Brevet FR2827046A1 — publié le 20030110

PROCEDE DE CRIBLAGE DE MOLECULES APTES A SE LIER A LA PROTEINE GP120 DU VIRUS DE L'IMMUNODEFICIENCE DESCRIPTION Domaine technique La présente invention se rapporte à un procédé de criblage de molécules aptes à se lier à la protéine gpl20 du virus de l'immunodéficience ou à ses analogues. Elle utilise une technique d'anisotropie de fluorescence et une famille particulière de peptides présentant une affinité et une spécificité élevées pour la protéine virale gpl20. Il existe de nombreux virus de l'immunodéficience comportant une protéine d'enveloppe virale gpl20 ou une protéine analogue à celle-ci. Parmi ceux-ci on peut citer le virus de l'immunodéficience humaine (VIH), le virus de l'immunodéficience simienne (VIS), le virus de l'immunodéficience des ovidés (VISNA), le virus de l'immunodéficience bovine (VIB), et le virus de l'immunodéficience des félins (VIF). Certains des peptides de la présente invention sont capables de se fixer à la protéine virale gpl20 ou à ses analogues, d'inhiber la fixation de la protéine virale gpl20 au récepteur CD4, avec des valeurs de CIso entre 0, 1 et 400 nM en fonction de leur séquence. Certaines de ces molécules sont capables d'inhiber l'infection de lymphocytes T par le virus du sida avec par exemple une DEso (Dose Effective 50%) de 100 à 900 nM. En outre, la fixation de ces molécules à la protéine virale gpl20 recombinante induit une variation conformationnelle dans celle-ci qui démasque de nouveaux épitopes, avec la même efficacité que la molécule CD4 soluble. Le procédé de criblage de la présente invention est un outil puissant de recherche permettant de sélectionner de nouvelles molécules utiles pour la fabrication de nouveaux médicaments anti-SIDA. Il trouve donc une application évidente dans le développement de nouvelles thérapies et de nouveaux moyens de diagnostic permettant de luter contre le SIDA. Art antérieur De nombreuses recherches sont menées pour trouver des traitements et des moyens de prévention efficaces de l'infection par le virus de l'immunodéficience et notamment de l'immunodéficience humaine (VIH). Ceci est dû en particulier à la variabilité du virus, à la difficulté de compréhension du mécanisme de son entrée dans les cellules cibles et de la réponse immunitaire nécessaire pour la protection de l'infection par le virus. Comme le démontre l'analyse de la structure tridimensionnelle du complexe CD4-gpl20 [1] (voir références annexées), les éléments structuraux du CD4 critiques pour sa liaison à la glycoprotéine virale gpl20 incluent les acides aminés Gly38, Gln40, Gly41, Ser42, Phe43, Thr45, qui sont compris dans la région 36-47, et l'arginine-59 du CD4. La région 36-47 du CD4 a été assimilée à la région CDR2 des immunoglobulines et présente une structure ordonnée en épingle à cheveux. Cette structure est formée d'un brin ss (C'), correspondant à la séquence 36-40, suivie d'un coude correspondant à la séquence 40-43 qui permet à un deuxième brin (C"), correspondant à la séquence 43-47, de former avec le premier une structure ss antiparallèle. Cette structure est stabilisée par des liaisons hydrogène entre l'azote amidique des résidus Gly38, Gln40, Phe43, Thr45, Gly47 du premier brin ss et l'oxygène carbonylique des résidus, respectivement, Thr45, Phe43, Gln40, Gly38, Ile36 du deuxième brin P. Cette structure en épingle à cheveux a un rôle central dans l'interaction du CD4 avec la protéine virale gpl20 et accomplit une double fonction : premièrement, elle permet aux acides aminés Gly38, Gln40, Gly41, Ser42, Phe43 et Thr45 de former une surface moléculaire complémentaire à la surface d'interaction de la protéine virale gpl20 et, en particulier, permet à la chaîne latérale de la Phe43 de s'insérer à l'entrée d'une cavité hydrophobe dans la surface moléculaire de la protéine virale gpl20 ; deuxièmement, elle permet une interaction de type feuillet ss entre les squelettes polypeptidiques du brin ss C"du CD4 et le brin ss15 (résidus 365-368) de la protéine virale gpl20. L'arginine 59 (Arg59) a aussi un rôle critique dans l'interaction CD4-gpl20, puisque le groupement guanidinium de sa chaîne latérale forme un double pont hydrogène avec la chaîne latérale du résidu Asp368 de la protéine virale gpl20, permettant la stabilisation de l'interaction de type structure ss entre les brins C" du CD4 et ss15 de la protéine virale gpl20. Des expériences de mutagenèse dirigée ont démontré que tous ces résidus du CD4 jouent un rôle critique dans l'interaction avec la protéine virale gpl20 [2], [3]. La reproduction de cette structure ordonnée en épingle à cheveux et de la conformation des chaînes latérales de ses résidus est critique dans une molécule qui doit se fixer sur la protéine virale gpl20 au site d'interaction du CD4. Le fait que des constructions peptidiques simples, comme un peptide linéaire correspondant à la séquence 37-53 et un peptide cyclique correspondant à la séquence 37-46 du CD4, ne possèdent pas une affinité mesurable pour la protéine virale gpl20, en est une démonstration [4]. L'infection des cellules CD4 par le virus du sida est médiée par une interaction de haute affinité entre l'enveloppe virale et le CD4. Des expériences de mutagenèses et de compétition avec des anticorps ont permis de localiser dans le domaine Dl du CD4, la surface de contact avec la protéine gpl20 de l'enveloppe virale. La structure tridimensionnelle d'une forme recombinante fonctionnelle de la glycoprotéine gpl20, mais délétée des boucles Vl-V2-V3 et des régions N-et C-terminales, en complexe avec les domaines D1D2 du CD4 et avec le fragment Fab d'un anticorps monoclonal, a été résolue récemment par cristallographie [1]. Dans cette structure, le CD4 interagit avec une large dépression de la surface 0 moléculaire (800 A2) de la protéine virale gpl20, en 0 utilisant une large surface moléculaire (742 A2), qui est centrée autour de la région qui a été assimilée à la région CDR2 des immunoglobulines. Au coeur de la dépression moléculaire de la protéine virale gpl20 s'ouvre une cavité étroite et profonde, la"cavité Phe43", dans laquelle la chaîne latérale de la Phe43, au sommet de la région CDR2 du CD4, occupe l'entrée. La résolution de cette structure confirme les données précédentes de mutagenèses, qui indiquent le résidu Phe43 et toute la boucle CDR2 comme fonctionnellement très importants, et propose cette dernière comme cible possible pour l'inhibition de l'attachement des virions VIH-l aux cellules. L'interaction gpl20-CD4 permet la fixation du virus à la membrane des cellules cibles et représente la première interaction protéine-protéine dans le mécanisme de l'infection. Néanmoins, d'autres co-récepteurs sont nécessaires pour une entrée efficace du virus du sida dans les cellules. Il s'agit du CXCR-4 [5], [6], qui est impliqué dans l'entrée des souches virales lymphotropiques (X4) et du CCR-5 [7], [8], qui est impliqué dans l'entrée des souches M-tropiques (R5) et de la plupart des isolats primaires. Plusieurs preuves indiquent que la fixation de la protéine virale gpl20 sur le CD4 produirait des variations conformationnelles dans la glycoprotéine de l'enveloppe, qui exposeraient de nouveaux sites, détectables par des anticorps spécifiques, dénommés CD4i, et augmenteraient l'affinité de l'enveloppe pour les récepteurs des chemokines [9], [10], les corécepteurs de l'entrée. Après fixation du CD4 et du co-récepteur par la protéine virale gpl20, d'autres variations conformationnelles conduiraient à une réorganisation structurale de la gp41, qui aboutirait à l'exposition de son peptide fusogène, puis à la fusion des membranes virales et cellulaires et enfin à l'entrée de la charge virale dans la cellule. La structure cristallographique de la protéine virale gpl20 complexée au CD4 a permis d'élucider un des mécanismes qu'utilise le virus du sida pour échapper à la réponse immune. On savait déjà que la protéine de l'enveloppe gpl20 possédait des régions hypervariables et fortement glycosylées. La structure cristallographique a démontré en fait que les régions hypervariables et les régions hautement glycosylées forment la surface moléculaire exposée de la protéine virale gpl20, qui correspond aussi à la surface accessible des virions. Seules quelques régions de la surface moléculaire de la protéine virale gpl20 sont conservées et peuvent être la cible des anticorps. Ces régions ne sont pas normalement accessibles et sont probablement protégées par les boucles hypervariables (Vl-V2-V3) qui dans la protéine cristallisée ont été délétées, et sont donc invisibles. Une de ces régions est une surface proche du site d'interaction pour les récepteurs des chemokines, et accessibles aux anticorps CD4i, après fixation de l'enveloppe au CD4. Le site de liaison au CD4 est une autre surface exposée et conservée : cependant, cette surface est présente dans une cavité de la protéine virale gpl20 et n'est donc pas accessible aux anticorps, mais peut accommoder le CD4 qui présente un seul domaine d'immunoglobuline à la différence des anticorps qui utilisent deux domaines pour la reconnaissance moléculaire. L'inhibition de l'interaction de la protéine virale gpl20 avec le récepteur principal de l'entrée, le CD4, par un CD4 recombinant soluble et/ou par des chimères d'immunoglobulines contenant des domaines du CD4, a été l'une des premières approches thérapeutiques suggérées et expérimentées pour l'inhibition de l'infection par VIH-l. Ces molécules sont efficaces in vitro dans l'inhibition de l'infection virale seulement dans le cas de souches adaptées au laboratoire, mais sont inefficaces dans le cas de nombreux isolats primaires. La dégradation rapide in vivo de ces constructions dérivées du CD4 et leur affinité plus faible pour l'enveloppe virale des isolats primaires ont été proposées comme causes principales de leur inefficacité. Cependant, des études ont démontré que l'affinité, pour le CD4, des gpl20 recombinantes monomériques de certains isolats primaires n'est pas significativement différente de celle de gpl20 issues de souches de laboratoire. La nature oligomérique de la protéine virale gpl20 à la surface du virus, la densité et la structure du CD4 à la surface des cellules permissives et peut être la présente d'autres interactions moléculaires non encore clairement élucidées ou d'autres molécules accessoires d'entrée pourraient jouer un rôle important dans le mécanisme de l'entrée et représenter d'autres causes de l'inefficacité des protéines CD4 solubles comme antagonistes de l'entrée. Le développement d'agents antiviraux qui ciblent la protéine virale gpl20 présente un challenge majeur, à cause de la grande variabilité génétique de la protéine de l'enveloppe, facteur qui peut expliquer l'inefficacité de beaucoup d'inhibiteurs de la protéine virale gpl20. Néanmoins, le fait que les résidus qui contribuent à former le coeur du site de liaison de la protéine virale gpl20 pour le CD4 sont formés par des résidus très conservés suggère que des inhibiteurs de la protéine virale gpl20 peuvent être efficaces contre un large spectre d'isolats VIH-1. Des constructions peptidiques dérivées du CD4 ont été proposées comme inhibiteurs de l'infection virale : il s'agit d'un peptide mimétique structural de la boucle CDR2 du CD4 qui incorpore un groupement phényl mimant la Phe43 [14] et un peptide cyclique correspondant à la boucle CDR3 du CD4 et incorporant des résidus aromatiques additionnels [15]. Cependant, ces constructions présentent une activité antivirale faible limitée à un isolat de laboratoire et, même si elles ont été conçues au départ comme mimétiques structuraux du CD4, elles ne sont pas actives dans l'étape d'entrée [16]. Actuellement, un certain nombre d'inhibiteurs de l'interaction gpl20-CD4 ont été proposés et présentent une application clinique. Il s'agit par exemple d'une protéine recombinante de grosse taille, formée par la fusion génétique des domaines DID2 du CD4 avec les domaines constants d'une immunoglobuline IgG2 [17]. Cette construction PR0542 est en phase clinique 1/11. Cette large protéine recombinante semble être bien tolérée par l'organisme humain, mais son efficacité dépend d'une dose circulante élevée difficile à atteindre. Des molécules de plus petites tailles ont été proposées comme inhibiteurs de l'interaction CD4-gpl20 et sont en phase de test clinique. Il s'agit : d'un colorant bis-azo FP21399 [18], identifié par une approche combinatoire, du phosphorothioate oligonucléotide zintevir (AR177) [19], d'un polymère à base de naphtalène sulfonate, PR02000 [20] et d'un dérivé d'amidon, le dextrin 2-sulfate (D2S) [21], qui inhibent des isolats chimiques VIH-1 dans des cultures cellulaires, mais exigent des concentrations élevées. Parmi les inhibiteurs de l'entrée, il y a aussi le SPC3 [22], une construction peptidique synthétique multibranchée, qui, proposée à l'origine comme un inhibiteur de l'interaction CD4-gpl20, est ensuite révélée active dans une étape suivant l'attachement des virions aux cellules. D'autres molécules de petite taille ont été proposées comme inhibiteurs de l'entrée : le bicyclam AMD3100 [23], le NSC651016 [24], le peptide T22 [25] et sa version plus récente T134 ou T140 [26] et le TAK779 [27]. Ces molécules sont des inhibiteurs de l'entrée virale, actifs sur les corécepteurs de l'entrée CXCR4 et CCR5, mais n'ont aucune activité dans l'interaction CD4-gpl20. Des peptides dérivés de la séquence de la région C-terminale de la glycoprotéine gp41, le peptide T20 (ou DP178) [28] et sa plus récente version améliorée DT1249 [29], sont d'autres inhibiteurs de l'infection qui ciblent une phase transitoire de l'entrée, postérieure à l'attachement de l'enveloppe virale au CD4 et précédant la fusion des membranes virus cellule : ces peptides sont inactifs dans l'interaction gpl20-CD4. La plupart de ces produits sont actuellement en test clinique de phase 1/11, mais leur efficacité thérapeutique reste encore à vérifier. Le régime thérapeutique anti-SIDA actuellement utilisé en clinique, la trithérapie, comporte une combinaison de trois inhibiteurs qui ciblent deux enzymes virales, la transcriptase inverse et la protéase. Même si la trithérapie est arrivée à réduire significativement la charge virale de beaucoup de malades, elle n'est pas capable même dans les cas les plus favorables d'éradiquer la maladie, car des réservoirs dormants d'infection persistent toujours [30]. Le succès partiel de la trithérapie d'une part et l'impossibilité de stopper l'infection SIDA avec les protocoles thérapeutiques actuels d'autre part, ont augmenté la demande de nouveaux médicaments pouvant être actifs au niveau d'autres cibles virales et augmenter le répertoire et l'efficacité des médicaments cliniques actuels. Les banques de molécules disponibles actuellement et potentiellement actives dans l'inhibition de l'entrée et de l'infection par le virus du sida sont énormes. Cependant, un outil de recherche rapide et efficace de molécules effectivement actives pour inhiber l'interaction gpl20-CD4 nécessaire pour une infection efficace par le virus du sida fait défaut. Les procédés actuels de criblage sont lents, peu précis et nécessitent des quantités de réactifs souvent importantes. En outre, les coûts engendrés par ces recherches sont élevés. Exposé de l'invention La présente invention a précisément pour but de fournir un procédé de criblage de molécules capables de se lier avec une affinité déterminée à la protéine gpl20 du virus du sida, notamment de l'immunodéficience humaine (VIH). Le procédé de criblage de la présente invention inclut au moins un cycle de criblage comprenant les étapes suivantes : a) marquage covalent avec une sonde fluorescente d'un peptide ayant ladite affinité déterminée pour la protéine gpl20, ledit peptide comprenant la séquence (A) définie ci-dessous, b) mise en présence du peptide marqué avec la protéine gpl20, à une concentration de gpl20 qui permet entre 20 et 50% de fixation du peptide marqué, de manière à former un complexe réversible peptide marqué-gpl20], c) mesure étalon de la polarisation de fluorescence du complexe peptide marqué-gpl20], d) essai de criblage par mise en compétition du complexe peptide marqué-gpl20] formé avec au moins une molécule candidate susceptible de se lier à la protéine gpl20 à une concentration déterminée de ladite ou desdites molécule (s) et dans des conditions physicochimiques rendant possible la compétition entre ladite molécule et le peptide marqué pour former éventuellement un complexe avec la protéine gpl20, e) mesure de la polarisation de fluorescence émise par l'essai de criblage, et f) comparaison de la mesure de polarisation de fluorescence de l'étape e) avec la mesure étalon de l'étape c) la ou une des molécule (s) candidate (s) étant considérée comme une molécule capable de se lier à la protéine Gpl20 lorsque la mesure de polarisation de fluorescence de l'étape e) est inférieure à la mesure étalon de l'étape c). Les molécules recherchées au moyen du procédé de criblage de la présente invention sont donc celles qui entrent en compétition avec le peptide de la présente invention. En effet, le procédé de la présente invention se caractérise notamment en ce qu'il utilise une famille de peptides particuliers qui miment le CD4 et pallient les inconvénients précités de l'art antérieur. En effet, il utilise un peptide stable, présentant une très forte affinité pour l'enveloppe du virus du SIDA, en particulier pour la protéine gpl20. Le peptide de la présente invention se caractérise en ce qu'il comprend la séquence (A) suivante : TPA-P-Cys-P-Cys-P-Cys-Ala ou Gln Gly ou (D) Asp ou Ser-Ser ou His ou Asn-Xaaj Cys-Thr ou Ala - Cys- Xaak - NH2 dans laquelle TPA représente l'acide thiopropionique, XaaJ représente la ss-napthylalanine, la phénylalanine ou la bi-phénylalanine, Xaak représente Gly, Val ou Ileu, Pl représente 3 à 6 acides aminés, p2 représente 2 à 4 acides aminés et p3 représente 6 à 10 acides aminés, les acides aminés dans Pl, p2 et p3 étant naturels ou non naturels, identiques ou différents et Pl, p2 et p3 ayant ou non une séquence commune, ledit peptide présentant une conformation en épingle à cheveux ss dont le coude j3 est formé par les résidus acides aminés Ala ou Gln Gly ou DAsp ou Ser-Ser ou His ou Asn-Xaai de sa séquence (A). Selon un mode de réalisation de la présente invention, le peptide de la présente invention est caractérisé en ce qu'il comprend la séquence (I) suivante : TPA- Xaaa- xaab- Ala ou Gln ou His-Arg ou Phe- 1 5 Cys-Xaac-Xaad-Arg-Cys-Lys-Xaae-Xaaf- 10 Xaag-Xaah-Leu ou Lys Xaai-Lys-Cys-Ala 15 ou Gln-Gly ou (D) Asp ou Ser-Ser ou His ou Asn- 20 XaaJ- Cys - Thr ou Ala-Cys-Xaa-NHs, 25 dans laquelle TPA représente l'acide thiopropionique, Xaaa, Xaab, Xaac, Xaad, Xaae, Xaaf, Xaag, Xaah, et Xaai, sont des acides aminés, naturels ou non naturels, identiques ou différents, xaaj représente Nal, Phe ou Bip, et Xaak représente Gly, Val ou Ile. Le résidu (D) Asp représente l'isomère optique D de l'acide aspartique, Nal représente la ss-naphtylalanine, et Bip représente la bi-phénylalanine. Les inventeurs ont mis en évidence que ce peptide définit par la séquence (A), en particulier la séquence (I), comportant un acide thiopropionique à la position 1 de la séquence, un résidu Phe, Nal, ou Bip en position 23 de la séquence (Xaaj), et un résidu Gly, Val ou Ile en position 27 de la séquence (Xaak) présente une forte affinité et une grande spécificité de liaison pour la protéine gpl20 de l'enveloppe virale du virus de l'immunodéficience. Ce peptide comporte 27 ou 28 résidus seulement, et présente une structure en épingle à cheveux constituée de deux brins ss antiparallèles reliés par un coude ss de quatre résidus. Les deux brins antiparallèles, étant à une distance pouvant donner des interactions à ponts hydrogène intramoléculaires, stabilisent la structure. Notamment, la distance entre les atomes azote amidique et oxygène carbonylique de la liaison peptidique est de 2,5 à 3,6 A. Cette structure bien définie et stable reproduit des éléments structuraux du CD4 critiques pour sa liaison à la glycoprotéine gpl20. La structure tridimensionnelle de ce peptide a été résolue expérimentalement par résonance magnétique nucléaire (RMN). Cette analyse démontre que son organisation tridimensionnelle reproduit le squelette peptidique de la structure en épingle à cheveux du CD4, et la région 37-46 de ce peptide peut être superposée à la région 36-37 du CD4 avec une déviation rms de seulement 1,05 À. En outre, les chaînes latérales des résidus Ala ou Gln 20, Ser 22, XaaJ 23 (Nal, Phe ou Bip), et Thr ou Ala 25 ont une orientation comparable à celle des résidus correspondants du CD4, à savoir Gln 40, Ser 42, Phe 43, et Thr 45. En particulier, la chaîne latérale de XaaJ 23 pointe du motif en épingle à cheveux dans une conformation semblable à celle de la Phe 43 du CD4 pour s'insérer à l'entrée d'une cavité hydrophobe de la protéine virale gpl20, renforçant ainsi le lien avec gpl20. Arg et Lys aux positions 9 et 18 sont topologiquement équivalents aux résidus Arg59 et Lys35 de la protéine CD4. TPA et les 5 cys du peptide forment des ponts disulfures qui présentent un appariement de type 1-3, 2-4 et 3-6 et stabilisent la structure en épingle à cheveux. Le motif structural en épingle à cheveux a une surface accessible au solvant et/ou à une molécule de plus grosse taille telle qu'une protéine, ce qui peut favoriser son interaction avec la protéine de l'enveloppe virale. Les chaînes latérales des acides aminés de la surface accessible au solvant de ce motif sont proches dans l'espace et forment une surface moléculaire continue qui reproduit la structure de plusieurs résidus importants pour la liaison CD4-gpl20. La plate-forme structurale qui contient le motif structural en épingle à cheveux contient aussi d'autres régions structurales capables d'accueillir des fonctionnalités chimiques additionnelles dans une position spatiale bien définie par rapport au motif structural en épingle à cheveux pouvant ainsi renforcer sa fonction biologique de liaison et/ou présenter des groupement de marquage. Par exemple, un groupement de biotine ou un groupement de fluorescéine a été incorporé au niveau de la chaîne latérale de la lysine 11, sans provoquer de perte de l'activité biologique du dérivé. L'incorporation de ces groupements a permis l'utilisation de ces dérivés dans des tests d'interaction avec la protéine de l'enveloppe, comme décrit ci-dessous. Selon l'invention, la séquence (A), par exemple la séquence, (I) peut comprendre en outre un résidu k proline lié au résidu Xaak. Un résidu proline ajouté en position 28 stabilise l'extrémité C-terminale et rend moins flexible le brin ss C-terminal du motif structural en épingle à cheveux. Selon l'invention, dans la séquence (I), Xaai peut être Gly. Par exemple, le peptide de la présente invention peut comprendre une séquence choisie parmi les séquences ID n 4, ID n05, ID n06, ID n07, ID n08, ID n09, ID nO 10, ID noel, ID n 12, ID n 13, ID n 14, ID n 15, ID n 16, ID n 17, ID n 18, ID n 19 et ID n 20 de la liste de séquences annexée. Le peptide de la présente invention peut être obtenu par synthèse chimique en phase solide ou par recombinaison génétique. La synthèse chimique peut être réalisée par exemple avec un synthétiseur automatique de peptide du type Applied Biosystems, mod. 433A (marque de commerce). Elle peut être réalisée par exemple en chimie Fmoc qui utilise le groupement fluorométhyloxycarbonyle pour la protection temporaire de la fonction a-aminique des acides aminés. Le peptide de l'invention peut aussi être fabriqué au moyen d'un procédé comprenant les étapes suivantes : a) intégration d'une séquence d'acide nucléique dans un vecteur d'expression, ladite séquence d'acide nucléique codant pour le peptide de la présente invention, b) introduction du vecteur d'expression comprenant ladite séquence d'acide nucléique dans une cellule hôte, c) culture de la cellule hôte comprenant ledit acide nucléique dans des conditions de culture permettant la synthèse dudit peptide, d) récupération du peptide synthétisé, et e) greffage du TPA en position N-terminale. Les éléments techniques pour la réalisation de ce procédé de synthèse peptidique sont connus de l'homme du métier. Ils sont décrits par exemple dans l'ouvrage de Sombrook, Fritsch et Maniatis, MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, 2nd édition. Le greffage d'un TPA en position C-terminale du peptide peut être réalisé au moyen d'un procédé classique de chimie organique applicable à un peptide. Les inventeurs ont synthétisé une famille de peptides reproduisant une partie de la structure de la région du CD4 ressemblant à la région CDR2 des immunoglobulines, qui, comme l'ont démontré des résultats mutagenèse et d'analyse cristallographique, sont parmi les régions critiques de la liaison CD4 à la protéine virale gpl20. Les peptides de la présente invention sont capables de se fixer sur la région de la glycoprotéine gpl20 qui interagit avec le CD4, le récepteur principal de l'entrée du virus du sida, notamment du VIH-1, dans les cellules cibles CD4. Ces peptides constituent une famille d'inhibiteurs dont l'affinité pour la glycoprotéine virale gpl20 recombinante monomérique, varie entre des valeurs de CIso allant de 0,1 nM à 400 nM. Ils constituent des inhibiteurs spécifiques et puissants de l'interaction CD4-gpl20 basés sur la structure du CD4. La liaison avec la protéine virale gpl20 recombinante se fait en compétition avec le CD4 soluble et est spécifique de la forme bien structurée. En outre, ils peuvent être marqués, par exemple avec une sonde fluorescente, sans que l'affinité de liaison à la protéine de l'enveloppe virale gpl20 soit altérée. Ces peptides peuvent donc être utilisés en tant que traceurs dans le procédé de criblage utilisant une technique d'anisotropie de fluorescence conforme à la présente invention. Ce procédé utilise la polarisation de fluorescence dudit peptide marqué de façon covalente par une sonde fluorescente. Le peptide utilisé est celui qui présente une affinité dans la gamme de celle des molécules recherchées. Par exemple, si l'on cherche à cribler des molécules présentant une affinité plus grande ou égale à 106 M'\ on utilisera un peptide marqué présentant une affinité de 106 M'. Par exemple aussi, si on cherche à cribler des molécules présentant une plus forte affinité, par exemple 109 M' on utilisera un peptide présentant une affinité similaire. Ainsi, le procédé de criblage de la présente invention peut être accordé suivant l'affinité recherchée en choisissant le peptide utilisé. En outre, l'affinité pour la protéine virale Gpl20 des molécules détectées par le procédé de criblage de la présente invention peut être déterminée à partir de celle du peptide selon l'invention choisi pour le criblage. Les méthodes et appareils utilisables pour la mise en oeuvre du procédé de la présente invention sont ceux qui sont accessibles à l'homme du métier dans la littérature qui se rapporte à l'étude des interactions moléculaires, par exemple dans les documents [37], [38], [39], et [40] et dans le brevet US 5,756, 292. Les analyses et les simulations peuvent être effectuées en utilisant le programme BIOEQS décrit dans les documents [41], [42] et [43] ou d'autres programmes d'analyse d'interactions. La sonde fluorescente doit de préférence présenter un rendement quantique élevé et une fluorescence dans le visible pour une sensibilité de détection élevée. Nous avons testé la rhodamine green, la fluorescéine et l'Alexa488 (marque de commerce), D'autres sondes fluorescentes présentant les propriétés spécifiées cidessus peuvent bien entendu être utilisés. La polarisation de fluorescence est calculée à partir de deux mesures, l'intensité d'émission de la fluorescence polarisée en parallèle et en perpendiculaire, avec une excitation en parallèle. Ici, la polarisation en parallèle est définie selon la direction z de l'axe du laboratoire. La polarisation se calcule ainsi : On peut aussi exprimer le résultat en terme d'anisotropie de fluorescence, calculée comme : la relation entre polarisation et anisotropie étant la suivante : La valeur de l'anisotropie ou polarisation de fluorescence est liée à la vitesse de diffusion rotationnelle de la molécule en solution par la relation (4) suivante : dans laquelle Ao est l'anisotropie limite du fluorophore, une constante physique déterminée par l'angle entre les dipôles d'absorption et d'émission, T est la durée de vie de fluorescence, et Te est le temps de corrélation rotationnelle. Ce dernier dépend du volume hydraté (Vh) de la molécule ou du complexe moléculaire suivant la relation (5) : dans laquelle il est la viscosité de la solution, R est la constante de gaz et T, la température en Kelvin. Ainsi, lorsque le peptide marqué est seul en solution, sa vitesse de diffusion rotationnelle est rapide et donc l'anisotropie de fluorescence du fluorophore lié de façon covalente reste relativement basse. Par contre lorsque le peptide marqué interagit avec le gpl20 l'anisotropie de fluorescence de la sonde augmente considérablement puisque la protéine virale gpl20 a un poids moléculaire de 120000 daltons, et donc la taille du complexe peptide de la présente inventiongpl20 est nettement plus élévée que celle du peptide seul. Donc la vitesse de diffusion rotationnelle diminue, et l'anisotropie augmente. Dans le procédé de criblage de la présente invention, toute molécule capable d'inhiber l'interaction entre un peptide de la présente invention et une protéine virale gpl20 peut représenter un inhibiteur de l'interaction CD4-gpl20, et donc un inhibiteur de l'infection virale. Il est donc possible, grâce aux peptides de la présente invention de cribler dans une banque de molécules toute molécule capable d'interagir avec la protéine gpl20 ou une protéine analogue à la gpl20 en particulier des molécules à activité antivirale ou des molécules utiles pour la fabrication de médicament. Le procédé de criblage de la présente invention fonctionne par compétition. Le peptide de la présente invention, choisi et marqué, est mis en présence de gpl20 à une concentration qui permet entre 20 et 50% de fixation. La quantité de gpl20 ne doit pas être saturante, sinon, il faudrait utiliser une grande quantité de molécules à cribler pour permettre la compétition. En outre, le complexe peptide marquégpl20] formé doit être réversible pour permettre la compétition. Les conditions de concentration des molécules candidates dans les essais de criblage du procédé de la présente invention sont déterminées de la même manière que dans les essais classiques de compétition de molécules pour un récepteur utilisés en biologie moléculaire. La concentration de la ou des molécule (s) candidate (s) est de préférence 10 à 100 fois supérieure à la concentration du peptide marqué de la présente invention. Le procédé de la présente invention est un procédé à la fois rapide, notamment du fait qu'il utilise les techniques d'anisotropie de fluorescence, et précis car il utilise les peptides de la présente invention. De plus, il nécessite de très petites quantités de réactifs comme le montrent les exemples ci-dessous ce qui diminue les coûts engendrés dans la recherche de molécules susceptibles d'être utilisées pour la fabrication de médicaments destinés au traitement du SIDA par rapport aux procédés de l'art antérieur. En outre, le procédé de criblage de la présente invention est tout à fait adapté au criblage des banques de molécules disponibles actuellement et potentiellement actives dans l'inhibition de l'entrée et de l'infection du virus du sida. Il constitue donc un outil de recherche rapide et efficace de molécules effectivement actives pour inhiber l'interaction gpl20-CD4 nécessaire pour une infection efficace par le virus du sida. Par exemple, selon un premier mode de réalisation de la présente invention, une seule molécule candidate est testée dans un cycle de criblage. Dans ce cas, si la mesure de polarisation de fluorescence de l'étape e) est inférieure à la mesure étalon de l'étape c), alors la molécule candidate testée sera considérée comme une molécule capable de se lier à la protéine virale Gpl20. Si la mesure de polarisation fluorescence de l'étape e) est inchangée par rapport à la mesure étalon de l'étape c), alors la molécule candidate testée ne sera pas considérée comme étant capable de se lier à la protéine virale Gpl20. Ainsi, selon ce mode de réalisation, les cycles devront se succéder autant de fois qu'il y a de molécules candidates différentes à tester, à raison d'une molécule par cycle. Par exemple, selon un second mode de réalisation de la présente invention, un échantillon comprenant plusieurs molécules candidates différentes peut être testé dans un seul cycle de criblage. Dans ce cas, si la mesure de polarisation de fluorescence de l'étape e) est inférieure à la mesure étalon de l'étape c), alors l'échantillon sera considéré comme comprenant au moins une molécule capable de se lier à la protéine virale Gpl20. Si la mesure de polarisation fluorescence de l'étape e) est inchangée par rapport à la mesure étalon de l'étape c), alors l'échantillon ne sera pas considéré comme comprenant au moins une molécule capable de se lier à la protéine virale Gpl20. Ainsi, suivant ce second mode de réalisation, un seul cycle permet de tester un échantillon comprenant plusieurs molécules candidates différentes. Si pour un des échantillons la mesure de polarisation de fluorescence de l'étape e) est inférieure à la mesure étalon de l'étape c), alors au moins une des molécules candidates dudit échantillon sera considérée comme capable de se lier à la protéine virale Gpl20. Le criblage peut ensuite être affiné sur les molécules dudit échantillon suivant le premier mode de réalisation de la présente invention pour identifier la ou les molécules de l'échantillon capable (s) de se lier à la protéine virale Gpl20. Ce second mode de e réalisation de la présente invention permet un criblage très rapide de molécules candidates. Ces premier et deuxième modes de réalisation de la présente invention peuvent être réalisés sur des molécules candidates connues disponibles actuellement et potentiellement actives dans l'inhibition de l'entrée et de l'infection par le virus du sida. Suivant un troisième mode de réalisation, le procédé de la présente invention peut être appliqué sur des liquides biologiques non purifiés tels que de l'urine, des extraits cellulaires, bactériens, etc. Lorsque le procédé de l'invention permet de considérer qu'un tel extrait comprend au moins une molécule capable de se lier à la protéine virale Gpl20, cet extrait peut être analysé par les procédés traditionnels d'analyse en chimie pour identifier les molécules qu'il contient. Un criblage plus précis, suivant le premier mode de réalisation de la présente invention, peut ensuite être réalisé pour mettre en évidence, parmi toutes les molécules identifiées dans l'extrait, la ou les molécule (s) capable (s) de se lier à la protéine virale Gpl20. Le procédé de la présente invention constitue donc un puissant outil de criblage, rapide, reproductible, sensible et accordable à une large gamme d'affinité Il se pratique en solution et ne nécessite pas de séparer les complexes des molécules libres. Le procédé de criblage de la présente invention présente de nombreux avantages que l'homme du métier peut facilement identifier. Parmi ces avantages, on peut citer la capacité du procédé de pouvoir sélectionner des molécules ayant une affinité prédéterminée. En effet, si les conditions de la réaction de compétition permettent de garder constant le Kd entre le peptide marqué de la présente invention et la protéine virale gpl20, l'affinité de la molécule sélectionnée après l'étape de compétition sera au moins égale à celle du peptide marqué Un autre avantage est que le marquage du peptide de la présente invention peut être réalisé avec différents composés tels que la Rhodamine green, la fluorescéine, etc. De plus, l'utilisation de composés tels que les fluorophores, qui des propriétés d'absorption et d'émission dans le visible peut être particulièrement avantageuse pour la détection de molécules dans des extraits non purifiés tels que l'urine, des extraits cellulaires, bactériens, etc. En outre, ce procédé permet d'utiliser peu de protéine virale gpl20, puisse qu'il peut se dérouler en présence d'une concentration de gpl20 non saturante, voire de préférence à une concentration qui permet 20 à 50% de fixation. Au contraire des tests Elisa couramment pratiqués dans les laboratoires pour mettre en évidence une compétition entre molécules données, le procédé de la présente invention utilisant les peptides et les mesures d'anisotropie définies ci-dessus permet d'effectuer des mesures entièrement en solution. En outre, le procédé de la présente invention peut être adapté à des volumes très petits, de quelques microlitres, et donc à des mesures en micropuits. Il permet aussi d'effectuer des mesures très rapides, en une ou deux minutes pour les compétitions. Un autre avantage du procédé de la présente invention réside dans la reproductibilité des résultats. En effet, la valeur d'anisotropie pour un peptide marqué de la présente invention, par exemple dans les conditions définies dans les exemples cidessous, est toujours la même. Un autre avantage du procédé de la présente invention réside dans le fait que les conditions de température et de solution peuvent facilement être modifiées et contrôlées. Un autre avantage encore réside dans le fait que le rapport signal/bruit étant très élevé, le procédé de la présente invention permet de détecter de très faibles taux de fixation. D'autres avantages encore apparaîtront à l'homme du métier à la lecture des exemples suivants en référence à la liste de séquences et aux figures annexées. Brève description de la liste des séquences La liste des séquences annexée fournit les séquences peptidiques suivantes : - séquence ID n01 : séquence sCD4. - séquence ID n02 : séquence de la scyllatoxine (ScTx). - séquence ID n03 : séquence CD4M9 : peptide issu de la scyllatoxine, ne présentant pas de TPA en position 1 de la séquence. - séquences ID n04-16 et 19 et 20 : séquences nommées CD4M9T, CD4M26, CD4M27, CD4M27A, CD4M27B, CD4M27C, CD4M30, CD4M31, CD4M32, CD4M33, CD4M35, K15, K16 et CD4M9BIP et CD4M9V respectivement de la présente invention. - séquence ID n 17 : séquence nommée CD4M3 issue de la scyllatoxine ne présentant pas de TPA en position 1 de la séquence. - séquence ID n 18 : séquence nommée CD4MO issue de la charybdotoxine. Brève description des figures Figure 1 : Courbes d'inhibition de la liaison du CD4 à la protéine virale gpl20, par des peptides de la présente invention, obtenues par ELISA en compétition. Les peptides testés sont : CD4M9, CD4M9T, CD4M27, CD4M32, CD4M33 et CD4M35. Les données expérimentales sont reportées en pourcentage de liaison (% F) en fonction de la concentration des peptides. Figure 2 : Courbe d'inhibition de la liaison du CD4 à la protéine virale gpl20, par le peptide marqué CD4M33-fluorescéine, CD4M33-F, obtenue par ELISA en compétition. Les courbes des peptides CD4M9 (séquence ID n03), CD4M33 (séquence ID n 13) et CD4M35 (séquence ID n 14) sont aussi représentées pour comparaison. Les données expérimentales sont reportées en pourcentage de liaison (% F) en fonction de la concentration des peptides. Figure 3 : courbes d'interaction de la protéine virale recombinante gpl20-HXB2 avec le peptide CD4M33 (séquence ID n 13) fixé à la surface d'une puce d'un instrument de résonance plasmonique de surface, Les courbes d'association (0-300 s) et de dissociation (300-800 s) ont été enregistrées après injection de la protéine virale gpl20 aux concentrations 13,2 (1), 19,8 (2), 29,6 (3), 44,4 (4), 66,6 (5) et 100 (6) nM. Les données sont reportées en unités de résonance (RU) en fonction du temps (t) en seconde. Figure 4 (a) et (b) : courbe d'interaction du VIH-1, inactivé par AT-2 [34], avec l'anticorps 48d [11] (a) et CG10 [35], (b), fixés à la surface d'une puce d'un instrument de résonance plasmonique de surface en présence du peptide CD4M33 (10 ug/ml), d'un peptide inactif (Ala23) CD4M9 (Phe23 remplacé par Ala dans la séquence peptidique de CD4M9) (10 ug/ml) et en absence de peptide. Les courbes d'association (0-180 s) et de dissociation (180-600 s) ont été enregistrées après injection du VIH-1, qui a été pré-incubé avec les peptides à 200C pendant lh. Les données sont reportées en unité de résonance (RU) en fonction du temps (t) en seconde. Figures 5 (A)- (C) : effets des peptides CD4M30 (séquence ID n010) (figure 4A), CD4M33 (séquence ID n 13) (figure 4B), CD4M35 (séquence ID n 14) (figure 4C) sur la réplication de la souche VIH-1LAI dans les CMSP activées par la PHA-P. Les données sont représentées en pourcentage d'inhibition (% I) de l'activité Transcriptase Inverse (TI) dans les surnageants de culture en fonction de la concentration en nM des peptides. Figures 6 (A) et (B) : effet de la présence du CD4 soluble et des peptides de la présente invention sur l'interaction de la protéine virale recombinante gpl20HxB2 avec les anticorps CG10 (A) et 48d (B), fixés à la surface d'une puce d'un instrument de résonance plasmonique de surface. Les courbes d'association (0-180 s) et de dissociation (180-400,180-450 s) sont reportés pour la protéine virale gpl20 seule et la protéine virale gpl20 en présence du CD4M27 (1,5 équivalent, séquence ID n06), du CD4M9 (1,5 équivalent), du mutant inactif (Ala23) CD4M9 (1,5 équivalent) et du CD4 soluble (1,5 équivalent). Les données sont reportées en unité de résonance (RU) en fonction du temps (t) en seconde. Figure 7 : exemples de séquences peptidiques de la présente invention représentées avec les codes à une lettre des résidus acides aminés. TPA et B représentent l'acide thio-propionique et la biphénylalanine respectivement et"d"la forme optique D de l'acide aspartique. Figures 8 a), b) et c) : courbes illustrant des mesures d'anisotropie de fluorescence (An), exprimées en millianisotropie (mA), du peptide K16 de la présente invention marqué à la rhodamine green, en solution à une concentration de 2 nM, et mis en présence de protéine virale gpl20 de souche HXB2 à différentes concentrations [GP120] nanomolaires (nM). Figures 9 et 10 : courbes illustrant des mesures d'anisotropie de fluorescence (An), exprimées en millianisotropie (mA), respectivement des peptides CD4M33 et K15 de la présente invention marqués à la rhodamine green, en solution à une concentration de 2 nM, et mis en présence de protéine virale gpl20 de souche HXB2 à différentes concentrations [GP120] nanomolaires (nM). Figure 11 : courbe illustrant des mesures d'anisotropie de fluorescence (An), exprimées en millianisotropie (mA), du peptide CD4M9 de la présente invention marqué à la fluorescéine, en solution à une concentration de 6 nM, et mis en présence de protéine virale gpl20 de souche HXB2 à différentes concentrations [GP120] nanomolaires (nM). Figures 12a) et 12b) : courbes illustrant des mesures d'anisotropie de fluorescence (An), exprimées en millianisotropie (mA), du peptide CD4M33 de la présente invention marqué à la rhodamine green, en solution à une concentration de 6 nM, et mis en présence de protéine virale gpl20 respectivement de souches HXB2 et SF2 à différentes concentrations [HXB2] et [SF2] nanomolaires (nM). Figure 13 : courbes théoriques illustrant des valeurs théoriques d'anisotropie de fluorescence (An), exprimées en millianisotropie (mA), d'une compétition entre un peptide CD4M33 marqué et un peptide CD4M33 non marqué, en fonction de la concentration nanomolaire (nM) du peptide CD4M33 non marqué, pour différentes concentrations nanomolaires (nM) d'une protéine virale gpl20 (HXB2) Ces courbes ont été calculées à partir du Kd=14nM du CD4M33 déterminé par titrage directe. Figures 14 a) à i) : courbes illustrant des mesures d'anisotropie de fluorescence (An), exprimées en millianisotropie (mA), d'une compétition entre un peptide CD4M33 marqué à la fluorescéine et différents peptides non marqués (respectivement CD4M33, CD4M35, CD4M32, sCD4, CD4M27, CD4M9, CD4M9TPA, CD4M24 et CD4M9BIP), en fonction de la concentration nanomolaire (nM) du peptide non marqué. Exemples EXEMPLE 1 : SYNTHESE DES PEPTIDES DE LA PRESENTE INVENTION. Les peptides de la présente invention ont été fabriqués dans cet exemple par synthèse chimique en phase solide avec un synthétiseur automatique de peptides Applied Biosystems, mod. 433A, et en chimie Fmoc, qui utilise le groupement Fluorenylmethyloxycarbonyle (Fmoc) pour la protection temporaire de la fonction a-aminique des acides aminés. Les groupements protecteurs utilisés pour prévenir les réactions secondaires des chaînes latérales des acides aminés, dans cette stratégie Fmoc, ont été le tertio-butyle éther (tBu) pour les résidus Ser, Thr et Tyr ; tertio-butyle ester (OtBu) pour Asp, Glu ; trityle (Trt) pour Gln, Asn, Cys, His ; tertio-butyloxycarbonyle (Boc) pour Lys et 2,2, 5,7, 8-pentametylchromane-6-sulfonyle (Pmc) pour Arg. La réaction de couplage se déroule avec un excès de 10 équivalents d'acides aminés (1 mmol) par rapport à la résine (O, lmmol). L'acide aminé protégé est dissous dans 1 ml de N-méthylpyrollidone (NMP) et 1 ml d'une solution de 1-N-hydroxy-7-azabenzotriazole (HOAt) 1M dans le solvant NMP. 1 ml d'une solution de N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) 1M est alors ajouté. Après 40 à 50 minutes d'activation, l'ester actif formé est transféré dans le réacteur qui contient la résine. Avant cette étape de transfert puis de couplage, la résine est déprotégée de son groupement Fmoc par une solution de 20 % de pipéridine dans le NMP. L'excès de pipéridine est enlevé par lavage à la NMP après 5 à 10 minutes environ. Pendant la déprotection, la détection des adduits dibenzofulvène-pipéridine à 305 nm permet de suivre le bon déroulement de la synthèse. En effet, la quantification de l'adduit permet d'estimer l'efficacité de la déprotection du groupement Fmoc et par suite du couplage du dernier acide aminé incorporé. MODIFICATIONS CHIMIQUES APPORTEES AUX PEPTIDES DE LA PRESENTE INVENTION. Une sonde fluorescente ainsi qu'un groupement biotine ont été couplés sur deux des peptides étudiés de la présente invention, le CD4M9T (séquence ID n 4) et le CD4M33 (séquence ID n 13). L'incorporation sur ces deux composés s'est faite sur le résidu lysine 11, au niveau d'une face opposée au site de liaison de la protéine virale gpl20. Ce choix d'une lysine a été conditionné par ses possibilités de protection de sa chaîne latérale avec un groupement protecteur, dit orthogonal, comme le groupement de (1- (4, 4-diméthyl- 2, 6-dioxo-cyclohexylidène) éthyle) (ou groupement Dde). Un tel groupement est en effet stable au traitement à 20 % de pipéridine utilisé pour la déprotection du groupement Fmoc, mais est clivé de façon spécifique par traitement avec une solution d'hydrazine à 2 %. Une fois le groupement Dde retiré, la fluorescéine ainsi que la biotine ont pu être couplées. INTRODUCTION DE LA FLUORESCEINE. Le groupement fluorescent a été introduit sur la chaîne latérale de la lysine 11 du peptide de la présente invention CD4M33 et de la lysine 15 ou 16 des peptides K15 (séquence ID n015) ou K16 (séquence ID n 16), respectivement, de la présente invention. Le groupement Dde a donc été utilisé pour la protection de la chaîne latérale de la lysine pendant la synthèse du peptide, et ensuite libéré par deux traitements de 5 min avec 2 % d'hydrazine dans la diméthylformamide (DMF). La molécule de fluorescéine a été couplée directement sur le peptide synthétisé. Le couplage de la sonde a été réalisé à l'aide de l'ester fluorescéine- (5- (6)-carboxylate de Nhydroxysuccinimidyle. Pour cela, à un équivalent de résine sont ajoutés 4 équivalents d'ester activé de fluorescéine en présence de 14 équivalents de diisopropyléthylamine (DIEA). La réaction se déroule dans le solvant NMP pendant une nuit. La déprotection finale est enfin réalisée. INTRODUCTION DE LA BIOTINE. Un bras espaceur 8-amino-3, 6dioxaoctanoïque a été ajouté dans un premier temps sur la lysine 11 préalablement déprotégé du groupement Dde. La réaction est similaire à celle décrite dans le paragraphe précédent. La biotine est ensuite incorporée sous la forme d'un ester biotinamidocaproate de N-hydrosuccinimidyle : à un équivalent de résine sont ainsi ajoutés 4 équivalents d'ester activé de biotine en présence de 14 équivalents de diisopropyléthylamine (DIEA). La réaction se poursuit pendant une nuit à température ambiante. La résine est ensuite lavée avant d'être traitée par la solution de déprotection finale. INTRODUCTION D'UN GROUPEMENT THIOL. Le peptide CD4M9 est synthétisé selon la procédure décrite ci-dessus avec la Lysine en position 11 présentant comme groupement protecteur de la chaîne latérale un groupement Dde. Après synthèse du peptide, le peptide-résine est traité à 5 reprises avec une solution de 2% d'hydrazine dans la DMF. Le couplage d'un bras de liaison est réalisé pendant une heure à température ambiante dans la DMF avec 10 équivalents d'acide Fmoc-8-amino-3, 6-dioxaoctanoïque utilisant le réactif HBTU en présence de diisopropyléthylamine. Le groupement Fmoc est ensuite déprotégé avec 20% de pipéridine dans la DMF. Le peptide-résine est dès lors traité avec 10 équivalents de réactif de Traut (hydrochlorure de 2-iminothiolane (Sigma) en présence de DIEA. Le peptide est enfin libéré et déprotégé comme décrit ci-dessous. DEPROTECTION FINALE DE LA RESINE. Le clivage de la résine et des groupements protecteurs présents sur les chaînes latérales ont été réalisés simultanément par traitement du peptide lié à la résine par de l'acide trifluoroacétique (TFA). Avant d'effectuer le clivage, la résine a été lavée plusieurs fois au dichlorométhane (DCM) et enfin séchée. Le réactif utilisé lors du clivage est un mélange acide contenant 81,5 % de TFA et les piégeurs phénol (5 %), thioanisole (5 %), eau (5 %), éthanedithiol (2,5 %) et tri-isopropylsilane (1 %). La résine a été traitée avec ce mélange pendant trois heures sous agitation et à température ambiante, à raison de 100 ml de solution par gramme de résine. Le peptide libre en solution a été récupéré par filtration. Le peptide a été ensuite précipité et lavé à froid dans l'éther de diisopropyle puis dissous dans de l'acide acétique à 20 % et lyophilisée. REPLIEMENT DES PEPTIDES DE LA PRESENTE INVENTION PAR FORMATION DE PONTS DISULFURES Le peptide récupéré après lyophilisation, le brut de synthèse, se trouve sous forme réduite, c'est-à-dire que les ponts disulfures intrachaînes ne sont pas formés. La formation de ces liaisons covalentes a été réalisée en utilisant le couple redox cystamine/cystéamine. Le brut de synthèse a été repris dans l'eau ajoutée de TFA 0,1 % (v/v) et de chlorure de guanidinium 6M pour faciliter sa dissolution, à raison de 2, 0 mg. mil-1. Cette solution a ensuite été ajoutée au goutte-à-goutte, diluée à 0, 2 mg/ml', au tampon de réduction, composé de Tris/HCl 100mM, pH 7,8, et de cystéamine 5 mM. La cystamine (oxydant) 0,5 mM en final, a été ajoutée après 45 minutes de réaction à température ambiante. Le milieu est amené à pH 3,0 après 30 minutes. La cystéamine permet de réduire les groupements thiols présents sur le peptide. A l'air libre, elle s'oxyde et permet l'oxydation de cystéines et donc le repliement du peptide par formation de ponts disulfures intrachaînes. La cystamine ajoutée en fin de manipulation permet de parfaire le repliement. Le bon déroulement de l'oxydation est vérifié par chromatographie analytique en comparant les temps de rétention des produits brut et oxydé, plus importants pour le premier. L'oxydation du peptide CD4M9, présentant un groupement thiol en position 11, diffère quelque peu de celle décrite dans le paragraphe plus haut. Le milieu de repliement réactionnel, composé d'un tampon 20 mM phosphate, 200 mM NaCl, ajusté à pH 7,8 est longuement dégazé par de l'argon et ensuite additionné de 5 mM de cystéamine, 5 mM cytamine. Le peptide comprenant sept fonctions SH libres est ensuite ajouté et la réaction d'oxydation est stoppée par ajout d'acide après seulement 10 minutes, temps suffisant au repliement et à la formation des trois ponts disulfures naturels et suffisamment court pour limiter la formation de produit secondaire correspondant à des états d'oxydation supérieurs. PURIFICATION DES PEPTIDES DE LA PRESENTE INVENTION Les peptides de la présente invention ont été purifiés par chromatographie liquide haute performance en phase inverse sur une colonne préparative Vydac C18 (marque de commerce) (1,0 x 25,0 cm). On a utilisé un gradient linéaire 0-60 % d'acétonitrile dans une solution aqueuse d'acide trifluoroacétique à 0,1 % pendant 90 minutes. Les fractions du pic majeur ont été analysées par HPLC analytique ; les fractions ne présentant qu'un seul pic ont été rassemblées et lyophilisées. Le produit ainsi obtenu a été analysé par spectrométrie de masse. EXEMPLE 2 : TESTS DE COMPETITION PAR ELISA INDIRECTE. L'inhibition de l'interaction rgpl20-CD4 a été mesurée par ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) indirecte. 50 ng par puits d'anticorps anti-gpl20, D7324, ont été immobilisés sur une plaque 96 puits (Maxisorb, Nunc) pendant une nuit à 4 C. Après passivation par la Sérumalbumine Bovine et trois lavages avec le tampon de lavage (Tris 10 mM, pH 7,8, Tween 20 0,05 %), 15 ng de rgpl20HXB2 par puits ont été ajoutés. Différentes concentrations de compétiteurs ont ensuite été ajoutées, après trois lavages, ainsi que 0,4 ng de CD4 soluble par puits. Des témoins 100 % ne contenant que du CD4 soluble sont effectués. Après une nuit à 40C et trois lavages, 5 ng d'anticorps de souris anti-CD4 L120.3 ont été ajoutés par puits, puis un anticorps de chèvre anti-IgG de souris couplé à la peroxydase (GAMPO). La révélation a été effectuée par ajout de 3,3', 5,5'-tétraméthylbenzidine, substrat fluorescent de la peroxydase. La réaction a été arrêtée après 30 minutes par ajout d'acide sulfurique 2M. L'inhibition de l'interaction rgpl20-CD4 a été calculée par lecture de l'absorbance A à 450 nm. Des témoins sans compétiteur ont permis de déterminer l'absorbance Aloi% (absorbance en absence de compétiteur). Le pourcentage d'inhibition pour chaque concentration de peptide de la présente invention a été calculé par la formule : pourcentage d'inhibition = 100 x (A1oo%-A)/A1OO%. Les tests ont été conduits en duplicats et les résultats exprimés comme la moyenne de doublons expérimentaux. Les activités biologiques du peptide CD4MO (séquence ID n 18) issu de la charybdotoxine et du peptide CD4M3 (séquence I. D. n 17), issu de la scyllatoxine (séquence I. D. n 2) ont été testées en test ELISA indirecte. Ces peptides présentent une capacité à inhiber l'interaction rgp120LAI-CD4 soluble, avec une concentration d'inhibition à 50% (ou CI5o) de 4,0 x 10-5 M et de 2,0 x 10-5 M, respectivement (Tableau 1) [4]. Ces valeurs sont 10 000 fois plus élevées que la CI50 présentée par le CD4 soluble (CI50 = 4, 0 x 10-9 M) [4]. La figure 1 annexée regroupe les résultats obtenus dans cet exemple avec les peptides de la présente invention. Il s'agit de représentations du pourcentage de fixation (% F) de la protéine virale gpl20HXB2-CD4 en fonction de la concentration molaire (C (M) ) en compétiteur, c'est-à-dire en peptide de la présente invention. Cette figure montre l'inhibition de l'interaction CD4 -gp12 OHXB2. Le CD4M9 (séquence ID n 3) a été testé en ELISA par compétition. Il présente la capacité d'inhiber l'interaction rgpl20-CD4 soluble avec une concentration d'inhibition à 50% (ou CIso) de 4, 10-7 M (Tableau I) soit une augmentation de la capacité d'inhibition d'un facteur 50 par rapport au peptide de la présente invention CD4M3 (séquence ID n 17). Le peptide de la présente invention CD4M9, en test ELISA par compétition, est également capable d'inhiber l'interaction du CD4 avec d'autres protéines gpl20 recombinantes, provenant de virus T-et M-tropique : VIH-lIIB, VIH-lMN, VIH-lBa-L, VIH-1JR-FL, VIH-lw61D, avec une concentration d'inhibition à 50% (CIso) entre 0, 1 et 1, 0 x 10-6 M [4]. Ce peptide inhibe l'interaction gpl20HXB2-CD4 soluble à une CIso de 9 x 10-sM (figure 1, tableau I). Un mutant CD4M9V, comportant la substitution de la séquence C-terminale Gly-Pro du CD4M9 par Val, présente une CIso de 3,0. 10-7 M dans l'inhibition de l'interaction gp120LAcCD4 (tableau 1), ce qui représente une légère augmentation de la capacité inhibitrice. Le mutant CD4M9Bip comporte la substitution Phe23Bip par rapport au CD4M9 ; ce peptide présente une CIso de 1, 0. 10-7 M dans l'inhibition de l'interaction gpl20LAI-CD4 (tableau 1), ce qui représente une augmentation supplémentaire de la capacité inhibitrice. Le mutant CD4M9T (séquence ID n04), comportant un acide thio-propionique en substitution de l'acide aminé Cys C-terminal, présente une CIso de 3,0. 10-8 M dans l'inhibition de l'interaction gp120LAI-CD4 (figure 1 ; la CIso dans l'interaction gpl20HxB2 est de 1, 1. 10-s M, tableau 1), ce qui représente une augmentation de la capacité d'inhibition d'un facteur proche de 10 par rapport à CD4M9. Les mutants suivants présentent tout un résidu thio-propionique (TPA) et valine (Val ou Ile) en position N-et C-terminale, respectivement, et ont tous été testés avec la gpl20, issue des virus T tropiques VIH-1HXB2 et VIH-lLAI. Le peptide de la présente invention CD4M27 (séquence I. D. n06) comporte les mutations Arg5Phe (pour enlever une arginine non essentielle et protéger le pont disulfure 6-24), Gly27Val et la délétion du résidu C-terminal proline (pour mieux stabiliser la structure). Il présente une augmentation de la capacité d'inhibition de la liaison CD4 - gp12 OHXB2, CIso de 7. 10-9 M, (Fig. 1, Tableau I). Les peptides CD4M27 A, B et C sont obtenus respectivement par une mutation Gly21Ser (a), Ser22His (b) et Ser22Asn (c) à partir du peptide CD4M27. Ils présentent une capacité d'inhibition comparable à celle du peptide CD4M27. Le peptide de la présente invention CD4M32 (séquence ID n 12), comparée au CD4M9T, comporte la délétion du résidu proline C-terminal, la mutation Gly27Val et la mutation de la Phe23 en biphénylalanine (Bip) : la mutation Phe23Bip ajoute une extension hydrophobe à la chaîne latérale de la Phe23, pour augmenter l'interaction avec la cavité hydrophobe de la protéine virale gpl20. CD4M32 présente une augmentation de l'inhibition de la liaison CD4-gpl20HxB2 (CIso de 8. 10-10 M, Fig. 1). Le mutant CD4M30 (séquence ID n 10), par rapport au CD4M32, comporte la mutation Arg5Phe (déjà introduite dans le CD4M27) et Ala4Gln pour augmenter la solubilité de la molécule. Ce peptide de la présente invention présente un CIso de 3, 0 nM, dans les tests d'inhibition de l'interaction CD4-gpl20LAI. Le mutant CD4M33 (séquence ID n 13) regroupe les mutations présentes dans les deux peptides précédents, notamment Cys1TPA, Arg5Phe, Phe23Bip, Gly27Val, la délétion d'un résidu en position C-terminale et en plus la mutation Ala4His (pour augmenter la solubilité de la molécule). Ces mutations ont un effet additif et permettent au peptide de la présente invention CD4M33 d'inhiber l'interaction CD4-gpl20HxB2 et CD4 -gp12 OLAI avec une CI50 de 1,2 x 10-10 M et de 2,5 x 10-10 M (Fig. 1 et Tableau 1) soit une augmentation de la capacité d'inhibition de la liaison CD4-gpl20 d'un facteur 1000 par rapport au CD4M9. Un peptide supplémentaire, CD4M35 (séquence ID n 14), a été synthétisé avec, par rapport au peptide CD4M33 de la présente invention, les mutations Val27Ile et Gly21 (D) Asp. Ces mutations permettent au peptide de la présente invention d'inhiber l'interaction CD4-gpl20HXB2 avec un CIso de 7.0 10-11 M (Fig. 1, Tableau 1). Deux autres peptides K15 (séquence ID n 15) et K16 (séquence ID n016) ont été synthétisés : ils comportent les substitutions Gln7Val, Leu8Gln, LysllHis, par rapport au peptide CD4M33 de la présente invention, et un résidu Lys en position 15 ou 16, respectivement. Un groupement fluorescent de fluorescéine a ensuite été fixé, d'une façon covalente, au niveau de la chaîne latérale de ce résidu lysine, selon le protocole décrit dans l'exemple 1. Les peptides fluorescents K15 et K16 présentent une CIgo de 5,0. 10-8 M et 6,0. 10-9 M dans l'inhibition de l'interaction gp120LAI-CD4, dont l'affinité pour la protéine virale gpl20 n'est pas modifiée par un marquage. En conclusion, la présente invention fournit une famille de peptides qui représentent de puissants inhibiteurs de l'interaction CD4-gpl20. Tableau 1 Concentration d'inhibition 50% (CIso) des peptides mimétiques du CD4 dans l'interaction du CD4 recombinant soluble pour la protéine de l'enveloppe virale gpl20LAI et gpl20HxB2. L'écart type pour chaque valeur est inférieur à 30%. Nom Séquence IDn CI50 (gp120LAI) CI50 (gp120HXB2) CD4MO 18 40 IIM CD4M3 17 20 pM CD4M9 3 400 nM 90 nM CD4M9V-300nM CD4M9T 4 30nM 11 nM CD4M9Bip - 100 nM CD4M27 6 10 nM 7 nM CD4M30 10 3, 0 nM CD4M32 12 2, OnM SOOpM CD4M33 13 250 pM 120 pM CD4M35 14-70pM K15FR 15 50nM K16FR 16 6 nM Exemple 3 : Expériences de résonance plasmonique de surface Les expériences de résonance plasmonique de surface ont été réalisées avec un système Biacore 2000 (Biacore, Uppsala, Suède). Les peptides à tester ont été couplés à la biotine (comme décrit auparavant) puis immobilisées sur une puce sur laquelle de la streptavidine a été préalablement fixée. La streptavidine a été immobilisée sur la puce comme suit : la surface de la puce a été d'abord activée par l'injection de 50 ilL d'agent de couplage prévu par le constructeur et pouvant former des liaisons amidiques : N-éthyl-N'- (diméthylaminopropyl) carbodiimide (EDC)/N-hydroxysuccinimide (NHS), 50/50 ; ensuite, 20 gel de streptavidine, 0,2 mg. mL -1 dans l'acétate de sodium 10 mM, pH 4,5, ont été injectés à 5 jlL. min', suivis d'une neutralisation des groupements carboxyliques activés par 2 x 20 p, L d'éthanolamine 1, 0 M, pH 8, 5. Les molécules biotinylées ont été ensuite injectées (10 jj. L. min' dans un tampon Hepes 10 mM, NaCl 0,3 M, pH 7,4) sur trois des quatre pistes de la puce. Sur la première piste, le CD4M9 (10-7 M) a été immobilisé jusqu'à une valeur RU (unité de résonance) 100 ; la deuxième piste a été laissée vierge (témoin) ; la troisième piste a été recouverte avec du CD4 soluble (10-7 M) jusqu'à une valeur de 450 RU ; sur la quatrième piste, le CD4M33 (10-7 M) a été immobilisé à une valeur de 100 RU. Pour chaque analyse, plusieurs concentrations de différentes gpl20 (souches HXB2, BAL, JRFL) ont été injectées, à une vitesse de 50 L.min-1 à 25 C, pour un temps d'association de 4 min. La puce est ensuite rincée avec un tampon de course, 10 mM Hepes, 150 mM NaCl, 3,4 mM EDTA et 0,05 % P20, pH 7,4, pour analyser la phase de dissociation. Après chaque expérience, la puce est régénérée avec 25 go d'acide formique 1,0 M. Les constantes de dissociation sont calculées à partir des constantes cinétiques déterminées par le logiciel Bia-evaluation 3,0. Exemple 4 : Activité antivirale des mimétiques CD4. Les manipulations du matériel infectieux ont été réalisées dans un laboratoire de haute sécurité de type L3. De façon à être le plus proche des conditions physiopathologiques 1 l'étude a été menée à l'aide de cultures primaires de cellules mononucléées du sang périphérique (CMSP) humaines. Dans toutes les expériences, les effets des nouvelles molécules ont été comparés à ceux de l'AZT. ISOLEMENT, CULTURE ET ACTIVATION DES CELLULES Milieux de culture Le milieu A est composé de milieu de culture cellulaire RPMI 1640 (Life Technologies) supplémenté par 10% de sérum de veau foetal (SVF, Roche Product) décomplémenté par la chaleur à +56 C pendant 30 min, de 2 mM de L-Glutamine (Roche Product), et d'une solution à 100 ug/ml de trois antibiotiques (pénicilline, streptomycine, néomycine ; PSN, Life Technologies). Le milieu B est constitué de milieu A supplémenté par 20 UI/ml d'IL-2 humaine recombinante (Roche Product). Isolement et activation des CMSP Les CMSP sont séparées des autres éléments figurés du sang par centrifugation en gradient de ficoll (MSL 2000, Eurobio) : 30 ml de sang, d'un donneur sain, dilués au tiers sont déposés sur un coussin de 20 ml de ficoll. Après 20 min de centrifugation à 850 g, l'anneau de CMSP est prélevé puis lavé deux fois à l'aide de RPMI 1640, après 10 min de centrifugation à 750 g et 5 min à 400 g. Les CMSP sont alors activées pendant 48 h par 1 ug/ml de phytohémagglutinine-P (PHA-P ; Difco Laboratories). Les CMSP sont cultivées à +37 C, en atmosphère saturée en humidité, sous 5% de C02. Au terme des 48 heures d'activation mitogénique, elles sont cultivées en milieu B. Tout au long de la culture, les surnageants de culture sont prélevés, et les milieux de culture sont renouvelés tous les trois ou quatre jours. A chaque renouvellement des milieux de culture, la viabilité cellulaire est évaluée par une observation microscopique. EVALUATION DE L'ACTIVITE ANTIRETROVIRALE DES MOLECULES Les composés de la présente invention CD4M30, CD4M33 et CD4M35 ont été solubilisés dans de l'eau ppi stérile (Aguettant), aliquotés puis conservés à-20 C. Le composé SAH-CD4 (CD4 soluble couplé à la sérum albumine humaine fournit par Aventis (Vitry-sur-Seine) a été conservé à -80OC jusqu'à son utilisation. Les solutions et les dilutions ont ensuite été réalisées extemporanément dans du milieu A. Les CMSP ont été prétraitées avec les composés pendant 1 heure puis infectées par l'isolat de référence à tropisme lymphocytaire VIH-1LAI ou par l'isolat clinique VIH-lLEN. Les caractéristiques biologiques de cet isolat sont : rapid/high, scyncitia inducing (SI), X4 : il est donc préférentiellement apte à infecter les lymphocytes. Le stock viral a été constitué en amplifiant in vitro cette souche à l'aide de cellules mononucléées du sang ombilical (CMSO) activées préalablement par 1 ug/ml de PHA-P et cultivées dans du milieu B. Afin d'éliminer les facteurs solubles tels que les cytokines, les surnageants de culture ont été ultracentrifugés à 360 000 g pendant 5 min, et les culots ont été resuspendus dans du RPMI 1640. Le stock viral ainsi constitué a été ensuite titré à l'aide de CMSP activées par la PHA-P. La TCIDso (50% Tissue Culture Infectious Dose) a été calculée en utilisant la formule de Kärber. Les CMSP ont été infectées avec différentes doses virales 10-100 TCIDso de la souche VIH-1LAI et par 50 TCIDgo de la souche VIH-1LEN (multiplicité d'infection m. o. i. = 0,001). DOSAGE DE LA REPLICATION VIRALE DANS LES SURNAGEANTS DE CULTURE. La réplication virale a été mesurée, au jour 7 de la culture, en dosant l'activité Transcriptase Inverse dans les surnageants de culture à l'aide de la trousse de dosage RetroSys (marque déposée) selon les recommandations de la société Innovagen. Analyse des résultats et détermination des doses effectrices 50% Les doses effectrices 50% (DEso) sont calculées en utilisant le logiciel"Dose-effects analysis with microcomputers"mis au point par J. Chou & T. C. Chou. EXEMPLE 5 : PROTOCOLE DE PRODUCTION DE LA PROTEINE VIRALE GP120 RECOMBINANTE. Le fragment codant la protéine virale gpl20 (acide aminé V12 à R481) a été amplifié par PCR dans le plasmide HIVIIIB/HXB2R, à l'aide de deux amorces permettant de générer un fragment contenant les sites BamHI (en amont du site KpnI de la protéine virale gpl20) et PstI (en aval du codon stop ajouté à l'extrémité de la séquence de la protéine virale gpl20). Le fragment BamHI/PstI ainsi obtenu a été cloné dans le vecteur Bluescript (pBS, Stratagene), conduisant au plasmide pBSm1. La séquence codant l'extrémité N-terminale de la protéine virale gpl20 (Tl à Gll), ainsi que celle codant le peptide signal de l'ecdystéroide glycosyltransférase du baculovirus d'Autographa californica, ont été insérées entre les sites BamHI et KpnI de pBSml, conduisant à pBSm2. Le fragment BamHI-PstI de pBSm2 a ensuite été inséré entre les sites BglII-PstI du vecteur de transfert pll9P du baculovirus P10. Des cellules d'insectes Sf9 ont été cotransfectées avec l'ADN viral purifié du baculovirus modifié AcSLP10 et l'ADN du vecteur recombinant pll9P gpl20. Les virus recombinants sont purifiés par une méthode standard. Les cellules Sf9 scla (lignée adaptée à la croissance sans sérum, déposée à la collection de l'Institut Pasteur) sont entretenues en spinner en milieu sans sérum. Ces cellules (5. 105 cellules/mL) sont ensuite infectées par les virus recombinants à une multiplicité d'infection de 1 UFP (Unité Formant Plage) par cellule et incubées à 28 C. Après six jours d'infection, les cellules sont centrifugées (500 g), et la protéine virale gpl20 sauvage est concentrée et directement purifiée à partir du surnageant de culture par chromatographie d'affinité sur une colonne de Sépharose-bromacétylée couplée à l'anticorps anti-gpl20 D7324. EXEMPLE 6 : FIXATION DE L'ENVELOPPE VIRALE. Afin de mieux caractériser son activité biologique, le peptide de la présente invention CD4M33 (séquence ID n 13) a été marqué avec la biotine et avec la sonde fluorescente fluorescéine comme décrit dans l'exemple 1, au niveau de la Lys-11 positionnée sur la surface opposée de la surface active du peptide de la présente invention CD4M33. Son activité demeure inchangée dans des tests ELISA (Figure 2). La figure 2 regroupe les résultats obtenus dans cet exemple. Il s'agit de courbes montrant l'évolution du pourcentage de fixation (% F) de peptides de la présente invention à la protéine virale gp120HxB2 en fonction de la concentration molaire de ces peptides (C (M)). Ces résultats montrent que le peptide CD4M33 peut incorporer un groupement de marquage sans que son activité biologique soit altérée. Afin d'obtenir une première évaluation de l'affinité du peptide de la présente invention CD4M33 pour la protéine virale gpl20, une analyse d'interactions biospécifiques (décrite dans l'exemple 3), basée sur la détection par résonance plasmonique de surface, a été utilisée. Dans cette technique, le peptide CD4M33 de la présente invention biotinylé (préparé comme dans l'exemple 1) a été fixé de façon spécifique sur la matrice de dextran carboxylé d'une puce qui a été prégreffée avec de la streptavidine. Des solutions de différentes protéines recombinantes gpl20 (gpl20HxB2, gpl20BAL et gp120JRFL) ont été ensuite injectées sur cette matrice et un signal indiquant une association spécifique et de haute affinité a été alors détecté. La figure 3 montre l'évolution du signal de résonance plasmonique en fonction du temps, après interaction de la protéine gpl20HxB2 (à des concentrations différentes) avec le peptide CD4M33 de la présente invention. Après régression non-linéaire des courbes d'association et de dissociation obtenues, on obtient une constante de dissociation KD de 2.4. 10-9 M pour la protéine virale gpl20HxB2, de 7.4. 10-9 M pour la protéine virale gp120BAL et de 8. 5. 10-9 M pour la protéine virale gp12 OJRFL'Ces valeurs sont comparables à la valeur de KD=1, 9xlO-8 M, reportée dans la littérature [34] pour l'interaction CD4-gpl20. La même technique basée sur la détection par résonance plasmonique de surface a été aussi utilisée pour vérifier si le peptide de la présente invention CD4M33 pouvait fixer l'enveloppe virale dans sa forme native. Pour ce faire, une suspension de particules virales inactivées par l'adrithiol-2 [35] a été injectée sur la même puce, greffé avec les anticorps 48d et CG10. Un signal d'interaction spécifique et de haute affinité a été alors clairement détecté, dans le cas où la suspension était incubée avec le peptide de la présente invention CD4M33, mais pas dans le cas où la suspension virale était incubée avec le peptide CD4M9, beaucoup moins actif, ou en absence du peptide (figure 4). La figure 4 montre que la présence du peptide CD4M33 est essentielle pour l'interaction de l'enveloppe virale avec les anticorps 48d et CG10, spécifiques de l'enveloppe virale, et que le VIH-1 ne se fixe pas aux anticorps en son absence : il s'agit d'une démonstration indirecte de la fixation du peptide CD4M33 à l'enveloppe virale du VIH-1. Ces expériences démontrent que le peptide de la présente invention CD4M33 marqué ou non possède une capacité à fixer l'enveloppe virale VIH tant dans sa forme recombinante isolée et purifiée que dans sa forme native présente à la surface du virus. EXEMPLE 7 : INHIBITION DE L'INFECTION PAR LE VIRUS DU SIDA Afin d'évaluer la capacité antivirale des peptides de la présente invention, les inventeurs ont conduit des expériences d'infection, par le virus VIH-1LAI et par l'isolat chimique VIH-1Lm, de cultures primaires de cellules mononucléoses du sang périphérique (CMSP) humaines. Dans toutes les expériences, les effets des nouvelles molécules ont été comparés à ceux de l'AZT. Le virus VIH-1LAI a été ajouté à des différentes doses virales (10-100 TCID50, Tableau 2) en présence de concentrations variables de CD4M30, CD4M33, CD4M35 et du SAH-CD4. Le virus VIH-1LEN a été ajouté à TCIDso (tableau 4) en présence de CD4M33. Des tests de toxicité de mimétiques du CD4 ont été aussi effectués sur les mêmes cellules. A. TOXICITE DES MIMETIQUES CD4. Aux doses testées, aucun des composés, AZT, SAH-CD4 ou mimétiques antiCD4, n'a diminué la viabilité des CMSP activées par la PHA-P. B. ACTIVITE ANTI-VIH-liAi DES MIMETIQUES CD4. b. 1. Réplication de la souche VIH-1LAI dans les CMSP. La souche VIH-1LAI réplique à haut niveau dans les CMSP activées par la PHA-P. Le pic de réplication virale est au jour 7 de la culture, et les effets des peptides CD4M30, CD4M33 et CD4M35 ont été quantifiés à ce temps post-infection. b. 2. Effets de l'AZT sur la réplication de la souche V1H-1uI dans les CMSP. L'AZT inhibe fortement la réplication de la souche VIH-lAI dans les CMSP activées par la PHA-P (Tableau 2). La DEgo est égale à 3-14 nM. b. 3. Effets du composé SAH-CD4 sur la réplication de la soucheVIH-lLAidanslesCMSP. L'activité antirétrovirale du composé SAH-CD4 vis-à-vis des CMSP activées par la PHA-P et infectées par la souche V1H-1LAI se traduit par une inhibition de 8515% de la réplication virale à la concentration de 2, 5 uM. b. 4. Effets des mimétiques CD4 sur la réplication de la souche VIH-ILAI dans les CMSP. Les peptides de la présente invention CD4M30, CD4M33 et CD4M35 ont démontré une activité anti-rétrovirale (Tableau 3) dans les cultures de CMSP activées par la PHA-P et infectées par la souche V1H-1LAI'Le composé CD4M33 est le plus antiviral des trois aux différentes doses virales testées. Son activité est plus faible de celle de l'AZT : DEso = 100-500 nM vs. AZT : DE50 = 3 nM (tableau 3 ci-dessous), mais elle est supérieure d'au moins 1 logarithme de base 10 à celle du dérivé du récepteur CD4, SAH-CD4. Les figures 5A-C regroupent les résultats obtenus : pourcentage d'inhibition (% I) en fonction de la concentration en peptide en nM. C. ACTIVITE ANTIRETROVIRALE DU COMPOSE CD4M33 VIS-A-VIS DE L'ISOLAT CLINIQUE VIH-luN cl. Effets de l'AZT sur la réplication de l'isolat VIH- 1LEN dans les CMSP. L'AZT inhibe fortement la réplication de la souche VIH-1LEN dans les CMSP activées . N dans les CMSP activées par la PHA-P et infectées par l'isolat VIH-1LEN, avec une DEso égale à 2,2 nM (tableau 4). Le degré d'inhibition est identique à celui observé vis-à-vis de la souche de référence à tropisme lymphocytaire VIH- PILAI- c2. Effets du mimétique CD4M33 sur la réplication de l'isolat clinique VIH-1LEN dans les CMSP. L'activité rétrovirale du mimétique CD4M33 vis-à-vis des CMSP activées par la PHA-P et infectées par l'isolat VIH-1LEN se traduit par une diminution dose dépendante de la réplication virale et une DEso égale à 367 nM (tableau 4). Le mimétique CD4M33 conserve donc une activité anti-VIH-1 significative, même si elle s'avère légèrement plus faible par rapport à celle observée avec la souche VIH-1LAI. Ces expériences démontrent que ces peptides de la présente invention sont capables d'inhiber l'infection des cellules, même à des doses virales élevées, avec des valeurs de DEso de 900-35 nM (Tableau 3 ci-dessous). Le peptide de la présente invention CD4M33 est le plus antiviral et son DEso est d'environ 100 nM pour les doses virales standards d'infection (Fig. 4 a-c, Tableau 3 ci-dessous). En outre, le peptide CD4M33 est doté d'une activité antirétrovirale supérieure à 1 logarithme de base 10 à celle observée avec un autre dérivé du récepteur CD4, le SAH-CD4, et surtout a montré une activité anti-VIH significative vis-à-vis d'un isolat clinique (tableau 4). En conclusion, le peptide de la présente invention CD4M33, qui est capable de se fixer sur la protéine virale gpl20 recombinante avec une Kd de 2.4-8. 0 nM (expériences de résonance plasmonique de surface) et d'inhiber l'interaction entre les protéines recombinantes CD4-gpl20 en ELISA, avec une CIso de 120-250 pM, présente aussi la capacité d'inhiber cette interaction dans des cultures primaires de cellules humaines, d'inhiber l'étape initiale de l'entrée et donc de bloquer l'infection même d'un isolat clinique VIH-1. Tableau 2 Effet de l'AZT sur la réplication de la souche VIH-LLAI dans les CMSP activées par la PHA-P. Les résultats sont exprimés en pourcentages d'inhibition + écart-type : AZT (nM) % Inhibition 139+10% 10 59+28% 100 87+18% 100 100 ~ 0% 10 000 100 : ! : 0% Tableau 3 Doses effectives 50% (DEso) des peptides de la présente invention et de l'AZT dans des cultures de cellules mononucléoses du sang périphérique (CMSP) humaines, activées par la phytohémagglutinine-P (PHA-P) et infectées par la souche VIH-LLAI à des différentes doses infectieuses (TCIDso) : 50% Tissue Culture Infectious Dose) : DEgo (nM) séquences 100 TCIDso 50 TCIDso 10 TCIDso CD4M30 894 235 253 CD4M33 534 133 118 CD4M35 154 428 266 AZT 14 3 5 Tableau 4 Effet de l'AZT et du mimétique CD4M33 sur la réplication de l'isolat clinique VIH-1Lm dans les cultures de cellules mononucléoses du sang périphérique (CMSP) humaines, activées par la phytohémoagglutinine-P (PHA-P). Les cellules ont été infectées par 50 TCID50 de virus : VIH-1LEN AZT CD4M33 DEso (nM) 2, 2 367 DE70 (nM) 4,8 542 DEgo (nM) 16,5 1006 EXEMPLE 8 : EXPOSITION DE SITES ANTIGENIQUES DE L'ENVELOPPE. Afin d'évaluer la capacité du peptide de la présente invention CD4M33 à induire des variations conformationnelles dans la protéine gpl20, caractérisée par l'exposition d'épitopes sensibles à des anticorps neutralisants, l'interaction de tels anticorps humains 48d et CG10 avec l'enveloppe VIH en présence du CD4M33 et, par comparaison, du CD4 recombinant, a été entreprise, en utilisant la technique de résonance plasmonique de surface. Les anticorps 48d et CG10 ont été fixés covalement à la surface des puces (bio-chip), puis des solutions de gpl20, en absence de CD4 et en présence d'un excès de CD4 et de CD4M33 ont été injectées. Lorsque le CD4M33 est ajouté à la protéine virale gp12 OHXB2, avec un excès molaire de 1.5 et 20 fois, la protéine virale manifeste une forte interaction avec les anticorps (Figures 6a-b) ; par contre, en son absence (et en absence de CD4 soluble) la protéine de l'enveloppe interagit avec les anticorps très faiblement (Fig. 6a-b). En outre, l'effet de l'ajout de CD4M33 sur l'augmentation de l'affinité d'interaction de la protéine virale gpl20 pour les anticorps est comparable à celui qui est obtenu par ajout de quantités équivalentes de CD4 soluble. Les inventeurs ont conduit aussi des expériences similaires de résonance plasmonique en utilisant directement le VIH-1, souche HXB2. La figure 4 montre les résultats obtenus dans ces expériences et démontre l'évolution du signal de résonance plasmonique en fonction du temps après interaction d'une suspension de particules virales VIH-1HXB2 avec une puce présentant les anticorps 48d et CG10 immobilisés : le VIH-1 interagit avec les anticorps seulement après incubation avec le peptide CD4M33 de la présente invention et, par contre, en son absence ou en présence du peptide [Ala23] CD4M9 inactif, l'interaction est pratiquement nulle. La technique de résonance plasmonique de surface a donc permis de démontrer que la liaison du CD4M33 à la protéine de l'enveloppe gpl20 est capable d'induire une modification de la protéine virale, qui, par suite, expose de façon préférentielle certaines surfaces moléculaires aux anticorps neutralisants (17b, CG10), isolés chez des personnes affectées par le VIH-1 [11], [12], [13]. L'exposition de ces épitopes cryptiques, induite par le peptide CD4M33 de la présente invention, est efficace tant dans la protéine de l'enveloppe sous forme recombinante que dans l'enveloppe des virions. De plus, aux vues des expériences récentes qui montrent que la protéine gpl20 complexée au CD4 peut être une forme moléculaire capable d'induire la formation d'anticorps neutralisants [31, 32, 33] le complexe CD4M33-gpl20 représente donc un candidat très intéressant en tant qu'immunogène pour l'induction d'anticorps neutralisants, notamment dans une application vaccinale. Le CD4M33 possède la propriété de démasquer des épitopes de la protéine virale gpl20, comme le fait le CD4 soluble, avec l'avantage qu'il ne pourra pas induire de réponse immune contre le CD4 et que, de plus, en raison de sa petite taille, il permettra un accès encore plus favorable aux épitopes démasqués de la protéine virale gpl20. EXEMPLE 9 : CRIBLAGE A) MATERIEL ET METHODES. LE MATERIEL Le matériel utilisé pour les mesures est celui décrit dans les documents référencés [41], [42] et [43], ainsi que dans le brevet US 5, 756, 292. LES PEPTIDES Des peptides de la présente invention, marqués ou non-marqués, sous forme de 50 1g lyophilisé (poudre) ont été solubilisés en ajoutant dans un Eppendorf (marque de commerce) contenant la poudre, 50 11 d'un tampon potassium phosphate, 10 mM, 100 mM KC1, pH 7,0 afin d'obtenir une solution concentrée à entre 300 et 750 pM. Le marquage est réalisé avec de la fluorescéine (F) ou avec de la rhodamine green (R). Deux autres solutions, des dilutions 1 : 10 et 1 : 100 des solutions précitées, ont été préparées avec le même tampon. Ces peptides marqués sont utilisés d'abord dans des expériences de liaison à la Gpl20 pour déterminer leur affinité et ensuite sont utilisés en tant que traceurs, dans des expériences de criblage par compétition de l'interaction de ces peptides avec la protéine virale gpl20. Le sCD4 (CD4 soluble) utilisé est une protéine recombinante produite dans le système d'expression Baculovirus par Intracell (marque de commerce) commercialisé en France par Neosystem Laboratoire (Strasbourg, France). LES PROTEINES VIRALES GP120 Les protéines virales gpl20 ont été préparées sous forme de solutions à une concentration-1 mg/ml. LES TITRAGES DIRECTS Les titrages ont été réalisés en sens"inverse". D'abord, 4 ml d'une solution de peptide de la présente invention, marqué et à une concentration de 6 nM dans le tampon phosphate cité ci-dessus a été préparée. Ensuite, 200 pm d'une solution contenant 10 pl de gpl20 à une concentration de 0, 421 uM, 4 pl de peptide de la présente invention marqué à la fluorescéine et à une concentration de 6 nM, et 186 pl de tampon a été préparée. Toutes les mesures d'anisotropie ont été effectuées à l'aide d'un Beacon 2000 polarimeter (marque de commerce) (Société Panvera Corp., Madison WI) avec le jeu de filtres correspondant à la fluorescéine. L'anisotropie de 200 pl de la solution de peptide marqué seul a d'abord été testée. Suivant la sonde utilisée sur le peptide et les réglages de l'appareil, en particulier le gain, l'anisotropie du peptide de la présente invention marqué seul varie entre 80 et 110 unités de millianisotropie. Ensuite, l'anisotropie du tube contenant le peptide marqué et le gpl20 à 410 nM a été mesurée. Généralement, la valeur du peptide marqué en présence de cette forte concentration de gpl20 était de l'ordre de 200 millianisotropie. Le titrage a été effectué en faisant des prélèvements de 40 pi de la solution et ensuite des additions de 40 pl de la solution de peptide marqué seul à 6 nM. De cette façon, le gpl20 a été dilué, par une valeur de 0,1 unité log par dilution, tout en gardant constante la concentration de peptide marqué. Ce protocole de titrage à l'envers utilise le moins de gpl20 possible. Les mesures d'anisotropie ont été enregistrées jusqu'à la stabilisation du signal. Dans le cas de cette interaction, la stabilisation est relativement longue, puisqu'elle dure plus de 20 minutes pour le premier point, mais ensuite les points de dilution s'équilibrent plus vite, en 2 à 4 minutes. Tous les titrages ont été effectués à 21 C, dans un porte-échantillon thermostaté du Beacon 2000 (marque de commerce). Les peptides marqués ont montré une tendance à se coller aux parois des récipients. Plusieurs solutions de dilution ont donc été réalisées afin d'éviter une diminution progressive de la concentration de peptide marqué. LES COMPETITIONS Pour les tests de compétition, des simulations de la compétition du peptide CD4M33 marqué avec de la fluorescéine (CD4M33-F) avec le peptide CD4M33 nonmarqué ont été réalisées. Les résultats de ces simulations sont présentés sur la figure 13 annexée. Ces simulations ont montré que les conditions idéales pour la compétition seraient 20mM de Gpl20 et 6 nM de peptide marqué. La compétition a alors été effectuée entre 10 et 100 nM de peptide CD4M33 non-marqué. Les compétitions ont été effectuées expérimentalement en ajoutant à 200 ul d'une solution 6 nM de peptide CD4M33-F et 20 nM gpl20 des aliquotes de 1 pl de peptide CD4M33 compétiteur non marqué dans le tampon phosphate ci-dessus afin de couvrir des concentrations entre 10 et 100 nM. Les valeurs d'anisotropies ont ensuite été mesurées après chaque addition. Les courbes résultantes de ces compétitions ont été analysées pour déterminer le Kd de l'interaction entre le compétiteur et le gpl20 en gardant fixé le Kd entre le peptide CD4M33-F et le gpl20. Les analyses et les simulations ont été effectuées en utilisant le programme BIOESQ décrit dans les documents [41] [42] et [43]. B) RESULTATS. 1) MESURES D'AFFINITES AVEC DIFFERENTS PEPTIDES DE LA PRESENTE INVENTION POUR UNE PROTEINE GP120 Le principe du criblage par le procédé de la présente invention est démontré sur les Figures 8a), 8b) et 8c) annexées. Pour obtenir les résultats exposés sur ces figures, un peptide de la présente invention marqué par la rhodamine green, dénommé K16-R, en solution à une concentration de 6 nM a été titré par une solution de gpl20 de souche HXB2. Sur la figure 8a), la préparation de gpl20 s'est avérée un peu moins active que celle utilisée sur la Figure 8b). En effet, dans le premier cas (I K16/GP120) ), l'affinité (Kd) extraite de l'analyse des données selon un modèle de fixation simple, c'est à dire une molécule de gpl20 fixant une molécule de peptide de la présente invention marqué, était de 176 nM, alors que dans le deuxième cas (II K16/GP120), représenté sur la Figure 8b), l'affinité était de 46 nM. Une troisième préparation a donc été réalisée (III K16/GP120). Les mesures effectuées sur cette préparation sont représentées sur la Figure 8c). Dans ce cas l'affinité (Kd) mesurée est de 97nM. Trois autres peptides marqués, le CD4M33, le CD4K15 et le CD4M9, ont été testés pour leur interaction avec le gpl20 HXB2. Les résultats de ces tests sont représentés sur les figures 9,10 et 11. Leur affinité pour la protéine virale gpl20 était respectivement de 14 nM, 195 nM, et 323 nM. 2) MESURES D'AFFINITES EFFECTUES AVEC UN PEPTIDE DE LA PRESENTE INVENTION POUR DIFFERENTES PROTEINES VIRALES GP120 Les affinités du peptide CD4M33 pour des protéines gpl20 issues de différentes souches du virus : HXB2 et SF2, ont également été déterminées. Elles sont représentées sur les figures 12 a) et 12b). L'affinité de 8nM pour le gpl20 HXB2 est très proche de la valeur déterminée à partir des résultats exposés sur la Figure 9, c'est à dire 14 nM. En revanche, la préparation de gpl20 SF2 présentait une affinité plus forte pour le peptide CD4M33, de l'ordre de 1 nM. 3) DEPLACEMENT D'UN PEPTIDE MARQUE DE LA PRESENTE INVENTION FIXE A LA PROTEINE VIRALE gpl20 PAR UN PEPTIDE NON MARQUE Un déplacement d'un peptide marqué ayant une affinité déterminée, représenté par le peptide CD4M33, par un peptide CD4M33 non marqué a été réalisé pour simuler un criblage selon le procédé de la présente invention. Les résultats de cet exemple sont représentés sur la figure 13. Ces résultats montrent qu'une concentration de 20 nM de gpl20 permet une fixation avoisinant 50%, et donc une anisotropie de départ relativement élevée d'environ 180 millianisotropie. Il est à noter que le grand changement d'anisotropie observé lors de la fixation des peptides de la présente invention marqués par le gpl20, AA-180 millianisotropie, confère une grande gamme dynamique à cette mesure, et permet un rapport signal bruit très élevé. Ainsi, avec une déviation standard de 2 unités de millianisotropie dans les mesures, il est possible de détecter des changements de 2% dans la quantité fixée. En conséquence, une compétition avec une molécule d'une même affinité que le CD4M33 résulte en 100% de déplacement avec une concentration du compétiteur avoisinant 100 nM. Les inventeurs ont donc utilisé la compétition du CD4M33 marqué avec d'autres peptides de la présente invention non-marqués afin de déterminer l'affinité de ces derniers pour le gpl20 HXB2. Les résultats de ces compétitions sont regroupés sur les Figures 14a) à i) Une compétition du CD4M33 marqué avec un CD4M33 non marqué a d'abord été réalisée pour déterminer si le marquage perturbe l'affinité pour le gpl20. En fixation directe, représentée sur les figures 10 et 11, l'affinité du CD4M33 marqué pour le gpl20 HXB2 était de 11+3 nM. * L'analyse des données de compétition a été réalisée en fixant la valeur de l'affinité du CD4M33 marqué à sa valeur de 11 nM et en laissant évoluer la valeur de l'affinité du compétiteur, en l'occurrence le peptide CD4M33 non marqué. La valeur de l'affinité correspondante à la ligne traversant les points dans la Figure 14a) était de 14 nM. Il a donc été conclu que le marquage du CD4m33 n'affecte pas son affinité pour le gpl20. Ensuite sept autres peptides non marqués de la présente invention ainsi que le domaine soluble du CD4 humain (sCD4) ont été testés. Les résultats de ces tests sont représentés sur les Figures 14b) à 14i). Leur affinité diffère par un facteur 40. Les résultats obtenus sont regroupés dans le tableau 5 ci-dessous. Il est à noter que l'affinité du peptide CD4M9 pour la protéine virale gpl20 obtenue par compétition, Kd=359 nM, est la même, en tenant compte des erreurs de mesure estimées à-10%, que celle trouvée par titrage directe du CD4M9 marqué (Kd=323 nM). Etant donné que les molécules criblées ne sont pas observées directement, mais en compétition avec le peptide marqué de la présente invention, ce test de criblage peut mettre en évidence n'importe quelle molécule, quelque soit sa structure chimique, qui se fixerait sur le gpl20 de façon compétitive avec ce peptide. Tableau I : Peptide de la Affinité Kd présente Méthode Gp 120 (nM) invention K16 Directe HXB2 176 K16 Directe HXB2 46 K16 directe HXB2 97 K15 Directe HXB2 195 CD4M9 Directe HXB2 323 CD4M9 Compétition HXB2 359 CD4M33 Directe HXB2 14 CD4M33 Directe HXB2 8 CD4M33 Directe SF2 1 CD4M33 Compétition HXB2 14 CD4M35 Compétition HXB2 9 CD4M32 Compétition HXB2 23 sCD4 Compétition HXB2 9 CD4M27 Compétition HXB2 148 CD4M9TPA Compétition HXB2 26 CD4M9BIP Compétition HXB2 97 (seq ID n 19) CD4M9V Compétition HXB2 320 (seq ID n 20) Les peptides de la présente invention représentent donc des inhibiteurs in vitro de l'infection par le virus du sida, notamment le VIH-I. Le procédé de criblage de la présente invention qui utilise l'anisotropie de fluorescence d'un peptide marqué de la présente invention, constitue en conséquence un nouvel outil de criblage de molécules candidates pour la fabrication de médicaments pour traiter le SIDA. REFERENCES [1] Kwong, P. D., Wyatt, R., Robinson, J., Sweet, R. 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Procédé de criblage de molécules capables de se lier avec une affinité déterminée à la protéine gpl20 du virus de l'immunodéficience, ledit procédé incluant au moins un cycle de criblage comprenant les étapes suivantes : a) marquage covalent avec une sonde fluorescente d'un peptide ayant ladite affinité déterminée pour la protéine gpl20, ledit peptide comprenant la séquence (A) suivante : TPA - P1 - Cys - P2 - Cys - P3 - Cys - Ala ou Gln Gly ou (D) Asp ou Ser-Ser ou His ou Asn-Xaaj Cys-Thr ou Ala - Cys- Xaak - NH2 dans laquelle TPA représente l'acide thiopropionique, XaaJ représente la ss-napthylalanine, la phénylalanine ou la bi-phénylalanine, Xaak représente Gly, Val ou lieu, pl représente 3 à 6 acides aminés, p2 représente 2 à 4 acides aminés et p3 représente 6 à 10 acides aminés, les acides aminés dans 1 2 3 pl, p2 et p3 étant naturels ou non naturels, identiques 1 2 3 1 ou différents et pl, p2 et p3 ayant ou non une séquence commune, ledit peptide présentant une conformation en épingle à cheveux ss dont le coude ss est formé par les résidus acides aminés Ala ou Gln-Gly ou DAsp ou Ser-Ser ou His ou Asn-Xaai de sa séquence (A), b) mise en présence du peptide marqué avec la protéine gpl20, à une concentration de gpl20 qui permet entre 20 et 50% de fixation du peptide marqué, de manière à former un complexe réversible peptide marqué-gpl20], c) mesure étalon de la polarisation de fluorescence du complexe peptide marqué-gpl20], d) essai de criblage par mise en compétition du complexe peptide marqué-gpl20] formé avec au moins une molécule candidate, susceptible de se lier à la protéine gpl20, à une concentration déterminée de ladite ou desdites molécule (s) et dans des conditions physicochimiques rendant possible la compétition entre ladite molécule et le peptide marqué pour former éventuellement un complexe avec la protéine gpl20, e) mesure de la polarisation de fluorescence émise par l'essai de criblage, et f) comparaison de la mesure de polarisation de fluorescence de l'étape e) avec la mesure étalon de l'étape c), la ou une des molécule (s) candidate (s) étant considérée comme une molécule capable de se lier à la protéine Gpl20 lorsque la mesure de polarisation de fluorescence de l'étape e) est inférieure à la mesure étalon de l'étape c). 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel la séquence (A) peut comprendre en outre un résidu k proline lié au résidu Xaak. 3. Procédé selon la revendication 1, dans lequel la séquence est choisie parmi les séquences ID n04, ID n 5, ID n 6, ID n07, ID n 8, ID n09, ID nO 10, ID n ll, ID n 12, ID n 13, ID n 14, ID n 15, ID n 16, ID n 17, ID n 18, ID n 19 et ID n020 de la liste de séquence annexée. 4. Procédé selon la revendication 1, dans lequel la sonde fluorescente est un fluorophore ayant des propriétés d'absorption dans le visible.