Brevet FR2843800A3 — publié le 20040227

FR 2843800 A3 20040227 FR 0213952 A 20021107 La présente invention a pour objet une plaque de référence de fluorescence multi-modalité utilisable pour étalonner et tester des instruments de spectroscopie de fluorescence, tels que des microscopes, des dispositifs 5 d'imagerie et des lecteurs de plaques. L'invention a également pour objet un procédé de fabrication de telles plaques et l'utilisation de ces plaques en fluorescence à l'état stationnaire, fluorescence résolue dans le temps, polarisation de fluorescence et temps de vie de fluorescence. De nombreuses molécules de colorants, lorsqu'elles sont irradiées en lumière visible ou ultraviolette, émettent une partie de l'énergie absorbée sous forme de lumière fluorescente de plus grande longueur d'onde. Ces molécules de colorants, désignées composés fluorogènes, 15 sont abondamment utilisées dans les tests biologiques, dans lesquels les signaux fluorescents qu'elles produisent peuvent fournir des informations sur le système étudié. La technique de fluorimétrie est extrêmement puissante, car elle fournit une mesure extrêmement sensible sur de très 20 petites quantités de matériel étudié. Les fluorimètres ont trois composants principaux: i) une source de lumière d'excitation; ii) un ou plusieurs filtres et/ou des monochromateurs à élément dispersif pour sélectionner la longueur d'onde d'intérêt; et 25 iii) un détecteur pour la conversion de la lumière de fluorescence en un signal électrique. Traditionnellement, la plupart des détecteurs étaient constitués soit d'une diode, soit d'un tube photomultiplicateur (PMT), tous deux mesu- rant un seul échantillon à la fois. Plus récemment, des détecteurs qui comprennent un dispositif à transfert de charge (CCD) ont été utilisés car ils permettent une imagerie simultanée et une quantification de nombreux échantil5 lons fluorescents à la fois. La sensibilité élevée des techniques fluorimétriques, et les exigences concomitants de petits échantillons, en ont fait un procédé de criblage favori pour la recherche de nouveaux médicaments dans l'industrie pharmaceutique, o 10 elles trouvent une application importante dans le criblage à haut débit (HTS). Des plaques multipuits ou micropuits sont souvent utilisées en HTS car leur format compact (typiquement 96 ou 384 puits dans une empreinte de 108 x 72 mm) maximise le débit tout en minimisant la quantité 15 d'échantillon et l'espace nécessaires. De telles plaques sont bien connues dans le domaine et sont disponibles chez un certain nombre de fournisseurs dans le commerce (par exemple, Greiner Labortechnik). La forme la plus courante de fluorimètres utili20 sés en HTS est représentée par les scanners à tube photomultiplicateur (PMT) dans lesquels un puits à la fois est mesuré d'une manière supposée " identique " (par exemple FarcyteTM, Amersham Biosciences, Buckinghamshire, RoyaumeUni). Les fluorimètres de ce type sont appelés lecteurs de 25 plaques. Le procédé implique généralement le déplacement de la plaque entre les lectures pour pouvoir aligner chaque puits en dessous du détecteur et mesurer le signal fluorescent dans chacun d'eux. Des vérifications constantes sont nécessaires, en utilisant des solutions étalons de fluores30 cence " connue ", pour s'assurer que le système fonctionne correctement et que les signaux de tous les puits sont mesurés d'une manière identique. Plus récemment, des systèmes d'imagerie dotés d'un dispositif à transfert de charge (CCD), tels que LeadseekerTM et ViewluxTM (Perckin-Elmer Life Science, Inc., Massachusetts, tat-Unis), ont été utilisés dans des appli5 cations HTS car ils réduisent sensiblement la durée de test et améliorent le débit en analysant simultanément des plaques entières. A nouveau, des vérifications fréquentes sont nécessaires pour étalonner l'instrument et s'assurer qu'il fonctionne de manière reproductible et précise. Il existe donc un besoin persistant de disposer d'instruments fluorimétriques d'étalonnage en effectuant des mesures régulières sur des étalons fluorescents. De tels étalons sont basés sur des sources correctement caractérisées de signaux qui ne varient pas significativement 15 d'un test à l'autre ou d'un laboratoire à l'autre. De nombreuses méthodes existent dans le domaine pour atteindre cet objectif. Ainsi, par exemple, Model et Burkhardt (Cytometry, 2001, 44, 309-316) décrivent un procédé de normalisation d'images fluorescentes par rapport à 20 l'image d'un étalon de référence en utilisant des solutions-mères de fluorescéine et des lames de microscope. Cependant, ce procédé n'est pas aisément applicable en HTS ni à l'utilisation de plaques micropuits. Le brevet US n 6 348 965 décrit un dispositif à support solide pour 25 l'étalonnage de la fluorescence de microplaques et de lecteurs d'absorption. L'invention décrite est constituée d'une série d'échantillons de verre optique enduits d'un matériau fluorogène qui ont une forme adaptée aux puits d'une microplaque. L'utilisateur doit donc placer 30 l'échantillon approprié, enduit d'une concentration particulière d'un composé fluorogène, manuellement dans des puits spécifiques de la microplaque. Une telle opération peut, à la fois, être longue et constituer une source d'erreurs. En outre, la manipulation continue des échantil- lons peut conduire à enduire d'un revêtement fluorogène excessif induisant une réduction du signal fluorescent. Le brevet US n 2002/0048817 décrit des étalons pour étalonner des instruments de fluorescence, qui consis5 tent en polymères modifiant la viscosité et en colorants. Les étalons peuvent être utilisés pour dissoudre une large gamme de colorants différents qui sont ensuite répartis dans des plaques micropuits, transformés en gels et utilisés pour étalonner l'instrument. A nouveau, cette méthode 10 nécessite une préparation manuelle ou mécanique des solutions et la répartition dans des plaques micropuits. Plusieurs produits sont disponibles dans le commerce pour étalonner des dispositifs fluorimétriques. Sous la forme la plus simple, Varian Inc. (Mesa Components, Ca15 lifornie, tats-Unis) fournit un ensemble de référence de fluorescence consistant en substances étalons fluorescentes dans des blocs de polymère (réf. 66 100 103 00) utilisables avec des instruments fluorimétriques. Starna (Optiglass Ltd., Essex, Royaume-Uni) propose un " ensemble de réfé20 rence " (réf. 6BF) similaire de substances fluorescentes stables dans des blocs constitués d'hydrocarbures. De telles substances ne se prêtent pas aisément à l'étalonnage de fluorimètres à PMT et de systèmes d'imagerie à CCD. BMG Labtechnologies Ltd. (Buckingamshire, Royaume-Uni) propose une " microplaque d'étalonnage " (réf. CLS96M) qui peut être utilisée pour mesurer la fluorescence. La microplaque est basée sur un système LED/support solide, à douze puits, générant un signal lumineux reproductible dans la gamme 500 - 520 nm. Avec seulement douze 30 puits capables de générer un signal, la microplaque d'étalonnage est difficilement utilisable comme étalon de référence pour des systèmes d'imagerie à CCD. La plaque micropuits QC PakTM fournie par Innovative Instruments Inc. (Caroline du Nord, tats-Unis) convient à la fois pour les systèmes d'imagerie à PMT et à CCD. Le produit QC PakTM est constitué de fluorophores or5 ganiques (par exemple, fluorescéine, rhodamine, ombelliférone) inclus dans une matrice de styrène dans les puits d'une plaque de 96 micropuits en aluminium anodisé. La plaque est prête à l'emploi et contient une gamme de fluorophores différents à des concentrations variées, permettant 10 donc un étalonnage à la fois de la longueur d'onde et de l'intensité. Cependant, le procédé de fabrication impose certaines restrictions au produit en termes de cot et du fait que seuls les colorants solubles dans des solvants organiques sont disponibles. MatechTM (Health Scientific Ltd., Buckinghamshire, Royaume-Uni) fournit des étalons de fluorescence de référence (FRS) sous la forme de plaques multipuits. De nombreux puits de ces FRS contiennent une série d'étalons inorganiques, à des concentrations variées, qui sont ra20 dioactifs et qui émettent des signaux fluorescents de longueur d'onde et d'intensité spécifiques lorsqu'ils sont irradiés par une source particulière. En raison de la nature radioactive de l'étalon inorganique, certaines limitations de sécurité doivent être appliquées à l'utilisation de ces 25 plaques. En outre, le nombre d'étalons de référence est restreint à ces " étalons inorganiques " disponibles dans le commerce. Il existe donc un besoin de disposer d'une plaque de référence peu coteuse pouvant être utilisée soit en 30 mode diode PMT/simple soit en mode imagerie multi-CCD pour étalonner les instruments de fluorescence. La présente invention permet de pallier de nombreuses limitations des dispositifs de l'art antérieur mentionnées ci-dessus et fournit une plaque de fluorescence multi-modalité qui peut être utilisée pour étalonner l'alignement de la plaque, ainsi que la longueur d'onde, l'intensité et le temps de vie de fluorescence. Selon un premier aspect, la présente invention concerne une plaque de référence de fluorescence multimodalité comprenant un ou plusieurs puits, chaque puits comprenant une ou plusieurs parois et une base dans laquelle ladite base d'au moins un puits comprend un revête10 ment d'un composé fluorogène. De préférence, le revêtement est appliqué par impression jet d'encre sur la base. Les avantages de l'impression jet d'encre par rapport aux autres méthodes sont le cot et la précision, car le procédé est relative15 ment bon marché tout en étant extrêmement précis. De manière appropriée, le revêtement est appliqué par impression par sérigraphie sur la base. De manière appropriée, la base comprend du papier d'impression. De préférence, le papier d'impression com20 prend un film métallique. Typiquement, le film métallique est choisi dans le groupe constitué d'aluminium, étain, argent et or. Plus avantageusement, le film métallique comprend de l'aluminium. De préférence, le papier d'impression comprend en 25 outre un revêtement polymérique. Plus avantageusement, le revêtement polymérique comprend un polymère organique. Un papier d'impression approprié est, par exemple, " Silver Glossy Film ", disponible auprès de Sensitisers Group Ltd. (Sensitisers International Ltd. Cornouail30 les, Royaume-Uni), numéro de référence du produit F102CMET. De façon appropriée, la base comprend un polymère organique. De préférence, le polymère est choisi dans le groupe constitué de polyéthylène, polystyrène et chlorure de polyvinyle (PVC). De façon appropriée, la base comprend un métal. De préférence, le métal comprend de l'aluminium ou de l'acier inoxydable. De façon appropriée, le composé fluorogène est constitué d'atomes stables, non radioactifs. Les atomes non 10 radioactifs sont préférés parce que cela évite toutes restrictions d'utilisation de la plaque en termes de sécurité de l'opérateur, de manipulation et de transport. De préférence, le composé fluorogène est choisi dans le groupe constitué de fluorescéine, rhodamine, ombel15 liférone, Hoechst 33342, Cy2, Cy3, Cy3B, Cy5, Cy5B, Cy7, CypHer, coumarine, DAPI, Alexa 633, DRAQ5, Alexa 488, acridone, quinacridone, et chélate de lanthanide. L'acridone et les composés fluorogènes de quinacridone sont décrits dans les demandes de brevet PCT GB02/02509 et GB02/02537, res20 pectivement. Des chélates de lanthanide typiques incluent l'europium, le terbium, le samarium et le dysprosium. Le composé fluorogène est d'abord dissous ou mis en suspension dans un solvant aqueux ou organique et transféré dans une cartouche d'impression jet d'encre standard 25 pour imprimer sur une feuille de base. De façon appropriée, le nombre de puits dans la plaque est choisi dans le groupe constitué de un, six, douze, vingt-quatre, quarante-huit, quatrevingt-seize, trois cent quatre-vingt-quatre et mille cinq cent trente30 six. De préférence, la plaque micropuits comporte quatrevingt-seize, trois cent quatre-vingt-quatre ou mille cinq cent trente-six puits. On notera que les plaques de référence de l'invention peuvent être lues par le haut au moyen de systèmes de lecture " par en haut ", tels que décrits cidessus, ou inversés et lus au moyen d'instruments de lec5 ture " par le fond " (par exemple, lecteurs Imagetrak/Zeiss). Selon un second aspect, la présente invention concerne l'utilisation de la plaque de référence comme décrite ci-dessus pour l'étalonnage d'instruments utilisés 10 pour mesurer la fluorescence à l'état stationnaire, la fluorescence résolue dans le temps, la durée de vie de fluorescence et/ou la polarisation de fluorescence. Dans ce contexte, le terme étalonnage se rapporte à la longueur d'onde du signal fluorescent, l'intensité du signal de 15 fluorescence, la durée de vie ou la durée du signal de fluorescence, et/ou l'alignement de la plaque micropuits. L'alignement peut être vérifié en déplaçant la plaque, par rapport au lecteur, jusqu'à une position dans laquelle l'intensité maximale de fluorescence est observée. De façon appropriée, l'instrument est choisi dans le groupe constitué d'un lecteur de plaques et d'un système d'imagerie. De préférence, l'instrument est un système d'imagerie. De façon particulièrement préférée, l'instrument est un système d'imagerie LeadseekerTM ou Vie25 wluxTM. Selon un troisième aspect, la présente invention concerne une méthode de production d'une plaque de référence de fluorescence multi-modalité comprenant les étapes: i) d'impression jet d'encre ou de sérigraphie d'un composé fluorogène sur une première surface d'une feuille de base; et ii) de fixation d'une feuille de base sur une première surface d'une plaque comprenant un ou plusieurs puits pour fournir un joint entre ceux-ci. De préférence, le joint est étanche à l'eau si 5 des liquides sont distribués dans l'un quelconque des puits de la plaque. ventuellement, la méthode comprend également les étapes ultérieures consistant à fixer un support sur une seconde surface de la feuille de base pour la renforcer. De 10 préférence, le support comprend deux surfaces plates de telle façon qu'une surface plate touche la feuille de base et l'autre serve de fond à la plaque multipuits. De préférence, la feuille de base comprend du papier d'impression. De préférence, le papier d'impression 15 comprend un film métallique notamment choisi dans le groupe constitué d'argent, aluminium, étain ou or. De façon particulièrement préférée, le film métallique comprend de l'aluminium. De préférence, le papier d'impression comprend en 20 outre un revêtement polymérique. Plus avantageusement, le revêtement polymérique comprend un polymère organique. De façon appropriée, la feuille de base comprend un polymère organique. De préférence, le polymère est choisi dans le groupe constitué de polyéthylène, polystyrène et 25 chlorure de polyvinyle (PVC). De façon appropriée, la base comprend un métal. De préférence, le métal comprend de l'aluminium ou de l'acier inoxydable. De façon appropriée, le composé fluorogène est 30 d'abord dissous ou mis en suspension dans un solvant aqueux ou organique et transféré dans une cartouche d'impression jet d'encre standard pour imprimer sur une feuille de base. De façon appropriée, le composé fluorogène est choisi dans le groupe constitué de fluorescéine, rhodamine, 5 ombelliférone, Hoechst 33342, Cy2, Cy3, Cy3B, Cy5, Cy5B, Cy7, CypHer, coumarine, DAPI, Alexa 633, DRAQ5, Alexa 488, acridone, quinacridone et chélate de lanthanide. Les chélates de lanthanide typiques incluent l'europium et le terbium, le dysprosium et le samarium. De préférence, le composé fluorogène est constitué d'atomes stables, non radioactifs. De façon appropriée, le nombre de puits dans la plaque est choisi dans le groupe constitué de un, six, douze, vingt-quatre, quarante-huit, quatrevingt-seize, 15 trois cent quatre-vingt-quatre et mille cinq cent trentesix. De préférence, la plaque est constituée de quatrevingt-seize, trois cent quatre-vingt-quatre ou mille cinq cent trente-six puits. Les figures la et b sont des représentations 20 schématiques de l'impression jet d'encre d'un (de) composé(s) fluorogène(s) sur la surface d'une feuille de base. Les figures 2a-c illustrent la fixation d'une feuille de base sur une plaque possédant une pluralité de micropuits. Les figures 3a-c représentent le même procédé que les figures 2a-c excepté que la feuille de base a une surface moindre. Les figures la et lb illustrent schématiquement l'impression jet d'encre d'un (ou de) composé(s) fluoro30 gène(s) sur une première surface d'une feuille de base (10). Dans l'exemple présenté (figure la), la feuille de l1 base (10) est composée d'un papier d'impression qui comprend un film d'aluminium (13) recouvrant une première surface de papier (15). Le film d'aluminium (13) peut éventuellement être recouvert par un revêtement de polymère 5 (non montré) pour faciliter le procédé d'impression ultérieur. Un papier d'impression approprié est, par exemple, " Silvery Glossy Film " (réf. F02CMET) de Sensitisers Group Ltd. Le composé fluorogène est dissous dans un solvant aqueux approprié (par exemple 1,5-pentanediol et triméthyl10 propane (10-15 % poids/poids)) et la solution résultante est introduite dans une cartouche d'impression jet d'encre standard (par exemple Hewlett Packard (HP) 516410A ou Canon BCI-21). Sur la figure la, la solution contenant le composé fluorogène (22) est imprimée sur la surface du film 15 d'aluminium (13) par la buse de l'imprimante jet d'encre (20). Dans d'autres modes de réalisation, on notera que la feuille de base (10) peut être composée d'un polymère de plastique sur lequel il est possible d'imprimer directement. La figure lb illustre un revêtement par un composé fluorogène (12), représenté par les lignes hachurées, qui a été imprimé sur la surface du film d'aluminium (13) de la plaque de base (10). On notera que le procédé d'impression jet d'encre peut être soigneusement contrôlé 25 afin d'imprimer des surfaces spécifiques de la plaque de base (10); de cette manière, seules les régions des plaques qui seront finalement lues par le fluorimètre peuvent être traitées avec le composé fluorogène. Par exemple, il est possible de contrôler l'impression de telle façon que 30 la base de chaque puits soit enduite par la solution contenant la substance fluorogène, ce qui permet d'économiser le produit et de réduire les cots. L'impression jet d'encre de composés fluorogènes est bien connue dans le domaine. Le brevet US 6 402 986, par exemple, décrit une méthode d'impression jet d'encre d'une solution aqueuse d'un dérivé d'europium, utilisant une cartouche HP standard, pour faciliter l'identification et la vérification du produit. Le brevet US 2002/0047884 5 décrit également l'utilisation de compositions d'encre spécifiques contenant des mélanges de composés fluorescents qui peuvent être appliquées sur des articles par impression jet d'encre. Dans les exemples ci-dessus, cependant, les colorants sont utilisés d'une manière qualitative plutôt 10 que quantitative pour marquer et identifier les produits. Les figures 2a-c illustrent le procédé par lequel la feuille de base (110) est fixée sur la plaque (130). La figure 2a montre que la plaque (130) est constituée d'un bloc, avec des parois (133), comprenant une pluralité de 15 puits (135) la parcourant. Dans l'exemple présenté, il y a 384 puits dans le bloc, mais d'autres possibilités existent par exemple, 24, 48, 96 et 1536. Typiquement, le bloc est composé de polystyrène noir, mais d'autres substances, y compris d'autres plastiques et métaux (par exemple, de 20 l'aluminium) peuvent être utilisées. La figure 2b montre la feuille de base (110) de la figure lb, enduite avec le composé fluorogène (112), en position pour être fixée sur la plaque (130). Le procédé de jonction ou de fixation (flèche A) peut être réalisé par 25 des méthodes bien connues dans le domaine, telles que par adhésion ou par soudure, afin de sécuriser le joint entre la feuille de base (110) et la plaque (130). Le joint réalisé peut être étanche si la plaque doit être utilisée avec des échantillons liquides. Lorsque le composé fluoro30 gène est uniquement déposé sur des surfaces spécifiques de la feuille de base, la précision en ce qui concerne l'alignement de la plaque et de la feuille de base est évidemment critique car les puits doivent être positionnés uniquement au-dessus des surfaces de la feuille qui ont un revêtement de produit fluorogène. Une fois la feuille de base (110) réunie à la plaque (130) par le procédé de fixation (figure 2c), la 5 plaque micropuits (140) est prête à l'emploi. Comme on peut le voir, la feuille de base (110) est plus large et plus longue que la plaque (130) pour garantir la réalisation d'une fixation sre. Cependant, on notera qu'une jonction acceptable ne sera obtenue qu'à condition que la feuille de 10 base soit plus large que la surface des puits(et pas nécessairement plus large que la surface de la plaque). Dans une telle situation, la feuille de base s'adapte à " l'empreinte " de la plaque multipuits (140) de telle sorte qu'elle est insérée entre les parois latérales (133). 15 Dans certaines situations, dans lesquelles les solutions ou échantillons liquides testés sont répartis dans les puits (135) de la plaque (140), il est essentiel que les joints soient étanches. Des volumes typiques de solutions de test sont dans une gamme entre 1 g1 et 1 ml. Bien que non montré aux figures 2a-c, on notera qu'un support supplémentaire peut être placé en position adjacente à une seconde surface de la feuille de base pour obtenir un renforcement. Les figures 3a-c représentent la fixation d'une 25 feuille de base (210) à la plaque (230) dans laquelle la feuille de base (210) présente une surface uniquement marginalement supérieure à la surface totale des puits (235). La figure 3a illustre schématiquement une vue en perspective du plan inférieur de la plaque (230), montrant qu'elle 30 comprend une pluralité de puits (235) la traversant. Sur la figure 3b, on voit que la feuille de base (210) comprend un film en aluminium (213) au dessus de la feuille de papier (215). La surface exposée du film d'aluminium (213), qui n'est pas présentée dans la vue en perspective, a été revêtue d'un composé fluorogène (comme décrit à la figure 1 ci-dessus). Cette surface enduite est fixée ou jointe à la base de la plaque (230), comme indiqué 5 par la flèche A, pour former un joint entre les surfaces en contact. Le procédé de fixation peut être réalisé par tout moyen conventionnel connu dans le domaine, tel que soudure ou adhésion. La figure 3c représente la plaque multipuits ré10 sultante (240) dans laquelle la feuille de base (210) est réunie à la plaque (230) de sorte que la surface de la feuille enduite de fluorogène forme à présent la base des puits (non montré). Comme on peut le voir, la feuille de base s'adapte à " l'empreinte " de la plaque micropuits 15 (240) car la surface de la plaque de base est uniquement marginalement plus grande que celle des puits de la plaque. Bien que non montré dans les figues 3a-c, une plaque support supplémentaire (par exemple de polyéthylène) peut éventuellement être jointe à la surface exposée et non 20 traitée de la feuille de base (210) pour la renforcer. Exemple Des résultats de fluorescence typiques d'une plaque de référence réalisée conformément à la présente invention sont présentés dans le tableau 1. On dissout le fluo25 rophore Cy3 dans une solution de base aqueuse d'encre d'impression (Coates Brothers plc, Bath, Royaume-Uni) pour obtenir une concentration de 10 gM. On introduit la solution dans une cartouche d'impression jet d'encre Canon BCI21 et on l'insère dans une imprimante Canon S100 standard. 30 On applique un revêtement uniforme de Cy3 sur une feuille de base, comprenant un " Silver Glossy Film ", par impression jet d'encre et on construit une plaque de référence à 384 puits comme décrit aux figures 3a-c ci-dessus. Les lectures d'intensité de fluorescence de l'ensemble des 384 puits sont ensuite obtenues en utilisant une longueur d'excitation de 558 nm avec un système d'imagerie LeadseekerTM. L'intensité moyenne est présentée 5 dans le tableau 1 ci-dessous. Comme on peut le voir, le coefficient de variation obtenu est extrêmement faible, mettant en évidence l'exactitude et la précision du procédé d'impression de l'invention et l'uniformité du signal de fluorescence produit. Tableau 1: Analyse des mesures de fluorescence Description valeur Nombre de lectures 384 Lecture moyenne 9538,1 (unités d'intensité de fluorescence) Ecart-type 79,91927 (unités d'intensité de fluorescence) Coefficient de variation 0,837895 REVENDICATIONS 1. Plaque de référence de fluorescence multi-modalité comprenant un ou plusieurs puits, chacun desdits puits (135; 235) comprenant une ou plusieurs parois (133) et une 5 base (10; 110; 210) dans laquelle ladite base d'au moins un puits comprend un revêtement d'un composé fluorogène (12; 112). 2. Plaque de référence de la revendication 1, dans laquelle ledit revêtement est appliqué par impression jet 10 d'encre sur la base. 3. Plaque de référence de la revendication 1 ou 2, dans laquelle le revêtement est appliqué par sérigraphie sur la base. 4. Plaque de référence de l'une quelconque des re15 vendications 1 à 3, dans laquelle la base comprend du papier d'impression (45). 5. Plaque de référence de la revendication 4, dans laquelle ledit papier d'impression comprend un film métallique (213). 6. Plaque de référence de la revendication 5, dans laquelle ledit film métallique est choisi dans le groupe constitué d'aluminium, argent, étain et or. 7. Plaque de référence de l'une quelconque des revendications 4 à 6, dans laquelle le papier d'impression 25 comprend en outre un revêtement polymérique. 8. Plaque de référence de l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle la base comprend un polymère organique. 9. Plaque de référence de la revendication 8, dans laquelle le polymère organique est choisi dans le groupe constitué de polyéthylène, polystyrène et chlorure de polyvinyle (PVC). 10. Plaque de référence de l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle la base comprend un métal. 11. Plaque de référence de la revendication 10, dans laquelle le métal comprend de l'aluminium ou de l'acier 10 inoxydable. 12. Plaque de référence de l'une quelconque des revendications 1 à 11, dans laquelle le composé fluorogène est constitué d'atomes stables, non radioactifs. 13. Plaque de référence de l'une quelconque des re15 vendications 1 à 12, dans laquelle le composé fluorogène est choisi dans le groupe constitué de fluorescéine, rhodamine, ombelliférone, Hoechst 33342, Cy2, Cy3, Cy3B, Cy5, Cy5B, Cy7, CypHer, coumarine, DAPI, Alexa 633, DRAQ5, Alexa 488, acridone, quinacridone et chélate de lanthanide. 14. Plaque de référence selon la revendication 13, dans laquelle ledit chélate de lanthanide est choisi dans le groupe constitué d'europium, terbium, dysprosium et samarium. 15. Plaque de référence selon l'une quelconque des 25 revendications 1 à 14, dans laquelle le nombre de puits dans la plaque est choisi dans le groupe constitué de un, six, douze, vingt-quatre, quarante-huit, quatre-vingtseize, trois cent quatre-vingtquatre et mille cinq cent trente-six. 16. Utilisation de la plaque de référence selon l'une quelconque des revendications 1 à 15 pour l'étalonnage d'instruments utilisés pour mesurer la fluorescence à l'état stationnaire, la fluorescence résolue dans le temps, la durée de vie de fluorescence et/ou la polarisation de fluorescence. 17. Utilisation de la plaque de référence selon la revendication 16, dans laquelle l'étalonnage concerne la longueur d'onde du signal de fluorescence, l'intensité de la fluorescence, la durée de vie ou la durée du signal de fluorescence et/ou l'alignement de la plaques micropuits. 18. Utilisation de la plaque de référence selon l'une quelconque des revendications 16 ou 17, dans laquelle ledit instrument est un lecteur de plaques ou un système d'imagerie. 19. Utilisation de la plaque de référence selon la 15 revendication 18, dans laquelle ledit système d'imagerie est un instrument LeadseekerTM ou ViewluxTM. 20. Méthode de production d'une plaque de référence de fluorescence multimodalité comprenant les étapes: i) d'impression jet d'encre ou de sérigraphie 20 d'un composé fluorogène sur une première surface d'une feuille de base; et ii) de fixation de ladite feuille de base sur une première surface d'une plaque comprenant un ou plusieurs puits pour fournir un joint entre 25 ceux-ci. 21. Procédé de la revendication 20, dans lequel ledit joint est un joint étanche à l'eau. 22. Procédé de l'une quelconque des revendications 20 ou 21, comprenant en outre l'étape supplémentaire consis- tant à fixer un support à une seconde surface de la feuille de base pour la renforcer. 23. Procédé de l'une quelconque des revendications 20 à 22, dans lequel la feuille de base comprend du papier d'impression. 24. Procédé de la revendication 23, dans lequel ledit papier d'impression comprend un film métallique. 25. Procédé de la revendication 24, dans lequel ledit film métallique est choisi dans le groupe constitué 10 d'argent, aluminium, étain et or. 26. Procédé de la revendication 25, dans lequel le film métallique comprend de l'aluminium. 27. Procédé de l'une quelconque des revendications 23 à 26, dans lequel le papier d'impression comprend en outre 15 un revêtement de polymère. 28. Procédé de l'une quelconque des revendications 20 à 22, dans lequel la feuille de base comprend un polymère organique. 29. Procédé selon la revendication 28, dans lequel 20 ledit polymère organique est choisi dans le groupe constitué de polyéthylène, polystyrène et chlorure de polyvinyle. 30. Procédé selon l'une quelconque des revendications 20 à 22, dans lequel la feuille de base comprend un métal. 31. Procédé selon la revendication 30, dans lequel ledit métal comprend de l'aluminium ou de l'acier inoxydable. 32. Procédé de l'une quelconque des revendications 20 à 31, dans lequel le composé fluorogène est choisi dans le groupe constitué de fluorescéine, rhodamine, ombelliférone, Hoechst 33342, Cy2, Cy3, Cy3B, Cy5, Cy5B, Cy7, CypHer, coumarine, DAPI, Alexa 633, DRAQ5, Alexa 488, acridone, quinacridone et chélate de lanthanide. 33. Procédé de l'une quelconque des revendications 20 à 32, dans lequel le composé fluorogène est constitué d'atomes stables, non radioactifs. 34. Procédé selon l'une quelconque des revendications 20 à 33, dans lequel le nombre de puits dans la pla10 que est choisi dans le groupe constitué de un, six, douze, vingt-quatre, quarante-huit, quatre-vingt-seize, trois cent quatre-vingt-quatre, et mille cinq cent trente-six.