Brevet FR2822707A1 — publié le 20021004

ASSOCIATION D'UN ANTIGENE TUMORAL ET D'UN SYSTEME DE DELIVRANCE D'UNE CYTOKINE OU D'UNE CHEMOKINE A DES FINS D'IMMUNOTHERAPIE DU CANCER. La présente invention concerne le domaine du traitement des cancers et consiste à administrer à un patient cancéreux une association de composants potentialisant mutuellement leur effet immunothérapeutiques in vivo. Plus particulièrement, l'invention concerne l'association d'un système de délivrance d'une cytokine ou d'une chémokine stimulant le système immunitaire et d'antigènes tumoraux, délivrés par exemple sous forme de lysats cellulaires. De nombreux arguments expérimentaux et cliniques ont montré que les cellules du système immunitaire pouvaient contrôler le développement et la croissance tumorale. Le rôle capital des lymphocytes T comme effecteurs de la réponse immunitaire anti-tumorale est largement confirmé dans de nombreux modèles animaux, dans lesquels la régression et la prévention des lésions tumorales est le plus souvent dépendante de ce type de cellules. Divers mécanismes peuvent générer des épitopes antigéniques reconnus par des lymphocytes T anti-tumoraux. Ces épitopes peuvent provenir de gènes normaux dont l'expression est limitée aux cancers et aux cellules de la lignée germinale mâle (MAGE, BAGE, GAGE, RAGE, NY-ESO-1). Certains antigènes sont les produits de gènes codant pour des antigènes de différenciation (tyrosinase, gplOO, Meia. nA, TjRP- et TRP-2) ou proviennent de gènes mutés dans les cellules tumorales (mutation de CDK4, caténine B, caspase 8, Ras, p53). Enfin, certains antigènes sont codés par des gènes sur-exprimés dans les tumeurs (p53, Her-2/neu, PRAME) ou sont des antigènes viraux (protéine E7 du virus HPV16) (Curr Opin Immunol 1997 Oct ; 9 (5) : 684-93). L'induction d'une réponse immunitaire anti-tumorale inclut la présentation des antigènes associés aux tumeurs, la sélection et l'activation des lymphocytes T spécifiques, la migration de ces cellules au site tumoral et la reconnaissance des antigènes tumoraux conduisant à l'élimination des cellules tumorales. Un antigène, en soi, n'est pas immunogène. Il doit être présenté à des lymphocytes T par des cellules professionnelles présentatrices de l'antigène, telles que les macrophages, les cellules dendritiques, les lymphocytes B en périphérie, ou telles que les astrocytes ou les cellules de la microglie dans le système nerveux central. Les lymphocytes T reconnaissent sur ces cellules présentatrices de l'antigène des peptides dérivés de protéines endogènes ou exogènes, après un processus biologique appelé apprêtement (Immunol. Today 2000 Jul ; 21 (7) : 317-9) (Immunol. Res. 1999 ; 20 (3) : 195-205). Les antigènes reconnus par les lymphocytes T CD8 sont généralement des peptides de 8 à 10 acides aminés associés aux molécules HLA de classe I, alors que les antigènes reconnus par les lymphocytes T CD4 sont généralement des peptides de 14 à 22 acides aminés présentés par les molécules HLA de classe II. La progression tumorale résulte souvent de l'absence de reconnaissance des antigènes tumoraux par le système immunitaire, ou de l'absence de réponse immunitaire appropriée (Crit Rev Oncog. 2000 ; 11 (2) : 97-133). Une première approche dans l'immunothérapie du cancer est l'identification d'antigènes associés aux tumeurs reconnues par des lymphocytes T cytotoxiques (CTL). Des techniques variées ont été utilisées afin d'identifier des peptides tumoraux présentés à des CTL. Pour chacune d'elles, il est important de prouver que les CTL obtenus in vitro et dirigés contre ces peptides reconnaissent les cellules exprimant la protéine parentale endogène. La mort cellulaire peut être obtenue par différents procédés conduisant à l'apoptose ou la nécrose. L'utilisation de matériel tumoral sous forme de corps apoptotiques peut engendrer, sans restriction liée aux molécules HLA, la présentation de multiples antigènes présentés à la fois par les molécules HLA de classe II et de classe I par des cellules présentatrices de l'antigène, à des lymphocytes T CD4 et CD8 respectivement (J. Exp. Med. 2000 Dec 4 ; 192 (11) : 1535-44). Des antigènes exogènes peuvent en effet avoir accès au cytosol et à la voie de présentation via les molécules HLA de classe I (Reimann J, Schirmbeck R., Immunol. Rev. 1999 Dec ; 172 : 131-52). Les lymphocytes T CD4 restreints par les molécules HLA de classe II peuvent exercer des fonctions de type helper impliquées dans l'induction et dans le maintien de la réponse cytotoxique. En outre, ils peuvent avoir des effets soit directs contre les tumeurs exprimant les molécules HLA de classe II (Qi L, Rojas JM, Ostrand-Rosenberg S. J Immunol 2000 Nov 15 ; 165 (10) : 5451-61), soit indirects en activant d'autres cellules effectrices telles que les macrophages, les éosinophiles et les cellules NK. La lyse des cellules tumorales par nécrose permet leur relargage de Heat Shock Proteins (HSP), protéines intracellulaires solubles, capables d'interagir avec les cellules présentatrices de l'antigène (Int. Immunol. 2000 Nov ; 12 (11) : 1539-46). Les HSP sont des protéines chaperonnes liant des peptides antigéniques (J. Biol. Chem. 2000 Feb 25 ; 275 (8) : 5472-7). Elles interagissent avec les cellules présentatrices de l'antigène par l'intermédiaire de récepteurs tels que CD91 ou CD14, entraînant la synthèse de cytokines pro-inflammatoires telles que TNF-a, IL-12, GM-CSF et ILl-5 et la présentation des peptides en association avec les molécules du complexe majeur d'histocompatibilité de classe I sur les cellules présentatrices de l'antigène (Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 1997 Nov 25 ; 94 (24) : 13146-51) (J. Immunol. 1999 Apr 1 ; 162 (7) : 3757-60) (J Immunol. 2000 Jan 1 ; 164 (1) : 13-7) (J Immunol. 1999 Aug 1 ; 163 (3) : 1398-408). L'immunisation de souris avec HSP gp96 induit la maturation et la migration de cellules présentatrices de l'antigène au sein des ganglions lymphatiques. Il a été montré que les complexes HSP-peptides isolés de cancers murins induisaient une immunité protectrice et l'activation de lymphocytes T antitumoraux spécifiques du cancer à partir duquel les HSP avaient été isolées. La progression tumorale est souvent associée à un défaut de l'immunité cellulaire et à une diminution de la production de cytokines ou de chémokines impliquées dans cette immunité. L'identification et le clonage de gènes codant pour des cytokines ou des chémokines spécifiques a permis une avancée importante concernant la compréhension des réponses immunitaires anti-tumorales. La modulation des réponses immunes par l'utilisation de cytokines ou de chémokines recombinantes est l'une des stratégies utilisées pour la thérapie anti-tumorale. En effet, la différenciation de lymphocytes T naïfs en cellules effectrices est régulée par les cytokines envers lesquelles sont exposées ces cellules T au moment de la stimulation antigénique. Des études pré-cliniques ont montré que des cytokines stimulant les réactions immunitaires médiées par les lymphocytes T helper de type I, lorsqu'elles sont induites au site tumoral, entraînaient une réponse immunitaire anti-tumorale. Afin d'améliorer les stratégies consistant à employer séparément un lysat de cellules tumorales et une cytokine ou une chémokine immunostimulante en immunothérapie anti-tumorale, la Demanderesse a maintenant développer une technologie permettant de délivrer localement et de façon soutenue une cytokine ou une chémokine immunostimulante, en combinaison avec une source d'antigène représentée par des corps apoptotiques et/ou nécrotiques provenant de cellules tumorales. Les cytokines exerçant leurs effets modulateurs de façon paracrine au site antigénique, cette combinaison peut être placée directement au voisinage de la tumeur ou dans un site périphérique approprié pour l'initiation d'une réponse immunitaire. Ce mode de délivrance permet d'obtenir d'une part des concentrations élevées de cytokine au niveau du site d'implantation tout en minimisant une éventuelle toxicité systémique, d'autre part une grande diversité et des niveaux élevés d'antigènes tumoraux directement apprêtables par les cellules présentatrices de l'antigène présentes au site d'implantation. L'invention a donc tout particulièrement pour objet une association de deux composants actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale pour être administrée à un patient, caractérisée en ce que le premier composant est un antigène tumoral ou un mélange d'antigènes tumoraux et le second composant est un système de délivrance d'une cytokine ou d'une chémokine immunostimulante. L'association de composants actifs selon l'invention permet d'offrir une méthode d'immunothérapie des cancers qui s'affranchit de la détermination fine des déterminants antigéniques tumoraux. L'association selon l'invention est remarquable en ce qu'elle permet de s'affranchir de la restriction HLA à laquelle se heurte l'utilisation des peptides tumoraux antigéniques synthétiques présentés par des molécules HLA de classe I et/ou de classe II. En outre, la présente invention offre l'avantage de s'affranchir de l'absence d'informations sur le caractère immunogène des peptides synthétiques in vivo. Les antigènes tumoraux de l'association selon l'invention peuvent provenir : - D'une ou de plusieurs lignées de cellules tumorales ou de cellules tumorales primaires, rendues incapables de proliférer in vivo et représentant une source d'antigènes tumoraux susceptibles d'activer une réponse immunitaire antitumorale. - D'antigènes tumoraux non-définis, purifiés ou non, provenant de cellules tumorales primaires ou de cellules tumorales issues de la lignée autologue ou de lignées allogéniques, ou de leur mélange, rendues incapables de proliférer in vivo et lysées par un mécanisme biologique, physique, mécanique ou autre. Les antigènes peuvent inclure, à titre d'exemple, des débris cellulaires ou des sous-fractions cellulaires purifiées, telles que les hsp. - D'antigènes tumoraux caractérisés pouvant être soit purifiés, soit synthétisés et utilisés sous forme de peptides et/ou de protéines recombinantes. Selon une forme préférée de réalisation de l'invention, l'antigène tumoral est un lysat de cellules tumorales. Avantageusement ledit lysat de cellules tumorales est constitué par des corps apoptotiques et/ou par des corps nécrotiques. Cette forme de réalisation de l'invention offre l'avantage de mettre en oeuvre des cellules présentatrices de l'antigène qui sont capables d'apprêter les antigènes contenus dans les lysats issus de cellules tumorales, et de présenter les peptides résultant d'un processus physiologique au système immunitaire. Les cellules tumorales sont de préférence soit des cellules provenant d'une ou de plusieurs lignées allogéniques, soit des cellules tumorales autologues provenant patient à qui sera administrée l'association selon l'invention. Selon une forme toute préférée de réalisation de l'invention, le système de délivrance d'une cytokine ou chémokine immunostimulante est une cellule modifiée génétiquement exprimant un gène codant pour une cytokine ou une chémokine immunostimulante. Avantageusement, il s'agit d'une cellule xénogénique ou allogénique. Les cellules modifiées génétiquement pour exprimer une cytokine ou une chémokine peuvent être des cellules primaires allogéniques ou xénogéniques présentant soit spontanément, soit après immortalisation, une capacité de prolifération étendue. Ces cellules peuvent également provenir de lignées allogéniques ou xénogéniques. Ces cellules peuvent être des cellules primaires, choisies parmi les cellules épithéliales de la rétine, les cellules endothéliales, les cellules de rein, les cellules musculaires lisses, les fibroblastes, les cellules dérivées du muscle, les cellules de l'épiderme et du derme. L'immortalisation des cellules peut être obtenues par introduction à l'aide de vecteurs : - d'un ou plusieurs oncogènes cellulaires et viraux, incluant SV40T, ElA, E6, E7, v-myc, c-myc, src, ras ; - de gènes ayant un effet anti-sénéscence, tels que la télomérase ; - de gènes ayant un effet anti-apoptotique, tels que bic12. On entend par vecteur toute séquence nucléotidique dans laquelle la séquence désirée peut être insérée par restriction et ligation et permettant le transfert dans des cellules cibles des-dites séquences insérées. Ces vecteurs sont par exemple des plasmides ou des virus. Les vecteurs viraux pourront être des virus humains ou non, rétroviraux, adénoviraux ou associés aux adénovirus, lentiviraux, poxviraux, ou des virus dérivés de l'Herpes. Selon une forme de réalisation toute préférée, les cellules modifiées génétiquement pour exprimer une cytokine ou une chémokine sont encapsulées dans des microcapsules ou de macrocapsules de polymères biodégradable ou non. Il s'agit de microcapsules ou de macrocapsules, compatibles avec la survie et la bioactivité des cellules encapsulées et ne présentant aucune toxicité ni immunogénicité chez le receveur. La composition des capsules utilisées selon la présente invention permet une sécrétion contrôlée et prolongée de l'agent pharmaceutique actif par diffusion à travers les pores de ladite capsule. La composition pharmaceutique des capsules utilisées dans la présente invention est hautement biocompatible. L'utilisation des cellules encapsulées modifiées génétiquement pour exprimer une cytokine ou une chémokine selon l'invention présente de nombreux avantages. Premièrement, cette encapsulation permet la sécrétion d'une protéine biologiquement active. Deuxièmement, cette approche permet d'obtenir une sécrétion soutenue dans le temps de ladite cytokine ou une chémokine. Une étude phase I a été conduite chez des patients atteints de sclérose latérale amyotrophique, dans laquelle six patients ont reçu des capsules contenant des cellules BHK génétiquement modifiées pour produire le CNTF. Des niveaux de CNTF de l'ordre du nanogramme ont été mesurés dans les liquides cérébrospinaux des patients pendant au moins dix-sept semaines post-implantation (P. Aebischer et coll., Nat Med 1996,2 : 696-699). Enfin, cette encapsulation offre une protection desdites cellules vis-à-vis d'un rejet immunitaire du receveur. Cette encapsulation présente en outre l'avantage de surmonter plusieurs limitations liées à l'administration systémique de protéines biologiquement actives, telles que la nécessité d'injections répétées due la faible stabilité de certaines protéines. Le taux de relarguage d'une protéine, biologiquement active et sécrétée par des cellules modifiées génétiquement et contenues dans des capsules, est continu au cours du temps au contraire d'un système basé sur la diffusion passive d'une protéine recombinante contenue dans un polymère. De plus, la cinétique de diffusion d'une protéine encapsulée est plus rapide que la sécrétion puis la diffusion observées avec des cellules encapsulées produisant la même protéine et selon le système d'encapsulation de cellules décrit dans la présente invention. Des exemples préférés d'association selon l'invention sont les suivants : Une première formulation comprend : i) Des antigènes tumoraux sous forme de lysats cellulaires obtenus par exemple par des procédés physiques, chimiques ou biologiques, combinés ou non, induisant l'apoptose et/ou la nécrose dans les cellules tumorales. Les cellules tumorales ou leurs dérivés utilisés sont soit des cellules provenant d'une ou de plusieurs lignées allogéniques éventuellement caractérisées pour l'expression de certains gènes tumoraux par RT-PCR, soit des cellules tumorales autologues. ii) Des cellules xénogéniques ou allogéniques modifiées génétiquement et exprimant de façon stable un gène codant pour une cytokine ou une chémokine immunostimulante. Ce mode de délivrance paracrine possède l'avantage de s'apparenter étroitement à la biologie naturelle des cytokines ou chémokines. Il peut s'agir d'interleukines connues pour activer les lymphocytes T, telles que l'IL-2, l'IL-4, l'IL-7, l'IL-12, l'IL-18, ou de chemokines ayant un effet direct ou indirect sur les cellules présentatrices de l'antigène, notamment sur leur capacité de migration et d'activation, telles que GM-CSF, M-CSF, MIP-lalpha, MIP-lbeta, MIP-5, MCP-3, MCP-4, RANTES, TECK, SDF-1 ou MIP-3beta/ELC, 6Ckine/SLC. Une deuxième formulation comprend : i) Des antigènes tumoraux sous forme de lysats cellulaires obtenus par des procédés physiques, chimiques ou biologiques, combinés ou non, induisant l'apoptose et/ou la nécrose dans les cellules tumorales. Les cellules tumorales ou leurs dérivés utilisés sont soit des cellules provenant d'une ou de plusieurs lignées allogéniques caractérisées éventuellement pour l'expression de certains gènes tumoraux par RT-PCR, soit des cellules tumorales autologues. ii) Des cellules xénogéniques ou allogéniques modifiées génétiquement et exprimant de façon stable un gène codant pour une cytokine ou une chémokine immunostimulante, aussi dénommées cellules immunostimulantes , protégées par encapsulation, avant leur implantation chez le patient, d'un rejet médié par le système immunitaire du patient. Une quantité adéquate des deux composants de l'association selon l'invention peut être administrée à un patient atteint d'un cancer de manière simultanée. Les administrations peuvent être uniques ou multiples dans le temps et dans l'espace. L'administration peut être effectuée soit directement au voisinage de la tumeur, soit dans un site périphérique approprié pour l'initiation d'une réponse immunitaire anti-tumorale. Dans le cas ou les cellules sont encapsulées, l'implantation de (s) capsule (s) et d'antigènes tumoraux pourra se faire de manière séquentielle au voisinage de la tumeur ou dans un site périphérique approprié pour l'initiation d'une réponse immunitaire anti-tumorale. Il peut s'agir d'une administration intramusculaire, intra-crânienne, sous-cutanée, intra-dermique, ou au sein d'une cavité, telle que la cavité peritonéale, la capsule rénale ou la prostate. Ainsi, dans une première forme de mise en oeuvre de l'invention consistant à administrer conjointement les deux composantes, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant à titre de composants actifs un mélange d'une quantité efficace des deux composants définis précédemment. Dans une seconde forme de mise en oeuvre de l'invention consistant à administrer séquentiellement les deux composants, l'invention concerne un pack pharmaceutique comprenant deux compositions pharmaceutiques, chacune comprenant une quantité efficace de l'un des deux composants définis précédemment. Plus particulièrement, l'invention concerne l'utilisation d'une association définie précédemment pour la préparation d'un médicament destiné à l'immunothérapie anti-tumorale chez un patient. Ce médicament peut être sous la forme d'une composition ou d'un pack pharmaceutique cidessus selon que les deux composants sont administrés en mélange ou séparément. Un premier médicament selon l'invention est destiné à être administré directement au site tumoral ou voisinage ou au niveau d'un organe lymphoïde approprié pour l'initiation d'une réponse immunitaire, par exemple au niveau des ganglions lymphatiques drainant la tumeur. Un deuxième médicament selon l'invention est destiné à être administré en périphérie de la tumeur, par exemple par voie sous-cutanée. Un troisième médicament selon l'invention est destiné à être administré dans la cavité abritant la tumeur, telle que la cavité péritonéale dans le cas des cancers du côlon, la cavité pleurale dans le cas des mésothéliomes ou la cavité crâienne après exérèse éventuelle de la tumeur. Un exemple préféré utilisant cette nouvelle approche consiste en l'immunothérapie des gliomes. Longtemps considéré comme un site immunoprivilégié, le cerveau possède néanmoins des mécanismes de présentation antigénique, distincts de ceux de la périphérie. La présence d'antigènes spécifiques des tumeurs, la présence des molécules HLA sur les gliomes et l'augmentation de leur expression dans des conditions appropriées (Int J Cancer. 1988 Nov 15 ; 42 (5) : 780-6) (J Neuroimmunol. 1991 Dec ; 35 (1-3) : 139-52) suggèrent que les gliomes sont sensibles à une réponse immunitaire cellulaire. Les lymphocytes infiltrent, parfois en grand nombre, la plupart des maladies inflammatoires du système nerveux central. En particulier, les gliomes sont infiltrés principalement par des lymphocytes T CD4 et CD8, alors que les lymphocytes B et les cellules NK sont plus rares. Ces lymphocytes infiltrant les tumeurs correspondent des expansions polyclonales contre des antigènes de gliomes non encore identifiés (Int Immunol. 1999 Aug ; 11 (8) : 1337-50). Bien que dans certaines circonstances, les cellules tumorales soient capables de présenter leurs antigènes directement aux lymphocytes T, il est peu probable que le déclenchement d'une réponse immunitaire anti-tumorale soit possible sans intervention de cellules spécialisées dans la présentation antigénique, en présence d'antigènes de tumeurs. La présentation d'antigènes provenant de lysats cellulaires délivrés dans le cerveau pourrait être assurée entre autres par les cellules microgliales. Ces cellules, qui constituent 5 à 15 % de la population cellulaire du cerveau, possèdent la plupart des caractéristiques des cellules dendritiques, comme les molécules d'adhésion et de co-stimulation. Elles sont abondantes dans les tumeurs et dans les lésions inflammatoires. La localisation strictement cérébrale des gliomes et l'absence habituelle de métastases suggérerait qu'il est préférable d'injecter le matériel immunogène directement au site tumoral. Toutefois, il est probable que ce site ne soit pas favorable à l'établissement d'une réponse immunitaire anti-tumorale, du fait de l'immunosuppression locorégionale due par exemple au TGF-ss2, aux prostaglandines E2, à l'IL-10 ou l'antagoniste au récepteur de l'IL-l sécrétés par les cellules tumorales. Un autre site d'injection combinée pourrait être la périphérie. Il a été clairement établi que des lymphocytes T activés en dehors du cerveau pouvaient re-circuler et atteindre leur cible tumorale à l'intérieur du système nerveux central. Il sera indiqué ci-après plusieurs exemples préférés de mise en oeuvre de l'invention, ces exemples sont donnés à titre d'illustration et ne sauraient limiter la portée de la demande. Exemple 1 : Encapsulation de cellules endothéliales de rat productrices d'IL-2 humaine. Les cellules productrices d'IL-2 ont été encapsulées dans des macrocapsules disposant d'une membrane PES 14, d'un réseau matriciel PET coaté avec de la laminine et du collagen de type IV. Trois densités de chargement ont été utilisée : 4xi05, 8xi05 ou 1. 6xi06 cellules par capsule. La production d'IL-2 humaine a été mesurée au cours du temps par ELISA (R & D). Les résultats obtenus au jour 1, jour 3 et au jour 7 après le chargement sont respectivement présentés dans les figures 1, 2 et 3. Exemple 2 : Encapsulation de cellules endothéliales de rat productrices d'IL-2 humaine. La production d'IL-2 présentée sous forme de moyenne par type de capsule et suivi au cours du temps est présentée à la figure 4. Les capsules ont été chargées au jour 0 par différentes quantités de cellules NTC-121 qui sont des cellules endothéliales de rat productrices d'IL-2 humaine, puis gardées en culture. La quantité d'IL-2 sécrétée dans le milieu de culture a été mesurée par ELISA aux jours 1,3, 7,10, 14 et 21 suivant le chargement des capsules. REVENDICATIONS 1) Une association de deux composants actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale pour être administrée à un patient, caractérisée en ce que le premier composant est un antigène tumoral ou un mélange d'antigènes tumoraux et le second un système de délivrance d'une cytokine ou une chémokine immunostimulante. 2) Une association de deux composants actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'antigène tumoral est un lysat de cellules tumorales. 3) Une association de deux composants actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon la revendication 2, caractérisée en ce que le lysat de cellules tumorales est constitué par des corps apoptotiques et/ou par des corps nécrotiques. 4) Une association de deux composantss actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisée en ce que le lysat de cellules tumorales est un lysat d'une ou de plusieurs lignées de cellules tumorales ou de cellules tumorales primaires. 5) Une association de deux composantss actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon la revendication 1, caractérisée en ce que le ou les antigènes tumoraux sont des antigènes, purifiés ou non, provenant de la lyse de cellules tumorales primaires ou de cellules tumorales issues de la lignée autologue ou de lignées allogéniques, ou de leur mélange. 6) Une association de deux composantss actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon la revendication 1, caractérisée en ce que le ou les antigènes tumoraux sont des peptides ou des protéines recombinantes ou un mélange de ceux-ci. 7) Une association de deux composants actfs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le système de délivrance d'une cytokine ou chemokine immunostimulante est constitué par des cellules modifiées génétiquement exprimant un gène codant pour une cytokine ou chemokine immunostimulante. 8) Une association de deux composants actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon la revendication 7, caractérisée en ce que les cellules modifiées génétiquement exprimant un gène codant pour une cytokine ou chemokine immunostimulante sont des cellules xénogéniques ou allogéniques. 9) Une association de deux composants actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisée en ce que les cellules modifiées génétiquement pour exprimer une cytokine ou une chemokine sont des cellules primaires ou des cellules issues de lignées allogéniques ou xénogéniques 10) Une association de deux composants actifs dans l'immunothérapie anti-tumorale selon la revendication 9, caractérisée en ce que les cellules sont choisies dans le groupe comprenant les cellules épithéliales de la rétine, les cellules endothéliales, les cellules de rein, les cellules musculaires lisses, les fibroblastes, des cellules dérivées du muscle, les cellules de l'épiderme et du derme. 11) Une association selon l'une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisée en ce que les cellules modifiées génétiquement pour exprimer une cytokine ou une chemokine sont encapsulées dans des microcapsules ou des macrocapsules. 12) Une association selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la cytokine est une interleukine activant les lymphocytes T. 13) Une association selon la revendication 12, caractérisée en ce que l'interleukine est choisie dans le groupe comprenant : l'IL-2, l'IL-4, l'IL-7, l'IL-12, l'IL- 18. 14) Une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisée en ce que la chemokine est choisie parmi celles ayant un effet direct ou indirect sur les cellules présentatrices de l'antigène, notamment sur leur capacité de migration et d'activation. 15) Une association selon la revendication 14, caractérisée en ce que la chémokine est choisie dans le groupe comprenant : GM-CSF, M-CSF, MIP-lalpha, MIP-lbeta, MIP-5, MCP-3, MCP-4, RANTES, TECK, SDF-1 ou MIP-3beta/ELC, 6Ckine/SLC. 16) Une composition pharmaceutique pour l'immunothérapie anti-tumorale, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de composants actifs un mélange d'une quantité efficace des deux composants définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 15. 17) Un pack pharmaceutique pour l'immunothérapie anti-tumorale, caractérisé en ce qu'il comprend deux compositions pharmaceutiques, chacune comprenant une quantité efficace de l'une des deux composants définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 15. 18) Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'une composition pharmaceutique ou d'un pack pharmaceutique destiné à l'immunothérapie anti-tumorale chez un patient. 19) Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament destiné à l'immunothérapie anti-tumorale chez un patient administré directement au site tumoral ou voisinage. 20) Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament destiné à l'immunothérapie anti-tumorale chez un patient administré au voisinage d'organes lymphoïdes appropriés pour l'initiation d'une réponse immunitaire, tels que les ganglions lymphatiques drainant la tumeur. 21) Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament destiné à l'immunothérapie anti-tumorale chez un patient administré en périphérie de la tumeur, par exemple par voie sous-cutanée. 22) Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament destiné à l'immunothérapie anti-tumorale chez un patient administré dans la cavité abritant la tumeur, telle que la cavité péritonéale, la cavité pleurale, la cavité crânienne, après exérèse éventuelle de la tumeur. 23) Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament destiné à l'immunothérapie des gliomes. 24) Utilisation selon la revendication 22, caractérisée en ce que la cytokine est choisie dans le groupe comprenant l'IL-2, l'IL-4, l'IL-7, l'IL-12, l'IL-18. 25) Utilisation selon la revendication 22, caractérisée en ce que la chémokine est le GM-CSF.