Brevet FR2847269A1 — publié le 20040521

La présente invention concerne essentiellement un procédé d'identification d'une modification éventuelle d'au moins un paramètre biologique, comprenant l'analyse protéomique comparée et/ou transcriptomique comparée et/ou génomique comparée : a) de cellules vivantes dites jeunes, b) de cellules vivantes dites âgées, c) au moins une de ces deux classes de cellules étant utilisée dans un modèle tissulaire tridimensionnel, permettant l'identification éventuelle d'au moins un paramètre biologique modifié suite au vieillissement cellulaire. La présente invention concerne encore un procédé d'identification d'au moins une substance potentiellement active capable de reverser au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement, ou prévenir la modification d'au moins, un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement. La présente invention concerne encore l'utilisation d'une substance active sélectionnée par un tel procédé, pour la préparation d'au moins une composition cosmétique et/ou pharmaceutique. La présente invention concerne encore une substance active dans le domaine de la cosmétique ou de la pharmacie sélectionnée par un tel procédé. Les cellules dites jeunes sont soit des cellules issues de biopsies de donneurs jeunes, soit des cellules qui ont été peu multipliées, correspondant à un nombre de passages in vitro relativement faibles, soit des cellules prélevées sur des biopsies peu exposées au rayonnement solaire (corps, sein, abdomen, prépuce, etc...), les cellules dites âgées étant alors soit des cellules issues de biopsies de donneurs âgés, soit des cellules qui ont subi un nombre important de passages in vitro, soit des cellules issues de biopsies prélevées dans des zones exposées au soleil (cou, main, visage, etc...). L'analyse par différentes méthodes génomiques et protéomiques des modèles cellulaires ainsi réalisés permet la mise en évidence des cibles thérapeutiques potentielles et la sélection de principes actifs, cosmétiques ou pharmaceutiques, pour moduler les effets du vieillissement ainsi identifiés. L'efficacité de formulations cosmétiques ou pharmaceutiques contenant de tels principes actifs peut également être évaluée sur ces modèles cellulaires. ETAT DE LA TECHNIQUE Toutes les fonctions cellulaires, incluant la prolifération, la différenciation et la mort cellulaire, sont contrôlées par de nombreux gènes et voies de signalisation cellulaire. Toutefois, l'analyse des résultats obtenus in vitro sur des cultures cellulaires en monocouche, généralement de fibroblastes ou kératinocytes, issus de donneurs sains, pathologiques ou de lignées, n'est pas toujours en adéquation parfaite avec ceux obtenus sur des biopsies. En effet, la régulation de la prolifération cellulaire et des synthèses métaboliques est complètement différente entre des modèles cellulaires en monocouche et une biopsie ou un modèle cellulaire tridimensionnel qui en est une représentation très proche. De même, dans les modèles pluricellulaires tridimensionnels, des mécanismes de régulations intercellulaires ont été mis en évidence. Ils sont dus soit à l'inter- connexion des types cellulaires, soit à la présence de facteurs diffusibles qui permettent par exemple la régulation des kératinocytes par les fibroblastes et inversement (Saintigny G., Bonnard M., Damour 0. and Colombel C. dans Acta Derm Venerol (Stockh) (1993) 73 : 175-180 et Lacroix M., Bovy T., Nusgens B. V. and Lapière C.M. dans Arch Dermatol Res (1995) 287: 659-664), ou la différenciation de précurseurs dendritiques en cellules endothéliales et macrophages dans des modèles plus complexes de peaux reconstruites immunocompétentes (A. Black : Structure maturation et dynamique d'un modèle de peau reconstruite humaine ; Thèse 82/2000 UCBL1). Par ailleurs, il n'est pas toujours possible de trouver des données sur l'expression et les synthèses protéiques en fonction du vieillissement physiologique ou photo-induit par exemple, ou ces données se révèlent parfois contradictoires à ce que l'on peut observer in vivo du fait du modèle simplifié utilisé dans l'expérimentation. L'apparition des technologies issues de la protéomique et de la génomique, telles que les électrophorèses bi-dimensionelles, les protéines arrays et DNA arrays , permettent à l'heure actuelle la détection de multiples paramètres de façon très sensible et par conséquent, la mise en évidence de variations d'expression de gènes ou de synthèses protéiques à partir d'échantillons biologiques de petite taille. Jusqu'à présent, ces technologies ont été utilisées sur différents types d'échantillons biologiques tels que des sérums humains ou des milieux de culture conditionnés par des cellules humaines cultivées en monocouche (Huang R. P., Huang R., Fan Y. and Lin Y dans Analytical Biochemistry (2001) 294 : ou dans des cultures en monocouche de différents types cellulaires et par exemple de fibroblastes et de mélanocytes (Gutsmann-Conrad A., Heydari A. R., You S. and Richardson A. dans Exp. Cell Res. (1998) 241(2) : 404-413). De même, des expérimentations ont été réalisées sur des kératinocytes issus de donneurs d'âges variables cultivés en monocouche (Compton C., Tong T., Trookman N., Zhao H. and Roy D. dans J. Invest. Dermatol. (1994)103(1) : 127-133) ou des fibroblastes issus de donneurs d'âges variables cultivés en monocouche (Reed M.J., Ferara N.S. and Vernon R.B. dans Mechanisms of ageing and development (2001) 122(11) : 1203- 1220) ou des fibroblastes vieillis in vitro (Nishio K., Inoue A., Qiao H.K., Mimura A. dans Histochem Cell Biol (2001) 116 : Certaines expérimentations ont également permis l'étude du rôle modulateur d'un stress ultraviolet sur des mélanocytes humains normaux ou malins (lignée cellulaire ou mélanocytes extraits de tissu tumoral) cultivés en monocouche (Valéry C., Grob J.J. and Verrando P. dans J. Invest. Dermatol. (2001) 117 : 1471-1482).Parallèlement au développement des techniques analytiques, de nombreux modèles d'épidermes (EP 0 789 074 Al de l'Oréal) ou d'épithélia reconstruits (Schmalz G. Schweikl H. and Hiller K. A. dans Eur. J. Oral Sci. (2000) 108: 442-448), mais également de muqueuse reconstruites, de peaux reconstruites ou de peau reconstruites pigmentées et/ou immunocompétentes ont été réalisés (EP 0 296 78 du CNRS). Ces modèles sont aujourd'hui très largement utilisés pour les évaluations pharmaco-toxicologiques et les études d'efficacité d'ingrédients pharmaceutiques et cosmétiques. Toutefois, les méthodes d'analyses mises en #uvre sont essentiellement des techniques d'histologie combinées à l'analyse d'image, des analyses de synthèses métaboliques et de leur régulation par analyse électrophorétique, Western-blot Northern- blot ou RT-PCR. Les techniques de protéines array et de DNA array ou les dosages combinés de cytokines en particulier n'ont pas été appliqués à ces modèles. BUTS DE L'INVENTION L'invention a pour but principal de résoudre de manière inattendue le problème technique qui consiste à fournir un modèle d'étude du métabolisme cellulaire, reflétant la situation observée in vivo, lorsque les cellules ont subi un vieillissement. L'invention a pour but de résoudre le nouveau problème technique qui consiste à fournir un procédé d'identification d'une modification éventuelle d'au moins un paramètre biologique, caractérisé en ce qu'il comprend l'analyse protéomique comparée et/ou transcriptomique comparée et/ou génomique comparée : a) de cellules vivantes dites jeunes, b) de cellules vivantes dites âgées, c) au moins une de ces deux classes de cellules étant utilisée dans un modèle tissulaire tridimensionnel, permettant l'identification éventuelle d'au moins un paramètre biologique modifié suite au vieillissement cellulaire. La présente invention a pour but de réaliser l'étude du profil génomique et protéique de modèles cellulaires comparés. Cette comparaison est effectuée entre d'une part, un modèle choisi parmi : 1) des épithélia reconstruits (dont les épidermes reconstruits), des épithélia reconstruits pigmentés et/ou immunocompétents, des matrices conjonctives (dont les chorions, dont les dermes), des peaux ou des muqueuses reconstruites, des peaux ou des muqueuses reconstruites pigmentées et/ou immunocompétentes, des peaux ou des muqueuses reconstruites pigmentées et/ou immunocompétentes et /ou endothélialisées et/ou contenant des macrophages, des biopsies, et d'autre part : 2) les modèles ci-dessus, ou les cellules composant les différents modèles décrits ci-dessus, cultivées en monocouche ou en suspension, la comparaison étant effectuée entre des cellules dites jeunes et des cellules dites âgées : # cellules dites jeunes , c'est à dire des cellules extraites de biopsies de donneurs d'âge jeune, ou peu amplifiées in vitro ou extraites de biopsies issues de zones corporelles non exposées au soleil (corps, sein, abdomen, prépuce,...) # cellules dites âgées , c'est à dire des cellules extraites de biopsies de donneurs d'âge élevé, ou beaucoup amplifiées in vitro ou extraites de biopsies issues de zones corporelles exposées au soleil (cou, visage, main...). Cette comparaison protéomique ou génomique permet de définir des cibles d'action afin de reverser ou prévenir au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement, que ce vieillissement soit physiologique ou qu'il soit photo-induit. La présente invention a encore pour but de fournir une solution qui permette l'utilisation des modèles tissulaires décrits précédemment dans le but d'évaluer l'effet sur le profil génomique ou transcriptomique ou protéique d'un principe actif, en particulier cosmétique ou pharmaceutique. La présente invention a encore pour but de fournir une solution qui permette l'utilisation des modèles tissulaires décrits précédemment dans le but d'évaluer l'effet sur le profil génomique ou protéique d'une formulation, en particulier cosmétique ou pharmaceutique, contenant ou non un principe actif. RESUME DE L'INVENTION La présente invention permet de résoudre les problèmes techniques énoncés ci-dessus. Dans le cadre de cette invention, Lies inventeurs entendent par étude génomique : le fait de dresser l'inventaire et d'effectuer l'étude d'au moins une partie de l'ensemble des gènes d'un organisme pour étudier leur fonction. Les inventeurs entendent par étude transcriptomique : Le fait de dresser l'inventaire et d'effectuer l'étude d'au moins une partie de l'ensemble des ARN transcrits à partir du génome. Les inventeurs entendent par étude protéomique : le fait de dresser l'inventaire et d'effectuer l'étude d'au moins une partie des protéines exprimées. L'invention consiste principalement en la fourniture d'un procédé d'identification d'une modification éventuelle d'au moins un paramètre biologique, caractérisé en ce qu'il comprend l'analyse protéomique comparée et/ou transcriptomique comparée et/ou génomique comparée : a) de cellules vivantes dites jeunes, b) de cellules vivantes dites âgées, c) au moins une de ces deux classes de cellules étant utilisée dans un modèle tissulaire tridimensionnel, permettant l'identification éventuelle d'au moins un paramètre biologique modifié suite au vieillissement cellulaire. Les cellules dites jeunes sont soit des cellules issues de biopsies de donneurs jeunes, soit des cellules qui ont été peu multipliées, correspondant à un nombre de passages in vitro relativement faibles, soit des cellules prélevées sur des biopsies peu exposées au rayonnement solaire (corps, sein, abdomen, prépuce, etc...). Les cellules dites âgées sont alors soit des cellules issues de biopsies de donneurs âgés, soit des cellules qui ont subi un nombre important de passages in vitro, soit des cellules issues de biopsies prélevées dans des zones exposées au soleil (cou, main, visage, etc...). Les inventeurs entendent par "passage": le fait d'amplifier par trypsination. Le modèle cellulaire tissulaire est défini comme étant un modèle tissulaire dit également modèle tridimensionnel, pouvant être ensemencé par des cellules vivantes, notamment dans le but de reconstituer le tissu d'un être vivant, en particulier le modèle tissulaire est défini comme pouvant être un modèle de matrice conjonctive, appelé derme dans la cas de la peau et appelé chorion dans le cas d'une muqueuse, contenant principalement des cellules stromales, un modèle d'épithélium constitué principalement de cellules épithéliales, un modèle d'épiderme constitué principalement de kératinocytes, un modèle de peau constitué d'un épiderme et d'un derme, d'un modèle de muqueuse constitué d'un épithélium et d'un chorion, d'un modèle de biopsies (ou explants) maintenu en survie, ainsi que les modèles en monocouche ou en suspension mettant en #uvre les cellules présentes dans les modèles décrits ci-dessus. On peut utiliser dans ces modèles, des cellules normales, saines ou pathologiques, ou des cellules issues de lignées ; ces cellules peuvent être d'origine humaines ou animales. Selon une variante de cette dernière caractéristique, le modèle de culture tridimensionnel de matrices conjonctives (derme ou chorion), comprend un support ensemencé par des cellules stromales pour former des dermes reconstruits ou des chorions reconstruits. Le modèle de culture tridimensionnel d'épiderme ou d'épithélium comprend un support ensemencé ou non au préalable par des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, puis par des cellules épithéliales et en particulier des kératinocytes afin d'obtenir des épithélia ou épidermes reconstruits. Le modèle de culture tridimensionnel de peau ou de muqueuse reconstruite comprend un support matriciel (dermique ou de chorion) ensemencé par des cellules épithéliales pour obtenir une muqueuse reconstruite ou des kératinocytes pour obtenir une peau reconstruite. Selon une variante, le modèle de culture tridimensionnel utilisé comprend un modèle dans lequel a été incorporé au moins un type cellulaire complémentaire, par exemple des cellules endothéliales (CE) et/ou des lymphocytes et/ou des cellules adipeuses et/ou des cellules dendritiques interstitielles et/ou des annexes cutanées, comme des poils, des cheveux, des glandes sébacées. Avantageusement, on peut introduire en plus au niveau de la partie épithéliale : des cellules pigmentaires, des cellules immunocompétentes (cellules de Langerhans), des cellules nerveuses... Les différents types cellulaires (fibroblastes, kératinocytes, mélanocytes) extraits sont amplifiés séparément mais peuvent être utilisés séparément ou en pool de plusieurs donneurs pour la reconstruction des modèles tridimensionnels ainsi que pour les cultures en monocouche ou en suspension. Selon une variante, les précurseurs dendritiques (cellules dendritiques interstitielles) peuvent se différencier spontanément et initier au moins deux types cellulaires supplémentaires tels que les cellules endothéliales et les macrophages, quand les précurseurs dendritiques sont cultivés dans un environnement tridimensionnel comprenant au moins des cellules épithéliales et stromales. Les modèles tissulaires définis précédemment sont utilisés au terme de la culture pour réaliser des analyses génomiques et/ou transcriptomiques et/ou protéomiques, qui permettent en particulier la sélection, l'identification et la caractérisation de cibles potentielles afin de reverser ou prévenir au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement qu'il soit physiologique ou photo-induit. Les cibles potentielles correspondent aux paramètres biologiques, à reverser ou dont la modification est à prévenir, identifiés grâce à la mise en #uvre de l'invention. Après définitions des cibles, ces mêmes modèles et méthodes de détection peuvent être utilisés pour le criblage de principes actifs cosmétiques ou pharmaceutiques, la démonstration d'efficacité de formulations cosmétiques ou pharmaceutique contenant ou non les actifs. Parmi les techniques analytiques utilisées, on peut citer en particulier : - pour les analyses du profil du protéome : électrophorèse bidimensionnelle, et/ou matrice différentielle de protéine (Protein arrays) et/ou matrice différentielle de cytokine (cytokine array), et/ou dosages Elisa combinés, - pour les analyses du profil génomique : matrice différentielle d'ADN (DNA Arrays), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne Multiplexée (PCR-multiplex), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne (PCR), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne en temps réel (PCR en temps réel), - les analyses du profil transcriptomique : matrice différentielle d'ARN (RNA Arrays), matrice différentielle d'ADNc (cDNA Arrays) et/ou Réverse Transcription de Réaction de Polymérisation en Chaîne Multiplexée (RTPCR-Multiplex) et/ou Réverse Transcription Réaction de Polymérisation en Chaîne (RT-PCR) et/ou Réverse Transcription Réaction de Polymérisation en Chaîne en temps réel (RT-PCR en temps réel). DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION : Selon un premier aspect l'invention concerne un procédé d'identification d'une modification éventuelle d'au moins un paramètre biologique, comprenant l'analyse protéomique comparée et/ou transcriptomique comparée et/ou génomique comparée : a) de cellules vivantes dites jeunes, b) de cellules vivantes dites âgées, c) au moins une de ces deux classes de cellules étant utilisée dans un modèle tissulaire tridimensionnel, permettant l'identification éventuelle d'au moins un paramètre biologique modifié suite au vieillissement cellulaire. Avantageusement, les cellules dites jeunes et les cellules dites âgées sont toutes les deux utilisées dans un modèle tissulaire tridimensionnel. Avantageusement, ledit paramètre biologique, modifié au cours du vieillissement cellulaire, est défini par au moins une différence entre le métabolisme des cellules dites jeunes et le métabolisme des cellules dites âgées. Avantageusement, les cellules dites jeunes de l'étape a) précitée sont soit des cellules issues de biopsies de donneurs jeunes, d'un âge avantageusement inférieur à 40-45 ans, soit des cellules qui ont été peu multipliées, correspondant à un nombre de passages in vitro relativement faibles, soit des cellules prélevées sur des biopsies peu exposées au rayonnement solaire (par exemple le corps, le sein, l'abdomen, le prépuce) Avantageusement, les cellules dites âgées de l'étape b) précitée sont soit des cellules issues de biopsies de donneurs âgés, d'un âge avantageusement supérieur à 40-45 ans, soit des cellules qui ont subi un nombre important de passages in vitro, soit des cellules issues de biopsies prélevées dans des zones exposées au soleil (par exemple la main, le visage, le cou, la nuque). Avantageusement, les cellules dites âgées de l'étape b) précitée sont des cellules dites jeunes qui ont été intégrées dans un modèle tissulaire tridimensionnel comportant un ou plusieurs types cellulaires, artificiellement vieilli par une culture prolongée sur une longue période, avantageusement supérieure à 1 mois, encore avantageusement supérieure à 2 mois. Avantageusement, lesdites cellules dites jeunes ou dites âgées sont des cellules d'au moins un être humain ou d'au moins un animal. Avantageusement, ladite étude comprend au moins une analyse choisie parmi les méthodes d'analyses suivantes : - pour les analyses du profil du protéome : électrophorèse bidimensionnelle, et/ou matrice différentielle de protéine (Protein arrays) et/ou matrice différentielle de cytokine (cytokine array), et/ou dosages Elisa combinés, - pour les analyses du profil génomique : matrice différentielle d'ADN (DNA Arrays), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne Multiplexée (PCR-multiplex), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne (PCR), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne en temps réel (PCR en temps réel), -les analyses du profil transcriptomique : matrice différentielle d'ARN (RNA Arrays), matrice différentielle d'ADNc (cDNA Arrays) et/ou Réverse Transcription de Réaction de Polymérisation en Chaîne Multiplexée (RT- PCR-Multiplex) et/ou Réverse Transcription de Réaction de Polymérisation en Chaîne (RT-PCR) et/ou Réverse Transcription de Réaction de Polymérisation en Chaîne en temps réel (RT-PCR en temps réel). Avantageusement, ledit modèle tissulaire est cultivé et/ou conservé dans des conditions maintenant, au moins partiellement, un métabolisme cellulaire. Avantageusement, ledit modèle tissulaire comprend au moins des fibroblastes ou des kératinocytes. Avantageusement, ledit modèle comprend des cellules normales, saines ou pathologiques, ou des cellules issues de lignées, de préférence ces cellules sont d'origine humaine ou animale. Avantageusement, ledit modèle tissulaire est choisi parmi les modèles suivants : un modèle de matrice conjonctive, appelé derme dans la cas de la peau et appelé chorion dans le cas d'une muqueuse, contenant principalement des cellules stromales, un modèle d'épithélium constitué principalement des cellules épithéliales, un modèle d'épiderme constitué principalement de kératinocytes, un modèle de peau constitué d'un épiderme et d'un derme, d'un modèle de muqueuse constitué d'un épithélium et d'un chorion. Avantageusement, ledit modèle tissulaire est un modèle tissulaire de matrice conjonctive (derme ou de chorion) comprenant un support matriciel de préférence choisi parmi : - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi- perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène, polypropylène, polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, une membrane ou un film d'acide polyglycolique. Dans ce groupe on trouve par exemple les modèles dermiques Skin 2 TM modèle ZK1100 et Dermagraft# et Transcyte# (Advanced Tissue Sciences) ; - un plastique traité culture cellulaire (formation d'un feuillet dermique : Michel M. et al dans In Vitro Cell. Dev Biol.-Animal (1999) 35 : 318-326) ; - un gel ou une membrane à base d'acide hyaluronique (Hyalograft# 3D - Fidia Advanced Biopolymers) et/ou de collagène et/ou de fibronectine et/ou de fibrine ; dans ce groupe on trouve par exemple modèle dermique Vitrix# (Organogenesis) ; une matrice poreuse, surfacée ou non surfacée, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane (EP0296078A1 du CNRS, WO 01/911821 et WO 01/92322 de Coletica). Dans ce groupe on trouve par exemple le modèle dermique Mimederm# (Coletica). Ces supports matriciels comprennent des cellules stromales, en particulier des fibroblastes. Avantageusement, ledit modèle tissulaire est un modèle tissulaire d'épiderme ou d'épithélium comprenant un support matriciel de préférence choisi parmi : - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi- perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène, polypropylène, de polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable ; dans ce groupe on trouve les modèles Epiderme et Epithelia reconstruits (Skinethic) ainsi que les modèles EpiDerm, EpiAirway#, EpiOccular (Mattek Corporation) ; - un film ou une membrane à base d'acide hyaluronique et/ou de collagène et/ou de fibronectine et/ou de fibrine. Dans ce groupe on peut citer particulèrement les modèles : Laserskin# (Fidia Advanced Biopolymers), Episkin (L'Oréal). Ces modèles sont ensemencés par des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, puis par des cellules épithéliales et en particulier des kératinocytes. Avantageusement, au niveau de la partie épithéliale, on introduit en plus des cellules épithéliales, des cellules pigmentaires, des cellules immunocompétentes, des cellules nerveuses, de préférence les cellules immunocompétentes sont des cellules de Langerhans. Avantageusement, ledit modèle tissulaire est un modèle tissulaire de peau ou de muqueuse reconstruite comprenant un support matriciel dermique ou de chorion de préférence choisi parmi : - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi- perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène, polypropylène, de polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un gel à base de collagène et/ou acide hyaluronique et/ou fibronectine, et/ou de fibrine comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, surfacée ou non surfacée, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses intégrant des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un derme desépidermisé ou derme mort, humain ou animal. Dans ce groupe, on peut citer particulièrement les modèles Mimeskin (Coletica), Apligraf# (Organogenesis), ATS-2000 (CellSystems# Biotechnologie Vertrieb) ainsi que Skin 2TM (ZK1200-1300-2000 Advanced Tissue Science). Il existe par ailleurs des modèles dédiés à la thérapie tissulaire qui peuvent également faire l'objet de telles études. On peut citer les modèles Epidex (Modex Thérapeutiques), Epibase# (Laboratoire Genévrier), EpicellTM (Genzyme), AutodermTM et Transderm TM (Innogenetics). Le support matriciel est ensuite ensemencé par des cellules épithéliales pour obtenir une muqueuse reconstruite ou des kératinocytes pour obtenir une peau reconstruite. Avantageusement, ledit modèle tissulaire utilisé comprend un modèle dans lequel a été incorporé au moins un type cellulaire complémentaire, de préférence des cellules endothéliales (CE) et/ou des cellules immunitaires telles que lymphocytes, macrophages, cellules dendritiques et/ou des cellules adipeuses et/ou des annexes cutanées, comme des poils, des cheveux, des glandes sébacées. Selon un second aspect l'invention concerne l'utilisation d'un procédé tel que défini précédemment pour effectuer le criblage d'au moins une substance potentiellement active capable de reverser au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement tel que défini précédemment. Avantageusement le procédé pour effectuer le criblage d'au moins une substance potentiellement active capable de reverser au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement tel que défini précédemment comprend : A/ la mise en contact de ladite substance potentiellement active avec des cellules dites âgées telles que définies précédemment, ensemencées dans un modèle cellulaire ou tissulaire tel que défini précédemment, pendant une période de temps suffisante pour permettre à ladite substance potentiellement active d'agir ; B/ des cellules dites jeunes telles que définies précédemment, ensemencées dans un modèle cellulaire ou tissulaire tel que défini précédemment ; C/ l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète pour la réalisation de l'étude de l'action de ladite substance sur le métabolisme cellulaire desdites cellules âgées ; D/ la comparaison du métabolisme cellulaire desdites cellules âgées en présence de la substance potentiellement active, avec le métabolisme desdites cellules âgées ou des cellules dites jeunes sans la présence de ladite substance, et ; E/ l'identification de la présence ou l'absence d'activité de ladite substance potentiellement active, notamment comprend l'identification d'un effet positif ou négatif de ladite substance pour prévenir la modification du paramètre biologique identifié comme étant modifié au cours du vieillissement. Selon un autre aspect l'invention concerne un procédé d'identification d'au moins une substance potentiellement active capable de reverser au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement comprenant : a) la culture de cellules dites cellules jeunes de préférence telles que définies précédemment, utilisées comme référence ; b) la culture de cellules dites cellules âgées de préférence telles que définies précédemment ayant un paramètre biologique modifié par rapport aux cellules dites jeunes, en présence d'au moins une substance éventuellement active, pendant une période de temps suffisante pour permettre à ladite substance potentiellement active d'agir éventuellement sur le métabolisme cellulaire desdites cellules, afin de récupérer le métabolisme des cellules jeunes ; c) l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète, de préférence telle que définie précédemment, des cellules dites âgées cultivées en présence ou non d'une substance éventuellement active ; d) La comparaison de l'analyse effectuée au c) avec l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète, de préférence telle que définie précédemment, de cellules vivantes dites jeunes, cultivées sans la présence de ladite substance potentiellement active, tel que décrit au a) ; e) Suite à la comparaison des analyses effectuées au c) et d), l'identification éventuelle d'au moins une substance active capable de reverser au moins un paramètre biologique modifié par le vieillissement. Selon un autre aspect l'invention concerne un procédé d'identification d'au moins une substance potentiellement active capable de prévenir la modification d'au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement comprenant : a) la mise en contact de ladite substance potentiellement active avec des cellules dites âgées telles que définies précédemment, ensemencées dans un modèle tissulaire tel que défini précédemment, pendant une période de temps suffisante pour permettre à ladite substance potentiellement active d'agir ; b) l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète, de préférence telle que définie précédemment, des cellules dites âgées, soumises à contact avec ces substances ; c) La comparaison de l'analyse effectuée au b) avec l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète, de préférence telle que définie précédemment, de cellules vivantes cultivées sans la présence de ladite substance potentiellement active ; d) Suite à la comparaison des analyses effectuées au c), l'identification éventuelle d'au moins une substance active capable de prévenir la modification d'au moins un paramètre biologique modifié par le vieillissement. Selon un autre aspect l'invention concerne l'utilisation d'une substance active sélectionnée par un procédé tel que défini précédemment, pour la préparation d'au moins une composition cosmétique et/ou pharmaceutique. Selon un autre aspect l'invention concerne une substance active dans le domaine de la cosmétique ou de la pharmacie sélectionnée par un procédé défini précédemment. Selon un autre aspect l'invention concerne une substance active capable de reverser un paramètre biologique qui est identifié comme étant modifié au cours du vieillissement, et/ou d'en prévenir la modification, ce paramètre ayant été identifié par réalisation d'études comparées réalisées entre des modèles cellulaires mettant en #uvre des cellules dites jeunes et des modèles cellulaires mettant en #uvre des cellules dites âgées , l'un au moins de ces modèles étant un modèle tissulaire comprenant au moins soit des fibroblastes, soit des kératinocytes. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à la lumière de la description explicative, qui va suivre, faite en référence aux exemples donnés simplement à titre d'illustration et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention. Les exemples font partie intégrante de la présente invention, et toute caractéristique, qui apparaît être nouvelle par rapport à un état de la technique quelconque est revendiquée comme partie intégrante de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité. Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, la température est donnée en degré Celsius, la pression est la pression atmosphérique, sauf indications contraires. EXEMPLES EXEMPLE 1 Extraction et culture de cellules dites jeunes ou âgées Les cellules dites jeunes sont soit : # des cellules extraites de donneurs jeunes, c'est à dire extraites de biopsie obtenues à partir de chirurgie plastique de préférence prépuce ou abdominale ou mammaire ou éventuellement gingivale ou vaginale, non exposées au soleil, # des cellules extraites de donneurs jeunes, par exemple des donneurs âgés de moins de 45 ans, # des cellules utilisées en passage précoce, par exemple inférieur à 10 pour les fibroblastes, à 6 pour les mélanocytes et à 2 pour les kératinocytes. Les cellules dites âgées sont soit : # des cellules extraites de biopsies de donneurs âgés obtenues à partir de chirurgie plastique de préférence abdominale ou mammaire ou éventuellement gingivale ou vaginale, non exposées au soleil de patients âgés, par exemple de donneurs de plus de 45 ans, # des cellules extraites de biopsies de donneurs d'âge variable, obtenues de chirurgie plastique de zones exposées au soleil (visage, cou, main) # de cellules utilisées en passage tardif, par exemple supérieur à 10 pour les fibroblastes, à 6 pour les mélanocytes et à 2 pour les kératinocytes. Les types cellulaires obtenus peuvent être des fibroblastes extraits par la technique des explants ou par digestion enzymatique, par exemple à la collagènase, des kératinocytes ou des mélanocytes extraits après dissociation dermo-épidermique enzymatique en particulier dispase ou thermolysine ou trypsine-EDTA.... Après extraction, les fibroblastes sont amplifiés en milieu DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) /Ham F12 glutamax 50/50 volume/volume, supplémenté de 10% de sérum de veau, de pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, de gentamicine à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, d'amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre. Les fibroblastes sont amplifiés par trypsination dès l'obtention d'une confluence de 90%. Après extraction, les kératinocytes sont amplifiés en milieu K-SFM (Keratinocyte Sérum Free Medium - Invitrogen) contenant de l'extrait de glande pituitaire bovine supplémenté de pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, de gentamicine à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, d'amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre. Les kératinocytes sont amplifiés par trypsination dès l'obtention d'une confluence de 90%. Après extraction, les mélanocytes sont amplifiés en milieu MMK2 (Melanocyte Medium Kit - Sigma) supplémenté de pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, de gentamicine à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, d'amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre et de généticine à raison de 100microgrammes/millilitre pendant 3 jours afin d'éliminer les kératinocytes résiduels. La culture est ensuite poursuivie dans le même milieu excepté la généticine. Les mélanocytes sont amplifiés par trypsination dès l'obtention d'une confluence de 90%. EXEMPLE 2 Préparation de dermes reconstruits dits jeunes et âgés et extraction d'ARN. d'ADN et des protéines 500 000 fibroblastes d'un pool de trois donneurs jeunes (inférieur à 45 ans) et âgés (supérieur à 45 ans) amplifiés tel que décrit dans l'exemple 1 sont ensemencés dans des substrats dermiques composés de collagène réticulé au diphénylphosphorylazide, dans un milieu DMEM-glutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau , ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 nanogramme/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre pour une période de 21 jours. En fin d'expérimentation, les dermes reconstruits sont broyés dans l'azote liquide à l'aide d'un biopulverizer. Le broyat est repris dans du Tri Reagent# (T9424 Sigma, St Louis USA) puis extrait par du chloroforme. Après centrifugation à 12000g pendant 15 minutes à 4 C, les ARNs se trouvent dans la phase supérieure, les ADNs dans la phase inférieure et les protéines à l'interface. EXEMPLE 3 Préparation d'épidermes reconstruits dits jeunes et âgés et extraction d'ARN, d'ADN et des protéines 4 106 kératinocytes dits jeunes (donneur d'âge inférieur à 35 ans) et âgés (donneur d'âge supérieur à 55 ans) amplifiés tel que décrit dans l'exemple 1 jusqu'au passage 1 (première amplification par trypsination) sont ensemencés dans des inserts type chambre de Boyden (membrane de porosité 0,4 m et diamètre 25mm) préalablement ensemencés par une sous couche nourricière de fibroblastes, dans un milieu de culture DMEM-Glutamax / Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou facteurde croissance épidermique à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, Isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture en immersion de 3 à 8 jours. Les cultures de kératinocytes sont ensuite placées à l'interface air-liquide pendant 12 à 18 jours dans le même milieu de culture utilisé pour la culture en immersion, excepté le sérum de veau l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et l'umuline. En fin d'expérimentation, les épidermes reconstruits présents dans les inserts sont grattés, collectés puis sont repris dans du Tri Reagent# (Sigma) et extraits par du chloroforme. Après centrifugation à 12000g pendant 15 minutes à 4 C, les ARNs se trouvent dans la phase supérieure, les ADNs dans la phase inférieure et les protéines à l'interface. EXEMPLE 4 Préparation d'épithélia de muqueuse gingivale reconstruits dits jeunes et âgés et extraction d'ARN. d'ADN et des protéines 1 à 2.106 cellules épithéliales de muqueuse gingivale dite jeunes (Passage 1, première amplification par trypsination) et âgées (Passage 4, quatrième amplification par trypsination) extraites tel que décrit dans l'exemple 1 sont ensemencées dans des inserts type chambre de Boyden (membrane de porosité 0,4 m et diamètre 10mm), dans un milieu de culture DMEM-Glutamax / Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 mole/litre, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture en immersion de 3 à 8 jours. Les cultures de cellules épithéliales sont ensuite maintenues en immersion pendant 12 à 18 jours dans le même milieu de culture que celui utilisé pour la culture en immersion, excepté le pourcentage de sérum de veau qui est abaissé de 10% jusqu'à 1%. En fin d'expérimentation, les épithélia reconstruits sont repris dans du Tri Reagent (Sigma) puis extraits par du chloroforme. Après centrifugation à 12 000 g pendant 15 minutes à 4 C, les ARNs se trouvent dans la phase supérieure, les ADNs dans la phase inférieure et les protéines à l'interface. EXEMPLE 5 Modèle pluricellulaire tridimensionnel de peaux reconstruites dites jeunes et âgées et extraction d'ARN, d'ADN et des protéines 400 000 fibroblastes dits jeunes (pool de trois donneurs de moins de 35 ans) et âgées (pool de trois donneurs de plus de 55 ans) sont extraits et amplifiés jusqu'au passage 5 (cinquième amplification par trypsination) tel que décrit dans l'exemple 1 puis sont ensemencés sur des substrats dermiques à base d'éponges de collagène surfacées. Brièvement, les substrats dermiques sont préparés selon le protocole suivant : -Séchage à 25 C d'un gel de collagène à 0,75% pour former un film -Dépôt du film de collagène sur un gel de collagène à 0,75% -Lyophilisation pendant 24h et réticulation au DPPA (diphénylphosphorylazide 50 l/g de collagène en solvant diméthylformamide puis tampon borate pH 8,9) -Après rinçage à l'eau déminéralisée, les substrats dermiques surfacés sont de nouveau lyophilisés. Le milieu utilisé pour la culture des fibroblastes est un milieu DMEMGlutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou Facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 ng/mL, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture de 14 jours. Puis 400 000 kératinocytes dits jeunes (pool de trois de moins de 35 ans) et âgées (pool de trois donneurs de plus de 55 ans) extraits et amplifiés jusqu'au passage 2 (deuxième amplification par trypsination) tel que décrit dans l'exemple 1 sont ensemencés sur les équivalents dermiques dans un milieu de culture DMEM-Glutamax / Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture en immersion de 7 jours. Les cultures sont ensuite placées à l'interface air-liquide pendant 21 jours dans le même milieu de culture utilisé pour la culture en immersion, excepté le sérum de veau, l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et l'umuline. En fin d'expérimentation, les peaux reconstruites sont reprises dans du Tri Reagent (Sigma), broyées dans l'azote liquide à l'aide d'un biopulverizer puis extraites par du choloroforme. Après centrifugation à 12 000g pendant 15 minutes à 4 C, les ARNs se trouvent dans la phase supérieure, les ADNs dans la phase inférieure et les protéines à l'interface. EXEMPLE 6 Modèle pluricellulaire tridimensionnel de peau reconstruite dites jeunes et âgées , contenant les populations cellules de Lanqerhans. cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales puis extraction d'ARN, d'ADN et des protéines Génération des cellules dendritiques indifférenciées et immatures capables de s'orienter préférentiellement dans la voie de différenciation des cellules de Langerhans : Le sang circulant périphérique a été récolté par prise de sang veineux sur un ou plusieurs donneurs humains, dans des vacutainers supplémentés en produits anti-coagulants habituels tel que le lithium-héparine. La séparation des monocytes CD14+ à partir de ce sang circulant peut-être réalisée avantageusement selon le protocole décrit par Geissmann et al. dans J. EXP. MED. Vol 187, No 6, 16 mars 1998, pages 961-966 publié par The Rockefeller University Press de la manière suivante: - après centrifugation sur un gradient Ficoll# (sodiumdiatrizoate/ polysucchrose densité 1,077 ; Abcys 1053980), les cellules mononucléées du sang circulant sont récupérées et marquées indirectement avec un cocktail d'anticorps (principalement anti-CD3, ou anti-fCluster de différenciation 3, anti-CD7, anti-CD19, anti-CD45RA, antiCD56, ou Cluster de différenciation anti-IgE ou anti-immunoglobuline E) couplés à des billes magnétiques. - après passage sur une colonne aimantée, seuls les monocytes non marqués magnétiquement sont élués. Les monocytes CD14+ sont récupérés dans l'éluat en procédant par tout procédé physique de séparation bien connu de l'homme de l'art et notamment par sédimentation ou centrifugation et sont élues tels quels pour les cultures ultérieures. Les monocytes CD14+, sont ensuite mis en culture, à raison d'environ 1 million par millilitre, dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFpl à raison de 10 ng/mL. On réalise la culture à 37 C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02. Le milieu de culture est supplémenté initialement d'une troisième cytokine, à savoir la cytokine IL-13 à raison de 10 ng/mL. Avant au plus 2 jours de culture, on rajoute le même milieu de culture mais ne contenant pas l'IL- 13 jusqu'au 6ème jour de culture. Au 6ème jour, on génère des cellules dendritiques indifférenciées et immatures capables de s'orienter préférentiellement dans la voie de différenciation en cellules de Langerhans : - environ 60 à 80% des cellules dendritiques générées in vitro expriment la Languerine au niveau intracellulaire, et CCR6 qui est le récepteur spécifique de MIP-3a ; - les cellules dendritiques générées in vitro sont fortement chimioattractées par MIP-3a, ce qui démontre la fonctionnalité du récepteur CCR6 ; - les cellules dendritiques générées in vitro sont immatures car elles n'expriment pas les marqueurs de maturité CD83, DC-LAMP et CCR7. # Le modèle tridimensionnel est ensuite réalisé selon le protocole : 2.105 fibroblastes amplifiés du passage 3 au passage 10 (dixième amplification par trypsination), tels que décrits dans l'exemple 1, sont ensemencés sur des substrats dermiques à base de collagèneglycosaminoglycanne-chitosane, dans un milieu de culture DMEMGlutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou Facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 ng/mL, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture de 21 jours. La culture est poursuivie une semaine supplémentaire dans le milieu décrit précédemment excepté l'EGF. Puis 2.105 kératinocytes amplifiés du passage 0 au passage 2 (deuxième amplification par trypsination) tels que décrits dans l'exemple 1, et 1 à 3.105 cellules dendritiques indifférenciées générées in vitro sont ensemencées sur les équivalents dermiques dans un milieu de culture DMEM-Glutamax / Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture en immersion de 7 jours. Les cultures sont ensuite placées à l'interface air-liquide pendant 21 jours dans le même milieu de culture utilisé pour la culture en immersion, excepté le sérum de veau, l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et l'umuline. Dans ces conditions, les cellules de Langerhans sont localisées dans l'épiderme, les cellules dendritiques interstitielles, les macrophages et les cellules endothéliales dans le derme. En fin d'expérimentation, les peaux reconstruites immunocompétentes sont reprises dans du Tri Reagent (Sigma), broyées dans l'azote liquide à l'aide d'un Biopulverizer puis extraites par du choloroforme. Après centifugation à 12 000 g pendant 15 minutes à 4 C, les ARNs se trouvent dans la phase supérieure, les ADNs dans la phase inférieure et les protéines à l'interface. EXEMPLE 7 Purification des ARN , ADN et protéines des modèles cellulaires précédemment décrits Les ARN sont solubilisés à raison de 1 pg/pl d'eau après précipitation par du propanol 2, centrifugation 15 minutes à 12 000 g, lavage du culot à l'éthanol 80%, séchage, traitement par DNAses (AMBION) et lecture de l'absorbance à 260/280nm. Les ADN sont précipités par centrifugation 2 000 g, 5 minutes à 4 C, après élimination de la phase supérieure contenant les ARN, par de l'éthanol. Le surnageant est conservé et contient la fraction protéique. Le culot contenant les ADN est rincé par centrifugation 2 000 g, 5 minutes à 4 C par un tampon citrate 0,1M 10% éthanol, de l'éthanol 75% puis séché sous vide pendant 5-10mn et enfin solubilisé dans de la soude 8 millimolaire. Centrifuger 10 minutes à 12 000 g pour éliminer les insolubles et ajuster la concentration en ADN à 0,3 pg/pl après lecture de l'absorbance à 260nm. Les protéines contenues dans l'extrait éthanolique (surnageant) sont précipitées par de l'isopropanol après centrifugation 12 000 g pendant 10 minutes à 4 C, rincées par trois lavages par centrifugation 7 500 g pendant 5 minutes à 4 C en 0,3M guanidine HCI dans éthanol 95%. Le culot est ensuite séché sous vide pendant 5-10mn puis solubilisé dans du SDS 1%. EXEMPLE 8 Etude d'efficacité d'un complexe anti-âae sur peaux reconstruites dites jeunes et âgées Des peaux reconstruites ont été préparées selon l'exemple 5. Un complexe anti-age composé de trois actifs, dont un actif Basaline (protéine de malt modifiée, Coletica, Lyon) stimulant la reconstruction de la membrane basale, a été ajouté ou non (Témoin non traité) au milieu de culture d'émersion à une concentration de 2,25%, et ceci pendant une durée de 14 jours. Etudes Immunohistochimiques Après 14 jours de culture, les peaux reconstruites témoins et traitées étaient congelées dans de l'azote liquide et des cryocoupes étaient réalisées à l'aide d'un cryomicrotome (cryostat, Microm 500M). La présence de laminines totales, de laminine-5, de collagène IV et de collagène VII était révélée par des techniques immunohistochimiques. Il s'agissait pour les laminines, du NCL-LAMININ, pour le collagène IV, du NCL-COLL-IV et pour le collagène VII, du NCL-COLL-VII. L'anticorps utilisé pour la laminine-5 était le kalinine/Laminine ss3. Tous ces anticorps étaient couplés à de la DiAminoBenzidine (DAB), utilisé comme système de révélation. Toutes les opérations nécessaires à la mise en évidence des molécules étudiées (liaison anticorps-molécules, rinçages, révélation...) ont été réalisées à l'aide d'un automate d'immunohistochimie (Nexes, Ventana). Des clichés des coupes de peaux reconstruites ont été réalisés pour chaque anticorps à l'aide d'un microscope Axiophot (Zeiss) (grossissement x 40) et permettent la mise en évidence d'une membrane basale organisée de bonne qualité. Les résultats obtenus montrent que les modèles de peaux reconstruites expriment tous les marqueurs suivis qu cours de cette étude : les laminines totales, la laminine 5, le collagène de type IV et VII. Le marquage est plus intense dans le cas des peaux reconstruites traitées par le complexe anti-âge. L'analyse histologique ne permet toutefois pas de montrer une réelle différence entre les peaux jeunes et âgées. Expériences de Dot-Blot Dans une première étape, les collagènes sont extraits à partir des reconstructions cutanées après digestion à la pepsine (20 mg/g sec d'échantillon) en milieu acide acétique 0,5 N pendant 48 h à 4 C. Après centrifugation pendant 30mn à 15 000 g, le collagène de type I est éliminé par précipitation en NaCI 0,7M 2 heures à 4 C et centrifugation 13 000 rpm. Le collagène de type IV contenu dans le surnageant est précipité en NaCI 1,2M pendant une nuit à 4 C et collecté par centrifugation 13 000 rpm. Le collagène de type VII contenu dans le surnageant est précipité par un mélange TCA/Acétone/DTT (Biorad) pendant deux heures à 4 C et 45mn à -20 C, collecté par centrifugation 13 000 rpm pendant 30 mn, puis rincé en DTT/Acétone par centrifugation. Les échantillons contenant les différents types de collagène sont repris dans du tampon TBS puis sont transférés sur membrane de nitrocellulose. Après saturation en tampon TBS contenant 3% l'albumine bovine sérique pendant 30mn , la membrane est rincée en tampon TBS puis incubée 1 heure à température ambiante et sous agitation dans la solution contenant l'anticorps primaire. Après rinçage en tampon TBS contenant 0,05% de Tween 20 (ICI), la membrane est incubée dans le second anticorps pendant 1 heure à température ambiante et sous agitation. Le signal est ensuite amplifié en utilisant un kit d'amplification et de révélation Opti-4CN substrate kit (Bio-rad) en suivant les recommandations du fournisseur. La quantification des bandes par analyse d'image ne permet pas de montrer un effet significatif de l'actif anti-âge sur la synthèse de collagène IV et VII (problème de sensibilité). Expériences de PCR Quantitative en temps réel La quantification des ARNm codant l'actine, le collagène IV et le collagène VII a été réalisée dans les modèles reconstruits par une technique de PCR Quantitative en temps réel. Pour cela, des couples d'amorces ( primers ) permettant l'amplification de fragments spécifiques des collagènes IV (231 paires de bases) et VII (763 paires de bases) et des amorces de séquence d'actine (541 paires de bases) ont été utilisés. Collagène IV sens 5'-GTACTGCAACCCTGGTGATGTCTGC-3' Collagène IV antisens 5'-GAATATCCGATCCACAAACTCCGCC-3' Collagène VII sens 5'-GCCACAGGATACAGGGTTTC-3' Collagène VII antisens 5'-CACCACACGTAGTTCAATGC-3' ACTINE sens GTGGGGCGCCCCAGGCACCA ACTINE antisens CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC L'extraction des ARN à partir des peaux reconstruites traitées et non traitées a été réalisée en suivant le protocole décrit dans l'exemple 7. Les réactions de RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reactions) sont réalisées par RT-PCR en temps réel à l'aide du système Opticon (MJ Research.). Le mélange réactionnel (50 l) introduit dans les puits est le suivant, pour chaque échantillon : - 10 l d'ARN à la concentration de 5 ng/pl. - Les amorces des différents marqueurs utilisés - Mélange réactionnel (Qiagen) contenant l'enzyme de reverse transcription et l'enzyme DNA polymérase, le marqueur SYBR Green I (fluorophore s'intercalant dans l'ADN double brin au cours de l'étape d'élongation) et du MgCI2. Les conditions de RT-PCR sont les suivantes : - Reverse transcription :30 min à 50 C, - Réactions de PCR : sec à 94 C, 30 sec à 56 C et 30 sec à 72 C], 50 cycles. L'absence de contamination et la pureté des produits amplifiés sont vérifiés via les courbes de fusion des produits de PCR amplifiés. Les produits présentant un double pic ou une température de fusion anormale sont éliminés. Analyse et Méthode de calcul : L'incorporation de fluorescence dans l'ADN amplifié a été mesurée en continu au cours des cycles de PCR. Ce système permet d'obtenir des courbes de mesure de la fluorescence en fonction du nombre de cycles de PCR et ainsi d'évaluer une quantité relative d'ADN amplifié. Afin de tenir compte de la population cellulaire présente dans les peaux reconstruites, tous les résultats ont été rapportés au signal actine , utilisé comme housekeeping gene . Selon l'expérimentation , le seuil de mesure du C(T) (=cycle threshold) est fixé pour T compris entre 0,05 et 0,01 puis une unité arbitraire de mesure est calculée pour chaque gène selon la formule : Sgène x = 107 x (1/2)C(T)gène x C (T)gène x signifiant seuil de mesure du C(T) (Cycle Threshold) du gène x . Les valeurs des gènes d'intérêt sont rapportées au signal actine par calcul du rapport : R = Sgène x / Sactine. Ces rapports sont comparés entre les échantillons traités et non traités. Les résultats obtenus démontrent que le complexe anti-âge augmente significativement l'expression des ARNm codant pour le collagène de type IV (+65% p EXEMPLE 9 Analyse par DNA array de monocouches, dermes reconstruits et peaux reconstruites, entre des modèles dits jeunes et âgés . Les mêmes souches cellulaires, au même passage, sont utilisés pour réaliser les trois modèles cellulaires. # Des fibroblastes (pool de trois donneurs d'âges inférieur à 35 ans et supérieur à 55 ans) extraits tels que défini dans l'exemple 1 ont été cultivés en monocouche jusqu'à confluence en milieu DMEM/Ham F12 glutamax 50/50 v/v, supplémenté de 10% de sérum de veau, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, gentamicine à une concentration finale de 20 microgramme/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre. Les tapis sont collectés en Tri Reagent# (Sigma). # Les dermes reconstruits dits jeunes et âgés sont préparés par ensemencement de matrices collagéniques surfacées réticulées au diphénylphosphoryl azide par 400 000 fibroblastes (issus d'un pool d'au moins trois donneurs d'âges inférieur à 35 ans et supérieur à 55 ans, extraits et amplifiés séparément selon le protocole décrit dans l'exemple 1). Les dermes reconstruits sont cultivés pendant 15 jours en milieu DMEM-glutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau , acide ascorbique à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 nanogramme/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, gentamicine à une concentration finale de 20 microgramme/millilitre. Les dermes reconstruits sont collectés en Reagent# (Sigma). # Les peaux reconstruites dites jeunes et âgées sont préparées par ensemencement de matrices collagéniques surfacées réticulées au diphénylphosphoryl azide par 400 000 fibroblastes (issus d'un pool d'au moins trois donneurs d'âges inférieur à 35 ans et supérieur à 55 ans, extraits et amplifiés séparément selon le protocole décrit dans l'exemple 1). Les dermes reconstruits ainsi préparés sont cultivés pendant 15 jours en milieu DMEM-glutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau , acide ascorbique à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou facteurde croissance épidermique à une concentration finale de 10 nanogramme/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, gentamicine à une concentration finale de 20 microgramme/millilitre. Les kératinocytes (issus des mêmes pools de donneurs et extraits et amplifiés séparément selon le protocole décrit dans l'exemple 1) sont ensemencés à raison de 400 000 par derme reconstruit. La culture est poursuivie pendant une semaine en milieu de prolifération composé de DMEM-Glutamax/ Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre. Les peaux reconstruites sont alors émergées puis cultivés pendant deux semaines supplémentaires dans le même milieu excepté le sérum de veau, l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et l'umuline. Les peaux reconstruites sont collectées en Tri Reagent (Sigma). cDNA array : -Brièvement, les ARNs des échantillons sont extraits (après broyage dans l'azote liquide à l'aide d'un Biopulverizer pour les modèles tridimensionnels) et purifiés selon le protocole du fournisseur de Tri Reagent# (élimination totale de l'ADN). -Les ARNs purifiés sont analysés qualitativement et quantitativement. -L'étape suivante a été la purification des pools d'ARN messagers (ARNm) par hybridation des extrémités poly(A) des ARNm à des amorces oligo(dT) biotinylées et capture sélective sur billes de streptavidine, selon le protocole Atlas Pure (Clontech). Les sondes ADN multiple marquées au 33P ont été réalisées par réverse transcription des ARNm liés sur billes de poly(dT), à l'aide d'un pool de primers spécifiques des séquences immobilisées sur les arrays , en présence de [a33P]-dATP. Les sondes marquées ont été purifiées par chromatographie sur colonne d'exclusion, la qualité et l'équivalence des sondes marquées ont été évaluées par comptage en scintillation liquide. -Les membranes Custom ATLAS ont été pré-traitées puis les ADNc immobilisés sur chaque membrane ont été hybridés (68 C une nuit) avec les sondes marquées correspondantes ; les filtres ont ensuite été lavés avant analyse. -Analyse par autoradiographie et quantification de la radioactivité des spots à l'aide d'un Phosphorimager Cyclone (Packard instrument ; 3h puis 72h d'acquisition) et du logiciel QuantArray, Packard. -Identification des gènes d'intérêt variant entre les différentes conditions expérimentales : donneurs jeunes versus donneurs âgés. Les résultats sont exprimés en pourcentage de variation entre le modèle âgé et jeune, en condition monocouche, tridimensionnel monocellulaire et , tridimensionnel pluricellulaire. Si on s'intéresse plus particulièrement aux protéines de la matrice extracellulaire, il a pu ainsi être démontrer par exemple que la quantité d'ARN codant pour le précurseur de la fibronectine était augmentée dans les monocouches (x2,1) et les dermes reconstruits (xl,8) dits âgés comparativement aux modèles dits jeunes . Par contre dans le modèle de peau reconstruite dit âgées , la quantité d'ARN est nettement diminuée (1,75) par rapport au modèle de peau reconstruite dite jeunes . Les résultats obtenus dans le modèle de peau reconstruite corroborent tout à fait les résultats obtenus par analyses immunohistochimiques de prélèvements de peau de donneurs d'âges variables. Les résultats obtenus sur les monocouches qui démontrent une augmentation des ARNs de précurseurs de fibronectine, sont eux en accord avec des résultats d'études obtenus par analyse des ARNm qui démontrent également une augmentation du messager en fonction de l'âge du donneur mais également du nombre de passages des fibroblastes cultivés en monocouche. Ces résultats illustrent tout à fait le fait que les résultats sont dépendant des modèles cellulaires mis en #uvre et que les modèles en monocouche, ou tridimensionnels unicellulaires ne sont pas totalement prédictifs puisqu'ils ne tiennent pas compte des interactions entre les différents types cellulaires. Par ailleurs , il a pu être montré que de nombreux autres gènes ont une expression différentes entre les monocouches fibroblastiques, les dermes reconstruits et les peux reconstruites et que les niveaux d'expression de ces gènes ne sont pas toujours équivalents dans ces trois différents modèles. On peut citer par exemple (résultats exprimés par le rapport âgé/jeune en pourcentage) : TABLEAU 1 Gène Fibroblastes Dermes Peaux en reconstruit reconstruites monocouche Cytokératine 1 118 178 85 Alpha-2-PRAP et LRPAP1 292 95 81 Antigène 1 de la pemphigoïde nd Nd 232 bulleuse Protéine du protéoglycanne de 129 155 53 cartilage, précurseur protéique de l'aggrécanne, Protéine 1 du protéoglycanne CS Précurseur antigénique CD44,77 33 89 ECMIII, LHR, récepteur au hyaluronate, HS proteoglycanne, épicanne Glycoprotéine précurseur du CD59,95 40 83 membrane attack c Antigène CD9, P24, antigène 40 124 102 leucocytaire MIC3, MRP Précurseur de la sous unité 46 120 46 Procollagène 3 alpha 1 Colla en 6 alpha 1 subunit 285 92 64 Sous unité Colla en 6 alpha 2 154 99 80 Précurseur de la sous unité 139 48 79 Procollagène 16 alpha 1 Précurseur d'élastine 36 Nd nd Précurseur de l'inhibiteur 1 de 95 252 87 l'activateur endothélial du plasminogène Précurseur de la fibronectine 209 177 57 Hyaluronanne synthase 2 109 282 189 Involucrine nd Nd 260 LRP1, récepteur alpha 2 226 187 65 macroglobuline, récepteur de l'apolipoprotéine E antigène CD91 Précurseur lumicanne, kératane 95 21 109 sulfate protéoglycanne, LDC MMP11, stromélysine 3 189 217 63 Précurseur MMP16, MMP 3 de type 129 201 135 membranaire, MMP-X2 MMP3, précurseur stromélysine 1 7 117 143 TIMP1, EPA, inhibiteur de 40 49 74 collagénase fibroblastique TIMP3, gène mitogène inductible 5 49 210 173 PAI-2, monocyte ARG-serpine, nd 88 333 inhibiteur de l'urokinase SPARC, ostéonectine, BM40 65 135 50 Facteur de croissance osseux 213 141 93 (BDGF1) Récepteur riche en cystéine du 101 124 49 facteur de croissance fibroblastique, sialoglycoprotéine de membrane golgienne MG160 Protéine TIS11B, BRF1, facteur de 237 165 78 réponse 1 à l'EGF Facteur de croissance glial des 49 137 53 neurites GCP2, peptide d'activation nd Nd 562 neutrophile ENA-178 Facteur d'inhibition de croissance, 66 148 161 métallothionéine III Précurseur de la protéine de liaison 131 291 91 3 au facteur de croissance insuline like Précurseur IL1 alpha, nd Nd 161 hématopoiétine 1 Précurseur de la protéine nd 88 156 antagoniste du récepteur IL1 Précurseur du récepteur de type II nd Nd 512 à l'IL1 Précurseur de la sous unité IL12 137 173 81 beta Précurseur IL3, facteur MCS, 114 180 75 facteur de stimulation MCGF, facteur de stimulation P-cell, facteur de croissance hématopoiétique Précurseur IL6, BSF2, IFN beta 2,86 293 84 facteur de croissance hybridoma Précurseur IL8, MDNCF, NAP1, nd 121 737 LYNAP, protéine 3-10C KGF, FGF7 65 150 50 MIF, GIF 35 193 121 Calgranuline, chaine lourde Ll nd nd 1981 leucocytaire, S100A9, MRP14, Calgranuline A, MRP8, , chaine nd nd 4593 légère Ll leucocytaire, S100A8 MCP1, MCAF, SCYA2 94 174 289 Paxilline 154 160 71 Facteur de croissance placentaire 1 90 188 388 et 2 Précurseur sous unité PDGFA nd nd 397 Sous unité alpha du récepteur 49 118 50 PDGF Précurseur pleiotrophine, facteur 84 143 49 spécifique ostéoblastique 1, , HBNF1, HB-GAM, HB-GF8 Relatif au récepteur tyrosine kinase 122 159 80 Rho-related GTP-binding protein 132 88 188 Thymosine beta 10, PTMB10 44 139 138 Protéine inductible par TNF, nd nd 482 protéine de liaison au hyaluronate Précurseur VEGF B, facteur 186 163 98 106 relatif au VEGF Précurseur VEGF, facteur de 105 230 114 perméabilité vasculaire Zyxine 2 152 75 114 HSP-90, HSP84, HSPCB 97 40 107 HSPB3, HSP17, HSPL27 97 168 95 SOD1 Cytosolique 88 47 120 SOD2 88 47 120 Métallothionéine IH, MT0, MT11, 53 127 150 MT2, MTiL, MT1R Les méthodes de l'invention permettent donc une meilleure compréhension des synthèses de différentes molécules au cours du vieillissement de la peau et peuvent permettre le criblage de principes actifs visant à prévenir ou limiter les modifications observées au cours du vieillissement. EXEMPLE 10 Analyse par Northern Blot des ARNm codant pour la fibronectine dans un modèle de peaux reconstruites dites jeunes et âgés Les peaux reconstruites jeunes et âgées sont préparées par ensemencement de matrices Collagène-GAG-Chitosane par 400 000 fibroblastes (issus d'un pool d'au moins trois donneurs d'âges inférieur à 35 ans et supérieur à 55 ans, extraits et amplifiés séparément selon le protocole décrit dans l'exemple 1) et culture pendant 15 jours en milieu DMEM-glutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau , acide ascorbique à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 nanogramme/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, gentamicine à une concentration finale de 20 microgramme/millilitre. Les kératinocytes (issus des mêmes pools de donneurs et extraits et amplifiés séparément selon le protocole décrit dans l'exemple 1) sont ensemencés à raison de 400 000 par derme reconstruit. La culture est poursuivie pendant une semaine en milieu de prolifération composé de DMEM-Glutamax / Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre. Les peaux reconstruites sont alors émergées puis cultivés pendant deux semaines supplémentaires dans le même milieu excepté le sérum de veau, l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et l'umuline. Les échantillons sont collectés en Tri Reagent# (Sigma). Les ARNs totaux sont extraits selon le protocole décrit dans l'exemple 7. Après la quantification des ARNs par densitométrie à 260nm, les solutions sont ajustées à 1 g/ l d'ARN. 3 à 10 g de chaque échantillon ont alors été déposés sur un gel d'agarose/formaldéhyde pour séparation. Les ARNs ont ensuite été transférés par capillarité sur membranes de nylon HybondN (Amersham) pendant une nuit. Les ARNs sont été couplés de manière covalente au nylon par chauffage à 80 C pendant 90 minutes. Les membranes ont ensuite été pré-hybridées pendant 20 minutes à 68 C dans 8ml d'ExpressHyb (Clontech) à 0,1 mg/ml et hybridées pendant une nuit à 68 C en présence de sondes marquées. A la fin de la période d'incubation, les membranes ont été lavées 4 fois 30 minutes à 68 C par une solution 2 fois concentrée de SSC contenant 1% de SDS puis 1 fois à 68 C par une solution 0,1 fois concentrée de SSC contenant 0,5% de SDS et enfin une dernière fois par une solution 2 fois concentrée de SSC. Le comptage direct de la radioactivité des spots à l'aide d'un Phosphoimager (Packard Instruments) permet la quantification des ARNs. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'expression rapportés au signal actine. L'analyse quantitative par Northern Blot des ARNm codant pour la fibronectine a permis de démontrer une diminution (facteur 2) des ARNm dans les modèles de peaux reconstruites dites âgées comparativement aux peaux reconstruites dites jeunes . EXEMPLE 11 Analyse par Western Blot du collagène de type VII dans un modèle de peaux reconstruites dites jeunes et âgés Les dermes reconstruits dits jeunes et âgées sont préparés par ensemencement de matrices Collagène-GAG-Chitosane par 400 000 dits jeunes en P2 (passage 2, deuxième amplification par trypsination) et âgés en P12 (passage 12, douzième amplification par trypsination), (extraits et amplifiés séparément selon le protocole décrit dans l'exemple 1) et cultivés pendant 15 jours en milieu DMEM-glutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau , acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 nanogramme/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre. Les kératinocytes dits jeunes en P1 (passage 1, première amplification par trypsination) et âgés en P3 sont extraits et amplifiés séparément selon le protocole décrit dans l'exemple 1, puis sont ensemencés à raison de 400 000 par derme reconstruit. La culture est poursuivie pendant une semaine en milieu de prolifération composé de DMEM-Glutamax / Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre. Les peaux reconstruites sont alors émergées puis cultivée pendant deux semaines supplémentaires dans le même milieu excepté le sérum de veau, l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et l'umuline. Le collagène de type VII est extrait selon le protocole décrit dans l'exemple 8 et dissout en tampon d'électrophorèse (0,5M Tris-HCI, pH6,8, 10% glycérol, 2% SDS, 5% mercaptoethanol). Les échantillons sont chauffés à 95 C pendant 5mn. Le fractionnement par taille se fait sur SDS-PAGE 5%. Le transfert est réalisé sur membrane polyvinylidene fluoride. Un témoin de collagène VII purifié est réalisé en parallèle aux échantillons extraits, ainsi qu'un standard de masse moléculaire. Après transfert, les membranes sont incubées pendant une heure dans le tampon de blocage (15nM NaCl, 20mM Tris-HCI, 0,5% Tween 20, 3% BSA, pH7,4). Le premier anticorps anticollagène de type VII (polyclonal lapin 1/1000) est ajouté dans une solution de PBS/BSA 1%. Après 2 heures à température ambiante, les membranes sont rincées avec le tampon de blocage et incubées avec le second anticorps marqué (IgG anti-lapin conjugué HRP (horseradish peroxidase) pendant une heure à température ambiante. Après rinçage en PBS, les membranes sont développées avec une solution de 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride. En cas de faible marquage, on peut utiliser le kit d'amplification (Biorad) puis de révélation Opti-4CN Substrate kit (Biorad). Après révélation, la membrane est rincée quelques minutes à l'eau puis séchée entre papier absorbant. L'analyse d'intensité des bandes par analyse d'images permet de mettre en évidence une diminution significative de la teneur en collagène de type VII des extraits des différents échantillons âgés. EXEMPLE 12 Analyse par DNA array de kératinocvtes en monocouche, en comparaison avec des épidermes reconstruits, modèles dits jeunes et âgés . Les mêmes souches cellulaires, au même passage, sont utilisés pour réaliser les trois modèles cellulaires. Des kératinocytes (pool de trois donneurs d'âges inférieur à 35 ans et supérieur à 55 ans) extraits tels que défini dans l'exemple 1 ont été cultivés en monocouche jusqu'à confluence en milieu K-SFM (Gibco) pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, gentamicine à une concentration finale de 20 microgramme/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre. Les tapis sont collectés en Tri Reagent (Sigma). Des épidermes reconstruits sont préparés à raison de 4 106 kératinocytes dits jeunes (pool de trois donneurs d'âges inférieur à 35 ans et supérieur à 55 ans) amplifiés tel que décrit dans l'exemple 1 jusqu'au passage 1 (première amplification par trypsination) sont ensemencés dans des inserts type chambre de Boyden (membrane de porosité 0,4 m et diamètre 25mm) préalablement ensemencés par une sous couche nourricière de fibroblastes, dans un milieu de culture DMEM-Glutamax Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, Isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture en immersion de 3 à 8 jours. Les cultures de kératinocytes sont ensuite placées à l'interface air-liquide pendant 12 à 18 jours dans le même milieu de culture utilisé pour la culture en immersion, excepté le sérum de veau l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et l'umuline. En fin d'expérimentation, les monocouches de kératinocytes et les épidermes reconstruits présents dans les inserts sont grattés, collectés puis sont repris dans du Tri Reagent# (Sigma) et extraits par du chloroforme. Après centrifugation à 12000g pendant 15 minutes à 4 C, les ARNs se trouvent dans la phase supérieure, les ADNs dans la phase inférieure et les protéines à l'interface. Les cDNA array sont réalisés tel que décrit dans l'exemple 9. Les résultats obtenus sont les suivants (RE : unité relative d'expression) : TABLEAU II Kératinocytes en monocouche Jeunes Agés A/J Nom de la protéine/ du ène RE RE % Antichymotrypsine-alpha-1 (AACT, ACT 3,0 10,5 351 cytokératine 18 (CYK18, CK18) kératine 18 de type I 7,4 3,0 41 du os uelette KRT18 K18 Protéine de liaison du calcium S100 A4 ; Protéine de 6,5 17,8 273 liaison du calcium placentaire ; calvasculine; protéine MTS1 Protéine de liaison du calcium S100 A7; psoriasine la 3 3,1 30 tro om osine muscle squelettique, sous unité alpha 9 0 27 5 305 Vimentine (VIM) 20 2 41,0 203 fibronectine (FN) 18,3 53 4 291 Inhibiteur de l'activateur du plasminogène, type 1,10,7 32,4 302 endothélial (PAI1 ; PLANH1) syndécanne-4 ; amphiglycanne ; protéine du 11,3 22,7 200 odocanne Inhibiteur tissulaire de la métalloprotéinase 1 3,7 9,1 247 (TIMP1) ; activité potentialisatrice érythroide (EPA) ; inhibiteur de la collagénase fibroblasti ue stéroide 5-alpha réductase 1 (SRD5A1) ; 3-oxo-5- 3,8 8,0 212 alpha stéroide 4 déhydrogénase 1 Facteur de croissance osseux I (BPGF1) 4 8 12 7 265 Récepteur cation-independent mannose-6- 3,8 8,2 218 phosphate (CI man-6-P receptor ; récepteur au facteur de groissance insulin-like II(IGFR II) Facteur de transcription SREB1 et SREBP1 6 9 3 3 49 VEGF . facteur de perméabilité vasculaire (VPF) 6,7 3,0 45 Protéine calmoduline-like cutanée (CLSP) 24 8 6 25 TABLEAU III Epidermes reconstruits Jeunes Agés A/J Nom de la protéine 1 du gène RE RE % Antichymotrypsine-alpha-1 (AACT; ACT) 106,4 37,3 35 Protéine de liaison du calcium p22 et CHP 3,0 7,2 238 cornéodesmosine (CDSN); protéine S 3,0 6,8 225 Cytokératine 10 (K10); kératine 10 squelettique type 28,6 82,5 289 I cytokératine 19 (K19; CK19 kératine 19 squelettique 46,1 3,0 7 type cytokératine 6B (CK 6B; KRT6B; K6B kératine 6B 16,8 33,9 202 squelettique type II) cytokeratin 7 (K7; CK7) kératine 7 squelettique type 131,3 9,7 7 II (KRT7) desmocolline 2A/2B (DSC2) ; glycoprotéine 3,0 15,7 524 desmosomale II/III desmoglein 1 (DSG1); glycoprotéine desmosomale 1 3,0 16,1 537 (DG1) desmogléine 3 (DSG), antigène de la pemphigoïde 16,2 35,5 219 vulgaire 130-kDa (PVA) Desmoplakine I & II (DSP; DPI & DPII) 23,0 53,7 233 intégrine alpha 6 (ITGA6); VLA6; antigène CD49F 7,4 15,9 215 Inibiteur ribonucléase/angiogénine (RAI; RNH); 5,1 14,4 284 inhibiteur ribonucléase placentaire tropomyosine, muscle squelettique, sous unité alpha 21,1 8,0 38 bone proteoglycan II (PGS2); decorin (DCN) 5,0 10,7 213 Régulateur de l'adhésion cellule-matrice (CMAR; 8,7 3,1 35 CAR) Sous unité alpha 1 du colla en 1 (COL1A1) 6,0 3,0 50 Fibronectine (FN) 12,4 5,3 43 Hyaluronanne synthase 3 (HAS-3) 3,0 6,8 228 Sous unité beta 2 de la laminine (laminin B2; 7,0 27,0 387 LAMB2); S-laminine MMP1; collagénase interstitielle (CLG); collagénase 3,0 52,2 1739 fibroblastique MMP11; stromélysine 3 8,9 23,7 266 MMP2 ; 72-kDa gélatinase A ; type IV 3,0 9,4 314 collagénase (CLG4A); TBE-1 MMP3 ; stromélysine 1 (STMY1; SL1); transine 1 8,1 82,6 1023 MMP7 ; matrilysine 16,9 3,0 18 Inhibiteur de l'activateur du plasminogène, type 2, 3,0 12,9 429 placentaire (PAI-2 ; PLANH2); monocyte ARGserpine; inhibiteur d'urokinase Activateur du plasminogène, type tissulaire (T- 11,5 3,0 26 plasminogen activator; TPA) ténascine (TN) ; hexabrachion (HXB) ; cytotactine ; 18,9 476 neuronectine ; GMEM ; antigène myotendineux ; antigène de la matrice extracellulaire (glioma associée) TIMP1 ; activité potentialisatrice érythroïde (EPA) ; 13,5 34,6 257 inhibituer collagénase fibroblastique 3-hydroxy-3-méthylglutaryl-coenzyme A réductase 3,0 14,4 481 (HMG-CoA reductase; HMGCR) phosphatase alcaline, type 3, placentaire 8,4 17,7 210 cytochrome P450 réductase 5,2 10,4 202 Acides gras synthase (FAS) 6,3 14,0 222 lactate déhydrogénase chaine M 10,6 22,0 206 ornithine décarboxylase (ODC) 4,1 24,6 604 S-adenosylméthionine synthétase forme gamma (EC 3,0 8,7 291 2.5.1.6) ; méthionine adénosyltransférase; ADOMET synthétase ; MAT-II Facteur de croissance fibroblastique 8 (FGF8) ; 3,3 15,3 467 facteur de croissance androgène-induit (AIGF) ; HBGF8 protéine insulino induite 1 3,0 25 4 847 protéine antagoniste du récepteur IL1 (IL-1RA ; 5,8 19,4 335 IRAP) interleukine-6 (IL-6) ; B-cell stimulatory factor 2 3,0 29,7 992 (BSF2) ; interféron beta-2 (IFNB2) ; facteur de croissance des hybridomes interleukine-8 (IL-8) ; facteur chémotactique des 3,8 44,6 1171 neutrophiles dérivé des monocytes (MDNCF) ; facteur chémotactique des cellules T ; protéine activatrice 1 des neutrophiles (NAP1) ; facteur d'activation des neutrophiles dérivé des lymphocytes (LYNAP) ; protéine 3-10C cytokine 1 inhibitrice des macrophages (MIC1) 49,9 14,6 29 Members C de la famille du gene ras homologue 15,3 7,6 50 (RHOC ; ARHC) ; ARH9 ; H9 Substrat 1de la toxine botulinique ras-related C3 5,5 13,6 249 (RAC1) ; RAS-likeprotéine TC25 inhibiteur de dissociation 2 rho GDP (RHO GDI2 ; 12,8 3,0 23 RHO-GDI bêta) ; LY-GDI : ARHGDIB ; GDID4 @ Protéine de liaison GTP rho-related RhoE ; Rho8 ; 7,0 22,5 321 ARHE Facteur de transcription AP-1 ; proto-oncogène ; 35,7 318 avian sarcoma virus 17 oncogène homologue Facteur de transcription C/EBP alpha (CEBPA) 3,0 6,8 228 Facteur de transcription NF-kappa-B plOO ; facteur 3,0 6,9 231 nucléaire NF-kappa-B plOO sous unité ; facteurnucléaire NF-kappa-B p52 sous unité; H2TF1; oncogène lyt-10 VEGF ; facteur de perméabilité vasculaire (VPF) 3,0 14,0 467 protéine 5 épidemique de liaison aux acides gras 3,0 9,8 327 (FABPS; EFABP); protéine de liaison homologue aux acides gras associée au psoriasis (PAFABP) gelsoline; facteur de dépolymérisationde Tartine 18,4 9,1 50 (ADF); brevine sérine palmitoyle transférase 3 9 7,8 203 Petite protéine riche en proline 1B (cornifine) 147,3 314,8 214 Glutathion peroxidase (GSHPX1 ; GPX1) 36,8 15,5 42 HSP70.1 ; 70-kDa heat shock protein 1 (HSPA1) 13,9 41,1 297 HSPA9B ; protéine de stress mitochondrial -70 ; 3,7 8,7 238 protéine de régulation du glucose 75-kDa (GRP75) ; protéine de liason peptidique 74 (PBP74) ; mortaline (MOT) Les méthodes de l'invention permettent donc une meilleure compréhension des synthèses de différentes molécules au cours du vieillissement épidermique et peuvent permettre le criblage de principes actifs visant à prévenir ou limiter les modifications observées au cours du vieillissement épidermique. EXEMPLE 13 Test d'efficacité d'un actif cosmétique appliqué par voie topique sur des peaux reconstruites dites jeunes et âgées 600 000 fibroblastes dits jeunes (extraction à partir de biopsie de sein) et âgées (extraction à partir de biopsie de visage obtenue après lifting) sont extraits et amplifié jusqu'au passage 6 (sixième amplification par trypsination) tel que décrit dans l'exemple 1 puis sont ensemencés sur des substrats dermiques à base de collagène-glycosaminoglycannechitosane, dans un milieu de culture DMEM-Glutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou Facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 ng/mL, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture de 21 jours. Puis 600 000 kératinocytes dits jeunes (extraction à partir de biopsie de sein) et âgés (extraction à partir de biopsie de visage obtenue après lifting) sont amplifiés tel que décrit dans l'exemple 1 puis sont ensemencés en passage 1 (première amplification par trypsination) sur les équivalents dermiques dans un milieu de culture de prolifération DMEMGlutamax / Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimole/litre, EGF à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2.10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture en immersion de 5 jours. Les cultures sont ensuite placées à l'interface air-liquide pendant 14 jours dans un milieu de différenciation constitué du milieu de culture utilisé pour la culture en immersion, excepté le sérum de veau, l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et l'umuline. 8 l d'une formulation cosmétique placebo et d'une formulation cosmétique contenant 3% d'actif sont appliqués sur les peaux reconstruites dites jeunes et âgées . Après 2 jours de culture en milieu de différenciation, les formulations cosmétiques sont éliminées très délicatement des peaux reconstruites et remplacées par la même quantité de formulations fraîches. Cette manipulation est renouvelée 7 fois, soit 14 jours de culture supplémentaires. En fin d'expérimentation les formulation cosmétiques sont éliminées très délicatement des peaux reconstruites, les peaux reconstruites sont rincées en PBS puis immergées dans du Tri Reagent# (Sigma). L'efficacité du traitement par l'actif cosmétique en formulation est évaluée par la méthode des cDNA array selon le protocole décrit dans l'exemple 9. EXEMPLE 14 Test d'efficacité d'un actif cosmétique appliqué par voie systémique dans des modèles de dermes reconstruits dits jeunes et âgés Dans l'exemple 12, il a été montré que le taux de fibronectine diminuait dans des modèles utilisant des cellules dites âgées par rapport à des modèles utilisant des cellules âgées (diminution de 43%). Des dermes reconstruits sont réalisés tel que décrit dans l'exemple 9. Deliner (extrait de maïs, Coletica, Lyon) est utilisé à 2% dans le milieu de culture qui est changé tous les deux jours. Les milieux de culture sont collectés et la teneur en fibronectine est quantifiée par Dot-Blot tel que défini à l'exemple 8 suivi par une analyse d'image. L'augmentation de la teneur en fibronectine est de 25%. Deliner est donc bien capable d'empêcher la diminution de synthèse de fibronectine qui est affectée par le vieillissement. Revendications : 1. Procédé d'identification d'une modification éventuelle d'au moins un paramètre biologique, caractérisé en ce qu'il comprend l'analyse protéomique comparée et/ou transcriptomique comparée et/ou génomique comparée : a) de cellules vivantes dites jeunes, b) de cellules vivantes dites âgées, c) au moins une de ces deux classes de cellules étant utilisée dans un modèle tissulaire tridimensionnel, permettant l'identification éventuelle d'au moins un paramètre biologique modifié suite au vieillissement cellulaire. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les cellules dites jeunes et les cellules dites âgées sont toutes les deux utilisées dans un modèle tissulaire tridimensionnel. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit paramètre biologique, modifié au cours du vieillissement cellulaire, est défini par au moins une différence entre le métabolisme des cellules dites jeunes et le métabolisme des cellules dites âgées. 4. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les cellules dites jeunes de l'étape a) précitée sont soit des cellules issues de biopsies de donneurs jeunes, d'un âge avantageusement inférieur à 40-45 ans, soit des cellules qui ont été peu multipliées, correspondant à un nombre de passages in vitro relativement faibles, soit des cellules prélevées sur des biopsies peu exposées au rayonnement solaire (par exemple le corps, le sein, l'abdomen, le prépuce) 5. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que les cellules dites âgées de l'étape b) précitée sont soit des cellules issues de biopsies de donneurs âgés, d'un âge avantageusement supérieur à 40-45 ans, soit des cellules qui ont subi un nombre important de passages in vitro, soit des cellules issues de biopsies prélevées dans des zones exposées au soleil (par exemple la main, le visage, le cou, la nuque). 6. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que les cellules dites âgées de l'étape b) précitée sont des cellules dites jeunes qui ont été intégrées dans un modèle tissulaire tridimensionnel comportant un ou plusieurs types cellulaires, artificiellement vieilli par une culture prolongée sur une longue période, avantageusement supérieure à 1 mois, encore avantageusement supérieure à 2 mois. 7. Procédé, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que lesdites cellules dites jeunes ou dites âgées sont des cellules d'au moins un être humain ou d'au moins un animal. 8. Procédé, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite étude comprend au moins une analyse choisie parmi les méthodes d'analyses suivantes : - pour les analyses du profil du protéome : électrophorèse bidimensionnelle, et/ou matrice différentielle de protéine (Protein arrays) et/ou matrice différentielle de cytokine (cytokine array), et/ou dosages Elisa combinés, - pour les analyses du profil génomique : matrice différentielle d'ADN (DNA Arrays), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne Multiplexée (PCR-multiplex), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne (PCR), et/ou Réaction de Polymérisation en Chaîne en temps réel (PCR en temps réel), - les analyses du profil transcriptomique : matrice différentielle d'ARN (RNA Arrays), matrice différentielle d'ADNc (cDNA Arrays) et/ou Réverse Transcription de Réaction de Polymérisation en Chaîne Multiplexée (RTPCR-Multiplex) et/ou Réverse Transcription de Réaction de Polymérisation en Chaîne (RT-PCR) et/ou Réverse Transcription de Réaction de Polymérisation en Chaîne en temps réel (RT-PCR en temps réel). 9. Procédé, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit modèle tissulaire est cultivé et/ou conservé dans des conditions maintenant, au moins partiellement, un métabolisme cellulaire. 10. Procédé, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit modèle tissulaire comprend au moins des fibroblastes ou des kératinocytes. 11. Procédé, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit modèle comprend des cellules normales, saines ou pathologiques, ou des cellules issues de lignées, de préférence ces cellules sont d'origine humaine ou animale. 12. Procédé, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit modèle tissulaire est choisi parmi les modèles suivants : un modèle de matrice conjonctive, appelé derme dans la cas de la peau et appelé chorion dans le cas d'une muqueuse, contenant principalement des cellules stromales, un modèle d'épithélium constitué principalement des cellules épithéliales, un modèle d'épiderme constitué principalement de kératinocytes, un modèle de peau constitué d'un épiderme et d'un derme, d'un modèle de muqueuse constitué d'un épithélium et d'un chorion. 13. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que ledit modèle tissulaire est un modèle tissulaire de matrice conjonctive (derme ou de chorion) comprenant un support matriciel de préférence choisi parmi : - un support inerte choisi parmi le groupe consistant en un plastique traité culture cellulaire, en une membrane synthétique semi- perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi- perméable, une membrane de nylon semi-perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène, polypropylène, ou polyéthylène téréphtalate (PET) semi- perméable, une membrane inorganique AnoporeTM semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CMTM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un gel ou une membrane à base d'acide hyaluronique et/ou de collagène et/ou de fibronectine et/ou de fibrine comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses comprenant des cellules stromales, en particulier des fibroblastes. 14. Procédé, selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que ledit modèle tissulaire est un modèle tissulaire d'épiderme ou d'épithélium comprenant un support matriciel de préférence choisi parmi : - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi- perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène, polypropylène, ou polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique AnoporeTM semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CMTM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte étant ou non ensemencé au préalable par des cellules stromales, en particulier des fibroblastes puis par des cellules épithéliales et en particulier des kératinocytes, - un film ou une membrane à base d'acide hyaluronique et/ou de collagène et/ou de fibronectine et/ou de fibrine, ensemencé au préalable par des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, puis par des cellules épithéliales et en particulier des kératinocytes. 15. Procédé, selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'au niveau de la partie épithéliale, on introduit en plus des cellules épithéliales, des cellules pigmentaires, des cellules immunocompétentes, des cellules nerveuses, de préférence les cellules immunocompétentes sont des cellules de Langerhans. 16. Procédé, selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que ledit modèle tissulaire est un modèle tissulaire de peau ou de muqueuse reconstruite comprenant un support matriciel dermique ou de chorion de préférence choisi parmi : - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi- perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène, polypropylène, ou polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un gel à base de collagène et/ou acide hyaluronique et/ou fibronectine, et/ou de fibrine comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses intégrant des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un derme desépidermisé ou derme mort, humain ou animal, le support matriciel est ensuite ensemencé par des cellules épithéliales pour obtenir une muqueuse reconstruite ou des kératinocytes pour obtenir une peau reconstruite. 17. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisé en ce que ledit modèle tissulaire utilisé comprend un modèle dans lequel a été incorporé au moins un type cellulaire complémentaire, de préférence des cellules endothéliales (CE) et/ou des cellules immunitaires telles que lymphocytes, macrophages, cellules dendritiques et/ou des cellules adipeuses et/ou des annexes cutanées, comme des poils, des cheveux, des glandes sébacées. 18. Utilisation d'un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 17 pour effectuer le criblage d'au moins une substance potentiellement active capable de reverser au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 17. 19. Procédé, selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il comprend : A/ la mise en contact de ladite substance potentiellement active avec des cellules dites âgées telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 17, ensemencées dans un modèle cellulaire ou tissulaire tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 17, pendant une période de temps suffisante pour permettre à ladite substance potentiellement active d'agir ; B/ des cellules dites jeunes telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 17, ensemencées dans un modèle cellulaire ou tissulaire tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 17 ; C/ l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète pour la réalisation de l'étude de l'action de ladite substance sur le métabolisme cellulaire desdites cellules âgées ; D/ la comparaison du métabolisme cellulaire desdites cellules âgées en présence de la substance potentiellement active, avec le métabolisme desdites cellules âgées ou des cellules dites jeunes sans la présence de ladite substance, et ; E/ l'identification de la présence ou l'absence d'activité de ladite substance potentiellement active, notamment comprend l'identification d'un effet positif ou négatif de ladite substance pour prévenir la modification du paramètre biologique identifié comme étant modifié au cours du vieillissement. 20. Procédé d'identification d'au moins une substance potentiellement active capable de reverser au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement comprenant : a) la culture de cellules dites cellules jeunes de préférence telles que définies aux revendications 4 et 7, utilisées comme référence ; b) la culture de cellules dites cellules âgées de préférence telles que définies aux revendications 5 à 7 ayant un paramètre biologique modifié par rapport aux cellules dites jeunes, en présence d'au moins une substance éventuellement active, pendant une période de temps suffisante pour permettre à ladite substance potentiellement active d'agir éventuellement sur le métabolisme cellulaire desdites cellules, afin de récupérer le métabolisme des cellules jeunes ; c) l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète, de préférence telle que définie à la revendication 8, des cellules dites âgées cultivées en présence ou non d'une substance éventuellement active ; d) La comparaison de l'analyse effectuée au c) avec l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète, de préférence telle que définie à la revendication 8, de cellules vivantes dites jeunes, cultivées sans la présence de ladite substance potentiellement active, tel que décrit au a) ; e) Suite à la comparaison des analyses effectuées au c) et d), l'identification éventuelle d'au moins une substance active capable de reverser au moins un paramètre biologique modifié par le vieillissement. 21. Procédé d'identification d'au moins une substance potentiellement active capable de prévenir la modification d'au moins un paramètre biologique modifié au cours du vieillissement comprenant : a) la mise en contact de ladite substance potentiellement active avec des cellules dites âgées telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 17, ensemencées dans un modèle tissulaire tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 17, pendant une période de temps suffisante pour permettre à ladite substance potentiellement active d'agir ; b) l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète, de préférence telle que définie à la revendication 8, des cellules dites âgées, soumises à contact avec ces substances ; c) La comparaison de l'analyse effectuée au b) avec l'analyse protéomique et/ou transcriptomique et/ou génomique, partielle ou complète, de préférence telle que définie à la revendication 8, de cellules vivantes cultivées sans la présence de ladite substance potentiellement active ; d) Suite à la comparaison des analyses effectuées au c), l'identification éventuelle d'au moins une substance active capable de prévenir la modification d'au moins un paramètre biologique modifié par le vieillissement. 22. Procédé d'identification, selon la revendication 20 ou 21, caractérisé en ce que ladite substance potentiellement active est choisie parmi une protéine de malt modifiée et un extrait de maïs.