Brevet FR2854076A1 — publié le 20041029

La présente invention concerne une huile essentielle obtenue à partir d'une plante appelée Monarda fistulosa. Elle concerne également des compositions à propriétés antiseptiques contenant de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. Les huiles essentielles de plantes sont connues et utilisées depuis des siècles pour leurs propriétés bénéfiques et notamment médicinales. Elles sont généralement obtenues à partir des fruits, des fleurs, des feuilles, des tiges, des racines et/ou de l'écorce de certains végétaux et peuvent être extraites selon divers procédés classiques, tels que la distillation sous vide ou avec entraînement à la vapeur ou la pression à froid. Le but de la présente invention est d'enseigner un nouveau type d'huile essentielle : l'huile essentielle de Monarda fistulosa, dont les propriétés sont particulièrement intéressantes. En effet, les présents inventeurs ont démontré que cette huile essentielle possède de manière surprenante des propriétés antiseptiques exceptionnelles. La description détaillée qui va suivre permettra de mieux comprendre l'invention. Elle est accompagnée des figures suivantes: . la figure 1 est une photographie de la plante Monarda fistulosa en buisson ; . la figure 2 est un graphique représentant une comparaison des propriétés antiseptiques de l'huile essentielle de Monarda fistulosa par rapport à celles du Chloramphénicol ; . les figures 3 à 10 sont des photographies de résultats de tests démontrant l'activité antiseptique de l'huile essentielle de Monarda fistulosa vis-à-vis de diverses bactéries, levures et moisissures, respectivement vis-à-vis de : - Staphylococcus aureus sur la figure 3, - Staphylococcus aureus sauvage sur la figure 4, - Bacillus subtilis sur la figure 5, - Enterobacter cloacae sur la figure 6, - Proteus mirabilis sur la figure 7, - Pseudomonas aeruginosa sur la figure 8, - Saccharomyces cerevisiae sur la figure 9, - et Aternaria alternata sur la figure 10. La plante appelée Monarda fistulosa est une plante herbacée vivace d'Amérique du Nord appartenant à la famille des labiées. Elle présente des feuilles opposées et des fleurs mauves, purpurines ou rouge vif, très nombreuses, groupées en faux verticilles très serrés et accompagnés de bractées. Une représentation de cette plante est donnée à la figure 1. A partir de cette plante, on peut obtenir une huile essentielle appelée huile essentielle de Monarda fistulosa. Pour produire cette huile essentielle, on peut cultiver la plante de manière classique, la dupliquer par clonage, l'obtenir par embryogenèse somatique ou par tout autre moyen ou méthode. L'huile essentielle peut alors être extraite à partir de cette plante par tout moyen approprié, par exemple par distillation sous vide ou avec entraînement à la vapeur, par électrophorèse ou par hydrodiffusion. L'huile essentielle peut être extraite à partir de la plante entière, ou à partir de certaines parties seulement de celle-ci, par exemple à partir des feuilles ou des fleurs. Comme toute huile essentielle de plantes, l'huile essentielle de Monarda fistulosa est composée de plusieurs constituants dont les proportions relatives peuvent varier suivant la plante ou la partie de la plante à partir de laquelle l'huile essentielle est extraite. Néanmoins ces proportions restent globalement similaires pour toute huile essentielle de Monarda fistulosa. Les présents inventeurs ont analysés par chromatographie en phase gazeuse (CPG) la composition de l'huile essentielle de Monarda fistulosa provenant de plusieurs lots de plantes. Les résultats sont donnés ci-dessous à titre d'exemple. Les différents lots d'huile essentielle analysés ont été obtenus par distillation avec entraînement à la vapeur d'eau à l'aide de l'appareil inscrit à la pharmacopée française, à partir des feuilles pour les lots 1 et 2 ou des fleurs pour les lots 3 et 4 du végétal sec. Constituants Feuilles Fleurs Lot n 1 Lot n02 Lot n03 Lot n 4 a 0,6 1,1 0 0,1 a pinène 3,17 2,71 3,33 3,86 a terpinène 2,86 2,38 2,65 3,21 limonène 0,94 0,90 0,97 1,07 # terpinène 0,11 0,74 0,09 0,07 p.cymène 41,96 43,29 41,75 45,5 thuyone 0,24 0,11 0,14 0,11 octène/ol 3 5,19 4,72 2,23 2,23 b 0,7 0,9 1,1 0,72 citronellal 0,1 0,08 0,04 0,05 linalol 0,38 0,38 0,33 0,27 caryophyllène 6,30 5,31 3,47 3,97 c 0,98 0,63 0,44 0,60 d 16,25 23,39 33,71 28,09 nérol (géraniol) 0,18 0 0 0 thymol 12,78 9,21 5,04 5,39 carvacrol 1,31 0,61 0,73 0,63 Les résultats indiqués représentent le pourcentage du constituant par rapport à l'ensemble de l'huile. Un certain nombre de constituants (a, b, c, d) n'ont pas pu être identifié par cette analyse chromatographique. Des analyses plus poussées, par exemple par sphectrographie de masse, permettront à l'homme du métier d'identifier ces composants. Afin d'évaluer l'influence du mode d'extraction de l'huile essentielle de Monarda fistulosa sur la composition de celle-ci, les inventeurs ont réalisé une analyse par chromatographie en phase gazeuse de plusieurs lots d'huile essentielle obtenus, à partir du végétal sec, par divers procédés d'extraction : - par distillation avec entraînement à la vapeur à l'aide d'un appareil classique de type industriel, - par distillation avec entraînement à la vapeur à l'aide de l'appareil inscrit à la pharmacopée française, - par hydrodiffusion, - avec un désorbeur. Les résultats obtenus sont donnés à titre d'exemple dans le tableau ci-dessous. Là encore, les résultats appraissent en pourcentage du constituant par rapport à l'ensemble de l'huile. Constituants Appareil Appareil Appareil Constituants industriel pharmaco. hydrodiff. Desorbeur industriel pharmaco. hydrodiff. a 0,1 0,6 0,02 0 [alpha]pinène 3,34 3,17 3,85 3,19 a terpinène 2,18 2,86 3,77 1,69 limonene 1,34 0,94 1,13 0,75 y terpinène 0,33 0,11 0,12 0,5 p.cymène 44,06 41,96 49,87 34,06 thuyone 0,29 0,24 0,18 0,25 octène/ol 3 3,26 5,19 3,20 2,78 b 1,26 0,7 1,24 1,50 citronellal 0,21 0,1 0,16 0,10 linalol 0,39 0,38 0,50 0,37 ss caryophyllène 3,42 6,30 4,74 3,02 c 1,72 0,98 1,78d 19,59 16,25 16,37 4,08 nérol (géraniol) 0,27 0,18 0 0 thymol 7,39 12,78 9,30 4,82 carvacrol 3,20 1,31 0,71 0,42 A travers ces analyses, il apparaît que la composition chimique de l'huile essentielle de Monarda fistulosa est sensiblement identique, qu'elle soit extraite à partir des feuilles ou à partir des fleurs, le taux de thymol étant cependant inférieur dans les fleurs. De même, la comparaison des chromatogrammes obtenus pour les huiles provenant des différents types d'appareils ne montre pas de grandes différences. On peut donc considérer que les huiles obtenues sont de qualités similaires. Les présents inventeurs ont découvert que l'huile essentielle de Monarda fistulosa présente des propriétés très intéressantes et notamment des propriétés antiseptiques exceptionnelles. Ces propriétés ont été mises en évidence par toute une série d'expériences dont le protocole et les résultats vont être résumés ci-dessous. 1) Etude de l'activité antibactérienne de l'huile essentielle de Monarda fistulosa . Mode opératoire : Une émulsion a été réalisée avec 0,8 mg d'huile essentielle de Monarda fistulosa, 1 mg de Tween 80 et 8,2 mg d'eau distillée stérile. Le mélange a été soumis à une sonication durant quelques minutes. Cette émulsion mère a fait l'objet d'une série de dilutions au 1/125,1/250, 1/500,1/1000, 1/2000,1/4000 et 1/8000. Ces dilutions correspondent à des quantités d'essence par millilitre de milieu de WELLER-INTON de 8 mg/ml, 4 mg/ml, 2 mg/ml, 1 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,25 mg/ml et 0,125 mg/ml, correspondant à des concentrations minimales inhibitrices (CMI) de 8,4, 2, 1, 0,5,0,25, 0,125. Les inventeurs ont testé l'activité antibactérienne de l'huile essentielle de Monarda fistulosa vis-à-vis d'un large éventail de souches pathogènes pour l'homme, ainsi que de quelques bactéries de l'environnement. Les cultures ont été placées à l'étuve à 37 C pendant 24h ou 48h selon le temps nécessaire à la formation d'une colonie dans les conditions de culture décrites. Résultats : Les résultats sont présentés dans le tableau suivant. Ils démontrent une très bonne activité antibactérienne de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. Les symboles utilisés dans le tableau ont la signification suivante : T témoin +++ colonie normale ++ colonie moyenne qc quelques colonies 0 pas de colonies Souches T 1/125 1/250 1/500 1/10001/20001/40001/8000 CMI mg/ml Serratia +++ 0 0 0 qc ++ +++ +++ 1 marcesens Citrobacter SP +++ 0 0 0 0 0 0 +++ 0,25 Pseudomonas Pseudomonas +++ qc ++ +++ +++ fluorescens +++ +++ +++ Pseudomonas +++ 0 qc qc ++ +++ +++ +++ 8 aeruginosa - Klebsiella +++ 0 0 0 0 +++ +++ +++ 1 pneumoniae Salmonella +++ 0 0 qc ++ +++ +++ +++ 4 typhimurium E. coli +++ 0 0 0 qc ++ +++ +++ 2 Staphylococcus +++ 0 0 0 0 0,12 aureus Bacillus +++ 0 0 0 0 0 0 0 0,12 cereus Aeromoas +++ 0 0 0 0 0 0 0 0,12 hudrophila Citrobacter +++ qc ++ +++ +++ freundii Salmonella +++ 0 0 0 0 0 qc ++ 0,50 paraB Proteus +++ 0 0 0 0 0 ++ +++ 0,50 mirabilis 2) Etude l'activité antifongique de l'huile essentielle de Monarda fistulosa : Mode opératoire : Une émulsion a été réalisée avec 0,8 mg d'huile essentielle de Monarda fistulosa, 1 mg de Tween 80 et 8,2 mg d'eau distillée stérile. Le mélange a été soumis à une sonication durant quelques minutes. Cette émulsion mère a fait l'objet d'une série de dilutions au 1/125,1/250, 1/500,1/1000, 1/2000,1/4000 et 1/8000. Ces dilutions correspondent à des quantités d'essence par millilitre de milieu de SABOURAUD (sans antibiotiques) de 8 mg/ml, 4 mg/ml, 2 mg/ml, 1 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,25 mg/ml et 0,125 mg/ml, correspondant à des CMI de 8,4, 2,1, 0,5,0,25, 0,125. Les espèces testées ont été choisies parmi les espèces responsables de manifestations digestives, cutanées ou respiratoires chez l'homme. Les ensemencements ont été effectués par inondation (inocolum de 105 spores et fragments mycelliens). L'incubation a été effectuée à 27 C pendant 96 heures. Résultats : Les résultats sont présentés dans le tableau suivant. Ils démontrent une bonne activité antifongique de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. Les symboles utilisés dans le tableau ont la signification suivante : T témoin 0 pas de colonies qc quelques colonies + colonies jointives, croissance normale Souches T 1/125 1/250 1/500 1/1000 1/2000 1/4000 1/8000 CMI mg/ml Goetrichium + + 0,500 candidum Candida + 0 0 0 + + 0,500 albicans Candida + 0 0 0 0 qc + + 1 tropicalis Candida + 0 0 0 0 0 + + 0,500 parapsilosis Saccharomyce + qc + + 1 cerevisiae Aspergillus 0 0 qc + + + + 4 fumigatus Microsporum + 0 0 0 0 0 0 + 0,250 canis Epidermophyton + + + + floccosum Trichophyton 0 qc qc 0,500 mentagrophytes Trichophyton + qc qc 0,500 rubrum Les inventeurs savent également que l'huile essentielle de Monarda fistulosa possède des propriétés virucides intéressantes. Comme mentionné précédemment, l'huile essentielle de Monarda fistulosa présente de très bonnes propriétés antiseptiques, notamment à la fois bactéricides et anti-fongiques. En outre, les inventeurs ont remarqué que cette activité antiseptique était, de façon surprenante, très supérieure à celle d'autres produits, notamment antibiotiques, ou huiles essentielles classiquement utilisés dans ce but. Ils ont dans ce but comparé, dans les mêmes conditions expérimentales, l'efficacité de l'huile essentielle de Monarda fistulosa avec celle d'un antibiotique classique : le chloramphénicol, puis avec celles d'une série d'huiles essentielles couramment utilisées. Leur activité a été testée in vitro par rapport à sept germes, sélectionnés pour représenter au mieux la flore microbienne de l'environnement. Il s'agit de saprophytes ou commensaux de l'homme, parfois pathogènes opportunistes, mais très facilement disséminables par celui-ci. On y retrouve cinq procaryotes : - Proteus mirabilis (souche repiquée), - Bacillus subtilis (souche repiquée), - Pseudomonas aeruginosa (souche repiquée), - Staphylococcus aureus (souche sauvage), - Enterobacter cloacae (souche sauvage) et deux eucaryotes : - Saccharomyces cerevisiae (souche sauvage), - Alternaria alternata (souche sauvage). Le terme sauvage signifie que le microorganisme a été isolé de l'environnement et n'a pas subit de repiquages successifs après isolement nécessaires à sa conservation. Le protocole et les résultats de ces expérimentations sont résumés ci-dessous. 3) Mesure du pouvoir antiseptique de l'huile essentielle de Monarda fistulosa par rapport à celui du chloramphénicol : Mode opératoire : Le mode opératoire qui a été suivi est identique à celui d'un antibiogramme standard. Les milieux utilisés sont un milieu ordinaire CASO agar pour les bactéries et un milieu SABOURAUD pour la levure et la moisissure, coulés en boîte de Pétri en quantité nécessaire pour obtenir une épaisseur de 4 mm. La densité de l'inoculum est telle, qu'après incubation, les colonies apparaissent à la fois isolées et jointives (sauf moisissure). On utilise une dilution d'un bouillon de 24 heures ou d'une suspension équivalente réalisée à partir d'une culture sur milieu gélosé. Les taux de dilution réalisés sont de : 1/1000 pour Enterobacter cloacae, Proteus mirabilis et Pseudomonas aeruginosa, et 1/100 pour Staphilococcus aureus, Bacillus subtilis et Saccharomyces cerevisiae. Seule Alternaria alternata est utilisée sans dilution, directement à partir de la suspension mère ou du bouillon de 24 heures. Des disques filtres stériles ont été imprégnés d'une charge de 50 l pour l'huile essentielle de Monarda fistulosa et d'une dose cytotoxique de 50 g pour le chloramphénicol. L'ensemencement a ensuite été réalisé par inondation de façon homogène. L'excès d'inoculum a ensuite été retiré avant le séchage des boîtes et la dépose des disques. Après un temps d'incubation à 20-25 C pendant 24 heures pour les bactéries, 48 heures pour Saccharomyces cerevisiae et 72 heures pour Alternaria alternata, un diamètre d'inhibition a été éventuellement observé et mesuré. Résultats : Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous et illustrés graphiquement sur la figure 2. Les figures 3 à 10 sont des photographies des boîtes de Pétri ayant contenu les disques imprégnés d'huile essentielle de Monarda fistulosa et sur lesquelles les différents diamètres d'inhibition ont été mesurés. Ces résultats démontrent une bien meilleure activité antibactérienne pour l'huile essentielle de Monarda fistulosa que pour le chloramphénicol. En outre, le chloramphénicol, étant un antibiotique, ne présente aucune efficacité contre la levure et la moisissure, contrairement à l'huile essentielle de Monarda fistulosa dont le caractère antifongique est très satisfaisant. Diamètre d'inhibition (mm) Diamètre d'inhibition (mm) Souche Huile essentielle de Chloramphénicol Souche Monarda fistulosa dose cytotoxique Charge 50 l/disque Charge 50 g/disque Staphilococcus 47 22 aureus Staphilococcus 44 19 aureus sauvage Bacillus 44 18 subtilis Enterobacter 41 25 cloacae Proteus 38 23 mirabilis Pseudomonas aeruginosa Saccharomyces 56 0 cerevisiae Alternaria alternata 4) Comparaison du pouvoir antiseptique de l'huile essentielle de Monarda fistulosa par rapport à celui de diverses autres huiles essentielles courantes : Mode opératoire : Le mode opératoire suivi est identique à celui décrit précédemment au paragraphe 3 de la présente demande. Les différentes huiles essentielles testées en comparaison à l'huile essentielle, sont des huiles essentielles issues de l'agriculture biologique : l'huile essentielle de cannelle, géranium, girofle, lavande, menthe poivrée et origan. Dans chaque cas, les disques filtres stériles ont été imprégnés d'une charge de 50 l d'huile essentielle. Résultats : Les résultats sont présentés dans le tableau récapitulatif suivant. Ils démontrent, et ce de manière surprenante, que l'huile essentielle de Monarda fistulosa possède globalement une meilleure activité antiseptique que toutes les huiles essentielles classiques testées. Diamètre d'inhibition (mm) Monarda @ @ Menthe Souche Monarda Cannelle Géranium Girofle Lavande poivrée Origan fistulosa poivrée Staphilococcus 47 40 il 21 11 20 34 aureus Staphilococcus 44 38 9 18 8 9 28 aureus sauvage Bacillus 44 41 16 18 10 15 40 subtilis Enterobacter 41 29 6 15 7 9 27 cloacae Proteus 38 29 g 18 12 18 27 mirabilis Pseudomonas 21 19 6 8 10 8 17 aeruginosa Saccharomyces 56 60 15 26 7 15 46 cerevisiae Alternaria 52 69 17 44 7 34 61 alternata Grâce à la découverte des propriétés très intéressantes de l'huile essentielle de Monarda fistulosa, on peut envisager de nombreuses applications pour celle-ci. Selon l'invention, on peut par exemple l'utiliser dans la préparation de compositions variées et notamment dans la préparation d'une composition thérapeutique, de préférence d'une composition antiseptique : bactéricide, anti-fongique ou virucide. De manière évidente, la présente invention se rapporte également aux médicaments, aux compositions antiseptiques, bactéricides ou antifongiques contenant de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. Les compositions selon la présente invention peuvent comprendre un ou plusieurs excipient(s) quelconque(s) et être préparées selon des techniques conventionnelles. L'huile essentielle de Monarda fistulosa peut être utilisée en tant qu'unique principe actif ou en mélange avec d'autres substances actives. Elle peut être utilisée pure ou diluée par exemple sous forme de solution liquide, d'émulsion, de microémulsion ou de gel, être intégrée à un excipient solide, pulvérulent ou pâteux, ou même être entraînée sous forme de microgouttelettes par un vecteur gazeux par exemple de nébulisation ou d'atomisation. L'homme du métier pourra envisager, sans sortir du cadre de la présente invention, toute autre forme appropriée en fonction de l'application souhaitée. De façon préférentielle, l'huile essentielle de Monarda fistulosa pourra par exemple être mise en solution dans de l'alcool à 60%, dans du cétiol ou dans une solution extractive hydrofluorée. A titre d'exemple, on peut citer quelques applications préférentielles envisagées pour l'huile essentielle selon l'invention. Elle peut être utilisée dans une composition anti-acné, par exemple sous forme de crème, de lotion ou de gel nettoyant. Elle peut également être intégrée dans une mousse à raser, un savon ou un gel nettoyant sans savon. Enfin, on peut imaginer la réalisation d'un spray antiseptique à base d'huile essentielle selon l'invention ou encore l'imprégnation d'un masque de protection individuel. Cette liste n'est évidemment pas exhaustive, l'homme du métier pouvant imaginer beaucoup d'autres applications ou variantes comprises dans la portée de l'invention. Bien qu'elle soit particulièrement adaptée pour des applications dans le domaine médical, de l'hygiène ou de la cosmétique, l'huile essentielle de Monarda fistulosa peut trouver des applications dans bien d'autres domaines, par exemple dans le domaine de la purification de l'air, du nettoyage des surfaces ou autre. REVENDICATIONS 1. Huile essentielle caractérisée en ce qu'elle est obtenue à partir de la plante Monarda fistulosa. 2. Procédé d'obtention d'une huile essentielle selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on duplique la plante de Monarda fistulosa par clonage. 3. Procédé d'obtention d'une huile essentielle selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on obtient la plante de Monarda fistulosa par embryogenèse somatique. 4. Procédé d'obtention d'une huile essentielle selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'elle est extraite par distillation sous vide ou avec entraînement à la vapeur. 5. Procédé d'obtention d'une huile essentielle selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'elle est extraite par électrophorèse. 6. Procédé d'obtention d'une huile essentielle selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'elle est extraite par hydrodiffusion. 7. Utilisation de l'huile essentielle de Monarda fistulosa dans la préparation d'une composition thérapeutique. 8. Utilisation de l'huile essentielle de Monarda fistulosa dans la préparation d'une composition antiseptique. 9. Utilisation de l'huile essentielle de Monarda fistulosa dans la préparation d'une composition bactéricide. 10. Utilisation de l'huile essentielle de Monarda fistulosa dans la préparation d'une composition anti-fongique. 11. Utilisation de l'huile essentielle de Monarda fistulosa dans la préparation d'une composition contre l'acné. 12. Médicament caractérisé en ce qu'il contient de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. 13. Composition antiseptique caractérisée en ce qu'elle contient de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. 14. Composition antiseptique selon la revendication précédente caractérisée en ce qu'elle est formulée sous forme de spray. 15. Composition bactéricide caractérisée en ce qu'elle contient de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. 16. Composition antifongique caractérisée en ce qu'elle contient de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. 17. Composition anti-acné caractérisée en ce qu'elle contient de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. 18. Mousse à raser caractérisée en ce qu'elle contient de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. 19. Gel nettoyant caractérisé en ce qu'il comprend de l'huile essentielle de Monarda fistulosa. 20. Savon caractérisé en ce qu'il comprend de l'huile essentielle de Monarda fistulosa.