Brevet FR2822236A1 — publié le 20020920

PROCEDE DE DETERMINATION DE L'EFFICACITE THERAPEUTIQUE D'UN MEDICAMENT CONTRE LA MALADIE DE PARKINSON ETIOU LE SYNDROME PARKINSONIEN UTILISANT LA SOURIS FRI/FRI COMME MODELE Arrière-plan de l'invention L'invention est basée sur une souris qui peut être utilisée comme modèle dans la maladie de Parkinson et/ou de syndrome parkinsonien. De façon plus spécifique, cette souris exprime le phénotype de la mutation frissonnante (homozygote fri/fri). Plus particulièrement, cette invention a pour objet un procédé de determination de l'efficacité thérapeutique d'un médicament contre la maladie de Parkinson et/ou le syndrome Parkinsonien chez des animaux tels que les mammifères comprenant l'homme. Cette souris peut aussi servir à étudier les mécanismes d'action de la maladie de Parkinson et ainsi de pouvoir découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques. Etat de la technique La maladie de Parkinson (MP) est caractérisée par une akinésie (incoordination motrice), des tremblements, une rigidité et une instabilité de la posture (Hughes et al., 1992). D'autres symptômes tels que de légers troubles cognitifs, des dysfonctionnements du système nerveux autonome et des perturbations affectives sont aussi observées (Parkinson, 1817). La MP affecte généralement des personnes d'âge moyen ou en fin de vie avec une incidence de 5-20 pour 100,000 (Rajput et al., 1984). 90% des cas de MP sont sporadiques et 10% sont héréditaires (Duvoisin, 1986). Les déficits observés sont principalement dus à une dégénérescence progressive des neurones dopaminergiques de la région nigro-striatale d'où résulte le syndrome moteur. Les 3 principaux symptômes (akinésie, tremblements, rigidité et instabilité de la posture) apparaissent quand plus de 55-60 % des voies nigrostriatales ont disparu (Feamiey et al., 1991). Jusqu'à présent, 3 modèles animaux sont utilisés comme modèles de MP et sont tous induits par des substances neurotoxiques : (a) par injection unilatérale de 6- hydroxydopamine dans le système nigro-strié de rats adultes (Ungerstedt, 1971) ; (b) par traitement de rats ou de souris avec de la réserpine ; ou (c) par injection de MPTP (1- methyl-4-phenyl-1, 2,3, 6-tetrahydropyridine) chez le primate (Bums et al., 1983) ou la souris. Les lésions unilatérales du striatum chez le rat par la 6-hydroxydopamine est le modèle le plus largement utilisé pour tester l'activité de nouveaux traitements. Le modèle MPTP consiste en des injections systématiques de fortes doses de MPTP chez la souris, induisant une sévère dégénérescence des neurones catécholaminergiques (Sundstrom et al., 1990). Suivant le traitement, la déplétion en dopamine dans le striatum a été observée (Hallman et al., 1984 ; Heikkila et al., 1984 ; Sundstrom et al., 1990). Les souris présentent une altération des fonctions cognitives (Dluzen and Kreutzerg, 1993) identique à celle observée chez certains patients parkinsoniens (Liebennan, 1992 ; Sagar et al., 1988). Néanmoins, ces modèles ne sont pas complètement satisfaisants pour étudier la MP. En effet, le modèle d'injection au 6-OH-dopamine chez le rat lorsque l'injection est bilatérale entraîne une profonde akinésie qui s'accompagne d'aphagie et d'adipsie à un tel degré que l'animal doit être alimenté par gavage, beaucoup d'animaux meurent après l'induction de lésion, ce qui rend le modèle très difficile d'utilisation. Lorsque l'injection est unilatérale, les animaux ne présentent aucun trouble fonctionnel, l'effet d'un composé est simplement estimé par une rotation collatérale après l'administration du composé actif. De plus, l'étude d'effet d'antagonistes des récepteurs à l'acéthylcholine n'est pas possible dans ce modèle animal. Le modèle induit par la réserpine pose un problème de spécificité. En effet, la réserpine est connue comme agissant sur toutes les voies des catécholamines, ainsi les effets remarqués par ce composé ne sont pas tous liés à un syndrome parkinsonien. Le modèle de souris traitées par le MPTP est considéré comme un modèle peu moins représentatif de MP, car les déficits comportementaux induits par le traitement sont très hétérogènes et transitoires (Hallman et al., 1984 ; Willis et al., 1987 ; Fredriksson et al., 1990 ; Rozas et al., 1998) probablement à cause d'une régénération terminale des neurones dopaminergiques lésés (Sundstrom et al., 1990). Même si le MPTP est une toxine efficace et spécifique du système nigro-strié chez la souris, les effets de cette toxine dépendent de la souche de souris, de sa provenance (Giovanni et al., 1991), de l'âge (Gupta et al., 1986 ; Ricaurte et al., 1987), du sexe, de la voie d'administration, de la dose et de la période d'administration du MPTP (Fredriksson et Archer, 1994). Tous ces paramètres sont impliqués dans la réactivité de l'animal au MPTP et rendent ce modèle difficile à utiliser et à reproduire. Les rats lésés unilatéralement sont considérés à ce jour comme le modèle le moins imparfait pour cribler les effets pharmacologiques de composés. On cherche donc un modèle animal qui remédie à ces inconvénients (manque de fonctionnalité, manque de spécificité et de reproductibilité). Or, la présente invention représente une solution à ces problèmes. Résumé de l'invention L'invention a pour objet un procédé de determination de l'efficacité thérapeutique d'un médicament contre la maladie de Parkinson et/ou le syndrome Parkinsonien comprenant l'administration dudit médicament à tester à une souris fri/fri, puis l'évaluation d'au moins un symptôme choisi parmi : (1) l'akinésie ; et/ou (2) les tremblements ; et/ou (3) la rigidité et l'instabilité de la posture ; et/ou (4) l'altération des fonctions cognitives. Selon un mode de réalisation, on évalue au moins deux symptômes. Selon un autre mode de réalisation, le symptôme d'akinésie est évalué par les tests de la roue tournante, marche sur la barre, du plan incliné, d'accrochage au fil suspendu, la marche dans l'allée et du test d'activité locomotrice en champ ouvert. Le symptôme des tremblements peut être évalué par appréciation de leurs fréquences et/ou leur amplitudes. Le symptôme de rigidité et d'instabilité de la posture est de préférence évalué par les tests de marche dans l'allée et de redressement et de vitesse de déplacement en champ ouvert. Le symptôme d'altération des fonctions cognitives est avantageusement évalué par le test de reconnaissance d'objet. Selon un mode de réalisation de l'invention, ladite maladie de Parkinson et/ou ledit syndrome Parkinsonien est chez l'homme. L'invention a également pour objet un procédé de criblage par mise en oeuvre simultanée ou séquentielle dudit procédé sur une pluralité de médicaments. L'invention concerne enfin l'utilisation de la souris pour la détermination de l'efficacité thérapeutique et/ou le criblage de médicaments contre la maladie de Parkinson et/ou du syndrome Parkinsonien. L'évaluation permet d'appréhender l'amélioration de l'état clinique de ces animaux lors d'injection dudit médicament dans la sourisfrilfri. Brève description des fïsures Figure 1. Performances des souris dans le test de la roue tournante (a), de la marche dans l'allée (b), du plan incliné (c) et de l'accrochage au fil (d). Groupes : souris sauvages +/+ (n = 8), hétérozygotes +Ifri (n = 8) et homozygotes frissonnantes frilfri (n = 8). Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M.). Dunnett's test. Figure 2. Analyse des traces de pas : distance intra-pas (a), largeur des pas (b) longueur des pas (c). Groupes : +/+ (n = 8) etfrilfri (n = 8). Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M. ). Dunnett's test. Figure 3. Tests de sensibilité à la chaleur. Test de retrait de la queue (a) ; test de la plaque chauffante (b). Groupes : +/+ (n = 8) etfrilfri (n = 8). Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M. ). Test T non apparié. Figure 4. Activité locomotrice (a) en champ ouvert (OF) et nombre de redressements (b) pour les souris sauvages +/+ (n = 8), hétérozygotes +Ifri (n = 8) et homozygotes frilfri (n = 8 Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M. ). Dunnett's test. Figure. 5. Electromyographie : SNCV (a), amplitude (b) et latence (c) des CMAP. +/+ : n = 7 ; frifri : n = 7. Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M.). Test T non apparié. Figure 6. Test de reconnaissance d'objets : Indice de reconnaissance en champ ouvert (OF). +/+ : n = 8 ; frilfri : n = 8. Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M. ). Test T non apparié. La moyenne théorique de 50 % correspond à l'absence de reconnaissance. Figure 7. Activité locomotrice exprimée en pourcentage (a), vitesse de mouvements (b) et nombre de redressements (c) avant et 90 minutes après l'injection de différentes concentrations de L-Dopa (5,10, 20,40 et 60 mg/kg). +/+ : n = 8 ; fri/fri : n = 7. Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M.). Test T apparié. Figure 8. Activité locomotrice (a) et nombre de redressements (b) avant et 30 minutes après injection de 0.1 ou 0.5 mg/kg d'apomorphine. Souris +/+ : n = 8 ; souris frilfri : n = 7. Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M. ). Test T apparié. Figure 9. Activité locomotrice avant et 45 minutes après injection de 10 mg/kg de sélégiline chez des souris +/+ (n = 7) et frilfri (n = 7). Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M. ). Test T apparié. Figure 10. Activité locomotrice avant et 45 minutes après injection de 20 mg/kg de ropinirole chez des souris +/+ (n = 7) et frilfri (n = 7). Les valeurs représentent la moyenne +/-l'erreur standard à la moyenne (S. E. M. ). Test T apparié. Description détaillée de l'invention Les souris frifri présentent une symptomatologie permanente et homogène contrairement aux autres modèles animaux cités ci-dessus. La mutation frissonnante (fri) est une mutation autosomale récessive apparue spontanément dans un élevage de souris C3H en 1977 à l'Institut Pasteur de Paris (Mouse News letter, 1977,56). Cette souris est disponible à l'Institut Pasteur et/ou chez le déposant. Par souris fri/fri, on entend aussi toute souris atteinte d'une altération génétique (substitution, addition et/ou délétion d'un ou plusieurs nucléotides) dans au moins un allèle du gène FRI qui ne permet pas une expression normale du gène fonctionnel. Les animaux fri/fri présentent des manifestations communes avec les modèles animaux de MP existants. Notamment, les souris fri/fri sont atteintes d'une pauvreté gestuelle et des mouvements très lents (comme ce que l'on constate dans les tests de la roue tournante, du plan incliné, de la marche dans l'allée et de l'accrochage au fil). De plus, les souris fri/fri présentent une diminution significative de leur activité locomotrice en champ ouvert, contrairement aux souris sauvages et hétérozygotes ; le nombre de redressements est aussi plus faible chez les fri/fri que chez les animaux sains et hétérozygotes. L'exécution des mouvements est plus lente et plus faible dans le cas des souris fri/fri que pour les souris saines. L'étude de l'analyse des pas révèle que les souris fri/fri ont un pas plus court que les souris saines, peut être à cause d'une relative atrophie. Elles exécutent difficilement leurs mouvements en particulier du fait d'un défaut de synchronisation. Quand le mouvement est déclenché, il est réalisé rapidement et est de grande amplitude comme ce que l'on rencontre dans le symptôme de la roue dentée chez les humains atteints de maladie de Parkinson. Les souris fri/fri ne présentent aucune modification de la sensibilité. Elles n'ont pas d'atteinte de la thermorégulation car leur température corporelle est identique à celles des souris saines (non montré). Les examens électromyographiques ne révèlent aucune atteinte périphérique (neurodégénérescence ou dysfonction sensitive ou motrice des fibres nerveuses) qui aurait pu être responsable des manifestations cliniques de leur maladie. La présente invention a permis de démontrer que, comme dans le cas de la maladie de parkinson chez l'homme, aucune atteinte périphérique de la conduction nerveuse n'a été relevée chez l'animalfrifri. Les souris frifri présentent par ailleurs des tremblements rapides. Ces tremblements cessent lorsque l'animal dort ou est anesthésié. Chez l'homme parkinsonien, on note également les mêmes caractéristiques. Les souris présentent une altération des fonctions cognitives (troubles de la mémoire) telle que démontrée par le test de reconnaissance d'objet. L'analyse des souris frifri, qui a porté sur une période d'une année, a montré aucune évolution significative des signes cliniques. Les souris fri/fri naissent avec l'ensemble de leurs symptômes qu'ils gardent jusqu'à leur mort. Ainsi, les souris expriment un ensemble de signes cliniques permettant de remplir le critère d'isomorphisme du modèle. Le modèle est dopamino-sensitif : les souris réagissent à la L-dopa, précurseur de dopamine. Un traitement sévère à la L-dopa améliore l'activité locomotrice desfrifri et est sans effet sur les souris saines sauvages ou hétérozygotes. Le gain en activité locomotrice se traduit, lh30 après administration du traitement, par une réduction des tremblements et la capacité des souris à se dresser sur leurs pattes, à se mouvoir avec plus de facilité et de vitesse. La dose optimale se situe à 20 mg/kg. Les effets transitoires disparaissent 4 heures après administration de la L-Dopa. Ce fait est identique à ce qui est remarqué chez le malade parkinsonien. Seule une administration chronique permet la disparition des symptômes, un traitement aigu n'a qu'un effet transitoire et disparaît après l'élimination de la substance dans l'organisme (ceci quelque soit le composé actif administré). Ces dernières remarques sont aussi valables pour l'apomorphine, la sélégiline et le ropinirole qui améliorent également l'état clinique des souris fri/fri. La sélégiline n'est pas un médicament anti-parkinsonien per se, mais elle est souvent utilisée en association avec la L-Dopa ; la sélégiline en effet est un inhibiteur de MAO-B (la forme cérébrale de monoamine oxydase-MAO-) augmentant de ce fait la demi-vie de la dopamine. Ainsi, les souris fri/fri remplisse le critère de prédictibilité, ce qui leur confere une valeur en tant que modèle. En conséquence, les sourisfrilfri présentent donc une pathologie analogue à la maladie de Parkinson et représentent un outil de choix pour l'évaluation d'antiparkinsoniens. La souris fri/fri de la présente invention fournit un moyen pour identifier des médicaments potentiels contre la maladie de Parkinson et/ou le syndrome Parkinsonien. Le médicament à tester est administré de façon classique, par voie orale, ou par voie parentérale (injection ou autre), ou tout autre mode d'administration classique. Cette invention est illustrée par les exemples suivants qui ne sont pas limitatifs. Exemples Exemple 1 Tests d'évaluation d'akinésie Animaux Tous ces tests ont été réalisés sur des animaux de différents âges (5,6, 8, 10, 12, 28 et 34 mois). Aucune différence significative dans l'évolution des paramètres observés n'a été trouvée pour les 3 groupes d'animaux (fri/fri ; +/frei ; +/+). Malgré le fait que les souris fri/fri soient fertiles, seules les hétérozygotes +/fri ont été utilisées pour la reproduction. Les souris homozygotes sonst identifiées à la naissance grâce à leurs tremblements caractéristiques. Pour les animaux contrôle sauvages +/+, le même fond génétique a été utilisé. Les souris hétérozygotes +Ifri ont été identifiées par un double back cross avec des animaux +Ifri identifiés et détection dans la progéniture d'animaux frifri. Les animaux ont été hébergés en cages plastiques à une température constante de 22 C (+/-0. 5 C) et sous cycle jour-nuit inversé (12/12h). Ils ont accès à l'eau et à la nourriture ad libidum. Les animaux utilisés ont été manipulés en accord avec les nonnes institutionnelles et les recommandations du NIH. Pour toutes les expériences, les souris mâles et femelles étaient âgées entre 5 et 34 mois. Analyse statistique Dans tous les protocoles expérimentaux les résultats sont exprimés en moyenne +/-erreur standard à la moyenne (S. E. M. ). Des analyses de variance (ANOVA) et des analyses de variance à facteur répété ainsi que des tests T de Student ont été utilisés. Les différences sont considérées comme significatives lorsque la valeur de P est inférieure à 0.05. Les analyses ANOVA sont suivies par un test de Dunnett. Selon les cas des tests appariés ou non appariés ont été utilisés. Les symboles suivant ont été utilisé dans les figures : * : p Test de la roue tournante. La capacité d'un animal à se maintenir sur un appareil en rotation (Rotarod) est un test approprié de mesure de la sensibilité proprioceptive et de la coordination motrice. La souris est posée sur une barre de 1 cm de diamètre tournant à 12 tours par minute (Bioseb, Paris, France). Le but est que l'animal se maintienne sur la barre pendant 300 s. Si l'animal tombe, sa performance est enregistrée et un nouvel essai est réalisé (3 essais maximum). Les résultats ont montré que les souris fri/fri ne sont pas capables de se maintenir sur la roue tournante plus de 10 s, alors que les animaux témoins (sauvages, +/+) et hétérozygotes +/fri se maintiennent au moins 300s (Figure la). Test de la marche sur la barre : Ce test consiste à suivre le déplacement de l'animal sur une barre (1.5 cm de diamètre ; 80 cm de longueur) surélevée (40 cm de hauteur). La barre est graduée du milieu aux 2 extrémités (40 cm). Le temps mis par l'animal pour parcourir 40 cm est relevé (avec un temps maximum de 60 s) ; 3 essais successifs sont réalisés. Si l'animal tombe, il est crédité de 60s. Une atteinte motrice entraîne une augmentation de la durée du déplacement Les résultats ont montré que les souris frilfri ne pouvaient pas marcher sur la barre alors que les animaux témoins étaient capables de la traverser entièrement en un temps très court (Figure alb). Test du plan incliné : L'animal est placé sur un plan incliné progressivement ; on mesure l'angle maximal auquel la souris est capable de se maintenir sans tomber. Dans ce test, les souris frilfri présentaient de médiocres performances par rapport aux souris témoins et aux souris hétérozygotes (Figure lc). Test d'accrochage Un fil est placé à 40 cm de hauteur. L'animal y est suspendu par les pattes antérieures. Le temps mis par la souris pour attraper la corde avec au moins une patte postérieure est relevé avec un temps maximum de 60 s. Trois essais sont réalisés. Si l'animal tombe, il est crédité de 60s. Ce test a montré que les souris étaient incapables de se suspendre au fil avec leurs pattes inférieures, contrairement aux animaux témoins et aux souris hétérozygotes qui pouvaient l'attraper très rapidement (Figure Id). Test de la plaque chauffante L'animal est posé sur une plaque chauffée à 52 C, dans un cylindre en verre de 10 cm de diamètre et de 20 cm de hauteur. Le temps de la première réaction à la chaleur (léchage ou secousse de la patte) manifestée par l'animal est mesuré. Réflexe du retrait de la queue La queue de la souris est placée sous un rayon lumineux chauffant. On mesure le temps que l'animal met pour retirer la queue. En cas de perte de la sensibilité à la chaleur, le temps est allongé. Dans ces deux tests (réflexe de la queue et de la plaque chauffante), on ne trouve aucune différence entre les différents groupes dans les temps de première réaction (Figure 3a et 3b). Ces 2 tests permettent d'exclure toute perte de la sensibilité chez la souris Fri/fri. Etant donné que le malade parkinsonien ne présente lui non plus aucun trouble de ce genre, ces observations ne font que confirmer le phénotype parkinsonien. La thermosensibilité est testée chez l'homme notamment à l'aide d'une source lumineuse chauffante. Exemple 2 Tests d'évaluation des tremblements Les souris sont filmées à l'aide d'une caméra vidéo et les enregistrements sont étudiés pour déterminer de visu la fréquence et l'amplitude des tremblements des souris frei, comparé aux autres souris. Les souris fri/fri sont atteintes de tremblements rapides alors que les autres souris en sont dépourvus. Exemple 3 Tests d'évaluation de la rigidité et d'instabilité de la posture Test de marche dans l'allée Les souris sont placées dans une allée de 9.5-cm-de largeur, 58-cm-de longueur dont le sol est recouvert de papier blanc absorbant. Lors d'un premier essai, les animaux sont habitués au corridor, puis leur pattes sont trempées dans l'encre noire et les animaux sont placés dans l'allée pour l'essai. Les traces de pas laissées par les animaux sont ainsi obtenues. Les animaux doivent réaliser l'essai sans s'arrêter et en marchant tout droit, sans quoi l'essai est recommencé (avec un maximum de 3 essais). Les paramètres enregistrés sont : (a) la largeur du pas ; (b) la distance latérale entre les pas et (c) la longueur du pas. Dans le test de marche dans l'allée, l'écartement des pas (largeur entre les traces) des animaux frifri était plus importante que pour les animaux témoins et hétérozygotes (Figure 2b). La longueur du pas était elle aussi plus courte (Figure 2c et 2a). Activité locomotrice en champ ouvert L'animal est placé pendant 10 ou 30 minutes en champ ouvert ( Open-field ) (52x52x40 cm) dont le fond est divisé en 9 carreaux identiques. L'activité locomotrice est relevée minute par minute. Le nombre total de redressements est mesuré. L'activité locomotrice est exprimée en terme de nombre moyen de carreaux traversés par minute ou par 30 minutes. En champ ouvert, des différences significatives ont été détectées entre les animaux fri/fri et les animaux sains (+frei et +/+) (Figure 4a). De plus, le nombre de redressements et la vitesse d'exécution du mouvement étaient moins faibles pour les souris saines pour les souris frilfri (Figure 4b). Exemple 4 Test d'évaluation des troubles de la mémoire Test de reconnaissance d'objet Ce test est basé sur la tendance spontanée des animaux à explorer un nouvel objet lors de 2 essais successifs, et met en jeu des processus de mémorisation à court terme. L'appareil utilisé est un champ ouvert ou Open-Field (OF). Les objets utilisés, sont 1 bille (2.5 cm de diamètre) en verre et 1 dé (1.8 cm de côté) en plastique. Les objets sont fixés afin qu'ils ne puissent être déplacés par l'animal. Le test se déroule en 2 séances séparées de 3 heures. Lors de l'essai 1 les animaux sont en présence d'un seul objet (objet familier, Objet A) ; un deuxième objet est placé lors de l'essai 2 (nouvel objet, Objet B). Les paramètres relevés sont : le temps d'exploration des 2 objets respectivement TA et TB, l'activité locomotrice et le nombre de redressements. Un indice de reconnaissance (IR) est calculé comme suit [Ti (TA + TB)] X 100. Aucune reconnaissance n'est attribuée lorsque l'indice ne diffère pas de 50. Les résultats montrent une différence significative dans l'indice de reconnaissance détectée entre les animaux homozygotes (IR : 45.93 7. 65) et sains (IR : 72. 65 : 2. 77). Les animaux homozygotes étaient incapables de reconnaître l'objet A qu'ils étaient supposés reconnaître. Ce déficit ne peut être la conséquence d'une atteinte locomotrice puisque les animaux explorent les 2 objets aussi longtemps que les animaux sains (Figure 6) ce qui témoigne d'un déficit de mémoire à court terme. Exemple 5 Tests de performances motrices après administration de LDopa, apomorphine, sélégiline ou ropinirole Traitement des animaux fri/fri avec la L-Dopa, l'apomorphine, la sélégiline et le ropinirole La L-Dopa (Sigma, L'Isle d'Abeau-Chesnes, France), l'apomorphine (Sigma), la sélégiline ([R ]-[ - ]-N, a-diméthyl-N-[2-propynyl]phénetylamine hydrochlorure ; Sigma), et un inhibiteur de monoaminooxydase de type B, le ropinirole, un agoniste sélectif des récepteurs D2 (Requip ; SmithKline-Beecham, Nanterre, France), ont été dissous dans une solution aqueuse à 9 % o de chlorure de sodium. La L-Dopa (5,10, 20,40 et 60 mg/kg), la sélégiline (10 mg/kg) et le ropinirole (20 mg/kg) ont été injectés par voie intrapéritonéale respectivement 9,45 ou 30 minutes avant les tests comportementaux. L'apomorphine (0.1, 0.2 et 2 mg/kg) a été injectée par voie sous-cutanée 30 minutes avant les tests comportementaux. L'activité locomotrice, les redressements et l'initiation du mouvement ont été enregistrés après l'administration des drogues. L'activité locomotrice a été mesurée et exprimée relativement aux performances mesurées avant traitement (référencées 100%). Une activité locomotrice de 100% est attribuée pour chaque animal avant tout traitement par les molécules de l'étude. L'activité locomotrice après traitement est rapporté à celle mesurée avant traitement et ceci pour chaque animal. Elle est exprimée en pourcentage. Il est montré que les sourisfrifri amélioraient leurs performances motrices 90 minutes après l'administration de L-Dopa, à toutes les doses observées (Figure 7a). Les différences significatives (test t de student) ont été observées pour les doses de 10 mg/kg (p pour les animauxfri/fri à toutes les doses comprises entre 10 et 60 mg/kg (p Les souris frilfri montrent une augmentation de l'activité locomotrice 30 minutes après administration d'apomorphine (0.1 et 0.5 mg/kg), (p L'apparente hétérogénéité dans les résultats obtenus est due aux variations intragroupes, c'est pourquoi dans chaque groupe, chaque animal est son propre témoin. Les souris frifri traitées par la sélégiline (10 mg/kg) présentent des performances motrices améliorées 45 minutes après l'administration de la drogue (Figure 9 ; p Le ropinirole (20 mg/kg) augmente significativement (p On observe en outre une diminution de la fréquence et de l'amplitude des tremblements lorsque les souris fri/fri sont traitées par administration de L-Dopa, apomorphine, sélégiline ou ropinirole. Electromyographie Ces tests sont réalisés dans le but de confirmer que ces souris ne présentent aucun trouble périphérique (sous entendu que le trouble est de nature central) de la conduction nerveuse comme ce que l'on observe dans la pathologie humaine (qui est d'origine centrale et non périphérique). Les mesures sont réalisées en utilisant un électromyographe Neuromatic 2000M (Dantec, Les Ulis, France). Les animaux sont anesthésiés par injection intrapéritonéale d'un mélange de 60 mg/kg de chlorhydrate de kétamine (Ketalar Mesure de la vitesse de conduction du nerf caudal (SNCV) : Le territoire intéressé sur la queue est maintenu pendant toute la durée du test à une température de 31OB. Cinq électrodes aiguilles sont implantées dans la queue : 2 électrodes de stimulation (l'une active et l'autre de référence), sont placées à la racine de la queue et 2 électrodes de détection sont placées à la pointe de la queue. Une électrode reliée à la terre est placée entre les électrodes. La latence de la réponse suite à la sommation de stimulation à une intensité supramaximale est relevée. La vitesse de conduction est mesurée. Mesure du potentiel d'action musculaire composé (CPAM) : Ce potentiel est relevé au niveau du muscle gastrocnémien après stimulation du nerf sciatique. Deux électrodes de référence sont insérées au niveau du tendon d'Achille et l'électrode simulatrice de référence est placée à la base de la queue. Le nerf sciatique est stimulé une seule fois à une intensité supramaximale. L'amplitude (mV) et la latence (ms) de la réponse sont relevées. L'amplitude révèle le nombre d'unités motrices actives, alors que la latence reflète la vitesse de conduction du nerf moteur. Les résultats ne montre aucune différence significative détectée dans les paramètres d'EMG entre les souris saines et les souris frissonnantes (Figure 5a, 5b et sec). Références - Burns, RS., Chiued, C. C., Markey, S. P., Ebert, M. H., Jacobowitz, D. M. & Kopin, I. J. 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Procédé pour tester le comportement d'une souris fri/fri, à laquelle un médicament contre la maladie de Parkinson et/ou le syndrome Parkinsonien dont on souhaite déterminer l'efficacité thérapeutique est administré, comprenant l'évaluation d'au moins un symptôme choisi parmi : (1) l'akinésie par les tests de la roue tournante, marche sur la barre, du plan incliné, d'accrochage au fil suspendu, la marche dans l'allée, du test d'activité locomotrice en champ ouvert ; et/ou (2) les tremblements par appréciation de leurs fréquences et/ou leur amplitudes ; et/ou (3) la rigidité et l'instabilité de la posture par les tests de marche dans l'allée et de redressement, de vitesse de déplacement en champ ouvert ; et/ou (4) altération de fonctions cognitives par le test de reconnaissance d'objet. 2. Procédé selon la revendication 1 dans lequel on évalue au moins deux symptômes. 3. Procédé de criblage d'une pluralité de médicaments contre la maladie de Parkinson et/ou le syndrome Parkinsonien, par mise en oeuvre simultanée ou séquentielle du procédé pour tester le comportement d'une souris fri/fri, à laquelle un desdits médicaments dont on souhaite déterminer l'efficacité thérapeutique est administré, comprenant l'évaluation d'au moins un symptôme choisi parmi (1) l'akinésie ; et/ou (2) les tremblements ; et/ou (3) la rigidité et l'instabilité de la posture ; et/ou (4) altération de fonctions cognitives 4. Procédé selon la revendication 3 dans lequel on évalue au moins deux symptômes. 5. Procédé selon l'une des revendications 3 à 4 dans lequel le symptôme d'akinésie (1) est évalué par les tests de la roue tournante, marche sur la barre, du plan incliné, d'accrochage au fil suspendu, la marche dans l'allée et du test d'activité locomotrice en champ ouvert. 6. Procédé selon l'une des revendications 3 à 5 dans lequel le symptôme des tremblements (2) est évalué par appréciation de leurs fréquences et/ou leur amplitudes. 7. Procédé selon l'une des revendications 3 à 6 dans lequel le symptôme de rigidité et d'instabilité de la posture (3) est évalué par les tests de marche dans l'allée et de redressement et de vitesse de déplacement en champ ouvert 8. Procédé selon l'une des revendications 3 à 7, dans lequel le symptôme d'altération des fonctions cognitives est évalué par le test de reconnaissance d'objet. 9. Procédé selon l'une des revendications 3 à 8, dans lequel ladite maladie de Parkinson et/ou ledit syndrome Parkinsonien est chez l'homme.