Brevet FR2861994A1 — publié le 20050513

L'invention concerne l'utilisation diagnostique ou thérapeutique de particules d'oxyde métallique magnétique, recouvertes de molécules monomériques, oligomériques ou polymériques, pour les maladies impliquant des métalloprotéinases de la matrice ou matrixines (MMP). L'imagerie des pathologies où sont impliquées les MMP constitue un enjeu majeur en terme de diagnostic et de thérapeutique. Ces pathologies incluent notamment les maladies cardio-vasculaires (lésions athéroscléreuses), les maladies inflammatoires (telles que la polyarthrite rhumatoïde, les scléroses multiples, etc.), les cancers (tumeurs et métastases). On sait que les MMP sont des enzymes de la famille des endopeptidases zinc-dépendantes, qui possèdent la propriété de dégrader les membranes basales et les tissus conjonctifs et qui participent à l'homéostase de la matrice extracellulaire. Cette matrice extracellulaire entourant les cellules est constituée de glycosaminoglycanes ainsi que de protéines de structure comme le collagène et l'élastine et de protéines d'adhésion comme la fibronectine et la laminine. Les MMP ont été classées en 5 groupes: les Gélatinases (Collagènases type IV, MMP-2 et -9), les Stromelysines (MMP-3, -10 et -11) , les Collagénases (MMP-1, -8, -13 et -18) , les Matrilysines (MMP-7 et 26) ainsi que le groupe des MT-MMP ( membrane-type MMP). Les MMP sont surexprimées dans les plaques d' athérome actives, un niveau d'expression élevé étant corrélé à un risque de rupture accru de ces plaques. Plusieurs études indiquent que les MMP sont impliquées dans le remodelage de la matrice extra-cellulaire au niveau de la plaque: au moins huit MMP y sont surexprimées, et de nouvelles MMP sont régulièrement identifiées: Enzyme MMP Collagénase interstitielle MMP-1 Gélatinase A MMP-2 Gélatinase B MMP-9 Stromélysine-1 MMP-3 Matrilysine MMP-7 Elastase macrophagique MMP-12 Collagénase-3 MMP-13 MMP- membranaire MT-MMP-1 MMP-14 Les MMP1 et 3 sont notamment décrites dans Johnson J et al. Activation of matrix-degrading metalloproteinases by mast cell proteases in atherosclerotic 5 plaques (Arterioscl Thromb Vasc Biol 1998; 18: 1707-1715). Les MMP sont également impliquées dans les pathologies cancéreuses, avec principalement deux fonctions distinctes: a) elles participent à la dissémination tumorale en détruisant la matrice extra-cellulaire; b) elles créent un environnement qui favorise la croissance et l'angiogénèse des tumeurs primaires et métastasées. Les MMP exprimées dans les principales tumeurs humaines sont notamment et de façon non exhaustive les suivantes: cancer du sein: MMP-1,2,3,7,9,11, 13,14 cancer colo-rectal: MMP-1,2,3,7,9,11 cancer du poumon: MMP- 2,3,7,9, 11,14 cancer de la prostate: MMP-1,2,3,7,9. Et il y a une corrélation fréquente entre le stade de progression tumorale et le niveau d'expression des MMP. En général, les tumeurs malignes expriment une 20 plus grande quantité de MMP que les tumeurs bénignes. Les MMP sont également impliquées dans les pathologies associées à des réactions inflammatoires comme les arthrites et les néphrites, ou des maladies dégénératives comme par exemple les ulcérations de la peau, de la cornée, de l'estomac, les scléroses multiples, la maladie d'Alzheimer, les cirrhoses du foie, les fibroses des poumons, les problèmes d'infertilité, etc. (catalogue BACHEM 2002). Plusieurs études indiquent que les MMP interviennent dans les différentes phases du développement des lésions de la Sclérose en Plaques. Ainsi, les cellules résidentes du SNC (cellules endothéliales, astrocytes, microglie) et les cellules immunitaires (lymphocytes, macrophages) sécrètent des MMP qui permettent l'ouverture de la BHE. Une production accrue de MMP-1, -2, -3, -7 et -9 a été rapportée au centre et à la périphérie des plaques dans les cerveaux de patients décédés. On connaît déjà des produits de contraste destinés au diagnostic de pathologies impliquant des MMP. Ces produits sont utilisés en Médecine Nucléaire ou en Imagerie par Résonance Magnétique (IRM). L'IRM permet la visualisation d'organes internes chez des êtres vivants et constitue donc un auxiliaire et un guide puissant dans le diagnostic, le traitement médical et la chirurgie. Ces produits de contraste sont appelés des produits spécifiques car ils ciblent de manière spécifique des marqueurs associés à des pathologies, en l'occurrence des MMP. Le ciblage spécifique de MMP est obtenu dans l'art antérieur à l'aide de biovecteurs moléculaires destinés spécifiquement au ciblage de MMP, tels que des peptides ou d'autres molécules connus de l'art antérieur comme ayant une affinité spécifique pour au moins une MMP. On connaît d'une part des produits spécifiques à base de chélates, capables de se lier à un ion de métal paramagnétique tel que le Gadolinium ou à un radioisotope. Le chélate est une molécule linéaire (telle que le DTPA) ou macrocyclique (telle que le DOTA) couplée à un biovecteur ligand de ciblage des MMP (document WO 01/60416). On connaît d'autre part des produits spécifiques à base de particules d'oxyde de fer recouvertes à leur surface de biovecteurs de ciblage spécifique d'une pathologie. Par exemple le brevet US 6 576 221 décrit comme biovecteur un peptide ligand du récepteur à l'endothéline. Ces particules, désignées selon leur taille SPIO (small particles of iron oxide) ou USPIO (ultra small particles of iron oxide), comprennent un coeur à base d'oxyde de fer, sur lequel est greffé le biovecteur. Dans la suite de la description on utilisera indifféremment les termes SPIO et USPIO, l'invention recouvrant l'utilisation de ces particules à base d'oxyde de fer en imagerie chez l'homme. On rappelle que l'effet de contraste peut être accentué par la présence, dans l'environnement des organes soumis à examen, de diverses espèces magnétiques, par exemple paramagnétiques, ferromagnétiques ou superparamagnétiques. Les substances paramagnétiques comprennent certains métaux comme le fer, le manganèse, le gadolinium à l'état ionique ou organométallique. Les substances de contraste ferromagnétiques comprennent généralement des particules d'agrégat magnétiques de taille micrométrique ou sous-micrométrique, c'est-à-dire non inférieure à 500 nm, par exemple des particules de ferrites, dont notamment de magnétite (Fe3O4), de maghémite (y-Fe2O3) et autres composés minéraux magnétiques d'éléments de transition. Les particules super-paramagnétiques sont habituellement de très petites particules de ferrite, dont notamment de magnétite (Fe3O4), de maghémite (y-Fe2O3) et autres composés minéraux magnétiques d'éléments de transition, de taille inférieure à environ 100-150 nm. Contrairement aux particules ferromagnétiques, les particules superparamagnétiques ne se comportent plus comme de petits aimants autonomes du fait que leur taille est inférieure à une valeur critique, c'est-à-dire qu'elles s'alignent dans une direction préférentielle uniquement lorsqu'elles sont soumises à un champ magnétique externe. Les particules superparamagnétiques présentent avantageusement une densité d'efficacité plus élevée par rapport aux particules ferromagnétiques. Le demandeur a découvert, de manière totalement inattendue, que des produits à base de particules d'oxydes de fer recouvertes d'un revêtement, en principe non spécifiques car les particules ne sont pas recouvertes d'un biovecteur de ciblage des MMP, sont efficaces dans le ciblage de MMP, et ainsi dans le diagnostic spécifique de maladies impliquant des MMP. Les particules d'oxyde magnétique de fer préparées sont capables de reconnaître spécifiquement les MMP, alors qu'elles ne possèdent pas de ligand ciblant les MMP greffé à leur surface. Cette nouvelle utilisation d'USPIO et/ou de SPIO ne comprenant pas de partie de ciblage spécifique est très avantageuse pour le diagnostic et le traitement de pathologies spécifiques, notamment pour des raisons de coût et/ou de toxicité nettement réduits du produit. L'invention concerne ainsi selon un premier aspect l'utilisation de particules d'oxyde métallique magnétique recouvertes d'un revêtement dépourvu de composé de ciblage spécifique de MMP, pour la préparation d'un agent de diagnostic par IRM d'une pathologie impliquant au moins une MMP. L'invention concerne une méthode de diagnostic par IRM d'une pathologie impliquant au moins une MMP, comprenant l'administration d'une particule recouverte d'un revêtement dépourvu de composé de ciblage spécifique de MMP, et la détection de la modification du signal en IRM. Par l'expression pathologie impliquant au moins une MMP, on désigne une pathologie où une ou plusieurs MMP ont un niveau d'expression différent dans la zone pathologique par rapport au niveau d'expression dans une zone saine. Le niveau d'expression d'une MMP peut être dû à une quantité accrue de MMP produite et/ou au niveau d'activation de la MMP produite (rapport zymogène versus enzyme activée). Selon un mode de réalisation la pathologie est une maladie due à la présence de plaques d'athérome. Selon un mode de réalisation la pathologie est un cancer. Selon un mode de réalisation la pathologie est une maladie inflammatoire ou dégénérative. Selon un mode de réalisation la pathologie est une maladie faisant intervenir un mécanisme réactionnel inflammatoire. Les particules d'oxyde de fer sont recouvertes d'un revêtement de préférence de type polysaccharide choisi parmi les dextrans ou dérivés. Les dérivés de dextrans peuvent contenir au moins un groupe acide, ou plusieurs groupes fonctionnels comprenant des atomes O, N, S, P. On pourra notamment utiliser des carboxy ou polycarboxy dextrans. Les dérivés carboxyliques de polysaccharides sont par exemple le dérivé carboxyméthylique (la particule est recouverte de carboxyméthyldextran le cas échéant réduit), carboxyéthylique, carboxypropylique. Ce revêtement des particules magnétiques est destiné à obtenir une stabilité des solutions colloïdales de particules magnétiques, encore dénommées ferrofluides, en milieu physiologique. Les synthèses permettant d'aboutir à ce type de particules sont connues, par exemple décrites dans Robert S. Molday and D. Mackenzie; J. of Immunological Methods (1982), 52, p 353-367) ou Chem.Commun 2003,927-937. De telles particules recouvertes sont décrites par exemple dans les documents EP 656 368, WO 98/05430, EP 450 092 (dans ce document le dérivé carboxylique est contenu en une quantité de 0.05 à 10 parties en poids par partie en poids du métal de l'oxyde métallique magnétique; le dérivé carboxyalkylique utilisé pour la fabrication de la particule a une viscosité intrinsèque comprise entre 0.02 et 0.5 dl/g, de préférence 0.05 à 0.3d1/g). Parmi les particules utilisables, recouvertes d'un revêtement de dérivés polymériques ou non polyrnériques, on préfèrera des USPIO actuellement en phase clinique dont le SINEREM, le 7228, le SHU 555A (RESOVIST, revêtement à base de carboxydextran, décrit notamment dans Radiology,2001, vol 221,237-243), le SHU555C (SUPRAVIST), le NC100150 (revêtement d'amidon décrit notamment dans Magn.Res.Mat in Physics, Biology and Medicine,1999,8:207-213), le VSOP (revêtement à base de citrate décrit notamment dans Prog Colloid Polym Sci,1996,100:212-216, et Journ.magn.res.imag,2000,12:905-911, EP 888 545), les particules de type MION et CLIO, les ADMS, ainsi que les dérivés perfectionnés de ces différents composés encore au stade pré-clinique. Le SINEREM et plusieurs procédés de synthèse du SINEREM sont décrits dans les brevets EP B 441 797, EP B 517 740, EP B 514 493. Dans le cas du composé 7228 (EP 1 169 062), le coeur est couvert d'un dérivé carboxylique de polysaccharide hydrosoluble neutre, ce qui lui confère des caractéristiques avantageuses notamment de faible toxicité, le produit pouvant ainsi être administré en bolus. On pourra aussi utiliser comme revêtement des macromolécules telles que des protéines comme l'albumine ou des polymères de synthèse comme les méthacrylates et les organosilanes, des galactanes [Josephson L., Groman E. V., Menz E. et al; Magnetic Resonance Imaging 8; 616-637; 1990], de l'amidon [Fahlvik A. K., Holtz E., Schroder U. et al; Invest. Radiol. 25; 793-797; 1990], des glycosaminoglycanes [Pfefferer D, Schimpfky C., Lawaczeck R.; SMRM--Book of abstracts 773; 1993]. On pourra aussi utiliser comme revêtement des branches PEG et aminoalcool. Grâce à l'enseignement de la présente demande, l'homme du métier pourra sélectionner des revêtements appropriés à l'aide de tests de mesure de l'activité inhibitrice de MMP décrite dans les exemples plus loin. Les particules non recouvertes (ferrofluides "acides" ou "alcalins") ont largement 5 été décrites dans la littérature, notamment dans la publication Massait et al., C. R. Acad. Sc. Paris, t. 291, 7/07/1980, Série C et IEE, Transactions on Magnetics, 1981, vol. MAG-17,n 2, p. 1247). L'invention concerne selon un autre aspect l'utilisation de particules d'oxyde métallique magnétique recouvertes, mais dépourvues de ligand de ciblage spécifique des MMP, pour la préparation d'un agent thérapeutique d'une pathologie impliquant au moins une MMP (et une méthode de traitement thérapeutique comprenant l'administration à des patients de ces particules). On connaît un grand nombre d'agents destinés au traitement thérapeutique de maladies impliquant des MMP, en particulier des agents comprenant des inhibiteurs de MMP abondamment décrits dans l'art antérieur, par exemple dans Current Medicinal Chemistry, 2001, 8, 425-474; Chem.Rev, 1999, 99, 2735-2776. Certains agents possèdent une faible efficacité thérapeutique, en raison de leur dégradation prématurée, avant même d'avoir pu atteindre leur cible. On a dans l'art antérieur recherché à associer de tels inhibiteurs à des substances protectrices (introduction dans une matrice de dextran par exemple) mais ces agents perdent alors leur efficacité thérapeutique (biodistribution défavorable, libération de l'inhibiteur inadéquate). Or, les résultats des études de biodistribution et d'imagerie in vivo et ex vivo, avec du Sinerem notamment, démontrent que les particules de fer recouvertes de revêtements hydrophiles parviennent à un niveau suffisamment élevé jusqu'au site biologique où sont surexprimées les MMP, par exemple dans les plaques d'athérome. Les particules administrées à une dose appropriée pour assurer une bonne tolérance, permettront ainsi un traitement au moins partiel de la pathologie. On peut de plus utiliser les propriétés rl et r2 des USPIO pour obtenir des images en double contraste (Ruehm, Corot, Circulation). On décrit maintenant plus précisément les particules utilisées. Par "particules à base d'un composé du fer", on entend, au sens de la présente description, des particules constituées en tout ou partie par un dérivé du fer, comprenant généralement du fer (III), généralement un oxyde ou un hydroxyde de fer. Les particules magnétiques sont composées typiquement en tout ou partie d'hydroxyde de fer; d'oxyde de fer hydraté ; de ferrites; d'oxydes de fer mixtes tels que des oxydes de fer mixtes de cobalt, de nickel, de manganèse, de béryllium, de magnésium, de calcium, de baryum, de strontium, de cuivre, de zinc ou de platine; ou d'un mélange de ceux-ci. Au sens de la présente invention, le terme de "ferrite" désigne les oxydes de fer de formule générale [x Fe2O3, y MOL], où M désigne un métal magnétisable sous l'effet d'un champ magnétique tel que Fe, Co, Ru, Mg, Mn, le métal magnétisable pouvant être éventuellement radioactif. De façon préférentielle, les particules magnétiques des compositions de l'invention comprennent une ferrite, notamment la maghémite (y Fe2O3) et la magnétite (Fe3O4), ou encore les ferrites mixtes de cobalt (Fe2CoO4) ou de manganèse (Fe2MnO4). Le diamètre hydrodynamique de la structure de base des USPIO/SPIO utilisées (coeur d'oxyde de fer recouvert) en solution est typiquement compris entre 5 et 500 nm, de préférence 5 à 50 nm. L'intensité d'aimantation de l'oxyde métallique est typiquement comprise entre 1 et 150 u.em pour 1 g de métal dans un champ magnétique de 1 tesla à 20 C, de 20 préférence de 50 à 100. Les relaxivités r1 et r2 d'un produit de contraste magnétique donnent la mesure de son efficacité magnétique et permettent d'apprécier son influence sur le signal enregistré. Les composés obtenus présentent des relaxivités r1 et r2 avantageuses, permettant d'obtenir une forte augmentation des vitesses de relaxation des protons (RI = 1/Tl et R2 = 1/T2). Cet effet sur les vitesses de relaxation permet alors d'obtenir un bon contraste en IRM, dans les zones ciblées. La relaxivité rl est de l'ordre de 10 à 50 mMol-ls-1 et la relaxivité r2 de l'ordre de 20 à 400 mMol-ls-1, à 20 MHz. La teneur en fer de la particule (% en poids) est de l'ordre de 20 à 60%, 30 typiquement de 30 à 50%. Les USPIO/SPIO sont typiquement utilisées à une dose de 0.1 mol/kg à 10 mmol/kg en métal, de préférence de 1 mol/kg à 5 mmol/kg, notamment de l'ordre de la mmol, par injection ou perfusion dans une artère ou une veine. Les USPIO/SPIO sont typiquement sous forme de solutions colloïdales stables (ou de suspensions de particules stabilisées) et peuvent être formulées sous forme de poudres lyophilisées à associer à un solvant approprié. Leur voie d'administration est connue de l'homme du métier, typiquement intraveineuse, mais aussi en application locale (carcinome mammaire par exemple). Les compositions de l'invention sont préférablement administrées par voie parentérale, par voie orale, les autres voies d'administration n'étant cependant pas exclues, l'administration sous forme d'une injection intraveineuse étant particulièrement préférée. Lorsque l'administration par voie orale est envisagée, les compositions de l'invention se trouvent par exemple sous la forme de gélules, comprimés effervescents, comprimés nus ou enrobés, sachets, dragées, ampoules ou solutés buvables, microgranules ou formes à libération prolongée ou contrôlée. Des produits à administration orale sont connus comme le Lumirem. Lorsque l'administration par voie parentérale est envisagée, les compositions de l'invention se trouvent par exemple sous la forme de lyophilisats prêts à être reconstitués ou de solutés et suspensions injectables conditionnées en ampoules ou flacons ou seringues préremplies, pour perfusion veineuse lente ou injection intraveineuse en bolus. Les formes pour l'administration orale sont préparées par mélange des particules magnétiques avec différents types d'excipients ou de véhicules tels que des charges, des agents de délitement, des liants, des colorants, des agents correcteurs de goût et analogues, et puis, mise en forme du mélange en une gélule à libération contrôlée notamment. La solubilité aqueuse et la faible osmolalité des particules de l'invention permettent de préparer des solutions aqueuses isotoniques, de forte concentration 30 et de viscosité acceptable pour l'injection. Les formes pour l'administration parentérale sont obtenues de façon conventionnelle par mélange des particules magnétiques avec des tampons, des agents stabilisants, des conservateur, des agents solubilisants, des agents isotoniques et des agents de mise en suspension. Conformément aux techniques connues; ces mélanges sont ensuite stérilisés puis conditionnés sous la forme d'injections intraveineuses ou de lyophilisats prêts à être reconstitués dans un véhicule stérile pharmaceutiquement acceptable. Les doses unitaires seront fonction de la composition des particules magnétiques, de la voie d'administration, du type de diagnostic à établir, ainsi que du patient. Les doses unitaires seront en général de 1-10 mmol de fer pour un homme de taille moyenne (75 kg) Parmi les adjuvants pharmaceutiques on pourra citer des agents conservateurs, stabilisateurs de pH, des antioxydants. On pourra en outre éventuellement, afin d'accroître encore l'effet des particules dépourvues de biovecteurs, administrer des agents thérapeutiques destinés au traitement de pathologies associées aux MMP, notamment des agents réduisant les plaques d'athérome, des anticancéreux, des agents anti-inflammatoires. Un grand nombre d'inhibiteurs de MMP sont connus. On pourra en outre augmenter l'effet thérapeutique par utilisation de rayonnement pour tuer par hyperthermie les éléments ciblées. Les particules pourront aussi être utilisées en radiothérapie en utilisant par exemple l'isotope Fe55. Dans la mesure où la reconnaissance spécifique des MMP est susceptible d'être due au moins en partie à l'effet colloïdal des particules et/ou à leurs charges négatives, l'invention couvre aussi l'utilisation diagnostique et/ou thérapeutique de particules colloïdales non à base d'oxydes métalliques, recouvertes de molécules hydrophiles, avec ou sans principe actif dans le coeur de la particule, la taille de la particule étant appropriée pour obtenir une reconnaissance spécifique et ainsi un effet diagnostique et/ou thérapeutique. Parmi les indications particulièrement intéressantes des particules USPIO/SPIO décrites par le demandeur dans la demande, on citera notamment l'identification de plaques actives dans des indications suivantes: sténoses des carotides symptomatiques comprises entre 50 et 70% de réduction 30 du diamètre, pour lesquelles il est important d'obtenir d'autres critères de décision thérapeutique que le seul degré de sténose sténoses asymptomatiques de plus de 70% pour lesquelles le choix thérapeutique n'est pas clairement défini accidents ischémiques transitoires où il est important de connaître très rapidement la lésion responsable avant intervention chirurgicale. La caractérisation des plaques inflammatoires à l'aide des particules sera aussi très utile pour analyser l'aorte thoracique, les anévrysmes de l'aorte abdominale, les anévrysmes intracrâniens, des pathologies neurovasculaires en prévention primaire ou secondaire, les ischémies cérébrales. L'invention couvre également en outre: un kit de diagnostic par marquage des MMP-1 et MMP-3 au moyen d'USPIO/SPIO, à une concentration de 10-3 M en fer, la révélation des enzymes pouvant se faire par différentes techniques: histochimie (coloration de Perl's, marquage du fer), IRM, microscopie électronique, relaxométrie notamment. un procédé d'isolement et/ou de récupération des MMP utilisant des particules telles que décrites précédemment. Par ailleurs d'autres enzymes retrouvées dans des zones pathologiques, notamment des enzymes ayant des analogies structurales et/ou fonctionnelles avec les MMP, sont susceptibles d'être également reconnues spécifiquement par les particules recouvertes d'un revêtement et dépourvues de biovecteur de ciblage spécifique citées dans la demande. D'autres objets et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description détaillée ci-après. Des résultats significatifs ont été obtenus avec notamment le SINEREM et le 7228. On rappelle que le SINEREM est un USPIO composé d'un cristal d'oxyde de fer (magnétite), recouvert de dextran T-10. Il possède les caractéristiques physico-chimiques suivantes: diamètre moyen de la particule: aux environs de 26,8 nm (mesuré par diffusion quasi-élastique de la lumière) diamètre moyen du cristal de fer: de l'ordre de 4,9 5,85 nm (en fonction de la technique de mesure: diffraction des rayons X ou microscopie électronique à transmission). rapport moyen dextran T-10 / Fer: de l'ordre de 1,20 relaxivité Rl (M-1 x sec-1) : de l'ordre de 0,202 x 105 (mesure dans une solution d'agar à 0, 5%, à 39,5 C, 20 MHz). relaxivité R2 (M"1 x sec-l) : aux environs de 0,671 x 105 (mesure dans une 5 solution d'agar là10,5%, à 39,5 C, 20 MHz). - données biologiques chez le rat (dose administrée: 40 mol/kg): demivie plasmatique: 184 min, volume de distribution: 19 ml (produit à rémanence vasculaire prolongée). Résultats d'inhibition des MMP humaines in vitro. Le protocole de mesure de l'effet inihibiteur des particules de fer sur MMP-1 a été le suivant: principe: évaluation de l'effet inhibiteur du produit testé sur l'activité d'une MMP-1 humaine (isolée de fibroblastes humains de synovie rhumatoïde), quantifié par fluorimétrie (? ex=360 nm, Xem=465 nm; mesure de la formation deCys(Me)- His-Ala-Lys-(n-Me-Abz)-NH2 par clivage du substrat DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me) -His-Ala-Lys-(n-Me-Abz)-NH2) -protocole décrit dans la référence bibliographique Bickett and al, 1993, Anal.Biochem, 212:58. Le produit de référence utilisé dans ce test a été le GM6001 (Ilomastat, Galardin IC50 = 3.6E-09). Plus précisément, le produit à tester, ou le produit de référence ou de l'eau, est ajouté à une solution tampon contenant 7 nM en MMP-1 (activée préalablement au moyen d'acétate de p-aminophenylmercurique). La fluorescence de ce milieu est évaluée après une incubation de 30 min à 37 C (t=0). La réaction enzymatique est ensuite initiée en ajoutant le substrat à une concentration de 10 M; après une seconde incubation de 40 min à 37 C, la fluorescence est à nouveau évaluée (t=40). L'activité enzymatique est déterminée en soustrayant le signal mesuré à t=0 du signal mesuré à t=40. Le résultat est finalement exprimé en pourcentage d'inhibition de l'activité enzymatique. Le protocole de mesure de l'effet inihibiteur des particules de fer sur la MMP-3 a 30 été le suivant: principe: évaluation de l'effet inhibiteur du produit testé sur l'activité d'une MMP-3 humaine (utilisation d'une enzyme recombinante exprimée la lignée cellulaire sF9), quantifié par fluorimétrie (Xex=340 nm, lem 405 nm; mesure de la formation de Mca-ArgPro-Lys-Pro-Tyr-Ala par clivage du substrat Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-AlaNva-Trp-Met-Lys(DNP)-NH2 (NFF2). Protocole décrit dans la référence Nagase et al., J.Biol.Chem, 269:20952. Le produit de référence utilisé dans ce test a été le TIMP-1 (IC50 = 3.6E09). Plus précisément, le produit à tester, ou le produit de référence ou de l'eau, est ajouté à une solution tampon contenant 6 nM en MMP-3. La fluorescence de ce milieu est évaluée après une incubation de 30 min à 37 C (t=0). La réaction enzymatique est ensuite initiée en ajoutant 10.tM du substrat NFF-2; après une seconde incubation de 90 min à 37 C, la fluorescence est à nouveau évaluée (t=90). L'activité enzymatique est déterminée en soustrayant le signal mesuré à t=0 du signal mesuré à t=90. Le résultat est finalement exprimé en pourcentage d'inhibition de l'activité enzymatique. Les résultats d'inhibition des MMP humaines par différentes particules de fer 15 recouvertes de polysaccharides (Sinerem et 7228) sont représentés dans les tableaux 1 et 2. TABLEAU 1: résultats d'inhibition des MMP-1 humaines par des USPIO. Produit Concentration en fer % d'inhibition de la valeur de référence [M] Sinerem 1.0E-07 -2 1.0E-05 -2 1.0E-03 69 7228 1.0E-07 1 1.0E-05 -2 1.0E-03 64 TABLEAU 2: résultats d'inhibition des MMP-3 humaines par des USPIO. Produit Concentration en fer % d'inhibition de la valeur de [M] référence Sinerem 1.0E-07 1 1.0E-05 2 1.0E-03 71 7228 1.0E-07 0 1.0E-05 3 1.0E-03 73 Les résultats démontrent un effet inhibiteur significatif des MMP humaines testées, 5 en présence d'une concentration particulaire de 10-3 M en fer. De telles concentrations en fer (10-3 M) sont atteintes dans la pratique courante de l'imagerie médicale, par exemple selon les modalités suivantes: Injection intravasculaire de 300 3000 mol de fer à un animal (lapin). Au moment du bolus, la concentration sanguine est typiquement de l'ordre de 1,5 10 à 15 mM en fer. Accumulation moyenne du Sinerem dans les plaques d'athérome de lapins WHHL, après injection intravsculaire de 1000 p.mol Fe I kg: 22 g Fe / g de tissu, soit environ 0,4 mM de Fer. - Incubation ex vivo de carotides humaines prélevées au cours d'une endarectomie, dans une suspension particulaire à 1 mM en fer, pour la détection des MMP-1 et MMP-3 par IRM ou histochimie (coloration de Perl's) ou autre technique (microscopie électronique à transmission, relaxométrie, etc). REVENDICATIONS 1. Utilisation de particules d'oxyde métallique magnétique recouvertes d'un revêtement dépourvu de composé de ciblage spécifique de MMP, dans la préparation d'un agent de diagnostic par IRM d'une pathologie impliquant au moins une MMP. 2. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que la pathologie se traduit par la présence de plaques d'athérome. 3. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que la pathologie est un cancer, notamment un cancer du sein, colo-rectal, du poumon, de la prostate. 4. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que la pathologie est une maladie inflammatoire et/ou dégénérative, ou une maladie impliquant un mécanisme inflammatoire. 5. Utilisation selon la revendication 1 à 4 caractérisée en ce que la particule est recouverte d'un polysaccharide. 6. Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que le polysaccharide est choisi parmi les dextrans. 7. Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que le polysaccharide est choisi parmi les dérivés carboxyliques de polysaccharides, de préférence les 20 dérivés carboxyméthylique, carboxyéthylique, carboxypropylique. 8. Utilisation selon la revendication 1 à 4 caractérisée en ce que la particule est recouverte d'un dérivé PEG ou d'un dérivé aminoalcool. 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 caractérisée en ce que le diamètre du complexe est compris entre 5 et 500 nm, de préférence 5 à 25 200 nm, encore de préférence 5 et 30 nm. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 caractérisée en ce que l'intensité d'aimentation de l'oxyde métallique est comprise entre 1 et 150 u.em par gramme de métal. 11. Utilisation l'une quelconque des revendications 1 à 10 caractérisée en ce que la relaxivité rl de la particule est de l'ordre de 10 à 50 mMolls-1 et la relaxivité r2 de l'ordre de 20 à 400 mMol-ls-1. 12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 caractérisée en ce que la dose administrée est de 1 gmol/kg à 10 mmol/kg en métal. 13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 caractérisé en ce que les particules recouvertes sont utilisées en association avec au moins un 5 agent thérapeutique inhibiteur de MMP. 14. Utilisation de particules d'oxyde métallique magnétique recouvertes d'un revêtement dépourvu de composé de ciblage spécifique de MMP, dans la préparation d'un agent de traitement thérapeutique d'une pathologie impliquant au moins une MMP.