Brevet FR2886652A1 — publié le 20061208

B0674FR 2886652 1 L'invention concerne un procédé de réalisation d'au moins une zone hydrophile sur une surface d'un substrat hydrophobe, ainsi qu'une pièce en matériau composite comprenant au moins une zone hydrophile, et l'utilisation d'une telle pièce. En particulier, le procédé selon l'invention fait appel à une technique de réduction localisée par voie électrochimique, de sorte à former sur la surface d'une pièce des zones hydrophiles entourées de zones hydrophobes. Les pièces en matériau composite comprenant de telles zones hydrophiles localisées sont destinées à être utilisées notamment pour la réalisation de plots aptes à la reconnaissance chimique, tels que des biopuces (également appelées puces à ADN), ou dans le domaine de la microfluidique, qui concerne les écoulements dans des structures mettant en jeu des dimensions caractéristiques de l'ordre du micromètre, afin d'obtenir des zones de transport de fluides ou de particules (cellules biologiques). En effet, pour de telles applications, il est nécessaire que la partie hydrophile du substrat, ou partie active, soit bien localisée, et que le reste du substrat soit inerte chimiquement et physiquement, afin de ne pas influer sur les réactions ayant lieu dans la partie active. Pour les applications considérées, l'utilisation de substrats en matériau polymère s'est récemment développée. En effet, ces substrats offrent, par rapport au silicium ou au verre classiquement utilisés, de nombreux avantages tels qu'une mise en forme aisée, un faible coût, et une bonne biocompatibilité. Ainsi, on connaît la modification locale de substrats formés de polytétrafluoroéthylène, ou PTFE (généralement commercialisé sous la marque Teflon') par réduction électrochimique. On peut se référer aux publications suivantes: C. Combellas et al., Polymer 44 (2003) 19-24; C. Combellas et al., Polymer 45 (2004) 4669-4675; C. Combellas et al., J. Phys.Chem. B (2004), 108, 6391-6397. L'utilisation de la voie électrochimique permet un ajustement aisé des dimensions des zones hydrophiles par B0674FR 2886652 2 choix de l'électrode utilisée, une transposition facile à grande échelle, et présente en outre un faible coût. Par ailleurs, le PTFE offre l'intérêt d'une bonne résistance thermique et d'un faible coût. Toutefois, ce polymère possède des inconvénients extrêmement gênants pour les applications considérées. En effet, il présente un mauvais état de surface, en particulier un caractère rugueux qui ne peut être amélioré, même par polissage. En outre, il présente un fluage dès 60 C, et il est opaque. Pour remédier à ces inconvénients, les inventeurs proposent d'utiliser, en tant que substrat hydrophobe, un matériau inerte chimiquement dont une surface est revêtue d'un film hydrophobe de faible épaisseur. Le film est formé de groupements organiques fluorés. Les inventeurs ont déterminé un groupe de composés qui sont des réducteurs suffisamment puissants pour réduire la surface hydrophobe de tels substrats, et qui permettent de faire une réduction localisée. A cet effet, selon un premier aspect, l'invention propose un procédé de réalisation d'au moins une zone hydrophile sur un substrat qui est constitué par un matériau chimiquement inerte et dont une surface à traiter est revêtue d'un film hydrophobe, ledit film hydrophobe étant constitué par des groupements organiques fluorés, ledit procédé consistant à effectuer une réduction par voie électrochimique de la surface à traiter, et dans lequel - la réduction est effectuée dans une cellule électrochimique qui est pourvue d'une électrode réductrice, d'une contre-électrode, et qui contient une solution électrolytique contenant au moins un solvant et un composé précurseur d'un agent réducteur, ledit composé étant choisi de sorte à posséder un potentiel standard inférieur à - 2,7 V par rapport à l'électrode au calomel saturé (ECS) ; - l'électrode réductrice est placée par rapport à la surface du substrat de telle sorte que ladite surface soit disposée en regard de la surface utile de B0674FR 2886652 3 l'électrode, ladite surface de l'électrode étant l'image de la zone à réduire; - l'électrode réductrice est soumise au potentiel de formation de l'agent réducteur. Par surface utile de l'électrode , on entend la portion de la surface de contact de l'électrode et de la solution électrolytique sur laquelle se produit la génération du réducteur. Ce procédé combine l'utilisation de composés particuliers aptes à former en solution des agents fortement réducteurs et l'emploi d'une électrode de géométrie adaptée à la zone à réduire. On peut ainsi obtenir de façon maîtrisée, précise et aisément ajustable une zone hydrophile dépourvue de fluor, dont la géométrie est choisie en fonction de l'application considérée. La ou les zones hydrophiles obtenues sont bien localisées, car l'agent réducteur est généré au voisinage immédiat de l'électrode. Ces zones hydrophiles sont entourées d'un matériau hydrophobe non seulement durable, mais également inerte chimiquement et physiquement. Ce substrat hydrophobe modifié présente notamment d'excellentes qualités de surface. Selon une réalisation, le composé précurseur de l'agent réducteur répond à la formule générale P (R'R2R3) , dans laquelle au moins l'un des substituants R', R2, R3 représente un groupement phényle portant de 1 à 3 substituants, parmi lesquels on peut citer les groupements alkyle comportant de 1 à 6 atomes de carbone, linéaires ou ramifiés, éventuellement substitués. De préférence, R1, R2 et R3 représentent indépendamment les uns des autres un groupement phényle portant de 1 à 3 groupes méthyle. En particulier, le composé précurseur de l'agent réducteur est la tritolylphosphine. Selon cette réalisation, le composé précurseur est réductible en un radical anion Rad qui induit la réduction. La solution électrolytique comprend de préférence: - un solvant choisi dans le groupe constitué par le diméthylformamide (DMF), le diméthylsulfoxyde (DMSO), B0674FR 2886652 l'hexaméthylphosphorotriamide (HMPT), l'hexaméthylphosphoramide (HMPA), un nitrile tel que l'acétonitrile, le tétrahydrofuranne (THF), l'ammoniac, les amines primaires; - un sel de type M+A- dans lequel M+ est un cation non réductible choisi dans le groupe constitué par Li+, Na+, K+, NR4+, R étant un radical alkyle, et dans lequel A-est un anion non réductible choisi dans le groupe constitué par BF4-, B (C6H5) 4, CF3CO2-, PF6-, (EtO) 2PO-, NCCHCO2Et-, AcO-, SCN-, CH3CH2CH2CH (NH2) CO2-, C1O4-, Br-, Cl, 1, SO42-. Selon une autre réalisation, le composé précurseur de l'agent réducteur est un cation métallique choisi dans le groupe comprenant les cations provenant des métaux alcalins, des métaux alcalino-terreux, du magnésium et de l'aluminium, ledit cation métallique étant apte à induire la formation d'électrons solvatés qui provoquent la réduction. Dans ce cas, la solution électrolytique comprend de préférence un solvant choisi dans le groupe constitué par l'ammoniac, les amines primaires (telles que la méthylamine, l'éthylamine, la propylamine, l'éthylènediamine), l'hexaméthylphosphoramide, un mélange ammoniac / THF ou un mélange d'une amine et du THF. Les groupements organiques fluorés formant le film hydrophobe sont de préférence choisis dans le groupe constitué par les groupements alkyle fluorés linéaires et les groupements alkyle fluorés ramifiés, les groupements fluoroalkylthiol, les groupements phényle fluorés, et peuvent être des groupements perfluorés. Selon une réalisation, le rapport F / H (atomes de fluor / atomes d'hydrogène) est, avant réduction, supérieur ou égal à 1. Le matériau formant le substrat est avantageusement choisi dans le groupe constitué par le verre, la silice, le silicium, l'alumine, les oxydes métalliques, les métaux, ou un matériau isolant, par exemple un polycarbonate, recouvert d'un film conducteur ou semi-conducteur. Notamment, l'emploi de matériaux transparents comme le verre permet d'utiliser des types de détection très variés, en particulier optiques. B0674FR Selon une réalisation, la surface de l'électrode réductrice en regard de la surface à traiter du substrat est une surface continue. Cette surface peut présenter une forme de disque, de bande, ou bien être un tampon sur lequel est inscrit le motif à graver, c'est-à-dire le motif que l'on souhaite imposer à la zone hydrophile. Selon une autre réalisation, la surface de l'électrode réductrice en regard de la surface à traiter du substrat est une surface discontinue. Elle peut être formée d'une pluralité de plots, l'extrémité de l'électrode présentant ainsi une forme de brosse. Lorsque l'électrode présente une surface en forme de disque, il est préférable que la distance entre cette surface de l'électrode et la surface à traiter du substrat soit comprise entre 0 et 2 fois le rayon du disque. Lorsque l'électrode présente une surface en forme de bande, il est préférable que la distance entre cette surface de l'électrode et la surface à traiter du substrat soit comprise entre 0 et 2 fois la largeur de la bande. Selon un deuxième aspect, l'invention a pour objet une pièce en matériau composite obtenue par le procédé de l'invention, ladite pièce étant constituée par un matériau inerte chimiquement portant sur l'une de ses faces un film hydrophobe interrompu par au moins une zone hydrophile dont au moins l'une des dimensions est micrométrique. Selon une première variante, cette pièce comprend au moins une zone hydrophile en forme de disque, le diamètre de ladite zone étant inférieur ou égal à 500 microns. Une telle pièce est obtenue grâce à l'utilisation d'une électrode de type électrode-disque , le diamètre du disque étant de l'ordre du diamètre de la zone hydrophile obtenue. Selon une deuxième variante, cette pièce comprend une pluralité de zones hydrophiles en forme de disque, le diamètre de chaque zone étant inférieur ou égal à 500 microns. Cette pièce est obtenue grâce à l'utilisation d'une électrode à plots multiples. Ces deux types de pièces peuvent être utilisés de façon avantageuse pour la réalisation de biopuces. B0674FR 2886652 6 Selon une troisième variante, cette pièce comprend au moins une zone hydrophile en forme de trait, la longueur dudit trait étant de l'ordre de quelques millimètres et l'épaisseur dudit trait étant inférieure ou égale à 500 microns. Une telle pièce peut être utilisée de façon avantageuse pour la réalisation d'un système microfluidique qui comprend, selon une réalisation particulière, au moins un canal formé par ledit trait. En effet, les systèmes microfluidiques tels que les chambres de réaction, les mélangeurs, ou les micro-canaux doivent être inertes chimiquement, ce qui est le cas des pièces obtenues selon le procédé de l'invention. D'autres objets et avantages de l'invention apparaîtront au cours de la description qui suit, faite en 15 référence aux dessins annexés dans lesquels: - les figures la et lb sont des vues schématiques en coupe d'une cellule électrochimique dans laquelle est mis en uvre le procédé selon l'invention, respectivement immédiatement avant et immédiatement après réduction, l'électrode réductrice étant, pendant la réduction, en contact direct avec la surface à traiter du substrat; - les figures 2a et 2b sont des vues analogues à la figure 1, dans lesquelles l'électrode réductrice est, pendant la réduction, située au voisinage de la surface à traiter du substrat; - la figure 3 est une photographie d'un substrat modifié, dont la surface présente un trait hydrophile; - la figure 4 est une photographie d'un substrat modifié, dont la surface présente un trait hydrophile sur lequel 30 de l'eau a été condensée; - la figure 5 est une photographie montrant les plots obtenus selon le mode opératoire de l'exemple 1.1. Le substrat est extrait verticalement d'un liquide (partie sombre de la photographie) qui reste ancré sur les plots. Le procédé selon l'invention est destiné à permettre la formation d'une ou plusieurs zones hydrophiles 1 sur un substrat 2. Ce substrat 2 est constitué d'un matériau B0674FR chimiquement inerte 3, et présente une surface 4 revêtue d'un film hydrophobe qui est constitué par des groupements organiques fluorés. Cette surface 4 est celle sur laquelle on souhaite créer la ou les zones hydrophiles 1. Dans la suite de la description, cette surface 4 sera désignée par les termes surface à traiter . Le procédé consiste en une réduction électrochimique localisée de la surface à traiter 4, de sorte à réduire certains groupes organiques fluorés situés sur une zone précise. Ce procédé est mis en oeuvre dans une cellule électrochimique classique 5. Cette cellule 5 est pourvue d'une électrode réductrice 6, ou électrode de travail , d'une contre-électrode, et éventuellement d'une électrode de référence. L'électrode réductrice 6 est typiquement une microélectrode, c'est-à-dire une électrode dont la pointe a une dimension micrométrique. Cette microélectrode 6 est formée d'un métal non réductible aux potentiels considérés comme le platine, l'or, le tungstène ou l'acier inoxydable. L'électrode 6 possède une surface 7 pouvant présenter des formes diverses, selon la géométrie de la zone hydrophile 1 que l'on souhaite obtenir. Par exemple, on peut utiliser une électrode 6 dont la surface 7 est continue. Cette surface 7 peut présenter une forme de disque ou de bande, ce qui permet d'obtenir sur le substrat 2 une zone hydrophile 1 unique respectivement en forme de disque, ou en forme de trait. La surface 7 de l'électrode 6 peut également être un tampon sur lequel est inscrit le motif à graver, le motif étant de la forme que l'on souhaite conférer à la zone hydrophile 1 du substrat 2. On peut également utiliser une électrode 6 dont la surface 7 est discontinue, et par exemple formée d'une pluralité de plots, de sorte à former sur le substrat 2 une pluralité de zones hydrophiles 1 en forme de disque. La contre-électrode utilisée (non représentée) est formée d'un métal difficilement oxydable, tel que le platine, l'or, le tungstène, ou l'acier inoxydable. Il peut B0674FR 2886652 8 s'agir d'un fil ou d'une grille dont la dimension (la surface dans le cas d'une grille) est très supérieure à celle de l'électrode réductrice 6. Par exemple, on peut utiliser une électrode réductrice 6 de type disque, de rayon a = 25 m, avec une contre-électrode formée d'un fil de platine de 1 mm de diamètre et de quelques millimètres de longueur. Un tel dispositif permet de travailler en absence d'électrode de référence. Le procédé de réduction électrochimique est réalisé sous atmosphère inerte, c'est-à-dire en absence d'oxygène et d'eau. Dans la cellule, l'électrode réductrice 6 est placée par rapport au substrat 2 de telle sorte que la surface à traiter 4 soit disposée en regard de la surface 7 de l'électrode 6. Selon le mode de réalisation représenté sur les figures la et lb, la surface 7 de l'électrode 6 est en contact avec la surface à traiter 4. Selon le mode de réalisation représenté sur les figures 2a et 2b, la surface 7 de l'électrode 6 est placée au voisinage de la surface à traiter 4, l'expression au voisinage signifiant ici à une distance micrométrique. Pour obtenir la distance souhaitée entre la surface 7 de l'électrode 6 et la surface à traiter 4, on utilise un dispositif adapté permettant de déplacer soit l'électrode 6, soit le substrat 2, d'une distance de quelques micromètres, tout en ajustant le parallélisme entre la surface 7 de l'électrode 6 et la surface à traiter 4. Ce type de dispositif est décrit dans les publications suivantes: C. Combellas et al. , J. Phys. Chem., B 108, 2004, 6391-6397, et C. Combellas et al., Anal. Chem. 76, 2004, 3612-3618. En variante, on peut également utiliser une cellule électrochimique 1 de configuration couche mince, dans laquelle l'électrode 6 et le substrat 2 sont fixes, et sont séparés par un film mince (quelques micromètres d'épaisseur) de solvant. Cette technique permet une approche bien contrôlée et une bonne reproductibilité d'une expérience à l'autre. B0674FR 2886652 9 La distance (d) séparant la surface 7 de l'électrode 6 et la surface à traiter 4 peut être évaluée par mesure optique, ou en utilisant une sonde électrochimique de distance. La solution électrolytique 8 qui est introduite dans la cellule 5 remplit au moins l'espace entre la surface 7 de l'électrode 6 et le substrat 2. La contre-électrode, et le cas échéant l'électrode de référence, sont également en contact avec la solution électrolytique 8. Cette solution 8 contient un solvant approprié, et un composé précurseur d'un agent réducteur, dont le potentiel standard est inférieur à -2,7 Volts, par rapport au système de référence ECS (Électrode au Calomel Saturé). Pour effectuer la réduction électrochimique, l'électrode 6 est soumise au potentiel de formation de l'agent réducteur, pendant la durée nécessaire à la réduction de la zone 1 du substrat 2 en regard de la surface 7 de l'électrode 6. Cette durée est typiquement de l'ordre de 10 à 100 secondes. Le fait de soumettre l'électrode 6 à un tel potentiel permet de transformer le composé en l'agent réducteur, qui est donc généré in situ, au voisinage immédiat de la surface 7 de l'électrode 6. Cet agent provoque la réduction des groupes fluorés situés sur la zone 1 en regard de la surface 7 de l'électrode 6. La réduction se traduit par la coupure de liaisons carbone-fluor, et conduit au remplacement d'atomes de fluor par des atomes d'hydrogène et/ou à l'apparition de doubles et/ou de triples liaisons carbone-carbone qui peuvent ensuite être hydrolysées. Ces nouvelles fonctionnalités confèrent son caractère hydrophile à la zone 1. Le mécanisme de la réduction est complexe. On montre qu'en solution, des molécules fluorées (C6F14, C8F18, C10F22) identiques à l'extrémité terminale des molécules qui sont greffées sur les surfaces sont aussi réduites par le composé réducteur (électron solvaté ou radical anion du composé précurseur P(R1R2R3)). La réduction conduit à la défluoration des molécules. B0674FR 2886652 10 Si l'agent réducteur est un radical-anion Rad'-, obtenu au moyen d'une électrode polarisée au potentiel de réduction de Rad selon la réaction (1): Rad + e- > Rad- (1) la réduction d'une liaison C-F correspond à la réaction (2) : -[CF-] + Rad' -+ -[C.-] + F-+ Rad (2) Si l'agent réducteur est un électron solvaté, la réduction d'une liaison C-F correspond à la réaction (3) - [CF-] + [e-] 901, -> -[c'-] + F- (3) Lorsque le composé précurseur de l'agent réducteur est un composé apte à former un radical-anion Rad'-, il est possible de fixer soit le potentiel, soit le courant. Lorsque le composé précurseur est un cation métallique pouvant induire en solution la formation d'électrons solvatés, fixer le courant offre plus de reproductibilité. Lorsque l'on travaille à potentiel contrôlé, la valeur du potentiel est fixée à une valeur inférieure de l'ordre de 150-200 mV à celle du potentiel de formation de l'agent réducteur. Le courant est alors contrôlé par le transfert de matière à l'électrode 6. Lorsque l'on travaille à courant contrôlé, la valeur du courant dépend de la concentration de l'agent réducteur que l'on souhaite générer localement. Cette valeur dépend également de la distance (d) entre l'électrode 6 et la surface à traiter 4, et de la dimension (a) de l'électrode. Par exemple, pour une concentration du composé précurseur de l'agent réducteur de 0,1 M, une électrode-disque de rayon a = 25 m, et une distance d = 0,7a = 17 m, un courant de 400 nA doit être appliqué. Après la réduction, le substrat 2 est récupéré et rincé. On obtient ainsi un substrat 2 dont la surface 4 présente une zone hydrophile 1 défluorée. Les dimensions de cette zone hydrophile 1 sont déterminées par la géométrie de la surface 7 de l'électrode 6, et sont l'image de cette surface 7. B0674FR 2886652 11 Le procédé peut être mis en uvre pour l'obtention d'un système microfluidique, sous la forme d'une pièce, par exemple une plaquette, comprenant au moins un trait hydrophile. Le ou les traits hydrophiles sont gravés sur la surface hydrophobe du substrat au moyen d'une électrode à bande ou d'un tampon sur lequel est inscrit le motif à graver. L'électrode peut être en contact direct avec le substrat, ou elle peut être maintenue à une distance micrométrique de celui-ci. Selon l'application souhaitée, le canal formé par le trait hydrophile peut être fermé par un couvercle, ou être ouvert, ce qui permet des interventions aisées, par exemple pour des injections ou des prélèvements. L'analyse en surface des traits peut être réalisée par spectrométrie de masse d'ions secondaires (ToF-SIMS), de sorte à mettre en évidence qualitativement l'effet de la réduction électrochimique. On observe en effet sur le ou les traits une défluoration (spectre des ions positifs) et une teneur plus importante en oxygène et groupements hydroxyle (spectre des ions négatifs). Par ailleurs, deux types d'approches complémentaires peuvent être adoptées pour tester le confinement d'un liquide sur une zone réduite d'un substrat hydrophobe. La première approche consiste à plonger quasiment horizontalement dans un liquide polaire un échantillon sur lequel avait été gravé un trait hydrophile (voir photographie de la figure 3). La déformation du front de liquide 9 indique la présence du trait hydrophile entouré de la surface hydrophobe. L'étirement du liquide est provoqué par l'augmentation de l'énergie de surface. La deuxième approche consiste à condenser de l'eau à partir d'air saturé en eau sur une plaque comportant un trait hydrophile, et à analyser l'évolution de la taille des gouttes de condensation au niveau des parties traitée et non traitée. Cette méthode permet de comprendre le confinement des gouttes à l'intérieur du trait et la possibilité d'obtenir B0674FR 2886652 12 un film continu au niveau de ce trait avec un volume de liquide constant (voir photographie de la figure 4). Des essais de déplacement d'espèces ont été réalisés sur le film d'eau condensée. A cet effet, une différence de potentiel de 10 Volts a été imposée entre les extrémités d'un trait de condensation de 5 mm de longueur, et une solution saline de chlorure de sodium, de concentration 1 M, a été placée à une extrémité du trait. L'apparition d'un courant électrique de quelques nanoAmpères sur le trait a témoigné du déplacement ionique le long du trait. Le procédé selon l'invention peut également être mis en oeuvre pour l'obtention de biopuces. Dans ce cas, l'électrode utilisée est une électrode disque, ou un réseau d'électrodes disques. On peut aussi prévoir l'utilisation d'une seule électrode comprenant une pluralité de plots. Les biopuces obtenues sont par exemple destinées à l'immobilisation d'ADN, de protéines ou de cellules vivantes. Le caractère hydrophobe du support évite l'étalement des gouttes contenant par exemple la solution de synthèse in-situ de l'ADN. Le contraste d'hydrophobie permet de localiser la réaction de synthèse dans le puits hydrophile, et permet ainsi d'augmenter le rendement de la réaction de greffage de l'ADN sur la surface. Il est donc possible de réaliser des plots de faible diamètre (typiquement jusqu'à 10 m), ce qui permet d'obtenir des biopuces de densité élevée. De même, pour l'immobilisation de cellules, la taille des plots et le cas échéant des canaux les reliant peut être 30 ajustée aux dimensions des cellules à analyser. La présente invention est illustrée par les exemples suivants, auxquels elle n'est cependant pas limitée. Exemple 1.1 Tracé de 10 plots hydrophiles sur un substrat de verre Le substrat est constitué d'un verre greffé par un silane fluoré répondant à la formule (Si- (CH2) 2- (CF2) 6-CF3) . B0674FR 2886652 13 Le traitement est réalisé dans un sac à gant alimenté en azote. Le substrat fluoré est sous la forme d'un carré de côté égal à 2 cm. On place le substrat au fond d'une cellule électrochimique, dans laquelle on introduit 5 mL de DMF, 0,5 mmol de NBu4BF4, 0,25 mmol de tritolylphosphine et un fil de platine (diamètre: 0,25 mm). On positionne une microélectrode disque en platine (diamètre 25 m) à une distance de 10 gm au-dessus du substrat fluoré et parallèlement à celuici. La microélectrode est asservie à une platine motorisée permettant un déplacement linéaire dans le plan horizontal. On la polarise à - 2,8 Volts/ECS (électrode au calomel saturé) pendant 30 secondes. On coupe le courant, on déplace la microélectrode de 200 gm dans le plan horizontal. On la polarise de nouveau pendant 30 secondes et on répète l'opération encore 8 fois. Puis on retire le substrat, on le rince successivement à l'eau et l'acétone et on le sèche 30 minutes à l'air comprimé. On visualise les plots par accrochage d'un film de liquide polaire 10 (voir figure 5). Le diamètre de chaque plot est de 60 m, et l'espacement centre à centre est de 200 m. Exemple 2.1 Tracé d'un trait hydrophile sur un substrat en silicium Le substrat en silicium est recouvert d'un polymère 25 [(CF2)n ramifié] généré par plasma sous atmosphère de C4F8 selon le procédé décrit dans US 5 501 893. Le traitement est réalisé dans un sac à gant alimenté en azote. Le substrat fluoré est sous la forme d'un carré de côté égal à 2 cm. On place le substrat au fond d'une cellule électrochimique, dans laquelle on introduit 5 mL de DMF, 0,5 mmol de NBu4BF4, 0,25 mmol de tritolylphosphine (précurseur) et un fil de platine (diamètre: 0,25 mm). On positionne une microélectrode disque en or (diamètre 100 m) à une distance de 20 gm au-dessus du disque et parallèlement à celui-ci. La microélectrode est asservie à une platine motorisée permettant un déplacement linéaire dans le plan horizontal. Elle est polarisée à -2,8 Volts/ECS B0674FR et on la déplace parallèlement à la surface à une vitesse de 10 gm/s-1, de façon à obtenir en 1000 secondes un trait de 1 cm de longueur et 250 gm d'épaisseur. On retire le substrat, on le rince successivement à l'eau et l'acétone puis on le sèche 30 minutes dans un four à 50 C. Le trait est visualisable à l'oeil nu car le polymère est décapé au niveau du trait, et on observe l'aspect miroir du silicium. Exemple 2.2 On procède selon le même mode opératoire que dans l'exemple 2.1, en utilisant une électrode formée d'une bande d'or de 1 cm de longueur et de 50 gm de largeur. L'électrode est maintenue fixe à une distance de 20 m de la surface du substrat et est polarisée pendant 30 secondes. On obtient un trait de 1 cm de longueur et 100 gm d'épaisseur. Exemple 2.3 On procède selon le même mode opératoire que dans l'exemple 2.1, en utilisant une électrode formée d'un fil de platine fixe (longueur: 2 cm, diamètre: 250 m) posé sur le substrat et polarisé pendant 30 secondes. On obtient un trait de 2 cm de longueur et 500 gm d'épaisseur. Exemple 2.4 On procède selon le même mode opératoire que dans l'exemple 2.1 avec une électrode-disque de platine de diamètre 25 m positionnée à 8 gm du substrat. Le substrat est une plaque de silicium silanisée par réaction avec C13Si(CH2) 2- (CF2) 7-CF, par adsorption et réaction d'alkyltrichlorosilane sur un substrat (Si/SiO2), selon les conditions expérimentales décrites dansla publication suivante: S. R. Wasserman, Y.-T. Tao, G. M. Whitesides Langmuir, 1989, 5, 1074-1087. On obtient un trait de 1 cm de longueur et 50 gm d'épaisseur. B0674FR 2886652 15 Exemple 2.5 On procède selon le même mode opératoire que dans l'exemple 2.1 avec une électrode disque de platine de diamètre 50 gm positionnée à 15 gm du substrat. Le substrat est une plaque de verre recouverte d'une couche conductrice d'oxyde métallique tel que de l'ITO (Indium Tin Oxide). Ce substrat est silanisé par réaction avec C13Si- (CH2) 2- (CF2) 7-CF3 selon les conditions expérimentales de l'exemple 2.4 (silanisation en phase liquide) ou celles (en phase gaz) décrites dans la publication suivante: A. Hozumi, K. Ushiyama, H. Sugimura, O. Takai Langmuir, 1999, 15, 7600-7604. La solution électrolytique utilisée pour la réduction de surface est l'éthylènediamine contenant 0,2 M de LiBF4. L'électrode-disque de platine est polarisée à un potentiel de - 3 V par rapport au système Ag/AgCl pour générer localement des électrons solvatés. L'électrode est déplacée à une vitesse de 10 gm/s afin d'obtenir un trait de 8 mm de longueur et 150 gm d'épaisseur. Exemple 2.6 On procède selon le même mode opératoire que dans l'exemple 2.4. Le substrat est une plaque d'or greffée par des groupements organiques fluorés dérivés de sels de diazonium (voir la publication: Covalent Modification of Iron Surfaces by Electrochemical Reduction of Aryldiazonium Salts. A. Adenier, M. C. Bernard, B. Desbat, E. CabetDeliry, M. M. Chehimi, O. Fagebaume, J. Pinson and F. Podvorica, J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 4541 - 4549.). On obtient un trait de 5 mm de longueur et 50 m d'épaisseur. Exemple 2.7 On procède selon le même mode opératoire que dans l'exemple 2.4. Le substrat est une plaque d'or sur laquelle une couche de thiols fluorés (HS- (CH2)2- (CF2)n-CF3 avec n = 6, 8) est B0674FR 2886652 16 autoassemblée obtenue selon les conditions expérimentales décrites dans la publication suivante: C.D. Bain et al., J. Am. Chem. Soc 1989, 111, 321. On obtient un trait de 5 mm de longueur et 50 gm 5 d'épaisseur. Exemple 2.8 On procède selon le même mode opératoire que dans l'exemple 2.1. Le substrat est une plaque de verre texturée par des picots (côté environ 300 nm, hauteur environ 100 nm, espacement environ 1 micron) et fluorée - Si (CH3) 2- (CH2) 2-(CF2)6-CF3 afin de lui conférer des propriétés superhydrophobes. On obtient un trait de 1 cm de longueur et 200 gm d'épaisseur. Exemple 3 On exalte la différence d'hydrophobie en traitant les surfaces modifiées par une solution constituée d'un mélange de H2O2/H2SO4 30/70 pendant 1 à 10 minutes. L'angle de contact d'une goutte d'eau sur la surface de verre fluorée passe de 106 à 96 . L'angle de contact d'une goutte d'eau sur la surface de verre fluorée réduite passe de 76 à 30 . Exemple 4 Les angles de contact de trois liquides: eau, décanol polaire et tricrésylphosphate (TCP) sont mesurés sur deux types de substrats hydrophobes modifiés. Le premier substrat est formé d'un verre hydrophobe silanisé par un silane porteur du groupe (CH2) 2 (CF2) 6CF3. Le second substrat est formé d'un verre superhydrophobe dont la composition chimique est identique à celle du verre hydrophobe décrit ci-dessus. La seule différence est que ce second substrat est texturé par des picots (côté environ 300 nm, hauteur environ 100 nm, espacement environ 1 micron) , ce qui lui confère des propriétés superhydrophobes. B0674FR 2886652 17 Les résultats obtenus sur des échantillons témoins, et sur des échantillons réduits par du sodium dans l'ammoniac liquide sont reportés dans le tableau 1 ci-dessous: Type de Verre Verre hydrophobe substrat superhydrophobe hydrophobe Type de TCP Eau Décanol TCP Eau liquide Angles sur 108 143 66 78 1100 échantillons témoins Angles sur 27 55 32 36 76 échantillons réduits Tableau 1 Les résultats obtenus illustrent bien le fait que le traitement réducteur provoque une diminution importante des angles de contact, et par conséquent une augmentation du caractère hydrophile des échantillons lorsqu'ils ont subi la réduction électrochimique. B0674FR 2886652 18 Revendications 1. Procédé de réalisation d'au moins une zone hydrophile (1) sur un substrat (2) qui est constitué par un matériau chimiquement inerte (3) et dont une surface à traiter (4) est revêtue d'un film hydrophobe, ledit film hydrophobe étant constitué par des groupements organiques fluorés, caractérisé en ce qu'il consiste à effectuer une réduction par voie électrochimique de la surface à traiter (4) et en ce que: - la réduction est effectuée dans une cellule électrochimique (5) qui est pourvue d'une électrode réductrice (6) et d'une contre-électrode, et qui contient une solution électrolytique (8) contenant au moins un solvant et un composé précurseur d'un agent réducteur, ledit composé étant choisi de sorte à posséder un potentiel standard inférieur à - 2,7 V par rapport à l'électrode au calomel saturé (ECS) ; - l'électrode réductrice (6) est placée par rapport à la 20 surface (4) du substrat de telle sorte que ladite surface (4) soit disposée en regard de la surface utile (7) de l'électrode (6), ladite surface (7) de l'électrode (6) étant l'image de la zone à réduire; - l'électrode réductrice (6) est soumise au potentiel de 25 formation de l'agent réducteur. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé précurseur de l'agent réducteur répond à la formule générale P(R'R2R3), dans laquelle au moins l'un des radicaux R1, R2, R3 représente un groupement phényle portant de 1 à 3 substituants, ledit composé étant apte à former un radical-anion. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que les substituants des radicaux R1, R2, R3 sont des groupements alkyle comportant de 1 à 6 atomes de carbone, linéaires ou ramifiés, éventuellement substitués. 4. Procédé selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que R1, R2 et R3 représentent indépendamment les uns B0674FR 2886652 19 des autres un groupement phényle portant de 1 à 3 groupes méthyle. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le composé précurseur de l'agent réducteur est la 5 tritolylphosphine. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisé en ce que la solution électrolytique (8) comprend: - un solvant choisi dans le groupe constitué par le diméthylformamide (DMF), le diméthylsulfoxyde (DMSO), l'hexaméthylphosphorotriamide (HMPT), l'hexaméthylphospho -ramide (HMPA) , un nitrile tel que l'acétonitrile, le tétrahydrofuranne (THF), l'ammoniac, les amines primaires, et; - un sel de type M+A- dans lequel M+ est un cation non réductible choisi dans le groupe constitué par Li+, Na+, K+, NR4+, R étant un radical alkyle, et dans lequel A- est un anion non réductible choisi dans le groupe constitué par BF4-, B (C6H5) 4-, CF3CO2, PF6-, (EtO) 2PO-, NCCHCO2Et-, AcO, SCN-, CH3CH2CH2CH (NH2) CO2-, C1O4, Br-, Cl-, I-, S0,12-. 7. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé précurseur de l'agent réducteur est un cation métallique choisi dans le groupe comprenant les cations provenant des métaux alcalins, des métaux alcalino- terreux, du magnésium et de l'aluminium, ledit cation métallique étant apte à induire la formation d'électrons solvatés. 8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que la solution électrolytique (8) comprend un solvant choisi dans le groupe constitué par l'ammoniac, les amines primaires (telles que la méthylamine, l'éthylamine, la propylamine, l' éthylènediamine), l' hexaméthylphosphoramide, ou un mélange ammoniac/tétrahydrofuranne (THF). 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que les groupements organiques fluorés sont choisis dans le groupe constitué par les groupes alkyle fluorés linéaires, les groupes alkyle fluorés B0674FR 2886652 20 ramifiés, les groupes fluoroalkylthiol, les groupes phényle fluorés. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que les groupements organiques fluorés sont des 5 groupements perfluorés. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que, dans les groupements organiques fluorés constituant le film hydrophobe, le rapport F/H est supérieur ou égal à 1 avant réduction. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que le matériau chimiquement inerte (3) formant le substrat (2) est choisi dans le groupe constitué par le verre, la silice, le silicium, l'alumine, les oxydes métalliques, les métaux, ou un matériau isolant, par exemple un polycarbonate, recouvert d'un film conducteur ou semiconducteur. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que la surface (7) de l'électrode réductrice (6) est une surface continue. 14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que la surface (7) de l'électrode réductrice (6) présente une forme de disque. 15. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que la surface (7) de l'électrode réductrice (6) présente 25 une forme de bande. 16. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que la surface (7) de l'électrode réductrice (6) est un tampon sur lequel est inscrit le motif à graver. 17. Procédé selon l'une quelconque des revendications 30 1 à 12, caractérisé en ce que la surface (7) de l'électrode réductrice (6) est une surface discontinue. 18. Procédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que la surface (7) de l'électrode réductrice (6) est formée d'une pluralité de plots. 19. Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce que la distance entre la surface (7) de l'électrode réductrice (6) et la surface à traiter (4) est comprise entre 0 et 2 fois le rayon du disque. B0674FR 2886652 21 20. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que la distance entre la surface (7) de l'électrode réductrice (6) et la surface à traiter (4) est comprise entre 0 et 2 fois la largeur de la bande. 21. Pièce en matériau composite obtenue par la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 20, caractérisée en ce qu'elle est constituée par un matériau inerte chimiquement (3) portant sur l'une de ses faces un film hydrophobe interrompu par au moins une zone hydrophile (1) dont au moins l'une des dimensions est micrométrique. 22. Pièce selon la revendication 21 lorsqu'elle dépend de la revendication 14, caractérisée en ce qu'elle comprend une zone hydrophile (1) en forme de disque, le diamètre de ladite zone (1) étant inférieur ou égal à 500 microns. 23. Pièce selon la revendication 21 lorsqu'elle dépend de la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle comprend une zone hydrophile (1) en forme de trait, la longueur dudit trait étant de l'ordre de quelques millimètres et l'épaisseur dudit trait étant inférieur ou égal à 500 microns. 24. Pièce selon la revendication 21 lorsqu'elle dépend de la revendication 16, caractérisée en ce qu'elle comprend une pluralité de zones hydrophiles (1) en forme de disque, le diamètre de chaque zone (1) étant inférieur ou égal à 500 microns. 25. Utilisation d'une pièce selon la revendication 22 ou la revendication 24 pour la réalisation de biopuces. 26. Utilisation d'une pièce selon la revendication 23, 30 pour la réalisation d'un système microfluidique. 27. Utilisation d'une pièce selon la revendication 26, dans laquelle le système microfluidique comprend au moins un canal formé par ledit trait.