Brevet FR2833013A1 — publié le 20030606

L'invention a trait aux électrodes organiques élaborées à partir de polymères électroactifs sur lesquels sont liés des anti-ligands destinés à interagir spécifiquement avec des ligands. Dans les électrodes décrites dans l'art antérieur l'interaction spécifique de l'anti-ligand avec le ligand entraîne une variation sensible et sélective des propriétés électrochimiques du polymère électroactif, telle qu'une diminution de l'électroactivité dudit polymère. Cette variation, qui dépend de la concentration en ligand greffé, est observée, éventuellement mesurée, et directement corrélée à la quantité de ligand greffé. Une des applications essentielles de cette technique réside donc dans la détection, l'identification, et éventuellement le dosage, d'un ligand, présent dans un échantillon biologique. La variation précitée est de type potentiométrique, telle qu'une variation du potentiel d'oxydation du polymère électroactif avant et après interaction, ou de type ampérométrique, telle qu'une variation du courant d'oxydation ou de réduction du polymère avant et après hybridation, déterminé à un potentiel déterminé. Selon le document WO-A-95/29199, on connaît un polypyrrol, constitué par des monomères consistant chacun en un noyau pyrrole substitué de manière covalente sur le carbone en position 3 du noyau pyrrole, par un polynucléotide sonde. Le polypyrrol ainsi obtenu est appliqué à la détection, et éventuellement le dosage, de ligands, in vitro ou in vivo. Pour caractériser précisément la réponse électrochimique du polymère, celui-ci doit présenter une forte électroactivité. La capacité à lier des métaux du NTA (nitritotriacétate) ou de l'IDA (iminodiacétate) a déjà été étudiée avec des métaux bi-ou trivalents. Par exemple la chromatographie d'affinité par métal immobilisé (IMAC) a été utilisée pour purifier des protéines (Porath et al. (1975), Nature 258, 598-599) en utilisant l'IDA comme agent chélatant. L'IDA a été chargé avec des ions métalliques, tels que Zn2+, Cu2+ ou Ni2+ et a été utilisé pour purifier des protéines ou des peptides. L'IDA a seulement trois sites disponibles pour la chélation de métaux et ne peut donc pas fortement lier les métaux. Les métaux ont des potentiels d'oxydation spécifiques, qui sont caractéristiques et permettent leur détection et leur dosage par électrochimie. Cependant l'analyse classique par électrochimie en solution d'un milieu contenant des ions métalliques permet de détecter des quantités d'ions de l'ordre de 10-5 mole par litre. Par ailleurs la limite de détection d'un dispositif de complexation est dépendante de la quantité d'agent complexant utilisé. Une des solutions possibles pour abaisser la limite de détection consiste en le confinement d'espèces ioniques sur l'électrode de mesure, par l'intermédiaire de la fixation d'agents chélatants sur l'électrode. La fixation d'agents chélatants en grand nombre sur une électrode n'est cependant pas aisée, car les agents chélatants classiques comme l'EDTA, ne peuvent pas être déposés sur des électrodes en couche supérieures à des couches monomoléculaires, sous peine d'empêcher la conduction du courant et de nuire à la sensibilité et la fiabilité de la détection car seuls des dépôts de quelques Angströms sont conducteurs et ils ne permettent donc pas le confinement recherché. Utiliser un polymère conducteur comme support de ces agents chélatants permet de conserver même pour des dépôts relativement importants, de l'ordre de la centaine de micromètres, la continuité de la conduction et donc d'abaisser la limite de détection à des seuils de l'ordre de 10-9 à 1 molécules par cm2. Cette continuité de détection est obtenue grâce à la structure tridimensionnelle des polymères conducteurs sur lesquels sont fixés les agents chélatants. Ces polymères conducteurs sur lesquels sont fixés des agents chélatants lorsque des ions métalliques sont complexés permettent donc d'obtenir des réponses électrochimiques facilement caractérisables. Le NTA est un agent chélatant tétradentate. Quatre des ses six sites de liaison pour un ligand sont utilisés dans la sphère de coordination des ions cuivre ou nickel, ce qui laisse deux sites disponibles pour interagir avec une polyhistidine (6xHis tag). Le NTA lie les ions métalliques de manière plus stable que d'autres résines disponibles pour la chélation. Ainsi, un premier objet de l'invention est un complexe électroactif, constitué par un polymère homopolymère ou copolymère électroactif d'au moins deux monomères, fonctionnalisé par un agent chélatant complexé avec un ion métallique, un anti-ligand et un ligand ayant spécifiquement interagi avec ledit anti-ligand. Avant de détailler l'invention, certains termes employés dans la description et les revendications sont ci-après définis. Les termes anti-ligand et ligand font indifféremment référence à des molécules biologiques telles que des polynucléotides ou des peptides, mais aussi à des molécules chimiques. L'anti-ligand est susceptible d'interagir spécifiquement avec le ligand pour former un conjugué ligand/anti-ligand. A titre d'exemples de conjugués, on peut citer tout couple peptide/anticorps, anticorps/haptène, hormone/récepteur, polynucléotide/polynucléotide, polynucléotide/acide nucléique et analogues. Le terme polynucléotide tel qu'employé selon l'invention désigne un enchaînement d'au moins cinq nucléotides (désoxyribonucléotides ou ribonucléotides), naturels ou modifiés, susceptible de s'hybrider, dans des conditions appropriées d'hybridation, avec un polynucléotide au moins partiellement complémentaire. Par nucléotides modifiés, on entend par exemple, un nucléotide comportant une base modifiée et/ou comportant une modification au niveau de la liaison internucléotidique et/ou au niveau du squelette. A titre d'exemple de bases modifiées, on peut citer l'inosine, la méthyl-5-désoxycytidine, la diméthylamino-5-désoxyuridine, la diamino-2,6-purine et la bromo-5désoxyuridine. Pour illustrer une liaison internucléotidique modifiée, on peut mentionner les liaisons phosphorothioate, H-phosphonate et alkylphosphonate. Les alpha-oligonucléotides tels que ceux décrits dans FR-A-2 607 507 et les PNA qui font l'objet de l'article de M. Egholm et al., J. Am. Chem. Soc. (1992) 114,1895-1897, sont des exemples de polynucléotides constitués de nucléotides dont le squelette est modifié. Le terme peptide signifie notamment tout enchaînement d'au moins deux acides aminés, tels que protéine, fragment de protéine, oligopeptid, qui a été extrait, séparé, isolé ou synthétisé, comme un peptide obtenu par synthèse chimique ou par expression dans un organisme recombinant. Sont inclus aussi, tout peptide dans la séquence duquel un ou plusieurs acides aminés de la série L sont remplacés par un ou plusieurs acides aminés de la série D, et vice-versa ; tout peptide dont l'une au moins des liaisons CO-NH est remplacée par une liaison NH-CO ; tout peptide dont l'une au moins des liaisons CO-NH est remplacée par une liaison NH-CO, la chiralité de chaque résidu aminoacyle, qu'il soit impliqué ou non dans une ou plusieurs dites liaisons CO-NH, étant soit conservée, soit inversée par rapport aux résidus aminoacyles constituant un peptide de référence (ou immunorétroïdes) ; et tout mimotope. Pour illustrer les diverses classes des peptides concernés, on peut mentionner les hormones adrénocorticotropiques ou leurs fragments, les analogues d'angiotensine et leurs inhibiteurs, les peptides natriurétiques, la bradykinine et ses dérivés peptidiques, les peptides chimiotactiques, la dynorphine et ses dérivés, les endorphines et leurs dérivés, les encéphalines et leurs dérivés, les inhibiteurs d'enzymes, les fragments de fibronectine et leurs dérivés, les peptides gastro-intestinaux, les peptide opioïdes, l'oxytocine, la vasopressine, la vasotocine et leurs dérivés, les protéines kinase. Le terme anticorps définit tout anticorps monoclonal ou polyclonal, tout fragment dudit anticorps tel que les fragments Fab, Fab'2 ou Fc, ainsi que tout anticorps obtenu par modification ou recombinaison génétique. Les termes greffer , lier et fixer en l'absence de toute indication, sont indifféremment employés dans le présent texte pour désigner une relation entre deux entités, sans en définir la nature chimique. Il peut ainsi s'agir d'une liaison faible ou d'une liaison covalente. Un groupe de liaison selon l'invention relie, par liaison covalente, deux entités chimiques, après interaction desdites deux entités, l'une au moins ayant été au préalable activée ou activable, en vue de cette interaction, par un groupe activé ou activable. Le groupe de liaison peut donc résulter de la réaction dudit groupe activé ou activable d'une entité sur une fonction réactive de l'autre entité, et vice-versa, ou de la réaction dudit groupe activé ou activable d'une entité sur un autre dit groupe activé ou activable de l'autre entité. Par groupe activé, on entend un groupe permettant, par son intermédiaire, l'interaction de l'entité sur lequel il est fixé avec une autre entité. A titre d'exemple, il peut s'agir d'un groupe ester activé tel que le groupe -CO-[O-N-phtalimide]. Par groupe activable, on comprend un groupe qui peut être transformé en un groupe activé, par exemple dans certaines conditions réactionnelles ou lors de la mise en contact avec un groupe activé susceptible d'interagir avec lui. Le complexe de l'invention tel que défini précédemment répond avantageusement aux caractéristiques suivantes considérées seules ou en combinaison. Le ligand et l'anti-ligand sont des molécules biologiques, notamment choisies parmi les polynucléotides et les polypeptides, qui peuvent être marqués par un traceur susceptible de générer directement ou indirectement un signal. Selon un complexe préféré de l'invention, le polymère électroactif est un polypyrrol constitué d'au moins deux monomères consistant chacun en un noyau pyrrole. Ce complexe préféré présente en outre les caractéristiques suivantes, considérées seules ou en combinaison. Le polypyrrol est un copolymère et comprend un monomère dont le noyau pyrrole est substitué par un groupe-CH-COOH ou - CH2-CH2OH. Un autre objet de l'invention est une sonde électroactive, constituée par un polymère homopolymère ou copolymère, électroactif, d'au moins deux monomères, fonctionnalisé par un agent chélatant, un anti-ligand susceptible d'interagir spécifiquement avec un ligand, ladite sonde comprenant en outre au moins un groupement électrodonneur. Elle possède avantageusement au moins l'une quelconque des caractéristiques suivantes. Le polymère électroactif est choisi parmi le polypyrrol, le polyacétylène, la polyazine, le poly (p-phénylène), le poly (p-phénylène vinylène), le polypyrène, le polythiophène, le polyfuranne, le polysélénophène, la polypyridazine, le polycarbazole, la polyanilin, les polynucléotides bicaténaires et/ou le groupe électrodonneur est choisi parmi le ferrocène, la quinone et les dérivés de ceux-ci, et/ou l'anti-ligand est une molécule biologique notamment choisie parmi les polynucléotides et les polypeptides, et est éventuellement marqué par un traceur susceptible de générer directement ou indirectement un signal. L'étape d'électropolymérisation est réalisée en utilisant des techniques bien connues de l'homme du métier. Par exemple, elle peut être conduite en soumettant les monomères à des variations de potentiel électrique suffisantes pour provoquer la polymérisation par une oxydation et une réduction successives ; ou bien par polymérisation à courant (chronopotentiométrie) ou à potentiel (chronoampérométrie) imposés. Une sonde de l'invention présente des applications diagnostiques. Aussi, l'invention concerne encore un procédé de détection d'un polynucléotide cible dans un échantillon biologique, selon lequel on met en contact ladite sonde, dans des conditions d'hybridation appropriées, et on met en évidence ou on quantifie une différence de potentiel ou une variation de courant entre la sonde avant mise en contact et la sonde après mise en contact. L'invention concerne également l'utilisation pour la détection d'un polynucléotide cible dans un échantillon biologique d'une sonde, utilisation selon laquelle on met en contact ladite sonde, dans des conditions d'hybridation appropriées, et on met en évidence ou on quantifie une différence de potentiel ou une variation de courant entre la sonde avant mise en contact et la sonde après mise en contact. La présente invention a aussi pour objet une électrode dont tout ou partie de la surface est revêtue d'une sonde définie précédemment. Une telle électrode peut être obtenue par toute technique classique bien connue de l'homme du métier. A titre d'exemple, il peut être procédé à cette préparation en déposant un polypyrrole de l'invention à la surface d'une électrode de platine, d'or, de chrome ou de titane recouvert d'or, de carbone vitreux ou d'un oxyde conducteur tel que l'oxyde d'étain ou un oxyde mixte d'étain et d'indium. Les différents objets de l'invention sont illustrés dans les exemples suivants qui font référence aux figures 1 à 8 annexées et desquels ressortiront leurs caractéristiques préférentielles et avantages. Exemple 1 : préparation de films à base de polymères électro- conducteurs. Des monomères de pyrrole fonctionnalisés en position 3 par une N-hydroxyphthalimide (NHP) ont été synthétisés et ensuite polymérisés pour obtenir un film polymère Poly (3- (carboxymethylpyrrole)-NHP) portant des groupements ester actifs. Synthèse du monomère : La synthèse du monomère 3-carboxymethylpyrrole-NHP a été exécutée en estérifiant le groupement carboxylique de l'acide 3-pyrroleacétique avec de la N-hydroxyphthalimide et du dicyclocarboxydiimide comme catalyseur, dans du chloroforme comme solvant, à température ambiante. Le schéma réactionnel est présenté ci-dessous. /-L ? von'--l OH c0-t ? /-d\ PY-3 Acetio acide ) f'N CHC1. 3/RT 0 d H CHCL3/PTy Synthèse du polymère Une solution de monomère 3-carboxymethylpyrrole-NHP 0,1 M est préparée dans de l'acétonitrile anhydre fraîchement distillé en présence d'un électrolyte (LiC04, 0, 5 M). Ce monomère est polymérisé dans une cellule à quatre compartiments, en utilisant une électrode de platine de 0,7 cm2, une électrode auxiliaire de platine et une électrode de calomel saturée comme électrode de référence, au potentiel contrôlé de 0,9 V pour obtenir le film de Poly (3 carboxymethylpyrrole-NHP). Le film obtenu est lavé avec de l'acétone et séché. L'électroactivité est ensuite mesurée dans un milieu d'acétonitrile contenant LiCI04 0, 1 M comme électrolyte après purge avec de l'argon pour enlever l'oxygène. La voltamétrie cyclique est enregistrée à la vitesse de 20 mV/s comme représentée à la figure 1. On obtient un signal électrochimique stable et réversible avec un pic d'oxydation Eox = 317 mV/SCE et confirmation de l'activité électrochimique en milieu organique. Après analyse, l'électrode est lavée avec de l'acétone et séchée. Exemple 2 : greffage de l'acide imino-diacétique (IDA) ou de l'acide N- (5-amino-1-carboxypentyl) imino-diacétique (NTA) sur des films polymères de Poly (3-carboxymethylpyrrole-NHP) conducteurs. Une fois le film de Poly (3-carboxymethylpyrrole-NHP) formé et analysé comme décrit dans l'exemple 1, l'électrode est immergée dans une solution aqueuse saturée de NTAou IDA, à température ambiante pendant 12 heures, lavée avec l'eau ultra pure, séchée. La synthèse de Poly (3- carboxymethy ! pyrro ! e- ! DA) ou de Poly (3-carboxymethylpyrrole-NT A) est représentée ci-dessous : \P 0 (-00 OH N 0 - ~cU, COOIIh N 0 xW N L'électrode obtenue est lavée avec de l'eau ultra pure, séchée et l'électroactivité est contrôlée dans un milieu aqueux contenant du NaCI, 0, 5M. L'analyse électrochimique est représentée à la figure 2. Le signal électrochimique est stable et réversible en milieu aqueux. Des films de Poly (3-carboxymethylpyrrole-NHP) de différentes épaisseurs ont été préparés et les films obtenus ont été greffés avec le NTA. La réponse électrochimique enregistrée en milieu aqueux en présence de NaCI, 0,5 M confirme la présence d'un film électrochimiquement actif en milieu aqueux. La comparaison de la charge de Poly (3- carboxymethylpyrrole-NHP) déposée au début sur l'électrode et la charge calculée de NTA greffé sur le film, suggère que le rendement de greffage du NTA ou de l'IDA sur le film de 100 %. En d'autres termes, la quantité de NTA ou d'IDA greffée sur le film de poly (3-carboxy) pyrrole dépend de la quantité d'unités de 3-carboxymethylpyrrole-NHP présentes sur les électrodes, comme illustré par les courbes de la figure 3. Exemple 3 : Complexation du film de Poly (3- carboxymethylpyrrole-NTA) avec le cuivre sur électrode. HO Hots % HN NTA/Cu++ cu 2+ J~OH/i "Í N n ' & " /1 N n Poly (Py-NTA) Poly (Py-NTA-Cu) L'électrode comportant le film de poly (3-carboxymethylpyrrole- NTA) a été électrochimiquement analysée en milieu aqueux, lavée avec de l'eau déionisée, séchée et elle est ensuite immergée dans une solution aqueuse de CuCI2 en présence de NaCI 0,5 M, à température ambiante pendant 3 heures. L'électrode est ensuite rincée dans l'eau déionisée, séchée et analysée électrochimiquement dans une solution aqueuse contenant du NaCl 0,5M. La disparition du signal électrochimique du Poly (3carboxymethylpyrrole-NTA) et l'apparition d'un pic caractéristique de l'oxydation de Cu+ en Cu2+ à -0, 2 V-0,35 V, qui est stable mais non réversible et électroactif en milieu aqueux, confirme la complexation du cuivre avec le Poly (3-carboxymethylpyrrole-NT A) (figure 4). Exemple 4 : Greffage de la Polyhistidine sur les films de po) ypyrro) e-NTA/Cu Les électrodes comportant un film polypyrrole-NTa/Cu2+ sont lavées avec de l'eau, puis séchées et immergées dans une solution tampon PBS de polyhistidine de poids moléculaire de 6300 g en quantité équimoléculaire avec la quantité de cuivre complexé sur le film de Polypyrrole-NTA contenant du NaCI pendant une heure à température ambiante. Après lavage avec une solution tampon, elles sont séchées puis analysées électrochimiquement dans une solution aqueuse contenant 0,5 M DE NaCI. On observe sur le voltamogramme illustré par les courbes de la figure 5 que les signaux du cuivre sont toujours présents. Mise en évidence de la réversibilité du greffage : NTA/Cu++ NTA/Ca7 Po ! y H 4 Polybistidine 4 1 ti I-R) TA/I N n - - 1 N n Les électrodes comportant de la polyhistidine greffée obtenues précédemment sont traitées par immersion dans une solution aqueuse d'EDTA à température ambiante pendant 15 minutes, rincées puis séchées. Elles sont ensuite analysées électrochimiquement dans une solution aqueuse contenant 0,5 M de NaCI. On observe sur le voltamogramme illustré par les courbes de la figure 6 la disparition du pic caractéristique du Cuivre ce qui signifie que l'EDTA a déplacé le Cuivre du complexe avec le NTA du film. On peut conclure que la complexation et la décomplexation du cuivre sur un film de polypyrrole-NTA est un phénomène réversible. Exemple 5 : Immobilisation d'un antigène sur un film de polypyrrole-NTA complexé par des ions Cu2+ : La protéine immobilisée RH24 est une protéine modifiée par addition de 6 amino-acides Histidine en position N-terminale de la protéine P24 naturellement synthétisée par Escherichia Coli de masse moléculaire théorique de 26950 g. Le greffage est effectué par incubation de 5 nmole d'antigène pendant 3 heures à température ambiante sur le film Cu/Po ! ypyrro) e-NTA. Elles sont ensuite analysées électrochimiquement dans une solution aqueuse contenant 0, 5 M de NaCI. La voltamétrie cyclique est enregistrée à la vitesse de 20Mv/s. Sur le voltamogramme représenté à la figure 7 on observe une décroissance du signal lié à la complexation de l'antigène. Exemple 6 : Détection d'un Anticorps sur un film de polypyrrole-NTA complexé par des ions Cu2+ sur lequel est immobilisé un antigène. La détection est effectuée par immersion de l'électrode comportant un film de polypyrrole-NTA complexé par des ions Cu2+ sur lequel est immobilisé un antigène dans une solution de 0,6 nmole d'Anticorps spécifique de l'Antigène. Elles sont ensuite analysées électrochimiquement dans une solution aqueuse contenant 0,5 M de NaCI. La voltamétrie cyclique est enregistrée à la vitesse de 20Mv/s. Sur le voltamogramme représenté à la figure 8 on observe une modification du signal lié au couplage antigène/anticorps. REVENDICATIONS 1. Complexe électroactif, constitué par un polymère homopolymère ou copolymère électroactif d'au moins deux monomères, fonctionnalisé par un agent chélatant complexé avec un ion métallique, un anti-ligand et un ligand ayant spécifiquement interagi avec ledit anti-ligand. 2. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que le polymère électroactif est choisi parmi le polypyrrol, le polyacétylène, la polyazine, le poly (p-phénylène), le poly (p-phénylène vinylène), le polypyrène, le polythiophène, le polyfuranne, le polysélénophène, la polypyridazine, le polycarbazole, la polyanilin, les polynucléotides bicaténaires. 3. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que le l'agent chélatant est choisi parmi le NTA (nitrilotriacétate), L'IRA (iminodiacétate). 4. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'ion métallique est choisi parmi les cations de cuivre ou de mercure. 5. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que le ligand et l'anti-ligand sont des molécules biologiques notamment choisies parmi les polynucléotides et les polypeptides. 6. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que le ligand est la polyhistidine. 7. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'anti-ligand ou le ligand est lié sur les sites de chélation de l'agent chélatant. 8. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que les ions métalliques sont liés sur les sites de chélation de l'agent chélatant. 9. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que le polypyrrol est un copolymère et comprend un monomère dont le noyau pyrrole est substitué par un groupe-CH-COOH ou-CH-CHOH. 10. Sonde électroactive, constituée par un complexe électroactif, constitué par un polymère homopolymère ou copolymère électroactif d'au moins deux monomères, fonctionnalisé par un agent chélatant complexé avec un ion métallique, un anti-ligand et un ligand ayant spécifiquement interagi avec ledit anti-ligand. 11. Sonde électroactive selon la revendication 10, caractérisée en ce que le polymère électroactif est choisi parmi le polypyrrole, le polyacétylène, la polyazine, le poly (p-phénylène), le poly (pphénylène vinylène), le polypyrène, le polythiophène, le polyfuranne, le polysélénophène, la polypyridazine, le polycarbazole, la polyaniline, les polynucléotides bicaténaires. 12. Sonde électroactive selon la revendication 10, caractérisée en ce que le l'agent chélatant est choisi parmi le NTA (nitrilotriacétate), l'IDA (iminodiacétate). 13. Sonde électroactive selon la revendication 10, caractérisée en ce que l'ion métallique est choisi parmi les cations de cuivre ou de mercure. 14. Sonde électroactive selon la revendication 10, caractérisée en ce que le ligand et l'anti-ligand sont des molécules biologiques notamment choisies parmi les polynucléotides et les polypeptides. 15. Sonde électroactive selon la revendication 10, caractérisée en ce que le ligand est la polyhistidine. 16. Sonde électroactive selon la revendication 10, caractérisée en ce que l'anti-ligand ou le ligand est lié sur les sites de chélation de l'agent chélatant. 17. Sonde électroactive selon la revendication 10, caractérisée en ce que les ions métalliques sont liés sur les sites de chélation de l'agent chélatant. 18. Sonde électroactive selon la revendication 10, caractérisée en ce que le polypyrrol est un copolymère et comprend un monomère dont le noyau pyrrole est substitué par un groupe-CH-COOH ou-CH-CHOH. 19. Procédé pour préparer une sonde selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : (a) On dispose d'un polypyrrol homopolymère ou copolymère constitué par au moins deux monomères consistant chacun en un noyau pyrrole, dont au moins un est substitué sur le carbone en position 3 par un groupe activé, (b) On dispose d'agent chélatant en solution aqueuse, et (c) On fonctionnalise le polypyrrole homopolymère ou copolymère, substitué par un groupe activé, par l'agent chélatant par hydrolyse, d) on complexe le polypyrrole fonctionnalisé avec l'agent chélatant par contact avec une solution aqueuse d'ions métalliques e) on greffe le ligand par contact du polypyrrole complexé fonctionnalisé avec l'agent chélatant et complexé avec un les ions métalliques par contact avec une solution de ligand. 20. Procédé de détection d'un ligand dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'on met en contact une sonde selon l'une quelconque des revendications 10 à 18, dans des conditions de réaction appropriées pour l'interaction spécifique anti-ligand/ligand, et en ce qu'on met en évidence ou on quantifie une différence de potentiel ou une variation de courant entre la sonde avant mise en contact et la sonde après mise en contact. 21. Procédé selon la revendication 20, caractérisée en ce que le ligand est une polyhistidine. 22. Electrode dont tout ou partie de la surface est revêtue d'une sonde selon l'une quelconque des revendications 10 à 18.