Brevet FR2833699A1 — publié le 20030620

DESCRIPTION La présente invention concerne un procédé de contrôle de la présence ou de l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou de contrôle du remplissage d'un contenant par un volume de liquide, le contenant étant parcouru par au moins un canal aboutissant à au moins un puits réceptionnant tout ou partie du liquide, le ou les canaux et le ou les puits constituant un réseau fluidique. L'invention propose également la mise en oeuvre du procédé, ci-dessus mentionné, pour contrôler la présence ou l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou contrôler le remplissage d'un contenant par un volume de liquide. Elle a trait aussi à la mise en oeuvre du procédé, ci-dessus cité, pour dénombrer des micro-organismes, présents dans le volume de liquide initial. De plus, la présente invention divulgue un dispositif de contrôle de la présence ou de l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou de contrôle du remplissage d'un contenant par un volume de liquide, mettant en oeuvre le procédé, cidessus mentionné, le contenant étant parcouru par au moins un canal aboutissant à au moins un puits réceptionnant tout ou partie du liquide, le ou les canaux et le ou les puits constituant un réseau fluidique. L'invention a encore pour objet l'utilisation de ce dispositif pour contrôler la présence ou l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou contrôler le remplissage d'un contenant par un volume de liquide. Plus précisément, cette utilisation du dispositif peut être appliquée au dénombrement des micro-organismes, présents dans le volume de liquide initial. L'état de la technique est constitué de documents qui ont trait à différents domaines. Le premier domaine concerne la mesure par contact direct entre une électrode et le liquide. Un exemple représentatif est constitué par la détection capacitive à l'aide de cônes conducteurs, par exemple en carbone, utilisés sur des automates à trois axes et permettant la détection de liquide dans un tube. C'est par exemple le cas de la demande de brevet EP-A-O. 341. 438. D'autre part, la position de l'interphase d'unfluide, conducteur de l'électricité, peut être détectée au moyen d'une sonde capacitive. Cette détection s'appuie sur l'existence d'un courant entre la sonde et le liquide, la capacité électrique mesurée par la sonde étant affectée par la variation de niveau de liquide. Une telle sonde peut notamment comporter une tige métallique centrale gainée avec un matériau plastique isolant, plaqué par exemple par thermorétraction, qui plonge plus ou moins dans le liquide conducteur. On mesure alors la variation de la capacité inter-électrode entre la tige gainée et le liquide conducteur résultant de la variation du niveau de liquide, comme c'est le cas dans la demande de brevet FR-A-2. 772. 477. Ce domaine technique n'est pas pertinent, car il nécessite un contact direct entre l'électrode, constituée par le cône ou la sonde, et le liquide. Les inconvénients d'une telle technique sont principalement liés au fait que l'électrode doit tremper dans le liquide et être souillée, elle devra ensuite être lavée. D'autre part, le contrôle de la présence ou de l'absence de liquide est impossible par cette technique dans un consommable hermétiquement clos. Dans la suite du texte, par détection capacitive on entend la mesure de la variation de capacité d'un condensateur formé par deux électrodes ou par une électrode de mesure et un plan de masse. Dans un second domaine, le contact direct entre l'électrode et le liquide n'est pas nécessaire, ces dispositifs permettent de contrôler : la présence de bulles dans ces cuves, ou le niveau de remplissage desdites cuves. Dans le cas du contrôle de la présence de bulles présentes à la surface du liquide, le document US-A-4, 312, 341 propose un dispositifpour contrôler la variation de liquide présent dans un contenant, en l'occurrence un tube, dispositif comprenant un détecteur de bulles. Une source lumineuse est placée sur une des faces du contenant, alors qu'un détecteur de lumière est placé sur la face opposée. Le détecteur génère un signal de sortie en réponse à l'intensité du signal lumineux issu de la source lumineuse, proportionnel à la configuration de la luminosité présente dans le tube. Ce procédé de détection permet de mettre en évidence la présence de bulles, et de ce fait, la présence de liquide, mais ne permet pas de mesurer spécifiquement le volume de liquide présent dans le contenant. De même, le brevet US-A-4, 371, 786 décrit un dispositif pour détecter la présence de bulles dans un liquide, dispositif comprenant une source de radiation et un détecteur de radiation. Les rayons émis ont une configuration qui est alors différente si des bulles sont présentes ou non à la surface du liquide. Cette invention est plus particulièrement adaptée au domaine médical, lorsque l'on souhaite détecter et éviter la présence de bulles lors de la perfusion de sérum ou de sang à un patient afin d'éviter tout risque d'embolie. Toutefois, l'invention objet de ce brevet n'est pas adapté à la mesure d'un volume présent dans le contenant, mais seulement à la détection de la présence ou l'absence de bulles. Dans le cas du contrôle du niveau de remplissage desdites cuves, le document US-A-5, 017, 909 est basé sur le même principe physique que celui exposé dans le document US-A-4, 371, 786, c'est-à-dire de permettre la mesure d'un niveau de remplissage d'un liquide sans contact de l'électrode avec ce liquide. Ainsi la mesure est effectuée en déterminant une variation de capacité due à la différence de permittivité électrique entre l'eau et l'air. Cette mesure est effectuée par la mesure capacitive de niveau de liquides dans des cuves, généralement de grande dimension, c'est-à-dire bien supérieure à 1 litre, et non fermées. Toutefois, comme exposé ci-dessus, ces procédés de détection capacitive de niveau de liquides utilisent souvent comme contenant des cuves de grande dimension (cuves de plusieurs litres), puisque la variation de capacité est alors suffisamment importante pour être aisément mesurée. On ne retrouve pas dans la littérature l'application de tels procédés de détection à de très petits volumes, notamment des volumes compris entre quelques microlitres (ill) et quelques millilitres (ml), volumes qui sont utilisés pourtant couramment dans le domaine technique, notamment de la biologie. De plus, la mesure d'un volume de quelques microlitres dans un consommable clos, c'est-à-dire sans contact avec le ou les appareils de mesure du volume, n'est absolument pas décrite dans ces brevets de l'état de la technique. La présente invention se propose de résoudre l'ensemble des inconvénients de l'état de la technique en présentant un procédé et un dispositif de contrôle de la présence ou de l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou de contrôle du remplissage d'un contenant par un volume de liquide. Ce procédé et ce dispositif peuvent être appliqués à des contenants comportant de nombreux puits réceptionnant un liquide, les puits étant chacun d'un petit volume, comme ceux qui sont utilisés dans le cas de cartes d'analyse biologique, telles que celles décrites dans la demande de brevet FR/98/11053 de la Demanderesse. A cet effet, la présente invention concerne un procédé de contrôle de la présence ou de l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou de contrôle du remplissage d'un contenant par un volume de liquide, le contenant étant parcouru par au moins un canal aboutissant à au moins un puits réceptionnant tout ou partie du liquide, le ou les canaux et le ou les puits constituant un réseau fluidique. Le procédé consiste à : * remplir en tout ou partie le réseau fluidique, 'détecter la capacité, ou toute autre paramètre qui y est lié, tel que la permittivité relative de l'air présent dans le contenant ou la fréquence d'oscillation ou la tension, au niveau de chaque puits, après l'injection dudit liquide, 'déterminer la variation capacitive, ou toute autre variation d'un paramètre qui y est lié, au niveau de chaque puits, et * déduire la quantité de ce liquide présent au niveau de chaque puits réactionnel. Selon un autre mode de réalisation, on réalise une étape préalable pour calibrer la capacité, ou toute autre paramètre qui y est lié, par rapport à un matériau de capacité connue, ou toute autre paramètre qui y est lié. Cette étape peut consister à détecter la capacité, ou toute autre paramètre qui y est lié, au niveau de chaque puits, avant l'injection du liquide. L'étape de calibrage peut être réalisée une seule fois sur une carte vide. Les valeurs de fréquences résultantes sont enregistrées et prises comme référentiel. On compare ensuite les valeurs mesurées de chaque carte remplie par rapport aux valeurs de fréquence enregistrées. Selon un autre mode de réalisation, après le remplissage de tout ou partie du réseau fluidique, ledit réseau est clos. Toujours selon un autre mode de réalisation, la détection de la capacité, ou de toute autre paramètre qui y est lié, est réalisée en accumulant les charges électriques entre deux électrodes ou entre une électrode et un plan de masse, de part et d'autre de chaque puits, sans contact avec l'aliquote de volume de liquide présent dans chaque puits. Selon un autre mode de réalisation, chaque puits est d'un volume inférieur ou égal à 100 ml, préférentiellement inférieur ou égal à 10 ml, préférentiellement inférieur ou égal à 1 ml. Encore selon un autre mode de réalisation, qui permet le dénombrement de micro-organismes, présents dans le volume de liquide initial, par l'intermédiaire d'au moins deux puits de dimensions différentes, chaque puits contenant un même milieu, préférentiellement spécifique des micro-organismes, permettant la croissance et éventuellement la caractérisation des micro-organismes à dénombrer, on réalise une étape supplémentaire de traitement des données relatives : . à l'aliquote de volume de liquide présent dans chaque puits, et * au nombre de puits positifs ou négatifs, afin de déterminer la concentration initiale en micro-organismes dans ledit volume de liquide initial. Selon un autre mode de réalisation, la variation capacitive est détectée par : * une variation de l'amplitude d'une tension au moyen par exemple d'un pont d'impédance, ou . une variation de la fréquence d'un signal alternatif périodique (sinusoïdal, carré, triangle ou toutes autres formes périodiques) au moyen par exemple d'un oscillateur, ou 'la recherche d'un circuit électrique de type bouchon , c'est-à-dire RLC, ou 'la variation de l'amplitude maximale de la charge d'un condensateur (constitué par le système) ou la variation de la vitesse de charge ou de décharge du condensateur (à mesurer) étant donné que T = R x C. D'une manière générale, la capacité du condensateur , constitué par le puits de carte entouré des deux électrodes, peut être détecter en insérant ce condensateur dans tout circuit électronique sensible à une variation très faible de capacitance Toujours selon un autre mode de réalisation, les étapes de détection de la capacité, ou de tout autre paramètre qui y est lié, sont réalisées en mettant sous pression entre au moins les deux électrodes et/ou entre au moins l'électrode et le plan de masse, lesdites deux électrodes et/ou lesdits électrode et plan de masse prenant en sandwich au moins un contenant. La présente invention concerne également un dispositif de contrôle de la présence ou de l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou de contrôle du remplissage d'un contenant par un volume de liquide, mettant en oeuvre un procédé, tel que décrit ci-dessus, le contenant étant parcouru par au moins un canal aboutissant à au moins un puits réceptionnant tout ou partie du liquide, le ou les canaux et le ou les puits constituant un réseau fluidique. Le dispositif est constitué de deux parties qui enserrent le contenant, une première partie qui comporte au moins un moyen d'émission électrique, par exemple un moyen pour la constitution d'une électrode reliée au circuit électronique de détection et une seconde partie qui comporte au moins un moyen de réception électrique, tel qu'une électrode reliée au circuit électronique de détection ou directement au plan de masse, les moyens d'émission et/ou de réception : * comportant eux-mêmes des moyens qui annulent les effets de bord et les courants de fuite, et * prenant en sandwich chaque puits d'un volume inférieur ou égal à 100 ml, préférentiellement inférieur ou égal à 10 ml, préférentiellement inférieur ou égal à 1 ml, sans contact avec l'aliquote de volume de liquide éventuellement présent dans chaque puits. Le plan de masse peut être défini comme étant constitué par toutes les électrodes de masse reliées ensemble et reliées à la masse de l'alimentation. Selon un autre mode de réalisation, chaque moyen d'émission comporte une électrode, chaque moyen de réception comporte une électrode, reliée à la masse, ou préférentiellement un plan de masse et les moyens qui annulent les effets de bord et les courants de fuite sont constitués par au moins un anneau de garde entourant chaque électrode. Selon un autre mode de réalisation, les moyens d'émission et de réception sont plaqués contre chaque puits pris en sandwich. Toujours selon un autre mode de réalisation qui permet le dénombrement de micro-organismes, présents dans le volume de liquide initial, par l'intermédiaire d'au moins deux puits de dimensions différentes, chaque puits contenant un même milieu, préférentiellement spécifique des micro-organismes, permettant la croissance et éventuellement la caractérisation des micro-organismes à dénombrer, les moyens d'émission et de réception associés à un puits sont adaptés en dimensions et performances à la dimension dudit puits. Selon un autre mode de réalisation, les moyens d'émission ou de réception sont pris en sandwich entre deux contenants sensiblement parallèles et permettent la mise en oeuvre d'un procédé, tel que décrit ci-dessus, simultanément ou consécutivement dans lesdits deux contenants. Selon encore un autre mode de réalisation, le ou les contenants sont en position verticale. Toujours selon un autre mode de réalisation, les moyens d'émission ou de réception sont rapprochés les uns des autres, tout en prenant en sandwich au moins un contenant, par l'intermédiaire de moyens de mise sous pression, tels qu'un galet presseur associé à un ressort. La présente invention concerne la mise en oeuvre du procédé, tel que décrit cidessus, pour contrôler la présence ou l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou contrôler le remplissage d'un contenant par un volume de liquide. La présente invention concerne également la mise en oeuvre du procédé, tel que décrit ci-dessus, pour dénombrer des micro-organismes, présents dans le volume de liquide initial. La présente invention concerne l'utilisation du dispositif, tel que décrit cidessus, pour contrôler la présence ou l'absence d'un volume de liquide dans un contenant ou contrôler le remplissage d'un contenant par un volume de liquide. La présente invention concerne aussi l'utilisation du dispositif, tel que décrit cidessus, pour dénombrer des micro-organismes, présents dans le volume de liquide initial. Les figures ci-jointes sont données à titre d'exemple explicatif et n'ont aucun caractère limitatif. Elles permettront de mieux comprendre l'invention. La figure 1 met en évidence le contexte d'utilisation d'un contenant selon la présente invention, c'est-à-dire d'une carte d'analyse. Pour ce faire, cette figure représente une vue de face d'un récipient, recevant un volume initial d'échantillon biologique, associé structurellement et fonctionnellement avec une carte d'analyse, permettant le dénombrement et la caractérisation de micro-organismes présents dans cet échantillon biologique. La figure 2 représente une vue en coupe partielle selon A-A de la figure 1, avec un grossissement de deux fois par rapport à cette première figure. La figure 3 représente une vue identique à la figure 2, mais dans laquelle la carte d'analyse est enserrée entre des électrodes de détection constituant le condensateur, qui est inséré dans le circuit électronique de détection, au niveau de chaque puits, les puits étant vides. La figure 4 représente une vue identique à la figure 3, les puits étant remplis partiellement. La figure 5 représente une vue schématique d'ensemble du dispositif de contrôle de la présence ou de l'absence du volume de liquide dans la carte d'analyse ou de contrôle du remplissage de ladite carte par ledit volume de liquide, selon un autre mode de réalisation de la présente invention. Les électrodes de masse sont dans ce cas constitués par un unique plan de masse. La figure 6 représente une vue d'un dispositif de contrôle selon l'invention sur lequel les électrodes sont appliquées avec une pression constante, pour favoriser la sensibilité et la reproductibilité de ces mesures. La figure 7 représente une vue de deux dispositifs de contrôle selon l'invention sur lequel les électrodes sont appliquées avec une pression constante, pour favoriser la sensibilité et la reproductibilité de ces mesures. Enfin, la figure 8 représente une vue d'un montage électronique d'un dispositif de contrôle selon l'invention. Si on se réfère à la figure 1, une carte d'analyse 1 est essentiellement constituée d'un seul élément monobloc constitué par le corps 2 de la carte d'analyse 1. Ce corps 2 comporte une zone d'injection 3 d'un liquide biologique à analyser 4 qui est présent initialement dans un récipient 14. Une telle carte d'analyse peut par exemple être constituée par une carte telle que décrite dans la demande de brevet WO-A-00/12674 déposée par la Demanderesse sous priorité du 1 er septembre 1998. Pour plus d'informations à ce sujet le lecteur est prié de se reporter à ce document. Il est bien entendu envisageable que le corps 2 ne soit pas monobloc, mais constitué de plusieurs parties associées les unes aux autres par tout moyen de fixation de l'état de la technique, tel que colle, moyen mécanique (vis, boulon, rivet, élastique, etc. ), soudure. De plus, la zone d'injection 3 peut être sur n'importe quelle face du corps 2 que ce soit sur le côté, comme représenté sur la figure 1, ou au verso, ou encore sur une autre paroi latérale. La carte 1 n'est pas remplie directement par l'échantillon 4, contenu dans le récipient ou tube 14, mais est relié à ce liquide 4 par l'intermédiaire d'un tuyau souple 15. L'ensemble ainsi formé est prêt à être positionné dans une chambre à vide. Le canal d'amenée 5 constitue une chicane pour que la zone d'injection 3 soit positionnée latéralement au centre du corps 2 de la carte 1, c'est-à-dire qu'elle se prolonge au sein de ladite carte 1 en direction de l'une de ses surfaces latérales. Le corps 2 est en forme sensiblement de parallélépipède. Ce corps 2 comporte un certain nombre de rainures et de cavités 9, 10 ou 11 situées en son sein. Ces cavités peuvent être constituées par des trous traversants, comme c'est le cas en figures 2 à 4, ou par des trous borgnes, selon un mode de réalisation non représenté sur les figures. L'isolement de ces rainures et de ces cavités par rapport à l'extérieur est effectué par l'application d'un film transparent adhésif 18 qui vient se coller sur la surface dudit corps 2. Le film transparent adhésif 18 est d'une utilisation intéressante car, après son perçage ou son retrait, il permet à un opérateur d'avoir un accès direct au contenu des cavités 9 à 11. En ce qui concerne les rainures, on note tout d'abord qu'il existe un canal principal d'amenée 5 qui est situé en aval de la zone d'injection 3. En aval de ce canal 5, est présent un puits 12 qui fait office de moyen de distribution principal du liquide biologique 4 à analyser. En fait, le canal principal 5 est situé entre la zone d'injection 3 et le puits 12. De la même façon, il existe des canaux secondaires 6, qui relient ce puits 12 à un ensemble de puits 7, où chaque puits 7 correspond à un canal 6. Ces puits 7 font office de moyens de distribution. Au niveau de ces puits 7, est présent un certain nombre de canaux terminaux 8, chaque canal 8 reliant un puits 7 à une cavité d'analyse terminale 9, 10 ou 11. En fait, il y a trois types de cavités d'analyse terminales sur ces figures, à savoir, des cavités d'analyse terminales 9 de grande taille, des cavités d'analyse terminales 10 de taille moyenne et enfin des cavités d'analyse terminales 11 de petite taille. On comprend donc bien que les cavités situées sur le corps 2 de la carte d'analyse 1 sont, d'une part, les rainures qui sont constituées par le canal principal 5, les canaux secondaires 6 et les canaux terminaux 8 et, d'autre part, les trous éventuellement borgnes qui sont constitués par la zone d'injection 3, le puits 12, les puits 7 et l'ensemble des cavités d'analyse 9, 10 et 11. Les cavités d'analyse 9, 10 et 11 de tailles différentes permettent de se dispenser de la nécessité d'effectuer des dilutions. Ainsi, en fonction de la quantité de liquide 4, qui sera présente dans cette cavité d'analyse 9, 10 ou 11, on aura un nombre de microorganismes qui sera plus ou moins important. En fonction du milieu de culture à ajouter, il sera donc possible de faire croître certains micro-organismes qui en fonction de leur présence ou de leur absence dans chaque cavité 9, 10 ou 11 permettront d'avoir une modification de la densité optique, l'apparition ou la disparition d'une fluorescence ou d'une couleur (effet chromogène). Ceci permettra de détecter la présence ou l'absence de micro-organisme (s) et/ou également d'effectuer une quantification. Des exemples sont exposés dans la demande de brevet WO-A-00/12674 précédemment citée. En fait, il existe également une proportionnalité entre les petites cavités 11 et les grandes cavités 9 ainsi qu'avec les cavités moyennes 10. Ainsi, le rapport existant entre deux cavités de volumes différents, sur les figures représentées, sont de 1 pour 10 entre les cavités 10 et 9 et les cavités 11 et 10 et de 1 pour 100 entre les cavités 11 et 9. Cette proportionnalité peut également se retrouver au niveau de l'ensemble des canaux 6 et 8. Un dernier point en considération de la structure de la carte d'analyse 1, tous les canaux, qu'il soient principaux 5, secondaires 6, terminaux 8, ne se croisent pas les uns avec les autres afin d'éviter toute contamination d'une quantité de l'échantillon située dans une cavité d'analyse par rapport à une quantité de l'échantillon située dans une autre cavité d'analyse. Pour se faire, les points d'intersection de ces différents canaux entre eux, sont toujours réalisés par l'intermédiaire de puits faisant office non seulement de moyen de distribution mais également de volume tampon empêchant toute contamination après l'introduction de l'échantillon 4. Le procédé de remplissage d'une carte d'analyse 1, en relation avec la figure 1, consiste donc à : 'générer une dépression au sein et/ou au voisinage de la carte 1, . relier la zone d'injection 3 de ladite carte 1 à un volume de liquide biologique 4 à analyser présent dans le récipient 14, * casser progressivement la dépression de sorte que, d'une part, le liquide biologique 4 soit transféré dans les cavités d'analyse 9, 10 et/ou l l, et, d'autre part, l'air vienne isoler les différentes fractions de l'échantillon, issues dudit liquide biologique 4, qui sont présents dans chacune desdites cavités d'analyse 9, 10 ou 11. De ce fait, une fois que la dépression est cassée, l'air vient en contact avec les fractions de l'échantillon biologique 4, soit au niveau des canaux terminaux 8 selon la figure 1, soit au niveau des cavités d'analyse 9, 10 et 11. Ceci créé une séparation physique entre les bactéries. Bien entendu, ceci n'est réalisable que si le volume de liquide biologique 4 est en rapport avec le volume total des cavités d'analyse 9, 10 et 11 ainsi qu'éventuellement du volume des canaux terminaux 8. En lieu et place de l'air, on peut utiliser n'importe quel fluide, gazeux ou liquide, qui pourra assurer cette fonction d'isolement. Il y a lieu de veiller à cette occasion à ce que le fluide soit substantiellement inerte par rapport aux composés biologiques contenus dans l'échantillon, et non miscible avec ledit échantillon. Si le fluide est un liquide, comme par exemple de l'huile, il doit être d'une densité plus faible que l'échantillon biologique. Dans ce cas, la carte 1 doit être maintenue sensiblement en position verticale, comme représenté en figures 1 à 4, le fluide isolant, non représenté sur les figures, étant en position supérieure à l'échantillon biologique, contenu préalablement dans le récipient 14 puis dans chaque cavité 9, 10 et 11. Mais il est possible d'utiliser d'autres techniques pour isoler ou séparer physiquement les cavités 9, 10 et 11. Ainsi, on peut ajouter à l'échantillon biologique 4 et au milieu de culture, permettant la croissance microbienne, un gélifiant, tel que de la peptine. Dans ce cas et lorsque le gélifiant a fait son oeuvre, il n'y a plus de nécessité à maintenir la carte 1 en position sensiblement verticale. Enfin, l'isolement desdites cavités 9, 10 et 11 peut être réalisé par l'obstruction des canaux terminaux 8. On peut utiliser par exemple une colle comme fluide isolant, ou on peut les obstruer par une compression physique. Il est donc évident que le contrôle stricte du volume d'échantillon 4 qui est transféré dudit récipient 14 vers la carte 1 est d'une très grande importance. C'est l'objet de la présente invention d'assurer un contrôle très stricte des volumes de liquide 4 réparti entre les cavités 9, 10 et 11. Un autre avantage consiste à ne pas conserver, ou très peu, de liquide 4 au sein du récipient 14 après le transfert vers ladite carte 1. Ceci a fait l'objet d'un dépôt de demande de brevet FR01/09328 déposée le 13 juillet 2001 par la Demanderesse. Le lecteur peut se référer à ce document pour plus d'information à ce sujet. Le remplissage des cavités 9, 10 et 11 s'effectue simultanément, d'ailleurs, à un instant du remplissage donné, le rapport entre le volume de liquide présent dans chaque taille de cavité petite, moyenne ou grande sur le volume total de chaque taille de cavité, respectivement petite, moyenne ou grande, est sensiblement constant pour la totalité des cavités 9, 10 et 11 de la carte 1. Ladite carte 1, selon la figure 1, permet de dénombrer les micro-organismes contenus dans un échantillon biologique 4 et peut être utilisée dans le domaine alimentaire. Pour effectuer ce dénombrement, on calcule le nombre le plus probable (NPP) de bactéries dans un échantillon par une méthode statistique, expliquée par R. J. Pamow (1972). Ainsi, on associe la probabilité d'apparition à chaque combinaison de positif (s). On utilise pour cela la méthode de J. C. De Man (1975). Il est bien entendu possible d'avoir une carte d'analyse semblable du point de vue du concept général mais différente sur certains détails, par exemple une carte qui comporte quatre, cinq tailles différentes de cavités, voire plus, et ce afin d'augmenter le champ d'investigation de la carte. Bien entendu, il est possible de faire de la numération d'autres entités biologiques que les bactéries, telles que les acides nucléiques (ADN ou ARN), les anticorps, les antigènes. La révélation peut être réalisée par des anticorps anti-entités biologiques qui sont marqués. Le volume total des cavités 9, 10 et 11 étant de 4440 J. 11, le volume de l'échantillon 4 étant de 2220 J. 11, le volume du liquide isolant pourra être de 2220 J. 11. Il pourra être inférieur si l'on désire qu'il y ait de l'air dans la carte 1 une fois scellée, ou supérieur si l'on veut être sûr du remplissage complet de la carte par l'échantillon 4 et le liquide isolant. Dans ce dernier cas, cette technique peut être intéressante pour la croissance de micro-organismes anaérobies. Afin dans un premier temps, de déterminer assez précisément le volume de l'échantillon 4 qui a été transféré dans la carte 1, il est donc aisé de comprendre que, lorsque le transfert de l'échantillon 4 s'effectue, le prélèvement a lieu, dans un premier temps, au niveau dudit échantillon 4. C'est donc le niveau de l'échantillon 4 qui diminue jusqu'à ce que l'extrémité libre 17 du tuyau souple 15 se retrouve dans le fluide isolant. C'est alors, dans un second temps, ce fluide qui est transféré vers la carte 1. La figure 2 représente une coupe selon A-A de la figure 1, dans laquelle les cavités 9, 10 et 11 sont constituées par des trous traversants. Ces trous sont délimités latéralement par un ou deux films 18. Ce ou ces films 18 sont constitués de films BOPP (Biaxially Oriented PolyPropylen) ou autres films de même nature, qui sont soudés ou collés sur le corps de la carte 1, ce corps étant inerte par rapport aux liquides 4 transférés et aux réactions qu'ils subissent. Ce ou ces films 18 peuvent être présents sur toute la surface de la carte 1, ou sur certaines portions de ladite carte 1. Le dispositif selon la présente invention est représenté par exemple selon un premier mode de réalisation à la figure 3. Cette figure 3 est identique à la coupe A-A de la figure 2, pour ce qui concerne la carte 1 qui est donc constituée par un corps 2 définissant un certain nombre de trous traversants formant des cavités de petite taille 11, de taille moyenne 10 et de grande taille 9. L'ensemble de ces cavités traversantes est délimité latéralement par les films 18. On remarque sur cette figure 3 que les cavités 9,10 et Il ne sont pas remplies, néanmoins le dispositif est schématiquement représenté. Dans ce contexte, on note que les puits traversants sont en contact indirect via le film 18 avec des électrodes représentées, d'une part, à gauche et, d'autre part, à droite de la figure. Les électrodes de gauche, qui constituent les électrodes du condensateur de détection, peuvent être constituées par des électrodes de grande superficie 19a correspondant aux cavités d'analyse terminales de grande taille 9 ou bien des électrodes de moyenne superficie 20a correspondant aux cavités d'analyse terminales de taille moyenne 10 ou enfin des électrodes de petite superficie 2 la correspondant aux cavités d'analyse terminales de petite taille 11. De la même façon, les moyens de réception sont constitués par des électrodes de grande superficie 19b pour les cavités 9, des électrodes de moyenne superficie 20b pour les cavités d'analyse 10 et enfin des électrodes de petite superficie 21b pour les cavités de petite taille 11. Toutes ces électrodes 19a, 20a et 21a, d'une part, 19b, 20b ou 21b, d'autre part, sont reliées par des liaisons filaires électriques 16 à une installation électrique 13 comme ceci sera explicité dans la suite de la description. La figure 4 est absolument identique à la figure 3, à la seule différence que le remplissage de la carte 1 par un échantillon biologique 4 a été réalisé, selon le mode de réalisation représenté à la figure 1. Sur cette figure 4, il y a donc présence au niveau de l'ensemble des cavités 9,10 et 11 de liquide 4 correspondant à des aliquotes de l'échantillon biologique à analyser 4 qui se sont répartis de manière sensiblement proportionnelle en fonction de la taille des cavités où ils sont réceptionnés. La figure 5 décrit un autre mode de réalisation qui comporte principalement comme différence de regrouper l'ensemble des électrodes quelque soit la face considérée. Ainsi, en ce qui concerne la première face, l'ensemble des électrodes 19a, 20a et 2 la sont portées au niveau d'une première partie 22. Cette première partie 22 est donc munie d'électrodes sensiblement de forme identique à la section des cavités 9,10 et 11 selon le plan de la carte 1, néanmoins la forme de ces électrodes peut être rectangulaire. Ces électrodes 19a, 20a et 2 la sont déposées par sérigraphie ou constituées de plaques métalliques assemblées. Chaque électrode est réalisée au niveau d'une des faces de la première partie 22, partie 22 qui peut également porter les composants comportant des circuits de détection répétés à l'identique pour chaque électrode, l'ensemble étant muni d'un connecteur pour s'insérer dans le circuit électrique déjà succinctement évoqué par l'intermédiaire de l'installation électrique 13 et des liaisons filaires 16. En fait, les électrodes mentionnées plus haut 19a, 20a et 21 a et les composants électroniques permettant leur fonctionnement, peuvent être portés par la partie 22, c'est-à-dire sur une seule et unique carte, sur l'une ou sur les deux faces de celle-ci 22, mais également portés par deux cartes différentes reliées l'une à l'autre par de nouvelles liaisons filaires 16. Les circuits électroniques de détection peuvent être de différents types tels que ceux évoqués ci-dessous : 'mesure basée sur la modification de la fréquence d'un oscillateur par la capacité d'entrée, constitué par le condensateur formé par les électrodes autour du puits, * mesure du courant de déséquilibre d'un pont, dans ce cas, la mesure du courant est généralement préférable pour les mesures de capacité du fait de l'impédance des appareils de mesure qui n'est pas négligeable, . mesure d'un décalage de phase entre deux signaux alternatifs, 'mesure de la tension aux bornes d'un circuit résonnant, tel que circuit bouchon RLC, oscillateur à quartz, 'mesure de la tension en sortie d'un filtre passe-bas du troisième, quatrième ordre ou plus, dont la fréquence de coupure est calée sur la capacité à vide du puits de la carte. En fait, la variation de capacité des cavités 9,10 et 11 peut être détectée selon deux principes fondamentaux, soit la variation de l'amplitude d'une tension au moyen d'un pont d'impédance, soit la variation de la fréquence d'un signal via un oscillateur 27, comme cela est bien représenté sur la figure 5. Sur la figure 5, on remarque également que les électrodes 19b, 20b ou 21b sont solidarisées les unes aux autres pour constituer un seul et unique plan de masse 23 sur lequel la carte 1 est positionnée. Bien entendu, qu'il s'agisse du plan de masse 23 ou l'ensemble des électrodes de la première partie 22, tous ces éléments sont reliés par des liaisons filaires 16 à un circuit électrique constitué d'une alimentation électrique 26, d'un oscillateur 27 déjà évoqué et d'un oscilloscope 28. L'oscillateur 27 est relié à la masse par l'intermédiaire d'une mise à la masse 29. Sur cette figure, on remarque que la liaison filaire 16 avec les électrodes 19a, 20a et 21a n'est représentée qu'avec une seule électrode 19a de grande superficie. Néanmoins, il est bien évident que l'ensemble des électrodes est relié soit l'oscillateur 27, comme c'est le cas sur cette figure, avec un moyen de commutation permettant de sélectionner successivement l'électrode et donc le puits à contrôler, soit à autant d'oscillateur qu'il existe d'électrodes de mesure. Contrairement au mode de réalisation de la carte 1, selon les figures 1 à 4, où le transfert de liquide utilise la mise sous vide de l'ensemble du réseau fluidique de ladite carte 1, qui conserve toutefois la même référence pour ne pas compliquer plus avant ce descriptif, le procédé d'utilisation de la carte 1, selon la figure 5, est d'un tout autre ordre puisqu'il utilise pour transférer l'échantillon liquide 4, un moyen d'introduction dudit liquide 4 qui est constitué par une seringue 24. Cette seringue 24 est reliée par un tuyau souple, non référence sur cette figure, à un orifice d'introduction 30 dans la carte 1 du liquide 4. Pour que l'air emprisonné dans le réseau fluidique de la carte 1 n'empêche pas l'introduction du liquide 4, un évent 25 est pratiqué au sein de la carte 1, éventuellement au travers du film 18 si celui-ci est présent, qui fait office de moyen d'évacuation du fluide présent à l'intérieur de la carte avant que le liquide 4 ne soit introduit. Ce mode de réalisation est particulièrement intéressant pour permettre le remplissage à volonté des puits afin de vérifier la variation de mesure en fonction du niveau de remplissage. Les deux dernières figures 6 à 7 reprennent le mode d'utilisation de la carte 1 selon les figures 1 à 4, c'est-à-dire avec une introduction du liquide 4 après une mise sous vide du réseau fluidique de celle-ci 1. Néanmoins, il s'agit de deux modes de réalisation différents du dispositif. Selon la figure 6, le dispositif est constitué d'une première et d'une deuxième partie 22 et 23 portant les ensembles des électrodes respectivement de la première face 19a, 20a et 2 la ou de la seconde face 19b, 20b ou 21b. Ces deux parties 22 et 23 prennent en sandwich la carte 1 tout en maintenant chaque électrode 19a, 20a et 2 la en vis à vis d'une électrode de la seconde face de dimension identique 19b, 20b ou 21b. Sur ce mode de réalisation, on constate que le dispositif est constitué essentiellement par le bâti 33. Le bâti 33 comporte donc deux parois verticales droite et gauche sur cette figure, le bâti droit 33 fait office de support pour la seconde partie 23 comportant les électrodes 19b, 20b ou 21b. Par contre, entre le bâti 33 situé à gauche et la première partie 22 comportant les électrodes 19a, 20a et 21 la, est présent un galet presseur 31, qui est lui-même solidaire du bâti 33 par l'intermédiaire de ressort 32. Cette configuration permet d'avoir une pression sur le sandwich constitué par les première et deuxième parties 22 et 23 et la carte 1. Cette configuration a pour objectif principal d'améliorer encore les mesures qui sont effectuées et également d'éviter toute erreur ultérieure d'analyse. Bien entendu, l'ensemble des électrodes est relié par des liaisons filaires 16 à l'installation électrique 13, déjà décrite en relation avec la figure 5. A l'instar de cette figure 5, on notera que pour faciliter la compréhension de la figure, l'ensemble des liaisons filaires 16 avec l'ensemble des électrodes n'est pas représenté. C'est également le cas sur la figure 7 qui présente un autre mode de réalisation. Ce mode de réalisation est constitué par un dispositif comportant un bâti 33 qui n'est pas en contact direct avec les électrodes ou avec les cartes 1. Selon le mode de réalisation représenté deux cartes 1 sont remplies et peuvent être lues. Ainsi, le bâti 33, que ce soit à droite ou à gauche, est associé à des ressorts 32 qui eux-mêmes sont associés à un galet presseur 34 situé à gauche et à un galet presseur 34 situé à droite. Ces galets presseurs 34 ont pour caractéristiques de faire office de plan de masse 34, c'est-à-dire qu'ils font office de moyens de réception électrique. De ce fait, ils sont chacuns en contact direct avec une carte 1, les deux cartes 1 étant séparées par une première partie 22 où les électrodes 19a, 20a et 2 la sont identiques pour les cartes d'analyse 1 situées de part et d'autre. Il est tout à fait envisageable d'augmenter la taille de ce sandwich pour pouvoir réaliser alternativement ou simultanément des analyses d'au moins trois cartes. Exemple 1 : Evaluation de la détection du remplissage de puits de petits volumes, pouvant être différents, au sein d'une carte par mesure de la variation de capacitance (sans contact avec le liquide) : 1 ) Protocole (matériel) : 'Carte de test : carte en polystyrène avec un puits d'environ 4 x 3 x 4 mm (largeur x longueur x épaisseur), * Carte 1 référence Pl 1-20 (A03), selon la demande de brevet FR98/11053 déposée le 1 er septembre 1998 par la Demanderesse, * Film aluminium autocollant (Scotch 425,3M, référence 612975, fournisseur Radiospare, Beauvais, France), * Seringue 24, tubes silicone, raccords, pâte silicone pour étanchéité, * Eau distillée colorée à l'orange G, 'Potence de maintien de la carte, Multimètre Fluck 85 (Multimètre fournisseur Radiospare), 'ScopeMeter Fluck 96B (Scopemètre ou oscilloscope portable fournisseur Radiospare), Alimentation en tension 0 à 30 Volts de laboratoire (bioMérieux, Marcy l'Etoile, France, référence ? 01809), # Carte électronique de détection (capacitive), selon la figure 8, 2 ) Protocole (méthode) : 1. Calcul des ordres de grandeur, 2. Essai sur la carte de test en polystyrène choc muni d'une cavité de 4 x 3 x 4 mm soit 48 ut, 3. Essai sur la carte référencée 1, Pour chaque montage, la cavité sous test est fermée par un film adhésif. Une languette de film aluminium autocollant (formant l'électrode de mesure) est positionnée sur le film adhésif au dessous de la cavité sous test. Pour chaque essai, la méthode consiste à avoir une entrée et une sortie fluidique permettant de remplir et vidanger à volonté la cavité sous test. A chaque remplissage et vidange, on note la variation de fréquence ou de tension résultant de la présence ou de l'absence de liquide. 3 ) Résultats : Le résultat principal à obtenir est de conclure sur la possibilité de réaliser une détection de puits vides ou pleins par mesure de capacitance. A-Calcul des ordres de grandeur : Les calculs réalisés permettent d'évaluer la variation de capacité du condensateur formé par le puits fermé par le film BOPP et les deux électrodes constituées par les deux rectangles de film aluminium autocollant. La capacité équivalente Ceq de la cellule de test, en tenant compte des différentes couches, est donnée par la formule : 1 1 efilm epwts e aroi S+ p S] [iljm-+ 7aroi. S C, eq w sair. S (l-x) + sliq. S. xaroi. avec :-film, sparoi : permittivité relative du film BOPP (polypropylène) et du plastique (polystyrène), - sair : permittivité relative de l'air, - eliq : permittivité relative du liquide, - S : surface des électrodes, - eparoi : épaisseur de la paroi plastique, - efilm : épaisseur du film BOPP, - epuits : profondeur du puits, et - x : % de remplissage du puits (0 sachant que :-permittivité relative de l'air = 1, - permittivité relative du polypropylène et polystyrène-2, - permittivité relative de l'eau pure-81, et - permittivité du vide so = 10-9 1 367t. La permittivité des liquides testées est proche de 81. La bibliographie donne des valeurs variant de 81 pour l'eau pure à 2 pour les huiles minérales, en passant par des valeurs situées entre 40 et 20 pour le glycol, l'alcool méthylique et à partir de la formule ci-dessus, on peut estimer la capacité équivalente dans les deux cas (puits vide et puits plein) : e puits vide : x = 0 d'où Ceq-6, 15. 10-14 F, et 'puits plein : x = 1 d'où Ceq-3, 33. 10-12 F. Pour la cellule de test de 48 ill, la variation théorique de capacité est AC-3, 27 pF. Ceci est faible mais doit pouvoir être détecté par un montage électronique adapté. Le tableau 1 ci-dessous donne les valeurs théoriques de variation de capacité pour les puits des cartes telles que celles représentées à la figure 1 : Configuration Puits (144 l) Puits (30 l) Puits (2, 875 l) Longueur Electrodes (m) 3,40. 10-02 1,10.10-02 7, 00. 10-03 Largeur Electrodes (m) 6, 00.10-03 5, 00. 10-03 4, 00. 10-03 Surface Electrodes (m2) 0, 000204 0, 000055 0, 000028 Distance entre électrodes (m) 4,03. 10-03 4, 03. 10-03 4, 03. 10-03 Epaisseur film BOPP (m) 2,50. 10-05 2, 50. 10-05 2, 50. 10-05 Profondeur paroi (m) 1,30. 10-03 1, 30. 10-03 1, 30. 10-03 Profondeur puits (m) 2,70. 10-03 2, 70. 10-03 2, 70. 10-03 Permittivité El (paroi) 2 2 2 permittivité E2 (film) 2 2 2 Permittivité E3 du liquide 40 40 40 Permittivité vide EO 8, 84192. 10-12 8, 84192. 10-12 8, 84192. 10-12 Capacité film 1, 443E. 10-10 3, 89045. 10-tel 1, 98059. 10-11 Capacité paroi 2, 775. 10-12 7, 48163. 10-13 3,80883. 10-13 Capacité puits vide 5. 36. 10-13 1,45.10-13 7, 36. 10-14 Remplissage (0 à 100 %) 100% 100% 100% Capacité puits rempli 2, 67222. 10-11 7,20453. 10-12 3,66776. 10-12 Capacité théorique (F) 2,47. 10-12 6, 66. 10-'3 3, 39. 10-13 Variation de Capacité (pF) 1,93 0,52 0,27 Tableau 1 : Calcul de la variation de capacité entre un puits vide (air) et un puits plein (liquide) Les variations de capacité à détecter sont donc de l'ordre du picofarad, ce qui impose une électronique très sensible et bien protégée par rapport aux phénomènes parasites. B-Essai sur un unique puits de cellule de test : B. l-Mesure par détection directe de capacitance : Des premiers essais sommaires de détection directe de capacitance ont été réalisés avec un multimètre ayant la fonction de capacimètre. La sensibilité du multimètre n'a pas permis de mesurer une variation de capacité entre un puits vide et un puits plein. La mesure directe serait peut être possible avec un capacimètre ayant une sensibilité de l'ordre du picofarad. B. 2-Mesure de variation de la fréquence par un oscillateur : Le schéma de montage correspond sensiblement aux figures 6 et 7, mais avec un seul puits en position horizontale, et consiste à tester une configuration de détection avec deux électrodes (film aluminium collé sur la carte en polystyrène ou avec une seule électrode et un plan de masse. L'électrode est reliée à l'entrée du circuit oscillateur et la sortie de l'oscillateur à un oscilloscope permettant une mesure de fréquence. Les dimensions du puits de la cellule de test sont de 4 x 3 x 4 mm (longueur x largeur x profondeur). Le volume du puits testé est de 48 gl ce qui représente un volume quinze fois plus grand que le volume du plus petit puits des cartes 1 (2, 875 ul). Cet essai a été réalisé avec un oscillateur selon le montage reproduit en figure 8. Les résultats des mesures sont présentés dans le tableau 2 ci-dessous : Montage à une électrode et un Montage à deux électrodes plan de masse Mesure ? Fréquence (kHz) Fréquence (kHz) Fréquence (kHz) Fréquence (kHz) avec puits vide avec puits plein avec puits vide avec puits plein 1 70, 36 69, 07 65, 86 64, 66 2 70, 10 69, 11 65, 65 64, 61 3 69, 58* 69, 12 65, 74 64, 57 4 69, 79 69, 07 65, 60 64, 43 5 69, 72 69, 06 65, 48 64, 42 669, 8465, 36 Moyenne 69, 9 69, 09 65, 61 64, 54 CV 0,26 0,024 0,16 0,097 #f 0,81 kHz 1,07kHz * : Présence d'une bulle, puits non vidangé correctement. La fréquence d'oscillation se situe donc entre les deux fréquences à vide (environ 70 kHz), d'une part, et à plein (environ 69 kHz), d'autre part. Tableau 2 : Variation de la fréquence entre un puits vide et un puits plein selon deux configurations différentes en utilisant le montage décrit dans la figure 8 La variation de fréquence Af est d'environ 0,8 kHz et 1 kHz respectivement pour le montage à deux électrodes et le montage à une électrode et un plan de masse. Pour les essais, le puits est en position horizontale. D'autre part, la fréquence dans chaque état est stable et varie d'environ 0, 05 kHz dans la configuration testée. Ces résultats montrent que les montages en oscillateur sont assez sensibles et suffisamment stables pour observer une différence de fréquence lorsque le puits se remplit. Les résultats avec l'oscillateur, selon ce montage, sont bons car stables et avec une déviation en fréquence assez étendue. C'est ce type d'oscillateur qui sera utilisé ultérieurement. L'utilisation d'un plan de masse est plus intéressante au niveau des mesures et au niveau de la facilité de mise en oeuvre du contrôle des volumes de manière automatique. C'est ce type de configuration qui sera utilisé ultérieurement. Exemple 2 : Essai sur la carte d'analyse 1 : 1 ) Mesure de variation de fréquence d'oscillation pour chaque type de puits et pour différents liquides : La carte d'analyse 1 testée comprend des volumes de puits (grand, moyen et petit) qui sont respectivement égaux à 225 ul, 22,5 cl et 2,25 ul Le montage est représenté par la figure 5. La position verticale de la carte permet de faciliter le remplissage du puits sous test. Toutes les masses sont reliées. Les tests ont été réalisés avec trois liquides différents : eau distillée colorée avec de l'orange G, eau peptonée tamponnée (42-042) Lot 740661901 (bioMérieux, Marcy l'Etoile, France), et e tryptone sel (42-076) Lot 740493801 (bioMérieux, Marcy l'Etoile, France). A-Mesure sur un puits de 225 ul (grand) : Le tableau 3 ci-dessous donne les résultats suivants pour les grands puits et pour les trois liquides différents ci-dessus mentionnés : Eau peptonée Eau distillée colorée Tryptone Sel tamponnée Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Mesure NO (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec puits vide puits plein puits vide puits plein puits vide puits plein 1 62, 43 55, 04 62, 41 52,15 59,32 52,14 2 62,82 55,86 60,06 52,19 59,20 52,16 3 62,76 55, 18 59,70 52,30 59,22 52,20 4 62,62 55, 10 59,43 52,22 59,23 52, 21 5 62,59 55, 18 59,24 52, 18 59,25 52, 21 6 62, 54-59, 26-59, 20 Moyenne 62, 63 55,3 60,02 52,21 59,24 52,18 cl 0, 13 0,3 1,1 0,05 0,04 0,03 AFréquence 7, 33 kHz 7, 81 kHz 7, 06 kHz Tableau 3 : Mesure de variation de fréquence d'oscillation pour le puits de 225 ul La variation de fréquence devant être linéaire, on a donc une variation de fréquence d'environ 35 Hertz par micro litre (Hz/1). B-Mesure sur un puits de 22, 5 J. l (moyen) : Le tableau 4 ci-dessous donne les résultats suivants pour les puits moyens et pour les trois liquides différents ci-dessus mentionnés : Eau peptonée Eau distillée colorée Tryptone Sel tamponnée Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Mesure N (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec puits vide puits plein puits vide puits plein puits vide puits plein 1 70,84 67,07 70,94 67,15 70,56 66,70 2 70,74 67,08 70,98 67,14 70,57 66,53 3 70,83 67,08 70,99 67,44* 70,48 66,48 4 70,79 67,23* 70,96 67,19 70,48 67,67 5 70,82 67,48* 70,93 67,17 70,79 67,12 6 70,83 -- 70,95 -- 70,72 -Moyenne 70,81 67,19 70,96 67,22 70,6 66,9 CV 0,034 0,157 0,02 0,11 0,12 0,45 #Fréquence 3,62 kHz 3,74 kHz 3,7 kHz * : Présence d'une bulle, puits non vidangé complètement. Tableau 4 : Mesure de variation de fréquence d'oscillation pour le puits de 22,5 u. l La variation de fréquence devant être linéaire, on a donc une variation de fréquence d'environ 165 Hz/u.l. C-Mesure sur un puits de 2. 25 jl (petit) : Le tableau 5 ci-dessous donne les résultats suivants pour les petits puits et pour les trois liquides différents ci-dessus mentionnés : Eau peptonée Eau distillée colorée Tryptone Sel tamponnée Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Fréquence Mesure N (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec (kHz) avec puits vide puits plein puits vide puits plein puits vide puits plein 1 70,76 69,29 70,48 69,21 70,32 69,08 2 70,77 69,37 70,43 69,17 70,33 69,10 3 70,46 69,32 70,38 69,26 70,47 69,14 4 70,44 69,29 70,34 68,89 70,29 69,10 5 70,40 69,33 70,32 69,08 70,47 69,12 6 70,46 -- 70,33 -- 70,50 -Moyenne 70,55 69,32 70,38 69,12 70,4 69,11 CV 0,15 0,03 0,06 0,13 0,08 0,02 #Fréquence 1,23 kHz 1,26 kHz 1,29 kHz Tableau 5 : Mesure de variation de fréquence d'oscillation pour le puits de 2,25 u. l La variation de fréquence devant être linéaire, on a donc une variation de fréquence d'environ 555 Hz/ul. 2 ) Mesure de la stabilité de la fréquence d'oscillation pour les puits de taille moyenne : Le tableau 6 ci-dessous donne les résultats suivants pour les puits de taille moyenne. La même stabilité a été constatée pour les puits d'autres tailles : Temps (mn) Fréquence (kHz) puits vide Fréquence (kHz) puits vide 0 mn 70,72 67, 46 1 mn 70, 77 67, 49 2mu70, 8167, 53 3mu70, 8367, 55 4mu70, 8667, 56 5 mn 70,89 67,60 Tableau 6 : Mesure de la dérive en fréquence de l'oscillateur pour les puits de 22,5 ul Lors de la mesure de la variation en fréquence de l'oscillateur après 5 minutes lorsque le puits est plein ou vide, on constate une légère variation dans le temps. Toutefois la stabilité de la fréquence d'oscillation est suffisante pour discriminer les deux états. Exemple 3 : Configuration du dispositif de contrôle de la présence ou de l'absence d'un volume de liquide ou de remplissage par un liquide d'une carte d'analyse : Le dispositif de contrôle de remplissage est schématisé sur les figures. Toutefois, il peut être constitué de l'assemblage de deux cartes : * une carte portant les électrodes : Cette carte est munie d'électrodes rectangulaires (déposées par sérigraphie ou constituées de plaques métalliques par exemple). Chaque électrode est reliée à la face opposée de la carte puis à la carte composants . La référence 22 de la figure 5 est tout a fait dans cet esprit. Cette carte peut être montée sur la carte composants de manière élastique (ressorts) afin de permettre un bon contact entre les électrodes et le film de la carte d'analyse 1. De tels montages élastiques sont bien décrits en figures 6 et 7. 'une carte portant les composants : si une face de ladite carte comprend trente puits, on peut avoir trente circuits identiques montés en CMS, c'est-à-dire en composants montés en surface, pour des séries. Ceci permet de limiter les capacités et inductances parasites et de stabiliser l'influence de ces signaux parasites. Les signaux de sortie (connecteur) sont envoyés sur un module d'acquisition et traitement intégré dans un ordinateur. Si le câblage de la carte composant peut s'effectuer en simple face, les deux cartes peuvent être réunies sur une seule carte (une face électrode et une face composants). Ainsi, la carte électrodes peut avoir environ les mêmes dimensions que la carte 1 à contrôler soit environ 90 x 60 mm. La carte composants , qui peut être plus grande, peut être fixée sur la carte Electrodes de manière à réduire au maximum les fils de liaison. Exemple 4 : Procédure de contrôle : La procédure de contrôle de volume peut être réalisée avec les étapes successives suivantes : * CALIBRAGE : Mesure des valeurs sorties (fréquence ou tension) de chaque circuit de détection sur la carte d'analyse en faisant varier le niveau de remplissage. 'CONTROL : Mesure des valeurs sorties (fréquence ou tension) de chaque circuit de détection après remplissage de ladite carte. * TEST : Comparaison de la variation de fréquence mesurée à la variation de fréquence issue du calibrage, ce qui donne le niveau de remplissage. . RESULTAT : Rejet si le niveau de remplissage inférieur à 90 % par exemple, et acceptation si ce niveau est supérieur à ce pourcentage. Si la mesure est suffisamment robuste, le calibrage des cartes de contrôle peut s'effectuer à intervalle régulier mais sans nécessité de la faire sur un étalon avant chaque mesure. Le contrôle de remplissage peut également s'effectuer en temps réel dans la cloche de remplissage. Exemple 5 : Montage pour le contrôle de remplissage des cartes dans le dispositif de contrôle : Un mode particulièrement intéressant est présenté en figure 6. On peut par exemple effectuer successivement deux procédés selon l'invention, après remplissage. Ainsi, les cartes peuvent être contrôlées en deux fois, sans avoir à faire pivoter la carte mais simplement en la faisant coulisser. Ladite carte est poussée dans le bloc de contrôle de la première face (configuration de la figure 5) puis dans le bloc de contrôle de la seconde face (configuration inverse des électrodes et du plan de masse que sur la figure 6). Exemple 6 : Exemple montrant une détection d'une variation de remplissage dans un puits : 1 ) But et principe : Le but est de réaliser une carte électronique de contrôle de volume dans les puits de la carte d'analyse 1. Cette carte électronique, qui a été prise comme modèle pour la faisabilité, consiste en une carte en matériau épen matériau oxy sur laquelle est gravée, d'un côté les électrodes de détection (une par puits soit trente en tout) qui forment une des deux électrodes du condensateur mesuré, de l'autre les composants CMS (un amplificateur opérationnel et une résistance) permettant à la fois d'injecter le signal sinusoïdale d'entrée et de sortie et de déporter le signal de sortie sans subir de perturbations électromagnétiques via des fils de liaison vers l'électronique de démodulation (forte impédance d'entrée de l'amplificateur). Pour mémoire, le principe consiste à détecter la variation de capacité du condensateur formé par l'électrode de mesure (sur la carte de contrôle) et par le plan de masse. La permittivité des liquides (Ede 40 à 81 environ) étant très différente de celle de l'air (E - 1), le remplissage du puits, qui constitue le diélectrique du condensateur, entraîne une variation de capacité, car au premier ordre on a : C = soer. S/d. De plus, afin d'éviter les courants de fuite et l'influence de toutes les capacités parasites environnantes, chaque électrode est munie d'une électrode de garde. Ceci permet également de limiter fortement les effets de bord des électrodes de mesure. Les figures 5 et, plus précisément 8 donne le schéma de montage du banc de tests. La carte de contrôle électronique est simplement appliquée sur la carte d'analyse et est maintenue solidaire par un clip. Des repères de positionnement sont présents sur la carte d'analyse, de manière à positionner aussi parfaitement que possible les électrodes réalisées en sérigraphie sur les puits de ladite carte. 20) Matériel et méthode : 2.1 Matériel : 'Carte d'analyse décrite en 1 ), * Carte électronique de contrôle, voir figures 5 et, plus précisément 8, e Oscilloscope Philips PM3335,50MHz (Hollande), * Générateur de fonction HP 33l20A, * Pousse-seringue Kd scientific (Bioblock, France), 'Alimentation de laboratoire (bioMérieux) * Seringue (Terumo lml ou Hamilton 50nul) (Bioblock), tubes silicone, raccords, 'Eau distillée colorée à l'orange G, eau peptonnée tamponnée Lot 42042 et 42043, * Plaque métallique en fer pour le plan de masse, 'Potence de maintien de la carte d'analyse. 2.2 Méthode : Elle consiste à : * réaliser le montage du banc de test comme décrit aux figures 5 et, plus précisément 8, en reliant l'ensemble des masses, 'remplir la seringue avec le liquide à injecter dans le puits, * mettre en place, sur le support, la carte d'analyse, pour permettre l'injection directement de liquide dans un seul puits (petit, moyen ou grand) et raccorder les tubulures d'injection à la seringue placée sur le pousse-seringue, * appliquer la carte électronique de contrôle sur la carte d'analyse, en alignant les deux coins en haut à gauche des cartes et fixer l'ensemble par pression par un clip non métallique. Les électrodes, réalisées par sérigraphie, doivent être en contact intime avec le film BOPP de la carte d'analyse, 'régler le générateur de fonction pour injecter un signal d'entrée Ve sinusoïdale, F = 1 kHz et Vecc (tension d'entrée crête à crête) = 1 V, # visualiser sur l'oscilloscope le signal de sortie de l'oscillateur Vs (sinusoïdale), * le puits étant vide, rechercher la fréquence de résonance (amplitude maximum) du signal Vs (tension sortie) en jouant sur le fréquence du signal Ve et noter la valeur de fréquence, 'injecter un volume de liquide dans le puits, w rechercher la nouvelle fréquence de résonance qui doit être inférieure à la fréquence précédente en recherchant toujours le maximum d'amplitude de Vs, e recommencer les deux étapes précédentes jusqu'à remplir entièrement le puits, et e établir la courbe de Fr (Fréquence de résonance) en fonction du volume, sur plusieurs essais (volume injecté) pour vérifier que la détection est reproductible. 3 ) Résultats : Nous avons travaillé sur des puits de grande taille, la température du laboratoire était à 22 C et le liquide injecté était de l'eau peptonée tamponnée. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 7 ci-dessous. Fréquence de résonance (kHz) Volume (jut) Essai 1 Essai 2 Essai 3 Essai 4 Essai 5 Essai 6 0 35 30,8 30,2 33,2 34,8 30,4 40 29,6 29,5 29,2 28,8 29,6 28,9 80 28,2 28,3 27,9 27,5 28,2 27, 8 120 27,4 27,4 26,8 26,5 27,3 27,2 160 27,2 26,6 26,2 25,7 26,5 26,5 200 25,8 25,9 25,7 25,3 26 25,7 240 25,3 25, 5 24,8 24,6 25,3 25,4 280 24. 3 24. 6 24. 1 22. 7 24. 5 24. 5 320 23. 7 22. 9 23. 1 22. 8 23 22. 8 Tableau 7 : Variation de la fréquence de résonance de l'oscillateur (démodulation) en fonction du niveau de remplissage du grand puits. CONCLUSION Les mesures réalisées montrent que la détection de variation de capacité sans contact avec le liquide est possible pour détecter la présence ou l'absence d'un liquide dans un puits. De plus, sur la carte d'analyse 1, on obtient les variations de fréquence d'oscillation suivantes entre un puits vide et un puits plein : Puits de 225 ul : AF-7, 5 kHz Puits de 22, 5 ni : AF-3, 7 kHz Puits de 2,25 1 : AF-1, 25 kHz Pour les trois liquides testés (dont deux sont les tampons de dilution des matrices), la détection est possible dans les trois puits et les valeurs de DF mesurées sont proches. REFERENCES 1. Contenant ou carte d'analyse 2. Corps de la carte d'analyse 1 3. Zone d'injection dans la carte 1 i 4. Liquide ou échantillon biologique à analyser 5. Canal principal d'amenée 6. Canaux secondaires 7. Puits correspondant à chaque canal 6 ou moyen de distribution 8. Canaux terminaux 9. Cavités d'analyse terminales, de grande taille, correspondant à un canal 8 10. Cavités d'analyse terminales, de taille moyenne, correspondant à un canal 8 11. Cavités d'analyse terminales, de petite taille, correspondant à un canal 8 12. Puits ou moyen de distribution principal 13. Installation électrique associée aux électrodes 19,20 et 21 14. Récipient contenant l'échantillon 4 15. Moyen de transfert ou tuyau reliant la zone d'injection 3 au tube 14 16. Liaison filaire électrique 17. Extrémité libre du tuyau 15 18. Film fixé sur la carte 1 19a. Moyens d'émission électriques ou électrodes de grande superficie correspondant aux cavités d'analyse terminales de grande taille 9 20a. Moyens d'émission électriques ou électrodes de moyenne superficie correspondant aux cavités d'analyse terminales de taille moyenne 10 21 a. Moyens d'émission électriques ou électrodes de petite superficie correspondant aux cavités d'analyse terminales de petite taille 11 19b. Moyens de réception électriques ou électrodes de grande superficie correspondant aux cavités d'analyse terminales de grande taille 9 20b. Moyens de réception électriques ou électrodes de moyenne superficie correspondant aux cavités d'analyse terminales de taille moyenne 10 21b. Moyens de réception électriques ou électrodes de petite superficie correspondant aux cavités d'analyse terminales de petite taille 11 22. Première partie comportant les moyens d'émission électriques 19a, 20a et 21a 23. Plan de masse ou seconde partie comportant les moyens de réception électriques 19b, 20b et 21b 24. Moyens d'introduction du liquide 4 dans la carte d'analyse 1 ou seringue 25. Moyens d'évacuation d'un fluide provenant de la carte d'analyse 1 ou évent 26. Alimentation électrique 27. Oscillateur 28. Oscilloscope ou scopemètre 29. Mise à la terre 30. Orifice d'introduction dans la carte 1 du liquide 4 provenant des moyens 24 31. Galet presseur 32. Ressort 33. Bâti du dispositif 34. Plan de masse faisant office de galet presseur REVENDICATIONS 1. Procédé de contrôle de la présence ou de l'absence d'un volume de liquide (4) dans un contenant (1) ou de contrôle du remplissage d'un contenant (1) par un volume de liquide (4), le contenant (1) étant parcouru par au moins un canal aboutissant à au moins un puits réceptionnant tout ou partie du liquide (4), le ou les canaux et le ou les puits constituant un réseau fluidique, caractérisé en ce qu'il consiste à : * remplir en tout ou partie le réseau fluidique, * détecter la capacité, ou toute autre paramètre qui y est lié, tel que la permittivité relative de l'air présent dans le contenant (1) ou la fréquence d'oscillation ou la tension, au niveau de chaque puits, après l'injection dudit liquide (4), * déterminer la variation capacitive, ou toute autre variation d'un paramètre qui y est lié, au niveau de chaque puits, et w déduire la quantité de ce liquide (4) présent au niveau de chaque puits réactionnel. 2. Procédé, selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on réalise une étape préalable pour calibrer la capacité, ou toute autre paramètre qui y est lié, par rapport à un matériau de capacité connue, ou toute autre paramètre qui y est lié, telle que détecter la capacité, ou toute autre paramètre qui y est lié, au niveau de chaque puits, avant l'injection du liquide (4). 3. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'après le remplissage de tout ou partie du réseau fluidique, ledit réseau est clos. 4. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la détection de la capacité, ou de toute autre paramètre qui y est lié, est réalisée en accumulant les charges électriques entre deux électrodes ou entre une électrode et un plan de masse, de part et d'autre de chaque puits, sans contact avec l'aliquote de volume de liquide (4) présent dans chaque puits. 5. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que chaque puits est d'un volume inférieur ou égal à 100 ml, préférentiellement inférieur ou égal à 10 ml, préférentiellement inférieur ou égal à 1 ml. 6. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, permettant le dénombrement de micro-organismes, présents dans le volume de liquide (4) initial, par l'intermédiaire d'au moins deux puits de dimensions différentes, chaque puits contenant un même milieu, préférentiellement spécifique des micro-organismes, permettant la croissance et éventuellement la caractérisation des micro-organismes à dénombrer, caractérisé en ce qu'on réalise une étape supplémentaire de traitement des données relatives : . à l'aliquote de volume de liquide (4) présent dans chaque puits, et 'au nombre de puits positifs ou négatifs, afin de déterminer la concentration initiale en micro-organismes dans ledit volume de liquide (4) initial. 7. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la variation capacitive est détectée par : * une variation de l'amplitude d'une tension au moyen par exemple d'un pont d'impédance, ou 'une variation de la fréquence d'un signal (sinusoïdal, triangle, carré, ou toutes autres formes périodiques) au moyen par exemple d'un oscillateur, ou * la recherche d'un circuit électrique de type bouchon , c'est-à-dire RLC, ou * la variation de l'amplitude maximale de la charge d'un condensateur (constitué par le système) ou la variation de la vitesse de charge ou de décharge du condensateur (à mesurer) étant donné que T = R x C. 8. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisé en ce que les étapes de détection de la capacité, ou de toute autre paramètre qui y est lié, sont réalisées en mettant sous pression entre au moins les deux électrodes et/ou entre au moins l'électrode et le plan de masse, lesdites deux électrodes et/ou lesdits électrode et plan de masse prenant en sandwich au moins un contenant (1). 9. Dispositif de contrôle de la présence ou de l'absence d'un volume de liquide (4) dans un contenant (1) ou de contrôle du remplissage d'un contenant (1) par un volume de liquide (4), mettant en oeuvre un procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, le contenant (1) étant parcouru par au moins un canal aboutissant à au moins un puits réceptionnant tout ou partie du liquide (4), le ou les canaux et le ou les puits constituant un réseau fluidique, caractérisé par le fait qu'il est constitué de deux parties qui enserrent le contenant, une première partie qui comporte au moins un moyen d'émission électrique et une seconde partie qui comporte au moins un moyen de réception électrique, les moyens d'émission et/ou de réception : comportant eux-mêmes des moyens qui annulent les effets de bord et les courants de fuite, et prenant en sandwich chaque puits d'un volume inférieur ou égal à 100 ml, préférentiellement inférieur ou égal à 10 ml, préférentiellement inférieur ou égal à 1 ml, sans contact avec l'aliquote de volume de liquide (4) éventuellement présent dans chaque puits. 10. Dispositif, selon la revendication 9, caractérisé par le fait que chaque moyen d'émission comporte une électrode, chaque moyen de réception comporte une électrode, reliée à la masse, ou préférentiellement un plan de masse et que les moyens qui annulent les effets de bord et les courants de fuite sont constitués par au moins un anneau de garde entourant chaque électrode. 11. Dispositif, selon l'une quelconque des revendications 9 ou 10, caractérisé par le fait que les moyens d'émission et de réception sont plaqués contre chaque puits pris en sandwich. 12. Dispositif, selon l'une quelconque des revendications 9 à 11, permettant le dénombrement de micro-organismes, présents dans le volume de liquide (4) initial, par l'intermédiaire d'au moins deux puits de dimensions différentes, chaque puits contenant un même milieu, préférentiellement spécifique des micro-organismes, permettant la croissance et éventuellement la caractérisation des micro-organismes à dénombrer, caractérisé par le fait que les moyens d'émission et de réception associés à un puits sont adaptés en dimensions et performances à la dimension dudit puits. 13. Dispositif, selon l'une quelconque des revendications 9 à 12, caractérisé par le fait que les moyens d'émission ou de réception sont pris en sandwich entre deux contenants (1) sensiblement parallèles et permettent la mise en oeuvre d'un procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, simultanément ou consécutivement dans lesdits deux contenants (1). 14. Dispositif, selon l'une quelconque des revendications 9 à 13, caractérisé par le fait que le ou les contenants (1) sont en position verticale. 15. Dispositif, selon l'une quelconque des revendications 9 à 14, caractérisé par le fait que les moyens d'émission ou de réception sont rapprochés les uns des autres, tout en prenant en sandwich au moins un contenant (1), par l'intermédiaire de moyens de mise sous pression (31 ou 34,32 et 33), tels qu'un galet presseur (31 ou 34) associé à un ressort (32). 16. Mise en oeuvre du procédé, selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, pour contrôler la présence ou l'absence d'un volume de liquide (4) dans un contenant (1) ou contrôler le remplissage d'un contenant (1) par un volume de liquide (4) 17. Mise en oeuvre du procédé, selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7, pour dénombrer des micro-organismes, présents dans le volume de liquide (4) initial. 18. Utilisation du dispositif, selon l'une quelconque des revendications 9 à 11, pour contrôler la présence ou l'absence d'un volume de liquide (4) dans un contenant (1) ou contrôler le remplissage d'un contenant (1) par un volume de liquide (4). 19. Utilisation du dispositif, selon l'une quelconque des revendications 12 à 15, pour dénombrer des micro-organismes, présents dans le volume de liquide (4) initial.