Brevet FR2875910A1 — publié le 20060331

La présente invention concerne un dispositif immunochromatographique à migration latérale pour la détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comportant un témoin positif indépendant de l'analyte à détecter. Des dispositifs immunochromatographiques à migration latérale sont par exemple décrits dans le brevet EP 0 284 232. Ces dispositifs mettent en oeuvre un moyen de diffusion capillaire sous la forme d'un support solide poreux au sein duquel l'échantillon et les réactifs migrent par diffusion capillaire. Ces dispositifs intègrent ainsi un support solide poreux (ou immunochromatographique) comportant une première zone portant sous forme lyophilisée ou déshydratée, un réactif de liaison spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur particulaire et une zone de détection sur laquelle est immobilisé un réactif de capture spécifique de l'analyte. Le réactif de liaison spécifique de l'analyte est immobile sous forme lyophilisée mais devient mobile dans le support solide à l'état humide. Ainsi, lorsque le support solide est mis en contact avec un échantillon liquide, ce dernier migre par diffusion capillaire dans ce support entraînant le réactif de liaison spécifique de l'analyte conjugué au marqueur particulaire. L'échantillon et le réactif de liaison spécifique de l'analyte migrent par diffusion capillaire dans le support solide jusqu'à la zone de détection portant un réactif de capture spécifique de l'analyte immobilisé. Dans un test sandwich, le réactif de liaison marqué se lie à l'analyte alors que ce dernier est immobilisé sur le support solide par le réactif de capture. La présence ou l'absence de l'analyte dans l'échantillon est ainsi mesurée par la détection du réactif marqué. Dans ces dispositifs, le support solide peut, en outre, comporter une zone de contrôle qui permet de disposer d'un témoin positif. Un deuxième réactif de capture spécifique du réactif de liaison marqué est immobilisé sur le support solide poreux dans une zone de contrôle située en aval de la zone de détection par rapport à la direction de diffusion capillaire. Après avoir migré jusqu'à la zone de détection, le réactif de liaison spécifique de l'analyte migre jusqu'à la zone de contrôle. Dans cette zone de contrôle, le réactif de liaison spécifique de l'analyte marqué se lie au deuxième réactif de capture. La diffusion capillaire de l'échantillon liquide entraînant le réactif de liaison spécifique de l'analyte dans le support solide poreux est ainsi vérifiée par la détection du réactif de liaison spécifique de l'analyte dans la zone de contrôle. L'utilisateur dispose donc d'un témoin positif permettant de vérifier la migration de l'échantillon et des réactifs dans le dispositif et donc de vérifier le bon fonctionnement du test. Les brevets EP 0 291 194, EP 0 560 411 et EP 0 560 410 décrivent des dispositifs dans lesquels le support solide immunochromatographique est incorporé dans un boîtier pourvu d'une ouverture pour le dépôt de l'échantillon et d'une fenêtre d'observation pour la lecture des résultats. Le brevet EP 1 091 808 décrit des dispositifs améliorés comprenant également un support solide poreux intégré dans un boîtier dans lesquels un organe de captation mobile permet une meilleure collecte de l'échantillon. Ces dispositifs incorporent le même type de zone de contrôle que décrit ci-dessus. Tous ces dispositifs sont particulièrement adaptés à un usage domestique. En effet, ils sont d'un usage facile et rapide, ne nécessitant que très peu de manipulations puisque tous les réactifs sont intégrés dans le dispositif. Pour un utilisateur domestique il est particulièrement critique de disposer d'un témoin positif attestant du bon fonctionnement du dispositif. Ceci est particulièrement vrai lorsque la détermination de l'analyte dans l'échantillon est révélée par l'absence de liaison visible du réactif de liaison spécifique de l'analyte dans la zone de détection. Le seul résultat positif indiquant alors à l'utilisateur que le test a correctement fonctionné est la détection du réactif de liaison spécifique de l'analyte dans la zone de contrôle. Cependant, ces zones de contrôle conduisent souvent à des résultats peu reproductibles et ne permettent donc pas de disposer d'un véritable témoin positif attestant du bon fonctionnement du dispositif de détection dans toutes les situations. Un problème fréquemment rencontré est par exemple une grande variabilité de l'intensité du signal observé dans la zone de contrôle. D'un échantillon à un autre, l'utilisateur observera donc une liaison visible plus ou moins important du réactif de liaison spécifique de l'analyte dans la zone de contrôle. Dans certains cas, l'utilisateur pourra même observer une liaison visible du réactif de liaison marqué dans la zone de détection mais une liaison faible ou inexistante du réactif de liaison marqué dans la zone de contrôle. Ce problème est fréquemment rencontré lorsque l'analyte est fortement concentré dans l'échantillon. Lorsque la liaison du réactif spécifique de l'analyte dans la zone de contrôle est peu visible, l'interprétation du résultat du test est particulièrement difficile pour un utilisateur domestique. De plus, les tests de grossesse ou d'ovulation par exemple pourront être effectués de manière répétée par un même utilisateur en utilisant successivement différents dispositifs avec différents échantillons. Dans ce cas, la faible reproductibilité du résultat observé dans la zone de contrôle est une source de confusion pour l'utilisateur domestique. De plus, l'obtention d'un témoin positif revêt une grande importance parce que ces dispositifs immunochromatographiques sont à usage unique et il n'est donc pas possible de reproduire le test avec le même échantillon et le même dispositif. Pour remédier à ces inconvénients la présente invention propose des dispositifs dans lesquels le témoin positif est indépendant de l'analyte à détecter. Dans les dispositifs selon l'invention, le support solide poreux comprend un deuxième réactif de liaison marqué immobilisé à l'état sec mais capable de migrer par diffusion capillaire à l'état humide et la zone de contrôle comprend un réactif de capture spécifique de ce deuxième réactif de liaison marqué. L'échantillon liquide déposé sur le support solide poreux migre à travers la zone de détection jusqu'à la zone de contrôle entraînant le deuxième réactif de liaison marqué qui se lie alors au réactif de capture immobilisé dans cette zone de contrôle. La liaison visible du deuxième réactif marqué dans la zone de contrôle atteste de la migration de l'échantillon et des réactifs dans le support solide poreux constituant ainsi un témoin positif du bon fonctionnement du dispositif. Avantageusement, dans les dispositifs selon l'invention le résultat observé dans la zone de contrôle ne dépend pas de l'absence ou de la présence d'analyte dans l'échantillon. En effet, il s'avère que dans les dispositifs connus de l'état de la technique, seul le réactif de liaison spécifique de l'analyte qui n'est pas lié dans la zone de détection peut se lier dans la zone de contrôle. Ainsi, seul le réactif de liaison spécifique de l'analyte présent en excès migre jusqu'à la zone de contrôle. Dans le cas d'un échantillon très fortement concentré en analyte, la majorité du réactif de liaison spécifique de l'analyte se lie à l'analyte et à la zone de détection conduisant seulement à une faible liaison dans la zone de contrôle. Un autre avantage des dispositifs de la présente invention est que le résultat observé dans la zone de contrôle est reproductible et ne varie pas en fonction de l'échantillon ou de l'analyte recherché. Les dispositifs immunochromatographiques permettent la détection d'une grande variété d'analytes. Dans les dispositifs connus de l'état de la technique la nature du réactif de capture immobilisée dans la zone de contrôle dépend du réactif de liaison spécifique de l'analyte et donc de l'analyte. Dans les dispositifs selon l'invention la zone de contrôle est indépendante de l'analyte et la zone de contrôle pourra donc être identique quelque soit l'analyte recherché dans l'échantillon. Il sera donc plus facile d'adapter les dispositifs de la présente invention à la détection de nouveaux analytes. En outre, la fabrication de différents dispositifs destinés à la détection de différents analytes est également simplifiée et moins coûteuse. Un objet de la présente invention est donc un dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comportant un moyen de diffusion capillaire (1) dans une direction de référence (2) comprenant: a) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; b) un premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, immobilisé à l'état sec mais libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) ; c) une zone de détection de l'échantillon (5) en aval de ladite zone de dépôt de l'échantillon (3) ; d) un premier réactif de capture (6) spécifique de l'analyte immobilisé dans la zone de détection (5) ; et qui comprend d'une part un deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, immobilisé à l'état sec en aval de zone de dépôt de l'échantillon (3) ; ce deuxième réactif de liaison (7) étant libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide; et d'autre part une zone de contrôle (8) située en aval de la zone de détection (5) par rapport à la direction de référence (2) de diffusion capillaire dans laquelle est immobilisé un deuxième réactif de capture (9) spécifique du deuxième réactif de liaison (7). Avantageusement le moyen de diffusion capillaire (1) a la forme d'un support solide poreux. De préférence, le moyen de diffusion capillaire (1) est un support solide poreux en forme de bande ou de bandelette chromatographique. Plus préférentiellement, le moyen de diffusion capillaire a la forme d'une bandelette chromatographique fixée sur un support rigide. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et le deuxième réactif de liaison (7) sont 20 conjugués à un marqueur particulaire. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le moyen de diffusion capillaire (1) est intégré dans un support de préhension (10) pourvu d'au moins une fenêtre d'observation (11) permettant d'observer d'une part la mesure dans laquelle le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et /ou mesurable se fixe dans la zone de détection (5) du moyen de diffusion capillaire (1) et d'autre part la mesure dans laquelle le deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable se fixe dans la zone de contrôle (8) du moyen de diffusion capillaire (1). Dans ce mode de réalisation, le support de préhension (10) est 30 typiquement un boîtier. L'invention a également pour objet un procédé de détection d'un analyte dans un échantillon liquide comprenant les étapes suivantes: a) on dispose d'un dispositif selon l'invention; b) on dépose un échantillon liquide dans la zone de dépôt (3) du moyen de 35 diffusion capillaire (1) du dispositif de l'étape a); c) on attend un temps suffisant pour la migration par diffusion capillaire de l'échantillon liquide depuis la zone de dépôt (3) jusqu'à la zone de détection (5) puis jusqu'à la zone de contrôle (8) entraînant le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable ainsi que le deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ ou mesurable; d) on observe la mesure dans laquelle le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et /ou mesurable se fixe dans la zone de détection (5) du moyen de diffusion capillaire (1) pour la détection de l'analyte dans l'échantillon ainsi que la mesure dans laquelle le deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable se fixe dans la zone de contrôle (8) du moyen de diffusion capillaire (1) pour vérifier la migration de l'échantillon et du deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable jusqu'à la zone de contrôle (8). Dans un premier mode de réalisation de l'invention, le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le premier réactif de capture (6) immobilisé dans la zone de détection (5) permettent de détecter l'analyte par un test sandwich de telle sorte que la présence de l'analyte dans l'échantillon est révélée d'une part par une liaison visible et/ou mesurable du premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) dans la zone de détection (5) et d'autre part par une liaison visible et/ou mesurable du deuxième réactif de liaison (7) dans la zone de contrôle (8). Dans un deuxième mode de réalisation de l'invention, le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le premier réactif de capture (6) immobilisé dans la zone de détection (5) permettent de détecter l'analyte par un test compétition de telle sorte que la présence de l'analyte dans l'échantillon est révélée d'une part par l'absence de liaison visible et/ou mesurable du premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) dans la zone de détection (5) et d'autre part par une liaison visible et/ou mesurable du deuxième réactif de liaison (7) dans la zone de contrôle (8). L'invention concerne aussi un procédé dans lequel à l'étape b) on dépose un échantillon liquide et un diluant dans la zone de dépôt (3) du moyen de diffusion capillaire (1) du dispositif de l'étape a). L'invention a ainsi pour objet un procédé dans lequel à l'étape b) on dépose l'échantillon avant de déposer le diluant mais aussi un procédé dans lequel à l'étape b) on dépose le diluant avant de déposer l'échantillon. Par analyte , on entend toute entité chimique, biochimique ou biologique que l'on souhaite détecter dans un échantillon. Parmi les analytes détectés par les dispositifs et les procédés selon la présente invention, on citera notamment les protéines, les peptides, les anticorps, les hormones, les stéroïdes, les antigènes dérivés d'agents infectieux ou de cellules tumorales, les agents infectieux tels que les bactéries, les virus ou les parasites, les acides nucléiques (ADN ou ARN), les molécules thérapeutiques, les drogues ou encore les antibiotiques. Par détecter , on entend la détermination de la présence ou de l'absence d'un analyte dans un échantillon mais aussi la mesure et la quantification d'un analyte dans un échantillon. En effet, les performances des dispositifs et procédés selon l'invention autorisent la réalisation de mesures quantitatives ou semi quantitatives. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'analyte est la hCG (hormone choriogonadotropine) ou la LH (hormone luthinisante). Par échantillon liquide , on entend tout échantillon dans lequel l'analyte recherché est en solution ou en suspension. Cet échantillon liquide peut notamment être tout fluide biologique ou corporel. L'échantillon liquide peut également avoir été obtenu directement ou indirectement à partir d'un fluide biologique ou corporel. L'échantillon peut également être un extrait liquide d'un échantillon solide. Typiquement, l'échantillon liquide est de l'urine, du sang total, du plasma ou du sérum. Dans certains procédés selon la présente invention, un diluant est utilisé lorsque l'échantillon liquide est du plasma, du sérum ou du sang total par exemple. Le diluant est déposé avec l'échantillon. Alternativement, le diluant est déposé avant ou après l'échantillon. Ce diluant migre dans le support solide entraînant l'échantillon et le réactif de liaison marqué. Typiquement ce diluant est composé d'une solution saline tamponnée, il peut également comprendre un détergent ou tout autre composant nécessaire à la réaction. Par moyen de diffusion capillaire , on entend un support solide poreux permettant la migration d'un liquide par simple diffusion capillaire. La porosité de ce support permet la diffusion capillaire (ou migration latérale) de l'échantillon et/ou des réactifs à l'état liquide ou humide. De tels moyens de diffusion capillaire sont très largement utilisés dans toutes les techniques d'immunochromatographie à migration latérale notamment. Ainsi, les moyens de diffusion capillaire mis en oeuvre dans les dispositifs immunochromatographiques selon l'invention sont bien connus de l'homme du métier (EP 0 284 232). A titre d'exemple, ces moyens de diffusion capillaire peuvent être constitués de divers supports immunochromatographiques, de cellulose, de nylon, de nitrocellulose, de polyéthylène ou de fibre de verre. Le moyen de diffusion capillaire peut être constitué d'une ou de plusieurs parties distinctes. Les différentes parties du support pouvant être constitués de matériaux différents. Lorsque le moyen de diffusion capillaire est constitué de différentes parties ou de différents matériaux, ces éléments sont disposés de telle façon à permettre la continuité de l'écoulement capillaire dans le moyen de diffusion capillaire. Typiquement, le moyen de diffusion capillaire est constitué d'un support solide poreux allongé selon la direction de diffusion capillaire. De préférence, le moyen de diffusion capillaire des dispositifs selon l'invention est un support solide poreux en forme de bande ou de bandelette immunochromatographique. Le moyen de diffusion capillaire se présente par exemple sous la forme d'une bandelette immunochromatographique constituée de plusieurs bandelettes superposés ou chevauchantes. Le dispositif selon l'invention peut par exemple être constitué d'une bandelette chromatographique fixée sur un support rigide. Le support rigide peut être constitué de matériaux divers tel que du carton, du carton plastifié ou plus préférentiellement de matières plastiques. De préférence, le support rigide est constitué de polystyrène. Le moyen de diffusion capillaire comprend une zone de dépôt de l'échantillon, une zone de détection et une zone de contrôle. La zone de dépôt, la zone de détection et la zone de contrôle sont des zones distinctes et séparées du moyen de diffusion capillaire. Ces zones sont disposées de façon à permettre la continuité de l'écoulement capillaire depuis la zone de dépôt à travers la zone de détection jusqu'à la zone de contrôle selon une direction de référence de diffusion capillaire. Typiquement, la zone de dépôt et la zone de contrôle correspondent respectivement à l'une et l'autre des extrémités opposées du moyen de diffusion capillaire. Le moyen de diffusion capillaire est ainsi par exemple constitué d'un support solide poreux allongé selon la direction de diffusion capillaire présentant une extrémité proximale et une extrémité distale constituant respectivement la zone de dépôt et la zone de contrôle. La zone de détection étant située entre ces deux dernières zones habituellement à proximité de la zone de contrôle. Ces zones peuvent par exemple être présentes dans un même plan sur une bande constitué d'un matériau unique. Avantageusement, un matériau spécifique correspond à chaque zone du moyen de diffusion capillaire. Un matériau absorbant poreux peut par exemple être utilisé pour la zone de dépôt de l'échantillon. En effet, la zone de dépôt du moyen de diffusion capillaire est destinée à être mise en contact avec un flux d'urine ou à recevoir un échantillon liquide. On choisira donc un matériau absorbant adapté. Ces matériaux sont bien connus de l'homme du métier. La zone de dépôt de l'échantillon du moyen de diffusion peut aussi être constitué d'un organe de captation en matériau absorbant. Cet organe de captation peut être directement mis en contact avec un flux d'urine par exemple. Le support solide peut également comprendre un organe de captation mobile tel que décrit dans WO 00/00288. Le moyen de diffusion capillaire porte le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le deuxième réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. Ce deuxième réactif de liaison est indépendant de l'analyte à détecter. Ces réactifs de liaison marqués sont immobilisés à l'état sec dans le moyen de diffusion capillaire mais ils sont libres de migrer par diffusion capillaire à l'état humide. Ces réactifs sont préférentiellement localisés en aval de la zone de dépôt pour éviter toute perte de réactif par un effet de lavage lors du dépôt de l'échantillon. Ainsi, l'échantillon liquide est déposé dans la zone de dépôt du moyen de diffusion capillaire puis cet échantillon migre par diffusion capillaire à travers le moyen de diffusion capillaire entraînant alors les réactifs de liaison conjugués à un marqueur. Dans un autre mode de réalisation le moyen de diffusion capillaire peut être incorporé dans un support de préhension. Ce support de préhension facilite la manipulation du moyen de diffusion capillaire et peut également protéger celui-ci notamment de l'humidité. Le support de préhension peut envelopper partiellement ou totalement 20 le moyen de diffusion capillaire. Le support de préhension peut être constitué de matériaux divers tel que du carton, du carton plastifié ou plus préférentiellement de matières plastiques. De façon avantageuse, le support de préhension est constitué d'un matériau rigide et imperméable. Ces supports de préhension ou boîtiers sont notamment décrits dans les brevets EP 0 291 194, EP 0 560 411, EP 0 560 410 et EP1 091 808. Habituellement, le support de préhension est en forme de boîtier. Dans un mode de réalisation de l'invention, le moyen de diffusion capillaire peut comprendre une zone de dépôt saillante par rapport au support de préhension pour le dépôt de l'échantillon liquide. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le support de préhension ou le boîtier comprend au moins une ouverture pour le dépôt de l'échantillon liquide. Typiquement, le support de préhension est également pourvu d'au moins une fenêtre d'observation pour observer la zone de détection et la zone de contrôle du moyen de diffusion capillaire. Dans un autre mode de réalisation, le support de préhension est pourvu de deux fenêtres pour l'observation de la zone de détection et de la zone de contrôle respectivement. Les réactifs mis en oeuvre dans les procédés selon la présente invention sont bien connus de l'homme du métier. Le premier réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le premier réactif de capture immobilisé dans la zone de détection 5 sont spécifiques de l'analyte recherché dans l'échantillon. Le deuxième réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le deuxième réactif de capture immobilisé dans la zone de contrôle sont indépendants de l'analyte. Par réactif de capture , on entend toute entité chimique biochimique ou biologique susceptible de se lier spécifiquement avec l'analyte ou spécifiquement avec le deuxième réactif de liaison conjugué à un marqueur. Le premier réactif de capture spécifique de l'analyte est immobilisé dans la zone de détection alors que le deuxième réactif de capture est immobilisé dans la zone de contrôle du moyen de diffusion capillaire selon des techniques connues de l'homme du métier. Ces réactifs de capture sont immobilisés de telle façon qu'ils ne soient pas mobiles à l'état humide. Cette immobilisation peut s'effectuer par exemple par absorption ou par un couplage covalent. Lorsque le réactif de capture est un acide nucléique, il est par exemple fixé sur un support de type nitrocellulose par un traitement UV ou par toute autre technique connue de l'homme du métier. Le réactif de capture immobilisé est préférentiellement un anticorps polyclonal ou monoclonal ayant une forte affinité pour l'analyte ou pour le deuxième réactif de liaison et plus préférentiellement il s'agit d'un anticorps monoclonal. Par réactif de liaison , on entend toute entité chimique biochimique ou biologique susceptible de se lier spécifiquement avec l'analyte ou avec le réactif de capture en compétition avec l'analyte. Par réactif de liaison , on entend également toute entité chimique biochimique ou biologique susceptible de se lier spécifiquement avec le deuxième réactif de capture immobilisé dans la zone de contrôle. Par lier ou liaison , on entend toute liaison forte, par exemple covalente ou toute liaison faible, par exemple du type antigène/anticorps ou avidine/streptavidine. Le réactif de liaison est par exemple un anticorps, un antigène ou un acide nucléique. Tout autre réactif de liaison connu de l'homme du métier peut être utilisé tel que un (ou des anticorps) monoclonal aux antibiotine, de l'avidine, de la streptovidine, ou de la polytroptavidine. Ces réactifs peuvent être natifs ou recombinants. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le réactif de liaison spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le réactif de capture immobilisé dans la zone de détection du moyen de diffusion capillaire permettent de détecter l'analyte par un test sandwich. Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, le réactif de liaison spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le réactif de capture immobilisé dans la zone de détection du moyen de diffusion capillaire permettent de détecter l'analyte par un test de compétition. Les tests sandwich et les tests par compétition sont bien connus de l'homme du métier. Dans un test sandwich, le réactif de capture spécifique de l'analyte et le réactif de liaison marqué sont prédéterminés pour se lier respectivement et spécifiquement avec l'analyte, par exemple sur deux sites épitopiques, identiques ou différents de l'analyte. Dans un test par compétition, le réactif de liaison marqué est identique ou analogue à l'analyte, pour se lier avec le réactif de capture, en compétition avec l'analyte. Dans le cas d'un test par compétition, le réactif de capture se lie également au réactif de liaison. L'analyte et le réactif de capture forment typiquement un couple ligand/anti-ligand, antigène/anticorps, ADN/ARN ou ADN/ADN. Ainsi, si l'analyte est un antigène ou un haptène, le réactif de capture est par exemple un anticorps spécifique de l'analyte. Si l'analyte est un anticorps, le réactif de capture est l'antigène reconnu par l'anticorps ou un anticorps reconnaissant spécifiquement l'analyte. Si l'analyte est un acide nucléique, le réactif de capture est par exemple une sonde ADN complémentaire. Dans un test par compétition, le réactif de liaison est par exemple l'analyte lui-même ou un analogue approprié de l'analyte. Par analogue approprié de l'analyte, on entend un analogue se liant de manière spécifique au réactif de capture spécifique de l'analyte. Le réactif de liaison marqué est donc l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable ou un analogue de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. Dans un test de type sandwich, le réactif de liaison se lie de façon spécifique à l'analyte. Le réactif de liaison marqué est donc par exempleun anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. En ce qui concerne le deuxième réactif de liaison il s'agit par exemple d'un anticorps conjugué à un marqueur. Dans ce mode de réalisation, le réactif de capture immobilisé dans la zone de contrôle est un anticorps anti-anticorps spécifique du deuxième réactif de liaison. Les réactifs de liaison sont conjugués à un marqueur visible et/ou mesurable permettant une mesure ou une observation directe du résultat du test. Le marqueur peut être observé directement à l'oeil nu lorsqu'il est concentré dans la zone de détection et/ou dans la zone de contrôle du moyen de diffusion capillaire. La mesure du marqueur peut s'effectuer directement à l'oeil nu ou à l'aide d'un appareil de mesure. Cette mesure se fait par une observation directe ne nécessitant pas de manipulation supplémentaire. Avantageusement, les dispositifs selon la présente invention comprennent des réactifs de liaison conjugués à un marqueur particulaire. Typiquement, les marqueurs particulaires sont constitués de particules de petite taille insolubles dans l'eau et qui forment donc des suspensions en phase liquide c'est-à-dire une dispersion de particules solides dans un liquide. Les marqueurs particulaires sont bien connus de l'homme du métier. On connaît notamment les marqueurs particulaires colorés ou fluorescents. A titre d'exemple, on citera l'or colloïdal, les particules de latex colorées, les particules de latex fluorescentes et les particules conjugués à l'avidine ou à la streptavidine. Parmi les marqueurs permettant une observation directe à l'oeil nu on citera aussi les marqueurs de type dextran (Hansen T.M., IVD Technology 4, 35-40, 2003). Le réactif de liaison est alors conjugué à une chaîne de dextran (dérivé de polysaccharide) portant des fluorophores. Les réactifs de liaison sont conjugués au marqueur visible et/ou mesurable selon des techniques connues. L'invention est décrite plus en détail par référence aux figures suivantes: Figure 1: La figure 1 représente en perspective un moyen de diffusion capillaire selon un mode de réalisation particulier de l'invention. Figure 2: La figure 2 représente une vue en perspective d'un dispositif selon 25 l'invention montrant un résultat négatif dans un test sandwich. Figure 3: La figure 3 représente une vue en perspective d'un dispositif selon l'invention montrant un résultat positif dans un test sandwich. Par référence à la figure 1, un moyen de diffusion capillaire (1) selon un mode de réalisation particulier de l'invention, comprend: une zone de dépôt de l'échantillon (3) constituée d'un tampon absorbant, l'échantillon liquide est déposée sur cette zone alternativement la zone de dépôt de l'échantillon (3) est directement trempée dans l'échantillon liquide; un premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur et un deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur, ces réactifs sont immobilisés à l'état sec dans un deuxième tampon absorbent mais peuvent migrer à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) selon la direction de référence (2) ; une zone de détection de l'analyte (5) dans laquelle est immobilisé un premier réactif de capture (6) spécifique de l'analyte; une zone de contrôle (8) située en aval de la zone de détection (5) par rapport à la direction de référence (2) de diffusion capillaire dans laquelle est immobilisé un deuxième réactif de capture (9) spécifique du deuxième réactif de liaison (7). Le moyen de diffusion capillaire (1) représenté à la figure 1 se présente sous la forme d'une bandelette chromatographique fixée sur un support rigide. La bandelette chromatographique est constituée de plusieurs bandelettes chevauchantes de telle façon à permettre la continuité de l'écoulement capillaire dans le moyen de diffusion capillaire (1). La première bandelette est une membrane comprenant une zone de détection de l'analyte (5) dans laquelle est immobilisé le réactif de capture spécifique de l'analyte (6) et une zone de contrôle (8) dans laquelle est immobilisé un deuxième réactif de capture (9). En amont de cette membrane, par rapport à la direction de référence (2), sont disposés deux tampons absorbants en continuité capillaire avec la membrane. Un des tampons absorbants comprend le réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et le deuxième réactif de liaison (7). L'autre tampon absorbant constitue la zone de dépôt de l'échantillon (3). En aval de la membrane, par rapport à la direction de référence (2), est disposé un support absorbant permettant de recueillir l'excès d'échantillon liquide. Le fonctionnement du dispositif selon l'invention est décrit en référence à la figure 1. L'échantillon liquide suspecté de contenir l'analyte est déposé sur la zone de dépôt (3) du moyen de diffusion capillaire (1). Cette zone de dépôt (3) étant constituée d'un tampon absorbant. L'échantillon liquide diffuse et migre dans le moyen de diffusion capillaire (1) selon la direction de référence (2). L'échantillon liquide migre donc depuis le tampon absorbant constituant la zone de dépôt (3) vers le deuxième tampon absorbant contenant le réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et le deuxième réactif de liaison (7). Ces réactifs (4, 7) sont entraînés par l'échantillon liquide et migrent dans la membrane jusqu'à la zone de détection (5) comprenant le réactif de capture spécifique de l'analyte (6) et jusqu'à la zone de contrôle (8) comprenant le deuxième réactif de capture (9) spécifique du deuxième réactif de liaison (7). L'excès d'échantillon est recueilli dans le support absorbant situe en aval de la membrane. Dans un test sandwich, l'analyte se fixe au réactif de liaison (4) puis se fixe dans la zone de détection (5) au réactif de capture (6). La présence de l'analyte est donc révélée par l'observation de la mesure dans laquelle le réactif de liaison (4) se fixe dans la zone de détection (5). Etant donné que le réactif de liaison (4) est conjugué à un marqueur, cette fixation est directement observable ou mesurable. Le deuxième réactif de liaison (7) est également entraîné par l'échantillon liquide et se fixe au deuxième réactif de capture (9) dans la zone de contrôle (8) . Etant donné que le réactif de liaison (7) est conjugué à un marqueur, cette fixation est également directement observable ou mesurable. Cette zone de contrôle (8) permet donc de vérifier la bonne diffusion de l'échantillon et des réactifs (4, 7) dans le moyen de diffusion capillaire (1) indépendamment de la présence ou de l'absence de l'analyte dans l'échantillon. Les figures 2 et 3 représentent une vue en perspective d'un dispositif selon l'invention dans lequel le moyen de diffusion capillaire (1) est incorporé dans un support de préhension (10) constitué d'un boîtier rigide en matériau imperméable. Le boîtier est pourvu d'une fenêtre d'observation permettant d'observer la zone de détection (5) et la zone de contrôle (8) du moyen de diffusion capillaire (1) et d'une ouverture (12) pour le dépôt de l'échantillon liquide. La figure 2 montre un résultat négatif dans un test sandwich alors que la figure 3 montre un résultat positif dans un test sandwich. Exemples Quelques exemples de tests utilisant un marqueur particulaire non spécifique de la substance à analyser sont décrits ci-dessous. Ces dispositifs selon l'invention permettent d'assurer l'apparition d'une ligne de contrôle nette et bien visible indépendamment de l'analyte à doser qui mobilise une plus ou moins grande quantité de marqueur particulaire spécifique. Test rapide de détection des opiacés (test de compétition) Réactifs de liaison conjugués à des marqueurs particulaires (mélange) : - Antigène Morphine-BSA fixé à de l'or colloïdal (réactif de liaison spécifique de l'analyte), - Anticorps polyclonaux non spécifiques de souris marqués à de l'or colloïdal. Réactifs de capture immobilisés sur membrane (phase solide): - anticorps monoclonal de souris anti-morphine dans la zone de détection, - anticorps polyclonaux de chèvre anti IgG de souris dans la zone de contrôle. Test rapide de détection des anticorps humains anti HBs (antigène de surface de l'hépatite B) (test sandwich) Réactifs de liaison conjugués à des marqueurs particulaires (mélange): - Antigène de surface de l'Hépatite B (HBsAg) recombinant marqué à de l'or colloïdal, - Anticorps polyclonaux de souris marqués à de l'or colloïdal. Réactifs de capture immobilisés sur membrane (phase solide) : - antigène de surface de l'hépatite B recombinant dans la zone de détection, anticorps polyclonaux de chèvre anti IgG de souris dans la zone de contrôle. Test rapide de détection de l'hCG (test de grossesse) Réactifs de liaison conjugués à des marqueurs particulaires (mélange): - anticorps monoclonal anti hCG marqué à l'or colloïdal (spécifique de l'analyte), - anticorps polyclonaux de lapin marqués à l'or colloïdal (non spécifique de l'analyte). Réactifs de capture immobilisés sur membrane (phase solide) : - anticorps anti hCG (polyclonal ou monoclonal) dans la zone de détection, 15 anticorps polyclonaux de chèvre anti-Ig de lapin dans la zone de contrôle. REVENDICATIONS 1) Dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide comportant un moyen de diffusion capillaire (1) dans une direction de référence (2) comprenant: a) une zone de dépôt de l'échantillon (3) ; b) un premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4), conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, immobilisé à l'état sec mais libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide dans le moyen de diffusion capillaire (1) ; c) une zone de détection de l'échantillon (5) en aval de ladite zone de dépôt de l'échantillon (3) ; d) un premier réactif de capture (6) spécifique de l'analyte immobilisé dans la zone de détection (5) ; caractérisé en ce qu'il comprend d'une part un deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, immobilisé à l'état sec en aval de zone de dépôt de l'échantillon (3) ; ledit deuxième réactif de liaison (7) étant libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide; et d'autre part une zone de contrôle (8) située en aval de la zone de détection (5) par rapport à la direction de référence (2) de diffusion capillaire dans laquelle est immobilisé un deuxième réactif de capture (9) spécifique du deuxième réactif de liaison (7). 2) Dispositif selon l'une des revendications précédentes dans lequel le moyen de diffusion capillaire (1) a la forme d'un support solide poreux. 3) Dispositif selon la revendication 2 dans lequel le moyen de diffusion capillaire (1) est un support solide poreux en forme de bande ou de bandelette chromatographique. 4) Dispositif selon la revendication 3 dans lequel le moyen de diffusion capillaire a la forme d'une bandelette chromatographique fixée sur un support rigide. 5) Dispositif selon l'une des revendications précédentes dans lequel le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) et le deuxième réactif de liaison (7) sont conjugués à un marqueur particulaire. 6) Dispositif selon l'une des revendications précédentes dans lequel le moyen de diffusion capillaire (1) est intégré dans un support de préhension (10) pourvu d'au moins une fenêtre d'observation (11) permettant d'observer d'une part la mesure dans laquelle le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et /ou mesurable se fixe dans la zone de détection (5) du moyen de diffusion capillaire (1) et d'autre part la mesure dans laquelle le deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable se fixe dans la zone de contrôle (8) du moyen de diffusion capillaire (1). 7) Dispositif selon la des revendication 6 dans lequel le support de préhension (10) est un boîtier. 8) Procédé de détection d'un analyte dans un échantillon liquide comprenant 15 les étapes suivantes: a) on dispose d'un dispositif selon l'une des revendications précédentes; b) on dépose un échantillon liquide dans la zone de dépôt (3) du moyen de diffusion capillaire (1) du dispositif de l'étape a); c) on attend un temps suffisant pour la migration par diffusion capillaire de l'échantillon liquide depuis la zone de dépôt (3) jusqu'à la zone de détection (5) puis jusqu'à la zone de contrôle (8) entraînant le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable ainsi que le deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ ou mesurable; d) on observe la mesure dans laquelle le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et /ou mesurable se fixe dans la zone de détection (5) du moyen de diffusion capillaire (1) pour la détection de l'analyte dans l'échantillon ainsi que la mesure dans laquelle le deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable se fixe dans la zone de contrôle (8) du moyen de diffusion capillaire (1) pour vérifier la migration de l'échantillon et du deuxième réactif de liaison (7) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable jusqu'à la zone de contrôle (8). 9) Procédé selon la revendication 8 dans lequel le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le premier réactif de capture (6) immobilisé dans la zone de détection (5) permettent de détecter l'analyte par un test sandwich de telle sorte que la présence de l'analyte dans l'échantillon est révélée d'une part par une liaison visible et/ou mesurable du premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) dans la zone de détection (5) et d'autre part par une liaison visible et/ou mesurable du deuxième réactif de liaison (7) dans la zone de contrôle (8). 10) Procédé selon la revendication 8 dans lequel le premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le premier réactif de capture (6) immobilisé dans la zone de détection (5) permettent de détecter l'analyte par un test compétition de telle sorte que la présence de l'analyte dans l'échantillon est révélée d'une part par l'absence de liaison visible et/ou mesurable du premier réactif de liaison spécifique de l'analyte (4) dans la zone de détection (5) et d'autre part par une liaison visible et/ou mesurable du deuxième réactif de liaison (7) dans la zone de contrôle (8). 11)Procédé selon l'une des revendications 8-10 dans lequel à l'étape b) on dépose un échantillon liquide et un diluant dans la zone de dépôt (3) du moyen de diffusion capillaire (1) du dispositif de l'étape a). 12)Procédé selon la revendication 11 dans lequel à l'étape b) on dépose l'échantillon avant de déposer le diluant. 13)Procédé selon la revendication 11 dans lequel à l'étape b) on dépose le diluant avant de déposer l'échantillon.