Brevet FR2836828A1 — publié le 20030912

La présente invention concerne l'utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou de composés équivalents de L-a-lysophosphatidylcholine pour la différenciation de monocytes en cellules dendritiques matures in vitro. La présente invention concerne également un procédé pour la différenciation de monocytes en cellules dendritriques matures selon lequel on dispose de monocytes dans un milieu approprié permettant leur différenciation et on additionne audit milieu le L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L a-lysophosphatidylcholine. Les cellules dendritiques sont impliquées dans le développement d'une réponse immune et dans l'initiation d'une réponse lymphocytaire T spécifique par reconnaissance, capture et présentation des antigènes notamment des agents infectieux (Steinman et al. 1997, Immuno. Rev., 156 : 25-37 ; Cella et al. 1997, Curr. Opin. Immunol., 9 : 10-16). Si les cellules dendritiques immatures captent et digèrent les antigènes des agents infectieux de façon très efficace, certains signaux, comme les agents bactériens ou les cytokines inflammatoires, peuvent les activer en induisant un processus de maturation, qui est l'étape initiale du déclenchement de la réponse immunitaire adaptative. En effet, au cours de cette activation, les cellules dendritiques acquièrent la capacité à migrer vers les organes lymphoïdes où se trouvent les lymphocytes T et la capacité à transmettre des signaux de co-stimulation indispensables à l'activation des lymphocytes T naïfs. Lors de cette maturation, les cellules dendritiques subissent des modifications fonctionnelles et phénotypiques telles que : a une augmentation de molécules de surface impliquées dans l'activation des lymphocytes T (telles que CD40, CD80, CD83, CD86 et les molécules du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de classe 1 et II), e la production de cytokines proinflammatoires (telles que les interleukines IL-12, IL-1 (3, TNFa et IL-6) 'la diminution de leur capacité à capter et à digérer l'antigène. De part leurs capacités de développement d'une réponse immune et d'initiation d'une réponse lymphocytaire T spécifique, les cellules dendritiques matures présentent un intérêt thérapeutique particulier notamment dans les domaines de vaccination anti- infectieuse et anti-tumorale et de l'immunothérapie (Austin. 1998, Curr. Opin. Hematol. 5 : 3-15 ; Reise Sousa et al. 1999, Curr. Opin. Immunol. Il : 392-399). In vitro, des cellules dendritiques matures peuvent être obtenues à partir de monocytes en culture. Ces monocytes sont in vivo des cellules circulantes qui, en traversant notamment la paroi vasculaire endothéliale, entrent au contact de facteurs environnementaux influençant leur devenir d'une façon encore méconnue. Schématiquement, on envisage alors trois possibilités pour ces monocytes : * la sortie des tissus et le retour vers les ganglions lymphatiques, 'la différenciation en macrophages, 'la différenciation en cellules dendritiques immatures. La première étape pour obtenir des cellules dendritiques matures à partir de monocytes en culture, consiste alors à induire la différenciation des monocytes en cellules dendritiques immatures par notamment l'interleukine IL-4 et le facteur GM-CSF (Granulocyte Macrophage-Stimulating factor). Au bout de 6 jours, 95% des cellules en culture sont des cellules dendritiques immatures. La deuxième étape consiste ensuite en une activation de la maturation des cellules dendritiques immatures en cellules dendritiques matures par des agents exogènes, tels que des agents bactériens ou viraux. Ainsi, la protéine kpOmpA de Klebsiella pneumoniae est capable d'induire la maturation de ces cellules dendritiques immatures en cellules dendritiques matures (P. Jeannin et al., Nature Immunology, 2000,1 : 502- 509). Toutefois, l'utilisation de molécules exogènes dérivées d'agents infectieux induit des problèmes sécuritaires et financiers, (effets secondaires directs ou indirects in vivo ; nécessité de purification très importante selon des exigences légales ou réglementaires très strictes), rendant l'utilisation de ce type de molécules délicate dans le cadre de la vaccinologie et de l'immunothérapie. Plus récemment, il a été décrit par Perrin-Cocon et al en 2001 (The Journal of Immunology, 167 : 3785-3891) que la production de cellules dendritiques matures à partir de monocytes en différenciation peut être induit par des molécules endogènes, telles que certaines lipoprotéines plasmatiques oxydées, et plus particulièrement les lipoprotéines de faible densité (LDL) oxydées. Toutefois, les LDL oxydés sont des particules complexes, composées de protéines, de triacylglycérols, de phospholopides, de cholestérol libre et estérifié, et sont, de ce fait difficiles à synthétiser artificiellement. Ainsi, la présente invention se propose de résoudre les inconvénients de l'état de la technique en présentant une molécule endogène, facile à synthétiser et peu coûteuse qui stimule la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures in vitro. Une des molécules actives générées durant l'oxydation des LDL est le La-lysophosphatidylcholine, dénommé ci-après LPC. Toutefois, il a été montré que la fixation du LPC sur le récepteur G2A, qui est le récepteur de haute affinité du LPC, inhibe notamment la prolifération et l'activation des lymphocytes T, suggérant plutôt un rôle du LPC dans l'inhibition du déclenchement d'une réaction immunitaire (Carson & Lo, 2001, Science, 293 : 618-619). De plus, il a également été montré que de forte concentration de LPC (50ils) inhibe l'activité du facteur de transcription NF-KB (facteur KB nucléaire), connu pourtant pour être activé lors de la maturation des cellules dendritiques. De plus, le LPC est présent à forte concentration dans le plasma, suggérant qu'il ne serait pas actif dans le plasma, ce qui ne le prédispose pas à être choisi par l'homme du métier pour une utilisation thérapeutique. D'une façon surprenante, la présente invention concerne notamment l'utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine pour la différenciation de monocytes en cellules dendritiques matures in vitro. Avant de continuer plus avant, les définitions suivantes permettront de mieux comprendre la suite de l'exposé de l'invention. Par composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine, on entend une molécule agissant selon les mêmes mécanismes d'action cellulaires que le La-lysophosphatidylcholine, c'est à dire par les mêmes récepteurs membranaires, notamment des récepteurs membranaires à protéines G, tels que les récepteurs G2A, GPR4, récepteur du PAF (platelet activating factor). Ce composé équivalent peut ainsi être notamment un agoniste des récepteurs précédemment cité (tel que notamment le 0methyl-PAF, le carbamyl-PAF), mais également le PAF. Par agent biologique, on entend une molécule (ou un ensemble de molécules) qui, introduite dans un organisme, doit être la cible d'une réponse immunitaire ou qui permet la synthèse de cette cible. Cet agent biologique peut ainsi être choisi parmi les antigènes de bactéries, de virus, de levures, de parasites, de champignons, les antigènes tumoraux, les lysats de cellules tumorales autologues et/ou héterologues. Cet agent biologique peut également être un acide nucléique qui code pour au moins un antigène choisi parmi les antigènes de bactéries, de virus, de levures, de parasites, de champignons, les antigènes tumoraux. Par antigène tumoral, on entend un antigène issu de cellules tumorales, tel qu'un peptide tumoral, notamment un peptide interagissant avec les molécules de classe I et présenté aux lymphocytes T CD8+. On peut citer à titre non limitatif les antigènes tumoraux suivants : MAGE-2, MAGE-3, MART, MUC-1, MUC-2, HER-2, GD2, carcinoembryonic antigen (CEA), TAG-72, ovarian-associated antigens OV-TL3 et MOV18, TUAN, alpha-feto protein (AFP), OFP, CA-125, CA-50, CA-19-9, renal tumor-associated antigen G250, EGP-40 (ou EpCAM), SI 00 (malignant meanomaassociated antigen), p53, prostate tumor-associated antigens (e. g., PSA et PSMA) et p21ras. Par cellules tumorales autologues, on entend des cellules de tumeurs appartenant au sujet qui reçoit un médicament déterminé. Les cellules tumorales peuvent être obtenues par prélèvement de tissus cancéreux, notamment une biopsie ou résection chirurgicale. Par cellules tumorales hétérologues, on entend des cellules issues de tumeurs provenant d'un sujet différent de celui qui reçoit un médicament déterminé. L'utilisation de cellules hétérologues permet notamment d'obtenir un médicament permettant de traiter des patients atteints de cancer chez qui un prélèvement de cellules tumorales n'est pas possible. Cela permet aussi d'utiliser une source standard d'antigènes tumoraux. Par lysat cellulaire, on entend un mélange d'antigènes intra-cellulaires et/ou membranaires, obtenu par une lyse de cellules selon un protocole connu de l'homme du métier, telle qu'une lyse mécanique, chimique ou enzymatique. Par milieu de culture, on entend un milieu comprenant tous les éléments nécessaires à la viabilité des cellules. On peut citer à titre d'exemple le milieu RPMI 1640 et ses dérivés. Par agent d'activation, on entend une molécule qui, dans une composition pharmaceutique, induit les effets d'une médication ou renforce ou complète les effets de la médication principale. Dans le cas d'une composition vaccinale, l'agent d'activation est un adjuvant qui est préférentiellement une molécule qui stimule la réponse immunitaire de l'organisme hôte. Par inhibiteur de L-a-lysophosphatidylcholine, on entend une molécule (ou un ensemble de molécules) qui bloque l'activité inflammatoire de La-lysophosphatidylcholine, notamment en bloquant la différenciation des cellules dendritiques matures par le L-a-lysophosphatidylcholine. On peut citer à titre indicatif l'Intralipid, le lipoïd Erz De tels inhibiteurs pourraient ainsi in vivo être utilisés pour la fabrication d'un médicament pour diminuer une réponse inflammatoire, notamment articulaire, ou lors d'une greffe notamment. Ainsi, l'invention concerne l'utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou d'au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine pour la différenciation de monocytes en cellules dendritiques matures in vitro. Le La-lysophosphatidylcholine et/ou le composé équivalent peuvent être notamment sous la forme d'une émulsion lipidique ou sous la forme d'un liposome de synthèse. Selon un mode particulier de l'invention, le composé équivalent est le PAF. L'invention concerne également l'utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou d'au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et/ou la prévention d'une infection d'origine bactérienne, virale, fongique, parasitaire ou provoquée par une levure et/ou pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et/ou la prévention des cancers. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne l'une des utilisations telles que définies précédemment caractérisée en ce qu'elle comprend également au moins un agent biologique. Selon un mode préféré, l'agent biologique est choisi parmi les antigènes de bactéries, de virus, de levures, de parasites, de champignons, les antigènes tumoraux, les lysats de cellules tumorales autologues et/ou héterologues. Selon un autre mode préféré de l'invention, l'agent biologique est un acide nucléique qui code pour au moins un antigène choisi parmi les antigènes de bactéries, de virus, de levures, de parasites, de champignons, les antigènes tumoraux. L'invention concerne également un procédé pour la différenciation in vitro de monocytes en cellules dendritriques matures selon lequel on dispose de monocytes dans un milieu de culture permettant leur différenciation et on additionne audit milieu de La-lysophosphatidylcholine et/ou d'au moins un composé équivalent de a-lysophosphatidylcholine. Selon un mode particulier de l'invention, le composé équivalent est le PAF. Selon un mode préféré de réalisation, le L-a-lysophosphatidylcholine est additionné audit milieu à une concentration finale dans le milieu comprise entre environ 10 et 80 ! lM, préférentiellement entre environ 20 et 60 uM et avantageusement entre 30 et 50 u. M. Selon un autre mode préféré de réalisation, le L-a-lysophosphatidylcholine est ajouté dans ledit milieu entre le 3ème et 6ème jour de différenciation des monocytes, préférentiellement entre le 4ème et le sème jour de différenciation des monocytes. Selon un autre mode préféré de réalisation, on ajoute dans le milieu de culture un agent biologique. L'invention concerne également les cellules dendritiques matures susceptibles d'être obtenues selon l'un des procédés tels que définis ci dessus. L'invention concerne également un milieu de culture pour la différenciation de monocytes en cellules dendritiques matures, caractérisé en ce qu'il comprend du La-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de La-lysophosphatidylcholine. Selon un mode préféré de réalisation, le L-a-lysophosphatidylcholine est à une concentration finale dans ledit milieu comprise entre environ 10 et 801lM, préférentiellement entre environ 20 et 60 uM et avantageusement entre 30 et 50 uM. Selon un autre mode préféré de réalisation, le composé équivalent est le PAF. Selon un autre mode de réalisation, le milieu de culture comprend un agent biologique. L'invention concerne également un agent d'activation pour la différenciation de monocytes en cellules dendritiques matures caractérisé en ce qu'il comprend du La-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de La-lysophosphatidylcholine. Selon un mode particulier de réalisation, le composé équivalent est le PAF. L'invention concerne également l'utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine comme agent d'activation pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et/ou la prévention d'une infection d'origine bactérienne, virale, fongique, parasitaire ou provoquée par une levure ; pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et/ou la prévention des cancers. Selon un mode préféré de l'invention, le composé équivalent est le PAF. L'invention concerne également le L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine pour utilisation comme médicament. L'invention concerne également le L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine et au moins un agent biologique pour utilisation comme médicament. L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant de La-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de La-lysophosphatidylcholine. L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un inhibiteur de La-lysophosphatidylcholine pour la fabrication d'un médicament pour la prévention d'une inflammation. Les exemples qui suivent sont donnés à titre explicatif et n'ont aucun caractère limitatif. Ils permettront de mieux comprendre l'invention. Exemple 1-Différenciation de monocytes en culture en cellules dendritiques en présence ou en l'absence de LPC Isolement, mise en culture et initiation de la différenciation des monocytes - Les monocytes sont isolés de sang périphérique humain par une première centrifugation suivant le gradient de densité (400g ; 20 minutes) dans du Ficoll-Hypaque, suivie d'une deuxième centrifugation (400g ; 20 minutes) dans une solution à 50% en Percoll. Les monocytes sont ensuite purifiés par déplétion immunomagnétique (Dynal, Oslo, Norway), en utilisant un cocktail d'anticorps monoclonaux anti CD 19 (hybridome 4G7) (Becton Dickinson, Francklin Lakes, NJ, USA), anti-CD3 (OKT3, American Type Culture Collection, Rockeville, MD) et anti-CD56 (NKH1, Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA). Les monocytes ainsi obtenus sont alors purifiés à au moins 90%, comme montré par l'absence des marqueurs CD1a et la présence du marqueur CD14. La différenciation des monocytes en cellules dendritiques est initiée par 40ng/ml de GM-CSF (Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor) humain recombiné et 250U/ml d'interleukine IL-4 humain recombiné. Les monocytes sont mis en culture dans le milieu RPMI 1640 (Life technologies, Rockeville, MD, USA) enrichi par 2mM de glutamine (Life technologies), 10mM d'Hepes (Life Technologies), 40ng/ml de gentamycine (Life technologies) et 10% de sérum de veau foetal dépourvu de lipoprotéines (LPDS, Sigma, St Quentin-Fallavier, France). Notons que le milieu de culture présenté dans cet exemple est un milieu de culture LPDS. Des résultats comparables peuvent être obtenus par l'utilisation d'autres milieux de culture, tel qu'un milieu FCS, c'est à dire un milieu contenant 10% de sérum de veau foetal non dépourvu de lipoprotéines, ou pourraient être obtenus par l'utilisation de tout milieu de culture synthétique connus de l'homme du métier. Traitement des monocytes par le LPC - 5 jours après le début de la différenciation des monocytes sont ajoutés dans le milieu de culture 40 AM de LPC pendant 24 heures (L-a-lysophosphatidylcholine ; Sigma ; St Quentin Fallavier, France). Des cellules contrôles sont également obtenues en l'absence de LPC dans le milieu de culture. On obtient alors des cellules dites"contrôles"et des cellules dites"LPC". Exemple 2-Phénotype des cellules obtenues selon l'exemple 1 Les cellules utilisées dans cette analyse sont celles obtenues au 6ème jours de différenciation selon le protocole décrit dans l'exemple 1. Le phénotype des cellules"contrôle"et"LPC"est analysé par cytométrie de flux sur un FACSCalibur (Becton Dickinson, Francklin Lakes, NJ, USA) par l'utilisation de conjugué FITC (isothiocyanate de fluorosceine) anti-CD14, anti-HLADR, anti-CD80 et conjugué PE (phycoerythrine) anti-CDla, anti-CD83, anti-CD86, anti-CD40 (Beckman Coulter). Selon l'état de la technique, les monocytes ont préférentiellement un phénotype CD14+ CD la-, les cellules dendritiques immatures ont préférentiellement un phénotype CD 14-CDla+ CD86-, les cellules dendritiques matures ont préférentiellement un phénotype CD 14-CD la intermédiaire-CD86+. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1. TABLEAU 1-Expression des marqueurs CD83, HLA-DR et CD86 en absence (contrôle) ou en présence de LPC CD83 HLA-DR CD86 Contrôle 5, 79 78, 76 117, 77 LPC 11, 74 146,31 759,69 Les cellules" LPC" obtenues après l'initiation de la différenciation des monocytes en présence de LPC, présentent un phénotype comparables à celui de cellules dendritiques matures, tel que le démontre notamment l'induction des marqueurs CD86, et l'augmentation de HLA-DR par comparaison au phénotype des cellules" contrôles ". Exemple 3-Capacité d'internalisation des cellules obtenues selon l'exemple 1 Les cellules"contrôle"et"LPC"utilisées dans cette analyse sont celles obtenues après 6 jours de différenciation selon le protocole décrit dans l'exemple 1. Ces cellules sont incubées à 37 C : pendant 30 minutes avec lmg/ml de FITC-T70-Dextran (Sigma) afin d'estimer la capacité d'intemalisation de ces cellules par endocytose e pendant 30 minutes avec Img/ml de Lucifer Yellow (ref. L0259, Sigma, St Quentin-Fallavier, France) afin d'estimer la capacité d'intemalisation de ces cellules par pinocytose pendant 3 heures avec carboxylate-modified yellow-green FluoSpheres (nom commercial, 0,45 m, Molecular Probes, Leiden, The Netherlands) afin d'estimer la capacité d'intemalisation de ces cellules par macropinocytose. L'intemalisation est stoppée sur glace par un tampon PBS froid contenant 0, 1 % de BSA (Bovine serum Albumin, albumine sérique bovine) et 0,05% de NaN3. Les cellules "contrôle"et"LPC"sont lavées 3 fois à 4 C dans ce même tampon et la fluorescence est quantifiée par FACScalibur (nom commercial, Becton Dickinson). Comme le montre le tableau 2, les capacités d'intemalisation par endocytose, pinocytose et macropinocytose sont fortement diminuées par l'ajout de LPC dans le milieu de culture au 5ème jour de différenciation des monocytes par rapport aux cellules contrôles différenciées en l'absence de LPC. TABLEAU 2 - Capacité d'intemalisation par endocytose, pinocytose et macropinocytose des monocytes différenciés en absence (contrôle) ou en présence de LPC Endocytose Pinocytose Macropinocytose Contrôle 100% 100% 100% LPC 53% 49% 66% La réduction des capacités d'internalisation est une des caractéristiques des cellules dendritiques matures. Ces résultats montrent que en présence de LPC, les monocytes ont une forte tendance à se différencier en cellules dendritique matures. Exemple 4-Capacité des cellules obtenues selon l'exemple 1 à stimuler les lymphocytes T Les cellules"contrôle"et"LPC"utilisées dans cette analyse sont celles obtenues après 6 jours de différenciation selon le protocole décrit dans l'exemple 1. Les lymphocytes T allogéniques naïfs sont isolés de sang périphérique humain. Les cellules mononuclées du sang périphérique sont isolées par centrifugation (400g, 20 minutes) selon le gradient de densité en présence de Ficoll-Hypaque. Après élimination des monocytes sur gradient de Percoll, les lymphocytes du sang périphérique se situent dans la fraction dense. Les lymphocytes T sont purifiés par déplétion immunomagnétique par l'utilisation d'un cocktail d'anticorps monoclonaux anti-CD19 (anticorps 4G7) (Becton Dickinson, Francklin Lakes, NJ, USA), anti-CD16 (anticorps 3G8), anti-CD56 (anticorps NKH1), anti-glycophorin A (anticorps llE4B7. 6) et antiCD14 (anticorps RMP052), commercialisés par Beckman Coulter. Les lymphocytes T purifiés sont cultivés dans des plaques de culture de 96 puits à fond plat avec les cellules"contrôle"ou"LPC". 2x105 cellules T sont cultivées dans 2001. 11 de milieu de culture selon un rapport de 1 : 5, 1 : 10 ou 1 : 20 monocytes différenciés en présence ou non de LPC/cellules T (ratio DC/LT). Après 4 jours, 50gel du surnageant de culture sont utilisés pour déterminer la sécrétion d'IL-2 (interleukine 2) et d'IFNy (interféron gamma) par un kit ELISA (Endogen, Wobum, MA, USA). Comme le présente le tableau 3, la sécrétion d'IL2 et d'IFNy par les lymphocytes T, exprimée classiquement selon le ratio cellules dendritiques/lymphocyte T, (ratio DC/LT) est fortement stimulée par les cellules provenant de la différenciation de monocytes en présence de LPC ajoutée 5 jours après l'initiation de la différenciation des monocytes (cellules"LPC"), par comparaison aux résultats contrôles (cellules "contrôles"). TABLEAU 3-Stimulation de la sécrétion d'IL2 et d'IFNypar lymphocytes T induite par les monocytes différenciés en absence (contrôle) ou en présence de LPC Ratio DC/LT 0 0,05 0,1 0,2 Contrôle IL-2 0 68 156 3511 IFNy041 1451 41199 LPC IL-2 0 23 1 47 26 173 : t 31 IFNy073 47 439108 795 : t 19 Ces résultats montrent une augmentation des capacités des monocytes différenciés en présence de LPC à stimuler les lymphocytes T allogéniques, ce qui est une caractéristique des cellules dendritiques matures. A titre indicatif, des résultats comparables sont obtenus que le LPC soit dissous dans l'éthanol ou sous forme d'émulsion lipidique. Exemple 5-Propriétés des cellules obtenues selon l'exemple 1 : comparaison avec des cellules dendritiques matures obtenues par différenciation de monocytes en présence de LDL oxydés L'objectif de cet exemple est de démontrer que les mécanismes d'action mis en jeu lors la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures en présence de LPC pourraient être différents de ceux mis en jeu lors de la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures en présence de LDL oxydés (Perrin-Cocon et al. The Journal of Immunology, 167 : 3785-3891,2001). Dans cet exemple sont utilisées des cellules"contrôle"et"LPC"telles qu'obtenues dans l'exemple 1, ainsi que des cellules"LDLox", obtenues tel que décrit dans la publication scientifique (Perrin-Cocon et al. The Journal of Immunology, 167 : 3785-3891,2001), c'est à dire après différenciation de monocytes en culture en présence de LDL oxydés ajoutés dans le milieu 5 jours après l'initiation de la différenciation. Les inventeurs ont recherché si les inhibiteurs de l'action des LDL oxydés sur la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures inhibaient également l'action du LPC sur la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures. Ainsi, une solution d'Intralipid&commat; (50gIml de phospholipides, Fresenius Kabi, Sèvres, France), ou une solution de molécules synthétiques de nature lipidique (lipoïd Erz Lipoïd Ag, Ludwigshafen, Allemagne, 50 Ilglml de phospholipides) ont été ajoutées dans le milieu de culture au 5ème jour de différenciation. L'expression de CD86 des cellules"LPC"et"LDLox"en présence de ces inhibiteurs est analysée selon le protocole décrit dans l'exemple 2, et les résultats sont présentés dans le tableau 4. TABLEAU 4-Inhibition (en %) de l'expression de CD86 des cellules LPC et LDLox par l'Intralipide et le lipoïd E-80 Intralipide Lipoïd E-80 LDLox 88% 10 81% 14 LPC86% 1224% 19 L'ajout d'Intralipid inhibe la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures par les LDL oxydés et par le LPC d'une façon comparable (inhibition de l'ordre de 80%). Par contre, d'une façon surprenante, l'ajout de lipoïd E-80 induit une inhibition de l'expression des CD86 de 81% lorsque les monocytes sont cultivés en présence de LDLoxydés, alors que cette inhibition est de seulement 24% lorsque les monocytes sont cultivés en présence de LPC. Ces résultats suggèrent que les mécanismes d'action du LPC pour la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures seraient différents des mécanismes d'action des LDL oxydés. Exemple 6-Mécanismes cellulaires impliqués dans la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures en présence de LPC Afin d'aller plus avant dans la recherche des mécanismes cellulaires de l'action du LPC dans la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures, les inventeurs ont recherché quels récepteurs pouvaient être impliqués. Dans un premier temps, afin de déterminer si les récepteurs impliqués dans l'action du LPC lors de la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures appartenaient à la famille des récepteurs couplés à une protéine G, du PTX (toxine pertussis ; lOOng/ml), connu pour bloquer les protéines Gi est ajouté pendant 3 heures dans le milieu de culture. Le milieu de culture est ensuite changé et le LPC est ajouté tel que décrit dans l'exemple 1. Les résultats présentés dans le tableau 5 montrent que la préincubation des monocytes par le PTX bloque l'augmentation de CD86 induite par le LPC, suggérant que l'action du LPC implique des récepteurs à protéines Gi. TABLEAU 5-Inhibition de l'expression de CD86 des cellules"LPC"par le PTX Induction de CD86 LPC 100% LPC + PTX 10% ces récepteurs pourraient être notamment les récepteurs suivants : récepteur G2A (G2A-R) : il a été démontré récemment que le LPC était un ligand de forte affinité pour la protéine G2A, une protéine G couplé à un récepteur exprimé dans les lymphocytes. De plus, la stimulation de G2A par le LPC induit la phosphorylation d'une kinase extracellulaire (ERK1/2 : extracellular signal-related kinases). Cette phosphorylation peut d'ailleurs être observée lors de l'ajout de LPC dans le milieu de culture suggérant l'implication du récepteur G2A dans les différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures par le LPC. 'récepteur PAF (PAF-R) comme décrit précédemment, certains effets du LPC pourraient impliquer le récepteur du PAF dans divers types de cellules * récepteur GPR4 : le LPC est également un ligand de la protéine GPR4, une autre protéine G couplé à un récepteur ayant une forte affinité pour le sphingosylphosphorylcholine Exemple 7-Différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures en présence de composés équivalents au LPC Les inventeurs ont déterminé si des composés équivalents au LPC, c'est à dire impliquant les mêmes mécanismes d'action cellulaires via les mêmes récepteurs membranaires, pouvait également induire la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures. Pour cela, les inventeurs ont recherché si l'ajout de PAF dans le milieu de culture pouvait augmenter l'action du LPC sur la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures. Ainsi, une solution de PAF (Sigma, 5uM) a été ajoutée dans le milieu de culture au 5ème jour de différenciation des monocytes. L'expression de CD86 des cellules"contrôle", et des cellules"LPC", obtenues en présence ou en absence de PAF, est analysée selon le protocole décrit dans l'exemple 2, et les résultats sont présentés dans le tableau 6. TABLEAU 6-Expression du marqueur CD86 (intensité moyenne de fluorescence) des cellules"contrôles"et"LPC"en présence ou en absence de PAF CD86 Contrôle 49,02 PAF 102, 88 LPC 287, 11 LPC+PAF 676, 88 Ces résultats suggèrent que le PAF seul induit une légère surexpression de CD86 contrairement au LPC qui induit une augmentation de l'expression de CD 86 de 470%. Par contre, il est important de noter que le PAF agit en synergie avec le LPC, puisque l'action des deux composés induit une augmentation de l'expression de CD86 de plus de 1200%. Afin de renforcer l'implication du récepteur au PAF, les inventeurs ont étudié l'action d'un antagoniste de ce récepteur sur la différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures par le LPC. Ainsi, une solution de l'antagoniste BN52021 du PAF (Biomol, Plymouth Meeting, USA, lOOuM) a été ajoutée dans le milieu de culture au 56mue jour de différenciation des monocytes. L'expression de CD86 des cellules"contrôles"et"LPC", obtenues en présence ou en absence de BN52021, est analysée selon le protocole décrit dans l'exemple 2, et les résultats sont présentés dans le tableau 7. TABLEAU 7-Expression de CD86 des cellules"contrôle"et"LPC"en présence de l'antagoniste BN52021 CD86 LPC 100% LPC + BN52021 54% Ces résultats suggèrent que l'action du LPC implique bien le récepteur du PAF mais suggèrent également que l'action du LPC pourrait impliquer d'autres récepteurs. A titre indicatif, les inventeurs ont également démontré que l'antagoniste BN52021 ajouté dans le milieu de culture au sème jour de différenciation des monocytes en cellules dendritiques matures par des LDL oxydés induisait une inhibition de 100 % de l'action des LDL oxydés, suggérant la encore, que les mécanismes d'action du LPC et des LDL oxydés seraient différents. REVENDICATIONS 1. Utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou d'au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine pour la différenciation de monocytes en cellules dendritiques matures in vitro. 2. Utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou d'au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et/ou la prévention d'une infection d'origine bactérienne, virale, fongique, parasitaire ou provoquée par une levure. 3. Utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou d'au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et/ou la prévention des cancers 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle comprend également au moins un agent biologique. 5. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'agent biologique est choisi parmi les antigènes de bactéries, de virus, de levures, de parasites, de champignons, les antigènes tumoraux, les lysats de cellules tumorales autologues et/ou héterologues. 6. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'agent biologique est un acide nucléique qui code pour au moins un antigène choisi parmi les antigènes de bactéries, de virus, de levures, de parasites, de champignons, les antigènes tumoraux. 7. Procédé pour la différenciation in vitro de monocytes en cellules dendritriques matures selon lequel on dispose de monocytes dans un milieu de culture permettant leur différenciation et on additionne audit milieu de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou d'au moins un composé équivalent de a-lysophosphatidylcholine. 8. Procédé selon la revendication 7, selon lequel le L-a-lysophosphatidylcholine est additionnée (s) audit milieu à une concentration finale dans le milieu comprise entre environ 10 et 80uM, préférentiellement entre environ 20 et 60 uM et avantageusement entre 30 et 50 uM. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 ou 8, selon lequel le La-lysophosphatidylcholine est ajoutée dans ledit milieu entre le 3ème et 6ème jour de différenciation des monocytes, préférentiellement entre le 4ème et le 5ème jour de différenciation des monocytes. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 ou 9 caractérisé en ce qu'on ajoute dans le milieu de culture un agent biologique. 11. Cellules dendritiques matures susceptibles d'être obtenues selon le procédé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 7 à 10. 12. Milieu de culture pour la différenciation de monocytes en cellules dendritiques matures, caractérisé en ce qu'il comprend du L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine. 13. Milieu de culture selon la revendication 12 caractérisé en ce que le La-lysophosphatidylcholine est à une concentration finale dans le milieu comprise entre environ 10 et 80uM, préférentiellement entre environ 20 et 60 uM et avantageusement entre 30 et 50 u. M. 14. Milieu de culture selon l'une quelconque des revendications 12 à 13 caractérisé en ce qu'il comprend un agent biologique. 15. Agent d'activation pour la différenciation de monocytes en cellules dendritiques matures caractérisé en ce qu'il comprend du L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine. 16. Utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine comme agent d'activation pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et/ou la prévention d'une infection d'origine bactérienne, virale, fongique, parasitaire ou provoquée par une levure. 17. Utilisation de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine comme agent d'activation pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et/ou la prévention des cancers. 18. L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L- a-lysophosphatidylcholine pour utilisation comme médicament 19. L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L- a-lysophosphatidylcholine et au moins un agent biologique pour utilisation comme médicament. 20. Composition pharmaceutique comprenant de L-a-lysophosphatidylcholine et/ou au moins un composé équivalent de L-a-lysophosphatidylcholine.