Brevet FR2847267A1 — publié le 20040521

L'invention concerne essentiellement un principe actif capable de réduire l'inflammation cutanée et son utilisation principalement dans le domaine de la cosmétique ou de la pharmacie. La présente invention concerne essentiellement un procédé de test d'une substance éventuellement active dans le domaine de l'inflammation. La présente invention concerne essentiellement un nouveau procédé de test et son utilisation, pour la recherche et l'identification d'une substance éventuellement active dans le domaine de l'inflammation, qui est basée sur la capacité d'inhibition de l'enzyme phospholipase A2 (PLA2). La présente invention concerne essentiellement les nouvelles substances actives dans le domaine de l'inflammation ainsi détectées et leur utilisation dans le domaine cosmétique ou dermo-pharmaceutique ou pharmaceutique, notamment pour réaliser des soins permettant de réduire les signes d'irritation cutanées. Etat de la technique Les produits anti-inflammatoires développés dans les laboratoires à ce jour, destinés à lutter contre l'inflammation cutanée sont sélectionnés sur des modèles d'études non adaptés aux conditions permettant de mettre en évidence des activités liées à l'inflammation de la peau (érythèmes, dartre, xérose, couperose...). En effet, les modèles utilisés sont pour la plupart développés sur animaux o le stress généré reste très drastique puisqu'il peut s'agir: - d'une irradiation UV en un point précis, dans le but de générer un érythème et de tester après application du produit potentiellement actif, la disparition de cet érythème; - de l'injection sous cutanée de lipopolysaccharides (LPS) et/ou aminoguanidine et/ou encore de carraghénanne afin de créer un oedème chez le cobaye puis de tester après application du produit potentiellement actif, la disparition de cet oedème. Des tests in vitro sont également développés, qui traitent de l'inhibition de la phospholipase A2, enzyme impliquée dans la synthèse des médiateurs de l'inflammation, mais ces tests sont très éloignés des conditions rencontrées in vivo et sont par conséquent peu significatifs. Précisions sur les tests in vitro connus: Les tests décrits jusqu'ici présentent des problèmes de sensibilité et sont très éloignés de la situation rencontrée in vivo de par la nature des constituants des modèles utilisés. Ainsi par exemple, le brevet FR2757395Ai décrit l'inhibition d'une phospholipase A2 placée à réagir avec un substrat très éloigné des substrats naturels de cette enzyme rencontrés dans les réactions de l'inflammation; ce substrat, le L-phosphatidylcholine dimyristoyl est en effet un phospholipide comportant deux acides gras en C14 (chaîne grasse hydrocarbonée de 14 atomes de carbone, saturée). Or, ce substrat et ces acides gras ne sont pas impliqués dans la chaîne de formation des médiateurs de l'inflammation puisque c'est un phospholipide porteur d'un acide gras en C20 insaturé (l'acide arachidonique) qui est hydrolysé par la phospholipase A2 à cette occasion. Toujours dans ce document, l'acide gras en position sn-2 est hydrolysé par l'enzyme et la libération de celui-ci entraîne l'apparition d'un trouble de la solution d à l'insolubilité de l'acide gras dans le milieu mesuré en spectrophotométrie à 360 nm. Cette technique est très peu sensible et ne permet pas d'obtenir une classification fiable des inhibiteurs d'une part; elle ne permet pas d'autre part de tester des molécules lipophiles ou émulsionnante qui, en troublant la solution, ne permettent pas une mesure correcte de l'inhibition de la phospholipase A2. Les PHOSPHOLIPASES A2 (PLA2) La phospholipase A2 est une enzyme produite par les cellules au niveau membranaire. Elle prédomine dans les cellules liées aux phénomènes d'inflammation, telles que les mastocytes. Cette enzyme hydrolyse les phospholipides membranaires en position de substitution nucléophile de type 2 (sn-2) pour libérer un acide gras. De manière schématique, on peut attribuer 3 types de fonctions aux phospholipases: des fonctions digestives, des fonctions de remodelage des phospholipides membranaires, responsables du maintien de l'architecture cellulaire, faisant intervenir des cycles de déacylation/réacylation et enfin des fonctions de transduction de signaux par la production à partir des phospholipides membranaires de produits biologiquement actifs: ainsi, la régulation de l'activation des phospholipases va devenir un élément prédominant des cascades de signalisation et donc d'amplification des signaux lors des réactions inflammatoires. Les PLA2 ont tout d'abord été identifiées dans le milieu extracellulaire de différentes espèces: mammifères (PLA2 pancréatique), serpents, insectes (PLA2 de venins). Par la suite, cinq groupes de PLA2, ont été définis, caractérisés tant sur le plan enzymatique que structural et fonctionnel (Tableau 1). ORIGINE LOCALI TAILLE Ca2+ SATION (Kda) Groupe I Sécrétée 13-15 mM Cobra Pancréatique Mammifère Groupe II Sécrétée 13-15 mM SPLA2 Vipères Synoviale Mammifère Groupe III Sécrétée 16-18 mM Abeille Groupe IV Cytosolique 85 PM CPLA2 Ubiquitaire Mammifère Groupe V Cytosolique 40 non Myocarde Mammifère Tableau 1 Caractéristiques des différentes PLA2 Ces enzymes partagent le même substrat: les phospholipides qu'elles hydrolysent en position sn-2; elles sont des 2-acyl hydrolases et libèrent l'acide gras localisé à cette position ainsi qu'un lysophospholipide. Cependant, ces groupes d'enzymes différent par leur fonction, leur localisation, leur régulation, le mécanisme de leur action, leur séquence, leur structure et leur dépendance vis-à-vis des ions divalents. Les trois premiers groupes ont été isolés comme enzymes extracellulaires ou PLA2 sécrétées (sPLA2), ont un grand nombre de ponts disulfure, une masse moléculaire autour de 15KDa et requièrent, pour leur activité, une concentration élevée de calcium. La classification des PLA2 dans l'un de ces 3 groupes est essentiellement réalisée sur la base des homologies de structure. Bien que la majorité des PLA2 soient des enzymes non humaines, il existe des PLA2 sécrétées humaines, dans le liquide synovial (groupe II) ou dans le pancréas humain (groupe I). La PLA2 la mieux caractérisée est la PLA2 sécrétée du groupe II issue de liquide synovial humain. Le groupe IV des PLA2 ne comporte qu'une enzyme intra-cellulaire appelée PLA2 cytoplasmique (cPLA2) d'un poids moléculaire élevé (85KDa), spécifique des phospholipides porteurs d'acide arachidonique; celle-ci requiert des concentrations de calcium compatible avec une activation intra cytoplasmique. L'enzyme est cytosolique et transloque à la membrane lors de l'activation cellulaire. Cette enzyme ne possède pas de pont disulfure et est activée par des kinases de la famille des PKC et des MAP. Enfin, un cinquième groupe de PLA2, intra cytoplasmique a été décrit. Cette enzyme d'un PM de 40KDa est aussi spécifique des phospholipides porteurs d'acide arachidonique, et ne requiert pas de calcium pour son activation. Il semblerait de manière très schématique, que la PLA2 du groupe IV soit l'enzyme préférentiellement utilisée dans des conditions physiologiques et que la sPLA2 soit synthétisée et secrétée en réponse à des stimuli inflammatoires, afin de produire des médiateurs de l'inflammation. Néanmoins, cette distinction est trop schématique: en effet, lors de l'activation cellulaire survenant dans une réaction inflammatoire, les deux PLA2, sPLA2 et cPLA2 sont induites et activées. Différents travaux traitent des modifications de l'activité des PLA2 secrétées dans le psoriasis (Forster et al, Br. J. Dermatol. 1985, II2, 135147). Les études n'identifient pas les formes spécifiques de la PLA2. Buts de l'invention L'invention a pour but de fournir un principe actif dans le domaine de l'inflammation, notamment capable réduire l'inflammation cutanée. L'invention a pour but de résoudre le problème technique consistant à fournir un principe actif dans le domaine de l'inflammation capable d'inhiber, l'activité enzymatique de la phospholipase A2. L'invention a pour but de résoudre le problème technique consistant à fournir l'utilisation de ces principes actifs dans le domaine cosmétique ou dermo-pharmaceutique ou pharmaceutique, notamment pour la fabrication de compositions cosmétiques ou dermo-pharmaceutiques ou pharmaceutiques. L'invention a pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant à fournir un procédé de test de l'activité d'une substance potentiellement active capable d'inhiber, de manière significative, l'activité enzymatique de la phospholipase A2. L'invention concerne essentiellement les phospholipases A2 de type I et/ou de type II. L'invention a pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en l'utilisation de ce procédé de test, pour la recherche et l'identification d'une substance éventuellement active dans le domaine de l'inflammation, qui est basé sur la capacité d'inhibition de l'enzyme phospholipase A2. L'invention a pour but de résoudre le problème technique consistant à fournir un principe actif, une composition cosmétique ou dermopharmaceutique ou pharmaceutique contenant le principe actif, identifié par ledit procédé de test, notamment pour réaliser des soins permettant de réduire les signes d'irritations cutanées, tels que les érythèmes ou rougeurs du tégument plus ou moins localisés liés à un agent physique extérieur ou à un syndrome inflammatoire, les xéroses ou sécheresse cutanée, le relâchement ou perte de tonicité de la peau et la couperose ou l'apparition de petits vaisseaux éclatés observés sur des peaux très sèches. Description de l'invention La présente invention permet de résoudre l'ensemble des problèmes techniques énoncés ci dessus, en particulier d'une manière particulièrement inattendue. Ainsi, la présente invention fournit un nouveau procédé de test de l'activité d'une substance potentiellement active capable d'inhiber, de manière significative, l'activité enzymatique de la phospholipase A2. La présente invention fournit aussi l'utilisation de ce procédé de test, pour la recherche et l'identification d'une substance éventuellement active dans le domaine de l'inflammation, qui est basée sur la capacité d'inhibition de l'enzyme phospholipase A2. Selon un premier aspect, la présente invention fournit un procédé de test de l'activité d'une substance potentiellement active pour inhiber, de manière significative, l'activité enzymatique de la phospholipase A2, de préférence la phospholipase A2 de type I ou II, comprenant: a) La mise en présence de ladite substance potentiellement active avec: - La phospholipase A2; - Un substrat qui est un phospholipide, comprenant au moins un acide gras sous forme ester, de préférence l'acide gras est à chaîne longue comprenant entre 15 et 22 atomes de carbones, de préférence encore le substrat est insaturé ou poly-insaturé, ledit substrat étant capable de libérer lors de son hydrolyse au moins un acide gras; b) La mesure de l'activité enzymatique de la phospholipase A2, comprenant notamment la détection de la présence dudit acide gras libéré et éventuellement son dosage quantitatif. Cette mesure de l'activité enzymatique est effectuée de préférence par dosage des acides gras non estérifiés. Les inventeurs utilisent le terme "phospholipase A2 " dans cette partie du document en référence à la phospholipase A2 de type I et/ou II. Les inventeurs entendent par " inhiber " le fait que ledit principe actif inhibe la phospholipase A2, de façon à induire une activité enzymatique inférieure à celle induite sans la mise en contact de la phospholipase A2 avec la substance potentiellement active, toutes conditions de température, de temps de contact, et de conditions opératoires identiques, ou comparables par ailleurs. Avantageusement les inventeurs considèrent dans le cadre de l'invention que la sélection des molécules potentiellement actives lors du criblage peut être réalisée pour des inhibitions de l'activité PLA2 qualifiées de très fortes, lorsque celles-ci sont supérieures ou égales à 50% de l'activité de référence, cette activité de référence étant mesurée sans que la PLA2 n'ait été mise en contact avec la substance potentiellement active, toutes conditions de température, de temps de contact, et de conditions opératoires identiques, ou comparables par ailleurs. Dans un autre mode de réalisation avantageux, le procédé de test est mis en oeuvre avec une phospholipase A2 de type I, notamment pour présélectionner les substances potentiellement actives, qui sont actives au moins de manière significative, en référence à leur activité inhibitrice de phospholipase A2. Le procédé est de nouveau mis en oeuvre avec la phospholipase A2 de type II, notamment pour confirmer les substances potentiellement actives capables d'inhiber, de manière significative, activité enzymatique de la phospholipase A2 de type I et/ou de type II. Ceci permet de minimiser l'utilisation de phospholipase A2 de type II qui est peu disponible et coteuse. Selon un mode de réalisation avantageux, l'enzyme phospholipase A2 de type I et/ou de type II est issue de venin d'abeille (Apis mellifera) ou issue de pancréas de boeuf ou issue de levure Streptomyces violaceoruber, ou issue de venin de serpent (Crotalus adamanteus ou Crotalus atrox ou Crotalus Durissus ou Naja mossambica mossambica) ou issue de lysat cellulaire humain ou animal ou issue de liquide biologique humain ou animal (liquide synovial), ou issue d'un des quelconques mélanges possibles de ces enzymes ainsi obtenues. Selon un mode de réalisation avantageux, l'enzyme phospholipase A2 de type I est issue de pancréas de porc. Selon un mode de réalisation avantageux, l'enzyme phospholipase A2 de type II est issue de liquide synovial humain ou issue de venin de serpent Crotalus adamanteus. Selon un mode de réalisation avantageux, le substrat est de nature phospholipidique comprenant en position de substitution nucléophile de type 2 (sn-2) au moins un acide gras à longue chaîne de préférence entre C15 et C22 atomes de carbones, de préférence encore cet acide gras étant insaturé ou poly-insaturé. Selon un mode de réalisation avantageux, le substrat est choisi parmi au moins un dérivé ester de l'acide arachidonique, de préférence le substrat est le L-oa-phosphatidylcholine P-arachidonoyl-y-palmitoyl. Selon un mode de réalisation avantageux, le procédé comprend la mise en contact avec un co-facteur de la phospholipase A2. Les concentrations en co-facteur sont de préférence comprises entre 0, 0001% et 10%. Avantageusement, le co-facteur est un ion bivalent. De manière encore plus avantageuse, le co-facteur est le cofacteur spécifique qui est le calcium. Selon un mode de réalisation avantageux, le procédé comprend la mise en contact avec un agent de solubilisation. Les concentrations en agent de solubilisation sont de préférence comprises entre 0,001% et %. Avantageusement, l'agent de solubilisation est le déoxycholate de sodium. Selon un second aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un procédé de test tel que défini précédemment, ou dans la description suivante, pour identifier au moins un principe actif capable d'inhiber, de manière significative, l'activité enzymatique de la phospholipase A2, notamment de la phospholipase A2 de type I et/ou II. Avantageusement, l'activité enzymatique de la phospholipase A2 est inhibée du moment que l'activité phospholipase A2 mesurée en présence de l'actif est inférieure à l'activité mesurée sans la mise en contact de la phospholipase A2 avec ladite substance potentiellement active, toutes conditions de température, de temps de contact, et de conditions opératoires identiques, ou comparables par ailleurs. Selon un troisième aspect, la présente invention concerne un principe actif capable d'inhiber, l'activité enzymatique de la phospholipase A2, notamment de la phospholipase A2 de type I et/ou II, l'activité de ladite phospholipase A2 étant mesurée en effectuant la mise en contact de ladite phospholipase A2 avec: - ledit principe actif; - Un substrat qui est un phospholipide, comprenant au moins un acide gras sous forme ester, de préférence l'acide gras est à chaîne longue de 15 à 22 atomes de carbones, de préférence encore i1 l'acide gras est insaturé ou poly-insaturé, ledit substrat étant capable de libérer lors de son hydrolyse au moins un acide gras. Les divers modes de réalisation du procédé de test décrits ci-dessus peuvent être mis en oeuvre pour identifier et/ou sélectionner un principe actif tel que décrit ci-dessus. C'est à dire notamment que: Selon un mode de réalisation avantageux, l'enzyme phospholipase A2 de type I et/ou de type II est issue de venin d'abeille (Apis mellifera) ou issue de pancréas de boeuf ou issue de levure Streptomyces violaceoruber, ou issue de venin de serpent (Crotalus adamanteus ou Crotalus atrox ou Crotalus Durissus ou Naja mossambica mossambica) ou issue de lysat cellulaire humain ou animal ou issue de liquide biologique humain ou animal (liquide synovial), ou issue d'une des mélanges possibles des enzymes ainsi obtenues. Selon un mode de réalisation avantageux, l'enzyme phospholipase A2 de type I est issue de pancréas de porc. Selon un mode de réalisation avantageux, l'enzyme phospholipase A2 de type II est issue de liquide synovial humain ou issue de venin de serpent Crotalus adamanteus. Selon un mode de réalisation avantageux, le substrat est de nature phospholipidique comprenant en position de substitution de nucléophile de type 2 (sn-2) au moins un acide gras à chaîne longue de préférence entre C15 et C22 atomes de carbones, de préférence encore insaturé ou polyinsaturé. Selon un mode de réalisation avantageux, le substrat est choisi parmi au moins un dérivé ester de l'acide arachidonique, de préférence le substrat est le L-c-phosphatidylcholine P-arachidonoyl Y-palmitoyl. Selon un mode de réalisation avantageux, le procédé comprend la mise en contact avec un co-facteur de la phospholipase A2. Les concentrations en co-facteur sont de préférence comprises entre 0, 0001% et 10%. Avantageusement, le co-facteur est un ion bivalent. De manière encore plus avantageuse, le co-facteur est le cofacteur spécifique qui est le calcium. Selon un mode de réalisation avantageux, le procédé comprend la mise en contact avec un agent de solubilisation. Les concentrations en agent de solubilisation sont de préférence comprises entre 0,001% et %. Avantageusement, l'agent de solubilisation est le déoxycholate de sodium. Selon un quatrième aspect, la présente invention concerne un principe actif capable d'inhiber, l'activité enzymatique de la phospholipase A2, notamment de la phospholipase A2 de type I et/ou II, ledit principe actif étant identifié le procédé de test tel que défini précédemment. Selon un cinquième aspect, la présente invention concerne un principe actif ayant un effet anti-inflammatoire et/ou anti-douleur et/ou antiirritation et/ou anti-picotement et/ou anti-brlure et/ou antidémangeaison et/ou anti-érythème et/ou anti-xérose et/ou anti- couperose et/ou anti-relâchement des tissus cutanés caractérisé en ce qu'il est choisi parmi un extrait de pépins de raisin, un extrait de Pueraria lobata, un extrait de Pneumus boldus (boldo), un extrait d'arnica, un extrait de citron, un extrait de tournesol, un extrait de camomille, le gluconate de zinc, un extrait de guarana et un extrait de liane (Uncaria tomentosa), ou une des combinaisons résultant de l'association d'au moins deux des principes actifs énumérés, les extraits végétaux étant de préférence utilisés à une concentration comprise entre 0,1 et 30% (p/p) en poids du produit final. Selon un sixième aspect, la présente invention concerne un principe actif capable d'inhiber, de manière significative, l'activité enzymatique de la phospholipase A2, notamment de la phospholipase A2 de type I et/ou II, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi un extrait de pépins de raisin, un extrait de Pueraria lobata, un extrait de Pneumus boldus (boldo), un extrait d'arnica, un extrait de citron, un extrait de tournesol, un extrait de camomille, le gluconate de zinc, un extrait de guarana et un extrait de liane (Uncaria tomentosa), ou une des combinaisons résultant de l'association d'au moins deux des principes actifs énumérés, les extraits végétaux étant de préférence utilisés à une concentration comprise entre 0,1 et 30% (p/p) en poids du produit final. Selon un septième aspect, la présente invention concerne un extrait végétal de la racine de Pueraria Lobata, réalisé à partir de la racine de Pueraria Lobata, de préférence extraite à une concentration comprise entre 0,1% et 20% en poids, de préférence à une concentration d'environ % (par exemple environ 5g qsp 100g de solvant), dans un solvant aqueux contenant un alcool/glycol comme par exemple le Butylène Glycol et/ou l'éthanol, par exemple à une concentration comprise entre 0% et %, de préférence à une concentration d'environ 25% de Butylène Glycol, et éventuellement un conservateur comme le Methyl Paraben à une concentration comprise entre 0,01% et 0,5% de préférence à une concentration d'environ 0,1% (p/p). L'extrait appelé " Extrait 1 " est réalisé à partir d'une extraction aqueuse uniquement. Selon un huitième aspect, la présente invention concerne un extrait végétal de pépins de raisin, réalisé à partir de pépins de raisins, de préférence extraits à une concentration comprise entre 0,1% et 20% en poids, de préférence à une concentration d'environ 2% (par exemple environ 2g qsp 100g de solvant), dans un solvant aqueux contenant un alcool/glycol comme par exemple le Butylène Glycol et/ou l'éthanol, par exempie à une concentration comprise entre 0% et 80%, de préférence à une concentration d'environ 25% de Butylène Glycol, et éventuellement un conservateur comme le Methyl Paraben à une concentration comprise entre 0, 01% et 0,5% de préférence à une concentration d'environ 0,1% (p/p). L'extrait appelé " Extrait 2 " est réalisé à partir d'une extraction aqueuse uniquement. Selon un neuvième aspect, la présente invention concerne un extrait végétal de boldo, réalisé à partir de feuilles de boldo, de préférence extraites à une concentration comprise entre 0,1% et 20% en poids, de préférence à une concentration d'environ 2% (par exemple environ 2g qsp g de solvant), dans un solvant aqueux contenant un alcool/glycol comme par exemple le Butylène Glycol et/ou l'éthanol, par exemple à une concentration comprise entre 0% et 80%, de préférence à une concentration d'environ 25% de Butylène Glycol, et éventuellement un conservateur comme le Methyl Paraben à une concentration comprise entre 0,01% et 0,5% de préférence à une concentration d'environ 0,1% (P/P). Selon un dixième aspect, la présente invention concerne un extrait végétal d'arnica, réalisé à partir de la plante arnica, de préférence extraites à une concentration comprise entre 0,1% et 20% en poids, de préférence à une concentration d'environ 2% (par exemple environ 2g qsp g de solvant), dans un solvant aqueux contenant un alcool/glycol comme par exemple le Butylène Glycol et/ou l'éthanol, par exemple à une concentration comprise entre 0% et 80%, de préférence à une concentration d'environ 25% de Butylène Glycol, et éventuellement un conservateur comme le Methyl Paraben à une concentration comprise entre 0,01% et 0,5% de préférence à une concentration d'environ 0,1% (p/p). Selon un onzième aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un principe actif tel que défini précédemment ou dans la description suivante, et/ou d'un extrait tel que défini précédemment ou dans la description suivante, pour la fabrication d'une composition, notamment d'une composition cosmétique, utilisée dans le but de diminuer les irritations et/ou les picotements et/ou les démangeaisons et/ou de limiter les observations superficielles de couperose et/ou l'apparition de petits vaisseaux éclatés et/ou le relâchement des tissus s cutanés et/ou la perte de tonicité de la peau et/ou la sécheresse de la peau. Selon un douzième aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un principe actif tel que défini précédemment ou et/ou d'un extrait tel que défini précédemment ou dans la description suivante, pour la fabrication d'une composition, notamment d'une composition pharmaceutique, utilisée dans le but de diminuer les inflammations et/ou les douleurs et/ou les brlures et/ou les érythèmes et/ou les rougeurs du tégument plus ou moins localisée liée à un agent physique extérieur ou à un syndrome inflammatoire et/ou les xéroses. Selon un treizième aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un principe actif tel que défini précédemment ou dans la description suivante et/ou d'un extrait tel que défini précédemment ou dans la description suivante, pour la fabrication d'une composition cosmétique, utilisée dans le but d'inhiber, l'activité enzymatique de la phospholipase A2, notamment de la phospholipase A2 de type I et/ou II. Selon un quatorzième aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un principe actif tel que défini précédemment ou dans la description suivante et/ou d'un extrait tel que défini précédemment ou dans la description suivante, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique, utilisée dans le but d'inhiber, l'activité enzymatique de la phospholipase A2, notamment de la phospholipase A2 de type I et/ou II. Selon un quinzième aspect, la présente invention concerne une composition cosmétique comprenant au moins un principe actif tel que défini précédemment ou dans la description suivante et/ou d'un extrait tel que défini précédemment ou dans la description suivante. Selon un seizième aspect, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins un principe actif tel que défini précédemment ou dans la description suivante et/ou d'un extrait tel que défini précédemment ou dans la description suivante. De préférence, la concentration du principe actif selon la présente invention est comprise entre 0,01% et 30% en poids de la composition totale. Les principes actifs peuvent être avantageusement combinés entre eux pour traiter plusieurs symptômes ou de manière plus efficace un même symptôme. Selon un dix-septième aspect, la présente invention concerne un procédé de soin cosmétique comprenant l'application topique sur les zones de la peau d'une personne souhaitant réaliser ledit soin cosmétique, d'une composition cosmétique telle que définie précédemment. Avantageusement le procédé de soin cosmétique concerne les soins des irritations et/ou des picotements et/ou des démangeaisons et/ou pour limiter ou supprimer les observations superficielles de couperose et/ou l'apparition de petits vaisseaux éclatés et/ou le relâchement des tissus cutanés et/ou la perte de tonicité des tissus cutanés et/ou la sécheresse des tissus cutanés. Avantageusement ces tissus cutanés comprennent la peau. Description détaillée de l'invention L'étude de l'inhibition de la phospholipase A2 (PLA2) est réalisée dans un modèle in vitro acellulaire qui se veut être un reflet le plus proche possible, de la situation rencontrée in vivo. Les PLA2 de type I et de type II sont utilisées in vitro, dans un modèle comprenant: 1) Un substrat choisi parmi les dérivés esters de l'acide arachidonique (comme le L--c-phosphatidylcholine 3-arachidonoyl ypalmitoyl, qui est un phospholipide contenant en position sn-2, site hydrolysé par la phospholipase A2, l'acide arachidonique) qui est spécifiquement l'acide gras impliqué dans la synthèse des médiateurs de l'inflammation, 2) Un ion bivalent jouant le rôle de catalyseur (comme le calcium), 3) Un activateur indispensable à l'activité de l'enzyme, jouant le rôle de solubilisateur du substrat dans le milieu réactionnel et permettant de favoriser l'interaction enzyme-substrat (de préférence le sodium deoxycholate). Ce mélange réactionnel est mis en présence de différentes substances potentiellement actives dont l'activité d'inhibition de la PLA2 est à tester, et le taux d'acides gras libres après le test peut être évalué de différentes façons (chromatographie phase vapeur, HPLC, dosage calorimétrique, etc...) ce qui permet de sélectionner les meilleurs inhibiteurs. La PLA2 utilisée de préférence dans le modèle d'étude est issue de pancréas de porc (enzyme de type I), pour des raisons de disponibilité et de cot étant entendu que: - les homologies de séquence entre la PLA2 de type I et la PLA2 de type II équivalente humaine (Tatina A et ai, Blast 2 sequences-a new tool for comparing protein and nucleotide séquences, FEMS Microbil Lett, 174, 247-250 (1999)) sont de plus de 54%, des études parallèles ont permis aux inventeurs de montrer que ces 2 enzymes ont des spectres d'activité relativement similaires en fonctions des inhibiteurs qui leur sont présentés. La PLA2 est mise en présence d'un substrat, par exemple le L-ac5 phosphatidylcholine P-arachidonoyl y-palmitoyl, qui est un phospholipide contenant en position sn-2, site hydrolysé par la phospholipase A2, l'acide arachidonique qui est spécifiquement l'acide gras impliqué dans la synthèse des médiateurs de l'inflammation. En parallèle on peut réaliser des témoins de l'inhibition de la phospholipase A2, qui peuvent être par exemple: - L'acide aristolochique (8-methoxy-6-nitrophenanthro(3,4-o)-1,3-dioxole5-carboxylic acid), constituant majeur isolé à partir de différentes espèces de plantes Aristolochia est utilisé dans la médecine traditionnelle pour neutraliser les venins de serpents notamment de Naja naja atra et Bungarus multicinctus. Il a été montré que l'acide aristolochique inhibait spécifiquement in vitro l'activité enzymatique et l'activité inductrice d'oedème de la PLA2 issue de venins de serpents ( Vishwanath B.S. Edema-Inducing activity of phospholipase A2 purified from human synovial fluid and inhibition by aristolochic acid, Inflammation, Vol 12, N06, 549-561, 1988, Sannanaik Vishwanath B, Interaction of aristolochic acid with vipera Russelli phospholipase A2: its effect on enzymatic and pathological activities Toxicom, 25, 929-937, 1987; Moreno JJ, Effect of aristolochic acid on arachidonic acid cascade and in vivo models of inflammation, Immunopharmacology, 26, 1-9, 1993). - Le p-bromophenacyl bromide, inhibiteur spécifique des PLA2 secrétées (Mao-Qiang M and ai, Secretory phospholipase A2 activity is required for permeability barrier homeostasis, J. Invest. Derm., 106, 1996, 57-63). Au milieu réactionnel sont également ajoutés: - Un catalyseur, qui est de préférence du calcium. - Un activateur indispensable à l'activité de l'enzyme, qui est par exemple le sodium deoxycholate. Cet activateur permet d'augmenter la solubilité du substrat dans le milieu réactionnel et donc favorise l'interaction enzyme5 substrat. L'étude de l'inhibition de la PLA2 est réalisée, de préférence, en 2 temps. L'enzyme en présence de son cofacteur est incubée pendant un temps déterminé (par exemple environl5minutes) avec l'inhibiteur puis un seconde incubation est réalisée pendant (par exemple environ 20minutes) en présence du substrat qui est de préférence le L-a-phosphatidylcholine f3-arachidonoyl -palmitoyl et de l'activateur, qui est de préférence du sodium deoxycholate. A l'issue de cette incubation un dosage des acides gras non estérifiés est réalisé sur le milieu réactionnel par une technique enzymatique qu'il est par exemple possible de suivre en colorimétrie à une longueur d'onde définie. En parallèle, un témoin correspondant à l'activité de la phospholipase A2 en l'absence d'inhibiteur est réalisé. L'utilisation d'un actif capable d'inhiber significativement l'activité enzymatique va se traduire par une diminution de la densité optique à la longueur d'onde définie, c'est à dire par une diminution des acides gras libérés dans le milieu par rapport au témoin. De cette manière, il a pu être effectué le criblage (ou screening) de substances potentiellement actives capables d'inhiber l'enzyme PLA2. Par cette technique, un criblage sur une centaine de molécules a été réalisé, afin de sélectionner parmi différentes familles de principes actifs potentiels, à savoir des extraits végétaux, des algues, des polysaccharides ou protéines, ceux ayant une forte activité inhibitrice de PLA2. Les produits issues du criblage et donc présentant une activité inhibitrice de la PLA2 de type I, sont ensuite évalués par le biais d'un procédé de test similaire mettant en oeuvre la mise en contact de la substance potentiellement active avec une PLA2 de type II, issue de Crotalus Adamanteus (venin de serpent), enzyme de choix retrouvée dans les tissus cutanés lors des processus inflammatoires. Ce test avec la PLA2 de type II est effectué généralement après celui mettant en oeuvre la PLA2 de type I pour des raisons de disponibilité et de cot comme énoncé précédemment. Il convient donc pour cette raison de présélectionner les substances potentiellement actives avec le procédé de test mettant en oeuvre la PLA2 de type I puis de confirmer ou infirmer l'activité des substances présélectionnées avec le procédé de test mettant en oeuvre la PLA2 de type II. Ainsi des extraits spécifiques ont été sélectionnés sur la base de leur efficacité: les extrait de pépins de raisin, les extraits de Pueraria Lobata, les extraits de boldo (Pneumus boldus), les extraits de citron, les extraits de tournesol, les extraits de camomille, le gluconate de zinc, les extraits de guarana, les extraits de liane (Uncaria tomentosa), les extraits d'arnica. Descriptions des figures: - La figure 1 montre les résultats d'essai d'activité anti-PLA2 pour différentes concentrations en extrait 1, la concentration en extrait 1 étant exprimée en pourcentage en abscisse; et le taux d'inhibition en PLA2 étant exprimé en pourcentage en ordonnée, et ceci pour l'exemple 2 relatif à l'extrait de Pueraria Lobata, ou extrait 1; - La figure 2 représente de manière similaire à la figure 1, une comparaison d'activité anti-PLA2 entre une PLA2 de type I issue de l'extrait 1 de Pueraria Lobata, et une PLA2 de type II issue de Crotalus Adamanteus, objet du tableau IV; - La figure 3 représente les résultats obtenus en terme d'activité anti-PLA2 pour différentes concentrations en extrait 2, extrait de pépins de raisin, selon l'exemple 3, avec la concentration en extrait 2 en pourcentage en abscisse et l'inhibition PLA2 en pourcentage en ordonnée; La figure 4 est une courbe similaire à la figure 2 pour l'extrait 2, comparant la PLA2 de type I avec la PLA2 de type II; La figure 5 représente la répartition du nombre de volontaires dont les signes d'irritation cutanée ont augmenté, n'ont pas été modifiés ou ont diminué après 28 jours d'utilisation d'une formulation placebo ou contenant 3 % d'extrait 1 de Pueraria selon l'étude in vivo de l'exemple 6; La figure 6 représente l'amélioration des signes d'irritation cutanée après 28 jours d'utilisation d'une formulation placebo ou contenant 3 % d'un extrait 1 de Pueraria, selon l'étude in vivo de l'exemple 6; La figure 7 représente les résultats de diminution de l'intensité des signes d'irritations cutanées en pourcentage, comparant une formulation placebo avec une formulation contenant 3 % de l'extrait 1, selon l'étude in vivo de l'exemple 6; La figure 8 représente le nombre de volontaires, en pourcentage l'effectif, ayant une peau adoucie ou une peau assouplie entre une formulation placebo et une formulation contenant 3 % d'extrait 1 dans le cadre de l'étude in vivo sur volontaire humain de l'exemple 6; La figure 9 représente de manière similaire à la figure 8, le nombre de volontaires en pourcentage de l'effectif, désirant poursuivre le traitement ou ayant une tension d'achat entre une formulation placebo et une formulation contenant 3 % de l'extrait 1. Dans les exemples, toute caractéristique qui apparaît être nouvelle par rapport à l'état de la technique quelconque fait partie intégrante de la présente invention et la protection est recherchée dans sa fonction et sa généralité. D'autre part, dans la description et les revendications, tous les pourcentages sont donnés en poids, la température est en degrés Celsius, la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire. Exemple 1 de l'invention mettant en oeuvre le criblage d'actifs: La PLA2 en solution aqueuse (35 Unités/ml), est mise en présence du L-(xphosphatidylcholine f3-arachidonoyl rpalmitoyl à 3 mM, qui est un phospholipide contenant en position sn-2, site hydrolysé par la phospholipase A2, l'acide arachidonique qui est spécifiquement un acide gras important impliqué dans la synthèse des médiateurs de l'inflammation. Au milieu réactionnel sont également ajoutés - Du calcium (Cofacteur): 0, 9 mM - Le sodium deoxycholate (Activateur): 1,6 mM L'étude de l'inhibition de la PLA2 est réalisée en 2 temps a) l'enzyme en présence du cofacteur (le calcium) est incubée pendant 15 minutes à température ambiante (200C) avec l'inhibiteur; b) puis un seconde incubation de 20 minutes est réalisée en présence du L-ca-phosphatidylcholine f3- arachidonoyl r-palmitoyl (3mM) et du sodium deoxycholate (1,6mM). A l'issue de cette incubation un dosage des acides gras libres, donc non estérifiés, est réalisé sur le milieu réactionnel par une technique enzymatique classique, bien connue de l'homme de l'art, qu'il est possible de suivre en colorimétrie, par exemple ici, à 550 nm. Les témoins utilisés conformément à la description sont: - l'acide aristolochique (8-methoxy-6-nitrophenanthro(3,4-a)-1,3-dioxole5carboxylic acid), - le bromure de p-bromophenacyl, inhibiteurs spécifiques des PLA2 sécrétées. Ces molécules ont permis d'obtenir les résultats suivants: Inhibition (%) Inhibiteurs Produit non dilué Produit dilué au Produit dilué au (concentrations (utilisés aux 100ième dans de l'eau 1000ième dans de initiales) oncentrations citées déminéralisée au déminéralisée en colonne 1) Acide Aristolochique 96,2 % + 1,04 10,00 % + 3,4 0,25 % + 0,5 (2mM) Bromure de p- 29,9 % + 8,3 4,5 % 2,3 bromophénacyl (10 mM) Acide 97,3% 13,2 8,8 % + 0,8 Nordihydroguaiaretique (5 mM) Les substances potentiellement actives testées et les résultats sont répertoriés dans le tableau II ci-dessous: Tableau II: Résultats des tests de screening pour des produits fabriqués et commercialisés par Coletica: les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport au témoin. Substance potentiellement Inhibition par la Inhibition par la active testée substance testée pure substance diluée à 1% (%) dans de l'eau déminéralisée (%) Extrait de Potiron 1,3 1,5 Extrait de Liane 55,3 O Extrait de luzerne 19,4 1,7 Extrait de cresson O O Extrait de citron 23,5 1,4 Extrait de myrtille 9,2 2,2 Extrait de mrier O O Extrait de Pueraria 90,2 23,9 Extrait de tournesol 25,5 O Extrait de pépin de raisin 79,82 29, 7 Extrait de Millepertuis 35,7 O Extrait de Shiitake O O Extrait d'algue 1,7 O Gluconate de zinc (solution 50 12,6 aqueuse à 5% p/p) Gluconate de magnésium 3,4 O (solution aqueuse à 50/o p/p) Extrait de potiron 1,3 1,5 Extrait de champignon O O Extrait de réglisse 5,8 O Farine de lupin (extraction de 2,6 O g dans 95g d'eau) Extrait de camomille 41,3 O Extrait de vanille O O Extrait de Guarana 59,1 1,1 Extrait de saxifrage 2, 6 0 Extrait de Lentinus Edodes 0,9 0 Extrait de Peumus boldus 80,2 72,4 Extrait d'arnica 79,8 69,2 Exopolysaccharide Coletica 24,2 0 fabriqué par fermentation (1% p/p dans l'eau déminéralisée) Les extraits de Potiron, de luzerne, de cresson, de citron, de murier de tournesol, de Millepertuis, de réglisse, de camomille, de vanille, de Guarana, de saxifrage, de lentinus edodes et de pneumus boldus sont réalisés de la façon suivante: Une macération de la feuille à 5% (p/p) dans l'eau ou de la plante entière à 5% (p/p) dans l'eau ou du fruits à 5% (p/p) dans l'eau est réalisée pendant 1 nuit à 40C. Puis la suspension obtenue est filtrée sur 0,45pm. Le dosage de l'activité inhibitrice de PLA2 est réalisée directement sur le filtrat obtenu. Les extraits de Liane, de myrtille, de Pueraria Lobata et de pépins de raisin sont réalisés après broyage des racines ou plantes entières ou du fruit puis extraction alcoolique à 5% (p/p) dans éthanol à 70%. Une décoction est réalisée en chauffant le mélange à 600C pendant 1 heure puis le surnageant est filtré. Une seconde décoction est réalisée à partir du culot obtenu dans les même proportion à 5% (p/p) dans Ethanol 70%. L'alcool des 2 surnageants obtenus est évaporé au rotavapor puis le culot est séché par lyophilisation. Le produit sec obtenu est re solubilisé à 5% (p/p) dans un mélange constitué par de l'eau à 69,6% (p/p), butylène glycol (25%), methyl paraben (0,1%). La solution de "Farine de lupin" est obtenue à partir d'une solubilisation d'un mélange de protéine et polysaccharide de Lupin à %(p/p) dans l'eau. A l'issue de cette étude permettant de rechercher les substances actives, des extraits spécifiques ont été sélectionnés sur la base de leur efficacité: les extrait de pépins de raisin, les extraits de pueraria lobata, les extraits de boldo (Pneumus boldus), les extraits de citron, les extraits d'acacia, les extraits de tournesol, les extraits de camomille, le gluconate de zinc, les extraits de guarana, les extraits de liane (uncaria tomentosa). Exemple 2 de la présente invention 1- Extrait de Pueraria Lobata ou extrait 1 A - Généralités Pueraria lobata (Kudzu, Ge-gen) est une plante originale, munie de tiges volubiles comme les sarments de la vigne, qui lui permettent de s'accrocher aux grillages, aux arbres. Originaire de Chine et du Japon o sa racine est utilisée en cuisine comme fécule, cette plante est connue en médecine chinoise depuis le VIe siècle avant Jésus Christ pour de nombreuses propriétés, dont l'une qui a été l'objet de récentes recherches par les Américains: celle de favoriser la désaccoutumance aux drogues. La racine de Pueraria Lobata contient 3 flavonoides: puerarine, dadzéine, dadzine. Celle-ci est consommée régulièrement en cure, car elle entraîne une diminution de la consommation d'alcool et une dépendance à la cigarette fortement réduite (Shebek, J et ai, Journal of alternative and complementary medicine, 4548, 2000) B Composition de l'extrait 1 L'extrait 1 est réalisé après broyage des racines puis extraction alcoolique à 5% (p/p) dans éthanol à 70%. Une décoction est réalisée en chauffant le mélange à 600C pendant 1 heure puis le surnageant est filtré. Une seconde décoction est réalisée à partir du culot obtenu dans les même proportion à 5% (p/p) dans Ethanol %. L'alcool des 2 surnageants obtenus est évaporé au rotavapor puis le culot est séché par lyophilisation. Le produit sec obtenu est resolubilisé à 5% (p/p) dans un mélange constitué par de l'eau à 69,6% (p/p), butylène glycol (25%), methyl paraben (0,1%). C - Activité anti-PLA2 Ci- Dosage des acides gras libres (non estérifiés) Afin d'évaluer la spécificité d'action du produit sélectionné vis à vis de la PLA2 de type I issue de pancréas de porc, une étude de la dose dépendance des effets de l'extrait végétal aqueux (appelé "extrait 1") a été réalisée. L'activité anti-PLA2 de concentrations croissantes du produit sélectionné a été mesurée sur 3 lots différents de matière première. Chaque dosage a été réalisé en triplicate. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau III ci-dessous Tableau III Concentrations d'utilisation de l'extrait i(%) 0,1 Inhibition (%) 88, 62 77, 31 58,73 44,2 21,66 0,38 Ecart type (%) 0,36 0,80 2,33 1,78 1,4 0,36 Les résultats sont exprimés en pourcentage témoin et font l'objet de la figure 1. d'inhibition par rapport au A la Figure 1, les résultats montrent que l'effet inhibiteur du produit sélectionné vis-à-vis de la PLA2 est dose relié. Ce résultat est en faveur d'une spécificité d'action de ce composé vis-à-vis du paramètre étudié. C2- Activité mesurée sur une PLA2 de type Il Afin de valider les résultats obtenus sur la PLA2 de type I utilisée dans notre modèle de criblage, une courbe effet dose est réalisée sur une PLA2 de type Il issue de Crotalus adamanteus. Tableau IV Concentration d'utilisation 10% 5% 3% 20/o 1% (%). sPLA2 type I 91,3 77,5 56,6 40,7 21,6 Moyenne Ecart type 0,36 0,79 3,44 2,19 2,65 sPLA2 type II 87,3 72,3 51,6 40,1 16,9 Moyenne Ecart type 1,49 0,52 0,99 1,52 1,85 Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport au témoin et font l'objet de la figure 2. A la figure 2, Les résultats présentés ici montrent que les activité inhibitrices du produit sélectionné vis-à-vis de PLA2 de type I ou de type II sont équivalentes. Le produit sélectionné est donc bien capable d'inhiber la forme de PLA2 rencontrée dans les tissus cutanés au cours de l'inflammation et constitue de ce fait un outil de choix pour venir en aide aux peaux sensibles. ExemDle 3 de la présente invention Extrait de pépins de raisin (extrait 2) L'extrait 2 est réalisé après récolte des pépins et extraction alcoolique à 5% (p/p) dans éthanol à 70%. Une décoction est réalisée en chauffant le mélange à 600C pendant 1 heure puis le surnageant est filtré. Une seconde décoction est réalisée à partir du culot obtenu dans les même proportion à 5% (p/p) dans Ethanol %. L'alcool des 2 surnageants obtenus est évaporé au rotavapor puis le culot est séché par lyophilisation. Le produit sec obtenu est resolubilisé à 2% (p/p) dans un mélange constitué par de l'eau à 72,6% (p/p), butylène glycol (25%), methyl paraben (0,1%). * Extrait végétal de pépins de raisin, réalisé à 2%, contenant 25% de Butylène Glycol et 0,10% de Methyl Paraben. Activité anti-PLA2 Afin d'évaluer la spécificité d'action du produit sélectionné vis à vis de la PLA2, une étude de la dose dépendance des effets de cette substance a été réalisée. L'activité anti-PLA2 de concentrations croissantes du produit sélectionné a été évaluée sur 3 lots différents de matière première. Chaque dosage a été réalisé en triplicate. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau V ci-dessous: Tableau V Concentration 5 3 2 1 0,1 d'utilisation Inhibition (%) _71,75 17 32,78 3, 40 Ecart type (%) 3,95 2,62 1,98 3,42 1,52 Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport au témoin et font l'objet de la figure 3 A la figure 3 les résultats montrent que l'effet inhibiteur du produit sélectionné vis-à-vis de la PLA2 est dose relié. Ce résultat est en faveur d'une spécificité d'action de ce composé vis-à-vis du paramètre étudié. Activité mesurée sur une PLA2 de type II Afin de valider les résultats obtenus sur la PLA2 de type I utilisée dans notre modèle de screening, une courbe effet dose est réalisée sur une PLA2 de type II. Tableau VI _ ________ So10% 5% 3% 2% 1% sPLA2 type I 841 69,5 60 1 46,2 31,9 66 Ecart type 0,89 1,06 1,21 2,49 0,77 3,98 sPLA2 type II 8 7 Ecart type 099 19 0,47 1,58 3,2 Les résultats sont exprimés en pourcentage témoin et font l'objet de la figure 4. d'inhibition par rapport au A la figure 4, les résultats présentés ici montrent que les activités inhibitrices du produit sélectionné vis-à-vis de PLA2 de type I ou de type II sont équivalentes. Le produit sélectionné est donc bien capable d'inhiber la forme de PLA2 rencontrée dans les tissus cutanés au cours de l'inflammation et constitue de ce fait un outil de choix pour venir en aide aux peaux sensibles. Exemple 4 de la présente invention - Activité des anti-inflammatoires Les anti-inflammatoires non stérofdiens et stéroidiens classiquement utilisés en pharmacie sont testés dans notre modèle d'étude afin de comparer leur activité par rapport à l'efficacité démontrée des produits sélectionnés ci-dessus. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport au témoin: Tableau VII Anti-inflammatoires non 10 mM 1 mM stéroldiens Diclofenaque 29,8 8 Indomethacine 25,7 0 Ibuprofène 40,3 6,9 Aspirine 7 3, 5 Anti-inflammatoires stéroldiens 10 mM_____Cortisone 0 Hydrocortisone 4, 5 Prednisolone 6,3 Les résultats obtenus, dans notre modèle d'étude, montrent que les anti-inflammatoires classiquement étudiés ont une activité anti-PLA2 plus faible que les actifs sélectionnés et décrits cidessus, utilisés à 3% dans une formule. Exemple 5 de la présente invention - Identification des isoflavones présents dans l'extrait de Pueraria Pueraria Lobata est une plante connue pour son contenu en isoflavones telle que Puerarine, Dadzéine, Dadzine et Génisteine. (Kaufman P, et ai, 1997). Ces molécules ont été dosées dans le produit sélectionné et décrit ci-dessus par une technique HPLC. Les teneurs en Puerarine, Dadzine et Dadzeine sont mentionnées dans le tableau VIII ci-dessous: Tableau VIII Isoflavones Teneur (en %) Puerarine 1,5 Daidzine 0,45 Dadzéine 0,06 Génisteine à 0,005%, n'a pu être dosée dans le produit sélectionné et décrit cidessus. Cependant une solution commerciale de Génisteine à 1% a été évaluée dans notre modèle d'inhibition de la PLA2 et le résultat obtenu (28,79%), ce qui montre que cette isoflavone n'est pas responsable de l'activité de l'extrait sélectionné dans la mesure o la teneur en génisteine de ce produit est inférieure à 0,005% L'activité anti-PLA2 du mélange des 3 isoflavones aux concentrations retrouvées dans l'extrait est évaluée dans le modèle d'inhibition mis au point. Les résultats montrent que les isoflavones identifiées dans l'extrait de pueraria ne sont pas responsables de l'activité inhibitrice de la PLA2. Exemple 6 de la présente invention: - Etude in vivo sur volontaires humains Une étude sur volontaires humains est réalisée afin de tester l'efficacité d'une formulation, contenant 3% de l'extrait 1, vis à vis des signes d'irritations cutanés observés lors d'une inflammation de la peau. 1 - Protocole de l'étude 50 volontaires ont utilisé une formulation placebo pendant 28 jours. autres volontaires ont utilisé une formulation contenant 3 % d'un extrait 1 pendant le même temps. Chaque groupe de 50 volontaires était divisé en deux sous-groupes de 25 volontaires. Un sous-groupe était constitué de volontaires présentant une peau réactive (sous-groupe "peau sensible", PS), l'autre était constitué de volontaires estimant présenter une peau réactive (sousgroupe "peau estimée sensible", PES). L'inclusion des volontaires dans chaque sousgroupe a été réalisée à l'aide d'un questionnaire clinique validé depuis deux ans par le laboratoire ayant mené l'étude. N.B. Les volontaires des 2 sous-groupes (PES + PS) pouvaient présenter des signes d'irritation cutanée. Avant et après les 28 jours de traitement par l'une ou l'autre des formulations (placebo ou contenant l'extrait 1): les signes d'irritation cutanée présentés par les volontaires étaient "cotés" par un médecin. Les différents signes observés étaient les suivants: Erythème: Xérose: Rougeur du tégument plus ou moins localisée liée à un agent physique extérieur ou à un syndrome inflammatoire. Terme médical utilisé pour définir la sécheresse cutanée mais avec une connotation d'intensité. Quand on veut définir une sécheresse plus que modérée on utilise le terme de xérose. tonicité de la peau analysée cliniquement par la capacité de récupération de la peau soumise à des contraintes. Petits vaisseaux éclatés ( télangiectasies) en forme d'étoiles, couleur rose cuivrée survenant chez des peaux sèches au niveau du visage. Relâchement: Couperose: A la fin de l'étude, les volontaires répondaient à un questionnaire d'évaluation des produits. Résultats Analyse globale Si aucune distinction n'est faite entre les sous-groupes PS et PES et que l'on examine la répartition des volontaires dont les signes d'irritation cutanée ont augmenté, n'ont pas été modifiés ou ont diminué au cours de l'étude, il peut être observer: Pour les volontaires ayant utilisé la formulation placebo 4 ont vu leurs signes d'irritation cutanée augmenter 23 n'ont pas vu leurs signes d'irritation cutanée être modifiés 23 ont vu leurs signes d'irritation cutanée diminuer Pour les volontaires ayant utilisé la formulation contenant 3 % d'un extrait de 1: 0 ont vu leurs signes d'irritation cutanée augmenter 19 n'ont pas vu leurs signes d'irritation cutanée être modifiés 31 ont vu leurs signes d'irritation cutanée diminuer Ces résultats, présentés dans la figure 5 montrent clairement que la formulation qui contient l'extrait 1 propose une amélioration des signes cliniques d'irritation cutanée supérieure à celle proposée par la formulation placebo (p A la figure 5, il est à noter que la répartition du nombre de volontaires dont les signes d'irritation cutanée ont augmenté, n'ont pas été modifiés ou ont diminué après 28 jours d'utilisation d'une formulation placebo ou contenant 3 % d'extrait de pueraria. AnaIvse item par item Si aucune distinction n'est faite entre les sousgroupes PS et PES, les deux formulations (placebo et contenant l'extrait 1) sont capables d'améliorer significativement la plupart des signes cliniques d'irritation cutanée rencontrés chez les panélistes (figure ci dessous). A la figure 6 on observe une amélioration des signes d'irritation cutanée après 28 jours d'utilisation d'une formulation placebo ou contenant 3 % d'un extrait 1: Analyse globale sans distinction entre les sous-groupes PES et PS Les commentaires suivants peuvent être réalisés relativement à la figure 6 ns: pas de différence significative entre J0 et 328 *: différence significative entre 30 et J28 (p des résultats. Lorsque l'on considère uniquement les peaux sensibles, seule la formulation contenant 3% d'un extrait 1 est capable d'améliorer de manière significative 3 des 4 signes cliniques d'irritation cutanée étudiés (figure 6). La formulation placebo améliore quant à elle, uniquement l'item "relâchement" (figure 6), item le plus probablement en relation avec l'effet hydratant obtenu après l'application d'une crème. A la figure 7 on observe une amélioration des signes d'irritation cutanée après 28 jours d'utilisation d'une formulation placebo ou contenant 3 % d'un extrait i: Analyse des sous-groupes "peau sensible". Les commentaires suivants peuvent être réalisés relativement à la figure 7 ns pas de différence significative entre J0 et 328 * différence significative entre J0 et 328 (p lutte contre les peaux sensibles. Questionnaire d'évaluation des produits Le questionnaire soumis aux volontaires ayant utilisé la formulation placebo ou contenant 3 % de l'extrait 1 pendant 28 jours a lui aussi permis de mettre en évidence des différences significatives entre les produits testés (figure 8 et 9). La formulation contenant 3 % de l'extrait 1 permettait un adoucissement (p (figure 8). A la figure 8 on observe un adoucissement et assouplissement de la peau en réponse à l'application pendant 28 jours d'une formulation placebo ou contenant 3 % de l'extrait 1 Les commentaires suivants peuvent être réalisés relativement à la figure 8 *: Significativement différent du groupe placebo (p 60 % d'entre eux désiraient continuer à l'utiliser (contre 29 % pour la formulation placebo, p (contre 26 % pour la formulation placebo, p A la Figure 9 on présente les résultats d'intention d'achat et de poursuite du traitement Les commentaires suivants peuvent être réalisés relativement à la figure 9 *: Significativement différent du groupe placebo (p N.B. Le test du Chi-2 compare des répartitions de population. Les données sont dans ce graphe exprimées en nombre de volontaires, inutile dans ce cas de chercher les écart types. L'extrait 1 propose une action spécifiquement ciblée sur la diminution des signes d'irritation cutanée rencontrés chez les sujets à peaux sensibles. Cet actif constitue de ce fait un outil particulièrement pertinent pour soulager les peaux réactives et pour corriger par des applications cosmétiques, les rougeurs et picotements désagréables ressentis par les consommateurs. Exemple 7 de la présente invention formulations de compositions cosmétiques ou de compositions Pharmaceutiques: Utilisation des produits de l'invention dans des formulations de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques de type émulsion huile dans eau Formulation 7a A Eau qsp 100 Butylène Glycol 2 Glycérine 3 Sodium Dihydroxycétyl 2 Phosphate, Isopropyl Hydroxycétyl Ether B | Glycol Stéarate SE 14 Triisononanoine 5 | Octyl Cocoate C Butylène Glycol, M éthyl para ben, Ethylparaben, Propylparaben, pH ajusté à 5,5 D | Produits de l'invention 0,01 - 30 % Les phases A et B sont chauffées séparément à 750C, puis B est ajouté à A sous agitation vigoureuse; C puis D sont rajoutés ensuite, lors du refroidissement de la crème ainsi formée. Formulation 7b: A Eau Butylène Glycol Glycérine Polyacrylamide, Laureth-7 qsp 100 2,8 Isoparafine, B Butylène Méthylparaben, Ethylparaben, Propylpai Phénoxyéthanol, Méthylparaben, Propylparaben, Ethylparaben Butylène Glycol Glycol, 2 raben; araben, 0,5 0,01 - 30 % Butylpi C | Produits de l'invention La phase A est chauffée à 750C; B puis C sont ajoutés à A sous agitation, lors du refroidissement de la formule ainsi fabriquée. Formulation 7c: A Carbomer Propylène Glycol 0,50 Glycérol 5 [Eau qsp 100 B Octyl Cocoate 5 Bisabolol 0,30 Diméthicone 0,30 C | Sodium Hydroxyde 1, 60 D Phénoxyéthanol, 0,50 Méthylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben E Parfum 0,30 F | Produits de l'invention 0,01 - 30 % Les phases A et B sont chauffées séparément à 750C, puis B est ajouté à A sous agitation vigoureuse; C puis D puis E puis F sont rajoutés ensuite, lors du refroidissement de la crème ainsi formée. Exemple 8 de la présente invention Utilisation des produits " antiinflammatoires " dans une formulation de type eau dans huile A PEG 30 - 3 dipolyhydroxystearate Triglycérides capriques 3 Cétéaryl Octanoate 4 Dibutyl Adipate 3 Huile de grains de raisin 1,5 Huile de Jojoba 1,5 Phénoxyéthanol, 0,5 Méthylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben B 1 Glycérine Butylène Glycol Magnésium Sulfate EDTA Eau C | Cyclométhicone Diméthicone D [ Parfum 0,5 0,05 qsp 100 0,3 E | Produits de l'invention 0,01 - 30 % Les phases A et B sont chauffées séparément à 750C, puis B est ajouté à A sous agitation vigoureuse; C puis D puis E sont rajoutés ensuite, lors du refroidissement de la crème ainsi formée. Exemple 9 de la présente invention Utilisation des produits "antiinflammatoires" dans une formulation de type gel nettoyant visage. A Gomme de Xanthane Eau 0,8 qsp 100 B Butylène Glycol, Méthylparaben, Ethylparaben, Propylparaben Phénoxyéthanol, Méthylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben C | Acide citrique 0,5 0,5 0,8 D | Sodium Laureth Sulfate ,0 E | Produit de l'invention 0,01 - 30 % Les phases A et B sont préparées à température ambiante séparément, puis B est ajouté à A sous agitation; C puis D puis E sont rajoutés ensuite, sous agitation modérée. Exemple 10 de la Présente invention Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type anhydre A Cire minérale Isostéaryl Isostéarate Propylène Glycol Dipélargonate Propylène Glycol Isostéarate Cire d'abeilles/PEG 8 Huile de noyaux de palme hydrogénée Huile de glycérides de palme hydrogénée Huile de Lanoline Huile de Sésame Cétyl Lactate Huile minérale, Alcool de Lanoline 17,0 31,5 2,6 1,7 3,0 3,4 3,4 1,7 1,7 3,0 B Huile de ricin Produits de l'invention présentés sous forme sèche Qsp 100 0,001 - 5 % Les phases A et B sont chauffées séparément à 800C, puis B est ajouté à A sous agitation. Exemple 11 de la présente invention Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de gels aqueux (gels visages, gels corps, etc...) A |Eau qsp 100 Polymère carboxyvinylique (aussi 0,5 appelé carbomer) Butylène Glycol 15 Phénoxyéthanol, Méthylparaben, 0,5 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben B | Produits de l'invention 0, 01 - 30 % La phase A est préparée en ajoutant tous les ingrédients et en chauffant l'ensemble à 800C jusqu'à l'obtention d'un mélange homogène. B est alors ajouté à A sous agitation vigoureuse lors du refroidissement du gel ainsi formée. Exemple 12 Tests d'innocuité Evaluation de l'acceptation cosmétique d'une préparation contenant les produits de l'invention Les essais de toxicologie ont été réalisés sur un composé retenu à savoir l'extrait 1 utilisé pur, par une évaluation oculaire chez le lapin, par l'étude de l'absence de toxicité anormale par administration orale unique chez le rat et par l'étude du pouvoir sensibilisant sur le cobaye. 1. Evaluation de l'irritation primaire cutanée chez le lapin: La préparation décrite ci-dessus est appliquée sans dilution à la dose de 0, 5 ml sur la peau de 3 lapins selon la procédé préconisée par la directive OCDE concernant l'étude de " 'effet irritant/corrosif aigu sur la peau ". Les produits sont classés selon les critères définis par l'arrêté du 1/2/1982 publié au JORF du 21/02/82. Les résultats de ces essais, ont permis de conclure que la préparation retenue était classée non irritante pour la peau. 2. Evaluation de l'irritation oculaire chez le lapin: La préparation décrite ci-dessus ont été instillée pure en une seule fois, à raison de 0, lml, dans l'oeil de 3 lapins selon la procédé préconisée par la directive de l'OCDE n 0405 du 24 février 1987 concernant l'étude de l'effet irritant/corrosif aigu sur les yeux ". Les résultats de ce test permettent de conclure que la préparation peut être considérée comme non irritante pour les yeux, au sens de la directive 91/326 CEE utilisée pure 3. Essai sur l'absence de toxicité anormale par administration orale unique chez le rat: La préparation décrite a été administrée en une fois par voie orale à la dose de 5g/Kg de poids corporel, à 5 rats mâles et 5 rats femelles selon un protocole inspiré de la directive de l'OCDE n'401 du 24 février 1987 et adapté aux produits cosmétiques. Les DLO et DL50 sont trouvées supérieures à 5000 mg/Kg. La préparation testée ne sont donc pas classées parmi les préparations dangereuses par ingestion. 4. Evaluation du potentiel de sensibilisation cutanée chez le cobaye: La préparation décrite est soumise au test de maximisation décrit par Magnusson et Kligmann, protocole en accord avec la ligne directrice n0406 de l'OCDE. Les préparations sont classées comme non sensibilisantes par contact avec la peau. 5. Evaluation du potentiel phototoxique et photoallergique par applications topiques chez le cobaye: animaux ont reçu le produit tel quel en application topique unique puis ont été exposés au rayonnement UV afin d'apprécier son potentiel phototoxique. Puis ils ont reçu le produit à tester tel quel par applications topiques répétées suivies d'expositions à un rayonnement UV (expositions d'induction). Après une période de repos de 10 jours les animaux ont reçu une application unique du produit à tester tel quel sur peau vierge suivie d'une exposition aux UV (exposition déclenchante). Parallèlement, 5 animaux ayant reçu le produit à tester dans les mêmes conditions et non exposés au rayonnement UV ont servi de témoins d'irradiation. L'évaluation du potentiel phototoxique et photoallergique est réalisée par comparaison de l'intensité des érythèmes et oedèmes sur les zones traitées avec le produit à tester puis exposées aux UV et les zones non traitées et exposées aux UV, et sur les zones traitées non exposées des animaux témoins. Dans les conditions expérimentales adoptées, le produit testé tel quel est considéré comme dépourvu de potentiel phototoxique et photoallergique. 49 FR 02.14490 du 09-04-03 Revendications 1. Procédé de test de l'activité d'une substance potentiellement active pour inhiber l'activité enzymatique de la phospholipase A2, de préférence la phospholipase A2 de type I ou II, caractérisé en ce qu'il comprend: a) La mise en présence de ladite substance potentiellement active avec: - La phospholipase A2; - Un substrat qui est un phospholipide, comprenant au moins un acide gras sous forme ester, de préférence l'acide gras est une chaîne longue comprenant entre 15 et 22 atomes de carbones, de préférence cet acide gras étant insaturé ou poly-insaturé, ledit substrat étant capable de libérer lors de son hydrolyse au moins un acide gras; b) La mesure de l'activité enzymatique de la phospholipase A2, comprenant notamment la détection de la présence dudit acide gras et éventuellement son dosage quantitatif. 2. Procédé de test selon la revendication 1 caractérisé en ce que le procédé est mis en oeuvre avec une phospholipase A2 de type I, notamment pour présélectionner, en référence à leur activité inhibitrice de phospholipase A2, les substances potentiellement actives, de manière significative, et caractérisé en ce que le procédé est de nouveau mis en oeuvre avec la phospholipase A2 de type II, notamment pour déterminer quelles sont les substances potentiellement actives capables d'inhiber, de manière significative, l'activité enzymatique de la phospholipase A2 de type I et/ou de type II. FR 02.14490 du 09-04-03 3. Procédé de test selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que l'enzyme phospholipase A2 de type I et/ou de type II est issue de venin d'abeille (Apis mellifera) ou issue de pancréas de boeuf ou issue de levure Streptomyces violaceoruber, ou issue de venin de serpent (Crotalus adamanteus ou Crotalus atrox ou Crotalus Durissus ou Naja mossambica mossambica) ou issue de lysat cellulaire humain ou animal ou issue de liquide biologique humain ou animal (liquide synovial), ou issue d'un des quelconques mélanges possibles des enzymes ainsi obtenues. 4. Procédé de test selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que l'enzyme phospholipase A2 de type I est issue de pancréas de porc. 5. Procédé de test selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que l'enzyme phospholipase A2 de type II est issue de liquide synovial humain ou issue de venin de serpent Crotalus adamanteus. 6. Procédé de test selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que ledit substrat est de nature phospholipidique comprend en position de substitution nucléophile de type 2 (sn-2) au moins un acide gras à longue chaîne de préférence entre C15 et C22 atomes de carbones, de préférence encore cet acide gras étant insaturé ou poly-insaturé. 7. Procédé de test selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisé en ce que le substrat est choisi parmi au moins un dérivé ester 51 FR 02.14490 du 09-04-03 de l'acide arachidonique, de préférence le L-ca-phosphatidylcholine arachidonoyl rpalmitoyl. 8. Procédé de test selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 caractérisé en ce que le procédé comprend la mise en contact avec un cofacteur de la phospholipase A2, les concentrations en co-facteur sont de préférence comprises entre 0,0001% et 10%. 9. Procédé de test selon la revendication 8 caractérisé en ce que le co10 facteur est le calcium. 10. Procédé de test selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 caractérisé en ce que le procédé comprend la mise en contact avec un agent de solubilisation dudit substrat en phase aqueuse, les concentrations en agent de solubilisation sont de préférence comprises entre 0,001% et 10%. 11. Procédé de test selon la revendication 10 caractérisé en ce que l'agent de solubilisation est le déoxycholate de sodium. 12. Procédé de test selon l'une quelconque des revendications 1 à Il caractérisé en ce que l'activité enzymatique de la phospholipase A2 est mesurée par dosage quantitatif des acides gras libérés. 13. Utilisation d'un procédé de test tel que défini aux revendications 1 à 12, pour identifier au moins un principe actif capable d'inhiber l'activité enzymatique de la phospholipase A2, notamment de la phospholipase A2 de type I et/ou II. 52 FR 02.14490 du 09-04-03 14. Utilisation de test selon la revendication 13 caractérisée en ce que la substance potentiellement active est considérée comme un principe actif lorsque celle-ci inhibe l'activité enzymatique de la phospholipase A2, c'est à dire lorsque l'activité mesurée en présence de l'actif est inférieure à l'activité mesurée sans la mise en contact de la phospholipase A2 avec la substance potentiellement active, toutes conditions de température, de temps de contact, et de conditions opératoires identiques, ou comparables par ailleurs. 15. Utilisation d'au moins un principe actif capable d'inhiber l'activité enzymatique de la phospholipase A2, de préférence la phospholipase A2 de type I et/ou II, ledit principe actif étant choisi parmi un extrait de pépins de raisin, un extrait de pueraria lobata, un extrait de pneumus boldus (boldo), un extrait de citron, un extrait de tournesol, un extrait de camomille, le gluconate de zinc, un extrait de guarana, un extrait de liane uncaria tomentosa, ou un extrait d'arnica, ou une des combinaisons résultant de l'association d'au moins deux des principes actifs énumérés; pour la fabrication d'une composition cosmétique. 16. Utilisation d'au moins un principe actif capable d'inhiber l'activité enzymatique de la phospholipase A2, de préférence la phospholipase A2 de type I et/ou II, ledit principe actif étant choisi parmi un extrait de pépins de raisin, un extrait de pueraria lobata, un extrait de pneumus boldus (boldo), un extrait de citron, un extrait de tournesol, un extrait de camomille, le gluconate de zinc, un extrait de guarana, un extrait de liane uncaria tomentosa, ou un extrait d'arnica, ou une des combinaisons résultant de l'association d'au moins deux des principes actifs énumérés; pour la fabrication d'une composition pharmaceutique. 53 FR 02.14490 du 09-04-03 17. Utilisation selon la revendication 15 ou 16, caractérisée en ce que les extraits végétaux ont une concentration de 1 à 30 % en poids de l'extrait total. 18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 15 à 17, caractérisée en ce que la concentration du principe actif est comprise entre 0,01 % et 30 % en poids de la composition totale. 19. Composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un principe actif capable d'inhiber l'activité enzymatique de la phospholipase A2, de préférence de type I et/ou II, ledit principe actif étant choisi parmi un extrait de pépins de raisin, un extrait de pueraria lobata, un extrait de pneumus boldus (boldo), un extrait de citron, un extrait de tournesol, un extrait de camomille, le gluconate de zinc, un extrait de guarana, un extrait de liane uncaria tomentosa, ou un extrait d'arnica, ou une des combinaisons résultant de l'association d'au moins deux des principes actifs énumérés. 20. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un principe actif capable d'inhiber l'activité enzymatique de la phospholipase A2, de préférence de type I et/ou de type II, ledit principe actif étant choisi parmi un extrait de pépins de raisin, un extrait de pueraria lobata, un extrait de pneumus boldus (boldo), un extrait de citron, un extrait de tournesol, un extrait de camomille, le gluconate de zinc, un extrait de guarana, un extrait de liane uncaria tomentosa, ou un extrait d'arnica, ou une des combinaisons résultant de l'association d'au moins deux des principes actifs énumérés. 54 FR 02.14490 du 09-04-03 21. Composition, selon l'une des revendications 19 ou 20, caractérisée en ce que la concentration du principe actif est comprise entre 0,01% et % en poids de la composition totale. 22. Utilisation d'un principe actif selon l'une quelconque des revendications 15 à 18, ou d'une composition selon l'une quelconque des revendications 19 à 21, pour exercer un effet anti-inflammatoire et/ou anti-douleur et/ou anti-irritation et/ou anti-picotement et/ou antibrlure et/ou anti-démangeaison et/ou anti-érythème et/ou anti-xérose et/ou anti10 couperose et/ou anti-relâchement des tissus cutanés, notamment dans le but de diminuer les irritations et/ou les picotements et/ou les démangeaisons et/ou de limiter les observations superficielles de couperose et/ou le relâchement des tissus cutanés, et/ou diminuer les inflammations et/ou les douleurs et/ou les brlures et/ou les érythèmes et/ou les rougeurs du tégument plus ou moins localisée liée à un agent physique extérieur ou à un syndrome inflammatoire et/ou les xéroses. 23. Utilisation d'un principe actif selon l'une quelconque des revendications 15 à 18, ou d'une composition selon l'une quelconque des revendications 19 à 21, pour inhiber, de manière significative, l'activité enzymatique de la phospholipase A2, notamment de la phospholipase A2 de type I et/ou II. 24. Procédé de soin cosmétique caractérisé en ce qu'il comprend l'application topique sur les zones de la peau d'une personne souhaitant réaliser ledit soin cosmétique, d'une composition cosmétique telle que définie à la revendication 19 ou 21. FR 02.14490 du 09-04-03 25. Procédé de soin cosmétique selon la revendication 24, caractérisé en ce qu'il permet de traiter les irritations et/ou les picotements et/ou les démangeaisons et/ou pour limiter ou supprimer les observations superficielles de couperose et/ou l'apparition de petits vaisseaux éclatés et/ou le relâchement des tissus cutanés et/ou la perte de tonicité des tissus cutanés et/ou la sécheresse des tissus cutanés.