Brevet FR2824334A1 — publié le 20021108

revendications L'invention concerne un procédé pour tester une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse et son utilisation principalement cosmétique. La présente invention concerne essentiellement un procédé de test d'une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse, les substances actives dans le domaine de la lipolyse ainsi détectées et leur utilisation dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, notamment pour réaliser des soins amincissants, pour augmenter la micro circulation sanguine, pour améliorer l'aspect de la peau et notamment pour atténuer l'aspect "peau d'orange". Art antérieur concernant les produits amincissants et la linolYse Les produits lipolytiques développés dans les laboratoires à ce jour présentent des activités amincissantes réellement efficaces. En effet, ces produits sont le résultat de stratégies qui prennent de plus en plus en compte l'ensemble des mécanismes régulant la lipolyse. En résumé, le développement de produits amincissants implique le recours à: 1) des actifs veinotoniques 2) des actifs lipolytiques ciblant l'ensemble des mécanismes impliqués dans la régulation de la lipolyse. Les actifs veinotoniques présentent une action sur la micro circulation sanguine cutanée. Ils sont utilisés depuis longtemps dans le traitement des jambes lourdes et des _dèmes ou encore pour augmenter la résistance capillaire et participer à des réactions antiinflammatoires. Les veinotoniques constituent donc des actifs de choix 1) pour augmenter la micro circulation sanguine et 2) pour améliorer l 'aspect de la peau (atténuation de l 'aspect Les actifs lipolytiques: 1) L'enzyme clef de la lipolyse est la Lipase Hormono-Sensible (LHS) qui est une enzyme intracellulaire des adipocytes. Cette lipase permet le déstockage des triglycérides adipocytaires, par hydrolyse (par la LHS) et dégradation des acides gras formés (par la cellule). Les actifs cosmétiques lipolytiques cherchent donc à activer cette enzyme à l'aide de cotacteurs, ou à éviter son inhibition. 2) La LHS existe sous deux formes: la forme activée correspond à la phosphorylation de la forme inactive, phosphorylation réalisée par une enzyme, la Protéine Kinase (PKA) qui est AMPc dépendante, c'est à dire qui a besoin d'AMPc pour être elle-même active. Les actifs cosmétiques lipolytiques cherchent donc à activer cette enzyme, en essayant de faire fabriquer plus d'AMPc à la cellule, ou en cherchant à éviter la dégradation de cet AMPc. 3) L'AMPc est formé dans la cellule grâce à une enzyme membranaire, l'Adényl Cyclase qui peut être activoe par les protéines G stimulatrices (Gs) sensibles aux récepteurs beta 3 adrénergiques, ou qui peut être inhibée par les protéines G inhibitrices (Gi) sensibles aux récepteurs alpha 2 adrénergiques. Un certain nombres d'actifs cosmétiques ont été o développés de manière à pouvoir interagir avec les uns ou les autres de ces récepteurs, de façon à stimuler l'Adényl Cyclase et à augmenter le taux d'AMPc intracellulaire. 4) L'AMPc peut également être hydrolysé dans la cellule grâce à une enzyme intracellulaire, la Phospho Di Estérase (PDE) et d'autres actifs cosmétiques ont été développés de manière à pouvoir inhiber cette enzyme et à conserver un taux d'AMPc intracellulaire élevé. Buts de l'invention La présente invention a pour but principal de fournir un nouveau procédé de test d'une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse, sûr et fiable permettant de déterminer le degré d'activité lipolytique d'une substance, et ainsi sa capacité à agir sur la lipolyse, à permettre ainsi de diminuer, ralentir ou résorber les dépôts graisseux, d'avoir une activité amincissante, d'augmenter la micro circulation sanguine, d'améliorer l'aspect de la peau et en particulier 2s d'atténuer l'aspect "peau d'orange" particulièrement disgracieux. La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un procédé de test qui soit capable de trouver des substances actives dans le domaine de la lipolyse, par un procédé de test en un nombre d'étapes aussi faibles que possible, peu coûteux, utilisable à l'échelle industrielle, notamment au niveau des laboratoires de recherche, de préférence de manière automatisée, en permettant ainsi de s'affranchir le plus possible de la dextérité de la personne réalisant le test. La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un procédé de test qui permette 3s de trouver de nouvelles substances actives dans le domaine de la lipolyse, présentant une grande efficacité et qui puisse être utilisé pour la préparation de nouvelles compositions cosmétiques, ou même des compositions pharmaceutique, mettant en o euvre une tell e activité lip olyti que, notamment dan s le c adre d' une activité de diminution, retard ou résorption de dépôts graisseux, ou d'une activité amincissante, ou pour améliorer la tonicité de la peau. Résumé de l'invention - La présente invention permet d'atteindre simultanément l'ensemble des buts précédemment énoncés d'une manière particulièrement inattendue, non évidente pour un homme de l'art. 0 Ainsi, la présente invention fournit un nouveau procédé de test d'une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse, qui est basé sur la cap acité d' inUib iti on de l ' enzyme lip oprotéine lip as e p ar une sub stance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse que l'on teste. L'enzyme lipoprotéine lipase ou LPL est une enzyme produite par les adipocytes et sécrétée par exocytose vers les cellules endothéliales des capillaires sanguins, qui présente la capacité d'hydrolyser les liaisons esters en position 1,3 des triacylglycérols portés par les Chylomicrons et les lipoprotéines de très faibles densités VLDL circulant dans la lumière des vaisseaux sanguins comme décrit par Goldbreg I.J. dans l'article "Lipoprotein lipase and lipolysis: central roles in lipoprotein metabolism and atherogenesis" publié dans le Journal of Lipid Rescarch, 37, 693-707, (1996), pour libérer des acides gras qui sont ensuite captés par des adipocytes. On notera que les Chylomicrons et les VLDL sont des lipoprotéines plasmatiques humaines qui véhiculent les lipides vers les tissus, voir Quinn D. et al, dans l'article "Lipoprotein lipase: mechanism of action and role in 2s lipoprotein metabolism" publié dans Prog. Lipid Res. 22, 35-78 (1982). D'autre part, on notera aussi que les acides gras transtérés à travers la membrane plasmique de la cellule adipeuse, seront pris en charge par des systèmes biochimiques internes de l'adipocyte pour être stockés à nouveau sous forme de triacylglycérols comme mis en évidence par Féve B. dans l'article "L'adipocyte, une cellule très active que l'on commence à savoir contrôler" publié dans Cosmetologie, N 21, 30-33 (1999). Ainsi, la présente invention est basce sur le nouveau concept qui est d'une part de mettre au point un procédé de test d'une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse, de préférence qui soit capable d'agir sur l'inhibition de la lipoprotéine lipase, et d'autre part d'utiliser toute substance présentant une telle activité dans le domaine de la lipolyse, et en particulier capable d'inhiber l'activité de la lipoprotéine lipase, comme nouvelle voie d'action pour limiter le stockage dans l'adipocyte. Ainsi, sous un premier aspect, la présente invention fournit un procédé de test d'une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse, s caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) on prépare un substrat contenant au moins un triacylglycérol b) on met ce substrat en contact avec une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse, et avec une lipoprotéine lipase, en présence d'un co-facteur de lipoprotéine lipase, pendant un temps suffisant pour libérer au moins o en partie l'acide gras du triacylglycérol, et c) on dose la capacité d'inhibition de la libération de l'acide gras résultant de l'activité de la lipoprotéine lipase, sous l'action de ladite substance éventuellement active et on évalue les résultats de l'inhibition que l'on compare au résultat obtenu en l'absence de la substance testée éventuellement active ou relativement au résultat obtenu en présence d'un inhibiteur connu servant de , reterence. Ainsi, l'homme de l'art comprend aisément que lorsque les résultats d'inhibition de la substance éventuellement active sont significativement sup éri eurs au témoi n, c' e st- à- dire sans sub stanc e active, ou s imilaire s ou significativement supérieurs à un inhibiteur de référence, l'activité de la substance dans le domaine lipolytique peut être caractérisée, c'est-à-dire confirmée ou non. Dans le cadre de l'invention, on constate que le procédé de test met en _uvre un dosage des acides gras libérés de la partie acylée ou triacylée du triacylglycérol, ou acides gras non estérifiés. 2s Selon une variante de réalisation avantageuse, ce procédé est caractérisé en ce que la lipoprotéine lipase utilisée est issue du lait de bovin ou est d'origine bactérienne. Selon une autre variante de réalisation, le procédé est caractérisé en ce que le triacylglycérol précité comprend une partie acyle obtenue à partir d'un acide gras à longue chaîne, de prétérence comprenant C12 à C30 atomes de carbones saturés ou insaturés à chaîne droite ou ramifiée, encore de prétérence majoritairement présent dans l'alimentation. De préférence, le triacylglycérol comprend ou est constitué de trioléin. Selon une caractéristique avantageuse du procédé selon l'invention, celuici est caractérisé en ce que la lipoprotéine lipase est présente avec ledit co-facteur comprenant ou constitué de apolipoprotéine C-II, de préférence d'origine humaine. Selon une autre variante de réalisation avantageuse du procédé selon l'invention, celui-ci est caractérisé en ce que la lipoprotéine est mise en contact avec le substrat en présence d'une substance accepteur ou séquestrante d'acide gras évitant le blocage de l'activité enzymatique de la lipoprotéine lipase. Avantageusement, la substance accepteur ou séquestrante d'acide gras comprend ou est constituée par de l'albumine bovine ou humaine. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux du procédé selon l'invention, celui-ci est caractérisé en ce que la capacité d'inhibition de la lipoprotéine lipase par la substance éventuellement active est réalisée en plusieurs o étapes: a) tout d'abord, la lipoprotéine lipase est incubée pendant un temps déterminé en présence de la substance éventuellement active comme inhibiteur, b) le substrat contenant le triacylglycérol est incubé en présence du coLacteur de la lipoprotéine lipase, de prétérence comprenant ou constitué par l'apolipoprotéine C-II, c) le mélange triacylglycérol/cofacteur de la lipoprotéine lipase, de prétérence apolipoprotéine C-II, est incubé en présence de l'enzyme lipoprotéine lipase avec ou sans la substance testée éventuellement active pour sa capacité d'inhibition de la lipoprotéine lipase, d) à l'issue de cette incubation, on effectue un dosage des acides gras non estérifiés sur le milieu réactionnel par une technique disponible à l'homme de l' art, et e) on compare la capacité d'inhibition de la libération de l'acide gras du triacylglycérol, ou acide gras non estérifié, résultant de l'activité de la lipoprotéine lipase en présence de la substance testée éventuellement active, relativement au résultat obtenu en l'absence de la substance testée éventuellement active ou relativement au résultat obtenu en présence d'un inhibiteur connu servant de référence. Selon une variante de réalisation de ce mode de réalisation, le dosage des acides gras non estérifiés est réalisé sur le milieu réactionnel par une technique enzymatique, de préférence pour étre suivi en colorimétrie à une longueur d'onde déterminée par la technique enzymatique choisie, et dans ce cas on détermine la diminution de la densité optique obtenue à cette longueur d'onde par rapport au témoin ou à l'inhibiteur de référence. Selon une variante de réalisation encore plus avantageuse le dosage des acides gras non estérifiés est réalisé sur le milieu réactionnel par une technique enzymatique pouvant être suivie en colorimétrie à 550nm et on détermine une inhibition de la densité optique à 550nm traduisant une diminution des acides gras synthétisés dans le milieu réactionnel, que l'on compare au témoin ou à un inhibiteur de rétérence, et on détermine l'activité positive ou négative de la dite s substance testée dans le cadre de l'observation d'une inhibition significative ou non réalisée par la dite substance testée par rapport au témoin ou un inhibiteur de référence. Selon une autre variante de réalisation particulièrement avantageuse du procédé selon l'invention, on réalise le test d'une substance éventuellement active o dans le domaine de la lipolyse choisie parmi le groupe consistant d'un extrait de Fucus; un extrait de Dulse palmaria palmata; un extrait de protéine de blé; un extrait Spiruline; un extrait de Chèvrefeuille; un extrait de Citron; un extrait de Millepertuis; un extrait de protéines de riz; un extrait de Liane; un extrait de Pomme de terre; un extrait de Shiitake; un extrait de saumon frais; un extrait de Potiron; un extrait de citron. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, on réalise le test précité avec un extrait de Millepertuis. Selon une autre variante de réalisation avantageuse de l'invention, on réalise le test avec un extrait de Liane, de préférence un extrait de Liane du Pérou dénommée Liane Uncaria Tomentosa. Selon encore un mode de réalisation avantageux de l'invention, le procédé est caractérisé en ce que l'on identifie une substance pour son activité lipolytique, en particulier amincissante, à partir du test d'inhibition précité. Selon un deuxTème aspect, la présente invention couvre aussi l'utilisation 2s du procédé de test précité pour évaluer l'activité d'une substance utilisable dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'un médicament en vue de traiter les dépôts graisseux, notamment par lipolyse ou pour une activité amincissante, ainsi que pour évaluer l'efficacité d'un traitement au soin amincissant appliqué à un sujet. Selon un troisième aspect, la présente invention couvre aussi toute substance active dans le domaine de la lipolyse caractérisce en ce que son activité dans le domaine de la lipolyse a été évaluce par un procédé de test tel que précédemment défini ou tel que résultant de la description suivante. Selon encore un quatrième aspect, la présente invention couvre encore l'utilisation d'une substance dont l'activité dans le domaine de la lipolyse a été évaluée par le procédé de test précédemment défini ou découlant de la description suivante, comme l'un des agents actifs lipolytiques dans une composition cosmétique pour diminuer, ralentir ou résorber les dépôts graisseux, pour une activité amincissante, ou pour augmenter la microcirculation sanguine, pour améliorer l'aspect ou la tonicité de la peau, en particulier pour atténuer l'aspect "peau d'orange". Selon un cinquième aspect, la présente invention couvre encore l'utilisation d'une substance dont l'activité dans le domaine de la lipolyse a été évaluée par le procédé de test précité ou résultant de la description suivante comme l'un des agents actifs lipolytiques pour la préparation d'un médicament en vue de traiter o une pathologie résultant d'un excès de dépôt graisseux. L' inventi on c ouvre encore l 'utili s ati on d'un extrait de Li ane Unc aria Tomentosa comme l'un des principes lipolytiques ou activité amincissante dans une composition cosmétique. L' invention couvre encore l 'utili s ati on d'un extrait de Mi ll ep ertui s c omme l'un des agents actifs lipolytiques ou activité amincissante dans une composition cosmétique. Selon un cinquième aspect, la présente invention couvre encore une composition cosmétique, caractérisce en ce qu'elle comprend comme l'un des agents actifs lipolytiques ou activité amincissante une quantité efficace de Liane Uncaria Tomentosa, dans un excipient cosmétiquement acceptable. L'invention couvre encore une composition cosmétique, caractérisce en ce qu'elle comprend comme l'un des agents lipolytiques ou activité amincissante, une quantité efficace d'un extrait de Millepertuis. S el on un sixième asp ect, l 'invention couvre enc ore un pro c é dé de s o in cosmétique caractérisé en ce qu'on applique topiquement sur la peau une composition cosmétique comprenant comme l'un des agents actifs lipolytiques ou activité amincissante, une substance active lipolytique ou amincissante dont l'activité a été déterminée par le procédé de test tel que précédemment défini ou tel que résultant de la description suivante prise dans son ensemble. Selon un mode de réalisation particulier, l'invention couvre encore un procédé de soin cosmétique caractérisé en ce qu'on applique topiquement sur la peau une composition cosmétique comprenant comme l'un des agents actifs lipolytiques ou activité amincissante un extrait de Liane Uncaria Tomentosa. S el on un autre mo de de réali sation p articuli er, l ' invention vi se enc ore un procédé de soin cosmétique caractérisé en ce qu'on applique topiquement sur la peau une composition cosmétique comprenant comme l'un des agents actifs lipolytiques ou activité amincissante un extrait de Millepertuis. Dans le cadre de l'un quelcouque des aspects ou mode de réalisation précédents de l'invention, on peut utiliser la substance active dans le domaine de la lipolyse en une quantité suffisante pour obtenir l'effet lipolytique recherché pour diminuer, ralentir ou résorber les dépôts graisseux, pour une activité amincissante, pour augmenter la microcirculation sanguine, pour améliorer l'aspect ou la tonicité de la peau, en particulier pour atténuer l'aspect "peau d'orange". La concentration d'utilisation de la dite substance variera en fonction de la nature de la substance o elle-même. Généralement, la concentration de la substance ou d'un extrait de plante comprenant ou constituant la substance active, au sens large, sera comprise entre 0,01% et 70% en poids, mieux entre 0,01% en poids et 30% en poids, de prétérence entre 0, 5% et 20% en poids. Des concentrations commerciales seront généralement de 0,01% à 30% en poids comme montré dans les exemples de s formulation 2 à 6. La présente invention sera mieux comprise par l'homme de l'art à partir de la description suivante décrivant de mode de réalisation préféré du procédé de test d'une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse selon la présente invention, donné simplement à titre d'illustration ou qui ne saurait donc en aucune façon limiter la portée de l'invention. Egalement, des exemples actuel lement prétéré s de sub stance s dont l' activité a été démontrée dans le domaine de la lipolyse dans le cadre du procédé de test selon l'invention sont donnés simplement à titre d'illustration et ne sauraient en aucune façon limiter la portée du procédé de test selon l'invention. En outre, toute caractéristique qui apparat être nouvelle à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples et complétée par les fgures annexées, est revendiquée en temps que telle, également dans sa fonction et dans son mode d'action général. Les exemples de composition cosmétique ou pharmaceutique seront aussi donnés d'une manière similaire à titre d'illustration. Dans les exemples tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indications contraires, la température est en dogré C sauf indications contraires, et la pression est la pression atmosphérique, sanf indications contraires. Exemple 1 de 1'invention concernant la mise en oeuvre d'un procédé de test d'une substance éventuellement acquise dans le domaine de la linolvse IModèle d'étude pour déterminer l'activité linolYtique s L'étude de l'inhibition de la lipoprotéine lipase est réalisce dans un modèle in vioro acellulaire qui se veut étre un reflet le plus " intelligent " possible, de la situation rencontrée in vivo. En effet, la LPL utilisce dans le modèle d'étude retenu est issue du lait bovin, ce choix ayant été déterminé par la très forte homologie (97 /0) de cette 0 enzyme avec son équivalente humaine (Tatina A. et al, "La séquence en acides aminés de la Lipoprotéine lipase humaine a été comparée à celle du lait bovin selon le programme BLAST 2 SEQUENCES", "Blast 2 sequences-a new tool for comparing protein and nucleotide sequences" publié dans FEMS Microbil Lett.,174,247-250, (1999)); elle est mise en présence d'un substrat, la trioléin, qui est un triacylglycérol constitué de 3 chames d'acide oléique, (acides gras à longues chaînes majoritairement trouvés dans l'alimentation). La trioléin est le substrat le plus représentatif de la situation rencontrée in vivo car une étude de l'analyse des acides gras présents dans l'adipocyte révèle (Raclot T. et al, "Selective release of hyman adipocyte fatty acids according to molecular structure" publié dans Biochemj., 324, 911-915, (1997); "Cholesteryl ester transSer activity in liver disease and cholestasis, and its relation with fatty acid composition of lipoprotein lipids" Clinica Chimica Acta, 248, 157-174, (1996)) que l'acide oléique y est majoritairement présent et constitue donc le produit d'hydrolyse majoritaire de la lipoprotéine lipase. 2s Au milieu réactionnel sont également ajoutés: - Le cofacteur de la LPL, l'apolipoprotéine C-II (apoCII) d'origine humaine, qui présente un rôle déterminant dans l'hydrolyse des triacylglycérols par la LPL (Posner et al, "kinetics of product inhibition and mechanisms of lipoprotéin lipase activation by apolipoprotein CII" publié dans Biochemistry, 26, 3771-3717, ( 1987)). L'apoCII est fixé sur les triacylglycérols du sang et permet d'induire un changement de conformation de la LPL indispensable à la reconnaissance du substrat par le site actif de l'enzyme (SantamarinaFojo S. and Dugi K.A. "Structure, function and role of lipoprotein lipase in lipoprotein metabolism publié dans Curretn Opinlon in Lipidology, 5, 117-125, (1994)). - Un accepteur d'acide gras constitué par de l'albumine bovine. La LPL est une enzyme qui présente une affinité importante pour son produit de réaction. En effet, les acides gras libérés vont s'agréger autour de l'euzyme qui sera en quelque sorte séquestrée par les acides gras et ne sera donc plus accessible au substrat. L'utilisation de l'albumine qui possède une très forte affnité pour les acides gras permet de ne pas bloquer l'activité enzymatique de la LPL (Bengtsson-Olivecrona s G. and Olivecrona T. "Phospholipase activity of milk lipoprotein lipase" publié dans Methods in enzymology, 197, 345-356, (1991)). II- Inhibition de la Lipourotéine Lipase: L' étude de l 'inhibition de la LPL est réalisce selon l'invention ici de 0 préférence en 2 temps: L'enzyme est incubée pendant un temps déterminé en présence de son inhibiteur tandis que la trioléin est incubée en présence de l'apoCII de façon à mimer la situation rencontrce in vivo. Ensuite le mélange trioléin / ApoCII est incubé en présence du milieu constitué par l'enzyme + inDibiteur. A l'issue de cette incubation un dosage des acides gras non estérifiés (AGNE) est réalisé sur le milieu réactionnel par une technique enzymatique qu'il est possible de suivre en colorimétrie à 550 nm (kit NEFA-C). Un témoin correspondant à l ' activité de la LPL en l 'absence d' inhibiteur est réalisé. L'utilisation d'un actif capable de modifer l'activité enzymatique va se traduire par une diminution de la DO à 550nm c'est à dire à une diminution des acides gras synthétisés dans le milieu par rapport au témoin. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport au témoin. 2s 1- Inhibiteurs de rétérence de la Lipoprotéine Lipase: Des inhibiteurs de rétérences, cités dans la littérature (Korn E.D. "Clearing factor, a heparin-activated lipoprotein lipase" publié dans J.Biol. Chem. 215, 1-14, (1955); Quinn D.M. et al, "Lipoprotein lipase catalysed hydrolysis of water soluble p-nitrophenyl esters. Inhibition by apolipoprotein C-II" publié dans Biochemistry, 21(26), 6872-6879, (1982); Greten H. et al, "Comparison of assay methods for selective measurement of plasma lipase" publié dans Atherosclerosis, 26, 563-572, (1977)), ont pu étre testés dans notre modèle et ont donné les résultats suivants: Tableau 1 Inhibition (%) Inhibiteurs Produitpur Produit pur dilué Produit pur dilué (concentration initiale) au 1/lOOième au 1/lOOOOième Protamine sulfate (0. 4%) 10,1% + 7.9 2,6% + 14.4 11,8% + 14.7 Protamine (2.4%) 11,2% + 6.6 9, 6% + 5 8,5% + 8.7 Sodium pyrophosphate 15% + 12.6 13% + 12.5 0,4% + 8.3 (6%) Les inhibiteurs cités dans la littérature ne semblent pas étre des inhibiteurs s extrémement puissants de la LPL puisque les niveaux d'inhibition observés aux concentrations testées, sont relativement modestes; ils sont décrits dans la littérature scientifique pour être des inhibiteurs qui agissent par compétition avec le substrat de l'enzyme. lo 2- Dénaturants de protéines: Des dénaturants tel s que les tannins et le s flavonoides, connus pour précipiter les protéines, ont pu étre évalués et les résultats sont répertoriés dans le tableau 2. Tableau 2 Inhibition Dénaturants Produit pur Produit pur dilué au Produit pur dilué au 1/lOOième 1/lOOOOième Acide tannique 98.3% + 12.4 11.4% + 10.39 0% + 9. 8 OPC raisin 99.3% + 17.5 0% + 1.5 0% + 5.6 3- Screenina d'actifs par le procédé selon l'invention: Par le procédé selon l'invention, un screening sur une centaine de molécules a été réalisé, afin de sélectionner parmi différentes familles de principes actifs potentiels, à savoir des extraits végétaux, des algues, des polysaccharides ou protéines, ceux ayant une forte activité inhibitrice de la LPL. Tous les extraits ont été réalisés selon les protocoles décrits dans les paragraphes III-l-b. Les niveaux d'inhibition sont évalués à deux concentrations différentes afin de comparer l'activité inhibitrice des différents composés. Le tableau 3 ci-dessous rassemble quelques pourcentages d' inhibition obtenus: s Tableau 3 Inhibition de Inhibition de l'extrait l'extrait pur (%) dilué à 1% (%) Extrait de Fucus 39 34 Extrait de Dulse palmaria 49 19 palmata Extrait de Protéine de blé 71 69 Extrait de Spiraline 66 47 Extrait de Chèvreleuille 79 21 Extrait de Citron 53 12 Extrait de Millepertuis 86 33 Extrait de Protéine de riz 24 0 Extrait de Liane 98 50 Extrait de Pomme de terre 27 5 Extrait de Shiitake 47 41 Extrait de saumon frais 1.1 0.4 Extrait de Potiron 30 60 Extrait de citron 6.2 5.9 A l'issue de cette étude un extrait spécifique réalisé à partir d'une liane très particulière d'Amérique du Sud (Urcaria Tomentosa) a été sélectionné sur la base 0 de sa forte efficacité. III- Les Actifs sélectionnés 1- Extrait de liane ou Ucaria Tome7tosaCat's Claw: a) Généralités La griffe de chat ou Cat's Claw est une plante appartenant à la famille des Rubiaceae de nom Uncaria Tomentosa. Cat's Claw est une liane qui s'accroche aux artres de la forêt amazonienne à l' aide de griffes situées à la base des feuilles et semblables à celles d'un chat d'o son nom. Elle est récoltée surtout au Pérou et dans le centre de l'Amérique du Sud. Elle vit en milieu humide à une altitude variant entre 400 et 800 mètres. La tradition des indiens du Pérou attribue à cette liane des vertus multiples. Ils utilisent des extraits d'écorces pour des problèmes gastriques et intestinaux et pour des koubles d'inflammation diverse. De plus, la décoction est utilisée contre plusieurs types d'infections, tant en usage topique que systémique. On lui attribue la capacité de prévenir la maladie et de guérir les tumeurs et les cancers. On rapporte également un effet normalisateur du cycle menstruel féminin et des possibilités contraceptives (Karl-Heinz Reinhard "Uncaria Tomentosa 0 (Willd.)D.C.: Cat's claw, Una de gato, or Savéntaro" publié dans The Journal of Alternative and Complementary Medecine, vol.5, N 2, 143-151, (1999)). Uncaria Tomentosa existe aux Etats Unis sous plusieurs formes de produits pour des applications thérapeutiques: asthme, cancer, prévention des maladies, fièvre, ulcères gastriques, hémorragies, inflammations, rhumatisme, inflammation des voies urinaires, impureté de la peau(Keplinger Klaus, et al, "Uncaria Tomentosa (Willd.) DCEthnomedicinal use and new pharmacological, toxicological an bonatnical results" publié dans Journal of Ethnopharmacology, 64, 23-34, (1999)). De nombreux kavaux de recherche sont effectués sur cette liane depuis une dizaine d'années. Dans la nature, Uncaria Tomentosa existe sous deux types chimiques, qui contiennent dans leurs racines soit des alcalodes tétracycliques oxindoles (rynchophylline et isorhyncophylline) soit des alcaloïdes pentacycliques oxindoles (ptéropodine, isoptéropodine, spéclophylline, uccarine F. mitraphylline et isomitraphylline). Selon le type chimique, les propriétés d' Uncaria Tomentosa ne sont pas les mémes (Laus Gerhard, Brossner Dagmar and Keplinger Klaus "Alkaloids of peruvian Uncaria Tomentosa" publié dans Phytochemistry, vol. 45, N 4, 855-860, (1997)). I1 a été montré que Uncaria Tomentosa possède une activité anti inflammatoire. Cette propriété serait principalement due aux glycosides d'acide quinovique présents dans l'écorce de cette liane. Un exkait aqueux des écorces de Cat's Claw permet d'inhiber la toxicité cellulaire induite par le peroxynitrite en le dégradant. Elle inhibe l'expression de la nitrique oxyde synthase inductible (NOSi) faisant inhiber l'activation de NF-KB ce qui atténue la production de NO. Il a été mis en évidence que cette activité anti-inflammatoire serait due à la 3s combinaison de tous les glycosides présents dans la liane (Sandoval-Chacon M. et al, "Antiinflammatory actions of Cat's claw: the role of NF-KB" publié dans Aliment Pharmacol Ther 12, 1279-1289, (1998)). En plus de ces propriétés anti-inflammatoires, des effets antimutagéniques protecteurs ont été démontrés in vitro contre la photomutagénèse par le test Ames ((Karl-Heinz Reinhard "Uncaria Tomentosa (Willd.)D.C.: Cat's claw, Una de gato, or Savéntaro" publié dans The Journal of Alternative and Complementary Medecine, vol.5, N 2, 143-151, (1999)). Uncaria Tomentosa du type alcaloides pentacycliques oxindoles (POA) augmente le taux de phagocytose par les graculocytes. De plus elle augmente la 0 prolifération des lymphocytes humains B et T via les cellules endothéliales. Les POA induisent les cellules endothéliales in vitro pour libérer dans le surnageant un facteur qui régule la prolifération des lymphocytes. Uncaria Tomentosa inhibe la prolifération des lymphoblastes et des lignées de cellules lymphoblastoïdes. Ces alcaloïdes agissent comme un régulateur des réponses immunes humaines (Wurm Martin, et al, "Pentacyclic Oxindole Alkaloids form Uncaria Tomentosa induce hymna endothelial cells to release a lymphocyteproliferation-regulating factor" publié dans Planta Medica, 64, 701-704, (1998)). Les glycosides de l'acide quinovique et des stéroïdes présents dans Uncaria Tomentosa posséderaient une activité antivirale contre le Virus Vesiculaire Stomatitis à des valeurs de concentrations minimales inhibitrices de -60 mg/ml. Une activité anti-leucémique a été montrée par les POA qui inhibent la croissance des cellules leucémiques HL60 et U937 (Keplinger Klaus, et al, "Uncaria Tomentosa (Willd.) DC- Ethnomedicinal use and new pharmacological, toxicological an bonatnical results" publié dans Journal of Ethnopharmacology, 64, 23-34, (1999)). Uncaria Tomentosa stimulerait aussi la production d' interleukines IL 1 et IL6 par les macrophages. Elle posséderait donc une action immunostimulante (Lemaire I. et al, " Stimulation of interleukin-1 and -6 production in alveolar macrophage s by the ncotrop ic al l iana, Un ca ria To m en tosa (una de gato) pub l i é dans Journal of Ethnopharmacology 64, 109-115, (1999)). b) Activité anti-lipoprotéine lipase de Uncaria Tomentosa: bl-a) Préparation d'un extrait hydroalcoolique de la liane du Pérou Uncaria Tomentosa A partir de l'écorce et/ou des racines de la plante entière de la liane du Pérou Uncaria Tomentosa disponible dans le commerce, on prépare un extrait alcoolique de la manière suivante: On broie 50 grammes de l'écorce ou 30 grammes de la plante entière, très finement. Rajouter à ce broyat 500 ml d'une solution aqueuse éthanolique à 70% 0 d'éthanol vol/vol. Chauffer à 65 C et porter à reflux pendant 2 heures. Ensuite, l'alcool est évaporé puis le précipité restant dans la solution aqueuse est éliminé par centrifugation. Le surnageant obtenu peut étre utilisé tel quel ou de préLérence être lyophilisé et constitue l'extrait sec de liane utilisé selon l'invention selon le paragraphe b2 ci-après et notamment pour préparer une composition cosmétique. bl-b) Préparation d'un extrait aqueux de la liane du Pérou Uncaria Tomentosa. L'extraction est réalisce telle que décrite dans le paragraphe bl-a mais en présence d'eau sans nécessité de chauffage, par exemple à une température comprise entre 15 et 35 C, avantageusement à la température ambiante. Les insolubles sont éliminés par centrifugation et le surnageant obtenu sous forme de solution aqueuse peut étre utilisé de préférence tel quel et notamment pour préparer une composition cosmétique. 2s bl-c) Préparation d'un extrait hvdroalvcolique de la liane du Pérou Uncaria Tomentosa. L'extraction est réalisée telle que décrite dans le paragraphe bl-a, mais en présence d'un mélange eau/Butylène glycol à froid dans des proportions pouvant aller de 80/20 à 20/80. Le même protocole est réalisé avec un mélange eau/Propylène glycol sans nécessité de chauffage, par exemple à une température comprise entre 15 et 35 C, avantageusement à la température ambiante dans des proportions pouvant aller de 80/20 à 20/80 ou encore avec du glycérol sans nécessité de chauffage, par exemple à une température comprise entre 15 et 35 C, avantageusement à la température ambiante dans des proportions pouvant aller de 3s 80/20 à 20/80. Les insolubles sont éliminés par centrifugation et le surnageant hydroglycolique obtenu peut être utilisé de prétérence tel quel et notamment pour préparer une composition cosmétique. s b2)Dosace des Acides Gras Non Estérifés ou AGNE par le kit du dosace du commerce NEFA-C de Wako (chez Oxoïd, 69571 Dardillv Cedex, France) Une étude de l'activité inhibitrice d'un extrait de liane à 2% (2 g du o lyophilisat préparé selon le paragraphe bl-a qsp 100 g d'eau) contenant 0.2% de Sodium Methylparaben et 15% de butylène glycol à différentes concentrations d'utilisation a été réalisée en quadruples. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau 4 ci-dessous et à la fgure 1: Tableau 4 Concentrations d'utilisation 5 % 3 % 2 % 1 % 0.5 0.25 d'extrait de Uncaria Tomentosa à % % Inhibition (%) 99.7 83.2 64.3 12.2 0 0 Ecart type (%) 36.3 10.7 8.4 4.0 1.8 1.7 I1 résulte du tableau 4 et de la figure 1 que l'extrait de liane sélectionné présente une activité inhibitrice de la Lipoprotéine Lipase puissante et de façon "dose-dépendante" contrairement aux inhibiteurs "potentiels" cités dans la littérature. L'extrait de liane se positionne par conséquent comme un actif très puissant et très innovant dans le domaine des amincissants. 2s 13) Dosace des AGNE Par chromatocraphie en phase euzeuse ou CPG: Afm de confrmer les résultats d'inhibition obtenus avec Uncaria Tomentosa en utilisant le kit NEFA-C, les acides gras libérés dans le milieu réactionnel par LPL sont analysés par CPG. Pour cela une technique de dosage de l'acide oléique permettant de quantifer l'acide olélque en fn de réaction euzymatique a été mise au point. L'acide oléique est extrait du milieu réactionnel du dosage enzymatique par l'éthanol puis injecté sur une colonne du commerce de chez DBJW scientific référence DB FFAP 15 m de longueur, 0.32 mm de diamètre interne, 0.25,um d'épaisseur en mode splitless. Les températures de l'injecteur et du détecteur sont à 280 C. La programmation en température commence à 50 C pendant 1 minute pour monter de 40 C/minute jusqu'à 200 C puis de 15 C par minute jusqu'à 250 C pendant 3 minutes. Le temps de rétention de l'acide oléique dans ces conditions est de 7.74 minutes. Certains inhibiteurs de rétérence sont retestés par cette technique par CPG, 0 tels que le sodium pyrophosphate et la protamine sulfate ainsi que l'acide tannique comme dénaturant. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau 5 ci-dessous. Tableau 5 Inhibition Inhibiteurs ou dénaturant Produit pur Produit pur dilué Produit pur (concentration initiale) au 1/lOOième dilué au 1/l OOOOième Sodium nvrochoshate (6%) 35.1 /0 +11.1 30.4 % + 4.0 47.4 % + 10.4 .. _, Protamir re sultate (0.4 X) 17.9 % + 17.5 5.0% + 9.6 27.7% + 2.9 Acide tannique 100% + 1.8 44.8% + 10.6 0% + 3.8 L'extrait d'Uncaria Tomentosa à 2% objet du test de dosage des AGNE par le kit NEFA-C, à savoir 2 g qsp 100 g d'eau, et contenant 0,2 % de Sodium Methylparaben et 15% de butylène glycol est testé sur LPL à différentes concentrations d'utilisation en quadruple. Les acides gras libérés sont donc analysés par CPG. Les résultats obtenus sont répertoriés au tableau 6 et à la fgure 2: Tableau 6 Concentration d'utilisation d'extrait 5 /u 3 /o 2 % 1 % 0.25 0.05 d'Uncaria Tomentosa à 2% % % hibition (%) 96.8 83.6 64.8 24.4 13 6.2 Ecart type (%) 6.2 2.5 5.2 1.5 0.1 0.1 L'analyse par CPG confrme les résultats obtenus avec le kit de dosage. La CPG possède une plus grande sensibilité dans les faibles pourcentages d'inhibition. En effet, les inhibitions obtenues pour les inhibiteurs de référence et l'acide tannique sont plus élevoes. Par contre, les inhibitions obtenues avec la liane par CPG ou par le kit pour une concentration d'utilisation comprise entre 2 et 5 % sont exactement les 0 mêmes. En dessous de 2%, la CPG va détecter une inhibition alors que le kit non. Ces résultats confortent le fait que la liane Uncaria Tomentosa est un actif inhibiteur très puissant de la Lipoprotéine Lipase. 2! Autre actif sélectionné pour l'inhibition de la LPL: Extrait de millepertuis 2.1) Prénaration de l'extrait de millenertuis A partir des sommités fleuries (fleurs et/ou bourgeons) de la plante millepertuis disponible dans le commerce, on prépare un extrait de millepertuis selon la procédure suivante: 2.1-a) Prénaration d'un extrait alcoolinue de Millenertuis On broie 50 grammes de sommités fleuries très fmement. Raj outer à ce broyat 500 ml d'une solution aqueuse éthanolique à 70% d'éthanol vol/vol. Chauffer à 65 C et porter à reflux pendant 2 heures. Ensuite, l'alcool est évaporé puis le précipité restant dans la solution aqueuse est éliminé par centrifugation. Le surnageant obtenu peut étre utilisé tel quel ou de prétérence est lyophilisé et constitue l'extrait sec de millepertuis utilisé selon l'invention selon 2.2 ci-après, et notamment pour préparer une composition cosmétique 2.1-b) Prénaration d'un extrait aqueux de Millepertuis L'extraction est réalisée telle que décrite dans le paragraphe 2.1-a mais en présence d'eau sans nécessité de chauffage, par exemple à une température comprise entre 15 et 35 C, avantageusement à la température ambiante. Les insolubles sont éliminés par centrifugation et le surnageant obtenu sous forme de solution aqueuse peut être utilisé de préférence tel quel notamment pour préparer une composition cosmétique. 2.1-c) Préparation d'un extrait hydroalvcolinue de Millepertuis o L'extraction est réalisée telle que décrite dans le paragraphe 2.1-a, mais en présence d'un mélange eau/Butylène glycol sans nécessité de chauffage, par exemple à une température comprise entre 15 et 35 C, avantageusement à la température amblante dans des proportions pouvant aller de 80/20 à 20/80. Le même protocole est réalisé avec un mélange eau/Propylène glycol sans nécessité de chanffage, par exemple à une température comprise entre 15 et 35 C, avantageusement à la température ambiante dans des proportions pouvant aller de /20 à 20/80 ou encore avec du glycérol à froid dans des proportions pouvant aller de 80/20 à 20/80. Les insolubles sont éliminés par centrifugation et le surnageant hydroglycolique obtenu est utilisé de prétérence tel quel notamment pour préparer une composition cosmétique. 2.2) Dosae des Acides Gras Non Estérililés ou AGNE par le kit du dosae du commerce NEFA-C de Wako (chez Oxold. 69571 Dardillv Cedex 2s France) Une étude de l'activité inhibitrice de LPL d'un extrait de Millepertuis à 2%, préparé selon le paragraphe 2 1-c, a été réalisé à différentes concentrations en quadruple. Les résultats obtenus sont répertoriés au tableau 7 ci-dessous. Tableau 7 Concentration 5 % 3 % 2 % 1 % 0,5 % d'utilisation d'extrait de Millopertuis à 2% % inhibition avec écart 96.5 + 0.7 90.9 +0.S 76.9 + 3. 8 9.5 +1.7 5.7 + 0;S type en % Les pourcentages d'inhibition obtenus sont répertoriés au tableau 7, s mesurés par le dosage des AGNE par le kit de dosage du commerce NEFA-C de Wako comme pour le test de dosage de Uncaria Tomentosa précité sous b2) ci dessus. Les résultats d'inhibition respectifs obtenus avec l'extrait de millopertuis et l'extrait d'Uncaria Tomentosa font l'objet de la figure 3. 0 On peut constater à partir de la figure 3 qu'aux concentrations d'étude les résultats d'inhibition de la LPL sont sensiblement identiques pour les 2 extraits sélectionnés. De plus, nous pouvons rajouter que l'activité inhibitrice de LPL des extraits de Liane et de Millepertuis est forte et dose-dépendante. Le screening d ' actifs sur le modèle d' inhibition de la Lipoprotéine Lipase développé par les inventeurs permet de sélectionner des actifs qui inhibent cette enzyme de façon dose-dépendante. Parmi les actifs qui ont été sélectionnés, deux extraits présentent des effets spectaculaires: il s'agit d'extraits aqueux, ou glycoliques ou alcooliques de deux plantes: À la liane du Pérou appelée Uncaria Tomentosa À le millepertuis. Ainsi, l'invention apporte des avantages techniques particulièrement inattendus, non évi dents à un homme de l ' art et p ermet de fournir une nouvel l e 2s méthode de tests qui permettent de sélectionner les actifs capables d'étre actifs sur la lipoprotéine lipase ou LPL. La menti on c ouvre aus si le s acti fs sé le cti onné s s el on c ette métho de de tests, en particulier les extraits de Liane et Millopertuis, pour une utilisation cosmétique dans des applications amincissantes, lipolytiques, tonifiantes de la peau, etc. L'invention couvre encore les formulations cosmétiques qui contiennent de tels actifs, et leur utilisation en tant que crèmes amincissantes. L'inventi on c ouvre enc ore l a sél ecti on d' acti fs pharmaceuti quem ent acti fs par la méthode de test qui peut être les mémes actifs ou non que ceux qui ont pu s être sélectionnés dans le cadre d'une activité cosmétique, ainsi que les formulations pharmaceutiques contenant de tels actifs et leurs utilisations dans le cadre du traitement d'un pathologie dans le domaine de la lipolyse. Des exemples de formulation de compositions cosmétiques ou de compositions pharmaceutiques sont maintenant décrits si après. Exemples de formulation de compositions cosméticenes ou de compositions pharmaceutiques Exemple 2: Utilisation des produits de l'invention dans des formulations de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques de type émulsion huile dans eau Formulation 2a: A Eau qsp 100 Butylène Glycol 2 Glycérine 3 Sodium Dihydroxycétyl 2 Phosphate, Isopropyl Hydroxycétyl Ether B Glycol Stéarate SE 14 Triisononanoine 5 Octyl Cocoate 6 C Butylène Glycol, Méthylparaben, 2 Ethylparab en, Propylp arab en, pH ajusté à 5,5 D | Produits de l'invention 0,01 - 30 % Les phases A et B sont chauffées séparément à 75 C, puis B est ajouté à A sous agitation vigoureuse; C puis D sont rajoutés ensuite, lors du retroidissement de la crème ainsi formée. Formulation 2b: A Eau qsp 100 Butylène Glycol 2 Glycérine 3 Polyacrylamide, Isoparafme, 2,8 Laureth-7 B Butylène Glycol, Méthylparaben, 2 Ethylparaben, Propylparaben; Phénoxyéthanol, Méthylparaben, 2 P rop ylp arab en, Butylp arab en, Ethylparaben Butylène Glycol 0,5 C | Produits de l'invention 0,01 - 30 % La phase A est chauffée à 75 C; B puis C sont ajoutés à A sous agitation, 0 lors du retroidissement de la formule ainsi fabriquée. Formulation 2c: A Carbomer 0,50 Propylène Glycol 3 Glycérol 5 Eau qsp l00 B Octyl Cocoate 5 Bisabolol 0,30 Diméthicone 0,30 C | Sodium Hydroxyde 1, 60 D Phénoxyéthanol, Méthylparaben, 0,50 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben E Parfum 0,30 F | Produits de l'invention 0,01 - 30 /0 Les phases A et B sont chanffées séparément à 75 C, puis B est ajouté à A sous agitation vigoureuse; C puis D puis E puis F sont rajoutés ensuite, lors du refroidissement de la crème ainsi formoe. Exemple 3 de 1'invention: Utilisation des produits "lipolytiques" dans une formulation de type eau dans huile A PEG 30 - dipolyhydroxystearate 3 Triglycérides capriques 3 Cétéaryl Octanoate 4 Dibutyl Adipate 3 Huile de grains de raisin 1,5 Huile de Jojoba 1,5 Phénoxyéthanol, Méthylparaben, 0, 5 Propylp arab en, Butylp arab en, Ethylparaben B Glycérine 3 Butylène Glycol 3 Magnésium Sultate 0,5 EDTA 0,05 Eau qsp 100 C |Cyclométhicone 1 | Diméthicone 1 D | Parfum 0,3 E | Produits de l'invention 0,01 - 30 % Les phases A et B sont chauffées séparément à 75 C, puis B est ajouté à A sous agitation vigoureuse; C puis D puis E sont rajoutés ensuite, lors du refroidissement de la crème ainsi formoe. s Exemple 4 de l'invention: Utilisation des produits "lipolytiques" dans une formulation de type gel nettoyant visage A | Gomme de Xanthane 0,8 | Eau qsp 100 B Butylène Glycol, Méthylparaben, 0,5 Ethylp arab en, Propylp arab en Phénoxyéthanol, Méthylparaben, O,5 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben C Acide citrique 0,8 D Sodium Laureth SulLate 40,0 E Produit de l'invention 0,01 - 30 % Les phases A et B sont préparées à température ambiante séparément, puis B est ajouté à A sous agitation; C puis D puis E sont rajoutés ensuite, sous agitation modérce. Exemple 5 de l'invention: Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type anhydre A Cire minérale 17,0 Isostéaryl Isostéarate 31,5 Propylène Glycol Dipélargonate 2,6 Propylène Glycol Isostéarate 1,7 Cire d'aboilles/PEG 8 3,0 Huile de noyaux de palme hydrogénce 3,4 Huile de glycérides de palme hydrogénée Huile de Lanoline 3,4 Huile de Sésame 1,7 Cétyl Lactate 1,7 Huile minérale, Alcool de Lanoline 3,0 B Huile de ricin Qsp 100 Produits de l'invention présentés sous 0,001 - 5 % forme sèche Les phases A et B sont chanffées séparément à 80 C, puis B est ajouté à A sous agitation. s Exemple 6 de 1'invention: Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de gels aqueux (gels visages, gels corps, etc.) A Eau qsp 100 Polymère carboxyvinylique (aussi 0,5 appelé carbomer) Butylène Glycol15 Phénoxyéthanol,Méthylparaben, 0,5 P ropylp arab en,B utylp arab en, Ethylparaben B | Produits de l'invention 0,01 - 30 % La phase A est préparée en ajoutant tous les ingrédients et en chauffant l'ensemble à 80 C jusqu'à l'obtention d'un mélange homogène. B est alors ajouté à A sous agitation vigoureuse lors du refroidissement du gel ainsi formée. Exemple 7 - Tests d'innocuité Evaluation de l'acceptation cosmétique d'une préparation contenant les produits de l'invention Les essais de toxicologie ont été réalisés sur les deux composés retenus à savoir l'extrait de liane et l'extrait de millepertuis, utilisés purs, par une évaluation oculaire chez le lapin, par l'étude de l'absence de toxicité anormale par administration orale unique chez le rat et par l'étude du pouvoir sensibilisant sur le cobaye. 0 1. Evaluation de l'irritation primaire cutanée chez le lapin: Les préparations décrites ci-dessus sont appliquces sans dilution à la dose de 0,5 ml sur la peau de 3 lapins selon la méthode préconisce par la directive OCDE concernant l'étude de " l'effet irritant/corrosif aigu sur la peau ". Les produits sont classés selon les critères défnis par l'arrêté du 1/2/1982 publié au JORF du 21/02/82. Les résultats de ces essais, ont permis de conclure que les préparations retenues étaient classée non irritante pour la peau. 2. Evaluation de l'irritation oculaire chez le lapin: Les préparations décrites ci-dessus ont été instillées pure en une seule fois, à raison de 0,1ml, dans l'_il de 3 lapins selon la méthode préconisce par la directive de 1'OCDE n 405 du 24 février 1987 concernant l'étude de " l'effet irritant/corrosif aigu sur les yeux ". Les résultats de ce test permettent de conclure que les préparations peuvent étre considérées comme non irritantes pour les yeux, au sens de la directive 91/326 CEE utilisées pures 3. Essai sur l'absence de toxicité anormale par administration orale unique chez le rat: Les préparations décrites ont été administrces en une fois par voie orale à la dose de Sg/Kg de poids corporel, à 5 rats males et 5 rats femelles selon un protocole inspiré de la directive de 1'OCDE n 401 du 24 février 1987 et adapté aux produits cosmétiques. Les DL0 et DL50 sont trouvées supérieures à 5000 mg/Kg. Les préparations testées ne sont donc pas classces parmi les préparations dangereuses par ingestion. 4. Evaluation du potentiel de sensibilisation cutanée chez le cobaYe: Les préparations décrites sont soumises au test de maximisation décrit par Magousson et Kligmann, protocole en accord avec la ligne directrice n 406 de 1'OCDE. Les preparations sont classces comme non sensibilisantes par contact avec la peau. REVENDICATIONS 1. Procédé de test d'une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) on prépare un substrat contenant au moins un triacylglycérol, b) on met ce substrat en contact avec une substance éventuellement active dans le domaine de la lipolyse, et avec une lipoprotéine lipase, en présence d'un co-facteur de lipoprotéine lipase, pendant un temps suffisant pour libérer au moins en partie l'acide gras du triacylglycérol, et 0 c) on dose la capacité d'inLibition de la libération de l'acide gras résultant de l'activité de la lipoprotéine lipase, sous l'action de ladite substance éventuellement active et on évalue les résultats de l'inhibition que l'on compare au résultat obtenu en l'absence de la substance testée éventuellement active ou relativement au résultat obtenu en présence d'un inhibiteur connu servant de is référence. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la lipoprotéine lipase utilisée est issue du lait bovin, ou est d'origine bactérienne. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2 caractérisé en ce que le triacylglycérol précité comprend une partie acyle obtenue à partir d'un acide gras à longue châîne, de préférence comprenant C12 à C30 atomes de carbones saturés ou insaturés à chaine droite ou ramifice, encore de préférence majoritairement présent dans l'alimentation. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le triacylglycérol précité comprend ou est constitué de trioléin. 5. Procédé selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la lipoprotéine lipase est présente avec ledit co-facteur comprenant ou constitué de apolipoprotéine C-II, de préférence d'origine humaine. 6. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la lipoprotéine est mise en contact avec le substrat en présence d'une substance accepteur ou séquestrante d'acide gras évitant le blocage de l'activité enzymatique de la lipoprotéine lipase. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que la substance accepteur ou séquestrante d'acide gras comprend ou est constituée par de l'albumine bovine ou humaine. 8. Procédé selon l'une quelcouque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la capacité d'inhibition de la lipoprotéine lipase par la substance éventuellement active est réalisée en plusieurs étapes: a) tout d'abord, la lipoprotéine lipase est incubée pendant un temps déterminé en présence de la substance éventuellement active comme inhibiteur, b) le substrat contenant le triacylglycérol est incubé en présence du cofacteur de la lipoprotéine lipase, de préférence comprenant ou constitué par l'apolipoprotéine C-II, c) le mélange triacylglycérol/cotacteur de la lipoprotéine lipase, de o préférence apolipoprotéine C-II, est incubé en présence de l'enzyme lipoprotéine lipase avec ou sans la substance testée éventuellement active pour sa capacité d'inUibition de la lipoprotéine lipase, d) à l'issue de cette incubation, on effectue un dosage des acides gras non estérifiés sur le milieu réactionnel par une technique disponible à l'homme de l'art, lS et e) on compare la capacité d'inhibition de la libération de l'acide gras du triacylglycérol, ou acide gras non estérifié, résultant de l'activité de la lipoprotéine lipase en présence de la substance testée éventuellement active, relativement au résultat obtenu en l'absence de la substance testée éventuellement active ou relativement au résultat obtenu en présence d'un inhibiteur connu servant de rétérence. 9. Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce que le dosage des acides gras non estérifiés est réalisé sur le milieu réactionnel par une technique enzymatique, de préférence pour étre suivi en colorimétrie à une longueur d'onde déterminée par la technique enzymatique choisie, et dans ce cas on détermine la diminution de la densité optique obtenue à cette longueur d'onde par rapport au témoin ou à l'inhibiteur de référence. 10. Procédé selon la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce que le dosage des acides gras non estérifiés est réalisé sur le milieu réactionnel par une technique enzymatique pouvant être suivie en colorimétrie à SSOnm et on détermine une inhibition de la densité optique à SSOnm traduisant une diminution des acides gras synthétisés dans le milieu réactionnel, que l'on compare au témoin ou à un inhibiteur de référence, et on détermine l'activité positive ou négative de la dite substance testée dans le cadre de l'observation d'une inhibition significative ou non réalisoe par la dite substance testée par rapport au témoin ou un inhibiteur de référence. -- 2824334FR 01 05908 le 11-10-2001 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 caractérisé en ce que la substance éventuellement active précitée est choisie parmi le groupe consistant d'un extrait de Fucus; un extrait de Dulse palmaria palmata; un extrait de protéines de blé; un extrait de Spiruline; un extrait de Chèvrefeuille; un extrait de Citron; un extrait de Millepertuis; un extrait de protéines de riz; un extrait de Liane; un extrait de Pomme de terre; un extrait de Shiitake; un extrait de saumon frais; un extrait de Potiron; un extrait de citron. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la substance éventuellement active est un extrait de Liane, en particulier de Liane Uncaria Tomentosa. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la substance éventuellement active précitée est un extrait de Millepertuis. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'on identifie une substance pour son activité lipolytique, en particulier amincissante, à partir du test d'inUibition précité. 15. Utilisation du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, pour évaluer l'activité d'une substance utilisable dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'un médicament en vue de traiter les dépôts graisseux, notamment par lipolyse, ou pour une activité amincissante, ou pour augmenter la microcirculation sanguine, pour améliorer l'aspect ou la tonicité de la peau, en particulier pour atténuer l'aspect "peau d'orange". 16. Utilisation du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14