Brevet FR2837491A1 — publié le 20030926

L'invention se rapporte à un nouveau procédé de purification de la 7alphahydroxydéhydroépiandrostérone (7a-OH-DHEA) et de dérivés de la 7a-OH-DHEA , ainsi qu'aux solvates obtenus. Plus précisément l'invention concerne un procédé de purification de composés de formule (la) ou (Ib): dans lesquelles Ri et R2 désignent indépendamment l'un de l'autre H, alkyle, arylalkyle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle, et OR3 et OR4 représentent indépendamment l'un de l'autre des groupements alkoxy comprenant de préférence 1 à 6 atomes de carbone, tels que méthoxy, éthoxy ou t-butoxy, ou OR3 et OR4 représentent ensemble un cycle -0-(CH2)x- O-, éventuellement substitué, tel que x est compris entre 1 et 6. Le composé de formule (la) tel que Ri et R2 désignent H correspond à la 7alpha- hydroxydéhydroépiandrostérone(7a-OH-DHEA). Dans le cadre de'la présente invention, le terme alkyle désigne un groupement carboné saturé, linéaire ou ramifié, contenant de 1 à 6 atomes de carbone. Le terme alkoxy désigne un groupement RO-, dans lequel R représente un alkyle, par exemple méthoxy, éthoxy ou t-butoxy. Le terme arylalkyle se rapporte à un radical alkyle substitué par un aryle. Le terme aryle se rapporte à un cycle ou à un bicycle aromatique tel que par exemple phényle, naphtyle, indanyle, éventuellement substitué par un à trois substituants tels que alkyle, halogène ou alkoxy. Le terme alkylcarbonyle se réfère à un groupement R-CO-, dans lequel R représente un alkyle, par exemple acétyle. Le terme arylcarbonyle désigne un radical Ar-CO- , tel que Ar est une aryle. L'expression éventuellement substitué siginifie que le radical -0-(CH2)x-0- peut être substitué ou non substitué par un ou plusieurs groupes tels que halogène, alkyle, alkoxy ou hydroxy. L'objet de l'invention réside également dans la découverte de nouveaux composés formés par le dérivé de formule (la) ou (Ib) et un alcool. La 7a-OH-DHEA est un dérivé bien décrit dans la littérature scientifique. L'obtention de la forme stéréoisomérique pure en 7a est décrite dans plusieurs documents (FR-A1- 2771105, WO-A1-92/03925, FR-A1-2793491). Les différents procédés de synthèse décrits dans l'art antérieur conduisent toujours à un produit brut sous la forme d'un mélange composé de 7a-OH-DHEA, de l'isomère 7ss-OHDHEA et d'autres sous-produits. Le document FR-A1-2771105 décrit un procédé pour la préparation de la 7a-OH-DHEA à partir de la DHEA en utilisant un champignon : Fusarium moniliforme. Le produit formé est purifié par une chromatographie sur une colonne de gel de silice montée dans l'acétate d'éthyle et éluée par l'acétate d'éthyle. Ce procédé est coûteux et difficilement reproductible pour obtenir une grosse quantité. Le document WO-A1-92/03925 décrit un procédé de synthèse par voie chimique à partir de la 3-O-acétyl-DHEA via le dérivé 3-0-acétyl-7-bromo-DHEA. Le produit désiré est purifié par un procédé qui consiste en une dissolution du produit brut dans l'acétone ou dans le méthanol, suivie d'une précipitation avec l'hexane. Le document n'indique pas le rendement obtenu et ne précise pas la pureté isomérique en 7a-OH-DHEA. En reproduisant ce procédé, la demanderesse a isolé un mélange des isomères 7a et 7p- OH-DHEA dont la proportion de l'isomère 7p est de 30 %. Le document FR-A1-2793491 décrit un procédé qui consiste en une synthèse stéréosélective par oxydation allylique de la position 7 de la 3-O-acétyl-DHEA. Le produit attendu est purifié par une chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec un mélange hexane/acétate d'éthyle, dans les proportions initiales 50/50, progressivement enrichi en acétate d'éthyle jusqu'à 100 % en acétate d'éthyle. En résumé, il est très laborieux, par les procédés ci-dessus mentionnés, d'obtenir la 7aOH-DHEA ou des dérivés de la 7a-OH-DHEA purs. Par la méthode de chromatographie sur gel de silice, les temps d'élution des isomères 7a et 7p sont très proches, rendant l'opération de purification difficile, coûteuse et difficilement transposable à l'échelle industrielle. Par la méthode de précipitation, l'isomère 7ss est obtenu en mélange avec l'isomère 7a. L'objectif de la présente invention est de fournir un procédé de purification des composés de formule (la) ou (lb), notamment de la 7a-OH-DHEA, simple, efficace, et transposable industriellement. Le procédé de purification des composés de formule (la) ou (Ib) selon l'invention consiste à recristalliser un produit brut de réaction contenant un mélange de l'isomère 7a-OH de formule (la) ou (Ib) et de l'isomère 7ss-OH correspondant, dans un solvant alcoolique ou un mélange de solvants contenant un solvant alcoolique et au moins un solvant miscible avec ledit solvant alcoolique. Le solvant miscible avec ledit solvant alcoolique peut être choisi parmi les hydrocarbures, par exemple l'heptane, l'éther de pétrole ou le toluène. On entend au sens de la présente invention par isomère 7a-OH , le composé de formule (la) ou (Ib), notamment la 7a-OH-DHEA ou le dérivé de la 7a-OH-DHEA. On entend en outre par isomère 7 p-OH , l'isomère ss correspondant à l'isomère 7a-OH de formule (la) ou (Ib). Le procédé de l'invention permet avantageusement d'obtenir une pureté isomérique en isomère 7a-OH supérieure à au moins 90 %, de préférence supérieure à 95%, de préférence encore supérieure à 97%. Il met en #uvre des solvants non toxiques d'un prix de revient modéré. Enfin, il est simple de manipulation. Plus précisément, un premier objet de l'invention est un procédé de purification d'un dérivé 7a-OH de formule (la) ou (lb), à partir d'un mélange contenant l'isomère 7a-OH de formule (la) ou (Ib) et l'isomère 7p-OH correspondant, le dit procédé comprenant les étapes consistant à : - dissoudre le mélange contenant lesdits isomères 7a-OH et 7p-OH dans un volume approprié d'un solvant alcoolique comprenant un à dix atomes de carbone, ou un mélange de solvants contenant un solvant alcoolique comprenant un à dix atomes de carbone et au moins un solvant miscible dans ledit solvant alcoolique, - faire cristalliser l'isomère 7a-OH, et - filtrer et laver l'isomère 7a-OH. Selon un mode de mise en oeuvre de l'invention le composé de formule (la) tel que R1 et R2 désignent H (7a-OH-DHEA) et tel que Ri représente H et R2 représente acétyle (3-0acétyl-7a-OH-DHEA), sont préférés. Le solvant alcoolique comprend de préférence entre un et six, de préférence encore deux et quatre atomes de carbone. Il est avantageusement choisi parmi l'éthanol, le npropanol, le tert-butanol, l'isopropanol, l'isobutanol et le n-butanol. On choisit de préférence l'isopropanol. Le mélange contenant l'isomère 7a-OH et l'isomère 7ss-OH, est dissout dans un volume approprié dudit solvant alcoolique ou dudit mélange de solvants, de préférence 1 à 4 ml/g, de préférence encore entre 1 et 2 ml/g, de préférence encore environ égale à 2 ml/g de mélange d'isomères 7a-OH et 7ss-OH. La recristallisation peut être opérée par abaissement de la température ou par simple évaporation du solvant. De façon avantageuse, le produit brut de réaction est dissout à chaud dans ledit solvant alcoolique ou ledit mélange de solvants, de façon préférée à reflux. Dans ce cas, le solvate de l'isomère 7a-OH cristallise avantageusement à froid, notamment par refroidissement de la solution à une température inférieure ou égale à 10 C environ. Le solvant alcoolique ou le mélange de solvants est éventuellement éliminé par séchage sous vide. Le procédé de l'invention est avantageusement mis en #uvre avec un produit brut de réaction constitué d'un mélange d'isomère 7a-OH de formule (la) ou (lb) et d'isomère 7p- OH correspondant, comprenant au moins 70 % en poids de l'isomère 7a-OH, étant entendu que le procédé de l'invention peut être mis en #uvre avec un mélange 7a/7p en toutes proportions. Ainsi, partant d'un brut d'un ratio 7a/7p de 95/5, on obtient un produit purifié dans un ratio 7a/7p supérieur à 99/1. Partant d'un brut d'un ratio de 70/30, le ratio après purification est de 98/2. Selon un mode de mise en #uvre de l'invention, le produit brut de réaction est obtenu par l'un des procédés décrits dans les demandes de brevet FR-A1-2 771 105, WO-A1- 92/03925 et WO-A1-94/03176 incorporées dans la présente demande par référence. Le document FR-A1-2 771 105 décrit un procédé pour la préparation de la 7a-OH-DHEA en une étape à partir de la déhydroépiandrostérone (DHEA) en utilisant le champignon Fusarium moniliforme. Les documents WO-A1-94/03176 et WO-A1-92/03925 décrivent un procédé par voie chimique en quatre étapes, pour la préparation de la 7a-OH-DHEA à partir de la 3-0acétyl-DHEA. La première étape de ce procédé permet l'obtention de la 3-O-acétyl-7- Bromo-DHEA à partir de la 3-O-acétyl-DHEA par traitement avec un agent bromant. Dans une seconde étape, le mélange racémique d'isomères 7a-Bromo sous forme majoritaire. Après équilibration, la 3-O-acétyl-7-Bromo-DHEA traitée avec un mélange d'acide acétique glacial et d'acétate d'argent permet l'obtention du 3-O-acétyl-7a-O-acétyl-DHEA. Le 3-O-acétyl-7a-O-acétyl-DHEA est ensuite traité par du carbonate de sodium (Na2C03) dans un mélange constitué d'eau et de méthanol. Selon un autre mode de mise en #uvre de l'invention, le produit brut de réaction est obtenu selon le procédé décrit dans la demande de brevet non publiée FR 01 01998 incorporée dans la présente demande par référence. Le procédé décrit dans la demande FR 01 01998 consiste essentiellement à réaliser une (i) réaction d'oxydation en position allylique de la 3-O-acétyl-DHEA, puis à (ii) réduire la 3- O-acétyl-7-oxo-DHEA de manière régiosélective et diastéréosélective en utilisant le L- Selectride comme agent réducteur, (iii) à déprotéger par trans-estérification l'acétate de 7a-hydroxy-DHEA pour obtenir la 7a-OH-DHEA. Un autre objet de la présente invention est un solvate formé par la 7a-OH-DHEA ou un dérivé de la 7a-OH-DHEA et un alcool, ledit solvate ayant une des formules suivantes : dans lesquelles Ri et R2 désignent indépendamment l'un de l'autre H, alkyle, arylalkyle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle, et OR3 et OR4 représentent indépendamment l'un de l'autre des groupements alkoxy comprenant de préférence 1 à 6 atomes de carbone, tels que méthoxy, éthoxy ou t-butoxy, ou OR3 et OR4 représentent ensemble un cycle -O-(CH2)X O-, éventuellement substitué, tel que x est compris entre 1 et 6, n est supérieur à 0 et inférieur à 9, et X représente un alcool comprenant un à dix atomes de carbone, de préférence entre un et six, de préférence encore deux et quatre atomes de carbone. Un solvate particulièrement préféré est tel que n vaut 1, et X représente un alcool aliphatique tel que l'isopropanol, le tert-butanol, l'éthanol, ou le n-butanol. Un solvate particulièrement préféré est tel Ri et R2 désignent H (solvate de la 7a-OHDHEA) ou tel que Ri représente H et R2 représente acétyle (solvate de la 3-O-acétyl-7a- OH-DHEA). Les caractéristiques physico-chimiques du solvate de 7a-OH-DHEA tel que n vaut 1 et X représente l'isopropanol sont données dans l'exemple ci-après. La valeur de n peut être égale à 0,5,1, 1,5,2 ou 2,5 par exemple, car des molécules de solvant alcoolique peuvent engager des liaisons avec deux molécules d'isomère 7a-OH différentes. Exemple 1. Obtention du solvate 7a-OH-DHEA, isopropanol On reproduit le procédé décrit dans l'exemple 1 de la demande de brevet FR 01 01998, inclus dans la présente demande par référence, en partant de 30g de 3-O-acétyl-7-céto- DHEA, pour synthétiser le mélange d'isomères de 7a-OH-DHEA et de 7-OH-DHEA. Le produit brut ainsi obtenu est dissous dans 60 ml d'isopropanol (soit 2 ml/g) au reflux. La solution est ensuite refroidie à +10 C. Les cristaux sont filtrés et lavés avec un mélange d'heptanelisopropanol (1/1 ) froid pour donner 14,6 g d'une poudre blanche. Caractérisations : RMN 1H (DMSO-d6, 200MHz) ( ppm) : conforme au produit attendu Ratio 7[alpha]/7 par HPLC : 99 %. Profil DSC: pic de départ de solvant à 116,0 C et puis pic de fusion à 170,6 C, correspondant au solvate isopropanol, 7a-OH-DHEA. Analyse élémentaire pour C,gH2sO3.C3HsO : Théorie % : C : 72,48 H : 9. 95 0: 17,56 Trouvé % : C : 72,88 H : 9. 88 0: 16,76 Dosage d'isopropanol par la chromatographie gazeuse : - 16 %. Exemple 2 L'exemple 1 est reproduit en utilisant d'autres solvants alcooliques. Les résultats obtenus sont regroupés dans le tableau suivant : Solvant quantité de solvant de Ratio 7a/7 par HPLC recristallisation Ethanol 1 mg/l 99,2/0,8 n-butanol 1 mg/ml 98,4/1,6 tert-butanol 2,3 mg/ml 99,5/0,5 1. Solvate de la 7-alpha-hydroxy-déhydroépiandrostérone (7a-OH-DHEA) ou d'un dérivé de la 7a-OH-DHEA avec un alcool, ledit solvate ayant une des formules suivantes : dans lesquelles R1 et R2 désignent indépendamment l'un de l'autre H, alkyle, arylalkyle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle, et OR3 et OR4 représentent indépendamment l'unde l'autre des groupements alkoxy comprenant de préférence 1 à 6 atomes de carbone, tels que méthoxy, éthoxy ou t-butoxy, ou OR3 et OR4 représentent ensemble un cycle -0-(CH2)x- O-, éventuellement substitué, tel que x est compris entre 1 et 6, n est supérieur à 0 et inférieur à 9, et X représente un alcool comprenant un à dix atomes de carbone, de préférence entre un et six, de préférence encore deux et quatre atomes de carbone. 2. Solvate selon la revendication 1, caractérisé en ce que R1 et R2 représentent H. 3. Solvate selon la revendication 1, caractérisé en ce que R1 représente H et R2 représente acétyle. 4. Solvate selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé X représente un alcool aliphatique tel que l'isopropanol, le tert-butanol, l'éthanol, ou le n-butanol. 5. Solvate selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que X représente l'isopropanol et n vaut 1. 6. Procédé de purification d'un composé de formule (la) ou (Ib) : dans lesquelles Ri et R2 désignent indépendamment l'un de l'autre H, alkyle, arylalkyle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle, et OR3 et OR4 représentent indépendamment l'un de l'autre des groupements alkoxy comprenant de préférence 1 à 6 atomes de carbone, tels que méthoxy, éthoxy ou t-butoxy, ou OR3 et OR4 représentent ensemble un cycle -0-(CH2)x- 0-, éventuellement substitué, tel que x est compris entre 1 et 6, à partir d'un mélange contenant l'isomère 7a-OH de formule (la) ou (Ib) et l'isomère 7p- OH correspondant, le dit procédé comprenant les étapes consistant à : - dissoudre le mélange contenant lesdits isomères 7a-OH et 7ss-OH dans un volume approprié d'un solvant alcoolique comprenant un à dix atomes de carbone, ou un mélange de solvants contenant un solvant alcoolique comprenant un à dix atomes de carbone et au moins un solvant miscible dans ledit solvant alcoolique, - faire cristalliser l'isomère 7a-OH, et - filtrer et laver l'isomère 7a-OH. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le composé de formule (la) est la 7a-OH-DHEA, telle que Ri et R2 désignent H. 8. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le composé de formule (la) est tel que Ri représente H et R2 représente acétyle. 9. Procédé selon l'une des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que le solvant alcoolique comprend de préférence entre un et six, de préférence encore deux et quatre atomes de carbone, tel que est l'isopropanol, l'éthanol, le tert-butanol ou le n- butanol. 10. Procédé selon l'une des revendications 6 à 9, caractérisé en ce que le volume approprié de solvant alcoolique ou dudit mélange de solvants est compris entre 1 à 4 ml/g, de préférence compris entre 1 et 2 mg/l, de préférence encore environ égal à 2 ml par gramme de mélange d'isomère 7a-OH et d'isomère 7ss-OH. 11. Procédé selon l'une des revendications 6 à 10, caractérisé en ce que le mélange d'isomère 7a-OH et d'isomère 7p-OH est dissout à chaud dans le solvant alcoolique ou le mélange de solvants, en particulier à reflux. 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le produit cristallise par refroidissement à une température inférieure ou égale à 10 C environ. 13. Procédé selon l'une des revendications 6 à 12, caractérisé en ce que le solvant ou le mélange de solvants est éliminé par séchage sous vide. 14. Procédé selon l'une des revendications 6 à 13 caractérisé en ce que le mélange d'isomère 7a-OH et d'isomère 7ss-OH comprend au moins 70 % en poids d'isomère 7a-OH. 15. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que le mélange de 7a-OH-DHEA et de 7p-OH-DHEA est obtenu par : (i) réaction d'oxydation en position allylique de la 3-O-acétyl-DHEA, (ii) réduction régiosélective et diastéréosélective de la 3-O-acétyl-7-oxo-DHEA suivie d'une désacétylation, et (iii) réaction de désacétylation de la 3-O-acétyl-7a-acétyloxy-DHEA.