Brevet FR2825279A1 — publié le 20021206

MEDICAMENTS UTILISABLES DANS LE TRAITEMENT DU CANCER La présente invention concerne l'utilisation de nouvelles classes de composés destinés à la réalisation d'un médicament destiné au traitement du cancer. Les recherches conduites par la Demanderesse, notamment dans le cadre du phénomène de réversion tumorale, l'ont amenée à mettre en évidence la surexpression de certains gènes lors de la phase tumorale par rapport à la phase de réversion. Parmi ces gènes, la surexpression du gène TPT1 pour "translationally controlled tumor protein encoding histamin releasing factor" a montré que l'expression de ce gène était fortement diminué lors de la réversion tumorale. Ainsi, une lignée U937 tumorale est susceptible de réverser pour conduire à une cellule US, c'est-à-dire une lignée cellulaire ne présentant plus le caractère à phénotype malin aussi prononcé. Dans la lignée U937, sur par exemple 2000 séquences, le nombre de clones pour le gène TPT1était de 248 alors que dans la lignée US il n'était plus que de 2. Ceci a conduit la Demanderesse à se préoccuper de l'importance de la voie d'activation de l'histamine dans le phénomène de réversion tumorale et de mettre en évidence l'activité des produits interférant avec cette voie à titre de traitement du cancer. Plus particulièrement, la présente invention concerne l'utilisation de composés qui inhibent totalement ou partiellement l'expression du gène TPT1 ou des produits qu'il contrôle pour la réalisation d'un médicament destiné au traitement du cancer. Il est bien entendu que la présente invention concerne, non seulement la possibilité d'inhiber l'expression du gène TPT1 dans la cellule, mais également d'inhiber totalement ou partiellement l'expression des produits dont il contrôle directement ou indirectement la chaîne métabolique jusqu'à et y compris la libération notamment de l'histamine. Plus particulièrement, parmi les composés utilisables dans le cadre de la présente invention il faut citer les antihistaminiques, c'est-à-dire notamment les antagonistes des récepteurs Hl à l'histamine. Il doit être bien entendu que la fonction anticancéreuse de ces composés peut être liée avec des éléments annexes de la cellule, compte tenu du fait par exemple que l'un des prototypes des antihistaminiques, la spécialité pharmaceutique "Polaramine", est inactive dans le cadre de la présente invention. Parmi ces composés utilisables dans la présente invention, il faut citer tout particulièrement les dérivés de phénothiazines ainsi que les dérivés de type pipérazine. Il est possible également d'utiliser d'autres dérivés de type éthanolamine, éthyldiamine ou encore la nouvelle génération des antagonistes des récepteurs Hl à l'histamine ne comportant pas de composante sédative. Parmi les dérivés de phénothiazines, il faut citer le diméthothiazine, l'hydroxyéthylprométhazine, l'isothipendyle, le méquitazine, le méthdilazine, l'oxomémazine, le prométhazine, le propiomazine, le thiazinamium et le triméprazine. Parmi les dérivés de pipérazines, il faut citer notamment le buclizine, le cetirizine, le chlorcyclizine, le cinnarizine, le clocinizine, le cyclizine, le flumarizine, l'homochlorcycline, l'hydroxyzine, le méclozine, le niaprazine et l'oxatomide. Parmi les dérivés d'éthanolamines, on peut citer notamment les dérivés de phénhydramines tels que la bromodiphénhydramine, la diphénhydramine ainsi que leurs homologues. Parmi les éthylendiamines, il faut citer les composés de type mépyramine par exemple. Enfin, parmi les divers composés ne présentant pas de composante sédative, on peut citer par exemple l'acrivastine, l'ébastine, la tazifyline et la terfénadine. Ces composés ne constituent que les molécules de base utilisables selon la présente invention, il est également possible d'utiliser des dérivés, notamment de substitution, des composés précédents de même que des sels physiologiquement acceptables. Par traitement du cancer, on entend selon la présente invention essentiellement la capacité pour un composé de détruire sélectivement les cellules tumorales sans atteindre sensiblement les cellules saines, étant entendu que cette sélectivité peut être variable en fonction des composés et en fonction de la condition du patient et du type de cancer traité. Comme on le constatera dans les exemples ci-après, les produits selon la présente invention présentent une remarquable sélectivité et surtout une très grande capacité de destruction à l'égard des cellules tumorales, en particulier les résultats se sont révélés particulièrement impressionnants dans le cadre des cellules de type leucémique et dans le cancer du sein, carcinome ductal ou carcinome des glandes mammaires. Les composés selon la présente invention peuvent être utilisés sous forme de compositions pharmaceutiques utilisables par une voie d'administration quelconque, mais de façon générale on préférera utiliser les voies injectables, notamment pour le traitement des tumeurs. Il est bien sûr possible d'utiliser d'autres formes galéniques, notamment la voie orale. Les dosages journaliers devront tenir compte du composé, de l'état du malade et du cancer traité ainsi que de son stade. Les résultats annexés démontrent qu'il existe un dosage au-delà duquel le produit devient peu actif. Il est également possible d'envisager l'utilisation combinée des composés selon la présente invention avec d'autres agents anticancéreux, qu'il s'agisse d'antimétabolites, d'agents alkylants, de poisons du fuseau, d'agents intercalants ou d'autres types de cytolytiques ou d'anticancéreux hormonaux, de même que certaines protéines telles que les interférons selon des processus de polychimiothérapie, lesdits composés étant utilisés ensemble ou séparément selon un protocole à déterminer pour chaque association. Les figures représentent les résultats obtenus par le traitement de cellules, soit malignes, soit normales, au moyen des molécules A, B, C ou D après 48 heures ou 144 heures. Elles représentent le pourcentage de cellules survivantes en fonction d'un traitement sans molécule ou sans produit (contrôle) ou avec une molécule selon une dilution telle qu'indiquée précédemment. - La figure 1 illustre le traitement de cellules de leucémie myéloïde issues de la lignée K562 avec la molécule A, B, C ou D (lA : au bout de 48 heures, 1B : au bout de 144 heures). - La figure 2 illustre le traitement de cellules de leucémie prémonocytique U937 avec la molécule A, B, C ou D (2A : au bout de 48 heures, 2B : bout de 144 heures). - La figure 3 illustre le traitement de cellules T de leucémie aiguë issues de la lignée Jurkat avec la molécule A, B, C ou D (3A : au bout de 48 heures, 3B : bout de 144 heures). - La figure 4 illustre le traitement de cellules d'un carcinome ductal du sein issues de la lignée T47-D avec la molécule A, B, C ou D (4A : au bout de 48 heures, 4B : bout de 144 heures). - La figure 5 illustre le traitement de cellules d'un carcinome ductal du sein issues de la lignée MCF7 avec la molécule A, B, C ou D (5A : au bout de 48 heures, 5B : au bout de 144 heures). - La figure 6 illustre le traitement de cellules de carcinome des glandes mammaires issues de la lignée BT20 avec la molécule A, B, C ou D (6A : au bout de 48 heures, 6B : au bout de 144 heures). - La figure 7 illustre le traitement de cellules immortalisées de l'épithélium non tumorigéniques du sein issues de la lignée 184B5 avec la molécule A, B, C ou D (7A : au bout de 48 heures, 7B : bout de 144 heures). - La figure 8A illustre le traitement des lymphocytes du donneur 1 avec la molécule A ou C au bout de 48 heures. - La figure 8B illustre le traitement des lymphocytes du donneur 2 avec la molécule A ou C au bout de 48 heures. - La figure 9 illustre le traitement des lymphocytes du donneur 3 avec la molécule A ou C au bout de 48 heures. - La figure 10A illustre le traitement de cellules d'adénocarcinome colorectal issues de la lignée LoVo avec la molécule A ou C au bout de 48 heures. - La figure 10B illustre le traitement de cellules immortalisées de l'épithélium luminal du sein non tumorigéniques issues de la lignée 184B5 avec la molécule A ou C au bout de 48 heures. Les exemples ci-après permettront de mettre en évidence d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention. EXEMPLES Dans cette étude, on a utilisé un certain nombre de tumeurs humaines de différentes origines et des lymphocytes de donneurs sains qui ont été traitées avec des concentrations variables des molécules A, B, C et D de façon à déterminer leur cytotoxicité. Ces produits sont : A) Hydroxyzine dihydrochloride (Atarax # UCB). Solution : 100 mg/2 ml B) Bromphéniramine maléate (Dimegan # FEDERA S.A.). Solution : 10 mg/1 ml C) Prométhazine (Phénergan # Medeva Pharma S.A.). Solution : chlorhydrate de prométhazine : 2 820 g/100 ml D) Maléate de dexchlorphéniramine (Polaramine # Schering-Plough). Solution : 5 mg/1 ml. Ces produits ont été ajoutés à des concentrations différentes dans des cultures de diverses lignées malignes ainsi que des cellules normales. K562 : leucémie myéloïde KS : revertant de K562 avec une tumorigénicité réduite U937 leucémie prémonocytique US4 : revertant de U937 avec une tumorigénicité réduite Jurkat : lymphocyte T, leucémie aiguë de cellules T T47-D : cancer du sein, carcinome ductal MCF7 : cancer du sein, carcinome ductal BT20 : cancer du sein, carcinome des glandes mammaires LoVo : adénocarcinome colorectal 184B5 : sein, cellules immortalisées de l'épithélium luminal non tumorigéniques MCF10A : sein, cellules épithéliales luminales immortalisées non tumorigènes Donneurs 1,2, 3 : cellules T et B fraîchement isolées de 3 donneurs sains. Lignées de cellules leucémiques Toutes les lignées de cellules leucémiques ont été mises en croissance et utilisées en phase logarythmique. Après 1 jour du traitement les cellules sont isolées, comptées et diluées dans un milieu de croissance régulier jusqu'à obtenir une densité cellulaire de 75.103 cellules/ml et 9,375 cellules/ml pour la lecture sur des plaques à 48 heures et 144 heures après le traitement respectivement. Pour les lignées de cellules leucémiques, chaque produit de dilution a été ajouté aux puits (12 puits par plaque, TPP) et après complétion d'une lignée, 1 ml de cellules de la solution mère a été ajouté par puits. Toutes les dilutions de chaque produit ont été testées 4 fois et comptées manuellement et testées à l'essai réduit Alamar. La dilution des produits est effectuée dans un milieu de culture. Contrôle : pas de produit Dilution 1: 100 : 10 l de produit Dilution 1:1000 : lui de produit Dilution 1:2000 : 50 l d'une dilution à 1:100 Dilution 1:5000 : 20 ul d'une dilution à 1: 100 Dilution 1:10000 : 10 l d'une dilution à 1:100 Lymphocytes de donneurs sains Le sang est collecté sur citrate et dilué 1:avec 0,15M NaCl. 6 ml de cette dilution de sang sont chargés sur 3 ml de lymphoprep (Nycomed) et centrifugés à la température ambiante pendant 30 minutes à 800 g. Les cellules blanches sont isolées et lavées avec RPMI1640 + 10% FBS. Elles sont diluées jusqu'à 450 000 cellules/ml dans un milieu RPMI1640 + 10 FBS. On poursuit ensuite la même procédure que pour les cellules leucémiques. Cellules adhérentes du sein et du colon Toutes les cellules sont mises en croissance sur leur propre milieu de propagation et ensemencées 24 heures avant d'ajouter les produits. Les cellules sont trypsinisées, comptées et ensemencées à 50 000 et 10 000 cellules/puits pour effectuer une lecture des plaques à 48 heures et 144 heures après le traitement. Le milieu est remplacé (1 ml/puits) le jour du traitement avec les dilutions suivantes : Contrôle : pas de produit Dilution 1:100 : 100 l de produit dans 9,9 ml de milieu de croissance Dilution 1:1000 : 10 l de produit dans 10,0 ml de milieu de croissance Dilution 1:2000 : 5 l de produit dans 10,0 ml de milieu de croissance Dilution 1:5000 : 2 ul de produit dans 10,0 ml de milieu de croissance. On considère que le produit est actif lorsque le pourcentage de cellules survivantes est inférieur à 30%. Les résultats ci-joints montrent qu'à des dilutions de 1:100 à 1:1000 en 48 heures mais la plupart du temps en 144 heures l'ensemble des cellules cancéreuses ont été détruites, en particulier dans le cas de K562, U937, Jurkat, T47-D, MCF7, BT20,184B5 et ce pour les composés A et C. Au contraire, le composé B et le composé D se révèlent peu ou pas actifs. De même, des essais réalisés avec des dilutions supérieures à 1:1000, en particulier 1:10000, montrent que le composé devient inactif. Les essais effectués avec les lymphocytes de donneurs sains montrent qu'à des concentrations de 1:1000 le taux de survivance est très important, il existe donc bien un effet différentiel entre les lymphocytes de donneurs sains et les cellules cancéreuses. Afin de démontrer que ce phénomène n'est pas lié à une cytotoxicité générale des essais ont été réalisés sur un cancer LoVo résistant à l'effet cytopathique au parvovirus Hl. Ces essais montrent que le cancer LoVo est totalement résistant aux antihistaminiques. REVENDICATIONS 1) Utilisation d'un composé inhibant l'expression du gène TPT1 ou des produits qu'il contrôle pour la réalisation d'un médicament destiné au traitement du cancer. 2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé inhibant l'expression du gène TPT1 ou des produits qu'il contrôle est un antihistaminique. 3) Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'antihistaminique est du groupe chimique des pipérazines et des phénothiazines. 4) Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que le produit est choisi parmi l'hydroxyzine et le prométhazine. 5) Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le cancer traité est une leucémie ou un cancer du sein.