Brevet FR2817749A1 — publié le 20020614

NOUVELLE UTILISATION DES COMPOSES DE LA CLASSE DES CHALCONES La présente invention concerne une nouvelle utilisation des composés de la classe des chalcones. Elle concerne plus particulièrement l'utilisation de composés particuliers de la dite classe. Elle concerne encore plus particulièrement leur utilisation pour inhiber la vascularisation d'une masse tumorale ou encore leur application pour la préparation d'un médicament ayant une propriété pharmacologique antivasculaire On entend par inhibition de la vascularisation au niveau d'une masse tumorale, le fait de détruire les vaisseaux qui irriguent cette masse tumorale et ainsi qui permettent le développement des cellules tumorales. Il est scientifiquement bien connu que les tumeurs pour se développer nécessitent la présence d'une vascularisation très importante. Depuis quelques années les chercheurs spécialisés dans le domaine de l'oncologie ont cherché à développer des produits qui permettaient de détruire ces vaisseaux encore appelés produits antivasculaires ou qui permettaient d'éviter la formation de nouveaux vaisseaux encore appelés produits antiangiogéniques. Les produits antiangiogéniques sont souvent des produits cytostatiques comme par exemple des produits qui bloquent les facteurs de croissance endothéliaux des vaisseaux tels que les VEGF (vascular endothelial growth factors) dont les exemples les plus connus sont les polypeptides naturels tels que l'angiostatine ou l'endostatine. Parmi les composés antivasculaires on peut citer des produits non cytotoxiques ou plus exactement des " prodrugs " de produits cytotoxiques comme par exemple celles qui sont décrites dans la demande de brevet WO00/48606 qui sont des phosphates de composés cytotoxiques. Ces composés non toxiques à l'origine ont un effet antivasculaire au niveau de la tumeur et provoqueraient simultanément la production d'enzymes spécifiques qui permettraient au niveau de la multivascularisation la transformation de la, en drogue active et par ce double effet la destruction de la tumeur. Cet effet a été décrit dans la demande de brevet WO 00/48606 uniquement pour une classe de composés bien spécifiques que sont les phosphates de combrétastatines, bien que le même effet ait été évoqué pour tous les phosphates. En effet il semblerait que la phosphatase enzyme d'hydrolyse de la semblable n'est apparu à ce jour pour les autres drogues ou En ce qui concerne l'effet des drogues actives telles qu'en particulier des agents de liaison avec la tubuline il est décrit toujours selon ce dernier brevet WO 00/48606 que ces composés dans leur ensemble pouvaient réduire le débit sanguin, les doses utilisées pour cet effet étant souvent toxiques sur les cellules normales et pas particulièrement toxiques sur les cellules cancéreuses. Or il vient d'être découvert que parmi les chalcones, certaines avaient un effet de liaison avec la tubuline et pas d'effet sur le détachement cellulaire encore appelé effet antivasculaire et d'autres avaient un effet sur le détachement cellulaire et pas d'effet sur la tubuline. Les deux effets ne sont donc pas parfaitement corrélés et un ou plusieurs autres mécanismes d'action entrent en jeu et sont à ce jour encore inconnus. On entend par détachement cellulaire le détachement des cellules endothéliales à partir des vaisseaux qui vont entrainer une désorganisation des vaisseaux et par conséquence une stase du flux sanguin et mort subséquente de la tumeur par non approvisionnement en facteurs de croissance essentiellement. Un test de détermination du détachement des cellules endothéliales a été mis au point pour sélectionner les produits quant à leur activité au fluorimètre. Ce test consiste à mesurer le détachement des cellules endothéliales cultivées sur des substratums à base d'un agent liant choisi de préférence parmi la fibronectine, la vitronectine ou la gélatine. De préférence un jour après l'ensemencement des cellules en plaques contenant par exemple 96 puits, le milieu de culture est remplacé par un milieu contenant le composé à tester en absence de sérum. On prépare six fois la même préparation à trois concentrations différentes (0.1, 0.3 et 0.6 pM) et six fois le contrôle sans adjonction de produit antivasculaire. Après deux heures de traitement avec la substance à tester, les cellules sont marquées avec la calcéine-AM (1.6 pg/ml) dans du milieu de culture supplémenté avec 0.1 % de BSA. Les cellules qui se sont détachées sont éliminées par lavage avec le milieu de culture contenant 0.1 % de sérum albumine bovine; on ajoute 100 pl de milieu à chaque puit. La fluorescence; des cellules restantes est comptée au fluorimètre. Les données obtenues sont exprimées par rapport au témoin (cellules non traitées). Les chalcones de formule générale suivante ont présenté des résultats tout à fait étonnant en détachement cellulaire et donc dans l'application visée l'action antivasculaire: o (MeO)n A V -A A dans lesquelles - R représente l'hydrogène, un groupe méthyle ou éthyle, le chlore ou le brome - A représente un groupe NR1R2 dans lequel R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe méthyle ou éthyle - n représente un nombre entier égal à 2 ou 3. A titre non limitatif, la liste ci-dessous de chalcones est représentative des composés revendiqués dans la présente invention: 1-(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-méthyl-prop- 2-èn-1 -one 1 -(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-prop-2èn-1 -one 1 -(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-éthyl-prop-2- èn-1 -one 1-(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-bromo-prop- 2-èn-1 -one 1 -(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-chloro-prop- 2-èn-1 -one 1 -(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino)phényl]-2-méthyl-prop-2- èn-1-one 1 -(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino)phényl]-prop-2-èn-1 one 1 -(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino)phényl]-2-éthyl-prop-2- èn-1 -one 1 -(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-bromo-prop- 2-èn-1 -one 1-(2,5-diméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-chloro-prop- 2-èn-1 -one 1-(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2méthyl- prop-2-èn-1 -one 1 -(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino) phényl]-prop-2-èn-1 -one 1 -(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-éthyl-prop- 2-èn-1 -one 1-(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-bromo- prop-2-èn-1 -one 1 -(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-chloro- prop-2-èn-1 -one 1 -(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino)phényl]-2-méthyl-prop- 2-èn-1 -one 1 -(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino)phényl]-prop-2èn-1 -one i -(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino)phényl]-2-éthyl-prop-2- èn-1 -one 1 -(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-bromo- prop-2-èn-1 -one 1 -(2,3,4-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-chloro- prop-2-èn-1 -one 1 -(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-méthyl- prop-2-èn-1 -one 1-(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]prop-2-èn-1 -one 1 -(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-éthyl-prop- 2-èn-1 -one 1 -(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-bromo- prop-2-èn-1 -one 1 -(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-chloro- prop-2-èn-1 -one 1-(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino)phényl]-2méthyl-prop- 2-èn-1 -one 1 -(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino) phényl]-prop-2-èn-1 -one 1-(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diéthylamino)phényl]-2-éthyl-prop-2- èn-1 -one 1-(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-bromo- prop-2-èn-1 -one 1 -(3,4,5-triméthoxyphényl)-3-[4-(diméthylamino)phényl]-2-chloro- prop-2-èn-1 -one Il est connu dans l'art antérieur que les chalcones exercent une activité antitumorale par interaction avec la tubuline comme décrit dans la publication de N. Lawrence, A. McGown, S. Ducki et J. Hadfield dans Anti-Cancer Drug design (2000), 15, 135-141. A aucun endroit dans cette publication n'est décrit l'effet antivasculaire des agents revendiqués, les composés de la publication dont seul un d'entre eux entre dans la formule générale de la présente invention ne présentent par pour les autres l'activité antivasculaire très caractéristique des chalcones porteuses d'une chaîne alkylamino sur le cycle phényle en gamma par rapport à la fonction carbonyle. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples suivants qui ne servent en aucun cas à limiter l'invention. Les chalcones utilisées dans la présente invention sont préparées par condensation d'une cétone triméthoxylée et porteuse du groupe R avec un aldéhyde porteur de l'amine dans un mélange alcool (C1-C4) et acide acétique en présence d'une base organique telle que la pipéridine selon le schéma suivant: I o o_ (MeO)n (MeO n A A L'évaluation du détachement des cellules endothéliales in vitro est déterminé de la façon suivante. Les cellules HDMEC (Human Dermal Microvascular Endothelial Cells, Promocell, c-122102) sont cultivées dans un milieu ECGM-MV qui contient 5 % de sérum de veau foetal, des facteurs de croissance (EGF 10 ng/ml, hydrocortisone 1 pg/ml, 0.4 % supplément de croissance avec héparine) et des antibiotiques (amphotericine 50 ng/ml, gentamicine 50 pg/ml) Pour le test de détachement, les HDMEC sont ensemencées à 5,000 cellules dans des plaques 96 puits à fond clair (Costar) pré-coatées avec de la fibronectine (10 pg/ml) ou de la vitronectine (1 pg/ml) ou de la gélatine. Vingt quatre heures plus tard, le milieu de culture est remplacé par du milieu ECGM-MV 0.1 % BSA contenant les produits indiqués. Les concentrations testées sont 0,1-0,3 et 1 pM pour chaque produit. Après deux heures de traitement, les cellules sont marquées pendant une heure à la calcéine (1.6 pg/ml, Molecular Probes) dans du milieu ECGM- MV 0.1 % BSA. Les cellules détachées sont ensuite enlevées par lavage avec du milieu ECGM-MV 0.1 % BSA; 100 pIl de milieu est ajouté à chaque puits. La fluorescence des cellules qui restent attachées au substratum du puits sont comptées à l'aide d'un fluorimètre, Spectrafluor Plus (Tecan, excitation 485 nm, et emission 535 nm). Les données sont la moyenne de six échantillons différents et sont exprimées en pourcentage du contrôle (cellules non traitées). Un effet de détachement cellulaire supérieur ou égal à 15 % est considéré comme significatif. Tableau des résultats Pourcentage Exemple Composé de détachement de cellules HDMEC induit par 1 pM de composé 1 I 23 - 49% Nj ""O O 2 20-23 % O O 3 0'CN25-29 % 4 '18-19% N O N, 15 % O N 6 O 35 -41 % O O 0,0 / 0 7 O y 22-42 % ON/ I. o 8 23 -43 % oI 9 |I "> I19 % 0 15% oN I 11 20 % il QI ' 2I% N0 12 N 29-42% 13 O 23 - 34 % 14 N_ 14 18-20 % N Exemple comparatif 1 o 2 % EN)k -o o 6% I Exemple comparatif 2 I 6 % 0No' REVENDICATION Application d'une chalcone de formule générale suivante O (MeO)n A dans laquelle - R représente l'hydrogène, un groupe méthyle ou éthyle, le chlore ou le brome -A représente un groupe NR1R2 dans lequel R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe méthyle ou éthyle - n représente un nombre entier égal à 2 ou 3. pour la préparation d'un médicament ayant une activité pharmacologique antivasculaire.