Brevet FR2853550A1 — publié le 20041015

COMPLEMENT ALIMENTAIRE DESTINE A L'ANIMAL, EN PARTICULIER LA VOLAILLE L'invention concerne un complément alimentaire destiné à l'animal, en particulier la volaille et le gibier à plumes. Elle se rapporte également à l'utilisation dudit complément pour la fabrication d'une composition destinée au traitement préventif ou curatif des pathologies animales, au cours desquelles une présence surnuméraire de parasites flagellés et en particulier du genre Trichomonas et Histomonas est observée. Les flagellés unicellulaires sont des parasites connus pour leur implication dans les troubles digestifs chez l'animal. Ces parasites se manifestent dans de multiples pathologies. Parmi les animaux susceptibles d'être infectés, on distingue tout d'abord les volailles et en particulier les dindes, le gibier à plumes (perdrix et faisans) et plus anecdotiquement le poulet sans pour autant que cette liste soit limitative. Ces animaux développent des pathologies en liaison avec la présence de Trichomonas (Tetratrichomonas gallinarum) ou d'Histomonas (H. meleagridis). Chez la dinde, H. meleagridis est l'agent de la pathologie entérohépatique, communément appelée Histomonose. H melagridis possède un hôte intermédiaire, Heterakis gallinarum et probablement Ascaris galli. Cette pathologie est caractérisée par des diarrhées importantes, une inflammation et une ulcération des caecums et par des lésions hépatiques sur les animaux infectés. Sous sa forme clinique, l'histomonose se traduit par des mortalités importantes et une baisse des performances zootechniques. Sous sa forme subclinique, la présence du parasite modifie l'équilibre de la flore intestinale et entraîne des dysbactérioses, qui se manifestent par des troubles digestifs, en raison d'une quantité anormale de germes pathogènes (Clostridium perfringens, E. coli). Chez le gibier à plumes, la présence de Trichomonas est associée à une pathologie des caecums, la trichomonose. La prévention des pathologies liées à la présence de flagellés chez la volaille est notamment effectuée par administration de Nitro-imidazole et Dimetridazole (DMZ). Cependant le Dimitridazole a été identifié comme potentiellement carcinogène pour le consommateur, de sorte que sa commercialisation est aujourd'hui interdite. Le produit commercialisé sous la marque NIFURSOL restait seul autorisé comme additif antiflagellé mais est interdit depuis le 01/04/2003. Le document WO 00/47069 décrit une composition destinée au traitement des diarrhées sécrétrices de l'humain ou de l'animal contenant un extrait de latex riche en proanthocyanidine avec un extrait de plante, en particulier de cannelle. L'association de proanthocyanidine et de cannelle est plus précisément utilisée dans les pathologies dans lesquelles le Clostridium perfringens est impliqué. Le document JP 05176689 décrit une composition destinée aux animaux non terrestres, en particulier aux poissons, contenant du cinnamaldéhyde. Le document DE 3508875 décrit l'utilisation de différentes huiles essentielles, en particulier de cannelle pour stimuler la réponse immune chez l'animal. Le document FR-A-2 502 906 décrit un additif alimentaire utilisé pour l'engraissement intensif des volailles associant notamment cannelle et citron. Le document GB-A-2 321 783 décrit un complément alimentaire destiné à l'animal, en particulier le cheval, associant molasse, oxyde de calcium et extrait de plantes, en particulier de l'ail. Le problème que se propose de résoudre l'invention est de développer une nouvelle composition susceptible d'inhiber le développement des flagellés, leur propagation (activité sur Heterakis) et de limiter leur incidence sur la flore. Un autre objectif de l'invention est de proposer un produit qui soit efficace dans des quantités les plus faibles possibles. Or, le Demandeur a constaté que de manière tout à fait inattendue, l'association de cinnamaldéhyde encore dénommé trans-cinnamaldéhyde et de thiosulfinates en présence éventuellement de limonène inhibaient le développement, chez l'animal, des parasites du genre trichomonas et histomonas. L'invention a donc pour objet un complément alimentaire destiné à l'animal, qui se caractérise en ce qu'il contient du cinnamaldéhyde et des thiosulfinates. De manière connue, les thiosulfinates répondent à la formule RS20R'. On utilise avantageusement mais de manière non limitative les thiosulfinates choisis dans le groupe comprenant le diallyl sulfide, le diallyl disulfide, le diallyl trisulfide, le 5-alkyl-cystéine, le 5 alkyl-mercapto-cystéine, l'alliine, seuls ou en mélange. Dans un mode de réalisation avantageux, le complément alimentaire de l'invention contient en outre du limonène. Bien entendu, le cinnamaldéhyde, le limonène et les thiosulfinate peuvent être obtenus par synthèse, mais également à partir d'un extrait végétal. Ainsi le cinnamaldéhyde peut être utilisé sous la forme d'un extrait de feuilles de cannelle de Chine, connue sous la dénomination latine Cinnamomum aromaticum Nees ou de la cannelle connue sous la dénomination cinnamomum ceylani. De même, les thiosulfinates peuvent être utilisés sous la forme d'un extrait, notamment de bulbe d'ail (Allium sativum) ou de bulbe d'oignon. L'extrait peut résulter du broyage du bulbe et se présenter sous forme solide, en poudre après séchage ou, sous forme liquide après dissolution en milieu aqueux de ladite poudre. Lorsqu'on utilise directement l'extrait d'ail sous forme de poudre, en tant que source de thiosulfinate, l'extrait représente de 20 à 50 % en poids de la composition lorsque celle-ci se présente sous forme solide. Lorsque l'extrait se présente sous forme d'une solution aqueuse, ledit extrait représente entre 0,1 et 5 % de la composition lorsqu'elle se présente elle même sous forme liquide. Enfin, le limonène peut être utilisé sous la forme d'un extrait de péricarpe de citron (Citrus limon). Pour obtenir un extrait le plus concentré possible en cinnamaldéhyde, limonène ou thiosulfinates, les extraits peuvent se présenter sous la forme d'huile essentielle. En effet, l'huile essentielle de cannelle contient entre 50 et 90 % en poids de cinnamaldéhyde, avantageusement entre 70 et 85 % en poids. Ladite huile essentielle contient en outre du méthoxycinnamaldéhyde, en pratique à raison de 20% en poids. L'huile essentielle d'ail contient quant à elle entre 60 et 90 % de dérivés thiosulfinates. Elle est en pratique utilisée dans la composition de l'invention lorsque cette dernière se présente sous la forme solide, éventuellement en présence d'un extrait de bulbe, sous forme de poudre. L'huile essentielle de Citron contient entre 60 et 75 % en poids de limonène. Ladite huile essentielle contient en outre du ss pinène, en pratique à raison de 10% en poids. Bien entendu, les huiles essentielles citées peuvent être obtenues par toutes les techniques connues de l'homme du métier, en particulier par entraînement à la vapeur ou ébullition. Pour rendre les huiles essentielles administrables par voie orale, la préparation de l'invention se présente, selon un premier mode de réalisation, sous forme d'une émulsion stabilisée, dans laquelle les huiles essentielles sont dispersées dans une phase aqueuse en présence d'un agent dispersant. Préférentiellement, l'agent dispersant est un dispersant alimentaire, notamment choisi panni les saponines ou les tweens. Dans ce mode de réalisation, l'huile essentielle de cannelle représente entre 5 et 15 %, avantageusement 10 % en poids de la composition. Avantageusement, l'extrait d'ail se présente sous forme d'une solution aqueuse et représente entre 0,1 et 5 %, avantageusement 1 % en poids de la composition. L'huile essentielle de citron représente entre 0,5 et 5 %, avantageusement 1,7 % en poids de la composition. En pratique, les tweens, quand ils sont utilisés, représentent entre 20 et 40 % en poids de la composition, avantageusement 30 % en poids. S'agissant des saponines, celles-ci représentent en pratique entre 0,5 et 5 %, avantageusement 1,5 % en poids de la composition. Dans un autre mode de réalisation, la préparation se présente sous forme d'une poudre sur laquelle sont adsorbées les huiles essentielles. En pratique, la poudre est constituée de silice ou issue de remoulage, en particulier de blé. S'agissant du bulbe d'ail, celui-ci peut être avantageusement utilisé directement sous forme de poudre bien que l'huile essentielle reste une solution alternative, seule ou en combinaison avec l'extrait de bulbe. Dans ce mode de réalisation, l'huile essentielle de cannelle représente entre 3 et 15 %, avantageusement 7 % en poids de la composition. L'extrait de bulbe d'ail, sous forme de poudre représente entre 30 et 50 %, avantageusement 40 % en poids de la composition. L'huile essentielle de citron représente entre 0,1 et 5 %, avantageusement 1 % en poids de la composition. Dans une alternative, la composition contient un extrait de bulbe d'ail sous forme de poudre et d'huile essentielle. Dans un troisième mode de réalisation, les huiles essentielles peuvent être microencapsulées, en particulier par des (3 3-cyclodextrines, procédé conduisant cependant à augmenter de manière importante le coût de la préparation. La préparation est administrée comme déjà dit par voie orale. Elle peut être incorporée soit dans l'alimentation soit dans l'eau de boisson. Dès lors, l'invention a également pour objet un aliment ou une eau de boisson destinés à l'animal, incorporant le complément alimentaire ci-avant décrit. Lorsqu'il s'agit d'une eau de boisson, la préparation sous forme d'émulsion, est incorporée a raison de 0,1 a 3 ml, avantageusement de 0,35 à 2 ml par litre d'eau de boisson. Comme déjà dit, la préparation peut être utilisée dans toutes les pathologies animales dans lesquelles les parasites flagellés, en particulier H. meleagridis et T. gallinarum, sont impliqués. Dès lors l'invention concerne également l'utilisation du complément alimentaire pour la fabrication d'une composition destinée au traitement préventif ou curatif des pathologies animales au cours desquelles une présence surnuméraire des parasites flagellés, en particulier H. meleagridis et T. gallinarum est observée. En pratique, les pathologies et animaux concernés par la préparation de l'invention comprennent les histomonoses et trichomonoses se développant chez les volailles (en particulier, les dindes, poulets, pintades) et chez le gibier à plumes. Lorsque la source de cinnamaldéhyde, limonène et thiosulfinate est constituée d'huiles essentielles et que la préparation est utilisée dans le cadre d'un traitement préventif, la quantité d'huile essentielle totale administrée est comprise entre 30-100 ppm dans l'aliment et 50-200 ppm dans l'eau de boisson. En revanche, lorsqu'il s'agit d'un traitement curatif, la quantité d'huile essentielle totale administrée est comprise entre 100 et 300 ppm dans l'aliment et 100 à 300 ppm dans l'eau de boisson. Le Demandeur a par ailleurs constaté que le cinnamaldéhyde, le limonène ou les thiosulfinates pris séparément avaient, à eux seuls, une action sur les parasites flagellés. En d'autres tenues, l'invention concerne également l'utilisation de cinnamaldéhyde, limonène ou thiosulfinates pris séparément, pour la préparation d'une composition destinée au traitement préventif ou curatif des pathologies animales au cours desquelles une présence surnuméraire de parasites flagellés, en particulier du germe Trichomonas et Histomonas est observée. L'invention et les avantages qui en découlent ressortent bien des exemples de réalisation suivants. Figure 1 : Effets de diverses concentrations d'huile essentielle de cannelle (C. aromaticum), de citron (C. limon) et d'ail (A sativum) sur la viabilité du T. gallinarum. Les données exprimées comme la moyenne +/- #. Les correspondances des séries de dilutions aux concentrations sont les suivantes : 1 = 2 y /ml, 2 = 1 t /ml, 3 = 0,5 l. /ml, 4 = 0,25 , hnl, 5 = 0,125 y hnl, 6 = 0,0625 ,u /ml, 7 = 0,030 cl hul, 8 = 0,016 y hul, 9 = 0,008 pal /ml, 10 = 0,004 u /ml, 11 = 0,002 /ml et 12 = 0,001 /ml. Figure 2 : Effets de diverses concentrations en mélange de 50 :50 2 huiles différentes choisies parmi la Cannelle, le citron et l'ail, sur la viabilité du T gallinarum. Les données exprimées comme la moyenne +/- #. Les correspondances des séries de dilutions aux concentrations sont les suivantes : 1 = 2 /ml, 2 = 1 /ml, 3 = 0,5 /ml, 4 = 0,25 /ml, 5 = 0,125 /ml, 6 = 0,0625 1 /ml, 7 = 0,030 y /ml, 8 = 0,016 , hul, 9 = 0,008 y hul, 10 = 0,004 /ml, 11 = 0,002 /ml et 12 = 0,001 /ml. Figure 3 : Effets de diverses concentrations d'huiles essentielles de cannelle, de citron et d'ail sur la viabilité des H. meleagridis. Les données exprimées comme la moyenne +/- #. (Do = jour 0, D1= jour 1 et D2 = day2). EXEMPLE 1 Dans cet exemple, on étudie l'activite inhibitrice de 3 huiles essentielles sur Tetratrichomonas gallinarum et Histomonas meleagridis. Le Demandeur a testé l'activité in vitro de trois huiles essentielles obtenues à partir de feuilles de cannelle (Cinnamomum aromaticum) (A) (fig 1), de péricarpe de Citron (Citrus limon) (B) (fig l)et de bulbes d'ail (Allium sativum) (C) (fig 1), contre les deux parasites de volailles cités précédemment. On également été testés les mélanges A/B(fig 2 + 3), A/C (uniquement sur Tetratrichomonas gallinarum) fig 2, B/C (fig 2) (uniquement sur Tetratrichomonas gallinarum et) et A/B/C (uniquement surHistomonas meleagridis.) (fig 3). Matériel et méthode Les huiles essentielles ont été obtenues par hydrodistillation à partir des feuilles de cannelle, du bulbe d'ail et du pressage à froid de péricarpe de Citron. Les huiles essentielles de cannelle et de citron ont été analysées à l'aide d'un appareil de Chromatographie en Phase Gazeuse (HP-INNOWax, Hewlett Packard) équipé d'une colonne de 60.0 m, 320 m de diamètre et d'un film nominal de 0.50 m d'épaisseur, et d'un détecteur à ionisation de flamme. La température du four varie de 100 C à 220 C à raison de 1.5 C/mn et avec un split ratio de 1:100. Le temps d'élution est de 95 mn. L'huile essentielle d'ail a été analysée avec un appareil HPINNOWax instrument (Hewlett Packard) équipé d'une colonne silice capillaire (25 m, 0. 32 mm i.d., 0.33 d'épaisseur). L'identification des composants a été déterminée à partir de standards et en fonction des temps de rétention respectif. La composition des huiles utilisées est décrite dans le tableau 1. Huile de Cimiamomum l1Y0111LItlCllll! Huile de Citrus limon Huile de Allitun sativam Composé!' Composition Composés Composition Composés Composition (% du poids total) ~~~ (% du poids total) (% du poids total) -1-iatis-ciiii3aiiialLIeliyde 79,40 Limonène 71,10 Diallyl ti-istilfide 49,8 Eugenol 1,40 , Pinène 9,50 Diallyi disultide 29,8 Lmatol 1,20 Terpmène 8,10 Diallyl sulfide 1,3 Coumartne 0,40 . P-cymène 1,40 Limonène 1,2 Terpinéol Traces , Allyl-méthyl disulfide 0,9 Tableau 1 : composition chimique des constituants principaux d'huiles essentielles de cannelle (Cinl1aIllOI1lUl/1 aromaticul1l), de citron (Citrus limon) et d'ail (Allutm sativum) Souches de parasites La souche T. gallinarum a été isolée en Tchécoslovaquie à partir des caecums d'un canard et cultivée en milieu axénique, Tripticase-Yeast-Maltose media (TYM, pH 7.2), 10 % horse sérum at 37 C inactivé à la chaleur. La souche de H. meleagridis HmBR-a strain a été isolée à partir des fèces d'un poulet infecté oralement par Heterakis gallinarum, qui avait développé des signes d'histomonose. Le parasite et sa flore d'accompagnement ont été cultivés en milieu anaérobique à 39 C sur un milieu Stepkowski (20). Culture de T. gallinarum 2 ml d'aliquots de culture de T gallinarum (5.10 4 parasites/ml) ont été incubés en conditions anaérobies pendant 24 h à 37 C. Pendant ce temps, 12 dilutions des compositions A, B, C ont été préparées dans des plaques en U à 96 puits (Prolabo, Lyon, France), hydrodispersées avec du Tween 80 (Sigma, L'Isle d'Abeau, France). La dilution initiale était 4 % ; puis100 l de chaque ont été ajoutés au tube de culture, de sorte que les dilutions de chacune des compositions se soient étendues de 2 /ml à 0,001 /ml. Après 24 h d'incubation, la plus basse dilution de composition dans laquelle on a observé aucun parasite actif a été définie comme concentration léthale minimum (CLM). Puis, le nombre de parasites dans chaque tube de culture a été estimé à l'aide d'une cellule de Malassez (Polylabo, Strasbourg, France). Le témoin négatif contient une dilution de 0,2% de Tween 80 (2 l/ml) (sigma) et le témoin positif contient du dimetridazole à 400 l/ml. L'activité des mélanges A/B, A/C, B/C a été évaluée en utilisant la même méthode avec une première dilution de 2 l/ml d'un mélange de 50 :50 2 huiles différentes. Culture de H. meleagridis L'activité in vitro de chaque huile A, B, C contre des meleagridis de H. a été évaluée en utilisant une technique semblable. Brièvement, 2 aliquots d'un millilitre de ce parasite ont été incubées en conditions anaérobies avec une concentration de 106 parasites/ml. 4 dilutions de chaque huile ont été préparées comme décrit ci-dessus et supplémentaires à la culture de parasite afin d'obtenir des dilutions finales s'étendant de 2 tl/ml à 0,25 l/ml. Après incubation pendant 24 et 48 h, le nombre de parasites actifs dans chaque culture a été estimé par coloration au bleu de trypan à 0,4 % (technique Gibco BRL, Cergy Pontoise, France). La plus basse dilution d'huile dans laquelle on a observé aucun parasite actif a été définie comme la concentration léthale minimum (CLM). Les mélanges de 2 huiles (C. Aromaticum et C. Limon) aux proportions d'un 50 :50 de 3 huiles (C. Aromaticum, C. Limom et A. Sativum) aux proportions d'un 50:30:20 ont été également examinés contre les histomonas. Résultats des essais Comme le montrent les figures, l'ensemble des huiles essentielles utilisées prises seules ou en combinaison inhibent le développement de T. gallinarum et H. meleagridis, avec une efficacité supérieure lorsque les trois huiles essentielle de cannelle, ail et citron sont utilisées ensemble (figure3). REVENDICATIONS 1/ Complément alimentaire destiné à l'animal, caractérisé en ce qu'il contient du cinnamaldéhyde et des thiosulfinates. 2/ Complément alimentaire selon la revendication 1, caractérisé en ce que les thiosulfinates sont choisis dans le groupe comprenant le diallyl sulfide, le diallyl disulfide, le diallyl trisulfide, le 5-alkyl-cystéine, le 5-alkyl-mercapto-cystéine, l'alléine, seuls ou en mélange. 3/ Complément alimentaire selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient en outre du limonène. 4/ Complément alimentaire selon la revendication 1, caractérisé en ce que le cinnamaldéhyde se présente sous la forme d'un extrait de feuille de cannelle. 5/ Complément alimentaire selon la revendication 1, caractérisé en ce que les thiosulfinates se présentent sous la forme d'un extrait de bulbe d'ail. 6/ Complément alimentaire selon la revendication 1, caractérisé en ce que le limonène se présente sous la forme d'un extrait de péricarpe de citron. 7/ Complément alimentaire selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'extrait de feuille de cannelle se présente sous la forme d'une huile essentielle de cannelle. 8/ Complément alimentaire selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'extrait de bulbe d'ail se présente sous la forme d'une huile essentielle ou sous la forme de poudre après broyage du bulbe puis séchage, ou sous la forme de solution aqueuse après dissolution de la poudre dans l'eau. 9/ Complément alimentaire selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'extrait de péricarpe de citron se présente sous la forme d'une huile essentielle de citron. 10/ Complément alimentaire selon la revendication 5, caractérisé en ce que, lorsqu'il se présente sous la forme d'une émulsion, l'huile essentielle de cannelle représente entre 5 et 15 % en poids de la composition. 11/ Complément alimentaire selon la revendication 6, caractérisé en ce que, lorsqu'il se présente sous la forme d'une émulsion, l'extrait de bulbe d'ail se présente sous forme d'une solution aqueuse et représente entre 0,1 et 5 % en poids de la composition. 12/ Complément alimentaire selon la revendication 7, caractérisé en ce que lorsque, lorsqu'il se présente sous la forme d'une émulsion, l'huile essentielle de citron représente entre 0,5 et 5 % en poids de la composition. 13/ Complément alimentaire selon la revendication 4, caractérisé en ce que, lorsqu'il se présente sous la forme d'une poudre, l'huile essentielle de cannelle représente entre 3 et 15% en poids de la composition. 14/ Complément alimentaire selon la revendication 5, caractérisé en ce que, lorsqu'il se présente sous la forme d'une poudre, l'extrait de bulbe d'ail sous forme de poudre représente entre 30 et 50 % en poids de la composition. 15/ Complément alimentaire selon la revendication 6, caractérisé en ce que lorsque, lorsqu'il se présente sous la forme d'une poudre, l'huile essentielle de citron représente entre 0,1 et 5 % en poids de la composition. 16/ Aliment ou une eau de boisson destiné à l'animal, incorporant le complément alimentaire objet de l'une des revendications 1 à 15. 17/ Utilisation du complément alimentaire objet de l'une des revendication 1 à 15 pour la fabrication d'une composition destinée au traitement préventif ou curatif des pathologies animales au cours desquelles une présence surnuméraire des parasites flagellés, en particulier H. meleagridis et T. gallinarum est observée. DEPOSANT : PHYTOSYNTHESE MANDATAIRE : CABINET LAURENT ET CHARRAS