Brevet FR2868320A1 — publié le 20051007

La présente invention concerne des agents de contraste pour l'imagerie par résonance magnétique. L'art antérieur L'imagerie par résonance magnétique (IRM) est une technique largement utilisée dans le domaine médical, notamment aux fins de diagnostic. L'IRM repose principalement sur l'observation de la magnétisation des spins des noyaux des atomes d'hydrogène dans les molécules d'eau. Elle consiste à mesurer la relaxation par deux modes (Tl et T2) des molécu- les d'eau par rapport à une distribution à l'équilibre, pour former une image. La relaxation survient après un état dans lequel tous les spins ont été complètement alignés sous l'effet d'un champ magnétique extérieur par utilisation d'une impulsion de radiofréquence. L'IRM permet de distin- guer entre les zones de forte concentration et les zones de faible concentration d'un agent de contraste. Dans le domaine biologique, l'image obtenue met en évidence les tissus riches en agent de contraste, essentiellement ceux qui sont hydrophiles par nature. Les agents de contraste de la première génération sont des agents dits "passifs" qui sont répartis à travers l'échantillon soumis à l'IRM, essentiellement en fonction des gradients de lipophilicité et des liaisons non spécifiques. Des travaux ont été effectués pour définir des agents actifs, c'est-àdire des agents capables de révéler la présence d'une activité chimique ou biochimique, de conditions de pH ou une concentration d'un ion particulier. Ces agents sont constitués par un ion fortement paramagnétique complexé par un ligand, l'ion étant généralement Gd(III). Les agents de contraste contenant un tel ion fortement paramagnétique constituent par conséquent un aimant moléculaire permanent, qui exerce toujours une influence, plus ou moins importante, sur la relaxation des molécules d'eau environnantes. Le moyen pour rendre ces complexes de type aimant moléculaire permanent sensibles à des composés chimiques spécifiques de leur environnement reposait essentiellement sur la modification de l'accessibilité de l'environnement immédiat du métal B0596fr 2868320 2 paramagnétique pour les molécules d'eau. De tels marqueurs, pour lesquels la relaxation par une activité enzymatique est améliorée par le fait qu'ils agissent comme catalyseurs pour l'échange rapide de molécules d'eau, sont décrits dans divers documents. US-5,707,605 décrit un agent IRM qui est un complexe d'un ion de métal paramagnétique et d'un ligand, ledit ligand comprenant un groupe chélatant et un substituant qui est lié par liaison covalente au chélatant. En l'absence de substance cible, le substituant est associé ou lié à l'ion métallique du complexe, et il occupe ou bloque au moins un site de coordination de l'ion métallique. Tous les sites de coordination de l'ion métallique sont alors saturés par le chélatant et le substituant. En présence de la substance cible, le substituant réagit avec ladite substance et cesse de bloquer ou d'occuper au moins un site de coordination de l'ion métallique, de sorte qu'un échange rapide d'eau peut s'effectuer sur le site, ce qui donne une amélioration de l'image RM. Un dérivé de l'acide 1,4,7,10- tétraazacyclododécane-N,N',N",N"'-tétraacétique (DOTA) dans lequel l'un des substituant acétate est remplacé par un substituant hydroxyéthyl ss-galactose est un exemple d'un tel complexe. Dans ce complexe, le groupe terminal sensible à l'enzyme n'a qu'un faible effet protecteur du centre métallique vis à vis de la coordination par l'eau: le nombre moyen de molécules d'eau qui sont coordinées à tout moment au 9ème site de coordination du gadolinium est de 0,65 au lieu de 1,02 pour la forme "clivée" d'un composé similaire contenant un ligand capable d'occuper seulement 8 sites de coordination. (Cf. Meade, T.J. et al. "In vivo visualization of gene expression using magnetic resonance imaging. Nature Biotechnology 18, 321-325 (2000)"). Ce faible accès supplémentaire des molécules d'eau durant la bioactivation de l'agent de contraste ne donne pas une modification satisfaisante de la relaxation. WO99/21592 décrit l'application de la technique de US-5,707,605 à une substance cible du type agent thérapeutique. L'amélioration du taux de contraste qui peut B0596fr être obtenue à l'aide des marqueurs du type de ceux décrits dans les deux documents précités est cependant limitée. On connaît des complexes formés par un ion de métal de transition et par un ligand qui peuvent exister sous une forme haut spin et sous une forme bas spin suivant la nature du ligand. A l'état haut spin, la quasitotalité des électrons sont des électrons impairs, il n'y a pas de compensation interne de leur spins, ce qui produit une augmentation substantielle du moment magnétique. A l'état bas spin, les complexes ont un moment magnétique faible, voire nul, suivant le nombre d'électrons impairs (en général 0 ou 1). Un exemple de composé de Fe(II) complexé par un ligand macrocyclique hexadentate à spin faible est donné par Wieghardt et al. (Inorg. Chem. 1986, 25, 4877) et un exemple de composé de Fe(II) complexé par un ligand macrocyclique pentadentate similaire à spin élevé est donné par Spiccia et al. (Inorg. Chim. Acta, 1998, 279, 192). L'invention Le but de l'invention est de fournir un agent de contraste capable de détecter une substance cible ou l'activité chimique associée à cette substance cible dans une cellule, un tissu ou chez un patient soumis à l'IRM, durant la phase d'acquisition et de construction de l'image. Les composés Un agent de contraste pour l' IRM selon la présente invention est un complexe comprenant un ligand chélatant et un ion de métal de transition, ledit ligand portant un substituant dont l'élimination ou la modification électronique par réaction chimique ou biochimique avec une substance cible provoque un changement de l'état de spin. Un changement de l'état de spin obtenu par élimination dudit substituant est un passage d'un bas spin (complexe diamagnétique et inactif en RM) à un spin élevé (complexe paramagnétique et actif en RM). Un changement de l'état de spin du complexe obtenu par modification électronique du substituant est généralement un passage d'un bas spin à un haut spin. Cependant, un B0596fr changement dans le sens contraire peut également être obtenu par le choix d'un ligand approprié. Le métal de transition peut être choisi parmi Mn, Co et Fe. Fe est particulièrement préféré. Le ligand est un ligand multidentate macrocyclique, ou un ligand multidentate non cyclique linéaire ou ramifié. Dans un mode de réalisation particulier, un complexe selon l'invention comprend un ligand macrocyclique hexadentate qui porte un substituant dont l'élimination ou la modi- fication est initiée par réaction avec une substance cible, le complexe initial étant à l'état bas spin, le complexe modifié étant à l'état haut spin. Un exemple de complexe à ligand hexadentate est représenté par la formule (I) (I) R2 R5 dans laquelle: - lorsque R5 ne représente pas un atome d'hydrogène, on se trouve en présence de complexes de formule (Ia), - R5 représente alors un groupe capable de réagir avec la substance cible pour provoquer une coupure entre l'atome N du macrocycle et le carbone portant ledit groupe R5, - R1 à R3 (désignés ci-après par R1) représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe choisi pour ajuster les propriétés de solubilité, de dispersibilité dans les milieux biologiques, et de moment magnétique du complexe, l'un des R1 pouvant encore représenter un groupe capable de subir une modification électronique du groupement pyridyle voisin par réaction B0596fr avec la substance cible, tel que défini ci-après pour les complexes de formule (Ib) ; - lorsque R5 représente un atome d'hydrogène, on se trouve en présence des complexes de formule (Ib), un des groupes R1 représente alors un groupe capable de subir une modification électronique du groupement pyridyle voisin par réaction avec la substance cible, les groupes R1 restant pouvant alors représenter, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou être choisis pour ajuster les propriétés de solubilité, de dispersibilité dans les milieux biologiques, et de moment magnétique du complexe. Lorsque le substituant R5 ne représente pas un atome d'hydrogène, les composés de l'invention, complexes de type 15 (Ia), peuvent être définis comme suit: R5 peut être représenté par le groupe -E-R6, E est alors un groupe espaceur capable de s'auto-effondrer en cas de coupure de la liaison E-R6 et, R6 est un groupe réagissant avec un composé chimique ou un composé biochimique en déclenchant une succession de coupures provoquant l'élimination de la pyridine-2-carbaldéhyde, selon le mécanisme exposé dans la description ci-après. Plus particulièrement, R6 représente un groupe ss-galactosyle, un groupe ssglucuronyle, un groupe L-leucyle (ou tout autre groupe aminoacyle susceptible de subir un clivage par une aminopeptidase naturelle), un groupe -0005H11 (ou tout autre groupe susceptible de subir un clivage par un esterase ou un lipase naturelle), un groupe de type a,ss-dihydroxycétone OH OH OH O (ou tout autre groupe susceptible de subir une transformation retroaldol par une aldolase naturelle) ou un groupe prolyle. E peut être un groupe -O-CO- (CRx2) n-Y- B0596fr 2868320 6 où les groupes Rx représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou sont choisi pour préorganiser l'espaceur afin d'accélérer son auto-effondrement après clivage du R6. Plus particulièrement les groupes Rx peuvent représenter, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène, un groupe méthyle ou le(s) carbone(s) d'un ou deux groupements voisins - (CRx2) - peu(ven)t appartenir à un cycle aliphatique ou aromatique à 5 ou 6 chaînons (voir par exemple: L. A. Carpino et al. J. Org. Chem. 1989, 54, 3303), n est un entier pouvant être égal à 3 ou 4, Y est un hétéroatome choisi parmi un atome d'oxygène, un atome d'azote ou un atome de soufre, De façon préférée E prend l'une des significations qui 15 suivent: Schéma 1 É , s//' Y O El Les groupes Ri représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène, un groupe électroattracteur choisi parmi le groupe -COOR7, le groupe -NO2 et un atome d'halogène afin de contrôler l'état de spin du métal ou un groupe portant des charges négatives tel que le groupe -CH2000- pour compenser les deux charges positives du Fer(II) et donc rendre l'agent globalement neutre, L'un des trois groupes R1 peut en outre représenter un groupe -CH(OH)CH(COOH)NH2, les Rl restant étant alors tels que définis ci-dessus. R7 peut représenter un groupe (C1_C4) alkyle. Un tel 30 groupe R7 peut être utile pour réduire la polarité de l'agent entier. B0596fr E2 L'élimination de la pyridine-2-carbaldéhyde forme un complexe ayant un ligand pentadentate, ce qui change l'état de spin du complexe et en même temps permet la fixation d'une molécule d'eau sur un site de coordination du fer. Lorsque le substituant R5 représente un atome d'hydrogène, les composés de l'invention, complexes de type (Ib), peuvent être définis comme suit: L'un des trois groupes R1 représente un groupe - CH(OH)CH(COOH)NH2 ou tout autre groupe capable de subir une modification électronique du groupement pyridyle voisin par réaction avec la substance cible et les groupes Ri restant peuvent représenter, indépendamment les uns des autres, soit un atome d'hydrogène soit être choisis parmi le groupe - COOR7, le groupe -NO2 et un atome d'halogène et, R7 peut représenter un groupe (C1-C4) alkyle. Dans le cas des complexes de type (Ib), le complexe change d'état de spin sous l'effet d'une modification de l'un des substituants R'. Le substituant R1 du type -CH (OH) CH (COOH) NH2 se réorganise sous l'action de la L-thréonine aldolase, en produisant un changement de l'état de spin. Aucun accès n'est offert à une molécule d'eau dans la lère sphère de coordination lors de sa transformation en -CHO, selon le mécanisme exposé ci-après. Seules les molécules d'eau dans la 2ème sphère de coordination (selon les termes couramment employés dans le domaine) sont influencées. Dans le cadre de la présente invention - un atome d'halogène signifie, un atome de chlore, de fluor, de brome ou d'iode. D'une manière générale on 30 préfère l'atome de chlore et de fluor; - un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons signifie un groupe éventuellement hétérocyclique choisi parmi un groupe phényle, pyridyle, pyrimidinyle, pyrazinyle, indoyle, indazolyle, furyle et thiényle et leurs dérivées portant différents substituants choisis parmi les groupes méthyle, chloro, fluoro, nitro, méthoxy, carboxy, et acétamido; B0596fr 2868320 8 - un cycle aliphatique à 5 ou 6 chaînons signifie un groupe cyclohéxyle ou un groupe cyciopentyle; - un groupe alkyle signifie une chaîne aliphatique linéaire ou ramifiée de 1 à 4 atomes de carbone. L'utilisation comme marqueur Un complexe selon l'invention peut être utilisé comme marqueur en IRM, pour détecter une substance cible telle que par exemple une enzyme. L'action d'un complexe du type (Ia) est illustré par le schéma réactionnel (schéma 2) ci-dessous, pour un complexe dans lequel R5 est un groupe -E-R6, où E est un groupe espaceur -O-CO-C (CH3) 2- (CH2) 2-0- et R6 est un groupe ss-galactosyle. Ce type de complexe permet la détection de ss-galactosidase. Lorsque le complexe (Ia) est mis en présence de ssgalactosidase, il se produit une coupure du groupe ss-galactosyle avec formation de ss-galactose, puis une coupure spontanée du groupe espaceur avec formation du lactone 4,4-dimethyle-dihydro-furan-2-one puis une coupure spontanée entre l'atome de carbone qui portait le substituant R5 et l'atome d'azote du macrocycle, avec formation de pyridine-2carbaldéhyde. Une molécule d'eau peut alors se fixer sur le site de coordination libéré. B0596fr Schéma 2 ss-galactosidasess-galactose N N Y Fe-e-N OH HO,,,H Of-- O i^--OH OH N- N N Fe) 1 dH O O N (V) N/ N - Fe-,e-NH N H2O Cette technique permet de détecter, outre la ss-galactosidase, la présence de substances cibles très variées. On rapporte ci-après des exemples de groupes E-R6 utiles pour détecter la présence de certaines substances cibles particulières, ou tout autre enzyme faisant partie des classes auxquelles les substances cibles suivantes B0596fr appartiennent, notamment les glycosidases, les aminopeptidases et les lipases: E- R6 Substance cible (3-galactosidase (EC 3.2.1.23) HO OHOH O O OH O HO OH OH (3-glucuronidase (EC 3.2.1.31) \O O O CO2H 0 Leucyl aminopeptidase NH2 (EC 3.4.11.1) 0 lipases (EC 3.1.1.3) O O OH transaldolases (EC 2.2.1.2) OH OH (voir par exemple E. Gonzalez- O Garcia et al. Chem. Eur. J. 2003, 9, 893-899) 0 N = prolyl aminopeptidase + (EC 3.4.11.5) H2 02N Le code EC vient de la International Union of Biochemistry and Molecular Biology IUBMB . On peut trouver les significations des exemples ci-dessus dans des bases de donnés comme celles répertoriées dans http://www.brenda.unikoeln.de ou http://au. expasy.org/enzyme/. L'action d'un complexe (Ib) qui comprend un ion Fe et un ligand du type hexadentate portant un substituant Ri capable de subir une modification électronique est illustré par le schéma réactionnel ci-dessous (schéma 3), pour un complexe dans lequel l'un des substituants R1 est un groupe -CH(OH)CH(COOH)NH2 et les autres substituants R1 sont des groupes -NO2. Un tel substituant se réorganise sous l'action de la L-thréonine aldolase en libérant de la glycine, ce qui B0596fr provoque un changement d'état de spin. Il permet par conséquent de détecter la L-thréonine aldolase. Schéma 3 NO2 02N L-threonine aldolase glycine / \ ^ N N/ 02N. N r--Fe- --N N) NO2 L'invention a donc également pour objet une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un agent de contraste selon l'invention. Elle concerne aussi l'utilisation d'un agent de contraste selon l'invention pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au diagnostic par imagerie par résonance magnétique, ainsi que la méthode de diagnostic par imagerie par résonance magnétique d'une cellule, d'un tissu ou d'un patient auquel un agent de contraste selon l'invention a été administré. En outre, l'invention est relative à une méthode non invasive de détermination de la distribution tissulaire de J3-galactosidase ou de ssglucuronidase comportant les étapes d'au moins une injection d'un agent de contraste de formule (Ia), pour lequel R5 représente un groupe -E-R6, R6 représentant respectivement un groupe (3-galactosyle ou un groupe (3glucuronyle, et les groupes E et R1 sont tels que précédemment définis, et d'au moins une détermination des zones riches en agent de contraste par imagerie par résonance magnétique. De même, l'invention est relative à une méthode non invasive de détermination de la distribution tissulaire d'aminopeptidases, de lipase ou de transaldolases comportant les étapes d'au moins une injection d'un agent de contraste B0596fr de formule (Ia), pour lequel R5 représente un groupe -E-R6, R6 représentant un groupe L-leucyle (ou tout autre groupe aminoacyle susceptible de subir un clivage par une aminopeptidase naturelle), un groupe -C005H11 (ou tout autre groupe susceptible de subir un clivage par un esterase ou un lipase naturelle) un groupe de type a,(3dihydroxyacétone OH OH OH O (ou tout autre groupe susceptible de subir une transformation retroaldol par une aldolase naturelle) ou un groupe prolyle, et les groupes E et Ri sont tels que précédemment définis, et d'au moins une détermination des zones riches en agent de contraste par imagerie par résonance magnétique. Enfin, elle concerne une méthode non invasive de détermination de la distribution tissulaire de L-thréonine aldolase comportant les étapes d'au moins une injection d'un agent de contraste de formule (Ib) pour lequel R5 représente un atome d'hydrogène, l'un des trois groupes Ri représente un groupe -CH(OH)CH(COOH)NH2 et les groupes Ri restant sont tels que définis précédemment, et d'au moins une détermination des zones riches en agent de contraste par imagerie par résonance magnétique. Préparation des agents de contraste Complexe de type (Ia) dans lequel R5 est un groupe -O-CO-C (CH3) 2- (CH2) 2-OR6 La préparation d'un composé (Ia) dans lequel R6 est un groupe (3-galactosyle et les autres substituants Ri sont des atomes d'hydrogène, peut être effectuée comme suit. Le schéma 4 illustre la synthèse de ce complexe de formule (Ia) B0596fr Schéma 4 1 2 N H PhCH2OH LiOH, 60 C 1. H2O, pH 9, 5 jours 2. pH 13, extract CHCI3 3 4 1. [Fe(DMSO)6](NO3)2; 60 C 2. Na BPh4 OBn OBn 6 OAc AcO,, OAc Clf O^nOAc 1. 0 pyridine 2. NH3, MeOH, 20 1C, 2,5 h OH H2, Pd/C ethanol la C N--FeE-N \ N) OH HO,, OH O." O--Ne-OH B0596fr Le composé 2 est préparé en faisant réagir le 1,4,7-triazacyclononane 1 disponible dans le commerce avec deux équivalents de chlorométhylpyridine en milieu aqueux à pH 9 pendant 3 jours; A ce point le pH a baissé à 7. On ajuste le pH encore à 9 et on agite 3 jours de plus avant d'extraire le composé 2, selon le mode opératoire décrit par Spiccia, et al., Inorg. Chem. 1994, 33, 4663. Le composé 2 est ensuite transformé en N/0-acetal benzylé 3 par réaction avec le pyridine-2-carbaldehyde dans l'alcool benzylique, en présence de LiOH à 60 C, selon un procédé publié pour un produit analogue par UgaldeSaldivar et al. (J. Chem. Soc. Dalton Trans. 2001, 3099-3107). Ensuite, on transforme le composé 3 en complexe de fer 4 par réaction avec [Fe(DMSO)6](NO3)2 à 60 C dans du méthanol pour 30 min, puis on ajoute du NaBPh4 avant de refroidir à 5 C pour précipiter le complexe et l'isoler. Après élimination du groupe benzyle par l'hydrogène en présence de palladium sur charbon dans de l'éthanol, on obtient le composé 5 que l'on fait réagir avec le chlorure d'acyle 6 (voir sa synthèse ci-dessous) dans la pyridine et l'on obtient un complexe dans lequel le groupe galactosyle est sous forme protégée. La déprotection est effectuée par action de l'ammoniaque aqueux dans le méthanol à 20 C pendant 2,5 heures et l'on obtient le complexe de formule (Ia) souhaité. La présente invention concerne également le composé 4, utile en tant qu'intermédiaire de synthèse. Pour synthétiser le chlorure d'acyle 6 on peut procéder selon le schéma 5 suivant: B0596fr Schéma 5 O tBuOK, THF OH OAc AcO,, OAc AcO pOAc BF3 É Et2O OAc AcO,,. OAc tBuO ppOAc O tBuO O OH 1. CF3CO2H/ CH2Cl2 2. (COCI)2 OAc ACO,,, OAc CIppiOAc O Pour obtenir un complexe de formule (Ia), dans laquelle l'espaceur est de type (E2), le précurseur analogue du chlorure d'acyle 6 peut être synthétisé selon le schéma 6 suivant: Schéma 6 OAc ACO,, OAc tBuOK, THF O OH OAc AcO tBuO BF3 É Et2O OAc AcO,,. OAc O . OAc OAc AcO,, OAc O O OOAc tBuO 1. CF3CO2H/ CH2Cl2 2. (COCI)2 CI Pour obtenir des complexes de formule (Ia), dans laquelle les substituants Ri ne sont pas des atomes d'hydrogène, on peut procéder de la même façon en utilisant de la chlorométhylpyridine substituée avec les groupes R1 souhaités. Par exemple on pourra se reporter au schéma 7 pour la préparation du chlorométhylpyridine para- nitrosubstitué comme produit de départ dans la 'ère étape du schéma 4. Pour obtenir des complexes de formule (Ia), dans laquelle E- R6 a une définition plus générale B0596fr -O-CO-(CRx2)n-Y-R6 avec Rx, n, Y et R6 tels que précédemment définis, on procède comme dans le schéma 4 par couplage d'un composé 4 préalablement hydrogéné, avec un chlorure d'acyle de formule Cl-CO- (CRx2) n-Y-R6 en présence d'une base. On obtient alors un composé de formule (Ia) éventuellement protégé, que l'on peut ensuite déprotéger selon les techniques classiques de l'homme de l'art. Complexe de type (Ib) dans lequel R5 est un atome d'hydrogène et l'un des substituants Ri est un groupe -CH (OH) CH (COOH) NH2 Un composé (Ib) dans lequel R5 est un atome d'hydrogène l'un des substituants Ri est un groupe -CH (OH) CH (COOH) NH2 et les substituants Ri restants sont des groupes -NO2, peut être obtenu à partir du cyclène 1 précité, et des réactifs quant. 2868320 préparés au préalable. Un réactif 7 peut être préparé selon le schéma réactionnel suivant (schéma 7). La dernière étape est effectuée sous reflux du dichlorométhane. Schéma 7 2 NO2 MeOH, NO2 Ac20 NaOH 140 C -20 C 28% 80% > 1 O Ov0 Un réactif 8 peut être préparé selon le schéma réactionnel suivant (schéma 8). La quatrième étape est effectuée en échauffant le produit de départ avec le dioxyde de sélènium dans le dioxane pour 4 jours (Bishop et al. Tetrahedron 2000, 4629-4638). B0596fr SOC12 NO2 CH2Cl2 reflux 7 Cl OH Schéma 8 Ac2O 140 C 28% 0 0 MeOH, NaOH -20 C 80% ' SOCl2 CH2Cl2 % SeO2 dioxane 2, 4 jours 65% OH Cl Threonine aldolase (EC 4.1.2.5) Glycine BocHN 8 1 OH La préparation du complexe peut être effectuée selon le 5 mode opératoire suivant, illustrée par le schéma 9: Schéma 9 1)1eg8 acetone Nal, NEt3 2) TFNCH2Cl2 NO2 (Ib) NO2 HO COO N O2 F M âH)2,^ 02N/ N; Fe La présente invention concerne également le composé 9, utile en tant qu'intermédiaire de synthèse. B0596fr B0596fr - 2130 REVENDICATIONS 1. Agent de contraste pour l'imagerie par résonance magnétique comprenant un ligand chélatant et un ion de métal de transition, caractérisé en ce que le ligand porte un s substituant capable de réagir par voie chimique ou biochimique avec une substance cible en provoquant un changement de l'état de spin. 2. Agent de contraste selon la revendication 1, caractérisé en ce que le changement de l'état de spin est le Io passage d'un état de bas spin à haut spin. 3. Agent de contraste selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le métal de transition est choisi parmi Mn, Co et Fe. 4. Agent de contraste selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le ligand est un ligand multidentate macrocyclique, ou un ligand multidentate non cyclique linéaire ou ramifié. 5. Agent de contraste selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il possède la 20 formule (I) dans laquelle: - lorsque R5 ne représente pas un atome d'hydrogène, on se 25 trouve en présence de complexes de formule (Ia), - R5 représente un groupe capable de réagir avec la substance cible pour provoquer une coupure entre l'atome N du macrocycle et le carbone portant ledit groupe R5, (I) B0596fr - 2130 - RI à R3, désignés par Ri, représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou un groupe choisi pour ajuster les propriétés de solubilité, de dispersibilité dans les milieux biologiques, et de moment magnétique du complexe, l'un des Ri pouvant encore représenter un groupe capable de subir une modification électronique du groupement pyridyle voisin par réaction avec la substance cible; - lorsque R5 représente un atome d'hydrogène, on se trouve Io en présence des complexes de formule (Ib), un des groupes Ri représente un groupe capable de subir une modification électronique du groupement pyridyle voisin par réaction avec la substance cible, les groupes Ri restant pouvant représenter, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène ou être choisis pour ajuster les propriétés de solubilité, de dispersibilité dans les milieux biologiques, et de moment magnétique du complexe. 6. Agent de contraste de formule (Ia) selon la revendication 5, caractérisé en ce que R5 représente le groupe -E-R6, E est un groupe espaceur capable de s'auto-effondrer en cas de coupure de la liaison E-R6 et, R6 est un groupe réagissant avec un composé chimique ou un composé biochimique en déclenchant une succession de coupure provoquant l'élimination de la pyridine-2-carbaldéhyde. 7. Agent de contraste de formule (Ia) selon la revendication 6, caractérisé en ce que R6 représente un groupe ss-galactosyle, un groupe ss-glucuronyle, un groupe L-leucyle, un groupe -C005H11, un groupe de type a,ss dihydroxycétone OH O ou un groupe L-prolyle, E est un groupe -0-CO(CRx2)n-Y- où les groupes Rx représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène, un groupe méthyle ou 35 le(s) carbone(s) d'un ou deux groupements voisins B0596fr - 2130 -(CRx2)- appartien(nen)t à un cycle aliphatique ou aromatique à 5 ou 6 chaînons, n est un entier pouvant être égal à 3 ou 4, Y est un hétéroatome choisi parmi un atome d'oxygène, s un atome d'azote ou un atome de soufre, les groupes Ri représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène, un groupe électroattracteur choisi parmi le groupe -COOR7, le groupe -NO2 et un atome d'halogène ou un groupe -CH2- COO-, Io ou encore l'un des trois groupes Ri représente un groupe -CH(OH) CH(COOH)NH2, les R1 restant étant alors tels que définis ci-dessus, R7 représente un groupe (C1_C4)alkyle. 8. Agent de contraste de formule (Ia) selon la is revendication 7, caractérisé en ce que le cycle aromatique à ou 6 chaînons est choisi parmi un groupe phényle, pyridyle, pyrimidinyle, pyrazinyle, indoyle, indazolyle, furyle et thiényle et pouvant porter différents substituants choisis parmi les groupes méthyle, chloro, fluoro, nitro, méthoxy, carboxy et acétamido et le cycle aliphatique à 5 ou 6 chaînons est soit un groupe cyclohéxyle soit un groupe cyclopentyle. 9. Agent de contraste de formule (la) selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que E 25 prend l'une des significations qui suivent: O El E2 où Y est tel que défini à la revendication 7. 10. Agent de contraste de formule (Ib) selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'un des trois groupes Ri représente un groupe CH(OH)CH(COOH)NH2 et les groupes R1 restant représentent, 7; B0596fr 2130 indépendamment les uns des autres, soit un atome d'hydrogène soit sont choisis parmi le groupe -COOR7, le groupe -NO2, le groupe -CHO et un atome d'halogène et, R7 représente un groupe (C1-C4)alkyle. 11. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un agent de contraste selon l'une quelconque des revendications 1 à 10. 12. Utilisation d'un agent de contraste selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au diagnostic par imagerie par résonance magnétique. 13. Méthode de diagnostic par imagerie par résonance magnétique d'une cellule ou d'un tissu auquel un agent de contraste selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 a été administré. 14. Composition pharmaceutique selon la revendication 11, destinée à la détermination de la distribution tissulaire de ss-galactosidase ou de ssglucuronidase, caractérisée en ce que l'agent de contraste répond à la formule (Ia), dans laquelle R5 représente un groupe -E-R6, R6 représentant respectivement un groupe ss-galactosyle ou un groupe ss- glucuronyle, et les groupes E et R1 sont tels que définis à l'une quelconque des revendications 6 à 9. 15. Composition pharmaceutique selon la revendication 11, destinée à la détermination de la distribution tissulaire d'aminopeptidases, de lipase ou de transaldolases, caractérisée en ce que l'agent de contraste répond à la formule (la), dans laquelle R5 représente un groupe -E-R6, R6 représentant un groupe L-leucyle, un groupe -C005H11, un 3o groupe de type a,ss-dihydroxyacétone OH O ou un groupe prolyle, et les groupes E et R1 sont tels que définis à l'une quelconque des revendications 6 à 9. 16. Composition pharmaceutique selon la revendication 11, destinée à la détermination de la distribution tissu-35 laire de L-thréonine aldolase, caractérisée en ce que B0596fr - 2130 l'agent de contraste répond à la formule (Ib) selon la revendication 10. 17. Composé de formule 4 utile en tant qu'intermédiaire de synthèse. 18. Procédé de préparation d'un composé de formule (Ia), dans laquelle R5 et R1 sont tels que définis à l'une quelconque des revendicaitons 5 à 8 et E-R6 est un groupe io -O-CO- (CRx2) n-Y-R6 avec Rx, n, Y et R6 tels que définis dans l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisé en ce que l'on procède par couplage d'un composé 4 selon la revendication 17, préalablement hydrogéné, avec un chlorure d'acyle de formule Cl-CO(CRx2)n-Y-R6 en présence d'une base pour obtenir le composé dans lequel le groupe R6 est éventuellement sous forme protégée, éventuellement suivie d'une déprotection pour obtenir le composé de formule (Ia). 19. Procédé de préparation d'un composé de formule (Ia) dans laquelle R5 est un groupe -O-CO-C (CH3) 2- (CH2) 2-OR6, R6 est un groupe ssgalactosyle penta-acétylé et les autres substituants Ri sont des atomes d'hydrogène, caractérisé en ce qu'il comprend une étape consistant à faire réagir un composé 4 selon la revendication 17, préalablement hydrogéné, avec un composé de formule 6 OBn B0596fr - 2130 OAc en présence d'une base, pour obtenir le composé dans lequel le groupe galactosyle est sous forme protégée, suivie d'une déprotection pour obtenir le composé de formule (la). 20. Composé de formule 9 02N NO2 utile en tant qu'intermédiaire de synthèse. io 21. Procédé de préparation d'un composé de formule (Ib) dans laquelle R5 est un atome d'hydrogène et l'un des substituants Ri est un groupe -CH(OH)CH(COOH)NH2, caractérisé en ce qu'il comprend une étape consistant à faire réagir un composé de formule 9 selon la revendication 20, avec un 15 composé de formule 8 BocHN CI 8 suivie d'une étape de déprotection du groupement amine primaire et d'une transformation en complexe de fer pour obtenir le composé de formule (Ib). B0596fr - 2130 22. Utilisation selon la revendication 12, d'un agent de contraste répondant à la formule (Ia), dans laquelle R5 représente un groupe -E-R6, R6 représentant respectivement un groupe ss-galactosyle ou un groupe ss- glucuronyle, et les s groupes E et R1 sont tels que définis à l'une quelconque des revendications 6 à 9, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à la détermination de la distribution tissulaire de ss-galactosidase ou de ss-glucuronidase. 23. Utilisation selon la revendication 12, d'un agent io de contraste répondant à la formule (Ia), dans laquelle R5 représente un groupe -E-R6, R6 représentant un groupe L-leucyle, un groupe -C005H11, un groupe de type a,ss-dihydroxy- acétone OH O ou un groupe prolyle, et les groupes E et Ri sont tels que définis à l'une quelconque des reven- dications 6 à 9, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à la détermination de la distribution tissulaire d'aminopeptidases, de lipase ou transaldolase. 24. Utilisation selon la revendication 12, d'un agent de contraste répondant à la formule (Ib) selon la revendication 10 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à la détermination de la distribution tissulaire de L-thréonine aldolase.