Brevet FR2853909A1 — publié le 20041022

La présente invention a pour objet l'utilisation d'une sonde relative au gène DPYSL3 pour la caractérisation d'un échantillon biologique. L'invention a également pour objet l'utilisation de cette sonde pour 5 l'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis, un procédé d'identification ainsi qu'un nouvel outil de recherche. Le psoriasis est une pathologie dermatologique fréquente qui touche de 3 à 5% de la population européenne. Le psoriasis est couramment associé à d'autres 10 pathologies, telles que l'hypertension, l'arthrite, ou encore le SIDA (Farber EM, Nall L, In Roenigk HH, Maibach HI (Eds.): Psoriasis Third Edition, Revised and Expanded (1998), chapitre 9:107-157; Duvic M. et al., J Invest Dermatol (1990 Nov);95(5):38S-40S). Sur la base de l'âge d'apparition des symptômes et de l'association avec 15 certains gènes du complexe majeur d'histocompatibilité de type I (CMH I), le psoriasis a été classé en deux sous-types appelés I et Il (Henseler T, Christophers E, In Roenigk HH, Maibach HI (Eds.): Psoriasis Third Edition, Revised and Expanded (1998), chapter 10:159-166). Des études ont également montré que 30 à 50% des patients atteints de psoriasis ont un antécédent 20 familial chez un des parents du 1er ou 2e degré. Ces observations ont permis de suggérer que le psoriasis est une maladie génétique avec une composante autoimmune (Bos, Br. J. Dermatol. (1988) 118:141; Baadsgaard et al., J. Invest. Dermatol. (1990) 95:328). Les principales composantes physiopathologiques du psoriasis incluent une hyperprolifération associée à une différenciation anormale des kératinocytes de l'épiderme, une inflammation caractérisée par un infiltrat inflammatoire (principalement de lymphocytes T helpers activés) au niveau du derme et de l'épiderme et par le relargage de cytokines proinflammatoires, et enfin une 30 vascularisation anormale du derme (Krueger JG, J Am Acad Dermatol (2002) Jan;46(1):1-23; quiz 23-6). L'implication du processus inflammatoire dans la physiopathologie du psoriasis est soutenue par le mécanisme d'action de certains agents ayant un effet thérapeutique bénéfique pour la maladie. Par exemple, la cyclosporine utilisée dans le traitement des formes sévères de psoriasis, exerce un effet inhibiteur 5 sur la synthèse de l'interleukine-2, cytokine promouvant la prolifération des lymphocytes T et la sécrétion des cytokines inflammatoires par ces cellules. Par conséquent, les modulateurs de l'inflammation permettent de limiter la composante inflammatoire caractérisant en partie le psoriasis. Cliniquement, le psoriasis se définit par une hyperplasie de l'épiderme, ainsi 10 que par une desquamation, un érythème et une inflammation cutanés. Les méthodes actuellement disponibles pour le traitement incluent la thérapie topique, la photothérapie, la photo-chimiothérapie et la thérapie systémique, réservée aux formes plus sévères de la maladie. Néanmoins, ces thérapies 15 offrent uniquement des périodes de rémission aux patients, mais la pathologie resurgit généralement après l'arrêt du traitement. Les glucocorticoïdes administrés par voie topique sont le plus généralement prescrits dans le traitement initial du psoriasis, et exercent des effets antiinflammatoires, antimitotiques et antipruritiques bénéfiques. Le goudron brut de charbon est un mélange complexe de milliers de composés d'hydrocarbure. Son effet thérapeutique est lié à l'inhibition d'enzymes et à des propriétés antimitotiques. Bien qu'efficace, ce traitement est, de par son odeur, désagréable à utiliser pour le patient et peut induire des cancers cutanés. La photothérapie et photo-chimiothérapie basées sur l'administration du 25 methoxsalen, principe actif photosensibilisant, sont seulement temporairement efficaces. Le traitement doit être répété et offre une thérapie palliative, mais non curative. De plus, ces traitements ont des effets secondaires à long terme, notamment des altérations immunologiques et un risque accru de carcinogenèse. Le methotrexate est l'agent cytotoxique systémique le plus généralement administré pour les formes sévères de psoriasis s'étendant sur une surface importante du corps. Les contre-indications de ce traitement sont nombreuses et l'arrêt du traitement peut s'accompagner d'une aggravation des symptômes. L'hydroxyurée, l'etretinate, la cyclosporine, et l'AZT sont également les médicaments systémiques utilisés pour lutter contre le psoriasis mais tous ont des effets secondaires sérieux. A ce jour, aucun traitement ne permet une rémission durable de cette pathologie sans engendrer des effets secondaires importants, car le psoriasis est une pathologie complexe d'origine multifactorielle. La compréhension du mécanisme physiopathologique conduisant au phénotype psoriasique demeure donc un défi important dans le traitement médical dermatologique. En effet, 10 beaucoup d'aspects de la maladie restent à élucider, comme par exemple la réponse hétérogène à certains traitements, de patients présentant des signes cliniques semblables. Le système nerveux est un ensemble complexe de nombreux processus et de 15 contrôles. La majeure partie de l'activité du système nerveux est initiée par les récepteurs sensoriels comme les récepteurs visuels, les récepteurs auditifs, les récepteurs tactiles à la surface de la peau ou d'autres récepteurs. Le système sensoriel transmet des informations suite à des actions comme le toucher, la pression ou les vibrations, au cerveau venant des récepteurs présents sur toute 20 la surface de la peau. Ces informations entrent dans le système nerveux central à travers les nerfs périphériques et sont conduites immédiatement vers de nombreuses zones sensorielles comme dans la colonne vertébrale, la medulla, le mésencéphale, le cortex cérébral, le thalamus. Au vu des connaissances du processus de transmission des sensations 25 somatiques, rien ne permet à l'homme du métier de déduire une quelconque implication des nerfs sensitifs cutanés dans le dérèglement physiologique menant au phénotype psoriasique. L'analyse de l'expression génique dans la peau de patients psoriasiques 30 constitue une voie pour mieux comprendre le mécanisme physiopathologique de cette maladie (Bowcock AM, Shannon W, Du F, et ai., Hum Mol Genet (2001) 10(17):1793-805; Oestreicher JL, Walters IB, Kikuchi T, et ai., Pharmacogenomics J (2001) 1(4):272-87). La technologie des filtres à ADNc (" arrays ") (NGuyen C, Rocha D, Granjeaud S, et ai., Genomics (1995)) est une des technologies permettant d'analyser simultanément et rapidement l'expression de plusieurs centaines d'ARNm à partir d'une biopsie cutanée prélevée chez le patient, par opposition à d'autres 5 technologies plus lourdes à mettre en oeuvre, comme le SAGE (" Serial Analysis of Gene Expression ") (Velculescu VE, Zhang L, Vogelstein B, Kinzler KW, Science (1995 Oct) 20;270(5235):484-7), ou le Differential Display (Liang P, Pardee AB, Science (1992) 257: 967971; Zhang L, et ai., Science: (1997) 276:1268-1272). La Demanderesse a mis en évidence un nouveau gène marqueur du psoriasis. La présente invention a pour objet une sonde relative au gène DPYSL3 pour la caractérisation d'un échantillon biologique, et également un nouvel outil de 15 caractérisation d'un composé destiné au traitement du psoriasis, ainsi q'un nouvel outil de recherche. En particulier, l'invention se rapporte à l'utilisation d'une sonde relative, respectivement, au gène DPYSL3 pour la caractérisation d'un échantillon 20 biologique. Selon la présente invention, un échantillon biologique correspond à tout prélèvement ou échantillon d'organisme vivant, de préférence un mammifère, en particulier un organisme humain, en quantité suffisante pour être caractérisé. On peut citer comme échantillon biologique, à titre d'exemple non limitatif, un 25 échantillon de peau, de cuir chevelu, de muqueuse, ou cellulaire. Selon la présente invention, la caractérisation d'un échantillon biologique consiste à mesurer le niveau d'expression d'un gène d'intérêt, c'est à dire plus précisément la quantité d'ARN messager ou de protéine correspondante à ce 30 gène qui est présente dans l'échantillon biologique. Selon la présente invention, on entend par sonde relative à un gène une sonde polynucléotidique ou une sonde polypeptidique. Dans le cas d'une sonde polynucléotidique, il s'agit d'un oligo- ou polynucléotide simple ou double brin, d'ARN, ou ADN, dont la séquence est complémentaire d'une séquence cible correspondant à une partie ou à la totalité dudit gène et pouvant aller de 10 à classiquement 500 paires de bases et dont la séquence 5 est complémentaire avec la séquence cible à au moins 80% et préférentiellement d'au moins 90% (pourcentage de bases d'acide nucléiques appariées entre deux séquences, voir les méthodes de calcul proposées par Atschul et al. J. Molec. Biol. (1990), 215:403). Les sondes polynucléotidiques selon l'invention pourront être des oligoou polynucléotides comportant un ou plusieurs nucléotides modifiés par substitution, délétion ou insertion, ces modifications seront telles que la séquence de la sonde lui permettra de reconnaître spécifiquement le fragment de séquence cible. Les sondes polynucléotidiques pourront également présenter un squelette modifié lui conférant, par exemple, une meilleure stabilité. Par exemple, les liaisons phosphodiesters des brins d'ARN naturels peuvent être modifiées pour inclure au moins un atome d'azote ou de soufre. On entend par analogue d'une sonde polynucléotidique, un oligo- ou polynucléotide dont les liaisons phosphodiesters sont remplacées par des séquences de type peptidique (peptide nucleic acids). De plus, les sondes polynucléotidiques ou leurs analogues selon l'invention peuvent comprendre des bases autres que les 4 bases classiques. Les sondes polynucléotidiques ou leurs analogues selon l'invention peuvent être synthétisés selon de nombreuses méthodes de synthèse in vivo ou in vitro 30 de façon manuelle ou automatique. Les méthodes de synthèse in vitro peuvent être chimiques ou enzymatiques. Par exemple, une sonde d'ARNc simple brin peut-être obtenue par transcription in vitro d'un modèle de séquence d'ADN d'intérêt servant de matrice, en faisant intervenir une ARN polymérase (à titre d'exemple la T3, T7 ou SP6 ARN polymérase). Une sonde d'ADNc simple brin peut-être générée par transcription inverse d'un 5 ARNm d'intérêt en présence d'une reverse transcriptase (par exemple la MMLV (Moloney Murine Leukemia Virus) Reverse Transcriptase isolée d'Escherichia Coli). De nombreuses méthodes de synthèse in vivo d'ARN double brin sont décrites 10 dans la littérature, elles peuvent être réalisées dans divers types cellulaires de bactéries ou d'organismes supérieurs. On pourra également se référer aux méthodes de synthèses décrites dans les demandes de brevet WO01/36646 et WO01/75164. Ces ARN double brin peuvent être ensuite dénaturés pour servir de polynucléotide simple brin. Concernant son environnement, la sonde polynucléotidique peut être ou faire partie d'un plasmide, d'un génome viral ou d'un autre type de vecteur. Elle peut, dans d'autres cas, faire partie du génome d'une cellule, ou bien d'une cellule génétiquement modifiée pour comporter cette sonde dans son génome. Il peut 20 s'agir aussi d'une molécule isolée. Concernant les régions encadrant cette sonde, elle est de préférence sous le contrôle de séquences régulatrices. Si la sonde est insérée dans un vecteur, ledit vecteur comprend de préférence toutes les séquences nécessaires à la transcription et éventuellement la traduction de la sonde. Cette sonde peut 25 aussi être entourée par des régions flanquantes permettant une étape de recombinaison homologue avec un autre fragment polynucléotidique, conduisant éventuellement à l'insertion de la sonde de l'invention dans l'ADN génomique d'une cellule cible. Les sondes polypeptidiques selon l'invention sont des polypeptides capables de se lier spécifiquement avec l'ARN messager ou avec la protéine codée par le gène d'intérêt. Il pourra, par exemple, s'agir d'anticorps mono- ou polyclonal, ou de leur fragment biologiquement actif capable de reconnaître la protéine codée par le gène d'intérêt. Ces anticorps pourront être marqués, par exemple immunoconjugués à des enzymes ou marqués à l'aide de composés fluorescents, de la biotine ou encore radiomarqués. Les sondes polypeptidiques peuvent être des polypeptides homologues, des variants ou une forme modifiée ainsi que des fragments biologiques actifs issus de ces polypeptides. Par polypeptides homologues, on entend des polypeptides dont les séquences en acides aminés présentent au minimum 80%, et préférentiellement 90% d'acides aminés en commun. Par polypeptide variant, on entend désigner un polypeptide muté ou 15 correspondant à un polymorphisme pouvant exister, notamment chez l'être humain et pouvant présenter une troncature, une substitution, une délétion et/ou une addition d'au moins un acide aminé par rapport à la séquence du polypeptide sauvage normal. Par polypeptide modifié, on entend désigné un polypeptide obtenu par recombinaison génétique ou par synthèse chimique, présentant une modification par rapport à la séquence sauvage normale. Ces modifications pourront notamment porter sur les domaines pré-, pro- ou mature des polypeptides, sur les acides aminés à l'origine d'une spécificité de spectre ou 25 d'efficacité de l'activité, ou à l'origine de la conformation structurale, de la charge ou de l'hydrophobicité, et de la capacité de multimérisation et d'insertion membranaire des polypeptides. On pourra ainsi créer des polypeptides d'activité équivalente, plus étroite ou plus large. Les modifications pourront aussi porter sur les séquences impliquées dans la maturation, le transport et 30 l'adressage des polypeptides. Par fragment biologiquement actif d'un polypeptide, on entend désigner un fragment polypeptidique ayant conservé au moins une activité du polypeptide dont il est issu. Une étude comparative de l'expression génique dans la peau psoriasique par rapport à la peau saine, a permis à la Demanderesse d'identifier un gène, 5 dénommé DPYSL3 (Dihydropyrimidinase-like 3) ou hULIP (unc-33-like phosphoprotein) ou Collapsin response mediator protein 4, référence Genbank (NCBI): NM_001387.1, dont l'activité transcriptionnelle est induite dans la peau malade. Ce gène DPYSL3 fait partie d'une famille de protéines TUC, homologues à unc33 de C. Elegans, impliquées dans la croissance neuronale (Quinn CC et al. J Neurobiol. (1999 Oct) ;41(1):158-64; Nacher J et al. J Comp Neurol(2000 Sep) 4;424(4) :628-39; Byk T et al. J Neurosci. (1996 Jan) 15; 16(2) :688-701). Le gène DPYSL3 est aussi impliqué dans la différenciation neuronale et son 15 expression est induite au niveau transcriptionnel par l'acide rétinoique (Gaetano C et al. J Biol Chem. (1997 May) 2;272(18) :12195-201) . En particulier, la présente invention se rapporte à l'utilisation d'une sonde polynucléotidique ou polypeptidique relative au gène DPYSL3 telle que définie 20 ci-dessus pour l'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis. Dans un mode de réalisation particulier, la sonde polynucléotidique ou polypeptidique sera utilisée dans le procédé décrit ci-dessous. L'invention se rapporte aussi à un procédé d'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis comprenant les étapes suivantes: a) préparation d' au moins deux d'échantillons biologiques; b) mise en contact d'un des échantillons avec un ou plusieurs composés à tester; c) mesure de la quantité d'ARN messager ou de la protéine correspondant au gène DPYSL3 dans les échantillons biologiques; d) sélection desdits composés pour lesquels une inhibition de la transcription des ARN messagers du gène DPYSL3 ou de l'expression de la protéine correspondante est mesurée dans l'échantillon traité de l'étape b). On entend par inhibition de la transcription d'un gène DPYSL3 ou de 5 l'expression de la protéine, une diminution de la quantité d'ARN messagers ou de la protéine correspondant audit gène dans un échantillon testé. Dans un autre mode de réalisation, la présente invention se rapporte à un outil de recherche comprenant une sonde relative au gène DPYSL3. L'outil de recherche pourra en outre permettre l'analyse des effets de certains traitements sur l'expression de ces gènes marqueurs du psoriasis, ou l'analyse de mutation de la séquence de ces gènes chez des individus atteints de psoriasis. Par exemple, cet outil de recherche pourra être tel que la ou les sondes qu'il comprend, sont mises en contact avec la ou les séquence(s) cible(s) correspondante(s) déposées sur un support tel qu'un filtre en nylon. La sonde peut être utilisée dans un test d'hybridation (par exemple un test de détection de mésappariement), un séquençage, un microséquençage. Selon d'autres outils de recherche envisagés par la présente invention, la sonde selon l'invention pourra être associée à une autre sonde détectable dont la nature pourra être de préférence fluorescente, radioactive ou enzymatique. Cette caractéristique peut permettre, entre autres, de suivre la localisation de la sonde, du milieu extracellulaire vers la cellule, ou du cytoplasme vers le noyau, 25 ou bien de préciser son interaction avec l'ADN, ou l'ARN ou des protéines. L'homme du métier saura quelle sonde détectable est la mieux adaptée en fonction de la caractéristique qu'il veut pouvoir suivre. La découverte de la surexpression du gène DPYSL3 dans la peau psoriasique 30 permet d'une part de diagnostiquer le psoriasis, et d'autre part, de développer de nouvelles thérapeutiques basées sur l'inhibition de l'expression et/ou de la fonction de DPYSL3 pour traiter le psoriasis en limitant la composante neuronale qui le caractérise. Dans un aspect particulièrement préférable, la présente invention fournit une méthode pour caractériser des échantillons de peau pour déterminer la prédisposition au psoriasis. La Demanderesse a démontré que l'expression du gène DPYSL3 est induite dans la peau psoriasique lésionnelle présentant une plaque de psoriasis, par rapport à la peau saine (expression moyenne mesurée chez 13 sujets psoriasiques et 10 sujets sains). Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1. La mesure de l'expression de DPYSL3 permet de caractériser une peau psoriasique lésionnelle indépendamment du type et de la localisation de la plaque de psoriasis (tableaux 2 et 3). Le tableau 2 représente l'expression de 15 DPYSL3 relative à une expression moyenne chez les sujets sains, chez les patients présentant majoritairement des plaques au niveau du tronc et des plaques asymétriques. Le tableau 3 représente l'expression de DPYSL3 relative à une expression moyenne chez les sujets sains, chez les patients présentant majoritairement des plaques de type symétrique. En outre, hormis la caractérisation d'une peau présentant une plaque de psoriasis par rapport à une peau saine, la découverte de ce nouveau marqueur du psoriasis permet également de discriminer une peau de patient psoriasique non lésionnelle (cliniquement saine) mais déjà engagée vers le processus psoriasique, d'une peau non lésionnelle ayant les réelles caractéristiques d'une 25 peau saine. La Demanderesse a découvert de façon surprenante, que certaines peaux non lésionnelles surexpriment aussi le gène DPYSL3. Sur la base de l'expression de ce gène, le diagnostic du psoriasis est réalisable très précocement puisque 30 l'expression du gène DPYSL3 permet de différencier au niveau moléculaire des peaux non lésionnelles déjà atteintes, alors que les signes cliniques ne le permettent pas. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 4. Ainsi l'invention se rapporte également à un procédé de diagnostic du psoriasis ou d'une prédisposition au psoriasis comprenant une étape de mesure de la surexpression dans un échantillon biologique du gène DPYSL3 à l'aide d'une sonde relative au gène DPYSL3. Par surexpression d'un- gène dans un échantillon biologique, on entend une expression de l'ARN messager ou de la protéine correspondant à ce gène plus élevée dans cet échantillon par rapport à un échantillon sain de référence. Par ailleurs, l'invention se rapporte aussi à un kit de diagnostic comprenant une 10 sonde relative au gène DPYSL3. Les observations décrites ci-dessus indiquent également que DPYSL3 est une cible thérapeutique pour le développement de nouvelles thérapies visant à traiter le psoriasis chronique vulgaire en plaques, quelque soit le type 15 prédominant de plaques chez le patient, et la localisation de la plaque de psoriasis sur le corps. Ainsi, un autre objet de la présente invention se rapporte à l'utilisation d'une sonde polynucléotidique ou de l'un de ses analogues, complémentaire, au gène 20 DPYSL3 pour inhiber l'expression du gène DPYSL3. En particulier, la sonde polynucléotidique pourra être un ARN antisens ou un siRNA qui a pour rôle d'inhiber l'expression d'un gène spécifique (Fire A., Trends in Genetic (1999); 15: 358-363). Enfin, l'invention se rapporte également à l'utilisation d'une sonde polynucléotidique ou de l'un de ses analogues, complémentaire au gène DPYSL3 pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée au traitement du psoriasis. EXEMPLE 1 - MESURE D'EXPRESSION GENIQUE DANS LA PEAU SAINE ET DANS LA PEAU PSORIASIQUE Une étude clinique réalisée en présence de volontaires sains et de patients atteints de psoriasis chronique vulgaire en plaques, a permis de mettre en évidence l'implication du gène DPYSL3 dans le psoriasis. Des biopsies cutanées sont prélevées chez des volontaires sains, ainsi que sur des plaques de psoriasis et sur des zones non lésionnelles apparaissant cliniquement 5 saines, chez des patients atteints de psoriasis. La présence ou l'absence de psoriasis sur la zone de peau biopsiée, ainsi que la sévérité de la plaque de psoriasis, sont déterminées par l'évaluation de paramètres cliniques locaux (scores d'érythème, de desquamation et d'élévation de la plaque de psoriasis). L'analyse de l'expression génique est ensuite réalisée à partir de chaque 10 biopsie individuelle. La comparaison des profils géniques correspondant à la peau saine et la peau psoriasique non lésionnelle et lésionnelle, permet d'identifier des gènes dont l'expression est induite dans la maladie. La détermination des profils géniques est basée sur l'hybridation d'une sonde 15 complexe d'ADNc simple brin (générée par la rétro-transcription des ARNm issus de chaque biopsie de peau) sur des fragments d'ADNc d'intérêt, qui sont déposés sur un support tel qu'un filtre en nylon. Les signaux d'hybridation obtenus sont proportionnels à la quantité de chaque ADNc marqué dans la sonde et reflètent le niveau d'expression de chaque ARNm au sein de 20 l'échantillon de peau analysé (Nguyen C et ai. Genomics (1995 Sep) 1;29(1):207-1 6). Des filtres élaborés par la Demanderesse, spécifiques à la dermatologie ont été développés. Ces filtres sont constitués de 474 ADNc impliqués dans les 25 processus physiologiques de la peau humaine. En parallèle, des filtres commerciaux à 4200 ADNc humains (Invitrogen GF21 1) ont été utilisés. Ces filtres d'ADNc vont permettre de déterminer l'expression de gènes d'intérêt dans la peau saine ainsi que dans la peau non lésionnelle et lésionnelle de patients atteints de psoriasis chronique vulgaire en plaques. Méthode La mesure de l'expression génique dans la peau saine et dans la peau psoriasique est réalisée en utilisant la technologie des filtres à ADNc (" Le principe de cette technologie repose sur l'hybridation d'une sonde d'ADNc simple brin radiomarquée sur des fragments d' ADNc cibles déposés à haute densité sur des filtres de nylon (Nguyen C et ai. Genomics (1995 Sep) 1;29(1):207-16). Dans cette étude, des filtres de nylon (GF21 1) commercialisés par la société Invitrogen sur lesquels sont déposés 4200 ADNc humains 10 identifiés, ainsi que des filtres dédiés à la dermatologie à 474 ADNc humains, développés par la Demanderesse, sont utilisés. Les sondes d'ADNc radiomarquées sont générées par rétrotranscription des ARN totaux (protocole Invitrogen), isolés à partir des différentes biopsies prélevées chez 10 volontaires sains et 13 sujets atteints de plaques chroniques de psoriasis 15 vulgaire (protocole RNEasy, Qiagen). Les signaux d'hybridation obtenus sont proportionnels à la quantité de chaque ADNc marqué présent dans la sonde, qui s'est hybridé sur l'ADNc qui lui est complémentaire sur le filtre et reflètent ainsi l'activité transcriptionnelle des ARNm dans les biopsies analysées. Analyse, normalisation des résultats d'expression uénigue et com araison des profils géniques entre la peau saine et la peau psoriasiaue Les signaux d'hybridation sont mesurés par phospholuminescence, puis 25 quantifiés à l'aide du logiciel d'analyse d'image Imagen (Biodiscovery). Afin de discriminer les signaux d'hybridation spécifiques des gènes étudiés, le bruit de fond lié à une hybridation non spécifique est mesuré sur chaque filtre sur des zones vierges de dépôt d'ADNc (filtres GF211), ou au sein d'une couronne entourant chaque spot (filtres dédiés). Après transformation des 30 données en log, un seuil de détection permettant de discriminer une mesure relevant d'un signal réel ou du bruit, est déterminé automatiquement pour chaque filtre en utilisant la méthode décrite précédemment par Fogel et ai., 2002. En vue de comparer les résultats d'expression génique entre les différentes biopsies analysées, les signaux d'hybridation sont normalisés par la médiane de l'ensemble de signaux obtenus pour chaque biopsie (filtres GF21 1), ou par s l'expression d'un ARN messager exogène, servant de référence, dont l'expression est invariante entre les échantillons analysés. Ce transcrit exogène est ajouté en quantité constante dans les préparations d'ARN totaux issues des différents échantillons, avant synthèse de la sonde d'ADNc radiomarquée. La séquence cible de ce transcrit exogène est déposée sur chaque filtre. Pour chaque gène, une expression moyenne de référence est déterminée sur l'ensemble des biopsies de sujets sains, puis soustraite à l'expression obtenue dans chaque biopsie de peau psoriasique non lésionnelle et lésionnelle (valeurs en log). Le ratio entre l'expression de chaque gène dans la peau psoriasique par rapport à la peau saine est alors obtenu en prenant l'exponentielle en base 10 15 de la valeur calculée précédemment (tableaux 1 à 4). Les résultats obtenus permettent de mettre en évidence la surexpression du gène DPYSL3 dans la peau humaine lésionnelle présentant une plaque de psoriasis par rapport à la peau humaine saine (tableau 1). Les résultats des tableaux 2 et 3 indiquent que cette surexpression est 20 observée quelque soit le type prédominant de plaques exprimées chez le patient (symétrique ou troncal) et également indépendamment de la localisation des plaques de psoriasis. Les abréviations mentionnées dans ces tableaux représentent la localisation des biopsies prélevées sur le corps pour chaque sujet psoriasique (SP) et ont la signification suivante: JG: jambe gauche, JD: 25 jambe droite, BD: bras droit, BG: bras gauche, T: tronc. Les résultats du tableau 4 montrent que l'expression de ce gène est également induite dans la peau psoriasique non lésionnelle. Les abréviations ont la même signification que précédemment. EXEMPLE 2 - MESURES DES PARAMETRES CLINIQUE LOCAUX LIES A LA PLAQUE DE PSORIASIS: SCORES D'ERYTHEME. DE DESQUAMATION ET D'ELEVATION DE LA PLAQUE Les différents scores cliniques locaux permettant de définir la présence ou l'absence de psoriasis sur la zone de peau biopsiée, ainsi que la sévérité de la plaque de psoriasis, sont les scores d'érythème, de desquamation et d'élévation de la plaque. Ces scores sont classiquement mesurés grâce aux classements suivants: La mesure de l'érythème se fait à l'aide du classement suivant: 0 = aucun (absence d'érythème) 1 = léger (légère rougeur présente) 2 = modéré (rougeur facilement décelable) 15 3 = sévère (rougeur intense) 4 = très sévère (rougeur très intense) La mesure de la desquamation se fait à l'aide du classement suivant: 0 = aucun (absence de desquamation) l = léger (squames détectés, une seule couche de desquamation) 2 = modéré (squames de degré intermédiaire entre le léger et le sévère) 3 = sévère (Plusieurs couches de squames) 4 = très sévère (plusieurs couches de squames épais) La mesure de l'élévation de la plaque se fait à l'aide du classement suivant: 0 = aucun (absence d'élévation de l'épaisseur) 1 = léger (légère élévation détectable au toucher) 2 = modéré (épaisseur modérée) 3 = sévère (fort épaississement) 4 = très sévère (très fort épaississement) Cette étude démontre que les paramètres cliniques locaux obtenus avec la peau psoriasique non lésionnelle ne sont pas différents de ceux obtenus pour la peau saine. Ils ne permettent donc pas de différencier une peau psoriasique non lésionnelle d'une peau saine. Par contre, les résultats du tableau 4 ont permis de mettre en évidence au niveau moléculaire, une surexpression du gène DPYSL3 dans certaines peaux psoriasiques non lésionnelles. La mesure de l'expression du gène DPYSL3, permet donc, de réaliser un diagnostic très précoce du psoriasis, puisque l'expression de ces gènes permet de différencier au niveau moléculaire des peaux non lésionnelles déjà atteintes, alors que les signes cliniques ne le permettent pas. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec 5 une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène DPYSL3 (n d'accession NM 001387.1), pour caractériser un échantillon biologique par la mesure du niveau d'expression du gène DPYSL3. 2. Utilisation d'une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence 10 de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène DPYSL3 (n d'accession NM 001387.1), pour l'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis. 3. Procédé d'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis comprenant les étapes suivantes a) préparation d'au moins deux d'échantillons biologiques b) mise en contact d'un des échantillons avec un ou plusieurs composés à tester; c) mesure de la quantité d'ARN messager correspondant au gène DPYSL3 dans les échantillons biologiques à l'aide d'une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène DPYSL3 (n d'accession NM 25 001387.1); d) sélection desdits composés pour lesquels une inhibition de la transcription des ARN messagers du gène DPYSL3 est mesurée dans l'échantillon traité de l'étape b). 4. Outil de recherche comprenant une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène DPYSL3 (n d'accession NM 001387.1). 5. Procédé de diagnostic du psoriasis ou d'une prédisposition au psoriasis comprenant une étape de mesure de la surexpression dans un échantillon biologique du gène DPYSL3 par mise en contact d'une sonde 5 polynucléotidique avec les séquences cibles isolées à partir dudit échantillon biologique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène DPYSL3 (n d'accession NM 001387.1). 6. kit de diagnostic comprenant une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène DPYSL3 (n d'accession NM 001387.1).