Brevet FR2826010A1 — publié le 20021220

OLIGONUCLEOTIDES ANTISENS CAPABLES D'INHIBER LA FORMATION DES TUBES CAPILLAIRES PAR LES CELLULES ENDOTHELIALES. La présente invention a pour objet des oligonucléotides antisens capables d'inhiber l'expression de la protéine IRS-1 et d'inhiber la formation des tubes capillaires par les cellules endothéliales. Les oligonucléotides selon l'invention sont donc indiquées comme agent anti-angiogéniques. Ils sont également indiqués comme agents anti-multiplication cellulaire, en particulier comme agents anti-tumoraux. L'invention concerne aussi des compositions pharmaceutiques contenant lesdits oligonucléotides et l'utilisation desdits oligonucléotides comme réactifs d'analyse. L'angiogénèse est un processus fondamental par lequel de nouveaux vaisseaux sanguins se forment. Ce processus est essentiel dans plusieurs phénomènes physiologiques normaux tels que la reproduction, le développement ou encore la cicatrisation. Dans ces phénomènes biologiques normaux, l'angiogénèse est sous contrôle strict, c'est-à-dire qu'elle est déclenchée pendant une période courte (quelques jours), puis complètement inhibée. Cependant, plusieurs pathologies sont liées à une angiogénèse invasive et incontrôlée ; l'arthrite, une pathologie due à l'endommagement des cartilages par les néovaisseaux invasifs ; la rétinopathie diabétique où l'invasion de la rétine par les néovaisseaux conduit à l'aveuglement des malades ; la néovascularisation de l'appareil oculaire présente la cause majeure de l'aveuglement, et cette néovascularisation intervient dans une vingtaine de maladies de l'oeil ; ou encore la croissance et la métastase des tumeurs qui sont liées directement à la néovascularisation et sont dépendantes de l'angiogénèse. La tumeur stimule la croissance des néovaisseaux pour sa croissance elle-même. De plus, ces néovaisseaux sont des voies d'échappement des tumeurs qui joignent ainsi la circulation sanguine et provoquent des métastases dans des sites éloignés du foyer tumoral initial, comme le foie, le poumon ou l'os. La formation de néovaisseaux par les cellules endothéliales, l'angiogénèse, implique la migration, la croissance, et la différentiation des cellules endothéliales. La régulation de ces phénomènes biologiques est directement liée à l'expression génétique. Ainsi, les travaux de recherche réalisés dans le cadre de la présente invention ont permis d'identifier et de préparer des séquences d'acide nucléique impliquées dans la régulation de l'angiogénèse. D'autres travaux concernant l'angiogénèse ont permis de mettre en évidence une expression importante et une phosphorylation, au niveau d'un résidu tyrosine d'une protéine intracellulaire de 180 kDa, par les cellules endothéliales cultivées sur un tapis du collagène type I et stimulées par un facteur angiogénique tel que le bFGF. L'expression importante et la phosphorylation au niveau du résidu tyrosine de la protéine intracellulaire de 180 kDa accompagnent la formation des tubes capillaires par les cellules endothéliales. Cette protéine est déjà connue en tant que substrat du récepteur de l'insuline (nommé IRS-1). Elle a été, en effet, partiellement identifiée et étudiée par certains auteurs travaillant sur le diabète (Quon et al., J. Biol. Chem. (1994), 269 (45), 27920-27924). Ces auteurs ont étudié le rôle de l'IRS-1 sur (i) la translocation du GLUT 4 stimulée par l'insuline et (ii) le transport du glucose, dans des cellules adipeuses de rat. Pour ce faire, ils ont construit un plasmide contenant : un oligonucléotide bicaténaire, obtenu à partir de l'oligonucléotide sens de séquence SEQ ID No. 1 suivante : 5'-TCGATGTGAC GCTACTGATG AGTCCGTGAG GACGAAACTC TGGCCTAG-3', et -l'ADNc codant pour l'IRS-1 humain, et ont transfecté des cellules adipeuses de rat avec ledit plasmide. Les travaux menés dans le cadre de la présente invention ont mis en évidence le fait que l'expression de la protéine IRS-1 est également induite dans les cellules endothéliales lorsque ces dernières sont stimulées par le facteur angiogénique bFGF. Dans le cadre de l'invention, des oligonucléotides anti-sens du gène codant pour cette protéine ont été préparés. Ces oligonucléotides présentent des activités anti-angiogénique et antitumorale remarquables. Ils sont donc particulièrement utiles pour le traitement des maladies liées à une angiogénèse invasive et non contrôlée par des méthodes de thérapies géniques consistant à administrer à un individu une composition contenant au moins un de ces oligonucléotides. Ainsi, un oligonucléotide selon l'invention est constitué par la séquence nucléotidique de formule SEQ ID No. 2 suivante : 5'-TATCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCTGCGGAGCAGA-3', un fragment de celle-ci comprenant au moins 12 nucléotides contigus, ou leur dérivé. L'invention concerne tout particulièrement un oligonucléotide constitué par l'une des séquences nucléotidiques de formules SEQ ID No. 3 et 4 suivantes : 5'-TATCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3', 5'-TCGCCATGCTGCTGCGGAGCAGA-3', un fragment de celles-ci comprenant au moins 12 nucléotides contigus, ou leur dérivé. On entend par dérivé, une séquence capable de s'hybrider dans des conditions strictes avec l'une des séquences SEQ ID No. 2,3 ou 4 ou avec un fragment de celles-ci d'au moins 12 nucléotides contigus. A titre d'exemples d'oligonucléotides selon l'invention, on peut mentionner ceux de séquences suivantes : SEQ ID No. 5 : 5'-TATCCGGAGGGCCTGCCATGCTGCT-3' SEQ ID No. 6 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGCCATG CTGC-3' SEQ ID No. 7 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGCCATG CTG-3' SEQ ID No. 8 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGCCATG CT-3' SEQ ID No. 9 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGCCATG C-3' SEQ ID No. 10 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGCCATG-3' SEQ ID No. 11 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGCCAT-3' SEQ ID No. 12 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGCCA-3' SEQ ID No. 13 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGCC-3' SEQ ID No. 14 : 5'-TATCCGGAGG GCCTGC-3' SEQ ID No. 15 : 5'-TATCCGGAGG GCCTG-3' SEQ ID No. 16 : 5'-TATCCGGAGG GCCT-3' SEQ ID No. 17 : 5'-TATCCGGAGG GCC-3' SEQ ID No. 18 : 5'-TATCCGGAGG GC-3' SEQ ID No. 19 : 5'-CCGGAGG GCCTGCCATG CTGCT-3' SEQ ID No. 20 : 5'-GAGG GCCTGCCATG CTGCT-3' SEQ ID No. 21 : 5'-G GCCTGCCATG CTGCT-3' SEQ ID No. 22 : 5'-CTGCCATG CTGCT-3' SEQ ID No. 23 : 5'-TGCCATG CTGCT-3' Avantageusement, tout ou partie des liaisons phosphodiester des oligonucléotides de l'invention sont protégées. Cette protection s'effectue généralement par voie chimique, selon des méthodes classiques bien connues de l'homme du métier. Par exemple, on peut protéger les liaisons phosphodiester par une fonction thiol ou amine ou bien encore par un groupement phényle. De façon également aventageuse, les extrémités 5 \ - et/ou 3'- des oligonucléotides de l'invention sont protégées, par exemple en utilisant la technique indiquée précédemment pour protéger les liaisons phosphodiester. Les oligonucléotides de l'invention peuvent être synthétisés selon les techniques conventionnelles bien connues de l'homme du métier, par exemple à l'aide d'un synthétiseur d'ADN commercialisé par différents sociétés. Bien que leur mécanisme d'action ne soit pas entièrement élucidé, les oligonucléotides selon l'invention inhibent l'expression de la protéine IRS-1 au sein des cellules endothéliales. Ces oligonucléotides sont capables de bloquer la formation des néovaisseaux par les cellules endothéliales (i. e. inhibent l'angiogénèse), et de ce fait ils inhibent la multiplication des cellules tumorales chez la souris. L'invention a donc aussi pour objet une composition pharmaceutique pour l'inhibition du gène codant pour la protéine IRS-1 comprenant un oligonucléotide complémentaire d'une partie dudit gène ou d'un transcrit dudit gène. Une telle composition comprend avantageusement comme agent actif au moins un oligonucléotide défini précédemment, avantageusement associé dans ladite composition avec un véhicule acceptable. L'analyse des travaux réalisés dans le cadre de l'invention a donc permis de montrer que la protéine IRS-1 représente un constituant cellulaire essentiel dans le processus de l'angiogénèse. En effet, l'inhibition de l'expression de la protéine IRS-1 par lesdits oligonucléotides antisens conduit à l'inhibition de la formation de tubes capillaires par les cellules endothéliales. Les oligonucléotides selon l'invention et les compositions les contenant sont donc indiquées comme agent anti-angiogénique. Ils sont également indiqués comme agents anti-multiplication cellulaire, en particulier comme agents anti-tumoraux, et en conséquence sont tout particulièrement utiles pour le traitement des tumeurs. L'invention a donc pour objet l'utilisation desdits oligonucléotides pour la préparation d'une composition destinée au traitement ou à la prévention de pathologies liées à une angiogénèse invasive et incontrôlée, comme par exemple à titre non limitatif : l'arthrite, la rétinopathie diabétique, des maladies de l'oeil liées à la néovascularisation de l'appareil oculaire, la croissance et la métastase des tumeurs. Les compositions pharmaceutiques ci-dessus sont plus particulièrement réalisées de manière à pouvoir être administrées par voie sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse ou transdermique. Pour une telle administration, on utilise notamment des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des agents mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol. La dose unitaire usuelle à administrer contient de 0,001 mg à 50 mg de principe actif. L'invention concerne des compositions pharmaceutiques comprenant au moins un des oligonucléotides de l'invention, destinées à être utilisées dans le traitement d'une rétinopathie. L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques comprenant au moins un des oligonucléotides de l'invention, destinées à être utilisées dans la prévention de mélanomes. Les oligonucléotides de l'invention sont aussi utiles comme réactif de recherche, notamment pour l'étude in vitro des voies de signalisation impliquant la protéine 180 kDa, par exemple sur des cellules, tumorales ou non, transfectées par lesdits oligonucléotides. Ils sont également utiles pour l'étude in vivo des voies de signalisation impliquant la protéine 180 kDa dans un grand nombre de phénomènes physiologiques et pathologiques, comme l'angiogénèse ou la cancérogenèse, essentiellement à partir du rapport kinase/phosphatase. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront des exemples qui suivent dans lesquels on désigne par "oligonucléotide" l'oligonucléotide de séquence ID NO. 1 et qui font référence aux figures jointes annexe dans lesquelles : - la figure 1A représente l'image du Western Blot obtenu à partir des échantillons de surnageants issus des cellules non stimulées (Piste NS) et des cellules stimulées avec le bFGF (Piste S), révélée par un anticorps anti-IRS-1. - la figure 1B montre l'image du Western blot obtenue après coloration au nitrate d'argent à partir des mêmes échantillons de surnageants issus des cellules non stimulées (Piste NS) et des cellules stimulées avec le bFGF (Piste S) - la figure 2 montre les images du Western Blot obtenues à partir des échantillons des surnageants issus des cellules non stimulées (Piste NS) et des cellules stimulées avec le bFGF (Piste B), lorsque la membrane est incubée avec un anticorps monoclonal antiphosphotyrosine et révélée avec un anticorps anti-isotype marqué à la peroxydase comme indiqué dans l'exemple 3, - Les figure 3A à 3D montrent les images des cultures, sur un tapis du collagène type I, des différents lots de cellules épithéliales : - La figure 3A montre la culture des cellules endothéliales non traitées. - La figure 3B montre la culture des cellules endothéliales stimulées avec 3 ng/ml de bFGF. - la figure 3C montre la culture des cellules endothéliales incubés avec 100 g/ml d'oligonucléotide de séquence SEQ ID No. 3 pendant 4 heures, puis stimulées avec 3 ng/ml de bFGF. - la figure 3D montre la culture des cellules endothéliales incubés avec 100 g/ml d'oligonucléotide de séquence SEQ ID No. 3 pendant 4 heures. Exemple 1 : Mise en évidence de l'induction de l'expression d'IRS-1 (la protéine de 180 kDa) dans les cellules endothéliales suite à la stimulation de ces cellules par le bFGF. La protéine 180 kDa a été mise en évidence de la manière suivante : Les cellules endothéliales ont été mises en culture dans une plaque de microtitration à 6 puits préalablement recouverts avec du collagène type I comme décrit dans (Montesano et al., J. Cell. Biol., 1983,83, 1648-1652). Le milieu de culture est le DMEM (Sigma) enrichi avec 10 % de sérum de voeu fétal, 4 mM glutamine, 500 U/ml pénicilline, et 100 g/ml streptomycine. Après 3 à 4 jours de culture, on obtient une couche semiconfluente des cellules endothéliales. Les milieux de culture de six puits ont été aspirés et remplacés par du milieu de culture frais. Trois puits ont été enrichis avec 3 ng/ml de bFGF. Après une incubation de 48 heures, les différents puits sont lavés trois fois avec un tampon phosphate, et les cellules sont utilisées pour extraire l'ARN messager (ARNm) selon des protocoles connus de l'homme du métier. Les ARNm sont reverse transcrits par une réaction de polymérisation en chaîne (PCR) en utilisant chacun des quatre groupes dégénérés d'amorces oligo (dT) (T12MN), M peut être G, A, ou C ; et N est G, A, T, et C. Chaque groupe d'amorces est dicté par la base en position 3' (N), avec une dégénérescence dans la position (M). Exemple : le set d'amorces où N = G est constitué de : SEQ ID No. 24 : 5'-TTTTTTTTTTTTGG-3' SEQ ID No. 25 : 5'-TTTTTTTTTTTTAG-3' SEQ ID No. 26 : 5'-TTTTTTTTTTTTCG-3' Les ADNc ainsi obtenus sont amplifiés et marqués au moyen d'un décamère arbitraire, en présence d'ATP marqué isotopiquement. L'analyse des ADNc amplifiés par électrophorèse a révélé la présence d'un fragment d'ADNc de 326 bp amplifié dans l'échantillon issu des cellules endothéliales stimulées avec le bFGF, identifié dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID. No. : 27, cependant, ce même fragment est faiblement présent ou présent à l'état de trace dans l'échantillon issu des cellules endothéliales non stimulées avec le bFGF. Le séquençage de ce fragment et l'interrogation subséquente des banques des données ont révélé que ce fragment correspond à une partie d'un gène déjà connu, codant pour le substrat du récepteur de l'insuline (une protéine intracellulaire de 180 kDa). Exemple 2 : Mise en évidence de l'induction de l'expression d'IRS-1 (la protéine de 180 kDa). Des cellules endothéliales en culture sur un tapis du collagène type I stimulées ou non stimulées avec le bFGF (cf. exemple 1) sont lysées dans un tampon de lyse cellulaire contenant de l'orthovanadate de sodium. Ces solutions sont en suite clarifiées par centrifugation à 14000 g pendant 15 min. Des échantillons de surnageants issus des cellules non stimulées et des cellules stimulées avec le bFGF, contenant des quantités équivalentes de protéines ont été repris avec une solution d'électrophorèse contenant 2% SDS et 15 mM de dithiothréitol, chauffés à 100 OC pendant 5 min. puis déposés en gel de polyacrylamide (gradient de 4 à 15% en acrylamide) dans des conditions dénaturantes (en présence de 2% SDS). Après migration, les protéines sont transférées sur une membrane de nitrocellulose. La membrane est bloquée par une incubation à température ambiante dans une solution de 5% de lait dans un tampon PBS. La membrane est ensuite lavée trois fois avec un tampon PBS, incubée dans un tampon PBS contenant 1 g/ml d'anticorps monoclonal anti-IRS-1 pendant 2 heures à température ambiante, et lavée trois fois avec un tampon PBS. Les protéines sont ensuite révélées au moyen d'un anticorps secondaire anti-isotype couplé à la peroxydase. On constate la présence d'une protéine de poids moléculaire 180 kDa reconnue par l'anticorps anti-IRS-1 monoclonal dans les préparations issues des cellules endothéliales stimulées avec le bFGF ; cette protéine est faiblement présente dans la préparation issue des cellules endothéliales non stimulées avec le bFGF (Figure 1). Exemple 3 : Mise en évidence de l'induction de la phosphorylation au niveau de tyrosine d'IRS-1 (la protéine de 180 kDa). Des cellules endothéliale humaines en culture sur un tapis du collagène type I stimulées ou non stimulées avec le bFGF sont lysées dans un tampon de lyse cellulaire contenant de l'orthovanadate de sodium. Ces solutions sont ensuite clarifiées par centrifugation à 14000 g pendant 15 min (cf. exemple 2). La protéine IRS-1 a été extraite grâce à un anticorps monoclonal anti-IRS- 1. Cette extraction est réalisée après une immunoprécipitation à l'aide d'un anticorps monoclonal anti-IRS-l (Sigma). Après addition de l'anticorps antiIRS-1 couplé à l'agarose, la suspension est incubée pendant 2 heures à température ambiante, puis centrifugée à 4000 g pendant 15 min. Le précipité obtenu est repris avec une solution d'électrophorèse contenant 2% SDS et 15 mM de dithiothréitol, chauffé à 100 oc pendant 5 min. puis déposé en gel de polyacrylamide (gradient de 4 à 15% en acrylamide) dans des conditions dénaturantes (en présence de 2% SDS). Après migration, les protéines sont transférées sur une membrane de nitrocellulose. La membrane est bloquée par une incubation à température ambiante dans une solution de 5% de lait dans un tampon PBS. La membrane est ensuite lavée trois fois avec un tampon PBS, incubée dans un tampon PBS contenant 1 jug/ml d'anticorps monoclonal anti-phosphotyrosine pendant 2 heures à température ambiante, et lavée trois fois avec un tampon PBS. Les protéines sont ensuite révélées au moyen d'un anticorps secondaire anti-isotype couplé à la peroxydase. On constate que la protéine IRS-1 de poids moléculaire 180 kDa est phosphorylée au niveau du résidu tyrosine dans les préparations issues des cellules endothéliales stimulées avec le bFGF ; cette protéine est très faiblement phosphorylée au niveau du résidu tyrosine dans la préparation issue des cellules endothéliales non stimulées avec le bFGF (Figure 2) Exemple 4 : Evaluation de l'activité antianqioqénique in vitro de l'oliqonucléotide. Des cellules endothéliales humaines sont mises en culture sur un tapis du collagène type I. Au septième jour de culture, les puits de culture sont divisés en quatre lots : Lot 1 : Puits correspondant à la culture des cellules endothéliales non traitées. (Figure 3A) Lot 2 : Puits correspondant à la culture des cellules endothéliales stimulées avec 3 ng/ml de bFGF. (Figure 3B) Lot 3 : Puits correspondant à la culture des cellules endothéliales incubés avec 100 gg/ml d'oligonucléotide de séquence SEQ ID No. 3 pendant 4 heures, puis stimulées avec 3 ng/ml de bFGF. (Figure 3C) Lot 4 : Puits correspondant au culture des cellules endothéliales incubés avec 100 g/ml d'oligonucléotide de séquence SEQ ID No. 3 pendant 4 heures. (Figure 3D) Après 3 à 4 jours de culture, les différents puits sont examinés à l'aide de microscope optique à phase inverse. A la lecture des résultats, il apparaît que les cellules endothéliale humaines dans le lot 2 forment des tubes capillaires suite à la stimulation avec le bFGF. On constate aussi que l'oligonucléotide inhibe la formation de néovaisseaux par ces mêmes cellules stimulées avec le bFGF dans le lot 3. On observe enfin que l'oligonucléotide ne modifie pas de manière prononcée la croissance des cellules endothéliales. En effet, le nombre des cellules endothéliales dans le puits de lot 1 et ceux de lot 4 sont comparables. Exemple 5 : Evaluation de l'activité in vivo de l'oliqonucléotide. Trois lots de souris nude ont été utilisés. Chaque lot étant constitué de 5 souris. Lot NO 1 : Ce lot a servi de témoin. Chaque souris est inoculée en sous-cutané à JO avec 200 gl d'une suspension de cellules de mélanome B16 (fournies par l'Institut Gustave Roussy de Villejuif) dispersées dans du PBS à raison de 106 cellules/ml. Ces souris ne sont pas traitées par la suite. Lot N02 : Chaque souris est inoculée en souscutané à JO avec 200 Ml d'une suspension de cellules de mélanome B16 dispersées dans du PBS à raison de 106 cellules/ml. A Jl, J2, J3, J4, J5, J6, J7, J8, J9 et J10 chaque souris reçoit une injection en sous-cutanée de 200 , d'une solution d'oligonucléotide diluée dans du PBS à une concentration de 500 g/ml. L'injection d'oligonucléotide est effectuée à proximité du site d'injection des cellules. Lot N03 : Les souris de ce lot ne sont pas inoculées avec les cellules de mélanome B16. Cependant, chacune de ces souris reçoit une injection de 200 lit d'une solution d'oligonucléotide dans du PBS à une concentration de 500 g/ml ; les injections sont faites à Jl, J2 J3, J4, J5, J6, J7, J8, J9 et J10. Les résultats sont les suivants : Après inoculation, chez les souris du lot N 1, la masse tumorale se développe d'une façon très rapide. En effet, la masse tumorale atteint une taille de 1,6 à 2,5 cm de diamètre après dix jours chez les souris dudit lot ? 1 (souris non traitées). L'évolution de la masse tumorale chez les souris du lot N02 (souris traitées après inoculation par injection d'oligonucléotide à J1, J2 et J3), montre une augmentation nettement moindre du volume de la masse tumorale. La masse tumorale chez les souris du lot 2 ne dépasse pas 0,8 cm de diamètre au dixième jour. Au quatorzième jour, la différence entre la masse tumorale des souris de lots N02 et celle des souris du lot ? 1 est remarquable. Chez les souris du lot N03 (souris n'ayant pas reçu de cellules de mélanome B16, mais traitées par injection d'oligonucléotide pendant trois jours) on note un effet général inattendu sur la peau. Il est identique à celui noté chez toutes les souris qui ont été traitées par l'oligonucléotide (lot 2). La peau prend un aspect vieilli, fripé. On note aussi l'apparition de poils chez toutes les souris traitées. Il existe un parallélisme au cours de l'évolution entre la régression des signes cutanés et la reprise de la croissance tumorale. On constate donc que l'oligonucléotide inhibe la développement et la formation des néovaisseaux par les cellules endothéliales in vitro ; Il possède d'autre part une activité anti-tumorale in vivo remarquable chez la souris nude. REVENDICATIONS 1) Un oligonucléotide constitué par la séquence nucléotidique de formule SEQ ID NO. 2 : 5'-TATCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCTGCGGAGCAGA-3' un fragment de celle-ci comprenant au moins 12 nucléotides contigus, ou leur dérivé. 2) Un oligonucléotide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est constitué par la séquence nucléotidique de formule SEQ ID NO. 3 : 5'-TATCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3' un fragment de celle-ci comprenant au moins 12 nucléotides contigus, ou leur dérivé. 3) Un oligonucléotide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est constitué par la séquence nucléotidique de formule SEQ ID NO. 4 : 5'-TCGCCATGCTGCTGCGGAGCAGA-3' fragment de celle-ci comprenant au moins 12 nucléotides contigus, ou leur dérivé. 4) Un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que tout ou partie des liaisons phosphodiester est protégée. 5) Un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que les extrémités 5'et/ou 3'sont protégées. 6) Une composition pharmaceutique comprenant comme agent actif au moins un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, avantageusement associé dans ladite composition avec un véhicule acceptable. 7) Une composition pharmaceutique pour l'inhibition du gène codant la protéine IRS-1 comprenant comme agent actif un oligonucléotide complémentaire d'une partie dudit gène ou d'un transcrit dudit gène. 8) Une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7 pour être utilisée contre la multiplication cellulaire. 9) Une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 6 à 8 pour être utilisée dans le traitement des tumeurs. 10) Une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 6 à 8 pour être utilisée dans le traitement d'une rétinopathie. 11) Une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 6 à 8 pour être utilisée dans la prévention de mélanomes. 12) Une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 6 à 11, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme pour être administrée par voie sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse ou transdermique, et en ce qu'elle comprend de 0,001 mg à 50 mg d'agent actif.