Brevet FR2869414A1 — publié le 20051028

Laboratoire sur puce et compteur de particules fluorescentes à laboratoire sur puce La présente invention concerne un laboratoire sur puce permettant de mélanger deux liquides ou davantage, et un compteur de particules fluorescentes doté de ce laboratoire sur puce. Dans divers domaines techniques, on compte un nombre de particules après avoir réalisé une coloration fluorescente. Dans le domaine médical, par exemple, on utilise des concentrés de plaquettes et des concentrés de globules rouges qui sont obtenus en extrayant respectivement les plaquettes et les globules rouges du sang. Il est préférable qu'il ne reste pas de leucocytes dans les concentrés de plaquettes et les concentrés de globules rouges. Pour cette raison, les leucocytes sont supprimés dans un procédé de production. Afin de confirmer si les leucocytes ont bien été enlevés d'un concentré de plaquettes ou d'un concentré de globules rouges, on compte le nombre de leucocytes (voir une demande de brevet japonais, par exemple la Publication n 2001-83092). La figure 4 est un schéma fonctionnel montrant la structure d'un compteur de leucocytes conventionnel. La référence 100 de la figure 4 désigne un récipient destiné à contenir un concentré de plaquettes à coloration fluorescente ou similaire, et la référence 101 désigne une source de faisceau laser par laquelle un faisceau laser éclaire le récipient 100. La référence 102 désigne un miroir, et la référence 103 une caméra CCD. Lorsque le faisceau laser (lumière d'excitation) éclaire le récipient 100 au moyen de la source de faisceau laser 101 de ce compteur, on obtient une image des leucocytes grâce à la caméra CCD 103. Cette image est récupérée dans un ordinateur (non représenté), puis elle est traitée et enfin le nombre de leucocytes est compté. Afin de colorer de manière fluorescente les particules à compter, il est nécessaire de mélanger des colorants fluorescents dans la solution qui contient les particules. Par exemple, pour colorer de manière fluorescente les leucocytes d'un concentré de plaquettes, il est nécessaire de mélanger des colorants fluorescents, comme de l'iodure de propidium, et un produit à base de plaquettes (concrètement, des noyaux nus de leucocytes après suppression 2869414 2 des plaquettes et des globules rouges avec un tensioactif, comme le Triton X-100 ). Il a été proposé une machine servant à mélanger deux liquides ou davantage (laboratoire sur puce), laquelle n'est pas fabriquée dans le but de compter des particules fluorescentes, ayant la structure montrée en figure 5 (voir par exemple les deux demandes de brevet japonais n 2002-221485 et 2003-181255). La référence 200 sur la figure 5 désigne un orifice d'entrée d'échantillon permettant de fournir un échantillon liquide, et la référence 201 désigne un passage de celui-ci. La référence 202 désigne un orifice d'entrée de réactif permettant de fournir un réactif liquide, et la référence 203 est un passage de celui-ci. L'échantillon et le réactif qui entrent par les orifices d'entrée 200 et 202 se rencontrent dans une partie de jonction 204 et se mélangent, puis sont drainés par une sortie 206 via un passage d'évacuation 205. Pour colorer de manière fluorescente les particules, il est nécessaire de mélanger suffisamment les colorants fluorescents dans la solution qui contient les particules. Lorsque l'on colore de manière fluorescente des leucocytes avec des colorants fluorescents, par exemple de l'iodure de propidium ou du bromure d'éthidium, il est nécessaire d'intercaler les colorants fluorescents entre les bases de l'ADN des noyaux de leucocytes, et il nécessaire de mélanger suffisamment. Si les particules sont comptées avec une unité de numération comme celle de la figure 4 après avoir mélangé les colorants fluorescents avec une structure comme celle de la figure 5, la précision de numération des particules n'est pas bonne en raison d'une coloration fluorescente insuffisante. Afin de supprimer les plaquettes et les globules rouges et d'obtenir les noyaux nus des leucocytes, il est nécessaire de mélanger suffisamment un tensioactif pour qu'il réagisse. Mais, dans la structure montrée en figure 5, il reste des plaquettes et les membranes cellulaires des leucocytes en raison d'un mélange insuffisant, ce qui détériore la précision de numération des leucocytes. Par ailleurs, avec l'unité de numération montrée en figure 4, des opérations d'introduction d'un concentré de plaquettes coloré de manière fluorescente ou similaire dans le récipient 100, de mise en rotation du récipient 100 pour fixer les particules fluorescentes au fond du récipient (centrifugation), et de tracé (détermination spécifique) d'échantillon dans le récipient 100 sont nécessaires, ce qui rend les opérations de comptage complexes. En outre, il est nécessaire de commuter un chemin optique en fonction de la concentration de l'échantillon à mesurer dans le cas de l'unité de numération montrée en figure 4. Pour cette raison, l'opération de comptage est rendue plus complexe, et la structure de l'unité est complexe. Dans ces conditions, un laboratoire sur puce permettant de mélanger suffisamment deux liquides ou davantage, et un compteur de particules fluorescentes dans lequel l'opération de comptage est simple sont souhaitables. La présente invention propose un laboratoire sur puce comprenant un premier passage d'entrée dans lequel s'écoule un premier liquide, un deuxième passage d'entrée dans lequel s'écoule un deuxième liquide, une partie de brassage qui est connectée aux deux passages d'entrée, formée de manière à être courbée, pour mélanger le premier liquide et le deuxième liquide qui s'y écoulent, et un passage d'évacuation positionné de manière à être connecté à ladite partie de brassage, par lequel le liquide mélangé est drainé. Dans ce cas, la partie de brassage est formée de manière à être courbée, afin de mélanger suffisamment les premier et deuxième liquides. Dans un mode de réalisation, la partie de brassage est courbée presque en zigzag. Dans ce cas, la partie de brassage courbée presque en zigzag permet de mélanger suffisamment les premier et deuxième liquides. En outre, la traversée de la partie de brassage prend relativement plus de temps, ce qui permet de faire réagir suffisamment les premier et deuxième liquides au cours de cet intervalle. La présente invention propose également un compteur de particules fluorescentes, comprenant ledit laboratoire sur puce pour mélanger le premier liquide contenant les particules à compter et le deuxième liquide contenant des colorants fluorescents dans ladite partie de brassage et pour transmettre les particules fluorescentes au passage d'évacuation, et une partie comptage de particules fluorescentes pour compter le nombre de particules fluorescentes transmises. Dans ce cas, les premier et deuxième liquides peuvent être suffisamment mélangés pour colorer de manière fluorescente les particules, et la partie comptage de particules fluorescentes peut compter correctement le nombre de particules fluorescentes. Par ailleurs, la quantité de premier liquide et de deuxième liquide peut être réduite en rétrécissant le passage d'entrée et le passage d'évacuation du laboratoire sur puce. Même si le premier liquide est un concentré de plaquettes ou du sang, la perte de charge des concentrés de plaquettes peut être limitée. Le compteur de particules fluorescentes peut comprendre un troisième passage d'entrée pour envoyer dans le côté amont de ladite partie de brassage un diluant pour diluer les premier et deuxième liquides. Dans ce cas, le diluant peut diluer les premier et deuxième liquides, de sorte que les particules fluorescentes peuvent être alignées en une couche mince, et le nombre de particules fluorescentes peut être déterminé correctement même si les premier et deuxième liquides ont une viscosité élevée. Le compteur de particules fluorescentes peut comprendre un quatrième passage d'entrée pour envoyer dans le côté aval de ladite partie de brassage, en amont dudit passage d'évacuation, un quatrième liquide afin d'aligner lesdites particules fluorescentes en fournissant ce quatrième liquide. Dans ce cas, l'envoi du quatrième liquide peut aligner les particules fluorescentes en une mince couche, de sorte que les particules fluorescentes peuvent être correctement comptées par la partie comptage de particules fluorescentes malgré les concentrations des premier et deuxième liquides. Il n'est alors plus nécessaire de commuter un passage optique en fonction des concentrations de liquide à mesurer, comme décrit dans la demande de brevet japonais portant le numéro de publication 2001- 83092, ce qui simplifie l'opération de comptage ou l'unité. De plus, il n'est pas nécessaire d'aligner les particules fluorescentes par centrifugation comme dans le cas de l'unité conventionnelle mentionnée plus haut, si bien que l'opération de comptage peut être simplifiée et que la précision de la numération peut être améliorée. Et la reconnaissance d'erreur d'information due à une erreur humaine peut être éliminée, et la tâche physique et intellectuelle d'un inspecteur peut être réduite. 2869414 5 La partie comptage de particules fluorescentes peut être constituée d'une source lumineuse par laquelle une lumière d'excitation éclaire les particules fluorescentes du passage d'évacuation, et d'un moyen de mesure de fluorescence pour capter la fluorescence qui est produite suite à l'irradiation de ladite lumière d'excitation sur les particules fluorescentes. Dans ce cas, les particules peuvent être colorées de manière fluorescente en mélangeant suffisamment les premier et deuxième liquides, et la partie comptage de particules fluorescentes peut déterminer correctement le nombre de particules fluorescentes. Par ailleurs, la quantité de premier liquide et de deuxième liquide peut être réduite en rétrécissant le passage d'entrée et le passage d'évacuation du laboratoire sur puce. Par exemple, les pertes de charge des concentrés de plaquettes peuvent être limitées même si le premier liquide est un produit à base de plaquettes ou du sang. Le premier passage d'entrée peut être un passage d'entrée dans lequel s'écoule le premier liquide, qui contient des leucocytes, et le deuxième passage d'entrée est un passage d'entrée dans lequel s'écoule le deuxième liquide, qui contient un tensioactif pour dissoudre les membranes cellulaires des leucocytes et les colorants fluorescents pour colorer de manière fluorescente les leucocytes. Dans ce cas, les plaquettes et les globules rouges présents dans le premier liquide peuvent être enlevés, et les membranes cellulaires des leucocytes peuvent être dissolues afin de colorer de manière fluorescente les noyaux des leucocytes, ce qui permet de compter correctement les leucocytes. Le premier passage d'entrée peut avoir une partie de connexion permettant la fixation d'une unité de prélèvement sanguin ou d'une poche de sang. Dans ce cas, le nombre de leucocytes peut être déterminé seulement en connectant une unité de prélèvement sanguin ou une poche de sang avec la partie de connexion, et il n'est pas nécessaire de déplacer d'échantillon pour la mesure dans l'autre récipient, comme c'est le cas avec une unité conventionnelle, ce qui simplifie l'opération de comptage. Par ailleurs, le nombre peut être obtenu avec l'unité directement reliée à une unité de prélèvement sanguin ou une poche de sang, si bien qu'il n'est pas nécessaire de tracer l'information et donc la reconnaissance d'erreur d'information due à des 2869414 6 erreurs humaines peut être éliminée, et la tâche physique et intellectuelle d'un inspecteur peut être réduite. Le compteur de particules fluorescentes peut comprendre en outre un moyen d'échantillonnage pour obtenir une sortie du moyen de mesure de fluorescence à des instants périodiques, et un moyen de comptage pour déterminer le nombre desdites particules fluorescentes d'après ladite sortie du moyen d'échantillonnage. Dans ce cas, il est possible de mélanger suffisamment les premier et deuxième liquides afin de colorer de manière fluorescente les particules, et il est possible de compter correctement les particules fluorescentes au moyen de la partie comptage de particules fluorescentes. Par ailleurs, la quantité de premier liquide et de deuxième liquide peut être réduite en rétrécissant le passage d'entrée et le passage d'évacuation du laboratoire sur puce. Même si le premier liquide est un concentré de plaquettes ou du sang, la perte de charge des concentrés de plaquettes et liquides similaires peut être limitée. Le moyen de mesure de fluorescence peut être une caméra qui permet d'obtenir des images statiques à intervalles prédéterminés. Dans ce cas, on peut utiliser une caméra du marché, ce qui permet de réduire les coûts, car il n'y a pas besoin de fabriquer un moyen de mesure de fluorescence dédié. Dans un mode de réalisation, le moyen de comptage détermine le nombre de particules fluorescentes dans une zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée dans chacune des images statiques obtenues par le moyen de mesure de fluorescence, et la largeur w de la zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée dans une direction de déplacement des particules fluorescentes est donnée par l'expression suivante: largeur w de la zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée vitesse de déplacement des particules fluorescentes X temps que met le moyen de mesure de fluorescence pour obtenir une nouvelle image statique. Dans ce cas, le nombre de particules fluorescentes est compté, en utilisant une zone virtuelle constante. Pour cette raison, la précision de comptage peut être améliorée par rapport au cas où la zone n'est pas utilisée. 2869414 7 La largeur w, de la zone de mesure de distribution fluorescente dans la partie distante de x d'une paroi est donnée par l'expression suivante, si le débit de liquide s'écoulant dans le passage d'évacuation change entre une partie voisine de ladite paroi et une partie centrale du passage d'évacuation: largeur w,, de la zone de mesure de distribution fluorescente dans la partie distante de x d'une paroi vitesse de déplacement des particules fluorescentes en un point distant de x de ladite paroi X temps que met le moyen de mesure de fluorescence pour obtenir une nouvelle image statique. Dans ce cas, la précision de comptage des particules fluorescentes peut être améliorée même si le débit change entre la partie voisine de la paroi et la partie centrale du passage d'évacuation. Dans un mode de réalisation, un côté situé en amont de la zone de mesure de distribution fluorescente est une ligne droite coupant ledit passage d'évacuation, et un côté en aval de ladite zone est une ligne courbe faisant saillie sur le côté aval, et ladite zone a une forme de balle de fusil. Dans ce cas, la précision de comptage des particules fluorescentes peut être améliorée même si le débit change entre la partie voisine de la paroi et la partie centrale du passage d'évacuation. Dans un mode de réalisation, le moyen de comptage compte n'importe quelle particule fluorescente au moment où elle passe par un bord situé en amont de la zone de mesure de distribution fluorescente et au moment où elle passe par un bord situé en aval de la zone de mesure de distribution fluorescente dans ladite image statique, et il ne compte pas les autres particules fluorescentes. Dans ce cas, le comptage répété est réduit afin d'améliorer la précision du comptage. La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée qui suit, en se référant aux dessins annexés, dans lesquels: la figure 1 est une vue schématique montrant les structures d'un laboratoire sur puce et un compteur de particules fluorescentes selon la présente invention; la figure 2 est une vue schématique montrant une façon d'aligner des particules fluorescentes dans un écoulement d'un quatrième liquide; la figure 3(a) est une vue schématique permettant d'expliquer un procédé de comptage de particules fluorescentes, et la figure 3(b) est une vue montrant une forme d'onde d'une distribution d'intensité fluorescente le long d'une porte 20 de la figure 3(a) ; la figure 4 est un schéma fonctionnel montrant la structure d'un compteur de leucocytes conventionnel; la figure 5 est une vue schématique montrant la structure d'une unité conventionnelle pour mélanger deux liquides ou davantage; la figure 6 est une vue schématique permettant d'expliquer un autre procédé de comptage de particules fluorescentes; et la figure 7 est une vue schématique permettant d'expliquer encore un autre procédé de comptage de particules fluorescentes. Les modes de réalisation préférés de la présente invention vont maintenant être expliqués, en se référant aux figures 1 à 3 et 6 et 7. La figure 1 est une vue schématique montrant les structures d'un laboratoire sur puce et un compteur de particules fluorescentes selon la présente invention, la figure 2 est une vue schématique montrant une façon d'aligner des particules fluorescentes dans un écoulement d'un quatrième liquide, la figure 3(a) est une vue schématique permettant d'expliquer un procédé de comptage de particules fluorescentes, et la figure 3(b) est une vue montrant une forme d'onde d'une distribution d'intensité fluorescente le long d'une porte 20 de la figure 3(a). La figure 6 est une vue schématique permettant d'expliquer un autre procédé de comptage de particules fluorescentes, et la figure 7 est une vue schématique permettant d'expliquer encore un autre procédé de comptage de particules fluorescentes. Un laboratoire sur puce selon l'invention, désigné par A sur la figure 1, comporte un premier passage d'entrée B1 dans lequel s'écoule un premier liquide L1, un deuxième passage d'entrée B2 dans lequel s'écoule un deuxième liquide L2, une partie de brassage C qui est connectée aux deux passages d'entrée B1 et B2, formée de manière à être courbée, pour mélanger le premier liquide L1 et le deuxième liquide L2 qui s'y écoulent, et un passage d'évacuation D positionné de manière à être connecté à la partie de brassage C, par lequel le liquide mélangé est drainé. Selon l'invention, la partie de brassage C est formée de manière à être courbée, mélangeant ainsi suffisamment les premier et deuxième liquides L1 et L2. De préférence, la partie de brassage C est courbée presque en zigzag afin de mélanger suffisamment les premier et deuxième liquides L1 et L2. De ce fait, il est possible de mélanger suffisamment les premier et deuxième liquides L1 et L2. En outre, la traversée de la partie de brassage C prend relativement plus de temps, ce qui permet de faire réagir suffisamment les premier et deuxième liquides L1 et L2 au cours de cet intervalle. Un tensioactif décrit ci-après, par exemple, peut dissoudre suffisamment les membranes cellulaires des leucocytes, des globules rouges et des plaquettes. Les passages d'entrée B 1 et B2, la partie de brassage C et le passage d'évacuation D peuvent avoir la forme d'une rainure sur une surface d'une plaque de base 1, et un élément de couverture 2 peut être attaché à la surface. Le compteur de particules fluorescentes de la présente invention comporte le laboratoire sur puce A ayant la structure susmentionnée. De préférence, l'échantillon de mesure comportant les particules (telles que des leucocytes) à compter (comme du sang, un concentré de plaquettes et un concentré de globules rouges) en tant que premier liquide L1 s'écoule dans le premier passage d'entrée B1 du laboratoire sur puce A, et une solution contenant des colorants fluorescents en tant que deuxième liquide L2 s'écoule dans le deuxième passage d'entrée B2. Dans ce cas, les premier et deuxième liquides L1, L2 sont mélangés dans la partie de brassage C, et des particules fluorescentes sont formées (cf. référence 3 en figure 2) et transmises au passage d'évacuation D. Ensuite, les particules fluorescentes transmises 3 peuvent être comptées par une partie de comptage de particules fluorescentes désignée par E sur la figure 1. Avec ce compteur de particules fluorescentes, les particules peuvent être colorées de manière fluorescente en mélangeant suffisamment les premier et deuxième liquides L1, L2 afin de déterminer correctement le nombre de particules fluorescentes 3 au moyen de la partie de comptage de particules fluorescentes E. Les passages d'entrée B1 et B2 et le passage d'évacuation D du laboratoire sur puce A peuvent être rétrécis afin de réduire la quantité des premier et deuxième liquides L1 et L2. Même si le premier liquide L1 est un concentré de plaquettes ou du sang, la perte de charge des concentrés de plaquettes et liquides similaires peut être limitée. 2869414 10 Lors du comptage des leucocytes dans un concentré de plaquettes ou un concentré de globules rouges, il est nécessaire de retirer les plaquettes et les globules rouges, et de former des noyaux nus de leucocytes (pour supprimer les membranes cellulaires des leucocytes). A cette fin, il est préférable d'ajouter un tensioactif pour dissoudre les membranes cellulaires des leucocytes, plaquettes et globules rouges dans le premier liquide L1, (le produit susmentionné) ou le deuxième liquide L2 (solution comportant des colorants fluorescents) afin d'être mélangé. Le premier passage d'entrée B 1 peut être un passage d'entrée dans lequel s'écoule le premier liquide L1 contenant les leucocytes, et le deuxième passage d'entrée B2 peut être un passage d'entrée dans lequel s'écoule le deuxième liquide L2 contenant un tensioactif pour dissoudre les membranes cellulaires des leucocytes et des colorants fluorescents pour colorer de manière fluorescente les leucocytes. Dans ce cas, les plaquettes et les globules rouges peuvent être enlevés, et les membranes cellulaires des leucocytes peuvent être dissoutes afin de colorer de manière fluorescente les membranes cellulaires des leucocytes, ce qui permet de compter correctement les leucocytes. Le tensioactif peut être du Triton X-100 , et les colorants fluorescents peuvent être de l'iodure de propidium ou du bromure d'éthidium. Sur la figure 1, il n'y a qu'un deuxième passage d'entrée B2, mais deux deuxièmes passages d'entrée B2 ou davantage peuvent être prévus pour permettre d'amener du tensioactif et des colorants fluorescents par différents passages d'entrée B2 respectifs. De préférence, un troisième passage d'entrée B3 est prévu en amont de la partie de brassage C afin d'amener un diluant (troisième liquide) L3 en amont de la partie de brassage C, pour diluer le premier liquide L1 et le deuxième liquide L2. Dans ce cas, le premier liquide L1 et le deuxième liquide L2 peuvent être dilués, de sorte que les particules fluorescentes peuvent être alignées en couche mince, et peuvent être comptées correctement même si le premier liquide L1 et le deuxième liquide L2 ont une viscosité élevée (comme du sang ayant une tendance à l'hyperlipémie, dont la viscosité est élevée, et du sang chyleux). De préférence, le diluant peut être un tampon transparent incolore, dans lequel les cellules peuvent exister de façon stable. Concrètement, il s'agit de préférence d'un tampon PBS. Avant d'amener le premier liquide L1 dans le premier passage d'entrée B1 ou d'amener le deuxième liquide L2 dans le deuxième passage d'entrée B2, le premier liquide L1 ou le deuxième liquide L2 peut être dilué de façon à avoir la bonne viscosité (c'est-à- dire une viscosité avec laquelle au moins les deux liquides L1 et L2 peuvent s'écouler en douceur dans les passages d'entrée B 1 et B2) à l'avance, puis du diluant est amené par le troisième passage d'entrée B3, également pour que le liquide puisse avoir la viscosité optimale (telle que la viscosité optimale avec laquelle les particules fluorescentes s'écoulent, séparées respectivement les unes des autres). Par exemple, le premier liquide L1 peut être ajusté en mixant du diluant dans du sang ayant une viscosité élevée pour avoir la bonne viscosité, le premier liquide ajusté L1 peut être envoyé dans le premier passage d'entrée B1 puis des colorants fluorescents sont mélangés à partir du deuxième passage d'entrée B2 afin de colorer de manière fluorescente les leucocytes, puis du diluant peut être ajouté par le troisième passage d'entrée B3 pour effectuer un dernier ajustement de la viscosité. Sur la figure 1, le troisième passage d'entrée B3 rencontre les premier et deuxième passages d'entrée B1 et B2 en aval (en H2) plutôt qu'une partie de jonction Hl entre les premier et deuxième passages d'entrée B1 et B2 (autrement dit, avec cette structure, le diluant L3 est mélangé après le mélange des premier et deuxième liquides L1, L2). En variante, une partie de jonction entre les premier et troisième passages d'entrée B1 et B3 est prévue en amont d'un point de jonction avec le deuxième passage d'entrée B2, de sorte que le premier liquide L1 et le diluant L3 sont mélangés, puis le deuxième liquide L2 se mélange avec eux, ou bien une partie de jonction entre les deuxième et troisième passages d'entrée B2 et B3 est prévue en amont d'un point de rencontre du premier passage d'entrée B1, de sorte que le deuxième liquide L2 et le diluant L3 sont mélangés, puis le premier liquide L1 se mélange avec eux. Lorsque les particules 3 sont assemblées entre elles (une boule de particules 3) et traversent la partie de comptage E de particules fluorescentes, deux particules 3, ou davantage, sont comptées comme une particule, si bien que la précision de numération est réduite. Pour cette raison, il est nécessaire que les particules 3 traversent la partie de comptage E de particules fluorescentes en se séparant les unes des autres. De préférence, la partie de comptage E de particules fluorescentes ou l'autre moyen détecte si les 2869414 12 particules fluorescentes 3 sont connectées entre elles, et l'information détectée est transmise à un moyen servant à introduire du diluant dans le troisième passage d'entrée B3 (moyen d'introduction de diluant) ou à un moyen servant à introduire un quatrième liquide L4 (décrit en détail ci-après), et la quantité de diluant ou de quatrième liquide L4 à introduire est ajustée en fonction de l'état des particules fluorescentes 3, si bien que les particules fluorescentes 3 peuvent être envoyées séparées les unes des autres. Par ailleurs, de préférence, un quatrième passage d'entrée B4 servant à fournir le quatrième liquide L4 est prévu en aval de la partie de brassage C et en amont du passage d'évacuation D, et le quatrième liquide L4 est transmis de façon à ne pas perturber l'écoulement à partir de la partie de brasage C (écoulement comportant des couches), de sorte que les particules fluorescentes 3 peuvent être alignées (cf. figure 2). Le quatrième liquide L4 peut être le tampon mentionné plus haut. Dans ce cas, de préférence, un écoulement comportant des couches depuis la partie de brassage C est rétréci (di et d2 en figure 2) en ajustant la direction d'introduction ou la vitesse d'introduction du quatrième liquide L4, de sorte que les particules fluorescentes 3 peuvent s'écouler en une seule couche d'écoulement le long d'une face de paroi du passage d'évacuation D. Dans ce cas, la partie de comptage E de particules fluorescentes peut compter correctement les particules fluorescentes 3 en dépit des concentrations des premier et deuxième liquides LI et L2. Autrement dit, il n'est pas nécessaire de commuter un passage optique en fonction des caractéristiques d'absorption lumineuse ou des caractéristiques optiques du liquide àmesurer, comme décrit dans la demande de brevet japonais portant le numéro de publication 2001-83092, ce qui simplifie l'opération de comptage ou l'unité de comptage. A savoir, l'épaisseur de la couche dans laquelle se trouvent les particules fluorescentes 3 dans le passage d'évacuation D (épaisseur dans une direction de rayonnement d'une source lumineuse 10) est suffisamment faible pour obtenir des images avec une caméra, si bien qu'il est complètement possible d'empêcher une différence de transmissivité d'un concentré de plaquettes et d'un concentré de sang entier/globules rouges d'influer sur le niveau de fluorescence en tant que lumière de fond qui est excitée à partir des colorants fluorescents restant dans le liquide. Il n'est donc pas nécessaire de commuter le chemin optique de la source lumineuse au passage d'évacuation D pour empêcher l'influence de la lumière de fond. Par ailleurs, il n'est pas nécessaire d'aligner les particules fluorescentes par centrifugation, comme c'est le cas avec une unité conventionnelle, si bien que l'opération de comptage peut être simplifiée (la tâche physique et intellectuelle d'un inspecteur peut être réduite), et que la précision de la numération peut être améliorée. De plus, la reconnaissance d'erreur d'information due à une erreur humaine peut être éliminée, ce qui réduit la tâche physique et intellectuelle d'un inspecteur. Lorsque l'on utilise un système optique ayant une grande distance focale, il n'est pas nécessaire d'aligner les noyaux des leucocytes, de sorte qu'il est possible d'adopter un dessin de passage plus simple que celui montré en figure 1. De préférence, le premier passage d'entrée B1 est muni d'une partie de connexion (adaptateur) 4 permettant d'installer une unité de prélèvement sanguin ou une poche de sang. Dans ce cas, le nombre de leucocytes peut être compté simplement en connectant une unité de prélèvement sanguin ou une poche de sang à la partie de connexion 4, et il n'est pas nécessaire de déplacer l'échantillon pour une mesure dans un récipient différent (comme le récipient 100 de la figure 4) comme c'est le cas avec une unité conventionnelle, ce qui simplifie l'opération de comptage (et permet de réduire la tâche physique et intellectuelle d'un inspecteur). Lorsque le nombre de leucocytes dépasse un standard, le nombre de leucocytes peut être réduit au moyen d'un filtre à leucocytes ou élément similaire. Il est facile de tester tout le sang prélevé et d'augmenter le nombre d'inspections d'échantillons puisque l'opération de comptage est simplifiée. Lorsque l'on teste tout le sang prélevé et que l'on augmente le nombre d'inspections d'échantillons, il est possible d'empêcher de façon plus sûre la production de produits "hors spécifications" que dans le cas où le nombre d'inspections d'échantillons est faible. En outre, le nombre de leucocytes peut être compté avec une unité directement reliée à une unité de prélèvement sanguin ou une poche de sang, si bien qu'il n'est pas nécessaire de tracer l'information (alors que dans le cas du récipient 100 montré en figure 4, il est nécessaire de déterminer de façon spécifique quel échantillon se trouve dans chaque récipient 100, dans le cas où une unité de prélèvement sanguin ou similaire est directement reliée à l'unité de comptage, de sorte qu'une opération de détermination spécifique n'est pas nécessaire). De plus, la reconnaissance d'erreur d'information due à une erreur humaine peut être éliminée, et la tâche physique et intellectuelle d'un inspecteur peut être réduite. De préférence, une partie ouvrante (orifice de sortie) 5 est prévue dans le passage d'évacuation D, de sorte que les premier et deuxième liquides L1 et L2 peuvent s'écouler en couches dans les passages d'entrée respectifs, par aspiration par la partie ouvrante 5. De préférence, la partie de comptage E de particules fluorescentes comprend la source lumineuse 10 par laquelle une lumière d'excitation éclaire les particules fluorescentes 3 passant dans le passage d'évacuation D, et un moyen de mesure de fluorescence 11 pour obtenir (mesurer) la fluorescence produite par l'irradiation de la lumière d'excitation sur les particules fluorescentes 3. Il est nécessaire de choisir la source lumineuse 10 de façon qu'elle corresponde aux caractéristiques d'absorption lumineuse des colorants fluorescents (colorants utilisés pour colorer de manière fluorescente les particules des leucocytes). Lorsque l'on utilise de l'iodure de propidium (PI) comme colorant fluorescent, il est préférable d'utiliser une source lumineuse produisant une lumière verte (lumière d'excitation dont la plage de longueur d'onde est d'environ 500 à 550 nm). Lorsque l'on utilise du bromure d'éthidium (EtBr) comme colorant fluorescent, il est préférable d'utiliser une source lumineuse produisant de la lumière ultraviolette. Par ailleurs, une caméra permettant d'obtenir des images statiques à intervalle prédéterminé peut être utilisée comme moyen de mesure de fluorescence 11. Concrètement, cette caméra peut être une caméra vidéo, une caméra CCD ou une caméra USB. Dans ce cas, on peut utiliser une caméra du marché, ce qui permet de réduire les coûts, car il n'y a pas besoin de fabriquer un moyen de mesure de fluorescence dédié. De préférence, on place un filtre optique 12 qui ne laisse passer que la lumière due à la fluorescence (les lumières ayant une autre plage de longueurs d'onde ne peuvent pas passer) ou une lentille 13 de convergence entre le moyen de mesure de fluorescence 11 et le passage d'évacuation D. De préférence, un moyen d'échantillonnage 14 est connecté au moyen de mesure de fluorescence 11 afin d'obtenir une sortie du moyen de mesure de fluorescence 11 à intervalle régulier. De plus, de préférence, un moyen de comptage 15 est relié au moyen d'échantillonnage 14 afin de compter le nombre de particules fluorescentes 3 d'après la sortie du moyen d'échantillonnage 14. A savoir, la porte 20 qui coupe le passage d'évacuation D où se déplacent les particules fluorescentes 3, comme représenté par la flèche L5 sur la figure 3(a), est placée virtuellement, et l'on obtient une distribution d'intensité fluorescente unidimensionnelle le long de la porte 20 à l'aide du moyen de mesure de fluorescence 11 et du moyen d'échantillonnage 14. Le résultat est une distribution d'intensité fluorescente unidimensionnelle G1, G2, G3... obtenue à intervalle régulier, comme montré sur la figure 3(b). Ensuite, le moyen de comptage 15 analyse cette distribution d'intensité fluorescente afin de compter le nombre de particules fluorescentes 3 qui passent par la porte 20. Lorsque l'on prend des images animées à une fréquence vidéo de 30 images par seconde avec une caméra comportant le moyen de mesure de fluorescence 11 et le moyen d'échantillonnage 14, on peut obtenir des images statiques tous les 1/30e de seconde, qui permettent d'obtenir la distribution d'intensité fluorescente montrée en figure 3(b). De préférence, le nombre de particules fluorescentes 3 est compté en analysant la distribution d'intensité fluorescente obtenue. En variante, le nombre de particules fluorescentes 3 peut être déterminé en détectant les objets apparaissant dans les images animées à l'aide d'une technique de détection de mouvement à utiliser dans une technique de compression/analyse d'images animées. Lorsque l'on compte le nombre de particules fluorescentes 3 d'après la mesure de distribution d'intensité fluorescente unidimensionnelle susmentionnée, il est nécessaire d'obtenir une image de toutes les particules fluorescentes 3 au moment de leur passage dans la porte 20 une seule fois avec une caméra. Ceci parce que si certaines particules fluorescentes s'écoulent sans qu'une image d'elles soit prise au moment où elles passent la porte, le nombre de particules fluorescentes ne peut pas être déterminé, ce qui détériore la précision du comptage. A l'inverse, si l'image de certaines particules fluorescentes au moment de leur passage dans la porte 20 est obtenue deux fois ou davantage en raison d'un intervalle de prise de vue court (temps d'obtention d'une image statique suivante avec une caméra, comme mentionné plus loin), le nombre de particules fluorescentes est compté de façon répétée, ce qui détériore la précision du comptage. Pour obtenir une image de toutes les 2869414 16 particules fluorescentes 3 au moment de leur passage dans la porte 20, une seule fois avec une caméra, il est nécessaire d'ajuster de façon optimale le rapport entre la fréquence vidéo de la caméra et le débit (débit du liquide s'écoulant dans le passage d'évacuation D, comme représenté en L5 sur la figure 3(a)). Si une erreur de numération des particules fluorescentes est difficile à éviter dans la mesure de distribution d'intensité fluorescente unidimensionnelle susmentionnée, le moyen de comptage 15 peut compter le nombre de particules fluorescentes dans une zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée dans chaque image statique qui a été obtenue par le moyen de mesure de fluorescence 11. De préférence, la largeur w de la zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée (longueur dans la direction dans laquelle se déplacent les particules fluorescentes) satisfait l'expression suivante: largeur w de la zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée vitesse de déplacement des particules fluorescentes X temps que met le moyen de mesure de fluorescence pour obtenir une nouvelle image statique (appelé dans ce qui suit "intervalle d'obtention d'image"). Dans ce cas, le nombre de particules fluorescentes est compté en utilisant une zone virtuelle constante. Pour cette raison, l'erreur de comptage peut être réduite afin d'améliorer la précision de comptage par rapport aux cas où cette zone n'est pas utilisée. Par exemple, cette zone de mesure de distribution fluorescente est une zone rectangulaire bidimensionnelle K1, comme montré en hachuré sur la figure 6. La largeur wl de cette zone peut être obtenue par l'expression suivante: largeur wl de la zone rectangulaire K1 débit L5 du liquide s'écoulant dans le passage d'évacuation D X intervalle d'obtention d'image. Lorsque la largeur wl de la zone rectangulaire K1 est ainsi définie, l'image de toutes les particules fluorescentes s'écoulant dans le passage d'évacuation est théoriquement obtenue une fois dans la zone K1 dans n'importe quelle image statique, ce qui réduit les erreurs de comptage des particules fluorescentes, comme les comptages manqués et les comptages répétés, et permet d'améliorer la précision du comptage. Mais, comme montré sur la figure 6, la particule fluorescente 31, dont l'image est obtenue au moment du passage par un côté (bord) 21 amont de la zone rectangulaire K1, seule la moitié droite de cette particule entrant dans la zone rectangulaire K1 déplace w1 dans l'intervalle d'obtention d'image suivant pour être positionné en une position 32, si bien que l'image est finalement obtenue deux fois. En conséquence, les deux sont comptées, de sorte que la précision de comptage est diminuée. De préférence, le moyen de comptage 15 ne compte pas à la fois la particule fluorescente (comme la particule fluorescente 31) au moment du passage à travers le côté 21 en amont de la zone rectangulaire (zone de mesure de distribution fluorescente) K1 et la particule fluorescente (comme la particule fluorescente 32) au moment du passage à travers un côté (un bord) 22 en aval de la zone rectangulaire K1 dans toutes les images statiques obtenues, seule l'une des deux est comptée. Ainsi, le comptage répété est réduit, afin d'améliorer la précision du comptage. La méthode illustrée en figure 6 est efficace si les débits dans une partie centrale et dans une partie voisine d'une paroi du passage d'évacuation D (L51 et L50 sur la figure 6) sont presque identiques, mais dans de nombreux cas, ces débits sont différents l'un de l'autre. Lorsque l'on introduit du liquide dans le passage d'évacuation D à une vitesse légèrement supérieure, le débit est plus faible dans la partie voisine d'une paroi 27 en raison de l'influence exercée par la paroi 27, et le débit L51 dans la partie centrale du passage d'évacuation D est finalement plus élevé que le débit L50 dans la partie voisine de la paroi, de sorte qu'une grosse différence entre les deux débits apparaît. Dans un tel cas (si le débit du liquide qui s'écoule dans le passage d'évacuation D change entre la partie voisine de la paroi et la partie centrale du passage d'évacuation D), la zone de mesure de distribution fluorescente peut ne pas avoir la forme d'un rectangle de largeur constante w1 comme montré en figure 6, mais elle peut avoir une largeur dans la partie centrale (w21) du passage d'évacuation D plus grande que la largeur dans la partie voisine de la paroi (w20), comme montré sur la figure 7(a). De préférence, la largeur w,, de la zone de mesure de distribution fluorescente dans la partie distante de x de la paroi 27 du passage d'évacuation D satisfait l'expression suivante: largeur w, de la zone de mesure de distribution fluorescente dans la partie distante de x de la paroi vitesse de déplacement des particules fluorescentes en un point éloigné de x de la paroi X intervalle d'obtention d'image. Dans ce cas, la précision de comptage des particules fluorescentes peut être améliorée même si le débit varie entre la partie voisine de la paroi et la partie centrale du passage d'évacuation D. Concrètement, on utilise les expressions suivantes: largeur w21 de la zone dans la partie centrale du passage d'évacuation D débit L51 dans la partie centrale X intervalle d'obtention d'image; largeur w20 de la zone dans la partie voisine de la paroi débit L50 dans la partie voisine de la paroi X intervalle d'obtention d'image. Si la différence entre le débit L51 dans la partie centrale du passage d'évacuation D et le débit L50 dans la partie voisine de la paroi est importante, de préférence, la largeur de zone (w31) dans la partie centrale du passage d'évacuation D est choisie très supérieure à la largeur de zone (w30) dans la partie voisine de la paroi, comme montré sur la figure 7(b). Dans la partie K2 aussi (montrée en figure 7(a)), la particule fluorescente 31 dont l'image est obtenue au moment du passage à travers un côté (un bord) 23 du côté amont de la zone K2, dont la moitié droite entre dans la zone K2, se positionne en 32 dans l'intervalle d'obtention d'image suivant, si bien que l'image est finalement obtenue deux fois. En conséquence, les deux sont comptées, si bien que la précision de comptage est diminuée. De préférence, le moyen de comptage 15 ne compte pas à la fois la particule fluorescente (comme la particule fluorescente 31) au moment de son passage par un côté 23 sur le côté amont de la zone K2 et la particule fluorescente (comme la particule fluorescente 32) au moment de son passage par un bord (limite) 24 du côté aval de la zone K2 dans toutes les images statiques obtenues, seule l'une des deux est comptée. Ainsi, le comptage répété est réduit afin d'améliorer la précision de comptage. Chacune des zones K2, K3 des figures 7(a) et 7(b) a le côté 23 ou 25 du côté amont qui est une ligne droite coupant le passage d'évacuation D et le côté 24 ou 26 du côté aval qui est une ligne incurvée faisant saillie du côté aval en forme de balle de fusil. De préférence, les côtés 23 et 25 du côté amont sont des lignes droites puisqu'il est facile de compter les particules fluorescentes au 2869414 19 moment où elles passent à travers les côtés 23 et 25. Si les largeurs de zone w20 et w21 satisfont les expressions susmentionnées, les bords du côté amont peuvent ne pas être des lignes droites mais des lignes incurvées. La présente invention a été décrite en sa basant sur les modes de réalisation donnés à titre d'exemple. Bien que certaines variations aient été mentionnées, les modes de réalisation qui sont décrits dans la description sont illustratifs et non limitatifs. REVENDICATIONS 1. Laboratoire sur puce (A), caractérisé en ce qu'il comprend: un premier passage d'entrée (BI) dans lequel s'écoule un premier liquide (LI) ; un deuxième passage d'entrée (B2) dans lequel s'écoule un deuxième liquide (L2) ; une partie de brassage (C) qui est connectée aux deux passages d'entrée, formée de manière à être courbée, pour mélanger ledit premier liquide (LI) et ledit deuxième liquide (L2) qui s'y écoulent; et un passage d'évacuation (D) positionné de manière à être connecté à ladite partie de brassage (C), et par lequel le liquide mélangé est drainé. 2. Laboratoire sur puce selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite partie de brassage (C) est courbée presque en zigzag. 3. Compteur de particules fluorescentes, caractérisé en ce qu'il comprend: un laboratoire sur puce (A) conforme à la revendication 1 pour mélanger ledit premier liquide contenant les particules à compter et ledit deuxième liquide contenant des colorants fluorescents dans ladite partie de brassage (C) et pour transmettre les particules fluorescentes audit passage d'évacuation; et une partie de comptage (E) de particules fluorescentes pour compter le nombre de particules fluorescentes transmises. 4. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un troisième passage d'entrée (B3) pour envoyer dans le côté amont de ladite partie de brassage (C) un diluant pour diluer lesdits premier et deuxième liquides. 5. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un quatrième passage d'entrée (B4) pour envoyer dans le côté aval de ladite partie de brassage (C), en amont dudit passage d'évacuation (D), un quatrième liquide (L4) afin d'aligner lesdites particules fluorescentes en fournissant ledit quatrième liquide. 6. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 3, caractérisé en ce que ladite partie de comptage (E) de particules fluorescentes est constituée d'une source lumineuse (10) par laquelle une lumière d'excitation éclaire lesdites particules fluorescentes (3) du passage d'évacuation (D), et d'un moyen de mesure de fluorescence (11) pour capter la fluorescence qui est produite suite à l'irradiation de ladite lumière d'excitation sur lesdites particules fluorescentes. 7. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit premier passage d'entrée (B1) est un passage d'entrée dans lequel s'écoule le premier liquide (L1), qui contient des leucocytes, et le deuxième passage d'entrée (B2) est un passage d'entrée dans lequel s'écoule le deuxième liquide (L2), qui contient un tensioactif pour dissoudre les membranes cellulaires des leucocytes et les colorants fluorescents pour colorer de manière fluorescente lesdits leucocytes. 8. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 7, caractérisé en ce que ledit premier passage d'entrée (B1) comporte une partie de connexion (4) permettant la fixation d'une unité de prélèvement sanguin ou d'une poche de sang. 9. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un moyen d'échantillonnage (14) pour obtenir une sortie du moyen de mesure de fluorescence (11) à des instants périodiques, et un moyen de comptage (15) pour déterminer le nombre desdites particules fluorescentes d'après ladite sortie du moyen d'échantillonnage. 10. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 6, caractérisé en ce que ledit moyen de mesure de fluorescence (11) est une caméra qui permet d'obtenir des images statiques à intervalles prédéterminés. 11. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 10, caractérisé en ce que ledit le moyen de comptage (15) détermine le nombre de particules fluorescentes dans une zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée dans chacune desdites images statiques obtenues par le moyen de mesure de fluorescence (11), et la largeur w de ladite zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée dans une direction de déplacement des particules fluorescentes est donnée par l'expression suivante: largeur w de la zone de mesure de distribution fluorescente prédéterminée vitesse de déplacement des particules fluorescentes X temps que met le moyen de mesure de fluorescence pour obtenir une nouvelle image statique. 12. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 11, caractérisé en ce que la largeur wx de ladite zone de mesure de distribution fluorescente dans la partie distante de x d'une paroi est donnée par l'expression suivante, si le débit de liquide s'écoulant dans le passage d'évacuation change entre une partie voisine de ladite paroi et une partie centrale dudit passage d'évacuation: largeur wx de la zone de mesure de distribution fluorescente dans la partie distante de x d'une paroi vitesse de déplacement des particules fluorescentes en un point distant de x de ladite paroi X temps que met le moyen de mesure de fluorescence pour obtenir une nouvelle image statique. 13. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'un côté situé en amont de ladite zone de mesure de distribution fluorescente est une ligne droite coupant ledit passage d'évacuation (D), et un côté en aval de ladite zone est une ligne courbe faisant saillie sur le côté aval, et ladite zone a une forme de balle de fusil. 14. Compteur de particules fluorescentes selon la revendication 11, caractérisé en ce que ledit moyen de comptage (15) compte n'importe quelle particule fluorescente au moment où elle passe par un bord situé en amont de la zone de mesure de distribution fluorescente et au moment où elle passe par un bord situé en aval de ladite zone de mesure de distribution fluorescente dans ladite image statique, et il ne compte pas les autres particules fluorescentes.