Brevet FR2868953A1 — publié le 20051021

La présente invention concerne une composition pour la transfection intracellulaire d'acide(s) nucléique(s) à des fins d'expression de protéines, peptides, d'ARNs antisens ou de polypeptides. L'invention est tout particulièrement intéressante pour la thérapie génique in vivo, l'administration de protéines, de peptides et polypeptides à effet thérapeutique, ou encore la vaccination. La thérapie génique constitue à ce jour un axe de recherche important pour la mise au point de nouvelles thérapies curatives ou préventives. Toutefois, un des obstacles majeurs à son développement clinique réside dans la non disponibilité à ce jour de méthodes efficaces et dotées d'une totale innocuité pour délivrer in vivo un matériau génétique. On sait aujourd'hui que l'injection in vivo de gènes nus, c'est-à-dire non associés à un véhicule quelconque dans le muscle squelettique ou cardiaque, est capable de conduire à l'expression d'une protéine. Toutefois, la quantité en protéine ainsi exprimée demeure beaucoup trop faible pour être exploitable à l'échelle clinique. Pour suppléer à ce défaut de l'ADN nu, il a donc été proposé de lui associer un vecteur de transfection de nature virale ou non virale. La présente invention concerne plus particulièrement le domaine de la vectorisation non virale. Les systèmes de vecteurs non viraux actuellement disponibles reposent pour la plupart sur une complexation de l'acide nucléique avec des molécules cationiques caractérisées par une densité de charge positive élevée à l'image des lipides cationiques, du polyéthylèneimine ou de la polylysine. Toutefois, ces composés, très efficaces pour le transfert de gène in vitro, se sont révélés inefficaces ou inappropriés pour la transfection in vivo. Plus récemment, il a été proposé des copolymères blocs non ioniques amphiphiles constitués de motifs oxyde de polyéthylène (POE) et oxyde de polypropylène (PPO). La nature amphiphile de ces copolymères blocs a pour avantage de favoriser le franchissement de barrières cellulaires et nucléaires. Comme exemples de ces copolymères blocs, on peut plus particulièrement citer les copolymères triblocs POE-POP-POE, encore appelés Poloxamers , Pluronics ou Synperonics et qui sont commercialisés notamment par la société BASF. Apparentés à ces familles de copolymères, les poloxamines ont également été proposés. Ces molécules sont constituées de segments hydrophobes (à base d'oxyde de polypropylène), de segments hydrophiles (à base d'oxyde de polyéthylène) et d'une partie centrale dérivant du motif éthylène diamine, susceptible d'être chargée positivement. L' ensemble de ces copolymères ont généralement été mis en oeuvre sous une forme cationique pour le transfert d'acide(s) nucléique(s). Ainsi, le brevet US 6 353 055 propose des complexes polycationiques de polynucléotides liés covalemment à des Poloxamers ou Poloxamines possédant des segments polycationiques, pour le transfert de gènes. De même, la demande internationale WO 00/51645 décrit des Poloxamers et Poloxamines chargés positivement pour le transfert de gènes. Cette charge positive est obtenue par fonctionnalisation du polymère considéré à l'aide de groupements aminés et/ou glycosylés. Plus récemment, la demande WO 02/67990 a montré que des copolymères POE/POP/POE spécifiques, c'est-à-dire possédant une proportion en poids de motif POE plus réduite comparativement aux copolymères usuels, permettaient d'obtenir des taux de transfection significativement améliorés. Enfin, la demande WO 03/066104 propose de mettre en oeuvre à titre de vecteur synthétique des poloxamines spécifiques, sous forme cationique. Bien que s'avérant nettement plus efficaces que l'ADN nu, ces copolymères ne 20 permettent pas toutefois d'atteindre un niveau d'expression à ce jour suffisant pour envisager des applications thérapeutiques. La présente invention a précisément pour objectif de proposer une formulation originale pour les vecteurs non viraux de type copolymère polyoxyéthylène/polyoxypropylène permettant d'accroître significativement le taux d'expression in vivo d'une protéine à partir de son acide nucléique. Plus précisément, les inventeurs ont découvert que l'association d'une quantité efficace de cation inorganique divalent à ce type de copolymères avait un effet déterminant sur leur efficacité pour la transfection intracellulaire d'acide(s) nucléique(s). En conséquence, la présente invention concerne, selon un premier de ses aspects, une composition utile pour le transfert intracellulaire d'au moins un acide nucléique, ladite composition comprenant au moins: - une quantité efficace d'au moins un acide nucléique, - une quantité efficace d'au moins un copolymère polyoxyéthylène/polyoxypropylène répondant à l'une des formules générales suivantes: HO(CH2CH2O)a(CH(CH3)CH2O)b(CH2CH2O)cH (I) ou HO(CH(CH3)CH2O) b(CH2CH2O)a(CH(CH3)CH2O)dH (II) et dans lesquelles b et d représentent, indépendamment l'un de l'autre, un entier différent de zéro tel que le fragment hydrophobe représenté par (CH(CH3)CH2O)b en formule (I) ou (CH(CH3)CH2O)b+d en formule (II) possède un poids moléculaire de 750 à 15000, en particulier de 1000 à 10000 et plus particulièrement de 1200 à 5000 et a et c représentent, indépendamment l'un de l'autre, un entier différent de zéro tel que la proportion hydrophile figurée par (CH2CH2O)a en formule (II) ou (CH2CH2O)a+c en formule (I) représente de 10 % à 90 % en poids et en particulier de 40 % à 80 % en poids du poids total du copolymère, et - une quantité efficace d'au moins un sel de cation divalent inorganique. Elle concerne, selon un autre de ses aspects, une méthode pour transférer in vivo un acide nucléique à l'intérieur de cellules eucaryotiques comprenant la mise en contact des cellules avec une composition telle que définie ci-dessus. Elle concerne selon un autre de ses aspects, un procédé pour préparer une composition utile pour le transfert intracellulaire d'au moins un acide nucléique comprenant la mise en présence, dans un milieu de formulation, dudit acide nucléique avec au moins un copolymère tel que défini cidessus et au moins un sel de cation divalent inorganique, la quantité dudit copolymère étant ajustée pour complexer l'intégralité dudit acide nucléique sous forme de complexe acide nucléique/copolymère de potentiel zêta égal à ou proche de zéro, et la quantité en sel de cation étant ajustée pour procurer un arrangement structurel dudit copolymère propice à la complexation dudit acide nucléique. Au sens de l'invention, une quantité efficace en acide nucléique couvre les quantités usuellement considérées comme compatibles pour une administration in vivo à un mammifère et en particulier à l'homme. Bien entendu, cette quantité est susceptible de varier significativement selon le poids de l'organisme hôte considéré et de l'effet thérapeutique recherché à savoir curatif ou préventif, comme par exemple à des fins de vaccination. A titre illustratif, la quantité d'ADN considérée dans la composition selon l'invention peut varier de quelques g à quelques mg. Au sens de l'invention, une quantité efficace de copolymère désigne une quantité suffisante en copolymère pour formuler l'intégralité de l'acide nucléique associé sous la forme d'un complexe acide nucléique/copolymère. Cette complexation efficace semble notamment être atteinte lorsque le complexe ainsi formé manifeste un potentiel zêta égal ou proche de zéro. Sans vouloir être lié à une théorie, cette complexation semble correspondre à la neutralisation de l'intégralité de la charge négative associée à l'acide nucléique sous sa forme libre. En d'autres termes, elle correspond au piégeage de l'intégralité de l'acide nucléique avec le copolymère. Cette concentration doit par ailleurs demeurer inférieure ou égale à la concentration micellaire critique, CMC, concentration au-delà de laquelle les segments d'oxyde de propylène cherchent à s'associer entre eux pour former des micelles pures de copolymère. Dans ce cas, ils ne participent plus au piégeage de l'acide nucléique et des micelles de copolymères et des molécules d'acide nucléique sont alors présents sous une forme non associée dans la solution, conduisant ainsi à un potentiel zêta de valeur négative. Il est entendu que cette CMC est susceptible de varier significativement d'un copolymère à l'autre dans la mesure où ceuxci possèdent un nombre de motifs POP et POE différents. Généralement, les copolymères blocs POE/POP forment des micelles sphériques en solution aqueuse au-dessus d'une certaine concentration en polymère (CMC) variable selon la température de la solution (CMT, température critique de micellisation), ces deux valeurs dépendant du poids moléculaire du copolymère, de la composition des blocs (rapport hydrophile/hydrophobe) et de l'architecture du copolymère bloc. Dans la mesure où le potentiel zêta manifesté par l'ADN nu dans une solution de NaCl usuel est inférieur à la valeur -20, on considère au sens de l'invention comme valeur proche de zéro, ou encore "potentiel zêta qualifié de zéro", une valeur telle que définie ci-après. Cette valeur est généralement représentative sur un graphique dans lequel figurent, en axe abscisse, l'échelle en concentration en copolymère et, en axe ordonné, l'échelle des valeurs de potentiel zêta, d'un plateau parallèle à l'axe des abscisses figuré par la plage de concentrations en copolymère à laquelle est affectée une valeur de potentiel zêta quasi- identique, cette valeur étant la plus proche du potentiel zêta de valeur zéro. Elle peut être également considérée comme représentant le point neutralisant de l'ensemble des charges négatives de l'acide nucléique associé. Comme il ressort de l'exemple 1 ci-après, la concentration en copolymère permettant d'obtenir une telle valeur de potentiel zêta à savoir égale ou proche de zéro 5 varie significativement selon la nature chimique du copolymère. Par exemple, cette valeur de potentiel zêta proche de 0 est observée pour les copolymères PE6400 , F68 et F127 à respectivement une concentration de 1,72 mM (0,5 % pds/vol) pour le PE 6400 , une concentration de 3,5 mM (3 % pds/vol) pour le F68 et une concentration de 3,49 x 10-2 mM (0,044 % pds/vol) pour le F127 , et ceci pour une concentration de 101.1g/ml en ADN plasmidique associé. Ces valeurs de potentiels zêta ont été mesurées directement à partir de la formulation commerciale des polymères considérés. En conséquence, pour un copolymère donné, la détermination de cette valeur implique de procéder au préalable à la mesure des potentiels zêta de différents mélanges de copolymère/acide nucléique à des concentrations variables en copolymère dans un milieu de composition ionique déterminé et à une température donnée et à l'identification des concentrations en copolymère pour lesquelles la valeur de potentiel zêta associée aux mélanges correspondants est qualifiée de zéro. Au sens de l'invention, une quantité efficace en sel de cation divalent désigne une quantité suffisante pour conférer une organisation structurelle dudit copolymère propice à la complexation de l'intégralité de l'acide nucléique. Sans vouloir être liée à une théorie, il semble que la présence d'un tel sel conditionne l'organisation structurelle de l'intégralité de l'acide nucléique présent dans la composition avec le copolymère POE/POP sous une forme complexe/copolymère dans laquelle l'acide nucléique est présent à un état plus complexé. Par ailleurs, la concentration en ce sel de cation divalent inorganique semble avoir une incidence déterminante sur les valeurs des CMC et CMT du copolymère considéré. Ainsi, en milieu fortement ionique, la CMC manifestée par un copolymère s'avère généralement plus faible que celle possédée par ce même copolymère dans un milieu non ionique. En conséquence, elle privilégie une réactivité plus immédiate des motifs POP du copolymère avec l'acide nucléique associé, et donc l'obtention d'un potentiel zêta égal à ou qualifié de zéro pour une concentration en copolymère inférieure à la quantité requise en l'absence de sel de cation divalent. Selon une variante particulière, les compositions selon l'invention sont exemptes d'acide nucléique sous forme libre et/ou de lipide cationique. Comme il ressort des exemples soumis ci-après, les compositions conformes à la présente invention permettent d'obtenir un taux de transfection au moins cinq fois, voire dix fois supérieur à celui observé avec une composition formulée sans ce sel divalent mais par exemple avec du NaCl à l'image des solutions isotoniques généralement utilisées pour formuler l'acide nucléique à administrer. Conviennent tout particulièrement à l'invention les cations divalents comme les cations Ca et Mgr et leurs mélanges. Les cations divalents organiques à l'image de l'éthylène diamine dicationique peuvent également avoir un effet bénéfique toutefois cet effet n'est pas aussi significatif qu'avec les cations inorganiques précités. En ce qui concerne l'anion associé, il peut être de natures très diverses. Conviennent tout particulièrement à l'invention les anions de type nitrates ou chlorures. Toutefois, d'autres anions, de type sulfates par exemple, sont également susceptibles d'être mis en oeuvre. Comme précisé précédemment, il semble que les sels de cations divalents inorganiques considérés selon l'invention aient une incidence sur l'organisation structurelle du copolymère et par ce biais sur la complexation de l'acide nucléique. La quantité efficace de ces sels est bien entendu susceptible de varier significativement d'une part en fonction de la nature du polymère qui leur est associée et d'autre part les concentrations en ces copolymère et acide nucléique dans la composition selon l'invention. A titre illustratif, ces sels de cation divalent peuvent être présents à raison de 0,5 mmol/1 à 6 mmol/1 de la composition. Par exemple, pour une composition comprenant, à titre de copolymère: - un copolymère possédant un poids moléculaire variant de 2500 à 3000 et un pourcentage de motifs d'oxyde d'éthylène de 30 à 50 % comme par exemple le L64 , ou - un copolymère possédant un poids moléculaire variant de 7000 à 9000 et un pourcentage de motifs oxyde d'éthylène de 60 à 85 % comme par exemple le F68 , - un copolymère possédant un poids moléculaire variant de 9 000 à 13 000 et un pourcentage de motif oxyde d'éthylène variant de 60 à 85 % en poids, en particulier présent à une concentration ajustée pour conférer à ladite composition un potentiel zêta égal à ou qualifié de zéro, les sels de cations divalents en particulier des cations choisis parmi Ça++, Mg++ et leurs mélanges peuvent être présents à raison de 0,5 mmol/1 à 6 mmol/l, en particulier de 1 mmol/l à 5 mmol/l et plus particulièrement de 2 mmol/l à 5 mmol/l. Les compositions selon l'invention peuvent notamment comprendre de 10 à 100 g/ml d'acide nucléique. Ces sels de cations divalents inorganiques peuvent être introduits en tant que tels dans les compositions selon l'invention ou par le biais d'un mélange préexistant à l'image par exemple du milieu Tyrode qui est un mélange de 140 mM NaCl, 6 mM KC1, 3 mM CaC12, 2 mM MgC12, 10 mM HEPES, pH7,4 et 10 mM glucose, le cas échéant complémenté en un ou plusieurs de ses sels, et en particulier en CaC12 et MgCl2. En particulier, les sels de cations divalents selon l'invention, peuvent être présents en tout ou partie sous la forme d'un mélange Tyrode. On peut également envisager de préparer une composition selon l'invention à partir d'un milieu conventionnel et en particulier contenant 150 mM NaCl, et en le complémentant en sels de cations divalents inorganiques, c'est-à- dire cations de Ça++ et/ou Mgr et/ou en milieu Tyrode. En ce qui concerne, les copolymères blocs considérés selon l'invention, ils peuvent posséder des groupements alkylènes de longueurs et/ou de conformations 20 différentes ou non, au sein du polymère. Plus particulièrement, il répond à la formule générale suivante: HO(CH2CH2O)a(CH(CH3)CH2O)b(CH2CH2O)cH (I) Dans laquelle a, b et c sont tels que définis précédemment. En particulier, a, b et c représentent indépendamment l'un de l'autre des 25 nombres entiers pouvant varier entre 10 et 110 inclusivement. De tels copolymères poly(oxyéthylène)-poly(oxypropylène) ont notamment été décrits par SANTON, Am. Perfumer cosmet. 72(K)..54-58 (1958) ; SCHMOKA, Loc. cit. 82(7)-25-30 (1967) ; Non ionic surfactance, Schick, Ed. (Dekker, NY, 1976) pp. 300-371. Un grand nombre de ces composés sont commercialement disponibles sous le nom commercial Poloxamers , Pluronics et Synperonics . Le copolymère bloc selon l'invention possède un poids moléculaire pouvant varier de 1000 à environ 15000, voire de 2000 à environ 15000, en particulier de 2500 à 13000. A titre illustratif des copolymères blocs polyoxyéthylène/polyoxypropylène 5 susceptibles d'être utilisés selon la présente invention, on citera tout particulièrement ceux commercialisés par la société BASF et figurant dans le tableau ci-après. Dénomination Poids moléculaire % POE commerciale en POP (en poids) L42 1200 20 % L61 1750 = 10 % L62 1750 20 % L63 1750 30 % L64 1750 40 % P65 z' 1750 50 % F68 1750 80 % L72 z' 2050 20 % L81 2250 10 % L92 2750 = 20 % L101 3250 10 % P103 3250 30 % P105 3250 50 % F108 3250 80 % F127 3780 70 % L121 4000 10 % L122 = 4000 20 % P123 z- 4000 30 % L141 4400 -= 10 % Conviennent tout particulièrement à l'invention: - les copolymères possédant un poids moléculaire variant de 2500 à 3500 et un pourcentage de motif oxyde d'éthylène variant de 30 à 50 % en poids, - les copolymères possédant un poids moléculaire variant de 7000 à 9000 et un pourcentage de motif oxyde d'éthylène variant de 60 à 85 % en poids, et - les copolymères possédant un poids moléculaire variant de 9 000 à 13 000 et un pourcentage de motif oxyde d'éthylène variant de 60 à 85 % en poids. Comme précisé précédemment, le copolymère considéré est mis en oeuvre selon l'invention à une concentration suffisante pour ajuster le potentiel zêta du complexe 15 copolymère/acide nucléique qu'il forme avec l'intégralité de l'acide nucléique présent dans ladite composition, à une valeur égale à ou qualifiée de zéro. Cette concentration peut au préalable avoir été déterminée selon le protocole décrit précédemment. A titre illustratif et non limitatif des compositions conformes à l'invention, on peut plus particulièrement citer celles comprenant - une quantité efficace en acide(s) nucléique(s) notamment variant de 10 g à 100 g/ml, - de 0,1 à 0,6% (pds/vol) d'un copolymère POE/POP/POE pour lequel (a + c) varie de 20 à 30, en particulier est égal à environ 26 et b varie de 20 à 50, et en particulier est égal à 30, - de 2 à 4% (pds/vol) d'un copolymère POE/POP/POE pour lequel (a + c) varie de 125 à 200, en particulier est égal à environ 150 et b varie de 20 à 50, et en particulier est égal à 30, - de 0,03 à 0,06 % (pds/vol) d'un copolymère POE/POP/POE pour lequel (a + c) varient de 150 à 250, en particulier est égal à environ 200, et b varie de 50 à 75, en particulier est égal à 65, et - une quantité efficace en sel de cations divalents notamment de 0,5 mmol/l à 6 mmol/1(pds/vol) de Cam et/ou Mg++. Conviennent tout particulièrement, le F68 , le PE6400 , et le F127 et leurs mélanges. Selon une variante particulière, les compositions de l'invention possèdent un potentiel zêta égal ou qualifié de zéro. Au sens de l'invention, le potentiel zêta est distinct de la charge de surface. La charge de surface d'une particule dépend de sa nature et du milieu qui l'entoure. Dans le cas de particules dispersées en milieu liquide, cette charge est essentiellement liée à l'ionisation de groupes chimiques situés à la surface ainsi qu'à l'adsorption de tensioactifs ioniques. L'apparition d'une charge à la surface d'une particule affecte la distribution ionique dans la région interfaciale entre la particule et le liquide. Il en résulte une augmentation de la concentration en contreions près de la surface. Il existe donc une double couche électrique autour de chaque particule. La première couche correspond à la région la plus proche de la surface et comporte des ions solidement liés à cette dernière. La seconde, externe, est plus diffuse et présente une distribution ionique déterminée par les forces électriques mais aussi par les mouvements thermiques aléatoires. Le plan externe glissant de la particule est situé à la surface extérieure de cette seconde couche. Lorsque la particule bouge dans le milieu (sous l'influence d'un flux provoqué ou mouvement Brownien), on considère que la structure de ces couches reste stable. C'est au niveau du plan glissant que les particules interagissent réellement entre elles, et c'est à ce niveau que l'on mesure le potentiel zêta. Le potentiel zêta est proportionnel à une densité de charge exprimée en coulomb/m2. Le potentiel électrostatique décroît de manière exponentielle lorsque l'on s'éloigne de la surface de la particule, jusqu'à atteindre une valeur nulle au coeur de la solution. Le potentiel zêta, à l'inverse d'autres caractéristiques (forme taille, surface spécifique) ou chimiques n'est pas figé. Il présente la particularité de varier en fonction de l'environnement de la particule. Le principe de la mesure du potentiel zêta est le suivant: Quand un champ électrique est appliqué à travers un électrolyte, les particules possédant une charge électrique qui sont en suspension dans cet électrolyte, sont attirées vers l'électrode de charge opposé. La force de frottement subie par les particules tend à s'opposer à ce mouvement. Quand l'équilibre entre ces deux forces opposées est atteint, les particules se déplacent à vitesse constante. La vitesse dépend de la force du champ électrique, de la constante diélectrique, de la viscosité du milieu et du potentiel zêta. Le potentiel zêta est déduit de la mobilité electrophorétique par la loi de Henry. Le potentiel zêta dépend d'un facteur qui correspond au rapport entre l'épaisseur de la double couche ionique et le diamètre de la particule et de la forme de la particule. La technique retenue aujourd'hui pour mesurer la vitesse sur un échantillon est la suivante: une tension alternative est appliquée à l'électrode contenu dans une cellule de mesure grâce à deux électrode provoquant la migration des particules. La vitesse des particules est évaluée par mesure de fluctuation temporelle de l'intensité diffusée par la particule en mouvement dans le réseau d'interférences. Dans le cadre de la présente invention, cette mesure est réalisée par interférométrie Laser Doppler (zêtasizer 3000HSA) selon le protocole précisé par le 30 fabricant. Dans les compositions de la présente invention, l'acide nucléique peut être aussi bien un acide désoxyribonucléique qu'un acide ribonucléique. Il peut s'agir de séquences d'origine naturelle ou artificielle, et notamment d'ADN génomique, d'ADNc, d'ARNm, d'ARNt, d'ARNi, d'ARNr, de séquences hybrides ou de séquences synthétiques ou semi-synthétiques d'oligonucléotides modifiés ou non. Ces acides nucléiques peuvent être d'origine humaine, animale, végétale, bactérienne, virale, etc. Ils peuvent être obtenus par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par criblage de banques, par synthèse chimique ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques. Ils peuvent être modifiés chimiquement. Concernant plus particulièrement les acides désoxyribonucléiques, ils peuvent être simple ou double brin de même que les oligonucléotides courts ou des séquences plus longues. Ces acides désoxyribonucléiques peuvent porter des gènes thérapeutiques, des séquences régulatrices de la transcription ou de la réplication, des séquences antisens modifiées ou non, des régions de liaison à d'autres composants cellulaires, etc. Au sens de l'invention, on entend par gène thérapeutique notamment tout gène codant pour un produit protéique ayant un effet thérapeutique. Le produit protéique ainsi codé peut être une protéine, un peptide, etc. Ce produit protéique peut être homologue vis-à-vis de la cellule cible (c'est-à-dire un produit qui est normalement exprimé dans la cellule cible lorsque celle-ci ne présente aucune pathologie). Dans ce cas, l'expression d'une protéine permet par exemple de pallier une expression insuffisante dans la cellule ou l'expression d'une protéine inactive ou faiblement active en raison d'une modification, ou encore de surexprimer ladite protéine. Le gène thérapeutique peut aussi coder pour un mutant d'une protéine cellulaire, ayant une stabilité accrue, une activité modifiée, etc. Le produit protéique peut également être hétérologue vis-à-vis de la cellule cible. Dans ce cas, une protéine exprimée peut par exemple compléter ou apporter une activité déficiente dans la cellule, lui permettant de lutter contre une pathologie, ou stimuler une réponse immunitaire. Parmi les produits thérapeutiques au sens de la présente invention, on peut citer plus particulièrement les enzymes, les dérivés sanguins, les hormones, les lymphokines; interleukines, interférons, TNF, etc. (FR 92 03120), les facteurs de croissance, les neurotransmetteurs ou leurs précurseurs ou enzymes de synthèse, les facteurs trophiques: BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, HARP/pléiotrohine, etc., la dystrophine ou une minidystrophine (FR 91 11947), la protéine CFTR associée à la mucoviscidose, les gènes suppresseurs de tumeurs: p53, Rb, Rap1A, DCC, k-rev, etc. (FR 9304745), les gènes codant pour des facteurs impliqués dans la coagulation: Facteurs VII, VIII, IX, les gènes intervenants dans la réparation de l'ADN, les gènes suicides (thymidine kinase, cytosine déaminase), les gènes de l'hémoglobine ou d'autres transporteurs protéiques, les gènes correspondant aux protéines impliquées dans le métabolisme des lipides, de type apolipoprotéine choisie parmi les apolipoprotéines A-I, A-II, A-IV, B, C-I, C-II, C-III, D, E, F, G, H, J et Apo(a), les enzymes du métabolisme comme par exemple la lipoprotéine lipase, la lipase hépatique, la lécithine cholestérol acyltransférase, la 7-alpha cholestérol hydroxylase, la phosphatidique acide phosphatase, ou encore des protéines de transfert de lipides comme la protéine de transfert des esters de cholestérol et la protéine de transfert des phospholipides, une protéine de liaison des HDL ou encore un récepteur choisi par exemple parmi les récepteurs LDL, récepteurs des chylomicrons-remnants et les récepteurs scavenger, l' érythropoïétine (EPO), l'alpha-1-antitrypsine, etc. L'acide nucléique thérapeutique peut également être un gène ou une séquence antisens, responsable d'interférence, dont l'expression dans la cellule cible permet de contrôler l'expression de gènes ou la transcription d'ARNm cellulaires. De telles séquences peuvent, par exemple, être transcrites dans la cellule cible en ARN complémentaires d'ARNm cellulaires et bloquer ainsi leur traduction en protéine, selon la technique décrite dans le brevet EP 140 308. Les gènes thérapeutiques comprennent également les séquences codant pour des ribozymes, qui sont capables de détruire sélectivement des ARN cibles (EP 321 201). Comme indiqué plus haut, l'acide nucléique peut également comporter un ou plusieurs gènes codant pour un peptide antigénique, capable de générerchez l'homme ou l'animale une réponse immunitaire. Dans ce mode particulier de mise en oeuvre, l'invention permet donc la réalisation soit de vaccins soit de traitements immunothérapeutiques appliqués à l'homme ou à l'animal, notamment contre des microorganismes, des virus ou des cancers. Il peut s'agir notamment de peptides antigéniques spécifiques du virus d'Epstein Ban, du virus HIV, du virus de l'hépatite B (EP 185 573), du virus de la pseudo-rage, du syncitia forming virus , d'autres virus ou encore spécifiques de tumeurs (EP 259 212). Préférentiellement, l'acide nucléique comprend également des séquences permettant l'expression du gène thérapeutique et/ou du gène codant pour le peptide antigénique dans la cellule ou l'organe désiré. Il peut s'agir de séquences qui sont naturellement responsables de l'expression du gène considéré lorsque ces séquences sont susceptibles de fonctionner dans la cellule infectée. Il peut également s'agir de séquences d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Notamment, il peut s'agir de séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus. A cet égard, on peut citer par exemple les promoteurs des gènes El A, MLP, CMV, RSF, etc. En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, etc. Il peut aussi s'agir de promoteur, inductible ou répressible. Par ailleurs, l'acide nucléique peut également comporter, en particulier en amont du gène thérapeutique, une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé dans les voies de sécrétion de la cellule cible. Cette séquence signal peut être la séquence signal naturelle du produit thérapeutique, mais il peut également s'agir de toute autre séquence signal fonctionnelle, ou d'une séquence signal artificielle. L'acide nucléique peut également comporter une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé vers un compartiment particulier de la cellule. Les compositions selon l'invention peuvent également mettre en oeuvre un ou plusieurs éléments de ciblage permettant de diriger les complexes nucléiques vers des récepteurs ou des ligands à la surface de la cellule. A titre d'exemple, la composition de la présente invention peut comprendre un ou plusieurs anticorps dirigés contre des molécules de la surface cellulaire, ou encore un ou plusieurs ligands de récepteurs membranaires comme l'insuline, la transferrine, l'acide folique ou tout autre facteur de croissance, cytokines ou vitamines. Avantageusement, la composition peut utiliser des lectines, modifiées ou non, afin de cibler des polysaccharides particuliers à la surface de la cellule ou sur la matrice extracellulaire avoisinante. Des protéines à motif RGD, des peptides contenant un tandem de motifs RGD, cyclique ou non, ainsi que des peptides polylysine peuvent ainsi être utilisés. Il a également été décrit des peptides ligands, naturels ou synthétiques, intéressants notamment pour leur sélectivité vis-à-vis de cellules spécifiques et capable de promouvoir efficacement l'internalisation au niveau de ces cellules (Bary et al. Nature Medecine, 2, 1996, 299-305). Ces agents de ciblages sont généralement conjugués au copolymère considéré. On peut aussi citer à titre d'exemple des sucres de type galactose pour le ciblage des récepteurs des asiologlycoproteines présent à la surface des hépatocytes. Les compositions selon l'invention peuvent être formulées en vue d'administrations par voie topique, cutanée, orale, rectale, vaginale, parentérale, intranasale, intrapulmoniare, intraveineuse, intramusculaire, intracardiaque, intracérébral, sous-cutanée, intraoculaire, transdermique, etc. Elles se présentent sous la forme d'une formulation injectable, notamment pour une injection directe au niveau de l'organe désiré, dans un muscle squelettique par exemple, ou sous une forme appropriée à une administration par voie topique (sur peau et/ou muqueuse) . Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables. Les doses d'acide nucléique utilisées pour l'injection ainsi que le nombre d'administrations peuvent être adaptés en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée, du gène à exprimer, ou encore de la durée du traitement recherchée. En ce qui concerne plus particulièrement le mode d'administration, il peut s'agir soit d'une injection directe dans les tissus ou les voies circulatoires, soit d'un traitement de cellule en culture suivi de leur réimplantation in vivo, par injection ou greffe. Les compositions selon l'invention sont particulièrement avantageuses sur le plan thérapeutique et notamment pour la vaccination. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples et figures qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Figure 1: Elle illustre les variations de potentiel zêta de différents complexes ADN/copolymères POE/POP pour différentes concentration en copolymères, à une température donnée. Les copolymères testés sont PE6400 , F68 et F127 . Figure 2: Elle illustre l'efficacité de transfection d'un gène dans le muscle 30 squelettique pour différents complexes ADN/copolymères POE/POP. Figure 3: Elle illustre l'influence de la composition du milieu de formulation sur l'efficacité de transfection de différents copolymères POE/POP. Figure 4: Elle rend compte de l'incidence des quantités en acide nucléique et en concentration du copolymère F68 sur l'efficacité d'une transfection intramusculaire. Figure 5: Elle rend compte de l'efficacité de transfection du copolymère P25R2 sur la transfection d'ADN plasmidique. Figure 6: Elle rend compte de l'expression de la protéine CAT à partir de l'administration endotrachéale chez la souris d'ADN formulé dans une composition conforme à l'invention. Figure 7: Elle rend compte de l'efficacité de transfection de compositions conformes à l'invention contenant des sels de cations divalents de quantité et nature variables. MATERIEL ET METHODES Animaux Des souris femelles Swiss (élevage Janvier), âgées de 8 semaines, sont utilisées. Plasmides Le plasmide utilisé est le pCMV-luc (Ferrari et al., Gene Ther. 4, 1100-1106, 1997). Il s'agit d'un vecteur d'expression contenant le gène reporter luciférase sous le 20 contrôle du promoteur du cytomegalovirus. Les plasmides sont purifiés à partir d' E. coli recombinante à l'aide de colonnes de purification plasmidiques EndoFree (Qiagen, Chatsworth, CA). Formulations Les copolymères POE/POP utilisés sont PE6400 , F68 , F127 et P25R2 commercialisés par la société BASF. Le milieu Tyrode dit Tyrode 1X est un mélange de 140 mM NaCl, 6 mM KC1, 3 mM CaCl2, 2 mM Mg C12, 10 mM HEPES pH7,4 et 10 mM glucose. Dans les formulations préparées ci-après, le milieu utilisé avec l'ADN, est dénommé Tyrode 2X dans la mesure où ces composants sont présents à une concentration multipliée par 2. Mesures du potentiel zêta La charge globale d'une formulation est évaluée par Interférométrie Laser Doppler (zêtasizer 3000HSA) selon le protocole précisé par le fabricant( Malvern). La valeur ainsi mesurée est appréciée cinq fois pour 20 secondes avec une 5 correction de champ zéro dans une cellule capillaire aqueuse. Méthode de transfection in vivo Les souris Swiss sont anesthésiées avec de l'hypnomidate (40 mg/kg injectés par voie intrapéritonéale). 50 l de formulation à tester contenant 5 g de pCMVLuc sont injectés dans le muscle tibial anterior en un point unique, en utilisant une seringue microfine (U100; Becton Dickinson Infusion Therapy Systems, Sandy, UT). Au moins six muscles tibial anterior ont été mis en oeuvre pour chaque groupe d'expérience. Pour les injections intrapulmonaires, les souris sont anesthésiées avec un mélange kétamine (70 mg/kg) et de Xylasine (15mg/kg) en injection intrapéritonéale. Ensuite, 100 gl de formulation contenant 20 gg de plasmide codant la chloramphenicol acétyl transferase (CAT) en présence de 2% de F68 ou de 0. 1% de PE6400 sont administrés par injection endotrachéale àl'aide d'un catheter de 22-gauge. Méthode de dosage de l'expression du gène reporter Sept jours après l'injection intramusculaire, les muscles tibial anterior sont disséqués, congelés dans de l'azote liquide et homogénéisés dans un 1 ml de tampon de lyse reporter (Promega, Madison, WI), complémenté avec un cocktail d'inhibiteurs de protéases (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN). Après centrifugation à 10000 tr/min. pendant quatre minutes, l'activité luciférase est mesurée sur un échantillon de surnageant avec VICTOR2 (PerkinElmer, Norwalk, MA) en utilisant un système de dosage luciférase (Promega). Chaque extrait de muscle est analysé deux fois. L'activité luciférase est déterminée en mesurant l'émission de lumière après addition de 100 l de substrat de dosage luciférase à 10 gl de surnageant. Une courbe standard est établie avec un muscle tibial anterior de souris non traité pour chaque microplaque de lecture en utilisant une luciférase purifiée (Sigma, St. Louis, MO). La teneur en protéines est mesurée avec un kit de dosage protéine à l'acide bicinchoninique (BCA). Deux jours après l'injection dans les poumons, les souris sont sacrifiées et les poumons sont disséqués puis congelés dans l'azote liquide. Les poumons sont ensuite broyés dans 1 ml de tampon de lyse reporter (Promega, Madison, WI), complémenté avec un cocktail d'inhibiteurs de protéases (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN). Après centrifugation à 10000 tr/min. pendant cinq minutes, l'activité chloramphénicol acétyl transferase est mesurée sur un échantillon de surnageant avec VICTOR2 (PerkinElmer, Norwalk, MA) en utilisant un kit de dosage par ELISA (Roche diagnostics). Chaque poumon est analysé en duplicate. Une courbe standard est établie avec un poumon de souris non traité pour chaque microplaque de lecture en utilisant une Chloramphénicol acétyl transférase purifiée. Exemple 1 Caractérisation physicochimique des complexes ADN/Poloxamers Les Poloxamers utilisés sont les Poloxamers L64 , F68 et F127 dont les caractéristiques sont les suivantes: Poloxamer Poids moléculaire % d'oxyde d'éthylène L64 ou PE6400 2900 40 F68 ou Lutrol 8600 80 F127 12600 70 Les solutions sont préparées à raison de 20 % (poids par volume) dans l'eau et stockées à 4 C. Les formulations comprennent des concentrations variables du copolymère considéré et 10 g/ml d'une solution d'ADN plasmidique dans une solution Tyrode 2X. Les potentiels zêta des complexes copolymères/ADN sont mesurés pour chaque formulation. Les résultats obtenus sont présentés en figure 1. Y est également représentée, une courbe témoin obtenue avec un polymère à base uniquement de motifs POE. Il apparaît, qu'en l'absence de Poloxamer, le potentiel zêta mesuré est égal à -22 mV ce qui est en accord avec les valeurs de l'ADN nu figurant dans la littérature. Le potentiel zêta augmente et atteint une valeur proche de zéro avec une concentration croissante en copolymère. Dans le Tyrode, cette valeur qualifiée de zéro est atteinte pour le PE6400 , F68 et F127 à des concentrations respectives de 1,72 mM (0,5 % pds/vol), 3,5 mM (3 % pds/vol) et 3,49 x 10-2 (0,044 % pds/vol). Dans le NaCl, cette valeur qualifiée de zéro est atteinte pour le F68 et F127 à des concentrations respectives de 6 % (pds/vol) et 0,25 % (pds/vol) qui sont des concentrations beaucoup plus élevées en copolymères. Par opposition aux copolymères selon l'invention, un homopolymère d'oxyde d'éthylène ne modifie pas le potentiel zêta de l'ADN et ce quelle que soit la concentration en polymère. Exemple 2 Essais de transfection in vivo des complexes copolymères/ADN de l'exemple 1 gg de plasmide codant le gène luciférase formulé dans un milieu contenant du Tyrode nécessaire à l'ajustement de la tonicité sont associés avec le F68 ou le F127 . Deux concentrations sont retenues pour chaque Poloxamer, l'une correspondant au point de neutralisation c'est-à-dire au potentiel zêta qualifié de zéro et l'autre à un potentiel zêta négatif, pour une concentration plus faible. Les formulations correspondantes complexes/ADN sont injectées intramusculairement dans le tibial antérieur de la souris selon le protocole décrit précédemment. Sept jours après l'injection, les muscles sont analysés pour l'expression de gène reporter. Les résultats obtenus sont illustrés en figure 2. On note que les formulations contenant le F68 à 3 % soit la concentration associée à un potentiel zêta qualifié de zéro, manifeste une activité luciférase nettement supérieure (d'au moins un facteur de 3) comparativement à une formulation de F68 à une concentration de 0,03 % en poids par volume correspondant à un potentiel zêta négatif Ce même comportement est observé en utilisant le F127 à la concentration associée à un potentiel zêta qualifié de zéro. Exemple 3 Essais de transfection avec des compositions conformes à l'invention Les trois milieux de formulation suivants sont testés. (i) 150 mM NaCl, (ii) Tyrode contenant 3 mM CaCl2 et 2 mM MgC12, et (iii) Tyrode contenant 1 mM CaCl2 et 1 mM MgC12. gg d'ADN plasmidique codant pour le gène de la luciférase sont formulés dans 50 l de chacun des milieux précédents avec différents poloxamers. Ces derniers y sont respectivement présents aux concentrations déterminées dans l'exemple précédent pour obtenir un potentiel zêta qualifié de zéro, à savoir 3 % en pds/vol pour le F68 , 0,05 % en pds/vol pour le F127 et 0.5 % en pds/vol pour le PE6400 . de chaque formulation sont injectés au niveau du muscle tibial antérieur des souris Swiss selon le protocole décrit précédemment. Les résultats d'expression, obtenus dans un délai de 7 jours post injection, sont 10 représentés en figure 3. On observe que seules les formulations possédant des sels cationiques divalents conduisent à une augmentation très significative en activité de luciférase. Cette augmentation va d'un facteur de 30 à 40 comparativement aux valeurs obtenues avec chaque copolymère en milieu isotonique, c'est-àdire sans sels de cations divalents. Exemple 4 Influence de la quantité d'ADN sur l'efficacité de transfection Les formulations de l'exemple précédent, à base de poloxamer F68 présent à raison de 0,3 % (conduisant à une solution de potentiel zêta négatif), 3 % (conduisant à des particules de potentiel zêta qualifié de zéro) ou 9 % en pds/vol manifestant une viscosité du milieu très élevée avec observation au microscope électronique d'ADN condensés par de très grosses particules, sont reproduites pour différentes concentrations en ADN plasmidique dans un milieu de formulation contenant du Tyrode. Les concentrations en ADN plasmidique testées sont 50 g ADN/ml et 100 gg ADN/ml, soit respectivement 2,5 et 5 gg d'ADN injectés dans le tibial antérieur de souris. Les résultats obtenus sont présentés en figure 4. Ils indiquent que seul les formulations ayant un potentiel zêta qualifié de zéro permettent l'expression maximale du transgène. Exemple 5 Incidence de la structure chimique des copolymères POE/POP Le poloxamer utilisé est le P25R2 à savoir [poly(propylèneoxyde)214[poly(éthylèneoxyde)140-poly(propylèneoxyde)214]. L'efficacité de ce poloxamer dit inverse a été testée dans un milieu de formulation standard à base de NaCl et dans un milieu à base de Tyrode, complémenté ou non en CaC12 et MgCl2 dans les conditions expérimentales précisées en exemple 3. L'expression a été mesurée sept jours après l'injection de l'ADN plasmidique. Les résultats obtenus sont présentés en figure 5. On note, d'une part, que l'expression la plus élevée en luciférase est atteinte avec le milieu Tyrode complémenté en CaCl2 et MgC12 et que, d'autre part, ce poloxamer est totalement inefficace en l'absence de cation divalent. Exemple 6 L'efficacité de transfection d'une composition conforme à l'invention a été 15 testée au niveau du poumon. Pour ce faire, des formulations à base de 20 g d'ADN plasmidique codant pour la chloramphénicol acetyl transferase (CAT) complexés avec soit 0,1 % (pds/vol) de PE6400 ou 2 % (pds/vol) de F68 , ont été préparées soit dans 10 mM de milieu HEPES pH7,4 ou de milieu Tyrode. Les compositions ainsi préparées ont été administrées via la voie endotrachéale dans les voies respiratoires de souris. L'expression de la chloroamphénicol acétyl transférase, CAT a été déterminée quantitativement par un test CAT ELISA sur l'intégralité des voies respiratoires (trachée et poumons), deux jours après l'administration. Les résultats sont présentés en figure 6. On note que deux jours après l'administration, l'expression CAT est augmentée de manière très significative dans l'ensemble des voies lorsqu'un complexe acide nucléique/copolymère POE/POP est formulé en présence de sels cationiques inorganiques divalents. Exemple 7 Influence de la concentration des cations divalents sur l'efficacité de transfection des vecteurs F68 Les résultats sont présentés en figure 7. Les quatre milieux de formulation suivants sont testés. (iv) 150 mM NaCl, (v) Tyrode contenant 0.5 mM CaCl2 et 0.5 mM MgC12, (vi) Tyrode contenant 1 mM CaC12 et 1 mM MgC12, et (vii) Tyrode contenant 3 mM CaC12 et 2 mM MgC12 5 g d'ADN plasmidique codant pour le gène de la luciférase sont soit injectés nu ou formulés dans 50 pl de chacun des milieux avec le poloxamer F68 à 3 % pds/vol. 50 l de chaque préparation sont injectés au niveau du muscle tibial antérieur des souris Swiss selon protocole décrit précédemment. 7 jours post-injection les muscles sont broyés et l'activité luciférase dosée. Les 15 résultats sont présentés en figure 7. Seuls les mélanges conformes à l'invention manifestent une efficacité élevée de l'expression de la luciférase. REVENDICATIONS 1. Composition utile pour le transfert intracellulaire d'au moins un acide nucléique, ladite comprenant: une quantité efficace d'au moins un acide nucléique, une quantité efficace d'au moins un copolymère polyoxyéthylène/polyoxypropylène répondant à l'une des formules générales suivantes: HO(CH2CH2O)a(CH(CH3)CH2O)b(CH2CH2O)cH (I) ou HO(CH(CH3)CH2O) b(CH2CH2O)a(CH(CH3)CH2O)dH (II) et dans lesquelles b et d, indépendamment l'un de l'autre, représentent un entier différent de zéro tel que le fragment hydrophobe représenté par (CH(CH3)CH2O)b en formule (I) ou (CH(CH3)CH2O)b+d en formule (II) possède un poids moléculaire de 750 à 15000 et a et c, indépendamment l'un de l'autre, représentent un entier différent de zéro tel que la proportion hydrophile figurée par (CH2CH2O)a en formule (II) ou (CH2CH2O)a+c en formule (I) représente de 10 % à 90 % en poids du poids total du copolymère, et - une quantité efficace d'au moins un sel de cation divalent inorganique. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit copolymère est présent en quantité suffisante pour formuler l'intégralité dudit acide nucléique sous la forme d'un complexe acide nucléique/copolymère. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que le complexe acide nucléique/copolymère ainsi formé possède un potentiel zêta égal à ou qualifié de zéro. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ladite composition possède un potentiel zêta égal à ou qualifié de zéro. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un sel de cation divalent inorganique en quantité suffisante pour conférer une organisation structurelle dudit copolymère propice à la complexation de l'intégralité de l'acide nucléique. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les cations divalents inorganiques sont choisis parmi les cations Ça++, Mg++ et leurs mélanges. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend 0,5 mmol/1 à 6 mmol/l de cation(s) divalent(s) inorganique(s). 8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les cations divalents inorganiques sont présents dans la composition en tout ou partie sous la forme d'un mélange de type Tyrode. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le copolymère possède un poids moléculaire de 2000 à 15000 et plus particulièrement de 2500 à 13000. 10. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle comprend un copolymère possédant un poids moléculaire variant de 2500 à 3500 et un pourcentage de motif oxyde d'éthylène de 30 à 50 % en poids. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle comprend un copolymère possédant un poids moléculaire variant de 7000 à 9000 et un pourcentage de motif oxyde d'éthylène variant de 60 à 85 % en poids. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle comprend un copolymère possédant un poids moléculaire variant de 9 000 à 13 000 et un pourcentage de motif oxyde d'éthylène variant de 60 à 85 % en poids. 13. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend de 0,1 à 0,6 % en poids/vol d'un copolymère POE/POP/POE pour lequel (a+c) varie de 20 à 30 et b varie de 20 à 50. 14. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend de 2 à 4 % en poids/vol d'un copolymère POE/POP/POE pour lequel (a+c) varie de 125 à 200 et b varie de 20 à 50. 15. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle possède de 0,03 à 0,06 % en poids/vol d'un copolymère POE/POP/POE pour lequel (a+c) varie de 150 à 250 et b varie de 50 à 75. 16. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le copolymère est choisi parmi le F68 , le PE6400 , et le F127 et 30 leurs mélanges. 17. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'acide nucléique est un acide désoxyribonucléique. 18. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisée en ce que l'acide nucléique est un acide ribonucléique. 19. Composition selon la revendication 17 ou 18, caractérisée en ce que l'acide nucléique est modifié chimiquement. 20. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisée en ce que l'acide nucléique est un acide nucléique codant pour un produit protéique ayant un effet thérapeutique. 21. Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que ledit produit est choisi parmi les enzymes, les dérivés sanguins, les hormones, les lymphokines; interleukines, interférons, TNF, les facteurs de croissance, les neurotransmetteurs ou leurs précurseurs ou enzymes de synthèse, les facteurs trophiques: BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, HARP/pléiotrohine, la dystrophine, une minidystrophine, la protéine CFTR associée à la mucoviscidose, les gènes suppresseurs de tumeurs: p53, Rb, Rap1A, DCC, k-rev, les gènes codant pour des facteurs impliqués dans la coagulation: Facteurs VII, VIII, IX, les gènes intervenants dans la réparation de l'ADN, les gènes suicides (thymidine kinase, cytosine déaminase), les gènes de l'hémoglobine ou d'autres transporteurs protéiques, les gènes correspondant aux protéines impliquées dans le métabolisme des lipides, les apolipoprotéines A-I, A- II, A-IV, B, C-I, C-II, C-III, D, E, F, G, H, J et apo(a), les enzymes du métabolisme comme la lipoprotéine lipase, la lipase hépatique, la lécithine cholestérol acyltransférase, la 7 alpha cholestérol hydroxylase, la phosphatidique acide phosphatase, les protéines de transfert de lipides comme la protéine de transfert des esters de cholestérol et la protéine de transfert des phospholipides, une protéine de liaison des HDL ou un récepteur choisi parmi les récepteurs LDL, récepteurs des chylomicrons-remnants, les récepteurs scavenger, l' érythropoïétine et l'alpha-1- antitrypsine. 22. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'il s'agit d'un vaccin. 23. Procédé pour préparer une composition utile pour le transfert intracellulaire d'au moins un acide nucléique comprenant la mise en présence, dans un milieu de formulation, d'au moins un acide nucléique, d'au moins un copolymère tel que défini en revendications 1 et 9 à 16 et d'au moins un sel de cation divalent inorganique, la quantité dudit copolymère étant ajustée pour complexer l'intégralité dudit acide nucléique sous forme de complexe acide nucléique/copolymère de potentiel zêta égal à ou proche de zéro, et la quantité en sel de cation étant ajustée pour procurer un arrangement structurel dudit copolymère propice à la complexation dudit acide nucléique. 24. Procédé selon la revendication 23, caractérisé en ce que le sel de cation 5 divalent inorganique est choisi parmi les cations Ça++, Mg++ et leurs mélanges.