Brevet FR2835701A1 — publié le 20030815

Procédé d'élevage d'un insecte parasitoïde. L'invention concerne le domaine de la lutte biologique contre les insectes. L'invention trouve notamment son application dans le domaine de l'agriculture. Plus précisément, l'invention se rapporte à un procédé d'élevage d'un insecte, Trybliographa rapae W (Westwood) (Hymenoptera : Eucolidae) qui est le principal ennemi naturel parasitoïde de la mouche du chou Delia radicum L (Linné). (Diptera : Anthomyiidae). Les cultures de végétaux crucifères (toutes les variétés et cultivars de choux, navets, radis, colza, etc. ) sont régulièrement infestées par la mouche du chou dont les larves consomment les racines. Il peut en résulter des dommages importants aux cultures et des baisses significatives de productivité. Afin de lutter contre cette mouche, il est courant de pulvériser des insecticides chimiques sur les cultures et ce jusqu'à huit fois entre les semis et la récolte. Ceci a pour conséquence de conduire à la présence de résidus de pesticides pouvant être considérés comme excessifs dans les plantes dans le sol et les eaux. Il est donc recherché des méthodes alternatives, telles que le contrôle biologique, pour lutter contre ce diptère. Trybliographa rapae est un parasitoïde de plusieurs mouches de l'espèce Delia (=Hylemia). Cet insecte hyménoptère présente l'intérêt d'attaquer préférentiellement Delia radicum L en pondant dans les larves de celle-ci. La larve de cet insecte hyménoptère se nourrit de la larve de cette mouche et la tue. Il est donc envisagé d'utiliser des Trybliographa rapae comme moyens de lutte biologique contre Delia radicum. À ce titre, il est indispensable de disposer d'un procédé d'élevage permettant de produire en quantités importantes des Trybliographa rapae afin de pouvoir les utiliser comme auxiliaire de l'agriculture contre la mouche du chou. Les pupes précédant le stade adulte peuvent en effet être stockées dans des conditions adéquates pour être ultérieurement disséminées dans les cultures afin de donner naissance à des adultes qui parasiteront les larves de mouches présentes dans ces cultures. Or, jusqu'ici, l'élevage de Trybliographa rapae n'a pas été maîtrisé dans le monde. L'objectif de la présente invention est de proposer un procédé d'élevage de Trybliographa rapae qui permette de produire, de façon aisée et selon un rendement élevé, des pupes de cet insecte. Un autre objectif de la présente invention est de décrire un tel procédé présentant un coût de revient peu élevé. Ces différents objectifs sont atteints grâce à l'invention qui concerne un procédé d'élevage d'un insecte hyménoptère parasitoïde, Trybliographa rapae, caractérisé en ce qu'il comprend : - une phase de production de larves de mouches du genre Delia consistant : à fournir à des mouches mâles et femelles de ladite espèce dans au moins une première enceinte un support de ponte constitué par au moins une moitié de racine sub-sphérique de légume crucifère reposant par son plan de coupe sur un premier lit incluant du sable puis À transférer ledit support avec ledit lit dans une deuxième enceinte de façon à autoriser les oeufs de mouches à donner des larves ; - Une phase de production de pupes dudit insecte hyménoptère consistant : À couper ladite moitié de racine de façon à obtenir des morceaux de racine présentant chacun au moins deux plans de coupe, à transférer lesdits morceaux de racines dans une troisième enceinte à l'intérieur de laquelle se trouvent des individus mâles et femelles de Trybliographa rapae pour leur permettre de pondre leurs oeufs dans lesdites larves de mouche, à transférer lesdits morceaux de racine dans une quatrième enceinte, à les poser sur un second lit incluant du sable et à laisser les oeufs atteindre le stade larvaire puis entrer en pupaison, et à récupérer les pupes de Trybliographa rapae. Le procédé selon l'invention propose donc d'obtenir, au cours d'une première phase, des larves de mouches de l'espèce Delia grâce à l'utilisation d'un support de ponte particulier constitué de morceaux de racines subsphériques de légume crucifère posées sur un lit incluant du sable. De telles racines sub-sphériques diffèrent de celles du chou et d'autres crucifères attaqués par ce type de mouche et qui sont cylindriques. Le lit incluant du sable se rapproche quant à lui du terrain naturel dans lequel pousse les légumes attaqués par celles-ci. Ainsi, l'ensemble constitué par le support de ponte posé sur le lit incluant du sable constitue-t-il un milieu ressemblant au milieu naturel, propice à la reproduction des mouches. Lors de la première phase du procédé, les mouches pondent leurs oeufs sur le lit incluant du sable dans une couronne d'environ 1 cm autour de chaque moitié de racine. Les larves issues de ces oeufs migrent ensuite à l'intérieur de ces demi-racines et se nourrissent de la pulpe de celles-ci. La migration des larves est grandement facilitée par le fait que les racines sont coupées en deux et présentent un plan de coupe en contact avec la surface supérieure du lit de sable, au niveau duquel les larves peuvent pénétrer facilement. Lors de la seconde phase du procédé, les demi-racines infestées de larves de mouches sont transférées dans une enceinte après avoir été coupées au moins en deux. Les morceaux de racines ainsi obtenus présentent donc chacun au moins deux plans de coupe, ce qui permet d'augmenter l'accessibilité des larves de mouches présentes dans ceux-ci aux hyménoptères parasitoïdes. Ainsi, l'invention propose, lors de cette deuxième phase de couper chaque demi-racine au moins en deux. On obtient donc à partir d'une demiracine sub-sphérique, au moins quatre morceaux présentant chacun deux plans de coupe. On notera qu'au lieu de couper chaque demi-racine en deux on pourra aussi envisager de la couper en trois, en quatre ou plus, selon la taille de la racine sub-sphérique qui aura été choisie. En tout état de cause, l'objectif de cette étape est d'augmenter la surface des plans de coupe afin d'offrir davantage de surfaces de ponte aux hyménoptères et de réduire la distance des larves de Delia radicum au maximum de la longueur de l'ovipositeur de Trybliographa rapae. On comprendra qu'afin de disposer de mouches pour la mise en oeuvre de la première phase du procédé, certaines larves seront autorisées à évoluer normalement. À cette fin, certaines demi-racines sphériques infestées de larves de mouches ne sont pas utilisées pour la deuxième phase du procédé mais simplement laissées en conditions pour permettre aux larves d'évoluer pour donner des pupes puis des mouches. Le procédé inclut donc préférentiellement une phase complémentaire de production de mouches de l'espèce Delia radicum consistant à laisser évoluer certaines larves présentes dans des demiracines infestées jusqu'au stade de la pupaison, à tamiser sous un jet d'eau le lit incluant du sable sur lequel sont posées ces demi-racines de façon à en extraire le maximum de pupes de mouches et à placer ces pupes en boîte de nymphose pour obtenir lesdites mouches au stade adulte. On comprendra également que la seconde phase du procédé mettant en oeuvre des individus adultes de Trybliographa rapae, il sera nécessaire de produire ceux-ci. C'est pourquoi le procédé selon l'invention comprend préférentiellement une autre phase complémentaire de production de Trybliographa rapae consistant à laisser évoluer certaines des pupes de cet hyménoptère produite à l'issue de cette deuxième phase jusqu'au stade adulte. Comme déjà précisé, Trybliographa rapae est un parasitoïde de plusieurs mouches du genre Delia. Préférentiellement, la mouche utilisée pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention est Delia radicum. En effet, cette mouche est celle à laquelle Trybliographa rapae s'attaque préférentiellement et celle qui est la plus répandue dans les cultures de choux, navets, colza, etc. Toutefois, le procédé selon l'invention pourra aussi être mis en oeuvre avec d'autre espèce de mouche du genre Delia. Préférentiellement, ledit procédé se déroule en conditions thermohygrométriques contrôlées à la température de 20 : t 2 oC, sous une hygrométrie relative de 60 + 10 % et en photopériode de 16 heures de jour alternant avec 8 heures de nuit. Ces conditions ont été selectionnées comme celles donnant les meilleurs résultats. On pourra utiliser dans le cadre du procédé selon l'invention différents types de légumes crucifères présentant des racines sub-sphériques, en fonction notamment de la saison et du lieu de mise en oeuvre du procédé. Préférentiellement, ce légume est choisi dans le groupe constitué par le rutabaga (Brassica napus) et le navet (Brassica rapa). Avantageusement, le procédé selon l'invention comprend une étape de préparation du premier et du second lit de sable consistant à stériliser, à humidifier le sable et à le répartir en couche d'environ 1 cm. Egalement préférentiellement, le premier et le second lit de sable sont prévus dans au moins une coupelle en verre telle qu'une demi-boîte de Pétri. Avantageusement, au cours de la phase de production de larves de mouches, l'alimentation des mouches est apportée sous forme sèche d'un mélange à part égale de levure de bière en poudre de lait en poudre et de sucre en poudre ; l'eau est fournie sur support absorbant. L'invention concerne également toute utilisation des pupes de Trybliographa rapae produites grâce au procédé décrit ci-dessus comme auxiliaire de l'agriculture dans la lutte contre les mouches du genre Delia, particulièrement Delia radicum. L'invention, ainsi que les différents avantages qu'elle présente seront plus facilement compris grâce à la description qui va suivre d'un mode de réalisation de celle-ci donné en référence aux figures 1 et 2. Selon ce mode de réalisation, l'ensemble du procédé d'élevage a été mis en oeuvre avec des conditions thermo-hygrométriques contrôlées : - température : 20 2 C - hygrométrie relative : 60 10 % - photopériode de 16 heures jour/8 heures nuit avec l'utilisation de lampes reproduisant la lumière du jour. Afin de pouvoir réaliser la première phase du procédé, on a réalisé un élevage de mouches du chou Delia radicum Au cours du procédé, l'alimentation de ces mouches a été apportée sous forme sèche d'un mélange à part égale de levure de bière en poudre, lait en poudre et sucre en poudre. Les mouches ont pu s'abreuver d'eau stérile sur des supports absorbants : éponge de ménage, papier filtre, coton hydrophile. La nourriture et la boisson ont été renouvelées toutes les 48 heures. La ponte des mouches s'est faite sur deux types de légumes crucifères à racines sub-sphériques, à savoir, en fonction de leur disponibilité saisonnière : le rutabaga (Brassica napus) d'octobre à mai et le navet (Brassica rapa) de juin à septembre. La préparation de ces racines sub-sphériques a été la suivante. Elles ont d'abord été lavées sous l'eau du robinet pour éliminer les particules de terre pouvant contenir des micro-organismes puis essuyées avec un torchon propre et ensuite été coupées avec une lame stérile selon leur plan équatorial de manière à obtenir deux demi-racines formant approximativement deux hémisphères. Chaque hémisphère (1) a ensuite été déposé sur un lit de sable (2) de 1 cm d'épaisseur et dont les grains montrent une granulométrie comprise entre 0,5 et 1,2 mm dans une demi-boîte de Pétri (5) de 15 cm de diamètre. Le sable utilisé a été préalablement stérilisé à sec dans une étuve à 100 C durant 24 heures puis humidifié à l'eau stérile. Les mouches adultes âgées de 2 jours ont été collectées dans leur cage d'émergence et ont été placées par lot de 100 individus comportant 50 femelles et 50 mâles, dans des enceintes constituant des cages de ponte en altuglass transparent de 60 x 60 x 45 cm. Chaque. cage est aérée par des fenêtres de tulle. 6 demi-boîtes de Pétri et donc autant de demi légumes reposant par leur face coupée sur le lit de sable ont été disposés dans chaque cage de ponte. Les mouches ont déposé leurs oeufs au contact du légume et du sable humidifié principalement sur une couronne externe large d'environ 1 cm. Toutes les 48 heures, les légumes ont été renouvelés. Les légumes ayant reçu les pontes des mouches ont été transférés dans des cages de développement. Les oeufs des mouches ont éclos après 4 jours d'incubation et donnent des larves de premier stade qui pénètrent dans les tissus végétaux des crucifères. Le cycle de développement de la mouche comprend 3 stades larvaires qui sont endophytophages et durent en tout 20 jours environ. Les larves parvenues en fin de leur cycle ressortent en majorité de la racine qu'elles ont consommée et entrent en pupaison sur le lit de sable humide. Afin de produire des mouches adultes, une partie des larves ont été autorisées à poursuivre son cycle normal. Dans ce but, la totalité du contenu de certaines coupelles (sable, nymphes et végétal fortement dégradé par le développement des larves) a été versée sur un tamis et douché à l'eau du robinet pour achever la dilacération des tissus végétaux et récolter le plus grand nombre possible de pupes. Les pupes ainsi collectées ont été transférées en boîtes de nymphose, en plastique transparent de 16 x 9 x 8 cm contenant une couche de 3 cm de sable stérile humide. La durée de la nymphose est de 10 à 15 jours. Les adultes émergent dans ces boîtes et sont transférés en cages de ponte. La durée du cycle de F oeuf à l'adulte est de l'ordre de 34 jours. Une autre partie des larves a été destinée à la mise en oeuvre de la seconde phase du procédé, c'est-à-dire la production de pupes de Trybliographa rapae (Westwood). Pour cette phase, on a élevé des adultes de cet hyménoptère. L'alimentation a été apportée sous forme de gouttelettes de miel sirupeux d'acacia déposées sur une languette de plastique jaune. Les insectes ont pu s'abreuver d'eau stérile imprégnant une mèche de coton hydrophile. Les demi-racines (1) de crucifères contenant les larves de la mouche âgées de 10 à 12 jours ont été découpées en éléments (3) grossièrement cubiques d'environ 3 cm d'arête. Ce découpage est essentiel pour le succès de l'élevage car il rend toutes les larves de mouche accessibles aux femelles de l'hyménoptère. Les stades larvaires 2 et 3 du diptère sont les stades préférentiels d'infestation de l'hyménoptère. Les morceaux (3) de racines découpés, contenant les larves à infester, ont été déposés sur un lit (4) de sable stérile et humidifiés de 1 cm d'épaisseur dans une coupelle de verre (6) de 15 cm de diamètre. Les coupelles (6) et leur contenu ont été placés une à une dans une cage d'infestation en altuglass (marque déposée) transparent comportant des fenêtres d'aération en mousseline. 60 adultes (40 femelles et 20 mâles) de l'hyménoptère ont été transférés dans la cage. Les femelles pondent dans les larves du diptère. Les coupelles sont exposées durant 48 heures puis renouvelées. Les coupelles contenant les morceaux (3) de végétaux contenant les larves de diptère (7) infestées par l'hyménoptère ont été transférées en cage de développement de 60 x 60 x 45 cm. Chaque jour une pulvérisation d'eau stérile destinée à réduire la dessiccation des morceaux de végétaux a été effectuée. Un demi-légume fraîchement découpé et ne contenant pas de larves de mouches a été apporté aux larves parasitées pour leur alimentation. A l'issu du cycle de développement larvaire, qui dure environ 45 jours, les pupes de la mouche du chou se forment puis meurent victimes du parasitisme. Les larves du parasite se transforment alors en pupes dans la pupe morte du diptère. Une partie de ces pupes peut être récupérée et placée en cage de nymphose pour donner des adultes hyménoptères, la nymphose durant environ 15 jours et le cycle de F oeuf à l'adulte durant environ 60 jours. Une autre partie de ces pupes peut être utilisée comme auxiliaire de l'agriculture et être dispersée dans des cultures pour donner des adultes qui parasiteront les larves de mouches du chou présentes dans celles-ci et qui, à terme, permettront de débarrasser ladite culture de ce phytophage ravageur REVENDICATIONS 1. Procédé d'élevage d'un insecte hyménoptère parasitoïde, Trybliographa rapae, caractérisé en ce qu'il comprend : - une phase de production de larves de mouches du genre Delia consistant : à fournir à des mouches mâles et femelles de ladite espèce dans au moins une première enceinte un support de ponte constitué par au moins une moitié (1) de racine sub-sphérique de légume crucifère reposant par son plan de coupe sur un premier lit (2) incluant du sable puis à transférer ledit support avec ledit lit dans une deuxième enceinte de façon à autoriser les oeufs de mouches à donner des larves ; - une phase de production de pupes dudit insecte hyménoptère consistant : à couper ladite moitié (1) de racine de façon à obtenir des morceaux (3) de racine présentant chacun au moins deux plans de coupe, à transférer lesdits morceaux de racine (3) dans une troisième enceinte à l'intérieur de laquelle se trouvent des individus mâles et femelles de Trybliographa rapae pour leur permettre de pondre leurs oeufs dans lesdites larves de mouche, à transférer lesdits morceaux de racine (3) dans une quatrième enceinte, à les poser sur un second lit (4) incluant du sable et à laisser les oeufs atteindre le stade larvaire puis entrer en pupaison, et à récupérer au moins une partie des pupes de Trybliographa rapae. 2. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend une phase complémentaire de production de mouches adultes du genre Delia consistant à laisser évoluer certaines larves présentes dans des demi-racines infestées jusqu'au stade de la pupaison, à filtrer le lit incluant du sable sur lequel sont posées ces demi-racines de façon à en extraire le maximum de pupes de mouches et à placer ces pupes en boîte de nymphose pour obtenir lesdites mouches. 3. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend une autre phase complémentaire de production de Trybliographa rapae consistant à laisser évoluer certaines des pupes de cet hyménoptère jusqu'au stade adulte. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que ladite mouche est Delia radicum. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il se déroule en conditions thermohygrométriques contrôlées à la température de 20 2 C, sous une hygrométrie relative de 60 : t 10 % et en photopériode de 16 heures de jour alternant avec 8 heures de nuit. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que ledit légume crucifère est choisi dans le groupe consitué par le rutabaga (Brassica napus) et le navet (Brassica rapa). 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de préparation du premier (2) et du second (4) lit de sable consistant à stériliser, à humidifier le sable et à le répartir en couche d'environ 1 cm. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 caractérisé en ce que le premier (2) et le second (4) lit de sable sont prévus chacun dans au moins une coupelle en verre (5,6) telle qu'une demi-boîte de pétri. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 caractérisé en ce qu'au cours de la phase de production de larves de mouches, l'alimentation des mouches est apportée sous forme sèche d'un mélange à part égale de levure de bière en poudre de lait en poudre et de sucre en poudre, l'eau étant fournie sur support absorbant. 10. Utilisation des pupes de Trybliographa rapae produites grâce au procédé selon l'une des revendications 1 à 9 comme auxiliaire de l'agriculture dans la lutte contre les mouches du genre Delia, particulièrement Delia radicum.