Brevet FR2847345A1 — publié le 20040521

L'invention a pour objet un procédé de criblage et/ou d'évaluation de l'activité anti-ride de produits utilisant un modèle in vitro, le derme équivalent. Les femmes, voire même les hommes, ont tendance actuellement à vouloir paraître jeunes le plus longtemps possible et cherchent par conséquent à estomper les marques du vieillissement de la peau, qui se traduisent notamment par des rides et des ridules. A ce sujet, la publicité et la mode font état de produits destinés à garder le plus longtemps possible une peau éclatante et sans ride, marques d'une peau jeune, d'autant plus que l'aspect physique agit sur le psychisme et/ou sur le moral. La peau humaine est constituée de deux compartiments à savoir un compartiment superficiel, l'épiderme et un compartiment profond, le derme. L'épiderme humain naturel est composé principalement de trois types de cellules qui sont les kératinocytes, très majoritaires, les mélanocytes et les cellules de Langerhans. Chacun de ces types cellulaires contribue par ses fonctions propres au rôle essentiel joué dans l'organisme par la peau. Le derme fournit à l'épiderme un support solide. C'est également son élément nourricier. Il est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire composée elle-même principalement de collagène, d'élastine et d'une substance, dite substance fondamentale, composants synthétisés par le fibroblaste. On y trouve aussi des leucocytes, des mastocytes ou encore des macrophages tissulaires. Il est également constitué de vaisseaux sanguins et de fibres nerveuses. Jusqu'à présent, on traitait les rides et les ridules à l'aide de produits cosmétiques contenant des actifs agissant sur la peau, par exemple en l'hydratant ou en améliorant son renouvellement cellulaire ou encore en favorisant la synthèse du collagène qui compose le tissu cutané. Bien que ces traitements permettent d'agir sur les rides et ridules dues au vieillissement chronologique ou intrinsèque, ainsi que de celles dues au photo30 vieillissement, ils n'ont pas d'effet sur les rides d'expression, lesquelles nécessitent une intervention sur la composante contractile musculaire des rides présente dans la peau. En effet, la demanderesse a montré que les fibres musculaires contractiles, en particulier des fibres musculaires striées, qui se trouvent sous le contrôle direct de l'influx neuro-musculaire, jouaient un rôle essentiel dans la formation des rides d'expression et que la modulation de l'influx neuro-musculaire atténuait les rides d'expression et avait aussi un effet de "lissage" sur le microrelief cutané. Par ailleurs, les tractions mécaniques répétées exercées par les muscles souscutanés au niveau des zones d'expression du visage (rides de front, de la glabelle, de la patte d'oie) créent des forces de tension au niveau du derme. Ces forces de traction modifieraient progressivement le phénotype des fibroblastes présents dans la zone de la ride, leur faisant acquérir des propriétés contractiles particulières. Un des moyens couramment utilisés pour agir sur les rides d'expression est la toxine botulique qui est notamment injectée dans les rides de la glabelle qui sont les rides inter-sourcillières (voir J.D. Carruters et al., J. Dermatol. Surg. Oncol., 1992, 18, pp. 1715 21). Les dermatologues ont également recours à des implants dégradables à base de collagène, d'acide hyaluronique ou d'acide polylactique. Ces méthodes présentent toutefois l'inconvénient de nécessiter une intervention médicale et ne donnent pas de résultats durables. La Demanderesse a en outre proposé divers produits susceptibles d'offrir un effet relaxant lorsqu'ils sont appliqués topiquement sur la peau, permettant ainsi d'agir par une autre voie sur les rides d'expression. Parmi ces composés, on peut notamment citer les antagonistes des récepteurs associés aux canaux calciques (FR-2 793 681), et en particulier le manganèse et ses sels (FR-2 809 005) et l'alvérine (FR- 2798 590); et les agonistes des récepteurs associés aux canaux chlore, dont la glycine (EP-0 704 210) et certains extraits d'Iris pallida (FR-2 746 641). Il existe donc toujours un besoin de disposer de produits à activité antiride qui soient utilisables dans des compositions cosmétiques pour application topique sur la peau ou dans des procédés de traitement cosmétique pour prévenir ou traiter, notamment lisser ou estomper les rides et ridules, en particulier les rides d'expression. Cependant, une des étapes limitantes à l'identification et à la caractérisation de ces nouveaux produits est l'évaluation de leur efficacité pour l'utilisation recherchée. Certes, on connaît des méthodes de type extensomètre permettant d'évaluer les effets tenseurs de matières premières in vitro, comme certains polymères, sur la base de critères physiques (force, élasticité...). On connaît par ailleurs des méthodes de type 'modèle de jonction nerf/muscle' pour appréhender l'effet de produits: un produit est reconnu comme relaxant par exemple lorsqu'il montre un effet de relaxation sur un tissu musculaire contracté et/ou montre un effet inhibiteur dans un modèle expérimental de jonction nerf-muscle (plaque motrice), notamment le modèle décrit par W. Steinbrecher dans: Electrodes for stimulation and bioelectric potential recording, Ed Biomerstechnic, 1988, pages 96-98. Mais ces méthodes sont parfois délicates à mettre en oeuvre. Il serait donc souhaitable de disposer d'un test simple à mettre en oeuvre et qui reproduise les phénomènes biologiques à l'origine de l'activité in vivo, ou qui en soit le plus proche possible. De manière inattendue, la Demanderesse a trouvé qu'un modèle de derme équivalent permet de déterminer, de manière qualitative et semiquantitative, l'activité anti-ride de produits, en particulier de produits cosmétiques. A la connaissance de la Demanderesse, le derme équivalent, connu jusqu'ici dans la mise au point de peaux reconstruites, comme décrit dans les demandes de brevets (EP-A285471, EP-A-285474, EP-A-789074, EP-A- 502172, EP-A-418035, WO-A-9116010, EPA-197090, EP-A-20753, FR-A-2665175, FR-A-2689904), n'a jamais été utilisé pour cribler et/ou évaluer l'activité anti-ride de produits. C'est pourquoi la présente invention a pour objet un procédé de criblage et/ou d'évaluation de l'activité anti-ride d'au moins un produit, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes: a) on prépare, sur un support, un derme équivalent dans un milieu de culture adéquat comprenant au moins un produit à tester; b) on mesure de la contraction spontanée des dermes équivalents; c) on compare la contraction spontanée du derme équivalent préparé avec le ou les produit(s) à tester, par rapport à un témoin. Par " activité anti-ride " selon l'invention, on entend toute activité pouvant conduire au lissage des rides et des ridules, en particulier des rides d'expression; cette activité anti-ride peut notamment se manifester par un effet relaxant, c'est-à-dire un effet décontractant ou inhibiteur sur les forces contractiles des fibroblastes du derme, générées par les tractions mécaniques répétées exercées par les muscles sous-cutanés Par " support " selon l'invention, on entend tout support de culture adapté à la préparation du derme équivalent. On peut citer par exemple une plaque de culture de 12 puits (type Costar référence 3512). Par " derme équivalent " selon l'invention, on entend par exemple toute matrice de collagène ensemencée par des cellules de peau, choisies au moins parmi les fibroblastes et les myofibroblastes obtenus par différenciation in vitro, sur un support de culture. On peut citer à titre d'exemple de préparation de derme équivalent les protocoles décrits dans les demandes de brevets (EP-A-285471, EP-A-285474, EP-A-789074, EP-A-502172, EP-A-418035, WO-A-9116010, EP-A-197090, EP-A20753, FR-A-2665175, FR-A2689904) ou de préférence le protocole décrit par Asselineau et col., 1987, (Models in dermato., vol.III, Ed. Lowe & Maibach, 1-7). L'équivalent de derme utilisé selon l'invention peut être constitué par exemple de lattices mixtes collagène/fibroblastes, de substituts souscutanés à base de collagène contenant des fibroblastes, ou de tout autre support compatible avec la viabilité cellulaire dans lequel pourraient être inclus des fibroblastes. Préférentiellement selon l'invention, l'équivalent de derme est constitué de lattices mixtes collagène/fibroblastes, correspondant à des cultures en 3 dimensions de fibroblastes humains ancrés dans une matrice de collagène. Les fibroblastes utilisés selon l'invention peuvent être de toute espèce (homme, souris, etc.) et provenir de peaux jeunes ou âgées, ou encore être vieillis expérimentalement in vitro selon les méthodes connues de l'homme du métier. De préférence, selon l'invention, on utilise des fibroblastes de peau humaine normale. On peut également utiliser des myofibroblastes obtenus par différenciation in vitro avec des facteurs de croissance. Il est envisageable que le support comprenne en outre d'autres types cellulaires et/ou d'autres types de protéines. On citera par exemple les glycosaminoglycans. La densité de cellules -utilisée selon l'invention est en général celle décrite dans l'art antérieur à propos des équivalents de derme obtenus in vitro. Mais, il est possible de faire varier cette densité en toute proportion que l'on estime être utile à l'évaluation objet du procédé de l'invention. L'épaisseur du derme équivalent utilisé selon l'invention est en général celle décrite dans l'art antérieur. On sait d'après cet art antérieur que cette épaisseur est fonction de la quantité de mélange collaigène/cellule que l'on utilise. En général, cette épaisseur est 1 0 comprise entre 0,05 mm et plusieurs millimètres. Préférentiellement, selon l'invention, l'épaisseur du derme équivalent est comprise entre 0,20 mm et 1,5 mm. Il peut s'avérer intéressant de faire varier cette épaisseur en toute proportion que l'on estime être utile à l'évaluation objet du procédé de l'invention. L'homme du métier sait adapter la quantité de mélange collagène/cellule qu'il utilise pour obtenir l'équivalent 1 5 de derme de l'épaisseur qu'il désire. Selon le procédé de l'invention, on peut utiliser alternativement: - soit un derme équivalent libre: une fois formé, le derme équivalent est immédiatement détaché du support de culture et sa contraction démarre; soit un derme équivalent attaché: une fois formé, le derme équivalent est laissé adhérent au support de culture pendant une certaine durée, puis détaché du support pour que la contraction puisse démarrer. L' étape d'attachement du derme équivalent induit un effet réservoir de forces au sein du derme équivalent; par ailleurs, elle permet lors du détachement du derme équivalent un déclenchement de la contraction simultanément pour toutes les cellules. Ce derme équivalent attaché permet donc de cribler plus rapidement et/ou plus efficacement des produits à effet relaxant, par rapport au derme équivalent libre.' Selon un mode préféré, on utilisera donc un procédé dans lequel le derme équivalent préparé à l'étape a) est laissé adhérent au support pendant une durée comprise entre 2 à 5 jours, de préférence 3 jours, avant d'être détaché de son support pour que la contraction démarre. Selon un autre mode préféré, le procédé selon l'invention comprend en outre, dans le milieu de culture à l'étape a), un agent contractant pour accélérer la contraction spontanée des fibroblastes ou myofibroblastes et permettre ainsi de cribler plus rapidement et/ou plus efficacement des produits à effet relaxant. A titre d'agents contractants utilisables selon l'invention, on peut citer la bradykinine, l'acide lysophosphatidique (LPA) et le facteur de croissance PDGF (Platelet-derived Growth Factor). L'agent contractant selon l'invention peut être utilisé à des concentrations comprises entre de 1-O1T M et I04 M, de préférence entre 10-9 M et 10-3 M. Par " milieu de culture adéquat " selon l'invention, on entend un milieu de culture nutritif qui comprend au moins les éléments nécessaires à la croissance et à la survie des cellules de peau, notamment des fibroblastes ou des myofibroblastes. On peut citer par exemple comme milieu culture bien connu de l'homme du métier, le milieu MEM (Minimum essential medium). Par "produits" selon l'invention, on entend tout composé, molécule, extrait d'origine végétale ou biologique, association de composés, ou éventuellement en mélange avec au moins des excipients physiologiquement acceptables, et notamment sous une forme adaptée à une application cosmétique sur la peau. Les produits à tester, pris seuls ou en association, dans le procédé selon l'invention sont utilisés à des concentrations comprise entre 10-8 M et 10-3 M, de préférence entre 10-7 Met 105 M. Le procédé selon l'invention est particulièrement adapté au criblage et/ou à l'évaluation de produits cosmétiques, utilisables dans des compositions pour application topique sur la peau ou dans des procédés de traitement cosmétique pour prévenir ou traiter, notamment lisser ou estomper les rides et les ridules, en particulier les rides d'expression. Par " contraction spontanée " du derme équivalent selon l'invention, on entend l'effet des rétractions intercellulaires établissant des forces de tension entre les cellules et leur milieu environnant. Ces forces induisent une réduction de la surface du derme équivalent au cours du temps, qu'il est possible de mesurer, notamment par analyse d'image. De ces mesures de surface, on déduit un pourcentage de contraction qui permet d'appréhender le phénomène de " micro-tensions " in vitro. La mesure de contraction spontanée des dermes équivalents à l'étape b) consiste à mesurer la surface des dermes équivalents et en déduire un taux de contraction spontanée correspondant. Elle peut être réalisée par tout système connu de l'homme du métier. De préférence, on utilisera un système d'imagerie numérique associé à un logiciel d'analyse d'image. En particulier l'image numérique est acquise au moyen d'une caméra CDD-Iris Sony DXC- 1 07P puis transcrite en mesure de surface et pourcentage de contraction au moyen d'un système d'analyse d'image Zeiss Axiovision 3.0. Le procédé selon l'invention comprend en outre une étape c) o l'on compare la contraction spontanée du derme équivalent préparé avec le produit à tester, par rapport à un témoin. Selon un premier aspect de l'invention, le témoin est un derme équivalent préparé en absence de produit à tester, autrement appelé 'derme équivalent témoin' dans le reste de la description. Le principe de criblage selon l'invention consiste à tester, sur des dermes équivalents préparés dans les mêmes conditions, un grand nombre de produits et de sélectionner, parmi les produits testés, ceux pour lesquels on mesure une différence de taux de contraction spontanée du derme équivalent par rapport à un derme équivalent témoin. Selon un second aspect de l'invention, le témoin est un derme équivalent préparé avec un produit témoin. Par " produit témoin ", on entend un composé, molécule, extrait d'origine végétale ou biologique, pour lequel l'activité anti-ride est connue et utilisée comme référence, ou encore un des produits constitutif d'une association de produits à évaluer. Le procédé selon l'invention présente en effet l'avantage de pouvoir évaluer de façon qualitative et/ou semi-quantitative l'activité anti-ride d'une association de produits par rapport à l'activité anti-ride de chaque produit pris isolément. Le procédé permet ainsi de mettre en évidence, pour une association de produits, une activité anti-ride de type additionnelle ou synergique. Par "activité anti-ride de type additionnelle " d'une association de produits, on entend une activité anti-ride correspondant à la somme des activités anti-rides de chaque produit pris isolément. Par "activité antiride de type synergique " d'une association de produits, on entend une activité anti-ride supérieure à la somme des activités anti-rides de chaque produit pris isolément. L'invention a également pour objet un procédé dans lequel on sélectionne à l'issue de l'étape c) les produits pour lesquels la contraction spontanée du derme équivalent préparé avec le produit est inférieure d'au moins 10% à la contraction d'un derme équivalent préparé sans produit ou préparé avec un produit témoin. Ces produits sont donc caractérisés par un effet relaxant par rapport au témoin. On comprend donc de ce qui précède les principaux avantages du procédé selon l'invention par rapport aux méthodes existantes: - ce procédé permet de cribler et/ou évaluer des produits sur des critères biologiques, en ce qu'il reproduit in vitro un des facteurs contractiles impliqué dans la formation de la ride; - ce procédé est modulable (fibroblastes jeunes ou âgés, myofibroblastes, derme libre ou attaché, ajout d'agent contractant...) selon l'efficacité du produit recherchée (activité antiride plus ou moins importante); - il permet de mesurer des effets additionnels ou synergiques entre plusieurs produits, en comparant l'efficacité biologique de chacun des produits pris isolément par rapport à leur efficacité en mélange, sur la contraction spontanée des dermes équivalents. - enfin, il est facile à mettre en oeuvre et rapide: un simple crible et/ou évaluation visuel de dermes équivalents par rapport à un témoin permet de sélectionner les produits à activité anti-ride, en particulier avec un effet relaxant. L'invention a donc également pour objet l'utilisation d'un derme équivalent dans un procédé de criblage et/ou d'évaluation selon l'invention pour visualiser, évaluer et quantifier l'activité anti-ride de produits à tester, en particulier un effet relaxant. L'invention porte également sur l'utilisation d'un procédé selon l'invention pour obtenir des produits à activité anti-ride ou effet relaxant utilisables dans des compositions cosmétiques ou procédés de traitement cosmétique destinés à traiter et/ou lisser les rides et les ridules, en particulier les rides d'expression. Enfin, l'invention concerne un procédé de préparation d'une composition cosmétique comprenant au moins (i) une étape de sélection d'un produit selon le procédé de criblage et/ou d'évaluation selon l'invention et (ii) une étape de mélange dudit produit sélectionné en (i) avec au moins des excipients physiologiquement acceptables Par "excipients physiologiquement acceptables ", on entend des produits connus de l'homme du métier dans la préparation de compositions cosmétiques, qui sont compatibles avec la peau. On peut citer par exemple les adjuvants, les huiles, émulsionnants et coémulsionnants, les gélifiants. La composition peut également comprendre des actifs, comme par exemple des agents desquamants, des agents hydratants, des agents dépigmentants ou propigmentants; des agents anti-glycation; des inhibiteurs de NOsynthases; des agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques ou épidermiques et/ou empêchant leur dégradation; des agents tenseurs; des agents photoprotecteurs... L'invention sera maintenant illustrée par les exemples non limitatifs suivants. La figure 1 est une représentation graphique représentant des mesures de pourcentage de contraction de derme équivalent en fonction du temps, en présence de vérapamil par rapport à un témoin. La figure 2 est une représentation graphique représentant des mesures de pourcentage de contraction de derme équivalent en fonction du temps, en présence de gluconate de manganèse par rapport à un témoin. EXEMPLES Exemple l: Mise au point du procédé de criblage de produits à activité anti-ride Sauf indication contraire, l'ensemble des milieux et tampons utilisés dans les exemples sont décrits dans Bell et col. 1979, (P.N.A.S. USA, 76, 1274-1278), Asselineau et Prunieras, 1984, (British J. of Derm., Il l, 219-222) ou Asselineau et col., 1987, (Models in dermato., vol.III, Ed. Lowe & Maibach, 1-7). a) préparation du derme équivalent attaché en présence ou non de vérapamil Deux séries de 3 dermes équivalents attachés contenant des fibroblastes humains normaux sont préparés: une série témoin sans aucun traitement, et une série traitée par le vérapamil (10-5 M). L'expérience est répétée 2 fois. Le vérapamil est connu comme inhibiteur calcique ayant un effet relaxant sur les fibres musculaires lisses. Il agit comme antagoniste calcique au niveau des canaux calciques de type L, empêchant le calcium de rentrer pour jouer son effet sur la contraction musculaire. Les équivalents de derme sont préparés comme décrits dans Asselineau et col., Exp. Cell. Res., 1985, 159, 536-539; Models in dermatology, 1987, vol 3 pp 1-7, dans les proportions suivantes: Milieu MEM (1,76X) avec ou sans vérapamil 45% Sérum de Veau Foetal: 9% NaOH (0.N): 5% Acide acétique (1/1000): 4% Collagène: 26% Fibroblastes: 11% Le derme équivalent traité diffère du derme équivalent témoin en ce que l'on ajoute au milieu MEM 1,76X du vérapamil, qui se trouve à la concentration finale de 10-5 M dans le derme équivalent traité. il Le collagène utilisé est du collagène de type I (solution commerciale), mais on peut également utiliser du collagène de type III ou IV. Il est extrait de queues de rat ou de peau de veau par hydrolyse acide et conservé en milieu acide à +40C; il polymérise naturellement par réchauffement à 370C et par diminution du taux d'acidité. Le collagène est préalablement dialysé contre des bains successifs d'eau + Acide acétique. Le protocole est le suivant: dans un tube Falcon stérile, on introduit le milieu MEM 1,76 X en présence d'additifs (Glutamine 1%, Acides aminés non essentiels 1%, Pyruvate de sodium 1%, Fungizone 1% et Pénicilline/Streptomycine 1%), le sérum de veau foetal, la soude NaOH 0,1 N. On ajoute alors les fibroblastes isolés à partir d'explants de peau humaine à la concentration de 1,4x 105 cellules pour 1 ml de milieu de culture. On ajoute alors lentement, contre la paroi du tube de façon à observer l'apparition d'un nuage blanchâtre, un mélange volume/volume de collagène dans de l'acide acétique au 1/1000. L'ensemble est alors mélangé avec précaution et réparti dans les puits d'une plaque de culture de 12 puits (type Costar référence 3512) à raison de 0.5ml de mélange par cm2. La plaque de culture est alors placée dans un incubateur à 370C avec 5% de Co2. Une fois formés après polymérisation du collagène, les dermes équivalents sont laissés adhérents au support de culture pendant 3 jours puis détachés du support pour que la contraction puisse démarrer. Ces dermes équivalents attachés sont sortis de l'incubateur pour effectuer les prises d'image en vue de la mesure de leur surface et ce pour chaque point de la cinétique de contraction (0, 4, 8 et 24 heures). Ils sont immédiatement remis dans l'incubateur entre chaque point de mesure. b) Evaluation de l'activité anti-ride du vérapamil par mesure du pourcentage de contraction du derme équivalent L'évaluation de la contraction spontanée des dermes équivalents traité (avec vérapamil) et témoin (sans vérapamil) est réalisée en mesurant leur surface, à différents temps après le début de la contraction spontanée. Pour cela, une image numérique est acquise pour chaque derme équivalent traité ou non traité au moyen d'une caméra (Caméra CCD -Iris Sony DXC 107P) et la surface est ensuite calculée sur chaque image au moyen d'un système d'analyse d'image (Zeiss Axiovision 3.0). A cette mesure de surface correspond un pourcentage de contraction égal au rapport des surfaces selon la formule: % de contraction = (Sp - Si) x 100 Sp o: Sp' représente la surface d'un puits de la plaque de culture; elle correspond à la surface totale du derme équivalent avant contraction Si' représente la surface du derme équivalent à l'instant i de la cinétique de contraction. Les résultats sont présentés à la figure 1, qui représente l'effet du vérapamil sur la contraction spontanée des dermes équivalents en fonction du temps, par rapport à des dermes équivalents témoins. La figure montre que: - 4 heures après avoir détaché le derme équivalent témoin de son support, le taux de contraction atteint 34%, pour progresser à 48% à 8 h et 65% à 24 h. - en comparaison, 4 heures après avoir détaché le derme équivalent traité avec le vérapamil, le taux de contraction n'est que de 20%, puis 22% à 8 h et 37% à 24 h, d'o une différence de taux de contraction par rapport au derme équivalent témoin de 14%à4h,de26%à8hetde28%à24heures. Cet effet d'inhibition ou de retard sur la contraction spontanée du derme équivalent traité par rapport au derme équivalent témoin est bien corrélé à l'effet relaxant du vérapamil. Ces résultats montrent donc que le procédé de l'invention utilisant un modèle in vitro de type derme équivalent permet de mettre en évidence des différences de contraction des dermes équivalents en présence de produits à tester, par rapport à des dermes équivalents témoins. Ce procédé permet donc de cribler facilement et rapidement de nouveaux produits antirides à effet relaxant, utilisables dans des compositions cosmétiques ou des procédés de traitement cosmétique pour lisser les rides et les ridules, en particulier les rides d'expression. Exemple 2: Mise en évidence de l'effet relaxant du pluconate de manganèse sur derme équivalent libre Les dermes équivalents libres utilisés dans le cadre de cet exemple sont préparés comme décrits à l'exemple 1 à la différence près que, une fois formés, les dermes équivalents sont immédiatement détachés du support de culture et leur contraction démarre. Et le derme équivalent traité comprend du gluconate de manganèse à une concentration finale dans el derme équivalent traité de 0.08mM au lieu du vérapamil à une concentration de 10-5 M. Le manganèse est connu pour son activité inhibitrice vis-à-vis des canaux calcium; l'utilisation du manganèse et de ses sels pour relâcher ou relaxer les tissus, et ainsi diminuer les rides et les ridules est décrite par la Demanderesse dans FR 2 809 005. Selon le protocole d'évaluation décrit à l'exemple 1, la cinétique de contraction est réalisée de jour 1 (Ji) à jour 4 (J4) avec une mesure quotidienne de la surface. Le milieu de culture contenant ou pas le gluconate de manganèse est renouvelé tous les 2 jours. Les résultats sont présentés à la figure 2: - pour le derme équivalent témoin, le taux de contraction est de 22% à J1, puis de 29% à J2, 37% à J3 et 40% à J4; - en présence de gluconate de manganèse à 0.08 mM, le taux de contraction est de 21% àJl, puis de 28% àJ2, 26% àJ3 et 27% àJ4. Donc l'effet relaxant du gluconate de manganèse se manifeste progressivement, avec une différence de taux de contraction de 11% à J3 et de 13% à J4. Cet exemple montre que l'effet relaxant d'un produit cosmétique peut être évalué sur derme équivalent selon le protocole de l'invention. Par comparaison à l'exemple 1, et bien que les produits testés ne soient pas les mêmes, les différences de cinétiques (jours/heures) suggèrent que le derme équivalent attaché est avantageux en ce qu'il permet d'accélérer le phénomène de contraction spontanée et donc de rendre plus rapide et/ou plus efficace le procédé de criblage des produits anti-rides d'intérêt. REVENDICATIONS 1. Procédé de criblage et/ou d'évaluation de l'activité anti-ride d'au moins un produit, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes: a) on prépare, sur un support, un derme équivalent dans un milieu de culture adéquat comprenant au moins un produit à tester; b) on mesure la contraction spontanée des dermes équivalents; c) on compare la contraction spontanée du derme équivalent préparé avec le ou les produit(s) à tester, par rapport à un témoin. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le témoin à l'étape c) est un derme équivalent préparé en l'absence de produit à tester. 3. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le témoin à l'étape c) est un derme 1 5 équivalent préparé avec un produit témoin. 4. Procédé selon l'une des revendications i à 3, caractérisé en ce que le derme équivalent préparé à l'étape a) comprend au moins du collagène et au moins des cellules de peau choisies parmi les fibroblastes ou les myofibroblastes. 5. Procédé selon l'une des revendications I à 4, caractérisé en ce que le derme équivalent préparé à l'étape a) est laissé adhérent au support de culture pendant une durée comprise entre 2 et 5 jours. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le milieu de culture à l'étape a) comprend en outre un agent contractant. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel l'agent contractant est choisi parmi la bradykinine, l'acide lysophosphatidique (LPA) et le facteur de croissance PDGF. 8. Procédé selon l'une des revendications 6 et 7, caractérisé en ce que l'agent contractant est utilisé à une concentration comprise entre 10-9 M et 103M. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, dans lequel les produits à tester sont utilisés à une concentration comprise entre 10-' M et 1 0- M. 10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, dans lequel les produits à tester sont utilisés à une concentration comprise entré 107 M et 10-5 M. Il. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape b) consiste, à un temps donné après le début de la contraction spontanée, à mesurer la surface de dermes équivalents et à en déduire un pourcentage de contraction des dermes équivalents. 12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel la mesure à l'étape b) utilise un système d'imagerie numérique associé à un système d'analyse d'image. 13. Procédé selon la revendication 12 dans lequel l'image numérique est acquise au moyen d'une caméra CDD-Iris Sony DXC-107P puis transcrite en mesure de surface et pourcentage de contraction au moyen d'un système d'analyse d'image Zeiss Axiovision 3.0. 14. Procédé selon l'une des revendications 1 à 13, dans lequel on sélectionne à l'issue de l'étape c) les produits pour lesquels la contraction spontanée du derme équivalent préparé avec le produit est inférieure d'au moins 10% à la contraction d'un derme équivalent préparé en l'absence de produit ou préparé avec un produit témoin. 15. Utilisation d'un derme équivalent dans un procédé de criblage et/ou d'évaluation selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisée en ce qu'il permet de visualiser, évaluer et quantifier l'activité anti-ride de produits à tester, en particulier un effet relaxant. 16. Utilisation d'un procédé selon l'une des revendications 1 à 14 pour obtenir des produits à effet relaxant utilisables dans des compositions cosmétiques ou procédés de traitement cosmétique destinés à traiter et/ou lisser les rides et les ridules, en particulier les rides d'expression. 17. Procédé de préparation d'une composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins (i) une étape de sélection d'un produit selon le procédé de criblage et/ou d'évaluation selon l'une des revendications 1 à 14 et (ii) une étape de mélange dudit produit sélectionné en (i) avec au moins des excipients physiologiquement acceptables.