Brevet FR2837492A1 — publié le 20030926

La présente invention est relative à un nouveau transporteur d'iode et à ses applications dans la prévention, le diagnostic et le traitement des maladies génétiques ou acquises impliquant un dysfonctionnement de ce transporteur. L'iode est un constituant essentiel des hormones thyroïdiennes, qui interviennent dans la régulation du métabolisme et le développement, notamment du système nerveux central. La synthèse des hormones thyroïdiennes implique la concentration de l'iode dans la lumière de la thyroïde (colloïde). Les mammifères ont développé des mécanismes très efficaces permettant de collecter et de concentrer cet élément rare. Dans la thyroïde, l'iode présente dans la circulation sanguine est tout d'abord accumulée dans les thyrocytes, au travers de la membrane basale. puis elle diffuse dans la colloïde, au travers de la membrane apicale. Une accumulation d'iode serait également observée dans la lumière de l'estomac, ainsi que dans la lumière des glandes salivaires et mammaires ; l'iode est également transportée vers la circulation sanguine, au travers de l'épithélium duodénal, rénal et du placenta. Le transport d'iode par les thyrocytes est un processus en deux étapes qui implique des transporteurs de nature protéique, tant au niveau de la membrane basale que de la membrane apicale de la cellule : - La protéine NIS est localisée dans la membrane basolatérale, en contact direct avec la circulation sanguine et intervient dans l'accumulation d'iode dans les thyrocytes (Pour une revue, voir De la Vieja et al., Physiological Reviews, 2000, 80,1083-1105). Le gène NIS (Na/I Symporter ou Sodium Iodide Symporter) a été cloné notamment chez le rat, la souris et l'homme : il code pour une protéine qui est localisée dans la membrane basale des cellules épithéliales de la thyroïde, de l'estomac, ainsi que des glandes salivaires et mammaires. et catalyse le transport couplé du sodium et de l'iode (2 Na/11). de la circulation sanguine dans les cellules épithéliales, en utilisant le gradient entrant de sodium. Ce gène appartient à la famille SSS (Sodium Soluté Symporter) qui inclut des protéines impliquées dans le transport couplé du sodium et de petites molécules telles que le glucose, des vitamines comme la biotine et le pantothénate (SMVT pour Sodium Multivitamin Symporter) ou bien des nucléosides. - La pendrine a été proposée comme transporteur apical potentiel. La pendrine qui est localisée dans la membrane apicale est le produit d'un gène (gène PDS) associé à une maladie autosomale récessive caractérisée par une surdité combinée à un goitre thyroïdien (syndrome de Pendred). Toutefois, le rôle de la pendrine dans la physiologie de la thyroïde n'est pas clairement établi ; les variations phénotypiques observées chez les patients présentant ce syndrome. suggèrent l'existence d'un autre système de transporteur apical de l'iode (Scott et al.. Nature genetics. 1999. 21, 440. 443) et les souris knock-out pour le gène PDS présentent un déficit auditif sévère mais aucune altération physiologique de la thyroïde (Everett et al., Human Molecular Genetics. 2001, 10. 153-161). Il ressort de ce qui précède que le transporteur impliqué dans le transport de l'iode au travers de la membrane basale des cellules épithéliales de la thyroïde et des glandes salivaires a été identifié (protéine NIS) mais que l'identité des protéines impliquées dans le transport de l'iode au travers de la membrane apicale des cellules épithéliales de la thyroïde, de l'estomac, des glandes salivaires et mammaires et au travers des membranes apicales et baso-latérales des cellules épithéliales du duodénum. du rein et du placenta est inconnue ou uniquement spéculative. Les Inventeurs ont identifié un nouveau transporteur d'iode qui est impliqué dans le transport de l'iode au travers de la membrane apicale des thyrocytes et dans l'accumulation d'iode dans la colloïde. Ce transporteur, de nature protéique, est dénommé AIT pour Apical lodide Transporter ou prot:ine AIT ; il est exprimé principalement dans la thyroïde, mais également dans les glandes salivaires (glandes sous-maxillaires et parotide). l'intestin grêle. le rein, les glandes surrénales et la prostate et dans une moindre mesure dans l'estomac, la peau, le poumon et les testicule. Un tel transporteur est utile dans la prévention, le diagnostic et le traitement des maladies génétiques ou acquises impliquant un dysfonctionnement du transport apical de l'iode. Il est également utile en médecine nucléaire pour contrôler l'accumulation et prévenir la contamination par de l'iode radioactif. La présente invention a. en conséquence. pour objet une protéine isolée et purifiée, caractérisée en ce qu'elle présente une séquence sélectionnée dans le groupe constitué par : - la séquence SEQ ID NO: 2 qui correspond à la protéine AIT humaine (hAIT). et - les séquences présentant, sur leur totalité, au moins 70 % d'identité ou au moins 85 % de similarité. de préférence au moins 80 % d'identité ou au moins 90 % de similarité. et de manière préférée au moins 95 % d'identité ou au moins 99 % de similarité avec la séquence SEQ ID NO:2, à l'exclusion de la séquence présentant le numéro d'accession AAH17691 dans la base de données du NCBI. Cette protéine représente un nouveau transporteur apical d'iode et sera dénommée ci-après protéine AIT ; le gène codant cette protéine est dénommé ciaprès gène AIT. Les protéines selon l'invention incluent toute protéine (naturelle, synthétique, semi-synthétique ou recombinante) de n'importe quel organisme procaryote ou eucaryote, notamment d'un mammifère humain ou non-humain, comprenant ou consistant en une séquence d'acides aminés d'une protéine AIT fonctionnelle. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, ladite protéine est une protéine de mammifère. On entend par "fonctionnelle", une protéine possédant une activité biologique normale. en l'occurrence une activité de transporteur apical d'iode. Cette protéine peut comprendre des mutations silencieuses n'induisant aucun changement substantiel dans son activité et ne produisant aucune modification phénotypique. Une protéine AIT fonctionnelle présente les propriétés suivantes : - elle présente une séquence d'environ 610 acides aminés et possède une structure comprenant : (i) 13 domaines transmembranaires présentant une structure en hélice ; les hélices 1 et II possèdent chacune un résidu chargé négativement (Aspl4 et Glu77) pouvant jouer un rôle catalytique, (ii) 3 sites potentiels de N-glycosylation (Asn 260. 481 et 485) et (iv) des sites consensus de phosphorylation par une kinase AMPc dépendante (RRMT situé entre les positions 50 et 53) ou Ca++ dépendante [TSK (41-43). SCK(269-271). SER (377-379). SYK (576- 578) et SGK (602-604)] ; les positions des résidus d'acides aminés étant indiquées en référence à la séquence de la protéine hAIT (SEQ ID NO: 2), - elle est exprimée principalement dans la membrane apicale des thyrocytes mais également dans les cellules épithéliales des glandes salivaires (sous- maxillaire et parotide). l'intestin grêle. le rein. les glandes surrénales et la prostate et dans une moindre mesure dans l'estomac, la peau. le poumon et les testicules. -elle est impliquée dans le transport de l'iode au travers de la membrane apicale des thyrocytes. L'identité d'une séquence par rapport à une séquence de référence s'apprécie en fonction du pourcentage de résidus d'acides aminés qui sont identiques, lorsque les deux séquences sont alignées, de manière à obtenir le maximum de correspondance entre elles. Une protéine ayant une séquence en acides aminés ayant au moins X % d'identité avec une séquence de référence est définie, dans la présente invention comme une protéine dont la séquence peut inclure jusqu'à 100-X altérations pour 100 acides aminés de la séquence de référence, tout en conservant les propriétés fonctionnelles de ladite protéine de référence, en l'occurrence son activité de transport apical de l'iode. Au sens de la présente invention, le terme altération inclut les délétions, les substitutions ou les insertions consécutives ou dispersées d'acides aminés dans la séquence de référence. Cette définition s'applique, par analogie, aux molécules d'acide nucléique. La similarité d'une séquence par rapport à une séquence de référence s'apprécie en fonction du pourcentage de résidus d'acides aminés qui sont identiques ou qui différent par des substitutions conservatives, lorsque les deux séquences sont alignées de manière à obtenir le maximum de correspondance entre elles. Au sens de la présente invention, on entend par substitution conservative, la substitution d'un acide aminé par un autre qui présente des propriétés chimiques similaires (taille, charge ou polarité), qui généralement ne modifie pas les propriétés fonctionnelles de la protéine, en l'occurrence son activité de transport apical de l'iode. Une protéine ayant une séquence en acides aminés ayant au moins X % de similarité avec une séquence de référence est définie, dans la présente invention comme une protéine dont la séquence peut inclure jusqu'à 100-X altérations non-conservatives pour 100 acides aminés de la séquence de référence. Au sens de la présente invention, le terme altérations non-conservatives inclut les délétions, les substitutions non-conservatives ou les insertions consécutives ou dispersées d'acides aminés dans la séquence de référence. Par exemple, parmi les séquences de protéines connues. aucune séquence identique ou similaire n'a été trouvée: - la protéine hNIS présente 46 % d'identité et 70 % de similarité avec la protéine hAIT, et - la protéine hSMVT présente 42 % d'identité et 64 % de similarité avec la protéine hAIT. La présente invention a également pour objet un peptide, caractérisé en ce qu'il est constitué par un fragment d'au moins 7 acides aminés de la protéine AIT, telle que définie ci-dessus. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, ledit peptide est constitué par un fragment C-terminal de ladite protéine AIT. Il est particulièrement utile pour la production d'anticorps reconnaissant spécifiquement la protéine AIT. La présente invention a également pour objet des anticorps, caractérisés en ce qu'ils sont dirigés contre la protéine AIT ou un fragment de celle-ci, tels que définis ci-dessus. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, lesdits anticorps sont dirigés contre un fragment C-terminal de ladite protéine AIT. Conformément à l'invention, lesdits anticorps sont soit des anticorps monoclonaux, soit des anticorps polyclonaux. Ces anticorps peuvent être obtenus par les méthodes classiques, connues en elles-mêmes, comprenant notamment l'immunisation d'un animal avec une protéine ou un peptide conforme à l'invention, afin de lui faire produire des anticorps dirigés contre ladite protéine ou ledit peptide. De tels anticorps permettent notamment de déterminer le profil d'expression de la protéine AIT et une éventuelle altération de ce profil dans un tissu ou un échantillon biologique, et par voie de conséquence de diagnostiquer une maladie génétique ou acquise impliquant un dysfonctionnement de ce transporteur. La présente intention a également pour objet une molécule d'acide nucléique isolée (ADNc ou fragment d'ADN génomique), caractérisée en ce qu'elle présente une séquence sélectionnée dans le groupe constitué par : - les séquences codant pour une protéine AIT telle que définie cidessus, et - les séquences complémentaires des précédentes, sens ou anti-sens. L'invention englobe, les séquences des allèles du gène AIT issues de n'importe quel mammifère. ainsi que les séquences des mutants naturels ou artificiels du gène AIT codant pour une protéine AIT fonctionnelle telle que définie ci-dessus. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention. ladite séquence codant pour une protéine AIT est sélectionnée dans le groupe constitué par : a) la séquence SEQ ID NO: 1 qui correspond à l'ADNc de la protéine hAIT, laquelle séquence de 2509 pb comprend des extrémités 5' et 3' non-traduites de respectivement 364 pb et 311 pb, encadrant une phase de lecture ouverte de 1830 nucléotides, et b) la séquence située entre les positions 2316362 et 2369604 de la séquence présentant le numéro d'accession NT009743.8 dans la base de données du NCBI, laquelle séquence qui correspond au gène hAIT, est localisée dans la région chromosomomique 12q23.1 et présente une organisation exon-intron comprenant 15 exons (Tableau I). similaire à celle du gène NIS. Tableau 1 : Organisation exon-intron du gène HAIT Exon n Taille de Extrémité 3' de Extrémité 5' de Taille de Extrémité 3' de Extrémité 5' de l'exon (pb) l'exon l'intron l'intron (pb) l'intron l'exon (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: GATTCG 15 à 29) 30 à 43) 1 714 TACGAG gtaatttgca 4936 tttgcaacag TATTTA 2 66 CAAACA gtaagtagct 2285 tcccccctag ATTCTG 3 52 ATCAAG gtacatttta 7002 ttttctacag TCACAG 4- 68 ACACTG gtacgtccag 1315 cccctcaaag GGTGGT 5 155 CTGGAA gtaagtgtct 3013 tgtcatttag TTTTAA 6 141 AAAACT gtaagtcaca 2950 acttctttag GTCTCT 7 130 GACCAG gttcagtacc 3166 aatttttcag CTCATG 8 89 ATTAAG gtgtgaacta 1220 tcccttcag CACAGT 9 113 GAATGA gtaagtttct 2706 gtccatttag GTGGG 10 68 TTGCAG gtgagagctg 11842 atttttgtag GCAGCA 11 87 TCAATT gtaagtacaa 1396 tgtttacag GGAGCA 12 206 TCAAAG gtattgaatt 4426 gctctcttag GACTCC 13 104 CAACAG gtaactatct 3652 ttttttccag GAGGAA 14 80 AAGAAA gtgagttggc 745 tttcttttag AAGAAG 15 409 ATACAC acatatgcac Les moiecuies d'acides nucléiques telles que definies ci-aessus peuvent être utilisées comme sondes pour isoler le gène AIT d'autres espèces ou des allèles de ce gène. notamment par criblage d'une banque d'ADN génomique ou d'ADNc. L'invention a également pour objet des fragments d'au moins 8 pb des molécules d'acides nucléiques telles que définies ci-dessus. à l'exclusion des EST présentant les numéro d'accessions AI261687, AI433656. AI793005 et AW195079 dans la base de données GENBANK et du fragment d'ADNc présentant le numéro d'accession BCO 17691 dans la base de données du NCBI. De tels fragments peuvent notamment être utilisés comme sondes ou comme amorces pour détecter/amplifier des molécules d'acide nucléique (ARNm ou ADN génomique codant une protéine AIT telle que définie ci-dessus. Les molécules d'acide nucléique selon l'invention sont obtenues par les méthodes classiques, connues en elles-mêmes, en suivant les protocoles standards tels que ceux décrits dans Ciment Protocols in Molecular Biology (Frederick M. AUSUBEL,2000, Wiley and son Inc, Library of Congress. USA). Par exemple, elles peuvent être obtenues par amplification d'une séquence nucléique par PCR ou RTPCR, par criblage de banques d'ADN génomique par hybridation avec une sonde homologue. ou bien par synthèse chimique totale ou partielle. Ces différentes molécules d'acides nucléiques permettent, soit de déterminer le profil de transcription du gène AIT et une éventuelle altération de ce profil dans un tissu ou un échantillon biologique, soit de mettre en évidence le gène AIT. des variants alléliques de ce gène et une éventuelle altération fonctionnelle de ce gène AIT (changement substantiel dans l'activité de transporteur apical d'iode de la protéine AIT) résultant d'une mutation (insertion, délétion ou substitution) d'un ou plusieurs nucléotides au niveau d'au moins un exon dudit gène. De telles mutations incluent en particulier les délétions, les insertions ou les substitutions nonconservatives au niveau de codons correspondant à des résidus d'acides aminés situés dans un domaine essentiel pour l'activité biologique de la protéine AIT. - Les transcrits du gène AIT sont par exemple amplifiés par RT-PCR à l'aide d'amorces sélectionnées dans le groupe constitué par les séquences SEQ ID NO: 3 à 13, et - Les exons 1 à 15 sont amplifiés par PCR à l'aide d'amorces de 15à 50 pb situées dans les introns flanquant lesdits exons, à une distance d'environ 20 à 100 pb en amont et/ou en aval desdits exons. Par voie de conséquence. ces différentes molécules d'acides nucléiques permettent de diagnostiquer une état pathologique ou une maladie génétique impliquant un dysfonctionnement de ce transporteur et de cribler des substances capables de moduler (activer ou inhiber ) la transcription du gène AIT. La présente invention a également pour objet un vecteur recombinant, caractérisé en ce qu'il comprend un insert sélectionné dans le groupe constitué par les molécules d'acides nucléiques codant une protéine AIT et leurs fragments tels que définis ci-dessus. De préférence, ledit vecteur recombinant est un vecteur d'expression dans lequel ladite molécule d'acide nucléique ou l'un de ses fragments sont placés sous le contrôle d'éléments régulateurs de la transcription et de la traduction appropriés. Ces vecteurs sont construits et introduits dans des cellules hôtes par les méthodes classiques d'ADN recombinant et de génie génétique, qui sont connues en elles-mêmes. De nombreux vecteurs où l'on peut insérer une molécule d'acide nucléique d'intérêt afin de l'introduire et de la maintenir dans une cellule hôte eucaryote ou procaryote. sont connus en eux-mêmes ; le choix d'un vecteur approprié dépend de l'utilisation envisagée pour ce vecteur (par exemple réplication de la séquence d'intérêt, expression de cette séquence, maintien de la séquence sous forme extrachrbmosomique ou bien intégration dans le matériel chromosomique de l'hôte), ainsi que de la nature de la cellule hôte. La présente invention a également pour objet des cellules procaryotes ou eucaryotes transformées par un vecteur recombinant tel que défini cidessus. Les vecteurs recombinants et les cellules transformées tels que définis ci-dessus, sont utiles notamment pour la production des protéines et des peptides AIT selon l'invention ou en thérapie génique substitutive. La présente invention a également pour objet un mammifère transgénique non-humain, caractérisé en ce qu'il contient des cellules transformées par au moins une molécule d'acide nucléique telle que définie ci-dessus. Les mammifères transgéniques non-humains et les cellules transformées tels que définis ci-dessus, sont utiles notamment pour le criblage de médicaments aptes à moduler l'activité de transporteur apical d'iode de la protéine AIT. telle que définie ci-dessus. La présente invention a également pour objet un médicament destiné au traitement des maladies impliquant un dysfonctionnement du transport apical de l'iode, caractérisé en ce qu'il inclut : une molécule d'acide nucléique nue, codant pour une protéine AIT telle que définie ci-dessus, un vecteur recombinant tel que défini ci- dessus, une protéine AIT telle que définie ci-dessus ou un anticorps tel que défini ci- dessus. La présente invention a également pour objet un réactif de détection d'une maladie impliquant un dysfonctionnement du transport apical de l'iode, caractérisé en ce qu'il est sélectionné dans le groupe constitué par : les molécules d'acide nucléique et leurs fragments tels que définis ci-dessus (sondes ,amorces) et les anticorps tels que définis ci-dessus. La présente invention a également pour objet une méthode de criblage d'une substance capable de moduler (activer ou inhiber) le transport apical de l'iode dans des cellules, caractérisée en ce qu'elle comprend : - la préparation de cellules exprimant une protéine AIT telle que définie ci-dessus. - la mise en contact desdites cellules avec une substance à tester, - la mesure par tout moyen approprié de l'effet de ladite substance sur l'activité de ladite protéine AIT, et - la sélection des substances capables de moduler ladite activité. Au sens de la présente invention, on entend par activité de la protéine AIT, aussi bien l'expression de la protéine AIT ou des transcrits (ARNm) correspondants, que l'activité biologique de ladite prot@ine AIT. en l'occurrence l'activité de transporteur apical d'iode. Ladite mesure est réalisée par les techniques classiques d'analyse d'ARNm, de protéines ou de l'influx d'iode qui sont connues en elles mêmes ; à titre d'exemple non-limitatif, on peut citer les techniques suivantes : RT-PCR, Northern-blot, Western-blot. RIA, ELISA, immunoprécipitation, incorporation d'iode radiomarqué. Avantageusement. ladite mesure est réalisée à l'aide des réactifs de détection tels que définis ci-dessus (anticorps; sondes, amorces). Des substances capables d'inhiber le transport apical de l'iode dans des cellules ont des applications pour le traitement des pathologies impliquant une hypersécrétion d'hormones thyroïdiennes, ainsi que pour la prévention et le traitement des contaminations par de l'iode radioactif. En effet, une inhibition sélective de l'activité de la protéine AIT dans les tissus accumulant l'iode comme la thyroïde pourrait limiter les risques de tumorisation de ces tissus et la protéine AIT pouvant être impliquée dans la ré-assimilation vers le sang, de l'iode passé dans l'urine primaire, une inhibition de l'activité de la protéine AIT augmenterait également l'élimination, dans l'urine, de l'iode radioactif assimilé accidentellement. La présente invention a également pour objet une méthode de détection d'une mutation dans le gène AIT, caractérisée en ce qu'elle comprend : - la préparation d'un échantillon d'acides nucléiques, - la détection de la présence, dans ledit échantillon d'acides nucléiques, d'une mutation dans la séquence codant pour une protéine AIT telle que définie ci-dessus, à l'aide d'au moins une sonde ou une amorce telles que définies ci-dessus. Selon un mode de mise en #uvre avantageux de ladite méthode de détection, ladite mutation est située au niveau d'un exon du gène AIT. Ladite détection est réalisée par les techniques classiques qui sont connues en elles mêmes, par exemple : (i) par amplification d'une région dudit gène AIT susceptible de contenir une mutation, puis détection de ladite mutation par séquençage ou par digestion par une enzyme de restriction appropriée, du produit de PCR obtenu, ou bien (ii) par hybridation avec une sonde marquée spécifique d'une région duditgène AIT susceptible de contenir une mutation, puis détection directe des mésappariements et/ou digestion par une enzyme de restriction appropriée. L'invention a en outre pour objet une trousse de détection et ou de criblage pour la mise en #uvre des méthodes telles que définies ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle inclut au moins un réactif tel que défini ci-dessus. 11 Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en #uvre de la protéine AIT de la présente invention ainsi qu'aux dessins annexés dans lesquels : - la figure 1 illustre la comparaison des séquences des protéines hAIT (SEQ ID NO: 2). hNIS (GENBANK n U66088) et hSVMT (GENBANK n AF69307) les acides aminés identiques sont représentés par un trait. Les 13 domaines transmembranaires potentiels sont encadrés et les résidus de ces domaines chargés négativement (-) ou positivement (+) sont indiqués. Les sites potentiels de glycosylation (g), de phosphorylation par : une protéine kinase AMPc dépendante (pa), une protéine kinase C (pc) ou une tyrosine kinase (ptyr), sont également indiqués. - la figure 2 illustre l'analyse par RT-PCR quantitative du profil d'expression de l'ARNm d'hAIT dans différents tissus humains : les résultats sont normalisés en utilisant une sonde correspondant à l'ARN ribosomal 18S. Les résultats sont exprimées en unité arbitraire, relativement à l'expression de l'ARNm dans la thyroïde (100 %). - la figure 3 illustre la détection par immunohistochimie, de la protéine hAIT, dans la thyroïde normale (figure 3A) et dans la glande sous maxillaire (figure 3B). grossissement x 250. Un immunomarquage intense de la membrane apicale des thyrocytes et des cellules canaliculaires de la glande sous-maxillaire est observée avec le sérum anti-peptide hAIT (577-610). - la figure 4 illustre l'analyse, par incorporation d'iode radiomarqué (125I), de l'influx d'iode dans des cellules HEK-293-T et COS-7 transfectées de façon transitoire par un plasmide d'expression de la protéine hAIT, seul ou en combinaison avec un plasmide exprimant la protéine mNIS. Chaque mesure est effectuée en triple et les résultats, correspondant à la moyenne + s. e.m, sont exprimées en milliers de cpm /puits. - la figure 5 illustre l'analyse cinétique, par incorporation .d'iode radiomarqué (125I), de l'influx d'iode dans des cellules CHO transfectées de façon stable par un plasmide d'expression de la protéine hAIT (hAIT) ou non-transfectées (contrôle). Les résultats, correspondant à la moyenne ~ s.e.m, sont exprimées en nombre de cpm/puits. La figure 5A illustre l'influx d'iode mesuré dans les conditions telles que décrites à l'exemple 1 : cellules transfectées traitées par le perchlorate (-O-) ou non-traitées (--), cellules contrôle traitées ( -#-) ou non-traitées (-#-). Les mesures sont effectuées en triple, à différents instants, compris entre 0 et 15 min, après l'addition d'125I. La figure 5B illustre l'influx d'iode en présence d'un contre-flux, mesuré dans les conditions telles que décrites à l'exemple 1 : cellules transfectées (-#-), cellules contrôle (-#-). Les mesures sont effectuées en triple, à différents instants, compris entre 0 et 6 min, après l'addition d'125I. EXEMPLE 1 : ET METHODES 1) Matériel Les réactifs sont fournis par SIGMA-ALDRICH CHEMICHAL. Les endonucléases de restriction et la T4 ADN-ligase sont fournis par BIOLABS. Le kit de clonage (TA cloning kit) est fourni par PROMEGA. Les bactéries E. coli de souche XL2-Blue sont fournies par STRATAGENE. La séquence des amorces oligonucléotidiques est déterminée à l'aide du programme disponible sur le site internet (htttp://alces.med.umn.edu/rawprimer.html) et les amorces oligonucléotidiques sont synthétisées par SIGMA-GENOSYS. L'analyse des séquences est réalisée à l'aide du programme BLAST (http:..'7w ww.ncbi.nlm.nih.gov/). Les sites potentiels de glycosylation et de phosphorylation ont été localisés à l'aide du programme Pro.site fourni par EXPASY (http:7\vww.expasv~~ch/prosite). Les échantillons de tissus normaux ont été prélevés à distance du site tumoral; lors d'interventions chirurgicales. Les échantillons ont été congelés à -70 C dans l'isopentane puis conservés dans l'azote liquide. 2) Méthodes a) clonage de l'ADNc de la protéine hAIT par RT-PCR Des ADNc de rein humain (Marathon ready cDNAs, CLONTECH) ont été utilisés comme matrice. Les réactions de PCR sont réalisées dans un Robocycler (STRATAGENE). en utilisant le système PCR de haute fidélité (Expand high fidelity system. ROCHE) et éventuellement des tubes Hotstart (MOLECULAR BIO-PRODUCTS). selon les instructions du fabricant. L'amplification PCR est réalisée dans les conditions suivantes : une étape initiale de dénaturation à 94 C pendant 3 min est suivie de 35 à 40 cycles alternant une étape de dénaturation à 94 C pendant 50 s, une étape d'hybridation à 50 C pendant 50 s et une étape d'élongation à 69 C pendant 1 à3 min et une étape finale d'élongation est effectuée à 69 C pendant 6 à 8 minutes. Les produits d'amplification PCR sont séparés par électrophorèse en gel d'agarose, purifiés et clonés dans le plasmide pGEM-T (PROMEGA). Les extrémités des ADNc sont amplifiées par la technique RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends), à l'aide d'un kit commercial (kit Marathon, CLONTECH). Les fragments clonés sont séquences par la société GENOME EXPRESS. Dans une première étape. des fragments d'ADNc recouvrant la totalité de la séquence d'hAIT ont été amplifiés, clonés dans le plasmide pGEM-T, puis séquencés. A savoir : - un fragment d'ADNc de 350 pb correspondant à une partie de la région 5' non-codante et à l'extrémité 5' de la phase de lecture ouverte de la protéine hAIT a été amplifié à l'aide du couple d'amorces SEQ ID NO: 3 et SEQ ID NO: 4. - un fragment d'environ 1682 pb. situé entre les positions 273 et 1954 de l'ADNc d'hAIT a été amplifié en deux étapes à l'aide : d'une première paire d'amorces (amorce sens SEQ ID NO: 5, située entre les positions 273 et 293 et amorce anti-sens SEQ ID NO:6, située entre les positions 1261 et 1283) et d'une seconde paire d'amorces (amorce sens SEQ ID NO:7, située entre les positions 694 et 719 et amorce anti-sens SEQ ID NO:8, située entre les positions 1929 et 1954), et - l'extrémité 3' de l'ADNc d'hAIT a été amplifiée par la technique RACE, en utilisant comme amorce spécifique. l'amorce sens SEQ ID NO: 9, située entre les-positions 1630 à 1652 de l'ADNc d'hAIT. Dans une seconde étape, un fragment contenant la totalité de la séquence codante d'hAIT a été amplifié par PCR à l'aide du couple d'amorce: - SEQ ID NO: 10 : amorce sens 5'-AAATCTAGAGCCACCnucléotides des positions 365 à 388 de l'ADNc d'hAIT-3', comprenant un site NotI et une séquence de Kozak. placés immédiatement avant le codon d'initiation de la phase de lecture ouverte d'hAIT. et - SEQ ID NO: 11 :amorce anti-sens 5'-TTAGAATTC-nucléotides des positions 2187 à 2209 de l'ADNc d'hAIT, comprenant un site EcoRI placé juste en amont du codon stop. Le produit d'amplification obtenu a été inséré entre les sites Notl et EcoRI du plasmide pcDNA3.1(INVITROGEN). b) Détermination du niveau d'expression du gène hAIT par RT-PCR en temps réel La distribution des ARNm dans différents tissus est analysée par une méthode de RT-PCR quantitative en temps réel. selon la technique Taqman (PERKIN- ELMER APPLIED BIOSYSTEMS). Des ARNs totaux sont extraits de différents tissus, à l'aide d'un kit commercial d'extraction d'ADN et d'ARN, en suivant les instructions du fabricant (QIAGEN). La qualité des ARN est vérifiée par électrophorèse en gel d'agarose. 1 g d'ARN total est rétro-transcrit à l'aide d'amorces hexamériques aléatoires (PERKINELMER APPLIED BIOSYSTEMS), en suivant le protocole décrit dans Lazar et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 1999, 84, 3228-3231. Les ADNc ainsi obtenus sont dilués d'un facteur 20 dans de l'eau sans nucléase (PROMEGA). Les amorces oligonucléotidiques (SEQ ID NO: 12 et SEQ ID NO: 13) et la sonde Taqman (SEQ ID NO: 14) ont été sélectionnées dans des régions chevauchant des introns du gène hAIT. Les réactions de PCR quantitative en temps réel ont été réalisées dans un volume de 50 l contenant une quantité d'ADNc correspondant à 20 ng d'ADN total, à l'aide du kit commercial (Taqman PCR core reagent kit), selon les instructions du fabricant (PERKIN-ELMER APPLIEL) BIOSYSTEMS). Pour normaliser les différences entre les quantités d'ARN ajoutées dans les réactions, l'ARN ribosomal 18S a été amplifié simultanément comme contrôle interne (Lazar et al., précité). L'expression d'hAIT dans les différents tissus est exprimée, relativement à un échantillon de référence, constitué par un mélange d'ARNs totaux de 5 thyroïdes normales. Chaque point expérimental est dupliqué et le coefficient de variation dans une même expérience est inférieur à 1 %. c) Synthèse de peptides Un peptide situé entre les acides aminés 577 et 610 de la protéine hAIT a été synthétisé selon les techniques classiques de synthèse en phase solide, à l'aide d'un synthétiseur automatique (modèle 431 A, PE APPLIED BIOSYSTEMS). L'identité et la pureté du peptide synthétisé a été vérifiée par : (i) analyse des acides aminés par un analyseur automatique (LKB), (ii) chromatographie de haute performance en phase liquide (HPLC), et (iii) microséquençage de chaque pic obtenu en HPLC, à l'aide d'un séquenceur automatique (modèle 477A . PE APPLIED BIOSYSTEMS). Le peptide hAIT a été conjugué, au niveau du résidu Tyr578, à la protéine KLH (Keyhole Limpet Hemocyanine), en utilisant la benzédine comme agent couplant. d) Production et caractérisation d'anticorps anti-peptide hAIT Deux lapins ont été immunisés par injection intradermique du peptide hAIT couplé à la KLH. selon un protocole comprenant une première injection, suivie de trois injections de rappel, espacées d'un intervalle de 3 semaines. Le sang des lapins a ensuite été récolté et le titre des sérums en anticorps anti-hAIT a été déterminé en ELISA. à l'aide de plaques de microtitration recouvertes du peptide hAIT et d'anticorps anti-immunoglobulines de lapin couplés à la peroxydase (NORDIC). e) Immunohistochimie Des coupes sériées, espacées de 5 mm. d'échantillons de thyroïde normale ont été réalisées à l'aide d'un cryostat, puis les coupes ont été fixées dans l'acétone pendant 10 min. Les coupes ont ensuite été incubées pendant 1 h avec le sérum anti-peptide hAIT dilué d'un facteur 50. Après trois lavages successifs de 5 min dans du tampon 15 mM Tris-HCI pH 7,4, les coupes sont incubées avec un anticorps anti-immunoglobulines de lapin couplé à la biotine (K674, DAKO). Après trois lavages successifs de 5 min dans le même tampon Tris-HCI. la réaction est révélée en présence du substrat fast red (K699, DAKO). Les témoins négatifs sont constitués par des coupes incubées avec un sérum pré-immun ou un sérum anti-peptide hAIT préadsorbé en présence d'un excès de peptide hAIT. f) Analvse de l'incorporation d'125I par des cellules HEK-293T. COS-7 et CHO transfectées fi ) tr.é;l.l)..f.t.i.Q.mJXm1$.i.9.r.. Des lignées de cellules HEK-293-T (cellules embryonnaires de rein humain transfectées de façon stable par l'antigène T de SV40, EACCC numéro 85120602) et COS-7 (cellules de rein de singe vert africain. EACC numéro 87021302) sont ensemencées dans des plaques à 12 puits (recouvertes de polylysine, dans le cas des cellules HEK-293-T). et cultivées à 37 C en présence de CO2, dans du milieu DMEM (GIBCO) contenant 2 mM de glutamine (GIBCO) et 10 % de sérum de veau f#tal (GIBCO). Lorsque les cellules atteignent 70 % de confluence, elles sont transfectées de façon transitoire par différents plasmides. à l'aide du réactif FugeneR (ROCHE) : le plasmide pcDNA3.1 recombinant contenant l'ADNc d'hAIT (pcDNAhAIT). le plasmide pcDNA3.1 recombinant contenant l'ADNc de la protéine NIS de souris (pcDNA-mNIS. Perron et al., J. Endocrinol., 170. 185-196), le plasmide pcDNA-hAIT en combinaison avec le plasmide pcDNA-mNIS ou le plasmide pcDNA3.1vide. L'expression de la protéine hAIT par les cellules transfectées a été vérifiée par immunohistochimie. à l'aide du sérum anti-peptide hAIT. 3 jours après la transfection. les cellules sont rincées 2 fois avec une solution HBSS tamponnée avec 10 mM d'Hepes pH 7,0 (GIBCO). L'influx d'iode est analysé par incorporation d'125I par les cellules, selon le protocole décrit dans Weiss et al., Endocrinology. 1984, 114,1090-1098. De manière plus précise, une solution HBSS tamponnée (tampon HBSS) contenant 50 M Na125I (50Ci/mol) est ajoutée dans chaque puits (en triplicat) et les cellules sont incubées à 37 C pendant 45 min. Ensuite, la solution radioactive est enlevée et les cellules sont rincées rapidement, 3 fois, avec une solution HBSS froide. Enfin, les cellules sont perméabilisées avec de l'éthanol et le relargage de 1'125Iest mesuré à l'aide d'un compteur à scintillation liquide. 12) transfectipns.stables f2) WJ.p.ft;j9D~~tR!- Des cellules CHO (Chinese Hamster Ovary, EACC numéro 85050302) sont ensemencées dans du milieu F12(GIBCO) contenant 2 mM de glutamine et 10 % de sérum de veau f#tal et incubées à @7 C en présence de C02, jusqu'à ce qu'elles atteignent 70% de confluence. Ensuite les cellules sont transfectées par le plasmide pcDNA-hAIT, en présence du réactif FUGENER (ROCHE) puis elles sont sélectionnées en présence de G418 (500ug/ml. INVITROGEN). L'expression de la protéine hAIT par les clones résistants au G418 a été vérifiée par immunohistochimie à l'aide de l'antisérum anti-peptide hAIT. L'influx d'iode est analysé par incorporation d'125I comme décrit ci-dessus, aux exceptions suivantes : (1) les cellules sont incubées en présence d'125I, pendant une durée variable comprise entre 0 et 15min et (2) 1 mM de perchlorate est éventuellement ajouté dans le tampon HBSS contenant l'iode radioactif. L'influx d'iode est également mesuré en présence d'un contre-flux : les cellules sont lavées 2 fois avec du tampon HBSS, incubées pendant 30 min dans un tampon HBSS contenant 1 mM de Nal, puis du tampon HBSS contenant 50 M Na125I(50Ci/mol) est ajouté dans chaque puits (en triplicat) et les cellules sont incubées à 37 C pendant une durée variable comprise entre 0 et 6 min. EXEMPLE 2 : Clonage, séquençage et analyse de l'ADNc de la protéine hAIT. L'analyse de séquences, le clonage et le séquençage de l'ADNc d'hAIT ont réalisées selon les protocoles décrits à l'exemple 1. Quatre fragments d'ADNc humains possédant une forte homologie avec la séquence d'ADNc de la protéine NIS ont été identifiés dans la base de donnée d'EST du NCBI (AI261687, AI433656, AI793005 et AW195079). Parmi ces fragments, trois présentent des séquences chevauchantes (AI261687, AI433656, AI793005) correspondant à l'extrémité 5' non-traduite et à une partie d'une phase de lecture ouverte ; la protéine la plus longue (50 acides aminés), qui est dérivée du fragment AI261687, présente 46 % d'identité et 78 % de similarité avec la séquence N-terminale de la protéine hNIS (GENBANK n U66088). Le fragment AW195079 contient une phase de lecture ouverte codant pour un fragment de 117 acides aminés présentant 47 % d'identité et 83 % de similarité avec les résidus situés entre les positions 68 et 184 de la protéine hNIS. Des réactions de RT-PCR réalisées à l'aide des amorces SEQ ID NO: 3 (amorce sens dérivée des séquences chevauchantes AI261687, AI433656 et AI793005) et de l'amorce SEQ ID NO: 4 (amorce anti-sens dérivée de la séquence AW195079) et d'ADNc de rein humain permettent d'amplifier un produit de 350 bp ; ces résultats démontrent que les 4 EST proviennent du même ARNm. Les séquences des extrémités 5' et 3' de ce nouveau messager ont été déterminées par la technique RACE et un ADNc correspondant à la séquence complète de cet ARNm a été cloné et séquence. Les résultats montrent que cet ADNc est constitué par une séquence de 2509 pb (SEQ ID NO: 1), comprenant des extrémités 5' et 3' non-traduites de respectivement 364 pb et 311pb, encadrant une phase de lecture ouverte de 1830 nucléotides. Cette phase de lecture ouverte code pour une protéine de 610 acides aminés (SEQ ID NO: 2). présentant 46 % d'identité et 70 % de similarité avec la protéine hNIS et 42 %d'identité et 64 % de similarité avec la protéine hSMVT (figure 1). La structure potentielle de cette protéine dénommée hAIT pour human Apical Iodide Tram;porter, obtenue à partir du modèle de la protéine NIS revu par Levy et al.. J. Biol. Chem., 1998, 273. 22657-22663 est présentée à la figure 1. La protéine hAIT comprend 13domaines transmembranaires potentiels présentant une structure en hélice. Les hélices 1 et II possèdent chacune un résidu chargé négativement (Aspl4 et Glu77) pouvant jouer un rôle catalytique; ces résidus sont conservés à des positions équivalentes dans la protéine NIS (Dai et al., Nature, 1996, 379, 458-460). Elle comprend également 3 sites potentiels de N-glycosylation (Asn 260,481 et 485) ; ces sites sont également présents à des positions équivalentes dans la protéine NIS. Elle possède en outre des sites consensus de phosphorylation par une kinase AMPc dépendante (RRMT situé entre les positions 50 et 53) ou Ca++ dépendante [TSK (41-43). SCK (269-271). SER (377-379), SYK (576-578) et SGK (602-604) ]. EXEMPLE 3 : Localisation et organisation du gène hAIT. Le gène hAIT a été localisé dans la région chromosomomique 12q23.1. L'organisation intron-exon de ce gène montre que la séquence codante d'hAIT est interrompue par 14 introns. La séquence de chaque jonction intron-exon est présentée dans le Tableau I. L'organisation du gène hAIT est très similaire à celle rapportée pour le gène NIS (Smanik et al., Endocrinology. 1997, 138, 3555-3558) qui montre la présence de 14 introns situés à des positions équivalentes à celles du gène hAIT. EXEMPLE 4 : Analyse du niveau d'expression du gène HAIT dans les tissus humains L'expression du gène hAIT a été analysée par RT-PCR quantitative, selon le protocole décrit à l'exemple 1. Les résultats montrent que l'expression la plus élevée est détectée dans la thyroïde normale (figure 2). Dans les tissus digestifs et apparentés, l'expression d'hIA Test détectée dans les glandes sous-maxillaires et, dans une moindre mesure. dans la glande parotide et l'intestin grêle. Un signal très faible a également été détecté dans la muqueuse gastrique, alors que d'autres tissus incluant l'#sophage. le colon. le pancréas et le foie n'expriment pas le gène HAIT. Dans le rein, la glande surrénale et la prostate une expression significative de l'ARNm d'hAIT est détectée . à des niveaux 10 à 50 fois supérieurs à ceux observés dans la thyroïde. Des transcrits hAIT sont aussi détectés dans le poumon, la peau et le testicule, à un niveau 100 à 500 fois inférieur à celui observé dans la thyroïde, aucune expression du gène hAIT n'a été détectée dans le muscle, le c#ur, l'ovaire, le sein et l'endomètre. EXEMPLE 5 : Localisation de la protéine hAIT dans la thyroïde et la glande salivaire sous-maxillaire. La localisation de la protéine hAIT dans la thyroïde et dans la glande salivaire sous-maxillaire a été analysée par immunohistochimie, selon le protocole décrit à l'exemple 1. Les résultats présentés à la figure 3 montrent qu la protéine hAIT est localisée au niveau de la membrane apicale des thyrocytes (figure 3 A). Un patron d'expression hétérogène est observé avec un immunomarquage plus important de certains follicules et de certaines régions d'un même follicule, la majorité des thyrocytes sont marqués mais une absence de marquage est cependant observée dans certains thyrocytes. Dans la glande salivaire, seules les cellules canaliculaires sont marquées par l'antisérum (figure 3B). le signal est distribué de façon diffuse dans l'ensemble du cytoplasme. EXEMPLE 6 : de la fonction de la protéine hAIT dans des cellules de mammifère Le flux d'iode dans les cellules exprimant la protéine hAIT a été analysée par transfection transitoire de cellules HEK-293-T ou de cellules COS-7 ou bien par transfection stable de cellules CHO, selon le protocole décrit à l'exemple 1. L'analyse, par immunohistochimie, de l'expression des protéines hAIT et mNIS dans les cellules transfectées de façon transitoire, à l'aide de respectivement le sérum antipeptide hAIT et d'un anticorps dirigé contre la protéine NIS de rat (Boland et al., Cancer Res., 2000,60, 3484-3492) . montre qu'une expression maximale est observée48 h et 72 h après la transfection, respectivement pour mNIS et hAIT. Ces résultats indiquent une différence dans la cinétique de synthèse ou le transport cellulaire, entre les protéines NIS et AIT. Les résultats d'incorporation d'iode raJioactif dans les cellules transfectées de façon transitoire, présentés à la figure 4, montrent que, par comparaison avec les cellules exprimant la protéine mNIS seule qui accumulent de l'iode, on observe une diminution de cet équilibre d'accumulation de l'iode dans les cellules co-exprimant les protéines la protéine hAIT et mNIS. Ces résultats indiquent que la protéine hAIT catalyse la diffusion de l'iode au travers de la membrane cellulaire. Du fait de la localisation de la protéine hAIT dans la membrane apicale des thyrocytes (exemple 5). ces résultats indiquent que la protéine hAIT catalyse la diffusion facilitée de l'iode au travers de la membrane apicale des thyrocytes et le transfert de l'iode des thyrocytes vers la colloïde. En revanche, la protéine NIS qui est exprimée au niveau de la membrane basale des thyrocytes, en contact avec la circulation sanguine, catalyse le transport de l'iode au travers de la membrane basale des thyrocytes et l'accumulation de l'iode dans les thyrocytes. Les résultats d'incorporation d'iode dans les cellules transfectées de façon stable présentés à la figure 5, montrent une augmentation significative de l'influx initial d'iode (figure 5A), par rapport aux cellules non-transfectées. Cette augmentation est inhibée par un inhibiteur compétitif du transport de l'iode par la protéine NIS (perchlorate). Cette augmentation de l'influx initial d'iode est également observée en présence d'un contre-flux (figure 5B). ce qui indique que le transfert d'iode est effectivement médié par un transporteur. Ces résultats indiquent que la protéine hAIT catalyse le transport d'iode au travers de la membrane cellulaire mais pas son accumulation intracellulaire. En conséquence, la protéine AIT contribue au transfert facilité de l'iode dans les tissus dans lesquels il est exprimé, notamment la thyroïde, les glandes salivaires, le rein, l'intestin grêle et l'estomac ; dans la thyroïde, elle catalyse le transport de l'iode dans la colloïde; au travers de la membrane apicale des thyrocytes. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en #uvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1 ) Protéine isolée et purifiée, caractérisée en ce qu'elle présente une séquence sélectionnée dans le groupe constitué par : - la séquence SEQ ID NO:2, et - les séquences présentant, sur leur totalité, au moins 70 % d'identité ou au moins 85 % de similarité, de préférence au moins 80 % d'identité ou au moins 90 % de similarité, et de manière préférée au moins 95 % d'identité ou au moins 99 % de similarité avec la séquence SEQ ID NO: 2, à l'exclusion de la séquence présentant le numéro d'accession AAH17691 dans la base de données du NCBI. 2 ) Protéine selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est une protéine de mammifère. 3 ) Peptide, caractérisé en ce qu'il est constitué par un fragment d'au moins 7 acides aminés de la protéine selon la revendication 1 ou la revendication 2. 4 ) Peptide selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il est constitué par un fragment C-terminal de ladite protéine. 5 ) Molécule d'acide nucléique isolée, caractérisée en ce qu'elle présente une séquence sélectionnée dans le groupe constitué par : - les séquences codant pour une protéine selon la revendication 1 ou la revendication 2, et - les séquences complémentaires des séquences précédentes, sens ou anti-sens. 6 ) Molécule d'acide nucléique isolée selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle est sélectionnée dans le groupe constitué par : a) la séquence SEQ ID NO: 1, et b) la séquence située entre les positions 2316362 et 2369604 de la séquence présentant le numéro d'accession NT009743. 8 dans la base de données du NCBI. 7 ) Sonde ou amorce, caractérisée en ce qu'elle est constituée par un fragment d'au moins 8 pb de la molécules d'acide nucléique selon la revendication 5 ou la revendication 6, à l'exclusion des séquences présentant les numéros d'accession AI261687, AI433656, AI793005 et AW195079 dans la base de données GENBANK et le numéro d'accession BC017691 dans la base de données du NCBI. - 8 ) Vecteur recombinant, caractérisé en ce qu'il comprend un insert sélectionné dans le groupe constitué par les molécules d'acides nucléiques selon la revendication 5 ou la revendication 6 et leurs fragments tels que définis à la revendication 7. 9 ) Cellules, caractérisées en ce qu'elles sont transformées par un vecteur recombinant selon la revendication 8. 10 ) Anticorps, caractérisés en ce qu'ils sont dirigés contre la protéine selon la revendication 1 ou la revendication 2 ou le peptide selon la revendication 3 ou la revendication 4. Il') Médicament destiné au traitement des maladies impliquant un dysfonctionnement du transport apical de l'iode, caractérisé en ce qu'il comprend une molécule sélectionnée dans le groupe constitué par : protéine selon la revendication 1 ou la revendication 2, un peptide selon la revendication 3 ou la revendication 4, une molécule d'acide nucléique selon la revendication 5 ou la revendication 6, un vecteur recombinant selon la revendication 8 et un anticorps selon la revendication 10. 12 ) Réactif de détection d'une maladie impliquant un dysfonctionnement du transport apical de l'iode, caractérisé en ce qu'il est sélectionné dans le groupe constitué par : une molécule d'acide nucléique selon la revendication 5 ou la revendication 6, une sonde ou une amorce selon la revendication 7 et un anticorps selon la revendication 10. 13 ) Mammifère transgénique non-humain, caractérisé en ce qu'il contient des cellules transformées par au moins une molécule d'acide nucléique selon la revendication 5 ou la revendication 6. 14 ) Méthode de criblage d'une substance capable de moduler le transport apical de l'iode dans des cellules, caractérisée en ce qu'elle comprend : - la préparation de cellules exprimant une protéine telle que définie à la revendication 1 ou à la revendication 2, - la mise en contact desdites cellules avec une substance à tester, - la mesure par tout moyen approprié de l'effet de ladite substance sur l'activité de ladite protéine, et - la sélection des substances capables de moduler ladite activité. 15 ) Méthode de détection d'une mutation dans le gène AIT, caractérisée en ce qu'elle comprend : - la préparation d'un échantillon d'acides nucléiques, - la détection de la présence, dans ledit échantillon d'acides nucléiques, d'une mutation dans la séquence codant pour une protéine selon la revendication 1 ou à la revendication 2, à l'aide d'au moins une sonde ou une amorce selon la revendication 7. 16 ) Trousse de détection et ou de criblage, caractérisée en ce qu'elle inclut au moins un réactif selon la revendication 12.