Brevet FR2809619A1 — publié le 20011207

NOUVELLES FORMULATIONS AQUEUSES DE PRINCIPES ACTIFS SENSIBLES A L'OXYDATION ET LEUR PROCEDE D'OBTENTION La présente invention a pour objet un nouveau mode de conditionnement de principes actifs en particulier de principes actifs utiles en thérapeutique et sensibles à l'oxygène, ainsi 'un procédé pour la préparation de ces modes de conditionnements, et leur utilisation. Elle a plus précisément pour objet des formulations aqueuses de principes actifs sensibles à l'oxydation et utilisables notamment dans des préparations injectables, stables pendant une longue période, contenant par exemple des substances phénoliques ou polyphénoliques, des aminoalcools, ou des substances soufrées. Les solutions aqueuses de principes actifs trouvent classiquement différentes applications, notamment en thérapeutique, en particulier sous forme de solutions injectables destinées à l'homme ou l'animal. Il arrive cependant que certains principes actifs présentent en solution des problèmes de stabilité. Ces problèmes peuvent être liés au fait que les principes actifs sont sensibles à l'oxydation et forment des produits de dégradation non désirés, par réaction avec l'oxygène de l'air ou surtout avec l'oxygène dissous dans la solution aqueuse. D'autres principes actifs sont eux indirectement sensibles à l'oxygène, c'est-à-dire qu'ils sont susceptibles de former, par des réactions chimiques, au cours de leur conservation, des dérivés oxydables. Ces dérivés, par réaction avec l'oxygène, conduisent alors à la formation de produits secondaires désirés. C'est le cas, notamment, du paracétamol. Les Demandeurs ont, en effet, mis en évidence le fait que le paracétamol, en solution aqueuse, subit, d'une part une hydrolyse, et d'autre se décompose pour former une quinone-imine susceptible de se polymériser en polymères azotés. Les dérivés issus de ces réactions sont eux aussi sensibles à l'oxydation et forment des produits secondaires non désirés. Or les produits secondaires formés par réaction de l'oxygène avec ces principes actifs, ou leurs dérivés, conduisent à de nombreux inconvénients comme par exemple une perte d'activité ou la production de produits allergisants. En effet, par suite de la dégradation par oxydation, le titre en principe actif de la solution aqueuse diminue sensiblement, de façon non contrôlable et ceci pose un problème important, notamment lorsque ces solutions sont utilisées en thérapeutique, plus particulièrement sous forme de solutions injectables, où il importe que la dose en principe actif soit parfaitement déterminée. Par ailleurs, les produits d'oxydation conduisent à la formation de composés colorés, et rendent ainsi la solution aqueuse impropre aux applications thérapeutiques. En outre, la formation de produits secondaires peut encore augmenter par suite de l'élévation de la température, ce qui peut, par voie de conséquence, interdire ou tout au moins rendre difficile stérilisation des solutions aqueuses de ces principes actifs, par la chaleur. On entend ici et dans ce qui suit par le terme principe actif phénolique sensible à l'oxydation toute substance, médicamenteuse ou non, comportant une structure phénolique et/ou des fonctions portées par la structure phénolique qui réagissent facilement avec l'oxygène et qui se dégradent en formant des produits d'oxydation, colorés ou non, ou des produits d'hydrolyse ou des produits de polymérisation. Les principes actifs sensibles à l'oxygène sont essentiellement des substances organiques porteuses de fonctions oxydables parmi lesquelles on citera en particulier les phénols, les polyphénols, les aminophénols, les alcools phénoliques et les cétones phénoliques, ainsi que les amines aromatiques ou des structures cycliques partiellement hydrogénées. On citera également les composés à structure énolique ou encore à fonction aldéhyde, ou à fonction cétone, ou à fonction alcool. Les aminosides qui sont également sensibles à la présence d'oxygène, peuvent en outre être cités. Parmi les principes actifs facilement oxydables que l'on incorporera dans les solutés de l'invention, on pourra citer plus particulièrement des phénols ou des aminophénols, comme le paracétamol, l'épinéphrine, la nor-épinéphrine, l'adrenalone, l'isoprenaline, l'orciprénaline, l'isoxuprine, la phényléphrine ou la dobutamine ; comme amines aromatiques, on citera la procaïne, la bupivacaïne, la tétracaïne, le butoforme, la 1-DOPA ou la Carbidopa ; comme aminocétones, on citera la Propaphénone ; comme aminoglucosides, on citera les gentamycines, l'amikacine, la dibékacine, la netilmycine, la sisomycine, la tobramycine, la micronomycine ; comme phénothiazines, on citera la prométhazine ; comme molécules hydroaromatiques, on citera la riboflavine, la 9-amino dihydro acridine ; on pourra citer encore des dérivés cortisoniques, comme la dexaméthasone, la bétaméthasone, la triamcinolone, le fluocinonide, le flunisolide, l'acétonide de fluocinolone, la fluocortolone, la Clobetasone et leurs dérives, la béclométasone et ses esters ; des dérivés de la Tétracycline, comme la Doxycycline ou la Minocycline. En vue d'améliorer la stabilité de tels principes actifs médicamenteux sensibles à l'oxydation et donc d'obvier aux inconvénients décrits ci-dessus, on a déjà proposé d'empêcher l'action de l'oxygène, soit en éliminant l'oxygène, soit en le neutralisant, soit encore, en combinant ces deux types d'opérations. Plusieurs méthodes ont été utilisées dans ce but a) l'élimination de l'oxygène par élévation de la température de la solution aqueuse, par mise sous vide de la solution aqueuse ou par barbotage dans la solution, d'un gaz inerte tel que l'azote, le dioxyde de carbone ou l'argon. Ces méthodes ont cependant pour inconvénient de ne permettre qu'une élimination partielle et insuffisante de l'oxygène, ou de requérir beaucoup de temps. Le barbotage d'azote, méthode la plus pratiquée dans l'industrie pharmaceutique, ne permet d'abaisser la teneur en oxygène qu'à des valeurs de l'ordre de 2 ppm. b) la neutralisation de l'oxygène dissous dans la solution aqueuse par adjonction à cette dernière d'un agent antioxydant comme un thiol ou les dérivés de l'anhydride sulfureux comme les sulfites, les bisulfites ou les métabisulfites de métal alcalin. c) la combinaison de l'élimination de l'oxygène et de l'adjonction d'un agent antioxydant. méthode de ce type a été décrite par les Demandeurs dans le brevet français 2.751.875. Toutes les méthodes antérieures ont une certaine efficacité. Cependant, l'oxygène manifeste très grande facilité à se dissoudre dans l'eau, et ceci oblige à priver la solution fois désoxygénée de tout contact ultérieur avec l'air atmosphérique, sous peine de perdre le bénéfice de l'élimination préalable de l'oxygène. Dans le cadre de fabrications industrielles de solutions injectables, on a pu aisément désoxygéner des solutions en vrac dans des cuves étanches et les conserver ainsi à l'abri de l'air. Cependant, lors d'opérations ultérieures de remplissage et de conditionnement en flacons ou en poches, il est difficile de maintenir les solutions totalement à l'abri de l'air. Malgré les précautions peut prendre à cet effet, et notamment de remplir et de conditionner les flacons sous adjonction de gaz inerte, les solutions une fois conditionnées, peuvent encore contenir ou fixer des quantités non négligeables d'oxygène dissous. Si ces solutions doivent être stérilisées par la chaleur, en particulier à températures élevées, voisines de 120 C, la quantité résiduelle d'oxygène dissous peut facilement réagir avec le principe actif sensible à l'oxydation et entraîner sa dégradation totale ou partielle. On a constaté en effet que toute présence d'oxygène est néfaste et qu'il suffit de quantités infinitésimales d'oxygène pour induire une réaction d'oxydation, surtout à la température de stérilisation. La concentration limite résiduelle d'oxygène présent dans le milieu, apte à produire un effet oxydant, est de l'ordre de 2 ppm. Les demandeurs ont donc mis en oeuvre un procédé de stabilisation des solutions de substances phénoliques facilement oxydables, dans lequel on complète la désoxygénation préalable à un degré tel qu'on évite que cette dégradation puisse se produire. En outre, la mise en oeuvre d'agents antioxydants ne présente pas toujours des avantages. Ainsi les agents antioxydants utilisés se dégradent au fur et à mesure, ce qui nécessite d'en ajouter quantités relativement importantes pour assurer une protection satisfaisante du principe actif. On peut aussi combiner l'élimination de l'oxygéne et l'adjonction d'un agent antioxydant. Des essais complémentaires ont montré que le problème de la stabilisation des formulations selon l'invention était sensiblement plus complexe et notamment on a constaté que sans agent antioxydant une solution essentiellement désoxygénée se colorait en rose après un certain temps à température ambiante. On a observé à cet égard que des solutions injectables qui ne sont totalement désoxygénées ne se colorent pas sensiblement si au préalable on ajoute à la solution un acide a-hydroxypolycarboxylique. Notamment l'addition d'acide citrique ou d'un citrate alcalin ou d'un mélange des deux permet de ralentir l'apparition d'une coloration. En outre, il est apparu qu'il est possible de compléter la désoxygénation d'une solution substance sensible à l'oxydation par utilisation du vide. Il en résulte une plus grande stabilité de l'agent antioxydant et une formation moindre de produits secondaires résultant de la dégradation oxydative, notamment après plusieurs cycles de stérilisation. Les acides a-hydroxypolycarboxyliques et leurs sels jouent un rôle important. n'agissent pas en stabilisant le pH, ni en jouant un rôle de capteur de radicaux libres. Ils remplacent avantageusement les composés polyhydroxylés comme le sorbitol ou le mannitol. Dans le cas particulier du paracétamol on utilise de préférence un mélange de citrate trisodique et d'acide citrique en quantité suffisante pour obtenir une valeur de pH de l'ordre 5 à 6, et de préférence de 5,5. La présente invention a donc pour objet des formulations de solutions aqueuses de principes actifs phénoliques, en particulier de principes actifs sensibles à l'oxydation, comme le paracétamol, permettant de conférer une grande stabilité dans le temps. Un autre objet de l'invention consiste en un procédé de préparation de telles formulations. Un objet de la présente invention consiste encore en l'utilisation de ces formulations pour la réalisation de solutés injectables destinés à l'homme ou à l'animal, contenant principe actif phénolique additionné ou non d'un agent anti-inflammatoire et/ou analgésique central. L'invention a spécifiquement pour objet des formulations aqueuses de principes actifs phénoliques facilement oxydables, stables sur une période prolongée, contenant éventuellement des antioxydants, caractérisées en ce qu'elles sont obtenues en les soumettant à une désoxygénation poussée soit par barbotage d'un gaz inerte soit par mise sous vide, puis en les protégeant d'une éventuelle reprise d'oxygène en cours de production maintien sous atmosphère de gaz inerte, en ce qu'elles sont conditionnées dans des flacons préalablement débarrassés d'air par insufflation de gaz inerte, et notamment de gaz de nappage plus lourd que l'air comme l'argon, puis en ce qu'au moment du bouchage on les soumet à dépression telle qu'on obtienne une pression inférieure à la pression atmosphérique, d'au maximum 65 000 Pa, de préférence comprise entre 5 000 et 50 000 Pa, pour obtenir un soluté ayant une concentration en oxygène dans la solution, inférieure à 2 ppm. Selon un autre aspect de l'invention, l'invention consiste en un procédé de préparation d'une formulation comme décrit précédemment, qui comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes a) on soumet une solution aqueuse d'au moins un principe actif à une désoxygénation poussée et on la complète éventuellement, b) on introduit, sous une atmosphère de gaz inerte, une partie ou la totalité de la solution aqueuse désoxygénée dans un récipient préalablement débarrassé de l'air qu'il contient, c) on bouche le récipient sous une atmosphère de gaz inerte, tout en procédant de sorte créer dans le récipient, une pression d'au maximum 65 000 Pa. La solution aqueuse est de préférence désoxygénée par barbotage par un gaz inerte, comme par exemple l'azote. Le barbotage peut être mis en oeuvre jusqu'à obtention d'une teneur inférieure à 2 ppm et de préférence de 1 à 0,5 ppm, et même tout particulièrement 0,05 ppm d'oxygène dans la solution aqueuse. La solution désoxygénée ainsi obtenue peut alors être amenée, à l'abri de l'air, dans une machine de remplissage afin d'être distribuée dans des récipients tels que flacons, ampoules ou bouteilles. L'introduction de la solution aqueuse dans le récipient est réalisée sous une atmosphère gaz inerte, tel l'azote. Avant l'introduction de la solution aqueuse de principe actif dans le récipient, celui-ci est débarrassé de l'air qu'il contient, par exemple par insufflation d'un gaz inerte, de préférence un gaz inerte plus lourd que l'air, tel que l'argon, afin d'éviter que celui-ci soit immédiatement remplacé par de l'air par suite de la poussée d'Archimède. Une fois que les récipients ont été remplis, toujours sous insufflation concomitante d'un gaz inerte, on bouche les flacons sous un vide poussé afin de les maintenir après bouchage, à une pression inférieure ou égale à 65 000 Pa, de préférence comprise entre 5 000 et 50 000 Pa. Pour ce faire, on peut mettre en oeuvre des moyens connus, comme par exemple la mise, sur le col du récipient, d'une cloche à vide, immédiatement après la pose du bouchon. Après mise en contact hermétique, l'enceinte de la cloche est mise sous vide, par exemple en la reliant à un récipient sous vide. Le bouchon du récipient est soulevé et le gaz surmontant la solution est aspiré. Le bouchon est ensuite remis en place sur le récipient et celui-ci peut être hermétiquement fermé par exemple par la pose d'une capsule, puis sertissage. Le récipient, une fois bouché, peut être soumis à une stérilisation, en particulier une stérilisation réalisée par autoclavage ou par irradiation. La solution aqueuse du principe actif peut être soumise à une stérilisation par filtration stérilisante avant introduction de cette solution dans le récipient. La solution est ensuite dans le récipient, de préférence dans conditions d'asepsie, sous gaz inerte, celui-ci étant avantageusement stérile. Le gaz inerte employé de préférence dans le procédé selon l'invention pour le barbotage est l'azote, celui pour le nappage est l'Argon, qui est plus lourd que l'air. On peut également utiliser le Xénon ou le Néon. Après que les flacons ont été remplis toujours sous insufflation concomitante d'un gaz inerte, de la solution de substance facilement oxydable, le bouchage du flacon est réalisé sous vide poussé afin de maintenir dans les flacons apres bouchage, une dépression de plus de 300 mm de mercure, soit une pression d'au maximum 000 Pa. Selon le procédé de l'invention, la dépression qui règne dans le flacon favorise l'élimination de l'oxygène encore présent dans la solution ceci constitue un net avantage. Cette élimination permet de diminuer la quantité d'agent antioxydant nécessaire à la protection du principe actif, voire d'éviter d'en ajouter. Elle peut permettre également de stériliser par la chaleur des solutions qu'on ne pouvait pas stériliser précédemment du fait de la dégradation du principe actif par oxydation lors de cette opération. Cette diminution de la quantité d'agent antioxydant peut permettre également stabiliser ces solutions sur de plus longues durées. Ainsi, le brevet français 2.751.875 mentionne que des solutions aqueuses de paracétamol sont stables pendant 48 heures à température ambiante à la lumière, ainsi qu'à 70 C à l'obscurité, lorsqu'elles sont soumises à un barbotage d'azote, un remplissage sous azote et l'adjonction d'un antioxydant. Il est possible d'obtenir stabilités de plus longue durée, par mise en oeuvre du procédé décrit, comme il est montré aux exemples suivants. L'antioxydant qu'il peut être approprié d'ajouter au milieu est un sulfite ou un dérivé de sulfite, une substance thiolique comme par exemple la cystéine, l'acétylcystéine, le dithiothreitol ou Poc- thioglycérol, une substance hydroxylée comme l'acide ascorbique, l'acide iso-ascorbique, le mannitol, le sorbitol, une substance non saturée éthylèniquement comme l'acide sorbique, l'acide undecylènique ou l'acide fumarique ou acide hydroxy polycarboxylique. En outre, il a été constaté que l'addition acide hydroxypolycarboxylique conjointement à, ou à la place de l'opération de désoxygénation, a pour effet de réduire sensiblement la consommation d'antioxydant et amène une diminution de la concentration en agent antioxydant. La quantité d'agent oxydant qu'il peut être approprié d'ajouter est faible et s'échelonne de préférence de 0,1 mg à 1 000 mg par litre de solution, et de préférence de 0,2 à 20 mg. Il peut être également avantageux d'ajouter un agent de régulation du pH et notamment un agent tampon, surtout lorsque les principes actifs phénoliques facilement oxydables sont susceptibles d'être dégradés ou hydrolysés dans des plages de pH particulières. Il peut ainsi etre approprié d'ajuster le pH des solutions entre 4 et 8 et en particulier entre 4,5 et 6,0 où l'oxydabilité des molécules phénoliques sera plus faible. Un tampon approprié sera par exemple le mélange hydrogénophosphate de sodium / acide chlorhydrique, le mélange hydrogénophosphate de sodium / hydroxide de sodium, le mélange acide acétique/acétate de sodium, le mélange acide citrique/citrate de sodium, ou le mélange citrate trisodique/acide chlorhydrique. choix du pH dépendra principalement de la nature du principe actif. Les formulations selon l'invention trouvent une utilisation dans le domaine thérapeutique sous forme injectable administrée directement ou ajoutée dans une poche de perfusion comme analgésique ou comme antibiotique ou comme médicament cardio-vasculaire. La solution injectable de paracétamol selon l'invention se distingue par des propriétés analgésiques tout à fait remarquables. Elle peut contenir en outre un agent vasoconstricteur comme de l'adrénaline ou un agent analgésique central comme la codéine ou le d-propoxyphène ou agent anti- inflammatoire comme l'acide tiaprofénique ou un de ses sels. La préparation d'une telle solution se fait sous azote. La concentration en oxygène dissous est inférieure à 0,05 ppm. On peut également utiliser comme acide hydroxypolycarboxylique l'acide tartrique ou un monotartrate alcalin comme le sel de sodium ou le sel de potassium en présence d'un tartrate dimétallique pour obtenir une valeur de pH de l'ordre de 5,5. On note également qu'en présence d'acide hydroxypolycarboxylique, le pH est beaucoup plus stable. Il en est de même pour les autres acides hydroxypolycarboxyliques comme l'acide gluconique, l'acide saccharique, l'acide citramalique ou l'acide malique. On peut utiliser seulement un sel d'acide hydroxypolycarboxylique comme le citrate trisodique ou le tartrate disodique et ajuster le pH par addition ménagée d'acide chlorhydrique. L'addition d'acide hydroxypolycarboxylique et notamment d'acide citrique, à des concentrations qui permettent d'obtenir une valeur de pH de l'ordre de 5,5 joue un rôle important. Il s'avère que des concentrations s'échelonnant de 5 à 200 mg pour 100 ml assurent une protection efficace contre l'oxydation (absence de coloration) et une protection contre la dégradation de l'agent antioxydant attestée par une moindre teneur en produits de dégradation de la cystéine utilisée comme agent antioxydant. En particulier, dans le cas du paracétamol, après addition de citrate trisodique à la concentration de 70 mg / 100 ml, la concentration résiduelle en cystéine est environ le double de celle des préparations sans citrate, il n'apparait pas de coloration même après 7 semaines à , et la concentration en paracétamol ne subit pas de variation. En conclusion, les trois paramètres qui actuellement doivent être pris en considération comme essentiels pour la conservation après stérilisation à la chaleur, de formulations aqueuses d'un principe actif sensible à l'oxydation sont, pris séparément ou en combinaison # la désoxygénation complète par barbotage de gaz inerte en dessous d'une concentration en oxygène inférieure à 2 ppm, # complétée par l'addition éventuelle d'un agent antioxydant, # et l'addition d'un acide hydroxypolycarboxylique. Dans ces conditions, la concentration en principe actif ne subit pas de variation et l'absence d'oxydation peut être constatée par le maintien de solutions incolores pendant une période de temps prolongée. EXEMPLE I Réalisation d'une composition aqueuse de naracétamol On prépare une solution de paracétamol dans l'eau à une concentration variant de 2 à 50 mg/ml. On procède à la désoxygénation poussée à moins de 2 ppm par barbotage de gaz inerte, puis au conditionnement en flacons sous gaz inerte et sous vide (moins de 65 000 Pa de pression résiduelle). On maintient ainsi une concentration résiduelle en oxygène dans la solution, à moins de 2 ppm et de préférence en dessous de 1 ppm. Le pH de la solution est compris entre 4 et 8, et de préférence de 4,5 à 6,0. A cette on ajoute un système tampon ajusté à 5,5. L'addition d'agent antioxydant contribue à la stabilité de la solution. Les agents antioxydants préférés sont l'acide ascorbique, un ascorbate, un thiol, un polyol un acide hydroxypolycarboxylique. L'agent antioxydant préféré est le mélange citrate sodium- cystéine. La solution peut être additionnée d'un agent isotonisant. EXEMPLE II Réalisation d'une composition aqueuse de paracétamol sans agent antioxydant On prépare une solution aqueuse de paracétamol à 10 mg/ml. On l'ajuste à pH 5,5 addition de CIH et on la tamponne par ajout d'hydrogénophosphate de sodium. On procède ensuite à une désoxygénation par barbotage d'azote jusqu'à obtention d'une teneur résiduelle en oxygène voisine de 0,2 ppm. Après remplissage des flacons avec la solution sous barbotage prolongé d'azote, ceux-ci sont stérilisés à 121 C pendant 15 minutes. Après 6 mois de conservation à 25 C, la solution est toujours incolore, la teneur en paracétamol n'évolue pas et la teneur en produits de dégradation du paracétamol déterminée par CLHP demeure inférieure à 0,015 % du paracétamol. Dans un autre essai, la solution de paracétamol après avoir été soumise à un barbotage d'azote, a été conditionnée sous azote. Au moment du bouchage des flacons de solution, on applique le vide afin d'obtenir une pression résiduelle de moins de 10 000 Pa. La teneur en oxygène dissous résiduel était de 0,16 ppm. Après stérilisation à 121' C pendant 15 minutes, et conservation pendant 8 jours à 30 C, la solution est restée incolore. Il apparaît donc que le moyen essentiel est la désoxygénation en dessous d'une concentration résiduelle de l'ordre de 0,2 ppm et ce moyen permet d'obtenir une conservation complète pendant une période prolongée. EXEMPLE III Réalisation d'une composition aqueuse de naracétamol contenant des ions citrate On a pu déterminer que des solutions aqueuses de paracétamol contenant des concentrations résiduelles d'oxygène un peu plus élevées c'est-à-dire de l'ordre de 0,3 à 0,4 ppm, se conservent moins bien du fait que le paracétamol peut réagir avec de très faibles quantités d'oxygène et peut former des composés colorés. C'est ainsi qu'une solution de paracétamol à 10 mg/ml ajustée à pH 5,5 par de l'acide chlorhydrique a été soumise à un barbotage d'azote jusqu'à obtention d'une teneur en oxygène voisine de 0,4 ppm. Les flacons ont été stérilisés à 121' C pendant 15 minutes et conservés à température ambiante. Après 9 jours de conservation, on observe une coloration jaune rose dans la solution de paracétamol. Au contraire, si on ajoute à une composition identique à la précédente un agent stabilisant sous la forme d'un mélange d'acide citrique et de citrate de sodium, l'ajustement du pH à 5,5 se fait spontanément et il n'est pas nécessaire d'ajouter de l'acide chlorhydrique. Après barbotage d'azote, la teneur résiduelle en oxygène est de l'ordre de 0,4 ppm. Ensuite on conditionne la solution en flacons, sous vide et on la stérilise à 121' C pendant 15 minutes. Les flacons sont conservés pendant 67 jours à température ambiante. La solution reste parfaitement incolore. Ce résultat est inattendu car l'action de l'ion citrate ne peut être rattachée ni à des propriétés complexantes, ni à des propriétés de renforcement des agents antioxydants. En outre, l'effet propre de l'ion citrate ne peut être rattaché à une action anti-oxydante. EXEMPLE IV Stabilisation de solutions aqueuses de naracétamol partiellement désoxygénées Pour des teneurs résiduelles en oxygène plus importantes, pouvant atteindre 1,5 on a recours de préférence à l'addition d'un agent stabilisant possédant des propriétés anti oxydantes plus énergiques comme par exemple un sulfite, un dérivé thiol ou un ascorbate. Une solution aqueuse de paracétamol à 10 mg/ml ajustée à pH 5,5 par de l'hydroxyde de sodium et tamponnée à cette valeur par de l'acétate de sodium, a été rendue isotonique une quantité adéquate de chlorure de sodium puis additionnée d'un agent antioxydant, en l'occurrence 0,20 mg/ml de chlorhydrate de cystéine. Cette solution a été soumise à un barbotage d'azote puis mise sous vide (dépression environ 550 mm de Hg) avant bouchage des flacons. La teneur résiduelle en oxygène s'élevait à environ 1,5 ppm d'oxygène dissous. Après stérilisation, les flacons contenant cette solution ont été conservés pendant 24 mois à 25 C. Les flacons sont restés incolores après cette période, la teneur en paracétamol était de 100 % de celle de départ et les produits de dégradation du paracétamol mesurés par CLHP représentaient moins de 0,02 de la teneur en paracétamol. La présence d'un agent antioxydant a donc joué un grand rôle. Dans la solution de paracétamol, l'anti-oxydant comme la cystéine réagit avec l'oxygène dissous en se substituant à la molécule phénolique que l'on cherche à protéger. Cependant, après conservation, la cystéine disparaît presque complètement et il se forme de la cystine qui est le produit d'oxydation majeur de la cystéine. EXEMPLE V Solutions aqueuses de paracétamol tamponnées et stabilisées Sachant que les ions citrate exercent un effet stabilisant à l'égard du paracétamol, on a voulu vérifier si cet effet pouvait s'expliquer par une action stabilisante vis-à-vis de l'agent anti- oxydant comme la cystéine. Une solution aqueuse de cystéine à 0,25 mg/ml a été ajustée à pH 5,5, rendue isotonique par du chlorure de sodium et tamponnée par un agent tampon: citrate de sodium déshydrate (0,70 mg/ml), acétate de sodium, hydrogéno phosphate de sodium, en quantités équimolaires à celle du citrate. Ces solutions qui ne comportaient ni barbotage d'azote, ni mise sous vide, contenaient environ 7 ppm d'oxygène dissout. Elles ont été conservées pendant 3 jours à 25 C dans l'obscurité. Les dosages effectués ont montré que la teneur résiduelle en cystéine la plus faible est trouvée soit dans des solutions non tamponnées (15 %), soit en présence de citrate. Par contre, en présence d'acétate (18 %) ou d'hydrogénophosphate (21 %) elle est plus élevée. Il en ressort que les ions citrate n'exercent aucune protection particulière vis-à-vis agent antioxydant comme la cystéine. EXEMPLE VI Préparation de solutions de paracétamol tamponnées Dans cet essai on a mis en présence le paracétamol, la cystéine et un tampon. A des solutions aqueuses de paracétamol à 10mg/ml, rendues isotoniques par du C1 Na et stabilisées par addition de chlorhydrate de cystéine (0,25mg/ml), on a ajouté une quantité de citrate de sodium (sous forme de citrate disodique dihydraté) propre à ajuster le pH à 5,5. Une quantité de citrate de l'ordre de 0,7mg/ml suffit. Des solutions de comparaison ont été préparées sans citrate de sodium ou en remplaçant les ions citrate par des quantités équimolaires à celles du citrate, soit avec de l'acétate de sodium, soit avec de l'hydrogéno phosphate de sodium en ajustant dans tous cas le pH à une valeur de 5,5 par addition d'hydroxyde de sodium ou d'acide chlorhydrique. Les solutions n'ont pas été soumises à un barbotage de gaz inerte (azote) et ont été conservées pendant 3 jours à 25 C à l'obscurité. On constate ainsi la présence de cystéine résiduelle en quantités croissantes, respectivement dans la solution non tamponnée (42 %), en présence d'acétate de sodium (17 %), en présence d'hydrogéno phosphate de sodium (21 %) et en présence de citrate (22 %). Après 20 jours de conservation, toutes les solutions étaient fortement colorées à l'exception la solution contenant des ions citrate qui était restée incolore. On constate qu'en présence de paracétamol, la cystéine est protégée par la présence de citrate, alors qu'en l'absence de citrate, la cystéine n'exerce aucun effet protecteur. Le tableau 1 ci-après, illustre les conclusions exposées ci-dessus Les expériences montrent donc les interactions en présence de différentes teneurs en oxygène Solution Teneur en oxygène Résultats Paracétamol seul 0,2 ppm Pas de dégradation du paracétamol Paracétamol + citrate 0,4 ppm Pas de dégradation du paracétamol Paracétamol + cystéine 1,5 ppm Pas de dégradation du paracétamol Cystéine + citrate 7 ppm Pas de protection de la cystéine Paracétamol + cystéine + citrate 7 ppm Protection du paracétamol et de la cystéine D'une manière inattendue, c'est en associant le paracétamol, la cystéine et le citrate qu'on obtient la meilleure conservation, tant de la cystéine que du paracétamol même en présence d'oxygène. Les mêmes essais ont été repris avec des solutions plus concentrées en paracétamol. Constituant Paracétamol seul Paracétamol + citrate Paracétamol + citrate + (P) (P C) cystéine (PCC) Paracétamol 1 g 1 g 1 g Citrate de sodium 0,070g pH 5,5 (soit 0,07g de citrate) Cystéine chlorhydrate 0 025g NaC 1 HC 1 ou NaOH pH 5,5 qsp pH 5,5 Gaz inerte qsp OZ environ 0,5 ppm qsp OZ environ 0,5 ppm qsp OZ environ 0,5 ppm Eau 100m1 qsp 100m1 qsp 100m1 Conditionnement : sous azote (A) ou sous pression résiduelle d'environ 10 000 Pa Stérilisation à 121 C pendant 15 minutes Résultats (après stérilisation) a) les solutions P : et PA sont roses b) les solutions PC : PCV est incolore et PCA est rose c) les solutions PCC : PCCV et PCCA sont incolores mais la teneur en cystéine résiduelle est supérieure avec PCV Conclusion Pour des teneurs en oxygène résiduel de l'ordre de 0,5 ppm, le vide est insuffisant à lui seul pour assurer la stabilité du paracétamol. En revanche, il exerce une action synergique avec le citrate tant vis-à-vis de la conservation du paracétamol que de la cystéine. EXEMPLE VII Stabilité des solutions de paracétamol et de paracétamol additionné de citrate de sodium en présence d'azote, ou d'azote et de vide Préparation des solutions Composant Paracétamol (P) Paracétamol - Citrate (PC) Paracétamol (mg) 1 1000 Citrate trisodique, 2H20 (mg) 70 NaCI (mg) 700 700 HCI q.s.p. pH 5 5,50 H20 q.s.p. (ml) 100 100 La fabrication des solutions se fait sous azote ( La moitié des flacons subit un vide poussé avant bouchage. Les solutions sont stérilisées par la chaleur à +120 C pendant 15 minutes. Les solutions sont mises en stabilité à +25 C et à +40 C. Analyse à T=0 Solution Oxygène (ppm) Pression résiduelle pH en Pa Paracétamol/azote, non stérilisé 0,40 - 5,92 Paracétamol/azote, stérilisé 0,34 - 6,03 Paracétamol vide, non stérilisé 0,55 10 000 5,98 Paracétamol vide, stérilisé 0,50 10 000 6,28 Paracétamol/Citrate/Azote, non stérilisé 0,50 - 5,50 Paracétamol/Citrate/Azote, stérilisé 0,60 - 5,53 Paracétamol/Citrate vide, non stérilisé -0,36 10 000 5,50 Paracétamol/Citrate vide, stérilisé 0,40 10 000 5,54 L'analyse par CLHP ne montre pas la présence pics correspondant à des produits de dégradation (4,01%). Aspect des solutions après conservation 2 mois à 25 C a l'obscurité Solution coloration à coloration à coloration à coloration à coloration à coloration à J9 Jl3 J21 J26 1 mois 2 mois Paracétamol/Azote incolore incolore Nuance jaune nuance jaune jaune + jaune + stérilisé Paracétamol mise incolore incolore incolore incolore incolore nuance jaune sous vide, stérilisé Paracétamol/Citrate incolore incolore incolore nuance jaune nuance jaune jaune + /Azote, Paracétamol/ stérilisé Azote Paracétamol/Citrate incolore incolore incolore incolore incolore incolore mise sous vide, stérilisé Conclusion Seule la combinaison citrate + vide assure conservation du paracétamol. EXEMPLE VIII Stabilité des solutions de Paracétamol proténées par le citrate de sodium et la cystéine pour des concentrations d'oxygène proches de 1 ppm Composition de la solution Constituant Quantité Paracétamol (g) 1 Cystéine HCL, H20 (mg) 25 Citrate de sodium, (mg) 70 Chlorure de sodium (mg) 700 Eau qsp 100 ml La préparation de la solution s'effectue sous barbotage continu d'azote. Le remplissage se fait dans des flacons de 100 ml, sous azote, jusqu'à obtention d'une solution contenant entre 0,7 et 1,0 ppm d'oxygène. Les flacons sont ensuite bouchés sous atmosphère d'azote ou sous vide (environ 10 000 Pa). Après stérilisation à 121'C pendant 15 minutes, les flacons sont conservés à 40 C, à l'obscurité. On évalue la coloration, le pH, la teneur en oxygène et la teneur en cystéine résiduelle immédiatement après stérilisation, puis après conservation pendant 14 jours. Résultats Solution Coloration pH Oxygène (ppm) Cystéine résiduelle Solution sous azote, incolore 5,53 0,85 75 après stérilisation Solution sous vide, incolore 5,51 0,90 85 après stérilisation Solution sous azote jaune 5,58 0,60 27 après 14 jours à Solution sous vide, incolore 5,59 0,90 85 après 14 jours à 40 C Conclusion La conservation sous vide exerce une protection du Paracétamol et de la cystéine lors de conservation de la solution dans des conditions de dégradation accélérée. En revanche, la conservation est insuffisante sous azote. Le vide semble inhiber la réaction d'oxydation de paracétamol et de la cystéine, ce que confirme la diminution de l'oxygène résiduel sous azote, comparé à son maintien sous vide. REVENDICATIONS 1. Formulation d'un principe actif de nature phénolique sensible à l'oxydation, se conservant pendant une période prolongée, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par barbotage d'au moins un gaz inerte et/ou par mise sous vide, jusqu'à ce que la teneur en oxygène qui y est contenu soit inférieure à 2 ppm, et en ce que la solution aqueuse dudit principe actif éventuellement surmontée d'un nappage de gaz inerte, est disposée dans un récipient clos la pression régnante est au maximum de 65 000 Pa, la teneur en oxygène de la solution aqueuse étant inférieure ou égale à 2 ppm. 2. Formulation selon la revendication 1, dans laquelle l'effet de la désoxygénation de la solution est complété par addition d'un agent antioxydant. 3. Formulation selon la revendication 1, dans laquelle l'effet de la désoxygénation de la solution est complété par addition d'un acide hydroxypolycarboxylique. 4. Formulation selon l'une des revendication 1, caractérisée en ce que le principe actif est substance phénolique facilement oxydable. 5. Formulation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le principe actif phénolique est le paracétamol. 6. Formulation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la désoxygénation est obtenue par l'action du barbotage d'un gaz inerte, de la mise sous vide et par la présence d'un agent antioxydant. 7. Formulation selon la revendication 1, dans laquelle la teneur résiduelle en oxygène inférieure à 1 ppm. 8. Formulation selon la revendication 1, dans laquelle la teneur résiduelle en oxygène est égale 0,5 ppm ou inférieure à cette valeur. 9. Formulation selon l'une des revendications précédentes dans laquelle l'acide hydroxypolycarboxylique est choisi parmi l'acide citrique, l'acide tartrique, l'acide gluconique, l'acide saccharique, l'acide citramalique et l'acide malique. 10. Formulation selon l'une des revendications précédentes dans laquelle l'acide hydroxypolycarboxylique est un acide ou un sel de cet acide. 11. Formulation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que concentration en acide hydroxypolycarboxylique et/ou d'un de ses sels s'échelonne de 5 à 200mg/100m1. 12. Formulation selon l'une des revendications précédentes caractérisée en que l'agent anti- oxydant est choisi parmi les thiols et les dérivés de l'acide ascorbique. 13. Formulation selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'agent antioxydant est choisi parmi l'acide ascorbique et l'acide isoascorbique. 14. Un procédé de préparation d'une formulation selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'on 1 - soumet une solution aqueuse contenant au moins un principe actif phénolique éventuellement additionnée d'un acide hydroxypolycarboxylique, à désoxygénation poussée, mise en oeuvre à l'abri de l'air; 2 - introduit, sous une atmosphère de gaz inerte, une partie ou la totalité de solution aqueuse désoxygénée, dans un récipient préalablement débarrassé de l'air qu'il contient ; 3 - bouche le récipient sous une atmosphère de gaz inerte, tout en procédant de façon à créer, dans le récipient fermé, une pression d'au maximum 65 000 Pa ; 4 - obtient une solution aqueuse d'un principe actif, disposée dans un récipient clos dont la teneur en oxygène est inférieure ou égale à 2 ppm. 15. Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce que la désoxygénation est réalisée par barbotage d'un gaz inerte. 16. Procédé selon la revendication 14, caractérisée en ce que la désoxygénation est effectuee par application du vide. 17. Procédé selon l'une des revendications 14 à 16, caractérisé en ce que la solution après bouchage est soumise à une stérilisation, en particulier par autoclavage ou irradiation. 18. Procédé selon l'une des revendications 14 à 17, caractérisé en ce qu'on soumet la solution aqueuse du principe actif oxydable, à une stérilisation par filtration stérilisante sous gaz inerte. 19. Procédé selon l'une des revendications 14 à 18, caractérisé en ce que le gaz inerte de barbotage est l'azote. 20. Procédé selon l'une des revendications 14 à 19, caractérisé en ce que le gaz inerte de nappage est plus lourd que l'air, tel l'argon. 21. Procédé selon l'une des revendications 14 à 19, caractérisé en ce que le récipient est débarrassé de l'air qu'il contient, par insufflation d'un gaz inerte. 22. Utilisation d'une formulation selon l'une des revendications 1 à 8, comprenant un principe actif phénolique, pour la préparation d'une solution injectable destinée à être administrée à l'homme ou l'animal. 23. Utilisation selon la revendication 22, caractérisée en ce que le principe actif le paracétamol. 24. Utilisation selon la revendication 22 et/ou 23, caractérisée en ce que dans la formulation, le paracétamol est additionné d'un agent anti-inflammatoire et/ou d'un analgésique central.