Brevet FR2852328A1 — publié le 20040917

La présente invention se rapporte à de nouveaux marqueurs de la qualité boulangère d'un blé, et à leur utilisation pour améliorer celle-ci. La qualité des blés constitue une donnée fondamentale des échanges internationaux. Toutefois, chaque filière du blé possédant des exigences particulières, la définition de la qualité d'un blé va dépendre considérablement de l'utilisation envisagée. La qualité boulangère d'un blé (on parle aussi de sa valeur en panification ) définit son aptitude à faire du bon pain. Du fait du nombre important d'étapes intervenant dans le processus de réalisation d'un pain (ou panification), les caractéristiques d'un blé à prendre en considération pour établir sa valeur en panification sont multiples. En France, la valeur en panification est déterminée par le test du BIPEA (Bureau InterProfessionnel d'Etudes Analytiques, norme AFNOR NF V03-716). Ce test se base sur une procédure de panification standardisée et sur une grille de notation de l'évolution des propriétés de la pâte au cours du pétrissage, du façonnage, de l'apprêt et de la mise en four. La qualité du produit fini (volume du pain, aspect de la mie, de la croûte) est également étudiée. Les résultats du test BIPEA sont donnés dans une grille de notation sur 300 points, avec des notations intermédiaires de pâte, de mie et de pain sur 100 points. Toutefois, ces tests grandeur nature de réalisation d'un pain sont coûteux à la fois en temps, en moyens et en quantité de farine (2,5 à 3 kg de grain, soit 1,5 kg de farine pour un test). Il n'est possible de réaliser un tel test qu'aux dernières étapes de la sélection, lorsqu'une quantité importante de grains de blé est disponible. D'autres tests, qualifiés d'indirects, ont été développés pour être utilisés au cours des premiers stades de sélection où le nombre de lignées à tester est élevé et la quantité de grains disponibles pour chaque lignée est très faible. Parmi ces tests, on mentionnera notamment l'alvéographe de Chopin. L'alvéographe de Chopin consiste à soumettre un pâton à un débit constant d'air et à mesurer la pression à l'intérieur de la bulle de pâte ainsi formée. Cette extension reproduit la déformation de la pâte sous l'influence du dégagement gazeux. Ce test fournit des renseignements sur la ténacité (P = pression maximale à la déformation), l'extensibilité (L = longueur de la courbe) et la force de la pâte (W = énergie fournie pour la formation d'une bulle jusqu'à rupture, proportionnelle à la surface sous la courbe). Il est réalisé à hydratation constante et donc ne prend pas en compte les différences d'absorption d'eau de la farine liées à la dureté d'un blé. D'autres tests indirects, utilisables sur une quantité faible de grain et dès les premières étapes de la sélection, ont été mis au point. Ces tests permettent d'estimer certaines caractéristiques du blé impliquées plus spécifiquement dans la valeur en panification d'un blé : la dureté du grain et sa teneur en protéines. La dureté d'un grain correspond à sa capacité à résister à l'écrasement et dépend de la force de liaison entre les composants de l'albumen. Les méthodes d'analyse de la dureté portent sur deux aspects du caractère : la résistance du grain à l'écrasement proprement dite et l'état des particules de la farine. Une méthode fréquemment utilisée pour l'évaluation de ce dernier paramètre est la spectrométrie de réflexion dans le proche infra rouge, qui s'appuie sur le principe selon lequel le spectre de réflexion dans le proche infra rouge est sensible aux variations de taille et de distribution des particules d'un échantillon broyé (ROBERT et BERTRAND, Sci. Aliment., 5 : 501-517,1985). Le rayonnement infrarouge pénètre d'autant moins dans un échantillon que les particules de l'échantillon sont petites, ce qui entraîne une diminution des valeurs des absorbances. Les blés soft ayant une granulométrie plus fine que les blés hard (à méthode de mouture identique), les valeurs d'absorbance d'une farine standardisée soumise à un rayonnement dans le proche infrarouge seront d'autant plus faibles que le blé sera soft (WILLIAM, Cereal. Chem., 56 : 169-172,1979). Il s'agit donc d'une méthode d'estimation indirecte du Particule Size Index , norme AACC. La teneur en protéines du grain varie généralement entre 9 et 16% selon la variété et les conditions agro-environnementales. L'utilisation de la spectroscopie dans le proche infrarouge permet une mesure rapide du taux de protéines (WILLIAMS. 1979, précité). Cette méthode non destructive s'effectue sur grains entiers. Néanmoins, l'ensemble de ces tests nécessite, comme pour le test BIPEA, de disposer au préalable de plants de blé matures pour recueillir une quantité de grains (et donc de farine) suffisante. De plus, ces tests n'étudient qu'une partie des contraintes subies par la farine au cours de sa transformation en pain et donc ne renseignent les sélectionneurs que sur certains caractères de la pâte. La panification constituant l'un des débouchés principaux des blés français, la valeur en panification du blé constitue un enjeu majeur pour les sélectionneurs. Or, du fait de la complexité des caractères associés à la qualité boulangère d'un blé, la mise en #uvre de méthodes classiques de sélection variétale pour obtenir des plantes possédant les propriétés souhaitées peut s'avérer longue et fastidieuse. L'identification et l'utilisation de marqueurs moléculaires liés à des gènes déterminant la valeur en panification permettraient d'accélérer le processus de sélection de variétés de blé présentant une meilleure valeur en panification. Actuellement, une approche de plus en plus utilisée pour faciliter l'obtention de plantes possédant un caractère quantitatif d'intérêt agronomique consiste à localiser des régions chromosomiques intervenant dans la variabilité de ce caractère. Ces régions, dénommées QTL (pour Quantitative Trait Locus ), sont balisées par des marqueurs moléculaires dont le polymorphisme explique une part significative de la variation du caractère d'intérêt. Fondamentalement, un QTL constitue un objet statistique que l'on peut définir par (au moins) deux paramètres : sa position et son effet (additif). Lorsqu'un QTL associé au caractère souhaité a été mis en évidence, il peut ensuite être utilisé de différentes manières pour l'obtention de plantes présentant ce caractère. Par exemple, des marqueurs moléculaires d'un QTL peuvent être utilisés pour sélectionner des plantes porteuses de ce QTL. Ceci, afin d'utiliser ces plantes comme source de matériel génétique à des fins d'amélioration de ce caractère d'intérêt chez d'autres plantes. L'allèle associé à ce QTL favorable peut ensuite être introduit (par exemple par des méthodes classiques d'introgression) dans des plantes chez lesquelles on souhaite améliorer ce caractère d'intérêt ; l'efficacité de cette introgression peut être contrôlée grâce à l'utilisation de marqueurs moléculaires associés au QTL concerné, selon les procédures usuelles de sélection assistée par marqueurs (SAM) (Hospital et Charcosset, Genetics, 147 : 1469-1485,1997). En ce qui concerne la valeur en panification d'un blé, différents QTL d'intérêt ont pu d'ores et déjà être identifiés. Ainsi, SYMES (Aust. J. Agr. Res., 16 : 113-123, 1965) a montré que la différence de dureté entre des variétés de blé est essentiellement liée à un gène unique, Ha , positionné sur le bras court du chromosome 5D (MATTERN et al., Proc 4th Int. Wheat Genet. Symp. Coloumbus, Missouri, 703-707, 1973 ; LAW et al., Heredity, 40 : 133-151, 1978,). Toutefois, SOURDILLE et al. (Theor. Appl. Genet., 93 : 580- 586,1996) ont montré par une approche QTL que ce gène Ha permettait d'expliquer 63% de la variation phénotypique de la dureté. D'autres études de la dureté, utilisant une approche par analyse génétique, ont mis en évidence des effets mineurs associés aux chromosomes 2A, 4A, 4B, 7A (MATTERN et al. 1973, précité), 5A, 5B (MORRISON et al., J. Cereal. Sci., 2 : 145- 152,1989), 2A, 2D, 5B et 6D (SOURDILLE et al. 1996, précité). L'étude de lignées de substitution ou de lignées monosomiques a permis de détecter des facteurs génétiques contrôlant la quantité de protéines sur les bras longs et courts du chromosome 5D (MORRIS et al., Proc 4th Int. Wheat Genet. Symp. Coloumbus, Missouri, 715-718,1973 ; LAW et al., Seed Protein Improvment by Nuclear Techniques (ed) IAEA, 483- 502,1978), le chromosome 5A (MORRIS et al. 1973, précité), les chromosomes 1A, 1B, 5B et 7A (STEIN IRA et al., Crop. Sci., 32 : 581-584, 1992). Plus récemment, deux QTL intervenant à hauteur de 66% et 20% dans la variation de ce caractère ont été détectés sur le chromosome 6B (JOPPA et al., Crop. Sci., 37 : 1586-1589, 1997) et sur le chromosome 2D (PRASAD et al., Theor. Appl. Genet., 99 : 341-345, 1999) respectivement. Enfin, quelques études QTL concernant divers composants de la valeur en panification ont permis d'identifier différentes régions génétiques impliquées dans la qualité boulangère d'un blé (PERRETANT et al., Theor. Appl. Genet., 100 : 1167-1175, 2000 ; ZANETTI et al., Plant. Breed., 120 : 13-19, 2001). Les Inventeurs ont entrepris d'identifier d'autres QTL associés à la valeur en panification d'un blé. Dans ce but, ils ont analysé la descendance d'un croisement entre deux variétés de blé de bonne valeur agronomique et boulangère : la variété Renan et la variété Récital . Ils ont ainsi détecté une région, portée par le chromosome 3A, qui contrôle divers caractères influençant la qualité boulangère d'un pain : la force de la pâte, le taux de protéines du grain, la dureté du grain, le volume du pain et la valeur en panification (note de pain, note de pâte et note totale du test BIPEA). Ils ont identifié dans cette région des QTL stables d'aptitude à la panification, ainsi que plusieurs marqueurs moléculaires de ces QTL. La présente invention a pour objet l'utilisation d'un ou plusieurs marqueurs moléculaires de la région du chromosome 3A bordée par les marqueurs cfd079b et gwm68b pour l'évaluation de la qualité boulangère de plants, lignées, ou variétés de blés. On définit ici comme marqueur moléculaire de la région du chromosome 3A mentionnée ci-dessus, toute séquence polynucléotidique comprise dans cette région et présentant un polymorphisme corrélé avec l'aptitude d'un blé à la panification. Ces marqueurs peuvent être de différentes catégories : à titre d'exemples non limitatifs, il peut s'agir de RFLPs (Restriction Fragment Length Polymorphism), d'AFLPs (amplification fragment length polymorphisms), de RAPDs (random amplified polymorphic DNA), de microsatellites, de SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms), de STS (Séquence Tagged Sites) et notamment d'ESTs (Expressed Séquence Tags ou de gènes. La présente invention a en particulier pour objet un procédé pour évaluer la qualité boulangère d'un blé, caractérisé en ce qu'il comprend la détection de la présence ou de l'absence dans du matériel biologique provenant dudit blé, d'un allèle d'au moins un marqueur moléculaire de la région du chromosome 3A définie ci-dessus, ledit allèle étant associé à une qualité boulangère élevée. Selon un mode de mise en #uvre préféré de la présente invention, ledit ou lesdits marqueur(s) moléculaire(s) sont un ou des marqueur(s) microsatellite(s). Selon une disposition préférée de ce mode de mise en #uvre le(s)dits marqueur(s) microsatellite(s) est (sont) choisi(s) parmi les marqueurs gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b. Ces quatre marqueurs couvrent l'intégralité de la région du chromosome 3A définie ci-dessus. De préférence, on utilisera une combinaison d'au moins 2, avantageusement d'au moins 3, et de manière tout à fait préférée une combinaison des 4 marqueurs. Ces marqueurs sont connus en eux-mêmes : gwm5 (également dénommé WMS5), gwm068 (également dénommé WMS68), gwm369 (également dénommé WMS369) ont été décrits par RÔDER et al. (Genetics, 149 : 2007-2023,1998) ; cfd79 a été décrit par GUYOMARC'H et al. (Theor. Appl. Gen., 104 : 1164-1172, 2002) et SOURDILLE et al. (Improvement of the genetic maps of wheat using new microsatellite markers. In : Proc. 'Plant and Animal Genome' IX Conf. San Diego, CA, USA, 425 : 167, 2001). Leurs caractéristiques sont indiquées ci-après : gwm5 : amorce gauche : GAAAGGGCCAGGCTAGTAGT (SEQ ID N l) amorce droite : CCAGCTACCTCGATACAACTC (SEQ ID N 2) Tm : 50 C Ce marqueur est lié à un QTL de teneur en protéines du grain, à un QTL de force de pâte, à un QTL de dureté du grain, à un QTL de volume du pain (test BIPEA) , à un QTL de note de pain (test BIPEA) , et à un QTL de note de pâte (test BIPEA). La taille du produit d'amplification de l'allèle favorable apporté par la variété Renan est de 168 pb. gwm68 : amorce gauche : AGGCCAGAATCTGGGAATG (SEQ ID N 3) amorce droite : CTCCCTAGATGGGAGAAGGG (SEQ ID N 4) Tm : 60 C Ce marqueur est lié à un QTL de force de pâte, à un QTL de volume du pain (test BIPEA), à un QTL de note de pain (test BIPEA) , à un QTL de note de pâte (test BIPEA) , et à un QTL de note totale (test BIPEA). La taille du produit d'amplification de l'allèle favorable apporté par la variété Renan est de 126 pb. gwm369 : amorce gauche : ACCGTGGGTGTTGTGAGC (SEQ ID N 5) amorce droite : CTGCAGGCCATGATGATG (SEQ ID N 6) Tm : 60 C Ce marqueur est lié à un QTL de teneur en protéines du grain, à un QTL de dureté du grain, et à un QTL de volume du pain (test BIPEA). La taille du produit d' amplification de l'allèle favorable apporté par la variété Renan est de 184 pb. cfd079 : amorce gauche : TCTGGTTCTTGGGAGGAAGA (SEQ ID N 7) amorce droite : CATCCAACAATTTGCCCAT (SEQ ID N 8) Tm : 60 C Ce marqueur est lié à un QTL de dureté du grain. La taille du produit d'amplification de l'allèle favorable apporté par la variété Renan est de 284 pb. A partir des informations fournies par la présente invention sur la région du chromosome 3A définie cidessus et sur les QTL localisés dans cette région, l'homme du métier peut facilement identifier d'autres marqueurs moléculaires de cette région et de ces QTL, par des méthodes classiques, connues en elles-mêmes. A titre d'exemple, il est possible, à partir d'une banque BAC couvrant la zone d'intérêt du chromosome 3A, de définir quels sont les clones positifs, c'est-à-dire ceux pour lesquels les marqueurs gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b s'hybrident. Chaque extrémité de clones BAC pourra alors être séquencée, générant ainsi de nouveaux marqueurs microsatellites ou SNP si leur polymorphisme est corrélé avec l'aptitude d'un blé à la panification. Les marqueurs moléculaires de la région du chromosome 3A définie ci-dessus, et notamment les marqueurs gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b, sont utilisables pour évaluer le potentiel de valeur en panification d'un plant, d'une lignée ou d'une variété de blé, par détection d'un ou plusieurs des QTL associés à la valeur en panification présents dans cette région. Des plants, lignées, ou variétés possédant au moins un QTL de valeur en panification améliorée ainsi détecté peuvent être utilisés comme source de matériel génétique pour améliorer la valeur en panification de plantes de qualité boulangère faible ou moyenne, par exemple par introgression dudit QTL dans lesdites plantes. Le suivi de cette introgression peut ensuite être assuré à l'aide des marqueurs moléculaires conformes à l'invention. Dans le cadre de la mise en #uvre de la présente invention, on peut utiliser, selon les techniques connues en elles-mêmes de sélection assistée par marqueurs, un ou plusieurs marqueurs moléculaires de la région du chromosome 3A définie ci-dessus et des QTL localisés dans cette région, à différents stades de l'obtention de blés possédant une bonne qualité boulangère. L'association de marqueurs couvrant l'intégralité de cette région du chromosome 3A, tels que les marqueurs gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b, permet de suivre l'introgression de plusieurs caractéristiques à la fois. La présente invention est utilisable en particulier chez Triticum aestivum, qui est la principale espèce utilisée en boulangerie. Toutefois, les marqueurs microsatellites gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b, étant spécifiques du génome des Triticaceae, ils peuvent également être transférés chez le blé diploïde Triticum monococcum, ou le blé tétraploïde Triticum durum. Notamment, le marqueur gwm5 peut être utilisé dans le cadre de l'amélioration de la teneur en protéines du grain qui est une caractéristique recherchée chez ces espèces. La présente invention englobe également l'utilisation de sondes ou amorces polynucléotidiques permettant la détection des marqueurs moléculaires définis ci-dessus, et notamment des marqueurs gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b, dans le cadre des utilisations desdits marqueurs définies ci-dessus. La présente invention a également pour objet un kit de détection utilisable pour évaluer la valeur en panification d'un blé caractérisé en ce qu'il comprend au moins deux couples d'amorces permettant l'amplification de deux marqueurs différents choisis parmi gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b. De préférence, des kits conformes à l'invention comprennent trois couples d'amorces permettant l'amplification de trois des marqueurs ci-dessus, et de manière particulièrement avantageuse, ils contiennent quatre couples d'amorces permettant l'amplification de quatre de ces marqueurs. La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à un exemple non-limitatif illustrant la mise en évidence de QTL de valeur en panification. EXEMPLE: I- MATERIEL ET METHODES Population utilisée : Pour la cartographie, une population constituée de 194 lignées consanguines recombinantes F7 (RIL pour : recombinant inbred lines ) a été utilisée. Cette population a été obtenue à partir du croisement entre deux variétés de blé d'hiver européen : Renan et Récital . La première se caractérise par une très bonne valeur boulangère, associée à une teneur en protéines élevée. La seconde se caractérise par une bonne qualité boulangère malgré une teneur en protéines relativement faible. Elles possèdent aussi toutes deux une dureté de grain importante. Les RILs ont été semées en France en 1999 dans 6 environnements différents, à savoir Châlons en Champagne (CHAL),Clermont-Ferrand (CF), Chartainvilliers (CVIL), Le Moulon (LM), Mons(MO) et Rennes(RN). Construction de la carte génétique de la population Récital x Renan La carte de liaison génétique est construite en utilisant des marqueurs RFLP, AFLP et microsatellites. L'analyse RFLP a été réalisée par marquage non radioactif (sonde froide) selon le protocole décrit par LU et al. (Agronomie, 14 : 33-39, 1994). La technique de révélation des marqueurs microsatellites et des AFLP utilisée est une méthode non radioactive au nitrate d'argent, décrite par TIXIER et al. (Journal of Genetics and Breeding, 51 : 175-177, 1997). La carte génétique Renan x Récital (ReR) comporte actuellement 525 locus répartis sur 38 groupes de liaison couvrant un total de 2722,3 centiMorgans (cM) en distance génétique. L'analyse des liaisons est effectuée en utilisant le logiciel Mapmaker/exp 3. 06 (LANDER et al., Genomics., 121 : 185-199,1987). Les fréquences de recombinaison sont converties en distances en centiMorgans (cM) en utilisant la fonction de cartographie de KOSAMBI (KOSAMBI, Ann. Eugen., 12 : 172-175, 1944). Les groupes de liaison sont attribués à des chromosomes, en utilisant les loci microsatellites, par comparaison avec les cartes de référence de Courtot X Chinese Spring et Synthetic X Opata décrites respectivement par CADALEN et al. (Theo. Appl. Genet., 94 :367-377, 1997) et RODER et al. (Genetics, 149 : 2007-2023, 1998). Analyse des QTL Dans une première étape, une analyse de variance (ANOVA) est réalisée pour chaque marqueur pris individuellement. Les marqueurs déclarés significatifs sont ensuite soumis à une étape de régression multiple pour déterminer le sous-ensemble de marqueurs qui restent significatifs ensemble. Le sous-ensemble de marqueurs ainsi défini est utilisé comme source de covariables dans l'étape suivante. La liste des chromosomes porteurs des QTL putatifs est établie d'après l'ANOVA au marqueur. La part du caractère expliquée par ces marqueurs est déterminée par le R2 du modèle de régression multiple. Pour chaque chromosome porteur d'un QTL putatif, la localisation et l'effet de ce QTL sont calculés par la méthode de marker régression (HYNE V. et KEARSEY M., Theor. Appl Genet., 91 :471-476, 1995). Cette méthode consiste à réaliser un ajustement des moindres carrés entre les valeurs des effets observés aux marqueurs et les valeurs prédites compte tenu de la fréquence de recombinaison entre les marqueurs et le QTL. Analyse statistique: Toutes les analyses statistiques de caractères ont été réalisées en utilisant le programme SAS (SAS Institute Inc., 1991). Les coefficients de corrélation de Pearson entre les données phénotypiques ont été estimés en utilisant le programme software Splus (Splus guide to statistical and mathematical analyses, Mathsoft, Seattle, Wash, 1993). Paramètres d'aptitude à la panification : Mesure de la qualité rhéologique de la pâte : Les caractéristiques rhéologiques des pâtes sont testées au moyen de l'alvéographe de Chopin (norme ISO 5530-4). Mesure de la dureté du grain : Deux méthodes différentes ont été utilisées : La dureté a été évaluée sur farine par analyse dans le proche infrarouge (NIR) à l'aide d'un Inframatic 8100. Cette méthode est normalisée par l'AACC (American Association of Cereal Chemists) sous la référence 39-70A. L'étalonnage de l'appareil est réalisé d'après les données issues du laboratoire de l'ITCF (Institut Technique des Céréales et Fourrages) qui sert de référence en France. La dureté du grain a également été mesurée selon le protocole 55-31 de l'AACC, à l'aide de l'appareil SKCS 4100 (SKCS : Singel-Kernel Characterization System, GAINES et al., Cereal. Chem., 73 : 278-283,1996) commercialisé par la société PERTEN INSTRUMENTS. Cet appareil mesure l'énergie nécessaire pour broyer un grain ; une moyenne sur un échantillon de 300 grains est établie. Mesure du taux de protéines de grain : La méthode choisie pour la mesure du taux de protéines dans le grain est la méthode par analyse infrarouge du grain entier normalisée par l'AACC (méthode 39-25). Mesure de la valeur en panification : Le test final de panification utilisé dans cette méthode est le test normalisé dit BIPEA (NF V03-716). Quatre échantillons sont traités simultanément, en même temps qu'un témoin qui est repris à chaque analyse et qui sert de référence. II- RESULTATS : Un ensemble de QTL associés à l'aptitude à la panification a été détecté sur le chromosome 3A. La Figure 1 en annexe représente la position de ces QTL sur le chromosome, et leurs caractéristiques. Légende de la Figure 1 : Les traits verticaux représentent l'intervalle de confiance du QTL (lorsque celui-ci a été détecté dans plusieurs environnements, seul l'intervalle le plus court est représenté). Les nombres entre parenthèses en regard de ces traits représentent, pour le premier d'entre eux le nombre d'environnements où le QTL a été détecté et pour le second la valeur la plus élevée de R2 pour ce caractère. GPC : taux de protéines du grain HNIR . dureté du grain W : force de la pâte Volpain . volume du pain (test BIPEA) Notepain : Note de pain (test BIPEA) Notepâte . note de pâte (test BIPEA) Notetotaie : note totale (test BIPEA) Détection de QTL de teneur en protéines du grain : Le tableau I ci-après résume les résultats de teneur en protéines du grain obtenus pour les RILs et les lignées parentales au niveau de chaque environnement. Tableau@ Population RIL Lignées parentales Min Max Moy Renan Récital CHAL 9,7 14,2 11,6 13,4 10,3 CF 9,7 13,1 11,2 12,3 10,2 CVIL 9,0 13,8 11,1 12,3 9,8 LM 9,8 14,2 11,8 12,9 10,3 MO 9,2 14,5 11,7 12,9 10,5 RN 10,8 16,2 12,9 13,8 11,6 Les résultats obtenus montrent que les deux lignées parentales présentent des valeurs de teneurs en protéines du grain très différentes. Le fait que les lignées recombinantes présentent des valeurs moyennes proches de celles des lignées parentales suggère l'existence d'effets épistatiques faibles. En revanche, la variation en terme de teneur en protéines du grain est plus importante chez les RILs que chez les lignées parentales. Ainsi, la différence entre les lignées présentant les teneurs en protéines de grain les plus élevées et celles présentant les teneurs les plus faibles est environ le double de celle existant entre les variétés Renan et Récital. Ces résultats suggèrent que des allèles favorables sont portés par les deux parents. L'analyse des QTL de teneur en protéines du grain a permis de détecter 4 QTL stables (c'est à dire détectés dans au moins 4 environnements sur 6). Ces QTL sont présents sur les chromosomes 2A, 3A, 4D et 7D. Chacun de ces QTL permet d'expliquer environ 10% de la variation phénotypique associé à la teneur en protéines du grain. Le QTL de teneur en protéines du grain associé au chromosome 3A est détecté dans les 6 environnements, et l'allèle favorable de ce QTL est fourni par la lignée Renan. La valeur de R2varie de 4,1 à 8,3 selon l'environnement testé. Détection de QTL de dureté du grain : Les différences de dureté entre les blés hard et soft sont contrôlées majoritairement par le gène Ha (SYMES, 1965, précité). Cependant, ce gène ne permet pas d'expliquer la totalité de la variation phénotypique associée à la dureté du grain. Dans cette étude, les deux cultivars utilisés présentent un même allèle du gène Ha. Toute variation de dureté est donc indépendante de ce gène, et est associée à des gènes associés potentiellement aux variations mineures de la dureté du grain. La dureté, déterminée selon les deux méthodologies différentes (NIR et SKCS) décrites dans les exemples, a été analysée dans trois environnements (CF, CH et RN). Quelle que soit la méthode utilisée, le cultivar Renan présente les valeurs de dureté les plus élevées. Ces analyses mettent chacune en évidence 7 QTL associés à la dureté du grain. Cinq d'entre eux sont détectés par les deux méthodes, aussi bien par la méthode NIR que SKCS, et expliquent de 29 à 37% environ de la variation phénotypique de la dureté. Les résultats pour la dureté évaluée par NIR et SKCS sont présentés dans le tableau II. La Figure 1 illustre les résultats pour la dureté évaluée par NIR. Tableau Il - - - Méthode R 2 Parent contributeur NIR 4,1-7,2 Renan SKCS 4,5 -5,5 Renan Détection de QTL associés à la force de la pâte (W) : Ce caractère a été analysé dans trois environnements (CF, CH et RN). 11 marqueurs liés à la force de la pâte ont été identifiés. Ces marqueurs permettent d'expliquer ensemble de 24 à 46% environ de la variation phénotypique associée à la force de la pâte. Seul un QTL, localisé sur le chromosome 3A apparaît dans les 3 environnements étudiés avec un R2maximum de 10,8. Dans ce croisement, une relation significative a pu être mise en évidence entre GPC et W. Le QTL localisé sur le chromosome 3A pour GPC colocalise avec celui associé à W. Cette corrélation entre W et GPC peut résulter de l'effet d'un gène influençant ces deux traits, ou de celui de plusieurs gènes intimement liés. Détection de QTL associés au volume du pain (Volpain) Ce caractère a été analysé dans les trois environnements CF, CH et RN. Un QTL, localisé sur le chromosome 3A est détecté dans ces 3 environnements avec un R2 maximum de 4,6. Détection de QTL associés à la note de pain (Notepain) : Ce caractère a été analysé dans les trois environnements CF, CH et RN. La note de pain montre une gamme de variations très large au sein de la descendance. Pour cette note, Renan et Récital sont relativement contrastés, Renan possédant des caractéristiques plus favorables que Récital. La population présente de nombreuses lignées transgressives de part et d'autres des valeurs des deux parents. Cette note présente une distribution d'aspect bimodal, ce qui pourrait laisser supposer l'existence d'un gène majeur expliquant une part importante de la variabilité de cette note. Un QTL a été détecté sur le chromosome 3A dans 2 environnements distincts, avec un R 2 maximum de 7,9. Détection de QTL associés à la note de pâte (Notepâte) Ce caractère a été analysé dans les trois environnements CF, CH et RN. Un QTL a été détecté sur le chromosome 3A dans un de ces environnements, avec un R2maximum de 5,3. Détection de QTL associés à la note totale (Notetotale) : Ce caractère a été analysé dans les environnements CF, CH et RN. Un QTL a été détecté sur le chromosome 3A dans les 3 environnements, avec un R2 maximum de 9,3. REVENDICATIONS 1) Procédé pour évaluer la qualité boulangère d'un blé, caractérisé en ce qu'il comprend la détection de la présence ou de l'absence dans du matériel biologique provenant dudit blé, d'un allèle, d'au moins un marqueur moléculaire de la région du chromosome 3A bordée par les marqueurs cfd079b et gwm68b, ledit allèle étant associé à une qualité boulangère élevée. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le(s)dit(s) marqueur(s) moléculaire(s) comprennent un ou plusieurs marqueur(s) microsatellite(s). 3) Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le(s)dit(s) marqueur(s) microsatellite(s) est (sont) choisi(s) parmi les marqueurs gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b. 4) Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'on utilise une combinaison d'au moins 2 des marqueurs gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b. 5) Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'on utilise une combinaison des 4 marqueurs gwm5, gwm068b, gwm369 et cfd79b. 6) Utilisation d'un ou plusieurs marqueurs moléculaires de la région du chromosome 3A bordée par les marqueurs cfd079b et gwm68b, pour l'évaluation de la qualité boulangère de plants, lignées, ou variétés de blés. 7) Utilisation d'un ou plusieurs marqueurs moléculaires de la région du chromosome 3A bordée par les marqueurs cfd079b et gwm68b, pour le suivi de l'introgression d'au moins un QTL de valeur en panification porté par ladite région chromosomique dans une lignée ou variété de blé. 8) Kit de détection utilisable pour évaluer la valeur en panification d'un blé caractérisé en ce qu'il comprend au moins deux couples d'amorces permettant l'amplification de deux marqueurs différents choisis parmi gwm5, gwm068b, gwm369et cfd79b. Chromosome 3A HNIR (1; 7.2) 11.5 # cfd79b Xcfd79 GPC Volpain 11. 5 (6;8.3) Volpain 18.2 # cdo638 (14.2) # (3;10.8) # Notepain 18.2 cdo638(14.2) (3;10.8) Notepain Note -tale (2;7.9) Note 182 fbb250 j gwm5 (2.3) (14.2) Xfbb250 - (3;10.8) Notepain (3;93) 7.5 gwm666c gwm403d (2.6) 7.6 # #40M50 # cfa2134 (2.I) 4DAFmta83 (3.0) 7.6 # E40M50 # cfa2134 (2.1) -L # bcd402 Xbcd402 20.0 Notepâte 6.1 # bcd372 Xbcd372 (1;5.3) @.1 E36M49129 fbb293a Xfbb293-1 17. 5 fbb293a Xfbb293-1 gwm480 3.8 # gwm666b 1 Jba367a (5. 2) Xgwm666 - 10.0 cdo482 tam63c (7.7) 8.4 fbb293d gwm162(1.0) Xfbb293-2 (79. 5 + 39. 7 cM) (79.5 + 39. 7 cM) Fig. 1