Brevet FR2837098A1 — publié le 20030919

La présente invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant une quantité efficace d'un peptide de séquence Xi-Y-Phe-Thr-X2-Ala-Thr-Z- Ile-X3-Leu-X4-Phe-Leu-X5, dans laquelle : X1, X2, X3, X4, X5 = Arg, Lys, His Y=Asp,Glu Z = Asn, Gln, et où les acides aminés peuvent être sous la forme L, D ou DL. Selon un mode de réalisation actuellement préféré de l'invention, le peptide précité est de séquence Arg-Asp-Phe-Thr-Lys-AIa-Thr-Asn-Ile-Arg-Leu-Arg-Phe-Leu-Arg. L'invention concerne également des procédés de traitement cosmétique ou dermatologique de la peau, notamment pour le traitement des manifestations du vieillissement. L'invention se rapporte encore à l'utilisation pour la préparation d'une telle composition, d'une quantité efficace des peptides tels que définis précédemment ; les peptides ou la composition étant destinés, notamment, à augmenter l'adhésion cellulaire. Le vieillissement cutané est un phénomène complexe qui est dû à de nombreux facteurs endogènes et exogènes. Cliniquement, on observe l'apparition de rides et ridules, une perte de l'élasticité cutanée, un relâchement des tissus cutanés et sous-cutanés... De nombreuses voies de recherches sont proposées pour lutter contre le vieillissement, parmi lesquelles la protection contre l'environnement (soleil, pollutions...), l'activation de la régénération cellulaire, le renforcement de la matrice extracellulaire (collagène et élastine). Récemment, des études ont montré le rôle important d'une bonne l'adhésion kératinocytes -jonction dermo-épidermique pour le traitement des peaux âgées. De façon générale, en augmentant l'adhésion des cellules entre elles, et l'adhésion entre les cellules et la matrice extra-cellulaire, il est possible de prévenir voire de traiter le relâchement de la peau. Cette dernière voie de recherche, prometteuse, est encore peu étudiée, alors que le rapprochement cellule-matrice ne peut que favoriser les échanges bénéfiques que l'on sait maintenant nombreux entre la cellule est son milieu environnant complexe. Elément clé de la matrice extra-cellulaire, la laminine participe à l'adhésion, au ciment inter-cellulaire. Elle est de ce fait un acteur majeur dans la migration et la communication cellulaire. Très étudiée en biologie cutanée pour ses nombreuses fonctions, elle commence à être étudiée en cosmétique, bien que sa structure de protéine (taille importante et charge) grève son efficacité au niveau cutané. Comme il est souvent le cas dans ce type de problématique, la recherche dermatologique se tourne vers des séquences peptidiques, donc plus courtes, qui pourraient mimer les activités de la laminine. L'industrie cosmétique récemment sensibilisée à l'utilisation des peptides en biologie cutanée (séquences dérivées de l'alpha-MSH, de certains neuropeptides comme le Neuropeptide Y et la Substance P...), est à la recherche de peptides ayant une activité forte au niveau cutané. On constate donc que subsiste le besoin d'un nouveau dérivé de la laminine, ayant une action bénéfique sur l'adhésion cellulaire. Or, la demanderesse a trouvé, de façon surprenante et inattendue, qu'une quantité efficace d'un peptide de séquence X1-Y-Phe-Thr-X2-Ala-Thr-Z-Ile-X3-Leu-X4-PheLeu-Xs a une action sur l'adhésion cellulaire. A la connaissance de la demanderesse, il n'a jamais été décrit, dans l'art antérieur, l'utilisation d'un peptide de séquence X1-Y-Phe-Thr-X2-Ala-Thr-Z-Ile-X3-Leu-X4-PheLeu-Xs en cosmétique. L'invention a donc pour objet premier, une composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant, dans un milieu cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable, une quantité efficace d'un peptide de séquence X1-Y-Phe-Thr-X2-Ala-Thr-Z-Ile-X3-Leu-X4Phe-Leu-X5, dans laquelle : X1, X2, X3, X4, X5 = Arg, Lys, His Y = Asp, Glu Z = Asn, Gin et où les acides aminés peuvent être sous la forme L, D ou DL. Selon un mode de réalisation actuellement préféré de l'invention, le peptide précité est de séquence Arg-Asp-Phe-Thr-Lys-Ala-Thr-Asn-Ile-Arg-Leu-Arg-Phe-Leu-Arg. Les peptides de l'invention peuvent être modifiés par acylation sur leur fonction N- terminale et/ou par estérification sur leur fonction C-terminale. Par la suite, le terme adhésion cellulaire doit s'entendre d'une part par l'adhésion entre les cellules et la matrice extra-cellulaire, et d'autre part par l'adhésion entre les cellules. Dans les compositions de l'invention, les peptides peuvent être obtenus par synthèse chimique ou enzymatique à partir des acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. Dans les compositions de l'invention, les peptides peuvent aussi être obtenus par hydrolyse ménagée de protéines naturelles (animale ou végétale) ou par biotechnologie (utilisation d'un micro-organisme modifié ou non par génie génétique). Dans les compositions de l'invention, les peptides peuvent enfin être obtenus par synthèse peptidique classique en phase homogène ou hétérogène ou par synthèse enzymatique à partir des acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. L'homme de l'art, connaissant le métier de l'extraction et de la purification des peptides et protéines, pourra aisément envisager d'autres procédés d'obtention des peptides décrits par la demanderesse. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, les peptides de l'invention sont préalablement solubilisés dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables comme l'eau, la vaseline, une huile végétale, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, l'éthanol, le propanol ou l'isopropanol. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, les peptides précités sont préalablement solubilisés dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans, ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. Pour donner un ordre de grandeur, dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques de la présente invention, le peptide est utilisé à une concentration représentant de 0,005 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement à une concentration représentant de 0,1à 50 ppm (p/p). Préférentiellement, les compositions selon la présente invention se présenteront sous une forme galénique adaptée à l'administration par voie topique cutanée, et couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau, les poils ou les cheveux. Ces compositions pourront notamment se présenter sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions, ou encore poudres, adaptés à une application sur la peau, les lèvres et/ou les cheveux. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick, ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. Ces compositions comprennent, de façon connue, les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que solvants, épaississants, diluants, anti-oxydants, colorants, filtres, pigments, charges, conservateurs, parfums, absorbeurs d'odeur. Dans tous les cas, ces adjuvants, ainsi que leurs proportions, seront choisis de manière à ne pas nuire aux propriétés recherchées dans l'invention. Ces adjuvants peuvent par exemple correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids, et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et coémulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en un proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition. Bien entendu, l'homme de métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leurs quantités, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. L'invention concerne aussi un procédé cosmétique pour le traitement des manifestations du vieillissement, consistant à appliquer, sur la peau ou les cheveux, la composition telle que définie précédemment. L'invention concerne encore un procédé cosmétique ou pharmaceutique pour augmenter l'adhésion cellulaire, consistant à appliquer, sur la peau, la composition telle que définie précédemment. L'invention concerne aussi un procédé cosmétique ou pharmaceutique pour augmenter l'expression des molécules de la matrice extra-cellulaire, consistant à appliquer, sur la peau, la composition telle que définie précédemment. L'invention concerne encore un procédé cosmétique ou pharmaceutique pour augmenter l'expression des intégrines, consistant à appliquer, sur la peau, la composition telle que définie précédemment. L'invention concerne enfin un procédé cosmétique ou pharmaceutique pour accélerer la cicatrisation et la régénération tissulaire, consistant à appliquer, sur la peau, la composition telle que définie précédemment. L'invention se rapporte encore à l'utilisation pour la préparation d'une composition, d'une quantité efficace des peptides tels que définis précédemment ; les peptides ou la composition étant destinés à traiter de manière curative et/ou préventive les manifestations cutanées du vieillissement (d'origine physiologique et solaire) et améliorer l'aspect de la peau. L'invention se rapporte encore à l'utilisation pour la préparation d'une composition, d'une quantité efficace des peptides tels que définis précédemment ; les peptides ou la composition étant destinés à augmenter l'adhésion cellulaire. L'invention se rapporte encore à l'utilisation pour la préparation d'une composition, d'une quantité efficace des peptides tels que définis précédemment ; les peptides ou la composition étant destinés à augmenter l'expression des intégrines. L'invention se rapporte encore à l'utilisation pour la préparation d'une composition, d'une quantité efficace des peptides tels que définis précédemment ; les peptides ou la composition étant destinés à augmenter l'expression des protéines de la matrice extracellulaire. L'invention se rapporte encore à l'utilisation pour la préparation d'une composition, d'une quantité efficace des peptides tels que définis précédemment ; les peptides ou la composition étant destinés à accélerer la cicatrisation et la régénération tissulaire. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. Exemple 1- Stabilité du peptide Arg-Asp-Phe-Thr-Lys-Ala-Thr-Asn-Ile-Arg-Leu-ArgPhe-Leu-Arg Le peptide Arg-Asp-Phe-Thr-Lys-Ala-Thr-Asn-Ile-Arg-Leu-Arg-Phe-Leu-Arg a été analysé à une concentration de 10-4 M dans de l'eau distillée, par HPLC avec une colonne type C18 et un gradient linéaire eau/TFA 0,1% - acétonitrile/TFA 0,1%. Aucune dégradation du peptide n'a été observée, dans l'eau distillée, après 24 heures à 25 C, 37 C et 60 C. De plus, après 8 jours à 25 C, le peptide ne présente toujours pas de dégradation. Des fibroblastes et des kératinocytes humains sont cultivés pendant 24 heures à 37 C et 5 % de CO2. Pendant ce temps, les cellules peuvent libérer dans le milieu de culture des enzymes. Ensuite, le milieu de culture est retiré pour être mis en présence du peptide. Après 24 heures, le peptide ne présente pas de dégradation. Lorsque le peptide est appliqué sur des fibroblastes et kératinocytes en culture, un dosage HPLC du milieu de culture révèle que la concentration en peptide décroît rapidement en quelques heures. Ces données, prises dans leur ensemble, suggèrent la possibilité d'une pénétration du peptide dans la cellule. Cette hypothèse est ensuite confortée par les tests d'efficacité exposés dans les exemples 2 à 4. Exemple 2 - Effets du peptide de l'exemple 1 sur l'adhésion cellulaire L'étude est réalisée dans des plaques de 96 puits, sur des kératinocytes cultivés dans un incubateur à 37 C et 5 % de C02. Selon les puits, différents peptides de 3 à 25 acides aminés sont incubés de 5 à 50 ppm. Les contrôles négatifs ne contiennent pas de peptide. Après 3 heures, les puits sont totalement remplis de milieu, hermétiquement fermés, retournés et agités sur un agitateur tridimensionnel pendant 20 minutes. Puis les plaques sont vidées retournées du milieu et ensuite le milieu restant est aspiré. Ensuite, 100 ul de MTT à 1 mg/ml sont ajoutés par puits et laissés pendant 3 heures à 37 C, 5 % CO2. La solution est enfin retirée, 100 (il de DMSO ajoutés et la lecture est faite à 560 nm contre 630 nm. Pour la plupart des peptides et pour les contrôles sans peptide, une densité optique de 0,36 UDO est obtenue à 540 nm. Pour le peptide de l'exemple 1 Arg-Asp-Phe-Thr-Lys-Ala-Thr-Asn-Ile-Arg-Leu-ArgPhe-Leu-Arg testé à une concentration de 5 ppm, la densité optique est de 0,43 UDO. En conclusion, après seulement 3 heures de contact avec les kératinocytes, le peptide Arg-Asp-Phe-Thr-Lys-Ala-Thr-Asn-Ile-Arg-Leu-Arg-Phe-Leu-Arg apporte une adhésion cellulaire supérieure à celle des autres peptides testés. Exemple 3 - Effets du peptide de l'exemple 1 sur l'expression de la fibronectine Le but de l'étude est de déterminer l'influence du peptide de l'exemple 1 sur l'expression des protéines de la matrice extra-cellulaire de fibroblastes. Des fibroblastes sont cultivés puis ensemencés dans des labteks. Selon les puits, le peptide est appliqué ou non à la concentration de 10-6 M. Après 48 heures, l'étude de l'expression de la fibronectine est réalisée par immunomarquage. Une très forte augmentation du marquage est observée dans les puits traités avec le peptide, par rapport aux puits non traités. En conclusion, l'utilisation du peptide de l'exemple 1 augmente grandement l'expression de la fibronectine dans les fibroblastes. Exemple 4 - Effets du peptide de l'exemple 1 sur l'expression de la laminine V Le but de l'étude est de déterminer l'influence du peptide de l'exemple 1 sur l'expression des protéines de la matrice extra-cellulaire de kératinocytes. Des kératinocytes sont cultivés puis ensemencés dans des labteks, Selon les puits, le peptide est appliqué ou non à des concentrations de 10-6 M. Après 48 heures, l'étude de l'expression de la laminine V est réalisée par immunomarquage. Une augmentation du marquage est observée dans les puits traités avec le peptide, par rapport aux puits non traités. En conclusion, l'utilisation du peptide de l'exemple 1 augmente grandement l'expression de la laminine V dans les kératinocytes. Exemple 5 - Effets du peptide de l'exemple 1 sur l'expression des intégrines Le but de l'étude est de déterminer l'influence du peptide de l'exemple 1 sur l'expression des intégrines ss1 dans les kératinocytes. Des kératinocytes sont cultivés puis ensemencés dans des labteks. Selon les puits, le peptide est appliqué ou non à la concentration de 10-6 M, soit 12 heures avant l'ensemencement des cellules, soit en même temps. 24 heures après l'ensemencement des kératinocytes, l'étude de l'expression des intégrines ss 1 est réalisée par immuno-marquage. Une augmentation du marquage est observée dans les puits traités avec le peptide, par rapport aux puits non traités, et ce, que le peptide ait été appliqué avant l'ensemencement cellulaire ou en même temps que celui-ci. De plus, dans les puits traités, les cellules se répartissent plus uniformément, ce qui est probablement dû à une meilleure adhésion des cellules sur la lame. En conclusion, l'utilisation du peptide de l'exemple 1 augmente grandement l'expression des intégrines (31 dans les kératinocytes, donc leur adhésion aux protéines de la matrice extra-cellulaire. Exemple 6 - Préparation de compositions Ces compositions ont été obtenues par simple mélange des différents composants. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. 1-Emulsion huile dans eau Phase huileuse : # Montanov 68 (Cetearyl Alcohol and Cetearyl Glucoside) 5,00 % # Huile de Jojoba 5,00 % # Huile de Vaseline 5,00 % # Isopropyl Palmitate 7,00 % Phase aqueuse : # Glycérine 5,00 % # Allantoïne 0,10 % # peptide de l'exemple 1 100 ppm # Sepigel 305 (Polyacrylamide and C13-14 Isoparaffin and Laureth-7) 0,30 % # Conservateur 0,50 % # Parfum 0,50 % # Eau qsp 100 % 2- Gel # Carbopol Ultrez 10 (sol. à 2%) 25,00 % # Triéthanolamine 0,50 % # peptide de l'exemple 1 5 ppm # Conservateur 0,20 % # EDTA (séquestrant) 0,10 % # Parfum 0,50 % Eau qsp 100 % 3- Lotion # Mono Propylene Glycol 1,00 % # Allantoïne 0,30 % # Glycérine 1,00 % # Cetiol HE (PEG-7 Glyceryl Cocoate) 1,00 % # peptide de l'exemple 1 0,5 ppm # Conservateur 0,20 % # Parfum 0,50 % # Eau qsp 100 % REVENDICATIONS 1. Composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant, dans un milieu cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable, une quantité efficace d'un peptide de séquence Xi-Y-Phe-Thr-X2-Ala-Thr-Z-Ile-X3-Leu-X4-Phe-Leu-X5, dans laquelle : Xl, X2, X3, X4, Xs = Arg, Lys, His Y = Asp, Glu Z = Asn, Gln, et où les acides aminés peuvent être sous la forme L, D ou DL. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le peptide est de séquence Arg-Asp-Phe-Thr-Lys-Ala-Thr-Asn-Ile-Arg-Leu-Arg-Phe-Leu-Arg. 3. Composition selon l'une des revendications précédentes, caratérisée en ce que les peptides sont modifiés par acylation sur leur fonction N-terminale et/ou par estérification sur leur fonction C-terminale. 4. Composition selon l'une des revendications précédentes, caratérisée en ce que les peptides sont obtenus par synthèse chimique à partir des acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. 5. Composition selon l'une des revendications précédentes, caratérisée en ce que les peptides sont obtenus par hydrolyse ménagée de protéines naturelles ou par biotechnologie. 6. Composition selon l'une des revendications précédentes, caratérisée en ce que les peptides sont obtenus par synthèse peptidique classique en phase homogène ou hétérogène ou par synthèse enzymatique à partir des acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. 7. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les peptides sont préalablement solubilisés dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables comme l'eau, la vaseline, une huile végétale, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, l'éthanol, le propanol ou l'isopropanol. 8. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les peptides sont préalablement solubilisés dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans, ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. 9. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le peptide est utilisé à une concentration représentant de 0,005 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement à une concentration représentant de 0,1 à 50 ppm (p/p). 10. Procédé cosmétique pour le traitement des manifestations du vieillissement, consistant à appliquer, sur la peau ou les cheveux, la composition selon l'une des revendications précédentes. 11. Procédé cosmétique pour augmenter l'adhésion cellulaire, consistant à appliquer, sur la peau, la composition selon l'une des revendications 1 à 9. 12. Procédé cosmétique pour augmenter pour augmenter l'expression des molécules de la matrice extra-cellulaire, consistant à appliquer, sur la peau, la composition selon l'une des revendications 1 à 9. 13. Procédé cosmétique pour augmenter l'expression des intégrines, consistant à appliquer, sur la peau, la composition selon l'une des revendications 1 à 9. 14. Procédé cosmétique pour accélérer la cicatrisation et la régénération tissulaire, consistant à appliquer, sur la peau, la composition selon l'une des revendications 1 à 9. 15. Utilisation des peptides selon l'une des revendications 1 à 9, pour la préparation d'une composition pour traiter de manière curative et/ou préventive les manifestations cutanées du vieillissement (d'origine physiologique et solaire) et améliorer l'aspect de la peau. 16. Utilisation des peptides selon l'une des revendications 1 à 9, pour la préparation d'une composition pour augmenter l'adhésion cellulaire. 17. Utilisation des peptides selon l'une des revendications 1 à 9, pour la préparation d'une composition pour augmenter l'expression des intégrines. 18. Utilisation des peptides selon l'une des revendications 1 à 9, pour la préparation d'une composition pour augmenter l'expression des protéines de la matrice extra- cellulaire. 19. Utilisation des peptides selon l'une des revendications 1 à 9, pour la préparation d'une composition pour accélérer la cicatrisation et la régénération tissulaire.