Brevet FR2878248A1 — publié le 20060526

R2 1+ RI -N-R3 X- A R6 PO3H2 P03H2 (I) L'invention concerne le domaine de la protection de surfaces solides, telles que des surfaces métalliques ou minérales, contre la contamination macromoléculaire et microbiologique, en particulier la contamination bactérienne. On entend par contamination microbiologique, la contamination par des microorganismes. L'invention concerne en particulier des nouveaux composés bisphosphoniques, les compositions anti-contamination les contenant, ainsi que leur utilisation pour limiter la fixation de macromolécules et de microorganismes, en particulier de bactéries, sur des surfaces, telles que des surfaces métalliques ou minérales. Dans l'industrie alimentaire ou médicale, les surfaces représentent une source importante de contamination bactériologique. Par exemple, dans les industries utilisant des fermentations ou des réacteurs comme en biotechnologie, l'adsorption de macromolécules sur les parois des conteneurs peut conduire à la dénaturation de ces composés, ce qui a un effet délétère dans le cas de productions de protéines de haute valeur (comme des cytokines par exemple) au moyen de fermenteurs. Dans d'autres situations, la couche polymérique formée peut être ellemême potentiellement pathogène, comme dans le cas de prions adsorbés et partiellement dénaturés dont l'enlèvement complet de la surface est difficile à obtenir. Les microorganismes, et en particulier les bactéries, sont susceptibles de coloniser des surfaces variées et de former de véritables communautés. Ces phénomènes de colonisation de surface sont à l'origine de la formation du biofilm qui constitue une source importante de contamination microbiologique. La formation des biofilms sur une surface implique différents phénomènes successifs. Le phénomène précurseur est la fixation ou encore l'adsorption de macromolécules par leur dénaturation et leur étalement au contact de la surface. Ces macromolécules polymériques sont de type protéique ou polyosidique, voire polyphénolique. De manière générale, elles sont d'origine biologique, en particulier d'origine bactérienne. En se fixant sur la surface, les macromolécules forment une couche polymérique potentiellement pathogène, comme dans le cas de prions adsorbés. De nombreux micro-organismes tels que les protozoaires, les bactéries, les champignons ou encore les algues, vont alors pouvoir se développer dans cette couche polymérique par la présence de zones hydrophobes, de groupements amines ou sulfures ou de sites mono ou polyosidiques. Une fois fixés, en conditions favorables, ces micro-organismes vont non seulement se multiplier mais également sécréter d'autres polymères, construisant ainsi une matrice de type film, que l'on appelle biofilm. Ce film est connu par exemple pour être un facteur essentiel de la contamination des installations de climatisation par des légionelles, permettant une dissémination de ces germes en haute concentration. En conditions particulières, comme en milieux marin ou fluvial, ce film microbiologique va servir de support à des organismes pluricellulaires végétaux ou animaux conduisant à des films épais. Un exemple est celui de la contamination des coques de bateaux, conduisant à une augmentation importante de leur résistance à l'avancement. De manière générale, l'ensemble de ces phénomènes est souvent connu sous le terme fouling ou biofouling , ce qui peut se définir ainsi: ensemble des processus successifs conduisant à la colonisation de surfaces par des micro-organismes voire des organismes pluricellulaires. Un phénomène proche est celui des prothèses implantées, qui se recouvrent rapidement des macromolécules présentes dans les milieux en contact, en servant ultérieurement de support à l'envahissement des cellules migrantes. La structure du biofilm est en général poreuse et permet la circulation de l'eau et de nutriments qui permettent le renouvellement et le développement des colonies de microorganismes. Cette couche macromoléculaire permet également de protéger les microorganismes contres les agressions extérieures (biocides, antibiotiques, antiseptiques) en ralentissant l'accès de produits biologiquement actifs vis à vis des cellules. Lors de l'étape d'adsorption macromoléculaire, différentes forces d'attraction entrent en jeu selon le type de surface. Celles qui interviennent généralement dans ce processus sont de type électrostatiques, ioniques, Van Der Waals, liaisons hydrogènes ou interactions hydrophobes. L'adsorption dépend ainsi des forces d'attraction ou de répulsion existant entre les macromolécules et la surface. En outre, il faut tenir compte de nombreux facteurs comme la tension de surface du support (modulée par la présence ou l'absence de tensio-actifs), ou encore la répartition non uniforme des charges électriques sur la surface. Après cette phase d'adsorption, la fixation proprement dite du microorganisme dépend de son type, de l'importance de sa population dans le milieu, de la durée de sa phase de croissance, et de la déformation cellulaire. Cette dernière dépend également du milieu de dispersion: température de la solution, pH, concentration en électrolyte et disponibilité des nutriments. Enfin, la force d'attachement dépend aussi de la charge de la surface et de la durée du contact. Après fixation, les microcolonies se forment sur la surface. Leur croissance puis leur confluence aboutissent rapidement à la formation d'un enduit mince et superficiel au départ, qui s'épaissit au fur et à mesure de la croissance microbiologique jusqu'à atteindre quelques millimètres d'épaisseur: c'est le biofilm. L'adhésion macromoléculaire est donc une étape primordiale dans le processus de formation du biofilm. Le biofilm le plus connu est probablement le biofilm dentaire, communément appelé plaque dentaire, écosystème complexe de la cavité buccale de l'homme, qui est à l'origine des caries dentaires, des récidives de caries, des maladies parodontales et des péri-implantites qui mettent en péril la longévité du biomatériau. Les agents chimiques biocides, tels que le chlore ou les anti-biotiques, s'avèrent souvent inefficaces ou insuffisants contre la formation du biofilm sur les surfaces. En effet, la chloration d'un biofilm n'atteint que la partie externe du biofilm et laisse intact une couche de bactéries capables de se développer rapidement à nouveau. L'utilisation de chlore pour éliminer le biofilm n'est efficace que si celui-ci est éliminé manuellement de la surface. Les antibiotiques ne sont pas non plus satisfaisants car ils sont susceptibles d'entraîner la dissémination de gênes de résistance chez les microorganismes, notamment les bactéries, les rendant ainsi peu à peu inactifs. Il est fréquent de voir des produits biocides actifs in vitro contre des bactéries isolées devenir complètements inactifs contre des bactéries sessiles. Par ailleurs, l'utilisation de molécules répulsives ne s'avère efficace que pour les organismes pluricellulaires évolués. A l'heure actuelle, la recherche est donc orientée vers le développement de produits actifs contre les biofilms et non plus uniquement contre le développement des microorganismes ou des bactéries eux-mêmes. Deux possibilités existent pour lutter contre la contamination des surfaces: Une action enzymatique directe permettant une dégradation de la structure du biofilm facilitant ainsi son décrochage. Une limitation de l'adhésion des macromolécules sur les surfaces pour empêcher le développement de colonies de microorganismes et faciliter le nettoyage de ces surfaces. Dans la présente invention, l'approche choisie consiste à rendre les propriétés physico-chimiques des surfaces solides, notamment les forces d'attraction de ces surfaces, défavorables à l'adhésion ou l'adsorption macromoléculaire, et donc à limiter voire empêcher la fixation de microorganismes, en particulier de bactéries, sur ces surfaces. La difficulté de cette approche réside dans l'identification d'un composé qui est capable à la fois de se fixer ou de s'adsorber rapidement, efficacement et durablement sur la surface à protéger, et qui empêche ou limite la fixation de microorganismes sur cette surface, grâce à la création d'une interface entre la surface et le milieu extérieur, défavorable à l'adhésion et au développement des microorganismes. Pour limiter l'adsorption des macromolécules, une voie connue est le recouvrement, par adsorption et/ou greffage, de polymères hydrophiles. L'agitation brownienne de leurs chaînes repousse les molécules susceptibles de s'adsorber. Dans cette gamme de molécules, se trouvent des polymères naturels comme certains polyosides (dextrane par exemple) et des protéines (dont l'exemple le plus courant est l'albumine) mais également des polymères synthétiques comme les polyéthylèneglycols (PEG). Malgré ses avantages indéniables et son efficacité prouvée, cet effet de brosse polymérique présente certaines limitations: la densité de surface ne doit être ni trop faible (dans ce cas, il existe des trous dans la couche et donc des possibilités d'adsorption) ni trop forte (les chaînes ne présentent plus la liberté suffisante pour avoir une agitation brownienne permettant de repousser les autres molécules). De plus, les interactions entre les macromolécules immobilisées et les molécules en solution, qu'elles soient de nature spécifique ou non, doivent être faibles. Ce point exclut de fait tous les polymères fortement chargés électrostatiquement qui peuvent contracter des interactions fortes avec des macromolécules de forte charge opposée. D'un point de vue pratique, la réalisation d'un revêtement aux propriétés convenables et durables dans le temps est en général difficile à mettre en uvre, en particulier pour des surfaces étendues. Des moyens pour arriver à obtenir des couches de propriétés convenables sont proposés dans ce brevet. Depuis quelques années, il a été montré que des surfaces exprimant des groupements phosphorylcholine en densité suffisante pouvaient limiter considérablement l'adsorption de protéines (Biomaterials, 2002, 23, 36993710). Ceci a notamment été montré pour des liposomes à base de phosphatidylcholine et dans la protection de prothèses vasculaires recouvertes de polymères porteurs de groupements phosphorylcholine. De même, il est possible de réduire considérablement l'adsorption de protéines sur des supports métalliques de type or en utilisant des molécules, comportant des groupements phosphorylcholine, fixées sur le support par des groupements thiols. Le mécanisme en cause dans ces effets semble être lié à la forte hydrophilie intrinsèque de la phosphorylcholine greffée et à la présence d'un dipôle électrique, en absence de groupements acide-base de Lewis susceptibles de contracter des liaisons hydrogène. Cette hypothèse expliquerait que des molécules zwitterioniques comme des sulfobétaïnes soient également susceptibles d'avoir un effet anti-adsorption. Le brevet US 5,888,405 propose l'utilisation d'aminophosphonates pour modifier les 30 propriétés superficielles et par là altérer le phénomène de biofouling. Cependant, les forces d'adsorption de phosphonates sur des supports métalliques types oxydes de fer sont relativement discrètes (J. Coll. Interface Sei., 238(l):37-42) et laissent entrevoir une action limitée. Dans la littérature, il n'existe pas de molécule disponible limitant l'adsorption protéique et capable de se fixer fortement sur des supports comme l'acier, l'aluminium, les calcaires ou le verre modifié. L'invention vise à palier les inconvénients de l'art antérieur en proposant des composés et des compositions particulièrement efficaces et adaptées à la réduction du biofouling (au sens large du terme), selon différentes applications possibles, notamment pâtes et gels, solutions aqueuses, alcooliques ou organiques, suspensions, mousses, poudres, aérosols.... L'invention vise à définir le protocole de fabrication le plus adapté pour des molécules efficaces dans ces applications. L'invention vise également à fournir des compositions utilisant une quantité efficace de composé actif, apte à lutter contre les contaminations microbiologiques de surfaces métalliques ou minérales. L'invention vise en particulier à obtenir une composition comprenant un composé capable à la fois d'être un bon inhibiteur compétitif de la fixation des protéines et de se fixer efficacement et durablement sur les surfaces métalliques ou minérales à protéger. L'invention propose ainsi de nouveaux composés capables de se fixer sur des surfaces métalliques ou minérales et de limiter la fixation de microorganismes, en particulier de bactéries, et le développement de ceuxci sur ces surfaces. L'invention vise en particulier les compositions contenant ces nouveaux composés et leur utilisation contre la contamination microbiologique de surfaces métalliques ou minérales, dans le domaine odontologique (limitation de la formation de la plaque dentaire, lutte contre la formation de caries et les maladies parodontales) et les domaines de l'hygiène hospitalière et de l'agroalimentaire. L'invention a pour premier objet les composés de formule (I) : R2 I+ Rl N R3 X- A R6 PO3H2 PO3H2 (I) dans laquelle: - R6 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle en C1-C12, linéaire ou ramifié, un groupe OH, une amine éventuellement substituée par un ou deux groupes alkyle en C1-C4, linéaires ou ramifiés, ou un groupe A' N+ RI'R2'R3', XI - RI, RI', R2, R2', R3 et R3' représentent indépendamment l'un de l'autre: * un groupe alkyle en C1-C12, linéaire ou ramifié, ou * un groupe alkylammonium (CH2)6 N+RR'R", X2- dans lequel n est un entier compris entre 1 et 12 et R, R', et R" représentent indépendamment l'un de l'autre un alkyle en CI à C4, linéaire ou ramifié, - A et A' représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe (CH2)m Z (CH2)p dans lequel: * m est un entier compris entre 0 et 12, * p est un entier compris entre 0 et 12, * m + p est un entier compris entre 0 et 12, et * Z-- représente un atome d'oxygène, un atome de soufre, un groupe CR7R8R9 , un groupe COO , un groupe CONR7 ou un groupe NR7R8 dans lesquels R7, R8 et R9 ont les mêmes significations que R6, ou bien un groupe N+R4R5 , X3" dans lequel R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en CI-C12, linéaire ou ramifié, - avec la condition que la molécule de formule (I) contient au moins deux fonctions ammonium quaternaires, et X, XI, X2 et X3 sont des contre-ions pharmaceutiquement acceptables. Le terme pharmaceutiquement acceptable signifie acceptable d'un point de vue de la toxicité. Le terme atome d'halogène signifie un atome de fluor, de chlore, de brome ou d'iode. Les termes alkyle en C1 à C4 et alkyle en C1 à C12 signifient respectivement un alkyle comprenant 1 à 4 atomes de carbone et un alkyle comprenant 1 à 12 atomes de carbone. Un groupe alkyle en C1 à C4, linéaire ou ramifié, comprend notamment les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, sec-butyle, tert butyle. L'expression R7, R8 et R9 ont les mêmes significations que R6 signifie que R6, R7, R8 et R9 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle en C1-C12, linéaire ou ramifié, un groupe OH, une amine éventuellement substituée par un ou deux groupes alkyle en C1-C4, linéaires ou ramifiés, ou un groupe A' N+ RI'R2'R3', X1- tel que défini précédemment. Ces composés sont particulièrement appropriés contre la contamination microbiologique de surfaces métalliques ou minérales, pour les raisons suivantes: - ils sont non toxiques et biodégradables, - ils ne sont pas nécessairement biocides, - ils ne sont pas nécessairement bactériostatiques, - ils présentent une haute affinité pour les surfaces métalliques (tels que l'acier inoxydable ou l'aluminium) ou minérales (tels que la surface dentaire), - ils sont capables de se fixer rapidement, efficacement et durablement sur les surfaces à protéger, -ils forment un film monomoléculaire auto-assemblé au contact de surfaces métalliques ou minérales et créent ainsi une interface entre la surface protégée et le milieu extérieur, qui limite efficacement et durablement le développement de biofilms sur ces surfaces, - cette interface limite voire évite la dénaturation des macromolécules 30 habituellement à l'origine de la formation de biofilms au contact de la surface. Les composés de formule (I) comprennent deux groupements phosphoniques liés au même atome de carbone (groupements bisphosphoniques ou gemdiphosphoniques) qui permettent la fixation sur les surfaces solides à protéger, et une ou deux chaînes éventuellement ramifiées, liées également à ce même atome de carbone et comprenant au moins deux fonctions ammonium quaternaire, situées l'une à la suite de l'autre sur la chaîne ou bien sur des chaînes ramifiées. Les fonctions ammonium quaternaire ont deux rôles importants pour lutter contre le phénomène de contamination microbiologique: elles permettent de réduire la charge de surface qui est souvent très négative 10 dans le cas de la dent ou de surfaces métalliques. Une faible charge électrique est un facteur important de biocompatibilité, elles permettent une hydratation de la surface par une structuration de l'eau à l'interface avec le milieu extérieur. Cette hydratation permet de limiter voire d'éviter la dénaturation des composés macromoléculaires. Dans la formule (I), si R6 représente le groupe A' N+RI'R2'R3', XI-, alors, de préférence, A'=A, RI' = RI, R2' = R2 et R3' = R3 et XI- = X-. De manière préférée, R6 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe -OH ou une amine NH2. De préférence, Z représente un atome d'oxygène, un atome de soufre, un groupe CR7R8R9 , un groupe COO , un groupe CONR7 ou un groupe NR7R8 où R7, R8 et R9 sont tels que définis précédemment. De manière encore plus préférée, Z représente un groupe N+R4R5 , X3- dans lequel R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1- C12, linéaire ou ramifié. Avantageusement, RI, R2, R3, R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en CI à C4, de préférence linéaire, tel que le groupe éthyle ou méthyle. Encore plus avantageusement, RI, R2, et R3 sont identiques et représentent chacun un groupe méthyle ou éthyle et R4 et R5 sont identiques et représentent chacun un 30 groupe méthyle ou éthyle. Avantageusement, X, X1, X2 et X3 sont choisis parmi les ions iodure, chlorure, bromure, fluorure, sulfonate, phosphate, phosphonate, ou tout ion pharmacologiquement actif. De préférence, les composés selon la présente invention sont choisis parmi ceux répondant à la formule (Ia) suivante: R1 N R3 iCH2)P + R4 N R5 2 X- I (CH2)m R6 PO3H2 PO3H2 (Ia) dans laquelle: _ R6 représente OH ou -NH2, m est un entier compris entre 1 et 12, _ p est un entier compris entre 1 et 12, m + p est un entier compris entre 2 et 12, _ R1, R2, R3, R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1-C4, linéaire ou ramifié, et X- représente un contre-ion pharmaceutiquement acceptable. Chez les composés de formule (Ia), m est de préférence compris entre 3 et 7 et p est 20 de préférence compris entre 1 et 4. Avantageusement, R1, R2, R3, R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1 à C4, de préférence linéaire, tel que le groupe éthyle ou méthyle. R2 R1, R2, et R3 sont de préférence identiques et représentent chacun un groupe méthyle ou éthyle R4 et R5 sont de préférence identiques et représentent chacun un groupe méthyle ou éthyle. Avantageusement, X est choisi parmi les ions iodure, chlorure, bromure, fluorure, 5 sulfonate, phosphate, phosphonate, ou tout ion pharmacologiquement actif. Selon un second aspect, l'invention a pour objet une composition pour hygiène buccale par voie topique, comprenant au moins un composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus, de préférence un composé de formule (Ia), de préférence en association avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. La composition comprend avantageusement entre 0,01% et 20% en poids du composé de formule (I), de préférence entre 0,05 et 5% en poids, encore plus préférentiellement entre 0,1% et 2% en poids. La composition se présente typiquement sous la forme d'un bain de bouche, d'un liquide à pulvériser, d'une pâte à dentifrice, d'un gel dentifrice, d'une pâte à appliquer, d'une poudre, d'une gomme à mâcher ou à appliquer ou d'une mousse. La composition peut être appliquée sur les dents par diverses techniques appropriées notamment le brossage, la teinture, la pulvérisation, le bain de bouche, la gomme à mâcher, ou au moyen d'un accessoire dentaire comme un fil dentaire imprégné de ladite composition, une lingette éventuellement jetable imprégnée de ladite composition ou une éponge imprégnée de ladite composition. D'autres moyens d'application possibles sont connus de l'homme du métier. Divers autres ingrédients peuvent être incorporés dans la composition, tels que des agents prophylactiques, des agents de polissage, d'autres surfactants, des arômes, des agents d'épaississement ou d'humectation appropriés. Il faut cependant s'assurer que ces agents n'empêchent pas la fixation souhaitée des polyphosphonates sur les surfaces dentaires. Parmi les agents prophylactiques, on peut citer des composés limitant les caries tels que du fluorure de sodium, du fluorure de potassium, de l'hydrofluorure d'hexylamine, mais également tous les antiseptiques et antibiotiques connus pour leur activité au niveau buccal. Typiquement, ces agents prophylactiques sont présents en quantités suffisantes, par exemple pour fournir une concentration en ion fluorure de l'ordre de 0,5 à 2 % en poids de la composition. Parmi les agents de polissage on peut citer des résines (produit de condensation de l'urée et du formaldéhyde), des particules de résines polymérisées par chauffage (voir US 3 070 510), des xérogels de silice (US 3 538 230), des particules de silice précipitées, le pyrophosphate de calcium, le métaphosphate insoluble de sodium, l'alumine hydratée, l'orthophosphate dicalcium, ces agents étant suffisamment peu abrasifs pour ne pas altérer de manière non souhaitée la surface de la dent ou de la dentine. Ces agents peuvent représenter par exemple 5 à 95 % en poids de la composition. Parmi les agents de gélification ou d'épaississement, on peut citer des gommes naturelles, telle que la gomme arabique, le carboxyle cellulose de sodium, l'hydroxyéthyl cellulose, représentant généralement 0,5 à 10 % de la composition en poids. Lorsque la composition est sous forme d'un liquide buccal, elle contient typiquement un alcool, un solubilisant, un agent de nettoyage non abrasif, et lorsqu'elle est sous forme d'un gel elle comprend typiquement un agent épaississant. Parmi les humectants, on peut citer la glycérine, le sorbitol, le polyéthylène glycol et d'autres alcools polyhydriques, ces humectants pouvant représenter jusqu'à environ 35 % du poids de la composition. Typiquement la composition peut comprendre une phase liquide représentant 10 à 99% en poids et comprenant de l'eau et un humectant en proportion variable. Parmi les arômes, on peut utiliser éventuellement associés les huiles de menthe, le menthol, l'eugénol, l'orange, le citron, l'anis, la vanilline, le thymol, ces agents 25 représentant généralement moins de 5 % en poids de la composition. La composition peut comprendre en outre par exemple des agents sucrants (saccharinate de sodium), des agents de blanchiment (dioxyde de titane ou oxyde de zinc), des vitamines, d'autres agents anti-plaque ( sels de zinc, dont citrate de zinc, sels de cuivre, sels d'étain, sels de strontium, allantoïne, chlorhexidine), des agents antibactériens (triclosan: 2',4,4'10 / trichloro-2-hydroxy-diphényl éther), des agents anti-calculs (pyrophosphates de métal di et/ou tétra alcalins), des agents ajusteurs de pH, des agents colorants, des agents anti-caries (caséine, urée, glycérophosphates de calcium, fluorure de sodium, fluorophosphate de monosodium), des composés antitaches (polymères de silicone), des agents anti-inflammatoires (salicylanilides substitués), des agents désensibilisants (nitrate de potassium, citrate de potassium). D'autres agents sont cités dans le brevet US 5 258 173. Le pH de la composition est typiquement compris entre 5 et 10. Le pH sera préférentiellement compris entre 5 et 7. Exemple de composition pour une pâte ou un gel dentifrice (% en poids) : composé bisphosphonique de formule (I): 0,2 à 5% - agent abrasif: 10% à 50% - agent épaississant: 0,1% à 5% agent humectant: 10% à 55% agent arôme: 0,04% à 2% agent sucrant: 0,1 % à 3% agent colorant: 0, 01% à 0,5% eau: 2 à 45%. Exemple de composition de gel non abrasif tel qu'un gel subgingival (% en poids) : composé bisphosphonique de formule (I): 0,2 à 5% agent épaississant: 0,1% à 20% agent humectant: 10% à 55% agent arôme: 0,04% à 2% - agent sucrant: 0,1% à 3% - agent colorant: 0,01% à 0,5% eau: 2 à 45%. Exemple de composition de bain de bouche (% en poids) : - composé bisphosphonique de formule (I): 0,2 à 5% - agent humectant: 0 à 50% agent arôme: 0,04% à 2% agent sucrant: 0,1% à 3% agent colorant: 0,01 % à 0,5% eau: 45 à 95 % ethanol: 0 à 25% Une solution dentaire comprendra typiquement 90 à 99% d'eau. Une composition de type chewing-gum comprendra typiquement une gomme de base (environ 80% à 99%), un agent arôme (environ 0,4% à 2%), un agent sucrant (environ 0,01% à 20%). L'homme du métier incorporera de manière appropriée et sans effort excessif différents agents tels que cela est décrit dans le brevet US 6 132 702. Pour préparer une composition dentifrice, on procède par exemple comme suit: les humectants tels que la glycérine, le propylène glycol, sont dispersés avec l'agent sucrant et l'eau dans un mélangeur, jusqu'à ce que le mélange devienne un gel homogène. On ajoute alors un pigment, un ajusteur de pH le cas échéant, un agent anti-caries. Ces ingrédients sont mélangés jusqu'à obtenir une phase homogène, à laquelle on mélange alors un agent de polissage. Le mélange est alors transféré dans un mélangeur à haute vitesse, dans lequel un agent épaississant, un arôme, et le composé de formule (I) sont mélangés, sous pression réduite de 20 à 100 mm de Hg. Le produit obtenu est une pâte semi-solide et extrudable. La composition dentifrice est typiquement appliquée régulièrement, chaque jour ou tous les deux ou trois jours, d'une à_trois fois par jour, à un pH d'environ 5 à 9 ou 10, en général entre 5,5 et 8. La présente invention a également pour objet un procédé cosmétique pour prévenir l'apparition de la plaque dentaire ou limiter le développement de la plaque dentaire sur les dents, comprenant l'application d'une quantité efficace de la composition pour hygiène buccale telle que précédemment décrite, sur les dents. Une quantité efficace signifie une quantité permettant de limiter ou d'empêcher l'apparition ou le développement de la plaque dentaire. La présente invention a également pour objet un médicament comprenant au moins un composé de formule (I), de préférence (Ia), ou bien la composition buccale précédemment décrite, notamment pour prévenir la formation des caries ou pour prévenir les maladies parondotales. Selon un troisième aspect, la présente invention a pour objet unecomposition anticontamination destinée à empêcher ou limiter la fixation de macromolécules sur les surfaces solides, telles que les surfaces métalliques ou minérales, comprenant au moins un composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus, de préférence au moins un composé de formule (Ia). Dans le cadre de la présente invention, on entend par macromolécule, une molécule organique ayant une masse moléculaire relativement élevée (poids moléculaire supérieur à 1000 Da) et pouvant servir de substrat pour la fixation et le développement de microorganismes sur des surfaces solides. Ces macromolécules sont notamment de type peptidique, protéique, polyosidique, polyphénolique, lipidique ou acide nucléique. En outre, la composition anti-contamination selon l'invention limite ou empêche la fixation des microorganismes, en particulier des bactéries, et ainsi, limite ou empêche la formation et le développement d'un biofilm sur les surfaces solides, notamment métalliques ou minérales. Dans le cadre de la présente invention, le terme microorganisme désigne notamment les bactéries, les virus et les prions. Parmi les bactéries ciblées par ce type de composition, on peut citer notamment, Streptococcus (mutans, sanguis, pyogenes...), Salmonella, Listeria monocytogenes, Legionella, Vibrio cholerae, Lactobacillus, Porphyromonas, Staphylococcus (aureus, epidermidis), Pseudomonas, Escherichia coli, Candida. La composition anti-contamination comprend avantageusement entre 0, 01 % et 10 % en poids du composé de formule (I), de préférence le composé de formule (Ia), de préférence entre 0,05 % et 5 % en poids. Le pH de la composition est typiquement compris entre 5 et 10. Le pH sera préférentiellement compris entre 5 et 7. Ce produit pourra être utilisé en mélange en tant qu'additif dans des foiHiulations détergentes ou désinfectantes utilisées dans l'industrie. Les agents chimiques les plus communément utilisés pour la fabrication de détergents sont les agents tensio-actifs (ioniques, non ioniques ou amphotères), les agents chélatants, les alcalins et les solvants. Ces formulations peuvent également contenir des principes actifs de type antiseptiques, biocides, antibiotiques. A titre d'exemple, le composé de formule (I) peut être incorporé dans une formulation de composition suivante: désinfectants (tels que le glutaraldéhyde, l'acide peracétique, l'hypochlorite de sodium...) représentant par exemple 0,01 % à 30 % en poids de la composition, agents tensio-actifs (tels que alcools gras étholés, propoxylés, des oxydes d'amines, des condensats d'oxyde d'éthylène et de propylène, des sels d'ammoniums quaternaires, des sulfates, des sulfonates et sulfosuccinates) en représentant par exemple 0,01 % à 30 % en poids de la composition, agents chélatants (par exemple l'EDTA, iminodisuccianate de sodium, les carbonates de soude, les ortho phosphates et les silicates, les phosphates condensés) représentant par exemple 0,1 % à 5 % en poids de la composition, alcalins (carbonates, phosphates et silicates) représentant par exemple 0,1 % à 40 % en poids de la composition, solvants, miscibles à l'eau (alcools, glycol) ou non miscibles à l'eau (dérivés de térébentine, dérivés du pétrole), éventuellement ioniques, représentant par exemple 0,1 % à 80 % en poids de la composition. Les surfaces pouvant être protégées par la composition anti-contamination selon l'invention sont par exemple des surfaces métalliques telles que le fer, l'acier inoxydable, le chrome, l'aluminium, le zinc, le titane, le tungstène, le plomb ou le cuivre, ainsi que les alliages ou composites contenant au moins l'un de ces métaux, ou bien des surfaces minérales, telles que le silicium et ses dérivés, les matériaux silicieux, les surfaces calciques, céramiques ou dentaires. L'application de la composition anti-contamination sur les surfaces à traiter peut se faire par trempage ou immersion de cette surface dans la composition, ou par pulvérisation de la composition sur la surface à traiter. Elle peut se faire aussi au moyen d'accessoires, comme par l'emploi de lingettes éventuellement jetables imprégnées de la composition. La présente invention a ainsi pour objet l'utilisation des composés de formule (I) tels que précédemment décrits ou des compositions anticontamination microbiologique telles que précédemment décrites, pour limiter ou empêcher la fixation de macromolécules, de microorganismes et de biofilm sur des surfaces solides, notamment métalliques ou minérales. Ces surfaces sont par exemple la surface de matériel industriel, agroalimentaire ou hospitalier, de bâtiments, de constructions ou de véhicules terrestres, aériens ou maritimes, de matériel de climatisation ou de réfrigération, ou bien sur la surface d'instruments chirurgicaux, de prothèses, d'instruments de dentisterie ou de capteurs biologiques et médicaux. Exemple de composition liquide anti-contamination microbiologique appliquée par 15 trempage, rinçage, dépôt par chiffon humide ou par aspersion (% en poids): - composé de formule (I) : 0,02 à 5 % -eau:15à99% - éthanol: 0 à 85 % Dans la composition précédente, la présence d'alcool facilite le mouillage de la surface et l'homogénéité du revêtement. De plus, l'évaporation de l'alcool permet d'obtenir à la surface de très hautes concentrations facilitant une adsorption rapide. L'éthanol peut être avantageusement remplacée par des composés volatils miscibles à l'eau (alcools de Cl à C6 en particulier alcool isopropylique, aldéhydes, cétones dont acétone, éthers, ...) ou peu miscibles à l'eau (alcanes de C4 à C8 en particulier). Une telle composition ne laisse que peu de résidus solides après évaporation des liquides et est donc particulièrement indiquée lorsque la surface doit être directement utilisée après application, en particulier pour les appareils et instruments devant être au contact de la nourriture ou de l'organisme humain. Exemple de composition de liquide de rinçage de surface (% en poids): composé bisphosphonique de formule (I) : 0,02 à 5 % agent humectant: 0 à 50 % - agent odoriférant: 0,04 % à 2 % - agent colorant: 0 à 0,5 % eau:15à99% éthanol: 0 à 85 % Dans cette composition destinée à faciliter l'entretien de surfaces esthétiques, comme les feuilles inox dans les bâtiments publics, la présence d'agents humectants, odoriférants voire colorants est prévue pour rendre l'application plus aisée mais également pour améliorer l'agrément esthétique (par exemple, colorant azurant). Exemple de composition pour une pâte ou un gel (% en poids) : composé bisphosphonique de formule (I) : 0.02 à 5 % - agent abrasif: 10 % à 50 % agent épaississant: 0,1% à 5 % - agent humectant: 10 % à 55 % -agent colorant: 0 à 0,5 % - agent de contrôle du pH: 0 à 3 % - eau: 2 à 60 %. Cette composition est spécialement destinée au récurage de surfaces fortement encrassées, en particulier sur des surfaces verticales voire inversées. Exemple de composition de type mousse (% en poids): composé bisphosphonique de formule (I) : 0,02 à 5 % - agent tensioactif: 0 à 20 % - agent épaississant: 0 à 20 % - eau:25à50% - éthanol: 0 à 25 % - agent propulseur: 5 à 70 % Dans cette composition, l'agent propulseur peut être un gaz liquéfié comme des alcanes (propane ou butane), des fluorocarbonés (F14, F26, ...), des gaz sous pression (CO2, N2, ...) voire des liquides volatils. Cette formulation est particulièrement avantageuse lorsque les pièces sont difficiles à atteindre (intérieur de tuyaux fins, échangeurs de chaleur, climatiseurs, ...). Elle est également intéressante pour les usages avec de larges surfaces (fermenteurs en biotechnologie, salles de préparation ou de découpe en agro-alimentaire, ...). Exemple de composition de type poudre (% en poids): - composé bisphosphonique de formule (I) : 0,02 à 5 % agent tensio-actif: 5 % à 95 % agent complexant: 1 à 10 % agent diluant: 10 à 90 % - agent humectant: 1 % à 5 % - agent colorant: 0 à 0,5 % - agent de contrôle du pH: 0 à 3 % Dans cette composition, la composition globale peut être celle d'une poudre de lavage déjà connue de l'homme de l'art, à laquelle est rajouté le composé bisphosphonique de formule (I). Cette formulation est particulièrement avantageuse comme agent de lavage pour les machines à laver la vaisselle, les machines à laver le linge. Dans toutes les compositions précédentes, les composés bisphosphoniques de formule (I) peuvent être utilisés soit seuls soit en association. Exemple de composition pour recouvrement de prothèses (% en poids) : composé bisphosphonique de formule (I) : 0,02 à 5 % agent complexant: 0 à 10 % - agent de contrôle du pH: 0 à 3 % Dans cette composition, l'ajout d'agents complexant et de contrôle de pH est destiné à assurer une fixation optimale du composé bisphosphonique de formule (I). De plus, l'utilisation de composé bisphosphonique de formule (I) lié à une ou des molécules biologiquement actives, de type peptide, protéine, lipides, glucides ou acides nucléiques peut permettre une meilleure biocompatibilité, ou une orientation de la réaction de l'organisme. Les prothèses concernées sont en particulier les systèmes métalliques (acier inoxydable, nitinol, titane, nickel-chrome...) soit pour être au contact des tissus tout en restant extérieurs à l'organisme (comme les prothèses dentaires ou auditives) soit implantables, aux niveaux vasculaire, osseux, implants dentaires... Exemple de composition pour recouvrement de capteurs (% en poids): composé bisphosphonique de formule (I) : 0,02 à 5 % - agent complexant: 0 à 10 % - agent de contrôle du pH: 0 à 3 % Dans cette application également, l'utilisation de composé bisphosphonique de formule (I) lié à une ou des molécules biologiquement actives, de type peptide, protéine, lipides, glucides, acides nucléiques ou autres permet de détecter un objet moléculaire, particulaire, cellulaire, viral... dont la concentration peut être dosée. Suivant les usages retenus, les compositions anti-contamination microbiologique selon l'invention sont typiquement appliquées après chaque utilisation (comme par exemple avec le matériel de chirurgie), après chaque cycle d'utilisation (comme par exemple avec le matériel de découpe industrielle de viande), régulièrement lors de l'entretien général (surfaces esthétiques) voire de manière unique. La figure 1 représente la croissance de Streptococcus mutans sur l'hydroxyapatite (HAP). É biofilm témoin ^ biofilm essai La figure 2 représente l'évolution de la population de Streptococcus mutans en suspension. 2878248 21 É surnageant témoin ^ surnageant essai La figure 3 représente la variation du pourcentage de fixation de molécules 5 bisphosphoniques modèles par unité de surface en fonction du pH de la solution et par rapport au pH = 7. ^ pH=5 É pH=7 É pH=9 x pH=11 La présente invention est illustrée par les exemples suivants. A) Synthèse de composés selon la formule (I) 15 A-1) Etape 1 OH / CH2)a + / \\ H3 \/ (CH2)b O N (CH2)a Br / 1 2 3 Cinq équivalents de la diamine 1 sont dissous dans un minimum d'acétonitrile. On ajoute ensuite goutte à goutte le bromoacide 2. Le mélange est agité de 3 à 24 h. Séparation de l'excès de diamine par recristallisation ou par lavage à chaud. Séchage. molécule étape 1 b 3 a 1 rendement 98 % ml (g) 9,0g m2 (g) 4,0g m3 (g) 3, 2g A-2) Etape 2 OH HO O PO 3H2 (CH 2)b r(CH 2)b H3C i + H2O + PCI3 H3C N (CH 2)a r(CH 2)a NH H H3C,,, H3C 3 4 5 Le produit de départ 3 est dispersé dans du chlorobenzène. A ce mélange, 2.5 équivalents d'H20 sont ajoutés. Le mélange est chauffé à 40 C. Par une ampoule à addition on ajoute ensuite le trichlorure de phosphore goutte à goutte. Le mélange est porté à reflux pendant deux heures. La réaction est stoppée par ajout d'un excès d'eau. Le produit 4 ainsi formé est porté à reflux (100 C) pendant deux heures. La molécule 4 est purifiée par cristallisation dans l'éthanol. molécule étape 2 b 3 a 1 rendement 50 % m3 1,OOg mPC13 1,26g m4 0, 85g A3) Etape 3 HO)PO3H2 P03H2 2 + NaOH + CH3I a H3C i CH3 2 1-5 4 5 La molécule 4 est reprise dans un excès de CH3I auquel on ajoute trois équivalents d'hydroxyde de sodium anhydre. Le mélange est agité à l'abri de l'air et de la lumière à reflux pendant 24 à 72 heures. Le produit formé est condensé sous vide. molécule étape 3 molécule étape 3 b 3 a 1 rendement 30% m4 0,27g mCH3I 0, 09g m5 0,10g A-4) Autres synthèses Par ailleurs, les molécules dont le nombre de fonctions ammonium quaternaires est supérieur à deux peuvent aisément être obtenues en additionnant des quantités stoechiométriques de bromure de bromoalkyl-trialkylammonium sur un aminoalkyldiphosphonate. Cette étape est suivie ou non d'une méthylation au iodométhane suivant le degré de saturation de l'amine substituée. (CH2)b H3C N (CH2)a NH H3C (CH2)b Par exemple, des molécules comportant trois ou bien quatre fonctions ammonium peuvent être synthétisées de la façon suivante: Br- NH2 ÇH3 H3C N CH 3 CH2)b + 2 /(CH2) a Br/ CH 1+3 H3C N CH3 (CH2)a HO PO3H2 HO PO3H(\PO3H2 ICH2)b P03H2 CHBr --1+3 H3C N CH 3 (CH2)a NH2 (CH2)b +3 HO Br - CH 1+ H3C N CH3 /(CH2)a Br- (CH2)b HOC PO3H (\P03H2 b=[0; 11] a=[0; 10] Br/ PO3H2 P03H2 D'une façon générale, l'homme du métier saura préparer sans difficulté les composés de formule (I) en faisant à appel à des synthèses classiques et bien connues de celui-ci. B) Fixation sur support d'hydroxyapatite Des tests comparatifs ont été menés sur des molécules modèles radiomarquées afin de mettre en évidence la capacité qu'elles ont à se fixer rapidement et de façon homogène sur des surfaces minérales. Ces tests réalisés dans des conditions de pH différents ont permis de mettre en évidence une cinétique de fixation rapide des acides bisphosphoniques sur des surfaces minérales (hydroxyapatite). B-1) Matériel et méthodes B-1-1) Solutions Des solutions aqueuses d'acides bisphosphoniques radiomarqués à l'iode 125 ont été préparées à des concentrations de 0,1 mol.L-1 et 0,01 mon-1. Le pH de ces solutions a été ajusté à 5, 7, 9 et 11 grâce à des solutions molaires en HC1 et NaOH. Chaque solution a reçu une quantité de molécules radiomarquées correspondant à 5. 108 Bq/mL. B-1-2) Surface Les surfaces servant de support aux composés bisphosphoniques consistent en de la poudre d'hydroxyapatite (CHT Ceramic hydroxyapatite, phosphate de calcium (Ca5(PO4)30H)2, Biorad, France). Cette surface est conditionnée en tubes à hémolyse à raison de 14 mg par tube. B-1-3) Recouvrement des surfaces Les molécules servant au recouvrement des surfaces sont des composés bisphosphoniques de synthèse dont la structure est la suivante: Ces molécules ont été choisies comme modèle de fixation des acides bisphosphoniques sur des surfaces métalliques et minérales à cause de leur similarité de structure (présence d'un groupe bisphosphonique et d'un atome d'azote), mais aussi pour P03H2 leur propriété physicochimiques (solubilité dans l'eau importante, adsorption rapide sur les surfaces considérées) similaires à celles des molécules correspondant à la formule générale (I). Un volume de 200 L de solution de recouvrement est ajouté à chaque tube contenant les surfaces. Un témoin est réalisé en utilisant 200 L d'eau distillée stérile (pH 6,8 0,2). Les temps d'incubation utilisés pour la fixation des molécules de composés bisphosphoniques sont de 30 secondes, 5 minutes ou 1 heure. Le surnageant est ensuite éliminé en prenant soin de ne pas aspirer les particules de surface, puis deux cycles rinçage/décantation/élimination du surnageant sont effectués à l'aide de 3 mL d'eau distillée. B-1-4) Dénombrement des molécules fixées Après élimination des eaux de rinçage, la radioactivité gamma émise lors de la désintégration de 1'1251 présent sur les composés bisphosphoniques fixés à la surfaces des billes d'hydroxyapatite est comptée grâce à un appareil Cobra 2 autogamma counting system (Packard Bioscience Company, France). B-2) Résultats Les résultats sont exprimés en fonction du pH, en pourcentage de l'activité mesurée par rapport à celle de la solution à pH7, et ce pour une concentration en composé bisphosphonique de 0,1 mol/L. Les résultats sont représentés sur la figure 3. On note une forte influence du pH, à la fois sur la cinétique de fixation et sur la quantité de produit fixé par unité de surface. On note que la cinétique de fixation atteint rapidement une phase de plateau puisque dès les cinq premières minutes de mise en contact presque 80% de la surface disponible est recouverte. Par ailleurs, le pH a une influence considérable sur la charge de la molécule et entraîne une répulsion électrostatique importante aux pH élevés, ce qui explique les faibles taux de recouvrement observés à pH 9 et 11. Le pH préférentiel d'utilisation des composés bisphosphoniques pour recouvrir une surface est donc compris entre 5 et 7. C) Limitation de la contamination 5 C-1) Matériel et méthodes C-1-1) Surfaces Les surfaces servant de support au biofilm consistent en de la poudre d'hydroxyapatite (CHT Ceramic hydroxyapatite, phosphate de calcium (Cas(PO4)3OH)2, Biorad, France). La granulométrie de la poudre d'hydroxyapatite (HAP) est de 80 8 m et la surface développée de 72 cm2.g-1. Cette surface est conditionnée en tubes à hémolyse à raison de 14 mg par tube. La quantité correspondante de particules de surface par tube est de 5000. Avant utilisation, elles sont stérilisées par chaleur sèche (four Tau, Italie) à 180 C pendant 2 heures. C-1-2) Molécules de recouvrement Les molécules servant au recouvrement des surfaces sont des acides bisphosphoniques de synthèse. La molécule utilisée est la molécule A, synthétisée à l'exemple A et de formule suivante: HO P 0 3 H 2 P03H2 /' H3C-N-CH3 H3C- i'. CH3, 21- CH3 (A) Des solutions sont préparées à 0,1 mon-1 (pH 4,8) et stérilisées par filtration sur filtre 0, 2 m (Minisart, Sartorius, France). C-1-3) Salive artificielle Afin de reproduire l'environnement buccal, le modèle de salive suivant a été foilliulé (d'après Hutteau & Mathlouti, 1998) : É Salive incomplète A: NaHCO3 5,208 g.L"1; KH2PO4, 3H2O 1,369 g.L1; NaCl 0,877 g.L-1; NaN3 0,500 g.L-1; KC1 0,477 g.Li; CaC12, 2H2O 0,441 gÉL-1É É Salive artificielle complète: salive A complétée par 2,16 g.L-1 de mucine et par 200 000 UI.L-1 d'alpha amylase. La salive artificielle est ajustée à pH isotonique (pH 7) et stérilisée par filtration sur filtre 0,2 m (Minisart, Sartorius, France). C-1-4) Souche bactérienne L'étude est menée sur un modèle de bactéries cariogènes: Streptococcus mutans ATCC 25175D (LGC Promochem, Molscheim, France). Streptococcus mutans est un constituant de la plaque dentaire et un agent étiologique majeur de la carie dentaire. La souche est conservée en aliquots à -80 C. Elle est remise en culture par transfert d'une pointe de pipette de 2 mL vers un tube de 10 mL de bouillon Schaedler (Bio Mérieux, France) et incubation à 37 C pendant 24 heures. L'absorbance d'une dilution au 1/20eme de la solution mère obtenue est mesurée à 600 nm puis elle est diluée en salive artificielle (préparée comme indiqué en C-1-3.) de façon à obtenir 3 mL de suspension ajustée (SA) à environ 5.106 unités formant colonies (ufc) dans 100 L. C-1-5) Recouvrement des surfaces Un volume de 200 L de solution de recouvrement (C-1-2) est ajouté à chaque tube contenant les surfaces (C-11). Un témoin est réalisé en utilisant 200 L d'eau distillée stérile (pH 6,8+ 0,2). Le temps d'incubation utilisé pour la fixation des molécules bisphosphoniques est de 1 heure à 37 C. Le surnageant est ensuite éliminé en prenant soin de ne pas aspirer les particules de surface, puis deux cycles rinçage/décantation/élimination du surnageant sont effectués à l'aide de 3 mL d'eau distillée stérile. C-1-6) Formation du biofilm Un volume de 3 mL de salive artificielle (C-13) est ajouté aux tubes contenant les surfaces recouvertes (témoins et essais). Immédiatement après, un volume de 100 l de la suspension bactérienne ajustée (C-1-4) est inoculé dans les tubes. Les tubes sont incubés pendant 4 à 24 heures à 37 C. C-1-7) Dénombrement des bactéries dans le surnageant Le surnageant est prélevé en prenant garde de ne pas aspirer les particules de surface, puis un dénombrement des bactéries présentes est effectué sur 1 mL par dilutions décimales en eau physiologique et étalement de 100 l des dilutions -3 et - 4 sur gélose au sang (Columbia + 5% de sang de mouton, Bio Mérieux, France). La numération est réalisée après 48 à 72 heures d'incubation à 37 C. Le nombre de bactéries est exprimé en ufc par mL. C-1-8) Dénombrement des bactéries du biofilm Les particules colonisées sont lavées afin d'éliminer les bactéries non adhérentes en réalisant trois cycles rinçage/décantation/élimination du surnageant (en prenant soin de ne pas aspirer les particules de surface) à l'aide de 3 mL d'eau physiologique. Les particules de surface sont remises en suspension dans 1 mL d'eau physiologique et traitées par ultra-sons afin de détacher les bactéries adhérentes (Branson 1200, 47 KHz, 95 W, 5 minutes, Bransonic, USA). La suspension bactérienne obtenue est dénombrée par dilutions décimales en eau physiologique et étalement de 100 l des dilutions -1 et -2 sur gélose au sang. La numération est réalisée après 48 à 72 heures d'incubation à 37 C. Le nombre de bactéries est exprimé en ufc pour 14 mg d'hydroxyapatite. C-2) Résultats C-2-1) Biofilm Le tableau 1 rassemble les résultats obtenus montrant la colonisation bactérienne en fonction du temps pour des surfaces d'hydroxyapatite recouvertes ou non par les composés bisphosphoniques (respectivement essai et témoin). Pour l'analyse statistique les nombres d'ufc ont été transformés en 10Log pour obtenir une distribution normale des résultats. Le test de Student a été utilisé pour évaluer la signification des valeurs dans les deux expérimentations (tableau I). Tableau I. Valeurs moyennes des dénombrements de Streptococcus mutans 20 adhérent à l'hydroxyapatite Temps (heures) 4 6 8 15 24 Témoin (T) 4,25 4,52 + 0,23 4,55 0,03 4,85 0,30 5,55 + 0,14 Essai (E) 4,08+ 4,16+0,09 4,10+0,05 4,64+0,36 4,70+0,13 Pourcentage de 34,6 % 59,4 % 64, 4 % 34,4 % 86,1 % diminution (T-E/T) Valeur de t 2,00 4,23 29,5 6,5 5,54 P 0,184 0, 052 0,001 0,023 0,031 Essai. hydroxyapatite (HAP) recouverte par les composés bisphosphoniques. Témoin: HAP non recouverte. Données exprimées en log du nombre d'ufc pour 14 mg de HAP (n = 6). Dans les deux cas une croissance du biofilm est observée, mais le profil des courbes de colonisation n'est pas similaire. Le nombre de bactéries colonisant les surfaces d'hydroxyapatite est plus élevé pour le témoin. La différence de colonisation est significative dès 6 heures et après 8, 15 et 24 heures d'incubation (p C-2-2) Surnageant La figure 2 rassemble les résultats obtenus montrant l'évolution de la population bactérienne en fonction du temps dans les surnageants recouvrant les surfaces d'hydroxyapatite recouvertes ou non par les composés bisphosphoniques (respectivement essai et témoin). Pour l'analyse statistique les nombres d'ufc ont été transformés en10Log pour obtenir une distribution normale des résultats. Le test de Student a été utilisé pour évaluer la signification des valeurs dans les deux expérimentations (tableau II). Tableau II. Valeurs moyennes des dénombrements de Streptococcus mutans en suspension Temps (heures) 0 4 6 8 15 24 Témoin (T) 5,12 5,02 5,05 4, 90 5,35 5,24 0,04 0,06 0,15 0,15 0,26 Essai (E) 0,20 5, 10 4,92 4,91 4,83 4,84 0,01 0,11 0,03 0,07 0,44 Pourcentage de na 4,0 % 20, 6 % 29,5 % 16,9 % 63,3 % diminution (TE/T) Valeur de t na 0, 63 1,39 1,55 1,00 4,91 P na 0,596 0,300 0,261 0,424 0,039 Essai: hydroxyapatite recouverte par les composés bisphosphoniques. Témoin hydroxypatite non recouverte. Données exprimées en log du nombre d'ufc dans 100,uL (n 6). na: non applicable. Une décroissance du nombre de bactéries en suspension est observée de façon similaire dans les deux cas jusqu'à 15 heures après le début de l'incubation. Ces résultats indiquent que le milieu salive artificielle utilisé dans l'étude ne permet pas la croissance des bactéries en suspension, mais favorise la colonisation des surfaces d'hydroxyapatite. Dans le surnageant essai la population reste stable jusqu'à 24 h alors qu'une reprise de croissance intervient dans le surnageant témoin. La différence de population à 24 h est significative (p D- Biocompatibilité D-1)I. Matériel et méthodes 20 D-1-1). Molécule Le composé bisphosphonique défini comme la molécule A, conforme à la présente invention, a été évalué. Une solution mère est préparée à environ 1,9 mon-1 et stérilisée par filtration sur filtre 0,2 m (Minisart, Sartorius, France). D-1-2). Souche bactérienne Les essais sont réalisés avec le modèle de bactéries cariogènes choisi pour l'étude sur biofilm: Streptococcus mutans ATCC 25175D (LGC Promochem, Molscheim, France). La souche est conservée en aliquots à -80 C. Elle est remise en culture par transfert d'une pointe de pipette de 2 mL vers un tube de 13 mL de bouillon Schaedler (Bio Mérieux, France) et incubation à 37 C pendant 24 heures. D-1-3). Mesure de la concentration minimale inhibitrice (CMI) Le protocole suivant est utilisé. Quinze tubes sont remplis avec du bouillon Schaedler à raison de 2 mL pour les tubes 1 et 15 et de 1 mL pour les autres tubes (2 à 14). Un volume de 200 L de la solution de composés bisphosphoniques à environ 1,9 mol.L-1 (I.1.) est ajouté au tube 1. Puis des dilutions successives au sont réalisées par transfert de 1 mL du tube 1 vers le tube 2 et ainsi de suite jusqu'au tube 13. Un volume de 1 mL du tube 13 est prélevé et éliminé. Les tubes 14 et 15 ne contiennent pas de composés bisphosphoniques. D'autre part, 150.iL de la solution mère obtenue par remise en culture de la souche (1.2.) est transféré dans 15 mL de bouillon Schaedler. Un volume de 1 mL de cette suspension bactérienne est ajouté aux tubes 1 à 14. Le tube 15 ne contenant ni composés bisphosphoniques ni bactéries est un témoin négatif. Le tube 14 ne contenant que des bactéries est un témoin positif. La gamme de concentrations en composés bisphosphoniques obtenue est indiquée dans le tableau III ci-dessous. Les tubes sont incubés pendant 72 heures à 37 C. Ils sont observés régulièrement afin de visualiser la présence éventuelle d'un trouble signalant une croissance bactérienne. La plus faible concentration ne permettant pas la croissance bactérienne correspond à la valeur de la CMI pour la souche considérée. Tableau III. Gamme de concentrations en molécule A utilisées pour l'évaluation de la CMI N tube dilution concentration concentration ensemencement en mol.L-1(1) en % m/v (2) en bactéries (oui/non) 1 1/20 9, 5010-2 3,724 oui 2 1/40 4,7510-2 1,862 oui 3 1/80 2,3810-2 0,933 oui 4 1/160 1,1910-2 0,466 oui 1/320 5,9410-3 0,233 oui 6 1/640 2,97 10-3 0,116 oui 7 1/1280 1,4810-3 0,058 oui 8 1/2560 7,43104 0,029 oui 9 1/5120 3,71104 0,015 oui 1/10240 1,86104 0,007 oui 11 1/20480 9,2810-5 0,004 oui 12 1/40960 4,6410-5 0,002 oui 13 1/81920 2,3210-5 0,001 oui 14 (3) absence 0 0 oui (4) absence 0 0 non (1) concentration de la solution mère = 1,901 mon-1 5 (2) masse molaire = 392 g.mol-1 (3) témoin positif (4) témoin négatif D-2). Résultats Le tableau IV rassemble les résultats obtenus pour la molécule A indiquant la croissance observée ou non des bactéries et le temps d'incubation correspondant (72 heures au maximum). Tableau IV. Résultats des essais de mesure de CMI pour la molécule A N tube concentration concentration croissance temps d'incubation en mol.L-1 (1) en % m/v (2) des correspondant bactéries (+i_) (heures) 1 9, 5010-2 3, 724 + 36 2 4,7510-2 1,862 + 24 3 2,3810-2 0,933 + 24 4 1,19 10-2 0,466 + 24 5,9410-3 0,233 + 24 6 2,9710-3 0,116 + 24 7 1,4810-3 0,058 + 24 8 7, 43104 0,029 + 24 9 3,71104 0,015 + 24 1,86104 0,007 + 24 11 9,2810-5 0, 004 + 24 12 4,6410-5 0,002 + 24 13 2,3210-5 0,001 + 24 14 (3) 0 0 + 24 (4) 0 0 72 (1) concentration de la solution mère = 1,901 mol.L-1 (2) masse molaire = 392 g.mol-1 (3) témoin positif (4) témoin négatif Une croissance est observée jusqu'au tube n 1 inclus, la valeur de CMI est donc supérieure à 9,50 10"2 mol.L-1 ou 3,7% m/v. Ces résultats montrent que le composé A n'est ni bactériocide, ni bactériostatique dans la gamme de concentration étudiée. REVENDICATIONS 1. Composés bisphosphoniques de formule (I) : R2 + Rl N R3 X- A P03H2 P03H2 (I) dans laquelle: - R6 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle en C1-C12, linéaire ou ramifié, un groupe OH, une amine éventuellement substituée par un ou deux groupes alkyle en C1-C4, linéaires ou ramifiés ou un groupe A' N+RI'R2'R3', X1 - RI, RI', R2, R2', R3 et R3' représentent indépendamment l'un de l'autre: 15 * un groupe alkyle en C1-C12, linéaire ou ramifié, ou * un groupe alkylammonium (CH2) n N+RR'R", X2- dans lequel n est un entier compris entre 1 èt 12 et R, R', et R" représentent indépendamment l'un de l'autre un alkyle en C1 à C4, linéaire ou ramifié, - A et A' représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe (CH2)m Z 20 (CH2)p dans lequel: * m est un entier compris entre 0 et 12, * p est un entier compris entre 0 et 12, * m + p est un entier compris entre 0 et 12, et * Z représente un atome d'oxygène, un atome de soufre, un groupe 25 CR7R8R9 , un groupe COO , un groupe -CONR7 , ou un groupe NR7R8 dans lesquels R7, R8 et R9 ont les mêmes significations que R6, ou bien un groupe R6 5 N+ R4R5 , X3- dans lequel R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1-C12, linéaire ou ramifié, - avec la condition que la molécule de formule (I) contient au moins deux fonctions ammonium quaternaire, - et X, X1, X2 et X3 sont des contre ions pharmaceutiquement acceptables. 2. Composés bisphosphoniques selon la revendication 1, caractérisés en ce que R6 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène,un groupe OH ou une amine NH2. 3. Composés bisphosphoniques selon la revendication 1 ou 2, caractérisées en ce que Z représente un atome d'oxygène, un atome de soufre, un groupe CR7R8R9 , un groupe COO , un groupe CONR7 ou un groupe NR7R8 où R7, R8 et R9 sont tels que définis à la revendication 1. 4. Composés bisphosphoniques selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que Z représente un groupe N+ R4R5 , X3- dans lequel R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1-C12, linéaire ou ramifié. 5. Composés bisphosphoniques selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que R1, R2, R3, R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1-C4, linéaire ou ramifié, de préférence un groupe méthyle ou éthyle. 6. Composés bisphosphoniques selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule (Ia) suivante: f 38 R2 1 + R1 N R3 (CH2)p 1+ R4 i R5 2 X- CH2)m R6 PO3H2 PO3H2 (Ia) dans laquelle: - R6 représente OH ou NH2, _ m est un entier compris entre 1 et 12, de préférence entre 3 et 7 - p est un entier compris entre 1 et 12, de préférence entre 1 et 4 _ m + p est un entier compris entre 2 et 12, RI, R2, R3, R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1-C4, linéaire ou ramifié, de préférence un groupe méthyle ou éthyle, et _ Xreprésente un contre-ion pharmaceutiquement acceptable tel que les ions iodure, chlorure, bromure, fluorure, sulfonate, phosphate, phosphonate ou tout ion pharmacologiquement actif. 7. Composition pour hygiène buccale par voie topique, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en association avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que le composé de formule (I) présente une concentration comprise entre 0,01 % et 20 % en poids, plus préférentiellement entre 0,05 % et 5 % en poids, et encore plus préférentiellement entre 0,1 % et 2 % en poids. 9. Composition selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce qu'elle présente sous la forme d'un bain de bouche, d'un liquide à pulvériser, d'une pâte dentifrice, d'un gel dentifrice, d'une pâte à appliquer, d'un liquide à appliquer, d'une poudre, d'une gomme à mâcher ou à appliquer ou d'une mousse. 10. Accessoire dentaire, tel qu'un fil dentaire, une lingette éventuellement jetable ou une éponge, caractérisé en ce qu'il est imprégné de la composition selon l'une quelconque des revendications 7 à 9. 11. Composition anti-contamination microbiologique pour surfaces métalliques ou minérales, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 12. Composition selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle comprend 15 entre 0,01 % et 10 % en poids, de préférence entre 0, 05 % et 5 % en poids, du composé de formule (I). 13. Lingette éventuellement jetable imprégnée de la composition selon la revendication 11 ou 12. 14. Utilisation des composés de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour empêcher ou limiter la fixation de macromolécules sur des surfaces solides telles que des surfaces métalliques ou minérales. 15. Utilisation des composés de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour empêcher ou limiter la fixation de microorganismes, de préférences de bactéries, sur des surfaces solides telles que des surfaces métalliques ou minérales. 16. Utilisation des composés de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, empêcher ou limiter la formation et le développement d'un biofilm sur les surfaces solides, notamment métalliques ou minérales. 17. Utilisation des composés de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 14 à 16, caractérisée en ce que les surfaces métalliques appartiennent au groupe comprenant le fer, l'acier inoxydable, le chrome, l'aluminium, le zinc, le titane, le tungstène, le plomb ou le cuivre, ainsi que les alliages ou composites contenant au moins l'un de ces métaux et les surfaces minérales appartiennent au groupe comprenant le silicium et ses dérivés, les matériaux silicieux, les surfaces calciques, les surfaces céramiques ou dentaires. 18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 17, caractérisée en ce que les surfaces sont la surface de matériel industriel, agroalimentaire ou hospitalier, de bâtiments, de constructions ou de véhicules terrestres, aériens ou maritimes, de matériel de climatisation ou de réfrigération ou bien la surface d'instruments chirurgicaux, de prothèses, d'instruments de dentisterie ou de capteurs biologiques et médicaux. 19. Procédé pour prévenir l'apparition de la plaque dentaire ou limiter le développement de la plaque dentaire sur les dents, comprenant l'application d'une quantité efficace d'une composition selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, sur les dents. 20. Médicament comprenant au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 21. Médicament selon la revendication 20 pour la prévention des caries ou des maladies parodontales.