Brevet FR2877576A1 — publié le 20060512

La présente invention a pour objet une composition pharmaceutique utilisée pour stimuler la prolifération et l'activation des mastocytes. Elle concerne plus particulièrement les compositions pharmaceutiques utilisées pour amplifier la réponse immunitaire suite à l'introduction d'agents infectieux dans le corps humain ou animal. Elle concerne également les compositions utilisées dans ou pour la réalisation de tests destinés à déceler des allergies. Le système immunitaire permet d'éliminer et de neutraliser les substances étrangères qui peuvent s'introduire dans l'organisme et en particulier les agents infectieux comme les bactéries, les parasites, les virus ou les champignons. Les cellules spécifiques intervenant dans la réponse immunitaire sont notamment les lymphocytes, les cellules phagocytaires, :L5 les basophiles, les plaquettes et les mastocytes. Les mastocytes sont des cellules caractéristiques des tissus conjonctifs et représentent environ 5% des cellules de la peau. On les retrouve plus particulièrement au niveau des tissus de la face et du cuir chevelu, à proximité des vaisseaux sanguins et des nerfs. Les mastocytes exercent notamment leurs fonctions par l'intermédiaire de médiateurs (histamine, héparine, protéines angiogéniques) présents dans leurs granules. Les mastocytes jouent un rôle dans la réponse immunitaire, dans la lutte contre les infections parasitaires et bactériennes et dans la stimulation de l'angiogénèse (Metcalfe DD et al. Mast ce/1s. Physiol Rev 1997, 77:1033-70). Les mastocytes ont la capacité de produire des cytokines proinflammatoires et immunorégulatrices (Okayama Y et al. Cytokine :30 production by human mast cens. Human basophils and mast cens: biological aspects. Marone ed. Chem Immunol Base/ Karger 1995; 61: 114-34) une propriété qui les rapproche des lymphocytes T auxiliaires de type TH2. Il a été ainsi suggéré que les mastocytes jouent un rôle dans l'orientation de la réponse immune (Ouvrage Collectif. Mastocytes, basophiles et biologie clinique. Biotem Edition. 1996). Il a également été démontré que les mastocytes jouent un rôle fondamental dans la reconstruction tissulaire et la formation de tissus fibreux (fibrose) (Garbuzenko E et al. Human mast cells stimulate fibroblast proliferation, collagen synthesis and lattice contraction: a direct role for mast cells in skin fibrosis. Clin Exp AII 32:237-246, 2002. LeviShaffer F. hast cell/fibroblast interactions in health and disease. Chem Immunol 61:161-185, 1995). Il a été ainsi mis en évidence que l'activation des mastocytes augmente la prolifération des fibroblastes et la synthèse du collagène. En effet, certains médiateurs libérés par les mastocytes sont à la base du facteur de croissance des fibroblastes ( Artuc M et al. Mast ce/1-fibroblast interactions: human mast cells as source and inducers of fibroblast and epithelial growth factors. J Inv Dermatol 118:391-395, :15 2002). Les mastocytes agissent également dans la croissance des cheveux: on les retrouve en plus grand nombre dans la phase anagène du cycle pileux (Li et al. Flair shaft elongation, fol/ide growth, and spontaneous regression in long-term, gelatin sponge-supported histoculture of human scalp skin. Proc Natl Acad Sci 1992 Sep 15; 89(18):8764-8). Une carence et/ou une désactivation des mastocytes peut donc avoir une interaction néfaste sur un vaste champ de processus biologiques comme la fonction immunitaire, la vascularisation, la formation du tissu fibreux, la régénération tissulaire ou la cicatrisation. Une composition augmentant et/ou stimulant les mastocytes est donc tout à fait utile dans le milieu cosmétique et médical. Le mastocyte est la principale cellule impliquée dans l'initiation et l'amplification de la réaction inflammatoire dans le cas des allergies. Le phénomène allergique est dû à une surproduction d'immunoglobulines E (IgE) qui se fixent en abondance sur les mastocytes des tissus pour provoquer leur dégranulation en réponse à la fixation des antigènes spécifiques sur les anticorps. Cette dégranulation entraîne la libération de substances inflammatoires diverses et notamment de l'histamine. Pour déterminer les allergènes en cause on peut pratiquer des tests cutanés, des tests de provocation, des dosages d'IgE. Le test cutané consiste à appliquer sur la peau de petites quantités de produits suspectés d'être allergènes. Une réaction locale donne une réponse fiable et rapide 'quant aux substances responsables. Une augmentation des mastocytes sur la zone où sont effectués ces tests est donc tout à fait utile pour amplifier localement la réaction :10 allergique afin de mieux identifier les substances allergènes. La plupart des facteurs stimulant l'activation et la prolifération des mastocytes sont de grosses protéines ne pouvant être obtenues que par des voies de synthèses complexes et coûteuses. :15 La demanderesse a mis en évidence qu'une composition comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate, stimule de façon surprenante la prolifération et l'activation des mastocytes. Le profil toxicologique de ces différents composés n'est pas de nature à induire un risque sur la santé humaine et la formulation ne présente pas d'innovation de nature à provoquer des réactions nocives pour l'être humain. De plus, il n'est pas connu à ce jour d'interaction néfaste entre ces composés. Selon l'invention, cette composition est utilisée dans la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à amplifier la réponse immunitaire et plus particulièrement pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter les infections bactériennes, les infections parasitaires, les infections virales ou les infections fongiques. Selon une autre caractéristique de l'invention, cette composition est utilisée pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter les pathologies dans lesquelles une carence ou une inactivation des mastocytes est impliquée, autres que les cancers ou l'alopécie. Selon une autre caractéristique de l'invention, cette composition est utilisée dans ou pour la réalisation d'un test destiné à déceler les allergies. :10 Cette composition est particulièrement adaptée pour être utilisée en médecine humaine mais peut également l'être en médecine vétérinaire. Préférentiellement, les composés sont dosés dans des proportions voisines des valeurs suivantes: éthanol 20% ; acétate d'éthyle 1% eucalyptol 1% ; dipropylène glycole 20% ; linalol 13% ; acétate de linalol 2% ; anydride itaconique ou méthyle succinique 1% ; terpinène-4-ol 5% a-terpinéol 5 % ; camphre 1% ; acétate de bornyle 4 % ; formiate de géranyle 2% ; géraniol ou acétate de géranyle 5% ; coumarine 1% diethyle phtalate 20%. La quantité utilisable dépend de l'effet recherché et la composition peut être utilisée pure ou diluée avec de l'eau distillée ou tout autre dissolvant équivalent, par exemple entre 0.3 et 1%, avantageusement à 0. 5%. La plupart des composés à la base de la composition peuvent être extraits par distillation de produits naturels, par exemple: éthanol (raisin fermenté), euca/ypto/ (eucalyptus radiata), linalol (occimum basilicum), acétate de linalol (citrus aurantium), terpinène-4-ol (malaleuca alternifolia), a-terpinéol (citrus aurantifolia), camphre (rosmarinus officinalis), acétate de bornyle (cistus ladaniferus), formiate de géranyle (pelargonium graveolens), géraniol (citrus lemonum), acétate de géranyle (cymbopogon nardus), coumarine (fève Tonka). Les autres composés peuvent être obtenus par des procédés de fabrication simples et peu onéreux, par exemple, acétate d'éthyle (WO 01/46117A1), dipropylène glycole (US 3574772), anhydride itaconique (GB 854999), anhydride méthyle succinique (FR 2735775), diethyle phtalate (US 2618651). Selon une caractéristique de l'invention, ces composés sont avantageusement extraits par distillation d'un mélange de sel iodé, de jus de citron, d'oignon frais, d'acide citrique et d'alcool, dosés dans les proportions voisines de: 10 % de sel iodé, 15 % de jus de citron, 50 % d'oignon frais, 5 % d'acide citrique, 20 % d'alcool. :L0 Ces différentes caractéristiques permettent d'obtenir une composition ne contenant que des composés naturels de très faible coût, facile à préparer et simple à utiliser. Les composés de l'invention peuvent être utilisés seuls ou associés de manière classique à des véhicules, supports ou excipients traditionnellement utilisés dans le milieu médical et pharmaceutiquement acceptables: conservateurs, antioxydants, solvants, stabilisants.... Les voies d'administration de la composition s'effectuent sous une forme médicamenteuse appropriée, établie en fonction de la pathologie à traiter, par exemple par voie buccale, par voie locale en application topique sur la peau et les muqueuses ou par injection par voie intraveineuse, intramusculaire, intrapérithonéale ou sous-cutanée. Ces compositions peuvent se présenter sous toutes les formes pharmaceutiques habituellement utilisées en médecine humaine ou vétérinaire: comprimés, gélules, gouttes, granulés, préparations injectables, sérums, pommades, crèmes, lotions, gels ou patchs. Pour ce qui concerne les concentrations d'administration, il faudra adapter la concentration à la pathologie visée et éventuellement au patient. Les concentrations peuvent se situer entre 0.3 et 1 % et de préférence situées à environ 0.5 %. La composition peut également être utilisée pure. La posologie sera adaptée en fonction de la concentration du mélange de base, de la pathologie à traiter et du profil du patient. Par exemple, pour traiter des infections parasitaires (ex: la leishmaniose) la composition de la demanderesse peut être utilisée pure et préparée de telle façon à en administrer quotidiennement de 0.01 à 1000 mg par application topique sur la zone à traiter. Les différents composés utilisés dans l'invention peuvent éventuellement être employés avec d'autres agents stimulant la prolifération et/ou l'activation des mastocytes, ou des agents bloquant la dégranulation de certains médiateurs (notamment l'histamine) responsables des réactions inflammatoires ou d'autres réactions nocives pour l'organisme. En outre, la composition pourra être utilisée en combinaison avec d'autres principes actifs lorsque la stimulation de la prolifération et/ou l'activation des mastocytes ne constitueront qu'un traitement thérapeutique d'appoint à un traitement principal où une prolifération et/ou l'activation des mastocytes est bénéfique. Pour son utilisation dans ou pour la réalisation d'un test destiné à déceler les allergies, la composition peut être employée pure ou diluée. Elle peut se présenter sous forme de lotion, de crème, de patch ou de toute autre forme équivalente, que l'on applique préalablement sur la zone du corps (par exemple sur la main ou le bras) où sera effectué un test cutané d'allergie. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention ressortiront mieux à la lecture de l'exemple suivant, fait à titre indicatif et non limitatif et des dessins annexés sur lesquels: - La figure 1 est un graphique montrant la densité de mastocytes comptés sur un groupe d'animaux traités (T) avec la composition de la demanderesse et sur un groupe contrôle (C). - La figure 2 est un graphique montrant la quantité de follicules pileux en phase anagène sur le groupe traité (T) et sur le groupe contrôle (C). - La figure 3 est un graphique montrant la quantité de follicules pileux en phase catagène sur le groupe traité (T) et sur le groupe contrôle (C). EXEMPLE: Evaluation de l'effet de la composition selon l'invention sur la prolifération et l'activation des mastocytes dans un modèle in vivo réalisé sur des souris. Les études ont été réalisées sur des jeunes souris mâles BAL/C âgées de 7 semaines. 30 de ces animaux ont été épilés avec un rasoir dans la région dorsale le matin et partagés ensuite en deux groupes: un groupe contrôle (C) sans traitement et un groupe traité (T) avec la composition de la demanderesse utilisée pure, deux fois par jour, sur la région épilée. Le mélange de base de la composition objet de l'invention est dosé dans des proportions voisines des valeurs suivantes: base % masse éthanol 20 acétate d'éthyle 1 eucalyptol 1 dipropylène glycole 20 linalol 13 acétate de linalol 2 anydride itaconique ou méthyle 1 succinique 5 terpinène-4-ol a-terpinéol 5 camphre 1 acétate de bornyle 4 formiate de géranyle 2 géraniol ou acétate de géranyle 5 coumarine 1 diethyle phtalate 20 25 30 Après 2, 7, 14 et 21 jours de traitement, les animaux ont été sacrifiés et des échantillons de peau retirés et fixés dans du formol pour réaliser des coupes histologiques destinées à être testées par une solution aqueuse 0.5% de bleu de toluidine (Merck ). L'analyse des mastocytes est réalisée en utilisant un Système d'Analyse d'Images (Kontrom300 ) sur une surface du derme et la densité de mastocytes est exprimée par le nombre de cellules par mm2 de tissu. Parallèlement à cette analyse, une étude histologique d'une section des tissus a permis de compter les follicules pileux en phase anagène de croissance et en phase catagène d'involution. Analyse statistique: les différences entre chaque groupe sont estimées par le test T de Student et la corrélation entre le comptage et les jours de traitement est évaluée par une simple analyse régressive. Les données sont évaluées avec le Sigma Stat Softwear (Jandel Sientific ). P Les résultats des analyses relatives aux mastocytes sont présentés dans le tableau suivant: Nombre de jours 2 7 14 21 Nombre de Groupe 49.3 46. 8 48.7 46.2 mastocytes contrôle (C) par mm2 Groupe 75.3 77.7 49.6 48.1 traité (T) La comparaison de la densité de mastocytes entre les deux groupes d'animaux, en utilisant le test de Student, est représentée figure 1 (p Les résultats du comptage des follicules pileux en phase anagène et en phase catagène, en utilisant le test de Student, sont représentés respectivement figures 2 et 3 (p On observe sur le groupe traité (T) une augmentation de la densité de mastocytes des jours 2 à 7 puis une diminution de la densité des jours 14 à 21. Sur le groupe contrôle (C), on n'observe aucune variation de densité aux différents points de mesure. En comparant la densité de mastocytes entre les deux groupes étudiés (figure 1), on constate une densité plus importante de mastocytes chez le groupe traité (T). Ces résultats montrent que la composition de la demanderesse stimule de façon significative la prolifération des mastocytes dans la peau. On observe parallèlement une quantité plus importante de follicules pileux en phase anagène dans le groupe traité (T) que dans le groupe contrôle (C) (figure 2) et inversement une quantité moins importante de follicules pileux en phase catagène dans le groupe traité (T) que dans le groupe contrôle (C) (figure 3). Or, la phase anagène du cycle pileux est caractérisée par une activation des mastocytes (Maurer M et al. Actived skin mast cens are involved in murine hair follicle regression. Lab Invest. 1997 Oct. 77(4):319). Ces résultats montrent que la composition de la demanderesse active de façon significative les mastocytes dans la peau. - 10 - REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une composition comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter les infections bactériennes. 2. Utilisation d'une composition comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter les infections parasitaires. 3. Utilisation d'une composition comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter les infections virales. 4. Utilisation d'une composition comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la - 11 - coumarine, du diethyle phtalate, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter les infections fongiques. 5. Utilisation d'une composition comprenant de l'éthanol, de l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate, pour la fabrication d'une composition :10 pharmaceutique destinée prévenir ou traiter les pathologies dans lesquelles une carence ou une inactivation des mastocytes est impliquée, autres que les cancers ou l'alopécie. 6. Utilisation d'une composition comprenant de l'éthanol, de :15 l'acétate d'éthyle, de l'eucalyptol, du dipropylène glycole, du linalol, de l'acétate de linalol, de l'anydride itaconique ou méthyle succinique, du terpinène-4-ol, du a-terpinéol, du camphre, de l'acétate de bornyle, du formiate de géranyle, du géraniol ou de l'acétate de géranyle, de la coumarine, du diethyle phtalate, dans ou pour la réalisation d'un test destiné à déceler les allergies. 7. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée par le fait que les différents composants sont extraits d'une composition comprenant du sel iodé, du jus de citron, de l'oignon frais, de l'acide citrique et de l'alcool. 8. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée par le fait que les composants sont dosés dans les proportions voisines de: 10 % de sel iodé, 15 % de jus de citron, 50 % d'oignon frais, 5 % d'acide citrique, 20 d'alcool. - 12 - 9. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée par le fait que la composition est diluée avec de l'eau entre 0.3 et 1 %. 10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée par le fait que la composition est diluée avec de l'eau à environ 0.5 %.