Brevet FR2878959A1 — publié le 20060609

Procédé de détermination de la maturation et le cas échéant du sexe d'un bivalve marin tel qu'une huître. La présente invention concerne un procédé de détermination de la maturation et le cas échéant du sexe d'un bivalve marin tel qu'une huître. L'élevage d'huîtres creuses représente une activité aquacole très importante en France. Une partie croissante de ces élevages dépend de la production de jeunes huîtres (ou naissain) en écloserie. Afin de mettre en oeuvre une reproduction contrôlée et réaliser des croisements entre individus, les producteurs de naissain 1s (ou écloseurs) sont amenés à devoir déterminer l'état de maturation et le sexe des huîtres qui leur servent de géniteurs. Un problème important est qu'il n'existe à l'heure actuelle que des méthodes intrusives voire le plus souvent destructives pour examiner l'état de maturation et déterminer le sexe de l'huître. Ainsi, pour déterminer le sexe d'un individu, on réalise actuellement une biopsie, opération délicate et fastidieuse à mettre en oeuvre qui, en outre, se révèle souvent incertaine voire traumatisante pour l'individu. L'état de maturation de l'animal est quant à lui souvent méconnu, et ne se révèle qu'à l'ouverture de l'animal. La présente invention a donc pour but de proposer un procédé de détermination quantitative de la maturation et le cas échéant du sexe, d'un mollusque bivalve hermétique tel qu'une huître creuse ou perlière, qui soit non intrusif, non destructeur dudit individu tout en offrant une fiabilité importante. A cet effet, l'invention a pour objet un procédé de détermination de la maturation et, le cas échéant du sexe, d'un mollusque bivalve tel qu'une huître creuse, une huître perlière, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes: soumission de chaque individu étudié à une imagerie par résonance magnétique nucléaire en vue de l'obtention d'une série d'images de l'individu étudié, et acquisition, analyse et traitement des images obtenues pour l' individu étudié pour déterminer l'état de maturation des gonades par évaluation de leur volume et, le cas échéant, le sexe dudit individu. to De manière avantageuse, l' imagerie par résonance magnétique permet de caractériser de façon non destructrice et non-invasive la gamétogenèse des huîtres en permettant la quantification du volume des gonades, ainsi que le sexe dudit individu étudié lorsqu'il est mature. En effet, de manière particulièrement avantageuse, l'imagerie par résonance magnétique (IRM) permet d'obtenir des images en deux dimensions, voire des reconstitutions en trois dimensions, d'un organe à travers toute structure calcaire comme la coquille d'un mollusque bivalve tout en offrant une résolution satisfaisante, c'est-à-dire inférieure à 1 mm, voire inférieure à 100 pm. L'IRM permet d'obtenir des signaux étroitement liés à la composition biochimique et chimique des tissus étudiés ce qui conduit à l'obtention d'images contrastées présentant des différences de niveau de gris entre les différents tissus visualisés, permettant de visualiser la structure interne dudit bivalve étudié. Ainsi, l'analyse et le traitement desdites images permettent de repérer les viscères, les branchies, le coeur, le muscle adducteur dudit bivalve, d'estimer le degré d'occupation des gonades et de déterminer (le cas échéant) le sexe, mâle ou femelle, en fonction des niveaux de gris obtenus sur lesdites images d'un même individu. Ainsi, l'analyse et le traitement des images s'effectuent sur la base de seuillages des niveaux de gris de l'ensemble des images acquises pour un même individu permettant de déterminer des indicateurs du degré de gamétogenèse et du sexe, et une comptabilisation des niveaux de gris entre ces seuils. Ainsi, on a déterminé que l'ensemble viscères-branchies-coeur se situe dans des niveaux de gris bas alors que l'ensemble muscle- gonade se situe dans les niveaux de gris plus élevés, les gonades mâles se situant dans les niveaux de gris moyens et les gonades femelles dans les niveaux de gris les plus élevés. i0 On obtient donc, selon le procédé de l'invention, un suivi routinier et individualisé de la gamétogenèse d'un individu étudié par la quantification du volume des gonades permettant d'établir un indice de maturation pour ledit individu, puis lorsque l'état mature est détecté, la détermination du sexe de l'individu de manière fiable. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l' imagerie par résonance magnétique nucléaire est réalisée selon une séquence IRM pondérée en Ti en écho de spin, le paramètre TR (temps de récupération ou recyclage) étant ajustable proportionnellement au temps de relaxation longitudinal Ti variant avec l'intensité du champ magnétique permanent. Selon un exemple de réalisation de l'invention, le champ magnétique permanent est au moins de 0,2 tesla, le paramètre TR est inférieur à 600 ms, et de préférence de l'ordre de 400 ms pour un champ magnétique permanent de 0,2 tesla. On décrira maintenant l'invention plus en détail en référence au dessin dans lequel: La figure 1 représente une série de 15 images IRM transversales d'une même huître femelle; La figure 2 représente une série de 16 images IRM transversales d'une même huître mâle, et La figure 3 représente les histogrammes des niveaux de gris des images acquises selon les figures 1 et 2. Le problème qui est posé est celui de la détermination fiable de la maturité de l'huître et de son sexe. Selon l'invention, l'imagerie par résonance magnétique (IRM) permet l'évaluation to de la gamétogenèse chez l'huître. Cependant, les images obtenues par IRM en écho de gradient, qui permettent a priori d'obtenir un meilleur rapport signal sur bruit, ne donnent pas le résultat escompté en raison de leur sensibilité aux effets de susceptibilité magnétique. C'est pourquoi la présente invention retient la combinaison de l'imagerie par résonance magnétique en écho de spin, et d'un paramètre TR (temps de récupération ou de recyclage) suffisamment court pour permettre une bonne différenciation des niveaux de gris correspondant aux différentes parties du corps de l'huître. Une valeur du paramètre TR de l'ordre de 400 ms, associée à une valeur du champ magnétique permanent de 0,2 tesla, permet d'acquérir au moins 15 images correctement contrastées du corps d'une huître creuse de 2 à 3 ansen maturation (figures 1 et 2). La figure 3 montre les nombres de pixels en fonction des niveaux de gris pour une huître mâle (carrés) et pour une huître femelle (ronds) avec un pic pour la gonade mâle et un autre pic pour la gonade femelle, les niveaux de gris pour la gonade femelle étant plus élevés que ceux de la gonade mâle. La présence d'un pic correspondant à la gonade permet donc d'apprécier le degré de maturité de l'huître, et la position du pic dans l'échelle des niveaux de gris permet de déterminer de façon fiable le sexe de l'huître. Le procédé selon l'invention est mis en oeuvre par une séquence d'acquisition d'images IRM pondérée en Ti , en écho de spin et en choisissant un paramètre TR (temps de récupération) suffisamment court pour obtenir un contraste suffisant pour différencier les différents constituants de l'huître étudiée. Le TR choisi est de l'ordre de 400 ms et le champ est alors de préférence de 0,2 Tesla. Comme on peut le voir, les images obtenues permettent une bonne différenciation des organes internes de l'individu étudié. i0 Ces images sont alors exploitées pour comptabiliser les pixels obtenus selon des niveaux de gris déterminés par rapport à des seuils. Le procédé de maturation ci-dessus décrit s'applique à toutes les espèces d'huîtres de la famille des ostréidés ainsi qu'à toutes les espèces d'huîtres perlières de la famille des ptériidés, et plus généralement à tous les mollusques bivalves. REVENDICATIONS 1. Procédé de détermination de la maturation et, le cas échéant du sexe, d'un mollusque bivalve tel qu'une huître creuse, une huître perlière, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes: soumission de l'individu étudié à une imagerie par résonance magnétique nucléaire en vue de l'obtention d'une série d'images de l'individu étudié, et acquisition, analyse et traitement des images obtenues pour l'individu étudié pour déterminer l'état de maturation des gonades par évaluation de leur volume et, le io cas échéant, le sexe dudit individu. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l' imagerie par résonance magnétique nucléaire est réalisée selon une séquence IRM pondérée en Ti en écho de spin, le paramètre TR (temps de récupération ou recyclage) étant ajustable proportionnellement au temps de relaxation longitudinal Ti variant avec l'intensité du champ magnétique permanent. 3. Procédé selon la revendication 2, 20 caractérisé en ce que le champ magnétique permanent est au moins de 0,2 tesla, et le paramètre TR est inférieur à 600 ms. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le champ magnétique permanent est de 0,2 tesla et le paramètre TR de l'ordre de 400 ms. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'analyse et le traitement des images obtenues pour l'individu étudié consistent à comptabiliser les niveaux de gris de l'ensemble des images acquises sur ledit individu entre des seuils de niveaux de gris indicateurs du degré de gamétogenèse et du sexe.