Brevet FR2862878A1 — publié le 20050603

La présente invention a trait au domaine des substrats métalliques revêtus, en particulier à usage médical tels que les endoprothèses (encore appelées stents) utilisées dans le traitement des maladies sténosantes. Pour rendre ces endoprothèses plus efficaces et mieux tolérées, leur surface peut être recouverte de substances d'origine biologique telles que le collagène, l'héparine, la phosphorylcholine ou encore l'acide désoxyribonucléique (ADN), de polymères tels que les silicones, les polyuréthannes ou les polytétrafluoroéthylène expansés, de céramiques ou oxydes de nature variable (carbone, nitrure ou oxyde de titane, carbure de silicium etc...). Les différentes modifications de surface peuvent dans certains cas améliorer le comportement in vivo des endoprothèses mais ne suffisent pas toujours à prévenir des complications telles que la resténose. On connaît aujourd'hui des implants métalliques qui sont recouverts d'agents thérapeutiques, rapamicyne et paclitaxel, qui inhibent au moins partiellement le phénomène de resténose lorsque ces agents sont relargués localement. Ces produits sont commercialisés respectivement par les sociétés Cordis et Boston Scientific. On connaît de W099/29734 ou de l'article de D. Logeart-Avramoglou et J. Jozefonvicz paru dans J. Biomed. Mater. Res (Appt. Biomater) 48, 578-590, 1999 des dérivés de dextrane fonctionnalisés qui répondent à la formule DMCaBbSucSd dans laquelle: D représente une chaîne polysaccharidique, constituée par des 25 enchaînements d'unités a-D-glucopyranosiques reliées entre elles par des liaisons a(1-6) ; MC représente des groupes méthylcarboxylates; B représente des groupes carboxymethylbenzylamides; Su représente des groupes sulfates; S représente des groupes sulfonates et a, b, c et d représentent le degré de substitution (ds), exprimé par rapport au nombre de fonctions hydroxyles libres dans une unité glucosidique du dextrane, respectivement en groupements MC, B, Su et S, a étant égal à 0 ou à 0,2, b étant égal à 0 ou à 0,1, c étant égal à 0 ou à 0,1 et d étant égal à 0 ou à 0,15, à condition que lorsque d=0, a et/ou b soient 0. On connaît de WO97/08206, WO01/15654 ou de l'article Biological activities of polysaccharides from marine algae , C. Boisson-Vidal et al. , Drugs of the Future 20 (12) :1237-1249, 1995, des polysaccharides sulfatés de bas poids moléculaire extraits d'algues marines présentant des propriétés antithrombotiques et antiprolifératives. On connaît de WO03/011355 des implants métalliques, dont des endoprothèses pour angioplastie, qui sont recouvertes de dérivés fonctionnalisés du dextrane liés de manière covalente à la surface de l'endoprothèse en vue de conférer à cette dernière des propriétés biologiques d'intérêt de manière permanente en fixant définitivement sur l'endoprothèse les agents ou composés actifs retenus. Toutefois, dans certains cas, et notamment lorsque l'on recherche un effet à distance de la surface métallique sur toute la longueur du segment artériel stenté, il est nécessaire que l'endoprothèse ne soit pas recouverte de façon définitive afin d'avoir une diffusion progressive des agents ou composés actifs retenus dans le vaisseau au contact. On connaît de WO98/34656 des compositions à base de collagène et d'un dérivé de dextrane pour réaliser des barrières biodégradables utilisées dans la prévention des adhérences post-opératoires. Le but de la présente invention est de conférer à un substrat métallique pouvant être utilisé comme endoprothèse, par exemple un stent, des propriétés biologiques d'intérêt, compte tenu de l'application ou de l'indication de ladite prothèse, et ce de manière intégrée de façon temporaire au substrat, c'est à dire sans modifier les propriétés mécaniques intrinsèques dudit substrat d'une part, et en fixant temporairement sur ce substrat les agents ou composés actifs retenus pour exhiber certaines ou la totalité des propriétés biologiques précitées par diffusion progressive ou par action directe de ces agents ou composés actifs. Un premier objet de la présente invention concerne un substrat métallique, caractérisé en ce qu'il est revêtu d'une composition de revêtement 5 comprenant: - au moins un composé polysaccharidique, et - au moins un collagène. Un deuxième objet de la présente invention concerne un procédé de revêtement d'au moins une partie de la surface d'un substrat métallique, 10 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - a ) on prépare une composition de revêtement comprenant i ) au moins un composé polysaccharidique, et ii ) au moins un collagène, - b ) on immerge la partie de la surface du substrat à revêtir dans la composition de revêtement obtenue en a ), - c ) on retire ledit substrat de la composition de revêtement et on laisse sécher. Un autre objet de l'invention est un substrat métallique revêtu, susceptible d'être obtenu selon le procédé décrit ci-dessus. Un autre objet de la présente invention est un objet à usage médical ou chirurgical, du type implant, par exemple une endoprothèse vasculaire (dite "stent") pour angioplastie coronarienne transluminale percutanée, comprenant un substrat métallique dont au moins une partie de la surface est revêtue par une composition de revêtement telle que décrite ci-dessus. Un autre objet de l'invention est une endoprothèse comprenant un 25 substrat métallique revêtu d'une composition de revêtement, tel que décrit ci-dessus. Ainsi l'invention permet d'obtenir un objet à usage médical ou chirurgical, du type implant, par exemple une endoprothèse vasculaire (dite "stent") pour angioplastie coronarienne transluminale percutanée, qui conserve toutes ses propriétés mécaniques, qui ne déclenche pas de réponse biologique défavorable chez le sujet receveur et évite la resténose. On entend par propriétés biologiques intrinsèques les activités biologiques précitées et notamment des activités anti-complémentaires et une activité modulatrice de la prolifération des cellules endothéliales et musculaires lisses vasculaires ou encore des propriétés anticoagulantes ou une activité antibactérienne. La présence des composés polysaccharidiques selon l'invention à la surface de l'endoprothèse permet de développer sur la surface et autour de cette dernière des interactions spécifiques avec le milieu biologique dans lequel elle est implantée; on observe notamment une inhibition de la prolifération des cellules musculaires lisses humaines et une stimulation de la prolifération des cellules endothéliales au contact de l'endoprothèse, processus qui favorise l'intégration de l'endoprothèse dans le milieu biologique. En outre, en fonction de leurs degrés de substitution en différents groupements fonctionnalisés, les composés polysaccharidiques décrits cidessus peuvent présenter des activités anti-complémentaires et donc antiinflammatoires, des activités antibactériennes ou encore des propriétés anticoagulantes et antithrombotiques. En outre, ces dérivés peuvent être utilisés comme substituts de plasma sanguin. Grâce à l'association spécifique selon l'invention dans la composition de revêtement d'un composé polysaccharidique et d'un collagène, il est possible d'obtenir une quantité maximale de produit actif à la surface du substrat métallique. Grâce à la composition de revêtement selon l'invention, les produits actifs sont libérés progressivement. Cela permet le contrôle de la resténose au niveau de l'endoprothèse par exemple et évite certaines complications ultérieures dues à la mise en place de l'endoprothèse dans le corps du patient. Les objets ou endoprothèses selon l'invention présentent également comme caractéristiques le fait qu'ils n'entraînent pas la diffusion dans l'organisme de produits toxiques. Ils s'avèrent également non cytotoxiques et non hémolytiques. Un substrat métallique selon l'invention est un support, dont la surface est destinée à recevoir le revêtement selon l'invention, réalisé en métal ou dont la surface est revêtue d'un métal ou d'un alliage comme les aciers inoxydables, les alliages à base de chrome et de cobalt ou même les superalliages. Par métal selon l'invention, on entend tout matériau constitué d'un corps simple bon conducteur de la chaleur et de l'électricité, ayant un grand pouvoir réflecteur à l'état poli, et donnant des oxydes qui réagissent avec l'eau pour donner des bases comme le fer, le cobalt, le chrome. Par alliage, on entend tout produit métallique homogène obtenu par l'association de plusieurs métaux avec une nette prédominance de l'un d'entre eux, en vue de conférer à ce dernier des caractéristiques déterminées. De préférence, le substrat métallique de l'invention est un alliage, par exemple un acier inoxydable, ou un superalliage, par exemple le phynox. La composition de revêtement du substrat selon l'invention comprend au moins un composé polysaccharidique. Par composé polysaccharidique, on entend, au sens de la présente demande, tout polymère, naturel ou synthétique, comprenant une chaîne polymère constituée d'une multiplicité de motifs osidiques encore appelée chaîne polyosidique, ladite chaîne étant substituée ou non. De préférence, les composés polysaccharidiques de l'invention comprennent au moins un groupe choisi parmi les méthylcarboxylates, les carboxyméthylbenzylamides, les sulfonates, dont les carboxyméthylsulfonates, les sulfates et leurs mélanges. Dans ce cas, au moins une fonction hydroxyle libre d'au moins un motif osidique est substituée par un groupe choisi parmi les méthylcarboxylates, les carboxyméthylbenzylamides, les sulfonates, dont les carboxyméthylsulfonates, les sulfates et leurs mélanges. Outre des groupes méthylcarboxylates, carboxyméthylbenzylamides, sulfonates, sulfates ou leurs mélanges, les composés polysaccharidiques convenant à l'invention peuvent comprendre au moins un groupe choisi parmi les chaînes comportant des fonctions hydroxyles, des fonctions amide, des groupes benzyles et/ou leurs mélanges. De préférence, la chaîne polyosidique du composé polysaccharidique est celle d'un polysaccharide choisi dans le groupe constitué par l'amidon, le glycogène, les celluloses, les dextranes, les poly-a-1,3-glucanes, les pullulanes, la chitine, les arabanes, les xylanes, les fucanes, les pectines, les chondroitines sulfates, les mucopolysaccharides et leurs dérivés. De préférence, la chaîne polyosidique du composé polysaccharidique selon l'invention est celle d'un dextrane. De préférence, le dextrane est un 5 polysaccharide constitué d'un enchaînement d'unités a-D-glucopyranosiques reliées entre elles par des liaisons a(1-6). De préférence, le composé polysaccharidique est un dextrane ayant une masse molaire moyenne comprise entre 10000 et 1000000 g/mol, ayant par exemple une masse molaire égale à 40000, 70000 ou 460000 g/mol. De préférence, le composé polysaccharidique de la composition de revêtement du substrat de l'invention est choisi parmi les composés de formule générale DMCaBbSucSd dans laquelle: D représente une chaîne polysaccharidique, constituée par des enchaînements d'unités a-Dglucopyranosiques reliées entre elles par des 15 liaisons a(1-6), MC représente des groupes méthylcarboxylates, B représente des groupes carboxyméthylbenzylamides, Su représente des groupes sulfates, S représente des groupes sulfonates, et a, b, c et d représentent le degré de substitution (ds), exprimé par rapport au nombre de fonctions hydroxyles libres dans une unité glucosidique de la chaîne polysaccharidique D (ou dextrane), respectivement en groupements MC, B, Su et S, a étant égal à 0 ou >_à 0,2, b étant égal à 0 ou >_à 0,1, c étant égal à 0 ou >_à 0,1 et d étant égal à 0 ou Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le composé polysaccharidique est choisi parmi les dérivés de dextrane, possédant un poids moléculaire supérieur à environ 5000 g/mol, constitués de manière statistique de motifs D, MC, B, Su et S, les motifs D étant des motifs osidiques de dextranes, les motifs MC, B Su et S étant tels que définis ci-dessus. De préférence encore, le composé polysaccharidique est choisi dans le groupe constitué par: - les composés polysaccharidiques répondant à la formule générale DMCaBbSucSd décrite ci-dessus dans laquelle a >0,7; 0,15 _0,5; 0,3 De tels composés polysaccharidiques, ainsi que leur procédé de 15 préparation, sont décrits dans WO99/29734. Dans une forme de réalisation de l'invention, le composé polysaccharidique est naturellement porteur de groupes sulfonates et/ou sulfates. De préférence, un tel composé polysaccharidique est choisi parmi l'héparine, les fucanes et leurs mélanges. La composition de revêtement du substrat selon l'invention comprend également au moins un collagène. Le collagène utilisable selon la présente invention est de préférence choisi parmi le collagène d'origine animale, le collagène d'origine humaine, comme par exemple le collagène humain placentaire, le collagène obtenu par des moyens de recombinaison génétique et leurs mélanges. Dans une forme de réalisation de l'invention, le collagène utilisé est du collagène d'origine animale. Le collagène d'origine animale est de préférence du collagène bovin ou porcin de type I. Le collagène d'origine humaine ou obtenu par recombinaison génétique 30 est de préférence du collagène de type I, de type III, de type IV ou leurs mélanges. Dans une forme de réalisation de l'invention, on utilise du collagène natif, solubilisé à pH acide ou après traitement par digestion à la pepsine. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le collagène est modifié par coupure oxydative. On peut utiliser à cet effet de l'acide périodique ou l'un de ses sels selon la technique décrite par Tardy et coll. (1986) dans la demande FR 2 601 371-A1. Selon la technique décrite dans cette demande, on soumet une solution acide de collagène à l'action de l'acide périodique ou l'un de ses sels par mélange avec une solution de cet acide ou sel à une concentration molaire comprise entre 1 et 10-5; de préférence entre 5x1 0"3M et 10-1M, à une température voisine de la température ambiante, pendant une durée pouvant aller de 10 minutes à 72 heures. Toujours selon cette technique, on utilise une solution acide de collagène dont la concentration est comprise entre 5 et 50 g/l. La concentration en collagène est de préférence 30 gll. Ce traitement provoque des coupures dans certains constituants du collagène qui sont l'hydroxylysine et les sucres et crée ainsi des sites réactifs sans en provoquer la réticulation. Le collagène oxydé ainsi préparé en solution est chauffé à une température de 37 C ou légèrement supérieure. Il en résulte que la structure hélicoïdale du collagène est dénaturée, au moins partiellement. Dans une variante de l'invention, on peut supprimer l'étape d'oxydation et utiliser directement la solution de collagène non oxydé initiale. De préférence, le collagène utilisé est du collagène de type I, extrait de dermes animaux, par solubilisation à pH acide ou par digestion à la pepsine et purifié par précipitations salines; il est utilisé soit après oxydation par l'acide 25 périodique, soit à l'état natif non oxydé. De préférence, selon le procédé selon l'invention, on prépare la composition de revêtement en mélangeant de façon homogène une solution de composé polysaccharidique et une solution de collagène. De préférence, la solution de composé polysaccharidique comprend, à 30 l'état liquide, entre 7,5 et 15% en poids du composé polysaccharidique en solution aqueuse. Dans une forme de réalisation de l'invention, la solution de composé polysaccharidique comprend en outre un polymère hydrophile plastifiant, naturel ou synthétique, différent dudit composé polysaccharidique. De préférence, ce polymère hydrophile plastifiant est choisi parmi le glycérol, le polyéthylène glycol, les polysaccharides non modifiés ou non fonctionnalisés, comme par exemple le dextrane, ou parmi les polysaccharides substitués par des fonctions carboxylates. Ainsi, de préférence, la composition de revêtement comprend, outre le composé polysaccharidique et le collagène décrits ci-dessus, au moins un polymère hydrophile plastifiant, naturel ou synthétique, différent dudit composé polysaccharidique, choisi parmi le glycérol, le polyéthylène glycol, les polysaccharides non modifiés ou non fonctionnalisés, comme par exemple le dextrane, les polysaccharides substitués par des fonctions carboxylates, et leurs mélanges. De préférence encore, la solution de collagène comprend du glycérol et du polyéthylène glycol. Ainsi, de préférence, la composition de revêtement comprend, outre le composé polysaccharidique et le collagène décrits ci-dessus, du glycérol et du polyéthylène glycol. Lors du mélange de la solution de composé polysaccharidique et de la solution de collagène, l'association du collagène avec le composé polysaccharidique se fait par interactions électrostatiques fortes de préférence avec les groupes porteurs de charges négatives de ce dernier, comme les groupes méthylcarboxylates, carboxyméthylbenzylamides, sulfates ou/et sulfonates. Ces interactions peuvent être complétées par une réticulation finale du réseau collagénique par tous moyens connus tels que l'addition de glutaraldéhyde, de polyaldéhydes macromoléculaires, ou autres agents chimiques, ou enfin par irradiation avec des sources ionisantes: U.V. ; Cobalt; Faisceau d'électrons. Le collagène est lié au composé polysaccharidique par formation d'un polyélectrolyte complexe grâce aux charges électriques complémentaires des deux principaux constituants que sont le collagène et le composé polysaccharidique. De préférence, selon le procédé selon l'invention, on immerge la partie de la surface du substrat métallique à revêtir dans la composition de revêtement comprenant le complexe de collagène et de composé polysaccharidique. Selon le procédé de l'invention, le composé polysaccharidique mis en oeuvre conserve ses propriétés biologiques intrinsèques après revêtement du substrat malgré les liaisons électrostatiques avec le collagène. De préférence, on immerge la partie de la surface du substrat métallique à revêtir dans la composition de revêtement afin de réaliser une enduction. Pour ce faire, la composition de revêtement est de préférence liquide. Elle peut être diluée si nécessaire. De préférence, cette composition présente une viscosité allant de 25 10"3 à 0,1 Pa.s mesurée sur un rhéomètre Rheovisco L2 (Rheo, Shannon Irlande) permettant la mesure de la viscosité dynamique par la résistance à la rotation d'un rotor dans la composition. L'enduction a lieu de préférence à une température comprise entre 30 C et 50 C, à un pH compris entre 5 et 8, durant un temps compris entre 2 secondes et 5 min. Pour réaliser une enduction optimale, l'immersion de la surface du substrat dans la composition de revêtement est de préférence réitérée à un nombre de reprises allant de 1 à 10. Selon le procédé de l'invention, on retire ensuite le substrat de la composition de revêtement et on laisse sécher la partie revêtue de sa surface. De préférence, le séchage se fait sous rotation constante afin d'obtenir une couche ou un film de revêtement homogène sur toute la surface revêtue dudit substrat métallique. De préférence la surface revêtue est mise à sécher sous hotte à une température comprise entre 10 C et 35 C et durant une durée comprise entre 6 et 36 heures. Dans une forme préférée de réalisation de l'invention, le procédé de l'invention comprend en outre une étape de stérilisation du substrat revêtu. De 30 préférence, cette stérilisation se fait par traitement au gaz d'oxyde d'éthylène. De préférence, l'épaisseur de la couche ou du film de revêtement, mesurée par microscopie électronique à balayage, va de 20 nm à 100 microns, et de préférence encore de 1 micron à 100 microns. - La figure 1 représente schématiquement la structure d'un dérivé fonctionnalisé de dextrane substitué par les différents groupements chimiques MC, B, Su et S fixés sur les unités glucosidiques D; à titre d'exemple, la position du substituant sur les différents carbones des unités glucosidiques est présentée sur le carbone 2. Les exemples suivants illustrent l'invention. EXEMPLE 1: préparation du collagène Le collagène de cet exemple est réalisé comme décrit dans le brevet Tardy et coll. : FR 8610160. Le collagène utilisé est du collagène bovin de type I en solution aqueuse à 3% (mN), extrait de dermes animaux, par solubilisation à pH acide ou par digestion à la pepsine et purifié par précipitations salines selon des techniques déjà décrites. Ce collagène oxydé est composé d'un enchevêtrement de trois chaînes aminées a de 100 000 g/mol chacune. On utilise de préférence des fibres sèches de collagène, obtenues par précipitation d'une solution acide de collagène par addition de NaCl, puis par lavages et séchage du précipité obtenu par des solutions aqueuses d'acétone de concentration croissante de 80% à 100%. Une solution de collagène à 30 gll est préparée par dissolution en HCI 0,01N. Son volume est de 49 litres. Elle est additionnée d'acide périodique à une concentration finale de 8 mM soit 1,83 g/I. On réalise l'oxydation à température ambiante voisine de 22 C, pendant 3 heures à l'abri de la lumière. Puis la solution est additionnée d'un volume égal d'une solution de chlorure de sodium pour obtenir une concentration finale de 41 g/l de NaCl. Après 30 minutes d'attente, le précipité est récolté par décantation à travers un tamis de toile de porosité voisine de 100 microns, puis lavé 4 fois avec une solution de NaCI 41 g/l en HCI 0,01N. On obtient 19 Kg de précipité de collagène salin acide. Ces lavages permettent l'élimination de toutes traces d'acide périodique ou dérivés iodés formés pendant l'oxydation du collagène. Ensuite plusieurs lavages en solution aqueuse d'acétone à 80% permettent la concentration du précipité de collagène et l'élimination des sels présents. Un lavage final en acétone 100% permet de préparer 3,6 Kg d'un précipité très dense de collagène oxydé acide, non réticulé, ne contenant aucune trace de produit chimique indésirable. EXEMPLE 2: Préparation des compositions de revêtement des 10 endoprothèses vasculaires 1) Support et solutions utilisés Le support utilisé consiste en une plaque de polychlorure de vinyle. 15 La solution de revêtement est une solution de collagène de type 1 ou 1+111 à 2,4% en poids, de glycérol à 2% en volume et de polyéthylène glycol (PEG) à 2% en poids mélangés à un composé polysaccharidique. Le composé polysaccharidique utilisé est un dérivé fonctionnalisé du dextrane, de masse molaire moyenne en poids 70 000 g/mol, de formule DMCO36B045Suo,6, correspondant à la formule générale DMCaBbSucSd telle que précédemment décrite dans la présente demande. Son protocole de préparation est tel que décrit dans le brevet européen publié sous le numéro 0146455. Ce dérivé fonctionnalisé du dextrane inhibe la prolifération des cellules musculaires lisses mais inhibe aussi l'activation du système du complément (test de CHSO réalisé) et stimule la prolifération des cellules endothéliales vasculaires. Ses activités spécifiques anticoagulantes et anticomplémentaires sont respectivement de 3,5 U1/mg et 0,13 pg/mL par comparaison à l'héparine dont l'activité anticoagulante est de 173 U1/mg et l'activité anticomplémentaire de 44,5 pg/mL. 2) Protocole Une solution composée de collagène, de PEG et de glycérol respectivement à 2,4% en poids, 2% en poids et 2% en volume est préparée à 5 37 C. Le pH de cette solution est fixé à 7 par ajout de NaOH. Une solution de DMCO36B0,45Suo,6, tel que décrit au point 1 ) ci-dessus, à 10% (mN), est préparée dans la solution de collagène-PEG-glycérol telle que décrite ci-dessus. Le pH est contrôlé et éventuellement réajusté à 7. La composition de revêtement ainsi obtenue est versée sur un film de PVC à raison de 0,133 g/cm2 puis laissée à sécher sous hotte durant 16 heures. EXEMPLE 3: Préparation de stents en aciers inoxydables selon la présente invention, nettoyage, revêtement et séchage 1) Support et solutions utilisés Le support utilisé consiste en un stent en acier inoxydable fourni par la société SOFRADIM sous la dénomination commerciale MedXflexy et répondant aux normes NF EN 12006-3 (Implants chirurgicaux non actifs. Exigences particulières relatives aux implants cardiaques et vasculaires. Partie 3: Prothèses endovasculaires (stents)) et ISO 25539-1 (Cardiovascular implants Endovascular devices Part 1: endovascular prostheses.) Les compositions de revêtement utilisées sont telles que décrites dans l'exemple 2 mais diluées avec 80%vol. d'eau distillée. Cette dilution permet d'éviter la formation de ponts de collagène entre les mailles du stent et ainsi de ne pas déformer le stent lors de sa mise en place sur son ballonnet. 2) Protocole Une composition de collagène-dérivé du dextrane-PEG-Glycérol respectivement à 0,48% en poids; 2% en poids; 0,4% en poids et 0,4% en volume est préparée telle que décrite au point 1 ) ci-dessus. Un stent est immergé verticalement 10 secondes dans la composition ainsi préparée puis extrait et laissé à sécher sous rotation durant 1 minute. L'opération est renouvelée 6 fois afin d'assurer un revêtement suffisant du stent. Le stent enduit est alors laissé à sécher définitivement en position verticale durant 16 heures sous hotte à flux laminaire. Le stent enduit est alors serti mécaniquement sur son ballonnet de dilatation de type PTA (percutaneous transluminal angioplasty), PTCA (percutaneous transluminal coronary angioplasty) ou PTRA (percutaneous transluminal renal angioplasty) puis stérilisé en présence d'oxyde d'éthylène ou par rayonnement afin de faciliter la réticulation du film à base de collagène. EXEMPLE 4: Préparation de stents en acier inoxydable sertis sur leur ballonnet selon la présente invention, revêtement et séchage 1) Support et solutions utilisés Le support utilisé consiste en un stent en acier inoxydable monté sur son ballonnet fourni par la société SOFRADIM sous la dénomination commerciale MedXFlexy et répondant aux normes NF EN 12006-3 (Implants chirurgicaux non actifs. Exigences particulières relatives aux implants cardiaques et vasculaires. Partie 3: Prothèses endovasculaires (stents)) et ISO 25539-1 (Cardiovascular implants Endovascular devices Part 1: endovascular prostheses). Les compositions de revêtement utilisées sont telles que décrites dansl'exemple 2 mais diluées avec 25%vol. d'eau distillée. Cette dilution permet d'éviter la formation de ponts de collagène entre les mailles du stent empêchant ainsi le déchirement du collagène lors de l'expansion du stent. 2) Protocole Une composition de collagène-dérivé du dextrane-PEG-Glycérol respectivement à 1,8% en poids; 7,5% en poids; 1,5% en poids et 1,5% en 5 volume est préparée telle que décrite au point 1 ) ci-dessus. Un stent serti est immergé verticalement 10 secondes dans la composition ainsi préparée puis extrait et laissé à sécher sous rotation durant 1 minute. L'opération est renouvelée 3 fois afin d'assurer un revêtement suffisant du stent. Le bout du ballonnet (extrémité distale) est débarrassé de la composition en excès par essuyage. Le stent serti enduit est alors laissé à sécher définitivement en position semi-verticale durant 16 heures sous hotte à flux laminaire puis stérilisé par traitement au gaz d'oxyde d'éthylène. EXEMPLE 5: Analyse de la surface des stents enduits 1) Description des appareils Afin de vérifier l'homogénéité du revêtement à la surface des stents, ceux-ci sont observés et leurs surfaces caractérisées chimiquement. Les méthodes d'analyse de la surface employées sont l'XPS (Spectroscopie de Photoelectron X) et le MEB (Microscope électronique à balayage). 2) Protocole L'appareil XPS employé est un ESCA S-Probe de Surface Science Instruments (SSI) avec source Al monochromatisée sous ultravide. Cet appareil analyse plusieurs surfaces de 0,3x1,2 mm2 sur une profondeur de 10 30 nm. Le MEB utilisé est un Leica S-440. Les échantillons sont métallisés par dépôt d'Or-Palladium sur leurs surfaces. 3) Résultats L'analyse XPS des stents tels que préparés et enduits à l'exemple 3, puis stérilisés à l'oxyde d'éthylène, a montré un revêtement homogène sur toute la surface des stents. L'indexation des pics est attribuée aux éléments du collagène et du dérivé du dextrane. Le substrat métallique n'est pas atteint par le faisceau d'électron, ce qui montre que la couche de revêtement est supérieure à 10 nm. L'analyse MEB a montré, selon les deux modes d'enduction, un revêtement homogène sur la surface et la tranche des fils du stent. L'épaisseur du revêtement a été évaluée à environ 1 pm en moyenne à la surface des fils du stent. EXEMPLE 6: Test de cytotoxicité du revêtement par essai de diffusion des extraits 1) Test, cellules témoins et échantillons utilisés Le test employé est un test de mesure indirecte basée sur la toxicité des produits diffusés ou relargués par le film de revêtement. Ce test suit la norme internationale ISO 10993-5, concernant l'évaluation biologique des dispositifs médicaux. Les supports utilisés sont des plaques de culture cellulaire 24 puits 25 commercialisées par la société Corning Costar. Le composé polysaccharidique est le dérivé de dextrane décrit dans l'exemple 2. Les cellules employées sont des cellules musculaires lisses immortalisées d'aorte de rats de la lignée BLC#5 en phase de croissance 30 exponentielle ensemencées à 10000 cellules par puits. Le véhicule d'extraction ainsi que le témoin négatif est un milieu de culture à 10% (VN) en sérum de veau foetal (SVF). Les échantillons utilisés sont des puits au fond desquels a été coulé un gel composé de collagène-PEG-Glycérol ou un gel composé de collagènederivé du dextrane-PEG-Glycérol, tel que décrit dans l'exemple 2, ainsi qu'une solution d'extraction contenant 2% (VN) de glycérol. 2) Protocole Les gels sont préparés de manière stérile puis coulés au fond des puits de plaques de culture. Ils sont alors laissés à sécher 24 heures en incubateur airICO2. Les puits sont alors remplis de 1,5 mL de milieu de culture à 10% (VN) SVF, et de milieu de culture à 10% (VN) SVF et 2% (VN) glycérol dans le cas d'une plaque vide. Les plaques sont alors placées pendant 72 heures dans un incubateur air/CO2. Après 72 heures d'incubation, les extraits sont récupérés et mis au contact des cellules BLC#5 en début de phase de croissance exponentielle. La densité cellulaire est déterminée au bout de 5 jours d'incubation à l'aide d'un compteur de cellules (coulter counter Coultronic ). Chaque expérience est effectuée trois fois. Les résultats sont donnés sous la forme d'une moyenne des trois mesures effectuées. 3) Résultats Le tableau I ci-dessous donne le nombre de cellules par puits au bout de 5 jours d'incubation. Tableau I: Effet des surfaces par diffusion des extraits sur les cellules musculaires lisses Témoin Gel de collagène- Collagène-dérivé du Glycérol négatif Glycérol-PEG dextrane-glycérol-PEG 680570 277000 112640 210000 Un effet d'inhibition de la prolifération des cellules musculaires lisses a été constaté pour la composition comprenant le coposé polysaccharidique et le collagène. Dans ce dernier cas, il semble que le relargage rapide de glycérol soit la cause de cette inhibition. EXEMPLE 7: Propriétés biologiques d'un film de collagène-dérivé du dextrane PEG-glycérol 1) Test, supports et cellules utilisés Le test utilisé est un test de prolifération des cellules directement sur un support enduit. Les supports et les produits utilisés sont tels que décrits dans l'exemple 6. Les cellules utilisées sont les cellules endothéliales humaines 15 immortalisées de la lignée EAhy 926. 2) Protocole Les cellules endothéliales sont ensemencées au fond des puits enduits 20 de gel de collagène-PEG-Glycérol et de gel de collagène- dérivé du dextrane-PEG-Glycérol ainsi que dans des puits témoins. Les cellules sont ensemencées à raison de 10000 cellules par puits. Les cellules sont maintenues 7 jours dans un incubateur air/CO2. Elles sont détachées toutes les 24 heures au moyen de la trypsine-EDTA et leur nombre est déterminé au compteur de cellules. Les milieux des puits à 10 % (VN) de SVF sont changés toutes les 48 heures. 3) Résultats Les résultats du test sont donnés dans le tableau Il cidessous. Ils sont présentés en nombre de cellules par cm2. Une meilleure prolifération est observée sur les films de collagènePEGGlycérol et sur les films de collagène-dérivé du dextrane-PEG-Glycérol que sur les puits témoins. Ces résultats indiquent que la prolifération des cellules endothéliales est 5 favorisée par le support à base de collagène, et que, en outre, la présence du dérivé fonctionnalisé du dextrane stimule cette prolifération. Tableau Il: Nombre de cellules par cm2 en fonction du temps et de la surface Puits témoins Collagène-PEG- Collagène-dérivé du dextraneGlycérol PEG-Glycérol TO 5000 5000 5000 JI 3500 6500 7200 J2 8000 17000 15500 J4 22500 Collagène dissous 58000 J5 55000 Collagène dissous 76000 J7 90000 Collagène dissous 98500 EXEMPLE 8: Propriétés biologiques d'un film de collagène-dérivé du dextrane-PEG-glycérol 1) Test, supports et cellules utilisés Le test utilisé est un test de prolifération des cellules directement sur un support enduit. Les supports et produits utilisés sont tels que décrits dans l'exemple 6. Les cellules utilisées sont les cellules musculaires lisses d'aorte de rat de la lignée BLC#5. 2) Protocole Les cellules musculaires lisses sont ensemencées au fond des puits enduits de gel de collagène-PEG-Glycérol et de gel de collagènedérivé du dextrane-PEG-Glycérol ainsi que dans des puits témoins. Les cellules sont ensemencées à raison de 10000 cellules par puits. Les cellules sont maintenues 7 jours dans un incubateur air/CO2. Elles sont décrochées toutes les 24 heures grâce à de la trypsine-EDTA et comptées au compteur de cellules. Les milieux des puits à 10 % de SVF sont changés toutes les 48 heures. 3) Résultats Les résultats du test sont donnés dans le tableau III cidessous. Ils sont présentés en nombre de cellules par cm2. Une meilleure prolifération est observée sur les films de collagène-PEG15 Glycérol que sur les puits témoins. La présence de dérivé du dextrane dans le gel inhibe très fortement l'adhérence et la prolifération des cellules musculaires lisses à la surface des puits. Tableau III: Nombre de cellules par cm2 en fonction du temps et de la surface Puits témoins Collagène-PEG- Collagène-dérivé du dextraneGlycérol PEG-Glycérol TO 5000 5000 5000 JI 13800 34500 495 J2 55500 78900 555 J4 306300 645000 745 J5 476000 Collagène dissous 1062 J7 747500 Collagène dissous 4515 REVENDICATIONS 1. Substrat métallique, caractérisé en ce qu'il est revêtu d'une 5 composition de revêtement comprenant: - au moins un composé polysaccharidique, et - au moins un collagène. 2. Substrat selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé polysaccharidique comprend une chaîne polymère constituée d'une multiplicité de motifs osidiques encore appelée chaîne polyosidique, ladite chaîne étant substituée ou non. 3. Substrat selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le composé polysaccharidique comprend au moins un groupe choisi parmi les méthylcarboxylates, les carboxyméthylbenzylamides, les sulfonates, dont les carboxyméthylsulfonates, les sulfates et leurs mélanges 4. Substrat selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le composé polysaccharidique comprend en outre au moins un groupe choisi parmi les chaînes comportant des fonctions hydroxyles, des fonctions amide, des groupes benzyles et/ou leurs mélanges. 5. Substrat selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que la chaîne polyosidique du composé polysaccharidique est celle d'un polysaccharide choisi dans le groupe constitué par l'amidon, le glycogène, les celluloses, les dextranes, les poly-a-1,3-glucanes, les pullulanes, la chitine, les arabanes, les xylanes, les fucanes, les pectines, les chondroitines sulfates, les mucopolysaccharides et leurs dérivés. 6. Substrat selon la revendication 5, caractérisé en ce que la chaîne polyosidique du composé polysaccharidique est celle d'un dextrane. 7. Substrat selon la revendication 6, caractérisé en ce que le composé polysaccharidique est un dextrane ayant une masse molaire moyenne comprise entre 10000 et 1000000 g/mol, ayant par exemple une masse molaire égale à 40000, 70000 ou 460000 g/mol. 8. Substrat selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que le composé polysaccharidique est choisi parmi les composés de formule générale DMCaBbSucSd dans laquelle: D représente une chaîne polysaccharidique, constituée par des 5 enchaînements d'unités a-Dglucopyranosiques reliées entre elles par des liaisons a(1-6), MC représente des groupes méthylcarboxylates, B représente des groupes carboxyméthylbenzylamides, Su représente des groupes sulfates, S représente des groupes sulfonates, et a, b, c et d représentent le degré de substitution (ds), exprimé par rapport au nombre de fonctions hydroxyles libres dans une unité glucosidique de la chaîne polysaccharidique D, respectivement en groupements MC, B, Su et S, a étant égal à 0 ou >_à 0,2, b étant égal à 0 ou >_à 0,1, c étant égal à 0 ou >_à 0,1 et d étant égal à 0 ou 9. Substrat selon la revendication 8, caractérisé en ce que le composé polysaccharique est choisi dans le groupe constitué par: - les composés polysaccharidiques répondant à la formule générale DMCaBbSucSd dans laquelle a ?0,7; 0,15 _0,5; 0,3 10. Substrat selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé polysaccharidique est naturellement porteur de groupes sulfonates et/ou sulfates. 11. Substrat selon la revendication 10, caractérisé en ce que le composé polysaccharidique est choisi parmi l'héparine, les fucanes et leurs mélanges. 12. Substrat selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le collagène est choisi parmi le collagène d'origine animale, le collagène d'origine humaine, comme par exemple le collagène humain placentaire, le collagène obtenu par des moyens de recombinaison génétique et leurs mélanges. 13. Substrat selon la revendication 12, caractérisé en ce que le collagène est du collagène d'origine animale. 14. Substrat selon la revendication 12, caractérisé en ce que le collagène d'origine animale est du collagène bovin ou porcin de type I. 15. Substrat selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisé en ce que le collagène est du collagène natif, solubilisé à pH acide ou après traitement par digestion à la pepsine. 16. Substrat selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisé en ce que le collagène est du collagène modifié par coupure 20 oxydative. 17. Substrat selon l'une quelconque des revendication 1 à 13, caractérisé en ce que le collagène est du collagène de type I, extrait de dermes animaux, par solubilisation à pH acide ou par digestion à la pepsine et purifié par précipitations salines. 18. Substrat selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la composition de revêtement comprend en outre au moins un polymère hydrophile plastifiant, naturel ou synthétique, différent dudit composé polysaccharidique, choisi parmi le glycérol, le polyéthylène glycol, les polysaccharides non modifiés ou non fonctionnalisés, comme par exemple le dextrane, les polysaccharides substitués par des fonctions carboxylates, et leurs mélanges. 19. Substrat selon la revendication 18, caractérisé en ce que la composition de revêtement comprend du glycérol et du polyéthylène glycol. 20. Procédé de revêtement d'au moins une partie de la surface d'un substrat métallique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - a ) on prépare une composition de revêtement comprenant i ) au moins un composé polysaccharidique, et ii ) au moins un collagène, b ) on immerge la partie de la surface du substrat à revêtir dans la composition de revêtement obtenue en a ), - c ) on retire ledit substrat de la composition de revêtement et on 10 laisse sécher. 23. Procédé selon la revendication 20, caractérisé en ce qu'on prépare la composition de revêtement en mélangeant de façon homogène une solution de composé polysaccharidique et une solution de collagène. 24. Procédé selon la revendication 21, caractérisé en ce que la solution 15 de composé polysaccharidique comprend, à l'état liquide, entre 7,5 et 15% en poids du composé polysaccharidique en solution aqueuse. 25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 20 à 22, caractérisé en ce que la composition de revêtement présente une viscosité allant de 25 10-3 à 0,1 Pa.s. 24. Procédé selon l'une quelconque des revendications 20 à 23, caractérisé en ce qu'on immerge la partie de la surface du substrat métallique à revêtir dans la composition de revêtement afin de réaliser une enduction. 25. Procédé selon la revendication 24, caractérisé en ce que l'enduction a lieu à une température comprise entre 30 C et 50 C, à un pH compris entre 5 et 8, durant un temps compris entre 2 secondes et 5 min. 26. Procédé selon la revendication 25, caractérisé en ce que l'immersion de la surface du substrat dans la composition de revêtement est de préférence réitérée à un nombre de reprises allant de 1 à 10. 27. Procédé selon l'une quelconque des revendications 20 à 26, caractérisé en ce que le séchage se fait sous rotation constante afin d'obtenir une couche ou un film de revêtement homogène sur toute la surface revêtue dudit substrat métallique. 28. Procédé selon l'une quelconque des revendications 20 à 27, caractérisé en ce que la surface revêtue est mise à sécher sous hotte à une température comprise entre 10 C et 35 C et durant une durée comprise entre 6 et 36 heures. 29. Procédé selon l'une quelconque des revendications 20 à 28, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape de stérilisation du substrat revêtu. 30. Procédé selon la revendication 29, caractérisé en ce que la stérilisation se fait par traitement au gaz d'éthylène. 31. Objet à usage médical ou chirurgical, du type implant, par exemple une endoprothèse vasculaire pour angioplastie coronarienne transluminale percutanée, comprenant un substrat métallique dont au moins une partie de la surface est revêtue par une composition de revêtement telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 19. 32. Endoprothèse comprenant un substrat métallique selon l'une quelconque des revendications 1 à 19. 33. Endoprothèse selon la revendication 32, caractérisée en ce que le substrat métallique est un alliage, par exemple un acier inoxydable, ou un superalliage, par exemple le phynox. 34. Substrat métallique revêtu, susceptible d'être obtenu par un procédé selon l'une quelconque des revendications 20 à 30.