Brevet FR2833598A1 — publié le 20030620

La présente invention concerne de nouveaux peptides utilisables comme médicaments permettant de lutter contre l'infection par le virus de l'immunodéficience féline (FIV) chez le chat. On sait que l'infection par le FIV est une infection répandue et ancienne qui pose d'importants problèmes de santé chez le chat domestique dans le monde entier ; voir par exemple G. Pancino et al., Annales de l'Institut Pasteur 5 (1), 25-34 (1994), et M. Bendinelli et al., Clinical Microbiology Reviews, 8 (1), 87-112 (1995). On a maintenant découvert de nouveaux peptides utilisables en thérapeutique vétérinaire pour traiter les infections par le FIV chez le chat. Ces peptides ont la propriété d'inhiber l'entrée du virus FIV dans ses cellules cibles (principalement les lymphocytes T), et donc d'inhiber ou de réduire l'infectivité du virus. On sait que dans le traitement du SIDA humain, on utilise actuellement un traitement dit"trithérapie"dont le prix de revient est très élevé, et dont l'efficacité est remise en question par l'apparition de souches virales résistantes. Il n'est pas possible d'envisager en pratique l'utilisation des trithérapies pour traiter les infections à FIV chez le chat, compte tenu de leur coût prohibitif. Au contraire, les peptides constituent des principes actifs de faible coût. En outre, les peptides utilisables selon l'invention ont des séquences correspondant à certaines régions de la protéine transmembranaire d'enveloppe du FIV qui sont hautement conservées. Il n'y a donc pratiquement pas de risques d'apparition de souches virales résistantes. Les peptides connus (DP 178, DP 219, DP 107) ayant des propriétés d'inhibiteur de l'infectivité des virus du SIDA humain sont des peptides ayant au moins une trentaine de résidus d'acides aminés. On a maintenant découvert que, de façon surprenante, certains peptides courts ayant moins de 20, ou même moins de 10, résidus d'acides aminés, peuvent également avoir des propriétés d'inhibition de l'infectivité du FIV. L'invention a pour objet un peptide dont la séquence contient au moins 6 et au plus 18 résidus d'acides aminés et est incluse dans la séquence peptidique (1) suivante : XjLQX2WX3X4WX5X6WIGX7IPXsYLKG (1) dans laquelle : Xl représente un résidu d'acide aminé choisi parmi K, R et Q X2 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi K, R, Q, E et N X3 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi E et Q X4 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi D et N Xs représente un résidu d'acide aminé choisi parmi V et M X6 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi K, R, Q et G X7 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi N, K, R et Q Xg représente un résidu d'acide aminé choisi parmi Q, R et K, et les lettres autres que X sont les symboles usuels utilisés pour désigner les acides aminés selon le code à une lettre. Les peptides constituant le principe actif des médicaments selon l'invention correspondent à des séquences incluses dans la séquence de la protéine gp36 de IFV. Les différentes possibilités prévues ci-dessus dans la formule (1) résultent des résultats connus de séquençage de la protéine gp36 de diverses souches de FIV depuis la position 766 jusqu'à la position 786. Ces séquences connues disponibles pour diverses souches, ainsi qu'une séquence consensus correspondante, sont rassemblées dans le Tableau 1 annexé. Les diverses possibilités prévues dans la formule 1 résultent en outre du fait connu que l'activité d'un peptide n'est généralement pas modifiée notablement lorsque l'on remplace K par R (ou inversement), ou lorsqu'on remplace 1 par L (ou inversement). On sait en outre qu'il est possible de remplacer K et R par Q, ce qui rend les peptides plus résistants aux enzymes digestives en cas d'administration par la voie orale. Dans le même but, on peut utiliser des résidus d'acides aminés modifiés, par exemple N-acétylés (et les peptides de l'invention sont notamment ceux dont l'extrémité N-terminale est acétylée), ou des résidus de proline hydroxylés. Les peptides de l'invention sont notamment ceux dont la séquence, incluse dans celle de formule (I), contient au plus 17, ou au plus 15, ou au plus 12 résidus d'acides aminés. Dans des modes de réalisation particuliers, l'invention a également pour objet : un peptide, tel que défini précédemment, contenant au moins la séquence peptidique : X4WX5X6W, - un peptide, tel que défini précédemment, contenant au moins la séquence peptidique : WX3X4WXsX6W, - un peptide, tel que défini précédemment, contenant au moins la séquence peptidique : LQX2WX3X4WXsX6W, - un peptide, tel que défini précédemment, choisi parmi : LQX2WX3X4WX5X6WIGX7IPX8YL LQX2WX3X4WXsX6WIGX7lPX8Y QX2WX3X4WX5X6WIGX7IPX8 QX2WX3X4WX5X6WIGX7 WX3X4WX5X6WIGX7IP Xi LQX2WX3X4WXsX6WI WX3X4WXsX6WI X4WX5X6WI, et notamment tout peptide correspondant dont la séquence est incluse dans les séquences des diverses souches, ou la séquence consensus, rassemblées dans le Tableau 1 annexé ; un peptide choisi parmi : LQKWEDWVRWIGNIPQYL LQKWEDWVRWIGNIPQY QKWEDWVRWIGNIPQ QKWEDWVRWIGN WEDWVRWIGNIP QLQKWEDWVRWI WEDWVRWI DWVRWI LQKWEDWVGWIGNIPQYL LQKWEDWVGWIGNIPQY QKWEDWVGWIGNIPQ QKWEDWVGWIGN WEDWVGWIGNIP QLQKWEDWVGWI WEDWVGWI DWVGWI. Les peptides tels que définis ci-dessus peuvent être utilisés comme médicaments dans le traitement des infections à FIV chez le chat. Ils peuvent être administrés par exemple à des doses allant de 0,1 à 2 mg/kg de poids corporel. Le médicament de l'invention, qui contient au moins un peptide tel que défini ci-dessus, et éventuellement un véhicule pharmaceutique approprié, peut être administré par exemple par voie orale, rectale ou parentérale, notamment par injection intramusculaire ou intraveineuse. A cet effet, il peut se présenter en particulier sous la forme de solution (ou suspension ou hydrogel) injectable ou sous la forme de poudre lyophilisée contenant le peptide utilisé comme principe actif, avec éventuellement un adjuvant de lyophilisation classique. La poudre lyophilisée permet de reconstituer une solution (ou une suspension ou un hydrogel) injectable. L'invention concerne en outre l'utilisation d'au moins un peptide tel que défini ci-dessus dans la préparation d'un médicament destiné à lutter contre l'infection par le virus de l'immunodéficience féline chez le chat. Les documents de la littérature cités dans la présente description y sont incorporés par référence. L'exemple suivant illustre l'invention. Exemple 1 : On a préparé par synthèse le peptide suivant : LQKWEDWVRWIGNIPQYL. On prépare une poudre lyophilisée à partir d'une solution aqueuse, stérile et apyrogène de ce peptide. Des solutions injectables peuvent être reconstituées à partir de cette poudre lyophilisée, avec du sérum apyrogène, pour former des solutions isotoniques injectables. Exemple 2 : De façon analogue, on a préparé par synthèse les peptides suivants : Peptide n 1 : QKWEDWVRWIGN ; Peptide n 2 : WEDWVRWIGNIP ; Peptide n 3 : QLQKWEDWVRWI ; Peptide n 4 : WEDWVRWI ; et Peptide n 5 : DWVRWI. On peut préparer des peptides analogues en remplaçant R par G dans la formule des peptides n 1 à 5. De façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, on a préparé avec ces peptides des poudres lyophilisées et des solutions injectables. Exemple 3 : Essais pharmacologiques : Pour étudier l'inhibition de l'infectivité, on utilise une lignée de lymphocytes T établie à partir de cellules mononucléées du sang périphérique d'un chat séronégatif au FIV et au FELV. L'obtention de cette lignée a été décrite par Del Mauro et al., J. Virol. 72 : 2199-2207 (1998). Ces cellules sont cultivées en milieu RPMI 1640 supplémenté en sérum foetal bovin (10 %) contenant par millilitre 5 jj. g de concanavaline A et 20 U d'interleukine-2 humaine. Les virus utilisés sont issus des souches FIV-M2 et FIV-Pet. Dans des puits de plaques de microtitrage, on introduit le peptide étudié à des concentrations finales pouvant varier de 0,0005 à 50 jlg/ml, des cellules MBM (105 cellules par puits) et le virus FIV à des doses égales à 10 fois la TCIDso (doses infectieuses de cultures de tissus 50 %). Après 5 heures à 37 C, on rince les cellules et on rajoute du milieu de culture frais. 4 jours plus tard, on élimine 100 J. l de surnageant que l'on remplace par du milieu frais dans chaque puits. La croissance des cultures est arrêtée au jour 8 et on mesure la quantité d'antigène p25 produit par la multiplication de FIV, à l'aide d'un test ELISA tel que décrit par Lombardi, S. et al., Virology 220,274-284 (1996). On détermine les concentrations inhibitrices 50 % (ICso). Les résultats obtenus sont résumés dans le Tableau suivant : Peptide n'IC50 (pg/ml) FIV-M2 FIV-Pet 1 0, 25 0,18 2 0, 04 0,09 3 0, 03 0,04 4 0, 06 0, 05 5 0, 15 0, 07 TABLEAU 1 1. GP36FIVPE QLQKWEDWVRWIGNIPQYLKG 2. GP36~FIVWO QLQEWEDWVGWIGNIPQYLKG 3. GP36~FIVU1 QLQKWEDWVGWIGNIPQYLKG 4. GP36~FIVU2 QLQEWEDWVGWLGNIPRYLKG 5. GP36~FIVU8 QLQEWEDWVGWIGNIPQYLKG 6. GP36FIVSD KLQNWQDWMGWIGKIPQYLKG 7. GP36~FIVT2 QLQKWENWVGWIGKIPQYLKG 8. Séq. consensus QLQKWEDWVGWIGNIPQYLKG REVENDICATIONS 1. Peptide dont la séquence contient au moins 6 et au plus 18 résidus d'acides aminés et est incluse dans la séquence peptidique suivante : XiLQX2WX3X4WXsX6WIGX7lPXgYLKG dans laquelle : Xl représente un résidu d'acide aminé choisi parmi K, R et Q X2 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi K, R, Q, E et N X3 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi E et Q X4 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi D et N Xs représente un résidu d'acide aminé choisi parmi V et M X6 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi K, R, Q et G X7 représente un résidu d'acide aminé choisi parmi N, K, R et Q Xg représente un résidu d'acide aminé choisi parmi Q, R et K, et les lettres autres que X sont les symboles utilisés pour désigner les acides aminés selon le code à une lettre. 2. Peptide selon la revendication 1, contenant au moins la séquence peptidique : X4WXsX6W. 3. Peptide selon la revendication 1 ou 2, contenant au moins la séquence peptidique : WX3X4WXSX6W, 4. Peptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, contenant au moins la séquence peptidique : WX3X4WXsX6WIGX7IP ou LQX2WX3X4WXsX6W. 5. Peptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, contenant au plus 17 résidus d'acides aminés. 6. Peptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, contenant au plus 15, ou au plus 12, résidus d'acides aminés. 7. Peptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, ayant la séquence peptidique suivante : LQX2WX3X4WXsX6WIGX7IPX8YL LQX2WX3X4WXsX6WIGX7lPX8Y QX2WX3X4WX5X6WIGX7IPX8 QX2WX3X4WXsX6WIGX7 WX3X4WX5X6WIGX7IP XlLQX2WX3WXSX6WI WX3X4WXsX6WI X4 WX5X6 WI. 8. Peptide selon la revendication 7, choisi parmi : LQKWEDWVRWIGNIPQYL (SEQ ID No. 1) LQKWEDWVRWIGNIPQY (SEQ ID No. 2) QKWEDWVRWIGNIPQ (SEQ ID No. 3) QKWEDWVRWIGN (SEQ ID No. 4) WEDWVRWIGNIP (SEQ ID No. 5) QLQKWEDWVRWI (SEQ ID No. 6) WEDWVRWI (SEQ ID No. 7) DWVRWI (SEQ ID No. 8) LQKWEDWVGWIGNIPQYL (SEQ ID No. 9) LQKWEDWVGWIGNIPQY (SEQ ID No. 10) QKWEDWVGWIGNIPQ (SEQ ID No. 11) QKWEDWVGWIGN (SEQ ID No. 12) WEDWVGWIGNIP (SEQ ID No. 13) QLQKWEDWVGWI (SEQ ID No. 14) WEDWVGWI (SEQ ID No. 15) DWVGWI (SEQ ID No. 16). 9. Peptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, sous la forme d'un dérivé N-acétylé. 10. Peptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel un résidu de proline, s'il est présent, est hydroxylé. 11. Médicament contenant un peptide tel que défini dans l'une quelconque des revendications précédentes, et éventuellement un véhicule pharmaceutique. 12. Utilisation d'un peptide tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans la fabrication d'un médicament destiné à lutter contre l'infectivité du virus FIV chez le chat.