Brevet FR2877344A1 — publié le 20060505

PEPTIDE POSSEDANT NOTAMMENT UNE ACTIVITE ANTI-HIV, PROCEDE DE PREPARATION ET COMPOSITION PHARMACEUTIQUE LE CONTENANT La présente invention concerne une nouvelle construction peptidique dérivant de l'enveloppe du virus de type I responsable du syndrome de l'immunodéficience humaine (désigné ci-après HIV-I) et présentant une activité anti-fusogène par inhibition de la fusion membranaire entre HIV1 et sa cible cellulaire. L'invention a également pour objet un procédé de préparation d'une telle construction et ses applications biologiques et thérapeutiques en relation avec ses propriétés anti-HIV. L'enveloppe mature de HIV-1 (désignée ci-après Env ) est i) codée par le génome viral, ii) produite par la machinerie de la cellule-cible dans le cadre du cycle infectieux, iii) constituée par la glycoprotéine gp120, appelée sous-unité de surface et la glycoprotéine gp4l, appelée sous-unité transmembranaire . Les glycoprotéines gp120 et gp4l sont les produits de la maturation endoprotéolytique d'un précurseur de 160 kDa, la glycoprotéine gp160, maturation qui a lieu dans le trans Golgi par des protéines convertases cellulaires de type furine (Einfeld, D. Curr Top Microbiol 214: 133, 1996; Decroly et al. J Biol Chem 269: 12240, 1994) . L'enveloppe mature est représentée schématiquement à la figure 1. La séquence consensus de la région 'de clivage endoprotéolytique de la gp160 est représentée à la figure 2. Elle comprend deux séquences de clivage possibles, riches en acides aminés basiques, à savoir: - un site de clivage en amont, représenté par la séquence KAKRR * et, - un site de clivage en aval, représenté par la séquence REKR + . L'étoile * symbolise le site de clivage potentiel en amont, et la croix + , le site 30 de clivage potentiel en aval. Si la maturation se fait au niveau du site REKR * , il y a génération d'une enveloppe fusogène puisque l'extrémité N terminale (Nt) de la gp4l est constituée alors du peptide de fusion AVGIG hydrophobe, ce qui permettra, après contact avec la surface de la cellule cible, son insertion dans la membrane de l'hôte cellulaire et le déclenchement de la fusion membranaire HIV / cellule-cible. Si en revanche la maturation se fait au niveau du site KAKRR *, l'enveloppe générée n'est pas fusogène: l'extrémité N terminale (Nt) de la gp4l possède alors une séquence VVQREKR polaire attenant au peptide de fusion qui est incapable alors de s'insérer dans la membrane de la surface de l'hôte (Kieny et al., Protein Eng 2: 219-225, 1988, et Fenouillet et al., Virology 187: 825, 1992) et donc d'induire le processus de fusion HIV / cellule. Dans la présente demande, les acides aminés des séquences peptidiques sont représentés par leur code à une lettre, mais ils pourraient également être représentés par leur code à trois lettres selon la nomenclature ci-dessous: A ou Ala: alanine, C ou Cys: cystéine, D ou Asp: acide aspartique, E ou Glu: acide glutamique, F ou Phe: phénylalanine, G ou Gly: glycine, H ou His: histidine, I ou lle: isoleucine, K ou Lys: lysine, L ou Leu: leucine, M ou Met: méthionine, N ou Asn:asparagine, P ou Pro: proline, Q ou Gln: glutamine, R ou Arg: arginine, S ou Ser:, sérine, T ou Thr: thréonine, V ou Val: valine, W ou Trp: tryptophane et Y ou Tyr: tyrosine. A la surface virale, la gp120 est responsable de la liaison de HIV à l'antigène de surface cellulaire CD4. La liaison gp120 / CD4 définit la première étape du cycle infectieux. La liaison à CD4 induit une conformation particulière au sein de Env et la création d'un site de liaison à haute affinité pour divers co-récepteurs, dont ceux des chemokines. Ces interactions Env / co-récepteurs conduisent à de nouveaux changements conformationnels au sein de Env. Ils permettent l'acquisition ultime de la capacité de Env à induire la fusion membranaire par activation et démasquage du peptide de fusion membranaire de la gp4l. Le peptide de fusion de la gp4l peut alors s'ancrer à la surface de sa cible cellulaire et induire la coalescence puis la fusion des membranes virale et cellulaire; ceci conduit à l'entrée du génome viral dans la cellule (Berger et al., Annu Rev Immunol 17: 657, 1999). La figure 3 illustre différentes étapes du processus d'interaction de Env avec la surface lymphocytaire conduisant à la fusion HIV / lymphocyte. Divers catalystes associés à la surface cellulaire sont impliqués dans ces changements conformationnels (Kido et al., FEBS Lettérs 286: 233-236, 1991; Avril et al., FEBS Letters 345: 81-86, 1994; Fenouillet et al., J Infect Dis 183: 744, 2001). Quatre groupes de peptides dérivés de la région de clivage endoprotéolytique du précurseur de l'enveloppe du virus HIV-I, et présentant des propriétés anti-HIV ont déjà été décrits dans la littérature. Dans la publication de Hallenberger et al. (Nature 360: 358, 1992) , il est notamment décrit que les cétones peptidyl-chlorométhyl qui présentent le motif Arg-X-Lys/Arg-Arg et qui sont des inhibiteurs spécifiques de la furine, interfèrent avec la maturation intracellulaire de la gp160 et ainsi altère l'activation intracellulaire de la fusogénicité de l'enveloppe et la formation de particules virales infectieuses. Leur cytotoxicité est significative. Dans les travaux de Decroly et al. (J Biol Chem 269: 12240, 1994), différents inhibiteurs de peptides ont été testés pour leur capacité à interférer avec le processus de maturation endoprotéolytique intracellulaire de la gp160. Le meilleur inhibiteur testé est le décanoylArg-Lys-Arg-Arg-P[CH2NH]-Phe-Leu-Gly-Phe-NH2, mais sa toxicité est forte. Kibler et al.(J.Biol.Chem., publié online le 14 septembre 2004: Polyarginine inhibits gp160 processing by furin and suppresses productive human immunodeficiency virus type I infection") montrent que des peptides linéaires, produits pour divers usages par la Société Sigma, et consistant notamment en des enchaînements d'arginine, inhibent l'infectivité virale en interférant avec la maturation de la gp160 par les protéines-convertases cellulaires. La toxicité in vitro et in vivo est rapportée comme compatible avec la mise en oeuvre de l'effet anti- viral. Le mode d'action propre à cette classe d'inhibiteurs, à savoir l'inhibition des protéines-convertases cellulaires, rend cependant très probables des effets secondaires majeurs à moyen terme, la maturation de nombreuses pro-protéines étant ainsi inhibées. Dans les travaux de Barbouche et al., E. Virology 273: 169, 2000, il est décrit un peptide multibranché dénommé CLIV, de formule [PTKAKRRWQREKR]4K2-K-19A, présentant une activité anti-HIV essentiellement par interférence directe avec le processus de fusion. Le mode d'action anti-viral de ces trois classes de peptides décrits dans les travaux de Kibler et al, Decroly et al et Hallenberger et al. susmentionnés n'est pas le même que celui de la classe de peptides utilisés selon l'invention. Ainsi, les peptides décrits dans les travaux de Hallenberger et al. et Decroly et al. et Kibler et al agissent par inhibition de la maturation intracellulaire de la gp160, tandis que les peptides décrits par Barbouche et al.exercent une activité antivirale par interférence avec une étape du processus d'interaction HIV-cellule conduisant à la fusion, sans cytotoxicité significative aux doses antivirales. Leur site d'activité est donc extracellulaire. II est observé que seule la présentation multibranchée de la séquence d'intérêt (PTRRRRRRWQREKR ou PTKAKRRVVQREKR) permet l'obtention d'un composé actif contre HIV, les monomères étant dépourvus d'activité. Il est ainsi supposé que la présentation multibranchée de la séquence d'intérêt mîme la présentation oligomérique de son équivalent sur la gp120, seules les enveloppes oligomériques associées à la surface virale étant aptes à induire le processus de fusion membranaire. Le composé, en présentant une densité importante de la séquence d'intérêt et sa structuration sous une forme multimérique, pourrait interagir avec le ligand naturel des C terminus de gp120 oligomérique et interférer alors avec la liaison des oligomères de gp120 au ligand cellulaire. Les peptides décrits ci-dessus présentent généralement une cytotoxicité assez importante aux doses où ils présentent une activité anti-HIV. L'un des buts de la présente invention est de fournir une nouvelle construction peptidique au mode d'action original, puisqu'intervenant au niveau de l'interaction HIV-cellule, avant que ne débute l'infection proprement dite, et présentant des propriétés anti-HIV supérieures aux peptides déjà décrits et exploitables en thérapeutique. Un autre but de la présente invention est de fournir une nouvelle construction peptidique présentant de telles propriétés anti-HIV, sans présenter de cytotoxicité ou d'effets secondaires, notamment hématologiques, aux doses où une activité anti-HIV est observée. Un autre but encore de la présente invention est de fournir un nouveau peptide dont la séquence en acides aminés diffère de celle de l'extrémité C terminale de la gp120 d'isolats connus, de façon à obtenir un spectre d'activité large tant en termes d'isolats viraux que de cibles cellulaires et une faible induction de mécanismes de résistance viraux. La présente invention a pour objet un peptide multibranché possédant notamment une activité anti-HIV, caractérisé en ce qu'il comprend au moins deux branches peptidiques, identiques ou différentes, la séquence peptidique de chacune des dites branches (i) dérivant de la séquence consensus de la région de clivage endoprotéolytique native du précurseur gp160 de l'enveloppe du virus HIV- I, le site de clivage en amont de chacune desdites séquences peptidiques ayant été ou non modifié, par rapport au site de clivage en amont de la région de clivage endoprotéolytique native, de façon à améliorer l'activité anti-fusogène par rapport à la construction peptidique correspondant à la séquence consensus de la région de clivage endoprotéolytique, tout en augmentant le spectre d'activité, (ii) dérivant de la séquence consensus de l'extrémité C terminale de la gp120 mature de l'enveloppe fusogène de HIV-I, (iii) comprenant de 5 à 25 acides aminés, dont au moins deux acides aminés basiques situés au niveau du site de clivage en amont, (iv) lesquels acides aminés basiques situés à l'emplacement du site en amont sont à une distance de plus de 4 acides aminés du core de lysine, à l'exclusion d'un peptide tétramère non modifié, avec des branches identiques. Dans la présente demande, l'expression dérivant de désigne une séquence riche en acides aminés basiques Lys-Arg correspondant à ladite séquence consensus établie sur la base de différents isolats, étant entendu que des séquences différentes, mais présentant une similitude en termes de caractéristiques physico-chimiques peuvent aussi être actives et, à ce titre, entrent dans le champ de l'invention. II s'agit, notamment, de séquences peptidiques présentant 50% à 100% d'homologie, de séquence ou de caractéristiques physico-chimiques, avec la séquence native, de préférence 65% à 80%, et plus préférentiellement encore de l'ordre de 70%. L'activité anti-fusogène présentée par le peptide de l'invention signifie que le peptide de l'invention inhibe la fusion membranaire HIV I cellule cible ou des étapes de l'interaction HIV/ cellule cible indispensables au déclenchement de la fusion. Le peptide selon l'invention est plus particulièrement caractérisé en ce qu'il comprend au moins un motif de structure polybranchée de formule (I) : al b1 (I) dans laquelle - b1 représente une molécule disubstituée, notamment un acide aminé disubstitué tel que la lysine. - a1 et a2, identiques ou différents, comportent un premier motif au niveau du site en amont avec au moins deux acides aminés basiques, tels que K ou R, suivi d'une séquence d'au moins quatre acides aminés en son C terminus, jouant le rôle d'espaceur, branchée sur la molécule disubstituée, notamment l'acide aminé. Selon une disposition de l'invention, au moins l'un de a1 et a2 comporte, au niveau du site en amont du premier motif, deux acides aminés basiques. Par exemple, au moins l'un de a1 et a2 comporte, au niveau du site en amont du premier motif, une séquence répondant à SEQ ID N 2: PTRRRRRR. Dans un peptide préféré de l'invention, au moins l'un de a1 et a2 comporte une 5 séquence répondant à SEQ ID N 3: PTRRRRRRVVQREKR. Le peptide selon l'invention est plus particulièrement caractérisé en ce qu'il comporte une structure tetrabranchée avec deux motifs de formule (I) telle que définie ci-dessus, répondant à la formule (Il) : a2 b1 b1 b1 dans laquelle b1 est tel que défini ci-dessus, al et a2 sont tels que définis ci-dessus, a3 et a4, identiques ou différents, ont les mêmes significations que al et a2. L'invention vise en particulier un peptide tétrabranché dans laquelle chaque branche 25 a1, a2, a3 et a4 répond à la séquence peptidique SEQ ID N 3: PTRRRRRRVVQREKR, de formule (III) suivante: SEQ ID N 3 K SEQ ID N 3 K-(5A (III) SEQ ID N 3 K SEQ ID N 3 Le peptide tétrabranché de formule (Ill) sera dénommé dans ce qui suit Poly6R . Comme indiqué ci-dessus, les peptides de l'invention présentent des propriétés anti- HIV de grand intérêt, puisque inhibant la première étape du cycle infectieux, bloquant ainsi à la source le cycle réplicatif viral avant que HIV n'entre dans l'hôte cellulaire. En outre, les peptides de l'invention sont d'une grande innocuité, ce qui les rend donc particulièrement avantageux comme principes actifs de médicaments. L'invention vise donc également une nouvelle composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre d'agent actif, une quantité thérapeutiquement efficace d'un peptide tel que défini ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'invention vise en outre l'utilisation d'un peptide tel que défini cidessus pour la préparation d'un médicament destiné à lutter contre l'infection par HIV. De façon plus générale, l'invention vise l'utilisation d'un peptide multibranché tel que défini ci-dessus pour la préparation d'un médicament destiné à lutter contre tout processus pathologique impliquant la cible moléculaire de surface cellulaire du composé (ie le peptide de l'invention) La composition pharmaceutique, ou médicament, se présente sous des formes appropriées pour une administration par voie orale, ou injectable. Pour l'administration par voie orale, la composition est notamment sous forme de comprimés ou tablettes, lesdits comprimés ou tablettes protégeant le peptide de l'invention des dégradations protéolytiques digestives. Pour l'administration par injection, on a recours à des solutions ou des suspensions, le peptide étant stable et facilement soluble dans l'eau. Des doses d'administrations appropriées varient de 10-5 M à 10-12 M, de préférence de 10"6 M à 10-9 M, et sont administrées de façon à maintenir ces concentrations stables au cours de la journée. Selon un autre aspect, l'invention vise un fragment d'ADN, caractérisé en ce qu'il code pour un peptide tel que défini ci-dessus. Un tel fragment d'ADN est plus particulièrement caractérisé en ce qu'il code pour un peptide montrant une capacité au repliement telle qu'il présente la séquence d'intérêt d'une façon similaire à celle du modèle du peptide synthétique de l'invention. Cette capacité au repliement peut notamment être acquise par insertion de séquences codant pour des résidus cystéine et aptes à engager des ponts disulfures induisant une présentation des séquences linéaires de l'invention similaire à celle du peptide multibranché ci-dessus. Ainsi, l'invention permet de réaliser in vivo, après injection de matériel génétique par exemple, un polypeptide de structure similaire à celle du peptide multibranché. La présente invention vise également un vecteur, notamment de type plasmide, caractérisé en ce qu'il comporte un tel fragment d'ADN codant pour un peptide tel que défini ci-dessus. Selon encore un autre aspect, l'invention a pour objet un procédé de préparation du peptide multibranché défini ci-dessus. La synthèse du peptide multibranché de l'invention est similaire à celle des monomères, sauf que la résine qui sert de base insoluble et à partir de laquelle se fait l'élongation présente plusieurs acides aminés, tels la lysine de façon à ce que la synthèse s'effectue sur plusieurs branches en même temps. La synthèse des peptides multibranchés (ou MAP pour multiple antigen peptide ), a été décrite dans la publication de Tam et al., Proc Natl Acad Sci USA, 85: 5409-13, 1988. Ainsi qu'il ressort de l'une quelconque des formules (I), (Il) ou (III) définies ci-dessus, les peptides multibranchés comportent une matrice centrale (core) qui donne le io caractère multibranché du peptide. Cette matrice comporte généralement des branches constituées d'acides aminés tels la lysine. Le peptide multibranché va donc se présenter sous la forme d'un chandelier dont le pied est constitué de la matrice centrale de lysine et dont chaque branche correspond au peptide original proprement dit, à savoir par exemple à la séquence SEQ ID N 3 pour un peptide de formule (III). La lysine est un acide aminé très utilisé pour la matrice car il présente deux groupements a et s amines à partir desquels deux séquences peptidiques peuvent 10 être développées selon les modalités habituelles. Ainsi le procédé de préparation du peptide multibranché de l'invention comporte les étapes suivantes: - ancrage, par une liaison covalente, de l'acide aminé C terminal du futur peptide d'intérêt au support solide représenté par la résine portant la matrice centrale constituée, lors de la première étape, uniquement d'une ou plusieurs lysine(s), - assemblage ou élongation du peptide d'intérêt sur la chaîne peptidique naissante fixée sur la résine, par répétition d'une série de réactions chimiques dont l'ensemble forme le cycle d'incorporation d'un acide aminé, - lavage, à chaque étape du cycle de synthèse, afin d'éliminer les réactifs utilisés lors de chaque étape d'assemblage d'un acide aminé dans la chaîne peptidique, - traitement chimique spécifique en fin d'assemblage afin de décrocher le peptide du support solide, ce qui libère le peptide en solution. Lors de l'étape d'assemblage ou élongation, les divers acides aminés portant des 25 groupements protecteurs sont ainsi couplés séquentiellement. dans la chaîne peptidique suivant ce cycle répétitif, en fonction de la séquence du peptide désiré. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention seront donnés dans les 30 exemples qui suivent. La figure 1 est une représentation schématique de l'enveloppe du virus HIV-1 constituée de: - la sous-unité de surface gp120 (représentée en noir), - la sous-unité transmembranaire gp4l (représentée en gris foncé), - le site de clivage de la gp160 (représenté en gris clair), - le peptide de fusion membranaire (représenté en pointillé), La figure 2 représente la séquence SEQ ID N 4 de la région de clivage endoprotéolytique du précurseur de l'enveloppe, la gp160, en gp120 et gp4l. Le site de clivage en amont KAKRR * et le site de clivage en aval REKR + sont représentés en gras et sont suivis, respectivement, par une étoile (*) et une croix (+ ). Le peptide de fusion est AVGIGALFLG. Les résidus d'acides aminés soulignés sont ceux pris en compte lors de l'élaboration des branches du peptide de l'invention. La figure 3 illustre certaines étapes connues du processus d'interaction de HIV Env avec la surface lymphocytaire conduisant à la fusion HIV/lymphocytes. La figure 3a représente schématiquement le virus HIV et la cellule CD4+ qu'il va infecter. La figure 3b illustre la fixation du HIV à la cellule. II y a formation de la liaison gp 120-20 CD4 et évolution vers un complexe gp 120/CD4/CXCR4. La figure 3c illustre l'activation du peptide de fusion. Il y a modification conformationnelle de l'enveloppe au sein du complexe gp 120/CD4/CXCR4 avec acquisition de la fusogénicité de la gp 41. La figure 3d illustre l'ancrage du peptide de fusion de la gp 41 dans la membrane cellulaire et le rapprochement des membranes virale et cellulaire. La figure 3e illustre la fusion des membranes virale et cellulaire conduisant à l'entrée 30 du génome viral dans la cellule. EXEMPLE 1: préparation et étude de l'activité anti-virale d'un peptide de l'invention: Poly6R . 1) Préparation du peptide Poly6R (répondant à la formule (III)) Des résines de type Fmoc4-Lys-Beta-Ala-Clear Acid Resin sont utilisées pour la synthèse du peptide modèle quadribranché selon les techniques usuelles de synthèse peptidique en phase solide, tel que décrit, notamment, par Merrifield (Science, 1986, 232:341-347) et Barbouche etal. (Virology, 1998, 247,137-143). Les peptides bruts sont alors purifiés par C18 reverse HPLC (gradient linéaire de 90 min d'acétonitrile avec 0,1% (par volume) d'acide trifluoroacétique, de 0 à 40% ; débit de 6m1/min.). L'homogénéité des peptides est vérifiée par C18 reverse HPLC par gradient d'acétonitrile en 0,1% (par volume) d'acide trifluoroacétique de 0 àà 60% ; débit de 1 ml/min.. Les fractions contenant les peptides purifiés sont caractérisés par analyse des acides aminés et spectrométrie de masse. 2) Etude de l'activité anti-virale de Poly6R De manière avantageuse selon l'invention, Poly6R ne présente pas de cytotoxicité significative aux doses où une activité anti-HIV est observée. En effet, Poly6R est cytotoxique à une dose de 10-4 M; or, Poly6R bloque à 100% la fusion virus HIV/lymphocyte pour des doses allant de 3. 10-5 M à 10.6 M selon les systèmes d'expression de Env. L'activité anti-HIV du peptide de l'invention et son rapport toxicité/efficacité sont donc supérieurs à ceux de peptides dérivés de la région de clivage endoprotéolytique déjà décrits dans l'art antérieur (Hallenberger et al., Nature 360: 358, 1992; Decroly et al., J Biol Chem 269: 12240, 1994; Barbouche et al., E. Virology 273: 169, 2000). Selon un aspect de grand intérêt, le peptide Poly6R de l'invention ne correspond pas à une séquence virale connue, ainsi son spectre d'activité et sa faible sensibilité à l'apparition de résistance sont potentiellement tout à fait avantageux. La présence de Poly6R dans des cultures de lymphocytes CD4+ infectées empêche la formation syncytiale, preuve de l'incapacité de Env à induire, en sa présence, la fusion entre membranes virale et cellulaire. En ce qui concerne le mode d'action de Poly6R, les Inventeurs ont observé qu'il agissait en bloquant directement, par sa présence dans le milieu extracellulaire, le processus de fusion membranaire lui-même, de la même façon qu'un peptide dénommé CLIV, précédemment étudié par les Inventeurs (Barbouche et al., E. Virology 273: 169, 2000, Barbouche et al., AIDS Research, Vol. 18; 2002). Poly6R possède cependant des avantages très intéressants par rapport aux peptides déjà décrits: 1) contrairement à CLIV, qui possède des séquences KAKRR reconnaissant les glycosaminoglycanes (activités parasites anti-coagulantes potentielles), Poly6R a vu ce type de site de reconnaissance modifié ; 2) la séquence peptidique de Poly6R, qui ne s'apparente pas à celle de l'extrémité C terminale de la gp120 d'un isolat connu, est (i) un gage quant à la prévention de l'émergence de mécanismes de résistance à son activité antivirale; (ii) aussi un gage d'efficacité contre un vaste éventail d'isolats viraux différents en terme de séquence d'enveloppe; (iii) un gage de prévention de l'infection de divers de celules-cibles Un autre peptide, (Fuzéon, T20, Enfuvirtide) , en usage clinique de routine depuis 2004, dérive de la gp4l et agit en interférant avec les changements conformationnels ayant lieu au sein de la gp4l en prélude au déclenchement de la fusion HIV / cellule. Cependant, Poly6R présente un avantage remarquable par rapport au T20: en effet, Poly6R n'agit pas par interaction avec une séquence peptidique virale - ce qui est source potentielle d'apparition de résistances - mais avec un composant de surface cellulaire selon les résultats disponibles. La présence de Poly6R lors de la seule co-incubation de cellules exprimant Env et de lymphocytes CD4+, inhibe la formation syncytiale. L'inhibition n'est pas due alors à un effet sur la biosynthèse de Env ou sur le clivage de la gp160 par des protéases puisque ces événements se font en absence du peptide, ce dernier n'étant ajouté que lors du contact inter-cellules. Poly6R agit donc essentiellement, au cours de l'interaction Envlsurface lymphocytaire, par interférence directe avec une étape du processus de fusion membranaire ou avec des événements conduisant à cette fusion, et non, de façon principale, par inhibition du clivage intracellulaire ou d'une autre étape de la biosynthèse de Env. Grâce à des essais de fusion cellules/cellules aptes à établir une discrimination entre l'étape d'interaction Env/CD4 et l'étape de fusion induite par la gp4l, les Inventeurs ont également observé que l'étape inhibée par Poly6R est postérieure à l'étape de liaison de la gp120 à CD4. L'inhibition se fait via l'interaction avec un composant de surface cellulaire, la pré-incubation de Poly6R et des cellules-cibles induisant une inhibition sensible de l'infection. Ces résultats indiquent que ce peptide a des applications thérapeutiques anti-HIV potentiellement larges. Il a aussi les caractéristiques d'un outil très précieux pour décortiquer certaines étapes encore inconnues du processus de fusion membranaire, et permettre éventuellement l'isolement par affinité du partenaire cellulaire impliqué dans le mécanisme d'inhibition. REVENDICATIONS 1. Peptide multibranché possédant notamment une activité anti-HIV, caractérisé en ce qu'il comprend au moins deux branches peptidiques, identiques ou différentes, la 5 séquence peptidique de chacune des dites branches (i) dérivant de la séquence consensus de la région de clivage endoprotéolytique native du précurseur gp160 de l'enveloppe du virus HIVI, le site de clivage en amont de chacune desdites séquences peptidiques ayant été ou non modifié, par rapport au site de clivage en amont de la région de clivage endoprotéolytique native, de façon à améliorer l'activité anti-fusogène par rapport à la construction peptidique correspondant à la séquence consensus de la région de clivage endoprotéolytique, tout en augmentant le spectre d'activité, (ii) dérivant de la séquence consensus de l'extrémité C terminale de la gp120 mature de l'enveloppe fusogène de HIV-I, (iii) comprenant de 5 à 25 acides aminés, dont au moins deux acides aminés basiques situés au niveau du site de clivage en amont, (iv) lesquels acides aminés basiques situés à l'emplacement du site en amont sont à une distance de plus de 4 acides aminés du core de lysine, à l'exclusion d'un peptide tétramère non modifié, avec des branches identiques. 20 2. Peptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend au moins un motif de structure polybranchée de formule (I) : al b1 (l) dans laquelle - b1 représente une molécule disubstituée, notamment un acide aminé disubstitué tel que la lysine, - al et a2, identiques ou différents, comportent un premier motif au niveau du site en amont avec au moins deux acides aminés basiques, tels que K ou R, suivi d'une séquence d'au moins quatre acides aminés en son C terminus, jouant le rôle d'espaceur, branchée sur la molécule disubstituée, notamment l'acide aminé disubstitué. 3. Peptide selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'au moins l'un de a1 et a2 5 comporte, au niveau du site en amont du premier motif, une séquence répondant à SEQ ID N 2: PTRRRRRR. 4. Peptide selon l'une quelconque des revendications 2 ou 3, caractérisé en ce qu'au moins l'un de al et a2 comporte une séquence répondant à SEQ ID N 3: 10 PTRRRRRRWQREKR. 5. Peptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte deux motifs de formule (I) telle que définie à la revendication 2, répondant à la formule (Il) : a1 b1 a2 a3 b1 dans laquelle b1 est tel que défini à la revendication 2, a1 et a2 sont tels que définis à l'une quelconque des revendications 2 à 5, a3 et a4, identiques ou différents, ont les mêmes significations que a1 et a2. 6. Peptide selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un peptide à quatre branches dans laquelle chaque branche a1, a2, a3 et a4 répond à la séquence peptidique SEQ ID N 3: PTRRRRRRWQREKR, de formule (III) suivante: b1 SEQ ID N 3 SEQ ID N 3 SEQ ID N 3 SEQ ID N 3 7. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre d'agent actif, une quantité thérapeutiquement efficace d'un peptide tel que défini à la revendication 1, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que la quantité thérapeutiquement efficace varie de 10-5 M à 10-12 M, et de préférence de 10"6 M à 10-9M. 9. Utilisation d'un peptide tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour la préparation d'un médicament destiné à lutter contre l'infection par le virus du SIDA (syndrome d'immunodéficience acquise) ou tout processus pathologique impliquant le ligand cellulaire de la construction peptidique. 10. Fragment d'ADN, caractérisé en ce qu'il code pour un peptide tel que défini à 25 l'une quelconque des revendications là 6. 11. Vecteur, notamment de type plasmide, caractérisé en ce qu'il comporte le fragment d'ADN tel que défini à la revendication 10. K-(3A (III) K