Brevet FR2816844A1 — publié le 20020524

L'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant dans un milieu pharmaceutiquement acceptable au moins un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ou une construction nucléique codant pour ledit peptide, tout comme l'utilisation d'un tel peptide ou d'une telle construction nucléique pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylactique ou thérapeutique des infections virales, bactériennes, parasitaires ou fongiques ou pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylactique ou thérapeutique des cancers. La vaccination est un moyen efficace de prévenir ou de réduire les infections virales ou bactériennes. Le succès des campagnes de vaccination dans ces domaines a permis d'étendre le concept de vaccin jusqu'alors utilisé dans le domaine de l'infectiologie aux domaines du cancer et des maladies auto-immunes. La mise au point de vaccins parfaitement définis et dépourvus d'effets secondaires marqués, nécessite l'emploi d'antigènes vaccinants de faible masse moléculaire, tels que des peptides ou des oligosaccharides. Ces antigènes de faible masse, mais aussi certains antigènes de masse moléculaire supérieure tels que les polysaccharides de la paroi bactérienne, ne peuvent induire seuls une réponse immunitaire durable et intense. Il est indispensable de lier ces antigènes, par voie chimique ou par génie génétique, à des protéines porteuses. Les protéines porteuses, actuellement utilisées, sont de deux types : - les anatoxines tétanique et diphtérique : l'emploi trop fréquent de ces protéines porteuses risque d'aller à l'encontre d'une réponse intense contre l'haptène et risque de poser des problèmes d'immunotoxicologie, - les extraits de protéines membranaires bactériennes telles que les OMPC de Neisseria meningitidis (Vella et al., Infect. Immun., 60, 1992, 4977-4983), TraT d'Escherichia coli (Croft et al., J. Immunol., 146, 1991,793-798) ou PorB de Neisseria meningitidis (Fusco et al., 1. Infect. Dis., 175, 1997,364-372). De plus, les antigènes possèdent généralement une faible immunogénicité et il est nécessaire de les mélanger à des adjuvants. Ainsi, il existe aujourd'hui un grand besoin de disposer d'un composé qui, associé à une molécule, notamment un antigène ou haptène, soit capable de générer une réponse immunitaire dirigée contre ladite molécule. Un tel composé pourrait en particulier être utilisé pour la préparation d'une composition vaccinale destinée à induire une protection immunitaire antivirale, antibactérienne, antifongique ou antiparasitaire, ou antitumorale. L'OmpA de Klebsiella pneiimoniae, protéine majeure de la membrane externe baptisée P40, présente une activité de protéine porteuse, par voie systémique, pour des antigènes sous-unitaires peptidiques (brevets WO 95/27787 et WO 96/14415 ; Haeuw et al., Eur. J. Biochem., 255, 1998, 446-454 ; Plotnicky-Gilquin et al., J. Virol., 73, 1999, 5637-5645) et polysaccharidiques (brevet WO 97/41888 ; Rauly et al., Infect. Immun., 67,1999, 5547-5551). Cette activité, due à la présence d'au moins un épitope T sur la protéine (Haeuw et al., Eur. J. Biochem., 255,1998, 446-454), est comparable à celle d'une protéine porteuse de référence comme l'anatoxine tétanique (Rauly et al., Infect. Immun., 67, 1999, 5547-5551), protéine utilisée dans les vaccins à usage humain. Un modèle structural de l'OmpA d'Escherichia coli a été établi sur la base d'études biochimiques et physico-chimiques (Ried et al., Mol. Gen. Genet., 243, 1994, 127-135 ; Koebnik et Krämer, J. Mol. Biol., 250, 1995, 617-626 ; Pautsch et Schulz, Nature Struct. Biol., 5, 1998, 1013-1017). Selon ce modèle, les OmpA présenteraient deux domaines distincts : un domaine membranaire présentant une structure en feuillets ss, et un domaine périplasmique sans structure définie. Le principal inconvénient lié à l'utilisation de protéines membranaires est dû à la nécessité d'utiliser des détergents pour les solubiliser et les maintenir en solution, ces détergents devant ensuite faire partie de la formulation vaccinale finale. Ainsi, lorsque de telles protéines sont destinées en particulier à être injectées in vivo, la présence de ces détergents est potentiellement toxique (risques de nécrose, etc.). Il existe donc aujourd'hui un besoin de disposer de protéine porteuse et/ou adjuvante capable de générer une réponse immunitaire en l'absence ou en quantité non significative de détergent. Ceci est justement l'objet de la présente invention. De manière surprenante, il a été mis en évidence qu'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, notamment une protéine OmpA d'entérobactérie telle que la protéine P40 de Klebslella pneumoniae, répond à ces besoins. La présente invention a ainsi pour objet l'utilisation du domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, dépourvue de la partie membranaire, en tant que protéine porteuse et/ou adjuvante par voie systémique pour augmenter l'immunogénicité d'un antigène associé de manière covalente, soit conjuguée de manière chimique (notamment par l'intermédiaire de réactif de couplage), soit fusionnée (protéine chimérique exprimée par recombinaison génétique lorsque l'antigène associé est de nature protéique). Ce fragment périplasmique dépourvu du domaine membranaire de la protéine est actif en l'absence de détergent, contrairement à la protéine entière. Son activité est de plus équivalente à celle de la protéine entière utilisée en présence d'un détergent. Dans la présente invention, on entendra désigner par le terme peptide également les polypeptides et les protéines, ces trois termes étant utilisés indifféremment, et par le terme Omp (pour Outer Membrane Protein ), les protéines de la membrane externe. Par peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, on entend désigner en particulier tout peptide dont la séquence d'acides aminés est comprise dans la séquence d'acides aminés d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie et qui, lorsqu'il est administré chez un organisme, notamment chez un animal ou chez l'homme, est capable de générer ou accroître une réponse immunitaire, notamment dirigée contre un agent infectieux ou une cellule tumorale lorsque ledit peptide périplasmique associé à un antigène ou haptène spécifique dudit agent infectieux ou de ladite cellule tumorale. L'invention a pour objet une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend dans un milieu pharmaceutiquement acceptable au moins un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ou une construction nucléique codant pour ledit peptide. Par construction nucléique codant pour ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, on entend désigner de préférence une construction nucléique, notamment de type ADN ou ARN, dont l'acide nucléique codant pour un peptide dérivé d'une protéine Omp d'entérobactérie est constitué exclusivement d'un acide nucléique codant pour son domaine périplasmique, l'un de ses peptides homologues ou l'un de ses fragments comme ci-après définis pour les termes d'homologie ou de fragments. Bien entendu, ladite construction nucléique pourra en outre comprendre d'autres séquences nucléiques nécessaires par exemple à l'expression ou au clonage dudit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie (construction nucléique de vecteur d'expression et/ou de clonage), et/ou une séquence nucléique codant pour l'immunogène, antigène ou haptène que l'on désire associer audit peptide dérivé de la protéine Omp. Par peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, on entend notamment un peptide choisi parmi : - un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ; - un peptide présentant une homologie d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 % avec un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ; - un peptide d'au moins 5 acides aminés consécutifs, de préférence d'au moins 8, 10,15, 20,25, 30,40, 45 et 50 acides aminés consécutifs d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie et présentant une activité immunogénique ; et - un épitope T helper d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie. Le domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie peut être obtenu par un procédé d'extraction à partir d'une culture de ladite entérobactérie. Les procédés d'extraction de protéines de membrane bactériennes sont connus de l'homme de l'art et ne seront pas développés dans la présente description. On peut citer par exemple, mais sans s'y limiter le procédé d'extraction décrit par Haeuw J. F. et al. (Eur. J. Biochem, 255,446-454, 1998). Le domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie peut également être obtenu par voie recombinante. Les méthodes de préparation de protéines recombinantes sont aujourd'hui bien connues de l'homme de l'art et ne seront pas développées dans la présente description, on pourra néanmoins se référer à la méthode décrite dans les exemples. Parmi les cellules utilisables pour la production de ces protéines recombinantes, il faut citer bien entendu les cellules bactériennes (Olins P. O. et Lee S C., 1993, Recent advances in heterologous gene expression in E. coli. Curr. Op. Biotechnology, 4 : 520-525), mais également les cellules de levure (Buckholz R. G., 1993, Yeast Systems for the Expression of Heterologous Gene Products. Curr. Op. Biotechnology, 4 : 538-542), de même que les cellules animales, en particulier les cultures de cellules de mammifère (Edwards C. P. et Aruffo A., 1993, Current applications of COS cell based transient expression systems. Curr. Op. Biotechnology, 4 : 558-563) mais également les cellules d'insectes dans lesquelles on peut utiliser des procédés mettant en oeuvre par exemple des baculovirus (Luckow V. A., 1993, Baculovirus systems for the expression of human gene products. Curr. Op. Biotechnology, 4 : 564-572). De manière tout à fait préférée, le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie est choisi parmi un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp A, et plus préférentiellement parmi un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp A de Klebsellia pneumoniae. Dans un autre mode de réalisation préféré de l'invention, le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie comprend, de préférence est constitué par, un peptide dont la séquence est choisie parmi les séquences suivantes : a) la séquence d'acides aminés de séquence SEQ ID NO 2 ; b) la séquence d'acides aminés d'une séquence présentant une homologie d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 % avec la séquence SEQ ID ? 2 ; et c) la séquence d'acides aminés d'un fragment d'au moins 5 acides aminés, de préférence d'au moins 8,10, 15,20, 25,30, 40,45 et 50 acides aminés consécutifs d'une séquence telle que définie en a). Par séquence d'acide nucléique ou d'acides aminés présentant une homologie d'au moins 80 % après alignement optimal avec une séquence d'acide nucléique ou d'acides aminés déterminée, on entend désigner une séquence qui après alignement optimal avec ladite séquence déterminée présente un pourcentage d'identité d'au moins 80 % avec ladite séquence déterminée. Par pourcentage d'identité entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés au sens de la présente invention, on entend désigner un pourcentage de nucléotides ou de résidus d'acides aminés identiques entre les deux séquences à comparer, obtenu après le meilleur alignement, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Les comparaisons de séquences entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés sont traditionnellement réalisées en comparant ces séquences après les avoir alignées de manière optimale, ladite comparaison étant réalisée par segment ou par fenêtre de comparaison pour identifier et comparer les régions locales de similarité de séquence. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé, outre manuellement, au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Smith et Waterman (Ad. App. Math., 2 : 482,1981), au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Neddleman et Wunsch (J. Mol. Biol., 48 : 443,1970), au moyen de la méthode de recherche de similarité de Pearson et Lipman (Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 85 : 2444, 1988), au moyen de logiciels informatiques utilisant ces algorithmes (GAP, BESTFIT, FASTA et TFASTA dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI, ou encore par les logiciels de comparaison BLAST N ou BLAST P). Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés est déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale par fenêtre de comparaison dans laquelle la région de la séquence d'acide nucléique ou d'acides aminés à comparer peut comprendre des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide ou le résidu d'acide aminé est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison et en multipliant le résultat obtenu par 100 pour obtenir le pourcentage d'identité entre ces deux séquences. Par exemple, on pourra utiliser le programme BLAST, BLAST 2 sequences , disponible sur le site http : //www. ncbi. nlm. nih. gov/gorf7bl2. html, les paramètres utilisés étant ceux donnés par défaut (en particulier pour les paramètres open gap penaltie : 5, et extension gap penaltie : 2 ; la matrice choisie étant par exemple la matrice BLOSUM 62 proposée par le programme), le pourcentage d'identité entre les deux séquences à comparer étant calculé directement par le programme. Parmi lesdites séquences présentant une homologie d'au moins 80 % avec la séquence OmpA de référence, on préfère les séquences de, ou codant pour des, peptides capables d'induire une réponse immunitaire dirigée spécifiquement contre l'antigène ou haptène qui lui est associée, telle que l'induction d'une réponse immunitaire mesurée au moyen des techniques standards décrites dans les exemples ci-après. La présente invention concerne aussi une composition selon l'invention, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique comprend une construction nucléique codant pour ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ou une cellule hôte transformée capable d'exprimer ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie. L'invention a également pour objet la composition selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend en outre, un antigène, immunogène ou haptène. Par immunogène, antigène ou haptène spécifique d'un agent infectieux ou d'une cellule tumorale , on entend désigner en particulier tout composé exprimé par un agent infectieux, tel qu'un virus, une bactérie, une levure, un champignon ou un parasite, par une cellule tumorale, ou un de leurs analogues structuraux, qui seul ou en association avec un adjuvant ou porteur est capable d'induire une réponse immunitaire spécifique dudit agent infectieux ou de ladite cellule tumorale. On entend également désigner par"immunogène, antigène ou haptène"dans la présente description un composé présentant une analogie structurale avec ledit antigène ou haptène capable d'induire une réponse immunologique dirigée contre ledit antigène ou haptène dans un organisme préalablement immunisé avec ledit composé analogue. Ledit antigène ou haptène peut notamment être choisi parmi les protéines, les glycopeptides, les lipopeptides, les polysaccharides, les oligosaccharides, les acides nucléiques et les lipides. Dans une forme de réalisation de l'invention, ledit antigène, immunogène ou haptène dérive d'un virus, d'une bactérie, d'un parasite ou d'un champignon. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, ledit antigène, immunogène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé de micro-organisme responsable de pathologies des voies aériennes choisi parmi le VRS (virus syncytial respiratoire), le para influenza virus (PIV), l'influenza virus, les hantavirus, les streptocoques, les pneumocoques, haemophilus influenza type b, les rhinovirus, les coronovirus et les méningocoques. Dans un mode de réalisation encore plus préféré de l'invention, ledit antigène, immunogène ou haptène comprend au moins un fragment de la protéine G du virus respiratoire syncytial de type A ou B, notamment humain. Dans une autre forme de réalisation de l'invention, ledit antigène, immunogène ou haptène est associé ou spécifique d'une cellule tumorale. Parmi les cancers dont les tumeurs expriment un antigène tumoral associé pouvant être prévenus ou traités par les utilisations selon la présente invention, on peut citer en particulier, mais sans s'y limiter : * le cancer du sein, du poumon, du colon, et le carcinome gastrique (Kawashima et al., 1999, Cancer Res., 59 : 431-5) ; * le mésothéliome, l'ostéosarcome, les cancers du cerveau (Xie et al., 1999, J. Natl. Cancer. Inst., 91 : 169-75) ; * le mélanome (Zheuten et al., 1998, Bratilsl. Lek. Listy, 99 : 426-34) ; * l'adénome cystique du pancréas (Hammel et al., 1998, Eur. J. gastroenterol. Hepatol., 10 : 345-8) ; * le cancer colorectal (Ogura et al., 1998, Anticancer Res., 18 : 3669-75) ; 'le carcinome des cellules rénales (Jantzer et al., 1998, Cancer Res., 58 : 3078-86) ; et 'le cancer de l'ovaire et du cervix (Sonoda et al., 1996, Cancer., 77 : 1501-9). La présente invention a aussi pour objet une composition selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène, immunogène ou haptène est couplé ou mélangé au peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie. L'invention comprend également l'utilisation selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène est couplé par liaison covalente, notamment par couplage chimique, avec ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, il est introduit un ou plusieurs éléments de liaison ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp, ou l'un de ses fragments, et/ou dans ledit antigène ou haptène pour faciliter le couplage chimique, de préférence, ledit élément de liaison introduit est un acide aminé. Selon l'invention, il est possible d'introduire un ou plusieurs éléments de liaison, notamment des acides aminés pour faciliter les réactions de couplage entre le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, et ledit immunogène, antigène ou haptène. Le couplage covalent entre le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie et ledit immunogène, antigène ou haptène selon l'invention peut être réalisé à l'extrémité N-ou C-terminale dudit peptide. Les réactifs bifonctionnels permettant ce couplage seront déterminés en fonction de l'extrémité dudit peptide choisie pour effectuer le couplage et de la nature dudit immunogène, antigène ou haptène à coupler. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'utilisation selon l'invention est caractérisée en ce que le couplage entre ledit immunogène, antigène ou haptène et ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie est réalisé par recombinaison génétique, lorsque ledit immunogène, antigène ou haptène est de nature peptidique. Les conjugués issus d'un couplage entre l'immunogène, antigène ou haptène et ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, peuvent être préparés par recombinaison génétique. La protéine chimérique ou hybride (le conjugué) peut être produite par des techniques d'ADN recombinant par insertion ou addition à la séquence d'ADN codant pour ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, d'une séquence codant pour ledit immunogène, antigène ou haptène de nature protéique. Les procédés de synthèse des molécules hybrides englobent les méthodes utilisées en génie génétique pour construire des polynucléotides hybrides codant pour les séquences polypeptidiques recherchées. On pourra, par exemple, se référer avantageusement à la technique d'obtention de gènes codant pour des protéines de fusion décrite par D. V Goeddel (Gene expression technology, Methods in Enzymology, vol. 185, 3-187, 1990). Ainsi, la présente invention concerne aussi une composition pharmaceutique qui comprend une construction nucléique codant pour ladite protéine hybride, ou qui comprend un vecteur contenant une construction nucléique codant pour ladite protéine hybride ou une cellule hôte transformée contenant ladite construction nucléique capable d'exprimer ladite protéine hybride Les compositions selon l'invention peuvent contenir en outre un adjuvant. Ce dernier peut notamment être choisi parmi le MPL-A ( MonoPhosphoryl Lipid A ), le Quil-A (adjuvant dérivé de saponine), l'ISCOM ( ImmunoStimulaing COMplex ), le Diméthyl Dioctadécyl Ammonium sous forme de bromure (DDAB) ou de chlorure (DDAC), les CpG (oligodésoxynucléotides contenant un motif spécifique centré sur un dinucléotide CpG), la Leif (antigène protéique dérivée de Leishmania capable de stimuler les cellules PBMC et présentatrices d'antigène, et de produire une réaction cytokine de type Th-1), la CT (Toxine Cholérique), la LT ( heat Labil Toxin ) et les versions détoxifiées de la CT ou la LT. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la composition pharmaceutique selon l'invention ne contient pas d'adjuvant autre que le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie. Dans un mode de réalisation encore plus préféré de l'invention ladite composition pharmaceutique selon l'invention ne contient pas de détergent. Au sens de la présente invention, le milieu pharmaceutiquement acceptable est le milieu dans lequel les composés de l'invention sont administrés, préférentiellement un milieu injectable chez l'homme. Il peut être constitué d'eau, d'une solution aqueuse saline ou d'une solution aqueuse à base de dextrose et/ou de glycérol. L'invention comprend également une composition selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique est véhiculée sous une forme permettant d'améliorer sa stabilité et/ou son immunogénicité ; ainsi, elle peut être véhiculée sous forme de liposomes, virosomes, nanosphères, microsphères ou microcapsules. La présente invention concerne encore une protéine du domaine périplasmique d'une Omp d'entérobactérie choisie parmi les protéines de séquence suivantes : a) la protéine de séquence SEQ ID ? 2 ; b) une protéine de séquence présentant une homologie d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 % avec la séquence SEQ ID ? 2 ; c) une protéine d'au moins 5 acides aminés, de préférence d'au moins 8, 10, 15, 20,25, 30,40, 45,50, 75 et 100 acides aminés consécutifs du domaine périplasmique de séquence SEQ ID ? 2 et présentant une activité immunogénique, notamment comme protéine porteuse et/ou comme adjuvant. La présente invention concerne encore une construction nucléique, notamment de type ADN, codant pour le domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie de séquence SEQ ID NO 2, ses séquences homologues ou ses fragments tels que ci-avant définis en b) et c). La présente invention concerne notamment une construction nucléique, caractérisée en ce que l'acide nucléique codant pour le peptide provenant du domaine périplasmique est choisi parmi les acides nucléiques de séquence suivante : a) l'acide nucléique de séquence SEQ ID ? 1 ; b) un acide nucléique de séquence présentant une homologie d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 % avec la séquence SEQ ID ? 1 ; et c) un acide nucléique dont la séquence est constituée de la séquence d'un fragment d'au moins 15 nucléotides, de préférence 24,30, 45,60, 75,90, 105,120, 135,150, 225 et 300 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID ? 1 et dont le peptide codé par ledit fragment présente une activité immunogénique, notamment comme protéine porteuse et/ou comme adjuvant. La SEQ ID ? 2 correspond aux acides aminés 199 à 335 de l'OmpA de Klebsiella pneumoniae (OmpA dont la protéine de 335 acides aminés est dénommée également protéine P40). Ce fragment est dépourvu des 17 premiers acides aminés du domaine périplasmique (acides aminés 182 à 198 de ladite séquence de l'OmpA de Klebsiella pneumoniae, afin d'éliminer la zone dite charnière , qui présente une forte homologie avec la chaîne légère 1 de la myosine humaine. L'utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini ci-dessus comme porteur et/ou adjuvant dans un vaccin (ou pour la préparation d'un vaccin) constitue un autre objet de l'invention. L'invention concerne encore l'utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini ci-dessus pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylactique ou thérapeutique des infections virales, bactériennes, parasitaires ou fongiques ou pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylactique ou thérapeutique des cancers. L'invention a encore pour objet l'utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini ci-dessus pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à générer ou accroître une réponse immunitaire contre un agent infectieux ou une cellule tumorale. Les légendes des figures et exemples qui suivent sont destinés à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée. Légendes des figures Figures IA et IB : Etude de la réponse anti-G5 sérique après immunisation de souris BALB/c avec les conjugués P40-G5 et P40péri-G5 ( P40péri pour fragment du domaine périplasmique de la protéine P40). Exemple 1 : Clonage du domaine périplasmique de la P40 Le gène codant pour la partie périplasmique a été obtenu par amplification par PCR à partir de l'ADN plasmidique codant pour rP40 en utilisant comme couple d'amorces : - l'oligonucléotide sens de séquence : 5'-GCGAATTCGTGGCTACCAAGCACTTCACC-3' (SEQ ID No. 3) ; et - l'oligonucléotide antisens de séquence : 5'-CGAAGCTTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGTTCCGGAGCCGGAGCCG-3' (SEQ ID No. 4). Le fragment ainsi amplifié correspondant à P40péri ( P40péri ou P40p pour fragment du domaine périplasmique de la protéine P40) et identifié par séquençage a été cloné dans un vecteur sous le contrôle du promoteur de l'opéron tryptophane, en amont de 9 acides aminés du peptide leader (MKAIFVLNA (SEQ ID No. 5)). La séquence protéique de la partie périplasmique correspond aux acides aminés 182 à 335 de l'OmpA de Klebsiella pneumoniae Exemple 2 : Expression du domaine périplasmique de la P40 chez Escherichia coli La souche d'cnc coli ICONE 100 (Souche ICONE 100 telle que décrite dans la demande WO 99/53080 publiée le 15 Octobre 1999) transformée par le vecteur pvaLP40p est mise à cultiver une nuit à 37 C sous agitation dans 100 ml de TSB complémenté en extrait de levure, en tétracycline (8 ug/ml). Le lendemain une culture diluée à une concentration en biomasse équivalente à une densité optique D. O. = 1 pour une longueur d'onde de 580 nm est préparée dans du milieu TSB additionnée d'extrait de levure, de tétracycline et de tryptophane (100 ug/ml). Après 10 minutes de culture, l'expression de la protéine recombinante est induite par addition d'IAA (acide indole-3 acrylique) à 25 ug/ml dans le milieu. Environ 5 heures à 37 C après induction, les cellules sont récoltées par centrifugation. Exemple 3 : Extraction et purification du domaine périplasmique de la P40 Après centrifugation, les cellules sont remises en suspension dans un tampon Tris-HCI 25 mM pH 8, 5, puis traitées par le lysozyme (0,5 g/litre pendant 1 heure à température ambiante sous agitation douce). Après centrifugation (25 min à 10 000g et à + 4OC), le surnageant est dialysé pendant une nuit à + 4 C sous agitation contre un tampon 20 mM phosphate de sodium, pH 7, contenant 0,5 M NaCl. La purification est réalisée par chromatographie d'affinité sur métal immobilisé. Le dialysat précédent est déposé sur une colonne de type Chelating Sepharose (Amersham Pharmacia Biotech) préalablement chargée d'ions Ni2+ à l'aide d'une solution 1 M NiSO4. La protéine est éluée à l'aide d'un gradient d'imidazole de 0 à 0, 5 M. La protéine peut être concentrée, après purification, par ultrafiltration tangentielle. 1 litre de culture permet d'obtenir 50 à 100 mg de protéine purifiée. La concentration en protéine est déterminée par dosage à l'aide de la méthode BCA (microdosage de protéine à l'Acide BicinChoninique), et la pureté de la protéine purifiée est déterminée par analyse par électrophorèse SDS-Page. Le domaine périplasmique purifié présente une masse moléculaire apparente de 18 kDa. Exemple 4 : Couplage du peptide G5 Le peptide G5 (SEQ ID No. 6) est un peptide synthétique de 16 acides aminés, dont la séquence est la suivante : Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gin Arg Gin Asn Lys Pro Pro Asn Lys Pro 1 5 10 15 Ce peptide correspond à la partie 144-159 de la protéine G du virus respiratoire syncytial Il est couplé aux protéines P40 et P40péri, grâce à un résidu cystéine introduit en position C-terminale, à l'aide du réactif bromo-N-hydroxysuccinimide acétate selon la méthode décrite par Haeuw et al. (Eur. J. Biochem., 255, 446-454). Les conjugués obtenus sont analysés par électrophorèse SDS-PAGE (PolyAcrylamide Gel Electrophorèse). Le taux de couplage du peptide sur les protéines est estimé par dosage du résidu carboxyméthylcystéine libéré après hydrolyse (HCI 6N) des conjugués. Le taux de couplage déterminé par cette méthode est d'environ 3 à 5 moles de peptides couplés par mole de P40péri. Exemple 5 : Immunogénicité du conjugué P40péri-G5 La partie périplasmique de la protéine P40 a été comparée à la P40 entière pour sa capacité à induire une réponse anticorps contre un épitope B pur : le peptide G5 décrit précédemment. L'extraction et la purification de la rP40 (rP40 pour protéine P40 recombinante) ont été décrites par Haeuw et al. (Eur. J. Biochem., 255, 446-454, 1998), ainsi que dans les demandes WO 95/27787 et FR 00 02 104. Pour cette étude, le peptide G5 a été couplé selon la méthode indiquée ci-dessus aux protéines P40 et P40péri. 10 ug d'équivalents G5 ont été administrés, par voie sous cutanée, A en présence ou B en absence d'hydroxyde d'aluminium à des souris BALB/c (n=5), à JO, no et J20. Une ponction individuelle des souris a été réalisée avant chaque immunisation et 11 jours après la dernière immunisation, et le titre en IgG sériques antiG5 a été déterminé par ELISA. Les résultats présentés dans les figures 1A et ! B montrent que la partie périplasmique de P40 est capable, comme la P40 entière, d'induire une réponse anticorps dirigée contre un épitope B pur en présence ou en absence d'adjuvant. En présence d'adjuvant (figure via), l'intensité de la réponse anti-G5 et la cinétique de réponse sont identiques dans les deux cas. En absence d'adjuvant (figure IB), on note une réponse anti-G5 lorsque G5 est conjugué à P40péri. Ces résultats mettent en évidence le rôle porteur de la partie périplasmique de la protéine P40. REVENDICATIONS 1/Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend dans un milieu pharmaceutiquement acceptable au moins un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ou une construction nucléique codant pour ledit peptide 2/Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie est choisi parmi les peptides suivants : - un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ; - un peptide présentant au moins 80 % d'homologie avec un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ; - un peptide d'au moins 5 acides aminés consécutifs d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie et présentant une activité immunogénique ; et - un épitope T helper d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie. 3/Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie est choisi parmi un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp A et plus préférentiellement parmi un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp A de Klebsellia pneumonia. 4/Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie comprend, de préférence est constitué par, un peptide dont la séquence est choisie parmi les séquences suivantes : a) la séquence d'acides aminés de séquence SEQ ID NO 2 ; b) la séquence d'acides aminés d'une séquence présentant une homologie d'au moins 80 % avec la séquence SEQ ID NO 2 ; et c) la séquence d'acides aminés d'un fragment d'au moins 5 acides aminés consécutifs d'une séquence telle que définie en a). 5/Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle contient en outre un antigène, immunogène ou haptène. 6/Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que ledit antigène, immunogène ou haptène est choisi parmi les peptides, les glycopeptides, les lipopeptides, les poly-ou oligosaccharides, les acides nucléiques et les lipides. 7/Composition selon la revendication 5 ou 6, caractérisée en ce que ledit antigène, immunogène ou haptène dérive d'un virus, d'une bactérie, d'un parasite ou d'un champignon. 8/Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que ledit antigène, immunogène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé de microorganisme responsable de pathologies des voies aériennes choisi parmi le VRS, le para influenza virus (PIV), l'influenza virus, les hantavirus, les streptocoques, les pneumocoques, haemophilus influenza type b, les rhinovirus, les coronovirus et les méningocoques. 9/Composition selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce que ledit antigène, immunogène ou haptène comprend au moins un fragment de la protéine G du virus respiratoire syncytial. 10/Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que l'antigène, immunogène ou haptène est associé ou spécifique d'une cellule tumorale. 11/Composition selon l'une des revendications 5 à 10, caractérisée en ce que ledit antigène, immunogène ou haptène est associé, par mélange ou par couplage, au peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie. 12/Composition selon la revendication 11, caractérisée en ce que le couplage entre ledit antigène, immunogène ou haptène et ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie est réalisé par recombinaison génétique. 13/Composition selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique contient en outre un adjuvant, préférentiellement choisi dans le groupe d'adjuvant comprenant le MPL-A, le Quil-A, l'ISCOM, le Diméthyl Dioctadécyl Ammonium sous forme de bromure (DDAB) ou de chlorure (DDAC), les CpG, la Leif, la CT, la LT et les versions détoxifiées de la CT ou la LT. 14/Composition selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique ne contient pas d'adjuvant autre que le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie 15/Composition selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisée en ce que ladite composition ne contient pas de détergent. 16/Composition selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisée en ce que ledit milieu pharmaceutiquement acceptable est constitué d'eau, d'une solution aqueuse saline ou d'une solution aqueuse à base de dextrose et/ou de glycérol. 17/Composition selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique est véhiculée sous une forme permettant d'améliorer sa stabilité et/ou son immunogénicité 18/Peptide provenant du domaine périplasmique d'une Omp d'entérobactérie choisie parmi les peptides de séquence suivante : a) le peptide de séquence SEQ ID NO 2 ; b) un peptide de séquence présentant une homologie d'au moins 80 % avec la séquence SEQ ID NO 2 ; c) un peptide d'au moins 5 acides aminés consécutifs du domaine périplasmique de séquence SEQ ID ? 2 et présentant une activité immunogénique, notamment comme protéine porteuse et/ou comme adjuvant. 19/Construction nucléique codant pour un peptide selon la revendication 18. 20/Construction nucléique selon la revendication 19, caractérisée en ce que l'acide nucléique codant pour le peptide provenant du domaine périplasmique est choisi parmi les acides nucléiques de séquence suivante : a) l'acide nucléique de séquence SEQ ID ? 1 ; b) un acide nucléique de séquence présentant une homologie d'au moins 80 % avec la séquence SEQ ID ? 1 ; c) un acide nucléique dont la séquence est constituée de la séquence d'un fragment d'au moins 15 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID ? 1 et dont le peptide codé par ledit fragment présente une activité immunogénique, notamment comme protéine porteuse et/ou comme adjuvant. 21/Utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini dans l'une des revendications 1 à 4 comme porteur et/ou adjuvant pour la préparation d'un vaccin 22/Utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini dans l'une des revendications 1 à 4 pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylactique ou thérapeutique des infections virales, bactériennes, parasitaires ou fongiques ou pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylactique ou thérapeutique des cancers. 23/Utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini dans l'une des revendications 1 à 4 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à générer ou accroître une réponse immunitaire contre un agent infectieux ou une cellule tumorale.