Brevet FR2855760A1 — publié le 20041210

La présente invention concerne le domaine général des compositions destinées à combattre les particules virales. Ces dernières années, de nombreuses nouvelles approches ont été explorées pour lutter contre les infections virales, tel que l'utilisation d'oligonucléotides antisens, de PNAs, de dérivés de polylysine, protéines succinylées, etc Outre ces approches, certaines protéines cellulaires natives sont connues pour leur action inhibitrice de la réplication virale. Par exemple, il a été montré qu'une chimiokine de macrophages sous sa forme tronquée, qui est notamment produite par différents types cellulaires incluant les lymphocytes B et T, présente un large spectre inhibiteur à l'encontre de différentes souches de VIH ou SIV (Simian Immunodeficiency Virus), bien que le mécanisme d'action reste inconnu (Pal R. et al., Science 1997 ; 278 : 695; Struyf S. et al, J.lmmunol 1998 ; 161 : 2672 ; Cota M. et al, Poli.G. PNAS 2000 ; 97 : 9162). Egalement, la protéine humaine MxA est connue pour participer à l'activité antivirale à l'encontre de plusieurs virus à ARN et ADN (Gordien E., J.Virol 2001 ; 75 : 2684). Mais dans la grande majorité des cas, ces différentes techniques s'avèrent complexes et/ou onéreuses à mettre en oeuvre. On a d'autre part tenté de rechercher si certains produits ou substances biologiques facilement disponibles et peu coûteuses étaient susceptibles de présenter une activité antivirale ; mais les investigations en question se sont révélées infructueuses. En particulier, on a mis en évidence que la grande majorité des protéines connues à ce jour ne présentent pas d'activité antivirale. C'est par exemple le cas des principales protéines natives du lactosérum, tel que l'a-lactalbumine et la sslactoglobuline, qui ne permettent pas d'inhiber l'effet cytopathique de l'Adenovirus (Arnold D. et al, Antiviral Res. 2002, Février ; 52 (2) : 158-8). Or, la Demanderesse a mis en évidence que l'utilisation de protéines et/ou de peptides, dont l'un au moins de leurs groupes estérifiables a été modifié par estérification, présente une action antivirale, alors même, comme on l'a vu ci-dessus, que la forme native de ces protéines et/ou peptides ne dispose pas d'une telle activité. La présente invention permet l'obtention de compositions antivirales mettant en #uvre des protéines et/ou peptides largement disponibles et peu onéreux ; part, la technique de modification desdits peptides et/ou desdites protéines, à savoir une estérification, est largement connue, très simple à mettre en #uvre et d'un faible coût de revient. Autre avantage, les agents antiviraux ou compositions antivirales selon l'invention présentent une innocuité environnementale et une toxicité quasi nulle. En outre, certaines compositions conformes à l'invention offrent une solution intéressante pour répondre aux problèmes d'émergence de résistances virales pouvant être rencontrés avec certains agents actifs. La composition selon l'invention est destinée à inactiver plus particulièrement les virus à ADN ou ARN, ou les Virinos. A titre d'exemple non limitatif de protéines ou de peptides susceptibles d'être modifiés par estérification et utilisés comme agents antiviraux, on peut citer les protéines d'origine végétale ou animale, tel que le gluten de blé ou de maïs, la zeïne, les concentrats et isolats protéiques de soja, pois, féverole (à condition d'être désamidés)... ou encore le collagène, la sérumalbumine, l'ovalbumine ... De préférence, on peut encore utiliser les protéines d'origine laitière, telles que les protéines du lactosérum que sont l'a-lactalbumine et la !1-lactoglobuline. On notera que l'expression peptide utilisée ci-dessus peut définir des populations peptidiques très variées aptes à contenir diverses entités telles que des peptides, fractions peptidiques, et leurs mélanges. Egalement, l'utilisation dans la composition objet de l'invention, d'agents antiviraux sous forme peptidique assure une stabilité efficace de la solution, étant donné que d'une manière générale les protéines ont une plus grande tendance à précipiter. La réaction d'estérification mise en #uvre sur le substrat protéique et/ou peptidique est conduite selon les procédures classiques, parfaitement connues de l'homme du métier (voir par exemple le procédé d'estérification en milieu acide décrit par Fraenkel-Conrat H. et Olcott H. S. 1945, J. Biol. Chem. 161,259-269). Elle est de préférence réalisée sur au moins un groupe carboxylique du substrat de base ; elle est avantageusement conduite en milieu acide au moyen d'un alcool (ou d'un dérivé activé de cet alcool obtenu selon les méthodes classiques bien connues de l'homme du métier). Par exemple, on propose l'utilisation d'un alcool aliphatique possédant entre un et cinq atomes de carbone (méthanol, éthanol ...). Dans le cadre d'une estérification par un alcool aliphatique, on obtient un substrat protéique estérifié au niveau de son groupe carboxylique C-terminal et au niveau des groupes carboxyliques latéraux de certains des résidus aspartyl et/ou glutamyl. Les conditions de mise en oeuvre de la réaction d'estérification (température, durée, pression, concentration en acide ...) sont fonction du taux d'estérification désiré et, plus généralement, des produits finaux que l'on désire obtenir. Le taux d'estérification correspondant est de préférence inférieur à 100%, ce qui permet une modification de type aléatoire des différents groupes estérifiables des protéines et/ou peptides concernés ; particularité permet l'obtention de mélanges de dérivés estérifiés de protéines et/ou de peptides, ce qui limite le risque d'apparition de souches virales résistantes, après mise en #uvre des compositions antivirales correspondantes. Les peptides dont l'un au moins de leurs groupes estérifiables ont été modifiés par estérification, peuvent être obtenus par tout procédé parfaitement connu à ce jour de l'homme du métier. De préférence, ces peptides sont obtenus par la mise en #uvre du procédé décrit dans le document EP-0 736 102. En l'espèce, le procédé correspondant consiste à réaliser une réaction d'estérification d'au moins un groupe estérifiable de l'une au moins des protéines ou peptides contenus dans le substrat d'origine animale ou végétale, dans le but de modifier l'action ultérieure d'une protéase ou peptidase. Bien entendu, la composition selon l'invention comportera une concentration appropriée en protéines et/ou peptides modifiés par estérification, et cela notamment pour obtenir une activité antivirale adaptée à l'application envisagée. Cette concentration est de préférence comprise entre 1 et 50 g/ml. La composition correspondante comportera tout excipient approprié, notamment pour obtenir une composition de présentation souhaitée, par exemple sous forme de liquide, solide ... ; elle comprendra encore tout principe actif, ou additif complémentaire, pour une activité optimale des dérivés protéiques et/ou peptidiques obtenus par estérification. La présente invention a également pour objet certaines compositions présentant une activité antivirale particulièrement intéressante à l'encontre de certains virus. Ainsi, une composition pour l'inactivation de particules virales de type Herpes simplex, sensible à l'acyclovir (ACV-sensible), comprend au moins un dérivé d'alactalbumine et/ou son hydrolysat pepsique, dont les groupes estérifiables sont méthylés entre 50 et 70 %. D'autre part, une composition pour l'inactivation de particules virales de type Herpes simplex, résistant à l'acyclovir (ACV-résistant), comprend au moins un dérivé de I1-lactoglobuline, dont les groupes estérifiables sont méthylés à au moins 90 %. De plus, une composition pour l'inactivation de particules virales de type Adenovirus comprend au moins un dérivé de R-lactoglobuline et/ou son hydrolysat pepsique, dont les groupes estérifiables sont méthylés à au moins 90 %. Encore, une composition pour l'inactivation de particules virales de type Poliovirus, et autres virus nus (virus d'hépatite A, Calicivirus ...) et enveloppés, comprend au moins un dérivé d'a-lactalbumine et/ou son hydrolysat pepsique, et/ou un dérivé de 11-lactoglobuline et/ou son hydrolysat pepsique, dont les groupes estérifiables sont méthylés à au moins 60 %. En outre, une composition pour l'inactivation de particules virales de type Cytomegalovirus comprend au moins un hydrolysat pepsique d'un dérivé d'a- lactalbumine, et/ou un dérivé de I1-lactoglobuline, dont les groupes estérifiables sont méthylés à au moins 60 %. Les domaines d'application des compositions antivirales conformes à l'invention, sont variés. Elles peuvent particulièrement être mises en #uvre dans le domaine de la protection environnementale pour la lutte contre les contaminations virales, par exemple dans le traitement des eaux usées. Ces compositions peuvent également être mises en oeuvre comme agents désinfectants pour le traitement des surfaces industrielles, hospitalières ou domestiques, par exemple sous forme de poudre, incorporés dans des antiseptiques (savons, crèmes, ovules ...) ou des détergents ; les protéines estérifiées peuvent aussi être déposées à la surface des tissus de masques ou de gants de protection. Ces applications sont particulièrement intéressantes en raison du large spectre d'activité antivirale des protéines et/ou peptides estérifiés ; d'autre part, ces substrats protéiques estérifiés ne présentent pas de toxicité, et ils sont relativement facilement biodégradables. Exemples Les premières étapes des différents protocoles d'étude d'activités antivirales, c'est-à-dire les étapes visant l'obtention des protéines estérifiées et leurs hydrolysats pepsiques, sont identiques, et décrits en détail ci-dessous. Protéines natives La R-lactoglobuline (Protarmor 907 NK) est préparée selon la méthode de Mailliart et Ribadeau Dumas (1988, J.Food Sci. 53,743-745). L'a-lactalbumine (Armor Protéines) est purifiée par chromatographie d'échange d'ions sur une colonne DEAE-Sepharose Fast Flow (50 x 300 mm). L'élution est ensuite obtenue avec une solution Tris 50 mM, CaCl2 10 mM à pH 4, avec un gradient de 10 à 40 mM de NaCI. Estérification Le procédé d'estérification de ces a-lactalbumine et 11-lactoglobuline est décrit plus en détails dans le document EP-0 736 102. La 11-lactoglobuline (5 %, rapport poids/volume) est mise en suspension dans un alcool concentré (supérieur à 99,5 %). Une quantité d'acide chlorhydrique équivalant à un rapport molaire d'acidité de 60 (mole d'acide/mole de groupe carboxylique), est ajoutée goutte-à-goutte en début de réaction. Cette préparation est ensuite placée sous agitation à 4 C pendant 8 heures. A la fin de la réaction, les échantillons sont centrifugés à 10 000 g pendant 10 minutes. Le surnageant obtenu est éliminé, et le culot est élue par agitation dans un volume d'alcool (éthanol à 99,7 %) équivalant au volume de surnageant éliminé, avant une nouvelle centrifugation sous des conditions identiques. L'étape de lavage est répétée trois fois. Le précipité final est dissous dans un volume approprié d'eau distillée, ajusté à un pH de 7,6 ; puis cette solution est dialysée contre de l'eau distillée pendant trois jours. Le pH est ensuite réajusté à 7,6 avant séchage à froid. Le lyophilisât obtenu est conservé à - 20 C en vue d'analyse. La même technique est utilisée pour l'estérification de l'a-lactalbumine, à l'exception du fait que le précipité obtenu est directement dissous dans l'eau, ajusté à un pH de 7,6, puis dialysé pendant trois jours sans lavage à l'alcool. Les étapes suivantes sont similaires à celles décrites ci-dessus pour la fi-lactoglobuline. Analyse du pourcentage d'estérification Une réaction colorimétrique, utilisant l'hydrochlorure d'hydroxylamine, et développée par Halpin, M.I., Richardson, T. (1985, J. Dairy Sci. 68,3189-3198), modifiée selon Bertrand-Harb, C., Chobert, J.M. Dufour, E. Haertlé, T. (1991, Sci. Aliments 11,641-652), est mise en #uvre pour déterminer le degré d'estérification des protéines. Hydrolyse pepsique de protéines estérifiées Des quantités connues de protéines natives et modifiées par estérification sont dispersées dans un tampon d'acide citrique 20 mM, pH 2,6. Des fractions aliquotées de solution de pepsine (concentration initiale : 2 mg/ml d'eau) sont ajoutées de sorte à obtenir un rapport enzyme/substrat protéique (E/S) de 2 %. Le mélange est incubé à 37 C pendant 10 heures. Un volume approprié d'une solution de phosphate disodique est ajouté pour stopper la protéolyse et pour ajuster le pH à 7,6. Le degré de protéolyse est déterminé par quantification de l'augmentation de groupes aminés libres dans l'hydrolysat, et cela selon une réaction à l'orthophtalaldehyde (OPA) par la mesure de l'absorption à 340 nm (Frister et al. 1988, Anal. Chem. 330 : 631-633). Le degré d'hydrolyse (% DH) est obtenu en divisant la quantité de groupes aminés libérés par la quantité totale de groupes a-aminés liés dans le substrat de départ, puis par multiplication par 100. Exemple 1 - Activité antivirale d'une a-lactalbumine estérifiée et d'une R-lactoglobuline estérifiée à l'encontre de l'Herpes simplex virus type 1 1.1Cellules et virus Une ligne cellulaire Vero ATCC CCL81 (Cellules de rein de singe vert d'Afrique) est multipliée dans un milieu MEM (Eurobio) contenant 8 % de sérum foetal de veau (FCS, Eurobio) et 1 % de PCS (pénicilline 10 000 U, colimycine 25 000 U, streptomycine 10 mg). Un lot de Herpes simplex virus type 1, souche sauvage 17 ACVs et PCSs (HSV-1), est multiplié dans les cellules Vero et conservé à - 70 C en vue de son utilisation. 1.2 Mesure de l'activité anti-HSV-1 et essai de cvtotoxicité 100 l d'une gamme de concentration de protéines estérifiées sont dilués avec une solution de MEM contenant 8 % de FCS, puis ajoutés à chacun des puits d'une plaque 96 puits contenant chacun 50 l d'une suspension de cellules Vero (105 cellules par ml). Pour procéder au test d'activité anti-HSV-1,50 l d'une suspension de virus sont ajoutés aux cellules à une dose équivalant à un effet viral cytopathogène déterminé (CPE), en présence de différentes concentrations de la substance testée. Pour tester la cytotoxicité, 50 l de MEM contenant 8 % de FCS sont ajoutés aux puits en présence de différentes concentrations de protéines, sans virus. Des contrôles cellules et virus sont menés en simultané. Après 72 heures d'incubation à 37 C, en présence de 5 % de C02, l'activité antivirale est suivie par une évaluation de la viabilité cellulaire par la méthode du rouge neutre (Mac Laren et al. 1983, Antivirale Res. 3 : La densité optique est directement proportionnelle à la quantité de cellules viables, qui est inversement proportionnelle au rapport CPE. Le pourcentage de protection cellulaire est calculé selon la formule suivante : Protection cellulaire (%) = DOs - DOv/DOc - DOv x 100 où DOs est la densité optique mesurée pour les cellules infectées par le virus et protégées par la substance testée ; la DOv est la densité optique mesurée pour des cellules infectées par le virus ; la DOc est la densité optique mesurée pour des cellules contrôles (sans infection par un virus, ni traitement par la substance testée). La cytotoxicité de la substance testée est calculée par comparaison de la viabilité des cellules multipliées en présence de la substance testée par rapport aux cellules contrôles (absence de substance testée), selon la formule suivante : Cytotoxicité (%) = DOc - DOs/DOc x 100 La même procédure est utilisée sur des cellules fixées par incubation pendant 24 heures, 50 l de suspension cellulaire étant distribués dans chaque puits de la plaque. Le jour suivant, les virus et la substance testée sont ajoutés tel que défini précédemment. La plaque est incubée pendant trois jours avant de déterminer la viabilité cellulaire. 1.3 Résultats 1. 3.1 Activité antivirale de protéines estérifiées à l'encontre du virus HSV-1, ACVsensible La figure 1 représente le pourcentage de protection cellulaire obtenu par l'alactalbumine méthylée à 60 % (A) et son hydrolysat pepsique-10 heures (B) à l'encontre du virus HSV-1 (CPE 50 et 100 %) inoculé à des cellules Vero, après 72 heures d'incubation à 37 C, et cela en fonction de la concentration de protéines en g/ml. L'a-lactalbumine méthylée à 60 %, et son hydrolysat pepsique (25 % DH ; peptides de masse moléculaire inférieure à 1 kDa), exercent une activité antivirale plus prononcée à l'encontre de faibles quantités de virus (50 % CPE). L'hydrolysat pepsique est aussi efficace que la protéine native estérifiée. La concentration moyenne de protéines permettant l'obtention d'une inhibition de 50 % (IC5o) est similaire dans le cas de la protéine estérifiée et de son hydrolysat (20 1 g/ml). Les résultats représentés sur la figure 2 montrent une activité similaire de la sslactoglobuline méthylée à 100 % (A), et de son hydrolysat pepsique (B) (25 % DH ; peptides résultant de masse moléculaire inférieure à 1 kDa) ; l'IC50 est de 95 1,5 et 85 1,5 g/ml, respectivement. L'activité antivirale de l'a-lactalbumine méthylée à 60 % est supérieure à celle de la (1-lactoglobuline méthylée à 100 %, en dépit de son faible degré d'estérification. Il est à noter que ni l'a-lactalbumine native, ni la (1-lactoglobuline native, ne présentent d'activité antivirale à l'encontre du virus HSV-1 (résultats non présentés). Dans les concentrations de protéines utilisées pour ces expérimentations (0- 110 g par ml), aucun signe de cytotoxicité n'a été observé. 1. 3.2 Activité antivirale de protéines estérifiées à l'encontre de souches de virus HSV- 1, ACV-résistant La figure 3 représente le pourcentage de protection cellulaire obtenue par l'application d'a-lactalbumine méthylée à 60 % (A) et de son hydrolysat pepsique-10 heures (B) à l'encontre du virus HSV-1, ACV-résistant inoculé sur des cellules fixées Vero, après 72 heures d'incubation à 37 C, et cela en fonction de la concentration de protéines en g/ml. Les résultats correspondants montrent que l'a-lactalbumine méthylée à 60 %, et son hydrolysat pepsique, sont tous deux actifs à l'encontre de la souche de virus HSV- 1, ACV-résistante, pour une concentration inhibitrice 50 de 58 1,6 pg/ml pour l'alactalbumine méthylée à 60 %. Cette activité antivirale est légèrement inférieure à celle observée dans le cas de la souche de virus HSV-1, ACV-sensible (IC5o : 20 1 g/ml). Cependant, contrairement à ce qui a été observé dans le cas de la souche HSV-1, ACV-sensible, la concentration inhibitrice 50 n'est pas mesurable avec l'hydrolysat pepsique de l'a-lactalbumine méthylée à 60 %, dans le domaine de concentration utilisé. La figure 4 représente le pourcentage de protection cellulaire obtenue par la sslactoglobuline méthylée à 100 % (A) et son hydrolysat pepsique-10 heures (B) à l'encontre du virus HSV-1, ACV-résistant, inoculé à des cellules Vero fixées, après 72 heures d'incubation à 37 C, et cela en fonction de la concentration en protéines en g/ml. La figure 5 représente le pourcentage de protection cellulaire obtenue par l'application de (1-lactoglobuline éthylée à 73 % (A) et son hydrolysat pepsique-10 heures (B) à l'encontre du virus HSV-1, ACV-résistant, inoculé sur des cellules fixées Vero, après 72 heures d'incubation à 37 C, et cela en fonction de la concentration de protéines en g/ml. Le même phénomène est observé pour la r1-lactoglobuline méthylée et éthylée, et pour leurs hydrolysats respectifs. La concentration inhibitrice 50 est de 8 1 et de 75 2 Nglml pour la (1-lactoglobuline méthylée et pour son hydrolysat pepsique, respectivement, et de 62 3 Nglml pour la I1-lactoglobuline éthylée. Tel qu'observé dans le cas de l'a-lactalbumine méthylée à 60 %, la concentration inhibitrice 50 n'est pas mesurable dans le cas de l'hydrolysat pepsique de la sslactoglobuline éthylée. La r1-lactoglobuline méthylée à 100 % présente une activité antivirale à l'encontre de la souche de virus HSV-1, ACV-résistante, supérieure à celle de l'a-lactalbumine méthylée à 60 %. Exemple 2 : Activité antivirale d'une a-lactalbumine estérifiée et d'une 13-lactoglobuline estérifiée à l'encontre du Cytomegalovirus 2.1 Mesure de l'activité anti-Cyfomegalovirus Une souche de référence AD 169 de Cytomegalovirus est multipliée au moyen de fibroblastes MRC-5 (Bio Mérieux Lyon, France). Les cellules de fibroblaste confluentes (MRC-5) sont conservées dans un milieu minimum Eagle (MEM, Eurobio) contenant 2 % de sérum foetal de veau (FCS, Eurobio). Le milieu de culture (MEM, 2 % FCS) est ensuite retiré de l'ensemble des puits, et remplacé avec 1 ml de milieu de culture neuf dans les puits servant de contrôle cellulaire. Dans le cas des puits servant de contrôle virus, 0,1 ml d'une suspension de virus dont le titre est connu est ajouté à 0,9 ml de milieu de culture. Pour les puits destinés à l'évaluation de l'activité antivirale, 0,1 ml de virus et 0,1 ml d'une solution de substance testée sont ajoutés ; le volume est complété à 1 ml avec le milieu de culture. Tous les contrôles sont répliqués quatre fois (4 puits). Les plaques sont incubées à 37 C en présence de 5 % de CO2 pendant 48 heures. Après incubation, le milieu de culture est retiré et les cellules sont fixées par addition d'acétone (à - 20 C) pendant 10 minutes. Après séchage, les cellules sont incubées avec des anticorps monoclonaux E13 à 37 C pendant 30 minutes. Après rinçage au PBS, les IgG antiglobuline, couplés avec un agent isothiocyanate fluorescent (Bio Atlantique) sont ajoutés et les cellules sont de nouveau incubées pendant 30 minutes. Pour finir, les cellules sont lavées au PBS, séchées et couvertes avec du glycérol 90 %. Les plaques sont lues au microscope inversé (Leitz) équipé d'une lampe UV. Le nombre de noyaux fluorescents est utilisé comme index du niveau de cellules infectées par les Cytomegalovirus. L'activité antivirale est calculée selon la formule suivante : Nombre de cellules infectées (Cv) - le nombre de cellules infectées et traitées (T)/nombre de cellules infectées (Cv) x 100. 2. 2 Résultats - Activité antivirale à l'encontre du Cytomegalovirus Les résultats illustrés sur la figure 6 montrent l'activité antivirale des protéines du lait estérifiées selon différentes concentrations en g/ml (1 : a-lactalbumine méthylée à 68 % ; 2 : hydrolysat pepsique de l'a-lactalbumine méthylée à 68 % ; 3 : ss- lactoglobuline méthylée à 100 % ; 4 : hydrolysat pepsique de la f1-lactoglobuline méthylée à 100 %), sur la souche AD169 du Cytomegalovirus pendant l'opération d'infection des cellules de fibroblaste confluentes (MRC-5), après 2 jours d'incubation à 37 C. L'a-lactalbumine méthylée et la r1-lactoglobuline méthylée, ainsi que leur hydrolysat pepsique respectif, diminuent l'activité infectieuse des Cytomegalovirus sur les cellules de fibroblaste. Lors de l'utilisation de faibles concentrations de protéines estérifiées (4 g/ml), l'activité antivirale de l'a-lactalbumine est supérieure à celle de la r1-lactoglobuline. Dans le cas de concentrations plus élevées de protéines estérifiées (20 et 100 g/ml), l'activité antivirale est similaire pour les deux protéines estérifiées. De manière générale, l'activité antivirale des hydrolysats pepsiques de ces protéines estérifiées est inférieure ou égale à celle de la protéine entière, à l'exception de l'hydrolysat pepsique de la R-lactoglobuline testé à faible concentration. Cependant, les formes hydrolysées de protéines estérifiées sont recommandées comme agent antiviral par rapport aux protéines intactes, qui précipitent souvent. Exemple 3 : Activité antivirale d'une a-lactalbumine estérifiée et d'une 11-lactoglobuline estérifiée à l'encontre du Poliovirus 3. 1 Mesure de l'activité anti-Poliovirus et essai de cvtotoxicité 100 l de différentes concentrations de protéines estérifiées, ou de peptides pepsiques, dilués dans un milieu MEM, contenant 8 % de FCS, sont répartis dans des plaques 96 puits contenant 50 l de suspension cellulaire de lignée Vero (105 cellules par ml). Pour tester l'activité antivirale, 50 l d'une suspension de Poliovirus type 1 ou Poliovirus type 2, à une concentration équivalant à 50 ou 100 % CPE, sont ajoutés aux cellules, en présence de différentes concentrations de protéines estérifiées ou de peptides pepsiques. Pour tester la cytotoxicité, 50 l de différentes concentrations de protéines estérifiées ou de peptides pepsiques, dilués dans une solution MEM contenant 8 % de FCS, sont ajoutés aux cellules en présence de virus. Des contrôles cellules et contrôles virus sont effectués simultanément. Après 48 heures (dans le cas de Poliovirus type 1 ) ou 96 heures (dans le cas de Poliovirus type 2) d'incubation à 37 C en présence de 5 % de CO2, l'activité antivirale est étudiée par l'évaluation de la viabilité des cellules par la méthode au rouge neutre (Mac Laren et al. 1983), tel que décrit précédemment lors de la mesure de l'activité anti HSV-1 des protéines estérifiées, au titre 1.2. 3.2 : Résultats - Activité antivirale à l'encontre des Poliovirus La figure 7 illustre le pourcentage de protection cellulaire de l'a-lactalbumine méthylée à 68 % (A), et de son hydrolysat pepsique-10 heures (B), à l'encontre du Poliovirus type 1, de titre 50 et 100 % CPE, inoculé à des cellules Vero, après 48 heures d'incubation à 37 C, et cela en fonction de la concentration de protéines en g/ml. L'a-lactalbumine méthylée à 68 %, et son hydrolysat pepsique (25 % DH, peptides obtenus de masse moléculaire inférieure à 1 kDa), montrent une protection cellulaire considérable et similaire, à l'encontre de la plus faible concentration en virus (50 % CPE). La concentration moyenne en protéines permettant l'obtention d'une inhibition à 50 % (IC50) est de l'ordre de 0,8 0,1 g/ml dans les deux cas. L'activité antivirale est généralement inférieure à l'encontre d'une concentration supérieure en virus (100 % CPE), où l'a-lactalbumine entière méthylée à 68 % est plus efficace que sa forme hydrolysée. Aucun signe de cytotoxicité n'a été observé dans le domaine de concentration testé (1 à 125 g par ml). La figure 8 montre le pourcentage de protection cellulaire obtenue par l'application de R-lactoglobuline méthylée à 100 % (A) et son hydrolysat pepsique-10 heures (B) à l'encontre de Poliovirus type 1 inoculé sur des cellules Vero, après 48 heures d'incubation à 37 C, et cela en fonction de la concentration de protéines d'intérêt en g/ml. Les informations correspondantes montrent des résultats similaires dans le cas de la sslactoglobuline méthylée à 100 % (A), et de son hydrolysat pepsique-10 heures (B) (25 % DH, peptide résultant de masse moléculaire inférieure à 1 kDa), avec une IC50 de l'ordre de 0,8 0,1 g/ml pour le titre inférieur en virus (50 % CPE). Bien que l'action protectrice pour un titre supérieur en virus (100 % CPE) est relativement inférieure à celle présentée ci-dessus, il n'y a pas de différence significative entre l'action de la R-lactoglobuline méthylée sous sa forme entière et sous sa forme hydrolysée. L'a-lactalbumine et la I1-lactoglobuline, sous leur forme native non modifiée, n'ont pas d'activité antivirale à l'encontre des Poliovirus type 1 (résultats non présentés). Une activité antivirale similaire est observée pour les deux protéines estérifiées, et leurs hydrolysats pepsiques respectifs, à l'encontre de Poliovirus type 2 infectant des cellules Vero incubées pendant 4 jours à 37 C. Cependant, l'activité antivirale est légèrement inférieure à celle observée dans le cas de Poliovirus type 1 (résultats non présentés). La valeur de l'IC50 mesurée pour un titre de virus de 50 % CPE est de 8 0,5 pg/ml pour l'a-lactalbumine méthylée à 68 %, et de 6 0,4 g/ml pour son hydrolysat pepsique-10 heures. D'autre part, la valeur de IC50 (50 % CPE) est de 6 0,4 pglml pour la f1-lactoglobuline méthylée à 100 %, et de 3 0,2 pglml pour son hydrolysat pepsique-10 heures. La f3-lactoglobuline éthylée à 70 % présente aussi une activité antivirale à l'encontre de Poliovirus type 2 avec une IC50 de 10 0,6 g/ml pour un titre de virus de 50 % CPE (résultats non représentés). Exemple 4 : Activité antivirale d'une a-lactalbumine estérifiée et d'une f1-lactoQlobuline estérifiée à l'encontre de l'Adenovirus 4. 1 Mesure de l'activité anti-Adenovirus et essai de cvtotoxicité La méthode suivie pour l'étude de l'activité antivirale des protéines estérifiées à l'encontre d'Adenovirus est similaire à celle décrite précédemment en relation avec l'exemple 3, au point 3.1 ; tests sont ici mis en oeuvre sur une ligne cellulaire Heps incubée à 37 C pendant 48 à 72 heures. 4.2 : Résultat : Activité antivirale à l'encontre de l'Adenovirus La figure 9 représente le pourcentage de protection cellulaire obtenue par l'alactalbumine méthylée à 68 % (A) et son hydrolysat pepsique-10 heures (B) à l'encontre d'Adenovirus inoculé sur des cellules Heps, après 48 heures d'incubation à 37 C, et cela en fonction de la concentration de protéines en g/ml. La figure 10 illustre le pourcentage de protection cellulaire obtenue par l'application de f3-lactoglobuline méthylée à 100 % (A) et son hydrolysat pepsique-10 heures (B) à l'encontre d'Adenovirus inoculé sur des cellules Heps, après 48 heures d'incubation à 37 C, et cela en fonction de la concentration de protéines appliquées en g/ml. Les résultats correspondants montrent que l'a-lactalbumine méthylée à 68 % et la f3-lactoglobuline méthylée à 100 %, ainsi que leur hydrolysat pepsique-10 heures, sont actifs à l'encontre d'Adenovirus infectant des cellules fixées Heps, après 48 heures d'incubation à 37 C. Ces activités sont directement en relation avec la concentration en protéines et peptides testés, et cela de manière encore plus évidente à faible concentration de virus (50 % CPE). Il n'y a pas différence significative, en terme d'activité antivirale, entre les protéines entières modifiées et leur forme hydrolysée. L'a-lactalbumine méthylée à 68 %, et son hydrolysat pepsique, inhibent l'activité de l'Adenovirus, avec une IC50 de 11 0,6 g/ml (50 % CPE). La IC50 pour la sslactoglobuline méthylée à 100 %, et son hydrolysat pepsique, est de l'ordre de 3,5 0,2 g/ml. - REVENDICATIONS - 1.- Composition pour l'inactivation de particules virales caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un dérivé d'une protéine et/ou d'un peptide, dont l'un au moins de leurs groupes estérifiables a été modifié par estérification. 2. - Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit dérivé de peptide est obtenu par l'hydrolyse d'une protéine dont l'un au moins de ses groupes estérifiables a été modifié par estérification. 3. - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un dérivé d'une protéine et/ou d'un peptide, qui est obtenu par estérification de l'un au moins de leurs groupes estérifiables en présence d'un alcool. 4. - Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que ladite estérification est réalisée en présence d'un alcool aliphatique possédant entre 1 à 5 atomes de carbone. 5. - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que lesdits dérivés de protéine et/ou de peptide sont obtenus par estérification de protéines et/ou de peptides d'origine animale ou végétale. 6. - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que lesdits dérivés de protéine et/ou de peptide sont obtenus par estérification de protéines et/ou de peptides d'origine laitière. 7. - Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce que lesdites protéines laitières sont choisies parmi l'a-lactalbumine et/ou la ss-lactoglobuline. 8. - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un dérivé d'une protéine et/ou d'un peptide dont la concentration est comprise entre 1 et 50 g/ml. 9. - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour l'inactivation de virus à ADN ou ARN, ou de Virinos. 10. - Composition pour l'inactivation de particules virales de type Herpes simplex virus, ACV-sensible, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un dérivé d'alactalbumine et/ou son hydrolysat pepsique, dont les groupes estérifiables sont méthylés entre 50 et 70 %. 11.- Composition pour l'inactivation de particules virales de type Herpes simplex virus, ACV-résistant, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un dérivé de sslactoglobuline, dont les groupes estérifiables sont méthylés à au moins 90 %. 12. - Composition pour l'inactivation de particules virales de type Adenovirus, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un dérivé de ss-lactoglobuline et/ou son hydrolysat pepsique, dont les groupes estérifiables sont méthylés à au moins 90 %. 13. - Composition pour l'inactivation de particules virales de type Poliovirus et autres virus nus et enveloppés, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un dérivé d'a-lactalbumine et/ou son hydrolysat pepsique, et/ou un dérivé de sslactoglobuline et/ou son hydrolysat pepsique, dont les groupes estérifiables sont méthylés à au moins 60 %. 14. - Composition pour l'inactivation de particules virales de type Cytomegalovirus, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un hydrolysat pepsique d'un dérivé d'a-lactalbumine, et/ou un dérivé de ss-lactoglobuline, dont les groupes estérifiables sont modifiés méthylés à au moins 60 %. 15. - Application d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, comme agent désinfectant pour le traitement des surfaces, par exemple sous forme de poudre, incorporé dans des antiseptiques ou des détergents. 16. - Application d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, comme agent pour la lutte contre les contaminations virales dans le traitement des eaux usées. 17. - Application d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, comme agent antiviral déposé à la surface des tissus de masques ou de gants de protection.