Brevet FR2834520A1 — publié le 20030711

20. Cellule de plante transformée par un vecteur selon la revendication 9. La présente invention se rapporte à un nouveau milieu de culture pour détecter des microorganismes, contenant un carraghénate, en tant que facteur de gélification. L' identification de microorganismes contaminants est trés importante, notamment dans les domaines de l'agroalimentaire ou du soin hospitaliers. On peut effectuer cette détection par de nombreux moyens, et notamment l'amplification des acides nucléiques spécifiques des contaminants recherchés. Toutefois, cette méthode nocessite le suivi d'un procédé qui ne peut pas toujours être fait en routine. On peut également effectuer la détection par la croissance des microorganismes sur des milieux de cultures adéquats, et l'analyse des colonies obtenues. Pour ce faire, on peut complémenter le milieu de culture avec des éléments permettant d'améliorer l'identification des contaminants, par exemple des agents chromogènes, libérant des chromophores précipitant dans le milieu solide, après hydrolyse p ar d es enzymes spéci fiques des microorgani sm es cibles. Toutefois, l'utilisation de tels milieux peut s'avérer problématique dans certains cas. En effet, les milieux déjà solidifiés ont une durée de vie (shelf-life) assez courte et doivent étre conservés de préLérence au froid. On préRere donc utiliser des milieux déshydratés, se présentant sous forme de poudre, à plus longue durée de vie sur l'étagère, et l'on prépare le milieu en cas de besoin. Ces milieux déshydratés contiennent de l'agar en tant qu'agent gélifiant, qui possède l'inconvénient de ne gélifier qu'en refroidissant àprès avoir été mis en présence d'eau chaude. Ainsi, on autoclave généralement le milieu, puis le coule dans les boites de Pétri et on laisse prendre en masse. Ceci ne peut être effectué lorsque l'on ne dispose pas de possibilité de faire chauffer l'eau pour préparer le . mleu. Il convient donc de trouver un moyen de préparer des milieux de culture gélifiés, même si l'on ne dispose pas d'autoclave, ou sans utiliser d'eau chaude, nécessaire pour la dissolution et gélification de l'agar. On a observé que l'on peut fabriquer un milieu de culture en utilisant, en tant qu'agent gélifiant, un carraghénate, et que le milieu prend en masse en présence d'eau, méme froide. Le milieu de culture ainsi préparé permet la croissance des microorganismes, comme sur un milieu contenant de l'agar. Les carraghénates sont des polysaccharides issus des algues Chondrus crispus, et sont bien connus dans les industries alimentaires et cosmétiques. n en existe de trois sortes, le kappa, le iota, et le lambda. Ainsi, la présente invention se rapporte à un milieu de culture déshydraté contenant une quantité suffisante de carrhagénane pour permettre la formation d'un milieu gélifié après apport d'eau, ledit carraghénate pouvant être n'importe lequel des trois carraghénates précités, préférablement le carraghénate iota, ou le carraghénate kappa. Un des modes d'utilisation du produit est d'ajouter l'échantillon à analyser directement sur le milieu en poudre et de mélanger. Le milieu gélifie alors en masse et les microorganismes présents croissent directement dans le volume créé par le milieu gélifié (globules dans le milieu à 3 dimensions), ce qui peut poser un problème si l'anaérobie dans le milieu est trop importante. Ainsi, afin de permettre une meilleure croissance des microorganismes dans le milieu de culture, on peut rajouter, si nécessaire, un agent libérateur d'oxygène, notamment du nitrate, en particulier un oxyde de nitrate. Afin de réduire les risques de dégradation du produit, on le conditionne de préférence à l'abri de l'humidité ambiante. Ainsi, l'invention se rapporte également à un kit de préparation d'un milieu de culture comprenant un milieu selon l'invention, conditionné dans un récipient hermétique à l'humidité. Alternativement, le kit selon l'invention comprenant un milieu selon l'invention ainsi qu'un élément déssicateur permettant d'éviter l'hydratation du milieu déshydraté. D'une façon générale, l'invention se rapporte à l'utilisation d'un carraghénate, en particulier le carraghénate iota ou bien le carraghénate kappa, en tant qu'agent gélifiant dans un milieu de culture gélifié. L'invention se rapporte également à un procèdé de préparation d'un milieu de culture gélifié comprenant l'étape de mélanger de l'eau avec un milieu de culture selon l'invention, en particulier lorsque l'eau est à une température inférieure à C, voire inférieure à 40 C. Le milieu de culture selon l'invention contient les nutriments nécessaires à la croissance des microorganismes cibles, etiou l'inhibition de certains microorganismes parasites et est semblable aux milieux connus de l'homme du métier, l'agar étant remplacé par le carraghénate. Le milieu selon l'invention peut également contenir des agents d' identification des microorganismes, et notamment des agents chromogènes ou fluorogènes. A titre d'exemple, la composition d'un milieu de culture selon l'invention peut être la suivante (pour l litre): Carraghénate iota 25 g Déoxycholate 1 g KNO3 1 g KH2PO4 0,66 g Na2HPO4 2,3 g NaC1 7,5 g Peptone 5 g Extrait de levure 2 g Magenta-glocoside 0,05 g X- glucuronide 0,05 g Meth-glucuronide 0,1 g Cellobiose 0,1 g Un tel milieu est particulièrement adapté pour la détection de coliformes, mais il est entendu que l'ajout d'autres nutriments ou éléments de croissance permet de définir des milieux pour détecter d'autres organismes. l - Revendications 1. Milieu de culture déshydraté contenant un carraghénate en tant qu'agent gélifiant. 2. Milieu de culture selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit carraghénate est le carraghénate iota. 3. Milieu de culture selon l'une des revendications 1 ou 2, comprenant en outre un agent libérant de l'oxygène. 4. Milieu de culture selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit agent libérant de l'oxygène est un oxyde de nitrate. 5. Kit de préparation d'un milieu de culture comprenant un milieu selon l'une des revendications 1 à 4, conditionné dans un récipient herrnétique à l'humidité. 6. Kit de préparation d'un milieu de culture comprenant un milieu selon l'une des revendications 1 à 4 ainsi qu'un élément déssicateur permettant d'éviter l'hydratation du milieu déshydraté. 7. Utilisation d'un carraghénate en tant qu'agent gélifiant dans un milieu de culture gélifié. 8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisé en ce que ledit carraghénate est le carraghénate iota. 9. Procédé de préparation d'un milieu de culture gélifié comprenant l'étape de