Brevet FR2897268A1 — publié le 20070817

La présente invention concerne l'utilisation d'un copolymère de styrène et de diacide carboxylique éthylénique comme agent de dépigmentation de la peau, ainsi qu'un procédé de dépigmentation de la peau. La couleur de la peau humaine est fonction de différents facteurs et notamment des saisons de l'année, de la race et du sexe; elle est principalement déterminée par la nature et la concentration de mélanine produite par les mélanocytes. Les mélanocytes sont les cellules spécialisées qui, par l'intermédiaire d'organelles particuliers, les mélanosomes, synthétisent la mélanine. En outre, à différentes pério- des de leur vie, certaines personnes voient apparaître sur la peau et plus spécialement sur les mains, des taches plus foncées et/ou plus colorées, conférant à la peau une hétérogénéité. Ces taches sont dues aussi à une concentration importante de mélanine dans les kératinocytes situés à la surface de la peau. L'utilisation de substances dépigmentantes topiques inoffensives présentant une bonne efficacité est tout particulièrement recherchée en vue de traiter les hyperpigmentations régionales par hyperactivité mélanocytaire telles que les mélasmas idiopathiques, survenant lors de la grossesse ("masque de grossesse" ou chloasma) ou d'une contraception oestro-progestative, les hyperpigmentations localisées par hyperactivité et prolifération mélanocytaire bénigne, telles que les taches pigmentaires séniles dites lentigo actiniques, les hyperpigmentations accidentelles, éventuellement dues à la photosensibilisation ou à la cicatrisation post-lésionnelle, ainsi que certaines leucodermies, telles que le vitiligo. Pour ces dernières (les cicatrisations pouvant aboutir à une cicatrice donnant à la peau un aspect plus blanc), à défaut de pouvoir repigmenter la peau lésée, on achève de dépigmenter les zones de peau normale résiduelle pour donner à l'ensemble de la peau une teinte blanche homogène. Le mécanisme de formation de la pigmentation de la peau, c'est-à-dire de la for- mation de la mélanine est particulièrement complexe et fait intervenir schématiquement les principales étapes suivantes : Tyrosine ---> Dopa ---> Dopaquinone ---> Dopachrome ---> Mélanine La tyrosinase (monophénol dihydroxyl phénylalanine : oxygen oxydo-reductase EC 1.14.18.1) est l'enzyme essentielle intervenant dans cette suite de réactions. Elle catalyse notamment la réaction de transformation de la tyrosine en Dopa (dihydroxyphénylalanine) grâce à son activité hydroxylase et la réaction de transformation de la Dopa en dopaquinone grâce à son activité oxydase. Cette tyrosinase n'agit que lorsqu'elle est à l'état de maturation sous l'action de certains facteurs biologiques. Une substance est reconnue comme dépigmentante si elle agit directement sur la vitalité des mélanocytes épidermiques où se déroule la mélanogénèse, et/ou si elle interfère avec une des étapes de la biosynthèse de la mélanine soit en inhibant une des enzymes impliquées dans la mélanogénèse, soit en s'intercalant comme analogue structural d'un des composés chimiques de la chaîne de synthèse de la mélanine, chaîne qui peut alors être bloquée et ainsi assurer la dépigmentation. Les substances les plus utilisées en tant que dépigmentants sont plus particuliè- rement l'hydroquinone et ses dérivés, en particulier ses éthers tels que le monométhyléther et le monoéthyléther d'hydroquinone. Ces composés, bien qu'ils pré-sentent une efficacité certaine, ne sont malheureusement pas exempts d'effets secondaires du fait de leur toxicité, ce qui peut rendre leur emploi délicat, voire dangereux. Cette toxicité provient de ce qu'ils interviennent sur des mécanismes fondamentaux de la mélanogénèse en tuant des cellules qui risquent alors de perturber leur environnement biologique et qui par conséquent obligent la peau à les évacuer en produisant des toxines. Ainsi, l'hydroquinone est un composé particulièrement irritant et cytotoxique pour 20 le mélanocyte, dont le remplacement, total ou partiel a été envisagé par de nombreux auteurs. On a ainsi cherché des substances qui n'interviennent pas dans le mécanisme de la mélanogénèse mais qui agissent en amont sur la tyrosinase en empêchant son 25 activation et sont de ce fait beaucoup moins toxiques. On utilise couramment comme inhibiteur de l'activation de la tyrosinase l'acide kojique qui complexe le cuivre présent dans le site actif de cette enzyme. Malheureusement, ce composé est instable en solution, ce qui complique quelque peu la fabrication de la composition. 30 Il subsiste le besoin d'un nouvel agent blanchissant de la peau humaine à action aussi efficace que ceux connus, mais n'ayant pas leurs inconvénients, c'est-à-dire qui soit non irritant, non toxique et/ou non allergisant pour la peau. 35 A cet égard la Demanderesse a de manière surprenante et inattendue découvert que certains polymères de styrène et de diacide carboxylique éthylénique présentaient une bonne activité dépigmentante et anti-pigmentante. De façon plus précise, l'invention a donc pour objet l'utilisation comme agent (et 40 notamment comme seul agent) pour dépigmenter et/ou blanchir la peau, notam- ment pour éliminer les taches pigmentaires, les taches de sénescence et/ou en tant qu'agent anti-pigmentant , d'un copolymère de monomère styrénique et de diacide carboxylique à insaturation éthylénique. L'invention a également pour objet un procédé cosmétique pour dépigmenter et/ou éclaircir une peau présentant des taches de pigmentation comprenant l'application sur la peau d'une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un copolymère de monomère styrénique et de diacide carboxylique à insaturation éthylénique tel que décrit précédemment, la composition étant exempte d'ingrédient actif hydrophile sensible à l'oxydation. Le procédé convient notamment pour éliminer les taches pigmentaires brunâtres et/ou les taches de sénescence, et/ou pour éclaircir la peau brunie. L'invention a aussi pour objet l'utilisation d'un copolymère de monomère styrénique et de diacide carboxylique à insaturation éthylénique tel que décrit précédemment pour la fabrication d'une composition dermatologique destinée à dépigmenter et/ou blanchir la peau, la composition étant exempte d'ingrédient actif hydrophile sensible à l'oxydation. Les copolymères de styrène / diacide carboxylique utilisé selon l'invention selon l'invention permettent de dépigmenter et/ou d'éclaircir efficacement la peau d'êtres humains. Ils sont notamment destinés à être appliqués sur la peau d'individus pré-sentant des taches de pigmentation brunâtres, des taches de sénescence, ou sur la peau d'individus désirant combattre l'apparition d'une couleur brunâtre provenant de la mélanogénèse, par exemple à la suite d'une exposition aux rayonne- ments ultra-violet. Le copolymère utilisé selon l'invention est un copolymère de monomère styrénique et de diacide carboxylique à insaturation éthylénique. Comme monomère styrénique, on peut citer le styrène, l'alpha-méthyl styrène, et de préférence le styrène. Comme monomère acide dicarboxylique à insaturation éthylénique, on peut citer l'acide maléique, l'acide itaconique, ou leur dérivé anhydride hydrolysé après polymérisation (notamment anhydride maléique ou anhydride itaconique). Des copolymères convenant plus particulièrement à la mise en oeuvre de l'invention sont des copolymères obtenu par copolymérisation d'une ou plusieurs unité(s) anhydride maléique ou itaconique suivi de leur hydrolyse. Les unités anhydride maléique ou anhydride d'acide itaconique peuvent être par- tiellement ou totalement hydrolysées. Ledit copolymère est de préférence sous forme de sel, notamment sous forme de sels alcalins, par exemple sous forme de sels d'ammonium, de sodium, de potassium ou de lithium, et de préférence sous forme de sel de sodium. Dans un aspect avantageux de l'invention, le copolymère possède une fraction molaire en unité diacide carboxylique à insaturation éthylénique comprise entre 0,1 et 0,9, de préférence entre 0,4 et 0,9, et plus préférentiellement entre 0,4 et 0,6. De préférence ledit polymère a une solubilité dans l'eau à 25 C supérieure ou égale à 2 g/I. La masse molaire moyenne en poids du copolymère styrènique/diacide carboxylique à insaturation éthylénique est de préférence comprise entre 1000 et 500 000 et de préférence entre 1000 et 50 000. De façon préférentielle, on utilisera un copolymère de styrène et d'acide maléique (ou d'anhydride maléique hydrolysé), en particulier dans un rapport molaire sty- rène/acide maléique allant de 40/60 à 60/40, en particulier égal à 50/50. On pourra utiliser par exemple, le copolymère styrène/anhydride maléique (50/50), hydrolysée sous forme de sel d'ammonium à 30% dans l'eau vendu sous la référence SMA1000H8 par la société CRAY VALLEY ou le copolymère styrène/anhydride maléique (50/50) hydrolysé sous forme de sel de sodium à 40% dans l'eau vendu sous la référence SMA1000HNa par la société CRAY VALLEY (et ayant pour nom INCI : sodium styrene/MA copolymer). Le copolymère est présent dans la composition utilisée selon l'invention en quanti-té suffisante pour obtenir l'effet recherché, c'est à dire en quantité suffisante pour dépigmenter la peau. De préférence le copolymère est présent en une teneur al- tant de 0,1 % à 40 % en poids, par rapport au poids total de la composition, plus particulièrement en une teneur allant de 0,1 à 20 % en poids, et préférentiellement allant de 0,1 % à 10 % en poids, par rapport au poids total de la composition. Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, le copolymère de mono-mère styrénique et de diacide carboxylique à insaturation éthylénique décrit pré- cédemment est utilisé selon l'invention en n'étant pas associé avec un ingrédient actif hydrophile sensible à l'oxydation. Par actif hydrophile, on entend un composé ayant une solubilité dans l'eau d'au moins 0,25 % à température ambiante (25 C). Par actif hydrophile sensible à l'oxydation on entend tout actif hydrophile d'origine naturelle ou synthétique susceptible de subir une dégradation par un mécanisme d'oxydation. Ce phénomène d'oxydation peut avoir plusieurs causes, en particulier la présence d'oxygène, de lumière, d'ions métalliques, une température élevée, ou encore certaines conditions de pH. En particulier, l'actif hydrophile sensible à l'oxydation peut être l'acide ascorbique ou l'un de ses dérivés notamment choisis parmi le 5,6-di-O-diméthylsilylascorbate, le sel de potassuim du dl-alpha-tocopheryl-dl-ascorbyl-phosphate, l'ascorbyl phosphate de magnésium, l'ascorbyl phosphate de sodium, l'ascorbyl glucoside ; le phloroglucinol ; l'acide kojique. La composition utilisée selon l'invention comprend, dans un milieu physiologique-ment acceptable, au moins un copolymère de styrène et d'anhydride maléique hydrolysé tel que défini précédemment. En particulier la composition est adaptée à une application topique sur la peau. Le milieu physiologiquement acceptable sera préférentiellement un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire sans odeur, couleur ou aspect désagréable, et qui ne génère pas de picotement, tiraillement ou rougeur inacceptable pour l'utilisateur. Par milieu physiologiquement acceptable, on comprend un milieu compatible avec les matières kératiniques d'êtres humains comme la peau, les muqueuses, les ongles, le cuir chevelu et/ou les cheveux. La composition utilisée selon l'invention peut être destinée à une application cosmétique ou pharmaceutique, particulièrement dermatologique. De préférence la composition selon l'invention est destinée à une application cosmétique. La composition peut alors comprendre tous les constituants usuellement employés dans l'application envisagée. On peut notamment citer l'eau, les solvants, les huiles d'origine minérale, animale et/ou végétale, les cires, les pigments, les charges, les tensioactifs, les actifs cosmétiques ou dermatologiques, les filtres UV, les polymères, les gélifiants, les conservateurs. Bien entendu l'homme du métier veillera à choisir ce ou ces éventuels composés complémentaires, et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses des composés selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par l'adjonction envisagée. La composition utilisée selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées dans les domaines cosmétique et dermatologique; elle peut être notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique, éventuellement gélifiée, d'une dispersion du type lotion éventuellement bi- phasée, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux, d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse à l'aide de sphérules, ces sphérules pouvant être des nanoparticules polymériques telles que les nanos- phères et les nanocapsules ou, mieux, des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non-ionique, ou bien encore d'une poudre. Lorsque la composition est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 à 80 % en poids, et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les émulsionnants et les éventuels coémulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. L'émulsionnant et le coémulsionnant sont présents, dans la composition, en une proportion pouvant aller de 0, 3 à 30 % en poids, et de préférence de 0,5 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition. Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, et par exemple sous forme de stick. Dans un aspect avantageux de l'invention, les compositions utilisées peuvent comporter en plus au moins un agent desquamant, et/ou au moins un agent apaisant, et/ou au moins agent photoprotecteur organique et/ou au moins un agent photoprotecteur minéral. Par "agent desquamant", on entend tout composé capable d'agir : - soit directement sur la desquamation en favorisant l'exfoliation, tel que les 13-hydroxyacides, en particulier l'acide salicylique et ses dérivés (dont l'acide noctanoyl 5-salicylique) ; les a-hydroxyacides, tels que les acides glycolique, citrique, lactique, tartrique, malique ou mandélique ; l'urée ; l'acide gentisique ; les oligofucoses ; l'acide cinnamique ; l'extrait de Saphora japonica ; - soit sur les enzymes impliquées dans la desquamation ou la dégradation des cornéodesmosomes, les glycosidases, la stratum corneum chymotryptic enzym (SCCE) voire d'autres protéases (trypsine, chymotrypsine-like). On peut citer les agents chélatant des sels minéraux : l'EDTA ; l'acide N-acyl-N,N',N' éthylène diaminetriacétique ; les composés aminosulfoniques et en particulier l'acide (N-2 hydroxyéthylpiperazine-N-2-éthane) sulfonique (HEPES) ; les dérivés de l'acide 2-oxothiazolidine-4-carboxylique (procystéine) ; les dérivés d'acides alpha aminés de type glycine (tels que décrits dans EP-0 852 949, ainsi que le méthyl glycine diacétate de sodium commercialisé par BASF sous la dénomination commerciale TRILON M) ; le miel ; les dérivés de sucre tels que l'O-octanoyl-6-D-maltose et la N-acétyl glucosamine. Comme agents apaisants utilisables dans la composition utilisée selon l'invention, on peut citer : les triterpènes pentacycliques et les extraits de plantes (ex : Glycyrrhiza glabra) en contenant comme l'acide 13-glycyrrhétinique et ses sels et/ou ses dérivés (l'acide glycyrrhétinique monoglucuronide, le stearyl glycyrrhetinate, l'acide 3-stéaroyloxy glycyrrhetique), l'acide ursolique et ses sels, l'acide oléanolique et ses sels, l'acide bétulinique et ses sels, un extrait de Paeonia suffruticosa et / ou lactiflora, les sels de l'acide salicylique et en particulier le salicylate de zinc, les phycosaccharides de la société Codif, un extrait de Laminaria saccharina, l'huile de Canola, le bisabolol et les extraits de camomille, l'allantoïne, le Sépivital EPC (diesterphosphorique de vitamine E et C) de Seppic, les huiles insaturées en oméga 3 telles que les huiles de rosier musca, de cassis, d'ecchium, de poisson, des extraits de plancton, la capryloyl glycine, le Seppicalm VG (sodium palmitoylproline et nymphea alba) de Seppic, un extrait du Pygeum, un extrait de Boswellia serrata, un extrait de Centipeda cunnighami, un extrait d'Helianthus annuus, un extrait de Linum usitatissimum, un extrait de menthe, un extrait de rose (notamment Rosa Gallica), les tocotrienols, les extraits de Cola nitida, le piperonal, un extrait de clou de girofle, un extrait d'Epilobium Angustifolium, l'aloe vera, un extrait de Bacopa moniera, les phytostérols, la cortisone, l'hydrocortisone, l'indométhacine et la beta méthasone. Les agents photoprotecteurs organiques sont notamment choisis parmi les anthranilates ; les dérivés cinnamiques ; les dérivés de dibenzoylméthane ; les dérivés salicyliques, les dérivés du camphre ; les dérivés de triazine tels que ceux décrits dans les demandes de brevet US 4367390, EP863145, EP517104, EP570838, EP796851, EP775698, EP878469, EP933376, EP507691, EP507692, EP790243, EP944624 ; les dérivés de la benzophénone ; les dérivés de 13,13-diphénylacrylate ; les dérivés de benzotriazole ; les dérivés de benzalmalonate ; les dérivés de benzimidazole ; les imidazolines ; les dérivés bis-benzoazolyle tels que décrits dans les brevets EP669323 et US 2,463,264; les dérivés de l'acide p- aminobenzoïque (PABA) ; les dérivés de méthylène bis-(hydroxyphényl benzotriazole) tels que décrits dans s les demandes US5,237,071, US5,166,355, GB2303549, DE 197 26 184 et EP893119 ; et les polymères filtres et silicones filtres tels que ceux décrits notamment dans la demande WO-93/04665 ; les dimères dérivés d'a-alkylstyrène tels que ceux décrits dans la demande de brevet DE19855649. Les agents photoprotecteurs minéraux sont choisis parmi des pigments ou bien encore des nanopigments (taille moyenne des particules primaires: généralement entre 5 nm et 100 nm, de préférence entre 10 nm et 50 nm) d'oxydes métalliques enrobés ou non comme par exemple des nanopigments d'oxyde de titane (amor- phe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), de fer, de zinc, de zirconium ou de cérium qui sont tous des agents photoprotecteurs UV bien connus en soi. Des agents d'enrobage classiques sont par ailleurs l'alumine et/ou le stéarate d'alumi- nium. De tels nanopigments d'oxydes métalliques, enrobés ou non enrobés, sont en particulier décrits dans les demandes de brevets EP518772 et EP518773. Les agents photoprotecteurs sont généralement présents dans la composition se- Ion l'invention dans des proportions allant de 0,1 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition, et de préférence allant de 0,2 à 15 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les exemples qui suivent illustrent l'invention . Exemple 1 : Mesure de l'effet modulateur de la mélanogénèse du copolymère styrène/anhydride maléique (50/50) hydrolysé sous forme de sel de sodium à 40% 15 dans l'eau ( SMA1000HNa par la société CRAY VALLEY), en présence ou en l'absence d'acide ascorbique, sur co-culture de kératinocytes et mélanocytes humains normaux 1.1. MATERIEL ET METHODE L'effet modulateur sur la mélanogénèse du copolymère SMA1000HNa été testé selon la méthode décrite dans le brevet FR-A-2 734 825, ainsi que dans l'article de R. Schmidt, P. Krien et M. Régnier, Anal. Biochem., 235(2), 113-18, 1996. 25 En bref, la méthode comprend les étapes consistant à : • mettre en co-culture des kératinocytes / mélanocytes humains normaux dans un milieu contenant l'extrait testé ainsi qu'un précurseur de mélanine mar-30 qué, en l'occurrence du thiouracile marqué au C14 • à lyser les cellules contenant la mélanine avec des enzymes dégradant les protéines, • à faire passer l'extrait obtenu sur un filtre échangeur d'anions ayant un diamètre de pores inférieur ou égal à 1 m, et 35 • à évaluer la quantité de mélanine fixée par le filtre au moyen d'un do-sage radioactif du thiouracile. Précisément, 50 000 kératinocytes humains normaux et 17 000 mélanocytes humains normaux sont mélangés et ensemencés par puits de plaques de 96 40 puits (type Costar) et cultivés trois jours dans le milieu de différenciation. Pendant les trois jours suivants, le milieu de culture est remplacé quotidiennement par le milieu test défini (contenant les produits à évaluer, ainsi que 3 Ci/ml de thiouracile marquée au C14) 20 Les témoins suivants sont réalisés : - culture témoin : milieu test -témoin positif de stimulation de la mélanogénèse : milieu test + 1 mM ty-rosine ; - 3 témoins positifs d'inhibition de la mélanogénèse : milieu test + respectivement 500 M d'acide kojique ; 100 pM d'arbutine ; 10 %M de lucinol (2-butyl benzène 1,3-diol) . La radioactivité totale incorporée dans les protéines est estimée par l'incorporation de leucine tritiée, prise comme indicateur de prolifération et indicateur précoce de cytotoxicité. La veille de la prise, 1 Ci/ml de leucine tritiée est ajouté au milieu test. On considère qu'un produit est cytotoxique lorsque la teneur en leucine tritiée diminue d'au moins 30 %. Après une nuit, les cellules sont rincées en tampon phosphate (Phosphate Buffered Saline, PBS). Les protéines sont précipitées à l'aide d'acide trichloracétique (TCA) à 5% et lavées afin d'éliminer la radioactivité libre. Les protéines sont incubées pendant la nuit à 37 C à l'aide d'une solution de protéinase K à 20 pl/ml dans du tampon Tris HCI-triton-EDTA. 50 pl d'extrait total sont prélevés et transférés dans une plaque 96 puits (Wallac) et 150 pl de liquide scintillant (Optiphase Supermix ) sont ajoutés. Le reste de l'extrait, soit 950 pl, est filtré sur filtre DEAE Filtermat. Après rinçage, le filtre recouvert du scintillant solide Meltilex est transféré dans une plaque de comptage. La radioactivité est comptée à l'aide du compteur Wallac. Les résultats sont exprimés en pourcentage du témoin selon la formule: (14CP / 3HP) - (14CT / 3HT) X 100 (14CT / 3HT) dans laquelle: 14CP est la moyenne des désintégrations par minute (dpm) thiouracile 14C sur 3 puits similaires traités par un produit (P) ; 3HP est la moyenne des dpm leucine 3H correspondant ; 14CT est la moyenne des dpm thiouracile 14 C sur 3 puits similaires témoin 3HT est la moyenne des dpm leucine 3H correspondant. On calcule le rapport de l'incorporation de thiouracile à l'incorporation de leucine, pour normaliser la mélanogénèse à la quantité de protéines présente dans le puit. Ce rapport traduit la modulation de la mélanogénèse. 5 .2. RESULTATS Références 3H Leu. 14C ThioU. 14C ThioU. (%/Témoin) (%/Témoin) 3H Leu. Tyrosine 1 mM +6% 96% 85% Acide kojique 500 M -8% -56% -52% Arbutine 100 M -8% -49% -44% Lucinol 10 M 4% -60% -62% 3H Leu. 0 /0 -17% -23% -23% (%/Témoin) 14C ThioU. -14% -69% -79% -76% (%/Témoin) 14C ThioU. -14% -62% -72% -68% 3H Leu. copolymère 18 53 70 105 SMA] ( M) 3H Leu. -4 /0 -15% -12% -11% (%/Témoin) 14C ThioU. -28% -66% -67% -71% (%/Témoin) 14C ThioU. -25% -60% -63% -68% 3H Leu. [copolymère 18 53 70 105 SMA] (PM) 3H Leu. 2% 4% 0% -16% (%/Témoin) 14c ThioU. -21 % -42% -56% -62% (%/Témoin) 14c ThioU. -23% -45% -56% -54% 3H Leu. 10 0,23 mM vitamine C I C50 0,23 mM vitamine C + 42 M SMA I C50 60 M SMA Dans les tableau, SMA signifie le copolymère SMA1000HNa 1.3. CONCLUSIONS Aucune cyto-toxicité des produits testés n'a été observée aux doses évaluées. La vitamine C présente une activité dépigmentante et permet d'atteindre l'IC50 sur ce modèle à environ 0.23 mM. L'activité de la vitamine C n'est pas modifiée en présence du copolymère SMA1000HNa8. En revanche, le copolymère SMA1000HNa testé seul, dans la même gamme de concentration qu'en présence de vitamine C, présente également un potentiel dépigmentant avec effet dose. Il permet d'atteindre l'IC50 à 60 M de copolymère. Le copolymère SMA1000HNa a donc une activité dépigmentante qui lui est propre. Les activités de la vitamine C et du copolymère SMA1000HNa ne sont pas synergiques. L'activité du copolymère SMA1000HNa semble au contraire être mas- quée en présence de vitamine C. Exemple 2 : 2) Principe du protocole anti-pigmentation : Mesure de l'effet modulateur de la mélanogénèse photoinduite du polymère SMA1000HNa en présence ou en l'absence d'acide ascorbique sur co-culture de kératinocytes et mélanocytes humains normaux (effet anti-pigmentation) 25 2.1. MATERIEL ET METHODE Des co-cultures Mélanocytes / Kératinocytes humains normaux (NHM/NHK) su-bissent 1 irradiation au rayonnement UV, répétée quotidiennement pendant 4 jours, en présence ou en absence des produits à évaluer. La synthèse de méla- 30 nine est quantifiée comme précédemment grâce à l'incorporation de 14cthiouracile présente dans le milieu de culture. Parallèlement, un dosage protéique est effectué dans chaque puit afin de normaliser la synthèse mélanique et d'estimer la toxicité du produit. Une atténuation de l'induction de la mélanogenèse après irradiation UV peut ainsi être mise en évidence. 35 Plus précisément, les Mélanocytes et Kératinocytes sont ensemencés respectivement à 80000 et 250000 cellules par puits en plaque 24 puits dans le milieu de20 différenciation kératinocytaire. Les plaques sont incubées 3 jours à 37 C avant traitement. Pour éviter la photo oxydation d'un de ses composants, le milieu de culture est remplacé au moment de l'irradiation, par une solution des produits dans du PBS. Les produits sont mis en contact avec les cellules 15 minutes avant l'irradiation. L' Irradiation UV est réalisée à l'aide d'un simulateur solaire. La dose délivrée est de 7J/cm2. Source d'irradiation : simulateur Oriel Xénon 1000W + filtre dichroïque + WG 320/1.5 mm. Les témoins suivants sont réalisés : - Témoin non irradiée (quantification de la mélanogenèse constitutive) - Témoin contrôle d'irradiation - 2 Témoins positifs d'inhibition de la mélanogénèse photoinduite : (100 pM Arbutine ; 1 M Lucinol) Après irradiation, le PBS est éliminé et les cellules sont mises à incuber dans un milieu de culture semi défini auquel sont ajoutés les produits et la 14C-thiouracile (1 Ci/ml). Ce traitement est renouvelé quotidiennement pendant 4 jours. Pour chaque condition expérimentale, des lysats cellulaires sont réalisés en rinçant les cellules avec un tampon phosphate (PBS). Les protéines sont précipitées à l'aide d'acide trichloracétique (TCA) à 5% et lavées afin d'éliminer la radioactivité libre. Les protéines sont incubées pendant un week end à 37 C à l'aide d'une solution de protéinase K à 20 pl/ml dans du tampon Tris HCI-triton-EDTA. 5 pl d'extrait total sont prélevés et transférés dans une plaque 96 puits (Wallac). Les protéines sont dosées à l'aide du kit de dosage Protein Assay Reagent (Pierce). La quantité de protéines par puits (P) servira à normaliser la mélanogenèse. Le reste de l'extrait est filtré sur filtre DEAE Filtermat (Wallac). Après rin- çage, le filtre recouvert du scintillant solide Meltilex (Wallac) est transféré dans une plaque de comptage costar. La radioactivité est comptée à l'aide du compteur Wallac et permet la quantification de la mélanogenèse(M) par mesure du 14C-thiouracile (ccpm) incorporé par les cellules. 10 Mélanogenèse normalisée (MN) = M / P Mélanogenèse Photo Induite (MPI) = MN (échantillon irradié) ù MN (échantillon non irradié) Effet Anti-pigmentant du Produit (%) = [[MPI (échantillon irradié+traité)-MPI (échantillon irradié)] / MPI (échantillon irradié)] X 100 2-2 RESULTATS Références Protéines MPI Effet anti- (%/Témoin (%/Témoin pigmentant du non irradié) non irradié) produit Témoin SSR -21 % 225% - Arbutine 100 M + SSR -15% -24% -111 % Lucinol 1 M + SSR -14% -36% - 116% Protéines -12% -19% -19% -22% (%/Témoin non irradié) MPI 134% 78% 23% 0 /0 (%/Témoin non irradié) Effet anti- -40% -65% -90% -100% pigmentant du produit 0.47 mM vitamine C [SMA] 53 180 350 530 (PM) Protéines -24% -26% -25% -27% (%/Témoin non irradié) MPI 118% 69% 17% 5 /0 (%/Témoin non irradié) Effet anti- -47% -69% -92% -102% pigmentant du produit I C50 0. 37 mM vitamine C + 67 PM SMA [SMA] 53 180 350 530 (PM) Protéines -24% -23% -22% -20% (%/Témoin non irradié) MPI 189% 126% 160% 166% (%/Témoin non irradié) Effet anti- - -44% -29% -26% pigmentant du produit 2.3. CONCLUSIONS Aucune cyto-toxicité des produits testés n'a été observée aux doses évaluées. La vitamine C présente une activité anti-pigmentante et permet d'atteindre l'IC50 sur ce modèle à environ 0,47 mM. L'activité de la vitamine C à faibles concentrations sous UV est sensiblement améliorée en présence du copolymère SMA1000HNa . En effet, l'IC50 de la vitamine C est atteinte à 0.37 mM en présence du copoly- mère SMA1000HNa , soit plus rapidement que lorsqu'elle est testée seule. Cette légère amélioration pourrait être due au potentiel stabilisant du copolymère SMA1000HNa sur la vitamine C, dans ces conditions expérimentales pro-oxydantes d'exposition aux rayons UV. Néanmoins, le copolymère SMA1000HNa testé seul, dans la même gamme de concentration qu'en présence de vitamine C, présente également un potentiel anti-pigmentant qui lui est propre. Cet effet n'est pas synergique à celui de la vitamine C. Exemple 3 : On prépare un gel dépigmentant pour le corps ayant la composition suivante : 0/0 en poids gomme de Xanthane 0.4 hydroxyde de potassium 0.3 Dimethicone PEG-7 phosphate (PECOSIL PS 100 2 de chez Phoenix Chemical) copolymère styrene / acide maléique, sel de sodium 1 à 40 % en poids dans l'eau (SMA 1000HNa de chez I C50 Non atteinte Cray Valley) Cyclohexasiloxane 10 Ethanol 15 Eau 70.65 Polymère acrylique épaississant (Carbomer) 0.4 Copolymère acide acrylique/méthacrylate de stéa- 0.25 ryle dans un mélange acétate d'éthyle/cyclohexane (Pemulen TRI de chez Noveon) La composition appliquée sur la peau présentant des taches de pigmentation permet après plusieurs applications d'estomper les taches. Exemple 4 : On prépare un tonique dépigmentant pour le visage ayant la composition sui-10 vante : 0/0 en poids Triethanolamine 0.6 Sel disodique de l'acide éthylène dia- 0.2 mine tétracétique copolymère styrene / acide maléique, sel 1 de sodium à 40 % en poids dans l'eau (SMA 1000HNa de chez Cray Valley) Cyclopentasiloxane 2 Dimethicone 2 Ethanol 10 Eau 82.8 Conservateurs 0.90 Copolymère acide acryli- 0.5 que/méthacrylate de stéaryle dans un mélange acétate d'éthyle/cyclohexane (Pemulen TRI de chez Noveon) 15 La composition appliquée sur une peu présentant des taches de pigmentation permet après plusieurs applications d'estomper les taches. 510 Exemple 5 : On prépare une lotion dépigmentante pour le visage ayant la composition sui-vante : Butylene glycol 4 PEG-32 0.5 PEG-8 1.5 copolymère styrene / acide maléique, 1 sel de sodium à 40 % en poids dans l'eau (SMA 1000HNa de chez Cray Val- ley) Glycerine 3 Propylene glycol 0.25 PEG-60 huile de ricin hydrogénée po- 0.17 lyoxyéthylénée (60 0E) Sel disodique de l'acide éthylène dia- 0.08 mine tétracétique Eau 88.65 Conservateurs 0.85 Exemple 6 : On prépare un soin du visage ayant la composition suivante : 0/0 en poids Sel disodique de l'acide éthylène dia- 0.05 mine tétracétique Dimethicone/vinyl dimethicone croo- 1.2 spolymer (KSG 16 de chez Shin Tetsu) Nylon -12 5 copolymère styrene / acide maléique, sel 1 de sodium à 40 % en poids dans l'eau (SMA 1000HNa de chez Cray Valley) Cyclopentasiloxane 17.3 Glycerine 23 Propylene glycol 6 Dimethicone 3.8 PEG/PPG-18/18 dimethicone (DC 5225 2.4 C de chez Dow Corning) Huile de noyau d'abricot 3 16 10 Phenyl trimethicone (DC 556 de chez 4 Dow Corning) Silice 3 Eau 29.95 Conservateurs 0.3 Appliquée quotidiennement, la composition estompe les taches du visage. Exemple 7 : On prépare une crème de soin du visage et des mains ayant la composition sui-vante : 0/0 en poids Alcool myristylique 0.025 alcool stéarylique 1.025 Phenoxyethanol 0.8 hydroxyde de potassium 0.5 stearate de glyceryle 1.25 alcool cétylique 0.95 copolymère styrene / acide maléique, sel 1 de sodium à 40 % en poids dans l'eau (SMA 1000HNa de chez Cray Valley) Cyclopentasiloxane 15 Glycerine 5 polyisobutene hydrogéné (huile de Par- 5 leam) Eau 65,10 Polymère acrylique épaississant (Car- 0. 6 bomer) stearate de PEG-50 2.5 stearate de PEG-100 1.25 La composition appliquée sur la peau estompe les taches. REVENDICATIONS 1. Utilisation comme agent pour dépigmenter et/ou blanchir la peau, notamment pour éliminer les taches pigmentaires, les taches de sénescence et/ou en tant qu'agent anti-pigmentant, d'un copolymère de monomère styrénique et de diacide carboxylique à insaturation éthylénique. 2. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée par le fait que le monomère styrénique est choisi parmi le styrène et l'alpha-méthyl styrène. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée par le fait que le mono-mère styrénique est le styrène. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée 15 par le fait que le diacide carboxylique à insaturation éthylénique est choisi parmi l'acide maléique, l'acide itaconique, ou leur dérivé anhydride hydrolysé après polymérisation. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée 20 par le fait que le diacide carboxylique à insaturation éthylénique est choisi parmi l'acide maléique, ou leur dérivé anhydride hydrolysé après polymérisation. 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que ledit copolymère est sous forme de sel. 7. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée par le fait que ledit copolymère est sous forme de sel choisi parmi les sels d'ammonium, de sodium, de potassium, de lithium, et de préférence sous forme de sel de sodium. 30 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que ledit copolymère possède une fraction molaire en unité diacide carboxylique à insaturation éthylénique comprise entre 0,1 et 0,9, et de préférence entre 0,4 et 0,9. 35 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que ledit copolymère a une masse molaire moyenne en poids comprise entre 1000 et 500 000, et de préférence entre 1000 et 50 000. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractéri-40 sée par le fait que ledit copolymère a une solubilité dans l'eau à 25 C supérieure ou égale à 2 g/I. 25 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que ledit copolymère est un copolymère de styrène et d'acide maléique 12. Procédé cosmétique pour dépigmenter et/ou éclaircir une peau présentant des taches de pigmentation comprenant l'application sur la peau d'une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un copolymère de monomère styrénique et de diacide carboxylique à insaturation éthylénique selon l'une quelconque des revendications précédentes, la composition étant exempte d'ingrédient actif hydrophile sensible à l'oxydation. 13. Procédé selon la revendication précédente, caractérisée par le fait qu'il est destiné à éliminer les taches pigmentaires brunâtres et/ou les taches de 15 sénescence, et/ou pour éclaircir la peau brunie. 14. Procédé selon l'une des revendications 12 ou 13, caractérisée par le fait que le copolymère est présent en une teneur allant de 0,1 % à 40 % en poids, par rapport au poids total de la composition, et plus particulièrement en une teneur allant 20 de 0,1 à 20 % en poids, par rapport au poids total de la composition. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisée par le fait qu'elle comprend au moins un ingrédient choisi parmi les agents desquamant, les agents apaisant, les agents photoprotecteurs organiques, les agents 25 photoprotecteurs minéraux. 16. Utilisation d'un copolymère de monomère styrénique et de diacide carboxylique à insaturation éthylénique selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 pour la fabrication d'une composition dermatologique destinée à dépigmenter et/ou 30 blanchir la peau.