Brevet FR2886311A1 — publié le 20061201

La présente invention concerne un support revêtu de collagène et un procédé pour la production d'un support revêtu de collagène. Ces dernières années, la technologie de culture cellulaire a été utilisée dans divers domaines industriels et domaines de recherche comme l'ingénierie des cellules et tissus, les tests d'innocuité de médicaments, la production de protéines à des fins de traitement et de diagnostic, et similaires. Actuellement, afin de cultiver efficacement un grand nombre de cellules dépendant de l'ancrage, une culture cellulaire est effectuée, non par une culture plane en utilisant une fiole de culture, mais par une culture tridimensionnelle à haute densité (culture en suspension) en utilisant des supports servant d'échafaudages sur lesquels les cultures peuvent croître. Dans ces cultures tridimensionnelles à haute densité, divers types de supports comme ceux constitués de polystyrène, de DEAE-cellulose ou de polyacrylamide et ceux constitués de particules magnétiques sont utilisés. A ce propos, ces dernières années, la recherche en médecine de régénération a progressé rapidement. La médecine de régénération est une thérapie médicale nouvelle qui est applicable à divers tissus ou organes dans un organisme et qui permet la réparation et la régénération des propres tissus ou organes d'un sujet en créant dans l'organisme un environnement approprié au moyen d'un échafaudage sur lequel les propres cellules du sujet peuvent croître. Afin de cultiver efficacement des cellules, par exemple des supports dont les surfaces sont revêtues d'un composé à base de phosphate de calcium présentant une grande biocompatibilité sont utilisés comme échafaudages (voir, par exemple, le brevet japonais mis à l'Inspection Publique N 2004-313007). 2886311 2 Cependant, en fonction du type de cellule à cultiver, il existe ur.. cas où il est difficile de pouvoir cultiver de manière fiable les cellules sur de tels supports en raison de leur mauvaise adhérence aux supports. Dans ces circonstances, il existe à présent une demande de supports auxquels même des cellules qui sont difficiles à faire adhérer à ces supports classiques peuvent adhérer de manière fiable. A cet égard, le collagène est connu comme étant une matière qui favorise l'adhérence et la croissance des cellules. En conséquence, il est possible de considérer que des supports dont les surfaces sont revêtues de collagène permettent à. diverses cellules d'adhérer à ces supports et de croître sur ceux-ci. Cependant, le pouvoir d'adsorption d'un composé à base de phosphate de calcium pour le collagène est très faible, ce qui pose un problème du fait que, même lorsque le collagène est adsorbé à un composé à base de phosphate de calcium, il se détache aisément des supports. En conséquence, un objet de la présente invention consiste à proposer un support revêtu de collagène qui présente d'excellentes propriétés d'adhérence de cellules et qui permet une excellente croissance de cellules sur celui-ci., et un procédé pour la production efficace et fiable d'un tel support revêtu de collagène. Afin d'atteindre l'objectif précité, la présente invention concerne un support revêtu de collagène, comprenant un support ayant une surface dont au moins une partie est constituée d'un composé à base de phosphate de calcium, une partie de la surface du support étant revêtue de collagène par l'intermédiaire d'une protéine ayant une forte affinité pour le collagène. Conformément à la présente invention, il est possible d'obtenir un support revêtu de collagène qui présente d'excellentes propriétés d'adhérence de cellules et qui permet une excellente croissance des cellules sur celui-ci. Dans le support revêtu de collagène conforme à la présente invention, il est préféré que la protéine comprenne un récepteur de collagène. Cela permet à la protéine de se lier sélectivement au 5 collagène de sorte que le collagène est adsorbé plus fermement au support (matière de base). Dans ce cas, la protéine contient de préférence au moins une des protéines consistant en fibronectine et intégrine comme ingrédient principal. Cela permet au collagène d'être adsorbé particulièrement fermement au support (matière de base) car la fibronectine et l'intégrine possèdent un récepteur de collagène qui se lie sélectivement au collagène dans leur molécule et ont pour propriété d'adsorber fermement un composé à Dans présente collagène principal. Cela est dû au fait que le collagène de type I est présent en grande quantité dans divers types de tissus (organes) constituant un corps vivant et, parmi divers types de collagènes, le collagène de type I présente une grande capacité d'adsorption pour diverses cellules. En outre, le collagène de type I est dénaturé relativement aisément et a une forte affinité pour les cellules. Dans le support revêtu de collagène conforme à la présente invention, il est également préféré que le collagène soit dérivé d'un animal terrestre. Cela est dû au fait que le collagène dérivé d'un animal terrestre a une température de dénaturation relativement: élevée et est de ce fait relativement stable et difficile à détacher de la surface du support aux températures généralement utilisées pour la culture des cellules. base de phosphate de calcium. le support revêtu de collagène invention, il est également préféré que contienne du collagène de type I comme ingrédient conforme à la le 2886311 4 Dans le support revêtu de collagène conforme à la présente invention, il est également préféré qu'au moins une partie du collagène soit dénaturée. Cela permet au collagène d'avoir une plus forte affinité pour les cellules, ce qui fait qu'un grand nombre de cellules est adsorbé plus fermement au collagène. Dans le support revêtu de collagène conforme à la présente invention, il est également préféré que le collagène puisse être dissous dans un solvant ayant un pH de 6,0 à 8,0 en un rapport égal ou supérieur à 100 pg par millilitre de solvant. Cela permet de dissoudre suffisamment le collagène dans le solvant afin que le collagène adhère de manière plus fiable à la surface du support (matière de base) dans le procédé de production d'un support revêtu de collagène. En outre, l'utilisation d'un tel solvant ayant un pH proche de la neutralité pour la dissolution du collagène empêche la dissolution du composé à base de phosphate de calcium. Dans le support revêtu de collagène conforme à la présente invention, il est également préféré que le support soit obtenu en revêtant la surface d'une matrice avec le composé à base de phosphate de calcium. Cela permet d'obtenir une matière de base ayant une forme plus complexe, tout en maintenant l'adhérence entre le composé à base de phosphate de calcium (la couche de surface) et une couche de revêtement couvrant la surface de la matière de base, qui est constituée du collagène et de la protéine ayant une forte affinité pour le collagène. Dans le support revêtu de collagène conforme à la présente invention, il est également préféré que le support soit sous forme de granulé, de pastille, de bloc ou de feuille. Cela permet d'obtenir un support revêtu de collagène en forme de granulé, de pastille, de bloc ou de feuille et de répondre de manière appropriée à la demande de supports 2886311 5 pour culture cellulaire ou de matériaux d'obturation de tissu osseux de différentes formes. Dans le support revêtu de collagène conforme à la présente invention, il est également préféré que le composé à base de phosphate de calcium contienne au moins un des agents consistant en phosphate tricalcique et hydroxyapatite comme ingrédient principal. Cela est dû au fait que le phosphate tricalcique et l'hydroxyapatite ont une grande biocompatibilité, et en conséquence, il est possible d'obtenir un support (matière de base) ayant une forte affinité pour un plus grand nombre de protéines. Le support revêtu de collagène conforme à la présente invention est de préférence utilisé pour une culture 15 cellulaire. Dans ce cas, les cellules à cultiver peuvent croître plus efficacement et de manière plus fiable. En outre, le support revêtu de collagène conforme à la présente invention est de préférence utilisé pour 20 l'obturation d'un site de déficience osseuse. Dans ce cas, le support revêtu de collagène et les ostéoblastes qui se sont développés réparent et régénèrent plus rapidement le site de défaut osseux. Un autre aspect de la présente invention concerne un 25 procédé pour la production d'un support revêtu de collagène, comprenant les étapes consistant à : préparer un support ayant une surface dont au moins une partie est constituée d'un composé à base de phosphate de calcium; et mettre le support en contact avec du collagène et une protéine présentant une forte affinité pour le collagène afin de revêtir la partie de la surface du support avec le collagène par l'intermédiaire de la protéine. Suivant un tel procédé, il est possible de produire 35 efficacement et de manière fiable un support revêtu de collagène. 2886311 6 Un aspect supplémentaire de la présente invention concerne un procédé de production d'un support revêtu de collagène, comprenant les étapes consistant à : préparer un support ayant une surface dont au moins 5 une partie est constituée d'un composé à base de phosphate de calcium; mettre le support en contact avec un premier liquide de traitement contenant une protéine ayant une forte affinité pour le collagène afin de permettre à la protéine d'adhérer à la partie de la surface du support; et mettre le support en contact avec un second liquide de traitement contenant le collagène pour revêtir la partie de la surface du support avec le collagène par l'intermédiaire de la protéine. Suivant un tel procédé, il est possible de produire plus efficacement et de manière plus fiable un support revêtu de collagène. Dans le procédé de production suivant un aspect supplémentaire de la présente invention, il est préféré que la concentration en protéines dans le premier liquide de traitement soit de 0,1 à 100 pg/ml. Cela permet à la protéine d'être adsorbée au support (matière de base) plus efficacement et de manière plus fiable. Dans le procédé de production suivant un aspect supplémentaire de la présente invention, il est également préféré que la température du premier liquide de traitement soit de 4 à 39 C. Cela permet à la protéine d'être adsorbée au support 30 (matière de base) efficacement. Dans le procédé de production suivant un aspect supplémentaire de la présente invention, il est également préféré que le temps pendant lequel le support est maintenu en contact avec le premier liquide de traitement soit de 10 minutes à 10 heures. Cela permet à la protéine d'être adsorbée au support (matière de base) plus efficacement. Dans le procédé de production suivant un aspect supplémentaire de la présente invention, il est également préféré que le pH du premier liquide de traitement soit de 6,0 à 8,0. Cela permet d'éviter convenablement la dénaturation et la dissolution de la protéine et du composé à base de phosphate de calcium. Dans le procédé de production suivant un aspect supplémentaire de la présente invention, il est également préféré que la concentration en collagène dans le second liquide de traitement soit de 1 à 1000 pg/ml. Cela permet au collagène d'être adsorbé à la protéine 15 plus efficacement et de manière plus fiable afin de former efficacement la couche de revêtement. Dans le procédé de production suivant un aspect supplémentaire de la présente invention, il est également préféré que la température du second liquide de traitement soit de 4 à 39 C. Cela permet au collagène d'être dénaturé de manière fiable et adsorbé efficacement à la protéine. Dans le procédé de production suivant un aspect supplémentaire de la présente invention, il est également préféré que le temps pendant lequel le support est maintenu au contact avec le second liquide de traitement soit de 10 minutes à 10 heures. Cela permet au collagène d'être dénaturé de manière fiable et d'être adsorbé plus efficacement à la protéine. Dans le procédé de production suivant un aspect supplémentaire de la présente invention, il est également préféré que le pH du second liquide de traitement soit de 6,0 à 8,0. Cela permet d'éviter convenablement l'agrégation/la 35 précipitation du collagène dans le second liquide de traitement et d'éviter la dissolution du composé à base de phosphate de calcium. La figure 1 est une vue en coupe transversale d'une première forme de réalisation d'un support revêtu de 5 collagène conforme à la présente invention; la figure 2 est une vue en coupe transversale d'une seconde forme de réalisation du support revêtu de collagène conforme à la présente invention; la figure 3 est une image d'observation de cellules 10 HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire obtenus dans l'exemple 1; la figure 4 est une image d'observation de cellules HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire obtenus dans l'exemple comparatif 1; la figure 5 est une image d'observation de cellules HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire obtenus dans l'exemple comparatif 2; et la figure 6 est une image d'observation de cellules HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire obtenus dans l'exemple comparatif 3. Un support revêtu de collagène conforme à la présente invention est décrit ci-dessous en détail par référence aux formes de réalisation préférées représentées sur les dessins annexés. (Première forme de réalisation) Tout d'abord, une première forme de réalisation du support revêtu de collagène conforme à la présente invention et un procédé pour la production du support revêtu de collagène sont décrits. La figure 1 est une vue en coupe transversale de la première forme de réalisation du support revêtu de collagène conforme à la présente invention. Comme le montre la figure 1, le support revêtu de collagène 1 comprend une matière de base (support) 2 constituée d'un composé à base de phosphate de calcium et une couche de revêtement 3 présente de manière à couvrir la surface de la matière de base 2. 2886311 9 Un tel support revêtu de collagène 1 sert d'échafaudage qui permet aux cellules d'adhérer à sa surface et de croître sur celle-ci. Des exemples de cellules à cultiver en utilisant de tels supports revêtus de collagène comprennent, mais à titre non limitatif, diverses cellules telles que des cellules souches embryonnaires indifférenciées, des cellules souches mésenchymateuses indifférenciées, des cellules hôtes destinées à être utilisées en recombinaison génétique et des cellules similaires. La matière de base 2 est formée de manière à avoir un forme granulaire, une forme de pastille, une forme de bloc ou une forme de feuille, ce qui permet d'obtenir un support revêtu de collagène 1 ayant une forme granulaire, une forme de pastille, une forme de bloc ou une forme de feuille et de répondre de manière appropriée à la demande de supports de culture cellulaire ou de matériaux d'obturation osseuse ayant diverses formes. Le support revêtu de collagène 1 ayant une forme granulaire, une forme de pastille ou une forme de feuille est de préférence utilisé comme, par exemple, support de culture cellulaire. En formant des supports revêtus de collagène 1 de telle sorte qu'ils aient une telle forme, il est possible de réduire les variations de la forme des différents supports revêtus de collagène 1, ce qui réduit au minimum l'influence de la forme du support de culture cellulaire sur la culture des cellules. En outre, le support revêtu de collagène 1 ayant une forme granulaire ou une forme de bloc est de préférence utilisé par exemple comme matériau d'obturation osseuse. Lorsqu'un site de déficience osseuse est obturé avec un tel matériau d'obturation osseuse, les tissus osseux (ostéoblastes) se développent plus efficacement sur le matériau d'obturation osseuse, ce qui fait que le site de déficience osseuse est réparé. 2886311 10 En particulier, les supports revêtus de collagène 1 ayant chacun une forme granulaire peuvent être introduits de manière fiable dans un site de déficience osseuse même lorsque le site de déficience osseuse a une forme complexe, ce qui fait que le site de déficience osseuse est réparé de manière plus fiable. D'autre part, le support revêtu de collagène 1 ayant une forme de bloc est souvent façonné de manière à s'adapter dans un site de déficience osseuse. En conséquence, dans le cas où un site de déficience osseuse est relativement grand, le support revêtu de collagène 1 ayant une forme de bloc est utilisé convenablement pour réparer de manière plus fiable le site de déficience osseuse. La couche de revêtement 3 couvrant la surface de la matière de base 2 est constituée de collagène ou d'une protéine ayant une grande affinité pour le collagène. Une telle couche de revêtement 3 est formée en laissant la matière de base 2 adsorber fermement le collagène par l'intermédiaire de la protéine. Ci-dessous, la couche de revêtement 3 est décrite en détail. Il faut noter que, dans la description suivante, une protéine ayant une forte affinité pour le collagène est simplement désignée sous le nom de "protéine". Ici, le terme "collagène" désigne une scléroprotéine fibreuse présente dans le tissu conjonctif des animaux. Ce collagène a une forte affinité pour les cellules et, en conséquence, peut être utilisé comme substrat qui favorise l'adhérence (la liaison) de cellules aux supports et la croissance des cellules sur ces supports. En outre, ce collagène peut être classé en cinq types principaux, consistant en les types I A V en fonction de leur structure moléculaire. Le collagène destiné à être utilisé dans la présente invention peut être constitué de n'importe lequel de ces divers types de collagène, mais il contient de préférence du collagène de type I comme ingrédient principal. Le collagène de type I est présent en grande 2886311 11 quantité dans divers tissus (organes) constituant un organisme vivant et, parmi les divers types de collagènes, le collagène de type I a une grande capacité d'adsorption pour diverses cellules. En outre, comme décrit ultérieurement plus en détail, le collagène de type I est dénaturé relativement aisément et a une forte affinité pour les cellules. Pour ces raisons, le collagène de type I peut être utilisé convenablement dans la présente invention. Des exemples de ces collagènes comprennent les collagènes dérivés d'animaux terrestres tels que les porcs, les bovins, les moutons et l'homme; et ceux dérivés de poissons tels que le saumon, le thon, le maquereau Atka, le colin d'Alaska, un poisson plat (comprenant la sole et le carrelet) et le requin. Parmi ceux-ci, les collagènes dérivés d'animaux terrestres sont de préférence utilisés dans la présente invention. Le collagène dérivé d'un animal terrestre a une température de dénaturation relativement élevée et, en conséquence, est relativement stable et difficile à détacher de la surface de la matière de base 2 aux températures généralement utilisées pour la culture cellulaire. En outre, il est préféré qu'au moins une partie du collagène à utiliser dans la présente invention soit dénaturée. Cela permet au collagène d'avoir une plus forte affinité pour les cellules, afin qu'un grand nombre de cellules soit adsorbé au collagène plus fermement. En outre, il est préféré que le collagène destiné à être utilisé dans la présente invention puisse être dissous dans un solvant ayant un pH de 6,0 à 8,0 en un rapport de 100 g ou plus par millilitre du solvant, plus avantageusement en un rapport de 1000 g ou plus par millilitre du solvant. Cela permet de dissoudre suffisamment le collagène dans le solvant afin que le collagène adhère de manière plus fiable à la surface de la matière de base 2 dans le procédé pour la production d'un support revêtu de collagène 1. En outre, 2886311 12 l'utilisation d'un tel solvant ayant un pH proche de la neutralité pour la dissolution du collagène empêche la dissolution du composé à base de phosphate de calcium. Des exemples de tels solvants comprennent divers types de tampons et divers types d'eau décrits plus loin. De la manière décrite ci-dessus, le collagène adhère à la matière de base 2 par l'intermédiaire de la protéine de manière à couvrir la matière de base 2. La protéine destinée à être utilisée dans la présente invention n'est pas particulièrement limitée du moment qu'elle présente une forte affinité pour le collagène, mais elle possède de préférence un récepteur de collagène. Un récepteur de collagène est un site qui existe dans une protéine et qui se lie spécifiquement au collagène. En conséquence, une protéine ayant un récepteur de collagène peut se lier sélectivement au collagène, ce qui permet à la matière de base 2 d'adsorber plus fermement le collagène. Des exemples d'une telle protéine comprennent la fibronectine, l'intégrine et la laminine. En outre, il est préféré que la protéine destinée à être utilisée dans la présente invention possède une excellente adhérence au composé à base de phosphate de calcium. Cela permet à la matière de base 2 d'adsorber fermement la protéine. Parmi les protéines précitées, la protéine destinée à être utilisée dans la présente invention contient de préférence au moins une des protéines consistant en fibronectine et intégrirle comme ingrédient principal. Cela permet à la matière de base 2 d'adsorber plus fermement la protéine car la fibronectine et l'intégrine ont un récepteur de collagène qui se lie sélectivement au collagène dans leur molécule, et ont pour propriété d'adsorber fermement un composé à base de phosphate de calcium. Ici, le terme "fibronectine" désigne une glycoprotéine qui est présente également dans la membrane plasmatique de cellules. La fibronectine non seulement se lie spécifiquement 2886311 13 à des polymères biologiques tels que le collagène mais, en outre, a pour propriété d'adsorber fermement un composé à base de phosphate de calcium. En conséquence, la fibronectine présente une capacité d'adsorption particulièrement forte pour la matière de base 2 et le collagène. D'autre part, l'intégrine est un récepteur qui se lie spécifiquement au collagène et à des substances similaires et qui possède une capacité d'adsorption particulièrement forte pour un composé à base de phosphate de calcium. Comme la fibronectine, l'intégrine présente également une capacité d'adsorption particulièrement forte pour la matière de base 2 et le collagène. La quantité de collagène à adsorber à la matière de base (au support) 2 est comprise avantageusement dans l'intervalle d'environ 1 x 10-6 à 1 x 10-3 g, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 1 x 10-5 à 1 x 10-9 g par cm2 de surface spécifique de la matière de base (du support) 2. Si la quantité de collagène à adsorber à la matière de base (au support) 2 est inférieure à la valeur limite inférieure précitée, l'effet du collagène sur l'adhérence des cellules ne se manifeste pas suffisamment. D'autre part, si la quantité de collagène à adsorber à la matière de base (au support) 2 dépasse la valeur limite supérieure précitée, il existe un risque qu'une quantité excessive de collagène se détache de la matière de base (du support) 2. Même si la quantité de couche de revêtement 3 est augmentée de manière à dépasser la valeur limite supérieure précitée, il ne peut être escompté que le nombre de cellules à faire adhérer à la couche de revêtement 3 soit augmenté davantage. Il faut noter que la couche de revêtement 3 couvre de préférence pratiquement la totalité de la surface de la matière de base (du support) 2 afin de permettre à un plus grand nombre de cellules d'adhérer à celleci, et de croître sur celle-ci. Cependant, la présente invention n'est pas limitée à une couche ayant une telle structure. Plus précisément, la couche de revêtement 3 peut couvrir 2886311 14 seulement une partie de la surface de la matière de base 2. Dans ce cas, la surface de la matière de base 2 peut être exposée partiellement. La matière de base (le support) 2 constitue l'ossature du support revêtu de collagène 1 et, de la manière décrite ci-dessus, est constituée principalement d'un composé à base de phosphate de calcium. Des exemples d'un tel composé à base de phosphate de calcium comprennent le phosphate tricalcique, l'hydroxyapatite, et des apatites halogénées telles que la fluoroapatite. En particulier, un composé à base de phosphate de calcium destiné à être utilisé dans la présente invention contient de préférence au moins un des agents consistant en phosphate tricalcique et hydroxyapatite comme ingrédient principal. Le phosphate tricalcique est proche du constituant inorganique de l'os humain par sa composition et sa structure et est hautement biocompatible. En conséquence, un phosphate tricalcique a une forte affinité pour la protéine décrite ci-dessus et peut adsorber la couche de revêtement 3 plus fermement. L'hydroxyapatite a une structure cristalline unique résultant de sa structure d'apatite et, en conséquence, a une biocompatibilité particulièrement grande parmi divers composés à base de phosphate de calcium et a une forte affinité pour diverses protéines. Un procédé pour la production d'un tel support revêtu de collagène 1 (c'est-à-dire un procédé de production de support revêtu de collagène conforme à la présente invention) est décrit ci-dessous. Le support revêtu de collagène 1 peut être produit en mettant la matière de base (le support) 2 en contact avec le collagène et la protéine. Suivant un tel procédé, il est possible de produire efficacement et de manière fiable le support revêtu de collagène 1 dans lequel la matière de base 2 est couverte de la couche de revêtement 3 formée en 2886311 15 laissant le collagène adhérer à la surface de la matière de base 2 par l'intermédiaire de la protéine. Des exemples spécifiques d'un procédé pour mettre la matière de base (le support) 2 en contact avec le collagène et la protéine comprennent un procédé comprenant la mise en contact de la matière de base 2 avec un liquide de traitement contenant à la fois le collagène et la protéine; et un procédé comprenant la mise en contact de la matière de base 2 avec un liquide de traitement contenant la protéine (ce liquide étant appelé également simplement ci-après "premier liquide de traitement") et la mise en contact de la matière de base 2, qui a été mise en contact avec le premier liquide de traitement, avec un liquide de traitement contenant le collagène (ce liquide étant appelé également simplement ci- après "second liquide de traitement"). Parmi ces procédés, ce dernier procédé est de préférence utilisé. En utilisant le dernier procédé, il est possible de former plus efficacement et de manière plus fiable une couche de revêtement 3 adsorbée fermement à la matière de base 2. Le dernier procédé est décrit ci-dessous plus en détail. (1) Tout d'abord, une matière de base (un support) 2 est mise en contact avec un premier liquide de traitement contenant une protéine présentant une forte affinité pour le collagène (appelée simplement ci-après "protéine") afin de permettre à la protéine d'adhérer à la surface de la matière de base 2. Des exemples de procédés pour mettre la matière de base 2 en contact avec le premier liquide de traitement comprennent un procédé comprenant l'immersion de la matière de base 2 dans le premier liquide de traitement (appelé simplement ci-après "procédé d'immersion"), un procédé comprenant l'application du premier liquide de traitement sur la matière de base 2 (appelé simplement ci-après "procédé d'application"), et un procédé comprenant la pulvérisation d'un brouillard fin du premier liquide de traitement sur la 2886311 16 matière de base 2 (appelé simplement ciaprès "procédé de pulvérisation"). Parmi ces procédés, le procédé d'immersion est de préférence utilisé. Suivant le procédé d'immersion, il est possible de mettre uniformément un grand nombre de matières de base 2 en contact avec le premier liquide de traitement. En outre, dans le cas où le procédé d'immersion est utilisé, le premier liquide de traitement est de préférence agité ou agité par secousses tandis qu'un grand nombre de matières de base 2 est immergé dans ce liquide. De cette manière, il est possible de traiter les matières de base 2 uniformément et rapidement. Le premier liquide de traitement est préparé en dissolvant la protéine dans un solvant (milieu de dispersion). Des exemples d'un tel solvant comprennent divers types de tampons (liquide contenant un agent tampon) tels que le tampon au chlorhydrate de triéthanolaminehydroxyde de sodium, le tampon au véronal (5,5-diéthylbarbiturate de sodium)-acide chlorhydrique, le tampon au tris-acide chlorhydrique, le tampon à base de glycylglycinehydroxyde de sodium, le tampon à base de 2-amino-2-méthyl-1, 3-propanediol-acide chlorhydrique, le tampon à base de diéthanolamineacide chlorhydrique, le tampon à l'acide borique, le tampon à base de borate de sodium-acide chlorhydrique, le tampon à base de glycinehydroxyde de sodium, le tampon à base de carbonate de sodium-bicarbonate de sodium, le tampon à base de borate de sodium-hydroxyde de sodium, le tampon à base de bicarbonate de sodium-hydroxyde de sodium, le tampon à l'acide phosphorique, le tampon à base de phosphate de potassiumphosphate disodique, le tampon à base de phosphate disodique-hydroxyde de sodium, le tampon à base de chlorure de potassium-hydroxyde de sodium, le tampon de Briton-Robinson et le tampon GTA; et divers types d'eau tels que l'eau pure, l'eau ultrapure et l'eau ayant subi un échange d'ions. Parmi ces solvants, 2886311 17 le tampon à l'acide phosphorique (PBS) est de préférence utilisé. La concentration en protéines dans le premier type de traitement est comprise avantageusement dans l'intervalle d'environ 0,1 à 100 g/ml, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 0,5 à 50 g/ml. En fixant la concentration en protéines à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de permettre à la protéine d'être adsorbée de manière plus efficace et fiable à la matière de base 2. Cependant, même si la protéine est ajoutée au premier liquide de traitement de telle sorte que la concentration en protéines dans le premier liquide de traitement dépasse la valeur limite supérieure précitée, il ne peut être escompté que l'efficacité d'adsorption de la protéine soit augmentée davantage. La température du premier liquide de traitement à mettre en contact avec la matière de base 2 est comprise avantageusement dans l'intervalle d'environ 4 à 39 C, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 15 à 38 C. En fixant la température du premier liquide de traitement à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de permettre à la protéine d'être adsorbée efficacement à la matière de base 2. Si la température du premier liquide de traitement dépasse la valeur limite supérieure précitée, il existe un risque que la protéine soit dénaturée. Le temps pendant lequel la matière de base 2 est maintenue en contact avec le premier liquide de traitement est de préférence compris dans l'intervalle d'environ 10 à heures, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 20 minutes à 1 heure. En fixant le temps pendant lequel la matière de base 2 est maintenue en contact avec le premier liquide de traitement à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de permettre à la protéine d'être adsorbée plus efficacement à la matière de base 2. Cependant, même si le temps pendant lequel la matière de base 2 est maintenue en contact avec le premier liquide de traitement est fixé de manière à dépasser la valeur limite supérieure précitée, il ne peut être escompté d'augmenter davantage l'efficacité d'adsorption de la protéine à la matière de base 2. Le pH du premier liquide de traitement est de préférence compris dans la plage d'environ 6,0 à 8,0, plus avantageusement dans la plage d'environ 6, 8 à 7,4. En fixant le pH du premier liquide de traitement à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible d'éviter convenablement la dénaturation et la dissolution de la protéine et du composé à base de phosphate de calcium. (2) Puis la matière de base 2 à laquelle la protéine a été adsorbée est mise en contact avec un second liquide de traitement contenant du collagène afin que le collagène adhère à la matière de base 2 par l'intermédiaire de la protéine. De cette manière, une couche de revêtement 3 est formée. La matière de base 2 peut être mise en contact avec le second liquide de traitement de la même manière que dans l'étape (1) décrite ci-dessus. Le second liquide de traitement est préparé en dissolvant le collagène dans un solvant (milieu de dispersion). Comme tel solvant, un solvant identique à celui utilisé dans l'étape (1) décrite ci-dessus peut être utilisé. La concentration en collagène dans le second liquide de traitement est comprise avantageusement dans l'intervalle d'environ 1 à 1000 g/ml, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 5 à 500 g/ml. En fixant la concentration en collagène dans le second liquide de traitement à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de permettre au collagène d'être adsorbé à la protéine plus efficacement et de manière plus fiable afin de former efficacement une couche de revêtement 3. Cependant, même si le collagène est ajouté au second liquide de traitement afin que la concentration en collagène dans le 2886311 19 second liquide de traitement dépasse la valeur limite supérieure précitée, il ne peut être escompté d'augmenter davantage l'efficacité de formation d'une couche de revêtement 3. La température du second liquide de traitement à mettre en contact avec la matière de base 2 est comprise de préférence dans l'intervalle d'environ 4 à 39 C, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 15 à 38 C. En fixant la température du second liquide de traitement à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de dénaturer de manière fiable le collagène et de permettre au collagène d'être adsorbé efficacement à la protéine. Le temps pendant lequel la matière de base 2 est maintenue en contact avec le second liquide de traitement est compris avantageusement dans l'intervalle d'environ 10 minutes à 10 heures, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 20 minutes à 1 heure. En fixant le temps pendant lequel la matière de base 2 est maintenue en contact avec le second liquide de traitement à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de dénaturer de manière fiable le collagène et de permettre au collagène d'être adsorbé plus efficacement à la protéine. Cependant, même si le temps pendant lequel la matière de base 2 est maintenue en contact avec le second liquide de traitement est fixé de manière à dépasser la valeur limite supérieure précitée, il ne peut être escompté d'augmenter davantage l'efficacité d'adsorption du collagène à la protéine. Le pH du second liquide de traitement est compris avantageusement dans la plage d'environ 6,0 à 8,0, plus avantageusement dans la plage d'environ 6, 8 à 7,4. En fixant le pH du second liquide de traitement à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible d'éviter convenablement l'agrégation/la précipitation du collagène dans le second liquide de traitement et d'éviter la dissolution du composé à base de phosphate de calcium. 2886311 20 Il faut noter que, dans le procédé de production de support revêtu de collagène décrit ci-dessus, le collagène peut être soumis à un traitement de dénaturation avant ou après son adsorption à la matière de base 2. Le traitement pour la dénaturation du collagène peut être effectué par exemple par un procédé comprenant le maintien du second liquide de traitement contenant du collagène à une température prédéterminée. Dans ce procédé de dénaturation du collagène, la température prédéterminée est comprise avantageusement dans l'intervalle d'environ 1 à 80 C, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 25 à 40 C. En fixant la température prédéterminée à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de dénaturer de manière plus fiable le collagène. En outre, dans le procédé pour la dénaturation du collagène, le temps pendant lequel le second liquide de traitement est maintenu à une température prédéterminée n'est pas particulièrement limité, mais est compris avantageusement dans l'intervalle d'environ 10 minutes à 10 heures, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 30 minutes à 90 minutes. En fixant le temps à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de dénaturer de manière plus fiable le collagène. Cependant, même si le temps est fixé de manière à dépasser la valeur limite supérieure précitée, il ne peut être escompté de parvenir à une plus forte dénaturation du collagène. En outre, dans le procédé de dénaturation du collagène, le pH du second liquide de traitement est compris avantageusement dans la plage d'environ 6,0 à 8,0, plus avantageusement dans la plage d'environ 6,8 à 7, 4. En fixant le pH du second liquide de traitement à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible d'éviter convenablement l'agrégation/la précipitation du collagène dans le second liquide de traitement. 2886311 21 Il faut noter que la couche de revêtement 3 couvre de préférence la surface entière de la matière de base 2 afin de permettre à un plus grand nombre de cellules d'adhérer à la surface du support revêtu de collagène 1 et de croître sur celle-ci. Cependant, la couche de revêtement 3 peut couvrir seulement une partie de la surface de la matière de base 2. (Deuxième forme de réalisation) Une deuxième forme de réalisation du support revêtu de 10 collagène conforme à la présente invention est décrite ci-dessous. La figure 2 est une vue en coupe transversale de la deuxième forme de réalisation du support revêtu de collagène conforme à la présente invention. Ci-après, le support revêtu de collagène de la deuxième forme de réalisation est expliqué en mettant l'accent sur la différence entre les première et deuxième formes de réalisation, et l'explication par référence aux points de concordance est omise. Un support revêtu de collagène 1 de la deuxième forme de réalisation représentée sur la figure 2 est identique à celui de la première forme de réalisation, sauf qu'une matière de base 2 comprend une matrice 4 et une couche de surface 5. La couche de surface 5 est constituée d'un composé à base de phosphate de calcium et couvre la surface de la matrice 4. Suivant une telle structure de la matière de base 2, il est possible d'obtenir une matière de base 2 ayant une forme plus complexe tout en maintenant l'adhérence entre le composé à base de phosphate de calcium (la couche de surface 5) et la couche de revêtement 3. Comme matière constitutive de la matrice 4, diverses matières céramiques et diverses résines peuvent être mentionnées. Des exemples de matières céramiques comprennent, en plus des composés à base de phosphate de calcium précités, l'oxyde d'aluminium, le phosphate de zirconium, un verre au silicate et des composés à base de carbone. Des exemples de résines comprennent diverses résines thermodurcissables et diverses résines thermoplastiques. Des exemples spécifiques de résines thermoplastiques comprennent des résines de polyamide, de polyéthylène, de polypropylène, de polystyrène, de polyimide, des résines acryliques et une résine de polyuréthanne thermoplastique. Des exemples spécifiques de résines thermodurcissables comprennent des résines époxy, des résines phénoliques, des résines de mélamine, des résines d'urée, des polyesters insaturés, des résines alkydes, un polyuréthanne thermodurcissable et l'ébonite. Ces résines peuvent être utilisées isolément ou sous forme d'une association de deux ou plus de deux d'entre elles. Les diverses matières précitées, proprement dites, sont souvent utilisées comme biomatériau en raison de leur degré élevé d'innocuité pour un organisme vivant. Pour cette raison, ces matériaux peuvent être utilisés convenablement comme matériaux constitutifs de la matrice 4. La matrice 4 peut être dense, mais est de préférence poreuse. Une matrice poreuse 4 permet à la couche de surface 5 (qui sera décrite plus loin) de pénétrer aisément dans les pores présents dans la surface de la matrice 4 afin d'obtenir un effet d'ancrage. En résultat, la force d'adhérence entre la matrice 4 et la couche de surface 5 est accrue, ce qui permet d'obtenir une matière de base 2 plus stable. Comme composé à base de phosphate de calcium constituant la couche de surface 5, il est possible d'utiliser les divers composés à base de phosphate de calcium précités. En outre, l'épaisseur moyenne de la couche de surface 5 n'est pas particulièrement limitée mais est comprise avantageusement dans l'intervalle d'environ 0,1 à 5 pm, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 0,5 à 2 pm. 2886311 23 La surface de la matrice 4 peut être couverte de la couche de surface 5 constituée d'un composé à base de phosphate de calcium, par exemple par un procédé comprenant la collision de particules constituées chacune d'un composé à base de phosphate de calcium avec la surface de la matrice 4. Suivant un tel procédé, il est possible de former une couche de surface 5 aisément et de manière fiable. Il faut noter que la matière de base 2 a de préférence une structure dans laquelle la surface totale de la matrice 4 est couverte d'un composé à base de phosphate de calcium, afin de permettre à un plus grand nombre de cellules d'adhérer à la surface du support revêtu de collagène 1 et de croître sur cette surface. Cependant, la présente invention n'est pas limitée à une matière ayant une telle structure. Plus précisément, la matière de base 2 peut avoir une structure dans laquelle la surface de la matrice 4 est couverte partiellement d'un composé à base de phosphate de calcium. Dans ce cas, le reste de la surface de la matrice 4 peut être exposé. Le support revêtu de collagène 1 de la première forme de réalisation et le support revêtu de collagène 1 de la deuxième forme de réalisation peuvent être utilisés convenablement, par exemple, pour la technologie de culture cellulaire utilisée dans divers domaines tels que l'ingénierie de modification de cellules et tissus, les tests d'innocuité de médicaments et la production de protéines à des fins de traitement et de diagnostic. En utilisant le support revêtu de collagène 1 de la présente invention pour cette technologie de culture cellulaire, il est possible de faire croître plus efficacement et de manière plus fiable les cellules à cultiver. En particulier, dans le cas où la culture cellulaire est effectuée par culture tridimensionnelle à haute densité 35 (culture en suspension), parmi diverses techniques de 2886311 24 culture cellulaire, le support revêtu de collagène 1 de la deuxième forme de réalisation est utilisé de préférence. Dans ce cas, le support revêtu de collagène 1 a de préférence une forme granulaire (substantiellement sphérique). Les supports revêtus de collagène 1 ayant chacun une forme granulaire peuvent être mis en suspension plus uniformément ou dans un milieu de culture, ce qui fait que les supports revêtus de collagène 1 ont plus de possibilités de venir en contact avec les cellules, ce qui permet aux cellules d'adhérer plus efficacement aux supports revêtus de collagène 1. Alors, les dimensions du support revêtu de collagène 1 ne sont pas particulièrement limitées. Cependant, lorsque la longueur maximale d'une cellule (cellule à faire adhérer au support revêtu de collagène 1) est définie par Ll ( m) et la dimension du support revêtu de collagène 1 est définie par L2 ( m), le rapport L2/L1 est compris avantageusement dans l'intervalle d'environ 2 à 100, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 5 à 50. Plus spécifiquement, L2 est comprise avantageusement dans l'intervalle d'environ 10 à 2000 m, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 50 à 1000 m, encore plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 100 à 300 m. En fixant la dimension du support revêtu de collagène 1 à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible d'augmenter suffisamment la surface spécifique du support revêtu de collagène 1 par rapport aux dimensions de la cellule, ce qui permet aux cellules d'adhérer plus aisément au support revêtu de collagène 1 et de croître plus aisément: sur celui-ci. En outre, dans une culture tridimensionnelle à haute densité, il est nécessaire de mettre en suspension plus uniformément les supports revêtus de collagène 1 dans un milieu de culture. En conséquence, la densité du support revêtu de collagène 1 est de préférence proche de celle de l'eau. Plus spécifiquement, la densité du support revêtu de 2886311 25 collagène 1 est comprise avantageusement dans l'intervalle d'environ 1,01 à 1,5 g/cm3, plus avantageusement dans l'intervalle d'environ 1,02 à 1,2 g/cm3. En fixant la densité du support revêtu de collagène 1 à une valeur dans l'intervalle précité, il est possible de mettre en suspension plus uniformément les supports revêtus de collagène 1 dans un milieu de culture, ce qui permet aux cellules d'adhérer plus efficacement aux supports revêtus de collagène 1. La densité du support revêtu de collagène 1 de la deuxième forme de réalisation peut être ajustée en fixant de manière appropriée, par exemple, la matière constitutive et la forme (par exemple structure poreuse ou creuse) de la matrice 4. De ce point de vue, le support revêtu de collagène 1 de la deuxième forme de réalisation peut être utilisé convenablement dans une culture tridimensionnelle à haute densité. La forme, les dimensions (par exemple le diamètre moyen de particule), les propriétés physiques (par exemple la densité), etc. du support revêtu de collagène 1 peuvent être ajustées en fixant de manière appropriée la forme, les dimensions et les propriétés physiques, etc. de la matière de base 2. D'autre part, le support revêtu de collagène 1 peut également être utilisé comme échafaudage (ou matériau d'obturation osseuse) à introduire dans, par exemple, un site de déficience osseuse pour permettre aux cellules osseuses (ostéoblastes) de croître sur celui-ci. Dans ce cas, le ou les supports revêtus de collagène 1 et les ostéoblastes qui se sont multipliés réparent et régénèrent plus rapidement le site de déficience osseuse. Des exemples spécifiques des supports revêtus de collagène 1 à introduire dans un site de déficience osseuse comprennent, en plus de ceux ayant chacun une forme granulaire, ceux ayant chacun une forme de bloc, tels que des tables crâniennes, des éléments intercalaires d'arcs vertébraux, des éléments intercalaires de vertèbres cervicales, des osselets auditifs artificiels et des racines dentaires artificielles. Dans le cas où le support revêtu de collagène 1 est utilisé comme matériau d'obturation osseuse, le support revêtu de collagène 1 de la première forme de réalisation est préféré. Le support revêtu de collagène 1 peut également être utilisé comme, par exemple, matériau en phase stationnaire pour chromatographie. Bien que le support revêtu de collagène et le procédé pour la production de support revêtu de collagène conformément: à la présente invention aient été décrits ci-dessus, la présente invention n'est pas limitée à ceux-ci. Par exemple, le procédé pour la production d'un support revêtu de collagène peut comprendre en outre une, deux ou plus de deux étapes supplémentaires à n'importe quelles fins, si nécessaire. Exemples Des exemples réels de la présente invention sont décrits ci-dessous. 1. Production d'un support de culture cellulaire. Dans chacun des exemples et exemples comparatifs suivants, dix supports revêtus de collagène ont été produits de la manière suivante. (Exemple 1) Tout d'abord, de la fibronectine (qui est une protéine ayant une grande affinité pour le collagène) a été ajoutée à du PBS (solvant) de telle sorte que la concentration de fibronectine dans le PBS soit égale à 5 g/ml, et ces constituants ont été mélangés pour préparer une solution de fibronectine (premier liquide de traitement). Le pH de la solution de fibronectine a été ajusté à 7,4. Puis, une pastille (matière de base) d'hydroxyapatite ayant un diamètre de 5 mm et une épaisseur de 2 mm a été immergée dans 1, 5 ml de la solution de fibronectine à une température de 37 C et a été laissée au repos pendant minutes dans la solution de fibronectine sous agitation. Puis la pastille a été retirée de la solution de fibronectine et a été lavée avec du PBS. Puis, du collagène de type I d'origine porcine a été ajouté à du PBS (solvant) afin que la concentration en collagène de type I dans le PBS soit égale à 100 g/ml, et ces constituants ont été mélangés pour préparer une solution de collagène (second liquide de traitement). Le pH de la solution de collagène a été ajusté à 7,4. Puis la pastille obtenue à l'étape a été immergée dans 1,5 ml de la solution de collagène ajustée à 37 C pour la dénaturation suffisante du collagène et a été laissée au repos pendant 30 minutes dans la solution de collagène sous agitation. La pastille a été ensuite retirée de la solution de collagène, puis a été lavée avec du PBS afin d'obtenir un support revêtu de collagène (appelé également ci-après "support de culture cellulaire). Les étapes à précitées ont été mises en oeuvre de manière répétée pour obtenir finalement 10 supports 20 revêtus de collagène. (Exemple 2) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la matière constitutive de la matière de base consistant en hydroxyapatite a été remplacée par le phosphate tricalcique. (Exemple 3) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la matière constitutive de la matière de base consistant en hydroxyapatite a été remplacée par un mélange comprenant 50 % en poids d'hydroxyapatite et 50 en poids de phosphate tricalcique. (Exemple 4) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la matière de base constitué d'hydroxyapatite a été remplacée par une matière de base obtenue en revêtant une matrice constituée de résine de polystyrène avec une couche de surface constituée d'hydroxyapatite. L'épaisseur moyenne de la couche de surface était égale à 0,7 m. (Exemple 5) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la protéine consistant en fibronectine a été remplacée par l'intégrine. (Exemple 6) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la protéine consistant en fibronectine a été remplacée par un mélange comprenant 50 % en poids de fibronectine et 50 % en poids d'intégrine. (Exemple 7) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que le collagène du type I a été remplacé par le collagène de type II. (Exemple 8) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que le collagène de type I d'origine porcine a été remplacé par le collagène de type I provenant du saumon. (Exemple 9) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la concentration de fibronectine dans la solution de fibronectine obtenue dans l'étape a été amenée à 0,1 g/ml. (Exemple 10) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la concentration de fibronectine dans la solution de fibronectine obtenue dans l'étape a été amenée à 100 g/ml. (Exemple 11) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la concentration de collagène de type I dans la solution de 2886311 29 collagène obtenue dans l'étape a été amenée à 1 g/ml. (Exemple 12) Dix supports revêtus de collagène ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que la concentration de collagène de type I dans la solution de collagène obtenue dans l'étape a été amenée à 1000 g/ml. (Exemple 13) Tout d'abord, de la fibronectine (qui est une protéine ayant une grande affinité pour le collagène) et du collagène du type I d'origine porcine ont été ajoutés à du PBS (solvant) de telle sorte que la concentration de fibronectine et la concentration de collagène de type I dans le PBS soient respectivement égales à 5 g/ml et 100 g/ml, puis ces ingrédients ont été mélangés pour préparer une solution mixte (liquide de traitement). Le pH de la solution mixte a été ajusté à 7,4. Puis, une pastille (matière de base) d'hydroxyapatite ayant un diamètre de 5 mm et une épaisseur de 2 mm a été immergée dans 1, 5 ml de la solution mixte à une température de 37 C et a été laissée au repos pendant 30 minutes dans la solution mixte sous agitation. La pastille a été ensuite retirée de la solution mixte, puis a été lavée avec du PBS. Les étapes et ont été mises en oeuvre de manière répétée pour obtenir finalement 10 supports revêtus de collagène. (Exemple comparatif 1) Dix supports de culture cellulaire ont été obtenus de la même manière que dans l'exemple 1, sauf que les étapes et ont été omises et qu'une pastille non traitée d'hydroxyapatite a été utilisée dans l'étape . (Exemple comparatif 2) Dix supports de culture cellulaire ont été obtenus de 35 la même manière que dans l'exemple 1, sauf que les étapes et ont été omises. (Exemple comparatif 3) Dix pastilles non traitées d'hydroxyapatite ont été préparées et ont été utilisées directement comme supports de culture cellulaire. 2. Evaluation 2.1 Evaluation du pouvoir d'adsorption de collagène Cinq des dix supports de culture cellulaire obtenus dans chacun des exemples 1 à 13 et l'exemple comparatif 1 ont été lavés avec du PBS, et le PBS a été récupéré pour évaluer la concentration en collagène dans le PBS par électrophorèse (SDS-PAGE). En résultat, dans tous les cas des exemples 1 à 13, la concentration en collagène dans le PBS avec lequel les supports de culture cellulaire avaient été lavés était inférieure à celle du cas de l'exemple comparatif 1. D'après les résultats, on peut considérer que le collagène des supports de culture cellulaire de chacun des exemples 1 à 13 était fermement adsorbé aux matières de base de ces supports par l'intermédiaire de la protéine, ce qui fait que le collagène ne s'est pas détaché aisément des matières de base même lorsque les supports de culture cellulaire ont été lavés avec du PBS. D'autre part, de la manière décrite ci-dessus, la concentration en collagène dans le PBS avec lequel les supports de culture cellulaire de l'exemple comparatif 1 avaient été lavés était forte. D'après ce résultat, on peut considérer que le collagène des supports de culture cellulaire de l'exemple comparatif 1 était faiblement adsorbé aux matières de base de ces supports, ce qui fait que le collagène s'est détaché des matières de base sous l'action du lavage avec du PBS. 2.2 Evaluation de la croissance des cellules Une culture cellulaire a été effectuée en utilisant les cinq supports de culture cellulaire restants obtenus dans chacun des exemples 1 à 13 et dans les exemples comparatifs 1 à 3 de la manière suivante. Tout d'abord, des cellules endothéliales normales de veine ombilicale humaine (désignées simplement ci-après par "cellules HUV-EC-C") ont été utilisées pour l'ensemencement en un rapport de 1,35 x 105 cellules par support de culture cellulaire. Puis les cellules HUV-EC-C utilisées pour l'ensemencement dans l'étape ont été cultivées dans du milieu MCDB131 contenant 10 en poids de sérum de foetus de veau (FCS) pendant 7 jours. La température du milieu de culture était égale à 37 C pendant la culture cellulaire. Les cellules HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire de chacun des exemples 1 à 13 et des exemples comparatifs 1 à 3 ont été ensuite colorées avec du cristal violet, puis ont été observées au microscope. A titre d'exemples, des images d'observations des cellules HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire de l'exemple 1 et des exemples comparatifs 1 à 3 sont représentées sur les figures 3 à 6, respectivement. Il faut noter que, sur les figures 3 à 6, les cellules HUV-EC-C ont une couleur plus foncée. Comme permet de le constater la figure 3, les cellules HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire de l'exemple 1 ont été adsorbées aux supports de culture cellulaire et le nombre de cellules qui se sont développées était plus grand, par comparaison avec les cas représentés sur les figures 4 à 6. D'autre part, comme permettent de le constater les figures 4 à 6, le nombre de cellules HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire des exemples comparatifs 1 à 3, respectivement, était plus petit, par comparaison avec le cas représenté sur la figure 3. Puis les cellules HUV-EC-C cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire de chacun des exemples 1 à 13 et des exemples comparatifs 1 à 3 ont été observées au microscope pour compter le nombre de cellules par surface unitaire de la surface de chacun des supports de culture cellulaire. Il convient de noter que le nombre de cellules a été déterminé en calculant la moyenne du nombre de cellules cultivées cellulaire la valeur l'exemple comparatif en utilisant les cinq supports de culture et a été exprimé en termes de rapport relatif de moyenne ainsi obtenue à la valeur moyenne de comparatif 3 (le rapport relatif de l'exemple 3 a été défini par la valeur 1,0). Les résultats sont présentés sur le tableau 1. Tableau 1 Résultat de l'évaluation Image Nombre d'observation de cellules pH au (rapport microscope relatif) Fig. 3 1,98 7,4 1,87 74. 1,91 7,4 1,90 7, 4 2,01 7,4 2,05 7,4 1,71 7,4 1,66 7,4 1,67 7,4 1,88 7,4 1,70 7,4 1,89 (30) (7,4) 1,80 7,4 Fig. 4 0,78 Fig. 5 1,39 Fig. 6 1,00 HAP: hydroxyapatite a: premier liquide de traitement (contenant la protéine) + second liquide traitement (contenant le collagène) TCP: phosphate tricalcique b: liquide de traitement (contenant la protéine et le collagène) PS: résine de polystyrène FN: fibronectine Dans les colonnes de conditions de production, les valeurs entre parenthèses sont des résultats du liquide INT: intégrine de traitement b. Ex. 12. _ Ex. 13 Ex. 6 Ex. 7 Ex. 8 Ex. 9 Ex. 5 Ex. 10 Ex. 11 Ex. comp. 2 Ex. comp. 3 Ex. comp. 1 Composition du support de culture cellulaire Collagène Type 1 Source HAP + TCP matrice: PS couche de surface: HAP Matière de TCP HAP HAP HAP HAP HAP HAP HAP HAP - HAP HAP HAP HAP HAP base INT I FN+INT I Protéine FN FN FN FN FN II porcine a 5 37 30 FN I saumon a 5 37 30 FN I porcine a 0,1 37 30 FN I porcine a 100 37 30 porcine a 5 37 30 porcine a 5 37 30 porcine b (5) (37) (30) porcine FN FN porcine........ porcine porcine porcine porcine a 5 37 30 porcine a 5 37 30 a Procédé a Premier liquide de traitement Conc. en 1 1 I Température Temps protéines [ C] [min] [mg/ml] ------ I 37 30 37 30 37 30 37 30 Conditions de production 7,4 100 37 7,4 100 37 7,4 100 37 7,4 100 37 7,4 100 37 7,4 100 37 7,4 1 37 7,4 1000 37 (7,4) (100) (37) 37 pH Second liquide de traitement Conc. en 1 I I Température Temps collagène [ C] [min] 2886311 34 Comme permet de le constater le tableau 1, le nombre de cellules cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire de l'exemple 1 était d'approximativement 1,4 à 2,5 fois celui de chacun des exemples comparatifs 1 à 3. En outre, le nombre de cellules cultivées en utilisant les supports de culture cellulaire de chacun des exemples 2 à 13 était d'environ 1,2 à 2,6 fois celui de chacun des exemples comparatifs 1 à 3. D'après ce résultat, on peut considérer que les supports revêtus de collagène de chacun des exemples 1 à 13 ont adsorbé fermement les cellules HUV-EC-C, ce qui fait que les cellules n'ont pu se détacher des supports revêtus de collagène, favorisant ainsi la croissance des cellules. D'autre part, de la manière décrite ci-dessus, le support de culture cellulaire de l'exemple comparatif 1 ne possède pas de protéine présentant une forte affinité pour le collagène, le support de culture cellulaire de l'exemple comparatif 2 ne possède pas de collagène et le support de culture cellulaire de l'exemple comparatif 3 est un support non traité constitué d'hydroxyapatite. D'après ce fait, on peut considérer que les cellules HUV-EC-C se sont détachées aisément des supports de culture cellulaire des exemples comparatifs 1 à 3 en raison de la faible adsorption des cellules HUV-EC-C aux supports de culture cellulaire, ce qui fait que les cellules ne se sont pas développées suffisamment:. 3. Matériau d'obturation osseuse (os artificiel) Essai d'implantation Tout d'abord, des matériaux d'obturation osseuse ont été produits de la même manière que dans les exemples 1 à 13 et les exemples comparatifs 1 à 3, respectivement, sauf que la matière de base a été remplacée par une pastille ayant un diamètre de 5 mm et une épaisseur (longueur) de 10 mm. Puis des lapins domestiques blancs japonais ont été préparés et un trou d'un diamètre de 5,5 mm et d'une profondeur de 10,5 mm a été foré dans le condyle du fémur 2886311 35 de chacun des lapins. Les trous dans ces lapins ont été obturés avec les matériaux d'obturation osseuse des exemples 1 à 13 et des exemples comparatifs 1 à 3, respectivement. Après un temps de 6 semaines, les lapins ont été tués. Le site obturé avec le matériau d'obturation osseuse dans le condyle du fémur de chacun des lapins a été coloré par coloration HE et a été ensuite observé au microscope. En résultat, dans chacun des sites obturés avec les matériaux d'obturation osseuse des exemples 1 à 13, respectivement, le tissu osseux régénéré et le matériau d'obturation osseuse étaient fusionnés l'un à l'autre malgré une période d'implantation relativement brève (6 semaines). Ce résultat indique que les matériaux d'obturation osseuse des exemples 1 à 13 ont rempli leurs fonctions de manière satisfaisante. D'autre part, dans chacun des sites obturés avec les matériaux d'obturation osseuse des exemples comparatifs 1 à 3, respectivement, une limite entre le matériau d'obturation osseuse et le tissu osseux nouveau a été nettement observée. Ce résultat indique que le tissu osseux nouveau et le matériau d'obturation osseuse étaient mal fusionnés l'un à l'autre. Conformément à la présente invention, il est possible d'obtenir de manière efficace et fiable un support revêtu de collagène qui présente d'excellentes propriétés d'adhérence de cellules et qui permet une excellente croissance des cellules sur celui-ci. Dans le cas où le support revêtu de collagène conforme à la présente invention est utilisé comme support de culture cellulaire, les cellules à cultiver se développent plus efficacement et de manière plus fiable. En outre, dans le cas où le support revêtu de collagène conforme à la présente invention est utilisé comme matériau d'obturation d'un site de déficience osseuse, le support sert d'échafaudage qui permet au tissu osseux nouveau (ostéoblastes) de se développer plus efficacement sur celui-ci. Dans ce cas, le support revêtu de collagène et les ostéoblastes qui se sont développés réparent et régénèrent plus rapidement le site de déficience osseuse. Il va de soi que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et que de nombreuses modifications peuvent y être apportées sans sortir de son cadre. Enfin, il doit être entendu que le présent mémoire 10 concerne le sujet figurant dans la demande de brevet japonais N 2005-152778 (déposée le 25 mai 2005). 2886311 37 REVENDICATIONS 1. Support revêtu de collagène (1), caractérisé en ce qu'il comprend un support (2) ayant une surface, dans lequel au moins une partie de la surface du support (2) est constituée d'un composé à base de phosphate de calcium, et dans lequel la partie de la surface du support (2) est revêtue de collagène par l'intermédiaire d'une protéine ayant une forte affinité pour le collagène. 2. Support revêtu de collagène suivant la 10 revendication 1, caractérisé en ce que la protéine possède un récepteur de collagène. 3. Support revêtu de collagène suivant la revendication 2, caractérisé en ce que la protéine contient au moins une des protéines consistant en fibronectine et intégrine comme ingrédient principal. 4. Support revêtu de collagène suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le collagène contient du collagène de type I comme ingrédient principal. 5. Support revêtu de collagène suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le collagène est dérivé d'un animal terrestre. 6. Support revêtu de collagène suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'au moins une partie du collagène est dénaturée. 7. Support revêtu de collagène suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le collagène peut être dissous dans un solvant ayant un pH de 6,0 à 8,0 en un rapport de 100 g ou plus par millilitre de solvant. 8. Support revêtu de collagène suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le support est obtenu en revêtant la surface d'une matrice avec le composé à base de phosphate de calcium. 9. Support revêtu de collagène suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le support a une forme granulaire, une forme de pastille, une forme de bloc ou une forme de feuille. 2886311 38 10. Support revêtu de collagène suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le composé à base de phosphate de calcium contient au moins un des ingrédients consistant en phosphate tricalcique et hydroxyapatite comme ingrédient principal. 11. Support de culture cellulaire caractérisé en ce qu'il comprend un support revêtu de collagène suivant la revendication 1. 12. Matériau d'obturation osseuse caractérisé en ce 10 qu'il comprend un support revêtu de collagène suivant la revendication 1. 13. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à : préparer un support ayant une surface, au moins une partie de la surface du support étant constituée d'un composé à base de phosphate de calcium; et mettre le support en contact avec le collagène et une protéine ayant une forte affinité pour le collagène afin de revêtir la partie de la surface du support avec le collagène par l'intermédiaire de la protéine. 14. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à : préparer un support ayant une surface, au moins une partie de la surface du support étant constituée d'un composé à base de phosphate de calcium; mettre le support en contact avec un premier liquide de traitement contenant une protéine ayant une forte affinité pour le collagène afin de permettre à la protéine d'adhérer à la partie de la surface du support; et mettre le support en contact avec un second liquide de traitement contenant le collagène pour revêtir la partie de la surface du support avec le collagène par l'intermédiaire de la protéine. 2886311 39 15. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène suivant la revendication 14, caractérisé en ce que la concentration en protéine dans le premier liquide de traitement est de 0, 1 à 100 g/ml. 16. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène suivant la revendication 14, caractérisé en ce que la température du premier liquide de traitement est de 4 à 39 C. 17. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène suivant la revendication 14, caractérisé en ce que le temps pendant lequel le support est maintenu en contact avec le premier liquide de traitement est de 10 minutes à 10 heures. 18. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène suivant la revendication 14, caractérisé en ce que le pH du premier liquide de traitement est de 6,0 à 8,0. 19. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène suivant la revendication 14, caractérisé en ce que la concentration en collagène dans le second liquide de traitement est de 1 à 1000 g/ml. 20. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène suivant la revendication 14, caractérisé en ce que la température du second liquide de traitement est de 4 à 39 C. 21. Procédé pour la production d'un support revêtu de collagène suivant la revendication 14, caractérisé en ce que le temps pendant lequel le support est maintenu en contact avec le second liquide de traitement est de 10 minutes à 10 heures. 22. Prccédé pour la production d'un support revêtu de collagène suivant la revendication 14, caractérisé en ce que le pH du second liquide de traitement est de 6,0 à 8,0.