Brevet FR2833271A1 — publié le 20030613

La présente invention concerne essentiellement un procédé de culture in vitro de monocytes CD14+, un milieu de culture et l'utilisation du procédé dans une méthode d'étude et de sélection de principe actif, dans une méthode d'étude physio-pathologique des tissus cutanés et des muqueuses, dans une méthode d'ingénierie et de thérapie cellulaire et/ou tissulaire. ETAT DE LA TECHNIQUE Les cellules dendritiques (CD) sont des cellules présentatrices d'antigènes considérées comme des sentinelles du système immunitaire. Elles présentent en effet une localisation quasi-ubiquitaire, à savoir dans le thymus, la circulation systémique, les organes lymphoïdes secondaires, mais également les tissus périphériques, tels que la peau et les muqueuses, qu'elles soient monostratifiées ou de type malpighien, c'est-à-dire comprenant un épithélium pluristratifié, à savoir celles du vagin, de l'exocol utérin, de la vulve, de la région péri-anale, de l'oesophage et de la bouche. Bien qu'en très faible nombre dans l'organisme, les CD sont au centre du déclenchement des réponses immunitaires spécifiques, en exerçant un contrôle sur la spécificité, l'intensité et la nature de la réponse immune et se placent à l'interface de l'immunité innée et acquise. Outre leur fonction "d'allumage" de la réponse immune, les CD jouent également un rôle dans l'induction de la tolérance périphérique. Les précurseurs des CD sont issus de la différenciation des précurseurs hématopoïétiques CD34+ tout comme de nombreuses populations du système immunitaire et les cellules sanguines. Ils sont acheminés par voie sanguine au niveau de la peau et des muqueuses pour se différencier et y résider sous forme de CD immatures. Deux types de CD peuvent être décrites en fonction de leur localisation in vivo : - les cellules de Langerhans (CL) sont localisées au niveau des épithéliums de type malpighien (peau et muqueuses) en densité plus ou moins importante (de 100 à 1100/mm2). Leur marqueur spécifique est la Langerine (CD207), protéine impliquée dans la formation d'organites observés à l'échelle électronique, les granules de Birbeck. Outre les marqueurs Langerine et CDla, les CL expriment les antigènes retrouvés sur les autres CD à un stade immature, tels que CD4, les intégrines ss2, ainsi que les molécules d'adhérence LFA-3 et ICAM-1. De par leur capacité à migrer vers les ganglions proximaux après avoir capturé un exo-antigène tout en poursuivant leur maturation, les CL sont responsables de nombreuses pathologies, telles que l'eczéma de contact et les réactions de rejet de greffe ; - les cellules dendritiques intertistielles (CDI) sont quant à elles retrouvées au niveau de la lamina propria des muqueuses comme au niveau du derme. Dans ce dernier cas, elles sont également appelées CD dermiques ou dendrocytes dermiques. Ces cellules sont dépourvues de granules de Birbeck et partagent de nombreuses similitudes et marqueurs communs avec les monocytes/macrophages. Les CDI expriment par ailleurs un marqueur spécifique, la lectine DC-SIGN et présentent une capacité allostimulatrice proche de celle des CD immatures. Suite à la capture d'un antigène, les CL et/ou CDI migrent vers les ganglions lymphatiques. Cette migration est corrélée à une activation des CL et/ou CDI, à une modification de l'expression des récepteurs des chimiokines (perte d'expression du récepteur CCR6 et acquisition d'expression de CCR7) et des molécules d'adhérence ainsi qu'à une modification de leurs caractéristiques phénotypiques et fonctionnelles. Par exemple, dans le cas des CL, les granules de Birbeck se désorganisent et leur morphologie est bouleversée. Au niveau des ganglions lymphatiques, l'interaction entre le récepteur CD40 des CD et son ligand CD40-L situé sur les lymphocytes T induit une maturation des CD en"CD interdigitées" caractérisées par l'expression membranaire de l'antigène CD83 et des marqueurs de costimulation CD80 et CD86 ainsi que par une translocation membranaire massive des molécules de classe II du complexe majeur d'histocompatibilité comme HLA-DR. Ces CD matures activées deviennent ainsi productrices de TNFa et dlL-12. Une utilisation intéressante des CL, notamment en combinaison avec des cellules épithéliales, soit issues de peau, soit de muqueuses humaines, consiste à les intégrer dans un système ou modèle de "peau reconstruite" de"muqueuse reconstruite" (voir publication Régnier, JID 1997 ; Brevet EP 0 789 074 L'OREAL ; Sivard P. Peaux et muqueuses reconstruites, Nouv. Dermatol., 2001 ; 20 : 520-523). Ceci pourrait, en particulier, servir de base biologique aux méthodes dites alternatives à l'expérimentation animale, et qui devraient être de plus en plus utilisées pour l'évaluation in vitro de la tolérance et/ou efficacité des produits cosmétiques. En fait, ces utilisations sont aujourd'hui limitées, voire inexistantes, du fait de l'absence de procédé raisonnablement exploitable d'obtention de CL, de façon fiable, à l'échelle industrielle et de l'imperfection des modèles décrits. Dans le brevet EP 0 789 074 de L'OREAL, il est question de modèle ou d'équivalent de peau et de l'utilisation de précurseurs CD34+ issus de sang de cordon ombilical. Il ne s'agit en fait que d'équivalent d'épiderme puisque les cellules sont déposées sur une matrice qui est un derme désépidermisé, c'est-à-dire un derme mort, ne contenant pas de cellules vivantes. En tout état de cause, on n'obtient jamais de CDI (ni de macrophage, ni de cellule endothéliale) puisque le derme n'est pas "vivant". D'autre part, le nombre de cellules CD34+ est limité puisqu'elles sont obtenues à partir de sang de cordon ombilical. Selon une publication de Geissmann (F. Geissmann, C. Prost, J-P. Monnet, M. Diy, N. Bruce, and O. Hermine ; 1998 ; J. Exp. Med. Vol 187, Number 6,961-966) il est décrit l'utilisation de monocytes CD14+ obtenus à partir de sang circulant ainsi que leur culture en suspension pendant 6 jours (en présence de GM-CST, TGF-Pi et IL4) permettant d'obtenir des CL. Selon le protocole décrit dans cette publication, les cellules sont cultivées sen suspension, et non pas sur un modèle tridimensionnel. De plus, la présence de CDI n'est pas décrite, ni celle d'autres cellules (macrophages, cellules endothéliales). BUTS DE L'INVENTION La présente invention a pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution pour, à partir d'un unique précurseur cellulaire, générer in vitro les deux populations vivantes de cellules dendritiques de la peau et des muqueuses, à savoir les cellules de Langerhans (ou CL) et les cellules dendritiques interstitielles (ou CDI). La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un précurseur unique pouvant être obtenu facilement car présent dans le sang circulant, et en particulier dans le sang circulant périphérique d'individu, humain ou animal. La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un précurseur unique présent en quantité suffisamment importante pour permettre de générer in vitro un nombre de cellules tel que l'on puisse en faire une utilisation à l'échelle industrielle. La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un précurseur unique, permettant de générer in vitro des cellules de façon parfaitement reproductible, en particulier sans variabilité en fonction du donneur. La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un précurseur unique, permettant de générer in vitro des cellules de façon rapide (il faut 7 à 8 jours de culture pour obtenir des CL). La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un précurseur unique, permettant de générer in vitro des cellules ayant le même phénotype et les mêmes fonctions que les cellules présentes in vivo. La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette à partir d'un unique précurseur cellulaire, de générer in vitro soit majoritairement des cellules de Langerhans (ou CL), soit majoritairement des cellules dendritiques interstitielles (ou CDI), soit une double population de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles (ou CL/CDI). L'invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette de générer in vitro des cellules dendritiques, à savoir des cellules de Langerhans et/ou des cellules dendritiques interstitielles, et de les intégrer dans des modèles de tissus cutanés ou de muqueuses. La présente invention a encore pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette de générer in vitro des cellules préconditionnées qui, quand elles sont intégrées dans un modèle de peau ou de muqueuse complet, c'est-à-dire comprenant à la fois un épithélium et une matrice conjonctive, sont capables, du fait de l'environnement cellulaire, préférentiellement fibroblastes et cellules épithéliales, et matriciel de se localiser dans l'épithélium pour se différencier en cellules de Langerhans, et de se localiser dans la matrice conjonctive pour se différencier en cellules dendritiques interstitielles, en macrophages et en cellules endothéliales, et d'acquérir une fonctionnalité comparable à celle des cellules de Langerhans, cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales in vivo. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution d'étude et/ou de sélection de principe actif. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette de générer in vitro des cellules endothéliales et des macrophages. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution qui permette d'obtenir un équivalent de peau ou de muqueuse immunocompétente. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un modèle/outil d'étude de la physiopathologie des différents types de cellules et de tissus concernés par l'invention ; d'un modèle/outil d'étude pharmacotoxicologique, dans le but par exemple de réaliser des tests in vitro de prédictivité du pouvoir allergisant d'agents extérieurs ; d'un modèle/outil d'étude de substance ayant des propriétés immunomodulatrices. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette l'utilisation en thérapie de ces divers modèles. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette l'utilisation d'un modèle, dans le but notamment d'étudier l'activité immunostimulante ou immuno-déprimante d'un principe actif ou d'évaluer ou d'induire une immuno-tolérance par ledit principe actif. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette l'utilisation d'un modèle pour étudier la physiopathologie des barrières épithéliales ; l'irritation de la peau ou des muqueuses ; les agressions d'ordre biologiques telles que par exemple virus, rétrovirus, tel que HIV, bactéries, moisissures, microorganismes, antigènes articulaires ; la photo-toxicité ; la photo-protection ; ainsi que l'effet de principe actif, en particulier cosmétique ou pharmaceutique ; l'effet de produits finis, en particulier produits cosmétiques ou pharmaceutiques ; étudier les mécanismes d'infection par un agent pathogène. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette l'utilisation d'un modèle, pour détecter la présence d'un agent pathogène tel que par exemple virus, rétrovirus, tel que HIV, bactéries, moisissures, microorganismes, antigènes articulaires. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette l'utilisation d'un modèle, pour mettre en évidence et éventuellement quantifier des ADN ou des fragments d'ADN caractérisée en ce que l'on utilise une méthode PCR in situ. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette l'utilisation d'un modèle, pour une application médicale, biomédicale, ou cosmétique, en particulier pour moduler la réponse immunitaire ou de tolérance in vitro ou in vivo, suite à une agression environnementale, en particulier du type physique, tel qu'irradiation UV, chimique ou biologique, en particulier dans un but thérapeutique préventif ou curatif. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution, qui permette l'utilisation d'un modèle, pour des applications d'ingénierie tissulaire et cellulaire, pour des applications médicales ou biomédicales, par exemple thérapie cellulaire anti-cancer, par exemple une injection de CD capables de stimuler la réponse immune ; la thérapie cellulaire dans les cas de maladie auto immune, par la création d'une situation d'immunotolérance, par exemple en produisant des cellules T anergiques ; la thérapie génique de maladies touchant le système immune ; la mise au point et la réalisation de vaccins. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une nouvelle méthode PCR in situ. RESUME DE L'INVENTION La présente invention permet pour la première fois de résoudre chacun des problèmes techniques énoncés précédemment d'une manière sûre et fiable, reproductible, utilisable à l'échelle industrielle et commerciale et notamment à l'échelle industrielle cosmétique et/ou pharmaceutique et/ou médicale. L'invention consiste principalement à partir d'un précurseur unique vivant qu'est le monocyte CD14+ présent dans le sang circulant périphérique de générer in vitro au moins les deux populations de cellules dendritiques de la peau et des muqueuses à savoir les cellules de Langerhans et les cellules dendritiques interstitielles. Dans le cadre de l'invention, lorsque 'on parle de cellules il s'agit toujours de cellules vivantes , sauf indications contraires. Par sang circulant périphérique , on entend selon l'invention le sang prélevé sur tout être vivant ayant un système sanguin dans lequel le sang accomplit un circuit, notamment à la périphérie, en particulier les animaux, les mammifères, de préférence un être humain. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention concerne une utilisation de monocytes CD14+ isolés de sang circulant périphérique pour l'obtention par différenciation d'au moins une population mixte de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles préconditionnées indifférenciées, et/ou différenciées et immatures, et/ou matures, et/ou interdigitées. Selon une caractéristique avantageuse, l'utilisation de monocytes CD14+ est caractérisée en ce que la différenciation conduit à la présence d'au moins une sous-population supplémentaire de cellules préconditionnées indifférenciées et/ou différenciées, telles que cellules de type macrophage, et/ou cellules de type endothélial. Selon une caractéristique avantageuse, l'utilisation de monocytes CD14+ est caractérisée en ce que la différenciation est réalisée par une culture de ces monocytes CD14+ dans un milieu de culture contenant au moins les deux cytokines GM-CSF et TGFss, de préférence TGFss1' Une caractéristique avantageuse de l'utilisation de ces monocytes CD14+ est caractérisée en ce que la répartition entre les populations de CL et de CDI est fonction de la présence d'une troisième cytokine à une concentration et pendant une période de temps déterminées au cours de ladite culture, ladite cytokine étant de préférence la cytokine IL-13. Une autre variante avantageuse est caractérisée en ce que l'on réalise la culture en présence de la cytokine IL-13 pendant au plus environ deux jours de manière à favoriser la différenciation en CL, c'est-à-dire favoriser la formation majoritaire de cellules CL. Une autre variante avantageuse est la culture en présence de la cytokine IL-13 pendant environ 6 jours pour favoriser la formation de CDI. Une autre variante avantageuse est la culture en présence de la cytokine IL-13 pendant environ 4 jours pour favoriser la formation de la double population CL/CDI. Une autre caractéristique avantageuse est caractérisée en ce qu'un niveau de différenciation supplémentaire des CL et des CDI peut être obtenu en réalisant ladite culture en présence de la cytokine TNFa. Avantageusement la culture peut être réalisée en présence de TNFa à une concentration et pendant une période de temps déterminées 1 la durée étant inférieure à environ 18 heures, pour obtenir des cellules de Langerhans et des cellules dendritiques interstitielles immatures tout en évitant une maturation de ces cellules en cellules dendritiques activées matures. Une autre caractéristique de l'invention est que la culture en présence de TNFa est réalisée à une concentration et pendant une période de temps déterminées, la durée étant supérieure à environ 20 heures, pour obtenir une maturation en cellules dendritiques activées matures. Selon une autre caractéristique avantageuse, la concentration en cytokine GM-CSF est comprise entre 0,1 et 4000 UI/mL, et avantageusement entre 1 et 2000 UI/mL et plus précisément d'environ 400 UI/mL ; la concentration en cytokine TGFss, de préférence TGFss1, est comprise entre 0,01 et 400 ng/mL, et avantageusement entre 1 et 100 ng/mL et plus précisément d'environ 10 ng/mL ; la concentration en cytokine IL-13, si cette cytokine est présente dans le milieu, est comprise entre 0,01 et 400 ng/mL, et avantageusement entre 1 et 100 ng/mL et plus précisément d'environ 10 ng/mL ; la concentration en cytokine TNFa, si cette cytokine est présente dans le milieu, est comprise entre 0,1 et 4000 UI/mL et, avantageusement entre 1 et 1000 UI/mL et plus précisément d'environ 200 UI/mL. Selon une autre caractéristique avantageuse, l'utilisation des monocytes CD14+ est caractérisée par l'obtention de CL et CDI présentant des phénotypes de fonctions identiques à ceux trouvés in vivo. Une autre caractéristique avantageuse est caractérisée en ce que l'on réalise la culture desdites CL et des CDI dans un environnement de culture tridimensionnel, en particulier comprenant au moins des cellules épithéliales et stromales. Avantageusement cette différenciation supplémentaire est caractérisée, lorsque les cellules épithéliales et stromales sont distinctement séparées, par la localisation des CL principalement vers les cellules épithéliales et par la localisation des CDI principalement au niveau des cellules stromales. Avantageusement, l'utilisation de ces monocytes CD14+ est caractérisée par l'obtention par différenciation, à partir de certaines cellules issues de la culture, de cellules endothéliales et de macrophages, en particulier quand elles sont mises dans un environnement tridimensionnel. Avantageusement, l'utilisation est caractérisée par l'obtention des cellules, préférentiellement préconditionnées, qui, quand elles sont intégrées dans un modèle de peau ou de muqueuse complet, c'est-à-dire comprenant à la fois un épithélium et une matrice conjonctive, sont capables, du fait de l'environnement cellulaire, préférentiellement fibroblastes et cellules épithéliales, et matriciel de se localiser dans l'épithélium pour se différencier en cellules de Langerhans, et de se localiser dans la matrice conjonctive pour se différencier en cellules dendritiques intersticielles, en macrophages et en cellules endothéliales, et d'acquérir une fonctionnalité comparable à celle des cellules de Langerhans, cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales in vivo. Aussi, selon un second aspect la présente invention concerne un procédé de culture in vitro de monocytes CD14+, caractérisé qu'il comprend : a) La séparation des monocytes CD14+, à partir de sang circulant, préalablement récoltés dans les règles de l'art, et b) La culture des monocytes CD14+ ainsi séparés dans un milieu de culture contenant plusieurs cytokines pendant une période de temps suffisante pour obtenir une double population de CL et de CDI. Selon une caractéristique avantageuse, ce procédé de culture in vitro de monocytes CD14+ est caractérisé en ce que la culture a lieu en présence d'au moins les cytokines GM-CSF et TGFss, de préférence TGFss1' Selon une autre caractéristique avantageuse de la présente invention, le procédé de culture in vitro de monocyte CD14+ est caractérisé en ce que la culture a lieu en présence d'une troisième cytokine à une concentration et pendant une période de temps déterminées au cours de ladite culture, ladite cytokine étant de préférence la cytokine IL-13. 1 1 Une variante de cette caractéristique avantageuse est la réalisation de la culture en présence de la cytokine IL-13 pendant au plus environ deux jours de manière à favoriser la différenciation en CL. Une autre variante de cette caractéristique avantageuse est la réalisation de la culture en présence de la cytokine IL-13 pendant environ six jours pour favoriser la formation de CDI. Une autre variante avantageuse de cette caractéristique est la réalisation de la culture en présence de la cytokine IL-13 pendant environ 4 jours pour favoriser la formation de la population mixte CL/CDI. Selon une caractéristique avantageuse de la présente invention, le procédé de culture in vitro de monocyte CD14+ est caractérisé en ce que la culture a lieu en présence de la cytokine TNFa. Une variante de cette caractéristique avantageuse est caractérisée en ce que la culture en présence de TNFa est réalisée à une concentration et pendant une période de temps déterminées, la durée étant inférieure à environ 18 heures, pour obtenir la différenciation des cellules en cellules de Langerhans et cellules dendritiques interstitielles encore immatures tout en évitant une maturation en cellules dendritiques matures activées. Une autre caractéristique avantageuse est que la culture en présence de TNFa est réalisée à une concentration et pendant une période de temps déterminées, la durée étant supérieure à environ 20 heures, pour une maturation en cellules dendritiques matures activées. Selon une autre caractéristique avantageuse de la présente invention, le procédé de culture in vitro de monocytes CD14+ est caractérisé en ce que la culture a lieu dans un environnement de culture tridimensionnel, en particulier en présence, au moins de cellules épithéliales et de cellules stromales. Selon une autre caractéristique avantageuse de la présente invention, un niveau de différenciation supplémentaire est obtenu en réalisant la culture desdites cellules de Langerhans et des cellules dendritiques interstitielles dans un environnement de culture tridimensionnel, en particulier comprenant au moins des cellules épithéliales et stromales distinctement séparées. Selon une autre caractéristique avantageuse de la présente invention, le procédé de culture in vitro de monocytes CD14+, est caractérisé en ce qu'après culture avec les cytokines, on réalise une stimulation de maturation complémentaire, en particulier par interaction des cellules dendritiques avec le CD40-ligand, ou par ajout de la cytokine TNFa ou de lipopolysaccharide, pendant une période de temps suffisante pour obtenir une maturation phénotypique et fonctionnelle desdites cellules. Selon une autre caractéristique avantageuse de la présente invention, le procédé de culture in vitro de monocytes CD14+, est caractérisé en ce qu'il comprend l'intégration de la double population de CL et de CDI, dans des proportions variables, dans un modèle de culture tridimensionnel. Selon une autre variante de cette dernière caractéristique avantageuse, le modèle de culture tridimensionnel comprend des modèles de peau, des modèles de muqueuse, des modèles de derme, des modèles de chorion, des modèles d'épiderme, des modèles d'épithélium. Selon une autre variante de cette dernière caractéristique avantageuse, le modèle de culture tridimensionnel comprend un support matriciel (dermique ou de chorion) de préférence choisi parmi : - un gel à base de collagène comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses intégrant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un derme mort désépidermisé, - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi-perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes. Selon une autre variante de cette dernière caractéristique avantageuse, le modèle de culture tridimensionnel utilisé comprend le modèle précité sur lequel des cellules épithéliales ont été déposées en surface, en particulier des kératinocytes. Selon une variante de cette dernière caractéristique avantageuse, le modèle de culture tridimensionnel utilisé comprend un modèle dans lequel a été incorporé au moins un type cellulaire complémentaire, par exemple des cellules nerveuses et/ou des cellules endothéliales (CE) et/ou des mélanocytes et/ou des lymphocytes et/ou des cellules adipeuses et/ou des annexes cutanées, comme des poils, des cheveux, des glandes sébacées. Selon une autre variante, certaines cellules issues de la culture se différencient en cellules endothéliales et en macrophages, en particulier quand elles sont mises dans un environnement tridimensionnel comprenant au moins des cellules épithéliales et stromales. L'invention concerne de manière générale un procédé de culture comprenant une utilisation des monocytes CD14+, telle que précédemment décrite ou telle que résultant de la description suivante, incluant les exemples, prise dans son ensemble. Selon un troisième aspect la présente invention concerne un milieu de culture in vitro de cellules de monocytes CD14+, caractérisé en ce qu'il comprend un milieu de culture de base, combiné à au moins deux cytokines, la cytokine GM-CSF et la cytokine TGFss, de préférence TGFss1' Avantageusement le milieu de culture est caractérisé en ce que le milieu de culture combiné avec lesdites deux cytokines est aussi combiné avec la cytokine IL-13 de préférence séparée physiquement afin de pouvoir être introduite dans le milieu de culture à un moment déterminé de la culture. Selon une caractéristique avantageuse de ce troisième aspect, le milieu de culture combiné avec lesdites deux cytokines est aussi combiné avec la cytokine TNFa de préférence séparée physiquement afin de pouvoir être introduite dans le milieu de culture à un moment déterminé de la culture. Selon une autre caractéristique avantageuse de ce troisième aspect, le milieu de culture est caractérisé en ce que la concentration en cytokine GM-CSF est comprise entre 0,1 et 4000 UI/mL, et avantageusement entre 1 et 2000 UI/mL et plus précisément d'environ 400 UI/mL ; la concentration en cytokine TGFss, de préférence TGFss1, est comprise entre 0,01 et 400 ng/mL, et avantageusement entre 1 et 100 ng/mL et plus précisément d'environ 10 ng/mL ; la concentration en cytokine IL-13, si cette cytokine est présente dans le milieu, est comprise entre 0,01 et 400 ng/mL, et avantageusement entre 1 et 100 ng/mL et plus précisément d'environ 10 ng/mL ; la concentration en cytokine TNFa, si cette cytokine est présente dans le milieu, est comprise entre 0,1 et 4000 UI/mL et, avantageusement entre 1 et 1000 UI/mL et plus précisément d'environ 200 UI/mL. Selon un quatrième aspect, l'invention concerne une population cellulaire comprenant au moins une population mixte de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles préconditionnées indifférenciées, et/ou différenciées et immatures, et/ou matures, et/ou interdigitées, caractérisées en ce qu'elles sont susceptibles d'être obtenues à partir de monocytes CD14+ et notamment par l'utilisation telle que définie précédemment ou par le procédé de culture selon la description précédente, ou par l'utilisation du milieu de culture tel que décrit précédemment. Encore, selon un cinquième aspect, la présente invention concerne l'utilisation de la population mixte de cellules CL et CDI obtenues à partir de l'utilisation précitée des monocytes CD14+, ou par le procédé de culture précité, ou l'utilisation du milieu de culture précité, ou telle que décrite précédemment pour la fabrication de modèle d'étude monocellulaire ou pluricellulaire en suspension, en mono-couche, ou tridimensionnel. Une caractéristique avantageuse de ce cinquième aspect, est le choix du modèle d'étude parmi : - un gel à base de collagène comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses intégrant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un derme mort désépidermisé, - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi-perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes. Selon une caractéristique avantageuse, ce modèle est caractérisé en ce qu'il comprend principalement soit des CL soit des CDI, soit un mélange CL/CDI, soit un mélange CL/CDI/cellules endothéliales/ macrophages, soit un mélange CDI/cellules endothéliales/macrophages. Le modèle tissulaire est défini comme pouvant être un modèle d'épiderme constitué principalement de kératinocytes, un modèle de matrice conjonctive, appelé derme dans la cas de la peau et appelé chorion dans le cas d'une muqueuse, contenant principalement des cellules stromales, un modèle d'épithélium constitué principalement de cellules épithéliales, un modèle de peau constitué d'un épiderme et d'un derme, d'un modèle de muqueuse constitué d'un épithélium et d'un chorion. On peut utiliser dans ces modèles, des cellules normales, saines ou pathologiques, ou des cellules issues de lignées ; ces cellules peuvent être d'origine humaines ou animales. Au niveau de la partie épithéliale, on peut introduire en plus des cellules générées selon l'invention des cellules épithéliales, des cellules pigmentaires, des cellules nerveuses... Au niveau de la matrice conjonctive, on peut introduire en plus des cellules générées selon l'invention des cellules stromales (fibroblastes en particulier), des lymphocytes T, des cellules adipeuses, des annexes cutanées (poils, cheveux, glandes sébacées). Selon un sixième aspect, la présente invention concerne un modèle complet de peau reconstruite ou de muqueuse reconstruite ou un modèle de derme reconstruit ou de chorion reconstruit ou un modèle d'épithélium reconstruit, en particulier un modèle d'épiderme, ou de tout autre modèle monocellulaire ou pluricellulaire en suspension, en mono-couche, ou tridimensionnel, comprenant au moins une population mixte CL/CDI de cellules telle qu'obtenue précédemment, à partir de monocytes CD14+. Selon une caractéristique avantageuse, ce modèle de tissu reconstruit ou autre modèle est choisi parmi : - un gel à base de collagène comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses intégrant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un derme mort désépidermisé, - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi-perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes. Selon une caractéristique avantageuse, ce modèle est caractérisé en ce qu'il comprend principalement soit des CL, soit des CDI, soit un mélange CL/CDI, soit un mélange CL/CDI/cellules endothéliales/ macrophages, soit un mélange CDI/cellules endothéliales/macrophages. Avantageusement ce modèle est caractérisé par la localisation des CL dans la partie épithéliale, et des CDI, des macrophages et des cellules endothéliales quand ils sont présents dans la matrice conjonctive. Avantageusement, l'invention concerne un modèle, tel que décrit précédemment, caractérisé par la présence de cellules assurant l'architecture, notamment de cellules stromales, en particulier de fibroblastes, et/ou de cellules épithéliales, en particulier de kératinocytes, et/ou d'autres types cellulaires, notamment de lymphocytes T, et/ou de cellules nerveuses, et/ou de cellules pigmentaires, en particulier de mélanocytes, et de cellules assurant la défense immune, notamment de CL, de CDI et/ou de macrophages, et de cellules assurant la vascularisation, notamment de cellules endothéliales, ainsi que de cellules adipeuses. Selon un septième aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins l'une desdites populations mixtes de CL et CDI comme modèle d'étude et/ou de sélection de principe actif. Par principe actif , on entend toute substance, produit ou composition potentiellement capable de présenter une activité intéressante dans l'industrie, en particulier dans l'industrie cosmétique, pharmaceutique, dermo-pharmaceutique, alimentaire, agro-alimentaire, etc. Un huitième aspect de l'invention concerne l'utilisation d'un modèle précité, dans le but notamment d'étudier l'activité immunostimulante ou immuno-déprimante d'un principe actif ou d'évaluer ou d'induire une immuno-tolérance par ledit principe actif. Selon un neuvième aspect, J'invention concerne, l'utilisation d'un modèle précité pour étudier la physiopathologie des barrières épithéliales ; l'irritation de la peau ou des muqueuses ; les agressions d'ordre biologiques telles que par exemple virus, rétrovirus, tel que HIV, bactéries, moisissures, microorganismes, antigènes particulaires ; la photo-toxicité ; la photo-protection ; ainsi que l'effet de principes actifs, en particulier cosmétiques ou pharmaceutiques ; l'effet de produits finis, en particulier produits cosmétiques ou pharmaceutiques ; étudier les mécanismes d'infection par un agent pathogène. En particulier l'invention permet d'utiliser les modèles pour étudier les mécanismes impliqués dans les phénomènes d'infection, de réplication et de transmission des virus, incluant les rétrovirus comme le HIV et de rechercher et de mettre au point des méthodes thérapeutiques (incluant vaccins, médicaments...). Selon un dixième aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un modèle précité pour détecter la présence d'un agent pathogène tel que par exemple virus, rétrovirus, tel que HIV, bactéries, moisissures, microorganismes, antigènes articulaires. Avantageusement, l'utilisation du modèle précité, pour mettre en évidence la présence d'un fragment ou totalité d'une molécule d'ADN, est caractérisée en ce que l'on utilise une méthode PCR in situ comprend notamment l'utilisation d'un milieu réactionnel contenant MgCJ2 à une concentration finale d'environ 2, 5 millimolaires, KCI à une concentration finale d'environ 50 millimolaires, gélatine à une concentration finale d'environ 0, 01%, ADN Taq polymérase à une concentration finale d'environ 0, 1 U/microlitre, dNTP marquées ou non à la digoxigénine à une concentration finale d'environ 10%. Avantageusement, l'utilisation précitée est caractérisée en ce que la méthode PCR in situ comprend notamment une étape d'amplification en particulier constituée d'une dénaturation de 5 minutes à 94 C, 3 cycles de 3 minutes à 95 C, 3 minutes à 55 C, 3 minutes à 72 C, et 17 cycles de 1 minute à 95 C, 1 minute à 55 C, 1 minute à 72 C. Selon un quatorzième aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un modèle d'étude précité, pour une application cosmétique, médicale ou biomédicale, en particulier pour moduler la réponse immunitaire ou de tolérance in vitro ou in vivo, suite à une agression environnementale, en particulier du type physique, notamment irradiation UV chimique ou biologique, comprenant immunologique, en particulier dans un but thérapeutique préventif ou curatif. Selon un quinzième aspect de la présente invention, le tissu reconstruit ou peau reconstruite ou muqueuse reconstruite ou modèle d'étude, peut être utilisé pour des applications d'ingénierie tissulaire et cellulaire pour des applications médicales ou biomédicales, par exemple thérapie cellulaire anti-cancer, par exemple une injection de CD capables de stimuler la réponse immune ; la thérapie cellulaire dans les cas de maladie auto immune, par la création d'une situation d'immuno-tolérance, par exemple en produisant des cellules T anergiques ; la thérapie génique de maladies touchant le système immune ; la mise au point et la réalisation de vaccins. Selon un autre aspect, l'invention concerne une méthode PCR in situ comprenant notamment l'utilisation d'un milieu réactionnel contenant NgCt2 à une concentration finale d'environ 2, 5 millimolaires, KCI à une concentration finale d'environ 50 millimolaires, gélatine à une concentration finale d'environ 0, 01%, ADN Taq polymérase à une concentration finale d'environ 0, 1 U/microlitre, dNTP marquées ou non à la digoxigénine à une concentration finale d'environ 10%. Avantageusement, cette PCR in situ précitée, est caractérisée en ce qu'elle comprend notamment une étape d'amplification en particulier constituée d'une dénaturation de 5 minutes à 94 C, 3 cycles de 3 minutes à 95 C, 3 minutes à 55 C, 3 minutes à 72 C, et 17 cycles de 1 minute à 95 C, 1 minute à 55 C, 1 minute à 72 C. Selon encore un autre aspect, la présente invention couvre aussi toute substance potentiellement active dont l'activité a été mise en évidence grâce à l'emploi d'au moins la population mixte de cellules obtenues à partir des monocytes CD14+, notamment par la mise en oeuvre de l'un quelconque des aspects précédents, pouvant en particulier utiliser un modèle d'étude. Grâce à l'invention, on utilise une source de monocytes circulants facile d'accès grâce à la possibilité d'utiliser des poches de sang de donneurs sélectionnables. Le nombre de précurseurs CD14+ présents dans le sang circulant est élevé et permet de produire in vitro avec une grande reproductibilité et faisabilité un nombre important de CL et de CDI. En outre, la culture des monocytes CD14+ permet de produire à la fois des CL et CDI ce qui permet de fournir un modèle de culture adapté pour le screening à haut débit de substances destinées en particuliers à des applications au niveau de la peau ou des muqueuses. Ce modèle de culture constitue donc un outil satisfaisant et complet car utilisant à la fois au moins des CL et/ou CDI ; il constitue par conséquent une méthode alternative à l'expérimentation animale et permet notamment de respecter les conventions éthiques en vigueur selon la législation de l'industrie cosmétique. L'invention permet en outre d'utiliser le modèle de culture en association avec les modèles de peau reconstruite ou de muqueuse reconstruite permettant de générer in vitro un modèle unique de"peau reconstruite immunocompétente endothélialisée"ou de"muqueuse reconstruite immunocompétente endothélialisée"physiologiquement très proches de la peau humaine normale ou d'une muqueuse humaine normale. Ce modèle pourra être utilisé pour étudier la physiopathologie des barrières épithéliales, l'irritation de la peau ou des muqueuses, les agressions d'ordre biologique (par exemple virus, rétrovirus tel que l'HIV, bactéries, moisissures, antigènes articulaires), la phototoxicité, la photoprotection ainsi que l'effet de principes actifs, en particulier cosmétiques et pharmaceutiques et de produits finis, en particulier produits cosmétiques et pharmaceutiques. L'invention permet de générer des populations de CD différentes, dont les différentes fonctionnalités permettent de rendre compte de l'ensemble des phénomènes intervenant dans les processus d'infection/défense de l'organisme. En outre, de manière remarquable et inattendue, les cellules générées in vitro à partir des monocytes CD14+ eux-mêmes isolés à partir de sang circulant périphérique, une fois intégrées dans un modèle de peau reconstruite ou de muqueuse reconstruite sont capables : - de se localiser dans l'épithélium pour ce différencier en CL ; - de se localiser dans la matrice conjonctive (derme ou chorion) pour se différencier en CDI, en cellules endothéliales et en macrophages ; - d'acquérir une fonctionnalité comparable à celle des CL, des CDI, des cellules endothéliales et des macrophages in vivo. On comprend que l'invention apporte des améliorations techniques majeures permettant une utilisation fiable et reproductible, à l'échelle industrielle et commerciale, en particulier dans l'industrie cosmétique et/ou pharmaceutique, et qu'elle peut avoir des implications cliniques majeures. Un résumé du protocole opératoire utilisé permet de mieux comprendre les différentes orientations du procédé de culture des monocytes CD14+. Génération des cellules à partir des protocoles suivants, après extraction des monocytes CD14+ à partir du sang circulant périphérique : Protocole 1 : CD14+ cultivés en suspension pendant 2 jours en présence de GM-CSF et TGFss1 et IL-13, puis pendant 4 jours supplémentaires en présence de GMCSF etTGFpl- > à J6 : pré-CL (indifférenciées et immatures) Addition de TNFa ( CL majoritaires (différenciées et immatures) Protocole 2 : CD14+ cultivés en suspension pendant 6 jours en présence de GM-CSF, TGFssl et IL-13- > à J6 : pré-CDI (indifférenciées et immatures) Addition de TNFa ( TGFpl et IL-13 puis pendant 2 jours supplémentaires en présence de GMCSF, TGFpl- à J6 : pré-CL et pré-CDI (indifférenciées et immatures) Addition de TNFa ( population mixte homogène de CL et de CDI (différenciées et immatures) Protocole 4 : CD14+ cultivés en suspension pendant 6 jours en présence de GM-CSF et TGFssl et de IL-13 pendant ou 2 jours, ou 4 jours, ou 6 jours à J6 : pré-CL et pré-CDI (indifférenciées et immatures) Addition de TNFa ( > 20 h) en suspension o cellules activées (différenciées matures, qui ne sont plus des CL ni des CDI Si on intègre les cellules obtenues selon les protocoles 1 ou 2 ou 3 dans des modèles de culture tridimensionnels (de préférence au stade cellules indifférenciées = pré-CL et/ou pré-CDI), on observe que : - l'ajout de TNFa n'est pas indispensable pour différencier les pré-CL et pré-CDI en CL et CDI - on obtient de façon spontanée, en plus des CL et des CDI, des macrophages et des cellules endothéliales dermiques/chorioniques Différentes étapes de différenciation/maturation des monocytes CD14+ : . Monocyte CD14z -7 J6 : pré-CL et/ou pré-CDI (= cellules indifférenciées et immatures) * Addition de TNFa ( 20 heures) -7. cellules matures qui ne sont plus des CL ni des CDI (= cellules matures activées) Addition de CD40-ligand (présent sur les lymphocytes T) sur les CL et/ou CDI ou sur les cellules matures #. cellules interdigitées (= dernier stade de maturation). D'autres buts, caractéristiques avantageux de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art à partir de la description suivante faite en référence à plusieurs exemples de réalisation donnés à titre d'illustration et qui ne seraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention. Dans les exemples, la température est en degré Celsius, ou à la température ambiante, la pression est la pression atmosphérique, sauf indications contraires. EXEMPLE 1 DE L'INVENTION Procédé de séparation des monocytes CD14+ à partir du sang circulant périphérique Le sang circulant périphérique a été récolté par prise de sang veineux sur un ou plusieurs donneurs humains, dans des vacutainers supplémentés en produits anti-coagulants habituels tel que le lithiumhéparine. La séparation des monocytes CD14+ à partir de ce sang circulant peut-être réalisée avantageusement selon le protocole décrit par Geissmann et al. dans J. EXP. MED. Vol 187, No 6,16 mars 1998, pages 961-966 publié par The Rockefeller University Press de la manière suivante : - après centrifugation sur un gradient Ficoll, les cellules mononucléées du sang circulant sont récupérées et marquées indirectement avec un cocktail d'anticorps (principalement anti-CD3, anti-CD7, anti-CD19, anti-CD45RA, anti-CD56, anti-IgE) couplés à des billes magnétiques. - après passage sur une colonne aimantée, seuls les monocytes non marqués magnétiquement sont élués. Les monocytes CD14+ sont récupérés dans l'eluat en procédant par tout procédé physique de séparation bien connu de l'homme de l'art et notamment par sédimentation ou centrifugation et sont élués tels quels pour les cultures ultérieures. Pour 100 millilitres de sang prélevé, on extrait environ 150 millions 20 millions) de cellules mononucléées et on purifie jusqu'à 40 millions de monocytes CD14+. Selon les conditions de culture utilisées (voir les exemples suivants), on génère de 12 à 16 millions de cellules de Langerhans et/ou cellules dendritiques interstitielles. EXEMPLE 2 DE L'INVENTION Culture des monocytes CD14+ isolés pour obtenir des cellules dendritiques indifférenciées et immatures Les monocytes CD14+, tels qu'obtenus à l'exemple 1 sont mis en culture, à raison d'environ 1 million par millilitre, dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 Unités Internationales/millilitre (ou UI/mL) et la cytokine TGFbetal à raison de 10 nanogrammes/millilitre. On réalise la culture à 370C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02. Le milieu de culture est supplémenté dans le cadre de l'invention initialement d'une troisième cytokine, à savoir la cytokine IL-13 à raison de 10 nanogrammes/millilitre. Au 4ème jour de culture, on rajoute le même milieu de culture mais ne contenant pas l'IL-13 et on poursuit la culture pendant deux jours supplémentaires. Au 6ème jour de culture, on génère des cellules dendritiques indifférenciées et immatures capables de s'orienter dans les voies de différenciation langerhansienne et cellules dendritiques interstitielles : - environ 30 à 50% des cellules dendritiques générées in vitro expriment la Langerine (marqueur spécifique des cellules de Langerhans) uniquement au niveau intracellulaire et n'expriment pas les marqueurs de maturité CD83, DC-LAMP et CCR7 ; - environ 30 à 50% des cellules dendritiques générées in vitro expriment DC-SIGN (marqueur spécifique des cellules dendritiques interstitielles) et n'expriment pas les marqueurs de maturité CD83, DC-LAMP et CCR7. EXEMPLE 3 DE L'INVENTION Culture des monocytes CD14+ isolés pour obtenir des cellules dendritiques indifférenciées et immatures capables de s'orienter préférentiellement dans la voie de différenciation des cellules dendritiques interstitielles (CDI) Les monocytes CD14+, tels qu'obtenus à l'exemple 1 sont mis en culture, à raison d'environ 1 million par millilitre, dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFbetal à raison de 10 ng/mL. On réalise la culture à 37 C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02. Le milieu de culture est supplémenté dans le cadre de l'invention initialement d'une troisième cytokine, à savoir la cytokine IL-13 à raison de 10 ng/mL. Après 6 jours de culture, on génère des cellules dendritiques indifférenciées et immatures capables de s'orienter préférentiellement dans la voie de différenciation CDI : - environ 60 à 80% des cellules dendritiques générées in vitro expriment DC-SIGN qui est le marqueur spécifique des cellules dendritiques interstitielles ; - la population de cellules DC-SIGN+ est immature car les cellules expriment fortement le marqueur CD68. EXEMPLE 4 DE L'INVENTION Culture des monocytes CD14+ isolés pour obtenir des cellules dendritiques indifférenciées et immatures capables de s'orienter préférentiellement dans la voie de différenciation des cellules de Langerhans (CL) Les monocytes CD14+, tels qu'obtenus à l'exemple 1 sont mis en culture, à raison d'environ 1 million par millilitre, dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFssl à raison de 10 ng/mL. On réalise la culture à 370C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02. Le milieu de culture est supplémenté initialement d'une troisième cytokine, à savoir la cytokine IL-13 à raison de 10 ng/mL. Avant au plus 2 jours de culture, on rajoute le même milieu de culture mais ne contenant pas l'IL-13 jusqu'au 6ème jour de culture. Au 6ème jour, on génère des cellules dendritiques indifférenciées et immatures capables de s'orienter préférentiellement dans la voie de différenciation en cellules de Langerhans : - environ 60 à 80% des cellules dendritiques générées in vitro expriment la Langerine au niveau intracellulaire, et CCR6 qui est le récepteur spécifique de MIP-3a ; - les cellules dendritiques générées in vitro sont fortement chimioattractées par MIP-3a, ce qui démontre la fonctionnalité du récepteur CCR6 ; - les cellules dendritiques générées in vitro sont immatures car elles n'expriment pas les marqueurs de maturité CD83, DC-LAMP et CCR7. EXEMPLE 5 DE L'INVENTION Culture des monocytes CD14+ isolés pour obtenir principalement des cellules dendritiques interstitielles Les monocytes CD14+, tels qu'obtenus à l'exemple 1 sont mis en culture, à raison d'environ 1 million par millilitre, dans un milieu de culture 1 1 RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFssl à raison de 10 ng/mL. On réalise la culture à 370C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02. Le milieu de culture est supplémenté dans le cadre de l'invention initialement d'une troisième cytokine, à savoir la cytokine IL-13 à raison de 10 ng/mL. Après 6 jours de culture, on rajoute la cytokine TNFa à raison de 200 UI/mL pendant moins de 18 heures, pour obtenir principalement des cellules dendritiques interstitielles : - environ 60 à 80% des cellules dendritiques générées in vitro expriment au niveau membranaire DC-SIGN ; - les cellules dendritiques générées in vitro expriment fortement des récepteurs mannose, une caractéristique des cellules dendritiques interstitielles ; - les cellules dendritiques interstitielles générées in vitro ont les mêmes caractéristiques fonctionnelles que les cellules dendritiques interstitielles in vivo. EXEMPLE 6 DE L'INVENTION Culture des monocytes CD14+ isolés pour obtenir principalement des cellules de Langerhans Les monocytes CD14+, tels qu'obtenus à l'exemple 1 sont mis en culture, à raison d'environ 1 million par millilitre, dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFpl à raison de 10 ng/mL. On réalise la culture à 37 C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02. Le milieu de culture est supplémenté dans le cadre de l'invention initialement d'une troisième cytokine, à savoir la cytokine IL-13 à raison de 10 ng/mL. Avant au plus 2 jours de culture, on rajoute le même milieu de culture mais ne contenant pas l'IL-13 jusqu'au 6ème jour de culture. Au 6ème jour, on ajoute la cytokine TNFa à raison de 200 UI/mL pendant au plus 18 heures, pour obtenir principalement des cellules Langerhans : - environ 60 à 80% des cellules dendritiques générées in vitro expriment la Langerine au niveau membranaire (marqueur spécifique des cellules de Langerhans), et présentent des granules de Birbeck qui sont des marqueurs spécifiques ultra-structuraux des cellules de Langerhans ; - les cellules de Langerhans générées in vitro ont une fonctionnalité semblable aux cellules de Langerhans in vivo, elles sont capables d'être chimio-attractées par MIP3a, ou de migrer sous l'effet de i'IL-lp ou après sensibilisation par un allergène fort comme le TNP ou Acide 2, 4, 6 trinitrozenzène-su/fonique. EXEMPLE 7 DE L'INVENTION Culture des monocytes CD14+ isolés pour obtenir la double population homogène de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles Les monocytes CD14+, tels qu'obtenus à l'exemple 1 sont mis en culture, à raison d'environ 1 million par millilitre, dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFpl à raison de 10 ng/mL. On réalise la culture à 370C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02. Le milieu de culture est supplémenté dans le cadre de l'invention initialement d'une troisième cytokine, à savoir la cytokine IL-13 à raison de 10 ng/mL. A 4 jours de culture, on rajoute le même milieu de culture mais ne contenant pas l'IL-13 pendant 2 jours supplémentaires. Au 6ème jour, on ajoute la cytokine TNFa à raison de 200 UI/mL pendant au plus 18 heures, ce qui permet de générer une double population cellules de Langerhans et cellules dendritiques interstitielles : - environ 30 à 50% des cellules dendritiques générées in vitro expriment la Langerine au niveau membranaire ; - environ 30 à 50% des cellules dendritiques générées in vitro expriment DC-SIGN au niveau membranaire ; - des expériences de double marquage confirment que les cellules dendritiques générées sont soit Langerine+, soit DC-SIGN+. EXEMPLE 8 DE L'INVENTION Culture des monocytes CD14+ isolés pour obtenir principalement des cellules dendritiques matures activées. Les monocytes CD14+, tels qu'obtenus à l'exemple 1 sont mis en culture, à raison d'environ 1 million par millilitre, dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFss1 à raison de 10 ng/mL. On réalise la culture à 370C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02. Le milieu de culture est supplémenté dans le cadre de l'invention initialement d'une troisième cytokine, à savoir la cytokine IL-13 à raison de 10 ng/mL. La culture étant réalisé quel que soit le temps d'incubation de la cytokine IL-13 jusqu'au 6ème jour de culture. Au 6ème jour, on ajoute la cytokine TNFa à raison de 200 UI/mL pendant plus de 20 heures pour générer des cellules dendritiques matures activées : - les cellules dendritiques générées in vitro expriment les marqueurs de maturation CD83, DC-LAMP et CCR7 qui est le récepteur spécifique de MIP-3ss ; - les cellules dendritiques générées in vitro sont fortement chimioattractées par MIP-3ss, ce qui démontre la fonctionnalité du récepteur CCR7. EXEMPLE 9 DE L'INVENTION Utilisation de la population de cellules principalement Langerhans dans un modèle monocellulaire en suspension de migration Génération des cellules : voir exemple 6 Pour évaluer la capacité migratoire des cellules de Langerhans générées in vitro vis-à-vis d'une quelconque agression, par exemple une agression d'ordre biologique telle un micro-organisme, par exemple un microorganisme de type bactérie, on utilise des chambres de migration à deux compartiments séparés par une membrane de porosité de 8 à 5 micromètres recouverte ou non d'une matrice mimant une membrane basale (type Matrigel-rm) ou chambre de Boyden selon le protocole suivant : - 2, 5. 105 cellules de Langerhans générées in vitro sont stimulées avec 100 microlitres de mannane à une concentration de 15 milligrammes/millilitre pendant 10 minutes à 370C ; - après cette stimulation de type bactérien, les cellules de Langerhans sont ensemencées dans le compartiment supérieur des chambres de migration à raison de 2,5. 105 cellules dans 0,5 millilitre de milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 2% (v/v) de sérum de veau fatal décomplémenté ; dans le compartiment inférieur des chambres de migration, 0,75 millilitres de milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 2% de sérum de veau foetal ont été déposés au préalable ; - après une heure de migration à 37 C, nous récupérons les cellules de Langerhans ayant migré dans le compartiment inférieur des chambres de migration à savoir le milieu de culture situé dans le compartiment inférieur des chambres de migration ; - la quantification des cellules de Langerhans ayant migré est réalisé par une numération des cellules sous un microscope à lumière blanche ; - les résultats sont exprimés en Index de migration c'est-à-dire le pourcentage de cellules stimulées ayant migré divisé par le pourcentage de cellules ayant migré spontanément (contrôle négatif). Après stimulation par le mannane, les index de migration sont compris entre 1,6 et 1,9 c'est-à-dire que les cellules de Langerhans générées in vitro et stimulées par le mannane migrent 1,6 à 1,9 fois plus que les cellules de Langerhans non traitées. Les cellules de Langerhans générées in vitro sont capables de migrer sous l'effet d'un agent stimulant, ce qui indique qu'elles sont fonctionnelles et que ce test peut être utilisé comme modèle d'étude pour évaluer l'effet d'agents potentiellement agressifs/allergisants. EXEMPLE 10 DE L'INVENTION Utilisation de la population de cellules dendritiques interstitielles principalement dans un modèle monocellulaire en suspension de sécrétion de cytokines Génération des cellules : voir exemple 5 Pour quantifier la sécrétion protéique des cytokines sécrétées par les cellules dendritiques interstitielles générées in vitro, par exemple l'interleukine 12 ou IL-12, vis-à-vis d'une quelconque agression, par exemple une agression d'ordre chimique, en particulier un allergène tel que le TNP ou Acide 2, 4, 6 trinitrobenzène-sulfonique, nous pouvons utiliser des dosages de type ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assa. 0 selon le protocole suivant : - 1 million de cellules dendritiques interstitielles générées in vitro sont stimulées avec 800 microlitres de TNP à une concentration de 5 millimolaires pendant 10 minutes à 370C, - après cette stimulation, les cellules dendritiques interstitielles sont récupérées et ensemencées dans des plaques 6 puits à raison de 1 million de cellules/1 millilitre de milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFpl à raison de 10 nanogrammes/millilitre ; - après 48 heures de culture à 370C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02, le surnageant de culture des cellules dendritiques interstitielles est récupéré ; - les surnageants de culture préalablement centrifugés à 1200 tours/minute pendant 10 minutes afin d'éliminer les débris - cellulaires sont utilisés pour le dosage ELISA ; pour la procédure du dosage ELISA de l'IL-12, se référer à la notice d'utilisation du fabricant (R & D System) ; - les résultats sont exprimés en concentration d'IL-12 en nanogramme/1 million de cellules/millilitre. Les cellules dendritiques interstitielles générées in vitro et stimulées par le TNP sécrètent l'IL-12p75 à des concentrations comprises entre 2,1 et 2,7 nanogrammes IL -12p75/1 million de cellules/millilitre alors que les cellules dendritiques interstitielles non traitées sécrètent l'IL -12p75 à des concentrations inférieures à 0,1 nanogrammes/1 million de cellules/millilitre. Les cellules dendritiques interstitielles générées in vitro augmentent leur sécrétion de cytokine immuno-activatrice sous l'effet d'un agent stimulant, ce qui indique qu'elles sont fonctionnelles et que ce test peut être utilisé comme modèle d'étude pour évaluer l'effet d'agents potentiellement agressifs/allergisants. EXEMPLE 11 DE L'INVENTION Utilisation de la double population de CL et de CDI dans un modèle bicellulaire en suspension dinternalisation d'antigène. Génération des cellules : voir exemple 7 L'avantage de la double population sensiblement homogène CL et CDI est la possibilité d'interaction avec les 2 types cellulaires comme en situation in vivo. Pour étudier les voies d'internalisation des cellules de Langerhans et des cellules dendritiques interstitielles générées in vitro, c'est-à-dire leur capacité à capturer l'antigène, nous avons utilisé le dextran et la technique de cytométrie en flux, selon le protocole suivant : 2. 105 cellules de la population mixte comprenant les cellules de Langerhans et les cellules dendritiques interstitielles générées in vitro sont incubées successivement avec : 5 microlitres d'anticorps anti-DC-SIGN à une concentration de 2 microgrammes/millilitre pendant 30 minutes à 40C ; 10 microlitres d'anticorps de chèvre anti-souris couplé avec le fluorochrome Tri-Color à une concentration de 1 microgramme/millilitre pendant 30 minutes à 40C ; blocage par du sérum normal de souris dilué au 1/20'e ; - 2 microlitres d'anticorps anti-Langerine couplé à la phycoérythrine à une concentration de 1 microgramme/millilitre pendant 30 minutes à 4 C ; - 1 milligramme/millilitre de FITC-Dextran dans 500 microlitres de tampon d'internalisation composé de PBS (Phosphate Buffered Saline) supplémenté avec 1% de sérum de veau foetal décomplémenté ; la réaction est effectuée à 370C pour l'essai et à 40C pour le contrôle négatif pendant une période de 15 minutes ; après la réaction avec le FITC-Dextran, les cellules sont analysées en cytométrie en flux ; les résultats sont exprimés en pourcentage de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles positives (par rapport au contrôle négatif) c'est-à-dire en pourcentage de cellules ayant internalisé le dextran ; - 50 à 70% des cellules de Langerhans (Langerine +) internalisent le FITC-Dextran et 60 à 80% des cellules dendritiques interstitielles (DC-SIGN+) internalisent le FITC- Dextran. Les cellules dendritiques générées in vitro sont capables d'internaliser des antigènes, ce qui indique qu'elles sont fonctionnelles et que ce test peut être utilisé comme modèle d'étude de l'internalisation d'antigènes. EXEMPLE 12 DE L'INVENTION Utilisation de la population de cellules dendritiques matures activées dans un modèle unicellulaire en suspension de stimulation allogénique de lymphocytes T naïfs. Génération des cellules : voir exemple 8 Pour étudier si les cellules dendritiques matures générées in vitro sont capables d'acquérir la fonctionnalité des cellules dendritiques interdigitées c'est-à-dire capable de stimuler la prolifération de lymphocytes T naïfs allogéniques, nous avons réalisé des réactions mixtes Iymphocytaires selon le protocole suivant : - les cellules dendritiques matures générées in vitro sont cultivées à 370C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02 pendant 48 heures avec des fibroblastes transfectés avec la molécule CD40-Ligand, en respectant un ratio 10 cellules dendritiques activées pour 1 fibroblaste transfecté CD40-Ligand, et dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFssl à raison de 10 nanogrammes/ millilitre. - les cellules dendritiques activées sont récupérées et cultivées pendant 3 jours avec des lymphocytes T naïfs allogéniques dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum humain AB ; une gamme de cellules dendritiques activées comprise entre 125 et 8000 cellules est effectuée et cultivée avec 105 lymphocytes T naïfs ; - au 3ème jour de la culture mixte Iymphocytaire, 20 microlitres de thymidine tritiée à 5 millicurie sont ajoutés pendant une période de 18 heures ; - les résultats sont exprimés sur un graphe portant en abscisse le nombre de cellules dendritiques activées (gamme de 125 à 8000 cellules) et en ordonnée l'incorporation de la thymidine tritiée dans les lymphocytes T naïfs allogéniques exprimées en cpm ou coup par minute. Après interaction par le CD40-Ligand, les cellules dendritiques activés générées in vitro stimulent fortement la prolifération des lymphocytes T naïfs (entre 12. 103 et 16. 103 cpm) comparativement aux cellules dendritiques activées qui induisent une faible prolifération des lymphocytes T naïfs (entre 3. 103 et 6. 103 cpm). Les cellules dendritiques générées in vitro sont capables d'acquérir la fonctionnalité de cellules dendritiques interdigitées, c'est-à-dire, capables d'acquérir de fortes capacités allostimulantes, ce qui indique qu'elles sont fonctionnelles et que ce test peut être utilisé comme modèle d'étude d'allostimulation. EXEMPLE 13 DE L'INVENTION Modèle pluricellulaire en monocouche de kératinocytes et de CL en coculture. Génération des cellules : voir exemple 4 ou 6. 1. 105 kératinocytes sont ensemencés dans des boîtes de culture de type plaque 6 puits dans un milieu Clonetics (référence : KGM-2) pour une période de culture en immersion jusqu'à confluence des kératinocytes. A confluence, on procède à l'ajout de 1 à 3. 105 de cellules dendritiques générées in vitro selon l'exemple 4 ou 6. La culture est maintenue 3 à 4 jours supplémentaires. Dans un milieu de culture RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau fatal décomplémenté et contenant initialement deux cytokines, à savoir la cytokine GM-CSF à raison de 400 UI/mL et la cytokine TGFpl à raison de 10 nanogrammes/millilitre. EXEMPLE 14 DE L'INVENTION Modèle pluricellulaire en monocouche de fibroblastes et de cellules dendritiques intersticielles en co-culture. Génération des cellules : voir exemple 3 et 5. 1. 105 fibroblastes sont ensemencés dans des boîtes de culture de type plaque 6 puits dans un milieu DMEM-Glutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, pénicilline à une concentration de 100 UI/millilitre, gentamicine à une concentration finale de 20 microgramme/millilitre pour une période de culture en immersion jusqu'à confluence des fibroblastes. A confluence, on procède à l'ajout de 1 à 3. 105 de cellules dendritiques générées in vitro selon l'exemple 3 ou 5. La culture est maintenue 3 à 4 jours supplémentaires. EXEMPLE 15 DE L'INVENTION Modèle pluricellulaire tridimensionnel d'épiderme reconstruit ou d'épithélium de muqueuse gingivale reconstruit contenant des cellules épithéliales et des cellules de Langerhans. Le modèle est réalisé selon le protocole : - 1 à 2. 106 kératinocytes ou cellules épithéliales sont ensemencées dans des inserts type chambre de Boyden (membrane de porosité 0, 4 um), après un jour de culture, 1 à 3. 105 cellules dendritiques générées in vitro selon l'exemple 4 sont ajoutées, la culture est poursuivie dans un milieu de culture DMEM-Glutamax/Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0, 4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0, 12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0, 4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2. 10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24, 3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture en immersion de 3 à 8 jours ; - les cultures de kératinocytes sont ensuite placées à l'interface airliquide pendant 12 à 18 jours dans le même milieu de culture utilisé pour la culture en immersion, excepté le sérum de veau l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et t'umutine. - Les cultures de cellules épithéliales sont ensuite maintenues en immersion pendant 12 à 18 jours dans le même milieu de culture que celui utilisé pour la culture en immersion, excepté le pourcentage de sérum de veau qui est abaissé de 10% jusqu'à 1%. EXEMPLE 16 DE INVENTION Modèles pluricellulaires tridimensionnels de derme reconstruit ou de chorion gingival reconstruit contenant les populations de cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales. Génération des cellules : voir exemple 3 ou 4 ou 5 ou 6 ou 7. Le modèle est réalisé selon le protocole suivant : - 2. 105 fibroblastes humains normaux de peau ou de muqueuse gingivale sont ensemencés sur un substrat matriciel à base de collagène réticulé au diphényl-phosphoryl-azide, dans un milieu de culture DMEMGlutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF 1. 1 ou Facteur de ce épidermique a une concentration finale de 10 nanogrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammesjmillilitre. Après 14 jours de culture, 1 à 3. 105 cellules dendritiques générées in vitro sont ensemencées sur l'équivalent de matrice conjonctive, qui est cultivé pendant 14 jours supplémentaires. Les marquages réalisés mettent en évidence la présence de cellules dendritiques interstitielles (DC-SIGN+), de macrophages (Macrophage Marker de Novocastra : clone BAS-anticorps monodonat NCL-MACRO) et de cellules endothéliales (V-CAM+). EXEMPLE 17 DE L'INVENTION Modèle pluricellulaire tridimensionnel de peau reconstruite contenant les populations cellules de Langerhans. cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales. Génération des cellules : voir exemples 4 ou 6. Le modèle est réalisé selon le protocole : - 2. 105 fibroblastes humains normaux de peau sont ensemencés sur un substrat dermique à base de coi ! agène-g) ycosaminogiycanne-chitosane, dans un milieu de culture DMEM-Glutamax supplémenté avec 10% de sérum de veau hyclone II, acide ascorbique-2-phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF ou Facteur de croissance épidermique à une concentration finale de 10 ng/mL, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture de 14 jours ; - puis 2. 105 kératinocytes humains normaux et 1 à 3. 105 cellules dendritiques générées in vitro sont ensemencées sur l'équivalent dermique dans un milieu de culture DMEM-Glutamax/Ham F-12 (ratio 3/1 v/v) supplémenté avec 10% de sérum de veau Hyclone II, acide ascorbique-2phosphate à une concentration finale de 1 millimolaire, EGF à une concentration finale de 10 ng/mL, hydrocortisone à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, umuline à une concentration finale de 0,12 UI/millilitre, isuprel à une concentration finale de 0,4 microgrammes/millilitre, triiodothyronine à une concentration finale de 2. 10-9 molaire, adénine à une concentration finale de 24,3 microgrammes/millilitre, pénicilline à une concentration finale de 100 UI/millilitre, amphotéricine B à une concentration finale de 1 microgramme/millilitre, et gentamicine à une concentration finale de 20 microgrammes/millilitre, et pour une période de culture en immersion de 7 jours ; - les cultures sont ensuite placées à l'interface air-liquide pendant 14 jours dans le même milieu de culture utilisé pour la culture en immersion, excepté le sérum de veau, l'hydrocortisone, l'isuprel, la triiodothyronine et llumuline ; - les cultures sont ensuite enrobées dans une résine amorphe comme le Tissue-Teck&commat; et congelés dans de l'azote liquide ; - des études immunohistochimiques sont réalisées sur des coupes congelées, d'une épaisseur de 6 micromètres, afin de caractériser les différents types cellulaires présents, en utilisant des anticorps monoclonaux dirigés contre la Langerine, DC-SIGN, V-CAM, (Macrophage Marker de Novocastra : clone 3AS - anticorps monoclonal NCL - MACRO). - Les marquages réalisés mettent en évidence la présence de cellules de Langerhans (Langerine +) dans l'épiderme, de cellules dendritiques interstitielles (DC-SIGN+), de macrophages (Macrophage Marker de Novocastra : clone BAS-anticorps monodona ! NCL-MACRO) et de cellules endothéliales (V-CAM+) dans le derme. EXEMPLE 18 DE L'INVENTION Modèle pluricellulaire tridimensionnel de peau reconstruite pigmentée contenant les populations cellules de Langerhans, cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales. Le modèle est réalisé selon le protocole décrit à l'exemple 17, en coensemençant 10. 000 mélanocytes avec les kératinocytes et les cellules dendritiques générées in vitro. On réalise, en plus des marquages décrits à l'exemple 17, un immunomarquage des mélanocytes (MELAN-A) et une immunohistochimie (DOPA réaction). EXEMPLE 19 DE L'INVENTION Modèle pluricellulaire tridimensionnel de peau reconstruite contenant les populations cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales. Génération des cellules : voir exemples 3 ou 5 ou 7. Le modèle est obtenu en réalisant le protocole décrit à l'exemple 17. Les marquages réalisés mettent en évidence la présence de cellules dendritiques interstitielles (DC-SIGN+), de macrophages (Macrophage Marker de Novocastra : done BAS-anticorps monodonat NCL-MACRO) et de cellules endothéliales (V-CAM+) dans le derme. EXEMPLE 20 DE L'INVENTION Modèle pluricellulaire tridimensionnel de muqueuse vaginale reconstruite contenant les population de cellules de Langerhans, cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales. Génération des cellules : voir exemple 4 ou 6. Le modèle est réalisé selon le protocole décrit à l'exemple 17, avec les modifications suivantes : les kératinocytes sont remplacés par des cellules épithéliales de vagin, les fibroblastes sont des fibroblastes issus de muqueuse vaginale et la culture est réalisée totalement en immersion dans le milieu de culture. Les cultures de cellules épithéliales sont ensuite maintenues en immersion pendant 12 à 18n jours dans le même milieu de culture excepté le pourcentage de sérum de veau qui est abaissé de 10 à 1%. Les marquages réalisés mettent en évidence la présence de cellules de Langerhans (Langerine +) dans l'épithélium, de cellules dendritiques interstitielles (DC-SIGN+), de macrophages (Macrophage Marker de Novocastra : clone BAS-anticorps monodona ! NCL-MACRO) et de cellules endothéliales (V-CAM+) dans le chorion. EXEMPLE 21 DE L'INVENTION Modèle pluricellulaire tridimensionnel de muqueuse vaginale reconstruite contenant les population de cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales. Génération des cellules : voir exemple 3 ou 5 ou 7. - Le modèle est réalisé selon le protocole décrit à l'exemple 17, avec les modifications suivantes : les kératinocytes sont remplacés par des cellules épithéliales de vagin, les fibroblastes sont des fibroblastes issus de muqueuse vaginale et la culture est réalisée totalement en immersion dans le milieu de culture. Les cultures de cellules épithéliales sont ensuite maintenues en immersion pendant 12 à 18 jours dans le même milieu de culture utilisé pour la culture en immersion, excepté le pourcentage de sérum de veau est abaissé de 10% jusqu'à 1%. Les marquages réalisés mettent en évidence la présence de cellules dendritiques interstitielles (DC-SIGN+), de macrophages (Macrophage Marker de Novocastra : clone SAS-anticorps monodonat NCL-MACRO) et de cellules endothéliales (V-CAM+) dans le chorion. EXEMPLE 22 DE L'INVENTION Utilisation de l'un quelconque des modèles décrits aux exemples 15, 17, 18 ou 20 pour étudier les interactions CL/environnement épithélial. Après obtention du modèle, on effectue un marquage de la E-Cadhérine. L'expression de la molécule d'adhésion E-Cadhérine est retrouvée sur les cellules de Langerhans et sur les cellules épithéliales, ce qui traduit d'éventuelles interactions de type hétérophilique via cette protéine entre les cellules de Langerhans et les cellules épithéliales avoisinantes. EXEMPLE 23 DE L'INVENTION Utilisation du modèle d'épiderme reconstruit décrit à l'exemple 15 pour étudier l'influence d'un rayonnement UVB. Pour étudier l'influence de divers facteurs environnementaux, en particulier les rayonnements UV, et plus précisément les UVB pénétrant principalement dans l'épiderme, nous avons évalué la migration et le profil phénotypique des cellules de Langerhans dans un modèle d'épiderme reconstruit après irradiations UVB, par des études immunohistochimiques, selon le protocole suivant : - à 11 jours de culture, les épidermes reconstruits sont irradiés à une dose de 0,5 joule/cm2 d'UVB et les cultures sont poursuivies pendant 3 jours ; - les études immunohistochimiques permettant la visualisation d'une déplétion épidermique des cellules de Langerhans sont réalisées en utilisant l'anticorps monoclonal anti-Langerine ; - la détection des modifications phénotypiques des cellules de Langerhans encore présentes dans le compartiment épidermique des épidermes reconstruits est réalisée avec l'utilisation des anticorps monoclonaux anti-CDla, anti-CCR6, anti-HLA-DR, anti-CD80, anti-CD83, anti-CD86, anti-CCR7, anti-DC-LAMP. Après irradiation UVB, on observe une diminution du nombre de cellules de Langerhans dans le compartiment épidermique estimée à plus de 50%, ainsi qu'une diminution, par exemple, de l'intensité de marquage de la molécule de c-stimulation CD86 sur les cellules de Langerhans restant dans l'épiderme. EXEMPLE 24 DE L'INVENTION Utilisation du modèle de peau reconstruite décrit à l'exemple 19 pour étudier l'influence d'un rayonnement UVA. Pour étudier l'influence de divers facteurs environnementaux touchant le derme de la peau, en particulier les rayonnements UV, et plus précisément les UVA, nous avons évalué le profil phénotypique des cellules dendritiques interstitielles dans un modèle de peau reconstruite après irradiation UVA, par des études immunohistochimiques, selon le protocole suivant : - à 32 jours de culture, les peaux reconstruites sont irradiées à une dose de 10 joules/cm2 d'UVA et les cultures sont poursuivies 3 jours supplémentaires ; - les études immunohistochimiques permettent la détection de modifications phénotypiques des cellules dendritiques interstitielles présentes dans le compartiment dermique des peaux reconstruites avec l'utilisation des anticorps monoclonaux anti-DC-SIGN, anti-Facteur de coagulation XIIIa, anti-HLA-DR, anti-CD80, anti-CD83, anti-CD86, antiCCR7, anti-DC-LAMP. Après irradiation UVA, on observe par exemple une diminution de l'intensité de marquage de la molécule HLA-DR et CD86 sur les cellules dendritiques interstitielles présentes dans le derme. EXEMPLE 25 DE L'INVENTION Utilisation du modèle de peau reconstruite décrit à l'un quelconque des exemples 17 ou 18 ou 19 pour étudier le profil des cytokines sécrétées sous l'effet d'un principe actif. Pour évaluer le pouvoir potentiellement sensibilisant, allergisant et juger d'une éventuelle activité pro-ou anti-inflammatoire d'un principe actif destiné à la peau humaine, nous avons quantifié la sécrétion des cytokines pro-inflammatoires telles que : IL-1, IL-6, IL-8, TNFa, INFy... et immunosuppressives : IL-2, IL-10... par dosage ELISA, selon le protocole suivant : - à 32 jours de culture, du Rétinol 10S est ajouté dans le milieu de culture à une concentration finale de 0, 05% pendant 7 jours ; - le dosage des cytokines est réalisé tous les 2 à 3 jours pendant 14 jours. On observe que le Rétinol 10S entraîne une stimulation des cytokines proinflammatoires. EXEMPLE 26 DE L'INVENTION Utilisation du modèle d'épiderme reconstruit décrit à l'exemple 15 pour réaliser un criblage de principes actifs capable de moduler les réactions allergiques. L'effet immunomodulateur d'un pricipe actif après induction d'un stress allergisant est étudié selon le protocole suivant : - au 12ème jour de culture, on ajoute 300 microlitres de TNP (Acide 2, 4, 6 trinitrobenzène-sulfonique) à une concentration de 5 millimolaires pendant 30 minutes à 370C dans le compartiment supérieur de la chambre de Boyden, - après cette stimulation, le milieu de culture est remplacé par du milieu frais contenant ou non les principes actifs à tester, à différentes concentrations, et la culture est poursuivie pendant 2 jours supplémentaires, - au bout de 14 jours de culture, le nombre de cellules de Langerhans ayant migré dans le compartiment inférieur de la chambre de Boyden (porosité de la membrane de 8 à 5 um recouverte ou non de MATRIGELTM) est quantifié par numération en microscopie optique ; le milieu de culture est récupéré et centrifugé, le surnageant est utilisé pour le dosage ELISA de l'IL-12 (R & D System) et pour le dosage des protéines (BCA), les résultats sont exprimés en concentration d'IL-12 en nanogramme/microgramme de protéines. Les résultats combinés du test de migration et de la synthèse d'IL-12 permettent d'établir le profil immunomodulateur des principes actifs testés. EXEMPLE 27 DE L'INVENTION Utilisation d'un modèle de peau reconstruite ou de muqueuse reconstruite obtenu selon l'un quelconque des exemples 17 ou 18 ou 20 pour étudier l'activité immunostimulante ou immunodéprimante d'un principe actif ou évaluer et/ou induire une immunotolérance. Pour évaluer la capacité des cellules de Langerhans et/ou des cellules dendritiques interstitielles à induire ou non des réponses immunes et/ou tolérogéniques vis-à-vis d'un principe actif, nous avons étudié le profil phénotypique des cellules de Langerhans et/ou des cellules dendritiques interstitielles par immunohistochimie dans les modèles de culture tridimensionnels, selon le protocole suivant : - au 32 jour de culture, le principe actif est ajouté dans le milieu de culture, à différentes concentrations, la culture est poursuivie pendant 7 jours, - l'analyse du profil phénotypique des cellules est réalisée par immunohistochimie avec une batterie d'anticorps (voir exemples 17 et 23). EXEMPLE 28 DE L'INVENTION Utilisation d'un modèle contenant principalement des cellules dendritiques interstitielles en suspension obtenu selon l'exemple 10 pour étudier l'activité immunostimulante ou immunodéprimante d'un principe actif ou évaluer et/ou induire une immunotolérance. L'étude est réalisée selon le protocole suivant : - après stimulation par le TNP, les cellules sont cultivées pendant 48 heures dans du milieu de culture contenant ou non les principes actifs à tester, à différentes concentrations, au terme de la culture, le profil phénotypique des cellules dendritiques interstitielles est étudié par cytométrie de flux en utilisant des anticorps monoclonaux anti-CDIa, antiCCR6, anti-HLA-DR, anti-CD80, anti-CD83, anti-CD86, anti-CCR7, anti-DCLAMP. Le profil phénotypique des cellules permet de définir l'effet immunomodulateur des principes actifs testés. EXEMPLE 29 DE L'INVENTION Utilisation de l'un quelconque des modèles de muqueuse reconstruite décrits aux exemples 20 ou 21 pour étudier l'infection par le VIH. L'étude est réalisée selon le protocole suivant : - les infections sont réalisées par injection directe ou dépôt de la suspension virale (souche monocytotrophe HIV-1BaL à la concentration de 55 nanogrammes p24/106) dans les muqueuses reconstruites à 35 jours de culture à l'aide d'une aiguille. L'incubation dure une nuit à 370C et est suivie de 4 lavages en milieu de culture. Les cultures sont poursuivies une semaine et les analyses effectuées sont les suivantes : - la réplication virale est quantifiée en mesurant la production de la protéine p24 dans le surnageant de culture des muqueuses reconstruites infectées par un test ELISA (Couiter/Immunotech). - t'infection des CD est contrôlée par PCR in situ : des coupes histologiques des muqueuses reconstruites infectées sont réalisées avec un cryostat puis fixées avec du paraformaldéhyde 4% pendant une semaine. Le milieu réactionnel de la PCR est composé des amorces SK38 et SK39 (amorces spécifiques du gène gag) à une concentration finale de 2 micromolaires, MgC12 à une concentration finale de 2,5 millimolaires, KCI à une concentration finale de 50 millimolaires, gélatine à une concentration finale de 0,01%, ADN Taq polymérase à une concentration finale de 0,1 U/microlitre, dNTP marquées ou non à la digoxigénine à une concentration finale de 10% dans un milieux Tris-HCI 10 millimolaires pH 8,3. La réaction de PCR comprend : une dénaturation de 5 minutes à 94 C, 3 cycles de 3 minutes à 95 C, 3 minutes à 55 C, 3 minutes à 72 C, et 17 cycles de 1 minute à 95 C, 1 minute à 55 C, 1 minute à 72 C. Après la PCR, les lames sont incubées 2 heures à température ambiante avec un anticorps anti-DIG couplé à la phosphatase alcaline et dilué au 1/500 dans un tampon Tris-HCI 100 millimolaires, NaCI 150 millimolaires et pH 7,5. La révélation est réalisée avec le substrat NBT-BCIP (dilué au 1/50) à température ambiante et obscurité pendant 1 heure. Les lames sont ensuite colorées au vert méthyle. Une production de p24 est observée dans le surnageant de culture des muqueuses reconstruites infectées et s'élève à 23. 103 ng/mL de p24 une semaine après l'infection. Les résultats de PCR in situ montrent qu'il y a des cellules infectées dans l'épiderme (cellules de Langerhans) et dans le derme (cellules dendritiques interstitielles). Ce modèle peut être utilisé en tant qu'outil d'étude des mécanismes d'infection, de réplication et de transmission du virus et de recherche et de mise au point de méthodes thérapeutiques (incluant vaccins, médicaments...). EXEMPLE 30 DE L'INVENTION Préparation de suspensions de cellules dendritiques en utilisant un milieu de culture sans sérum-Applications thérapeutiques Le protocole de culture des CD14+ est identique aux exemples 2,3, 4, 5, 6,7 et 8. Toutefois, le milieu RPMI1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau fatal est remplacé par le milieu défini sans sérum de STEMBIO de référence StembioA : SB A 100. Les cellules dendritiques peuvent alors servir de cibles pour être sensibilisées et d'outils thérapeutiques comme cellules présentatrices d'antigènes en immunothérapie cellulaire. REVENDICATIONS 1. Utilisation de monocytes CD14+ isolés de sang circulant périphérique pour l'obtention par différenciation d'au moins une population mixte de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles préconditionnées indifférenciées, et/ou différenciées et immatures, et/ou matures, et/ou interdigitées. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la différenciation conduit à la présence d'au moins une sous-population supplémentaire de cellules préconditionnées indifférenciées et/ou différenciées, telles que cellules de type macrophage, et/ou cellules de type endothélial. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que la différenciation est réalisée par culture dans un milieu de culture contenant au moins les deux cytokines GM-CSF et TGFss de préférence TGFpi. 4. Utilisation selon la revendication 1,2 ou 3, caractérisée en ce que la répartition entre les populations de cellules de Langerhans et les cellules dendritiques interstitielles est fonction de la présence d'une troisième cytokine à une concentration et pendant une période de temps déterminées au cours de ladite culture, ladite cytokine étant de préférence la cytokine IL-13. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'on réalise la culture en présence de cytokine IL-13 pendant au plus environ deux jours de manière à favoriser la différenciation en cellules de Langerhans. 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'on réalise la culture en présence de cytokine IL-13 pendant environ six jours pour favoriser la formation de cellules dendritiques interstitielles. 7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'on réalise la culture en présence de cytokine IL-13 pendant environ quatre jours pour favoriser la formation de la double population cellules de Langerhans/cellules dendritiques interstitielles. 8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'un niveau de différenciation supplémentaire des cellules de Langerhans et des cellules dendritiques interstitielles est obtenu en réalisant ladite culture en présence de la cytokine TNFa. 9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que la culture en présence de TNFa est réalisée à une concentration et pendant une période de temps déterminées, la durée étant inférieure à environ 18 heures, pour obtenir la différenciation des cellules de Langerhans et des cellules dendritiques interstitielles encore immatures tout en évitant une maturation en cellules dendritiques activées matures. 10. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que la culture en présence de TNFa est réalisée à une concentration et pendant une période de temps déterminées, la durée étant supérieure à environ 20 heures pour obtenir une maturation en cellules dendritiques activées matures. 11. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en cytokine GM-CSF est comprise entre 0, 1 et 4000 UI/mL avantageusement d'environ 400 UI/mL ; la concentration en cytokine TGFss, de préférence TGFss1, est comprise entre 0, 01 et 400 ng/mL, avantageusement d'environ 10 ng/mL ; la concentration en cytokine IL-13, si cette cytokine est présente dans le milieu, est comprise entre 0, 01 et 400 ng/mL ; avantageusement environ 10 ng/mL ; et la concentration en cytokine TNFa, si cette cytokine est présente dans le milieu, est comprise entre 0, 1 et 4000 UI/mL, avantageusement d'environ 200 UI/mL. 12. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les cellules de Langerhans et les cellules dendritiques interstitielles générées présentent des phénotypes de fonctions identiques à ceux trouvés in vivo. 13. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce que l'on réalise la culture desdites cellules de Langerhans et des cellules dendritiques interstitielles dans un environnement de culture tridimensionnel, en particulier comprenant au moins des cellules épithéliales et stromales. 14. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que, lorsque les cellules épithéliales et stromales sont séparées distinctement, les cellules de Langerhans se localisent préférentiellement vers les cellules épithéliales et les cellules dendritiques interstitielles se localisent principalement vers les cellules stromales. 15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, pour l'obtention par différenciation, à partir de certaines cellules issues de la culture, de cellules endothéliales et macrophages, en particulier quand elles sont mises dans un environnement tridimensionnel. 16. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour l'obtention de cellules, de préférence préconditionnées et indifférenciées, qui, quand elles sont intégrées dans un modèle de peau ou de muqueuse complet, c'est-à-dire comprenant à la fois un épithélium et une matrice conjonctive, sont capables, du fait de l'environnement cellulaire, préférentiellement fibroblastes et cellules épithéliales, et matriciel de se localiser dans l'épithélium pour se différencier en cellules de Langerhans, et de se localiser dans la matrice conjonctive pour se différencier en cellules dendritiques interstitielles, en macrophages et en cellules endothéliales, et d'acquérir une fonctionnalité comparable à celle des cellules de Langerhans, cellules dendritiques interstitielles, macrophages et cellules endothéliales in vivo. 17. Procédé de culture in vitro de monocytes CD14+, caractérisé en ce qu'il comprend : a) La séparation des monocytes CD14+, à partir de sang circulant périphérique, préalablement récoltés dans les règles de l'art, b) La culture des monocytes CD14+ ainsi séparés dans un milieu de culture contenant plusieurs cytokines pendant une période de temps suffisante pour obtenir une double population de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles. 18. Procédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que la culture à lieu en présence d'au moins les cytokines GM-CSF et TGFss, de préférence TGFss1' 19. Procédé selon la revendication 17 ou 18, caractérisé en ce que la culture a lieu en présence d'une troisième cytokine à une concentration et pendant une période de temps déterminées au cours de ladite culture, ladite cytokine étant de préférence la cytokine IL-13. 20. Procédé selon l'une des revendications 17 à 19, caractérisé en ce que la culture a lieu en présence de la cytokine IL-13 pendant au plus environ deux jours de manière à favoriser la différenciation en cellules de Langerhans. 21. Procédé selon l'une des revendications 17 à 19, caractérisé en ce que la culture a lieu en présence de la cytokine IL-13 pendant environ six jours pour favoriser la formation de cellules dendritiques interstitielles. 22. Procédé selon l'une des revendications 17 à 19, caractérisé en ce que la culture a lieu en présence de la cytokine IL-13 pendant environ quatre jours pour favoriser la formation de la population mixte cellules de Langerhans/cellules dendritiques interstitielles. 23. Procédé selon l'une des revendications 17 à 22, caractérisé en ce que la culture a lieu en présence de la cytokine TNFa. 24. Procédé selon la revendication 23, caractérisé en ce que la culture en présence de TNFa est réalisée à une concentration et pendant une période de temps déterminées, la durée étant inférieure à environ 18 heures, pour obtenir la différenciation des cellules en cellules de Langerhans et en cellules dendritiques interstitielles encore immatures tout en évitant une maturation en cellules dendritiques matures activées. 25. Procédé selon la revendication 23, caractérisé en ce que la culture en présence de TNFa est réalisée à une concentration et pendant une période de temps déterminées, la durée étant supérieure à environ 20 heures, pour une maturation en cellules dendritiques matures activées. 26. Procédé selon l'une des revendications 17 à 25, caractérisé en ce que la culture à lieu en présence d'un environnement de culture tridimensionnel, en particulier en présence, au moins de cellules épithéliales et de cellules stromales. 27. Procédé selon l'une des revendications 17 à 26, caractérisé en ce qu'un niveau de différenciation supplémentaire est obtenu en réalisant la culture desdites cellules de Langerhans et des cellules dendritiques interstitielles dans un environnement de culture tridimensionnel, en particulier comprenant au moins des cellules épithéliales et stromales, distinctement séparées. 28. Procédé selon l'une des revendications 17 à 27, caractérisé en ce qu'après culture avec les cytokines, on réalise une stimulation de maturation complémentaire, en particulier par interaction des cellules dendritiques avec le CD40-ligand, ou par ajout de cytokine TNFa ou de lipopolysaccharide, pendant une période de temps suffisante pour obtenir une maturation phénotypique et fonctionnelle desdites cellules. 29. Procédé selon l'une des revendications 17 à 28, caractérisé en ce qu'il comprend l'intégration d'au moins la population mixte de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles, dans des proportions variables, dans un modèle de culture tridimensionnel. 30. Procédé selon la revendication 29, caractérisé en ce que le modèle de culture tridimensionnel comprend des modèles de peau, des modèles de muqueuse, des modèles de derme, des modèles de chorion, des modèles d'épiderme, des modèles d'épithélium. 31. Procédé selon la revendication 29 ou 30, caractérisé en ce que le modèle de culture tridimensionnel comprend un support matriciel (dermique ou de chorion) de préférence choisi parmi : - un gel à base de collagène comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses intégrant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un derme mort désépidermisé, - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi-perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes. 32. Procédé selon l'une des revendications 29 à 31, caractérisé en ce que le modèle de culture tridimensionnel utilisé comprend le modèle précité sur lequel des cellules épithéliales ont été déposées en surface, en particulier des kératinocytes. 33. Procédé selon l'une des revendications 29 à 32, caractérisé en ce que le modèle de culture tridimensionnel utilisé comprend un modèle dans lequel a été incorporé au moins un type cellulaire complémentaire, par exemple des cellules nerveuses et/ou des cellules endothéliales et/ou des mélanocytes et/ou des lymphocytes et/ou des cellules adipeuses et/ou des annexes cutanées comme des poils, des cheveux, des glandes sébacées. 34. Procédé selon l'une des revendications 17 à 33, caractérisé en ce que certaines cellules issues de la culture se différencient en cellules endothéliales et en macrophages, en particulier quand elles sont mises dans un environnement tridimensionnel comprenant au moins des cellules épithéliales et stromales. 35. Procédé de culture, caractérisé par une utilisation des monocytes CD14+ telle que décrite dans l'une quelconque des revendications 1 à 16. 36. Milieu de culture in vitro de cellules de monocyte CD14+, caractérisé en ce qu'il comprend un milieu de culture de base, combiné à au moins deux cytokines, la cytokine GM-CSF et la cytokine TGFss, de préférence TGFss1. 37. Milieu de culture selon la revendication 36, caractérisé en ce que le milieu de culture combiné avec lesdites deux cytokines est aussi combiné avec la cytokine IL-13 de préférence séparée physiquement afin de pouvoir être introduite dans le milieu de culture à un moment déterminé de la culture. 38. Milieu de culture selon la revendication 36 ou 37, caractérisé en ce que le milieu de culture combiné avec lesdites deux cytokines est aussi combiné avec la cytokine TNFa de préférence séparée physiquement afin de pouvoir être introduite dans le milieu de culture à un moment déterminé de la culture. 39. Milieu de culture selon la revendication 36 à 38, caractérisé en ce que la concentration en cytokine GM-CSF est comprise entre 0,1 et 4000 UI/mL et avantageusement d'environ 400 UI/mL ; la concentration en cytokine TGFss, de préférence TGFss1, est comprise entre 0,01 et 400 ng/mL, et avantageusement d'environ 10 ng/mL ; la concentration en cytokine IL-13, si cette cytokine est présente dans le milieu, est comprise entre 0,01 et 400 ng/mL ; avantageusement environ 10 ng/mL ; et la concentration en cytokine TNFQ, si cette cytokine est présente dans le milieu, est comprise entre 0,1 et 4000 UI/mL, avantageusement d'environ 200 UI/mL. 40. Populations cellulaires comprenant au moins une population mixte de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles préconditionnées indifférenciées, et/ou différenciées et immatures, et/ou matures, et/ou interdigitées, caractérisées en ce qu'elles sont susceptibles d'être obtenues à partir de monocytes CD14+ et notamment par l'utilisation telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 16, ou par le procédé de culture selon l'une quelconque des revendications 17 à 35, ou par l'utilisation du milieu de culture tel que décrit selon l'une quelconque des revendications 36 à 39. 41. Utilisation d'au moins la population mixte de cellules de Langerhans et cellules dendritiques interstitielles obtenues à partir d'une utilisation des monocytes CD14+, selon l'une des revendications 1 à 16, ou par un procédé de culture, selon l'une des revendications 17 à 35, ou par l'utilisation du milieu de culture selon l'une des revendications 36 à 39, ou telle que définie à la revendication 40, pour la fabrication de modèle d'étude monocellulaire ou pluricellulaire en suspension, en mono-couche, ou tridimensionnel. 42. Utilisation selon la revendication 41, caractérisée en ce que le modèle d'étude comprend un support choisi parmi : - un gel à base de collagène comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses intégrant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un derme mort désépidermisé, - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi-perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes. 43. Utilisation selon la revendication 42, caractérisée en ce que le modèle d'étude comprend principalement soit des cellules de Langerhans, soit des cellules dendritiques interstitielles, soit un mélange de cellules de Langerhans/cellules dendritiques interstitielles, soit un mélange de cellules de Langerhans/cellules dendritiques interstitielles/cellules endothéliales/macrophages, soit un mélange cellules dendritiques interstitielles/cellules endothéliales/macrophages. 44. Modèle complet de peau reconstruite ou de muqueuse reconstruite ou un modèle de derme reconstruit ou de chorion reconstruit ou un modèle d'épithélium reconstruit, en particulier, un modèle d'épiderme, ou de tout autre modèle monocellulaire, ou pluricellulaire en suspension, en mono-couche, ou tridimensionnel, caractérisé en ce qu11 comprend au moins une population mixte telle qu'obtenue à l'une quelconque des revendications 1 à 35,40. 45. Modèle, selon la revendication 44, caractérisé en ce que ce modèle comprend un support choisi parmi : - un gel à base de collagène comprenant des cellules stromales en particulier des fibroblastes, - une matrice poreuse, réalisée à partir de collagène pouvant contenir un ou plusieurs glycosaminoglycannes et/ou éventuellement du chitosane, ces matrices poreuses intégrant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes, - un derme mort désépidermisé, - un support inerte choisi parmi le groupe consistant d'une membrane synthétique semi-perméable, en particulier une membrane de nitrocellulose semi-perméable, une membrane de nylon semi-perméable, une membrane ou une éponge de téflon, une membrane de polycarbonate ou de polyéthylène téréphtalate (PET) semi-perméable, une membrane inorganique Anopore semi-perméable, d'acétate ou d'ester de cellulose (HATF), une membrane Biopore-CM semi-perméable, une membrane de polyester semi-perméable, ledit support inerte contenant ou non des cellules stromales, en particulier des fibroblastes. 46. Modèle, selon la revendication 44 ou 45, caractérisé en ce qu'il comprend principalement soit des cellules de Langerhans, soit des cellules dendritiques interstitielles, soit un mélange de cellules de Langerhans/cellules dendritiques interstitielles soit un mélange de cellules de Langerhans/cellules dendritiques interstitielles/cellules endothéliales/macrophages, soit un mélange de cellules dendritiques interstitielles/cellu les endothéliales/macrophages. 47. Modèle selon les revendications 44 à 46, caractérisé par la localisation des CL dans la partie épithéliale, et des CDI, des macrophages et des cellules endothéliales quand ils sont présents dans la matrice conjonctive. 48. Modèle selon l'une des revendications 44 à 47, caractérisé par la présence de cellules assurant l'architecture, notamment de cellules stromales, en particulier de fibroblastes, et/ou de cellules épithéliales, en particulier des kératinocytes, et/ou d'autres types cellulaires, notamment de lymphocytes T, et/ou de cellules nerveuses, et/ou de cellules pigmentaires, en particulier de mélanocytes, et/ou de cellules adipeuses et de cellules assurant la défense immune, notamment de cellules de Langerhans, de cellules dendritiques interstitielles et/ou de macrophages, et de cellules assurant la vascularisation, notamment des cellules endothéliales. 49. Utilisation d'au moins la population mixte de cellules de Langerhans et de cellules dendritiques interstitielles telle qu'obtenue selon l'une des revendications 1 à 35,40 à 48, comme modèle d'étude et/ou de sélection de principes actifs. 50. Utilisation d'un modèle selon l'une des revendications 41 à 48, dans le but notamment d'étudier l'activité immunostimulante ou immunodéprimante d'un principe actif ou évaluer ou induire une immunotolérance par ledit principe actif. 51. Utilisation d'un modèle selon l'une des revendications 41 à 48 pour étudier la physiopathologie des barrières épithéliales ; l'irritation de la peau ou des muqueuses ; les agressions d'ordre biologiques telles que par exemple virus, rétrovirus, tel que HIV, bactéries, moisissures, microorganismes, antigènes articulaires ; la photo-toxicité ; la photoprotection ; ainsi que l'effet de principes actifs, en particulier cosmétiques ou pharmaceutiques ; l'effet de produits finis, en particulier produits cosmétiques ou pharmaceutiques ; étudier les mécanismes d'infection par un agent pathogène. 52. Utilisation d'un modèle selon l'une des revendications 41 à 48, pour détecter la présence d'un agent pathogène tel que par exemple virus, rétrovirus, tel que HIV, bactéries, moisissures, microorganismes, antigènes articulaires. 53. Utilisation d'un modèle selon l'une des revendications 41 à 48, pour mettre en évidence et, éventuellement quantifier, des ADN ou des fragments d'ADN en utilisant une méthode PCR in situ comprenant notamment l'utilisation d'un milieu réactionnel contenant MgC à une concentration finale d'environ 2, 5 millimolaires, KCI à une concentration finale d'environ 50 millimolaires, gélatine à une concentration finale d'environ 0, 01%, ADN Taq polymérase à une concentration finale d'environ 0, 1 UI/microlitre, dNTP marquées ou non à la digoxigénine à une concentration finale d'environ 10%. 54. Utilisation selon la revendication 53, caractérisée en ce que la méthode PCR in situ comprend notamment une étape d'amplication, en particulier constituée d'une dénaturation de 5 minutes à 94 C, 3 cycles de 3 minutes à 95 C, 3 minutes à 55 C, 3 minutes à 72 C, et 17 cycles de 1 minute à 95 C, 1 minute à 55 C, 1 minute à 72 C. 55. Utilisation d'un modèle, décrit selon l'une des revendications 41 à 48, pour une application médicale, biomédicale, ou cosmétique, en particulier pour moduler la réponse immunitaire ou de tolérance in vitro ou in vivo, suite à une agression environnementale, en particulier du type physique, tel qu'irradiation UV, chimique ou biologique, en particulier dans un but thérapeutique préventif ou curatif. 56. Utilisation d'un modèle, décrit selon l'une des revendications 41 à 48, pour des applications d'ingénierie tissulaire et cellulaire, pour des applications médicales ou biomédicales, par exemple thérapie cellulaire anti-cancer, par exemple une injection de CD capables de stimuler la réponse immune ; la thérapie cellulaire dans les cas de maladie auto immune, par la création d'une situation d'immuno-tolérance, par exemple en produisant des cellules T anergiques ; la thérapie génique de maladies touchant le système immune ; la mise au point et la réalisation de vaccins.