Brevet FR2827174A1 — publié le 20030117

La présente invention se rapporte à l'utilisation dans une composition, ou pour la préparation d'une telle composition, d'une quantité efficace de peptides de séquence (AA) ji-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n, dans laquelle AA est un quelconque acide aminé ou un de ses dérivés, n est compris entre 0 et 2, et où les acides aminés peuvent être sous la forme L, D ou DL ; les peptides ou la composition étant destinés à augmenter l'adhésion cellulaire. Selon un mode de réalisation actuellement préféré de l'invention, le peptide précité est de séquence Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr. L'invention se rapporte encore à l'utilisation dans une composition, ou pour la préparation d'une telle composition, d'une quantité efficace des peptides tels que définis précédemment ; les peptides ou la composition étant destinés à traiter de manière curative et/ou préventive les manifestations cutanées du vieillissement (d'origine physiologique et solaire) et améliorer l'aspect de la peau. Ces peptides peuvent être obtenus par synthèse, par hydrolyse ménagée de protéines naturelles, ou encore par biotechnologie. Le vieillissement cutané est un phénomène complexe qui est dû à de nombreux facteurs endogènes et exogènes. Cliniquement, on observe l'apparition de rides et ridules, une perte de l'élasticité cutanée, un relâchement des tissus cutanés et sous-cutanés... De nombreuses voies de recherches sont proposées pour lutter contre le vieillissement, parmi lesquelles la protection contre l'environnement (soleil, pollutions...), l'activation de la régénération cellulaire, le renforcement de la matrice extracellulaire (collagène et élastine). Récemment, des études ont montré l'importance de l'adhésion kératinocytesjonction dermo-épidennique dans le traitement des peaux âgées. De façon générale, en augmentant l'adhésion des cellules entre elles, et l'adhésion entre les cellules et la matrice extra-cellulaire, il est possible de prévenir voire de traiter le relâchement de la peau. Cette dernière voie de recherche, prometteuse, est encore peu étudiée, alors que le rapprochement cellule-matrice ne peut que favoriser les échanges que l'on sait maintenant nombreux entre la cellule est son milieu environnant complexe. Elément clé de la matrice extra-cellulaire, la fibronectine participe à l'adhésion, au ciment inter-cellulaire. Elle est de ce fait un acteur majeur dans la migration et la communication cellulaire. Très étudiée pour ses nombreuses fonctions, elle est aussi abondamment utilisée en cosmétique bien que sa structure de protéine (taille importante et charge) grève son efficacité au niveau cutané. Comme il est souvent le cas dans ce type de problématique, la recherche dermatologique se tourne vers des séquences peptidiques, donc plus courtes, qui pourraient mimer les activités de la fibronectine. L'industrie cosmétique récemment sensibilisée à l'utilisation des peptides en biologie cutanée (séquences dérivées de l'alphaMSH, de certains neuropeptides comme le NPY et la SP...), est à la recherche de peptides ayant une activité forte au niveau cutané. On constate donc que subsiste le besoin d'un nouveau dérivé de la fibronectine, ayant une action sur l'adhésion cellulaire. Or, la demanderesse a trouvé, de façon surprenante et inattendue, qu'une quantité efficace d'un peptide de séquence (AA) n-Leu-Asp-AIa-Pro- (AA) n a une action sur l'adhésion cellulaire. A la connaissance de la demanderesse, il n'a jamais été décrit dans l'art antérieur l'utilisation d'un peptide de séquence (AA) n-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n en cosmétique. Ainsi, l'invention a pour objet premier l'utilisation dans une composition, ou pour la préparation d'une telle composition, d'une quantité efficace de peptides de séquence (AA) n-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n, dans laquelle AA est un quelconque acide aminé ou un de ses dérivés, n est compris entre 0 et 2, et où les acides aminés peuvent être sous la forme L, D ou DL ; les peptides ou la composition étant destinés à augmenter l'adhésion cellulaire. Par la suite, le terme adhésion cellulaire doit s'entendre d'une part par l'adhésion entre les cellules et la matrice extra-cellulaire, et d'autre part par l'adhésion entre les cellules. Selon un mode de réalisation actuellement préféré de l'invention, le peptide précité est de séquence Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr. L'invention se rapporte encore à l'utilisation dans une composition, ou pour la préparation d'une telle composition, d'une quantité efficace des peptides tels que définis précédemment ; les peptides ou la composition étant destinés à traiter de manière curative et/ou préventive les manifestations cutanées du vieillissement (d'origine physiologique et solaire) et améliorer l'aspect de la peau. Les peptides de l'invention peuvent être obtenus par synthèse chimique ou enzymatique à partir des acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. Les peptides de l'invention peuvent aussi être obtenus par hydrolyse ménagée de protéines naturelles (animale ou végétale). Les peptides de l'invention peuvent enfin être obtenus par biotechnologie (utilisation d'un micro-organisme modifié ou non par génie génétique). L'homme de l'art, connaissant le métier de l'extraction et de la purification des peptides et protéines, pourra aisément envisager d'autres procédés d'obtention des peptides décrits par la demanderesse. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le peptide précité est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables comme l'eau, le propylène glycol, le butylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, l'éthanol, le propanol ou l'isopropanol. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le peptide précité est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. Pour donner un ordre de grandeur, dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques de la présente invention, le peptide de séquence (AA) n-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n est utilisé en une concentration représentant de 0,05 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement en une concentration représentant de 0,5 à 100 ppm (p/p). Pour donner un ordre de grandeur, dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques de la présente invention, le peptide de séquence Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr est utilisé en une concentration représentant de 0,05 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement en une concentration représentant de 0,5 à 100 ppm (p/p). Préférentiellement, les compositions selon la présente invention se présenteront sous une forme adaptée à l'administration par voie topique cutanée, et couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau, les poils ou les cheveux. Ces compositions pourront notamment être sous forme de crèmes, émulsions H/E, E/H ou émulsions multiples, solutions, suspensions, gels, laits, lotions, sticks ou encore poudres, adaptés à une application sur la peau, les lèvres et/ou les cheveux. Ces compositions comprennent les excipients nécessaires à leur formulation, tels que solvants, épaississants, diluants, tensioactifs, anti-oxydants, colorants, conservateurs, parfums. Bien entendu, l'homme de métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Aussi, un autre objet de l'invention consiste en une composition cosmétique ou dermatologique, caractérisée en ce qu'elle contient, dans un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, un peptide de séquence (AA) n-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n et préférentiellement de séquence Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr. Dans les compositions de l'invention, le peptide de séquence (AA) n-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n est utilisé en une concentration représentant de 0,05 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement en une concentration représentant de 0,5 à 100 ppm (p/p). Dans les compositions de l'invention, le peptide de séquence Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr est utilisé en une concentration représentant de 0,05 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement en une concentration représentant de 0,5 à 100 ppm (p/p). L'invention concerne enfin un procédé cosmétique pour le traitement des manifestations du vieillissement, consistant à appliquer, sur la peau ou les cheveux, la composition telle que définie précédemment. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif Exemple 1-Stabilité du peptide Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr Le peptide Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr a été analysé à une concentration de 10-4 M par HPLC avec une colonne type Cl 8 et un gradient linéaire eau/TFA 0,1 %-acétonitrile/TFA 0, 1%. Aucune dégradation du peptide n'a été observée après 24 heures à 25 C, 37 OC et 60 C. De plus, après 8 jours à 25 C, le peptide ne présente toujours pas de dégradation. Des fibroblastes et des kératinocytes humains sont cultivés pendant 24 heures à 37 C et 5 % de C02. Pendant ce temps, les cellules peuvent libérer dans le milieu de culture des enzymes. Ensuite, le milieu de culture est retiré pour être mis en présence du peptide. Après 24 heures, le peptide ne présente pas de dégradation. Lorsque le peptide est appliqué sur des fibroblastes et kératinocytes en culture, un dosage HPLC du milieu de culture révèle que la concentration en peptide décroît rapidement en quelques heures. Ces données, prises dans leur ensemble, suggèrent la possibilité d'une pénétration du peptide dans la cellule. Cette hypothèse est ensuite confortée par les tests d'efficacité exposés dans l'exemple 2. Exemple 2-Effets du peptide de l'exemple 1 sur l'adhésion cellulaire L'étude est réalisée dans des plaques de 96 puits, sur des kératinocytes cultivés dans un incubateur à 37 C et 5 % de CO2. Selon les puits, différents peptides de 3 à 25 acides aminés sont incubés à 35 ppm. Les contrôles négatifs ne contiennent pas de peptide et les contrôles positifs sont effectués avec de la fibronectine à 50 ppm. Après 3 heures, les puits sont totalement remplis de milieu, hermétiquement fermés, retournés et agités sur un agitateur tridimensionnel pendant 20 minutes. Puis les plaques sont vidées retournées du milieu et ensuite le milieu restant est aspiré. Ensuite, 100 nul de MTT à 1 mg/ml sont ajoutés par puits et laissés pendant 3 heures à 37 C, 5 % CO2. La solution est enfin retirée, 100 nul de DMSO ajoutés et la lecture est faite à 560 nm contre 630 nm. Pour la plupart des peptides et pour les contrôles sans peptide une densité optique de 0,49 UDO est obtenue à 540 nm. Pour la fibronectine testée à une concentration de 50 ppm, la densité optique est de 0,78 UDO. Pour le peptide de l'exemple 1 Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr testé à une concentration de 5 ppm, la densité optique est de 0,77 UDO. En conclusion, après seulement 3 heures de contact avec les kératinocytes, le peptide Lys- Leu-Asp-Ala-Pro-Thr apporte une adhésion cellulaire semblable à celle de la fibronectine, bien qu'utilisé en concentration plus faible que la fibronectine. Exemple 3-Préparation de compositions Ces compositions ont été obtenues par simple mélange des différents composants. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. 1-Emulsion huile dans eau Phase huileuse : a Montanov 68 (Cetearyl Alcohol and Cetearyl Glucoside) 5.00 % a Huile de Jojoba 5.00 % a Huile de Vaseline 5.00 % 'Isopropyl Palmitate 7.00 % Phase aqueuse : # Glycérine 5.00 % # Allantoïne 0.10 % # Peptide de l'exemple 1 5.00 % # Sepigel305 (Polyacrylamide and C13-14Isoparaffin and Laureth-7) 0.30 % # Conservateur 0.50 % # Parfum 0. 50 % # Eau qsp 100 % 2-Gel # CarbopolUltrezlO (sol. à 2%) 25.00 % 8 Triéthanolamine 0.50 % # Peptide de l'exemple 1 1. 0 % # Conservateur 0.20 % # EDTA (séquestrant) 0.10 % # Parfum 0.50 % # Eau qsp 100 % 3-Lotion # Mono Propylène Glycol 1.00 % # Allantoïne 0.30 % # Glycérine 1.00 % # Cetiol HE (PEG-7 Glyceryl Cocoate) 1.00 % # Peptide de l'exemple 1 1 ppm # Conservateur 0.20 % # Parfum 0.50 % # Eau qsp 100 % REVENDICATIONS 1. Utilisation pour la préparation d'une composition, d'une quantité efficace de peptides de séquence (AA) n-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n, dans laquelle AA est un quelconque acide aminé ou un de ses dérivés, n est compris entre 0 et 2, et où les acides aminés peuvent être sous la forme L, D ou DL ; les peptides ou la composition étant destinés à augmenter l'adhésion intercellulaire. 2. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que le peptide est de séquence Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr. 3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes pour la préparation d'une composition, d'une quantité efficace des peptides ; les peptides ou la composition étant destinés à traiter de manière curative et/ou préventive les manifestations cutanées du vieillissement (d'origine physiologique et solaire) et améliorer l'aspect de la peau. 4. Peptides, tels que définis dans l'une des revendications précédentes, obtenus par synthèse chimique ou enzymatique à partir des acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. 5. Peptides, tels que définis dans l'une des revendications précédentes, obtenus par hydrolyse ménagée de protéines naturelles. 6. Peptides, tels que définis dans l'une des revendications précédentes, obtenus par biotechnologie. 7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le peptide est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou phannaceutiquement acceptables comme l'eau, le propylène glycol, le butylène glycol, les diglycol éthoxylés ou propoxylés, l'éthanol, le propanol ou l'isopropanol. 8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3 et 7, caractérisée en ce que le peptide est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. 9. Utilisation selon l'une des revendications 1, 2,3, 7 et 8, caractérisée en ce que le peptide de séquence (AA1-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n est utilisé en une concentration représentant de 0,05 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement en une concentration représentant de 0,5 à 100 ppm (p/p). 10. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3 et 7 à 9, caractérisée en ce que le peptide de séquence Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr est utilisé en une concentration représentant de 0,05 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement en une concentration représentant de 0, 5 à 100 ppm (p/p). 11. Composition cosmétique ou dermatologique, caractérisée en ce qu'elle contient, dans un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, un peptide de séquence (AA) n-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) n et préférentiellement de séquence Lys-Leu-Asp-Ala- Pro-Thr. 12. Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que le peptide de séquence (AA) n-Leu-Asp-Ala-Pro- (AA) a est utilisé en une concentration représentant de 0,05 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement en une concentration représentant de 0,5 à 100 ppm (p/p). 13. Composition selon la revendication H, caractérisée en ce que le peptide de séquence Lys-Leu-Asp-Ala-Pro-Thr est utilisé en une concentration représentant de 0, 05 à 500 ppm (p/p) et préférentiellement en une concentration représentant de 0,5 à 100 ppm (P/P). 14. Procédé cosmétique pour le traitement des manifestations du vieillissement, consistant à appliquer, sur la peau ou les cheveux, la composition selon les revendications 11 à 13.