Brevet FR2845686A1 — publié le 20040416

MELANGES DE POLYSACCHARIDES DERIVES D'HEPARINE, LEUR PREPARATION ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES LES CONTENANT La présente invention concerne des mélanges de polysaccharides dérivés d'héparine, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques les contenant. L'héparine est un mélange de mucopolysaccharides sulfatés d'origine animale, utilisée notamment pour ses propriétés anticoagulantes et antithrombotiques. L'héparine présente cependant des inconvénients qui limitent les conditions de son utilisation. En particulier, son activité anticoagulante importante (anti IIa) peut occasionner des hémorragies. Des héparines de bas poids moléculaire obtenues par dépolymérisation basique d'esters d'héparine ont été proposées (EP40144) ; cependant ces produits ont encore une activité anti-IIa importante. Des héparines de très bas poids moléculaire ont également été décrites dans US6384021. Cependant les valeurs d'activité Anti-Xa obtenues dans les exemples décrits ne dépassent pas les 120 UI, et le ratio AntiXa/AntiIIa obtenu est compris entre 15 et 50. Dans WO 0208295, des héparines de très bas poids moléculaires sont préparés par un procédé différent de US6384021 et présentent une activité comprises entre 100 et 150 UI avec des ratio également très élevé pouvant atteindre 100 pour certains exemples d'application. Il existe toutefois un besoin constant dans cette classe de médicament d'améliorer les activités Anti-Xa et le ratio AntiXa/AntiIIa et donc de mettre au point de nouvelles générations de dérivés d'Héparines. Un des objectifs de l'invention est donc d'améliorer l'activité anti-Xa et le ratio Anti-Xa/Anti-IIa en modifiant les procédés décrits dans l'art antérieur. Les héparines ainsi obtenues présentent une excellente activité antitrombique qui permet de se rapprocher de l'activité des héparines tout en ayant une activité anticoagulante proche de 0. L'invention a donc pour objet de nouveaux mélanges de polysaccharides dérivés d'héparine possédant une activité plus sélective vis-à-vis du facteur X activé (facteur Xa) et du facteur II activé (facteur IIa) que l'héparine. La présente invention a plus particulièrement pour objet les mélanges de polysaccharides sulfatés possédant la structure générale des polysaccharides constitutifs de l'héparine et présentant les caractéristiques suivantes : - ils ont un poids moléculaire moyen de 1500 à 3000 daltons, une activité anti-Xa de 120 à 200 UI/mg, une activité antiIIa de 0 à 10 UI/mg et un rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa supérieur à 30, - les oligosaccharides constitutifs des mélanges contiennent 2 à 26 motifs saccharidiques, ont un motif acide uronique-4,5 insaturé 2-0-sulfate à l'une de leurs extrémités, et contiennent l'hexasaccharide de formule suivante, L'hexasaccharide #IIa-IIs-Is contenu dans le mélange d'oligosaccharides décrit dans la présente invention est une séquence fortement affine à l'ATIII et caractérisé par une activité aXa supérieure à 740 U/mg. Le mélange d'oligosaccharides décrit dans la présente invention est sous forme d'un sel de métal alcalin ou alcalinoterreux. Comme sel de métal alcalin ou alcalinoterreux, sont préférés les sels de sodium, potassium, calcium et magnésium. Le poids moléculaire moyen est déterminé par chromatographie liquide haute pression en utilisant deux colonnes en série par exemple celles commercialisées sous le nom de TSK G3000 XL et TSK G2000 XL. La détection est réalisée par réfractométrie. L'éluant utilisé est du nitrate de lithium et le débit est de 0,6 ml/min. Le système est calibré avec des standards préparés par fractionnement de l'enoxaparine (AVENTIS) par chromatographie sur gel d'agarosepolyacrylamide (IBF). Cette préparation est réalisée selon la technique décrite par Barrowcliffe et al, Thromb. Res., 12, 27-36 (1977-78) ou D. A. Lane et al, Thromb. Res., 12,257-271 (1977-78). Les résultats sont calculés à l'aide du logiciel GPC6 (Perkin Elmer). L'activité anti-Xa est mesurée par la méthode amydolytique sur un substrat chromogénique décrite par Teien et al, Thromb. Res., 10,399-410 (1977), avec comme étalon le premier étalon international des héparines de bas poids moléculaire. L'activité anti-IIa est mesurée par la technique décrite par Anderson L. O. et al, Thromb. Res., 15,531-541 (1979), avec comme étalon le premier étalon international des héparines de bas poids moléculaire. De préférence, les mélanges selon l'invention contiennent de 8 à 15 % de l'hexasaccharide #IIa-IIs-Is dans la fraction hexasaccharide du mélange d'oligosaccharides. La fraction hexasaccharide représente de préférence de 15 à 25 % du mélange d'oligosaccharides. Le pourcentage de la fraction hexasaccharide peut être déterminée de façon analytique par chromatographie liquide haute pression sur colonnes TSK G3000 XL et TSK G2000 XL (décrit dans le présent brevet d'invention) ou bien par séparation préparative de la fraction hexasaccharide. Le mélange est dans ce cas chromatographie sur des colonnes remplies de gel de type polyacrylamide agarose tel que celui commercialisé sous la marque Ultrogel ACA202R (Biosepra). Le mélange est élué par une solution d'hydrogénocarbonate de sodium. De préférence, la solution d'hydrogénocarbonate de sodium est une solution de 0,1 mol/1 à 1 mol/1. Encore plus préférentiellement, la séparation est réalisée a une concentration de 1 mole/1. La détection est réalisée par spectrométrie UV (254nm). Après fractionnement, la fraction hexasaccharide en solution dans l'hydrogénocarbonate de sodium est neutralisée par de l'acide acétique glacial. La solution est ensuite concentrée sous pression réduite de façon à obtenir une concentration en acétate de sodium supérieure à 30 % en poids. La fraction d'hexasaccharide est précipitée par addition de 3 à 5 volumes de méthanol. La fraction d'hexasaccharides est récupérée par filtration sur verre fritté n 3. Le mélange d'hexasaccharides obtenu peut être analysé par CLHP (Chromatographie Liquide Haute Performance) pour en déterminer la teneur en hexasaccharide #IIa-IIs-Is. L'hexasaccharide #IIa-IIs-Is peut être isolé par chromatographie CLHP préparative ou par chromatographie d'affinité sur colonne antithrombine III sepharose selon les techniques utilisées par l'homme du métier (M. Hook, I. Bjork, J. Hopwood and U. Lindahl, F. E B.S letters, vol 656 (1) (1976) ) . De préférence, les mélanges selon l'invention ont une activité anti-Xa supérieure à 150 UI/mg. De préférence, les mélanges selon l'invention ont une activité anti-IIa de 0 à 5 UI/mg. Encore plus préférentiellement, les mélanges présentent un rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa supérieur à 50. De préférence, les mélanges selon l'invention ont un poids moléculaire moyen compris entre 2000 et 3000 Daltons. Les mélanges d'oligosaccharides selon l'invention peuvent être préparés par dépolymérisation d'un sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine en milieu organique, au moyen d'une base organique forte de pKa de préférence supérieur à 20 (propriétés de préférence apparentées à la famille des phosphazènes définies par exemple selon R. Schwesinger et al, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 26,1167-1169 (1987), R. Schwesinger et al, Angew. Chem. 105,1420 (1993) ), transformation du sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine dépolymérisée en sel de sodium, saponification des esters résiduels et éventuellement purification. Le procédé selon l'invention reprend les grandes étapes du procédé tel que décrit dans WO 0208295 tout en ajoutant une caractéristique essentielle pour obtenir les mélanges d'oligosaccharides selon l'invention avec les caractéristiques physico-chimiques et les activités décrites plus haut. En effet, pour obtenir les mélanges d'oligosaccharides spécifique selon l'invention, il est nécessaire de contrôler la sélectivité de la base par un contrôle très précis de la teneur en eau du mélange pendant l'étape de dépolymérisation. Le procédé selon la présente invention est en effet caractérisé par un contrôle de la forte sélectivité de la base lors de la dépolymérisation. Elle permet de dépolymériser l'héparine tout en préservant au maximum les séquences affines à l'ATIII tel que l'hexasaccharide #IIa-IIs-Is décrit dans la présente invention. Cette étape critique du procédé permet d'obtenir les polysaccharides selon l'invention. Cette caractéristique du procédé se traduit par des activités aXa inattendues au regard du poids moléculaire moyens des mélanges d'oligosaccharides (150 UI/mg Cet effet s'exprime pleinement lorsque le milieu réactionnel est anhydre. Par contre, lorsque la teneur en eau du milieu réactionnel augmente, on observe une diminution drastique de la sélectivité de la dépolymérisation. La préservation des séquences affines à l'ATIII diminue et la conséquence est une chute importante de l'activité aXa. En présence de faible quantité d'eau, la base phosphazène se protone et l'espèce réactive devient un hydroxyde d'ammonium quaternaire. Dans ce cas, les propriétés de très fort encombrement stérique et faible nucléophilicité sont perdues et influent fortement sur la qualité du produit obtenu. Lorsque l'on réalise des essais de dépolymérisation avec une teneur en eau mesurée et contrôlée, on peut voir cet effet pleinement s'exprimer. Le tableau suivant résume l'impact de la teneur en eau sur la sélectivité de la dépolymérisation (seul ce paramètre est variable dans les essais : les st#chiométries des réactifs, les dilutions, les températures restent constantes selon les critères de l'homme de l'art. La base utilisée est la base phosphazène : 2-tert-butylimino-2-diéthylamino- 1,3 diméthylperhydro-1,2,3-diaza-phosphorine ). Teneur en 0,1% 0,2% 0,3% 0,4% 0,57% 1,8% 2,5% eau % aXa UI/mg 177 161 132 122 120 105 99 alla UI/mg 1,5 1,4 1,4 1,3 1,4 3,1 13,4 aXa/aIIa 118 115 94 94 85,7 34 7,4 Pour une sélectivité optimale et une préservation maximale des séquences affines à l'ATIII, il est préférable de travailler à des teneurs en eau inférieures à 0,6 % et tout particulièrement inférieure à 0,3 % lorsque l'on travaille avec 1 équivalent molaire de base phosphazène par rapport à l'ester benzylique de l'héparine, sel de benzéthonium. L'invention a donc tout particulièrement pour objet l'étape de dépolymérisation du sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine obtenue selon les méthodes connues de l'homme du métier caractérisé en ce qu'on utilise - une base de la famille des phosphazènes notamment en solution dichlorométhane renfermant un pourcentage d'eau inférieur à 0,6 %. Le sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine est de préférence le sel de benzéthonium, de cétylpyridinium ou de cétyltriméthyl ammonium. Les bases de la famille des phosphazènes sont, de préférence, celles de formule : dans laquelle les radicaux R1 à R7 sont identiques ou différents et représentent des radicaux alkyle. Dans les formules précédentes, les radicaux alkyle contiennent 1 à 6 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée. Avantageusement, le rapport en mole base forte/ester est compris entre 0,2 et 5 et, de préférence, entre 0,6 et 2. L'invention a donc pour objet un procédé de préparation des mélanges d'oligosaccharides selon l'invention comprenant les étapes suivantes a) Transalification de l'héparine de sodium par action de chlorure de benzéthonium, b) Estérification de l'héparinate de benzéthonium par action de chlorure de benzyle, c) Transalification de l'ester benzylique obtenu en sel d'ammonium quaternaire, d) Dépolymérisation du sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine par la méthode telle que définie plus haut, e) Transformation du sel d'ammonium quaternaire en sel de sodium, f) Eventuellement saponification de l'héparine par action d'une base telle que la soude g) Eventuellement purification notamment par action d'un agent d'oxydation tel que l'eau oxygénée. Le schéma réactionnel suivant illustre la présente invention : La transformation du sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine dépolymérisée en sel de sodium (étape e) est effectuée, généralement, par traitement du milieu réactionnel avec une solution alcoolique d'acétate de sodium et, de préférence avec une solution à 10 % d'acétate de sodium dans le méthanol (poids/volume), à une température comprise entre 15 et 25 C. L'équivalent en poids d'acétate ajouté est préférentiellement 3 fois supérieur à la masse de sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine engagé dans la réaction de dépolymérisation. La saponification (étape f) s'effectue généralement au moyen d'un hydroxyde de métal alcalin tel que la soude, la potasse, l'hydroxyde de lithium, en milieu aqueux, à une température comprise entre 0 et 20 C et de préférence 0 et 10 C. On utilisera de façon générale de 1 à 5 équivalents molaires d'hydroxyde de métal alcalin. De préférence, la saponification sera réalisée en présence de 1 à 2 équivalents molaires d'hydroxyde de métal alcalin. Le produit final peut éventuellement être purifié (étape g) par toute méthode connue de purification des héparines dépolymérisées (par exemple EP 0037319B1). De préférence, on purifie au moyen de peroxyde d'hydrogène, en milieu aqueux, à une température de 10 à 50 C. De préférence, cette opération sera réalisée entre 20 et 40 C. Le sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine peut être préparé selon le schéma réactionnel suivant : a) transformation de l'héparine de sodium au moyen du chlorure de benzéthonium pour obtenir l'héparinate de benzéthonium, b) estérification du sel de benzéthonium obtenu précédemment au moyen du chlorure de benzyle et traitement par une solution alcoolique d'acétate de sodium pour obtenir le sel de sodium de l'ester benzylique de l'héparine, c) transalification du sel de sodium de l'ester benzylique de l'héparine en sel d'ammonium quaternaire et, de préférence en sel de benzéthonium, de cétyl pyrinium ou de cétyltriméthyl ammonium. La réaction de l'étape a) est réalisée par action du chlorure de benzéthonium en excès, sur l'héparine sodique, à une température voisine de 15 à 25 C. De manière avantageuse, le rapport molaire sel/héparine sodique est compris entre 2 et 3. L'héparine de départ utilisée est de préférence une héparine de porc. Celle-ci peut être préalablement purifiée pour diminuer son taux de sulfate de dermatan selon le procédé décrit dans le brevet FR2663639. L'estérification de l'étape b) s'effectue de préférence au sein d'un solvant organique chloré (chloroforme, chlorure de méthylène par exemple), à une température comprise entre 25 et 45 C et, de préférence entre 30 et 40 C. L'ester sous forme de sel de benzéthonium est ensuite récupéré sous forme de sel de sodium par précipitation au moyen d'acétate de sodium à 10 % en poids dans un alcool tel que le méthanol. On emploie généralement 1 à 1,2 volume d'alcool par volume de milieu réactionnel. La quantité de chlorure de benzyle et le temps de réaction sont adaptés pour obtenir un taux d'estérification compris entre 50 et 100 % et, de préférence, entre 70 et 90 %. De façon préférentielle, on utilise 0,5 à 1,5 parties en poids du chlorure de benzyle pour 1 partie en poids du sel de benzéthonium de l'héparine. De même, de façon préférentielle, le temps de réaction sera compris entre 10 et 35 h. La transalification de l'étape c) s'effectue au moyen d'un chlorure d'ammonium quaternaire et, de préférence, au moyen de chlorure de benzéthonium, de chlorure de cétylpyridinium ou de chlorure de cétyltriméthyl ammonium, en milieu aqueux, à une température comprise entre 10 et 25 C. De manière avantageuse, le rapport en mole chlorure d'ammonium quaternaire/sel de sodium de l'ester benzylique de l'héparine est compris entre 2 et 3. Les mélanges selon l'invention sous forme de sel de sodium, peuvent être transformés en un autre sel d'un métal alcalin ou alcalinoterreux. On passe éventuellement d'un sel à l'autre en utilisant la méthode décrite dans le brevet FR 73 13 580. Les mélanges selon l'invention ne sont pas toxiques et peuvent ainsi être utilisés comme médicaments. Les mélanges d'oligosaccharides de la présente invention peuvent être utilisés comme agents antithrombotiques. En particulier, ils sont utiles pour la prévention ou le traitement des thromboses veineuses, des accidents thrombotiques artériels, notamment dans le cas d'infarctus du myocarde, dans la prévention ou le traitement de l'angor instable. Ils sont également utiles dans la prévention et le traitement de la prolifération des cellules musculaires lisses, l'angiogénèse, et comme agent neuroprotecteurs de l'athérosclérose et de l'artériosclérose. La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif un mélange de formule (I) éventuellement en association avec un ou plusieurs excipients inertes. Les compositions pharmaceutiques sont par exemple des solutions injectables par voie sous-cutanée ou intraveineuse. Elles sont également utiles par voie pulmonaire (inhalation). La posologie peut varier en fonction de l'âge, du poids et de l'état de santé du patient. Pour un adulte, elle est en général comprise entre 20 et 100mg par jour par voie intramusculaire ou sous-cutanée. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. EXEMPLE A : PREPARATION D'HEPARINATE DE BENZYLE SEL DE BENZETHONIUM Héparinate de benzéthonium A une solution de 10 g d'héparine de sodium dans 100 ml d'eau, on ajoute une solution de 25 g de chlorure de benzéthonium dans 125 ml d'eau. Le produit est filtré, lavé à l'eau et séché. Ester benzylique d'héparine (sel de sodium) A une solution de 20 g d'héparinate de benzéthonium dans 80 ml de chlorure de méthylène, on ajoute 16 ml de chlorure de benzyle. La solution est chauffée à une température de 30 C pendant 12 heures. On ajoute alors 108 ml d'une solution à 10 % d'acétate de sodium dans le méthanol, filtre, lave au méthanol et sèche. On obtient ainsi 7,6 g d'ester benzylique d'héparine sous forme de sel de sodium dont le taux d'estérification est de 77 %. Ester benzylique de l'héparine (sel de benzéthonium) Dans un erlenmeyer A de 2 litres, on introduit 36 g (0,0549 mole) d'ester benzylique d'héparine (sel de sodium) et 540 ml d'eau distillée. Après homogénéisation à une température d'environ 20 C, on obtient une solution jaune pâle. Sous agitation magnétique, on prépare dans un erlenmeyer B de 1 litre, une solution de 64,45 g (0,1438 mole) de chlorure de benzéthonium et de 450 ml d'eau. La solution de l'erlenmeyer B est coulée en environ 35 minutes dans la solution de l'erlenmeyer A sous agitation. On observe la formation d'un précipité blanc abondant. L'erlenmeyer B est rincé avec 200 ml d'eau distillée et l'eau de lavage est introduite dans l'erlenmeyer A. L'agitation est alors arrêtée et on laisse déposer la suspension pendant 12 heures. Ce temps écoulé, on prélève et on écarte la partie limpide du surnageant. Sur le précipité sédimenté (aspect de bouillie), on ajoute 560 ml d'eau et on agite pendant 20 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité en 30 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (560 ml). Sur le précipité sédimenté, on renouvelle deux fois cette opération de lavage par environ 560 ml d'eau distillée. Dans la dernière opération de lavage, on laisse le précipité en suspension et on filtre sur Verre fritté 3. Le gâteau est ensuite lavé par 4 fois 200 ml d'eau distillée. Le solide blanc humide est essoré puis séché sous pression réduite (2,7 kPa), à une température voisine de 60 C. Après 12 heures de séchage, on obtient 87,5 g d'héparinate de benzyle, sel de benzéthonium. Le rendement obtenu est de 94,9 %. EXEMPLE B : DESCRIPTION DE l'HEXASACCHARIDE ATIII (#IIa-IIs- Is) Spectre proton dans D20,500 MHz, T=298 K, 8 en ppm : 1,97 (3H, s), 3,18 (1H, dd, 10 et 3Hz), 3,30 (1H, t, 8Hz), 3,37 (1H, dd, 10 et 3Hz), 3,60 (2H, m), entre 3,65 et 3,85 (6H, m), 3,87 (2H, m), 3,95 (1H, d, 8Hz), 4,03 (1H, d, 8Hz), entre 4,05 et 4,13 (4H, m), entre 4,16 et 4,45 (8H, m), 4,52 (1H, d, 8Hz), 4,67 (1H, m), 5,06 (1H, d, 6Hz), 5,10 (1H, d, 3Hz), 5,33 (1H, d, 4Hz), 5,36 (1H, d, 3Hz), 5,46 (1H, d, 3Hz), 5,72 (1H, d, 4Hz). Sel de décasodium de l'acide 4-désoxy -a-L-thréo-hex- enepyranosyluronique-(1# 4)-2-désoxy-2-acétamido-6-0-sulfo- [alpha]-D-glucopyranosyl-(1# 4)-acide (3-D-glucopyranosyluronique- (1# 4)-2-désoxy-2-sulfamido-3,6-di-O-sulfo-a-D- glycopyranosyl)-(1#4)-acide 2-0-sulfo-a-L-idopyrano- syluronique-(1# 4)-2-desoxy-2-sulfamido-6-0-sulfo-a-D- glucopyranose. INFLUENCE DE LA TENEUR EN EAU SUR LA SELECTIVITE DE LA REACTION DE DEPOLYMERISATION ET L'ACTIVITE aXa ET alla DES PRODUITS OBTENUS EXEMPLE 1 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium ( 0,1 % d'eau ) : Dans un erlenmeyer A, on introduit 70 ml de dichlorométhane. Sous agitation, on charge lentement 10 g (0,006 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. La teneur en eau du milieu réactionnel est ajustée 0,1 %. La solution est chauffée à 40 C sous azote. Après dissolution complète, on revient à une température voisine de 20 C puis on ajoute 1,75 ml (0,006 mole) de 2-tert-butylimino-2-diethylamino-1,3-diméthylperhydro-1,2,3diaza-phosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 30 g d'acétate de sodium anhydre dans 300 ml de méthanol. Après dissolution complète, on ajoute à la solution 5 g de célite Hyflo supercel. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en 1 minute 30 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 5 C. Après 5 minutes d'agitation on laisse décanter la suspension pendant une heure 30 minutes. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (220 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 220 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse resédimenter le précipité 1 heure 20 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (250 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 250 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur Verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 100 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 2,51 g d'héparine dépolymérisée sel de sodium dans la célite (5 g). Le rendement obtenu est de 64 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 2,5 g (0,0038 mole) de l'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (5 g) obtenue précédemment et 17 ml d'eau. La suspension est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 5 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 150 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 0,4 ml (0,004 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 5 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 3 g de chlorure de sodium. Après dissolution on ajoute au milieu réactionnel 21 ml de méthanol. Après 15 minutes d'agitation on ajoute 44 ml de méthanol puis on agite pendant une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 45 minutes à une température voisine de 5 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (90 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 90 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 20 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (80 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 80 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 1,31 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 66 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 1,3 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 13 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,7 ~ 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,07 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl à 1 N, puis on ajoute 2 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 14 ml de méthanol. La solution est ensuite refroidie à 10 C et agité pendant environ 15 minutes. On ajoute alors 36 ml de méthanol puis on agite une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 15 minutes environ. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (50 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 50 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 25 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (50 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 1,13 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 87 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2600 Daltons Activité anti-Xa : 177 UI/mg Activité anti-IIa : 1,5 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 118 EXEMPLE 2 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium (0,2 %) Dans un erlenmeyer A, on introduit 70 ml de dichlorométhane. Sous agitation et sous pression d'azote, on charge lentement 10 g (0,006 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. La teneur en eau du milieu réactionnel est ajustée à 0,2 %. Après dissolution complète, on ajoute 1,75 ml (0,006 mole) de 2-tert-butylimino-2diethylamino-1,3-diméthylperhydro-1,2,3-diaza-phosphorine. On agite pendant 24 heures à une température voisine de 20 C. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 30 g d'acétate de sodium anhydre dans 300 ml de méthanol. Après dissolution complète on ajoute à la solution 5 g de célite Hyflo supercel. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en 1 minute 30 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 5 C. Après 5 minutes d'agitation on laisse décanter la suspension pendant 2 heures. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (220 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 220 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 2 heures environ. Le surnageant est prélevé et écarté (230 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 230 ml de méthanol. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 150 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 2,63 g d'héparine dépolymérisée brute dans la célite (5 g). Le rendement obtenu est de 67 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 2,5 g (0,0038 mole) de l'héparine dépolymérisée sel de sodium dans la célite (5 g) obtenue précédemment et 18 ml d'eau. La suspension est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 5 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 150 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 0,4 ml (0,004 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 5 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 2 g de chlorure de sodium. On coule 14 ml de méthanol dans le mélange réactionnel. Après 15 minutes d'agitation on ajoute 36 ml de méthanol puis on agite pendant une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 45 minutes à une température voisine de 5 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (80 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 80ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 48 heures de séchage, on obtient 2,3 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 65 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 1,4 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 15 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,7 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,07 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 40 C le mélange est refroidit à une température voisine de 20 C puis neutralisé par ajout d'HCl 1N. on ajoute au milieu réactionnel 2 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 14 ml de méthanol. La solution est ensuite refroidit à 10 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 36 ml de méthanol puis on agite une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 15 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (40 ml). Sur le précipité sédimenté (aspect de bouillie), on ajoute 40ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 20 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (50 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 1,2 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 86 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2650 Daltons Activité anti-Xa : 161 UI/mg Activité anti-IIa : 1,4 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 115 EXEMPLE 3 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium (0,3 % d'eau) Dans un erlenmeyer A, on introduit 70 ml de dichlorométhane. Sous agitation et sous pression d'azote, on charge 10 g (0,006 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. La teneur en eau du milieu réactionnel est ajustée 0,3 %. Après dissolution complète, on ajoute 1,75 ml (0,006 mole) de 2-tert-butylimino-2diethylamino-1,3-diméthylperhydro-1,2,3-diaza-phosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 30 g d'acétate de sodium anhydre dans 300 ml de méthanol. Après dissolution complète, on ajoute à la solution 5 g de célite Hyflo supercel. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en 1 minute 30 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 5 C. Après 5 minutes d'agitation, on laisse décanter la suspension pendant 1 heure 10 minutes. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (220 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 220 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 100 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 2,57 g d'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (5 g). Le rendement obtenu est de 66 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 2,5 g (0,0038 mole) de l'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (5 g) obtenue précédemment et 18 ml d'eau. La suspension est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 5 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 150 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 0,4 ml (0,004 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 5 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 3 g de chlorure de sodium. On coule 15 ml de méthanol dans le mélange réactionnel. Après 15 minutes d'agitation, on ajoute 36 ml de méthanol puis on agite pendant une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 1 heure. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (70 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 70 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 48 heures de séchage, on obtient 1,42 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 62 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 1,4 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 14 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,7 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,07 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl 1N, puis on ajoute 2 g de chlorure de sodium. Après dissolution la solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 14 ml de méthanol. Le filtrat est ensuite refroidi à 10 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 36 ml de méthanol puis on agite environ une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 40 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (50 ml). Sur le précipité sédimenté (aspect de bouillie), on ajoute 50 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 25 minutes environ. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 1,24 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 89 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2400Daltons Activité anti-Xa : 132 UI/mg Activité anti-IIa : 1,4 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 94 EXEMPLE 4 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium ( 0,4 % en eau) : Dans un erlenmeyer A, on introduit 70 ml de dichlorométhane. Sous agitation, on charge lentement 10 g (0,006 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. La teneur en eau du milieu réactionnel est ajusté à 0,4 %. La solution est chauffée à 30 C sous azote. Après dissolution complète, on revient à une température voisine de 20 C puis on ajoute 1,75 ml (0,006 mole) de 2-tert-butylimino-2-diethylamino-1,3-diméthylperhydro-1,2,3diaza-phosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 30 g d'acétate de sodium anhydre dans 300 ml de méthanol. Après dissolution complète, on ajoute à la solution 5 g de célite Hyflo supercel. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en environ 1 minute 30 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 5 C. Après 5 minutes d'agitation, on laisse décanter la suspension pendant 2 heures. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (80 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 80 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 1 heure environ. Le surnageant est prélevé et écarté (80 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 80 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 150 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 3,25 g d'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (5 g). Le rendement obtenu est de 83 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 3,1 g (0,0018 mole) de l'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la celite (10 g) obtenue précédemment et 21 ml d'eau. La suspension est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 6 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 150 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 0,7 ml (0,007 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 5 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 4 g de chlorure de sodium. On coule 28 ml de méthanol dans le mélange réactionnel. Après 15 minutes d'agitation, on ajoute 72 ml de méthanol puis on agite pendant une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 1 heure. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (90 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 90 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 20 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (90 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 90 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 48 heures de séchage, on obtient 1,9 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 67 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 1,9 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 19 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,7 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,1 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl 1N, puis on ajoute 2 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 14 ml de méthanol et on agite 15 minutes. On ajoute alors 36 ml de méthanol puis on agite une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 15 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (40 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 40 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse resédimenter le précipité 20 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (50 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 500 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 20 minutes environ. La suspension est ensuite filtrée sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 72 heures de séchage, on obtient 1,56 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 82 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2350 Daltons Activité anti-Xa : 122 UI/mg Activité anti-IIa : 1. 3 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 94 EXEMPLE 5 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium (0,57 % d'eau) : Dans un erlenmeyer A, on introduit 140 ml de dichlorométhane. Sous agitation, on charge lentement 20 g (0,019 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. La teneur en eau du milieu réactionnel est ajustée à 0,57 %. Après dissolution complète, on ajoute 3,5 ml (0,012 mole) de 2-tert-butylimino-2-diethylamino-1,3-diméthylperhydro-1,2,3-diaza-phosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 60 g d'acétate de sodium anhydre dans 600 ml de méthanol. Après dissolution complète, on ajoute à la solution 10 g de célite Hyflo supercel. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en 1 minute 30 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 4 C. Après 5 minutes d'agitation on laisse décanter la suspension pendant 30 minutes. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (400 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 400 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 1 heure environ. Le surnageant est prélevé et écarté (420 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 420 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. La suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 200 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 50 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 6,66 g d'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (10 g). Le rendement obtenu est de 85 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 6,66 g (0,0101 mole) de l'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (10 g) obtenue précédemment et 47 ml d'eau. La suspension est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 15 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 150 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 1,1 ml (0,011 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 5 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 9,5 g de chlorure de sodium. On ajoute au milieu réactionnel 66 ml de méthanol. Après 15 minutes d'agitation, on ajoute 171 ml de méthanol puis on agite pendant une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 3/4 d'heure à une température voisine de 5 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (160 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 160 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 20 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (180 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 180 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. La suspension est ensuite filtrée sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 2 fois 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 4,53 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 74 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 100 ml, on introduit 4,53 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 45 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,7 ~ 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,25 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl à 1 N, puis on ajoute 5,5 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 38 ml de méthanol à une température voisine de 10 C. La solution est ensuite amenée à 20 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 100ml de méthanol puis on agite une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 20 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (90 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 90 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 25 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (100 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 50 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 3,7 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 82 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2200 Daltons Activité anti-Xa : 120 UI/mg Activité anti-IIa : 1. 4 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 86 EXEMPLE 6 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium (1,8 % d'eau) : Dans un erlenmeyer A, on introduit 140 ml de dichlorométhane. Sous agitation, on charge lentement 20 g (0,019 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. La teneur en eau du milieu réactionnel est ajustée à 1,8 %. Après dissolution complète, on ajoute 3,5 ml (0,012 mole) de 2-tert-butylimino-2-diethylamino-1,3diméthylperhydro-1,2,3-diaza-phosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 60 g d'acétate de sodium anhydre dans 600 ml de méthanol. Après dissolution complète, on ajoute à la solution 10 g de célite Hyflo supercel. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en 1 minute 30 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 4 C. Après 5 minutes d'agitation, on laisse décanter la suspension pendant 30 minutes. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (400 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 400 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse resédimenter le précipité 1 heure environ. Le surnageant est prélevé et écarté (420 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 420 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 200 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 50 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 7,54 g d'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la celite (10 g). Le rendement obtenu est de 96 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 7,54 g (0,0101 mole) de l'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (10 g) obtenue précédemment et 53 ml d'eau. La solution est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 15 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 150 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 1,25 ml (0,012 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 4 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 10,5 g de chlorure de sodium. On ajoute au milieu réactionnel 70 ml de méthanol. Après 15 minutes d'agitation, on ajoute 190 ml de méthanol puis on agite pendant une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 3/4 d'heure à une température voisine de 4 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (180 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 180 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 20minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (180 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 180 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 2 fois 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 50 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 5,53 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 80 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 100 ml, on introduit 5,53 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 55 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,7 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,31 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl 1N, puis on ajoute 7 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 49 ml de méthanol à une température voisine de 10 C. La solution est ensuite amenée à 20 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 126 ml de méthanol puis on agite une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 20 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (105 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 105 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 25 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (110 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 55 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 4,53 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 82 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2600 Daltons Activité anti-Xa : 105 UI/mg Activité anti-IIa : 3. 1 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 34 EXEMPLE 7 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium : Dans un erlenmeyer A, on introduit 140 ml de dichlorométhane. Sous agitation, on charge lentement 20 g (0,019 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. La teneur en eau du milieu réactionnel est ajustée à 2,5 %. Après dissolution complète, on ajoute 3,5 ml (0,012 mole) de 2-tert-butylimino-2diethylamino-1,3-diméthylperhydro-1,2,3-diaza-phosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 60 g d'acétate de sodium anhydre dans 600 ml de méthanol. Après dissolution complète, on ajoute à la solution 10 g de célite Hyflo supercel. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en 1 minute 30 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 4 C. Après 5 minutes d'agitation, on laisse décanter la suspension pendant 1 heure. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (400 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 400 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 30minutes environ. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (400 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 200 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 50 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 7,78 g d'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (10 g). Le rendement obtenu est de 99,6 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 7,78 g (0,0119 mole) de l'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium dans la célite (10 g) obtenue précédemment et 79 ml d'eau. La suspension est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 15 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 150 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 1,3 ml (0,012 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 4 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 10 g de chlorure de sodium. On ajoute au milieu réactionnel 60 ml de méthanol. Après 15 minutes d'agitation, on ajoute 190 ml de méthanol puis on agite pendant une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 3/4 d'heure à une température voisine de 4 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (180 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 180 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 20 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (180 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 180 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 2 fois 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 50 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 5,87 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 82 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 100 ml, on introduit 5,87 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 59 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,7 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,34 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl à 1 N, puis on ajoute 7 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 49 ml de méthanol à une température voisine de 10 C. La solution est ensuite amenée à 20 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 126 ml de méthanol puis on agite une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 20 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (105 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 105 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 25 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (110 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 55 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 5,21 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 89 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 3550 Daltons Activité anti-Xa : 99 UI/mg Activité anti-IIa : 13,4 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 7. 4 INFLUENCE DU NOMBRE D'EQUIVALENTS DE BASE SUR L'ACTIVITE aXa ET aIIa DU PRODUIT OBTENU (TENEUR EN EAU 0,1 %) EXEMPLE 8 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium (0,5 équivalents de base): Dans un erlenmeyer A, on introduit 140 ml de dichlorométhane. Sous agitation, on charge lentement 20 g (0,019 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. Après dissolution complète à une température voisine de 30 C et retour à une température d'environ 20 C, on ajoute 1,75 ml (0,006 mole) de 2-tert- butylimino-2-diethylamino-1,3-diméthylperhydro-1,2,3-diaza- phosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 60 g d'acétate de sodium anhydre dans 600 ml de méthanol. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 4 C. Après 1 heure d'agitation on laisse décanter la suspension pendant 2 heures. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (420 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 420 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 18 heures environ. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (400 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 400 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. Le surnageant est prélevé et écarté (400 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 2 fois 100 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 60 C. Après séchage, on obtient 5,7 g d'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium. Le rendement obtenu est de 73 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 100 ml, on introduit 5,7 g (0,0086 mole) de l'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium obtenue précédemment et 53 ml d'eau. Sous agitation magnétique, on introduit 0,93 ml (0,009 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 4 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 6 g de chlorure de sodium. On ajoute au milieu réactionnel 42 ml de méthanol. Après 15 minutes d'agitation on ajoute 108 ml de méthanol puis on agite pendant 30 minutes. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 30 minutes à une température voisine de 4 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (180 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 180 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 30 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (170 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 170 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 2 fois 30 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite, à une température voisine de 60 C. Après séchage, on obtient 3,5 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 67,4 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 100 ml, on introduit 3,5 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 35 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,6 ~ 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,18 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl à 1N, puis on ajoute 3,6 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 27 ml de méthanol à une température voisine de 10 C. La solution est ensuite amenée à 20 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 65 ml de méthanol puis on agite 30 minutes. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 30 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (80 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 80 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 30 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (70 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 70 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 2 fois 30 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite, à une température voisine de 60 C. Après séchage, on obtient 2,8 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 80%. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2900 Daltons Activité anti-Xa : 146,1 UI/mg Activité anti-IIa : 5,1 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 28,6 EXEMPLE 9 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium (0,6 equivalents de base): Dans un tricol A, on introduit 280 ml de dichloro- méthane. Sous agitation, on charge lentement 40 g (0,024 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification . 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. Après dissolution complète à une température voisine de 30 C et retour à une température voisine de 20 C, on ajoute 4,2 ml (0,014 mole) de 2-tert-butylimino-2-diethylamino-1,3diméthylperhydro-1,2,3-diaza-phosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 60 g d'acétate de sodium anhydre dans 600 ml de méthanol. Sous agitation magnétique, la moitié du mélange réactionnel du tricol A est coulé dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 4 C. Après 1 heure d'agitation on laisse décanter la suspension. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (310 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 310 ml de méthanol et on agite pendant 1 heure. On laisse re-sédimenter le précipité 18 heures environ. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (400 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 400ml de méthanol et on agite pendant 1 heure. Le surnageant est prélevé et écarté (300 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 2 fois 100 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite, à une température voisine de 60 C. Après séchage, on obtient 6 g d'héparine dépolymérisée brute, sel de sodium. Le rendement obtenu est de 77 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 250 ml, on introduit 6 g (0,0091 mole) de l'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium) obtenue précédemment et 56 ml d'eau. Sous agitation magnétique, on introduit 1 ml (0,010 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 4 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 6,4 g de chlorure de sodium. On ajoute au milieu réactionnel 45 ml de méthanol. Après 15 minutes d'agitation on ajoute 115 ml de méthanol puis on agite pendant 30minutes. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 30 minutes à une température voisine de 4 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (170 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 170 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 30 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (140ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 140 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 2 fois 30 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite, à une température voisine de 60 C. Après séchage, on obtient 3,6 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 65,3 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 100 ml, on introduit 3,5 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 35 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,6 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,18 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C, le mélange est neutralisé par ajout d'HCl à 1N, puis on ajoute 3,5 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 25 ml de méthanol à une température voisine de 10 C. La solution est ensuite amenée à 20 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 63 ml de méthanol puis on agite 30 minutes. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 30 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (70 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 70 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité quelques minutes. La suspension est ensuite filtrée sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 2 fois 30 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite, à une température voisine de 60 C. Après séchage, on obtient 2,5 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 71,4 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2600 Daltons Activité anti-Xa : 150,5 UI/mg Activité anti-IIa : 3,2 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 47 EXEMPLE 10 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium (0,8 équivalents de base): Dans un erlenmeyer A, on introduit 70 ml de dichlorométhane. Sous agitation, on charge lentement 10 g (0,006 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estérification : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. Après dissolution complète à une température voisine de 30 C et retour à une température voisine de 20 C, on ajoute 1,38 ml (0,004 mole) de 2-tertbutylimino-2-diethylamino-1,3-diméthylperhydro-1,2,3-diazaphosphorine. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 30 g d'acétate de sodium anhydre dans 300 ml de méthanol. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en 1 minute 15 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 4 C. Après 5 minutes d'agitation, on laisse décanter la suspension pendant 1 heure. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (190 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 190 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 30 minutes environ. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (190 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 190 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. Le surnageant est prélevé et écarté (190 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 150 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 3,05 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 80 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 100 ml, on introduit 3,05 g (0,0048 mole) de l'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium) obtenue précédemment et 21 ml d'eau. La solution est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 6 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 150 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 0,6 ml (0,006 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 4 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 4 g de chlorure de sodium. On ajoute au milieu réactionnel 28 ml de méthanol. Après 15 minutes d'agitation on ajoute 72 ml de méthanol puis on agite pendant 1 heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 30 minutes à une température voisine de 4 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (80 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 80 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 30 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (80 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 80 ml de méthanol et on agite pendant 30 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après séchage, on obtient 1,6 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 57 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 1,6 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 16 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,6 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,08 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl à 1 N, puis on ajoute 2 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45 m puis on coule 14 ml de méthanol à une température voisine de 10 C. La solution est ensuite amenée à 20 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 36 ml de méthanol puis on agite 1 heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 30 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (50 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 50 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 30minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (50 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après séchage, on obtient 1,25 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 78 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2400 Daltons Activité anti-Xa : 154,3 UI/mg Activité anti-IIa : 1,6 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 96,4 EXEMPLE D'AUTRE BASE PHOSPHAZENE : le tert-butylimino tri(pyrrolidino) phosphorane EXEMPLE 11 Dépolymérisation et transformation en sel de sodium : Dans un erlenmeyer A, on introduit 140 ml de dichlorométhane. Sous agitation, on charge lentement 20 g (0,019 mole) d'ester benzylique d'héparine (taux d'estéri- fication : 75 %, sel de benzéthonium) obtenu comme décrit dans l'exemple A. Après dissolution complète à une température voisine de 40 C et retour à une température voisine de 20 C, on ajoute 3,5 ml (0,011 mole) de tertbutylimino-tri(pyrrolidino)phosphorane. On agite à une température voisine de 20 C, pendant 24 heures. Pendant ce temps, on prépare dans un erlenmeyer B, une solution de 60 g d'acétate de sodium anhydre dans 600 ml de méthanol. Après dissolution complète on ajoute à la solution 10 g de célite Hyflo supercel. Sous agitation magnétique, le mélange réactionnel de l'erlenmeyer A est coulé en 1 minute 30 secondes dans la solution méthanolique d'acétate de sodium à une température voisine de 4 C. Après 5 minutes d'agitation on laisse décanter la suspension pendant 30 minutes. La partie limpide du surnageant est prélevée et écartée (400 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 400 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse resédimenter le précipité 1 heure 20 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (250 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 250 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 200 ml de méthanol. Le solide humide jaune clair est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après séchage, on obtient 5,39 g d'héparine dépolymérisée (ester de benzyle, sel de sodium). Le rendement obtenu est de 69 %. Saponification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 5 g (0,0076 mole) de l'héparine dépolymérisée (ester de benzyle, sel de sodium) obtenue précédemment et 35 ml d'eau. La solution est filtrée sur verre fritté 3 et rincé par 2 fois 10 ml d'eau. Le filtrat obtenu est chargé dans un erlenmeyer de 250 ml. Sous agitation magnétique, on introduit 1 ml (0,01 mole) de lessive de soude à 30 %, à une température voisine de 4 C. Après addition, le mélange est agité pendant 2 heures. On neutralise la solution par ajout d'HCl 1N et on ajoute 6 g de chlorure de sodium. On ajoute au milieu réactionnel 42 ml de méthanol. Après 15 minutes d'agitation on ajoute 104 ml de méthanol puis on agite pendant 15 minutes. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 1 heure à une température voisine de 4 C. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (140 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 140 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 45 minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (160 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 160 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau obtenu est ensuite lavé par 100 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 48 heures de séchage, on obtient 2,7 g d'héparine dépolymérisée brute (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 59 %. Purification : Dans un erlenmeyer de 50 ml, on introduit 2,6 g d'héparine dépolymérisée brute obtenue précédemment et 25 ml d'eau distillée. Le mélange est porté à 40 C sous agitation magnétique. Par addition de soude 1N, on porte le pH à 9,7 0,1. Le milieu réactionnel est filtré sur membrane 0,45 m et on ajoute 0,15 ml d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30 %. Après environ 2 heures d'agitation, à une température voisine de 20 C le mélange est neutralisé par ajout d'HCl 1N, puis on ajoute 3 g de chlorure de sodium. La solution est ensuite filtrée sur membrane 0,45m puis on coule 21 ml de méthanol à une température voisine de 10 C. La solution est ensuite amenée à 20 C et agité 15 minutes. On ajoute alors 54 ml de méthanol puis on agite une heure. L'agitation est alors arrêtée et on laisse sédimenter la suspension pendant 20 minutes. Le surnageant est ensuite prélevé puis écarté (50 ml). Sur le précipité sédimenté, on ajoute 50 ml de méthanol et on agite pendant 5 minutes. On laisse re-sédimenter le précipité 20minutes environ. Le surnageant est prélevé et écarté (50 ml). Le précipité en suspension est ensuite filtré sur verre fritté 3. Le gâteau blanc obtenu est ensuite lavé par 50 ml de méthanol. Le solide humide est essoré puis séché sous pression réduite (6 kPa), à une température voisine de 40 C. Après 18 heures de séchage, on obtient 2,35 g d'héparine dépolymérisée pure (sel de sodium). Le rendement obtenu est de 90 %. Les caractéristiques de l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue sont les suivantes : Poids moléculaire moyen : 2400 Daltons Activité anti-Xa : 167,5 UI/mg Activité anti-IIa : 1,1 UI/mg Rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa : 152 REVENDICATIONS 1) Mélanges de polysaccharides sulfatés possédant la structure générale des polysaccharides constitutifs de l'héparine et présentant les caractéristiques suivantes : - ils ont un poids moléculaire moyen de 1500 à 3000 daltons, une activité anti-Xa de 120 à 200 UI/mg, une activité antiIIa de 0 à 10 UI/mg et un rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa supérieur à 30, les oligosaccharides constitutifs des mélanges - contiennent 2 à 26 motifs saccharidiques, - ont un motif acide uronique-4,5 insaturé 2-0-sulfate à l'une de leurs extrémités, - contiennent l'hexasaccharide de formule suivante, et sont sous forme d'un sel de métal alcalin ou alcalinoterreux. 2) Mélange de polysaccharide selon la revendication 1 caractérisé en ce que le sel de métal alcalin ou alcalinoterreux, sont les sels de sodium, potassium, calcium et magnésium 3) Mélange de polysaccharides selon la revendication 1 ou 2 caractérisé en ce qu'il contient une fraction hexasaccharide représentant de 15 à 25 % du mélange d'oligosaccharides. 4) Mélange de polysaccharides selon la revendication 3 caractérisé en ce qu'il contient de 8 à 15 % de l'hexasaccharide #IIa-IIs-Is dans la fraction hexasaccharide du mélange d'oligosaccharides. 5) Mélange de polysaccharides selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il a une activité anti-Xa supérieure à 150 UI/mg. 6) Mélange de polysaccharides selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisé en ce qu'il a activité antiIIa de 0 à 5 UI/mg. 7) Mélange de polysaccharides selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisé en ce qu'il présente un rapport activité anti-Xa/activité anti-IIa supérieure à 50. 8) Mélange de polysaccharides selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il a un poids moléculaire moyen compris entre 2000 et 3000 Daltons. 9) Procédé de préparation de mélanges de polysaccharide selon la revendication 1 au cours duquel on dépolymérise le sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine en milieu organique en présence d'une base organique forte de pKa supérieur à 20 caractérisé en ce que la base organique utilisée consiste en la famille des phosphazènes notamment en solution dichlorométhane renfermant un pourcentage d'eau inférieur à 0,6 %. 10) Procédé de préparation selon la revendication 9 de mélanges de polysaccharide selon la revendication 1, caractérisé en ce que la teneur en eau est inférieur à 0,3 %. 11) Procédé de préparation selon les revendications 9 ou 10 caractérisé en ce que le sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine est le sel de benzéthonium, de cétylpyridinium ou de cétyltriméthyl ammonium. 12) Procédé de préparation selon les revendications 9 ou 10 caractérisé en ce que les bases de la famille des phosphazènes sont, celles de formule : dans laquelle les radicaux R1 à R7 sont identiques ou différents et représentent des radicaux alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 6 atomes de carbone. 13) Procédé de préparation selon les revendications 9 ou 10 caractérisé en ce que le rapport en mole base forte/ester est compris entre 0,2 et 5 et, de préférence, entre 0,6 et 2. 14) Procédé de préparation des polysaccharides selon la revendication 1 à partir des héparines dans lequel on effectue les opérations suivantes : a) Transalification de l'héparine de sodium par action de chlorure de benzéthonium, b) Estérification de l'héparinate de benzéthonium obtenu par action de chlorure de benzyle, c) Transalification de l'ester benzylique obtenu et obtention du sel d'ammonium quaternaire, d) Dépolymérisation du sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine par la méthode telle que définie à la revendication 9 ou 10, e) Transformation du sel d'ammonium quaternaire en sel de sodium, f) Eventuellement saponification de l'héparine par action d'une base telle que la soude, g) Eventuellement purification notamment par action d'un agent d'oxydation tel que l'eau oxygénée. 15) Procédé selon la revendication 14 caractérisé en ce que la réaction de l'étape a) est réalisée par action du chlorure de benzéthonium en excès, sur l'héparine sodique, à une température voisine de 15 à 25 C. avec un rapport molaire sel/héparine sodique compris entre 2 et 3. 16) Procédé selon la revendication 14 caractérisé en ce que l'estérification de l'étape b) s'effectue au sein d'un solvant organique chloré tel que le chloroforme ou le chlorure de méthylène, à une température comprise entre 25 et 45 C et, de préférence entre 30 et 40 C et l'ester sous forme de sel de sodium est ensuite récupéré par précipitation au moyen d'acétate de sodium à 10 % en poids dans un alcool tel que le méthanol à raison d'1 à 1,2 volume d'alcool par volume de milieu réactionnel. 17) Procédé selon la revendication 14 ou 16 caractérisé en ce que le taux d'estérification du sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine est compris entre 50et 100 % et, de préférence, entre 70 et 90 %. 18) Procédé selon la revendication 14,16 ou 17 caractérisé en ce qu'on utilise de 0,5 à 1,5 parties en poids du chlorure de benzyle pour 1 partie en poids du sel de benzéthonium de l'héparine avec un temps de réaction qui sera compris entre 10 et 35 h. 19) Procédé selon la revendication 14 caractérisé en ce la transalification de l'étape c) s'effectue au moyen d'un chlorure d'ammonium quaternaire et, de préférence, au moyen de chlorure de benzéthonium, de chlorure de cétylpyridinium ou de chlorure de cétyltriméthyl ammonium, en milieu aqueux, à une température comprise entre 10 et 25 C. 20) Procédé selon la revendication 19 caractérisé en ce que le rapport en mole chlorure d'ammonium quaternaire/sel de sodium de l'ester benzylique de l'héparine est compris entre 2 et 3 21) Procédé selon la revendication 14 caractérisé en ce que la transformation en sel de sodium du sel d'ammonium quaternaire de l'ester benzylique de l'héparine dépolymérisée (étape e) est effectué par traitement du milieu réactionnel avec une solution alcoolique d'acétate de sodium et, de préférence avec une solution à 10 % d'acétate de sodium dans le méthanol (poids/volume), à une température comprise entre 15 et 25 C. 22) Procédé selon la revendication 14 caractérisé en ce que la saponification (étape f) s'effectue au moyen d'un hydroxyde de métal alcalin tel que la soude, la potasse, l'hydroxyde de lithium, en milieu aqueux, à une température comprise entre 0 et 20 C et de préférence 0 et 10 C. 23) Procédé selon la revendication 22 caractérisé en ce qu'on utilise de 1 à 5 équivalents molaires d'hydroxyde de métal alcalin et de préférence de 1 à 2 équivalents molaires d'hydroxyde de sodium. 24) Procédé selon la revendication 14 caractérisé en ce qu'on purifie (étape g) au moyen de peroxyde d'hydrogène, en milieu aqueux, à une température de 10 à 50 C et de préférence entre 20 et 40 C. 25) A titre de médicament les polysaccharides selon la revendication 1 26) A titre de médicament ayant une activité antithrombotique les polysaccharides selon la revendication 1 27) Médicaments selon les revendications 25 ou 26 pour la prévention ou le traitement des Thromboses veineuses profonde, de l'angor instable, de l'infarctus du Myocarde. 28) Compositions pharmaceutiques renfermant au moins un médicament tel que défini à la revendication 25 et un ou plusieurs excipients ou véhicules ou additifs pharmaceutiquement inertes. 29) Compositions pharmaceutiques selon la revendication 10 caractérisée en ce qu'elles consistent en solutions injectables par voie sous-cutanée ou intraveineuse. 30) Compositions pharmaceutiques selon la revendication 10 caractérisée en ce qu'elles consistent en une formulation par inhalation destinée par voie pulmonaire. 31) Mélanges de polysaccharides tels que définis à la revendication 1 susceptible d'être obtenu par le procédé tel que défini à la revendication 14.