Brevet FR2849378A1 — publié le 20040702

i La présente invention concerne une composition trophique en milieu aqueux, et ses diverses applications, en particulier en ophtalmologie, aussi bien chez l'homme que chez l'animal. Plus particulièrement, la présente invention s'intéresse aux compositions trophiques comprenant une base nutritive complexe. Par base nutritive complexe, on entend toute composition ou formulation, en milieu aqueux, se distinguant, comme précisé ci-après, d'un milieu de culture cellulaire, même si elle permet, en général, comme ce dernier, une culture in vitro viable pendant au moins 72 heures d'un inoculum de certaines cellules prédéterminées. Différents milieux de cultures ont été effectivement décrits, et sont commercialisés. Ainsi, s'agissant de la culture in vitro de kératinocytes, on peut citer: - BOYCE ST, HAM RG, Calcium-regulated differentiation of normal human epidermal keratinocytes in defined clonal culture and serumfree 20 serial culture; J. Invest. Dermatol. 1983; 81:335-409; - BOYCE ST, HAM RG, Cultivation, frozen storage, and clonal growth of normal human epidermal keratinocytes in serum-free media J. Tissue Culture Methods 1985; 9: 83-93; - le milieu commercial dénommé MCDB 153, commercialisé 25 notamment par les Sociétés IRVINE SCIENTIFIC et GIBCO-BRL; - les milieux commerciaux dénommés DMEM (DUBECO Modified Epidermal Medium); KSFM de GIBCO-BRL, etc... De tels milieux de cultures incorporent, pour être actifs, des facteurs de croissance cellulaire, soit que ces facteurs sont compris au départ 30 dans la composition du milieu de culture, soit que ces facteurs sont produits au moment de la culture, par exemple par une couche nourricière de fibroblastes, s'agissant de la culture de kératinocytes. Une base nutritive complexe, telle que considérée selon la présente invention, ne comporte pas dans sa mise en oeuvre de facteur de 35 croissance, par exemple, d'EGF (Epidermal Growth Factor). Beaucoup des milieux de culture précédemment identifiés comportent des extraits biologiques, par exemple d'origine animale, cellulaire, ou autre, c'est-à-dire obtenus à partir d'une matière première biologique. Au rang de ces extraits biologiques, on peut citer, à titre d'exemple, tout sérum de veau foetal, tout extrait de tige pituitaire de boeuf. Par nature, ces extraits ont une composition variable, voire indéterminée. Une base nutritive complexe, telle que considérée selon la présente invention, ne comporte aucun extrait biologique tel que défini 10 précédemment. Ces mêmes milieux de culture précédemment identifiés comprennent, dans certains cas, différents principes actifs thérapeutiques, utilisés en tant que médicaments, et ce pour favoriser la conservation, et/ou, l'efficacité du milieu de culture. Au rang de ces principes actifs, on peut citer certains antibiotiques, par exemple la pénicilline et/ou la streptomycine, seules ou en mélange, certaines hormones, par exemple la toxine cholérique, l'insuline. Une base nutritive complexe, considérée selon la présente invention, ne comporte pas de principe actif médicamenteux. De telles bases nutritives complexes, au sens o celles-ci peuvent être utilisées, seules ou en combinaison avec d'autres composants, en tant que produit actif ou comme excipient, ont été décrites dans le document WO 96/21421. De telles bases nutritives complexes sont constituées en milieu 25 aqueux par au moins, une multiplicité d'acides aminés, dont certains essentiels, différentes vitamines, des oligo-éléments, et des sels métalliques. Conformément au document WO 96/21421, une telle base nutritive complexe a, par exemple, la composition suivante, selon Tableau 1 ci-après: Tableau I COM POSANTS i Concentration ________________________________enmgl Eau {q.s.p. Acides aminés L-Alanine 9,2 L-Ar-qinine HCL -421,4 COMPOSANTS Concentration en mg/I Acides aminés (suite) L-Asparagine (anhydre). . .... .. ................DTD: Acid e.. .........L.sp rti....... qu.. .. . ........... .................. ..................DTD: L -C y s t.n H C... . ....... ...... ................................ .... . . ............... .......... Acide L-qlutamiq.ue L-Glutamine,... ",,.,,.,,..,,. ,,, ""............. G. ..yc.. n e... " .................................. ............. L-Histidine HCI.. H.20. ................ .......................... L-Isoleucine,, ," ,, ,,,,,..,,,." " . L -M sd ione... ......... .......... ..................................... ........DTD: L-Méthi onine..... . ... .. ... ........ L-héylta!n ",,,... . ........... - . ,., ,,,"".".",.".."...... ......... . . ..... . .... L-Proline L-Thréonine.. .... ................. L-Tryp!ophane...Tyrosine. 2. Na 2H............ .......... ............. .. .....................................DTD: L-Valine !.,.2......... ............. ........_I _.l -42,0 1754,4l !.75. .. ..... ....... 5.! .... ... . 0, ............. .. . ......... . ..... ..........DTD: 131.,2............. 5...........................4, 0................. 35................ _._... .... ....... 34,6 9___..__._.____.. ____......... 1,...... 70,3. .11,7 70.3 Vitamines d-Biotine 0,02 - Acide -foli-------ue_-- . ........ ...... ........ ..................... ............................ -,O -............DTD: Acide oliRue 0,80 Nicotinamide. . 0,04 D-Ca Pantothénate.0,. ..30 R!bof!ve.................................................................. ...........................................4.......... Pyridoxine HCI. ...DTD: ...... . . . 0,06 Riboflavine 0,04 Thiamine HCI 0,30 i-lnositol 18,0 _i-Jn osito[ . ......................................................... ...DTD: . -. .. .................... ... ........... !,. ..............DTD: !Pyruvate de sodium 55,0 Thymidi. ..ne 0,73 Adn ne- - -- . 24,0 Acide DL-lipoique 0,20 Composants inorganiques Chlorure de sodium 6800,0 KO 112,0 C___a_ h___u. r e __ e s. _. ............. ......... .................. _6 _0 ___.?__._.Na2 HP04 - 284,0-CuSO4.5H20 0,003 Acétate de sodium 300,0 D-Glucose 1080,0 _.a... n y.re_......... HEPES (pipérazine) . .. 6600,0 P_ phosPhryléthanolamin.e..0,.......,,, 06768 ...E_ h o a m ne............. .......... ........ . ......................DTD: ....... ............................... ................ 0. 6.8. .........DTD: Ethanolamnine. . . 0,04684 Sulfate de sodium 3,4. Bicarbonate de sodium 1160,0 . ... . Biaboaee. s.J i.......... ......... .......... ...... ...... ..... ....................................J6.0....... FeSO4.7H20. 1,39 FeS94-7H9_.. ......... ..... ........... ....... ........ ... ... .. . ..... ...... . .............................................DTD: 9.........DTD: mgCl2.6H2O,.. 120,0 M rgJ- 6HzO. ............ . .......................... ................................................--9............DTD: CaCI2.2H20 De 13,0 à 22,05 _ZCanS!O,4,H2 O.,, ,,.......... .................... , 1 __Z _nS 0 _.-Z _H a.......................... . ......................... ....... .............DTD: (NH,4) Mo7O,4.4HO20 Na2SiO. 5H20. . ........... .. -..... ...... ....... ... ....... ....... .. . ........... O..4.. .. .-... . .............DTD: COMPOSANTS Concentration _______________________________enmgII Composants inorganiques. suite).. .. ... ..... . .....DTD: MnCI2.4H20 0,00002 M nC!2 4H2O. . ...... . ................ ............. . .... . .... ....0002 SnCI2.2H20 0,00011 NH4 V03 0,00057 La présente invention a pour objet une composition trophique comprenant une base nutritive complexe, telle que précédemment définie, permettant en particulier d'améliorer la viabilité, par exemple en cas 5 d'agression ou de stress, et de maintenir l'intégrité et l'équilibre des cellules épithéliales de la cornée de l'oeil, chez l'homme ou l'animal. Plus particulièrement, la présente invention a pour objet une composition trophique permettant d'améliorer la viabilité, la croissance, et la différenciation des cellules de l'épithélium cornéen, chez l'homme ou l'animal. 10 Conformément à la présente invention, la composition trophique en milieu aqueux comprend une base nutritive complexe, constituée, au moins, par une multiplicité d'acides aminés, des vitamines, des oligo-éléments, et des sels métalliques, ladite base excluant tout facteur de croissance cellulaire, tout extrait biologique d'origine animale ou cellulaire, et tout principe actif 15 thérapeutique, et ladite composition est caractérisée en ce que: - outre la base nutritive complexe, elle est constituée par un inhibiteur des collagénases de l'épithélium cornéen chez l'homme ou l'animal, et par un promoteur de la synthèse du néocollagène; - elle est formulée, avec la base nutritive complexe, pour établir 20 un pH compris entre 7,3 et 7,5, et une osmolarité comprise entre 300 et 350 mOsm. Selon l'invention, la composition trophique présente avantageusement les caractéristiques suivantes, ces dernières étant considérées seules ou en combinaison: - l'inhibiteur des collagénases est choisi dans le groupe constitué par la cystéine, la N-acétyl cystéine, et le sel de calcium de l'EDTA; - l'inhibiteur des collagénases est la N-acétyl cystéine; l'inhibiteur des collagénases représente au maximum 5 %, et de préférence entre 0,05 et 0,5 % en poids de ladite composition; - le promoteur de la synthèse du néocollagène est la proline ou l'hydroxyproline; - le promoteur de la synthèse du néocollagène représente au maximum 0,5 %, et de préférence 0,004 % en poids de ladite composition; - la composition trophique comprend de l'acide hyaluronique, et/ou un sel de l'acide hyaluronique, dans une proportion pondérale totale de la composition, au plus égale à 0,1 %, et de préférence égale à 0,07 %; - la composition trophique comprend un conservateur, dans une proportion pondérale de la composition, au plus égale à 0,0001 %; - le conservateur est le polyhexanide ou polyhexaméthylène biguanide (PHMB); - la composition trophique répond à la formule décrite par le Tableau 2 dans la description. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition telle que précédemment décrite en tant que médicament, par exemple en ophtalmologie ou contactologie, chez l'homme ou l'animal. Elle concerne également un médicament, caractérisé en ce qu'il comprend une composition selon l'invention, sous forme liquide, ou sous forme sèche, c'est-à-dire pour reconstitution avec un milieu aqueux. Dans une variante, le médicament est sous forme liquide, pour application locale au contact extérieur de la cornée, chez l'homme ou l'animal. 20 Dans une autre variante, le médicament tel que précédemment décrit, est sous la forme de gouttes, ou de larmes régénérantes, ou de collyre, ou de solution. Ainsi, la présente invention propose un collyre comprenant une composition trophique telle que définie précédemment, permettant de cicatriser 25 la cornée, ou pour prévenir les adhérences conjonctivales. Un tel collyre a les indications suivantes: - ulcérations cornéennes d'origine traumatique ou autre, brlures de la cornée; - prévention des adhérences conjonctivales et cornéo30 conjonctivales (symblépharon); xerosis conjonctival et cornéen. L'invention concerne également une solution de confort pour application locale au contact extérieur de la cornée, chez l'homme ou chez l'animal, caractérisée en ce qu'elle comprend une composition selon 35 l'invention. Ainsi, la présente invention propose, par exemple, " des larmes régénérantes ", comprenant une composition trophique telle que définie précédemment, pour l'hydratation de lentilles de contact et la régénération de la cornée, chez l'homme ou l'animal. De telles " larmes régénérantes " lubrifient accessoirement la cornée. En définitive, elles évitent ou limitent l'érosion prématurée de la cornée, sous l'action de lentilles de contact, rigides ou semi-rigides en particulier. Et ces " larmes régénérantes " améliorent le confort visuel, et augmentent la durée de port possible de lentilles de contact. Ainsi, la présente invention propose, par exemple, des gouttes de confort, pour les utilisations suivantes: - sécheresses oculaires d'origine iatrogène (liées notamment à l'emploi de rétinodes topiques ou systémiques d'antihistaminiques, d'antiparkinsoniens, de betabloquants, de spasmolytiques, d'anxiolytiques, de 15 neuroleptiques, d'antidépresseurs et de bronchodilatateurs, etc...) , et entraînant un inconfort, en particulier chez les patients porteurs de lentilles de contact; sécheresses oculaires chez les personnes agées. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition 20 selon l'invention pour la conservation de pièces ou prothèses, par exemple lentilles de contact, agencées pour venir au contact par l'extérieur de la cornée oculaire, chez l'homme ou l'animal. Elle concerne également une solution pour la conservation, le stockage, ou le transport de pièces ou prothèses, par exemple lentilles de 25 contact, agencées pour venir au contact par l'extérieur de la cornée oculaire, chez l'homme ou l'animal, caractérisée en ce qu'elle comprend une composition selon l'invention. L'invention concerne également l'utilisation d'une base nutritive complexe en milieu aqueux, constituée au moins par une multiplicité d'acides 30 aminés, des vitamines, des oligo-éléments, et des sels métalliques, ladite base excluant tout facteur de croissance cellulaire, tout extrait biologique d'origine animale ou cellulaire, et tout principe actif thérapeutique, en tant que médicament ophtalmologique. Elle concerne également l'utilisation d'une base nutritive complexe 35 en milieu aqueux, constituée au moins par une multiplicité d'acides aminés, des vitamines, des oligo-éléments, et des sels métalliques, ladite base excluant tout facteur de croissance cellulaire, tout extrait d'origine biologique ou cellulaire, et tout principe actif médicamenteux, en tant que produit pour le stockage, le transport et la mise en oeuvre de pièces, par exemple lentilles de contact, destinées à venir au contact de l'oeil. Grâce à une composition trophique selon la présente invention, et comme démontré par les études exposées ci-après, les propriétés intrinsèques primaires de l'épithélium cornéen sont préservées durablement, tout en augmentant sa résistance aux agressions, et favorisant, le cas échéant, son retour à un état d'équilibre. La présente invention est maintenant décrite et exemplifiée, à partir d'une composition trophique en milieu aqueux, ayant la formule selon Tableau 2. Tableau 2 DENOMINATION INTERNATIONALE CONCENTRATION NBRE NOMENCLATURE LIGNE COSMETIQUE E INGREDIENT (NOMn mg/ INCI) 1 EAU g.s.p. 2 CHLORURE DE 6800 SODIUM 3 GLUTAMINE 1754,4 4 SODIUM BICARBONATE 1160 GLUCOSE 1080 6 ARGININE HCL 421,4 7 SODIUM ACETATE 300 8 DISODIUM PHOSPHATE 284 9 LEUCINE 131,2 SERINE 126,1 11 CHLORURE DE Mg 120,0 12 CHLORURE DE K 112 13 VALINE 70,3 14 SODIUM PYRUVATE 55 LYSINE HCL 54 16 HISTIDINE HCL 50 17 CYSTEINE HCL 42 18 ADENINE 24 19 THREONINE 24 CHLORURE DE Ca 20,05 21 INOSITOL 18 22 ACIDE GLUTAMIQUE 14,8 23 ASPARAGINE 14,2 24 METHIONINE 13,5 TYROSINE 11,7 26 PHENYLALANINE 10,0 27 TRYPTOPHANE 9,3 28 ALANINE 9,2 29 GLYCINE 7,6 ISOLEUCINE 6,0 DENOMINATION INTERNATIONALE CONCENTRATION NBRE NOMENCLATURE LIGNE COSMETIQUE E INGREDIENT (NOMn mg/ INCI) 31 ACIDE ASPARTIQUE 4,0 32 SODIUM SULFATE 3,4 33 SULFATE FERREUX 0,003 34 ACIDE FOLIQUE 0,8 THYMIDINE 0,73 36 CYANOCOBALAMINE 0,41 37 CALCIUM 03 PANTOTHENATE 38 THIAMINE HCL 0,3 39 ACIDE THIOCTIQUE 0,3 ZINC SULFATE 0,144 41 SODIUM SILICATE 0,142 42 PYRODIXINE HCL 0,06 43 NIACINAMIDE 0,04 44 RIBOFLAVIN 0,3 BIOTIN 0,02 46 SULFATE DE CUIVRE 0,003 47 AMMONIUM 0,00120 MOLYBDATE 48 AMMONIUM VANADATE 0,003 49 CHLORURE DE Mn 0,00002 HYALURONATE DE 70 SODIUM 51 POLYHEXANIDE ou 0,1 POLYHEXAMETHYLENE BIGUANIDE 52 N-ACETYL-CYSTEINE 500 53 HYDROXYPROLINE ou 35 PROLINE Conformément à la définition selon la présente invention de la composition trophique, les ingrédients en milieu aqueux de la base nutritive complexe sont tous ceux numérotés de 1 à 49, tandis que les ingrédients 50 à 53 sont considérés comme extérieurs à la base nutritive complexe, et 5 permettent son adaptation à un contact externe avec l'épithélium de la cornée de l'oeil. Les ingrédients 50 et 51 sont optionnels, en fonction du rôle ou de la fonction recherchée pour la composition trophique. Par ailleurs, le choix et les proportions des différents ingrédients 10 sont définis pour établir dans la composition trophique finalement obtenue: - un pH compris entre 7,3 et 7,5, et préférentiellement compris entre 7,42 et 7,45 (pH favorisant l'oxygénation de l'épithélium cornéen et l'activité du lyzosyme des larmes). - une osmolarité comprise entre 300 et 350 mOsm, et par 15 exemple, égale à 340 mOsm. Etude n'1 On évalue la biocompatibilité de la composition trophique précédemment définie sur un modèle d'épithélium de cornée humain 20 reconstitué. A partir de la formule selon Tableau 2, on définit et formule quatre variantes, appelées respectivement: EVE 1: sans Hyaluronate de sodium (ingrédient 50) et sans 25 conservateur (ingrédient 51). EVE 2: sans Hyaluronate de sodium (ingrédient 50) et avec conservateur (ingrédient 51). EVE 3: avec Hyaluronate de sodium (ingrédient 50) et sans conservateur (ingrédient 51). EVE 4: identique à la formule selon Tableau 2, et donc avec Hyaluronate de sodium (ingrédient 50), et avec conservateur (ingrédient 51). Des ajustements minimes des autres ingrédients sont apportés, 35 pour maintenir le pH et l'osmolarité dans les valeurs précédemment énoncées. La cytocompatibilité des formules EVE 1 à EVE 4 est évaluée par application topique sur un modèle in vitro d'épithélium de cornée humain reconstruit, tel que disponible auprès de la Société SKINETHIC LABORATORIES, 45 Rue Saint Philippe, 06000 NICE, France. Roger W. BEUERMAN et Lia PEDROSA ont décrit, par le détail, l'ultrastructure de la cornée humaine, dans un article intitulé " Ultrastructure of the human cornea ", dans le journal " Microscopy Research and Technique ", 33: 320-335 (1996), et on s'y référera en tant que de besoin. A partir de la structure naturelle, O. DOUCET et al. ont proposé et 10 décrit un épithélium de cornée humaine, tridimensionnel, reconstruit, en particulier pour effectuer différents essais in vitro de toxicité; cf. l'article ayant pour titre " A new in vitro human epithelium model for assessing the eye irritation potential of formulated cosmetic products ", paru dans " In vitro and Molecular Toxicology ", 11, 4: 273-283 (1998). Cet épithélium de cornée reconstruit, ou modèle, est obtenu par culture de cellules épithéliales de cornée, par exemple la lignée HCE, disponible et commercialisée par LSU Eye Center, Louisiana State University School of Medicine, New Orleans, Louisiana, 70112 USA. Les cellules épithéliales sont cultivées à l'interface air/liquide dans un milieu défini, et elles 20 forment un tissu épithélial cornéen, dépourvu de stratum corneum, s'approchant de l'épithélium cornéen in vivo. L'étude est réalisée sur de tels épithéliums cornéens reconstruits, tels qu'obtenus au 5ème jour de culture (taille: 0,5 cm2), le contrôle qualité des différents épithéliums aux différents stade de culture étant assuré par la 25 Société SKINETHIC LABORATORIES, précitée, conformément à la publication dernière citée. Le principe du test consiste à appliquer la composition trophique directement au contact de l'épithélium cornéen reconstruit, 15 minutes trois fois par jour sur une période de 7 jours. On réalise en parallèle un témoin 30 épithélium cornéen non traité. Chaque condition (à l'exception du témoin non traité) est réalisée en double. Aux 2ème, 4ème et 7ème jours d'expérimentation, la viabilité cellulaire (test au MTT) est évaluée pour chacune des conditions. En pratique, 30 pi des compositions trophiques à tester sont déposés 3 fois par jour (à 9 h, 13 h et à 17 h), directement à la surface des 35 équivalents cornéens, pendant 15 minutes. Après cette période de contact, les compositions en excès sont éliminées et les épithéliums maintenus en incubation à 370C sous atmosphère humide, 5 % C02. Cette opération est répétée tous les jours pendant 7 jours. Aux 2ème, 4ème et 7ème jours d'expérimentation, les épithéliums reconstruits sont prélevés pour effectuer le test de viabilité cellulaire. Aux 2ème, 4ème et 7ème jours d'expérimentation, les épithéliums prélevés sont rincés au PBS et placés dans 300 pI de MTT (0,5 mg/ml). Après 3 heures d'incubation à 370C, 5 % C02, les épithéliums sont transférés dans 1,5 ml d'isopropanol. L'extraction du produit de clivage du MTT est réalisée sous légère agitation, pendant 2 heures à température ambiante. La densité 10 optique à 570 nm est ensuite mesurée sur 200 pl de solution, d'extraction. Les résultats sont exprimés en pourcentage de viabilité par rapport au témoin (non traité): % viabilité = [DO (570 nm produit testé) / DO (570 nm témoin)] X 1 00 Dans les conditions expérimentales ainsi définies, on observe un maintien total de la viabilité in vitro des épithéliums de cornée humain reconstruits, après application topique de chacune des compositions trophiques précitées. La présence du conservateur et de l'acide hyaluronique aux concentrations d'utilisation ainsi définies n'influe pas sur la viabilité 20 cellulaire des épithéliums qui est maintenue. Etude n02 Par mise en culture d'un épithélium de cornée humain reconstitué, dans les compositions trophiques précédemment définies, on compare les 25 résultats obtenus par rapport à ceux obtenus par mise en culture dans une solution saline tamponnée. Le modèle d'épithélium cornéen retenu est à l'identique de celui décrit et défini dans l'Etude n'l, mis en culture pendant 72 heures dans la composition trophique étudiée. Une seule composition trophique est retenue pour cette étude, à savoir celle définie par le Tableau 2, appelée EVE 4 dans l'Etude ni1. Dès réception des épithéliums, le milieu nutritif de transport SKINETHIC est éliminé et remplacé, pour un des épithéliums, par 1 ml de la composition trophique étudiée. Un second épithélium est placé, pour 35 comparaison, dans une solution saline tamponnée (Phosphate Buffered Saline, PBS, enrichi en Ca2+ et Mg2+). La cytocompatibilité de la composition il trophique étudiée a été préalablement vérifiée (absence d'effet cytotoxique, cf. Etude précédente n01). Les épithéliums sont maintenus en incubation à 370C sous atmosphère humide, 5 % CO2. Les milieux sont renouvelés tous les jours. Après 3 jours de culture, les 2 épithéliums reconstruits sont prélevés pour 5 effectuer une analyse histologique. Ils sont fixés par une solution de formaldéhyde à 10 % puis inclus dans la paraffine. L'histologie des coupes colorées à l'hematoxyline/éosine est évaluée en microscopie optique. L'interprétation histopathologique des coupes prend en compte l'épaisseur et la régularité du tissu épithélial ainsi que la morphologie, la 10 cohésion et la capacité des cellules à proliférer. Concernant l'épithélium cultivé pendant 72 h dans la composition trophique, l'analyse du prélèvement montre un épithélium implanté sur le support membranaire. Il comporte 6 à 7 couches de cellules jointives (les ponts d'union sont visibles). Il n'y a pas de signe de nécrose ni de kératinisation de la 15 couche superficielle. Dans le cas de l'épithélium cultivé pendant 72 h dans une solution saline tamponnée, l'analyse du prélèvement montre une disparition quasi-totale de l'épithélium, seul le support est visible. Il n'y a pas de couche cellulaire identifiable. Dans les conditions expérimentales définies pour cette étude, on observe la survie et la cohésion cellulaire d'un épithélium de cornée humain reconstruit, mis en culture pendant 72 h dans une composition trophique selon la présente invention. En comparaison, l'expérimentation similaire réalisée avec une solution saline tamponnée montre une dégénérescence complète de 25 l'épithélium, qui n'est plus identifiable. Etude n03 On évalue les propriétés cicatrisantes de compositions trophiques selon l'invention, sur un modèle de cornée humain reconstitué. Les quatre variantes de la composition trophique étudiée sont identiques à celles définies et décrites dans l'Etude nol. Le modèle d'épithélium cornéen, reconstruit, est à l'identique de celui décrit et défini dans les Etudes nol et n02. Les propriétés cicatrisantes des compositions trophiques étudiées 35 sont évaluées après application topique sur le modèle précité, sur lequel est réalisée au préalable une lésion par altération mécanique. La réalisation des lésions à la surface des épithéliums cornéens reconstruits est opérée à l'aide de la pointe d'un scalpel partageant sur leur diamètre chacun des épithéliums. Le principe du test consiste à appliquer, immédiatement après le 5 traumatisme, la composition trophique directement au contact de l'épithélium cornéen reconstruit, 15 minutes trois fois par jour, et ce quotidiennement sur une période de 9 jours. On réalise en parallèle un contrôle avec une solution saline tamponnée (PBS). Aux 2ème, 4ème, 7ème et 9ème jours d'expérimentation, l'histologie du tissu reconstruit est évaluée pour chacune des conditions. Elle 10 est comparée à l'histologie d'une condition témoin de référence correspondant à un épithélium non agressé non traité. En pratique, 30 pl des compositions trophiques à tester sont déposés 3 fois par jour (à 9 h, 13 h et à 17 h) directement à la surface des épithéliums cornéens pendant 15 minutes. Après cette période de contact, les 15 compositions en excès sont éliminées et les épithéliums maintenus en incubation à 370C sous atmosphère humide, 5 % CO2. Cette opération est répétée tous les jours pendant 9 jours. Aux 2ème, 4ème, 7ème et 9ème jours d'expérimentation, les épithéliums reconstruits sont prélevés pour effectuer l'analyse histologique. Aux 2ème, 4ème 7ème et 9ème jours d'expérimentation, les épithéliums sont fixés par une solution de formaldéhyde à 10 %, puis inclus dans la paraffine. L'histologie des coupes colorées à l'hematoxyline/éosine est évaluée en microscopie optique. L'évaluation des propriétés cicatrisantes des compositions 25 trophiques est réalisée par analyse histologique des coupes et observation de la réparation de l'épithélium au niveau de la lésion induite par le scalpel. La localisation des lésions est effectuée par marquage à l'encre de Chine à la surface des épithéliums cornéens, avant d'effectuer la coupe histologique (coupe transversale de l'épithélium). L'interprétation histopatholoqique des coupes prend en compte l'épaisseur et la régularité du tissu épithélial, ainsi que la morphologie, la cohésion et la capacité des cellules à proliférer après le traumatisme opéré. Des photographies regroupées établissent, pour chaque condition, les coupes transversales des épithéliums réalisées en début de traitement 35 (2e jour après réalisation de la lésion) et au dernier jour de celui-ci (9ème jour). Dans le cas du Témoin (non traité, non agressé), on observe, au 2ème jour de culture, un épithélium vivace composé de 6 à 7 couches de cellules, régulières dans leur forme (aspect pavimenteux), jointives. Au 9ème jourde traitement, on observe un épaississement de l'épithélium formé d'une 5 dizaine de couches de cellules, toujours jointives et régulières. On note la présence d'une couche kératinisée en surface. Dans le cas du traitement avec EVE 4 (composition trophique selon Tableau 2), on observe, sur la photographie prise au 2ème jour, la lésion réalisée au niveau de l'épithélium, mettant à nu le support membranaire. De 10 part et d'autre de la plaie, l'épithélium est vivace. Il n'y a pas de kératinisation. Au 9ème jour de traitement, on observe au niveau du repère réalisé à l'encre de Chine, un épithélium réparé, continu, formé de plusieurs couches de cellules relativement régulières (d'aspect plus arrondi que dans le cas du Témoin), non nécrosées. On note la présence d'une zone de kératinisation dans les couches 15 superficielles. Dans le cas du traitement avec une solution saline tamponnée (PBS), on visualise au 2ème jour la zone lésée, marquée par une perte de substance importante au niveau de l'épithélium. Au 9ème jour, on observe au niveau du repère un épithélium réparé, constitué de 5 à 6 couches de cellules 20 seulement, d'aspect arrondi, turgescentes pour certaines, avec la présence de vacuoles. Dans le cas du traitement avec les compositions dites EVE 1, EVE 2, EVE 3, on observe, pour les prélèvements réalisés au 2ème jour d'expérimentation, la lésion repérée par une perte de substance totale. De part 25 et d'autre, l'épithélium est pluristratifié, vivace et non kératinisé. Au 9ème jour, pour la formulation EVE 1, on observe un épithélium reconstitué, continu, formé de cellules arrondies, assez régulières avec présence de quelques vacuoles. Pour les formulations EVE 2 et EVE 3, les épithéliums ont un aspect identique, avec des cellules jointives et de 30 morphologie régulière. Cependant, l'épaisseur des épithéliums apparaît plus mince par rapport à celle des épithéliums traités par la formulation EVE 4. Dans les conditions expérimentales ainsi définies, on observe pour chacune des conditions testées une réparation des épithéliums de cornée 35 humains préalablement lésés, au terme des traitements. La formulation EVE 4 (contenant acide hyaluronique et conservateur) permet d'obtenir les meilleurs résultats. L'épithélium réparé est continu, vivace, pluristratifié, composé de cellules jointives et régulières. Etude n04 On évalue les propriétés cicatrisantes de compositions trophiques selon la présente invention, en comparaison avec une solution saline tamponnée. La composition trophique étudiée est à l'identique de celle définie 10 par le Tableau 2. Le modèle d'épithélium cornéen, reconstruit, est à l'identique de celui mis en oeuvre dans les Etudes nos 1 à 3. Les propriétés cicatrisantes des compositions trophiques sont évaluées par application topique sur un modèle in vitro d'épithélium de cornée 15 humain reconstruit, sur lequel est réalisée, au préalable, une lésion par traumatisme mécanique. La réalisation des lésions à la surface des épithéliums cornéens reconstruits est opérée à l'aide de la pointe d'un scalpel partageant sur leur diamètre chacun des épithéliums. Le principe du test consiste à appliquer, immédiatement après le traumatisme, la composition trophique directement au contact de l'épithélium cornéen reconstruit, 15 minutes trois fois par jour, et ce quotidiennement sur une période de 7 jours. On réalise en parallèle un contrôle en solution saline tamponnée (PBS enrichi en Ca2+ et Mg2+). Aux 2ème, 4ème et 7ème jours 25 d'expérimentation, l'histologie du tissu reconstruit est évaluée pour chacune des conditions. Elle sera comparée à l'histologie d'une condition témoin de référence correspondant à un épithélium non agressé non traité. En pratique, 30 pi des compositions à tester sont déposés 3 fois par jour (à 9 h, 13 h et à 17 h) directement à la surface des équivalents 30 cornéens pendant 15 minutes. Après cette période de contact, les compositions en excès sont éliminées et les épithéliums maintenus en incubation à 370C sous atmosphère humide, 5 % CO2. Cette opération est répétée tous les jours pendant 7 jours. Aux 2ème, 4ème et 7ème jours d'expérimentation, les épithéliums reconstruits sont prélevés pour effectuer 35 l'analyse histologique. Aux 2ème, 4ème et 7ème jours d'expérimentation, les épithéliums sont fixés par une solution de formaldéhyde à 10 % puis inclus dans la paraffine. L'histologie des coupes colorées à l'hematoxyline/éosine est évaluée en microscopie optique. L'évaluation des propriétés cicatrisantes des compositions trophiques est réalisée par analyse histologique des coupes et observation de la réparation de l'épithélium au niveau de la lésion induite par le scalpel. La localisation des lésions est effectuée par marquage à l'encre de Chine à la surface des épithéliums de cornée avant d'effectuer la coupe histologique 10 (coupe transversale de l'épithélium). L'interprétation histopathologique des coupes prend en compte l'épaisseur et la régularité du tissu épithélial ainsi que la morphologie, la cohésion et la capacité des cellules à proliférer après le traumatisme opéré. Des photographies établissent, pour chaque condition, les coupes 15 transversales des épithéliums réalisées aux différentes étapes du traitement. Dans le cas du Témoin (non traité, non agressé), on observe, au 2ème jour de culture, un épithélium vivace composé de 6 à 7 couches de cellules, régulières dans leur forme (aspect pavimenteux), jointives. Au 7ôme jour de traitement, on observe un épaississement de l'épithélium formé d'une 20 dizaine de couches de cellules, toujours jointives et régulières. On note la présence d'une couche kératinisée en surface. Dans le cas du traitement avec la composition trophique selon tableau 2, on observe, sur la photographie prise au 2ème jour, la lésion réalisée au niveau de l'épithélium mettant à nu le support membranaire. De part et 25 d'autre de la plaie, l'épithélium est vivace. Il n'y a pas de kératinisation. Au 4ème jour, on observe une recolonisation cellulaire du support. L'épithélium comporte 3 à 4 couches de cellules dont certaines sont en division. Au 7ème jour de traitement, on observe au niveau du repère réalisé à l'encre de Chine, un épithélium réparé, continu, formé de plusieurs couches de cellules relativement 30 régulières (d'aspect plus arrondi que dans le cas du Témoin), non nécrosées. On note la présence d'une zone de kératinisation dans les couches superficielles. Dans le cas du traitement avec une solution saline tamponnée (PBS), on visualise au 2ème jour la zone lésée marquée par une perte de 35 substance importante au niveau de l'épithélium. Au 4ème jour, l'épithélium se reconstitue, composé seulement d'une à deux couches de cellules arrondies. Au 7ème jour, l'épithélium est réparé, constitué de 5 à 6 couches de cellules, d'aspect arrondi, turgescentes pour certaines, avec la présence de vacuoles. Dans les conditions expérimentales ainsi définies, la composition trophique permet la reconstitution d'un épithélium de cornée humain 5 préalablement lésé. L'épithélium réparé est continu, vivace, pluristratifié, composé de cellules jointives et régulières. L'application d'une solution saline tamponnée permet également une réparation de l'épithélium. Celui-ci n'est cependant formé que de 3 à 4 couches de cellules, témoin d'une régénération inférieure à celle observée 10 avec la composition trophique. D'autre part, les cellules sont arrondies avec présence de nombres vacuoles. REVENDICATIONS 1. Base nutritive complexe en milieu aqueux, constituée au moins 5 par une multiplicité d'acides aminés, des vitamines, des oligo-éléments, et des sels métalliques, ladite base excluant tout facteur de croissance cellulaire, tout extrait biologique d'origine animale ou cellulaire, et tout principe actif thérapeutique, pour utilisation comme médicament ophtalmologique. 2. Utilisation d'une base nutritive complexe en milieu aqueux, 10 constituée au moins par une multiplicité d'acides aminés, des vitamines, des oligo-éléments, et des sels métalliques, ladite base excluant tout facteur de croissance cellulaire, tout extrait biologique d'origine animale ou cellulaire, et tout principe actif thérapeutique, en tant que produit pour le stockage, le transport ou la mise en oeuvre de pièces, par exemple lentilles de contact, 15 destinées à venir au contact de l'oeil.