Brevet FR2825720A1 — publié le 20021213

DISPOSITIF D'ELECTROPHORESE ET ACCESSOIRES DE MOULAGE POUR UN TEL DISPOSITIF La présente invention concerne un dispositif d'électrophorèse et des accessoires de moulage pour un tel dispositif. Le développement des plateaux techniques au sein des établissements de recherche ou dans l'industrie conduit ces derniers à s'équiper de plus en plus en stations robotisées pour des programmes de criblage ou de fabrication de molécules biologiques à haut débit. Plusieurs centres se sont ainsi engagés dans la robotisation des procédés d'amplification de molécules nucléotidiques par PCR ( Polymerase Chain Reaction ) sur plaques de 96 puits (généralement quatre plaques par cycle automatisé). Néanmoins, les produits amplifiés doivent être nécessairement contrôlés, généralement à la fois pour leur qualité et leur quantité. Pour ce faire, la qualité des produits est visualisée par électrophorèse sur gel d'agarose et la quantité évaluée par densité optique. Ce pré-requis nécessite le développement d'une méthodologie et d'appareils pour le traitement d'un grand nombre d'échantillons de manière rapide et standardisée à un coût abordable. Or à l'heure actuelle, il n'existe pas sur le marché de système d'électrophorèse dont la taille permet, sur un seul support de gel d'agarose, le dépôt d'un nombre élevé d'échantillons (par exemple de 384 échantillons, représentant 4 microplaques de 96 puits), leur migration efficace ainsi que leur l'analyse et quantification en une seule manipulation à l'aide d'une caméra numérique placée au-dessous ou au-dessus du gel. Dans le cadre d'une électrophorèse, des particules ayant une charge électrique nette sont soumises à l'action d'un champ électrique et se déplacent dans la direction du champ vers le pôle de signe opposé à leur charge, à une vitesse proportionnelle à cette charge. Cette opération, s'appliquant à un ensemble hétérogène de particules chargées, entraîne la séparation des particules. On définit différents types d'électrophorèses parmi lesquels figurent l'électrophorèse analytique et l'électrophorèse séparative. La première a pour but la séparation du plus grand nombre possible de constituants d'un mélange. Les supports souvent utilisés sont les gels d'amidon, de polyacrylamide et d'acrylamide-agarose, c'est-à-dire des gels possédant les propriétés filtrantes qui permettent de séparer les particules non seulement en fonction de leur charge électrique mais aussi de leur taille. La seconde a pour but d'obtenir des quantités plus ou moins importantes d'un ou plusieurs constituants d'un mélange ; aussi le rendement de l'opération doitil être pris en considération, éventuellement aux dépens de la finesse de la séparation. Les supports utilisés dans ce cas sont la cellulose, la poudre d'amidon et les gels d'acrylamide. La réalisation d'un gel d'agarose horizontal (dans un support indépendant ou dans la cuve d'électrophorèse elle-même) nécessite en effet son moulage ainsi que celui, dans un même temps, des puits devant recevoir les échantillons. La création des puits requiert l'utilisation d'une ou plusieurs unités de peigne contenant un nombre varié de dents. Une fois le gel pris en masse, les peignes sont retirés et l'empreinte des dents constitue un réceptacle dans lequel est déposé l'échantillon. Ainsi les dimensions du gel et, par conséquent, de la cuve qui le contient, seront conditionnées par la contrainte de préserver un espacement entre chaque dent, de préférence de 9 mm environ. En effet, ces dimensions se doivent d'être compatibles avec la surface de travail disponible de la plate-forme robotisée ainsi qu'avec le transport sans risque du gel dont la texture est fragile et son analyse ultérieure sur des tables lumineuses dont les tailles sont limitées. L'invention vise en particulier un accessoire de moulage pour dispositif d'électrophorèse destiné à créer des puits dans un gel, ledit accessoire comportant une barrette allongée suivant une direction principale et une pluralité de dents en saillie de ladite barrette dans une direction secondaire sensiblement orthogonale par rapport à la direction principale. La présente invention a notamment pour but de résoudre les différents problèmes essentiellement rencontrés dans le cadre de l'électrophorèse analytique, et propose un dispositif et des accessoires pour électrophorèse permettant de réaliser un nombre élevé de puits sur une surface de gel réduite, pour l'analyse simultanée d'un nombre élevé d'échantillons Uusqu'à 384), et adaptés à un usage manuel, automatisé, ou semi-automatisé. L'invention repose notamment sur la mise au point de nouveaux peignes, permettant de générer un nombre élevé de puits sur une surface limitée de gel. A cet effet, un accessoire de moulage suivant l'invention est caractérisé en ce que les dents sont réparties suivant au moins deux rangées espacées l'une de l'autre dans une troisième direction sensiblement orthogonale à la direction principale et à la direction secondaire, les dents d'une rangée étant décalées par rapport aux dents de l'autre rangée. Suivant d'autres caractéristiques : 0 lesdites rangées sont espacées d'au moins 4 mm ; ci les dents d'une même rangée sont espacées suivant un intervalle régulier, notamment sensiblement égal à 9 mm ; 0 chaque rangée comporte un nombre de dents compris entre 10 et 30 ; 0 les dents d'une même rangée sont identiques ; 0 chaque dent présente une longueur suivant la direction principale comprise entre 2,5 et 3,1 mm, une largeur suivant la troisième direction comprise entre 1 et 1,5 mm, et une hauteur suivant la direction secondaire comprise entre 8 et 9 mm ; et 0 l'accessoire est réalisé dans un matériau rigide, notamment du delrin, du métal, du plastique, du plexiglas. L'invention vise d'autre part un dispositif d'électrophorèse comprenant un bac de moulage destiné à contenir un gel, des accessoires de moulage adaptés pour créer des puits dans le gel contenu dans le bac, tels que décrits précédemment, et des moyens de support desdits accessoires, adaptés pour maintenir les accessoires parallèlement les uns aux autres. Suivant d'autres caractéristiques : 0 lesdits moyens de support comprennent un cadre disposé sur une périphérie extérieure du bac, ledit cadre comportant deux longerons parallèles opposés pourvus de logements d'ancrage des accessoires ; 0 deux logements consécutifs d'un même longeron sont distants d'au moins 2 cm, de préférence d'une distance d'environ 2,5 cm ; 0 le dispositif comporte en outre un support de pipettes, et le cadre comprend des moyens d'appui et de guidage du support de pipettes permettant son coulissement dans la direction des longerons ; ci les moyens d'appui et de guidage comprennent une tringle réalisée dans un matériau rigide, par exemple du métal, ladite tringle comportant des éléments de positionnement adaptés pour coopérer avec des éléments complémentaires du support de pipettes ; 0 les éléments de positionnement sont des évidements formés dans la tringle en des emplacements correspondant respectivement aux emplacements des rangées de dents des accessoires de moulage lors de la formation des puits dans le gel, tandis que les éléments complémentaires comportent au moins une bille sollicitée élastiquement vers l'un des évidements ; 0 support de pipettes est monté sur la tringle avec un jeu suivant la direction principale des accessoires, le jeu correspondant au moins au décalage entre les dents des deux rangées ; 0 les éléments de positionnement comportent des paires d'évidements espacés suivant la direction secondaire et suivant la direction principale, respectivement d'une distance correspondant à l'espacement des rangées de dents et d'une distance correspondant au décalage des dents de deux rangées, de sorte que le support de pipettes peut être positionné au droit d'une rangée de puits formés dans le gel, ou de la rangée consécutive décalée ; et 0 les moyens de support des accessoires comprennent des moyens de déplacement desdits accessoires, adaptés pour soulever simultanément tous les accessoires en place de façon à dégager au moins partiellement leurs dents du gel contenu dans le bac. Le dispositif d'électrophorèse suivant l'invention permet ainsi avantageusement de faire migrer, avec une bonne séparation, jusqu'à 384 échantillons sur une relativement petite surface de gel et notamment de gel d'agarose, tout en maintenant un espacement entre les échantillons (de centre à centre) correspondant à celui des embouts de pipettes multi-canaux ou de bras pipetteurs de plate-formes robotisées de l'ensemble des fabricants. Il facilite en outre grandement le dépôt d'échantillons dans les puits du gel lors de dépôts manuels. De plus, le système de l'invention intègre des caractéristiques qui permettent un démoulage aisé du gel et un dépôt des échantillons en manuel ne demandant pas un effort constant de l'utilisateur pour maintenir, à la seule force de son poignet, la pipette multi-canaux dans un axe qui assure un positionnement des embouts au niveau du centre des puits du gel d'agarose. Un mode particulier de réalisation de l'invention, donné à titre d'exemple nonlimitatif, va maintenant être décrit en référence aux dessins annexés, sur lesquels : 0 la Figure 1 est une vue en perspective d'un dispositif d'électrophorèse suivant l'invention ; 0 la Figure 2 est une vue en perspective éclatée du dispositif de la Figure 1 ; 0 la Figure 3 est une vue schématique en coupe suivant un plan vertical, à plus grande échelle, d'un détail du dispositif représenté aux Figures précédentes, dans une région périphérique ; 0 la Figure 4 est une vue en élévation d'un accessoire de moulage ou peigne du dispositif des Figures précédentes ; 0 la Figure 5 est une vue de dessus du peigne de la Figure 4 ; 0 la Figure 6 est une vue schématique de dessus du dispositif de la Figure 1, équipé en outre d'un support de pipettes ; et 0 la Figure 7 est une vue schématique en perspective, à plus grande échelle, du support de pipettes de la Figure 6 et d'une partie d'appui et de guidage de ce support. 0 La figure 8 est une vue schématique en coupe du dispositif d'électrophorèse et du support de pipettes de la figure 7 guidant les embouts de pipettes multi-canaux. Sur les Figures 1 et 2, on a représenté, respectivement sous forme assemblée prête à usage et sous forme éclatée, un dispositif d'électrophorèse conforme à l'invention. La Figure 1 illustre la disposition normale du dispositif dans ses conditions d'utilisation, à savoir que le dispositif, qui présente une forme très aplatie suivant un plan de référence, repose sur un appui plan parallèle horizontal. Dans tout ce qui suit, les termes horizontal , vertical , seront compris en référence à cette orientation du dispositif. Le dispositif comprend une cuve d'électrophorèse 1, reposant sur des supports 2 d'ancrage à une plate-forme (non représentée), une série d'accessoires de moulage ou peignes 6, dont un seul a été représenté sur la Figure 2 pour des raisons de clarté, et un cadre 8 formant support des peignes 6. Le cadre 8 présente une forme correspondante au bord périphérique de la cuve 1, de façon à pouvoir être disposée en superposition sur le bord de la cuve. De façon, classique, la cuve 1 et le cadre 8 sont de forme rectangulaire. Le cadre 8 comprend deux longerons 10A, 10B correspondant à deux côtés opposés, destinés à supporter les extrémités respectives des peignes 6. A cet effet, chaque longeron 10A, 10B est pourvu d'un même nombre de logements d'ancrage 12 régulièrement espacés, et disposés en vis-à-vis de logements d'ancrage correspondants sur le longeron opposé, de sorte que le cadre 8 peut supporter horizontalement plusieurs peignes au-dessus de la cuve 1, parallèlement les uns aux autres. De manière préférée, lesdits logements sont agencés pour assurer une distance entre chaque peigne d'environ 2 cm au moins, avantageusement de 2,5 cm environ. Comme il sera mieux vu sur la Figure 3, la cuve 1 présente une face interne 15 dans laquelle est formé un épaulement périphérique 17. Elle comporte un bac de moulage 19 destiné à contenir un gel 20, et une plaque de plexiglas 21 en appui sur l'épaulement 17 afin de supporter elle-même le bac de moulage 19. Sur la Figure 3, on a représenté un peigne dans sa position fonctionnelle, en appui sur le cadre 8, ses extrémités étant reçues dans les logements d'ancrage 12 correspondants. On va maintenant décrire de façon détaillée, en référence aux Figures 4 et 5, la structure d'un peigne conforme à l'invention, et utilisé dans le dispositif précédemment décrit. Le peigne représenté est essentiellement constitué d'une barrette horizontale allongée 31, dont les deux extrémités 31A, 31 B forment les parties d'appui sur le cadre 8 s'engageant dans les logements d'ancrage 12, et de deux rangées de dents verticales 33,34 espacées transversalement. Les rangées de dents sont découpées dans des lames plates verticales, lesquelles sont de forme allongée suivant la direction longitudinale de la barrette 31, et fixées à celle-ci par un bord longitudinal. Les dents 36 d'une rangée sont décalées longitudinalement par rapport aux dents de l'autre rangée. De préférence, comme représenté, les dents 36 sont toutes identiques, de forme en créneau, et espacées les une des autres d'un intervalle régulier ou pas , par exemple égal à 9 mm environ, qui correspond de façon courante à l'espacement des embouts de pipettes multi-canaux ou de bras pipetteurs de plate-formes robotisées. Cet espacement est non seulement compatible avec les principaux instruments commerciaux (pipettes), mais assure également une bonne utilisation de l'espace du gel. Il est entendu que cet intervalle peut être légèrement plus faible ou plus important, par exemple compris entre 8 et 20 mm. Les dents ont une longueur, suivant la direction longitudinale du peigne, comprise entre 2,5 et 3,1 mm, une largeur, suivant la direction transversale, comprise entre 1 et 1,5 mm, et une hauteur comprise entre 8 et 9 mm, la hauteur étant prise verticalement entre le sommet et la base du créneau. De préférence encore, le décalage entre les dents des deux rangées est égal à un demi-pas. Il n'est pas indispensable que le décalage soit parfaitement centré, c'est-à-dire que la dent de la première rangée se trouve exactement au centre de l'intervalle existant entre deux dents de la seconde rangée. Néanmoins pour assurer une meilleure séparation des puits, il est avantageux que ce décalage soit le plus grand possible. Dans le mode de réalisation représenté, les rangées sont espacées de 4 mm environ, ce qui correspond à un écartement minimal pour un moulage correct de puits dans un gel communément utilisé. Dans le mode de réalisation représenté, les rangées de dents sont au nombre de deux, mais on pourrait concevoir des peignes comportant un nombre de rangées décalées plus important. De même, on a représenté un peigne à deux rangées de 27 dents, mais on estime que chaque rangée peut contenir de 10 à 30 dents pour répondre aux besoins communément rencontrés. Dans l'exemple spécifique représenté, chaque peigne contient donc au total 54 dents, réparties sur une distance égale à 24,6 cm dont 6 dents peuvent être utilisées pour le dépôt de marqueur de taille. Les peignes peuvent être réalisés dans tout matériau suffisamment solide pour créer des puits dans un gel sans altérer autrement ledit gel, par exemple du delrin, du métal, du plastique, du plexiglas, etc. On se réfère maintenant à la Figure 6, qui représente un dispositif conforme à ce qui a été décrit précédemment, comportant en outre un support de pipettes 40. Un tel support de pipettes 40 est nécessaire dans le cadre d'une utilisation manuelle du dispositif d'électrophorèse, au cours de laquelle on réalise un dépôt d'échantillons au moyen notamment d'une pipette multi-canaux. Le cadre 8 est, dans ce mode de réalisation, pourvu d'une doublure 42 également en forme de cadre, dont deux côtés sont superposés aux longerons 10A, 10B, au-dessus d'eux, et constituent des tringles 44A, 44B d'appui et de guidage du support de pipettes 40. Bien que les logements d'ancrage 12 aient été représentés sur la Figure 6, on comprend que ces derniers, ménagés dans les longerons 10A, 10B, sont situés au-dessous des tringles 44A, 44B Les tringles 44A, 44B coopèrent avec des parties complémentaires respectives du support de pipettes 40 de façon à permettre son coulissement horizontal suivant la direction des longerons 10A, 10B. Les tringles 44A, 44B sont réalisées dans un matériau rigide et suffisamment résistant pour supporter des supports de pipettes, par exemple du métal. De même que le support de pipettes 40, elles sont conformées de façon symétrique par rapport au plan vertical médian du dispositif, ce qui permettra de ne décrire qu'une seule de ces tringles et qu'une partie du support de pipettes 40, ce qui sera fait ultérieurement en référence à la Figure 7. Comme cela apparaît sur la Figure 6, le dispositif comporte huit paires de logements d'ancrage 12, dont seulement quatre ont été représentés, correspondant à huit peignes 6 (représentés schématiquement par les empreintes de leurs dents). Ces huit peignes représentent au total 432 dents, réparties par exemple de la façon suivante : 384 pour les échantillons et 48 pour les marqueurs. Le nombre de peignes, qui dépend des besoins de l'utilisateur, peut différer et être compris entre 2 et 10. Les peignes peuvent être enchâssés sur les longerons 1 DA, 10B de la cuve de façon à avoir entre la première rangée du premier peigne et la première rangée du peigne suivant, une distance d'au moins 2,5 cm. Cette distance permet une séparation nettement supérieure à celle actuellement offerte pour les appareils d'électrophorèse conçus pour des dépôts de 91 échantillons. La longueur du gel, dans le sens de la migration, sera donc de 21,4 cm si l'on prend en considération l'exemple décrit ci-dessus. Le gel dont les dimensions sont de 21,4 cm x 24,6 cm (Lxi) correspond à un gel de taille standard analysable sur des tables lumineuses (appelées transilluminateurs ) commercialisées par la plupart des fabricants. Une tringle comporte des éléments de positionnement 46,47 du support de pipettes 40, formés par des trous adaptés pour coopérer avec une bille complémentaire 49 (Figure 7), liée audit support 40 et sollicitée élastiquement vers l'un des trous. La bille 49 et les trous 46,47 définissent ainsi des crans d'arrêt sur la tringle 44A, 44B correspondant à la position des pipettes au droit des puits formés dans le gel par une rangée de dents donnée. Pour cela, les trous 46,47 d'une tringle 44A, 44B sont associés par paires à la position d'un peigne 6 marquée par les logements d'ancrage 12. Par rapport à la direction principale des longerons 10A, 10B, les trous 46,47 d'une même paire sont décalés longitudinalement d'une distance égale à l'espacement des deux rangées de dents d'un même peigne 6, et latéralement d'un intervalle correspondant au décalage des rangées de dents. Comme cela est représenté sur la Figure 7, le support de pipettes 40 comporte une barre 50 transversale par rapport à la direction des longerons 10A, 10B et des tringles 44A, 44B. La barre transversale 50 est, elle, solidaire de plusieurs (au nombre de trois sur la Figure précédente) pièces 51 à encoches et trous de maintien des pipettes. Chaque extrémité de la barre transversale 50 est pourvue d'une partie de guidage en U 52, dont l'ouverture est tournée vers la tringle 44A, 44B et l'extérieur de la cuve, ladite pièce de guidage 52 coopérant à coulissement avec la tringle, avec un jeu latéral permettant de positionner la bille 49 au droit de l'un ou l'autre des trous 46,47 d'une même paire. Grâce à ce système, un opérateur peut amener et maintenir la rangée de pipettes au droit d'une rangée de canaux quelconque, et y réaliser un dépôt d'échantillons. En se référant à nouveau à la Figure 6, on prévoit des moyens de déplacement vertical simultané de l'ensemble des peignes disposés dans leurs logements d'ancrage, lors de la phase de démoulage, afin de dégager au moins partiellement les dents du gel. Ces moyens comprennent des éléments de levier actionnés par un organe de commande à pression manuelle 60, ménagé dans le cadre 8. Les moyens décrits ci-dessus sont destinés à extraire les peignes du gel sans altérer la structure de celui-ci, avec une force homogène sur l'ensemble des peignes. Le cadre 8 peut donc présenter un renfoncement, d'une largeur de quatre doigts par exemple, permettant d'enclencher, avantageusement, sur simple pression, un élément de levier qui provoque une montée verticale simultanée de l'ensemble des peignes avec une répartition homogène des forces. Ce système évite que les puits ne collabsent lors de la phase de démoulage des peignes et permet donc de préserver l'intégrité du gel et la structure des puits formés. REVENDICATIONS 1. Accessoire de moulage pour dispositif d'électrophorèse destiné à créer des puits dans un gel, ledit accessoire (6) comportant une barrette allongée (31) suivant une direction principale et une pluralité de dents (36) en saillie de ladite barrette (31) dans une direction secondaire sensiblement orthogonale par rapport à la direction principale, caractérisé en ce que les dents (36) sont réparties suivant au moins deux rangées (33,34) espacées l'une de l'autre dans une troisième direction sensiblement orthogonale à la direction principale et à la direction secondaire, les dents (36) d'une rangée (33) étant décalées par rapport aux dents de l'autre rangée (34). 2. Accessoire de moulage selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdites rangées (33,34) sont espacées d'au moins 4 mm. 3. Accessoire de moulage selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que les dents (36) d'une même rangée (33) sont espacées suivant un intervalle régulier, notamment sensiblement égal à 9 mm. 4. Accessoire de moulage selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que chaque rangée (33,34) comporte un nombre de dents (36) compris entre 10 et 30. 5. Accessoire de moulage selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les dents (36) d'une même rangée (33, 34) sont identiques. 6. Accessoire de moulage selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que chaque dent (36) présente une longueur suivant la direction principale comprise entre 2,5 et 3,1 mm, une largeur suivant la troisième direction comprise entre 1 et 1,5 mm, et une hauteur suivant la direction secondaire comprise entre 8 et 9 mm. 7. Accessoire de moulage selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est réalisé dans un matériau rigide, notamment du delrin, du métal, du plastique, du plexiglas. 8. Dispositif d'électrophorèse comprenant un bac de moulage (19) destiné à contenir un gel (20), des accessoires de moulage (6) adaptés pour créer des puits dans le gel contenu dans le bac, et des moyens de support (8,12) desdits accessoires (6), caractérisé en ce lesdits accessoires (6) sont conformes à l'une quelconque des revendications précédentes, et les moyens de support (8,12) sont adaptés pour maintenir les accessoires (6) parallèlement les uns aux autres. 9. Dispositif d'électrophorèse selon la revendication 8, caractérisé en ce que lesdits moyens de support (8,12) comprennent un cadre (8) disposé sur une périphérie extérieure du bac (19), ledit cadre (8) comportant deux longerons parallèles (10A, 10B) opposés pourvus de logements (12) d'ancrage des accessoires (6). 10. Dispositif d'électrophorèse selon la revendication 9, caractérisé en ce que deux logements (12) consécutifs d'un même longeron (10A, 10B) sont distants d'au moins 2 cm, de préférence d'une distance d'environ 2,5 cm. 11. Dispositif d'électrophorèse selon la revendication 9 ou 10 comportant en outre un support de pipettes (40), caractérisé en ce que ledit cadre (8) comprend en outre des moyens d'appui et de guidage (44A, 44B) du support de pipettes (40) permettant son coulissement dans la direction des longerons (10A, 10B). 12. Dispositif d'électrophorèse selon la revendication 11, caractérisé en ce que les moyens d'appui et de guidage comprennent une tringle (44A, 44B) réalisée dans un matériau rigide, par exemple du métal, ladite tringle (44A, 44B) comportant des éléments de positionnement (46,47) adaptés pour coopérer avec des éléments complémentaires (49) du support de pipettes (40). 13. Dispositif d'électrophorèse selon la revendication 11 ou 12, caractérisé en ce que les éléments de positionnement sont des évidements (46,47) formés dans la tringle (44A, 44B) en des emplacements correspondant respectivement aux emplacements des rangées de dents (33,34) des accessoires de moulage (6) lors de la formation des puits dans le gel (20), tandis que les éléments complémentaires comportent au moins une bille (49) sollicitée élastiquement vers l'un des évidements (46,47). 14. Dispositif d'électrophorèse selon la revendication 13, caractérisé en ce que le support de pipettes (40) est monté sur la tringle (44A, 44B) avec un jeu suivant la direction principale des accessoires (6), le jeu correspondant au moins au décalage entre les dents (36) des deux rangées (33,34). 15. Dispositif d'électrophorèse selon la revendication 14, caractérisé en ce que les éléments de positionnement comportent des paires d'évidements (46, 47) espacés suivant la direction secondaire et suivant la direction principale, respectivement d'une distance correspondant à l'espacement des rangées de dents (33,34) et d'une distance correspondant au décalage des dents de deux rangées (33,34), de sorte que le support de pipettes (40) peut être positionné au droit d'une rangée de puits formés dans le gel (20), ou de la rangée consécutive décalée. 16. Dispositif d'électrophorèse selon l'une quelconque des revendications 8 à 15, caractérisé en ce que les moyens de support (8,12) des accessoires (6) comprennent des moyens de déplacement desdits accessoires (6), adaptés pour soulever simultanément tous les accessoires (6) en place de façon à dégager au moins partiellement leurs dents (36) du gel (20) contenu dans le bac (19).