Brevet FR2836830A1 — publié le 20030912

PROCEDE D'OBTENTION D'UN PRINCIPE ACTIF A PARTIR DE Peumus bo/dus PO Z. t/rTTER CONT/E A CE LL/. TE, ACTTF OBTENUt/T COMPOSITIONS L'INCLUANT La présente invention concerne un procédé d'obtention d'un principe actif Ci partir de Peumus boldus ayant des propriétés pour lutter contre la cellulite. L'invention couvre aussi le principe actif caractéristique obtenu ainsi que des compositions qui incluent ce principe actif. La cellulite est un terme non médical mais bien connu pour désigner les dépôts de gras qui conduisent à un effet disgracieux sur la peau lui donnant un allure de peau d'orange. Ces dépôts sont généralement localisés en des endroits bien précis hanches et fesses. Ces dépôts sont en fait des transformations de l'hypoderme. Ce tissu est composé de cellules spécialisées : les adipocytes. Ce type de cellule est extensible et augmente ou diminue de volume sous l'effet du remplissage ou de la vidange des graisses contenues. Ces variations ont des causes d'ordre hormonal, métabolique ou psychologique. Ces facteurs provoquent les variations de volume mais aussi les variations du nombre de ces cellules spécialisées. Ces variations résultent d'un déséquilibre entre la captation (lipogenèse) et la libération (lipolyse) des graisses. La lipogenèse consiste en une transformation par les voies métaboliques connues des nutriments cellulaires en triglycérides et des glucides en acides gras, qui sont retenus dans ces cellules du tissu adipeux essentiellement. La régulation de cette transformation est gérée par l'insuline. La lipolyse est une transformation de ces triglycérides stockes en acides gras libres et en glycérol grâce à une enzyme, la triglycéride lipase ou la lipase hormono-sensible dite HSL. Cette transformation lipolytique est déclenchée par l'AMP cyclique (Adényl MonoPhosphate cyclique), dite AMPc. La concentration intracellulaire de cet AMPc dépend de l'activation de récepteurs membranaires de l'adényl cyclase. Au contraire, la phosphodiestérase III catalyse la transformation de l'AMPc en AMP donc diminue la quantité d'AMPc. C'est donc un frein à la lipolyse à l'encontre duquel il convient d'agir. Aussi, pour lutter efficacement contre cette accumulation de graisses, il convient de stimuler la lipolyse des triglycérides et de limiter la vitesse de stockage. Le principe actif obtenu par le procédé selon la présente invention, à partir de Peumus boldus, permet d'agir simultanément sur la lipogenèse par inhibition de la néosynthèse des lipides adipocitaires et sur la lipolyse en activant la lipase hormono-sensible tout en diminuant l'effet inhibiteur de la phosphodiestérase III. Le Peumus boldus est un arbre, notamment présent au Chili, dont on utilise les feuilles. Ces feuilles sont connues comme digestif tonique hépatique et comme stimulant de la sécrétion gastrique. Les effets obtenus à l'aide des compositions intégrant ce principe actif et connus sont des effets désinfiltrants et amincissants. La présente invention est maintenant décrite en détail à travers un procédé d'obtention d'un principe actif à partir de Peutnus boldus, un principe actif à caractéristiques définies et des exemples de compositions adaptées incluant ce principe actif. ,, PROCÉDÉ D'OBTENTION Le procédé consiste en la succession des étapes suivantes : - solubilisation dans l'eau de Peumus boldus de feuilles réduites en poudre à raison de 100 à 500 g/l, plus particulièrement 150 à 300 g/ !, a température ambiante, pendant une durée de l'ordre de 1 Ci 6h. - séparation des phases soluble et insoluble, - filtration sur filtre à plateaux en sorte de retirer toutes les fractions végétales, et - filtration stérilisante sur membrane. PRINCIPE ACTIF 11 Taux de matières sèches Le taux de matières sèches est compris entre 10 et 100 g/l, plus particulièrement entre 30 et 55 g/). Ce taux est obtenu par passage à l'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant. 2/Mesure du pH le pH est déterminé par la méthode potentiométrique, à température ambiante. Le pH est ainsi compris entre 4,0 et 7,0 plus particulièrement entre 5,0 et 6,0. 31 Dosage des composés phénoliques Le dosage est réalisé par lecture de l'intensité de coloration en présence de ferricyanure de potassium, intensité détectable à 715 nm et comparée à une gamme étalon d'acide lactique. Le taux de polyphénols est compris entre 5 et 30 g/l, plus particulièrement entre 6 à 11 gel. INHIBITION DE LA LIPOGENESE L'inhibition de la lipogénèse est essentiellement obtenue par inhibition de la néosynthèse de lipides adipocytaires. Le protocole consiste à isoler des adipocytes à partir de fragments de tissus adipeux en présence de collagénose. Après incubation, on ajoute un traceur radioactif. On extrait ensuite les lipides par la méthode de Bligh et Dyer (extraction méthanol/chloroforme 1 eau). On effectue un comptage en scintillation liquide pour mesurer les photons émis lors de l'interaction avec des particules radioactives. Ce nombre exprimé en cpm, impacts par minute est déterminé à l'aide d'un appareillage du commerce tel que celui commercialisé sous la dénomination compteur LKB 1210 Rackbeta. La comparaison est réalisée par rapport à une enzyme la cérulénine, inhibiteur de l'acide gras synthétase, présente dans la transformation du glucose en acides gras. Cette enzyme est testée à 10 pM. Le principe actif est introduit à raison de 1 "0 ; 3 % ; 5 %. Les résultats de l'inhibition de la néosynthèse des lipides adipocytaires sont regroupés dans le tableau ci-après. cpm (moyenne)'10 de la radioactivité Témoin 2639 5 Témoin après incubation 53010 100 Cérulénine 10 pM 1074 35 Principe actif selon l'invention 1% 33074 62 Principe actif selon l'invention 3% 17341 33 Principe actif selon l'invention 5% 10882 21 Le principe actif selon la présente invention est un inhibiteur de la néosynthèse des lipides adipocytaires. ACTIVITE LIPOLYTIQUE 1/Stimulation de l'activité lipolytique des adipocytes. Cette étude consiste à évaluer in vitro sur des préadipocytes l'activité lipolytique du principe actif en dosant les acides gras libres non estérifiés, (AGNE). Une comparaison est effectuée avec des polyphénols modèles, en l'occurrence : kaempférol, acide gallique et caféine. Le protocole consiste à faire incuber des préadipocytes en présence du principe actif ou des polyphénols modèles Après plusieurs jours de culture, on dose les AGNE à l'aide d'un test colorimétrique. La lecture est réalisée à une longueur d'ondes donnée 550nm contre le blanc. A partir de ces valeurs, on calcule le taux d'AGNE exprimé en pM/l, calculé par le rapport de la densité optique de l'échantillon et de la densité optique d'un étalon, dans le cas présent de l'acide oléique (1000 /M/)). Les résultats obtenus sont regroupés dans le tableau ci-après. Taux d'AGNE (pM/l) Principe Actif selon l'invention 2 "0 244 Kaempf érol 2% 150 Acide gallique 2 % 98 Caféine 2% 184 La comparaison montre qu'il y a une libération des acides gras sous l action du principe actif selon la présente invention. On en conclut qu'il y a une activité de stimulation de l'activité lipolytique des adipocytes Par sa fraction flavonoïde, le principe actif obtenu conduit à des propriétés amincissantes. 2/Limitation de l'activité de la phosphodiestérase III sur les AMP Ainsi qu'indiqué ci-avant, la phosphodiestérase III est une enzyme qui convertit l'AMP cyclique en 5'AMP, qui est inhibiteur de la lipolyse. Si cette enzyme peut voir son activité diminuer sous l'action du principe actif selon la présente invention, il se produira une augmentation du contenu intracellulaire en AMP cyclique et donc une stimulation de la lipolyse. Afin de déterminer cette activité inhibitrice, on mesure in vitro l'action du principe actif comparé à celle d'un inhibiteur connu de la phosphodiestérase III, le milrinone. Les tests sont conduits avec des pourcentages de principe actif selon l'invention variant de 1 à 3 %. Le protocole consiste à diluer le principe actif et le milrinone dans un tampon et à faire incuber chaque préparation en présence de phosphodiestérase III et d'AMP cyclique, en l'occurrence de l'AMPc tritié. Un témoin est incubé sans introduire d'enzyme. On détermine la quantité de 3H-AMPc transformée en 3H-AMP. Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au groupe témoin. % d'inhibition de la phosphodiestérase III Milrinone/Témoin 50 Principe Actif selon l'invention 1% 84 Principe Actif selon l'invention 3% 106 Principe Actif selon l'invention 5 "0 110 Le principe actif selon l'invention présente une activité inhibitrice de la phosphodiestérase dès 1%, qui est dose-dépendante. 3/Augmentation du taux d'hormone majeure de la lipolyse, la HSL Pour activer cette hormone HSL, responsable de l'hydrolyse des triglycérides en glycérol et en acides gras, il convient de provoquer une phosphorylation, en stimulant la synthèse des périlipines. Les tests sont conduits sur des fragments de tissus adipeux. On y incube des échantillons suivants : témoin, 1% ; 3% ; 5% de principe actif, théophylline 1mM et isoprotérénol1mM. Les différentes fractions et les adipocytes sont marqués radioactivement (32psi). Les protéines adipocytaires sont extraites et sont séparées par électrophorèse. La radioactivité est quantifiée par comptage direct sur gel. Les effets des traitements par les différents agents sur le profil de phosphorylation des protéines adipocytaires sont indiqués dans le tableau qui suit : cpm (moyenne)'7'0 Témoin 736 100 Principe actif selon l'invention 1% 974 132 Principe actif selon l'invention 3% 1074 146 Principe actif selon l'invention 5% 1191 162 Théophylline lmM 2350 320 Isoprotérénol ImM 1999 272 On observe une stimulation de la phosphorylation des protéines adypocitaires avec un effet dose-dépendant. L'électrophorèse permet de déterminer une augmentation de la synthèse de phosphoprotéines de poids moléculaire comprise entre 60 et 65 kDa, les périlipines. EFFETS DU PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION 1/Effet désinfiltrant et amincissant On évalue contre placebo ces effets en mesurant les infiltrations graisseuses par échographie avant et après 8 jours d'application biquotidienne du principe actif. L'utilisation d'ultrasons permet une mesure qualitative et quantitative de la densité du derme. En effet, plus le derme est dense et plus il est échogène et plus la mesure est élevée. Suivant le protocole utilisé, on effectue les mesures sur des volontaires, sur la face postérieure latérale de chaque cuisse avant et après traitement avec une émulsion dosée à 5 % de principe actif. On acquiert les images sur une zone donnée avant et après le traitement. Les moyennes des variations individuelles et la variation en pourcentage sont regroupées dans le tableau ci-après. Principe actif Placebo Paramètres J0 J28 J0 J28 # #% Moyenne 10,9 11,5 10,8 10,9 0,5 5,1 Le principe actif formulé à 5 % en émulsion conduit à une augmentation de la densité du derme de 5,1 % comparée à Ici cuisse traitée par le placebo. COMPOSITIONS Le présent principe actif peut être utilisé pour lutter contre la cellulite par effet désinfiltrant et amincissant introduit à raison de 0, 5 à 10%, plus particulièrement de 1 à 5 %, dans des formulations galéniques adaptées. De telles formulations peuvent comprendre de façon non limitative, les émulsions grasses ou aqueuses, les crèmes, les onguents ou les gels. Une composition permettant d'atteindre les résultats indiqués ci-avant comprend les composés suivants : - PEG-100 stéarate glycéryl (Simulsol 165-SEPPIC) 0, 5% - Alcool arachidyl/alcool béhényl/glucoside arachidyl 2, 0% (Montanov 202-SEPPIC) - Isononanoate d'isononyl (Lanol 99-SEPPIC) 5, 0% - Octanoate de cétéaryl (Lanol 1688-SEPPIC) 5, 0% - Diméthicone (DC 200-Dow Corning) 0, 5% - Ethanol 10% - Eau 67% - C13-14 isoparaffine / isostéarate d'isostéaryl / polyacrylate de sodium/ polyacrylamide/polysorbate 60 (Sepigel-SEPPIC) 2,0% - Glycérol 2, 0% - Conservateur (NIPPA) 0, 7% - Urée d'imidazolidinyl (Germall 115-ISP) 0, 3% - Principe actif 5, 0% REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention d'un principe actif pour lutter contre la cellulite, pour des effets amincissant et désinfiltrant, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - solubilisation dans l'eau de feuilles réduites en poudre de Peumus boldus à raison de 100 à 500 g/t, à température ambiante, pendant une durée de l'ordre de 1 à 6 heures. - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, centrifugation ou filtration, - filtration sur filtre à plateaux en sorte de retirer toutes les fractions végétales, et - filtration stérilisante sur membrane. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on solubilise dans l'eau une quantité de feuilles réduites en poudre de Peumus boldus comprise entre 150 et 300 g/t. 3. Principe actif selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il présente les paramètres suivants : parcime - matières sèches comprise entre 30 et 55 g/l - pH compris entre 5 et 6 - composés phénoliques compris entre 6 et 11 g/I 4. Principe actif selon la revendication 3, obtenu par le procédé des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il diminue la lipogénèse et augmente la lipolyse sur les zones à accumulation d'adipocytes chargés en graisse de la peau. e e 5. Principe actif selon la revendication 3, obtenu par le procédé des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il inhibe la néosynthèse de lipides adipocytaires lorsqu'il est appliqué sur la peau. 6. Principe actif selon la revendication 3, obtenu par le procédé des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il stimule l'activité lipolytique des adipocytes lorsqu'il est appliqué sur la peau. 7. Principe actif selon la revendication 3, obtenu par le procédé des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il limite l'activité de l'enzyme phosphodiestérase III sur l'Adényl MonoPhosphate cyclique lorsqu'il est appliqué sur la peau. 8. Principe actif selon la revendication 3, obtenu par le procédé des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il augmente le taux d'hormone majeure de la lipolyse, la HSL lorsqu'il est appliqué sur la peau. 9. Composition comprenant le principe actif selon la revendication 3, obtenu par le procédé des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu 1 elle comprend ce principe actif introduit à raison de 1 à 10%, plus particulièrement de 1 à 5 %, dans des formulations galéniques adaptées telles que les émulsions grasses ou aqueuses, les crèmes, les onguents ou les gels afin de produire des effets désinfiltrant et amincissant.