Brevet FR2894253A1 — publié le 20070608

La présente invention concerne une composition d'histocolorant utilisée en diagnostic avec un endoscope. Les techniques de diagnostic utilisant un endoscope sont très répandues et sont appliquées à l'endoscopie gastro-intestinale dans le tractus digestif supérieur et le tractus digestif inférieur et en particulier au diagnostic de troubles tels que le cancer, l'ulcère peptique, la colite peptique, etc. La détection d'une anomalie histologique (de la région atteinte) par un examen endoscopique est effectuée généralement en utilisant un endoscope (grossissement d'environ 10 x à 500 x) en lumière visible sans utiliser d'agent colorant. D'une part, il existe une méthode appelée endoscopie par pulvérisation de colorant dans laquelle la surface d'un tissu est soumise à la pulvérisation d'une solution contenant un colorant et est observée avec un endoscope. Par cette endoscopie par pulvérisation de colorant, la forme de la surface d'une lumière du tractus digestif peut être observée nettement et, ainsi, une région atteinte minuscule peut être aisément observée en raison d'un changement de teinte de couleur. L'endoscope utilisé dans l'endoscopie par pulvérisation de colorant comprend un endoscope à lumière visible et un endoscope à fluorescence. Le colorant utilisé principalement dans l'endoscopie par pulvérisation de colorant est par exemple le carmin indigo pour colorer une lumière du tractus digestif en lumière visible et est par exemple la fluorescéine pour la coloration par fluorescence. Pour le diagnostic, il est important d'observer non seulement la surface d'un tissu dans l'organisme vivant mais également l'intérieur d'un tissu dans l'organisme vivant. Dans un procédé général d'observation de l'intérieur d'un tissu dans l'organisme vivant, une micropartie d'un tissu obtenue par biopsie est débitée en coupes minces au laboratoire, puis est colorée et observée. Dans une méthode d'observation de l'intérieur de tissus biologiques in situ, des méthodes d'imagerie par résonnance magnétique (IRM), une méthode de tomographie par émission de positrons (PET), un méthode CT, une méthode utilisant des rayons X mous et des méthodes similaires sont utilisées pour l'observation de l'organisme entier. Pour l'endoscopie gastro-intestinale, un endoscope auquel la réaction d'autofluorescence d'un tissu biologique est appliquée a été commercialisé. En irradiant le tissu biologique avec une lumière ayant une longueur d'onde spécifique, une autofluorescence est engendrée par une substance endogène du tissu et, ainsi, une région normale et une région atteinte peuvent être observées optiquement et différenciées en raison d'une différence d'intensité et de spectre. Cependant, dans l'observation endoscopique habituelle, il est inévitable que la région atteinte soit jugée de manière empirique et qu'un fragment de tissu soit prélevé et diagnostiqué séparément par des techniques telles que la coloration histologique en laboratoire. Au moyen d'un endoscope confocal élaboré récemment, d'autre part, l'intérieur du tissu peut être observé sans prélever le tissu. A savoir, le système confocal est une technique dans laquelle une lumière réfléchie seulement par la surface du tissu, dans le foyer, est détectée par une perforation placée devant un détecteur, ce qui permet d'obtenir une image nette. Habituellement, dans le système optique confocal, une image fluorescente d'un échantillon coloré avec une substance fluorescente est observée par balayage de l'échantillon coloré avec une lumière laser. En conséquence, un colorant fluorescent est nécessaire. Un endoscope confocal utilisant le système confocal comprend à la fois un système optique de contrôle usuel et un système optique de contrôle confocal et, ainsi, est utile en raison de la possibilité d'effectuer in situ le dépistage d'une région atteinte et l'observation optique par coupe mince optique d'un tissu, sans prélever de cellules, avec une moindre invasivité. Comme colorant fluorescent utilisé à des fins d'observation interstitielles avec un endoscope confocal, la fluorescéine et l'acriflavine sont connues d'après un document figurant dans la littérature (Gastroenterology 2004, vol. 127, n 3, pp. 706-713). Dans ce document, une grande quantité de fluorescéine est administrée par voie intraveineuse et, lorsque la fluorescéine atteint le tissu du tractus digestif, l'observation interstitielle avec un endoscope confoncal est effectuée. Dans le cas de l'acriflavine, ce colorant est pulvérisé directement sur le tractus digestif avant l'observation interstitielle, mais ne peut donner une image colorée nette et, ainsi, il est révélé ici que la fluorescéine est plus utile que l'acriflavine. Cependant, il existe un problème relatif aux graves effets secondaires que présente le colorant fluorescéine utilisé classiquement dans l'endoscopie par pulvérisation de colorant. Dans le cas de l'acriflavine, ces effets secondaires sur les organismes vivants posent des problèmes car il s'agit d'un antibiotique. Dans l'endoscopie par pulvérisation de colorant, en particulier l'endoscopie confocale, il existe un besoin de colorants capables de colorer les cellules en une brève période de temps, d'affiner la forme de la surface d'un tissu pour l'observation avec une source de lumière constituée de lumière visible ou bien de lumière d'excitation par fluorescence, et en outre, de colorer l'intérieur d'un tissu. En conséquence, l'objectif de l'invention consiste à proposer un agent colorant qui affine les formes de surfaces de lumières du tractus digestif et de surfaces similaires sous une lumière dans la plage de longueurs d'onde de la lumière visible, ayant pour fonction d'être excité par une lumière de longueur d'onde spécifique pour émettre une fluorescence, et qui soit biologiquement sûr et adapté à l'endoscopie. Du point de vue de l'innocuité, de la propriété de coloration en lumière visible et de la propriété de coloration en lumière fluorescente, les présents inventeurs ont porté leur attention à des colorants naturels et, en résultat d'études approfondies, ils ont trouvé de manière inattendue que des colorants dérivés de Monascus sont caractérisés par une excellente propriété de coloration en lumière visible, avec une fluorescence dont la longueur d'onde est différente de sa longueur d'onde d'excitation, ce qui fait qu'ils sont utiles non seulement comme agent colorant dans l'endoscopie usuelle mais également comme colorant fluorescent pour la coloration interstitielle en endoscopie confocale, donnant une image colorée vive utile dans la détection d'une petite région atteinte, et colorant seulement le cytoplasme sans colorer les noyaux cellulaires, ce qui indique que ces colorants ont une mutagénicité cellulaire réduite, et la présente invention a été ainsi menée à bonne fin. A ce propos, la présente invention propose une composition d'histocolorant pour l'endoscopie contenant un ou plusieurs membres choisis parmi des colorants dérivés de Monascus. La présente invention propose également une méthode de diagnostic avec un endoscope, qui comprend l'administration d'une composition contenant un ou plusieurs membres choisis parmi des colorants dérivés de Monascus et l'observation, au moyen d'un endoscope, d'un tissu coloré avec la composition. En outre, la présente invention propose l'utilisation d'un ou plusieurs membres choisis parmi des colorants dérivés de Monascus dans la production d'un agent colorant pour endoscopie. Au moyen de la composition d'histocolorant de la présente invention, la surface d'une région atteinte et l'intérieur d'un tissu peuvent être visualisés simultanément par observation en lumière visible ou avec un endoscope confocal, c'est-à-dire sans prélever de tissu. La composition d'histocolorant de la présente invention présente une excellente capacité d'utilisation car elle peut être distribuée à partir du tractus digestif. Comme un colorant naturel est utilisé, la composition est extrêmement sûre pour l'organisme humain. D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée qui va suivre, faite en regard des 5 dessins annexés sur lesquels : la figure 1 représente les spectres d'absorption et de fluorescence d'un colorant dérivé de Monascus (rouge). La figure 2 est une photographie représentant le résultat d'observations du gros intestin de rat coloré avec 10 un colorant dérivé de Monascus (rouge) (objectif 63 x). Sur la figure, 1) est une image d'une partie de surface, 2) est une image à une profondeur de 5,98 [lm, 3) est une image à une profondeur de 11,96 p,m et 4) est une image à une profondeur de 17,94 15 La figure 3 est une image en coupe du gros intestin de rat coloré avec un colorant dérivé de Monascus (rouge) (avec un objectif 10 x). La figure 4 est une image endoscopique en lumière visible de l'intestin grêle de rat coloré avec un colorant 20 dérivé de Monascus (rouge). L'image supérieure est une image colorée et l'image inférieure est une image non colorée. La figure 5 est une photographie représentant le résultat d'observations du gros intestin de rat coloré avec 25 du Jaune Monasco (objectif : objectif à immersion 63 x). La figure 6 est une photographie représentant le résultat d'observations du gros intestin de rat coloré avec du Rouge Monasco (objectif : objectif à immersion 63 x). La figure 7 est un graphique représentant la variation 30 de l'intensité de fluorescence du Jaune Monasco à différentes valeurs de pH. La figure 8 est une photographie représentant le résultat d'observations du gros intestin de rat coloré avec de la fluorescéine. La figure 9 est une photographie représentant une image colorée du gros intestin de souris 1 minute après diffusion de Jaune Monasco. La figure 10 est une photographie représentant une 5 image du gros intestin prélevé chez la souris, coloré avec du Jaune Monasco. La figure 11 est une photographie représentant une image colorée du gros intestin de souris 10 minutes après diffusion de Jaune Monasco. 10 La figure 12 est une photographie représentant une image colorée du gros intestin de souris 60 minutes après diffusion de Jaune Monasco. La figure 13 est une photographie représentant l'état de coloration du gros intestin par perfusion de Jaune 15 Monasco à travers le coeur chez une souris. La figure 14 est une photographie représentant l'état du gros intestin par perfusion de fluorescéine sodique à travers le cœur chez une souris. La figure 15 est une photographie représentant une 20 image (objectif 20 x) du gros intestin de souris coloré avec de la xanthomonasine A. La figure 16 est une photographie représentant une image (objectif à immersion 63 x) du gros intestin de souris coloré avec de la xanthomonasine A. 25 La figure 17 est une photographie représentant une image colorée normalement (objectif 40 x) du gros intestin de souris coloré avec de l'hématoxyline-éosine. La figure 18 est une photographie représentant une image colorée par fluorescence (objectif 63 x) du gros 30 intestin de souris coloré avec de la xanthomonasine A. La figure 19 est une photographie représentant une image (1 minute après coloration) prise au microscope confocal du gros intestin de souris coloré avec de la xanthomonasine A. 35 La figure 20 est une photographie représentant une image (10 minutes après coloration) prise au microscope confocal du gros intestin de souris coloré avec de la xanthomonasine A. L'endoscope de la présente invention comprend des endoscopes médicaux tels qu'un endoscope gastro-intestinal, un endoscope respiratoire, un endoscope vasculaire, un endoscope articulaire, un endoscope péritonéal et des endoscopes similaires. Parmi ces endoscopes, l'endoscope gastro-intestinal est particulièrement préférable. Dans la présente invention, l'endoscope à lumière visible comprend chaque endoscope utilisé dans l'observation en lumière visible et comprend un endoscope usuel, un endoscope grossissant (10 x à 200 x) et un endoscope à pulvérisation de colorant pour l'observation en lumière visible. L'endoscope à fluorescence comprend un endoscope pour la mesure de la fluorescence engendrée par irradiation avec de la lumière d'excitation, par exemple un endoscope grossissant à fluorescence. L'endoscope confocal consiste en un endoscope muni d'un système confocal. L'endoscope confocal possède à la fois un système optique de contrôle usuel et un système optique de contrôle confocal. La composition d'histocolorant pour un endoscope conforme à la présente invention comprend en outre plusieurs membres choisis parmi les colorants dérivés de Monascus. Monascus est un Ascomycota Monascus, et n'est pas particulièrement limité dans la mesure où il appartient au genre Monascus, et des exemples comprennent Monascus pilosus, Monascus anka, Monascus perpureus et des espèces similaires. Les colorants dérivés de Monascus comprennent ceux représentés par les formules (1) à (5) suivantes : ankaflavine (représentée par la formule (1) dans laquelle R1 = C7H15) , la monascine, (formule (1) dans laquelle RI = C5H11), la monascorubrine (formule (2) dans laquelle R2 = C7H15), la rubropunctatine (formule (2) dans laquelle R2 = C5H11), la monascorubramine (formule (3) dans laquelle R3 = C7H15, R6 = H), la rubropunctamine (formule (3) dans laquelle R3 = CsHll), la rubropunctalysine (formule (3) dans laquelle R3 = C5HII, R6 = (CH2) 4CH (NH) COOH) et la xanthomonasine ou ses dérivés (formule (4) ou (5) dans laquelle chacun des groupes R4 et R5 représente un groupe C5H11 ou C7H15), et un ou plusieurs types choisis parmi ceux-ci sont de préférence présents dans la composition de colorant de la présente invention. La xanthomonasine de formule (4) ou (5) est la xanthomonasine A dans laquelle R4 et R5 représentent des groupes C5H11 ou la xanthomonasine B dans laquelle R4 et R5 représentent des groupes C7H15 formules dans lesquelles R1, R2, R3, R4 et R5 représentent chacun un groupe alkyle en C1 à C11, de préférence C5H11 ou C7H15 et R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe - (CH2),CH (NH2) COOH dans lequel n représente un nombre de 2 à 15 6, et de préférence égal à 4.10 Comme constituants décrits ci-dessus, un ou plusieurs membres choisis entre l'ankaflavine, la monascorubrine, la monascorubramine et la xanthomonasine ou leurs dérivés sont présents de manière particulièrement préférable dans la composition de colorant de la présente invention. Ces colorants dérivés de Monascus sont des colorants rouge ou jaune et ils ont été utilisés classiquement dans des pâtés de poisson et le poulpe aromatisé au Japon et ils ont été utilisés dans des aliments fermentés tels que le koshu (un type de porto) et le beni tofu (pâte de haricots rouges) depuis la Chine antique, ce qui indique qu'ils ne posent pas de problème en ce qui concerne l'innocuité. La DL50 des colorants dérivés de Monascus administrés par voie orale à des souris est non inférieure à 20 g/kg et le taux sans aucun effet néfaste observé dans des études de doses répétées (13 semaines) est de 1,25 g/kg/jour. Ces colorants dérivés de Monascus peuvent être obtenus en soumettant des micro-organismes Monascus à une extraction avec, par exemple, de l'éthanol aqueux, du propylèneglycol aqueux ou de l'éthanol acide avec de l'acide chlorhydrique, à une température comprise dans l'intervalle de la température ambiante à une température légèrement plus élevée. Des produits commerciaux de ces colorants dérivés de Monascus comprennent, par exemple, le Sun Red M, le Sun Red MA, le Sun Red MR et le Sun Yellow n 1244 produits par San-Ei Gen F.F.I. Inc. ; les Monasco A, Monasco G, Monasco Z, Monasco RX, TS Red MP, TS Yellow M et TS Yellow MP produits par Taisho Technos Co., Ltd ; les Monasco Red AL450RA et Monasco Yellow S produits par KIRIYA Chemical Co., LTD ; les KC Red MR et KC Red MY-2 produits par Kobe Chemical Co., LTD ; et les Monascus Colors produits par Wako Pure Chemical Industries, Ltd. La quantité du colorant dérivé de Monascus dans la composition d'histocolorant de la présente invention est avantageusement de 0,01 à 70 % en masse, plus avantageusement de 0,01 à 50 % en masse, mieux encore de 0,01 à 20 % en masse, du point de vue de la priorité de coloration et de la vivacité d'une image colorée. La composition d'histocolorant de la présente invention peut être utilisée sous forme d'un liquide, de granules, de comprimés, etc. La composition d'histocolorant est de préférence liquide pour la diffusion dans le tractus digestif ou pour l'administration sous-muqueuse, ou bien est de préférence un liquide, des granules, des comprimés, etc. pour l'administration orale. Il est possible d'incorporer à la composition d'histocolorant de la présente invention une large gamme d'ingrédients, en fonction de sa forme (forme médicamenteuse). Par exemple, il est possible d'incorporer à la composition d'histocolorant un agent visqueux, un agent épaississant, un agent tensioactif, un agent édulcorant, un conservateur, un parfum, un agent d'ajustement du pH, de l'eau et des agents similaires. L'agent d'ajustement du pH comprend les agents pour l'ajustement du pH dans la plage de 5 à 9, par exemple l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique, l'acide citrique, l'acide malique, l'acide acétique et leurs sels, l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, le bicarbonate de sodium et le pyrophosphate tétrasodique. Il est possible d'incorporer à la composition d'histocolorant de l'éthanol, de l'eau, et des agents similaires comme solvant. Dans le cas de comprimés, il est possible d'utiliser des ingrédients de compression connus tels qu'un liant, un agent de délitement et des agents similaires. La composition d'histocolorant de la présente invention peut colorer un tissu en rouge ou une couleur similaire ou en jaune ou une couleur similaire et, ainsi, est utile comme agent pour colorer la surface d'un tissu lors de l'observation avec un endoscope usuel en lumière visible. L'endoscope utilisé dans ce cas est un endoscope usuel ou un endoscope grossissant et est utile pour l'observation endoscopique à un grossissement de 10 x à 500 x en lumière visible. Le colorant dérivé de Monascus, par l'excitation avec de la lumière à une valeur proche de 487 nm, émet une fluorescence intense à une valeur proche de 514 nm. En conséquence, le colorant est utilisé comme colorant fluorescent pour colorer la surface d'un tissu pour l'observation avec un endoscope à fluorescence ou un endoscope confocal. En diffusant le colorant dérivé de Monascus sur la lumière du tractus digestif, le colorant peut pénétrer aisément dans ce tissu et est ainsi utile comme colorant fluorescent pour coloration interstitielle au moyen d'un endoscope confocal. Comme endoscope confocal, il existe un endoscope ayant par exemple une profondeur d'observation de 250 m (champ d'observation, 500 m x 500 m ; grossissement 500 x). En conséquence, cet endoscope confocal peut être utilisé pour obtenir une image en coupe, colorée par un colorant fluorescent, de tissu interne (par exemple jusqu'à 250 m de profondeur) après la diffusion ou administration orale de la composition d'histocolorant de la présente invention. Lorsque l'endoscope utilisant un système optique confocal comprend à la fois un système optique de contrôle usuel et un système optique de contrôle confocal, une région atteinte est observée à l'oeil nu en lumière visible, puis la surface et l'intérieur du tissu dans la région atteinte en question dans le tractus digestif peuvent être diagnostiqués avec un endoscope confocal en observant une image en coupe, colorée avec un colorant fluorescent, d'un tissu interne (par exemple jusqu'à 250 m de profondeur) sans prélever le tissu atteint. Cela signifie que la forme de la cellule et du noyau dans le tissu vivant peut être observée à l'état vivant. En résultat, le diagnostic de troubles dans le tractus digestif, tels qu'un état précancéreux, un cancer, un ulcère, la colite ulcéreuse et des troubles similaires, peut être effectué de manière sûre et rapide avec une invasivité moindre, tout en améliorant considérablement la précision. Dans l'observation endoscopique, la composition d'histocolorant de la présente invention peut être appliquée directement à la lumière du tractus digestif ou peut être administrée au niveau sous-muqueux ou par voie orale. EXEMPLES La présente invention est décrite ci-après plus en détail, mais la présente invention n'est pas limitée à ces exemples. Exemple 1 Des colorants naturels très divers ont été soumis à une mesure de leurs spectres d'absorption et de leurs spectres d'excitation de fluorescence pour identifier les substances fluorescentes. Les colorants soumis à la mesure ont été acquis auprès de Wako Pure Chemical Industries, Ltd., à l'exception du colorant dérivé de Monascus (jaune). La mesure a été effectuée de la manière suivante : chaque colorant a été dissous dans une concentration de 1 à 0,1 mm/ml dans de l'eau pour préparer une solution. La longueur d'onde maximale d'absorption du colorant a été déterminée en mesurant l'absorbance de manière continue à des longueurs d'ondes de 200 à 600 nm avec un spectrophotomètre (BioSpec-1600 produit par SHIMADZU CORPORATION), ce qui a permis de déterminer la longueur d'onde à laquelle apparaît le maximum d'absorption. Chaque colorant a été irradié avec une lumière à la longueur d'onde maximale d'absorption comme lumière d'excitation, et la longueur d'onde de la lumière de diffusion détectée dans une direction perpendiculaire à l'axe de la lumière d'excitation a été déterminée en tant qu'absorption maximale de fluorescence par un spectrophotomètre à fluorescence (RF-1500 produit par SHIMADZU CORPORATION). Comme le montre le tableau 1, un décalage (décalage de Stokes) du côté des plus grandes longueurs d'ondes, par rapport à la longueur d'onde d'excitation utilisée pour la longueur d'onde de fluorescence (lumière de diffusion), a été observé dans le cas du colorant dérivé de Monascus (jaune) et du colorant dérivé de Monascus (rouge). Aucun décalage de Stokes n'a été observé dans le cas des colorants autres que les colorants dérivés de Monascus. La figure 1 représente les spectres d'absorption et de fluorescence d'un colorant dérivé de Monascus (rouge). Le colorant dérivé de Monascus (rouge) utilisé était le colorant dérivé de Monascus produit par Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Comme colorant dérivé de Monascus (jaune), le Jaune Monasco produit par KIRIYA Chemical Co., LTD a été utilisé. Tableau 1 Colorants naturels Longueur d'onde Longueur d'onde Décalage de Stokes* maximale d'excitation maximale de fluorescence (diffusion de lumière) Colorant extrait de 497 nm 497 nm 0 cochenilles Laque des teinturiers 491 nm 491 nm 0 Colorant extrait de la 536 nm 536 nm 0 peau de raisin Colorant dérivé du 331 nm 331 nm 0 rocou Colorant rouge extrait 534 nm 534 nm 0 de la betterave Colorant dérivé du 473 nm 473 nm 0 cacao Colorant dérivé de Monascus 487 nm 514 nm 27 (rouge) Colorant dérivé de Monascus 460 nm 503 nm 43 (jaune) * Décalage de Stokes : longueur d'onde maximale de fluorescence - longueur d'onde maximale d'excitation Exemple 2 Le gros intestin de rat fixé avec une solution de formaldéhyde a été coupé en morceaux de 5 x 5 mm de côté et a été lavé avec du sérum physiologique tamponné avec un phosphate (137 mol/1 de NaCl, 8,1 mol/1 de Na2HPO4, 2,7 mol/1 de KC1, 1,5 mmol/l de KH2PO4 ; désigné ci-après par l'abréviation STP(-)). Le tissu a été placé dans une solution aqueuse (10 mg/ml) de colorant dérivé de Monascus (rouge) (colorant dérivé de Monascus produit par Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), puis a été abandonné pendant 1 minute et lavé avec du STP(-) pendant 10 secondes. Puis le tissu a été fixé avec une solution de formaldéhyde et observé avec un microscope confocal (TCS SP2 produit par Leica ; ci-après, un microscope confocal utilisé dans les exemples consiste en ce microscope confocal). Le tissu a été observé en fluorescence à des longueurs d'ondes de 500 à 535 nm par excitation avec un laser à Ar à 488 nm. La figure 2 représente des microphotographies confocales. Ces microphotographies sont des images de la même coupe photographiée tous les 6 .4,m approximativement vers l'intérieur (intérieurement) à partir de la couche de surface. Comme le montre la figure 2, le gros intestin est coloré, et il a été trouvé que l'image colorée fluorescente du tissu qui est coloré intérieurement peut être obtenue. Exemple comparatif 1 Lorsque les colorants naturels (colorants dérivés du rocou, colorant extrait de la peau de raisin, colorant rouge extrait de la betterave, colorant extrait des cochenilles) n'émettant pas de fluorescence ont été utilisés et observés avec un microscope confocal de la même manière que dans l'exemple 2, aucune image colorée fluorescente n'a pu être obtenue. Exemple 3 A partir du gros intestin coloré dans l'exemple 2, un échantillon en coupe mince a été préparé. L'échantillon a été observé avec un microscope confocal pour la fluorescence à des longueurs d'ondes de 500 à 535 nm par excitation avec un laser Ar à 488 nm. En résultat, il a été trouvé qu'une image sur laquelle le gros intestin était coloré uniformément de la lumière jusqu'aux fascias (en excluant la couche sous-muqueuse), peut être obtenue de la manière représentée sur la figure 3. D'après la photographie, il a été trouvé que la profondeur de coloration avec le colorant dérivé de Monascus était de 500 à 1000 ptm ou plus. Exemple 4 L'intestin grêle de rat fixé avec une solution de formaldéhyde a été coupé en morceaux de 10 x 10 mm de côté, revêtu d'une solution aqueuse (à 10 mg/ml) de colorant dérivé de Monascus (rouge) (colorant dérivé de Monascus produit par Wako Pure Chemical Industries, Ltd) et observé avec un endoscope en lumière visible. En résultat, l'intestin grêle a été coloré en rouge de la manière représentée sur la figure 4, et l'information concernant, par exemple, la forme des villosités qui est difficilement déterminée sur une image d'observation non colorée a pu être obtenue de manière plus vive. Exemple 5 Un essai de coloration de gros intestin de rat a été effectué avec une solution aqueuse (à 6 mg/ml) de colorant dérivé de Monascus (jaune) (Jaune Monasco S produit par KIRIYA Chemical Co., LTD) et une solution aqueuse (10 mg/ml) de colorant dérivé de Monascus (rouge) (Rouge Monasco 9000P produit par KIRIYA Chemical Co., LTD). Comme échantillon, le gros intestin de rat, fixé au formol, a été plongé dans chaque solution de colorant pendant 1 minute et observé avec un microscope confocal. Les résultats indiquent que, comme le montrent les figures 5 et 6, les solutions colorantes de Rouge Monasco et de Jaune Monasco ont pénétré à l'intérieur du tissu et une fluorescence intense s'est produite. En résultat de l'observation, il a été trouvé que seul le cytoplasme était coloré vivement, tandis que les noyaux cellulaires n'étaient pas colorés. Exemple 6 La variation de propriété de coloration à différentes valeurs de pH par coloration in vivo est un facteur très important. En conséquence, l'influence du pH sur la propriété de fluorescence du Jaune Monasco S (produit par KIRIYA Chemical Co., LTD) a été étudiée. Les résultats sont représentés sur la figure 7. L'intensité de fluorescence n'a pas été modifiée de manière significative lors de la mesure dans des solutions tampons à des pH de 4,65, 5,00, 6,00, 6,80, 7,00, 7,40, 8,00 et 9,30. Ainsi, il a été trouvé que la propriété de fluorescence du colorant jaune dérivé de Monascus n'est pas influencée de manière significative par le pH. Exemple comparatif 2 Le gros intestin de rat a été observé au microscope confocal de la même manière que dans les exemples 2 et 5, sauf que de la fluorescéine ajustée à pH 9 a été utilisée au lieu du colorantdérivé de Monascus. Les résultats indiquent que, comme le montre la figure 8, le tissu a été coloré mais l'intensité de fluorescence de la fluorescéine a provoqué une plus forte coloration de fond, qui a rendu l'observation difficile. Exemple 7 L'effet de coloration de la diffusion d'un colorant dérivé de Monascus (jaune) sur la lumière du tractus digestif dans l'organisme vivant a été vérifié par la méthode suivante. Du Jaune Monasco (produit par KIRIYA Chemical Co., LTD) (0,1 mg/ml, 500 p,l) a été injecté par l'anus à une souris (mâle, âgé de huit semaines) et, 1 minute plus tard, le gros intestin a été prélevé et observé pour déterminer sa coloration au microscope confocal (produit par Leica). Le tissu muqueux sur la surface du gros intestin de souris provenant de l'organisme vivant a été coloré de manière excellente par diffusion du colorant (figure 9). Les cellules présentes dans le tissu muqueux sur le gros intestin comprennent des fibroblastes et des globules blancs dans le chorion de la membrane muqueuse, en plus des cellules épithéliales en colonne et des cellules en gobelets. Les constituants cytoplasmiques dans ces cellules étaient colorés avec le Jaune Monasco, mais les constituants muqueux dans les cellules en gobelets et les noyaux de toutes les cellules présentaient une mauvaise capacité de coloration. Ces résultats étaient en accord avec ceux obtenus avec une image au microscope (figure 10) par coloration in vitro du tissu du gros intestin prélevé. Exemple 8 Les gros intestins de souris vivantes ont été colorés avec du Jaune Monasco (produit par KIRIYA Chemical Co., LTD) de la même manière que dans l'exemple 7 et les souris ont été maintenues pendant 10 et 60 minutes après coloration puis ont été soumises à une observation de la variation de la propriété de coloration avec le temps. L'observation a été effectuée de la même manière que dans l'exemple 7. Les sites colorés convenablement avec le Jaune Monasco n'ont pas varié quelque soit le tampon dans lequel les souris ont été maintenues après administration, mais la brillance de fluorescence du tissu a diminué au cours du temps lorsque l'observation a été effectuée après 60 minutes d'élevage (figures 11 et 12). En jugeant les résultats de manière très étendue, les sites colorés convenablement de la muqueuse du gros intestin sont résumés sur le tableau 2. Tableau 2 Cytoplasme Noyau Autres Mucus N/A N/A Epithélium en colonne + N/A Cellule en gobelets - (mucus) Cellules du chorion de la membrane muqueuse N/A : non coloré, N/A : non applicable, + : coloré Exemple comparatif 3 Différence d'intensité de fluorescence Dans un microscope confocal (produit par Leica), la sensibilité spectrale peut être régulée de manière à fixer à la même valeur la brillance de la fluorescence affichée. Cela signifie que cette fonction peut être utilisée pour l'estimation relative de l'intensité de fluorescence de chacun des échantillons ayant des valeurs de brillance différentes. La brillance de fluorescence d'un échantillon avec de la fluorescéine sodique par rapport a un colorant dérivé de Monascus (jaune), de la manière calculée d'après une telle sensibilité spectrale pour parvenir au même degré de brillance de fluorescence, était égale à 0,74 fois au bout de 10 minutes ou 0,84 fois au bout de 60 minutes. En conséquence, lorsque l'échantillon a été coloré avec une solution du colorant fluorescent à la même concentration, il est possible de considérer que la brillance de fluorescence du tissu du gros intestin est plus forte lorsqu'il a été coloré avec le colorant dérivé de Monascus (jaune), par rapport à la fluorescéine sodique. Exemple 9 Un essai de coloration a été effectué avec un colorant dérivé de Monascus (jaune) (1 mg/mi, 2 ml) en perfusant ce colorant à travers le cœur d'une souris. En résultat de la coloration, le tissu du gros intestin a été coloré de manière excellente. La perméabilité au colorant par cette méthode de coloration par perfusion était plus forte qu'avec la méthode dans laquelle le tissu excisé est coloré (exemple 2) ou la méthode dans laquelle les colorants sont injectés par l'anus (exemple 7). Lors de l'observation de lumière avec un microscope confocal, le cytoplasme de presque toutes les cellules constituant la muqueuse était convenablement coloré, tandis que les constituants muqueux des cellules en gobelets et les noyaux des cellules présentaient une mauvaise capacité de coloration (figure 13). Cela signifie que les sites colorés convenablement étaient identiques à ceux des exemples 7 et 8. Exemple comparatif 4 De la fluorescéine sodique (1 mg/ml) a été également étudiée de la même manière que dans l'exemple 9. La fluorescéine sodique a donné une image colorée identique à celle de l'exemple 9, ce qui signifie que la plupart des cellules constituant le tissu muqueux étaient colorées convenablement, et la partie muqueuse des cellules en gobelets n'était pas colorée. L'état de coloration des noyaux cellulaires n'a pu être jugé (figure 14). Ces résultats étaient en accord avec ceux de l'image obtenue en résultat de la coloration par la méthode de diffusion, et de meilleurs résultats en ce qui concerne la plage de coloration, la densité, etc., ont pu être obtenus par la méthode de coloration par perfusion. A des fins d'observation de l'état des cellules et de la forme des noyaux, il est possible de considérer que l'observation avec un colorant dérivé de Monascus (jaune) donne des résultats plus utiles qu'avec la fluorescéine sodique. Exemple 10 Un colorant jaune dérivé de Monascus a été soumis à une chromatographie en phase liquide à haute vitesse (SCL10A produit par SHIMADZU CORPORATION), et ses principaux constituants, c'est-à-dire la xanthomonasine A et la xanthomonasine B, ont été extraits et purifiés. Du colorant jaune dérivé de Monascus a été injecté dans une colonne ODS (Wakosil 25018) et ensuite soumis à une séparation avec une phase mobile constituée d'un mélange de 20 % d'acétonitrile/eau. D'après le chromatogramme résultant, les constituants dans chaque pic ont été récupérés, concentrés avec un évaporateur et soumis de nouveau à une chromatographie dans les conditions précitées. Chaque fraction a été analysée en ce qui concerne sa pureté et sa masse par CL-SM (appareil Acquity UPLC-ZQ produit par Waters), et les fractions présentant un pic unique sur le chromatogramme ayant la même masse que la xanthomonasine A (ou xanthomonasine B) ont été concentrées et désignées sous le nom de xanthomonasine A (ou xanthomonasine B) purifiée. Exemple 11 En utilisant de la xanthomonasine A purifiée de l'exemple 10, un essai de coloration de gros intestin de souris a été effectué. Une souris (ddY, mâle, âgée de 9 semaines) a été anesthésiée et 100 111 de xanthomonasine A (échantillon centrifugé et séché, 10 mg/ml de sérum physiologique) ont été injectés par une aiguille d'injection dans la lumière du gros intestin à des fins de coloration. Au bout de 5 minutes, le gros intestin de souris a été prélevé et son image confocale a été prise et observée au microscope confocal (TCS SP2). La figure 15 représente l'image prise par un objectif 20 x. La figure 16 représente l'image prise par un objectif à immersion 63 x. Les valeurs de gain indiquant le gain étaient égales à 348,2 V et 339,7 V, et des images de coupes très nettes ont été obtenues avec la xanthomonasine A. Exemple 12 De la xanthomonasine A purifiée de l'exemple 10 a été utilisée dans un essai de coloration de gros intestin de souris et pour l'observation d'une coupe congelée. Une souris (ddY, mâle, âgée de 11 semaines) a été anesthésiée et 100 p.l de xanthomonasine A (échantillon centrifugé et séché, 10 mg/ml de sérum physiologique) ont été injectés par une aiguille d'injection dans la lumière du gros intestin à des fins de coloration. Au bout de 5 minutes, le gros intestin de souris a prélevé, congelé et inclus dans un composé OCT, et la coupe congelée ainsi obtenue a été coupée en lames minces ayant chacune une épaisseur de 6 pin. Les lames minces ont été observées par coloration avec l'hématoxyline-éosine et ont été également observées en ce qui concerne la fluorescence par coloration avec de la xanthomonasine A. La figure 17 représente l'image colorée à l'hématoxyline-35 éosine prise à travers un objectif 40 x et la figure 18 représente l'image fluorescente colorée a la xanthomonasine A prise à travers un objectif 63 x. Les deux images colorées indiquent que les cellules épithéliales étaient colorées de manière relativement excellente par coloration avec la xanthomonasine A, et qu'un myomère était également coloré de manière excellente. La valeur de gain, qui indique un gain, était comprise dans la plage de 300 à 500 V, indiquant une excellente propriété de coloration. Exemple 13 Des souris (ddY, mâles, âgées de 9 semaines) ont été anesthésiées et 100 pl de xanthomonasine A (échantillon centrifugé et séché, 1 mg/ml de sérum physiologique) ont été injectés par une aiguille d'injection dans la lumière du gros intestin à des fins de coloration. Les gros intestins de souris ont été prélevés respectivement au bout de 1 minute et de 10 minutes et les échantillons ont été observés au microscope confocal (TCS SP2). La figure 19 représente l'image confocale du gros intestin prélevé 1 minute après coloration et la figure 20 représente l'image confocale du gros intestin prélevé 10 minutes après coloration. Les deux images présentent des différences en fonction du temps, de la propriété de la coloration et de la perméation, mais ont été identiques en ce qui concerne les sites colorés. Il est possible de considérer que, lorsque le gros intestin a été coloré pendant 10 minutes, la visibilité a pu être améliorée davantage. Il de va de soi que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et que de nombreuses modifications peuvent y être apportées sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un ou plusieurs membres choisis parmi des colorants dérivés de Monascus, caractérisée en ce qu'elle est destinée à la production d'un agent colorant pour un endoscope. 2. Utilisation suivant la revendication 1, caractérisée en ce que les colorants dérivés de Monascus comprennent un ou plusieurs membres choisis parmi les composés représentés par les formules (1) à (5) suivantes : Al (2) dans lesquelles R2, R3, R4 et R5 représentent chacun un groupe alkyle en C1 à C11 et R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe - (CH2) nCH (NH2) COOH dans lequel n représente un nombre de 2 à 6. 15 3. Utilisation suivant la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que les colorants dérivés de Monascus consistent en un ou plusieurs membres choisis dans le groupe consistant en l'ankaflavine, la monascine, la10monascorubrine, la rubropunctatine, la monascorubramine, la rubropunctalysine et la xanthomonasine. 4. Utilisation suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'endoscope est un endoscope 5 à usage médical. 5. Utilisation suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'endoscope est un endoscope à lumière visible, un endoscope à fluorescence ou un endoscope confocal. 10 6. Utilisation suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle est destinée à l'administration orale, l'administration directe à un tractus digestif ou l'administration sous-muqueuse. 7. Utilisation suivant l'une quelconque des revendications 15 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle est destinée à la coloration de la surface de la lumière d'un tractus digestif et/ou de l'intérieur des cellules dans la lumière d'un tractus digestif. 8. Composition d'histocolorant pour un endoscope, 20 caractérisée en ce qu'elle comprend un ou plusieurs membres choisis parmi des colorants dérivés de Monascus. 9. Composition de colorant suivant la revendication 8, caractérisée en que les colorants dérivés de Monascus comprennent un ou plusieurs membres choisis parmi les 25 composés représentés par les formules (1) à (5) suivantes :dans lesquelles R1, R2, R3, R4 et R5 représentent chacun un groupe alkyle en C1 à C11 et R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe - (CH2) 1CH (NH2) COOH dans lequel n représente un nombre de 2 à 6. 10. Composition de colorant suivant la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce que les colorants dérivés de Monascus consistent en un ou plusieurs membres choisis dans le groupe consistant en l'ankaflavine, la monascine, la monascorubrine, la rubropunctatine, la monascorubramine, la rubropunctalysine et la xanthomonasine. 11. Composition de colorant suivant l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisée en ce que l'endoscope est un endoscope à usage médical. 12. Composition de colorant suivant l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisée en ce que l'endoscope est un endoscope à lumière visible, un endoscope à fluorescence ou un endoscope confocal. 13. Composition de colorant suivant l'une quelconque des revendications 8 à 12, caractérisée en ce qu'elle est administrée par voie orale, administrée directement au tractus digestif, ou administrée au niveau sous-muqueux. 14. Composition de colorant suivant l'une quelconque des revendications 8 à 13, caractérisée en ce qu'elle est destinée à la coloration de la surface de la lumière d'un tractus digestif et/ou de l'intérieur de cellules dans la lumière d'un tractus digestif.