Brevet FR2877944A1 — publié le 20060519

1. DOMAINE La présente invention concerne des compositions stéréoisomériquement enrichies de composés 4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2. 1]hept-5-én-2-yl)-2N-phényle substitué-2,4-pyrimidinediamine qui présentent une activité antiproliférative, des promédicaments des composés, des intermédiaires et des procédés de synthèse pour produire les composés et/ou les promédicaments, des compositions pharmaceutiques comprenant les composés et/ou les promédicaments et l'utilisation des composés et/ou des promédicaments dans différents contextes incluant par exemple le traitement des affections prolifératives comme les tumeurs et les cancers. 2. ARRIERE-PLAN Le cancer constitue un groupe de différentes maladies caractérisées par la croissance et la prolifération incontrôlées de cellules anormales. Généralement, tous les types de cancers impliquent une certaine anomalie dans la régulation de la croissance et de la division cellulaires. Les voies régulant la division cellulaire et/ou la communication cellulaire sont altérées dans les cellules cancéreuses de sorte que les effets de ces mécanismes régulateurs dans la régulation et la limitation de la croissance cellulaire disparaissent ou sont contournés. Du fait de l'occurrence répétée de mutations et de la sélection naturelle, un groupe de cellules anormales, issues généralement d'une seule cellule mutante, accumule des mutations supplémentaires qui procurent un avantage de croissance sélectif par rapport aux autres cellules, et conduit de ce fait à un type cellulaire qui prédomine dans la masse cellulaire. Ce processus de mutation et de sélection naturelle est amplifié par l'instabilité génétique présentée par de nombreux types de cellules cancéreuses, instabilité qui résulte de mutations somatiques ou qui est transmise par la lignée germinale. La mutabilité accrue des cellules cancéreuses augmente la probabilité de leur progression en direction de la formation de cellules malignes. Quand les cellules cancéreuses se développent encore, certaines deviennent localement invasives puis produisent des métastases pour coloniser des tissus différents du tissu des cellules cancéreuses d'origine. Ces propriétés ainsi que l'hétérogénéité de la population des cellules 2877944 2 tumorales font du cancer une maladie particulièrement difficile à traiter et à éradiquer. Les traitements traditionnels du cancer tirent profit de la plus grande capacité proliférative des cellules cancéreuses et de leur sensibilité accrue aux détériorations de l'ADN. Les rayonnements ionisants, incluant les rayons y et les rayons X, et les agents cytotoxiques, comme la bléomycine, le cis-platine, la vinblastine, le cyclophosphamide, le 5'fluorouracile et le méthotrexate sont basés sur une détérioration généralisée de l'ADN et une déstabilisation de la structure chromosomique qui conduisent finalement à la destruction des cellules cancéreuses. Ces traitements sont particulièrement efficaces pour les types de cancer qui ont des défauts dans les points de contrôle du cycle cellulaire, ce qui limite l'aptitude de ces cellules à réparer l'ADN détérioré avant de subir une division cellulaire. Cependant, la nature non sélective de ces traitements conduit souvent à des effets secondaires graves et invalidants. L'utilisation systémique de ces médicaments peut conduire à des dégradations d'organes et de tissus normalement sains, et peut compromettre la santé à long terme du patient. Bien que des traitements chimiothérapeutiques plus sélectifs aient été développés sur la base des connaissances concernant le mode de développement des cellules cancéreuses, par exemple le composé antioestrogène tamoxifène, l'efficacité de tous les traitements chimiothérapeutiques est confrontée au développement d'une résistance aux médicaments. En particulier, l'expression accrue de transporteurs liés à la membrane cellulaire, comme Mdrl, produit un phénotype de résistance à des médicaments multiples caractérisé par un efflux accru de médicaments depuis la cellule. Ces types d'adaptation par les cellules cancéreuses limitent gravement l'efficacité de certaines classes d'agents chimiothérapeutiques. Par conséquent, l'identification d'autres agents chimiothérapeutiques, en particulier de stéréoisomères actifs et/ou de mélanges stéréoisomères actifs, est critique pour établir de thérapies efficaces pour attaquer la nature hétérogène d'une maladie proliférative et pour surmonter toute résistance qui peut se développer au cours d'une thérapie avec d'autres composés. En outre, l'utilisation de combinaisons d'agents chimiothérapeutiques, incluant différents stéréoisomères et/ou mélanges stéréoisomères d'un agent chimiothérapeutique particulier, qui 2877944 3 peuvent avoir des propriétés et des cibles cellulaires différentes, augmente l'efficacité d'une chimiothérapie et limite l'apparition d'une résistance aux médicaments. 3. RESUME Dans un aspect, il est fourni des composés 4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2. 1]hept-5-én-2-yl)-2N-phényle substitué-2,4-pyrimidinediamine enrichis en diastéréoisomères spécifiés qui présentent une activité antiproliférative contre une variété de types de cellules tumorales différents. Dans certains modes de réalisation, il est fourni des composés selon la formule structurale (I) : (I) y compris leurs promédicaments, sels, hydrates, solvates et N-oxydes, qui sont enrichis en le diastéréoisomère de formule structurale (Ia) correspondant, appelé diastéréoisomère (1R,2R, 3S,4S) : N H (1R,2R,3S,4S) où : chaque RI est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, -(CH2),-OH, ORa, -O(CH2)n-Ra, 25 -O(CH2),-Rb, -C(0)ORa, halogéno, -CF3 et -OCF3; Modifications du 15. 03.06 chaque R2 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, -ORa, -O(CH2)n Ra, -O(CH2)n-Rb, -NHC(0)Ra, halogéno, -CF3, -OCF3, - 0 et / \ N R4 v chaque R3 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, (CH2)n OH, ORa, -O(CH2)n Ra, - 0(H2)m-Rb, -O(CH2)n Rb, halogéno, -CF3, -OCF3, 0 f Ço, fNCN-R4, et I N N chaque R4 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, arylalkyle, -ORa, -NRcR, - C(0)Ra, -C(0)ORa et -C(0)NRR; R5 est l'hydrogène, halogéno, fluoro, -CN, -NO2, -C(0)ORa ou - CF3; chaque n est indépendamment un entier de 1 à 3; chaque Ra est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur et cycloalkyle inférieur; chaque Rb est choisi indépendamment dans le groupe consistant en -ORa, -CF3, -OCF3, - NRR, -C(0)Ra, -C(0)ORa, -C(0)NRcR et - C(0)NRand; chaque Rc est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène et alkyle inférieur, ou bien, à titre d'alternative, deux substituants Rc peuvent être combinés avec l'atome d'azote auquel ils sont liés pour former un cycle saturé à 4-9 membres, en particulier à 5-7 membres, qui inclut éventuellement 1-2 groupes hétéroatomiques supplémentaires choisis parmi 0, NRa, NRa-C(0)Ra, NRa-C(0) ORa et NRa-C(0)NRa; et chaque Rd est indépendamment mono-hydroxyalkyle inférieur ou di-hydroxyalkyle inférieur. Dans certains modes de réalisation, le composé de formule 30 structurale (I) est un mélange racémique d'isomères (2-exo-3-exo)cis selon la formule structurale (Iia) : NHN" N CONH2 H y compris leurs promédicaments, sels, hydrates, solvates et N-oxydes, où RI, R2, R3 et R5 sont définis comme pour la formule structurale (I), ci-dessus. Dans certains modes de réalisation, le composé est un diastéréoisomère stéréoisomériquement enrichi selon la formule structurale (Ia), ci-dessus, incluant ses promédicaments, sels, hydrates, solvates et N-oxydes, qui est sensiblement exempt de son énantiomère et de tout autre diastéréoisomère. Dans encore un autre aspect, il est fourni des promédicaments des composés stéréoisomériquement enrichis. De tels promédicaments peuvent être actifs sous leur forme de promédicament, ou bien ils peuvent être inactifs jusqu'à ce qu'ils soient convertis dans des conditions physiologiques ou d'autres conditions d'utilisation en une forme médicamenteuse active. Dans les promédicaments, un ou plusieurs groupes fonctionnels des composés stéréoisomériquement enrichis sont inclus dans des progroupements qui sont clivés de la molécule dans les conditions d'utilisation, typiquement par hydrolyse, clivage enzymatique ou certains autres mécanismes de clivage, pour produire les groupes fonctionnels. Par exemple, des groupes amino primaires ou secondaires peuvent être inclus dans un progroupement amide qui se clive dans les conditions d'utilisation pour produire le groupe amino primaire ou secondaire. Ainsi, les promédicaments incluent des types spéciaux de groupes protecteurs, appelés "progroupes", qui masquent un ou plusieurs groupes fonctionnels des composés qui se clivent dans les conditions d'utilisation pour donner un composé médicamenteux actif. Les groupes fonctionnels dans les composés stéréoisomériquement enrichis qui peuvent être masqués avec des progroupes pour l'inclusion dans un progroupement incluent, mais ne sont pas limités à, des amines (primaires et secondaires), des hydroxyles, des sulfanyles (thiols), des carboxyles, des carbonyles, etc. De très nombreux progroupes qui conviennent pour 2877944 6 masquer de tels groupes fonctionnels pour donner des progroupements qui sont clivables dans les conditions d'utilisation souhaitées sont connus dans la technique. Tous ces progroupes, seuls ou en combinaison, peuvent être inclus dans les promédicaments. Des exemples spécifiques de progroupements qui donnent des groupes amine primaires ou secondaires qui peuvent être inclus dans les promédicaments incluent, mais ne sont pas limités à, les amides, les carbamates, les imines, les urées, les phosphényles, les phosphoryles et les sulfényles. Des exemples spécifiques de progroupements qui donnent des groupes sulfanyle qui peuvent être inclus dans les promédicaments incluent, mais ne sont pas limités à, les thioéthers, par exemple les dérivés S-méthyle (monothio, dithio, oxythio, aminothioacétals), les silylthioéthers, thioesters, thiocarbonates, thiocarbamates, disulfures asymétriques, etc. Des exemples spécifiques de progroupements qui se clivent pour donner des groupes hydroxyle qui peuvent être inclus dans les promédicaments incluent, mais ne sont pas limités à, les sulfonates, les esters et les carbonates. Des exemples spécifiques de progroupements qui donnent des groupes carboxyle qui peuvent être inclus dans les promédicaments incluent, mais ne sont pas limités à, les esters (incluant les silylesters, les esters d'acide oxamique et les thioesters), les amides et les hydrazides. Dans un autre aspect encore, il est fourni des compositions comprenant un ou plusieurs composés stéréoisomériquement enrichis. Les compositions comprennent généralement le ou les composés et/ou des promédicaments, sels, hydrates, solvates et/ou N-oxydes de ceux-ci, et un support, excipient et/ou diluant approprié. La nature exacte du support, excipient et/ou diluant dépendra de l'utilisation souhaitée de la composition, et peut aller de supports, excipients et/ou diluants appropriés ou acceptables pour des utilisations in vitro à des supports, excipients et/ou diluants qui sont appropriés ou acceptables pour des utilisations vétérinaires, et à des supports, excipients et/ou diluants qui sont appropriés ou acceptables pour une utilisation chez les humains. Les composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici sont de puissants inhibiteurs de la prolifération des cellules anormales, comme les cellules tumorales, dans des analyses in vitro. Ainsi, dans un autre aspect encore, il est fourni des procédés d'inhibition de la prolifération des cellules anormales, en particulier des cellules tumorales. Les procédés 2877944 7 comprennent généralement la mise en contact d'une cellule anormale, comme une cellule tumorale, avec une quantité d'un ou plusieurs composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, et/ou de promédicaments, sels, hydrates, solvates et/ou N-oxydes de ceux-ci, efficace pour inhiber la prolifération des cellules. Les cellules peuvent être mises en contact avec le composé en soi, ou bien le composé peut être formulé dans une composition. Les procédés peuvent être mis en oeuvre dans des contextes in vitro, ou dans des contextes in vivo à titre d'approche thérapeutique au traitement ou à la prévention d'affections prolifératives, comme les cancers tumorigènes. Dans un autre aspect encore, il est fourni des procédés de traitement d'affections prolifératives. Les procédés peuvent être mis en oeuvre chez des animaux dans des contextes vétérinaires ou chez les humains. Les procédés comprennent généralement l'administration à un sujet animal ou humain d'une quantité d'un ou plusieurs composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, et/ou de promédicaments, sels, hydrates, solvates et/ou N-oxydes de ceux-ci, efficace pour traiter ou prévenir l'affection proliférative. Le ou les composés en soi peuvent être administrés au sujet, ou bien le ou les composés peuvent être administrés sous forme d'une composition. Les affections prolifératives qui peuvent être traitées selon les procédés incluent, mais ne sont pas limitées à, les cancers tumorigènes. Les composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici sont de puissants inhibiteurs des kinases Aurora. Les kinases Aurora constituent une famille d'enzymes connues comme étant des régulateurs clés de la division cellulaire. Des niveaux élevés de kinases Aurora ont été trouvés dans plusieurs types de cellules cancéreuses humaines, comme les tumeurs du sein, du côlon, rénales, cervicales, de neuroblastome, mélanome, lymphome, pancréatiques, de la prostate et d'autres tumeurs solides (voir, par exemple Bischott et al., 1998, EMBO J. 17: 3052-3065; Geopfert & Brinkley, 2000, Curr. Top. Dev. Biol., 49: 331-342; Sakakura et al., 2001, Br. J. Cancer, 84: 824-831), et on a montré que la surexpression de kinases Aurora conduit à la transformation cellulaire, un processus par lequel des cellules normales deviennent cancéreuses. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie particulière d'action, on pense que les composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, ainsi 2877944 8 que leurs promédicaments, sels, hydrates, solvates et/ou N-oxydes actifs, exercent leur activité antiproliférative en inhibant une ou plusieurs kinases Aurora. Ainsi, dans encore un autre aspect, il est fourni des procédés d'inhibition de l'activité d'une kinase Aurora. Les procédés comprennent généralement la mise en contact d'une kinase Aurora avec une quantité d'un ou plusieurs composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, et/ou des promédicaments, sels, hydrates, solvates et/ou N-oxydes actifs de ceux-ci, efficace pour inhiber son activité. Les procédés peuvent être mis en oeuvre dans des contextes in vitro avec des enzymes kinases Aurora partiellement purifiées (par exemple avec des extraits de cellules exprimant une kinase Aurora), dans des contextes in vitro avec des cellules intactes exprimant une kinase Aurora, ou dans des contextes in vivo pour inhiber un processus à médiation par une kinase Aurora (par exemple mitose cellulaire) et/ou sous forme d'une approche thérapeutique au traitement ou à la prévention de maladies ou affections qui sont à médiation, au moins en partie, par l'activité de kinases Aurora. Dans un autre aspect encore, il est fourni des procédés de traitement ou de prévention de maladies ou affections à médiation par des kinases Aurora. Les procédés comprennent généralement l'administration à un sujet animal ou humain d'une quantité d'un ou plusieurs composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, et/ou de promédicaments, sels, hydrates, solvates et/ou N-oxydes actifs de ceux-ci, efficace pour traiter ou prévenir la maladie ou affection à médiation par des kinases Aurora. Les maladies et affections à médiation par les kinases Aurora incluent toute maladie, affection ou autre état délétère où un membre de la famille des enzymes kinases Aurora joue un rôle. Des exemples spécifiques de telles maladies ou affections à médiation par des kinases Aurora comprennent, mais ne sont pas limités à, les maladies prolifératives comme le mélanome, la leucémie, et les cancers à tumeur solide, comme par exemple les cancers du côlon, du sein, gastrique, ovarien, cervical, de type mélanome, rénal, de la prostate, de type lymphome, de type neuroblastome, du pancréas et de la vessie. D'autres aspects incluent, mais ne sont pas limités à, 35 des intermédiaires et des procédés utiles pour synthétiser des composés 2877944 9 stéréoisomériquement enrichis et des promédicaments, ainsi que cela sera décrit de manière plus détaillée ci-dessous. 4. BREVE DESCRIPTION DES DESSINS Les figures 1-4 illustrent l'effet inhibiteur du bischlorhydrate de (1 R, 2 R,3S,4S)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2-yl)-5-fluoro-2N[3-méthyl-4-(4-méthylpipérazin-1-yl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine (composé 60a, 2HCI) sur la croissance de différents types de tumeurs dans des modèles de traitement ou de régression de xénogreffes standards. 5. DESCRIPTION DETAILLEE 5.1 Définitions Tels qu'ils sont utilisés ici, les termes suivants sont destinés à 15 avoir les significations suivantes: "Alkyle", par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un radical hydrocarboné monovalent ramifié, linéaire ou cyclique, saturé ou insaturé, ayant le nombre indiqué d'atomes de carbone (c'est-à- dire que C1-C6 signifie 1 à 6 atomes de carbone) qui est obtenu par retrait d'un atome d'hydrogène d'un seul atome de carbone d'un alcane, alcène ou alcyne parent. Les groupes alkyle typiques incluent, mais ne sont pas limités à, méthyle; les éthyles comme éthanyle, éthényle, éthynyle; les propyles comme propan-1-yle, propan-2-yle, cyclopropan-1- yle, prop-l-én-l-yle, prop-1-én-2-yle, prop-2-én-1-yle, cycloprop-l-én-l- yle, cycloprop-2-én-1-yle, prop-l-yn-l-yle, prop-2-yn-1-yle, etc. ; les butyles comme butan-1-yle, butan-2-yle, 2-méthyl-propan-1-yle, 2-méthylpropan-2-yle, cyclobutan-1-yle, but-l-én-l-yle, but-1-én-2-yle, 2-méthylprop-l-én-l-yle, but-2-én-1-yle, but-2-én-2-yle, buta-1,3-dién-1-yle, buta-1,3-dién-2-yle, cyclobut-l-én-l-yle, cyclobut-1-én-3-yle, cyclobuta1,3-dién-1-yle, but-l-yn-l-yle, but-1-yn-3-yle, but-3-yn-1-yle, etc. ; et analogues. Quand des niveaux spécifiques de saturation sont souhaités, la nomenclature "alcanyle", "alcényle" et/ou "alcynyle" est utilisée, telle qu'elle est définie ci-dessous. "Alkyle inférieur" désigne un groupe alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone. "Alcanyle" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un alkyle ramifié, linéaire ou cyclique saturé obtenu 2877944 10 par retrait d'un atome d'hydrogène d'un seul atome de carbone d'un alcane parent. Les groupes alcanyle typiques incluent, mais ne sont pas limités à, méthanyle; éthanyle; les propanyles comme propan-1-yle, propan-2-yle (isopropyle), cyclopropan-1-yle, etc. ; les butanyles comme butan-1-yle, butan-2-yle (sec-butyle), 2-méthyl-propan-1-yle (isobutyle), 2-méthyl-propan-2-yle (t-butyle), cyclobutan-1-yle, etc. ; et analogues. "Alcényle" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un alkyle ramifié, linéaire ou cyclique insaturé ayant au moins une double liaison carbone-carbone obtenu par retrait d'un atome d'hydrogène d'un seul atome de carbone d'un alcène parent. Le groupe peut être dans la conformation cis ou trans au niveau de la double liaison ou des doubles liaisons. Les groupes alcényle typiques comprennent, mais ne sont pas limités à, éthényle; les propényles comme prop-l-én-l-yle, prop1-én-2-yle, prop-2-én-1-yle, prop-2-én-2-yle, cycloprop-l-én-l-yle; cycloprop-2-én-1-yle; les butényles comme but-1-én-1-yle, but-1-én-2-yle, 2-méthyl-prop-l-én-l-yle, but-2-én-1-yle, but-2-én-2-yle, buta-1,3-dién-1yle, buta-1,3-dién-2-yle, cyclobut-1-én-1-yle, cyclobut-1-én-3-yle, cyclobuta-1,3-dién-1-yle, etc. ; et analogues. "Alcynyle" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un alkyle ramifié, linéaire ou cyclique insaturé ayant au moins une triple liaison carbone-carbone obtenu par retrait d'un atome d'hydrogène d'un seul atome de carbone d'un alcyne parent. Les groupes alcanyle typiques incluent, mais ne sont pas limités à, éthynyle; les propynyles comme prop-l-yn-l-yle, prop-2-yn-1-yle, etc. ; les butynyles comme but-l-yn-l-yle, but-1-yn-3-yle, but-3-yn-1-yle, etc. ; et analogues. "Alkyldiyle" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un groupe hydrocarboné divalent ramifié, linéaire ou cyclique saturé ou insaturé ayant le nombre indiqué d'atomes de carbone (c'est-à-dire C1-C6 signifie de 1 à 6 atomes de carbone) obtenu par retrait d'un atome d'hydrogène de chacun des deux atomes de carbone différents d'un alcane, alcène ou alcyne parent, ou par retrait de deux atomes d'hydrogène d'un seul atome de carbone d'un alcane, alcène ou alcyne parent. Les deux centres radicaux monovalents ou chaque valence du centre radical divalent peuvent former des liaisons avec le même atome ou des atomes différents. Les groupes alkyldiyle typiques incluent, mais ne 2877944 11 sont pas limités à, méthanediyle; les éthyldiyles comme éthane-1,1-diyle, éthane-1,2-diyle, éthène-1,1-diyle, éthène-1,2-diyle; les propyldiyles comme propane-1,1-diyle, propane-1,2-diyle, propane-2,2-diyle, propane-1, 3-diyle, cyclopropane-1,1-diyle, cyclopropane-1,2-diyle, prop-1-ène-1,1- diyle, prop-l-ène-1,2-diyle, prop-2-ène-1,2-diyle, prop-1-ène-1,3-diyle, cycloprop-1-ène-1,2-diyle, cycloprop-3-ène-1,2-diyle, cycloprop-2-ène-1,1- diyle, prop-1-yne-1,3-diyle, etc. ; les butyldiyles comme butane-1,1- diyle, butane-1,2-diyle, butane-1,3-diyle, butane-1,4-diyle, butane-2,2- diyle, 2-méthyl-propane-1,1-diyle, 2-méthyl-propane-1,2-diyle, cyclobutane-1,1diyle, cyclobutane-1,2-diyle, cyclobutane-1,3-diyle, but-l-ène-1,1-diyle, but-1-ène-1,2-diyle, but-1-ène-1,3-diyle, but-1-ène-1,4-diyle, 2méthylprop-1-ène-1,1-diyle, 2-méthanylidène-propane-1,1-diyle, buta-1,3diène-1,1-diyle, buta-1,3-diène-1,2-diyle, buta-1,3-diène-1,3-diyle, buta1,3- diène-1,4-diyle, cyclobut-1-ène-1,2-diyle, cyclobut-1-ène-1,3-diyle, cyclobut-2-ène-1,2-diyle, cyclobuta-1,3-diène-1,2-diyle, cyclobuta-1,3diène-1,3-diyle, but-1-yne-1,3-diyle, but-1-yne-1,4-diyle, buta-1,3-diyn1,4-diyle, etc. ; et analogues. Quand des niveaux spécifiques de saturation sont envisagés, la nomenclature alcanyldiyle, alcényldiyle et/ou alcynyldiyle est utilisée. Quand il est envisagé spécifiquement que les deux valences soient sur le même atome de carbone, la nomenclature "alkylidène" est utilisée. Un "alkyldiyle inférieur" est un groupe alkyldiyle contenant 1 à 6 atomes de carbone. Dans certains modes de réalisation, les groupes alkyldiyle sont des groupes alcanyldiyle acycliques saturés dans lesquels les centres radicaux sont au niveau des carbones terminaux, par exemple méthanediyle (méthano) ; éthane-1,2-diyle (éthano) ; propane-1,3-diyle (propano) ; butane-1,4-diyle (butano) ; et analogues (appelés aussi alkylènes, définis ci-dessous). "Alkylène" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un groupe alkyldiyle saturé ou insaturé linéaire ayant deux centres radicaux monovalents terminaux obtenu par retrait d'un atome d'hydrogène de chacun des deux atomes de carbone terminaux d'un alcane, alcène ou alcyne parent linéaire. La position d'une double ou triple liaison, si elle est présente, dans un alkylène particulier est indiquée entre crochets. Les groupes alkylène typiques incluent, mais ne sont pas limités à, méthylène (méthano) ; les éthylènes comme éthano, éthéno, éthyno; les propylènes comme propano, prop[1]éno, propa[1,2]diéno, 2877944 12 prop[1]yno, etc. ; les butylènes comme butano, but[1]éno, but[2]éno, buta[1,3]diéno, but[1]yno, but[2]yno, buta[1,3]diyno, etc. ; et analogues. Quand des niveaux spécifiques de saturation sont envisagés, la nomenclature alcano, alcéno et/ou alcyno est utilisée. Dans certains modes de réalisation, le groupe aikylène est (C1-C6) ou (C1-C3)alkylène. Dans certains modes de réalisation, le groupe aikylène est un groupe alcano saturé linéaire, par exemple méthano, éthano, propano, butano et analogues. "Cycloalkyle" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne une version cyclique d'un groupe "alkyle". Les groupes cycloalkyle typiques incluent, mais ne sont pas limités à, cyclopropyle; les cyclobutyles comme cyclobutanyle et cyclobutényle; les cyclopentyles comme cyclopentanyle et cyclopentényle; les cyclohexyles comme cyclohexanyle et cyclohexényle; et analogues. Un "système cyclique aromatique parent" désigne un système cyclique ou polycyclique insaturé ayant un système d'électrons 1z conjugués. Sont spécifiquement inclus dans les définitions d'un "système cyclique aromatique parent" les systèmes cycliques condensés dans lesquels un ou plusieurs des cycles sont aromatiques et un ou plusieurs des cycles sont saturés ou insaturés, comme par exemple fluorène, indane, indène, phénalène, tétrahydronaphtalène, etc. Les systèmes cycliques aromatiques parents typiques incluent, mais ne sont pas limités à, acéanthrylène, acénaphtylène, acéphénanthrylène, anthracène, azulène, benzène, chrysène, coronène, fluoranthène, fluorène, hexacène, hexaphène, hexalène, indacène, s-indacène, indane, indène, naphtalène, octacène, octaphène, octalène, ovalène, penta-2,4-diène, pentacène, pentalène, pentaphène, perylène, phénalène, phénanthrène, picène, pléiadène, pyrène, pyranthrène, rubicène, tétrahydronaphtalène, triphénylène, trinaphtalène, et analogues. "Aryle" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un groupe hydrocarboné aromatique monovalent ayant le nombre indiqué d'atomes de carbone (c'est-à-dire que C5-C15 signifie de 5 à 15 atomes de carbone) obtenu par retrait d'un atome d'hydrogène d'un seul atome de carbone d'un système cyclique aromatique parent. Les groupes aryle typiques incluent, mais ne sont pas limités à, les groupes dérivés de acéanthrylène, acénaphtylène, 2877944 13 acéphénanthrylène, anthracène, azulène, benzène, chrysène, coronène, fluoranthène, fluorène, hexacène, hexaphène, hexalène, as-indacène, s-indacène, indane, indène, naphtalène, octacène, octaphène, octalène, ovalène, penta-2,4-diène, pentacène, pentalène, pentaphène, perylène, phénalène, phénanthrène, picène, pléiadène, pyrène, pyranthrène, rubicène, triphénylène, trinaphtalène, et analogues, ainsi que leurs différents isomères hydro. Dans certains modes de réalisation, le groupe aryle est (C5-C15)aryle, (C5-C10) étant plus typique. Des exemples spécifiques sont phényle et naphtyle. "Halogène" ou "halogéno" par eux-mêmes ou en tant que partie d'un autre substituant, désignent, sauf indication contraire, fluoro, chloro, bromo et iodo. "Halogénoalkyle" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un groupe alkyle dans lequel un ou plusieurs des atomes d'hydrogène sont remplacés par un halogène. Ainsi, le terme "halogénoalkyle" est destiné à inclure les monohalogénoalkyles, les dihalogénoalkyles, les trihalogénoalkyles, etc., jusqu'aux perhalogénoalkyles. Par exemple, l'expression "(C1-C2)halogénoalkyle" inclut fluorométhyle, difluorométhyle, trifluorométhyle, 1-fluoroéthyle, 1,1- difluoroéthyle, 1,2-difluoroéthyle, 1,1,1-trifluoroéthyle, perfluoroéthyle, etc. "Hydroxyalkyle" par lui-même ou en tant que partie d'un autre substituant désigne un groupe alkyle dans lequel un ou plusieurs des atomes d'hydrogène sont remplacés par un substituant hydroxyle. Ainsi, le terme "hydroxyalkyle" est destiné à inclure les monohydroxyalkyles, les dihydroxyalkyles, les trihydroxyalkyles, etc. Les groupes définis ci- dessus peuvent inclure des préfixes et/ou des suffixes qui sont communément utilisés dans la technique pour créer des groupes substituants bien connus supplémentaires. A titre d'exemples, "alkyloxy" ou "alcoxy" désigne un groupe de formule -OR, "alkylamine" désigne un groupe de formule -NHR et "dialkylamine" désigne un groupe de formule -NRR, où chaque R est indépendamment un alkyle. A titre d'autre exemple, "halogénoalcoxy" ou "halogénoalkyloxy" désigne un groupe de formule -OR', où R' est un halogénoalkyle. "Promédicament" désigne un dérivé d'un composé actif (médicament) qui peut nécessiter une transformation dans les conditions 2877944 14 d'utilisation, par exemple dans l'organisme, pour libérer le médicament actif. Les promédicaments sont fréquemment, mais pas nécessairement, pharmacologiquement inactifs jusqu'à ce qu'ils soient convertis en le médicament actif. Les promédicaments sont typiquement obtenus par masquage d'un groupe fonctionnel dans le composé médicamenteux considéré comme étant dans une partie nécessaire pour l'activité avec un progroupe (défini ci-dessous) pour former un progroupement qui subit une transformation, comme un clivage, dans les conditions d'utilisation spécifiées pour libérer le groupe fonctionnel, et donc le médicament actif. Le clivage du progroupement peut se dérouler spontanément, par exemple par une réaction d'hydrolyse, ou bien il peut être catalysé ou induit par un autre agent, par exemple par une enzyme, la lumière, un acide ou une base, ou par un changement ou une exposition à un paramètre physique ou environnemental, par exemple un changement de température. L'agent peut être endogène pour les conditions d'utilisation, par exemple une enzyme présente dans les cellules dans lesquelles le promédicament est administré ou les conditions acides de l'estomac, ou bien il peut être fourni de manière exogène. Une grande variété de progroupes, ainsi que les progroupements résultants, qui conviennent pour masquer des groupes fonctionnels dans les composés stéréoisomériquement enrichis actifs décrits ici pour donner des promédicaments sont bien connus dans la technique. Par exemple, un groupe fonctionnel hydroxyle peut être masqué sous forme d'un progroupement sulfonate, ester ou carbonate, qui peut être hydrolysé in vivo pour donner le groupe hydroxyle. Un groupe fonctionnel amino peut être masqué sous forme d'un progroupement amide, carbamate, imine, urée, phosphényle, phosphoryle ou sulfényle, qui peut être hydrolysé in vivo pour donner le groupe amino. Un groupe carboxyle peut être masqué sous forme d'un progroupement ester (incluant les silylesters et les thioesters), amide ou hydrazide, qui peut être hydrolysé in vivo pour donner le groupe carboxyle. D'autres exemples spécifiques de progroupes appropriés et de leurs progroupements respectifs apparaîtront à l'homme du métier. "Progroupe" désigne un type de groupe protecteur qui, quand il est utilisé pour masquer un groupe fonctionnel dans un composé médicamenteux stéréoisomériquement enrichi actif pour former un 2877944 15 progroupement, convertit le médicament en un promédicament. Les progroupes sont typiquement fixés au groupe fonctionnel du médicament par des liaisons qui sont clivables dans les conditions d'utilisation spécifiées. Ainsi, un progroupe est la partie d'un progroupement qui se clive pour libérer le groupe fonctionnel dans les conditions d'utilisation spécifiées. A titre d'exemple spécifique, un progroupement amide de formule -NH-C(0)CH3 comprend le progroupe -C(0)CH3. "Affection proliférative" désigne une maladie ou une affection caractérisée par une prolifération cellulaire aberrante, par exemple où les cellules se divisent plus que les cellules normales équivalentes. La prolifération aberrante peut être causée par un mécanisme d'action quelconque ou par une combinaison quelconque de mécanismes d'action. Par exemple, le cycle cellulaire d'une ou plusieurs cellules peut être affecté de telle manière que la ou les cellules se divisent plus fréquemment que les cellules normales équivalentes, ou à titre d'exemple supplémentaire, une ou plusieurs cellules peuvent contourner les signaux inhibiteurs qui limiteraient normalement leur nombre de divisions. Les maladies prolifératives incluent, mais ne sont pas limitées à, les tumeurs et cancers à croissance lente ou rapide. "Composé antiprolifératif' désigne un composé qui inhibe la prolifération d'une cellule par rapport à une cellule témoin non traitée d'un type similaire. L'inhibition peut être provoquée par un mécanisme quelconque ouune combinaison quelconque de mécanismes, et peut agir en inhibant la prolifération de manière cytostatique ou cytotoxique. A titre d'exemple spécifique, l'inhibition telle qu'elle est utilisée ici inclut, mais n'est pas limitée à, l'arrêt de la division cellulaire, une réduction dans le taux de division cellulaire, la prolifération et/ou la croissance et/ou l'induction de la mort cellulaire, par un mécanisme d'action quelconque, incluant par exemple l'apoptose. "Kinase Aurora" désigne un membre de la famille des protéine kinases à sérine/thréonine qui sont appelées généralement kinases "Aurora". Les protéine kinases à sérine/thréonine de la famille Aurora sont essentielles pour la prolifération cellulaire (voir par exemple Bischhoff & Plowman, 1999, Trends Cell Biol., 9: 454-459; Giet & Prigent, 1999, J. Cell Science, 112: 3591-3601; Nigg, 2001, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2: 2877944 16 21-32; Adams et al., 2001, Trends Cell Biol., 11: 49-54). Actuellement, il existe trois membres connus de la famille chez les mammifères: AuroraA ("2"), Aurora-B Cl") et Aurora-C ("3") (voir, par exemple, Giet & Prigent, 1999, J. Cell Sci., 112: 3591-3601; Bischoff & Plowman, 1999, Trends Cell Biol., 9: 454-459). Tel qu'il est utilisé ici, le terme "kinase Aurora" inclut non seulement ces trois membres de la famille connus chez les mammifères, mais aussi des membres de la famille découverts ultérieurement chez les mammifères et les protéines homologues provenant d'autres espèces et d'autres organismes (pour des exemples non limitatifs des membres homologues de la famille des kinases Aurora provenant d'autres espèces et d'autres organismes, voir Schumacher et al., 1998, J. Cell Biol., 143: 1635-1646; Kimura et al., 1997, J. Biol. Chem., 272: 13766-13771). "Processus à médiation par une kinase Aurora" ou "maladie ou affection à médiation par une kinase Aurora" désigne un processus cellulaire, une maladie ou une affection où une kinase Aurora joue un rôle. On suppose que les kinases Aurora jouent un rôle clé dans les événements de phosphorylation des protéines qui régulent la phase mitotique du cycle cellulaire. Les kinases Aurora humaines présentent des positions subcellulaires distinctes pendant la mitose. Par exemple, Aurora-A est régulée positivement pendant la phase M du cycle cellulaire et est localisée dans le pôle du fuseau pendant la mitose, ce qui suggère une implication dans des fonctions centrosomales. Tandis que l'activité d'Aurora-A est maximisée pendant la prophase, on suppose qu'Aurora-B joue un rôle important pendant la séparation des chromatides et la formation du sillon de clivage dans l'anaphase et la télophase. Le rôle d'Aurora-C est moins clair, mais on a montré qu'elle est localisée dans les centrosomes pendant la mitose, de l'anaphase à la cytokinèse. De plus, l'inhibition de l'activité des kinases Aurora dans des cellules de mammifères conduit à une croissance cellulaire anormale et à une polyploïdie (Terada et al., 1998, EMBO J. 17: 667-676). Ainsi, les kinases Aurora sont considérées comme régulant la division cellulaire, la ségrégation des chromosomes, la formation du fuseau mitotique et la cytokinèse. Tels qu'ils sont utilisés ici, tous ces différents processus sont dans le cadre du "processus à médiation par des kinases Aurora". 2877944 17 De plus, depuis sa découverte en 1997, la famille des kinases Aurora de mammifère a été liée étroitement à la tumorigenèse. L'indice le plus convaincant en est la surexpression d'Aurora-A qui transforme les fibroblasts de rongeurs (Bischoff et al., 1998, EMBO J., 17: 3052-3065). Les cellules ayant des niveaux élevés de cette kinase contiennent de multiples centrosomes et des fuseaux multipolaires, et deviennent rapidement aneuploïdes. L'activité oncogène des kinases Aurora est susceptible d'être liée à la production d'une telle instabilité génétique. En réalité, une corrélation entre l'amplification du locus d'Aurora-A et l'instabilité chromosomique dans des tumeurs mammaires et gastriques a été observée (Miyoshi et al., 2001, Int. J. Cancer, 92: 370-373; Sakakura et al., 2001, Brit. J. Cancer, 84: 824-831). Il a été décrit que les kinases Aurora sont surexprimées dans une large gamme de tumeurs humaines. Une expression élevée d'Aurora- A a été détectée dans plus de 50 % des tumeurs colorectales (Bischoff et al., 1998, EMBO J., 17: 3052-3065; Takahashi et al., 2000, Jpn. J. Cancer Res., 91: 1007-1014), ovariennes (Gritsko et al., 2003, Clinical Cancer Research, 9: 1420-146) et gastriques (Sakakura et al., 2001, Brit. 3. Cancer, 84: 824-831), et dans 94 % des adénocarcinomes des canaux du sein invasifs (Tanaka, 1999, Cancer Research, 59 2041-2044). De hauts niveaux d'Aurora-A ont aussi été décrits dans des lignées cellulaires de tumeurs rénales, cervicales, de neuroblastomes, mélanomes, lymphomes, pancréatiques et de la prostate (Bischoff et al., 1998, EMBO J., 17: 30523065; Kimura et al., 1999, J. Biol. Chem., 274: 7334-7340; Zhou et al., 1998, Nature Genetics, 20: 189-193; Li et al., 2003, Clin. Cancer Res., 9(3) : 991-7). Une amplification/surexpression d'Aurora-A est observée dans les cancers de la vessie humains et l'amplification d'Aurora-A est associée avec l'aneuploïdie et un comportement clinique agressif (Sen et al., 2002, J. Natl. Cancer Inst., 94(17) : 1320-9). De plus, l'amplification du locus d'Aurora-A (20q13) est corrélée avec un médiocre pronostic pour les patients ayant un cancer du sein sans ganglions (Isola et al., 1995, American Journal of Pathology, 147: 905-911). Aurora-B est hautement exprimée dans de multiples lignées cellulaires tumorales humaines, incluant les cellules leucémiques (Katayama et al., 1998, Gene, 244: 1-7). Les niveaux de cette enzyme augmentent en fonction du stade de Duke dans les cancers colorectaux primaires (Katayama et al., 1999, J. 2877944 18 Nat'l Cancer Inst., 91: 1160-1162). Aurora-C, qui est trouvée normalement seulement dans les cellules germinales, est également surexprimée dans un grand pourcentage de cancers colorectaux primaires et dans différentes lignées cellulaires tumorales incluant les cellules 5 d'adénocarcinome cervical et les cellules de carcinome du sein (Kimura et al., 1999, J. Biol. Chem., 274: 7334-7340; Takahashi et al., 2000, Jpn. J. Cancer Res., 91: 1007-1014). Au contraire, la famille Aurora est exprimée à un bas niveau dans la majorité des tissus normaux, des exceptions étant les tissus ayant 10 une grande proportion de cellules en division, comme le thymus et les testicules (Bischoff et al., 1998, EMBO J., 17: 3052-3065). Pour une revue supplémentaire du ou des rôles que les kinases Aurora jouent dans les affections prolifératives, Bischhoff & Plowman, 1999, Trends Cell Biol., 9: 454-459; Giet & Prigent, 1999, J. Cell Science, 112: 3591-3601; Nigg, 2001, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2: 21-32; Adams et al., 2001, Trends Cell Biol., 11: 49-54 et Dutertre et al., 2002, Oncogene, 21: 6175-6183. Bien que la surexpression de protéines par les cellules cancéreuses n'indique pas toujours que l'inhibition de l'activité des protéines produira un effet antitumoral, il a été confirmé dans des analyses fonctionnelles qu'au moins les types suivants de cellules tumorales sont sensibles à l'inhibition de l'activité des kinases Aurora: prostate (DU145), cervical (Hela), pancréatique (Mia-Paca2, BX-PC3), leucémie histologique (U937), adénocarcinome pulmonaire, épidermoïde pulmonaire, carcinome pulmonaire à petites cellules, cancer du sein, rénal, MoIT3 (all) et Molt4 (all). Sur la base du rôle établi des kinases Aurora dans différents cancers, des exemples de "maladies et affections à médiation par des kinases Aurora" incluent, mais ne sont pas limités à, le mélanome, la leucémie et les cancers à tumeurs solides, comme par exemple les cancers du côlon, du sein, gastrique, ovarien, cervical, de type mélanome, rénal, de la prostate, de type lymphome, neuroblastome, pancréatique et de la vessie. "Quantité thérapeutiquement efficace" désigne une quantité d'un composé suffisante pour traiter une affection ou maladie spécifiée ou un ou plusieurs de ses symptômes. En référence aux affections 2877944 19 prolifératives tumorigènes, une quantité thérapeutiquement efficace comprend une quantité suffisante pour, entre autres choses, amener la tumeur à rétrécir, ou diminuer la vitesse de croissance de la tumeur. Dans de nombreuses situations, les traitements standards pour une affection proliférative tumorigène comprennent une intervention chirurgicale pour retirer la ou les tumeurs, seule ou en combinaison avec des thérapies médicamenteuses (chimiothérapie) et/ou des radiothérapies. Tel qu'il est utilisé ici, le terme "quantité thérapeutiquement efficace" d'un composé est destiné à inclure une quantité de composé qui empêche la récurrence de tumeurs chez des sujets qui ont eu une ou des tumeurs retirées par chirurgie, ou qui ralentit la vitesse de récurrence d'une ou plusieurs tumeurs chez de tels sujets. Ainsi, telles qu'elles sont utilisées ici, les quantités de composés qui procurent un avantage thérapeutique en plus d'un autre type de thérapie, comme une intervention chirurgicale et/ou un traitement avec d'autres agents antiprolifératifs incluant, par exemple, le 5-fluoro-uracile, la vinorelbine, le taxol, la vinblastine, le cisplatine, le topotécan, etc.), sont incluses dans la signification de "quantité thérapeutiquement efficace". "Quantité efficace du point de vue prophylactique" désigne une quantité d'un composé suffisante pour empêcher un sujet de développer une maladie ou affection spécifiée. Typiquement, les sujets chez lesquels une prophylaxie est pratiquée ne souffrent pas de la maladie ou affection spécifiée, mais sont reconnus comme présentant un risque élevé de développer cette maladie ou affection sur la base de facteurs comme les marqueurs diagnostiques et l'histoire familiale, sans être limités à ceuxci. 5.2 Composés stéréoisomériquement enrichis et stéréoisomériquement purs Il a été découvert récemment que certains composés 4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2-yl)-2N-phényl substitué-2,4pyrimidinediamine, représentés par la formule structure (I), ci-dessous, sont de puissants inhibiteurs de l'activité des kinases Aurora et de la prolifération des cellules tumorales dans des analyses in vitro (voir par exemple la demande US de n de série 11/133 419 déposée le 18 mai 2005 et la demande PCT n PCT/US05/17470 déposée le 18 mai 2005 et les demandes prioritaires qui y sont citées) : N NON N H H CONH2 (I) L'homme du métier comprendra que, dans la formule structurale (I), la stéréochimie au niveau des carbones 1, 2, 3 et 4 n'est pas spécifiée, de sorte que les composés selon la formule structurale (I) incluent 8 diastéréoisomères, représentés par les formules structurales (Ia)-(Ih) cidessous: H z N^N N *3 H (1R,2R,3S,4S) (1S,2R,3S,4R) H (Ic) 3 H H CONH2 (1R,2S,3R,4S) (Ie H (1S,2S,3S,4R) H CONH2 (1R,2S,3S,4S) (1S,2R,3R,4R) Les composés de formule structurale (I) incluent aussi deux racémates cis, représentés par les formules structurales (IIa) et (IIb), et deux racémates trans, représentés par les formules structurales (IIIa) et (IIIb) ci-dessous: (2-exo-3-exo) R1 (2-endo-3-endo) CONH2 (2-exo-3-exo) R1 (2-endo-3-exo) Le racémate cis de formule structurale (IIa) peut être appelé racémate 2- exo-3-exo, et il inclut les diastéréoisomères (1R,2R,3S,4S) et (1S,2S,3R, 4R) de formule structurale (Ia) et (Ib) respectivement. Le racémate cis de formule structurale (IIb) peut être appelé racémate 2- endo-3-endo, et il inclut les diastéréoisomères (1R,2S,3R,4S) et (1S,2R, 3S,4R) des formules structurales (Ic) et (Id), respectivement. Comme décrit de manière plus détaillée dans la section des exemples, pour les composés dans lesquels R5 est fluoro, RI est l'hydrogène, R2 est 4- méthylpipérazin-1-yle et R3 est méthyle, ces deux racémates cis présentent une activité antiproliférative contre une variété de lignées 2877944 22 cellulaires tumorales différentes dans des analyses antiprolifération in vitro. Cependant, ce racémate 2-exo-3-exo (racémate ri) est approximativement 20 fois plus actif que le racémate 2-endo-3- endo (racémate r2) correspondant dans toutes les lignées cellulaires testées avec les deux racémates. En outre, il a été découvert que le diastéréoisomère (1R,2R,3S,4S) du racémate ri est largement responsable de l'activité du racémate ri. Quand ils ont été testés sous forme de stéréoisomères isolés, ce diastéréoisomère (1R,2R,3S,4S) (appelé diastéréoisomère "a") présentait généralement des CI50 dans le domaine nanomolaire, tandis que le diastéréoisomère (1S,2S,3R,4R) (appelé énantiomère "b") présentait généralement des CI50 dans le domaine micromolaire contre les mêmes lignées cellulaires. Ainsi, en général, le diastéréoisomère (1R,2R,3S,4S) de ce composé est généralement 1000 fois plus actif que l'énantiomère (1S,2S,3R,4R) correspondant. Il est aussi approximativement 20-50 fois plus actif que le racémate 2-endo-3-endo r2 correspondant dans les lignées cellulaires testées. Le diastéréoisomère (1R,2R,3S,4S) présentait des résultats supérieurs similaires par comparaison avec l'énantiomère (1S,2S,3R,4R) dans des analyses d'inhibition basées sur des cellules contre la kinase Aurora B. Sur la base de l'activité observée de ce diastéréoisomère (1R,2R,3S,4S), on prévoit que toute la gamme de diastéréoisomères (1R,2R,3S,4S) selon la formule structurale (Ia) présentera des activités supérieures similaires par comparaison avec les énantiomères (1S,2S,3R,4R), les racémates 2-exo- 3-exo, les racémates 2-endo-3-endo correspondants et d'autres diastéréoisomères correspondants. Ainsi, il est fourni ici des composés qui sont enrichis en ce diastéréoisomère (1R,2R,3S,4S) particulièrement actif. Dans un mode de réalisation, de tels composés stéréoisomériquement enrichis incluent des composés selon la formule structurale (I) : (I) 2877944 23 qui sont enrichis en le diastéréoisomère correspondant de formule structure (Ia) : (1R,2R,3S,4S) où chaque R1 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, -(CH2)n-OH, ORa, -0(CH2)n-Ra, -0(CH2) -Rb, -C(0)ORa, halogéno, -CF3 et -OCF3; chaque R2 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, -ORa, -0(CH2),-Ra, -0(CH2)n-Rb, - NHC(0)Ra, halogéno, -CF3, -OCF3, 0 et -i N N R4; \_ _J \_J chaque R3 est choisi indépendamment dans le groupe 15 consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, -(CH2),-OH, -ORa, 0(CH2)n-Ra, - 0(CH2)n-Rb, halogéno, -CF3, -OCF3, N O Ç)N Ret N N chaque R4 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, arylalkyle, -ORa, -NRR, 20 -C(0)Ra, -C(0)ORa, et -C(0)NRR; R5 est l'hydrogène, halogéno, fluoro, -CN, -NO2, -C(0)ORa ou -CF3; chaque n est indépendamment un entier de 1 à 3; chaque Ra est choisi indépendamment dans le groupe 25 consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur et cycloalkyle inférieur; 2877944 24 chaque Rb est choisi indépendamment dans le groupe consistant en -ORa, -CF3, -OCF3, -NRR, -C(0) Ra, -C(0)ORa, -C(0)NRR et -C(0)NRand; chaque Rc est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène et alkyle inférieur ou bien, à titre d'alternative, deux substituants Rc peuvent être combinés avec l'atome d'azote auquel ils sont liés pour former un cycle saturé à 4-9 membres qui inclut éventuellement 1-2 groupes hétéroatomiques supplémentaires choisis parmi 0, NRa, NRa-C(0)Ra, NRa-C(0)ORa et NRa-C(0) NRa; et chaque Rd est indépendamment mono-hydroxyalkyle inférieur ou dihydroxyalkyle inférieur. Dans un autre mode de réalisation, de tels composés stéréoisomériquement enrichis incluent les racémates 2-exo-3-exo cis selon la formule structurale (IIa), où R', R2, R3, R4 et R5 sont définis comme précédemment pour la formule structurale (I), qui sont enrichis en le diastéréoisomère de formule structure (Ia), voir ci-dessus. Tel qu'il est utilisé ici, un composé est "enrichi" en un diastéréoisomère particulier quand ce diastéréoisomère est présent en excès par rapport à tout autre diastéréoisomère présent dans le composé. Le pourcentage réel du diastéréoisomère particulier comprenant le composé dépendra du nombre d'autres diastéréoisomères présents. A titre d'exemple spécifique, un mélange racémique est "enrichi" en un énantiomère spécifié quand cet énantiomère constitue plus de 50 % du mélange. Quel que soit le nombre de diastéréoisomères présents, un composé qui est enrichi en un diastéréoisomère particulier comprendra typiquement au moins environ 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou même plus du diastéréoisomère spécifié. La quantité d'enrichissement d'un diastéréoisomère particulier peut être confirmée au moins de procédés analytiques conventionnels utilisés en routine par l'homme du métier, ainsi que cela sera discuté de manière plus détaillée ci-dessous. Dans un autre mode de réalisation, les composés stéréoisomériquement enrichis incluent des composés selon la formule structurale (Ia) cidessus où R', R2, R3, R4 et R5 sont définis comme précédemment pour la formule structurale (I), qui sont sensiblement dépourvus de l'énantiomère correspondant et/ou de tout autre diastéréoisomère correspondant. Par "sensiblement dépourvu de", on veut Modifications du 15.03.06 dire que le composé comprend moins d'environ 10 % des diastéréoisomères et/ou énantiomères indésirables ainsi que cela est établi au moyen de procédés analytiques conventionnels utilisés en routine par l'homme du métier (discutés de manière plus détaillée ci-dessous). Dans certains modes de réalisation, la quantité de stéréoisomères indésirables peut être inférieure à 10 h, par exemple 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 % ou même moins. Les composés stéréoisomériquement enrichis qui contiennent environ 95 % ou plus du stéréoisomère souhaité sont appelés ici stéréoisomères "sensiblement purs". Les composés stéréoisomériquement enrichis qui contiennent environ 99 h ou plus du stéréoisomère souhaité sont appelés ici stéréoisomères "purs". La pureté de tout composé stéréoisomériquement enrichi (pureté diastéréoisomérique; % de) peut être confirmée au moyen de procédés analytiques conventionnels, comme cela sera décrit de manière plus is détaillée ci-dessous. Dans certains modes de réalisation des différents composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, RI est l'hydrogène; R2 est / \ N O \ / et R3 n'est pas \ / N N R4 \ / \ / ou N Dans d'autres modes de réalisation des différents composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, R3 est l'hydrogène, méthyle, méthoxy, trifluorométhyle ou chloro. Dans d'autres modes de réalisation encore, R4 est méthyle, -C(0)CH3, -C(0)OCH3 ou -C(0)OCH2CH3. Dans d'autres modes de réalisation des différents composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, RI est l'hydrogène; R2 est différent de N N NO R4 et R3 est / \ N \ /N R4 ou N 0 N N R4 \ / \ / ou N Dans d'autres modes de réalisation encore, R2 est l'hydrogène, méthyle, méthoxy, trifluorométhyle ou chloro. De préférence, R4 est méthyle, -C(0)CH3r -C(0)OCH3 ou -C(0)CH2CH3. Dans d'autres modes de réalisation des différents composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, R2 n'est pas N O N \ \ N R4 / ou \ / et R3 n'est pas N O N\ \N R4 \ / \ / ou N Dans d'autres modes de réalisation encore, RI et R2 sont chacun l'hydrogène et R3 est -OCH2NHRa. Dans certains autres modes de réalisation, RI, R2 et R3 sont choisis chacun, indépendamment les uns des autres, dans le groupe consistant en l'hydrogène, méthyle, méthoxy, trifluorométhyle et chloro, à condition qu'au moins deux parmi R', R2 et R3 ne soient pas l'hydrogène. Dans d'autres modes de réalisation encore, RI est l'hydrogène, R2 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, N O N \N R4 \ / et \ / et R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, 20 halogéno, -CF3, N N NO R4 \ / et \ / Dans d'autres modes de réalisation encore, R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, méthyle, chloro, -CF3, N O N N R4 \ / et \ / 2877944 27 et R4 est méthyle, -CORa ou -CO(0)Ra où Ra est méthyle ou éthyle. Dans un autre mode de réalisation encore, R2 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, N N NO R4 / et \ / et R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, halogéno, -CF3, N O N N R4 \ / et \ / Dans d'autres modes de réalisation encore, R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, méthyle, chloro, -CF3, N O N N R4 \ / et \ / et R4 est méthyle, -CORa ou -CO(0)Ra où Ra est méthyle ou éthyle. De préférence, R2 est / \ N R4 \ / R4 est -CORa où Ra est méthyle; et R3 est l'hydrogène. Dans d'autres 15 modes de réalisation, R2 est \N +N/ R4 \ / R4 est CO(0)Ra où Ra est éthyle, et R3 est l'hydrogène. Dans un autre mode de réalisation encore, R2 est / \ N O \ / et R3 est hydrogène. Dans un autre mode de réalisation encore, R2 est l'hydrogène; R3 est N O N N R4 \ / ou \ / et R4 est méthyle, -CORa ou -CO(0)Ra où Ra est méthyle ou éthyle. De 25 préférence, R2 est 2877944 28 / \ N N R4 \ / R4 est méthyle et R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, méthyle, chloro et -CF3. De préférence encore, R3 est méthyle. Dans d'autres modes de réalisation des composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici, R5 est fluoro. Dans d'autres modes de réalisation encore, le composé stéréoisomériquement enrichi est la (1 R,2R,3S,4S)-4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4méthylpipérazin-1-yl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine sensiblement stéréoisomériquement pure ou stéréoisomériquement pure. D'autres exemples de modes de réalisation de composés selon la formule structurale (I) qui peuvent être stéréoisomériquement enrichis en le diastéréoisomère de formule structurale (Ia) correspondant, voir cidessus, sensiblement exempts de tout énantiomère et/ou diastéréoisomère de celui-ci, et/ou sensiblement purs ou purs concernant le diastéréoisomère de formule structurale (Ia) ci-dessus sont illustrés dans le tableau 1 ci-dessous: TABLEAU 1 Ri 7 RS,N R2 (I) s, z HH N Rs Anie s CONH2 Composé Rl R2 R3 R5 H / \ Me F N N Me \ / 62 H / \ H F N N Me \ i 64 H H / \ F N N Me / 66 H N N H \ / . F 68 H H N N F H N \O H F 72 HN N O I H I F \ / 74 H H N \ O \ / OEt F N N /0 \ / OEt 76 H I H F 78 H 8o H 82 H 84 I H 86 I H 88 H N N Me \ / N N Me \ / N N Me \ / N N Me \ / N N Me \ / N N Me \/ H F Me F CF3 I F CF3 I F H H F 2877944 30 Quand des diastéréoisomères spécifiques et/ou des mélanges racémiques de composés spécifiques décrits ici, comme les composés décrits dans le tableau 1, sont envisagés, le numéro du composé est suivi par une lettre spécifiant le diastéréoisomère spécifique ou le mélange racémique de la manière suivante: a = (1R,2R,3S,4S) b = (1S,2S,3R,4R) c = (1R,2S,3R,4S) d = (1S,2R,3S,4R) e = (1R,2R,3R,4S) f = (1S,2S,3S,4R) g = (1R,2S,3S,4S) h = (1S,2R,3R,4R) ri = racémate cis 2-exo-3-exo r2 = racémate cis 2-endo-3-endo r3 = racémate trans 2-exo-3-endo r4 = racémate trans 2-endo-3-exo Ainsi, à titre d'exemple spécifique, le diastéréoisomère (1R,2R,3S,4S) du composé 60 est appelé composé 60a. L'homme du métier comprendra que les composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici peuvent inclure des groupes fonctionnels qui peuvent être masqués avec des progroupes pour créer des promédicaments. Habituellement, mais pas nécessairement, de tels promédicaments sont pharmacologiquement inactifs jusqu'à ce qu'ils soient convertis en leurs formes de médicaments actifs. Par exemple, les groupes ester subissent communément une hydrolyse catalysée par les acides pour donner l'acide carboxylique parent quand ils sont exposés aux conditions acides de l'estomac, ou une hydrolyse catalysée par des bases quand ils sont exposés aux conditions basiques de l'intestin ou du sang. Ainsi, quand ils sont administrés à un sujet par voie orale, les composés stéréoisomériquement enrichis qui incluent des groupements ester peuvent être considérés comme des promédicaments de leur acide carboxylique correspondant, que la forme ester soit ou non pharmacologiquement active. Sont inclus dans le cadre de l'invention les promédicaments des différents composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici. Dans de 2877944 31 tels promédicaments, tout groupement fonctionnel disponible peut être masqué avec un progroupe pour donner un promédicament. Les groupes fonctionnels dans les composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici qui peuvent être masqués avec des progroupes pour l'inclusion dans un progroupement incluent, mais ne sont pas limités à, les amines (primaires et secondaires), les hydroxyles, les sulfanyles (thiols), les carboxyles, etc. De très nombreux progroupes qui conviennent pour masquer de tels groupes fonctionnels pour donner des progroupements qui sont clivables dans les conditions d'utilisation souhaitées sont connus dans la technique. Tous ces progroupes, seuls ou en combinaison, peuvent être inclus dans les promédicaments stéréoisomériquement enrichis de l'invention. Dans un mode de réalisation illustratif, les promédicaments stéréoisomériquement enrichis sont des composés selon la formule structurale (I) ci-dessus où Ra, Rb et R peuvent être, en plus de leurs alternatives définies précédemment, un progroupe, qui sont enrichis en le diastéréoisomère de formule structurale (Ia) ci-dessus correspondant. L'homme du métier comprendra que beaucoup des composés et des promédicaments décrits ici, ainsi que les différentes espèces des composés décrites et/ou illustrées spécifiquement ici, peuvent présenter les phénomènes de tautomérie et d'isomérie de conformation. Par exemple, les composés et les promédicaments peuvent exister sous différentes formes tautomères, incluant la forme énol, la forme céto et leurs mélanges. Comme les différents noms de composés, les différentes formules et les différents dessins de composés dans la présente invention peuvent représenter l'une seulement des différentes formes tautomères ou conformationnelles possibles, il conviendrait de comprendre que l'invention englobe tous les tautomères ou tous les isomères conformationnels des composés ou des promédicaments ayant une ou plusieurs des utilisés décrites ici, ainsi que les mélanges de ces différentes formes isomères. Dans les cas de rotation limitée autour de la structure formant le noyau 2,4-pyrimidinediamine, des isomères atropiques sont possibles aussi et sont également inclus spécifiquement dans les composés et/ou promédicaments de l'invention. Selon la nature des différents substituants, les composés stéréoisomériquement enrichis et les promédicaments peuvent être sous forme de sels. De tels sels incluent les sels qui conviennent pour les 2877944 32 utilisations pharmaceutiques ("sels pharmaceutiquement acceptables"), les sels qui conviennent pour les utilisations vétérinaires, etc. De tels sels peuvent être dérivés d'acides ou de bases, comme cela est bien connu dans la technique. Dans certains modes de réalisation, le sel est un sel pharmaceutiquement acceptable. Généralement, les sels pharmaceutiquement acceptables sont les sels qui conservent sensiblement une ou plusieurs des activités pharmacologiques souhaitées du composé parent et qui sont appropriés pour l'administration à des êtres humains. Les sels pharmaceutiquementacceptables incluent les sels d'addition d'acide formés avec des acides inorganiques ou des acides organiques. Les acides inorganiques qui conviennent pour former des sels d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptables incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, les acides halogénhydriques (par exemple acide chlorhydrique, acide bromhydrique, acide iodhydrique, etc.), l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique et analogues. Les acides organiques qui conviennent pour former des sels d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptables incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, l'acide acétique, l'acide trifluoroacétique, l'acide propionique, l'acide hexanoïque, l'acide cyclopentanepropionique, l'acide glycolique, l'acide oxalique, l'acide pyruvique, l'acide lactique, l'acide malonique, l'acide succinique, l'acide malique, l'acide maléique, l'acide fumarique, l'acide tartrique, l'acide citrique, l'acide palmitique, l'acide benzoïque, l'acide 3-(4-hydroxybenzoyl)benzoïque, l'acide cinnamique, l'acide mandélique, les acides alkylsulfoniques (par exemple acide méthanesulfonique, acide éthanesulfonique, acide 1,2-éthanedisulfonique, acide 2-hydroxyéthanesulfonique, etc.), les acides arylsulfoniques (par exemple acide benzènesulfonique, acide 4- chlorobenzènesulfonique, acide 2-naphtalènesulfonique, acide 4- toluènesulfonique, acide camphosulfonique, etc.), l'acide 4méthylbicyclo[2.2.2]-oct-2-ène-1-carboxylique, l'acide glucoheptonique, l'acide 3-phénylpropionique, l'acide triméthylacétique, l'acide tertbutylacétique, l'acide laurylsulfurique, l'acide gluconique, l'acide glutamique, l'acide hydroxynaphtoïque, l'acide salicylique, l'acide stéarique, l'acide muconique et analogues. 2877944 33 Les sels pharmaceutiquement acceptables incluent aussi les sels formés quand un proton acide présent dans le composé parent est remplacé par un ion métallique (par exemple un ion de métal alcalin, un ion de métal alcalino-terreux ou un ion aluminium) ou est coordonné avec une base organique (par exemple éthanolamine, diéthanolamine, triéthanolamine, N-méthylglucamine, morpholine, pipéridine, diméthylamine, diéthylamine, etc.). Les composés stéréoisomériquement enrichis et les promédicaments, ainsi que leurs sels, peuvent aussi être sous forme d'hydrates, de solvates et/ou de N-oxydes, comme cela est bien connu dans la technique. L'enrichissement stéréoisomérique et/ou la pureté des composés et des promédicaments décrits ici peuvent être établis par des procédés analytiques conventionnels bien connus de l'homme du métier. Par exemple, l'utilisation de réactifs de déplacement de RMN chiraux, l'analyse par chromatographie en phase gazeuse avec des colonnes chirales, l'analyse par chromatographie liquide à haute pression avec des colonnes chirales, la formation de dérivés diastéréoisomères par réaction avec des réactifs chiraux et l'analyse conventionnelle peuvent être utilisées pour établir l'enrichissement stéréoisomérique et/ou la pureté d'un stéréoisomère spécifique. A titre d'alternative, la synthèse utilisant des produits de départ d'enrichissement stéréoisomérique et/ou de pureté connus peut être utilisée pour établir l'enrichissement stéréoisomérique et/ou la pureté des composés décrits ici. D'autres procédés analytiques pour démontrer l'homogénéité stéréoisomérique sont bien connus de l'homme du métier. 5.3 Procédés de synthèse Les composés stéréoisomériquement enrichis et les promédicaments peuvent être synthétisés par différentes voies de synthèse au moyen de produits de départ disponibles dans le commerce et/ou de produits de départ préparés par des procédés de synthèse conventionnels. Différents exemples de voies de synthèse qui peuvent être utilisés pour synthétiser les composés stéréoisomériquement enrichis et les promédicaments sont décrits dans WO 03/063794 et US 2004/0029902. 2877944 34 A des fins d'illustration, un exemple de schéma de synthèse qui peut être utilisé pour synthétiser toute la gamme des composés décrits ici est illustré dans le schéma (I) ci-dessous: Schéma (I) s (autres agents halogénants) 3 X^N 2 POx3 R5 N 1 équiv. NH2 R5 6 CONH2 CONH2 8 l'halogénure C4 est plus réactif avec les nucléophiles RI H2N 1 équiv. Rt (I) Dans le schéma (I), R1, R2, R3 et R5 sont définis comme précédemment pour la formule structurale (I), ci-dessus, X est un halogène (par exemple F, Cl, Br ou I) et chaque G est choisi indépendamment des autres parmi 0 et S. Il conviendrait de noter qu'un "*" dans l'aminocarboxamide 6 indique que le stéréocentre particulier n'est pas spécifié. Ainsi, l'homme du métier comprendra que le schéma (I) peut être utilisé pour préparer des mélanges diastéréoisomères racémiques, des mélanges diastéréoisomériquement enrichis de composés selon la formule structurale (I), ainsi que des stéréoisomères des composés de formule structurale (I) qui sont sensiblement exempts d'autres diastéréoisomères spécifiés. 2877944 35 En se référant au schéma (I), l'uracile ou thio-uracile 2 est dihalogéné aux positions 2 et 4 avec l'agent halogénant standard PDX3 (ou d'autres agents halogénants) dans des conditions standards pour produire la 2,4-bis-halogénopyrimidine 4. L'halogénure à la position C4 est plus réactif avec les nucléophiles que l'halogénure à la position C2 dans la pyrimidine 4. Cette réactivité différentielle peut être exploitée pour synthétiser les composés et les promédicaments décrits ici tout d'abord en faisant réagir la 2,4-bis-halogénopyrimidine 4 avec un équivalent de 2aminobicyclo[2.2.1]hept-5-ène-3-carboxamide 6, pour donner 8, puis réaction avec l'aniline 10 pour donner des composés selon la formule structurale (I). L'homme du métier comprendra que la configuration stéréoisomérique et la pureté optique de l'aminocarboxamide 6 détermineront dans la plupart des cas la configuration stéréoisomérique et la pureté optique des composés de formule structurale (I). Dans la plupart des situations, l'halogénure C4 est plus réactif avec les nucléophiles, comme le montre le schéma. Cependant, ainsi que le comprendra l'homme du métier, l'identité du substituant R5 peut modifier cette réactivité. Par exemple, quand R5 est trifluorométhyle, un mélange 50:50 de 4-pyrimidineamine 8 4N-substitué et de la 2- pyrimidineamine 2N-substituée correspondante est obtenu. Quelle que soit l'identité du substituant R5, la régiosélectivité de la réaction peut être régulée en ajustant le solvant et les autres conditions de synthèse (comme la température), ainsi que cela est bien connu dans la technique. Les réactions représentées dans le schéma (I) peuvent se dérouler plus rapidement quand les mélanges réactionnels sont chauffés par des microondes. Quand on chauffe de cette manière, il est possible d'utiliser les conditions suivantes: chauffage à 175 C dans l'éthanol pendant 5-20 min dans un réacteur de Smith (Persona) Chemistry, Biotage AB, Suède) dans un tube scellé (à une pression de 20 x 105 Pa (20 bar)). Les produits de départ uracile ou thio-uracile 2 peuvent être achetés auprès de sources commerciales ou préparés au moyen de techniques standards de la chimie organique. Les uraciles et thio-uraciles disponibles dans le commerce qui peuvent être utilisés comme produits de départ dans le schéma (I) incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, l'uracile (Aldrich #13 078-8; n d'enregistrement CAS 66-228) ; le 2-thio-uracile (Aldrich #11 558-4; n d'enregistrement CAS 141-902877944 36 n d'enregistrement CAS 611-08-5) ; le 5-(triflurométhyl)uracile (Aldrich #22 327-1; n d'enregistrement CAS 54-20-6). D'autres uraciles et/ou thio-uraciles 5-substitués sont disponibles auprès de General Intermediates of Canada, Inc., Edmonton, CA (http://www.generalintermediates.com) et/ou Interchim, Cedex, France (http://www.interchim.com), ou peuvent être préparés au moyen de techniques standards. De très nombreuses références d'ouvrages enseignant des procédés de synthèse appropriés sont présentées ci-dessous. Les anilines 10 peuvent être achetées auprès de sources commerciales ou bien encore synthétisées au moyen de techniques standards. Par exemple, des anilines appropriées peuvent être synthétisées à partir de précurseurs nitro au moyen d'une chimie standard. Des exemples de réactions spécifiques sont donnés dans la section des exemples. Voir aussi Vogel, 1989, Practica/ Organic Chemistry, Addison Wesley Longman, Ltd. and John Wiley & Sons, Inc. L'homme du métier comprendra que, dans certains cas, les anilines 10 peuvent inclure des groupes fonctionnels qui exigent une protection pendant la synthèse. L'identité exacte de tout groupe protecteur utilisé dépendra de l'identité du groupe fonctionnel qui est protégé, et apparaîtra à l'homme du métier. Un guide pour choisir des groupes protecteurs appropriés, ainsi que des stratégies de synthèse pour leur fixation et leur retrait, peuvent être trouvés par exemple dans Greene & Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ème édition, John Wiley & Sons, Inc., New York (1999) et les références qui y sont citées (dans la suite "Greene & Wuts"). Les promédicaments décrits ici peuvent être préparés par une modification de routine des procédés décrits ci-dessus. Comme le comprendra l'homme du métier, le diastéréoisomère (1R,2R,3S,4S) correspondant à la formule structure (Ia) ci-dessus peut être isolé par séparation chirale ou d'autres techniques standards. Des 2) ; le 2,4-dithiouracile (Aldrich #15 846-1; n d'enregistrement CAS 2001-93-6) ; le 5-bromouracile (Aldrich #85 247-3; n d'enregistrement CAS 51-20-7; le 5-fluoro-uracile (Aldrich #85 847-1; n d'enregistrement CAS 51-21-8), le 5-iodouracile (Aldrich #85 785-8; n d'enregistrement CAS 696-07-1) ; le 5-nitro-uracile (Aldrich #85 276-7; 2877944 37 procédés pour la résolution chirale de diastéréoisomères spécifiques sont décrits de manière plus détaillée dans la section des exemples. Les composés stéréoisomériquement enrichis et/ou les diastéréoisomères sensiblement purs et/ou purs peuvent être synthétisés aussi à partir de produits de départ 2-amino-3-carboxamide 6 ayant une stéréochimie spécifiée, ou à l'aide d'auxiliaires chiraux. Dans un mode de réalisation constituant un exemple, illustré dans le schéma (II) ci-dessous, le diastéréoisomère souhaité est résolu chimiquement avec la (R)-méthyl-p-méthoxybenzylamine 18 comme auxiliaire chiral. Schéma (II) NH Boc O, DMAP O THF, ta, 24 h 14r1 16r1 HN OMe 20a OMe 20b (racémique 2-exo-3-exo) (racémique 2-exo-3-exo) THF, ta, 1 semaine ou 0 60 C, 3 jours OMe TFA/CH2Cl2 ta, 2-3 h O + OMe OMe 24b OMe 24a 22b Dans le schéma (II), le 13-lactame racémique 2-exo-3-exo 14r1 (préparé de la manière décrite dans Stajar et al., 1984, Tetrahedron 40(12):2385) est protégé avec un groupe Boc, ce qui donne le 13-lactame 2877944 38 Bocprotégé racémique correspondant 16r1. Le racémate Boc-protégé 16r1 est ensuite mis à réagir avec la (R)-méthyl-paraméthoxybenzylamine 18, pour donner un mélange de diastéréoisomères 20a et 20b. Ce mélange de diastéréoisomères est traité avec un acide comme le TFA pour cliver le groupe Boc, ce qui donne un mélange de diastéréoisomères 22a et 22b qui peuvent être mis à réagir avec la 2,4-dihalogénopyrimidine 4 pour donner un mélange racémique de composés 24a et 24b. A ce stade, les composés 24a et 24b peuvent être séparés l'un de l'autre par cristallisation et mis à réagir avec l'aniline 10 pour donner les diastéréoisomères 25a et 25b isolés. Les auxiliaires chiraux provenant des diastéréoisomères 25a et 25b isolés peuvent être clivés pour donner des diastéréoisomères isolés selon les formules structurales (Ia) et (Ib) respectivement. Pour les composés 25a et 25b dans lesquels RI est l'hydrogène, R2 est 4méthyl-pipérazin-1-yle, R3 est méthyle et R5 est fluoro, le clivage de l'auxiliaire chiral s'est révélé difficile. Pour ces composés et d'autres composés pour lesquels un tel clivage se révèle difficile, l'auxiliaire chiral peut être clivé des composés 24a et 24b, et les composés isolés résultants peuvent être mis à réagir avec l'aniline 10 pour donner des diastéréoisomères isolés selon les formules structurales (Ia) et (Ib). Des exemples spécifiques de telles réactions sont décrits dans la section des exemples. Les composés qui sont stéréoisomériquement enrichis, sensiblement stéréoisomériquement purs et/ou stéréoisomériquement purs en les diastéréoisomères spécifiés peuvent aussi être synthétisés à partir de f3lactames stéréoisomériquement enrichis, sensiblement stéréoisomériquement purs et/ou stéréoisomériquement purs. De tels plactames stéréoisomériquement enrichis et/ou (sensiblement) stéréoisomériquement purs peuvent être résolus enzymatiquement et isolés. Dans un exemple de mode de réalisation, des J3-lactames (sensiblement) stéréoisomériquement purs peuvent être résolus et isolés à partir d'un mélange racémique de 13lactame 2-exo-3-exo 14r1 au moyen d'une lipolase immobilisée (disponible auprès de Sigma Chemical Co., n de catalogue L4777) de la manière décrite dans Eniko et al., 2004, Tetrahedron Asymmetry 15:573-575. Dans un autre exemple de mode de réalisation, des 3-lactames (sensiblement) stéréoisomériquement purs 2877944 39 peuvent être résolus et isolés à partir du 3-lactame racémique Bocprotégé 2-exo-3-exo 16r1 avec une enzyme Chirazyme L-2-type B, c.f. immobilisée liée à une résine (Candida antarctica Type B, c-f, disponible auprès de Biocatalytics, Inc. Pasadena, CA) comme décrit dans la demande US de n de série 60/628 401, déposée le 15 novembre 2004, la demande en instance de n de série 11/133 419 déposée le 18 mai 2005 et la demande PCT n PCT/US05/17470 déposée le 18 mai 2005. Un exemple spécifique de l'utilisation de cette enzyme pour résoudre des diastéréoisomères de J3-lactames spécifiés est décrit dans la section des exemples, ainsi qu'un procédé de synthèse du f3-lactame racémique 2-exo-3-exo 16r1. Des exemples de synthèses de diastéréoisomères spécifiés selon la formule structurale (Ia) utilisant des réactions enzymatiques sont illustrés dans les schémas (III) et (IV) ci-dessous. Un exemple spécifique de l'utilisation de l'enzyme Novozyme 435 comme illustré dans le schéma IV, qui, comme l'enzyme Chirazyme discutée cidessus et illustrée dans le schéma (III), peut être utilisée pour résoudre des énantiomères à partir de (3-lactames racémiques, est décrit dans la section des exemples. Schéma (III) Chirazyme L-2, type B, c.f. O diisopropyléther, 60 C, 60 h 16a NH40H, EtOH ta, 3 h NHBoc,,,NHBoc + NH2 O-N H4+ O 26b + O 26b 16r1 (racémique) O 28a (reste en solution organique) (reste en solution aqueuse) R5 XN'X O 32a 30a Schéma (IV) NH Novozyme 435 NH 70 C, 14 jours a Boc2O, DMAP O THF, 22 C, 3 h 14r1 (racémique) Ri 14a 16a R, 32a 5.4 Activité des composés antiprolifératifs Les composés stéréoisomériquement enrichis inhibent typiquement la prolifération de cellules souhaitées, comme les cellules tumorales, avec une CI50 dans la plage d'environ 20 pM ou moins, telle qu'elle est mesurée dans une analyse de prolifération cellulaire in vitro standard. Bien entendu, l'homme du métier comprendra que les composés qui présentent des CI50 plus basses, par exemple de l'ordre de 10 pM, 1 pM, 100 nM, 10 nM, 1 nM ou même plus basses, peuvent être particulièrement utiles dans des applications thérapeutiques. L'activité antiproliférative peut être cytostatique ou cytotoxique. Dans les cas où une activité antiproliférative spécifique d'un type cellulaire particulier est souhaitée, le composé peut être analysé concernant son activité avec le type cellulaire souhaité et contre-criblé concernant un manque d'activité à l'égard d'autres types cellulaires. Le degré "d'inactivité" souhaité dans de tels contre-criblages, ou le rapport souhaité de l'activité à l'inactivité peut varier pour différentes situations, et peut être choisi par l'utilisateur. Typiquement également, les composés actifs inhibent une activité d'une kinase Aurora, avec une CI50 dans la plage d'environ 20 pM ou moins, typiquement dans la plage d'environ 10 pM, 1 pM, 100 nM, 10 nM, 1 nM, ou même moins. La CI50 contre une kinase Aurora peut être déterminée dans une analyse in vitro standard avec une kinase Aurora isolée, ou dans une série cellulaire fonctionnelle. Une analyse à couplage d'enzyme appropriée qui peut être utilisée pour déterminer le degré 2877944 42 d'activité d'une kinase Aurora est décrite dans Fox et al., 1998, Protein Sci. 7:2249-2255. La séquence peptidique de Kemptide LRRASLG (Bochern Ltd. , UK) peut être utilisée comme substrat pour la kinase Aurora A, la kinase Aurora B et/ou la kinase Aurora C, et les réactions peuvent être conduites à 30 C dans une solution contenant HEPES 100 mM (pH 7,5), MgCl2 10 mM, NaCI 25 mM, DU 1 mM. Les valeurs CI50 peuvent être déterminées par régression non linéaire informatisée avec un logiciel disponible dans le commerce (par exemple Prism 3.0, GraphPed Software, San Diego, CA). Une analyse fonctionnelle basée sur des cellules appropriée est décrite dans la section des exemples. 5.5 Utilisation des composés antiprolifératifs Les composés stéréoisomériquement enrichis actifs, y compris les différents promédicaments, sels, hydrates et/ou N-oxydes de ceux-ci, peuvent être utilisés pour inhiber les kinases Aurora, les processus à médiation par des kinases Aurora, et/ou la prolifération cellulaire dans différents contextes. Selon certains modes de réalisation, une cellule ou une population de cellules est mise en contact avec une quantité d'un tel composé efficace pour inhiber une activité d'une kinase Aurora, un processus à médiation par une kinase Aurora et/ou la prolifération de la cellule ou de la population de cellules. Quand il est utilisé pour inhiber la prolifération cellulaire, le composé peut agir cytotoxiquement pour tuer la cellule, ou cytostatiquement pour inhiber la prolifération sans tuer la cellule. Dans certains modes de réalisation, les procédés peuvent être mis en oeuvre in vivo à titre d'approche thérapeutique au traitement ou à la prévention de maladies ou affections à médiation par une kinase Aurora, et en particulier les affections prolifératives. Ainsi, dans un mode de réalisation spécifique, les composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici (et les différentes formes décrites ici) peuvent être utilisés pour traiter ou prévenir des affections prolifératives chez des sujets animaux, y compris les êtres humains. Le procédé comprend généralement l'administration au sujet d'une quantité d'un composé stéréoisomériquement enrichi, ou d'un promédicament, sel, hydrate ou N- oxyde de celui-ci, efficace pour traiter ou prévenir l'affection. Dans un mode de réalisation, le sujet est un animal, y compris, mais pas limité à, 2877944 43 un bovin, un cheval, un félin, un chien, un rongeur ou un primate. Dans un autre mode de réalisation, le sujet est un être humain. Il est possible de traiter ou prévenir différentes affections prolifératives cellulaires avec les composés décrits ici. Dans certains modes de réalisation, les composés sont utilisés pour traiter différents cancers chez des sujets atteints. Les cancers sont traditionnellement classés sur la base du type de tissu et du type de cellule dont sont issus les cellules cancéreuses. Les carcinomes sont considérés comme des cancers provenant de cellules épithéliales tandis que les sarcomes sont considérés comme des cancers provenant du tissu conjonctif ou du muscle. D'autres types de cancers incluent les leucémies qui sont issues de cellules hématopoïétiques, et les cancers des cellules du système nerveux, qui sont issus du tissu neural. Pour les tumeurs non invasives, les adénomes sont considérés comme des tumeurs épithéliales bénignes avec une organisation glandulaire tandis que les chondomes sont des tumeurs bénignes issues du cartilage. Dans la présente invention, les composés décrits peuvent être utilisés pour traiter des affections prolifératives comme les carcinomes, les sarcomes, les leucémies, les tumeurs de cellules neurales et les tumeurs non invasives. Dans un mode de réalisation spécifique, les composés sont utilisés pour traiter des tumeurs solides issues de différents types de tissus, incluant, mais pas limités à, les cancers osseux, du sein, des voies respiratoires, du cerveau, des organes reproducteurs, des voies digestives, des voies urinaires, de la vessie, des yeux, du foie, de la peau, de la tête, du cou, de la thyroïde, de la parathyroïde, du rein, du pancréas, du sang, des ovaires, du côlon, germinal/de la prostate, et leurs formes métastatiques. Des affections prolifératives spécifiques incluent les suivantes: a) les affections prolifératives du sein incluent, mais ne sont pas limitées à, le carcinome des canaux invasif, le carcinome globulaire invasif, le carcinome des canaux, le carcinome globulaire in situ, et le cancer du sein métastatique; b) les affections prolifératives de la peau incluent, mais ne sont pas limitées à, le carcinome à cellules basales, le carcinome à cellules squameuses, le mélanome malin et le sarcome de Kaposi; c) les affections prolifératives des voies respiratoires incluent, mais ne sont pas limitées à, le carcinome pulmonaire à petites cellules et non-à petites 2877944 44 cellules, l'oedème bronchique, le blastome pleuropulmonaire, et le mésothéliome malin; d) les affections prolifératives du cerveau incluent, mais ne sont pas limitées à, le gliome du tronc cérébral et hypothalamique, l'astrocytome cérébelleux et cérébral, le médulloblastome, les tumeurs épendymaires, l'oligodendrogliome, les méningiomes et les tumeurs neuroectodermiques et pinéales; e) les affections prolifératives des organes reproducteurs mâles incluent, mais ne sont pas limitées à, le cancer de la prostate, le cancer testiculaire et le cancer pénien; f) les affections prolifératives des organes reproducteurs femelles incluent, mais ne sont pas limitées à, le cancer de l'utérus (endométrial), les cancers du col de l'utérus, ovariens, vaginaux, vulvaires, le sarcome utérin, les tumeurs à cellules germinales ovariennes; g) les affections prolifératives des voies digestives incluent, mais ne sont pas limitées à, le cancer anal, du côlon, colorectal, oesophagien, de la vésicule biliaire, de l'estomac (gastrique), du pancréas, des cellules d'îlots, rectal, de l'intestin grêle et des glandes salivaires; h) les affections prolifératives du foie incluent, mais ne sont pas limitées à, le carcinome hépatocellulaire, le cholangiocarcinome, le colangiocarcinome hépatocellulaire mixte, et le cancer du foie primaire; i) les affections prolifératives de l'oeil incluent, mais ne sont pas limitées à, les mélanomes intraoculaires, le rétinoblastome et le rhabdomyosarcome; j) les affections prolifératives de la tête incluent, mais ne sont pas limitées à, les cancers laryngés, hypopharyngés, nasopharyngés, oropharyngés, le cancer des lèvres et oral, le cancer du cou squameux, le cancer des cavités annexes des fosses nasales métastatique; k) les affections prolifératives de type lymphome incluent, mais ne sont pas limitées à, différents lymphomes à cellules T et à cellules B, le lymphome non hodgkinien, le lymphome à cellules T cutané, la maladie de Hodgkin, et les lymphomes du système nerveux central; I) les leucémies incluent, mais ne sont pas limitées à, la leucémie myéloïde aiguë, la leucémie lymphoblastique aiguë, la leucémie lymphocytaire aiguë, la leucémie myélogène chronique et la leucémie à tricholeucocytes; m) les affections prolifératives de la thyroïde incluent le cancer de la thyroïde, les thymomes et le thymome malin; n) les sarcomes incluent, mais ne sont pas limités à, le sarcome du tissu mou, l'ostéosarcome, l'histiocytome fibreux malin, le lymphosarcome et le rhabdomyosarcome. 2877944 45 Il convient de comprendre que la description des affections prolifératives n'est pas limitée aux affections décrites ci-dessus, mais englobe d'autres affections caractérisées par une croissance incontrôlée et une malignité. On comprendra en outre que les affections prolifératives incluent différentes formes métastatiques des types de tumeurs et de cancers décrits ici. Les composés de la présente invention peuvent être testés concernant leur efficacité contre les affections décrites ici, et un schéma thérapeutiquement efficace établi. L'efficacité, telle qu'elle est décrite plus précisément ci-dessous, inclut la réduction ou la rémission de la tumeur, des diminutions dans la vitesse de prolifération cellulaire, ou un effet cytostatique ou cytotoxique sur la croissance cellulaire. 5.6 Thérapies d'association Les composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici peuvent être utilisés seuls, en combinaison entre eux, ou sous forme d'adjonction à, ou en combinaison avec, d'autres thérapies anti-prolifératives établies. Ainsi, les composés peuvent être utilisés avec des thérapies du cancer traditionnelles, comme un rayonnement ionisant sous forme de rayons y et de rayons X, délivrés par voie externe ou interne par implantation de composés radioactifs, et consécutivement au retrait chirurgical de tumeurs. Dans un autre aspect, les composés peuvent être utilisés avec d'autres agents chimiothérapeutiques utiles pour l'affection ou maladie en cours de traitement. Ces composés peuvent être administrés simultanément, successivement, par la même voie d'administration ou par une voie différente. Dans certains modes de réalisation, les présents composés sont utilisés avec d'autres agents anticancéreux ou cytotoxiques. Différentes classiques de composés anticancéreux et antinéoplasiques incluent, mais ne sont pas limités à, les agents alkylants, des antimétabolites, les alcaloïdes extraits de la pervenche, les taxanes, les antibiotiques, les enzymes, les cytokines, les complexes de coordination du platine, les urées substituées, les inhibiteurs de tyrosine kinase, les hormones et les antagonistes d'hormones. Des exemples d'agents alkylants incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, la méchlorothamine, le cyclophosphamide, l'ifosfamide, le meiphalan, le chlorambucil, les 2877944 46 éthylèneimines, les méthylmélamines, les sulfonates d'alkyle (par exemple busulfan) et la carmustine. Les exemples d'antimétabolites incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, l'analogue d'acide folique méthotrexate, l'analogue de pyrimidine fluoro-uracile, le cytosine arabinoside; les analogues de purine mercaptopurine, thioguanine et azathioprine. Les exemples d'alcaloïdes extraits de la pervenche incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, la vinblastine, la vincristine, le paclitaxel et la colchicine. Les exemples d'antibiotiques incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, l'actinomycine D, la daunorubicine et la bléomycine. Un exemple d'enzyme efficace comme agent antinéoplasique est la L-asparaginase. Les exemples de composés de coordination incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, le cispiatine et le carboplatine. Les exemples d'hormones et de composés apparentés aux hormones incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, les adrénocorticostérôides, la prednisone et la dexaméthasone; les inhibiteurs d'aromatase aminoglutéthimide, formestane et anastrozole; les composés progestines caproate d'hydroxyprogestérone, médroxyprogestérone; et le composé anti-oestrogène tamoxifène. Ces composés anticancéreux et d'autres composés anticancéreux utiles sontdécrits dans Merck Index, 13ème ed. (O'Neil M.J. et al., ed) Merck Publishing Group (2001) et Goodman and Gilmans The Pharmaco%ogica/ Basis of Therapeutics, 10ème édition, Hardman, J.G. et Limbird, L.E. eds., p. 1381-1287, McGraw Hill, (1996). Des composés antiprolifératifs supplémentaires qui sont utiles en combinaison avec les composés stéréoisomériquement enrichis décrits ici incluent, à titre d'exemple et non pas de limitation, les anticorps dirigés contre des récepteurs de facteur de croissance (par exemple antiHer2) ; des anticorps pour activer les cellules T (par exemple anticorps anti-CTLA-4) ; et les cytokines comme l'interféron-a et l'interféron-y, l'interleukine-2 et GM-CSF. 5.7 Formulations et administration Quand ils sont utilisés pour traiter ou prévenir de telles maladies, les composés actifs et promédicaments peuvent être administrés isolément, sous forme de mélanges d'un ou plusieurs composés actifs, ou en mélange ou en combinaison avec d'autres agents utiles pour traiter de 2877944 47 telles maladies et/ou les symptômes associés avec de telles maladies. Les composés actifs et les promédicaments peuvent aussi être administrés en mélange ou en combinaison avec des agents utiles pour traiter d'autres maladies comme les stéroïdes et les stabilisants membranaires. Les composés actifs ou promédicaments peuvent être administrés en soi, ou sous forme de compositions pharmaceutiques comprenant un composé actif ou promédicament. Des compositions pharmaceutiques comprenant les composés actifs (ou leurs promédicaments) peuvent être produites par des procédés conventionnels de mélange, dissolution, granulation, lévigation pour la production de dragées, émulsification, encapsulation, piégeage ou lyophilisation. Les compositions peuvent être formulées d'une manière conventionnelle avec un ou plusieurs supports, diluants, excipients ou auxiliaires physiologiquement acceptables qui facilitent l'incorporation des composés actifs dans des préparations qui peuvent être utilisées pharmaceutiquement (voir Remington 's Pharmaceutica/ Sciences, 15ème ed., Hoover, J.E. ed., Mack Publishing Co. (2003).) Le composé actif ou le promédicament peut être formulé dans les compositions pharmaceutiques en soi, ou sous forme d'un hydrate, solvate, N-oxyde ou sel pharmaceutiquement acceptable, comme décrit précédemment. Typiquement, de tels sels sont plus solubles dans les solutions aqueuses que les acides libres correspondants et les bases libres correspondantes, mais des sels ayant une solubilité plus basse que les acides libres correspondants et les bases libres correspondantes peuvent aussi être formés. Les compositions pharmaceutiques peuvent revêtir une forme appropriée pour virtuellement tout mode d'administration, incluant par exemple l'administration topique, oculaire, orale, buccale, systémique, nasale, par injection, transdermique, rectale, vaginale, etc., ou une forme appropriée pour l'administration par inhalation ou insufflation. Pour l'administration topique, le ou les composés actifs ou le ou les promédicaments peuvent être formulés sous forme de solutions, gels, pommades, crèmes, suspensions, etc., comme cela est bien connu dans la technique. Les formulations systémiques incluent celles qui sont conçues pour l'administration par injection, par exemple injection sous-cutanée, 2877944 48 intraveineuse, intramusculaire, intrathécale ou intrapéritonéale, ainsi que celles qui sont conçues pour l'administration transdermique, transmuqueuse, orale ou pulmonaire. Les préparations injectables utiles incluent les suspensions, solutions ou émulsions stériles du ou des composés actifs dans des véhicules aqueux ou huileux. Les compositions peuvent contenir aussi des agents de formulation comme des agents de suspension, stabilisants et/ou dispersants. Les formulations pour injection peuvent être présentées sous une forme galénique unitaire, par exemple dans des ampoules ou des récipients multidoses, et peuvent contenir des conservateurs ajoutés. A titre d'alternative, la formulation injectable peut être fournie sous forme de poudre destinée à être reconstituée avec un véhicule approprié, incluant mais pas limité à, l'eau stérile sans pyrogènes, un tampon, une solution de dextrose, etc., avant l'utilisation. Pour ce faire, le ou les composés actifs peuvent être séchés par toute technique connue, comme la lyophilisation, et reconstitués avant l'utilisation. Pour l'administration transmuqueuse, des agents pénétrants appropriés pour la barrière qui doit être traversée sont utilisés dans la formulation. De tels agents pénétrants sont connus dans la technique. Pour l'administration orale, les compositions pharmaceutiques peuvent revêtir la forme par exemple de pastilles, de comprimés ou de capsules préparées par des moyens conventionnels avec des excipients pharmaceutiquement acceptables comme des agents liants (par exemple amidon de maïs prégélatiné, polyvinylpyrrolidone ou hydroxypropylméthylcellulose) ; des charges (par exemple lactose, cellulose microcristalline ou hydrogénophosphate de calcium) ; des lubrifiants (par exemple stéarate de magnésium, talc ou silice), des désintégrants (par exemple amidon de pomme de terre ou glycolate d'amidon sodique) ; ou des agents mouillants (par exemple laurylsulfate de sodium, lécithine). Les comprimés peuvent être enrobés par des procédés bien connus dans la technique, par exemple avec des sucres, des pellicules ou des enrobages entériques. Les préparations liquides pour l'administration orale peuvent revêtir la forme par exemple d'élixirs, de solutions, de sirops ou de suspensions, ou bien elles peuvent être présentées sous forme d'un produit sec destiné à être reconstitué avec l'eau ou un autre véhicule 2877944 49 approprié avant l'utilisation. De telles préparations liquides peuvent être préparées par des moyens conventionnels avec des additifs pharmaceutiquement acceptables comme des agents de suspension (par exemple sirop de sorbitol, dérivés cellulosiques ou graisses comestibles hydrogénées) ; des agents émulsifiants (par exemple lécithine ou gomme arabique) ; des véhicules non aqueux (par exemple huile d'amande, esters huileux, alcool éthylique, CremophoreTM ou huiles végétales fractionnées) ; et des conservateurs (par exemple p-hydroxybenzoate de méthyle ou de propyle ou acide sorbique). Les préparations peuvent contenir aussi des sels tampons, des conservateurs, des arômes, des colorants et des agents édulcorants selon ce qui est approprié. Les préparations pour l'administration orale peuvent être formulées de manière appropriée pour permettre une libération contrôlée du composé actif ou du promédicament, comme cela est bien connu dans la technique. Pour l'administration buccale, les compositions peuvent revêtir la forme de comprimés ou de pastilles formulées d'une manière conventionnelle. Pour les voies d'administration rectale et vaginale, le ou les composés actifs peuvent être formulés sous forme de solutions (pour des lavements à garder), de suppositoires ou de pommades contenant des bases de suppositoires conventionnelles comme le beurre de cacao ou d'autres glycérides. Pour l'administration nasale ou l'administration par inhalation ou insufflation, le ou les composés actifs ou le ou les promédicaments peuvent être délivrés de manière appropriée sous forme d'un spray d'aérosol depuis des récipients sous pression ou un nébuliseur au moyen d'un propulseur approprié, par exemple le dichlorodifluorométhane, le trichlorofluorométhane, le dichlorotétrafluoroéthane, les fluorocarbures, le dioxyde de carbone ou un autre gaz approprié. Dans le cas d'un aérosol sous pression, l'unité de prise peut être déterminée en prévoyant une valve pour délivrer une quantité mesurée. Il est possible de formuler des capsules et des cartouches destinées à être utilisées dans un inhalateur ou un insufflateur (par exemple capsules et cartouches constituées par de la gélatine) contenant un mélange pulvérulent du composé et d'une base de poudre appropriée comme le lactose ou l'amidon. 2877944 50 Pour l'administration oculaire, le ou les composés actifs ou le ou les promédicaments peuvent être formulés sous forme d'une solution, émulsion, suspension, etc., qui convient pour l'administration à l'oeil. différents véhicules qui conviennent pour administrer des composés à l'oeil sont connus dans la technique. Des exemples non limitatifs spécifiques sont décrits dans le brevet U.S. n 6 261 547; le brevet U.S. n 6 197 934; le brevet U.S. n 6 056 950; le brevet U.S. n 5 800 807; le brevet U.S. n 5 776 445; le brevet U.S. n 5 698 219; le brevet U.S. n 5 521 222; le brevet U.S. n 5 403 841; le brevet U.S. n 5 077 033; le brevet U.S. n 4 882 150 et le brevet U.S. n 4 738 851. Pour la délivrance prolongée, le ou les composés actifs ou le ou les promédicaments peuvent être formulés sous forme d'une formulation retard pour l'administration par implantation ou l'injection intramusculaire. L'ingrédient actif peut être formulé avec des matières polymères ou hydrophobes appropriées (par exemple sous forme d'une émulsion dans une huile acceptable) ou des résines échangeuses d'ions, ou sous forme de dérivés peu solubles, par exemple sous forme d'un sel peu soluble. A titre d'alternative, il est possible d'utiliser des systèmes de délivrance transdermique fabriqués sous forme d'un disque adhésif ou timbre qui libère lentement le ou les composés actifs pour l'absorption percutanée. Pour ce faire, il est possible d'utiliser des agents augmentant la perméation pour faciliter la pénétration transdermique du ou des composés actifs. Des timbres transdermiques appropriés sont décrits par exemple dans le brevet U.S. n 5 407 713; le brevet U.S. n 5 352 456; le brevet U.S. n 5 332 213; le brevet U.S. n 5 336 168; le brevet U.S. n 5 290 561; le brevet U.S. n 5 254 346; le brevet U.S. n 5 164 189; le brevet U.S. n 5 163 899; le brevet U.S. n 5 088 977; le brevet U.S. n 5 087 240; le brevet U.S. n 5 008 110 et le brevet U.S. n 4 921 475. A titre d'alternative, il est possible d'employer d'autres systèmes de délivrance pharmaceutique. Les liposomes et les émulsions sont des exemples bien connus de véhicules de délivrance qui peuvent être utilisés pour délivrer un ou des composés actifs ou un ou des promédicaments. Certains solvants organiques comme le diméthylsulfoxyde (DMSO) peuvent aussi être employés, bien qu'habituellement au prix d'une plus grande toxicité. 2877944 51 Les compositions pharmaceutiques peuvent être présentées si on le souhaite dans un récipient ou dispositif distributeur qui peut contenir une ou plusieurs formes galéniques unitaires contenant le ou les composés actifs. Le récipient peut comprendre par exemple une feuille métallique ou plastique, comme un récipient de type blister. Des instructions pour l'administration peuvent être jointes au récipient ou au dispositif distributeur. 5.8 Posologies efficaces Le ou les composés actifs ou le ou les promédicaments, ou leurs compositions, seront généralement utilisés en une quantité efficace pour atteindre le résultat souhaité, par exemple en une quantité efficace pour traiter ou prévenir la maladie particulière en cours de traitement. Le ou les composés peuvent être administrés thérapeutiquement pour obtenir un bénéfice thérapeutique. Par bénéfice thérapeutique, on entend l'éradication ou l'amélioration de l'affection sous-jacente en cours de traitement et/ou l'éradication ou l'amélioration d'un ou plusieurs des symptômes associés à l'affection sous-jacente de telle sorte que le patient indique une amélioration de son état, nonobstant le fait que le patient puisse encore souffrir de l'affection sous-jacente. Le bénéfice thérapeutique inclut aussi l'arrêt ou le ralentissement de la progression de la maladie, qu'une amélioration soit réalisée ou pas. La quantité de composé administré dépendra de différents facteurs incluant, par exemple, l'indication particulière en cours de traitement, le mode d'administration, la gravité de l'indication en cours de traitement et l'âge et le poids du patient, la biodisponibilité du composé actif particulier, etc. La détermination d'une posologie efficace est tout à fait de la compétence de l'homme du métier. Les posologies efficaces peuvent être estimées initialement d'après des analyses in vitro. Par exemple, une posologie initiale destinée à être utilisée chez des animaux peut être formulée pour obtenir une concentration du composé actif dans le sang circulant ou le sérum qui est égale ou supérieure à une CI50 du composé particulier telle qu'elle est mesurée dans une analyse in vitro, comme les analyses in vitro décrites dans la section des exemples. Le calcul de posologies pour obtenir de telles concentrations dans le sang circulant ou le sérum en prenant en 2877944 52 compte la biodisponibilité du composé particulier est tout à fait de la compétence de l'homme du métier. Pour un guide, le lecteur se référera à Fingl & Woodbury, "General Principles", In: Goodman and Gi/man's The Pharmaceutica/ Basis of Therapeutics, chapitre 1, p. 1-46, dernière édition, Pergamon Press, et les références qui y sont citées. Les posologies initiales peuvent aussi être estimées d'après des données in vivo, comme des modèles animaux. Des modèles animaux utiles pour tester l'efficacité de composés pour traiter ou prévenir les différentes maladies décrites ci-dessus sont bien connus dans la technique. Les quantités posologiques seront typiquement dans la plage d'environ 0,0001 ou 0,001 ou 0,01 mg/kg/jour à environ 100 mg/kg/jour, et peuvent être supérieures ou inférieures, selon, entre autres facteurs, l'activité du composé, sa biodisponibilité, le mode d'administration et différents facteurs discutés ci-dessus. La quantité administrée et les intervalles d'administration peuvent être ajustés individuellement pour produire des niveaux plasmatiques du ou des composés qui sont suffisants pour maintenir un effet thérapeutique ou prophylactique. Par exemple, les composés peuvent être administrés une fois par semaine, plusieurs fois par semaine (par exemple un jour sur deux), une fois par jour ou de multiples fois par jour, selon, entre autres choses, le mode d'administration, l'indication spécifique en cours de traitement et le jugement du médecin traitant. Dans les cas d'administration locale ou d'absorption sélective, comme l'administration topique locale, la concentration locale efficace du ou des composés actifs peut ne pas être liée à la concentration plasmatique. L'homme du métier sera capable d'optimiser des posologies locales efficaces sans expérimentation excessive. De préférence, le ou les composés procureront un bénéfice thérapeutique ou prophylactique sans provoquer de toxicité sensible. La toxicité du ou des composés peut être déterminée au moyen de processus pharmaceutiques standards. Le rapport des doses entre l'effet toxique et l'effet thérapeutique (ou prophylactique) DL50/DE50 est l'indice thérapeutique (DL50 est la dose létale pour 50 % de la population et DE50 est la dose thérapeutiquement efficace pour 50 % de la population). Le ou les composés qui présentent de hauts indices thérapeutiques sont préférés. 2877944 53 5.9 Kits Les composés et/ou les promédicaments décrits ici peuvent être assemblés sous forme de kits. Dans certains modes de réalisation, le kit fournit le ou les composés et les réactifs pour préparer une composition pour l'administration. La composition peut être sous une forme sèche ou lyophilisée, ou dans une solution, en particulier une solution stérile. Quand la composition est sous une forme sèche, le réactif peut comprendre un diluant pharmaceutiquement acceptable pour préparer une formulation liquide. Le kit peut contenir un dispositif pour l'administration ou pour distribuer les compositions, incluant, mais pas limité à, une seringue, une pipette, un timbre transdermique ou un inhalateur. Les kits peuvent inclure d'autres composés thérapeutiques destinés à être utilisés en combinaison avec les composés décrits ici. Dans certains modes de réalisation, les agents thérapeutiques sont d'autres composés anticancéreux et d'autres composés antinéoplasiques. Les composés peuvent être fournis sous une forme séparée, ou mélangés avec les composés de la présente invention. Les kits incluront des instructions appropriées concernant la préparation et l'administration de la composition, les effets secondaires de la composition et toute autre information pertinente. Les instructions peuvent être sous un format approprié quelconque, incluant, mais pas limité à, un texte imprimé, une bande vidéo, un disque lisible par ordinateur ou un disque optique. 6. EXEMPLES L'invention est définie plus précisément en se référant aux exemples suivants qui décrivent la préparation des différents composés décrits ici, des procédés pour analyser leur activité biologique et des procédés pour les utiliser. Il apparaîtra à l'homme du métier que de nombreuses modifications peuvent être apportées en ce qui concerne les matériels et les procédés sans s'écarter du cadre de l'invention. 2877944 54 6.1. Préparation du 4-(4-méthylpipérazin-1-yl)-3-méthylnitrobenzène Réaction NMP, 130 C, 18 h HN 1 3 5 Processus: Un mélange homogène de 4- fluoro-3-méthylnitrobenzène 1 (20 g, 129 mmol) et de N-méthylpipérazine 3 (25,82 g, 258 mmol) dans la /1/méthylpyrrolidone (NMP) (10 mL) a été chauffé à reflux (120 C) sous N2 pendant 24 h. Après son refroidissement à la température ambiante, le mélange réactionnel a été versé sur une solution de NaCl saturée (100 mL). Le solide résultant a été soumis à une sonication pendant approximativement 30 s, filtré, lavé avec de l'eau glacée (2 x 10 mL) et séché sous haut vide pour obtenir le 4-(4méthylpipérazin-1-yl)-3-méthylnitrobenzène 5 (28 g, 92 %). RMN de 1H (CD30D) S 8,02 (m, 2H), 7,13 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 3,08 (m, 4H), 2,66 (m, 4H), 2,38 (s, 6H) ; LCMS: pureté : 99 %, MS (mie) : 236 (MH+). 6.2 Préparation de la 4-(4-méthylpipérazin-1-yl)-3- méthylaniline Réaction [H2]. Pd/C (10 % en masse) MeOH 276 x 103 Pa (40 psi) 7 Processus: Un mélange homogène de 4-(4- méthylpipérazinyl)-3-méthylnitrobenzène 5 (20 g, 85 mmol), de Pd à %/C (1,3 g) dans le méthanol (1,2 I) a été hydrogéné [H2] à 276 x 103 Pa (40 psi) pendant 3 h. Le catalyseur au palladium a été filtré 2877944 55 sur un tampon de Celite, lavé avec du méthanol (3 x 50 mL) et le filtrat combiné a été concentré pour donner la 4-(4méthylpipérazin-1-yl)-3-méthylaniline 7 (15 g, 86 %). RMN de 1H (CD30D) : 8 6,83 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,59 (d, 1H, J = 2,7 Hz), 6,54 (dd, 1H, J = 8, 4 et 2,7 Hz), 2,84 (t, 4H, J = 4,8 Hz), 2,60 (lm, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,20 (s, 3H) ; LCMS: pureté : 99,9 %, MS (mie) : 206 (MH-). 6.3 Préparation du 3-aza-4-oxo-tricyclo[4.2.1.0(2,5)]non-7-ène Réaction: 1. CI-S(0)2-NCO, CH2Cl2, NH o 14r1 (racémique, 2-exo-3-exo) Processus: Partie 1: Une solution de 2,5norbornadiène 47 (25,0 mL, 0,246 mol) dans CH2Cl2 (110 mL, flacon frais) a été refroidie dans un bain de glace/NaCI (-10 C). A ceci a été ajoutée goutte à goutte une solution de CSI (21,4 mL, 0,246 mol) dans CH2Cl2 (45 mL, flacon frais) à un débit permettant de maintenir la température en dessous de 5 C (l'addition a nécessité approximativement 1,25 h). A la fin de l'addition, le mélange réactionnel a été agité pendant 1 h à 0-5 C puis retiré du bain réfrigérant et mis à chauffer à 20 C. Le mélange réactionnel a été fixé avec de l'eau (60 mL) et agité vigoureusement pendant plusieurs minutes. La couche organique a été séparée, lavée avec de la saumure et séchée avec Na2SO4. La concentration a donné une huile brun clair. Partie 2: Un mélange de Na2SO3 (24,5 g), d'eau (70 mL) et de CH2Cl2 (30 mL) a été refroidi dans un bain de glace/NaCI. L'huile provenant de la partie 1 a été diluée à 100 mL avec CH2Cl2 et ajoutée goutte à goutte au mélange ci-dessus à un débit permettant de maintenir la température en dessous de 15 C (l'addition a nécessité approximativement 1,75 h). Le pH du mélange réactionnel a été suivi avec 2877944 56 un pH-mètre et maintenu basique (pH 7-10) par ajustement avec NaOH à 10 % (m/v) (selon ce qui était nécessaire). A l'achèvement de l'addition, le mélange réactionnel a été agité pendant 1 h pendant 5-10 C (le pH final était 8,5) . Le mélange réactionnel a été versé dans une ampoule à décanter et la couche de CH2Cl2 a été séparée. Cette phase organique était une suspension solide, épaisse et gélatineuse. Elle a été diluée avec de l'eau (approximativement 400 mL) pour produire une solution plus fluide. La couche aqueuse a été extraite encore avec CH2Cl2 (4 x 100 mL). (A titre d'alternative, les solides peuvent être séparés de CH2Cl2 par centrifugation. Les solides peuvent ensuite être dilués avec de l'eau (jusqu'à ce qu'ils soient sensiblement tous dissous) et extraits avec CH2Cl2). La couche aqueuse a été extraite encore avec CH2Cl2 (10 x 100 mL) . Les extraits avec CH2Cl2 ont été suivis par CCM concernant la présence de produit. Les extraits organiques combinés ont été lavés avec de la saumure, séchés avec MgSO4 et filtrés sur de la Celite. Le retrait du solvant a donné le produit souhaité, le 3-aza-4-oxotricyclo[4.2.1.0(2,5)] non-7-ène 14r1 2-exo-3-endo racémique sous forme d'un solide blanc (20,5 g, 62 %). RMN de 1H (DMSO-d6) : 8 8,01 (Is, 1H), 6,22 (dd, J = 3,3 et 5,4 Hz, 1H), 6,12 (dd, J = 3,3 et 5,4 Hz, 1H), 2,88 (dd, J = 1,5 et 3,3, 1H), 2,79 (Is, 1H), 2,74 (Is, 1H), 1,58 (d, J = 9,3 Hz, 1H) et 1,47 (d, J = 9,3 Hz, 1H). 6.4 Préparation du 4-oxo-3-tert-butoxycarbonylazatricyclo[4.2.1.0(2,5)] non-7-ène Réaction: 6 6 Boc2O, DMAP THF, ta, 24 h NBoc O (racémique, 2-exo-3-exo) 16r1 (racémique, 2-exo-3-exo) Processus: Un mélange homogène de 3-aza-4-oxo- 30 tricyclo[4.2.1.0(2,5)]non-7-ène (14r1; 2-exo-3-exo racémique; 10,0 g, 74 mmol), de (BOC)20 (16,1 g, 74 mmol) et de DMAP (1,1 g) dans CH2Cl2 2877944 57 a été agité sous N2 à la température ambiante pendant 24 h. A ce mélange réactionnel ont été ajoutés EtOAc (100 mL) puis H20 (100 mL) et il a été agité pendant 1 h supplémentaire. La couche organique a été séparée et lavée avec H20 (2 x 100 mL). La couche organique a été séchée sur Na2SO4 anhydre et le solvant a été retiré sous pression réduite pour donner le 4-oxo-3-tert-butoxycarbonylaza-tricyclo[4.2.1.0(2,5)]non-7-ène (16r1; 2-exo-3-exo racémique) (16,5 g, 70 %) ; RMN de 1H (DMSO-d6) : b 6, 29 (dd, J = 3,3 et 5,4 Hz, 1H), 6,19 (dd, J = 3,3 et 5,4 Hz, 1H), 3,77 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,13 (Is, 1H), 3,08-3,04 (m, 1H), 2,93 (Is, 1H), 1,45 (s, 9H), LCMS: 95 %. 6.5 Préparation et isolement de diastéréoisomères stéréoisomériquement purs à partir de la ( ) (2-exo-3-exo)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2. 11hept-5-én-2yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4-méthylpipérazin-i-yl)-phényl]-2,4pyrimidinediamine racémique Un mélange racémique du composé du titre a été préparé à partir du racémate 2-exo-3-exo du 2-aminobicyclo[2.2.1]hept5-ène-3-carboxamide de la manière suivante. Réaction: NH4OH, EtOAc ta, 3 h NBoc (racémique, 2-exo-3-exo) 28r1 (racémique, 2-exo-3-exo) Processus: Un ballon à fond rond équipé d'un bouchon en 25 caoutchouc et d'un barreau d'agitateur magnétique a été chargé avec le N-BOC-13-lactame racémique 16r1 (2,0 g) sous une pression positive d'azote. A ceci a été ajouté de l'acétate d'éthyle (25 mL) suivi par de l'ammoniaque à 30 % (25 mL) et l'ensemble a été agité à la température ambiante pendant 3 'h. La couche d'acétate d'éthyle a été séparée et lavée 30 avec une solution aqueuse de NaHCO3 à 5 % (20 mL), séchée sur Na2SO4 2877944 58 anhydre et le solvant a été évaporé pour donner 1,10 g de N-BOC carboxamide racémique 28r1. Réaction: TFA, CH2Cl2 O MeOH, H2O NaHCO3, ta 48 h 28r1 (racémique, 2-exo-3-exo) 30r1 (racémique, 2-exo-3-exo) 36r1 (racémique, 2-exo-3-exo) Processus: Un ballon à fond rond équipé d'une entrée de N2 et d'un barreau d'agitateur magnétique a été chargé avec le N-BOC lactame racémique 28r1 (2,00 g, 7,9 mmol) puis traité avec du TFA à 20 % dans CH2Cl2 à la température ambiante pendant 2 h. La solution résultante a été concentrée sous pression réduite. Les traces de TFA ont été retirées sous haut vide pendant plusieurs heures pour donner l'intermédiaire sel de TFA (30r1, racémique). Le sel de TFA racémique 30r1 résultant a été traité avec de la 2,4-dichloro-5-fluoropyrimidine 10 (1,58 g, 9,51 mmol) dans McOH:H20 (20:10 mL) en présence de NaHCO3 (1,33 g, 15,84 mmol) à la température ambiante pendant 48 h. Le mélange réactionnel a été dilué avec H20 (25 mL), saturé avec NaCl et extrait avec EtOAc (3 x 50 mL). Après séchage sur Na2SO4 anhydre, le solvant a été évaporé et le résidu a été chromatographié (gel de silice, CH2Cl2 puis NH3 2N/MeOH 2-4 % dans CH2Cl2) pour donner 1,3 g de produit mono- SNAr racémique 36r1. Réaction: _Me NH2 p H2N 36r1 (racémique, 2-exo-3-exo) (racémique, 2-exo-3-exo) 2877944 59 Processus: Un tube scellé chargé avec le produit mono-SNAr racémique 36r1 (1,1 g, 8 mmol), l'aniline 7 (0,90 g, 4,4 mmol), du TFA (0,6 mL) et du méthanol (9 mL) a été agité à 100 C pendant 24 h. La solution homogène visqueuse résultante a été concentrée et le résidu a été chromatographié (gel de silice, CH2Cl2, puis NH3 2N/MeOH 2-5 % dans CH2Cl2) pour donner le dérivé de 2,4-pyrimidinediamine 2-exo-3-exo racémique 60r1 attendu (1,12 g; pureté : 95 %). Isolement d'énantiomères: Les diastéréoisomères ont été résolus et isolés à partir du racémate 60r1 par chromatographie CLHP préparative chirale sur une colonne Phenomenex Chirex 3020 de 250 x 10 mm, en éluant avec un mélange 35:63:2 (vol:vol:vol) d'hexane:dichlorométhane:méthanol à un débit de 6 mL/min. L'énantiomère élué à 9,44 min a été appelé énantiomère El et l'énantiomère élué à 12,74 min a été appelé énantiomère E2. 6.6 Préparation enzymatique de la (1R,2R,3S,4S)-4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4méthylpipérazin-l-yl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine stéréoisomériquement pure avec Chirazyme 6.6.1 Préparation du N-Boc-[3-lactame stéréo-chimiquement pur Réaction: Chirazyme L-2, type B, c.f. NBoc diisopropyléther, 60 C, 60 h + 16a 16r1 (racémique, 2-exo-3-exo) 26b acide N-Boc carboxylique Processus: Un tube scellé sec chargé avec du 4-oxo-3-tertbutoxycarbonylazatricyclo[4. 2.1. 0(2,5)]non-7-ène (16r1; 2-exo-3-exo racémique) (4,0 g, 17,02 mmol), du chirazyme L-2, type B, c.f. lié à une résine/immobilisé (8,0 g, acheté chez BioCatalytics Inc., Pasadena, CA) et du diisopropyléther (80 mL) a été secoué doucement dans un incubateur à 2877944 60 60 C pendant 60 h (la résolution enzymatique du N-BOC 13-lactame racémique 16r1 a été suivie par RMN du proton. L'intégration du groupe tert-butyle du N-BOC lactame énantiomériquement pur 16a et de l'acide N- BOC carboxylique 26b a été observée dans un rapport 1:1). Le mélange réactionnel résultant a été filtré et la résine solide a été lavée avec du diisopropyléther (2 x 40 mL).O Le filtrat a été concentré pour donner un mélange de N-BOC-R-lactame 16a énantiomériquement pur et d'acide NBoc carboxylique 26b (masse totale: 4,0 g). Réaction: e OH O " NHBoc NH4OH, EtOAc ta, 3 h 28a (reste dans la phase N-Boc aminocarboxylate organique) (reste dans la solution aqueuse) 26b acide N-Boc carboxylique 16a Processus: Un ballon à fond rond équipé d'un bouchon en caoutchouc et d'un barreau d'agitateur magnétique a été chargéavec un mélange de N-Boc-lactame 16a énantiomériquement pur et d'acide N-Boc carboxylique 26b (4,0 g) sous une pression d'azote positive. A ceci ont été ajoutés de l'acétate d'éthyle (50 mL) puis de l'hydroxyde d'ammonium aqueux à 25 h (50 mL) et l'ensemble a été agité à la température ambiante pendant 3 h. L'évolution de la réaction a été suivie par CCM. La couche d'acétate d'éthyle a été séparée et lavée avec une solution aqueuse de NaHCO3 à 5 % (40 mL), séchée sur Na2SO4 anhydre et le solvant a été évaporé pour donner 2,00 g (7,93 mmol pour 8,51 mmol théorique; rendement 93 %) de N-BOC carboxamide 28a énantiomériquement pur souhaité avec un excès énantiomérique supérieur à 99 %, tel qu'il est déterminé par CLHP chirale. La solution aqueuse contenant le N-BOC carboxylate d'ammonium par acidification avec HCI 1N froid puis extraction avec CH2Cl2 a régénéré l'acide N-BOC carboxylique 26b (1,8 g, 7,11 mmol pour 8,51 mmol théorique, rendement 84 %). RMN de 1H (DMSO-d6) : 7,26 (Is, 1H), 6,66 (Is, 1H), 6,13 (m, 2H), 3,59 (t, 1H, 3 = 6,9 Hz), 2,80 (s, 1H), 2,54 (s, 1H), 2,31 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 2, 00 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 1,36 (s, 9H), 1,30 (d, 1H, J = 8,1 Hz), LCMS: MS (m/z) : 254 (MH+) ; [ ]D -76,78 (c 1,0, MeOH). 6.6.2 Préparation du produit Mono SNAr stéréoisomériquement pur Réaction: TFA, CH2Cl2 CIN CI s 34 MeOH, H2O NaHCO3, ta 48 h O 36a NHBoc NH2 Processus: Un ballon à fond rond équipé d'une entrée de N2 et d'un barreau d'agitateur magnétique a été chargé avec le N-BOC carboxamide 28a énantiomériquement pur (2,0 g, 7,93 mmol) puis traité avec du TFA à 20 % dans CH2Cl2 à la température ambiante pendant 2 h. L'évolution de la réaction a été suivie par CCM. La solution résultante a été concentrée sous pression réduite. Les traces de TFA ont été retirées sous haut vide pendant plusieurs heures pour donner l'intermédiaire énantiomériquement pur sel de TFA 30a avec un rendement quantitatif. RMN de 1H (DMSO-d6) : 8, 10 (Is, 2H), 7,92 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,29 (m, 1H), 6,18 (m, 1H), 4,38 (Is, 1H), 3,06 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 2,97 (s, 1H), 2,87 (s, 1H), 2,43 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 2,10 (d, 1H, J = 6 Hz), 1,36 (d, 1H, J = 8,7 Hz) ; LCMS: MS (m/z) : 152 (MH+). Le sel de TFA 30a résultant a été traité avec de la 2,4-dichloro-5fluoropyrimidine 34 (1,58 g, 9,51 mmol) dans MeOH:H20 (20:10 mL) en présence de NaHCO3 (1,33 g, 15,84 mmol) à la température ambiante pendant 48 h. Le mélange réactionnel a été dilué avec H20 (25 mL), saturé avec NaCl et extrait avec EtOAc (3 x 50 mL). Après séchage sur Na2SO4 anhydre, le solvant a été évaporé et le résidu a été chromatographié (gel de silice, CH2Cl2 puis NH3 2N/MeOH 2-4 % dans CH2Cl2) pour donner 2,02 g (91 %) de produit mono-SNAr 36a souhaité. RMN de 1H (DMSO-d6) : 8,25 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 8,07 (d, 1H, J = 3,3 Hz), 7,71 (s, 1H), 6,29 (m, 2H), 3,99 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 2,85 (s, 1H), 2,75 (s, 1H), 2,49 (d, 1H, 3 = 0,9 Hz), 2,11 (d, 1H, 3 = 8,7 Hz), 1,39 (d, 1H, 2877944 62 3 = 8,7 Hz) ; LCMS: pureté : 95 %, MS (m/z) : 283 (MH+). La pureté énantiomérique, déterminée par CLHP chirale, était supérieure à 99 % ; [a] D + 61,10 (c 1,0, MeOH). 6.6.3 Préparation de la (1R,2R,3S,4S)-4N-(3-aminocarbonyl-bicyclo[2.2.1] hept-5-én-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4-méthylpipérazin-lyl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine stéréoiso- mériquement pure Réaction: i-PrOH, TFA, reflux NCl N_ J 8-10h + _Me Processus: Un ballon réactionnel sec équipé d'un barreau d'agitateur, d'un réfrigérant à reflux et d'une entrée de N2 a été chargé avec le produit mono-SNAr 36a énantiomériquement pur (2,25 g, 8 mmol), l'aniline 7 (1,80 g, 8,8 mmol), du TFA (1,12 mL) et de l'isopropanol (18 mL) et le mélange réactionnel résultant a été agité à la température de reflux pendant 8-10 h. Après refroidissement du mélange réactionnel à la température ambiante, de l'acétate d'éthyle (20 mL) a été ajouté. Le solide obtenu a été filtré et lavé avec de l'acétate d'éthyle (2 x 5 mL) pour donner le composé 60a sous forme de sel acide. Le solide résultant a ensuite été repris dans l'eau et le mélange aqueux a été ajusté à pH 9 avec NaHCO3 aqueux, ce qui a provoqué la précipitation d'un solide. Le solide a été filtré à partir du mélange, lavé avec de l'eau et séché pour donner 3,3 g (93 %) de dérivé de 2,4-pyrimidinediamine 60a. RMN de 1H (DMSO-d6) : 8,85 (s, 1H), 7,83 (d, 1H, J = 2,7 Hz), 7,68 (s, 1H), 7,47 (s, 2H), 7,36 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,18 (s, 1H), 6,89 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6, 32 (m, 1H), 6,25 (m, 1H), 4,11 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 3,32 (s, 3H), 2,86 (s, 1H), 2,76 (m, 4H), 2,49 (m, 4H), 2,46 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 1,39 (d, 1H, J = 9 Hz) ; LCMS: pureté : 100 %, MS (m/z) : 452 (M+) ; > 99 %ee déterminé par CLHP chirale; [a]DTA 2877944 63 +101,2 (c 1,0, MeOH). Les données analytiques chirales, RMN de 1H et LCMS se sont révélées être identiques à l'isomère appelé El. 6.7 Préparation enzymatique de la (1R,2R,3S,4S)-4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4méthylpipérazin-l-yl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine stéréoisomériquement pure avec l'enzyme Novazyme 435 6.7.1 Préparation du f -lactame stéréoisoméri- quement pur Réaction: lipolase o NH o NH 14r1 14a Processus: De la lipolase immobilisée (8,0 g, provenant de Sigma, numéro d'ordre L4777), le 8-lactame 14r1 (2-exo-3-exo racémique) (4,0 g, 7,4 mmol) et de l'eau (0,13 ml, 7,4 mmol) ont été ajoutés à 250 ml de diisopropyléther dans un récipient à pression. Le mélange a été dégazé avec de l'azote pendant 20 min et le récipient a été fermé hermétiquement et incubé pendant 14 jours à 70 C. Le mélange a été refroidi à la température ambiante, filtré sur de la Célite et lavé avec 300 ml de diisopropyléther. Le filtrat combiné a été concentré à siccité et le résidu a été cristallisé dans le diisopropyléther pour donner le 8-lactame 14a énantiomériquement pur sous forme d'aiguilles incolores (1,22 g, 61 %). La pureté énantiomérique, déterminée par CLHP chirale, était supérieure à 99 %. 2877944 64 6.7.2 Préparation du 2-N-Boc-amino-3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5- ène stéréoisomériquement pur Réaction: NHBoc NH Boc2O, DMAP THF, 22 C, 3h o NH2 30%NH2OH NBoc 22 C, 4h 14a 16a 28a Processus: Un mélange homogène de 3-aza-4-oxotricyclo[4.2.1. 0(2,5)]non-7-ène 14a énantiomériquement pur (1,1 g, 8,2 mmol), de (BOC)20 (2,76 g, 12,3 mmol) et de DMAP (100 mg) dans CH2Cl2 a été agité sous N2 à la température ambiante pendant 3 h pour donner le N-BOC lactame 16a énantiomériquement pur qui a été utilisé sans être isolé. A ce mélange réactionnel ont été ajoutés 20 ml d'hydroxyde d'ammonium aqueux à 25 % et l'agitation a été prolongée pendant 4 h supplémentaires. De l'eau a été ajoutée et le mélange réactionnel a été extrait avec du dichlorométhane (2 x 50 ml). La phase organique combinée a été lavée avec HCI aqueux (5 %), séchée sur sulfate de sodium et réduite à siccité sous pression réduite pour donner le N-BOC carboxamide 28a énantiomériquement pur (2,51 g) sous forme d'un solide blanc qui a été utilisé dans l'étape suivante sans autre purification. 6.7.3 Préparation du produit mono SNAr stéréo- isomériquement pur (1R,2R,3S,4S)-4N-(3-25 aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept- 5-én-2-yl)-2chloro-5-fluoro-4-aminopyridine Réaction: 1. TFA 2. MeOH, H2O NaHCO3, ta, 48 h 28a 36a 2877944 65 Processus: Le N-BOC carboxamide 28a énantiomériquement pur (2,51 g) a été dissous dans 10 ml de dichlorométhane et traité avec 10 ml de TFA. Le mélange a été agité pendant 1 h à la température ambiante et concentré à siccité sous pression réduite. Le résidu a été mis en suspension dans le toluène et concentré de nouveau à siccité. Le solide résultant a été dissous dans le méthanol:eau (30 ml:3 ml) et traité avec 1,5 g de bicarbonate de sodium. La 5-fluoro-2,4-dichloropyrimidine 34 (3 g, 17,9 mmol) a été ajoutée et le mélange a été agité pendant 2 jours à la température ambiante. Les produits volatils ont été retirés sous vide et le résidu a été mis en suspension dans de la saumure. Le précipité a été filtré, séché et soumis à une chromatographie sur colonne (gel de silice, dichlorométhaneméthanol, 20:1) pour donner le produit mono-SNAr énantiomériquement pur 36a sous forme d'un solide blanc (1,7 g, 74 %). 6.7.4 Préparation de la (1R,2R,3S,4S)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1] hept-5-én-2-yl)-5-fluoro2N-[3-méthyl-4-(4-méthylpipérazin-l-yl)phényl]-2, 4-pyrimidinediamine stéréoisoméri- quement pure Réaction: e /\ ^ Î ,Me Ir i-PrOH, TFA, 100C 20 h, tube scellé H2N N Cl + s 60a Processus: Un mélange homogène d'aniline 7 (400 mg, 1,95 mmol), de produit mono-SNAr énantiomériquement pur 36a (400 mg, 1,41 mmol) et de 0,2 ml de TFA dans 4 ml d'isopropanol dans un tube scellé a été agité à 100 C pendant 20 h. Le mélange a été refroidi à la température ambiante, dilué avec 2 ml de diéthyléther et le précipité résultant a été filtré et lavé avec du diéthyléther. Les solides restants ont été dissous dans l'eau et traités avec une solution aqueuse d'hydroxyde d'ammonium à 25 %. Le précipité résultant a été filtré, lavé à l'eau et 2877944 66 séché pour donner 527 mg (83 %) de produit souhaité, le dérivé de 2,4-pyrimidinediamine 60a sous forme d'un solide blanc cassé. La pureté a été déterminée par LCMS comme étant supérieure à 97 % et la pureté énantiomérique a été déterminée par CLHP chirale comme étant supérieure à 99 %. Les données analytiques chirales, les analyses par RMN de 1H et LCMS étaient identiques à l'énantiomère qui a été appelé El. 6.8 Préparation de composés stéréoisomériquement purs avec la (R)-méthylp-méthoxybenzylamine comme auxiliaire chiral 6.8.1 Préparation de 2-exo-3-exo amines racémiques Réaction: 16r1 (racémique, 2-exo-3-exo) 20a OMe OMe 20b OMe NBoc + H2N" H + Processus: Un mélange homogène de 4-oxo-3-tertbutoxycarbonylazatricyclo[4. 2.1.0(2,5) ]non-7-ène (16r1; 2-exo-3-exo racémique) (9,2 g, 40 mmol) et de (R)méthyl-4-méthoxybenzylamine 13 (18, 24 g, 48 mmol) dans le THF sec (75 mL) a été agité à la température ambiante pendant 48 h. Le mélange réactionnel a été concentré, mis en suspension dans les hexanes (5 mL), traité par sonication et le solide a été séparé par filtration pour donner un mélange de diastéréoisomères 20a et 20b (12 mg). A titre d'alternative, la purification peut être réalisée par chromatographie sur colonne (gel de silice, hexanes puis EtOAc à 5 %, 10 %, 20 % et 50 h dans les hexanes). 2877944 67 6.8.2 Préparation de produits mono-SNAr 2-exo-3-exo racémiques puis séparation de composés isomériquement purs par cristallisation Réaction: 20a r ( ?\z.NHeoc 20b OMe OMe OMe TFA, CHzCIz ta, 2-3 h OMe CI' N" CI McOH:HzO NaHCOP ta, 24 h -48 h 38b séparés par cristallisation Processus: Un mélange hétérogène de diastéréoisomères 20a et 20b (6,0 g, 17 mmol), de TFA (20 mL) dans CH2Cl2 a été agité à la température ambiante pendant 2 h. La CCM a été utilisée pour suivre l'évolution de la réaction. Le mélange réactionnel résultant a été concentré à siccité et séché sous haut vide pendant plusieurs heures pour donner un mélange diastéréoisomère d'intermédiaires 22a et 22b. Ce mélange a ensuite été mis à réagir avec la 2,4-dichloro-5-fluoropyrimidine 34 (3,4 g, 20 mmol) en présence de NaHCO3 (5,7 g, 68 mmol) dans MeOH:H20 (50 mL chacun) à la température ambiante pendant 24 h. Le mélange réactionnel a ensuite été dilué avec de l'eau saturée de NaCl (50 mL) et extrait avec CH2Cl2. Après séchage sur Na2SO4 puis retrait du solvant sous pression réduite, l'extrait a donné un résidu qui a été chromatographié (gel de silice, CH2Cl2 puis NH3 2N/MeOH à 2 % dans CH2Cl2). La purification chromatographique a donné un mélange de diastéréoisomères 38a et 38b (4,0 g) (un rapport 1:1 peut être observé avec une séparation nette sur LCMS en phase inversée). Les 4,0 g résultants de la cristallisation avec EtOAc:hexanes (30:150 mL; v/v) ont donné un produit cristallin de l'intermédiaire 38a qui a été confirmé par la structure cristalline aux rayons X; pureté chimique: 96 % et % de: 96 %. [ ]D -36,7 (c, 01,18 MeOH) . La liqueur mère contenant l'autre 2877944 68 isomère avait un médiocre % de (70-80 %), qui est supposé être le diastéréoisomère 38b. 6.8.3 Préparation d'un produit stéréoisomériquement 5 pur incluant l'auxiliaire chiral Réaction: _Me MeOH, TFA, 100 C + 24 h, tube scellé OMe 38a 70a Processus: Un mélange de diastéréoisomère 38a (1,42 g, 3,4 mmol), d'aniline 7 (0,834 g, 4,0 mmol) et de TFA (700 mg) dans MeOH (10 mL) a été chauffé dans un tube scellé à 100 C pendant 24 h. Le résidu résultant a été chromatographié (gel de silice, CH2Cl2 puis NH3 2N/MeOH à 2 % dans CH2Cl2) pour donner le produit 40a sous forme d'un solide incolore, pureté chimique: 96 %. 6.8.4 Clivage de l'auxiliaire chiral Le clivage de l'auxiliaire chiral de 40a s'est révélé délicat, de sorte que le clivage de l'auxiliaire chiral des composés intermédiaires 38a et 38b suivi par la réaction du second SNAr avec l'aniline 7 a été réalisé de la manière suivante. 2877944 69 6.8.5 Clivage de l'auxiliaire chiral de l'intermédiaire 38a stéréoisomériquement pur et préparation de la (1R,2R,3S,4S)-4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2-yl)-5-fluoro-2N-[3méthyl-4-(4méthylpipérazin-l-yl)phényl]-2,4pyrimidinediamine stéréoisomériquement pure Réaction: McOH, TFA, 1 WC 24 h, tube scellé 60e CI H2N 38a Processus: Le produit mono-SNAr avec l'auxiliaire chiral 38a a été mis à réagir avec DDQ (3 équivalents) dans CH2Cl2:H20 à la température ambiante pour obtenir le produit mono-SNAr 36a souhaité. Le produit mono-SNAr a été purifié par chromatographie sur colonne et s'est révélé être le même que le composé 36a obtenu par la voie enzymatique, ce qui a été confirmé par CLHP analytique chirale, LCMS et RMN de 1H. De plus, la réaction du produit mono-SNAr 36a avec l'aniline 7 dans MeOH:TFA à 100 C dans un tube scellé pendant 24 h a donné le produit 60a souhaité. Il a été purifié par chromatographie sur colonne et analysé par RMN de 1H, LCMS et CLHP analytique chirale. Les analyses par CLHP analytique chirale, LCMS et RMN de 1H indiquaient que les données pour le produit 60a coïncidaient avec l'énantiomère appelé El. 2877944 70 6.8.6 Clivage de l'auxiliaire chiral de l'intermédiaire 38b et préparation de la (1S,2S,3R,4R)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo-[2.2.1]hept-5én-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4-méthylpipérazin-l-yl)phényl]-2,4pyrimidinediamine stéréoisomériquement pure Réaction: MeOH, TFA, 100 C 24 h, tube scelle 60b OMe 36b Me 38b Processus: Le produit mono-SNAr 38b a été mis à réagir avec DDQ (3 équivalents) dans CH2Cl2:H20 à la température ambiante pour obtenir le produit mono-SNAr 36b souhaité (après clivage de l'auxiliaire chiral). Le produit mono-SNAr a été purifié par chromatographie sur colonne et s'est révélé être un diastéréoisomère différent de celui qui a été obtenu par la voie enzymatique, et ceci a été confirmé par CLHP analytique chirale. De plus, la réaction du produit mono-SNAr 36b avec l'aniline 7 dans MeOH:TFA à 100 C dans un tube scellé pendant 24 h a donné le produit 60b souhaité. Il a été purifié par chromatographie sur colonne et analysé par RMN de 1H, LCMS et CLHP analytique chirale. Les analyses par CLHP analytique chirale, LCMS et RMN de 1H indiquaient que les données pour le produit 60b étaient identiques à l'énantiomère appelé E2. [a]DTA -102,00 (c, 1,0 MeOH). 6.9 Préparation de sels de HCI Des sels de HCI et du racémate 60r1 et de 60a stéréoisomériquement pur ont été préparés comme décrit ci-dessous. 2877944 71 6.9.1 Préparation du sel chlorhydrate de 4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2-yl)-5fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4-méthyl-pipérazin-lyl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine racémique A une solution de 4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-en2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4-méthylpipérazin-l-yl)phényl]-2,4pyrimidinediamine 2-exo-3-exo racémique (60r1) (0,140 g, 0,3 mmol) dans MeOH (3 mL) à 0 C a été ajouté goutte à goutte HCI (4M, dioxane, 0,170 mL, 0,681 mmol) puis l'ensemble a été agité à 0 C pendant 1 h et à la température ambiante pendant 15 min. La solution homogène limpide a été filtrée, concentrée et redissoute dans EtOH. De l'acétate d'éthyle a été ajouté à la solution éthanolique pour précipiter le produit souhaité, qui a été isolé pour donner le sel bischlorhydrate de 4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4méthyl- pipérazin-1-yl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine 2-exo-3-exo racémique (composé 60r1, 2HCI). LCMS: pureté : 98 % ; MS (m/e) : 453 (MH+). 6.9.2 Préparation du sel chlorhydrate de (1R,2R,3S,4S)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl4-(4-méthylpipérazin-l-yl)phényl]-2,4- pyrimidinediamine stéréoisomériquement pur D'une manière analogue à ci-dessus, l'interaction de 2 équivalents de HCI (4M, dioxane) avec la (1R,2R,3S,4S)-4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4méthylpipérazin-1-yl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine (60a) stéréoisomériquement pure a donné le sel bischlorhydrate de (1R,2R,3S,4S)-4N-(3aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-méthyl-4-(4méthylpipérazin-1-yl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine stéréoisomériquement pur (composé 60a, 2HCI). LCMS: pureté : 97 h; MS (mie) : 453 (MH+) ; [a] D +46,3 (c, 0,04 MeOH). 6.10 Préparation de la (1R,2R,3S,4S)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1] hept-5-en-2-yl)-5-fluoro-2N-[3-(1,3oxazol-2-yl)phényl]-2,4pyrimidinediamine La (1R,2R,3S,4S)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept5-en-2-yI)-5-fluoro-2N-[3-(1,3-oxazol-2-yl)phényl]-2,4-pyrimidinediamine (composé 90a) a été préparée comme décrit ci-dessus. RMN de 1H (DMSO-d6) : 9,36 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 9,92 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,79 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,68 (s, 1H), 7,42 (m, 4H), 7,18 (s, 1H), 6,29 (m, 1H), 6,13 (m, 1H), 4,21 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 2,86 (s, 1H), 2,77 (s, 1H), 2,55 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 2,14 (d, 1H, 3 = 8,4 Hz), 1,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz) ; LCMS: pureté : 98 %, MS (mie) : 407 (MH+). 6.11 Inhibition de la prolifération cellulaire in vitro Les composés 60r1, 60r2, 60r1,2HCI, 60a, 60b et 60a,HCI ont été testés contre différents types de cellules tumorales concernant leur aptitude à inhiber la prolifération avec des analyses d'antiprolifération in vitro standards. Les différentes lignées cellulaires testées incluaient: A549 (carcinome pulmonaire) ; ASPC-1 (adénocarcinome pancréatique) ; BXPC-3 (adénocarcinome pancréatique) ; CaOV-3 (adénocarcinome ovarien) ; COLO 205 (adénocarcinome colorectal) ; DU145 (carcinome de la prostate) ; ES-2 (carcinome ovarien à cellules claires) ; H1299 (carcinome pulmonaire non à petites cellules) ; H1155 (carcinome pulmonaire non à petites cellules) ; H460 (carcinome pulmonaire à grandes cellules) ; HELA (adénocarcinome cervical) ; HL160 (leucémie promyélocytaire promyéloblastique) ; K562 (leucémie myélogène chronique de la moelle osseuse) ; L1210 (leucémie lymphocytaire de souris) ; MiaPaCa-2 (carcinome pancréatique) ; MOLT4 (leucémie lymphoblastique aiguë à lymphoblastes T) ; OVCAR-3 (adénocarcinome ovarien) ; MOLT3 (leucémie lymphoblastique aiguë à lymphoblastes T) ; OVCAR-8 (carcinome ovarien) ; PC3 (adénocarcinome de la prostate) ; SK-OV-3 (adénocarcinome ovarien) ; SU86.86 (carcinome pancréatique) ; SW620 (adénocarcinome colorectal) ; THP-1 (leucémie monocytaire aiguë monocytaire) ; TOV-21G (carcinome ovarien à cellules claires) ; U2OS (ostéocarcinome osseux) ; et U937 (lymphome histiocytaire). Les valeurs CI50 obtenues avec les composés sont présentées dans le tableau 2 ci-dessous. Dans le tableau 2, un "+" indique une valeur CI50 1 pM. Un blanc indique que le composé n'a pas été testé contre la lignée cellulaire spécifique. TABLEAU 2 Valeurs CI50 in vitro de composés choisis 60r1 60r1,2HCI 60r2 60a 60a,2HCI 60b A549 ++ + + +++ +++ - ASPC1 ++ +++ BxPC-3 +++ CaOV-3 +++ Co1o205 +++ +++ +++ - DU 145 ++ ++ + + ES-2 H 1299 + +++ + - H 1155 +++ +++ H460 +++ H7299 ++ + + ++ + - HELA +++ +++ +++ - HL160 +++ +++ - K562 + + L1210 + ++ - Miapaca2 +++ +++ +++ - MOLT3 +++ +++ - MOLT4 +++ +++ - OVCAR-3 2877944 74 TABLEAU 2 Valeurs CI50 in vitro de composés choisis 60r1 60r1,2HCI 60r2 60a 60a,2HCI 60b OVCAR-8 PC3 ++ +++ - SKOV3 ++ Su86.86 ++ SW620 + ++ - THP-1 + + + TOV-G21 +++ U2OS ++ +++ + U937 +++ - 6.12 Inhibition de kinases Aurora dans des analyses cellulaires fonctionnelles Les composés 60a et 60b ont été testés concernant leur aptitude à inhiber la kinase Aurora-B dans une analyse cellulaire fonctionnelle mettant en jeu la phosphorylation de son substrat, l'histone H3. Pour l'analyse, des cellules A549 ont été ensemencées dans les puits d'une microplaque de titrage (5000 cellules/puits dans 100 pI de milieu F12K) tard l'après-midi du jour 1. Les cellules ont été cultivées pendant une nuit (37 C, 5 % de CO2). Le jour 2, 50 pl de nocodazole (1 pM dans du milieu) ont été ajoutés à chaque puits, pour donner une concentration finale de 333 nM. Les cellules ont été cultivées pendant 18 h supplémentaires dans les mêmes conditions. Le jour 3, des portions aliquotes de 50 pI de concentrations variables de composé test ont été ajoutées aux puits. Les composés tests ont été préparés par dilution en série de deux fois d'une solution de réserve 2 mM (dans le DMSO). Les composés dilués dans le DMSO ont ensuite été dilués encore 1:50 avec du milieu pour donner une solution finale contenant 4X composé test, 98 % de milieu, 2 % de DMSO. Après l'incubation, le milieu/composé test a été lavé et les cellules ont été fixées avec 2 % de paraformaldéhyde (dans de la solution salée tamponnée au phosphate de Dulbecco "DPBS" ; 25 pl par puits; incubation pendant plus de 20 min). Les cellules fixées ont été lavées une fois avec DPBS 2877944 75 (200 pl/puits), colorées avec de la phospho-histone H3 (Cell Signaling Technology; 1:500 dans DPBS, 10 % de sérum de chèvre normal "NGS", 0,05 % de Triton X-100; 1-2 h à la température ambiante), et lavées deux fois avec DPBS (200 pl/puits). Les cellules ont ensuite été colorées avec un anticorps secondaire marqué avec un colorant fluorescent (anticorps secondaire d'âne anti-souris AlexFluor 488 (Invitrogen Molecular Probes; 1:2000) et DAPI (1:15 000 de solution de réserve à 1 mg/ml) pendant 1 h à la température ambiante, lavées trois fois avec DPBS (200 pl/puits) et conservées sous DPBS (100 pl/puits) à 4 C jusqu'à ce qu'elles soient prêtes pour l'analyse. Un microscope à fluorescence inversée Zeiss Axiovert S100 avec un objectif Plan-NEOFLUAR 10x, une source lumineuse au mercure-xénon Hamamatsu Lightningcure 200 et un filtre qad Omega Optical XF57 ont été utilisés pour la collecte de toutes les données. Le système était équipé d'un support motorisé Ludl Mac2000 avec une commande X/Y/Z, une roue à filtre Ludl, un bras robotisé Zymark Twister et un appareil photographique numérique Quantix de Roper Scientific. Tout le dispositif était commandé avec ImagePro 4.5 avec le module ScopePro/StagePro 4.1 (Media Cybernetics) sur un PC fonctionnant sous Win2000. Des Visual Basic Scripts ont été écrits pour ImagePro pour automatiser la commande du dispositif et la collecte des images. La focalisation a été réalisée avec un logiciel auto-focus contenu avec StagePro qui utilisait le contraste local maximum pour déterminer le meilleur plan de focalisation d'après une série Z capturée une fois dans chaque puits. Lorsque la focalisation appropriée a été obtenue, les images ont été capturées dans un motif de grille 3x3 d'images adjacentes à proximité de la position de focalisation mais n'incluant pas cette position. Les images ont été capturées et analysées dans un format de 12 bits avec des logiciels de segmentation et morphologiques contenus dans l'ensemble logiciel Image Pro. Les noyaux identifiés ont été comptés et les données de pixel pour chaque cellule ainsi que les conditions expérimentales ont été mémorisées dans une base de données avec MySQL 4.0.14. L'analyse subséquente des résultats expérimentaux et la création de graphiques ont été réalisées avec Matlab 6.5. Pour l'analyse de la phospho-histone H3, les données sont converties en fichiers Facs et analysées avec FlowJo. Le pourcentage de 2877944 76 cellules phospho-H3 est représenté graphiquement à chaque concentration de composé pour déterminer une CE50 pour l'inhibition de Aurora B. Résultats. Le composé 6Oa inhibait la kinase Aurora B avec une CI50 d'environ 7 nM dans cette analyse. Au contraire, la CI50 de son énantiomère, le composé 6Ob, était 2,49 pM, approximativement 350 fois plus grande. 6.13 Pharmacocinétique du composé El chez des singes Le composé 6Oa a été administré à des singes par voie intraveineuse (1 mg/kg dans la solution salée) et oralement (5 mg/kg dans de la solution salée) et les concentrations plasmatiques ont été suivies au cours du temps. Quand il était administré par i.v., la concentration plasmatique du composé restait supérieure à la CI50 de 7 nM pendant 11 h après l'administration; quand il était administré oralement, une concentration plasmatique du composé supérieure à la CI50 a été maintenue pendant plus de 20 h. 6.14 Le composé 6Oa rétrécit les tumeurs in vivo Le composé 6Oa,2HCI a été testé pour son aptitude à rétrécir les tumeurs A549 et Co1o205 dans un modèle thérapeutique de xénogreffe standard chez des souris SCID, et les tumeurs Co1o205 et MiaPaCa dans un modèle de régression de xénogreffe standard chez des souris SCID. Quand des tumeurs palpables apparaissaient et étaient d'un volume présélectionné (approximativement 100 mm3 pour le modèle de traitement; > 300 mm3 pour le modèle de régression), les composés tests ont été administrés aux souris en une quantité et selon les schémas posologiques spécifiés dans le tableau 3 (protocole de traitement) et le tableau 4 (protocole de régression) ci-dessous. 2877944 77 TABLEAU 3 Résumé des expériences sur le modèle de traitement (taille tumorale moyenne mm3) Lignée cellulaire Dose (mg/kg/jour) Schéma (jour avec/jour sans) Voie Colo205 2 4/3 orale Co1o205 10 4/3 orale Colo205 10 2/1 orale Colo205 10 5/2 orale Co1o205 10 7/7 orale Co1o205 10 3/11 orale Colo205 10 1/6 orale Colo205 10 quotidiennement orale A549 10 5/2 orale A549 10 2/1 orale A549 10 7/4 orale A549 10 quotidiennement (13 jours) i. p. A549 20 quotidiennement (5 jours) i.p. TABLEAU 4 Résumé des expériences sur le modèle de régression (taille tumorale moyenne 300 mm3) Lignée cellulaire Dose (mg/kg/jour) Schéma Voie Co1o205 10 quotidiennement (13 jours) orale MiaCaPa 10 quotidiennement (3 cycles) orale MiaCaPa 10 quotidiennement (3 cycles) i.p. Résultats: Les effets inhibiteurs du composé 60a,2HCI sur la croissance de la tumeur Co1o205 dans le modèle de traitement sont illustrés sur les figures 1 et 2. Les résultats du schéma posologique journalier sont illustrés sur la figure 1; les résultats des schémas posologiques pulsés sont représentés sur la figure 2. Les deux schémas posologiques donnaient des réductions significatives (p 0,05). Les effets inhibiteurs du composé 60a,2HCI sur la croissance de la tumeur Colo205 dans le modèle de régression sont présentés sur la figure 3. Les effets du composé 60a,2HCI sur les tumeurs MiaPaCa dans le modèle de régression sont illustrés sur la figure 4. Des réductions significatives de la vitesse de croissance tumorale ont été observées avec les deux lignées tumorales. Ces réductions étaient indépendantes du mode d'administration. De plus, les réductions observées dans les tumeurs MiaPaCa étaient similaires à celles observées avec le taxol (voir figure 4). Modifications du 15.03.06 REVENDICATIONS 1. Composé caractérisé en ce qu'il est conforme à la formule s structurale (I) : N (I) /iZ HN H CONH2 y compris ses promédicaments, sels, hydrates, solvates et N-oxydes, qui 10 est enrichi en le diastéréoisomère de formule structurale (Ia) correspondant: (1R,2R,3S,4S) où : chaque RI est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, -(CH2)n OH, ORa, -O(CH2)n Ra, -O(CH2)n Rb, -C(0)ORa, halogéno, -CF3 et -OCF3; chaque R2 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, -ORa, -O(CH2),-Ra, -O(CH2)R Rb, -NHC(0)Ra, halogéno, -CF3, -OCF3, N 0 et f-N N R4; v v Modifications du 15.03.06 chaque R3 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, (CH2),-OH, ORa, -O(CH2)n Ra, -O(CH2) Rb, halogéno, -CF3, -OCF3, N â \ N R4 0 et - , C i N\ / N N chaque R4 est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, arylalkyle, -ORa, - NRR, -C(0)Ra, -C(0)ORa et -C(0)NRcR; R5 est l'hydrogène, halogéno, fluoro, -CN, -NO2, -C(0)ORa ou -CF3; 1 o chaque n est indépendamment un entier de 1 à 3; chaque Ra est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur et cycloalkyle inférieur; chaque Rb est choisi indépendamment dans le groupe consistant en -ORa, -CF3, -OCF3, -NRR, -C(0)Ra, -C(0)ORa, -C(0) NRRc et -C(0)NRand; chaque Rc est choisi indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène et alkyle inférieur, ou bien, à titre d'alternative, deux substituants Rc peuvent être combinés avec l'atome d'azote auquel ils sont liés pour former un cycle saturé à 4-9 membres, en particulier à 5- 7 membres qui inclut éventuellement 1-2 groupes hétéroatomiques supplémentaires choisis parmi 0, NRa, NRa-C(0)Ra, NRa-C(0)ORa et NRa-C(0) NRa; et chaque Rd est indépendamment mono-hydroxyalkyle inférieur ou dihydroxyalkyle inférieur. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé selon la formule structurale (I) est un racémate (2-exo-3-exo) cis. 3. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'il comprend environ 60 % ou plus du 30 diastéréoisomère de formule structurale (Ia). 4. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il contient environ 90 % ou plus du diastéréoisomère de formule structurale (Ia). Modifications du 15.03.06 5. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il contient environ 99 % ou plus du diastéréoisomère de formule structurale (Ia). 6. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, 5 caractérisé en ce que R5 est fluoro. 7. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que R1 est l'hydrogène; R2 est N N NO R4 \ / ou \ / et R3 n'est pas \ N \ /N R4 ou I0 8. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 caractérisé en ce que R3 est l'hydrogène, méthyle, méthoxy, trifluorométhyle ou chloro. 9. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 15 caractérisé en ce que R4 est méthyle, -C(0)CH3i -C(0)OCH3 ou - C(0)OCH2CH3. 10. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisé en ce que RI est l'hydrogène; R2 n'est pas / \ -fN N R4 \ / ou 0 N N-R4 / \ / ou 11. Composé selon la revendication 10, caractérisé en ce que R2 est l'hydrogène, méthyle, méthoxy, trifluorométhyle ou chloro. 12. Composé selon la revendication 10 ou 11, caractérisé en ce que R4 est méthyle, -C(0)CH3, -C(0)OCH3 ou -C(0)CH2CH3. 13. Composé l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisé en ce que R2 n'est pas N O N N R4 \ / ou / \ Modifications du 15.03.06 et R3 n'est pas N N N,.,O 0 R4 \ /, \ / ou 14. Composé selon la revendication 13 caractérisé en ce que R1 et R2 sont chacun l'hydrogène et R3 est -OCH2NHRa. 15. Composé selon la revendication 13 caractérisé en ce que R1, R2 et R3 sont choisis chacun indépendamment dans le groupe consistant en l'hydrogène, méthyle, méthoxy, trifluorométhyle et chloro, à condition qu'au moins deux parmi R1, R2 et R3 ne soient pas l'hydrogène. 16. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 io caractérisé en ce que R1 est l'hydrogène, R2 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, N O N N R4 \ / et 1 \ / et R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, halogéno, -CF3, 5N \ N \N R4 \ / et 17. Composé selon la revendication 16 caractérisé en ce que R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, méthyle, chloro, -CF3, / \ +N/ \N R4 \ / et \ / et R4 est méthyle, -CORa ou CO(0)Ra où Ra est méthyle ou éthyle. 18. Composé selon la revendication 16 caractérisé en ce que R2 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, / \ N)N R4 \ / et \ et R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, alkyle inférieur, halogéno, -CF3, N N NO R4 \ / et \ / Modifications du 15.03.06 19. Composé selon la revendication 18 caractérisé en ce que R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, méthyle, chloro, -CF3, N O N N R4 / et \ / et R4 est méthyle, -CORa ou -CO(0)Ra où Ra est méthyle ou éthyle. 20. Composé selon la revendication 19 caractérisé en ce que R2 est / \ N N R4 \ / R4 est -CORa où Ra est méthyle; et R3 est l'hydrogène. 21. Composé selon la revendication 18 ou 19 caractérisé en ce 10 que R2 est / \ N N R4 \ / R4 est -CO(0)Ra où Ra est éthyle; et R3 est l'hydrogène. 22. Composé selon la revendication 19 caractérisé en ce que R2 est / \ N O \ 1 et R3 est l'hydrogène. 23. Composé selon la revendication 19 caractérisé en ce que R2 est l'hydrogène, R3 est N O N \N R4 \ I ou \ / et R4 est méthyle, -CORa ou CO(0)Ra où Ra est méthyle ou éthyle. 24. Composé selon la revendication 18 ou 19 caractérisé en ce que R2 est / \ N N R4 \ / R4 est méthyle; et R3 est choisi dans le groupe consistant en l'hydrogène, 25 méthyle, chloro et -CF3. Modifications du 15.03.06 25. Composé selon la revendication 24 caractérisé en ce que R3 est méthyle. 26. Composé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il s'agit de la (1 R,2R,3S,4S)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2yl)-5-fluoro-2N-[(3-méthyl-4-(4-méthylpipérazin-l-yl)]phényl-2,4pyrimidinediamine sensiblement pure. 27. Composé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il s'agit de la (1R,2R,3S,4S)-4N-(3-aminocarbonylbicyclo[2.2.1]hept-5-én-2-yl)-5-fluoro2N-[(3-méthyl-4-(4-méthylpipérazin-l-yl)]phényl-2,4- io pyrimidinediamine pure. 28. Composition caractérisée en ce qu'elle comprend un composé selon l'une quelconque des revendications précédentes et un support, excipient et/ou diluant. 29. Composition selon la revendication 28 caractérisée en ce que le support, excipient et/ou diluant est pharmaceutiquement acceptable. 30. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 27 pour la fabrication d'une composition, notamment pour réaliser l'inhibition de la prolifération d'une cellule. 31. Utilisation selon la revendication 30 caractérisée en ce que la cellule est une cellule tumorale. 32. Utilisation selon la revendication 31 caractérisée en ce que la cellule tumorale est une cellule tumorale du poumon, du côlon, du sein, gastrique, ovarienne, cervicale, de mélanome, rénale, de la prostate, de lymphome, de neuroblastome, pancréatique, de la vessie ou hépatique. 33. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 27 pour la fabrication d'une composition notamment pour réaliser l'inhibition d'une activité d'une kinase Aurora. 34. Utilisation selon la revendication 33 caractérisée en ce qu'il 30 est réalisé une inhibition in vitro avec une kinase Aurora isolée ou partiellement isolée. 35. Utilisation selon la revendication 33 caractérisée en ce qu'il est réalisé une inhition in vitro avec une cellule exprimant une kinase Aurora. Modifications du 15.03.06 36. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 27, pour la fabrication d'une composition pour inhiber un processus à médiation par une kinase Aurora. 37. Utilisation selon la revendication 36 caractérisée en ce que le processus à médiation par une kinase Aurora est la mitose. 38. Utilisation selon la revendication 36 caractérisée en ce que la cellule est une cellule tumorale. 39. Utilisation selon la revendication 36 caractérisée en ce que la cellule est mise en contact avec une concentration du composé qui est io égale ou supérieure à sa CI50 mesurée dans une analyse in vitro. 40. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 27, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique; notamment pour réaliser le traitement d'une maladie à médiation par une kinase Aurora. 41. Utilisation selon la revendication 40 caractérisée en ce que la maladie à médiation par une kinase Aurora est une maladie proliférative. 42. Utilisation selon la revendication 41 caractérisée en ce que la maladie proliférative est un cancer. 43. Utilisation selon la revendication 42 caractérisée en ce que le cancer est un tumeur métastatique. 44. Utilisation selon la revendication 43 caractérisée en ce que le cancer est choisi parmi le cancer du poumon, le cancer du sein, le cancer gastrique, le cancer ovarien, le cancer cervical, le mélanome, le cancer rénal, le cancer de la prostate, le lymphome, le neuroblastome, le cancer pancréatique, le cancer de la vessie et le cancer du foie. 45. Utilisation selon l'une des revendications 40 à 44 caractérisée en ce que la composition est formulée pour une administration orale. 46. Utilisation selon l'une des revendications 40 à 44 caractérisée en ce que la composition est formulée par voie intraveineuse. 47. Utilisation selon l'une des revendications 40 à 46 caractérisée en ce que la composition est formulée pour l'administration à un humain. Modifications du 15.03.06 48. Utilisation selon l'une des revendications 40 à 47 caractérisée en ce que la composition comprend une quantité efficace du composé pour obtenir une concentration sérique qui est supérieure ou égale à la CI50 du composé telle qu'elle est mesurée dans une analyse in vitro. 49. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 27, dans un procédé d'inhibition in vitro choisi parmi un procédé d'inhibition in vitro de la prolifération d'une cellule, un procédé d'inhibition in vitro d'une activité d'une kinase Aurora; et un procédé io d'inhibition in vitro d'un processus à médiation par une kinase Aurora.