Brevet FR2849862A1 — publié le 20040716

DISPOSITIF ET PROCEDE DE CULTURE DE CELLULES POUR ESSAI IN VITRO L'invention concerne un dispositif principalement 5 destiné à la culture de cellules par exemple sous forme de tissu pour effectuer des essais in vitro. Aujourd'hui il existe divers dispositifs pour effectuer des cultures in vitro. En plus de l'augmentation 10 du nombre de cultures simultanées, on cherche également à réduire les sources d'erreur de mesure, le temps de manipulation lors d'une culture et à améliorer l'automatisation des mesures. Ainsi il existe des dispositifs de réalisation de cultures in vitro qui comprennent l'utilisation d'au moins une chambre, comprenant au moins un moyen de support telle que par exemple une microplaque à puits telle que décrite dans la demande de brevet FR 01/11.923 de la demanderesse. 20 De tels dispositifs permettent d'améliorer l'automatisation des mesures, principalement en terme de contrôle de la température, de la pression, et d'autres paramètres éventuels - tel que le pH - du milieu généralement liquide ou gel comprenant les cellules, et de 25 tout fluide admis dans ladite chambre. Le fluide admis dans la chambre comprend généralement au moins un gaz choisi dans le groupe formé par le dioxyde de carbone, l'air, la vapeur d'eau, l'oxygène et l'azote. Cependant l'amélioration peut ne pas être aussi efficace en pratique 30 que ce que la théorie permettait d'envisager, 2 2849862 principalement pour les régulations autres que la thermorégulation, et plus particulièrement pour l'étude des fonctions cellulaires de cellules placées dans différents contextes expérimentaux, tels que état naturel, 5 stress, pollution, rayonnement UV, thermique, avant et/ou après traitement desdites cellules par des principes actifs molécules ou produits finis à vocation santé pharmaceutiques, cosmétiques ou environnementales etc. ; ou bien simplement la capacité de résistance, de tolérance 10 ou de récupération des cellules suite à un stress. Par " stress ", on entend une agression de nature physicochimique, ou plus généralement une réaction impliquée dans toutes les relations entre l'organisme et le milieu qui l'entoure. Il existe généralement différents types de 15 stress: de radiations, d'irradiation par au moins un rayonnement, d'oxydation, thermique, chimique, gazeux, aux *métaux lourds, d'arsénite, physiologique (par au moins un élément choisi dans le groupe formé par les hormones, les facteurs de croissance, le cycle cellulaire, et les 20 analogues d'acides aminés), physiopathologique (infections, hypoglycémie, anoxie) ; typiquement les trois types de stress les plus couramment étudiés sur les cellules sont, séparément, les stress gazeux, les stress de type rayonnement et les stress de type thermique. De 25 plus, de tels dispositifs ne permettent généralement pas d'utiliser au moins un fluide comprenant au moins un gaz polluant, par exemple choisi dans le groupe formé par les gaz d'échappement, l'ozone, et les fumées de cigarette. En effet, la présence de résidus laissés par le gaz polluant 30 implique un risque élevé de dégradation par contamination 3 2849862 de la ou des mesures au cours du temps. Enfin, aucun appareil connu à ce jour ne permet de réaliser les trois types de stress décrits plus haut de façon simultanée, dans le cas o le gaz est un polluant gazeux. Il existe aussi d'autres dispositifs d'incubation cellulaire, tels que ceux commercialisés par les sociétés JOUAN ou KENDRO, de très grosse capacité (typiquement 150 litres, avec plusieurs centaines de microplaques), ce qui 10 est difficile à gérer et plus précisément à homogénéiser en particulier au niveau de la température. Par ailleurs, de tels dispositifs sont principalement utilisés pour la culture cellulaire en masse. De plus, si la majorité des dispositifs de l'art antérieur permettent le plus souvent et dans certaines conditions d'effectuer une culture de cellules relativement satisfaisante, ils ne permettent pas, pour les raisons évoquées plus haut, d'effectuer une étude des 20 fonctions cellulaires et en particulier du stress cellulaire la plus adéquate possible, principalement en termes de reproductibilité et de multiplicité du stress. Et ce d'autant plus que les fluides mis en circulation au moins temporairement dans la chambre comprennent au moins 25 un gaz polluant. Par ailleurs de tels dispositifs nécessitent des quantités de gaz journalières très importantes, notamment pour la mise en condition d'hypoxie du matériel cellulaire. 4 2849862 Le dispositif selon l'invention permet de pallier aux problèmes décrits précédemment. Ainsi, le dispositif selon l'invention est un 5 dispositif de culture de cellule pour effectuer au moins un essai in vitro, ledit dispositif comprenant au moins une chambre dans laquelle se trouve au moins un moyen de support, et ledit dispositif comprenant au moins un moyen de régulation d'au moins un paramètre de fonctionnement de 10 ladite chambre lors de l'utilisation en essai in vitro dudit dispositif, ledit paramètre étant choisi dans le groupe formé par la température, la pression, l'hygrométrie et éventuellement au moins un autre paramètre éventuel d'un milieu éventuel comprenant la 15 cellule supporté par ledit moyen de support, ledit dispositif comprenant en outre au moins un moyen d'entrée dans la chambre d'au moins un fluide et au moins un moyen de sortie de la chambre d'au moins un fluide, ledit dispositif étant caractérisé en ce que ladite chambre est 20 amovible. Avantageusement, un tel dispositif selon l'invention permet l'étude des fonctions cellulaires de cellules placées dans différents contextes expérimentaux, 25 tels que état naturel, stress, pollution, rayonnement UV, thermique, avant et/ou après traitement desdites cellules par des principes actifs molécules ou produits finis à vocation santé pharmaceutiques, cosmétiques ou environnementales etc. ; ainsi que la capacité de 30 résistance, de tolérance ou de récupération des cellules 2849862 suite à un stress. Ledit dispositif permet avantageusement d'étudier simultanément les trois types de stress les plus couramment étudiés que sont les stress gazeux, les stress de type rayonnement (par irradiation) et les stress de 5 type thermique. Le dispositif selon l'invention peut aussi être qualifié de générateur de stress, c'est-à-dire d'appareil de mise en condition de stress. Par " au moins une cellule " on entend selon 10 l'invention tout microorganisme unicellulaire, tel qu'un virus, une bactérie ou un parasite, ainsi que tout organisme pluricellulaire, tel qu'un tissu cellulaire d'origine animale ou végétale. Par " essai " selon l'invention, on entend la mise en condition, par exemple 15 en température et/ou en pression et/ou en hygrométrie, éventuellement en présence d'un fluide, aussi bien que la génération de stress in vitro, laquelle génération peut être précédée, se poursuivre et/ou s'analyser en dehors du dispositif selon l'invention, par exemple par mise de ladite cellule dans un incubateur classique ou dans un appareil de mesure d'au moins un paramètre donné. Le dispositif selon l'invention est avantageusement et le plus souvent un appareil de mise en condition de 25 stress cellulaire. Ainsi, ledit dispositif est donc un équipement de préparation, à but principalement non analytique. L'impact du stress est généralement évalué par les techniques de l'art existant: tests de cytotoxicité (LDH, Glucose, XTT, MTT, RN, PAC, PAL, GSH, CVDE, SRB...), 30 de génotoxicité (AO/BET, comet, micronoyaux), moléculaires 6 2849862 (PCR quantitative, bio puces à ADNc...), protéomiques (ELISA, bio puces à protéines...etc. Le moyen de support selon l'invention est 5 généralement choisi dans le groupe formé par les microplaques à puits (6, 12, 24, 48, 96, 384 ou 1536 puits), telle que par exemple celle décrites dans la demande de brevet FR 01/11.923 de la demanderesse, les tubes à essais, les micro tubes à essais, les boîtes de 10 Pétri, les flacons ou les boîtes de culture par exemple de 12,5, 25, 75 et 125 cm2, éventuellement eux-mêmes supportés par au moins un support de type plateau. Selon l'invention, le milieu éventuel comprenant la 15 ou les cellules et supporté par ledit moyen de support est généralement, et le plus souvent, dans les conditions d'utilisation, sous forme liquide ou gel, et la ou les cellules baignent dans ledit milieu. Ledit milieu peut être suivi (c'est-à-dire mesuré dans sa structure et/ou 20 fonction et/ou nature) et éventuellement et de préférence régulé par au moins un paramètre par exemple choisi dans le groupe formé par le pH, la concentration de bicarbonate et le taux de dioxyde de carbone. De préférence, le pH est régulé à une valeur de 6,9 à 7,4, la concentration de bicarbonate est régulée à environ 24 mM dans le milieu de culture, et le taux du dioxyde de carbone est régulé à environ 5% en volume dans la phase gazeuse totale, ainsi qu'il est connu de l'homme du métier. Ledit milieu appelé milieu de culture comprend généralement au moins un 30 élément choisi dans le groupe formé par les sels 7 2849862 inorganiques, les acides aminés, les vitamines, les cofacteurs, les nucléosides, les ribonucléosides et le glucose. Selon l'invention, le milieu de culture peut également comprendre au moins un polluant, généralement liquide et/ou solide, apporté par exemple par pipette avant et/ou après l'utilisation du dispositif selon l'invention. Un tel polluant comprend par exemple un actif 10 moléculaire à l'égard duquel on veut tester la réaction des cellules, ou bien un produit fini à usage de santé et/ou cosmétique et/ou environnemental comme par exemple un insecticide ou un pesticide, dont on veut tester l'innocuité et/ou l'efficacité sur les cellules. Dans ce cas ledit polluant est bien apporté avant l'utilisation du dispositif selon l'invention. Mais un tel polluant peut aussi comporter un actif moléculaire à l'égard duquel on veut tester la réaction des cellules stressées, ou bien un produit fini à usage de santé et/ou cosmétique et/ou 20 environnemental dont on veut tester l'innocuité et/ou l'efficacité sur les cellules stressées. Dans ce cas ledit polluant est bien apporté après l'utilisation du dispositif selon l'invention. L'homme du métier adapte évidemment toute utilisation du dispositif selon 25 l'invention selon ses besoins et ses connaissances. Selon l'invention, on entend par " fluide " tout liquide et/ou gaz ou tout autre état intermédiaire, pouvant éventuellement contenir quelques particules 30 solides (par exemple la fumée de cigarette comprend 8 2849862 notamment du goudron sous forme de particules solides) Selon l'invention on entend par " chambre " tout moyen fermé de préférence étanche dans lequel est disposé au moins une cellule sur laquelle on peut effectuer au moins 5 un essai in vitro. Ainsi, et de préférence, la chambre du dispositif selon l'invention est étanche et hermétiquement close. Le dispositif selon l'invention comprend donc généralement et de préférence au moins un moyen d'isolation étanche de ladite chambre par rapport au 10 milieu extérieur à ladite chambre. Par " amovible " on entend-selon l'invention qui peut être déplacé(e) au moins temporairement d'une position qualifiée d'initiale et replacé(e) au moins temporairement sensiblement dans sa position initiale, et ce généralement à volonté. 15 Le fluide qui peut être admis dans la chambre comprend généralement au moins un gaz choisi dans le groupe formé par le dioxyde de carbone, l'air, la vapeur d'eau, l'oxygène et l'azote. De façon particulièrement 20 avantageuse selon l'invention, le fluide qui peut être admis dans la chambre comprend généralement au moins un gaz polluant, par exemple choisi dans le groupe formé par les gaz d'échappement, les fumées de cigarette et l'ozone. Plus généralement un tel gaz polluant peut être choisi 25 dans le groupe formé par les gaz d'échappement de véhicule à moteur tel l'oxyde nitrique et le monoxyde de carbone; les fumées de cigarette tels que la nicotine, le goudron, le monoxyde de carbone, les gouttelettes goudronnées, le polonium, le nickel, les hydrocarbures, l'acroléine, les 30 dérivés nitrés, les amines aromatiques, l'acide 9' 2849862 cyanhydrique, l'acide silique, l'acide carbonique, l'acide acétique, l'acide formique, l'acide benzoque, les phénols, l'acétone, acétaldéhydes, formaldéhyde, toluène, l'éthanal, l'ammoniac, le plomb, le méthanol, le sulfite 5 d'hydrogène, le chlorure de vinyle, le cadmium, l'arsenic, le mercure, le formol, les pesticides, les insecticides, le dioxyde de titane, le phosphore, la naphtalène, le chlorure de méthyle, l'acétonitrile, l'oxyde nitreux, et la pyridine; les gaz asphyxiants; les gaz corrosifs; 10 les gaz toxiques par inhalation tel que le sulfure d'hydrogène, le dioxyde de soufre, le trioxyde de soufre, la phosphine, le brome, le bromure d'hydrogène, le fluorure d'hydrogène, et le gaz de pétrole; les gaz très toxiques tels qu'ils sont qualifiés par la 15 réglementation; les gaz rares tel que défini par la nomenclature des éléments périodiques; et l'ozone. Une telle liste est bien sr donnée à titre indicatif et l'homme du métier pourra aisément à la lueur de ses connaissances la compléter. Ceci permet avantageusement 20 l'étude de stress gazeux par le dispositif selon l'invention. La température dans la chambre lors de l'utilisation du dispositif selon l'invention se situe 25 généralement de 20C environ à 50C environ, de préférence de la température ambiante (du milieu extérieur, typiquement environ 200C) à 500C environ, de façon encore plus préférée de 270C environ à 45'C environ. La température est ainsi, tel qu'il est connu de l'homme du 30 métier, généralement d'environ 370C pour les cellules 2849862 humaines, 340C pour les cellules sexuelles humaines, 270C pour les cellules d'insectes, et 220C pour les cellules de poissons. La pression dans la chambre lors de l'utilisation du dispositif selon l'invention est 5 généralement inférieure ou égale à 4 bars, soit 0,4 MPa. L'hygrométrie dans la chambre lors de l'utilisation du dispositif selon l'invention se situe généralement dans la fourchette de 50 à 99,999 % d'eau (en humidité relative), de préférence de 90 à 99,99 % d'eau (en humidité 10 relative). Le pH du milieu éventuel lors de l'utilisation du dispositif selon l'invention se situe généralement dans la fourchette de 6 à 8, de préférence de 6,8 à 7,4. Le milieu extérieur au dispositif lors de son 15 utilisation est conforme aux règles usuelles d'utilisation, en termes de matériel de laboratoire et d'appareillages industriels, ainsi qu'il est connu de l'homme du métier. Selon l'invention, la température dans la chambre est généralement et de préférence régulée par au moins un moyen de régulation de température comprenant au moins un moyen d'isolation thermique de la chambre du milieu extérieur et au moins un moyen de mesure de la 25 température, associé à au moins un moyen de réglage, qui est par exemple au moins un moyen de chauffage et/ou de refroidissement. Le moyen de mesure de la température est par exemple et typiquement une sonde de température. De façon traditionnelle ledit moyen d'isolation est le moyen 30 de chauffage et/ou de refroidissement, par exemple sous la I1* 2849862 forme d'une enceinte chauffante comprenant de l'eau que l'on peut chauffer par au moins un moyen de chauffage approprié par exemple constitué d'au moins une résistance chauffante présente dans l'eau, et que l'on peut refroidir 5 (et/ou' chauffer) par au moins un moyen approprié par exemple constitué d'au moins un moyen extérieur à ladite enceinte de circulation d'eau pouvant fournir l'eau de ladite enceinte à une température voulue. Le moyen de mesure de la température est par exemple et typiquement 10 une sonde de température. Avantageusement le dispositif selon l'invention permet donc l'étude de stress thermique. Selon l'invention, la pression dans la chambre peut être régulée par au moins un moyen de régulation de 15 pression. Par exemple la variation de mélange gazeux peut permettre, dans une certaine mesure, de réguler la pression dans la chambre. Selon l'invention, la teneur en oxygène dans la 20 chambre est généralement régulée par au moins un moyen de régulation d'oxygène comprenant au moins un moyen de mesure du taux d'oxygène, typiquement une sonde à oxygène, associé à au moins un moyen de réglage, typiquement au moins un moyen d'entrée en oxygène ou en azote. 25 Pour la régulation de l'oxygène, il est judicieux selon le dispositif de l'invention de disposer d' au moins trois entrées de fluide, à savoir, l'air, le dioxyde de carbone et l'oxygène ou l'azote, combinées par au moins un 30 moyen de mélange qui régule les conditions d'admission du 12 2849862 mélange dans la chambre. Ainsi, pour la mise en oeuvre de condition d'hyperoxie (cas d'un taux d'oxygène généralement supérieur à environ 21% en volume), le moyen de mélange qui est un mélangeur de gaz est associé à au 5 moins une bouteille d'air (apportant le environ 21% en volume), au moins une bouteille de dioxyde de carbone (généralement pour assurer un taux de dioxyde de carbone de 5% en volume) et au moins une bouteille d'oxygène pour apporter la quantité d'oxygène supplémentaire désirée. 10 Pour la mise en oeuvre de condition d'hypoxie (taux d'oxygène généralement inférieur à environ 21%), le mélangeur de gaz est associé à au moins une bouteille d'air (apportant le environ 21% en volume), au moins une bouteille de dioxyde de carbone (pour assurer un taux de 15 dioxyde de carbone de 5% en volume) et au moins une bouteille d'azote pour apporter une quantité d'azote supplémentaire qui fera diminuer de façon relative le taux d'oxygène, le tout étant avantageusement régulé au moyen d'au moins un moyen de mesure du taux d'oxygène, 20 typiquement une sonde à oxygène. De façon particulièrement avantageuse, la chambre du dispositif selon l'invention est de préférence de volume limité, par exemple de 3 à 6 litres. Mais tout 25 volume de la chambre depuis environ un millilitre jusqu'à environ une dizaine de litres est envisageable selon l'invention. Ceci permet avantageusement une mise en conditions, par exemple une mise en température ou une mise en conditions d'hypoxie ou d'hyperoxie, relativement 13' 2849862 rapide et nécessitant une faible quantité de gaz contrairement aux incubateurs classiques. Avantageusement, la chambre d'un tel dispositif est 5 démontée de façon relativement aisée et, en particulier, elle peut être nettoyée et/ou désinfectée voire dépolluée, par exemple et de façon préférée par passage dans un autoclave à haute température et haute pression ainsi qu'il est connu de l'homme du métier, de façon à ôter, de 10 façon pratiquement totale (voir ci-après) toute source éventuelle de contamination et/ou toute trace éventuelle de produit dans ladite chambre. Ledit dispositif est donc aisément réutilisable de nombreuses fois dans des conditions de pureté excellentes. C'est un des nombreux 15 avantages de l'invention, qui permet une excellente reproductibilité des essais in vitro effectués dans ledit dispositif. Dans un mode de réalisation préféré, ledit 20 dispositif comprend au moins deux chambres, de préférence de deux à cinq, voire une pluralité (soit au moins trois), typiquement dans le cas d'utilisation de gaz polluant, de chambres selon l'invention accueillant les cellules, dont une seule chambre est utilisable à la fois au sein du 25 dispositif selon l'invention. Il est possible dans le cadre de l'invention de disposer lesdites chambres dans un incubateur classique de grand capacité durant les périodes de culture avant et après le stress généré par le dispositif selon l'invention. La chambre amovible du 30 dispositif selon l'invention permet de maintenir une 14 2849862 chaîne de température par exemple d'environ 370C durant le transfert des microplaques éventuellement contenues dans ladite chambre depuis l'incubateur classique vers le dispositif selon l'invention. Ceci évite un choc thermique 5 et permet avantageusement de gagner en sécurité et en reproductibilité. Ainsi, le dispositif selon l'intention vient avantageusement opérer en complément d'au moins un incubateur classique. Un tel incubateur classique permet typiquement, ainsi qu'il est expliqué dans la description 10 de l'art antérieur, un paramétrage thermique et gazeux (au moins un gaz choisi dans le groupe formé par l'air, la vapeur d'eau, l'oxygène, l'azote et le dioxyde de carbone). La présence d'au moins deux chambres permet avantageusement d'augmenter le rendement du dispositif selon l'invention. En effet, pendant l'utilisation ou le nettoyage et/ou la désinfection voire la décontamination d'une chambre, le dispositif peut fonctionner avec une 20 autre chambre. De plus, cela permet de façon particulièrement avantageuse selon l'invention d'éviter pratiquement totalement toute contamination croisée, car une chambre donnée est associée à un type de fluide donné, par exemple comprenant un gaz polluant, ou pour un type 25 d'expérience donné. Ceci est particulièrement intéressant dans le cas de la présence de microorganismes tel que le prion, ou des bactéries thermorésistantes, ou de gaz polluant(s) tel que par exemple l'ozone, les fumées de cigarette ou les gaz d'échappement, tels qu'explicités 30 précédemment, car malgré un autoclavage à haute 2849862 température et à haute pression, ces composés sont extrêmement difficiles à éliminer pratiquement totalement. Le dispositif selon l'invention peut aussi 5 comprendre au moins un moyen supplémentaire de nettoyage et/ou de désinfection et/ou de décontamination in situ, en particulier dans le cas o au moins un moyen d'entrée de fluide doit servir pour un autre fluide dans une utilisation ultérieure. Selon une variante il et possible 10 qu'une partie au moins dudit moyen d'entrée soit jetable et interchangeable, et que une autre partie dudit moyen soit nettoyée et/ou désinfectée et/ou décontaminée en même temps que la chambre. Dans un mode de réalisation préféré, le dispositif selon l'invention peut aussi comprendre au moins un moyen d'entrée de fluide, par fluide susceptible d'être utilisé dans le dispositif selon l'invention. Un tel moyen d'entrée comprend généralement et de façon préférée au 20 moins un moyen de régulation, par exemple sous la forme d'une vanne pointeau (ou tout autre dispositif connu de robinet pour gaz), du débit d'entrée dudit fluide. Dans un mode de réalisation, indépendant ou non du 25 mode de réalisation précédent, le dispositif selon l'invention peut aussi comprendre au moins un moyen de sortie de fluide, par fluide susceptible d'être utilisé dans le dispositif selon l'invention. 16 2849862 De préférence, le dispositif selon l'invention comprend en outre au moins un moyen supplémentaire de nettoyage et/ou de désinfection et/ou de décontamination in situ par fluide susceptible d'être utilisé dans le 5 dispositif selon l'invention, pour le moyen d'entrée et/ou de sortie dudit fluide. Selon une variante il est possible qu'une partie au moins dudit moyen d'entrée et/ou de sortie soit jetable et interchangeable, et que une autre partie dudit moyen soit nettoyée et/ou désinfectée et/ou 10 décontaminée en même temps que la chambre. Selon l'invention, il est possible et préféré que les différents moyens d'entrée éventuellement présents dans le dispositif selon l'invention soient combinés 15 ensemble en un moyen de mélange lui-même combiné à un moyen d'entrée unique de façon à ce que uniquement un moyen d'entrée de mélange soit relié à la chambre. Un tel moyen d'entrée de mélange comprend généralement et de façon préférée au moins un moyen de régulation, par 20 exemple sous la forme d'une électrovanne (ou tout autre dispositif connu de robinet tout ou rien ou débitmètre à commande électronique), du débit d'entrée dudit mélange. Un tel moyen de régulation est avantageusement tel qu'il permet généralement l'entrée dudit mélange dans la chambre 25 sous la forme de cycles d'injection et de non injection, dont le nombre, le débit et la durée peuvent être préalablement programmés. Selon l'invention, les différents moyens de sortie 30 éventuellement présents dans le dispositif selon 17 2849862 l'invention sont généralement et de préférence combinés ensemble en un moyen de mélange lui-même combiné à uniquement un moyen de sortie de mélange de façon à ce que seulement un moyen de sortie de mélange soit relié à la 5 chambre. Eventuellement, et en particulier dans le cas d'une régulation de pression dans la chambre, ledit moyen de sortie peut être régulé par au moins un moyen de régulation telle qu'une soupape ou une électrovanne telle que décrite précédemment. D'autre part il est possible 10 selon l'invention de récupérer le fluide de sortie du dispositif selon l'invention puis de l'injecter dans un second dispositif selon l'invention; ceci peut être par exemple le cas lors de l'évaluation de l'activité d'une bactérie dépolluante. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré du dispositif de l'invention, un seul moyen de sortie est présent et directement relié à la chambre. Selon l'invention, le ou les moyens de sortie de fluide sont associés à au moins un moyen de récupération et/ou au moins un moyen d'évacuation vers l'extérieur. Bien entendu de tels moyens se doivent de respecter toutes les normes, en particulier sanitaires, en vigueur. 25 Selon l'invention, tout moyen d'entrée ou de sortie de fluide, y compris le moyen d'entrée de mélange évoqué ci-dessus, du dispositif selon l'invention comprend généralement et de préférence au moins un moyen de 30 filtration de façon à diminuer et si possible éviter toute 18 2849862 contamination éventuelle de la chambre par le fluide lors de l'utilisation dudit dispositif. Par exemple un tel moyen de filtration est une membrane de filtration. Le dispositif selon l'invention comprend aussi au moins un moyen d'alimentation de ladite chambre en vapeur d'eau. L'eau qui est utilisée est de préférence de l'eau désionisée ou distillée. Par exemple ledit dispositif comprend généralement au moins un moyen de stockage d'eau, 10 par exemple situé au sein de la chambre, de* façon à maintenir un degré d'humidité suffisant au sein de ladite chambre lors de l'utilisation du dispositif selon l'invention. Cela est particulièrement avantageux dans le cas de l'utilisation de milieu de culture de cellule, car 15 ce milieu a généralement tendance à s'évaporer au cours du temps par évaporation de l'eau qu'il peut contenir. Ainsi l'hygrométrie est généralement quasiment stable au sein de la chambre lors de l'utilisation du dispositif, ce qui empêche pratiquement totalement le dessèchement du milieu 20 de culture éventuel. Cette quasi-absence de dessèchement préserve donc avantageusement son osmolarité (c'est-à-dire la concentration en sels inorganique dudit milieu, qui est typiquement de 280 à 300 mOsm/kg pour un milieu de culture cellulaire animale). Vue l'importance que peut revêtir cette teneur en eau, le dispositif selon l'invention comprend généralement au moins un moyen de mesure de la teneur en eau dans ladite chambre, par exemple une sonde d'humidité. 30 19 2849862 Selon un mode de réalisation du dispositif selon l'invention, ledit dispositif comprend en outre au moins un moyen d'irradiation d'au moins une partie de la chambre aux photons et aux UV, individuellement ou simultanément. 5 Ledit moyen d'irradiation peut être un moyen d'accès à l'irradiation par la lumière extérieure, ainsi qu'il sera explicité ciaprès. Mais il peut aussi comprendre au moins un moyen d'irradiationsupplémentaire et extérieur à la chambre qui est apporté éventuellement en complément du 10 dispositif selon l'invention. Un tel moyen supplémentaire irradie généralement au moins une partie du spectre lumineux tel que visible, UV, IR, et est par exemple choisi dans le groupe formé par les sources de lumière UV, IR, visible et les laser. Par exemple, pour une irradiation par la lumière extérieure, ladite chambre est de forme sensiblement parallélépipédique et comprend divers tiroirs amovibles comprenant chacun au moins un moyen de support qui est par 20 exemple une microplaque à puits, par exemple à 6, 12, 24, 96, 384, 1536 ou 3072 puits, de préférence à 96 puits, lesdits tiroirs étant superposés les uns aux autres. Alors, selon cet exemple, la partie supérieure de la chambre comprend un cache typiquement sous la forme d'une 25 plaque amovible qui permet en position fermée de maintenir l'obscurité à l'intérieur de l'enceinte, ledit cache couvrant une vitre perméable (en verre pour la lumière visible ou, interchangeable, en quartz pour les UV) aux photons (utilisation possible de filtre passe haut, passe 30 bas, passe bande, passe block ou encore d'un miroir 20' 2849862 dichroque pour obtenir un spectre ou une longueur d'onde spécifique) et aux UV (UVa et/ou UVb et/ou UVc), typiquement sous la forme d'une plaque, qui constitue ledit moyen d'irradiation. Dans ce cas, le tiroir 5 supérieur constitue alors généralement ladite partie de la chambre qui est susceptible d'être irradiée. Bien entendu une telle vitre est généralement équipée d'au moins un moyen d'isolation étanche, par exemple une telle vitre est entourée d'au moins un joint de type silicone. De façon 10 encore plus préférée, ladite vitre est équipée d'au moins un moyen de chauffage de préférence autorégulé à la même température que la chambre. Un tel moyen de chauffage permet avantageusement d'éviter, lors de l'utilisation du dispositif selon l'invention, une condensation sur la face 15 de la vitre intérieure à la chambre. L'invention concerne aussi un procédé de réalisation d'au moins un essai in vitro, dans lequel on place au moins une cellule sur au moins un moyen de 20 support, ledit moyen de support étant placé au sein d'au moins une chambre, ladite cellule étant soumise à au moins un paramètre choisi dans le groupe formé par la température, la pression, l'hygrométrie et éventuellement au moins un autre paramètre éventuel d'un milieu éventuel 25 comprenant la cellule, et à au moins un fluide comprenant généralement au moins un gaz choisi dans le groupe formé par le dioxyde de carbone, l'air, la vapeur d'eau, l'oxygène et l'azote, et au moins un gaz polluant choisi tel que décrit précédemment. 21 2849862 Dans un mode de réalisation préféré, ledit fluide comprend au moins un gaz polluant choisi tel que décrit précédemment. De préférence, ledit procédé est tel que, avant et/ou après la réalisation d'essai, la cellule est soumise à au moins un paramètre choisi dans le groupe formé par la température, la pression, l'hygrométrie et éventuellement au moins un autre paramètre éventuel d'un milieu éventuel 10 comprenant la cellule, et à au moins un fluide comprenant généralement au moins un gaz choisi dans le groupe formé par le dioxyde de carbone, l'air, la vapeur d'eau, l'oxygène et l'azote. Dans un mode de réalisation du procédé selon l'invention, ledit procédé comprend toute analyse de paramètre tel que, avant et/ou après la réalisation de l'essai, la cellule est soumise à au moins une analyse d'au moins un paramètre. De façon particulièrement préférée selon l'invention, ledit procédé comprend l'utilisation du dispositif selon l'invention. L'invention concerne aussi le procédé tel que décrit précédemment comprenant au moins une culture cellulaire. Une telle culture dure généralement de 24 à 96 heures. En particulier et de façon préférée, un tel procédé comprend au moins une étude de stress cellulaire. 30 Un stress cellulaire est généralement effectué sur une 22 2849862 courte période de 0 à 180 minutes, mais peut selon les besoins de l'expérimentateur se dérouler plus longtemps, sur près de 96 heures par exemple. Par cellulaire on entend qui s'applique à au moins une cellule, les cellules 5 se présentant généralement et le plus souvent sous la forme d'un organisme monocellulaire ou pluricellulaire. De façon particulièrement préférée selon l'invention, le procédé selon l'invention comprend au moins une culture cellulaire et/ou au moins une étude de stress cellulaire 10 en présence d'au moins un gaz polluant, généralement choisi dans le groupe formé par les gaz d'échappement, l'ozone, et les fumées de cigarette, et/ou au moins une étude curative ou préventive d'un stress de polluant liquide et/ou solide de santé et/ou cosmétologique à but 15 pharmaceutique et/ou cosmétologique. En effet une étude de stress peut permettre l'évaluation de la tolérance de la résistance et de la récupération d'un organisme. Un tel procédé selon l'invention comprend, de façon quasiment reproductible toutes choses égales par ailleurs, au moins une des opérations suivantes, sur au moins une cellule: * Evaluation de l'efficacité de produits anti-cancéreux * Etude en radiothérapie * Evaluation de la photo toxicité et de la photo protection de produit cosmétique * Evaluation de produit dermocosmétique contre la 30 pollution 23' 2849862 * Evaluation de la tolérance et/ou de la résistance et/ou de la récupération à un gaz polluant et/ou à un stress cellulaire * Evaluation de la génotoxicité, de la carcinogenèse ou 5 de la mutagenèse d'origine gazeuse, liquide ou solide * Evaluation de la cytotoxicité de gaz voire de mélanges gazeux et de gaz polluant(s) * Evaluation de la toxicité et/ou de l'efficacité d'insecticide et/ou de pesticide * Etude de choc thermique (typiquement par passage d'une valeur de température de consigne- par exemple de 370C - à une valeur de température supérieure, stable et homogène, par exemple de 42 ou 450C) * Etude d'hypoxie, hyperoxie ou anoxie 15 * Etude du vieillissement * Etude d'ischémie et/ou de reperfusion (typiquement dans le cas de graves atteintes cérébrales et/ou cardiaques), * Etude fondamentale. Bien entendu, toutes les analyses liées aux études mentionnées ci-dessus se font à l'aide de tests connus. L'invention sera mieux comprise et d'autres 25 caractéristiques et avantages apparaîtront à la lecture de la description qui va suivre, donnée à titre non limitatif, par référence aux figures 1 à 5. 24 2849862 La figure 1 représente de façon schématique en perspective un dispositif selon l'invention comprenant une chambre parallélépipédique à trois tiroirs superposés. La figure 2 représente de façon schématique en perspective ladite chambre du dispositif selon l'invention de la figure 1. La figure 3 représente de façon schématique en 10 perspective ladite chambre de la figure 2, un des tiroirs étant ouvert. La figure 4 représente de façon schématique en perspective ladite chambre de la figure 2, un des tiroirs 15 étant ouvert et son fond (plateau) étant ôté. La figure 5 représente de façon schématique en perspective ladite chambre de la figure 2, le dessus de la chambre étant ôté. Des numéros identiques sur différentes figures indiquent des objets semblables. La figure 1 représente de façon schématique en 25 perspective un dispositif 1 selon l'invention comprenant une chambre 2 à trois tiroirs 3, 4 et 5 superposés, le tiroir 3 étant situé en position supérieure, le tiroir 4 étant situé en position intermédiaire et le tiroir 5 étant situé en position inférieure. Un cache 6 recouvre la 30 chambre 2, ce cache 6 étant amovible. Le cache 6 permet de 2849862 faire l'obscurité dans la chambre, il peut se rabattre sur une face du dispositif 1 par pivotement le long de charnières représentées par l'axe XX'. La chambre 2 peut s' enlever par glissement vers le haut (glissières non représentées) une fois le cache 6 rabattu. Le dispositif 1 comprend une première partie comprenant ladite chambre 2, le cache 6 et une enceinte 10 constituée d'une jaquette à eau 10 permettant un échange 10 de chaleur sur trois faces de la chambre 2. La chambre 2 peut par exemple être réalisée pour le fond et les côtés en cuivre à parois lisses, favorisant ainsi l'échange de chaleur avec la jaquette à eau 10. Les faces avant et arrière de la chambre 2 sont par exemple réalisées en 15 polypropylène. La chambre 2 peut comporter en face arrière un support de sonde (non représenté), par exemple pour trois sondes d'oxygène, de température et d'humidité, fixé par exemple par vissage sur le fond de la chambre 2. La partie supérieure de la chambre 2 est une vitre chauffante 20 18, qui sera explicitée sur la figure 5. Elle comprend une partie vitrée 18b entourée d'un joint 18a par exemple en silicone. La vitre 18 est en fait formée de deux plaques superposées entre lesquelles se situe une résistance chauffante, sous la forme d'un film microscopique, 25 autorégulée à la même température que (l'atmosphère de) la chambre. La jaquette à eau 10 comprend un orifice lOa de remplissage et un orifice lOb de vidange. 30 26 2849862 Chaque tiroir respectif 3, 4 et 5 de la chambre 2 est réalisé par exemple en acier inoxydable et en propylène. L'étanchéité est assurée pour chaque tiroir 3, 4 et 5, par l'utilisation de deux loquets de verrouillage 5 qui peuvent être deux vis respectivement 3a et 3b, 4a et 4b, 5a et 5b, et d'un joint d'étanchéité en silicone, respectivement 3d, 4d et 5d. Une poignée, respectivement 3c, 4c et 5c, facilite l'ouverture du tiroir respectif 3, 4 et 5. Chaque tiroir 3, 4 et 5 possède un plateau amovible par exemple en acier inoxydable. Seul un plateau 17 du tiroir 4 est représenté sur la figure 4 détaché du support 16 qui constitue le socle du tiroir 4 et qui s'emboîte dans deux glissières (non représentées) de la chambre 2. Le plateau 17 peut supporter tout moyen de 15 support tel que défini précédemment; par extension on considère que le plateau 17 fait partie dudit moyen de support. Le dispositif 1 comprend une deuxième partie 20 constituée d'un compartiment fluide 7 comprenant un mélangeur 9 de gaz. Un indicateur 11 de passage de gaz est situé dans ce compartiment fluide 7. De plus trois indicateurs de niveau de gaz 9a, 9b et 9c sont présents, que l'on peut réguler par les vannes pointeau respectives 25 8a, 8b et 8c. Par exemple, dans le cas d'une utilisation avec un gaz polluant, tout ce qui est indexé par " a " concerne l'air, tout ce qui est indexé par " b " concerne le dioxyde de carbone et tout ce qui est indexé par " c " correspond au gaz polluant. 27 2849862 Le dispositif 1 comprend une troisième partie 7 constituée d'un compartiment électrique 12 comprenant une partie de commande 13 comprenant un clavier 13a et un écran de contrôle 13b. La figure 2 représente de façon schématique en perspective ladite chambre 2 du dispositif 1 selon l'invention de la figure 1. En plus des trois tiroirs 3, 4 et 5, chacun en position fermée, on distingue un 10 dispositif de verrouillage de la vitre chauffante 18, constitué d'un cadre métallique rigide 15, par exemple en acier inoxydable, et de quatre boulons 14a, 14b, 14c et 14d qui permettent de serrer le cadre 15 sur la vitre 18 et d'assurer ainsi l'étanchéité de la face supérieure de 15 la chambre 2. La figure 3 représente de façon schématique en perspective ladite chambre de la figure 2, un des tiroirs 4 étant ouvert. Comme indiqué à la figure 1, le plateau 17 20 du tiroir 4 est représenté sur la figure 4 détaché du support 16 qui constitue le socle du tiroir 4 et qui s'emboîte dans deux glissières (non représentées) de la chambre 2. La figure 4 représente de façon schématique en perspective, ladite chambre 2 de la figure 2, un des tiroirs 4 étant ouvert et le plateau 17 étant ôté. Le point de vue de la figure 4 est légèrement différent du point de vue en perspective des autres figures 1,2, 3 et 30 5. 28 2849862 La figure 5 représente de façon schématique en perspective ladite chambre 2, le dessus de la chambre 2 étant ôté. On y distingue les tiges filetées respectives 5 14e, 14f et 14g, de la chambre 2, destinées à recevoir respectivement les boulons 14a, 14b et 14c (la tige filetée destinée à recevoir le boulon 14d n'étant pas visible) . On y distingue de plus les éléments distinctifs de la vitre chauffante 18, qui sont la partie vitrée 18b 10 et le joint 18a. L'exemple suivant sert à illustrer l'invention sans pour autant limiter la portée. Exemple Mise en oeuvre d'un dispositif selon l'invention pour l'évaluation de la tolérance, récupération et résistance de kératinocytes humains soumis à une asphyxie et un choc thermique. Dans cet exemple on utilise un dispositif générateur de stress selon l'invention, à trois tiroirs tel que le dispositif 1 illustré sur les figures 1 à 5. La chambre a une capacité totale de quatre litres. Le dispositif comprend une sonde à oxygène, une sonde 25 d'humidité et une sonde de température. Les % de gaz sont donnés en volume. Des kératinocytes humains sont ensemencés à la densité de 20.000 cellules par puits dans 200 pl de milieu 30 de culture défini pour kératinocytes tel que connu de 29 2849862 l'homme du métier dans les 60 puits centraux de neuf microplaques 96 puits. Les puits périphériques des microplaques sont remplis par de l'eau stérile afin de constituer une barrière d'hygrométrie. Trois microplaques 5 sont placées par tiroir dans la chambre d'incubation constituée elle-même de trois tiroirs. Ladite chambre a été préalablement préchauffée à 370C à l'aide du dispositif générateur de stress selon l'invention. Il est aussi possible d'effectuer ce préchauffage à l'aide d'un 10 incubateur classique. La chambre est ensuite positionnée dans un incubateur classique de grande capacité à 370C sous 5% de C02 et 99% d'hygrométrie. Vingt-quatre heures après l'ensemencement, les 15 kératinocytes sont mis en contact avec un principe actif, ou bien un produit à vocation cosmétique solubilisé et dilué dans du milieu de culture défini pour kératinocytes, à différentes doses de traitement. On utilise classiquement huit doses d'un produit répétées six fois 20 par microplaques, six autres puits étant réservés au contrôle positif, c'est- à-dire aux cellules sans traitement, et les six derniers puits étant réservés au contrôle solvant. Le solvant utilisé est typiquement de l'éthanol ou du DMSO (DiMéthyl SulfOxyde) qui permet de 25 solubiliser les principes actifs non hydrosolubles. Chaque gamme de dilution est répétée sur trois microplaques. Il est ainsi possible selon l'invention de tester de façon reproductible trois produits différents en neufs microplaques dans une même chambre d'incubation. 30 30' 2849862 Vingt-quatre heures après le traitement des cellules, le dispositif générateur de stress selon l'invention est préchauffé à la température de 37 C. La chambre d'incubation comportant les microplaques de 5 kératinocytes traités est sortie de l'incubateur pour être positionnée dans le dispositif générateur de stress programmé pour une montée en température progressive à 430C en quinze minutes, générant ainsi le stress thermique. Afin de soumettre les kératinocytes pendant 10 quinze minutes à une atmosphère contrôlée sous 5% de dioxyde de carbone, 45 % de monoxyde de carbone et 50 % d'air (génération de stress par le gaz asphyxiant qu'est le monoxyde de carbone), il est nécessaire de connecter sur trois entrées séparées une bouteille de dioxyde de 15 carbone, une bouteille de monoxyde de carbone et une bouteille d'air. Le débit d'injection d'air est réglé sur 250 ml/ min, le débit de dioxyde de carbone est réglé sur 25 ml/ min et le débit de monoxyde de carbone est réglé sur 225 ml/ min à l'aide leur vanne pointeau respective. 20 Afin de remplacer l'atmosphère naturelle à l'intérieur de la chambre, la sortie de gaz est en position ouverte pendant la période d'injection du mélange gazeux. Le gaz sortant de la chambre est récolté puis stocké dans une bouteille prévue à cet effet. Le renouvellement total des 25 quatre litres de volume de la chambre est effectué en deux à trois minutes. Une fois que le taux d'oxygène mesuré à l'aide de la sonde à l'intérieur de la chambre est stable à 10,5%, le mélange gazeux a totalement remplacé l'atmosphère naturelle. La sortie et l'entrée des gaz sont 30 alors fermées. Après 15 minutes de ce stress gazeux, un 31 2849862 mélange de 5% de dioxyde de carbone (débit réglé sur 25 ml/ min) et 95% d'air (débit réglé sur 475 ml/ min) est injecté dans la chambre pendant deux à trois minutes afin de renouveler totalement l'atmosphère de ladite chambre, 5 autrement dit jusqu'à mesurer un taux de 21% d'oxygène dans la chambre. Le mélange gazeux contenant le gaz asphyxiant est récolté en sortie et stocké dans une bouteille prévue à cet effet. De façon complémentaire, les cellules peuvent soumises sous une atmosphère de 95 % d'air et 5% de dioxyde de carbone uniquement au choc thermique ou sous une température de 370C (température normale pour des kératinocytes) uniquement à l'asphyxie de manière à 15 distinguer les effets dus aux stress pris séparément et aux stress cumulés. Facultativement, une fois l'atmosphère normale rétablie, les kératinocytes peuvent être mis en période de 20 récupération dite période de post incubation, par le transfert de la chambre comportant les microplaques depuis le dispositif générateur de stress selon l'invention vers un incubateur classique à 370C, sous 5% de dioxyde de carbone et 99% d'hygrométrie. L'activité respiratoire des kératinocytes est ensuite mesurée par exemple par le test calorimétrique au MTT. Dans un même contexte, il possible d'évaluer le profil d'expression des gènes des kératinocytes de façon 30 qualitative et quantitative par biopuces à ADNc. 32 2849862 L'évaluation par MTT ou par biopuces peut être effectuée à O minute, 15 minutes, 30 minutes, 1 heure, 24 heures etc. après la période de stress. Ce plan d'expérience permet d'évaluer la tolérance, la récupération voire la 5 résistance de kératinocytes à l'asphyxie et au choc thermique, en fonction de leur état physiologique naturel ou du traitement. Les différents traitements pourront ainsi être classés selon leur efficacité. 33. 2849862 REVENDICATIONS 1. Dispositif (1) de culture de cellule pour 5 effectuer au moins un essai in vitro, ledit dispositif (1) comprenant au moins une chambre (2) dans laquelle se trouve au moins un moyen de support (17), et ledit dispositif (1) comprenant au moins un moyen de régulation d'au moins un paramètre de fonctionnement de ladite 10 chambre (2) lors de l'utilisation en essai in vitro dudit dispositif (1), ledit paramètre étant choisi dans le groupe formé par la température, la pression, l'hygrométrie et éventuellement au moins un autre paramètre éventuel d'un milieu éventuel comprenant la 15 cellule supporté par ledit moyen de support (17), ledit dispositif (1) comprenant en outre au moins un moyen d'entrée dans la chambre (2) d'au moins un fluide et au moins un moyen de sortie de la chambre d'au moins un fluide, ledit dispositif (1) étant caractérisé en ce que 20 ladite chambre (2) est amovible. 2. Dispositif (1) selon la revendication 1 tel que le moyen de support (17) selon l'invention est généralement choisi dans le groupe formé par les 25 microplaques à puits, les tubes à essais, les micro tubes à essais, les boîtes de Pétri, les flacons ou les boîtes de culture, éventuellement eux-mêmes supportés par au moins un support de type plateau. 34 2849862 3. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 ou 2 tel que le milieu éventuel comprenant la ou les cellules et supporté par ledit moyen de support (17) est, dans les conditions d'utilisation, sous forme liquide ou gel, et la ou les cellules baignent dans ledit milieu. 4. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 3 tel que le milieu éventuel, comprenant la ou les cellules et supporté par ledit moyen de support (17) 10 comprend également au moins un polluant, liquide et/ou solide, apporté avant et/ou après l'utilisation du dispositif (1). 5. Dispositif (1) -selon l'une des revendications 1 15 à 4 comprenant au moins un moyen d'isolation (10, 18a, 3a, 3c, 3d, 4a, 4c, 4d, 5a, 5c, 5d) étanche de ladite chambre (2) par rapport au milieu extérieur à ladite chambre (2). 6. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 20 à 5 tel que le fluide qui peut être admis dans la chambre (2) comprend généralement au moins un gaz choisi dans le groupe formé par le dioxyde de carbone, l'air, la vapeur d'eau, l'oxygène et l'azote. 7. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 6 tel que le fluide qui peut être admis dans la chambre (2) comprend généralement au moins un gaz polluant choisi dans le groupe formé par les gaz d'échappement, les fumées de cigarette, les gaz asphyxiants, les gaz corrosifs, les 2849862 gaz toxiques par inhalation, les gaz très toxiques, les gaz rares et l'ozone. 8. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 5 à 7 tel que la température dans la chambre (2) est régulée par au moins un moyen de régulation (10, 18a, 3a, 3c, 3d, 4a, 4c, 4d, 5a, 5c, 5d) de température comprenant au moins un moyen d'isolation thermique (10, 18a, 3a, 3c, 3d, 4a, 4c, 4d, 5a, 5c, 5d) de la chambre (2) du milieu extérieur 10 et au moins un moyen de mesure de la température, associé à au moins un moyen de réglage (10). 9. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 8 tel que la teneur en oxygène dans la chambre (2) est 15 généralement régulée par au moins un moyen de régulation d'oxygène comprenant au moins un moyen de mesure du taux d'oxygène associé à au moins un moyen de réglage. 10. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 20 à 9 comprenant au moins deux chambres (2), dont une seule (2) est utilisable à la fois au sein dudit dispositif (1). 11. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 10 tel que le volume de ladite chambre (2) est de un 25 millilitre jusqu'à une dizaine de litres. 12. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 11 comprenant au moins un moyen d'entrée de fluide, par fluide susceptible d'être utilisé dans ledit dispositif 30 (1). 36 2849862 13. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 12 comprenant au moins un moyen de sortie de fluide, par fluide susceptible d'être utilisé dans ledit dispositif (1). 14. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 13 tel que les différents moyens d'entrée éventuellement présents dans le dispositif (1) sont combinés ensemble en un moyen de mélange lui-même combiné à un moyen d'entrée unique de façon à ce que uniquement un moyen d'entrée de mélange soit relié à la chambre (2). 15. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 * 15 à 14 tel qu'un seul moyen de sortie est présent et directement relié à la chambre (2). 16. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 15 comprenant au moins un moyen d'alimentation de ladite chambre (2) en vapeur d'eau. 17. Dispositif (1) selon la revendication 16 comprenant au moins un moyen de stockage d'eau. 18. Dispositif (1) selon l'une des revendications 1 à 17 comprenant au moins un moyen d'irradiation d'au moins une partie de la chambre (2) aux photons et aux UV. 19. Procédé de réalisation d'au moins un essai in vitro, dans lequel on place au moins une cellule sur au moins un moyen de support, ledit moyen de support étant placé au sein d'au moins une chambre (2), ladite cellule étant soumise à au moins un paramètre choisi dans le groupe formé par la température, la pression, 5 l'hygrométrie et éventuellement au moins un autre paramètre éventuel d'un milieu éventuel comprenant la cellule, et à au moins un fluide comprenant généralement au moins un gaz choisi dans le groupe formé par le dioxyde de carbone, l'air, la vapeur d'eau, l'oxygène et l'azote, 10 et au moins un gaz polluant choisi dans le groupe formé par les gaz d'échappement, les fumées de cigarette, les gaz asphyxiants, les gaz corrosifs, les gaz toxiques par inhalation, les gaz très toxiques, les gaz rares et l'ozone, ledit procédé comprenant l'utilisation du 15 dispositif selon l'une des revendications 1 à 18. 20. Procédé selon la revendication 19 tel que, avant et/ou après la réalisation d'essai, la cellule est soumise à au moins un paramètre choisi dans le groupe 20 formé par la température, la pression, l'hygrométrie et éventuellement au moins un autre paramètre éventuel d'un milieu éventuel comprenant la cellule, et à au moins un fluide comprenant généralement au moins un gaz choisi dans le groupe formé par le dioxyde de carbone, l'air, la 25 vapeur d'eau, l'oxygène et l'azote. 21. Procédé selon l'une des revendications 19 ou 20 tel que, avant et/ou après la réalisation de l'essai, la cellule est soumise à au moins une analyse d'au moins un 30 paramètre. -8 2849862 >38 22. Procédé selon l'une des revendications 19 à 21 comprenant au moins une culture cellulaire. 23. Procédé selon l'une des revendications 19 à 21 comprenant au moins une étude de stress cellulaire. 24. Procédé selon l'une des revendications 19 à 21 comprenant au moins une culture cellulaire et/ou au moins 10 une étude de stress cellulaire en présence d'au moins un gaz polluant, généralement choisi dans le groupe formé par les gaz d'échappement, l'ozone, et les fumées de cigarette, et/ou au moins une étude curative ou préventive d'un stress de polluant liquide et/ou solide de 15 santé et/ou cosmétologique à but pharmaceutique et/ou cosmétologique et/ou environnemental. 25. Procédé selon l'une des revendications 19 à 21 comprenant au moins une des opérations suivantes, sur au 20 moins une cellule: * Evaluation de l'efficacité de produits anti-cancéreux * Etude en radiothérapie * Evaluation de la photo toxicité et de la photo protection de produit cosmétique * Evaluation de produit dermocosmétique contre la pollution * Evaluation de la tolérance et/ou de la résistance et/ou de la récupération à un gaz polluant et/ou à un stress cellulaire 39 2849862 * Evaluation de la génotoxicité, de la carcinogenèse ou de la mutagenèse d'origine gazeuse, liquide ou solide * Evaluation de la cytotoxicité de gaz voire de mélanges gazeux et de gaz polluant(s) * Evaluation de la toxicité et/ou de l'efficacité d'insecticide et/ou de pesticide * Etude de choc thermique * Etude d'hypoxie, hyperoxie ou anoxie * Etude du vieillissement * Etude d'ischémie et/ou de reperfusion * Etude fondamentale.