Brevet FR2853910A1 — publié le 20041022

La présente invention a pour objet l'utilisation des sondes relatives aux gènes FANCC, DAD1 GRIM19 et HADHII pour la caractérisation d'un échantillon biologique. L'invention a également pour objet l'utilisation de ces sondes pour l'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis, un procédé d'identification ainsi qu'un nouvel outil de recherche. Le psoriasis est une pathologie dermatologique fréquente qui touche de 3 à 5% de la population européenne. Le psoriasis est couramment associé à d'autres pathologies, telles que l'hypertension, l'arthrite, ou encore le SIDA (Farber EM, Nall L, In Roenigk HH, Maibach HI (Eds. ): Psoriasis Third Edition, Revised and Expanded (1998), chapitre 9 :107-157; M., J Invest Dermatol (1990 Nov);95(5):38S-40S). Sur la base de l'âge d'apparition des symptômes et de l'association avec certains gènes du complexe majeur d'histocompatibilité de type @ (CMH 1), le psoriasis a été classé en deux sous-types appelés 1 et Il (Henseler T, Christophers E, In Roenigk HH, Maibach HI (Eds. ): Psoriasis Third Edition, Revised and Expanded (1998), chapitre 10:159-166). Des études ont également montré que 30 à 50% des patients atteints de psoriasis ont un antécédent familial chez un des parents du 1 er ou 2e degré. Ces observations ont permis de suggérer que le psoriasis est une maladie génétique avec une composante autoimmune (Bos, Br. J. Dermatol. (1988) 118:141; Baadsgaard et al., J. Invest. DermatoL (1990) 95:328). Les principales composantes physiopathologiques du psoriasis incluent une hyperprolifération associée à une différenciation anormale des kératinocytes de l'épiderme, une inflammation caractérisée par un infiltrat inflammatoire (principalement de lymphocytes T helpers activés) au niveau du derme et de l'épiderme et par le relargage de cytokines pro-inflammatoires, et enfin une vascularisation anormale du derme (Krueger JG, J Am Acad Dermatol (2002 Jan);46(1 ):1-23; quiz 23-6). L'implication du processus inflammatoire dans la physiopathologie du psoriasis est soutenue par le mécanisme d'action de certains agents ayant un effet thérapeutique bénéfique pour la maladie. Par exemple, la cyclosporine utilisée dans le traitement des formes sévères de psoriasis, exerce un effet inhibiteur sur la synthèse de l'interleukine-2, cytokine promouvant la prolifération des lymphocytes T et la sécrétion des cytokines inflammatoires par ces cellules. Par conséquent, les modulateurs de l'inflammation permettent de limiter la composante inflammatoire caractérisant en partie le psoriasis. Cliniquement, le psoriasis se définit par une hyperplasie de l'épiderme, ainsi que par une desquamation, un érythème et une inflammation cutanés. Les méthodes actuellement disponibles pour le traitement incluent la thérapie topique, la photothérapie, la photo-chimiothérapie et la thérapie systémique, réservée aux formes plus sévères de la maladie. Néanmoins, ces thérapies offrent uniquement des périodes de rémission aux patients, mais la pathologie resurgit généralement après l'arrêt du traitement. Les glucocorticoïdes administrés par voie topique sont le plus généralement prescrits dans le traitement initial du psoriasis, et exercent des effets antiinflammatoires, antimitotiques et antipruritiques bénéfiques. Le goudron brut de charbon est un mélange complexe de milliers de composés d'hydrocarbure. Son effet thérapeutique est lié à l'inhibition d'enzymes et à des propriétés antimitotiques. Bien qu'efficace, ce traitement est, de par son odeur, désagréable à utiliser pour le patient et peut induire des cancers cutanés. La photothérapie et photo-chimiothérapie basées sur l'administration du methoxsalen, principe actif photosensibilisant, sont seulement temporairement efficaces. Le traitement doit être répété et offre une thérapie palliative, mais non curative. De plus, ces traitements ont des effets secondaires à long terme, notamment des altérations immunologiques et un risque accru de carcinogenèse. Le methotrexate est l'agent cytotoxique systémique le plus généralement administré pour les formes sévères de psoriasis s'étendant sur une surface importante du corps. Les contre-indications de ce traitement sont nombreuses et l'arrêt du traitement peut s'accompagner d'une aggravation des symptômes. L'hydroxyurée, l'etretinate, la cyclosporine, et l'AZT sont également les médicaments systémiques utilisés pour lutter contre le psoriasis mais tous ont des effets secondaires sérieux. A ce jour, aucun traitement ne permet une rémission durable de cette pathologie sans engendrer des effets secondaires importants, car le psoriasis est une pathologie complexe d'origine multifactorielle. La compréhension du mécanisme physiopathologique conduisant au phénotype psoriasique demeure donc un défi important dans le traitement médical dermatologique. En effet, beaucoup d'aspects de la maladie restent à élucider, comme par exemple la réponse hétérogène à certains traitements, de patients présentant des signes cliniques semblables. L'apoptose, est un phénomène de mort cellulaire (décrit entre autres par KERR J. F.R. et al., J. Cancer (1972), 265, 239) qui est une forme hautement sélective de suicide cellulaire. Elle se caractérise par des phénomènes morphologiques et biochimiques aisément observables. Ainsi, on observe une condensation de la chromatine associée ou non à une activité endonucléasique, la formation de corps apoptotiques et une fragmentation de l'acide désoxyribonucléique (ADN) du fait de l'activation d'endonucléases, en fragments d'ADN de 180-200 paires de base donnant un profil facilement reconnaissable par électrophorèse sur gel d'agarose. L'apoptose est impliquée dans le développement, la différenciation et le renouvellement tissulaire. Au vu des connaissances du processus physiologique d'apoptose cellulaire, rien ne permet à l'homme du métier de déduire une quelconque implication de celle-ci dans le dérèglement physiologique menant au phénotype psoriasique. L'analyse de l'expression génique dans la peau de patients psoriasiques constitue une voie pour mieux comprendre le mécanisme physiopathologique de cette maladie (Bowcock AM, Shannon W, Du F, et al., Hum Mol Genet (2001); 10(17):1793-805 ; Oestreicher JL, Walters IB, Kikuchi T, et al., Pharmacogenomics J (2001); 1 (4):272-87). La technologie des filtres à ADNc ( arrays ) (NGuyen C, Rocha D, Granjeaud S, et al., Genomics (1995)) est une des technologies permettant d'analyser simultanément et rapidement l'expression de plusieurs centaines d'ARNm à partir d'une biopsie cutanée prélevée chez le patient, par opposition à d'autres technologies plus lourdes à mettre en #uvre, comme le SAGE ( Serial Analysis of Gene Expression ) (Velculescu VE, Zhang L, Vogelstein B, Kinzler KW, Science (1995 Oct) 20 ;270(5235):484-7), oule Differential Display (Liang P, Pardee AB, Science (1992); 257 : 967-971 ; Zhang L, et ai., Science (1997) ; 276: 1268-1272). La Demanderesse a mis en évidence de nouveaux gènes marqueurs du psoriasis. La présente invention a pour objet des sondes relatives aux gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII pour la caractérisation d'un échantillon biologique, et également un nouvel outil de caractérisation d'un composé destiné au traitement du psoriasis, ainsi q'un nouvel outil de recherche. En particulier, l'invention se rapporte à l'utilisation d'une sonde relative, respectivement, aux gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII pour la caractérisation d'un échantillon biologique. Selon la présente invention, un échantillon biologique correspond à tout prélèvement ou échantillon d'organisme vivant, de préférence un mammifère, en particulier un organisme humain, en quantité suffisante pour être caractérisé. On peut citer comme échantillon biologique, à titre d'exemple non limitatif, un échantillon de peau, de cuir chevelu, de muqueuse, ou cellulaire. Selon la présente invention, la caractérisation d'un échantillon biologique consiste à mesurer le niveau d'expression d'un gène d'intérêt, c'est à dire plus précisément la quantité d'ARN messager ou de protéine correspondante à ce gène qui est présente dans l'échantillon biologique. Selon la présente invention, on entend par sonde relative à un gène une sonde polynucléotidique ou une sonde polypeptidique. Dans le cas d'une sonde polynucléotidique, il s'agit d'un oligo- ou polynucléotide simple ou double brin, d'ARN, ou ADN, dont la séquence est complémentaire d'une séquence cible correspondant à une partie ou à la totalité dudit gène, et pouvant aller de 10 à classiquement 500 paires de bases et dont la séquence est complémentaire avec la séquence cible à au moins 80% et préférentiellement d'au moins 90% (pourcentage de bases d'acide nucléiques appariées entre deux séquences, voir les méthodes de calcul proposées par Atschul et al. J. Molec. Biol. (1990), 215:403). Les sondes polynucléotidiques selon l'invention pourront être des oligo- ou polynucléotides comportant un ou plusieurs nucléotides modifiés par substitution, délétion ou insertion, ces modifications seront telles que la séquence de la sonde lui permettra de reconnaître spécifiquement le fragment de séquence cible. Les sondes polynucléotidiques complémentaires pourront également présenter un squelette modifié lui conférant, par exemple, une meilleure stabilité. Par exemple, les liaisons phosphodiesters des brins d'ARN naturels peuvent être modifiées pour inclure au moins un atome d'azote ou de soufre. On entend par analogue d'une sonde polynucléotidique, un oligo- ou polynucléotide dont les liaisons phosphodiesters sont remplacées par des séquences de type peptidique (peptide nucleic acids). De plus, les sondes polynucléotidiques ou leurs analogues selon l'invention peuvent comprendre des bases autres que les 4 bases classiques. Les sondes polynucléotidiques ou leurs analogues selon l'invention peuvent être synthétisés selon de nombreuses méthodes de synthèse in vivo ou in vitro de façon manuelle ou automatique. Les méthodes de synthèse in vitro peuvent être chimiques ou enzymatiques. Par exemple, une sonde d'ARNc simple brin peut-être obtenue par transcription in vitro d'un modèle de séquence d'ADN d'intérêt servant de matrice, en faisant intervenir une ARN polymérase (à titre d'exemple la T3, T7 ou SP6 ARN polymérase). Une sonde d'ADNc simple brin peut-être générée par transcription inverse d'un ARNm d'intérêt en présence d'une reverse transcriptase (par exemple la MMLV (Moloney Murine Leukemia Virus) Reverse Transcriptase isolée d'Escherichia Coli. De nombreuses méthodes de synthèse in vivo d'ARN double brin sont décrites dans la littérature, elles peuvent être réalisées dans divers types cellulaires de bactéries ou d'organismes supérieurs On pourra également se référer aux méthodes de synthèses décrites dans les demandes de brevet W001/36646 et W001/75164. Ces ARN double brin peuvent être ensuite dénaturés pour servir de polynucléotide simple brin. Concernant son environnement, la sonde polynucléotidique peut être ou faire partie d'un plasmide, d'un génome viral ou d'un autre type de vecteur. Elle peut, dans d'autres cas, faire partie du génome d'une cellule, ou bien d'une cellule génétiquement modifiée pour comporter cette sonde dans son génome. Il peut s'agir aussi d'une molécule isolée. Concernant les régions encadrant cette sonde, elle est de préférence sous le contrôle de séquences régulatrices. Si la sonde est insérée dans un vecteur, ledit vecteur comprend de préférence toutes les séquences nécessaires à la transcription et éventuellement la traduction de la sonde. Cette sonde peut aussi être entourée par des régions flanquantes permettant une étape de recombinaison homologue avec un autre fragment polynucléotidique, conduisant éventuellement à l'insertion de la sonde de l'invention dans l'ADN génomique d'une cellule cible. Les sondes polypeptidiques selon l'invention sont des polypeptides capables de se lier spécifiquement avec l'ARN messager ou avec la protéine codée par le gène d'intérêt. Il pourra, par exemple, s'agir d'anticorps mono- ou polyclonal, ou de leur fragment biologiquement actif capable de reconnaître la protéine codée par le gène d'intérêt. Ces anticorps pourront être marqués, par exemple immunoconjugués à des enzymes ou marqués à l'aide de composés fluorescents, de la biotine ou encore radiomarqués. Les sondes polypeptidiques peuvent être des polypeptides homologues, des variants ou une forme modifiée ainsi que des fragments biologiques actifs issus de ces polypeptides. Par polypeptides homologues, on entend des polypeptides dont les séquences en acides aminés présentent au minimum 80%, et préférentiellement 90% d'acides aminés en commun. Par polypeptide variant, on entend désigner un polypeptide muté ou correspondant à un polymorphisme pouvant exister, notamment chez l'être humain et pouvant présenter une troncature, une substitution, une délétion et/ou une addition d'au moins un acide aminé par rapport à la séquence du polypeptide sauvage normal. Par polypeptide modifié, on entend désigné un polypeptide obtenu par recombinaison génétique ou par synthèse chimique, présentant une modification par rapport à la séquence sauvage normale. Ces modifications pourront notamment porter sur les domaines pré-, pro- ou mature des polypeptides, sur les acides aminés à l'origine d'une spécificité de spectre ou d'efficacité de l'activité, ou à l'origine de la conformation structurale, de la charge ou de l'hydrophobicité, et de la capacité de multimérisation et d'insertion membranaire des polypeptides. On pourra ainsi créer des polypeptides d'activité équivalente, plus étroite ou plus large. Les modifications pourront aussi porter sur les séquences impliquées dans la maturation, le transport et l'adressage des polypeptides. Par fragment biologiquement actif d'un polypeptide, on entend désigner un fragment polypeptidique ayant conservé au moins une activité du polypeptide dont il est issu. Une étude comparative de l'expression génique dans la peau psoriasique par rapport à la peau saine, a permis à la Demanderesse d'identifier quatre gènes, dénommés FANCC (Fanconi anemia, complementation group C), référence Genbank (NCBI): NM~000136.1, DAD1 (Defender against cell death 1) référence Genbank (NCBI): NM~001344.1, GRIM19 (Gene associated with retinoid-interferon-induced mortality 19) référence Genbank (NCBI): NM~015965.3 et HADHII (Hydroxyacyl-Coenzyme A dehydrogenase, type Il) référence Genbank (NCBI): NM~004493.1, dont l'activité transcriptionnelle est induite dans la peau malade. Ces gènes sont impliqués dans la régulation de l'apoptose et en partie également dans la régulation de la prolifération cellulaire. FANCC régule l'apoptose cellulaire induite par l'interféron gamma (Pang Q, et al. EMBO J (2001 Aug) 15;20(16):4478-89; Rathbun RK et al. Blood (2000 Dec) 15 ; 96 (13):4204-11 Comment in: Blood. (2002 Apr) 1;99(7):2627-8; discussion 2629-30) et le TNF alpha (Pang Q, et al. EMBO J (2001 Aug) 15 ; 89), qui sont deux cytokines dont l'expression est augmentée dans le psoriasis (Chodorowska G. J Eur Acad Dermatol Venereol (1998 Mar) 10(2):147-51; Uyemura K, Yamamura M, Fivenson DF et al. J Invest Dermatol (1993 Nov) 101(5):701-5). FANCC régule également l'apoptose induite par un stress oxydatif ou certains xenobiotiques en modulant l'activité de la gluthatione-Stransferase P1 (GSTP1 ), responsable de la détoxification de ces agents proapoptotiques (Cumming RC et al. Nat Med (2001 Jul) 7 (7):814-20 Comment in: Nat Med. (2001 Dec) 7(12):1259-60; Pagano G. Carcinogenesis (2000 May) 21 (5):1067-8). Or, le stress oxydatif a été décrit comme un des facteurs étiologiques potentiels du psoriasis avec notamment une augmentation de l'activité anti-oxydante dans la maladie (Shilov VN, Sergienko VI. Bull Exp Biol Med (2000 Apr) 129 (4):309-13). pourrait donc jouer un rôle dans le mécanisme impliquant le stress oxydatif dans la maladie. De plus, FANCC joue un rôle dans la prolifération cellulaire (Nadler JJ, Braun RE. Genesis (2000 Jul) 27(3):117-23; Haneline LS, Gobbett TA, Ramani R et al. Blood (1999 Jul) 1;94(1): 1-8). DAD1 joue un rôle dans l'apoptose (Hong NA et al. Dev Biol (2000 Apr) 1;220(1):76-84; Nakashima T et al. Mol Cell Biol (1993 Oct) 13 (10):6367-74), etmodule la prolifération des lymphocytes T (Hong NA et al. J Immunol (1999 Aug) 15;163(4):1888-93), qui sont des cellules importantes dans la physiopathologie du psoriasis (Krueger JG, J Am Acad Dermatol (2002 Jan) 46(1 ):1-23; quiz 23-6). GRIM19 est un modulateur de l'apoptose induite par l'interféron-beta et l'acide rétinoïque (Angell JE, Lindner DJ, Shapiro PS et al. J Biol Chem (2000 Oct) 27 ;275(43):33416-26). HADHII, hydroxyacyl-CoA dehydrogenase de type Il, fait partie de la famille des short-chain dehydrogenases/reductases (SDR) (Oppermann UC, Salim S et al. FEBS Lett (1999 May) 28;451 (3):238-42). HADHII est également impliquée dans l'apoptose et la prolifération cellulaire. En effet, HADHII lie le peptide amyloide A-beta, qui exerce des effets régulateurs sur l'apoptose. De plus, l'amyloide A-beta semble moduler la prolifération cellulaire, puisque son expression est associée à un état sénescent des cellules (Adler MJ., Coronel C., Shelton E. Proc Natl Acad Sci U S A (1991 Jan) 1;88(1 ):16-20). En particulier, la présente invention se rapporte à l'utilisation d'une sonde polynucléotidique ou polypeptidique relative au gène FANCC et/ou DAD1 et/ou GRIM19 et/ou HADHII telle que définie ci-dessus pour l'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis. Dans un mode de réalisation particulier, la sonde polynucléotidique ou polypeptidique sera utilisée dans le procédé décrit ci-dessous. En effet, l'invention se rapporte aussi à un procédé d'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis comprenant les étapes suivantes : a) préparation d'au moins deux d'échantillons biologiques; b) mise en contact d'un des échantillons avec un ou plusieurs composés à tester ; c) mesure de la quantité d'ARN messager ou de la protéine correspondant au gène FANCC et/ou DAD1 et/ou GRIM19 et/ou HADHII dans les échantillons biologiques ; d) sélection desdits composés pour lesquels une modulation de la transcription des ARN messagers du gène FANCC et/ou DAD1 et/ou GRIM19 et/ou HADHII ou de l'expression des protéines correspondantes est mesurée dans l'échantillon traité de l'étape b). On entend par modulation de la transcription d'un gène ou de l'expression des protéines correspondantes, une augmentation ou une diminution de la quantité d'ARN messagers ou de la protéine correspondant audit gène dans un échantillon testé. Dans un autre mode de réalisation, la présente invention se rapporte à un outil de recherche comprenant une sonde relative au gène FANCC ou au gène DAD1 ou au gène GRIM19 ou au gène HADHII. L'outil de recherche pourra en outre permettre l'analyse des effets de certains traitements sur l'expression de ces gènes marqueurs du psoriasis, ou l'analyse de mutation de la séquence de ces gènes chez des individus atteints de psoriasis. Par exemple, cet outil de recherche pourra être tel que la ou les sondes qu'il comprend, sont mises en contact avec la ou les séquence(s) cible(s) correspondante(s) déposées sur un support tel qu'un filtre en nylon. La sonde peut être utilisée dans un test d'hybridation (par exemple un test de détection de mésappariement), un séquençage, un microséquençage. Selon d'autres outils de recherche envisagés par la présente invention, la sonde selon l'invention pourra être associée à une autre sonde détectable dont la nature pourra être de préférence fluorescente, radioactive ou enzymatique. Cette caractéristique peut permettre, entre autres, de suivre la localisation de la sonde, du milieu extracellulaire vers la cellule, ou du cytoplasme vers le noyau, ou bien de préciser son interaction avec l'ADN, ou l'ARN ou des protéines. L'homme du métier saura quelle sonde détectable est la mieux adaptée en fonction de la caractéristique qu'il veut pouvoir suivre. La découverte de la surexpression de FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII, dans la peau psoriasique permet d'une part de diagnostiquer le psoriasis, et d'autre part, de développer de nouvelles thérapeutiques basées sur la modulation de l'expression et/ou de la fonction d'un ou plusieurs de ces gènes, pour traiter le psoriasis en agissant sur la composante apoptotique en vue de limiter les désordres de la prolifération cellulaire qui caractérisent en partie le psoriasis. Dans un aspect particulièrement préférable, la présente invention fournit une méthode pour caractériser des échantillons de peau pour déterminer la prédisposition au psoriasis. La Demanderesse a démontré que l'expression des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII était induite dans la peau psoriasique lésionnelle présentant une plaque de psoriasis, par rapport à la peau saine (expression moyenne mesurée chez 13 sujets psoriasiques et 10 sujets sains). Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1. La mesure de l'expression de l'un des gènes, et de préférence les quatre, FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII permet de caractériser une peau psoriasique lésionnelle indépendamment du type et de la localisation de la plaque de psoriasis (tableaux 2 et 3). Le tableau 2 représente l'expression des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII relative à une expression moyenne chez les sujets sains, chez les patients présentant majoritairement des plaques au niveau du tronc et des plaques asymétriques. Le tableau 3 représente l'expression des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII relative à une expression moyenne chez les sujets sains, chez les patients présentant majoritairement des plaques de type symétrique. En outre, hormis la caractérisation d'une peau présentant une plaque de psoriasis par rapport à une peau saine, la découverte de ces nouveaux marqueurs du psoriasis permet également de discriminer une peau de patient psoriasique non lésionnelle (cliniquement saine) mais déjà engagée vers le processus psoriasique, d'une peau non lésionnelle ayant les réelles caractéristiques d'une peau saine. La Demanderesse a découvert de façon surprenante, que certaines peaux non lésionnelles surexprimaient aussi les gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII. Sur la base de l'expression de ces gènes, le diagnostic du psoriasis est réalisable très précocement puisque l'expression des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII permet de différencier au niveau moléculaire des peaux non lésionnelles déjà atteintes, alors que les signes cliniques ne le permettent pas. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 4. Ainsi l'invention se rapporte également à un procédé de diagnostic du psoriasis ou d'une prédisposition au psoriasis comprenant une étape de mesure de la surexpression dans un échantillon biologique d'au moins un des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 ou HADHII à l'aide d' une sonde relative à au moins un des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII. Par surexpression d'un gène dans un échantillon biologique, on entend une expression de l'ARN messager ou de la protéine correspondant à ce gène plus élevée dans cet échantillon par rapport à un échantillon sain de référence. Par ailleurs, l'invention se rapporte aussi à un kit de diagnostic comprenant au moins une sonde relative à au moins un des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII. Les observations décrites ci-dessus indiquent également que FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII sont des cibles thérapeutiques pour le développement de nouvelles thérapies visant à traiter le psoriasis chronique vulgaire en plaques, quelque soit le type prédominant de plaques chez le patient, et la localisation de la plaque de psoriasis sur le corps. Ainsi, un autre objet de la présente invention se rapporte à l'utilisation d'une sonde polynucléotidique ou de l'un de ses analogues, complémentaire, respectivement, au gène FANCC ou DAD1 ou GRIM19 ou HADHII pour moduler l'expression du gène FANCC ou DAD1 ou GRIM19 ou HADHII. En particulier, la sonde polynucléotidique pourra être un ARN antisens ou un siRNA qui a pour rôle d'inhiber l'expression d'un gène spécifique (Fire A., Trends in Genetic (1999) 15 : 358-363). Enfin, l'invention se rapporte également à l'utilisation d'une sonde polynucléotidique ou de l'un de ses analogues, complémentaire au gène FANCC ou DAD1 ou GRIM19 ou HADHII pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée au traitement du psoriasis. EXEMPLE 1 - MESURE D'EXPRESSION GENIQUE DANS LA PEAU SAINE ET DANS LA PEAU PSORIASIQUE Une étude clinique réalisée en présence de volontaires sains et de patients atteints de psoriasis chronique vulgaire en plaques, a permis de mettre en évidence l'implication des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII dans le psoriasis. Des biopsies cutanées sont prélevées chez des volontaires sains, ainsi que sur des plaques de psoriasis et sur des zones non lésionnelles apparaissant cliniquement saines, chez des patients atteints de psoriasis. La présence ou l'absence de psoriasis sur la zone de peau biopsiée, ainsi que la sévérité de la plaque de psoriasis, sont déterminées par l'évaluation de paramètres cliniques locaux (scores d'érythème, de desquamation et d'élévation de la plaque de psoriasis). L'analyse de l'expression génique est ensuite réalisée à partir de chaque biopsie individuelle. La comparaison des profils géniques correspondant à la peau saine et la peau psoriasique non lésionnelle et lésionnelle, permet d'identifier des gènes dont l'expression est induite dans la maladie. La détermination des profils géniques est basée sur l'hybridation d'une sonde complexe d'ADNc simple brin (générée par la rétro-transcription des ARNm issus de chaque biopsie de peau) sur des fragments d'ADNc d'intérêt, qui sont déposés sur un support tel qu'un filtre en nylon. Les signaux d'hybridation obtenus sont proportionnels à la quantité de chaque ADNc marqué dans la sonde et reflètent le niveau d'expression de chaque ARNm au sein de l'échantillon de peau analysé (Nguyen C et al. Genomics (1995 Sep) 1;29(1):207-16). Des filtres élaborés par la Demanderesse, spécifiques à la dermatologie ont été développés. Ces filtres sont constitués de 474 ADNc impliqués dans les processus physiologiques de la peau humaine. En parallèle, des filtres commerciaux à 4200 ADNc humains (Invitrogen GF211) ont été utilisés. Ces filtres d'ADNc vont permettre de déterminer l'expression de gènes d'intérêt dans la peau saine ainsi que dans la peau non lésionnelle et lésionnelle de patients atteints de psoriasis chronique vulgaire en plaques. Méthode La mesure de l'expression génique dans la peau saine et dans la peau psoriasique est réalisée en utilisant la technologie des filtres à ADNc ( arrays ) sur support nylon. Le principe de cette technologie repose sur l'hybridation d'une sonde d'ADNc simple brin radiomarquée sur des fragments d'ADNc cibles déposés à haute densité sur des filtres de nylon (Nguyen C et al. Genomics (1995 Sep) 1;29(1):207-16). Dans cette étude, des filtres de nylon (GF211) commercialisés par la société Invitrogen sur lesquels sont déposés 4200 ADNc humains identifiés, ainsi que des filtres dédiés à la dermatologie à 474 ADNc humains, développés par la Demanderesse, sont utilisés. Les sondes d'ADNc radiomarquées sont générées par transcription inverse des ARN totaux (protocole Invitrogen), isolés à partir des différentes biopsies prélevées chez 10 volontaires sains et 13 sujets atteints de plaques chroniques de psoriasis vulgaire (protocole RNEasy, Qiagen). Les signaux d'hybridation obtenus sont proportionnels à la quantité de chaque ADNc marqué présent dans la sonde, qui s'est hybridé sur l'ADNc qui lui est complémentaire sur le filtre et reflètent ainsi l'activité transcriptionnelle des ARNm dans les biopsies analysées. Analyse de normalisation des résultats d'expression génique et comparaison des profils géniques entre la peau saine et la peau psoriasique Les signaux d'hybridation sont mesurés par phospholuminescence, puis quantifiés à l'aide du logiciel d'analyse d'image Imagen (Biodiscovery). Afin de discriminer les signaux d'hybridation spécifiques des gènes étudiés, le bruit de fond lié à une hybridation non spécifique est mesuré sur chaque filtre sur des zones vierges de dépôt d'ADNc (filtres GF211), ou au sein d'une couronne entourant chaque spot (filtres dédiés). Après transformation des données en log, un seuil de détection permettant de discriminer une mesure relevant d'un signal réel ou du bruit, est déterminé automatiquement pour chaque filtre en utilisant la méthode décrite précédemment par Fogel et al., 2002. En vue de comparer les résultats d'expression génique entre les différentes biopsies analysées, les signaux d'hybridation sont normalisés par la médiane de l'ensemble de signaux obtenus pour chaque biopsie (filtres GF211), ou par l'expression d'un ARN messager exogène, servant de référence, dont l'expression est invariante entre les échantillons analysés. Ce transcrit exogène est ajouté en quantité constante dans les préparations d'ARN totaux issues des différents échantillons, avant synthèse de la sonde d'ADNc radiomarquée. La séquence cible de ce transcrit exogène est déposée sur chaque filtre. Pour chaque gène, une expression moyenne de référence est déterminée sur l'ensemble des biopsies de sujets sains, puis soustraite à l'expression obtenue dans chaque biopsie de peau psoriasique non lésionnelle et lésionnelle (valeurs en log). Le ratio entre l'expression de chaque gène dans la peau psoriasique par rapport à la peau saine est alors obtenu en prenant l'exponentielle en base 10 de la valeur calculée précédemment (tableaux 1 à 4). Les résultats obtenus permettent de mettre en évidence la surexpression des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII dans la peau humaine lésionnelle présentant une plaque de psoriasis par rapport à la peau humaine saine (tableau 1). Les résultats des tableaux 2 et 3 indiquent que ces surexpressions sont observées quelque soit le type prédominant de plaques exprimées chez le patient (symétrique ou troncal) et également indépendamment de la localisation des plaques de psoriasis. Les abréviations mentionnées dans ces tableaux représentent la localisation des biopsies prélevées sur le corps pour chaque sujet psoriasique (SP) et ont la signification suivante : jambe gauche, JD: jambe droite, BD: bras droit, BG : gauche, T : Les résultats du tableau 4 montrent que l'expression de ces gènes est également induite dans la peau psoriasique non lésionnelle. Les abréviations ont la même signification que précédemment. EXEMPLE 2 - MESURES DES PARAMETRES CLINIQUES LOCAUX LIES A LA PLAQUE DE PSORIASIS: SCORES D'ERYTHEME. DE DESQUAMATION ET D'ELEVATION DE LA PLAQUE Les différents scores cliniques locaux permettant de définir la présence ou l'absence de psoriasis sur la zone de peau biopsiée, ainsi que la sévérité de la plaque de psoriasis, sont les scores d'érythème, de desquamation et d'élévation de la plaque. Ces scores sont classiquement mesurés grâce aux classements suivants : La mesure de l'érythème se fait à l'aide du classement suivant: 0 = aucun (absence d'érythème) 1 = léger (légère rougeur présente) 2 = modéré (rougeur facilement décelable) 3 = sévère (rougeur intense) 4 = très sévère (rougeur très intense) La mesure de la desquamation se fait à l'aide du classement suivant: 0 = aucun (absence de desquamation) 1 = léger (squames détectés, une seule couche de desquamation) 2 = modéré (squames de degré intermédiaire entre le léger et le sévère) 3 = sévère (Plusieurs couches de squames) 4 = très sévère (plusieurs couches de squames épais) La mesure de l'élévation de la plaque se fait à l'aide du classement suivant: 0 = aucun (absence d'élévation de l'épaisseur) 1 = léger (légère élévation détectable au toucher) 2 = modéré (épaisseur modérée) 3 = sévère (fort épaississement) 4 = très sévère (très fort épaississement) Cette étude démontre que les paramètres cliniques locaux obtenus avec la peau psoriasique non lésionnelle ne sont pas différents de ceux obtenus pour la peau saine. Ils ne permettent donc pas de différencier une peau psoriasique non lésionnelle d'une peau saine. Par contre, les résultats du tableau 4 ont permis de mettre en évidence au niveau moléculaire, une surexpression des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII dans certaines peaux psoriasiques non lésionnelles. La mesure de l'expression des gènes FANCC, DAD1, GRIM19 et HADHII, permet donc de réaliser un diagnostic très précoce du psoriasis, puisque l'expression de ces gènes permet de différencier au niveau moléculaire des peaux non lésionnelles déjà atteintes, alors que les signes cliniques ne le permettent pas. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène FANCC (n accession NM 000136.1), pour caractériser un échantillon biologique par la mesure du niveau d'expression du gène FANCC. 2. Utilisation d'une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène FANCC (n accession NM 000136.1), pour l'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis. 3. Procédé d'identification d'un composé destiné au traitement du psoriasis comprenant les étapes suivantes : a) préparation d'au moins deux d'échantillons biologiques ; b) mise en contact d'un des échantillons avec un ou plusieurs composés à tester ; c) mesure de la quantité d'ARN messager correspondant au gène FANCC dans les échantillons biologiques à l'aide d'une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène FANCC (n accession NM 000136.1 ) ; d) sélection desdits composés pour lesquels une modulation de la transcription des ARN messagers du gène FANCC est mesurée dans l'échantillon traité de l'étape b). 4. Outil de recherche comprenant une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène FANCC (n accession NM 000136.1). 5. Procédé de diagnostic du psoriasis ou d'une prédisposition au psoriasis comprenant une étape de mesure de la surexpression dans un échantillon biologique du gène FANCC, par mise en contact d'une sonde polynucléotidique avec les séquences cibles isolées à partir dudit échantillon biologique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène FANCC (n d'accession NM 000136.1). 6. kit de diagnostic comprenant une sonde polynucléotidique, ladite sonde ayant une séquence de 10 à 500 paires de bases et étant complémentaire à au moins 80% avec une séquence cible correspondant à tout ou partie du gène FANCC (n accession NM 000136.1).