Brevet FR2890173A1 — publié le 20070302

La présente invention concerne un dispositif immunochromatographique à migration latérale permettant simultanément la détermination d'un analyte dans un échantillon liquide par un test sandwich et par un test de compétition. Des dispositifs immunochromatographiques à migration latérale sont par exemple décrits dans le brevet EP 0 284 232. Ces dispositifs mettent en oeuvre un moyen de diffusion capillaire sous la forme d'un support solide poreux au sein duquel l'échantillon et les réactifs migrent par diffusion capillaire. Ces dispositifs intègrent ainsi un support solide poreux (ou immunochromatographique) comportant une première zone portant sous forme lyophilisée ou déshydratée, un réactif de liaison spécifique de I'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et une zone de détection sur laquelle est immobilisé un réactif de capture spécifique de l'analyte. Le réactif de liaison spécifique de I'analyte est immobile sous forme lyophilisée mais devient mobile dans le support solide à l'état humide. Ainsi, lorsque le support solide est mis en contact avec un échantillon liquide, ce dernier migre par diffusion capillaire dans ce support entraînant le réactif de liaison spécifique de I'analyte conjugué au marqueur visible et/ou mesurable. L'échantillon et le réactif de liaison spécifique de l'analyte migrent par diffusion capillaire dans le support solide jusqu'à la zone de détection portant un réactif de capture spécifique de I'analyte immobilisé. On connaît de WO 2004/088320 des procédés immunochromtographiques en phase solide dans lesquels le réactif de liaison, conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est ajouté extemporanément sous forme liquide. Ces dispositifs permettent classiquement la détection de l'analyte soit par un test sandwich soit par un test de compétition. Dans un test sandwich, le réactif de liaison marqué se lie à l'analyte 30 alors que ce dernier est immobilisé sur le support solide par le réactif de capture. Dans un test de compétition, l'analyte et le réactif de capture sont en compétition pour se lier au réactif de liaison marqué. La présence ou l'absence de l'analyte dans l'échantillon est 35 mesurée par la détection du réactif marqué. Les brevets EP 0 291 194, EP 0 560 411 et EP 0 560 410 décrivent des dispositifs dans lesquels le support solide immunochromatographique est incorporé dans un boîtier pourvu d'une ouverture pour le dépôt de l'échantillon et d'une fenêtre d'observation pour la lecture des résultats. Le brevet EP 1 091 808 décrit des dispositifs améliorés comprenant également un support solide poreux intégré dans un boîtier dans lesquels un organe de captation mobile permet une meilleure collecte de l'échantillon. Ces dispositifs peuvent être adaptés à un usage domestique. En effet, ils sont d'un usage facile et rapide, ne nécessitant que très peu de manipulations puisque tous les réactifs sont intégrés dans le dispositif. Cependant, ces tests immunochromatographiques en phase solide ne permettent pas une détermination quantitative de l'analyte dans l'échantillon. En outre, en test sandwich, on observe pour certains analytes un effet crochet ou effet Hook . L'effet crochet est un effet indésirable bien connu dans les tests immunologiques. Il se produit lorsque l'analyte est présent dans l'échantillon à une concentration très élevée. L'effet crochet peut alors conduire à un résultat négatif concluant de façon aberrante à l'absence de l'analyte dans l'échantillon. Les analytes présentant un effet crochet lors de dosages immunologiques présentent des courbes signal/concentration du type courbe de Gauss (voir figure 1). La figure 1 montre également qu'à un signal donné (S) correspondent deux concentrations possibles de l'analyte (Cl et C2), l'une faible (C1) et l'autre élevée (C2) lors de la lecture du résultat à un temps défini. Les courbes signal/concentration pour les dosages par compétition sont représentées à la figure 2. Pour le test par compétition, il y a bien l'obtention de deux signaux différents (Si et S2) pour deux concentrations (Cl et C2) de I'analyte à doser. Cependant, les tests par compétition montrent également très rapidement leurs limites car il y a une extinction du signal à des concentrations relativement peu élevées d'analyte. Une solution communément adoptée pour remédier aux inconvénients des tests sandwich et des tests de compétition consiste à doser une gamme de dilution de l'échantillon. L'utilisation d'une gamme de dilution ne convient cependant pas un usage domestique. En outre, l'utilisation d'une gamme de dilution de l'échantillon nécessite des manipulations supplémentaires et une consommation accrue de dispositifs de test puisque chaque échantillon est testé plusieurs fois à différentes dilutions. Pour remédier à ces inconvénients, la présente invention propose des dispositifs permettant de doser simultanément, un analyte donné, par un test sandwich et par un test de compétition. Dans un mode de réalisation les dispositifs permettent de doser simultanément et sur un même moyen de diffusion capillaire, un analyte donné, par un test sandwich et par un test de compétition. La présente invention propose également un procédé de dosage 10 simultané d'un analyte donné, par un test sandwich et par un test de compétition. Avantageusement, les dispositifs et/ou les procédés selon la présente invention permettent de doser des analytes faiblement ou très fortement concentrés dans un échantillon sans obtenir de résultats faux positifs ou faux négatifs. En outre, de façon surprenante, les dispositifs et/ou les procédés selon la présente invention permettent le dosage quantitatif de l'analyte. Les dispositifs et/ou les procédés selon l'invention sont particulièrement adaptés au dosage d'analytes présentant un effet crochet important comme l'hormone de grossesse (hCG), la protéine C-réactive, l'albumine, etc. Description de l'invention La, présente invention concerne donc un dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comportant un moyen de diffusion capillaire (1) comprenant dans la direction de diffusion capillaire (2) : a) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; b) un réactif de liaison spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur 30 visible et/ou mesurable, libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) ; c) une zone de détection de l'analyte (5) ; dans lequel la zone de détection de l'analyte (5) comprend, successivement, dans la direction de diffusion capillaire (2), un deuxième réactif de liaison spécifique de l'analyte (6) immobilisé et l'analyte, ou un analogue de l'analyte, immobilisé (7) ; de telle sorte que le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et le deuxième réactif de liaison spécifique de l'analyte (6) permettent la détermination de I'analyte dans l'échantillon liquide par un test sandwich alors que le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et l'analyte, ou l'analogue de l'analyte, immobilisé (7) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test de compétition. Dans un mode de réalisation le premier réactif de liaison spécifique de I'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est immobilisé à l'état sec sur le support, l'invention concerne donc un dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comportant un moyen de diffusion capillaire (1) comprenant dans la direction de diffusion capillaire (2) : a) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; b) un premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, immobilisé à l'état sec mais libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) ; c) une zone de détection de l'analyte (5) ; dans lequel la zone de détection de I'analyte (5) comprend, successivement, dans la direction de diffusion capillaire (2), un deuxième réactif de liaison spécifique de l'analyte (6) immobilisé et I'analyte, ou un analogue de I'analyte, immobilisé (7) ; de telle sorte que le premier réactif de liaison spécifique de I'analyte (4) et le deuxième réactif de liaison spécifique de l'analyte (6) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test sandwich alors que le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et l'analyte, ou l'analogue de l'analyte, immobilisé (7) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test de compétition. Dans un autre mode de réalisation, le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est ajouté extemporanément sous forme de réactif sous forme liquide. Par réactif sous forme liquide , on entend tout réactif dans lequel le réactif de liaison est en solution ou en suspension. La préparation du réactif de liaison conjugué au marqueur visible et/ou mesurable sous forme liquide se fait selon des techniques décrites dans la littérature. Habituellement, le réactif de liaison conjugué est en solution ou en suspension dans une solution saline tamponnée. Cette solution peut également comprendre des agents stabilisants et d'autres composés tels que des anti-bactériens ou des anti-fongiques. Parmi les agents stabilisants on citera par exemple la sérum albumine bovine (BSA) et la caséine. Dans certains procédés selon la présente invention, un diluant est utilisé lorsque l'échantillon liquide est du plasma, du sérum ou du sang total par exemple. Ce diluant migre dans le support solide entraînant l'échantillon et le réactif de liaison marqué. Typiquement ce diluant est composé d'une solution saline tamponnée, il peut également comprendre un détergent ou tout autre composant nécessaire à la réaction. De préférence, le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte 15 (4) est conjugué à un marqueur particulaire. Préférentiellement, le moyen de diffusion capillaire (1) est une bandelette chromatographique fixée sur un support rigide. Dans un mode de réalisation préféré, le moyen de diffusion 20 capillaire (1) est intégré dans un support de préhension (8) pourvu d'au moins une fenêtre d'observation (9) permettant d'observer la zone de détection (5). Par réactif de liaison , on entend toute entité chimique biochimique ou biologique susceptible de se lier spécifiquement avec l'analyte 25 ou avec le réactif de capture en compétition avec l'analyte. Par lier ou liaison , on entend toute liaison forte, par exemple covalente ou toute liaison faible, par exemple du type antigène/anticorps ou avidine/streptavidine. Le réactif de liaison est par exemple un anticorps, un antigène ou 30 un acide nucléique. Dans un test par compétition, le réactif de liaison est en phase solide et fixé l'analyte lui-même ou un analogue approprié de I'analyte. Par analogue approprié de l'analyte, on entend un analogue se liant de manière spécifique au réactif de capture spécifique de l'analyte. Le réactif de liaison marqué est un anti-analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, par exemple un anticorps spécifique de l'analyte conjugué. Dans un test de type sandwich, le réactif de liaison se lie de façon spécifique à l'analyte. Le réactif de liaison marqué est donc également un antianalyte par exemple un anticorps spécifique de I'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. Par marqueur visible et/ou mesurable , on entend tout procédé de marquage permettant une détection directe ou indirecte à l'oeil nu ou à l'aide d'un appareil, en raison de l'émission d'un signal, ledit signal étant par exemple, une fluorescence, une coloration, une présence d'isotope, un signal magnétique. On citera par exemple les marqueurs particulaires colorés ou fluorescents comme l'or colloïdal, les particules de latex colorées, les particules de latex fluorescentes et les particules conjuguées à l'avidine et à la streptavidine. La présente invention concerne donc un dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comportant un moyen de diffusion capillaire (1) comprenant dans la direction de diffusion capillaire (2) : a) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; b) un premier anticorps spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) ; c) une zone de détection de l'analyte (5) ; dans lequel la zone de détection de l'analyte (5) comprend, successivement, dans la direction de diffusion capillaire (2), un deuxième anticorps spécifique de l'analyte (6) immobilisé et l'analyte, ou un analogue de l'analyte, immobilisé (7) ; de telle sorte que le premier anticorps spécifique de l'analyte (4) et le deuxième anticorps spécifique de l'analyte (6) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test sandwich alors que le premier anticorps spécifique de l'analyte (4) et l'analyte, ou l'analogue de l'analyte, immobilisé (7) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test de compétition. Dans un mode de réalisation le premier anticorps spécifique de I'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est immobilisé à l'état sec sur le support, l'invention concerne donc un dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comportant un moyen de diffusion capillaire (1) comprenant dans la direction de diffusion capillaire (2) : a) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; b) un premier anticorps spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, immobilisé à l'état sec mais libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) , c) une zone de détection de l'analyte (5) ; dans lequel la zone de détection de l'analyte (5) comprend, successivement, dans la direction de diffusion capillaire (2), un deuxième anticorps spécifique de l'analyte (6) immobilisé et I'analyte, ou un analogue de l'analyte, immobilisé (7) ; de telle sorte que le premier anticorps spécifique de l'analyte (4) et le deuxième anticorps spécifique de l'analyte (6) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test sandwich alors que le premier anticorps spécifique de l'analyte (4) et l'analyte, ou l'analogue de l'analyte, immobilisé (7) permettent la détermination de I'analyte dans l'échantillon liquide par un test de compétition. Dans un autre mode de réalisation, le premier anticorps spécifique de I'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est ajouté extemporanément sous forme de réactif sous forme liquide. De préférence, le premier anticorps spécifique de l'analyte (4) est conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. Préférentiellement, le moyen de diffusion capillaire (1) est une bandelette chromatographique fixée sur un support rigide. Dans un mode de réalisation préféré, le moyen de diffusion 30 capillaire (1) est intégré dans un support de préhension (8) pourvu d'au moins une fenêtre d'observation (9) permettant d'observer la zone de détection (5). L'invention concerne aussi un procédé de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comprenant les étapes suivantes: a) on dispose d'au moins un support solide poreux pourvu d'au moins une zone de collection et d'une zone de détection, au moins un réactif de capture étant immobilisé dans la zone de détection, b) on dépose, séparément dans la zone de collection du support solide poreux au moins un fois l'échantillon liquide, c) on attend un temps suffisant pour la migration par diffusion capillaire de l'échantillon liquide jusqu' à la zone comportant le réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, d) on attend un temps suffisant pour la migration par diffusion capillaire du réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et de l'échantillon liquide jusqu'à la zone de détection, e) on observe la mesure dans laquelle le réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable se fixe dans la zone de détection pour la détermination de l'analyte simultanément par un test sandwich et par un test de compétition. Selon un mode de réalisation, le réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est immobilisé. Selon un mode de réalisation le réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est ajouté extemporanément sous forme de réactif sous forme liquide simultanément, postérieurement ou préalablement au dépôt de l'analyte. Selon un mode de réalisation un diluant sous forme liquide est également ajouté. Selon un mode de réalisation du procédé à l'étape a) la zone de détection comprend au moins deux réactifs de capture, au moins l'un des deux étant I'analyte ou un analogue de l'analyte immobilisé et au moins l'un des deux étant un réactif de liaison spécifique de l'analyte immobilisé. Selon un mode de réalisation on dispose de deux supports solides, 30 l'un permettant la détermination de l'analyte par un test sandwich et l'autre par un test de compétition. Par réactif de capture)), on entend toute entité chimique biochimique ou biologique susceptible de se lier spécifiquement avec l'analyte. Dans le cas d'un test par compétition, le réactif de capture se lie également au réactif de liaison. L'analyte et le réactif de capture forment typiquement un couple ligand/anti-ligand, antigène/anticorps, ADN/ARN ou ADN/ADN. Ainsi, si l'analyte est un antigène ou un haptène, le réactif de capture est par exemple un anticorps spécifique de l'analyte. Si l'analyte est un anticorps, le réactif de capture est l'antigène reconnu par l'anticorps ou un anticorps reconnaissant spécifiquement l'analyte. Si l'analyte est un acide nucléique, le réactif de capture est par exemple une sonde ADN complémentaire. Le réactif de capture immobilisé est par exemple un anticorps polyclonal ou monoclonal ayant une forte affinité pour l'analyte et plus 10 particulièrement il peut s'agir d'un anticorps monoclonal. Pour augmenter la sensibilité, on peut avoir recours par exemple, à un anticorps comportant lui-même un marquage selon des techniques connues de l'homme de l'art pour une détection indirecte, comme par exemple un anticorps biotinylé, permettant indirectement la détection par la formation des entités avidine-biotine et streptavidine-biotine. Cet anticorps marqué et biotinylé peut également soit être directement déjà déposé sur la ligne-test, pour augmenter la sensibilité, soit être déposé avec le premier anticorps spécifique et être élué et fixé de manière que l'analyte et l'anticorps, pour augmenter le temps de contact et encore la sensibilité notamment, par exemple, en raison du nombre de sites de fixation. Le réactif de capture spécifique de l'analyte est immobilisé sur le support solide selon des techniques connues de l'homme du métier. Ce réactif de capture est immobilisé de telle façon qu'il ne soit pas mobile à l'état humide. Cette immobilisation peut s'effectuer par exemple par absorption ou par un couplage covalent. Par anti-analyte , on entend toute entité chimique biochimique ou biologique susceptible de se lier spécifiquement avec l'analyte ou avec le réactif de capture en compétition avec l'analyte, par exemple un anticorps, un antigène ou un acide nucléique. Selon un mode de réalisation, elle concerne également i un procédé de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comprenant les étapes suivantes: a) on dispose d'un dispositif selon l'une des revendications précédentes; 35 b) on dépose un échantillon liquide dans la zone de dépôt (3) du moyen de diffusion capillaire (1) du dispositif de l'étape (a) ; c) on attend un temps suffisant pour la migration par diffusion capillaire de l'échantillon liquide depuis la zone de dépôt (3) jusqu'à la zone de détection (5) entraînant le premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (4) ; d) on observe la mesure dans laquelle le premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (4) se fixe dans la zone de détection (5) pour la détermination de l'analyte simultanément par un test sandwich et par un test de compétition. Dans un mode de réalisation avantageux, à l'étape b) on dépose un échantillon liquide et un diluant dans la zone de dépôt (3) du moyen de diffusion capillaire (1) du dispositif de l'étape (a). L'invention concerne également un kit comportant deux supports solides, pourvus chacun d'au moins une zone de collection et d'une zone de détection, au moins un réactif de capture étant immobilisé dans la zone de détection, caractérisé en ce que l'un permet la détermination de I'analyte par un test sandwich et l'autre la détermination du même analyte par un test de compétition. Par analyte , on entend toute entité chimique, biochimique ou biologique que l'on souhaite détecter dans un échantillon. Parmi les analytes détectés par les dispositifs et les procédés selon la présente invention, on citera notamment les protéines, les peptides, les anticorps, les hormones, les stéroïdes, les antigènes dérivés d'agents infectieux ou de cellules tumorales, les agents infectieux tels que les bactéries, les virus ou les parasites, les acides nucléiques (ADN ou ARN), les molécules thérapeutiques, les drogues ou encore les antibiotiques. Par détecter ou déterminer , on entend la détermination de la présence ou de l'absence d'un analyte dans un échantillon mais aussi la mesure et la quantification d'un analyte dans un échantillon. En effet, les performances des dispositifs et procédés selon l'invention autorisent la réalisation de mesures quantitatives ou semi quantitatives. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'analyte est 35 la hCG (hormone choriogonadotropine), la protéine C-réactive ou l'albumine. Par échantillon liquide , on entend tout échantillon dans lequel I'analyte recherché est en solution ou en suspension. Cet échantillon liquide peut notamment être tout fluide biologique ou corporel. L'échantillon liquide peut également avoir été obtenu directement ou indirectement à partir d'un fluide biologique ou corporel. L'échantillon peut également être un extrait liquide d'un échantillon solide. Typiquement, l'échantillon liquide est de l'urine, du sang total, du plasma ou du sérum. Dans certains procédés selon la présente invention, un diluant est utilisé lorsque l'échantillon liquide est du plasma, du sérum ou du sang total par exemple. Le diluant est déposé avec l'échantillon. Alternativement, le diluant est déposé avant ou après l'échantillon. Ce diluant migre dans le support solide entraînant l'échantillon et le réactif de liaison marqué. Typiquement ce diluant est composé d'une solution saline tamponnée, il peut également comprendre un détergent ou tout autre composant nécessaire à la réaction. Par moyen de diffusion capillaire , on entend un support solide poreux permettant la migration d'un liquide par simple diffusion capillaire. La porosité de ce support permet la diffusion capillaire (ou migration latérale) de l'échantillon et/ou des réactifs à l'état liquide ou humide. De tels moyens de diffusion capillaire sont très largement utilisés dans toutes les techniques d'immunochromatographie à migration latérale notamment. Ainsi, les moyens de diffusion capillaire mis en oeuvre dans les dispositifs immunochromatographiques selon l'invention sont bien connus de l'homme du métier (EP 0 284 232). A titre d'exemple, ces moyens de diffusion capillaire peuvent être constitués de divers supports immunochromatographiques, de cellulose, de nylon, de nitrocellulose, de polyéthylène ou de fibre de verre. Le moyen de diffusion capillaire peut être constitué d'une ou de plusieurs parties distinctes. Les différentes parties du support pouvant être constitués de matériaux différents. Lorsque le moyen de diffusion capillaire est constitué de différentes parties ou de différents matériaux, ces éléments sont disposés de telle façon à permettre la continuité de l'écoulement capillaire dans le moyen de diffusion capillaire. Typiquement, le moyen de diffusion capillaire est constitué d'un support solide poreux allongé selon la direction de diffusion capillaire. De préférence, le moyen de diffusion capillaire des dispositifs selon l'invention est un support solide poreux en forme de bandelette immunochromatographique. Le moyen de diffusion capillaire se présente par exemple sous la forme d'une bandelette immunochromatographique constituée de plusieurs bandelettes superposés ou chevauchantes. Le dispositif selon l'invention peut par exemple être constitué d'une bandelette chromatographique fixée sur un support rigide. Le support rigide peut être constitué de matériaux divers tel que du carton, du carton plastifié ou plus préférentiellement de matières plastiques. De préférence, le support rigide est constitué de polystyrène. Le moyen de diffusion capillaire comprend une zone de dépôt de l'échantillon et une zone de détection de l'échantillon. La zone de dépôt et la zone de détection sont des zones distinctes et séparées du moyen de diffusion capillaire. Ces zones sont disposées de façon à permettre la continuité de l'écoulement capillaire depuis la zone de dépôt jusqu'à la zone de détection selon une direction de diffusion capillaire. Typiquement, la zone de dépôt et la zone de détection correspondent respectivement à l'une et l'autre des extrémités opposées du moyen de diffusion capillaire. Le moyen de diffusion capillaire est ainsi par exemple constitué d'un support solide poreux allongé selon la direction de diffusion capillaire présentant une extrémité proximale et une extrémité distale constituant respectivement la zone de dépôt et la zone de détection. Ces zones peuvent par exemple être présentes dans un même plan sur une bande constitué d'un matériau unique. Avantageusement, un matériau spécifique correspond à chaque zone du moyen de diffusion capillaire. Un matériau absorbant poreux peut par exemple être utilisé pour la zone de dépôt de l'échantillon. En effet, la zone de dépôt du moyen de diffusion capillaire est destinée à être mise en contact avec un flux d'urine ou à recevoir un échantillon liquide. On choisira donc un matériau absorbant adapté. Ces matériaux sont bien connus de l'homme du métier. La zone de dépôt de l'échantillon du moyen de diffusion peut aussi être constitué d'un organe de captation en matériau absorbant. Cet organe de captation peut être directement mis en contact avec un flux d'urine par exemple. Le support solide peut également comprendre un organe de captation mobile tel que décrit dans WO 00/00288. Le moyen de diffusion capillaire porte un premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. Cet anticorps est immobilisé à l'état sec dans le moyen de diffusion capillaire mais libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide. Ce premier anticorps spécifique de l'analyte peut être localisé dans la zone de dépôt de l'échantillon. Plus préférentiellement, ce premier anticorps est immobilisé à l'état sec en aval de la zone de dépôt pour éviter touteperte de réactif par un effet de lavage lors du dépôt de l'échantillon. Ainsi, l'échantillon liquide est déposé dans la zone de dépôt du moyen de diffusion capillaire puis cet échantillon migre par diffusion capillaire à travers le moyen de diffusion capillaire entraînant alors le premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur. Avantageusement, le moyen de diffusion capillaire peut être incorporé dans un support de préhension. Ce support de préhension facilite la manipulation du moyen de diffusion capillaire et peut également protéger celui-ci notamment de l'humidité. Le support de préhension peut envelopper partiellement ou totalement le moyen de diffusion capillaire. Le support de préhension peut être constitué de matériaux divers tel que du carton, du carton plastifié ou plus préférentiellement de matières plastiques. De façon avantageuse, le support de préhension est constitué d'un matériau rigide et imperméable. Ces supports de préhension ou boîtiers sont notamment décrits dans les brevets EP 0 291 194, EP 0 560 411, EP 0 560 410 et EP 1 091 808. Habituellement, le support de préhension est en forme de boîtier. Dans un mode de réalisation de l'invention, le moyen de diffusion capillaire peut comprendre une zone de dépôt saillante par rapport au support de préhension pour le dépôt de l'échantillon liquide. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le support de préhension ou le boîtier comprend au moins une ouverture pour le dépôt de l'échantillon liquide. Typiquement, le support de préhension est également pourvu d'au moins une fenêtre d'observation pour observer la zone de détection du moyen de diffusion capillaire. Les réactifs mis en oeuvre dans les procédés selon la présente invention, permettant la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide, 35 sont bien connus de l'homme du métier. Le premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est immobilisé à l'état sec dans le moyen de diffusion capillaire mais il est libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide. Le deuxième anticorps spécifique de I'analyte est immobilisé de façon permanente dans la zone de détection du moyen de diffusion capillaire. Par anticorps spécifique de l'analyte , on entend un anticorps capable de se lier spécifiquement avec l'analyte dans une liaison de type antigène/anticorps. Il s'agit typiquement, d'un anticorps polyclonal ou monoclonal ayant une forte affinité pour l'analyte. De préférence, il s'agit d'un anticorps monoclonal. Le deuxième anticorps spécifique de l'analyte est immobilisé dans la zone de détection du moyen de diffusion capillaire selon des techniques connues de l'homme du métier. Ce deuxième anticorps est immobilisé de telle façon qu'il ne soit pas mobile à l'état humide. Cette immobilisation peut s'effectuer par exemple par absorption ou par un couplage covalent. Le premier et le deuxième anticorps se lient respectivement et spécifiquement avec I'analyte, par exemple sur deux sites épitopiques, identiques ou différents de l'analyte. Le premier et le deuxième anticorps des dispositifs de la présente invention permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test sandwich. En outre, les dispositifs selon la présente invention comprennent l'analyte lui-même, ou un analogue de l'analyte, immobilisé dans la zone de 25 détection du moyen de diffusion capillaire. L'analyte, ou l'analogue de l'analyte, est immobilisé dans la zone de détection du moyen de diffusion capillaire selon des techniques connues de l'homme du métier. L'analyte est immobilisé de telle façon qu'il ne soit pas mobile à l'état humide. Cette immobilisation peut s'effectuer par exemple par absorption ou par un couplage covalent. Ce second réactif de la zone de détection est identique à I'analyte luimême ou un analogue approprié de l'analyte. Par analogue approprié de l'analyte, on entend un analogue se liant de manière spécifique au premier anticorps spécifique de l'analyte en compétition avec l'analyte. Dans un mode de réalisation, le premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et l'analyte, ou l'analogue de l'analyte, immobilisé dans la zone de détection du moyen de diffusion capillaire, permettent la détection de l'analyte de l'échantillon liquide par un test de compétition. Préférentiellement, le dépôt dule deuxième anticorps spécifique de l'analyte peut être effectué en amont de l'analyte, ou de l'analogue de l'analyte, par rapport à la direction de diffusion capillaire. Le premier anticorps spécifique de l'analyte, libre de migrer à l'état humide, est conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable permettant une mesure ou une observation directe du résultat du test sandwich et du test de compétition. Le marqueur peut être observé directement à l'oeil nu lorsqu'il est concentré dans la zone de détection du moyen de diffusion capillaire. La mesure du marqueur peut s'effectuer directement à l'oeil nu ou à l'aide d'un appareil de mesure. Cette mesure se fait par une observation directe ne nécessitant pas de manipulation supplémentaire. Avantageusement, les dispositifs selon la présente invention 15 comprennent un premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. Les marqueurs permettent une détection directe ou indirecte à l'ceil nu ou à l'aide d'un appareil, en raison de l'émission d'un signal, ledit signal étant par exemple, une fluorescence, une coloration, une présence d'isotope, un signal magnétique. On citera par exemple les marqueurs particulaires colorés ou fluorescents qui sont typiquement, les marqueurs particulaires sont constitués de particules de petite taille insolubles dans l'eau et qui forment donc des suspensions en phase liquide c'est-à-dire une dispersion de particules solides dans un liquide. Les marqueurs particulaires sont bien connus de l'homme du métier. On connaît notamment les marqueurs particulaires colorés ou fluorescents. A titre d'exemple, on citera l'or colloïdal, les particules de latex colorées, les particules de latex fluorescentes et les particules conjugués à l'avidine ou à la streptavidine. Parmi les marqueurs permettant une observation directe à l'ceil nu on citera aussi les marqueurs de type dextran (Hansen T.M., IVD Technology 4, 35-40, 2003). Le réactif de liaison est alors conjugué à une chaîne de dextran (dérivé de polysaccharide) portant des fluorophores. Les réactifs de liaison sont conjugués au marqueur visible et/ou mesurable selon des techniques connues. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la zone de détection du moyen de diffusion capillaire comprend un troisième réactif disposé en aval du deuxième anticorps spécifique de l'analyte et en aval de l'analyte, ou de l'analogue de l'analyte, par rapport à la direction de diffusion capillaire. Ce troisième réactif permet de disposer d'un contrôle positif afin de s'assurer de la diffusion capillaire de l'échantillon liquide depuis la zone de dépôt jusqu'à la zone de détection du moyen de diffusion capillaire. Ce troisième réactif est immobilisé de façon permanente dans la zone de détection du moyen de diffusion capillaire. II peut s'agir par exemple d'un anticorps se liant au premier anticorps spécifique de I'analyte conjugué au marqueur. Dans ce cas, ce troisième réactif permet de vérifier la migration du premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué au marqueur jusqu'à la zone de détection du moyen de diffusion capillaire. Alternativement, ce troisième réactif est indépendant de l'analyte et permet simplement de vérifier la diffusion de l'échantillon jusqu'à la zone de détection. L'invention est décrite plus en détail par référence aux figures suivantes: Figures Figure 1: Dosage immunologique par un test sandwich Figure 2: Dosage immunologique par un test de compétition Figure 3: Dispositif de dosage simultané d'un analyte par un test sandwich et un test de compétition Figure 4: Dispositif de test rapide comprenant une bandelette immunochromatographique dans un boîtier. Figure 5: Bandelette immunochromatographique pour la détection de I'hCG 30 Figure 6: Résultat du test en cas de concentration faible en analyte Figure 7: Résultat du test en cas de concentration forte en analyte La figure 1 représente la courbe signal/concentration obtenue pour un dosage immunologique par test Sandwich. La courbe obtenue est une courbe du type courbe de Gauss, qui montre qu'à un signal donné (S) correspondent deux concentrations possibles de I'analyte (Cl et C2), l'une faible (Cl) et l'autre élevée (C2) lors de la lecture du résultat à un temps défini. La figure 2 représente une courbe signal/concentration pour les dosages par compétition. On observe l'obtention de deux signaux différents (SI et S2) pour deux concentrations (Cl et C2) de l'analyte à doser. Cependant, on observe une extinction du signal à des concentrations relativement peu élevées d'analyte. La figure 3 représente un dispositif de dosage simultané d'un analyte par un test sandwich et un test de compétition. La vue A) présentant le dispositif sans support de préhension et la vue B) , le dispositif intégré dans un support de préhension. La vue A) représente le dispositif comportant un moyen de diffusion capillaire (1) comprenant dans la direction de diffusion capillaire (2) : a) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; b) un premier anticorps spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, libre de migrer par diffusion capillaire à l'état 20 humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) ; c) une zone de détection de I'analyte (5) ; dans lequel la zone de détection de l'analyte (5) comprend, successivement, dans la direction de diffusion capillaire (2), un deuxième anticorps spécifique de l'analyte (6) immobilisé et l'analyte, ou un analogue de l'analyte, immobilisé (7). La vue B) représente le moyen de diffusion capillaire (1) intégré dans un support de préhension (8) pourvu d'au moins une fenêtre d'observation (9) permettant d'observer la zone de détection (5). Exemples Test de grossesse (détection de l'hormone choriogonadotrophine ou hCG) La figure 4 représente la vue extérieure d'un test rapide de type boîtier dans lequel est insérée une bandelette chromatographique. La bandelette contient un anticorps monoclonal anti (3-hCG marqué à l'or colloïdal déposé sur de la fibre de verre et déshydraté (conjugué). Ce marqueur particulaire est dissout par l'échantillon lors de son dépôt dans le puits échantillons (S) contenant (ou non) de l'hCG puis entre en contact successivement, par migration sur le support membranaire, avec une 1èfe zone contenant un anticorps polyclonal anti-hCG fixé (T1), une 2ème zone contenant de l'hCG fixée (T2) et une 3ème zone contenant un anticorps polyclonal de chèvre anti Immunoglobuline de souris (C). Voir figure 5. En cas d'absence (ou concentration très faible) d'hormone hCG dans l'échantillon déposé, aucune réaction visible ne se produira dans la zone Tl, alors qu'une ligne très forte apparaîtra dans la zone T2 et la zone C (figure 6). En cas de très forte concentration en hCG dans l'échantillon, la réaction dans la zone T1 sera très faible ou inexistante (à cause de l'effet de zone), la zone T2 sera négative (le marqueur particulaire anti 3-hCG étant déjà saturé par l'hCG de l'échantillon et ne pouvant donc plus se fixer sur la même molécule de la phase membranaire) et la zone C sera positive (figure 7). Ce système permet donc effectivement de différencier l'interprétation du résultat en cas de faible concentration d'analyte (2 lignes positives: T2+ C) ou de forte concentration d'analyte (1 ligne positive: C). De plus l'apparition des lignes se fera à des endroits différents (Tl ou T2). Le tableau ci-dessous résume les résultats obtenus dans la zone de détection (T1, T2 et C) en fonction de la concentration en analyte dans l'échantillon à l'aide d'une lecture visuelle du test. Concentration 0 10 25 150 800 4.103 2.104 105 5.105 en hCG (m1U/ml) Ligne Ti - +/- + 2+ 4+ 4+ 3+ 2+ + Ligne T2 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ + - Ligne C 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ Tableau 1: Résultats de la lecture visuelle du test en fonction de la concentration en hCG dans l'échantillon. En plus d'une interprétation visuelle des résultats, il est tout à fait possible de réaliser une lecture à l'aide d'un automate qui est alors capable de donner un résultat quantitatif ou semi quantitatif de la concentration sans dilution préalable de l'échantillon et sans faire de gammes de concentration. En effet en fonction de la zone de concentration, les résultats obtenus dans la zone de détection sont différents et l'interprétation de cette différence permet après étalonnage ou par observation visuelle de quantifier les concentrations.. REVENDICATIONS 1. Dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon 5 liquide comportant un moyen de diffusion capillaire (1) comprenant dans la direction de diffusion capillaire (2) : a) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; b) un réactif de liaison spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, libre de migrer par diffusion capillaire à l'état 10 humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) ; c) une zone de détection de l'analyte (5) ; dans lequel la zone de détection de l'analyte (5) comprend, successivement, dans la direction de diffusion capillaire (2), un deuxième réactif de liaison spécifique de l'analyte (6) immobilisé et l'analyte, ou un analogue de l'analyte, immobilisé (7) ; de telle sorte que le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et le deuxième réactif de liaison spécifique de l'analyte (6) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test sandwich alors que le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et l'analyte, ou l'analogue de l'analyte, immobilisé (7) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test de compétition. 2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur 25 visible et/ou mesurable, est immobilisé à l'état sec mais libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) . 3. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur 30 visible et/ou mesurable est ajouté extemporanément sous forme de réactif sous forme liquide. 4. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) est 35 conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable 5. dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comportant un moyen de diffusion capillaire (1) comprenant dans la direction de diffusion capillaire (2) : d) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; e) un premier anticorps spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) ; f) une zone de détection de l'analyte (5) ; dans lequel la zone de détection de l'analyte (5) comprend, successivement, dans la direction de diffusion capillaire (2), un deuxième anticorps spécifique de l'analyte (6) immobilisé et I'analyte, ou un analogue de l'analyte, immobilisé (7) ; de telle sorte que le premier anticorps spécifique de l'analyte (4) et le deuxième anticorps spécifique de l'analyte (6) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test sandwich alors que le premier anticorps spécifique de l'analyte (4) et l'analyte, ou l'analogue de l'analyte, immobilisé (7) permettent la détermination de l'analyte dans l'échantillon liquide par un test de compétition. 6. Dispositif selon la revendication 5, caractérisé en ce que le premier anticorps spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, est immobilisé à l'état sec mais libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1). 7. Dispositif selon l'un quelconque des revendications 5 ou 6 dans lequel le premier anticorps spécifique de l'analyte (4) est conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. 8. Dispositif selon l'une des revendications précédentes dans lequel 30 le moyen de diffusion capillaire (1) est une bandelette chromatographique fixée sur un support rigide. 9. Dispositif selon l'une des revendications précédentes dans lequel le moyen de diffusion capillaire (1) est intégré dans un support de préhension (8) pourvu d'au moins une fenêtre d'observation (9) permettant d'observer la zone de détection (5). 10. Procédé de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comprenant les étapes suivantes: a) on dispose d'au moins un support solide poreux pourvu d'au moins une zone de collection et d'une zone de détection, au moins un réactif de capture étant immobilisé dans la zone de détection, b) on dépose, séparément dans la zone de collection du support solide poreux au moins un fois l'échantillon liquide, c) on attend un temps suffisant pour la migration par diffusion capillaire de l'échantillon liquide jusqu' à la zone comportant le réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, d) on attend un temps suffisant pour la migration par diffusion capillaire du réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et de l'échantillon liquide jusqu'à la zone de détection, e) on observe la mesure dans laquelle le réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable se fixe dans la zone de détection pour la détermination de I'analyte simultanément par un test sandwich et par un test de compétition. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est immobilisé. 12. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le réactif de liaison spécifique conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable est ajouté extemporanément sous forme de réactif sous forme liquide simultanément ou préalablement au dépôt de l'analyte. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, caractérisé en ce que à l'étape a) la zone de détection comprend au moins deux réactifs de capture, au moins l'un des deux étant l'analyte ou un analogue de l'analyte immobilisé et au moins l'un des deux étant un réactif de liaison spécifique de l'analyte immobilisé. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, caractérisé en ce qu'on dispose de deux supports solides, l'un permettant la détermination de l'analyte par un test sandwich et l'autre par un test de compétition. 15. Procédé de détermination d'un analyte dans un échantillon 5 liquide comprenant les étapes suivantes: a. on dispose d'un dispositif selon l'une des revendications précédentes; b. on dépose un échantillon liquide dans la zone de dépôt (3) du moyen de diffusion capillaire (1) du dispositif de l'étape (a) ; c. on attend un temps suffisant pour la migration par diffusion capillaire de l'échantillon liquide depuis la zone de dépôt (3) jusqu'à la zone de détection (5) entraînant le premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (4) ; d. on observe la mesure dans laquelle le premier anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (4) se fixe dans la zone de détection (5) pour la détermination de l'analyte simultanément par un test sandwich et par un test de compétition. 16. Procédé de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide selon la revendication 5 dans lequel à l'étape b) on dépose un échantillon liquide et un diluant dans la zone de dépôt (3) du moyen de diffusion capillaire (1) du dispositif de l'étape (a). 17. Kit comportant deux supports solides, pourvus chacun d'au moins une zone de collection et d'une zone de détection, au moins un réactif de capture étant immobilisé dans la zone de détection, caractérisé en ce que l'un permet la détermination de l'analyte par un test sandwich et l'autre la détermination du même analyte par un test de compétition.