Brevet FR2859102A1 — publié le 20050304

L'invention concerne l'utilisation d'un extrait de Rhodiola crenulata, par voie topique pour augmenter le métabolisme énergétique des tissus cutanés d'un sujet. ETAT DE LA TECHNIQUE Il est connu que cette famille de plantes, aussi appelée Rhodiole, pousse en altitude, en environnement défavorable voire hostile, et qu'elle posséde des propriétés adaptogènes. Les extraits de Rhodiola ont été utilisés par voie orale, sous forme de boissons alcooliques pour de multiples applications: effets sur le système cardio-vasculaire, effets sur la mémoire, effets anti-histaminiques, etc...sans que les effets soient bien étudiés d'un point de vue de la biologie mécanistique. Les effets ont par ailleurs principalement été décrits sur Rhodiola rosea, Rhodiola kirilowii et Rhodio/a sacha/inensis, car Rhodiola crenulata est une plante relativement difficile à trouver, ne pousse que sur les hauts plateaux tibétains et de ce fait, n'a fait l'objet que de très peu d'études à l'heure actuelle. Par ailleurs, des applications cosmétiques sans activité biologique directement démontrée, ont été décrites pour Rhodiola rosea (]P 20 2001048768) ou pour Rhodiola sachalinensis (CN 1306816). Pour finir, des extraits de Rhodiola crenu/ata ont été décrits pour des utilisations par voie orale pour des applications pharmaceutiques en particulier pour augmenter les taux de testostérone et d'oestradiol dans le sang, ou pour favoriser le transport de l'oxygène dans le sang (US 2002/0127285 = US 6,399,116). Il est également décrit dans ce document que le transport efficace d'oxygène permet de réduire la fatigue musculaire en augmentant le taux d'ATP présent dans les fibres musculaires. Ceci permet de réduire la fatigue musculaire. Cependant les études sont restreintes à ce domaine et l'homme de l'art ne peut pas tirer d'enseignement quant à une éventuelle utilisation cosmétique ou dermopharmaceutique des extraits de Rhodio/a crenulata pour augmenter le métabolisme cellulaire des tissus cutanés. A l'heure actuelle de nombreuses recherches sont effectuées, notamment par les spécialistes des tissus cutanés afin de mettre en évidence des solutions permettant de pallier notamment le relâchement du tissu cutané et l'apparition de rides, en utilisant des méthodes généralement assez agressives du type pilling du tissu cutané, afin de faire disparaître les rides de surface et de lutter contre son relâchement. De nombreuses recherches ont également lieu dans le domaine concernant la lutte contre l'acné. A l'identique, de nombreuses recherches ont lieu afin de pallier différents problèmes du tissu cutané, en particulier de la peau, comme la présence de différentes zone de pigmentation. Malgré l'importance de ces recherches, il existe à l'heure actuelle une carence dans les solutions apportées à ces différents problèmes. D'autre part les utilisateurs de produits cosmétiques sont sensibles à l'origine végétale des compositions qu'on leur propose et préfèrent ainsi utiliser des compositions comportant des extraits végétaux. BUTS DE L'INVENTION L'invention vise donc à pallier les carences de l'état de la technique en résolvant les différents problèmes techniques énoncés ci-dessus et ci-25 après. L'invention a pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture de nouvelles compositions topiques permettant d'augmenter le métabolisme énergétique des tissus cutanés d'un sujet, notamment de la peau, dans le but en particulier de réduire, 2859102 3 ralentir ou prévenir l'apparition de rides ou exercer un effet anti-ride, et/ou d'augmenter la plasticité du tissu cutané, et/ou de lutter contre, ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, et/ou de lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné, et/ou d'exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier de la peau, et/ou de favoriser la desquamation du tissu cutané (ou pilling). DESCRIPTION DE L'INVENTION L'ensemble de ces problèmes techniques est résolu pour la première fois d'une manière satisfaisante par l'invention, notamment à l'échelle industrielle et en particulier cosmétique. L'invention concerne, selon un premier aspect, l'utilisation d'un extrait de Rhodiola crenulata pour la fabrication d'une composition topique, pour augmenter le métabolisme énergétique des tissus cutanés d'un sujet. Le métabolisme énergétique des tissus cutanés est avantageusement représenté par le dosage de I'ATP cytosolique. Avantageusement le métabolisme énergétique du tissu cutané peut également être mesuré in situ, par exemple par spectroscopie RMN (Résonance Magnétique Nucléaire), en particulier du phosphore 31. En particulier les variations du métabolisme énergétique de la peau peuvent être déterminées par spectroscopie RMN du phosphore 31 grâce à la mesure des concentrations relatives des principaux métabolites phosphorylés de la peau: phosphate inorganique (Pi), phosphocréatine (PCr) et adénosine tri-phosphate (ATP). Les molécules d'ATP fournissent l'énergie nécessaire aux cellules et aux tissus. La phosphocréatine est une molécule qui constitue une réserve d'énergie immédiatement disponible, chargée de reconstituer les réserves d'ATP consommées lors d'une période d'ischémie cellulaire en fournissant 2859102 4 un groupement phosphate aux molécules d'ADP selon la réaction catalysée par la créatine phosphokinase: L'évolution des rapports PCr/Pi, ATP/Pi, PCr/ATP et PCr/Ptotal sont un reflet du statut énergétique d'un tissu. L'invention elle-même n'est pas limitée à l'analyse particulière permettant de mettre en évidence l'évaluation du métabolisme énergétique, mais les méthodes indiquées ci-dessus sont avantageusement utilisées dans l'invention et fournissent en particulier une rapidité et une précision d'analyse efficaces pour atteindre le but recherché. Selon un mode de réalisation, ledit tissu cutané est la peau. De 15 préférence, ledit tissu cutané est l'épiderme et/ou le derme, en particulier de l'être humain. Avantageusement, cette utilisation permet d'augmenter le métabolisme énergétique des kératinocytes et/ou des fibroblastes. Selon un mode de réalisation, le sujet est un mammifère, en 20 particulier l'être humain. Avantageusement, la composition topique comprend entre 0,01 % et 10 % d'extrait (p/p). Selon un autre mode de réalisation, l'extrait contient la crénulatine, ou au moins un de ses sels ou au moins un de ses dérivés, tel que ses 25 dérivés sous forme acide ou ester. Selon encore un autre mode de réalisation, l'extrait de Rhodiola crenulata est préparé par extraction de préférence des racines, et/ou de la tige basse de la plante, par un solvant, éventuellement suivi d'une étape 2859102 5 de fractionnement permettant d'isoler la ou les fractions actives. Le solvant peut être polaire ou non. Ledit solvant est choisi de préférence parmi le groupe consistant en le pentane, le décane, le cyclohexane, l'hexane, l'éther de pétrole, le monochlorométhane, le dichlorométhane, le chloroforme, l'isopropanol, le propanol, l'acétate d'éthyle, l'éthanol, le méthanol, l'acétone, le butylène glycol, le propylène glycol, le pentylène glycol, le glycérol, l'eau, et un mélange quelconque d'au moins deux de ces solvants, en particulier les mélanges hydroalcooliques ou hydroglycoliques. Avantageusement, l'extrait est purifié. Avantageusement, cette utilisation permet de lutter contre, ou de ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, et/ou d'augmenter la plasticité du tissu cutané, et/ou d'exercer un effet anti-ride, et/ou de lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné, et/ou d'exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier de la peau, et/ou de favoriser la desquamation du tissu cutané (ou pilling). En particulier, la présente invention permet d'accroître la capacité des cellules du tissu cutané de se multiplier, c'est-à-dire d'augmenter la prolifération cellulaire de ces cellules, en particulier des kératinocytes et des fibroblastes. Avantageusement, cette augmentation de la prolifération cellulaire dans l'épiderme permet un renouvellement plus rapide de l'épiderme. Avantageusement, ce renouvellement plus rapide de l'épiderme permet, de modifier la quantité de mélanine présente dans l'épiderme ce qui permet ainsi de modifier la pigmentation du tissu et d'exercer un effet dépigmentant du tissu cutané. Cet effet est notamment utilisé pour éclaircir la peau d'un être humain ou d'un animal. Avantageusement, cette augmentation de la prolifération cellulaire permet, par exemple sur une peau âgée, qui est généralement très fine, 2859102 6 d'épaissir l'épiderme de manière à restituer le rôle d'effet barrière de l'épiderme. Avantageusement, cette augmentation de la prolifération cellulaire permet par exemple dans les cas de peau sèche qui par définition ont du 5 mal à desquamer de favoriser la desquamation. Avantageusement, l'augmentation de la prolifération cellulaire, en particulier des fibroblastes dans le derme permet de densifier ce derme et de restaurer ainsi la plasticité de celui-ci et/ou sa fermeté de manière notamment à exercer un effet anti-ride ou à lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition des rides. Selon un second aspect, l'invention concerne une composition topique comprenant un agent actif pour augmenter le métabolisme énergétique du tissu cutané sur au moins la partie sur laquelle est appliquée ladite composition, ledit agent actif étant un extrait de Rhodio/a crenu/ata, tel que défini précédemment. Avantageusement l'extrait est en mélange avec un excipient acceptable par voie topique, en particulier un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. Pour ces compositions, l'excipient contient par exemple au moins un composé choisi parmi le groupe consistant en les conservateurs, les émollients, les émulsifiants, les tensioactifs, les hydratants, les épaississants, les conditionneurs, les agents matifiant, les stabilisants, les antioxydants, les agents de texture, les agents de brillance, les agents filmogènes, les solubilisants, les pigments, les colorants, les parfums et les filtres solaires. Ces excipients sont de préférence choisis parmi le groupe consistant en les acides aminés et leurs dérivés, les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de Lanoline, les phospholipides, les lactoferrines, les lactoperoxidases, les stabilisants à base de sucrose, les vitamines E et ses dérivés, les cires naturelles et 2859102 7 synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les insaponifiables, les phytosterols, les esters végétaux, les silicones et ses dérivés, les hydrolysats de protéines, l'huile de Jojoba et ses dérivés, les esters Iipo/hydrosolubles, les betaines, les aminoxides, les extraits de plantes les esters de Saccharose, les dioxydes de Titane, les glycines, et les parabens, et encore de préférence parmi le groupe consistant en le butylène glycol, le stéareth-2, le stéareth-21, le glycol-15 stéaryl éther, le cétéaryl alcool, le phénoxyéthanol, le méthylparaben, l'éthylparaben, le propylparaben, le butylparaben, le butylène glycol, les tocophérols naturels, la glycérine, le sodium dihydroxycétyle, l'isopropyl hydroxycétyl éther, le glycol stéarate, le triisononaoine, I'octyl cocoate, le polyacrylamide, l'isoparaffine, le laureth-7, un carbomer, le propylène glycol, le glycérol, le bisabolol, une diméthicone, l'hydroxyde de sodium, le PEG 30-dipolyhydroxystérate, les caprique/caprylique triglycérides, le cétéaryl octanoate, le dibutyl adipate, l'huile de pépin de raisin, l'huile de jojoba, le sulfate de magnésium, l'EDTA, une cyclométhicone, la gomme de xanthane, l'acide citrique, le lauryl sulfate de sodium, les cires et les huiles minérales, l'isostéaryl isostéarate, le dipélargonate de propylène glycol, I'isostéarate de propylène glycol, le PEG 8 Beewax, les glycérides d'huile de coeur de palme hydrogénée, les glycérides d'huile de palme hydrogénée, l'huile de lanoline, l'huile de sésame, le cétyl lactate, le lanoline alcool, l'huile de ricin, le dioxyde de titane, le lactose, le saccharose, le polyéthylène basse densité, une solution isotonique salée. Avantageusement, les compositions précitées sont formulées sous une forme choisie parmi le groupe consistant en une solution, aqueuse ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment en pot ou en tube, notamment un gel douche, un shampoing; un lait; une émulsion, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile- dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée; une lotion, 2859102 8 notamment en flacon de verre, de plastique ou en flacon doseur ou en aérosol; une ampoule; un savon liquide; un pain dermatologique; une pommade; une mousse; un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de bâtonnet, notamment sous forme de rouge à lèvre. Selon un troisième aspect, l'invention concerne un procédé de préparation dudit extrait de Rhodiola crenulata, comprenant la réduction sous forme de poudre d'au moins une partie de la plante Rhodio/a crenulata, de préférence des racines et/ou la tige basse, par exemple par broyage. L'ensemble des méthodes connues par l'homme de l'art peuvent être employées pour effectuer l'extraction. On soumet de façon particulièrement avantageuse la poudre à une extraction en utilisant un solvant ou un mélange de solvants, puis on fait subir éventuellement au produit ainsi obtenu des étapes de fractionnement permettant d'isoler la ou les fractions actives. La ou les fractions actives sont avantageusement filtrées sur un filtre adéquat pour obtenir une matière solide contenant la substance active vis-à-vis du but recherché. De préférence, la poudre est laissée à macérer dans un solvant ou mélange de solvants, par exemple à température ambiante ou à reflux du solvant. Avantageusement, ledit solvant est choisi parmi ceux décrits précédemment. Avantageusement, la substance active obtenue après filtration est mélangée avec au moins un excipient, topiquement acceptable tel que 25 précédemment défini. Avantageusement, l'homme de l'art réalisera la formulation adéquate au but recherché de par ses connaissances techniques. Selon un quatrième aspect, l'invention concerne une méthode de soin cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application topique 2859102 9 sur au moins une partie du tissu cutané d'un sujet de ladite composition comprenant un extrait de Rhodio/a crenulata, pour augmenter le métabolisme énergétique d'au moins la partie du tissu cutané du sujet. Avantageusement, la méthode de soin cosmétique permet de d'exercer un soin choisi parmi le groupe constituant en lutter contre, ou de ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, augmenter la plasticité du tissu cutané, exercer un effet anti-ride ou ralentir ou prévenir l'apparition de rides, lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné, exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier de la peau, et favoriser la desquamation du tissu cutané (ou pilling). Selon un mode de réalisation particulier, la méthode de soin cosmétique permet d'accroître la capacité des cellules du tissu cutané de se multiplier, c'est-à-dire d'augmenter la prolifération cellulaire de ces cellules, en particulier des kératinocytes et/ou des fibroblastes, et donc en particulier d'obtenir les effets décrits précédemment. Avantageusement, le soin cosmétique est effectué sur un sujet en ayant besoin, en particulier en effectuant une étape préalable de sélection desdits sujets vis-à-vis d'une population. Avantageusement, ladite partie du tissu cutané sur laquelle est appliquée la composition, est sélectionnée en fonction du soin à effectuer. Selon un cinquième aspect, l'invention concerne une méthode de traitement thérapeutique comprenant l'application topique sur au moins une partie du tissu cutané d'un sujet d'une quantité thérapeutiquement efficace de ladite composition comprenant un extrait de Rhodio/a crenu/ata, permettant ainsi d'augmenter le métabolisme énergétique d'au moins ladite partie du tissu cutané du sujet. Avantageusement cette méthode de traitement permet d'effectuer un traitement choisi parmi le groupe consistant en lutter contre, ou de ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, augmenter la plasticité lo du tissu cutané, exercer un effet anti-ride ou ralentir ou prévenir l'apparition de rides, lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné, exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier de la peau, et favoriser la desquamation du tissu cutané (ou pilling). Selon un mode de réalisation particulier, la méthode de traitement thérapeutique permet d'accroître la capacité des cellules du tissu cutané de se multiplier, c'est-à-dire d'augmenter la prolifération cellulaire de ces cellules, en particulier des kératinocytes et/ou des fibroblastes, et donc en particulier d'obtenir les effets décrits précédemment. Avantageusement, cette méthode de traitement est effectué sur un sujet ayant besoin de ce traitement, en particulier en effectuant une étape préalable de sélection desdits sujets vis-à-vis d'une population. Avantageusement, ladite partie du tissu cutané sur laquelle est appliquée la composition, est sélectionnée en fonction du traitement à effectuer. De manière générale, le tissu est de préférence la peau ou la muqueuse du sujet. La composition topique de la présente invention permet en particulier d'obtenir un effet local d'augmentation du métabolisme du tissu cutané au niveau de la zone d'application. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la description explicative qui fait référence à des exemples qui sont donnés seulement à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention. Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son 2859102 11 ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité. Ainsi, chaque exemple a une portée générale. D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire, et la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire. EXEMPLES Exemple 1: Préparation d'un extrait de Rhodiola crenulata Un extrait de Rhodiola crenulata a été réalisé à partir des racines coupées, puis broyées en poudre. La poudre obtenue a été mélangée avec de l'éthanol pour obtenir une solution à 10% (p/p) dans de l'éthanol. Cette solution a été portée à reflux. L'extraction a été réalisée pendant 1 heure puis la solution a été mise à température ambiante et a été filtrée, l'éthanol éliminé. Le résultat a été solubilisé à 5% (p/p) dans un mélange eau/glycol 75/25 (p/p) puis ultrafiltré sur filtre céramique à différents seuils de coupure, et enfin filtrée à 0,45pm. Puis, 0,1% de methyl paraben, utilisé comme conservateur, a été rajouté en final en présence ou non d'un gel de xanthane. Exemple 2: Préparation d'un extrait de Rhodiola crenulata Un extrait de Rhodiola crenu/ata a été est réalisé à partir des racines coupées, puis broyées en poudre. La poudre obtenue a été mélangée avec du cyclohexane pour obtenir une solution à 10% (p/p) dans le cyclohexane. Cette solution a été portée à reflux.L'extraction a été réalisée pendant 24 heure puis la solution a été mise à température ambiante et a été filtrée, le cyclohexane éliminé. Le résultat a été 2859102 12 solubilisé à 5% (p/p) dans un mélange eau/glycol 75/25 (p/p) puis ultrafiltré sur filtre céramiques à différents seuils de coupure, et enfin filtrée à 0,45pm. 0,1% de methyl paraben, utilisé comme conservateur a été rajouté en 5 final en présence ou non d'un gel de carbomer. Exemple 3 Préparation d'un extrait de Rhodiola crenulata Un extrait de Rhodio/a crenulata est réalisé à partir des racines coupées, puis broyées en poudre. La poudre obtenue a été mélangée dans un solvant constitué par 75% d'eau et 25% de butylène glycol pour obtenir une solution à 10% (p/p) dans le solvant. La macération a été réalisée pendant 1 nuit à 45 C puis la solution a été ultrafiltrée sur filtre céramiques à différents seuils de coupure, et enfin filtrée à 0,45pm. 0,1% de methyl paraben, utilisé comme conservateur a été rajouté en final en présence ou non d'un gel de cellulose. Exemple 4: Préparation d'un extrait de Rhodiola crenulata Un extrait de Rhodio/a crenulata est réalisé à partir des racines coupées, puis broyées en poudre. La poudre obtenue a été mélangée avec dans un solvant constitué par 75% d'eau et 25% de butylène glycol pour obtenir une solution à 1% (p/p) dans le solvant. La macération est réalisée pendant 1 nuit à 4 C puis la solution est ultrafiltrée sur filtre céramiques a différents seuils de coupure, et enfin filtrée à 0,45pm. 0,1% de methyl paraben, utilisé comme conservateur est rajouté en 25 final en présence ou non d'un gel de xanthane. 2859102 13 Exemple 5 - Etude de cytotoxicité Etude de la Cytotoxicité de l'Extrait de Rhodiola crenulata préparé selon l'exemple 4 sur kératinocytes (dosage au para-nitrophényl phosphate, PNPP). Des kératinocytes humains normaux ont été extraits d'une biopsie abdominale. Ils ont été ensemencés dans des plaques de culture 96 puits. Une fois la confluence atteinte, les cellules étaient incubées dans un milieu de culture seul (témoin) ou contenant 0.01%, 0.1%, 1%, 3%, 5% et 10% de l'Extrait de Rhodio/a Crenulata (p/p) préparé selon l'exemple 4, pendant 24 heures à 37 C dans une atmosphère contenant 5% de CO2. A la fin de la période d'incubation, la viabilité cellulaire était évaluée par un test au PNPP. Ce test permet d'évaluer l'activité des phosphatases acides intracellulaires qui est directement proportionnelle au nombre de cellules viables. 200pl de solution de PNPP (Sigma) à 5mM dans de l'eau déminéralisée contenant 0,1% de triton X100 (Sigma) et 0,1M de sodium acétate (Sigma) à pH 5 sont placés dans chaque puits de culture. Une incubation à 37 C pendant 2 heures est réalisée puis la réaction est stoppée par ajout de NaOH iN (Merck). Une lecture de l'absorbance est réalisée à 405 nm et les résultats sont exprimés en pourcentage de cellules viables par rapport au témoin (sans actif). Tableau I Concentration en Pourcentage de Ecart type Extrait de Rhodio/a viabilité sur crenulata kératinocytes 0,01% 95,9 3,3 0,1% 92,4 5,5 1% 92,2 4,8 2859102 14 3% 84,5 8 5% 79,4 5,9 10% 55,7 5,3 Exemple 6: Evaluation du métabolisme énergétique sur kératinocytes humains en culture de l'extrait obtenu dans l'exemple 4 Mesure des taux d'ATP Cellulaire Des kératinocytes humains normaux sont ensemencés à raison de 15.103 cellules par puits dans des microplaques de 96 puits. Après 72 heures d'incubation à 37 C, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant l'actif à différentes concentrations. Les cellules sont incubées 3 jours consécutifs puis les cellules sont rincées avec du tampon PBS. Le dosage de I'ATP cytosolique est déterminé par une technique de bioluminescence selon la réaction: Luciférine + 02 + Luciférase + ATP -> Oxyluciférine + AMP + PPi + CO2 + Luciférase + Photons Après rinçage au PBS, les kératinocytes sont mis à incuber pendant minutes dans un tampon de perméabilisation contenant de la digitonine. Une solution diluée d'AMR (ATP monitoring reagent Roche Diagnostic) est injectée directement dans les microplaques et l'intensité de lumière émise (RLU total) est mesurée par un luminomètre (Luminoscan, Labsystem). Après une première lecture, les puits de microplaques reçoivent une solution d'hexokinase (Sigma) (système utilisateur d'ATP). Après 10 minutes d'incubation, une seconde mesure de la lumière est effectuée (RLUO) permettant de soustraire la part de luminescence liée à des molécules autres que l'ATP: RLUATp = RLUTotal RLU0 Le taux d'ATP cytosolique est déterminé à partir d'une gamme étalon réalisée avec des concentrations standards d'ATP. Parallèlement à la mesure de l'ATP cytosolique, un dosage des protéines cellulaires est réalisé sur une seconde microplaque par un test au bleu de Coomassie (BioRad Protein Assay). Résultats: Les résultats (taux d'ATP) sont exprimés en pmoles d'ATP/pg de protéines. Le tableau ci-dessous regroupe les valeurs moyennes (N=4). Tableau II Moyenne Ecart Stat* ATP (%) type Témoin 47,86 4,77 n.s. 100% Extrait de Rhodiola Crenulata à 0,1 % 52,68 1,72 n.s. 110% Extrait de Rhodiola Crenulata à 0,5% 54,04 3,44 n.s. 113% Extrait de Rhodiola Crenulata 1 % 62,18 2,68 p 2859102 16 Par contre, une légère diminution (11%) du taux de protéines est enregistrée au niveau des cellules traitées avec l'extrait de Rhodiola crenu/ata à 2% (p/p). Une augmentation dose-dépendante des taux d'ATP est enregistrée au niveau des culture traitées; les différences enregistrées au niveau des essais avec l'Extrait de Rhodio/a crenu/ata à 1% et 2% sont statistiquement significatives (test t de Student). La figure 1 représente le taux d'ATP dans des kératinocytes humains en fonction de différentes concentration s de l'extrait de Rhodio/a 10 Crenulata. Conclusion: Dans les conditions expérimentales décrites ci-dessus, l'extrait de Rhodio/a crenu/ata est capable de stimuler le métabolisme énergétique des kératinocytes humains. En effet, une augmentation dose-dépendante du taux d'ATP cytosolique a été enregistrée dans la gamme des concentrations testées. A la concentration de 2% (p/p), l'extrait de Rhodio/a crenulata est capable d'induire une augmentation de 59% du taux d'ATP des kératinocytes. Exemple 7: Amélioration du métabolisme énergétique du tissu, cutané. La mesure in situ du métabolisme énergétique du tissu cutané a été réalisée en utilisant la spectroscopie RMN (Résonance Magnétique Nucléaire). Le but de cette étude était d'évaluer l'effet d'une formulation contenant 3 % (p/p) de l'extrait de Rhodiola crenu/ata sur le métabolisme énergétique de la peau, dans un test in vivo faisant intervenir des volontaires sains. 16 volontaires sains âgés de plus de 18 ans ont été inclus dans cette étude. Les 16 volontaires sains ont appliqué une 2859102 17 formulation contenant 3 % (p/p) de l'extrait de Rhodiola crenulata deux fois par jour pendant 28 jours sur l'un de leurs avant-bras. Pendant la même période, 8 de ces volontaires appliquaient une formulation placebo sur leur autre avant-bras, alors que l'autre moitié du panel n'appliquait aucun traitement sur ce deuxième avant bras (avant-bras témoins ). Avant et après 28 jours d'applications bi quotidiennes de la formulation àtester, le métabolisme énergétique de la peau de chacun des avant-bras des volontaires a été analysé par spectroscopie RMN. Les variations du métabolisme énergétique de la peau peuvent être déterminées par spectroscopie RMN du phosphore 31 grâce à la mesure des concentrations relatives des principaux métabolites phosphorylés de la peau: phosphate inorganique (Pi), phosphocréatine (PCr) et adénosine triphosphate (ATP). Les molécules d'ATP fournissent l'énergie nécessaire aux cellules et aux tissus. La phosphocréatine est une molécule qui constitue une réserve d'énergie immédiatement disponible, chargée de reconstituer les réserves d'ATP consommées lors d'une période d'ischémie cellulaire en fournissant un groupement phosphate aux molécules d'ADP selon la réaction catalysée par la créatine phosphokinase: L'évolution des rapports PCr/Pi, ATP/Pi, PCr/ATP et PCr/Ptotal sont un reflet du statut énergétique d'un tissu. Les résultats présentés dans la figure ci-dessous montrent que la formulation contenant l'extrait de Rhodio/a crenu/ata était capable, après 28 jours de traitement, d'augmenter significativement le rapport PCr/Ptotal. 2859102 18 Dans le même temps, alors que le rapport PCr/ATP mesuré sur les avant-bras témoins diminuait, celui des avant-bras traités par la formulation contenant l'extrait de Rhodio/a crenulata, augmentait. Cette différence était significative. Aucune amélioration des paramètres mesurés n'a pu être observée sur les avant-bras ayant reçu la formulation placebo, et ce, quel que soit le temps de mesure. La figure 2 représente l'évolution des rapports PCr/Ptotal et PCr/ATP (en %) par rapport à JO (jour 0 = jour d'application de la composition) après 28 jours d'application d'une formulation contenant 3 % de Rhodio/a crenulata. Dans la figure, les symboles utilisés sont: É : significativement différent de JO (p TABLEAU III Rhodiola crenulata Témoin Moyenne 3,72 0,05 Ecart type 4,72 3,14 Evolution du rapport PCr/ATP (en pourcentage) dans les conditions témoin et traité après 28 jours: 2859102 19 TABLEAU IV Rhodiola crenulata Témoin Moyenne 5,83 - 4,17 Ecart type 10,56 4,92 La présente étude a permis de montrer qu'une formulation contenant 3 % (p/p) d'un extrait de Rhodiola crenu/ata est capable in vivo d'améliorer le métabolisme énergétique du tissu cutané. En effet après 28 jours d'applications bi quotidiennes, les résultats obtenus montrent un effet significatif du produit testé sur le métabolisme de la phosphocréatine. Exemple 8: Tests d'innocuité Evaluation de l'acceptation cosmétique d'une préparation contenant le produit de l'invention Les essais de toxicologie ont été réalisés sur l'extrait de Rhodio/a crenu/ata obtenu selon l'exemple 4, utilisé pur, par une évaluation oculaire chez le lapin, par l'étude de l'absence de toxicité anormale par administration orale unique chez le rat et par l'étude du pouvoir sensibilisant sur le cobaye. A) Evaluation de l'irritation primaire cutanée chez le lapin: Les préparations décrites ci-dessus sont appliquées sans dilution à la dose de 0,5 ml sur la peau de 3 lapins selon la méthode préconisée par la directive OCDE concernant l'étude de " l'effet irritant/corrosif aigu sur la peau ". 2859102 20 Les produits sont classés selon les critères définis par l'arrêté du 1/2/1982 publié au JORF du 21/02/82. Les résultats de ces essais, ont permis de conclure que la préparation retenue était classée non irritante pour la peau. B) Evaluation de l'irritation oculaire chez le lapin: Les préparations décrites ci-dessus ont été instillées pure en une seule fois, à raison de 0,lml, dans l'oeil de 3 lapins selon la méthode préconisée par la directive de l'OCDE n 0405 du 24 février 1987 concernant l'étude de " l'effet irritant/corrosif aigu sur les yeux ". Les résultats de ce test permettent de conclure que la préparation peut être considérée comme non irritante pour les yeux, au sens de la directive 91/326 CEE utilisées pures C) Essai sur l'absence de toxicité anormale par administration orale unique chez le rat: Les préparations décrites ont été administrées en une fois par voie orale à la dose de 5g/Kg de poids corporel, à 5 rats mâles et 5 rats femelles selon un protocole inspiré de la directive de l'OCDE n 401 du 24 février 1987 et adapté aux produits cosmétiques. Les DLO et DL50 sont trouvées supérieures à 5000 mg/Kg. La préparation testée n'est donc pas classée parmi les préparations dangereuses par ingestion. D) Evaluation du potentiel de sensibilisation cutanée chez le cobaye: Les préparations décrites sont soumises au test de maximisation décrit par Magnusson et Kligmann, protocole en accord avec la ligne directrice n 406 de l'OCDE. La préparation est classée comme non sensibilisante par contact avec la peau. Dans les exemples suivant, "Produits de l'invention représente les 5 extraits de Rhodio/a crenu/ata selon l'invention et en particulier selon les exemples 1 à 4. Exemple 9: Rouge à lèvre no transfert Utilisation des produits de l'invention dans des formulations cosmétiques 10 ou pharmaceutiques de type émulsion huile dans eau. Formulation 9a: A Eau qsp 100 Butylene Glycol 2 Glycerine 3 Sodium Dihydroxycetyl 2 Phosphate, Isopropyl Hydroxycetyl Ether B Glycol Stearate SE 14 Triisononaoin 5 Octyl Cocoate 6 C Butylene Glycol, 2 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, pH ajusté à 5,5 D Produits de l'invention 0,01 10 0/0 Formulation 9b: Eau qsp 100 Butylene Glycol 2 Glycerine 3 Polyacrylamide, Isoparafin, 2,8 Laureth-7 Butylene Glycol, 2 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben; 2 Phenoxyethanol, Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben 0,5 Butylene Glycol Produits de l'invention 0,01 10 0/0 Formulation 9c: A Carbomer 0,50 Propylene Glycol 3 Glycerol 5 A B D Eau qsp 100 B Octyl Cocoate 5 Bisabolol 0,30 Dimethicone 0,30 C Sodium Hydroxide 1,60 D Phenoxyethanol, 0,50 Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben E Parfum 0,30 F Produits de l'invention 0,01 10 Io Exemple 10: Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type eau dans huile A PEG 30 3 di po ly hyd roxystea rate Capric Triglycerides 3 Cetearyl Octanoate 4 Dibutyl Adipate 3 Grape Seed Oil 1,5 Jojoba Oil 1,5 Phenoxyethanol, 0,5 Methylparaben, B Propylparaben, Butylparaben, 3 Ethylparaben Glycerine Butylene Glycol 3 Magnesium Sulfate 0,5 EDTA 0,05 Eau qsp 100 C Cyclomethicone 1 Dimethicone 1 D Parfum 0,3 E Produits de l'invention 0,01 10 0/0 Exemple 11: Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type shampoing ou gel douche A Xantham Gum 0,8 Eau qsp 100 B Butylene Glycol, 0,5 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben Phenoxyethanol, 0,5 Methylparaben, C Propylparaben, Butylparaben, 0,8 Ethylparaben Citric acid D Sodium Laureth Sulfate 40,0 E Produit de l'invention 0,01 10 Exemple 12: Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de tvae rouge à lèvres et autres produits anhydres A Minerai Wax 17,0 Isostearyl Isostearate 31,5 Propylene Glycol Dipelargonate 2,6 Propylene Glycol Isostearate 1,7 PEG 8 Beewax 3,0 Hydrogenated Palm Kernel Oil 3,4 Glycerides, Hydrogenated Palm Glycerides Lanoline Oil 3,4 Sesame Oil 1,7 Cetyl Lactate 1,7 Minerai Oil, Lanolin Alcohol 3,0 Castor Oil Titanium Dioxide qsp 100 3,9 B 2859102 26 CI 15850:1 0,616 CI 45410:1 0,256 CI 19140:1 0,048 CI 77491 2, 048 C Produits de l'invention 0,01 5 % Exemple 13: Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de gels aqueux (contours de l'oeil, amincissants, 5 etc...) Eau qsp 100 Carbomer 0,5 Butylene Glycol 15 Phenoxyethanol, Methylparaben, 0,5 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Produits de l'invention 0,01 10 0/0 A B REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un extrait de Rhodiola crenulata, pour la fabrication d'une composition topique, pour augmenter le métabolisme énergétique 5 des tissus cutanés d'un sujet. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit tissu cutané est la peau, de préférence, ledit tissu cutané est l'épiderme et/ou le derme, en particulier de l'être humain. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour augmenter le métabolisme énergétique des kératinocytes et/ des fibroblastes. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le sujet est un mammifère, en particulier l'être humain. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition topique comprend entre 0,01 % et 20 10 % d'extrait (p/p). 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait de Rhodio/a crenulata est obtenu par extraction avec un solvant choisi parmi le groupe consistant en le pentane, le décane, le cyclohexane, l'hexane, l'éther de pétrole, le monochlorométhane, le dichlorométhane, le chloroforme, l'isopropanol, le propanol, l'acétate d'éthyle, l'éthanol, le méthanol, l'acétone, le butylène glycol, le propylène glycol, le pentylène glycol, le glycérol, l'eau, et un mélange quelconque d'au moins deux de ces solvants. 2859102 28 7. Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que en particulier le solvant est un mélange hydroalcooliques ou hydroglycoliques. 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait est un extrait des racines, et/ou de la tige basse de Rhodiola crenulata. 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait est obtenu par réduction sous forme de poudre d'au moins une partie de la plante Rhodiola crenulata, de préférence des racines, et/ou de la tige basse de Rhodiola crenulata. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait contient la crénulatine, ou au moins un de ses sels ou au moins un de ses dérivés. 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour lutter contre, ou de ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, et/ou pour augmenter la plasticité du tissu cutané, et/ou pour exercer un effet anti-ride ou ralentir ou prévenir l'apparition de rides, et/ou pour lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné, et/ou pour exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier de la peau, et/ou pour favoriser la desquamation du tissu cutané (ou pilling). 12. Composition topique caractérisée en ce qu'elle comprend un agent actif pour augmenter le métabolisme énergétique du tissu cutané sur au moins la partie sur laquelle est appliquée ladite composition, ledit agent 29 FR 03.10249 du 28-11-03 actif étant un extrait de Rhodio/a Grenu/ata, tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 11. 13. Méthode de soin cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application topique sur au moins une partie du tissu cutané d'un sujet de la composition selon la revendication 12, pour augmenter le métabolisme énergétique d'au moins ladite partie du tissu cutané du sujet. 14. Méthode selon la revendication 13, caractérisée en ce que le soin cosmétique est choisi parmi le groupe consistant lutter contre, ou de ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, augmenter la plasticité du tissu cutané, exercer un effet anti-ride ou ralentir ou prévenir l'apparition de rides, lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné, exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier de la peau, et favoriser la desquamation du tissu cutané (ou pilling). 15. Méthode selon la revendication 13 ou 14, caractérisée en ce qu'elle permet d'accroître la capacité des cellules du tissu cutané de se multiplier, c'est-à-dire d'augmenter la prolifération cellulaire de ces cellules, en particulier des kératinocytes et/ou des fibroblastes.