Brevet FR2883183A1 — publié le 20060922

L'invention concerne le domaine de la cosmétique et de la pharmaceutique, notamment le domaine de la dermatologie. La présente invention a pour objet l'utilisation d'un extrait de noyaux de dattes, en tant qu'agent antioxydant, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique. Ledit extrait ou la composition le contenant étant, entre autres, destinés à prévenir ou traiter les dommages cellulaires provoqués par les radicaux libres induits, notamment, par les polluants atmosphériques et/ou par le rayonnement ultraviolet. La peau est un organe de protection essentiel à notre organisme. Directement en contact avec l'environnement extérieur, elle est soumise constamment à diverses agressions comme, par exemple, l'air, les polluants atmosphériques et les rayonnements visibles ou ultraviolets. En effet, ces diverses agressions et, tout particulièrement les rayonnements UV entraînent la formation de radicaux libres. D'autres facteurs d'origine extérieure, tels que la pollution et les agressions de toutes sortes peuvent agir de façon néfaste sur la peau. On sait, par exemple, que la toxicité des polluants atmosphériques, notamment des polluants gazeux tels que le dioxyde de souffre, l'ozone et les oxydes d'azote, est liée en grande partie à leur pouvoir initiateur de radicaux libres. Les cellules de la peau, en contact direct avec le milieu extérieur, sont donc particulièrement exposées à ces polluants. Les radicaux libres sont des sources de phénomènes d'oxydation. Ce sont des constituants chimiques très réactionnels qui interviennent de manière transitoire dans de nombreux mécanismes cellulaires. Les radicaux libres photo-induits proviennent en grande partie de l'oxygène moléculaire. Etant donné son abondance dans l'organisme et sa capacité à accepter les électrons, les radicaux libres qui en dérivent sont les plus nombreux à participer aux réactions radicalaires. On peut ainsi dénombrer parmi ces espèces réactives: l'oxygène singulet (produit de l'excitation de l'oxygène moléculaire par les photons) ; le radical anion superoxyde (produit de l'addition d'un électron sur l'oxygène moléculaire) ; le peroxyde d'hydrogène (non radicalaire mais qui peut donner lieu à la production de radicaux hydroxyles) ; le radical hydroxyle (très oxydant donc très réactif et très toxique pour les cellules). Ces radicaux libres, s'ils sont incontrôlés, peuvent rapidement réagir avec des molécules avoisinantes donnant naissance à des produits toxiques pouvant interférer avec le fonctionnement physiologique normal des cellules. Par les phénomènes d'oxydation et 2883183 -2 les attaques radicalaires qu'ils engendrent, les radicaux libres vont produire un stress oxydant et provoquer des dégâts importants. Ils vont, par exemple, provoquer des dommages au niveau des membranes cellulaires; ils vont altérer des macromolécules (péroxydation lipidique, carbonylation des protéines) et engendrer des mutations et des ruptures au niveau des brins d'ADN, ce qui peut conduire à la mort de la cellule. Ils sont ainsi souvent associés aux phénomènes de nécrose des tissus. La présence de ces radicaux libres dans la peau est probablement responsable d'un grand nombre d'effets indésirables. Ainsi, de nombreux phénomènes d'inflammation sont dus à la présence de ces radicaux libres particulièrement réactifs. Une autre conséquence est, par exemple, un vieillissement prématuré au niveau de la peau, le photovieillissement, accélérant entre autres les phénomènes de détérioration de l'élastine, du collagène ou de la fibronectine. Par ailleurs, ces dommages peuvent parfois aboutir à des processus de cancérisation. Il est donc important de mettre au point des systèmes capables de lutter activement contre ces réactifs et leurs conséquences. L'organisme possède des mécanismes enzymatiques de défense contre ces radicaux libres, trois enzymes constituent les clés de voûte de cette protection: la famille des superoxydes dismutases (SOD) qui dismutent l'ion superoxyde en peroxyde d'hydrogène; les catalases, généralement confinées dans les peroxisomes, accélérant la réaction spontanée qui transforme le peroxyde d'hydrogène en oxygène et en eau, et la glutathion peroxydase, enzyme cytosolique séléniée réduisant le peroxyde d'hydrogène en présence de glutathion. Cependant ces systèmes de défenses antioxydantes s'avèrent souvent insuffisants devant les nombreux stress et agressions extérieures auxquels sont soumis les organismes et la peau en particulier. De nombreux actifs ont déjà été mis au point afin de combattre activement ces radicaux libres et les réactions d'oxydation qu'ils engendrent. Afin de limiter les phénomènes d'oxydation il est connu d'appliquer sur la peau des substances actives présentant des propriétés de capteurs de radicaux qui stimulent l'activité d'enzymes spéciales de réparations et de détoxication cellulaire. On peut notamment citer, par exemple, les vitamines A, C ou E, les polyphénols (notamment ceux d'origine végétale), ou encore la quinoléine et ses dérivés. Cependant, ces actifs ne permettent pas de résoudre ces problèmes de manière réellement satisfaisante, et de nombreux progrès restent encore à faire afin de pouvoir disposer d'actifs présentant des propriétés véritablement convenables. De nombreux acides aminés ont aussi été utilisés en tant qu'agent antioxydant. Cependant, ils présentent le désavantage d'être très rapidement métabolisés dans les cellules et possèdent ainsi une très faible efficacité. Il subsiste donc toujours un besoin d'actif ayant une action réellement efficace en tant qu'agent antioxydant et/ou en tant qu'agent anti-radicalaire tout en ayant en plus une action antiinflammatoire. La présente invention vise à combler cette lacune et a pour principal objectif de fournir un nouveau principe actif antioxydant et/ou antiradicalaire. Les inventeurs ont réussi à sélectionner des substances particulières présentant des propriétés remarquables lorsque celles-ci sont appliquées sur la peau. Ils ont ainsi découvert, de manière inattendue, qu'un extrait de noyaux de dattes possède des effets particulièrement efficaces contre les radicaux libres. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention a pour objet l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un extrait de noyaux de dattes en tant qu'agent antioxydant et/ou anti-radicalaire, seul ou en association avec au moins un autre agent actif, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique. L'utilisation d'un extrait de noyau de dattes dans le domaine de la cosmétique est déjà connue, comme par exemple dans les brevets FR 2828399 et FR 2841132, où cet extrait est décrit pour son activité contre les manifestations cutanées du vieillissement. Cependant, l'activité antiradicalaire et/ou anti-inflammatoire de cet extrait n'a jamais été décrit. Un aspect essentiel de l'invention est l'utilisation d'au moins un extrait de noyaux de dattes tel que défini précédemment, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, à usage topique, destinée, notamment, à obtenir une activité protectrice vis-àvis des espèces réactives de l'oxygène. Lesdits extraits étant avantageusement utilisés en tant qu'agent antioxydant et/ou en tant qu'agent antiradicalaire. La datte est le fruit du palmier-dattier Phoenix dactylifera L. appartenant à la famille des Arecaceae. C'est une baie allongée verte qui brunit en mûrissant, appréciée pour ses valeurs gustatives: sa pulpe charnue est riche en sucres (75 à 80 %) et contient -.4- également des sels minéraux, des oligo-éléments (fer, magnésium phosphore) ainsi que des vitamines. Le noyau est la partie du fruit, c'est-à-dire la datte, constituée par une enveloppe ligneuse qui a comme rôle de protéger la graine. Le terme "extrait" désigne toute substance isolée, obtenue à partir de la matière première que constituent les noyaux de dattes. L'extrait de noyaux de dattes doit s'entendre comme extrait de noyaux de baie d'au moins un végétal appartenant à l'espèce Phoenix dactylifera L. Par agent anti-radicalaire, on entend tout composé capable de piéger les radicaux libres. Cet actif est, en effet, capable de bloquer les réactions en chaînes des radicaux libres avant les étapes ultimes de dégradation des constituants biologiques de la peau, on parle alors de composés antioxydants. L'extrait selon l'invention sera tout particulièrement utilisé afin de prévenir ou de traiter les dommages cellulaires provoqués par les radicaux libres. Il sera aussi destiné à lutter contre les dommages esthétiques provoqués sur la peau et/ou les phanères par les radicaux libres. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée afin de préparer l'extrait selon l'invention. Ainsi, on peut, par exemple, dans une première étape, broyer des noyaux lavés et séchés issus des fruits d'au moins un végétal appartenant à l'espèce Phoenix dactylifera L. à l'aide d'un broyeur à plante. Cette opération est réalisée par tout type de broyeur communément utilisé pour traiter des végétaux: broyeur à marteaux, à broches ou à fléaux. L'extraction proprement dite est réalisée sous agitation, par un solvant organique ou un mélange de solvant, à une température ambiante ou à une température inférieure ou égale à celle de l'ébullition du solvant. Comme type de solvant, on peut citer les solvants chlorés (chloroforme, chlorure de méthylène..), les alcools, les esters, les cétones, les hydrocarbures... Les fractions organiques sont réunies pour être traitées, c'est-à-dire filtrées et évaporées. Si nécessaire une étape de lavage ou une étape de décoloration/déodorisation pourra être envisagée. L'extrait huileux obtenu peut aussi être fractionné par cristallisation dans un solvant. L'extrait selon l'invention peut être avantageusement utilisé dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, en tant qu'agent photo-protecteur et, plus particulièrement, en tant qu'agent photo-protecteur dit secondaire . On distingue, en effet, les agents photo-protecteurs primaires des agents photo- protecteurs secondaires. Les agents photo-protecteurs primaires sont des substances qui exercent un pouvoir physique: ils sont en mesure d'absorber les rayonnements UV et de les restituer sous forme de chaleur afin de protéger la peau. Les agents photo-protecteurs secondaires sont des substances qui ont plutôt un effet biologique; ce sont, par exemple, les agents de type antioxydant qui interrompent les chaînes de réactions photo-chimiques qui sont déclenchées lorsque le rayonnement UV pénètre dans la peau. Par ses activités particulières, les extraits selon l'invention pourront être utilisés avantageusement dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, à usage topique, destinée, notamment, à protéger la peau et les phanères contre tous les types d'agressions extérieures et à lutter de manière préventive et/ou curative contre les effets néfastes des UV et/ou de la pollution sur la peau. En effet, par son activité anti-radicalaire et anti-oxydante, l'extrait selon l'invention permet de protéger la peau contre tous types d'agressions extérieures. Ainsi il peut être destiné à protéger les substrats kératiniques et, plus particulièrement, à protéger la peau et/ou les phanères contre tous les types d'agressions extérieures. L'utilisation de cet extrait ou d'une composition le contenant, va permettre aux substrats kératiniques d'être protégés et de mieux résister au stress que produit l'environnement. On entend, par le terme "agression extérieure", les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums. Par pollution, on entend aussi bien la pollution extérieure , due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution intérieure qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldehydes), ou bien encore la fumée de cigarette. L'extrait selon l'invention permettra tout particulièrement de protéger la peau et/ou les phanères des agressions qui aboutiraient à la formation de radicaux libres et créeraient ainsi un stress oxydatif. Ainsi, l'extrait selon l'invention permettra de lutter contre les dommages esthétiques provoqués sur la peau et/ou les cheveux par les radicaux libres induits, notamment, par les polluants atmosphériques et par le rayonnement. L'extrait pourra être utilisé dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter les dommages cellulaires provoqués par les radicaux libres induits, entre autres, par les polluants atmosphériques et/ou par le rayonnement ultraviolet. Plus généralement, par son action antioxydante, l'extrait selon l'invention pourra être utilisé dans ou pour la fabrication d'une composition destinée à protéger la peau contre le stress, notamment contre le stress oxydatif. Par ailleurs, par son activité anti-radicalaire et anti-oxydante, l'extrait selon l'invention permettra avantageusement de prévenir et de lutter contre les phénomènes inflammatoires, ceux-ci étant directement liés à la formation de radicaux libres aux seins de l'organisme. Ainsi, l'extrait selon l'invention pourra être utilisé en tant qu'agent antiinflammatoire et permettra de lutter contre les manifestations cutanées de l'inflammation résultant, entre autres, des agressions extérieures. Selon un autre aspect, l'invention concerne une composition cosmétique et/ou dermatologique ayant une action anti-oxydante caractérisée en ce qu'elle contient, dans un milieu acceptable, comme principe actif, au moins un extrait tel que défini précédemment. Selon une méthode de réalisation particulièrement avantageuse de l'invention, la composition contient un extrait de noyaux de dattes tel que défini précédemment. Il est bien entendu que l'extrait selon l'invention peut être utilisé seul ou en association avec au moins un autre agent actif. La composition contenant le peptide selon l'invention peut être une composition cosmétique ou dermatologique ou pharmaceutique. Préférentiellement selon l'invention, la composition est une composition cosmétique car elle est destinée à améliorer l'aspect et les performances cutanées générales de l'individu qui en fait usage. La composition selon l'invention est préférentiellement une composition cosmétique et/ou dermatologique adaptée à l'administration par voie topique cutanée comprenant un milieu cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. L'invention concerne, en particulier, une composition cosmétique destinée à obtenir une action antioxydante et/ou une action anti-radicalaire lorsqu'elle est appliquée sur la peau. Il est bien évident que l'invention s'adresse aux mammifères en général et plus particulièrement aux êtres humains. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, les extraits précités selon 30 l'invention sont, préalablement à leur utilisation, solubilisés dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables, classiquement utilisés par l'homme du métier, comme l'eau, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, les extraits précités sont, préalablement à leur utilisation, solubilisés dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans, ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. Il est bien entendu évident que l'extrait selon l'invention peut être utilisé seul ou bien en association avec au moins un autre agent actif, dans ou pour la préparation d'une 10 composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique. La quantité efficace de principe actif correspond à la quantité nécessaire afin d'obtenir le résultat désiré. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait précité est présent dans les compositions de l'invention en une quantité représentant entre 0,0001 % et 20 % environ, et préférentiellement en une quantité représentant entre 0,01 % et 10 % , environ, par rapport au poids total de la composition finale. Quelle que soit la forme de l'invention, la composition selon l'invention peut être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau (sur toute zone cutanée du corps), les cheveux, les ongles ou les muqueuses. Selon le mode d'administration, la composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées. Préférentiellement, les compositions selon la présente invention se présenteront sous une forme galénique adaptée à l'administration par voie topique cutanée. Elles couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau, les poils ou les cheveux. Ces compositions peuvent notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse; d'une émulsion huile-dans-eau, eaudans-huile ou émulsions multiples; elles peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les cheveux. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un shampooing, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. Pour l'injection, la composition selon l'invention peut se présenter sous forme de lotion aqueuse, huileuse ou sous forme de sérum. Pour l'application sur les yeux, la composition peut se présenter sous forme de gouttes et pour l'ingestion, elle peut se présenter sous forme de capsules, de granulés, de sirops ou de comprimés. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif usuellement utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des antioxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des actifs cosmétiques ou pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. Dans tous les cas, l'homme du métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leurs quantités, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Les compositions selon l'invention trouvent une application notamment comme compositions cosmétiques ou pharmaceutiques antioxydantes pour la peau, les muqueuses et/ou les semi-muqueuses, mais aussi comme composition cosmétique pour les cheveux et/ou les poils. Elles trouvent une application toute particulière en tant que produit de protection et/ou de soin de la peau. La composition selon l'invention est, préférentiellement, une composition capable, capable de protéger la peau contre les agressions extérieures provoquées, notamment, par l'action du rayonnement solaire ou par d'autres agents physiques, chimiques ou biologiques, en agissant principalement par suppression de la formation de radicaux libres oxygénés et des réactions qu'ils entraînent. On peut également envisager une application dans le domaine des compositions de maquillage de la peau du visage et du corps, tels que les rouges à lèvres, les fonds de teint, les crèmes teintées, les sticks anticernes, les compositions anti-solaires ou de bronzage artificiel. Les compositions, objet de l'invention, trouvent leur application dans grand nombre de traitements notamment cosmétiques ou dermatologiques, et elles peuvent constituer une composition cosmétique, notamment pour le traitement, la protection, le soin, le démaquillage et/ou le nettoyage de la peau, des lèvres et/ou des cheveux, et/ou pour le maquillage de la peau, des lèvres, des cils et/ou du corps. La composition selon l'invention peut également consister en des préparations solides comprenant également des savons ou des pains de nettoyage. La composition peut être aussi conditionnée sous forme d'une composition pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression. La composition peut être aussi à usage bucco-dentaire, comme par exemple une pâte de dentifrice. La composition de l'invention peut aussi être une composition cosmétique destinée à une administration par voie orale. Pour une administration par voie orale, la composition selon l'invention peut se présenter sous toutes formes adaptées, particulièrement sous forme d'une solution buvable, d'un sirop, d'un comprimé, d'une dragée, d'une gélule ou encore d'un aliment ou complément nutritionnel. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de soin cosmétique destiné à lutter contres les dommages inesthétiques provoqués sur la peau et/ou les cheveux par les radicaux libres, induits notamment par les polluants atmosphériques et le rayonnement ultraviolet; ce procédé de soin cosmétique consistant à appliquer sur la surface de la peau une quantité efficace de la composition telle que définie précédemment afin obtenir l'action désirée. La présente invention concerne, de la même manière, un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la peau et/ou les phanères contre tous types d'agressions extérieures. Ce procédé consistant à appliquer sur la peau ou les cheveux une composition telle que définie précédemment. 2883183 -Io- La présente invention est aussi relative à un procédé de soin cosmétique de la peau permettant de lutter contre, et/ou de prévenir, l'inflammation cutanée, consistant à appliquer sur la peau ou les cheveux une composition telle que définie précédemment. Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. Le procédé de traitement cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre notamment en appliquant les compositions cosmétiques telles que définies ci-dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions, par exemple: application de crèmes, de gels, de sérums, de lotions, de laits, de shampooings ou de compositions anti-solaires, sur la peau ou sur les cheveux, ou encore, application de dentifrice sur les gencives. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. Exemple 1: Procédé d'obtention de l'extrait de noyaux de dattes selon l'invention. Une quantité de 1 kg de noyaux de dattes est lavé à l'eau, puis séché à l'air libre ou dans une étuve à une température de 50 C. Les noyaux sont ensuite broyés. Cette opération est réalisée par un broyeurs à marteaux. Les noyaux ainsi broyés sont, par la suite, extraits sous agitation par un solvant organique, l'extraction est réalisée à température ambiante avec un de gaz carbonique à l'état supercritique. Un solvant chloré (chlorure de méthylène..) est utilisé. Cette opération est réalisée plusieurs fois, puis les fractions organiques sont réunies afin d'être traitées. Les fractions organiques sont filtrées et évaporées. Une étape de lavage à l'eau pure additionnée d'acide, est réalisée; cette opération est effectuée directement après évaporation et reprise de l'extrait huileux dans un solvant non mixible à l'eau. Puis, une étape de décoloration-désodorisation, par des charbons, est effectuée. L'extrait huileux ainsi obtenu est fractionné par cristallisation dans un solvant (alcool). L'extrait est mis en solution à 3 / dans un solvant propre à une utilisation cosmétique (un glycol). Exemple 2: Mise en évidence de l'effet anti-oxydant de l'extrait de noyaux de dattes selon l'invention sur des fibroblastes. 1. Protocole expérimental: Des fibroblastes primaires, à un passage compris entre P6 et P13, ont été ensemencés sur des boîtes de diamètre 100 à environ 200 000 cellules par boîte dans 8 mL de milieu complet (1 g/L). Une fois la confluence désirée atteinte, les cellules sont traitées suivant différentes conditions: une condition contrôle (aucun traitement des cellules n'est effectué) ; traitements des cellules avec une composition contenant l'extrait de noyaux de dattes formulé à 1 % ; traitements des cellules avec une composition placebo, c'est-à-dire ne contenant pas d'actif. Les boîtes sont ensuite remises en culture, pendant 24 heures. Ces cellules sont irradiées, ou non, par des UVA à 4 J/cm2. Pendant le temps d'irradiation, les boîtes sont traitées avec du PBS seul ou bien avec le produit à tester ou le placebo, dilué dans du PBS. Puis les boites sont de nouveaux traitées et remises en culture. Six conditions sont ainsi réalisées: Conditions Traitement des boites Présences Traitement des boîtes avant irradiation d'irradiations après irradiation a. Contrôle (CTR) - 6 h avec du milieu de _ - 6 h avec du milieu de culture Absence d'irradiation, culture - remise en culture PBS seulement - remise en culture 24 h. _ pendant 24 h. _pendant b. Placebo à 1% (Pi) 6 h avec le placebo Absence d'irradiation, - 6 h avec le placebo -remise en culture PBS seulement - remise en culture pendant 24 h. pendant 24 h. c. Actif à 1% (Act) - 6 h avec l'actif Absence d'irradiation, - 6 h avec l'actif remise en culture PBS seulement -remise en culture pendant 24 h. pendant 24 h. d. UVA Contrôle - 6 h avec du milieu de Irradiations au UVA - 6 h avec du milieu de (UVA CTR) culture dans du PBS culture - remise en culture - remise en culture pendant 24 h. pendant 24 h. e. UVA Placebo à 6 h avec du milieu de Irradiations au UVA - 6 h avec du milieu de 1% (UVA Pl) culture dans du PBS culture - remise en culture - remise en culture pendant 24 h. _ pendant 24 h. f. UVA Actif à 1% - 6 h avec du milieu de Irradiations au UVA - 6 h avec du milieu de (UVA Act) culture dans du PBS culture _ remise en culture - remise en culture pendant 24 h. pendant 24h. Les échantillons à tester sont préparés en récupérant toutes les cellules des boîtes. Les traitements sont arrêtés en retirant le milieu de culture (par aspiration) puis les boîtes sont rincées avec 5ml de PBS froid. Les cellules sont récupérées par lyse avec un tampon adéquat contenant des inhibiteurs de protéases, puis elles sont placées à -80 C. Afin - 12 -d'extraire les protéines, les tubes contenant les cellules sont décongelées à 4 C et trois cycles d'azotes (congélation- décongélations) sont réalisés. Les extraits protéiques sont finalement centrifugés à 10000 rpm durant 10 min à 4 C afin de ne récupérer que le surnageant. Un dosage de protéines par BCA est effectué ( Kit BCA de Pierce) afin de standardiser tous les échantillons à la même concentration. II. Mise en évidence de l'activité de la Super Oxyde Dismutase: La Super Oxyde Dismutase (SOD) est un système enzymatique qui assure une protection efficace contre les radicaux libres. Cette enzyme catalyse, en effet, la dismutation d'un radical libre, l'anion superoxyde, en peroxyde d'hydrogène. Ce peroxyde d'hydrogène sera éliminé par la catalase. Le principe de ce test est basé sur une migration des protéines totales d'un extrait cellulaire, sur un gel de polyacrylamide (gel page natif), qui sera ensuite coloré afin de permettre la mise en évidence de l'activité de la SOD. Les échantillons à tester, correspondant aux conditions décrites précédemment, sont déposés sur un gel de polyacrylamide à 8 ro et soumis à une électrophorèse durant 2 heures à 100 V. A la fin de la migration, le gel est coloré par un mélange de NBT (Nitrobleu de tetrazolium) et de riboflavine. L'absence de coloration démontre la présence d'une activité SOD. La riboflavine, en présence de lumière, forme un anion superoxyde pris en charge par le NBT et résultant en une coloration du gel en violet. En présence de la SOD, l'anion superoxyde sera dégradé, et la coloration violette ne se fera donc pas. Les bandes achromatiques obtenues peuvent ensuite être quantifiées par rapport à leur intensité. Le tableau ci-dessous illustre le résultat de la quantification de l'intensité des bandes, résultant de l'activité de la SOD, en fonction des différentes conditions d'étude. Conditions d'étude % d'intensité des bandes achromatiques a. CTR 100 b. Pl 106.86 c. Act 141.94 d. UVA CTR 133.71 e. UVA Pl 123.43 f. UVA Act 160. 95 - 13 - Les résultats obtenus démontrent qu'en présence de l'extrait de noyaux de dattes selon l'invention l'activité de la SOD augmente. L'intensité des bandes achromatiques, représentative de l'activité de la SOD, double même lorsque l'actif est appliqué sur des cellules ayant subi une irradiation aux UVB, par rapport aux cellules n'ayant pas reçu l'actif. III. Dosage de l'activité Catalase: La Catalase est une des enzymes les plus importantes intervenant dans le système de défense contre les radicaux libres. C'est un puissant antioxydant cellulaire. Elle agit en réduisant le peroxyde d'hydrogène (H2O2), produit par la SOD, en oxygène et en eau (02 et H2O). L'étude de l'activité de la catalase s'effectue par des mesures spectrophotométriques. L'activité, présente dans l'échantillon, est calculée en mesurant la vitesse de disparition du peroxyde d'hydrogène. La mesure de l'activité de la catalase s'effectue sur les échantillons dont les différentes conditions sont décrites ci-dessus; ces échantillons étant traités avec l'extrait selon l'invention ou avec le placebo. Ils sont soumis, ou pas, à un rayonnement UVA. La cinétique de disparition de l'H2O2 dans l'échantillon, dilué dans un tampon phosphate, est mesurée à une longueur d'onde de 240 nm; le zéro aura préalablement été effectué avec un tampon phosphate à 50 mM, puis la concentration du substrat (H2O2), dans ce même tampon, aura été ajustée à 14 mM (ce qui correspond à une absorbance comprise entre 0,52 et 0,55). Le tableau ci-dessous illustre le résultat des mesures de l'activité de la catalase en fonction des différentes conditions d'étude. Activité de la catalase % d'augmentation par rapport Conditions d'étude ( mol/rnin/g) aux conditions contrôles a. CTR 9492 - b. Pl 12482 + 31.50 c. Act 14896 + 56.93 d. UVA CTR 7425 - e. UVA P1 10928 + 47.17 f. UVA Act 14063 + 89.4 - 14 - Cette étude met en évidence une augmentation de l'activité de la catalase lorsque les cellules sont traitées avec l'extrait de noyaux de dattes par comparaison avec les cellules non traitées et avec par comparaison avec les cellules traitées le placebo. Cette augmentation est encore plus significative lorsque les cellules ont subi un traitement avec des UVA. IV. Dosage de la peroxydation lipidique: Parmi les conséquences néfastes majeures causées par le stress oxydatif, on peut citer les dommages provoqués aux macromolécules telles les lipides et, plus particulièrement, les phénomènes de péroxydation des lipides. Cette péroxydation est le résultat d'un mécanisme d'addition de radicaux libres sur les acides gras causant ainsi des fragmentations ou des altérations de sa structure. Le dosage de la peroxydation lipidique permet donc de quantifier les dégâts causés par le stress oxydatif et/ou de quantifier la protection contre ce stress. Le principe de ce dosage est basé sur la formation d'un chromogène de couleur rose absorbant à 532 nm. Ce composé est formé par l'association, en milieu acide et à chaud, d'une molécule de malonedialdéhide (MDA), produite par péroxydation lipidique, avec deux molécules d'acides thiobarbiturique (TBA). La quantité de MDA produite est déterminée par une lecture au spectrophotomètre; cette quantité de MDA est proportionnelle au phénomène de péroxydation lipidique. Le dosage de la peroxydation lipidique a été effectué sur les cellules dans les différentes conditions d'étude précédemment décrite. Le tableau ci-dessous illustre le résultat des mesures de la quantité de MDA obtenue en fonction des différentes conditions d'étude. Conditions d'étude Quantité de MDA % d'inhibition par rapport aux (pg/mg de protéines) conditions contrôles a. CTR 526.67 - b. PI 493.9 - 6, 22 % c. Act 405.3 - 23,04 % d. UVA CTR 713.25 - e. UVA Pl 428.65 - 39,9 % f. UVA Act 249.9 - 64,96 % - 15 - Cette étude met en évidence une inhibition du phénomène de péroxydation lipidique lorsque les cellules sont traitées avec l'actif par comparaison avec les cellules non traitées et/ou avec par comparaison avec les cellules traitées avec le placebo. Cette inhibition est encore plus significative lorsque les cellules ont subi un traitement avec des UVA. V. Conclusion La SOD et la catalase sont des systèmes enzymatiques spécialisés dans la protection des cellules contre les dommages occasionnés par les radicaux libres. Ainsi, une augmentation de l'activité de la SOD et de la catalase résulte d'une activation du système de protection cellulaire existant naturellement, cette activation permettant une meilleure protection contre les stress oxydants. Ces tests nous permettent donc de démontrer que l'extrait de noyaux de dattes selon l'invention agit en tant qu'agent antioxydant et antiradicalaire. Ces conclusions sont, par ailleurs, confortées par l'évaluation des phénomènes de péroxydation lipidique. Les résultats obtenus démontrant en effet que l'extrait selon l'invention permet de diminuer significativement les phénomènes de péroxydation lipidique. Les extraits selon l'invention possèdent ainsi un important effet protecteur contre les effets néfastes des radicaux libres. Exemple 3: Préparation de compositions. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. 1-Crème protection solaire Noms commerciaux ' I NomsINCI % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Pemulen TRI Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate 0.40 Crosspolymer Glycerine Glycerin 3.00 Nipastat Sodium Sodium Methylparaben (and) Sodium 0.15 Ethylparaben (and) Sodium Butyl paraben (and) Sodium Propylparaben (and) Sodium Isobutylparaben PHASE B Parsol MCX Ethylhexyl Methoxycinnamate 7.50 Yoms ommei ciaû k'r ' . oms'INCIe massique Eusolex 4360 Benzophenone-3 3.00 Parsol 1789 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2.00 Myritol 318 Caprylic/Capric Triglyceride 4. 00 Emulgade SEV Hydrogenated Palm Glycerides (and) 5.00 Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol Propylparaben Propylparaben 0.15 Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1.00 Extrait de l'exemple 1 Phoenix Dactylifera (Date) Seed Extract 2,50 PHASE C TEA I Triethanolamine 0.20 PHASE D Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément à une température comprise entre 70 C et 75 C. La phase B est émulsionnée dans A sous agitation. La phase C est ajoutée, à 45 C, en augmentant l'agitation. La phase D est ensuite additionnée lorsque la température se situe en dessous de 40 C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25 C sous vive agitation. 2- Stick labial protecteur solaire oms commerciaux fi,+* 1:"? , M yy., ry. 3y.#^ i rAÉ, .. oms c. massique Lanoline Lanolin (or) Lanolin Alcohol 4,00 Cetiol SB45 Butyrospermum Parkii ( Shea Butter 0,50 Myristate d'isopropyle Isopropyl Myristate 9,00 Cire cerabel S60 Synthetic Beeswax 5,00 Cire de jojoba hydrogénée Jojoba Wax 1,50 Amerlate P Isopropyl Lanolate 3,00 Huile de vaseline AAB2 Paraffinum Liquidum qsp (Minerai Oil) :Noms commerciaux + Noms Il 'y Cl % massique- Paraffine Paraffin 28,00 Vaseline blanche Paraffinum Liquidum 24,50 Parsol MCX Ethylhexyl Methoxycinnamate 5,00 Parsol 1789 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2,00 Propylparaben Propylparaben 0,15 Vitamine E naturelle Tocopherol 0,40 Extrait de l'exemple 1 Phoenix Dactyliféra (Date) Seed 1,50 Extract Parfum Parfum ( Fragrance) 1,00 Tous les ingrédients sont fondus et mélangés à 70 C. L'actif et la vitamine E sont ensuite délicatement ajoutés. Le mélange est coulé dans un moule. -18-REVENDICATIONS: 1. Utilisation d'une quantité efficace d'au moins un extrait de noyaux de dattes en tant qu'agent antioxydant et/ou anti-radicalaire, seul ou en association avec au moins un autre agent actif, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique. 2. Utilisation d'une quantité efficace d'au moins un extrait de noyaux de dattes, dans ou pour la fabrication d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, destinée à obtenir une activité protectrice vis-à-vis des espèces réactives de l'oxygène et/ou destinée à prévenir ou traiter les dommages cellulaires provoqués par les radicaux libres. 3. Utilisation d'une quantité efficace d'au moins un extrait de noyaux de dattes, dans ou pour la fabrication d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique destinée à lutter contre les dommages esthétiques provoqués sur la peau et/ou les phanères par les radicaux libres. 4. Utilisation d'une quantité efficace d'au moins un extrait de noyaux de dattes, dans ou pour la fabrication d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, en tant qu'agent photo-protecteur et/ou destinée à protéger la peau et les phanères contre tous les types d'agressions extérieures. 5. Utilisation d'une quantité efficace d'au moins un extrait de noyaux de dattes, dans ou pour la fabrication d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, en tant qu'agent anti-inflammatoire. 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que l'extrait est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquem.ent acceptables comme l'eau, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. 7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisée en ce que l'extrait est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans, ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. 8. Procédé de soin cosmétique destiné à lutter contres les dommages inesthétiques provoqués sur la peau et les cheveux par les radicaux libres caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau ou les cheveux un extrait tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 7. 9. Procédé de soin cosmétique destiné à protéger la peau et les phanères contre les agressions d'origines extérieures; et/ou destiné à lutter contre l'inflammation cutanée, caractérisé en ce que l'on applique sur la peau un extrait tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 7. 10. Procédé de soin cosmétique destiné à lutter contre l'inflammation cutanée, caractérisé en ce que l'on applique sur la peau un extrait tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 7.