Brevet FR2837204A1 — publié le 20030919

PROCÉDÉ D'IMMOBILISATION D'UNE PROTÉINE PAR EXTRUSION CONTINUE La présente invention est relative à un procédé d'immobilisation d'une protéine par extrusion en continu, à un matériau obtenu selon ce procédé et à des compositions cosmétiques le contenant. L'immobilisation des protéines dans des matrices préparée par voie sol-gel (dénommée ci-après matrice sol-gel) est connue dans la technique. En effet, le brevet US 5 200 334 de Bruce S. Dann et al décrit un procédé de préparation de protéines encapsulées dans un verre transparent poreux préparé par voie sol-gel. Ce procédé comprend l'hydrolyse d'un alcoxyde métallique en milieu acide, puis l'application d'ultra-sons, l'ajout d'une solution tampon pour neutraliser la solution à un pH d'environ 5-6, et l'ajout d'une solution de protéine. On laisse ensuite gélifier la composition, on la laisse reposer et on la fait sécher. Le brevet US 4 418 147 de Johannes et al décrit l'immobilisation d'une enzyme dans un gel d'amidon. Dans ce procédé, on prépare un sol d'amidon comprenant une enzyme, on laisse gélifier le tout et on laisse sécher le gel obtenu. Ensuite, on introduit le gel séché dans une extrudeuse afin d'obtenir des brins. Ces différents procédés permettent de stabiliser les protéines dans une matrice tout en conservant leur réactivité. En effet, cette encapsulation physique de protéine conduit à une absence d'interaction entre les différentes molécules de protéine et empêche l'auto-agrégation et la dénaturation de la protéine. En outre, les pores des matrices ainsi obtenues étant relativement petits, ils empêchent les bactéries de pénétrer dans la matrice et de dégrader la protéine. En même temps, cette matrice poreuse permet aux biomolécules de réagir avec des substrats de faible poids moléculaire qui sont capables de rentrer et de sortir de la matrice et d'aller et venir dans la matrice elle-même. Néanmoins, tous ces procédés ne sont pas réalisables à grande échelle et permettent seulement de préparer des protéines encapsulées dans une matrice sol-gel par des procédés discontinus. La demanderesse a trouvé de manière surprenante un procédé qui permet de préparer en continu une protéine immobilisée dans une matrice sol-gel et qui présente toujours les propriétés décrites cidessus. La présente invention a donc pour objet un procédé d'immobilisation d'une protéine dans une matrice sol-gel par extrusion en continu. D'autres objets, caractéristiques, aspects et avantages de l'invention apparaîtront encore plus clairement à la lecture de la description et des divers exemples qui suivent. Ce procédé d'immobilisation, par extrusion en continu, d'une protéine dans une matrice sol-gel, comprend les étapes suivantes consistant à : - effectuer d'une part une préhydrolyse d'au moins un alcoxyde métallique en milieu acide, - préparer d'autre part une solution de protéine, - introduire ensemble la solution de protéine et l'alcoxyde préhydrolysé en tête d'extrudeuse par pompage, - effectuer la condensation de l'alcoxyde métallique à pH alcalin, compris de préférence entre 7 et 10, et à - récupérer un matériau final solide sous forme de particules humides. La préhydrolyse est effectuée de préférence à une température inférieure ou égale à 35 C tandis que la préparation de la solution de protéine et la condensation se font de préférence à température ambiante. Par température ambiante, on entend dans la présente invention une température de l'ordre de 20 C. Les particules ainsi obtenues présentent une taille moyenne de 1,3 m à 140 m, de préférence de 5 m à 45 m, telle que mesurée, par exemple, avec un granulomètre Malvern Mastersizer 2000 équipé d'une extension hydro 2000M. Les mesures ont été effectuées en milieu dispersé en présence d'un tensioactif de type laurylsulfate de sodium. Les particules présentent également une surface spécifique comprise de préférence entre 0,65 et 0,85 m2/g, mieux encore entre 0,70 et 0,80 m2/g, et encore plus préférentiellement elle est de l'ordre de 0,75 m2/g. Le procédé selon l'invention est réalisé à l'aide d'une extrudeuse à une seule vis ou à double vis, de préférence à double vis. L'extrudeuse notamment utilisée dans le cadre de la présente invention peut comprendre une vis de rétromélange, une vis de transport présentant notamment un pas de 16,6 à 50 mm, et/ou un bilobe dispersif ou distributif présentant de préférence un angle de 45 à 90 et un pas de 2,5 à 5 mm. En outre, l'extrudeuse comporte notamment plusieurs zones, par exemple de 9 à 14 zones, mieux encore de 12 à 14 zones. Ces zones peuvent être, par exemple, des zones de refroidissement, de chauffage ou d'introduction de produit comme de l'eau de lavage. Dans un mode de réalisation préféré, le procédé selon l'invention comprend également une étape supplémentaire de lavage du matériau final avec de l'eau, l'eau de lavage circulant de préférence à contre-courant dans l'extrudeuse. Cette eau peut être ensuite rejetée de différentes manières bien connues dans la technique, et notamment au travers d'un filtre disposé sur un fourreau ouvert. Le procédé peut comprendre en outre une étape de séchage consistant à laisser sécher le matériau final sous forme de particules humides jusqu'à obtenir un xérogel, par exemple pendant 10 jours à une température de 30 C en étuve, ou pendant 20 jours sous vide à température ambiante, ou pendant 30 jours sous une pression de 1,013 x 105 Pa à température ambiante. Le procédé selon l'invention permet l'immobilisation de protéines dans une matrice élaborée par voie sol-gel et formée à partir d'un alcoxyde métallique choisi parmi : (1) les composés métallo-organiques répondant à l'une des formules suivantes : dans lesquelles : M et M' représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome de métal de transition des groupes IB à VIIB, du groupe VIII ou du groupe des lanthanides de la classification périodique, un atome d'aluminium, de silicium, de bore ou d'étain, ou un atome de métal alcalin ou alcalino-terreux, n et n' désignent les valences respectives des atomes de métal représentés par M et M', R1 et R2, identiques ou différents, représentent chacun un groupe hydrocarboné en Ci.30, de préférence en Ci.5, linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comportant éventuellement un hétéroatome tel qu'un atome d'azote, de soufre, d'oxygène ou de phosphore, et plus préférentiellement un groupe alkyle linéaire ou ramifié, en Ci.30, de préférence en CI-6' R et R', indépendamment l'un de l'autre, représentent un groupe hydrocarboné en Ci.30, de préférence en C2-20, linéaire, ramifié ou cyclique, saturé ou insaturé, éventuellement substitué et/ou comportant éventuellement un hétéroatome tel qu'un atome d'azote, de phosphore, de soufre ou d'oxygène, comme par exemple, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, un groupe cycloalkyle ou un groupe aryle, R" représente un groupe hydrocarboné divalent en CI-30' linéai- re, ramifié ou cyclique, saturé ou insaturé, éventuellement substitué et/ou comportant éventuellement un hétéroatome tel qu'un atome d'azote, de phosphore, de soufre ou d'oxygène, comme par exemple, un groupe alkylène linéaire ou ramifié, un groupe cycloalkylène ou un groupe arylène, lesdits groupes R, R' et/ou R" pouvant porter comme substituant (s), au moins un groupe cosmétiquement actif ; (2) les composés métallo-organiques complexés ou chélatés répondant à l'une des formules suivantes : dans lesquelles : M, M', n, n', R,, R2, R, R' et R" ont les mêmes significations que celles données pour les formules (la) à (Id) ci-dessus, X représente un ligand monodenté ou un groupe chélatant comportant un atome d'azote, un atome de phosphore, un atome de soufre ou un atome d'oxygène, et pouvant porter comme substituant (s), moins un groupe cosmétiquement actif ; x représente le nombre de ligands X ; b représente le nombre d'atomes liants du ligand X ; (3) les halogénures métalliques répondant à l'une des formules suivan- tes : dans lesquelles : M, M', n, n', R, R' et R" ont les mêmes significations que celles données pour les formules (la) à (Id) ci-dessus, Z et Z', identiques ou différents, représentent chacun un atome d'halogène tel qu'un atome de chlore, de brome, d'iode ou de fluor ; (4) les halogénures métalliques complexés ou chélatés répondant à l'une des formules suivantes : dans lesquelles : M, M', n, n', R, R' et R" ont les mêmes significations que celles données pour les formules (la) à (Id) ci-dessus, Z et Z' ont les mêmes significations que celles données pour les formules (IIIa) à (IIIId) ci-dessus. Par ligand monodenté, on entend un groupe comportant un seul atome pouvant se lier avec l'atome central métallique. Par groupe chélatant, on entend un ligand polydenté lié à un seul atome métallique central par plus d'un atome donneur de doublet. On peut citer à titre d'exemples de tels ligands (X) monodentés ou polydentés, les acides sulfuriques, les acides sulfoniques, les acides phosphoniques, les acides phosphoriques, les acides carboxyliques, les cétones, les P-dicétones, les esters, les (3-cétoesters, les amines, les sscétoamines, les acides aminés de préférence a- ou (3-hydroxylés et leurs dérivés, les a- ou ss-hydroxyacides, les éthers et polyéthers, les imines, les amides éventuellement hydroxylés, les composés azoïques, les thiols, les urées, les sulfoxydes de thioéther, les sulfones de thioéther, les thioéthers éventuellement cycliques, les di (thioéthers), mono-alcools ou les polyols, la dextrine et ses dérivés, les thiazolidines. Comme dicétone, on peut citer en particulier la 2,4-pentanedio- ne, la 2,4-hexafluoropentanedione, la 2,2,6,6-tétraméthyl-3,5-heptane- dione ; l'acide salicylique et ses dérivés tels que l'acide (méth)acryl- amino-4- ou-5-salicylique ; les acides lactique, succinique, acétique et citrique ; les esters de l'acide (méth) acrylique tel que le méthacrylate d'acétoxyéthyle, l'a-hydroxy(méth)acrylate de méthyle ; l'acétoacétate d'éthyle, l'acétoacétate de méthyle et l'acétylacétone ; l'EDTA ; les poly- éthers de faible masse moléculaire tels que les poly(éthylèneglycol) et les poly(propylèneglycol) ; les polyéthylèneimines ; lysine et ses dé- rivés comme l'e-N-(méth)acryloyl-L-lysine ; la cystéine et ses dérivés tels que la N-acétylcystéine, la carboxyméthylcystéine, la cystine, la N,N'-diacétylcystine ; la méthionine ; les esters de l'acide lactique ou de l'acide acétique ; la triéthanolamine ; les acides lipoïques ; dextrine ou la cyclodextrine. Par groupe cosmétiquement actif, on entend les groupes choisis, par exemple, parmi un groupe colorant, un groupe photochromique, un groupe filtrant le rayonnement UV, un groupe favorisant l'adhérence sur les matières kératiniques (comme des groupes de type amide, uréthanne, urée, hydroxy, carboxy, acide aminé ou polypeptide), un groupe facilitant le démaquillage, un groupe bactéricide, un groupe chélatant pouvant en particulier complexer des cations multivalents, un hydroxyacide, un neuro-suppresseur, un groupe anti-chute des cheveux, un groupe antioxydant, un groupe anti-radicaux libres ou un groupe porteur de vitamine. Parmi les alcoxydes métalliques mentionnés ci-dessus, on pré- fère tout particulièrement le tétraméthoxysilane (TMOS), le tétraéthoxysilane (TEOS) ou le triméthyléthoxysilane (TMEOS). L'étape de préhydrolyse d'au moins un alcoxyde métallique tel que décrit ci-dessus, est effectuée, de préférence à un pH inférieur à 2, en présence d'une quantité suffisante d'eau pour l'hydrolyse partielle de l'alcoxyde. On prépare ainsi une solution aqueuse comprenant 30 à 80 % en poids, de préférence 50 à 75 % en poids, et mieux encore 60 à 70 % en poids d'alcoxyde métallique. L'eau utilisée pour la préhydrolyse contient de préférence un acide tel que l'acide chlorhydrique, l'acide nitrique ou l'acide acétique. Dans l'étape de préhydrolyse, on peut également utiliser un solvant tel qu'un alcool ou un polyol, par exemple le méthanol, l'éthanol, un glycol comme un polyéthylèneglycol ou un polypropylèneglycol, ou un glycérol. Comme protéine convenant dans la mise en #uvre du procédé selon l'invention, on utilise toute protéine bien ' connue dans la technique, par exemple l'ovalbumine, et les enzymes telles que les uricases, les laccases et les peroxydases. Comme uricases, on peut notamment citer les uricases d'origine animale, microbiologique ou biotechnologique, par exemple, l'uricase extraite du foie de sanglier, l'uricase d'Arthrobacter globiformis, ainsi que l'uricase d'Aspergillus flavus. Les laccases peuvent notamment être choisies parmi les laccases d'origine végétale, d'origine animale, d'origine fongique (levures, moisissures, champignons) ou d'origine bactérienne, les organismes d'origine pouvant être mono- ou pluricellulaires. Les laccases peuvent également être obtenues par voie biotechnologique. Parmi les laccases d'origine végétale utilisables selon l'invention, on peut citer les laccases produites par des végétaux effectuant la synthèse chlorophyllienne telles que celles indiquées dans la demande de brevet FR-A-2 694 018. On peut notamment citer les laccases présentes dans les extraits d'Anacardiacées tels que, par exemple, les extraits de Magnifera indica, de Schinus molle ou de Pleiogynium timoriense ; dansles extraits de Podocarpacées ; Rosmarinus off. ; Solanum tuberosum ; sp.; de Coffea sp.; de Daucus carrota ; Vinca minor ; Persea americana ; Catharenthus roseus ; de Musa sp.; de Malus pumila ; Gingko biloba ; Monotropa hypopithys (sucepin), d'Aesculus sp.; d'Acer pseudoplatanus ; de Prunus persica et de Pistacia palaestina. Parmi les laccases d'origine fongique, éventuellement obtenues par voie biotechnologique, utilisables selon l'invention, on peut citer la ou les laccases issues de Polyporus versicolor, de Rhizoctonia praticola et de Rhus vernicifera telles que décrites par exemples dans les demandes de brevet FR-A-2 112 549 et EP-A-504005 ; laccases décrites dans les demandes de brevet WO 95/07988, WO 95/33836, WO 95/33837, WO 96/00290, WO 97/19998 et WO 97/19999, dont le contenu fait partie intégrante de la présente description comme, par exemple, la ou les laccases issues de Scytalidium, de Polyporus pinsitus, de Myceliophtora thermophila, de Rhizoctonia solani, de Pyricularia orizae, et leurs variantes. On peut également citer la ou les laccases issues de Trametes versicolor, de Fomes fomentarius, de Chaetomium thermophile, de Neurospora crassa, de Colorius versicol, de Botrytis cinerea, de Rigidoporus lignosus, de Phellinus noxius, de Pleurotus ostreatus, d'Aspergillus nidulans, de Podospora anserina, d'Agaricus bisporus, de Ganoderma lucidum, de Glomerella cingulata, de Lactarius piperatus, de Russula delica, d'Heterobasidion annosum, de Thelephora terrestris, de Cladosporium cladosporioides, de Cerrena unicolor, de Coriolus hirsutus, de Ceriporiopsis subvermispora, de Coprinus cinereus, de Panaeolus papilionaceus, de Panaeolus sphinctrinus, de Schizophyllum commune, de Dichomitius squalens, et de leurs variantes. Les peroxydases peuvent notamment être choisies parmi les enzymes appartenant à la sous-classe 1. 11.1 décrite dans l'ouvrage Enzyme Nomenclature, Academic Press Inc., 1984. Les peroxydases utilisées peuvent être d'origine végétale, animale, fongique, bactérienne. Elles peuvent être également obtenues par voie biotechnologique. Ainsi, les peroxydases peuvent par exemple être issues de la pomme, de l'abricot, de l'orge, du radis noir, de la betterave, du chou, de la carotte, du maïs, du coton, de l'ail, du raisin, de la menthe, de la rhubarbe, du soja, de l'épinard, du coprin, du lait de bovin, des microorganismes du type Acetobacter peroxidans, Staphylococcus faecalis, Arthromycesramosus. La solution de protéine est préparée notamment par mélange d'eau, d'au moins une protéine telle que décrite ci-dessus, et éventuellement d'une base telle qu'une base faible, par exemple, l'aminométhylpropanol (AMP) ou la monoisopropanolamine (MIPA). On prépare ainsi une solution aqueuse de protéine comprenant 10 à 50 % en poids, de préférence 15 à 40 % en poids, et mieux encore 20 à 35 % en poids de protéines. Cette solution de protéine peut comprendre entre outre d'autres ingrédients tels que les sucres, notamment le saccharose. L'alcoxyde préhydrolysé, sous forme de solution aqueuse, et la solution de protéine sont ensuite introduits dans une extrudeuse telle que décrite ci-dessus, de préférence en un rapport pondéral de 40/60 à 60/40, mieux encore de 50/50, pour immobiliser la protéine. Les protéines immobilisées selon le procédé de l'invention peuvent être utilisées dans des compositions cosmétiques, notamment dans des compositions de coloration capillaire d'oxydation. Ces compositions cosmétiques contiennent, dans un milieu cosmétiquement acceptable, au moins une protéine immobilisée selon le procédé tel que décrit ci-dessus. La composition de teinture d'oxydation contient par exemple, dans un milieu cosmétiquement acceptable, une quantité efficace d'au moins une protéine immobilisée selon le procédé tel que décrit cidessus, au moins un précurseur de colorant d'oxydation choisi parmi les bases d'oxydation et/ou les coupleurs. Les protéines immobilisées représentent de préférence de 0,01% à 50 %, et en particulier de 0,1 à 30 % du poids total de la composition de teinture d'oxydation. Par milieu cosmétiquement acceptable, on entend un milieu compatible avec toutes les matières kératiniques, telles que les cheveux, les cils les sourcils, et la peau, mais aussi d'odeur, d'aspect et de toucher agréables. Les bases d'oxydation utilisables dans les compositions de teinture d'oxydation sont choisies parmi celles classiquement connues en teinture d'oxydation. On peut notamment citer les ortho- et para- phénylènediamines, les bases doubles, les ortho- et para- aminophénols et les bases hétérocycliques, ainsi que leurs sels d'addition d'acide . Les bases d'oxydation représentent de préférence de 0,0005 à 12 % en poids environ du poids total de la composition de teinture d'oxydation et encore plus préférentiellement de 0,005 à 8 % en poids environ de ce poids. Les coupleurs utilisables dans les compositions de teinture d'oxydation sont ceux classiquement utilisés dans le domaine des teintures d'oxydation des fibres capillaires, c'est-à-dire les méta- aminophénols, les méta-phénylènediamines, les métadiphénols, les naphtols et les coupleurs hétérocycliques tels que par exemple les dérivés indoliques, les dérivés indoliniques, le sésamol et ses dérivés, les dérivés pyridiniques, les dérivés pyrazolotriazoles, les pyrazolones, les indazoles, les benzimidazoles, les benzothiazoles, les benzoxazoles, les 1,3-benzodioxoles, les quinolines et leurs sels d'addition d'acide. D'une manière générale, les sels d'addition d'acide des bases d'oxydation et coupleurs sont notamment choisis parmi les chlorhydrates, les bromhydrates, les sulfates, les tartrates, les lactates et les acétates. Lorsqu'ils sont présents, ces coupleurs représentent de préférence de 0,0001 à 10 % en poids du poids total de la composition, et encore plus préférentiellement de 0,005 à 5 % en poids. Les compositions peuvent également contenir des agents antioxydants. Ceux-ci peuvent être choisis en particulier parmi le sulfite de sodium, l'acide thioglycolique, l'acide thiolactique, le bisulfite de sodium, l'acide déhydroascorbique, l'hydroquinone, la 2- méthylhydroquinone, la tert-butylhydroquinone, la 3-méthyl-1-phényl- 5-pyrazolone et l'acide homogentisique et sont généralement présents dans des proportions comprises entre environ 0,05 et 1,5 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les composition peuvent également contenir des principes actifs cosmétiques et des adjuvants de formulation utilisés habituellement dans des compositions de teinture d'oxydation, tels que des agents conservateurs, des épaississants polymériques, des agents tensioactifs cationiques, anioniques, non ioniques ou zwitterioniques, des colorants, des parfums, des charges, des vitamines ou des agents conditionneurs. Les exemples suivants sont donnés à titre illustratif de la pré- sente invention. EXEMPLES Exemple 1 On a utilisé une extrudeuse CLEXTRAL BC21 à double vis corotatives et interpénétrantes. Elle comporte 6 zones de 100 mm chacune. Différents types de vis ont été utilisées et sont regroupées dans le tableau 1 ci-dessous. Tableau 1 Type de vis Pas Longueur Angle Commentaires (mm) (mm) (bilobes) Transport 50 50 Transport 33,3 50 Transport 25 50 Transport 16,6 50 Bilobes 2,5 50 90 Mélange Bilobes 2,5 50 45 distributif Transport 16,6 50 Bilobes 5 50 90 Transport 16,6 25 Mélange Bilobes 5 50 90 dispersif Transport 16,6 25 Bilobes 5 50 45 Transport 50 50 Par mélange distributif, on entend un mélange intime de deux phases qui consiste à croiser les flux le plus grand nombre de fois. Par mélange dispersif, on entend un mélange entraînant une réduction de la taille des phases dispersées ou de la taille des particules. On a préparé une solution homogène par mélange de 800 g de tétraméthoxysilane (TMOS) et de 250 ml d'eau contenant de l'acide chlorhydrique, le pH de la solution étant égal à 2. Dans un récipient séparé, on a mélangé, en milieu basique (pH = 9,5), une uricase en une quantité de 450 g, 800 ml de l'eau et du saccharose en une quantité de 225 g. Les deux solutions préparées séparément ont été ensuite introduites ensemble en tête de l'extrudeuse. Les conditions de fonctionnement de l'extrudeuse sont les suivantes : - vitesse de rotation de 200 tours/min, - temps de séjour dans l'extrudeuse de 50 s, - débit de 5,6 kg/h Une étape de lavage a été prévue dans ces exemples, dans laquelle le matériau final a été lavé à l'eau à contre-courant au cours de l'extrusion. L'eau a été introduite sous pression au niveau de la 5e ou 6e zone dans l'extrudeuse comportant soit une vis de transport, soit un bilobe dispersif ou distributif. L'eau a été ensuite rejetée au niveau de la 4e ou 5e zone au travers d'un filtre sur un fourreau ouvert. A la sortie de l'extrudeuse, on a donc récupéré un matériau final sous la forme de particules humides présentant une taille de particules d'environ 5 à 45 m. On procède ensuite à un séchage pendant 10 jours en étuve à une température de 30 C. Exemple 2 On procède comme dans l'exemple 1 à l'exception près que l'on prépare une solution d'alcoxyde de silicium comprenant 66,7 % en poids de TMOS, 25 % en poids d'eau et 8,3 % en poids de HC1 0,1 M, et une solution de protéine comprenant 24 % d'ovalbumine, 25 % de saccharose, 1 % d'aminométhylpropanol (AMP) et le restant d'eau. Exemple 3 On procède comme dans l'exemple 1 à l'exception près que l'on prépare une solution d'alcoxyde de silicium comprenant 66,7 % en poids de triméthyléthoxysilane (TMEOS), 25 % en poids d'eau et 8,3 % en poids de HCl 0,1 M, et une solution de protéine comprenant 33 % d'uricase, 16 % de saccharose, 1 % de monoisopropanolamine (MIPA) et le restant d'eau. Exemple 4 : composition tinctoriale On a préparé une composition de teinture à partir des ingrédients suivants : Para-phénylène, 2 HC1 1,0 g N-acétylcystéine 0,10 g 6-méthoxybenzo[l,3]dioxol-5-ylamine HC1 0,71 g 1-ss-hydroxyéthyloxy-2,4-diaminobenzène, 2 HCl 0,88 g Uricase immobilisée de l'exemple 1 4,0 g Acide urique 1,0 g Monooléate de polyglycérol* 1,0 g Aculyn 22** 0,75 g MA*** 2-amino-2-méthyl-1-propanol qs pH 9,5 Eau qsp 100 g * vendu sous la dénomination commerciale Decaglynl-0 par la société NIKKO ** terpolymère acide méthacrylique/acrylate d'éthyle/méthacrylate de stéaryle oxyéthyléné (55/35/10) en dispersion aqueuse à 30 %, vendu par la société ROHM ET HAAS ***MA : Matière Active On a préparé cette composition au moment de l'emploi par mélange de l'uricase immobilisée au reste de la composition et on l'a appliquée sur des cheveux gris naturels à 90 % de blancs. Au bout de 30 minutes de pose, les cheveux ont été rincés, lavés avec un shampoing standard et séchés. On a obtenu une nuance noire intense des cheveux. Exemple 5 : composition tinctoriale On a préparé une composition de teinture à partir des ingrédients suivants : 4-aminophnéol 0,11 g N-acétylcystéine 0,10 g 2-méthyl-5-aminophénol 0,12 g Uricase immobilisée de l'exemple 1 4,0 g Acide urique 1,0 g Monooléate de polyglycérol* 1,0 g Aculyn 22** 0,75 g MA*** 2-amino-2-méthyl-l-propanol qs pH 9,5 Eau qsp 100 g * vendu sous la dénomination commerciale Decaglynl-0 par la société NIKKO ** terpolymère acide méthacrylique/acrylate d'éthyle/méthacrylate de stéaryle oxyéthyléné (55/35/10) en dispersion aqueuse à 30 %, vendu par la société ROHM ET HAAS ***MA : Matière Active On a préparé cette composition au moment de l'emploi par mélange de l'uricase immobilisée au reste de la composition et on l'a appliquée sur des cheveux gris naturels à 90 % de blancs. Au bout de 30 minutes de pose, les cheveux ont été rincés, lavés avec un shampoing standard et séchés. On a obtenu une nuance dorée-cuivrée intense des cheveux. REVENDICATIONS 1. Procédé d'immobilisation, par extrusion en continu, d'une protéine dans une matrice préparée par voie sol-gel, comprenant les étapes suivantes consistant à : - effectuer d'une part une préhydrolyse d'au moins un alcoxyde métallique en milieu acide, - préparer d'autre part une solution de protéine, - introduire ensemble la solution de protéine et l'alcoxyde préhydrolysé en tête d'extrudeuse par pompage, - effectuer la condensation de l'alcoxyde métallique à pH alcalin, et à - récupérer un matériau final solide sous forme de particules humides. 2. Procédé d'immobilisation en continu selon la revendication 1, caractérisé en ce que la préhydrolyse se fait à un pH inférieur à 2. 3. Procédé d'immobilisation en continu selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la condensation se fait à pH compris entre 7 et 10. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la préhydrolyse est effectuée à une température inférieure ou égale à 35 C tandis que la préparation de la solution de protéine et la condensation se font à température ambiante. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les particules présentent une taille moyenne de 1,3 m à 140 m, de préférence de 5 à 45 m. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les particules présentent une surface spécifique comprise entre 0,65 et 0,85 m2/g, mieux encore entre 0,70 et 0,80 m2/g. 7. Procédé d'immobilisation en continu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'extrudeuse comprend une vis de rétromélange, une vis de transport à pas large et/ou un bilobe dispersif ou distributif. 8. Procédé d'immobilisation en continu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de lavage avec de l'eau. 9. Procédé d'immobilisation en continu selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'eau de lavage circule à contre-courant. 10. Procédé d'immobilisation en continu selon la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce que l'eau est rejetée au travers d'un filtre disposé sur un fourreau ouvert. 11. Procédé d'immobilisation en continu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'on laisse sécher le matériau final sous forme de particules humides jusqu'à obtenir un xérogel. 12. Procédé d'immobilisation en continu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'alcoxyde métallique est choisi parmi : (1) les composés métallo-organiques répondant à l'une des formules suivantes : dans lesquelles : M et M' représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome de métal de transition des groupes IB à VIIB, du groupe VIII ou du groupe des lanthanides de la classification périodique, un atome d'aluminium, de silicium, de bore ou d'étain, ou un atome de métal alcalin ou alcalino-terreux, n et n' désignent les valences respectives des atomes de métal représentés par M et M', RI et R2, identiques ou différents, représentent un groupe hydrocarboné en Ci.30, de préférence en CI-6, linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comportant éventuellement un hétéroatome, R et R', indépendamment l'un de l'autre, représentent un groupe hydrocarboné en CI-30' linéaire, ramifié ou cyclique, saturé ou insaturé, éventuellement substitué et/ou comportant éventuellement un hétéroatome, R" représente un groupe hydrocarboné divalent en C1-30, linéaire, ramifié ou cyclique, saturé ou insaturé, éventuellement substitué et/ou comportant éventuellement un hétéroatome, lesdits groupes R, R' et/ou R" pouvant porter comme substituant (s), au moins un groupe cosmétiquement actif ; (2) les composés métallo-organiques complexés ou chélatés répondant à l'une des formules suivantes : dans lesquelles : M, M', n, n', R1, R2, R, R' et R" ont les mêmes significations que celles données pour les formules (la) à (Id) ci-dessus, X représente un ligand monodenté ou un groupe chélatant, x représente le nombre de ligands X ; b représente le nombre d'atomes liants du ligand X ; (3) les halogénures métalliques répondant à l'une des formules suivantes : dans lesquelles : M, M', n, n', R, R' et R" ont les mêmes significations que celles données pour les formules (Ia) à (Id) ci-dessus, Z et Z', identiques ou différents, représentent chacun un atome d'halogène ; (4) les halogénures métalliques complexés ou chélatés répondant à l'une des formules suivantes : dans lesquelles : M, M', n, n', R, R' et R" ont les mêmes significations que celles données pour les formules (Ia) à (Id) ci-dessus, Z et Z' ont les mêmes significations que celles données pour les formules (IIIa) à (IIIId) ci-dessus. 13. Procédé d'immobilisation en continu selon la revendication 12, caractérisé en ce que l'alcoxyde métallique est le tétraméthoxysilane, le tétraéthoxysilane ou le triméthyléthoxysilane. 14. Procédé d'immobilisation en continu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que, dans l'étape de préhydrolyse, on prépare une solution aqueuse comprenant 30 à 80 % en poids, de préférence 50 à 75 % en poids d'alcoxyde métallique. 15. Procédé d'immobilisation en continu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les protéines sont choisies parmi l'ovalbumine et les enzymes. 16. Procédé d'immobilisation en continu selon la revendication 15, caractérisé en ce que la protéine est une uricase, une laccase ou une peroxydase. 17. Procédé d'immobilisation en continu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la solution aqueuse de protéine comprend 10 à 50 % en poids, de préférence 15 à 40 % en poids de protéine. 18. Procédé d'immobilisation en continu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'alcoxyde préhydrolysé, sous forme de solution aqueuse, et la solution de protéine sont introduits dans l'extrudeuse en un rapport pondéral de 40/60 à 60/40, de préférence de 50/50.