Brevet FR2860320A1 — publié le 20050401

L'invention concerne un procédé de mise en correspondance d'images d'échantillons tissulaires portées par une pluralité de lames en matériau transparent, préférentiellement en verre, après un recalage automatique de ces images. L'invention trouve une application particulière, bien que non exhaustive, dans le domaine de la cancérologie. Pour fixer les idées, on se placera dans ce qui suit dans le cas de cette application préférée de l'invention. Dans ce cadre d'application, il est bien connu de congeler des o échantillons de tissus ou de les fixer puis de les inclure dans un bloc de paraffine ou de résine plastique. On effectue ensuite des coupes fines à l'aide d'un microtome, coupes d'épaisseurs typiquement comprises entre 5 et 8 pm. Ces coupes sont ensuite appliquées sur une lame de verre. L'étape suivante consiste à pratiquer des colorations et/ou des marquages, à l'aide de produits appropriés. Ces marquages sont appelés histochimiques ou immunohistochimiques. Le marquage par un colorant ou un anticorps spécifique permet la mise en évidence sélective de certains éléments de l'échantillon. L'analyse quantitative des structures tissulaires colorées permet de déterminer des paramètres d'évaluation de l'évolution d'une maladie, par exemple d'un cancer, qui peuvent constituer eux-mêmes des aides à la prise de décision pour établir le traitement. Généralement, pour l'étude d'un échantillon de tissu, plusieurs marqueurs distincts sont utilisés pour mettre en évidence des entités également distinctes de l'échantillon analysé. A titre d'exemple non limitatif, trois marqueurs peuvent être utilisés: un premier pour mettre en évidence le stroma, un deuxième pour mettre en évidence des vaisseaux sanguins et un troisième pour mettre en évidence les noyaux cellulaires en prolifération. Dans cet exemple précis, la première étape du processus consiste à réaliser trois lames à partir d'un même bloc de paraffine. On réalise ensuite trois marquages distincts, un pour chaque lame. L'examen des lames est 2860320 2 effectué de façon classique visuellement à l'aide d'un microscope, éventuellement associé à une caméra numérique hautedéfinition. II a déjà été proposé dans l'état de la technique de scanner une lame portant un échantillon de tissus pour acquérir une image numérique pour effectuer une mesure totalement automatique par analyse d'images. II serait intéressant de "corréler" les informations issues des trois lames, ce également en superposant les résultats d'analyse issus des trois lames. II est possible, du moins théoriquement, de superposer de façon aisée des images numériques. De nombreux logiciels de traitement d'image permettent de telles opérations. Chaque image est enregistrée dans une "couche" ou "layer", selon la terminologie anglo-saxonne. Chaque couche peut subir un traitement particulier: modification de la teinte, de la transparence, etc. et les couches être superposées et éventuellement fusionnées, pour un affichage sur écran, une impression et/ou un enregistrement pour un traitement ultérieur. Cependant, un certain nombre de problèmes se posent dans le cadre de l'application visée. Tout d'abord, et en dehors du fait, normal et voulu, que des marquages distincts modifient l'aspect de chacune des lames (notamment la couleur de certains éléments des échantillons de tissus), lors de l'opération de coupe à l'aide d'un microtome puis d'étalement des rubans de paraffine, on constate des dégradations des échantillons des tissus d'une lame à l'autre qui se traduisent notamment par des déformations, des rotations, des translations et/ou des modifications de tailles. En deuxième lieu, lorsque les lames sont scannées, les tailles des images finales obtenues peuvent être différentes. Enfin, des détails, lors des opérations précédentes, peuvent avoir été dégradés, voire supprimés des images finales. Dans le cadre de l'application considérée, ces modifications rendent toute superposition des trois images manuelle, laborieuse voire impossible par les outils disponibles dans le commerce. De plus, aucune mesure entre les marqueurs ne peut être effectuée. 2860320 3 L'invention vise à pallier les inconvénients des procédés de l'art connu, et dont certains viennent d'être rappelés. L'invention se fixe pour but un procédé de mise en correspondance d'images d'échantillons tissulaires portées par une pluralité lames de verre, après recalage automatique de ces images. Les lames sont réalisées à partir d'un bloc initial unique, par exemple de paraffine, contenant un échantillon de tissu que l'on appellera primaire, et sont soumises à des marquages distincts Pour ce faire, selon une première caractéristique importante, une image de chaque lame est acquise à l'aide d'un scanner ou par tout autre procédé similaire. Selon une caractéristique importante encore, par application d'un seuil déterminé, une image binaire des échantillons de tissus de chaque lame est créée. De même, par application d'une séquence de traitements d'images déterminée une image binaire des marqueurs de chaque lame est créée. On extrait ensuite les contours des images binaires de tissu. Selon une caractéristique importante encore, on procède ensuite à des étapes de recalage itératives de ces images, de la façon qui sera détaillée ci-après. De façon plus précise, ces étapes comprennent un recalage des images binaires de contours, deux à deux, par rapport à une première image binaire de contour, que l'on appelle "image de référence". Des paramètres de rotation et de translation sont déterminés lors de ces étapes. En utilisant ces paramètres, on applique des rotations et des translations aux images binaires de marqueurs, de façon à recaler les images 25 binaires de marqueurs par rapport à la référence précitée. Ensuite, les images de marqueurs recalées sont superposées à l'image dite de référence. Cette image composite peut être visualisée, imprimée et/ou enregistrée dans des moyens de mémoire informatiques pour un traitement ou une analyse ultérieurs. L'invention a donc pour objet principal un procédé de mise en correspondance d'images d'échantillons tissulaires portés par une pluralité de lames en matériau transparent, notamment en verre, chacune desdites lames 2860320 4 portant un échantillon de tissus créé par coupe fine à partir d'un échantillon tissulaire unique dit primaire, le dit procédé comprenant une étape initiale de marquage de chacun desdits tissus par un marqueur distinct modifiant des caractéristiques déterminées de ces tissus, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes: acquisition d'images numériques correspondant à chacun desdits tissus portés par lesdites lames, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation; - création d'images binaires de tissus à partir desdites images 10 numériques, une desdites image binaires étant dite de référence, et leur enregistrement dans des moyens de mémoire; - création d'images binaires représentant lesdits marqueurs à partir desdites images numériques, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation; création d'images binaires représentant les contours des dites images binaires de tissu; - détermination de valeurs numériques représentant des paramètres de rotation et de translation à appliquer à chacune desdites images binaires de tissus nécessaires à leur recalage par rapport à ladite image binaire de référence, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation; et - recalage deux à deux desdites images binaires de marqueurs par rapport à une image binaire ou une image polychrome de référence en leur appliquant lesdits paramètres de rotation et de translation, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation. L'invention va maintenant être décrite de façon plus détaillée en se référant aux dessins annexés, parmi lesquels: - la figure 1 illustre schématiquement l'étape initiale du procédé permettant d'acquérir des images numériques d'une pluralité de lames portant des échantillons de tissus obtenues à partir d'un bloc de paraffine unique; - la figures 2 illustre très schématiquement les principales étapes du procédé selon l'invention; 2860320 5 - les figure 3A à 3E illustrent de façon plus détaillée les étapes de recalages et de superposition finale d'images selon le procédé de l'invention; et la figure 4 illustre de façon plus détaillée l'étape de recalage 5 d'images binaires de contours de la figure 3A. Le procédé selon l'invention de mise en correspondance d'images d'échantillons tissulaires portées par une pluralité de lames et de recalage automatique de ces images va maintenant être explicité par référence aux figures 1 à 4. Sur ces figures, les éléments identiques portent les mêmes références et ne seront re-décrits qu'en tant que de besoin. La figure 1 illustre de façon schématique l'étape initiale du procédé selon l'invention. On a supposé que l'on disposait d'une pluralité de lames La; obtenues de façon classique, par coupes fines, à partir d'un bloc unique B (figure 2) portant un échantillon de tissus E que l'on appellera primaire. Toujours de façon classique en soi, on effectue des marquages immunohistochimiques distincts pour chaque lame. Pour fixer les idées, et sans que cela limite en quoi que ce soit la portée de l'invention, dans un but de simplification, on suppose que l'on utilise trois marqueurs distincts, Mai à Mai (figure 2). Il s'ensuit que le nombre de lames nécessaires est également égal à trois (1= 3) : La, à La3. Ces lames, La, à Lai, sont disposées à tour de rôle dans un scanner 1. Le scanner 1 est relié à un ordinateur 2 par toute liaison 10 appropriée, par exemple du type "USB" (pour "Universal Serial Bus" ou "Bus universel série"). L'ordinateur 2 comprend, de façon habituelle, une unité centrale 21, munie notamment de moyens (non représentés) de calcul et de mémorisation (notamment une mémoire centrale à accès aléatoire et un ou plusieurs disques durs), d'un clavier 12 et d'un organe de pointage (souris) 13. De façon connue en soi, les lames, La, à La3, sont scannées pour en acquérir des images numériques, /Lai à ILa3 (figure 2), enregistrées dans les moyens de mémorisation de l'ordinateur 2, les valeurs acquises représentant des valeurs RVB pour chaque pixel de ces lames. La résolution du scanner peut être relativement basse, au moins de l'ordre de 2000 à 4000 points par pouce L'étape suivante, illustrée plus précisément par la figure 2, consiste à créer, à partir des trois images numériques (dans l'exemple), /Lai à !La3, acquises et enregistrées, des images binaires, 1B1 à 1B3, correspondant aux images numériques des tissus 1E1 à 1E3. On procède ensuite à une étape de recadrage, c'est-à-dire de remise à une taille identique, des images binaires de tissus, IB1 à /B3. De même, de façon avantageuse, on soumet ces images à des prétraitements numériques, connus en soi, pour en améliorer la qualité : élimination des artefacts de petite taille, etc. Dans un deuxième temps, on créé des images binaires, /Mal à IMa3, des marqueurs, Ma, à Mai. La création de ces images binaires s'effectue fondamentalement par application de séquences de traitements d'images spécifiques et déterminées. Pour ce faire, il est possible d'utiliser un logiciel développé sur site, par exemple le logiciel "Pixcyt" (marque déposée). L'image, arbitrairement N 1, soit ILAI, et les images qui en sont tirées (images binaires de tissu et de marqueurs) sont appelées "images de référence". Les images binaires ci-dessus, !B1 à 1B3, et, /Mal à IMa3, respectivement, sont enregistrées dans des moyens de mémoire, par exemple la mémoire de l'ordinateur 2 (figure 1). On extrait ensuite dans des images ICI à 1C3 (voir figure 3A) les contours des images 1B, à 1B3. Les étapes suivantes consistent à recaler deux à deux les images binaires de contours, !C2 à 1C3 (à IC;dans un cas général, avec 1 supérieur à 2), deux à deux, par rapport à l'image de référence, IC1. Les étapes ci-dessus, ainsi que les suivantes sont réalisées, par exemple, en faisant appel aux moyens de calcul (non représentés) et de visualisation 20 de l'ordinateur 2 (figure 1). 2860320 7 La figure 3A illustre très schématiquement le recalage de l'image binaire de contour 1C2 par rapport à l'image binaire de contour de référence /C,, et la figure 3B illustre le recalage de l'image binaire de contour IC3 par rapport à cette même image binaire de contour de référence IC1. Lors de ces deux étapes, on constitue à chaque fois un fichier de données numériques, Fi, et Fie, respectivement, enregistrés dans des moyens de mémoire, par exemple la mémoire de l'ordinateur 2 (figure 1). Ces données numériques représentent des paramètres de rotation (centre et angle de rotation) et des valeurs de translation qui devront être appliqués aux images binaires de marqueurs, IMa2 et IMa3. Les figures 3C et 3D illustrent très schématiquement ces opérations: l'image de marqueur IMa2 est recalée en une image binaire 1M'a2 (figure 3C), en faisant usage des données numériques enregistrées dans le fichier et l'image de marqueur IMa2 est recalée en une image binaire IM'a2 (figure 3D) en faisant usage des données enregistrées dans le fichier Fi2. A la suite de ces étapes, dans des variantes de réalisation du procédé non explicitement illustrées, on peut procéder à des étapes supplémentaires optionnelles. Selon une première variante de réalisation supplémentaire, les images de marqueurs recalées /Ma', à IMa'3, sont superposées à l'image de référence /LA,, comme illustré schématiquement par la figure 3E, de façon à former une image composite /Lao destinée à être visualisée ou à subir tout autre traitement informatique, notamment l'enregistrement dans des moyens de mémoire, par exemple la mémoire de l'ordinateur 2 (figure 1). Selon une deuxième variante de réalisation supplémentaire, on peut calculer des distances entre les marqueurs destinées à subir une analyse et à être enregistrées notamment dans des moyens de mémoire, par exemple la mémoire de l'ordinateur 2 (figure 1). On va maintenant décrire de façon plus détaillée les étapes permettant 30 le recalage illustré par la figure 3A, par référence à la figure 4. De façon pratique, on effectue les recalages en deux phases principales: un recalage primaire, ou grossier, et un recalage fin. 2860320 8 On acquiert tout d'abord les coordonnées des points des contours des images binaires de contours, 1C, à 1C3, Ces coordonnées sont enregistrées. Pour chaque paire d'images binaires de contour à traiter, par exemple les images, 1C, et 1C2, comme illustré sur la figure 4, on obtient deux ensembles 5 de points, PC1 et PC2. Pour effectuer le recalage primaire, on applique une opération dite d'Analyse en Composantes Principales ou "ACP". Cette opération permet d'inscrire les ensembles de points, PC1 et PC2, dans des ellipses, respectivement E!, et E12, d'axes principaux orthogonaux et Y2X2, o respectivement, et de centres, C, et C2. On calcule les coordonnées des points dans les repères de ces axes. Cela revient à superposer les deux formes. Mais les ellipses, E!, et E!2, ne sont pas orientées. Les formes sont donc superposées à 180 près: elles peuvent donc être soit à l'endroit soit à l'envers l'une par rapport à l'autre. Il est donc nécessaire de déterminer un sens de rotation à opérer pour faire basculer les deux figures et pouvoir les mettre en correspondance. Pour déterminer le bon sens, on va effectuer une recherche de points homologues avec la forme PC2 superposée dans un sens puis dans l'autre. On retiendra comme bon sens celui qui rendra le plus de points homologues. Pour faire la recherche de points homologues, on recherche pour chaque point Pi, de l'ensemble de points des contour PC1 la distance euclidienne le séparant de tous les points Pie de l'ensemble de points de contour PC2. On enregistre le point le plus proche de Pi, dans PC2. On détermine ainsi une première série de points les plus proches de PC2 par calcul de la distance Euclidienne. On enregistre aussi dans une autre série le deuxième point le plus proche de Pi, dans PC2 On procède de même pour chaque point Pi2: on recherche pour chacun de ces point Pie de l'ensemble de points de contour PC2 la distance euclidienne le séparant de tous les points Pi, de l'ensemble de points de contour PC1. On enregistre le point le plus proche de Pi2 dans PC1. On détermine ainsi une troisième série de points les plus proches de PC1 par 2860320 9 calcul de la distance Euclidienne. On enregistre aussi dans une autre série le deuxième point le plus proche de Pi2 dans PC1 On dit que deux points, un point dans la forme de référence et son point le plus proche dans la forme à recaler sont homologues si le premier point est le point le plus proche ou le deuxième plus proche du deuxième point ou de son propre deuxième point le plus proche. On définit ainsi un ensemble de points dits homologues. On détermine ensuite des valeurs numériques représentant la somme des carrés des distances entre points homologues et on détermine un angle de rotation, un centre de rotation C et un vecteur de translation qui minimisent cette somme, et on les enregistre dans le fichier de données numériques Fil. A partir de ces données numériques, on applique des translations et des rotations à l'ensemble de points de contour PC2, ce qui permet d'obtenir un recalage par rapport à l'ensemble de points de contour PC1, ce dernier formant la référence. Les mêmes étapes sont réalisées pour la paire d'ensembles de points de contours correspondant aux images binaires de contours, ICI et IC3. Les données numériques de rotation et de translation, déterminées pour cette paire d'ensembles de points de contours, sont enregistrées dans le fichier de données numériques Fi2. A partir de ces données numériques, on applique des translations et des rotations à l'ensemble de points de contour (non représenté) correspondant à l'image binaire de contour IC3, ce qui permet d'obtenir, comme précédemment, son recalage primaire par rapport à l'ensemble de points de contour PC1. De façon préférentielle, comme il a été indiqué, on procède à une phase de recalages itératifs, dits "fins", à partir des positions obtenues, lors de la première phase, pour les ensembles de points de contours correspondant aux images binaires de contours, IC2 et IC3. Dans la pratique, les étapes itératives propres à cette phase, consistent à répéter une ou plusieurs fois, les processus de recherche de points homologues et de minimisation de la distance entre les points pour 2860320 10 déterminer les paramètres de rotation et de translation, jusqu'à ce que les deux ensembles de points (dans l'exemple) ne "bougent" plus par rapport à l'ensemble de référence à PC1. Pour ce faire, on fixe des seuils (différence de rotation et différence de translation) en dessous desquels on estime que la précision voulue est atteinte. On dira que les ensembles de points de contours sont alors figés. Les données numériques de rotation et de translation sont enregistrées à chaque étape, dans les fichiers Fil et Fi2, respectifs, et remplacent les précédentes devenues obsolètes. Les données numériques o finales de rotation et de translation (c'est-à-dire lorsque les ensembles de points de contours sont figés), servent ensuite à appliquer des rotation et des translations aux images binaires de marqueurs, IMa2 et IMa3, comme illustré schématiquement par les figures 3C et 3D. Une fois ces images binaires de marqueurs, Mal à IMa3, recalées, il devient possible de les superposer les unes sur les autres, d'une part, et sur l'image binaire ou polychrome de référence, lBI ou ILAI, d'autre part, pour obtenir l'image composite ILAo de la figure 3E par exemple, tous les éléments de cette images étant disposés dans une position identique à celle de l'image de référence, malgré les diverses dégradations de qualité (déformation, rotation, etc.) subies lors des opérations de coupe au microtome pour créer les lames, de chauffage de la paraffine, et de scannérisation pour obtenir des images numériques. Il est également possible de calculer des distances inter-marqueurs à partir des images binaires de marqueurs, Mai à IMa3, recalées. L'étape de détermination desdites valeurs numériques représentant des paramètres de rotation et de translation comprend le traitement, deux à deux, d'un ensemble desdits points de contour (PC1) appartenant à ladite image binaire de référence et d'un ensemble desdits points de contour (PC2) d'une autre desdites images binaires de tissus, en ce que ledit traitement comprend: - la recherche pour chaque point dudit ensemble de points de contour (PC1) de ladite image binaire de tissu de référence de la distance euclidienne le séparant de tous les points dudit ensemble de points de contour (PC2) de ladite autre image binaire de tissu à recaler, la détermination d'une première série de points dits les plus proches par le calcul de la distance dite Euclidienne et son enregistrement dans des moyens de mémorisation; - la recherche pour chaque point dudit ensemble de points de contour (PC1) de ladite image binaire de référence de la distance euclidienne le séparant de tous les points dudit ensemble de points de contour (PC2) de ladite autre image binaire de tissu à recaler, la détermination d'une deuxième o série de points dits les deuxièmes plus proches par le calcul de la distance dite Euclidienne et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation; - la recherche pour chaque point dudit ensemble de points de contour (PC2) de ladite autre image binaire de tissu à recaler de la distance le séparant de tous les points dudit ensemble de points de contour (PCC) de ladite image binaire de tissu de référence, la détermination d'une troisième série de points dits les plus proches par le calcul de la distance dite Euclidienne, et son enregistrement dans des moyens de mémorisation; - la recherche pour chaque point dudit ensemble de points de contour (PC2) de ladite autre image binaire de tissu à recaler de la distance le séparant de tous les points dudit ensemble de points de contour (PC1) de ladite image binaire de tissu de référence, la détermination d'une quatrième série de points dits les deuxièmes plus proches par le calcul de la distance dite Euclidienne, et son enregistrement dans des moyens de mémorisation; la détermination à partir desdites première, deuxième, troisièmes et quatrièmes séries de points les plus proches et deuxièmes plus proches d'un ensemble de points dits homologues; - la détermination de valeurs numériques représentant la somme des carrés des distances entre lesdits points homologues; et la détermination d'un angle de rotation, d'un centre de rotation et d'un vecteur de translation qui minimisent ladite somme, constituant lesdits paramètres à appliquer pour ledit recalage, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation A la lecture de ce qui précède, on constate aisément que l'invention atteint bien les buts qu'elle s'est fixés. Il doit être clair cependant que l'invention n'est pas limitée aux seuls exemples de réalisations explicitement décrits, notamment en relation avec les figures 1 à 4. Elle permet d'obtenir un recalage automatique des images des échantillons de tissus portés par une pluralité de lames de verre obtenues à partir d'un bloc initial unique, mais ayant subi des marquages histochimiques et/ou immunohistochimiques distincts et leur mise en correspondance. o Les exemples numériques n'ont été fournis que pour mieux fixer les idées et ne sauraient constituer une quelconque limitation de la portée de l'invention. Ils procèdent d'un choix technologique à la portée de l'Homme de Métier. En particulier le nombre de marqueurs histochimiques et/ou immunohistochimiques utilisés peut être différent de trois. Enfin, elle est applicable à des images intramodales ou multimodales d'origines différentes, de macro ou microimagerie tissulaire et/ou cellulaire REVENDICATIONS 1. Procédé de mise en correspondance d'images d'échantillons tissulaires portés par une pluralité de lames en matériau transparent, notamment en verre, chacune desdites lames portant un échantillon de tissus créé par coupe fine à partir d'un échantillon tissulaire unique dit primaire, le dit procédé comprenant une étape initiale de marquage de chacune desdits tissus par un marqueur distinct modifiant des caractéristiques déterminées de ces tissus, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes: o acquisition d'images numérique (ILa1-ILa3) correspondant à chacun desdits tissus portés par lesdites lames (La1-La3), et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation; création d'images binaires de tissus (1B,-IB3) à partir desdites images numériques, une desdites image binaires étant dite de référence (lB1), 15 et leur enregistrement dans des moyens de mémoire; création d'images binaires (IMai-IMa3) représentant lesdits marqueurs (Ma1-Ma3) à partir desdites images numériques, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation; création d'images binaires (IC1-IC3) représentant les contours des dites 20 images binaires de tissu; détermination de valeurs numériques représentant des paramètres de rotation et de translation à appliquer à chacune desdites images binaires de tissus nécessaires à leur recalage par rapport à ladite image binaire de référence, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation; et recalage deux à deux desdites images binaires de marqueurs (IMai-IMa3) par rapport à une image binaire ou une image polychrome de référence en leur appliquant lesdits paramètres de rotation et de translation, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite acquisition desdites images numériques est obtenue par scannérisation (1) desdites lames (La1-La3). 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdites images binaires de tissus (IB1-IB3) et de marqueurs (IMaj-IMa3) sont obtenues par application de séquences de traitement d'images déterminées aux dites images numériques. 4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de remise à l'échelle desdites images binaires de o tissus (/B1-/B3) entre elles, de façon à ce qu'elles présentent une taille identique. 5. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire consistant à acquérir les coordonnées d'ensembles de points représentant les contours (PC1-PC2) de chacune desdites images binaires de tissus (/B1-IB3), en ce que ces dits ensembles de points de contours sont enregistrés dans des moyens de mémorisation. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que ladite étape de détermination desdites valeurs numériques représentant des paramètres de rotation et de translation comprend le traitement, deux à deux, d'un ensemble desdits points de contour (PC1) appartenant à ladite image binaire de référence et d'un ensemble desdits points de contour (PC2) d'une autre desdites images binaires de tissus, en ce que ledit traitement comprend: la recherche pour chaque point dudit ensemble de points de contour (PC1) de ladite image binaire de tissu de référence de la distance euclidienne le séparant de tous les points dudit ensemble de points de contour (PC2) de ladite autre image binaire de tissu à recaler, la détermination d'une première série de points dits les plus proches par le calcul de la distance dite Euclidienne et son enregistrement dans des moyens de mémorisation; la recherche pour chaque point dudit ensemble de points de contour (PC1) de ladite image binaire de référence de la distance euclidienne le séparant de tous les points dudit ensemble de points de contour (PC2) de ladite autre image binaire de tissu à recaler, la détermination d'une deuxième série de points dits les deuxièmes plus proches par le calcul de la distance dite Euclidienne et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation; la recherche pour chaque point dudit ensemble de points de contour (PC2) de ladite autre image binaire de tissu à recaler de la distance le o séparant de tous les points dudit ensemble de points de contour (PC1) de ladite image binaire de tissu de référence, la détermination d'une troisième série de points dits les plus proches par le calcul de la distance dite Euclidienne, et son enregistrement dans des moyens de mémorisation; la recherche pour chaque point dudit ensemble de points de contour (PC2) de ladite autre image binaire de tissu à recaler de la distance le séparant de tous les points dudit ensemble de points de contour (PC1) de ladite image binaire de tissu de référence, la détermination d'une quatrième série de points dits les deuxièmes plus proches par le calcul de la distance dite Euclidienne, et son enregistrement dans des moyens de mémorisation; la détermination à partir desdites première, deuxième, troisièmes et quatrièmes séries de points les plus proches et deuxièmes plus proches d'un ensemble de points dits homologues; la détermination de valeurs numériques représentant la somme des carrés des distances entre lesdits points homologues; et la détermination d'un angle de rotation, d'un centre de rotation et d'un vecteur de translation qui minimisent ladite somme, constituant lesdits paramètres à appliquer pour ledit recalage, et leur enregistrement dans des moyens de mémorisation. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend une série d'étapes de recalages supplémentaires, dits fins, constituée par l'itération desdites étapes de détermination desdites valeurs numériques représentant des paramètres de rotation et de translation, suivie l'application de ces dits paramètres, jusqu'à ce que lesdites valeurs soient inférieures à un seuil prédéterminé. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il comprend des étapes supplémentaires consistant en la superposition desdites images de marqueurs recalées (/Ma',-IMa 3), entre elles et avec ladite image binaire de référence de manière à créer une image composite (ILao). 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de visualisation sur un écran (20) de ladite image composite (ILao). 10. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire d'enregistrement dans des moyens de mémorisation de ladite image composite (ILao). 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce qu'il comprend des étapes supplémentaires consistant à réaliser des calculs de distance entre marqueurs et à les analyser