Brevet FR2877725A1 — publié le 20060512

LIANT POUR PHASE STATIONNAIRE POUR LA. SEPARATION DE CONSTITUANTS D'ECHANTILLONS PAR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE, PLAQUES DE SEPARATION EN COMPORTANT ET LEUR PROCEDE DE PREPARATION Dans le domaine de la séparation des constituants d'échantillons complexes par chromatographie, les techniques de chromatographie liquide sur colonne et de chromatographie planaire permettent de séparer les constituants d'un échantillon dans un milieu attracteur appelé phase stationnaire, à l'aide d'un fluide porteur appelé phase mobile. Ces techniques diffèrent par le type de phase stationnaire utilisé et par le mode d'introduction de l'échantillon dans la phase stationnaire. Plus précisément, en chromatographie liquide sur colonne dont l'acronyme anglais est HPLC pour High Performance Liquid Chromatography l'échantillon et la phase mobile sont introduits dans une boucle d'injection qui alimente une colonne, généralement cylindrique, contenant la phase stationnaire. Les constituants séparés de l'échantillon sortent de la colonne, puis sont élués et détectés. En chromatographie planaire, on distingue deux techniques appelées chromatographie en couche mince (CCN!) dont l'acronyme anglais est TLC pour Thin Layer Chromatography et chromatographie sous flux forcé dont l'acronyme anglais est OPLC pour Over Pressure Layer Chromatography ou Optimum Performance Laminar Chromatography , encore connue sous le nom de FF-TLC pour Forced Flow TLC . Dans ces deux techniques planaires différents échantillons sont déposés directement sur une couche formant la phase stationnaire, puis entraînés par la phase mobile selon un ordre connu, fonction de leur rétention. Dans la TLC, les échantillons sont placés sur une phase stationnaire avant l'admission de la phase mobile par capillarité. La phase stationnaire est 30 partiellement au contact de l'atmosphère, sans y subire de pression. La détection s'effectue dans un détecteur externe après évaporation de la phase mobile. La TLC se distingue de la FF-TLC ou OPLC où l'on peut même injecter l'échantillon dans un flux de solvant, phase mobile. La technique OPLC consiste à déposer un échantillon à une extrémité d'une couche de phase stationnaire qui est enfermée de façon étanche entre deux parois pour être soumise à une pression externe appliquée sur ces parois. Les constituants de l'échantillon sont séparés par entraînement dans la phase stationnaire au moyen d'une phase mobile formée par un fluide sous pression. Les parois délimitant la phase stationnaire sont équipées de moyens d'injection de l'échantillon dans la phase stationnaire et d'alimentation de celle-ci en phase mobile, à une première extrémité de la phase stationnaire, et comprennent des moyens de collecte d'échantillon et de phase mobile à l'autre extrémité de la phase stationnaire. Ces deux techniques mettent en oeuvre des phases stationnaires à base d'une matière appropriée adsorbante telle que de la poudre ou des particules de gel de silicate, de silice, de silice microporeuse et/ou greffée, d'alumine, de silicate de magnésium, de cellulose, de polyamide, etc., généralement sous forme d'une couche déposée sur une plaque d'un matériau imperméable, comme de l'aluminium, du verre ou du plastique, l'ensemble phase stationnaire plaque étant aussi appelé colonne plate . L' adhésion au support de la couche de phase stationnaire est généralement assurée par un adhésif. La phase stationnaire doit avoir une certaine cohésion. Ces techniques se distinguent donc de l'HPLC en ce que la phase stationnaire est déposée en général sur un support plat, et non dans une colonne cylindrique ou tube où la cohésion de la phase stationnaire libre n'est pas nécessaire. Cette disposition à plat présente de grands avantages en recherche sur les méthodes analytiques et pour la mise au point de nouvelles molécules car elle permet aux utilisateurs d'avoir un accès visuel direct au milieu de séparation et ainsi de s'assurer que la séparation a bien eu lieu comme ils l'entendent. Les colonnes plates ou plaques de séparation par chromatographie liquide, ci-après plaques de séparation , commercialement disponibles pour la TLC, usuelles, peuvent être adaptées pour l'OPLC par exemple en créant des rainures dans la phase stationnaire, en enlevant du matériau de séparation du support, à la périphérie de la couche, et en introduisant une solution d'élastomère dans la rainure, sans toutefois dépasser le niveau de la couche elle-même, puis en durcissant l'élastomère. Les couches préparées usuellement pour des applications en chromatographie en couche mince (CMC) comportent un liant polymère ajouté au matériau de base de la phase stationnaire (silice, cellulose, alumine, etc). Toutefois, les couches usuelles pour la TLC, couches de silice microporeuse, par exemple, adaptées à l'OPLC ne supportent pas l'utilisation intensive sous flux forcé impliquée par cette technique OPLC, sans voir leur performance baisser notamment avec des flux forcés d'éluants aqueux ou fortement aqueux, à plus de 20 % d'eau par exemple, ou même d'autres solvants sont susceptibles d'entraîner le liant et de fragiliser l'adhésion au support. Ceci se traduit par un élargissement ou un dédoublement des pics. La couche de phase stationnaire perd en effet de son homogénéité, du fait de la solubilisation du liant. On observe parfois en outre que des parcelles de la couche de silice se détachent du support en verre ou en aluminium, notamment quand le support est retiré du dispositif de réalisation de l'OPLC, ceci compromettant les mesures visuelles et densitométriques ultérieures. Des liants typiques utilisés en TLC sont l'acide polyacrylique et/ou ses sels, la polyacrylamide, la polyvinylalcool, les polyviinylpyrrolidones; ils sont solubles le plus souvent dans l'eau, à des pH neutres, acides ou basiques, ce qui limite leur utilisation comme liants en OPLC, car l'eau de la phase mobile les entraîne vers la sortie durant le passage du flux forcé, laissant la phase stationnaire sans liant. De tels adhésifs sont décrits aux brevets US 3 535 265 ou US 4 658 000. Ce liant interagit avec les groupes polaires des matériaux particulaires et crée des liaisons entre les particules quand la couche sèche. Les couches dont les constituants comportent peu de sites polaires pour créer des liaisons sont inaptes à la TLC, par manque de cohésion, dû à un contact affaibli entre liant et particules. De plus, les couches hautement fonctionnalisées ou greffées ne sont pas non plus aptes à la TLC pour des raisons liées à la faible capillarité de phase mobile aqueuse ce qui la rend visqueuse alors que la bonne circulation du solvant est nécessaire à la séparation. De ce fait, bien que des matériaux à haut taux de greffage soient utilisés pour la chromatographie HPLC, on ne peut les employer facilement pour la TLC ou l'OPLC, applications visées ici. En effet, de façon générale, un liant peut lier des particules de la phase stationnaire entre elles et aussi la phase stationnaire au support, par une combinaison de un ou plusieurs mécanismes chimique (liaison directe avec la phase), physique (liaison-H et polaires) et/ou mécanique (interpénétration). Alors que la silice présente une abondance de groupements polaires, les phases greffées n'en présentent que peu, et par conséquent les liants usuels ne sont pas performants. De plus, les phases greffées fonctionnent plus couramment avec des solvants polaires, tel que l'eau, qui solubilisent les liants classiques, donc les entraînent hors de la couche CCM. De ce fait, les phases CCM dites greffées ne sont que peu greffées, c'est-à-dire présentent moins de greffons, donc plus de points polaires non greffés, afin d'avoir suffisamment de points d'ancrage entre liant et particules pour résister aux faibles contraintes de la CCM. II existe donc un besoin pour des couches de chromatographie utilisables dans la technique OPLC ou même TLC qui présentent une meilleure résistance mécanique, notamment au stress mécanique causé par le flux forcé d'éluants en OPLC, particulièrement les éluants aqueux ou mélanges aqueux d'éluants. De plus, les couches doivent pouvoir supporter des phases hautement aqueuses telles qu'elles sont utilisées en chromatographie en phase inverse. L'invention a pour but de résoudre tout ou partie des inconvénients présentés ci-avant. La présente invention concerne des nouveaux matériaux pour la couche de phase stationnaire de séparation de constituants d'échantillon à analyser par chromatographie liquide. Ces nouveaux matériaux sont préparés à partir d'au moins un matériau de base pour phase stationnaire et d'un système liant, le système liant comportant au moins un polymère du type polyacrylamide résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié. L'invention concerne l'utilisation du glyoxal dans un système liant pour couche de matériau de séparation par chromatographie liquide à base d'une phase stationnaire particulaire. Elle concerne également une plaque de séparation pour chromatographie du type comportant une couche de phase stationnaire liée déposée sur un support, la phase stationnaire liée comportant au moins un matériau de base pour phase stationnaire. et un système liant comportant au moins un polymère du type polyacrylamide défini ci-dessus et du glyoxal. L'invention concerne aussi un procédé de préparation d'une plaque de séparation pour chromatographie du type comportant une couche de phase stationnaire liée déposée sur un support qui comporte au moins les étapes (a) de mélange d'un premier polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un polymère du type polyacrylamide ou copolymère polyacrylamide ramifié et d'un matériau de. base de phase stationnaire, (b) de couchage de la phase stationnaire liée sur le support, (c) de chauffage de la phase stationnaire liée couchée sur le support, l'adjonction du glyoxal étant réalisée par a) mélange d'un second polymère de type polyacrylamide, résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement d'un ou plusieurs comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un polymère ou copolymère du type polyacrylamide ramifié, avec ledit premier polymère ou avec le mélange dudit premier polymère et du matériau de base de phase stationnaire, avant couchage ou p) l'ajout de glyoxal, et/ou d'un second polymère du type polyacrylamide, résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un polymère ou copolymère du type polyacrylamide ramifié, à la phase stationnaire couchée sur le support, entre le couchage et le chauffage. Selon un autre aspect, l'invention concerne un procédé de préparation d'une plaque de séparation par chromatographie du type comportant une couche d'un matériau de base pour phase stationnaire, liée par un système liant, déposée sur un support, dans lequel l'un au moins du système liant de la phase stationnaire et du support comporte un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié, traité au glyoxal. Ainsi, selon l'invention le résultat cle l'interaction d'un polymère défini ci-dessus avec du glyoxal est utilisé dans le système liant de la couche stationnaire et/ou en traitement du support, résultant dans la cohésion de la couche et/ou son adhésion au support. L'invention concerne donc également un procédé de prétraitement du support de couche de phase stationnaire, par un traitement le rendant plus apte à faire des liaisons/interactions physique et/ou mécaniques avec un film de polymère de même type que le liant, ceci afin qu'il soit incorporé dans le réseau polymère liant les particules du matériau de base de la phase stationnaire, et ainsi créer une liaison entre les particules et la surface du support. L'invention permet d'obtenir des matériaux pour CCM qui, comme cela apparaîtra dans les exemples, non seulement permettent une cohésion de la couche stationnaire suffisante pour que la couche puisse être utilisée en TLC, mais aussi en OPLC, mais aussi présentent une homogénéité satisfaisante, et encore permettent une adhésion suffisante de la couche sur le support. Ainsi, selon l'invention, on dispose d'un liant réticulable thermiquement en présence de particules d'absorbant utiles en chromatographie; la réticulation diminue la solubilité du liant et, de cette manière, le liant n'est pas éliminé lors des procédés de chromatographie séparative, notamment ceux où la phase mobile contient de l'eau, et il conserve ses propriétés de liant dans les conditions de ces séparations. Cette réticulation notamment est assurée par une réaction entre groupes acrylamide et glyoxal. Cette réticulation a (lieu de préférence en deux temps: d'abord une réaction quasi-totale sur un premier polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et éventuellement au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié, pour former un autre polymère (polymère 2), puis le mélange du polymère 2 avec un premier polymère (polymère 1) à base d'un premier monomère du type acrylamide, d'un ou plusieurs comonomères et d'au moins un monomère difonctionel, ces deux polymères réagissant ensemble. La température de réaction entre polymère 1 et polymère 2 peut être de l'ordre de 40 C à 140 C, de préférence supérieure à 60 C, de façon encore préférée de plus de 120 C, pour des temps de réaction de l'ordre de 10 minutes à 1 heure. Toutefois, ces températures et temps de réaction dépendent bien entendu de la nature des polymères, et l'homme du métier saura adapter ces conditions réactionnelles aux polymères choisis. Le procédé de traitement d'un premier polymère avec du glyoxal permet d'obtenir une solution homogène de polymère 'modifié et susceptible de réticuler avec un polymère acrylamide pour former un réseau de solubilité réduite, comme cela apparaîtra dans les exemples. Le traitement du polymère 4 avec le glyoxal est réalisé à température de l'ordre ambiante pour obtenir le polymère 2. La durée de l'interaction est de l'ordre de 30 minutes à 1 heure. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée ci-dessus et des exemples. Comme support selon la présente demande, on utilise les supports usuels pour colonnes plates. Ainsi, sont utilisées usuellement des feuilles d'aluminium, de verre ou de plastique, typiquement de polyester, pour plaquette de chromatographie en couches minces. Les feuilles en aluminium ont de façon standard une épaisseur de l'ordre de 100 pm. D'autres épaisseurs peuvent cependant convenir, dépendant notamment du dispositif utilisé pour réaliser la chromatographie, par exemple de l'ordre de 10 pm à 2 mm, de préférence environ 100 pm à 11 mm dans les appareils de mesure usuels actuels. De même, les plaques de verre standard ont une épaisseur de l'ordre de 1 mm, mais d'autres épaisseurs peuvent convenir. Comme on le verra par la suite, ces matériaux peuvent être prétraités. A titre de matériau de base pour phase stationnaire, on peut utiliser selon l'invention les matériaux particulaires pour phase stationnaire que sont la silice microporeuse, la silice greffée, l'alumine, la cellulose, le talc, les microbilles de silice, l'agarose, la silice diatomée par exemple, et similaire, à savoir tout matériau utilisable comme phase stationnaire en chromatographie et notamment aussi des particules polymériques, telles que polystyrènedivinylbenzène, polyacrylates, polyméthacrylates, ainsi que des systèmes plus complexes de phases stationnaires composites, telle que la silice imprégnée de polymères à base de silicone, polystyrène, etc. Des particules de phase stationnaire greffées sont également utilisables, par exemple des silices greffées, ainsi que des phases greffées dites endcappées , c'est-à-dire qu'elles ont subi un post traitement au triméthylsilyl. Ce matériau peut être poreux ou non, et les particules de forme irrégulière ou sphérique. Les particules de la phase stationnaire ont selon l'invention une taille moyenne inférieure à environ 50 pm, de préférence environ 20 pm, de façon encore préférée environ 10 pm. Plus précisément, on peut utiliser de la silice microporeuse standard comportant des pores de l'ordre de 6 nm (60 angstrôms), plus couramment connue sous le nom de silice 60, mais on peut également utiliser de la silice microporeuse à 10, 15 ou 30 nm (100, 150, 300 ou 500 angstrôms ou même plus). La surface d'absorption est de façon générale comprise entre 200 et 700 m2/gr. On peut également utiliser de la silice greffée. Ces silices sont classiquement greffées avec des chaînes aliphatiques en C2 à C18, et peuvent également l'être avec des groupements hydroxyl, dihydroxypropyl, aminopropyl, phényl, fluorés ou cyanés en C3 par exemple, et des silices comportant d'autres motifs greffés usuels similaires étant également utilisables, ainsi que des particules portant des fonctions d'échangeur d'ions (sulfate, diméthylamine, carboxy, etc.). Selon l'invention, on utilise un système liant comportant un premier polymère ou copolymère (ci-après aussi polymère 1) du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et d'un ou plusieurs comonomères difonctionnels permettant d'obtenir un copolymère ramifié, et un second polymère ou copolymère du type polyacrylamide (ci-après aussi polymère 2), identique ou similaire au premier, et qui a été mis en présence de glyoxal. On appelle ici par la suite polymère indistinctement un polymère et un copolymère. Ainsi, le premier polymère (polymère 1) peut être mélangé avec le résultat de l'interaction d'un autre premier polymère (qui peut être similaire ou identique au polymère 1) avec du glyoxal. On peut ainsi envisager le mélange du premier polymère avec un second polymère préparé par interaction de glyoxal avec un polymère du type polyacrylamide similaire au premier, sans lui être identique. Selon l'invention, le premier polymère peut comporter 1 à 99 % en poids d'acrylamide ou méthacrylamide et au moins 0,1 % en poids de monomère difonctionnel. Selon l'invention, le monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié peut être utilisé à raison de 0,1 % en poids de premier polymère. Ainsi, à titre de premier polymère, on utilise selon l'invention soit du type polyacrylamide à base de monomères H2C=CR3-CO-NR1R2 où RI et R2 sont identiques ou différents et représentent H ou un groupe alkyle en CI à C6, et R3 est H ou Me, ou les copolymères avec l'acide acrylique ou méthacrylique, ou encore des copolymère d'acrylamide et de méthylènebisacrylamide. A titre de seconds comonomères, ont peut utiliser l'acide acrylique, l'acide méthacrylique, l'acrylate ou le méthacrylate de sodium, le N,N-diméthylacrylamide, les acrylates ou méthacrylates de méthyle, éthyle, propyle, butyle, phényle, glycidyle ou dihydroxypropyle ou tout autre comonomère similaire, ou leurs mélanges. Les procédés de préparation des polymères utilisables sont décrits dans US 4 685 000 et US 3 535 265. Comme cela apparaîtra dans les exemples, le premier polymère est de préférence un copolymère acrylamide/N,N'-méthylène-bis-acrylamide. II est préparé de façon usuelle et de préférence en présence de N,N,N',N'tétraméthyl-éthylène-diamine (TMED) additif usuel de polymérisation radicalaire, et d'un amorceur radicalaire. Le monomère difonctionel présent dans le polymère 1 et éventuellement présent dans le polymère 2 est choisi parmi le méthylène-bisacrylamide ou méthylène-bis-méthacrylarnide, de préférence, mais d'autres monomères difonctionels sont envisageables, par exemple propylèneglycol- d iacrylate, propylèneglycol-diméthacrylate, éthylèneglycol-diacrylate ou dans l'éthylèneglycol-bis-acrylate ou méthacrylate. A titre d'amorceur radicalaire, ors peut utiliser les amorceurs usuels tels que les dialkylperoxides, hydroperoxides, diacylperoxides, peresters, polyoxides organiques, composés diazo, ozone, halogènes, persulfate, sels métalliques, par exemple, etc. Le second polymère (polymère 2) résulte de l'interaction d'un premier polymère avec du glyoxal, dans des proportions de l'ordre de 0,1 à 5 moles de glyoxal par mole de CONH2 dans le premier polymère, de préférence 0,5 à 1,5 mole de glyoxal par mole de CONH2, et de façon encore préférée 0,8 à 1,3 mole par mole de CONH2, plus précisément préférée de 0,9 à 1,1 mole de glyoxal par mole de CONH2 dans le premier polymère. Ceci correspond à des proportions de l'ordre de 0,2 à 20 % en poids, de préférence 0,5 à 10 % en poids de glyoxal dans le système liant, de façon encore préférée de 1 à 3 % en poids de glyoxal dans le système liant. Selon l'invention, dans le mélange du premier et du second polymère au glyoxal (polymère 2), le premier est majoritaire. Ils sont mélangés dans des proportions allant d'environ 1 à environ 50 % en poids sec du résultat de l'interaction polymère-glyoxal dans le premier polymère, de préférence 2 à 30 % en poids. De plus, selon l'invention, le pourcentage en poids du système liant dans la couche stationnaire est d'environ 0,5 à 20 % en poids, de préférence 1 à 10 %, de façon encore préférée 2 à 6 % en poids, et plus précisément préférée 3 à 5 % en poids de la couche. Ainsi on peut dans un premier temps mélanger le premier polymère et le second polymère préalablement préparé, avec le matériau de base pour phase stationnaire, coucher ce mélange sur le support et chauffer. On peut aussi faire le mélange clu premier polymère avec la phase stationnaire, puis mélanger le second polymère préalablement préparé au mélange du premier polymère et de la phase stationnaire, coucher ce mélange sur le support et chauffer. Néanmoins, dans un autre mode de réalisation, on peut mélanger le premier polymère et la phase stationnaire, coucher ce mélange sur le support, y adjoindre le second polymère préalablement préparé ou du glyoxal, puis chauffer. Selon un autre aspect de l'invention, la surface du support est préparée avant le couchage, par une étape qui introduit sur le support des sites d'accrochage pour le système liant, par exemple une étape de préoxydation suivie du dépôt d'un film du second polymère. Ainsi, on prépare le support d'aluminium par un pré-traitement oxydant. De tels traitements (eau/air) sont usuels pour former de l'alumine en surface. De tels traitements forment des irrégularités de surface qui permettent la liaison mécanique au support. Les supports en verre sont traités pour former des sites silanol, à la soude. Les supports en plastique peuvent être oxydés au plasma ou par effet Corona, par exemple. Une solution liquide du second polymère est alors appliquée sur le support préoxydé par exemple inférieure à 40 % pds, de préférence inférieure à 20 % pds, par exemple environ 10 9'o. Le film peut être appliqué par enduction, par exemple au pinceau, ou par immersion, puis essuyé, ou par pulvérisation ou tout autre moyen adapté au dépôt d'un tel film. On procède à la réticulation, par exemple par chauffage pendant un temps nécessaire à la réticulation, par exemple à des températures de l'ordre de 100 à 130 C pendant des temps variant de 10 minutes à une heure, ceci dépendant de la nature du polymère. Cette étape permet d'améliorer l'adhésion de la couche au support. Exemple 1: Préparation du polymère 1 selon US 4,685,000 On a dissous 5 g d'acrylamide et 500 mg de N,N'-méthylène-bisacrylamide dans 250 ml d'eau distillée. On a alors ajouté 0,75m1 de N,N,N',N'-tétraméthyl-éthylènediamine (TMED) à la solution, sous agitation. Enfin, on a versé 200 mg de (NH4)2S2O8 dissous dans 0,750 ml d'eau distillée au centre de la solution. La solution a alors été fortement agitée quelques secondes et on l'a laissé gélifier une demi-heure. Le gel légèrement teinté d'opaline a été agité jusqu'à obtenir une composition lisse. 250 ml d'acétone ont été versés lentement au centre de cette composition sous agitation, et on a agité ensuite durant 15 minutes. Après avoir versé l'acétone en excès, on a récupéré un précipité blanc et on l'a dissous dans 200ml d'eau distillée avec un mélangeur. La solution obtenue, homogène et sans précipité, contient 0,022g/ml de polyacrylamide et présente une densité de 0,988/mI. Exemple 2: Préparation de polymère réticulable 2 3,785 ml d'une solution de glyoxal à 40% Pds dans l'eau ont été dissous dans 37,865 ml d'eau distillée et passés aux ultrasons pendant 5 minutes. 118,350 ml d'une solution de polymère obtenu de façon analogue à celle de l'exemple 1, contenant 0,019 g.lml de polymère et de densité 0,96 g/ml ont alors été ajoutés au goutte à goutte au centre de la solution de glyoxal sous agitation. La composition obtenue a enfin été passée aux ultrasons pendant 5 minutes. La composition ainsi obtenue présente aune concentration en polymère de 0, 2 mol/I. Exemple 3: Préparation d'un support en aluminium La préparation des plaquettes d'aluminium plates implique la préparation préalable a) d'un polymère 1, de façon analogue à celle de l'exemple 1, et b) d'une solution du polymère 2, de façon analogue à la façon décrite à l'exemple 2. a) On a dissous 1 g d'acrylamide et 100 mg de N,N'-méthylènebisacrylamide dans 50 ml d'eau distillée. On a alors ajouté 0,150 ml de N, N,N',N'-tétraméthyl-éthylène-diamine (TMED) à la solution, sous agitation. Enfin, on a versé 40 mg de (NH4)2S2O8 dissous dans 0,150 ml d'eau distillée au centre de la solution. La solution a alors été fortement agitée quelques secondes et on l'a laissé gélifier une demi-heure. Le gel légèrement teinté d'opaline a été mélangé jusqu'à obtenir une composition lisse. 50 ml d'acétone ont été versés lenternent au centre de la composition sous agitation, et on a agité ensuite durant 15 minutes. Après avoir versé l'acétone en excès, on a récupéré un précipité blanc et on l'a dissous dans 25m1 d'eau distillée avec un mélangeur. La solution concentrée obtenue, lisse et sans précipité, contient 0, 036g/ml de polyacrylamide et présente une densité de 0,98g/ml. b) 1,435 ml d'une solution de glyoxal à 40% Pds dans l'eau ont été dissous dans 2,165 ml d'eau distillée et passés aux ultrasons pendant 5 minutes. 21,400 ml de la solution concentré de polymère obtenue en a) ont alors été ajoutés au goutte à goutte au centre de la solution de glyoxal sous agitation. La solution a enfin été passée aux ultrasons pendant 5 minutes. La solution ainsi obtenue présente une concentration en polymère de 0,5 mol/I. c) Une plaquette d'aluminium a été degraissée au CH2Cl2, plongée dans l'eau bouillante pendant 2 minutes et séchée au four à 120 C. 2 ml de la solution du polymère obtenue en b) ont alors été coulés 5 et étalés à la raclette sur la plaquette, qui a finalement été séchée à nouveau au four à 120 C pendant 1 min. Exemple 4: Préparation de la phase stationnaire avant dépôt. 7,3 ml de la solution de polymère obtenu à l'exemple 1 ont été dissous dans 8,5 ml d'eau distillée. La solution de polymère ainsi obtenue a été agitée pendant 5 minutes et passée aux ultrasons pendant 5 minutes. 5 g de silice Silice Merck Silica 60 45 pm ont alors été ajoutés à la solution sous agitation, et le mélange a été agité sous vide pendant 20 minutes. Finalement, après passage aux ultrasons du mélange obtenu pendant 7 minutes, 2,2 ml de la solution cle polymère obtenue à l'exemple 2 ont été versés doucement au centre du mélange agité et le mélange résultant a été agité sous vide pendant 5 minutes. Exemple 5: Préparation de la phase stationnaire avant dépôt. De même, on a préparé une suspension pour préparer une couche de phase stationnaire avec 5,810 ml de la solution de polymère obtenu à l'exemple 1 dissous dans 6,260 ml d'eau distillée. La solution de polymère ainsi obtenue a été agitée pendant 5 minutes et passée aux ultrasons pendant 5 minutes. 4 g de silice Zeochem C.Gel 5-2C) pm ont alors été ajoutés à la solution sous agitation, et le mélange a été agité sous vide pendant 20 minutes. Finalement, après passage aux ultrasons du mélange obtenu pendant 7 minutes, 0,170 ml de la solution de polymère obtenue à l'exemple 2 ont été versés doucement au centre du mélange agité et le mélange résultant a été agité sous vide pendant 5 minutes. 16 Exemple 6: Dépôt sur plaque Sur une plaque on dépose un excès de la suspension préparée ci- dessus (ex 4 ou 5) qui est ensuite étalée à l'aide d'une réglette ajustée pour laisser une couche de 200 pm de suspension humide de manière uniforme sur la surface de l'aluminium. On laisse la couche sécher à l'air libre pendant 1 heure. puis on la place dans un four à 120 pendant 20 min. L'épaisseur finale obtenue est d'environ 80 pm. Exemple 7: plaques avec silice RP18 On procède selon le procédé des exemples 4 et 6, avec des polymères préparés de façon analogue aux exemples 1 et 2 et avec de la silice RP18 (Merck LiChroprep RP-Select B, 25-40 prn). 1 ml éthanol est ajouté à 5.1 ml de polymère 1 dont la concentration est de 7,2 % en poids avant de l'ajouter à 4 g silice. Après avoir obtenu une suspension homogène, on ajoute 0,74 ml de polymère 2 de l'exemple 2 et 3,37 ml d'eau, puis on suit le reste du protocole de l'exemple 4 et les proportions, puis sur une plaque d'aluminium traité, on a étalé et séché selon l'exemple 6. Exemple 8: plaques avec silice R.P18 endcappée On procède comme à l'exemple 7, en utilisant pour phase stationnaire: RP18 3 pm sphérique et endcappée Alltech Exsil 80 ODS, 3 pm . Exemple 9: étalement sans pré-traitement Les plaques ont été préparées selon l'exemple 7 à ceci près que la plaque aluminium est seulement dégraissée au dichlorométhane, c'est-à-5 dire qu'elle n'est pas préalablement oxydée. La phase stationnaire a été étalée et séchée comme dans l'exemple 6. Exemple 10: Test de stabilité à l'eau (résistance à l'eau) Méthode et Résultats a) La stabilité des plaquettes portant d'une couche de phase stationnaire a été déterminée par OPLC en utilisant une cassette de développement radial 20x20 cm. Après avoir pompé 300 pl d'eau dans des conditions de flux forcé à une vitesse de flux de 100 pi/min, la cassette est retirée de l'appareil OPLC et la couche inspectée pour constater visuellement l'état de la phase stationnaire. On a noté si la silice est arrachée du support, ou si la silice est venue s'appliquer à la couche supérieure en Teflon de la cassette ou si la couche est dégradée mécaniquement, ou si aucun dommage n'est visible. b) Résultats - Une plaque commerciale (Merck ref 105560) jointoyée on observe que la silice RP18 se détache cle la plaquette aluminium. Elle est poudreuse, montrant un manque de cohésion et d'adhésion de la couche. - Une plaque selon l'exemple 6 a été testée selon l'exemple 10a). On observe que la silice est maintenue en parfait état sur le support et la silice ne se détache pas. - Une plaque selon l'exemple 7 a été testée selon l'exemple 10a). On observe que la silice RP18 est maintenue en parfait état sur la plaquette et la silice ne se détache pas. - Une plaque préparée selon l'exemple 8 présente après essai une couche parfaitement adhésive et cohésive. - Une plaque préparée selon l'exemple 9 présente après essai une couche cohésive sans adhésion. Exemple 11: séparation d'échantillons Méthode et résultats a) Des analyses séparatives en ligne (on-line) ont été réalisées pour des surfaces de plaquettes de 5x20 ou 20x20 cm2 dans un système OPLC usuel. On équilibre la plaquette avec le solvant d'élution à un débit de 200 pl/min. Un mélange standard de paraben (méthyl-/éthyl-/propyl-/ et butyl- paraben) a été préparé en le dissolvant à raison de 1 mg/ml dans un mélange eau/acétonitrile (50:50). L'élution avec un rnélange isocratique (50:50 acétonitrile eau) a été faite continuellement sur une période d'une semaine à un débit de l'ordre de 200 pl/min. Périodiquement, pendant cette semaine la séparation du paraben a été réalisée sur système OPLC équipé d'une vanne d'injection manuelle et d'un détecteur d'UV. b) Résultats - Avec une plaquette commerciale (Merck réf. 105560), coupées à la dimension 5x20 cm et jointoyée avec élastomère pour OPLC. Dans le test décrit ci-dessus, on a observé dès l'obtention de l'équilibre une contrepression très importante, supérieure à 40 Bar. Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et que l'on a retiré la plaquette, la silice est tombée de son support, révélant un manque 25 d'adhésion au support. Même avec une plaquette Merck 105560 20x20 cm2, la contrepression a été aussi très forte. Ces colonnes sont inexploitables car les pics d'élution ont été très irréguliers (large ou dédoublés) dès la première injection, montrant une inhomogénéité de la phase de séparation sur la plaque. Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et l'on a retiré la plaquette, la silice est tombée de son support. - Avec une plaquette commerciale (Machery-Nagel réf. Alugram C18), de dimensions 5x20 cm et jointoyée avec élastomère pour OPLC, on a observé une contrepression trop importante, supérieure à 40 Bar. Toutefois, un gradient d'élution de solvants a pu être fait et répété sur une période d'une semaine. Les temps de rétention des différents composés on été stables. Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et l'on a retiré la plaquette, la silice est tombée de son support. - Avec une plaquette selon l'exemple 9, de dimensions 5x20 cm et jointoyée avec élastomère pour OPLC. On a observé une contrepression moyenne à faible (30 à 40 Bar). Un gradient d'élution de solvants a pu être fait et répété sur une période d'une semaine. Les temps de rétention des différents composés ont été stables. Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et l'on a retiré la plaquette, la silice n'adhérait pas sur le support, cependant, elle est restée cohésive, comme un film, et pouvant être retirée d'une seule pièce. - Avec une plaquette selon les exemples 7 et 8, de dimensions 5x20 cm et jointoyée avec élastomère pour OPLC. On a observé une contrepression moyenne à faible (30 à 40 Bar). Un gradient d'élution de solvants a pu être fait sur une période d'une semaine. Les temps de rétention des différents composés ont été stables. Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et l'on a retiré la plaquette, la silice adhérait sur le support et est restée cohésive. REVENDICATIONS 1. Utilisation du glyoxal dans un système liant pour couche de matériau de séparation par chromatographie liquide à base d'une phase stationnaire particulaire. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le système liant comporte un premier polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié et un second polymère du type polyacrylamide résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et éventuellement d'un ou plusieurs seconds comonomères et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le glyoxal est présent pour 0,2 à 20 % en poids de glyoxal du système liant. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le glyoxal est présent pour 0,5 à 10 % en poids de glyoxal dans le système liant, de préférence de 1 à 3 % en poids. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le pourcentage en poids de liant dans la couche stationnaire est de l'ordre de 0,5 à 20 % en poids de la couche. 6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le pourcentage en poids de liant dans la couche stationnaire est de 25 l'ordre de 1 à 10 % en poids, de préférence 2 à 6 % en poids, et de façon encore préférée 3 à 5 % en poids de la couche. 7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le premier monomère du type acrylamide est choisi parmi l'acrylamide et le méthacrylamide. 8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le comonomère est choisi parmi l'acide acrylique, l'acide méthacrylique, l'acrylate ou le méthacrylate de sodium, le N,Ndiméthylacrylamide, les acrylates ou méthacrylates de méthyle, éthyle, propyle, butyle, phényle, glycidyle ou dihydroxypropyle. 9. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en 10 ce que le premier polymère comporte 1 à 99 % en poids d'acrylamide ou méthacrylamide et au moins 0,1 % en poicls de monomère difonctionnel. 10. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que le monomère difonctionnel est choisi parmi le méthylène-bisacrylamide ou méthylène-bis-méthacrylamide, propylèneglycol-diacrylate, propylèneglyc:ol-diméthacrylate, éthylèneglycol- diacrylate ou, de préférence l'éthylèneglycol-bis-acrylate ou méthacrylate. 11. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que le monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié est utilisé à raison de 0,1 % en poids de premier polymère. 12. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisée en ce que l'interaction du premier polymère avec du glyoxal est faite dans des proportions de l'ordre de 0,1 à 5 moles de glyoxal par mole de CONH2 dans le premier polymère. 13. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce que l'interaction du premier polymère avec du glyoxal est faite dans des proportions de l'ordre de 0,5 à 1,5 mole de glyoxal par mole de CONH2 dans le premier polymère. 14. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce que l'interaction du premier polymère avec du glyoxal est faite dans des proportions de l'ordre de 0,8 à 1,3 mole par mole de -CONH2, de préférence de 0,9 à 1,1 mole de glyoxal par mole de CONH2 dans le premier polymère, 0,2 à 20 % en poids de glyoxal dans le système liant. 15. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisée en ce que le premier polymère et le second sont mélangés dans des proportions allant d'environ 1 à 50 % en poids sec du résultat de l'interaction polymère glyoxal dans le premier polymère ou copolymère. 16. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisée en ce que le premier polymère et le second sont mélangés dans des proportions allant d'environ 2 à 30 % en poids en poidls sec du résultat de l'interaction polymère glyoxal dans le premier polymère ou copolymère. 17. Plaque de séparation pour chromatographie du type comportant une couche de phase stationnaire liée déposée sur un support, caractérisée en ce que la phase stationnaire liée comporte au moins un matériau de base pour phase stationnaire et un système liant comportant du glyoxal. 18. Plaque de séparation selon la revendication 17, caractérisée en ce que le système liant comporte au moins un polyacrylamide résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et éventuellement, d'un ou plusieurs comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié. 19. Plaque de séparation pour chromatographie selon l'une des revendications 17 ou 18, caractérisée en ce que le système liant comporte un premier polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères et d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié et le résultat de l'interaction du glyoxal avec un second polymère polyacrylamide résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié. 20. Plaque de séparation selon l'une des revendications 13 ou 14, caractérisée en ce que ledit second polymère, avant son interaction 10 avec le glyoxal, est identique audit premier polymère. 21. Procédé de préparation d'une plaque de séparation par chromatographie du type comportant une couche d'un matériau de base pour phase stationnaire, liée par un système liant, déposée sur un support, caractérisé en ce que l'un au moins du système liant de la phase stationnaire et du support comporte un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide el: éventuellement d'un ou plusieurs seconds comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié traité au glyoxal. 22. Procédé de préparation d'une plaque de séparation pour chromatographie du type comportant une couche d'un matériau de base pour phase stationnaire, liée déposée sur un support, caractérisé en ce qu'il comporte le mélange d'un premier polymère du type pollyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylarnide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié avec le matériau de base de la phase stationnaire, le couchage de la phase stationnaire liée sur le support, le chauffage de la phase stationnaire liée couchée sur le support, l'adjonction du glyoxal étant réalisée a) par mélange d'un second polymère polyacrylamide résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié audit premier polymère ou audit mélange dudit premier polymère et du matériau de base de la phase stationnaire, avant couchage; ou b) l'ajout d'un second polymère du type polyacryllamide résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et éventuellement, d'un ou plusieurs comonomères et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié et/ou de glyoxal à la phase stationnaire couchée sur le support entre le couchage et le chauffage. 23. Procédé selon la revendication 21 ou 22, caractérisé en ce que le support est traité avant couchage en déposant une solution du second polymère sur le support préoxidé. 24. Procédé de préparation d'un liant pour couche de phase stationnaire par chromatographie liquide, dans lequel on traite un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié, avec du glyoxal. 25. Procédé de préparation selon la revendication 24, caractérisée en ce que le traitement du polymère avec du glyoxal est fait dans des proportions de l'ordre de 0,1 à 5 moles de glyoxal par mole de CONH2 dans le polymère. 26. Procédé de préparation selon la revendication 24 ou 25, caractérisée en ce que le traitement du polymère avec du glyoxal est fait dans des proportions de l'ordre de 0,5 à 1,5 mole de glyoxal par mole de -CONH2, et, de préférence 0,8 à 1,3 mole par mole de -CONH2, de façon encore préférée de 0,9 à 1,1 mole de glyoxal par mole de CONH2 dans le polymère.