Brevet FR2839721A1 — publié le 20031121

La présente invention se rapporte à un antigène polypeptidique dérivant de la protéine gp41, ainsi qu'à son utilisation pour l'immunisation contre l'infection liée au VIH. Ces travaux ont été co-financés par l'ANRS. La mise au point d'une méthode d'immunisation contre le VIH est aujourd'hui l'une des priorités de la recherche scientifique. Les obstacles majeurs que sont la grande variabilité génétique du virus et la faible exposition au système immunitaire d'épitopes viraux neutralisants conservés freinent considérablement le développement d'un vaccin capable de neutraliser les isolats primaires du VIH. La glycoprotéine d'enveloppe du VIH qui est requise pour conférer au virus son caractère infectieux représente la cible d'anticorps neutralisants. Ces caractéristiques ont fait de cette dernière un sujet d'investigations intenses. L'utilisation à des fins vaccinales de polypeptides dérivant de la protéine gp41 a été décrite dans WOOO/40616. Selon cette demande, les hélices N peuvent être utilisées seules ou en association avec les hélices C pour induire des anticorps neutralisants. La demanderesse propose ici un nouvel antigène polypeptidique utilisable pour l'immunisation thérapeutique et prophylactique contre l'infection liée au VIH. La demanderesse a en effet mis en évidence un polypeptide dérivant de l'ectodomaine de la protéine gp41 qui est capable d'induire des anticorps neutralisant les isolats primaires du VIH. La présente invention concerne donc un polypeptide représenté par la formule : N-L-C Dans laquelle : N représente la séquence des acides aminés 25-81 de la gp41, C représente la séquence des acides aminés 112-157de la gp41, et L représente une séquence de liaison flexible comprenant de 2 à 30 acides aminés. Selon un mode de réalisation particulier, N représente SEQ ID N 1 et C représente SEQ ID N 2. Selon un mode de réalisation préféré, le polypeptide est constitué de la séquence SEQ ID N 3. Selon un autre mode de réalisation, le polypeptide tel que défini ci-dessus comprend en outre une séquence contenant l'épitope ERDRD. Selon un mode de réalisation particulier, le polypeptide tel que défini ci-dessus comprend une séquence supplémentaire de formule (G)a-S-(H)b dans laquelle G représente un résidu glycine, H représente un résidu histidine, a est supérieur ou égal à 4 et b est supérieur ou égal à 6, ladite séquence étant liée par liaison amide à l'extrémité NH2- ou COOH-terminale du polypeptide. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le polypeptide selon la présente invention est constitué de la séquence SEQ ID N 4. La présente invention a également pour objet un conjugué comprenant un polypeptide tel que défini ci-dessus, conjugué à une protéine ou un peptide porteur. La présente invention concerne également une séquence d'ADN codant pour un polypeptide ou pour un conjugué tel que défini ci-dessus. La présente invention a également pour objet un vecteur d'expression comprenant ladite séquence d'ADN. Selon un mode de réalisation préféré l'ADN code pour un polypeptide tel que défini ci- dessus qui comprend en outre une séquence contenant l'épitope ERDRD. La présente invention a également pour objet une cellule hôte contenant le vecteur tel que défini ci-dessus. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de préparation d'un polypeptide tel que défini ci-dessus comprenant l'expression dudit polypeptide à partir d'une cellule hôte telle que définie ci-dessus. Selon un autre aspect, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins un polypeptide, ou au moins un conjugué, ou au moins un vecteur d'expression tel que défini ci-dessus, un excipient pharmaceutiquement acceptable et éventuellement un adjuvant. Selon un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique comprend un polypeptide de séquence SEQ ID N 4 et un adjuvant sélectionné dans le groupe consistant en DC-Chol et gel d'aluminium. La présente invention a également pour objet le polypeptide tel que défini ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, en particulier pour l'induction d'anticorps spécifiques neutralisants chez un mammifère. La présente invention concerne également une méthode d'induction d'anticorps spécifiques neutralisants chez un mammifère comprenant l'administration d'une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus et l'induction desdits anticorps. Selon un mode de réalisation préféré, l'administration est réalisée par voie orale ou intramusculaire. L'invention est décrite plus en détails dans la description qui suit. La demanderesse a mis en évidence de façon surprenante que le polypeptide selon l'invention induisait des anticorps IgG spécifiques neutralisant les isolats primaires du VIH. L'induction d'anticorps neutralisant les isolats primaires peut être déterminée par le test de neutralisation tel que décrit dans l'article de C. Moog et al (AIDS Research and human retroviruses, vol. 13(1), 13-27,1997) auquel on pourra se référer pour un descriptif complet de ce dernier. On estime dans le cadre de la présente invention que des anticorps neutralisants ont été induits par l'antigène testé selon la technique de C. Moog lorsque le sérum dilué au moins au 1/4 en présence de VIH entraîne une réduction d'un facteur 10 du titre viral en comparaison au VIH seul, le titre viral étant évalué par la quantité de p24 produite dans le surnageant de culture. L'induction d'anticorps neutralisant les isolats primaires peut également être déterminée par le test de neutralisation de D. Montefiori tel que décrit dans J. Infect. Dis. 1996, 173:60-67. Dans ce test, le titre neutralisant est exprimé par le pourcentage de réduction d'antigène p24 produit dans les surnageants de culture lorsque le virus est incubé en présence de sérum dilué au par comparaison au virus en absence de sérum. On considère dans le cadre de la présente invention que des anticorps neutralisants ont été induits lorsque la réduction du taux de p24 produit atteint au moins 80% avec un sérum dilué au'/. On considère dans le cadre de la présente invention que les anticorps induits par le polypeptide selon l'invention sont neutralisants si une activité neutralisante est détectée pour un isolat donné dans au moins un des deux tests ci-dessus. L'induction d'anticorps neutralisant la souche VIH-1 de laboratoire MN peut être estimée en utilisant la lignée cellulaire MT-2 selon la méthode de D. Montefiori, décrite dans : DCMontefiori et al. J Clin Microbiol. 1988,26: 231-5). Dans cette méthode, le titre neutralisant est exprimé comme l'inverse de la dilution du sérum (en valeur arithmétique) protégeant au moins 50% de cellules de l'effet cytopathogène du virus VIH. Les séquences N et C constitutives du polypeptide selon la présente invention peuvent être issues de toute protéine gp41 du VIH, incluant les souches VIH1 et VIH2, incluant les souches de laboratoire et les isolats primaires. De préférence les séquences constitutives sont issues d'une souche VIH1 et en particulier d'une souche VIH 1 LAI. La numérotation des acides aminés est faite par référence à la séquence du fragment de gp41 SEQ ID No 8 dans lequel le premier acide aminé A porte le numéro 1. Selon un mode de réalisation préféré, N représente SEQ ID N 1 et C représente SEQ ID N 2. Les séquences nucléotidiques et peptidiques d'un grand nombre de protéine gp41 sont connues et disponibles par exemple sur Internet sur le site http://hiv-web.lanl.gov/ ainsi que dans les compendium correspondants de Los Alamos. Il est clair que toute séquence dans laquelle une ou plusieurs mutations conservatives qui n'altèrent pas substantiellement l'immunogénicité ont été introduites est également incluse dans le cadre de la présente invention. Les séquences N et C sont liées entre elles via une séquence peptidique de liaison L comprenant de 2 à 30 acides aminés. Cette séquence de liaison L est une boucle permettant l'appariement des séquences N et C entre elles selon une orientation anti-parallèle. Le polypeptide selon la présente invention est un trimère constitué de 3 monomères N-L-C formant un faisceau dans lequel les hélices N sont appariées entre elles et les hélices C sont appariées aux hélices N selon une orientation anti-parallèle. Les séquences L appropriées dans le cadre de la présente invention peuvent être sélectionnées par utilisation d'un logiciel de prédiction de structure secondaire GOR (Garnier, Osguthorpe and Robson (1078), J. Mol. Biol., 120, 97-120 ; http://molbiol.soton.ac.uk/compute/GOR.html) sur la séquence N-L-C en spécifiant dans les fenêtres hélice et étendue la notion inconnue. Le pourcentage d'hélice dans la prédiction de la structure secondaire de L doit être inférieur à 10. Les séquences L présentent avantageusement un caractère faiblement hydrophobe, de préférence hydrophile pour faciliter la purification du polypeptide correspondant. Le caractère hydrophile peut être obtenu par utilisation d'acide aminé ayant un caractère hydrophile tel que la sérine qui peut être associé avec des glycines. Selon un mode de réalisation préféré, le polypeptide selon l'invention présente la séquence SEQ ID N 3. Cette séquence peut avantageusement être modifiée pour diminuer son caractère hydrophobe par exemple par introduction d'au moins l'une des mutations suivantes : W85D ; L91K; I92K et W103D et de préférence par l'introduction d'au moins 2 mutations quelconques sélectionnées dans le groupe des 4 mutations proposées cidessus, voire de l'ensemble desdites mutations. Selon un mode de réalisation particulier, le polypeptide de formule N-L-C tel que défini ci-dessus comprend en outre une séquence contenant l'épitope ERDRD de Kennedy. La séquence ERDRD peut être liée en N- ou C-terminal du polypeptide, directement ou de préférence via un lien flexible. Un tel lien flexible comprend typiquement une dizaine d'acides aminés environ de préférence à caractère hydrophile. Des séquences comprenant des glycines et sérines telles que GGR, sont par exemple parfaitement appropriées. L'épitope ERDRD peut également être insérée au niveau de la séquence L du polypeptide. Dans un tel cas de figure, l'épitope sera préférentiellement encadré de séquences de liaison assurant la jonction avec les séquences N et C. La nature de ces séquences est facilement déterminable par l'utilisation du logiciel de prédiction de structure secondaire GOR mentionné ci-dessus, l'objectif étant que la séquence de liaison L permette l'appariement anti-parallèle des hélices N et C. On entend donc par une séquence comprenant l'épitope ERDRD dans le cadre de la présente invention une séquence constituée : de l'épitope ERDRD , éventuellement d'un lien flexible et éventuellement de quelques acides aminés supplémentaires qui résulteraient du procédé de construction des plasmides exprimant le polypeptide du fait de l'utilisation des sites de restriction. C'est le cas par exemple des acides aminés RSGGGGS présents en C-terminal des constructions testés dans l'exemple 4. Le polypeptide selon l'invention peut être obtenu par toute technique classique de synthèse chimique ou de génie génétique. Lorsque le polypeptide est produit par synthèse chimique, le polypeptide selon l'invention peut être synthétisé sous la forme d'une séquence unique, ou sous la forme de plusieurs séquences qui sont ensuite liées les unes aux autres. La synthèse chimique peut être réalisée en phase solide ou en solution, ces deux techniques de synthèse étant bien connues de l'homme de l'art. Ces techniques sont décrites notamment par Atherton et Shepard dans solid phase peptide synthesis (IRL press Oxford, 1989) et par Houbenweyl dans method der organischen chemie édité par E.Wunsch vol, 15-1 et II thieme, Stuttgart, 1974, ainsi que dans les articles suivants dont l'intégralité est incorporée ici à titre de référence : Dawson PE et al (Science 1994 ; 266(5186):776-9);Kochendoerfer GG et al (1999 ;3(6):665-71); et Dawson PE et al, Annu Rev Biochem 2000 ; 69 :923-60. Le polypeptide selon l'invention peut être également produit par les techniques de génie génétique bien connues de l'homme de l'art. Lorsque le polypeptide selon l'invention est produit par génie génétique il comprend à l'extrémité NH2-terminale un résidu méthionine supplémentaire correspondant à la traduction du premier codon d'initiation. Ces techniques sont décrites en détails dans Molecular Cloning : a molecular manual de Maniatis et al, Cold Spring Harbor, 1989. Classiquement, la technique de PCR est utilisée pour produire la séquence d'ADN codant pour le polypeptide selon l'invention sous une forme insérable dans un vecteur d'expression. La séquence d'ADN ainsi obtenue est ensuite insérée dans un vecteur d'expression. Le vecteur d'expression renfermant la séquence d'intérêt est alors utilisé pour transformer une cellule hôte permettant l'expression de la séquence d'intérêt. Le polypeptide produit est ensuite isolé du milieu de culture par des techniques classiques de chromatographie bien connues de l'homme de l'art. De préférence, la chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est utilisée dans la purification. Typiquement, les cellules sont collectées à la fin de la culture par centrifugation et reprises dans un tampon neutre, pour être cassées par tout moyen approprié. Le lysat cellulaire est alors centrifugé à environ 10000g pour séparer le matériel soluble du matériel insoluble. Une analyse par SDS-PAGE du surnageant et du culot de centrifugation fera apparaître si le polypeptide est soluble ou non. Dans le cas où le polypeptide n'est pas soluble, la solubilisation est obtenue grâce à un tampon contenant de l'urée, de la guanidine ou d'autres agents solubilisants. Une centrifugation à cette étape permet de se débarrasser des débris et des autres produits insolubles qui gêneraient la chromatographie. L'étape suivante consiste à charger la molécule solubilisée sur une colonne d'affinité, qui peut être de type métal chélate, si une queue polyhistidine est intégrée sur le polypeptide d'intérêt. Le système qui permet la purification par affinité peut être de nature variée, comme l'immunoaffinité, l'affinité sur bleu de cibachron, etc... A ce stade la protéine présente un taux de pureté voisin ou supérieur à 80%, comme on peut le déterminer par électrophorèse SDS PAGE suivi d'une coloration au bleu de coomassie. Une étape supplémentaire de chromatographie peut être ajoutée pour le polissage du polypeptide, on peut citer à titre d'exemple la filtration sur gel, la chromatographie en phase inverse. Le polypeptide selon l'invention peut ainsi être obtenu sous forme purifiée i.e. sous une forme présentant un taux de pureté d'au moins 80%. Le taux de pureté est défini par rapport aux autres protéines présentes dans le mélange qui sont considérées comme des contaminants. Ce taux est évalué par colorimétrie d'un SDS-PAGE en utilisant du bleu de coomassie. Une mesure densitométrique des bandes permet de quantifier le taux de pureté. La mesure du taux de pureté peut également se faire par HPLC en phase inverse par la mesure de l'aire des différents pics. Pour mettre en #uvre la synthèse du polypeptide, tout vecteur d'expression classiquement utilisé pour l'expression d'une protéine recombinante peut être utilisé dans le cadre de la présente invention. Ce terme englobe donc aussi bien les vecteurs d'expression dits vivants tels que les virus et les bactéries que les vecteurs d'expression de type plasmidiques. On utilise de préférence des vecteurs dans lesquels la séquence d'ADN du polypeptide selon l'invention est sous la dépendance d'un promoteur fort, inductible ou non inductible. On peut citer à titre d'exemple de promoteur utilisable, le promoteur de l'ARN polymérase T7. Les vecteurs d'expression incluent de préférence au moins un marqueur de sélection. De tels marqueurs incluent, par exemple, le gène de la dihydrofolate réductase ou le gène de résistance à la néomycine pour la culture des cellules d'eucaryote et les gènes de résistance à la kanamycine, tétracycline ou ampicilline pour la culture dans E. coli et des autres bactéries. On peut citer à titre de vecteur d'expression utilisable dans le cadre de la présente invention les plasmides pET28 (Novagen) ou pBAD (Invitrogen) par exemple ; les vecteurs viraux tels que : baculovirus, poxvirus en particulier les poxvirus décrits dans les brevets US 5,942,235, US 5,756,103 et US 5,990,091 dont l'intégralité est incorporée ici à titre de référence, les virus de la vaccine recombinants, en particulier les virus recombinants décrits dans les brevets EP 83286, US 5,494,807 et US 5,762,938 dans lesquels est cloné la séquence d'ADN codant pour un polypeptide selon l'invention. Pour favoriser l'expression et la purification du polypeptide, ce dernier peut être exprimé dans une forme modifiée, telle qu'une protéine de fusion, et peut inclure non seulement des signaux de sécrétion, mais aussi des régions fonctionnelles hétérologues supplémentaires. Par exemple, une région d'acides aminés supplémentaires, particulièrement des acides aminés chargés, peut être ajoutée au N-terminal du polypeptide pour améliorer la stabilité et le maintien dans la cellule hôte. De façon avantageuse le polypeptide selon la présente invention est produit sous la forme d'un peptide de fusion comprenant une séquence supplémentaire de formule (G) a-S-(H)b dans laquelle G représente un résidu glycine, H représente,un résidu histidine, a est supérieur ou égal à 4 et b est supérieur ou égal à 6 liée par une liaison amide à l'extrémité NH2- ou COOH- terminal du polypeptide. Cette séquence permet une purification rapide par immunoaffinité du polypeptide selon l'invention. Pour l'expression du polypeptide, toute cellule hôte classiquement utilisée en association avec les vecteurs d'expression décrits ci-dessus peut être utilisée. On peut citer à titre d'exemple non limitatif les cellules de E. coli, BL21 (lamdaDE3), HB 101, Top 10, CAG 1139, Bacillus, les cellules eucaryotes telles que CHO ou Vero. De préférence on utilisera dans le cadre de la présente invention le système vecteur d'expression /cellule suivant : pET (Cer) /BL21LamdaDE3, ou BL211amdaDE3(RIL). En fonction de la cellule hôte utilisée pour l'expression du polypeptide, les polypeptides de la présente invention pourront être glycosylés ou non-glycosylés. De plus, les polypeptides selon l'invention pourront aussi inclure un résidu de méthionine supplémentaire en N-terminal. La présente invention a également pour objet les conjugués comprenant un polypeptide selon l'invention et une protéine porteuse ou un peptide porteur. La protéine (ou peptide) porteuse (eur) renforce l'immunogénicité du polypeptide selon l'invention notamment en augmentant la production d'anticorps spécifiques. Ladite protéine (ou peptide) porteuse (eur) comprend de préférence un ou plusieurs épitope(s) T helper. Par épitope T helper , on entend un enchaînement d'acides aminés qui, dans le contexte d'une ou de plusieurs molécules du MHC classe II, active les lymphocytes T helper. Selon un mode de réalisation avantageux, la protéine (ou peptide) porteuse (eur) utilisée améliore la solubilité dans l'eau du polypeptide selon l'invention. Comme protéine porteuse on peut utiliser par exemple les protéines de surface de phages comme la protéine pIII ou pVIII du phage Ml 3, les protéines de surface bactériennes comme les protéines LamB, OmpC, ompA, ompF et PhoE d'E. coli, la protéine CotC ou CotD de B. Subtilis, les porines bactériennes comme la porine P1 de Neisseria gonorrheae, la porine P1 ou P2 d'H. influenzae B, la porine de classe I de N. meningitidis B, la porine P40 de K. pneumoniae, des lipoprotéines telles que OspA de B. bugdorfi, PspA de S. pneumoniae, TBP2 de N. meningitidis B, TraT d'E. coli ainsi que l'adhésine A de S. pneumoniae ; les heat shock protéines telles que Hsp65 ou Hsp71 de M. tuberculosis ou bovis ou Hin 47 d'H. infuenzae type B. Sont également particulièrement appropriées dans le cadre de la présente invention, les toxines bactériennes détoxifiées comme l'anatoxine tétanique ou diphtérique, la sous unité B de la toxine cholérique, la sous unité B de la toxine cholérique, la sous unité B de l'endotoxine A de P. aeruginosa ou l'exotoxine A de S. aureus. Comme peptide porteur on peut utiliser par exemple dans le cadre de la présente invention les peptides p24E, p24N, p24H et p24M décrits dans W094/29339 ainsi que les peptides PADRE tels que décrits par Del guercio et al (Vaccine (1997) ; voll5/4, p441-448). La protéine (ou peptide) porteuse (eur) est liée à l'extrémité N ou C terminale du polypeptide selon l'invention par tout procédé de conjugaison bien connu de l'homme de l'art. De plus, la séquence codant pour la protéine (ou peptide) porteur peut avantageusement être fusionnée à la séquence codant pour le polypeptide selon l'invention et la séquence résultante peut être exprimée sous la forme d'une protéine de fusion par tout procédé classique. Toutes les techniques de génie génétique utiles pour ce faire sont décrites dans le Maniatis et al. Lesdits conjugués peuvent être isolés par tout procédé classique de purification bien connus de l'homme de l'art. La présente invention a également pour objet les séquences d'ADN codant pour les polypeptides et les conjugués selon l'invention ainsi que les vecteurs d'expression comprenant lesdites séquences et les cellules hôtes transformées par lesdits vecteurs. Les séquences d'ADN codant pour les polypeptides selon l'invention peuvent être aisément produites par PCR en utilisant comme matrice la séquence nucléotidique d'une protéine gp41. Plutôt que d'extraire et de purifier le polypeptide ou le conjugué exprimé par le vecteur d'expression il est souvent plus facile et parfois plus avantageux d'utiliser le vecteur d'expression lui-même dans le vaccin selon l'invention. La présente invention a donc également pour objet tout vecteur d'expression tel que défini ci-dessus. Dans un tel cas de figure, le vecteur d'expression est dépourvu de marqueur et correspond de préférence à un vecteur viral, en particulier un poxvirus tel que ALVAC ou NYVAC. Un tel vecteur peut également contenir au moins un autre séquence codant pour un antigène du VIH. On peut citer à titre d'exemple les séquences des antigènes du VIH qui sont classiquement utilisées dans les vecteurs décrits dans les brevets US5942235, US5756103 et US5762938. Le vecteur d'expression selon l'invention comprend de préférence une séquence codant pour un polypeptide de formule N-L-C telle que défini ci-dessus comprenant en outre une séquence comprenant l'épitope ERDRD telle que définie ci-dessus qui est liée à l'extrémité Nou C- terminale dudit polypeptide. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le vecteur d'expression comprend une séquence codant pour le polypeptide de formule : AA25AA157-GGRERDRDRSGGGGS. Toute cellule hôte telle que définie ci-dessus transformée par un tel vecteur d'expression est également incluse dans le cadre de la présente invention. La présente invention a également pour objet les anticorps dirigés contre les polypeptides et conjugués tels que décrits ci-dessus. La préparation de tels anticorps est mise en #uvre par les techniques classiques d'obtention d'anticorps polyclonaux et monoclonaux bien connues de l'homme de l'art. Ces anticorps sont particulièrement appropriés pour être utilisés dans un schéma d'immunisation passive. La présente invention a également pour objet des compositions pharmaceutiques utilisables à des fins d'immunisation thérapeutique et prophylactique contre l'infection liée au VIH. Les compositions selon la présente invention comprennent au moins un polypeptide, au moins un conjugué ou au moins un vecteur d'expression tel que défini ci-dessus en une quantité appropriée pour induire une réponse humorale spécifique, un excipient ou diluant pharmaceutiquement acceptable et éventuellement un adjuvant. La quantité de polypeptide, de conjugué ou de vecteur dans la composition selon la présente invention dépend de nombreux paramètres comme le comprendra l'homme de l'art, tels que la nature de la protéine porteuse, le vecteur utilisé ou, la voie d'administration. Une quantité appropriée est une quantité telle qu'une réponse immunitaire humorale spécifique est induite après administration de ladite composition. La quantité de polypeptide à administrer est de l'ordre de 10 g à 5mg , la quantité sélectionnée variant en fonction de la voie d'administration. La quantité de conjugué à administrer sera déduite des quantités indiquées cidessus en tenant compte du PM de la protéine porteuse. La quantité de vecteur d'expression à administrer est de l'ordre de 10 à 5000 g dans le cas d'un vecteur non viral et de l'ordre de 10E4 à 10E8 TCID50 dans le cas d'un vecteur viral. Les compositions pharmaceutiques selon la présente invention peuvent également contenir un adjuvant. Tout adjuvant ou mélange d'adjuvants pharmaceutiquement acceptable classiquement utilisé dans le domaine des vaccins peut être utilisé à cette fin. On peut citer à titre d'exemple d'adjuvant appropriés les sels d'aluminium tels que l'hydroxyde d'aluminium ou le phosphate d'aluminium et le DC-Chol. Des agents auxiliaires classiques tels que agents mouillants, charges, émulsifiants, tampons etc.. peuvent également être additionnés à la composition selon l'invention. Les compositions selon la présente invention peuvent être préparées par tout procédé classique connu de l'homme de d'art. Classiquement les antigènes selon l'invention (i.e polypeptide, conjugué ou vecteur) sont mélangés avec un excipient ou diluant pharmaceutiquement acceptable, tel que eau ou solution saline tamponnée au phosphate. L'excipient ou diluant va être sélectionné en fonction de la forme galénique choisie, du mode et de la voie d'administration ainsi que de la pratique pharmaceutique. Les excipients ou diluants appropriés ainsi que les exigences en matière de formulation pharmaceutique sont décrits en détails dans Remington's Pharmaceutical Sciences, représentant un ouvrage de référence dans ce domaine. Les compositions mentionnées ci-dessus peuvent être administrées par toute voie classique, habituellement utilisée dans le domaine des vaccins, telle que la voie parentérale (intramusculaire, sous-cutanée, etc..). On utilisera de préférence dans le cadre de la présente invention pour les compositions injectables une administration intramusculaire. Une telle administration peut être réalisée avantageusement au niveau des muscles de la cuisse ou du bras. Les compositions selon la présente invention peuvent également avantageusement être administrées par voie orale. En effet, la demanderesse a mis en évidence que le polypeptide selon l'invention est très stable en milieu fortement acide (pH La demanderesse a en effet montré que la stabilité des formes comportant des boucles plus hydrophiles était obtenue sur une plus large gamme de pH. Les polypeptides comportant de telles boucles pourront donc avantageusement être utilisés pour une administration par voie parentérale. Une administration via la muqueuse nasale, vaginale ou rectale peut être également recommandée dans le cadre de la présente invention. L'administration peut être réalisée par l'administration d'une dose unique ou de doses répétées, par exemple à JO, à 1 mois, à 3 mois, à 6 mois et à 12 mois. On utilisera de préférence les injections à JO , à 1 mois et à 3 mois avec un rappel dont la périodicité pourra être aisément déterminée par le médecin traitant. La composition pharmaceutique selon la présente invention peut avantageusement être administrée selon un schéma posologique comprenant la co-administration d'un vecteur d'expression selon l'invention et d'un polypeptide selon l'invention ou selon un schéma de prime-boost dans lequel le vecteur selon l'invention est administré en premier et le polypeptide en tant qu'injection de rappel. Dans ces deux schémas posologiques, le vecteur d'expression selon l'invention peut être remplacé par tout vecteur d'expression exprimant un ou plusieurs antigènes ou épitopes du VIH différents du polypeptide selon l'invention, et en particulier par un poxvirus de préférence ALVAC ou NYVAC. On peut citer à titre d'exemple de vecteur ALVAC et NYVAC utilisables à cette fin les vecteurs décrits dans les brevets US 5,942,235, US 5,756,103 et US 5,990,091 ; EP 83286, US 5,494,807 et US 5,762,938. On peut également avantageusement utiliser dans le cadre des compositions administrables par voie orale les vecteurs bactériens tels que lactobacillus ou salmonella exprimant le polypeptide selon l'invention et/ou d'autres antigènes du HIV, tels que ceux utilisés classiquement dans les poxvirus décrits dans les brevets US ci-dessus. L'utilisation de ces vecteurs bactériens à des fins d'immunisation est décrite en détail dans International Journal of Food Microbiology 41 (1998) 155-167 de P. H. Pouwels et al et Cell vol 91,765-775, Dec, 1997 de A. Darji et al auxquels on pourra se référer pour plus de détails. La présente invention entend également couvrir un polypeptide, un conjugué ou un vecteur tel que défini ci-dessus et la composition pharmaceutique contenant ces composés pour leur utilisation comme médicament, en particulier pour l'induction d'anticorps spécifiques neutralisants chez un mammifère. Les anticorps induits ayant la propriété de neutraliser les isolats primaires du VIH, le polypeptide selon l'invention est donc un antigène intérêt pour l'immunisation prophylactique et thérapeutique du corps humain contre l'infection liée au VIH. La présente invention concerne donc une méthode d'induction d'anticorps spécifiques neutralisants chez un mammifère, de préférence l'homme, comprenant l'administration d'une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus et l'induction de ladite réponse humorale spécifique. On entend par une réponse humorale spécifique une réponse comprenant la production d'anticorps dirigés spécifiquement contre le polypeptide selon l'invention. La réponse humorale spécifique comprend la production d'IgA spécifiques lorsque la composition selon l'invention est administrée par voie muqueuse. La production d'anticorps spécifiques peut être aisément déterminée par des techniques classiques bien connues de l'homme de l'art telles que ELISA, RIA, Western Blot. Les anticorps induits par le polypeptide selon l'invention sont capables de neutraliser de nombreux isolats primaires du VIH. Cette propriété peut être déterminée par le test de neutralisation de C. Moog ou de D. Montefiori. La demanderesse a mis en évidence de façon surprenante que le polypeptide selon l'invention était capable après administration d'induire des anticorps susceptibles de neutraliser des isolats primaires du VIH. Ledit polypeptide représente donc un candidat de valeur pour l'élaboration d'un vaccin utilisable pour la protection et/ou le traitement d'un grand nombre de sujets à risques ou infectés par le VIH. L'invention a également pour objet une méthode de diagnostic comprenant la mise en contact d'un polypeptide selon l'invention avec un échantillon biologique et la détection des complexes anticorps/polypeptide qui se sont formés. Les sujets VIH+ contiennent en effet des anticorps sériques anti-gp41. Un test immunologique (tel qu'un test ELISA dans lequel le polypeptide selon l'invention est fixé sur la plaque de test puis mis en contact avec le sérum à tester et les complexes anticorps/polypeptide sont ensuite détectés par colorimétrie par utilisation d'un second anticorps marqué) permettrait donc de diagnostiquer les sujets infectés. La présente invention va être décrite de façon plus détaillée dans les exemples qui suivent qui sont donnés à titre purement illustratif de l'invention et ne peuvent en aucun cas être considérés comme limitant la portée de cette dernière. Exemple 1 : du polypeptide selon l'invention Clonage : La séquence d'ADN codant pour le polypeptide SEQ ID N 4 a été clonée dans un système d'expression inductible. Le vecteur utilisé est le Pet-cer qui est construit à partir du vecteur pET28 de Novagen. Le vecteur commercial pET28c a été amplifié par PCR à l'aide de 2 amorces situées de part et d'autre de la région correspondant à l'origine FI, de sorte que le produit amplifié corresponde à la quasi totalité du vecteur d'origine moins la région comprenant l'origine FI. Les sites de restriction uniques Ascl et Pacl sont apportés respectivement par les 2 amorces ayant servi à l'amplification. Parallèlement le fragment cer est amplifié à l'aide de 2 amorces qui permettent d'obtenir ce fragment encadré par les sites Ascl et Pacl. Vecteur et fragment Cer sont digérés par les enzymes Ascl et Pacl puis ligués entre eux. Ce vecteur comprend en particulier une cassette d'expression sous le contrôle du promoteur T7, un polylinker en aval du promoteur T7 pour le clonage du gène d'intérêt, le fragment CER situé en aval du polylinker , permettant de diminuer la multimérisation des plasmides, un terminateur de transcription T7 term et le gène de résistance à la kanamycine. La régulation positive du promoteur est obtenue en présence de la T7 RNA polymérase. Un fragment d'ADN d'environ 0. 5 Kb contenant la séquence codant pour la séquence SEQ ID N 3 est obtenu par PCR à partir d'un plasmide contenant la séquence codant pour la gp160 du VIH-1 LAI. Les sites de restriction BspHI and Xhol, utilisés pour le clonage, sont respectivement apportés par les amorces PCR 5' (5' gp41 SPF BspHI ) and 3' (3'gp41TMBR/HSX). L'amorce 3' contient également les séquences codant pour l'enchaînement poly histidine et le lien flexible qui le relie au polypeptide. Le fragment amplifié par PCR a été digéré par les enzymes BspHI et Xhol et inséré dans le vecteur d'expression digéré par Ncol et Xhol (les sites Ncol et BspHI produisent des extrémités 5' débordantes compatibles après digestion). Les conditions d'amplification PCR sont les suivantes : 97 C / 30 s ; 55 C / 1 mn ;72 C / 50s; Taq DNA polymérase - 25 cycles Amorce 5': 5' ....TCATGACGCTGACGGTACAGGCC 3' Amorce 3': 5' CCGCTCGAGCTAATGGTGATGGTGATGGTGTGACCCTCCCCCTCC ACTTGCCCATTTATCTAA 3' Les sites de restriction BspHI et Xhol sont indiqués en italique, les codons d'initiation ATG et de terminaison TAG (brin complémentaire) sont soulignés et en caractères gras. La construction a été caractérisée par cartographie de restriction, séquençage des jonctions 5' et 3' ainsi que de la totalité du fragment inséré. Des essais d'expression dans des conditions classiques ont permis d'obtenir et de visualiser aussi bien après coloration au bleu de Coomassie qu'analyse en western blot à l'aide d'un anticorps anti-polyhistidine un produit d'un poids moléculaire apparent conforme au résultat attendu. Expression et purification : L'expression du plasmide ainsi obtenu est réalisé chez E. coli BL21 lambda DE3 Les cellules d'E. coli sont transformées par environ 1 ng du plasmide. La culture d'E. coli BL21 DE 3 exprimant le polypeptide est réalisé en milieu TB en présence de kanamycine (25 ug/ml en final) avec une induction d'une durée de 4 heures à 37 C qui démarre par addition d 1mM d'IPTG quand la DO est d'environ 0.9. L'expression du polypeptide conduit à environ 30 mg de polypeptide purifié/ 1 de culture. Le cassage des bactéries est effectué par sonication (4x2min.) en évitant de chauffer les extraits bactériens. Le polypeptide se trouve alors sous forme de corps d'inclusion. Ceux ci sont récupérés par centrifugation (pendant 30 min à 10000g, à 4 C), puis ils sont solubilisés dans un tampon Tris 50mM à pH8 contenant de l'urée 6M et du NaCl 500mM. La solution est filtrée sur un filtre de 0,45 um de porosité (Millex HV, Millipore) avant chromatoghraphie sur colonne de Nickel-Sepharose (Hi-trap, Pharmacia). Le polypeptide est chargé sur la colonne en présence de 10mM imidazole dans le tampon Tris-Urée. La colonne est lavée dans les mêmes conditions, puis le polypeptide purifié est élué par injection d'une solution d'imidazole 0,5M dans le même tampon. Le polypeptide est alors dialysé dans un tampon formate 50 mM à pH2. 5 avant chromatographie sur colonne de phase inverse en HPLC dont le rôle est d'éliminer les endotoxines résiduelles. Après chargement du polypeptide, un gradient de 20 à 80% d'acétonitrile contenant 0,1% de TFA circule sur la colonne semi préparative (214TP510, Vydac). Le polypeptide est élué entre 40 et 60% d'acétonitrile. Les solvants sont ensuite éliminés par évaporation sous vide, puis par dialyse en tampon formate à pH2. 5. Le polypeptide obtenu, dont le taux de pureté est supérieur à 80%, est complètement débarrassé des endotoxines. Il est conservé à -45 C. Exemple 2 : Détermination de l'immunité humorale après administration par voie parentérale Le polypeptide SEQ ID N 4 a été testé chez le cobaye, chez le lapin et chez le macaque Cynomolgus selon les protocoles décrits ci-dessous. Cobayes : des groupes de 5 cobayes ont été injectés 3 fois, à 3 semaines d'intervalle, dans les cuisses (muscle biceps femoris) avec 20 ug par dose d'antigène. A chaque injection, les animaux ont reçu 0,5 ml de la formulation (0,25 ml dans chaque cuisse). Les sérums des animaux ont été prélevés pour l'analyse des anticorps avant immunisation, puis 3 et 2 semaines après les 2nde et 3ème immunisations, respectivement. Les trois compositions testées : antigène + alum (phosphate d'aluminium, 6 mg par dose); antigène + alginate et antigène en tampon arginine + alginate ont été préparées de la façon suivante : a- pour les formulations adjuvées avec le phosphate d'aluminium : l'antigène se trouve en milieu formate 50mM, pH 2. 5. Les formulations sont obtenues par ajout de l'alum à la composition d'antigène et incubation sous agitation douce pendant 30 minutes. le mélange est ensuite centrifugé (5 minutes à 3000 rpm), le surnageant étant prélevé et remplacé par du tampon PBS de sorte à obtenir 500ul/dose en final. La remise en suspension est réalisée à l'aide d'un bain à ultrasons. b- Pour la formulation en alginate : l'antigène se trouve en milieu formate 50mM, pH 2.5. Il est additionné d'une solution filtrée d'alginate, 1% (grade LVM, PRONOVA) en tampon PBS pour être à 1.4:1 (vol. antigène/vol. alginate). Après incubation à température ambiante (5 minutes), le mélange est complété avec une solution de Tween 80,0.67% en poids en tampon PBS, de sorte à obtenir 500ul/dose en final. L'homogénéisation est réalisée par un léger vortex. c- Pour la formulation en arginine + alginate : l'antigène se trouve en milieu arginine 1M, PBS, pH 7. 4. La préparation est la même que décrite en b-, avec utilisation dans ce cas d'un rapport 2.75 :1 (vol. antigène :vol. alginate). ../ Lapins: des groupes de 2 lapins ont été injectés 3 fois, à 3 semaines d'intervalle, dans les cuisses avec 40 g par dose d'antigène A chaque injection, les animaux ont reçu 1 ml de la formulation. Les sérums des animaux ont été prélevés pour analyses anticorps avant immunisation, puis 3 et 2 semaines après les 2nde and 3ème immunisations, respectivement. d- La composition testée ici : antigène + alum (phosphate d'aluminium, 6 mg par dose); a été préparée de la façon suivante : à l'antigène, en milieu formate 50mM, pH 2. 5, est ajouté du phosphate d'aluminium, l'ensemble étant incubé 30 minutes à +4 C sous faible agitation (roue mobile). Les tubes contenant ces préparations sont ensuite centrifugés (5 minutes à 3000 rpm), le surnageant étant prélevé et remplacé par du tampon PBS de sorte à obtenir 1 ml/dose en final. La remise en suspension est réalisée à l'aide d'un bain à ultrasons. Macaques Rhesus (macaca fascicularis) : Des groupes de 2 macaques ont été injectés 3 fois à 1 mois d'intervalle dans les cuisses (muscle rectus femoris) avec 100 g par dose d'antigène adsorbés sur 6 mg d'alum (phosphate d'aluminium). A chaque injection, les animaux ont reçu 1 ml de la formulation. Les sérums des animaux ont été prélevés pour analyses anticorps avant immunisation, puis 4 et 2 semaines après les 2nde and 3ème immunisations, respectivement. La composition testée ici : antigène + alum a été préparée de la façon suivante : à l'antigène, en milieu formate 50mM, pH 2. 5, est ajouté du phosphate d'aluminium, l'ensemble étant incubé 30 minutes à +4 C sous faible agitation (roue mobile). Les tubes contenant ces préparations sont ensuite centrifugés (5 minutes à 3000 rpm), le surnageant étant prélevé et remplacé par du tampon PBS de sorte à obtenir 1 ml/dose en final. La remise en suspension est réalisée à l'aide d'un bain à ultrasons. Les résultats sont donnés dans les tableaux ci-dessous : Comme le montre le tableau 1, le polypeptide induit des taux d'anticorps ELISA significatifs, homogènes et spécifiques contre le polypeptide selon l'invention et la gpl60 MN/LAI-2 (glycoprotéine hybride dans laquelle la sous-unité gpl20 dérive de l'isolat VIH-1 MN et la sous-unité gp41 dérive de l'isolat VIH-1 LAI). Ces réponses IgG atteignent quasiment un plateau dès la 2ème injection (tableau 1). La formulation en alginate apparaît 10 fois moins efficace, en termes de taux d'anticorps spécifiques induits, que la formulation en alum. Tableau 1- Test cobaye - Réponses anticorps en ELISA IRG anti-SEQ ID N 4 IgG anti- 160 MN/LAI-2 Immunogène Titres IgG (logio) Titres IgG (logio) Titres IgG Titres IgG post-2* post-3* (logio) post-2* (loglo) post-3* (nombre de positifs) (nombre de (nombre de (nombre de positifs) positifs) positifs) polypeptide SA 0.1 5.5.-:t 0.2 5.1.-:t 0.2 5.6 ~+ 0.2 (alum) (5+/5) (5+/5) (5+/5) (5+/5) polypeptide 4.5 .:!:. 0.2 4.6 + 0.1 4.1 + 0.3 4.4 + 0.3 (alginate) (5+/5) (5+/5) (5+/5) (5+/5) polypeptide 4.3 .:!:. 0.2 4.7 .-:t 0.2 3.8+0.3 4.3 .-:t 0.2 (PBS arginine (5+/5) (5+/5) (5+/5) (5+/5) /alginate) * Moyenne géométrique ~ déviation standard (logio) NB : tous les sérums préimmuns testés sont inférieurs au seuil de détection (soit 1.9 logio pour l'ELISA anti-gp160 et 1.0 loglo pour l'ELISA anti-polypeptide). L'activité neutralisante des sérums post-3 immunisation a ensuite été évaluée dans un 1er temps vis à vis de la souche de laboratoire VIH-1 MN sur des sérums individuels (chez DC Montefiori). Comme le montrent les résultats obtenus, aucune neutralisation de la souche MN n'a été observée L'activité neutralisante des sérums post-3 a également été évaluée visà vis de souches de VIH- 1 primaires (laboratoires de C. Moog et de D. Montefiori) (tableau 2). L'analyse a été réalisée sur des sérums individuels. De manière intéressante, contrairement à ce qui a été observé pour la souche MN, les cobayes ont montré des activités neutralisantes significatives contre plusieurs des souches virales testées. Tableau 2 - Test cobaye - Réponses anticorps neutralisantes anti-VIH-1 Souche de Isolats primaires Immunogènelaboratoire MN≈ Bal≈ SF162≈ 5768≈ Pavo≈ Bx08# Bxl7a Entre 97% entre entre entre 8 entre 8 et polypeptide 20 90% 94% 96% et 16 10 (alum) et et et 98% 99% 99% polypeptide (PBS arginine NT NT NT NT NT 4 NT alginate) ≈Lab. D. Montefiori : résultats donnés pour les sérums post-3 (valeur arithmétique ou %) # Lab. C. Moog : donnés pour les sérums post-3 (valeur arithmétique) NT : non testé NB : tous les sérums préimmuns testés sont inférieurs au seuil de positivité (soit, suivant les méthodes - Tableau 3 - Test lapin - Réponses anticorps ELISA IgG anti-SEQ ID N 4 Immunogène Titres IgG (log10) post-2* Titres IgG (log10) post-3* (nombre de positifs) (nombre de positifs) Polypeptide (en alum) 4.9.:!::. 0.04 5.1 .:!::. 01 @ (2+/2) (2+/2) Tableau 4 - Test macaque - Réponses anticorps ELISA IgG anti-SEQ ID N 4 Immunogène Titres IgG (logio) post-2* Titres IgG (logio) post-3* (nombre de positifs) (nombre de positifs) Polypeptide (en alum) 5.3 ~ 0.4 5.6 + 0 (2+/2) (2+/2) NB : les sérums préimmuns testés s'avèrent sont inférieurs au seuil de positivité (1 0 logio) Les résultats donnés ci-dessus montrent clairement que le polypeptide selon l'invention est capable d'induire des taux d'anticorps ELISA spécifiques significatifs chez toutes les espèces animales testées. Ces réponses IgG ont augmenté faiblement entre la 2ème et la 3ème injection Ces anticorps qui ont la propriété de neutraliser les isolats primaires font du polypeptide selon l'invention un candidat de valeur pour une immunisation chez l'homme. Exemple 3 : Détermination de l'immunogénicité humorale du polypeptide selon l'invention administré par voie muqueuse. Le polypeptide SEQ ID N 4 a été testé chez la souris BALB/c selon le protocole décrit cidessous. Souris BALB/c : des groupes de 6 à 7 souris ont été administrés par voie intrabuccale ou intragastrique 3 fois, à 2 semaines d'intervalle, et 1 fois 1 mois plus tard, avec 50 g par dose d'antigène seul ou formulé avec 5 g de toxine cholerique (CT). La gpl60 MN/LAI-2 a été ajoutée en contrôle formulée avec 5 g de toxine cholerique (CT). A chaque administration, les animaux ont reçu soit 20 l, pour la voie intrabuccale, soit 500 l, pour la voie intragastrique, de la formulation. Les compositions testées ont été préparées de la façon suivante : pour l'antigène gp 160 : on additionne le volume nécessaire d'une solution de CT à 2mg/ml en H2O, que l'on complète avec du tampon PBS de sorte à avoir les 20 ou 500ul/dose en final. L'antigène SEQ ID N 4, en milieu formate 50mM, pH 2. 5, est d'abord dilue en formate 50mM puis additionné d'une solution de CT à 2mg/ml en H20 de sorte à avor les 20 ou 500 l/dose en final. Les sérums et les sécrétions vaginales des animaux ont été prélevés pour l'analyse des anticorps avant immunisation, puis 2 semaines après la 4ème immunisation. Les réponses IgG et IgA induites dans les sécrétions vaginales, spécifiques du polypeptide ont été évaluées par ELISA, et normalisées respectivement par les IgG et IgA totales contenues dans ces prélèvements muqueux. Les réponses anticorps IgG spécifiques du polypeptide induites dans les sérums ont également été évaluées par ELISA. Comme le montre le tableau 5 ci-dessous, le polypeptide selon l'invention a induit des réponses IgG sériques spécifiques après administration par voie gastrique ou buccale. Pour ces 2 voies, les titres anticorps sont environ 10 fois supérieurs lorsque le polypeptide est administré en présence de CT comparativement à l'antigène seul. Toutefois, il est intéressant de noter que, même en absence de CT, une réponse humorale significative est induite par le polypeptide. La voie buccale s'est avérée globalement plus immunogène que la voie gastrique. Contrairement au polypeptide, la gpl60 MNLAI-2 en présence de CT n'a pas ou quasiment pas induit d'anticorps contre les différents antigènes testés (polypeptide, gpl20 MN [produit par Agrhed] et V3 MN), et ce, quelle que soit la voie d'immunisation. Tableau 5- Test souris - Réponses anticorps ELISA dans les sérums IgG anti-Seq ID IgG anti-gp120 IgG anti-V3 MN Voie N 4 MN immunisation Immunogène Titres IgG (log10) Titres IgG (logio) Titres IgG (log10) post-4* post-4* post-4* (nombre de (nombre de (nombre de positifs) positifs) positifs) gp160 1.5~+1.1 2.7+1.4 1.3~+07 MN/LAI-2 (1+/5) (2+/5) (1+/5) (+ CT) Gastrique polypeptide 2.2 ~ 1.2 NT NT (5+/6) polypeptide 3.5 ~ 0.9 NT NT (+ CT) (7+/7) gp160 1.0+0.0 1.9 ~ 1.9 1.0 ~ 1.0 MNILAI-2 (0+/4) (0+/4) (0+/4) (+ CT) Buccale polypeptide 2.9 ~ 1.1 NT NT (6+/7) polypeptide 4.0 ~ 0.7 NT NT (+ CT) (7+/7) * Moyenne géométrique déviation standard (loglo) ; NT : non testé NB : tous les sérums préimmuns testés sont inférieurs au seuil de détection (soit 1.9 logio pour l'ELISA anti-gpl20 et 1.0 logio pour les ELISA anti-polypeptide et anti-V3). Comme le montre le tableau 6 ci-dessous, le polypeptide selon l'invention a suscité des réponses spécifiques IgA et/ou IgG dans les sécrétions muqueuses testées. Au niveau des sécrétions vaginales, le polypeptide administré soit par voie buccale, soit par voie gastrique, a été capable, avec ou sans CT, de susciter des réponses IgA et IgG, les réponses étant cependant plus fréquentes en présence de CT. On peut noter que la gpl60 MN/LAI-2 + CT n'a pas ou très peu suscitée de réponses muqueuses, comme observé au niveau sérique. Tableau 6 - Test souris - Réponses anticorps ELISA dans les sécrétions muqueuses Sécrétions vaginales Voie Immunogène Ratio IgA anti- Ratio IgG antiimmunisation polypeptide/IgA totales* polypeptide/IgG (nombre de positifs) totales* (nombre de positifs) gp160 MN/LAI-2 0.6 ~+ 1.2 0.2 ~+ 0.4 (+ CT) (1+/5) (1+/5) polypeptide 3.7 ~ 7.4 2.8 ~ 5.2 Gastrique (6+/7) (2+/7) polypeptide 5.8~ 5.8 8.3 ~ 9.3 (+ CT) (6+/7) (6+/7) gp160 MN/LAI-2 0.0 + 0.0 0.0 + 0.0 (+ CT) (0+/4) (0+/4) Buccale polypeptide 1.3 + 1.5 1.2 + 2.9 (4+/7) (2+/7) polypeptide 14.5 + 14.5 7.2 + 10.2 (+ CT) (7+/7) (4+/7) * Moyenne des ratios des souris de chaque groupe x 103, le ratio étant défini comme le titre IgG ou IgA anti-polypeptide (en unités arbitraires) divisé par le titre IgG ou IgA totales (en ng/ml), respectivement. Les exemples ci-dessus montrent que le polypeptide selon l'invention est capable d'induire, chez toutes les espèces animales testées après administration parentérale, des réponses IgG sériques spécifiques significatives vis à vis du polypeptide et de la gpl60 MN/LAI-2. Les anticorps induits ont une activité susceptible de neutraliser plusieurs isolats primaires du VIH. Les exemples ci-dessus montrent également que le polypeptide selon l'invention est capable d'induire après administration par voie muqueuse, des anticorps IgG sériques et IgG et IgA muqueux au niveau des sécrétions vaginales. Exemple 4: Détermination de l'immunogénicité humorale de vecteurs ADN plasmidiques codant pour un polypeptide selon l'invention administré par voie intramusculaire. Quatre plasmides différents ont été préparés et testés pour déterminer leur immunogénicité. Ces plasmides sont : PCA TPA gp41 PK (antigène testé du N- au C-terminal: AAI-AA157GGRERDRDRSGGGGS) PCA TPA gp41 SPF PK (antigène testé du N- au C- terminal: AA25-AA157GGRERDRDRSGGGGS) PCA TPA gp41 (antigène testé du N- au C- terminal: AA1-AA157) PCA TPA gp41 SPF (antigène testé du N- au C- terminal: AA25-AA157) avec TPA pour : séquence signal du tPA humain, SPF pour : sans peptide de fusion, PK pour : l'épitope neutralisant Kennedy i. e ERDRD situé dans la portion intracytoplasmique de la gp41 en position 746-750, au sein de la séquence dite 'peptide Kennedy' localisée entre les résidus 731-752 [(Kennedy et al, 1986, Science, 231 : 1556-59 ; (Vella et al, 1993, J General Virology, 74 :2603-07 ] Les séquences codant pour les polypeptides testés ont été amplifiées par PCR et clonées dans un dérivé du vecteur d'expression pCAMycHis (Invitrogen). Le vecteur modifié utilisé est obtenu par remplacement du polylinker existant par un "polylinker" différent contenant les sites de restriction Xbal et BamHI dans lesquels est insérée la séquence codant pour l'antigène testé. L'expression du gène cloné est sous le contrôle du promoteur CMV. L'ADN est préparé après transformation d'une souche de E coli XL-1 blue. Une culture de 2 litres (milieu LB + Carbénicilline à 100 mg/ml) permet d'obtenir environ 10 mg de plasmide. Après lyse alcaline, le plasmide est purifié sur colonne Qiagen (Gigaprep) selon le protocole indiqué par le fournisseur. L'immunogénicité des constructions ainsi obtenues est évaluée chez le cobaye selon le protocole suivant : Des groupes de 5 cobayes ont été injectés 4 fois, à 1 mois d'intervalle, dans les cuisses (muscle biceps femoris) avec 200 g par dose de plasmide. A chaque injection, les animaux ont reçu 1 ml de la formulation (0,5 ml dans chaque cuisse). Les sérums des animaux ont été prélevés pour l'analyse des anticorps avant immunisation, puis 1 mois après la 4ème immunisation. Les résultats sont donnés dans les tableaux ci-dessous : Comme le montre le tableau 7, le plasmide PCA TPA gp41 SPF PK s'est avéré le plus immunogène, capable d'induire des taux significatifs d'anticorps spécifiques du polypeptide selon l'invention, reconnaissant également la gpl60 MN/LAI-2. Les réponses humorales induites par les autres constructions testées se sont avérées plus faibles. Ces résultats indiquent que l'absence de peptide de fusion et l'ajout de l'épitope neutralisant du peptide Kennedy semblent jouer tous deux un rôle important dans l'immunogénicité humorale du plasmide. Tableau 7 - Test cobaye - Réponses anticorps en ELISA IgG anti-SEQ ID N 4 IgG anti-gp160 MN/LAI-2 Immunogène Titres IgG (logio) post-4* Titres IgG (logio) post-4* (nombre de positifs) (nombre de positifs) PCA TPA gp41 PK 1.2 ~ 0.4 1.9 ~ 0.0 (1+/5) (0+/5) PCA TPA gp41 SPF PK 3.2 ~ 0.6 3.4 ~ 0.7 (4-/4) (4+/4) PCATPAgp41 1.0+0.0 1.9 ~ 0.0 (0~/5) (0+/5) PCA TPA gp41 SPF 1.2 ~ 0.5 NT (1 +/5) * Moyenne géométrique déviation standard (logio) ' NB : tous les sérums préimmuns testés sont inférieurs au seuil de détection (soit 1.9 logio pour l'ELISA anti-gpl60 et 1.0 logio pour l'ELISA anti-polypeptide). Les résultats de neutralisation d'isolats primaires indiqués dans le tableau 8 ci-dessous montrent que le plasmide PCA TPA gp41 SPF PK est le plus performant en terme de neutralisation. Les meilleurs résulats étant obtenus avec les constructions dépourvues du peptide de fusion de gp41. Tableau 8 - Test cobaye - Réponses anticorps neutralisante anti-VIH-1 Immunogène Bx08 Bxl7 PCA TPA gp41 PK 4 PCATPAgp41 SPFPK > 4 et ou =16 8 PCA TPA gp41 5 4 PCA TPA gp41 SPF > 4 et 16 8 # Lab. C. Moog .résultats donnés pour les sérums post-3 (valeur arithmétiques) NT : Non testé. Revendications. 1. Polypeptide représenté par la formule : N-L-C Dans la quelle : N représente la séquence des acides aminés 25-81 de la gp41, C représente la séquence des acides aminés 112-157 de la gp41, et L représente une séquence de liaison flexible comprenant de 2 à 30 acides aminés. 2. Polypeptide selon la revendication 1 dans lequel N représente SEQ ID N 1 et C représente SEQ ID N 2. 3. Polypeptide selon la revendication 1 ou 2 ayant la séquence SEQ ID N 3. 4. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant en outre une séquence contenant l'épitope ERDRD. 5. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 comprenant une séquence supplémentaire de formule (G) a-S-(H)b dans laquelle G représente un résidu glycine, H représente un résidu histidine, a est supérieur ou égal à 4 et b est supérieur ou égal à 6, ladite séquence étant liée par liaison amide à l'extrémité NH2- ou COOH-terminale du polypeptide. @ 6. Polypeptide selon la revendication 5 ayant la séquence SEQ ID N 4. 7. Conjugué comprenant un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, conjugué à une protéine ou un peptide porteuse(eur). 8. Séquence d'ADN codant pour un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 ou pour un conjugué selon la revendication 7. 9. Vecteur d'expression comprenant la séquence d'ADN selon la revendication 8. 10. Vecteur d'expression selon la revendication 9 comprenant la séquence d'ADN codant pour le polypeptide tel que défini à la revendication 4. 11. Cellule hôte contenant le vecteur selon la revendication 9 ou 10. 12. Procédé de préparation d'un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 comprenant l'expression dudit polypeptide à partir d'une cellule hôte telle que définie dans la revendication 11. 13. Composition pharmaceutique comprenant au moins un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 6, ou au moins un conjugué selon la revendication 7 ou au moins un vecteur d'expression selon la revendication 9 ou 10, un excipient pharmaceutiquement acceptable et éventuellement un adjuvant. 14. Composition pharmaceutique selon la revendication 13 comprenant un polypeptide selon la revendication 6 et un adjuvant sélectionné dans le groupe consistant en DC-Chol et gel d' aluminium. 15. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour son utilisation à titre de médicament. 16. Polypeptide selon la revendication 15 pour l'induction d'anticorps spécifiques neutralisants chez un mammifère.