Brevet FR2893841A1 — publié le 20070601

La présente invention se rapporte à une composition pharmaceutique dépigmentante comprenant du N-[2-[[3-(4-bromophényl)-2-propényl]amino]éthyl]-5isoquinolinesulfonamide (H89) ainsi que l'utilisation d'une telle composition pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des désordres hyperpigmentaires. La présente invention relève du domaine pharmaceutique et plus particulièrement des domaines dermatologique et cosmétique. La pigmentation constitutive de la peau résulte de la présence de grains de mélanine dans les kératinocytes épidermiques. Deux catégories de pigments ou mélanines existent : les phéomélanines, pigments jaune-orange riches en soufre, présents chez les sujets à peau claire, et les eumélanines, pigments marron-noir pauvres en soufre, présents chez les sujets à peau foncée. Ces pigments sont synthétisés dans des organites intracytoplasmiques, les mélanosomes, par des cellules spécialisées originaires de la crête neurale, les mélanocytes. La synthèse de mélanines ou mélanogénèse est une voie métabolique complexe contrôlée principalement par les enzymes de la famille de la Tyrosinase : TYR (Tyrosinase), TYRP1 (Tyrosinase Related Protein 1) et DCT (Dopa-Chrome Tautomérase), qui sont localisées dans la membrane du mélanosome. La Tyrosinase est l'enzyme clé de cette voie de synthèse car elle catalyse les deux premières étapes de la mélanogénèse, l'hydroxylation de la L-Tyrosine en DOPA et l'oxydation de la DOPA en DOPAquinone (Hearing, V. J., and Jimenez, M. (1987) Mammalian tyrosinase -the critical regulatory control point in melanocyte pigmentation. Int. J. Biochem. 19, 1141-1147) ; TYRP-1 et DCT quant à elles sont surtout impliquées dans la voie de l'eumélanogénèse (Hearing, V. J. (1999) Biochemical control of melanogenesis and melanosomal organization. J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 4, 24-28). A l'issue de cette réaction, la quantité et le type de mélanine générés déterminent la couleur constitutive de la peau. Cette pigmentation peut être modifiée par des facteurs extérieurs notamment les radiations solaires, qui représentent le stimulus physiologique le plus important de la mélanogénèse. Cette induction de la 2 synthèse de pigments par les radiations UV est caractérisée macroscopiquement par un assombrissement de la peau ou bronzage. Ce processus joue un rôle crucial de protection contre le photovieillissement et contre la photocarcinogénèse. Les radiations UV peuvent agir directement sur les mélanocytes ou indirectement par l'intermédiaire de la libération de facteurs kératinocytaires qui régulent la mélanogénèse (Gilchrest, B. A., Park, H. Y., Eller, M. S., and Yaar, M. (1996) Mechanisms of ultraviolet light-induced pigmentation. Photochem. Photobiol. 63, 1-10). Parmi les agents sécrétés par le kératinocyte sous l'influence des UV, l'a-MSH (alpha-Melanocyte stimuling hormone), codée par le gène de la proopiomélanocortine, est l'un des activateurs les plus importants de la mélanogenèse. Les effets de l'a-MSH sont déclenchés par sa liaison au récepteur MC1 (MC1R :récepteur à la mélanocortine 1) , présent sur le mélanocyte. Le MC1R est un récepteur à 7 domaines transmembranaires couplé à une protéine G de type as qui active l'adénylate cyclase induisant une augmentation de la teneur intramélanocytaire en AMPc et l'activation de la protéine kinase A (PKA). In vivo, il a été observé que des injections d'a-MSH chez des volontaires humains induisaient une stimulation de la pigmentation sans exposition au soleil (Levine, N., Sheftel, S. N., Eytan, T., Dorr, R. T., Hadley, M. E., Weinrach, J. C., Ertl, G. A., Toth, K., McGee, D. L., and Hruby, V. J. (1991) Induction of skin tanning by subcutaneous administration of a potent synthetic melanotropin. Jama. 266, 2730-2736). De plus, une hyperpigmentation cutanée est observée chez des patients atteints du syndrome de Mc Cune-Albright chez lesquels une activation soutenue de l'adénylate cyclase entraînant une augmentation des taux intracellulaires en AMPc a été observée. Chez les sujets atteints du syndrome de Carney, une mutation du gène codant pour la sous-unité régulatrice alpha typel de la PKA conduit à une activation constitutive de la PKA. Le phénotype décrit comprend des désordres pigmentaires tels que la présence de macules hyperpigmentées (Kirschner, L. S., Carney, J. A., Pack, S. D., Taymans, S. E., Giatzakis, C., Cho, Y. S., Cho-Chung, Y. S., and Stratakis, C. A. (2000) Mutations 3 of the gene encoding the protein kinase A type I-alpha regulatory subunit in patients with the Carney complex. Nat. Genet. 26, 89-92). ln vitro, le traitement de mélanocytes humains normaux (Hunt, G., Todd, C., Cresswell, J. E., and Thody, A. J. (1994) Alpha-melanocyte stimulating hormone and its analogue Nle4DPhe7 alpha-MSH affect morphology, tyrosinase activity and melanogenesis in cultured human melanocytes. J. Cell. Sci. 107 (Pt 1), 205-211) ou de cellules de mélanomes (Hill, S. E., Buffey, J., Thody, A. J., Oliver, I., Bleehen, S. S., and Mac Neil, S. (1989) Investigation of the regulation of pigmentation in alpha-melanocyte-stimulating hormone responsive and unresponsive cultured B16 melanoma cells. Pigment Cell. Res. 2, 161-166) à l'a-MSH stimule la mélanogénèse. Ces effets peuvent être reproduits par un agent pharmacologique, la Forskoline, activateur direct de l'adénylate cyclase (Englaro, W., Rezzonico, R., Durand-Clement, M., Lallemand, D., Ortonne, J. P., and Ballotti, R. (1995) Mitogen-activated protein kinase pathway and AP-1 are activated during cAMP-induced melanogenesis in B-16 melanoma cells. J. Biol. Chem. 270, 24315-24320). L'ensemble de ces données démontrent le rôle crucial de la voie AMPc / PKA dans le contrôle de la pigmentation. Les travaux réalisés par les inventeurs ont montré que l'activation de la voie de l'AMPc / PKA, conduit à une augmentation de l'activité transcriptionnelle des gènes de la Tyrosinase (TYR), TYRP-1 et DCT provoquant une augmentation de leur expression (Bertolotto, C., Bille, K., Ortonne, J. P., and Ballotti, R. (1996) Regulation of tyrosinase gene expression by cAMP in B16 melanoma cells involves two CATGTG motifs surrounding the TATA box: implication of the microphthalmia gene product. J. Cell. Biol. 134, 747-755) (Bertolotto, C., Busca, R., Abbe, P., Bille, K., Aberdam, E., Ortonne, J. P., and Ballotti, R. (1998) Different cis-acting elements are involved in the regulation of TRP1 and TRP2 promoter activities by cyclic AMP: pivotai role of M boxes (GTCATGTGCT) and of microphthalmia. Mol. Cell. Biol. 18, 694-702). Ainsi, 4 l'AMPc via l'activation de la PKA et du facteur de transcription CREB (cAMP responsive element binding protein) stimule la transcription de MITF (Microphthalmia Associated Transcription Factor), un facteur de transcription de type basique hélice-boucle-hélice, dont la mutation provoque, chez l'homme et la souris, des défauts pigmentaires (Tassabehji, M., Newton, V. E., and Read, A. P. (1994) Waardenburg syndrome type 2 caused by mutations in the human microphthalmia (MITF) gene. Nat. Genet. 8, 251-255). MITF en se fixant à la boîte M présente dans les promoteurs des gènes des enzymes mélanogéniques stimule l'expression de TYR, TYRP1 et DCT et augmente la mélanogénèse (Bertolotto, C., Abbe, P., Hemesath, T. J., Bill, K., Fisher, D. E., Ortonne, J. P., and Ballotti, R. (1998) Microphthalmia gene product as a signal transducer in cAMP-induced differentiation of melanocytes. J. Cell. Biol. 142, 827-835). Il a été montré que la Tyrosinase en tant qu'enzyme limitante de la mélanogénèse, est contrôlée par des mécanismes transcriptionnels mais également post traductionnels. Il est connu que des variations de l'activité de la Tyrosinase dans différents types cellulaires ne peuvent être expliquées sur l'unique base de la quantité d'enzymes présentes dans la cellule. Ceci met en avant l'importance d'évènements post-traductionnels dans ce phénomène (Buffey, J. A., Hill, S. E., Bleehen, S. S., Thody, A. J., and Mac Neil, S. (1991) Evidence for a calcium/calmodulin involvement in density-dependent melanogenesis in murine B16 melanoma cells. Pigment Cell. Res. 4, 112-119, Buffey, J. A., Edgecombe, M., and Mac Neil, S. (1993) Calcium plays a complex raie in the regulation of melanogenesis in muring B16 melanoma cells. Pigment Cell. Res. 6, 385-393, Parker, C., and Sherbet, G. V. (1993) The Ca2+ channel blocker verapamil enhances melanogenesis without altering metastatic potential in the B16 murine melanoma. Melanoma Res. 3, 347-350, Chakraborty, A. K., Funasaka, Y., Komoto, M., and Ichihashi, M. (1998) Effect of arbutin on melanogenic proteins in human melanocytes. Pigment Oeil. Res. 11, 206-212). Certaines études montrent que l'activité des molécules de Tyrosinase déjà présentes dans la cellule peut être augmentée, par des phosphorylations par la PKCbeta (Park, H. Y., Russakovsky, V., Ohno, S., and Gilchrest, B. A. (1993) The beta isoform of protein kinase C stimulates human melanogenesis by activating tyrosinase in pigment cells. J. Biol. Chem. 268, 11742-11749), ou par des glycosylations (Imokawa, G., and Mishima, Y. (1986) Importance of glycoproteins in the initiation of melanogenesis: an electron microscopic study of B-16 melanoma celas after release from inhibition of glycosylation. J. lnvest. Dermatol. 87, 319- 325 ; Imokawa, G., and Mishima, Y. (1982) Loss of melanogenic properties in tyrosinases induced by glucosylation inhibitors within malignant melanoma cells. Cancer Res. 42, 1994-2002). Cette glycosylation de la Tyrosinase qui se déroule dans le Réticulum Endoplasmique constitue un système de contrôle rigoureux impliquant des molécules chaperonnes qui permet de limiter l'activité des protéines qui ne sont pas glycosylées correctement (Branza-Nichita, N., Negroiu, G., Petrescu, A. J., Garman, E. F., Platt, F. M., Wormald, M. R., Dwek, R. A., and Petrescu, S. M. (2000) Mutations at critical N-glycosylation sites reduce tyrosinase activity by altering folding and quality control. J. Biol. Chem. 275, 8169-8175), et permet ensuite l'adressage des protéines correctement modifiées vers leur compartiment cible. D'autres types de régulation peuvent encore intervenir dans le mélanosome lui-même. Les domaines catalytiques de la Tyrosinase et des autres enzymes impliquées dans la mélanogénèse étant localisés à l'intérieur du mélanosome, il a été démontré que leur activité pourrait dépendre de l'environnement intramélanosomal, et notamment du pH. Il existe encore beaucoup de controverses sur le pH nécessaire à une activité optimale de la Tyrosinase ; le pH doit être acide pour certains auteurs (Devi, C. C., Tripathi, R. K., and Ramaiah, A. (1987) pH-dependent interconvertible allosteric forms of murine melanoma tyrosinase. Physiological implications. Eur. J. Biochem. 166, 705-711), (Tripathi, R. K., Chaya Devi, C., and Ramaiah, A. (1988) pH-dependent interconversion of two forms of tyrosinase in human skin. Biochem. J. 252, 481-487), neutre pour d'autres équipes (Hearing, V. J., and Ekel, T. M. (1976) Mammalian tyrosinase. A comparison of tyrosine hydroxylation and melanin formation. Biochem J. 157, 549-557). Ainsi, le groupe de Thody met en évidence que des conditions acides dans le mélanosome sont inhibitrices de la mélanogénèse alors que celle-ci est augmentée avec le pH (Ancans, J., and Thody, A. J. (2000) Activation of melanogenesis by vacuolar type H(+)-ATPase inhibitors in amelanotic, tyrosinase positive human and mouse melanoma cells. FEBS Lett. 478, 57-60), (Ancans, J., Tobin, D. J., Hoogduijn, M. J., Smit, N. P., Wakamatsu, K., and Thody, A. J. (2001) Melanosomal pH controls rate of melanogenesis, eumelanin/phaeomelanin ratio and melanosome maturation in melanocytes and melanoma cells. Exp. Cet/. Res. 268, 26-35). De plus, certains auteurs ont rapporté une augmentation de l'activité de la Tyrosinase dans les mélanomes B16 en présence de composés tels que le NH4CI ou encore des ionophores comme la Nigericine ou la Monensine (Saeki, H., and Oikawa, A. (1983) Stimulation of tyrosinase activity of cultured melanoma celas by lysosomotropic agents. J. Cell. Physiol. 116, 93-97 ; Saeki, H., and Oikawa, A. (1985) Stimulation by ionophores of tyrosinase activity of mouse melanoma celas in culture. J. Invest. Dermatol. 85, 423-425). A l'inverse, d'autres équipes montrent que la tyrosinase requiert un pH acide pour une activité optimale (Mani, I., Sharma, V., Tamboli, I., and Raman, G. (2001) Interaction of melanin with proteinsthe importance of an acidic intramelanosomal pH. Pigment Cell. Res. 14, 170-179). La protéine p, pourrait être un des acteurs de la régulation du pH intramélanosomal (Ancans, J., Hoogduijn, M. J., and Thody, A. J., (2001) Melanosomal pH, pink locus protein and their roles in melanogenesis. J. Invest. Dermatol. 117, 158-159 ; Brilliant, M., and Gardner, J. (2001) Melanosomal pH, pink locus protein and their roles in melanogenesis. J. Invest. Dermatol. 117, 386- 387 ; Brilliant, M. H. (2001) The mouse p (pink-eyed dilution) and human P genes, oculocutaneous albinism type 2 (OCA2), and melanosomal pH. Pigment Cell. Res. 14, 86-93 ; Puri, N., Gardner, J. M., and Brilliant, M. H. (2000) Aberrant pH of melanosomes in pink-eyed dilution (p) mutant melanocytes. J. Invest. Dermatol 115, 607-613). p est une protéine à 12 domaines trans-membranaires qui est mutée dans l'OCA-2 (Oculocutaneous albinism) et chez la souris pink-eyed. Les patients atteints d'OCA2 présentent, entre autre, des défauts pigmentaires au niveau des cheveux, de la peau et des iris avec une faible capacité à bronzer. 7 Initialement, la protéine p a été proposée comme un transporteur de Tyrosine dans le mélanosome, cette fonction a ensuite été exclue (Gahl, W. A., Potterf, B., Durham-Pierre, D., Brilliant, M. H., and Hearing, V. J. (1995) Melanosomal tyrosine transport in normal and pink-eyed dilution murine melanocytes. Pigment CO. Res. 8, 229-233). Plus récemment, des études ont suggéré un rôle de la protéine p dans le contrôle du pH mélanosomal (Ancans, J., Hoogduijn, M. J., and Thody, A. J., (2001) Melanosomal pH, pink locus protein and their roles in melanogenesis. J. Invest. Dermatol. 117, 158-159 ; Brilliant, M., and Gardner, J. (2001) Melanosomal pH, pink locus protein and their roles in melanogenesis. J. Invest. Dermatol. 117, 386-387 ; Brilliant, M. H. (2001) The mouse p (pink-eyed dilution) and human P genes, oculocutaneous albinism type 2 (OCA2), and melanosomal pH. Pigment CO. Res. 14, 86-93 ; Puri, N., Gardner, J. M., and Brilliant, M. H. (2000) Aberrant pH of melanosomes in pink-eyed dilution (p) mutant melanocytes. J. Invest. Dermatol 115, 607-613). Cependant, d'autres travaux suggèrent que la protéine p pourrait réguler l'adressage au mélanosome des protéines Tyrosinase et TYRP-1 (Manga, P., Boissy, R. E., Pifko-Hirst, S., Zhou, B. K., and Orlow, S. J. (2001) Mislocalization of melanosomal proteins in melanocytes form mice with oculocutaneous albinism type 2. Exp. Eye Res. 72, 695-710) ou encore entrer en jeu dans la formation d'un complexe stabilisateur avec TYR (Lamoreux, M. L., Zhou, B. K., Rosemblat, S., and Orlaow, S. J. (1995) The pinkeyed-dilution protein and the eumelanin/pheomelanin switch: in support of a unifying hypothesis. Pigment Cell. Res. 8, 263-270). Quoiqu'il en soit, et comme indiqué plus haut, la PKA est une protéine clé dans les voies de signalisation impliquées dans l'expression de la TYR et les inventeurs ont, de façon surprenante, mis en évidence que seul le H89, connu comme un inhibiteur pharmacologique de la PKA (Hidaka H.et Kobayashi R. (1992) Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol. 32, 377-397), avait un fort pouvoir dépigmentant sur les cellules de mélanomes, en particulier les mélanomes de souris B16 et les mélanomes humains MNT1, contrairement aux autres 8 inhibiteurs pharmacologiques de la PKA de la même famille comme le dihydrochlorure de H9, dihydrochlorure de HA1077, H7, et le dihydrochlorure de H8 qui eux ne sont pas actifs. En effet, la diminution de la pigmentation au sein des cellules B16 obtenue avec les autres inhibiteurs s'accompagne de toxicité entraînant la mort des cellules. Le H89 est connu depuis plusieurs années en tant qu'inhibiteur de la protéine kinase A, laquelle intervient dans de nombreux processus physiologiques et pathologiques tels que la régulation de l'expression génique, le métabolisme des lipides, l'apprentissage et la mémoire, ainsi que dans les processus de cancérisation. Afin de comprendre les mécanismes d'action du H89r les inventeurs ont étudié les effets de cette molécule sur différents paramètres régulateurs de la mélanogénèse. Ils ont observé que le H89 entraînait une diminution de l'expression de la Tyrosinase et de MITF ; cependant, ces effets modestes sur l'expression et l'activité de la Tyrosinase ne peuvent en aucun cas expliquer les effets dépigmentants drastiques qu'il provoque. L'utilisation de sondes sensibles au pH (DAMP) a permis de montrer que la Forskoline provoquait une augmentation du pH des mélanosomes alors que le H89 conduit à une acidification importante qui pourrait être responsable de l'inhibition de la synthèse de mélanines. Enfin, les inventeurs ont découvert que la Forskoline augmente fortement l'expression du gène codant pour la protéine p et que l'inhibition spécifique de son expression bloque la pigmentation induite par la Forskoline. Bien que le H89 affecte peu l'expression de p induite par la Forskoline, il pourrait exercer des effets dépigmentant et acidifiant par l'intermédiaire d'une inhibition de l'activité de la protéine p. Il existe donc une régulation physiologique du pH intramélanosomal qui joue un rôle important dans le contrôle de la mélanogénèse. Cette régulation du pH du mélanosome est une piste intéressante pour l'élaboration de nouveaux agents dépigmentants. La présente invention a par conséquent pour objet une composition pharmaceutique dépigmentante comprenant, dans un support pharmaceutiquement acceptable, une quantité efficace de H89 (N-[2-[[3-(4-bromophényl)-2-propényl]amino]éthyl] -5-isoquinolinesulfonamide). 10 Par support pharmaceutiquement acceptable , on entend tout support approprié à la forme galénique sous laquelle sera préparée la composition de l'invention. Plus particulièrement, l'homme du métier choisira le support pharmaceutiquement acceptable approprié selon que la composition de 15 l'invention est destinée à une administration orale ou à une utilisation topique. Par quantité efficace , on entend une quantité suffisante pour obtenir un effet dépigmentant. Les compositions pharmaceutiques dépigmentantes de l'invention 20 peuvent par ailleurs se présenter pour la voie orale sous la forme de comprimés, de gélules, de dragées, de sirops, de suspensions, de solutions, de poudres, de granulés, d'émulsions, de microsphères ou de nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques permettant une libération contrôlée. 25 Pour l'application topique, les compositions peuvent se présenter sous forme liquide, pâteuse, ou solide, et plus particulièrement sous forme d'onguents, de crèmes, de laits, de pommades, de poudres, de tampons imbibés, de syndets, des lingettes, de solutions, de collyres, de gels, d'émulsions huile dans eau, d'émulsions eau dans huile,de sprays, de mousses, de suspensions, 30 de lotions, de sticks, de shampoings, ou de bases lavantes. Elle peut également se présenter sous forme de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques ou de patchs polymériques et d'hydrogels5 10 permettant une libération contrôlée. Cette composition pour application topique peut se présenter sous forme anhydre, sous forme aqueuse ou sous la forme d'une émulsion. La composition pharmaceutique dépigmentante de l'invention, lorsque celle-ci est destinée à une administration orale, est administrée à une dose journalière comprise entre 0,001 mg/kg à 100 mg/kg de poids corporel, en 1 à 3 prises. La composition pharmaceutique selon l'invention comprend du H89 à une concentration généralement comprise entre 0,001 et 10% en poids, de préférence entre 0,01 et 5% en poids, par rapport au poids de la composition pour l'administration par voie systémique. Selon un mode de réalisation préféré de la présente invention, la composition pharmaceutique dépigmentante à usage topique comprend une quantité de H89 comprise entre 0.0001% % et 10 % en poids de H89 par rapport au poids total de la composition, de préférence entre 0.001% et 5 % du poids de ladite composition. II est à noter que la composition pharmaceutique dépigmentante de la l'invention peut en outre comprendre un ou plusieurs autres composé(s) ayant une activité complémentaire et/ou empruntant d'autres voies métaboliques que celle du H89 tels que par exemple, un filtre solaire, un agent anti-inflammatoire stéroïdien ou non-stéroïdien, ou un autre agent dépigmentant notamment choisi parmi un modulateur de MC1 R, un dérivé phénolique, un alpha hydroxyacide, un inhibiteur de la tyrosinase et un rétinoïde. Parmi les filtres solaires utilisables, on peut citer notamment les filtre solaires physiques tels que le dioxyde de titane ou l'oxyde de zinc, et les filtres solaires chimiques tels que l'octocrylene, l'ethylhexyl methoxycinnamate, l'octyl salicylate, l'avobenzone, l'oxybenzone, l'ecamsule ou le drometrizole trisiloxane ou leurs mélanges. 11 On peut citer comme autre agent dépigmentant, à titre d'exemple non limitatif : les dérivés phénoliques, tels que l'hydroquinone, le monoethyl éther d'hydroquinone, monobenzylether d'hydroquinone ou le 4-hydroxyanisol ; les hydroxyacides tels que l'acide glycolique; les rétinoïdes, tels que l'adapalène, la trétinoïne ou l'acide rétinoïque ; les modulateurs de MC1 R ; les inhibiteurs de tyrosinase, tels que les composés thioimidazoles décrits dans la demande FR0504444, ou les composés triazoles thiols décrits dans la demande FR0503249. 15 Bien évidemment, l'homme du métier sera tout à fait en mesure d'ajouter aux susdites compositions d'autres ingrédients ou excipients dermatologiquement (c'est-à-dire pharmaceutiquement et/ou cosmétiquement) acceptables et appropriés pour une utilisation conforme à celle cidessous décrite. 20 Un autre aspect de la présente invention se rapporte à l'utilisation d'une composition pharmaceutique ci-dessus décrite pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des désordres hyperpigmentaires. 25 Les compositions de l'invention conviennent particulièrement bien au traitement et/ou à la prévention des désordres hyperpigmentaires tels que le melasma, le chloasma, les lentigines, le lentigo sénile, les taches de rousseur, les hyperpigmentations post-inflammatoires dues à une abrasion et/ou une brûlure et/ou une cicatrice et/ou une dermatose et/ou une allergie de contact; les 30 nevi, les hyperpigmentations à déterminisme génétique, les hyperpigmentations d'origine métabolique ou médicamenteuse, les mélanomes ou toutes autres lésions hyperpigmentaires. 10 Les compositions selon l'invention trouvent également une application dans le domaine cosmétique, en particulier dans la protection contre les aspects néfastes du soleil, pour prévenir et/ou pour lutter contre le vieillissement photo- induit ou chronologique de la peau et des phanères. La composition peut comprendre en outre tout additif usuellement utilisé dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, tel que des séquestrants, des antioxydants, des filtres solaires, des conservateurs, des charges, des électrolytes, des humectants, des colorants, de bases ou d'acides usuels, minéraux ou organiques, des parfums, des huiles essentielles, des actifs cosmétiques, des hydratants, des vitamines, des acides gras essentiels, des sphingolipides, des agents apaisants et protecteurs de la peau tels que l'allantoïne. Bien entendu l'homme du métier veillera à choisir ce ou ces éventuels composés complémentaires, et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses de la composition selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées. Ces additifs peuvent être présents dans la composition à raison de 0,001 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les compositions pharmaceutiques de l'invention pourront également être utilisées pour la préparation d'un médicament destiné à éclaircir la peau indépendamment de tout évènement préalable ayant conduit à un brunissement accidentel de la peau. Les quantités des compositions de l'invention à appliquer sur la peau, les fréquences d'application et la durée du traitement seront adaptées à la zone de peau à traiter ainsi qu'à la pathologie à traiter ou encore de l'effet esthétique recherché. Quel que soit le but à atteindre, l'effet recherché est d'éclaircir la peau sur une zone plus ou moins étendue. Ceci revient à l'obtention d'une réduction de la pigmentation de la peau visible à l'oeil nu et constaté après une certaine durée d'application d'une composition de l'invention. L'invention a donc également pour objet un procédé cosmétique de dépigmentation de la peau ou de diminution de la production de mélanine comprenant l'application topique sur la peau à dépigmenter d'une composition telle que ci-dessus décrite. LEGENDES DES FIGURES : Fiqure 1 : H89 inhibe la synthèse des mélanines (A) Dosage des mélanines en cellules B16 en condition contrôle ou stimulées par 20 M de Forskoline (FSK) et de 5 M de H89 pendant 48 h. La quantité est évaluée par mesure de l'absorbance à 405 nm et rapportée à la quantité de protéines. Les résultats sont exprimés en facteur de stimulation par rapport aux cellules contrôle et représentent la moyenne de trois expériences indépendantes. (B) Dosage des mélanines des mélanomes MNT-1 stimulées 48 h en présence de H89. Les résultats sont exprimés en facteur de stimulation par rapport aux cellules contrôle. Figure 2 : H89 inhibe l'activité du promoteur de la Tyrosinase et de MITF Les cellules B16 sont transfectées avec 0,3 g de plasmide rapporteur pTyro (A), p-MITF (B) et pTYRP-1 (C). Elles sont stimulées 48 h en présence de 20 laM de FSK et de 5 M de H89. Les résultats sont exprimés en facteur de stimulation de l'activité luciférase basale. Fiqure 3: H89 inhibe l'activité DOPA Oxydase stimulée par la Forskoline Dosage de l'activité DOPA Oxydase sur lysat de cellules B16 (60 g) traitées 48 h à la Forskoline 20 M et H89 5 .tM. 14 Figure 4 : Ultrastructure des mélanomes B16 en présence de Fsk et L9 Microscopie électronique de coupes ultrafines de B16 traitées 48h avec différents effecteurs. Les flèches creuses représentent les mélanosomes stade I, les pleines, les mélanosomes stade II, les triangles creux les mélanosomes stade III, les pleins, les mélanosomes stade IV. Figure 5 : Acidification des mélanosomes sous l'action du H89 Microscopie confocale des cellules B16, traitées 48h avec les différents effecteurs et marqués au DAMP (vert), et TYRP-1, B8G3 (1 :10) (A), ou Pmel17, HMB45 (1 :20) (rouge). Les exemples ci-après ne sont mentionnés que pour illustrer certains aspects de la présente invention. En aucune manière ils ne peuvent être considérés comme limitant l'enseignement de la présente description. EXEMPLES : Exemple 1 : Matériel et Méthodes 1- Matériels A. Systèmes cellulaires Lignées de mélanomes de souris B16F10, humains MNT-1. 25 B. Plasmides - Le plasmide pTyro contient un fragment de 2,2 kb du promoteur de la Tyrosinase, cloné en amont du gène rapporteur de la luciférase dans le vecteur pGL2B (Promega). 30 - Le plasmide pTYRP1 contient un fragment de 1,2 kb du promoteur TYRP1, en amont du gène rapporteur de la luciférase dans le vecteur pGL2B. 5 10 15 20 30 15 - Le plasmide pMITF contient un fragment 2,1 kb du promoteur MITF, en amont dugène rapporteur de la luciférase dans le vecteur pGL2B. C. Anticorps 1. Anticorps primaires Ac anti-Tyrosinase, Pep7, polyclonal de lapin dirigé contre un peptide correspondant à la partie C terminale de la Tyrosinase de souris. Ac anti-TYRP1, Pepl, polyclonal de lapin dirigé contre un peptide correspondant à la partie C terminale de TYRP1 de souris (Dr V. Hearing, Bethesda, USA). Anticorps anti-Pmel-17, Pepl3, polyclonal de lapin dirigé contre un peptide correspondant à la partie C terminale de Pmel-17 de souris (Dr V. Hearing, Bethesda, USA). HMB45, monoclonal de lapin dirigé contre une chaîne oligosaccharidique sensible à la neuraminidase (DakoCymation France). Ac anti-MITF, monoclonal C5 dirigé contre une protéine de fusion exprimant le fragment Taq-Sac de l'ADNc de MITF humaine (Abcam). Ac anti-ERK1, monoclonal dirigé contre un peptide synthétique correspondant à la région carboxy-terminale de ERK1 de rat (ERK1) (Santa cruz). B8G3: anticorps monoclonal de souris contre Tyrp1 de souris. 5 ( Dr Parson, Brisbane, Queensland, Australia). Anti-DNP, polyclonal de lapin contre le dinitrophenol. (Molecular Porbe). 2. Anticorps secondaires Anti lapin et anti souris, fait chez la chèvre, marqués Texas Red et FITC, utilisés au 1/1000ee, Anticorps de souris IgG Alexa 350, utilisé au 1/100ème Molecular Probes distribué par Invitrogen France. 16 Anti lapin et anti souris, fait de chèvre, couplés à la péroxydase provenant de chez Dakopatts (Glostrup, Danemark) et utilisés au 1/3000è'. D. Tampons PBS (Phosphate Buffer Saline) : NaCI 140 mM, KCI 3 mM, NaH2PO4 6 mM, KH2PO4 1 mM, pH7 (a) Tampon de lyse : 50 mM Tris pH 7,4, 150 mM NaCl, 1 % Triton X-100, 10 Al leupeptine, 1 mM AEBSF, 100 U/ml aprotinine, 10 mM NaF et 1 mM Na3VO4. (b) Tampon de reprise : 40 mM Na2HPO4, 3 % SDS, 10 Glycérol, 0,01 % bleu de bromophénol, 10 % _betamercaptoéthanol. (c) Tampon de saturation : 10 mM Tris HCI pH 7,4 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0,1 % Tween 20, 3 % BSA, 5 % gélatine. (d) Tampon de lavage : 10 mM Tris, pH 7,6, 150 mM NaCl, 1 % Triton X-100. (e) Tampon de solubilisation : 25 mM Tris pH8, 1 % Triton X-100, 2 mM EDTA, 2 mM DTT. (f) 1,33 mg/ml ONPG, 200 mM sodium de phosphate pH 7,3, 100 mM _beta-mercaptoéthanol, 2 mM MgCl2. (g) Tampon Phosphate 0,1 M pH 6,8, 1 % Triton X-100. E. Effecteurs utilisés 25 - Activateur de l'adénylate cyclase : Forskoline (Sigma France) Inhibiteur de la PKA : H89 (Biochem France) II- Méthodes 30 A. Culture cellulaire - Les lignées de mélanomes de souris B16F10 sont cultivées dans du DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) supplémenté 10 15 20 17 avec 7 % de SVF (Sérum de Veau Foetal) et 100 U/ml / 50 g/ml de pénicilline / streptomycine. Les lignées de mélanomes humains MNT-1 sont cultivées dans du DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) supplémenté avec du AIM-V medium (Gibco) 10 %, FBS 20 %, NEA (acides aminés non essentiels) 1 %, Sodium pyruvate 1 %, 100 U/ml / 50 g/ml de pénicilline / streptomycine. Les deux lignées cellulaires sont maintenues dans une atmosphère humidifiée à 37 C, 5 % de CO2. B. Dosaqe des Mélanines Les cellules de mélanomes B16 (150.103 par puits de 35 mm de diamètre) sont incubées 48 h à 37 C en présence des différents effecteurs puis centrifugées. Les culots sont ensuite dissous dans 100 pl de NaOH 1M à 70 C pendant 2 h afin de dissoudre les mélanines. La quantité relative de mélanine est évaluée par mesure de la DO à 405 nm et rapportée à la quantité de protéine. Les résultats sont exprimés en niveau de stimulation par rapport à la condition contrôle. Le même traitement est appliqué aux cellules de mélanomes humains, 20 MNT-1. C. Western blot Les mélanomes B16 sont ensemencés à 200.103 cellules par puits de 35 mm de diamètre, puis stimulés en Forskoline et H89, à des temps variables. 25 Les cellules sont ensuite lysées dans le tampon (a) pendant 10 minutes à 4 C. Puis, 30 g de protéines sont dénaturées 4 minutes à 90 C dans du tampon de reprise (b). Les échantillons protéiques sont ensuite séparés par électrophorèse sur un gel de polyacrylamide 10 % en présence de SDS et transférés sur une 30 membrane de PVDF (Polyvinylidene fluoride) (Immobilon, Millipore), pré-humidifiée dans un bain de méthanol. La membrane est saturée pendant 1 heure à 25 C dans le tampon (c). L'anticorps primaire est incubé 18 h sur la membrane à 4 C. Le lendemain, 3 lavages de 10 minutes sont effectués dans le tampon de lavage (d). L'anticorps secondaire couplé à la péroxydase de Raifort (Dakopatts) est ensuite incubé 1 heure à 25 C. 3 lavages sont de nouveau effectués, les protéines d'intérêt sont révélées par la technique ECL Enhance Chemiluminescence , selon le protocole proposé par le fabricant (Amersham ). D. Transfection et dosaqe de l'activité luciférase Les cellules de mélanomes B16 (20.103 cellules par puits de 16 mm de diamètre) sont transfectées de façon transitoire, le transfectant utilisé est un lipide cationique, la Lipofectamine (Invitrogen). Pour chaque point, 0,3 g de plasmide rapporteur pTyro, pTYRP1 ou pMITF ainsi que 0,05 p.g de pCMV_beta-gal sont incubés avec 2 .tl de lipofectamine dans 25 l d'OptiMEM (Invitrogen). Le mélange est déposé sur les cellules pendant 6 h, il est ensuite remplacé par du DMEM 7 % SVF en présence de Forskoline (20 M) ou/et H89 (5 M). Les cellules sont solubilisées 48 h après transfection dans un tampon (e) pour la mesure de leur activité luciférase et beta-galactosidase. 10 .tl d'extraits cellulaires sont mis en présence de 50 l de luciférine et l'activité luciférase est mesurée par un luminomètre. En parallèle 20 l d'extraits cellulaires sont incubés dans 25 l de tampon contentant de I'ONPG (f) qui permet de mesurer l'activité beta- galactosidase par spectrophotométrie à 405 nm. Pour chaque point, l'activité luciférase est corrigée par l'activité de la beta-galactosidase. E. Mesure de l'activité DOPA Oxydase Les B16 sont ensemencées à 200.103 cellules par puits de 35 mm de diamètre, incubées en présence de Forskoline (20 M) et H89 (5 M). Les protéines sont solubilisées dans le tampon (g) pendant 3 minutes à 4 C, puis dosées par la technique Bio-rad Protein Assay. Les lysats (60 g de protéines) sont ensuite incubés avec 200 g de L-DOPA dans du tampon Phosphate à 37 C. Une cinétique de la réaction est réalisée par mesure de l'absorbance du produit formé à 570 nm toutes les 30 minutes. 19 F. Immunofluorescence indirecte Les mélanomes B16 sont ensemencés sur des lamelles en verre à 15.103 cellules par puits de 24 mm de diamètre. Les cellules sont traitées 48 h à la Forskoline (20 M) et H89 (5 M), puis lavées avec du milieu sans sérum et incubées 20 minutes en présence de DAMP (30 M). La fixation est réalisée à 25 C dans du PFA (Paraformaldéhyde) 3 %, 20 minutes, les lamelles sont ensuite lavées en PBS, incubées 10 minutes dans du NH4CI et enfin perméabilisées en PBS 0,1 % triton 2 minutes. Les lamelles portant les cellules sont alors incubées dans l'Anti DNP, Ac secondaire de lapin marqué à la fluorescence (FITC) au 1/50ème en PBS 1 % BSA (Bovine Serum Albumine). Puis, le marquage avec l'anticorps primaire monoclonal (B8G3 contre TYRP-1 au 1/10ème, HMB45 contre Pmel-17 au 1/20ème) est réalisé en PBS 1 % BSA. 3 lavages en PBS sont ensuite effectués, puis l'anticorps secondaire au 1/1000ème couplé au Texas Red est incubé. Le marquage des cellules est visualisé à l'aide d'un microscope à épifluorescence (Axiophot Zeiss). G. Microscopie Electronique Les B16 sont ensemencés à 200.103 cellules par puits de 35 mm de diamètre, incubés en présence de Forskoline (20 M) et H89 (5 M) 48 h. Les cellules sont fixées en glutaraldéhyde 2 % pendant 3 h à 4 C, suivi d'une post fixation par l'acide osmique 2 % dans l'eau, pendant 1 h à 4 C. Les cellules subissent ensuite des déshydratations successives dans des bains d'alcool 30 , 50 , 75 , 95 durant 15 minutes chacun puis à 100 toute la nuit. Une substitution est réalisée dans l'épon et l'alcool absolu en quantité 50-50 pendant 3 h, puis en quantité 75-25, et enfin dans l'épon pur 18 h. Les cellules sont ensuite incluses dans de la gélatine durant 2 jours à 60 C. Des coupes de 700 à sont enfin réalisées suivi d'un marquage à l'acétate d'uranyle et au citrate de Pb. Exemple 2 : Résultats I- Etude de l'effet du H89 sur la régulation de la synthèse de pigments mélaniques A. Effet de la Forskoline et du H69 sur la .. mentation des B16 et des MNT-1 La Forskoline (Fsk), activateur direct de l'adénylate cyclase, conduit à l'augmentation de l'AMPc intracellulaire, entraînant une stimulation de l'expression des enzymes mélanogéniques Tyrosinase et TYRP1. L'augmentation de l'expression de ces enzymes provoque une synthèse accrue des pigments mélaniques pour les culots cellulaires de B16 traitées 48 h à la Forskoline (20 M) en comparaison des cellules non traitées (non montré). De façon intéressante, le H89, un inhibiteur de la PKA, induit une dépigmentation des culots cellulaires stimulés par la Forskoline (non montré). Un dosage de mélanine effectué sur ces mêmes cellules montre que la quantité de mélanine dans les cellules traitées à la Forskoline est augmentée d'un facteur 4 par rapport à la condition non traitée (Figure 1A). Le traitement au H89 provoque un blocage de la synthèse de mélanine stimulée par la Forskoline. Les mêmes traitements sont effectués sur les cellules de mélanomes humains, MNT-1, qui sont des cellules présentant une pigmentation basale très élevée. Comme l'indique la couleur des culots (non montré) et le dosage des mélanines de MNT-1, cette pigmentation basale est inhibée en présence de H89 (Figure 1B). Ces observations indiquent donc que le H89 peut inhiber la synthèse de mélanine à la fois basale et induite par la Forskoline. B. Effet du H89 sur l'expression des protéines mélanogéniques, Tyrosinase, TYRP1 et PmeI17, et sur le facteur de transcription MITF Les inventeurs ont ensuite entrepris d'étudier l'effet du H89 sur l'expression des protéines mélanogéniques Tyrosinase, TYRP-1 et Pmel-17, une protéine de la matrice mélanosomale qui contribue à la régulation de la mélanogénèse comme protéine structurale (Kobayashi, T., Urabe, K., Orlow, S. J., Higashi, K., Imokawa, G., Kwon, B. S., Potterf, B. and Hearing, V. J. (1994) The Pmel 17/silver locus protein. Characterization and investigation of its melanogenic function. J. Biol. Chem. 269, 2919829205 ; Zhou, B. K., Kobayashi, T., Donatien, 21 P. D., Bennett, D. C., Hearing, V. J., and Orlow, S. J. (1994) Identification of a melanosomal matrix protein encoded by the murine si (silver) locus using organelle scanning . Proc. Nat/. Acad. Sci. USA 91, 7076-7080). II est nécessaire de comprendre alors si le H89 agit sur la pigmentation en modifiant l'expression de ces gènes. Des expériences de Western Blot montrent que l'expression de la Tyrosinase stimulée par la Forskoline est partiellement inhibée par le H89 (30 à 50 % d'inhibition). En revanche, le H89 ne bloque pas la stimulation d'expression de TYRP1 et Pmel-17 induite par la Forskoline (non montré). Les inventeurs se sont intéressés en parallèle à l'expression de MITF, un facteur de transcription qui régule l'expression des enzymes mélanogéniques (Hodgkinson, C. A., Moore, K. J., Nakayama, A., Steingrimsson, E., Copeland, N. G., Jenkins, N. A., and Arnheiter, H. (1993) Mutations at the mouse microphthalmia locus are associated with defects in a gene encoding a novel basic-helix-loop-helix-zipper protein. Ce//. 74, 395-404). En Western Blot, MITF apparaît sous forme d'un doublet de 55 et 60 kDa, la bande de plus faible mobilité électrophorétique correspond à MITF phosphorylé sur la sérine 73 par la MAPkinase ERK2 (Hemesath, T. J., Price, E. R., Takemoto, C., Badalian, T., and Fisher, D. E. (1998) MAP kinase links the transcription factor Microphthalmia to c-Kit signalling in melanocytes. Nature 391, 298-301). De plus, une inhibition par le HS9 de la stimulation induite par la Forskoline de l'expression de MITF (non montré) est observée. Enfin, ces observations sont confirmées par l'analyse de l'activité des promoteurs Tyrosinase, TYRP1 et MITF. Après transfection transitoire avec pTYRO, pTYRP1 et pMITF, les B16 sont traitées avec les différents effecteurs. Comme le montrent les Figures 2A et 2B respectivement, le HB9 inhibe l'activité transcriptionnelle des promoteurs de la Tyrosinase et de MITF induite par la Forskoline. Par contre, il ne modifie pas l'activité du promoteur de TYRP1 (Figure 2C). C. Effet du H89 sur l'activité intrinsèque de la Tyrosinase Les inventeurs se sont ensuite attachés à déterminer l'effet du H89 sur l'activité intrinsèque de la Tyrosinase. Le résultat de la Figure 3 révèle que le H89 inhibe l'activité DOPA oxydase de la Tyrosinase. Cependant, l'activité DOPA oxydase des cellules traitées par la Fsk et le H89 est diminuée de 30 à 50 % par rapport à la Fsk et reflète globalement le niveau d'expression de la Tyrosinase observée en Western Blot dans les mêmes conditions. De plus, l'ajout du H89 in vitro pendant les réactions enzymatiques n'affecte pas l'activité DOPA Oxydase de la Tyrosinase. On peut alors conclure que H89 n'est pas un inhibiteur spécifique de la Tyrosinase (non montré). L'ensemble de ces résultats indique que le H89 en diminuant l'expression de MITF et de la Tyrosinase diminue l'activité tyrosinase et la synthèse de pigments. Cependant, ce processus ne peut pas expliquer à lui tout seul l'effet dépigmentant du H89 puisque le niveau d'expression de la Tyrosinase ainsi que son activité en condition Fsk + H89 restent supérieurs à celui du contrôle alors que la Fsk + H89 bloquent complètement la pigmentation. II- Rôle du mélanosome dans la régulation de la mélanogénèse A. Effet du H89 sur le mélanosome Une étude en microscopie électronique a été effectuée afin d'observer l'ultrastructure du mélanosome. II existe quatre stades de différenciation classiquement décrits pour les mélanosomes. Les stades I et Il correspondent à des organites non mélanisés. Les mélanosomes de stade I ont un contenu dont la structure filamentaire est encore assez mal définie. Au contraire, les mélanosomes de stade II se remplissent d'une structure interne filamenteuse. La mélanine commence à s'accumuler dans les mélanosomes de stade III. Dans les mélanosomes de stade IV, l'accumulation de pigments est telle que la structure interne n'y est plus visible. Comme le montre la Figure 4, le traitement à la Forskoline provoque une augmentation des mélanosomes de stade IV. En présence de H89, on peut observer des mélanosomes de stade plus précoce ainsi que la présence des vésicules dans les mélanosomes, provoquant une désorganisation de la structure des organelles. 23 B. Effet du H89 sur le pH du mélanosome Les domaines catalytiques de la Tyrosinase et des autres enzymes impliquées dans la mélanogénèse étant localisés à l'intérieur du mélanosome, il a été démontré que leur activité pourrait dépendre de l'environnement intramélanosomal. Récemment il a été proposé que le pH intramélanosomal pouvait être un régulateur clé de la mélanogénèse. Les inventeurs ont donc étudié l'effet du H89 sur le pH des mélanosomes en utilisant une sonde (DAMP) qui marque les vésicules acides. Ce composé comporte des groupements aminés (primaires et tertiaires) qui se protonnent et se chargent positivement à un pH acide. Les groupements primaires lui confèrent la possibilité d'être retenu dans les organelles acides après fixation à des protéines par l'intermédiaire d'un lien aldéhydique. Le DAMP est ensuite visualisé par l'intermédiaire d'un Ac polyclonal anti- DNP couplé au FITC (vert) utilisé au 1/50ème. Les mélanosomes sont marqués en rouge par les Ac dirigés contre TYRP1(A) ou Pmel-17 (B). Les résultats (Figure 5) indiquent que le marquage DAMP des vésicules diminue après traitement à la Forskoline et augmente sous H89. De plus, la plupart des vésicules marquées au DAMP sont également positives pour les anticorps dirigés contre TYRP1 et Pmel17, indiquant que le DAMP marque principalement des mélanosomes. Ces résultats suggèrent que la synthèse accrue de mélanine sous l'effet de la Forskoline se fait à pH non acide dans le mélanosome. L'acidification du pH sous l'action du traitement au H89 suggère que celui-ci pourrait exercer son pouvoir dépigmentant en modifiant le pH intramélanosomal. REVENDICATIONS 1. Composition pharmaceutique dépigmentante comprenant, dans un support pharmaceutiquement acceptable, une quantité efficace de H89. 2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition est administrée par voie topique. 3. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition est administrée par voie orale. 4. Composition pharmaceutique dépigmentante selon la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme liquide, pâteuse, ou solide, et plus particulièrement sous forme d'onguents, de crèmes, de laits, de pommades, de poudres, de tampons imbibés, de syndets, de lingettes, de solutions, de collyres, de gels, d'émulsions huile dans eau, d'émulsions eau dans huile, de sprays, de mousses, de suspensions, de lotions, de sticks, de shampoings, ou de bases lavantes, de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques ou de patchs polymériques et d'hydrogels permettant une libération contrôlée. 5. Composition pharmaceutique dépigmentante selon la revendication 3, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme comprimés, de gélules, de dragées, de sirops, de suspensions, de solutions, de poudres, de granulés, d'émulsions, de microsphères ou de nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques permettant une libération contrôlée. 6. Composition pharmaceutique dépigmentante selon la revendication 2, caractérisée en ce que la quantité de H89 est comprise entre 0.0001% et 10 % en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence entre 0.001% et 5 % du poids de ladite composition. 25 7. Utilisation d'une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 6 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des désordres hyperpigmentaires. 8. Utilisation d'une composition pharmaceutique selon la revendication 7, caractérisée en ce que les désordres hyperpigmentaires sont choisis parmi le melasma, le chloasma, les lentigines, le lentigo sénile, les taches de rousseur, les hyperpigmentations post- inflammatoires dues à une abrasion et/ou une brûlure et/ou une cicatrice et/ou une dermatose et/ou une allergie de contact; les nevi, les hyperpigmentations à déterminisme génétique, les hyperpigmentations d'origine métabolique ou médicamenteuse et les mélanomes. 9. Utilisation d'une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 6 pour la préparation d'un médicament destiné à éclaircir la peau. 10. Procédé cosmétique de dépigmentation de la peau comprenant l'application topique sur la peau d'une composition selon l'une des revendications 1 à 6. 20