Brevet FR2852325A1 — publié le 20040917

Domaine de l'invention : L'invention se rapporte au domaine de la synthèse et de la sécrétion de protéines d'intérêt industriel, telles que des protéines fibreuses à usage textile, en particulier de nouvelles soies ou des protéines à destination biomédicale. Elle est relative à l'expression ciblée de polynucléotides et/ou de polypeptides d'intérêt spécifiquement dans certains tissus d'un animal et plus précisément dans la glande séricigène de Bombyx mori. Selon l'invention, on utilise la glande séricigène du ver à soie comme "bioréacteur" capable de produire des protéines en grande quantité et de les exporter dans le cocon de soie d'où elles peuvent être purifiées. Etat de la technique : Il existe des méthodes de production de protéines fibreuses à usage textile comme la méthode de production de protéines de fil de soie d'araignée par les glandes mammaires de chèvres transgéniques (Nexia Biotechnologies Inc. 1000 St-Charles Avenue, Bloc B, Vaudreuil-Dorion, QC, J7V 8P5, Canada). Cependant, ces méthodes ne permettent pas d'organiser la protéine fibreuse sous forme de fil. En ce qui concerne la production de protéines solubles à destination biomédicale, les méthodes connues mettent en #uvre des cultures bactériennes, des cultures de lignées cellulaires ou des organismes vertébrés comme les vaches, chèvres ou encore lapines transgéniques. Ce type de production de protéines recombinantes est très coûteux. D'autre part, lorsque les protéines recombinantes sont synthétisées à partir de systèmes vertébrés, leur utilisation industrielle, notamment leur utilisation alimentaire ou médicale, implique obligatoirement de vérifier au préalable que ces protéines ou les compositions qui les contiennent, sont exemptes de contaminants pathogènes transmissibles à l'homme. Etant donné le rôle important, au niveau économique, de la production de protéines recombinantes, il existe un besoin dans l'état de la technique pour de nouveaux moyens de production de protéines recombinantes, en grande quantité, à faible coût, et à partir d'un organisme suffisamment éloigné de l'espèce humaine pour éviter les problèmes de contamination, surtout lorsque la protéine produite a un intérêt biomédical. Il existe aussi un besoin pour de nouveaux moyens de production de protéines recombinantes lesquelles permettent d'organiser la protéine sous forme de fil lorsque ladite protéine recombinante est fibreuse. Pour que la production puisse être importante, la protéine doit être synthétisée de manière spécifique d'un tissu, et exportée à l'extérieur de l'animal, de préférence un invertébré. Cependant, à la connaissance du demandeur, aucun organisme invertébré n'est susceptible de répondre aux exigences précédemment formulées. La transgénèse de Bombyx mori par exemple est connue (Tamura et al. Germline transformation of the silkworm Bombyx mori L. using a piggyBac transposon derived vector. Nature Biotechnology Vol 18,2000), mais l'utilisation de cette méthode n'a pas encore permis de conduire à la production de protéines recombinantes en grande quantité. Le demandeur s'est donc attaché à la mise au point d'un système d'expression permettant notamment de supprimer les problèmes d'innocuité et de coût élevé des systèmes précédemment connus. Sommaire de l'invention : Un tel système d'expression de protéines recombinantes est désormais fourni selon l'invention. L'invention concerne un acide nucléique dirigeant l'expression d'une protéine d'intérêt spécifiquement dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori, caractérisé en ce que ledit acide nucléique comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', (i) une région régulatrice comprenant des signaux de régulation de l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans lesdites cellules séricigènes et (ii) une région codant un peptide signal modifié, placé sous le contrôle de ladite région régulatrice, ledit acide nucléique possédant au moins 90 % d'identité en nucléotides avec le polynucléotide allant du nucléotide 1150 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1 et dans lequel le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine et la leucine. L'invention est également relative à une cassette d'expression comprenant un polynucléotide d'intérêt placé sous le contrôle d'un acide nucléique tel que défini ci-dessus, le polynucléotide d'intérêt étant un polynucléotide sens, codant pour un polypeptide. L'invention est également relative à un vecteur recombinant d'intégration comprenant un acide nucléique ou une cassette d'expression tels que définis ci-dessus, ainsi qu'à une cellule hôte, modifiée par l'intégration de cet acide nucléique ou de cette cassette d'expression dans son génome. L'invention a encore pour objet l'utilisation d'un acide nucléique, d'une cassette d'expression, d'un vecteur recombinant ou d'une cellule hôte recombinante tels que définis ci-dessus pour l'obtention d'un animal transgénique. L'invention a aussi trait à des procédés d'obtention d'un animal transgénique modifié par intégration dans son génome d'un acide nucléique, d'une cassette d'expression, d'un vecteur recombinant ou d'une cellule hôte recombinante tels que définis ci-dessus. Description détaillée de l'invention : On a montré, selon l'invention, qu'un acide nucléique qui comprend à la fois (i) une région régulatrice comprenant au moins une copie du motif nucléotidique cible du facteur de transcription du type SGF1 forkhead , un site promoteur de la transcription approprié et (ii) une région codant un peptide signal modifié, ladite région étant placée sous le contrôle de ladite région régulatrice, est capable de diriger la synthèse d'une protéine d'intérêt spécifiquement dans les cellules séricigènes postérieures du lépidoptère Bombyx mori, lorsque la séquence nucléotidique codant ladite protéine d'intérêt est fusionnée en phase avec la séquence nucléotidique codant ledit peptide signal modifié. Selon l'invention, la séquence nucléotidique codant la protéine d'intérêt est fusionnée en phase avec la séquence nucléotidique codant ledit peptide signal modifié lorsque le nucléotide localisé à l'extrémité 3' du dernier codon de la séquence codant le peptide signal modifié précède le nucléotide localisé à l'extrémité 5' du premier codon de la séquence codant la protéine d'intérêt. De manière surprenante, le demandeur a montré que le remplacement du codon pour la cystéine du peptide signal inclus dans la pré-pro-protéine fibrohexamérine de la fibre du fil de soie par un acide aminé hydrophobe comme l'alanine, l'isoleucine ou encore la leucine, permettait à une protéine fusionnée avec ledit peptide signal modifié d'être exportée en dehors des glandes séricigènes de Bombyx mori, comme les protéines constitutives du fil de soie. L'invention a pour objet un acide nucléique dirigeant l'expression d'une protéine d'intérêt spécifiquement dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori, caractérisé en ce que ledit acide nucléique comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', (i) une région régulatrice comprenant des signaux de régulation de l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans lesdites cellules séricigènes et (ii) une région codant un peptide signal modifié, placé sous le contrôle de ladite région régulatrice, ledit acide nucléique possédant au moins 90 % d'identité en nucléotides avec le polynucléotide allant du nucléotide 1150 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1 et dans lequel le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine et la leucine. De manière préférée, tout acide nucléique et tout polypeptide selon l'invention se présente sous une forme isolée ou purifiée. Le terme " isolé " au sens de la présente invention désigne un matériel biologique qui a été soustrait à son environnement originel (l'environnement dans lequel il est localisé naturellement). Par exemple, un polynucléotide présent à l'état naturel dans un organisme n'est pas isolé. Le même polynucléotide séparé des acides nucléiques adjacents au sein desquels il est naturellement inséré dans le génome de l'organisme est isolé. Un tel polynucléotide peut être inclus dans un vecteur et/ou un tel polynucléotide peut être inclus dans une composition et demeurer néanmoins à l'état isolé du fait que le vecteur ou la composition ne constitue pas son environnement naturel. Le même raisonnement vaut aussi pour un polypeptide extrait de son environnement naturel. Le terme " purifié " ne nécessite pas que le matériel soit présent sous une forme de pureté absolue, exclusive de la présence d'autres composés. Il s'agit plutôt d'une définition relative. Un polynucléotide ou un polypeptide est à l'état purifié après purification du matériel de départ ou du matériel naturel d'au moins un ordre de grandeur, de préférence deux ou trois et préférentiellement quatre ou cinq ordres de grandeur. Aux fins de la présente description, l'expression " séquence nucléotidique " peut être employée pour désigner indifféremment un polynucléotide ou un acide nucléique. L'expression " séquence nucléotidique " englobe le matériel génétique luimême et n'est donc pas restreinte à l'information concernant sa séquence. Les termes " acide nucléique ", " polynucléotide ", " oligonucléotide ou encore séquence nucléotidique englobent des séquences d'ARN, d'ADN, d'ADNc ou encore des séquences hybrides ARN/ADN de plus d'un nucléotide, indifféremment sous la forme simple brin ou sous la forme de duplex. Le terme " nucléotide " désigne les nucléotides naturels (A, T, G, C et U). Aux fins de la présente invention, un premier polynucléotide est considéré comme étant " complémentaire " d'un second polynucléotide lorsque chaque base du premier nucléotide est appariée à la base complémentaire du second polynucléotide dont l'orientation est inversée. Les bases , complémentaires sont A et T (ou A et U), et C et G. Selon l'invention, un premier acide nucléique ayant au moins 90 % d'identité avec un second acide nucléique de référence, possédera au moins 90 %, de préférence au moins 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 97,5%, 98%, 98,3% 98,6%, 99%, 99,6% d'identité en acides aminés avec ledit second acide nucléique de référence. Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides nucléiques, au sens de la présente invention, est déterminé en comparant les deux séquences alignées de manière optimale, à travers une fenêtre de comparaison. La partie de la séquence nucléotidique dans la fenêtre de comparaison peut ainsi comprendre des additions ou des délétions (par exemple des gaps ) par rapport à la séquence de référence (qui ne comprend pas ces additions ou ces délétions) de manière à obtenir un alignement optimal entre les deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions auxquelles une base nucléique identique est observé pour les deux séquences comparées, puis en divisant le nombre de positions auxquelles il y a identité entre les deux bases nucléiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison, puis en multipliant le résultat par cent afin d'obtenir le pourcentage d'identité en nucléotides des deux séquences entre elles. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé de manière informatique à l'aide d'algorithmes connus. De manière tout à fait préférée, le pourcentage d'identité de séquence est déterminé à l'aide du logiciel CLUSTAL W (version 1.82) les paramètres étant fixés comme suit : (1) CPU MODE = ClustalW mp ; (2) ALIGNMENT = full ; (3) OUTPUT FORMAT = aln w/numbers (4) OUTPUT ORDER = aligned ;(5) COLOR ALIGNMENT = no ; (6) KTUP (word size) = default ; (7) WINDOW LENGTH = default ; (8) SCORE TYPE = percent ; (9) TOPDIAG = default ; (10) PAIRGAP = default ; (11) PHYLOGENETIC TREE/TREE TYPE = none ; (12) MATRIX = default ; (13) GAP OPEN = default ; (14) END GAPS = default ; (15) GAP EXTENSION = default ; (16) GAP DISTANCES = default ; (17) TREE TYPE = cladogram et (18) TREE GRAP DISTANCES = hide . Un acide nucléique possédant au moins 90 % d'identité en nucléotide avec un acide nucléique selon l'invention englobe les variants d'un acide nucléique selon l'invention. Par variant d'un acide nucléique selon l'invention, on entend un acide nucléique qui diffère de l'acide nucléique de référence par une ou plusieurs substitutions, additions ou délétions d'un nucléotide, par rapport à l'acide nucléique de référence. Un variant d'un acide nucléique selon l'invention peut être d'origine naturelle, tel qu'un variant allélique qui existe naturellement. Un tel acide nucléique variant peut être également un acide nucléique non naturel obtenu, par exemple par des techniques de mutagenèse. En général, les différences entre l'acide nucléique de référence et l'acide nucléique variant sont réduites de telle sorte que l'acide nucléique de référence et l'acide nucléique variant ont des séquences nucléotidiques très similaires et dans de nombreuses régions identiques. Les variants de l'acide nucléique régulateur selon l'invention comprennent tous 100 % d'identité en nucléotides avec la région allant du nucléotide 1379 jusqu'au nucléotide 1390 de la séquence SEQ ID N 1. Par ailleurs, le trinucléotide des variants de l'acide nucléique régulateur selon l'invention correspondant au trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code toujours pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine, et la leucine. Ainsi, dans l'acide nucléique régulateur selon l'invention, le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 est choisi parmi les trinucléotides suivants : (i) les trinucléotides suivants codant pour l'acide aminé alanine : GCU, GCT, GCC, GCA et GCG ; (ii) les trinucléotides suivants codant pour l'acide aminé isoleucine : AUU, ATT, AUC, ATC, AUA et ATA ; (iii) les trinucléotides suivants codant pour l'acide aminé leucine : CUU, CTT, CUC, CTC, CUA, CTA, CUG, et CTG. Un variant d'un acide nucléique régulateur selon l'invention conserve la capacité à diriger l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans les cellules des glandes séricigènes postérieures d'un lépidoptère. Pour vérifier le caractère fonctionnel d'un variant d'un acide nucléique selon l'invention, y compris d'un acide nucléique comprenant 90% d'identité en nucléotides avec la séquence SEQ ID N 1, l'homme du métier peut mettre en #uvre les tests d'expression spécifique d'un gène rapporteur ou marqueur décrits dans les exemples. Par polynucléotide d'intérêt au sens de l'invention, on entend un polynucléotide capable de diriger la synthèse d'un polypeptide fusion entre un peptide signal modifié et un polypeptide d'intérêt. Un acide nucléique selon l'invention comprend une séquence à fonction de promoteur, ledit promoteur constituant un signal de régulation permettant de diriger l'expression d'un polynucléotide d'intérêt, spécifiquement dans les cellules de la glande séricigène postérieure d'un lépidoptère. Aux fins de la présente description, un acide nucléique à fonction de promoteur aussi désigné promoteur ou encore séquence promotrice , consiste en un acide nucléique qui possède les motifs de reconnaissance de l'ARN polymérase, et plus spécifiquement d'une boite TATA et d'une boite CAAT , dont la structure est bien connue de l'homme du métier. Il a été montré selon l'invention que l'acide nucléique de séquence SEQ ID N 1 comprend les signaux de régulation nécessaires à l'expression d'un polynucléotide d'intérêt, spécifiquement dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori. Une telle spécificité n'avait pas été observée avec les séquences régulatrices décrites par Tamura (Tamura et al. Germline transformation of the silkworm Bombyx mari L. using a piggyBac transposon derived vector. Nature Biotechnology Vol 18,2000) dont l'expression n'était pas limitée aux cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori. Il a aussi été montré selon l'invention que l'acide nucléique comprenant, de l'extrémité 5' à l'extrémité 3', le polynucléotide allant du nucléotide 1150, au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1, est capable de diriger l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori. La séquence SEQ ID N 1 comprend, de l'extrémité 5' à l'extrémité 3', le promoteur du gène de la fibrohexamérine entre le nucléotide 1 et le nucléotide 1452. Ce promoteur comprend une boite TATA localisée du nucléotide en position 1420 jusqu'au nucléotide en position 1423 de la séquence SEQ ID N 1. Cette séquence promotrice contient également une boite CAAT localisée du nucléotide en position 1362 jusqu'au nucléotide en position 1365 de la séquence SEQ ID N 1. Cette séquence promotrice contient enfin une séquence TATTTATTTAA localisée du nucléotide en position 1379 jusqu'au nucléotide en position 1390 de la séquence SEQ ID N 1. La boite TATA constitue l'élément promoteur proprement dit, qui est localisé en général à une distance d'environ 30 bases du site d'initiation de la transcription. La boite CAAT est un élément agissant en cis qui est retrouvé communément dans la région promotrice et activatrice ( enhancer ). La séquence SEQ ID N 1 comprend l'exon 1 de la fibrohexamérine entre le nucléotide en position 1452 et le nucléotide en position 1525, qui code le peptide signal modifié. La séquence SEQ ID N 1 comprend l'intron 1 de la fibrohexamérine entre le nucléotide en position 1526 et le nucléotide en position 2026. La séquence SEQ ID N 1 comprend un polynucléotide entre le nucléotide en position 2027 et le nucléotide en position 2040. Ce dernier polynucléotide n'est pas essentiel à l'invention et a seulement facilité la construction de la séquence SEQ ID N 1 qui comprend en outre un polynucléotide codant pour une protéine rapporteur Ds-Red entre le nucléotide en position 2041 et le nucléotide en position 2721. Un acide nucléique comprenant (i) la région régulatrice allant du nucléotide en position 1 jusqu'au nucléotide en position 1452 de la séquence SEQ ID N 1 ou tout fragment biologiquement actif de cet acide nucléique contenant les boites TATA, CAAT et au moins une séquence CTATTTATTTAA telles que définies ci-dessus et (ii) une région codant un peptide signal modifié placé sous le contrôle d'un tel acide nucléique constitue un autre objet de la présente invention. Il a été montré selon l'invention que l'exon 1 du gène de la fibrohexamérine tel que défini ci-dessus doit porter une modification du trinucléotide en position 1486 à 1488 de la séquence SEQ ID N 1, pour que l'adressage du polypeptide codé par le polynucléotide d'intérêt soit correct, c'est à dire pour que le polypeptide codé par le polynucléotide d'intérêt soit sécrété avec le fil de soie. Le trinucléotide en position 1486 à 1488 de la séquence SEQ ID N 1codant pour la cystéine doit être modifié en un trinucléotide codant un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine et la leucine. Grâce à la réalisation de constructions d'ADN comprenant la totalité ou des parties plus restreintes de la séquence SEQ ID N 1, il a été montré selon l'invention que l'acide nucléique de l'invention permet de diriger spécifiquement l'expression d'un polynucléotide d'intérêt dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori. La présence du gène rapporteur Ds-Red a également permis de montrer que la modification de l'exon 1 du gène de la fibrohexamérine permet d'obtenir une sécrétion correcte du polypeptide codé par le polynucléotide d'intérêt. Il a été réalisé des cassettes d'expression comprenant un polynucléotide d'intérêt codant pour un gène rapporteur, le gène de la protéine Ds-Red, qui a été placé sous contrôle d'un acide nucléique régulateur tel que défini ci dessus, comprenant à la fois les signaux de régulation spécifiques de tissu, l'exon 1 de la fibrohexamérine modifié, l'intégralité de l'intron 1 de la fibrohexamérine et un acide nucléique à fonction de promoteur. Ces cassettes d'expression ont été utilisées pour transformer des cellules de Bombyx mori, et plus précisément des précurseurs gamétiques, à l'origine d'un animal transgénique, après quoi l'expression du gène rapporteur a été suivie dans les différents tissus de l'animal. Les résultats montrent que les signaux de régulation nécessaires à l'activité de transcription tissu spécifique et à une forte expression dans les cellules de la glande séricigène postérieure de Bombyx mori sont compris notamment dans la région allant du nucléotide 1150 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1. Plus précisément, Il a été montré selon l'invention que cette région contenait un motif : CTATTTATTTAA (séquence SEQ ID N 2) localisée du nucléotide en position 1379 jusqu'au nucléotide en position 1390 de la séquence SEQ ID N 1. Ce motif constitue un site de liaison à des facteurs de transcription du type SGF1 forkhead (Julien, E., Bordeaux, M.C., Garel, A. & Couble, P. (2002). Fork head alternative binding drives stage specific expression in the silk gland of Bombyx mori. Insect Biochem Molecul. Biol. 32, 377-387.) Sans vouloir être liés par une quelconque théorie, les inventeurs pensent que le motif CTATTTATTTAA constitue une caractéristique structurelle importante de l'acide nucléique de l'invention ayant une fonction de séquence activatrice de la transcription ( enhancer ) et de régulateur d'expression spécifique de tissu. Selon l'invention, l'insertion de nouveaux motifs CTATTTATTTAA en amont du motif naturellement contenu dans le promoteur de la fibrohexamérine permet d'augmenter le taux d'expression du polypeptide codé par le polynucléotide d'intérêt, sans altérer la spécificité. L'introduction d'ADN véhiculé par le vecteur d'intégration piggyBac dans le génome de Bombyx mori, obtenue après microinjection dans les #ufs de l'animal, a également permis de montrer de façon surprenante que la modification de l'exon 1 du gène de la fibrohexamérine permet d'obtenir un adressage de la protéine d'intérêt compatible avec une sécrétion de celle-ci dans le fil de soie. En d'autres termes, lorsqu'un polynucléotide d'intérêt est fusionné en phase à l'extrémité 3' de l'exon 1 du gène de la fibrohexamérine, la modification de l'exon 1 de ce gène, qui code le peptide signal modifié permet de conserver la sécrétion de la protéine d'intérêt identique à celle de la fibrohexamérine. Acides nucléiques régulateurs selon l'invention L'invention a pour objet un acide nucléique dirigeant l'expression d'une protéine d'intérêt spécifiquement dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori, caractérisé en ce que ledit acide nucléique comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', (i) une région régulatrice comprenant des signaux de régulation de l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans lesdites cellules séricigènes et (ii) une région codant un peptide signal modifié, placé sous le contrôle de ladite région régulatrice, ledit acide nucléique possédant au moins 90 % d'identité en nucléotides avec le polynucléotide allant du nucléotide 1150 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1 et dans lequel le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine, et la leucine. Selon un premier mode de réalisation, particulier à l'acide nucléique ci-dessus, ledit acide nucléique est caractérisé en ce qu'il comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', (i) une région régulatrice comprenant des signaux de régulation de l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans lesdites cellules séricigènes et (ii) une région codant un peptide signal modifié, placé sous le contrôle de ladite région régulatrice, ledit acide nucléique comprenant, de l'extrémité 5' à l'extrémité 3', le polynucléotide allant du nucléotide 1150 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1 et dans lequel le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine, et la leucine. Selon un second mode de réalisation particulier de l'acide nucléique ci-dessus, ledit acide nucléique est caractérisé en ce qu'il comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', (i) une région régulatrice comprenant des signaux de régulation de l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans lesdites cellules séricigènes et (ii) une région codant un peptide signal modifié, placé sous le contrôle de ladite région régulatrice, ledit acide nucléique comprenant, de l'extrémité 5' à l'extrémité 3', le polynucléotide allant du nucléotide 1 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1 et dans lequel le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine, et la leucine. Selon un troisième mode de réalisation particulier, l'acide nucléique ci-dessus est modifié par l'introduction d'au moins une et d'au plus quatre copies d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 2, entre les nucléotides 1 et 1379 de la séquence SEQ ID N 1. Un tel acide nucléique modifié correspond par exemple à l'acide nucléique de séquence SEQ ID N 3. La présente invention est également relative à un acide nucléique dont la séquence est complémentaire à la séquence de l'un quelconque des acides nucléiques tels que définis ci-dessus. Comme cela a déjà été précisé, l'un des objectifs poursuivis par la présente invention est l'obtention d'une expression à un taux important d'un polypeptide dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori codé par un polynucléotide d'intérêt. L'invention a donc encore pour objet un acide nucléique comprenant un polynucléotide d'intérêt codant un polypeptide d'intérêt, fusionné avec l'acide nucléique régulateur dirigeant l'expression du polypeptide d'intérêt spécifiquement dans les cellules séricigènes postérieures de Bombyx mori, tel que défini dans la présente description. Un tel acide nucléique comprenant un polynucléotide codant un polypeptide d'intérêt est aussi désigné cassette d'expression aux fins de la présente description. L'invention a donc encore pour objet une cassette d'expression comprenant un polynucléotide d'intérêt placé sous le contrôle d'un acide nucléique régulateur tel que défini précédemment. Cassettes d'expression selon l'invention : Selon un premier mode de réalisation, une cassette d'expression selon l'invention est caractérisée en ce que le polynucléotide d'intérêt qu'elle comprend code pour un polypeptide. Préférentiellement, le polynucléotide d'intérêt code pour un polypeptide choisi parmi les protéines comme la spidroïne d'araignée (genre Nephila), la fibroine de Galleria ou plus généralement tout autre polypeptide qui permet d'obtenir un fil de soie dont les propriétés de résistance de ductilité ou d'élasticité, par exemple sont modifiées. Le polynucléotide d'intérêt peut également coder pour un polypeptide soluble d'intérêt biomédical comme par exemple les hormones, les antigènes, les enzymes, les facteurs de croissance, ou encore les récepteurs. Vecteurs recombinants selon l'invention : L'invention concerne des vecteurs recombinants d'intégration comprenant un acide nucléique régulateur ou une cassette d'expression tels que définis ci-dessus. L'invention consiste donc en des vecteurs recombinants dans lesquels a été inséré un acide nucléique régulateur selon l'invention, comprenant des signaux de régulation permettant l'expression d'un polynucléotide d'intérêt, spécifiquement dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori, lorsque ce polynucléotide d'intérêt est placé sous son contrôle. Font ainsi partie de l'invention des vecteurs recombinants d'intégration comprenant : a) Un acide nucléique régulateur tel que défini dans la présente description ; et b) Un polynucléotide d'intérêt placé sous le contrôle de l'acide nucléique régulateur défini en a). Le polynucléotide d'intérêt peut consister en un polynucléotide codant pour un polypeptide détectable ou polypeptide marqueur tel que par exemple un polypeptide codant pour la protéine DsRed. Un vecteur recombinant d'intégration selon l'invention répondant à la définition ci-dessus est le vecteur Pig fhx(sp*)DsRed-(3xP3-GFP) déposé le 20 février 2003 à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) de l'Institut Pasteur sous le numéro d'enregistrement CNCM 1-2975. L'invention concerne également des vecteurs recombinants de clonage comprenant la séquence nucléotidique d'un vecteur recombinant d'intégration tel que décrit ci-dessus. Pour l'obtention de l'une quelconque des séquences régulatrices selon l'invention, il est possible d'utiliser les techniques et amorces décrites dans les exemples. L'homme du métier peut également utiliser le vecteur Pig fhx(sp*)DsRed- (3xP3-GFP) déposé le 20 février 2003 à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) de l'Institut Pasteur sous le numéro d'enregistrement CNCM 1-2975. Caractéristiques générales des vecteurs recombinants selon l'invention : Par vecteur au sens de la présente invention, on entend une molécule d'ADN ou d'ARN circulaire ou linéaire qui est indifféremment sous forme simple brin ou double brin. Un vecteur selon l'invention peut être un vecteur de clonage ou un vecteur d'intégration. Selon un mode de réalisation préféré, un vecteur recombinant selon l'invention est un vecteur intégratif permettant l'insertion de copies de la séquence d'ADN insérée dans ce vecteur dans le génome de l'animal de l'espèce Bombyx mori. De manière avantageuse, le vecteur recombinant, ou dans d'autres cas la cassette d'expression contenue dans ce vecteur peut aussi contenir des séquences 3' non traduites dites terminateurs . Parmi les terminateurs utilisables dans les constructions de l'invention, on peut citer la séquence de polyadénylation de SV40. Le vecteur d'intégration préféré selon l'invention est dérivé du transposon piggyBac issu de Trichoplusia ni, existant à l'état naturel dans cette espèce (Cary, L.C. et al. Transposon mutagenesis of baculoviruses: analysis of Trichoplusia ni transposon IFP2 insertions within the FP-locus of nuclear polyhedrosis viruses. Virology 172,156-69 (1989)) Le transposon piggyBac comprend des fragments d'ADN susceptibles de se déplacer d'un endroit du génome dans un autre par le biais de la transposition. Il comprend des pieds, gauche et droit, composés de deux courtes séquences répétées inverses encadrant les gènes codant pour ses fonctions de mobilité. Le vecteur d'intégration décrit selon l'invention est un transposon piggyBac modifié dans lequel l'acide nucléique d'intérêt remplace une partie des gènes codant pour les fonctions de mobilité du transposon qui ont été supprimées. Le vecteur d'intégration est utilisé en combinaison avec un vecteur assistant permettant l'expression des gènes de mobilité supprimés dans le vecteur d'intégration. Le vecteur d'intégration associé au vecteur assistant permet l'intégration de l'acide nucléique ou de la casette d'expression selon l'invention dans le génome de la cellule hôte par le biais de la transposition. Le vecteur d'intégration selon l'invention peut également être dérivé de l'élément Hobo de la drosophile ou du transposon minos de la drosophile. Selon un autre mode de réalisation, un vecteur recombinant de clonage est utilisé afin d'amplifier la séquence nucléotidique d'un vecteur d'intégration tel que décrit ci-dessus. Selon cet autre mode de réalisation, le vecteur recombinant d'intégration ci-dessus est linéarisé préalablement à son insertion dans un vecteur receveur au niveau d'un site ou d'un polysite de clonage dudit vecteur receveur, avant ligation. Les vecteurs de clonage utilisés sont d'origine bactérienne ou virale. Il s'agit par exemple des plasmides du type PUC, pBR ou pSK, connus de l'homme du métier, qui ne seront pas décrits en détail. Cellules hôtes recombinantes selon l'invention Pour permettre l'expression d'un polynucléotide d'intérêt placé sous le contrôle d'un acide nucléique régulateur selon l'invention, les acides nucléiques régulateurs, les cassettes d'expression ou encore les vecteurs recombinants définis dans la présente description doivent être introduits dans une cellule hôte. L'introduction des polynucléotides selon l'invention dans une cellule hôte peut être réalisée in vitro, selon les techniques bien connues de l'homme du métier. Par cellule hôte comprenant un acide nucléique on entend, une cellule ayant intégré dans son génome une ou plusieurs copies d'un acide nucléique. L'invention a en outre pour objet une cellule hôte comprenant un acide nucléique régulateur, une cassette d'expression ou encore un vecteur recombinant tels que définis ci-dessus. Une telle cellule hôte est de préférence une cellule d'un animal appartenant au genre Bombyx plus particulièrement à l'espèce Bombyx mori, quelle que soit la souche considérée. Une telle cellule hôte peut également être une cellule d'un animal appartenant à une autre espèce de lépidoptère comme Philosamia cynthia ou plus généralement, au genre Bombyx, Antheraea, Galleria, Philosamia, Spodoptera ou Drosophila. De manière tout à fait préférée, une cellule hôte selon l'invention consiste en une cellule des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori. Animaux transqéniques selon l'invention : L'invention a encore pour objet l'utilisation d'un acide nucléique, d'une cassette d'expression, d'un vecteur ou d'une cellule hôte recombinante tels que décrits ci-dessus pour l'obtention d'un animal transgénique producteur de soie appartenant au genre Bombyx. De manière préférée, ledit animal transgénique appartient à l'espèce Bombyx mori et sécrète une protéine d'intérêt dans le fil de soie. L'invention concerne aussi un organisme multicellulaire transgénique, comprenant une cellule hôte ou une pluralité de cellules hôtes, une cassette d'expression ou encore un vecteur recombinant tel que définis ci-dessus. L'invention a encore pour objet un animal transgénique, comprenant, sous une forme intégrée dans son génome, un acide nucléique ou une cassette d'expression tels que définis dans la présente description. De manière générale, l'invention est aussi relative à l'utilisation d'un acide nucléique régulateur, d'une cassette d'expression, d'un vecteur recombinant ou encore d'une cellule hôte tels que définis ci-dessus pour l'obtention d'un animal transgénique. Les animaux transgéniques selon l'invention appartiennent préférentiellement aux espèces et au genre qui ont déjà été listés ci-dessus concernant l'origine des cellules hôtes animales de l'invention. L'invention a encore pour objet un procédé d'obtention d'un animal transgénique appartenant à l'espèce Bombyx mori caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Injection d'un acide nucléique, d'une cassette d'expression ou d'un vecteur tels que définis ci-dessus dans des #ufs de Bombyx mori entre une et cinq heures après la ponte des #ufs, avant la formation du blastoderme ; b) Sélection des animaux transgéniques ayant intégré dans leur génome un acide nucléique ou une cassette d'expression tels que définis dans la présente description. L'invention a encore pour objet un procédé d'obtention d'un animal transgénique appartenant à l'espèce Bombyx mori caractérisé en ce qu'il comprend en outre les étapes suivantes : c) Croisement entre eux de deux animaux transgéniques tels qu'obtenus à l'étape b ; d) Sélection des animaux homozygotes pour le transgène. L'invention a encore pour objet un procédé d'obtention d'un fil de soie caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Elever un animal transgénique tel que défini dans la présente description ; b) Récupérer la soie produite par l'animal transgénique. L'invention a encore pour objet un procédé d'obtention d'une protéine d'intérêt caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Elever un animal transgénique tel que défini dans la présente description ; b) Récupérer la soie produite par l'animal transgénique ; c) Récupérer la protéine d'intérêt au sein du fil de soie. L'invention est en outre illustrée, sans pour autant être limitée, par les figures et les exemples suivants, dans lesquels : La figure 1 illustre un protocole de construction d'un vecteur selon l'invention. La figure 2 illustre un protocole substitution du codon cystéine en un codon isoleucine dans le peptide signal du gène codant la fibrohexamérine La figure 3 illustre un protocole de modification du promoteur de la fibrohexamérine par l'adjonction de trois copies d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 2. La figure 4 est une représentation schématique de la séquence SEQ ID N 3. La figure 5 illustre l'accumulation, spécifique de tissu, de la protéine Ds-Red placée sous le contrôle d'un acide nucléique selon l'invention. La figure 6 illustre la détection de la protéine Ds-Red, placée sous le contrôle d'un acide nucléique selon l'invention, dans les glandes séricigènes de vers à soie. La figure 7 illustre l'accumulation, dans le fil de soie, de la protéine Ds-Red placée sous le contrôle d'un acide nucléique selon l'invention. La figure 8 illustre la détection de la protéine Ds-Red, placée sous le contrôle d'un acide nucléique selon l'invention, dans les cocons de vers à soie. EXEMPLES : Matériel et méthodes généraux utilisés dans les exemples. A) Matériel : Les animaux utilisés appartiennent à l'espèce Bombyx mori, à la race Nistari provenant de l'Unité Nationale Séricicole (25, quai Jean-Jacques Rousseau 69350 La Mulatière, France) Il s'agit d'une race multivoltine, à développement sans diapause embryonnaire. Les bactéries utilisées pour les clonages sont les souches E.coli DH5alpha-TI Max. Efficiency disponibles auprès de la société INVITROGEN (référence 440097). B) Méthodes # Conditions d'élevage des animaux : Les vers à soie sont élevés dans des conditions contrôlées dans une animalerie de type Animalerie A1 à des températures variables selon l'âge des larves (entre 22 C et 25 C), et à une hygrométrie de 75%. Ils sont nourris sur milieu artificiel préparé à base de broyats de feuilles de mûrier. # Extraction des acides nucléiques : L'ADN des constructions plasmidiques a été extrait des bactéries par le kit Qiaprep Spin Miniprep de la société Qiagen (référence 27106). L'ADN génomique des vers à soie a été extrait par phénol-chloroforme-alcool isoamylique. # Production d'animaux transgéniques : L'injection du vecteur d'intégration dans les #ufs de l'animal est effectuée 2 à 5 heures après la ponte, avant la formation du blastoderme. Une solution comprenant le vecteur d'intégration et le vecteur "assistant" en quantités égales est préparée dans un tampon phosphate à 0,5 mM (pH 7,0) contenant 5mM KCI. Un à 5 nL de cette solution sont injectés à l'aide d'un microinjecteur Eppendorf (Transjector 5246). Le trou formé par l'injection est ensuite recouvert par de la glu (Loctite Superglue 3 de Henkel France S. A.) et les oeufs sont maintenus à 25 C pour poursuivre leur développement. # Sélection des animaux trangéniques : La sélection des animaux rendus transgéniques avec le vecteur Pigfhx (sp*)DsRed-(3xP3-GFP) est effectuée grâce à l'expression précoce du gène 3xP3-GFP dans les yeux de l'animal. # Test de détection de la présence de la protéine Ds-Red dans l'animal transgénique : La protéine Ds-Red est visualisée in situ (dans les cellules de la glande séricigène) et dans le cocon, sous une loupe Leica à fluorescence (MZFL2) équipée d'un système d'émission de lumière d'excitation (558 nm) et d'un filtre de lumière d'émission à 583 nm et d'un appareil de prise de vue numérique. L'analyse de la fluorescence des cocons est réalisée à sec. Les glandes séricigènes disséquées sont observées sous la loupe dans du PBS. La détection de la protéine Ds-Red a été effectuée à différents stades du développement et, en particulier, au 5ème stade larvaire au moment de la synthèse massive des protéines de la soie. Sur les extraits protéiques provenant de glandes séricigènes ou de cocons de soie, la détection est effectuée par Western Blot en utilisant un double anticorps : un anticorps anti-Ds-Red de Lapin (Société Clonetech, référence 8370-1) et un anticorps anti-Lapin de Chèvre couplé à la peroxydase (Société Biorad, référence 170-6515 ). # Test de détection de la protéine DS-red par Western Blot réalisé avec des échantillons de glandes séricigènes, de cocon et de blaze de ver à soie : Le test de détection de la protéine DS-red par Western Blot comprend plusieurs étapes : - Extraction des échantillons protéiques : On prend un tiers du cocon ou la paire de glandes séricigènes (sécréteur séparé du réservoir) que l'on transfère dans un microtube. On fragmente ensuite le cocon en petits morceaux ou on broie la glande dans 1 mL de LiSCN 10M puis on incube les extraits protéiques au moins 1 heure à température ambiante en agitant périodiquement à l'aide d'un vortex. On dilue enfin les échantillons protéiques dans 4/5 de tampon tris 10 mM- SDS 2%- ss-mercaptoéthanol 5%. On transfert l'enveloppe extérieure du cocon ou blaze dans un microtube auquel on ajoute 150 L d'H20 pour rincer la blaze. On récupère la protéine DsRed soluble par passage de l'échantillon aux ultrasons pendant 10 minutes. On prépare les échantillons avant dépôt en dénaturant les extraits protéiques dans le tampon Laemmli 5X, 5 min. à 100 C. - Electrophorèse : On dépose les extraits protéiques sur des gels précoulés (In Vitrogen Novex TrisGlycine , 10 puits, 1. 0 mm). On effectue la migration des protéines à 120Volts, 40 mA pendant 2h30 avec un tampon de migration (In Vitrogen Novex SDS Running buffer (10X)). - Transfert des protéines : On transfert les protéines sur des membranes de nitrocellulose de 9 cm sur 6 cm (Hybond ECL Amersham Pharmacia) La taille du papier whatman utilisé est de 10 cm sur 7. 5 cm. Le transfert des protéines est effectué à 120 Volts, 350 mA pendant 1 h15 avec un tampon de transfert (InVitrogen Novex Tris Glycine Transfert Buffer (25X)). - Coloration des protéines au Rouge Ponceau : On Incube la membrane de nitrocellulose avec du rouge Ponceau (Sigma) pendant 1 minute pour faire apparaître les protéines qui ont été transférées. Si nécessaire, on marque au stylo les bandes du marqueur de taille. - Blocage de la membrane : On Incube la membrane dans du PLT ( PBS- Tween 0.2%- lait 2%) sur la nuit à 4 C. - Incubation avec le premier anticorps : On dilue l'anticorps primaire anti-DsRed (Living Color DsPeptide Clontech) dans le PLT au 1/500ème, et on incube 2 heures à température ambiante. L'incubation est suivie d'un rinçage de deux fois 5 minutes dans du PBS- tween 0.02%. - Incubation avec le deuxième anticorps : On dilue l'anticorps secondaire (Goat Anti-Rabbit IgG (H+L), Horseradish Peroxidase Conjugate Biorad) dans le PLT au 1/3000ème, et on incube 1 heure à température ambiante. L'incubation est suivie d'un rinçage de 4 fois 10 minutes dans du PBS- tween 0. 02%. - Révélation des membranes : On utilise une solution A (5 mL de Tris 100 mM, pH 8.5, 22 L d'acide coumarique et 50 l de Luminol à rajouter à l'obscurité) et une solution B (5 mL de Tris 100 mM, pH 8. 5, 3 L de H202). On prépare extemporanément un mélange des solutions A et B à l'obscurité, puis on incube la membrane à révéler 1 minute dans le mélange de solution A et B. On expose la membrane sur un film autoradiographique pendant 3 minutes environ et on révèle le film après exposition. Exemple 1: Construction du vecteur d'intégration comprenant une cassette d'expression comprenant un polynucléotide codant pour le polypeptide Ds-Red, placé sous le contrôle d'un acide nucléique régulateur selon l'invention et, en particulier, construction de la cassette d'expression comprenant une partie de la séquence SEQ ID N 1. La première étape de la construction est représentée sur la figure 1A. Deux plasmides sont nécessaires à cette première étape. Il s'agit du plasmide pDsRed1-N1 commercialisé par la société Clonetech (référence 6921-1), comprenant, de l'extrémité 5', vers l'extrémité 3' : - Le promoteur CMV IE, - Le gène Ds-Red, - Le signal de polyadénylation SV40, - Le gène de résistance à la kanamycine, - L'origine de réplication du plasmide pUC. Le gène de la protéine Ds-Red est délimité à ses extrémités par la séquence nucléotidique des enzymes de restriction Age # et Not I. Le second plasmide utilisé, nommé pfhx (sp*)GFP, de l'extrémité 5', vers l'extrémité 3' : - Le promoteur de la fibrohexamérine modifié - Le gène codant pour la green fluorescent protein (GFP) - Le signal de polyadénylation SV40 - Le gène de résistance à la kanamycine - L'origine de réplication du plasmide pUC Comme cela est représenté sur la figure 1A, le plasmide pfhx(sp*)GFP, comprend également une séquence nucléotidique délimitée par la séquence nucléotidique de deux enzymes de restriction, Age # et Not I, placée en aval de la séquence du promoteur du gène de la fibrohexamérine. Le fragment Age I-Not I, provenant du plasmide pDSred1-N1 et comprenant la séquence codant pour la protéine Ds-Red est cloné dans le plasmide pfhx (sp*)GFP, à la place de la séquence Age I-Not I. Le plasmide résultant de ce clonage, nommé pfhx(sp*)DsRed est représenté sur la figure 1B, et comprend de l'extrémité 5', vers l'extrémité 3' : - Le promoteur de la fibrohexamérine modifié, - Le gène Ds-Red, - Le signal de polyadénylation SV40, - Le gène de résistance à la kanamycine, - L'origine de réplication du plasmide pUC. Comme cela est représenté sur la figure 1 B, le promoteur de la fibrohexamérine modifié, et le gène Ds-Red sont compris dans un fragment délimité par les séquences Bgl Il et Nae 1. Ce fragment est cloné dans le vecteur pPigA3cyp6a2-(3xP3-GFP)2 dérivé du transposon piggyBac dont la structure est représentée sur la figure 1 B, à la place du fragment Bgl II- Stu # compris dans ce dernier, selon une méthode identique à celle décrite ci- dessus. Le vecteur pPigA3cyp6a2- (3xP3-GFP)2 comprendun pied gauche (L), et un pied droit (R) représentés figure 1 B. Le vecteur obtenu à l'issue de ce deuxième clonage, représenté figure 1 C, nommé Pigfhx(sp*)DsRed-(3xP3-GFP) répond à la définition d'un vecteur selon l'invention. Exemple 2 : Méthode de substitution du codon cystéine en un codon isoleucine dans le gène codant le peptide signal de la fibrohexamérine. La méthode utilisée est représentée sur la figure 2 et comprend plusieurs étapes. Tout d'abord, un fragment du promoteur de la fibrohexamérine est isolé par digestion par les enzymes de restriction Hind III et Pst I. La deuxième étape, désignée PCR1 sur la figure 2A, consiste à réaliser une amplification en chaîne par polymérase en utilisant les amorces de séquence SEQ ID N 4 et SEQ ID N 5 représentées sur la figure 2A. La troisième étape désignée PCR2 sur la figure 2A, consiste à réaliser une amplification en chaîne par polymérase en utilisant les amorces de séquence SEQ ID N 6 et SEQ ID N 7. Les amorces de séquence SEQ ID N 5 et SEQ ID N 6 comprennent un codon isoleucine, destiné à remplacer le codon cystéine du peptide signal naturel de la fibrohexamérine. Les acides nucléiques amplifiés sont ensuite ligaturés, et on obtient l'acide nucléique représenté sur la figure 2B, délimité par les séquences des enzymes de restriction Sacllet Pstl. Cet acide nucléique comprend un codon isoleucine, représenté en gras sur la figure 1 B, remplaçant le codon naturel cystéine. Ce fragment est ensuite cloné à la place de la séquence naturelle correspondante dans le plasmide pfhx (sp*)GFP. Exemple 3 : Protocole de modification du promoteur de la fibrohexamérine par l'adjonction de trois copies d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 2, permettant la fixation du facteur de transcription SGF-1/forkhead, entre les nucléotides 1 et 1379 de la séquence SEQ ID N 1. Ce protocole est illustré sur la figure 3. Dans une première étape, une amplification en chaîne par polymérase de la séquence du promoteur de la fibrohexamérine est effectuée. Cette amplification est réalisée en utilisant des amorces A, B, C et D, représentées sur la figure 3, de séquence SEQ ID N 8 pour l'amorce B, et de séquence SEQ ID N 9 pour l'amorce C. Dans une deuxième étape, les acides nucléiques obtenus sont soumis à une ligature, afin d'obtenir l'acide nucléique dont le brin codant est représenté sur la figure 3. L'acide nucléique obtenu comprend une partie de la séquence du promoteur de la fibrohexamérine modifié par l'adjonction de trois copies d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 2. Cet acide nucléique est ensuite cloné dans le plasmide pfhx (sp*)GFP, à la place de la séquence naturelle du promoteur de la fibrohexamérine, délimitée par les sites de restriction Hind III et Pst I. Le schéma de la séquence SEQ ID N 3 est représenté sur la figure 4. La séquence SEQ ID N 3 comprend, de l'extrémité 5' à l'extrémité 3' : # Le promoteur (1) du gène de la fibrohexamérine. # Trois séquences (2) de fixation de l'élément SGF1/Forkhead (3), en plus de la séquence naturelle. # L'exon 1 (4) de la fibrohexamérine, dont le codon cystéine est modifié. # L'intron 1 (5) de la fibrohexamérine. # Un polynucléotide (6) ayant facilité la construction de la séquence SEQ ID N 1 # Un polynucléotide (7) codant pour la protéine rapporteur Ds-Red . Exemple 4: Accumulation de la protéine Ds-Red dans les glandes séricigènes de vers à soie rendus transgéniques avec le vecteur pPigFbx(sp*)DsRed-(3xP3-GFP) dérivé du transposon piggyBac comprenant la séquence SEQ ID N 1. Les photographies a, b, c, d, e et f présentées figure 5 illustrent l'expression spécifique de tissu de la protéine Ds-Red dans un ver à soie rendu transgénique avec le vecteur dérivé du transposon piggyBac comprenant la séquence SEQ ID N 3. Les photographies a, b et c ont été effectuées en lumière du jour selon trois grossissements. Le test de détection de la présence de la protéine Ds-Red a été effectué selon le protocole décrit cidessus. Les photographies d, e et f sont des prises de vues correspondant aux photographies a, b et c mais effectuées dans le spectre de fluorescence de la protéine Ds-Red. Ces photographies permettent de constater que la fluorescence de la protéine Ds-Red, et donc son expression est limitée aux cellules séricigènes postérieures (PSG, 2) de Bombyx morio Aucune fluorescence correspondant à la présence de la protéine Ds-Red n'est observée dans les cellules séricigènes médianes (MSG, 1). On peut en déduire que les acides nucléiques selon l'invention permettent de diriger l'expression d'un polypeptide d'intérêt spécifiquement dans les glandes séricigènes postérieures d'un lépidoptère. Ce résultat est confirmé par le Western Blot représenté sur la figure 6. Ce Western Blot réalisé dans les conditions décrites ci-dessus, permet de détecter la présence de la protéine Ds-Red dans les glandes séricigènes de vers à soie. Un gel SDS-PAGE (14% ; Tris-glycine ; 0. 1 % SDS) a été transféré sur un filtre de nitrocellulose et coloré au bleu de Coomassie. Le filtre de nitrocellulose est présenté figure 6A. Ce même filtre a ensuite été incubé avec un anticorps primaire polyclonal anti-protéine Ds-Red, puis par un anticorps secondaire de chèvre anti-lapin conjugué à la peroxydase de raifort. Le résultat est présenté sur la figure 6B. On observe des bandes détectées par chimioluminescence, correspondant à la présence de la protéine Ds-Red. Quatre dépôts de protéines des glandes séricigènes d'un ver à soie sont visibles sur le filtre présenté figure 6A et 6B. Les protéines ont été extraites des glandes séricigènes selon le protocole décrit ci-dessus. Les quatre dépôts sont les suivants : - Piste 1 : protéines issues des glandes séricigènes médianes d'un ver à soie non transgénique. - Piste 2 : protéines issues des glandes séricigènes médianes d'un ver à soie transgénique, hétérozygote pour le transgène contenu dans la séquence SEQ ID N 1. - Piste 3: protéines issues des glandes séricigènes postérieures d'un ver à soie non transgénique. - Piste 4: protéines issues des glandes séricigènes postérieures d'un ver à soie transgénique, hétérozygote pour le transgène contenu dans la séquence SEQ ID N 1. Le filtre représenté figure 6A présente des bandes d'intensité comparable, d'une piste à l'autre. Cela permet de conclure que des quantités équivalentes de protéines ont été déposées sur le gel SDS-PAGE. Le filtre présenté comprend également un marqueur de taille visible dans la partie gauche du filtre. Le même filtre, soumis à un traitement par des anticorps, comme cela est décrit ci-dessus est représenté sur la figure 6B. On observe que la protéine Ds-Red est présente en grande quantité dans les glandes séricigènes postérieures. La protéine Ds-Red est également présente dans les glandes séricigènes médianes, mais dans une moindre mesure. Les inventeurs pensent que cette présence est due à la migration de la protéine Ds-Red sécrétée par les cellules séricigènes postérieures dans les glandes séricigènes médianes, et non à une synthèse de la protéine Ds-Red par les glandes séricigènes médianes. Exemple 5 : Accumulation de la protéine Ds-Red dans la soie chez les vers à soie rendus transgéniques avec le vecteur Pigfhx (sp*)DsRed-(3xP3-GFP) dérivé du transposon piggyBac comprenant la séquence SEQ ID N 1. Le test de détection de la présence de la protéine Ds-Red a été effectué selon le protocole décrit ci-dessus. Comme on l'observe sur la figure 7, les fils de soie présentent une fluorescence correspondant à la présence de la protéine Ds-Red. On peut en déduire que les acides nucléiques selon l'invention permettent de diriger la sécrétion d'un polypeptide d'intérêt dans la soie d'un lépidoptère. Ce résultat est confirmé par le Western Blot représenté sur la figure 8. Ce Western Blot, réalisé dans les conditions décrites ci-dessus permet de détecter la présence de la protéine Ds-Red, dans les cocons de vers à soie. Un gel SDSPAGE (14% ; Tris-glycine ; 0. 1 % SDS) a été transféré sur un filtre de nitrocellulose et coloré au rouge Ponceau. Le filtre de nitrocellulose est présenté figure 8A. Ce même filtre a ensuite été incubé avec un anticorps primaire polyclonal anti-protéine Ds-Red, puis par un anticorps secondaire de chèvre anti-lapin conjugué à la peroxydase de raifort. Le résultat est présenté sur la figure 6B. On observe des bandes détectées par chimioluminescence, correspondant à la présence de la protéine Ds-Red. Neuf dépôts de protéines de cocons de vers à soie sont visibles sur le filtre présenté figure 8A et 8B. Les protéines ont été extraites selon le protocole décrit ci-dessus. Il s'agit de : - Pistes C1 et C2 : protéines issues d'un cocon de ver à soie non transgénique. - Pistes T1 et T2 : issues d'un cocon de ver à soie transgénique, hétérozygote pour le transgène décrit dans la séquence SEQ ID N 1. Les six premiers dépôts, en partant du marqueur de taille, présent sur la gauche du filtre, correspondent à des protéines issues du cocon d'un ver à soie débarrassé de l'enveloppe extérieure appelée blaze. Les trois derniers dépôts correspondent à des protéines issues du rinçage de la blaze du cocon d'un ver à soie avec de l'eau. Le filtre représenté figure 8A permet d'observer que les quantités de protéines déposées initialement sur le gel SDSPAGE sont équivalentes. Le même filtre, soumis au traitement décrit ci-dessus est représenté sur la figure 8B. On observe que la protéine Ds-Red est présente en grande quantité dans la fraction issue du rinçage de la blaze du cocon de ver à soie transgénique. On peut en déduire que les acides nucléiques selon l'invention permettent de diriger la sécrétion d'un polypeptide d'intérêt dans la soie d'un lépidoptère. REVENDICATIONS 1. Acide nucléique dirigeant l'expression d'une protéine d'intérêt spécifiquement dans les cellules des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori, caractérisé en ce que ledit acide nucléique comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', (i) une région régulatrice comprenant des signaux de régulation de l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans lesdites cellules séricigènes et (ii) une région codant un peptide signal modifié, placé sous le contrôle de ladite région régulatrice, ledit acide nucléique possédant au moins 90 % d'identité en nucléotides avec le polynucléotide allant du nucléotide 1150 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1 et dans lequel le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine et la leucine. 2. Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit acide nucléique comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', (i) une région régulatrice comprenant des signaux de régulation de l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans lesdites cellules séricigènes et (ii) une région codant un peptide signal modifié, placé sous le contrôle de ladite région régulatrice, ledit acide nucléique comprenant, de l'extrémité 5' à l'extrémité 3', le polynucléotide allant du nucléotide 1150 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1 et dans lequel le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine et la leucine. 3. Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit acide nucléique comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', (i) une région régulatrice comprenant des signaux de régulation de l'expression d'un polynucléotide d'intérêt spécifiquement dans lesdites cellules séricigènes et (ii) une région codant un peptide signal modifié, placé sous le contrôle de ladite région régulatrice, ledit acide nucléique comprenant, de l'extrémité 5' à l'extrémité 3', le polynucléotide allant du nucléotide 1 au nucléotide 2026 de la séquence SEQ ID N 1 et dans lequel le trinucléotide allant du nucléotide 1486 au nucléotide 1488 de la séquence SEQ ID N 1 code pour un acide aminé choisi dans le groupe comprenant l'alanine, l'isoleucine et la leucine. 4. Acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est modifié par l'introduction d'au moins une et d'au plus quatre copies d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 2, entre les nucléotides 1 et 1379 de la séquence SEQ ID N 1. 5. Acide nucléique de séquence complémentaire à un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 4. 6. Cassette d'expression comprenant un polynucléotide d'intérêt placé sous le contrôle d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 5. 7. Cassette d'expression selon la revendication 6, caractérisée en ce que le polynucléotide d'intérêt code pour un polypeptide. 8. Cassette d'expression selon la revendication 7, caractérisée en ce que le polynucléotide d'intérêt code pour un polypeptide choisi parmi les protéines suivantes : - la spidroïne d'araignée ; et - la fibroïne des animaux appartenant au genre Galleria. 9. Vecteur recombinant d'intégration comprenant un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 5 ou une cassette d'expression selon l'une des revendications 6 à 8. 10. Vecteur recombinant de clonage comprenant la séquence nucléotidique d'un vecteur recombinant d'intégration selon la revendication 9. 11. Vecteur recombinant d'intégration selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il s'agit du vecteur Pigfhx(sp*)DsRed- (3xP3-GFP) déposé le 20 février 2003 à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) de l'Institut Pasteur sous le numéro d'enregistrement CNCM 1- 2975. 12. Cellule hôte recombinante comprenant un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 5 ou une cassette d'expression selon l'une des revendications 6 à 8 ou un vecteur selon l'une des revendications 9 à 11. 13. Cellule hôte recombinante selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une cellule d'un animal producteur de soie appartenant à un genre choisi parmi Bombyx, Antheraea, Galleria, Philasomia, Spodoptera ou Drosophila. 14. Cellule hôte recombinante selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une cellule de Bombyx morio 15. Cellule hôte recombinante selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une cellule des glandes séricigènes postérieures de Bombyx mori. 16. Utilisation d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 5, d'une cassette d'expression selon l'une des revendications 6 à 8, d'un vecteur selon l'une des revendications 9 à 11 ou d'une cellule hôte recombinante selon l'une des revendications 12 à 15 pour l'obtention d'un animal transgénique appartenant au genre Bombyx. 17. Utilisation selon la revendication 16 caractérisée en ce que l'animal transgénique appartenant à l'espèce Bombyx mori sécrète une protéine d'intérêt dans le fil de soie. 18. Animal transgénique comprenant, sous une forme intégrée dans son génome, un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 5, une cassette d'expression selon l'une des revendications 6 à 8 ou un vecteur selon l'une des revendications 9 à 11. 19. Procédé d'obtention d'un animal transgénique appartenant à l'espèce Bombyx mori caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Injection d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 5, d'une cassette d'expression selon l'une des revendications 6 à 8 ou d'un vecteur selon l'une des revendications 9 à 11 dans des #ufs de Bombyx mori entre une et cinq heures après la ponte des #ufs, avant la formation du blastoderme ; b) Sélection des animaux transgéniques ayant intégré dans leur génome un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 5 ou une cassette d'expression selon l'une des revendications 6 à 8. 20. Procédé d'obtention d'un animal selon la revendication 19 caractérisé en ce qu'il comprend en outre les étapes suivantes : c) Croisement entre eux de deux animaux transgéniques tels qu'obtenus à l'étape b) ; d) Sélection des animaux homozygotes pour le transgène. 21. Procédé d'obtention d'un fil de soie caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Elever un animal transgénique selon la revendication 18 b) Récupérer la soie produite par l'animal transgénique. 22. Procédé d'obtention d'une protéine d'intérêt caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Elever un animal transgénique selon la revendication 18 b) Récupérer la soie produite par l'animal transgénique c) Récupérer la protéine d'intérêt au sein du fil de soie.