Brevet FR2894827A1 — publié le 20070622

La presente invention se rapporte a des preparations pour application topique et/ou parenterale comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, de 1'acide hyaluronique, des procedes de fabrication de telles preparations, et leurs utilisations en tant que medicament, lesdites preparations etant destinees au traitement des affections dermatologiques, en particulier, au traitement par comblement des rides, ridules, depletions fibroblastiques et toutes cicatrices. Le vieillissement de la peau est une des modifications les plus visibles du processus de senescence. De plus, la peau se retrouve exposee a de nombreux facteurs susceptibles d'accelerer ce processus physiologique. On distingue deux types differents de vieillissement cutane. D'une part, le vieillissement intrinseque, qu'il est plus facile d'evaluer sur des zones qui normalement ne sont pas exposees au soleil et, d'autre part, le vieillissement extrinseque, provoque par 1'interaction de facteurs environnementaux, notamment les rayons UV. Ces facteurs environnementaux ont un effet beaucoup plus marque sur les parties du corps exposees au soleil, surtout chez les personnes de phototype clair. On parle alors egalement de vieillissement actinique. D'autres facteurs tels que les habitudes alimentaires, le tabagisme, la consommation excessive d'alcool, les maladies chroniques et les dysfonctionnements des glandes endocrines contribuent egalement a ce vieillissement. Lors du vieillissement intrinseque de la peau, la couche cornee est peu modifiee. L'epiderme est atrophique et la jonction dermo-epidermique est aplatie, de sorte que 1'adhesion au derme est moins bonne, facilitant la formation de bulles. L'epaisseur du derme est nettement reduite ; it y a moins de vaisseaux sanguins. On observe aussi moins de fibroblastes et leurs capacites de biosynthese et de proliferation sont diminuees. Les fibres elastiques subissent d'abord des modifications, pour disparaitre par la suite. En ce qui concerne le vieillissement extrinseque, on observe un epiderme irregulier, parfois atrophique, parfois hyperplasique, avec des signes de desorganisation et de dysplasie. Les melanocytes sont plus nombreux a certains endroits, et en nombre reduit a d'autres. I1 y a aussi une irregularite de la distribution de la melanine dans 1'epiderme, suite a des problemes de transfert des melanosomes. Le nombre de cellules de Langerhans diminue. Les petits vaisseaux sanguins sont d'abord dilates, pour ensuite s'amincir et s'atrophier. Les rides sont les signes les plus visibles du vieillissement. On en distingue de plusieurs natures, notamment les rides superficielles et profondes. Les rides profondes seraient dues aux modifications dermohypodermiques, tandis que les rides superficielles pourraient s'expliquer par des modifications dermiques et eventuellement epidermiques. Les rides sont surtout dues a la perte d'elasticite de la peau. L'atteinte du reseau elastique sous-epidermique donne lieu a une laxite superficielle de la peau vieillie et a un plissement de sa surface. La destruction des fibres elastiques dans le derme reticulaire est responsable de la perte d'elasticite et de la capacite de la peau a reprendre sa forme apres etirement. Selon le type, 1'intensite et la topographie, un traitement adapte sera possible. Le traitement des modifications cutanees inesthetiques liees au vieillissement a fait d'enormes progres ces dernieres annees. Un nombre relativement important de substances naturelles ou synthetiques ont d'ores et deja ete decrites en tant qu'implants dermiques, c'est-a-dire en tant que substances injectees directement dans la peau, afin de remedier aux alterations cutanees resultant du vieillissement, de traumatismes ou de maladies. D'autres alternatives therapeutiques pour ces applications sont notamment 1'injection locale de la toxine botulique (Botox ) ou 1'utilisation de techniques laser. Ces differents types de traitement ne sont pas exclusifs et leur combinaison a meme ete recommandee. Parmi les substances naturelles d'origine humaine, le collagene et 1'acide hyaluronique sont celles qui sont a 1'origine de la majorite des produits disponibles sur le marche. L'acide hyaluronique est un polysaccharide naturel ubiquitaire qui existe sous la meme forme de la plus simple bacterie a 1'Homme. C'est un polymere de disaccharides eux-memes composes d'acide D-glucuronique et de N-acetylglucosamine, lies entre eux par des liaisons glycosidiques alternees beta-1,4 et beta-1,3. Les polymeres de cette unite recurrente peuvent avoir une taille entre 102 et 104 kDa in vivo. L'acide hyaluronique represente notamment un constituant naturel du derme ou it joue un role important dans 1'hydratation et 1'elasticite de la peau. I1 diminue cependant en quantite et en qualite avec 1'age, entrainant un dessechement de la peau qui se ride. I1 est tres hydrosoluble et forme des solutions a haute viscosite dans 1'eau. Du fait de ces proprietes particulieres, 1'acide hyaluronique fait partie des produits pharmaceutiques les plus utilises. Toutefois, chez 1'Homme, 1'acide hyaluronique est tres rapidement elimine du plasma par degradation. Sa demi-vie plasmatique apres injection intraveineuse est tres courte, entre 2,5 et 5,5 minutes, alors que clans la peau, sa demi-vie est de 0,5 a 2 jours selon sa concentration. Son excretion urinaire est faible, inferieure a 1% de la clairance totale. Chez le lapin, la vitesse d'elimination, dans la peau, a ete mesuree (Reed RK, Laurent UB, Fraser JR, Laurent TC. Removal rate of [3H]hyaluronan injected subcutaneously in rabbits. Am J Physiol. 1990 Aug;259(2 Pt 2):H532-5). Elie est non exponentielle avec une demi-vie de 0,5 a 1 jour quand sa concentration est de 5 mg/ml. La tolerance de 1'acide hyaluronique est tres bonne et aucune immunogenicite n'a ete associee a cette substance. On retrouve ainsi une incidence d'effets secondaires tres faible. L'utilisation de 1'acide hyaluronique, seul ou en association, a ainsi ete decrite pour plusieurs applications medicales, telles que par exemple le traitement de 1'osteoarthrite ainsi que 1'arthrite rhumatoide. Des compositions injectables telles que par exemple 1'acide hyaluronique seul, le collagene seul ou 1'association acide hyaluronique et collagene ont egalement deja ete utilisees en chirurgie reparatrice, dans le cadre de traitement par comblement des rides, ridules, depletions fibroblastiques et toutes cicatrices. Actuellement, de nombreux implants dermiques sont utilises mais aucun n'a encore ete considers comme ideal dans le cadre d'une augmentation tissulaire sure et saine (Naoum C, Dasiou-Plakida D. Dermal filler materials and botulin toxin Int J Dermatol. 2001 Oct;40(10):609-21). Cependant, 1'acide hyaluronique, en raison de sa biodisponibilite trop faible apres injection et sa frequence d'injection trop elevee, ne peut etre utilise en tant que tel. Bien stir, on a cherche a developper des compositions a base d'acide hyaluronique possedant une trss bonne biodisponibilite et susceptibles de mieux resister a 1'action des enzymes de degradation. Ceci permet, notamment, d'espacer les interventions et d'en reduire le nombre. Ces compositions utilisees en tant qu'implant dermique sont toutes composees d'acide hyaluronique stabilise et un grand nombre d'entre elles comprennent de 1'acide hyaluronique modifie chimiquement dans ce but. En outre, l'acide hyaluronique inclus dans ces produits est majoritairement d'origine non humaine telle que par exemple d'origine aviaire ou bacterienne. On retrouve ainsi dans ces compositions de nombreux derives d'acide hyaluronique modifies chimiquement sous forme, notamment d'esters, d'amides, ainsi que des derives possedant des o ponts intra et/ou interchaines (cross-linked). Cependant, ces modifications affectent les caracteristiques physico-chimiques et les proprietes biologiques de 1'acide hyaluronique, ainsi que son devenir apres administration. Ces modifications structurelles de 1'acide hyaluronique peuvent entrainer des reactions inflammatoires comme le reporte Sopaar CNS, Patrinely JR Ophtalmic plastic and reconstructive surgery 2005 Mar ; 21(2) :151-53. De plus, bien que superieure a celle de 1'acide hyaluronique naturel, la biodisponibilite de ces derives d'acide hyaluronique reste toujours trop courte. Compte tenu de ce qui precede, un probleme que se propose de resoudre 1'invention est de realiser des preparations comprenant de 1'acide hyaluronique ayant une meilleure biodisponibilite tout en conservant ses caracteristiques physico-chimiques et ses proprietes biologiques, ainsi qu'un procede de fabrication d'une telle preparation. La solution de 1'invention a ce probleme pose a pour premier objet une composition ou une preparation pharmaceutique ou cosmetique, notamment pour application topique et/ou parenterale comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, de 1'acide hyaluronique, caracterisee en ce qu'elle comprend en outre au moins : - un retinolde et/ou ses sels et/ou ses derives, - un oligosaccharide, et - un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique. Elie a pour deuxieme objet un procede de fabrication d'une composition ou d'une preparation pharmaceutique ou cosmetique pour application topique et/ou parenterale comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, de 1'acide hyaluronique, et au moms un retinolde et/ou ses sels et/ou ses derives, un oligosaccharide, et un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique, caracterise en ce qu'il comprend 1'etape de melange d'une quantite efficace de 1'acide hyaluronique avec au moms ]0 un retinolde et/ou ses sels et/ou ses derives, au moms un oligosaccharide, et au moms un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique. De preference, le procede selon 1'invention comprend egalement une etape de preparation d'un milieu physiologiquement acceptable, 15 dans lequel les actifs sont melanges. Enfin, elle a pour troisieme objet 1'utilisation d'une preparation selon 1'invention pour la fabrication d'un medicament destine au traitement et/ou a 20 la prevention des affections dermatologiques. Lorsqu'une composition ou preparation pharmaceutique ou cosmetique pour application topique et/ou parenterale comprend, dans un milieu physiologiquement acceptable, de 25 1'acide hyaluronique, et au moms un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, un oligosaccharide, et un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique, elle augmente nettement la biodisponibilite de 1'acide hyaluronique, elle permet d'espacer les applications et 30 d'en reduire le nombre et elle presente une efficacite importante dans le comblement des rides, ridules, depletions fibroblastiques et toutes cicatrices. L'invention sera mieux comprise a la lecture de la description non limitative qui va suivre, notamment au regard du dessin annexe, dans lequel : - La figure 1 presente sous une representation semilogarithmique les resultats d'une etude ayant pour but d'evaluer 1'effet inhibiteur de la glycyrrhizine sur 1'activite hyaluronidase d'origine bovine. La preparation selon 1'invention comprend, dans un milieu physiologiquement acceptable, de 1'acide hyaluronique, et au moms un retinolde et/ou ses sels et/ou ses derives, un oligosaccharide, et un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique. La presente invention a egalement pour objet un produit comprenant, de preference contenant : - de 1'acide hyaluronique, - au moms un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, - au moms un oligosaccharide, de preference un, et - au moms un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique, de preference un, comme produit de combinaison pour une utilisation simultanee, separee ou etalee dans le temps dans le 25 traitement d'affections dermatologiques. Un tel produit de combinaison est notamment efficace dans le traitement des rides, des ridules, des depletions fibroblastiques et des cicatrices. 30 Par produit de combinaison, on entend une composition unique comprenant chacun des composes actifs, mais aussi une composition complexe comprenant au moms deux compositions differentes comprenant chacune une partie des actifs de ladite preparation. Par actifs, on entend selon la presente invention les composes choisis parmi 1'acide hyaluronique, au moms un oligosaccharide, au moms un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique et au moms un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives. Ainsi, le produit de combinaison selon 1'invention comprend au moms 4 actifs. A titre d'exemple non limitatif de produit de combinaison selon 1'invention, on peut citer : - une composition unique comprenant de 1'acide hyaluronique, un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, un oligosaccharide et un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique ; - une composition comprenant un seul de ces quatre actifs associee a une composition comprenant au moms les trois autres actifs ; - une composition comprenant deux de ces quatre actifs, associee a une composition comprenant au moms les deux autres actifs ; et - une composition comprenant trois de ces quatre actifs associee a une composition comprenant au moms le 25 quatrieme actif. De preference, le produit de combinaison selon 1'invention comprend une composition A comprenant 1'acide hyaluronique sous forme de solution injectable (de 30 preference aqueuse), associee a une composition B comprenant au moms : - un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique, de preference la glycyrrhizine, - un oligosaccharide, de preference le pentamere (NAC-Glucuronic acid)5, et - un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, de preference le retinol, sous forme de composition pour application topique. Par milieu physiologiquement acceptable selon 1'invention, on entend un milieu compatible avec la peau et eventuellement avec ses phaneres (cils, ongles, cheveux) et/ou les muqueuses. Dans les preparations selon 1'invention, 1'acide hyaluronique, le retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, 1'oligosaccharide et 1'inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique sont presents en proportions pouvant aller de 0,0000001% a 10%, preferentiellement de 0,00001% a 1% en poids, par rapport au poids total de la preparation. Dans la presente description, et a moms quill ne soit specifie autrement, it est entendu que, lorsque des intervalles de concentrations sont donnes, ils incluent les bornes superieures et inferieures dudit intervalle. Les preparations selon 1'invention comprennent de 1'acide hyaluronique. Par acide hyaluronique on entend le compose constitue par 1'enchainement d'acide glucuronique et de 30 N-acetyl-glucosamine. De fagon avantageuse, 1'acide hyaluronique est naturel. Par acide hyaluronique naturel, on entend un acide hyaluronique non stabilise, non modifie chimiquement sous forme, notamment d'esters, d'amides, ou sous forme de derives possedant des Les preparations selon 1'invention comprennent en outre un retinolde et/ou ses sels et/ou ses derives, pris seuls ou en melange. Parmi les retinoldes susceptibles d'entrer dans les preparations selon 1'invention, on choisira preferentiellement le retinol, le retinal et/ou 1'acide retinolque, leurs sels et derives, pris seuls ou en melange, plus preferentiellement le retinol. Par sel de retinolde, on entend notamment un sel de metal alcalin, ou un sel alcalino-terreux, ou un sel d'amine organique. Par derive de retinolde, on entend notamment les esters, tels que le retinyl palmitate, le retinyl acetate, le retinyl stearate, le retinyl oleate, le retinyl propionate ou encore le retinyl linoleate. De fagon avantageuse, les retinoldes utilises dans les preparations selon 1'invention sont des retinoldes existant naturellement dans 1'organisme humain. Les preparations selon 1'invention comprennent en outre un oligosaccharide. Par oligosaccharide, on entend notamment tout oligosaccharide limitant la penetration de 1'acide hyaluronique dans les cellules de la peau, notamment les keratinocytes et les fibroblastes. Parmi les oligosaccharides, pris seuls ou en melange, susceptibles d'entrer dans les preparations selon 1'invention, on choisira les oligomeres de 1'acide hyaluronique, preferentiellement les tri- a decameres de 1'acide hyaluronique, plus preferentiellement les tetra-a hexameres de 1'acide hyaluronique, plus preferentiellement le pentamere de 1'acide hyaluronique. De facon avantageuse, les oligosaccharides utilises 15 dans les preparations selon 1'invention sont des composes existant de facon naturelle dans 1'organisme humain. Dans les preparations selon 1'invention, 1'oligosaccharide est utilise a des concentrations 20 comprises entre 10-9 M et 10-3 M, preferentiellement entre 10-8 M et 10-5 M. Les preparations selon 1'invention comprennent en outre un inhibiteur de la degradation de 1'acide 25 hyaluronique. Par inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique, on entend un compose capable de diminuer, voire de bloquer, le catabolisme soit extracellulaire 30 soit intracellulaire de 1'acide hyaluronique, preferentiellement un compose capable de diminuer, voire de bloquer, le catabolisme extracellulaire de 1'acide hyaluronique, plus preferentiellement un compose capable d'inhiber la hyaluronidase extracellulaire presente dans la peau. Parmi les inhibiteurs de la degradation de 1'acide hyaluronique, pris seuls ou en melange, susceptibles d'entrer dans les preparations selon 1'invention, on choisira notamment la glycyrrhizine ou 1'acide glycyrrhetinique, leurs derives et/ou analogues. De fagon avantageuse, les inhibiteurs de la degradation de 1'acide hyaluronique utilises clans les preparations selon 1'invention sont naturels. Dans les preparations selon 1'invention, 1'inhibiteur est utilise a des concentrations comprises entre 10-9 M et 10-2 M, preferentiellement entre 10-6 M et 10-3 M. Par derives de la glycyrrhizine ou de 1'acide glycyrrhetinique, on entend notamment les sels, les derives substitues, les enantiomeres et les racemates desdits composes. Comme sels desdits composes, on peut citer les sels obtenus par addition desdits composes avec une base inorganique, choisie notamment parmi les hydroxydes de sodium, de lithium, de calcium, de potassium, de magnesium, d'ammonium ou de zinc, les carbonates de metaux alcalins ou alcalino-terreux tels que les carbonates et bicarbonates de sodium, de lithium, de calcium, de potassium, de magnesium, d'ammonium ou de zinc, ou avec une base organique, choisie notamment parmi la methylamine, la propylamine, la trimethylamine, la diethylamine, la triethylamine, la N,N-dimethylethanolamine, le tris(hydroxymethyl)-aminomethane, 1'ethanolamine, la pyridine, la picoline, la dicyclohexylamine, la morpholine, la procelne, la lysine, 1'arginine, 1'histidine, la N-methylglucamine ou encore les sels de phosphonium tels que les sels d'alkylphosphonium, les sels d'aryl-phosphonium, les sels d'alkyl-arylphosphonium, les alkenyl-arylphosphonium ou les sels d'ammonium quaternaires tels que les sels de tetra-n-butyl-ammonium. De tels sels sont notamment le sel de potassium de 1'acide glycyrrhetinique, le sel de sodium de 1'acide glycyrrhetinique, ou encore le sel monoammonium de 1'acide glycyrrhetinique (ammonium glycyrrhetinate). Par analogue, on entend notamment les analogues enzymatiques ou biomimetiques desdits composes, capables de se fixer au site catalytique ou non des hyaluronidases et d'inhiber ainsi leur activation. De tels analogues peuvent titre selectionnes in vitro par des tests de liaison ou d'inhibition des hyaluronidases selon les techniques classiquement utilisees. De fagon avantageuse, les derives et/ou analogues 25 doivent titre d'origine naturelle. Les composes et leurs derives et/ou analogues d'origine naturelle sont des composes a 1'etat pur ou en solution a differentes concentrations, obtenus par 30 differents procedes d'extraction ou d'hydrolyse de materiel biologique d'origine naturelle. De fagon connue, les preparations selon 1'invention peuvent contenir egalement les adjuvants habituels bien connus de 1'homme de 1'art. Les preparations selon 1'invention sont formulees pour une application par voie topique et/ou parenterale. Par voie topique, les preparations peuvent se presenter sous toutes les formes galeniques normalement utilisees pour une administration par vole topique. A titre d'exemple non limitatif de preparations topiques, on peut citer des preparations sous forme liquide, pateuse, ou solide et, plus particulierement, sous forme d'onguents, de solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, de dispersions du type lotion eventuellement biphasee, de serum, de gels aqueux, anhydres ou lipophiles, de poudres, de tampons imbibes, de syndets, de lingettes, de sprays, de mousses, de sticks, de shampoings, de compresses, de bases lavantes, d'emulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), d'une microemulsion, de suspensions ou emulsions de consistance molle, semiliquide ou solide du type creme blanche ou coloree, gel ou pommade, de suspensions de microspheres ou nanospheres ou de vesicules lipidiques ou polymeriques, ou de microcapsules, micro- ou nanoparticules ou de patchs polymeriques ou gelifies permettant une liberation controlee. Par voie parenterale, les preparations selon 1'invention peuvent titre appliquees par voie sous-cutanee ou intradermique. A titre d'exemple non limitatif de preparations parenterales, on peut citer des preparations sous forme de solutions ou suspensions pour perfusion ou pour injection. Selon 1'invention, les composes constituant la preparation peuvent etre administres selon un meme mode d'administration ou selon un mode d'administration combine. Par mode d'administration combine, on entend 1'administration de 1'un ou de plusieurs composes de la preparation selon 1'invention par voie topique combinee a une administration par voie parenterale, notamment par injection sous cutanee ou intradermique du ou des autres composes de la preparation. De fagon avantageuse, une partie des composes est d'abord appliquee par voie topique et une autre partie desdits composes est ensuite appliquee par voie parenterale, ou inversement. Selon une alternative de 1'invention, on peut egalement appliquer simultanement une partie des composes par voie topique et une autre partie desdits composes par voie parenterale. A titre d'exemple non limitatif donne simplement a titre d'illustration et qui ne saurait en aucune fagon limiter la portee de 1'invention, 1'acide hyaluronique peut etre administre sous forme d'une solution aqueuse injectable, le retinol, le pentamere d'acide hyalobiuronique et la glycyrrhizine etant administres sous forme d'une creme. Dans le cadre d'une administration combinee, les frequences d'administration peuvent etre identiques ou differentes. A titre d'exemple non limitatif, la frequence d'administration de 1'acide hyaluronique injecte sous forme d'une solution aqueuse injectable peut varier de 1 a 12 mois, preferentiellement de 6 a 12 mois, alors que celles des autres composes de la preparation selon 1'invention administres sous forme de creme peut varier de 1 a 7 jours, preferentiellement de 1 a 3 jours. Le procede de fabrication d'une preparation selon 1'invention est caracterise en ce quill comprend une etape de melange d'une quantite efficace d'acide hyaluronique, d'au moins un retinolde et/ou ses sels et/ou ses derives, d'au moins un oligosaccharide, et d'au moins un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique. De preference, ledit procede comprend une etape de preparation d'un milieu physiologiquement acceptable, dans lequel les actifs sont ajoutes. Selon un mode particulier de 1'invention, le procede de fabrication d'une preparation comprend les etapes de preparation d'un milieu physiologiquement acceptable et de melange d'une quantite efficace d'acide hyaluronique, de retinol, de pentamere de 1'acide hyaluronique, et de glycyrrhizine et/ou ses derives et/ou analogues. De fagon avantageuse, le procede de fabrication d'un produit de combinaison selon 1'invention comprend une premiere etape de preparation d'une solution injectable, comprenant le melange de 1'acide hyaluronique avec un milieu physiologiquement acceptable, et une seconde &tape de preparation d'une formulation adaptee a la voie topique, comprenant le melange d'au moins un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, avec au moins un oligosaccharide et au moins un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique dans un milieu physiologiquement acceptable. L'invention se rapporte egalement a 1'utilisation d'une preparation telle que decrite precedemment pour la fabrication d'un medicament destine au traitement et/ou a la prevention des affections dermatologiques. Plus particulierement, 1'invention se rapporte a 1'utilisation d'une preparation telle que decrite precedemment pour la fabrication d'un medicament destine au traitement des rides, des ridules, des depletions fibroblastiques et des cicatrices. Un tel medicament est adapt& au traitement de la peau ridee et/ou agee, et vise notamment a en prevenir et/ou a en reduire les effets. Le traitement des rides, ridules, depletions fibroblastiques et toutes cicatrices se fait notamment par comblement. En particulier, la preparation selon 1'invention peut titre applique sur les zones du visage ou du front marquees par des rides d'expression. L'invention se rapporte egalement a 1'utilisation d'une preparation telle que decrite precedemment pour la fabrication d'un medicament destine a titre utilise en chirurgie reparatrice. En outre, 1'invention se rapporte a l'utilisation d'une preparation selon 1'invention au sein d'un implant dermique. La presente invention va maintenant etre illustree au moyen des exemples suivants. Example 1 : Effet inhibiteur de la glycyrrhizine (GLZ) 10 sur 1'activite hyaluronidase d'origine bovine Determination de la CI50 de GLZ, avec ou sans pre-incubation a 37 C : 15 La GLZ, a differentes concentrations, est preincubee ou non 20 minutes a 37 C en presence de 1'enzyme. La reaction enzymatique est declenchee par ajout de la solution d'acide hyaluronique (temps TO). Apres 20 minutes d'incubation, 1'acide hyaluronique non hydrolyse 20 est precipite par ajout de la solution acide d'albumine bovine. Afin de verifier que 1'etape de pre-incubation n'influe pas sur la stabilite de la hyaluronidase, une 25 aliquote d'une solution de 1'enzyme est placee a 37 C pendant 20 minutes. Une autre aliquote est conservee dans un bain de glace pendant 19 minutes, puis est incubee a 37 C pendant 1 minute. Une solution d'acide hyaluronique est alors ajoutee dans chaque aliquote (TO). Apres 15, 30 30 ou 45 minutes d'incubation, 1'acide hyaluronique non hydrolyse est precipite par ajout de la solution acide d'albumine bovine. Mesure de 1'activite hyaluronidase d'origine bovine : Apres 1'etape de precipitation, la turbidimetrie des solutions est determinee au spectrophotometre a une longueur d'onde de 600 nm. La densite optique (DO) de ces solutions est retranchee de la DO d'une solution temoin d'acide hyaluronique (de meme concentration) non hydrolyse par 1'enzyme. Cette difference de DO, qui est inversement proportionnelle a la concentration d'acide hyaluronique, est utilisee pour mesurer 1'activite de la hyaluronidase. L'effet inhibiteur de la GLZ sur la hyaluronidase 15 bovine est illustre sur la figure 1 (representation semilogarithmique). Les resultats obtenus montrent que cet effet est dose-dependant et que la concentration en GLZ inhibant a 20 50% (C150) 1'activite hyaluronidase est de 400 pM sans pre-incubation avec 1'enzyme. Lorsque la GLZ est pre-incubee 20 minutes a 37 C en presence de 1'enzyme, la CI50 est de 350 pM. Exemple 2 : Effet inhibiteur de la liaison du pentamere (NAC-Glucuronic acid)5 sur le recepteur CD44 de1'acide hyaluronique Sur une culture de keratinocytes humains normaux (KHN) est additionne de 1'acide hyaluronique marque a la fluoresceinamine (selon DeBelder et al., 1975, 25 30 20 Carbohydrate Res., 44, 251-257) puis des concentrations croissantes de pentamere (NAC-Glucuronic acid)5. La mesure du deplacement de 1'acide hyaluronique fluorescent par le pentamere (NAC-Glucuronic acid)5 est realisee. Exemple 3 : Composition n 1 Solution injectable n 1 contenant les 4 composants Cette composition est preparee de maniere classique pour 1'homme du metier: Acide hyaluronique 2% Glycyrrhizine 0,02% pentamere (NAC-Glucuronic acid) 5 0,002% Retinol 0,00001% Eau qsp 100% Exemple 4 : Composition n 2 Solution injectable n 2 d'acide hyaluronique couplee a une creme contenant les 3 autres composants Solution injectable 25 Acide hyaluronique 2% Eau qsp 100% Creme Glycyrrhizine 0,02% 30 pentamere (NAC-Glucuronic acid)5 0,002% Retinol 0,00001% Acide stearique 3,00% melange de mono- stearate de glyceryle et de stearate de PEG (100 OE) 2,5% Stearate de PEG (20 OE) 1, 0% Cyclopentadimethylsiloxane 10,00% Huiles vegetales 7,00% Huiles synthetiques 6,00% Gomme de silicone 0,20% Alcool stearique 1,00% Eau qsp 100% REVENDICATIONS 1. Preparation pharmaceutique ou cosmetique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, de 1'acide hyaluronique, caracterisee en ce qu'elle comprend en outre au moins : - un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, - un oligosaccharide, et - un inhibiteur de la degradation de 1'acide 10 hyaluronique. 2. Preparation selon la revendication 1, caracterisee en ce que le retinoide est le ratinol. 15 3. Preparation selon 1'une quelconque des revendications 1 ou 2, caracterisee en ce que 1'oligosaccharide est un oligomere de 1'acide hyaluronique. 20 4. Preparation selon 1'une des revendications 1 a 3, caracterisee en que 1'inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique est choisi parmi la glycyrrhizine ou 1'acide glycyrrhatinique, leurs derives et/ou analogues, pris seuls ou en melange. 25 5. Preparation selon 1'une quelconque des revendications 1 a 4, caracterisee en ce qu'elle est formulae pour une application par voie topique. 30 6. Preparation selon 1'une des revendications 1 a 4, caracterisee en ce qu'elle est formulae pour une application par voie parenterale. 7. Preparation parenterale selon la revendication 6, caracterisee en ce qu'elle se presente sous forme de solutions ou suspensions pour perfusion ou pour injection. 8. Produit contenant : - de 1'acide hyaluronique, - au moms un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, - au moms un oligosaccharide et - au moms un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique, comme produit de combinaison pour une utilisation simultanee, separee ou etalee dans le temps dans le 15 traitement d'affections dermatologiques. 9. Produit de combinaison selon la revendication 8, caracterise en ce qu'il comprend une composition A comprenant 1'acide hyaluronique sous forme 20 de solution injectable, associee a une composition B comprenant au moms : - un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique, - un oligosaccharide, et 25 - un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, sous forme de composition pour application topique. 10.Procede de fabrication d'une preparation pharmaceutique ou cosmetique selon 1'une des 30 revendications 1 a 7, caracterise en ce qu'il comprend 1'etape de melange d'une quantite efficace d'acide hyaluronique, d'au moms un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives, d'au moms un oligosaccharide, et d'au 20moms un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique. 11. Procede de fabrication d'un produit selon la revendication 9, caracterise en ce qu'il comprend : - une premiere etape de preparation d'une solution injectable, comprenant le melange de 1'acide hyaluronique avec un milieu physiologiquement acceptable, - une seconde etape de preparation d'une composition adaptee a la voie topique, comprenant le melange d'au moms un retinoide et/ou ses sels et/ou ses derives avec au moms un oligosaccharide et au moms un inhibiteur de la degradation de 1'acide hyaluronique dans un milieu physiologiquement acceptable. 12. Utilisation d'une preparation selon 1'une des revendications 1 a 7 pour la fabrication d'un medicament destine au traitement et/ou a la prevention des affections dermatologiques. 13. Utilisation d'une preparation selon 1'une des revendications 1 a 7 pour la fabrication d'un medicament destine a etre utilise en chirurgie reparatrice. 25 14. Utilisation d'une preparation selon 1'une des revendications 1 a 7 pour la fabrication d'un medicament destine au traitement par comblement des rides, des ridules, des depletions fibroblastiques et des cicatrices. 30 15. Utilisation d'une preparation selon 1'une des revendications 1 a 7 au sein d'un implant dermique.