Brevet FR2856060A1 — publié le 20041217

GROUPEMENT PROTECTEUR CLIVABLE PAR LES ALBUMINES SERIQUES La présente invention concerne un groupement protecteur, notamment de composés bioactifs ou chromogènes, clivable par les albumines sériques. Dans ses développements les plus récents, la protection de composés bioactifs, tels que les drogues ou les hormones, pour donner des prodrogues ou des prohormones, est basée sur le blocage d'une fonction indispensable à l'activité biologique de ces composés et leur activation, par clivage enzymatique du groupement protecteur in vivo. La protection de composés bioactifs permet de : (i) modifier la pharmacocinétique de ces composés, (ii) modifier les propriétés de solubilité et de franchissement des barrières biologiques des composés en question, (iii) libérer les composés uniquement au niveau du site d'action ciblé. Deux types d'approches sont utilisés afin de libérer les composés au niveau d'un site d'action particulier. Dans un premier cas, le clivage enzymatique est réalisé par une enzyme naturellement et spécifiquement présente au site d'action ciblé. C'est le cas notamment des drogues antitumorales modifiées en prodrogue par l'ajout d'un groupement glucuronide (Florent et al., J Med. Chem. (1998) 41:3572-3581 ; Leu et al., J Med. Chem. (1999) 42 :3623-3628). ce cas, une p-glucuronidase, présente en plus grande quantité au niveau des tumeurs, libère la drogue active directement auprès des cellules cancéreuses. Dans un deuxième cas, le clivage enzymatique est réalisé par une activité enzymatique portée par un anticorps ciblant spécifiquement les sites d'actions; souhaités (Syrigos et Epenetos, Anticancer Res. (1999) 19 :605-614). une adaptation de ce procédé, il a été suggéré de protéger une hormone, l'insuline, pour former une proinsuline, et de l'activer par injection d'un anticorps catalytique (Worall et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2001) 98 :13514-13518). Ce procédé d'activation semble toutefois délicat à mettre en #uvre, ne serait-ce que pour des raisons d'immunogénicité de l'anticorps injecté. Jusqu'à présent il n'existe donc pas de système simple permettant d'activer dans le compartiment plasmatique un composé bioactif protégé par des groupements clivables. Un des buts de l'invention est par conséquent de fournir un système simple de protection de composés bioactifs, tels que des drogues ou des hormones, ou de composés chromogènes, par ajout d'un groupement protecteur, pour former notamment des prodrogues ou des prohormones, le groupement protecteur étant clivable in vivo dans le compartiment plasmatique, en particulier grâce à l'action d'albumines sériques, son clivage permettant l'activation des composés auxquels il était lié, et notamment la conversion des prodrogues ou des prohormones, respectivement en drogues et en hormones. Un des buts de l'invention est également de fournir un groupement protecteur susceptible de se lier à des composés bioactifs ou à des composés chromogènes et d'être clivé des composés auxquels il est lié, par l'action catalytique d'albumines sériques, in vivo ou in vitro. Un autre but de l'invention est de fournir des composés bioactifs protégés par le groupement protecteur de l'invention, et notamment des prodrogues ou des prohormones, ainsi que des groupements chromogènes liés au groupement protecteur de l'invention. Enfin, un des buts de l'invention est de fournir un procédé de synthèse du groupement protecteur de l'invention ainsi que des composés résultant de la liaison de ce groupement protecteur à des composés bioactifs ou chromogènes. La présente invention découle de la mise en évidence par les Inventeurs que les albumines sériques catalysent le clivage d'un groupement protecteur dérivé de l'isoxazole. Un des objets de l'invention concerne l'utilisation des composés de formule générale (I) suivante : dans laquelle : # WestOouS; # B est - -H, # ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, # a vaut 0 ou 1 # X est un groupe contenant un hétéroatome, tel que-OH, -SH, -NH2 lorsque a vaut 0, ou -0-, -S-, -NH- lorsque a vaut 1, # A est un groupe de formule suivante : Y m zich- , dans laquelle Y est - -H, - ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, a , dans laquelle n est un entier de 1 à 10 ; # Z est un groupe de formule suivante : dans laquelle J est - H, - ou un groupe de formule suivante : en tant que groupement protecteur clivable. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation des composés susmentionnés en tant que groupement protecteur clivable dans le cadre de la protection de composés bioactifs ou chromogènes, et notamment dans le cadre de la préparation de prodrogues ou de prohormones à partir respectivement de drogues ou d'hormones. Selon un mode de réalisation particulier, le groupement protecteur ci-dessus est clivé suite à l'action d'albumines sériques, in vitro ou in vivo, notamment dans un organisme humain ou animal. On désigne par groupement protecteur un groupement chimique capable de se lier de manière covalente à une fonction ayant une réactivité chimique et/ou un rôle biologique et de masquer ainsi sa réactivité chimique et/ou son rôle biologique. On désigne par composé bioactif un composé susceptible de provoquer un effet chez un être vivant auquel il a été administré. On désigne par composé chromogène un composé présentant des propriétés d'absorption et/ou d'émission de lumière dans le domaine de l'ultraviolet, du visible ou de l'infrarouge. On désigne par prohormone une forme substantiellement inactive d'une hormone, pouvant générer une forme active de ladite hormone, suite à un traitement chimique ou enzymatique in vitro ou in vivo. On désigne par prodrogue une forme substantiellement inactive d'une drogue, pouvant générer une forme active de ladite drogue, suite à un traitement chimique ou enzymatique in vitro ou in vivo. On désigne par albumine sérique ou sérum albumine une protéine de la classe des albumines présente de manière majoritaire dans le plasma sanguin et dont le poids moléculaire est d'environ 66,5 kD. De manière avantageuse le choix de A et de B permet de moduler la solubilité du composé (I). A partir d'un composé de fomule (I) donné il est possible d'augmenter la solubilité dudit composé en raccourcissant le groupe alkyle de A et/ou B, et/ou en augmentant le nombre de substituants oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés dudit groupe alkyle de A et/ou B. A contrario il est possible de diminuer la solubilité du composé (I) en augmentant la taille du groupe alkyle de A et/ou B, et/ou en diminuant le nombre de substituants oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés dudit groupe alkyle de A et/ou B. Le choix de A et de B permet également de moduler la vitesse de libération du composé bioactif ou chromogène. A partir d'un composé de formule (I) donné, il est possible de diminuer la vitesse de libération du composé bioactif ou chromogène en augmentant la taille du groupe alkyle de A et/ou B, et/ou en augmentant le nombre de substituants oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés dudit groupe alkyle de A et/ou B. A contrario il est possible d'augmenter la vitesse de libération du composé bioactif ou chromogène en diminuant la taille du groupe alkyle de A et/ou B, et/ou en diminuant le nombre de substituants oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés dudit groupe alkyle de A et/ou B. Le choix de la valeur de n du composé de formule (I) permet de moduler l'accessibilité dudit composé aux albumines sériques en fonction de la taille des composés bioactifs ou chromogènes protégés. De manière avantageuse plus la taille des composés bioactifs ou chromogènes est importante plus la valeur de n peut être choisie grande. La nature du groupement X permet de varier les fonctions des composés bioactifs et chromogènes pouvant être protégées par les composés de formule (I) tels que notamment -OH, -NH2 ou -SH2. Le groupement Z est un groupement espaceur clivable capable de se lier aux composés bioactifs ou chromogènes, notamment sur des fonctions -NH2, après activation du groupement : en particulier par le chloroformiate de paranitrophénol pour former le groupement : Avantageusement le groupement Z se clive spontanément suite à l'action des sérums albumines ; par ailleurs il renforce l'affinité du groupement protecteur isoxazole pour le site actif des albumines sériques. L'invention concerne en particulier l'utilisation susmentionnée des composés de formule générale (II) suivante : dans laquelle X représente -OH, -NH2 ou-SH. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée du composé de formule (III) suivante : Selon un autre mode de réalisation l'invention concerne l'utilisation des composés de formules I, II et III, pour la préparation de composés répondant respectivement à l'une des formules suivantes : dans lesquelles W, B, A, a et X sont tels que définis ci-dessus, R est un groupement bioactif ou chromogène et Z répond à la formule suivante : L'invention est notamment caractérisée en ce que le groupement R est un groupement bioactif, notamment choisi parmi une drogue telle que : - un anticancéreux, tel que la daunorubicine, - un antiviral, - un antibactérien, - un antifongique, - un agent chélatant, tel que la défériprone, ou une hormone, telle que l'insuline ou l'oestradiol. Les drogues ou les hormones choisies sont en particulier actives dans le sang, le plasma ou la lymphe, elles ciblent notamment la surface extracellulaire de la membrane cytoplasmique des cellules de l'organisme. On désigne par groupement chélatant un groupement chimique capable de former un complexe de coordination stable avec un ion métallique et ainsi de dissimuler les propriétés dudit ion métallique. La défériprone correspond la formule suivante : Óe" R2 Ri Ri : CH3, (CH2hOH, (CHz)30H R2 CH3, CH2CH3 La présente invention est notamment caractérisée en ce que le groupement chromogène est le paranitrophénol ou un groupement fluorescent tel que l'umbelliferone. On désigne par groupement fluorescent un groupement chimique capable d'émettre des photons suite à un phénomène d'absorption électronique. L'umbelliferone correspond notamment à la 4-méthylumbelliferone, de formule suivante : L'invention a également pour objet les composés de formule générale (I) suivante : dans laquelle : # WestOouS; # B est # -H, # ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, # a vaut 0 ou 1, # X est un groupe contenant un hétéroatome, tel que-OH, -SH, -NH2 lorsque a vaut 0, ou -0-, -S-, -NH- lorsque a vaut 1, # A est un groupe de formule suivante : Y #" pu dans laquelle Y est - -H, - ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, ' , dans laquelle n est un entier de 1 à 10 ; # Z est un groupe de formule suivante : dans laquelle J est - H, - ou un groupe de formule suivante : à l'exclusion du composé de formule (III) suivante : L'invention concerne en particulier les composés de formule générale (II) suivante : dans laquelle X est-SH ou -NH2. L'invention a également pour objet les composés de formule générale (IV) suivante : dans laquelle : # WestOouS; # B est # -H, # ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, # a vaut 0 ou 1, # X est un groupe contenant un hétéroatome, tel que -O-, -S-, -NH-, # A est un groupe de formule suivante : Y " , dans laquelle Y est - -H, - ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, a ,dans laquelle n est un entier de 1 à 10 ; # Z est un groupe de formule suivante : # R est un groupement bioactifou chromogène. L'invention concerne en particulier les composés de formule générale (V) suivante : @ V dans laquelle X et R sont tels que définis ci-dessus. L'invention concerne plus particulièrement le composé de formule (VI) suivante : dans laquelle R est tel que défini ci-dessus. La présente invention concerne notamment un composé de formule IV, V ou VI, dans laquelle R est un groupement bioactif choisi parmi une drogue telle que : - un anticancéreux, tel que la daunorubicine, - un antiviral, - un antibactérien, - un antifongique, - un agent chélatant, tel que la défériprone, ou une hormone, telle que l'insuline ou l'oestradiol. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un composé ci-dessus, en tant que prodrogue ou prohormone. L'invention concerne également un composé de formule IV, V ou VI, dans laquelle le groupement chromogène est le paranitrophénol ou un groupement fluorescent tel que l'umbelliferone. Selon un mode de réalisation particulier l'invention concerne un composé de formule (VII) suivante : L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, tel que par exemple du carbonate de calcium, du phosphate de calcium, des sucres, tels que le lactose, ou des dérivés d'amidon ou de cellulose, de la gélatine, de l'huile végétale, du polyéthylène glycol, ou tout autre véhicule classiquement utilisé par l'homme de l'art. L'invention concerne en particulier une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle est présentée sous une forme convenant pour une administration par voie orale ou par injection. Selon un autre mode de réalisation l'invention concerne l'utilisation d'un composé de formule IV, V, ou VI, le groupement chromogène étant en particulier le paranitrophénol ou un groupement fluorescent tel que l'umbelliferone, et notamment du composé de formule VII, pour le dosage de la sérum albumine dans des échantillons biologiques tels que le sang, le plasma, le sérum ou l'urine. Selon un mode de réalisation particulier l'invention concerne un procédé de dosage de la sérum albumine dans des échantillons biologiques, comprenant les étapes suivantes : ajouter le composé de formule VII, à un échantillon biologique dont on souhaite déterminer la concentration en sérum albumine, à une concentration d'environ 50 à 200 mol.L-1, - incuber ledit échantillon biologique auquel a été ajouté ledit composé, à une température d'environ 20 C à 37 C, durant environ 20 à 60 min, - mesurer l'absorbance dudit échantillon biologique auquel a été ajouté ledit composé, après incubation, à une longueur d'onde d'environ 405 nm, - comparer la valeur d'absorbance obtenue à celles d'une gamme étalon de sérum albumine, afin de déterminer la concentration en sérum albumine de l'échantillon biologique de départ. On désigne par gamme étalon une série de solutions dont la concentration en sérum albumine est connue, la concentration en sérum albumine desdites solutions étant avantageusement comprise entre environ 0,05 g/L et 0,6 g/L. Les échantillons biologiques sont notamment du sang, du plasma, du sérum ou de l'urine. Selon un mode de réalisation préféré le procédé de dosage ci-dessus est effectué à pH 10. Selon un autre mode de réalisation préféré du procédé de dosage ci-dessus, le composé de formule VII est remplacé par un composé de formule VI dans lequel le groupement chromogène est un groupement fluorescent tel que l'umbelliferone. Avantageusement le procédé de dosage de la sérum albumine est automatisable. L'invention concerne un procédé de synthèse du composé de formule suivante ou du composé de formule suivante : dans lesquelles B, Z, R et a sont tels que définis ci-dessus, comprenant les étapes suivantes : - traitement du composé de formule (a) : par du chlorhydrate d'hydroxylamine, notamment dans du méthanol à chaud, pour former le composé de formule (ss) : - traitement du composé de formule (ss) par de l'acide chlorhydrique concentré, notamment dans de l'acide acétique, pour former le composé de formule ([gamma]) : - traitement du composé de formule ([gamma]) par du chloroformiate d'éthyle, notamment en présence de triéthylamine dans du tétrahydrofurane, pour former le composé de formule (#) : - traitement du composé de formule (#) par du borohydrure de sodium, notamment dans un mélange eau/tétrahydrofurane en proportion 1/9 pour former le composé de formule (#) : - éventuellement traitement du composé de formule (#) par du 4-hydroxyméthylphénol et éventuellement par du chloroformiate de paranitrophénol, pour former le composé de formule (#) : -éventuellement traitement du composé de formule (e) ou du composé de formule () par un groupement R, notamment en présence de N-succinimide, de triphénylphosphine, de diéthylazocarboxylate, dans du tétrahydrofurane, pour former un composé de formule suivante : L'invention concerne également un procédé de synthèse du composé de formule suivante : ou du composé de formule suivante, dans lesquelles B, Z, R et a sont tels que définis ci-dessus, comprenant les étapes suivantes : - traitement du composé de formule (#) : par du thiocyanate d'ammonium pour former le composé de formule (#) : - traitement du composé de formule (#) par du N-bromo-succinimide, du CCl4 et de l'azodlizobutyronitrile pour former le composé de formule (t) : - traitement du composé de formule (t) par de l'eau, du N,N-diméthylformamide ou de l'hydrogénosulfide de sodium pour former un composé de formule (K) : - éventuellement traitement du composé de formule (K) par du 4-hydroxyméthylphénol et éventuellement par du chloroformiate de paranitrophénol, pour former le composé de formule (#) : - éventuellement traitement du composé de formule (K) ou du composé de formule (X) par un groupement R, notamment en présence de N-succinimide, de triphénylphosphine, de diéthylazocarboxylate, dans du tétrahydrofurane, pour former un composé de formule suivante : L'invention concerne également un procédé de synthèse du composé de formule II ou du composé de formule V, comprenant les étapes suivantes : - traitement du propanal par de l'éthanol et du CaCl2 pour former de l'éthyl- acétaldéhyde, - traitement de l'éthyl-acétaldéhyde par de l'acide phosphorique et de la quinoléine pour former de l'éthyl-1-propényl éther, - traitement de l'éthyl-1-propényl ether, par de l'orthoformiate d'éthyl et de l'étherate de trifuoroborane pour former du diethyl-acétaldéhyde, - traitement du diethyl-acétaldéhyde par de l'hydroxylamine et de l'acide sulfurique pour former la 4-méthyl-isoxazole, - traitement de la 4-méthyl-isoxazole par du N-bromo-succinimide, du CCl4 et de l'azodiizobutyronitrile pour former la 4- bromométhyl-isoxazole, - traitement de la 4-bromométhyl-isoxazole par de l'eau, ou de l'azoture de sodium puis de la triphénylphosphine, ou de l'hydrogénosulfide de sodium, pour former un composé de formule II, éventuellement traitement d'un composé de formule II par un groupement R tel que défini ci-dessus, notamment en présence triphényl phosphine, de diéthyl-azodicarboxylate, de N-succinimide et de tétrahydrofurane, pour former un composé de formule V. L'invention concerne également un procédé de synthèse du composé de formule III, du composé de formule VI, ou du composé de formule VII, comprenant les étapes suivantes : - traitement du propanal par de l'éthanol et du CaCl2 pour former de l'éthyl- acétaldéhyde, - traitement de l'éthyl-acétaldéhyde par de l'acide phosphorique et de la quinoléine pour former de l'éthyl-1-propényl éther, - traitement de l'éthyl-1-propényl ether, par de l'orthoformiate d'éthyl et de l'étherate de trifuoroborane pour former du diethyl-acétaldéhyde, - traitement du diethyl-acétaldéhyde par de l'hydroxylamine et de l'acide sulfurique pour former la 4-méthyl-isoxazole, - traitement de la 4-méthyl-isoxazole par du N-bromo-succinimide, du CCl4 et de l'azodiizobutyronitrile pour former la 4- bromométhyl-isoxazole, - traitement de la 4-bromométhyl-isoxazole par de l'eau, pour former le composé de formule III, - éventuellement traitement composé de formule III par un groupement R tel que défini ci-dessus, notamment le 4-para-nitrophénol, notamment en présence triphényl phosphine, de diéthyl-azodicarboxylate, de N-succinimide et de tétrahydrofurane, pour former le composé de formule VI, et notamment le composé de formule VII. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 La figure 1 représente la décomposition du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole par les albumines sériques humaine et bovine in vitro en fonction du temps. L'axe des abscisses correspond au temps, exprimé en minute, l'axe des ordonnées correspond à la densité optique (DO) à 405 nm. Les cinétiques ont été réalisées dans un tampon Tris-HCl 100 mM, pH 9 avec une concentration en 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole de 250 M, la libération du pnitrophénol étant suivie par spectrophotométrie à 405 nm. La courbe correspondant aux triangles noirs représente la décomposition obtenue en présence de sérum albumine humaine (SAH) à la concentration de 10 M, la courbe correspondant aux carrés noirs représente la décomposition obtenue en présence de sérum albumine bovine (SAB) à la concentration de 10 M et la courbe correspondant aux cercles blancs représente la décomposition témoin obtenue en présence de tampon uniquement. Figure 2 La figure 2 représente la mesure de l'efficacité catalytique (kcat/Km) en fonction du pH pour la SAH et la SAB vis-à-vis de la décomposition du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole. L'axe des abscisses représente le pH, l'axe des ordonnées représente la valeur du rapport kcat/Km (x102M-1.min-1). La courbe représentée par des cercles noirs correspond à la SAB et la courbe représentée par ces carrés blancs correspond à la SAH. Figure 3 La figure 3 représente l'inhibition de l'activité catalytique de la, SAB et de la SAH par le nonanoate. L'axe des abscisses représente la concentration en nonanoate (en M), l'axe des ordonnées représente l' activité catalytique résiduelle de la SAB et de la SAH (en pourcentage de l'activité catalytique maximale). La courbe représentée par les carrés blancs correspond à la SAH, la courbe représentée par les cercles noirs correspond à la SAB. Figure 4 La figure 4 représente l'inhibition de l'activité catalytique de la SAB par le pyridoxal phosphate (PLP). L'axe des abscisses représente la concentration en PLP (en mM), l'axe des ordonnées représente l'activité catalytique résiduelle de la SAB (en pourcentage de l'activité catalytique maximale). Figure 5 La figure 5 représente l'inhibition de l'activité de décomposition du 4-(pnitrophénoxy) méthyl-isoxazole du sérum humain par le nonanoate. L'axe des abscisses représente le temps en minutes, l'axe des ordonnées représente la DO à 405 nm. La courbe représentée par des carrés noirs correspond à la cinétique de décomposition du 4-(pnitrophénoxy)méthyl-isoxazole par du sérum humain, la courbe représentée par des cercles blancs correspond à la cinétique de décomposition du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole par du sérum humain en présence de nonanoate (6 mM). EXEMPLES Exemple 1 Synthèse du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole Le 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole a été synthétisé selon le schéma réactionnel suivant : Brièvement, les réactions suivantes ont été effectuées : - réaction a : du propanal (1) (22 mL, 0,30 mol) a été ajouté goutte à goutte à une solution de CaCl2 (2,79 g, 25 mmol, 0,09 équivalents (éq.)) dans 34 mL d'éthanol (0,58 mol, 1,9 éq. ) à 0 C ; après 2 jours à température ambiante puis décantation, la phase supérieure a été recueillie et lavée trois fois avec de l'eau puis séchée sur K2C03 ; la purification du brut réactionnel par distillation sous pression réduite (température d'ébullition (Teb) 63 C, pression (P) 100 mmHg) a permis d'obtenir 9,39 g d'éthylacétaldéhyde (2) sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 49% ; une caractérisation RMN du produit obtenu a été effectuée ; RMN 1H (200 MHz, CDC13) : ô=0,91 (t, 3H, HI) ; 1,21 (t, 6H, H5, H5') ; 1,59 (m, 2H, H2) ; 3,41-3,72 (q, 4H, H4, H4') ; (t, 1H, H3) ; RMN 13C (50 MHz, CDC13): ô=8,7 (Ci) ; 15,1 (C5) ; 26,4 (C2) ; 60,7 (C4);103,9 (C3). - réaction b : dans un ballon ont été introduits successivement de l'anhydride phosphorique (26,5 g, 0,19 mol, 1,2 éq. ), de la quinoline (20 g, 0,155 mol, 1 éq. ) puis l'éthylacétaldéhyde (2) (20,47 g, 0,155 mol) ; après 15 min. sous agitation magnétique, l'éthyl-1-propényl éther (3) a été distillé in situ (Téb=40-60 C, P=760 mmHg) et a été obtenu sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 83% (11,02 g) ; RMN1H (200 MHz, CDC13) :. # = 1,23 (t, 3H, H5) ; 1,56 (d, 3H, Hi) ; 3,76 (q, 2H, H4) ; 4,35(m, 1H, H2) ; 5,92 (d, 1H, H3) ; RMN 13C (50 MHz, CDC13) : ô=8,87 (C5) ; 15,20 (Ci) ; 26,49 (C4) ; 60,76 (C2) ; 103,99 (C3) ; - réaction c : à 11,14 ml d'orthoformiate d'éthyle (67 mmol, 0,80 éq. ) a été ajouté de l'éthérate de trifluoroborane (0,04 mL, 0,04 mmol, 5.10 éq. ) et la solution a été chauffée à 40 C ; à cette solution a été ajouté un mélange d'éthyl-1-propényl éther (3) (9,28 mL, 84 mmol) et d'orthoformiate d'éthyle (11,14 mL, 67 mmol, 0,8 éq.) ; après refroidissement à température ambiante, la solution a été lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium 10%, séchée sur MgS04 puis concentrée sous pression réduite ; la distillation du brut réactionnel sous pression réduite (Téb=70 C, P=17 mmHg) a permis d'obtenir le produit désiré sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 36% (6,99 g) ; RMN 1H (200 MHz, CDCb) : ô=0,92 (d, 3H, HI) ; 1,17 (t, 12H, H5, H5', H5", H5'") ; 1,98 (m, 1H, H2) ; 3,47 (q, 8H, Ha, H4', H4", H4"') ; 4,40 (d, 2H, H3) ; RMN13C (50 MHz, CDCl3) : #-7,81 (Ci) ; 15,29 (C5) ; 40,66 (C2) ; 62,77 (C4) ; 104,01 (C3) ; - réaction d : 132 mmol (31 g) de diéthylacétaldéhyde (4) ont été traités par 159 mmol (11,05 g, 1,18 éq. ) d'hydroxylamine dans 80 ml d'eau en présence de 3 ou 4 gouttes de H2SO4 concentré, durant 8 heures à reflux ; le mélange a ensuite été refroidi et une solution aqueuse saturée de chlorure de cadmium a été ajoutée ; le mélange a été filtré sur Büchner et le précipité recueilli a été mis en solution dans 15 mL d'eau ; après distillation de la solution eau-4-méthyl-isoxazole (5), le distillat a été extrait trois fois avec de l'éther diéthylique et la phase organique a été séchée sur chlorure de calcium ; la distillation du brut réactionnel a permis d'obtenir le 4-méthyl-isoxazole (5) sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 73% (8 g) ; la température d'ébullition (Téb) mesurée était de 105 C à une pression (P) de 760 mmHg ; les données de RMN 1H (200 MHz, CDC13) donnent 0=20,7 (s, 3H, H6) ; 8,12 (s, 1H, H3); 8,18 (s, 1H, Hs) et les données de RMN 13C (50 MHz, CDC13) donnent 6=6,73 (C6) ; 113,64 (C4) ; 151,1 (C3) ; 154,55 (C5) ; - réaction e : une solution de N-bromosuccinimide (2,41 mmol, 0,352 g, 1 éq. ) et de 4- méthyl-isoxazole (5) (2,41 mmol, 0,200 g) dans 2,1 mL de tétrachlorure de carbone sous azote a été ajouté de l'azodiizobutyronitrile (AIBN) (0,24 mmol, 4,7 mg, 0,1 éq.) ; le mélange a été chauffé à reflux pendant 8 à 10 heures puis refroidi à 0 C et filtré. Le filtrat a été concentré puis distillé sous pression réduite (Téb=150 C, P=8 mmHg) afin d'obtenir le 4-bromométhyl-isoxazole (6) sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 44% (0,172 g) ; RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : 6=4,34 (s, 2H, H6) ; 8,32 (s, 1H, H3) ; 8,45 (s, 1H, H5) ; - réaction f : une solution de 4-bromométhyl-isoxazole (6) (10,1 mmol, 1 g) dans 10 mL d'eau a été laissée à reflux pendant 16 h. Après refroidissement à température ambiante, le mélange réactionnel a été extrait 3 fois par de l'éther diéthylique puis la phase organique a été décantée, séchée sur MgS04 et concentrée sous pression réduite ; le 4-hydroxyméthyl-isoxazole (7) a ainsi été obtenu sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 32% (0,2 g). RMN 'H (200 MHz, CDC13) : #=4,65 (s, 2H, H6) ; 8,31(s, 1H, H3) ; 8,41 (s, 1H, H5) ; - réaction g : cette réaction est une réaction de Mitsunobu ; à une solution de 4- hydroxyméthyl-isoxazole (7) (2 mmol ; g), de triphénylphosphine (4 mmol, 1 g, 2 éq. ) et de p-nitrophénol (8) (4 mmol, 0,56 g, 2 éq. ) dans 2 mL de tétrahydrofurane anhydre à 0 C a été ajouté du diéthylazodicarboxylate (4 mmol, 0,636 mL, 2 éq. ) ; après 30 minutes de réaction à 0 C, le milieu réactionnel a été mis 5 heures à température ambiante et a été ensuite concentré sous pression réduite ; après extraction (3 fois) par de l'éther diéthylique puis filtration sur Büchner, la phase organique a été lavée par de l'eau, séchée sur MgS04 et concentrée sous pression réduite ; la purification du brut réactionnel par chromatographie flash sur colonne de silice a permis d'obtenir le produit désiré (308 mg) avec un rendement de 70%. RMN 1H (200 MHz, CDC13) : #=4,35 (s, 2H, H6) ; 8,34 (s, 1H, H3) ; 8,53 (s, 1H, H5) ; 8,10 (d, 2Har) ; 6,88(d, 2Har) ; Alternativement lors de la réaction f la réaction peut être réalisée (i) en présence d'azoture de sodium dans du N,N-diméthylformamide à température ambiante pendant 12 heures suivie du traitement de l'azoture formé avec de la triphénylphosphine dans un mélange eau/tétrahydrofurane en proportion 1/9 à température ambiante pendant 20 heures ou (ii) avec de l'hydrogénosulfide de sodium à température ambiante pendant 12 heures, afin de former respectivement du 4-aminométhyl-isoxazole (10) et du 4-thiométhyl-isoxazole (11). Alternativement, lors de la réaction g le produit (7) peut être remplacé par un autre composé comportant une fonction hydroxyle, tel que l'oestradiol (12), la défériprone (13), le 4-hydroxyméthylphénol (14) pour former respectivement les produits (15), (16), et (17). L'insuline peut également être modifiée selon la réaction g par le biais des groupements hydroxyles portés par ses 4 tyrosines. Le composé (17), après activation par le chloroformiate de paranitrophénol, peut ensuite être utilisé notamment pour se lier à des molécules comportant des fonctions amines libres telles que la daunorubicine (18) pour former le composé (19) ci-dessous. Brièvement, une solution de composé (17) et 4-nitrophénylchlorofomate est chauffée à 60 C durant 1 heure en présence de 1,4-dioxane pour former le composé (17') ; ensuite une solution de daunorubicine (1 éq. ) et de composé (17') (1 éq. ) sont agités durant 15 min à température ambiante dans du N,N'-diméthyl-formamide en présence de triéthylamine (1,5 éq. ). La solution est alors diluée avec de l'eau et le produit obtenu (19) est extrait à l'éther. Exemple 2 Décomposition du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole par les sérum albumines in vitro Il a été mis en évidence, de manière inattendue, que les sérum albumines catalysaient la libération dup-nitrophénol à partir du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole. Le 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole (250 M) a été mis en présence de sérum albumine humaine (SAH, 10 M) ou bovine (SAB, 10 M) à 25 C, et la libération de p- nitrophénol a été suivie au cours du temps par lecture de la densité optique (DO) à 405 nm (voir Figure 1). Les résultats obtenus indiquent que dans ces conditions la quantité de pnitrophénol libérée est proportionnelle au temps écoulé et que sa vitesse de libération est de 0,13 M/min en présence de SAH, 0,15 M/min en présence de SAB et de 0,003 uM/min en absence d'albumines. L'efficacité catalytique des albumines sériques a ensuite été étudiée entre pH 7,0 et 11,5. L'efficacité catalytique (rapport kcat/Km) de la SAH (15 M) et de la SAH (15 M) vis-à-vis du substrat 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole a été déterminée, selon des méthodes bien connues de l'homme de l'art, à faible concentration en substrat (100,150 et 200 M), en suivant la libération du p-nitrophénol par spectrophotométrie à 405 nm, en fonction du pH, à l'aide des tampons suivants : phosphate (pH 7-8 et 11-11,5), bicine (pH 8- 9), et carbonate (pH 9-11), utilisés à la concentration de 30 mM en présence de NaCl (150 mM). Les résultats obtenus sont présentés dans la Figure 2. L'ajustement des données à l'équation kcat/Km = (kcat/Km)max/(1+10pKa-pH) a permis de déterminer un (kcat/Km)max de 3,2.102 M-1.min-l et un pKa de 10,6 pour la SAB, ainsi qu'un {k at/Km)m de 3,5.102 M-1 Min-1 et un pKa de 10,7 pour la SAH. Globalement les résultats obtenus indiquent que la réaction est plus efficace à pH basique. L'analyse de la Figure 2 suggère la participation à la catalyse de la forme déprotonnée de résidus possédant un pKa de 10,6 pour la SAB et de 10,7 pour la SAH, ce qui semble correspondre au groupement amine de résidus lysine ou à la fonction hydroxyle de résidus tyrosine qui pourraient jouer le rôle de base générale dans la catalyse. Afin d'identifier les sites responsable de cette catalyse, des tests d'inhibition par l'acide nonanoïque (HOOC-(CH2)7-CH3) et le pyridoxal phosphate (PLP) ont été réalisés. De la SAH (15 M) et de la SAB (15 M) ont été incubées en tampon bicine pH 9,0, NaCl 150 mM en présence de concentrations variables de nonanoate (0 à 300 M) durant 30 min. La libération du p-nitrophénol à partir du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole (200 M) a alors été suivie par spectrophotométrie à 405 nm (Figure 3) sur 60 min à 25 C. Ces tests montrent que l'activité de décomposition du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole est complètement inhibée par le nonanoate tant pour la SAH que pour la SAB. Les acides gras à longue chaîne, tel que le nonanoate, interagissent avec les albumines sériques au niveau de leurs différents sites d'interaction hydrophobes. Cela indique que la catalyse de cette réaction a lieu au niveau d'un seul ou des deux sites IIA et IIIA (Carter et Ho, Adv. Protein Chem. (1994) 45 :153-203) ces deux protéines, sites où se déroule aussi l'élimination de Kemp sur le 5-nitro-benzisoxazole (Hollfelder et al. J Am. Chem. Soc. (2000) 122 :1022-1029). résidus lysine et arginine interagissent au sein de ces sites avec de nombreuses molécules anioniques. Afin de mieux identifier la nature des résidus impliqués dans la catalyse, des tests d'inhibition de l'activité par le pyridoxal phosphate ont été réalisés sur la SAB. Le PLP est un inhibiteur covalent qui permet d'identifier l'intervention de résidus lysine dans la catalyse (Hollfelder et al., J Am. Chem. Soc. (2000) 122 :1022-1029). effet, la fonction aldéhydique du pyridoxal phosphate réagit avec la chaîne latérale d'un résidu lysine pour former un complexe covalent. De la SAB (15 M) a été incubée dans un tampon bicine 50 mM pH 9,0, NaCl 150 mM en présence de concentrations variables de PLP (0 à 1 mM) durant 10 h à 20 C à l'obscurité. Le 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole a alors été ajouté et la libération du pnitrophénol a été suivie par spectrophotométrie à 405 nm (Figure 4) durant 60 min à 25 C. Ces tests d'inhibition montrent que 70 % de l'activité de la SAB est vraisemblablement portée par un résidu lysine, probablement la lysine 222 du domaine IIA de la protéine. Exemple 3 Décomposition du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole par du sérum humain La décomposition du 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole a été étudiée dans du sérum humain dans des conditions proches des conditions physiologiques : 250 M de 4-(pnitrophénoxy) méthyl-isoxazole ont été incubés dans du sérum humain à pH 7,7 à 25 C en présence ou en absence de 6 mM nonanoate. La libération du p-nitrophénol a été suivie à 405 nm (Figure 5). L'inhibition totale de l'activité de décomposition par le nonanoate dans le sérum humain montre que le 4-(p-nitrophénoxy)méthyl-isoxazole est stable en conditions physiologiques et que seule la SAH est responsable de sa dégradation. Par ailleurs, en absence d'inhibiteur et dans les conditions de l'expérience la vitesse de dégradation dans le sérum humain est de 0,28 M/min. REVENDICATIONS 1. Utilisation des composés de formule générale (I) suivante : dans laquelle : # WestOouS; # B est # -H, # ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, # a vaut 0 ou 1 # X est un groupe contenant un hétéroatome, tel que-OH, -SH,-NH2 lorsque a vaut 0, ou -O-, -S-, -NH- lorsque a vaut 1, # A est un groupe de formule suivante : Y #""" dans laquelle Y est - -H, - ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, a , dans laquelle n est un entier de 1 à 10 ; # Z est un groupe de formule suivante : dans laquelle J est - H, - ou un groupe de formule suivante : en tant que groupement protecteur clivable. 2. Utilisation selon la revendication 1, des composés de formule générale (II) suivante : dans laquelle X représente-OH, -NH2 ou-SH. 3. Utilisation selon la revendication 2, du composé de formule (III) suivante : 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, des composés de formules I, II et III, pour la préparation de composés répondant respectivement à l'une des formules suivantes : dans lesquelles W, B, A, a et X sont tels que définis dans la revendication 1, R est un groupement bioactifou chromogène et Z répond à la formule suivante : 5. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que le groupement R est un groupement bioactif, notamment choisi parmi une drogue telle que : - un anticancéreux, tel que la daunorubicine, - un antiviral, - un antibactérien, - un antifongique, - un agent chélatant, tel que la défériprone, ou une hormone, telle que l'insuline ou l'oestradiol. 6. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que le groupement chromogène est le paranitrophénol ou un groupement fluorescent tel que l'umbelliferone. 7. Composés de formule générale (I) suivante : dans laquelle : # WestOouS; # B est # -H, # ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, # a vaut 0 ou 1, # X est un groupe contenant un hétéroatome, tel que-OH, -SH, -NH2 lorsque a vaut 0, ou -O-, -S-, -NH- lorsque a vaut 1, # A est un groupe de formule suivante : Y ---L;M- , dans laquelle Y est - -H, - ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, m ,dans laquelle n est un entier de 1 à 10 ; # Z est un groupe de formule suivante : dans laquelle J est - H, - ou un groupe de formule suivante : à l'exclusion du composé de formule (III) suivante : 8. Composés selon la revendication 7, de formule générale (II) suivante : dans laquelle X est-SH ou -NH2. 9. Composés de formule générale (IV) suivante : dans laquelle : # WestOouS; # B est - -H, # ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, # a vaut 0 ou 1, # X est un groupe contenant un hétéroatome, tel que -O-, -S-, -NH-, # A est un groupe de formule suivante : Y ##"" , dans laquelle Y est - -H, - ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ledit groupe alkyle pouvant être substitué par des groupements oxygénés, soufrés, azotés ou halogénés, # ,dans laquelle n est un entier de 1 à 10 ; # Z est un groupe de formule suivante : # R est un groupement bioactif ou chromogène. 10. Composés selon la revendication 9, de formule générale (V) suivante : dans laquelle X et R sont tels que définis dans la revendication 10. 11. Composé selon la revendication 10, de formule (VI) suivante : dans laquelle R est tel que défini dans la revendication 9. 12. Composé selon l'une des revendications 9 à 11, dans lequel R est un groupement bioactif choisi parmi une drogue telle que : - un anticancéreux, tel que la daunorubicine, - un antiviral, - un antibactérien, - un antifongique, - un agent chélatant, tel que la défériprone, ou une hormone, telle que l'insuline ou l'oestradiol. 13. Composé selon l'une des revendications 9 à 11, dans lequel le groupement chromogène est le paranitrophénol ou un groupement fluorescent tel que l'umbelliferone. 14. Composé selon la revendication 13, de formule (VII) suivante : 15. Utilisation du composé selon la revendication 12, en tant que prodrogue ou prohormone. 16. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé selon la revendication 12, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 17. Composition pharmaceutique selon la revendication 16, caractérisée en ce qu'elle est présentée sous une forme convenant pour une administration par voie orale par inj ection. 18. Utilisation d'un composé de formule IV, V, ou VI, selon l'une des revendications 9 à 11 et 13, et notamment du composé de formule VII selon la revendication 14, pour le dosage de la sérum albumine dans des échantillons biologiques tels que le sang, le plasma, le sérum ou l'urine. 19. Procédé de dosage de la sérum albumine dans des échantillons biologiques, comprenant les étapes suivantes : - ajouter le composé de formule VII selon la revendication 14, à un échantillon biologique dont on souhaite déterminer la concentration en sérum albumine, à une concentration d'environ 50 à 200 mol.L-1, - incuber ledit échantillon biologique auquel a été ajouté ledit composé, à une température d'environ 20 C à 37 C, durant environ 20 à 60 min, - mesurer l'absorbance dudit échantillon biologique auquel a été ajouté ledit composé, après incubation, à une longueur d'onde d'environ 405 nm, - comparer la valeur d'absorbance obtenue à celle d'une gamme étalon de sérum albumine, afin de déterminer la concentration en sérum albumine de l'échantillon biologique de départ. 20. Procédé de synthèse du composé de formule II selon la revendication 2 ou du composé de formule V selon la revendication 10, comprenant les étapes suivantes : - traitement du propanal par de l'éthanol et du CaCl2 pour former de l'éthyl- acétaldéhyde, - traitement de l'éthyl-acétaldéhyde par de l'acide phosphorique et de la quinoléine pour former de l'éthyl-1-propényl éther, - traitement de l'éthyl-1-propényl ether, par de l'orthoformiate d'éthyl et de l'étherate de trifuoroborane pour former du diethyl-acétaldéhyde, - traitement du diethyl-acétaldéhyde par de l'hydroxylamine et de l'acide sulfurique pour former la 4-méthyl-isoxazole, - traitement de la 4-méthyl-isoxazole par du N-bromo-succinimide, du CCl4 et de l'azodiizobutyronitrile pour former la 4- bromométhyl-isoxazole, - traitement de la 4-bromométhyl-isoxazole par de l'eau, ou de l'azoture de sodium puis de la triphénylphosphine, ou de l'hydrogénosulfide de sodium, pour former un composé de formule II selon la revendication 2, éventuellement traitement d'un composé de formule II selon la revendication 2 par un groupement R tel que défini dans la revendication 9, pour former un composé de formule V selon la revendication 10. 21. Procédé de synthèse du composé de formule III selon la revendication 3, du composé de formule VI selon la revendication 11, ou du composé de formule VII selon la revendication 14, comprenant les étapes suivantes : - traitement du propanal par de l'éthanol et du CaCl2 pour former de l'éthyl- acétaldéhyde, - traitement de l'éthyl-acétaldéhyde par de l'acide phosphorique et de la quinoléine pour former de l'éthyl-1-propényl éther, - traitement de l'éthyl-1-propényl ether, par de l'orthoformiate d'éthyl et de l'étherate de trifuoroborane pour former du diethyl-acétaldéhyde, - traitement du diethyl-acétaldéhyde par de l'hydroxylamine et de l'acide sulfurique pour former la 4-méthyl-isoxazole, - traitement de la 4-méthyl-isoxazole par du N-bromo-succinimide, du CCl4 et de l'azodiizobutyronitrile pour former la 4- bromométhyl-isoxazole, - traitement de la 4-bromométhyl-isoxazole par de l'eau, pour former le composé de formule III selon la revendication 3, - éventuellement traitement composé de formule III selon la revendication 3 par un groupement R tel que défini dans la revendication 9, notamment le 4-para- nitrophénol, pour former le composé de formule VI selon la revendication 11, et notamment le composé de formule VII selon la revendication 14.