Brevet FR2849054A1 — publié le 20040625

L'invention concerne un récipient destiné à la culture de cellules, un système comprenant au moins deux éléments reliés entre eux en circuit clos au moyen d'une tubulure, dont un tel récipient, ainsi que l'utilisation d'un tel récipient, ou d'un tel système, pour la culture de cellules. Le récipient selon l'invention est tout particulièrement destiné à la culture de cellules par adhérence à la surface intérieure du récipient Bien entendu, le récipient peut également servir à la culture de cellules en suspension dans un milieu contenu dans le récipient. L'avènement des cultures in vitro de cellules directement transplantables chez l'homme est à l'origine du développement de différents types de récipients pour le conditionnement desdites cultures Utilisés dans un cadre médical, pour la préparation de produits de thérapie cellulaire et génique, ces récipients doivent 15 présenter des garanties en matière de confinement des cellules et de prévention des risques de contamination et des erreurs techniques de manipulation Lesdits récipients se doivent donc de respecter les règles strictes de bonne pratique des produits transfusables pour le conditionnement clos et le transfert des cellules. De fait, I'utilisation de poches souples s'est accrue pour cultiver des cellules exploitées en thérapeutique humaine, notamment dans le cadre du développement des protocoles cliniques d'expansion ex vivo des cellules souches hématopoétiques issues de prélèvement de moelle osseuse, de sang périphérique et de sang de cordon. Les poches souples respectent les règles de bonnes pratiques précitées, cependant, elles présentent des inconvénients pour la culture de cellules. Tout d'abord, la souplesse de ces poches ne permet pas de les empiler 30 convenablement au sein d'un incubateur. Ensuite, la flexibilité d'une poche définit une surface de culture flexible et par conséquent déformable en fonction du remplissage et des manipulations Cette déformabilité engendre des zones de sédimentation et une répartition hétérogène des cellules sur la surface de culture disponible. En outre, la surface de culture disponible est limitée par la taille de la poche. 5 Pour satisfaire certaines applications nécessitant de grandes surfaces de culture, I'augmentation de la taille d'une poche ou la multiplicité de poches de petite taille accroît considérablement les difficultés de manipulation. Enfin, les matériaux perméables aux gaz conventionnellement utilisés pour les 10 poches souples de culture cellulaire, de type polyéthylène, polypropylène, polymères fluorés et éthylène-acétate de vinyle (EVA) ne permettent pas la culture de cellules adhérentes, mais uniquement la culture de cellules en suspension dans le milieu, ce qui limite considérablement les applications possibles En effet, la majorité des cellules d'intérêt sont des cellules dont la 15 culture s'effectue par adhérence. Par ailleurs, on connaît du document US 6 297 046 une poche souple destinée à la culture de cellules, notamment par adhérence De façon essentielle, la poche est formée par l'association de deux feuilles ellesmêmes composées 20 d'un complexe de deux films dont l'un définit une surface interne de nature adhérente pour les cellules La moindre flexibilité des films polymères de nature adhérente impose l'utilisation de films très minces dans la confection d'une poche souple d'o la nécessité de les complexer En outre, I'utilisation de feuilles complexes limite la transparence de la poche et donc la possibilité 25 d'observer le développement cellulaire au microscope En plus des difficultés de réalisation de la poche décrite dans ce document, cette poche ne vise à satisfaire que le problème d'adhésion des cellules, alors que l'utilisateur attend une réponse globale à l'ensemble des problèmes mentionnés ci-dessus. L'invention a notamment pour but de résoudre l'ensemble des inconvénients cités, en fournissant un récipient respectant les règles de bonnes pratiques mentionnées ci-dessus tout en permettant la culture de cellules par adhérence, ledit récipient étant empilable, et proposant des surfaces de culture homogènes et accrues pour un faible encombrement du récipient. A cet effet, et selon un premier aspect, I'invention concerne un récipient destiné à la culture de cellules, comprenant une première et une deuxième feuilles perméables au gaz solidarisées l'une à l'autre au voisinage de leur périphérie de 5 sorte à former un volume intérieur destiné à recevoir les cellules, et au moins une voie d'accès agencée pour permettre l'introduction et/ou la récupération des cellules. Selon l'invention, chacune desdites feuilles comprend au moins une couche réalisée en une matière polymérique qui est apte à permettre l'adhérence des cellules, et au moins l'une des deux feuilles est thermoformée. Le fait de réaliser un récipient à partir d'au moins une feuille de matière polymérique adhérente par la technique de thermoformage confère au récipient 15 des caractéristiques particulièrement intéressantes, parmi lesquelles: le récipient présente une géométrie définie, ce qui permet d'empiler convenablement plusieurs récipients au sein d'un incubateur; le récipient présente une certaine rigidité, ce qui permet d'éviter de créer des zones de sédimentation préférentielle et une hétérogénéité de répartition des cellules sur la surface de culture disponible. Dans une réalisation particulière, chaque feuille est formée essentiellement de 25 matière polymérique apte à permettre l'adhérence des cellules La technique de thermoformage permet en effet de s'affranchir de l'emploi de feuilles complexes. Selon une variante de l'invention, au moins l'une des feuilles thermoformées présente des reliefs qui sont disposés dans le volume intérieur du récipient. La technique de thermoformage permet en effet la réalisation de reliefs disposés dans le volume intérieur du récipient Ainsi, I'on peut considérablement augmenter la surface de culture disponible sans augmenter l'encombrement du récipient et sans augmenter le volume de milieu de culture consommé. Ces reliefs peuvent former des motifs répétés ou irréguliers, continus ou discrets. Selon une réalisation possible, les feuilles sont solidarisées l'une à l'autre par soudage au voisinage de leur périphérie. Par exemple, au moins une première feuille est thermoformée de sorte à présenter, en coupe transversale, la forme générale d'un rectangle avec des 10 angles arrondis comprenant un fond sensiblement plan, une paroi latérale et une paroi périphérique formant un rebord. La deuxième feuille, formant la paroi supérieure du récipient, peut être: soit solidarisée au rebord de la première feuille de sorte à être sensiblement plane; soit thermoformée de sorte à présenter une géométrie analogue à celle de la première feuille, lesdites feuilles étant solidarisées en regard l'une de l'autre par leurs rebords. Le récipient peut comprendre au moins une voie d'accès communiquant avec le volume intérieur du récipient depuis une paroi d'une feuille thermoformée, par exemple une paroi latérale, périphérique ou supérieure. Selon un deuxième aspect, I'invention concerne un système comprenant au 25 moins deux éléments reliés entre eux en circuit clos au moyen d'une tubulure, l'un au moins desdits éléments étant un récipient tel que précédemment décrit, la tubulure étant connectée à une première extrémité à la voie d'accès du récipient et à une deuxième extrémité à une voie d'accès d'un autre élément du système, de sorte à permettre le passage des cellules ou des fluides entre les 30 éléments du système. Enfin, selon un troisième aspect, I'invention concerne l'utilisation d'un tel récipient ou d'un tel système pour la culture de cellules adhérentes ou en suspension dans le milieu. Les autres caractéristiques de l'invention résultent de la description qui suit de modes de réalisation, effectuée en référence aux figures annexées dans lesquelles: la figure 1 est une représentation schématique en coupe transversale d'un récipient formé d'une feuille thermoformée et d'une feuille, le récipient étant muni de deux voies d'accès; les figures 2 a à 2 c sont des représentations schématiques en coupe 10 transversale de récipients formés d'une feuille thermoformée présentant des reliefs sur sa face intérieure et d'une feuille, les récipients étant munis d'une ou deux voies d'accès; les figures 3 a à 3 f sont des représentations schématiques en coupe transversale de récipients formés de deux feuilles thermoformées, 15 présentant des reliefs ou non, les récipients étant munis d'une ou deux voies d'accès; la figure 4 a est une représentation schématique en coupe transversale d'un récipient formé d'une feuille thermoformée et d'une feuille, le récipient étant muni, sur la paroi périphérique de la feuille thermoformée, d'une voie d'accès 20 orientée verticalement vers le bas; la figure 4 b est une représentation schématique en coupe transversale d'un récipient formé de deux feuilles thermoformées, le récipient étant muni, sur la paroi périphérique d'une des feuilles thermoformées, d'une voie d'accès orientée verticalement vers le haut; la figure 4 c représente de façon schématique la structure d'une voie d'accès; la figure 4 d représente de façon schématique la structure d'une voie d'accès associée à un renfort interne; les figures 5 a à 5 d représentent différentes structures que peuvent prendre 30 les reliefs de la ou des feuilles thermoformées. Un récipient 1 selon l'invention comprend deux feuilles 2, 3 respectivement inférieure et supérieure, solidarisées l'une à l'autre au voisinage de leur périphérie. Selon une réalisation possible, les feuilles 2, 3 sont soudées Toutefois, les feuilles 2, 3 peuvent également être solidarisées par une méthode différente, notamment par collage. Le récipient 1 définit ainsi un volume intérieur destiné à recevoir des cellules et un milieu de culture. Les deux feuilles 2, 3, sont perméables aux gaz, notamment à l'oxygène, et 10 réalisées en une matière polymérique biocompatible, transparente, et sur laquelle les cellules peuvent adhérer De la sorte, le récipient 1 permet un très bon développement des cellules, et sa transparence offre la possibilité de suivre la production cellulaire en microscopie optique. A titre d'exemple de matière polymérique utilisée pour les feuilles 2, 3, on peut citer le polyester notamment sous forme APET ou PETG, le polycarbonate ou le polystyrène. Par ailleurs, le potentiel d'adhérence cellulaire des polymères utilisés pour les 20 feuilles 2, 3 peut être facilement accru par différents traitements de surface connus, notamment le greffage chimique, ou un traitement par gaz activants De façon préférentielle, un traitement de surface de type plasma (plasma / oxygène ou plasma / air) est réalisé spécifiquement sur la surface destinée à la culture avant la fermeture du récipient 1. Selon l'invention, au moins la feuille inférieure 2 est thermoformée Le récipient 1 présente, en coupe transversale, la forme générale d'un rectangle avec des angles arrondis, comprenant une paroi formant le fond 4 du récipient 1 entourée par une paroi latérale 5, prolongé latéralement par une paroi périphérique 6 30 formant un rebord destiné à être solidarisé à la feuille supérieure 3 La présence de ces angles arrondis garantit une récupération optimale des produits cellulaires après la culture. Les feuilles 2, 3 peuvent avoir des épaisseurs variables et des niveaux variables de perméabilité aux gaz Par exemple, l'épaisseur d'une feuille est comprise entre 100 et 500 pm Cette faible épaisseur permet d'obtenir une perméabilité satisfaisante aux gaz, notamment à l'oxygène. Le thermoformage conduit à une réduction de l'épaisseur de la feuille Il est alors possible de jouer avec ce phénomène pour faire varier la perméabilité aux gaz du récipient 1. De plus, la réalisation de récipients de profondeurs différentes permet également de jouer sur l'oxygénation du milieu En effet, certaines cellules, notamment les cellules souches hématopoiétiques, poussent préférablement dans un milieu avec peu d'oxygène: dans ce cas, il est judicieux d'utiliser un récipient peu profond rempli exclusivement de milieu de culture, de façon à limiter les échanges de gaz Par contre, d'autres types de cellules, comme les hépatocytes, sont très consommatrices d'oxygène: un récipient plus profond rempli partiellement de milieu de culture permet alors d'obtenir une interface avec un volume d'air contenu dans le récipient, et par conséquent de favoriser les échanges gazeux et notamment l'apport en oxygène Dans ce cadre, 20 l I'utilisation de la technique de thermoformage permet de réaliser des récipients de profondeurs différentes très facilement, sans qu'il soit nécessaire de créer un moule pour chaque type de récipient à réaliser Une modification du calage du moule suffit à modifier le volume intérieur du récipient. Selon un deuxième aspect, I'invention concerne un système comprenant plusieurs éléments, dont au moins un récipient selon l'invention, associés entre eux de manière à former un circuit clos Un tel système peut notamment comporter des éléments aptes à prélever, transférer, alimenter, concentrer, filtrer, inactiver ou laver les produits cellulaires Par exemple, ces éléments 30 peuvent être composés de poches souples de conditionnement des milieux et réactifs de culture cellulaire et de poches souples de transfert et centrifugation des produits cellulaires Dans ce cadre, la notion de système clos intégrant au moins un' récipient selon l'invention, a pour but de sécuriser l'ensemble des manipulations effectuées pour la production de cellules par culture. Il peut être judicieux de limiter la perméabilité aux gaz du récipient 1 lorsque celui-ci s'intègre dans un système capable de piloter les apports de gaz aux cellules On peut facilement limiter cette perméabilité, notamment en utilisant des feuilles plus épaisses. Un pilotage des fluides au sein du système définit un bioréacteur de culture cellulaire Dans ce cadre, le système est en mesure d'alimenter en continu ou de façon séquentielle les cellules en culture par la mise en circulation des 10 milieux et réactifs Le système peut être également doté d'un ensemble de moyens de contrôle et de régulation Ces moyens permettent notamment d'appliquer les valeurs de temps, de température, de p H du milieu et de la teneur en gaz, sélectionnées pour une application donnée Un système pilotable ou bioréacteur trouve un intérêt tout particulièrement dans la mise en oeuvre de culture cellulaire à long terme; on peut citer par exemple la production de cellules souches mésenchymateuses extraites de la moelle osseuse ou la production de cellules souches hématopolétiques en coculture sur des cellules stromales adhérentes. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, représenté sur les figures 1 et 2 a à 2 c, la feuille supérieure 3 n'est pas thermoformée. Les feuilles 2, 3 sont solidarisées l'une à l'autre au niveau d'une zone de soudage 7 située par exemple sur la paroi périphérique 6 de la feuille inférieure 25 2, à proximité de la paroi latérale 5 La feuille supérieure 3 est disposée de sorte à être sensiblement plane. Sur la figure 1, la feuille inférieure 2 ne présente pas de reliefs Le fond 4, en particulier, étant sensiblement plan et lisse, offre une surface homogène pour la 30 répartition et la culture des cellules. Par ailleurs, le récipient 1 comporte deux orifices agencés pour permettre l'introduction et/ou la récupération des cellules, au moyen de voies d'accès coopérant avec lesdits orifices Une première voie d'accès 8 communique avec l'intérieur du récipient 1 depuis la paroi supérieure du récipient 1 formée par la feuille supérieure 3, et une seconde voie d'accès 9 communique avec l'intérieur du récipient 1 depuis la paroi latérale 5 de la feuille inférieure 2 thermoformée. Sur les figures 2 a à 2 c, la feuille inférieure 2 présente des reliefs 10 sur sa face intérieure au récipient 1, essentiellement sur le fond 4, le fond conservant une forme globalement plane et homogène. Les reliefs 10 permettent de résoudre le problème des grandes surfaces nécessaires à la culture de certaines cellules en système clos En effet, la production de cellules humaines adhérentes (cellules mésenchymateuses, musculaires, neuronales) se trouve limitée par la densité maximale des cellules par unité de surface au-delà de laquelle la prolifération cellulaire cesse. Le nombre minimal de cellules requises pour une greffe impose donc une 15 surface minimale de culture cellulaire, celle-ci devant être le plus souvent supérieure au mètre carré. L'utilisation de la technique de thermoformage permet de structurer la surface de culture cellulaire et d'augmenter considérablement la surface de culture 20 disponible pour un récipient 1 ayant le même encombrement. L'on comprend ainsi l'intérêt de former des reliefs 10 sur le fond 4 et à l'intérieur du récipient 1, tandis que la réalisation de tels reliefs 10 sur les parois latérales 5 n'est pas indispensable, dans la mesure o les cellules vont se déposer, par 25 gravité, sur le fond 4. Dans un exemple de réalisation particulier, les feuilles 2, 3 thermoformées et structurées en relief sont munies de zones planes pour faciliter l'observation des cellules au microscope, et l'apposition de voies d'accès le cas échéant. 30 Les reliefs 10 peuvent prendre différentes formes, comme il sera décrit plus loin en référence aux figures 5 a à 5 d. Le récipient I représenté sur les figures 3 a à 3 f est formé d'une feuille inférieure 2 thermoformée, et d'une feuille supérieure 3 également thermoformée, par exemple de géométrie analogue ou sensiblement identique à celle de la feuille inférieure 2 Les feuilles 2, 3 sont solidarisées en regard l'une de l'autre. La feuille inférieure 2 présente des reliefs 10 sur sa face intérieure au récipient 1, la feuille supérieure 3 pouvant également présenter de tels reliefs 11 sur sa face intérieure au récipient 1 (figures 3 d, 3 e, 3 f) ou, au contraire, présenter une surface sensiblement plane et lisse (figures 3 a, 3 b, 3 c) Lorsque les deux 10 feuilles 2, 3 présentent des reliefs 10, 11, le récipient 1 peut être posé soit sur la feuille inférieure 2, soit sur la feuille supérieure 3 pour la culture des cellules par adhérence; la culture de cellules adhérentes peut alors être envisagée au contact des deux feuilles 2, 3 simultanément, ce qui double la capacité de production cellulaire déjà optimisée dudit récipient 1. La figure 4 a représente un récipient I formé d'une feuille inférieure 2 thermoformée ne présentant pas de reliefs et d'une feuille supérieure 3, solidarisées l'une à l'autre au niveau d'une zone de soudage 7 La feuille supérieure 3 est disposée de sorte à être sensiblement plane. La figure 4 b est similaire à la figure 4 a, la feuille supérieure 3 étant néanmoins thermoformée, et ne présentant pas de reliefs. Différentes réalisations sont envisageables en ce qui concerne les voies 25 d'accès Le récipient I peut ainsi comporter, soit une voie d'accès 8 communiquant avec l'intérieur du récipient 1 depuis la paroi supérieure du récipient 1 formée par la feuille supérieure 3 (figures 2 a, 3 a, 3 d), soit une voie d'accès 9 communiquant avec l'intérieur du récipient 1 depuis la paroi latérale 5 de la feuille inférieure 2 (figures 2 b, 3 b, 3 e), soit les deux voies d'accès 8, 9 30 (figures 1, 2 c, 3 c, 3 f). Le récipient 1 présente également une voie d'accès 12 associée à la paroi périphérique 6 de la feuille inférieure 2 (figure 4 a) ou à la paroi périphérique de la feuille supérieure 3 (figure 4 b). Les voies d'accès 8, 9 sont soudées aux feuilles 2, 3, mais peuvent également être solidarisées auxdites feuilles 2, 3 notamment par collage. Toutefois, ces voies d'accès périphériques 8, 9, 12 peuvent être réalisées simplement par la technique du thermoformage Dans un premier temps, une protubérance est créée sur la paroi de la feuille 2, 3 Dans un deuxième temps, les protubérances sont perforées afin de créer les voies d'accès 8, 9, 12 et permettre notamment de raccorder une tubulure. Selon une réalisation possible, représentée sur les figures 1, 2 b, 2 c, 3 b, 3 c, 3 e et 3 f, la protubérance est créée sur la paroi latérale définit par le thermoformage de la feuille inférieure 2 L'utilisation de moules de thermoformage munis de parties amovibles permet de retirer la pièce ainsi formée. Selon une autre réalisation possible, représentée sur les figures 4 a et 4 b, la protubérance est créée sur la feuille de façon à être orientée perpendiculairement à la zone périphérique de la feuille, cette orientation permettant de faciliter la production puisque l'utilisation de moules munis de 20 parties amovibles n'est alors plus nécessaire. La réalisation du récipient selon l'invention et de ses voies d'accès 8, 9, 12 permet de s'affranchir de l'insertion desdites voies d'accès entre les deux feuilles constituant ledit récipient, comme tel est le cas dans la fabrication d'une 25 poche souple La zone de solidarisation des deux feuilles reste donc entièrement plane, cela constitue un élément important pour souder des matériaux de nature adhérente pour les cellules, en particulier des feuilles non complexées à base de films en polyester, en polycarbonate ou en polystyrène. En outre, I'intégration des voies d'accès 8, 9, 12 dans au moins une feuille thermoformée permet d'éliminer les risques de fuite qui peuvent exister au niveau de la zone d'insertion desdites voies entre les feuilles des récipients de l'art antérieur. La réalisation du récipient 1 n'exclut pas la possibilité d'apposer les voies d'accès, notamment sous la forme de tubes, entre les deux feuilles 2 et 3 (non représentées) Compte-tenu de l'emploi préférentiel de films polymères de moindre flexibilité, il conviendra d'y préformer les zones d'emplacement de ces s tubes, une condition satisfaite également par le thermoformage des feuilles 2 et 3. Comme représenté sur la figure 4 c, il est envisageable d'ajouter sur les voies d'accès 8, 9, 12 des cannelures 13 afin d'améliorer l'étanchéité avec une 10 tubulure On obtient ainsi des embouts cannelés (il est également envisageable de structurer des embouts coniques à olives, afin d'atteindre le même résultat). Comme représenté sur la figure 4 d, il est également envisageable d'ajouter à l'intérieur des voies d'accès 8, 9, 12 un renfort 14 interne permettant également d'obtenir un raccord parfaitement étanche avec une tubulure. En effet, les feuilles utilisées sont généralement de faible épaisseur pour assurer un niveau minimum de perméabilité aux gaz, notamment à l'oxygène, et le processus de thermoformage réduit encore cette épaisseur Il convient donc 20 de renforcer les voies d'accès 8, 9, 12 pour garantir leur solidité ainsi que leur étanchéité une fois raccordées à une tubulure. On se réfère maintenant aux figures 5 a à 5 d, qui illustrent différentes formes possibles des reliefs 10, 11. Les reliefs 10, 11 peuvent se présenter notamment sous la forme de plis, d'ondulations, de créneaux, de picots, respectivement représentés sur les figures 5 a, b, c et d Les reliefs 10, 11 peuvent former des motifs répétés ou être irréguliers Les reliefs 10, 11 peuvent s'étendre sur une partie ou sur la totalité 30 du fond 4 du récipient 1. Afin d'obtenir des augmentations de surface de culture suffisantes, ces reliefs 10, 1 1 ne sont pas réalisés à l'échelle micrométrique ou nanométrique, mais au moins à l'échelle millimétrique. Comme indiqué précédemment, la réalisation de reliefs 10, 11 sur la face des feuilles 2, 3 intérieure au récipient 1 par thermoformage permet d'augmenter la surface de culture pour les cellules adhérentes. Ces reliefs peuvent également être un moyen de retenir les cellules nonadhérentes sur la feuille 2, 3 lors de l'application d'une circulation de milieu, dans le cadre d'une culture cellulaire sous perfusion continue de milieu au sein du récipient 1. Sur ce point, un relief, ayant une forme en créneaux, représentée sur la figure 5 c, disposés dans le volume intérieur du récipient 1 serait particulièrement adapté à la culture de cellules non adhérentes sous perfusion de milieu. La demanderesse a développé la technique de thermoformage pour la réalisation du récipient selon l'invention Le récipient selon l'invention innove par l'apport d'une réponse globale à l'ensemble de critères limitants dans l'emploi d'une poche souple de culture cellulaire En outre, cette technologie de transformation des matières plastiques est particulièrement bien adaptée à la 20 réalisation d'une gamme de récipients de culture cellulaire dont les caractéristiques dimensionnelles et structurales peuvent être aisément adaptées en fonction des types cellulaires et de leurs applications Bien que particulièrement adapté à la préparation de cellules à des fins thérapeutiques, le récipient selon l'invention pourra trouver d'autres applications biotechnologiques 25 exploitant les cultures de cellules procaryotes comme eucaryotes. REVENDICATIONS 1 Récipient destiné à la culture de cellules, comprenant une première ( 2) et une deuxième ( 3) feuilles perméables aux gaz solidarisées l'une à l'autre au 5 voisinage de leur périphérie ( 6) de sorte à former un volume intérieur destiné à recevoir les cellules, et au moins une voie d'accès agencée pour permettre l'introduction et/ou la récupération des cellules, chacune desdites feuilles ( 2, 3) comprenant au moins une couche réalisée en une matière polymérique qui est apte à permettre l'adhérence des cellules, caractérisé 10 en ce qu'au moins l'une des deux feuilles ( 2, 3) est thermoformée. 2 Récipient selon la revendication 1, caractérisé en ce que chaque feuille ( 2, 3) est formée essentiellement de matière polymérique apte à permettre l'adhérence des cellules. 3 Récipient selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que les feuilles ( 2, 3) sont solidarisées l'une à l'autre par soudage au voisinage de leur périphérie. 4 Récipient selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'au moins une première feuille ( 2) est thermoformée de sorte à présenter, en coupe transversale, la forme générale d'un rectangle comprenant un fond ( 4) sensiblement plan, une paroi latérale ( 5) et une paroi périphérique ( 6) formant un rebord. Récipient selon la revendication 4, caractérisé en ce que la deuxième feuille ( 3) est solidarisée au rebord de la première feuille ( 2) de sorte à être sensiblement plane, ladite deuxième feuille ( 3) formant la paroi supérieure du récipient ( 1). 6 Récipient selon la revendication 4, caractérisé en ce que la deuxième feuille ( 3), formant la paroi supérieure du récipient ( 1), est thermoformée de sorte à présenter une géométrie analogue à celle de la première feuille ( 2), lesdites feuilles ( 2, 3) étant solidarisées en regard l'une de l'autre par leurs rebords. 7 Récipient selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'au moins une voie d'accès ( 9) communique avec le volume intérieur du récipient ( 1) depuis une paroi d'une feuille thermoformée ( 2, 3). 8 Récipient selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'au moins l'une des feuilles thermoformées ( 2, 3) présente des reliefs ( 10, 11) qui sont disposés dans le volume intérieur du récipient ( 1). 9 Récipient selon la revendication 8, caractérisé en ce que les reliefs ( 10, 11) forment des motifs répétés ou irréguliers, continus ou discrets. Système comprenant au moins deux éléments reliés entre eux en circuit clos au moyen d'une tubulure, I'un au moins desdits éléments étant un 15 récipient ( 1) conforme à l'une quelconque des revendications 1 à 9, la tubulure étant connectée à une première extrémité à la voie d'accès du récipient ( 1) et à une deuxième extrémité à un autre élément du système, de sorte à permettre le passage des cellules et/ou des fluides entre les éléments du système. 11 Utilisation d'un récipient ( 1) selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ou d'un système selon la revendication 10 pour la culture de cellules adhérentes et/ou en suspension dans le milieu.