Brevet FR2866118A1 — publié le 20050812

DISPOSITIF DE MESURE INSTANTANÉE ET CONTINUE DE SUBSTANCES EN PHASE AQUEUSE La présente invention se rapporte à un dispositif de mesure instantanée et continue des constituants d'un fluide biologique, à l'aide de capteurs électrochimiques intégrés, et plus particulièrement de capteurs issus de la technologie des transistors à effet de champ sensibles à une espèce ionique (ISFET). Durant ces dernières années, le domaine de la santé a vu une évolution vers une plus grande sûreté de fonctionnement et de prise de décision. L'amélioration des pratiques médicales, cependant est freinée par les délais existant entre les trois activités complémentaires qui la constituent: le diagnostic, la thérapie et la prévention. Pour résoudre ce problème les technologies de la santé doivent développer des techniques d'analyse médicales in vivo simples, rapides, sûres et peu coûteuses. En France, l'hémodialyse périodique permet de traiter plus de 30 000 patients insuffisants rénaux, et plus de 300 000 aux États-Unis. Elle consiste à épurer le sang des déchets du métabolisme azoté (en particulier l'urée et la créatinine) et à réguler l'équilibre hémodynamique du patient. Le contrôle de l'équilibre hydro-sodé et le bilan urée-créatinine sont réalisés en général sur deux prélèvements, en début et en fin de séance de dialyse, par prise de sang ou sur l'eau plasmatique contenant des ions (H+, K+, Na+) et de petites molécules (urée, créatinine, glucose). Bien que des progrès importants aient été réalisés pour concevoir des dispositifs de traitement des fluides biologiques, notamment le traitement du sang par circulation extracorporelle, la surveillance de certains paramètres biologiques en cours de fonctionnement n'est pas possible. De manière générale, on mesure directement sur le circuit des paramètres tels que la pression ou le débit du liquide traité. Pour d'autres paramètres, par exemple des substances telles que l'urée, la créatinine ou les ions K+, Na+ ou H+, un prélèvement de fluide doit être effectué pour analyse par une technique appropriée. Un personnel spécialisé doit être disponible pour effectuer le prélèvement au bon moment, et pour réaliser les manipulations nécessaires sur le dispositif d'analyse adapté. Ceci représente une surcharge de travail importante, alors que le délai pour obtenir le résultat peut être supérieur à la durée du traitement. C'est pourquoi, comme indiqué plus haut, jusqu'à présent le nombre des prélèvements a été limité, par exemple à deux (en début et en fin de séance). Les résultats des analyses servent donc avant tout à définir les conditions présumées les meilleures pour le traitement suivant, mais ne permettent pas l'adaptation du traitement en cours de séance en fonction de ces paramètres. Pour remédier à cet inconvénient, on a cherché à mettre en relation les paramètres mesurables durant le traitement avec des paramètres calculés reflétant l'efficacité de la dialyse en cours. Des modèles mathématiques essentiellement empiriques ont été développés. Cependant les valeurs obtenues doivent être confirmées par un contrôle sanguin. La malnutrition est maintenant reconnue comme un facteur de diagnostic et de pronostic important chez les patients sous hémodialyse. Plusieurs études ont montré que deux déterminants majeurs du statut nutritionnel sont l'efficacité de la dialyse et l'apport en protéines. Les paramètres nutritionnels utilisables comme indicateurs de l'état nutritionnel du patient sont notamment l'urée, la créatinine, l'albumine, la préalbumine, le taux de catabolisme des protéines (nPCR) et la perte de masse corporelle. Le but de la présente invention est de proposer un système permettant d'adapter la séance à chaque patient particulier, grâce à la mesure en continu des concentrations sanguines au cours de la dialyse afin de quantifier avec précision l'efficacité de la dialyse en mesurant l'épuration de l'urée et de la créatinine. Cette mesure donnant accès aux index d'efficacité liés à l'épuration apparaît comme essentielle à la bonne conduite sur le long terme des traitements de dialyse. Un capteur électrochimique permettant de détecter l'urée de manière instantanée dans un fluide issu de dialyse est décrit dans la demande de brevet WO 98/28613. Ce dispositif consiste en une électrode comprenant une couche d'oxyde sensible aux variations du pH et recouverte d'une couche sensible incorporant une uréase. L'urée contenue dans un échantillon du fluide à analyser mis en contact de la couche sensible, réagit avec 1'uréase et provoque une variation du pH qui est détectée par la couche d'oxyde. Ce dispositif nécessitant le prélèvement d'une goutte de sang réalise une mesure discrète et n'est pas adapté à une mesure en continu. Le dispositif selon la présente invention apporte une solution particulièrement avantageuse car il permet la mesure directe et en continu des paramètres chimiques et biochimiques directement sur le fluide biologique au cours d'un traitement durant une séance de dialyse. Le bon déroulement de la séance peut ainsi être surveillé sans effort supplémentaire du personnel médical, et le traitement peut être modulé de manière quasiment instantanée. Cette solution offre donc un confort amélioré et une grande sécurité pour le patient comme pour le personnel médical. De manière plus détaillée, le dispositif selon l'invention pour la mesure quantitative de substances présentes dans un fluide biologique comprend une enceinte étanche délimitant une chambre de mesure, dotée d'un orifice d'entrée et d'un orifice de sortie permettant la circulation dudit fluide biologique à travers ladite chambre de mesure, - un capteur chimique de type ISFET sensible à au moins une substance présente dans ledit fluide biologique, ledit capteur étant placé dans la chambre de mesure, - des moyens de transmission du signal émis par ledit capteur chimique de type ISFET à un lecteur de données. Par "fluide biologique" on entend tout milieu liquide ou visqueux d'origine biologique ou contenant des substances d'origine biologique. Un tel fluide a une consistance telle qu'il peut circuler dans un conduit sous l'effet d'une pompe. Il peut s'agir d'un fluide biologique naturel tel que le sang, d'un fluide biologique traité (par exemple du plasma, un effluent de dialyse) ou d'un fluide synthétique contenant des éléments biologiques. Les substances présentes dans le fluide biologique pour lesquelles des dosages de concentration sont pratiqués sont notamment des ions tels que le sodium, le potassium, ou de petites molécules organiques telles que l'urée, la créatinine, le glucose. La mesure du pH est également fréquemment réalisée. L'enceinte formant la structure de base du dispositif selon l'invention peut avoir une forme quelconque, par exemple cylindrique ou parallélipipédique. De préférence sa section est sensiblement constante de manière à permettre un écoulement régulier du fluide biologique dans la chambre de mesure. Cette enceinte peut être fabriquée par tout moyen à la disposition de l'homme du métier selon les règles de l'art et la réglementation en vigueur, par exemple par moulage ou thermoformage. Elle doit être étanche afin d'éviter les écoulements indésirables du fluide biologique vers l'extérieur du dispositif, mais aussi pour empêcher toute contamination du fluide par le milieu extérieur ou à l'inverse, du milieu extérieur par le fluide biologique qui peut être porteur de germes pathogènes. Il est également recommandé d'utiliser un matériau opaque, afin de protéger le capteur des effets de la lumière. Tout matériau rigide compatible avec les fluides biologiques convient, la préférence allant à des matériaux peu onéreux, de mise en oeuvre industrielle facile, tels que les matières plastiques. Du fait de la nature des éléments fonctionnels qu'elle comprend, il apparaîtra sans peine que l'enceinte peut adopter des dimensions réduites, ce qui constitue un des avantages notables du dispositif selon l'invention. Les orifices d'entrée et de sortie permettent la circulation dudit fluide biologique à travers la chambre de mesure. De manière avantageuse, ils sont ménagés en vis-à-vis sur deux parois opposées de l'enceinte, de manière à faciliter l'écoulement régulier et sans turbulence du fluide biologique dans la chambre de mesure. Bien entendu lors de l'utilisation du dispositif, l'orifice d'entrée doit être relié à un conduit d'alimentation en fluide biologique et l'orifice de sortie doit être relié à un conduit d'évacuation dudit fluide. De manière avantageuse, le dispositif selon l'invention comporte des moyens de connexion étanche de l'orifice d'entrée et de l'orifice de sortie au circuit fluidique d'un appareil de traitement d'un fluide biologique. La chambre de mesure est l'espace défini par le volume intérieur de l'enceinte. Elle contient au moins un capteur chimique de type ISFET sensible à au moins une substance présente dans ledit fluide biologique dont on souhaite mesurer la concentration, et pendant le fonctionnement du dispositif selon l'invention, elle est en permanence traversée par le fluide biologique à analyser. Ledit capteur chimique est donc en permanence balayé par ledit fluide. On désigne par "capteur chimique de type ISFET" un composant électronique comprenant un circuit imprimé comportant des pistes métalliques (appelé souvent aussi PCB pour Printed Circuit Board) et servant de support à au moins un ISFET. Ledit au moins un ISFET est relié aux pistes métalliques par des plots de connexion et des conducteurs électriques, l'ensemble assurant la polarisation et la conduction du signal électrique apparaissant au niveau de l'ISFET vers les moyens de transmission du signal à un lecteur de données. Un ISFET (Ion Sensitive Field Effect Transistor) est un transistor à effet de champ sensible aux ions. L'utilisation d'ISFET pour la mesure d'ions est bien connue. Cette technique a été développée sur la base du transistor classique MOSFET (transistor à effet de champ commandé en tension par une grille métallique) dans lequel la grille métallique est remplacée par un système composé d'une électrode de référence, de l'électrolyte à analyser et d'une grille isolante sensible à la concentration d'une espèce ionique, généralement H+. La grille isolante peut en outre être fonctionnalisée par une couche sensible à une espèce chimique ou biochimique donnée. Cette couche, recouvrant la grille isolante, contient un composé réagissant avec ladite espèce chimique ou biochimique en induisant une variation du pH qui est détectée par la grille isolante. On dit alors que l'ISFET est "fonctionnalisé". Les ISFET fonctionnalisés avec des composés d'origine biochimique (anticorps, enzymes, ...) sont appelés BioFET. De tels ISFET sont par exemple décrits dans "Thirty years of ISFETOLOGY (P. Bergveld, Sensors and Actuators B 6795, 2002, Ed. Elsevier, pp.l-20). Dans la présente demande le terme ISFET est employé pour désigner tous les ISFET, qu'ils soient fonctionnalisés ou pas. Les moyens de transmission du signal émis par ledit capteur chimique comprennent essentiellement une broche assurant la connexion entre le circuit imprimé et un cordon électrique relié au lecteur de données. Un connecteur standard peut être utilisé sans inconvénient. L'enceinte comporte une partie dont la forme permet le branchement dudit connecteur. Le lecteur de données a pour fonction de transformer les signaux dudit capteur chimique en valeurs numériques directement exploitables par le corps médical. De tels systèmes permettant de lire les informations issues d'un dispositif de mesure sont connus et utilisés de longue date. Selon un mode de réalisation avantageux du dispositif selon l'invention, ledit capteur chimique comprend un premier ISFET sensible à une première substance présente dans ledit fluide biologique et un deuxième ISFET sensible à une deuxième substance présente dans ledit fluide biologique. Un capteur unique est dans ce cas pourvu de deux ISFET voisinant sur un circuit imprimé, chacun des ISFET étant relié par des pistes métalliques adéquates aux moyens de transmission du signal. Il est ainsi possible, de mesurer les concentrations de deux substances présentes dans le fluide biologique à l'aide d'un dispositif unique. Le choix des composés réactifs utilisés pour fonctionnaliser les premier et deuxième ISFET sera donc déterminé par la nature des espèces chimiques ou biochimiques à doser. Lorsque la substance à doser est une espèce biochimique susceptible de constituer le substrat d'une réaction enzymatique, l'ISFET utilisé est spécifiquement un ENFET (Transistor à Effet de Champ Enzymatique), c'està-dire un ISFET dont la zone sensible est dotée d'une couche comprenant une enzyme. Ce type particulier d'ISFET exploite le fait que l'enzyme qu'il contient entraîne l'hydrolyse du substrat à doser et, par suite, une modification du pH de la solution de dosage au voisinage de la surface sensible de l'ISFET. Les variations du pH sont ainsi directement reliées à la concentration du substrat à doser. Dans ce cas, dans le dispositif selon l'invention, lesdits premier et deuxième ISFET sont des ENFET sensibles à des substances susceptibles de constituer le substrat d'une réaction enzymatique présentes dans ledit fluide biologique. Selon un mode préféré de mise en uvre, lesdits premier et deuxième ISFET sont des ENFET sensibles respectivement à l'urée et à la créatinine. Pour éliminer l'influence sur la réponse d'un ISFET des multiples constituants présents dans les milieux complexes tels que les fluides biologiques, notamment les variations de pH, il est connu de mettre en oeuvre un système de mesure différentielle à l'aide d'un ISFET de référence (appelé REFET) couplé à 1'ISFET de mesure. Dans ce système le REFET est identique à l'ISFET de mesure non fonctionnalisé. Ainsi, selon un mode particulier de réalisation de l'invention, le dispositif peut comprendre un ISFET de référence (REFET). De manière plus précise, est revendiqué un dispositif de mesure tel que décrit plus haut dans lequel ledit capteur chimique comprend a) au moins un ISFET comportant une zone sensible aux variations de pH, susceptible d'être en contact avec ledit fluide biologique, b) des moyens pour assurer les contacts électriques entre ledit au moins un ISFET et lesdits moyens de transmission du signal, c) une couche d'encapsulation permettant d'isoler lesdits moyens de contact électrique du fluide biologique. Comme indiqué plus haut, ledit capteur peut comporter deux ou même plusieurs ISFET, chacun étant doté de moyens assurant les contacts électriques avec les moyens de transmission du signal émis. Selon une variante de mise en oeuvre de l'invention, ledit capteur chimique comprend a) au moins un ENFET comportant une zone sensible aux variations de pH recouverte d'une couche comprenant une enzyme apte à catalyser une réaction avec une substance présente dans le fluide biologique en produisant ou en consommant une espèce induisant une variation du pH, ladite couche enzymatique étant susceptible d'être en contact avec ledit fluide biologique, b) des moyens pour assurer les contacts électriques entre ledit au moins un ENFET et lesdits moyens de transmission du signal, c) une couche d'encapsulation permettant d'isoler lesdits moyens de contact électrique du fluide biologique. Comme indiqué plus haut, ledit capteur peut comporter deux ou même plusieurs ENFET, chacun étant doté de moyens assurant les contacts électriques avec les moyens de transmission du signal émis. De préférence, ladite couche enzymatique comprend un polymère hydrophile photosensible et une enzyme choisie parmi les uréases et les créatininedéiminases. Le capteur ainsi défini sera donc destiné à mesurer la concentration en urée et en créatinine dans le fluide biologique analysé. Le type et l'activité spécifique et la quantité de l'enzyme présente dans la couche 2866118 7 enzymatique seront choisis en fonction de la sensibilité recherchée du capteur vis-à-vis de l'espèce dosée, différents fluides biologiques pouvant contenir ladite espèce dans des gammes de concentrations différentes. Des préparations commerciales d'enzymes sélectionnées ou recombinantes, d'activité définie, sont disponibles auprès des sociétés spécialisées. Selon la présente invention, le capteur chimique tel que décrit précédemment est placé dans la chambre de mesure, et commodément fixé sur la paroi intérieure de l'enceinte de sorte que les zones sensibles soient en contact avec le fluide à analyser. Lorsque le capteur comporte deux ISFET, il est recommandé qu'ils soient soumis aux mêmes conditions. De préférence, les zones sensibles seront placées au même niveau par rapport à l'écoulement du fluide biologique. De cette manière le fluide en contact avec les zones sensibles a toutes les chances d'avoir exactement les mêmes caractéristiques. En outre, dans le cas d'une paire d'ENFET, on évite que les produits de la réaction enzymatique ne diffusent sur dENFET voisin et ne viennent perturber la détection. Selon une caractéristique particulière d'un dispositif à deux, ISFET selon l'invention, lesdits deux ISFET peuvent être placés dans la chambre de mesure sur un axe perpendiculaire au sens de circulation dudit fluide biologique. Dans le présent dispositif le capteur est l'élément le plus fragile et c'est aussi le plus onéreux, en particulier en ce qui concerne un capteur à deux ENFET. En effet, la couche enzymatique, même lorsqu'elle est fabriquée à l'aide de méthodes non agressives pour l'enzyme, a une durée de vie relativement courte. Il convient donc de la remplacer régulièrement. Il est envisagé pour cela, soit de remplacer en totalité le dispositif selon l'invention, soit de remplacer uniquement le capteur. Dans ce dernier cas, ledit capteur chimique est amovible, c'est-à-dire que le circuit imprimé constituant le support du capteur peut être inséré dans la chambre de mesure et retiré ultérieurement. Par exemple, on pourra prévoir une fenêtre dans la paroi de l'enceinte, laissant place à l'insertion du capteur, celui-ci obturant ladite fenêtre une fois en place. L'étanchéïté du système sera assuré par un joint. Celui-ci peut être par exemple constitué par une bande adhésive fixée à la périphérie du circuit imprimé qui permet de coller le capteur sur la bordure de la fenêtre d'insertion. Comme indiqué plus haut, le fonctionnement des ISFET implique une polarisation du milieu dans lequel la mesure est réalisée, cette polarisation étant assurée par une électrode de référence. Mettant à profit la structure du dispositif selon l'invention, il a été imaginé d'intégrer l'électrode au capteur. Plus précisément ladite électrode peut être constituée par une piste supplémentaire sur le circuit imprimé servant de support au capteur. Ainsi, selon une caractéristique intéressante, l'électrode de référence assurant la polarisation du milieu est une électrode intégrée au capteur chimique. Afin de pouvoir adapter facilement le dispositif revendiqué à un appareil de traitement d'un fluide biologique, ledit dispositif comporte des moyens de connexion étanche de l'orifice d'entrée et de l'orifice de sortie de ladite chambre de mesure au circuit fluidique dudit appareil de traitement. Un tel appareil peut être notamment un générateur de dialyse. Selon une caractéristique avantageuse, les moyens de connexion étanche comprennent un organe supportant au moins une électrode de référence assurant la polarisation du milieu. On peut par exemple utiliser comme électrode de référence une ou plusieurs aiguilles en or fixées dans un manchon. Ce dernier peut être assujetti au circuit fluidique et assurer par ailleurs la connexion étanche avec l'orifice d'entrée ou de sortie de la chambre de mesure. Ainsi, lorsque le dispositif est remplacé, l'électrode peut rester fixée au circuit fluidique avec le manchon. Elle peut alors être stérilisée en même temps que la ligne de dialyse, le métal employé se prêtant à ce type de traitement. Ceci représente un avantage certain, du point de vue sanitaire comme du point de vue économique. Est objet de la présente invention un appareil de traitement d'un fluide biologique comprenant un dispositif tel que décrit précédemment pour la mesure quantitative d'au moins une substance présente dans ledit fluide. En particulier, il peut s'agir de l'urée et de la créatinine présentes dans un effluent de dialyse après traitement à l'aide d'un générateur de dialyse. Ledit appareil de traitement peut comprendre en outre des moyens d'enregistrement, des moyens de stockage et des moyens de traitement des données lues par ledit lecteur de données. Les méthodes de recueil et de traitement de données issues de dispositifs de mesures sont connues et peuvent être mises en oeuvre selon un cahier des charges adapté à la nature du fluide biologique et au type d'analyses réalisées. Dans le cas de l'hémodialyse, la mise en mémoire de l'historique des événements sur plusieurs jours, la possibilité de mise en réseau, associées à la mesure directe et continue des paramètres de la dialyse offrent une sécurité de traitement inédite. De par ses caractéristiques techniques, le dispositif selon l'invention trouve une application importante pour la mesure de la concentration des substances présentes dans un fluide biologique, en continu et en temps réel. Une application particulièrement avantageuse du dispositif selon l'invention est la surveillance en continu et en temps réel de la concentration de l'urée et de la créatinine dans un effluent de dialyse au cours d'une séance d'épuration extra-rénale. De manière générale, au-delà de l'analyse des fluides biologiques tels que définis dans la présente description, le dispositif selon l'invention peut être être utilisé pour toutes sortes de dosages d'un milieu liquide comprenant au moins une substance susceptible de réagir avec un capteur équipant le dispositif selon l'invention. Citons par exemple l'analyse de l'eau, que ce soit une eau usée ou une eau naturelle. A l'aide d'un capteur selon l'invention, fonctionnalisé par un réactif approprié, l'évolution des caractéristiques minérales pourra être déterminée, ainsi que le statut microbiologique ou la présence de résidus de pesticides. Les exemples de réalisation suivants accompagnés de dessins illustreront des aspects particuliers de la présente invention, sans toutefois en limiter la portée. É La figure 1 représente schématiquement un dispositif de dosage de deux substances à l'aide d'un capteur chimique comportant deux ISFET. É La figure 2 est une vue schématique en trois dimensions d'un capteur chimique comportant deux ENFET, avant encapsulation (Figure 2-a) et après encapsulation (Figure 2-b). É La figure 3 représente une vue en trois dimensions d'une enceinte avec fenêtre pour insertion d'un capteur. É La Figure 4 est la courbe de réponse d'un ENFET sensible à la créatinine, en fonction de la concentration en créatinine dans le fluide analysé. É La Figure 5 est la courbe de réponse d'un ENFET sensible à l'urée, en fonction de la concentration en urée dans le fluide analysé. EXEMPLE 1 Dans un premier exemple illustré par la Figure 1, le dispositif de mesure comprend - une enceinte étanche 1, de forme parallélipipédique, délimitant une chambre de mesure 2, dotée d'un orifice d'entrée 3 et d'un orifice de sortie 4. - un capteur chimique de type ISFET 5 placé dans la chambre de mesure 2, des moyens de transmission 6 du signal émis par le capteur chimique de type ISFET 5 à un lecteur de données 7. Les orifices d'entrée 3 et de sortie 4 sont ménagés en vis-à-vis sur deux parois opposées de l'enceinte 1, de manière à faciliter l'écoulement régulier et sans turbulence du fluide biologique dans la chambre de mesure 2. L'orifice d'entrée 3 est relié au conduit d'alimentation 8 en fluide biologique et l'orifice de sortie 4 est relié au conduit d'évacuation 9 dudit fluide. Dans le présent exemple, le dispositif de mesure est intégré sur une ligne de dialyse 20, en sortie du dialysat effluent. Le capteur 5 est collé dans la chambre de mesure 2 dans l'axe de l'écoulement du fluide biologique. Dans le présent exemple, le capteur 5 comporte deux ISFET 10 et 10', présentant les zones sensibles 12 et 12'. La position des ISFET 10 et 10' définit une droite perpendiculaire à l'écoulement du fluide. Les plots de connexion 17 permettent le branchement avec le lecteur 7 par l'intermédiaire de la broche 18 et du cordon 19. EXEMPLE 2 Structure d'un capteur chimique comportant deux ENFET Les Figures 2-a et 2-b illustrent plus en détail la structure d'un capteur comportant deux ENFET. La figure 2-a fait apparaître le capteur avant encapsulation. Sur un circuit imprimé 11 sont fixés deux ISFET 10 et 10', dont les zones sensibles 12 et 12' sont recouvertes d'une couche enzymatique 13 et 13', formant ainsi deux ENFET 15 et 15'. Les fils de connexion 14 (ici des fils d'or) relient les ENFET 15, 15' aux pistes métalliques 16 gravées sur le circuit imprimé 11. Les pistes métalliques 16 aboutissent aux plots de connexion en face arrière du PCB (non visibles ici). La Figure 2-b montre le capteur avec la couche d'encapsulation 23 isolant les connexions électriques 14,16, du milieu liquide dans lequel le capteur a vocation à fonctionner. Une résine silicone ou un résine époxy peuvent être utilisées pour la couche d'encapsulation, ou tout autre matériau isolant. EXEMPLE 3 Dispositif avec fenêtre d'insertion d'un capteur La figure 3 représente une vue en trois dimensions d'un dispositif selon l'invention. L'enceinte 1 comporte une fenêtre 21 dans laquelle est inséré le capteur 5 de manière fixe ou amovilble. L'étanchéité du système est assuré par le joint autocollant 22, permettant si désiré le remplacement du capteur usagé. EXEMPLE 4 ENFET sensible à la créatinine La créatinine est le produit final du métabolisme de la créatine dans les cellules des mammifères. C'est une substance importante, dont la mesure dans les fluides biologiques est largement utilisée comme indicateur pour le diagnostic des fonctions rénales, de la thyroïde et du muscle. C'est un des paramètres qui est contrôlé durant le traitement par hémodialyse. Chez l'homme adulte, la concentration normale en créatinine dans le sérum est comprise entre 34 et 140 M (N.W. Tietz, 1986, Textbook of Clinical Chemistry, Saunders, Philadelphia, 1 Ed., p. 1810). A partir de 140 M, on considère que la fonction rénale est perturbée, et les valeurs au- dessus de 530 M indiquent des désordres rénaux importants. La concentration peut alors atteindre 1000 M (F.S. Sena, D. Syed, R.B. McComb, 1988, Clin. Chem., 34, p. 594) La détection est basée sur une réaction enzymatique dans laquelle la créatinine est le substrat de la créatine iminohydrolase, qui forme la N-méthylhydantoïne avec production d'ammoniaque. L'ammoniaque réagit avec un proton, modifiant le pH au voisinage de la zone sensible de l'ISFET. créatine déiminase Créatinine + H20 N-méthylhydantoïne + NH3 NH3 + H+ > NH4+ Préparation d'une couche enzymatique sensible à la créatinine L'enzyme est piégée dans un polymère photosensible. On utilise dans cet exemple le PVA (polyvinylalcool), pour ses propriétés particulièrement adaptées aux techniques de microlithographie et à la fragilité de l'enzyme. En effet, le PVA est hydrophile, compatible avec les matières organiques, il forme des couches très minces compatibles avec lesdimensions de la microélectronique. Il se prête au greffage de radicaux photosensibles, permettant son utilisation en photolithographie, ce procédé étant compatible avec la matière biologique puisqu'il ne fait pas appel à des solvants agressifs ni à une température élevée. Composition de PVA greffée styrylpyridinium contenant la créatinine déiminase: L'enzyme utilisée ici est la créatinine déiminase EC 3.5.4.21, extraite d'un microorganisme sous forme de poudre lyophilisée. Son activité spécifique est de 41 U/mg de protéine. Dans une solution de PVAISbQ (un volume pour un volume H2O), on ajoute la créatinine déiminase, à hauteur de 10% en masse. Cette composition est soluble dans l'eau, polymérisable à la lumière et photosensible. Le dépôt de la couche enzymatique peut être réalisé par les techniques connues de photolithographie. Ces techniques permettent d'obtenir des couches parfaitement définies de très faible épaisseur, condition pour avoir un temps de réponse court. Dans le présent exemple, après application d'un couche de la composition ci-dessus, le transducteur muni des masques adéquats, est exposé à la lumière UV. Avant le dépôt de la couche enzymatique, une couche d'accrochage peut être prévue, permettant une meilleure adhésion du PVA. Sensibilité de LENFET L'ENFET sensible à la créatinine ainsi obtenu a été testé sur des solutions contenant différentes concentrations en créatinine. La Figure 4 montre qu'une réponse linéaire est obtenue dans l'intervalle de concentrations à surveiller durant une séance de dialyse. EXEMPLE 5 ENFET sensible à l'urée L'urée est l'indicateur le plus commun de la bonne épuration durant une séance de dialyse. Chez l'homme, sa concentration normale dans le sang est comprise entre 3 et 10 mmol/l, mais elle peut s'élever jusqu'à plusieurs dizaines de mmol/l de plasma chez les personnes insuffisantes rénales. La détection est basée sur une réaction enzymatique dans laquelle l'urée est hydrolysée par l'uréase avec formation de gaz carbonique et production d'un ion hydroxyde qui modifie le pH au voisinage de la zone sensible de l'ISFET. uréase 2 NH4+ + HCO3- Urée + H2O > CO2 + OH- HCO3- > La méthode de préparation d'un ISFET sensible à l'urée est similaire à celle décrite ci-dessus pour l'ISFET sensible à la créatinine. Composition de PVA greffée styrylpyridinium contenant l'uréase: L'enzyme utilisée ici est l'urée amidohydrolase recombinante EC 3.5.1.5, extraite d'E. coli, sous forme de poudre lyophilisée. Son activité spécifique est de 247 U/mg de protéine. Dans une solution de PVA/SbQ (un volume pour un volume H2O), on ajoute l'uréase en quantité suffisante pour réaliser la mesure. Cette composition est soluble dans l'eau, polymérisable à la lumière et photosensible. Sensibilité de LENFET L'ENFET sensible à l'urée ainsi obtenu a été testé sur des solutions contenant différentes concentrations en urée. La Figure 5 montre qu'une réponse proportionnelle est obtenue dans l'intervalle de concentrations à surveiller durant une séance de dialyse. EXEMPLE 6 Dispositif de surveillance des taux d'épuration de l'urée et de la créatinine dans un effluent de dialyse Cet exemple illustre l'utilisation d'un dispositif selon l'invention à la mesure directe de la créatinine et de l'urée, en sortie de dialyse, à 37 C avec un débit de 500 ml/mn. Un capteur tel que décrit à l'exemple 2, doté d'un premier ENFET sensible à la créatinine préparé comme dans l'exemple 4, et un deuxième ENFET sensible à l'urée préparé comme dans l'exemple 5, est collé dans la chambre de mesure d'un dispositif selon l'invention. Les deux ENFET ont la même composition hormis en ce qui concerne l'enzyme. É Étalonnage en deux points Les capteurs ayant des réponses linéaires, 2 points suffisent pour l'étalonnage. On utilise donc uniquement deux solutions étalon S1 et S2, par exemple: S 1: Urée = 5 mM et Créatinine = 0 mM S2: Urée = 0 mM et Créatinine = 1 mM Les courbes d'étalonnage sont enregistrées dans le système de gestion des données. Les conduits d'alimentation 8 et d'évacuation 9 sont intégrés en sortie d'une ligne de dialyse par simple branchement. Le lecteur de données 7 est relié aux plots de connexion 17. Les valeurs sont mesurées durant toute la séance de dialyse et sont lues sur le lecteur 7 après traitement par un système de gestion des données. Elle peuvent également être enregistrées pour un suivi médical à long ternie. REVENDICATIONS 1 - Dispositif de mesure quantitative de substances présentes dans un fluide biologique caractérisé en ce qu'il comprend - une enceinte(l) étanche délimitant une chambre de mesure (2), dotée d'un orifice d'entrée (3) et d'un orifice de sortie(4) permettant la circulation dudit fluide biologique à travers ladite chambre de mesure, - un capteur chimique de type ISFET (5) sensible à au moins une substance présente dans ledit fluide biologique, ledit capteur étant placé dans la chambre de mesure (2), - des moyens de transmission (6) du signal émis par ledit capteur chimique de type ISFET à un lecteur de données (7). 2 - Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit capteur chimique (5) comprend un premier ISFET (10) sensible à une première substance présente dans ledit fluide biologique et un deuxième ISFET (10') sensible à une deuxième substance présente dans ledit fluide biologique. 3 - Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que lesdits premier et deuxième ISFET (10, 10') sont des ENFET sensibles à des substances susceptibles de constituer le substrat d'une réaction enzymatique, présentes dans ledit fluide biologique. 4 - Dispositif selon la revendication précédente, caractérisé en ce que lesdits premier et deuxième ISFET (10, 10') sont des ENFET sensibles respectivement à l'urée et à la créatinine. - Dispositif selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il comprend en outre un capteur de référence (REFET). 6 - Dispositif selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ledit capteur chimique (5) comprend a) au moins un ISFET (10) comportant une zone sensible (12) aux variations de pH, susceptible d'être en contact avec ledit fluide biologique, b) des moyens (14, 16, 17) pour assurer les contacts électriques entre ledit au moins un ISFET et lesdits moyens de transmission du signal, c) une couche d'encapsulation (23) permettant d'isoler lesdits moyens de contact électrique du fluide biologique. 7 - Dispositif selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ledit capteur chimique (5) comprend a) au moins un ENFET (15) comportant une zone sensible (12) aux variations de pH recouverte d'une couche (13) comprenant une enzyme apte à catalyser une réaction avec une substance présente dans le fluide biologique en produisant ou en consommant une espèce induisant une variation du pH, ladite couche enzymatique étant susceptible d'être en contact avec ledit fluide biologique, b) des moyens (14, 16, 17) pour assurer les contacts électriques entre ledit au moins un ENFET et lesdits moyens de transmission du signal, c) une couche d'encapsulation (23) permettant d'isoler lesdits moyens de contact électrique du fluide biologique. 8 - Dispositif selon la revendication précédente, caractérisé en ce que la couche enzymatique (13) comprend un polymère hydrophile photosensible et une enzyme choisie parmi les uréases et les créatinine-déiminases. 9 - Dispositif selon l'une des revendications 2 à 8, caractérisé en ce que lesdits deux ISFET (10, 10') sont placés dans la chambre de mesure (2) sur un axe perpendiculaire au sens de circulation dudit fluide biologique. - Dispositif selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit capteur chimique (5) est amovible. 11 - Dispositif selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que au moins une électrode de référence assurant la polarisation du milieu est intégrée audit capteur chimique (5), de préférence sous la forme d'une piste métallique supplémentaire sur le circuit imprimé servant de support audit capteur chimique. 12 - Dispositif selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comporte des moyens de connexion étanche de l'orifice d'entrée (3) et de l'orifice de sortie (4) de la chambre de mesure (2) au circuit fluidique d'un appareil de traitement d'un fluide biologique. 13 - Dispositif selon la revendication 12 caractérisé en ce que les moyens de connexion étanche comprennent un organe supportant au moins une électrode de référence assurant la polarisation du milieu, de préférence au moins une aiguille en or. 14 - Application du dispositif selon l'une des revendications 1 à 13 à la mesure en continu et en temps réel de la concentration d'au moins une substance présente dans un fluide biologique. - Application du dispositif selon l'une des revendications 1 à 13 à la surveillance en continu et en temps réel de la concentration d'au moins une substance présente dans un effluent de dialyse, de préférence l'urée et la créatinine, au cours d'une séance d'épuration extra-rénale. 16 - Appareil de traitement d'un fluide biologique caractérisé en ce qu'il comprend un dispositif selon l'une des revendications 1 à 13 pour la mesure quantitative d'au moins une substance présente dans ledit fluide, de préférence l'urée et la créatinine présentes dans un effluent de dialyse. 17 - Appareil selon la revendication précédente caractérisé en ce qu'il comprend en outre des moyens d'enregistrement, des moyens de stockage et des moyens de traitement des données lues par ledit lecteur de données.