Brevet FR2833017A1 — publié le 20030606

METHODES DE CRIBLAGE DE MOLECULES MODULATRICES DE L'EXPRESSION DE GENES, LIGNEES CELLULAIRES, PREPARATION ET UTILISATIONS. La présente invention concerne des compositions et méthodes de criblage, permettant l'identification de molécules capables de moduler l'expression de gènes. Elle concerne également des outils, kits, compositions, vecteurs, lignées cellulaires et constructions génétiques, pour la mise en oeuvre de telles méthodes et leurs utilisations dans le domaine de la santé humaine ou animale, notamment pour prévenir ou traiter les pathologies entraînant une dérégulation de l'expression génétique telles que les cancers, ou en recherche expérimentale par exemple. Les méthodes de l'invention reposent plus particulièrement sur l'utilisation d'un double système de sélection, conférant une meilleure sensibilité et sélectivité. Elles comprennent avantageusement (i) la mise en contact d'un composé test avec au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la traduction, dans des conditions permettant l'expression desdits gènes de sélection, et (ii) la détermination de la capacité du composé test à moduler l'expression des gènes de sélection. La possibilité d'identifier des composés agissant sur l'expression des protéines offre de nombreuses applications, dans les domaines thérapeutiques, agricoles, de recherche, etc.. Actuellement, la plupart des stratégies développées dans ce but visent à identifier des composés modulant l'activité biologique d'une protéine ou son expression en général. Toutefois, ces stratégies ne présentent pas toujours une spécificité et une fiabilité suffisantes pour permettre la sélection de composés d'intérêt. La présente invention s'intéresse plus particulièrement à des mécanismes précis impliqués dans le processus global d'expression de gènes, qui confèrent aux technologies et compositions développées une meilleure fiabilité et prédictibilité. En particulier, l'invention décrit des outils et méthodes adaptés à l'identification de composés modulant la transcription et/ou l'initiation de la traduction. L'initiation de la synthèse protéique est une étape extrêmement régulée chez les eucaryotes. Cette étape joue un rôle fondamental dans le contrôle de l'expression génique et les mécanismes moléculaires impliqués dans le déclenchement de la synthèse protéique se révèlent chaque jour de plus en plus complexes et originaux. L'ARN constitue un intermédiaire entre l'information génétique stockée dans l'ADN et les protéines. Certains types d'ARN (ARNr et ARNt) ont un rôle directement fonctionnel. L'ARNm, qui ne représente en moyenne que 3 à 5% de l'ARN total d'une cellule, est transcrit à partir de l'ADN et contient l'information nécessaire à la synthèse protéique. Cette étape, encore appelée traduction, requiert la participation d'organites spécialisés : les ribosomes. Elle se déroule en trois phases successives : (1) l'initiation de la traduction, phase durant laquelle un ribosome compétent pour la traduction se constitue sur un ARNm, (2) l'élongation qui constitue la phase de synthèse de la protéine et (3) la terminaison qui marque la fin de la synthèse protéique avec la dissociation du ribosome. Le ribosome est un organite cytoplasmique assurant le contrôle de la synthèse cellulaire des protéines en déchiffrant le code inscrit dans l'ARNm. Les ribosomes sont constitués de deux sous-unités désignées par leur constante de sédimentation : la petite sous-unité 40S et la grande sous-unité 60S chez les eucaryotes. La sous-unité 40S contient une seule molécule d'ARN (I'ARNr 18S, 1900 nts) et 33 protéines. La sous-unité 608 contient trois molécules d'ARN (ARNr 5S, 120 nts ; ARNr 5, 8S, 190 nts ; ARN 28S, 4800 nts) et 47 protéines. Dans les ribosomes, les ARNr sont responsables des activités biochimiques de base nécessaires à la synthèse des protéines. Les protéines ribosomales facilitent le repliement des ARNr et le maintien de leur conformation structurale, améliorant ainsi l'action des ribosomes. L'ARNm eucaryote mature se distingue des ARNm procaryotes et de certains ARNm viraux par des modifications post-transcriptionnelles particulières à ses extrémités 5'et 3'. L'ARNm est coiffé à son extrémité 5'et présente une séquence polyadénylée à son extrémité 3'. La coiffe est nécessaire à l'épissage des ARN pré-messagers, facilite l'export nucléocytoplasmique des ARNm matures, augmente leur stabilité et, enfin, améliore l'efficacité de la traduction en interagissant spécifiquement avec certains facteurs d'initiation. La séquence poly A est impliquée dans l'export nucléocytoplamsique des ARNm matures et dans le contrôle de la stabilité des ARNm dans le cytoplasme. En outre, elle serait également indispensable à la traduction efficace des ARNm. En général, les ARNm eucaryotes ne comportent qu'une seule phase de lecture (cistron ou ORF pour Open Reading Frame ) délimitée en 5'par un codon d'initiation de la traduction (généralement AUG) et en 3'par un codon d'arrêt de la traduction ou codon stop (UAG, UGA ou UAA). Ils peuvent cependant parfois contenir plusieurs phases de lecture (uORF pour upstream ORF ). La région située entre la coiffe et la phase de lecture principale est appelée région 5'non traduite (5'UTR pour 5'-Untranslated Region ). Dans la majorité des cas, le site d'initiation de la traduction est le codon AUG le plus proche de l'extrémité 5'de l'ARNm. L'initiation de la traduction a pour but de positionner correctement un ribosome sur un ARNm de façon à ce que le déclenchement de la synthèse protéique s'opère sur le bon codon d'initiation. On distingue plusieurs mécanismes d'initiation de la traduction parmi lesquels le balayage des ribosomes, le mécanisme d'entrée directe des ribosomes (mécanisme IRES-dépendant), le mécanisme de shunt , encore appelé transfert du ribosome , ainsi que les mécanismes hybrides impliquant au moins deux des mécanismes précédemment cités. Le modèle d'initiation par balayage des ribosomes requiert la participation de nombreux facteurs d'initiation appelés elFs (eukaryotic Initiation Factor) et comprend quatre étapes : (1) l'association de l'ARNt initiateur (Met-tRNA) et des facteurs d'initiations e1F1A, elF3, elF5 et elF2 avec la petite sous-unité ribosomale 40S pour former le complexe de pré-initiation 43S ; (2) la formation du complexe de pré-initiation 43S ; (3) la fixation du complexe 43S à l'ARNm ; (4) le balayage du complexe de pré-initiation et la fixation de la grande sous-unité ribosomale. Ce mécanisme postule que les ribosomes doivent dérouler les structures secondaires de l'ARNm pour permettre leur migration. Le mécanisme de transfert du ribosome permet le déplacement de ce dernier en aval d'une structure secondaire sans que cette dernière n'ait apparemment été déroulée. Les ribosomes effectuent un saut le long de la séquence de l'ARNm. Il faut entendre par sites donneurs et accepteurs de shunt , les régions minimales de l'ARNm capables de diriger les étapes initiales et finales du mécanisme du shunt . Le mécanisme d'entrée directe des ribosomes est un mécanisme alternatif qui requiert la présence d'un élément structural particulier de l'ARNm (un IRES : Internal Ribosomal Entry Segment ). Ce mécanisme ne fait pas intervenir la reconnaissance de la coiffe par le facteur elF4F et permet néanmoins l'initiation de la traduction. L'élément IRES est formé de domaines très structurés de l'ARN qui, en association avec des protéines cellulaires, dirigent les ribosomes sur un codon d'initiation spécifique. Ce mécanisme gouverne la synthèse d'un certain nombre de protéines cellulaires, en particulier pendant la division cellulaire et dans certaines conditions de stress cellulaire (modifications de l'environnement de la cellule tels que des changements de température, des variations des taux de 02 et CO2, l'appauvrissement en nutriments et en facteurs de croissance, la présence de molécules toxiques). Le brevet US 6,171, 821 81 décrit une méthode de criblage de molécules capables de moduler le mécanisme alternatif d'initiation de la traduction via la séquence IRES du gène XIAP et prévoit une méthode de normalisation des résultats. La demande de brevet WO 99/61613 décrit quant à elle une méthode de criblage de composés capables de moduler l'interaction entre un facteur d'initiation de la traduction IRES-dépendant et un ligand, sans toutefois chercher à cibler le mécanisme général de traduction IRES-dépendant. Il existe donc un réel besoin de disposer d'outils et de méthodes permettant d'identifier de manière simple et fiable des composés permettant de moduler de manière ciblée l'expression de gènes, et notamment les mécanismes d'initiation de la traduction, qui soient utilisables dans le cadre de la préparation de médicaments destinés au traitement de pathologies, notamment de pathologies liées à une dérégulation traductionnelle, telles que les cancers. La présente invention décrit à présent une nouvelle approche pour l'identification, la sélection, la caractérisation ou l'optimisation de composés capables de moduler de manière ciblée l'expression de gènes. La présente invention décrit en particulier de nouvelles méthodes pour l'identification, la sélection, la caractérisation ou l'optimisation ex vivo ou in vitro, de composés capables de moduler de manière ciblée, Le. stimuler ou inhiber, l'initiation de la traduction ou la transcription. La présente invention décrit en outre de nouvelles lignées cellulaires et compositions pour le criblage de tels composés. Les méthodes selon l'invention sont basées sur la mise en place d'une double sélection particulièrement avantageuse qui permet d'accroître la spécificité desdits composés. Les méthodes de criblage selon l'invention permettent plus particulièrement l'identification de composés capables de moduler, de manière ciblée l'efficacité ou l'exécution d'un ou plusieurs mécanismes d'initiation de la traduction tels que le balayage des ribosomes, le mécanisme d'entrée directe des ribosomes (mécanisme IRES-dépendant), le mécanisme de shunt (encore appelé transfert du ribosome ) ou un mécanisme hybride impliquant au moins deux des mécanismes précédemment cités. Un autre objet particulier de l'invention réside dans une méthode de criblage de molécules agissant de manière ciblée sur l'activité transcriptionnelle d'un promoteur. L'action de manière ciblée des composés criblés par les méthodes de l'invention indique que ces composés ont une action principale sur une étape ou un mécanisme déterminé du processus d'expression, qui garantit leur plus grande spécificité. Ainsi, les méthodes de l'invention permettent un criblage de molécules agissant de manière ciblée (spécifique ou principale) sur les mécanismes d'initiation de la traduction, et n'agissant pas (ou pas directement ou principalement) sur d'autres mécanismes, tels que la transcription, l'épissage, l'export des ARNm, etc. De la même manière, les méthodes de l'invention adaptées au criblage de composés agissant de manière ciblée sur les mécanismes de transcription fournissent des composés n'ayant pas d'activité directe ou principale sur d'autres étapes du processus d'expression. Ainsi, il est possible, en adaptant les éléments mis en oeuvre, de cibler certains mécanismes d'action et de fournir des molécules ayant un profil biologique mieux défini et plus adapté à une utilisation thérapeutique. La haute sélectivité du système de criblage de l'invention permet en outre de tester un grand nombre de composés et d'éviter l'analyse fastidieuse d'un grand nombre de faux positifs . Les lignées cellulaires et méthodes selon l'invention offrent à présent aux biologistes et aux industriels de nouvelles solutions pour l'identification de tels composés, fondées sur des méthodes rapides, sensibles et automatisables. Un premier objet de l'invention réside plus particulièrement dans des méthodes de criblage permettant l'identification de composés modulant de manière ciblée l'expression de gènes comprenant (i) la mise en contact d'un composé test avec au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la traduction, dans des conditions permettant l'expression desdits gènes de sélection, et (ii) la détermination de la capacité du composé test à moduler l'expression desdits gènes de sélection. Un autre objet de l'invention réside dans une méthode de criblage permettant l'identification de composés modulant de manière ciblée le mécanisme d'initiation de la traduction, caractérisée en ce qu'elle comprend : - (i) la mise en contact d'un composé test avec au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur (de préférence distinct) et d'éléments d'initiation de la traduction, dans des conditions permettant l'expression desdits gènes de sélection, et - (ii) la détermination de la capacité du composé test à moduler l'expression desdits gènes de sélection. Un autre objet de l'invention réside dans une méthode de criblage permettant l'identification de composés modulant de manière ciblée la transcription de gènes, caractérisée en ce qu'elle comprend : - (i) la mise en contact d'un composé test avec au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la transcription (de préférence distincts), dans des conditions permettant l'expression desdits gènes de sélection, et - (ii) la détermination de la capacité du composé test à moduler l'expression desdits gènes de sélection. Un autre objet de l'invention réside dans une méthode selon l'invention dans laquelle les séquences IRES sont choisies parmi les séquences IRES des gènes ODC, c-myc, c-sis, FGF-2, PDGF-2, IGF-2, VEGF, apaf-1, XIAP, eIF4G, EMCV, HCV ou encore toute IRES fonctionnelle dans le système utilisé. Un autre objet de l'invention concerne une cellule comprenant au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la traduction, ainsi qu'une population cellulaire caractérisée en ce que une partie au moins des cellules qui la constituent comprennent au moins deux unités de sélection telles que définies ci-dessus. Les cellules sont typiquement des cellules recombinantes modifiées par insertion simultanée ou séquentielle des unités de sélection. Un autre objet de l'invention réside dans un kit pour la mise en oeuvre de méthodes de criblage caractérisé en ce qu'il comprend une population (e. g., une lignée) cellulaire telle que définie ci-dessus. L'invention concerne également l'utilisation d'un composé obtenu grâce à une méthode de criblage selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné au traitement d'une pathologie entraînant l'expression anormale d'une protéine, et en particulier du cancer. Comme il sera décrit plus en détails dans la suite du texte, l'invention peut être mise en oeuvre dans différents systèmes (cellulaires ou cellulaires), avec différents types de constructions, gènes de sélection et éléments régulateurs afin de cibler l'activité principale des composés criblés. L'invention est utilisable en recherche, criblage industriel, thérapie, modélisation moléculaire, etc. Systèmes de sélection/criblage Comme indiqué, l'invention repose notamment sur l'utilisation d'un double système de sélection, permettant d'améliorer l'efficacité des procédés. Le procédé fait appel, de manière générale, à l'utilisation de deux unités de sélection comprenant chacune au moins : - un gène de sélection distinct, c'est-à-dire différent d'une unité à l'autre, placé sous le contrôle - d'un promoteur, et - d'éléments d'initiation de la traduction. Les unités de sélection sont donc des molécules d'acides nucléiques comprenant un ensemble de régions fonctionnelles, conduisant dans des conditions adaptées à l'expression du gène de sélection. Les unités de sélection sont typiquement de l'ADN ou de l'ARN, préférentiellement de l'ADN double-brin. Le terme gène de sélection au sens de l'invention désigne ainsi toute région d'acide nucléique codant un produit protéique qui peut être mis en évidence. Dans ce contexte, le terme gène de sélection désigne uniquement la région codante. Chaque unité de sélection comprend au moins un gène de sélection placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la traduction. Les éléments d'initiation de la traduction sont compris dans une région nucléique non traduite, typiquement localisée en 5'du gène de sélection. Cette dernière peut contenir un ou plusieurs IRES et/ou des éléments impliqués dans les mécanismes de shunt. Les éléments d'initiation de la traduction comprennent de préférence une région non traduite (5'UTR) comprenant, de préférence, un ou plusieurs éléments IRES et/ou des éléments impliqués dans le mécanisme de transfert du ribosome, par exemple des sites donneur et accepteur de shunt. Pour le criblage de composés agissant de manière ciblée (ou spécifiquement) sur l'initiation de la traduction d'un ARNm particulier ou sur un même mode d'initiation de la traduction (mécanisme d'entrée directe, shunt ou balayage par exemple), les éléments d'initiation de la traduction de chacune des unités de sélection sont de préférence identiques, et correspondent par exemple à la région 5'non traduite dudit ARNm. Les éléments d'initiation de la traduction de chacune des unités de sélection peuvent également être différents, selon un autre mode préféré, adapté plus particulièrement au criblage de composés modulant le mécanisme général d'un ou de plusieurs modes d'initiation de la traduction ou le mécanisme de la transcription. Les séquences IRES sont choisies préférentiellement parmi les séquences IRES des gènes ODC (Pyronnet, S., L. Pradayrol, et N. Sonnenberg N. A cell cycledependent internal ribosome entry site. Molecular cell ; 2000 ; (5) 607-616), c-myc (Stoneley M, Paulin FE, Le Quesne JP, Chappell SA, Willis AE. ; c-myc 5' untranslated region contains an internal ribosome entry segment ; Oncogene ; 1998, Jan 22 ; 16 (3) : 423-8), c-sis (Bernstein J, Sella 0, Le SY, Elroy-Stein O. PDGF2/c-sis mRNA leader contains a differentiation-linked internal ribosomal entry site (D-IRES. J Biol. Chem. 1997, Apr 4 ; 272 (14) : 9356-62), FGF-2 (Vagner, S., M. C. Gensac, A. Maret, F. Bayard, F. Amalric, H. Prats, et A. C. Prats. Alternative translation of human fibroblast growth factor 2 mRNA occurs by internai entry of ribosomes. Mol. Cell. Biol. 1995, (15) : 35-44), PDGF-2 (Bernstein J., Sella O., Le SY, Elroy-Stein O. ; PDGF2/c-sis mRNA leader contains a differentiation-linked internal ribosomal entry site (D-IRES. J Biol. Chem. 1997, Apr 4 ; 272 (14) : 9356-62), IGF-2 (Henk Teerink, Harry O. Voorma, Adri A. M. Thomas. The human insulin-like growth factor Il leader 1 contains an internal ribosomal entry site. Biochimica et Biophysica Acta. 1995,403-408), VEGF (Akiri G, Nahari D, Finkelstein Y, Le SY, Elroy-Stein 0, Levi BZ. Regulation of vascular endotheliail growth factor (VEGF) expression is mediated by internai initiation of translation and alternative initiation of transcription. Oncogene. 1998 Jul 16 ; 17 (2) : 227-36), apaf-1 (Coldwell MJ, Mitchell SA, Stoneley M, MacFarlane M, Willis. Initaitaion of Apaf-1 translation by internal ribosome entry. Oncogene. 2000 Feb 17 ; 19 (7) : 899- 905), XIAP (Holcik M, Korneluk RG. Functional characterization of the X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) internal ribosome entry site element : role of La autoantigen in XIAP translation. Mol. Cell. Biol. 2000 Jul ; 20 (13) : 4648-57), elF4G (Gan W, LaCelle M, Rhoads RE. Functional characterization of the internai ribosome entry site of elF4G mRNA. J Biol Chem. 1998 Feb 27 ; 273 (9) : 5006-12), EMCV (Jang SK, Krausslich HG, Nicklin MJ, Duke GM, Palmenberg AC, Wimmer E. A segment of the 5'nontranslated region of encephalomyocarditis virus RNA directs internai entry of ribosomes during in vitro translation. J. Virol.. 1988 Aug ; 62 (8) : 2636-43), HCV (Pelletiet J. et Sonnenberg N. Internal initiation of translation of eukaryotic mRNA directed by a sequence derived from poliovirus RNA. Nature. 1988. (334) : 320-43) mais aussi PV, HRV, FMDV, HAV, TEV, BVDV, CSFV, MLV, HaMSV, HTLV, RevA, SIV, TGEV, RhPV, Bip, AMYL, NRF ou encore toute IRES fonctionnelle dans le système cellulaire utilisé, si un système cellulaire est utilisé. Tout autre élément d'initiation de la traduction (du type shunt ou balayage, par exemple) peut être choisi et incorporé à une unité de sélection selon l'invention par des techniques connues de l'homme du métier. Ces éléments peuvent correspondre à la région 5'non traduite de n'importe quel ARNm pour lequel on veut produire des modulateurs spécifiques du mécanisme d'initiation de la traduction. Les promoteurs des unités de sélection contrôlant l'expression des gènes de sélection peuvent être identiques ou différents d'une unité à l'autre. Lorsque deux promoteurs différents sont utilisés, cela favorise le criblage de composés agissant de manière ciblée sur les mécanismes d'initiation de la traduction, en particulier lorsque ces éléments sont identiques au sein des deux unités. Lorsque deux promoteurs identiques sont utilisés, cela favorise le criblage de composés agissant de manière ciblée sur les mécanismes de transcription, en particulier lorsque les éléments d'initiation de la traduction sont différents d'une unité à l'autre. Différents types de promoteurs peuvent être utilisés pour la mise en oeuvre de l'invention. Il peut s'agir de promoteurs forts ou faibles, ubiquitaires ou spécifiques de tissus, constitutifs ou régulés. On peut citer les promoteurs viraux, cellulaires (par exemple de gènes domestiques), bactériens, etc., de manière générale tout promoteur transcriptionnel fonctionnel dans le système cellulaire ou cellulaire utilisé. On peut citer à titre d'exemples spécifiques de promoteurs viraux les promoteurs CMV, SV40, LTR, TK, etc., comme exemple de promoteurs de gènes domestiques, les promoteurs des gènes ss-actine, PGK, apolipoprotéine, albumine et Ubiquitine C, et comme exemple de promoteurs bactériens les promoteurs pLac, pTrp, etc. Chaque unité de sélection utilisée dans le cadre d'une méthode de criblage selon l'invention, comprend, de préférence, au moins un gène de sélection, les gènes de sélection étant, de préférence, différents d'une unité de sélection à l'autre. Le gène de sélection peut être, de manière générale, tout gène dont l'expression peut être détectée, observée ou mesurée, par toute technique connue (auxotrophie, fluorescence, luminescence, résistance, etc. ). Tout gène connu de l'homme du métier dont l'activité ou la présence dans des extraits biologiques est (facilement) mesurable peut, d'une manière générale, être utilisé comme gène de sélection pour la mise en oeuvre du procédé de criblage selon l'invention. Selon un premier mode particulier de réalisation de l'invention, le gène de sélection est un gène de sélection négative. Parmi les gènes de sélection négative sont préférés les gènes codant pour une thymidine kinase (notamment la thymidine kinase du virus de l'herpes humaine (HSV-TK)), la cytosine déaminase d'E. coli (CodA), l'hypoxanthine phosphoribosyl transferase (gpt), la nitroréductase d'E. coli (NTR), etc.. Il existe pour ces enzymes une multitude de mutants ayant des substrats différents susceptibles d'être utilisés pour leurs propriétés particulières. Selon un autre mode particulier de réalisation de l'invention, le gène de sélection est un gène de sélection positive. Parmi les gènes de sélection positive, on peut citer à titre d'exemples préférés les gènes hygro (de résistance à l'hygromycine), néo (de résistance à la néomycine), phleo (de résistance à la phléomycine), puro (de résistance à la puromycine) et bla (de résistance à la blasticidine). Selon un troisième mode particulier de réalisation de l'invention, le gène de sélection est un gène rapporteur. Il peut s'agir, par exemple, du gène codant pour la luciférase (plus particulièrement pour la luciférase de luciole ou pour celle de Renilla), pour la phosphatase alcaline sécrétée, pour la galactosidase, pour la lactamase, pour la Chloramphenicol acetyl transférase (CAT), pour l'hormone de croissance humaine (hGH), pour la ss-glucuronidase (Gluc) ou pour la Green fluorescent protein (GFP) et ses variants ou dérivés (EGFP, ECFP, EBFP), etc. Un objet préféré de l'invention concerne une méthode selon l'invention dans laquelle les gènes de sélection sont des gènes de sélection négative, choisis de préférence parmi le gène de la thymidine kinase du virus de l'herpes humain (HSV-TK), le gène de la cytosine déaminase d'E. coli (CodA), le gène de l'hypoxanthine phosphoribosyl transferase (HPRT), le gène de la xanthine-guanine phosphoribosyl transférase (gpt) et le gène de la nitroréductase d'E. coli (NTR), de préférence TK ou CodA, et/ou des gènes rapporteurs, choisis de préférence parmi GFP, EGFP, ECFP et EBFP, et/ou des gènes de sélection positive, choisis de préférence parmi les gènes hygro, néo, phleo, puro et bla. Par ailleurs, dans un mode de réalisation particulier, une, plusieurs ou chacune des unités de sélection comporte plusieurs gènes de sélection, de préférence plusieurs gènes de sélection appartenant à une catégorie différente telle que définie ci-dessus, typiquement un gène de sélection négative et un gène de sélection positive. Un autre objet préféré de l'invention concerne une méthode dans laquelle chaque unité de sélection comporte un gène de sélection positive et un gène de sélection négative. L'utilisation de telles unités de sélection permet d'une part d'améliorer l'efficacité de la méthode et d'autre part de faciliter l'établissement (et notamment la sélection) in vitro ou ex vivo de cellules (e. g. d'une lignée stable) contenant les unités). Pour ce faire, le second gène de sélection (ou l'un au moins des deux) est avantageusement un gène de sélection positive, choisi de préférence parmi hygro, néo, phleo, puro et bla. Les deux gènes de sélection présents dans chaque unité sont différents l'un de l'autre. En outre, préférentiellement, les gènes de sélection présents sur une unité sont distincts (i. e., différents) des gènes de sélection présents sur une autre unité utilisée de manière concomitante. Dans un autre mode de réalisation, il est possible d'utiliser un gène de sélection ayant à la fois des propriétés de gène de sélection positive et négative. Le gène de sélection positive permettant l'établissement d'une lignée stable peut être fusionné avec le ou les gènes de sélection (négatif, rapporteur et/ou positif) présents au sein de chaque unité de sélection. A titre d'exemples de telles fusions on peut citer notamment les combinaisons ou fusions TK-bla, TK-hygro, TK-neo, TK-puro, CodA-hygro, CodA-neo, CodA-puro, CodA-bla, neo-HPRT, hygro-NTR, puro-gtp, ou tout autre combinaison fonctionnelle, notamment les gènes de fusion bla-TK, hygro-TK, neo-TK, etc.. Le gène de sélection positive permettant l'établissement d'une lignée stable peut également être présent sur un autre cadre de lecture (distinct de celui des gènes de sélection négatif, rapporteur et/ou positif) et fonctionner par réinitiation, ou encore être porté par une autre unité transcriptionnelle. Le promoteur (P), les éléments d'initiation de la traduction (5'UTR) avec ou sans IRES et/ou sites donneur et accepteur de shunt, et le ou les gènes de sélection (S) éventuellement fusionnés ou reliés par réinitiation, sont agencés de manière fonctionnelle dans l'unité de sélection, c'est-à-dire de sorte que le promoteur contrôle l'expression desdits gènes et que leur expression puisse être modulée par un composé test. Les unités de sélection selon l'invention comprennent en outre, de préférence, une séquence poly A de terminaison de la transcription précédée d'une région 3'-UTR. Généralement, ces régions sont donc disposées dans l'ordre suivant, dans l'orientation 5'- > 3' : (P) - (5'UTR) - (S) - (3'UTR) - (polyA). Lorsque l'unité comporte plusieurs gènes de sélection, par exemple un gène de sélection négative (S-), un gène de sélection positive (S+) ou un gène ayant plusieurs propriétés de sélection à la fois positive et négative (S-/+), ces régions sont avantageusement disposées dans l'ordre suivant, dans l'orientation 5'- > 3' : (P) - (5'UTR) - (S-) - (S+) - (3'UTR) - (polyA). Il est entendu que tout autre agencement fonctionnel peut être envisagé par l'homme du métier sans départir de la présente invention (cf : figure 3). Typiquement, chaque unité de sélection est comprise dans un vecteur propre (c'est-à-dire que chaque unité est comprise dans une vecteur distinct ou différent). Il peut s'agir de tout vecteur adapté au système utilisé, tel qu'un plasmide, virus, phage, episome, chromosome artificiel, etc. On peut citer à titre d'exemple des vecteurs plasmidiques, tels que les plasmides bactériens pQE70, pD10, phagescript, psiX174, p. BluescriptSK, pNH46A ; pKK233-3, pRIT5 ; pSV2CAT, pSG ; pSVK3, pBPV, pMSG et pSVL, disponibles dans le commerce, le bactériophage P1 (Sternberg N. L. (1992 ; 1994)), un adénovirus humain de type2 ou 5 ou d'origine animale (WO94/28152, W097/00326, W095/00655), et des rétrovirus (MLV, FLV, etc. ). Le vecteur est de préférence un plasmide (c'est-à-dire typiquement une molécule circulaire, de préférence à base d'ADN double-brin), qui peut être linéarisé. Les unités de sélection peuvent être introduites dans la cellule par transfection ou transduction virale, et se répliquer sous forme autonome ou s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, par exemple par recombinaison homologue. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, les gènes de sélection des unités de sélection sont portés par un vecteur unique, de préférence un plasmide, et, tout en étant placés sous le contrôle d'éléments IRES et/ou sites donneur et accepteur de shunt identiques ou différents, sont liés fonctionnellement par ces derniers. Un objet particulier de l'invention concerne l'utilisation, dans le cadre d'une méthode de criblage permettant l'identification de composés modulant le mécanisme d'initiation de la traduction, d'au moins deux unités de sélection comprenant chacune des éléments d'initiation de la traduction identiques et au moins un gène de sélection, le ou les gènes de sélection de chaque unité de sélection étant placés sous le contrôle du même promoteur. Un objet préféré de l'invention concerne ainsi une méthode de criblage dans laquelle chaque unité de sélection ou vecteur comprend un promoteur différent, un gène de sélection différent, une région 5'UTR située entre ledit promoteur et ledit gène de sélection au sein de l'unité de sélection et ladite région 5'UTR étant identique ou différente d'un vecteur ou d'une unité à l'autre. Préférentiellement, chaque unité de sélection est comprise dans un vecteur distinct. Un autre objet préféré concerne une méthode de criblage dans laquelle chaque unité de sélection ou vecteur comprend un promoteur différent contrôlant l'expression d'une unité bicistronique composée d'un gène de sélection positive, d'un élément de type IRES et/ou shunt et d'un gène de sélection négative, ledit élément IRES étant identique ou différent d'un vecteur ou d'une unité à l'autre. Préférentiellement, chaque unité de sélection est comprise dans un vecteur distinct. Un objet préféré de l'invention concerne une méthode de criblage dans laquelle les unités de sélection, situées au sein d'un même vecteur, comprennent des gènes de sélection différents et sont placées sous le contrôle d'un promoteur commun et d'éléments IRES identiques ou différents. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les unités de sélection telles que décrites précédemment (ou le ou les vecteurs les contenant), sont par ailleurs contenues dans une cellule permettant l'expression des gènes de sélection. Le composé test ou un précurseur de celui-ci peut alors être mis en contact avec la cellule. A cet égard, l'invention est également relative à une cellule comprenant au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la traduction. L'invention est également relative à une cellule comprenant au moins un vecteur tel que défini ci-avant. L'invention est également relative à une population de cellules dont les cellules (ou une partie d'entre-elles) comprennent au moins deux unités de sélection ou au moins un vecteur tels que définis ciavant. Les éléments d'initiation de la traduction peuvent comprendre une région non traduite (5'UTR) comprenant de préférence un ou plusieurs éléments IRES et/ou des éléments impliqués dans le mécanisme de transfert du ribosome. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, les éléments d'initiation de la traduction des unités de sélection sont identiques. Selon un autre mode préféré, les promoteurs des unités de sélection sont différents. Les gènes de sélection utilisés sont de préférence des gènes de sélection négative, choisis préférentiellement parmi Tk, HPRT, NTR, gpt et CodA et/ou des gènes rapporteurs, choisis de préférence parmi EGFP, ECFP, EBFP, et/ou des gènes de sélection positive, choisis de préférence parmi les gènes hygro, néo, phleo, puro et bla. Les séquences IRES sont quant à elles choisies de préférence parmi les séquences IRES des gènes ODC, c-myc, c-sis, FGF-2, PDGF-2, IGF-2, VEGF, apaf-1, XIAP, eIF4G, EMCV, HCV ou encore toute IRES fonctionnelle dans le système cellulaire ou acellulaire utilisé. Chaque unité de sélection peut être comprise dans un vecteur, de préférence, dans un plasmide. Les populations cellulaires selon l'invention sont préférentiellement composées de cellules eucaryotes, notamment humaines, de préférence immortalisées. Elles peuvent être préparées par toute technique connue de l'homme du métier, notamment par électroporation, infection, précipitation au phosphate de calcium, utilisation d'agents facilitant la transfection (e. g., liposomes, lipides cationiques, peptides, polymères, etc. ). Selon un autre mode de réalisation de l'invention, les unités de sélection sont mises en contact avec le composé test, dans un système cellulaire, en présence des enzymes et réactifs permettant la transcription et/ou la traduction in vitro. De tels systèmes sont commercialisés par des fournisseurs tel que Promega (Iysat de réticulocytes (RRL) ou système TNT). Mise en contact des composés avec au moins deux unités de sélection selon l'invention Les méthodes de criblage selon l'invention prévoient une étape ex vivo ou in vitro de mise en contact du composé test avec au moins deux unités de sélection selon l'invention, dans des conditions particulières qui permettent de déterminer l'expression desdits gènes de sélection et d'obtenir ainsi une information concernant l'effet du composé test. Classiquement, l'effet du composé test est comparé au niveau d'expression des gènes de sélection, déterminé en l'absence dudit composé, ou dans une situation de référence. De manière préférée, le composé test peut être mis en contact avec des cellules hôtes dans lesquelles des unités de sélection selon l'invention ont été introduites, via des vecteurs plasmidiques, par exemple. Ces cellules, dans un mode préféré de l'invention, peuvent être des cellules eucaryotes, par exemple des levures, des cellules de mammifères et notamment des cellules humaines (hépatocytes, fibroblastes, cellules endothéliales, musculaires, etc. ). De manière encore plus préférée, ces cellules peuvent être des cellules humaines immortalisées. Il peut également s'agir de populations, de cultures primaires ou de lignées établies (cellules Hela par exemple). L'invention concerne donc une méthode de criblage dans laquelle les composés tests sont préférentiellement mis en contact avec une cellule issue d'une population ou d'une lignée de cellules eucaryotes, notamment humaines, de préférence immortalisées, comprenant les unités de sélection. Un autre objet de la présente invention concerne une population ou une lignée cellulaire dont les cellules constitutives comprennent au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la traduction. Ces derniers comprennent de préférence une région non traduite (5'UTR) pouvant comprendre un ou plusieurs éléments IRES et/ou des éléments impliqués dans le mécanisme de transfert du ribosome, par exemple des sites donneur et accepteur de shunt, et sont de préférence identiques. Le ou les gènes de sélection de chaque unité de sélection sont de préférence différents et sont placés sous le contrôle de promoteurs de préférence différents également. Les composés peuvent être mis au contact des unités de sélection ou des cellules les contenant à différents moments, selon leur (s) effet (s), leur concentration, la nature des cellules et l'appréciation technique. Le contact peut être effectué sur tout support approprié et notamment sur une plaque, dans un tube ou une flasque. Généralement, la mise en contact est réalisée dans une plaque multipuits ce qui permet de conduire, en parallèle, des essais nombreux et variés. Parmi les supports typiques on trouve des plaques de microtitration et plus particulièrement des plaques 96 ou 384 puits (ou plus), faciles à manipuler et sur lesquels la révélation peut être obtenue grâce à une stimulation classique. Selon le support et la nature du composé test, des quantités variables de cellules peuvent être utilisées lors de la mise en oeuvre des méthodes décrites. De manière classique, 103 à 106 cellules sont mises en contact avec un type de composé test, dans un milieu de culture approprié, et de manière préférentielle entre 104 et 105 cellules. A titre d'exemples, dans une plaque de 96 puits, 104 à 105 cellules peuvent être incubées dans chaque puit avec une quantité voulue d'un composé test. Dans une plaque à 384 puits, moins de 105 cellules et typiquement entre103 et 5x 104 cellules sont généralement incubées dans chaque puit avec le composé test. La quantité (ou la concentration) de composé test peut être ajustée par l'utilisateur selon le type de composé (sa toxicité, sa capacité de pénétration cellulaire, etc.), le nombre de cellules, la longueur de la période d'incubation, etc. Généralement, les cellules sont exposées à des quantités de composés test qui varient de 1nM à 1mM. Il est bien sûr possible de tester d'autres concentrations sans dévier de la présente invention. Chaque composé peut, de plus, être testé, en parallèle, à différentes concentrations. Un autre objet de l'invention concerne ainsi une méthode de criblage qui comprend la mise en contact, en parallèle, de plusieurs composés tests avec les unités de sélection. Différents adjuvants et/ou vecteurs et/ou produits facilitant la pénétration des composés dans les cellules tels que des liposomes, des lipides cationiques ou des polymères peuvent, en outre, être utilisés, si nécessaire. Le contact est maintenu environ une semaine, généralement entre 5 et 72 heures, voire entre 12 et 48 heures. En effet, les cellules et les divers réactifs doivent, de préférence, rester en contact suffisamment longtemps pour permettre la synthèse de novo du produit d'expression des gènes de sélection. De manière préférée, l'incubation dure environ 36 heures. Détermination de l'expression des gènes de sélection La méthode de sélection, d'identification et de caractérisation de composés capables de moduler un mécanisme d'expression de gènes prévoit une étape de détermination de l'expression des gènes de sélection. Cette détermination peut être obtenue à l'aide de techniques variées dont la nature dépend du type de gène utilisé. La mesure peut, par exemple, correspondre à une densité optique ou à une émission fluorescente dans le cas d'une utilisation comme gène de sélection du gène rapporteur codant pour la ss-galactosidase ou la luciférase. Il peut s'agir d'une révélation de l'expression desdits gènes à l'aide d'un substrat adapté. La présence du produit du gène rapporteur (ou du produit d'hydrolyse du substrat) peut être déterminée par des méthodes classiques connues de l'homme du métier (fluorescence, D. O., luminescence, FRET (voir WO 0037077), SPA, biopuces, méthodes immunologiques, etc. ) La mesure de l'hydrolyse implique essentiellement une mesure (ou la détermination de la quantité relative) du produit d'hydrolyse contenu dans chaque échantillon réactionnel. Cette mesure peut être réalisée grâce à différentes techniques connues de l'homme du métier, incluant la détection d'une fluorescence, d'une radioactivité, d'une couleur, d'une activité enzymatique, d'un immun complexe antigène-anticorps, etc. De manière préférée, le produit d'hydrolyse est détecté et quantifié grâce à une technique de détection de fluorescence. Des fluorochromes variés peuvent ainsi être utilisés et contrôlés sur des échantillons de cellules. Généralement, on détermine l'activité d'un composé test dans une cellule et cet effet est comparé au niveau d'activité en l'absence de composé test ou à une valeur moyenne déterminée en l'absence de tout composé test. Comme indiqué précédemment, ces méthodes permettent le criblage, rapide et en parallèle, de nombreux composés test sur une ou plusieurs populations cellulaires (cellules eucaryotes, cellules de mammifère, cellules humaines, etc. ). Ces méthodes sont prédictives, automatisables et adaptées à la sélection, l'identification et la caractérisation desdits composés. Composés test La présente invention peut être appliquée à tout type de composé test. Ainsi, le composé test peut être tout produit qui se présente sous une forme isolée ou en mélange avec d'autres produits. Le composé peut être défini en termes de structure et/ou de composition ou ne pas être défini. Le composé peut, par exemple, être un produit isolé et structurellement défini, un produit isolé de structure indéfinie, un mélange de produits connus et caractérisés ou une composition indéfinie comprenant un ou plusieurs produits. De telles compositions indéfinies peuvent être des composés de nature, structure et origine variées, notamment des composés biologiques, des composés chimiques, synthétiques, etc., capables de moduler la traduction. Il peut s'agir par exemple, d'échantillons de tissus, de fluides biologiques, de surnageants cellulaires, de préparations végétales, etc. Les composés test peuvent être des produits inorganiques ou organiques, un composé chimique ou biologique et notamment un polypeptide (ou une protéine ou un peptide), un acide nucléique, un lipide, un polysaccharide, un cofacteur ou tout mélange ou dérivé de ces derniers. Le composé peut être d'origine naturelle ou synthétique et inclure une banque combinatoire, une chimiothèque, un clone ou une banque d'ADNc ou de fragments de ces derniers, une banque de protéines ou de peptides aléatoires contraints (cf : figure 2) ou libres, etc. Pour réaliser une méthode de criblage selon l'invention, le composé test est choisi préférentiellement parmi un peptide, un polypeptide, un glucide, un lipide, un acide nucléique, une molécule chimique ou synthétique, un extrait végétal ou une banque combinatoire. La présente invention est particulièrement adaptée à la sélection, l'identification ou la caractérisation d'un nombre important de composés. Ce criblage simple et efficace peut être accompli en un laps de temps très court. Les méthodes décrites peuvent, en particulier, être partiellement automatisées, autorisant ainsi le criblage efficace et simultané de composés divers et nombreux, soit sous forme de mélange soit sous forme séparée. Les composés sélectionnés sont ensuite étudiés pour confirmer leurs propriétés biologiques. Utilisation des composés sélectionnés Les composés identifiés selon l'invention présentent des propriétés avantageuses pour une utilisation thérapeutique, notamment dans le domaine des pathologies entraînant l'expression anormale d'une protéine telle qu'une dérégulation traductionnelle, par exemple le cancer. Une application possible de l'invention est de permettre l'identification d'une substance thérapeutique susceptible de moduler le mécanisme d'initiation de la traduction au sein, par exemple, des cellules cancéreuses. La sélection de composés présentant par exemple une activité modulatrice du mécanisme IRES-dépendant peut être utilisée pour concevoir de nouveaux types de molécules utilisables dans le cadre du traitement de certains cancers. En effet de nombreux proto-oncogènes ont une traduction dirigée par un IRES. Certaines mutations dans la région 5'non traduite de ces proto-oncogènes s'avèrent être directement liées à une dérégulation traductionnelle et au phénotype de cancérisation. Il semble par ailleurs que les IRES soient plus actifs dans les cellules cancéreuses ou en division que dans les cellules différenciées. L'invention inclut ainsi l'utilisation de tout composé (ou dérivés desdits composés) sélectionné, identifié ou caractérisé selon l'une des méthodes précédemment décrites, dans le cadre de la présente invention, comme cible de recherches expérimentales ou pour la préparation d'un médicament destiné au traitement d'une pathologie entraînant l'expression anormale d'une protéine (notamment une dérégulation traductionnelle), et en particulier du cancer, mais également des maladies neurodégénératives, auto-immunes, cardiovasculaires, de la sténose, etc. Kit L'invention concerne également tout kit utilisable pour la mise en oeuvre de méthodes de criblage telles que décrites ci-avant comprenant par exemple des vecteurs, lignée (s) cellulaire (s), compositions selon l'invention, plaques de dosages et/ou réactifs pour la détection de l'expression des gènes. La faisabilité, la réalisation et d'autres avantages de l'invention sont illustrés plus en détails dans les exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Légende des figures : Figure 1 : Unités de sélection utilisées pour cibler les IRES Apaf-1 et cMyc. Po : promoteur ; PGK : phospho-glycerate kinase ; Ubc : Ubiquitine c ; PAC : Puromycin N-acetyltransferase ; Tk : Thymidine kinase ; Hygro : Hygromycine phosphotransferase ; Coda : Cytosine deaminase ; UTR 3' : région 3'non traduite ; polyA : séquence de polyadénylation. Figure 2 : Systèmes sauveteurs. LTR : Long Terminal Repeat La partie grisée représente une partie variable. Figure 3 : Unités de sélection permettant de cibler un mode d'initiation de la traduction particulier. Le promoteur (P), les éléments d'initiation de la traduction (EIT= 5'UTR, IRES, donneur et récepteur (ou accepteur)) et le ou les gènes de sélection négative (S-) et/ou positive (S+) ou ayant plusieurs propriétés (S-/+), éventuellement fusionnés ou reliés par réinitiation, sont agencés de manière fonctionnelle dans l'unité de sélection, c'est-à-dire de sorte que le promoteur contrôle l'expression desdits gène et que leur expression soit modulée par le composé test. Figure 3 A : Système de gènes suicides permettant de cibler un mode d'initiation de la traduction particulier (balayage, entrée directe des ribosomes, shunt, etc.) Les régions 5'UTR 1 et 5'UTR 2 permettent de diriger une initiation de la traduction par un mécanisme similaire (balayage, entrée directe des ribosomes, shunt ou n'importe quel autre mécanisme). Figures 3 B et 3C : Variations spécifiques pour cibler le mode"Shunt". Figure 3D : Système de gènes suicides permettant de cibler l'initiation de la traduction dirigée par une région 5'non traduite particulière. La région 5'UTR 1 permet de diriger une initiation de la traduction par un mécanisme de type balayage, entrée directe des ribosomes, shunt ou n'importe quel autre mécanisme (mécanisme hybride). Exemples Exemple 1 : Méthode de criblage de composés modulant le mécanisme d'initiation de la traduction IRES-dépendant, issus d'une banque de peptides aléatoires, à l'aide de gènes de sélection négative. Dans un premier temps, la lignée cellulaire contenant les deux gènes de sélection négative doit être réalisée. La lignée Hela ou d'autres cellules humaines de préférence immortalisées peuvent être utilisées. Les séquences IRES sont choisies parmi ODC, c-myc, c-sis, FGF-2, PDGF-2, IGF-2, VEGF, apaf-1, XIAP, eIF4G, EMCV, HCV ou encore tout IRES fonctionnel dans le système cellulaire utilisé. Parmi les gènes de sélection négative sont préférés les gènes TK et CodA. Il existe pour ces deux enzymes une multitude de mutants ayant des substrats différents susceptibles d'être utilisés pour leurs propriétés particulières. Typiquement, les deux gènes suicides sont codés par deux plasmides qui contiennent par ailleurs tous les éléments nécessaires pour leur expression dans les cellules eucaryotes à savoir un promoteur (CMV, SV40, ss-actine, PGK, promoteur issu d'un gène domestique, etc. ), un signal de polyadénylation, etc. Dans un second temps, les plasmides codant pour les peptides issus d'une banque de peptides aléatoires (plasmides BPA) sont introduits dans la lignée cellulaire décrite précédemment. Différentes techniques de biologie moléculaire peuvent être utilisées pour l'introduction de ces plasmides dans les cellules eucaryotes (transfection, transduction, etc.). Cette étape est idéalement réalisée par transduction virale (utilisation de vecteurs rétroviraux ou adénoviraux). Le gène concerné peut coder pour une protéine provenant de différentes origines (banque d'ADNc procaryote ou eucaryote). Typiquement, le plasmide BPA code pour un peptide aléatoire libre (de 5 à 30 aa) ou inclus au sein d'une protéine présentatrice (peptide contraint ; de 5 à 20 aa) telle qu'une version inactive de la nucléase du staphylocoque, la boucle du site actif de la thioredoxine d'E. coli, les toxines de scorpion ou encore l'inhibiteur de l'alpha-amylase (Tendamistat). Le plasmide BPA dispose de préférence d'un gène de sélection positive pour permettre une expression stable à terme et ainsi faciliter son sous-clonage. La protéine présentatrice peut-être elle-même fusionnée à un marqueur de sélection positive (neo, hygro, puro, blasticidine, etc. ). Enfin, la lignée cellulaire est soumise à la double sélection négative par activation des deux programmes suicides (typiquement par apport dans le milieu de culture cellulaire de pro-drug de type Gancyclovir, Acyclovir, 5Fluoro-cytosine, etc. ). Les cellules exprimant un peptide capable d'inhiber le mécanisme d'initiation de la traduction IRES-dépendant, et par conséquent capable de diminuer conjointement l'expression des deux programmes de suicide (gène de sélection négative), survivent. Ces cellules sont ensuite cultivées et les peptides aléatoires caractérisés. Cette méthode est basée sur le système de sélection double de l'invention qui permet d'accroître la spécificité des peptides sélectionnés. En effet, ne seront pas sélectionnés les peptides aléatoires pouvant interférer avec des étapes non ciblées de l'expression de l'un des deux gènes de sélection (la transcription, l'épissage, l'export des ARNm, etc. ). De façon similaire ne seront pas sélectionnés les peptides pouvant interférer avec l'un des deux processus biochimiques impliqués dans le programme de suicide cellulaire. Ainsi, la haute sélectivité de ce système de criblage permet, en utilisant un grand nombre de cellules, de pouvoir tester un grand nombre de peptides aléatoires et d'éviter l'analyse fastidieuse d'un grand nombre de faux positifs . A l'issue de la sélection négative, les clones résistants obtenus sont amplifiés et soumis à différentes analyses (étude du profil cycle cellulaire par FACS pour déterminer la proportion de cellules dans chaque phase du cycle). La région du plasmide codant pour le peptide aléatoire est ensuite clonée après amplification par PCR. Finalement, les peptides isolés sont étudiés pour confirmer leurs propriétés biologiques. REVENDICATIONS 1. Méthode de criblage permettant l'identification de composés modulant de manière ciblée l'expression de gènes, caractérisée en ce qu'elle comprend : - (i) la mise en contact d'un composé test avec au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la traduction, dans des conditions permettant l'expression desdits gènes de sélection, et - (ii) la détermination de la capacité du composé test à moduler l'expression desdits gènes de sélection. 2. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que les éléments d'initiation de la traduction comprennent une région 5'non traduite (5'UTR) comprenant, de préférence, un ou plusieurs éléments IRES et/ou des éléments impliqués dans le mécanisme de transfert du ribosome. 3. Méthode selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que les éléments d'initiation de la traduction de chacune des unités de sélection sont identiques. 4. Méthode selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que les éléments d'initiation de la traduction de chacune des unités de sélection sont différents. 5. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les promoteurs des unités de sélection sont différents. 6. Méthode selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que les promoteurs des unités de sélection sont identiques. 7. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que chaque unité de sélection est comprise dans un vecteur, de préférence dans un plasmide. 8. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que les unités de sélection sont contenues dans une cellule permettant l'expression des gènes de sélection, et en ce que le composé test ou un précurseur de celui-ci est mis en contact avec la cellule. 9. Méthode selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que les unités de sélection sont mises en contact avec le composé test dans un système cellulaire, en présence des enzymes et réactifs permettant la transcription et/ou la traduction in vitro. 10. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend la mise en contact, en parallèle, de plusieurs composés tests avec les unités de sélection. 11. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les gènes de sélection sont des gènes de sélection négative, choisis de préférence parmi Tk, HPRT, NTR, gpt et CodA et/ou des gènes rapporteurs, choisis de préférence parmi EGFP, ECFP, EBFP, et/ou des gènes de sélection positive, choisis de préférence parmi les gènes hygro, néo, phleo, puro et blasticidine. 12. Méthode selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que chaque unité de sélection comporte un gène de sélection positive et un gène de sélection négative. 13. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les promoteurs sont choisis parmi les promoteurs viraux et les promoteurs de gènes domestiques, notamment parmi les promoteurs CMV, SV40, ss-actine, PGK et Ubiquitine C. 14. Méthode selon l'une des revendications 1-8 et 10-13, caractérisée en ce que la cellule est issue d'une population ou d'une lignée de cellules eucaryotes, notamment humaines, de préférence immortalisées. 15. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le composé test est choisi parmi un peptide, un polypeptide, un glucide, un lipide, un acide nucléique, une molécule synthétique, un extrait végétal ou animal ou une banque combinatoire. 16. Méthode selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisée en ce que chaque unité ou vecteur comprend un promoteur différent, un gène de sélection différent, une région 5'UTR située entre ledit promoteur et ledit gène de sélection au sein de l'unité de sélection et en ce que ladite région 5'UTR est identique d'un vecteur ou d'une unité à l'autre. 17. Méthode selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisée en ce que chaque unité ou vecteur comprend un promoteur différent, un gène de sélection différent, une région 5'UTR située entre ledit promoteur et ledit gène de sélection au sein de l'unité de sélection et en ce que ladite région 5'UTR est différente d'un vecteur ou d'une unité à l'autre. 18. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisée en ce que chaque unité ou vecteur comprend un promoteur différent contrôlant l'expression d'une unité bicistronique composé d'un gène de sélection positive, d'un élément de type IRES et/ou shunt et d'un gène de sélection négative, et en ce que ledit élément IRES est identique ou différent d'un vecteur ou d'une unité à l'autre. 19. Méthode selon l'une quelconque des revendications 7 à 15, caractérisée en ce que les unités de sélection, situées au sein d'un même vecteur, comprennent des gènes de sélection différents et sont placées sous le contrôle d'un promoteur commun et d'éléments IRES identiques ou différents. 20. Méthode selon l'une des revendications 1 à 15, 17 à 19, caractérisée en ce que les séquences IRES sont choisies parmi les séquences IRES des gènes ODC, c-myc, c-sis, FGF-2, PDGF-2, IGF-2, VEGF, apaf-1, XIAP, eIF4G, EMCV, HCV ou encore toute IRES fonctionnelle dans le système cellulaire ou acellulaire utilisé. 21. Population cellulaire caractérisée en ce que les cellules qui la constituent ou une partie d'entre-elles comprennent au moins deux unités de sélection comprenant chacune au moins un gène de sélection distinct placé sous le contrôle d'un promoteur et d'éléments d'initiation de la traduction. 22. Population cellulaire selon la revendication 21, caractérisée en ce que les éléments d'initiation de la traduction comprennent une région non traduite (5'UTR) comprenant de préférence un ou plusieurs éléments IRES et/ou des éléments impliqués dans le mécanisme de transfert du ribosome. 23. Population cellulaire selon l'une des revendications 21 ou 22, caractérisée en ce que les éléments d'initiation de la traduction des unités de sélection sont identiques. 24. Population cellulaire selon l'une des revendications 21 à 23, caractérisée en ce que les promoteurs des unités de sélection sont différents. 25. Population cellulaire selon l'une des revendications 21 à 24, caractérisée en ce que chaque unité de sélection est comprise dans un vecteur, de préférence, dans un plasmide. 26. Population cellulaire selon l'une des revendications 21 à 25, caractérisée en ce que les cellules sont des cellules eucaryotes, notamment humaines, de préférence immortalisées. 27. Population selon l'une des revendications 21 à 26, caractérisée en ce que les gènes de sélection sont des gènes de sélection négative, choisis de préférence parmi Tk et CodA et/ou des gènes rapporteurs, choisis de préférence parmi EGFP, ECFP, EBFP, et/ou des gènes de sélection positive, choisis de préférence parmi les gènes hygro, néo, phleo, puro et blasticidine. 28. Population selon l'une des revendications 21 à 27, caractérisée en ce que les séquences IRES sont choisies parmi les séquences IRES des gènes ODC, c- myc, c-sis, FGF-2, PDGF-2, IGF-2, VEGF, apaf-1, XIAP, eIF4G, EMCV, HCV ou encore toute IRES fonctionnelle dans le système cellulaire utilisé. 29. Kit pour la mise en oeuvre de méthodes de criblage caractérisé en ce qu'il comprend une lignée cellulaire selon l'une des revendications 21 à 28. 30. Utilisation d'un composé obtenu grâce à une méthode de criblage selon l'une des revendications 1 à 20 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement d'une pathologie entraînant l'expression anormale d'une protéine, et en particulier du cancer.