Brevet FR2894828A1 — publié le 20070622

NOUVELLES COMPOSITIONS COSMETOLOGIQUES ET/OU DERMATOLOGIQUES A BASE DE DERIVES DE LA PROLINE ET LEURS UTILISATIONS La presente invention se rapporte aux necessites de la vie et plus particulierement aux domaines de la cosmetologie et de la dermatologie. Elie a plus particulierement pour objet de nouvelles compositions cosmetologiques et/ou dermatologiques qui provoquent une augmentation tres significative du depot de collagene de type III dans la matrice extracellulaire et qui ameliorent le transport du pro-collagene par les proteines chaperonnes, notamment HSP 47, dans les fibroblastes de derme humain. L'invention a specifiquement pour objet de nouvelles compositions cosmetologiques et dermatologiques caracterisees en ce qu'elles renferment A. titre de principe actif 15 ]'association d'un amidoester d'acide gras de 4-hydroxy proline, de formule I : 20 (I) 0 dans laquelle RI et R' l sont des chaines aliphatiques, identiques ou differentes, comportant 25 de 10 a 24 atomes de carbone en ligne droite ou ramifiee et d'un extrait de 1'epicarpe du fruit de Opuntia Ficus-indica (figue de Barbarie), dans un excipient ou un vehicule inerte, non toxique approprie a ]'application topique. L'extrait de 1'epicarpe du fruit d'Opuntia Ficus-indica est, de preference, celui obtenu par 30 le procede decrit clans le brevet EP0948340 B 1, qui consiste en un epuisement par un solvant polaire de 1'epicarpe deshydrate, en une dilution a l'eau puis en une purification par epuisement a ]'hexane. Les amidoesters de 4-hydroxyproline sont des substances nouvelles, a ]'exception de la 35 dipalmitoyl 4-hydroxyproline, deja decrite dans le brevet francais 91/12597 (Vecteurs Vesiculaires intra cellulaires et leur application en cosmetique). L'invention repose sur la constatation surprenante du fait que les amidoesters de 4-hydroxy proline entrainent bien une augmentation dose-dependante de 1'expression du collagene dans le milieu de culture des fibroblastes, par stimulation de la formation et du clivage de pro-collagene de type III dans les fibroblastes de peau humaine (FpH) et par amplification de 1'activite des enzymes de degradation MMPK1, ou de rune des families des enzymes. Les memes amidoesters encapsules dans une forme vectorisee comme un liposome, amplifient de maniere importante la synthese du pro-collagene de type III et, de plus, reduisent l'activite des MMPK1. Les extraits d'Opuntia Ficus-indica stimulent dune maniere moins importante mais statistiquement significative, 1'expression des HSP 47 qui sont rune des proteines chaperonnes du pro-collagene. 15 En revanche, on constate que la presence simultanee d'un amidoester d'acide gras de 4-hydroxyproline et d'extrait d'epicarpe du fruit d'Opuntia Ficus-indica entraine une stimulation plus importante de la synthese de HSP 47 que chacun des constituants pris isolement. 20 La presence d'extrait d'Opuntia Ficus-indica potentialise dune maniere importante 1'expression de HSP 47 par les fibroblastes du derme humain. Cet effet synergique n'entraine pas de surexpression du pro-collagene de type III induite par un amidoester de 4-hydroxyproline, mais une surexpression du collagene de type III. 25 L'addition a des fibroblastes de peau humaine cultives en presence du surnageant de culture de keratinocytes de peau humaine est effectuee comme suit : a) La culture des keratinocytes est traitee simultanement avec 1'amidoester d'acide gras de 4-hydroxyproline encapsule et 1'extrait d'Opuntia Ficus-indica pendant une nuit, soit 8 heures. 30 b) Les cellules sont rincees a trois reprises afin d'enlever toute trace des vecteurs d'esters de 4-hydroxyproline ou d'extrait d'Opuntia Ficus-indica, c) Du milieu neuf sans addition de serum de veau foetal est ajoute et laisse au repos pendant 24 heures.10 Le surnageant de ce milieu conditionne par les keratinocytes est ajoute a 50 % dans un milieu de culture de fibroblastes. On constate alors par rapport a des fibroblastes n'ayant subi aucun traitement : 1. Une amplification de la synthese du pro-collagene de type III. 2. Une reduction des metallo-proteinases et enzymes de degradation du collagene. 3. Une amelioration de la synthese du collagene de type III. On constate alors par rapport a des fibroblastes cultives en presence d'amidoesters de 4- hydroxyproline encapsule (brevet francais 91/12597) : 1. Une amplification de la synthese du pro-collagene de type III. 2. Une augmentation des molecules chaperonnes du pro-collagene (dont HSPs) 3. Une reduction des metallo-proteinases et enzymes de degradation du collagene. 4. Une amplification considerable du depot de collagene de type III. On note que les milieux conditionnes, issus de la culture de keratinocytes (Kc) traites par le melange selon l'invention, appliques a des cultures de fibroblastes de peau humaine (FpH) augmentent la transformation du pro-collagene de type III en collagene de type III, Sun facteur d'ordre 4 selon le type de cellules et/ou de leur age, pour atteindre un taux de conversion proche de 100 % (80 a 90 %). Les cellules servant de controle ont un taux de conversion du pro-collagene en collagene de l'ordre de 25 %. En consequence, les cellules traitees par le melange decrit precedemment deposent deux fois plus de collagene que les cellules traitees directement par le derive de la 4-hydroxyproline. Les amidoesters d'acide gras de 4-hydroxyproline sont prepares d'une maniere generale par reaction d'un derive fonctionnel d'acide gras, tel qu'un chlorure d'acyle, sur la 4-hydroxyproline dans un solvant polaire. Des amidoesters symetriques sont alors obtenus (R1 = R'1). On peut egalement preparer des amidoesters mixtes (R1 R'1) a partir de la N-acetyl 4-hydroxyproline. Une voie de synthese envisageable est la mise en reaction avec un derive fonctionnel de l'acide gras R'1000H choisi, par exemple 1'esterification de l'acide lui-meme. La fonction acetyl sera ensuite clivee selectivement, en etant soumise par exemple a une hydrolyse acide. La fonction amine liberee pourra alors reagir avec un derive fonctionnel de 1'acide gras R,000H choisi, tel qu'un chlorure d'acyle, si necessaire en presence de base. Un amidoester mixte sera alors obtenu. Les acides gras utilises sont en general des acides possedant de 10 a 24 atomes de carbone, comme 1'acide undecylenique, 1'acide laurique, 1'acide myrystique, 1'acide stearique, 1'acide ricinoleique et 1'acide behenique. La transterification d'un ester methylique d'acide gras est egalement possible. Les acides gras utilises peuvent etre mono- ou polyinsatures comme 1'acide oleique, 1'acide linoleique, 1'acide a- ou y-linolenique, 1'acide eicosapentaenoique ou l'acide nervonique. Les acides gras peuvent etre substitues, comme par exemple 1'acide (3-hydroxymyristique ou l'acide 12-hydroxystearique. La 4-hydroxyproline et ses amidoesters comportent deux centres d'asymetrie ; on peut separer les formes optiquement actives et les diastereoisomeres cis et trans. On pourra utiliser comme matiere premiere la 4-hydroxy proline cis ou trans. Un amidoester d'acide gras de 4-hydroxyproline, ('amidoester dipalmitoyle, de formule II : O \ C15 H31 N OH (II) 0 est deja connu et ses proprietes d'amplification de la synthese du pro-collagene et du collagene III ont deja ete decrites. Sa structure lipophile permet de le repartir sous forme de 25 liposomes dans un vecteur vesiculaire phospholipidique. La paroi lipophile des liposomes contient le derive dipalmitoyle amphiphile. Un vecteur du type liposome contenant un amidoester d'acide gras de 4-hydroxyproline agit comme un declencheur de la modulation de 1'expression des collagenes par les 30 phenotypes cellulaires. Parmi les changements observes, 1'augmentation de la synthese du collagene III est vraisemblablement le phenomene le plus important.20 L'amidoester dipalmitoyle de 4-hydroxyproline a deja ete decrit comme facteur de reparation de 1'epiderme, notamment comme agent cicatrisant. Il a egalement ete presente comme agent ameliorant l'aspect de la peau humaine, notamment dans les cas de vieillissement, en accroissant son epaisseur. Rien n'etait connu sur 1'effet des autres amidoesters de 4-hydroxyproline sur le plan pharmacologique et clinique. Les extraits d'epicarpe des fruits d'Opuntia Ficus-indica etaient deja connus pour leur action promotrice de la synthese des HSP, notamment de HSP 70 et de HSP 90. Its ont ete en particulier decrits comme utilisables dans le traitement d'ischemies vasculaires, de fibroses, des chocs ou du stress. La synergie constatee entre 1'effet des amidoesters d'acide gras de 4-hydroxyproline et d'extrait d'epicarpe de fruit d'Opuntia Ficus-indica etait tout a fait inattendue. Elie amene une expression accrue de pres de 50 % des HSP 47 par les fibroblastes et double la quantite de collagene produite, sans amplifier le pro-collagene III ni les enzymes de la famille des metallo-proteinases. L'addition d'extrait d'Opuntia Ficus-indica est active a tres faible dose. A la dose de 10 g, elle est deja significative pour 400.000 fibroblastes dans lml de milieu. On peut done considerer que les compositions selon 1'invention contiennent une dose d'aminoester de 4-hydroxyproline comprise entre 0,1 et 1 % de la preparation totale et de preference de 0,2 a 0,5 % en poids de la preparation totale, ainsi qu'une quantite d'extrait d'Opuntia Ficus-indica variant de 0,1 a 100 g en poids pour amener une telle synergie. Le rapport entre l'aminoester de 4-hydroxyproline et 1'extrait d'Opuntia Ficus-indica s'echelonne done entre 1.000.000 pour 1 a 10.000 pour 1. L'excipient utilise pour de telles compositions est un agent gelifiant tel qu'un polymere d'acide acrylique ou un ether de cellulose dans un vehicule aqueux ou hydro-alcoolique. Les compositions selon l'invention peuvent egalement etre dispersees dans un vehicule lipidique fluide ou semi-fluide pour realiser des cremes grasses ou non grasses.30 Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. EXEMPLE I Etude pharmacologique de l'association conforme a 1'invention. Expressions des HSP-47 par des fibroblastes senescentes: Effets des milieux conditionnes par les keratinocytes traites avec 1'aminoester dipalmitoyle de 4-hydroxyproline (Compose A) et d'extrait d'epicarpe du fruit d'Opuntia (Compose B) Valeur 1 Valeur 2 Valeur 3 Valeur 4 Moyenne Ecart-type Controle 0,67 0,68 0,67 0,67 0,67 0,005 Controle MC 1,01 1,04 1,02 1,02 1,02 0,013 Comp.A 0,2 % 1,92 1,94 1;97 1,93 1,94 0,022 Comp.A 0,5 % 2,39 2,42 2,43 2,36 2,40 0,032 Corn B 10 g/ml 1,5 1,59 1,57 1,57 1,56 0,039 A 0,2 + 10 g B 3,29 3,41 3,38 3,37 3,36 0,051 A 0,5 + 10 g B 2,47 2,59 2,58 2,54 2,55 0,054 Commentaire Les resultats ci-dessus montrent une augmentation tres significative de l'expression des HSP 47 par les fibroblastes apres addition du compose A dons le milieu de culture des keratinocytes. Cette augmentation est dose-dependante. De meme on note une stimulation qui est moins importante mats statistiquement significative en presence de compose B seul. Par ailleurs, lorsque A est ajoute dons le milieu de culture des keratinocytes, la concentration de 0.2 % en association avec le compose B, on assiste a une stimulation plus importante de I'expression des HSP 47 qu'avec A seul : la presence du compose B potentialise l'effet du compose A sur l'expression des HSP 47 par les fibroblastes de derme humain. La figure 1 illustre les resultats obtenus. EXEMPLE II Preparation d'un gel dermigue a base de dipalmitoyl-4-hydroxyproline et d'extrait de l'epicarpe du fruit d'Opuntia Ficus-indica. Allantoine 0,20 g 25 Sorbitol a 50 % 5,00 g Agents conservateurs (phenoxy ethanol) 0,30 g20 Carbomere (carbopol 940 P Goodrich) 0,80 g Tris (hydroxy methyl) amino methane 1,80 g Aminoester dipalmitoyle de 4-hydroxy proline 4,00 g Lecithine 0,60 g Extrait d'epicarpe de fruit d'Opuntia Ficus-indica 0,0005 g Eau q.s.p. 100 g On obtient ainsi un gel legerement jaune, opaque, possedant une viscosite determinee a 24 C au viscosimetre Brookfield RVT a 5 t/min de 60 A. 65000 mPas en fonction de la concentration en carbomere. Le pH du gel, determine a 25 C, est voisin de 7,5. REVENDICATIONS 1. Nouvelles compositions cosmetiques et/ou dermatologiques caracterisees en ce qu'elles renferment A. titre de principe actif 1'association d'un amidoester d'acide 5 gras de 4-hydroxyproline, de formule I : (I) 10 0 dans laquelle RI et R' i sont des chaines aliphatiques, identiques ou differentes, comportant de 10 a 24 atomes de carbone en ligne droite ou ramifiee et dans laquelle les asterisques representent des carbones asymetriques et d'un extrait de 1'epicarpe du fruit de Opuntia Ficus-indica (figue de Barbarie), 15 dans un excipient ou un vehicule approprie a 1'application topique. 2. Nouvelles compositions cosmetiques et/ou dermatologiques caracterisees en ce que 1'amidoester d'acide gras de 4-hydroxyproline est la dipalmitoyl-4-hydroxyproline. 20 de formule II : 3. Nouvelles compositions cosmetiques et/ou dermatologiques selon la revendication 1 ou la revendication 2, caracterisee en ce que 1'amidoester d'acide gras de 4-hydroxyproline est un amidoester de trans 4-hydroxyproline avec des acides gras comportant de 10 a 24 atomes de carbone. 4. Nouvelles compositions cosmetiques et/ou dermatologiques selon la revendication 1, caracterisee en ce que 1'extrait d'epicarpe de fruit d'Opuntia Ficus-indica est celui obtenu avec de 1'eau et epuisement a 1'hexane. 25 30 5. Nouvelles compositions cosmetiques et/ou dermatologiques selon la revendication 1, caracterisee en ce que le rapport entre l'amidoester d'acide gras de 4-hydroxyproline et 1'extrait d'epicarpe de fruit d'Opuntia Ficus-indica s'echelonne de 1.000.000 pour 1 a 10.000 pour 1. 6. Nouvelles compositions cosmetiques et/ou dermatologiques selon la revendication 1, dans lesquelles 1'excipient est un agent gelifiant ou une matiere grasse. 7. Nouvelles compositions cosmetiques et/ou dermatologiques selon la revendication 10 1, dans lesquelles le vehicule est un corps gras liquide ou semi-fluide.5