Brevet FR2875677A1 — publié le 20060331

La présente invention se rapporte au domaine de l'amélioration des plantes, en particulier de l'amélioration des plantes par la modification de la qualité et/ou de la quantité de lignine. Etant donné l'importance qualitative de la lignine, une augmentation, une diminution ou une modification de la quantité et/ou de la qualité de la lignine peut avoir des conséquences industrielles ou agronomiques importantes. La présente invention concerne plus précisément la mise au point d'un allèle particulier du gène codant pour la première isoforme de la Cinnamoyl CoA Reductase ou CCR1 (EC: 1.2. 1.44) chez le maïs. La présence de cet allèle a pour conséquence la diminution de la quantité de lignine présente dans la plante. La lignine est l'un des deux composants majoritaires de la paroi végétale avec la cellulose. La paroi végétale principalement constituée de cellulose, hémicellulose et de lignine offre à la cellule une barrière naturelle contre l'extérieur. En effet, de nombreuses études ont démontré que l'une des réponses aux stress biotiques (attaques pathogènes) ou abiotiques (sécheresse, vent...) consiste en un renforcement de la paroi végétale en particulier en une teneur supérieure en lignines. Par ailleurs, de nombreux secteurs agronomiques ou industriels voient leurs rendements directement liés à la teneur et/ou à la composition en lignine de la paroi. Parmi eux, il est possible de citer les industries papetières, la production de combustibles ou la production d'ensilage. Par conséquent, il est intéressant de pouvoir moduler la teneur et la composition en lignines soit afin de renforcer les parois végétales pour améliorer la résistance aux stress soit au contraire d'affaiblir la paroi végétale afin de faciliter l'extraction de la cellulose ou d'autres composés chimiques (industrie papetière, production d'énergie) (Lorrenz et Morris, 1995 http:://www.corbohydrateeconomy.com) ou la digestibilité des fourrages (Baucher et al., 1998 Plant Mol Biol 39, 437-447) Par exemple, l'amélioration des qualités du maïs d'ensilage consiste à diminuer la teneur en lignine ou à en modifier la composition. L'ensilage de maïs est un aliment intéressant: le rendement au champ est relativement élevé, la récolte et le stockage sont aisés, les qualités nutritionnelles sont stables et pouvant aisément être complémentées en protéines par d'autres ensilages de fourrage ou par des tourteaux de soja. Une expérimentation menée par Emile (1995, Annales de zootechnie) démontre qu'une variété plus digestible permet d'augmenter le niveau de production de lait de plus d'un kilogramme par jour et la prise de poids des vaches de 22 kg par rapport à une variété moins digestible. Ainsi, plus la variété est digestible plus la production laitière est élevée et moins la perte d'état de chair est importante. L'optimisation des qualités de l'ensilage de maïs consiste ainsi à augmenter l'énergie nette fournie par ce type d'alimentation en améliorant sa digestibilité et donc en diminuant la teneur en lignine. Ainsi, la sélection ou l'obtention de plantes de maïs plus digestibles, dont la voie de biosynthèse des lignines est modifiée, possédant de bons rendements et peu sensibles aux divers stress (mécanique, hydrique...) est un des axes privilégiés d'amélioration du maïs. Cependant, il est difficile de savoir comment modifier la voie de biosynthèse des lignines et de prévoir quelles seront les conséquences de telle ou telle modification En effet, la voie de biosynthèse des lignines est une voie complexe, imparfaitement élucidée et faisant intervenir un grand nombre de réactions enzymatiques (Dixon et al., 2001, Phytochemistry, 57(7), 1069-1084). La lignine est considérée comme étant un polymère insoluble de 3 monomères d'alcools ou monolignols: l'alcool p-coumarylique (sous-unités H), l'alcool coniférylique (sous-unités G) et l'alcool sinapylique (sousunités S), issus de la voie des phénylpropanoïdes (Neish, 1968, Constitution and Biosynthesis of lignin, eds New York, Springer Verlag 143). Chaque type de précurseurs peut former une variété de liaisons avec d'autres et ainsi constituer la lignine. D'autres liaisons peuvent également s'établir avec d'autres composés pariétaux (polysaccharides et protéines) pour former un réseau complexe tridimensionnel. Les principales étapes en sont l'hydroxylation, la 0-méthylation des cycles aromatiques puis la conversion de la chaîne latérale carboxyl en une fonction alcool. L'hypothèse actuelle de la voie de biosynthèse des monolignols considère que le réseau métabolique aboutissant à la formation des sous-unités S et G fait intervenir des réactions successives d'hydroxylations et de 0méthylations à différents niveaux de l'oxydation de la chaîne latérale. Les enzymes du réseau incluent: des 0-méthyltransférases distinctes: la Caffeic acid 3-O Méthyltransférase (COMT), la 5-hydroxyconiferyl aldéhyde 0-méthyl transférase (AIdOMT) et la Caffeoyl coenzyme A 3-O méthyltransférase (CCoAOMT) des hydroxycinnamate coenzyme A ligases (4CL) une férulate 5-hydroxylase (F5H) à cytochrome P450 et plusieurs isoformes de Cinnamoyl Co A réductase (CCR) et de Cinnamyl alcool dehydrogenase (CAD). La propriétés de ces différentes enzymes ont fait l'objet de revues (Boudet et al, 1995 New Phytol. 129, 203-236; Dixon et al, 2001, précédemment cité; Whetten et al., 1998 Annu Rev. Plant Physiol Plant Mol Biol, 49, 585 -609, Li et al., 2000 J. Biol Chem, 275, 6537-6545). Depuis plusieurs années, les scientifiques tentent de modifier les teneurs et composition des plantes en lignines en surexprimant ou sous exprimant un ou plusieurs gènes de la voie de biosynthèse des lignines (Anterola et Lewis, 2002, Phytochemistry 61, 221-294). Notamment, les demandes de brevets (WO 9924561, EP0516958, WO9305160, WO9712982) exposent les différentes stratégies imaginées. Cependant, la surexpression ou la sous expression d'une ou plusieurs enzymes ne donnent pas toujours des résultats constants et prévisibles. Par exemple, l'inhibition de la CCR aurait des conséquences physiologiques graves voire délétères, en particulier sur l'appareil vasculaire de la plante (Pinçon et al. 2001, Plant Physiol. 126, 144-155). Selon le taux d'inhibition de la CCR, il apparaît que le phénotype du transformant est très différent. Une lignée de tabac antisens CCR dont l'activité résiduelle est de 6% aura un phénotype de petite taille avec des feuilles en cuiller tandis qu'un autre transformant de tabac dont l'activité résiduelle de la CCR est de 9% aura un phénotype normal. Ainsi, il existerait des phénomènes de compensation au sein de la voie de biosynthèse de lignine. Par conséquent, s'il est avéré que l'inhibition de la CCR provoque une diminution de la quantité de lignine, il est très difficile pour l'homme de métier de prévoir quelles seront les conséquences du point de vue phénotypique et du point de vue de la qualité de lignine. Certains auteurs ont montré que l'inhibition de la CCR provoquait l'incorporation dans la lignine de composés inhabituels tels que les tyramines ferulates (Ralph et al. 1995, PNAS, 95 (22) 1280312808). Cependant, cette compensation par des phénols inhabituels semble remis en cause (Anterola et al. 2002, Phytochemistry, 221-294). Une autre stratégie consiste à utiliser, dans les schémas de sélection variétale, des mutants naturels. Par exemple, le mutant naturel bm3 de maïs possède une insertion dans le gène codant pour la COMT-A1dOMT et possède ainsi une excellente digestibilité. Ces maïs bm3 diffèrent des maïs normaux par une teneur fortement réduite en lignine (jusqu'à 40%) mais leur rendement en champ est moindre. Ils sont, en outre, plus sensibles à la verse accrue et montrent un manque de croissance et de vigueur en début de végétation et un retard à la floraison. Tous ces défauts en empêchent l'exploitation (Barrière et Argillier, Agronomie, 13, 865-876 (1993)). La Cinnamoyl Coenzyme-A Réductase intervient dans la voie de biosynthèse des lignines pour convertir en aldéhydes, le p-coumaroyl CoA, le feruloyl CoA et le sinapoyl CoA. L'existence des ces trois substrats laisse penser que soit il existe plusieurs isoformes de CCR soit la ou les CCR sont capables de catalyser les réactions à partir d'une grande variété de substrats (Lewis and Yamamoto, 1990, Animal Review of Plant Physiol. And Plant Mol Biol 41, 455-497; Davin and Lewis, 1992, In Stafford HA Ibrahim RK (eds), Phenolic Metabolism in Plants, vol 26, Plenum Press, New York and London, 325-375; Lewis et al. 1999, In Barton D.H.R., Sir, Nakanishi, K., Mehcohn, O. Eds, Comprehensive Natural Products Chemistry, vol 3, 617745). Une autre hypothèse envisage des isoformes de CCR différentes selon le type cellulaire (Chen et al. 1999, Planta, 207, 597-603; Matsui et al., 2000, Planta, 210, 831-835). Mais aucune de ces hypothèses n'a été clairement prouvée. Chez le maïs, à ce jour, deux isoformes de la CCR ont été isolées (Pichon et al., 1998, Plant Mol Biol, 38, 671-676). Il semblerait que seule la CCR1 soit impliquée dans la voie de biosynthèse des lignines. Les demandes de brevet WO9712982, WO9839454 et WO9910498 concernent entre autres, le gène de la CCR de maïs. Ces demandes ne décrivent pas comment obtenir des plantes de maïs à digestibilité améliorée possédant un gène de CCR muté. L'homme de métier, sans description précise de l'obtention de plante de maïs à digestibilité améliorée est incapable de prévoir les effets produits sur le maïs par une inhibition de sa CCR. En effet, étant donné la complexité du phénomène aboutissant à la lignification, l'homme du métier ne peut pas se baser sur des résultats obtenus sur d'autres plantes puisqu'il apparaît de plus en plus clairement que les voies de biosynthèses diffèrent d'une espèce angiosperme à une autre (Yamauchi, 2003, précédemment cité). De surcroît, il est évident qu'il existe des phénomènes de compensations et / ou de régulations croisées entre les gènes au sein de cette voie de biosynthèse (Pincon et al, 2001). Par conséquent, si l'homme de métier ne possède pas d'informations précises (espèce, enzyme ciblée, réalisation de la transformation...) sur l'obtention de plantes à digestibilité améliorée, il est incapable de prévoir si les effets de cette transformation seront conformes à ceux souhaités. De surcroît, il n'existe pas de mutant naturel affecté dans la CCR qui pourrait être utilisé par les sélectionneurs. De même on peut facilement imaginer que tous les allèles mutants n'auront pas le même effet sur la plante; en effet des modifications dans les sites responsables de la régulation de l'expression du gène peuvent se traduire par une modification du profil spatio-temporelle de la présence de l'enzyme correspondant. La présente invention a pour objet de fournir à l'homme du métier un maïs qui possède effectivement une digestibilité améliorée, par la mise au point d'un allèle favorable de la CCR1 (appelé A 3318), une insertion ayant été effectuée dans le premier intron du gène codant pour cette enzyme, dont la séquence d'un allèle est représentée par SEQ ID N 1. La séquence de l'ARNm correspondant est X98083 de GenBank (SEQ ID N 2), la partie codante étant des nucléotides 79 à 1194. Il est clair que ces séquences ne sont données qu'à titre d'exemples, et que l'homme du métier est à même d'identifier lui-même les séquences génomique et/ou d'ARNm de la CCR1 pour différentes variétés de maïs. Par exemple, un autre allèle correspondant à la séquence de la CCR de maïs est représenté par l'accession Y13734 (GenBank). Des graines possédant l'allèle A 3318 ont été déposées au NCIMB Limited, 23 St Machar Drive, Aberdeen, Scotland, AB24 3RY, UK, le 23 juillet 2004, selon les dispositions du Traité de Budapest, sous le numéro NCIMB 41236. L'invention fournit notamment une plante de maïs possédant ledit allèle A 3318. Malgré la présence de l'insertion dans un intron, cette plante montre une diminution de l'activité de l'enzyme de CCR1, de telle sorte que la teneur en lignine est diminuée d'au moins 5 %, de préférence d'au moins 7 %, de façon plus préférée d'au moins 10 %, et le taux de sousunités S est augmenté d'au moins 10 %, de préférence d'au moins 12 %, de façon plus préférée d'au moins 16 %, par rapport à des plantes presque isogéniques ne présentant pas cet allèle menant à une telle inhibition de l'activité CCR1. Ainsi, la présente invention se rapporte notamment à une plante de maïs présentant une augmentation de la digestibilité (mesurée par NIRS) d'au moins 10 %, de préférence d'au moins 15 %, de façon plus préférée d'au moins 20 %. De façon préférée, le maïs selon l'invention est un maïs élite . L'homme du métier connaît bien la définition d'un maïs élite. Par maïs élite, on entend un maïs destiné à générer des hybrides destinés à être commercialisés par croisement avec un autre maïs élite. Un maïs élite est défini comme tel en relation avec le territoire envisagé pour la commercialisation, ainsi que le(s) caractère(s) agronomique(s) recherché(s) pour la descendance hybride. Il s'agit notamment d'un maïs pouvant être inscrit dans un catalogue de référence. Ainsi, selon que la descendance est destinée à l'alimentation humaine ou animale, on recherchera par exemple respectivement un rendement en grains, ou un rendement à l'hectare et une bonne digestibilité, lorsque l'on évalue la nature élite du maïs . Afin de déterminer le caractère élite d'un maïs, on compare des hybrides obtenus à partir de celui-ci aux hybrides commerciaux de référence (vendus pour le même objectif dans la même région), par des essais en champs, par relevé et mesures de caractères agronomiques appropriés à l'objectif recherché. Un maïs est défini comme élite si les résultats obtenus paramètres étudiés pour un hybride obtenu par croisement dudit maïs sont supérieurs à 90 % aux résultats relevés pour les mêmes paramètres des hybrides de référence. Dans le cadre de la présente invention, on étudie notamment le caractère de digestibilité (digestibilité mesurée par NIRS (near infrared spectroscopy), par exemple) . La spectroscopie par proche infrarouge (NIRS) est la mesure de la longueur d'onde et l'intensité d'absorption de la lumière proche infrarouge par un échantillon, dans les domaines 800 nm - 2.5 m (12,500 - 4000 cm-') range. Cette spectroscopie est typiquement utilisée pour des mesures quantitatives de groupes fonctionnels organiques, en particulier O-H, N-H et C=O. Cette méthode est couramment utilisée dans l'analyse de la digestibilité d'échantillons. Ainsi, un maïs élite est un maïs rassemblant le maximum de caractéristiques agronomiques nécessaires pour une pénétration économique du marché visé. Le marché du maïs étant aujourd'hui un marché d'hybrides, l'évaluation du caractère élite d'un maïs s'effectue également par l'aptitude dudit maïs à la combinaison/production d'hybrides. Ainsi, la présente invention se rapporte préférentiellement à un maïs élite destiné à la commercialisation d'hybrides pour l'alimentation animale et l'ensilage, présentant l'allèle A 3318. Ce maïs élite est donc homozygote pour l'allèle A 338. Dans un autre mode de réalisation, l'invention se rapporte à un maïs hybride obtenu par croisement de deux lignées parentes homozygotes, ledit maïs hybride présentant un allèle A 3318. Ce maïs hybride peut être homozygote (si chaque parent homozygote présente l'allèle A 3318) ou hétérozygote pour l'allèle A 3318. La présente invention fournit également à l'homme de métier les moyens permettant de sélectionner les plantes de maïs possédant cette caractéristique de digestibilité améliorée. Il suffit en effet d'effectuer une PCR, ou un Southern Blot (hybridation de l'ADN génomique sur membrane) pour suivre la présence de l'insertion dans le premier intron du gène codant pour la CCR1. L'homme du métier peut aisément déterminer les amorces et sondes permettant d'identifier la présence de l'allèle A 3318. L'invention fait également l'objet d'un procédé d'obtention de plantes de maïs possédant une digestibilité améliorée grâce à l'allèle A 3318. L'invention se rapporte également à une méthode pour obtenir une lignée de maïs présentant une digestibilité accrue, comprenant l'étape d'introgresser l'allèle A 3318, dans une lignée de référence, présentant un caractère agronomique de qualité. L'introgression du caractère est notamment réalisée par sélection, selon les méthodes connues dans l'art (croisements et auto-fécondation). On sélectionne notamment les plantes à l'aide de marqueurs moléculaires. Le principe en est rappelé ci-dessous: On réalise une série de back-cross entre la lignée élite et la lignée portant l'allèle A 3318 (site unique sur le chromosome 1). Au cours des rétrocroisements, on peut sélectionner les individus porteurs de l'allèle A 3318, et ayant recombiné le plus petit fragment de la lignée donneuse autour de cet allèle. En effet, grâce aux marqueurs moléculaires, on sélectionne les individus ayant pour les marqueurs proches du gène, le génotype de la lignée élite. De plus, il est également possible d'accélérer le retour vers le parent élite grâce aux marqueurs moléculaires répartis sur l'ensemble du génome. A chaque rétrocroisement, seront choisis les individus ayant le plus de fragments issus du parent élite récurrent. Avec une bonne mise en oeuvre, dès la quatrième génération, on peut obtenir une lignée quasi isogénique de la lignée élite, c'est-à-dire identique à la lignée élite de départ, mais ayant intégré le locus portant l'allèle A 3318. Ainsi, dans un mode de réalisation préféré, ladite méthode comprend les 15 étapes consistant à : a) croiser une première lignée de maïs présentant l'allèle A 3318 avec une seconde lignée de maïs ne présentant pas ledit allèle, b) effectuer un génotypage de la descendance obtenue et sélectionner les descendants présentant l'allèle A 3318 ayant le meilleur génome ratio 20 pour ce qui est de ladite seconde lignée, c) effectuer un rétrocroisement desdits descendants avec ladite seconde lignée de maïs, d) répéter si nécessaire les étapes b) et c) jusqu'à obtenir une lignée isogénique de ladite seconde lignée de maïs, présentant l'allèle A 3318, e) de façon optionnelle, effectuer une auto-fécondation afin d'obtenir une plante homozygote pour l'allèle A 3318. Le génotypage de l'étape b) est effectué préférentiellement en utilisant des marqueurs moléculaires (marqueurs microsatellites par exemple), permettant de définir la part de chacun des deux parents dans la descendance. On sélectionne également, dans la descendance, les maïs qui possèdent le caractère génétique approprié pour ce qui est de l'allèle A 3318, de façon classique, par les méthodes de biologie moléculaire (telles que PCR ou Southern Blot). De manière surprenante, il a été montré que la répétition des rétrocroisements entre les lignées sélectionnées à l'étape b) et le second maïs permet d'obtenir l'apparition d'un phénotype bien plus marqué au sein dudit second maïs. Ce résultat est tout à fait surprenant car on aurait pu s'attendre à observer une amélioration de la digestibilité dès le premier croisement du maïs présentant l'allèle A 3318 avec le second maïs. Ainsi, l'homme du métier ne pouvait obtenir de maïs présentant une digestibilité accrue en suivant l'enseignement des demandes WO 97/12982, WO 98/39454 et WO 99/10498, ou être incité à mettre au point un allèle spécifique, qui plus est présentant une insertion dans un intron. En mettant en oeuvre l'enseignement de ces demandes, qui ne mentionnent pas l'importance d'effectuer certains rétrocroisements et optionnellement des autofécondations, l'homme du métier aurait pu conclure à une absence de rôle de la CCR1 pour améliorer la digestibilité chez le maïs. En particulier aucune de ces demandes ne décrit ni ne suggère l'allèle selon l'invention, ni même la possibilité de le mettre au point. Enfin, l'invention se rapporte à l'utilisation d'un maïs selon l'invention, pour la préparation d'une composition destinée à l'alimentation du bétail, à une méthode pour la préparation d'une composition destinée à l'alimentation du bétail comprenant l'ensilage d'un maïs selon l'invention, ainsi qu'à la composition destinée à l'alimentation du bétail, ainsi obtenue. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1: illustration d'une méthode permettant le suivi de l'allèle A 3318. représentation schématique des amorces utilisées (Figure 1.A) et résultats d'amplification (Figure 1.B) Figure 2: résultats NIR de l'introgression de l'allèle A 3318 sur la quantité de lignine (figure 2.A) et la digestibilité (figure 2.B) mutant: plantes possédant l'allèle 30 A 3318; témoins: plantes ne possédant pas cet allèle. EXEMPLES Description d'un maïs présentant une altération dans le gène de CCR Une lignée de maïs présentant une insertion de l'élément mutator dans le premier intron à la position 632 de la séquence de référence SEQ ID N 1 est isolée. 5 L'allèle ainsi obtenu est appelé A 3318. Bien que présente dans un intron, on suppose que cette insertion a pour conséquence de déréguler la transcription et/ou la traduction du gène CCR1, ou la stabilité de l'ARNm de CCR1, menant à une diminution de l'activité de l'enzyme en présence de l'allèle A 3318, ainsi qu'attesté par les résultats biochimiques de composition et teneur en lignine (voir plus loin). Afin de déterminer si l'insertion est sous forme homozygote ou hétérozygote, un couple d'amorces a été défini: amorce sens CCR 15 de séquence SEQ ID N 3: GTACATCGCCTCGTGGTTAG et une amorce antisens CCR 14 de séquence SEQ ID N 4: GAGTTCTGCAAGAGAACGAG En plus de ces deux amorces l'amorce OMuA SEQ ID N 5: ATCGACAAATATATATGTTTATAAGG spécifique des régions TIR (terminal inverted repeat) de l'élément transposable endogène est utilisée. Cette amorce est dirigée vers l'extérieur du transposon. (Figure 1. A) Ces trois amorces peuvent être utilisées simultanément dans une expérience 20 d'amplification PCR à partir d'ADN génomique (Température d'hybridation = 58 C). Le dépôt sur gel des produits d'amplification révèle: - l'obtention d'une seule bande d'environ 630 pb de long pour des plantes dites sauvages à ce locus (c'est à dire n'ayant pas la mutation) ; - l'obtention de deux bandes d'environ 115pb et 565 pb pour des plantes homozygotes mutantes, correspondant aux amplifications obtenues avec les amorces présentes dans le gène et dans le transposon (du fait de l'insertion, l'amplification avec les amorces CCR 15 et CCR 14 ets impossible (trop longue) ; - ou l'obtention de l'ensemble des trois bandes pour des plantes hétérozygotes. Ces résultats sont illustrés sur la figure 1.B. Le premier et le dernier puits sur gel contienne le marqueur de taille: la bande la plus basse correspond à 100pb et il y a 100pb entre chaque Les puits 2 et 3 correspondent à des individus sauvages Les puits 4 et 5 correspondent à des individus mutants Les puits 6 et 7 correspondent à des individus hétérozygotes. Schéma des Back cross et autofécondations Afin d'étudier plus précisément l'effet de l'insertion observée dans le premier intron de CCR dans un maïs élite, on effectue des back-cross (rétrocroisements) successifs avec une lignée élite de Limagrain. Cette méthode permet très rapidement d'obtenir des lignées quasi isogéniques ne différant que par le locus portant l'allèle modifié, les descendants étant testés pour posséder un ratio génome le plus proche possible de celui du parent élite tout en ayant l'allèle que l'on désire introgresser. Ces tests sont assistés par marqueurs moléculaires (techniques bien connues, microsatellites, AFLP...). Pour essayer d'apprécier l'effet de l'insertion au plus tôt (obtention de plantes homozygote), des autofécondations sont réalisées aux différents stades intermédiaires de back cross. La figure 2 présente des résultats NIR obtenus sur des plantes BC2S2 (2 rétrocroisements et 2 auto-fécondations). Ceci montre que l'introgression de l'allèle A 3318 permet d'obtenir une baisse de la quantité de lignine (Acid Detergent Lignin) après isolement des parois (Neutral Detergent Fibers), selon les méthodes connues de l'homme du métier (figure 2.A) et une amélioration de la digestibilité de la matière organique de la partie tige + feuilles de la plante, en pourcentage de matière organique digérée (figure2. B). On peut également mesurer le pourcentage de lignine de Klason et la 25 digestibilité des parois, selon les méthodes connues dans l'art, ce qui donne les résultats suivants pour les maïs BC2 S2: Valeur du mutant Valeur du témoin % lignine dans les parois 15.7 16.7 Digestibilité de paroi 25 21 Revendications 1. Maïs présentant un allèle du gène CCR1, appelé A 3318 comprenant une insertion d'un transposon dans le premier intron dudit gène, ledit allèle étant présent dans un échantillon représentatif de graines déposées au NCIMB sous le numéro NCIMB 41236. 2. Grain de maïs présentant un allèle du gène CCR1, appelé A 3318 comprenant une insertion d'un transposon dans le premier intron dudit gène, ledit allèle étant présent dans les graines déposées au NCIMB sous le numéro NCIMB 41236. 3. Méthode pour obtenir un maïs présentant une digestibilité accrue, comprenant l'introgression de l'allèle A 3318 dans ledit maïs. 4. Méthode selon la revendication 3, comprenant les étapes consistant à : a) croiser une première lignée de maïs présentant l'allèle A 3318 avec un second maïs ne présentant pas ledit allèle, b) effectuer un génotypage de la descendance obtenue et sélectionner les descendants présentant l'allèle A 3318, et ayant le meilleur génome ratio pour ce qui est dudit second maïs, c) effectuer un rétrocroisement desdits descendants avec ladite seconde lignée de maïs élite utilisable pour la production d'hybrides, d) répéter si nécessaire les étapes b) et c) jusqu'à obtenir une lignée isogénique dudit second maïs, présentant l'allèle A 3318, e) de façon optionnelle, effectuer une auto-fécondation afin d'obtenir une plante homozygote pour l'allèle A 3318. 5. Utilisation d'un maïs selon la revendication 1 pour la préparation d'une composition destinée à l'alimentation du bétail. 25 6. Méthode pour la préparation d'une composition destinée à l'alimentation du bétail comprenant l'ensilage d'un maïs selon la revendication 1.