Brevet FR2885130A1 — publié le 20061103

PROCEDE DE PREPARATION DE POLYLYSINES DENDRIMERES GREFFES La présente invention concerne un procédé de préparation de polylysines dendrimères greffés, les polylysines dendrimères greffés obtenues par la mise en oeuvre dudit procédé, et l'utilisation desdites polylysines dendrimères, notamment dans le cadre de la préparation de compositions pharmaceutiques. Deux méthodes sont décrites dans la littérature pour synthétiser des polylysines arborescentes. La méthode pas à pas initiée par Denkewalter et al [1, 2] et la méthode par polymérisation d'acides aminés NCA initiée par Klok et al [3-5]. Les premières polylysines arborescentes (qui ont été qualifiées de dendrimères réguliers) ont été préparées dès 1981 par Denkewalter via des réactions successives de couplage et déprotection à partir de N",N'E-di(ter-butoxycarbonyl)-L-lysine [1, 2]. Ces synthèses consistent à ajouter, à une lysine dont le groupement carboxylique est protégé par la benzhydrilamine (BHA), des monocouches successives de lysine, pour construire progressivement les composés suivants: BHALys, BHALysLys2, BHALysLys2Lys4, BHALysLys2Lys4Lys8, BHALysLys2Lys4Lys8Lys 16, BHALysLys2Lys4Lys8Lys16Lys32, etc... Les réactions de couplage sont réalisées en solvant anhydre (CH2C12, ou DMF). Les composés obtenus portent en surface de nombreuses fonctions amines. Dans l'eau ils sont polycationiques. Cette méthode de synthèse pas à pas est régulièrement reprise dans la littérature. On la trouve par exemple utilisée dans les travaux de Matthews et al [6-8] , de Baigude et al [9], de Menz et Chapman [10]. Par exemple, Matthews et al synthétisent dans un premier temps des polylysines identiques à celles de Denkewalter. Dans un deuxième temps ils en modifient leurs surfaces en liant covalentiellement à chaque fonction amine libre, des groupements portant des fonctions anioniques (- CO2-, SO3-, etc...) et obtiennent de nouveaux matériaux polyanioniques avec un coeur polylysine. Ces matériaux s'avèrent avoir des propriétés antivirales [6, 7], antibactériennes et antiparasitaires [8] importantes. Baigude et al modifient les surfaces des dendrimères en liant leurs fonctions amines périphériques à des oligosacharides et utilisent les matériaux obtenus pour produire des vaccins [9]. Takuro et al les utilisent naissantes pour transfecter des gènes [11]. Choi et al [12] construisent pas à pas des poly-L-lysine dendrimères à partir des deux - NH2 du polyéthylèneglycol-a,co-diamine, et montrent que les matériaux obtenus sont d'excellents transfecteurs de gènes. Ces multiples propriétés soulignent à l'évidence l'intérêt des polylysines arborescentes, comme tout ou partie d'une grande famille de nouveaux matériaux. Ces polylysines dendrimères [1] sont considérées comme ayant un taux de 5 ramification maximal. Par ailleurs, l'intérêt de ces matériaux ne doit pas néanmoins masquer la complexité de la méthode de synthèse pas à pas. Par exemple six étapes, en plus des étapes de déprotections et de purifications, sont nécessaires pour oligocondenser 63 motifs Lysines. Il faut également noter la nécessité d'utiliser dans ces solvants anhydres des amorceurs non-lysine (BHA) qui 10 peuvent poser des questions sur leurs possibles interactions biologiques. Contrairement à la synthèse pas à pas précédente, la seconde méthode récemment proposée par Klok et al [3-5] consiste à polymériser les Ncarboxyanhydrides de la lysine dans une procédure multi étape pour synthétiser des polylysines arborescentes. Les N-carboxyanhydrides d'aminoacides (NCA) sont des précurseurs bien connus des peptides [13]. Ces composés sont sensibles à l'hydrolyse, [14, 15], ce qui n'empèche pas que l'eau soit utilisée comme solvant pour réaliser certaines études particulières [16-19]. Généralement, il est néanmoins préconisé de polymériser les N-carboxyanhydrides d'a-aminoacides en milieu anhydre [13, 20, 21]. Parmi les solvants anhydres recommandés on trouve le DMF, le dioxane, le DMSO, avec une préférence pour le DMF [22]. Les auteurs de cette seconde approche pour synthétiser des polylysines arborescentes à partir des N-carboxyanhydrides de la lysine [3, 5] ont suivi les recommandations d'utilisation d'un milieu réactionnel anhydre. Il en a résulté une méthode de synthèse dans le DMF anhydre Dans cette méthode, la première étape consiste à copolymériser deux lysines Ncarboxyanhydrides différemment protégées sur leur fonction epsilon (Z-LysNCA et Boc- Lys-NCA dans des rapports 5/1 à 2/1). Les groupements protecteurs sont choisis pour que leur déprotection puisse être sélective. Pour éviter de perdre des NCA par hydrolyse, la copolymérisation est réalisée dans un solvant (DMF) soigneusement rendu anhydre par les traitements appropriés. Dans ces conditions pour que la polymérisation puisse se produire, les traces d'acide provenant de la synthèse des NCA doivent être soigneusement éliminées [23]. Dans le DMF anhydre, la polymérisation est amorcée par une amine (Hexylamine par exemple). Le temps de réaction est de 5 jours. En fin de réaction le milieu réactionnel est versé dans l'eau, et une polylysine linéaire poly([Z-L-lysine]-co-[Boc-L-lysine]) précipite. Après filtration et séchage, le produit subit un traitement acide (CF3COZH pendant 1 heure) qui supprime la fonction Boc, mais conserve la fonction Z. La poly([Z-L-lysine]-co-[L-lysine]) est ainsi formée. Elle est alors lavée et soigneusement séchée. Cette poly([Z-L-lysine]-co-[L- lysine]) linéaire, constitue un matériau nommé "coeur" par les auteurs à partir duquel des polylysines branchées sont obtenues dans des étapes ultérieures. Ce matériau (coeur) est en effet mis en réaction, toujours dans le DMF anhydre pendant 5 jours, avec un mélange des deux NCA précédents (Z-LysNCA et Boc-Lys-NCA) convenablement purifiés. Lors de cette réaction, les fonctions amines libres (ex Boc) de cette polylysine linéaire réagissent sur les Z-Lys-NCA et Boc-Lys-NCA, et il se forme une nouvelle {poly([Z-Llysine]-co-[Boc-L-lysine]) branchée}. Aprés récupération du matériau formé par un processus analogue au précédent, ce matériau est soumis à un traitement acide (CF3CO2H) qui élimine les fonctions Boc, et conserve les fonctions Z. Le produit obtenu {poly([Z-L-lysine]-co-[L-lysine] branché) nommé GO}, est à nouveau soigneusement purifié et séché. Ce produit est alors utilisé comme amorceur dans une nouvelle réaction dans le DMF anhydre pendant 5 jours sur un mélange des deux réactifs ZLys-NCA et Boc-Lys-NCA. Aprés récupération, séchage, traitement acide, et de nouveau séchage, un produit {poly([Z-L-lysine]-co-[L-lysine] branché) nommé G1} est obtenu. Ce produit G1, est à son tour utilisé comme amorceur dans une réaction dans le DMF anhydre pendant 5 jours sur un mélange des deux réactifs ZLys-NCA et Boc-Lys-NCA. Aprés récupération, séchage, traitement acide, et de nouveau séchage, un produit {poly([Z-L- lysine]-co-[L-lysine] branché) nommé G2} est obtenu. Les produits GO, G1, ou G2, sont alors soumis à un traitement en milieu très acide (HBr/ CH3CO2H). Ce traitement supprime les fonctions Z restantes, et on obtient des {poly(L-lysines branchées) GO, G1, ou G2} Ces {poly-L-Lysines branchées} sont ensuite précipitées au diethylether, et lyophylisées. Cette méthode permet donc effectivement d'obtenir des {poly-L-lysines branchées} de structures différentes de celles décrites initialement par Denkewalter et al. Ces {Poly-L-Lysine branchées} [5], sont caractérisées (Tableaul), par un taux de greffage égal ou inférieur à 30 % déduit du rapport Hb/Ha Hb correspond au proton chiral des motifs lysines liées en epsilon aux lysines voisines, Ha correspond au proton chiral des motifs lysines liées en alpha aux lysines voisines, en excluant toutefois les protons des lysines en bout de chaîne nommés Hc qui résonnent à un champ différent. Ces poly-L-lysines forment donc un réseau de polypeptides branchés (taux de greffage inférieur ou égal à 30 %) avec une amine primaire (hexylamine) comme amorceur de polymérisation. poly-L-lysines Mn (g/mole) DPn Points de branchements Taux de de Klok et al [3] déterminé par déterminés par le rapport greffage RMN 1H RMN (Hb/Ha) en % Coeur 2 670 20 (Coeur des matériaux de Klok et al) Polylysine linéaire de 20 unités (Mn = 20) 6 6/20=30% déterminés à partir du rapport Hb/Ha = 0,07 du GO GO 12 400 96 14 14/96= 14% déterminés à partir du rapport Hb/Ha = 0,08 du G1 G1 30 200 235 25 25/235 = 10% déterminés à partir du rapport Hb/Ha = 0,07 du G2 G2 44 600 347 / / Tableau 1: caractéristiques des polylysines branchées décrites par Klok et al [3]. Les points de branchement sont les fonctions NH2 en e qui ont réagi sur les NCA. Le taux de greffage représente le pourcentage des NH2 en e qui ont réagi par rapport au degré total de polymérisation d'un produit de génération n (DPn). Par conséquent, un objet de l'invention est de fournir un procédé de préparation de polypeptides, et notamment de polylysines dendrimères, permettant de réduire la complexité des procédés décrits ci-dessus. En particulier, l'objet de la présente invention est de fournir un procédé de préparation de polypeptides, et notamment de polylysines dendrimères, plus rapide, et comportant moins d'étapes de synthèse et/ou de purification que les procédés de préparation déjà connus. Un autre objet de l'invention concerne également les dendrimères pouvant être obtenus par la mise en oeuvre de ce procédé. Enfin, un autre objet de l'invention concerne également l'utilisation des dendrimères obtenus par la mise en oeuvre du procédé de l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques ou antiseptiques, ainsi que pour des analyses de type immunologiques. La présente invention concerne l'utilisation de monomères d'a-aminoacides activés pour la préparation de polypeptides hydrophobes sous forme de précipités, lesdits polypeptides résultant de la polymérisation desdits monomères d'a-aminoacides activés en solvant aqueux et étant susceptibles d'être resolubilisés dans ledit solvant. On désigne par monomère d'a-aminoacides activés les a-aminoacides qui ont subit une modification qui les a rendus polymérisables dans des conditions normales de température et de pression. On désigne par polypeptides hydrophobes les polypeptides insolubles dans l'eau ou dans les solvants aquo organiques utilisés. L'hydrophobie d'un soluté (polypeptide) peut être estimée par le coefficient de partage P du soluté entre l'eau et un solvant organique (généralement l'octanol pris comme reférence). Le coefficient de partage P est défini comme le rapport de la concentration du soluté dans la phase organique divisée par la concentration en phase aqueuse. Le logarithme de P peut être estimé par les constantes de Rekker [24] ou déterminé expérimentalement par le rapport des concentrations dans la phase organique et dans la phase aqueuse. On désigne par solvant aqueux tout solvant ou mélange de solvants miscibles 20 comprenant majoritairement de l'eau (au moins 50 % en poids). On désigne par resolubilisés la remise en solution aqueuse d'un peptide hydrophobe par modification de ses constantes de Rekker ce qui peut être obtenu par exemple en débloquant le groupement protégeant la fonction epsilon d'une lysine. Les avantages de cette utilisation sont que via un processus élémentaire cyclique facile à mettre en oeuvre: on peut 1/ synthétiser des peptides de taille contrôlée et les récupérer facilement, 2/ les resolubiliser par déprotection, 3/ accroître leur taille de manière également contrôlée et les récupérer tout aussi facilement du milieu réactionel. Dans un mode de réalisation particulier de l'utilisation définie cidessus, les a-aminoacides activés sont choisis parmi des a-aminoacides Ncarboxyanhydrides (NCA), des a-aminoacides-N,N'-carbonyldiimidazole, des a-aminoacides-sulfure de carbonyle, des a-aminoacides-anhydride carbonique, et des amino thioacides-agents oxydants. Les a-aminoacides N-carboxyanhydrides (NCA) sont préparés selon une des méthodes décrites [25-31] mais également par des méthodes indirectes analysées par Pascal et al [32]. Dans un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation définie cidessus, les a-5 aminoacides activés sont des a-aminoacides Ncarboxyanhydrides (NCA) de formule (1) suivante: o dans laquelle R représente une chaîne latérale d'un a-aminoacide naturel ou modifié. On désigne par acide aminé naturel les acides aminés qui se trouvent dans les systèmes 10 vivants On désigne par acide aminé modifié les acides aminés naturels qui ont subit une modification sur leur chaîne latérale (R). Dans un mode de réalisation plus particulier de l'utilisation définie cidessus, on utilise des monomères de L-lysine-NCA pour la préparation de polylysine en solvant aqueux. On désigne par polylysine tout polymère dont l'élément unitaire majoritaire est la lysine. Dans les monomères de L-lysine-NCA, le groupement amine en e peut être protégé ou non. On désigne par protection du groupement amine la fixation réversible d'un groupement chimique, dit groupement protecteur sur le groupement amine de façon à diminuer, voir à abolir sa réactivité et à modifier l'hydrophobie de la molécule. La présente invention concerne également un procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé, à partir d'un amorceur comprenant au moins un groupement amine primaire ou secondaire, comprenant une étape d'addition d'un monomère de L-lysine-NCA, et éventuellement d'un ou plusieurs autres monomères d'a-aminoacides-NCA, notamment choisis parmi la liste comprenant la L-ornithine-NCA, l'acide L- glutamique-NCA et sa y-amide, l'acide L-aspartique-NCA et sa [3-amide, l'acide L-diamino-2,4,-butyrique-NCA et sa R-amide, la L-tyrosine-NCA, la L-phenylalanine-NCA, la L-valine-NCA, la L-leucine-NCA, la L-isoleucineNCA, la L-alanine-NCA, et la glycine-NCA, audit amorceur dans un solvant aqueux. On désigne par homopolylysine une polylysine constituée uniquement de lysine. On désigne par hétéropolylysine une polylysine constituée de plus de 30% en mole de lysine et contenant également des unités de nature différente. On désigne par dendrimère greffé, notamment polylysine dendrimère greffé, une macromolécule dont la structure est plus flexible, plus étendue et moins régulière que celle des dendrimères (décrits initialement par Denkewalter [1]) mais plus structurée que celle des molécules branchées de Klok et al [3-5]. De telles structures flexibles ont des propriétés uniques différentes de celles des dendrimères traditionnels ainsi que cela est indiqué page 18 dans l'ouvrage "Dendrimers and other dendritic polymers" édité par Fréchet et Tomalia [33]. On désigne par amorceur toute espèce chimique susceptible d'initier un processus de polymérisation. Dans le cas des acides aminés activés les amorceurs sont des espèces nucléophiles telles que: une CI-C12 alkylamine primaire, une C1-C12 alkyldiamine, une C1-C12 alkylamines secondaires ou tertiaire, un acide aminé ayant une ou plusieurs fonctions amines libres, un peptide ayant une ou plusieurs fonctions amines libres, un dendrimère ayant une ou plusieurs fonctions amines libres, un polymère ayant une ou plusieurs fonctions amines libres. Pour la synthèse du dendrimère de la génération i (i >_2) l'amorceur utilisé correspond au dendrimère greffé déprotégé de génération i-1. Lors de la synthèse du dendrimère de génération 1 selon l'invention, il est possible de ne pas ajouter d'amorceur, i.e. un amorceur externe, au mélange réactionel lorsque l'on veut produire des peptides ne comportant que des motifs identiques à celui du (ou des) aminoacide(s) activé(s) (NCA) de départ. En effet, dans ce cas l'hydrolyse du (ou des) NCA (initiée par la présence d'eau dans le solvant) libère le ou les acide(s) aminé(s) nécessaire(s) à l'amorçage. Ainsi, pour la synthèse de la première génération (nommée P1) on peut utiliser ou non un amorceur externe et dans le cas où on en utilise un, il peut être différent du monomère d'aminoacide utilisé. Dans le cas particulier de la synthèse de dendrimère d'homopolylysine, si on n'utilise pas d'amorceur externe dans l'étape de synthèse du produit de première génération (P1), on obtient un résultat identique à celui obtenu en utilisant comme amorceur la lysine protégée en E. Avec une lysine non protégée comme amorceur externe, l'allongement de la chaîne a comme point de départ les deux fonctions amines en a et en e. Dans ces deux cas le rendement de la réaction est de 5% supérieur au cas où l'on n'utilise pas d'amorceur externe. Par contre dans chaque étape subséquente conduisant aux produits de génération 2 (P2), de génération 3 (P3), ou de génération n (Pn), l'amorceur utilisé est le produit obtenu dans l'étape Pn-1. Dans un mode de réalisation particulier du procédé de préparation défini ci-dessus, le monomère est uniquement de la L-lysine-NCA. Dans un autre mode de réalisation particulier du procédé de préparation défini ci- dessus, la L-lysine-NCA est protégée en NE, notamment par un groupement choisi parmi -COH (Formyl), -COCF3 (TFA), -OCOC(CH3)3 (Boc), COOCH2 (Z) , (Fmoc), ou -C((D)3 (Trityl). (D représente un groupement phényle. Les groupements ci-dessus ont été classés par ordre d'hydrophobie croissante, leurs 15 constantes de Rekker respectives sont données par log P = -1,528, -0,946, 0,964, 1,124, 2,849, 5,81.) Avantageusement la nature du groupement protecteur permet de moduler la taille de la polylysine obtenue. En effet, plus le groupement protecteur sera hydrophobe et moins le nombre d'unités de lysine protégées présentes dans la polylysine nécessaire pour entraîner la précipitation de la polylysine sera important. Ainsi, la taille de la polylysine obtenue avec des groupements protecteurs faiblement hydrophobes (Formyl) sera supérieure à la taille de polylysines obtenues avec des groupements plus hydrophobes (TFA). Dans un autre mode de réalisation particulier du procédé de préparation défini ci- dessus, l'amorceur est choisi parmi la L-lysine, la Lornithine, une homopolylysine, 25 un poly(éthylène glycol) a, co diamine, une hétéropolylysine, un hétéropeptide, ou un homopeptide. On désigne par homopeptide un peptide dont tous les résidus sont identiques On désigne par hétéropeptide un peptide constitué de résidus de nature différente. Dans un autre mode de réalisation du procédé de préparation défini ci-dessus, le pH du solvant est de 3 à 9. L'utilisation de cet intervalle de pH correspond au domaine de stabilité de la liaison peptidique [32] et conduit à une augmentation du rendement de la réaction par rapport à des pH situés hors de cet intervalle. Selon un mode de réalisation préféré, l'invention concerne un procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé de génération 1 (P1) tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes: l'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE à un amorceur dans un solvant aqueux, à un 5 pH approprié, pour obtenir de la polylysine dendrimère greffé protégée de génération 1 sous forme d'un précipité, - la déprotection de la polylysine dendrimère greffé protégée de génération 1 obtenue à l'étape précédente, pour obtenir de la polylysine dendrimère greffé de génération 1. On désigne par génération le produit obtenu lors de chaque phase de croissance de 10 cette macromolécule. On désigne par génération 1 le produit de la première réaction de polymérisation de la TFA-L-Lysine NCA, sans amorceur externe, ou avec la TFA-L-lysine ou tout autre amorceur défini ci-dessus. On notera que selon l'invention le dendrimère greffé de génération 1 (P1) est linéaire. Dans un mode de réalisation préféré du procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé de génération 1 tel que défini ci-dessus, l'amorceur est de la L-lysine protégée en NE ou non protégée. L'utilisation de L-lysine protégée en NE comme amorceur permet d'obtenir un homopolypeptide de L-lysine. L'utilisation de L-lysine non protégée permet l'élongation de deux chaînes homopolypeptidiques de L-lysine à partir des amines en a et en c respectivement. Dans un autre mode de réalisation du procédé de préparation d'une hétéropolylysine dendrimère de génération 1 tel que défini ci-dessus, l'amorceur est un poly(éthylène glycol) a,w diamine, dont la masse moléculaire est notamment d'environ 1000 Da à environ l0 000 Da. Dans un autre mode de réalisation préféré de l'invention, le procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère de génération 1 tel que défini ci-dessus, comporte: - une étape d'addition de L-lysine-NCA protégée en NE par un groupement TFA, à une solution aqueuse de pH d'environ 6 à environ 8, sans ajout d'amorceur ou avec un amorceur L- lysine protégée en NE par un groupement TFA, pour obtenir un précipité de polylysine dendrimère protégée de génération 1, et - une étape de déprotection du polymère de polylysine obtenu à l'étape précédente pour obtenir une polylysine dendrimère de génération 1, linéaire, de masse moléculaire moyenne approximative 1400 Da, présentant un indice de polymolécularité d'environ 1,2 et correspondant à un degré de polymérisation moyen de 8 unités de lysine. Dans ce qui précède et ce qui suit, on désigne par masse moléculaire moyenne E N,M, la masse moléculaire moyenne en nombre Mn = ' où la somme porte sur toutes les masses moléculaires possibles, Ni étant le nombre de molécules ayant la masse EN Mz moléculaire M. La masse moléculaire moyenne en poids est définie par Mw = E NM L'indice de polydispersité (ou polymolécularité) est défini par I=M,,,/Mn. On désigne par degré de polymérisation moyen le nombre moyen de monomères contenu dans la chaîne de polymère. Les masses moléculaires moyennes (en nombre ou en poids), le degré de polymérisation moyen ainsi que l'indice de polymolécularité ont été déterminées de façon absolue par chromatographie d'exclusion stérique couplée à la diffusion de la lumière et à un détecteur d'indice de réfraction différentiel. Pour la première génération (Pi, polymère de faible masse moléculaire) la détermination de la masse moléculaire absolue a été réalisée par électrophorèse capillaire. La présente invention concerne également un procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé de génération n tel que défini ci-dessus, dans lequel n est un nombre entier de 2 à 10. comportant une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération n-1, dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir de la polylysine dendrimère greffé protégée de génération n sous forme d'un précipité, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération n-1 étant elle-même obtenue à partir de l'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération n-2, dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère greffé protégée de génération n-1, et la déprotection de ladite polylysine, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération n- 2 étant elle-même obtenue comme indiqué à propos de la polylysine dendrimère greffé de génération n-1, o et lorsque n = 2, la polylysine dendrimère greffé de génération 1 est telle que définie ci-dessus, ladite polylysine dendrimère greffé de génération 1 formant le coeur de la polylysine dendrimère greffé de génération n, une étape de déprotection de la polylysine dendrimère greffé protégée de génération n pour obtenir la polylysine dendrimère greffé de génération n. Par pH approprié , on désigne un pH compris entre 3 et 9 et plus particulièrement un pH de 6,5. D'un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé de génération n (Pn) tel que défini ci-dessus, dans lequel la L-lysine-NCA est protégée en NE par du TFA, le coeur de ladite homopolylysine dendrimère greffé de génération n étant formé d'une polylysine linéaire comprenant environ 8 résidus de L-lysine, telle que pouvant être obtenue par la mise en oeuvre du procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère de génération 1 tel que défini ci-dessus, et le degré de ramification de ladite homopolylysine dendrimère greffé de génération n étant d'environ 40% à environ 100%, notamment d'environ 60% à environ 100%. On désigne indifféremment par degré de ramification , taux de greffage , ou taux de branchement d'une polylysine dendrimère greffé de generation n (Pn), le pourcentage des s NH2 de Pn qui ont réagi par rapport au degré total de polymérisation du produit de génération n (DPn). Le moyen préféré pour déterminer le degré de ramification est la mesure du rapport entre l'intensité des signaux RMN des protons Hb et Ha. Ces signaux correspondent: Hb (4,01 ppm) à la résonance du proton porté par les carbones chiraux des motifs lysines liés à des fonctions amines en e, Ha (4,08 ppm) à la résonance des protons portés par les carbones chiraux des motifs lysines liés à des fonctions amines en a. Les protons portés par les motifs lysines de fin de chaîne résonnent entre 3,5 et 3,9 ppm. Le rapport entre l'intensité de ces deux signaux permet d'apprécier le degré de ramification de ces dendrimères greffés [3]. Avantageusement, les rapports Hb/Ha des polylysines dendrimères greffés selon l'invention sont d'environ 0,2 à environ 0,8, notamment d'environ 0, 25 à environ 0,60. Dans un mode de réalisation préféré, l'invention concerne un procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé de génération 2 (P2) tel que défini ci-dessus comportant: - une étape d'addition de la Llysine-NCA protégée en Ne par du TFA à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère de génération 1, o ladite polylysine dendrimère de génération 1 étant telle que celle obtenue par la mise en oeuvre du procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère de génération 1 comprenant environ 8 unités de lysine, tel que défini ci-dessus, o le rapport massique (L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA) / (polylysine dendrimère de génération 1) étant d'environ 2,6 à environ 3,9, notamment environ ladite étape d'addition ayant lieu dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère protégée de génération 2, - une étape de déprotection de la polylysine obtenue à l'étape précédente, pour obtenir une polylysine dendrimère greffé de génération 2 (P2) ayant un poids moléculaire moyen d'environ 6 000 à environ 14 000 Da, notamment d'environ 8350 Da, une polydispersité d'environ 1,4, et d'environ 40 à environ 60, notamment environ 48, groupements -NH2 externes libres. L'homopolylysine dendrimère greffé de génération 2 ci-dessus est également caractérisée en ce que son rapport Hb/Ha est d'environ 0,1 à environ 0,8, notamment d'environ 0,2 à environ 0,3, plus particulièrement environ 0,25. Par ailleurs, lors de la synthèse de l'homopolylysine dendrimère greffé de génération 2 ci-dessus, l'amorceur Pl subit un taux de greffage d'environ 50% à environ 100%, notamment d'environ 80% à environ 100%, plusparticulièrement environ 100 %. On désigne par groupements -NH2 externes libres les groupements -NH2 des fonctions amine en g déprotégés et les groupements NH2 en position a. Le mode préféré pour déterminer la présence des groupements -NH2 externes libres est la RMN. Par exemple lorsqu'on utilise la Nctrifluoacetyllysine, l'élimination du groupement protecteur et l'émergence de la fonction amine libre, sont suivies en RMN du 19F par la disparition du signal du groupement trifluoroacetyl (à -76 ppm) et l'apparition simultanée du signal du trifluoroacétate (à -75,8 ppm). Cette disparition est totale en 15 heures à 40 C dans une solution eau/méthanol/ammoniac 1 M) Dans un autre mode de réalisation préféré, l'invention concerne un procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé de génération 3 (P3) tel que défini ci-30 dessus comportant: - une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération 2, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération 2 étant telle que celle obtenue par la mise en oeuvre du procédé défini ci-dessus, o le rapport massique (L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA) / (polylysine dendrimère greffé de génération 2) étant d'environ 2,6 à environ 3,9, notamment environ 3, ladite étape d'addition ayant lieu dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère greffé protégée de génération 3 (P3), une étape de déprotection de la polylysine obtenue à l'étape précédente pour obtenir une polylysine dendrimère greffé de génération 3 ayant un poids moléculaire moyen d'environ 15 000 à environ 30 000 Da, notamment d'environ 21 500 Da, une polydispersité d'environ 1,4, et d'environ 100 à environ 150, notamment environ 123, groupements NH2 externes libres. L'homopolylysine dendrimère greffé de génération 3 ci-dessus est également caractérisée en ce que son rapport Hb/Ha est d'environ 0,2 à environ 0,8, notamment d'environ 0,5 à environ 0,7, plus particulièrement environ 0,6. Par ailleurs, lors de la synthèse de l'homopolylysine dendrimère greffé de génération 3 ci-dessus, l'amorceur P2 subit un taux de greffage d'environ 50% à environ 90%, notamment d'environ 70% à environ 90%, plus particulièrement environ 81 %. Dans un autre mode de réalisation préféré, l'invention concerne un procédé de 20 préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé de génération 4 (P4) tel que défini ci-dessus comportant: - une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération 3, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération 3 étant telle que celle obtenue par la mise en oeuvre du procédé défini ci-dessus, o le rapport (L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA) / (polylysine dendrimère greffé de génération 3 étant d'environ 2,6 à environ 3,9, notamment environ 3, ladite étape d'addition ayant lieu dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère greffé protégée de génération 4 (P4), une étape de déprotection de la polylysine obtenue à l'étape précédente pour obtenir une polylysine dendrimère greffé de génération 4 ayant un poids moléculaire moyen d'environ 50 000 à environ 80 000 Da, notamment d'environ 64 000 Da, une polydispersité d'environ 1, 4, et d'environ 300 à environ 450, notamment environ 365, groupements NH2 externes libres. L'homopolylysine dendrimère greffé de génération 4 ci-dessus est également caractérisée en ce que son rapport Hb/Ha est d'environ 0,2 à environ 0,8, notamment d'environ 0,4 à environ 0,5, plus particulièrement environ 0,46. Par ailleurs, lors de la synthèse de l'homopolylysine dendrimère greffé de génération 4 ci-dessus, l'amorceur P3 subit un taux de greffage d'environ 50% à environ 90%, notamment d'environ 70% à environ 90%, plus particulièrement environ 80%. Dans un autre mode de réalisation préféré, l'invention concerne un procédé de 10 préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé de génération 5 (P5) tel que défini ci-dessus comportant: - une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en Nc par du TFA à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération 4, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération 4 étant telle que celle obtenue par la mise en oeuvre du procédé défini ci-dessus, o le rapport (L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA) / (polylysine dendrimère greffé de génération 4) étant d'environ 2,6 à environ 3,9, notamment environ 3, ladite étape d'addition ayant lieu dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère greffé protégée de génération 5, - une étape de déprotection de la polylysine obtenue à l'étape précédente pour obtenir une polylysine dendrimère greffé de génération 5 ayant un poids moléculaire moyen d'environ 140 000 à environ 200 000 Da, notamment d'environ 169 000 Da, une polydispersité d'environ 1,4, et d'environ 900 à environ 1100, notamment environ 963, groupements NH2 externes libres. L'homopolylysine dendrimère greffé de génération 5 ci-dessus est également caractérisée en ce que son rapport Hb/Ha est d'environ 0,2 à environ 0,8, notamment d'environ 0,3 à environ 0,5, plus particulièrement environ 0,4. Par ailleurs, lors de la synthèse de l'homopolylysine dendrimère greffé de génération 5 ci-dessus, l'amorceur P4 subit un taux de greffage d'environ 50% à environ 90%, notamment d'environ 60% à environ 70%, plus particulièrement environ 65%. Le procédé de préparation de polylysine dendrimère greffé selon l'invention présente de nombreux avantages. Un premier avantage est que dans un solvant aqueux le monomère activé (TFA-LLys-NCA) est utilisable brut de réaction, c'est-à-dire sans aucune purification préalable, contrairement aux recommandations de la littérature [23]. Les acides chlorhydrique ou nitreux, formés lors de la synthèse des NCA [27, 31, 34] ne sont, en solvant aqueux, absolument pas gênant quel que soit le pH compris entre 3 et 9 auquel est conduite la polymérisation. Un deuxième avantage est que les réactions de polymérisation selon l'invention sont rapides. Elle sont totales en un temps compris entre 2 heures et 30mn, fonction de la température comprise entre -10 et +60 C, et du pH compris entre 3 et 9. Un troisième avantage est que les polypeptides formés (quelles que soient les générations) précipitent en solvant aqueux et sont facilement récupérables par filtration ou centrifugation. Cet avantage est augmenté du fait que les peptides qui précipitent ont un faible indice de polydispersité. En effet, les polymères d'aminoacides courts sont solubles, ce qui autorise leur allongement, mais précipitent au delà d'une certaine longueur ce qui bloque leur allongement. La conséquence est que les produits obtenus ont une courbe de distribution étroite, dont la masse moyenne dépend notamment de la balance hydrophile- hydrophobe entre le porteur initial (amorceur) et le produit final. Cette balance est également fonction de la nature du groupement utilisé pour protéger la fonction amine en E. Un quatrième avantage du procédé de l'invention est qu'en milieu aqueux on peut amorcer les réactions de polymérisation dans un milieu acide contrairement aux procédés antérieurs qui nécessitent des solvants anhydres. Ainsi, la première réaction de polymérisation est amorcée soit par la TFA-L-Lys provenant de l'hydrolyse des NCA, soit par la TFA-L-Lys ajoutée au milieu réactionnel, de telle sorte qu'après déblocage, la polylysine dendrimère de génération 1 (P1) est strictement constituée de lysine. Cette pureté qualitative (biologiquement intéressante) se retrouve obligatoirement dans les générations suivantes puisque Pl est amorceur pour la polylysine dendrimère greffé de génération 2 (P2), lequel est amorceur pour la polylysine dendrimère greffé de génération 3 (P3) etc... Cette possibilité n'interdit pas d'amorcer la polymérisation par des amines autres que les précédentes telles que par exemple des aminoacides, des peptides, des alkylamines, des alkyldiamines. Un cinquième avantage du procédé de l'invention est qu'il est aisé de contrôler, et de programmer les masses moyennes en nombre (Mn) des polylysines dendrimères greffés de la génération i attendue (Pi). Dans la réaction de formation des polylysines dendrimères greffés, le choix du rapport {TFA-L-Lys-NCA} / amorceur, est en effet important. Pour un rapport ad hoc la polylysine dendrimère greffé obtenue est monomodale, de faible polydispersité et de Mn donnée. Mais si l'on utilise un excès de monomère activé la Mn moyenne du Pi obtenu sera plus élevée que lorsqu'on utilise le rapport ad hoc. Un trop fort excès de monomère activé conduit, à coté du Pi attendu, à la formation de traces de P1 que l'on élimine par microfiltration. Si au contraire on utilise un défaut de monomère activé la Mn du Pi formé est plus faible que celle obtenue en utilisant un rapport ad hoc. Cette propriété permet ainsi d'obtenir pour chaque génération, des polylysines dendrimères greffés de masses moyennes en nombre contrôlables à plus ou moins 30 % des masses moyennes ad hoc. On peut en conséquence en partant d'une génération Pl de Mn 1400 Da, obtenir des polylysines dendrimères greffés de masses variables comprises entre les minima et maxima suivants: 6 000 Da En variant la nature du groupement protecteur de la fonction amine en epsilon, on obtient selon l'hydrophobie de ce groupement, des composés de P1 à pi de Mn, plus faibles si le groupement protecteur est plus hydrophobe, ou plus élevé si le groupement protecteur est plus hydrophile. Ce procédé permet donc de synthétiser très facilement des polylysines dendrimères greffés ayant les masses moyennes (Mn) souhaitées. Les polylysines dendrimère greffé de l'invention ont des masses molaires qui augmentent plus vite en fonction du nombre de génération que pour des dendrimères de lysine de l'art antérieur en raison du fait que l'amorceur que l'on peut utiliser pour la génération 2 est une polylysine linéaire. Sur cet aspect, si les polylysines dendrimères greffés de l'invention peuvent être comparées aux polylysines branchées décrites par Klok et al [3], elles diffèrent structurellement de ces dernières par leur taux de greffage beaucoup plus élevé. C'est pour ces raisons que les polylysines dendrimères de l'invention sont nommées Poly-L-lysines-Dendrimères-Greffés (PKDG). La présente invention concerne également une polylysine dendrimère greffé telle que pouvant être obtenue par la mise en oeuvre d'un procédé de préparation, tel que défini ci-dessus, notamment par la mise en oeuvre d'un procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé de génération n, où n est supérieur à 1, tel que défini ci-dessus. Dans un mode de réalisation particulier, la polylysine dendrimère greffé telle que définie ci-dessus, est caractérisée en ce que les groupements NH2 externes sont totalement ou partiellement liés de manière covalente ou non-covalente, à des groupes choisis parmi la liste comprenant des oses, des acides nucléiques, des protéines, ou des groupements portant des fonctions carboxyliques, sulfoniques, phosphoriques, des polyoxydes d'éthylène, et des chaînes hydrocarbonées ou perfluorohydrocarbonées. Ces modifications de fonctionnalisation de leur surface leur confèrent de nouvelles propriétés physiques, et au delà de nouvelles activités biologiques. Dans un autre mode de réalisation particulier, la polylysine dendrimère greffé, telle que définie ci-dessus, est caractérisée en ce qu'elle est fixée sur un support de manière covalente ou non-covalente notamment par liaisons électrostatiques. Un premier avantage est qu'en conservant leurs propriétés lesdits supports, (particules, fibres, ou surfaces), acquiérent les propriétés des dendrimères. La mise en oeuvre de ces 10 supports permet alors de les utiliser comme filtres, tissus, revètement de surface, particules abrasives, dans des environnements divers. Un deuxième avantage est lié au fait qu'en fixant sur support les dendrimères greffés de cette invention on crée un grand nombre de fonctions réactives (amines ou acides) par unité de surface de ces supports et on modifie ainsi leur propriété. On tire alors partie de cette modification pour, par exemple fixer sur lesdits supports des concentrations d'anticorps, d'aptamères ou des fragments d'ADN supérieures à celles qu'il est possible de fixer sur les plaques habituellement utilisées pour les dosages immunologiques, ce qui permet d'augmenter la sensibilité de ces dosages à partir de ces récepteurs hautement spécifiques. Un troisième avantage est que la polylysine dendrimère greffé ainsi fixée conserve ses 20 propriétés par rapport à son état non-fixé. Par support, nous désignons les matériaux inorganiques (silice, alumine, oxydes métalliques,) ou organiques (polyacryliques, polyuréthanes, polyepoxy, polyisocyanate, polysacharides, polyamides) La présente invention concerne également l'utilisation des polylysines dendrimères greffés définies ci-dessus, pour la préparation de complexes antigène polylysine dendrimère greffé ou de complexes haptène -polylysine dendrimère greffé, destinés à la production d'anticorps dirigés contre ledit antigène ou ledit haptène. En effet, les polylysines dendrimères greffés selon l'invention sont caractérisées en ce qu'elles sont furtive vis-à-vis des systèmes immunitaires, c'est-à-dire que les systèmes immunitaires ne produisent pas d'anticorps dirigés contre les polylysines dendrimères greffés selon l'invention. Toutefois si les polylysines dendrimères greffés selon l'invention portent un haptène, ou un antigène fixé à leur surface les systèmes immunitaires peuvent reconnaître ces haptènes ou antigènes et créer des anticorps contre ces derniers sans en créer contre le porteur polylysine dendrimère greffé, contrairement à ce qui se produit lorsque les porteurs sont des protéines telles que la BSA (sérum albumine bovine), HSA (sérum albumine humaine), KLH (hémocyanine de patelle). L'avantage est que les anticorps ainsi produits se retrouvent dans des milieux moins complexes que lorsqu'ils sont produits par les techniques habituelles, et plus directement utilisables en tant qu'outils analytiques ultérieurs. Par haptène on entend une molécule de petite taille non antigénique par elle-même. La présente invention concerne également une composition de polylysines dendrimère greffé telle que pouvant être obtenue par la mise en oeuvre d'un procédé de préparation tel que défini ci-dessus. La présente invention concerne également une polylysine dendrimère greffé, telle que définie ci-dessus, en tant qu'antibactérien ou antifongique, sous réserve qu'elle ne soit pas utilisée pour le traitement thérapeutique du corps humain ou animal. En particulier en phase homogène, la polylysine dendrimère greffé selon l'invention est utilisée pour le traitement de surfaces dans le cadre d'un traitement antiseptique ou pour prévenir des risques de contamination microbiologiques de ces surfaces. Les polylysines dendrimères greffés peuvent également être utilisées pour le traitement de réservoirs de liquides à risque de contamination microbiologique, tels que des réserves d'eau par exemple. Les polylysines dendrimères greffés de l'invention peuvent être utilisées, fixées sur support comme défini ci-dessus, comme filtres et revètements antimicrobien, comme particules antimicrobienne circulante pour lutter contre les biofilms, ou comme revètement anti-biofilm, notamment pour protéger les coques de bateau du phénomène de fouling. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de substance active au moins une polylysine dendrimère greffé telle que définie ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. La présente invention concerne également l'utilisation d'une poylysine dendrimère greffé telle que définie ci-dessus, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des infections bactériennes ou fongiques, ou des cancers. Dans un mode de réalisation particulier de l'utilisation telle que définie ci-dessus d'une polylysine dendrimère greffé pour la préparation d'un médicament, les infections bactériennes sont choisies parmi les infections à bactéries GRAM- et GRAM+ appartenant notamment aux familles choisies dans la liste comprenant les Pseudomonadaceae, en particulier du genre Pseudomonas, les Legionellaceae, en particulier du genre Legionella, les Enterobacteriaceae, en particulier des genres Escherichia, Salmonella, Shigella, et Yersinia, les Vibrionaceae, les Pasteurellaceae, les Alcaligenaceae, en particulier du genre Bordetella, les Brucellaceae, en particulier du genre Brucella, les Francisellaceae, en particulier du genre Francisella, les Neisseriaceae, les Micrococcaceae, en particulier des genre Staphylococcus, Streptoccus, et Listeria. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 Chromatogrammes obtenus pour les différentes générations de polylysines dendrimères de l'invention (P1 à P5) en CES (Chromatographie d'Exclusion Stérique) couplée à la diffusion statique de lumière (LS). Conditions expérimentales: colonne Superose 12 (Amersham Pharmacia Biotech) ; débit 0,4 mL/min, température: 25 C, éluant 1, concentrations injectées: 5g/L, volume d'injection: 100 L. Les chromatogrammes présentent l'indice de réfraction (IR, en volt, en ordonnée) par rapport au volume d'élution (en mL, en abscisse). Figure 2A et Figure 2B Les Figures 2A et 2B représentent la variation de la masse molaire (en g/mol, en ordonnées) des polylysines dendrimères de l'invention (losanges) en fonction de la génération (en abscisse) et la comparaison avec les masses molaires théoriques des dendrimères monofonctionnels (carrés) et difonctionnels (triangles) décrits par H.A. Klok et al. Les masses molaires des PKDG ont été déterminées par CES couplée à la diffusion de la lumière. Les masses molaires des dendrimères de polylysines ont été calculées en supposant que la structure dendritique est parfaite (toutes les fonctions amines des monomères lysine sont supposées réagir). Le coeur du dendrimère monofonctionnel correspond à la benzhydrylamine. Le coeur du dendrimère difonctionnel correspond au 1,4-diaminobutane. Les équations obtenues par ajustement non linéaire des données expérimentales selon une loi exponentielle sont présentées dans les figures avec les coefficients de corrélation R2. Figure 3 La Figure 3 représente le rayon hydrodynamique des polylysines dendrimère greffés de l'invention (en nm, en ordonnées) en fonction de la génération (en abscisse) déterminé à l'aide de trois méthodes expérimentales différentes: la TDA (Analyse par diffusion de Taylor, carrés), la DLS (Diffusion de lumière quasi-élastique, losanges), et la CES-3D (Chromatographie d'Exclusion Stérique triple détection, diffusion de lumière, détecteur viscosimétrique et indice de réfraction, triangles). Figure 4 La Figure 4 représente le rayon hydrodynamique des polylysines dendrimère greffés de l'invention (en nm, en ordonnées) en fonction de la génération (en abscisse) déterminé par TDA dans les trois tampons étudiés dans les exemples, Ti (losanges), T2 (carrés), T3 (triangles). Figure 5 La Figure 5 représente la variation de la viscosité intrinsèque (en ordonnée, en mL/g) en fonction du nombre de génération calculé à partir des valeurs de rayons hydrodynamiques (TDA) pour différents tampons (tampon 1 (losanges), tampon 2 (carrés sombres) ou en tampon 3 (triangles)) ou à partir des valeur de masses moléculaires (CES) en tampon 2 (carrés blancs). Figure 6 La Figure 6 représente des résultats de 1H-RMN à 400 MHz (en ppm) pour les polylysines dendrimères greffés de l'invention des générations 2 à 5 en D2O (à gauche). Les signaux Ha et Hb correspondent au proton porté par le carbone chiral des motifs lysines lorsque celles-ci sont incorporées dans la chaine peptidique (Ha) à l'exception des motifs de bout de chaîne (Hc) qui résonnent à champs plus faibles, ou lorsqu'elles sont greffées à leur chaîne latérale (Hb). A droite est représenté à titre d'illustration un PKDG de deuxième génération contenant 48 lysines, dans lequel l'amorceur (8 lysines) est représenté au centre en pointillé et les protons Ha, Hb, Hc portés par les carbones chiraux sont respectivement représentés par un cercle blanc, un cercle noir, et l'absence de cercle. Le rapport Hb/Ha permet de définir le taux de greffage. Ce taux de greffage (Tableau 6) est delOO % pour le passage de Pl à P2 (Hb/Ha=0,25), 81 % pour le passage de P2 à P3 (Hb/Ha=0,60), 80 % pour le passage de P3 à P4 (Hb/Ha=0,46), 65 % pour le passage de P4 à P5 (Hb/Ha=0,40), et 64% pour le passage de P5 à P6 (Hb/Ha=0,42) (non montré sur la figure). Figure 7 La Figure 7 représente l'évolution pondérale moyenne (en g, en ordonnées en fonction du temps (en jours, en abscisse) sur 180 jours dans un groupe de rats mâles Sprague-Dawley (n=6) recevant chaque jour 0,5ml de la solution de polylysine dendrimère greffé de l'invention (P3) (courbe noire). Les rats contrôles (n=100) reçoivent 0,5ml de sérum physiologique (solvant de la solution) (courbe grise). Figure 8 La Figure 8 représente le pourcentage de survie (en ordonnées) par rapport à un témoin (losanges) de bactéries Legionella pneunoniae mises en contact avec des polylysines dendrimère greffé de l'invention de génération 2 à 10 mg/L (cercles), de génération 2 à 100 mg/L (triangles), de génération 3 à 10 mg/L (carrés), et de génération 3 à 100 mg/L (étoiles) en fonction du temps (en jours, en abscisse). EXEMPLES EXEMPLE 1 Polylysine dendrimère de génération 1 (Pl) 1/ On synthétise 94g de Ne TFAL-Lysine-NCA par une des méthodes de l'art, notamment telle que décrite ou rappellée par Collet et al [31] par exemple. 2/ Au produit brut de la réaction ci-dessus on ajoute 1 litre d'une solution aqueuse de 10 HCO3Na 0,1 M maintenue à 0 C. 3/ Après 30 mn on récupère par filtration ou centrifugation le précipité blanc de Poly-NE TFA-L-Lysine linéaire, formé dans le milieu 4/ Ce précipité, placé dans 1 litre de solution aqueuse ammoniacale à pH 11 pendant 15 heures à 40 C, perd les groupements protecteurs TFA de ses chaînes latérales et devient soluble dans l'eau. 5/ Le volume du solvant est réduit de moitié dans un évaporateur rotatif. 6/ Après lyophilisation on obtient 54 g d'une poly-L-Lysine linéaire de polydispersité 1,05 (mesurée en CES (Chromatographie d'Exclusion Stérique, voir Exemple 7)). Sa masse moyenne absolue mesurée par electrophorèse capillaire (EC) et confirmée par MALDI-TOF est de 1400 Da. EXEMPLE 2 Polylysine dendrimère greffé (PKDG) de génération 2 (P2) 1/ On synthétise 94g de monomère N TFA-L-Lysine-NCA comme précédemment. 2/ Au produit brut de la réaction on ajoute 1 litre d'une solution aqueuse 0,1 M de HCO3Na maintenue à 0 C, dans laquelle on a dissous 30 g du produit de la génération 1 de l'Exemple 1 en tant qu'amorceur de polymérisation. 3/ Après 30 mn on récupère par filtration ou centrifugation le précipité blanc de Poly-30 N TFA-L-Lysine greffé, formé dans le milieu. 4/ Ce précipité, placé dans 1 litre de solution aqueuse ammoniacale à pH 11 pendant 15 heures à 40 C, perd les groupements protecteurs TFA des chaînes latérales des motifs ajoutés lors de la polymérisation et devient soluble dans l'eau. 5/ Le volume du solvant est réduit de moitié dans un évaporateur rotatif. 6/ Après lyophilisation on obtient 70 g de poly-L-Lysine dendrimère greffé de polydispersité 1,40 (mesurée en CES). Sa masse moyenne mesurée par LS est de 8 350 Da. En faisant varier le rapport en masse monomère / amorceur de 3,9 à 2,6 on obtient des produits de génération 2 dont les masses varient entre 6 000 Da et 10 800 Da EXEMPLE 3 Polylysine dendrimère greffé (PKDG) de génération 3 (P3) 1/ On synthétise 94g de Nc TFA-L-Lysine-NCA comme précédemment. 2/ Au produit brut de la réaction on ajoute 1 litre d'une solution aqueuse de HCO3Na 0,1 M maintenue à 0 C, dans laquelle on a dissout 30 g du produit de la génération 2 de l'Exemple 2. 3/ Après 30 mn on récupère par filtration ou centrifugation le précipité blanc de Poly-N TFA-L-Lysine dendrimère greffé, formé dans le milieu. 4/ Ce précipité, placé dans 1 litre de solution aqueuse ammoniacale à pH 11 pendant 15 heures à 40 C, perd les groupements protecteurs TFA des chaînes latérales des motifs ajoutés lors de la polymérisation et devient soluble dans l'eau. 5/ Le volume du solvant est réduit de moitié dans un évaporateur rotatif. 6/ Après lyophilisation on obtient 70 g d'une poly-L-Lysine dendrimère greffé de polydispersité 1,46 (mesurée en CES). Sa masse moyenne mesurée par LS est de 21 500 Da. En faisant varier le rapport monomère / amorceur de 3,9 à 2,6 on obtient des produits de génération 3 dont les masses varient entre 15 000 Da et 27 000 Da EXEMPLE 4 Polylysine dendrimère greffé (PKDG) de génération 4 (P4) 1/ On synthétise 94g de NE TFA-L-Lysine-NCA comme précédemment. 2/ Au produit brut de la réaction on ajoute 1 litre d'une solution aqueuse de HCO3Na 0,1 M maintenue à 0 C, dans laquelle on a dissout 30 g du produit de la génération 3 de l'Exemple 30 3. 3/ Après 30 mn on récupère par filtration ou centrifugation le précipité blanc de Poly-NE TFA-L-Lysine greffé, formé dans le milieu. 4/ Ce précipité, placé dans 1 litre de solution aqueuse ammoniacale à pH 11 pendant 15 heures à 40 C, perd les groupements protecteurs TFA des chaînes latérales des motifs ajoutés lors de la polymérisation et devient soluble dans l'eau. 5/ Le volume du solvant est réduit de moitié dans un évaporateur rotatif. 6/ Après lyophilisation on obtient 70 g d'une poly-L-Lysine dendrimère greffé de polydispersité 1,36 (mesurée en CES) et de masse moyenne 64 000 Da (mesurée par LS). En faisant varier le rapport monomère / amorceur de 3,9 à 2,6 on obtient des produits de génération 3 dont les masses varient entre 41 000 Da et 79 000 Da EXEMPLE 5 Polylysines dendrimères greffé (PKDG) de génération 5 (P5) 1/ On synthétise 94g de Ne TFA-L-Lysine-NCA comme précédemment. 2/ Au produit brut de la réaction on ajoute 1 litre d'une solution aqueuse 0,1 M de HCO3Na maintenue à 0 C, dans laquelle on a dissout 30 g du produit de la génération 4 de l'Exemple 4. 3/ Après 30 mn on récupère par filtration ou centrifugation le précipité blanc de Poly-NE TFA-L-Lysine greffé de génération 5, formé dans le milieu. 4/ Ce précipité, placé dans 1 litre de solution aqueuse ammoniacale à pH 11 pendant 15 heures à 40 C, perd les groupements protecteurs TFA des chaînes latérales des motifs ajoutés lors de la polymérisation et devient soluble dans l'eau. 5/ Le volume du solvant est réduit de moitié dans un évaporateur rotatif. 6/ Après lyophilisation on obtient 70 g d'une Poly-L-Lysine dendrimère greffée de polydispersité 1,46 (mesurée en CES). Sa masse moyenne mesurée par LS est de 169 000 Da. En faisant varier le rapport monomère / amorceur de 3,9 à 2,6 on obtientdes produits 25 de génération 3 dont les masses varient entre 120 000 Da et 220 000 Da EXEMPLE 6 Polylysines dendrimères greffés (PKDG) de générations 6, 7 et 8 (P6, P7 et P8) Cette synthèse a été répétée pour les générations suivantes 6, 7, 8. Leurs masses (Mn) évaluées par extrapolation sont dans l'ordre égales à, 430 000 Da, 1 130 000 Da, et 3 000 000 Da. EXEMPLE 7 Détermination des masses molaires moyennes et des indices de polydispersité La chromatographie d'exclusion stérique couplée à la diffusion statique de lumière multi-angle et à un détecteur d'indice de réfraction différentiel (CES-2D) a permis d'obtenir la distribution en masse molaire des 4 générations de PKDG (P2-P5). La distribution en masse molaire du coeur P1 linéaire a été obtenue par EC (confirmé par MALDI-TOF) . Les mesures ont été réalisées dans un éluant aqueux constitué de 50 g/L de H2PO4Na+ (éluant 1, pour la définition des éluants, voir le Tableau 2) à pH 4,5. Les chromatogrammes obtenus sont présentés Figure 1. Bien qu'il ait été constaté que le stockage des PKDG à l'abri de l'humidité permettait de diminuer la formation d'agrégats, ce phénomène n'a cependant pas pu être complètement évité. Ainsi, la Figure 1 montre malgré ces précautions la formation d'agrégats (épaulements aux faibles volumes d'élution), notamment pour les P4 et P5. Les résultats de masses molaires moyennes sont regroupés dans le Tableau 3, avec les valeurs des incréments d'indice de réfraction (dn/dC) et les degrés de polymérisation estimés. Il convient de noter que, bien que cette méthode permette une détermination des masses molaires absolues, les valeurs de masses molaires données doivent prendre en compte une certaine proportion de contre-ions (ions phosphates H2PO4- dans l'éluant). Cette proportion, bien qu'elle soit difficile à évaluer expérimentalement, peut être estimée par la théorie de la condensation décrite par Manning. Dans le cadre de cette théorie, le taux de condensation est donné par le rapport entre la distance moyenne entre deux charges dans la polylysines (0,34 nm) et la longueur de Bjerrum (0,67 nm à 25 C). La masse molaire moyenne d'un monomère chargé dans un tampon phosphate pH 4,5 est donc de: 126x0, 49+223x0,51=175,5 g/mol. A partir de cette moyenne, il est possible d'estimer le nombre moyen de monomères N. Les résultats de masses molaires obtenus dans le tampon 2 par CES-3D (Viscotek) présentent des valeurs de masses molaires beaucoup plus élevées, notamment pour les P4 et P5, probablement à cause de la formation d'agrégats en quantité plus importante. Par la suite, les valeurs obtenues par CES-2D seront retenues. La variation de la masse molaire des PKDG est représentée sur les Figures 2A-2B en échelle linéaire (Figure 2A) ou en échelle semi-logarithmique (Figure 2B). A titre de comparaison, sont aussi représentées les masses molaires attendues (théoriques) pour des dendrimères de la polylysine amorcés, soit avec une monoamine (dendrimère 1, avec un coeur benzhydrylamine, [6, 7]), ou bien avec un amorceur diamine (dendrimère 2 amorcé avec un coeur 1,4-diaminobutane, [9]. Il est intéressant de noter que, dans tous les cas (y compris les PKDG), la croissance de la masse molaire suit une loi exponentielle. Ainsi, la masse molaire entre deux générations successives est multipliée par un même facteur. Cependant dans le cas des PKDG, le facteur multiplicateur est de 3,2 (e"62), contre 2,12 pour le dendrimère 2, et seulement 1,95 pour le dendrimère 1. Les masses molaires des PKDG présentent, par conséquent, une loi de croissance exponentielle, caractéristique des dendrimères, cependant, l'augmentation de la masse molaire s'effectue pour les PKDG de façon beaucoup plus rapide que pour les dendrimères de même nature. On notera que les indices de polydispersité sont relativement faibles compris entre 1,05 (génération 1) et 1,46 (génération 5), ce qui démontre que le procédé de synthèse proposé permet facilement d'obtenir des composés de polydispersité contrôlée. Les résultats du calcul du nombre moyen de monomères incorporés par amorceurs potentiels (fonction amine a ou s) lors du passage d'une génération i à une génération i+l sont donnés dans le Tableau 4. Ce résultat est cohérent avec les résultats de viscosité intrinsèque qui prévoit une densité minimale (viscosité intrinsèque maximale) pour un dendrimère de fonctionnalité 3 à la génération 4 (voir Exemple 9). EXEMPLE 8 Détermination des rayons hydrodynamiques (ou des coefficients de diffusion) Afin de connaître la dimension caractéristique des PKDG en solution, les rayons hydrodynamiques ont été déterminés à partir des coefficients de diffusion moléculaire en utilisant la relation de StokeEinstein: D. = kT (1) m 6 7crlR h où Il est la viscosité du milieu, k la constante de Boltzmann et T la température en K. Pour déterminer Dm, deux méthodes expérimentales ont été utilisées: la diffusion quasi-élastique (DLS) ou statique de la lumière (couplée ou non à une CES), et la méthode de diffusion de Taylor (TDA). Cette dernière méthode permet de mesurer le coefficient de diffusion d'une espèce à partir de l'élargissement d'une bande de soluté sous l'influence d'un flux hydrodynamique dont le profil de vitesse est connu pour être dispersif (profil parabolique de Poiseuille). Les mesures par TDA ont été effectuées à l'aide d'un appareillage d'électrophorèse capillaire, en utilisant des capillaires en silice de 50 m d.i. (60 cm x 50 cm jusqu'au détecteur) dont la surface interne a préalablement été modifiée par greffage d'un polycation (poly(diallyldimethyl-ammonium)) afin de limiter l'adsorption des solutés PKDG à la surface du capillaire. La dispersion de la bande de soluté sous l'influence de l'écoulement de Poiseuille a été mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre UV. Le coefficient de diffusion est par la suite déterminé selon la méthode initialement décrite par Taylor, puis reprise par Bello et al. [30]. En parallèle à la méthode TDA, les mesures par DLS ont été effectuée à l'aide d'un appareil zetasizer (Malvern). Enfin, des mesures de Rh ont aussi pu être obtenues à partir de la CES-3D (Viscotek). L'ensemble des données numériques de Rh sont regroupées dans le Tableau 3. La Figure 3 présente l'augmentation des rayons hydrodynamiques des PKDG en fonction de la génération, dans le tampon 2 et pour les trois méthodes expérimentales utilisées. Il apparaît que les valeurs obtenues par TDA sont inférieures à celles obtenues par DLS ou par CES-3D. Cette différence est probablement due à la présence d'agrégats dans l'échantillon qui, même en faible proportion, tend à augmenter les valeurs de Rh obtenues par DLS. En effet, les agrégats de haut poids moléculaire représentent une contribution importante du signal de la lumière diffusée (qui varie avec la masse molaire à la puissance 6), ce qui entraîne une surévaluation de la valeur des Rh correspondant aux unimères [31]. En CES-3D, la séparation partielle des agrégats par rapport aux unimères limite cet effet, ce qui peut expliquer que les valeurs en CES-3D se rapprochent plus des valeurs de TDA. En conclusion, les valeurs obtenues en TDA semblent être les valeurs les plus proches de la réalité, car la contribution des agrégats dans le cas d'une détection par absorbance UV est proportionnelle à leur concentration massique qui est relativement faible. L'influence du pH du tampon (tampon 1 vs tampon 3), à force ionique à peu près constante (de l'ordre de 0,5 M), montre qu'à pH 7,0 les PKDG ont un rayon hydrodynamique significativement plus faible qu'à pH 4,5 (Figure 4). Ce résultat est logique compte tenu de la déprotonation des fonctions amines qui doit commencer à être effective à pH 7,0, limitant ainsi les répulsions électrostatiques. Cet effet de pH devrait même être encore plus important à plus faible force ionique et/ou pour des valeurs de pH au-delà de 7. L'ajout de 3% d'acétonitrile dans le tampon 1 tend aussi à diminuer, mais de façon modérée, le rayon hydrodynamique. Cela pourrait s'expliquer par une diminution de la qualité du solvant. En conclusion les PKDG ont un rayon hydrodynamique qui varie quasilinéairement avec le nombre de générations. On retrouve, de nouveau, un comportement similaire à celui de dendrimères. Par ailleurs, l'augmentation du pH et l'ajout d'acétonitrile tend à diminuer leurs rayons hydrodynamiques. On notera aussi que la méthode TDA semble être la méthode la plus adéquate (et la plus répétable avec des écart-types relatifs de l'ordre de 2-3% contre 10-20% pour la DLS) pour la mesure des Rh. EXEMPLE 9 Détermination de la viscosité intrinsèque La viscosité intrinsèque [ri] est une grandeur inversement proportionnelle à la densité de la molécule dans le solvant. Cette grandeur dépend par conséquent de la masse moléculaire et du volume (ou du rayon hydrodynamique) de la molécule. Elle se détermine par des mesures de viscosité, en extrapolant à concentration nulle la viscosité réduite ou inhérente. La CES-3D a permis d'obtenir des valeurs de viscosité intrinsèques. Celle-ci sont données dans le Tableau 3 et sont représentées en fonction du nombre de génération dans la Figure 5 (triangles sombres). Il est intéressant de constater que [r)] passe par un maximum pour la génération 4 comme la théorie le prévoit pour un dendrimère de fonctionnalité 3. Pour les autres tampons, la viscosité intrinsèque a été calculée à partir des données de masses molaire et des valeurs de Rh obtenues par TDA. On remarquera un relativement bon accord entre les valeurs obtenues par CES- 3D (tampon 2, carrés blancs) et les valeurs déduites des données de M et Rh (carrés sombres). Par ailleurs, la courbe en cloche est aussi observée pour le tampon 3 même si les valeurs absolues sont plus faibles que pour les tampons 1 et 2 (augmentation de la densité à pH 7 et donc diminution de la viscosité intrinsèque). Une étude à partir des rayons hydrodynamiques et des volumes de Van der Waals (Vw) permet aussi de montrer que la densité des PKDG évolue de la même façon que pour un dendrimère de fonctionnalité 3. Le volume de Van der Waals représente le volume réellement occupé par les atomes (sans prendre en compte les phénomènes de solvatation). Il peut être calculé [32] par une somme d'incréments, chaque incrément correspondant au volume d'un atome (tabulé en fonction de la nature du ou des atomes voisins). Pour la polylysine de degré de polymérisation n, le volume de Van der Waals est donné par la relation suivante: Vw (nm3) = 0,1226 x n + 18,6 10"3 (2) Par la suite, on peut calculer la fraction de volume libre f selon l'équation: f=1-(Vw/Vh) (3) Le Tableau 5 présente les valeurs de Vw, Vh et f pour P1 et les 4 générations de PKDG. On observe sur ces valeurs un maximum de f pour P4. EXEMPLE 10 Analyse du taux de greffage des PKDG. On désigne par taux de greffage d'une polylylsine dendrimère de génération n (Pn), le pourcentage des fonctions NH2 E qui ont réagi par rapport au degré total de polymérisation de ce produit de génération n. (DPn). Les taux de greffage des PKDG de l'invention sont représentés dans le Tableau 6 suivant. Poly-L-lysines Mn (g/mole) DPn Points de branchements Taux de greffage de l'invention par EC pour Pl, déterminés par le rapport en % par CES-double 1H RMN (Hb/Ha) détection pour P2 à P5, et par extrapolation pour P6 P1 1400 8 (Coeur des matériaux de cette invention) Polylysine linéaire de 8 unités (Mn = 8) 8 8/8 = 100% déterminé à partir du rapport Hb/Ha = 0,25 du P2 P2 8 350 48 39 39/48= 81% déterminé à partir du rapport Hb/Ha = 0, 60 du P3 P3 21 500 123 98 98/123= 80% déterminé à partir du rapport Hb/Ha = 0,46 du P4 P4 64 400 365 237 237/365= 65% déterminé à partir du rapport Hb/Ha = 0,40 du P5 P5 169 000 963 614 614/963= 64% déterminé à partir du rapport Hb/Ha = 0,42 du P6 P6 430 000 2457 / / Tableau 6: Principales caractéristiques des PKDG de l'invention, en particulier points de branchements et taux de greffage. On obtient les taux de greffage donnés dans le Tableau 6 par une analyse progressive de la construction des dendrimères greffés en partant de la génération 1 à la génération n. Le 15 taux de greffage de Pl à P2 se calcule à partir des valeurs expérimentales des degrés de polymérisation, DP = 8 pour P1, DP = 48 pour P2 et du rapport expérimental Hb/Ha = 0,25 (Figure 6). A partir de ces valeurs la variation de DP est de 40. Considérant que le nombre maximum de fonctions réactives est de 8 s N1-12 et 1 a NH2, que dans l'eau carbonatée et à pH 6,5 la réactivité de la fonction a NH2 (pK =7,2) est identique à celle des fonctions s NH2 (pK = 11,2) en raison de la plus grande carbonatation de la première par rapport à la seconde, on en déduit que les 9 NH2 du P1 incorporent 4,4 monomères en moyenne. Ainsi dans le P2, le nombre maximum de Hb est de 8 et celui de Ha de 31 (40 - 9 Hc terminaux qui en RMN résonnent à des champs différents). Ces valeurs conduisent à un rapport Hb/Ha = 8/31 = 0, 25 identique au rapport expérimental. Ceci indique que les 8 s NH2 du Pl ainsi que la fonction a-NH2 du Pl ont réagi pour donner P2, ce qui montre que les 8 sNH2 sur la totalité des 8 sNH2 du P1 ont réagi pour donner le P2. Ainsi le taux de greffage du P1 est de 8/8 = 100%. Après déblocage, P2 porte 40 sNH2 et 9 aNH2. Le taux de greffage du P2 pour passer au P3 se calcule à partir des valeurs expérimentales de DP = 48 pour P2, DP = 123 pour P3, de la variation de DP = 75 et du rapport expérimental Hb/Ha = 0,60 (Figure 6). Le seul moyen de satisfaire cette valeur expérimentale est d'admettre que le nombre de sNH2 réactifs du P2 est de 31 sur les 40 possibles (9 cNH2 sont donc non réactifs). Les 75 lys (variation de DP) se répartissent alors comme suit: 10 sNH2 s'allongent chacun d'une lysine, 21 sNH2 de deux lysines, 4 aNH2 de deux lysines, et 5 aNH2 de trois lysines, ceci pour tenir compte de la réactivité des aNH2 légèrement supérieure à celle des s NH2. Cette solution correspond à un nombre de Hb = 31 + 8 = 39, avec 64 Ha et 20 Hc ce qui donne un rapport Hb/Ha = 39/64 = 0,60 égal au rapport expérimental. Ceci montre que 39 sNH2 sur la totalité des 48 sNH2 du P2 ont réagi pour donner le P3, et que le taux de greffage du P2 est de 39/48 = 81%. Un raisonnement analogue s'appuyant sur les rapports expérimentaux Hb/Ha permet d'obtenir les taux de greffage des différents Pn indiqués dans le Tableau 6. Ces taux de greffages, montrent que les polylysines dendrimères greffés de la présente invention sont très différentes et notamment beaucoup plus denses que les polylysines branchées décrite par Klok et al [3] (voir le Tableau 1). La haute densité de greffage des composés de l'invention, directement donnée par la réactivité des NCA sur les fonctions NH2 a et s dans l'eau bicarbonatée à pH environ 6,5, est une spécificité supplémentaire de la présente invention. Tableau 2: Définition des tampons et éluants utilisés pour la détermination des grandeurs physico-chimiques des PKDG: Tampon 1 H2PO4 Na+ 50g/L, pH 4,5 dans l'eau (force ionique 0,61 M) Tampon 2 Tampon 1 + 3% acétonitrile (en poids) Tampon 3 Tampon physiologique: 38 mM H2PO4- Na++ 38 mM HPO42-, 2Na+ + 9 g/L NaCl, ajusté à pH 7,0 (force ionique 0,48 M) Tableau 3: Tableau regroupant l'ensemble des déterminations physicochimiques effectuées sur les PKDG: P1 P2 P3 P4 P5 Méthode Mn (g/mo1) 1400 8350 21500 64000 169000 N 8 48 123 365 963 I 1,05 1,40 1,46 1,36 1,46 CES2D Tampon dn/dC 0,112 0,127 0,134 0,137 0,136 1 (mL/g) Rh (nm) 1,1 (3%) 2, 1 (0,9%) 3,2 (2%) 3,92 (5%) 6,74 (2%) TDA Rh (nm) 1,18 (17%) 2,33 (9%) 3, 41 (8%) 6,31 (8%) 8,38 (8%) DLS Rh (nm) 0,95 (2,4%) 1,82 (1,1%) 2,64 (0, 2%) (2,8%) 5,13 (0,8%) TDA Rh (nm) 1,1 (26%) 2,21 (8%) 3,73 (12%) 5,98 (6%) 8,5 (13%) DLS Tampon Mn (g/mol) 2700 20000 85500 460000 2 CES-3D Rh (nm) 1,79 2,95 4,95 7,99 [rl] (dL/g) 5,6 6,6 7,1 7,1 Tampon 0,74 2,05 2, 87 3 Rh (nm) (11,4%) 1,34 (4,6%) (0,63%) (2,2%) 4,24 (0,26%)TDA Rh (nm) 1, 01 (ND) 1,69 (ND) 3,28 (13%) 5,89 (15%) 6,85 (17%) DLS I représente l'indice de polymolécularité. N représente le nombre moyen de monomères. Entre parenthèses sont donnés les écart-types relatifs. Le nombre n de déterminations expérimentales indépendantes est de 5. CES-2D: chromatographie d'exclusion stérique double détection (diffusion de lumière et indice de réfraction) dans les conditions expérimentales décrites Figure 1; CES-3D: chromatographie d'exclusion stérique triple détection (diffusion de lumière, détecteur viscosimétrique et indice de réfraction). Conditions expérimentales de la CES-3D: tampon 5% NaH2PO4 + 3% Acétonitrile en volume, pH 4. Débit: 0, 6 mL/min. Volume injecté : 100,uL. Colonne Superose 12 HR 10/30. Température. 28 C. Tableau 4: Calcul du nombre moyen de monomères incorporés par amorceurs 5 potentiels (fonction amine a ou E) lors du passage d'une génération i à une génération i+l: Passage M1+1 M, N1+1 N1 nombre nombre génération i (g/mol) d'amorceurs monomères à i+1 à i incorporés / amorceur 1/2 6950 40 9 4,4 2/3 13150 75 48 1,55 3/4 42500 242 123 1,96 4/5 105000 598 366 1,64 Tableau 5: Volumes hydrodynamiques, volumes de Van der Waals et fraction de 10 volume libre des PKDG en fonction du nombre de génération dans le tampon 2 PKDG Vh (nm3) VW (nm3) f 1 3,59 1,0 0,721 2 25,3 5,9 0,766 3 77, 1 15,1 0,804 4 256 44,8 0,825 565 118 0,791 Les degrés de polymérisation pris en compte pour les calculs de VW sont ceux donnés dans le Tableau 2. EXEMPLE 11 Synthèses de triblock copolymères: poly(L-lysine) greffée-blocpoly(ethylene glycol)-blocpoly(L-lysine) greffée 1/ On synthétise 0,5 g de NE TFA-L-Lysine-NCA. 2/ Au produit brut de la réaction on ajoute 5 ml d'une solution aqueuse 0, 1 M de HCO3Na maintenue à 0 C, dans laquelle on a dissout 0,42 g de poly(ethylene glycol) a,o diamine de 3400 Da (Shearwater Corporation) . 3/ Après 30 mn on récupère par filtration ou centrifugation le précipité blanc de {poly(TFAL-lysine) linéaire-bloc-poly(ethylene glycol)-blocpoly(TFA-L-lysine) linéaire} formé dans le milieu. 4/ Ce précipité, placé dans 10ml de solution aqueuse ammoniacale à pH 12 pendant 10 heures à 40 C, perd les groupements protecteurs TFA des chaînes latérales des motifs ajoutés lors de la polymérisation et devient soluble dans l'eau. 5/ Le volume du solvant est réduit de moitié dans un évaporateur rotatif. 6/ Après lyophilisation on obtient 0,45 g d'une {poly(L-lysine) linéairebloc-poly(ethylene glycol)-bloc-poly(L-lysine) linéaire} de génération 1. Sa polydispersité est de 1,07 (mesurée en CES). Sa masse moyenne mesurée par LS est de 15 500 Da. En répétant cette réaction, et en utilisant comme amorceur 0,15 g du produit obtenu lors de la réaction précédente, on obtient 0,3 g d'une {poly(L-lysine) greffée-blocpoly(éthylène glycol)-bloc-poly(L-lysine) greffée} de polydispersité 1,3 et de masse moyenne égale à 23 800 Da mesurée par CES-double détection (Indice de réfractiondifusion de lumière) . EXEMPLE 12 Modifications des fonctions amines libres des PKDG A un gramme de PKDG P2 de Mn 8 350 Da en solution dans 50 cm3 de solvant eauacétonitrile 80/20 on ajoute 1 gramme de 3,5-dimethylester-dicarboxyphenyl isothiocyanate. La solution résultante est maintenue à 40 C pendant 10 heures. Deux grammes d'hydrogénocarbonate d'ammonium sont ajoutés à cette solution. Après 5 heures de contact à 40 C le milieu est dialysé, et lyophilisé. On obtient 1,50 g de PKDG P2 dans lequel chaque fonction amine est liée par une fonction thiourée à un phenyl-3,6-dicarboxylate de sodium. EXEMPLE 13 Fixation ionique des PKDG sur support 3 g de PKDG P3 de Mn 21 500 Da sont incubés avec 24 g de charbon Norit (GAC 1240 PLUS) dans 70 ml d'eau distillée stérile pendant 24 heures. Le charbon est ensuite lavé avec 250 ml d'eau distillée stérile. Après évaporation de cette dernière on récupère 1,82 g de P3, ce qui montre que 1,18 g de P3 sont adsorbés sur 24 g de charbon Norit. L'activité de 1 g de ce charbon sur lequel est adsorbé 49 mg de P3 est testée sur Micrococcus lysodeikticus, en la comparant à celle d'un témoin support sans P3. EXEMPLE 14 Fixation covalente des PKDG sur support Un oligomère d'hexaméthylènediisocyanate [OCN-(CH2)6-(NHCONH-(CH2)6)n-NCO] est utilisé pour fixer covalentiellement les PKDG sur des résines support. On mélange vigoureusement des quantités connues de PKDG (Pl, P2, P3) dans environ 5 g d'oligomère de façon à avoir des pourcentage de PKDG variables de 0 à 20 %, et on étale le mélange sur des plaques de verre. Après 48 heures, on broie la résine obtenue, jusqu'à obtenir des particules comprises entre 0,1 et 1 mm, et on la lave abondamment avec 250 ml d'acétone, 250 ml d'eau, 250 ml de méthanol, 250 ml d'éther éthylique, et on sèche. EXEMPLE 15 Etude de la toxicité in vivo des PKDG Les expérimentations ont été réalisées sur des rats de souche Sprague-Dawley âgés de 4 à 8 semaines (Elevage CER Janvier, Le Genest St-Isle). A. Toxicité aiguë : 5 rats reçoivent une injection de 2mL d'une solution de PKDG P3 (60 mg/ml) trois fois par jour pendant 4 jours. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 7 suivant: Tableau 7: étude de la toxicité aiguë d'une solution de PKDG P3: Poids jour 1 Poids jour 4 Var % Var % moyenne E.T. moyenne E.T. moyenne E.T. 252 10 280 11 11,0 10,0 Aucun effet toxique n'est visible. B. Toxicité chronique: Les rats reçoivent une injection sous-cutanée de 0, 5 mL de PKDG P3 (60mg/ml) chaque jour pendant 180 jours. Les rats contrôles reçoivent 0,5m1 de sérum physiologique (solvant de la solution). L'évolution pondérale des rats traités et des rats contrôles est comparée (Figure 7). Aucune modification dans l'évolution pondérale, ni aucun effet néfaste n'a été observé. Ces expérimentations soulignent que la poly-L-lysine (PKDG) P3 ne présente aucun caractère de toxicité apparent: tous les animaux sont vivants et ont un développement pondéral homogène et régulier, superposable à celui des contrôles. EXEMPLE 16 Activité antitumorale des PKDG Des tests de cytotoxicité ont été réalisés sur des cellules myélomateuses de souris avec des concentrations variables des PKDG P2, P3, P4 et P5. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 8 suivant. Tableau 8: Etude comparée de l'activité cytotoxique des polylysines dendrimères de l'invention sur cellules de myélome Concentration 50 25 12. 5 6.25 3.125 1.56 0.78 0.39 0.195 0.09 uM P2 (8350 Da) ++++ ++++ +++ ++ + - - - - en mg/L 52 P3 (21 500 Da) ++++ ++++ ++++ ++ + +++ ++ + +/- - - en mg/L 34 P4 (64 000 Da) ++++ ++++ +++ +++ ++ + +/- -- - en mg/L 202 P5 (169 000 Da) ++++ ++++ ++++ +++ ++ ++ + +/- - - en mg/L 263 ++++ = amas cellulaires et lyses cellulaires ++++ = amas cellulaires agglutinés et lyses cellulaires - = cellules vivantes identiques au témoin Ces tests sur cellules myélomateuses montrent que les PKDG sont actifs sur le myélome murin pour des concentrations égales ou supérieures à 34 mg/L selon la génération de PKDG étudiée. Les PKDG de forte masse molaire sont les moins actifs. EXEMPLE 17 Activité antifongique des PKDG Les tests antifongiques ont été réalisés sur un champignon filamenteux, Fusarium 10 oxysporum (Collection INRA Saint Christol-lés-Alès, France) selon la technique d'inhibition de croissance en milieu liquide décrite par Fehlbaum et al [38] l des spores de F. oxysporum (concentration finale de 104 spores.mL-') en suspension dans le milieu PDB (Potato Dextrose Broth, Difco) contenant 0, 1 mg de tétracycline, sont additionnés à 20 l des différentes dilutions des dendrimères dans des microplaques. Les dendrimères sont remplacés par 20 pi d'eau stérile pour les contrôles. L'inhibition de croissance est observée sous le microscope après 24 heures d'incubation à 30 C sous agitation et quantifiée après mesure de la densité optique à 48 heures. La concentration minimale de croissance (MIC) est évaluée par des dilutions en série (en doublets) des molécules et définie comme la plus faible concentration en dendrimère inhibant la croissance. Les résultats des tests antifongiques sont consignés dans le tableau cidessous. Tableau 9: Etude comparée de l'activité antifongiques des polylysines dendrimères de 25 l'invention Dendrimères P2 P3 P4 P5 Champignon: 22 1.25 0.54 0.36 Fusarium oxysporum 183 27 35 61 (Collection INRA St Christol lés Alès) en M en mg/L (valeurs des MIC en,uM et en mg/L) On peut globalement noter que la MIC est égale à 27 mg/L pour Fusarium oxysporum. EXEMPLE 18 Activité antibactérienne des PKDG La méthode utilisée pour les tests antibactériens est une modification de la technique de Hancock et al [39]. La mesure de l'activité antibactérienne est réalisée sur 3 souches de bactéries Gram-positif (Micrococcus lysodeikticus ATCC 4698, Bacillus megaterium ATCC 17748, Staphylococcus aureus ATCC 25293), et 4 souches de bactéries Gram négatif (Escherichia coli 363 ATCC 11775, Vibrio penaeicida, collection IFREMER, Vibrio anguillarum Listonella anguillarum ATCC 14181, Vibrio alginolyticus ATCC 17749) par des mesures de l'inhibition de croissance en milieu liquide. A. En phase homogène: Brièvement, 10.tl des molécules de synthèse (P2, P3, P4 et P5) sont incubés dans des microplaques avec 100 l de chaque suspension bactérienne à la concentration de départ D600 = 0,001, dans du milieu PB (Poor Broth: bactotryptone 1%, NaCl 0.5% w/v, pH 7.5). La croissance bactérienne est mesurée à 600 nm après une incubation de 24 Heures à 30 C sous agitation. La concentration minimale de croissance (MIC) est évaluée par des dilutions en série (en doublets) des molécules et définie comme la plus faible concentration en dendrimère inhibant la croissance des bactéries. Les résultats des tests antibactériens consignés dans le tableau cidessous mettent en évidence que le spectre d'activité des dendrimères P2 à P5 est large, en effet ces molécules sont actives aussi bien sur les bactéries Gram + que Gram . Tableau 10: Etude comparée de l'activité antibactérienne des PKDG Dendrimères P2 P3 P4 P5 Microorganismes Gram+ M. lysodeikticus ATCC 4698 en M 1,56 0,78 1,56 0,39 en mg/L 13 17 100 66 B. megaterium ATCC 17749 en M 0,39 1,56 1,56 0,78 en mg/L 3 --------- 34 100 - --------------Staphylococcus aureus ATCC 25293 en M >12,5 3,125 0,78 0,39 en mg/L 104 67 50 66 Gram- E. coli 363 ATCC 11775 en M 2,8 1,56 - -------------------------- 22,2 en mg/L 23 33,5 33,3 3751 Vibrio penaeicida collection IFREMER en M >50 25 2131 1,56 en mg/L---- 417_ 537 -------------------------------------- 264 Vibrio anguillarum en M 22,2 2,8 B. En phase hétérogène: L'activité antibactérienne des dendrimères PKDG fixés de façon ionique ou covalente sur support a été testée. 1. Fixation ionique: La fixation a été réalisée comme décrite dans l'Exemple 13. Ensuite, les supports (1 g) sont lavés par 5 fois 20 ml d'eau stérile et séchés. Les produits obtenus sont mis en contact avec 2 ml de suspension bactérienne (Micrococcus lysodeikticus) pendant 24 heures. Après cette période d'incubation, 100 L de surnageant sontprélevés et déposés sur boîte LB agar et mis à incuber 24 heures à 37 C. Le nombre de colonies observées (ou non) rend compte de l'activité des supports utilisés. Les résultats sont présentés dans le tableau suivant. Tableau 11: Activité antibactérienne de PKDG fixés de manière ionique sur support: Observation Témoin Boite envahie Charbon + P3 Absence de colonies Ces résultats indiquent que les PKDG exercent également une action antimicrobienne lorsque fixés sur un support de manière ionique. Les fixations ioniques n'étant pas nécessairement permanentes, des fixations 10 covalentes ont également été testées. 2. Fixation covalente: La fixation a été réalisée comme décrite dans l'Exemple 14. Ensuite, 0,5 g de chacun des matériaux est mis en contact avec 2 ml de suspension bactérienne (Micrococcus lysodeikticus), contenant 2.106 bactéries, pendant 24 heures. Après cette période d'incubation, 25 gL de surnageant sont prélevés et déposés sur 75 L de milieu LB ce mélange est étalé sur boîte LB agar et mis à incuber à 37 C. La lecture après 96 heures d'incubation fait apparaître les résultats consignés dans le tableau ci-dessous. Tableau 12: Activité antibactérienne de PKDG fixés de manière covalente sur support Matériaux Nombre de colonies à J+3 résine (témoin) boite envahie résine + 2% P 1 300 résine + 2% P2 0 résine + 2% P3 35 résine + 1 % P3 65 résine + 0,5% P3 > 300 Les résultats montrent que les PKDG covalentiellement fixés sur support conservent une excellente activité antibactérienne à des concentrations supérieures ou égales à 1 %. Des études complémentaires doivent être réalisées avec des broyages plus fins et avec de nouvelles résines. EXEMPLE 19 Activités des PKDG sur Pseudomonas aeruginosa A. En phase homogène: Des suspensions de Pseudomonas aéruginosa à 10 000 bactéries/ml ont été mises en contact avec des solutions de P2 et P3 à 1, 10, et 100 mg/L. A 6, 24 et 96 heures des contrôles ont été effectués par mise en culture sur cétrimide. Les résultats présentés dans le tableau suivant montrent la totale inhibition des 15 Pseudomonas par des solutions de P3 à 100 mg/L Tableau 13: Effet des PKDG en phase homogène sur une suspension à 10 000 P. aeruginosa/ml Temps témoin P2 P2 P2 P3 P3 P3 PBS + à lmg/L à 10mg/L à 100mg/L à lmg/L à 10mg/L à 100 suspension mg/L T=0 >300 / / / / / / T=6h >300 0 0 0 0 0 0 T= 24h boîte boîte 1 1 108 0 0 envahie envahie T= 96h boîte boîte 300 150 boîte 250 0 envahie envahie envahie filtration de 100,ul sur membrane + mise en culture sur cétrimide) B. En phase supportée: Les Pseudomonas aeruginosa ont été exposés à des résines d'hexaméthylène- diisocyanate (comme synthétisées précédemment) contenant 10 % en poids de P3 (P3S) pendant des temps variables. A 6, 24 et 96 heures des contrôles ont été effectués par mise en culture sur cétrimide. Les résultats présentés dans le tableau suivant montrent la totale inhibition des Pseudomonas par de tels supports sur des suspensions de 1000 Pseudomonas/ml. Tableau 14: Effet des PKDG en phase supportée sur des suspensions de P. aeruginosa: Suspension à 10 000 Pseudomonas/ml Suspension à 1 000 Pseudomonas/ml filtration de 100,ul sur membrane + (filtration de 100,ul sur membrane + mise en culture sur cétrimide) mise en culture sur cétrimide) Temps Témoin PBS + P3S à 10g/L Témoin PBS + P3S à 10g/L suspension suspension T=0 53 / 3 / T = 6h 83 1 9 0 T= 24h boîte envahie 0 8 0 T= 96h boîte envahie boîte envahie boîte envahie 0 EXEMPLE 20 Activités des PKDG sur Legionella pneumophila 10 A. En phase homogène: Des suspensions de Legionella pneumophila 10 000/ml ont été mises en contact avec des solutions de P2 et P3 à 10, et 100 mg/L. A 24, 96 et 168 heures des contrôles ont été 15 effectués par mise en culture sur GVPC. Les résultats présentés dans le tableau suivant et dans la Figure 8 montrent que Legionella pneumophila est plus sensible à P2 qu'à P3. Tableau 15: Effet des PKDG en phase homogène sur une suspension de Legionella pneumophila Suspension à 10 000 légionelle/ml (étalement de 100 l sur GVPC) Temps Témoin PBS + P2 à 10mg/L P2 à 100mg/L P3 à 10mg/L P3 à 100mg/L susp JO 210 210 210 210 210 J+1 180 19 27 45 28 J+4 78 3 8 11 14 J+7 45 4 6 3 3 Effet inhibiteur relatif observé par rapport au témoin Temps Témoin PBS + P2 à 10mg/L P2 à 100mg/L P3 à 10mg/L P3 à 100mg/L susp JO 100 100 100 100 100 J+1 100 10,6 15,0 25,0 15,6 J+4 100 3, 8 10,3 14,1 17,9 J+7 100 8,9 13,3 6,7 6,7 Un contrôle PCR a été effectué. Brièvement, après 96h de contact avec les dendrimères P2 et P3 à 10 et 100 mg/L, 5 ml de suspension bactérienne sont filtrés sur une membrane en polycarbonate de 0,45 m pour extraction des cellules présentes (les résidus cellulaires sont ainsi éliminés). Les cellules sont récupérées sur le filtre, leur ADN est extrait par chocs thermiques et chimiques. 1 ml est purifié par ultrafiltration, et quantifié par amplification PCR. Les résultats sont présentés dans le tableau suivant: Tableau 16: quantification de l'ADN des suspensions de L. pneumophila en présence de P2 ou P3 Suspension extraite, purifiée + PCR Résultat relatif Résultats pour 10 ml de suspension Témoin 10000/ml 2,94.105 100 P2 (10mg/ml) 2,08. 04 7 P2 (100mg/ml) 2,68.104 9 P3 (10mg/ml) 7,94.104 27 P3 (100mg/ml) 6,46. 104 22 Ainsi, l'analyse par PCR montre: - que la présence de P2 ou de P3 permet en 96 heures d'éliminer du milieu de culture, respectivement plus de 90 %, ou entre 70 et 80 % de bactéries par rapport au témoin. L'activité de P2 est supérieure à celle de P3 sur Legionella pneumophila. - que P2 ou P3 provoque aux concentrations létales une dégradation bactérienne par perforation des parois cellulaires et libération de leur ADN. B. En phase supportée: Des résines d'hexaméthylène-diisocyanate contenant 2 % en poids de Pl (Pl S) et 20 % en poids de P3 (P3S) sont obtenues comme précédemment. Test n 1: Tube 1: Le témoin est constitué de 9 ml de PBS + 1 ml PBS contenant 10 000 Legionella pneumophila. Tube 2: 9m1 de PBS + 1 ml PBS contenant 10 000 Legionella pneumophila + 0. lg de P3S Les résultats sont présentés dans le tableau suivant: Tableau 17: quantification de l'ADN de suspensions de L. pneumophila mises en 20 présence de P3S Suspension extraite, purifiée + PCR résultats dans 10 ml Résultat de susp. relatif Tube 1 0000/ml 7,36. 104 100 Tube 2 P3S 7,36. 103 10 Test n 2: Tube 1: Le témoin est constitué de 9 ml de PBS + 1 ml PBS contenant 10 000 Legionella pneumophila. Tube 2: Temoin résine: 9m1 de PBS + 1 ml PBS contenant 10 000 Legionella pneumophila + 0.1g de P1S Tube 3: 9ml de PBS + 1 ml PBS contenant 10 000 Legionella pneumophila + 0.lg de P3S Tableau 18: quantification de l'ADN de suspensions de L. pneumophila mises en présence de P3S Suspension extraite, purifiée + PCR résultats dans 10 ml Résultat de susp. relatif Tube 1 Témoin 1 06.106 100 10000/ml ' Tube 2 T TRO1n;3,26.105 31 Tube 3 P3S 3,59.104 3 Un contrôle PCR a été réalisé comme suit. Après 96h de contact on laisse décanter les résines au fond des tubes, 5 ml de suspension sont filtrés sur une membrane en polycarbonate de 0.45 m pour extraction des cellules. Celles-ci sont lavées, lysées par chocs thermiques et chimiques. Les ADN sont purifiés, amplifiés par PCR, et comptés. Ces résultats confirment: - l'action du dendrimère P3 greffé sur polyisocyanate - un effet non négligeable du témoin (PiS) même s'il semble inférieur à celui de P3S. EXEMPLE 21 Activité anti-fouling des PKDG La concentration minimale inhibitrice des PKDG, P2, P3, P4, et P5 vis-à-vis de bactéries impliquées dans le phénomène de fouling a également été mesurée. Les résultats sont présentés dans le Tableau 19 suivant. Tableau 19: Etude comparée de l'activité antibactérienne des PKDG sur deux bactéries GRAM+ impliquées dans le fouling Dendrimères P2 P3 P4 P5 Microorganismes Microbacterium maritypicus en M 10 4,2 - --------------------------- 1,2 en m g/L ---- 84 90 1,9 203 Brevibacterium stationis en M 10 2,8 122 1,2 en mg/L 84 60 2,8 203 valeurs des MIC en,uM et en mg/L) Les résultats obtenus indiquent que les dendrimères de l'invention sont susceptibles d'être utilisés pour lutter contre le fouling, notamment en empêchant la formation du film bactérien qui est à l'origine de ce phénomène. REFERENCES [1]. Denkewalter Robert G., Kolc Jaroslav, and Lukasavage William J. Macromolecular Highly Branched Homogeneous Compound Based On Lysine Units. 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Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle les a-aminoacides activés sont choisis parmi des a-aminoacides N-carboxyanhydrides (NCA), des a-aminoacides-N,N'-10 carbonyldiimidazole, des a-aminoacides-sulfure de carbonyle, des a-aminoacides-anhydride carbonique, et des amino thioacides-agents oxydants. 3. Utilisation selon la revendication 2, d'a-aminoacides Ncarboxyanhydrides (NCA) de formule (1) suivante: R HN/yO O O dans laquelle R représente une chaîne latérale d'un a-aminoacide naturel ou modifié. 4. Utilisation selon la revendication 2 ou 3, de monomères de L-lysineNCA pour la préparation de polylysine en solvant aqueux. 5. Procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé, à partir d'un amorceur comprenant au moins un groupement amine primaire ou secondaire, comprenant une étape d'addition d'un monomère de L-lysine-NCA, et éventuellement d'un ou plusieurs autres monomères d'aaminoacides-NCA, notamment choisis parmi la liste comprenant la Lornithine-NCA, l'acide L-glutamique-NCA et sa y-amide, l'acide Laspartique-NCA et sa p-amide, l'acide L-diamino-2,4,-butyrique-NCA et sa j3-amide, la L-tyrosine-NCA, la L-phenylalanine-NCA, la L-valine-NCA, la L-leucine-NCA, la L-isoleucine-NCA, la L-alanine-NCA, et la glycine-NCA, audit amorceur dans un solvant aqueux. 6. Procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé selon la revendication 5, dans lequel le monomère est uniquement de la L-lysine-NCA. 7. Procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé selon la 5 revendication 5 ou 6, dans lequel la L-lysine-NCA est protégée en NE, notamment par un groupement choisi parmi: -COH (Formyl), - COCF3 (TFA), -OCOC(CH3)3 (Boc), -COOCHe (Z) ,-COOCH2 (Fmoc) , ou -C(t)3 (Trityl). 8. Procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé selon la revendication 6 ou 7, dans lequel l'amorceur est choisi parmi la L-lysine, la L-ornithine, une homopolylysine, un poly(éthylène glycol) ,w diamine, une hétéropolylysine, un hétéropeptide, ou un homopeptide. 9. Procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé selon l'une des revendications 6 à 8, dans lequel le pH du solvant est de 3 à 9. 10. Procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé selon l'une des 20 revendications 6 à 9, ladite polylysine dendrimère étant de génération 1, comprenant les étapes suivantes: l'addition de la L-lysine-NCA protégée en N à un amorceur dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir de la polylysine dendrimère protégée de génération 1 sous forme d'un précipité, - la déprotection de la polylysine dendrimère protégée de génération 1 obtenue à l'étape précédente, pour obtenir de la polylysine dendrimère de génération 1. 11. Procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé selon la revendication 10, ladite polylysine dendrimère étant de génération 1, dans lequel l'amorceur est de la L-30 lysine protégée en NE ou non protégée. 12. Procédé de préparation d'une hétéropolylysine dendrimère greffé selon l'une des revendications 6 à 10, ladite polylysine dendrimère étant de génération 1, dans lequel l'amorceur est un poly(éthylène glycol) a, w diamine, dont la masse moléculaire est notamment d'environ 1000 Da à environ 10 000 Da. 13. Procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé selon l'une des revendications 10 ou 11, ladite polylysine dendrimère étant de génération 1, comportant: - une étape d'addition de L-lysine-NCA protégée en NE par un groupement TFA, à une solution aqueuse de pH d'environ 6 à environ 8, sans ajout d'amorceur ou avec un amorceur L-lysine protégée en NE par un groupement TFA, pour obtenir un précipité de polylysine dendrimère protégée de génération 1, et - une étape de déprotection du polymère de polylysine obtenu à l'étape précédente pour obtenir une polylysine dendrimère de génération 1, linéaire, de masse moléculaire moyenne approximative 1400 Da, présentant une polydispersité d'environ 1, 2 et correspondant à un degré de polymérisation moyen de 8 unités de lysine. 14. Procédé de préparation d'une homo ou hétéropolylysine dendrimère greffé, selon l'une des revendications 6 à 9, dans lequel la polylysine dendrimère greffé est de génération n, n étant un nombre entier de 2 à 10, comportant une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération n-1, dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir de la polylysine dendrimère greffé protégée de génération n sous forme d'un précipité, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération n-1 étant elle-même obtenue à partir de l'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération n-2, dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère greffé protégée de génération n-1, et la déprotection de ladite polylysine, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération n- 2 étant elle-même obtenue comme indiqué à propos de la polylysine dendrimère greffé de génération n-1, o et lorsque n = 2, la polylysine dendrimère de génération 1 est telle que définie dans l'une des revendications 10 à 13, ladite polylysine dendrimère de génération 1 formant le coeur de la polylysine dendrimère de génération n, - une étape de déprotection de la polylysine dendrimère greffé protégée de génération n pour obtenir la polylysine dendrimère greffé de génération n. 15. Procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé selon la revendication 14, ladite polylysine dendrimère greffé étant de génération n, dans lequel la L-lysine-NCA est protégée en NE par du TFA, le coeur de ladite homopolylysine dendrimère greffé de génération n étant formé d'une polylysine linéaire comprenant environ 8 résidus de L-lysine, telle que pouvant être obtenue par la mise en oeuvre du procédé de la revendication 13, et le degré de ramification de ladite homopolylysine dendrimère greffé de génération n étant d'environ 40% à environ 100%. 16. Procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé selon la revendication 14 ou 15, ladite polylysine dendrimère greffé étant de génération 2, comportant: une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère de génération 1, o ladite polylysine dendrimère de génération 1 étant telle que celle obtenue par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 13, o le rapport massique (L-lysine-NCA protégée en Ne par du TFA) / (polylysine dendrimère de génération 1) étant d'environ 2,6 à environ 3,9, notamment environ 3, ladite étape d'addition ayant lieu dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère protégée de génération 2, une étape de déprotection de la polylysine obtenue à l'étape précédente, pour obtenir une polylysine dendrimère de génération 2 ayant un poids moléculaire moyen d'environ 6 000 à environ 14 000 Da, notamment d'environ 8350 Da, une polydispersité d'environ 1,4, et d'environ 40 à environ 60, notamment environ 48, groupements NH2 externes libres. 17. Procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé selon la revendication 14 ou 15, ladite polylysine dendrimère greffé étant de génération 3, comportant: une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en Ne par du TFA à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération 2, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération 2 étant telle que celle obtenue par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 16, o le rapport massique (L-lysine-NCA protégée en N par du TFA) / (polylysine dendrimère greffé de génération 2) étant d'environ 2,6 à environ 3,9, notamment à environ 3, ladite étape d'addition ayant lieu dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir 5 une polylysine dendrimère greffé protégée de génération 3, une étape de déprotection de la polylysine obtenue à l'étape précédente pour obtenir une polylysine dendrimère de génération 3 ayant un poids moléculaire moyen d'environ 15 000 à environ 30 000 Da, notamment d'environ 21 500 Da, une polydispersité d'environ 1,4, et d'environ 100 à environ 150, notamment environ 123, groupements NH2 externes libres. 18. Procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé selon la revendication 14 ou 15, ladite polylysine dendrimère greffé étant de génération 4, comportant: une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA à un amorceur 15 constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération 3, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération 3 étant telle que celle obtenue par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 17, o le rapport (L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA) / (polylysine dendrimère greffé de génération 3) étant d'environ 2,6 à environ 3,9, notamment environ 3, ladite étape d'addition ayant lieu dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère greffé protégée de génération 4, une étape de déprotection de la polylysine obtenue à l'étape précédente pour obtenir une polylysine dendrimère greffé de génération 4 ayant un poids moléculaire moyen d'environ 50 000 à environ 80 000 Da, notamment d'environ 64 000 Da, une polydispersité d'environ 1,4, et d'environ 300 à environ 450, notamment environ 365, groupements NH2 externes libres. 19. Procédé de préparation d'une homopolylysine dendrimère greffé selon la revendication 14 ou 15, ladite polylysine dendrimère greffé étant de génération 5, comportant: - une étape d'addition de la L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA à un amorceur constitué d'une polylysine dendrimère greffé de génération 4, o ladite polylysine dendrimère greffé de génération 4 étant telle que celle obtenue par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 18, o le rapport (L-lysine-NCA protégée en NE par du TFA) / (polylysine dendrimère greffé de génération 4) étant d'environ 2,6 à environ 3,9, notamment environ 3, ladite étape d'addition ayant lieu dans un solvant aqueux, à un pH approprié, pour obtenir une polylysine dendrimère greffé protégée de génération 5, une étape de déprotection de la polylysine obtenue à l'étape précédente pour obtenir une polylysine dendrimère greffé de génération 5 ayant un poids moléculaire moyen d'environ 140 000 à environ 200 000 Da, notamment d'environ 169 000 Da, une polydispersité d'environ 1,5, et d'environ 900 à environ 1100, notamment environ 963, groupements NH2 externes libres. 20. Polylysine dendrimère greffé telle que pouvant être obtenue par la mise en oeuvre d'un procédé selon l'une des revendications 6 à 19, notamment 14 à 19. 21. Polylysine dendrimère greffé selon la revendication 20, caractérisée en ce que les groupements NH2 externes sont liés de manière covalente ou non-covalente, à des groupes choisis parmi la liste comprenant des oses, des acides nucléiques, des protéines, ou des groupements portant des fonctions carboxyliques, sulfoniques, phosphoriques, des polyoxydes d'éthylène, et des chaînes hydrocarbonées ou perfluorohydrocarbonées. 22. Polylysine dendrimère greffé selon la revendication 20 ou 21, caractérisée en ce qu'elle est fixée sur un support de manière covalente ou non-covalente, notamment par liaisons électrostatiques. 23. Utilisation d'une polylysine dendrimère greffé selon la revendication 20 ou 21, pour la préparation de complexes antigène polylysine dendrimère greffé ou de complexes haptène polylysine dendrimère greffé, destinés à la prudction d'anticorps dirigés contre ledit antigène ou ledit haptène. 24. Composition de polylysines dendrimères greffés telle que pouvant être obtenue par la 30 mise en oeuvre d'un procédé selon l'une des revendications 6 à 19. 25. Polylysine dendrimère greffé selon l'une des revendications 20 à 22, en tant qu'antibactérien ou antifongique, sous réserve qu'elle ne soit pas utilisée pour le traitement thérapeutique du corps humain ou animal. 26. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de substance active au moins une polylysine dendrimère greffé selon l'une des revendications 20 à 22, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 27. Utilisation d'une polylysine dendrimère greffé selon l'une des revendications 20 à 22, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des infections bactériennes ou fongiques, ou des cancers. 28. Utilisation selon la revendication 27, dans laquelle les infections bactériennes sont choisies parmi les infections à bactéries GRAM- et GRAM+ appartenant notamment aux familles choisies dans la liste comprenant les Pseudomonadaceae, en particulier du genre Pseudomonas, les Legionellaceae, en particulier du genre Legionella, les Enterobacteriaceae, en particulier des genres Escherichia, Salmonella, Shigella, et Yersinia, les Vibrionaceae, les Pasteurellaceae, les Alcaligenaceae, en particulier du genre Bordetella, les Brucellaceae, en particulier du genre Brucella, les Francisellaceae, en particulier du genre Francisella, les Neisseriaceae, les Micrococcaceae, en particulier des genre Staphylococcus, Streptoccus, et Listeria.