Brevet FR2847467A1 — publié le 20040528

La présente invention concerne l'utilisation d'un agent modulateur de l'activité de l'oxystérol 7a-hydroxylase pour le traitement, notamment cosmétique de désordres épidermiques. L'oxystérol 7a-hydroxylase est une enzyme connue pour être notamment impliquée au niveau du métabolisme de l'hormone stéroïdienne DHEA ou déhydroépiandrostérone, et de certaines molécules appartenant à la famille des oxystérols. Les oxystérols sont des métabolites naturels du cholestérol. Ils sont notamment connus pour être capables de bloquer le processus protéolytique des protéines dites SREBP (Sterol Regulatory Element Binding Proteins), nécessaires à l'expression transcriptionnelle d'un certain nombre d'enzymes impliquées au niveau de la synthèse du cholestérol (Brown et Goldstein Cell 89: 331-340,1997). Ils sont donc susceptibles d'agir comme des inhibiteurs de la synthèse du cholestérol. En outre, on sait que les oxystérols agissent au niveau de la différenciation terminale et de la formation de l'enveloppe cornifiée dans les kératinocytes (K.Hanley et al. j. invest. dermatol.114 : 545 553,2000). Plus précisément, il a été constaté qu'ils stimulent la différenciation des kératinocytes et inhibent leur prolifération. On sait ainsi que les stress subis par l'épiderme, provoqués notamment par les radiations UV ou la pollution ambiante, de même que le vieillissement, augmentent l'état d'oxydation des kératinocytes et, de ce fait, induisent une formation accrue d'oxystérols. Enfin, il a récemment été constaté que l'application, sur de la peau reconstituée, d'oxystérols spécifiques, à savoir les 22- et 25-hydroxystérols, permettait d'augmenter l'épaisseur de l'épiderme. Les oxystérols constituent donc également une cible thérapeutique intéressante pour le traitement des troubles cutanés associés à une diminution de la différenciation des kératinocytes et/ou une augmentation de leur prolifération comme par exemple le psoriasis. Pour sa part, la DHEA est un stéroïde naturel produit essentiellement par les glandes corticosurrénales. Ces dernières années, de nombreuses recherches tant sur la molécule DHEA que sur ses précurseurs chimiques ou biologiques et métabolites, ont permis de mettre en évidence d'intéressantes propriétés anti-âge pour ces molécules. Parmi les métabolites de la DHEA, on peut plus particulièrement citer la 7ahydroxy DHEA qui en est un métabolite majeur, obtenu précisément par action de l'oxystérol 7a-hydroxylase. Il a ainsi été montré que ce métabolite permettait d'augmenter la prolifération des fibroblastes et la viabilité des kératinocytes humains, et présentait des effets antiradicalaires (WO 98/40074). Il a également été mis en évidence chez le rat (WO 00/28996) que ce même métabolite augmentait l'épaisseur du derme et le contenu en élastine et collagène de la peau. En conséquence, il a déjà été suggéré d'utiliser ce métabolite de DHEA pour prévenir et/ou traiter les effets néfastes des UV sur la peau, lutter contre les rides et augmenter la fermeté et la tonicité de la peau. Dans la mesure où ces oxystérols et la DHEA possèdent la particularité d'être métabolisés par la même enzyme, à savoir l'oxystérol 7a-hydroxylase, cette dernière pourrait constituer une alternative avantageuse pour la modulation de leur expression. Or, à la connaissance de la Demanderesse, l'utilisation directe de cette enzyme spécifique à titre de cible cosmétologique pour notamment traiter des désordres cutanés liés notamment à un mauvais fonctionnement de la barrière cutanée et/ou au vieillissement chronobiologique, n'a jamais été envisagée. De manière inattendue, les inventeurs ont très récemment caractérisé la présence d'oxystérol 7a-hydroxylase au niveau de la peau. Plus particulièrement, ils ont détecté la présence de l'ARN messager correspondant au gène CYP7B1codant pour ladite protéine dans des extraits de peau humains. Cette observation est particulièrement intéressante dans la mesure où elle permet précisément d'envisager l'activation ou l'inactivation sélective de cette enzyme, au niveau de l'épiderme et donc par une voie topique. Un tel mode d'administration est, pour des raisons évidentes, plus confortable et associé à moins de risques secondaires qu'une action systémique. En conséquence, la présente invention concerne, selon un de ses aspects, l'utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de l'oxystérol 7a-hydroxylase pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou à traiter les désordres cutanés et/ou de membranes de type muqueuses qui affectent le bon fonctionnement de la barrière cutanée. La présente invention concerne également, selon un autre de ses aspects, l'utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de l'oxystérol 7a-hydroxylase pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à augmenter la fermeté et la tonicité de la peau. La présente invention a également pour objet, selon un autre de ses aspects, l'utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de l'oxystérol 7a-hydroxylase, pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à hydrater la peau, prévenir et/ou traiter une peau sèche. La présente invention a encore pour objet, selon un autre des ses aspects, l'utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de la 7a-hydroxylase pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou traiter les signes de vieillissement cutané chronobiologique. Par signes de vieillissement cutané , on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement chronobiologique, comme par exemple les rides et ridules, ou encore le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau. L'agent modulateur mis en #uvre dans le cadre de la présente invention peut être soit un agent inhibiteur de l'oxystérol 7a-hydroxylase soit un agent activateur de celleci. En l'occurrence, il est avantageux de mettre en #uvre un agent activateur de cette protéine lorsque l'on souhaite accroître la production de la 7a-hydroxy DHEA au niveau de la peau et/ou diminuer la concentration en oxystérols. En ce qui concerne la concentration en oxystérol, on sait qu'en réduisant celle-ci, on induit une augmentation de la synthèse en cholestérol. Or, cette concentration accrue en cholestérol est précisément intéressante pour traiter les désordres cutanés résultant d'un dysfonctionnement de la barrière cutanée lié notamment à une présence insuffisante en cholestérol. En conséquence, l'utilisation d'un activateur est privilégiée lorsque l'on souhaite plus particulièrement prévenir et/ou traiter des dysfonctionnements épidermiques liés au vieillissement naturel de la peau, une carence épidermique en cholestérol (ex. peau âgée, fonction barrière agressée par le stress, expositions répétitives à des agents chimiques, lavages excessifs, etc...) ou encore pour augmenter la fermeté et la tonicité de la peau. A titre illustratif de ces agents activateurs, on peut notamment citer la dexaméthasone. En ce qui concerne les agents inhibiteurs, leur usage est privilégié lorsqu'au contraire on cherche à augmenter significativement, les niveaux endogènes en certains oxystérols comme les 25- et 27-hydroxystérols dans l'épiderme. On agit ainsi également sur d'autres troubles de fonctionnement de la barrière cutanée. Ce type de composé est plus particulièrement intéressant lorsque l'on cherche à prévenir et plus particulièrement traiter une sécheresse cutanée associée, le cas échéant, à une desquamation. Les compositions, selon la présente invention, sont en l'occurrence particulièrement avantageuses pour traiter des peaux ainsi fragilisées en vue de réduire efficacement leur perméabilité vis-à-vis des agents chimiques et/ou thermiques agressifs externes. A titre représentatif des inhibiteurs utilisables selon l'invention, on peut notamment citer les kétoconazole, miconazole, clotrimazole, métyrapone, anaphtoflavone, antipyrine, nafimidone, denzimol, 3p-hydroystéroïdes et leurs mélanges. Parmi ces agents, conviennent plus particulièrement les métyrapone, a-naphtoflavone, antipyrine, nafimidone, denzymol, 3-ss-hydroxystéroïdes et leurs mélanges. La concentration en agent(s) modulateur(s) de l'oxystérol 7a-hydroxylase peut varier de 0,0001 % à 10 % en poids, notamment de 0,001 % à 5 % en poids, et en particulier de 0,005 à 1 % en poids par rapport au poids total de la composition. D'une manière générale, la composition de l'invention peut être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau (sur toute zone cutanée du corps) ou sur les muqueuses (buccale, jugale, gingivale, génitale, conjonctivale ...). Selon le mode d'administration considéré, elle peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées. De préférence, elle est appliquée directement sur la peau ou les muqueuses, c'est-à-dire par voie topique. Ainsi, une composition destinée à une application topique de la peau peut avoir la forme notamment de solutions aqueuses ou huileuses ou de dispersions du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), de suspensions ou émulsions de consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydre, de microcapsules ou microparticules, de dispersions vésiculaires du type ionique et/ou non ionique ou de mousses. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles. Pour l'injection, la composition peut se présenter sous forme de lotions aqueuses, huileuses ou sous forme de sérums. Pour les yeux, elle peut se présenter sous forme de gouttes. Pour l'ingestion, elle peut se présenter sous forme de capsules, de granulés, de sirops ou de comprimés. Les compositions selon l'invention peuvent également consister en des préparations solides constituant des savons ou des pains de nettoyage. Les compositions peuvent aussi être conditionnées sous forme de compositions pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression. Une composition selon l'invention peut aussi être une composition pour les soins du cuir chevelu, et notamment un shampooing, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant. Bien entendu, la composition peut contenir des adjuvants et additifs usuels pour les compositions à usage corporel et notamment des agents tensioactifs, des agents épaississants, et/ou des agents humectants. Lorsque la composition est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut varier d'environ 5 % à 80 % en poids, et notamment d'environ 5 % à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les cires, les émulsionnants et les co- émulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine cosmétique. L'émulsionnant et le co-émulsionnant peuvent être présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3 % à 30 % en poids, et notamment de 0,5 % à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition. L'émulsion peut, en outre, contenir des vésicules lipidiques. Lorsque la composition est une solution ou un gel huileux, la phase grasse peut représenter plus de 90 % du poids total de la composition. De façon connue, la composition cosmétique peut contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les additifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les absorbeurs d'odeurs et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine cosmétique, et par exemple peuvent varier d'environ 0,01 % à 10 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse et/ou dans les sphérules lipidiques. La composition peut contenir d'autres actifs, hydrophiles comme les protéines ou les hydrosylats de protéines, les acides aminés, les polyols, l'urée, l'allantoïne, les sucres et les dérivés de sucre, les vitamines hydrosolubles, les extraits végétaux et les hydroxyacides. Comme actifs lipophiles, on peut utiliser le rétinol (vitamine A) et ses dérivés, le tocophérol (vitamine E) et ses dérivés, les acides gras essentiels, les céramides, les huiles essentielles, l'acide salicylique et ses dérivés. Pour une utilisation en vue de prévenir ou lutter contre les signes du vieillissement cutané, la composition selon l'invention peut comprendre d'autres actifs anti-âge, en particulier des actifs anti-rides agissant par effet tenseur, des agents antiradicalaires ou encore des composés agissant sur la fermeté de la peau par inhibition de l'élastase ou augmentation de la synthèse de collagène. Les exemples qui suivent sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l' invention. Les quantités indiquées dans ces exemples sont données en pourcentage pondéral, sauf indications contraires. FIGURE 1 : Photographie du gel d'électrophorèse obtenu selon l'exemple 1. EXEMPLE 1 : Caractérisation de l'expression de l'ARNm correspondant au gène CYP7B1 dans un extrait de peau humaine. L'ADNc de peau humain a été obtenu auprès de la société Invitrogen. Un ADNc isolé du foie, disponible auprès de la Stratagène a été utilisé à titre de contrôle positif. En parallèle, l'ARN messager est isolé à partir d'échantillons EPISKIN en utilisant le kit de préparation Quiagen Rneasy mRNA# Les ADNc sont obtenus en utilisant le système de synthèse monobrin Superscript. Les réactions PCR sont ensuite réalisées en utilisant les ADNc obtenus et deux jeux d'amorces correspondants aux séquences spécifiques identifiées dans la séquence de gènes publiée CYP7B enregistrée sous la référence 4406533 dans la Gene Bank. Les deux jeux d'amorces utilisés sont les suivants : 5' -GAC CCG GTG AGC CTC CAT TGA TAA- 3', (SEQ Id N 1) - 5' -CAG TTC TGC CGT GTC CCA ACT TGT- 5', (SEQ Id N 2) et - 5' -GGG ACA CGG CAG AAC TGT ATC CAT-3', (SEQ Id N 3) - 5' -CTA CCA AGT CTC CCT TTC GCA CA?- 3' (SEQ Id N 4). L'utilisation du premier jeu d'amorces permet d'amplifier un fragment de 416 paires de base correspondant aux nucléotides 124 à 540, alors que l'utilisation du second jeu d'amorces permet d'amplifier le fragment de 656 paires de base correspondant aux nucléotides 523 à 1179. Suite à la réaction de PCR, les produits PCR sont analysés sur gel d'électophorèse Agarose. Les produits de PCR, des tailles attendues, sont obtenus à partir des deux jeux d'amorces 1 et 2 pour le foie, le contrôle positif, les échantillons de peau humaine et les échantillons Episkin. Comme attendu, aucun produit n'a été amplifié dans le contrôle négatif dans lequel tous les composants réactionnels, à l'exception des ADNc, avaient été inclus. En figure 1 est représentée une photographie du gel d'électrophorèse. EXEMPLE 2 : Composition pour application tonique. Une crème de soin ayant la composition suivante a été préparée : Dexaméthasone vendu par la société SIGMA 0,01 % Stéarate de glycérol 2 % Polysorbate 60 (Tween 60# vendu par la société ICI) 1 % Acide stéarique 1,4 % Triéthanolamine 0,7 % Carbomer 0,4 % Fraction liquide de beurre de karité 12 % Perhydrosqualène 12 % Parfum 0,5 % Conservateur QS Eau QSP 100 % REVENDICATIONS 1. Utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de l'oxystérol 7ahydroxylase pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à prévenir et ou/traiter les désordres cutanés et/ou de membranes de type muqueuses affectant le bon fonctionnement de la barrière cutanée. 2. Utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de l'oxystérol 7a-hydroxylase pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à hydrater la peau et prévenir et/ou traiter une peau sèche. 3. Utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de la 7ahydroxylase dans une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou traiter les signes de vieillissement cutané chronobiologique. 4. Utilisation d'au moins un agent modulateur de l'activité de la 7ahydroxylase dans une composition cosmétique destinée à augmenter la fermeté et la tonicité de la peau. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'agent modulateur est au moins un agent activateur de l'oxystérol 7a-hydroxylase. 6. Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que l'agent activateur est au moins la dexaméthasone. 7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'agent modulateur est au moins un agent inhibiteur de l'oxystérol 7a- hydroxylase. 8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que l'agent inhibiteur est choisi parmi les kétoconazole, miconazole, clotrimazole, métyrapone, a-naphtoflavone, antipyrine, nafimidone, denzymol et 3-p-hydroxystéroïdes et leurs mélanges. 9. Utilisation selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce que l'agent inhibiteur est choisi parmi les métyrapone, a-naphtoflavone, antipyrine, nafimidone, denzymol et 3-p-hydroxystéroïdes et leurs mélanges. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'agent modulateur est mis en #uvre à raison de 0,0001à 10 % et en particulier de 0,001 à 5 % en poids, par rapport au poids total de la composition. 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite composition est administrée par voie topique. 12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que ladite composition se présente sous la forme d'une solution aqueuse ou huileuse, une dispersion de type lotion ou sérum, d'émulsion de type phase grasse dans une phase aqueuse ou inversement, de suspension ou émulsion du type crème, gel aqueux ou anhydre, de micro capsules ou microparticules ou de dispersion vésiculaire de type ionique et/ou non ionique ou de mousse.