Brevet FR2857363A1 — publié le 20050114

4.5.6.7-TETRAHYDRO-1 H-PYRAZOLOr3,4-ClPYRlDINES SUBSTITUEES, COMPOSITIONSLESCONTENANTETUTILISATION Laprésenteinventionconcernedenouveauxcomposéschimiques, particulièrement de nouvelles 4,5,6,7-tetrahydro-1 H-pyrazolo[3,4-c]pyridines, descompositionslescontenant,etleurutilisationcommemédicaments. Plusparticulièrement,l'inventionconcernedenouvelles4,5,6,7-tetrahydro- 1H-pyrazolo[3,4-c]pyridinesprésentantuneactivitéanticancéreuse,eten particulieruneactivitéinhibitricedekinases,notammentTie2. Seulesquelques4,5,6,7-tetrahydro-1 H-pyrazolo[3,4-c]pyridinessont connues. Ainsi,WO02/012442divulguedes4,5,6,7-tetrahydro-1 H-pyrazolo[3,4c] pyridinessubstituéesenposition3parungroupementamino, éventuellementsubstitué.Cesproduitssontutilespourletraitementdu canceretd'autresmaladiesliéesàuneproliférationcellulaire. P.Krogsgaard-Larsenetal.dansEur.J.Med.Chemical -Chim.Ther.(1979),14(2), p.157-164 divulgue deux 4,5,6,7-tetrahydro-1H pyrazolo[3,4-c]pyridines substituées en position 3 par un groupement hydroxy. DestentativespourobtenirdesinhibiteursefficacesdeTie2ontdéjàaboutidansle passé (voir à ce propos, par exemple, WO 98/02434 ; WO 98/41525 ; 99/10325 ; WO99/17770 ;WO99/54286 ;WO99/21859 ;WO99/55335 ;WO00/17202 ;WO 00/17203 ;WO00/27822 ; WO 00/75139;WO01/37835;WO01/57008;WO 01/72751;WO02/060382 ;WO02/076396 ;WO02/076463 ;WO02/076954; WO02/076984 ;WO02/076985 ;WO02/080926 ;WO03/004488). Toutefois,aucundecesdocumentsnedivulguededérivésde4,5,6,7- tétrahydro-1H-pyrazolo[3,4-c]pyridinestellesquedéfiniesplusloin, présentantuneactivitéàl'encontredekinases,enparticulier Tie2. A cet effet, les produits conformes à l'invention répondent à la formule (I) suivante : (I) danslaquelle : Xestchoisiparmiliaison,CH2,CO,S02,CONH,COO ; R1estchoisiparmialkyle,cycloalkyle,hétérocyclyle,aryle,hétéroaryle, éventuellementsubstitué ; R2estHouchoisiparmialkyle,alkylène,cycloalkyle,hétérocyclyle,aryle, hétéroaryle,éventuellementsubstitué ; etdanslaquellelessubstituantssontindépendammentchoisisparmiR3, O-R3,halogène,N02,S02-R3,CO-R3,S02NH-R3,CONH-R3,N-(R3)2, NHCO-R3,NHS02-R3,NHCONH-R3,NHS02NH-R3,OCO-R3,COO-R3, OS02-R3,S020-R3,OCONH-R3,OS02NH-R3,danslequelchaqueR3est indépendammentchoisiparmiH,alkyle,cycloalkyle,alcènyle,aryle, hétéroaryle,hétérocyclyle,éventuellementsubstituéparhalogène,aryle, hétéroaryle,OR4,N(R4)2,etdanslequelchaqueR4estindépendamment choisiparmiH,C1-C4alkyle. R1estdepréférencehérétoaryle,éventuellementsubstitué,etenparticulier benzimidazolyle,indolyle,pyrrolyle,éventuellementsubstituéparhalogène, R4,O-R4. Plusspécifiquement,unsubstituantR1trèsavantageuxpeutêtrechoisi parmibenzimidazol-2-yle,indol-2-yle,pyrrol-2-yle,éventuellementsubstitué parhalogène,R4,O-R4. R2estchoisidepréférenceparmiphényle,pyridyle,thiényle,C1-C4alkyle, C3-C7cycloalkyle,éventuellementsubstitué. XpeutêtreavantageusementchoisiparmiCO,S02. Unproduitconformeàl'inventionpeutseprésentersousforme : 1 )racémique,ou 2)enrichieenunstéréoisomère,ou 3)enrichieenunénantiomère ; etêtreéventuellementsalifié. Selonunsecondaspect,l'inventionconcernedescompositions pharmaceutiquescomprenantunproduittelquedéfiniprécédemment,en combinaisonavecunexcipientpharmaceutiquementacceptable. Selonuntroisièmeaspect,l'inventionconcernel'utilisationd'unproduittel quedéfiniprécédemment,commeagentmodulantl'activitéd'unekinase.Une kinasepréféréeseraavantageusementchoisieparmiTie2etKDR.Tie2est pluspréférée. Selonsontroisièmeaspect,l'inventionconcernel'utilisationd'unproduittel quedéfiniprécédemment,pourlafabricationd'unmédicamentutilepour traiterunétatpathologique,enparticulierlecancer. Lesproduitsdel'inventionsontutilescommeagentsinhibiteursd'une réactioncatalyséeparunekinase.Tie2estunekinasepourlaquelleles produitsdel'inventionserontparticulièrementutilesentantqu'inhibiteurs. Cesproduitspeuventaussiêtreutilescommeinhibiteursd'autreskinases tellesqueKDR. Desraisonspourlesquellesceskinasessontchoisiessontdonnées ci-après : Tie2 Tie-2(TEK)estunmembred'unefamillederécepteursàtyrosinekinase, spécifiquedescellulesendothéliales.Tie2estlepremierrécepteuràactivité tyrosine kinase dont on connaît à la fois l'agoniste (angiopoïetine 1 ou Ang1) quistimulel'autophosphorylationdurécepteuretlasignalisationcellulaire[S. Davisetal(1996)Cell87,1161-1169]etl'antagoniste(angiopoïetine2ou Ang2) [P.C. Maisonpierre étal. (1997) Science 277,55-60]. L'angiopoïetine 1 peutsynergiseravecleVEGFdanslesderniersstadesdelanéoangiogénèse[AsaharaT.Cire.Res.(1998)233-240].Lesexpériencesde knock-outetlesmanipulationstransgéniquesdel'expressiondeTie2oude Ang1 conduisent à des animaux qui présentent des défauts de vascularisation[D. J.Dumontétal(1994)GenesDev.8,1897-1909etC.Suri (1996) Cell 87, 1171-1180]. La liaison d'Ang1 à son récepteur conduit à l'autophosphorylationdudomainekinasedeTie2quiestessentiellepourla néovascularisationainsiquepourlerecrutementetl'interactiondes vaisseauxaveclespéricytesetlescellulesmusculaireslisses ;ces phénomènescontribuentàlamaturationetlastabilitédesvaisseaux nouvellementformés[P.C.Maisonpierreetal(1997)Science277,55-60].Lin etal(1997)J.Clin.Invest.100,8 :2072-2078etLinP.(1998)PNAS95, 8829-8834,ontmontréuneinhibitiondelacroissanceetdelavascularisation tumorale,ainsiqu'unediminutiondesmétastasesdepoumon,lors d'infectionsadénoviralesoud'injectionsdudomaineextracellulairedeTie-2 (Tek)dansdesmodèlesdexénographesdetumeurduseinetdemélanome. LesinhibiteursdeTie2peuventêtreutilisésdanslessituationsoùune néovascularisationsefaitdefaçoninappropriée(c'est-à-diredansla rétinopathiediabétique,l'inflammationchronique,lepsoriasis,lesarcomede Kaposi,lanéovascularisationchroniquedueàladégénérationmaculaire, l'arthriterhumatoïde,l'hémoangiomeinfantileetlescancers). KDR KDR(KinaseinsertDomainReceptor)aussiappeléeVEGF-R2(Vascular EndothelialGrowthFactorReceptor2),estexpriméuniquementdansles cellulesendothéliales.Cerécepteursefixeaufacteurdecroissance angiogéniqueVEGF,etsertainsidemédiateuràunsignaltransductionnel vial'activationdesondomainekinaseintracellulaire.L'inhibitiondirectede l'activitékinasedeVEGF-R2permetderéduirelephénomèned'angiogénèse enprésencedeVEGFexogène(VascularEndothelialGrowthFactor :facteur decroissancevasculaireendothélial)(Strawnetal.,CancerResearch,1996, vol.56,p. 3540-3545).Ceprocessusaétédémontrénotammentàl'aidede mutantsVEGF-R2(Millaueretal.,CancerResearch,1996,vol.56,p.1615- 1620).LerécepteurVEGF-R2semblen'avoiraucuneautrefonctionchez l'adultequecelleliéeàl'activitéangiogéniqueduVEGF.Parconséquent,un inhibiteursélectifdel'activitékinaseduVEGF-R2nedevraitdémontrerque peudetoxicité. Enplusdecerôlecentraldansleprocessusdynamiqueangiogénique,des résultatsrécentssuggèrentquel'expressiondeVEGFcontribueàlasurvie descellulestumoralesaprèsdeschimio-etradio-thérapies,soulignantla synergiepotentielled'inhibiteursdeKDRavecd'autresagents(Leeetal. CancerResearch,2000,vol.60,p.5565-5570). Partieexpérimentale MéthodeA :AnalyseparLC/MS LesanalysesLC/MSontétéréaliséessurunappareilMicromassmodèle LCT relié à un appareil HP 1100. L'abondance des produits a été mesurée à l'aide d'un détecteur à barrette de diodes HP G1315A sur une gamme d'onde de200-600nmetundétecteuràdispersiondelumièreSedex65. L'acquisitiondesspectresdemassesMassspectraaétéréaliséesurune gamme de 180 à 800. Les données ont été analysées en utilisant le logiciel Micromass MassLynx. La séparation a été effectuée sur une colonne Hypersil BDS C18, 3 m (50 x 4. 6 mm), en éluant par un gradient linéaire de 5 à 90 % d'acétonitrilecontenant0,05%(v/v)d'acidetrifluoroacétique(TFA)dansl'eau contenant0,05%(v/v)TFAen3,5mnàundébitde1mL/mn.Letempstotal d'analyse, incluant la période de rééquilibration de la colonne, est de 7 mn. MéthodeB :PurificationparLC/MS: LesproduitsontétépurifiésparLC/MSenutilisantunsystèmeWaters FractionsLynx composé d'une pompe à gradient Waters modèle 600, d'une pompederégénérationWatersmodèle515,d'unepompededilutionWaters ReagentManager,d'unauto-injecteurWatersmodèle2700,dedeuxvannes Rheodyne modèle LabPro, d'un détecteur à barrette de diodes Waters modèle996,d'unspectromètredemasseWatersmodèleZMDetd'un collecteurdefractionsGilsonmodèle204.Lesystèmeétantcontrôléparle logicielWatersFractionLynx.Laséparationaétéeffectuéealternativement surdeuxcolonnesWatersSymmetry(C18,5 M,19x50mm,référence catalogue186000210),unecolonneétantencoursderégénérationparun mélangeeau/acétonitrile95/5(v/v)contenant0,07%(v/v)d'acide trifluoroacétique,pendantquel'autrecolonneestencoursdeséparation. L'élution des colonnes a été effectuée en utilisant un gradient linéaire de 5 à 95%d'acétonitrilecontenant0,07%(v/v)d'acidetrifluoroacétiquedansl'eau contenant0,07%(v/v)d'acidetrifluoroacétique,àundébitde10mL/mn.Ala sortiedelacolonnedeséparation,unmillièmedel'effluentestséparéparun LC Packing Accurate, dilué à l'alcool méthylique à un débit de 0,5 mL/mn et envoyé vers les détecteurs, à raison de 75 % vers le détecteur à barrette de diodes,etles25%restantsverslespectromètredemasse.Lerestede l'effluent(999/1000)estenvoyéverslecollecteurdefractionsoùlefluxest éliminétantquelamasseduproduitattendun'estpasdétectéeparlelogiciel FractionLynx.Lesformulesmoléculairesdesproduitsattendussontfournies aulogicielFractionLynxquidéclenchelacollecteduproduitquandlesignal demassedétectécorrespondàl'ion[M+H]+et/ouau[M+Na]+.Danscertains cas,dépendantdesrésultatsdeLC/MSanalytique,quandunionintense correspondantà[M+2H]++aétédétecté,lavaleurcorrespondantàlamoitié delamassemoléculairecalculée(MW/2)estaussifournieaulogiciel FractionLynx.Danscesconditions,lacollecteestaussidéclenchéequandle signaldemassedel'ion[M+2H]++et/ou[M+Na+H]++sontdétectés. MéthodeC :AnalyseEl Lesspectresdemasseontétéréalisésenimpactélectronique(70eV)sur spectromètreFinniganSSQ7000. MéthodeD :AnalyseRMN LesspectresRMNontétéréaliséssurspectromètreBRUKERAvance300et BRUKERAvanceDRX400. Exemple1 : 2-phényléthylamidedel'acide3-(5,6-diméthyl-1H-benzoimidazol- 2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6-carboxylique Le2-phényléthylamidedel'acide3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- 2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6-carboxyliquepeutêtrepréparéde lafaçonsuivante : 10 mg de 3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- pyrazolo[3,4-c] pyridinesontmisensuspensiondans0.3mLde tétrahydrofurane.7.8 Lde2-phényléthylisocyanatesontadditionnésetle mélangeréactionnelestagitéàtempératureambiantependant20heures puisconcentrésouspressionréduite. Lerésidud'évaporationestpurifiéparLC/MS(MéthodeB).Aprèspurification parLC/MS,lesfractionscontenantle2-phényléthylamidedel'acide3-(5,6- diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6carboxyliquesontréuniesetdéposéessurphaseSCX(500mgdephase CUBCX1-HL).LaphaseSCXestensuitelavéeavecduméthanolpuis extraiteavecunesolutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lasolution d'extractionobtenueestalorsconcentréesouspressionréduite.Onobtient ainsi1.2 mgde2-phényléthylamidedel'acide3-(5,6-diméthyl-1 H- benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6-carboxylique sousformedepoudreblanchedontlescaractéristiquessontlessuivantes : LC/MS (Méthode A) : ion moléculaire détecté : 415.29 ; temps de rétention = 3. 48minutes Exemple2 :3-(5,6-Diméthyl-1H-benzoimidazol-2-yl)-6-méthanesulfonyl- 4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine La 3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6-méthanesulfonyl-4,5,6,7tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinepeutêtrepréparéedelafaçon suivante : 10mgde3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- pyrazolo[3,4-c]pyridinesontmisensuspensiondans0.3mLde dichlorométhane.15. 8 Ldetriéthylaminesontadditionnésainsique4.5 L de chlorure de méthanesulfonyle. Le mélange réactionnel est agité à températureambiantependant20hpuisconcentrésouspressionréduite. Lerésidud'évaporationestpurifiéparLC/MS(MéthodeB).Aprèspurification parLC/MS,lesfractionscontenantla3-(5,6-diméthyl-1H-benzoimidazol-2-yl)- 6-méthanesulfonyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinesontréunies etdéposéessurphaseSCX(500mgdephaseCUBCX1-HL).LaphaseSCX estensuitelavéeavecduméthanolpuisextraiteavecunesolution d'ammoniac2Mdansleméthanol.Lasolutiond'extractionobtenueestalors concentréesouspressionréduite.Onobtientainsi4. 2mgde3-(5,6-diméthyl- 1 H-benzoimidazol-2-yl)-6-méthanesulfonyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo [3,4-c]pyridinesousformedepoudreblanchedontlescaractéristiquessont lessuivantes : LC/MS (Méthode A) : ionmoléculaire détecté : 346.30 ; temps de rétention = 3. 08minutes R.M.N.1 H(300MHz,(CD3)2SOd6,#enppm) : (slarge :6H) ; 3,02(s : 3H) ; 3,03 (mt : 2H) ; 3,52 (t large, J = 5 Hz : 2H) ; 4,45 (s large : 2H) ; 7,24 (s large :1 H) ;7,42(slarge :1 H) ;12,45(mf :1 H) ;13,07(mf :1 H). Exemple3 :[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydropyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-3-pyridinyl-méthanone La[3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4- c]pyridin-6-yl]-3-pyridinyl-méthanonepeutêtrepréparéedelafaçonsuivante : 10mgde3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2Hpyrazolo[3,4-c]pyridinesontmisensuspensiondans0.3mLdeDMF.6. 9mg d'acidenicotiniquesontadditionnés,suivisde7. 6mgdeHOBTet8.7 Lde diisopropylcarbodiimide.Lemélangeréactionnelestagitéàtempérature ambiantependant20heurespuisconcentrésouspressionréduite. Lerésidud'évaporationestpurifiéparLC/MS(MéthodeB).Aprèspurification parLC/MS,lesfractionscontenantla[3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol-2yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-3-pyridinyl-méthanonesont réuniesetdéposéessurphaseSCX(500mgdephaseCUBCX1-HL).La phaseSCXestensuitelavéeavecduméthanolpuisextraiteavecune solutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lasolutiond'extractionobtenue estalorsconcentréesouspressionréduite.Onobtientainsi5. 3mgde [3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4- c]pyridin-6-yl]-3-pyridinyl-méthanonesousformedepoudreblanchedontles caractéristiquessontlessuivantes : LC/MS (Méthode A) : ion moléculaire détecté : 373.31 ; temps de rétention = 2. 87minutes R. M.N. 1 H (400 MHz, (CD3)2SO d6, à une température de 373K, # en ppm) : 2,35 (s : 6H) ; 2,90 à 3,10 (mt : 2H) ; 3,76(mf : 2H) ; 4,76 (s large : 2H) ; 7,27 (mf : 1 H) ; 7,40 (mf: 1 H) ; 7,51 (dd, J = 8 et 5 Hz : 1 H) ; (d large, J = 8 Hz : 1 H) ; 8,70 (mt : 2H) ; de 11,80 à 12,20 (mf étalé : 1 H) ; de 12,50 à 13,00 (mf étalé :1 H). Exemple4 :6-(3-Chloro-benzyl)-3-(5,6-diméthyl-1H-benzoimidazol-2-yl)- 4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine La 6-(3-chloro-benzyl)-3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinepeutêtrepréparéedelafaçon suivante : 10 mg de 3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- pyrazolo[3,4-c]pyridinesontmisensuspensiondans0.3mLdeméthanol. 12. 7 Lde3-chlorobenzaldéhydesontadditionnés,suivisde4. 7mgde NaBH3CN.Lemélangeréactionnelestagitéàtempératureambiantependant 20hpuisconcentrésouspressionréduite. Lerésidud'évaporationestpurifiéparLC/MS(MéthodeB).Aprèspurification parLC/MS,lesfractionscontenantla6-(3-chloro-benzyl)-3-(5,6-diméthyl-1 Hbenzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine sont réuniesetdéposéessurphaseSCX(500mgdephaseCUBCX1-HL).La phaseSCXestensuitelavéeavecduméthanolpuisextraiteavecune solutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lasolutiond'extractionobtenue est alors concentrée sous pression réduite. On obtient ainsi 4 mg de 6-(3- chloro-benzyl)-3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- pyrazolo[3,4-c]pyridinesousformedepoudreblanchedontles caractéristiquessontlessuivantes : LC/MS (Méthode A) : ionmoléculaire détecté : 392.26 ; temps de rétention = 3. 18minutes R. M.N. 1 H (400 MHz, (CD3)2SO d6, à une température de 373K, 8 en ppm) : 2,35et2,36(2s :6Hentotalité) ;2,83(t,J=5,5Hz :2H) ; de2,90à3,00 (mt : 2H) ; 3,62 (s large : 2H) ; 3,78 (s : 2H) ; de 7,25 à 7,50 (mt : 6H) ; 11,91 (mf : 1 H) ; de12,30 à 12.60 (mf étalé : 1 H). Exemple5 :[3-(1H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c] pyridin-6-yl]-3-pyridinyl-méthanone La[3-(1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]- 3-pyridinyl-méthanonepeutêtrepréparéedelafaçonsuivante : 15mgdechlorhydratedela3-(1H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- pyrazolo[3,4-c]pyridinesontmisensuspensiondans0.5mLdeDMF. 24. 3mgded iisopropyléthyla minesontadditionnés,suivisde12. 7mgde HOBT,11.9mgdediisopropylcarbodiimideetde11.6mgd'acidenicotinique. Lemélangeréactionnelestagitéàtempératureambiantependant20heures puisconcentrésouspressionréduite. Lerésidud'évaporationestpurifiéparLC/MS(MéthodeB).Aprèspurification parLC/MS,lesfractionscontenantla[3-(1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7- tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-3-pyridinyl-méthanonesontréunieset déposéessurphaseSCX(500mgdephaseCUBCX1-HL).LaphaseSCX estensuitelavéeavecduméthanolpuisextraiteavecunesolution d'ammoniac2Mdansleméthanol.Lasolutiond'extractionobtenueestalors concentréesouspressionréduite.Onobtientainsi7. 7mgde[3-(1 H- benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-3-pyridinyl- méthanonesousformedepoudreblanchedontlescaractéristiquessontles suivantes : LC/MS(MéthodeA) :ionmoléculairedétecté :345.22 ; tempsderétention= 1.95minutes Exemple6 :6-(3-Chloro-benzyl)-3-(1 H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7- tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine La 6-(3-chloro-benzyl)-3-(1 H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2Hpyrazolo[3,4-c]pyridinepeutêtrepréparéedelafaçonsuivante : 15mgdechlorhydratedela3-(1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2Hpyrazolo[3,4-c]pyridinesontmisensuspensiondans0.5mLdeméthanol. 26. 5mgde3-chlorobenzaldéhydesontadditionnés,suivisde7. 9mgde NaBH3CN. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 20heurespuisconcentrésouspressionréduite. Lerésidud'évaporationestpurifiéparLC/MS(MéthodeB).Aprèspurification parLC/MS,lesfractionscontenantla6-(3-chloro-benzyl)-3-(1 H- benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine sont réuniesetdéposéessurphaseSCX(500mgdephaseCUBCX1-HL).La phaseSCXestensuitelavéeavecduméthanolpuisextraiteavecune solutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lasolutiond'extractionobtenue estalorsconcentréesouspressionréduite.Onobtientainsi6. 9mgde6-(3chloro-benzyl)-3-(1 H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4c]pyridinesousformedepoudreblanchedontlescaractéristiquessontles suivantes : LC/MS (Méthode A) : ion moléculaire détecté : 364.22 ; temps de rétention = 2. 19minutes Exemple7 : Préparationd'unelibrairied'amide Lalibrairied'amidespeutêtrepréparéedelafaçonsuivante : Les19acides(table1)sontpesésetplacésdans19tubesàessais individuels. Table1 : acidesutilisés Entrée Nom Quantité 1 ACIDE ISOBUTYRIQUE 3. 3 mg 2 ACIDE BENZOIQUE 4. 6 mg 3 ACIDE 2,3-DICHLOROBENZOIQUE 7. 1 mg 4 ACIDE PHENYLACETIQUE 5. 1 mg 5 ACIDE ACETIQUE 2. 2 mg 6 ACIDE CYCLOPROPANECARBOXYLIQUE 3. 2 mg 7 ACIDE 2-CHLOROBENZOIQUE 5. 9 mg 8 ACIDE 3-CHLOROBENZOIQUE 5. 9 mg 9 ACIDE 4-CHLOROBENZOIQUE 5. 9 mg 10 ACIDE ISOVALERIQUE 3. 8 mg 11 ACIDE HYDROCINNAMIQUE 5. 6 mg 12 ACIDE VINYLACETIQUE 3. 2 mg 13 ACIDE BUTYRIQUE 3. 3 mg 14 ACIDE 2-FUROIQUE 4. 2 mg 15 ACIDE PIVALIQUE 3. 8 mg 16 N,N-DIMETHYLGLYCINE 3. 9 mg 17 ACIDE VALERIQUE 3. 8 mg 18 ACIDE THIOPHENE-2-CARBOXYLIQUE 4. 8 mg 19 ACIDE 4-METHYLSULFONYLBENZOIQUE 7. 5 mg 152mgdeHOBTet142mgdediisopropylcarbodiimidesontplacésen solutiondans12mLdeDMFetlasolutionobtenueestdistribuéedans chacundes19tubesàessais,àraisonde600!-ILpartube. 200mgdechlorhydratedela3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7- tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine sont mis en suspension dans 4 mL de DMFenprésencede290mgdeN,N-diisopropyléthylamineetlasuspension obtenueestdistribuéedanschacundes19tubesàessais,àraisonde 200!-ILpartube. Les 19 mélanges réactionnels sont agités par agitation orbitalaire à températureambiantependant20heures. Pourchaquemélangeréactionnel,unprélèvementde10uLesteffectuéet diluédans40!-ILdeDMSO(GilsonLiquidHandlerQuad-Z215).Chaque échantillonensolutiondansleDMSOainsiobtenu,estanalyséparLC/MS (MéthodeA). Les19mélangesréactionnelssontensuiteévaporésàsecetlesrésidus d'évaporationsontplacésensolutiondans500 LdeDMSOchacun,puisles solutionsobtenuessontpurifiéesparLC/MS(MéthodeB). AprèspurificationparLC/MS,lesfractionscontenantlescomposéscherchés sont(éventuellementréunies)déposéessurphaseSCX(500mgdephase CUBCX1-HL).LesphasesSCXsontensuitelavéesavecduméthanolpuis extraitesavecunesolutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lessolutions d'extractionsontcollectéesentubesdeverretarés,évaporéesàsec (évaporateurcentrifugeSavantAES2000ouGenevacHT8),pesées(Mettler ToledoAutomatedWorkstationLA200)etdiluéesà10mMdansleDMSO (GilsonLiquidHandlerQuad-Z215).Chaquesolutionobtenueestanalysée parLC/MS(MéthodeA). Lescomposéssuivants(Table2),ontétéisolésetcaractérisésparleur tempsderétentionetpicmoléculaireenSpectrométriedeMasse(Méthode A). Table2 : librairied'amidesobtenue Quantité de Temps de Ion produit rétention moléculaire Entrée Nom obtenue (minutes) détecté 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- ,4,5, 7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-2- 1 méthyl-propan-1-one 5. 8 mg 3. 08 338.23 [3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7- tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridin-6-yl]-phényl- 2 méthanone 6. 8 mg 2. 68 372.21 (2,3-Dichloro-phényl)-[3-(5,6-diméthyl-1 H- benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro- 3 pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-méthanone 12 mg 3. 05 440. 13 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- 2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridin-6-yl]-2- 4 phényl-éthanone 7. 9 mg 2. 99 386.23 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- 2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridin-6-yl]- 5 éthanone 2. 7 mg 2. 4 310.19 Cyclopropyl-[3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol- -yl )-2, 4, 5, 7-tétrahyd ro-pyrazol 0[3, 4-c] pyrid i n-6- 6 yl]-méthanone 3. 4 mg 2. 57 336.21 (2-Chloro-phényl)-[3-(5,6-diméthyl-1 H- benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro- 7 pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-méthanone 11.2 mg 2. 97 406. 18 (3-Chloro-phényl)-[3-(5,6-diméthyl-1 H- benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro- 8 pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-méthanone 12. 1 mg 3. 31 406.16 (4-Chloro-phényl)-[3-(5,6-diméthyl-1 H- benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro- 9 pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-méthanone 11.5 mg 3. 51 406. 17 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- 10 F,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yll-3- 4.8 mg 2.72 352.24 méthyl-butan-1-one 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl) - 2,4,5,7 -tétrahydro-pyrazolo[3,4-c ]pyridin-6-yl]-3- 11 phényl-propan-1-one 11.9 mg 2. 95 400.24 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- ,4, 5, 7-tétrahyd ro-pyrazolo[3,4-c]pyrid i n-6-yl]- 12 but-3-en-1-one 10. 1 mg 2. 72 336.22 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- 2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridin-6-yl]- 13 butan-1-one 7 mg 2. 66 338. 23 [3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7- tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-furan-2-yl- 14 méthanone 9.5 mg 2. 67 362. 19 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- 2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]- 15 2,2-diméthyl-propan-1-one 9.3 mg 2. 8 352. 24 2-Diméthylamino-1-[3-(5,6-diméthyl-1 H- benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro- 16 pyrazolo[3,4-c]pyridin-6-yl]-éthanone 4. 7 mg 2. 55 353.23 1-[3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)- 2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridin-6-yl]- 17 pentan-1-one 5. 4 mg 2. 78 352.24 [3-(5,6-Diméthyl-1H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridin-6-yl]-thiophen- 18 2-yl-méthanone 7. 2 mg 2. 75 378. 17 [3-(5,6-Diméthyl-1H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridin-6-yl]-(4- 19 méthanesulfonyl-phényl)-méthanone 14. 3 mg 2. 79 450.19 Exemple8 :Préparationd'unelibrairiedesulfonamides Lalibrairiedesulfonamidespeutêtrepréparéedelafaçonsuivante : 190mgdechlorhydratedela3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinesontmisensuspensiondans2mLde dichlorométhaneenprésencede150 Ldetriéthylamineetlasuspension obtenueestdistribuéedans17tubesàessais,àraisonde500 Lpartube. Les17chloruresdesulfonyles(table3)sontpesésetadditionnésdans chacundes17tubesàessais. Table3 : Chloruresdesulfonyleutilisés Entrée Nom Quantité 1 CHLORURE DE BENZENESULFONYLE 9. 9 mg 2 CHLORURE DE ALPHA-TOLUENESULFONYLE 10.7 mg 3 CHLORURE DE 2,3-DICHLOROBENZENESULFONYLE 13.8 mg 4 CHLORURE DE 4-CHLOROBENZENESULFONYLE 11.9 mg 5 CHLORURE DE 2,2,2-TRIFLUOROETHANESULFONYLE 10.2 mg 6 CHLORURE DE ETHANESULFONYLE 7. 2 mg 7 CHLORURE DE 1-PROPANESULFONYLE 8 mg 8 CHLORURE DE 1-BUTANESULFONYLE 8. 8 mg 9 CHLORURE DE 2-CHLOROBENZENESULFONYLE 11.9 mg 10 CHLORURE DE 3-CHLOROBENZENESULFONYLE 11.9 mg 11 CHLORURE DE [(4-FLUOROPHENYL)METHYL]SULFONYLE 11.7 mg 12 CHLORURE DE 4-METHOXYBENZENESULFONYLE 11.6 mg 13 CHLORURE DE P-TOLUENESULFONYLE 10.7 mg 14 CHLORURE DE O-TOLUENESULFONYLE 10.7 mg 15 CHLORURE DE 3-METHYLBENZENESULFONYLE 10.7 mg 16 CHLORURE DE 3-METHOXYBENZENESULPHONYLE 11.6 mg 17 CHLORURE DE 2-METHOXY-4-METHYLBENZENESULPHONYLE 12.4 mg Les 17 mélanges réactionnels sont agités par agitation orbitalaire à 5températureambiantependant20h. Pourchaquemélangeréactionnel,unprélèvementde10 Lesteffectuéet diluédans40 LdeDMSO(GilsonLiquidHandlerQuad-Z215).Chaque échantillonensolutiondansleDMSOainsiobtenu,estanalyséparLC/MS (MéthodeA). Les17mélangesréactionnelssontensuiteévaporésàsecetlesrésidus d'évaporationsontplacésensolutiondans1mLdeDMSOchacunen présenced'unegoutted'unesolutionaqueused'acidechlorhydrique5Netles solutionsobtenuessontpurifiéesparLC/MS(MéthodeB).Aprèspurification parLC/MS,lesfractionscontenantlescomposéscherchéssont (éventuellementréunies)déposéessurphaseSCX(500mgdephase CUBCX1-HL).LesphasesSCXsontensuitelavéesavecduméthanolpuis extraitesavecunesolutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lessolutions d'extractionsontcollectéesentubesdeverretarés,évaporéesàsec (évaporateurcentrifugeSavantAES2000ouGenevacHT8),pesées(Mettler ToledoAutomatedWorkstationLA200)etdiluéesà10mMdansleDMSO (GilsonLiquidHandlerQuad-Z215).Chaquesolutionobtenueestanalysée parLC/MS(MéthodeA). Lescomposéssuivants(Table4),ontétéisolésetcaractérisésparleur tempsderétentionetpicmoléculaireenSpectrométriedeMasse(Méthode A). Table4 :librairiedesulfonamidesobtenue Quantité de Temps de Ion Entrée Nom produit rétention moléculaire obtenue (minutes) détecté 6-Benzenesulfonyl-3-(5,6-diméthyl-1 H- 1 benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 1.4 mg 3. 41 408. 18 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 2 phénylméthanesulfonyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 0. 7 mg 3. 51 422.2 pyrazolo[3,4-c]pyridine 6-(2,3-Dichloro-benzenesulfonyl)-3-(5,6- 3 diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7- 6. 4 mg 3. 25 476.1 tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine 6-(4-Chloro-benzenesulfonyl)-3-(5,6-diméthyl- 4 1 H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 5. 9 mg 3. 19 442.12 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 5 (2,2,2-trifluoro-éthanesulfonyl)-4,5,6,7- 1.7 mg 3. 06 414. 14 tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 6 éthanesulfonyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 5. 2 mg 2. 63 360.17 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 7 (propane-1-sulfonyl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 4. 3 mg 2. 8 374.19 pyrazolo[3,4-c]pyridine 6-(Butane-1-sulfonyl)-3-(5,6-diméthyl-1 H- 8 benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 5. 6 mg 2. 94 388.2 pyrazolo[3,4-c]pyridine 6-(2-Chloro-benzenesulfonyl)-3-(5,6-diméthyl- 9 1 H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 5. 6 mg 3. 38 442.13 pyrazolo[3,4-c]pyridine 6-(3-Chloro-benzenesulfonyl)-3-(5,6-diméthyl- 10 1H-benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 6. 9 mg 3. 71 442.13 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6-(4- 11 fluoro-phénylméthanesulfonyl)-4,5,6,7- 0. 7 mg 3. 05 440.18 tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6-(4- 12 methoxy-benzenesulfonyl)-4,5,6,7-tétrahydro- 7. 5 mg 2. 99 438.19 2H-pyrazolo [3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 13 (toluene-4-sulfonyl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 7. 3 mg 3. 22 422.2 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 14 (toluene-2-sulfonyl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 4. 8 mg 3. 16 422.19 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 15 (toluene-3-sulfonyl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 5. 1 mg 3. 13 422.19 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6-(3- 16 methoxy-benzenesulfonyl)-4,5,6,7-tétrahydro- 6. 9 mg 3. 07 438.18 2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6-(2- 17 methoxy-4-méthyl-benzenesulfonyl)-4,5,6,7- 0. 8 mg 3. 34 452.19 tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine Exemple9 : Préparationd'unelibrairied'amines Lalibrairied'aminespeutêtrepréparéedelafaçonsuivante : 180mgdechlorhydratedela3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinesontmisensuspensiondans2.7mLde méthanol et la suspension obtenue est distribuée dans 16 tubes à essais, à raisonde150 Lpartube. Les16aldéhydes(table5)sontpesésetadditionnésdanschacundes16 tubes à essais. Table5 : Aldéhydesutilisés Entrée Nom Quantité 1 ISOBUTYRALDEHYDE 8. 1 mg 2 FORMALDEHYDE 3. 4 mg 3 BENZALDEHYDE 11.9 mg 4 PHENYLACETALDEHYDE 13.5 mg 5 2,3-DICHLOROBENZALDEHYDE 19.6 mg 6 FURFURAL 10. 8 mg 7 4-CHLOROBENZALDEHYDE 15.8 mg 8 2-THIOPHENECARBOXALDEHYDE 12.6 mg 9 NICOTINALDEHYDE 12 mg 10 TRIMETHYLACETALDEHYDE 9. 7 mg 11 ACETALDEHYDE 4. 9 mg 12 ISOVALERALDEHYDE 9. 7 mg 13 PROPIONALDEHYDE 6. 5 mg 14 3-PHENYLPROPIONALDEHYDE 15. 1 mg 15 BUTYRALDEHYDE 8. 1 mg 16 CYCLOPROPANECARBOXALDEHYDE 7. 9 mg Unesolutionde85mgdeNaBH3CNdans2. 7mLdeméthanolestalors égalementdistribuéedansles16tubesàessais,àraisonde150 Lpartube. Les16mélangesréactionnelssontagitésparagitationorbitalaireà températureambiantependant20h.100 Ldeméthanolsontalorsajoutés danschacundes16tubes. Pourchaquemélangeréactionnel,unprélèvementde10 Lesteffectuéet diluédans40 LdeDMSO(GilsonLiquidHandlerQuad-Z215).Chaque échantillonensolutiondansleDMSOainsiobtenu,estanalyséparLC/MS (MéthodeA). Les16mélangesréactionnelssontensuiteévaporésàsecetlesrésidus d'évaporationsontplacésensolutiondans500 LdeDMSOchacun,filtrés surfritté,puislessolutionsrésiduellessontpurifiéesparLC/MS(MéthodeB). AprèspurificationparLC/MS,lesfractionscontenantlescomposéscherchés sont(éventuellementréunies)déposéessurphaseSCX(500mgdephase CUBCX1-HL).LesphasesSCXsontensuitelavéesavecduméthanolpuis extraitesavecunesolutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lessolutions d'extractionsontcollectéesentubesdeverretarés,évaporéesàsec (évaporateurcentrifugeSavantAES2000ouGenevacHT8),pesées(Mettler ToledoAutomatedWorkstationLA200)etdiluéesà10mMdansleDMSO (GilsonLiquidHandlerQuad-Z215).Chaquesolutionobtenueestanalysée parLC/MS(MéthodeA). Lescomposéssuivants(Table6),ontétéisolésetcaractérisésparleur tempsderétentionetpicmoléculaireenSpectrométriedeMasse(Méthode A). Table6 :librairied'aminesobtenue Quantité Temps de Ion Entrée Nom de produit rétention moléculaire obtenue (minutes) détecté 1 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 5. 9 mg 2.62 324. 32 isobutyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H- pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 2 méthyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4- 3. 5 mg 2. 49 282.29 c]pyridine 6-Benzyl-3-(5,6-diméthyl-1 H- 3 benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 8. 2 mg 2. 74 358.3 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 4 phenéthyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 6. 4 mg 2. 84 372.32 pyrazolo[3,4-c]pyridine 6-(2,3-Dichloro-benzyl)-3-(5,6-diméthyl-1 H- 5 benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 8. 6 mg 2. 95 426.23 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 6 uran-2-ylméthyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 5. 9 mg 2. 64 348.27 pyrazolo[3,4-c]pyridine 6- (4-Chloro-benzyl)-3-(5,6-diméthyl-1H- 7 benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 4. 7 mg 2. 9 392.26 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 8 hiophen-2-ylméthyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 8. 4 mg 2. 71 364.24 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 9 pyridin-3-ylméthyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 11.7 mg 2. 55 359. 29 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 10 (2,2-diméthyl-propyl)-4,5,6,7-tétrahydro- 3. 7 mg 2. 72 338.32 2H-pyrazolo [3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 11 éthyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4- 5 mg 2. 55 296. 27 c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 12 (3-méthyl-butyl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 5. 9 mg 2. 76 338.3 pyrazolo[3,4-c]pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 13 propyl-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4- 6. 4 mg 2. 62 310.29 c] pyridine 3-(5,6-Diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-6- 14 (3-phényl-propyl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 4. 2 mg 2. 97 386.31 pyrazolo[3,4-c]pyridine 6-Butyl-3-(5,6-diméthyl-1H-benzoimidazol- 15 2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4- 4. 5 mg 2. 68 324.28 c]pyridine 6-Cyclopropylméthyl-3-(5,6-diméthyl-1H- 16 benzoimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- 3. 9 mg 2. 62 322.27 pyrazolo[3,4-c]pyridine Exemple10 : Préparationd'unelibrairied'urées Lalibrairied'uréespeutêtrepréparéedelafaçonsuivante : 120mgdechlorhydratedela3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7- 5tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinesontmisensuspensiondans3. 6mLde tétrahydrofuraneenprésencede190 Ldetriéthylamineetlasuspension obtenue est distribuée dans chacun des 9 tubes à essais, à raison de 300 !-IL par tube. Les9isocyanates(table7)sontpesésetadditionnésdanschacundes9 10tubesàessais. Table7 : Isocyanatesutilisés Entrée Nom Quantité 1 PHENYL ISOCYANATE 6. 7 mg 2 BENZYL ISOCYANATE 7. 5 mg 3 2-CHLOROPHENYL ISOCYANATE 8. 6 mg 4 3-CHLOROPHENYL ISOCYANATE 8. 6 mg 5 4-CHLOROPHENYL ISOCYANATE 8. 6 mg 6 N-BUTYL ISOCYANATE 5. 6 mg 7 2-THIENYL ISOCYANATE 7 mg 8 2-METHOXYPHENYL ISOCYANATE 8. 4 mg 9 0-TOLYL ISOCYANATE 7. 5 mg Les9mélangesréactionnelssontagitésparagitationorbitalaireà température ambiante pendant 2 heures puis évaporés à sec. Les résidus d'évaporation sont placés en solution dans 1 mL de DMSO chacunetpourchaquesolutionobtenue,unprélèvementde10 Lest effectuéetdiluédans40 LdeDMSO(GilsonLiquidHandlerQuad-Z215). ChaqueéchantillonensolutiondansleDMSOainsiobtenu,estanalysépar LC/MS(MéthodeA). LessolutionsrésiduellessontpurifiéesparLC/MS(MéthodeB).Après purificationparLC/MS,lesfractionscontenantlescomposéscherchéssont (éventuellementréunies)soitévaporéesàsec(entrées1,3,6,8,9),soit déposéessurphaseSCX(500mgdephaseCUBCX1-HL ;entrées2,4,5, 7).LesphasesSCXsontensuitelavéesavecduméthanolpuisextraitesavec unesolutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lessolutionsd'extraction sont collectées en tubes de verre tarés, évaporées à sec (évaporateur centrifugeSavantAES2000ouGenevacHT8),pesées(MettlerToledo AutomatedWorkstationLA200)etdiluéesà10mMdansleDMSO(Gilson LiquidHandlerQuad-Z215).Chaquesolutionobtenueestanalyséepar LC/MS(MéthodeA). Lescomposéssuivants(Table2),ontétéisolésetcaractérisésparleur tempsderétentionetpicmoléculaireenSpectrométriedeMasse(Méthode A). Table8 : librairied'uréesobtenue Quantité Temps de Ion Entrée nom de produit rétention moléculaire obtenue (minutes) détecté bis-trifluoroacétate du phénylamide de l'acide3-(5,6-diméthyl-1 H-benzo-imidazol- 14. 6 3. 04 387. 28 1 2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4- 14. 6 mg 3. 04 387.28 c]pyridine-6-carboxylique benzylamide de l'acide3-(5,6-diméthyl-1 H- 2 benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro- 1.8 mg 2. 78 401. 29 pyrazolo [3,4-c]pyridine-6-carboxylique bis-trifluoroacétate du (2-chloro-phényl) amide de l'acide3-(5,6-diméthyl-1 H- 3 16 mg 2. 92 421.25 benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7-tétrahydropyrazolo[3,4-c]pyridine-6-carboxylique (3-chloro-phényl)-amide de l'acide3-(5,6 diméthyl-1H-benzoimidazol-2-yl) -2,4,5,7- 4 7. 9 mg 3. 89 421.24 étrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6carboxylique (4-chloro-phényl)-amide de l'acide3-(5,6 diméthyl-1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7- 5 9. 8 mg 3. 36 421.25 étrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6carboxylique bis-trifluoroacétate du butylamide de l'acide3-(5,6-diméthyl-1H-benzoimidazol- 6 2. 4 mg 2. 8 367.31 2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo [3,4c]pyridine-6-carboxylique hiophen-2-ylamide de l'acide3-(5,6 diméthyl-1H-benzoimidazol-2-yl) -2,4,5,7- 7 3. 8 mg 2. 77 393.24 tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridine-6carboxylique bis-trifluoroacétate du (2-methoxy phényl)-amide de l'acide3-(5,6-diméthyl 8 1 H-benzoimidazol-2-yl)-2,4,5,7- 14.4 mg 3. 14 417. 28 étrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6carboxylique bis-trifluoroacétate du o-tolylamide de l'acide3-(5,6-diméthyl-1 H-benzoimidazol- 9 16. 2 mg 2. 68 401.29 2-yl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo [3,4c]pyridine-6-carboxylique Exemple11 :3-(5,6-Diméthyl-1H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H- pyrazolo[3,4-c]pyridine La3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4c]pyridinepeutêtrepréparéedelafaçonsuivante : Aunesolutionde670mgde3-(2-amino-4,5-diméthyl-phénylcarbamoyl)- 2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6-carboxylatedetert-butyledans 9mLdeTHFsontadditionnés9mLd'eauet2. 8mLd'acidetrifluoroacétique. Après2heuresd'agitationà80 C,lemilieuréactionnelestconcentrésous pression réduite. Il est ensuite repris dans de l'eau et le précipité formé est récupéré par filtration sur fritté, lavé avec une solution aqueuse de soude 1 N etséché.Laphaseaqueuseobtenueestalorsextraiteavecdu dichlorométhane,puislaphaseorganiqueestséchéesursulfatede magnésiumetconcentréesouspressionréduite.Lerésiduobtenuetle précipitésontréunispuismisensolutiondansleméthanolavecquelques gouttesdeDMF.CettesolutionestensuitedéposéesurphaseMEGA BE-SCX.LaphaseSCXestensuitelavéeavecduméthanolpuisextraite avecunesolutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lasolutiond'extraction obtenueestalorsconcentréesouspressionréduite. Onobtientainsi46mgde3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinesousformedepoudrebeigedontles caractéristiquessontlessuivantes : El :m/z=267M+ picdebase m/z=238[M - NHCH2]+ m/z=209[M - C3H8N]+. R. M.N.1 H(300MHz,(CD3)zSOd6,#enppm) :2,31et2,32(2s :6Hen totalité) ; 2,81 (t large, J = 5 Hz : 2H) ; 2,92 (t large, J = 5 Hz : 2H) ; 3,83 (s large :2H) ; 7,22(slarge :1 H) ;7,40(slarge :1 H) ;12,28(mf :1 H) ;12,73 (mf :1 H). Exemple12 : Chlorhydratedela3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)- 4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine Lechlorhydratedela3-(5,6-diméthyl-1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinepeutêtrepréparédelafaçonsuivante : Aunesolutionde1. 7gde3-(2-amino-4,5-diméthyl-phénylcarbamoyl)-2,4,5,7tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6-carboxylatedetert-butyledans40mL d'éthanol est additionné 9 mL d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 5N. Après 60 heures d'agitation à 80 C, le milieu réactionnel est ramené à températureambiante.Leprécipitéforméestrécupéréparfiltrationsurfritté etséché.Onobtientainsi1. 04gdechlorhydratedela3-(5,6-diméthyl-1 Hbenzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridinesousforme depoudrebeigedontlescaractéristiquessontlessuivantes : El :m/z=267M+. picdebase m/z=238[M - CH2NH]+ m/z=209[M - C3H8N]+ m/z=36 [HCI]+ R. M.N.1 H(300MHz,(CD3)2SOd6avecajoutdequelquesgouttesde CD3COOD d4,8 en ppm) : 2,40 (s : 6H) ; 3,23 (t large, J = 5,5 Hz : 2H) ; 3,45 (t, J = 5,5 Hz : 2H) ; 4,45 (s : 2H) ; 7,54 (s : 2H). Le 3-(2-amino-4,5-diméthyl-phénylcarbamoyl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo [3,4-c]pyridine-6-carboxylatedetert-butylepeutêtrepréparédelafaçon suivante : A une solution de 3 g de l'acide 2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6- carboxylatedetert-butyle-3-carboxyliquedans50mLdeDMFanhydre,sont additionnés, à température ambiante, 8. 5 g de HBTU ainsi que 2. 9 g de d iiso pro pyléthylamine.Aprèsvingtminutesd'agitationàtempérature ambiante, sont additionnés 3. 06 g de 4,5-diamino-o-xylène. Après 60 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est dilué dans 3 L d'une solution aqueuse de NaHC03 à pH supérieur à 7, contenant 20 g de NaCI. La phase aqueuse est extraite trois fois avec 1 L d'acétate d'éthyle, puislesphasesorganiquesrassembléessontséchéessursulfatede magnésiumetconcentréessouspressionréduite.Lerésidubrutobtenuest reprisdans150mLdedichlorométhaneetl'insolubleestéliminépar filtration surfritté.Lefiltratestalorsconcentrésouspressionréduiteetpurifiépar chromatographie sur silice (20-45 m Amicon) avec un gradient de 50 à 100 %d'acétated'éthyledanslecyclohexane.Lesfractionscontenantle produitrecherchésontréuniesetconcentréessouspressionréduite.On obtient ainsi 4. 37 g de 3-(2-amino-phénylcarbamoyl)-2,4,5,7-tétrahydro- pyrazolo[3,4-c]pyridine-6-carboxylatedetert-butylesousformed'unepoudre beigedontlescaractéristiquessontlessuivantes : El :m/z=385M+. picdebase m/z=329[M - C4H8]+. m/z=312[M - C4H9O]+ m/z=57 [C4H9]+ R.M.N.1H(300MHz,(CD3)2SOd6,8enppm) :1,46(s :9H) ;2,10et2,12(2 s : 3H chacun) ; 2,77 (mt : 2H) ; 3,58 (t, J = 5,5 Hz : 2H) ; 4,53 (s : 2H) ; 4,57 (mf :2H) ;6,60(s :1 H) ;7,14(slarge :1 H) ;9,10(mf :1 H) ;13,08(mf :1H). Exemple13 : Chlorhydratedela3-(1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro- 2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine Lechlorhydratedela3-(1 H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2Hpyrazolo[3,4-c]pyridinepeutêtrepréparédelafaçonsuivante : Aunesolutionde200mgde3-(2-amino-phénylcarbamoyl)-2,4,5,7tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6-carboxylatedetert-butyledans1mL d'éthanolestadditionné2.2mLd'unesolutionaqueused'acidechlorhydrique 5 N. Après 20 heures d'agitation à 80 C, le milieu réactionnel est ramené à températureambiante.L'insolubleestéliminéparfiltrationsurfrittéetlefiltrat estconcentrésouspressionréduite.Onobtientainsi84mgdechlorhydrate dela3-(1H-benzimidazol-2-yl)-4,5,6,7-tétrahydro-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridine sousformedepoudreorangéedontlescaractéristiquessontlessuivantes : LC/MS (Méthode A) : ion moléculaire détecté : 240.26 ; temps de rétention = 1. 68minutes Le3-(2-amino-phénylcarbamoyl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6carboxylatedetert-butylepeutêtrepréparédelafaçonsuivante : Aunesolutionde150mgdel'acide2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4- c]pyridine-6-carboxylate de tert-butyle-3-carboxylique dans 1 mL de DMF anhydre,sontadditionnés,àtempératureambiante,425mgdeHBTUainsi que 145 mg de di isopropyléthyla mine. Après vingt minutes d'agitation à températureambiante,sontadditionnés121mgd'orthophénylènediamine. Après20heuresd'agitationàtempératureambiante,lemilieuréactionnelest diluédans100mLd'eauet50mLd'acétated'éthyle..Laphaseaqueuseest extraitetroisfoisavec50mLd'acétated'éthyle,puislesphasesorganiques rassembléessontséchéessursulfatedemagnésiumetconcentréessous pressionréduite.LerésidubrutobtenuestpurifiéparHPLC(phaseinverse C18Lichroprep12 m)avecungradientlinéairede5à95%d'acétonitrile contenant0,07%(v/v)d'acidetrifluoroacétiquedansl'eaucontenant0,07% (v/v) d'acide trifluoroacétique, à un débit de 10 mL/mn. Les fractions contenantleproduitrecherchésontréuniesetdéposéessurphaseMEGA BE-SCX.LaphaseSCXestensuitelavéeavecduméthanolpuisextraite avecunesolutiond'ammoniac2Mdansleméthanol.Lasolutiond'extraction obtenueestalorsconcentréesouspressionréduite.Onobtientainsi200mg de3-(2-amino-phénylcarbamoyl)-2,4,5,7-tétrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6carboxylatedetert-butylesousformed'unepoudrebeigedontles caractéristiquessontlessuivantes : LC/MS(MéthodeA) :ionmoléculairedétecté :358.34 ;tempsderétention= 3. 19minutes. Mesuresdupotentield'inhibitiondesproduitsàl'encontredel'activité deskinasesTie2etKDR : L'activitéinhibitricedesproduitsàl'encontredeskinasesTie2etKDRest testéeselonlesprotocolesexpérimentauxdécritsci-dessous. 1.Tie2 LaséquencecodantedeTie2humaincorrespondantauxacidesaminésdu domaineintracellulaire776-1124aétégénéréeparPCRenutilisantlecDNA isolédeplacentahumaincommemodèle.Cetteséquenceaétéintroduite dansunvecteurd'expressionbaculoviruspFastBacGTsousformede protéinedefusionGST. L'effetinhibiteurdesmoléculesestdéterminédansuntestde phosphorylationdePLCparTie2enprésencedeGST-Tie2purifiéeàenviron 80%d'homogénéité.LesubstratestcomposédesfragmentsSH2-SH3dela PLCexpriméesousformedeprotéinedefusionGST. L'activitékinasedeTie2estmesuréedansuntamponMOPS20mMpH7.2, contenant10mMMgCl2,10mMMnCl2,1mMDTT,10mMde glycérophosphate.Dansuneplaque96puitsFlashPlatemaintenuesurglace, ondéposeunmélangeréactionnelcomposéde70 ldetamponkinase contenant100ngd'enzymeGST-Tie2parpuits.Ensuite10 ldelamolécule àtesterdiluéedansduDMSOàuneconcentrationde10%maximumsont ajoutés.Pouruneconcentrationdonnée,chaquemesureesteffectuéeen quatreexemplaires.Laréactionestinitiéeenajoutant20 ldesolution contenant 2 g de GST-PLC, 2 M d'ATP froid et 1 Ci d'33P[ATP]. Après 1 heure d'incubation à 37 C, la réaction est stoppée en ajoutant 1 volume (100NI)d'EDTAà200mM.Aprèséliminationdutampond'incubation,les puitssontlavéstroisfoisavec300 ldePBS.Laradioactivitéestmesurée sur unMicroBeta1450Wallac. L'inhibitiondel'activitéTie2estcalculéeetexpriméeenpourcentage d'inhibition par rapport à l'activité contrôle déterminée en l'absence de composé. 2.KDR L'effetinhibiteurdescomposésestdéterminédansuntestde phosphorylationdesubstratparl'enzymeKDRinvitroparunetechniquede scintillation(plaque96puits,NEN). Ledomainecytoplasmiquedel'enzymeKDRhumaineaétéclonésousforme defusionGSTdanslevecteurd'expressionbaculoviruspFastBac.La protéine a été exprimée dans les cellules SF21 et purifiée à environ 60 % d'homogénéité. L'activitékinasedeKDRestmesuréedans20mMMOPS,10mMMgCI2, 10 mM MnCI2, 1 mM DTT, 2. 5 mM EGTA, 10 mM b-glycérophosphate, pH = 7. 2,enprésencede10mMMgCl2,100 MNa3VO4,1mMNaF.10 ldu composé sont ajoutés à 70 l de tampon kinase contenant 100 ng d'enzyme KDRà4 C.Laréactionestlancéeenajoutant20 ldesolutioncontenant 2 gdesubstrat(fragmentSH2-SH3delaPLCyexpriméesousformede protéine de fusion GST), 2 Ci y 33P[ATP] et 2 M ATP froid. Après 1 heure d'incubationà37 C,laréactioneststoppéeenajoutant1volume(100NI)de 200mMEDTA.Letampond'incubationestretiré,etlespuitssontlavéstrois foisavec300 ldePBS.Laradioactivitéestmesuréedanschaquepuitsen utilisantuncompteurderadioactivitéTopCountNXT(Packard). Lebruitdefondestdéterminéparlamesuredelaradioactivitédansquatre puitsdifférentscontenantl'ATPradioactifetlesubstratseul. Uncontrôled'activitétotaleestmesurédansquatrepuitsdifférentscontenant touslesréactifs(y33P-[ATP],KDRetsubstratPLCy)maisenl'absencede composé. L'inhibitiondel'activitéKDRaveclecomposédel'inventionestexpriméeen pourcentaged'inhibitiondel'activitécontrôledéterminéeenl'absencede composé. LecomposéSU5614(Calbiochem)(1 M)estinclusdanschaqueplaque commecontrôled'inhibition. Résultats : Tie2 KDR % Inhib at 10JM (FRX) % Inhib at 10JM Chemistry Assay 1 Assay 2 Assay 1 Assay 2 P-31378-112-3 F r1>--b 78,7 79,1 59,0 56,5 N H N~N H P-31378-112-6 0 ("1 92,7 93,8 71,4 68,0 H r' P-31378-112-9 -. n>-8 82,6 85,9 53,2 45,1 H P-31378-112-14 N '-0 XX N 697 73,8 19,5 13,0 N H fil' N N~N P-31378-112-1 N 83,1 88,1 96,5 96,7 N r 83,1 \ N H P-31378-112-16 0) XXN n>--6 88,7 88,3 90,2 89,1 r, \ NN P-31378-112-5 03 --{oo N r N 87,1 86,4 94,7 95,4 xxi ("1 87,1 86,4 H P-31378-112ë1 u- 90,6 87,9 42,3 287 JJo "'" N H H P-31378-112-7 N H / N 927 92,0 68,6 64,3 )0" 92,0 68,6 P-31378-112-15 #g 0 80,1 83,8 75,5 77,4 ~~~ KDR % Inhib. Tie2 % Inhib. Chemistry 10tjM 10M N NH NH 77,20 "-N Chemistry 2 NH N N-SO 78,10 0 il 78,10 HN-N Chemistry NH 0 N HN-N 25,40 HN-~N /N Chemistry 4 ci N 88,80 HN-N Chemistry N#\ \#N H J rY 2,10 41,2 N Chemistry 6 N H\=/"\ 12,15 48,6 N 15 Chemistry N Cf' 85,45 64,3 Chemistry N I H H N N 15,45 56,7 Chemistry 1 \ ci N NH N CI 79,55 83,9 N=WN-> 79,55 83,9 N Chemistry 10 N N#\ H N 70,35 66,1 70,35 66,1 N Chemistry 11 N H I /N 69,05 60,3 N cis: Chemistry 12 N N#\ \#N H\^ rf" 84,50 41,5 S Chemistry 13 / /N f T 14,85 50,5 Chemistry 14 "YN NB H N rj" 39,30 69,4 Chemistry 15 N H N N-/ -5,75 36,4 N Chemistry 16 N# \ \#N NB -2,90 50,7 fT -2,90 50,7 Chemistry 17 N H"\"\/# -3,70 55,0 Ho Ó Chemistry 18 nu N=()=(~\-/--' 17,90 68,1 N Chemistry 19 N H \#N H N?; 1,65 47,6 N Chemistry 20 1 / lN H N N 1,85 33,0 HN'N'" Chemistry 21 / HCI N 3,65 3,65 24,9 N H Chemistry 22 o s ,p N / N N IN 48 92,5 N Chemistry 23 nu N N-5=O IH4rN4/' 1-0 70,75 91,5 N Chemistry 24 N N / N i H 1 / ~W I N 31,85 89,1 bzz CI 0 Chemistry 25 1 / NH N 11 , 'C~fO 27,75 89,1 CI Chemistry 26 1-SF y-H r"j"# "-1) 22,95 65,4 N-N H Chemistry 27 N \ NH N 's*'o 16,50 78,5 .0 O Chemistry 28 N\il -n NH '-(--=( r \ /-A /'î" ?~ 13 HN-N N-S=O 13,35 47,5 Chemistry 29 N NH HN- '-(~) 15,30 44,2 0 Chemistry 30 ,N N N z / N 45,70 93,2 CI 0 Chemistry 31 N\ NH HN N-'CN\) \ o 46,45 91,5 çrs" CI Chemistry 32 N \ NH HN N \S>0 57,70 95,9 0 F Chemistry 33 N \ NH HN \\ "''Ci 18,15 84,7 \\0 O \ Chemistry 34 NH N N-O-O H \ 27,40 88,8 Chemistry 35 ,N i \ / N N N m N N z N 20,85 84,6 Ô ,SI Chemistry 38 0 N N N\\S N--j, N \ N N 30,90 97,9 Chemistry 39 NH N H rY" 14,40 83,4 O' Chemistry 40 N NI H 72,50 86,3 HN 72,50 86,3 PI Chemistry 41 CI N NH 1 H ~N 52,65 97,4 HN Chemistry 42 0 N NH 10,90 84,4 "A Chemistry 43 0 N NH- N "" 73,05 96,7 z Chemistry 46 -ID-r0 N "H 78,55 87,7 Chemistry 47 ci j NH 41,95 83,8 HN Chemistry 48 H H N# N \ N 12,20 84,8 -;N AyT 12'20 84,8 Chemistry 49 0 i N 74,75 82,4 H Chemistry 50 NH Ni HN\ N 1 38,70 72,9 N N0 Chemistry 51 '0 N HN N 1 29,35 89,3 Chemistry 52 0 --b:w 74,55 92,7 '""S" 74,55 N-N 74,55 92,7 H Chemistry 53 0 N C+ H 11,25 81,3 N Chemistry 54 '0 NH HN\ 1 15,95 65,4 \= l...N/ Chemistry 55 ,9- "J- 46,65 46,65 92,5 Chemistry 56 o -t:çW 75,15 94,6 N-N 75,15 94,6 N-N ' H Chemistry 57 .~~. 0 yy'y-=o N H NIN 27,90 82,3 ~N 27.90 82,3 "~v~ / # H Chemistry 58 HO J'Y VANH 4 =VCK 17,6 33,2 .N 'N 0 N H~~o 17,6 33,2 Chemistry 59 , H N # (. \# r '" Qu 33,55 64,85 HN-O Chemistry 60 N-\ H 3,75 /P 12,7 3,75 U 3 127 3,75 HN A HO F F Chemistry 61 H N#\ ")#N ?J\ 12,85 Lu 12,85 21 HNO Chemistry 62 H N#\ *\#N 23,75 Cr. -0,3 N -0,3 23,75 HNIIIIO ci Chemistry 63 N- - A N--{ 38,5 18 38,5 HOF Ho Chemistry 64 NH N=\ f\ -ol 63,3 85,9 HN-, IN 0 HNN Chemistry 65 1 \ N M#\ N ?1N 0 " J h'N H ' IIIIII F/IF 8,1 18,05 HNIJIIO 0-â Chemistry 67 N#\ \#N N-\- " 6" 1 19,5 19,1 HN' O HO' F/ X IF --à Chemistry 68 N H N; N 18,55 59,3 N Chemistry 69 ex \ " 92,1 65,5 H N#\ 92,1 65,5 cid Chemistry 70 REVENDICATIONS 1. Produitdeformulegénérale(I)suivante : (I) etsestautomères,caractériséenceque : Xestchoisiparmiliaison,CH2,CO,S02,CONH,COO ; R1estchoisiparmialkyle,cycloalkyle,hétérocyclyle,aryle,hétéroaryle, éventuellementsubstitué ; R2 est H ou choisi parmi alkyle, alkylène, cycloalkyle, hétérocyclyle, aryle, hétéroaryle,éventuellementsubstitué ; etencequelessubstituantssontindépendammentchoisisparmiR3,O-R3, halogène,N02,S02-R3,CO-R3,S02NH-R3,CONH-R3,N-(R3)2,NHCO-R3, NHS02-R3,NHCONH-R3,NHS02NH-R3,OCO-R3,COO-R3,OS02-R3, S020-R3,OCONH-R3,OS02NH-R3,danslequelchaqueR3est indépendammentchoisiparmiH,alkyle,cycloalkyle,alcènyle,aryle, hétéroaryle,hétérocyclyle,éventuellementsubstituéparhalogène,aryle, hétéroaryle,OR4,N(R4)2,danslequelchaqueR4estindépendammentchoisi parmiH,C1-C4alkyle. 2. Produitselonlarevendication1,caractériséencequeR1est hérétoaryle,éventuellementsubstitué. 3. Produitselonlarevendication2,caractériséencequeR1estchoisi parmibenzimidazolyle,indolyle,pyrrolyle,éventuellementsubstituépar halogène,R4,O-R4. 4.Produitselonlarevendication3,caractériséencequeR1estchoisi parmibenzimidazol-2-yle,indol-2-yle,pyrrol-2-yle,éventuellementsubstitué parhalogène,R4,O-R4. 5. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé encequeR2estchoisiparmiphényle,pyridyle,thiényle,C1-C4alkyle,C3C7cycloalkyle,éventuellementsubstitué. 6. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé encequeXestchoisiparmiCO,S02. 7.Produitselonl'unequelconquedesrevendicationsprécédentes, caractériséencequ'ilestsousforme : 4)racémique,ou 5)enrichieenunstéréoisomère,ou 6)enrichieenunénantiomère ; etencequ'ilestéventuellementsalifié. 8.Compositionpharmaceutiquecomprenantunproduitselonl'une quelconquedesrevendicationsprécédentes,encombinaisonavecun excipientpharmaceutiquementacceptable. 9. Utilisation d'un produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 oud'unecompositionselonlarevendication8,commeagentmodulant l'activitéd'unekinase. 10.Utilisationselonlarevendication9,danslaquellelakinaseestchoisie parmiTie2etKDR. 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, pour la fabricationd'unmédicamentutilepourtraiterunétatpathologique. 12.Utilisationselonlarevendication11,danslaquellel'étatpathologique estlecancer.