Brevet FR2876701A1 — publié le 20060421

PROCEDE DE PREPARATION D'UN SYSTEME DE CULTURE D'ENDOMETRE AUTOLOGUE POUR LA CO-CULTURE ENDOMETRE-EMBRYON La présente invention se rapporte au domaine de la fécondation in vitro 5 et concerne en particulier un procédé de préparation d'un système de culture d'endomètre autologue pour la co-culture endomètre - embryon. La fécondation extra-corporelle ou fécondation in vitro (FIV) consiste à reproduire au laboratoire ce qui se passe naturellement dans les trompes utérines: la fécondation et les premières étapes du développement embryonnaire. Depuis 1978, année de naissance de Louise Brown jusqu'à présent, cette technique a permis la naissance de centaines de milliers d'enfants dans le monde. Pour évaluer le taux de réussite des techniques de FIV, plusieurs paramètres sont utilisés dans la littérature. En référence au nombre de 15 ponctions en vue du recueil d'ovocytes, il est possible de prendre en compte: - les ponctions positives (plus de 95%) ; - les transferts d'embryons (environ 80%) ; - le nombre de grossesses cliniques (état de grossesse défini par sac intra-utérin et activité cardiaque) ; - le nombre d'accouchements; le nombre d'enfants vivants nés. C'est le nombre d'accouchements avec au moins un enfant normal vivant qui caractérise probablement au mieux le succès des techniques de FIV, ce taux étant de l'ordre de 12 à 15%. Ce taux est fortement dépendant de l'âge des femmes concernées et du nombre des cycles de traitement et du nombre d'embryons transférés. L'échec d'implantation après FIV peut être d'origine maternelle ou embryonnaire. L'échec d'implantation a été relié, entre autre, à l'aptitude des embryons à atteindre le stade de blastocyste en culture, qui est liée à son tour aux conditions de culture. 2876701 2 Classiquement, après la fécondation in vitro, l'embryon est placé dans des milieux de culture spécifiques synthétiques choisis en fonction du jour de culture (J1 à J6). L'embryon est ensuite replacé dans l'utérus de la patiente à 32 ou 33, c'est-à-dire au stade de 4 ou 8 cellules après culture dans un milieu synthétique. Le taux d'implantation des embryons âgés de 2 ou 3 jours reste faible (de l'ordre de 15% par embryon). Ce faible taux d'implantation peut s'expliquer en partie par l'hypermotricité utérine et la période inappropriée du transfert: en effet, ces embryons sont placés dans un environnement inadéquat puisqu'in vivo, les embryons à ce stade de développement sont encore dans les trompes et que l'embryon n'atteint l'utérus qu'au stade de blastocyste, c'est-à-dire 5 jours après la fécondation. Des techniques de co-culture (culture d'un embryon jusqu'au stade de blastocyste sur une couche cellulaire servant de support nutritif) ont été proposées pour la première fois chez l'homme en 1989 après que de nombreuses études aient prouvé chez l'animal dès 1962 que cette technique améliorait le taux d'embryons parvenant au stade de blastocyste. Outre la synchronisation endomètre - embryon, le fait de pouvoir cultiver un embryon jusqu'au stade de blastocyste permet de sélectionner les embryons à pouvoir de développement élevé et d'effectuer un diagnostic préimplantatoire. Par ailleurs, les techniques de co-culture d'embryons permettent d'obtenir des blastocystes de meilleure qualité, par rapport aux blatocystes cultivés dans des milieux synthétiques. Des techniques de co-culture de l'embryon jusqu'au stade de blastocyste sur des lignées cellulaires animales, comme les cellules Véro provenant d'épithélium de rein de singe vert d'Afrique, par exemple, ont donné des résultats améliorés par rapport au résultats des transferts précoces 32J3 dans des milieux synthétiques. Cependant, ces cellules animales n'ont fait l'objet d'aucune procédure de validation au regard de la sécurité sanitaire selon la législation en vigueur, dans le but d'une utilisation thérapeutique. L'arrêté du 12.01.1999, fixant les règles de bonnes pratiques en A.M.P. (aide médicale à la 2876701 3 procréation) en France, précise que seule la co- culture sur cellules autologues n'induit pas de risques infectieux exogènes. Devant le principe de précaution, la co-culture a été abandonnée dans les années '98-'99 dans la pratique des laboratoires FIV au profit des milieux synthétiques. De nouveaux milieux synthétiques permettant la culture de l'embryon jusqu'au stade de blastocyste, milieux dits séquentiels , ont alors fait leur apparition. Aucun de ces milieux n'a cependant pu reproduire l'effet de la co-culture. En effet, des études comparatives entre les blastocystes issus de milieux séquentiels et ceux issus de co-culture montrent que le taux de blastulation est plus important en co-culture (environ 45% contre 30 à 35%), quelque soit la co- culture, et que les blastocystes obtenus sont de meilleures qualité (nombre de blastomères plus important, grade plus élevé, taux de fragmentation diminué). L'effet positif des co-cultures sur le développement de l'embryon est lié aux interactions embryon - cellules, à l'élaboration de cytokines et/ou des facteurs embryotrophiques et trophoblastiques et à la détoxification du milieu de culture par les cellules somatiques. L'utilisation d'une co-culture de cellules somatiques autologues apparaît dès lors comme la solution idéale permettant des taux d'implantation élevés tout en prévenant la contamination de l'embryon avec des virus exogènes. Parmi ces cellules somatiques humaines, les cellules d'endomètre occupent une place particulière. Ce sont en effet les cellules physiologiques de l'implantation, ce qui les recommande comme le support idéal de l'embryon lors de la co-culture. Des systèmes de culture d'endomètre autologue destinés à être utilisés pour la co-culture endomètre embryon lors de la FIV, qui consistent en une culture de cellules épithéliales purifiées, sont connus. Leur utilisation reste cependant limitée, car la culture de cellules épithéliales des glandes est très fragile, a une durée de vie limitée à 2 à 4 jours, ne supporte qu'un seul passage en culture et est toujours en faible quantité. Le Demandeur a constaté, et c'est un des mérites de l'invention, que lors de la séparation des différentes fractions cellulaires à partir d'une biopsie 2876701 4 d'endomètre, il est possible d'obtenir, en plus d'une première fraction endométriale dite épithéliale (comprenant majoritairement des glandes) et d'une deuxième fraction endométriale dite stromale (comprenant majoritairement des cellules stromales), une troisième fraction endométriale dite mixte qui conduit, après la séparation et la purification des glandes et cellules stromales qui la composent et leur mise en culture, à une culture mixte (de cellules épithéliales et stromales) de qualité, utilisable pour la co-culture endomètre embryon lors de la FIV. La présente invention a pour but de proposer un procédé de préparation 10 d'un nouveau système de culture d'endomètre autologue pour la co-culture endomètre embryon lors de la FIV. A cet effet et selon un premier aspect, l'invention a pour objet un procédé de préparation d'un système de culture d'endomètre autologue destiné à être utilisé pour la co-culture endomètre-embryon lors de la FIV, ledit système de culture comprenant des cellules épithéliales et des cellules stromales, caractérisé en ce que ledit procédé comprend des étapes conduisant à l'obtention d'une première fraction endométriale dite épithéliale, d'une deuxième fraction endométriale dite stromale et d'une troisième fraction endométriale dite mixte comprenant un mélange de glandes et de cellules stromales et en ce qu'il comprend en outre une étape de purification de ladite troisième fraction. Dans une variante de réalisation, l'étape de purification de la troisième fraction comprend: a) l'obtention de cellules stromales à partir de la troisième fraction et b) l'obtention de glandes à partir de la troisième fraction et c) le mélange des cellules stromales et des glandes ainsi obtenues. Dans une variante de réalisation, l'étape a) d'obtention de cellules stromales à partir de la troisième fraction endométriale dite mixte comprend les opérations de: al. mise en suspension de ladite troisième fraction endométriale dans un milieu 30 de culture approprié conduisant à l'obtention d'une première suspension; 2876701 5 a2. filtration de ladite première suspension, conduisant à l'obtention d'un premier filtrat et d'une première fraction retenue sur le filtre; a3. centrifugation dudit premier filtrat conduisant à l'obtention d'un premier culot contenant des cellules stromales de la troisième fraction endométriale; a4. reprise dudit premier culot dans un milieu FIV conduisant à l'obtention d'une deuxième suspension de cellules stromales de la troisième fraction endométriale. Dans une variante de réalisation, l'étape b) d'obtention de glandes à partir de la troisième fraction endométriale dite mixte comprend les opérations 10 de: bl. mise en culture en présence de facteurs favorisant l'attachement des cellules de ladite première fraction retenue pendant une durée suffisante pour permettre l'adhésion des cellules stromales, conduisant à l'obtention d'un premier surnageant; b2. filtration dudit premier surnageant et mise en suspension de la deuxième fraction retenue ainsi obtenue, conduisant à l'obtention d'une troisième suspension contenant des glandes de la troisième fraction endométriale, dans un milieu FIV. Dans une variante de réalisation, l'étape c) consiste dans le mélange 20 desdites deuxième et troisième suspensions pour obtenir une troisième fraction endométriale purifiée. Le mélange de glandes et de cellules stromales de la troisième fraction endométriale obtenu à l'étape c) est ensuite mis en culture dans un milieu FIV. Les cellules sont maintenues en culture plusieurs jours. Dans une variante préférée de réalisation, la biopsie d'endomètre est cryoconservée à la réception, auquel cas, environ le jour de la ponction ovocytaire de la patiente, la biopsie est décongelée et soumise au traitement suivant le procédé décrit, puis les glandes et les cellules stromales de la troisième fraction endométriale purifiée sont mises en culture. Dans une autre variante de réalisation, la biopsie d'endomètre est traitée selon le procédé de l'invention immédiatement après sa réception au 2876701 6 laboratoire. Le mélange de glandes et de cellules stromales de la troisième fraction endométriale purifiée ainsi obtenu est mis en culture pendant plusieurs jours; cette culture cellulaire est cryoconservée et décongelée environ le jour de la ponction ovocytaire de la patiente. Dans tous les cas, le procédé de préparation d'un système de culture d'endomètre autologue destiné à être utilisé pour la co-culture endomètreembryon lors de la FIV peut comprendre une étape supplémentaire de conditionnement dudit système de culture d'endomètre autologue au moyen d'un milieu FIV semi solide, en vue du transport vers un laboratoire de Procréation Médicale Assistée. Selon un deuxième aspect, l'invention concerne un système de culture d'endomètre autologue destiné à être utilisé pour la co-culture endomètre - embryon lors de la FIV, ledit système comprenant une culture de cellules épithéliales et stromales de la troisième fraction endométriale purifiée. Selon un troisième aspect, l'invention se rapporte à l'utilisation du système de culture d'endomètre autologue décrit pour la préparation de cocultures endomètre-embryon lors de la FIV. Selon un quatrième aspect, l'invention a trait à système de culture d'endomètre autologue prêt à l'emploi, destiné à être utilisé pour la coculture 20 endomètre embryon lors de la FIV, caractérisé en ce qu'il comprend: une culture de cellules épithéliales et stromales de la troisième fraction endométriale purifiée; - un milieu de culture FIV semi solide, pour ladite culture; un emballage stérile pour le système de culture comprenant ladite culture et ledit milieu de culture. L'invention va maintenant être décrite en détail. La présente invention a pour objet, selon un premier aspect, un procédé de préparation d'une fraction endométriale mixte purifiée comprenant des cellules stromales et des glandes, à partir d'une biopsie d'endomètre. La biopsie est prélevée sur la patiente en phase lutéale du cycle menstruel. La biopsie est immédiatement placée dans un milieu de culture spécifique au transport et est 2876701 7 maintenue à une température comprise entre 4 et 8 C pendant toute la durée du transport. Le transport entre le site de prélèvement et le laboratoire effectuant la culture cellulaire doit se faire le plus rapidement possible; en général, la biopsie est livrée au laboratoire le lendemain du prélèvement. L'endomètre est constitué d'un tissu stromal comprenant des cellules mésenchymateuses dites stromales, et des glandes sécrétoires constituées de cellules épithéliales avec une lumière au centre où se déversent les produits de sécrétion. Le traitement de la biopsie selon l'invention comprend deux étapes de lyse de la biopsie suivies d'une séquence d'étapes de séparation et de purification des deux types cellulaires. Par lyse de la biopsie d'endomètre on entend la dissolution de la structure tissulaire de l'endomètre conduisant à l'obtention de cellules (telles que les cellules stromales) ou d'amas de cellules (tels que les glandes sécrétoires) isolés. La lyse de la biopsie peut s'effectuer par digestion enzymatique, par exemple à l'aide de la collagénase. Dans un autre mode de réalisation, la biopsie peut être lysée mécaniquement. Le principe de purification des glandes et des cellules stromales est basé sur la différence de taille et de poids entre les cellules stromales petites et légères par rapport aux glandes plus volumineuses et plus lourdes. A réception, la biopsie est rincée et un contrôle microbiologique du milieu de transport est effectué. Elle est ensuite découpée en petits fragments et les éléments contaminants de l'endomètre (mucus, sang, ...) sont éliminés. Elle est ensuite soit cryoconservée, soit traitée immédiatement pour isoler les différents fractions de cellules. Les fragments de biopsie sont soumis à une première lyse. Dans une variante de réalisation, la biopsie est digérée à l'aide d'une enzyme, telle que la collagénase. Le premier lysat est laissé sédimenter pendant 5 min environ, conduisant 30 à l'obtention d'un surnageant SN1 et d'un dépôt Dl riche en glandes (qui correspond à la première fraction endométriale). 2876701 8 Ledit surnageant est centrifugé pendant 5 min environ à 400g environ, permettant l'obtention d'un culot Cl. L'étape de lyse est répétée au moins une fois, comme suit: le dépôt Dl riche en glandes est repris dans un milieu approprié pour obtenir une suspension S1 comprenant, outre des glandes, des fragments d'endomètre non encore digérés. Par milieu approprié on entend toute solution assurant la viabilité et la fonctionnalité optimale d'une population de cellules donnée. La suspension S1 est soumise à une seconde lyse conduisant à l'obtention d'un second lysat. Celui-ci est laissé sédimenter pendant 5 min environ, conduisant à l'obtention d'un surnageant SN2 et d'un dépôt D2 riche en glandes. Si la biopsie d'endomètre est très compacte, une troisième lyse peut s'avérer nécessaire. Le surnageant SN2 est centrifugé pendant 5 min environ à 400g environ, permettant l'obtention d'un culot C2. Le culot Cl est repris dans un milieu approprié, conduisant à l'obtention d'une suspension S2, qui servira également pour reprendre le culot C2; une suspension S3 riche en cellules stromales grossièrement isolées est ainsi obtenue; elle correspond à la deuxième fraction endométriale. Cette suspension S3 est laissée sédimenter pendant 30 à 60 min environ, conduisant à l'obtention d'un surnageant SN3 riche en cellules stromales et d'un culot C3 comprenant une troisième fraction endométriale dite mixte comprenant un mélange de cellules stromales et de glandes. De manière caractéristique pour l'invention, il est possible de séparer les glandes et les cellules stromales de cette troisième fraction endométriale, afin de les comptabiliser pour mieux connaître et maîtriser la culture. a) Obtention des cellules stromales de la troisième fraction endométriale Le culot C3 est repris dans un milieu de culture approprié, pour obtenir une suspension S4 (étape al), qui est ensuite filtrée, conduisant à l'obtention d'un filtrat et d'une fraction retenue sur le filtre FR1 (étape a2). 2876701 9 Le filtrat est centrifugé environ 5 min à 400g, ce qui conduit à l'obtention d'un culot C4 contenant des cellules stromales de la troisième fraction endométriale (étape a3). Le culot C4 est repris dans un milieu FIV conduisant à l'obtention d'une suspension S5 de cellules stromales de la troisième fraction endométriale (étape a4). Sur cette suspension S5 sont alors effectuées des études de viabilité et une numération cellulaire. Par milieu FIV on entend tout milieu de culture utilisé par les laboratoires de procréation lors de la manipulation des gamètes et des embryons. b) Obtention de glandes de la troisième fraction endométriale Par ailleurs, la fraction retenue FR1 est mise en culture en présence de facteurs favorisant l'attachement des cellules pendant une durée suffisante pour faire adhérer les cellules stromales (étape bi), permettant de récupérer dans le surnageant les glandes. Les cellules mésenchymateuses sont en effet capables d'adhérer très rapidement (environ 30 min), alors que les glandes adhèrent beaucoup plus lentement. Par facteurs favorisant l'attachement des cellules on désigne des substances qu'on rajoute au milieu de culture ou qu'on utilise pour le traitement des boîtes plastiques de culture afin d'augmenter la vitesse d'adhésion des cellules aux parois. A l'issue de cette étape est obtenu un surnageant SN4, qui est à nouveau filtré. La fraction retenue FR2 ainsi obtenue est ensuite mise en suspension, conduisant à l'obtention d'une suspension S6 contenant des glandes de la troisième fraction endométriale, dans un milieu FIV (étape b2). Une numération des glandes purifiées est effectuée sur la suspension S6. c) Mélange des glandes et des cellules stromales de la troisième fraction endométriale purifiée Les suspensions S5 et S6 sont ensuite mélangées pour obtenir une troisième fraction endométriale purifiée (étape c). Le mélange de glandes et de cellules stromales de la troisième fraction 30 endométriale purifiée obtenu à l'étape c) est ensuite mis en culture dans un 2876701 - 10- milieu FIV. Les cellules épithéliales (provenant des glandes) et les cellules stromales sont laissées en cultures pendant quelques jours. Dans une variante préférée de réalisation, la biopsie d'endomètre est cryoconservée à la réception, auquel cas, environ le jour de la ponction ovocytaire de la patiente, la biopsie est décongelée et soumise au traitement suivant le procédé décrit, puis les glandes et les cellules stromales de la troisième fraction endométriale purifiée sont mises en culture pendant plusieurs jours. Dans une autre variante de réalisation, la biopsie d'endomètre est traitée selon le procédé de l'invention immédiatement après sa réception au laboratoire. Le mélange de glandes et de cellules stromales de la troisième fraction endométriale purifiée ainsi obtenu est mis en culture pendant plusieurs jours; cette culture cellulaire est cryoconservée et décongelée environ le jour de la ponction ovocytaire de la patiente. Dans tous les cas, le procédé de préparation d'un système de culture d'endomètre autologue destiné à être utilisé pour la co-culture endomètre - embryon lors de la FIV peut comprendre une étape supplémentaire de conditionnement dudit système de culture d'endomètre autologue au moyen d'un milieu FIV semi solide, en vue du transport vers le Laboratoire de Procréation Médicale Assistée. Le conditionnement du système de culture d'endomètre autologue comprend au préalable la préparation d'un milieu FIV semi solide à l'aide d'une solution concentrée d'agarose. Un mélange est effectué entre la solution d'agarose et le milieu FIV. Ce mélange est ensuite réparti uniformément dans des boîtes stériles et conservé à 4 C. Le jour de la fécondation in vitro, la culture de cellules d'endomètre autologue doit être prête à être envoyée au laboratoire de Procréation Médicale Assistée afin d'y placer l'embryon. La condition requise est d'avoir un tapis cellulaire à minimum 60% de confluence. Le milieu FIV semi solide, équilibré au préalable à 37 C et dans une atmosphère contenant 5% de CO2 pendant au minimum 2h, est déposé sur le tapis de cellules. La plaque est ensuite déposée 2876701 -11- dans un blister stérile et le tout est scellé par un opercule stérile. L'air à l'intérieur du blister contient 5% de CO2. Le transport vers le laboratoire de Procréation Médicale Assistée est effectué à 27 C environ, dans un temps inférieur à 36h, avec le moins de chocs possible. Dans un carton adapté au transport de marchandises très fragiles est placé un emballage isotherme. A l'intérieur de celui-ci sont placées une ou deux briques de gel eutectique permettant le maintien de la température aux alentours de 27 C. Le blister comprenant la culture de cellules d'endomètre autologue est ensuite déposé sur (ou entre) la (ou les) brique(s) de gel. Selon un deuxième aspect, l'invention concerne un système de culture d'endomètre autologue destiné à être utilisé pour la co-culture endomètre - embryon lors de la FIV, ledit système comprenant une culture de cellules épithéliales et stromales de la troisième fraction endométriale purifiée. Dans les procédés de traitement des biopsies d'endomètre connus, ce sont les cellules épithéliales, obtenues par mise en culture des glandes résultant du processus de purification à partir du dépôt D2 (première fraction endométriale), qui sont considérées comme étant les plus intéressantes et elles sont par conséquent utilisées lors de la coculture endomètre embryon, éventuellement en mélange avec des cellules stromales purifiées à partir du surnageant SN3 (deuxième fraction endométriale). Dans tous les procédés connus, la troisième fraction endométriale dite mixte contenue dans le culot C3 est éliminée. Or, le Demandeur a constaté que la culture de cellules épithéliales et stromales de la fraction endométriale mixte purifiée est plus importante que 25 celle des cellules épithéliales purifiées à partir du dépôt D2. De plus, la culture de cellules épithéliales et stromales de la fraction endométriale mixte purifiée est facilement réalisable, ce qui n'est pas le cas pour la culture de cellules épithéliales provenant de la première fraction endométriale. 2876701 -12- Selon un troisième aspect, l'invention se rapporte à l'utilisation d'un des systèmes de culture d'endomètre autologue décrits pour la préparation de cocultures endomètre-embryon lors de la FIV. Selon un quatrième aspect, l'invention a trait à un système de culture 5 d'endomètre autologue prêt à l'emploi, destiné à être utilisé pour la coculture endomètre embryon lors de la FIV, caractérisé en ce qu'il comprend: - une culture de cellules épithéliales et stromales de la troisième fraction endométriale purifiée; - un milieu de culture FIV semi solide, pour ladite culture; - un emballage stérile pour le système de culture comprenant ladite culture et ledit milieu. 20 25 2876701 -13- REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation, à partir d'une biopsie d'endomètre, d'un système de culture d'endomètre autologue destiné à être utilisé pour la co-culture endomètre - embryon lors de la FIV, ledit système de culture comprenant des cellules épithéliales et des cellules stromales, caractérisé en ce que ledit procédé comprend des étapes de séparation d'une première fraction endométriale dite épithéliale, d'une deuxième fraction endométriale dite stromale et d'une troisième fraction endométriale dite mixte comprenant un mélange de glandes et de cellules stromales et en ce qu'il comprend en outre une étape de purification de ladite troisième fraction. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de purification de ladite troisième fraction endométriale comprend: a) l'obtention de cellules stromales à partir de la troisième fraction et b) l'obtention de glandes à partir de la troisième fraction et c) le mélange des cellules stromales et de glandes ainsi obtenues. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'étape a) comprend les opérations de: al. mise en suspension de la troisième fraction endométriale dans un milieu de culture approprié conduisant à l'obtention d'une suspension S4 a2. filtration de la suspension S4, conduisant à l'obtention d'un filtrat et d'une fraction retenue sur le filtre FR1; a3. centrifugation dudit filtrat conduisant à l'obtention d'un culot C4 contenant des cellules stromales de la troisième fraction endométriale; a4. reprise du culot C4 dans un milieu FIV conduisant à l'obtention d'une suspension S5 de cellules stromales de la troisième fraction endométriale. 4. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'étape b) comprend les opérations de: 2876701 -14- bi. mise en culture en présence de facteurs favorisant l'attachement des cellules de la fraction retenue FR1 pendant une durée suffisante pour permettre l'adhésion des cellules stromales, conduisant à l'obtention d'un surnageant SN4; b2. filtration du surnageant SN4 et mise en suspension de la fraction retenue FR2 ainsi obtenue, conduisant à l'obtention d'une suspension S6 contenant des glandes de la troisième fraction endométriale, dans un milieu FIV. 5. Procédé selon les revendications 3 et 4, caractérisé en ce que l'étape c) consiste dans le mélange des suspensions S5 et S6 pour obtenir une troisième fraction endométriale purifiée. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape de mise en culture des glandes et des cellules stromales de la troisième fraction endométriale purifiée. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de conditionnement dudit système de culture d'endomètre autologue au moyen d'un milieu FIV semi solide, en vue du transport vers un laboratoire de Procréation Médicale Assistée. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la biopsie ayant été traitée immédiatement après sa réception au laboratoire, la culture de cellules ainsi obtenue est cryoconservée et décongelée environ le jour de la ponction ovocytaire de la patiente. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que, la biopsie d'endomètre ayant été cryoconservée à la réception, la mise en culture des glandes et des cellules stromales de la troisième fraction endométriale purifiée est réalisée environ le jour de la ponction ovocytaire de la patiente, après décongélation et traitement de ladite biopsie. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une étape de lyse de la biopsie d'endomètre. 2876701 -15- 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que la lyse est effectuée avec de la collagénase. 12. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que la lyse est effectuée de manière mécanique. 13. Système de culture d'endomètre autologue destiné à être utilisé pour la co-culture endomètre - embryon lors de la FIV caractérisé en ce qu'il comprend des cellules épithéliales et des cellules stromales obtenues par purification d'une troisième fraction endométriale dite mixte qui résulte de la mise en oeuvre d'un procédé de séparation des cellules issues d'une biopsie d'endomètre, ledit procédé comprenant au préalable des étapes de séparation d'une première fraction dite épithéliale et d'une deuxième fraction dite stromale à partir d'une biopsie d'endomètre. 14. Utilisation du système de culture d'endomètre autologue selon la revendication 13 ou obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon les revendications 1 à 12, pour la préparation de co-cultures endomètre embryon lors de la FIV. 15.Système de culture d'endomètre autologue selon la revendication 13 ou obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 prêt à l'emploi, destiné à être utilisé pour la coculture endomètre embryon lors de la FIV, caractérisé en ce qu'il comprend: - une culture de cellules épithéliales et stromales; un milieu de culture FIV semi solide, pour ladite culture; un emballage stérile pour le système de culture comprenant ladite culture et ledit milieu.