Brevet FR2849779A1 — publié le 20040716

i L'invention porte sur l'utilisation de protoxyde d'azote (N20) 5 et/ou de xénon ou d'un donneur de N20 ou de xénon pour fabriquer tout ou partie d'un médicament destiné à traiter ou à prévenir une détérioration postischémique de cellules cérébrales, en particulier une détérioration consécutive à un accident vasculaire cérébral (AVC), notamment tout ou partie d'un io médicament gazeux inhalable, chez l'homme ou l'animal. Dans les ischémies cérébrales consécutives à un AVC et, de façon générale, dans les AVC, on note habituellement au plan neurochimique, une altération fonctionnelle de nombreux systèmes de neurotransmission, notamment une augmentation de la i5 libération de glutamate dont l'excitotoxicité et la contribution à la mort neuronale sont connues, comme le rappelle Dirnagl et al., Trends Neurosci; 22: 391, 1999. Par ailleurs, au plan fonctionnel, on observe dans le cas d'ischémies globales chez le rat, une augmentation de l'activité 20 locomotrice, notamment décrite par Wang et Corbett, Brain Res. 533: 78, 1990; Baldwin et al., Neurodegenration 2: 139, 1993, dont le développement est généralement attribué à une altération des fonctions cognitives de reconnaissance spatiales plutôt qu'à une altération des fonctions sensori-motrices. De fait, le rôle thérapeutique potentiel des antagonistes des récepteurs glutamatergiques ionotropiques et métabotropiques a été soupçonné, notamment par Chazot, Curr Opin Invest Drugs 1: 370, 2000; Drian et al., Neurochem Int 38: 509, 2001. Il apparaît aussi que les effets délétères des ischémies cérébrales avérées semblent impliquer des ischémies localisées qui auraient pour origine une excitotoxicité glutamatergique. De fait, le thérapeutique potentiel des antagonistes des 5 récepteurs glutamatergiques est souvent avancé dans le traitement de neuropathologies d'origine excitotoxique, en particulier les ischémies cérébrales, comme décrit par Dirnagl et ai., Trends Neurosci 22: 391, 1999, et les troubles productifs, tel que décrit par Benes, Brain Res. Review 31: 251, 2000. Cependant, la physiologie des récepteurs glutamatergiques est complexe et il semble que les antagonistes à haute affinité peuvent également présenter des propriétés neurotoxiques, selon Burns et ai., Psychopharmacology 115: 516, 1994. Ainsi, un intérêt thérapeutique potentiel des antagonistes à 15 faible affinité, en particulier au NMDA, a été récemment proposé par Palmer et Widzowski, Amino acids 19: 151, 2000. A ce jour, il n'existe cependant pas de médicament permettant de prévenir ou de traiter, au moins partiellement, les dégradations cellulaires cérébrales post-ischémiques consécutives 20 aux accidents vasculaires cérébraux. La présente invention s'inscrit dans ce contexte et vise à proposer toute ou partie d'un médicament utilisable pour prévenir, diminuer ou traiter toute détérioration post-ischémique de cellules cérébrales notamment consécutive à un accident vasculaire 25 cérébral (AVC), chez l'homme ou l'animal. L'invention concerne alors une utilisation de protoxyde d'azote (N20) et/ou de xénon ou d'un donneur de N20 ou de xénon pour fabriquer tout ou partie d'un médicament destiné à traiter, à minimiser ou à prévenir une détérioration post-ischémique de cellules cérébrales. Selon le cas, l'utilisation de l'invention peut comprendre l'une ou plusieurs des caractéristiques techniques suivantes: - tout ou partie du médicament gazeux est sous forme inhalable. - la détérioration post-ischémique cérébrale résulte ou est consécutive à un accident vasculaire cérébral (AVC) - le xénon ou l'agent donneur de xénon est sous forme io gazeuse ou est compris dans un gaz ou un mélange gazeux. - le protoxyde d'azote (N20) ou l'agent donneur de protoxyde d'azote est sous forme gazeuse ou est compris dans un gaz ou un mélange gazeux. - le médicament contient une proportion efficace de 15 protoxyde d'azote (N20) et/ou de xénon ou d'un donneur de N20 ou de xénon. - le médicament contient, en outre, au moins un autre composé gazeux choisi parmi l'oxygène, l'azote ou l'argon, de préférence de l'azote et de l'oxygène. - le médicament contient une quantité inférieure à 60% en volume de xénon ou d'agent donneur de xénon, de préférence inférieure ou égale à 50% en volume. - le médicament contient une quantité allant jusqu'à environ 80% en volume de N20 ou d'agent donneur de N20, de préférence 25 jusqu'à 75% de N20. - le médicament contient de 19 à 25% en volume d'oxygène et éventuellement de l'azote. L'invention concerne alors aussi un médicament inhalable à action neuroprotectrice cérébrale contenant une quantité efficace de protoxyde d'azote (N20) et/ou de xénon, ou d'un donneur d'un tel composé, en particulier destiné à traiter, à minimiser ou à prévenir une détérioration post-ischémique de cellules cérébrales. Selon le cas, le médicament de l'invention peut comprendre l'une ou plusieurs des caractéristiques techniques suivantes: - il contient une quantité allant jusqu'à 80% en volume de N20 ou une quantité inférieure à 60%h en volume de xénon. - il contient, en outre, de 19 à 25% en volume d'oxygène et éventuellement de l'azote. io L'idée à la base de la présente invention est de tirer partie des propriétés antagonistes des récepteurs NMDA du xénon ou du N20 pour leur caractère neuroprotecteur dans la prévention ou le traitement de pathologies post-ischémiques consécutives aux accidents vasculaires cérébraux. En effet, des travaux récents, réalisés in vitro, ont montré que le xénon et le N20 peuvent potentiellement se comporter comme des antagonistes à faible affinité des récepteurs glutamatergiques au N-Méthyl-D-Aspartate NMDA (Franks et al., Nature 396: 324, 1998; Jevtovic-Todorovic et ai., Nature Med. 4: 20 460, 199; Yamakura and Harris, Anesthesiology, 20008). Partant de ces observations, des expérimentations ont été réalisées dans le cadre de la présente invention dans le but de déterminer les effets. neuroprotecteurs du N20 et du xénon sur la mort neuronale induite par ischémie cérébrale transitoire chez le 25 rat. Afin de démontrer l'effet bénéfique d'une administration de N20 ou de xénon sur les cellules cérébrales consécutivement à une ischémie cérébrale, des rats adultes Sprague-Dawley de 350 g ont été soumis au protocole expérimental suivant. Au jour 1, des ischémies focalisées ont été induites chez chacun des rats par occlusion artérielle cérébrale moyenne (Middle Cerebral Artery Occlusion = MCAO), pendant une durée de 1 h 30 minutes. L'ischémie cérébrale focalisée transitoire par MCAO est obtenue de manière classique par introduction d'un fil 1 de nylon souple schématisé en Figure 1 (longueur 6.5 mm, diamètre 180 gtm) dont une portion 2 de l'extrémité proximale est de diamètre supérieur à celui du fil (longueur 3 mm, diamètre 380 gm), à to l'intérieur du système vasculaire du rat jusque dans la région de l'hémisphère ipsilatéral de manière à y provoquer une embolie, i.e. une ischémie. Ensuite, on procède à une reperfusion des rats pendant 10 à minutes, puis on leur fait inhaler plusieurs mélanges gazeux, à is savoir: - mélange nO 1: air (témoin) - mélange nO 2: N20 (75% vol) et le reste étant de l'oxygène (25%) - mélange nO 3 xénon (50 % vol) et le reste étant de 20 l'oxygène (20 à 25%) et de l'azote (30 à 25%, respect.). - mélange nO 4 xénon (75% vol) et le reste étant de l'oxygène (250%) Au jour 2, soit 24 heures après la reperfusion, les rats sont tués, les cerveaux sont récupérés, congelés, découpés en fines 25 tranches de 40 gm d'épaisseur, puis colorés au violet cresyl, comme montré en Figure 5. A partir des tranches obtenues après coloration, le volume de mort neuronal est calculé de manière classique en utilisant un logiciel classique adapté disponible dans le commerce. En effet, comme schématisé en figure 2, l'ischémie cérébrale engendre, en général, sous 24 heures, un infarctus dans la région ischémiée (penumbra) conduisant à une mort neuronale des cellules cérébrales présentes dans une partie importante de cette région. Les résultats obtenus lors de ces mesures ont été consignés sur les figures 3a à 3d qui permettent de visualiser l'effet neuroprotecteur postischémie cérébrale des mélanges n0 2 à 4 cidessus par comparaison au mélange nO 1 (air) servant de témoin. 10 Ainsi, la figure 3a montre clairement que l'inhalation par les rats de xénon (Xe) ou de protoxyde d'azote (N20) consécutivement à une ischémie permet de réduire notablement le volume total d'infarctus puisqu'une diminution de ce volume d'environ 50% peut être atteint en cas d'inhalation des mélanges n0 2 et n03 en lieu et 15 place de l'air (mélange n0 1 servant de témoin), et de 30% environ lors de l'inhalation du mélange nO 4. A ce titre, on notera également que l'inhalation de 50% en volume de xénon (mélange n0 3) est plus efficace qu'une inhalation d'une dose plus élevée de xénon, à savoir 75% (mélange nO 4), ce qui laisse à penser que la 20 dose la plus efficace semble être plus proche de 50% que de 75% pour ce qui concerne le xénon. Les figures 3b à 3d confirment les résultats de la figure 3a puisqu'elles permettent de constater que l'inhalation de xénon ou de N20 permet de diminuer, respectivement, le volume d'infarctus 25 cortical (fig 3b), le volume d'infarctus striatal (fig. 3c) et le volume d'oedème (fig 3d) postischémiques par rapport à une inhalation d'air (témoin = mélange n0 1). Partant de ce constat, des examens complémentaires ont été réalisés pour déterminer les effets neurotoxiques du xénon et du protoxyde d'azote (N20) , à différentes teneurs, par rapport à l'air sur les récepteurs cérébraux de type NMDA. Les résultats de ces examens sont consignés sur la figure 4 qui montre clairement que l'administration de xénon ou de protoxyde 5 d'azote engendre un volume (en mn3) de récepteurs NMDA détériorés moins important que le témoin (air) et ce, avec le protoxyde d'azote dosé à 50% ou 75% en volume (reste = 25% de 02) et le xénon dosé à 50% ou à 75% ( reste = mélange 25% de 02 + 25% de N2 ou, respect., 25% de 02). o0 Toutefois, il apparaît ainsi un effet neurotoxique variable selon le dosage administré conduisant aux constats que le N20 à 75% et le xénon à 50% en volume sont davantage neuroprotecteurs que le N20 dosé à 50% et le xénon dosé à 75%. Autrement dit, ces données confirment qu'une administration i5 par inhalation de xénon dosé à 50% en volume (ou moins) ou de N20 dosé à 75% en volume (ou moins) engendre une action neuroprotectrice vis-à-vis des ischémies cérébrales et autres maladies excitotoxiques analogues. Le médicament inhalable selon l'invention est conditionné dans 20 des récipients de gaz sous pression telles des bouteilles de gaz, et est distribué au patient via un système d'administration de gaz adapté muni d'un masque respiratoire, d'une sonde trachéale ou analogue. Revendications 1 - Utilisation de protoxyde d'azote (N20) et/ou de xénon ou 5 d'un donneur de N20 ou de xénon pour fabriquer tout ou partie d'un médicament destiné à traiter, à minimiser ou à prévenir une détérioration postischémique de cellules cérébrales. 2 - Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce io que tout ou partie du médicament gazeux est sous forme inhalable. 3 - Utilisation selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que la détérioration post-ischémique cérébrale résulte ou est consécutive à un accident vasculaire cérébral (AVC) 4 - Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le xénon ou l'agent donneur de xénon est sous forme gazeuse ou est compris dans un gaz ou un mélange gazeux. - Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le protoxyde d'azote (N20) ou l'agent donneur de protoxyde d'azote est sous forme gazeuse ou est compris dans un gaz ou un mélange gazeux. 6 - Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le médicament contient une proportion efficace de protoxyde d'azote (N20) et/ou de xénon ou d'un donneur de N20 ou de xénon. 7 - Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le médicament contient, en outre, au moins un autre composé gazeux choisi parmi l'oxygène, l'azote ou l'argon, de préférence de l'azote et de l'oxygène. 8 - Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le médicament contient une quantité inférieure à 60% en volume de xénon ou d'agent donneur de io xénon, de préférence inférieure ou égale à 50% en volume. 9 - Utilisation selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que le médicament contient une quantité allant jusqu'à 80% en volume de N20 ou d'agent donneur de N20, de 1s préférence jusqu'à 75%/o de N20. - Utilisation selon l'une des revendications t à 9, caractérisée en ce que le médicament contient de 19 à 25% en volume d'oxygène et éventuellement de l'azote. l1 - Médicament inhalable à action neuroprotectrice cérébrale contenant une quantité efficace de protoxyde d'azote (N20) et/ou de xénon, ou d'un donneur d'un tel composé. 12 - Médicament selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'il contient une quantité allant jusqu'à 80% en volume de N20 ou une quantité inférieure à 60% en volume de xénon. 13 - Médicament selon l'une des revendications 11 ou 12, caractérisé en ce qu'il contient, en outre, de 19 à 25% en volume d'oxygène et éventuellement de l'azote. 14 - Récipient de gaz sous pression contenant un médicament selon l'une des revendications 11 à 13, en particulier une bouteille de gaz.