Brevet FR2822022A1 — publié le 20020920

DESCRIPTION L'invention concerne le domaine de l'agriculture et a plus particulièrement pour objet le remplacement du bromure de méthyle dans tous ses usages de traitement des sols destinés à l'agriculture en vue d'y contrôler les nématodes, champignons pathogènes, insectes nuisibles, adventices et bactéries. Actuellement, le traitement des sols destinés à l'agriculture intensive, notamment ceux destinés à l'arboriculture, à l'horticulture et au maraîchage, est effectué très majoritairement par fumigation au bromure de méthyle (consommation mondiale supérieure à 70 000 tonnes), ce composé présentant à l'état gazeux d'excellentes propriétés nématicide, fongicide, insecticide, bactéricide et herbicide. Malheureusement, ce composé contribue à l'appauvrissement de la couche d'ozone et, conformément à l'accord de Montréal (1992), il ne devra plus être utilisé en 2005 dans les pays industrialisés. Il apparaît donc un besoin urgent de proposer aux utilisateurs des substituts aussi efficaces et les plus respectueux possibles de l'environnement. Malgré les efforts continus mis en oeuvre aussi bien par les organisations gouvernementales que par les organismes privés, il n'a été trouvé à ce jour aucun substitut capable, à lui seul et au même coût, de remplacer le bromure de méthyle dans tous ses usages avec la même efficacité (cf. USDA Report, Vol. 6, N. 4 et Citrus & Vegetable Magazine, Methyl bromide Update : Spring 2000). En effet, les principaux substituts actuellement proposés sont très toxiques et nécessitent donc une protection respiratoire chère et peu commode (cas du dichloropropène) ou bien ils sont délicats à appliquer et conduisent donc à des résultats variables (cas du Métam-sodium et du tétrathiocarbonate) ou bien encore ils sont nettement plus coûteux (cas de l'iodure de méthyle). A notre connaissance, les seuls composés soufrés envisagés comme subs- tituts au bromure de méthyle sont l'isothiocyanate de méthyle (MITC), le tétrathiocar- bonate ou des composés générateurs de MITC comme le Métam-sodium et le Dazomet. On trouve dans la littérature quelques indications éparses sur l'activité de certaines substances soufrées à l'égard de divers organismes pathogènes, mais on n'y trouve aucune indication d'une activité pesticide globale de ces substances. L'activité insecticide des vapeurs issues de broyats d'allium contenant entre autres des disulfures et des thiosulfinates a été mise en évidence dans la demande de brevet FR-A-2 779 615 proposant l'emploi de ces broyats pour le traitement par fumigation des denrées stockées. Cependant, pour l'homme de métier, il n'est a priori pas évident qu'un fumigant pour denrées stockées puisse convenir pour l'application en traitement des sols. En effet, comme expliqué à la colonne 3 (lignes 8-54) du brevet US 5 518 692 préconisant l'iodure de méthyle comme substitut au bromure de méthyle, le sol est un milieu beaucoup plus complexe que les denrées stockées (humidité non uniforme, particules de diamètres très variables, etc...) et les organismes à contrôler sont beaucoup plus nombreux et variés dans le cas des sols. Il a maintenant été trouvé que les composés soufrés de formule générale : dans laquelle R représente un radical alkyle ou alcényle contenant de 1 à 4 atomes de carbone, n est égal à 0,1 ou 2, x est un nombre allant de 0 à 4, et R'représente un radical alkyle ou alcényle contenant de 1 à 4 atomes de carbone ou, seulement si n = x = 0, un atome d'hydrogène, possèdent toute l'activité pesticide requise pour la désinfection des sols destinés à la culture, à savoir essentiellement les propriétés nématicide, fongicide et insecticide, tout en étant inoffensifs (non phytotoxiques) pour les cultures envisagées. Cet ensemble de propriétés très rare fait des composés de formule (1) des substituts au bromure de méthyle particulièrement intéressants, et cela d'autant plus qu'ils sont déjà présents dans la nature en provenance de la dégradation naturelle des crucifères et des allium. D'autre part, ne contenant pas d'atomes d'halogène générateurs de radicaux halogénés responsables de la destruction catalytique de l'ozone stratosphérique, les composés de formule (1) sont sans danger pour la couche d'ozone. Comme exemples non limitatifs de radicaux R et R', on peut citer les radicaux méthyle, propyl, allyle et propènyle. Parmi les composés de formule (1), on préfère les disulfures (n =0, x = 1) et plus particulièrement le diméthyldisulfure (DMDS). Les composés de formule (1) peuvent être utilisés à l'état pur ou sous la forme d'une émulsion aqueuse ou d'une solution dans l'eau, dans un solvant organi- que ou dans un produit liquide pouvant lui-même avoir une activité pour le traitement des sols. Les émulsions aqueuses peuvent être obtenues en additionnant un ou plusieurs tensio-actifs au composé de formule (1), puis en rajoutant au mélange obtenu une certaine quantité d'eau de façon à obtenir une émulsion stable. Sont plus particulièrement adaptés à la préparation des émulsions aqueuses les tensio-actifs plutôt hydrophiles, c'est-à-dire ceux ayant une HLB ("Hydrophile Lipophile Balance") supérieure ou égale à 8, qui peuvent être de nature anionique, cationique, non ionique ou amphotère. Comme exemples non limitatifs de tensio-actifs anioniques, on peut citer : - les sels de métal alcalin, alcalino-terreux, d'ammonium ou de triéthanolamine des acides alkyl-, aryl-au alkylaryl-sulfoniques, des acides gras à pH basique, de l'acide sulfosuccinique ou des esters alkyliques, dialkyliques, alkylaryliques ou polyoxyéthylène-alkylaryliques de l'acide sulfosuccinique, - les sels de métal alcalin ou alcalino-terreux des esters d'acide sulfurique, phosphorique, phosphonique ou sulfoacétique et d'alcools gras saturés ou insaturés, ainsi que leurs dérivés alkoxylés, -) es sets de métal alcalin ou alcalino-terreux des acides alkyl aryl sulfuriques, alkyl aryl phosphoriques, alkyl aryl sulfoacétiques, ainsi que leurs dérivés alkoxylés. Les tensio-actifs cationiques utilisables sont, par exemple, ceux de la famille des alkyl ammonium quaternaires, des sulfonium ou des amines grasses à pH acide, ainsi que leurs dérivés alkoxylés. Comme exemples non limitatifs de tensio-actifs non ioniques, on peut citer les alkyl phénol éthoxylés, les alcools éthoxylés, les acides gras éthoxylés, les esters gras de glycérol ou les dérivés gras du sucre. Les tensio-actifs amphotères utilisables sont, par exemple, les alkyl bétaïnes ou les alkyl taurines. Les solvants organiques utilisables pour dissoudre les composés de formule (1) selon l'invention sont les hydrocarbures, les alcools, les éthers, les cétones, les esters, les solvants halogénés, les huiles minérales ainsi que les solvants polaires aprotiques tels que le diméthylformamide, le diméthylsulfoxide ou la N-méthylpyrrolidone. Conviennent particulièrement bien les alcools inférieurs, l'acétone et leurs mélanges avec l'eau. Les produits liquides à activité pesticide particulièrement adaptés pour être mélangés aux composés de formule (1) selon l'invention sont des produits purs tels que le 1, 3-dichloropropène ou la chloropicrine (Cl3C-NO2) eux-mêmes utilisés en tant que fumigants, les solutions aqueuses de produits tels que le Métam-sodium (CH3- NH-CS2-Na") ou le tétrathiocarbonate de sodium (Na2CS4) également utilisés comme fumigants, ou tout autre produit ayant une activité complémentaire ou synergique avec les composés de formule (1). Les composés de formule (1) et les compositions les contenant peuvent être appliqués suivant l'une quelconque des méthodes classiques d'introduction de pesticides dans le sol, comme par exemple l'injection par coutres qui permet d'introduire le produit en profondeur, la pulvérisation sur le sol, le goutte à goutte par un système d'irrigation classique ou l'aspersion du type"sprinkler". Après l'introduction du produit dans le sol et une éventuelle répartition (par exemple par une roto-bêche dans le cas d'une injection dans le sol), la surface du sol peut éventuellement être fermée, soit par un glaçage de la surface au moyen d'un rouleau lisseur, soit par un film plastique. Les doses de composé (1) à utiliser pour obtenir l'effet désiré se situent généralement entre 150 et 1000 kg/ha et dépendent du niveau d'infestation du sol, de la nature des ravageurs et des organismes pathogènes, du type de culture et de sol, et des méthodes d'application. A ces doses, on observe l'effet nématicide, fongicide, insecticide et herbicide recherché (réduction de l'ordre d'au moins 90% de la population des espèces nuisibles) et, comme dans le cas du bromure de méthyle, il faut attendre quelques jours, en fonction de la substance introduite et du type de sol et de culture, avant d'effectuer la semence. On ne sortirait pas du cadre de la présente invention en associant le traitement par un composé de formule (1) avec un traitement (simultané ou non) avec une ou plusieurs autres substances pesticides. Les exemples suivants illustrent l'invention sans la limiter. EXEMPLE 1 L'effet nématicide du di méthyldi sulfure (DMDS), du dipropy ! disulfure (DPDS) et du thiosulfinate de diallyle (Allicine), trois produits majeurs de la dégradation des Allium, a été démontré par des tests in-vitro réalisés sur des larves de Meloidogyne arenaria, une espèce parmi les nématodes à galles des racines, très nocifs, extrê- mement polyphages et des plus répandus dans le monde, sur la plupart des cultures légumières, en particulier celles de la tomate et du fraisier qui sont les cultures consommant le plus de bromure de méthyle. Matériel et méthodes Les larves juvéniles de second stade (le stade libre et infestant) sont plongées 24 heures dans la solution à tester, puis on compte le nombre de larves paralysées avant de les transférer dans de l'eau pure pour encore 24 heures. A l'issue des 48 heures ainsi écoulées, on compte à nouveau les larves paralysées et le lendemain les larves réellement mortes. L'élevage des nématodes a été réalisé sur plants de tomates. Les tests ont été effectués avec des solutions aqueuses de DMDS à 0, 0001 %, 0, 1%, 1% et 5% en masse, de DPDS à 1%, 5% et 10% en masse, et d'allicine à 0,0003%, 0,0015% et 0,003% en masse, en comparaison avec un témoin d'eau pure, et répétés cinq fois. L'activité ovicide a été également recherchée selon ces même modalités, en comptant le nombre d'éclosions après 5 à 20 jours suivant l'exposition aux produits. Résultats A une concentration inférieure à 1 %, le DMDS n'a qu'une très faible activité nématostatique et aucune activité nématicide. A une concentration supérieure ou égale à 1 %, le DMDS et le DPDS présentent une importante activité nématostatique et nématicide, comme le montrent clairement les tableaux 1 et 2. Une efficacité totale (100 % de mortalité) est obtenue pour des concentrations supérieures ou égales à 1 % dans le cas du DPDS. L'allicine présente également une activité nématostatique et nématicide importante à des concentrations beaucoup plus faibles comme le montre le tableau 3. Néanmoins, une efficacité totale (100 % de mortalité) n'a pas été recherchée dans ce cas. Tableau 1 : Efficacité du diméthyl disulfure (DMDS) sur les larves Concentration Taux d'immobilité Taux d'immobilité Taux de mortalité massique (%) après 24 h (%) après 48 h (%) après 72 h (%) 0 (Témoin) 8 6 9 1 72 84 80 5 97 98 98 Tableau 2 : Efficacité du dipropyl disulfure (DPDS) sur les larves Concentration Taux d'immobilité Taux d'immobilité Taux de mortalité massique (%) après 24 h (%) après 48 h (%) après 72 h (%) 0 (Témoin) 8 7 9 1 89 100 100 5 93 100 100 10mm100100 Tableau 3 : Efficacité de l'allicine sur les larves Concentration Taux d'immobilité Taux d'immobilité Taux de mortalité massique (%) après 24 h (%) après 48 h (%) après 72 h (%) 0 (Témoin) 2 10 8 0,0003 7 49 12 0,0015 19 85 45 0, 003 49 65 63 Comme il ressort des tableaux 4 et 5, le DMDS et le DPDS montrent égale- ment une activité ovicide très importante. Dans les deux cas, on observe environ 97 % de réduction du nombre d'éclosions le dernier jour d'observation. Tableau 4 : Efficacité du DMDS sur les caufs de nématodes Concentration Nombre d'éclosions (en cumulé) massique (%) J5 J10 J13 J17 O (Témoin) 141 179 184 184 1 7 7 7 7 5 2 2 5 5 10 0 2 5 5 Tableau 5 : Efficacité du DPDS sur les oeufs de nématodes Concentration Nombre d'éclosions (en cumulé) massique (%) J5 J8 J12 J15 J19 (O) Témoin 550 810 990 1030 1030 1 117 183 200 200 200 5 67 67 67 67 67 10 33 33 33 33 33 EXEMPLE 2 L'effet fongicide du DMDS a été démontré sur quatre des organismes pathogènes communs et dommageables aux principales cultures maraîchères décrits dans l'article"Désinfecter les sols autrement"publié en juin 1999 dans la revue du CTIFL (Centre technique interprofessionnel des fruits et légumes). Ces quatre orga- nismes sont les suivants : # Phytophthora cactorum, l'un des représentants les plus connus de la famille des Phytophthora, champignons polyphages attaquant particulièrement la tomate, le poivron et le fraisier, ces trois cultures représentant la majorité de la consommation du bromure de méthyle au niveau mondial. Phtytophthora cactorum, en particulier, attaque principalement le fraisier et les arbres fruitiers. Rhizoctonia solani : groupe de pathogènes polyphages très important dans le genre des Rhizoctonia et s'attaquant à de très nombreuses cultures maraîchères dont le poivron et la laitue. Sclerotinia sclerotiorum : champignon polyphage attaquant particulièrement les cultures de melons. Sclerotium rolfsii. champignon également polyphage que l'on trouve par exemple sur les cultures de melon et de courgette. Ces quatre champignons ont été étudiés sous la forme suivante : - Sclérotinia sclerotiorum : sclérotes - Sclerotium rolfsii : sclérotes - Rhizoctonia solani : grains d'orge colonisés (mycélium et sclérotes) - Phytophthora cactorum : grains de millet colonisés (mycélium, sporanges et oospores) Préparation des champignons (24 h avant l'opération de gazage) 1. Préparation des sclérotes de Sclerotinia sclerotiorum et de Scierotium roifsii Les champignons sont cultivés sur milieu malt gélosé jusqu'à l'obtention des sclérotes. Les sclérotes sont prélevés stérilement et stockés à sec en boites de Pétri vides jusqu'à leur utilisation. Les sclérotes utilisés pour l'essai ont plus de 3 mois et sont parfaitement dormants. 2. Préparation de Phytophora cactorum et de Rhizoctonia solani : Le millet et l'orge servant à la multiplication des deux champignons sont humectés avec de l'eau ultra pure par immersion pendant 24 heures. Les grains sont ensuite légèrement égouttés puis répartis en fioles et autoclavés (3 autoclavages à 110 C pendant 20 minutes, 3 fois à 24 heures d'intervalle). Des fragments de culture de champignons sont introduits dans les fioles qui sont ensuite incubées à 22 C +/- 2 C (lumière blanche 18h) jusqu'à l'obtention d'une colonisation homogène. Les grains sont ensuite sortis des fioles stérilement, séchés au flux stérile d'une hotte puis stockés à sec jusqu'à leur utilisation. Conditions de gazage et de désorption L'ensemble des lots de champignons à traiter est placé durant quelques heures à la température de l'essai (20 C). Entre 35 et 300 unités de champignons ou "propagules" (grains ou sclérotes) sont soumis au gazage lors de chaque essai. Chaque enceinte de fumigation comprenant une ou plusieurs espèces de champignons correspond à un ballon de verre étanche au gaz d'un volume de 11 litres. Chaque ballon est équipé de piquages, inférieur pour l'introduction du DMDS liquide, supérieur pour la prise d'échantillon d'air par seringue. Avant l'introduction du gaz, un vide partiel (-500 mbars) est effectué dans le ballon avec une pompe à vide. Ceci permet, d'une part, d'éviter le phénomène de surpression dû à l'expansibilité du DMDS dans le ballon et, d'autre part, de favoriser une meilleure homogénéité du mélange air-gaz dans les premières secondes qui suivent l'injection. Le DMDS (pesé précisément au mg) est injecté à la seringue par voie liquide au travers du piquage bas c'est-à-dire sous le grillage placé à mi-hauteur du ballon et supportant les lots de champignons. Après l'introduction du produit, la pression interne du ballon est rétablie à la pression atmosphérique. Un agitateur magnétique fonctionne pendant toute la durée du traitement pour bien homogénéiser le mélange air-gaz. A la fin du gazage, le couvercle du ballon est enlevé. Une minute après cette opération, les lots de champignons gazés sont sortis et laissés à l'air libre durant 15 minutes pour désorption du DMDS. Ils sont ensuite transvasés sur une boîte de Pétri, celle-ci restant ouverte durant 5 minutes pour permettre une parfaite désorption du gaz. MESURE DES CONCENTRATIONS EN GAZ Par CPG avec détecteur FID, on mesure la concentration moyenne (C en g/m3) de DMDS dans l'enceinte de fumigation après homogénéisation du gaz dans l'air de l'enceinte et, compte tenu de la durée d'exposition (T en heures), on calcule le produit CT (g. h/m3) qui, dans le domaine de la fumigation, est le paramètre clé à considérer, puisque l'efficacité biologique d'un gaz envers un agent pathogène donné n'est effective que si ce dernier a été exposé à une certaine concentration moyenne C durant une certaine durée d'exposition T, c'est-à-dire à une certaine valeur du produit CT, valeur (ou dose) que l'on peut atteindre de différentes façons : faibles concentrations et longue durée d'exposition ou l'inverse. Conditions de lecture des résultats Grains : Après gazage, les grains sont déposés sur un milieu sélectif à raison de 5 à 10 par boite de Pétri de 90 mm (Rhizoctonia : Malt agar ; Phytophthora-Malt agar +Pimaricine, Ampicilline, Rifampicine, Benomyl). Sclérotes : Après gazage, les sclérotes sont désinfectés superficiellement avec de l'eau de Javel (1 % de NaOCI), rincés deux fois à l'eau stérile, puis déposés à raison de un par boite sur un milieu Malt agar-Chloramphénicol (200ppm). Expression des résultats On note quotidiennement le nombre de propagules donnant naissance à une colonie (propagules viables), jusqu'à ce qu'il n'y ait plus d'évolution, et au maximum 19 jours après le jour de gazage. Les résultats sont exprimés en : -viabilité (V), c'est-à-dire le pourcentage de propagules viables ayant donné naissance à une colonie réduction de viabilité (Rv) par rapport au témoin, c'est-à-dire : Vtémo ! n-V Rv =--------------x 100 Vtémoln note de vigueur (Nm) : à chaque propagule ayant donné naissance à une colonie, on attribue une note (N) décrivant la rapidité de cette propagule à se développer ; cette note, égale à la différence entre le nombre de jours total d'observation (19 au maximum) et le nombre de jours entre le dépôt en boîte de Pétri et le développement de la colonie, est d'autant plus importante que l'apparition de la colonie est proche de la date de dépôt en boîte de Pétri. Pour chacun des essais, on effectue ensuite une moyenne (Nm) des notes attribuées. -réduction de note de vigueur (RNm) par rapport au témoin, c'est-à-dire : Nm RNm = 100------x 100 Nmtémoin RÉSULTATS 1. Efficacité biologique du DMDS sur Phytophtora cactorum Les résultats rassemblés dans le tableau 6 montrent clairement qu'à des doses CT supérieures à 2500 gh/m3 environ, l'efficacité fongicide progresse réguliè-rement avec la dose CT : baisse de la viabilité et de la note de vigueur. L'efficacité totale (0 % de viabilité) est obtenue aux environs de 3500 gh/m3. Tableau 6 : Récapitulatif de l'ensemble des lectures exprimées en terme de viabilité et de vigueur sur Phytophthora cactorum (X = nombre de grains) Viabilité Vigueur X C T CT V RV Nm RNm (sur 12 jours) 60 17,46 24 419 91,7 6,8 7,7 15,5 60 26,04 24 625 100-1, 7 8, 05 11, 9 60 29,29 24703100839J 60 37,79 24 907 100-1, 7 7, 2 21, 2 60 15, 91 66 1050 95 5, 0 5, 5 43, 1 90 21,24 66 1402 97, 8 2, 2 6, 6 32, 2 60 30,96 48 1450 95 3, 4 5, 4 40, 7 90 28,77 66 1899 97, 8 2, 2 5, 6 42, 6 90 30,02 66 1981 97, 8 2, 2 5, 3 45, 7 60 51,25 48 2460 43, 3 55, 9 1, 7 81, 2 300 37,44 66 2471 nm* nm* nm* nm* 90 42,98 66 2837 16, 7 83, 3 0, 6 93, 6 300 45,06 66 2974 nm* nm* nm* nm* 90 48,02 66 3169 1, 1 98, 9 0, 05 99, 5 300 52,53 66 3467 0 100 0 100 * nm = non mesuré 2. Efficacité biologique du DMDS sur Rhizoctonia solani Les résultats rassemblés dans le tableau 7 montrent clairement qu'à des doses CT supérieures à 2000 gh/m3 environ, l'efficacité fongicide progresse réguliè-rement avec la dose CT : baisse de la viabilité et de la note de vigueur. L'efficacité totale (0 % de viabilité) est obtenue aux environs de 3500 gh/m3. Tableau 7 : Récapitulatif de l'ensemble des lectures exprimées en terme de viabilité et de vigueur sur Rhizoctonia solani (X = nombre de grains) Viabilité Vigueur X C T CT V RV Nm RNm (sur 11 jours) 60 17,46 24 419 100 0 9,0 0 60 26,04 24 625 100 0 8, 7 3, 1 70 29,29 24 703 100 0 8, 3 7, 3 70 37,79 24 907 100 0 7, 1 21, 6 65 15,91 66 1050 89, 2 10, 8 7, 0 22, 2 65 21,24 66 1402 96, 9 3, 1 7, 6 15, 0 65 30,96 48 1450 98, 5 1, 5 4, 4 51, 3 70 28,77 66 1899 84, 3 15, 7 6, 0 33, 2 75 30,02 66 1981 94, 7 5, 3 7, 4 17, 2 73 51,25 48 2460 11, 0 89, 0 0, 3 96, 2 286 37,44 66 2471 24, 1 75, 9 0, 6 92, 0 90 42,98 66 2837 2, 2 97, 8 0, 1 98, 4 286 45,06 66 2974 9, 4 90, 6 0, 1 98, 4 80 48,02 66 3169 1, 2 98, 8 0, 05 99, 3 290 52,53 66 3467 0 100 0 100 3. Efficacité biologique du DMDS sur Sclerotinia scierotiorum Les résultats rassemblés dans le tableau 8 suivant montrent clairement qu'à des doses CT supérieures à 1000 gh/m3 environ, l'efficacité fongicide progresse régulièrement avec la dose CT : baisse de la viabilité et de la note de vigueur. L'efficacité totale (0 % de viabilité) est obtenue aux environs de 3500 gh/m3, en considérant que le point CT 3467 est un point normal. Tableau 8 : Récapitulatif de l'ensemble des lectures exprimées en terme de viabilité et de vigueur sur Sclerotinia sclerotiorum (X = nombre de sclérotes) Viabilité Vigueur X C T CT V RV Nm RNm (sur 19 jours) 39 17,46 24 419 89, 7-3, 0 13, 3-3, 6 41 26, 04 24 625 87, 8-0, 8 12, 8 0, 1 41 29, 29 24 703 85, 4 2, 0 12, 6 2, 2 38 37,79 24 907 81, 6 6, 3 12, 0 6, 6 67 15, 91 66 1050 41, 8 56, 1 5, 1 63, 6 62 21,24 66 1402 46, 8 50, 9 1, 3 90, 6 47 30, 96 48 1450 29, 8 65, 8 1, 0 92, 1 64 28,77 66 1899 29, 6 68, 9 3, 6 74, 8 54 30,02 66 1981 20, 3 78, 7 2, 7 81, 2 41 51, 25 48 2460 14, 6 83, 2 0, 7 94, 9 170 37,44 66 2471 32, 9 67, 1 4, 6 70, 5 64 42,98 66 2837 14, 1 85, 2 1, 8 87, 5 170 45,06 66 2974 11, 2 88, 8 1, 6 89, 9 64 48,02 66 316901000100 170 52,53 66 3467 32, 3 67, 7 3, 3 79, 0 4. Efficacité biologique du DMDS sur Scierotîum rolfsii Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau 9 suivant. Pour ce champi- gnon, on a observé une légère dégradation de la qualité de l'inoculum au cours du temps. Néanmoins, la viabilité et la vigueur sont fortement affectées à partir des CT de 900 à 1000 gh/m3 et l'efficacité totale est obtenue entre 2000 et 2500 gh/m3. Tableau 9 : Récapitulatif de l'ensemble des lectures exprimées en terme de viabilité et de vigueur sur Sclerotium rolfsii (X = nombre de sclérotes) Viabilité Vigueur X C T CT V RV Nm RNm (sur 19 jours) 44 17,46 24 419 59,1 33,7 5,1 40,9 41 26, 04 24 625 53, 7 39, 8 4, 8 44, 3 37 29,29 24 703 51, 4 42, 4 4, 4 48, 7 37 37,79 24 907 16, 2 81, 8 1, 4 84, 2 58 15,91 66 1050 27, 6 68, 0 2, 1 71, 1 60 21,24 66 1402 18, 3 78, 7 1, 3 81, 8 40 30,96 48 1450 15, 0 83, 2 0, 7 91, 8 65 28,77 66 1899 3, 1 96, 4 0, 2 96, 8 70 30,02 66 1981 4, 3 95, 0 0, 3 95, 1 40 51,25 48 2460 10, 0 88, 8 0, 4 94, 7 170 37,44 66247101000100 90 42,98 66 283701000100 170 45,06 66 2974 0 100 0 100 80 48,02 66 3169 0 100 0 100 170 52,53 66 346701000100 En résumé, pour les quatre espèces de champignons étudiés, le DMDS provoque une décroissance de la population très nette à partir de doses CT comprises entre 2000 et 2500 gh/m3, voire aux environs de 1000 gh/m3 dans le cas de Sclerotinia et Sclerotium, et une mortalité totale pour des doses CT comprises entre 3000 et 3500 gh/m3, voire entre 2000 et 2500 gh/m3 pour Sclerotium. EXEMPLE 3 L'absence de phytotoxicité du DMDS à une dose de 150 kg/ha de DMDS a été démontrée, d'une part, par des tests d'inhibition de germination de semences de laitue et de tomate et, d'autre part, par un essai plein-champ de culture de laitue. Dans les deux cas, le DMDS a été appliqué sous la forme d'une émulsion aqueuse obtenue en ajoutant de l'eau à un concentré émulsionnable de DMDS. Ce concentré émulsionnable a été obtenu en mélangeant à température ambiante 3638,9 g de DMDS pur avec 202 g de Toximule D et 202 g de Toximulo H, deux tensio-actifs commercialisés par la Société Stepan à base d'alkylbenzènesulfonate et d'alkylphénol alkoxylé en solution alcoolique. Exemple 3a : Absence de phytotoxicité du DMDS sur la germination de semences de laitue et tomate 1. Matériel et méthode Réactifs bioloqiques : - Semences de tomate : Lycopersicon Iycopersicum, variété Super Marmande - Semences de laitue : Lactuca sativa, variété Reine de Mai Caractéristiques du sol brut : - Distribution granulométrique par kg de sol sec : Sable grossier : 879 g/kg Sable fin : 17 g/kg Limon grossier : 27 g/kg Limon fin : 36 g/kg Argile : 21 g/kg Divers : 20 g/kg - Capacité totale de rétention d'eau : 31,4 g/100 g sec Application des traitements + Sol témoin = sol brut additionné de 98 g d'eau par kg de sol, pour atteindre 50% de sa capacité totale de rétention d'eau. l+ Sol de référence = sol témoin additionné de chlorure mercurique (HgCI2), à hauteur de 5 g par litre d'eau contenue dans le sol. + Sol traité au DMDS = sol brut additionné de 0,22 g de concentré émulsionnable par kg de sol. Cette dose correspond, par extrapolation, à une application de 150 kg de DMDS/ha, en supposant l'incorporation uniforme sur une épaisseur de sol de 5 cm, pour une densité apparente du sol de 1,5. Le produit a été appliqué après dilution dans le volume d'eau nécessaire pour humidifier le sol à 50 % de sa capacité totale de rétention d'eau. Pour chaque type de traitement, il a été constitué une vingtaine d'aliquots de sol, valant chacun pour 200 g de sol sec. Ces aliquots ont été déposés dans des gobelets en polyéthylène de qualité alimentaire, recouverts d'un film en polyéthylène micro-perforé permettant les échanges gazeux, et placés en incubation à 21 C + 2 C, à l'obscurité. Epreuves de qermination Des épreuves de germination ont été initiées immédiatement après l'application des traitements (Jo), puis après 2 jours (Jo+2) et 7 jours (Jo+7) d'incubation. A chacune de ces périodes et pour chaque type de traitement, trois des aliquots de sols placés en incubation ont été sélectionnés au hasard, de manière à constituer trois réplicats de substrat servant à la mise en germination de 50 semences (laitue ou tomate). Pour ce faire, le contenu de chacun des gobelets sélectionnés a été transvasé dans une barquette en polyéthylène de qualité alimentaire, de 500 ml de capacité totale, de manière à constituer une couche mince sur laquelle 50 semences ont été réparties. Les barquettes ont ensuite été recouvertes d'un film en polyéthylène micro-perforé propre à limiter la déshydratation du substrat, tout en permettant les échanges gazeux. Les observations ont été conduites à intervalles réguliers jusqu'à stabilisation du taux de germination. 2. Résultats Tests de germination sur semences de tomate Les résultats sont reportés ci-après dans le tableau 10 pour chaque période d'épreuve prise respectivement, tels qu'ils ont été observés 10 jours après la mise en germination des semences. Tableau 10 : Semences de tomate-Taux de germination observés 10 jours après l'introduction des semences, immédiatement après l'application des traitements (Jo), puis après 2 jours (Jo+2) et 7 jours (Jo+7) d'incubation des sols Période d'épreuve après mise en incubation des sols Modalité Réplicat Jo Jo+2 Jo+7 Témoin 1 82, 0 90,0 86,0 2 78, 0 86, 0 88, 0 3 90, 0 94, 0 92, 0 Moyenne 83, 3 90, 0 88, 7 Référence 1 0, 0 0,0 8,0 2 0, 0 0, 0 2, 0 3 0, 0 0, 0 12, 0 Moyenne 0,0 0,0 7,3 DMDS 1 82, 0 78, 0 88, 0 2 92, 0 70, 0 86, 0 3 74,0 84,0 92,0 Moyenne 82,7 77,3 88,7 A chaque période, un taux de germination sur sol témoin supérieur à 82 % (taux minimal exigé pour la commercialisation) a été observé. Les trois séries d'épreuves ont donc été validées. Dans tous les cas, le taux de germination observé dans la modalité DMDS est resté comparable à celui de la modalité témoin, et ce, quel que soit le délai entre l'application du traitement et la mise en germination des semences. A titre de comparaison, le taux de germination est resté nul ou faible dans la modalité traitée au chlorure de mercure. On peut donc conclure que le traitement opéré avec le DMDS est sans effet indésirable sur la germination des semences de tomate. Tests de germination sur semences de laitue Les résultats sont reportés ci-après dans le tableau 11 pour chaque période d'épreuve prise respectivement, tels qu'ils ont été observés 16 jours après la mise en germination des semences, Tableau 11 : Semences de laitue-Taux de germination observés 16 jours après l'introduction des semences, immédiatement après l'application des traitements (Jo), puis après 2 jours (Jo+2) et 7 jours (Jo+7) d'incubation des sols Période d'épreuve après mise en incubation des sols Modalité Réplicat Jo Jo+2 Jo+7 Témoin 1 48, 0 54, 0 66, 0 2 54, 0 60, 0 66, 0 3 58, 0 58, 0 62, 0 Moyenne 53, 3 57, 3 64, 7 Référence 1 0,0 0,0 0,0 2 0, 0 0, 0 0, 0 3 0,0 0,0 0,0 Moyenne 0, 0 0, 0 0, 0 DMDS 1 46, 0 60, 0 54, 0 2 60, 0 52, 0 82, 0 3 52, 0 58, 0 58, 0 Moyenne 52, 7 56, 7 64, 7 Dans tous les cas, le taux de germination sur sol témoin est resté inférieur à 82 %. Les trois séries d'épreuves ont néanmoins été validées en raison de la reproductibilité des résultats sur sol témoin, entre les trois séries d'épreuves à Jo, Jo+2 et Jo+7. On pense que l'âge des semences (supérieur à 1 an) et le faible taux de germination à l'origine (83 %) peuvent être responsables des faibles valeurs observées à l'issue des épreuves. Dans tous les cas, le taux de germination observé dans la modalité DMDS est resté comparable à celui de la modalité témoin, et ce, quel que soit le délai entre l'application du traitement et la mise en germination des semences. A titre de comparaison, le taux de germination est resté nul dans la modalité traitée au chlorure de mercure. On peut donc conclure que le traitement opéré avec le DMDS est également sans effet indésirable sur la germination des semences de laitue. Exemple 3b : Absence de phytotoxicité sur la laitue du DMDS, appliqué à 150 kg/ha, en plein champ, sous serre. 1. Matériel et méthodes Variété de laitue : Sprintia Traitement : Le concentré émulsionnable de DMDS est émulsionné avec 12 litres d'eau par kg de concentré, appliqué à l'aide d'un pulvérisateur à jet, puis incorporé sur une profondeur d'environ 5 cm avec une fraise rotative. Le sol est ensuite bâché par un film de polyéthylène noir. Plantation : 7 jours après le traitement, à raison de 160 000 pieds/ha Récolte : 2 mois et 20 jours après plantation 2. Résultats Des observations visuelles sur le terrain à 1 et 2 mois après la plantation n'ont révélé aucun signe de phytotoxicité. A la récolte, le poids moyen des laitues traitées au DMDS a été mesuré et trouvé égal à 505 g, à comparer à 490 g pour le témoin sans traitement. On peut donc en conclure que le traitement effectué avec le DMDS est sans effet phytotoxique sur la laitue et qu'il améliore le rendement de la récolte. REVENDICATIONS 1. Traitement pesticide des sols agricoles, caractérisé en ce que l'on appli- que dans le sol au moins un composé soufré de formule générale : dans laquelle R représente un radical alkyle ou alcényle contenant de 1 à 4 atomes de carbone, n est égal à 0, 1 ou 2, x est un nombre allant de 0 à 4, et R'représente un radical alkyle ou alcényle contenant de 1 à 4 atomes de carbone ou, seulement si n = x = 0, un atome d'hydrogène. 2. Traitement selon la revendication 1 dans lequel les radicaux R et R'du ou des composé (s) de formule (1) sont choisis parmi les radicaux méthyle, propyle, allyle et propènyle. 3. Traitement selon la revendication 1 ou 2 dans lequel le composé soufré est un disulfure, de préférence le diméthyldisulfure. 4. Traitement selon l'une des revendications 1 à 3 dans lequel on applique le ou les composé (s) de formule (1) à une dose suffisante pour réduire d'au moins 90% la population des espèces nuisibles. 5. Traitement selon la revendication 4 dans lequel la dose est comprise entre 150 et 1000 kg/ha. 6. Traitement selon l'une des revendications 1 à 5, associé à un traitement (simultané ou non) avec une ou plusieurs autres substances pesticides.