Brevet FR2893846A1 — publié le 20070601

La présente invention est relative à l'utilisation cosmétique, pharmaceutique ou comme complément alimentaire, d'un ecdystéroïde, d'un dérivé d'ecdystéroïde ou d'un extrait naturel végétal ou animal en contenant, en tant qu'agent de réparation cutanée après exposition aux rayonnements ultraviolets. Les ecdystéroïdes sont des stéroïdes polyhydroxylés porteurs d'un groupement 7-ène-6-one, d'un 14 alpha-OH, et présentant une jonction cis entre les cycles A et B. Ce sont des hormones de mue des insectes, mais on les rencontre aussi fréquemment dans les plantes (Lafont R., Chem.Listy 97,280-281,2003). De nombreux effets sur les mammifères, y compris sur l'homme, ont été mis en évidence : - stimulation de la croissance et de la reproduction, de la prolifération et de la différenciation cellulaire, du métabolisme des protéines, glucides et lipides, des systèmes nerveux et cardiovasculaire, de la détoxification du foie et du rein ; - effets anti-inflammatoires et immuno-modulateurs ; - effets antibiotiques (Lafont R. et Dinan L. Journal of Insect Science 3 :7,30pp, 2003, consultable en ligne: insectscience.org). Le document CN-86 01 06791-A concerne un produit cosmétique de protection cutanée contenant de la bêta-ecdysone, qui prévient le vieillissement de la peau, en préserve l'hydratation, et élimine l'acné et les taches brunes. Le document WO-90/03778-A concerne des compositions à base de phases lamellaires hydratées ou des liposomes contenant par exemple un ecdystéroïde, et pouvant être utilisées notamment comme compositions cicatrisantes ou anti-rides. Le document WO-94/04132-A concerne une composition cosmétique ou dermatologique contenant par exemple un ecdystéroïde, destinée notamment à donner à la peau un aspect plus lisse et plus doux, à renforcer la fonction de barrière hydrique de la peau, ainsi que la cohésion des cellules de l'épiderme. Le document FR-2801504A concerne un extrait de la plante Ajuga turkestanica contenant au moins un ecdystéroïde et au moins un iridoïde, ainsi que des compositions cosmétiques le contenant, pour améliorer la différenciation des kératinocytes, ou pour réguler les flux hydriques et la réabsorption de l'eau dans l'épiderme, ou pour hydrater l'épiderme. Le brevet US-6 641 848 est relatif à une composition comprenant une association de saponines tri-terpéniques et d'ecdystéroïdes pour stimuler la synthèse de collagène IV dans la peau. Le document FR-2863378-A est relatif à l'utilisation d'ecdystéroïdes pour la préparation de compositions cosmétiques ou dermatologiques anti-chute des cheveux. Le document FR-863886-A se rapporte à l'utilisation d'un ligand du récepteur de l'ecdystérone pour la préparation d'une composition destinée à maintenir l'homéostasie cutanée. De plus, l'ecdystérone est largement utilisée en sériciculture pour contrôler la mue du ver à soie, et entre dans la composition de très nombreux compléments alimentaires destinés à augmenter la masse musculaire (Lafont R. et aI, 2003, déjà cité). Par ailleurs, l'exposition répétée de la peau aux rayonnements ultraviolets entraîne des dommages à l'ADN, en particulier dans les cellules appelées fibroblastes qui sont responsables du renouvellement des macromolécules constituant la matrice extracellulaire du derme (Goukassian D. et al, The FASEB J. , 14 :1325-34,2000) . Ces dommages sont naturellement réparés. Mais, quand ce n'est pas le cas, cela peut avoir des conséquences graves pour les cellules, et cela peut même entraîner la photocarcinogénèse (Goukassian D.A. et Gilchrest B.A., Rejuvenation Res.7 (3) :175-85,2004). De plus, on sait depuis longtemps que les cellules de la peau exposée au soleil perdent plus vite leur capacité de reproduction (Gilchrest B.A., J Gerontol., 35(4) :537-20 41,1980). Les cellules qui ne peuvent plus se reproduire sont appelées sénescentes , et sont caractérisées par la forte expression d'une bêta-galactosidase active à pH 6. Et l'on trouve plus de cellules exprimant cette bêta-galactosidase aussi bien parmi les kératinocytes ou fibroblastes de la peau de personnes âgées, que dans les cultures de 25 cellules vieillies par repiquages successifs (Dimri G.P. et al, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 92 :9363-67,1995), ou dans les cultures ayant subi des stress ultra-violets répétés (Chainiaux F. et al, Int. J. Biochem. Cell. Biol. 34(11) :1331-9,2002). De plus, il a été montré récemment (Debacq-Chainiaux F. et al, J. Cell. Sci. 118(Pt4) :743-58, 2005) que les fibroblastes perdent avec l'âge une partie de leur 30 capacité de réparation des dommages causés par les rayonnements UV (Goukassian D. et al, 2000, déjà cité). Il apparaît donc bien qu'il serait très intéressant de pouvoir disposer de moyens pour stimuler la réparation naturelle des dommages causés aux cellules cutanées par les rayonnements ultraviolets, de manière à retarder l'apparition de cellules 35 sénescentes ayant perdu la capacité de se reproduire. Or, il a maintenant été trouvé de façon tout à fait inattendue et surprenante, que si le milieu de culture des fibroblastes soumis à des expositions aux ultra-violets répétées, est supplémenté, entre deux irradiations, par l'ajout d'un ecdystéroïde, on diminue de façon très significative le nombre de cellules qui passent à l'état sénescent caractérisé par l'apparition de l'activité bêta-galactosidase qui lui est associée ( Senescence Associated bêta-galactosidase ou SA bêta-gal ). Ainsi, l'un des buts de la présente invention est-il de fournir une méthode pour réparer au moins en partie les dommages causés aux cellules cutanées par l'exposition aux rayonnements ultraviolets. Ce but, ainsi que d'autres qui apparaîtront par la suite, est atteint par l'utilisation d'un ecdystéroïde, d'un dérivé d'ecdystéroïde ou d'un extrait naturel végétal ou animal en contenant, en tant qu'agent de réparation cellulaire après exposition de la peau et de muqueuses aux rayonnements ultraviolets. Cet ecdystéroïde est plus particulièrement appliqué sur la peau par l'intermédiaire d'une composition dermatologique ou cosmétique. Il peut aussi être administré par voie orale sous forme de complément alimentaire. Avantageusement, l'ecdystéroïde selon l'invention est l'ecdystérone. De préférence, la composition dermatologique ou cosmétique selon l'invention destinée à stimuler la réparation des dommages cellulaires causés à la peau par les expositions aux ultra-violets, contient de 0,001 à 10 % et plus précisément de 0,01 à 1 % en poids d'ecdystérone. Avantageusement, le complément alimentaire selon l'invention destiné à stimuler la réparation des dommages cellulaires causés à la peau par les expositions aux ultra-violets, est administré sous forme solide ou liquide à raison de 1 à 1200 mg/j et plus précisément 10 à 100 mg/j d'ecdystérone. Suivant une autre caractéristique de l'invention, l'ecdystéroïde peut être sous la forme d'un dérivé, tel qu'un dérivé mono- ou multi-acylé et notamment acétylé, un acétonide, un ester de l'acide phosphorique, etc. . Suivant encore une autre caractéristique de l'invention, l'ecdystéroïde utilisé est contenu dans un extrait végétal tel qu'un extrait de Cyanotis arachnoidea, Cyanotis vaga, Ajuga turkestanica, Ajuga iva, Ajuga decumbens, Serratula coronata, Leuzea (ou Rhaponticum) carthamoides, Paris polyphylla, Pfaffia paniculata, Pfaffia iresinoides, F'faffia stenophylla, Polypodium vulgare, Polypodium aureum, Polypodium lepidopteris, Silene otites, Cyatula officinalis, Cyatula capitata, Achyrantes aspera, Achyrantes bidentata, Spinacia oleracea, ou dans un extrait animal tel qu'un extrait de Bombyx mori. De préférence, la composition dermatologique ou cosmétique telle que ci- dessus contenant un ecdystéroïde pour stimuler la réparation des dommages cellulaires causés à la peau par les expositions aux ultra-violets, peut aussi contenir : - au moins une substance pour filtrer ou bloquer les rayonnements ultraviolets B et/ou A telle que des molécules de type benzophénone, anthranilate, cinnamique, dibenzoylméthane, salicylique, dérivés du camphre, des pigments à base d'oxyde de titane, des pigments nacrés, etc. ; - au moins un antioxydant tel qu'un tocophérol, un tocotriénol, un caroténoïde, un dérivé d'acide ascorbique, un flavonoïde, un isoflavonoïde, un polyphénol, une procyanidine, le resvératrol, la genistéine, la daidzéine, la formononétine, l'équol, un extrait de thé vert, etc. , - au moins un anti-inflammatoire tel qu'un extrait de Glycyrrhiza glabra, l'acide glycyrrhétinique, un extrait de Scutellaria baicalensis, un extrait d'Aloe vera, le bisabolol, le bêta-sitosterol, etc. . De préférence, le complément alimentaire contenant un ecdystéroïde pour réparer les dommages cellulaires causés à la peau par les expositions aux UV tel que ci-dessus, peut contenir : - au moins un antioxydant tel que la vitamine E, la vitamine C, un caroténoïde, un flavonoïde, un isoflavonoïde, un polyphénol, une procyanidine, le resvératrol, le gallate d'épigallocatéchine, la genistéine, la daidzéine, la formononétine, l'équol, un extrait de thé vert, etc. ;. - au moins un anti-inflammatoire tel qu'un extrait de Glycyrrhiza glabra, l'acide glycyrrhétinique, etc. Comme indiqué ci-avant, il a été trouvé de façon totalement inattendue et surprenante, que l'ecdystérone présente une action significative de stimulation de la réparation des dommages causés à des cellules cutanées en culture par des expositions répétées à un rayonnement ultraviolet . La description qui va suivre et qui ne présente aucun caractère limitatif, est en particulier relative à des exemples de réalisation de la présente invention qui permettront à l'homme du métier de mieux comprendre celle-ci. Exemple 1 : Réparation par un ecdystéroïde des dommages causés à des fibroblastes en culture, par des expositions répétées à un rayonnement ultraviolet. L'ecdystéroïde utilisé est un échantillon d'ecdystérone de pureté supérieure à 90% extrait de Cyanotis arachnoidea, fourni par le Kunming Institute of Botany (Kunming, Yunnan, Chine). Des fibroblastes de derme de la même souche BJ que celle utilisée par Chainiaux F. et al (2002, déjà cité) sont mis en culture par les méthodes classiques. L'absence de cytotoxicité de l'ecdystérone sur une durée de 24h, est vérifiée dans la gamme 0,4 à 250 pg /ml. Pendant 5 jours les fibroblastes sont exposés 1 fois par jour à une dose d'ultra-violets B de 500 mj/cm2. A la suite de chaque irradiation, le milieu de culture est remplacé par du milieu contenant 0,4, 2, 10, 50 et 250 pg /ml d'ecdystérone. Avant chaque nouvelle irradiation, ces milieux sont remplacés par un milieu ne contenant pas d'ecdystérone. Après la dernière irradiation, les cellules sont laissées en contact avec du milieu supplémenté en ecdystérone, renouvelé toutes les 24h. Au terme de cette dernière période de contact, l'activité bêta-galactosidase à pH6 (bêta-galactosidase associée à la sénescence ou SA bêta-gal) est évaluée suivant la méthode de Dimri G.P. et al (déjà cité), sur au moins 400 cellules pour chaque concentration en ecdystérone, par colorimétrie, ainsi que par fluorescence au BioAnalyseur. Les valeurs moyennes des pourcentages de cellules exprimant la SA bêta-gal sont les suivantes : Condition Colorimétrie BioAnalyseur Contrôle sans UV 29,1 45,7 UV et 0 pg /ml d'ecdystérone 41,9 52,5 UV et 0,4 pg /ml d'ecdystérone 47,6 / UV et 2 id 50,5 55,1 UV et 10 id 37,5 49,2 UV et 50 id 31 39,9 UV et 250 id 28 31 On constate que : les dommages causés par les expositions répétées aux rayons ultra-violets B ont entraîné une augmentation significative de fibroblastes présentant l'activité SA bêta- gal caractéristique des cellules qui ne peuvent plus se reproduire (qualifiées de sénescentes ), - le traitement des cellules par l'ecdystérone après les irradiations, a provoqué une réparation des dommages causés par les ultra-violets dès la concentration de 10 pg/ml et de façon significative à partir de 50 pg/ml, ce qui se traduit par un nombre de fibroblastes sénescents qui reste égal ou inférieur à celui des cultures n'ayant subi aucune irradiation. II apparaît ainsi, que l'utilisation d'un ecdystéroïde, permet bien selon l'invention de réparer les dommages cellulaires causés par l'exposition aux rayonnements ultraviolets. Composition N 1 : Crème cosmétique de réparation cellulaire. On procède comme pour la réalisation d'une émulsion classique huile dans eau, c'est-à-dire qu'on mélange sous agitation à 85 C une phase hydrophobe et une phase aqueuse contenant chacune des matières premières destinées à conférer au produit les propriétés d'usage habituelles : stabilité, sécurité, étalement facile, toucher final agréable, etc. On refroidit sous agitation, et, lorsque la température est descendue à 45 C, on ajoute 0,1 % en poids d'ecdystérone. Cette crème est appliquée sur le visage, le cou et les mains, de préférence le matin pour que le principe réparateur ait le temps de pénétrer jusqu'aux cellules vivantes, afin d'être en contact en milieu de journée quand les intensités d'irradiation UV solaires sont à leur maximum. Composition N 2 : Crème cosmétique de réparation cellulaire et de protection antioxydante. On réalise comme ci-dessus une émulsion huile dans eau contenant de l'alpha-tocophérol ainsi que de l'acétate d'alpha-tocophérol ; et lors du refroidissement, à 45 C, on rajoute l'ecdystérone et du phosphate de vitamine C en quantité suffisante pour arriver aux concentrations en poids dans la composition finale de : -ecdystérone 0,1 % - alpha-tocophérol 0,05 % - acétate d'alpha-tocophérol 0,2 % - phosphate de Vitamine C, sel de Mg 0,2 %. Cette formulation est une crème de jour. Composition N 3 : Crème cosmétique de réparation cellulaire et de protection filtrante. On réalise comme pour la Composition N 1, une émulsion huile dans eau contenant un filtre aux rayons ultra-violets B de type ester p-méthoxycinnamique dans la phase hydrophobe. Un extrait alcoolique sec de Leuzea carthamoides est rajouté sous agitation à 45 C à raison de 2 % en poids. La quantité de filtre UV est ajustée de façon à obtenir un facteur de protection SPF égal à 8. Le produit est destiné à être appliqué le matin sur les zones de peau non couvertes, et si possible l'application doit être renouvelée en milieu de journée. Composition N 4 : Gel cosmétique de réparation cellulaire pour peaux sensibles. On réalise un gel acrylique aqueux titré à 0,1 % en poids d'ecdystérone et contenant en outre 2 % en poids d'extrait hydroglycolique de Scutellaria baicalensis. Composition N 5 : Gel dermatologique de réparation cellulaire. On réalise un gel acrylique aqueux contenant 0,2 % en poids d'ecdystérone. Ce gel est appliqué le matin et en cours de journée sur les zones de peau exposées. Composition N 6 : Complément alimentaire réparateur de la peau. On réalise par les techniques classiques des comprimés dosés à 15 mg d'ecdystérone par comprimé. Ces comprimés sont à prendre avec un peu d'eau au cours des repas du matin et de milieu de journée, à raison de un à deux comprimés par prise suivant l'intensité et la durée d'ensoleillement attendue. Composition N 7 : Complément alimentaire réparateur et protecteur antioxydant de la peau. On réalise des capsules contenant 10 mg d'ecdystérone, 15 mg d'extrait de thé vert et 25 mg de vitamine C. La dose quotidienne conseillée est de 2 à 4 capsules par jour en deux prises le matin et en milieu de journée avec un peu d'eau au moment du repas. Composition N 8 : Boisson réparatrice de la peau. On réalise une boisson à base de lait de soja contenant 20 % en poids de jus d'épinard concentré, et 0,05 % en poids d'ecdystérone. Cette boisson est présentée en doses de 100 ml. II est conseillé d'en boire une dose le matin et une dose en milieu de journée au moment des repas. REVENDICATIONS 1. Composition pour la réparation cellulaire après exposition de la peau et des muqueuses aux rayonnements ultra-violets contenant un ecdystéroïde, un dérivé d'ecdystéroïde ou un extrait végétal ou animal le contenant . 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait que l'ecdystéroïde est de l'ecdystérone. 3. Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait que l'ecdystéroïde est sous la forme d'un dérivé tel qu'un dérivé mono- ou multi-acylé et notamment acétylé, un acétonide, un ester de l'acide phosphorique. 4. Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait que l'ecdystéroïde utilisé est contenu dans un extrait végétal tel qu'un extrait de Cyanotis arachnoidea, Cyanotis vaga, Ajuga turkestanica, Ajuga iva, Ajuga decumbens, Serratula coronata, Leuzea (ou Rhaponticum) carthamoides, Paris polyphylla, Pfaffia paniculata, Pfaffia iresinoides, Pfaffia stenophylla, Polypodium vulgare, Polypodium aureum, Polypodium lepidopteris, Silene otites, Cyatula officinalis, Cyatula capitata, Achyrantes aspera, Achyrantes bidentata, Spinacia oleracea, ou dans un extrait animal tel qu'un extrait de Bombyx mori. 5. Composition selon les revendications 1 à 4, caractérisée par le fait qu'elle comprend aussi - au moins un antioxydant tel que la vitamine E, la vitamine C, un caroténoïde, un flavonoïde, un isoflavonoïde, un polyphénol, une procyanidine, le resvératrol, le gallate d'épigallocatéchine, la genistéine, la daidzéine, la formononétine, l'équol, un extrait de thé vert ; - au moins un anti-inflammatoire tel qu'un extrait de Glycyrrhiza glabra, l'acide glycyrrhétinique. 6. Composition selon la revendication 2, caractérisée par le fait qu'elle comprend de 0,001 à 10 % en poids de d'ecdystérone. 7. Composition selon la revendication 6, caractérisée par le fait qu'elle comprend de 0,01 à 1 % en poids d'ecdystérone.