Brevet FR2871467A1 — publié le 20051216

La présente invention concerne une protéine Cog47 et son polynucléotide, associés notamment à une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante, et le gène S100(3 présentant un polymorphisme. L'invention concerne également une méthode de diagnostic et une trousse de diagnostic. Les démences sont des maladies neurodégénératives du système nerveux central correspondant à un affaiblissement progressif de la mémoire et des autres fonctions cognitives. Après une période plus ou moins longue de détérioration des fonctions cognitives et de la personnalité, la maladie conduit à un état complet de dépendance. Or, ces mêmes détériorations sont fréquemment observées à un niveau moindre lors du vieillissement cérébral dit "normal". Ainsi, pour certains auteurs, la démence apparaîtrait comme un processus inévitable au-delà d'un certain âge avec, au cours du vieillissement, un continuum entre déclin des fonctions cognitives et démence. La pathologie ne serait alors qu'une exagération ou qu'une accélération de ce vieillissement. Cette hypothèse du continuum est un des éléments clés qui justifie une approche globale ou parallèle de l'étude des déterminants du vieillissement cérébral normal et des pathologies cérébrales liées à l'âge. L'un des arguments principaux en faveur de cette hypothèse est la similarité entre des lésions neuropathologiques (plaques séniles et dégénérescence neurofibrillaires) observées fréquemment chez les personnes âgées sans détérioration cognitive et celles caractéristiques de la maladie d'Alzheimer, affection représentant près de 70% des démences. Cependant, la densité de ces lésions est toujours beaucoup plus importante et leur répartition plus large dans la maladie d'Alzheimer. S'il existe un continuum entre détérioration des fonctions cognitives et démence, il est logique que des facteurs de risque génétique ou environnementaux soient commun à ces deux entités. L'implication du gène de l'apolipoprotéine E (APOE) à la fois comme déterminant génétique de la maladie d'Alzheimer et du niveau global des fonctions cognitives chez le sujet âgé, de même que de la présence de plaques séniles chez le patient atteint de maladie d'Alzheimer et chez le sujet âgé, va dans ce sens. Ceci suggère donc que la connaissance de certains facteurs génétiques puisse permettre à la fois une meilleure compréhension des déterminants du déclin cognitif chez la personne âgée et de l'apparition d'une démence. Cependant l'étude de tels marqueurs génétiques doit reposer sur une hypothèse physiophathologique forte. Il est connu que l'activation des astrocytes contribue à la maintenance et à la sauvegarde du système nerveux central, en particulier suite à des événements aigus et limités dans le temps. Cependant, dans le cadre de lésions chroniques et/ou répétées induisant une activation systématique de ces astrocytes, ce mécanisme adaptatif et de réparation pourrait conduire à une progression plus importante et rapide d'une lésion ou d'une pathologie. Cette activation chronique apparaît au cours du vieillissement cérébral dit "normal" et prend une importance considérable lors de pathologies telles que la maladie d'Alzheimer. Ces simples observations suggèrent donc que les facteurs contrôlant le développement d'une activation astrocytaire chronique pourraient jouer un rôle angulaire entre détérioration des fonctions cognitives, observables aussi au cours du vieillissement, et démence. Parmi les facteurs potentiels contrôlant cette réponse astrocytaire, la protéine S100,3 semble être une cible privilégiée pour de nombreuses raisons. Au niveau physiologique, S10013, majoritairement produit par les astrocytes, apparaît être impliquée au niveau du développement et de la maintenance du cerveau mais aussi au niveau des processus cognitifs et de leur mise en place. Néanmoins, son importance par rapport à ces processus est toujours mal définie et pourrait même sembler contradictoire. En effet, l'injection d'anticorps dirigés contre 5100,13 dans le cerveau de rats, conduit à des troubles de l'apprentissage et de la mémoire alors que des souris transgéniques surexprimant S100,3 présentent quant à elles des troubles du comportement proches des troubles que l'on peut observer pour certaines démences. Cette apparence contradictoire pourrait s'expliquer par le fait que S100,6 est neuroprotecteur pour des concentrations de l'ordre du nanomolaire et neurotoxiques pour des concentrations de l'ordre du micromolaire. Au niveau pathologique, cette dernière observation pourrait être essentielle. En effet, les astrocytes activés au cours de la maladie d'Alzheimer surexpriment de façon marquée S 100i3. Cette protéine est capable, par action autocrine, de promouvoir la prolifération et l'hypertrophie astrocytaire. Or, de façon intéressante, la plupart des astrocytes activés et surexprimant S100,13 sont fortement associés à la présence de plaques amyloïdes, l'un des deux marqueurs pathologiques de la maladie d'Alzheimer. De façon moins spécifique, cette surexpression pourrait être aussi un marqueur de l'apparition de troubles cognitifs ou de dommages cérébraux. Ainsi, une surexpression de cette protéine est un indicateur de risque de dommages cérébraux chez le foetus ou le nouveau-né. De même, une concentration élevée en S100,6 est un indicateur pronostique d'une plus grande difficulté de récupération suite à un traumatisme crânien ou d'un risque plus important d'apparitions de troubles cognitifs légers à sévères après acte chirurgical. Ces données indiquent donc que la protéine S 10013 serait importante dans l'établissement des fonctions cognitives et de leur détérioration potentielle. De fait, toutes modifications susceptibles de moduler les fonctions biologiques de cette protéine pourraient être essentielles pour définir les risques de déclins cognitifs, voir de démence chez la personne âgée mais aussi par exemple après acte chirurgical. Jusqu'à présent, les outils utilisés pour caractériser un déclin cognitif, une conversion vers une démence ou une démence déjà existante sont basés sur des tests psychométriques très pointus dont l'utilisation est réservée aux praticiens. Cependant, 10% à 37% des diagnostics s'avèrent inexacts. De plus, ils sont relativement peu efficaces dans les premières étapes de la pathologie en raison de l'absence de signes cliniques objectifs et mesurables. Ainsi, un certain nombre de tests biologiques, qu'ils soient génétiques ou protéomiques, ont été élaborés pour palier ces déficiences. Il a été proposé que l'allèle e4 du gène de l'APOE puisse servir dans ce cadre. Cependant, il a été depuis démontré que ce marqueur génétique avait une faible valeur prédictive au niveau du déclin cognitif ou de la conversion vers une démence. Au niveau protéique, une quantification des protéines Tau et peptides amyloïdes a été mise en place à partir d'échantillons de sérum ou de liquide céphalo- rachidien. Cependant, les résultats obtenus ont montré que ces mesures biologiques n'étaient pas plus efficaces que les tests psychométriques, même s'ils permettaient d'orienter le diagnostic. La maladie d'Alzheimer et plus généralement les démences constituent un problème majeur de santé publique dont l'importance s'accroît avec le vieillissement des populations humaines. Dans l'état actuel de nos connaissances, il n'existe pas de traitement curatif de cette maladie. L'évolution se fait vers une désocialisation massive liée à la désorientation temporo-spatiale et aux troubles de mémoire incompatibles avec l'autonomie nécessaire à une vie sociale autonome. Le coût d'une telle affection en matière de prise en charge et de dépendance s'avère considérable et peut, à terme, engorger le système de soins et de prise en charge. Il existe aujourd'hui cependant quelques traitements symptomatiques fondés sur une amélioration des fonctions cognitives et de la mémoire agissant sur certains neurotransmetteurs. Ces médicaments font partie de la classe des inhibiteurs de l'acétylcholinestérase qui prolongent l'action de l'acétylcholine qui est un neurotransmetteur essentiel. Quatre molécules sont aujourd'hui disponibles: la TacrineR (laboratoires OTL Pharma), le DonezepilR (laboratoires Eisai), la RivastigmineR (laboratoires Novartis), la GalantamineR (laboratoires Janssen Cilag). Par ailleurs, il a été récemment proposé que les statines, molécules initialement développées pour le traitement de l'hypercholestérolémie, puissent aussi être utilisées. Enfin, une nouvelle molécule, la Mémantine (laboratoires Lundbeck), un antagoniste du récepteur NMDA à action anti- glutamatergique est également protégé. Ces traitements, lorsque les patients peuvent en bénéficier, permettent de retarder, dans une certaine mesure, la désocialisation. Or, différents travaux ont permis de montrer que même en l'absence de traitement curatif, le simple fait de retarder de 5 ans l'apparition des signes cliniques de la maladie d'Alzheimer permettrait de diminuer de moitié le nombre de cas prévalents de cette pathologie, essentiellement en raison de la mortalité concurrentielle importante à ces âges avancés. Les traitements sympthomatiques de la maladie d'Alzheimer n'ont d'indication que dans les formes de démences légères et modérées. En effet, un certain potentiel neuronal doit encore être présent pour que ces médications agissent. Aussi, afin que les patients puissent bénéficier au mieux de ces traitements, une identification précoce des patients qui présentent des signes discrets de démence est indispensable. Depuis le milieu des années 1990, le développent des inhibiteurs des cholinestérases a ouvert la voie à une prise en charge thérapeutique des malades présentant des formes légères à modérées de la maladie d'Alzheimer. Actuellement, plusieurs essais thérapeutiques sont en cours sur ce que l'on appelle le "Mild Cognitive Impairement". Cette atteinte intellectuelle modérée, fondée sur des tests des fonctions cognitives, est encore imprécise et le risque de traiter à tort des patients non atteints de démence et n'ayant que des troubles mineurs, liés par exemple à un épisode dépressif, est important. De nombreux travaux montrent que la quantification de S1000 au niveau plasmatique est un très bon indicateur de l'importance de lésions cérébrales post-traumatiques que ce soit chez l'enfant ou l'adulte.. Cette quantification est un très bon marqueur du niveau et du temps de récupération ainsi que des risques de complications liés à ce type de pathologie. Par exemple, monitorer la concentration de S100(3 est proposé pour prédire le développement d'une surpression intracrânienne secondaire suite à un traumatisme crânien, cette complication étant potentiellement fatale. De même, la concentration en S10013, de façon plus spécifique, est associée au niveau d'altération de la barrière hémato-encéphalique, de la présence de tumeurs cérébrales ou de métastases. D'ailleurs, le niveau de S 100/3 corrèle avec la taille des tumeurs et pourrait donc être utilisé comme marqueur précoce des tumeurs cérébrales. Enfin, le taux de S100,e est un marqueur très précoce de lésions cérébrales chez le foetus ou le nouveau-né, alors que les méthodes standard d'évaluation ne permettent pas de détecter ce type de lésions. Il a donc été proposé que S100,3 puisse être utilisé comme marqueur des lésions cérébrales en médecine périnatale. La quantité de S 100(3 est aussi un marqueur sensible de risques de complications après opération cardiaque. Ainsi, cette quantification est prédictive du risque de survenue d'une attaque cérébrale, cette pathologie étant un problème récurrent après opération à coeur ouvert. Elle est aussi corrélée à l'importance de cette attaque et donc au risque de décès du patient ayant subi une telle complication. Par ailleurs, la concentration en S 100i3 est un indicateur d'un déclin cognitif suite à ce type d'opération et du niveau de récupération de ces fonctions cognitives. Finalement, la mesure du taux de 5100,6 est un excellent marqueur du succès de la lyse d'un caillot après attaque cérébrale. Il a déjà été décrit que S100(3 pouvait être utilisé comme marqueur de tumeurs cérébrales. Cependant, les évolutions d'autres lésions cancéreuses peuvent être monitorées par la mesure de S10013 circulant. Ainsi cette mesure apparaît comme la plus appropriée pour suivre l'apparition et l'évolution de métastases provenant de mélanomes. Le brevet US 6/555,327 divulgue une méthode de détermination quantitative de la protéine S 100(3 et S 100(3,6 pour diagnostiquer des traumatismes du cerveau, les complications neurologiques après pontage et les mélanomes malins. La demande de brevet internationale WO 00/26668 divulgue une méthode pour diagnostiquer et pronostiquer un cancer chez un sujet détectant au moins une protéine S100 parmi S100AG, S1 OOA7, S1 OOA8, S1 OOA9, à l'aide d'un test immunologique. La demande de brevet internationale WO 98/01471 divulgue un peptide contenant au moins un fragment de la protéine S 100(3. Il est également divulgué une méthode de détermination de la présence dudit peptide dans un échantillon pour diagnostiquer de manière générale des maladies neurologiques. La demande de brevet internationale WO 02/089656 divulgue une méthode pour diagnostiquer un événement clinique dans des tissus de patients, plus particulièrement l'infarctus du myocarde, par la détection de la protéine S100(3. Le brevet US 5/849,528 divulgue deux protéines humaines S100 (S 100T1 et S100T2). Le document divulgue également un polynucléotide codant pour ladite protéine, ainsi qu'une composition contenant ce polynucléotide pour diagnostiquer la progression des changements neuropathologiques dans la maladie d'Alzheimer. Enfin, la demande de brevet US 2002/160,425 divulgue principalement une méthode de diagnostic et de différenciation de la démence liée à Alzheimer chez un mammifère, en utilisant un anticorps liant spécifiquement un marqueur biochimique de la maladie d'Alzheimer, tel que la protéine S100(3, et en déterminant la présence de ce marqueur. Les méthodes de diagnostic décrites ci-dessus, en l'occurrence pour la maladie d'Alzheimer, ne permettent pas de diagnostiquer suffisamment tôt la maladie pour qu'un traitement adapté puisse être réellement efficace à long terme. Le besoin d'un outil diagnostique simple de routine pouvant être réalisé sur sang circulant permettant de renforcer la certitude diagnostique et de garantir les indications thérapeutiques avant l'apparition par exemple des symptômes avancés de la maladie d'Alzheimer se fait donc ressentir. Les inventeurs se sont donc donnés pour but de mettre au point un outil diagnostique simple de routine pouvant être réalisé sur sang circulant et permettant de diagnostiquer un marqueur biologique du déclin cognitif, d'une conversion vers une démence ou une démence déjà existante. La présente invention a ainsi pour objet une protéine dénommée Cog47 représentée par la séquence SEQ ID N 1 présentant une séquence d'acides aminés différente de celle de la protéine S100(3 normale. Il est démontré par les exemples qui suivent que la protéine Cog47 est associée notamment à une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante. Ces exemples ne doivent pas exclure que la protéine Cog47 puisse être impliquée dans d'autres pathologies. Dans la présente invention, l'expression "déclin cognitif', signifie la perte progressive non pathologique des fonctions mnésiques et cognitives supérieures. Dans la présente invention, l'expression "conversion vers une démence", signifie l'apparition d'événement correspondant à l'apparition clinique d'une démence, d'un état asymptomatique ou infra-clinique à un état symptomatique ou pathologique. Dans la présente invention, l'expression "démence déjà existante", signifie cas prévalent de démence à l'inclusion dans l'étude ou au moment du diagnostic. La présente invention a encore pour objet un anticorps polyclonal ou monoclonal, ou fragment dudit anticorps, se fixant de manière spécifique sur la protéine Cog47 par affinité avec la séquence d'acides aminés différente de celle de la protéine S1003 normale et l'utilisation dudit anticorps polyclonal ou monoclonal, ou fragment dudit anticorps pour la mise en oeuvre d'un test immunologique chez l'humain. Dans la présente invention, par "affinité avec la séquence" on entend une reconnaissance par l'anticorps de la séquence d'acides aminés, soit par reconnaissance de l'alignement desdits acides aminés, soit par reconnaissance de la conformation dans l'espace desdits acides aminés. Dans la présente invention, l'expression "fragment dudit anticorps" signifie partie dudit anticorps permettant au moins la reconnaissance de l'épitope de la protéine Cog47, ledit épitope étant présent au niveau de la séquence d'acides aminés différente de celle de la protéine S100'3 normale. Le fragment contient au minimum le ou les paratopes correspondants. La présente invention a encore pour objet l'utilisation d'une protéine dénommée Cog47 telle que définie précédemment pour produire des anticorps se fixant de manière spécifique sur ladite protéine. La présente invention a en outre pour objet un procédé pour déterminer la présence d'une protéine Cog47 représentée par la séquence SEQ ID N 1 dans un 15 échantillon humain comprenant les étapes de: laisser l'échantillon à analyser réagir avec un premier anticorps tel que décrit précédemment, laisser l'échantillon à analyser réagir avec un second anticorps dirigé spécifiquement contre l'anticorps tel que décrit précédemment, - laver, et détecter la quantité de protéine Cog47 dans l'échantillon. De préférence, dans le procédé décrit précédemment l'anticorps est un anticorps monoclonal. Un autre objet de l'invention concerne le polynucléotide ARNm isolé et purifié codant pour la protéine Cog47 représenté par la séquence SEQ ID N 2. Encore un autre objet de l'invention concerne un polynucléotide ARNm d'interférence ciblant de manière spécifique l'ARNm décrit précédemment ainsi que ledit polynucléotide ARNm d'interférence à usage thérapeutique pour inhiber ou diminuer l'expression de la protéine Cog47. Par "usage thérapeutique", on entend dans la présente invention "utilisation en tant que médicament". Les indications thérapeutiques sont principalement le déclin cognitif, la conversion vers une démence et la démence déjà existante. D'autres indications thérapeutiques non connues à ce jour sont également comprises dans l'utilisation en tant que médicament. La présente invention a en outre pour objet un vecteur d'expression de la protéine Cog47 comprenant au moins la séquence SEQ ID N 1 et les éléments permettant l'expression de ladite protéine dans une cellule hôte procaryote dans le but de produire une protéine recombinante. La présente invention a encore pour objet une trousse de diagnostic pour déterminer la présence de la protéine Cog47 représentée par la séquence SEQ ID N 1 dans un échantillon humain, comprenant une protéine Cog47 telle que décrite précédemment et/ou des anticorps polyclonaux ou monoclonaux, ou leurs fragments, tels que décrits précédemment, et/ou un oligonucléotide comprenant 20 à 25 pb complémentaire de l'ARNm tel que décrit précédemment. Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation du polynucléotide ARNm tel que décrit précédemment, ou un de ses fragments, pour diagnostiquer une prédisposition pour le déclin cognitif, la conversion vers une démence et la démence déjà existante. Un autre objet de l'invention concerne une souris transgénique comprenant dans son génome la séquence nucléotidique nécessaire pour exprimer la protéine Cog47 selon la séquence SEQ ID N 1 dans le but de développer un modèle d'étude de l'implication de Cog47 dans des processus pathologiques et de cibles thérapeutiques potentielles. La présente invention a également pour objet un gène S10003 humain représenté par la séquence SEQ ID N 3, caractérisé en ce que ledit gène présente au moins un polymorphisme associé à une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante. Il est effectivement démontré par les exemples qui suivent que certains polymorphismes sur le gène S1000 humain sont associés à une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante. Dans un mode de réalisation très préférentiel selon l'invention, le polymorphisme du gène S1003 est caractérisé en ce que le polymorphisme se situe au niveau du nucléotide thymidine 100 par rapport au site d'initiation de transcription dudit gène S 100e. De préférence encore, le polymorphisme du gène est caractérisé en ce que le nucléotide thymidine est remplacé par un nucléotide cytosine. La présente invention a également pour objet l'utilisation du gène S100,3 humain tel que défini précédemment, ou un fragment de celui-ci, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, une conversion vers une démence ou une démence déjà existante. La présente invention a en outre pour objet l'utilisation du gène S100,3 humain représenté par la séquence SED ID N 3, ou un fragment de celui-ci, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, une conversion vers une démence ou une démence déjà existante, caractérisée en ce que le polymorphisme se situe au niveau du nucléotide guanidine + 2766 par rapport au site d'initiation de transcription dudit gène. Dans la présente invention, l'expression "un fragment de celui-ci" associé à "gène" signifie une partie dudit gène. Dans un mode de réalisation préférentiel selon l'invention, dans l'utilisation 20 du gène S1003 décrit précédemment, le nucléotide guanidine est remplacé par un nucléotide cytosine. La présente invention a également pour objet l'utilisation du gène S100,6 humain représenté par la séquence SED ID N 3, ou un fragment de celui-ci, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, une conversion vers une démence ou un démence déjà existante, caractérisée en ce que le polymorphisme se situe au niveau du nucléotide guadinine + 2963 par rapport au site d'initiation de transcription dudit gène. Dans un mode de réalisation préférentiel selon l'invention, dans l'utilisation du gène S100(3 décrit précédemment, le nucléotide guadinine est remplacé par un 30 nucléotide adénine. La présente invention a encore pour objet l'utilisation du gène S100J humain représenté par la séquence SED ID N 3, ou un fragment de celui-ci, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, une conversion vers une démence ou un démence déjà existante, caractérisée en ce que le polymorphisme se situe au niveau du nucléotide adénine + 3942 par rapport au site d'initiation de transcription dudit gène. Dans un mode de réalisation préférentiel selon l'invention, dans l'utilisation du gène 5100,6 décrit précédemment, le nucléotide adénine est remplacé par un nucléotide guanidine. Un autre objet de la présente invention concerne une trousse de diagnostic pour déterminer la présence d'un polymorphisme du gène S100(3 représenté par la séquence SEQ ID N 3 associé à une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante, dans un échantillon comprenant un ou plusieurs oligonucléotides de 20 à 25 pb complémentaire des polymorphismes tels que décrits précédemment. Enfin, la présente invention a pour objet une méthode de diagnostic de la prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante chez un humain comprenant la détermination de la présence d'un polymorphisme tel que décrit précédemment et/ou de la protéine Cog47. Outre les dispositions qui précèdent, la présente invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront du complément de description qui suit, qui se rapportent à l'exemple, ainsi qu'aux dessins annexés dans lesquels: - La figure 1 illustre en 1(a) la séquence de l'ARNm et de la protéine correspondante de l'isoforme 5100/3 normale, en 1(b) la séquence de l'ARNm et de la protéine correspondante de la séquence de l'isoforme Cog47 à partir d'ARNm total; - La figure 2 illustre en 2(a) l'amplification par RT-PCR des ARNm correspondant à S 100,6 normal et Cog47 à partir de macrophages et lymphocytes humains et de lymphocytes de cercopithèque de Hylan; la figure 2(b) illustre la comparaison inter-espèce des séquences protéiques de S 100 $ normal et Cog47 (après séquençage des ADN génomiques). En gris sont indiqués les acides aminés qui diffèrent entre les espèces étudiées; - La figure 3 illustre les niveaux d'expression des isoformes de S10013 et Cog47 dans le tissu cérébral de 85 patients souffrant de maladie d'Alzheimer et de 90 témoins; - La figure 4 illustre la corrélation entre le niveau d'expression de S100/3 et 5 Cog47 et le niveau de dégénérescence neurofibrillaire; - La figure 5 illustre la corrélation entre le niveau d'expression de S100$ et Cog47 et l'inflammation de la microglie. Les exemples qui suivent permettent d'illustrer le meilleur mode de 10 réalisation de l'invention, mais ils ne doivent pas pour autant être considérés comme réduisant la portée des revendications. Exemple: Etude du polymorphisme du gène S100j3 et de la protéine Cog47 associée à une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence 15 ou à une démence déjà existante 1. Matériel et méthodes: Population d'Eldnord L'étude d'ELDNOR (ELDerly dans le NORd de La France) a été conduite dans le département du Nord, une région administrative de la France, entre mars et septembre 1993. Un échantillon aléatoire de 1055 individus des deux genres ayant entre 60 et 105 ans a été recruté dans des maisons de retraite. Un seul médecin qualifié a exécuté l'entrevue et le prélèvement de sang. Au début de l'entrevue, tous les sujets ont reçu une description orale de l'étude et ont signé un consentement en connaissance de cause. Pour ceux qui étaient mentalement incompétents, nous avons approché leur descendance ou leurs précepteurs juridiques. Le Comité d'éthique de l'université locale a approuvé l'étude. Un MMS a été réalisé pour tous les sujets. 187 individus ont été diagnostiqués avec une démence. Population de Limeil Brévannes cas de démence (28,7% hommes, 85,5 ans) ont été recrutés dans le département long séjour de gérontologie de l'hôpital de Limeil Brévannes (France). La démence a été identifiée selon les critères de DSM-III-R. 36 individus présentant un déclin cognitif sans critères de démence ont été également recrutés. Des cerveaux (n = 167, 50,9% hommes, 79,6 ans) venant d'autopsies courantes effectuées aux Hospices Civils de Strasbourg (Est de la France) ont été utilisés comme témoins pour cette étude. Le recrutement a été conçu afin d'exclure des cas de démence et des patients souffrant de pathologies neurologiques. La plupart des sujets ont été admis moins de 48 heures avant la mort dans des services d'urgence et vivaient à domicile avant leur admission. Toutes les études ont été approuvées par les Comitésd'éthique locaux. Population Alzheimer Les échantillons témoins et Alzheimer sont Caucasiens, recrutés dans le nord de la France (cas Alzheimer: n = 589, âge = 72,3 ans, âge au début = 69,4 ans, 39,5% d'hommes; témoins: n = 663, l'âge = 72,5 + 7,9 ans, 36% d'hommes). Le diagnostic probable de maladie d'Alzheimer a été établi selon les critères du DSM- III-R et du NINCDS-ADRDA. Les témoins caucasiens ont été définis comme sujets sans critères de démence de DMS-III-R et avec l'intégrité de leurs fonctions cognitives. Chaque individu ou apparenté a donné un consentement en connaissance de cause. Échantillons de cerveaux Les 85 cerveaux de patients souffrant de maladie d'Alzheimer ont été obtenus à partir d'une banque de 114 patients atteints de formes définitives de la pathologie, et recrutés à Manchester et sa proche banlieue (Royaume Uni) durant les années 1986-2001 (âge moyen à la mort = 73,1 + 9,1 ans; âge moyen de début --65,9 + 10,3 ans; 51% de mâle). Tous les diagnostics ont été faits selon des critères neuropathologiques du CERAD. La quantité de plaques amyloïdes A,6 n-40, A(3 n-42(43) et Ae total (A,3 n-40 + A(3 n-42(430 a été mesurée par analyse d'image dans le cortex frontal (régions 8/9 de Brodmann) comme précédemment décrit. La charge de Tau a été déterminée dans 86 échantillons par un procédé standard utilisant l'anticorps monoclonal A T8 (Innogenetics, Belgique) en tant qu'anticorps primaire. La recherche de ferritine, comme marqueur de la microglie activé, a été réalisée sur 72 cerveaux en utilisant un procédé standard, une incubation avec un anticorps primaire contre la ferritine (sigma, R-V) ayant été utilisé durant la nuit à 4 C (à une dilution de 1:750). L'immunoréactivité à la ferritine a alors été visualisée par l'ajout de diaminobenzidène 3.3 (DAB). Les 90 cerveaux de témoins (de 79,4 + 6,1 ans; 43% d'hommes) proviennent d'un premier ensemble de 190 cerveaux obtenus à partir des autopsies courantes effectuées aux Hospices Civils de Strasbourg (France). Le recrutement a été conçu pour exclure des cas de démence. Les individus ont été recrutés dans un hôpital général et non pas au sein d'établissements médicaux gériatriques dans lesquels une majorité de patients peuvent présenter une démence. La plupart des cas ont été admis moins de 48 heures avant la mort dans des services d'urgence et vivaient à domicile avant leur admission. Les cas dont l'autopsie a visé des pathologies neurologiques ont été exclus. Les critères de Neuropathologie ont été appliqués pour définir des étapes de Braak et étaient conformes aux critères neuropathologique du CERAD. Séquençage et génotypage Tous les exons, liaisons d'intron/exon ainsi que le promoteur proximal et l'intron 3 du gène S100(3 ont été examinés dans 32 témoins pour mettre en évidence des variations de séquence en utilisant l'analyse par D-HPLC (chromatographie liquide à haute performance dénaturante). La D-HPLC également connue sous le nom d'analyse hétéro-duplex modulée par température est une technique extrêmement sensible pour détecter une variation des séquences d'ADN, en particulier les substitutions de simples bases. Tous les variants identifiés par DHPLC ont été confirmés par séquençage. Des produits de PCR ont été directement séquencés à l'aide du kit de séquençage Terminator colorant Taq (biosystèmes de Perkin Elmer, Foster City, CA). Le génotype rs2000403 a été déterminé par amplification à partir d'un fragment à l'aide des amorces 5'-actctgaaccattcacggtg-3' et 5'gtctctcaccaagccctatt-3'. Le génotype a alors été déterminé par digestion enzymatique (NIa III). RT-PCR en temps réel L'ARN total des cerveaux a été extrait à partir de tissu congelé en utilisant un protocole basé sur l'utilisation de phénol/chloroforme (réactif TRlzol , Invitrogen). La qualité de l'ARN total a été évaluée en utilisant le bioanalyseur 2100 d'Agilent et le rapport de l'ARN ribosomal 28S/18S a été systématiquement estimé (gamme de 0,0 à 1,8). La retrotranscription puis l'amplification PCR en temps réel a été exécutée à partir de 30 ng d'ADNc/ARN en utilisant la technologie Taqman, permettant ainsi de co-amplifier l'ADNc représentatif des gènes Si 00j, Cog47, et de la,6-actine comme décrit par le fournisseur (Applied biosystèmes). Analyses statistiques L'analyse statistique a été réalisée en utilisant le logiciel statistique de SAS, v. 7.0 (SAS Institute Inc., Cary, NC). Le niveau de la dégradation totale d'ARN (estimée par le rapport d'ARNr 28S/18S) n'a pas été identifié en tant que facteur de confusion pour les niveaux d'expression mesuré de S100j ou Cog47 (en utilisant un modèle de régression linéaire). Cependant, ce niveau de dégradation a été tout de même inclus dans les analyses multivariées de la covariance en utilisant un modèle linéaire général pour la comparaison de la quantité d'ARNm entre les cas d'Alzheimer et les témoins. La charge de Tau, le niveau d'activation de la microglie et les quantifications des ARNm ont été log-transformés pour obtenir une distribution normalisée. L'effet du polymorphisme rs2000403 sur le niveau d'ARNm a été examiné en utilisant le test non paramétrique de Wilcoxon. Les ORs (permettant d'évaluer un risque de maladie d'Alzheimer pour un niveau élevé ou bas d'expression de Cog47 ou de S 100a) ont été évalués par régression logistique, les sous-populations ayant été définies en utilisant la médiane du niveau d'ARNm. Les analyses univariées ont été exécutées en utilisant le test x2 de Pearson. Dans les analyses multivariées, nous avons codé le génotype du polymorphisme rs2000403 en dichotomisant les génotypes en fonction de la présence ou l'absence d'un allèle A (GG contre AA+GA). L'effet des ces variables sur la maladie a été évalué par un modèle logistique de régression linéaire ajusté sur l'âge et le sexe. Des coefficients de déséquilibre de liaison ont été estimés par paires dans les échantillons témoins. Des fréquences étendues d'haplotype des deux marqueurs ont été estimées en utilisant l'algorithme de dénombrement d'haplotype Myriad décrit par McLean et al. 2. Etude du polymorphisme du gène S 100 i' et de la protéine Cog47: Par comparaison des séquences d'ESTs disponibles sur le site de l'université de Santa-Cruz (http://genome.ucsc.edu), il a été mis en évidence l'existence d'un exon inconnu dans le gène S1003 constitué jusqu'à présent de 3 exons. Par RTPCR, un 4ieme exon permettant d'établir une nouvelle séquence d'ARNm (Figure lb) a été mis en évidence. La nouvelle isoforme dénommée Cog47 diffère de 47 acides aminés par rapport à l'isoforme jusqu'à présent connu de S100(3. Il n'a pas été retrouvé la séquence correspondante à cet exon sur l'ADN génomique de souris. Par contre, celle-ci a pu être observée aussi bien chez le chimpanzé que des cercopithèques, ceux-ci exprimant par ailleurs cet exon dans des lymphocytes (figure 2a). La séquence protéique de l'isoforme normal S1003 ou de l'isoforme Cog47 sont identiques chez l'homme ou le chimpanzé. Cependant, cette séquence protéique diffère respectivement d'un acide aminé et de 6 acides aminés pour S1000 et Cog47 chez les cercopithèques. Ces données associées au fait que nous n'avons pas réussi à mettre en évidence cette séquence exonique chez les lémuriens, suggèrent que la protéine Cog47 est récente en terme d'évolution. Les niveaux d'expression des isoformes de Si 00/3 et Cog47 ont été mesurés dans le tissu cérébral de 85 patients souffrants de maladies d'Alzheimer et de 90 témoins. Par RT-PCR semi-quantitative, il a été observé que le niveau d'expression de Cog47 semblait être inversement corrélé au niveau d'expression de S100(3: plus le niveau de S 100/3 est faible, plus le niveau de Cog47 est élevé (Figure 3). Ce résultat suggère des mécanismes interdépendants de production de ces deux isoformes. Confortant cette possibilité, il a été également observé que le taux d'expression de S100/3 étaient diminués de plus de 37% chez les malades par rapport aux témoins, alors que celle de Cog47 était augmentée de près de 41% chez ces mêmes malades (Tableau 1). Tableau 1: Niveau d'expression des différents ARNm issus du gène S 100(3 dans la population témoin et la population souffrant de maladie d'Alzheimer. Témoins Malades P n 90 84 ARNm S100[3 normal 1.19 0.74 -37.2% 0.0001 [0.63-2.24] [0.38-1.47] ARNm Cog47 0.015 0.021 +40.9% 0.0004 [0.008-0.026] [0.011-0.040] Ratio Cog47/S100(3 0.012 0.028 +124.3% 0.0001 [0.004-0.041] [0.007-0.104] Les individus présentant un taux élevé d'expression de Cog47 ont 3 fois plus de risque de développer une maladie d'Alzheimer que ceux présentant un niveau plus faible d'expression de cet isoforme (Tableau 2). Tableau 2: Estimation du risque de développer une maladie d'Alzheimer en 15 fonction des taux d'ARNm de S10013 normal et de Cog47 dans le lobe frontal. OR IC 95% p Niveau élevé ARNm S l 00(3 normal 0.33 0.18-0.63 0.0006 Niveau élevé ARNm Cog47 3.11 1.67-5.77 0.0003 Niveau élevé Ratio Cog47/S100(3 3.44 1.84-6.41 0.0001 valeur médiane utilisée pour différencier les niveaux élevés et faible d'expression). De façon cohérente à ces résultats, il a été mis en évidence une corrélation positive entre le niveau d'expression de Cog47 et le niveau de dégénérescence neurofibrillaire (Figure 4) ou d'inflammation de la microglie (Figure 5) dans le tissu cérébral des malades, ce niveau d'expression expliquant respectivement 10 % et 5,5 % de la variance de ces marqueurs pathologiques. Toutes les données qui précèdent semblent donc indiquer qu'outre le fait que les niveaux d'expression de S100/3 et de Cog47 soient des marqueurs de la maladie d'Alzheimer, Cog47 est un déterminant de la pathologie. Il est apparu que des variabilités génétiques contrôlant les niveaux d'expressions de Cog47 et/ou S10013 étaient associées au déclin cognitif et au risque de développer une démence telle que la maladie d'Alzheimer. Cette hypothèse a été confirmée par une recherche systématique de polymorphismes par D-HPLC puis séquençage, réalisés sur le promoteur, les exons ainsi que l'intron 3 (englobant le nouvel exon caractéristique de Cog47) du gène S 100 j3. Il a été ainsi confirmé l'existence d'un certain nombre de polymorphismes et découverts l'existence de nouveaux polymorphismes (tableau 3). Tableau 3: Polymorphismes caractérisés par D-HPLC et séquençage dans le gène S10013 numéro position localisation changementa Ref fréquence 1 -1358 promoteur C1T rs3788266 47.1% 2 -1132 promoteur TIC unknown b pas en équilibre de Hardy-Weinberg (génotypage par digestion enzymatique et séquençage) c associé au déclin cognitif dans un sous goupe de la population ELDNOR présentant un MMS supérieur ou égal à 25. A ce jour, sur les 25 polymorphismes recensés, 23 ont été étudiés dans un sous-groupe de la population ELDNOR (voir matériels et méthodes) regroupant 254 individus et présentant un MMS (minimental status) supérieur ou égal à 25. Ce premier criblage a permis de mettre en évidence trois polymorphismes (rs1051169, rs2839355 et rs2300403) localisés dans l'intron 3 ou à proximité de celui-ci, significativement associés à un déclin cognitif plus marqué. L'étude de ces trois polymorphismes a été étendu à toute la population ELDNOR (Tableau 4). Seul deux polymorphismes rs2839355 et rs2300403, montrent alors un effet significatif et d'amplitude similaire. Ainsi pour le polymorphisme rs2000403, il a été montré que les individus porteurs du génotype GG avaient un score de MMS de 1,7 point inférieur aux individus porteurs d'au moins un allèle A (Tableau 4). Tableau 4: Impact des polymorphismes rs1051169, rs2839355 et rs2000403 sur le déclin cognitif dans la population ELDNOR rs1051169 rs2839355 Rs2300403 n MMS n MMS n MMS CC+CG 712 21.3 5.1 GG+ AG 742 21.3 5.1 AA+AG 700 21.4 5.1 GG 71 20.2 5.0 AA 41 19.7 5. 0 GG 83 19.7 4.9 MMS -1.1 -1.6 -1.7 p NS p 0.05 p 0.004 Cependant puisque ces deux polymorphismes sont en déséquilibre de liaison complet et pour des raisons de puissance statistique, nous avons choisi de restreindre les études suivantes au polymorphisme rs2300403. Ainsi, dans la population de Limeil-Brévannes (voir matériel et méthode), le génotype GG du polymorphisme rs2300403 est associé à une augmentation de plus de 4 fois du risque de présenter un déclin cognitif (p=0.003; Tableau 5b). Tableau 5: Distribution génotypique du polymorphisme rs2000403 dans des populations de patients soufflant de démences ou présentant un déclin cognitif et de témoins. (a) population ELDNOR; (b) population LimeilBrévannes (LV); (c) combinaison des deux populations. (a) ELDNOR Genotype Distributionb ORd pd GG versus AG+AA n AA AG GG Demented cases 187 98 (0.52) 71 (0.38) 18 (0.10) 2.5 [0.9-7.2] 0.08 Controlsb 145 77 (0.53) 63 (0.43) 5 (0.04) (b) LV Distribution génotypiquea ORd pd GG versus AG+AA n AA AG GG Demented cases 125 62 (0.50) 42 (0.34) 21 (0.17) 2.4 [0.9-6.5] 0.08 Co tive 36 15 (0.42) 13 (0.36) 8 (0.22) 4.1 [1.6-10.2] 0.003 decline Control 115 56 (0.49) 51 (0.44) 8 (0.07) - (c) Both Genotype Distributions ORd pd GG versus AG+AA n AA AG GG Demented cases 312 160 (0.51) 113 (0.36) 39 (0.13) 2.4 [1.2-4.7] 0.004 Controlsb 260 133 (0.51) 114 (0.44) 13 (0.05) a p=0.037; b p=0.08; p=0. 004; d ajusté par rapport à l'âge et au sexe En conclusion le gène S 100p apparaît comme un déterminant génétique du 5 déclin cognitif. L'impact du polymorphisme rs2000403 sur le risque de développer une démence a également été étudié. Il a été observé que le génotype GG était associé à une augmentation du risque de développer ce type de pathologie que ce soit dans la population ELDNOR ou la population de LimeilBrévannes. Cette augmentation n'atteint pas le seuil de signification dans ces deux populations prises séparément en raison du faible pourcentage du génotype considéré et de la taille restreinte des populations étudiées. Néanmoins, cette augmentation de risque devient significative lorsque les deux populations sont combinées ensemble (Tableau 5c ci-dessus). Afin de conforter ce résultat, il a été étudié l'impact du polymorphisme rs2000403 sur le risque de développer une maladie d'Alzheimer. Dans la population totale (voir matériel et méthode), aucun effet significatif du génotype GG n'a été mis en évidence. Cependant, puisque les populations démentes de ELDNOR et Limeil-Brévannes sont significativement plus âgées, la population étudiée a été stratifiée en fonction de l'âge. Il est alors apparu que le génotype GG était de nouveau associé à une augmentation de plus de 2 fois du risque de développer une démence de type Alzheimer chez les plus âgés (Tableau 6). Finalement, afin de mettre en évidence un lien potentiel entre la production de l'isoforme Cog47 et le polymorphisme rs2000403, les échantillons cérébraux étudiés précédemment ont été génotypé pour ce polymorphisme. Dans la population témoin, nous n'avons pas pu mettre en évidence d'association entre le polymorphisme rs2000403 et la quantité d'ARNm de Cog47. Par contre dans la population malade, nous avons observé une augmentation de 77% de la quantité d'ARNm de Cog47 pour les individus porteurs du génotype GG par rapport à ceux porteurs d'au moins un allèle A (Tableau 7). Tableau 6: Distribution génotypique du polymorphisme rs2000403 dans des populations de patients souffrant de maladies d'Alzheimer et de témoins (a) sur toute la population; (b) sur la population la plus âgée (définie par la médiane pour l'âge de la population). (a) rs2000403 Distribution génotypiquea ORc n AA AG GG GG versus pc AG+AA AD cases 608 285 (0.47) 261 (0.43) 62 (o.10) 1.34 [0.88-2.04] 0.16 Control 499 242 (0.48) 218 (0.44) 39 (o.os (b) rs2000403 Distribution génotypiqueb ORc In the oldest n AA AG GG GG versus pc AG+AA AD cases 284 129 (0.45) 122 (0.43) 33 (0.12) 2.21 [1.06-4.62] 0.035 Control 173 81 (0.47) 82 (0.47) 10 (0.06 a p=0.38; b p=0.10; e ajusté par rapport à l'âge et au sexe Tableau 7: Niveau d'expression des différents ARNm issus du gène Si 00 f3 dans la population témoin et la population souffrant de maladie d'Alzheimer en fonction du génotype rs2000403. (a) Témoins AA+AG GG p n 79 6 ARNm 5100(3 normal 1.22 1.04 -15.0% ns [0.63-2.36] [0.59-1.85] ARNm Cog47 0.014 0.015 +4.6 % ns [0.008-0.026] [0.010-0.022] Ratio Cog47/S100[3 0.012 0.014 +23.0% ns [0.003-0.041] [0.006-0.037] (b) malades AA+AG GG p n 68 13 ARNm S100(3 normal 0.81 0.57 -30.6% 0.06 [0.44-1.51] [0.23-1.37] ARNm Cog47 0.019 0.033 +77.4% 0.02 [0.010-0.033] [0.017-0.064] Ratio Cog47/S100(3 0.023 0.058 +155.5% 0.05 [0.007-0.076] [0.011-0.309] En résumé, nous avons observé que: l'ARNm issu du gène S100j3 subit un nouvel épissage alternatif, conduisant à la formation de l'isoforme Cog47. la protéine correspondante est potentiellement différente de 47 acides aminés par rapport à la forme Si 00 j3 normale. la quantité d'ARNm de Cog47 est augmenté de plus de 40% dans le tissu cérébral des malades par rapport aux témoins tandis que la quantité d'ARNm de S 100(3 est quant à elle diminuée de près de 37%. un taux élevé d'ARNm de Cog47 dans le tissu cérébral est associé à une augmentation de plus de 3 fois du risque de développer une maladie d'Alzheimer. le niveau d'expression de Cog47 est corrélé à la quantité de dégénérescence fibrillaire dans le tissu cérébral des malades ainsi qu'à l'activation des cellules microgliales. Parallèlement, nous avons mis en évidence au niveau génétique que: le polymorphisme rs2000403, localisé dans l'intron 3 du gène S 100P, est un déterminant génétique du déclin cognitif, le génotype GG étant associé à la fois à une diminution des performances cognitives mesurées par le MMS mais aussi une augmentation du risque de développer un déclin cognitif le polymorphisme rs2000403 est un déterminant génétique du risque de développer une démence et en particulier une maladie d'Alzheimer, le génotype GG étant associé à une augmentation de plus de 2 fois de ce risque. le polymorphisme rs2000403 est associé à une augmentation de la quantité de 1'ARNm de Cog47 dans le tissu cérébral des malades, le génotype GG augmentant de 77% cette quantité par rapport aux individus non porteurs de ce génotype. Il apparaît au vu des résultats qui précèdent que l'isoforme Cog47 serait un déterminant du déclin cognitif et des démences, en particulier de type Alzheimer. Le polymorphisme rs2000403 en augmentant la quantité de Cog47 accentuerait alors le risque de présenter un déclin cognitif puis une démence. REVENDICATIONS 1. Protéine dénommée Cog47 représentée par la séquence SEQ ID N 1 5 présentant une séquence d'acides aminés différente de celle de la protéine S100/3 normale. 2. Anticorps polyclonal ou monoclonal, ou fragment dudit anticorps, se fixant de manière spécifique sur la protéine selon la revendication 1 par affinité avec la 10 séquence d'acides aminés différente de celle de la protéine S100/3 normale. 3. Utilisation d'un anticorps polyclonal ou monoclonal, ou fragment dudit anticorps, selon la revendication 2 pour la mise en oeuvre d'un test immunologique in vitro chez l'humain. 4. Utilisation d'une protéine selon la revendication 1 pour produire in vitro des anticorps se fixant de manière spécifique sur ladite protéine. 5. Procédé pour déterminer la présence d'une protéine Cog47 représentée par la séquence SEQ ID N l dans un échantillon humain comprenant les étapes de: laisser l'échantillon à analyser réagir avec un premier anticorps selon la revendication 2, laisser l'échantillon à analyser réagir avec un second anticorps dirigé spécifiquement contre l'anticorps selon la revendication 2, laver, et détecter la quantité de protéine Cog47 dans l'échantillon. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'anticorps est un anticorps monoclonal. 7. Polynucléotide ARNm isolé et purifié codant pour la protéine Cog47 représenté par la séquence SEQ ID N 2. 8. Polynucléotide ARNm d'interférence ciblant de manière spécifique l'ARNm selon la revendication 7. 9. Utilisation du polynucléotide ARNm d'interférence selon la revendication 8 pour la fabrication d'un médicament utile pour inhiber ou diminuer l'expression de la Protéine Cog47. 10. Vecteur d'expression de la protéine Cog47 comprenant au moins la séquence d'ADN complémentaire de la séquence SEQ ID N 2 et les éléments permettant l'expression de ladite protéine dans une cellule hôte procaryote dans le but de produire une protéine recombinante. 11. Trousse de diagnostic pour déterminer la présence de la protéine Cog47 représentée par la séquence SEQ ID N 1 dans un échantillon humain, comprenant une protéine Cog47 selon la revendication 1, ou des fragments de ladite protéine, et/ou des anticorps polyclonaux ou monoclonaux, ou leurs fragments, selon la revendication 2, et/ou un oligonucléotide comprenant 20 à 25 pb complémentaire de l'ARNm selon la revendication 7. 12. Utilisation du polynucléotide selon la revendication 7, ou un de ses fragments, et/ou de la protéine Cog47 selon la revendication 1, ou un de ses fragments, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante. 13. Souris transgénique comprenant dans son génome la séquence nucléotidique nécessaire pour exprimer la protéine Cog47 représentée par la séquence SEQ ID N 1 dans le but de développer un modèle d'étude de l'implication de Cog47 dans des processus pathologiques et de cibles thérapeutiques potentielles. 14. Gène S1003 humain isolé représenté par la séquence SEQ ID N 3, caractérisé en ce que ledit gène présente au moins un polymorphisme associé à une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante. 15. Gène selon la revendication 14, caractérisé en ce que le polymorphisme se 5 situe au niveau du nucléotide thymidine 100 par rapport au site d'initiation de transcription dudit gène Si 00,3. 16. Gène selon la revendication 15, caractérisé en ce que le nucléotide thymidine est remplacé par un nucléotide cytosine. 17. Utilisation du gène S100,3 humain tel que défini aux revendications 14 à 16, ou un fragment de celui-ci, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, une conversion vers une démence ou une démence déjà existante. 18. Utilisation du gène S100'3 humain représenté par la séquence SED ID N 3 selon la revendication 14, ou un fragment de celui-ci, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, une conversion vers une démence ou une démence déjà existante, caractérisée en ce que le polymorphisme se situe au niveau du nucléotide guanidine + 2766 par rapport au site d'initiation de transcription dudit gène. 19. Utilisation selon la revendication 18, caractérisée en ce que le nucléotide guanidine est remplacé par un nucléotide cytosine. 20. Utilisation du gène S1000 humain représenté par la séquence SED ID N 3 selon la revendication 14, ou un fragment de celui-ci, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, une conversion vers une démence ou un démence déjà existante, caractérisée en ce que le polymorphisme se situe au niveau du nucléotide guanidine + 2963 par rapport au site d'initiation de transcription dudit gène. 21. Utilisation selon la revendication 20, caractérisée en ce que le nucléotide guanidine est remplacé par un nucléotide adénine. 22. Utilisation du gène S1000 humain représenté par la séquence SED ID N 3 selon la revendication 14, ou un fragment de celui-ci, pour diagnostiquer in vitro une prédisposition au déclin cognitif, une conversion vers une démence ou un démence déjà existante, caractérisée en ce que le polymorphisme se situe au niveau du nucléotide adénine + 3942 par rapport au site d'initiation de transcription dudit gène. 23. Utilisation selon la revendication 22, caractérisé en que le nucléotide adénine est remplacé par un nucléotide guanidine. 24. Trousse de diagnostic pour déterminer la présence d'un polymorphisme du gène S1000 représenté par la séquence SEQ ID N 3 dans une échantillon humain et associé à une prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante, comprenant un ou plusieurs oligonucléotides de 20 à 25 pb complémentaire des polymorphismes selon les revendications 16 et/ou 19 et/ou 21 et/ou 23. 25. Méthode de diagnostic in vitro de la prédisposition au déclin cognitif, à une conversion vers une démence ou à une démence déjà existante chez une humain comprenant la détermination de la présence d'un polymorphisme selon la revendication 14 et/ou des protéines associées auxdits polymorphismes, notamment la protéine Cog47 selon la revendication 1.