui représente un groupe alkyle ou aryle. L'objet de l'invention va maintenant être décrit en détail. L'invention a pour objet des polymères solubles en solution aqueuse et présentant une fluorescence élevée. Les polymères selon l'invention présentent un facteur d'amplification de la fluorescence rapporté à la masse du polymère supérieur ou égal à 0,35 par Kg/mol de polymère, de préférence supérieur à 0,45 par Kg/mol de polymère. Par conséquent, même pour des polymères assez petits, il est possible dans le cadre de l'invention d'obtenir un facteur d'amplification de la fluorescence assez élevé. Les polymères selon l'invention présentent un grand nombre de fluorophores, à savoir au moins 5, de préférence au moins 10 fluorophores, repartis sur la chaîne polymère. La répartition des fluorophores le long de la chaîne est réalisée grâce à une fonctionnalisation statistique du polymère et/ou à une copolymérisation statistique comme expliqué plus loin. Compte tenu de cette répartition, 1' extinction de fluorescence des fluorophores est faible. Les fluorophores utilisés dans le cadre de l'invention présentent un certain nombre de caractéristiques permettant d'obtenir les propriétés souhaitées. Les fluorophores utilisés sont hydrosolubles, présentent, lorsqu'ils sont libres en solution aqueuse, un coefficient d'extinction molaire supérieur à 1000 M-'.cm i, de préférence supérieur à 5000 M-1.cm i, et un rendement quantique supérieur à 0,3, de préférence supérieur à 0, 6. De plus, les fluorophores sélectionnés forment peu d'auto-associations en solution aqueuse, de façon à encore diminuer l'extinction de fluorescence. Préférentiellement, les fluorophores sélectionnés ne formeront pas d'auto-association dans l'eau, jusqu'à une concentration de 10-4 mol/1, de préférence jusqu'à une concentration de 10-3 mol/1. La solubilité en phase aqueuse du polymère selon l'invention résulte, d'une part, du caractère hydrosoluble des fluorophores et, d'autre part, de la présence dans la chaîne polymère d'entités monomères hydrophiles. La solubilité du polymère pourra bien entendu être liée au pH ou à la force ionique de la solution aqueuse dans laquelle il est dissous. En particulier, les polymères selon l'invention seront solubles dans une solution aqueuse présentant un pH compris entre 5 et 10. En particulier, les fluorophores utilisés sont porteurs de groupes polaires ou ionisables, qui les rendent hydrosolubles. Des fluorophores ionisables en solution aqueuse seront de préférence utilisés. Les polymères non-ioniques, dont la solubilité ne dépend pas du pH, constituent une variante préférée, pour certaines applications. Par ailleurs, de façon avantageuse, la partie fluorescente des fluorophores est éloignée du polymère par un bras espaceur comportant au moins un enchaînement -CH2-CH2-. C'est-à-dire que l'entité émettrice de fluorescence est séparée de la chaîne polymère par au moins deux atomes successifs. De façon préférée, le polymère présente moins de 2,4 Kg/mol, de préférence moins de 2 Kg/mol de polymère par fluorophore. Selon un de ses aspects préférés, l'invention a pour objet un polymère soluble en phase aqueuse, porteur d'au moins 5 fluorophores, tels que précédemment définis, lesdits fluorophores présentant un rendement quantique de fluorescence relatif important, c'est-à-dire supérieur ou égal à 0,7, de préférence au moins égal à 0,75. De façon avantageuse, les fluorophores utilisés seront insensibles aux variations de pH, et/ou thermostables et/ou photostables. On peut néanmoins envisager d'utiliser des fluorophores sensibles à l'environnement tel que le pH ou la température, ou capables de faire du transfert d'énergie de fluorescence. De façon préférée, les fluorophores utilisés sont tous identiques. A titre d'exemples de fluorophores pouvant être utilisés dans le cadre de l'invention, on peut citer les fluorophores suivants: - le N-(5aminopentyl)-4-amino-3,6-disulfo-1,8-naphthalimide, dont le sel de dipotassium de formule: $, NH est commercialisé sous le nom de Lucifer Yellow par Molecular Probes; - le 3,6-diamino-9-(2-méthoxycarbonyl)phényle, dont le chlorhydrate de 25 formule: est commercialisé sous le nom de Rhodamine 123; le 9-(2,4disulfophényl)-2,3,6,7,12,13,16,17-octahydro-1H,5H,11H,15H xanthéno[2,3,4ij:5,6,7-i' j' ]diquinolizin- 18- ium, commercialisé sous le nome de Sulforhodamine 101; le 9- (2,4- disulfophényl) -3,6-bis(éthylamino)-2,7diméthyl-xanthylium, dont le sel de sodium de formule: est commercialisé sous le nom de Sulforhodamine G; - le 3,6-bis(diéthylamino)-9-(2,4disulfophényl)-xanthylium de formule: commercialisé sous le nom de Sulforhodamine B, ainsi que leurs dérivés. En particulier, le N- (5- aminopentyl) -4- amino -3,6- disulfo- 1,8 naphthalimide est un fluorophore particulièrement préféré. Ce fluorophore est particulièrement avantageux, car en plus d'être hydrosoluble, non sensible au pH, de ne pas former d'auto-association jusqu'à une concentration de 10-3 mol/L en solution aqueuse, de présenter une fonction NH2 aliphatique assurant sa liaison covalente avec le polymère, il présente d'une part un bras espaceur -(CH2)5- qui permet d'éloigner la partie fluorescente du squelette polymère et d'autre part une longueur d'onde d'émission de 531 nm, proche de la longueur d'onde d'émission de la fluorescéine, ce qui implique que les filtres habituellement utilisés pour la fluorescéine vont être directement utilisables. De préférence, les fluorophores sont tous identiques et sont le N-(5-15 aminopentyl)-4-amino-3,6-disulfo-1,8-naphthalimide. En utilisant de tels fluorophores, l'introduction d'un nombre croissant de ces fluorophores le long de la chaîne polymère, conduit à une augmentation quasi linéaire de l'intensité de fluorescence. Il est également possible d'introduire différents fluorophores, en proportions définies, le polymère pouvant alors servir, par exemple, à établir un code d'identification de la chaîne polymère. Par exemple, l'immobilisation covalente de 2 ou 3 fluorophores différents tels que définis précédemment, sur la même chaîne polymère et en proportions définies, pourra servir à établir un code d'identification de la chaîne polymère dans la mesure où les fluorophores choisis ont une longueur d'onde maximale d'émission suffisamment distincte. Afin de limiter les phénomènes d'auto-associations et d'inter-associations, on veillera à choisir des fluorophores porteur de groupes ionisés du même signe (cationiques ou anioniques). Ainsi, par exemple, en couplant 3 fluorophores différents sur le polymère et en faisant varier la proportion de chacun de n" = 1 à 5 (n" entier), il existera 125 combinaisons possibles de marquage des chaînes polymères. De façon avantageuse, les polymères selon l'invention sont obtenus en utilisant une technique de polymérisation radicalaire contrôlée (K. Matyjazewski, Controlled Radical Polymerization, American Chemical Society Symposium Series, 768, Washington DC, USA, 2000) ou ionique vivante (G. Odian, Principles of Polymerization, Third edition, Wiley- Interscience Publication, 1991). Ces techniques de polymérisation permettent de contrôler l'architecture des polymères obtenus et donc de synthétiser des polymères aux caractéristiques macromoléculaires (masse molaire, indice de polymolécularité et architecture des chaînes) bien définies. En particulier, ces techniques permettent de contrôler la masse molaire des polymères obtenus, masse molaire qui est tout à fait prédictible, et d'obtenir des polymères très homogènes en taille et, en particulier, qui présentent un indice de polymolécularité inférieur à 1,5, et de préférence inférieur à 1,3. De plus, le nombre de fluorophores par chaîne est également très homogène. Par ailleurs, ces différentes techniques de polymérisation contrôlée permettent d'obtenir aux extrémités du polymère au moins une fonction réactive, qui va pouvoir servir d'entité de fixation pour un composé d'intérêt, et notamment, un ligand biologique. Dans ce cas, les polymères selon l'invention constituent des outils biologiques, particulièrement intéressants. Dans le cadre de l'invention, les techniques de polymérisation radicalaire 25 contrôlée, plus faciles à mettre en oeuvre, sont préférées. La polymérisation radicalaire comporte trois étapes: l'amorçage (création de radicaux libres et réaction avec la première unité de monomère), la propagation (additions successives d'unités monomères sur la chaîne en croissance ((macro)radical)) et la terminaison (arrêt de la chaîne) par couplage ou dismutation entre deux chaînes en croissance ou par transfert d'un proton sur une chaîne en croissance. Les réactions de terminaison et de transfert affectant les (macro)radicaux sont responsables de la perte de contrôle de la polymérisation (chaînes polymères de masse non prévisible, polymolécularité élevée). Pour obtenir une polymérisation radicalaire contrôlée, il convient donc de réduire fortement ces réactions de terminaison et de transfert irréversible. Le principe général consiste à désactiver de façon réversible les centres actifs en formant des espèces dormantes (non réactives), afin d'avoir une très faible concentration en (macro)radicaux dans le milieu tout au long de la polymérisation (K. Matyjazewski, Controlled Radical Polymerization, American Chemical Society Symposium Series, 768, Washington DC, USA, 2000) . Deux types de désactivation des (macro)radicaux permettant d'obtenir une polymérisation radicalaire contrôlée ont été mis au point récemment: - par terminaison réversible, soit par couplage avec un nitroxyde (radical stable) généralement appelé procédé SFRP (Stable Free Radical Polymerisation) (Solomon D. et al., 1985, Chem. Abstr., 1985,102, 221-335) , soit par couplage avec un atome d'halogène généralement appelé procédé ATRP (Atom Transfer Radical Polymerisation) (Wang J. S. et al., 1995, Macromol., 28,7901) et - par transfert réversible de chaîne, procédé utilisant un agent de transfert 15 incluant, le plus souvent, le motif suivant: C S ... Il S Un exemple d'un tel procédé de polymérisation radicalaire contrôlée utilisant un agent de transfert réversible de chaîne organosoufré est le procédé RAFT (Reversible Addition Fragmentation chain Transfer) tel que notamment décrit dans la demande de brevet WO98/01478 où l'agent de transfert de chaîne est un dithioester. La demande de brevet WO99/31144, quant à elle, décrit le procédé de polymérisation RAFT dans lequel l'agent de transfert est choisi parmi les xanthates et les dithiocarbamates. Depuis, d'autres agents de transfert organosoufrés ont été décrits: soit des xanthates, comme décrit notamment dans les demandes de brevet WO00/75207, WO01/42312 et FR 2809 829, soit des dithiocarbamates, comme décrit notamment dans les demandes de brevet WO99/35177, FR 2 809 829, soit des trithiocarbonates, comme décrit notamment dans les demandes de brevet W098/58974, WO01/60792, WO02/070571, WO 03/066685, soit des thioétherthiones, comme décrit notamment dans la demande de brevet FR 2 794 464, soit des dithiocarbazates, comme décrit notamment dans les brevets US 6,380,335 et US 6,395,850, soit des dithiophosphoroesters comme décrit notamment dans la demande de brevet FR 2 812 293, soit des tétrathiophosphates comme décrit notamment dans la demande de brevet FR 2 816 311. Dans le cadre de l'invention, la technique RAFT sera, de préférence, utilisée, car elle est notamment applicable à n'importe quelle famille de monomères, contrairement au procédé SFRP, non applicable à ce jour à la famille des méthacrylates, et à l'ATRP difficilement applicable aux dérivés d'acrylamide. De plus, la technique RAFT ne fait pas intervenir de métaux, contrairement au procédé ATRP pour lequel les résidus métalliques, même en quantité très faible, peuvent être une contre- indication pour les applications biomédicales. Enfin, la technique RAFT permet d'introduire un composé d'intérêt, notamment, via une entité de fixation, Dit en début (extrémité cc), soit en fin de chaîne (extrémité co) du polymère, contrairement au procédé ATRP qui ne permet une introduction aisée qu'en début de chaîne via la molécule amorceur de polymérisation. Le procédé de polymérisation RAFT avec un agent de transfert réversible de chaîne est réalisé, selon des techniques classiques bien connues de l'homme de l'art, à partir de monomères identiques ou différents, en présence d'une source de radicaux amorceurs. Les réactions de polymérisation radicalaire contrôlée sont, généralement, réalisées à partir de un ou plusieurs monomères éthyléniquement insaturés. On pourra se référer pour les conditions de polymérisation aux documents de l'art antérieur précédemment cités et à WO 2004/055060 notamment. Dans la n-esure où les monomères utilisés sont identiques, la polymérisation conduit à des polymères de type homopolymère. Dans le cas contraire, elle conduit à des polymères de type copolymère, de façon à obtenir, au final, dans le cadre de l'invention, soit des copolymères statistiques, par exemple alternés, soit des copolymères à blocs, au moins un des blocs étant un copolymère statistique. On utilisera, avantageusement, pour les applications en biochimie, thérapeutique et diagnostic notamment, des polymères biocompatibles, c'est-à-dire qui ne perturbent pas les propriétés biologiques du ligand biologique fixé sur le polymère, en terme de reconnaissance moléculaire. La polymérisation peut être réalisée selon différentes voies. La première voie consiste à utiliser un monomère B1 fonctionnalisé porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée. On effectue alors, soit une réaction d'homopolymérisation de ce monomère B1, soit une réaction de copolymérisation de B1 avec un monomère B2 hydrophile à l'exception des monomères saccharidiques hydrophiles non protégés, ou bien avec un monomère B2' qui, après traitement, peut conduire à une entité hydrophile. Par monomère hydrophile, on entend un monomère dont le polymère présente en phase aqueuse une structure déployée, correspondant à un coefficient de Mark-Houwink Sakurada supérieur ou égal à 0,5. Dans le cas du procédé RAFT, le monomère hydrophile est, par exemple, choisi parmi les dérivés hydrophiles d' acrylate, de méthacrylate, d'acrylamide, de méthacrylamide et de N-vinylpyrrolidone, les monomères saccharidiques non protégés et leurs dérivés. La N- vinylpyrrolidone (NVP), le N,N-diméthylacrylamide et la N- acryloylmorpholine (NAM) sont préférés dans le cadre de l'invention. Par monomère hydrophobe, on entend un monomère non hydrophile. A titre d'exemple de monomère hydrophobe, on peut citer les dérivés hydrophobes de méthacrylate, d' acrylate, d' acrylamide, de méthacrylamide, du styrène, avantageusement 1' acrylate de n-butyle, 1' acrylate de t-butyle, le t-butylacrylamide et le styrène. En tant que monomère qui, après traitement, peut conduire à une entité hydrophile, on peut choisir un monomère sous forme protégée, tel que les monomères saccharidiques protégés, par exemple le 1,2:3,4-di-Oisopropylidène-6- O-(2-vinyloxyethyl)-a-D-galactopyranose polymérisable par polymérisation cationique vivante, le 6-O-acryloyl-1,2:3,4-di-Oisopropylidène-a-D- galactopyranose, le 6-O-acryloylamino-6-désoxy-1,2:3, 4-di O-isopropylidène-a-D-galactopyranose, le 6-0-(8-acryloylamino-3,6dioxaoctyl)-1,2:3,4-di-O-isopropylidène-a-D-galactopyranose, ces trois monomères étant polymérisables par polymérisation radicalaire contrôlée, notamment par le procédé RAFT. Après polymérisation, un traitement approprié permettra de déprotéger les entités saccharidiques, de manière à obtenir des entités hydrophiles. Un monomère hydrophobe porteur d'une fonction réactive, peut, également, après désactivation de la fonction réactive ou après couplage de cette dernière avec une molécule hydrosoluble, conduire à une entité hydrophile. A titre d'exemple de tels monomères, on peut citer le Nacryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque et plus particulièrement, le N- acryloxysuccinimide (NAS). Le monomère B1, qui est porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée, peut être un monomère hydrophile ou hydrophobe. Bien entendu, ce monomère doit être polymérisable avec la technique de polymérisation sélectionnée. La fonction réactive X1 doit être susceptible de réagir avec une fonction réactive X2 portée par le fluorophore ou le bras espaceur que l'on souhaite greffer. La fonction réactive X1 est choisie, à titre d'exemple, parmi les groupements amine, hydrazine, hydrazone, azide, isocyanate, isothiocyanate, alcoxyamine, aldéhyde (éventuellement un aldéhyde masqué, comme dans le cas des monomères saccharidiques), époxy, nitrile, maléïmide, halogénoalkyle, hydroxy, thiol, anhydride, acide carboxylique activé sous forme d'ester de N-hydroxysuccinimide, de pentachlorophényle, de trichlorophényle, de p-nitrophényle, de carboxyphényle. De préférence, la fonction réactive X1 est choisie parmi les fonctions amine, aldéhyde, anhydride, ou acide carboxylique activé sous forme d'ester de Nhydroxysuccinimide. Lorsque le fluorophore est porteur d'une fonction amine primaire, la fonction X1 sera avantageusement de type ester activé, aldéhyde, ou anhydride. L'utilisation d'un monomère porteur d'une fonction réactive X1, vis-à-vis d'une fonction X2 portée par le fluorophore (ou le bras espaceur) que l'on souhaite fixer, permet d'effectuer un couplagedirect du fluorophore (ou du bras espaceur) sur les fonctions réactives du polymère, en obtenant une liaison covalente stable. En tant que monomère B1 hydrophile porteur d'une fonction réactive X1, on peut citer le méthacrylate de 2-hydroxyéthyle, le méthacrylate de 2aminoéthyle, 1'acrylate de 2- hydroxyéthyle, 1'acrylate de 2-aminoéthyle et les monomères saccharidiques, tels que le 6-0-(2-vinyloxyéthyl)-a-Dgalactopyranose polymérisable par polymérisation cationique vivante, le 60- acryloyl-a-D-galactopyranose, le 6- 0-acryloylamino-6-désoxy-a-Dgalactopyranose, le 6-0- (8-aciyloylamino -3,6-dioxaoctyl)- - Dgalactopyranose, ces trois monomères étant polymérisables par polymérisation radicalaire contrôlée, notamment par le procédé RAFT. En tant que monomère B1 hydrophobe porteur d'une fonction réactive X1, on peut citer le N- acryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque et, de préférence, le N-acryloxysuccinimide (NAS). Il est également possible que le monomère B1 soit porteur d'une fonction réactive X1 sous forme protégée. C'est, par exemple, le cas des monomères saccharidiques protégés tels que définis ci-dessus. Bien entendu, les monomères B1, B2, B2' sont choisis en fonction de la technique de polymérisation sélectionnée. Après polymérisation, une réaction de couplage du fluorophore sur les fonctions réactives X1 est réalisée, de façon à immobiliser le nombre de fluorophores désirés sur le polymère. Dans le cas où les fonctions réactives X1 se trouvent sous forme protégée, la réaction de couplage sera précédée d'une réaction de déprotection appropriée. De façon avantageuse, le couplage des fluorophores est réalisé de façon à ce que la partie fluorescente des fluorophores soit éloignée du polymère par un bras espaceur comportant au moins un enchaînement -CH2-CH2-. Aussi, dans ce cas, soit le fluorophore comprend un bras espaceur et est porteur d'une fonction X2 et est donc directement couplé avec la fonction réactive X1, soit le fluorophore utilisé ne comporte pas de bras espaceur ou n'est pas porteur de la fonction réactive X2, dans ce cas, le fluorophore sera modifié pour inclure le bras espaceur, si nécessaire, et la fonction réactive X2. Il peut également être prévu d'effectuer le couplage en deux étapes, une première consistant à coupler un bras espaceur sur la fonction réactive X1, la deuxième consistant à coupler le fluorophore sur le bras espaceur. La fonction réactive X2, située à l'extrémité du fluorophore ou du bras espaceur, susceptible de réagir avec la fonction X1 est, de préférence, une fonction amine primaire ou secondaire. Dans ce cas, par réaction sur une fonction X1 de type ester activé, on obtient une fonction amide particulièrement stable, de sorte que les polymères fluorescents obtenus seront chimiquement stables. Bien entendu, le monomère B2' est, de préférence, porteur d'une fonction réactives X1' sous forme protégée pour éviter, après polymérisation, des réactions compétitives de couplage du fluorophore sur les monomères B1 et B2'. Dans le cas où B2' est porteur de fonctions réactives X1' sous forme protégée, la réaction de déprotection de ces fonctions est réalisée seulement après couplage des fonctions X2 portées par le fluorophore ou le bras espaceur, sur les fonctions X1 présentes sur le polymère (provenant du monomère B l) et masquage des fonctions X 1 résiduelles. La répartition des fluorophores le long de la chaîne polymère est obtenue d'une part, par le fait que le couplage se fait de façon statistique sur les fonctions réactives X1 présentes sur le polymère et d'autre part, dans la cas où une copolymérisation est mise en oeuvre, par l'obtention d'un copolymère statistique. Après couplage du nombre de fluorophores désiré sur le polymère, qui viennent donc, dans tous les cas, se répartir le long du polymère, il reste le plus souvent des fonctions réactives sur le polymère. Dans certains cas, il est nécessaire d'effectuer un traitement supplémentaire pour rendre hydrophiles les entités non porteuses du fluorophore. C'est, en particulier, le cas quand une homopolymérisation avec un monomère B1 hydrophobe a été réalisée. Selon une variante préférée du procédé de l'invention, on réalise alors une réaction de masquage des fonctions réactives résiduelles, soit par désactivation (par exemple une hydrolyse), soit par couplage avec un composé hydrosoluble non fluorescent, ce qui permet, d'une part, d'éliminer les fonctions réactives résiduelles le long de la chaîne polymère et, d'autre part, d'apporter une hydrophilie supplémentaire au polymère. Dans le cas où la fonction réactive est un anhydride ou un acide carboxylique activé sous forme d'ester de Nhydroxysuccinimide, par exemple, on pourra utiliser un excès d'une amine hydrosoluble, telle que l' aminoéthylmorpholine. La polymérisation sera, de préférence, réalisée entre un monomère porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée, et un monomère hydrophile. En particulier, entre: - un monomère B1 hydrophobe porteur d'une fonction réactive, tel que le N-acryloxysuccinimide, le Nméthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque et de préférence, le Nacryloxysuccinimide (NAS), - et un monomère hydrophile, tel que les dérivés hydrophiles d'acrylate, de méthacrylate, d' acrylamide, de méthacrylamide et de N vinylpyrrolidone, et de préférence la Nvinylpyrrolidone (NVP), le N,N-diméthylacrylamide et la Nacryloylmorpholine (NAM). ce qui ne nécessite aucune réaction de déprotection des fonctions réactives X1 et permet d'obtenir un polymère présentant une hydrophilie satisfaisante, après traitement des éventuelles fonctions réactives X1 restantes après couplage des fluorophores. Une autre variante préférée consiste à réaliser une réaction d'homopolymérisation d'un sucre protégé, par exemple le 1,2:3,4-di-Oisopropylidène-6-0-(2-vinyloxyethyl)-a-D-galactopyranose polymérisable par polymérisation cationique vivante, le 6-O- acryloyl-1,2:3,4-di- Oisopropylidène-cx-D-galactopyranose, le 6-O-acryloylamino-6-désoxy-1,2:3, 4-di O-isopropylidène-a-D-galactopyrano se, le 6-0-(8-acryloylamino-3,6dioxaoctyl)-1,2:3, 4-di-O-isopropylidène-a-D-galactopyranose, ces trois monomères étant polymérisables par polymérisation radicalaire contrôlée, notamment par le procédé RAFT. Après polymérisation, les entités saccharidiques seront déprotégées pour permettre le couplage des fluorophores. Une seconde voie qui peut également être envisagée, bien qu'elle ne soit pas préférée, est d'effectuer le couplage du fluorophore (ou du bras espaceur) sur le monomère B1 porteur de la fonction X1 et de réaliser la polymérisation avec ce nouveau monomère porteur du fluorophore. Cette voie consiste donc à utiliser un monomère B3 déjà porteur d'un fluorophore. On effectue alors une réaction de copolymérisation de ce monomère B3 avec un autre monomère B4 hydrophile, ou bien un monomère B4' qui, après traitement, peut conduire à une entité hydrophile. Le monomère B3 est, soit commercial, soit obtenu à partir d'un monomère B1 décrit ci dessus, par couplage, comme décrit précédemment, d'une fonction X2 portée par le fluorophore ou le bras espaceur, sur la fonction réactive X1 du monomère B1. Dans le cas où le monomère B1 est porteur d'une fonction réactive protégée, celle-ci sera bien entendu préalablement déprotégée. De préférence, les monomères B4 et Bt' correspondent, respectivement, aux monomères hydrophiles (B2), et aux monomères qui, après traitement, peuvent conduire à une entité hydrophile (B2'), précédemment cités. On utilisera de préférence un monomère B4 hydrophile. Dans le cas où un monomère B4' est utilisé, un traitement visant à rendre 25 hydrophile l'entité résultante, comme décrit précédemment, sera mis en oeuvre après polymérisation. Dans tous les cas, il faudra ajuster la quantité de monomère fonctionnalisé B1 (réactif) ou B3 (fluorescent) pour disposer, au final, de suffisamment de fluorophores sur le polymère (au moins 5, de préférence au moins 10). Dans le cas où une réaction de copolymérisation est mise en oeuvre, l'homme du métier choisira le type de fonctions polymérisables des deux monomères mis en jeu, de telle sorte que la copolymérisation s'effectue de façon statistique, et qu'ainsi les fluorophores ou les fonctions réactives X1 soient réparties sur le polymère. Dans le cas où la polymérisation a été réalisée par le procédé RAFT, avec un agent de transfert du type R"-S-C(S)-Z", le polymère présente à son extrémité co, la fonction -S-C(S)-Z" terminale et à son extrémité a le groupe R". L'étape de couplage d'un fluorophore aminé, comportant éventuellement un bras espaceur, ou ultérieurement l'étape de masquage avec un dérivé aminé, va entraîner la transformation de la fonction -SC(S)-Z" en une fonction thiol (-SH), qui va éventuellement permettre le greffage ultérieur d'un composé d'intérêt porteur d'une fonction apte à réagir avec cette fonction thiol, par exemple une fonction maléïmide ou iodoacétamide. Selon une autre variante du procédé de l'invention, il est également possible de réaliser une polymérisation RAFT avec un agent de transfert réversible de chaîne, déjà porteur d'un composé d'intérêt. En effet, lorsque l'agent de transfert répond à la formule R"-S-C(S)-Z", le procédé RAFT permet la synthèse de chaînes polymères de longueur contrôlée, et possédant à chacune de leurs extrémités, les groupements -R" et S-C(S)Z" provenant de l'agent de transfert de chaîne utilisé. On peut donc envisager de se servir de cet agent de transfert pour introduire sélectivement et quantitativement des composés d'intérêt à l'extrémité a de chaque chaîne polymère. En particulier, on pourra utiliser des agents de transfert déjà porteurs d'un composé d'intérêt, tels que des agents de transfert réversible de chaîne (II) pour polymérisation RAFT, appartenant à la famille des dithioesters, des xanthates ou des trithiocarbonates, qui comprennent un groupement de formule: C S R' I I S dans lequel R' comprend au moins une fonction amide-L, avec L choisi parmi les ligands biologiques, les mono- ou disaccharides, les lipides, les colorants, les molécules fluorescentes, les chaînes polymères et les supports solides. En particulier, la fonction amide-L correspond à une fonction: L C N X O avec X qui représente un atome d'hydrogène, un groupe éventuellement substitué choisi parmi les suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, 30 hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, ou bien une liaison covalente, de façon à former un cycle aminé avec le composé L, et L qui est tel que défini ci-dessus. De façon avantageuse, le groupe R' des agents de transfert (II) est choisi parmi les groupes suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, hétéroaralkyle, alkylhétéroaryle, cycloalkylalkyle, hétérocycloalkylalkyle, alkylcycloalkyle, alkylhétérocycloalkyle, ou une chaîne polymère, et ledit groupe étant, d'une part, porteur d'au moins une fonction: L C N X O avec X et L tels que précédemment définis et, d'autre part, éventuellement substitué par un ou plusieurs autres substituants. Les agents de transfert de chaîne réversible organosoufré décrits dans l'art antérieur possèdent le motif suivant: Z C S ... I I S Le groupe Z des agents de transfert (II) est avantageusement choisi pour que l'agent de transfert appartienne à la famille des dithioesters (Z comportant un atome de H, C, C S- I P, ou halogène lié au thiocarbonyle du groupe S), comme décrit dans la demande de brevet W098/01478, des xanthates, également nommés dithiocarbonates C S- II (Z comportant un atome d'oxygène lié au thiocarbonyle du groupe S), comme décrit notamment dans les demandes de brevet W098/58974, W099/31144, W000/75207 (dans lesquels le groupe Z est substitué par au moins un atome de chlore, brome ou fluor), WO01/42312 et FR 2 809 829, ou des trithiocarbonates (Z C S- II comportant un atome de soufre lié au thiocarbonyle du groupe S) également nommés trithioesters, comme décrit notamment dans les demandes de brevet W098/58974, W001/60792, W002/07057, WO 03/066685. De façon avantageuse, on utilisera les composés de formule (IIa), (IIb) ou (IIc) : Z C S R' (IIa) S Z' ( C S R p S (Z C S PR' (Ilc) S dans laquelle: - Z représente un atome d'hydrogène, un atome de chlore, COOH, -CN, ou un groupe choisi parmi les groupes suivants, éventuellement substitués: alkyle, cycloalkyle, aryle, hétérocycloalkyle, hétéroaryle, ORa, -SRa, -COORa, -OZCRa, - CONRaRb, -CONHRa, -P(0)ORaRb, -P(0)RaRb, -OCRcRd-P(0)(ORa)(ORb), - S-CReRf-COOH, -O-CReRf-COOH ou une chaîne polymère, - Z' est un dérivé d'un alkyle éventuellement substitué, d'un aryle éventuellement substitué ou d'une chaîne polymère, sa liaison avec les groupes carbonylthio, se faisant par un carbone aliphatique, un carbone aromatique ou un atome de soufre, ou d'oxygène, - R' est choisi parmi les groupes suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, hétéroaralkyle, alkylhétéroaryle, cycloalkylalkyle, hétérocycloalkylalkyle, alkylcycloalkyle, alkylhétérocycloalkyle, ou une chaîne polymère, et ledit groupe étant, d'une part, porteur d'au moins une fonction: L C N X O et, d'autre part, éventuellement substitué par un ou plusieurs autres substituants, - X représente un atome d'hydrogène, un groupe éventuellement substitué choisi parmi les suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, ou bien une liaison covalente, de façon à former un cycle aminé avec le composé L, - p est un entier supérieur à 1, - Ra et Rb représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un groupe éventuellement substitué choisi parmi les suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, - Rc et Rd représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou d'halogène, un groupe -NO2, -SO3H, SO3Rg, -NCO, -CN, -Rg, - OH, -ORg, -SH, -SRg, -NH2, -NHRg, -NRgRh, -000H, -COORg, -O2CRg, -CONH2, -CONHRg, -CONRgRh, -NHCORg, -NRgCORh, CmF2m+i avec m compris entre 1 et 20, de préférence égal à 1, - Re et Rf représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle ou aryle éventuellement substitué, - Rg et Rh représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un groupe 10 éventuellement substitué choisi parmi les suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, - L est tel que défini pour (II). En fait, R' représente un groupe L A ( C N) Il X n O dans lequel - A réprésente un groupe, éventuellement substitué, choisi parmi les suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, hétéroaralkyle, alkylhétéroaryle, cycloalkylalkyle, hétérocycloalkylalkyle, alkylcycloalkyle, alkylhétérocycloalkyle, ou une chaîne polymère, - L et X sont tels que définis précédemment, et - n est un entier supérieur ou égal à 1, de préférence égal à 1. Les composés de formule (IIa) et, en particulier, ceux dans lesquels R' est porteur d'une seule fonction: L C N X 0 sont préférés. Par ailleurs, R' présente avantageusement, dans les composés de formule (II), (IIa), (IIb) et (IIc), un atome de carbone secondaire ou tertiaire, situé en alpha de l'atome de soufre. De façon avantageuse, le groupe A du groupe R' est une chaîne aliphatique, ramifiée, éventuellement substituée, présentant un atome de carbone secondaire ou tertiaire, en alpha de l'atome de soufre. De façon avantageuse, Z représente un groupe choisi parmi: alkyle, cycloalkyle, aryle, -ORa, et SRa, lesdits groupes étant éventuellement substitués et Ra étant tel que défini précédemment pour (lia), (IIb) et (IIc). Ces agents de transfert (II), (lia), (IIb) et (IIc) sont obtenus par couplage d'agents de transfert (I) correspondants porteurs d'au moins une fonction ester activé, avec un composé aminé d'intérêt. Les agents de transfert réversible de chaîne (I), sont de type dithioester, xanthate, ou trithiocarbonate, pour polymérisation RAFT, modifiés pour comporter au moins une fonction ester activé qui est beaucoup plus réactive que la fonction C(=S)S-, vis-à-vis d'un composé d'intérêt porteur d'une fonction nucléophile, par exemple une fonction amine. Un tel agent de transfert (I) est porteur d'une fonction ester activé, -C(0)OY, dans laquelle Y est avantageusement choisi, de façon à ce que, lorsque l'agent de transfert est mis en présence d'une fonction nucléophile de type amine, la fonction ester activé réagisse avec cette dernière, préférentiellement à la fonction -C(=S)S-. La notion d'ester activé est bien connue de l'homme de l'art. Une fonction ester activé peut être définie comme un ester dont la partie alcool est un bon groupe partant vis-à-vis de réactions de substitutions nucléophiles, c'est-à-dire un groupe partant qui permet d'effectuer une réaction de substitution nucléophile entre 0 et 100 C, préférentiellement entre 0 et 60 C, plus préférentiellement entre 0 et 40 C. De tels esters activés ont, par exemple, été décrits par W. Anderson et al, dans American Society, 1964, 46, 1839-1842 et par R. Arshady dans Advances in Polymer Science, 1994, 111, 1-41. Par conséquent, l'utilisation d'un tel agent de transfert autorise le couplage en une seule étape de composés d'intérêt porteurs d'une fonction réactive vis-à-vis de cet ester activé, sans que la fonction C(=S)S- ne soit affectée. La fonctionnalisation peut donc être effectuée, en faisant réagir un composé d'intérêt comportant une fonction nucléophile, et en particulier une fonction amine primaire, secondaire, ou encore une fonction ammonium qui permettra de générer in situ une fonction amine réactive, sur la fonction ester activé. Cette réaction de couplage est facile, rapide, quantitative et en une seule étape, ce qui permet d'obtenir une liaison avec le composé d'intérêt, avec un rendement très élevé (proche de 100%). De plus, le couplage fonction amine/ester activé conduit à une liaison de type amide, ce qui en fait un composé très stable par rapport, notamment à une fonction de type ester plus fragile et hydrolysable, obtenue dans l'art antérieur (Stenzel et al. dans J. Mater. Chem. 2003, 13, 2090 et Chen et al. dans Chem. Comm. 2002, 2276- 2277). De tels agents de transfert (I) appartiennent à la famille des dithioesters, des xanthates, ou des trithiocarbonates et comprennent un groupe de formule: C S R I I S dans lequel R est un groupe qui comprend une fonction ester activé. En particulier, ce groupe R comporte au moins une fonction ester activé C(0) OY, -OY étant un groupe partant, Y étant, par exemple, choisi parmi les groupes suivants: N-succinimidyle, 1-benzotriazole, pentachlophényle, 2,4, 5-trichlorophényle, 4-nitrophényle, 3-pyridyle, 2-méthoxycarbonylphényle, N-phtalimidyle, et 2-carboxyphényle. De façon préférée, Y est le groupe Nsuccinimidyle: O -N >/' O A part cette particularité, tout type de groupement R décrit dans l'art antérieur peut être utilisé ; il sera choisi en fonction du groupe R' que l'on souhaite obtenir. En particulier, ces agents de transfert de chaîne (I) comprennent un groupe R qui est choisi parmi les groupes suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, hétéroaralkyle, alkylhétéroaryle, cycloalkyla lkyle, hétérocycloalkylalkyle, alkylcycloalkyle, alkylhétérocycloalkyle, ou une chaîne polymère, et ledit groupe étant porteur d'au moins une fonction ester activé telle que précédemment définie et étant éventuellement substitué par un ou plusieurs autres substituants. Quand l'ester activé est C(0)-OY, R représente un groupe A-(-C(0)-OY)n dans lequel: - A représente un groupe, éventuellement substitué, choisi parmi les suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, hétéroaralkyle, alkylhétéroaryle, cycloalkylalkyle, hétérocycloalkylalkyle, alkylcycloalkyle, alkylhétérocycloalkyle, ou une chaîne polymère, - Y est tel que défini ci-dessus et, - n est un entier supérieur ou égal à 1, de préférence égal à 1. En particulier, on utilisera des agents de transfert de formule (Ia), (Ib) ou (Ic) Z C S R (Ia) S Z, (_ë S R)p (lb) S (Z C S )PR (Ic) S dans laquelle: - Z représente un atome d'hydrogène, un atome de chlore, COOH, -CN, ou un groupe choisi parmi les groupes suivants, éventuellement substitués: alkyle, cycloalkyle, aryle, hétérocycloalkyle, hétéroaryle, ORa, -SRa, -COORa, -02CRa, - CONRaRb, -CONHRa, -P(0)ORaRb, -P(0)RaRb, -OCRcRd-P(0)(ORa)(ORb), -O-CReRf-000H, -S-CReRf-COOH ou une chaîne polymère, - Z' est un dérivé d'un alkyle éventuellement substitué, d'un aryle éventuellement substitué ou d'une chaîne polymère, sa liaison avec les groupes carbonylthio, se faisant par un carbone aliphatique, un carbone aromatique ou un atome de soufre, ou d'oxygène, - R est choisi parmi les groupes suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, hétéroaralkyle, alkylhétéroaryle, cycloalkylalkyle, hétérocycloalkylalkyle, alkylcycloalkyle, alkylhétérocycloalkyle, ou une chaîne polymère, et ledit groupe étant porteur d'au moins une fonction ester activé telle que précédemment définie et étant éventuellement substitué par un ou plusieurs autres substituants, - p est un entier supérieur à 1, - Ra et Rb représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un groupe éventuellement substitué choisi parmi les suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle, - Rc et Rd représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou d'halogène, un groupe -NO2, -SO3H, S03Rg, -NCO, -CN, -Rg, - OH, -ORg, -SH, -SRg, -NH2, -NHRg, -NRgRh, -000H, -COORg, -O2CRg, - CONH2, -CONHRg, -CONRgRh, -NHCORg, -NRgCORh, CmF2m+1 avec m compris entre 1 et 20, de préférence égal à 1, -Re et Rf représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle ou aryle éventuellement substitué, - Rg et Rh représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un groupe éventuellement substitué choisi parmi les suivants: alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aralkyle, alkylaryle. Les agents de transfert de formule (Ia) sont préférés, et en particulier ceux dans lesquels R est substitué par une seule fonction ester activé. De façon avantageuse, le groupe R des agents de transfert (I), (Ia), (lb) et (Ic) tels que définis ci-dessus présentent un atome de carbone secondaire ou tertiaire, situé en alpha de l'atome de soufre. En particulier, le groupe A du groupe R est une chaîne aliphatique, ramifiée, présentant un atome de carbone secondaire ou tertiaire, en alpha de l'atome de soufre. De façon avantageuse, Z est choisi parmi les groupes: alkyle, cycloalkyle, aryle, -ORa, et SRa, lesdits groupes étant éventuellement substitués et Ra étant tel que défini précédemment pour (Ia), (Ib) et (Ic). A titre d'exemple de composé (Ia), on peut citer le succinimido-6-phényl 6-thioxo-5-thia-4-cyano-4- méthylhexanoate et le succinimido-4-phényl-4thioxo-3-20 thia-2-méthylbutanoate. Les agents de transfert de formule (I), (Ia), (Ib) et (Ic) sont préparés selon des techniques bien connues de l'homme de l'art. Un agent de transfert porteur d'une fonction acide est obtenu par exemple selon la référence Dupont WO98/01478 s'il s'agit d'un dithioester ou d'un trithiocarbonate, ou par exemple selon la référence Rhodia WO98/58974 s'il s'agit d'un dithiocarbonate encore appelé xanthate. Puis, la fonction acide de cet agent de transfert est transformée en fonction ester activé par exemple par addition de NHS (N-hydroxysuccinimide) en présence de DCC (dicyclohexylcarb odiimide) . Le couplage entre la fonction ester activé et un composé porteur d'une fonction nucléophile est effectuée directement sur l'agent de transfert, qui est ensuite utilisé dans la polymérisation RAFT et permet donc la synthèse de polymères fonctionnalisés à leur extrémité a. Le couplage sur l'ester activé, avec un composé d'intérêt (porteur d'une fonction nucléophile) s'effectue donc, de préférence, avant la polymérisation RAFT. Lorsque B I est un monomère saccharidique protégé, soit homopolymérisé, soit copolymérisé avec un monomère hydrophile B2 ne portant pas de fonction réactive, il est également possible d'effectuer la polymérisation avec un agent de transfert (I). On procède alors dans l'ordre suivant: - on effectue la polymérisation RAFT de B1 (homo ou copolymérisation) en présence de lagent de transfert (I) ; on obtient donc un homopolymère (ou un copolymère) porteur d'au moins une fonction ester activé à son extrémité a, - on réalise le couplage d'un composé d'intérêt sur la fonction ester activé située à l'extrémité a du polymère (ou du copolymère), - on déprotège les entités saccharidiques portées par le (co)polymère, - et on réalise le couplage covalent d'un fluorophore aminé sur les fonctions réactives (aldéhyde) des entités saccharidiques. Dans le cas où l'agent de transfert porteur de la ou des fonctions ester activé est couplé avec un support solide, on obtient un agent de transfert supporté et la polymérisation RAFT est alors réalisée à partir de cet agent supporté, ce qui est appelé grafting from polymerization . Cette fixation permet, ultérieurement, d'obtenir des brosses de polymère en surface. Le composé d'intérêt qu'il soit fixé à l'extrémité co ou a du polymère sera, de préférence, un ligand biologique. Les ligands biologiques pouvant être fixés sur le polymère de la présente invention sont, par exemple, ceux utilisés dans le domaine du diagnostic dans des tests de détection de molécules cibles, par exemple, ou dans le domaine thérapeutique, notamment pour vectoriser des molécules actives ou des gènes. Dans le cas du diagnostic, pour permettre la détection et/ou la quantification et/ou la purification de la molécule cible, le ligand biologique est capable de former un complexe de capture ligand/ante ligand. En particulier, ledit anti ligand pourra constituer la molécule cible. En fonction de la nature de la cible à détecter, l'homme du métier choisira la nature du ligand biologique à fixer sur le polymère. A titre d'exemple, pour la mise en évidence d'une molécule cible de type acide nucléique préalablement capturée sur un support, le ligand biologique peut être une biotine. Dans ce cas, l'anti ligand sera une streptavidine immobilisée sur la cible via un acide nucléique marqué par une biotine et suffisamment complémentaire de la cible pour s'hybrider spécifiquement en fonction des conditions de réaction et notamment la température ou la salinité du milieu réactionnel. Le polymère fluorescent permet alors directement la détection de la molécule cible. De nombreuses méthodes pour introduire des fonctions réactives sur un ligand biologique sont disponibles: pour les protéines, antigènes, anticorps ou polypeptides, voir par exemple "Chemistry of ProteinConjugation and Cross-linking", Wong S. S., CRC press, Boca Raton, 1991 ou "Bioconjugate Techniques", Hermanson G. T., Academic Press, San Diego, 1996. Pour les acides nucléiques, on synthétise par exemple un polynucléotide par méthode chimique sur support solide ayant une fonction réactive à un endroit quelconque de la chaîne comme par exemple, l'extrémité 5' ou l'extrémité 3' ou sur une base ou sur un phosphate internucléotidique ou sur la position 2' du sucre (voir Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties édité par S. Agrawal, Humana Press, Totowa, New Jersey). Des méthodes d'introduction de fonctions réactives sur des haptènes sont données notamment dans "Preparation of Antigenic Steroid-Protein Conjugate", F Kohen et al., dans Steroidimmunoassay, Proceedings of the fifth tenovusworkshop, Cardiff, Avril 1974, ed. EHD Cameron, SH.Hillier,K. Griffiths. Par exemple, dans le cas d'un ligand biologique de type protéine possédant une composition en lysine suffisante, les amines portées par la chaîne latérale de la lysine pourront être utilisées pour le couplage avec la fonction ester activé. En particulier, il est possible de fixer en tant que composés d'intérêt, toutes molécules qui portent un site de reconnaissance et qui permettront d'induire une réaction de reconnaissance biologique spécifique, et donc d'utiliser les polymères selon l'invention en biologie, notamment dans des tests de diagnostic, notamment des test ELOSA de détection d'une cible d'ADN. Par exemple, une biotine, un sucre, un oligonucléotide, ou encore un lipide qui favorise l'insertion membranaire, pourra être couplé à l'extrémité du polymère. Le polymère fluorescent pourra alors être fixé par une de ses extrémités et de manière spécifique, sur n'importe quel support présentant, en surface, l'entité reconnue par le composé d'intérêt sélectionné (polymère, latex, silice, vésicule lipidique, protéine, cible ADN ou ARN...). Dans le cas où la molécule d'intérêt est une biotine, le polymère fluorescent pourra être immobilisé sur une surface donnée recouverte de streptavidine. Les polymères très fluorescents selon l'invention, éventuellement porteurs à leur extrémité d'un composé d'intérêt et, en particulier d'un ligand biologique trouvent également de nombreuses applications, dans l'imagerie par microscopie de fluorescence, par exemple, l'analyse de la communication intercellulaire et des phénomènes d'exclusion de taille comme la perméabilité de membranes. Grâce à l'utilisation d'un fluorophore insensible au pH et d'un polymère également insensible au pH, il sera possible d'étudier des phénomènes à l'intérieur des endosomes (pH = 5,5) où la fluorescéine est inutilisable. De plus, les polymères selon l'invention sont très résistants à la photodégradation, d'où un intérêt pour suivre une cinétique par microscopie de fluorescence, ou bien par microscopie confocale avec balayage laser pour analyser différents niveaux. Par ailleurs, les polymères très fluorescents selon l'invention, porteurs à leur extrémité d'un composé d'intérêt, pourront être utilisés dans des tests de diagnostic pour amplifier la détection de la capture d'une cible biologique, comme un acide nucléique par exemple. Les polymères selon l'invention pourront également être utilisés pour le marquage de matériaux (polymères, composés hybrides, autres) dans des applications de microscopie optique (confocale, multiphoton, SNOM). L'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples suivants donnés à titre illustratif et non limitatif, en référence à la Figure unique qui montre, de façon comparative, l'évolution dans le temps de l'intensité de fluorescence entre un polymère selon l'invention (poly(NAM-LY)) et un conjugué R-Phycoérythrine Streptavidine (RPE). Les réactifs suivants sont utilisés: Le N-acryloylmorpholine (NAM, vendu par ALDRICH, référence 44.827-3) est distillé avant utilisation en polymérisation. Le N-acryloxysuccinimide (NAS, vendu par ACROS, référence 40030) est purifié par chromatographie sur colonne de silice avant utilisation en polymérisation. Le dioxane (solvant de polymérisation) (vendu par SDS, référence 27,053-9) est distillé sur LiAlH4 avant utilisation. Le 2,2'-azobis-isobutyronitrile AIBN (amorceur de polymérisation) (Fluka, référence 30 11630) est recristallisé dans l'éthanol. Le dithiobenzoate de tert-butyle (agent de transfert de chaîne (ATC) de la polymérisation RAFT) est synthétisé selon le procédé décrit par A. Favier et al. dans Macromolecule, 2002, 35, 8271-8280 Le trioxane (référence interne pour le suivi R.M.N. 1H) (JANSSEN-CHIMICA, référence 14.029.61) est utilisé tel quel. a) Polymérisation RAFT: On réalise une copolymérisation entre le NAM et le NAS, dans le dioxane, en présence d'AIBN et de dithiobenzoate de tertbutyle. Les différents réactifs sont introduits dans un réacteur de type Schlenk à température ambiante, et le mélange est dégazé par une succession de cycles de congélation/vide/décongélation, puis mis sous azote. Le mélange réactionnel est porté à 90 C et laissé sous agitation pendant 2h. Le polymère obtenu, nommé poly(NAM-st-NAS) est précipité dans l'éther, plusieurs fois si nécessaire, c'est-à-dire jusqu'à élimination totale des monomères résiduels, puis, est récupéré par centrifugation et séché sous vide de la pompe à palettes. Conditions opératoires de la copolymérisation du NAM et du NAS par le procédé 15 RAFT: - [Monomères]= 1,55 mol.L-1 ([NAM] = 1,24 mol.L-1 et [NAS] = 0,31 mol.L-1) - [Monomères]/[ATC] = 1022 => Mn visée à 100% de conversion = 150 000 g.moll - [ATC]/[AIBN] = 10 - Température = 90 C, polymérisation dans le dioxane sous azote (en présence de trioxane). [a] signifie concentration en réactif a. Conditions d'analyses par Résonance Magnétique Nucléaire (R.M.N.) 1H: Le suivi cinétique de la consommation des monomères est réalisé par R.M.N. 1H (Résonance Magnétique Nucléaire) avec un spectromètre Bruker AC 200 MHz. Les échantillons à analyser sont préparés en mélangeant 300 L de chaque prélèvement à 300 L de solvant deutéré : le CDCb. Conditions d'analyses par Chromatographie d'Exclusion Stérique (C.E.S.) couplée à un détecteur de diffusion dynamique de la lumière (DDL) : Colonnes: Ultra Hydrogel 500 et 2000 (Waters) ; pompe: Waters 510;; détecteur réfractométrique différentiel: Waters 410; détecteur Diffusion Dynamique de la Lumière: Trois angles, miniDawn, Wyatt Technology; éluant: tampon borate 0,05 M, pH = 9,3; débit: 0,5 mL.min-i. Caractéristiques du copolymère poly(NAM-st-NAS) obtenu Les analyses par C. E.S. couplée à un détecteur D.D.L. permettent de déterminer: la masse molaire moyenne en nombre des chaînes polymères formées (Mn) et l'indice de polymolécularité reflétant l'homogénéité des masses des chaînes polymères (Ip). En ce qui concerne la composition molaire en monomères du polymère synthétisé, elle est obtenue par R.M.N. 1H. - Mn= 56 200 g.moli - Ip = 1,22 - 78,4 % d'unités NAM et 21,6 % d'unités NAS - soit 383 unités par chaîne polymère, parmi lesquelles 84 sont réactives (NAS) b) Réaction de couplage du fluorophore sur le copolymère obtenu par le procédé RAFT, suivi d'une étape de masquage Le fluorophore Lucifer Yellow Cadaverine, (N - (5- aminopenthyl)- 4- amino-3,6-disulfo-1, 8-naphtalimide, sel dipotassique) (LY, vendu par Molecular Probes, référence A-1340) est utilisé tel quel. La 4-(2-aminoethyl)morpholine (vendu par ALDRICH, référence A5,500-4) est utilisée telle quelle. Le dimethylformamide (solvant) (vendu par MERCK, référence 822275) est séché sur CaH2 et distillé avant utilisation. Mode opératoire Le polymère poly(NAM-st-NAS) obtenu au paragraphe a) et le fluorophore LY, sont introduits avec le solvant, dans un ballon en verre. Le mélange réactionnel mis sous argon, est porté à 45 C et laissé sous agitation à l'abri de la lumière pendant 96h. La température est diminuée jusqu'à 30 C et la 4-(2- aminoéthyl)morpholine est introduite dans le milieu réactionnel. Pour s'assurer d'un masquage complet, le mélange réactionnel est laissé pendant 4 jours sous argon, à l'abri de la lumière. Le polymère obtenu, nommé poly(NAM-LY) est précipité dans l'éther à partir d'une solution de dichlorométhane (plusieurs fois), récupéré par centrifugation et séché sous vide de la pompe à palettes. Conditions opératoires de la réaction de couplage du fluorophore et masquage du poly(NAM-st-NAS) : - masse de polymère = 0,03 g - masse de LY = 0,0174 g - volume de 4-(2-aminoéthyl)morpholine = 22 L (excès: 20 eq/NAS) - volume de solvant = 4 mL - Température: couplage = 45 C et masquage = 30 C, réaction sous argon et à l'abri de la lumière. Conditions d'analyses par Spectroscopie d'Absorption et de Fluorescence La caractérisation du polymère obtenu est réalisée par absorption UV-Vis avec un spectromètre JASCO V-560, et par fluorescence à l'état stationnaire avec un fluorimètre SPEX Fluorolog F112A (largeur de bande de 4,5 nm pour le monochromateur d'excitation et de 2,5 nm pour le monochromateur d'émission)). Les durées de vie sont obtenues par fluorescence résolue en temps par la technique du comptage mono- photonique avec excitation laser. Cuvettes en Quartz (1= 1cm ou 1 = 0,1cm, selon la concentration, de façon à obtenir une densité optique inférieure à 1). Les solutions sont analysées en tampon phosphate (50 mM; pH = 7,5). Caractéristiques du fluorophore LY en solution aqueuse (tampon phosphate pH = 7,5, 50mM) Maximum d'absorption = 430 nm et maximum d'émission = 531 nm E(430nm) = 11580 M Durée de vie de fluorescence: 6,05 ns (,ex = 290 nm; ,em = 525 nm) LY ne forme pas d'auto-association en solution diluée jusqu'à 10-3 mol/L Rendement quantique de LY = 0,61 Caractéristiques du polymère poly(NAM-LY) fluorescent en solution aqueuse Les maxima d'absorption et d'émission du fluorophore LY ne sont pas modifiés par le couplage de molécules LY sur le polymère poly(NAM-st-NAS). La quantité exacte de LY fixés au polymère est déterminée par RMN et confirmée par comparaison des spectres d'absorption et d'émission de fluorescence du polymère fluorescent et du LY libre: 36 molécules de fluorophore sont fixées par chaîne, ce qui correspond à un rendement de couplage de 58% et à 1,56 Kg/mol de polymère par fluorophore. Le rendement quantique de fluorescence de LY (4v libre) est déterminé en utilisant une solution de Rhodamine 101 dans l'éthanol (OF rhodamine libre = 0,92) comme étalon. Le rendement quantique de LY libre est 0,61 (4TFLY libre) et le rendement quantique de LY couplé sur le polymère est 0,48 (4TFLY immobilisé). Le rendement quantique relatif des fluorophores LY immobilisés sur le polymère est donc de 0,79. Le facteur d'amplification de fluorescence du polymère fluorescent poly[NAM- LY]est déterminé par la formule suivante: Facteur d'amplification de fluorescence = nombre de LY/chaîne x (4TFLY immobilisé) / (4TFLY libre) Il résulte que le polymère fluorescent obtenu présente une amplification de fluorescence de 28 par comparaison avec un fluorophore libre en solution aqueuse. Si l'on rapporte cette valeur à la masse molaire du polymère qui est de 56,2 Kg/mol, on obtient un facteur d'amplification de la fluorescence de 0,5 par Kg/mol de polymère. c) Réaction du copolymère fluorescent avec un ligand biologique Un dérivé de biotine portant un bras espaceur terminé par une fonctio n maléïmide: EZ-Link PEO-Maleimide Activated Biotin (vendu par Pierce; référence 21901) , est utilisé tel quel. Mode opératoire: Le polymère poly(NAM-LY) synthétisé comme décrit au paragraphe a) et b) et le ligand biologique (PEO-Maleimide Activated Biotin), sont introduits avec le solvant, dans un ballon. Le mélange réactionnel mis sous argon est laissé sous agitation, à une température de 30 C et à l'abri de la lumière pendant 5 jours. Le polymère obtenu, nommé poly(NAM-LY-B), est purifié par dialyse. Conditions opératoires de la réaction du ligand biologique avec le poly(NAM-LY) - [polymère] = 1,786 x 10-4 mol.L-1 - [PEO-Maleimide Activated Biotin] = 8.953 x 10-3 mol.L l (en excès, 50eq) - solvant: Tampon phosphate, 10mM, pH = 7 - volume de solvant = 1,7 mL - Température: 30 C, réaction sous argon et à l'abri de la lumière. Confirmation du couplage du ligand biologique au polymère: Le poly(NAM-LYB) purifié est mélangé avec un Latex Avidine-polystyrène (vendu par ESTAPOR, référence 1080-06) dans un tampon PBS-Tween 1 % contenant de l'albumine à 0,1 g.L 1. Le mélange réactionnel est laissé pendant 4 h à 37 C. Après centrifugation (4 000 rpm) et six lavages avec le tampon, le latex est analysé par fluorescence. L'émission de fluorescence à 530nm est comparée avec la fluorescence d'une solution du polymère fluorescent poly(NAM-LY) (dans les mêmes conditions opératoires). Cette comparaison permet de déterminer la proportion de chaînes polymères portant une biotine à leur extrémité, à savoir 15%. d) Essai de résistance du poly(NAM-LY) à la photodégradation Le conjugué R-Phycoérythrine Streptavidine (RPE, vendu par JACKSON ImmunoResearch Laboratories, INC., reference: 016-110-084) maximum d'absorption: 490nm - maximum d'émission: 578nm - est utilisé. Mode opératoire La variation de l'émission de fluorescence (,ex = 430 nm; ,em = 525 nm) en fonction de la durée d'irradiation du poly(NAM-LY) (3,1x 10-8 moles de chaînes.L-') en tampon phosphate (50mM, pH = 7,5) est comparée avec l'émission de fluorescence (,ex = 490 nm; ,em = 578 nm) du RPE (3,1 x 10-8 mon) dans le même solvant. Les solutions de RPE et de poly(NAM-LY) sont préparées dans les mêmes conditions. Pendant les 2 premières heures, l'émission de fluorescence du polymère ne varie pas, au contraire de ce qui est observé pour le RPE qui voit son émission diminuer de 30 %. Après 24h d'irradiation, l'émission du poly(NAM-LY) a diminué de 14 % pendant que celle du RPE a diminué de 56 %. En conclusion, comme le montre la Figure unique, le polymère fluorescent obtenu (poly(NAM-LY) sur la Figure unique) est beaucoup plus résistant à la photodégradation que le R-phycoerythrine-streptavidine (RPE). e) Essai de sensibilité du fluorophore LY au pH Le conjugué BiotineFluorescefne (B-F, vendu par SIGMA, référence: B 8889 ou MOLECULAR PROBES, référence: B-1370) est utilisé tel quel. Le conjugué Biotine-Lucifer Yellow (B-LY) est synthétisé par réaction du EZ-link NHS-PEO4-Biotine (vendu par PIERCE, référence 21330) et du Lucifer Yellow Cadaverine (lmol NHS:1,1 mol LY), dans les mêmes conditions opératoires que celles de la réaction de couplage du fluorophore sur le poly(NAM-st-NAS) décrites précédemment au paragraphe b) . Mode opératoire Les solutions de RF et B-LY en tampon phosphate (50mM à différents pH) sont préparées (pH = 4 à10) et à la même densité optique (0,15). Les spectres d'émission et excitation de fluorescence de B-LY (, ex = 430 nm; ,em = 530 nm) sont comparés avec les spectres de RF (,ex = 494 nm; ,em = 518 nm), en fonction du pH de la solution analysée. La Biotine-Fluorescéïne est très sensible au pH. Le maximum de fluorescence se déplace un peu vers le bleu et l'intensité de fluorescence du fluorophore diminue beaucoup pour pH 2887892 46 REVENDICATIONS 1 - Polymère fluorescent soluble en solution aqueuse porteur d'au moins 5 fluorophores répartis sur le polymère, qui présentent les propriétés suivantes: - les fluorophores sont hydrosolubles, - les fluorophores ne forment pas d'auto-association dans l'eau, jusqu'à une concentration de 10-4 mol/1, de préférence jusqu'à une concentration de 10-3 mol/1, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un coefficient d'extinction molaire supérieur à 1000 M l.cm 1, de préférence supérieur à 5000 M i.cm i, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un rendement quantique supérieur à 0,3, de préférence supérieur à 0,6, ledit polymère présentant un facteur d'amplification de fluorescence supérieur ou égal à 0,35 par Kg/mol de polymère, de préférence supérieur à 0,45 par Kg/mol de polymère. 2 - Polymère selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les fluorophores comportent ou sont liés par l'intermédiaire d'un bras espaceur, comportant au moins un enchaînement CH2-CH2- situé entre la partie fluorescente du fluorophore et le polymère. 3 - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les fluorophores comprennent au moins un groupe polaire ou ionisable en solution aqueuse. 4 - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est obtenu en utilisant un procédé de polymérisation radicalaire contrôlée ou de polymérisation ionique vivante. - Polymère selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il est obtenu en utilisant un procédé de polymérisation radicalaire contrôlée basé sur un transfert réversible de chaînes par addition/fragmentation (RAFT). 6 - Polymère selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il présente un indice de polymolécularité inférieur à 1,5, de préférence inférieur à 1,3. 7 - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il présente moins de 2,4 Kg/mol, de préférence moins de 2 Kg/mol de polymère par fluorophore. 8 - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les fluorophores répartis sur le polymère présentent un rendement quantique relatif de fluorescence au moins égal à 0,7, de préférence au moins égal à 0,75. 9 - Polymère selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que les fluorophores sont tous identiques. - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les fluorophores sont choisis parmi: le N-(5-aminopentyl)-4-amino-3,6disulfo-1,8- naphthalimide, le 3,6- diamino-9- (2- méthoxycarbonyl) phényle, le 9-(2,4-disulfophényl)-2,3,6,7,12,13,16,17-octahydro-1H,5H,11H, 15H xanthéno[2,3,4- ij:5,6,7-i'j ' ]diquinolizin- 18- ium, le 9-(2,4disulfophényl)-3,6-bis(éthylamino)- 2,7-diméthyl xanthylium, le 3,6-bis (diéthylamino)- 9- (2,4- disulfophényl)- xanthylium et leur dérivés. 11 - Polymère selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que les fluorophores sont la N-(5- aminopentyl) - 4-amino- 3,6- disulfo1,8- naphthalimide. 12 - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les fluorophores sont insensibles aux variations de pH. 13 - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les fluorophores sont photostables. 14 - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme d'un copolymère statistique, comportant au moins deux entités distinctes répétées, une entité porteuse du fluorophore et au moins une autre entité hydrophile. - Polymère selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comporte, à l'une de ses extrémités, un composé d'intérêt lié de façon covalente. 16 - Polymère selon la revendication 15, caractérisé en ce le composé d'intérêt est lié au polymère à l'extrémité co, par une fonction thioéther. 17 - Polymère selon la revendication 15, caractérisé en ce que le composé d'intérêt est lié au polymère à son extrémité a, par une fonction amide. 18 - Polymère selon l'une des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que le composé d'intérêt est choisi parmi les ligands biologiques, les mono- ou disaccharides, les lipides, les colorants, les molécules fluorescentes, les chaînes polymères, les supports solides. 19 - Polymère selon la revendication 18, caractérisé en ce que le composé d'intérêt est un ligand biologique choisi parmi les polynucléotides, les antigènes, les anticorps, les polypeptides, les protéines, les haptènes, la biotine. 20 - Procédé de préparation de polymères fluorescents solubles en solution aqueuse et qui présentent un facteur d'amplification de la fluorescence supérieur ou égal à 0,35 par Kg/mol de polymère, de préférence supérieur à 0,45 par Kg/mol de polymère comportant les étapes suivantes: É une étape de polymérisation par homopolymérisation ou copolymérisation réalisée avec un monomère fonctionnalisé porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée, de façon à obtenir un polymère porteur d'au moins 5 fonctions réactives X1, éventuellement sous forme protégée, réparties sur ledit polymère, É une étape de couplage d'au moins 5 fluorophores sur au moins une partie des fonctions réactives X1, après déprotection desdites fonctions réactives si nécessaire, lesdits fluorophores présentant les caractéristiques suivantes: - les fluorophores sont hydrosolubles, - les fluorophores ne forment pas d'auto-association dans l'eau, jusqu'à une concentration de 10-4 mol/1, de préférence jusqu'à une concentration de 10-3 mol/1, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un coefficient d'extinction molaire supérieur à 1000 M-'.cm i, de préférence supérieur à 5000 M-1.cm i, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un rendement quantique supérieur à 0,3, de préférence supérieur à 0,6. 21 - Procédé selon la revendication 20, caractérisé en ce que l'étape de polymérisation est réalisée par copolymérisation statistique entre un monomère porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée, et un monomère hydrophile, à l'exception des monomères saccharidiques hydrophiles non protégés, ou bien avec un monomère qui, après traitement, peut conduire à une entité hydrophile. 22 - Procédé selon la revendication 21, caractérisé en ce que l'on utilise un monomère porteur d'une fonction réactive X1, avantageusement choisi parmi les monomères fonctionnels suivants: le N- acryloxysuccinimide, le N- méthacryloxysuccinimide, le méthacrylate de 2- hydroxyéthyle, le méthacrylate de 2-aminoéthyle, l' acrylate de 2- hydroxyéthyle, l' acrylate de 2- aminoéthyle, l'anhydride maléïque et, de préférence, parmi le N- acryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque, et plus particulièrement le N- acryloxysuccinimide (NAS). 23 - Procédé selon la revendication 20, caractérisé en ce que l'étape de polymérisation est réalisée par homopolymérisation d'un monomère porteur d'une fonction réactive X1. 24 - Procédé selon la revendication 23, caractérisé en ce que le monomère est choisi parmi le N- acryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, le méthacrylate de 2-hydroxyéthyle, le méthacrylate de 2-aminoéthyle, 1'acrylate de 2-hydroxyéthyle, l' acrylate de 2- aminoéthyle, l'anhydride maléïque et, de préférence, parmi le N-acryloxysuccinimide, le Nméthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque, et plus particulièrement le N- acryloxysuccinimide (NAS). - Procédé selon l'une des revendications 20 à 24, caractérisé en ce qu'après l'étape de couplage des fluorophores, on réalise, de façon avantageuse, un traitement des fonctions X1 restantes sur le polymère, soit par désactivation, soit par couplage avec des molécules hydrosolubles non fluorescentes. 26 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 22 ou 25 caractérisé en ce que l'étape de polymérisation est réalisée par copolymérisation statistique entre un monomère porteur d'une fonction réactive X1, éventuellement sous forme protégée, et un monomère hydrophile. 27 - Procédé selon la revendication 26, caractérisé en ce que le monomère hydrophile est choisi parmi les dérivés hydrophiles d'acrylate, de méthacrylate, d'acrylamide, de méthacrylamide, de N-vinylpyrrolidone et, de préférence, parmi: la N-vinylpyrrolidone, le N,N-diméthylacrylamide et la N-acryloylmorpholine. 28 - Procédé selon la revendications 20, caractérisé en ce que l'étape de polymérisation est réalisée par homopolymérisation d'un monomère porteur d'une fonction réactive X1 sous forme protégée, ladite fonction étant déprotégée avant couplage des fluorophores. 29 - Procédé selon la revendications 28, caractérisé en ce que le monomère porteur d'une fonction réactive Xl sous forme protégée est choisi parmi les dérivés d'un sucre, de préférence, le 1,2:3,4-di-Oisopropylidène-6-0-(2-vinyloxyethyl)-a-D-galactopyrano se, le 6-Oacryloyl-1,2:3,4-di-O-isopropylidène-a-D-galactopyranose, le 6-Oacryloylamino-6-désoxy-1,2:3,4-di O-isopropylidène-a-D- galactopyrano se et le 6- 0- (8- acryloylamino- 3,6- dioxaoctyl)- 1,2:3,4-di Oisopropylidène-a-D- galactopyrano se. - Procédé de préparation de polymères fluorescents solubles en solution aqueuse et qui présentent un facteur d'amplification de la fluorescence supérieur ou égal à 0,35 par Kg/mol de polymère, de préférence supérieur à 0,45 par Kg/mol de polymère mettant en oeuvre une étape de polymérisation par copolymérisation d'un monomère fonctionnalisé porteur d'un fluorophore, avec un monomère hydrophile, ou bien un monomère, qui après traitement, peut conduire à une entité hydrophile, lesdits fluorophores présentant les caractéristiques suivantes: - les fluorophores sont hydrosolubles, - les fluorophores ne forment pas d'auto- association dans l'eau, jusqu'à une concentration de 10-4 mol/1, de préférence jusqu'à une concentration de 10-3 mol/1, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un coefficient d'extinction molaire supérieur à 1000 M-'.cm i, de préférence supérieur à 5000 M-1.cm i, - les fluorophores libres en solution aqueuse présentent un rendement quantique supérieur à 0,3, de préférence supérieur à 0,6. 31 - Procédé selon la revendication 30, caractérisé en ce que le monomère fonctionnalisé porteur d'un fluorophore est obtenu par couplage d'un fluorophore, éventuellement par l'intermédiaire d'un bras espaceur, sur un monomère fonctionnalisé porteur d'une fonction réactive X1. 32 - Procédé selon la revendications 31, caractérisé en ce que le monomère porteur d'une fonction réactive X1 est choisi parmi les monomères fonctionnels suivants: le N-acryloxysuccinimide, le Nméthacryloxysuccinimide, le méthacrylate de 2-hydroxyéthyle, le méthacrylate de 2-aminoéthyle, 1'acrylate de 2-hydroxyéthyle, l' acrylate de 2- aminoéthyle, l'anhydride maléïque et, de préférence, parmi le Nacryloxysuccinimide, le N-méthacryloxysuccinimide, l'anhydride maléïque, et plus particulièrement le N- acryloxysuccinimide (NAS). 33 - Procédé selon la revendications 31, caractérisé en ce que le monomère porteur d'une fonction réactive X1 est choisi parmi les dérivés d'un sucre, de préférence, le 6- 0- (2-vinyloxyethyl)-a-D-galactopyranose, le 6-O-acryloyl-a-D-galactopyranose, le 6-O-acryloylamino-6-désoxy -a-Dgalactopyranose et le 6-0- (8- acryloylamino- 3,6- dioxaoctyl)- a-D-g alactopyrano se. 34 - Procédé selon l'une des revendications 30 à 33, caractérisé en ce que l'étape de polymérisation est réalisée par copolymérisation statistique entre un monomère porteur d'un fluorophore et un monomère hydrophile Procédé selon la revendication 34, caractérisé en ce que le monomère hydrophile est choisi parmi les dérivés hydrophiles d'acrylate, de méthacrylate, d'acrylamide, de méthacrylamide, de N-vinylpyrrolidone, les dérivés hydrophiles de monomères saccharidiques et, de préférence, parmi: la N-vinylpyrrolidone, le N,N-diméthylacrylamide et la Nacryloylmorpholine. 36 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 29 ou 31 à 35, caractérisé en ce que la fonction réactive X1 est choisie parmi les fonctions hydroxy, amine, aldéhyde, anhydride, acide carboxylique activé sous forme d'ester activé. 37 - Procédé selon la revendication 36, caractérisé en ce que la fonction réactive Xl est une fonction acide carboxylique activé sous forme d'ester de N-hydroxysuccinimide. 38 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 37, caractérisé en ce que le couplage des fluorophores est réalisé de façon à ce que la partie fluorescente des fluorophores soit éloignée du polymère par un bras espaceur comportant au moins un enchaînement -CH2-CH2-. 39 - Procédé selon la revendication 38, caractérisé en que les fluorophores comportent un bras espaceur, comportant au moins un enchaînement CH2-CH2- situé entre la partie fluorescente du fluorophore et le polymère. - Procédé selon l'une des revendications 20 à 39, caractérisé en que les fluorophores comprennent au moins un groupe polaire ou ionisable en solution aqueuse. 41 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 40, caractérisé en que l'étape de polymérisation est réalisée par polymérisation radicalaire contrôlée ou polymérisation ionique vivante. 42 - Procédé selon la revendication 41, caractérisé en que l'étape de polymérisation est réalisée par un procédé de polymérisation radicalaire contrôlée basé sur un transfert réversible de chaînes par addition/fragmentation (RAFT). 43 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 42, caractérisé en ce que la quantité de fluorophore est ajustée, de façon à obtenir, moins de 2,4 Kg/mol, de préférence moins de 2 Kg/mol de polymère par fluorophore. 44 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 43, caractérisé en ce que les fluorophores répartis sur le polymère présentent un rendement quantique relatif de fluorescence au moins égal à 0,7, de préférence au moins égal à 0,75. - Procédé selon l'une des revendications 20 à 44, caractérisé en ce que les fluorophores sont tous identiques. 46 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 45, caractérisé en ce que les fluorophores sont choisis parmi: le N-(5-aminopentyl)-4-amino-3,6disulfo-1,8-naphthalimide, le 3,6- diamino-9- (2- méthoxycarbonyl)phényle, le 9-(2,4-disulfophényl)-2,3,6,7,12,13,16,17-octahydro-1H,5H,11H,15H xanthéno[2,3,4- ij:5,6,7-i'j ' ]diquinolizin- 18- ium, le 9-(2,4disulfophényl)-3,6-bis(éthylamino)- 2,7-diméthyl xanthylium, le 3,6-bis (diéthylamino)- 9- (2,4- disulfophényl)- xanthylium et leur dérivés. 47 - Procédé selon la revendication 46, caractérisé en ce que les fluorophores sont tous identiques et sont le N-(5-aminopentyl)-4-amino-3, 6-disulfo-1,8- naphthalimide. 48 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 47, caractérisé en ce qu'un composé d'intérêt, tel qu'un ligand biologique, est couplé de façon covalente à une fonction réactive E, présente en bout de chaîne du polymère fluorescent obtenu. 49 - Procédé selon la revendication 48, caractérisé en ce que l'étape de polymérisation est réalisée par polymérisation RAFT et en ce que le composé d'intérêt est couplé, à l'extrémité co du polymère, pour former une fonction thioether. - Procédé selon l'une des revendications 48 ou 49, caractérisé en ce que le composé d'intérêt est un ligand biologique choisi parmi les polynucléotides, les antigènes, les anticorps, les polypeptides, les protéines, les haptènes, la biotine. 51 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 50, caractérisé en ce que les fluorophores sont insensibles aux variations de pH. 52 - Procédé selon l'une des revendications 20 à 51, caractérisé en ce que les fluorophores sont photostables. 53 - Polymères susceptibles d'être obtenus selon un procédé tel que défini à l'une quelconque des revendications 20 à 52.