Brevet FR2833608A1 — publié le 20030620

Dispositif stérile comportant une membrane filtrante pour la culture de micro-organismes L'invention concerne un dispositif stérile pour la culture de micro-organismes constitué d'un récipient fermé par un couvercle et apte à contenir un milieu de culture, ce récipient comportant un fond et des parois raccordées au fond. Des boîtes de ce type, fréquemment appelées boîtes de Pétri, sont généralement en matière plastique injectée. Elles sont, de préférence, transparentes afin de permettre l'examen visuel du milieu de culture, par exemple un milieu gélosé. Ces boîtes ne sont pas étanches. Elles sont conditionnées dans un emballage étanche et stérile qui contient plusieurs boîtes. Dès l'ouverture de l'emballage, la stérilité des boîtes n'est plus assurée. La culture de micro-organismes contenus dans un liquide se fait le plus souvent en filtrant l'échantillon à travers une membrane filtrante qui retient les germes et qui est mise au contact d'un milieu de culture. L'ensemble est ensuite incubé à une température appropriée, ce qui permet la formation de colonies qui peuvent être identifiées ou comptées. Ces membranes sont le plus souvent conditionnées sous un emballage stérile individuel en enveloppe simple ou en enveloppes multiples sur bandes. Il en résulte de multiples inconvénients. Les emballages des boites de Pétri et des membranes filtrantes génèrent une quantité importante de déchets. En outre, ces emballages sont coûteux. Les membranes conditionnées en enveloppe simple sont peu commodes à utiliser. Leur préhension à l'aide de pincettes nécessite de l'habileté, et elle est difficile. Par ailleurs, l'analyse microbiologique nécessite un grand nombre d'opérations. Il faut ouvrir l'emballage de la boite de Pétri et celui de la membrane séparément. La membrane doit être disposée sur l'appareil de filtration. Cette opération doit se faire dans de bonnes conditions d'asepsie. On procède de préférence à cette opération délicate dans un laboratoire de contrôle où l'air est propre, ou encore en manipulant sous une hotte à flux laminaire où l'air est filtré et donc débarrassé d'une éventuelle contamination microbienne qui pourrait se déposer sur la membrane ou le milieu de culture de la boite de Pétri. La présente invention a pour objet de proposer un dispositif stérile pour la culture de micro-organismes qui remédie à ces inconvénients. En particulier, elle propose un dispositif qui diminue le nombre des emballages nécessaires et réduit leur coût. Ce résultat est obtenu, conformément à l'invention, par le fait que le fond du récipient est muni d'une nervure d'assise délimitant un logement et par le fait qu'une membrane de filtration est contenue dans ce logement. Grâce à cette caractéristique, un seul emballage est nécessaire pour la boîte et pour la membrane. La quantité d'emballage et, par suite, de déchets engendrés, est divisée par deux. Le coût de ces emballages est réduit dans les mêmes proportions. De plus, une seule stérilisation est nécessaire, en même temps pour la membrane et le milieu de culture, ce qui simplifie la fabrication. En outre, du fait que la membrane est contenue dans un logement du dispositif, sa préhension peut s'effectuer de façon aisée près de l'appareil de filtration, ce qui réduit les risques de contamination exogène. Par ailleurs, la membrane est maintenue parfaitement plane dans le logement du dispositif. Dans un premier mode de réalisation, le dispositif comporte un emballage individuel transparent constitué d'un film supérieur transparent entourant le couvercle et d'un film inférieur transparent entourant le logement du dispositif, ces deux films étant assemblés l'un à l'autre par leur périphérie. Dans une variante de réalisation particulière, la face du film supérieur dirigée vers le film inférieur est revêtue d'une substance adhésive, et le film inférieur n'est revêtu d'aucune substance adhésive. De cette manière, les deux films adhèrent l'un à l'autre grâce à la présence de substance adhésive sur le film supérieur. Ils peuvent être séparés l'un de l'autre aisément par pelage. En outre, du fait que le film inférieur ne comporte pas d'adhésif, la face de la membrane dirigée vers le film inférieur ne risque pas d'être altérée par un dépôt dû à un contact éventuel avec la substance adhésive, substance qui peut migrer dans la membrane et en modifier ses propriétés originelles. Les deux films peuvent également être assemblés l'un à l'autre d'une autre façon connue, par exemple par thermosoudage. Selon un mode de réalisation préféré, le couvercle du dispositif comporte une zone périphérique de scellement, et un opercule transparent est fixé de manière étanche sur la zone de scellement du couvercle, de façon à fermer hermétiquement le récipient apte à contenir le milieu de culture et le logement contenant la membrane de filtration, en les enveloppant, et à permettre de s'assurer de la présence de la membrane dans le logement au travers de l'opercule avant d'ôter l'opercule. Grâce à cette caractéristique, chaque dispositif pris individuellement est étanche. Les dispositifs peuvent être conditionnés dans un emballage qui peut être ouvert sans rupture de l'étanchéité de chacune d'eux. Chaque dispositif garde sa durée de péremption propre. Il est possible d'ôter l'opercule sans découvrir le milieu de culture et, de ce fait, de le maintenir à l'abri durant la filtration de l'échantillon avant le transfert de la membrane sur le milieu de culture. Dans une variante de réalisation préférentielle, au moins un bossage est formé dans l'opercule pour maintenir la membrane contre le fond du logement. Ce bossage est de préférence situé à l'aplomb d'une zone périphérique de la membrane, qui n'est pas utilisée pour la filtration. On évite ainsi d'avoir recours soit à un opercule spécial coûteux qui ne posséderait pas d'agent de scellage dans la zone centrale de la membrane utilisée pour la filtration, soit plus généralement d'ajouter un disque intercalaire de protection placé entre la membrane et l'opercule de scellement. Dans cette réalisation, l'opercule est, de préférence, semirigide et le ou les bossages sont avantageusement thermoformés. De préférence, le logement comporte un fond plan et poli afin d'immobiliser la membrane sur le fond par adhésivité statique. De préférence, la nervure d'assise comporte au moins un créneau permettant le passage d'un outil de préhension de la membrane. Et le fond du récipient comporte au moins un évidement chevauchant la périphérie de la membrane afin de permettre l'introduction d'un outil de préhension sous la membrane. Grâce à ces caractéristiques, on peut passer l'une des extrémités de pincettes sous la membrane pour la pincer et la décoller du fond du récipient. On évite ainsi tout risque d'endommagement de la membrane lors de sa préhension. Dans un mode de réalisation particulier, le couvercle comporte une ouverture obturée par un petit opercule étanche, de préférence adhésif et transparent, qui peut être transpercé par l'aiguille d'une seringue pour réhydrater le milieu de culture. Cette ouverture a notamment pour fonction de permettre le remplissage du récipient d'un milieu de culture solide préalablement liquéfié à chaud. Cette caractéristique est avantageuse, particulièrement lorsque le milieu de culture risque d'être endommagé par le procédé de stérilisation utilisé. Le milieu de culture est alors introduit après la stérilisation du dispositif en atmosphère stérile. Après le coulage du milieu de culture et son refroidissement, l'ouverture est fermée par le petit opercule de manière à préserver la stérilité du dispositif. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront encore à la lecture de la description qui suit d'exemples de réalisation donnés à titre illustratif. Sur ces figures : la Figure 1 est une vue générale en coupe d'un premier mode de réalisation d'un dispositif stérile conforme à la présente invention ; la Figure 2 est une vue du dispositif stérile représenté sur la Figure 1 en position retournée et après retrait de l'emballage individuel ; la Figure 3 est une vue générale d'un deuxième mode de réalisation d'un dispositif stérile conforme à l'invention ; la Figure 4 illustre le retrait de l'opercule du dispositif représenté sur la Figure 3 ; la Figure 5 est une vue du dispositif stérile représenté sur les Figures 3 et 4 en position retournée après retrait de l'opercule ; les Figures 6,7 et 8 illustrent la prise de la membrane au moyen d'un outil de préhension ; la Figure 9 est une vue en coupe qui illustre la filtration d'un échantillon de liquide à analyser ; la Figure 10 est une vue en plan de la membrane de filtration de la Figure 9 ; et les Figures 11 et 12 illustrent le dépôt de la membrane sur le milieu de culture dans le cas du second mode de réalisation (Figure 11) et du premier mode de réalisation (Figure 12). La Figure 1 illustre un premier mode de réalisation d'un dispositif stérile conforme à la présente invention. Il est constitué d'un récipient 2 surmonté d'un couvercle 4. Le récipient 2 comporte un fond 6 auquel sont raccordées des parois verticales 8. Dans l'exemple, le fond 6 est circulaire et les parois 8 sont circulaires et cylindriques. Le récipient 2 est apte à contenir un milieu de culture 14. Ce milieu est, par exemple, un milieu de culture gélosé coulé dans le récipient 2. Le couvercle 4 comporte une paroi 16 de forme circulaire qui ferme le récipient 2 et un rebord 18 relié au pourtour de la paroi 16. Conformément à l'invention, le fond 6 du récipient comporte une nervure d'assise 20 de forme circulaire, délimitant un logement 22. Une membrane de filtration 24 est contenue dans ce logement. Le logement 22 est circulaire et peu profond, et son diamètre intérieur est suffisamment grand pour permettre de loger librement la membrane 24. Les membranes couramment utilisées ont typiquement un diamètre de 47 ou de 50 mm. De préférence, le fond du logement 22 est plan et poli. Ainsi, la membrane 24 est plaquée sur le fond par adhésivité statique et elle est conservée parfaitement plane. L'effet statique permet, en outre, de maintenir la membrane en place pendant la fabrication du dispositif. Le dispositif représenté sur la Figure 1 est conditionné dans un emballage stérile individuel 28 qui est étanche et généralement transparent. Ainsi, chaque dispositif peut être utilisé sans avoir à tenir compte de la durée de péremption des autres dispositifs d'un même emballage. L'emballage individuel 28 est constitué d'un film supérieur transparent 30 qui entoure le couvercle 4 et d'un film inférieur transparent 32 qui entoure la partie inférieure du récipient 2 en prenant appui sur la nervure circulaire 20. Il faut éviter que la membrane 24 ne soit altérée par le contact avec le film inférieur 32. Plusieurs solutions peuvent être envisagées. Dans une première variante de réalisation, seul le film supérieur 30 comporte une substance adhésive sur l'une de ses faces. Le film inférieur 32 n'est revêtu d'aucune substance adhésive. La solidarisation étanche des films 30 et 32 se fait à leur périphérie 36 grâce à la présence d'adhésif sur la face du film 30 dirigée vers le film inférieur 32. Ainsi, le film inférieur 32 ne comporte pas d'adhésif sur sa face dirigée vers la membrane 24, de sorte que cette dernière ne risque pas d'être altérée par un contact avec elle. En outre, on peut ouvrir facilement l'emballage individuel 28 en séparant les deux films 30 et 32 l'un de l'autre par pelage. Il est également possible d'assembler le film supérieur et le film inférieur par thermosoudage. On peut aussi prévoir que l'adhésif ne sera disposé que sur la périphérie 36 d'un ou des deux films. Il est également possible d'interposer un disque de protection (non représenté) entre la membrane 24 et le film inférieur 32 dans le cas où sa face est revêtue d'adhésif. Toutefois, ces diverses solutions connues sont plus coûteuses. On a représenté sur la Figure 2 le dispositif de la Figure 1 en position retournée après retrait de l'emballage individuel 28. On peut ainsi tenir le dispositif d'une main en saisissant le couvercle 4 entre le pouce et les doigts de la main, ou bien le dispositif peut reposer sur une surface plane comme une paillasse. Etant donné que le logement ouvert 22 est maintenant dirigé vers le haut, on peut facilement retirer la membrane 24 de son logement au moyen d'un outil de préhension tel que des pincettes 40. La membrane filtrante 24 est ensuite utilisée pour recueillir des germes éventuellement présents dans un échantillon de liquide à analyser. A cette fin, elle est disposée sur un appareil de filtration, comme on l'expliquera plus en détail ultérieurement (voir Figure 9). On a représenté sur les Figures 3 à 8 un deuxième mode de réalisation d'un dispositif stérile pour la culture de microorganismes conforme à l'invention. Comme le premier, il est constitué d'un récipient 2 surmonté d'un couvercle 4. Le récipient 2 comporte de la même manière un fond 6 auquel sont raccordées des parois verticales 8. Le couvercle 4 comporte une paroi transparente 16 de forme circulaire et un rebord 18 flexible, relié à la paroi 16 par une partie arrondie 42 destinée à favoriser la flexibilité du rebord 18. Le couvercle 4 comporte, en outre, une zone de scellement périphérique. Dans l'exemple représenté, cette zone est constituée par un méplat 44 situé à l'extrémité du rebord flexible 18 et entourant le récipient 2. Le méplat 44 est situé en retrait par rapport à l'assise du récipient, constituée ici par l'extrémité de la nervure circulaire d'assise 20. Un opercule transparent 46 est fixé au méplat 44, par exemple thermoscellé, collé ou fixé par tout autre moyen. Le récipient est entièrement contenu dans le volume intérieur délimité par le couvercle 4 et l'opercule 46. En outre, étant donné que le méplat 44 est situé en retrait par rapport à la nervure circulaire d'assise 20, l'opercule 46, vu de l'extérieur, présente une forme concave. Une légère pré-tension de cet opercule permet de maintenir le couvercle 4 en appui sur la paroi verticale 8 du récipient 2. Dans l'exemple décrit, le dispositif est circulaire et son diamètre est de 70 mm environ, ce qui permet de le tenir facilement entre le pouce et les autres doigts de la main. Toutefois, le dispositif peut également être ovale, polygonal ou présenter encore une autre forme. L'opercule 46 est transparent, ce qui permet de s'assurer de la présence de la membrane 24 dans le logement 22. Le couvercle 4 est articulé sur le récipient, de manière à permettre l'ouverture et la fermeture du dispositif d'une seule main. Dans l'exemple représenté, le fond 6 du récipient est prolongé à sa périphérie par une couronne 48 qui présente, de préférence, la forme d'une coupelle creuse, de manière à faciliter le centrage du couvercle. 4 par rapport au récipient 2. Une ou plusieurs fentes 50 (par exemple trois fentes à 120' l'une de l'autre) sont prévues dans la couronne 48. Le couvercle 4 comporte une paroi intérieure circulaire 52. Un tenon 54 est prévu sur la paroi circulaire intérieure 52. Le tenon 54 peut s'engager dans la fente 50 ou l'une des fentes 50 s'il en existe plusieurs. Le couvercle 4 est également muni d'au moins un ergot de fonctionnement 56, de préférence décalé vers l'extérieur du tenon 54, sur lequel le pouce d'une main vient en appui afin de permettre l'ouverture et la fermeture du couvercle 4. Le dispositif représenté sur les Figures 3 à 8 peut être maintenu dans l'espace d'une seule main, par exemple de la main gauche d'un opérateur, comme montré à la Figure 11. Il peut être ouvert ou fermé instantanément de cette même main. La fente 50 comporte des surfaces de butée pour limiter le déplacement du tenon 54 et, par suite, l'angle d'ouverture du couvercle 4. Cet angle d'ouverture est limité à 60'environ. Conformément à une caractéristique particulière de l'invention, l'opercule 46 peut comporter un ou plusieurs bossages 60 (Figure 3). Dans l'exemple décrit, l'opercule 46 comporte un bossage unique présentant la forme d'un demi-tore continu. En variante, on pourrait prévoir plusieurs bossages, par exemple trois ou six, répartis angulairement sur le périmètre de la nervure d'assise 20. Le ou les bossages 60 peuvent être réalisés par thermoformage de l'opercule 46 semi-rigide. Ce ou ces bossages évitent à la membrane 24 de flotter dans le logement 22 au cas où elle se détacherait du fond 6. En outre, les bossages 60 évitent à la partie filtrante de la membrane 24 d'entrer en contact avec l'agent de scellage qui permet de sceller l'opercule 46 sur le méplat 44. En effet, comme on peut le constater sur les Figures 9 et 10, la totalité de la surface de la membrane 24 n'est pas utilisée pour la filtration. Les surfaces de filtration des membranes de contrôle microbiologique sont soit de 10 cm2, ce qui correspond à une partie filtrante de 35 mm de diamètre pour une membrane d'un diamètre extérieur de 47 mm, soit de 12,5 cm2, ce qui correspond à une partie d'un diamètre de 40 mm pour une membrane de diamètre extérieur de 50 mm. La zone ou couronne périphérique 62 de la membrane 24 qui entoure la partie filtrante utile 64 et qui n'est pas utilisée pour la filtration (Figure 10) permet de pincer la membrane dans l'appareil de filtration. Le ou les bossages 60 sont donc avantageusement disposés en regard de la couronne périphérique 62 de la membrane 24 qui n'est pas utilisée pour filtrer l'échantillon. Conformément à encore une autre caractéristique de l'invention, la nervure circulaire d'assise 20 peut être constituée de plusieurs parties, par exemple de trois parties disposées à 120'l'une de l'autre, de manière à ménager des espaces ou créneaux 70 (Figure 3) dont la fonction sera expliquée ultérieurement. Enfin, la paroi transparente 16 du couvercle 4 comporte, dans l'exemple de réalisation, une ouverture 83 obturée par un petit opercule 82, de préférence adhésif et transparent. L'ouverture 83 a plusieurs fonctions. Elle peut permettre le remplissage du récipient 2 du milieu de culture 14 en cours de fabrication. Il existe, en effet, divers procédés de stérilisation des boites stériles pour la culture de micro-organismes (boîtes de Pétri). Ces boîtes peuvent être stérilisées en les exposant à un rayonnement gamma ou encore à l'oxyde d'éthylène. Le milieu de culture gélosé 14 peut ne pas supporter le mode de stérilisation utilisé. Dans ce cas, il est liquéfié à chaud, puis introduit par coulage, par l'intermédiaire de l'ouverture 83, dans le fond du récipient 2 dans lequel il se solidifie après refroidissement. L'ouverture 83 favorise le refroidissement du milieu de culture, le couvercle 4 étant en place, ce qui évite la formation de condensation sous la paroi 16 du couvercle. L'ouverture 83 est ensuite fermée de manière étanche et stérile au moyen du petit opercule 82. L'ouverture 83 peut également être utilisée pour la réhydratation du milieu de culture au travers du petit opercule 82 à l'aide de l'aiguille d'une seringue pour le transpercer. On a représenté sur la Figure 4 la manière dont l'opercule semi-rigide 46 peut être retiré. Le dispositif est tout d'abord retourné de manière que le couvercle 4 soit dirigé vers le bas et l'opercule 46 vers le haut. Dans cette position, le dispositif peut être maintenu dans l'espace d'une seule main, par exemple de la main gauche d'un opérateur droitier, comme représenté sur la Figure 4. La main gauche prend le couvercle 4 par le rebord 18 maintenu entre le pouce et un ou plusieurs doigts de la même main. De sa main droite, l'opérateur saisit l'opercule 46, par exemple au moyen d'une languette prévue à cet effet (non représentée) et il la tire doucement de manière à desceller l'opercule 46 du méplat 44. On a représenté sur la Figure 5 le dispositif après retrait complet de l'opercule 46. Dans cette position, la membrane 24 peut être retirée aisément du logement 22. Le dispositif comporte plusieurs caractéristiques qui facilitent cette opération. Tout d'abord, comme on peut le voir particulièrement sur les Figures 5 et 7, la nervure circulaire d'assise 20 comporte, dans l'exemple, trois créneaux 70 disposés à 120' l'un de l'autre. Ces créneaux sont prévus suffisamment larges pour permettre le passage d'un outil de préhension de la membrane 24, par exemple des pincettes 40, comme représenté sur les Figures 6,7 et 11. En outre, au moins un évidement 80 est prévu dans le fond 6 du récipient 2 en regard d'au moins un créneau 70 (Figures 6 et 7). Chaque évidement 80 présente une inclinaison remontant du côté du créneau 70 par lequel l'outil de préhension est introduit. L'évidement 80 est suffisamment allongé pour être situé de part et d'autre de la périphérie de la membrane 24. Ainsi, une partie de l'évidement 80 est recouverte par la membrane et une autre partie ne l'est pas. Une branche des pincettes 40 est introduite sous la membrane 24, puis la membrane est pincée en refermant les pincettes 40 tenues par la main droite de l'opérateur (Figure 6). La membrane 24 au contact du fond 6 peut alors être ôtée aisément. L'opérateur dépose alors la membrane 24 sur un support de filtration 90 (Figure 9) à l'aide des pincettes 40 et il procède aux opérations d'échantillonnage en filtrant un échantillon de liquide à analyser 92 à travers la membrane 24 après avoir préalablement déposé le dispositif sur une paillasse. La filtration étant terminée, l'opérateur prend le dispositif sur la paillasse et le place près du support de filtration. Il dépose la membrane 24 sur le milieu de culture 14 et place le dispositif en position retournée dans un incubateur. Dans le cas du premier mode de réalisation de l'invention décrit en référence aux Figures 1 et 2, il est nécessaire de retirer le couvercle 4 avant de pouvoir déposer la membrane 24 sur le milieu de culture 14. L'opérateur a besoin de ses deux mains pour réaliser cette opération. Au contraire, dans le cas du second mode de réalisation de l'invention décrit en référence aux Figures 3 à 8, il est possible d'ouvrir le récipient d'une seule main, par exemple la main gauche dans le cas d'une personne droitière, comme représenté sur la Figure 11. Le récipient peut être ouvert ou fermé instantanément d'une seule main. Grâce à cette caractéristique, le récipient est ouvert rapidement, seulement lorsque cela est nécessaire pour déposer la membrane. Cette dernière n'est déplacée que de quelques centimètres dans un minimum de temps. Le couvercle s'ouvre partiellement, et seulement de l'angle nécessaire pour permettre de déposer la membrane sur le milieu de culture. De même, lorsque le dispositif est posé, le couvercle qui est articulé sur le récipient 2 peut être ouvert ou fermé instantanément d'un seul doigt, le poids du milieu de culture 14 favorisant la stabilité du récipient. Cette caractéristique est intéressante, par exemple, lors du repiquage de colonies de façon précautionneuse pour l'identification de germes. On réalise ainsi un dispositif stérile à usage unique, que l'on peut encore appeler nécessaire (ou"set"), qui renferme sous la forme d'un unique emballage, sur le dessus, une boîte contenant un milieu de culture et, sous le dessous, un logement contenant une membrane de filtration. Revendications 1. Dispositif stérile, pour la culture de micro-organismes, constitué d'un récipient (2) fermé par un couvercle (4) et apte à contenir un milieu de culture (14), ce récipient (2) comportant un fond (6) et des parois (8), caractérisé en ce que le fond (6) du récipient (2) est muni d'une nervure d'assise (20) délimitant un logement (22) et en ce qu'une membrane de filtration (24) est contenue dans ce logement (22). 2. Dispositif selon la revendication l, caractérisé en ce qu'il comporte un emballage individuel transparent (28) constitué d'un film supérieur transparent (30) entourant le couvercle (4) et d'un film inférieur transparent (32) entourant la nervure d'assise (20), ces deux films (30,32) étant assemblés l'un à l'autre par leur périphérie. 3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que la face du film supérieur (30) dirigée vers le film inférieur (32) est revêtue d'une substance adhésive et en ce que le film inférieur (32) n'est revêtu d'aucune substance adhésive. 4. Dispositif selon la revendication l, caractérisé en ce que le couvercle (4) comporte une zone périphérique de scellement (44) et en ce qu'un opercule transparent (46) est fixé de manière étanche sur la zone de scellement (44) du couvercle (4), de façon à fermer hermétiquement le récipient (2) apte à contenir le milieu de culture (14) et le logement (22) contenant la membrane de filtration (24), en les enveloppant, et à permettre de s'assurer de la présence de la membrane de filtration (24) dans le logement (22) au travers de l'opercule (46) avant d'ôter l'opercule. 5. Dispositif selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'au moins un bossage (60) est formé dans l'opercule (46) pour maintenir la membrane (24) contre le fond (6) du logement (22). 6. Dispositif selon la revendication 4, caractérisé en ce que le bossage (60) est situé à l'aplomb d'une zone périphérique (62) de la membrane (24) qui n'est pas utilisée pour la filtration. 7. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le logement (22) comporte un fond (6) plan et poli afin d'immobiliser la membrane (24) sur le fond (6) par adhésivité statique. 8. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que la nervure d'assise (20) comprend au moins un créneau (70) permettant le passage d'un outil de préhension (40) de la membrane (24). 9. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le fond (6) du récipient (2) comporte au moins un évidement (80) chevauchant la périphérie de la membrane (24) afin de permettre l'introduction d'un outil de préhension (40) sous la membrane (24). 10. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le couvercle (4) comporte une ouverture (83) obturée par un petit opercule étanche (82) qui peut être transpercé par l'aiguille d'une seringue pour réhydrater le milieu de culture.