Brevet FR2834521A1 — publié le 20030711

La présente invention a trait au domaine de la détermination d'une espèce animale appelée ci-après d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient, lui-même obtenu à partir d'au moins ladite espèce. Les produits à partir desquels s'exerce la détermination selon la présente invention sont par exemple des aliments ou denrées alimentaires à destination de l'homme ou des animaux, des produits cosmétiques, et, de manière générale des produits susceptibles de contenir des ingrédients d'origine animale, ou au contraire des produits dans lesquels ces extraits sont interdits. Par exemple, l'identification des espèces animales présentes dans les aliments peut être nécessaire dans de nombreux domaines d'activités. Une première raison est de lutter contre les fraudes alimentaires où sont substituées certaines espèces animales par des espèces moins chères, comme le remplacement de lièvre par du lapin. Une seconde raison est de santé publique, comme notamment lors de l'épidémie d'encéphalite spongiforme bovine ou ESB, maladie due à l'utilisation de farines animales carnées d'origine bovine pour l'alimentation des bovins. Une troisième raison est d'ordre religieux, afin de vérifier par exemple l'absence de porc dans les aliments. Une quatrième raison est d'ordre législatif, lors notamment de la vérification de l'absence d'espèces protégées dans les aliments. Trois principales approches d'identification sont actuellement décrites dans la littérature ; ces méthodes sont basées sur une analyse tissulaire ou microscopique, sur une analyse protéique, et/ou sur une analyse génétique. L'analyse tissulaire consiste ainsi à déterminer la présence dans des échantillons de farines destinées à l'alimentation animale, de fragments d'os. Cette technique, décrite notamment dans l'article de Michard, Revue de l'alimentation animale, vol. 508, pp 43-48,1997, bien que sensible, est fastidieuse et repose sur l'interprétation d'un expert. Elle est donc difficilement comparable d'un laboratoire à un autre. De plus, par nature, elle ne peut détecter l'adjonction de tissus mous, tels que abats, sérum, tissus sanguins, gélatine. Parmi les analyses protéiques utilisées, on distingue principalement dans la littérature trois groupes de méthodes permettant l'identification d'espèces animales présentes dans un échantillon donné. Le premier groupe de méthodes comprend des techniques d'électrophorèse de protéines, qui consiste à détecter les protéines cibles solubles par une coloration enzymatique spécifique. Le diagnostic est obtenu après électrophorèse sur gel polyacrylamide par exemple. Toutefois, cette technique ne peut être réalisée qu'avec des tissus frais ou congelés, non transformés, car une période de cuisson de l'aliment est un exemple de transformation susceptibles d'altérer les protéines. Cette technique ne peut donc pas être appliquée à la détection d'espèces animales présentes dans les farines végétales, qui subissent lors de leur fabrication des phases de cuisson. Le deuxième groupe de méthodes est basé sur des techniques immunologiques, par l'utilisation d'anticorps dirigés contre les protéines cibles solubles. La technique Ouchterlony , ou immunodiffusion double, méthode utilisée pour différencier des antigènes dans un mélange, peut être utilisée. Mais cette technique présente l'inconvénient majeur d'impliquer des réactions croisées avec les épitopes d'autres espèces. L'utilisation de techniques ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) permet une meilleure discrimination entre les espèces, et ces techniques peuvent être appliquées à de la viande cuite lorsque des anticorps dirigés contre des épitopes thermorésistants sont utilisés. Toutefois, des problèmes de spécificité sont encore observés. A titre indicatif, des anticorps polyclonaux dirigés contre les épitopes thermorésistants de poulet ne sont pas suffisamment spécifiques pour déterminer s'il s'agit de viande de poulet ou de viande de dinde. Le troisième groupe de méthodes comprend les techniques chromatographiques (HPLC) utilisées pour caractériser des protéines solubles de muscles. Toutefois, ces techniques restent lourdes financièrement et techniquement, et ne peuvent être appliquées qu'a des tissus frais ou récemment congelés. Les inconvénients de ces trois méthodes sont principalement dus à leur dépendance envers la caractérisation de protéines qui sont thermosensibles, se dénaturent lors d'une période de cuisson des aliments, perdent leur activité biologique après la mort de l'animal, et dont la présence est souvent fonction du type de cellules qui est examiné. Il est ainsi préférable d'analyser directement l'ADN, plutôt que les protéines de l'échantillon, pour identifier la ou les espèces animales d'origine présentes dans un échantillon donné, l'ADN étant identique dans tous les types cellulaires d'un même animal et stable en comparaison avec les protéines. Une troisième approche consiste donc à analyser l'ADN présent dans l'échantillon. Depuis peu de temps, on trouve ainsi dans la littérature des méthodes basées notamment sur l'utilisation d'enzymes de restriction ou de marqueurs génétiques, ces méthodes présentant l'avantage de pouvoir être appliquées à des produits transformés, en particulier après traitement thermique. La détermination nucléique peut faire appel à des enzymes de restriction, ou technique dite RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism, voir notamment Meyer et al, Journal of AOAC International, vol 78 n 6, pp 1542-1551,1995). Les enzymes de restriction coupent l'ADN, préalablement extrait de l'échantillon à analyser, à des endroits précis de la macromolécule. Il suffit alors de comparer, par simple électrophorèse, les fragments obtenus avec ceux d'échantillons témoins représentatifs de l'espèce à identifier. Toutefois, l'analyse des résultats obtenus par cette technique est très délicate, en particulier lorsque plusieurs espèces animales sont présentes dans l'échantillon. La détermination nucléique peut aussi consister à séquencer un marqueur ubiquitaire, tel que le cytochrome B de l'ADN mitochondrial. L'ADN mitochondrial est une cible connue pour ce genre d'analyse puisque chaque mitochondrie contient de une à dix molécules d'ADN mitochondrial, et chaque cellule renferme de quelques dizaines à quelques milliers de mitochondries, ce qui permet de travailler sur une très faible quantité d'échantillon. Ainsi, Bartlett & Davidson (Biotechniques, vol. 12, n 3, 1992) décrivent une méthode appelée FINS (Forensically Informative Nucleotide Sequencing). Cette méthode consiste à i) isoler l'ADN présent dans un échantillon biologique, ii) amplifier cet ADN par PCR par l'utilisation d'amorces spécifiques du gène cytochrome B mitochondrial, les amorces étant choisies dans la partie du gène hautement conservée au cours de l'évolution et iii) séquencer le segment d'ADN amplifié. La séquence est ensuite utilisée pour une analyse phylogénétique à l'aide d'une base de données, permettant l'identification de l'espèce animale présente initialement dans l'échantillon. Si cette méthode présente l'avantage d'être rapide et utilisable sur tout type d'aliments (frais, congelés, transformés...), elle présente toutefois l'inconvénient majeur de ne pas permettre l'analyse de mélanges d'espèces, à partir de mélanges de séquences amplifiées issues du même marqueur polymorphe ubiquitaire, et reste ainsi réservée à des matières premières homogènes. L'analyse peut également consister à amplifier un marqueur spécifique d'une espèce donnée. Ainsi, Lahiff et al (Molecular and Cellular Probes, vol.15, pp27-35, 2001) décrivent l'identification d'espèce ovine, bovine ou aviaire présente dans un échantillon par l'utilisation par PCR d'amorces particulières, spécifiques à chaque espèce. Si cette méthode permet l'identification spécifique et rapide de telle ou telle espèce, elle ne peut être appliquée simultanément à la détection de plusieurs espèces. Des PCR successives sont alors nécessaires si on souhaite détecter plusieurs espèces. On retrouve ainsi dans l'art antérieur la détection de six espèces animales par l'utilisation d'une PCR multiplex (Matsuda et al, 1999 Meat Sciences, (1999), 145-148). Toutefois, cette technique reste délicate et difficile à appliquer et implique pratiquement une connaissance préalable des espèces recherchées. Cette technique n'est cependant pas applicable en aveugle, c'est à dire sans connaissance préalable des espèces susceptibles d'être présentes dans l'échantillon. Elle ne permet pas d'avoir des résultats quantitatifs en raisons des difficultés dues à l'amplification multiplex et des possibilités de mésappariements. De plus, cette technique oblige à disposer d'un grand nombre d'amorces spécifiques si l'on veut tester un grand nombre d'espèces, ce qui est peu réalisable en pratique en raison de problèmes de sensibilité et de spécificité. Enfin, si une espèce n'est pas représentée dans le jeu d'amorces mais néanmoins présente dans l'échantillon à analyser, le résultat sera faussé. Il existe donc un besoin important pour une technique qui, tout en restant générique, puisse détecter une ou plusieurs espèces, même présentes en grand nombre dans le même échantillon à analyser ou en très faible quantité, et sans connaissance préalable des espèces présentes. En effet, si dans un produit, l'espèce non désirée doit être présente dans des quantités supérieures à 5 % par rapport à l'espèce normalement présente pour qu'il y ait effectivement fraude, ce qui allège les performances exigées pour le test de diagnostic moléculaire, il en est autrement dans le cas de produits dans lesquels la présence de produits d'origine animale est interdite. Par exemple dans le cas des farines employées en France pour l'alimentation animale depuis le 1er janvier 2001, les traces de teneur en produit d'origine animale sont recherchées, et la contrainte technique est importante en terme de sensibilité de la méthode car la majeure partie du matériel est d'origine végétale et l'adjonction de matériel animal varie entre 0,1 et 5% poids/poids. Il existe donc un besoin de disposer d'un outil de détermination, permettant l'identification ou la détection qualitative et/ou quantitative d'espèces animales, en aveugle, c'est à dire sans a priori sur l'identité de l'espèce recherchée, susceptible d'être mis en oeuvre de manière simple, tout en restant spécifique, fiable et fidèle, et susceptible d'être mis en #uvre dans un milieu pouvant contenir des ingrédients obtenus à partir de plusieurs espèces animales. Le problème à résoudre présente une complexité importante. La détermination doit être possible en aveugle, c'est à dire que l'échantillon est susceptible de contenir ou de ne pas contenir des ingrédients obtenus à partir d'une ou de plusieurs espèces animales et ces espèces d'origine sont inconnues. Si l'échantillon contient des ingrédients obtenus à partir d'espèces animales, les espèces d'origine doivent être déterminées et sont susceptibles d'être voisines, et la détermination doit être possible en ne faisant qu'une seule analyse, avec un seul réactif et une seule étape d'amplification, sans étape préalable de prédétermination par exemple du groupe d'espèces ou mise en #uvre de batteries de tests permettant par exemple de classer les réactifs par genres ou espèces pour éviter par exemple les réactions croisées. A cet effet, la Demanderesse a découvert un ensemble de séquences constitué par le groupe comprenant les séquences SEQ ID Nos 1 à 232, leurs séquences respectivement complémentaires, et toutes séquences homologues, comprenant au moins 5 monomères contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences et présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence, qui permettent par la mise en #uvre de méthodes d'analyse dites de biologie moléculaire, la détermination d'au moins une espèce animale d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins ladite espèce. Avant d'exposer l'invention, différents termes utilisés dans la description et les revendications sont définis ci-après. - Une "détermination" s'entend comme étant l'identification ou la détection ou analyse quantitative et/ou qualitative d'une espèce animale. - Une "espèce animale" s'entend comme étant la catégorie la plus simple utilisée dans le classement des espèces vivantes ou taxonomie. Les espèces vivantes sont classées en catégories appelées taxons, les plus importants taxons sont le Règne (animal ou végétal), l'Embranchement, la Classe, l'Ordre, la Famille, le Genre, et l'Espèce. Les Oiseaux, Poissons et Mammifères sont des classes d'animaux vertébrés. - Par "espèce animale d'origine" on entend l'espèce animale, de l'animal dont les tissus, quels qu'ils soient, ont été utilisé comme matière première pour la préparation du ou des ingrédients de l'échantillon. du produit soumis à la détermination selon la présente invention. - Une "méthode de biologie moléculaire", est une méthode basée sur l'amplification enzymatique de cibles nucléiques (ADN et/ou ARN) in vitro et l'utilisation de sondes oligonucléotidiques. - Un "échantillon" est toute partie obtenue directement ou indirectement à partir d'un produit, d'un matériau, d'une matière, de départ, lui-même susceptible de contenir au moins un ingrédient obtenu à partir d'au moins une espèce animale dite d'origine. En conséquence de cette définition, l'échantillon à déterminer conformément à la présente invention est susceptible de contenir ledit ingrédient d'origine animale, à partir duquel on identifie ou détecte la ou les espèces animales entrées dans la composition ou constitution du produit, matériau, ou matière de départ. Au sens de la présente invention, le produit de départ peut être un matériel biologique, un aliment ou denrée alimentaire, par exemple à base de viande ou poisson, un produit cosmétique, etc.. - Par "étape de lyse", on entend une étape capable de libérer les acides nucléiques contenus dans les enveloppes protéiques et/ou lipidiques des microorganismes (comme des débris cellulaires qui perturbent les réactions ultérieures). A titre d'exemple, on peut utiliser les méthodes de lyse telles que décrite dans les demandes de brevet de la Demanderesse : WO-A-00/05338 sur la lyse mixte magnétique et mécanique, WO-A-99/53304 sur la lyse électrique, et WO-A-99/15321 sur la lyse mécanique. L'homme du métier pourra utiliser d'autres méthodes de lyse bien connues, telles que les chocs thermiques ou osmotiques ou les lyses chimiques par des agents chaotropiques tels que les sels de guanidium (USA-5,234,809). - Par "purification", on entend la séparation entre les acides nucléiques et les autres constituants cellulaires relargués dans l'étape de lyse. Cette étape permet généralement de concentrer les acides nucléiques. A titre d'exemple, on peut utiliser des particules magnétiques éventuellement revêtues d'oligonucléotides, par adsorption ou covalence (voir à ce sujet les brevets US-A-4,672,040 et US-A-5,750,338), et ainsi purifier les acides nucléiques qui se sont fixés sur ces particules magnétiques, par une étape de lavage. Cette étape de purification des acides nucléiques est particulièrement intéressante si l'on souhaite amplifier ultérieurement lesdits acides nucléiques. Un mode de réalisation particulièrement intéressant de ces particules magnétiques est décrit dans les demandes de brevet déposées par la Demanderesse sous les références suivantes : WO-A-97/45202 et WO-A-99/35500. Dans la dernière de ces demandes de brevet, il s'agit de particules magnétiques thermosensibles ayant chacune un noyau magnétique recouvert d'une couche intermédiaire. La couche intermédiaire est elle-même recouverte par une couche externe à base d'un polymère susceptible d'interagir avec au moins une molécule biologique, par exemple acide nucléique ; le polymère externe est thermosensible et présente une température critique inférieure de solubilité (LCST) prédéterminée comprise entre 10 et 100 C et de préférence entre 20 et 60 C. Cette couche externe est synthétisée à partir de monomères cationiques, qui génèrent un polymère ayant la capacité de lier les acides nucléiques. Cette couche intermédiaire isole les charges magnétiques du noyau, afin d'éviter les problèmes d'inhibition des techniques d'amplification de ces acides nucléiques. Un autre exemple intéressant de méthode de purification des acides nucléiques est l'utilisation de silice soit sous forme de colonne (nécessaires Qiagen par exemple), soit sous forme de particules inertes [Boom R. et al., J. Clin. Microbiol., 1990, n 28(3), p. 495-503] ou magnétiques (Merck: MagPrep Silica, Promega : MagneSilTM Paramagnetic particles). D'autres méthodes très répandues reposent sur des résines échangeuses d'ions en colonne (nécessaires Qiagen par exemple) ou en format particulaire paramagnétique (Whatman: DEAE-Magarose) [Levison PR et al., J. Chromatography, 1998, p. 337-344]. Une autre méthode très pertinente mais non exclusive pour l'invention est celle de l'adsorption sur support d'oxyde métallique (société Xtrana : matriceXtra-BindTM). - Une "séquence", ou un "fragment nucléotidique", ou un oligonucléotide, ou un polynucléotide, est un enchaînement de motifs nucléotidiques assemblés entre eux par des liaisons ester phosphorique, caractérisé par la séquence informationnelle des acides nucléiques naturels, susceptibles de s'hybrider à un fragment nucléotidique, l'enchaînement pouvant contenir des monomères de structures différentes et être obtenu à partir d'une molécule d'acide nucléique naturelle et/ou par recombinaison génétique et/ou par synthèse chimique. - Un "motif" est dérivé d'un monomère qui peut être un nucléotide naturel d'acide nucléique dont les éléments constitutifs sont un sucre, un groupement phosphate et une base azotée ; dans l'ADN le sucre est le désoxy-2-ribose, dans l'ARN le sucre est le ribose ; selon qu'il s'agisse de l'ADN ou l'ARN, la base azotée est choisie parmi l'adénine, la guanine, l'uracile, la cytosine, la thymine ; ou bien le monomère est un nucléotide modifié dans l'un au moins des trois éléments constitutifs ; à titre d'exemple, la modification peut intervenir soit au niveau des bases, avec des bases modifiées telles que l'inosine, la méthyl-5désoxycytidine, la désoxyuridine, la diméthylamino-5désoxyuridine, la diamino-2,6-purine, la bromo-5désoxyuridine ou toute autre base modifiée capable d'hybridation, soit au niveau du sucre, par exemple le remplacement d'au moins un désoxyribose par un polyamide (P.E. Nielsen et al, Science, 254, 1497-1500 (1991), soit encore au niveau du groupement phosphate, par exemple son remplacement par des esters notamment choisis parmi les diphosphates, alkyl- et aryl-phosphonates et phosphorothioates, - Par "séquence informationnelle", on entend toute suite ordonnée de motifs de type nucléotidique, dont la nature chimique et l'ordre dans un sens de référence constituent une information de même qualité que celle des acides nucléiques naturels. - Par "hybridation", on entend le processus au cours duquel, dans des conditions appropriées, deux fragments nucléotidiques, ayant des séquences suffisamment complémentaires sont susceptibles de former un double brin avec des liaisons hydrogène stables et spécifiques. Un fragment nucléotidique "capable de s'hybrider" avec un polynucléotide est un fragment pouvant s'hybrider avec ledit polynucléotide dans des conditions d'hybridation, qui peuvent être déterminées dans chaque cas de façon connue. Les conditions d'hybridation sont déterminées par la stringence, c'est-à-dire la rigueur des conditions opératoires. L'hybridation est d'autant plus spécifique qu'elle est effectuée à plus forte stringence. La stringence est définie notamment en fonction de la composition en bases d'un duplex sonde/cible, ainsi que par le degré de mésappariement entre deux acides nucléiques. La "stringence" peut également être fonction des paramètres de la réaction, tels que la concentration et le type d'espèces ioniques présentes dans la solution d'hybridation, la nature et la concentration d'agents dénaturants et/ou la température d'hybridation. La stringence des conditions dans lesquelles une réaction d'hybridation doit être réalisée dépendra principalement des sondes cibles utilisées. Toutes ces données sont bien connues et les conditions appropriées peuvent être déterminées par l'homme du métier. En général, selon la longueur des sondes cibles utilisées, la température pour la réaction d'hybridation est comprise entre environ 20 et 70 C, en particulier entre 35 et 65 C dans une solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M. - Une "sonde" comprend un fragment nucléotidique comprenant de 5 à 100 monomères, notamment de 6 à 35 monomères, possédant une spécificité d'hybridation dans des conditions déterminées pour former un complexe d'hybridation avec un fragment nucléotidique ayant, dans le cas présent, une séquence nucléotidique comprise par exemple dans un ARN ribosomique, l'ADN obtenu par transcription inverse dudit ARN ribosomique et l'ADN (appelé ici ADN ribosomique ou ADNr) dont ledit ARN ribosomique est le produit de transcription ; une sonde peut être de capture ou de détection. - Une "sonde de capture" est immobilisée ou immobilisable sur un support solide par tout moyen approprié, c'est-à-dire directement ou indirectement, par exemple par covalence ou adsorption. - Une "sonde de détection" peut être marquée au moyen d'un marqueur choisi parmi les isotopes radioactifs, des enzymes (notamment une peroxydase, une phosphatase alcaline, ou une enzyme susceptible d'hydrolyser un substrat chromogène, fluorigène ou luminescent, des composés chimiques chromophores, des composés chromogènes, fluorigènes ou luminescents, des analogues de bases nucléotidiques, et des ligands tels que la biotine. - Une "amorce" comprend un fragment nucléotidique comprenant de 5 à 100 motifs nucléotidiques et possédant une spécificité d'hybridation dans des conditions déterminées pour l'initiation d'une polymérisation enzymatique, par exemple dans une technique d'amplification, dans un procédé de séquençage, dans une méthode de transcription inverse, etc. - "L'homologie" caractérise le degré d'identité de deux fragments nucléotidiques comparés, dont les critères retenus pour la présente invention sont définis ci-après. Les sondes et amorces selon l'invention sont choisies parmi : (a) les séquences identifiées dans le listage de séquences annexé à la description, (b) les séquences complémentaires à chacune des séquences identifiées dans le listage de séquences annexé à la description, la complémentarité s'entendant de toute séquence susceptible de s'hybrider à une température comprise entre 20 et 70 C et préférentiellement entre 35 et 65 C en solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1M et préférentiellement 0,8 à 1 M, avec une quelconque des séquences identifiées dans le listage de séquences annexé à la description, (c) les séquences homologues à chacune des séquences identifiées dans le listage de séquences annexé à la description, et des séquences complémentaires à chacune des séquences identifiées dans le listage de séquences annexé à la description, respectivement, l'homologie s'entendant de toute séquence, par exemple fragment comprenant une suite d'au moins 5 nucléotides contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences, et présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence ; à titre d'exemple, un fragment (c) comporte 10 nucléotides parmi lesquels 5 nucléotides contigus appartiennent à une séquence (a) et au moins 2 nucléotides des 5 nucléotides restants sont identiques respectivement aux deux nucléotides correspondants dans la séquence de référence, après alignement. - Par "séquence d'identification", on désigne toute séquence ou tout fragment tel que défini ci-dessus, pouvant servir de sonde de détection et/ou de capture. - Par "détection" on entend soit une détection directe par une méthode physique, soit une méthode de détection à l'aide d'un marqueur. De nombreuses méthodes de détection existent pour la détection des acides nucléiques. [Voir par exemple Kricka et al., Clinical Chemistry, 1999, n 45 (4), p.453-458 ou Keller G.H. et al., DNA Probes, 2nd Ed., Stockton Press, 1993, sections 5 et 6, p.173-249]. Par "marqueur", on entend un traceur capable d'engendrer un signal. Une liste non limitative de ces traceurs comprend les enzymes qui produisent un signal détectable par exemple par colorimétrie, fluorescence ou luminescence, comme la peroxydase de raifort, la phosphatase alcaline, la bêtagalactosidase, la glucose-6-phosphate déshydrogénase ; les chromophores comme les composés fluorescents, luminescents ou colorants ; les groupements à densité électronique détectables par microscopie électronique ou par leurs propriétés électriques comme la conductivité, par les méthodes d'ampérométrie ou de voltamétrie, ou par des mesures d'impédance ; les groupements détectables par des méthodes optiques comme la diffraction, la résonance plasmon de surface, la variation d'angle de contact ou par des méthodes physiques comme la spectroscopie de force atomique, l'effet tunnel, etc. ; les molécules radioactives comme 32P, 35S ou 1251. Ainsi, le polynucléotide peut être marqué pendant l'étape d'amplification enzymatique, par exemple en utilisant un nucléotide triphosphate marqué pour la réaction d'amplification. Le nucléotide marqué sera un désoxyribonucléotide dans les systèmes d'amplification générant un ADN, comme la PCR, ou un ribonucléotide dans les techniques d'amplification générant un ARN, comme les techniques TMA ou NASBA. Le polynucléotide peut aussi être marqué après l'étape d'amplification, par exemple en hybridant une sonde marquée selon la technique d'hybridation sandwich décrite dans le document WO-A- 91/19812. Un autre mode particulier préférentiel de marquage d'acides nucléiques est décrit dans la demande FR-A-2 780 059 de la Demanderesse. Un autre mode préférentiel de détection utilise l'activité exonucléase 5'-3' d'une polymérase, tel que décrit par Holland P.M., PNAS (1991) p 7276-7280. Des systèmes d'amplification du signal peuvent être utilisés comme décrit dans le document WO-A-95/08000 et, dans ce cas, la réaction préliminaire d'amplification enzymatique peut ne pas être nécessaire. - Par "amplification enzymatique", on entend une processus générant de multiples copies d'un fragment nucléotidique particulier à l'aide d'amorces spécifiques par l'action d'au moins une enzyme. Ainsi, pour l'amplification des acides nucléiques, il existe, entre autres, les techniques suivantes : - PCR (Polymerase Chain Reaction), telle que décrite dans les brevets US-A-4,683,195, US-A-4,683,202 et US-A-4,800,159, - LCR (Ligase Chain Reaction), exposée par exemple dans la demande de brevet EP-A-0 201 184, - RCR (Repair Chain Reaction), décrite dans la demande de brevet WO-A-90/01069, - 3SR (Self Sustained Sequence Replication) avec la demande de brevet WO-A-90/06995, - NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification) avec la demande de brevet WO-A-91 /02818, et - TMA (Transcription Mediated Amplification) avec le brevet US-A-5,399,491. On parle alors d"'amplicons" pour désigner les polynucléotides générés par une technique d'amplification enzymatique. - Le terme "support solide" tel qu'utilisé ici inclut tous les matériaux sur lesquels peut être immobilisé un acide nucléique. Des matériaux de synthèse ou des matériaux naturels, éventuellement modifiés chimiquement, peuvent être utilisés comme support solide, notamment les polysaccharides tels que les matériaux à base de cellulose, par exemple du papier, des dérivés de cellulose tels que l'acétate de cellulose et la nitrocellulose ou le dextrane, des polymères, des copolymères, notamment à base de monomères du type styrène, des fibres naturelles telles que le coton, et des fibres synthétiques telles que le nylon ; des matériaux minéraux tels que la silice, le quartz, des verres, des céramiques ; des latex ; des particules magnétiques ; des dérivés métalliques, des gels etc. Le support solide peut être sous la forme d'une plaque de microtitration, d'une membrane comme décrit dans la demande WO-A-94/12670, d'une particule ou d'une biopuce. - Par "biopuce", on entend un support solide de dimension réduite où sont fixés une multitude de sondes de capture à des positions prédéterminées. A titre d'illustration, des exemples de ces biopuces sont donnés dans les publications de [G. Ramsay, Nature Biotechnology, 1998, n 16, p. 40-44 ; F. Ginot, Human Mutation, 1997, n 10, p.1-10 ; J. Cheng et al, Molecular diagnosis, 1996, n 1(3), p.183-200 ; T. Livache et al, Nucleic Acids Research, 1994, n 22(15), p. 2915-2921 ; J. Cheng et al, Nature Biotechnology, 1998, n 16, p. 541-546] ou dans les brevets US-A- 4,981,783, US-A-5,700,637, US-A-5,445,934, US-A-5,744,305 et US-A- 5,807,522. La caractéristique principale du support solide doit être de conserver les caractéristiques d'hybridation des sondes de capture sur les acides nucléiques tout en générant un bruit de fond minimum pour la méthode de détection. Un avantage des biopuces est qu'elles simplifient l'utilisation de nombreuses sondes de capture permettant ainsi la détection multiple des espèces à détecter. L'invention décrite ci-après permet de résoudre les problèmes posés par les méthodes précédemment décrites, à la fois en terme de sensibilité, spécificité, capacité de multidétection et identification, tout en étant rapide et facile à mettre en #uvre. L'invention concerne un procédé de détermination d'une espèce animale d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins ladite espèce, caractérisé en ce que : a) on dispose d'une fraction nucléique obtenue à partir dudit échantillon, b) on dispose d'au moins un réactif spécifique à l'espèce animale, consistant en au moins une séquence, choisie dans les groupes constitués par - les séquences de référence SEQ ID Nos 1 à 232, - les séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 1 à 232 respectivement, la complémentarité s'entendant de toute séquence susceptible de s'hybrider à une température comprise entre 20 et 70 C et préférentiellement entre 35 et 65 C en solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M et préférentiellement 0,8 à 1 M avec l'une quelconque des séquences SEQ ID Nos 1 à 232, ou - les séquences homologues à chacune des séquences SEQ ID Nos 1 à 232 et des séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 1 à 232 respectivement, l'homologie s'entendant de toute séquence, par exemple fragment comprenant une suite d'au moins 5 nucléotides contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences, et présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence. c) on met en présence la fraction nucléique et ledit réactif, et d) par détection on détermine tout signal ou information résultant de la réaction spécifique entre ledit réactif et la fraction nucléique, caractérisant la présence dans ledit échantillon de ladite espèce animale d'origine. Elle concerne en outre un procédé tel que décrit précédemment, caractérisé en ce qu'on dispose d'un ensemble comprenant une multiplicité desdits réactifs spécifiques à une même espèce d'origine et/ou à des espèces animales d'origine respectivement différentes ; et on détermine une multiplicité de signaux ou informations caractérisant la présence dans ledit échantillon d'une même espèce animale d'origine ou de plusieurs espèces animales d'origine respectivement différentes. Elle concerne également toute séquence nucléotidique caractérisée en ce qu'elle est choisie dans les groupes constitués par : a) les séquences de référence SEQ ID Nos 1 à 232, b) les séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 1 à 232 respectivement, la complémentarité s'entendant de toute séquence susceptible de s'hybrider une température comprise entre 20 et 70 C et préférentiellement entre 35 et 65 C en solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M et préférentiellement 0,8 à 1 M avec l'une quelconque des séquences SEQ ID Nos 1 à 232, ou c) les séquences homologues à chacune des séquences SEQ ID Nos 1 à 232 et des séquences selon b) respectivement l'homologie s'entendant de toute séquence, par exemple fragment comprenant une suite d'au moins 5 nucléotides contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences, et présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence. Elle concerne également l'utilisation d'une séquence précédemment définie, pour la détermination d'au moins une espèce animale d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins ladite espèce animale. L'invention peut en outre être une sonde pour la détermination d'au moins une espèce animale d'origine, comprenant au moins une séquence nucléotidique d'identification précédemment définie. Elle concerne également une amorce pour l'amplification spécifique d'un acide nucléique d'une espèce animale d'origine, comprenant au moins une séquence nucléotidique d'identification précédemment définie. Un autre mode de réalisation de l'invention est un réactif pour la détermination d'au moins une espèce animale d'origine, comprenant un support solide, à l'état divisé ou non, sur lequel est fixée une séquence nucléotidique précédemment définie. Selon l'invention les séquences nucléotidiques ou leurs fragments peuvent être fixés sur un support solide et peuvent constituer une biopuce qui permet la détermination de la multiplicité de signaux ou informations. Le procédé selon l'invention peut être conduit de manière manuelle, semi-automatique ou automatique, permettant la mise en #uvre d'un moyen de détermination de l'espèce animale d'origine de la matière animale contenue dans un échantillon. Cette invention concerne également une méthode de détection utilisant en particulier la technique des biopuces. Cette méthode de détection est spécifique des espèces recherchées grâce à l'utilisation de séquences, dites séquences d'identification de chaque espèce, comme sonde. La rapidité, la sensibilité et la spécificité de cette méthode de détection, permettent de l'appliquer indifféremment à tout milieu. En particulier cette méthode s'applique à tout échantillon de produit alimentaire, comportant de la matière animale quelque soit son état et les procédés de fabrication et/ou d'élaboration mis en oeuvre, en particulier les techniques de cuisson, de déshydratation et/ou de conservation, et à tout échantillon de produit manufacturé susceptible de contenir des extraits animaux, comme par exemple les produits cosmétiques et/ou les produits pharmaceutiques comportant par exemple des gélatines d'origine animale. Cette détection simultanée en une seule étape de multiples produits d'amplifications spécifiques, est possible grâce à l'utilisation de support solide en particulier sous la forme d'un support solide de dimension réduite où sont fixées une multitude de sondes de capture à des positions prédéterminées, ou biopuce , ces sondes de capture étant constituées par un jeu de fragments ou de la totalité de séquences nucléotidiques spécifiques dites séquences d'identification des espèces recherchées. Ces séquences nucléotidiques peuvent également être mises en oeuvre dans toutes les techniques d'hybridation connues comme les techniques de dépôt ponctuel sur filtre dites "DOT-BLOT"[Maniatis et al, Molecular Cloning, Cold Spring Harbor, 1982], les techniques de transfert d'ADN dites "SOUTHERN BLOT" [Southern E. M., J. Mol. Biol., 1975,98, 503], les techniques de transfert d'ARN dites "NORTHERN BLOT", ou les techniques "SANDWICH" [Dunn A.R. et al., Cell,1977, 12,23]. La présente invention concerne également la détermination de groupe d'espèces ou classe d'espèces animales ou taxon. Ces groupes d'espèces ou classes ou taxons son constitués par exemple de classe, comme la classe des mammifères, les oiseaux ou les poissons, voire de sous groupes d'espèces comme une famille d'oiseaux ou de deux sougroupes réunis comme les oiseaux ou les mammifères. Cette identification est possible grâce à l'identification de séquences nucléotidiques, appelées séquences signatures, caractéristiques d'une classe, d'un groupe, d'un sous-groupe ou d'un taxon, et correspondant à des régions conservées pour l'ensemble des individus constituant le groupe. Toute séquence signature spécifique à une classe d'animaux mises en #uvre dans le procédé selon la présente invention présente la caractéristique selon laquelle, d'une part elle a une région nucléique conservée pour pratiquement toutes les espèces animales d'une même classe taxonomique, et d'autre part elle peut être discriminée d'autres séquences répondant à la même définition que précédemment, dans les conditions usuelles de détermination, définies de manière générique dans les revendications en annexe. Par exemple, pour la détection de la présence de mammifères on utilisera la séquence signature M, correspondant à la séquence SEQ N 235 GACACAACAA CAGC, positions 14685 à 14698 (séquence de référence Bos taurus genbank ; n accession V00654). Les bases CAA en positions 14689-14690-14691 (séquence de référence Bos taùrus genbank ; n accession V00654) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les mammifères. On observe au plus 5 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe de mammifères choisis. La présence de ces trois bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence de mammifères dans l'échantillon. L'identification de la présence d'oiseaux est déterminée par les signatures : 01, correspondant à la séquence SEQ N 236 TCCCTAGCCT TCTC, positions 15073 à 15086 (séquence de référence Gallus gallus; genbank n accession X52392). Les bases CT (positions 15076-15077) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les oiseaux. On observe au plus 5 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe d'oiseaux choisis. La présence de ces deux bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence d'oiseaux dans l'échantillon. 02, correspondant à la séquence SEQ N 237 ACACTTGCCG GAAC, positions 15098 à 15111 (séquence de référence Gallus gallus; genbank n accession X52392). Les bases CT ou CA (positions 15101 - 15102) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les oiseaux. On observe au plus 4 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe d'oiseaux choisis. La présence de ces deux bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence d'oiseaux dans l'échantillon. L'identification de la présence de mammifères et d'oiseaux est déterminée par la signature V, correspondant à la séquence SEQ N 238 ATAGCCACAGCATT, positions 14883 à 14896 (séquence de référence Bos taurus genbank ; n accession V00654). Les bases GC (en positions 14886 et 14887) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les oiseaux et les mammifères. On observe au plus 4 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe d'oiseaux et mammifères choisis. La présence de ces deux bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence de mammifères et d'oiseaux dans l'échantillon. L'identification de la présence de poissons est déterminée par la signature P, correspondant à la séquence SEQ N 239 ATAATAACCTCTTT, positions 14713 à 14726 (séquence de référence Gadus morhua ; genbank n accession X99772). Les bases ATA ou ATG (positions 14716-14717-14718 ) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les poissons. On observe au plus 4 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe de poissons choisis. La présence de ces trois bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence de poissons dans l'échantillon. La présente invention concerne donc également une séquence nucléotidique caractérisée en ce qu'elle est choisie dans les groupes constitués par : a) les séquences de référence SEQ ID Nos 235 à 239, b) les séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 235 à 239 respectivement, la complémentarité s'entendant de toute séquence susceptible de s'hybrider à une température comprise entre 20 et 70 C en solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M avec l'une quelconque des séquences SEQ ID Nos 235 à 239, ou c) les séquences homologues à chacune des séquences SEQ ID Nos 235 à 239 et des séquences selon b) respectivement l'homologie s'entendant de toute séquence, par exemple fragment, comprenant une suite d'au moins 5 nucléotides contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences ainsi qu'un groupe de deux ou trois nucléotides appartenant à une région conservée pour l'ensemble des espèces d'un groupe considéré, et ladite séquence présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence. Elle concerne plus particulièrement les séquences nucléotidiques telles que définies ci-dessus et caractérisées en ce qu'elles sont constituées d'un groupe de 2 à 3 nucléotides compris dans l'une des séquences SEQ ID Nos 235 à 239 et correspondant à une région conservée pour l'ensemble des espèces d'un groupe considéré. Elle concerne également l'utilisation des séquences définies précédemment, c'est à dire caractérisées en ce qu'elles sont constituées d'un groupe de 2 à 3 nucléotides compris dans l'une des séquences SEQ ID Nos 235 à 239 et correspondant à une région conservée pour l'ensemble des espèces d'un groupe considéré, pour la détermination d'un groupe d'espèces animales d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins une espèce animale appartenant au dit groupe d'espèces animales considéré. Ces séquences dites séquences signatures sont choisies parmi le groupe constitué par la séquence nucléotidique constituée des bases CAA en positions 14689-14690-14691 de SEQ ID N 235, de la séquence nucléotidique constituée des bases CT en positions 15076-15077 de SEQ ID N 236, de la séquence nucléotidique constituée des bases CT en positions 15101-15102 de SEQ ION 237, de la séquence nucléotidique constituée des bases GC en positions 14886-14887 de SEQ ID N 238, et de la séquence nucléotidique constituée des bases ATA en positions 14716-14718 de SEQ ID N 239. Elle concerne également un réactif pour la détermination d'au moins une espèce animale d'origine, comprenant un support solide, à l'état divisé ou non, sur lequel est fixée une séquence nucléotidique choisie parmi le groupe constitué par les séquences SEQ ID Nos 235 à 239. Elle concerne également le procédé de détermination d'un groupe d'espèces animales d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins une espèce appartenant au dit groupe d'espèces animales considéré, caractérisé en ce que : a) on dispose d'une fraction nucléique obtenue à partir dudit échantillon, b) on dispose d'au moins un réactif comprenant une séquence caractérisée en ce qu'elle est choisie dans les groupes constitués par : 1) les séquences de référence SEQ ID Nos 235 à 239, 2) les séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 235 à 239 respectivement, la complémentarité s'entendant de toute séquence susceptible de s'hybrider à une température comprise entre 20 et 70 C en solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M avec l'une quelconque des séquences SEQ ID Nos 235 à 239, ou 3) les séquences homologues à chacune des séquences SEQ ID Nos 235 à 239 et des séquences selon b) respectivement l'homologie s'entendant de toute séquence, par exemple fragment, comprenant une suite d'au moins 5 nucléotides contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences ainsi qu'un groupe de deux ou trois nucléotides appartenant à une région conservée pour l'ensemble des espèces d'un groupe considéré, et ladite séquence présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence. c) on met en présence la fraction nucléique et ledit réactif, et d) par détection on détermine tout signal ou information résultant de la présence d'une des séquences signatures choisies parmi le groupe constitué par la séquence nucléotidique constituée des bases CAA en positions 14689- 14690-14691 de SEQ ID N 235, de la séquence nucléotidique constituée des bases CT en positions 15076-15077 de SEQ ID N 236, de la séquence nucléotidique constituée des bases CT en positions 15101-15102 de SEQ ID N 237, de la séquence nucléotidique constituée des bases GC en positions 14886-14887 de SEQ ID N 238, et de la séquence nucléotidique constituée des bases ATA en positions 14716-14718 de SEQ ID N 239, caractérisant la présence dans ledit échantillon d'une classe d'espèces animales d'origine. Les séquences d'identification peuvent également être mises en #uvre comme amorces spécifiques dans des techniques d'identification par PCR, par mélange de plusieurs amorces choisies parmi les séquences nucléotidiques spécifiques d'une espèce animale en présence d'autres espèces susceptibles d'être présentes dans les milieux à doser, et en ce que au moins une desdites amorces est choisie parmi le groupe constitué par les séquences SEQ ID Nos : 1 à 232, et toutes séquences comprenant au moins 5 monomères contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences et présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence L'invention concerne également les séquences nucléotidiques, choisies parmi le groupe constitué des séquences SEQ ID N 240 à SEQ ID N 241 et leur utilisation comme amorces d'amplification universelles, c'est à dire utilisables pour la détection d'espèces en mélange et suffisamment sensibles vis à vis des différentes espèces pour éviter des résultats erronés dus au masquage de certaines espèces présentes en très faible proportion en raison de trop grande sensibilité vis à vis d'une autre espèce susceptible d'être présente dans un proportion plus importante. Ces amorces sont utilisées pour la mise en oeuvre des étapes d'amplification des procédés précédemment décrits, notamment lorsque les échantillons comprennent ou sont susceptibles de contenir du matériel biologique provenant d'espèces appartenant au groupe des vertébrés. Les exemples suivants sont donnés à titre illustratif et n'ont aucun caractère limitatif. Ils permettront de mieux comprendre l'invention. Exemple 1 : Détection d'une espèce animale dans un échantillon (tableau 1) a) Préparation de l'échantillon Des échantillons provenant de plusieurs espèces animales (mammifères, oiseaux, poissons) ont été utilisés dans cet exemple. Ces échantillons se répartissaient en plusieurs catégories : - des échantillons de référence (désignés sous le terme ref dans le tableau 1) : ADN de référence de diverses espèces animales : ADN de mammifères (b#uf, chèvre, mouton, porc, lapin, lièvre, renne), ADN d'oiseaux (autruche, poulet, dinde, oie), ADN de poissons (cabillaud, thon albacore, thon listao, merlu, maquereau espagnol, thonine de l'Atlantique, truite arc-en-ciel, truite de mer, saumon de fontaine) - des prélèvements tissulaires effectués au laboratoire selon un protocole classique : prélèvement buccal de chèvre, de chat ; souris - des prélèvements alimentaires, dont la composition exacte et l'origine sont connues : blanquette de veau, b#uf Bourguignon, langue de veau en sauce, rôti d'agneau, rôti de porc, cuisse de poulet, - des échantillons commerciaux (désignés sous le terme comm dans le tableau 1), obtenus en grande distribution à base de boeuf (foie de veau, beefsteack, côte de veau, vache à lait, rôti de veau, Parmentier, Bolognaise), de porc (jambon, saucisson, saucisse, porc à la chinoise), d'oiseau (steack d'autruche, poulet rôti, pintade rôti, cuisse de dinde, oie rôtie), de poisson (anguille d'Europe, filet de morue salée, thon albacore en boite, thon listao en boite, filet de saumon atlantique, maquereau commun, truite arc-en-ciel, omble chevalier). Tous les échantillons sont numérotés (E1 à E57), et cette numérotation a été conservée dans les 5 exemples illustrant l'invention. Chaque échantillon est placé dans un sac type baglight (Intersciences) puis malaxé jusqu'à homogénéisation dans un malaxeur type BagMixer (Intersciences). b) Lyse de 25 mg d'échantillon et purification des ADN totaux La lyse de l'échantillon et la purification des acides nucléiques est réalisée par l'utilisation du Dneasy TM Tissue Nécessaire (Qiagen, ref 69504) en appliquant le protocole préconisé par Qiagen pour l'extraction et la purification des acides nucléiques de tissus animaux. c) PCR Une PCR est réalisée en utilisant le nécessaire Ampli Taq gold de Applied Biosystems suivant le protocole ci dessous. On ajoute à 2 l de la suspension d'ADN total le tampon 10X gold buffer , 3,5mM de Mgcl2, 100 M de dNTPs (deoxyribonucleosides triphosphates), 2U de Taq gold polymérase, 0,4 M des amorces euvertébrés telles que décrites par Bartlett et al en 1992 (Biotechniques vol12n 3 p408.412) : SEQ ID N 233: 5' CCATCCAACA TCTCAGCATG ATGAAA 3' (séquence CDL) SEQ ID N 234: 5' GAAATTAATA CGACTCACTA TAGGGAGACC ACACCCCTCA GAATGATATT TGTCCTCA3' (séquence CBHT7, en gras : promoteur de la polymérase T7), afin d'obtenir 50 l de volume réactionnel final. Un premier cycle de PCR de 10 minutes est réalisé à 95 C suivi de 35 cycles composés chacun des 3 étapes suivantes : 94 C pendant 45 secondes, 50 C pendant 45 secondes, 72 C pendant 2 minutes. Une extension finale de 5 minutes à 72 C est ensuite réalisée. d) Vérification de l'amplification Afin de vérifier l'amplification, 5 l de produit d'amplification (ou amplicon) sont déposés sur un gel d'agarose 1,5% dans un tampon EDTATris Borate. Après une migration de 20 minutes à 100 Volts, la bande d'amplification est visualisée par coloration au Bromure d'Ethidium et par illumination aux Ultra Violets. L'amplification est positive comme le démontre la présence d'une bande ayant la taille attendue (350 paires de bases). e) Identification de l'amplicon sur une puce à ADN (Affymetrix, Santa Clara) Une biopuce est synthétisée sur un support solide en verre selon le procédé décrit dans le brevet US 5,744,305 (Affymetrix, Fodor et al) en utilisant la stratégie de reséquençage décrite dans la demande WO 95/11995 (Affymax, Chee et al) et selon la méthode décrite par A. Troesch et al. (J. Clin. Microbiol., 37(1) : 49-55,1999). Chaque séquence d'identification comporte 17 bases, avec une position d'interrogation en 10ème position par rapport à l'extrémité 3' de la séquence. L'analyse est effectuée avec le système complet GeneChip (référence 900228, Affymetrix, Santa Clara, CA) qui comprend le lecteur GeneArray, la station fluidique GeneChip et le logiciel d'analyse GeneChip. e. 1 . Transcription et marquage des amplicons Grâce à l'amorce antisens CBHT7, tous les produits d'amplification présentent un promoteur pour la RNA polymérase T7. Ces amplicons vont alors servir de matrice à une réaction de transcription au cours de laquelle sera incorporé un ribonucléotide fluorescent. A partir des 50 l de produit d'amplification positif, un aliquot de 2 l est prélevé et ajouté à un mélange de transcription contenant les composants du nécessaire Megascript T7 (Ambion, ref. 1334) et de fluorescein-12-UTP (Roche, ref. 1427857). Le mélange réactionnel final se fait dans 20 l et la réaction de transcription s'effectue pendant 2 heures à 37 C. e. 2. Fragmentation des transcripts marqués Afin d'améliorer les conditions d'hybridation, les transcripts marqués sont fragmentés en fragments d'environ 20 nucléotides. Pour cela, les 20 l de transcripts marqués sont soumis à l'action de l'imidazole (Sigma) 30mM et du chlorure de manganèse (Merck) 30mM pendant 30 minutes à 65 C. e. 3. Hybridation sur la puce à ADN A partir des 20 l de transcripts marqués et fragmentés, un aliquot de 7 l est prélevé et ajouté à 700/il de tampon d'hybridation (SSPE 6X (Eurobio), DTAB 5mM (Sigma), Bétaine 3M (Acros), antifoam 0,01% (ref A80082, Sigma), et 250 g/ml d'ADN de sperme de hareng (Gibco). Ce mélange est hybridé sur la puce dans les conditions suivantes : minutes à 40 C. Après lavage, la puce est scannée, puis l'image d'hybridation obtenue est analysée par le logiciel GeneChip (Affymetrix, Santa Clara, CA). Les spots d'hybridation permettent de reconstituer la séquence de l'amplicon, qui est ensuite comparée aux séquences de références de la puce. La séquence (et donc l'espèce qui lui correspond) qui présente le meilleur pourcentage d'homologie (appelé aussi base-call , exprimé en %) avec la séquence de l'amplicon est retenue pour l'identification. e. 4. Interprétation des résultats. Seule une partie de la séquence de 350 bases est analysée pour chaque espèce. Elle correspond à tout ou partie des sondes d'identification. Le seuil d'interprétation, c'est à dire le niveau d'identification est fixé à 90% de base-call sur la séquence signature. En dessous de ce seuil, la cible, et donc l'espèce correspondante n'est pas considérée comme identifiée. f) Résultat L'ADN extrait de l'échantillon alimentaire donne lieu à un produit d'amplification, puis à une identification sur la puce. Comme présenté dans le tableau 1, les échantillons de référence sont correctement analysés par cette technique, qui permet également la détection d'espèce animale (mammifère, oiseau, poisson) dans des échantillons commerciaux. Tableau 1 : d'une espèce animale dans un échantillon Espèce animale Nature de J'échantillon % base call Identification Séquence signature sur puce B#uf (Bos taurus) ref E1: ADN b#uf Bos taurus 100% boeuf E2 : Bourguignon Bos taurus 100% boeuf E3 : langue de veau Bos taurus 100% boeuf E4 : blanquette de veau Bos taurus 100% boeuf comm E5: côte de veau Bos taurus 95% boeuf E6 : vache à lait Bos taurus 100% boeuf E7 : rôti de veau Bos taurus 100% boeuf E8 : pannentier Bos taurus 100% boeuf E9 : bolonaise Bos taurus 100% boeuf E10: beefsteack Bos taurus 100% boeuf E1 foie de veau Bos taurus 100% boeuf Chèvre (Capra hircus) ref E12 : chèvre Capra hircus 100%, chèvre E13 : Prélèvement buccal Capra hircus 100% chèvre Mouton (Ovis aries) ref E14 : mouton Ovis aries 95,5% mouton E15 : rôti d'agneau Ovis aries 100% mouton Porc (Sus scrofa) ref E16 : porc Sus scrofa 100% porc E17 : rôti de porc Sus scrofa 100% porc comm E18: jambon Sus scrofa 100% porc E19: saucisson Sus scrofa 100% porc E20: saucisse Sus scrofa 100% porc E21: porc à la chinoise Sus scrofa 100% porc Lapin (Oryctolagus crenicrrlrrs) ref E22: ADN lapin Oryctolagus c11niculus 100 % lapin Lièvre (Lepus cuniculus) ref E22 : lièvre Lepus cuniculus 100% lievre Renne (Rengifer tarandus) ref E23 : ADNrenne Rangifer tarandus 100% Renne Souris (Mus museulus) rer E24: souris M us niuseilliis 100% souris Chat (Felis catus) ref E25 : buccal Felis catus 100% chat Autruche (Struthio camelus) ref E26 : ADNautruche Struthio camelus 100% Autruche comm E27 : steack d'autruche Struthio camelus 100% Autruche Poulet (Gallus gallus) ref E28 : poulet Gallus gallus 100% poulet E29 : cuisse de poulet Gallus gallus 94.7% poulet comm E30 : poulet rôti Gallus gallus 100% poulet Pintade (Numida meleagris) comm E31: Pintade rôtie Numida mcleagris 100% Pintade Dinde (illeleagi-is gallopovo) ref E32: ADN dinde Meleaaris gallopovo 100 % dinde E33 : rôti de dinde Nleleagris gallopovo 100% dinde comm E34 : cuisses de dinde Meleagris gallopovo 100% dinde Oie (Anser anser) ref E35 : oie Anser anser 100% oie comm E36: oie rôtie Anser auser 100% oie Anguille d'Europe (Anguilla anguilla) comm E37 : poisson entier Anguilla anguilla 100% Anguille d'Europe Cabillaud (Gadus morhua) ref E38 : ADNcabillaud Gadus morhua 100% Cabillaud comm E39 : filet de monte salée Gadus morhua 100% Cabillaud Thon albacore (Tiiieiiiiies albacures) ref E40: ADN thon albacore Thunnus 100 % thon comm E41 : thon albacore en boite Thunnus 100% thon Thon listao (Katsuwonis pelamis) ref E42 : ADN thon listao Thunnus 94,7% thon comm E43: thon listao en boite Thunnus 94,7% thon Saul1\ou d'atlantique (SI//mo sl/II/' comm E44: filet de saumon d'atlantique Salmo salar 100% saumon d'atlantique Merlu (Merluecius merluccius) ref E45: ADN merlu !\lerluccius 94,4'% Merlu Maquereau espagnol (Scoraberjaponicus) ref E46: ADN maquereau espagnol Seomber japonicns 100 % Maquereau espagnol Maquereau commun (Scomber scombrtis) comm E47: poisson entier Scomber seombrus 100% Maquereau commun Thonine de l'atlantique (Errtlryaxrrs alleteratlls) ref E48: ADN thonine atlantique Euthynnus alleteratus 100'% Thonine de l'atlantique Truite arc en ciel (Oucorhyncus mykiss) ref E49: ADN truite arc en ciel Oncorhyncus mykiss 100% Truite arc en ciel connu E50 : poisson entier Oncorhyncus mykiss 100% Truite arc en ciel Truite de mer (Salmo trutra fario) ref E51: ADN truite de mer Salmo trutta fario 100% Truite de mer Saumon de fontaine (Salvenius fontinalis) ref E52 : ADN saumon de fontaine Salvenius fontinalis 100% Saumon de fontaine Omble chevalier (Salvenius alpinus) comm E53: poisson entier Salvenius alpinus 100% Omble chevalier Exemple 2 : Détection de plusieurs d'espèces animales dans un échantillon (tableau 2) Les conditions expérimentales concernant la préparation des échantillons, la lyse des échantillons et la purification des ADN totaux, la PCR, la vérification de l'amplification et l'identification de l'amplicon sur une puce à ADN (Affymetrix, Santa Clara) sont identiques à ce qui est décrit dans l'exemple 1 . Dans cet exemple, plusieurs espèces animales sont simultanément analysées à partir d'un même échantillon. L'analyse est réalisée sur : des échantillons de référence (désignés ref , comme dans l'exemple 1) constitués par : un mélange d'ADN provenant de deux espèces d'animaux différentes, en proportion 50% de chacune des 2 espèces un mélange d'amplicons (obtenus selon le protocole de l'exemple 1), en proportion 80% d'amplicons de b#uf et 20% d'amplicons de dinde ; 50% d'amplicons de b#uf et 50% d'amplicons de dinde ; 20% d'amplicons de b#uf et 80% d'amplicons de dinde, des échantillons commerciaux (désignés comm , comme dans l'exemple 1), issus de la grande distribution, comprenant plusieurs espèces animales dans un même échantillon. Comme présentés dans le tableau 2, ces résultats montrent que des mélanges d'espèces peuvent être détectées simultanément dans un même échantillon, que cet échantillon soit constitué d'un mélange d'ADN, d'un mélange d'amplicons ou d'un échantillon commercial comprenant plusieurs espèces. Tableau 2 : détection de plusieurs espèces animales dans un échantillon Nature de l'échantillon Composition % base call Identification ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Séquence signature sur puce Ref Mélange ADN 50% porc (E16) S. scrofa 94,7% porc 50 %lapin (E22) 0. cuniculus 100% lapin 50% poulet G. gallus 100% poulet (E28) 50% dinde (E32) M. gallopovo 100% dinde 50% b#uf (E1) B. taurus 100% boeuf 50% dinde (E32) M. gallopovo 100% dinde Mélange amplicons 80% b#uf B. taurus 100% boeuf 20% dinde M. gallopovo 94,1 % dinde 50% b#uf B. taurus 100% boeuf 50% dinde M. gallopovo 100% dinde 20 % b#uf B. taurus 100% boeuf 80 % dinde M. gallopovo 100% dinde Comm E54 : Pâté porc S. scrofa 100% porc volaille M. gallopovo 94,1 % dinde E55 : boudin blanc porc S. scrofa 100% porc volaille M. gallopovo 94,1 % dinde Exemple 3 : Détection d'une ou plusieurs espèces animales dans les farines destinées à l'alimentation animale. a) Préparation de l'échantillon Les conditions expérimentales concernant la préparation des échantillons sont similaires à ce qui est décrit dans l'exemple 1. Les échantillons sont issus de farines destinées à l'alimentation animale. Ces échantillons (numérotés de F1 à F17) ont été préalablement répertoriés selon 4 catégories, après analyse de la présence de fragments d'os telle que décrite par Michard (Revue de l'Alimentation animale, vol. 508, pp 43- 48,1997 ; technique de référence). On distingue alors des échantillons négatifs lorsque le nombre de fragments d'os est inférieurs à 20, des échantillons traces lorsqu'il y a plus de 20 fragments d'os mais une proportion en os présents dans l'échantillon, inférieure à 0,01 %, des échantillons à suivre lorsque la proportion est comprise entre 0,01 % et 1#, et les échantillons positifs lorsque la proportion est supérieure à 1#. b) Lyse de l'échantillon et purification des ADN totaux Pour la lyse de l'échantillon et la purification des acides nucléiques, on utilise le Dneasy TM Tissue Nécessaire (Qiagen, ref 69504) tel que décrit dans l'exemple 1, à partir de 25 mg de farine. Une adaptation de la technique est réalisée afin d'éliminer les inhibiteurs de la PCR. En effet, ces inhibiteurs (polyphénols, cations (Ca2+ ,Fe3+), traces de métaux lourds, tanins, carbohydrates, sels (NaCl, nitrites)) sont en quantité importante dans les végétaux, et de ce fait dans les farines destinées à l'alimentation animale. Cette adaptation est la suivante : 1- Après la lyse avec le tampon ATL et la protéinase K, du chelex est ajouté lors de l'étape de purification de l'ADN (200 l de InstaGeneTM Matrix (BIO-RAD, ref 732-6030). 2- Après incubation de 30 minutes à 56 C, une centrifugation (5 minutes ; 14000 tours/minutes) est réalisée, et l'extraction est réalisée telle que décrite dans le manuel DneasyTM Tissue Nécessaire de Qiagen. c) PCR On effectue une PCR en utilisant le nécessaire Ampli Taq gold de Applied Biosystems. On ajoute à 10/il de la suspension d'ADN total extrait de farines le tampon 10X gold buffer, 3,5mM de MgCI2, 100 M de dNTPs (déoxyribonucleosides triphosphates), 2U de Taq gold polymérase, 0,4pM des amorces euvertébrés CBL et CBHT7 telles que définies dans l'exemple 1 afin d'obtenir 50 l de volume réactionnel final. On réalise un premier cycle de 10 minutes à 95 C de PCR puis 35 cycles composés chacun des 3 étapes suivantes : 94 C 45 sec, 50 C 45 sec, 72 C 2 minutes. Une extension finale de 5 minutes à 72 C est ensuite réalisée. d) Vérification de l'amplification La vérification de l'amplification est réalisée comme décrit dans l'exemple 1 . 29 e) Identification de l'amplicon sur une puce à ADN (Affymetrix, Santa Clara). Cette étape d'identification est réalisée telle que décrite dans l'exemple 1. f) Résultat Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 3, et comparés aux résultats obtenus par le protocole classique de l'art antérieur. Il y parfaite concordance entre les 2 techniques, mais avec, en plus, l'indication de l'espèce dans le cas de l'invention. L'invention permet de détecter la présence d'une ou plusieurs espèces animales dans des échantillons de farines destinées à l'alimentation animale. Tableau 3 :détection d'une ou plusieurs espèces animales dans les farines destinées à l'alimentation animale. Protocole classique Protocole selon l'invention Catégorie Fragments os F1 Négatif 20 fragments Aucune espèce détectée F2 Négatif 20 fragments Aucune espèce détectée F3 Négatif 20 fragments Aucune espèce détectée F4 Négatif 20 fragments Aucune espèce détectée F5 Traces % Aucune espèce détectée F6 Traces % Aucune espèce détectée F7 Traces % Porc F8 Traces 0,01 % Aucune espèce détectée F9 Traces % Porc, Souris, Boeuf, F10 A suivre 0,05% Porc, Boeuf F11 A suivre 0,03% Porc, Boeuf F12 A suivre 0,02% Porc, Rat, Boeuf F13 A suivre 0,01 % Porc F14 Positif 0,23% Porc, Boeuf F15 Positif 0,23% Boeuf, Porc F16 Positif 4,70% Boeuf, Porc, Souris, Dinde F17 Positif 3,50% Boeuf, Souris, Porc, Poulet Exemple 4 : détection de la classe des d'espèces contenues dans un échantillon (tableau 4) L'objectif de cet exemple est d'obtenir une technique permettant de détecter la classe de vertébrés (mammifères, oiseaux, poissons...) de l'animal d'origine de l'ingrédient contenu dans un échantillon alimentaire ou un échantillon de farine destinée à l'alimentation animale. Les conditions expérimentales concernant a) la préparation de l'échantillon, b) la lyse de l'échantillon et la purification des ADN totaux, c) la PCR, d) la vérification de l'amplification et e) l'identification de l'amplicon sur une puce à ADN (Affymetrix, Santa Clara) sont similaires à ce qui est décrit dans l'exemple 1 et 3. L'identification de la présence de mammifère et/ou d'oiseaux est déterminée par la présence de signatures spécifiques à chaque classe. Par exemple, pour la détection de la présence de mammifères on utilisera la séquence signature M, correspondant à la séquence SEQ N 235 GACACAACAA CAGC, positions 14685 à 14698 (séquence de référence Bos taurus genbank ; n accession V00654). Les bases CAA en positions 14689-14690-14691 (séquence de référence Bos taurus genbank ; n accession V00654) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les mammifères. On observe au plus 5 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe de mammifères choisis. La présence de ces trois bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence de mammifères dans l'échantillon. L'identification de la présence d'oiseaux est déterminée par les signatures : 01, correspondant à la séquence SEQ N 236 TCCCTAGCCT TCTC, positions 15073 à 15086 (séquence de référence Gallus gallus; genbank n accession X52392). Les bases CT (positions 15076-15077) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les oiseaux. On observe au plus 5 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe d'oiseaux choisis. La présence de ces deux bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence d'oiseaux dans l'échantillon. 02, correspondant à la séquence SEQ N 237 ACACTTGCCG GAAC, positions 15098 à 15111 (séquence de référence Gallus gallus; genbank n accession X52392). Les bases CT ou CA (positions 15101 - 15102) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les oiseaux. On observe au plus 4 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe d'oiseaux choisis. La présence de ces deux bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence d'oiseaux dans l'échantillon. L'identification de la présence de mammifères et d'oiseaux est déterminée par la signature V, correspondant à la séquence SEQ N 238 ATAGCCACAGCATT, positions 14883 à 14896 (séquence de référence Bos taurus genbank ; n accession V00654). Les bases GC (en positions 14886 et 14887) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici lesmammifères et les oiseaux. On observe au plus 4 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe de mammifères et d'oiseaux choisis La présence de ces deux bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence de mammifères et d'oiseaux dans l'échantillon. L'identification de la présence de poissons est déterminée par la signature P, correspondant à la séquence SEQ N 239 ATAATAACCTCTTT, positions 14713 à 14726 (séquence de référence Gadus morhua ; genbank n accession X99772). Les bases ATA ou ATG (positions 14716-14717- 14718 ) sont conservées pour l'ensemble du matériel nucléique correspondant aux espèces prédéfinies constituant le groupe que l'on veut rechercher, ici les poissons. On observe au plus 4 positions mutées pour le reste de la signature citée pour l'ensemble des séquences constituant le matériel nucléique du groupe poissons choisis La présence de ces trois bases aux positions indiquées ci dessus permet ainsi de déterminer la présence de poissons dans l'échantillon. Comme présenté dans le tableau 4, cette technique permet de détecter la présence de mammifères et/ou d'oiseaux et/ou de poissons, que ces espèces soient présentes isolément ou en mélange. Tableau 4 : détection de classe d'espèces dans un échantillon Echantillons Signatures interprétation détectées E1 : ADN boeuf V et M mammifère E16 : ADN porc V et M mammifère E17 : rôti de porc V et M mammifère E12 : ADN chèvre V et M mammifère E13 : chèvre prélèvement V et M mammifère buccal E35 : ADN oie V et 01 et 02 oiseau E49 : ADN truite arc en P poisson ciel E51 : ADN truite de mer P poisson Mélange amplicons boeuf V et M et 01 et mammifère/ / dinde 02 oiseau E15 : rôti d'agneau V et M mammifère F9 : farine trace V et M mammifère F1 : farine négatif Pas de pas signatures d'identification positive farine P poisson Exemple 5 : amorces universelles d'amplification des vertébrés (tableau 5a et 5b) L'objectif des expériences présentées dans cet exemple est d'obtenir des amorces encore plus sensibles que celles décrites dans les exemples précédents, et plus universelles pour la détection des espèces en mélanges. En effet, les amorces utilisées dans les exemples 1 à 4 sont très sensibles vis à vis du b#uf, ce qui peut masquer parfois la présence d'autres espèces lorsque elles sont présentes en très faible proportion. Les amorces utilisées dans cet exemple sont les suivantes : SEQ ID N 240: 5' GACCTCCCAG CCCCATCAAA 3' (séquence CBL 20) SEQ ID N 241: 5' GAAATTAATA CGACTCACTA TAGGGAGACC ACACAGAATG ATATTTGTCC TCA 3' ( séquence CBHT7 20, avec en gras, la localisation du promoteur de la polymérase T7). La technique utilisée pour obtenir l'identification sur la puce est telle que décrite dans l'exemple 1 a, 1 b,1 c (avec les amorces modifiées), 1 d, 1 e. Comme présenté dans le tableau 5a, l'utilisation de ces nouvelles amorces permettent d'obtenir, chez la dinde, un seuil de détection de l'ordre de 1 % par comparaison avec les amorces des exemples 1 à 4 où le seuil de détection était de l'ordre de 10%. L'utilisation de ces nouvelles amorces permettent également, dans des échantillons commerciaux, provenant de la grande distribution, l'identification d'espèces animales, notamment le mouton, présentes à l'état de trace, qui étaient masquées par la présence de boeuf dans les exemples précédents (tableau 5b). Tableau 5 a : de détection de la dinde en mélange avec du boeuf Détection sur puce : base call % ADN Amorces ex 1 à 4 Amorces ex 5 E1 : boeuf E32 : boeuf dinde boeuf dinde dinde 100 0 100 5,9 100 29,4 99,9 0,1 100 17,6 100 41,2 99 1 100 76,5 100 94,1 90 10 100 100 100 100 50 50 100 100 100 100 1 99 100 100 90 100 0,1 99,9 100 100 60 100 0 100 50 94,1 26,9 100 Seuil de détection 0,10% 10% 1 % 1 % Tableau 5b : du mouton en mélange avec d'autres espèces Produits commerciaux composition indiquée détection sur puce : espèces détectées amorces ex 1 à 4 amorces ex 5 E56 : Kebab Burger Pain, viande hachée Boeuf, Boeuf précuite Mouton (mouton, boeuf), sauce E57 : Boulette Boeuf, mouton, Boeuf Boeuf couscous végétaux Mouton REVENDICATIONS 1. Procédé de détermination d'une espèce animale d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins ladite espèce, caractérisé en ce que : a) on dispose d'une fraction nucléique obtenue à partir dudit échantillon, b) on dispose d'au moins un réactif spécifique à l'espèce animale, consistant en au moins une séquence choisie dans les groupes constitués par - les séquences de référence SEQ ID Nos 1 à 232, - les séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 1 à 232 respectivement, la complémentarité s'entendant de toute séquence susceptible de s'hybrider à une température comprise entre 20 et 70 C en solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M, avec l'une quelconque des séquences SEQ ID Nos 1 à 232, ou - les séquences homologues à chacune des séquences SEQ ID Nos 1 à 232 et des séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 1 à 232 respectivement, l'homologie s'entendant de toute séquence, par exemple fragment comprenant une suite d'au moins 5 nucléotides contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences, et présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence. c) on met en présence la fraction nucléique et ledit réactif, et d) par détection on détermine tout signal ou information résultant de la réaction spécifique entre ledit réactif et la fraction nucléique, caractérisant la présence dans ledit échantillon de ladite espèce animale d'origine. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on dispose d'un ensemble comprenant une multiplicité desdits réactifs spécifiques à une même espèce d'origine et/ou à des espèces animales d'origine respectivement différentes ; et on détermine une multiplicité de signaux ou informations caractérisant la présence dans ledit échantillon d'une même espèce animale d'origine et/ou de plusieurs espèces animales d'origine respectivement différentes. 3. Séquence nucléotidique caractérisée en ce qu'elle est choisie dans les groupes constitués par : a) les séquences de référence SEQ ID Nos 1 à 232, b) les séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 1 à 232 respectivement, la complémentarité s'entendant de toute séquence susceptible de s'hybrider à une température comprise entre 20 et 70 C en solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M, avec l'une quelconque des séquences SEQ ID Nos 1 à 232, ou c) les séquences homologues à chacune des séquences SEQ ID Nos 1 à 232 et des séquences selon b) respectivement, l'homologie s'entendant de toute séquence, par exemple fragment comprenant une suite d'au moins 5 nucléotides contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences et présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence. 4. Utilisation d'une séquence selon la revendication 3, pour la détermination d'au moins une espèce animale d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins ladite espèce animale. 5. Sonde pour la détermination d'au moins une espèce animale d'origine, comprenant au moins une séquence nucléotidique d'identification selon la revendication 3. 6. Amorce pour l'amplification spécifique d'un acide nucléique d'une espèce animale d'origine, comprenant au moins une séquence nucléotidique d'identification selon la revendication 3. 7. Réactif pour la détermination d'au moins une espèce animale d'origine, comprenant un support solide, à l'état divisé ou non, sur lequel est fixée une séquence nucléotidique selon la revendication 3. 8. Biopuce comprenant un support solide comportant une surface développée, sur laquelle est disposée et fixée une multiplicité de séquences nucléotidiques selon la revendication 3, et ceci selon un arrangement prédéterminé. 9. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on détermine la multiplicité de signaux ou informations avec une biopuce selon la revendication 8. 10. Séquence nucléotidique caractérisée en ce qu'elle est choisie dans les groupes constitués par : a) les séquences de référence SEQ ID Nos 235 à 239, b) les séquences complémentaires à chacune des séquences SED ID Nos 235 à 239 respectivement, la complémentarité s'entendant de toute séquence susceptible de s'hybrider à une température comprise entre 20 et 70 C en solution saline à une concentration d'environ 0,5 à 1 M avec l'une quelconque des séquences SEQ ID Nos 235 à 239, ou c) les séquences homologues à chacune des séquences SEQ ID Nos 235 à 239 et des séquences selon b) respectivement l'homologie s'entendant de toute séquence, par exemple fragment, comprenant une suite d'au moins 5 nucléotides contigus inclus dans l'une quelconque desdites séquences ainsi qu'un groupe de deux ou trois nucléotides appartenant à une région conservée pour l'ensemble des espèces d'un groupe considéré, et ladite séquence présentant au moins 70% d'identité avec ladite quelconque séquence. 11. Séquence nucléotidique caractérisée en ce qu'elle est constituée d'un groupe de 2 à 3 nucléotides compris dans l'une des séquences selon la revendication 10 et correspondant à une région conservée pour l'ensemble des espèces d'un groupe considéré. 12. Séquence nucléotidique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle est constituée des bases CAA en positions 14689-14690-14691 de SEQ ID N 235. 13. Séquence nucléotidique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle est constituée des bases CT en positions 15076- 15077 de SEO ID N 236. 14. Séquence nucléotidique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle est constituée des bases CT en positions 15101- 15102 de SEQ ID N 237. 15. Séquence nucléotidique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle est constituée des bases GC en positions 14886- 14887 de SEQ ID N 238. 16. Séquence nucléotidique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle est constituée des bases ATA en positions 14716-14718 de SEQ ID N 239. 17 Réactif pour la détermination d'au moins une espèce animale d'origine, comprenant un support solide, à l'état divisé ou non, sur lequel est fixée une séquence nucléotidique selon la revendication 10. 18. Procédé de détermination d'un groupe d'espèces animales d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins une espèce appartenant au dit groupe d'espèces animales considéré, caractérisé en ce que : a) on dispose d'une fraction nucléique obtenue à partir dudit échantillon, b) on dispose d'au moins un réactif comprenant une séquence selon la revendication 10, c) on met en présence la fraction nucléique et ledit réactif, et d) par détection on détermine tout signal ou information résultant de la présence d'une des séquences selon l'une quelconque des revendications 11 à 16, caractérisant la présence dans ledit échantillon d'un groupe d'espèces animales d'origine. 19. Utilisation des séquences définies dans l'une quelconque des revendications 12 à 16, pour la détermination d'un groupe d'espèces animales d'origine dans un échantillon susceptible de contenir un ingrédient obtenu à partir d'au moins une espèce animale appartenant au dit groupe d'espèces animales considéré.