Brevet FR2851577A1 — publié le 20040827

DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se rapporte au domaine du traitement préventif ou curatif à l'égard des pathologies provoquées par une infection de l'homme par le virus VIH-1. Elle a trait à des procédés permettant de sélectionner des composés capables d'inhiber le déroulement d'une étape précoce de l'infection de l'organisme par le virus VIH-1, à savoir l'étape d'initiation de la rétrotranscription du génome viral, préalable à l'intégration des séquences virales dans le génome cellulaire de l'organisme hôte infecté. ART ANTERIEUR Vingt ans après les premiers diagnostics du syndrome de l'immunodéficience humaine acquise, le SIDA est devenu la maladie la plus dévastatrice au niveau mondial, puisqu'on estime à environ 42 millions le nombre de personnes infectées par les virus VIH à ce jour. Durant la seule année 2002, plus de 3 millions de personnes ont contracté le virus, tandis que 3 millions sont décédés de la maladie. Depuis la découverte, en 1983, du principal agent responsable du SIDA, le virus VIH-1, des efforts considérables ont été déployés pour comprendre les mécanismes d'action du virus et développer des moyens préventifs et rechercher des moyens curatifs à l'encontre de la maladie. Aujourd'hui, les composés anti-VIH utilisés en thérapie ciblent principalement deux enzymes jouant un rôle clé dans le cycle réplicatif du virus, respectivement la protéase et la rétrotranscriptase virales. A ce jour, sept composés inhibiteurs de protéase sont couramment utilisés en thérapie et d'autres molécules dirigées contre la protéase sont en cours d'essais cliniques. De même, dix composés inhibiteurs de la rétrotranscriptase virale sont aujourd'hui utilisés couramment en thérapie, respectivement sept inhibiteurs nucléosidiques et trois inhibiteurs non nucléosidiques, d'autres inhibiteurs de la rétrotranscriptase étant actuellement en cours d'essais cliniques. Des essais préliminaires ont aussi été réalisés avec des inhibiteurs actifs à différents stades de l'infection par le VIH, notamment avec des inhibiteurs de la fusion virus-cellule, des inhibiteurs des doigts de zinc de la protéine de nucléocapside et des inhibiteurs de l'intégrase. Le traitement d'infections par le virus VIH-1 est réalisé aujourd'hui sous la forme de multi-thérapies ou HAART (pour Highly Active Antiretroviral Therapy ). Dans les multi-thérapies, on combine en général un inhibiteur de protéase et deux inhibiteurs de rétrotranscriptase. Ces cocktails d'inhibiteurs retardent considérablement la progression de la maladie et améliorent la vie des malades sur une longue période de temps . Toutefois, les multi-thérapies actuelles ne permettent pas une éradication totale du virus de l'organisme des personnes infectées. Une des difficultés majeures rencontrée est l'émergence rapide de souches de virus résistants qui accumulent des mutations de résistance dans les gènes codant pour la protéase et/ou la rétrotranscriptase. La résistance aux inhibiteurs de protéase s'exprime essentiellement par l'apparition de mutations dans le site actif de l'enzyme. La résistance aux inhibiteurs analogues non nucléosidiques de la rétrotranscriptase est due à l'apparition de mutations dans la poche hydrophobe qui fixe ces inhibiteurs. La résistance aux inhibiteurs nucléosidiques de la rétrotranscriptase est due à l'apparition de mutations localisées dans les doigts et la paume de l'enzyme. Il existe donc un besoin dans l'état de la technique d'améliorer l'efficacité des traitements anti-SIDA actuels. En particulier, il serait hautement important de compléter l'arsenal actuel de composés anti-viraux afin de mettre au point de nouvelles compositions utilisables notamment dans des multi-thérapies, capables de conserver une bonne efficacité antivirale lors de l'apparition de souches virales mutantes résistantes à un ou plusieurs des composés anti-viraux déjà utilisés. Notamment, l'efficacité thérapeutique anti-SIDA de compositions pharmaceutiques préventives ou curatives pourrait être accrue par la mise en oeuvre de composés actifs à l'encontre d'autres cibles que les seules protéase et rétrotranscriptase du VIH. SOMMAIRE DE L'INVENTION L'invention fournit des procédés pour le criblage de composés utiles dans le cadre d'une thérapie anti-SIDA, et plus spécifiquement de composés actifs pour inhiber ou bloquer une étape précoce de l'infection d'un organisme hôte par le virus VIH-1, l'étape de rétrotranscription . Plus spécifiquement, l'invention est relative à des procédés de criblage de composés capables d'inhiber la première étape de mise en place de la rétrotranscription de l'ARN génomique viral, à savoir l'étape d'initiation de la rétrotranscription. L'invention fournit les moyens de mise en #uvre de tels procédés de criblage sous la forme de complexes ARN/ARN entre un ARN amorce et un ARN matrice, dans lequel l'ARN amorce ne comprend pas de modification post-transcriptionnelle des bases qui le constituent. L'invention est également relative à des trousses ou kits de criblage de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1 comprenant un complexe ARN amorce/ARN matrice tel que défini ci-dessus. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 : Modèle de structure secondaire du complexe tARNMet/ARNv [Met-AC]. Figure 1A : Séquences correspondant aux nucléotides 131 à 205 de l'isolat Hxb2 de l'ARN génomique du VIH-1 sauvage et adapté. L'ARNv adapté [Met-AC] possède une séquence PBS complémentaire aux 18 nucléotides de l'extrémité 3' du tARNMet,une séquence en amont du PBS complémentaire à la boucle de l'anticodon du tARNMet et des mutations supplémentaires (encerclées) apparues après culture cellulaire prolongée. Figure 1 B : Structuresecondaire du complexe. L'ARNv [Met-AC] est en noir, le tARNMet en blanc sur fond noir. L'interaction entre la boucle de l'anticodon du tARNMet et la région complémentaire de l'ARNv, en amont du PBS, correspond à l'hélice 6C et celle de l'extrémité 3' du tARNMet avec le PBS forme l'hélice 7F. Les autres interactions intermoléculaires correspondent aux hélices 3E et 5D. Les nucléotides encerclés correspondent aux mutations apparues après culture cellulaire prolongée. Figure 2 : Modèle de structure secondaire du complexe tARNHis/ARNv [His-AC-GAC1. Figure 2A : Séquences correspondant aux nucléotides 131 à 205 de l'isolat Hxb2 de l'ARN génomique du VIH-1 sauvage (ligne supérieure) et adapté ligne inférieure). L'ARNv adapté [His-AC-GAC] possède une séquence PBS complémentaire aux 18 nucléotides de l'extrémité 3' du tARNHis,une séquence CCACAA en amont du PBS complémentaire à la boucle de l'anticodon du tARNHis et des mutations supplémentaires (encerclées) apparues après culture cellulaire prolongée. Figure 2B : structure secondaire du complexe L'ARNv [His-AC-GAC] est en noir, le tARNHis en blanc sur fond noir. L'interaction entre la boucle de l'anticodon du tARNHis et la région complémentaire de l'ARNv, en amont du PBS, correspond à l'hélice 6C et celle de l'extrémité 3' du tARNHis avec le PBS forme l'hélice 7F. Les nucléotides encerclés correspondent aux mutations apparues après culture prolongée. Figure 3 : Cartographie à la nucléase S1 des régions simple brin du tARNHis libre ( les 3 pistes à gauche) ou hybridé à l'ARNv [His-AC-GAC] (les trois pistes suivantes). Les pistes 0 sont des contrôles d'incubation en absence de nucléase S1 tandis que les pistes 7. 5 et 15 correspondent à des incubations de 7. 5 et 15 minutes respectivement, en présence de 200 U de nucléase S1. Les pistes T1 et L (à l'extrême droite de la Figure) correspondent respectivement à un séquençage à la RNase T1 et à une échelle obtenue par hydrolyse alcaline. Figure 4 : d'ADN strong-stop (-) à partir du tARNHis naturel ou synthétique. Dix nM de complexe matrice/amorce sont incubés en présence de 27 nM de rétrotranscriptase (RT) du VIH-1. La réaction est initiée par l'ajout de 1 l de [ -32P] dCTP (3000 Ci/mmole), 15 M de dCTP et 150 M de chacun des trois autres dNTP. Les temps de réaction sont de 5, 10, 15, 20, 25 et 30 min. Figure 5 : Cinétiques d'extension des amorces tARNHis et ODNHis en présence de l'ARNv [His-AC-GACI. Figure 5A : Synthèse de l'ADN strong-stop (-) à partir du tARNHis, en absence ou en présence d'un piège, poly(rA)/oligo(dT)18, ne permettant qu'un seul cycle de polymérisation. Deux nM de complexe matrice/amorce sont incubés en présence de 20 nM de RT du VIH-1 et la réaction de polymérisation est initiée par l'addition de 50 M de chaque dNTP, en absence ou en présence de 1.66 M de poly(rA)/oligo(dT)18. La réaction est arrêtée à des temps variables entre 15 secondes et 30 minutes. Figure 5B : Synthèse de l'ADN strong-stop (-) à partir de l'ODNHis, en absence ou en présence d'un piège, poly(rA)/oligo(dT)18 ne permettant qu'un seul cycle de polymérisation. L'ODNHis a la séquence SEQ ID n 5 suivante : 5'-ATCCGAGTCACGGCACCA-3' Dix nM de complexe matrice/amorce sont incubés en présence de 30 nM de RT du VIH-1 et la réaction de polymérisation est initiée par l'addition de 50 M de chaque dNTP, en absence ou en présence de 1.66 M de poly(rA)/oligo(dT)18. La réaction est arrêtée à des temps variables entre 15 secondes et 30 minutes. Figure 6 : d'ADN strong-stop (-) à partir du complexe ARNv [His- AC-GAC]/tARN"'s biotinilé, en présence de concentrations croissantes en AZTTP (de 0.1 à 5 pM) (Figure 6A) et en d4TTP (de 0.1 à 5 pM) (Figure 6B). Dix nM de complexe ARNv [His-AC-GAC]ItARN"'S préformé sont transférés dans les puits d'une microplaque de type Flashplate (NEN) et incubés en présence de 5 M de chaque dNTP (dATP, dCTP, dGTP et dTTP /dTTP[3H]), de 30 nM de RT du VIH-1 et en absence ou en présence d'inhibiteurs nucléosidiques. La réaction a lieu à 37 C pendant 5,15 ou 30 minutes avant d'être arrêtée en présence de 25 mM d'EDTA. La radioactivité liée à la surface de chaque puits d'une microplaque est comptée dans un compteur MicroBeta (Wallac-Perkin-Elmer) selon la technique de scintillation de proximité (SPA). En abscisses, les concentrations d'AZTTP, exprimées en Moles par litre ; en ordonnées, le signal de scintillation, exprimé en cpm . Figure 7: Synthèse d'un produit correspondant à l'initiation de la rétrotranscription à partir du complexe ARNv rH is-AC-GAC1/tARNHis biotinylé. Trente nM de complexe matrice/amorce préformé sont transférés dans les puits d'une microplaque de type Flasplate (NEN) et incubés en présence de dGTP, dCTP, dTTPIdTTP[3H] (5pM final chacun), de ddA (20 M), de 90 nM de RT du VIH-1, en absence ou en présence d'AZTTP. La réaction a lieu à 37 C pendant 20 minutes avant d'être arrêtée en présence de 25 mM d'EDTA. La synthèse d'un produit correspondant à l'addition de 6 nucléotides à l'amorce est détectable par la technique de scintillation de proximité (SPA) sur un compteur de type MicroBéta. On mesure une diminution du signal en présence de 0. 1 et 2.5 M d'AZTTP. Les chiffres en gras et en italique au-dessus des histogrammes correspondent au pourcentage de signal résiduel par rapport au contrôle sans inhibiteur. En abscisses, les concentrations d'AZTTP, exprimées en Moles par litre ; en ordonnées, le signal de scintillation, exprimé en cpm DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION L'invention fournit des procédés de criblage de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1. La mise au point des procédés de criblage selon l'invention a été rendue possible grâce à la préparation de nouveaux complexes ARN/ARN capables de mimer le complexe naturel d'initiation de la rétrotranscription, qui est formé après l'entrée du virus VIH-1 dans la cellule. La rétrotranscription est une étape clé du cycle réplicatif des rétrovirus, y compris les VIH, en particulier les VIH-1. La première étape dans le cycle de rétrotranscription est la synthèse d'un brin d'ADN, appelé ADN strong-stop (-). La synthèse du brin d'ADN strong-stop (-) est réalisée par l'élongation de l'isoaccepteur 3 de l'ARN de transfert spécifique de la lysine (tARN3LYS) d'origine cellulaire, à partir de la matrice constituée de l'ARN génomique viral. Les dix-huit nucléotides localisés à l'extrémité 3' du tARN3Lys sont strictement complémentaires de la séquence de liaison à l'amorce (PBS) de l'ARN génomique du VIH-1, localisée à proximité de l'extrémité 5' du génome viral. A partir du complexe ARN/ARN d'initiation de la rétrotranscription formé entre le tARN3Lys et l'ARN génomique viral, la transcriptase inverse du VIH-1 utilise le groupement 3'-OH du tARN amorce hybridé à l'ARN génomique viral pour débuter la synthèse du brin (-) d'ADN strong-stop. Dans l'état de la technique, on a montré que le complexe ARN viraI/tARN3ys) d'initiation de la rétrotranscription du VIH-1 possède des caractéristiques structurales et fonctionnelles spécifiques. Par cartographie chimique et enzymatique en solution, on a montré que l'interaction entre le tARN3Lys et l'ARN génomique viral ne se limite pas aux dix huit nucléotides de la séquence de liaison à l'amorce (PBS), mais s'accompagne de divers réarrangements structuraux intra- et inter-moléculaires, permettant la formation d'une structure compacte très complexe (ISEL et al., 1995 ; ISEL et al. 1996). Parmi les interactions intermoléculaires, l'appariement entre la boucle riche en A de l'ARN viral et la boucle de l'anticodon du tARN3Lys joue un rôle primordial dans la stabilisation de la structure du complexe d'initiation de la rétrotranscription. Il a été montré notamment que la stabilisation des interactions additionnelles est fortement dépendante de la présence des bases modifiées par modification post-transcriptionnelle intracellulaire de l'ARN de transfert naturel (Isel et al., 1996 ; Isel et al., 1993, Skripkin et al., 1996). A la spécificité structurale du complexe d'initiation de la rétrotranscription du VIH-1 correspond une spécificité fonctionnelle . Des études cinétiques ont montré que la synthèse du brin (-) d'ADN strong-stop comprend deux étapes : 1) une étape d'initiation, spécifique au tARN3Lys, qui correspond à l'addition des six premiers nucléotides à l'extrémité 3' de l'amorce naturelle, cette étape d'initiation étant suivie (2) d'une étape d'élongation non spécifique, qui peut être mimée par une amorce ADN de 18 nucléotides strictement complémentaire au PBS. (Isel et al., 1996 ; Lanchy et al., 1996). On a aussi montré que l'étape d'initiation de la rétrotranscription est distributive ; elle est caractérisée par une vitesse faible d'incorporation d'un nucléotide et une vitesse haute de dissociation de la transcriptase inverse du complexe matrice/amorce (ARN viraIItARN3''S) (Lanchy et al., 1996). A l'inverse, l'étape d'élongation, correspondant à l'addition des nucléotides subséquents à partir d'une amorce devenue une amorce oligodésoxyribonucléotidique non spécifique, est processive ; elle est caractérisée par une haute vitesse d'incorporation des nucléotides et une vitesse basse de dissociation de la transcriptase inverse (Lanchy et al., 1996 ; Lanchy et al., 1998). De même, Isel et al. (1996) constatent que les nucléosides modifiés par modifications post-transcriptionnelles intracellulaires de l'ARN de transfert naturel sont requis pour la mise en place d'une étape d'initiation de la rétrotranscription efficace en augmentant l'affinité de la rétrotranscriptase du VIH-1 pour le complexe binaire tARN3Lys/ARN (Isel et al., 1996 ; Lanchy et al., 1996 ; Isel et al., 1993 ; Isel et al., 1999). Il a également été montré que les interactions additionnelles matrice/amorce facilitent la transition de l'étape d'initiation vers l'étape d'élongation. De même, les résultats expérimentaux obtenus par Lanchy et al. (1996) indiquent que les modifications intracellulaires post-transcriptionnelles de l'ARN de transfert sont requises pour la formation d'un complexe d'initiation stable et actif. Les résultats obtenus montrent que les vitesses d'extension de l'amorce obtenue avec le tARN3Lys naturel purifié sont d'environ 32 à 35 fois plus grande que la vitesse d'extension de l'amorce obtenue avec le tARN3Lys transcrit in vitro, lequel ne comprend aucune modification post-transcriptionnelle et ne comprend en conséquence aucune base modifiée. Ces auteurs concluent que l'ARN de transfert qui ne comprend pas de base modifiée n'est pas reconnu spécifiquement comme une amorce par la transcriptase inverse du VIH-1. Selon ces auteurs, les bases modifiées par modification post-transcriptionnelle de l'ARN de transfert cellulaire naturel sont impliquées dans la formation du complexe d'initiation et sont susceptibles d'ancrer la transcriptase inverse du HIV-1 au complexe ARNt amorce/ARN viral matrice, ce qui explique la perte de spécificité de la transcriptase inverse qui est observée en présence d'un ARNt synthétique ne comportant aucune base modifiée. Ainsi, il a été reconnu que les modifications post-transcriptionnelles de l'ARN de transfert pour la lysine stabilisent les interactions amorce/matrice au sein du complexe d'initiation de la rétrotranscription (Isel et al., 1993). L'utilisation d'un ARN de transfert tARN3Lys ne comportant pas les bases modifiées par modifications post-transcriptionnelles ne permet pas l'obtention d'un complexe amorce/matrice stable. Les auteurs soulignent l'importance d'utiliser un ARN de transfert naturel purifié afin de former un complexe d'initiation de la rétrotranscription stable et actif. De même, Isel et al. (1996) constatent que les nucléosides modifiés par modifications post-transcriptionnelles intracellulaires de l'ARN de transfert naturel sont requis pour la mise en place d'une étape d'initiation de la rétrotranscription efficace, et pour une bonne transition de l'étape d'initiation vers l'étape d'élongation. L'importance fonctionnelle de l'interaction que nous avons proposée entre la boucle de l'anticodon du tARN3Lys et la bouche riche en A a été démontrée in vivo . En effet, des virus mutés, ne possédant plus cette complémentarité, présentent des défauts de réplication et restaurent progressivement la boucle des A en culture prlongée (Huang, et al., 1996. Liang et al. 1997). Enfin, des variants du virus HIV-1 dont le PBS a été mute afin d'être compatible aux tARNHis ou tARNMet utilisent de façon stable ces tARN, à condition que la boucle A ait été mutée simultanément de façon à être complémentaire à l'anticodon de ces tARN (Kang et al., 1997. Wakefield et al. 1998). L'analyse des mutants utilisant de façon stable le tARNHis a montré qu'ils contiennent, en plus des mutations dans le PBS et la boucle A (Zhang et al., 1996), trois mutations secondaires dans U5, en amont du PBS, apparues lors de cultures prolongées et impliquées dans le maintien du tARNHis comme amorce (Zhang et al., 1998). Or, de manière surprenante, on a montré selon l'invention, qu'un complexe ARN amorce/ARN matrice virale mimant le complexe d'initiation de la rétrotranscription du virus VIH-1 pouvait être obtenu entre un ARN matrice viral et un ARN amorce ne comportant aucune modification posttranscriptionnelle. Ainsi, le demandeur a pu former un complexe ARN amorce/ARN matrice viral entre un ARN de transfert pour l'histidine (ARNthis) obtenu par transcription in vitro et un ARN viral dont la séquence a été adaptée afin d'être complémentaire de l'ARNthis au niveau de la séquence codon et au niveau de la séquence de liaison à l'amorce (PBS), l'ARNthis ne comportant aucune base possédant une modification chimique identique à une modification post-transcriptionnelle naturelle. Le complexe ARN amorce/ARN matrice virale ci-dessus est stable et permet d'allonger efficacement l'ARN amorce (l'ARNthis sans base modifiée), selon le modèle initiation/élongation défini précédemment, comme représenté sur la figure 4. De même, le demandeur décrit un complexe ARNamorce/ARN matrice avec un ARN de transfert pour la méthionine (ARNtMet) obtenu par transcription in vitro et un ARN viral dont la séquence a été adaptée afin d'être complémentaire de l'ARNtMet au niveau de la séquence codon et au niveau de la séquence de liaison à l'amorce (PBS). Les résultats expérimentaux présentés dans les exemples montrent que, de manière surprenante, certains ARNs de transfert amorce obtenus par simple transcription in vitro de l'ADN codant ce dernier, et n'ayant en conséquence subi aucune modification post-transcriptionnelle de leurs bases, sont capables de former un complexe ARN amorce/ARN matrice avec un ARN matrice viral dont la séquence a été adaptée (i) au niveau de la séquence de l'ARN viral qui est complémentaire à la séquence anti-codon de l'amorce (aussi appelée séquence codon dans la suite de la description) et (ii) de la séquence de liaison à l'amorce (PBS). Il est aussi montré que, en présence d'une transcriptase inverse, le complexe ARN amorce/ARN matrice viral est biologiquement actif et est capable de mimer les étapes d'initiation puis d'élongation de la rétrotranscription du génome viral de VIH-1. Grâce à l'invention, il est désormais possible de produire en grandes quantités des complexes ARN amorce/ARN matrice viral mimant le complexe d'initiation de la rétrotranscription du VIH-1. En effet, la synthèse d'un ARN amorce ne comportant pas de modification post-transcriptionnelle peut être réalisée en grandes quantités et à moindre coût, par exemple par simple transcription in vitro d'un ADN codant ledit ARN amorce. En effet, comme déjà indiqué ci-dessus, les complexes stables et actifs d'initiation de la transcription du VIH-1 étaient formés, dans l'état de la technique, à partir d'un ARN de transfert naturel, obtenu selon des procédés de purification longs, complexes et hautement onéreux, notamment à partir de foie de b#uf ou de poulet. L'accessibilité, grâce à l'invention, de grandes quantités de complexes ARN amorce/ARN matrice viral ne comportant aucune modification posttranscriptionnelle et mimant l'activité du complexe d'initiation naturel de la rétrotranscription du VIH-1 rend enfin possible l'utilisation de ces complexes ARN amorce/ARN matrice viral pour sélectionner à grande échelle des composés inhibant l'activité du complexe d'initiation naturel du VIH-1. On a en effet montré selon l'invention que l'utilisation d'un complexe ARN amorce/ARN matrice viral, dans lequel l'ARN amorce est un produit de transcription in vitro ne comprenant aucune modification posttranscriptionnelle, lorsqu'il est mis en présence d'une transcriptase inverse de VIH-1, permettait de détecter l'activité inhibitrice d'un composé candidat, tel que l'AZTTP, sur l'étape d'initiation de la rétrotranscription de l'ARN génomique viral de VIH-1. Ainsi, l'invention rend pour la première fois accessible à l'homme du métier un procédé de criblage de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription du VIH-1. Le complexe d'initiation de la rétrotranscription constitue donc désormais, grâce à l'invention, une nouvelle cible thérapeutique dont le blocage ou l'inhibition constitue une stratégie thérapeutique supplémentaire anti-VIH-1, qui peut être facilement intégrée dans le cadre des multi-thérapies HAART. En effet, l'introduction de composés inhibiteurs de l'étape d'initiation de la rétrotranscription virale dans le cadre de multi-thérapies est de nature à réduire considérablement la probabilité de développement de souches de VIH-1 résistantes. L'utilisation de composés sélectionnés selon un procédé de criblage de l'invention, et capables d'inhiber l'étape d'initiation de la rétrotranscription du VIH-1, est d'autant plus susceptible de réduire la probabilité d'émergence de souches virales variantes résistantes que l'un des composants de la cible intracellulaire visée, à savoir l'ARN de transfert naturel, ne peut pas subir de mutation sans simultanément provoquer une altération grave, voire un blocage complet, de la synthèse de protéines dans la cellule, ce qui constitue aussi, indirectement, une très forte pression de sélection limitant les possibilités de variation ou de mutation de l'extrémité 5' de l'ARN génomique viral, qui doit être complémentaire, en de nombreuses régions, de la séquence de l'ARN de transfert amorce. Complexes ARN/ARN selon l'invention, mimant le complexe d'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1. Un complexe ARN amorce/ARN matrice mimant le complexe d'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1, selon l'invention, est caractérisé en ce qu'il comprend un complexe ARN matrice/ARN amorce formé entre : (i) un ARN amorce comprenant, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3' : - une séquence d'appariement intramoléculaire (109) ; - une séquence simple brin (111) ; - une séquence (112) formant une tige-boucle ; - une séquence simple brin (113) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (101) appelée séquence anti-codon ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (103) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (105) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (110) ; - une séquence simple brin (114) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire, servant d'amorce (107) ; et (ii) un ARN matrice, comprenant, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3' : - une séquence d'appariement intramoléculaire (115) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (116) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (106) ; - une séquence (117) formant une tige boucle intramoléculaire ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (104) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (102) appelée séquence codon ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (118) ; - une séquence simple brin (119) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (108) ; - une séquence (120) formant la tige-boucle intramoléculaire (8) ; - une séquence simple brin (121) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (122) ; l'ARN amorce consistant en : (a) soit le produit de la transcription in vitro d'un acide nucléique codant ledit ARN amorce, en amont duquel est localisé un site promoteur de la transcription, tel que le promoteur T7. (b) soit le produit d'une synthèse chimique ou d'une hémi-synthèse chimique dudit ARN amorce ; étant spécifié que : - les séquences (101) et (102) appariées forment une hélice (6C) ; - les séquences (107) et (108) appariées forment une hélice (7F) ; - les séquences (109) et (110) appariées forment une hélice (A) ; - les séquences (107) et (108) appariées forment une hélice (7F) ; - la séquence (112) forme une tige-boucle (B) ; - les séquences (115) et (122) appariées forment une hélice (1) ; - les séquences (116) et (118) appariées forment une hélice (2) ; - la séquence (117) forme une tige-boucle (4) ; - la séquence (120) forme une tige-boucle (8) ; De plus, pour une première famille de complexes ARN amorce/ARN matrice de l'invention, (i) les séquences (103) et (104) appariées forment une hélice (5D) et (ii) les séquences (105) et (106) appariées forment une hélice (3 E). C'est le cas du complexe ARN amorce/ARN matrice illustré sur la figure 1 B. En outre, pour une seconde famille de complexes ARN amorce/ARN matrice obéissant à la définition du complexe d'initiation de la rétrotranscription ci-dessus, la structure diffère de celle décrite pour la première feuille ci-dessus, au niveau des hélices 3E et 5D et de la tige boucle 4. Par exemple, la figure 2 illustre cette différence, qui permet cependant d'aboutir à une structure similaire à la précédente et qui obéit aux règles du complexe d'initiation définies par les inventeurs. C'est le cas du complexe ARN amorce/ARN matrice illustré sur la figure 2B. Le complexe ARN amorce/ARN matrice ci-dessus est aussi caractérisé en ce qu'il mime l'étape d'initiation de la rétrotranscription de l'ARN génomique viral de VIH-1, selon une cinétique qui est caractéristique de l'initiation de la rétrotranscription de VIH-1. Les caractéristiques fonctionnelles d'un complexe ARN amorce/ARN matrice de l'invention, au regard de l'initiation de la rétrotranscription sont décrites dans l'exemple 2. Ces caractéristiques incluent une incorporation distributive des 6 premiers nucléotides à l'extrémité 3' de l'ARN amorce. Selon l'invention, on montre qu'avec un ARN amorce tel que défini cidessus, on observe de fortes pauses lors de la polymérisation des 11 premiers nucléotides, pauses qui diminuent au cours du temps. Ceci signifie que la rétrotranscriptase, lors de la polymérisation de ces 11 premiers nucléotides, est peu processive et a tendance à se détacher facilement après l'addition d'un nucléotide. Ceci est encore mieux explicité par le fait qu'en présence d'un piège (polyrA/oligo dT), toute la transcriptase inverse est piégée par le piège et la polymérisation ne peut avoir lieu. En revanche, en présence d'une amorce oligonucléotidique, qui permet de mimer l'élongation, les pauses sont moins importantes. Il faut souligner qu'en présence du piège, la polymérisation en élongation a lieu quand même et que l'on détecte une quantité non négligeable de produit final, ce qui signifie bien que la transcriptase inverse est très processive et peut polymériser, dans ce système, environ 200 nucléotides, sans se détacher de son substrat. Selon une autre caractéristique avantageuse, un complexe entre un ARN matrice et un ARN amorce selon l'invention doit également répondre aux critères cinétiques suivants : la synthèse d'ADN à partir de l'ARN amorce se fait en deux phases : une phase d'initiation, distributive, et une phase d'élongation, processive, les cinétiques pouvant avantageusement être mesurées comme décrit par Lanchy et al. (EMBO ; 1996). La distribution entre les deux cinétiques, respectivement distributive et processive, peut être montrée en présence d'un piège polyrA/oligodT, comme décrit à l'exemple 2. Selon un mode de réalisation préféré, le complexe ARN amorce/ARN matrice ci-dessus comprend respectivement : (i) un ARN amorce choisi parmi : (a) le produit de transcription in vitro d'un acide nucléique, ADN ou ARN, codant un ARN de transfert ; (b) Un ARN amorce produit par synthèse chimique ou hémi-synthèse chimique, dont la séquence nucléotidique est celle d'un ARN de transfert retrouvé naturellement dans les cellules humaines ; et (ii) un ARN matrice consistant en un ARN dérivé d'un ARN génomique du virus VIH-1, le cas échéant adapté au moins dans la séquence codon (102) et dans la séquence PBS (108) de liaison à l'amorce, de manière à ce que la séquence de liaison à l'amorce (108) soit strictement complémentaire de la séquence (107) de l'ARN amorce utilisé et que la séquence anti-codon (101) soit strictement complémentaire à la séquence codon (102). La complémentarité des bases de la séquence (108) avec les bases correspondantes de la séquence (107) permet de s'assurer de la formation d'un complexe ARN amorce/ARN matrice stable et fonctionnellement actif pour mimer l'initiation de la rétrotranscription d'un virus VIH-1, en présence d'une transcriptase inverse de VIH-1. D'autres caractéristiques avantageuses d'un ARN amorce selon l'invention sont les suivantes : - la séquence (109) a de préférence 8 nucléotides de longueur ; - la séquence (111) a de préférence 2 nucléotides de longueur ; - la séquence (112) a de préférence 16 nucléotides de longueur ; - la séquence (113) a de préférence 4 nucléotides de longueur ; - la séquence (101) a de préférence 11 nucléotides de longueur ; - la séquence (103) a de préférence 3 nucléotides de longueur ; - la séquence (105) a de préférence 4 nucléotides de longueur ; - la séquence (110) a de préférence 6 nucléotides de longueur ; - la séquence (114) a de préférence 4 nucléotides de longueur ; et - la séquence (107) a de préférence 18 nucléotides de longueur. D'autres caractéristiques avantageuses d'u n ARN matrice selon l'invention sont les suivantes : - la séquence (115) a de préférence 5 nucléotides de longueur ; - la séquence (116) a de préférence 12 nucléotides de longueur ; - la séquence (106) a de préférence 5 nucléotides de longueur ; - la séquence (117) a de préférence 10 nucléotides de longueur ; - la séquence (104) a de préférence 6 nucléotides de longueur ; - la séquence (102) a de préférence 13 nucléotides de longueur ; - la séquence (118) a de préférence 3 nucléotides de longueur ; - la séquence (119) a de préférence 3 nucléotides de longueur ; - la séquence (108) a de préférence 18 nucléotides de longueur ; - la séquence (120) a de préférence 13 nucléotides de longueur ; - la séquence (121) a de préférence 6 nucléotides de longueur ; et - la séquence (122) a de préférence 5 nucléotides de longueur. Les figures 1 et 2 illustrent différents modes de réalisation d'un complexe ARN amorce/ARN matrice selon l'invention qui mime le complexe d'initiation de la rétrotranscription de l'ARN génomique du virus VIH-1. Pour chacun des modes de réalisation ainsi illustrés, les séquences de l'ARN matrice, plus spécifiquement la séquence codon (102) et la séquence de liaison à l'amorce (108), ont été adaptées afin d'optimiser les appariements de base avec respectivement les séquences anti-codon (101) et amorce (107) de l'ARN amorce, pour former respectivement les hélices (6C) et (7F). La figure 1 représente le complexe ARN amorce/ARN matrice qui a été formé entre l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 3, qui est un produit de transcription in vitro, et l'ARN matrice de séquence SEQ ID N 4. La figure 2 représente le complexe ARN amorce/ARN matrice qui a été formé entre l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 1, qui est un produit de transcription in vitro, et l'ARN matrice de séquence SEQ ID N 2. Pour les complexes ARN amorce/ARN matrice définis ci-dessus, on a montré selon l'invention, par des expériences de cartographie après action de la nucléase S1, que, de manière surprenante, l'ARN amorce, qui est obtenu par transcription in vitro de l'ADN codant celui-ci, et qui est donc dépourvu de base ayant subi des modifications post-transcriptionnelles, forme un complexe stable avec l'ARN matrice correspondant. On a ainsi montré que le complexe ARN amorce/ARN matrice stable ainsi obtenu mime les caractéristiques structurales du complexe d'initiation de la rétrotranscription qui caractérisent le complexe obtenu entre le tARN3Lys naturel et la région de l'ARN génomique viral correspondant à l'amorce naturelle du tARN3Lys. En particulier, on a montré que les interactions ARN amorce/ARN matrice englobent l'appariement entre la séquence codon (102) et la séquence anti-codon (101), et non seulement l'interaction entre la séquence amorce (107) et la séquence de liaison à l'amorce (108). Un complexe ARN amorce/ARN matrice tel que défini ci-dessus constitue un objet de l'invention. Un premier complexe ARN amorce/ARN matrice préféré selon l'invention est le complexe formé entre : - l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 1, qui ne comprend aucune base ayant subi de modification post-transcriptionnelle ; et - un ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 2. Un second complexe ARN amorce/ARN matrice préféré selon l'invention est le complexe formé entre : - l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 3, qui ne comprend aucune base ayant subi de modification post-transcriptionnelle ; et - un ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 4. Un ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 2 ou la séquence SEQ ID N 4 peut avoir une taille allant jusqu'à 10000 nucléotides de longueur. Un tel ARN matrice peut par exemple être obtenu selon le procédé comprenant les étapes suivantes : a) amplification, par exemple par PCR, de la séquence d'ADN d'intérêt d'un clone contenant un insert d'ADNc dérivé de l'ARN génomique du virus VIH1, ledit insert d'ADNc contenant la séquence correspondant à l'extrémité 5' du génome viral. L'amplification est avantageusement réalisée à l'aide d'un couple d'amorces nucléotidiques de séquences appropriées, respectivement une première amorce hybridant avec une séquence de l'insert d'ADNc, qui est localisée en aval (du côté 3') de la séquence de liaison à l'amorce (PBS) et une seconde amorce hybridant avec une séquence prédéterminée de l'insert d'ADNc, qui est localisée en amont (du côté 5') de la séquence de liaison à l'amorce (PBS). De manière tout à fait préférée, les séquences respectives de la première et de la seconde amorce sont choisies de telle manière à produire un ADN amplifié dont la séquence comprend au moins les séquences (115) et (122) de l'ARN matrice, qui sont complémentaires l'une de l'autre et dont les bases complémentaires s'apparient deux à deux. A titre illustratif, l'insert d'ADNc utilisé peut être l'insert d'ADNc contenu dans le clone moléculaire infectieux pHXB2 (His-AC-AGC) décrit par Li et al. (1997). Selon un mode de réalisation préféré de l'étape a) du procédé, la première amorce nucléotidique utilisée comprend la séquence d'un promoteur qui sera localisée, dans l'ADN amplifié, en amont de l'extrémité 5' de l'ADN codant l'ARN amorce, ledit promoteur étant fonctionnel pour permettre la transcription in vitro de l'ADN codant l'ARN matrice. Le promoteur peut être notamment le promoteur T7, comme cela est décrit dans l'exemple 1. b) si nécessaire, l'adaptation de la séquence de l'ARN matrice obtenu à l'étape a) peut se faire par exemple par une technique de mutagenèse dirigée, par exemple à l'aide d'amorces portant la mutation désirée et utilisées dans une amplification par PCR. Ceci permet l'obtention d'un ARN matrice dont la séquence est adaptée de manière à assurer sa parfaite complémentarité en bases avec la séquence de l'ARN amorce utilisée, dans les régions nucléotidiques d'appariement définies précédemment entre les deux séquences dans le complexe ARN amorce/ARN matrice. c) transcription in vitro de l'ADN codant l'ARN matrice, par exemple comme décrit dans l'exemple 1. Un mode de réalisation particulier du procédé d'obtention d'un ARN amorce ci-dessus est illustré à l'exemple 1. Le complexe ARN matrice/ARN amorce est de préférence préparé à partir respectivement d'un ARN amorce et d'un ARN matrice , selon la technique décrite par Isel et al. (1993). Procédé de criblage in vitro de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription de VIH-1. La préparation des complexes ARN amorce/ARN matrice tels que définis ci-dessus a permis aux demandeurs de mettre au point un procédé de criblage in vitro de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1. La disponibilité, en très grandes quantités, des complexes ARN amorce/ARN matrice ci-dessus, préparés en utilisant un ARN amorce ne portant aucune modification post-transcriptionnelle naturelle de ses bases, a rendu possible la mise au point d'un procédé de criblage réalisé entièrement in vitro, qui peut en conséquence être mis en oeuvre rapidement, à très grande échelle, à moindre coût, et avec une grande simplicité, du fait qu'aucune culture de cellules n'est requise. L'invention a donc pour objet un procédé de criblage in vitro, de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Mettre en contact, dans un échantillon : (i) un complexe ARN amorce/ARN matrice tel que décrit ci-dessus ; avec (ii) une enzyme transcriptase inverse de VIH1 ; et (iii) un mélange dNTPs/ddNTP approprié ; (iv) en présence d'un composé candidat à tester ; b) Mesurer l'activité d'initiation de la rétrotranscription dans ledit échantillon; c) Comparer l'activité mesurée à l'étape b) avec l'activité d'initiation de la rétrotranscription mesurée dans un échantillon témoin, pour lequel l'étape a) est réalisée en l'absence dudit composé candidat. Le procédé de criblage ci-dessus peut en outre comprendre l'étape suivante : d) sélectionner le composé candidat pour lequel l'activité d'initiation de la rétrotranscription mesurée à l'étape b) est inférieure à celle mesurée dans l'échantillon témoin ; e) calculer l'activité inhibitrice du composé candidat sélectionné à l'étape d). Comme indiqué précédemment, l'une des caractéristiques essentielles du complexe ARN amorce/ARN matrice utilisé dans le procédé de criblage d'inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription du VIH-1 ci-dessus est que l'ARN amorce du complexe ne comprend aucune modification posttranscription nelle. Selon un premier aspect, l'ARN amorce du complexe ARN amorce/ARN matrice constitue le produit de la transcription in vitro d'un acide nucléique, préférentiellement un ADN codant celui-ci. Selon ce premier aspect, l'amorce, produite par transcription in vitro, peut être synthétisée à partir d'un fragment d'ADN codant celle-ci, en amont duquel se trouve un site promoteur pour la transcription, par exemple le promoteur T7. Selon un second aspect l'ARN amorce du complexe ARN amorce/ARN matrice peut être obtenu par transcription in vitro d'un insert d'ADN inséré dans un vecteur d'expression, par exemple un plasmide, ledit vecteur comprenant également au moins la séquence d'un promoteur de la transcription sous le contrôle duquel est placé l'insert d'ADN codant l'ARN de transfert. L'ARN amorce peut également être obtenu par synthèse chimique, selon toute technique connue de l'homme du métier. Par exemple, la synthèse chimique d'un ARN amorce inclus dans un complexe ARN amorce/ARN matrice selon l'invention peut être réalisée par les techniques décrites par Micura et al. (2002). Selon un autre aspect, l'ARN amorce peut être une molécule hémisynthétique obtenue par couplage ordonné de plusieurs fragments d'ARN constituant des parties distinctes de l'ARN amorce, chaque fragment d'ARN étant soit un produit de transcription in vitro d'un ADN codant ledit fragment , soit le produit final d'une synthèse chimique. Le couplage ordonné des différents fragments d'ARN successifs afin de synthétiser l'ARN amorce peut être réalisé par toute technique connue de l'homme du métier. Notamment, pour effectuer un tel couplage entre les fragments d'ARN, l'homme du métier se référera avantageusement aux techniques décrites par Zimmerman et al., et les références incluses dans ce document (Incorporation of Modified Nucleotides into RNA for studies on RN A Structure, Function and termolecular Interactions (1998) Zimmermann, R. Gait, MJ and Moore MJ, Modification and Editing of RNAs ASM Press, Washington DC, 59-84). Avantageusement, l'ARN matrice inclus dans le complexe ARN amorce/ARN matrice est produit par transcription in vitro d'un ADN codant celui-ci, comme défini précédemment dans la présente description. De préférence, l'ADN codant l'ARN matrice viral est inséré dans un vecteur d'expression qui inclut également au moins une séquence promoteur de la transcription sous le contrôle de laquelle cet ADN est placé, comme cela est décrit à l'exemple 1. Avantageusement, l'ADN codant l'ARN matrice peut être obtenu par clonage d'un fragment d'ADN obtenu par amplification, par exemple par PCR, de l'ADN d'un clone viral infectieux , tel que le clonage PHXB2 décrit par LI et al. (1997). Avantageusement, la séquence codon (102) et la séquence de liaison à l'amorce PBS (108) de l'ARN matrice sont adaptées de manière à être complémentaires respectivement de la séquence anti-codon (101) et de la séquence amorce (107) de l'ARN de transfert du complexe ARN amorce/ARN matrice afin d'assurer la formation respectivement des hélices intermoléculaires (6C) et (7F) du complexe ARN/ARN de l'invention. L'adaptation de la séquence de l'ARN matrice viral à l'ARN amorce utilisé pour former le complexe ARN amorce/ARN matrice peut être réalisée par mutagénèse dirigée, comme décrit par exemple par WAKEFIELD et al. (1994). Avantageusement, le complexe entre l'ARN amorce et l'ARN matrice est préparé selon le protocole décrit par ISEL et al. (1993). De manière préférée, les conditions d'hybridation utilisées pour former le complexe ARN amorce/ARN matrice sont les suivantes : L'ARN amorce, par exemple un ARN amorce portant un ligand permettant par la suite la rétention de l'amorce sur la surface d'une microplaque, est incubé pendant 2 min à 90 C, 2 min dans la glace, puis 20 min à 70 C, dans 100 mM NaCI, en présence d'un excès d'ARN matrice, assurant une hybridation totale de l'amorce. Selon un autre aspect, la formation du complexe ARN amorce/ARN matrice peut être réalisée à 37 C en présence de la protéine de nucléocapside NCp7 selon la technique décrite par BRULE et al. (2002). Le complexe ARN matrice/ARN amorce de l'invention est mis en présence de l'enzyme transcriptase inverse, préférentiellement la transcriptase inverse du VIH-1, et d'une concentration finale connue du composé candidat inhibiteur à tester. Selon le procédé, l'étape a) est réalisée en présence d'un mélange approprié de désoxyribonucléotides triphosphate (dNTPs) et d'un didésoxyribonucléotide triphosphate (ddNTP), ce qui permet la synthèse d'un polynucléotide qui correspond exclusivement à l'étape d'initiation de la rétrotranscription. Le mélange approprié dNTPs/ddNTP permet l'allongement de la séquence amorce (107) de l'ARN amorce aboutissant à la synthèse d'une séquence correspondant au produit +6 correspondant à l'initiation. Par exemple, l'étape a) est réalisée en présence de trois seulement des quatre désoxyribonucléotides triphosphates naturels parmi A, T, G et C, le quatrième nucléotide étant alors un didéoxyribonucléotide triphosphate qui est complémentaire du nucléotide localisé en position -6 par rapport à l'extrémité 3' de la séquence de liaison à l'amorce (108) sur l'ARN matrice. Par exemple, dans le cas du complexe ARNtHis His[AC-ACG] représenté sur la figure 1, l'étape a) du procédé est préférentiellement réalisée en présence des trois déoxyribonucléotides T, G et C auxquels est ajouté le didéoxyribonucléotide A, qui est complémentaire du ribonucléotide U qui est localisé sur la séquence (118) en position - 6 par rapport à l'extrémité 3' de la séquence de liaison à l'amorce PBS (108) de l'ARN. Le même didéoxyribonucléotide A sera ajouté aux trois désoxyribonucléotides T, G et C lorsque l'étape a) est réalisée avec le complexe ARNtMet/ARNv adapté représenté sur la figure 2, puisque le nucléotide localisé en position-6 par rapport à l'extrémité 3' de la séquence de liaison à l'amorce PBS (108) est également la base Uridine. Dans le mode de réalisation ci-dessus, il est réalisé à l'étape a) un allongement de l'ARN amorce du complexe ARN amorce/ARN matrice correspondant spécifiquement à l'étape d'initiation de la rétrotranscription de l'ARN viral du virus VIH-1. Ainsi, le procédé de criblage d'inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription du VIH-1 ci-dessus est caractérisé en ce que l'étape a) est réalisée en présence d'un mélange approprié de dNTPs et d'un ddNTP. Avantageusement, l'un au moins des désoxyribonucléotides naturels ou encore le didésoxyribonucléotide utilisé est marqué par une molécule détectable. De préférence, la molécule détectable est une molécule radioactive choisie parmi le 3[H], le 14[C], le 32[p] et le 33[P]. Préférentiellement, le procédé de criblage ci-dessus est caractérisé en ce que le complexe ARN amorce/ARN matrice est immobilisé sur un support. Afin de permettre l'immobilisation du complexe ARN amorce/ARN matrice sur un support, par exemple la surface d'un puits d'une microplaque de test, l'un au moins des ARNs du complexe ARN/ARN comprend une molécule ligand capable de se lier spécifiquement à une molécule récepteur présente à la surface du support. Dans tous les cas, l'extrémité 3' de l'ARN amorce du complexe ARN amorce/ARN matrice doit rester libre pour exercer sa fonction d'amorce lors de l'initiation de la rétrotranscription. La molécule ligand capable de se lier spécifiquement à une molécule récepteur sur le support de test, par exemple la surface du puits d'une microplaque, peut être localisée sur l'extrémité 5' de l'ARN amorce ou encore sur l'une des extrémités 5' ou 3' de l'ARN matrice du complexe ARN amorce/ARN matrice. Selon un autre aspect avantageux, l'ARN amorce et/ou l'ARN matrice comprend la molécule ligand liée chimiquement à l'une quelconque de ses bases, autre qu'une base de l'extrémité 5' ou 3'. Selon un mode préféré de réalisation du complexe ARN amorce/ARN matrice de l'invention, la molécule ligand est une biotine. Pour l'introduction d'une base biotinylée dans la séquence de l'ARN amorce du complexe ARN amorce/ARN matrice de l'invention, on pourra procéder à la transcription de l'ADN codant l'ARN de transfert amorce avec une concentration réduite en ribonucléotide UTP et en présence du ribonucléotide modifié biotine-16-UTP. Toute autre modification de l'ARN amorce, ou de l'ARN matrice constitutive du complexe ARN amorce/ ARN matrice de l'invention peut être réalisée selon des techniques connues en soi. L'homme du métier pourra notamment avantageusement se référer à l'ouvrage de HERMANSON publié en 1996. De manière tout à fait préférée, c'est l'ARN amorce qui comprend une molécule ligand. Les couples de molécules ligand/récepteur sont préférentiellement choisis parmi : - Biotine/streptavidine - Biotine/avidine - Biotine/aptamère ARN qui reconnaît la biotine - Fucose/avidine - ARN-His-tag/NiNTA - Aptamère en 5' de l'amorce qui recon aît la streptavidine sur un support - CoA, ou NAD ou FAD en 5' de l'ARN/récepteur de ces molécules (Efficient incorporation of CoA, NAD and FAD into RNA by in vitro transcription, Huang, F., 2003). Avantageusement, la molécule ligand est une biotine, qui est capable de se lier spécifiquement à la streptavidine. Dans ce cas, l'immobilisation du complexe ARN/ARN-biotine peut être réalisée sur un support dont la surface a été préalablement recouverte de molécules de streptavidine. Selon ce mode de réalisation particulier, le procédé de criblage d'inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription du VIH-1 selon l'invention est caractérisé en ce que l'étape a) est réalisée dans une enceinte réactionnelle, par exemple le puits d'une microplaque de test, dont la surface constitue un support d'immobilisation du complexe ARNamorce/ARNmatrice. Préférentiellement, la surface de l'enceinte réactionnelle, par exemple le puits d'une microplaque, est recouverte d'une molécule récepteur susceptible de se lier spécifiquement à une molécule ligand portée par le complexe ARN/ARN. Une illustration en est donnée dans les exemples par la fixation du complexe ARN/ARN biotinylé sur la surface des puits d'une microplaque préalablement recouvert de streptavidine. Préférentiellement, pour la mise en #uvre du procédé de criblage cidessus, l'activité d'initiation de la rétrotranscription est quantifiée par mesure de la radioactivité présente dans le polynucléotide qui est synthétisé par allongement de l'ARN amorce hybridé à l'ARN matrice au sein du complexe ARN/ARN, en présence de l'enzyme transcriptase inverse et du mélange dNTPs/ddNTP. Selon un aspect avantageux du procédé de criblage ci-dessus, la mesure de la radioactivité, qui correspond à la détection des produits d'extension de l'ARN de transfert amorce, est réalisée grâce à l'utilisation du principe de scintillation de proximité décrit notamment dans le brevet américain N US 4,568,649. Selon ce principe, seules les molécules radioactives situées à proximité de la surface du support de test, qui comprend également un produit de détection de la radioactivité par scintillation, engendre la production d'un signal en scintillation. Les molécules radioactives induisant le signal de scintillation sont les désoxyribonucléotides ou les didésoxyribonucléotides radioactifs incorporés à l'ARN amorce par allongement de la séquence amorce (107) qui sont situés à proximité de la surface du support de test, par exemple la surface du puits de la microplaque. En revanche, les désoxyribonucléotides ou les didésoxyribonucléotides radioactifs qui n'ont pas été incorporés à l'ARN de transfert par allongement de la séquence amorce (107) n'engendrent aucun signal détectable. Ce principe de scintillation de proximité sur des microplaques de tests adaptés a été notamment utilisé par EARNSHAW et POPE (2001), auquel l'homme du métier peut avantageusement faire référence pour la mise en #uvre du procédé de criblage d'inhibiteurs selon l'invention. Selon un premier aspect préféré de mise en #uvre du procédé de criblage d'inhibiteurs de la rétrotranscription du virus VIH-1 selon l'invention, le complexe ARN amorce/ARN matrice comprend respectivement l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 1, et l'ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 2. Selon un second aspect préféré de mise en #uvre du procédé de criblage d'inhibiteurs de la rétrotranscription du virus VIH-1, le complexe ARN amorce/ARN matrice comprend respectivement l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 3 et l'ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 4. Les résultats présentés dans les exemples montrent qu'un inhibiteur nucléosidique de la rétrotranscription, comme l'AZTTP est capable d'inhiber l'initiation de la rétrotranscription du virus VIH-1, avec une efficacité accrue pour des concentrations croissantes de ce composé inhibiteur. A partir de la valeur de sélectivité théorique d'incorporation de l'AZTTP par rapport au dNTTP, les résultats des exemples montrent que les valeurs d'inhibition de l'étape d'initiation de la rétrotranscription obtenues sont conformes aux valeurs théoriques attendues et que le procédé de criblage tel que défini ci-dessus permet bien de détecter la synthèse d'un produit d'allongement de l'ARN amorce correspondant à l'initiation de la rétrotranscription du VIH-1 et permet également de mesurer l'inhibition de l'initiation de la rétrotranscription du VIH-1. De préférence, le procédé de criblage d'inhibiteurs de la rétrotranscription du VIH-1 tel que défini ci-dessus est mis en #uvre avec des concentrations croissantes d'un composé candidat à tester. De préférence, la comparaison du niveau d'activité d'initiation de la rétrotranscription mesurée à l'étape b) avec le niveau d'activité d'initiation de la rétrotranscription mesurée en l'absence du composé candidat inhibiteur est réalisée par l'introduction, dans le même test, d'un échantillon témoin comprenant le complexe ARN amorce/ARN matrice, l'enzyme transcriptase inverse et un mélange de dNTPs et d'un ddNTP qui est identique à celui utilisé pour les autres échantillons du test. Selon une alternative, la comparaison réalisée à l'étape c) du procédé est effectuée par rapport à une valeur connue du niveau d'activité de l'initiation de la rétrotranscription dans un échantillon témoin en l'absence du composé candidat à tester. Avantageusement, le procédé de criblage selon l'invention comprend également des échantillons témoins positifs dans lesquels des concentrations finales connues d'un inhibiteur connu, tel que l'AZTTP, ont été ajoutées à la combinaison du complexe ARN amorce/ARN matrice de l'invention et de la transcriptase inverse. En outre, afin de vérifier qu'un composé candidat qui a été sélectionné comme composé inhibiteur selon le procédé de criblage ci-dessus a une activité inhibitrice exclusive et sélective de la seule étape d'initiation de la rétrotranscription du virus VIH-1, ledit procédé peut comprendre en outre les étapes suivantes : f) mettre en contact, dans un échantillon : (i) une amorce nucléotidique permettant de mimer l'étape d'élongation, qui est complémentaire à une séquence de l'ARN viral, de préférence complémentaire à la séquence PBS de l'ARN viral. (ii) une transcriptase inverse du VIH-1 ; (iii) le mélange dNTPs/ddNTP utilisé à l'étape a) en présence du composé candidat testé à l'étape a) ; g) mesurer l'activité d'élongation de l'amorce nucléotidique ; h) comparer l'activité mesurée à l'étape g) avec l'activité d'élongation mesurée dans un échantillon témoin, pour lequel l'étape f) est réalisée en l'absence du composé candidat ; i) déterminer l'activité inhibitrice du composé candidat à partir de la comparaison d'activité réalisée à l'étape h) ; j) comparer l'activité inhibitrice du même composé candidat déterminée à l'étape e) avec l'activité inhibitrice du même composé déterminée à l'étape i). Si, à l'étape i), la comparaison montre que les activités inhibitrices du composé candidat, respectivement à l'étape e) et à l'étape i) sont du même ordre de grandeur, ledit composé candidat peut être classé comme un composé inhibiteur de l'étape d'initiation de la rétrotranscription du virus VIH- 1, mais non spécifique de cette étape d'initiation. Si, à l'étape i), la comparaison montre que l'activité inhibitrice du composé candidat à l'étape e) est supérieure à l'activité inhibitrice mesurée à l'étape i) ou alternativement que le composé candidat ne possède pas d'activité inhibitrice à l'étape i), ledit composé candidat peut être classé comme un composé inhibiteur spécifique de l'étape d'initiation de la rétrotranscription du virus VIH-1. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un complexe ARN amorce/ARN matrice tel que défini ci-dessus dans un procédé de criblage de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1. L'invention a également pour objet une trousse ou kit pour le criblage de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1, caractérisé en ce qu'il comprend un complexe ARN amorce/ARN matrice tel que défini ci-dessus. Selon un premier aspect, la trousse ou kit de criblage ci-dessus est caractérisé en ce qu'il comprend une enzyme transcriptase inverse, préférentiellement une enzyme transcriptase inverse du VIH-1. Selon un second aspect, la trousse ou kit de criblage ci-dessus est caractérisé en ce qu'il comprend un mélange approprié de dNTPs et d'un ddNTP permettant la synthèse d'un polynucléotide produit par allongement de l'ARN amorce pendant l'étape d'initiation de la rétrotranscription. De manière tout à fait préférée, l'un au moins des désoxyribonucléotides contenus dans la trousse ou kit de criblage de l'invention est marqué par une molécule détectable, de préférence une molécule radioactive choisie parmi le 3[H], le 14[C], le 32[P] et le 33[P]. La présente invention est en outre illustrée, sans pour autant être limitée, par les exemples suivants. EXEMPLES : Exemple 1 : Formation d'un complexe ARN amorce/ARN matrice mimant, in vitro, et structure du complexe d'initiation de la rétrotranscription du VIH-1. Un complexe ARN amorce/ARN matrice mimant le complexe d'initiation de la rétrotranscription du VIH-1 peut être formé in vitro à partir d'un transcrit de tARNHis hybridé à son ARNv adapté (ARNv [His-ACGAC]). A. Matériel et Méthodes A. 1 Obtention de l'ARN amorce Le plasmide comportant la séquence codant pour le tARNHis, pltRNAHis, a été obtenu par insertion, dans les sites EcoRI et Xmal de Puc18, d'un fragment d'ADN correspondant à la séquence du tARNHis et possédant, en amont, le site promoteur pour l'ARN polymérase du phage T7. Ce fragment a été créé par hybridation et ligation d'oligodéoxyribonucléotides adéquats. Le transcrit de tARNHis a été obtenu par transcription in vitro du vecteur pltARNHis préalablement digéré par l'enzyme de restriction Nsil. Le tARN amorce produit par transcription in vitro peut porter une modification permettant, au cours de l'essai de rétrotranscription, la rétention du complexe matrice/amorce allongé sur un support portant un ligand de cette modification. La modification peut être une biotine ou tout autre ligand ou réactif permettant un ancrage covalent ou non covalent pour l'attachement du complexe à un support solide. Une panoplie de méthodes peuvent être envisagées pour la modification de l'ARN (voir par exemple (Hermanson, 1996)). Notre exemple utilise une amorce tARNHis biotinilée, la biotinilation se faisant en cours de transcription en présence de 40 mM Tris HCI, pH8 (37 C),15 mM MgCI2 ,50 mM NaCI, 1. 6 mM spermidine, 50 U RNAsine, 5 mM DTE, 4 mM ATP, 4mM CTP, 4 mM GTP, 2,5 mM UTP, 0. 4 mM biotine- 16-UTP, 22. 5 U de T7 RNA Polymérase. Pour la synthèse d'un ARN non biotinilé, la biotine-16-UTP est omise et la concentration en UTP est ramenée à 4 mM. Après transcription, l'ADN plasmidique est digéré en présence de DNAse # et les transcrits sont purifiés sur colonnes HPLC. A. 2 Obtention de l'ARN matrice L'ARNv adapté ARNv [His-AC-GAC] utilisé dans nos essais correspond aux 295 premiers nucléotides de l'extrémité 5' de l'isolat HxB2 du VIH-1 et comporte des mutations permettant de former la structure caractéristique de l'initiation de la rétrotranscription (Fig. 1) : le site PBS est muté pour être complémentaire aux 18 nucléotides de l'extrémité 3' du tARNHis ; les nucléotides de la région riche en A en amont du site PBS sont mutés de façon à être complémentaires à la boucle de l'anticodon du tARNHis ; d'autres nucléotides autour du PBS sont mutés, augmentant ainsi la complémentarité avec le tARNHis (Zhang et al., 1998). Le plasmide plHisAC-AGC comportant les séquences codant pour l'ARNv adapté [His-ACAGC] a été construit par insertion, dans les sites EcoRI et Xmal du vecteur Puc18, d'un fragment d'ADN obtenu par PCR à partir du clone moléculaire infectieux pHXB2 (His-AC-AGC) et al., 1997), fourni par le Dr C. Morrow (Birmimgham, USA), et comportant, en amont du site de démarrage de la transcription, le promoteur T7. Les amorces de PCR ont été conçues de manière à amplifier la région correspondant aux 732 nucléotides de l'extrémité 5' de l'ARNv [His-AC-AGC]. Les 295 premiers nucléotides de l'ARNv [His-AC-AGC] ont été obtenus par transcription in vitro du vecteur plHis-AC-AGC, préalablement digéré par Rsal, selon le protocole précédemment décrit et (Marquet et al., 1991). L'ARN a été purifié comme décrit précédemment. A. 3 Obtention de la RT du VIH-1 Les plasmides utilisés pour la production de la RT du VIH-1 ainsi que le protocole de purification nous ont été fournis par le Dr T. Unge. A. 4 Cartographie de l'amorce ARN à la nucléase S1 En vue d'expériences de cartographie enzymatique en solution de l'amorce, libre ou hybridée à la matrice, le tARNHis est marqué à son extrémité 5'. Le tARNHis (15 g) est incubé pendant 30 minutes à 37 C dans le tampon CIP (Calf Intestinal Phosphatase), en présence de 15 U de CIP. Après extraction phénolique et précipitation, le tARN est purifié sur gel de polyacrylamide dénaturant. Le tARN est ensuite marqué à son extrémité 5' par transfert du phosphate - radioactif du [32]ATP. Le tARN (3 g) est incubé 1 heure à 37 C dans 15 l de tampon kinase en présence de 100 Ci de [-32]ATP et de 15 U de polynucléotide kinase du phage T4, avant d'être purifié sur gel de polyacrylamide dénaturant. Le complexe matrice/amorce est préparé comme décrit ci-dessous et selon des protocoles publiés précédemment (Isel et al, 1993). Alternativement, la formation du complexe peut se faire à 37 C, en présence de la protéine de nucléocapside, NCp7 (Brulé et al., 2002). La cartographie du tARNHis en absence ou en présence d'ARNv [HisAC-AGC] à l'aide de la nucléase S1 se fait selon le protocole suivant : 100 000 cpm de taRNHis marqué à son extrémité 5' au [ 32P] sont incubés en absence ou en présence de 12 pmoles d'ARNv [His-AC-AGC] pendant 2 min à 90 C, puis 2 min dans la glace. Les ARN sont ensuite incubés pendant 20 min à 70 C dans 50 mM Cacodylate de sodium (pH 7. 5), 300 mM KCI, puis le complexe est ramené à température ambiante pendant 5 minutes, dans 50 mM Cacodylate de sodium (pH 7. 5), 300 mM KCI, 5 mM MgCl2, 1 mM ZnCl2. Le tARN"'S, libre et additionné d'1 zig de tARNtotal, ou hybridé à l'ARN [His-AC-AGC], est ensuite incubé en absence ou en présence de 200U de nucléase S1, pendant 7. 5 ou 15 minutes à 37 C. La réaction est arrêtée par digestion de la nucléase S1 par 20 g de protéinase K, pendant 30 minutes à 37 C. Après extraction phénolique, les ARN sont précipités à l'éthanol, centrifugés et séparés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide dénaturant 15%. B. Résultats Ces expériences montrent que, de manière inattendue, le transcrit tARNHis, dépourvu de bases modifiées, permet la formation d'un complexe stable qui mime les spécificités structurales du complexe d'initiation de la rétrotranscription obtenues avec le tARN3Lys naturel et son ARNv complémentaire. En particulier, la boucle de l'anticodon du transcrit tARNHis, réactive à la nucléase S1 en absence de matrice, est protégée en présence de l'ARNv [His-AC-GAC], suggérant une interaction avec la boucle CCACAA de cet ARN (Fig. 1 et 3). La protection de la zone anticodon de l'amorce à la nucléase S1 constitue l'une des signatures du complexe d'initiation et représente un des contrôles essentiels indiquant que les interactions matrice/amorce ne se limitent pas à la région PBS. Le complexe matrice/amorce, constitué in vitro, et où la région anticodon de l'amorce interagit avec une région de l'ARN matrice en amont du site PBS, doit être testé pour sa capacité à répondre aux critères de la réaction d'initiation/élongation de la rétrotranscription tels que les auteurs les ont définis (Isel et al., 1996, Lanchy et al., 1996, Lanchy et al., 1998). Exemple 2 : Un complexe matrice ARNv [His-AC-GAC]/amorce tARNHis possède les caractéristiques fonctionnelles d'un complexe d'initiation de la rétrotranscription Des essais de rétrotranscription in vitro, selon des protocoles précédemment décrits (Isel et al., 1996), ont montré que le complexe ARNv [His-AC-GAC]/tARN"'Stranscnt possède également les caractéristiques cinétiques du complexe d'initiation du VIH-1, à savoir une étape d'initiation spécifique, suivie d'une étape d'élongation non spécifique. A. Matériel et Méthodes En vue de tests de rétrotranscription in vitro, les amorces tARNHis et ODNH,s doivent être marquées radioactivement. Le tARNHis est marqué selon le protocole décrit précédemment. L'O/dNHis est marqué par transfert du phosphate - radioactif du [-32]ATP selon le protocole suivant : 0. 1 nmole d'ODNHis sont incubée pendant 1 heure à 37 C dans le tampon kinase, en présence de 100 Ci de~[ -32]ATP et de 15 U de polynucléotide kinase du phage T4 avant d'être purifiée sur gel de polyacrylamide dénaturant. Deux nM de complexe matrice d'ARNv [His-AC-GAC]/amorce tARNHis (marqué au [-32]P, hybridé à un excès de 2. 5x d'ARNv [His-AC-GAC] selon le protocole décrit ci-dessus, dans 100 mM NaCI) ou 10 nM de complexe ARNv [His-AC-GAC]/ODNH,s (marqué au [ ~32]p , hybridé à un excès de 2.5x d'ARNv [His-AC-GAC] selon le protocole décrit ci-dessus, dans 100 mM NaCI) sont pré-incubés pendant 4 minutes en présence de 20 nM ou 30 nm final de RT du VIH-1 respectivement, dans 50 mM Tris-HCI pH7. 5, 50 mM KCI, 6 mM MgCl2 et 1 mM DTE. La réaction de rétrotranscription est initiée par l'ajout de 50 M de chaque dNTP et arrêtée à différents temps, de 15 secondes à 30 minutes, en présence de Tris-Borate 90 mM pH 8. 3, EDTA 25 mM. Les produits de la réaction sont séparés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide dénaturant 8%. B. Résultats En présence du tARNHis amorce, la synthèse du brin (-) d'ADN strongstop se fait en deux étapes (Fig.5) : l'addition des 7 premiers nucléotides à l'amorce tARNHis se fait de manière peu processive, comme en témoignent les produits intermédiaires qui s'accumulent entre les positions +1 et + 7 (Fig. 5), mais disparaissent au cours du temps. Cette étape correspond à la phase d'initiation définie précédemment pour le système naturel (Isel et al, 1996, Lanchy et al, 1996, Lanchy et al, 1998). Elle est suivie d'une phase d'élongation, plus processive, où les pauses sont diminuées. Comme dans le cas du système naturel, la phase d'élongation peut être mimée par une amorce oligodésoxyribonucléotidique complémentaire du PBS (ODNms), qui permet une rétrotranscription processive, comme en témoigne l'absence de pauses (Fig. 5). La faible processivité de la RT en initiation, en présence de l'amorce tARNHis, est confirmée par l'absence de synthèse d'ADN en présence d'un piège poly(rA)/(dT)18 (Fig. 5). Ce résultat est similaire à celui qui avait été obtenu dans le cas de l'amorce naturelle tARN3Lys. En revanche, lorsque l'amorce ODNHis est utilisée, la synthèse de l'ADN strong-stop (-) reste détectable en présence de poly(rA)/(dT)18, indiquant que, de manière comparable à la situation naturelle, la RT est hautement processive en élongation. L'étude fonctionnelle du complexe d'initiation, par comparaison des profils de synthèse de l'ADN strong-stop (-) obtenus en présence d'une amorce tARN ou d'une amorce oligodésoxyribonucléotidique constitue le contrôle fonctionnel qui permet de valider un complexe matrice/amorce comme mime du complexe naturel de rétrotranscription. Exemple 3 : L'initiation comme cible dans un test de criblage à haut flux Les complexes matrice/amorce décrits précédemment et mimant le complexe spécifique d'initiation de la rétrotranscription peuvent être utilisés dans un test de criblage à haut flux d'inhibiteurs de la rétrotranscription, ciblant spécifiquement cette étape d'initiation. A. Matériel et Méthodes Dans le cadre du test de criblage, le complexe matrice ARNv [His-ACGAC]/amorce tARNHis biotinilé est pré-formé selon le protocole décrit cidessus et (Isel et al., 1993). Alternativement, la formation du complexe peut se faire à 37 C, en présence de la protéine de nucléocapside, NCp7 (Brule et al., 2002). Le complexe, dans un tampon de rétrotranscription approprié (Tris-HCI 50 mM pH7.5 ; KCI 50 mM ; MgCl2 6 mM ; DTE 1 mM et (Isel et al., 1996)), est ensuite transféré dans les puits d'une microplaque (par exemple Flashplate , NEN). Afin de détecter la synthèse d'ADN strong-stop (-), 10 nM de complexe matrice/amorce sont allongés par la RT du VIH-1, sauvage ou mutée dans son site RNase H, en présence de 5 M de chaque dNTP (dGTP, dCTP, dATP et dTTP/dTTP[3H] (Activité spécifique : 121Ci/mmole ; Amersham)), en absence ou en présence d'inhibiteurs de la rétrotranscription (AZTTP ou d4TTP dans les exemples de la Fig. 6), pendant 5,15 et 30 minutes à 37 C. Les réactions sont arrêtées en présence d'EDTA 25 mM et la détection des produits d'extension se fait grâce à l'utilisation du principe de scintillation de proximité ou SPA, couvert par un brevet déposé par Amersham (US Patent N 4568649). Dans ce système, un radioélément non lié, c'est à dire non incorporé à l'amorce, n'est pas détecté, et seul le radioélément lié à la cible produira un signal en scintillation . Le signal est proportionnel à la quantité de produits d'extension. Le principe de scintillation de proximité sur flashplate a été largement utilisé dans ce type d'application (Earnshaw & Pope, 2001). La radioactivité liée à la surface de chaque puits d'une microplaque est comptée dans un compteur MicroBeta (Wallac-Perkin-Elmer) Ces expériences montrent qu'il est possible de détecter, dans ce formalisme, la synthèse de l'ADN strong-stop (-) ainsi que son inhibition par l'AZTTP et le d4TTP (Fig. 6). L'inhibition de la synthèse d'ADN strong-stop (-) est comparable à celle obtenue en solution, dans des systèmes expérimentaux différents. En présence de 5 M d'AZTTP, le taux d'inhibition est proche de 90% après 30 minutes de réaction. Enfin, conformément à des résultats déjà publiés (Arts et al., 1996a ; Isel et al., 2001), le taux d'inhibition en présence de la même concentration de d4TTP est inférieur (80%). Afin de détecter la synthèse d'un produit correspondant à l'initiation de la rétrotranscription, c'est à dire à l'addition des 6 premiers nucléotides à l'amorce tARNHis biotinilée, 30 nM de complexe matrice/amorce sont allongés en présence de 90 nM de RT du VIH-1, sauvage ou mutée dans son site RNase H, en présence de dGTP, dCTP, dTTP/dTTP[3H] (Activité spécifique : 121 Ci/mmole ; Amersham) (5 M final chacun) et de ddATP (20 M), complémentaire au 6ième nucléotide en amont du site PBS, en absence ou en présence de 0. 1 ou 2.5 M d'AZTTP (Fig. 7) (ou de molécules issues de banques dans l'application future de ce test), pendant 20 minutes à 37 C. Les réactions sont arrêtées en présence d'EDTA 25 mM et la détection des produits d'extension se fait comme décrit ci-dessus. B. Résultats Ces expériences montrent que la synthèse d'un produit correspondant à l'initiation de la rétrotranscription est détectable, mais de manière plus cruciale encore, que la diminution du signal en présence d'AZTTP est significative. A une concentration de 0.1 uM en AZTTP, en présence d'un excès de 50 fois en dTTP, le signal expérimental représente 92. 3 % (moyenne sur 3 expériences) (Tableau I) du signal obtenu en absence d'inhibiteur. En présence de 2.5 M d'AZTTP et d'un excès de 2 fois en dTTP, le signal représente 61% (moyenne sur 7 expériences) (Tableau 1) du signal obtenu en absence d'inhibiteur. A partir de la sélectivité théorique d'incorporation de l'AZTTP par rapport au dTTP, il est possible de calculer le signal théorique attendu à un rapport donné d'AZTTP et de dTTP et de le comparer au signal expérimental. Pour un rapport AZTTP/dTTP=1/2, les signaux théoriques attendus pour des sélectivités de 0. 6 et 0. 7 (sélectivité mesurée en initiation et en élongation (Rigourd et al., 2000)) sont de 60,7% et 56,7% respectivement. Une moyenne sur 7 expériences réalisées dans ces conditions (AZTTP/dTTP=1/2) conduit à un signal expérimental de 616%, en bon accord avec le signal théorique. L'accord entre les signaux théoriques (Tableau 1) et les signaux expérimentaux (Fig. 7), même à faible concentration en AZT, est satisfaisant, et valide ainsi l'utilisation de ce système pour cribler l'initiation. Tableau I : Comparaison entre les signaux théoriques attendus et les signaux expérimentaux lors de la synthèse d'un produit correspondant à l'initiation de la rétrotranscription. Le signal théorique attendu est calculé en fonction du rapport des concentrations en AZTTP et dTTP présents dans le milieu réactionnel et de la sélectivité d'incorporation de l'AZTTP vis à vis du dTTP (mesurée en initiation et en élongation (Rigourd et al., 2000)). Signal théorique Signal (%) expérimental (%) [dTTP]/AZTTP] = Sélectivité 60. 7 61 6 2 (AZTTP/dTTP)=0,6 Sélectivité 56. 7 (AZTTP/dTTP)=0.7 [dTTP]/AZTTP] = Sélectivité 97. 7 92. 3 3. 4 50 (AZTTP/dTTP)=0,6 Sélectivité 97.3 (AZTTP/dTTP=0.7 REFERENCES: BRULE F et al., 2002, RNA, vol.8 (1) :8-15. EARNSHAW D et POPE A, 2001, J. Biomo Screen , vol.6:39-46. HERMANSON G, 1996, Bioconjuguate Techniques, Academic Press Inc. SAN DIEGO, ETATS-UNIS. HUANG F., 2003, Nucleic Acids Res., vol. 31, DOI: 10.1093/nar/gng008. HUANG, Y., A SHALOM, Z. LI, J. WANG, J. Mak, M. A. WAINBERG, and L. KLEIMAN 1996. Effects of modifying the tRNA3Lys anticodon on the initiation of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcription J. 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ZIMMERMAN et al., Incorporation of Modified Nucleotides into RNA for studies on RNA Structure, Function and in termolecular Interactions (1998). ZIMMERMANN, R. GAIT, MJ AND MOORE MJ, Modification and Editing of RNAs ASM Press, Washington DC, 59-84. WAKEFIELD J K et al., 1994, J. Virol., vol.68:1605-1614. Revendications 1. Procédé de criblage in vitro, de composés inhibiteurs de l'initiation de la rétrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Mettre en contact, dans un échantillon : (i) un complexe ARN amorce/ARN matrice formé entre : (1) un ARN amorce comprenant, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3' : - une séquence d'appariement intramoléculaire (109) ; - une séquence simple brin (111) ; - une séquence (112) formant une tige-boucle ; - une séquence simple brin (113) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (101) appelée séquence anti-codon ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (103) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (105) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (110) ; - une séquence simple brin (114) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire, servant d'amorce (107) ; et (2) un ARN matrice, comprenant, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3' : - une séquence d'appariement intramoléculaire (115) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (116) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (106) ; - une séquence (117) formant une tige boucle intramoléculaire ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (104) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (102) appelée séquence codon ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (118) ; - une séquence simple brin (119) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (108) ; - une séquence (120) formant la tige-boucle intramoléculaire (8) ; - une séquence simple brin (121) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (122) ; l'ARN amorce consistant en : (a) soit le produit de la transcription in vitro d'un acide nucléique codant ledit ARN amorce, (b) soit le produit d'une synthèse chimique ou d'une hémi-synthèse chimique dudit ARN amorce ; étant spécifié que : - les séquences (101) et (102) appariées forment une hélice (6C) ; - les séquences (107) et (108) appariées forment une hélice (7F) ; - les séquences (109) et (110) appariées forment une hélice (A) ; - les séquences (107) et (108) appariées forment une hélice (7F) ; - la séquence (112) forme une tige-boucle (B) ; - les séquences (115) et (122) appariées forment une hélice (1) ; - les séquences (116) et (118) appariées forment une hélice (2) ; - la séquence (117) forme une tige-boucle (4) ; - la séquence (120) forme une tige-boucle (8) ; avec (ii) une enzyme transcriptase inverse de VIH1 ; et (iii) un mélange dNTPs/ddNTP approprié ; (iv) en présence d'un composé candidat à tester ; b) Mesurer l'activité d'initiation de la rétrotranscription dans ledit échantillon; c) Comparer l'activité mesurée à l'étape b) avec l'activité d'initiation de la rétrotranscription mesurée dans un échantillon témoin, pour lequel l'étape a) est réalisée en l'absence dudit composé candidat. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'ARN amorce constitue le produit de la transcription in vitro d'un acide nucléique codant celui-ci. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'ARN amorce est obtenu par synthèse chimique. 4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'ARN amorce est une molécule hemi-synthétique obtenue par couplage ordonné de plusieurs fragments d'ARN constituant des parties distinctes de l'ARN amorce, chaque fragment d'ARN étant soit un produit de la transcription in vitro d'un ADN codant ledit fragment, soit le produit final d'une synthèse chimique. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes additionnelles suivantes : d) sélectionner le composé candidat pour lequel l'activité d'initiation de la rétrotranscription mesurée à l'étape b) est inférieure à celle mesurée dans l'échantillon témoin ; e) calculer l'activité inhibitrice du composé candidat sélectionné à l'étape d). 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'à l'étape a), le mélange dNTPs/ddNTP approprié comprend trois des quatre désoxyribonucléotides triphosphate naturels parmi A, T, G et C, le quatrième nucléotide consistant en un didéoxyribonucléotide triphosphate qui est complémentaire du nucléotide localisé en position -6 par rapport à l'extrémité 3' de la séquence de liaison à l'amorce (108) sur l'ARN matrice. 7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en au moins l'un des désoxyribonucléotides ou le didésoxyribonucléotides est marqué par une molécule détectable. 8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que la molécule détectable est une molécule radioactive choisie parmi le 3[H], le 14[C], le 32[P] et le 33[p]. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le complexe ARN/ARN est immobilisé sur un support. 10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que l'un au moins des ARNs du complexe ARN amorce/ARN matrice comprend une molécule ligand capable de se lier spécifiquement à une molécule récepteur présente à la surface d'un support. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que la molécule ligand est une biotine. 12. Procédé selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisé en ce que l'étape a) est réalisée dans une enceinte réactionnelle dont la surface constitue le support d'immobilisation du complexe ARN/ARN. 13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que la surface de l'enceinte réactionnelle est recouverte d'une molécu le récepteur susceptible de se lier spécifiquement à une molécule ligand portée par le complexe ARN amorce/ARN matrice. 14. Procédé selon l'une des revendications 8 à 13, caractérisé en ce que l'activité d'initiation de la retrotranscription est quantifiée par mesure de la radioactivité présente dans le polynucléotide qui est synthétisé par allongement de l'ARN amorce hybridé à l'ARN matrice au sein du complexe ARN/ARN. 15. Procédé selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que le complexe ARN amorce/ARN matrice comprend respectivement l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 1 et l'ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 2. 16. Procédé selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que le complexe ARN amorce/ARN matrice comprend respectivement l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 3 et l'ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 4. 17. Procédé selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes additionnelles suivantes : f) mettre en contact, dans un échantillon : (i) une amorce nucléotidique permettant de mimer l'étape d'élongation ; (ii) une transcriptase inverse du VIH-1 ; (iii) le mélange dNTPs/ddNTP utilisé à l'étape a) en présence du composé candidat testé à l'étape a) ; g) mesurer l'activité d'élongation de l'amorce nucléotidique ; h) comparer l'activité mesurée à l'étape g) avec l'activité d'élongation mesurée dans un échantillon témoin, pour lequel l'étape f) est réalisée en l'absence du composé candidat ; i) déterminer l'activité inhibitrice du composé candidat à partir de la comparaison d'activité réalisée à l'étape h) ; j) comparer l'activité inhibitrice du même composé candidat déterminée à l'étape e) avec l'activité inhibitrice du même composé déterminée à l'étape i). 18. Complexe ARN matrice/ARN amorce formé entre : (i) un ARN amorce comprenant, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3' : - une séquence d'appariement intramoléculaire (109) ; - une séquence simple brin (111) ; - une séquence (112) formant une tige-boucle ; - une séquence simple brin (113) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (101) appelée anti- codon ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (103) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (105) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (110) ; - une séquence simple brin (114) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire, servant d'amorce (107) ; et (ii) un ARN matrice, comprenant, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3' : - une séquence d'appariement intramoléculaire (115) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (116) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (106) ; - une séquence (117) formant une tige boucle intramoléculaire ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (104) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (102) appelée codon ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (118) ; - une séquence simple brin (119) ; - une séquence d'appariement intermoléculaire (108) ; - une séquence (120) formant la tige-boucle intramoléculaire (8) ; - une séquence simple brin (121) ; - une séquence d'appariement intramoléculaire (122) ; l'ARN amorce consistant en : (a) soit le produit de la transcription in vitro d'un acide nucléique codant ledit ARN amorce, (b) soit le produit d'une synthèse ou d'une hémi-synthèse chimique dudit ARN amorce; étant spécifié que : - les séquences (101) et (102) appariées forment une hélice (6C) ; - les séquences (107) et (108) appariées forment une hélice (7F) ; - les séquences (109) et (110) appariées forment une hélice (A) ; - les séquences (107) et (108) appariées forment une hélice (7F) ; - la séquence (112) forme une tige-boucle (B) ; - les séquences (115) et (122) appariées forment une hélice (1) ; - les séquences (116) et (118) appariées forment une hélice (2) ; - la séquence (117) forme une tige-boucle (4) ; - la séquence (120) forme une tige-boucle (8) ; 19. Complexe ARN amorce/ARN matrice selon la revendication 18, caractérisé en ce que l'un au moins des ARNs du complexe ARN/ARN comprend une molécule ligand capable de se lier spécifiquement à une molécule récepteur. 20. Complexe ARN amorce/ARN matrice selon la revendication 19, caractérisé en ce que la molécule ligand est une biotine. 21. Complexe ARN amorce/ARN matrice selon l'une des revendications 18 à 20, caractérisé en ce qu'il comprend respectivement l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 1 et l'ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 2. 22. Complexe ARN amorce/ARN matrice selon l'une des revendications 18 à 20, caractérisé en ce qu'il comprend respectivement l'ARN amorce de séquence SEQ ID N 3 et l'ARN matrice comprenant la séquence SEQ ID N 4. 23. Utilisation d'un complexe ARN amorce/ARN matrice selon l'une des revendications 18 à 22 dans un procédé de criblage de composés inhibiteurs de l'initiation de la retrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1. 24. Trousse ou kit de criblage de composé inhibiteurs de l'initiation de la retrotranscription de l'ARN d'un virus VIH-1, caractérisé en ce qu'il comprend un complexe ARN amorce/ARN matrice selon l'une des revendications 18 à 22.