Brevet FR2876916A1 — publié le 20060428

PRODUIT IMPLANTABLE DE SURFACE FONCTIONNALISEE AU MOYEN DE DENDRIMERES A TERMINAISONS ANIONIQUES L'invention a trait à la réparation du tissu osseux. Elle concerne 5 plus particulièrement le domaine technique des biomatériaux, des implants et prothèses utilisés en chirurgie réparatrice du tissu osseux, notamment chirurgie orthopédique. Dans tout le texte, on entend par: - "produit implantable" : un dispositif médical de type implant ou 10 prothèse, une partie constitutive de ce dispositif médical, ou un dispositif assurant le maintien en place et/ou la stabilisation d'un des éléments précédemment cités, au niveau du site d'implantation; - "biomatériau" : un matériau constitutif d'un dispositif médical invasif (chirurgical ou non chirurgical) et/ou d'un produit implantable, selon les termes définis dans la classification française et européenne (classe I, IIa, IIb, III) ; ces biomatériaux sont biocompatibles, peuvent présenter des propriétés de bioactivité, de biodégradation, des propriétés biomécaniques de résistance, d'élasticité... ; - "un groupement de type phosphonate" : une séquence ionique qui comprend un groupement terminal correspondant à une base conjuguée d'un 20 groupement phosphonique P(OH)2, éventuellement associée à un cation organique ou minéral, notamment un proton (H+), - "un groupement de type carboxylate" : une séquence ionique qui comprend un groupement terminal correspondant à la base conjuguée d'un groupement carboxylique E Cu ô -0E11, éventuellement associée à un cation organique ou minéral, notamment un proton (H+). La matrice extra-cellulaire calcifiée du tissu osseux est le siège d'un remodelage permanent qui se caractérise par deux activités biologiques opposées, la formation d'os nouveau par les ostéoblastes, et la dégradation (résorption) d'os ancien par les ostéoclastes. Ce remodelage osseux assure la croissance de l'os au cours du développement de l'individu, la réparation de l'os après un traumatisme ou une fracture, le maintien qualitatif et quantitatif de la masse osseuse et l'homéostasie du calcium sérique de l'organisme. De nombreux évènements peuvent pourtant perturber cette homéostasie osseuse. Dans certains cas graves de troubles traumatiques ou pathologiques, par exemple, des fractures non consolidées, des maladies génétiques osseuses (maladie de Paget, ostéogénèse imparfaite, dysplasie fibreuse de l'os...), des malformations du squelette qui peuvent être innées ou induites (par exemple, par une activité physique néfaste ou encore à la suite d'une chimiothérapie)..., la sévérité de la perte de la substance osseuse peut se révéler telle que les capacités naturelles de l'os à se reconstituer soient insuffisantes et qu'une chirurgie réparatrice du tissu osseux (greffe de tissus ou implantation de matériaux osseux synthétiques de substitution) particulièrement lourde en soit le seul remède. Actuellement, la chirurgie réparatrice du tissu osseux concerne plus d'un million de personnes à travers le monde, et ce nombre ne cesse de croître d'année en année. Parmi les différentes techniques employées pour tenter de réparer les tissus osseux, on peut citer la greffe (autogreffe ou allogreffe) qui donne généralement de bons résultats du fait des propriétés ostéogènes intrinsèques aux greffons, mais est assortie de limites inéluctables. S'agissant de l'autogreffe, la quantité de greffons autologues est particulièrement limitée. L'allogreffe, quant à elle, est immunogène et n'est jamais exempte de risques graves d'infection. Une autre technique consiste à remplacer le tissu osseux traumatisé ou malade, dans son intégralité ou plus spécifiquement seulement la partie touchée, par un dispositif médical implantable réalisé en un biomatériau de type titane, zircone, et leurs alliages, alliage cobalt-chrome, bioverres, phosphates de calcium, carbonates de calcium, les polypeptides cellulosiques, l'alginate le polyéthylène glycol (PLG), les copolymères des acides lactiques et glycoliques (PLGA), le hyaluronate, le collagène, la gélatine, le chitosane, la fibrine, l'agarose, les acides polyacryliques et leurs dérivés, les oxydes de polyéthylène et leurs copolymères, les alcools polyvinyliques, les polyphosphazènes... Par ailleurs, pour favoriser et/ou accélérer la réhabilitation osseuse au niveau du site d'implantation, différents traitements physiques et/ou chimiques ont été imaginés pour améliorer les performances interfaciales de ces produits implantables. Par exemple, il a été proposé de fonctionnaliser la surface des produits implantables en les recouvrant de molécules bio-adhésives, de facteurs d'adhésion ou de molécules fonctionnellement analogues. US 2002/10111694 et US 6,280,760 proposent d'utiliser des séquences peptidiques de type RGD, c'est-à-dire des enchaînements peptidiques avec un motif de résidus arginine-glycine-acide aspartique, spécifiquement reconnu par les intégrines. US 2003/015385 propose de recouvrir les produits implantables d'une fine couche de chitosan. WO 98/36782 et FR 2 138 735 préconisent, quant à eux, de traiter la surface des produits implantables de façon à accentuer leur porosité et ainsi favoriser d'autant plus la pénétration du tissu. Jusqu'à présent, les perfectionnements ainsi apportés aux produits implantables ont permis tout au plus d'améliorer leurs propriétés d'ostéoconduction, c'est-à-dire leur capacité à favoriser l'attachement des cellules à leur surface, ce qui, éventuellement in fine, peut conduire à une meilleure pénétration du tissu osseux au niveau du site d'implantation. Toutefois, les résultats jusqu'alors obtenus se sont avérés souvent décevants; la formation ainsi que la reconstruction du tissu osseux requièrent une série d'évènements de grande complexité et ne se limitent aucunement à une étape d'adhésion des cellules à la surface des produits implantables. La réhabilitation du tissu osseux commence par le recrutement et la prolifération de cellules souches ostéoprogénitrices qui s'accompagne d'une différenciation cellulaire concomitante à la formation d'ostéoïdes et à la minéralisation de l'os. Le terme d'ostéoinduction résume ces différentes notions. Dans ce contexte, l'invention a pour principal objectif de proposer de nouveaux produits implantables destinés à la reconstruction osseuse, susceptibles de présenter des propriétés améliorées en terme d'ostéoinduction et, éventuellement, d'ostéoconduction. L'invention vise notamment à atteindre cet objectif en proposant des produits implantables destinés à la reconstruction osseuse qui soient capables de favoriser au moins une activité biologique participant au processus de remodelage du tissu osseux et/ou au processus de pénétration du tissu osseux, choisie parmi: la prolifération des cellules du tissu osseux et/ou leur différenciation; et/ou de modifier avantageusement les propriétés physico-chimiques d'un implant par une meilleure qualité de l'interface implant/tissu osseux et/ou par l'augmentation des capacités de nucléation des phosphates de calcium à la surface de cet implant. En particulier, l'invention vise à mettre au point un procédé, de mise en oeuvre simple, permettant de fonctionnaliser la surface des produits implantables, en vue d'améliorer leurs performances interfaciales d'ostéoinduction et, éventuellement, d'ostéoconduction. Elle a également pour vocation à s'appliquer, dans les grandes lignes, à des produits implantables réalisés dans des biomatériaux classiques au regard du domaine technique de la chirurgie réparatrice du tissu osseux. L'invention concerne donc un produit implantable de reconstruction du tissu osseux ayant au moins une surface réalisée en au moins un biomatériau et traitée de façon à favoriser une intégration dudit produit implantable en site osseux. Selon l'invention, sur cette surface, dite surface fonctionnalisée, sont immobilisés des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s). Par la suite, à des fins de simplification, ces dendrimères selon l'invention pourront être désignés par l'expression "dendrimères à terminaisons anioniques". Avantageusement et selon l'invention, l'immobilisation desdits dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) 25 anionique(s), sur ladite surface, est réalisée par adsorption. L'invention repose ainsi sur une application innovante des dendrimères à la fonctionnalisation des surfaces des produits implantables destinés à la reconstruction osseuse. En l'espèce, l'invention par l'utilisation de dendrimères à terminaisons anioniques permet d'établir, à la surface des produits implantables, un environnement favorable à la pénétration du tissu osseux en mimant la matrice extra- cellulaire de l'os et en particulier la phase matricielle de l'os, formée de fibres de collagène et de protéines associées. Dans l'os naturel, les fibres de collagène établissent des interactions avec de nombreuses protéines de la matrice extra-cellulaire et fournissent ainsi une surface inductrice de nucléation et/ou de formation de cristaux de phosphates de calcium apatitiques. Parmi les protéines associées aux fibres de collagène, nombreuses ont été caractérisées pour leur participation dans le remodelage du tissu osseux. Il s'agit, pour la plupart, de protéines anioniques et/ou de protéines acides (anioniques à pH physiologique). A titre d'exemple, l'ostéopontine et l'ostéonectine sont deux protéines ayant toutes deux la particularité de présenter des domaines de liaison de forte affinité au calcium (Ca2+), et de médier la fixation cellulaire via des motifs peptidiques du type RGD. L'ostéopontine et l'ostéonectine ont été également identifiées comme étant des substrats de la transglutaminase, une enzyme qui crée des liaisons y-amide entre les groupements 'y-carboxoamide des peptides et la glutamine, et agit en réticulant la matrice environnante par activation du Ca2+ rencontré dans l'espace extra-cellulaire. Plus particulièrement, l'ostéopontine (ou "bone sialoprotein") est une protéine acide. Le segment acide du résidu d'acide aspartique qu'elle contient, permet la liaison au Ca2+ et sert ainsi d'agent nucléateur de cristaux de phosphates de calcium à structure apatitique. Le résidu d'acide aspartique fixateur de Ca2+ est d'ailleurs inclus dans le motif RGD de cette protéine. L'ostéonectine est une protéine acide, riche en résidus cystéine. Entre autre, elle médie, elle aussi, la déposition d'apatite. D'autres protéines, également présentes dans la matrice extra-cellulaire de l'os, comme des chondroïtine sulfate-protéoglycannes (CS-PGIII) qui s'associent également au collagène et favorisent la minéralisation. Les phosphoprotéines, riches en résidus sérine, thréonine et acides, jouent un rôle dans l'interface entre la phase organique collagénique et la phase minérale. Ces protéines sont phosphorylées dans les ostéoblastes, puis sont sécrétées dans la matrice extra-cellulaires où elles s'associent à des régions spécifiques du collagène, au niveau des lacunes (en formant des complexes séryl-phosphoester) renfermant du calcium, stabilisé par des fonctions carboxylate présentes à ce niveau. Ces fonctions carboxylate, qui sont présentes au niveau des lacunes de la phase collagénique de l'os naturel, constituent ainsi des sites de l'amorce du processus de nucléation qui est une cristallisation par épitaxie du calcium et du phosphate circulant libéré par la phosphatase alcaline à partir des sucres phosphorylés. Avec les dendrimères exposant des séquences périphériques a terminaison(s) anionique(s), l'invention permet de recréer artificiellement de façon stable, à la surface des produits implantables, un environnement anionique à l'image de la matrice extra-cellulaire du tissu osseux, particulièrement riche en protéines anioniques, en phosphates circulant et en groupements carboxylate qui forment les sites de l'amorce du processus de nucléation. Schématiquement et de manière générale, on peut décrire de tels dendrimères phosphorés comme des polymères tridimensionnels de forme globalement sphérique, formés d'un coeur comprenant au moins un atome de phosphate et autour duquel des monomères sont greffés successivement les uns aux autres selon un processus arborescent, formant ainsi des couches successives de monomères qui délimitent de nombreuses cavités. Chaque couche de monomères constitue une génération particulière du dendrimère. A leur surface, les dendrimères exposent des séquences périphériques avec, à leur extrémité libre, un ou plusieurs groupements terminaux, on parle aussi de fonctions terminales ou, plus simplement, de terminaisons. Depuis ces dernières années, une chimie très riche a été développée autour de ces macromolécules, s'attachant notamment à préparer de nouveaux dendrimères aux propriétés de surface bien particulières, en modifiant les fonctions terminales de dendrimères de base déjà existants. Dans le cadre de l'invention, il s'agit de dendrimères phosphorés qui exposent des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s). Ces dendrimères peuvent avoir été préalablement préparés, par exemple, en fonctionnalisant des dendrimères de base (disponibles dans le commerce ou dont la préparation est déjà bien connue) pour leur conférer des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s). A titre d'exemples d'enseignement de méthode de préparation de dendrimères exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s), on peut citer les documents FR 2 734 268, Majoral et al., 2001 (Polym. Mat. Sci. Eng., 84:166-167), Majoral et al., 2000 (Tetrahedron, 56:6269-6277). Les dendrimères particuliers utilisés pour mimer fonctionnellement les protéines de la matrice extra-cellulaire conformément à l'invention, se sont révélés non seulement non toxiques pour l'organisme mais également compatibles avec la fonctionnalisation de surfaces réalisées en des biomatériaux les plus divers (titane, zircone, et leurs alliages, alliage cobalt-chrome, bioverres, phosphates de calcium, carbonates de calcium, les polypeptides cellulosiques, l'alginate le polyéthylène glycol (PLG), les copolymères des acides lactiques et glycoliques (PLGA), le hyaluronate, le collagène, la gélatine, le chitosane, la fibrine, l'agarose, les acides polyacryliques et leurs dérivés, les oxydes de polyéthylène et leurs copolymères, les alcools polyvinyliques, les polyphosphazènes...) et ce, par simple immobilisation -notamment par adsorption- sur ces surfaces. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, sur la surface fonctionnalisée d'un produit implantable conforme à l'invention, sont immobilisés adsorbés des dendrimères phosphorés qui exposent des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate. Outre l'avantage de mimer les protéines de la matrice extra-cellulaire de l'os naturel, sans présenter de toxicité pour l'organisme, et de pouvoir s'adsorber de façon stable sur la surface de produits implantables, notamment à base de titane ou de phosphates de calcium en formant des ponts ioniques ou par chélation du calcium, les dendrimères à terminaisons de type phosphonate conduisent de façon surprenante et inattendue à une amélioration supplémentaire des propriétés d'ostéoinduction d'une surface fonctionnalisée conforme à l'invention. En l'espèce, ils permettent avantageusement de stimuler la prolifération des cellules osseuses et la différenciation des cellules ostéoprogénitrices en cellules ostéoblastiques. Bien qu'aucune explication certaine ne soit pour l'instant donnée, des travaux effectués par les inventeurs leur ont permis de constater une augmentation remarquable de la prolifération des cellules de la lignée ostéoblastique lorsque celles- ci sont cultivées sur des plots de biomatériau dont la surface est recouverte de dendrimères exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate conformes à l'invention, par rapport à des cellules cultivées sur le plastique (polystyrène) des puits de culture. Egalement, et sans qu'aucune explication certaine ne soit non plus donnée pour l'instant, d'autres travaux menés par les inventeurs leur ont aussi permis de constater une augmentation remarquable de la différenciation de cellules ostéoprogénitrices lorsque celles-ci sont cultivées sur ces mêmes plots de biomatériau, par rapport à des cellules ostéoprogénitrices cultivées sur le plastique (polystyrène) des puits de culture. Par ailleurs, il est connu -notamment de Glimcher et al., 1990 (Biomaterials, 11:7-10)- que la présence de phosphoprotéines et de groupements phosphorylés sur le collagène favorise la germination des cristaux de phosphates de calcium et le processus de minéralisation du tissu osseux. On peut donc raisonnablement penser que la présence de groupements anioniques terminaux -notamment de type phosphonate- sur les dendrimères fonctionnalisés selon l'invention serait favorable à la nucléation de phosphates de calcium. Le fait d'immobiliser, notamment par adsorption, de tels dendrimères sur la surface d'un biomatériau permet ainsi de mettre à disposition ces terminaisons anioniques en surface du biomatériau et de favoriser la formation de germes de phosphates de calcium par l'intermédiaire d'interactions entre terminaisons anioniques et cations Ca.. Or, il est reconnu que la nucléation de phosphates de calcium à la surface d'un biomatériau augmente sensiblement la bioactivité de celui-ci, et notamment sa liaison avec le tissu. La qualité de l'interface entre le biomatériau fonctionnalisé selon l'invention et le tissu néo-formé s'en trouverait améliorée par la présence accrue de cristaux de phosphates de calcium interagissant avec la surface du biomatériau via les terminaisons des dendrimères immobilisés. De plus, puisque la formation de ces cristaux de phosphates de calcium se fait in situ, ces cristaux sont comparables à ceux formés naturellement lors du processus naturel de remodelage osseux. Il s'agit ainsi de cristaux de phosphates de calcium apatitique, non- stoechiométriques, et nanocristallins présentant une surface hydratée hautement réactive et une surface spécifique élevée. L'immobilisation de tels dendrimères sur une surface réalisée en un biomatériau selon l'invention, permettrait par ce biais d'améliorer la qualité de l'interface produit implantable/tissu. Or, la mauvaise qualité de l'interface entre un tissu biologique et un produit implantable est la principale cause de révision des prothèses. A titre de dendrimères déjà connus et qui peuvent être avantageusement utilisés pour mettre en oeuvre l'invention, on peut citer les dendrimères à terminaisons de type phosphonate comme décrits dans le document FR 2 734 268. Le procédé de préparation de ces dendrimères particuliers ainsi que le schéma réactionnel général correspondant sont donnés dans ce document FR 2 734 268. De façon très générale, il s'agit de fonctionnaliser une partie ou la totalité des séquences périphériques à terminaisons aldéhyde (- CHO) de dendrimères déjà disponibles dans le commerce, en y greffant sur les séquences périphériques des terminaisons de type phosphonate. Schématiquement, on réalise une réaction de substitution des fonctions aldéhyde ( CHO) par des séquences du type CH=N RI P(0)(OH)2 ou du type CH=N RI P(0)(O-)2. Pour ce faire, on peut utiliser entre autres un réactif aminé à 20 terminaisons diéthylphosphonodiester du type NH2 RI P(0)(OC2H5)2, où RI est une chaîne organique dont la longueur peut être modulée, pouvant être aromatique. Par exemple, il peut s'agir d'une réaction totale entre: - des dendrimères phosphorés de base, du type génération 2.5 et de formule semi-développée: S=P- {O-C6H4-CH=N-N(CH3)P(S)-[O-C6H4-CH=N-N(CH3) P(S)-(O-C6H4-CHO)2]2} 3 un réactif aminé notamment NH2 C6H4 CH2 P(0) (OC2H5)2, qui conduit à la formation de dendrimères de formule semidéveloppée: S=P- {O-C -CH=N-N(CH3)P(S)-[O-C6H4-CH N N(CH3)P(S)-(O-C6H4-CH N-RI-P(0)(OC2H5h]2} 3 2876916 lo La modification chimique des terminaisons diéthylphosphonoester, P(0) (OC2H5)2, en terminaisons de type acide phosphonique P(0)(OH)2 ou phosphonate P(0)(O-)2, peut être alors réalisée par déprotection des groupements diéthylphosphonoester -P(0)(OC2H5)2, par exemple au moyen d'un traitement au bromure de triméthylsilane (CH3)3SiBr, sous gaz inerte, par exemple de l'argon. Il est possible de transformer les fonctions imine CH=N R1 formées en fonctions amine CH2 NH R1 par traitement en solution en présence de cyanoborohydrure de sodium NaBH3CN. Le passage des terminaisons acide phosphonique en terminaisons phosphonate peut se faire par ajout de base forte. Avantageusement et selon l'invention, les dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate conformes à l'invention peuvent avoir été préparés à partir de dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaisons aldéhyde, par fonctionnalisation totale ou seulement partielle. Eventuellement, la fonctionnalisation totale ou partielle a été réalisée selon la méthode générale précédemment évoquée, en utilisant un réactif aminé à terminaisons phosphonate notamment du type NH2 R1 P(0) (OC2H5)2. Avantageusement et selon ce même mode de réalisation de l'invention, la surface fonctionnalisée d'un produit implantable conforme à l'invention 20 est fonctionnalisée par adsorption de dendrimères de formule semidéveloppée: S=P-{O-C -CH N-N(CH3)P(S)-[O-C -CH=N-N(CH3)P(S)-(O-C -CH N-R'P(0)(O-)2]2}3 Selon un autre mode de réalisation particulièrement préféré, sur la surface fonctionnalisée d'un produit implantable conforme à l'invention, sont adsorbés des dendrimères phosphorés qui exposent des groupements périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. A l'instar d'autres dendrimères exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s), ces dendrimères phosphorés particuliers sont aptes à s'adsorber avec une stabilité satisfaisante sur la surface de biomatériaux métalliques (tels que le titane, le zircone, et leurs alliages, alliage cobalt- 20 25 30 2876916 Il chrome) en formant des ponts ioniques, ou sur la surface de biomatériaux de type phosphates de calcium ou carbonates de calcium, en chélatant le calcium. Ces dendrimères phosphorés qui exposent des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate, à la surface des produits implantables permettent de mimer les protéines de la matrice extra-cellulaire de l'os naturel, et plus précisément la phase matricielle des sites de l'amorce du processus de nucléation. Avantageusement, les séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s) -notamment de type phosphonate ou de type carboxylate- des dendrimères qui peuvent être utilisés pour la mise en oeuvre de l'invention sont choisies parmi: - des séquences à terminaison phosphonate, de formule générale choisie parmi: OH 1 - 01-R-CH2-NH-R1-û -O- , Cat+ O OH 01-R-CH=N-RI-P-O-, Cat+ O 01-R-CH2-NH-R1-P-(O-)2, 2Cat+ O et 01-R-CH=N-R1-P-(O-)2, 2Cat+ O - des séquences à terminaison carboxylate, de formule générale choisie parmi: - 01-R-CH2-NH-R1-C-O-, Cat+ O - 01-R-CH=N-RI-C-O-, Cat+ O Dans les formules générales précédentes: - R et RI sont identiques ou non, et désignent des groupes alkyle ou aryle, et - X désigne un atome de soufre ou d'oxygène, et - Cat+ désigne un cation organique ou minéral, notamment H+. Chacune desdites séquences périphériques est reliée, par son atome d'oxygène 01, à un atome de phosphore d'un monomère de la génération 5 précédente. Avantageusement, les dendrimères phosphorylés présentant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s) pouvant être utilisés pour mettre en oeuvre l'invention, sont formés d'un coeur de formule générale choisie parmi: N, V N X et P P \N/ X désigne un atome de soufre ou d'oxygène. Au niveau du(des) atome(s) de phosphore formant le coeur des dendrimères conformes à l'invention, se projette une pluralité de séquences de structure ramifiée qui se terminent par lesdites séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s) -notamment de type phosphonate et/ou de type carboxylate-. Avantageusement et selon l'invention, les couches internes de ces ramifications sont formées d'un assemblage de monomères de formule générale: -02-R-CH=N-NH-P I I X l'atome d'oxygène 02 de chacun de ces monomères est lié soit à l'atome de phosphore d'un monomère adjacent de la génération précédente, soit à un atome de phosphore du 25 coeur. Avantageusement, la surface fonctionnalisée d'un produit implantable conforme à l'invention, est fonctionnalisée par adsorption de dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate et des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. Selon un autre mode de réalisation, la surface fonctionnalisée d'un produit implantable selon l'invention, est fonctionnalisée par immobilisation - notamment par adsorption- de dendrimères phosphorés exposant à la fois des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate et des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. Avantageusement et selon l'invention, les dendrimères à terminaisons anioniques adsorbés sur une surface fonctionnalisée d'un produit implantable conforme à l'invention sont de génération comprise entre 1.5 à 12.5. Avantageusement, la surface d'un produit implantable selon l'invention présente une concentration totale en dendrimères immobilisés -notamment adsorbés- au moins de l'ordre de 0,002 nmol/cm2. Il convient de noter que l'invention n'est nullement restreinte à la fonctionnalisation des surfaces de produits implantables au moyen de dendrimères phosphorés qui exposent de façon exclusive des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s), notamment de type phosphonate et/ou de type carboxylate. Eventuellement, en complément des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s), les dendrimères phosphorés utilisés dans le cadre de l'invention, peuvent exposer des séquences périphériques à terminaison(s) autrement fonctionnalisées en vue d'obtenir des effets supplémentaires. En effet, la chimie des dendrimères est particulièrement riche et les possibilités de variation/modification des fonctions périphériques terminales d'un dendrimère de base sont aujourd'hui nombreuses et offrent à l'invention de nombreuses perspectives d'évolution. En particulier, les dendrimères utilisés pour fonctionnaliser la surface d'un produit implantable conforme à l'invention, outre le fait d'exposer des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s), peuvent de façon avantageuse également exposer des séquences périphériques liés de façon covalente à des peptides, -notamment des peptides d'intérêt présentant des sites de liaison désirés, par exemple de type RGD-, à des protéines, à des oligosaccharides... selon l'activité cellulaire à induire (par exemple, pour favoriser l'ancrage cellulaire et ainsi améliorer la stabilisation des cellules sur la surface fonctionnalisée). Egalement, il peut être avantageux d'utiliser les cavités de ces dendrimères comme réservoirs permettant la distribution de divers molécules et/ou ions bioactifs aptes à favoriser les processus conduisant à la pénétration du tissu au niveau du site d'implantation d'un produit implantable. L'invention s'étend également à une méthode de préparation d'un produit implantable destiné à la reconstruction osseuse. Dans un procédé selon l'invention, on immobilise -notamment par adsorption- sur au moins une surface d'un produit implantable, dite surface à fonctionnaliser, des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s). Avantageusement et selon l'invention, on réalise l'adsorption avec une solution de concentration en dendrimères adaptée pour permettre une adsorption d'au moins de l'ordre de 0,002 nmol de dendrimères par cm2 de surface à fonctionnaliser; à l'intérieur de cette solution d'adsorption on immerge la surface à fonctionnaliser. Avantageusement et selon l'invention, cette solution d'adsorption est à base d'un mélange eau/solvant(s) organique(s). Dans le cas où les dendrimères à terminaisons anioniques utilisés, présentent une faible solubilité dans l'eau, par exemple due à la présence de terminaisons aldéhyde, on ajoute à la solution d'adsorption une quantité de tétrahydrofuranne (THF). La quantité de THF à ajouter à la solution d'adsorption augmente avec le nombre de terminaisons aldéhyde de ces dendrimères. Avantageusement et selon l'invention, on réalise l'adsorption des dendrimères sur une surface à fonctionnaliser réalisée en au moins un biomatériau choisi notamment dans le groupe constitué par: le titane, le zircone, et leurs alliages, un alliage cobalt-chrome, des bioverres, des phosphates de calcium, des carbonates de calcium, les polypeptides cellulosiques, l'alginate le polyéthylène glycol (PLG), les copolymères des acides lactiques et glycoliques (PLGA), le hyaluronate, le collagène, la gélatine, le chitosane, la fibrine, l'agarose, les acides polyacryliques et leurs dérivés, les oxydes de polyéthylène et leurs copolymères, les alcools polyvinyliques, les polyphosphazènes. 10 Avantageusement et selon l'invention, on utilise des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s), notamment de type phosphonate ou de type carboxylate, éventuellement choisies parmi: - des séquences à terminaison phosphonate, de formule générale choisie parmi: OH 1 O-R-CH2-NH-R1-P-O- , Cat+ O OH 1 01-R-CH=N-R1-P-O- , Cat+ O 01-R-CH2-NH-RI-P-(O-)2, 2Cat+ O O-R-CH=N-R1-P-(O-)2, 2Cat+ O - des séquences à terminaison carboxylate, de formule générale choisie parmi O-R-CH2-NH-R1- I-O-, Cat+ O 20 et O-R-CH=N-RI-C-O-, Cat+ O Dans les formules générales précédentes: - R et RI sont identiques ou non, et désignent des groupes alkyle ou aryle, 25 - X désigne un atome de soufre ou d'oxygène, et - Cat+ désigne un cation organique ou minéral, notamment H+. Avantageusement et selon l'invention, on utilise des dendrimères à terminaisons phosphonate de formule semi-développée: S=P-{O-C -CH N-N(CH3) P(S)-[O-C -CH N-N(CH3)P(S)-(O-C -CH N-RI-P(0)(O-)2]2}3 et Selon un mode de réalisation particulier, on utilise avantageusement en combinaison des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate et des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. Selon un autre mode de réalisation particulier, on utilise avantageusement des dendrimères phosphorés exposant à la fois des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate et des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. L'invention concerne également un produit implantable comprenant au moins une surface fonctionnalisée au moyen de dendrimères exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s), ainsi qu'un procédé de préparation d'un tel produit implantable, caractérisés en combinaison par tout ou partie des caractéristiques ci-dessus et ci-après. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description détaillée suivante, qui se réfère aux travaux menés par les inventeurs dans le cadre de cette invention et dont certains des résultats sont présentés dans les figures annexées: figures lA et 1B, figure 2, figures 3A à 3C. Les figures lA et 1B correspondent l'isotherme d'adsorption représentatif de l'immobilisation de dendrimères particuliers et conformes à 20 l'invention, sur une surface réalisée en titane. La figure 2 montre l'effet, sur la prolifération cellulaire, de différents produits ayant une surface fonctionnalisée conformément à l'invention. Les figures 3A à 3C sont des diagrammes qui illustrent l'effet, sur la différenciation des cellules ostéoprogénitrices, d'une surface réalisée en un biomatériau sur laquelle des dendrimères conformes à l'invention sont immobilisés. 1) PREPARATION DE DENDRIMERES A TERMINAISONS ANIONIQUES a) Dendrimères à terminaisons de type phosphonate Des dendrimères phosphorés exposant des séquences 30 périphériques à terminaisons de type phosphonate peuvent être préparés en suivant les instructions données dans le document FR 2 734 268. b) Dendrimères à terminaisons de type carboxylate Des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaisons de type carboxylate peuvent être préparés en suivant l'enseignement de la publication Majoral et al., 2001 (Polym. Mat. Sei. Eng., 84:166- 167) et/ou celui de la publication Majoral et al., 2000 (Tetrahedron Letter, 56:6269- 6277). c) Protocole particulier de synthèse de dendrimères à terminaisons phosphonate A titre d'exemple pratique, des dendrimères phosphorés de 10 formule semi-développée suivante ont été préparés: S=P- {O -C -CH=N N(CH3) P(S)-[O-C H -CH N N(CH3)P(S)-(O-C6-CH =N-RI -P(0)(O h]2} 3 Pour ce faire, une réaction de fonctionnalisation a été réalisée sur des dendrimères initiaux à terminaisons aldéhyde, commercialisés par la société SIGMAALDRICH, France, dont la formule semi-développée est la suivante: S=P- { O-C6H4-CH=N-N(CH3)P(S)- [O-C6H4-CH=N-N(CH3)P(S)-(O-C6H4-CH=0)2]2} 3 Ces dendrimères initiaux sont dits du type génération 2.5; ils sont en effet formés de deux couches profondes de monomères et d'une couche périphériques de monomères "tronqués" et portant les fonctions terminales (en l'occurrence, des groupements aldéhyde). La quantité souhaitée de dendrimères initiaux à terminaisons aldéhyde, par exemple 0,15 mmol, est dissoute dans un mélange contenant 13 ml de tétrahydrofuranne (THF) et 10 ml de méthanol. Le réactif aminé NH2-R-P(0)(OC2H5)2, par exemple NH2-C6H4-CH2-P(0)(OC2H5) 2, est dissous dans un second ballon contenant 7 ml de THF. La quantité de réactif est choisie en excès par rapport à la quantité de dendrimères initiaux utilisée. Par exemple, deux équivalents de réactif aminé peuvent être employés par rapport au nombre de fonctions aldéhyde du dendrimère initial. Cette solution est transférée dans la solution précédente placée sous agitation, au goutte-à-goutte à l'aide d'une micro-seringue. La solution est 30 maintenue sous agitation pendant 2 heures. Une solution contenant un équivalent au moins, par rapport aux fonctions aldéhyde du dendrimère initial, de cyanoborohydrure de sodium NaBH3CN est ajoutée au goutte-à-goutte dans le mélange réactionnel. La solution est maintenue sous agitation, à l'aide d'un barreau aimanté, à 25 C, pendant une durée variant typiquement de 1 à 3 jours. Il est à noter que ce protocole permet non seulement le greffage du réactif aminé à terminaisons phosphonate sur le dendrimère, conduisant à la formation d'imines (activé en présence de NaBH3CN), mais il permet également de procéder à l'amination réductive de l'étape (2) par la réduction des groupements imines 10 CH=N formés en groupements amines CH2--NH . A l'issue de la réaction, la solution est évaporée sur évaporateur rotatif. Le résidu est repris dans 2 ml de THF, puis un excès d'éther est introduit dans le ballon afin de provoquer la précipitation des dendrimères. L'excès de réactif aminé reste solubilisé dans l'éther. Cette étape peut être répétée si besoin est, afin d'éliminer toute trace de réactif aminé résiduel. La solution est alors filtrée, et le résidu est séché sous vide puis analysé par RMN 31P et 1H. La réaction est totale lorsque le pic caractéristique des fonctions aldéhyde a totalement disparu. A ce stade, le composé solide obtenu est le dendrimère fonctionnalisé, présentant des séquences terminales du type aminodiéthylphosphonoester NH R P(0)(OC2H5)2. Rappelons ici que le choix des quantités relatives de dendrimère initial et des autres réactifs, notamment le réactif aminé porteur des fonctions phosphonate, permet de modifier le taux de fonctionnalisation du dendrimère. La modification chimique des terminaisons di- éthylphosphonoester en groupements phosphonate (étape (3)) s'effectue de la manière suivante. Le produit obtenu précédemment est dissous, à température ambiante, dans un ballon contenant 15 à 25 ml de dioxanne-1,4 anhydre. Le ballon est traversé par une circulation de gaz inerte sec (par exemple, l'argon) permettant de travailler en conditions sèches (absence de vapeur d'eau). La solution est agitée par l'intermédiaire d'un barreau aimanté. La transformation des groupements phosphonoester en groupements phosphonate s'effectue en deux temps comme suit. Dans un premier temps, un excès de bromure de triméthylsilane (CH3)3SiBr, liquide, est ajouté goutte à goutte dans la solution. L'utilisation de plusieurs équivalents de (CH3)3SiBr par rapport au nombre de fonctions terminales du dendrimère initial est favorable à cette étape. Par exemple, entre 1,5 à 5 équivalents peuvent être utilisés. Au cours de cette étape, les fonctions terminales NH R P(0)(OC2H5)2 du dendrimère sont modifiées par la substitution des fonctions éthyles C2H5 par le groupement Si(CH3)3, conduisant à BrC2H5 comme sous- produit. La solution est laissée sous agitation et sous flux de gaz inerte pendant plusieurs heures, typiquement 4 heures. Des réajustements de volume par ajouts de faibles quantités de dioxanne-1,4 peuvent s'avérer nécessaires afin de garder un volume réactionnel constant, à cause de l'évaporation du solvant accélérée sous flux gazeux. L'ensemble de ce protocole est effectué à température ambiante. La solution est alors évaporée sous évaporateur rotatif pour analyse de contrôle par RMN 31P et H. Dans un second temps, le résidu ainsi obtenu est repris dans 25 ml de THF et 75 ml d'eau désionisée. Cette étape permet de procéder à l'hydrolyse des groupements terminaux OSi(CH3)3 en OH, avec pour sous-produit l'alcool HO-Si(CH3)3. Notons que cette étape d'hydrolyse peut également être réalisée directement dans le ballon réactionnel (après 4h de mélange sous agitation) par l'ajout d'un excès (par exemple 75-100 ml pour un ballon de 250 ml) d'eau désionisée. Au cours de l'hydrolyse, le dendrimère précipite progressivement, ce qui s'explique par la transformation des groupes phosphonoester hydrophobes en groupes de type acide phosphonique P(0)(OH)2 hydrophiles. 20 La solution/suspension est maintenue sous agitation pendant 1 heure puis filtrée. Le résidu ainsi obtenu est séché sous vide, puis analysé principalement par RMN 31P et 1H. Le produit solide obtenu est le dendrimère comportant des groupements terminaux de type phosphate P(0)(OH)2. Rappelons que le réactif aminé comporte deux groupes OC2H5. Par conséquent, si ces deux groupes sont transformés en OH, il y a doublement du nombre de fonctions périphériques par rapport au dendrimère initial. Par exemple, pour un dendrimère initial de génération 2.5, qui comporte 12 fonctions aldéhyde terminales, la fonctionnalisation mènera, dans le cas d'une fonctionnalisation totale, à 24 groupements OH terminaux. La caractérisation de ces macromolécules est réalisée par résonance magnétique nucléaire (31P, 13C, 1H) ainsi que par spectroscopie infrarouge. Ces méthodes d'analyse spectroscopiques permettent de suivre le bon déroulement de chaque réaction. Le passage des fonctions terminales acide phosphonique en fonctions phosphonate peut se faire notamment par traitement des dendrimères par une base, par exemple NaOH. 2) FONCTIONNALISATION DE SURFACE PAR ADSORPTION DE DENDRIMERES a) Protocole d'adsorption: Les dendrimères à terminaisons phosphonate précédemment préparés sont utilisés pour fonctionnaliser la surface de disques métalliques (14 mm de diamètre, 2 mm d'épaisseur) réalisés en un alliage Ti6A14V, alliage à base de titane largement utilisé pour la réalisation de prothèses orthopédiques. En l'espèce, les dendrimères phosphorés à terminaisons de type phosphonate utilisés dans le cas présent présentent un taux de fonctionnalisation proche de 50% (50% des groupements aldéhydes initiaux fonctionnalisés en groupements phosphonate, masse molaire proche de 4440 g/mol). Dans un premier temps, avant de subir l'adsorption, les disques sont polis mécaniquement pour obtenir des surfaces parfaitement lisses. Les disques sont ensuite nettoyés à l'alcool, rincés à l'eau déminéralisée, puis stérilisés à 180 C. Les dendrimères à terminaisons phosphonate sont mis en solution dans un mélange eau stérile/THF dans une proportion volumique 1:1. Pour réaliser l'isotherme d'adsorption (ou courbe d'adsorption) de ces dendrimères à terminaisons phosphonate, des solutions d'adsorption de concentrations variant entre 0 et 450 g/ml (soit des concentrations molaires variant de 0 à 0,1 mol/ml) ont été utilisées. Les disques de titane sont alors placés dans des puits de culture (plaque de 24 puits). La solution précédemment préparée est ajoutée à chaque puits. L'adsorption se déroule en condition stérile, à température ambiante, pendant 2 heures. La solution d'adsorption est ensuite retirée. L'isotherme d'adsorption sur titane, correspondant aux 15 dendrimères particuliers utilisés, est exposée à la figure 1. Cet isotherme peut être modélisé selon le modèle de Langmuir, menant à l'équation: N =N a m 1+bÉC dans laquelle Na est le nombre de moles de dendrimères adsorbés par cm2 de titane, b une constante, C la concentration de la solution d'adsorption, et N,n le nombre de moles de dendrimères adsorbés pour former une monocouche totalement occupée. La modélisation de cet isotherme mène ici à N,n. 2.218. 10-12 mol/cm2 à la monocouche. La concentration utilisée lors des expériences en présence de cellules (ci-après décrites) ont été réalisées avec une concentration pour la solution d'adsorption de 0.25 g/ml, soit 0.0563. 10-9 mol/ml. La figure 1B montre un agrandissement de l'isotherme d'adsorption aux alentours de cette valeur à titre informatif. 3) CULTURES CELLULAIRES SUR DES SURFACES FONCTIONNALISEES PAR DES DENDRIMERES A TERMINAISONS PHOSPHONATE bÉC a) Stimulation de la prolifération des cellules cultivées sur des surfaces fonctionnalisées Les tests de prolifération ont été réalisés avec des cellules MC3T3G, lignée ostéoblastique, cultivées dans du a-MEM, 10% de sérum, et 1% de pénicilline-streptomycine, 5% de CO2. Après trypsination, les cellules sont ensemencées à la densité de 2.104 cellules/cm2 d'une plaque de 24 puits. La prolifération de ces cellules MC3T3G est mesurée à J4, J7, J14 et J21 par comptage cellulaire en double, et en fonction des quatre conditions de culture suivantes: - sans disque de titane fonctionnalisé dans les puits et sans dendrimères (plastique non traité : Po), sans disque de titane fonctionnalisé mais en présence de dendrimères adsorbés sur le plastique des puits (plastique fonctionnalisé : P-d), en présence de disques de titane non fonctionnalisés (titane non traité : Tio), en présence de disques de titane fonctionnalisés (titane fonctionnalisé :Ti-d). Pour ces tests de culture cellulaire, il a été choisi d'utiliser un recouvrement des disques correspondant à une monocouche de dendrimères évaluée à 0,0025 g/disque soit une concentration de 0,01 g/cm2. Les résultats de prolifération cellulaire obtenus dans ces différentes conditions de cultures (Po, P-d, Tio et Ti-d) sont représentés à la figure 2; l'axe des abscisses représente le temps exprimé en jour, et l'axe des ordonnées le nombre de cellules (N) par cm2. Ces résultats permettent ainsi d'affirmer que: - les dendrimères associés au titane fonctionnalisé par les dendrimères à 25 terminaisons phosphonate entraînent une augmentation du nombre de cellules par rapport au titane non traité, - à J4, le titane fonctionnalisé donne de bons résultats, ce qui semble aller dans le sens d'une meilleure adhésion cellulaire, - les dendrimères utilisés ne sont pas cytotoxiques si l'on compare les 30 résultats obtenus avec le plastique traité et le plastique non traité, et les résultats obtenus avec le titane fonctionnalisé et le titane non traité, - les dendrimères ne semblent pas subir de désorption; leur action persiste encore à J21. b) Stimulation de la différenciation de cellules ostéoprogénitrices cultivées sur les surfaces fonctionnalisées Les cellules ostéoprogénitrices utilisées ont été obtenues à partir de crêtes iliaques humaines aspirées lors d'interventions chirurgicales effectuées sur des donneurs sains. Ces cellules sont cultivées dans du a-MEM, 10% de sérum, et 1% de pénicilline-streptomycine, 5% de CO2. A 90% de la confluence, les cellules sont trypsinées et poolées. Elles sont ensuite analysées pour leur potentiel de 10 différenciation. Le niveau d'expression de trois marqueurs de la différenciation ostéoblastique (cbfa-1, phosphatase alcaline et ostéocalcine) est mesuré. La méthode utilisée est indiquée ci-après. L'ARN total est extrait des cellules progénitrices en utilisant le kit RNeasy (QIAGEN). L'ARN est lavé et élué selon le protocole du fabricant. Les échantillons d'ARN sont réverse-transcrits en ADNc en utilisant la sélection d'oligo-dT selon le protocole du fabriquant (LIFE TECHNOLOGIES). L'expression du gène de la phosphatase est quantifiée en utilisant le système RT-PCR (APPLIED BIOSYSTEMS). Les conditions de réaction sont différentes selon la séquence à amplifier. Le contrôle est le plastique des puits de culture. Les séquencès amorce ("primers") 5' des gènes cbfa, phosphatase alcaline (PA) et ostéocalcine (OC) sont présentées dans le tableau 1. SEQUENCES Amorce 5' cbfa-1 5'-AGAGGTACCAGATGGGACTGTGGTT-3, Amorce 5' PA 51AGGCAGGATTGACCACCACGG-3i Amorce 5' OC 5 -TCTGCTCACTCTGCTGAC-3' Tableau 1 Les produits de la PCR sont séparés par électrophorèse sur un gel d'agarose à 1% et visualisés au bromure d'éthidium. L'intensité de la coloration est mesurée. Le potentiel de différenciation de ces cellules ostéoprogénitrices est analysé à J3, J9 et J21 et ceci selon qu'elles aient été ou non cultivées sur un support de titane fonctionnalisé. Les résultats obtenus sont présentés aux figures 3A à 3C montrant respectivement l'intensité relative des trois marqueurs (cbfa-1, PA et OC) par rapport à un gène référence, à différents temps (J3, J9 et J21), sur substrat non traités (le plastique des puits de culture: Po) et sur substrat traité (Ti-d). L'expression de cbfa-1 (Figure 3A) diminue ce qui est normal pour ce marqueur d'un stade de différenciation très précoce. En revanche, l'augmentation de l'expression de la phosphatase alcaline (Figure 3B) est nettement accrue par rapport au contrôle. Ce marqueur indique une évolution vers un stade de différenciation plus avancé : celui d'un ostéoblaste en début de maturité. Ces résultats témoignent ainsi d'une différenciation induite et l'engagement des cellules progénitrices vers la voie ostéoblastique. L'expression de l'ostéocalcine (Figure 3C), un autre marqueur de différenciation de l'ostéoblaste, un peu plus tardif que le précédent, est activée à un moindre niveau. L'ostéocalcine inhibe la maturation du minéral osseux en retardant la nucléation. Cette diminution montre le rôle réel des dendrimères à terminaisons de type phosphonate dans l'induction de la nucléation cristalline, laquelle entraîne au contraire une diminution de l'expression de l'ostéocalcine. REVENDICATIONS 1/ - Produit implantable de reconstruction osseuse ayant au moins une surface réalisée en au moins un biomatériau et traitée de façon à favoriser une intégration dudit produit implantable en site osseux, caractérisé en ce que sur ladite surface, dite surface fonctionnalisée, sont immobilisés des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s). 2/ - Produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'immobilisation desdits dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s), sur ladite surface fonctionnalisée, est réalisée par adsorption. 3/ - Produit selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que ladite surface fonctionnalisée est réalisée en au moins un biomatériau choisi dans le groupe constitué par: le titane, le zircone, et leurs alliages, un alliage cobalt-chrome, des bioverres, des phosphates de calcium, des carbonates de calcium, les polypeptides cellulosiques, l'alginate le polyéthylène glycol (PLG), les copolymères des acides lactiques et glycoliques (PLGA), le hyaluronate, le collagène, la gélatine, le chitosane, la fibrine, l'agarose, les acides polyacryliques et leurs dérivés, les oxydes de polyéthylène et leurs copolymères, les alcools polyvinyliques, les polyphosphazènes. 4/ - Produit selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que sur ladite surface fonctionnalisée sont immobilisés des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate. 5/ - Produit selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que sur ladite surface fonctionnalisée sont immobilisés des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. 6/ - Produit selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que lesdites séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s) sont choisies parmi: - des séquences à terminaison phosphonate, de formule générale choisie parmi: OH O-R-CH2-NH-RI-P-O- Cat+ O OH 1 -01-R-CH=N-RI-P-O-, Cat+ O 01-R-CH2-NH-R1-P -(0)2, 2Cat+ O 01-R-CH=N-R1-P-(O-)2, 2Cat+ O - des séquences à terminaison carboxylate, de formule générale choisie parmi: O-R-CH2-NH-RI-C-O-, Cat+ O O-R-CH=N-R1-C-O-, Cat+ O - R et RI désignant des groupes alkyle ou aryle, - Cat+ désignant un cation organique ou minéral. 7/ - Produit selon la revendication 6, caractérisé en ce que les dendrimères phosphorylés présentant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s) sont formés de: - un c ur de formule générale choisie parmi: X=P et N/P\N P---- / N \ 10 15 et - une pluralité de monomères assemblés en une structure ramifiée qui se projette à partir de chaque atome de phosphore dudit coeur, décrivant des couches successives de monomères, dites générations, et se terminant par lesdites séquences périphériques anioniques; chacun de ces monomères étant de séquence générale suivante: O-R-CH=N-NH-PI I X X désignant un atome de soufre ou d'oxygène. 8/ - Produit selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que ladite surface fonctionnalisée est fonctionnalisée par adsorption de dendrimères phosphorés de formule semi-développée: S=P-{O-C-CH N-N(CH3) P(S)-[O-C-CH=N-N(CH3)P(S)-(O-C-CH N-RI-P(0)(O-)2]2}3 9/ - Produit selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que ladite surface fonctionnalisée est fonctionnalisée par adsorption de dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate et des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. 10/ - Produit selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que sur ladite surface fonctionnalisée sont adsorbés des dendrimères phosphorés exposant à la fois des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate et des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. 11/ - Produit selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que lesdits dendrimères adsorbés sur ladite surface fonctionnalisée sont de 25 génération comprise entre 1.5 à 12.5. 12/ - Produit selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que ladite surface fonctionnalisée présente une concentration totale en dendrimères immobilisés au moins de l'ordre de 0,002 nmol/cm2. 13/ - Procédé de préparation d'un produit implantable destinée 30 à la reconstruction osseuse, dans lequel on immobilise sur au moins une surface d'un produit implantable, dite surface à fonctionnaliser, des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s). 14/ - Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que l'immobilisation desdits dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s) sur ladite surface à fonctionnaliser est réalisée selon une méthode d'adsorption dans laquelle on utilise une solution comprenant lesdits dendrimères, dite solution d'adsorption, et à l'intérieur de laquelle on immerge ladite surface à fonctionnaliser. 15/ - Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'on utilise une solution d'adsorption, à base d'un mélange eau/solvant(s) organique(s) , avec une concentration en dendrimères adaptée pour conduire à l'obtention d'une surface fonctionnalisée présentant une concentration en dendrimères au moins de l'ordre de 0,002 nmol/cm2. 16/ - Procédé selon l'une des revendications 13 à 15, caractérisé en ce que ladite surface à fonctionnaliser est réalisée en un au moins biomatériau choisi dans le groupe constitué par: le titane, le zircone et leurs alliages, un alliage cobalt-chrome, des bioverres, des phosphates de calcium, des carbonates de calcium, les polypeptides cellulosiques, l'alginate le polyéthylène glycol (PLG), les copolymères des acides lactiques et glycoliques (PLGA), le hyaluronate, le collagène, la gélatine, le chitosane, la fibrine, l'agarose, les acides polyacryliques et leurs dérivés, les oxydes de polyéthylène et leurs copolymères, les alcools polyvinyliques, les polyphosphazènes. 17/ - Procédé selon l'une des revendications 13 à 16, caractérisé en ce qu'on utilise des dendrimères phosphorés exposant des séquences 25 périphériques à terminaison(s) anionique(s) de type phosphonate. 18/ - Procédé selon l'une des revendications 13 à 16, caractérisé en ce qu'on utilise des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) anionique(s) de type carboxylate. 19/ - Procédé selon l'une des revendications 13 à 18, caractérisé en ce qu'on utilise, en combinaison, des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate et des dendrimères phosphorés exposant des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate. 20/ - Procédé selon l'une des revendications 13 à 17 et 19, caractérisé en ce qu'on utilise, à titre de dendrimères exposant des séquences 5 périphériques à terminaison(s) de type phosphonate de formule semidéveloppée: S=P-{O-C -CH NN(CH3)P(S)-[O-C -CH N-N(CH3)P(S)-(O-C -CH N-RIP(0)(O")2]2}3 21/ - Procédé selon l'une des revendications 13 à 18, caractérisé en ce qu'on utilise des dendrimères phosphorés exposant à la fois des séquences périphériques à terminaison(s) de type phosphonate et des séquences périphériques à terminaison(s) de type carboxylate.