Brevet FR2834886A1 — publié le 20030725

PROCEDE D'OBTENTION D'UN PRINCIPE ACTIF A PARTI'R D Agarum cribosum, NOTAMMENT POUR LUTTER CONTRE LA PIGMENTATION La présente invention concerne l'obtention d'un principe actif à partir d'une algue connue sous le nom d' Agarum cribosum et l'utilisation, dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques de ce principe actif. L'application concerne plus particulièrement la lutte contre la pigmentation de la peau. L'invention couvre aussi des compositions cosmétiques incluant ce principe actif. La couleur de la peau chez l'homme est principalement due à la concentration en kératinocytes de la mélanine produite par les mélanocytes. Ces mélanocytes synthétisent la mélanine. La tyrosinase est une enzyme qui intervient dans la réaction conduisant à la production de mélanine. Or la quantité de tyrosinase est sensiblement constante d'une personne à une autre et pourtant le taux de mélanine varie. On en conclut que les variations de l'activité de la réaction de la mélanogénèse sont engendrées par des modifications de l'activité de l'enzyme essentielle à savoir la tyrosinase. On connaît des utilisations d'extraits d'algues pour la préparation de compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou alimentaires. Ainsi la demande de brevet français N 2 655 268 prévoit l'obtention de compositions ayant une activité anti-radicalaire à partir d'algues de la variété Fucus vesiculosus. La présente invention prévoit de travailler à partir d'algues de la variété Agarum cribosum en vue d'extraire un principe actif ayant des propriétés éclaircissantes de la pigmentation de la peau. Cette variété d'algues est du type laminaire dit criblé par la présence de trous dans sa surface foliaire. Elle est présente notamment en mer, au nord du Canada. Cette algue dite brune est riche en polyphénols marins dits phlorotannins . On connaît de nombreuses actions de ces polyphénols, spécifiquement des propriétés antioxydantes mais aussi antibactériennes. Afin de lutter contre la pigmentation de la peau, notamment lorsqu'elle est localisée, la présente invention prévoit une utilisation du principe actif extrait de cette algue, Agarum cribosum , qui présente de façon inconnue et surprenante, une activité anti-tyrosinase. Cette propriété peut être mise à profit pour bloquer au moins partiellement la mélanogénèse. On connaît l'effet disgracieux des tâches dites de sénescence qui apparaissent avec l'âge, en particulier sur les parties exposées de la peau, mains, visage ou cou. La présente invention propose un procédé d'obtention d'un principe actif à partir d'Agarum cribosum permettant de lutter contre la pigmentation, notamment cette pigmentation localisée sous forme de tâches de sénescence, et présente des tests montrant l'efficacité de ce principe actif dans son application. Le procédé est maintenant décrit en détail et le principe actif est caractérisé en lui-même tandis que les résultats obtenus sont regroupés dans des tableaux au fur et à mesure de la description. PROCÉDÉ D' OBTENTION Le procédé consiste en la succession des étapes suivantes : - solubilisation de poudre d'algues de la variété Agarum cribosum dans un mélange eau/alcool. - hydrolyse enzymatique - décantation pour séparer les phases soluble et insoluble - inactivation des enzymes - refroidissement à température ambiante, - concentrations des phlorotannins et des protéines, et - stérilisation de la phase active concentrée. Les conditions d' hydrolyse sont : température comprise entre 45 C et 70 C, durée comprise entre 1 et 4 heures et un pH compris dans une plage de 2,0 à 7,0, Le milieu de solubilisation est avantageusement un mélange eau/butylène glycol. La concentration est réalisée de façon avantageuse par ultrafiltration. Quant à l'inactivation de l'activité enzymatique, elle est obtenue par voie thermique ou par modification du pH. PRINCIPE ACTIF 1/ Taux de matière sèche Le taux de matière sèche est compris entre 5 et 100 g/l, plus particulièrement entre 5 et 50 g/l. le taux de matière sèche préférentiel est compris entre 16 et 32 g/l. Ce taux est obtenu par passage à l'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant. 2/ pH La valeur du pH est comprise entre 4,0 et 8,0 plus particulièrement entre 5,0 et 6,0. La valeur est déterminée par la méthode potentiométrique, à température ambiante. 3/ Teneur en polyphénols totaux Les composés polyphénoliques forment des complexe colorés en présence de ferricyanure de potassium. L'intensité des pics correspondants peut être détectée à 715 nm. En comparant ces valeurs à une courbe étalon obtenue à partir d'une gamme étalon d'acide gallique allant de 0,04 à 0,12 g/l. On peut alors déterminer la teneur en composés polyphénoliques de la solution analysée, les résultats étant exprimés en grammes d'acide gallique. Dans l'extrait ainsi analysé, la valeur est supérieure à 0,5 g/l. Elle est plus particulièrement comprise entre 0,5 g/l et 10,0 g/l 4/ Identification des phlorotannins La détermination est semi-quantitative. Elle consiste à mettre les phlorotannins ( forme 1,3,5 substitués et 1,3 substitués) en présence de diméthoxybenzaldéhyde (DMBA), ce qui donne une coloration grenat spécifique à 510 nm. La densité optique de cette solution est mesurée en fonction de la concentration de principe actif. On obtient les résultats suivants : Principe Actif Densité Optique Teneur en phlorotannins 0,5% 0,14 Teneur moyenne 1,5% 0,17 Teneur moyenne 5,0% 0,29 Teneur forte 10,0% 0,49 Teneur très forte EFFET DÉPIGMENTANT 1/ Activité anti-tyrosinase L'effet anti-tyrosinase du principe actif est mesuré par la mise en oeuvre du protocole suivant : - dans une solution de L-DOPA, dihydroxyphénylalanine, (2mM), on ajoute 20 l de tyrosinase et 200 l de principe actif, - on effectue un blanc avec de l'eau osmosée, et - on mesure la densité optique à 475 nm. La formule suivante est utilisée avec DO comme abréviation de Densité Optique, #0 pour temps de départ, # pour temps de réaction et PA pour principe actif : (DOt-DOto)Blanc - (DOt-DOto)PA % activité anti-tyrosinase = --------------------- (DOt-DOto)Blanc Cette formule donne les résultats regroupés dans le tableau qui suit : Principe Actif Activité anti-tyrosinase 0,5 % 30 % 1,0 % 70 % 2,0 % 100 % 5,0 % 100 % On constate une inhibition de 100 % de l'activité de la tyrosinase dès 2,0 % de principe actif. 2/ Etude ex vivo des effets dépigmentants Le protocole consiste à traiter des peaux reconstruites pigmentées du type commercialisée sous la dénomination SkinEthic.avec des émulsions contenant 2 ou 4 % de principe actif, pendant 4 jours, Après traitement, on quantifie la mélanine de ces épidermes. Les résultats sont exprimés en g/ml de mélanine et l'activité dépigmentante est déterminée par rapport à l'épiderme témoin. Taux de mélanine Activité dépigmentante Témoin 135,76 0 % Principe Actif 2 % 119,55 ~~~~ 12 % Principe Actif 4 % 93,26 31 % 3/ Etude cutanée des effets dépigmentants Cette étude porte sur les modifications de la couleur des tâches de sénescence sur le dos de la main de volontaires . Le principe actif est introduit dans une émulsion blanche avec une formulation à 5 % . La mesure colorimétrique est réalisée à l'aide d'un appareillage du commerce connue sous la dénomination Chromamètre qui permet, par conversion numérique des couleurs dans le spectre de la vision humaine, d'indiquer trois paramètres : - L : luminance, correspondant à la clarté, allant du sombre au pâle. - a : chrominance, correspondant aux variations dans la zone du vert au rouge - b : chrominance, correspondant aux variations dans la zone du bleu au jaune Dans la présente étude, ce sont les paramètres de luminance L et de chrominance b et l'Angle Typologique Individuel (ITA) qui sont retenus pour déterminer la pigmentation de la peau. L'ITA est obtenu avec la formule : ITA =[ Arc tan (L- 50)/b]x 180/# Plus ITA est élevé , plus la peau est claire. Le test a porté sur des volontaires féminins âgés de 45 à 65 ans après 56 jours d'application biquotidienne. Une main est traitée avec la crème blanche à 5 % de principe actif et l'autre main traitée avec une crème blanche placebo. Les mesures sont réalisées à l'aide du Chromamètre sur trois tâches de sénescence. Les résultats des moyennes obtenues de la luminance sont indiqués ci-après : Principe Actif Placebo JO J56 #PA JO J56 APL #PA-#PL ##% Moyenne L 53,39 52,50-1,19 53,71 51,60-2,11 0,92 1,92 On constate ainsi une augmentation de la luminance de 1,92 %. Les résultats des moyennes obtenues concernant la chrominance b sont indiqués ci-après : Principe Actif Placebo JO J56 APA JO J56 ApL APA-APL AA% Moyenne b 12,64 14,11 1,47 12,32 14,26 1,94 - 0,46 - 4,06 On constate ainsi une diminution de la chrominance de 4,06 %. Les résultats des moyennes obtenues du paramètre ITA sont indiqués ciaprès : Principe Actif Placebo JO J56 APA JO J56 Apl Ap/rApL AA% ITA 25,57 19,00- 6,57 27,00 17,50-9,50 2,93 11,09 On constate ainsi une augmentation de l' Angle Typologique Individuel de plus de 11 %, qui est un paramètre essentiel puisqu'il représente le degré de pigmentation de la peau des volontaires. Le principe actif ainsi obtenu, riche en polyphénols, permet de lutter contre la pigmentation disgracieuse de la peau. Afin de pouvoir l'utiliser de façon pratique, ce principe actif peut être incorporé dans toute forme galénique adaptée : crème, onguent, lotion, émulsion aqueuse ou grasse, lait, solution ou gel. Dans de telles formulations cosmétiques, le principe actif peut être introduit à raison de 0,5 à 20 %. Des stabilisants peuvent être ajoutés en sorte de supprimer tout risque de déphasage lorsque cela est nécessaire. De même, les formes galéniques peuvent prévoir l'adjonction de parfum ou d'agents lissants ou facilitant la pénétration à travers l'épiderme, ceci à la discrétion du formulateur. REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention d'un principe actif pour des usages cosmétiques comme agent dépigmentant, inhibiteur de l'activité de la tyrosinase et inhibiteur de la synthèse de la mélanine, caractérisé en ce qu'on réalise cette obtention àpartir de l'algue de la variété Agarum cribosum par succession des étapes suivantes : - solubilisation de poudre d'algues de la variété Agarum cribosum dans un mélange eau/alcool, - hydrolyse enzymatique, - décantation pour séparer les phases soluble et insoluble, - inactivation des enzymes, - refroidissement à température ambiante, - concentrations des phlorotannins, et - stérilisation de la phase active concentrée. 2. Procédé d'obtention selon la revendication 1, caractérisé en ce que l' obtention alcoolique est réalisée dans un mélange eau/butylène glycol. 3. Procédé d'obtention selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la température est comprise entre 45 C et 70 C, la durée est comprise entre 1 et 4 heures et le pH est compris dans une plage de 2,0 à 7,0. 4. Principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il présente les paramètres suivants : - matière sèche comprise entre 5 et 100 g/l, - pH compris entre 4,0 et 8,0, et - taux de polyphénols totaux supérieur à 0,5 g/l. 5. Principe actif selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il présente les paramètres suivants : - matière sèche comprise entre 5 et 50 g/l, plus particulièrement entre 16 et 32 g/l, - pH compris entre 5,0 et 6,0, et - taux de polyphénols totaux compris entre 0,5 g/l et 10,0 g/l. 6. Composition cosmétique comprenant le principe actif selon l'une des revendications 4 ou 5, ou obtenu par le procédé selon les revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle comprend de 0,5 à 20 % de principe actif dans une formulation cosmétique adaptée. 7. Utilisation de la composition cosmétique selon la revendication 6, caractérisée en ce que l'on applique sur la peau cette composition sur les zones pigmentées en sorte d'obtenir des effets dépigmentant et éclaircissant.