Brevet FR2832290A1 — publié le 20030523

La présente invention concerne une plante cultivée Cichorium, rendue mâle stérile par la présence d'un allèle récessif, et concerne également l'utilisation de marqueurs moléculaires pour l'introgression du caractère de stérilité mâle dans des lignées parentales de Cichorium en vue de la production de semences commerciales hybrides. Tous les documents cités dans la présente demande sont cités en tant que références bibliographiques. La production d'hybrides est un but majeur pour de nombreuses sociétés de sélection. Les cultures ensemencées avec des hybrides démontrent pour les agriculteurs une supériorité par rapport aux cultures ensemencées avec des semences issues de pollinisation libre, notamment telles qu'une plus grande uniformité globale, ainsi qu'une meilleure vigueur hybride des caractères des lignées parentales constituantes. Les plantes du genre Cichorium présentent un intérêt agricole particulier. Cichorium intybus est cultivée pour ses feuilles utilisées comme nourriture (connue sous le nom d'endives ou de chicorées Witloof), et pour ses racines, à partir desquelles on fabrique un substitut de café et qui s'est révélé être une source potentielle intéressante d'inuline et de sirop à haute teneur en fructose. Comme toutes les plantes du genre Cichorium possèdent des fleurs hermaphrodites, un effort important a porté sur la mise en culture de lignées consanguines qui présentent un pourcentage d'auto-incompatibilité. La production d'hybrides est alors réalisée en combinant les lignées parentales à auto-incompatibilité partielle suivie d'une sélection de la combinaison optimale pour obtenir le pourcentage de consanguinité le plus faible possible. A cause des difficultés pour stabiliser et contrôler génétiquement ce caractère conjointement avec des caractéristiques agronomiques importantes, le pourcentage de consanguinité d'une variété commerciale peut varier entre 10 et 90 %, ce qui conduit à une culture non uniforme à la récolte. Afin de surmonter cette difficulté, la stérilité mâle cytoplasmique (CMS) a été développée à partir de croisements de parents de Cichorium sauvages, ou par hybridation somatique de protoplaste de chicorée avec des protoplastes CMS de tournesol (Rambaud et al. 1993, Theoretical and Applied Genetics 87 (3) : 347-352. ). Cependant, la plupart des systèmes CMS présentent des failles et les caractères liés au cytoplasme peuvent être difficiles à introgresser dans les lignées parentales souhaitées, et ceci aboutit souvent à des liaisons génétiques résiduelles et défavorables qui se retrouvent dans la descendance. Le système de stérilité mâle nucléaire décrit dans la demande internationale de brevet WO 89/10396 a été appliqué avec succès à la chicorée Witloof. Des plantes à stérilité mâle ont été obtenues par l'introduction d'un gène codant la barnase sous contrôle du promoteur TA29 qui dirige l' expression dans le tapetum (Reynaerts et al. 1993, Scientia Horticulturae 55 : 125-139). Cependant, comme toute approche transgénique chez les espèces légumières, ce système de culture de Cichorium ne prouvera sa valeur que si le bénéfice commercial (fortement dépendant aujourd'hui de l'acceptabilité des OGM) surpasse l'investissement significatif nécéssaire à la dérégulation. La présente invention porte sur une plante cultivée à stérilité mâle de légume de Cichorium, dans laquelle le caractère de stérilité mâle est codé par un facteur génétique qui est hérité en tant que simple allèle nucléaire récessif, et porte également sur le procédé d'introduction du caractère de stérilité mâle dans différents germplasms de Cichorium cultivés. La mise à disposition du caractère de la stérilité mâle dans différents germplasms de légume de Cichorium cultivé permet la production de véritables semences hybrides et la sélection de nouvelles variétés. La présente invention porte sur une plante cultivée de légume de Cichorium, ou sur les semences, les cellules ou tissus végétaux de cette plante, comprenant dans son génome, une région d'ADN comprenant un facteur génétique, qui lorsqu'il est homozygote, confère à la plante un phénotype de stérilité mâle. Le facteur génétique, qui confère à la plante la stérilité mâle dans le génome du dépôt NCIMB 41116, est localisé entre les marqueurs AFLP E44/M76 et E46/M75, auxquels il est lié. L'invention porte également sur une région d'ADN, comprenant un facteur génétique, qui lorsqu'il est présent dans la plante à l'état homozygote, confère un phénotype de stérilité mâle, laquelle region ADN est présente dans le génome du dépôt NCIMB 41116, et peut être identifiée par des marqueurs moléculaires dans les semences du dépôt. Plus particulièrement, le facteur génétique conférant la stérilité mâle peut être identifié en utilisant les marqueurs moléculaires AFLP E44/M76 et/ou E46/M75. L'invention porte également sur l'utilisation de marqueurs liés au locus MS présents dans le dépôt NCIMB 41116 pour la détection de la plante selon selon l'invention. L'invention porte égalementsur une méthode pour introgresser le caractère de stérilité mâle dans une variété de légume cultivée de Cichorium, la dite méthode comprenant a) croiser la plante selon l'invention avec une plante de légume de Cichorium cultivé, pour produire une population de plantes en ségrégation, b) cribler la dite population avec des marqueurs moléculaires liés au dit locus MS, c) sélectionner les plantes de la dite population ayant au moins un des dits marqueurs moléculaires, d) utiliser ces plantes sélectionnées pour croiser ultérieurement avec les plantes les dits légumes de Cichorium cultivées. Dans un mode de réalisation préféré selon l'invention, l'étape (d) de la méthode décrite ci-dessus comprend également des croisements de retour et/ou des autofécondations des dites plantes sélectionnées afin d'obtenir une lignée uniforme de légume de Cichorium cultivée, comprenant le dit allèle de stérilité mâle. La présente invention porte également sur un procédé pour introgresser, de manière sûre et prévisible, le phénotype de stérilité mâle dans tout germplasm souhaitable de légume de Cichorium cultivé. Le procédé de l'invention implique la cartographie génétique des loci associés à/ou liés au facteur génétique qui, lorsqu'il est présent dans une plante à l'état homozygote, confère le phénotype de stérilité mâle, ainsi que l'utilisation de ces marqueurs pour suivre l'introgression de l'allèle de stérilité mâle dans les croisements et dans les populations en ségrégation. La présente invention existe sous une forme préférentielle dans laquelle le facteur génétique conférant la stérilité mâle est présent dans le génome des semences de légume de Cichorium cultivé, déposées au"National Collections of Industrial, Food and Marine Bacteria" (NCIMB), sous le numéro de dépot NCIMB 41116, et peut être identifié par les marqueurs AFLP E44/M76 et/ou E46/M75 dans le génome du dépôt. La méthode de la présente invention comprend l'utilisation de marqueurs moléculaires pour sélectionner dans la descendance un croisement entre une plante possédant le facteur génétique conférant la stérilité mâle et une plante ne le possédant pas. Ainsi, selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'introduction d'une région d'ADN comprenant le facteur génétique codant pour la stérilité mâle, dans un germplasm choisi, par rétrocroisements récurrents, est facilitée par la sélection assistée par marqueurs, et plus particuliérement par sélection à l'aide de marqueurs moléculaires liés à la région d'ADN, tels que, mais non limités à, les marqueurs AFLP E44/M76 et E46/M75, et plus particulièrement les marqueurs caractérisés E44/M76-303F, 297f et E46/M75-260f. En accord avec une autre mise en oeuvre de l'invention, les plantes de légume de Cichorium cultivées a stérilité mâle du germplasm choisi sont obtenues par introgression d'une région d'ADN comprenant le facteur génétique codant pour le phénotype de stérilité mâle en utilisant les marqueurs AFLP liés à la région d'ADN de la présente invention, tels que, mais non limités à, E44/M76 et E46/M75. Selon un mode de réalisation préferé de l'invention, l'introgression d'une région d'ADN dans un germplasm choisi est réalisé par croisement d'une plante de ce germplasm avec une plante cultivée à partir du dépôt, et par croisements de retour récurrents avec le germplasm choisi, en utilisant la sélection assistée par marqueurs. En accord avec une autre mise en oeuvre choisie de l'invention, le matériel génétique de la plante dont les semences ont été déposées sous le numéro NCIMB 41116 est utilisé pour l'identification des loci associés à la région d'ADN comprenant un facteur génétique de la stérilité mâle. De préférence, les marqueurs moléculaires sont situés à moins de 50 cM de la région d'ADN, encore plus préférentiellement à une distance inférieure à 20 cM. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les marqueurs moléculaires sont situés à moins de 5 cM du facteur génétique codant pour la stérilité mâle. La description détaillée qui suit, donnée à titre d'exemple, mais sans intention de limiter la portée de l'invention aux applications spécifiques décrites, doit être comprise en relation avec les figures jointes, incluses ici en référence, dans lesquelles : Figure 1 : Tableau de résultats de 3 marqueurs AFLP liés à l'allèle de stérilité mâle, dont 2 dominants liés à F (E35/M55-183F et E40/M58-166F) et un co-dominant (E33/M48-272F, 273f). Résultats obtenus sur un pool fertile ("F") et 19 pools stériles ("ff"). Les résultats sont indiqués comme"+"= bande présente ; "-"= bande absente ;" ?" = résultat incertain. Figure 2 : Tableau de résultats de 3 marqueurs AFLP sur des individus issus de pools stériles ("ffll"à "ff19" - voir figure 1) et montrant une recombinaison entre l'allèle de stérilité mâle et les marqueurs AFLP. Sur la base de ces résultats, l'ordre des marqueurs et la distance initiale des marqueurs sont déterminés. Figure 3 : Carte AFLP du locus MS en chicorée, basée sur des populations en ségrégation de niveau BC4-BC5, établie avec près de 4000 individus au total. Les marqueurs co-dominants sont soulignés, tandis que les marqueurs liés à l'allèle f sont encadrés, de manière à les distinguer des marqueurs liés à F. La présente invention concerne une plante cultivée de légume de Cichorium qui est à stérilité mâle du fait de la présence, à l'état homozygote, d'un allèle de stérilité mâle qui confère la stérilité mâle. La présente invention concerne également une plante cultivée de légume de Cichorium comprenant dans son génome, un allèle de stérilité mâle qui, lorsqu'il est présent à l'état homozygote, confère à la plante un phénotype à stérilité mâle. Le locus de la stérilité mâle (MS) est caractérisé par le fait que, dans le matériel génétique du dépôt NCIMB 41116, il est bordé à moins de 5cM de distance par les marqueurs AFLP E44/M76- 303F, 297f et E46/M75-260f. 'Une plante cultivée de légume de Cichorium'comme utilisé ici, concerne une plante qui, issue de sélection, peut être commercialisée comme chicorée, endives ou radicchio. Plus spécifiquement, ceci concerne une plante de chicorée, endive ou radicchio (dénomée plus loin sous la référence de"chicorée") produisant des pousses qui conviennent à la consommation animale ou humaine. De préférence, les plantes concernées sont les plantes de Chichorium intybus L. ou de Cichorium enclava L., telles que mais non limitées à la chicorée Witloof, la chicorée rouge, la chicorée amére (ou radicchio), la chicorée en rosette, l'endive cultivée, l'endive frisée, l'endive à larges feuilles, et l'endive à petites feuilles. Toutefois, d'autres espèces de légume de Cichorium cultivés sont également envisagées, comprenant Cichorium spinosum L. La présente invention concerne des plantes cultivées de légume de Cichorium, et toutes parties de celles-ci comprenant, mais non limité à, les pousses feuillées, les cellules (ou cultures de cellules) et les semences (graines). Une plante cultivée de chicorée peut être une variété consanguine, une lignée haploide doublée, ou un hybride. 'Une plante à stérilité mâle', ou une plante avec un phénotype ou un caractère de stérilité mâle comme utilisé ici, se rapporte à une plante incapable de produire des gamètes mâles fertiles, et comme telle est incapable de produire des semences autofécondées. 'Une région d'ADN'comme utilisé ici concerne une région dans le génome nucléaire de la plante qui, dans le contexte de la présente invention, comprend un locus codant un caractère. Un locus à stérilité mâle (MS), dans le contexte de la présente invention concerne un locus dont un ou plusieurs allèle (s) peuvent comporter un facteur génétique codant pour la stérilité mâle. Plus spécifiquement, quand un tel allèle a stérilité mâle (f) est présent en condition homozygote dans la plante, la plante aura un phénotype de stérilité mâle. Un tel facteur génétique sur un allèle recessif codant pour la stérilité mâle peut comprendre un allèle (ou des allèles) d'un (ou plusieurs) gène (s) par lequel une plante comprenant ce facteur génétique sous la forme homozygote (en l'absence de tout facteurs antagoniste) est de stérilité mâle. Le phenotype de stérilité mâle peut être dû à une ou plusieurs mutation (s) dans un (ou plusieurs groupes) de gène (s) requis pour l'expression de la fertilité mâle, par example pour la production de gamètes mâles fertiles. L'allèle dominant de fertilité mâle (F), quand il est présent dans la plante, lui confère le phénotype fertile. 'Un marqueur (moléculaire)'comme utilisé ici se rapporte à une caractéristique génétique mesurable, qui a une position fixe dans le génome, qui est normalement héritable de façon Mendelienne, et qui peut être utilisé pour la cartographie d'un caractère d'intérêt. La nature du marqueur dépend de l'analyse moléculaire utilisée et peut être détectée au niveau de l'ADN, de l'ARN, ou des protéines. La cartographie peut être effectuée par différents moyens tels que, mais non limité à, RFLP, RAPD, AFLP, SNPs ou les microsatellites. Des sondes appropriées sont dictées par la méthode de cartographie utilisée. Un marqueur AFLP'comme utilisé ici est, en accord avec la terminologie de référence, nommé après la combinaison de l'amorce utilisée pour amplifier le fragment caractérisant l'ADN (protocole Keygene tel que décrit par Kuiper et Zabeau 1995, Nucl. Acids Res. 23 : 4407-4414), et de préférence la taille du fragment (ou des fragments en cas de marqueurs codominants) obtenu déterminé relativement au marqueur de taille utilisé (comme décrit dans les exemples joints). On comprendra que la taille de ces fragments peut varier légèrement selon le conditions du laboratoire et du matériel utilisé. Des marqueurs AFLP peuvent être convertis en marqueurs spécifiques de séquences tels que, mais non limités à, des marqueurs STS (sequenced-tagged-site) ou des marqueurs SCAR (sequenced-characterized-amplified-region) en utilisant la technologie standard telle qu'elle est décrite par Meksem et al., 2001 (Mol. Gen. Genomics 265 (2) : 207-214) ou par Xu et al., 2001 (Genome 44 (1) : 63-70). Selon la présente invention, la présence d'un facteur génétique codant pour la stérilité mâle dans le génome d'une plante cultivée de Cichorium végetal peut être identifiée en utilisant des marqueurs moléculaires. De préférence, ces marqueurs sont des marqueurs co-dominants AFLP, ou des marqueurs spécifiques de séquence dérivés de ceux-ci. 'Un marqueur de stérilité (mâle) 1 comme utilisé ici se rapporte à un marqueur qui est lié au locus MS. Un tel marqueur peut être lié à l'allèle de fertilité (lié à F) ou à l'allèle de sterilité (lié à f), ou aux deux (dans le cas de marqueurs co-dominants ou STS). La liaison comme utilisé ici se rapporte à la distance génétique du marqueur au locus MS. De préférence, le marqueur est situé à moins de 20 cM du locus MS. Plus favorablement, le marqueur est situé à moins de 5 cM, et encore mieux à moins de 3 cM du locus. En accord avec une réalisation préférée de la présente invention, la région d'ADN comprenant l'allèle de stérilité mâle est définie par des marqueurs adjacent le facteur génétique dans le dépôt NCIMB 41116. Selon un mode de réalisation préférée de l'invention, le locus MS peut être détecté au cours de la sélection des légumes de Cichorium cultivé par l'utilisation de marqueurs moléculaires qui sont liés au locus MS, de préférence à son allèle de stérilité mâle. 'L'introgression'tel qu'utilisé ici se rapporte à l'introduction d'un allèle d'une lignée de plante dans une autre, de préférence d'un germplasm dans un autre. Différentes méthodes sont utilisées par les sélectionneurs pour obtenir l'allèle désiré dans le germplasm désiré. Afin d'éliminer tout matériel génétique non souhaité, lorsqu'on veut obtenir une plante comprenant le facteur génétique codant pour la stérilité mâle à partir d'un croisement de la plante d'une variété choisie avec la plante de l'invention qui contient le facteur génétique codant pour la stérilité mâle, des croisements de retour et/ou des autofécondations de cette plante sont habituellement requises pour obtenir une lignée uniforme. Une population dite"BC", suivi d'un nombre se réfère au nombre de croisements de retour effectués. Exemple 1 : Développement d'une plante cultivée de légume de Cichorium à stérélité mâle. Une lignée de chicorée sauvage (Chicorium intybus L. var. sativus) qui était à stérilité mâle a été identifiée par F. Desprez et a été nommée"Edith". La chicorée Witloof à stérilité mâle cultivée a été développée par le croisement de cette plante (qui a été maintenue par propagation végétative) avec une variété de chicorée cultivée, suivi par des croisements de retour répétés pendant plusieurs années, d'autofécondations et la sélection du phénotype de stérilité mâle. Des semences d'une plante de chicorée cultivée, comprenant le facteur génétique codant pour la stérilité mâle, ont été déposées auprès du NCIMB (23 St. Marchar Drive, Aberdeen AB2 1RY, Scotland, UK), le 2 Octobre 2001 sous numéro de dépot NCIMB 41116. La stérilité mâle a été confirmée être codée par un facteur génétique hérité en tant que caractère récessif monogénique (ff) qui s'exprime de façon satisfaisante dans un background de chicorée cultivée. De façon à faciliter et accélérer le programme de sélection en chicorée, des marqueurs moléculaires liés au locus MS, et plus particulièrement à l'allèle de stérilité mâle, ont été identifiés. Exemple 2 : Liaison des marqueurs à l'allèle de stérilité mâle. L'analyse de ségrégation en vrac (Buled Segregant Analysis ou BSA) a été conduite selon la description de Michelmore (Michelmore et al. 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 : 9828-9832). L'AFLP à été exécuté après le protocole de Keygene (Kuiper et Zabeau 1995, Nucl. Acids Res. 23 : 4407- 4414). Les produits de réaction ont été placés sur des gels de polyacrylamide dénaturant à 6 % (FMC-LC-6) en utilisant le marqueur de taille 10bp provenant de Research Genetics Inc.. La détection AFLP a été conduite sur un système de gel séquentiel Li-cor (Westburg, Pays-Bas). Des criblages ultérieurs ont été réalisés avec 213 combinaisons d'amorces AFLP sur 2 pools d'individus à fertilité mâle (8 individus par pool) et sur 2 pools d'individus a stérilité mâle (4 individus par pool) pour l'identification de marqueurs potentiels du locus MS. 16 marqueurs potentiels liés à l'allèle de fertilité (F) ont été identifiés. Du fait de la présence d'individus hétérozygotes (Ff) dans le pool fertile, aucun marqueur lié à l'allèle de stérilité n'a pu être identifié. La liaison des 16 marqueurs a été déterminée sur des pools additionnels contenant 4 individus stériles issus de 10 populations en ségrégation pour la stérilité mâle. Les individus des pools manifestant un événement de recombinaison entre le locus MS et les marqueurs les plus proches identifiés ci-dessus ont été testés. Le tableau de résultats de 3 marqueurs AFLP étroitement liés, testés sur 1 pool fertile et : 19 pools stériles contenant 4 individus chacun, est montré sur la Figure 1. Les individus des pools recombinants ont été testés ensuite, ce qui est détaillé sur la Figure 2. Les marqueurs co-dominants AFLP ont été identifiés comme marqueurs préférentiels. Les marqueurs codominants E33/M48-272F, 273f se sont trouvés être localisés à environ 4.5 cM de l'allèle à stérilité mâle. Afin d'identifier les marqueurs qui étaient liés plus étroitement à l'allèle de stérilité mâle, une seconde sélection par BSA a été effectuée. Des pools ont été constitués à partir d'individus fertiles et stériles qui démontraient un événement de recombinaison entre le locus MS et les marqueurs liés les plus proches identifiés ci-dessus. 256 nouvelles combinaisons d'amorces ont été testées, et des marqueurs potentiels liés au locus MS ont été vérifiés sur des pools additionnels. Un sélection de ces derniers a été testée sur près de 4000 individus. Un marqueur co-dominant E44/M76-303F, 297f, situé à 1.6 cM a été identifié. Identification ultérieure d'un marqueur lié à la stérilité mâle : Des marqueurs candidats liés au phénotype de stérilité mâle ont été obtenus par criblage BSA sur deux pools FF, un pool ff et un recombinant entre deux marqueurs bordant le locus MS. 13 marqueurs potentiels liés à f ont été testés sur différents backgrounds génétiques du programme de sélection de chicorée, et sur des pools additionnels d'individus fertiles (FF). Le marqueur AFLP E46/M75-260f situé à 2.5 cM et le marqueur E36/M78-255f situé à 3.0 cM ont une bonne valeur prédictive. Une carte génétique a été établie en se basant sur les différents criblages par marqueurs liés à F ou à f. (Figure 3). Le marqueur co-dominant E44/M76, et le marqueur lié à f E46/M75 couvrant le locus MS ont été convertis en marqueurs STS pour faciliter les criblages de routine. Exemple 3 :. Confirmation de l'absence du marqueur moléculaire dans les variétés commerciales de chicorée Witloof. Afin que les marqueurs moléculaires soient utiles à l'identification de l'allèle à stérilité mâle chez la chicorée Witloof, on s'est assuré qu'ils pourraient être utilisés dans différents backgrounds génétiques, c. à d. que l'on n'observerait pas de réactions faussement positives. Pour établir ceci, 29 variétés commerciales différentes de chicorée Witloof, provenant de différentes sources, ont été testées pour la présence de la bande liée à f du marqueur AFLP E44/M76 et du marqueur AFLP E46/M75. Les résultats sont fournis dans le tableau 1. Deux variétés dans lesquelles l'allèle à stérilité mâle a été introduit ont été utilisées comme controls positifs. Tableau 1 : présence des marqueurs AFLP dans les variétés commerciales de chicorée E44/M76 AFLP E46/M75 AFLP Pourcentage de 93 93 négatifs % % Pourcentage de 0 positifs % 7 % Marquage 7 incertains % 0 % En utilisant les marqueurs STS dérivés des marqueurs AFLP E44/M76 et E46/M75, il a été montré que les marquages incertains (E44/M76) et les marquages positifs (E46/M75) etaient dûs à des bandes migrant à la même hauteur. Cependant, l'absence du produit PCR du STS a indiqué l'absence de relation entre la bande et l'allèle à stérilité mâle. Exemple 4 : Fiabilité des marqueurs dans différents backgrounds génétiques Afin d'examiner la fiabilité des marqueurs dans différents backgrounds génétiques, des croisements FF x Ff ont été effectués dans 20 backgrounds différents de chicorée. Les marqueurs AFLP E44/M76 et E46/M75 ont été utilisés sur les descendances. On a constaté que le marqueur E44/M76 était utilisable dans 18 des 24 backgrounds, et que le marqueur E46/M75 était utilisable dans chacun des 24 backgrounds testés. Ainsi on a pu conclure que ces marqueurs pourraient être utilisés pour la détection de l'allèle à stérilité mâle dans la plupart des mileux génétiques. Exemple 5 : Introduction du caractère de stérilité mâle dans d'autres espèces cultivées de légume de Cichorium. Pour introduire le caractère de stérilité mâle dans l'endive ou le radicchio, la chicorée Witloof cultivée est croisée respectivement avec une variété d'endive ou de radicchio, et les marqueurs moléculaires liés à l'allèle de stérilité mâle sont utilisés pour tracer le phénotype stérile pendant les croisements de retour successifs avec les parents récurrents. REVENDICATIONS 1. Plante de légume cultivée de Cichorium et les parties de celle-ci, laquelle plante comprend dans son génome un allèle à stérilité mâle du locus MS qui, lorsqu 1 il est présent à l'état homozygote, confère à cette plante un phénotype de stérilité mâle, et qui, dans le dépôt NCIMB 41116, est lié aux marqueurs AFLP E44/M76 et E46/M75. 2. Plante de légume cultivée de Cichorium selon la revendication 1, qui est a stérilité mâle du fait de la présence du dit allèle de stérilité mâle à l'état homozygote. 3. Plante selon la revendication 1, qui est une plante de légume hybride de Cichorium. 4. Utilisation de la plante de légume cultivée de Cichorium selon la revendication 2, pour la production de semences ou de plantes hybrides de légume de Cichorium. 5. Utilisation de marqueurs liés au locus MS présents dans le dépot NCIMB 41116 pour l'introduction du phénotype de stérilité mâle dans des plantes de légume de Cichorium cultivées. 6. Utilisation selon la revendication 5, dans laquelle les dits marqueurs qui sont des marqueurs AFLP, sont sélectionnés parmi le groupe de E35/M55-183F, E33/M48- 272F, 273f, E44/M76-303F, 297f, E46/M75-260f, E36/M78-255f et E40/M58-166F ou des marqueurs spécifiques de séquences dérivés de ceux-ci. 7. Utilisation de marqueurs liés au locus MS présents dans le dépôt NCIMB 41116 pour la détection de la plante selon les revendications 1 à 3. 8. Méthode pour introgresser le caractère de stérilité mâle dans une variété de légume cultivée de Cichorium, la dite méthode comprenant : a) croiser la plante selon la revendication 1 avec une plante de légume de Cichorium cultivé, pour produire une population de plantes en ségrégation, b) cribler la dite population avec des marqueurs moléculaires liés au dit locus MS, c) sélectionner les plantes de la dite population ayant au moins un des dits marqueurs moléculaires, d) utiliser ces plantes sélectionnées pour croiser ultérieurement avec les plantes les dits légumes de Cichorium cultivés 9. Méthode selon la revendication 8, dans laquelle l'étape (d) comprend également des croisements de retour et/ou des autofécondations des dites plantes sélectionnées afin d'obtenir une lignée uniforme de légume de Cichorium cultivé, comprenant le dit allèle de stérilité mâle.