Brevet FR2838342A1 — publié le 20031017

sensibles. COMPOSITIONS COSMETIQUES OU DERMOPHARMACEUTIQUES RENFERMANT UN EXTRAIT DE MACROALGUE MARINE COMME PRINCIPE ACTIF ANTI-OXYDANT ET/OU ANTI-POLLUTION La présente invention concerne des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques renfermant un extrait de l'algue marine Sargassum muticum (algue brune) en vue de lutter contre les conséquences du stress oxydatif induit par les espèces réactives de l'oxygène, les rayonnements ultraviolets et la pollution, notamment la pollution par les gaz toxiques. Dans la vie cellulaire normale, I'oxygène représente le carburant essentiel à toute vie aérobie. I1 représente aussi un réactif redoutable au niveau de noke organisme car il est responsable de réactions chimiques très toxiques pour les cellules. Ces processus conduisent à la formation de plusieurs espèces oxygénces très réactives, notamment l'oxygène singulet, 1'anion superoxyde, le peroxyde d'hydrogène et le radical hydroxyle. En fait, ces molécules activées font partie intégrante de l'activité et du métabolisme des cellules. Elles sont produites in viro dans des conditions biologiques normales à partir de lipides insaturés, de certains acides aminés ou même de l'oxygène au cours de réactions enzymatiques spontances du métabolisme général. Certaines agressions externes favorisent la formation des espèces oxygénées réactives, en particulier le rayonnement ultraviolet A et l'ozone dont l'exposition concomitante peut induire un stress oxydatif synergique. Le rayonnement ultraviolet A en pénétrant jusqu'au derme provoque des stress oxydatifs qui impliquent plusieurs espèces chimiques, notamment l'oxygène singulet, les radicaux hydroxyles et le peroxyde d'hydrogène (Gaboriau et al., 1995 - Arch. Dermatol., 287: 338 - 340; Morlière, 1996 Cosmétologie, 11: 32 - 2 - 36). I1 se produit aussi une peroxydation lipidique et une génération d'anions superoxydes (Morlière et al., 1991 Biochimica et Biophysioca Acta, 1084: 261 268; Moysan ef al., 1993 - J. Invest. Dermatol., 100: 692 - 698). Toutes ces formes réactives oxygénées sont des acteurs très importants des réactions photo-induites principalement par les WA dont les effets sont majoritairement médiés par ces formes activées de l'oxygène (Morlière et al., 1992 - Pathol. Biol., 40: 160 - 168). L'ozone (03) se forme en partie à partir de l'oxygène de l'air sous l'action o de rayons cosmiques. Sa présence apparaît de plus en plus importante dans l'atmosphère des villes surtout lorsque les trois facteurs suivants sont réunis: l'ensoleillement, les vapeurs d'essence et la richesse en oxydes d'azote. En fait la molécule d'ozone n'est pas un radical proprement dit mais c'est l'un des oxydants les plus puissants. L'ozone provoque un stress oxydatif au niveau cutané. I1 est capable de réagir avec une grande variété de systèmes biologiques. Les dommages générés sont attribués à sa capacité de provoquer la destruction oxydative des biomolécules soit par réaction directe soit par la formation de radicaux libres intermédiaires, so it encore par les deux processus. La toxicité de l'ozone fait intervenir plusieurs phénomènes (Mustapha, 1990 - Biochemical basis of ozone toxicity In: Free Radical Biology & Medecine, vol. 9: 245 - 265), notarnment l'initiation de la peroxydation lipidique, la perte oxydative de groupements ou d' activités de biomolécules, l' altération de la perméabilité et de la fonctionnalité des membranes, l'induction de l'inflammation. 2s Le mécanisme le plus important semble être la peroxydation des lipides des membranes (Pryor et al., 1991 - Chem. Res. Toxicol., 4: 341 - 348; Pryor, 1993 J. Lab. Clin. Med., 122: 483-486). En fait, notre organisme est naturellement protégé contre les phénomènes oxydatifs grâce à des systèmes chimiques et enzymatiques. Mais lorsque ces systèmes de déLense sont ou deviennent ineffcaces, il s'ensuit un déséquilibre (et donc le stress oxydatif) entraînant de nombreux effets nétastes au sein des cellules et sur tous leurs constituants, notamment sur l'ADN et les membranes phospholipidiques. L'ADN subit des motations, des coupures de brins au niveau des bases puriques et pyrimidiques. Ce phénomène concerne aussi bien 1'ADN nucléaire que 1'ADN mitochondrial (Brawn & Fridovich, 1980 - Acta Physiol. Scand., 492:9-18). Les membranes phospholipidiques subissent la peroxydation des lo acides gras polyinsaturés. Cette peroxydation va altérer leur structure et leur fonctionnalité en provoquant des perturbations au niveau des potentiels transmembranaires, des flux ioniques et des transports membranaires. I1 se produit aussi l' inactivation des récepteurs membranaires et la dérégulation de signaux de transduction. Mais les radicaux libres oxygénés ne font pas que s'attaquer à 1'ADN et aux lipides des cyto membranes. En fait, toutes les familles de macro mo lécule s sont concernées telles les polysaccharides et les protéines. Les constituants de la matrice extracellulaire sont aussi affectés avec dépolymérisation de l'acide hyaluronique, altérations anarchiques du collagène et de l'élastine. Tous les dommages occasionnés par les espèces réactives de l'oxygène sont de plus potentialisés par la présence de l'oxygène. Ils expliquent de nombreuses perturbations, en particulier la détérioration de nos tissus, la 2s dérégulation du système immunitaire et méme divers processus pathologiques graves liés à l'inflammation, l'irradiation et la cancérogenèse (Borck, 1998 - AIM 49:43-48). Au niveau de la peau, les effets nocifs se traduisent par un vieillissement accéléré, une apparence terne du teint et la formation précoce de rides et de ridules. Ces effets nocifs se font aussi sentir sur les phanères qui sont également en contact direct et permanent avec le milieu extérieur, avec par exemple une diminution de la vigueur des cheveux. Or les auteurs de la présente invention ont constaté, de manière inattendue et surprenante, que les extraits de l'algue brune Sargassum muticum présentaient des effets in vitro remarquables vis-à-vis des agressions occasionnces par plusieurs espèces réactives oxygénées et la pollution. Ces résultats ont permis d'envisager avantageusement l'incorporation de cet extrait dans les produits cosmétiques ou dermopharmaceutiques, plus particulièrement dans toutes les applications o l'on cherche une protection vis-à- vis du stress oxydatif et des pollutions, leurs effets étant tout autant néfastes au niveau de la peau qu'au niveau des phanères. Sargassum muticam (Yendo) Fensholt est une macroalgue appartenant au phylum des HeteroLontophyta, à la classe des Phaeophyta (algues brunes), à l'ordre des Fucales et à la famille des Sargassacées. Elle est originaire du Japon. De nombreux travaux se rapportent à sa composition chimique et au caractère invasif de sa distribution géographique. Dans le domaine cosmétique, le brevet S.E.C.M.A. FR 2 655 268 signale les activités antiradicalaires de cette espèce algale, mais les dites activités prouvées à l' aide d'un dosage biochimique sont limitées exclusivement au radical superoxyde. Dans le cadre de la présente invention, il a été découvert, de manière tout à fait surprenante, que l'utilisation d' un extrait de ladite espèce algale Sargassum muticum permet une protection au niveau cellulaire contre l'anlon superoxyde mais en plus, contre d'autres espèces réactives de l'oxygène plus - 5 particulièrement contre l'oxygène singulet, le peroxyde d'hydrogène, le radical hydroxyle et - présente également une activité cytoprotectrice vis-à-vis de la pollution, s notamment la pollution par les gaz toxiques, l' ozone en particulier. Dans un mode de réalisation avantageux, 1' extrait d'algue selon la présente invention est un extrait aqueux caractérisé en ce que l'on réalise l'extraction à partir de thalles ou de quelque partie isolée de thalles sous forme frache, congelée, lo sèche, entière, fragmentée ou broyée. Plus particulièrement, l'extrait est avantageusement obtenu par macération des thalles dans un solvant ou un mélange de solvants suivie d'une filtration et d'une centrifugation pour éliminer les particules. Dans un mode préféré de réalisation de la présente invention, l'extrait ainsi obtenu est calibré par des ultrafiltrations et concentrations successives. A titre de solvants avantageusement employés, on citera l'eau, les solvants chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les esters en C2 à CS tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en C1 à C6 tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène glycol et le butylène glycol, sans que cette liste soit limitative. Ces solvants peuvent être utilisés seuls ou en mélange. 2s L'extraction peut étre renouvelée plusieurs fois jusqu'à épuisement des thalles conformément aux procédés bien connus de l'homme de l'art. La proportion en masse entre le solvant et le matériau frais à extraire peut varier dans de larges limites. Plus précisément elle peut être comprise entre 10: 1 et 1: 5 et de prétérence 1: 2. Des améliorations, optimisations et modifications du procédé de préparation des extraits sont envisageables. A la place de la macération simple, on peut employer les techniques à contre courant, la décoction, la lixiviation, l'extraction sous reflux, l'extraction à l'aide d'ultrasons ou de micro-ondes associée ou non aux solvants, l' extraction au moyen de fluides sup ercritiques, notamment de CO2 supercritique avec ou sans co-solvant. Pour certaines applications cosmétiques, il peut s'avérer judicieux de concentrer et de purifier l'extrait liquide ou encore de préparer un extrait sec à lo partir d'extrait liquide par exemple par des techniques classiques de séchage, précipitation, évaporation, atomisation ou Iyophilisation. D 'autres caractéristiques et avantages de l' invention appara^tront à la lecture des exemples qui suivent, qui sont donnés à titre purement illustratifs et ne 1 5 sont pas limitatifs de l' invention. Exemple n l: Préparation d'un extrait selon l'invention La préparation de l'extrait de Sargassuum muticum selon l' invention comprend la succession des étapes suivantes: - 200 g de thalles préalablement séchés et réduits en poudre sont dispersés dans 2000 ml d'eau sous agitation modérée et à la température ambiante, - la suspension est filtrée et centrifugée pour éliminer les particules, - le surnageant est ensuite soumis à des ultrafiltrations successives et enfin 2s concentré jusqu'à la calibration de ses activités. L'extrait obtenu est limpide et de couleur ambre foncé. Exemple n 2: Mise en évidence de l'effet protecteur vis-à-vis de plusieurs espèces réactives de l'oxvène Les deux exemples suivants démontrent les effets protecteurs in vitro - 7 de l'extrait de Sargassum maticam préparé selon l'invention vis-à-vis de plusieurs espèces réactives de l'oxygène, sans que cela soit limitatif quant aux autres activités cosmétiques et dermocosmétiques qui ont été mises en évidence au cours du développement de cet agent cosmétique. 2-l Effet urotecteur de l'ADN vis-à-vis de l'o2eène sinaulet et du radical hdrowle Cet exemple démontre l'effet protecteur de l'extrait de Sargassum muticum o préparé selon l'invention, sur l'ADN vis-à-vis de l'oxygène singulet et du radical hydroxyle. L'oxygène singulet est un oxydant puissant non radicalaire réagissant rapidement sans catalyseur avec de nombreuses structures organiques, notamment l'ADN. Il est très diffusible et par conséquent très toxique. Le radical hydroxyle est considéré comme l'espèce radicalaire ayant le plus fort pouvoir oxydant sur les biomolécules. Conditions expérimentales: Le protocole utilisé est le test in vitro 3D (SFRI) sur ADN plasmidique. Il s'agit d'un système de détection des dommages sur de l'ADN capté sur microplaque (Salles et al., 1995 - Anal. Biochem., 232: 37 - 42). L'oxygène singulet est généré par éclairement du bleu de méthylène et les radicaux hydroxyles par scission homolytique de l'eau oxygénée. Ces espèces oxygénées, très électrophiles, possèdent une durée de vie très courte. Elles réagissent donc très rapidement avec des bases de l'ADN et induisent divers dommages, notamment une modification ou une perte de bases. Génération de l'oxygène singulet par éclairement au bleu de méthylène: Une solution stock de bleu de méthylène à lOIlg/ml a été diluée à la concentration de 4 ng/ml dans de l'eau ultrapure (qualité MilliQ de Millipore). - 8 Cette solution est mélangée à volume égal avec différentes dilutions de l'extrait de Sargassum mutcum (1% - 2,5% et 10%j. 501 du mélange sont ajoutés dans les puits d'une microplaque contenant de 1'ADN plasmidique adsorbé. L'ensemble est ensuite éclairé pendant 20 minutes sous deux lampes de 100 Watts, distantes de 30 cm. Génération des radicaux hydroxyles par scission homolytique de l'eau oxygénée: L'eau oxygénée est diluce à 10mM dans de l'eau ultrapure. Cette solution est mélangée à volume égal avec différentes solutions de l'extrait algal objet du présent brevet (1% - 2,5% et 10%). On ajoute 50 1ll du mélange dans les puits contenant l'ADN plasmidique adsorbé. L'ensemble est ensuite éclairé pendant une minute et 30 secondes sous une lampe WB (312 nm) ce qui correspond à une dose de 700 Joules/m2. Les autres étapes du test sont les suivantes: - une étape de réparation des lésions par les complexes spécifiques de réparation. Au cours de la phase de resynthèse du brin d'ADN excisé, un nucléotide marqué à la biotine est incorporé dans 1'ADN, - une étape de reconnaissance de la biotine par une molécule d'avidine couplée à une molécule de peroxydase, - une étape de révélation de la réaction par addition d'un substrat chimiluminescent de la peroxydase. Résultats: Pour une meilleure visualisation des résultats, ceux-ci sont exprimés comme le pourcentage d' inhibition de la formation de dommages oxydatifs sur 1'ADN ou pourcentage de protection. La valeur 0% correspond au signal de réparation de 1'ADN lésé par l'oxydant seul. Le pourcentage d'inhibition ou de protection (P) en présence d'espèces réactives de l'oxygène est calculé comme la baisse relative de l'effet lésionnel due à l'oxygène singulet soit: [RLU oxydant] - [RLU (oxydant + échantillon)] () - ----------------------- x 1 0 0 [ RLU oxydant] avec RLU: Relative Light Units (unités arbitraires de quantité de lumière) . La protection spécifique est le reflet de l'activité antiradicalaire due à l'extrait testé. Les résultats obtenus montrent qu'en présence de l'extrait de Sargassum muticum préparé selon l'invention à la concentration de 1% - 2,5% et 10%, - la protection spécifique de 1'ADN vis-à-vis de l'oxygène singulet est respectivement de 50% - 63% et 60%. - la protection spécifique de 1'ADN vis-à-vis du radical hydroxyle est respectivement de 38% - 54% et 61%. Cette capacité protectrice dudit extrait permet des applications destinées à protéger le matériel génétique et à lutter contre les mutations induites par exemple par divers radicaux libres et agents chimiques ou encore par les différents rayonnements ultraviolets. 2-2 Effet protecteur antiradicalaire au niveau cellulaire vis-à-vis de l'anion suneroxvde et du peroxvde d'hydroène Cet exemple démontre l'effet protecteur de l'extrait de Sargassum muticum selon l'invention sur des kératinocytes humains soumis au système enzymatique hypoxanthine (HX)xanthine oxydase (XO) qui génère des anlons superoxydes et du peroxyde d' hydrogène. L' attaque cellulaire est rapide et principalement en rapport avec les altérations membranaires provoquées par le peroxyde d'hydrogène. - 10 Conditions expérimentales: Le proto co le utilisé dans cet exemp le e st adapt é de s travaux de No ë l Hudsonetal., (1990-Int. J. Cosmetic Sc., 12: 105-114). Des suspensions de kératinocytes humains sont ensemencées dans leur milieu de culture dans des microplaques 96 puits à raison de 10000 cellules par puits. Après 24 h d'incubation, à 37 C dans une atmosphère à 5% de CO2, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu neuú Les doses d' hypoxanthine (HX) dans le tampon PBS et de xanthine oxydase (XO) dans le même tampon constituant le système enzymatique sont respectivement de 80 1lg.mli pour l'hypoxanthine, 20 mU.ml- pour la xanthine oxydase. L'extrait de Sargassum muticum préparé selon l'invention est testé à quatre concentrations différentes (2,5% - 5% - 7,5% et 10%). I1 est administré selon trois modalités, à savoir avant l'exposition à l'agression durant 24 heures (P1), pendant l'exposition à l'agression durant 150 minutes (P2) et avant et pendant l'exposition à l'agression (P1 + P2 = P3). Le standard choisi est la vitamine C à la concentration de 5.104 M appliquée selon les mémes modalités expérimentales. Après l'agression, les cellules sont soumises au test classique de viabilité cellulaire du MTT. Résultats: Le pourcentage de l'activité protectrice antiradicalaire C est déterminé par l'équation suivante: C ( /O) = [(A - B) / A] x 100 pour laquelle A = [ (DO cw - DO EW) / DO cw] x 100 B [ (DO TCW-DO TEW) / DO TCW] X 1 OO avec DO densités optiques CW puits témoins (cellules seules) EW puits exposés (cellules exposées au système HX-XO) TCW puits témoins traités (cellules avec l'extrait de Sargassum selon l' invention) TEW puits traités et exposés (cellules traitées avec l'extrait algal selon l' invention et exposées au système HX-XO). Les résultats ci-après représentent la moyenne de trois expérimentations avec 3 points pour chaque traitement. Les moyennes sont exprimées avec un risque d'erreur a = 0,05. lo Pour une dose de 5% d'extrait selon l'invention et avec les conditions expérimentales définies dans le présent brevet, l'activité protectrice des kératinocytes humains vis-à-vis de l'agression induite par l' anion superoxyde et le peroxyde d'hydrogène généré par le système enzymatique (en %) est de 11,9 + 0,4 pour P1 - 20,4 + 0,1 pour P2 et 21,9 + 0,8 pour P3. Pour une dose de 7,5% dudit extrait, elle est de 13,4 + 0,2 pour P1 - 23, 1 + 0,7 pour P2 et 31,1 + 0,6 pour P3. Pour une dose de 10% dudit extrait, elle passe à 14,4 + 0,8 pour P1 - 25, 8 + 0,5 pour P2 et 35,1 i 0,2 pour P3. Pour la ré térence vitamine C et avec le s mê me s co nd it io ns expériment ale s, cette activité protectrice antiradicalaire n'est que de 12 + 0,2 en P1 - 10 + 0,3 en P2 et 18+ 0,5 en P3. Les analyses réalisées par les inventeurs démontrent donc bien que l'extrait de Sargassum muticum selon l'invention possède un effet protecteur antiradicalaire efficace au niveau cellulaire vis-à-vis de l'anion superoxyde et du peroxyde d'hydrogène généré par le système enzymatique hypoxanthine-xanthine oxydase. Le fait d'introduire l'extrait à divers stades de la culture cellulaire (avant et/ou pendant l'agression) permet de plus de préciser le mode d'action de l'extrait. - 12 - Dans l'administration P1, l'extrait est éliminé du milieu de culture avant l'agression. L'activité enregistrée révèle que l'extrait de Sargassum muticum préparé selon l' invention est capable de pénétrer dans les kératinocytes humains pour les protéger contre les radicaux libres intracellulaires. - Dans l'administration P2,1'extrait de Sargassum préparé selon l'invention est présent au moment o l'agression enzymatique se déroule. L'activité enregistrée prouve que ledit extrait a été capable d'intercepter les radicaux libres formés à l'intérieur des cellules. lo - Les données enregistrées pour P3 (= P1 + P2) confirment bien la capacité protectrice antiradicalaire de l'extrait de Sargassum muticam objet du présent brevet vis-à-vis du peroxyde d'hydrogène généré par le système enzymatique hypoxanthine-xanthine oxydase pour les kératinocytes humains. Ces résultats permettent des applications destinées à lutter contre les radicaux libres actifs par exemple dans le vieillissement cutané. Exemple n 3: Mise en évidence d'un effet protecteur anti-UVA Cet exemple démontre les effets protecteurs de l'extrait objet du présent brevet sur des cellules fibroblastiques en culture soumises aux UVA. Les rayonnements ultraviolets A génèrent à l'intérieur des cellules plusieurs espèces réactives oxygénées, notamment de l'oxygène singulet, du radical hydroxyle et du peroxyde d'hydrogène (Morlière et al., 1992 Pathol. Biol., 40: 160-168, Morlière, 1996-Cosmétologie, 11: 32-36). Ils sont capables de provoquer des dommages cutanés profonds et insidieux (Béani, 1996 - Ann. Dermatol.Venereol., 123: 666-674; Moyal et al., 1998 Nouv. Dermatol., 17: 326-329). - 13 Conditions expérimentales et résultats: Des fibroblastes sont ensemencés avec du milieu de culture EMEM supplémenté en sérum de veau f_tal (10%) dans des microplaques 96 puits. s Après 24 heures d'incubation à 37 C dans une atmosphère avec 5% de CO2, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu neuf. Les ajouts de l'extrait de Sargassum muticum dans le milieu de culture (4 concentrations testées: 2%, 4%, 6% et 8%) sont efectués avant et pendant l'exposition à l'agression des rayonnements UVA longs, 366 nm) pendant 6 heures. Le standard choisi est la lo silymarine à la concentration de 5. 10=M appliquée selon les mémes conditions expérimentales. Le test de viabilité par réduction au MTT est réalisé 24 heures après l'agression. Le pourcentage de l'activité protectrice antiradicalaire C est déterminé selon l'équation définie pour l'exemple n 2, paragraphe 2, page 10. Les résultats IS sont exprimés avec un risque d'erreur a = 0,05. L'activité protectrice anti-UVA (en %) au niveau cellulaire de l'extrait de Sargassum mutczlm selon le présent brevet aux doses de 2%- 4% - 6% et 8% est respectivement de 107 + 3 - 168 + 4 - 184 + 4 et 218 + 6. Celle de la silymarine est de 69 + 5 pour les conditions précitées. Les résultats obtenus pour l'extrait, objet du présent brevet permettent des applications dans la protection contre les rayonnements ultraviolets, en particulier la protection solaire. 2s Exemple n 4: Mise en évidence de l'effet cvtoprotecteur vis-à-vis de la polluffon En solution aqueuse, l'ozone se décompose avant de réagir avec un substrat. Il en résulte une réaction en cha^ne dans laquelle le radical hydroxyle joue le rôle d'initiateur (Hoigne & Bader, 1976 - Water Reseach, 10: 3377-3386) . - 14 Toutes les membranes plasmiques sont alors susceptibles d'être attaquées par l' ozone et tout particulièrement les membrane s limitantes du hyaloplasme et les membranes mitochondriales. s Cet exemple démontre l'effet protecteur de l'extrait objet du présent brevet au niveau membranaire chez des kératinocytes et des fibroblastes soumis à une exposition à l' ozone par deux approches biochimiques classiques d' évaluation de la cytotoxicité, en utilisant le test de la LDH et le test au MTT. Le test de la LDH (lactate déshydrogénase) permet d'évaluer lo l'augmentation de l'activité de cette enzyme cytoplasmique dans le milieu de culture après une lyse cellulaire. Il quantifie donc les effets cytotoxiques liés à des altérations des membranes limitantes du hyaloplasme des cellules. Le test au MTT permet d'apprécier le métabolisme mitochondrial. Le MTT (diméthyl thiazol diphényl tétrazolium bromide) de couleur jaune pale est métabolisé dans les cellules vivantes par les mitochondries pour former des cristaux bleus de formazan dont la quantité est fonction du nombre de cellules vivantes et de l'activité de la succinate déshydrogénase mitochondriale, l'une des principales déshydrogénases intervenant dans la respiration des cellules. Conditions expérimentales Des kératinocytes et des fibroblastes sont ensemencés dans leur milieu de culture respectif dans des microplaques 96 puits. Après 24 heures d'incubation à 37 C dans une atmosphère avec 5% de 2s CO2, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu neuf additionné soit de l'extrait de Sargassum muticum selon l'invention (deux concentrations testées: 2% et 4%) soit du standard choisi: l'alpha-tocophérol (concentration: 5. 10 M). Au bout de 24 heures, ce milieu est éliminé et remplacé par du PBS. Les cellules sont alors soumises à une exposition à l'ozone généré par un ozoneur (dose administrée: 20 mg/h) pendant 6h30 pour les kératinocytes et 3h30 pour les fibroblastes. Les tests de la LDH et du MTT sont réalisés à la fin de l'essai. - 15 Le pourcentage de l'activité protectrice antiradicalaire C est déterminé selon l'équation définie pour l'exemple n 2 - 2 et insérée à la page 10. Les résultats sont exprimés avec un risque d'erreur a = O,OS. s Résultats: Les résultats obtenus montrent une bonne corrélation entre les deux tests effectués. Pour les kératinocytes, l'activité protectrice anti-pollution (en %) de l'extrait de Sargassum maticum selon le présent brevet aux doses de 2% et 4% est respectivement de 130 + 3 et 176 + 4 pour le test de la LDH et de 84 + 2 et 104 + 4 pour le test au MTT. Celle de l'alpha-tocophérol atteint 102 + 4 pour le test de la LDH et seulement 54 + 2 pour le test au MTT. Pour les fibroblastes, l'activité protectrice anti-pollution dudit extrait aux doses de 2% et 4% est respectivement de 74 + 2 et 109 + 4 pour le test de la LDH et de 77 + 3 et 90 + 3 pour le test au MTT. Celle de l'alpha-tocophérol atteint 109 +5pourle test delaLDHet79+3pourle test auMTT. A partir de cultures in vitro utilisant deux types cellulaires: les kératinocytes et les fibroblastes soumis à deux tests différents, il a été prouvé que 1' extrait objet du présent brevet exerce bien un effet protecteur efficace contre les dégâts induits par l'un des polluants atmosphériques les plus oxydants: l'ozone. Conclusion 2s Les exemples ci-dessus démontrent que l'extrait préparé à partir de la macroalgue Sargassum muticam selon l'invention possède de puissants effets protecteurs in vitro contre: - plusieurs espèces réactives de l'oxygène, notamment l'oxygène singulet, le peroxyde d'hydrogène et le radical hydroxyle - les agressions de la pollution des gaz toxiques, notamment l'ozone. - 16 Ledit extrait peut être avantageusement incorporé dans les compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques, lesdites compositions en contenant, seul ou en association avec au moins un autre principe actif, mais en quantité efficace pour une application topique et dans un milieu physiologiquement acceptable c'est-à dire un milieu compatible avec la peau, les muqueuses et les phanères. Il peut y étre employé pour l'exploitation soit d'une des activités protectrices démontrces prise isolément, soit d'au moins deux de ces activités soit encore de toutes ces activités considérées ensemble. La composition finale de l'extrait destiné à être utilisé dans lesdites compositions consiste dans une proportion pouvant varier entre 0,1 % et 40 % (p/p), préférentiellement entre 2,5 % et 7,5 %. On peut formuler l' invention sous diverses formes de compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques. Ces formulations incluent toute forme galénique normalement employée en cosmétique et dermopharmacie pour une application topique: solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, émulsions huile dans eau ou eau dans huile ou multiples, gels aqueux ou huileux, produits anhydres, liquides, pâteux ou solides sans que cette liste soit exhaustive. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides. Elles peuvent prendre l'aspect d'une crème, d'un lait, d'une lotion, d'un gel, d'une pommade, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse, d'un solide. Elles peuvent éventuellement étre appliquées sous forme d'aérosol et même de patch. L' extrait de Sargassum muticam selon l'invention peut être combiné dans lesdites compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques avec tout autre ingrédient habituellement utilisé dans les formulations: les lipides d'extraction et/ ou de synthèse, les polymères gélifiants et viscosants, les tensioactifs, les émulsionnants, les conservateurs, les antioxydants, les parfums, les vitamines, les émollients, les séquestrants, les dépigmentants, les filtres solaires, les agents amincissants, les céramides, les matières colorantes, les bactéricides, les - 17 antipelliculaires, les principes actifs hydro- ou liposolubles, les extraits de plantes, les extraits marins, les extraits tissulaires sans que cette liste soit limitative. Bien entendu, on veillera à sélectionner le ou les éventuels ingrédients à ajouter aux compositions selon l' invention de manière à ne pas altérer ou s substantiellement altérer les propriétés avantageusement attachées à ces compositions. Il est possible d'incorporer cet extrait algal selon l'invention dans tout vecteur cosmétique adéquat comme par exemple des agents filmogènes, des lo liposomes, des chylomicrons, des cyclodextrines, des micelles, des macro-, micro- et nanoparticules des macro-, micro- et nanocapsules, ou encore de les absorber sur des polymères organiques, des supports textiles et minéraux. L' extrait de Sargassum muticum selon l' invention est utilisé dans des applications cosmétiques ou dermopharmaceutiques destinées aux soins des peaux réactives et des peaux sensibles pour les aider à mieux supporter, voire à réparer les effets néfastes directs ou indirects des espèces réactives de l'oxygène induites au cours de nombreuses réactions, notamment l' irradiation par les rayonnements ultraviolets et les agressions dues à la pollution des gaz toxiques. En outre les effets dudit extrait permettent de prolonger la fonction protectrice de la peau. L'extrait de Sargassum muticum selon l'invention peut étre aussi utilisé pour d'autres applications de soins et d'hygiène de la peau (produits pour le visage et le corps, produits de jour et de nuit, produits solaires, produits anti-rides) mais 2s également dans le domaine des so ins et d 'hygiène capillaires (lotions, shampooings, crèmes, mousses, produits protecteurs, réparateurs, photoprotecteurs) et des pro duits pour le s ongles (crèmes, lotions, filmogène s, protecteur s, réparateurs, verni s) et enfin de s pro duit s pour le s lèvre s (ro uge à lèvres, baumes, bâtons applicateurs) sans que ces listes soient exhaustives. - 18 REVENDICATIONS 1 - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques contenant un extrait de 1' algue brune Sargassum maticum (Yendo) Fensholt. 2 - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon la revendication 1 caractérisées en ce que l'on réalise l'extraction à partir de thalles ou toute partie de thalles de ladite algue sous forme fraîche, congelée, sèche, entière, fragmentée ou broyée. 3 - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une o quelconque des revendications 1 et 2 caractérisoes en ce que ledit extrait est obtenu par macération des thalles de ladite algue, suivie de filtrations, centrifugation, ultrafiltrations et concentration. 4 - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications 2 et 3 caractérisées en ce que la macération peut être remplacée par des techniques à contre courant, la décoction, la lixiviation, l'extraction sous reflux, 1' extraction à 1' aide d'ultrasons, de microondes associée ou non aux so lvant s, l' extract ion par de s fluide s supercrit iques, notamment le CO2 supercritique avec ou sans co-solvant. - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 4 caractérisées en ce que le solvant d'extraction est choisi parmi le groupe constitué par l'eau, les solvants chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les esters en C2 à C8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en C1 à C6 tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène glycol et le butylène glycol et leurs mélanges. 6 - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisées en ce que ledit extrait est utilisé soit sous forme liquide soit sous forme sèche obtenue par séchage, précipitation, atomisation, évaporation ou lyophilisation. 7 - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisces en ce que ledit extrait est - 19 incorporé ou associé à un vecteur cosmétique adéquat tel que par exemple des agents filmogènes, des liposomes, des chylomicrons, des micelles, des cyclodextrines, des macro-, micro- et nanoparticules, des macro-, micro- et nanocapsules ou absorbé sur des polymères organiques, des supports textiles et minéraux. 8 - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 caractérisées en ce que qu'elles comprennent de 0,1 % à 40 % en poids, en particulier de 2,5 % à 7,5 % en poids d'extrait de ladite algue. o 9 - Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 caractérisées en ce que lesdites compositions se présentent sous toute forme galénique appropriée pour une application topique sur la peau, les muqueuses et/ou les phanères dans un milieu physiologiquement acceptable. 10 - Utilisation d'un extrait de ladite algue comme principe actif, le dit principe actif étant incorporé seul ou en association avec au moins un autre principe actif, pour des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques en application topique telles que définies dans l'une des revendications 1 à 9. 11 - Utilisation selon la revendication 10 caractérisée en ce que ledit extrait dans les dites compositions présente une activité protectrice visà-vis des espèces réactives de l'oxygène. 12 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon les revendications 10 et 11 caractérisée en ce que ledit extrait présente une activité protectrice des molécules d'ADN. 2s 13 - Utilisation selon l'une des revendications 10 à 12 caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinces à protéger le matériel génétique et à lutter contre les mutations induites notamment par les radicaux libres et les différents rayonnements ultraviolets. 14 - Utilisation selon l'une des revendications 10 à 13 caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à protéger la peau et les phanères contre - 20 les conséquences du stress oxydatif induit par les espèces réactives de l'oxygène et les rayonnements ultraviolets. - Utilisation selon les revendications 10 et 14 caractérisée en ce que ledit extrait présente une activité protectrice vis-à-vis de la pollution par les gaz toxiques, notamment l'ozone. 16 - Utilisation selon les revendications 10 et 1S caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à protéger la peau et les phanères contre les effets de pollution, notamment la pollution par les gaz toxiques. 17 - Utilisation selon les revendications 10 et 16 caractérisée en ce que 0 lesdites compositions sont destinées à lutter contre les efets du vieillissement