Brevet FR2824269A1 — publié le 20021108

ment de la laque organique sur les matières kératiniques. 1 2824269 La présente invention concerne de nouveaux adjuvants pour compositions vacci nales ainsi que des compositions comprenant au moins un antigène, notamment un anti gène d'origine virale, bactérienne ou parasitaire et au moins un adjuvant. Le développement de vaccins inactivés ou contenant des antigènes purifiés est de plus en plus important, car il permet d'éviter les effets secondaires indésirables. Cepen dant, I'amélioration de la qualité des antigènes se fait au détriment de leur caractère im munogène. C'est pour cette raison qu'ils sont associés à des adjuvants d'immunité. Les adjuvants d'immunité sont des produits qui augmentent les résctions du sys tème immunitaire, lorsqu'ils sont administrés en présence d'antigènes d'origine virale, bactérienne ou synthétique. Ils provoquent l'apparition massive de macrophages au site d'injection, puis dans les nodules Iymphatiques, accroissent la production d'immunoglobu lines spécifiques, les anticorps, et stimulent de nombreuses cellules impliquses dans les mécanismes de la défense immunitaire. Ces adjuvants sont de natures diverses. Ils peuvent par exemple consister en des liposomes ou des émuisions. Les adjuvants de Freund très efficaces; ils résultent de l'association d'une huile minéraie et d'un ester de mannitol contenant ou non une mycobactérie tuée. Les vaccins réalisés par mélange en parts égales d'un adjuvant de Freund avec un milieu antigénique aqueux, restent encore les références dans le monde entier pour les études en labora toire. I ls se présentent so us forme d'ému isions eau dans h ui le (E / H), c'est à dire d'ém u l sions dans lesquelles la phase continue est l'huile. Le principe actif est généralement lo calisé dans la phase aqueuse qui est souvent une solution saline tamponnée. Cette phase est sous forme de gouttes séparées entre elles par un film huileux. Cette formula tion permet d'obtenir des réponses biologiques amplifiées et prolongées dans le temps. Cependant les émuisions de ce type (E / H) sont généralement très visqueuses et sont donc difficilement injectables. Elles nscessitent souvent l'utilisation de seringues à diamètre d'aiguille important et sont la cause de douleurs lors de l'injection et de trauma tismes au site de l'injection. La teneur en phase aqueuse les émuisions E / H injectables se situe autour de 30 % à 40 % en poids. Le maximum rencontré est 50 %. Or cette limite constitue un frein notamment au développement de vaccins polyvalents, dans lesquels sont associés plu sieurs antigènes et pour lesquels il serait préférable d'obtenir des émuisions E / H ayant des teneurs en phase aqueuse supérieures à 50 %. Or, dans une émuision E / H à faible teneur en phase aqueuse, jusqu'environ 20 % en poids, la viscosité de l'émulsion est très proche de la viscosité de l'huile. i 2 2824269 L'augmentation de la proportion en phase aqueuse augmente sa viscosité. C'est ainsi qu'une émuision à 20 % en poids d'eau ayant une viscosité de 100 mPa.s, se transforme en une crème très difficilement injectable lorsqu'on augmente la teneur en eau jusqu'à 50 % en poids. Certains adjuvants huileux commerciaux comme le MONTANIDE_ ISA 70 per mettent d'obtenir des émuisions injectables E / H contenant environ 30 % en poids, de phase aqueuse, 70 % en poids de phase huileuse et ayant des viscosités de l'ordre de 50 à 100 mPa.s. D'autres adjuvants, comme le MONTANIDE_ ISA 50, permettent d'obtenir des émulsions injectables E / H contenant environ 50 % en poids de phase aqueuse, 50 % en poids de phase huileuse et ayant des viscosités inférieures à 250 mPa.s. La demande internationale de brevet publiée sous le numéro W0 99/20305 divul gue l' utilisation de tensioactifs sur oléate de man n itol avec des h u i les m iné rales comme le MARCOL_ 52 pour faire des émuisions, dites fluides, de viscosités de l'ordre de 500 mPa..s. La notion d'émuision fluide dépend largement du domaine d'application. Pour les émuisions injectables, la limite supérieure de viscosité pour une émuision fluide est défi nie par rapport à la viscosité d'une émuision de type E / H de référence, qui contient 50 % en poids de phase aqueuse et 50 % en poids d'adjuvant incomplet de Freund (IFA); cette viscosité est de l'ordre d'environ 2 000 mPa.s. Cette émuision est considérée comme très visqueuse. Une émuision de type E / H sera dite fluide, si sa viscosité est inférieure à 4 fois celle de cette émuision de référence, c'est-à-dire inférieure à 500 mPa.s à 25 C (BROOKFIELD LVT M 2 V 30). Cependant les émuisions fluides sont en général moins stables que les émuisions plus visqueuses, puisque des déphasages sont observés quelques jours seulement, après leur préparation. La demanderesse a donc cherché à mettre au point des émuisions de type eau dans - huile (E / H), concentrées en phase aqueuse qui n'aient pas les inconvénients ex posés ci-dessus, c'est à dire qui soient fluides et stables au cours du temps. Le critère de stabilité de l'émuision étant jugé satisfait si elle ne présente aucun défaut majeur après 1 mois aux trois températures suivantes: 4 C, 25 C et 37 C. L'invention a pour objet, une composition comprenant une phase grasse H et une phase aqueuse E, sous forme d'une émuision de type eau - dans - huile et caractérisée en ce que le rapport pondéral E / H est supérieur à 1. Selon un premier aspect particulier de la présente invention, le rapport pondéral E / H est inférieur ou égal à 3. 3 2824269 La phase grasse constitutive de la composition objet de la présente invention, comprend généralement un ou plusieurs composés choisis parmi les huiles d'origine mi nérale, végétale ou animale, les esters alkyliques desUites huiles, les esters alkyliques d'acides gras ou les éthers alkyliques d'acides gras, les esters d'acides gras et de polyols S ou les éthers d'alcools gras et de polyols. Comme exemples d'huile d'origine minérale, il y a les huiles d'origine pétrolière, comme les huiles blanches minérales telles que le MARCOL_ 52 ou le DRAKEOL_ 6 VR. Comme exemples d'huiles d'origine végétale, il y a l'huile d'arachide, I'huile d'olive, I'huile de sésame, I'huile de soja, i'huile de germes de blé, I'huile de pépins de raisin, I'huile de tournesol, I'huile de ricin, I'huile de lin, I'huile de soja, I'huile de mais, I'huile de coprah, I'huile de palme, I'huile de noix, I'huile de noisette, I'huile de colza ou encore le squalane ou le squalène d'olive. Comme exemples d'huiles d'origine animale, il y a l'huile de spermaceti, I'huile de suif, le squalane ou le squalène extraits des foies de poissons. Comme exemples d'esters alkyliques d'huiles, il y a les esters méthyliques éthyli ques, propyliques linéaires ou ramifiés ou butyliques, linéaires ou ramifiés, desdites hui les. Com me acides gras appropriés à la prépa ration des esters cités ci-dessus, il y a plus particulièrement, ceux comportant de 12 à 22 atomes de carbone, tels que par exemple, I'acide myristique, I'acide palmitique, I'acide oléique, I'acide ricinoléique ou I'acide isostéarique et avantageusement un acide gras liquide à 20 C. Comme exemples d'esters d'acides gras ou d'éthers d'acides gras, il y a les esters alkyliques d'acides gras, tels que, I'oléate d'éthyle, I'oléate de méthyle, le myristate d'isopropyle ou le palmitate d'octyle, les esters d'acides gras et de polyols ou les éthers d'alcools gras et de polyols, tels que les monoglycérides d'acides gras, les diglycérides d'acides gras, les triglycérides d'acides gras, les esters d'acides gras avec un polyglycérol ou les esters d'acides gras et de propylèneglycol, et plus particulièrement les esters d'aci des gras avec un hexcl, tel que par exemple le sorbitol ou le mannitol, les esters d'acides gras avec un anhydride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane. Dans le cadre de la présente invention, la phase grasse peut comprendre un seul des composés cités ci-dessus ou bien un mélange de plusieurs des composés cités ci dessus. La phase grasse, constitutive de la composition objet de la présente invention, comprend aussi un ou plusieurs agents tensioactifs ayant un nombre HLB global compris entre 5 et 8. La phase grasse comprend environ entre 1 % et 15 % en poids, de préférence en tre 3 % et 10% en poids d'agents tensioactifs. 4 2824269 Au sens de la présente invention, le nombre HLB d'un tensioactif est calculé par la formule HLB = 20 (1-lS/la), dans laquelle Is représente l'indice de saponification et la, I'in- dice d'acide d ud it tensioactif. Da ns le cas d' u n méla nge de tensioactifs, le H LB d u mé- lange est la som me pondérée des H LB de chaque tensioactif. Ces deux indices, de sapo nification et d'acide, sont déterminés par des méthodes décrites dans la Pharmacopée eu- ropéenne. L'invention a plus particulièrement pour objet, une composition telle que définie précédemment dans laquelle l'agent tensioactif ou le mélange d'agents tensioactifs a un nombre HLB global est supérieur ou égal à 6 et inférieur à 8. Les agents tensioactifs mis en _uvre sont généralement choisis parmi les corps gras modifiés. Les corps gras modifiés utilisés dans le cadre de la présente invention, peuvent être d'origine minérale végétale ou animale. Comme corps gras modifiés d'origine miné- rale, il y a les huiles d'origine pétrolière. Comme corps gras modifiés d'origine végétale, il y a les huiles végétales modi fises, par exemple, les huiles modifiées d'arachide, d'olive, de sésame, de soja, de ger mes de blé, de pépins de raisin de tournesol, de ricin, de lin, de soja, de maTs, de coprah, de palme, de noix, de noisettes ou de colza. Comme corps gras modifiés d'origine animale, il y a par exemple le squalane mo difié, le squalène modifié, I'huile modifiée de spermaceti ou l'huile modifiée de suif. Par corps gras modifiés, on désigne notamment les dérivés alcoxylés de corps gras et plus particulièrement les dérivés alcoxylés d'huiles ou les dérivés alcoxylés d'es- ters alkyliques d'huiles et plus particulièrement, les dérivés éthoxylés eVou propoxylés d'huiles ou les dérivés éthoxylés eVou propoxylés des esters méthyliques, éthyliques, propyliques linéaires ou ramifiés ou butyliques, linéaires ou ramifiés, desdites huiles. L'in- vention a plus spécifiquement pour objet une composition telle que définie précédem- ment, dans laquelle le corps gras modifié est choisi parmi les dérivés éthoxylés d'huiles ayant un nombre d'OE, compris entre 1 et 10. Par corps gras modifiés on désigne aussi, les esters d'acides gras et de polyols ou les éthers d'alcools gras et de polyols, et plus particulièrement, les esters d'acides gras avec un hexol, tel que par exemple le sorbitol ou le mannitol ou les esters d'acides gras avec un anhydride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane, les dérivés alcoxylés d'esters d'acides gras et de polyols ou les dérivés alcoxylés d'éthers d'alcools gras et de polyols, comme les triplycérides d'acides gras alcoxylés, les esters alcoxylés de polygiy cérol d'acides gras, et plus particulièrement les esters alcoxylés d'acides gras avec un hexol, tel que par exemple le sorbitol ou le mannitol ou les esters alcoxylés d'acides gras 2824269 avec un anhydride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane ayant un nombre d'OE, compris entre 1 et 20. Par esters d'acides gras et de polyols, on désigne dans le cadre de le présente in- vention, les monoesters d'acides gras et de polyols ou les polyesters d'acides gras et de polyol tels que par exemple les diesters d'acides gras et de polyols ou les triesters d'aci- des gras et de polyols. Il en est de même pour les dérivés polyalcoxylés desdits esters. Par éthers d'acides gras et de polyols, on désigne dans le cadre de le présente in- vention, les monoéthers d'acides gras et de polyols ou les polyéthers d'acides gras et de polyol tels que par exemple les diéthers d'acides gras et de polyols ou les triéthers d'aci des gras et de polyols. Il en est de même pour les dérivés polyalcoxylés desdits éthers. L'invention a plus particulièrement pour objet, une composition telle que définie précédemment, dans laquelle les corps gras modifiés sont choisis parmi les dérivés éthoxylés d'esters d'acides gras et de polyols ou les dérivés éthoxylés d'éthers d'alcools gras et de polyols, et plus particulièrement, les esters éthoxylés d'acides gras avec un hexol, tel que par exemple le sorbitol ou le mannitol ou les esters éthoxylés d'acides gras avec un anhydride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane ayant un nombre d'OE, compris entre 5 et 10. Comme acides gras appropriés à la préparation des corps gras modifiés décrits ci- dessus, il y a ceux comportant en moyenne de 12 à 22 atomes de carbone, tels que par exemple, ceux comportant de 16 à 18 atomes de carbone, comme l'acide olélque, I'acide ricinoléique ou l'acide isostéarique et avantageusement les acides gras liquides à 20 C. La com position, tel le q ue défi n ie ci-dessus, contient pl us pa rticulièrement un ou plusieurs corps gras modifiés tels que décrits ci-dessus, dérivés de l'acide olélque. Selon un autre aspect particulier de la présente invention, I'agent tensicactif ou le mélange d'agents tensioactifs présent dans la phase grasse, consiste essentiellement en un ou plusieurs esters choisis parmi les esters de mannitane, les esters de sorbitane, les esters de mannitane alcoxylés ou les esters de sorbitane alcoxylés. De façon toute particulière, I'agent tensioactif présent dans la phase grasse consiste en un mélange d'oléate de mannitane et d'oléate de mannitane polyéthoxylé, un mélange d'oléate de sorbitane et d'oléate de sorbitane polyéthoxylé, un mélange d'oléate de sorbitane et d'oléate de mannitane polyéthoxylé ou un mélange d'oléste de mannitane et d'oléate de sorbitane polyéthoxylé, lesdits mélanges ayant un nombre HLB global est supérieur ou égal à 6 et inférieur à 8. La composition selon l'invention, peut aussi comporter un ou plusieurs agents sti mulants immunitaires conventionnels, tel l'Avridine_, la N,Ndioctadecyl-N',N'-bis(2 6 2824269 hydroxysthyl) propanediamine, les dérivés du MDP (muramyl dipoptide), notamment le thréonyl-MDP, les dérivés de l'acide mycolique ou les dérivés du Lipide A. La composition selon l'invention, comprend éventuellement un ou plusieurs sels organiques de cations métalliques hydrosolubles, tel que par exemple le gluconate de calcium, le gluconate de manganèse le salicylate d'aluminium ou l'acétate d'aluminium soluble. Lorsque la composition adjuvante selon l'invention comprend, un sel pharmaceu- tiquement acceptable, celui-ci est à une concentration de 0,02 à 3000 mg/ cm3, de préfé- rence 0,1 à 1000 mg/cm3, plus préférentiellement de 0,1 à 150 mg/cm3. La composition selon l'invention peut aussi comprendre un ou plusieurs sels inso lubles généralement utilisés comme adjuvants d'immunité, tels que l'hydroxyde d'alumi- nium ou le phosphate de calcium. Selon un autre aspect de la présente invention, celle a pour objet une composition tel le qu définie précédem ment comprenant en outre, au moins u n antigène ou au moi ns un générateur in vivo d'un composé comprenant une séquence d'acides aminés et une quantité non nulle d'une composition telle que définie précédemment. Par antigène ou au moins un générateur in vivo d'un composé comprenant une séquence d'acides aminés, on désigne soit des micro-organismes tués, tels que les virus, les bactéries ou les parasites, soit des fractions purifiées de ces micro-organismes, soit des micro-organismes vivants dont le pouvoir pathogène a été atténué. A titre d'exemples de virus pouvant constituer un antigène selon la présente invention, il y a le virus de la rage, les herpès virus, tels que le virus de la maladie d'Aujeszky, les orthomixovirus tels que Influenzae, les picornavirus tels que le virus de la fièvre aphteuse ou les rétrovirus tels que les VIH. A titre de micro-organisme du type bactérien pouvant constituer un anti- gène selon la présente invention, on peut citer E. Coli, et ceux des genres Pasteurella, Furonculosis, Vibriosis, Staphylococcus et Streptococcus. A titre d'exemples de parasites, il y a ceux des genres Trypanosoma, Plasmodium et Lelshmania. On peut aussi citer les virus recombinants notamment les virus non enveloppés, tels que les adénovirus, le virus de la vaccine, le virus Canarypox, les herpès virus ou les baculovirus. On désigne aussi un vecteur recombinant viral non enveloppé vivant, dont le génome contient, insérée de préférence dans une partie non essentielle pour la réplication du virus enveloppé corres- pondant, une séquence codant pour une sous - unité antigénique induisant une synthèse d'anticorps eVou un effet protecteur contre le susdit virus enveloppé ou micro-organisme pathogène; ces sous - unités antigéniques peuvent être par exemple, une protéine, une glycoprotéine, un peptide ou une fraction peptidique eVou protectrice contre une infection par un micro-organisme vivant tel un virus enveloppé, une bactérie ou un parasite. Le 7 2824269 gène exogène inséré dans le micro-organisme peut être, par exemple, issu d'un virus Aujeszky ou HIV. On peut citer notamment un plasmide recombinant constitué d'une séquence de nucléotides, dans laquelle est insérée une séquence nucléotidique exogène, provenant d'un micro-organisme ou d'un virus pathogène. Cette dernière séquence nucléotidique a pour but de permettre l'expression d'un composé comprenant une séquence d'acides aminés, ce composé ayant luimême pour but de déclencher une résction immune dans un organisme hôte. Par générateur "in vivo" d'un composé comprenant une séquence d'acides ami nés, on désigne tout un produit biologique capable d'exprimer ledit composé dans l'orga nisme hôte dans lequel on a introduit ledit générateur in vivo. Le composé comprenant la séquence d'acides aminés, peut être une protéine, un peptide ou une glycoprotéine. Ces générateurs in vivo sont généralement obtenus par des procédés issus du génie généti que. Plus particulièrement, ils peuvent consister en des micro-organismes vivants, géné ralement un virus, jouant le rôle de vecteur recombinant, dans lequel est insérée une sé quence nucléotidique, notamment un gène exogène. Ces composés sont connus en tant que tels et utilisés notamment comme vaccin sous unitaire recombinant. A cet égard, on peut se référer à l'article de M. ELOIT et al., Journal of virology (1990) 71, 2925-2431 et aux demandes internationales de brevet publiées sous les numéros WO-A- 91/00107 et WO-A-94/16681. Les générateurs in vivo selon l'invention peuvent aussi consister en un plasmide recombinant comprenant une séquence nucléotidique exogène, capable d'ex primer dans un organisme hôte un composé comprenant une séquence d'acides aminés. De tels plasmides recombinants et leur mode d'administration dans un organisme hôte ont été décrits en 1990, par LIN et al., Circulation 82:2217,2221; COX et al., J. of VIROL, Sept. 1993, 67, 9, 5664-5667 et dans la demande internationale publiée sous le numéro WO 95/25542. Selon la nature de la séquence nucléotidique comprise dans le générateur in vivo, le composé comprenant la séquence d'acides aminés qui est exprimé au sein de l'organisme hôte, peut: (i) être un antigène, et permettre le déclenchement d'une réaction immune, (ii) avoir une action curative vis-àvis d'une maladie, essentiellement une maladie d'ordre fonctionnel, qui s'est déclenchée chez l'organisme hôte. Dans ce cas, le généra teur in vivo permet un traitement de l'hôte, du type thérapie génique. A titre d'exemple, une telle action curative peut consister en une synthèse par le générateur in vivo de cytokines, comme les interleukines, notamment l'interleukine 2. Celles-ci permettent le déclenchement ou le renforcement d'une réaction immune visant à I'élimination sélective des cellules cancéreuses. 8 2824269 La composition vaccinale telle que définie ci-dessus, comprend une concentration en antigène qui dépend de la nature de cet antigène et de la nature du sujet traité. Il est toutefois particulièrement remarquable qu'un adjuvant selon l'invention, permeKe de dimi nuer notablement la dose habituelle d'antigène requise. La concentration adéquate d'anti gène peut être déterminée de manière classique par l'homme du métier. Généralement, ceKe dose est de l'ordre de 0,1,ug / cm3 à 1 g I cm3 plus généralement comprise entre 1 g / cm3 et 100 mg / cm3. La concentration dudit générateur in vivo dans la composition selon l'invention dépend, là encore, notamment de la nature dudit générateur et de l'hôte da ns lequel il est adm in istré. CeKe concentration peut être aisément déterminée par I'homme du métier, sur la base d'expérience de routine. A titre indicatif, lorsque le géné rateur in vivo est un micro-organisme recombinant, sa concentration dans la composition selon l'invention en général comprise entre 102 et 1045 microorganismes / cm3 et de préfé rence entre 105 et 1042 microorganismes / cm3. Lorsque le générateur in vivo est un plas mide recombinant, sa concentration dans la composition selon l'invention peut être com prise entre 0,01 g / dm3 et 100 g / dm3. Le vaccin, tel que défini précédemment, est prépa ré en mélangeant la phase adjuvante et la phase antigénique, en ajoutant éventuellement de l'eau ou un milieu diluant pharmaceutiquement acceptable. L'invention a de préférence pour objet les émuisions de type E /H telles que défi nies précédemment, qui sont fluides. Par émuision fluide, on désigne les émuisions dont la viscosité, mesurée à 25 C avec un viscosimètre BROOKFIELD LVT à mobile tournant (mobile 2 vitesse 30 rpm) est inférieure à 500 mPa.s (BROOKFIELD LVT M 2 V 30). La composition vaccinale telle décrite ci-dessus peut être utilisée comme médica ment préventif ou curatif. Selon la nature de l'antigène ou du générateur in vivo, une com position selon l'invention peut être administrée à des poissons, des crustacés tels que les creveKes, des volailles, notamment, des oies, des dindes, des pigeons et des poulets, aux canidés tels le chien, aux félidés tels le chat, aux porcs, aux primates, aux bovidés, aux ovidés et aux chevaux. La com position selon l' invention peut être également admi nis trée à l'homme. L'administration de la composition peut se faire de manière classique par 3 0 voie parentérale, notamment par injection sous-cutanée, intramuscu la ire ou intrapérito neaie. Eile peut aussi se faire par voie orale ou nasale. Selon un autre aspect de l'invention, celle-ci a pour objet une composition essen tiellement constituée de 1 % et 15% en poids, et de préférence de 3 % et 10 % en poids, d'agents tensioactifs ayant un nombre HLB global compris entre 5 et 8, et de 85 % à 99 %, et de préférence de 90 % à 97 % en poids, d'un ou plusieurs composés choisis parmi les huiles d'origine minérale, végétale ou animale, les esters alkyliques desdites huiles, 9 2824269 les esters alkyliques d'acides gras ou les éthers alkyliques d'acides gras, les esters d'aci des gras et de polyols ou les éthers d'alcools gras et de polyols. Dans la composition huileuse telle que définie ci-dessus, I'huile est plus particuliè rement choisie parmi les huiles blanches minérales. Dans la composition huileuse telle que définie ci-dessus, I'agent tensioactif ou le mélange d'agents tensioactifs a de préférence un nombre HLB global supérieur ou égal à 6 et inférieur à 8. Dans la composition huileuse telle que définie ci-dessus, I'agent tensioactif ou le mélange d'agents tensioactifs sont choisis parmi les corps gras modifiés. Par corps gras modifié, on désigne notamment les dérivés alcoxylés d'huiles ou les dérivés alcoxylés d'esters alkyliques d'huiles et plus particulièrement, les dérivés éthoxylés et/ou propoxylés d'huiles ou les dérivés éthoxylés et/ou propoxylés des esters méthylique, éthylique, propyliques linéaire ou ramifié ou butyliques, linéaire ou ramifiés, desdites huiles et plus particulièrement parmi les dérivés éthoxylés d'huiles ayant un nombre d'OE, compris entre 1 et 20, de préférence entre 5 et10. Par corps gras modifié, on désigne aussi les esters d'acides gras et de polyols ou les éthers d'alcools gras et de polyols, et plus particulièrement, les esters d'acides gras avec un hexoi, tel que par exemple le sorbitol ou le mannitol ou les esters d'acides gras avec un anhydride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane, les dérivés alcoxylés d'esters d'acides gras et de polyols ou les dérivés alcoxylés d'éthers d'alcools gras et de polyols, et plus particulièrement, les esters alcoxylés d'acides gras avec un hexol, tel que par exemple le sorbitol ou le mannitol ou les esters alcoxylés d'acides gras avec un anhy dride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane ayant un nombre d'OE, compris entre 1 et 20, plus particulièrement, les dérivés éthoxylés d'esters d'acides gras et de polyols ou les dérivés éthoxylés d'éthers d'alcools gras et de polyols, et tout particulièrement, les esters éthoxylés d'acides gras avec un hexol, tel que par exemple le sorbitol ou le man nitol ou les esters éthoxylés d'acides gras avec un anhydride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane ayant un nombre d'OE, compris entre 5 et 10. Dans la définition précédente, les acides gras appropriés à la préparation des corps gras modifiés, comportent de préférence en moyenne de 12 à 22 atomes de car bone et plus particulièrement 16 à 18 atomes de carbone. Selon un aspect particulier de la présente invention, dans la composition huileuse telle que définie ci-dessus, I'agent tensioactif ou le mélange d'agents tensioactifs sont des dérivés de l'acide olélque. Selon un autre aspect particulier de la présente invention, dans la composition huileuse telle que définie ci-dessus, I'agent tensioactif ou les agents tensioactifs sont 2824269 choisis parmi les esters de mannitane, les esters de sorbitane, les esters de mannitane alcoxylés ou les esters de sorbitane alcoxylés. Selon un aspect très particulier de la présente invention, la composition huileuse telle que définie ci-dessus, contient comme système tensioactif, un mélange d'oléate de mannitane et d'oléste de mannitane éthoxylé ayant un nombre d'OE, compris entre 5 et 10. Selon les derniers aspects de la présente invention, celle-ci a pour objet un procé dé de préparation d'u ne ém u ision vaccinale de type ea u - dans - h u ile, tel le q ue défi n ie précédemment; comprenant l'addition dans un rapport pondéral E / H supérieur à 1, d'un milieu aqueux contenant au moins un antigène ou au moins un générateur in vivo d'un composé comprenant une séquence d'acides aminés à la composition huileuse telle que définie ci-dessus, ainsi que l'utilisation de ladite composition huileuse comme adjuvant dans les compositions injectables telles que les vaccins. Le procédé tel que défini précédemment, peut être mis en _uvre à froid, c'est à dire à une température comprise entre 0 C et 30 C. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. Prénaration des compositions selon l'invention. Exemple 1 On prépare une émuision selon l'invention, en versant une phase aqueuse consti tuée, d'une solution saline de sérum physiologique, sur une phase grasse, sous agitation avec un mélangeur à haut cisaillement (SILVERSON L4RT). 200 9 d'émuision sont prépa rés à chaque essai, la phase aqueuse représentant 65 % du poids de l'émulsion. La phase grasse est constituée de: 90 % en poids de MARCOL_ 52, 3 % en poids de monooléate de mannitane et 7 % en poids de monooléate de mannitane polyéthoxylé (indice d'OE = 8). Le mélange de monooléste de mannitane et de monooléate de mannitane polyéthoxylé (8 OE) a un nombre HLB égal à 6,2. La viscosité de l'émulsion est contrôlée après 24 heures de stabilisation à 25 C (BROOKFIELD LVT M 2 V 30). Elle est égale à 430 mPa.s. L'échantillon obtenu est fractionné en trois flacons pour évaluation des stabilités aux trois températures suivantes: 4 C, 25 C et 37 C. On constate que cette émulsion est stable aux trois températures testées. Après 1 mois de stockage, I'émuision n'est pas cassée et le relargage d'huile est inférieur à 5 %. 1 1 2824269 ExemoIe 2: On prépare une émuision selon l'invention comme décrit dans l'exemple 1, dans laquelle la phase aqueuse en représente 65 % en poids, et dans laquelle la phase grasse est constituée de S 92 % en poids de MARCOL_ 52, 4,3 % en poids de trioléate de sorbitane et 3,7 % en poids de trioléate de sorbitane polyéthoxylé (indice d'OE = 20). Le mélange de trioléate de sorbitane et de trioléate de sorbitane polyéthoxylé (indice d'OE = 20) a un nombre HLB égal à 6,1. La viscosité de l'émulsion est contrôlée après 24 heures de stabilisation à 25 C. Elle est égale à 134mPa.s. (BROOKFIELD LVT M 2 V 30). L'échantillon obtenu est fractionné en trois flacons pour évaluation des stabilités aux trois températures (4 C /25 CC /37 C). On constate que cette émuision est stable aux trois températures testées Après un mois de stockage, l'émuision n'est pas cassée et le relargage d'huile est négligeable. Exemple 3: On prépare une émulsion selon l'invention comme décrit dans l'exemple 1, dans laquelle la phase aqueuse en représente 65 % en poids, et dans laquelle la phase grasse est constituée de: 92 % en poids de MARCOL_ 52, , 4 % en poids de monooléate de sorbitane et 2,6 % en poids de monooléate de mannitane polyéthoxylé (indice d'OE = 8). Le mélange de monooléate de sorbitane et de monooléate de mannitane polyéthoxylé (indice d'OE = 8), a un nombre HLB égal à 7,6. La viscosité de l'émuision est contrôlée après 24 heures de stabilisation à 25 C. Elle est égale à 360 mPa.s. (BROOKFIELD LVT M 2 V 30). L'échantillon obtenu est fractionné en trois flacons pour évaluation des stabilités aux trois températures (4 C /25 C / 37 C). On constate que cette émuision est stable aux trois températures testées. Après un mois de stockage, I'émuision n'est pas cassée et le relargage d'huile est inférieur à %. 12 2824269 REVENDICATIONS 1. Composition essentiellement constituée de 1 % et 15% en poids, et de préférence de 3 % et 10 % en poids, d'agents tensioactifs ayant un nombre HLB global compris entre 5 et 8, et de 85 % à 99 %, et de préférence de 90 % à 97 % en poids, d'un ou plusieurs composés choisis parmi les huiles d'origine minérale, végétale ou animale, les esters alkyliques desdites huiles, les esters alkyliques d'acides gras ou les éthers al kyliques d'acides gras, les esters d'acides gras et de polyols ou les éthers d'alcools gras et de polyols. 2. Composition telle que définie à la revendication 1, dans laquelle l'huile est choisie parmi les huiles blanches minérales. 3. Composition telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans laquelle l'agent tensioactif ou le mélange d'agents tensioactifs a un nombre HLB global supérieur ou égal à 6 et inférieur à 8. 4. Composition telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle l'agent tensioactif ou le mélange d'agents tensiouctifs sont choisis parmi les corps gras modiflés. 5. Composition telle que définie à la revendication 4, dans laquelle les corps gras modifiés sont choisis parmi les dérivés alcoxylés d'huiles ou les dérivés alcoxylés d'esters alkyliques d'huiles et plus particulièrement, les dérivés éthoxylés eVou propoxylés d'huiles ou les dérivés éthoxylés eVou propoxylés des esters méthylique, éthylique, pro pyliques linéaire ou ramifié ou butyliques, linéaire ou ramifiés, desdites huiles et plus par ticulièrement parmi les dérivés éthoxylés d'huiles ayant un nombre d'OE, compris entre 1 et 20, de préférence entre 5 et10. 6. Composition telle que définie à la revendication 4, dans laquelle les corps gras modifiés sont choisis parmi les esters d'acides gras et de polyols ou les éthers d'al cools gras et de polyols, et plus particulièrement, les esters d'acides gras avec un hexol, tel que par exemple le sorbitol ou le mannitol ou les esters d'acides gras avec un anhy dride d'hexol, comme le sorditane ou le mannitane, les dérivés alcoxylés d'esters d'acides gras et de polyols ou les dérivés alcoxylés d'éthers d'alcools gras et de polyols, et plus particulièrement, les esters alcoxylés d'acides gras avec un hexol, tel que par exemple le sorbitol ou le mannitol ou les esters alcoxylés d'acides gras avec un anhydride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane ayant un nombre d'OE, compris entre 1 et 20. 7. Composition telle que définie à la revendication 6, dans laquelle les corps gras modifiés sont choisis parmi les dérivés éthoxylés d'esters d'acides gras et de polyols ou les dérivés éthoxylés d'éthers d'alcools gras et de polyols, et plus particulièrement, les 13 2824269 esters éthoxylés d'acides gras avec un hexol, tel que par exemple le sorbitol ou le man- nitol ou les esters éthoxylés d'acides gras avec un anhydride d'hexol, comme le sorbitane ou le mannitane ayant un nombre d'OE, compris entre 5 et 10. 8. Composition telle que définie à l'une des revendications 6 ou 7, dans la q uelle les acides g ras appropriés à la préparation des corps g ras mod ifiés, com portent en moyenne de 12 à 22 atomes de carbone et plus particulièrement 16 à 18 atomes de car- bone. 9. Composition telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans laquelle l'agent tensioactif ou le mélange d'agents tensioactifs sont des dérivés de l'acide olélque. 10. Composition telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle l'agent tensioactif ou les agents tensioactifs sont choisis parmi les esters de mannitane, les esters de sorbitane, les esters de mannitane alcoxylés ou les esters de sorbitane alcoxylés. 11. Composition telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans laquelle l'agent tensioactif présent dans la phase grasse consiste en un mélange d'oléate de mannitane et d'oléate de mannitane éthoxylé ayant un nombre d'OE, compris entre 5 et 10. 12. Utilisation de la composition telle que définie à l'une des revendications 1 à 11,