Brevet FR2825927A1 — publié le 20021220

COMPOSITION ANTIVIRALE INCORPORANT DES LECTINES La présente invention concerne une composition antivirale incorporant des glycoprotéines et plus particulièrement des protéines d'inactivation des ribosomes de type 2 (ou RIP de type 2) du groupe des chimérolectines, par exemple extraites du sureau noir, ou sambucus nigra. Les chimérolectines forment un sous-groupe des lectines. Le terme de lectine s'applique, selon la définition la plus récente, à toute protéine végétale qui possède au moins un domaine non catalytique et qui se lie de manière réversible à un mono-ou oligo-saccharide spécifique . Les chimérolectines sont des protéines de fusion qui possèdent un domaine de liaison aux hydrates de carbone en tandem avec un domaine sans relation avec le premier qui exhibe une activité catalytique (ou une autre activité biologique) bien définie, et qui agit de manière indépendante. Les RIP de type 2 forment une classe particulière de chimérolectines qui possèdent une plus ou moins grande toxicité pour les cellules eukaryotes si elles entrent en contact avec leurs ribosomes intra-cytoplasmiques. Elles participent ainsi aux mécanismes de défense du monde végétal envers ses prédateurs, et sont notamment connues pour leur action inhibitrice sur les virus des plantes. Le sureau noir est un arbre de la famille des caprifoliacées que l'on trouve couramment dans les zones tempérées telles que l'Europe ou l'Amérique du Nord. De manière connue, ces feuilles sont utilisées en préparation phytothérapeutique du fait de leurs propriétés fébrifuges, anti-allergiques, et anti-inflammatoires. A ce titre, l'indication officielle de l'autorisation de mise sur le marché du sureau noir en tant que plante fait référence à ses propriétés diurétiques. Ainsi, les différentes propriétés du sureau noir ont conduit à développer son utilisation dans le traitement des symptômes grippaux. On connaît par le document EP 0 173 092 une composition antivirale mettant en oeuvre des protéines et plus particulièrement des lectines extraites du sureau noir. Ces lectines sont la sambucus nigra agglutinine 1 (SNA 1) et la sambucus nigra agglutinine Il (SNA II). La demande de brevet européen EP 0 173 092 porte sur l'étude de l'activité antivirale de ces deux lectines, notamment vis-à-vis du virus de la peste aviaire. Cependant, des travaux complémentaires menés par le titulaire de la présente demande ainsi que l'Institut Pasteur de Paris entre 1997 et fin 1999, ont montré d'une part que la lectine SNA 1 était dépourvue de toute activité anti-grippale et d'autre part que la seconde lectine SNA Il présentait une toxicité trop importante pour permettre toute utilisation thérapeutique. En effet, le SNA 1 s'est révélé inefficace au cours des tests de réduction du nombre de plages de lyse cellulaire, et SNA Il a détruit le tapis cellulaire lors des expérimentations. Dans ce contexte, la présente invention propose de pallier les inconvénients de l'art antérieur en proposant une composition antivirale non toxique comprenant des protéines, et apte à lutter efficacement contre les virus, et particulièrement les virus grippaux. A cette fin, selon l'invention, la composition antivirale comprend des protéines, et plus particulièrement des protéines d'inactivation des ribosomes de type 2 appartenant au groupe des chimérolectines, sélectionnées parmi un groupe composé de sambucus nigra agglutinine IV, sambucus nigra agglutinine V et sambucus nigra protéine dérivée de lectine (ou Lectin Related Protein : SNL RP). Selon les résultats recherchés, la composition antivirale ne comporte qu'une seule desdites chimérolectines, ou un mélange d'au moins deux des trois chimérolectines. Les chimérolectines peuvent être obtenues par extraction du sureau, par synthèse ou hémi-synthèse chimique ou par toute méthode biotechnologique applicable. L'invention concerne également un médicament comprenant une composition selon l'invention, caractérisé en ce que sa forme galénique permet une administration orale pour absorption digestive, une administration orale pour absorption muqueuse, une administration nasale, percutanée ou encore parentérale. Selon une forme particulière de réalisation, le médicament comporte au moins un composant supplémentaire destiné à permettre son absorption et/ou sa conservation. L'invention sera mieux comprise à la lumière de la description qui suit, se rapportant à des exemples de réalisation illustratifs et aucun cas limitatifs, en référence aux dessins annexés dans lesquels : - La figure 1 est un graphique montrant l'évolution des plages de lyse en présence et en l'absence de la lectine SNA IV ; - La figure 2 est un graphique montrant l'évolution des plages de lyse en présence et en l'absence de la lectine SNA V ; - La figure 3 est un graphique montrant l'évolution des plages de lyse en présence et en l'absence de la lectine SNL RP. Les virus grippaux de la famille des Orthomyxoviridae comprennent les virus de grippe dits de type A, de type B et de type C. Le virus A est généralement plus pathogène et entraîne des maladies plus graves que le virus B, lui-même présentant généralement plus de risques que le virus C. Les virus de la grippe sont à ARN simple brin de polarité négative dont la séquence est complémentaire de la séquence qui code les protéines. Ces virus sont dits enveloppés c'est-à-dire qu'ils présentent une enveloppe virale constituée d'une bicouche lipidique. Les virus de type A et B comportent deux types de protéines de surface, l'hémagglutinine (H ou HA) et la neuraminidase (N ou NA), qui correspondent aux antigènes de surface des virus grippaux. Dans le cadre des recherches ayant abouties à la présente demande, les types et sous types de virus grippaux A (H 1 N 1), A (H3N2) et B ont été utilisés, étant ceux circulant chez l'homme. Ces virus grippaux initient leur cycle de multiplication en se liant à des résidus glucidiques portés par des macro molécules protéiques ou lipides. Dans le cas des virus de type A et B, cette liaison est réalisée au niveau d'un acide sialique terminal qui est reconnu par l'hémagglutinine grippale. Les acides sialiques sont également la cible de l'activité de la seconde glycoprotéine de surface desdits virus grippaux, la neuraminidase. Comme évoqué plus haut, les lectines forment un groupe hétérogène de protéines susceptibles de se lier également à des résidus glucidiques portés selon des séquences particulières et présents à la surface des cellules. En particulier, certaines lectines extraites du sureau noir sont aptes également à se lier à l'acide sialique terminal, tout comme les virus grippaux. Ainsi, les lectines végétales extraites du sureau noir sont susceptibles de présenter des interactions avec soit les glycoprotéines virales, soit les éléments qui servent de récepteurs aux virus grippaux. Dans ce cas, en utilisant le même substrat, les lectines empêchent la multiplication des virus grippaux en entrant en compétition avec ceux-ci pour l'attachement sur les cellules. Selon la partie du sureau noir dont elles sont issues, les lectines extraites sont de nature différente. Plus particulièrement, l'effet inhibiteur de préparation de baie de sureau noir sur la multiplication des virus grippaux in vitro ainsi que l'interaction entre les virus et lesdites préparations de baie de sureau (captures de virus) ont été étudiés. Trois des protéines isolées et identifiées du sureau noir (SNA IV, SNA V et SNL RP), ont montré une activité antivirale conséquente. Les concentrations en chimérolectines mises en oeuvre pour les expériences sont de 50 ptg/ml et le nombre de plages de lyse en ordonnée des graphiques représentés aux figures 1 à 3 est exprimé en unité formant plage (ufp). Le SNA IV (voir figure 1) a présenté une efficacité totale dès 48 heures d'incubation. Les plages de lyse ont été totalement réduites jusqu'à disparaître par le traitement avec SNA IV. Le traitement avec SNA V (figure 2) a présenté une efficacité conséquente puisque les plages de lyse ont été en grande partie réduites (61%) à 72 heures d'incubation. En effet, le nombre de plages de lyse est passé de 100 pour le témoin virus seul à 39. Enfin, le traitement avec SNL RP (figure 3) a présenté une activité plus importante au bout de 72 heures d'incubation qu'après 48 heures. En effet, le nombre de plages de lyse a été réduit de 100 à 11 (réduction de 90%) à 72 heures d'incubation et de 55 pour le témoin virus seul à 36 en présence de SNL RP à 48 heures d'incubation, soit environ 34% de réduction. Ces résultats montrent l'activité importante de ces trois chimérolectines et notamment l'efficacité totale de SNA IV dans la réduction du nombre de plages de lyse cellulaire. Dans les tests de captures virales, des résultats positifs ont été obtenus avec les chimérolectines SNA V et SNL RP mais aucune capture n'a été mise en évidence avec SNA IV. Ainsi, les lectines SNA IV et SNA V et SNL RP extraites du sureau noir, isolées et identifiées que récemment, ont montré une activité antivirale puissante. Un avantage particulièrement intéressant de la composition antivirale selon l'invention réside dans le double mécanisme d'action de ladite composition. En effet, un premier mécanisme d'action mis en évidence par les tests de capture virale fait appel à l'inhibition directe des virus. Ce mécanisme, particulièrement observable pour SNA V et SNL RP, utilise l'hémagglutinine virale lors d'un processus d'hémaglutination. Le second mécanisme, observable chez les trois lectines SNA IV, SNA V et SNL RP, fait appel à l'inhibition de la réplication virale intracellulaire, montrée lors des tests de réduction des plages de lyse cellulaire. Ce second mécanisme fait appel à la neuraminidase présente au niveau des virus grippaux. La combinaison de ces deux mécanismes d'action permet, soit par l'utilisation d'une seule de ces lectines, soit par la mise en oeuvre d'un mélange de ces mêmes lectines, de mettre en oeuvre des traitements à la fois préventifs et curatifs des virus grippaux La prévention ou le traitement des infections virales des voies respiratoires, par exemple d'origine grippale peuvent ainsi être menées en mettant en oeuvre des préparations médicamenteuses utilisant seul ou en association les chimérolectines SNA IV, SNA V et SNL RP. Avantageusement, les médicaments mettant en oeuvre ces lectines se présentent sous une forme galénique adaptée à leur administration. Ladite administration peut être orale pour absorption digestive : présentation sous forme de comprimés à avaler, à sucer, à croquer, en gélules, en capsules, en pâtes, en sirops, en solutions buvables. Elle peut être également orale pour absorption muqueuse : suspension, solution, gel, granules, poudres. L'administration du médicament utilisant les lectines selon l'invention peut également se faire par voie nasale (suspension, solution, poudre), percutanée (crème, lait, gel, onguent, huile,...) ou encore parentérale. Afin d'assurer une conservation ainsi qu'une absorption optimale des principes actifs de la composition selon l'invention, tout excipient adapté est avantageusement utilisé. Les SNA IV, V, et SNL RP peuvent être obtenues, en quantités expérimentales puis en quantités industrielles par extraction à partir du sureau, ou, mieux, en ayant recours à des méthodes biotechnologiques, parmi lesquelles : l'utilisation de plantes transgéniques, maïs, tabac, ou toute autre plante adaptée, l'utilisation de levures ou l'utilisation de cellules animales ou végétales en cultures. Ils peuvent aussi être l'objet d'une synthèse ou d'une hémi-synthèse chimique. Enfin, l'application de ces produits au traitement des infections virales respiratoires induites par des virus de structure proche de celle des virus grippaux est possible. REVENDICATIONS 1. Utilisation, dans la préparation d'une composition antivirale destinée à prévenir et/ou guérir les infections virales des voies respiratoires comprenant des glycoprotéines, de protéines d'inactivation des ribosomes de type 2 du groupe des chimérolectines, sélectionnées parmi un groupe composé de sambucus nigra agglutinine IV, sambucus nigra agglutinine V et sambucus nigra protéine dérivée de lectine. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que la composition antivirale ne comporte qu'une seule desdites chimérolectines. 3. Utilisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que la composition antivirale comporte un mélange d'au moins deux des trois chimérolectines. 4. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'une ou plusieurs desdites chimérolectines sont obtenues par extraction du sureau. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'une ou plusieurs desdites chimérolectines sont obtenues par synthèse ou hémi-synthèse chimique. 6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'une ou plusieurs desdites chimérolectines sont obtenues par toute méthode biotechnologique applicable. 7. Médicament comprenant une composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que sa forme galénique permet une administration orale pour absorption digestive. 8. Médicament comprenant une composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que sa forme galénique permet une administration orale pour absorption muqueuse. 9. Médicament comprenant une composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que sa forme galénique permet une administration nasale. 10. Médicament comprenant une composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que sa forme galénique permet une administration percutanée. 11. Médicament comprenant une composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que sa forme galénique permet une administration parentérale. 12. Médicament selon l'une des revendications 7 à 11, caractérisé en ce que qu'il comporte au moins un composant supplémentaire destiné à permettre son absorption et/ou sa conservation.