Brevet FR2814751A1 — publié le 20020405

Bactéries utilisables pour oxyder de l'arsenic, procédé pour leur sélection et leurs applications pour traiter des milieux renfermant de l'arsenic. L'invention a pour objet des bactéries utilisables pour oxyder de l'arsenic sous forme d'arsénite As (III) en arséniate As (V). Elle vise également un procédé de sélection de telles bactéries, ainsi que leurs applications pour traiter des milieux renfermant de l'arsenic sous forme As (III). La présence d'arsenic peut être observée dans des milieux naturels comme dans des matériaux ou résidus résultant d'activités humaines. On le trouve ainsi dans des eaux souterraines, avec pour origine le fond géochimique. Il est également détectable, par exemple, dans les rejets d'eaux résiduaires, industrielles, dans les résidus de traitement de minerais, de combustion de charbon, de traitement de déchets, de dépôts de résidus industriels, ou lors de l'utilisation d'engrais. Diverses voies d'élimination de l'arsenic ont été proposées, étant entendu que la valence sous laquelle se trouve l'arsenic à l'issue du traitement revêt une grande importance sur les rendements d'élimination. Ainsi, la forme la mieux éliminée correspond à l'As (V) dans les traitements suivants : co-précipitation par les sels de fer ou par les sels d'aluminium, ou lors de traitement de décarbonatation à la chaux, osmose inverse. Une autre voie d'élimination repose sur l'adsorption sur colonnes. Le matériau le plus utilisé est constitué par de l'alumine activée qui permet une bonne rétention de l'arsenic (III) et de l'arsenic (V). Cependant, la régénération de la colonne nécessite l'utilisation de soude caustique concentrée. Il s'ensuit que la récupération de l'As (III) est 2 fois moins élevée que celle de l'As (V). D'autres techniques, qui utilisent des résines échangeuses d'ions ou la nanofiltration, sont de mise en oeuvre complexe et s'accompagnent de coûts d'investissement et de maintenance élevés. De plus, la nanofiltration et l'osmose inverse entraînent la perte d'une partie de l'eau sous la forme d'un effluent concentré en arsenic. Par ailleurs, une récente étude effectuée par le "Geological Survey of Finland"a montré que les trois méthodes couramment proposées pour l'élimination de l'arsenic dans les eaux issues de forages privés n'étaient pas efficaces à long terme. Ces méthodes correspondent à l'utilisation de cartouches à alumine activée, de cartouches à charbon actif, ou de résines échangeuses d'ions. Les meilleurs résultats ont été obtenus en oxydant l'As (III) en As (V) et en combinant ensuite deux méthodes d'épuration. Comme souligné dans la littérature, l'efficacité de la plupart de ces traitements dépend de l'étape d'oxydation de l'As (III) en As (V). L'oxydation de l'As (III) peut être réalisée par voie chimique, avec par exemple du chlore, du chlorure ferrique, du permanganate de potassium ou de l'ozone. Les travaux des inventeurs dans ce domaine ont montré que, de manière inattendue, un tel processus d'oxydation pouvait être réalisé par catalyse biologique. Il est ainsi apparu qu'il était possible de faire l'économie des réactifs d'oxydation chimique en utilisant des bactéries sélectionnées pour leurs propriétés oxydantes spécifiques permettant d'oxyder As (III) en As (V). L'invention a donc pour but de fournir de nouvelles bactéries capables d'oxyder As (III) en As (V) moins toxique, moins mobile et donc plus facile à éliminer par des traitements physico-chimiques conventionnels des milieux traités. Selon un autre aspect, l'invention vise un procédé de sélection de telles bactéries, ainsi que les milieux de sélection en tant que nouveaux produits. Selon encore un autre aspect, l'invention vise également l'utilisation des nouvelles bactéries pour le traitement de milieux renfermant de l'arsenic. Les bactéries selon l'invention sont caractérisées en ce qu'il s'agit de bactéries isolées, autotrophes, aérobies, capables d'oxyder As (III) en As (V) en utilisant CO2 comme seule source de carbone et As (III) comme seule source d'énergie et qu'elles présentent des séquences d'ADNr 16S répondant à SEQ ID N l ou à SEQ ID ? 2. Ces séquences sont obtenues par analyse de la région de l'ADNr 16S correspondant aux positions 18-1492 selon E. Coli (Brosius et al, 1981, Journal of Molecular Biology, 148 : 107-127). Selon encore un autre aspect, les bactéries de l'invention présentent les caractéristiques suivantes : - elles supportent jusqu'à 1 g. 1-1 au moins d'As (III) sans perdre leur aptitude à oxyder l'As (III), - la vitesse d'oxydation de l'As (III) par ces bactéries en bioréacteur atteint au moins 12 mg. 1 h - leur activité spécifique d'oxydation de l'As (III) atteint au moins 5x10-7 mg d'As (III) par bactérie et par heure. Avec une telle valeur d'activité spécifique, une suspension bactérienne contenant 107 bactéries par ml est capable d'oxyder 5 mg d'As (III) par litre et par heure. Il s'ensuit que l'oxydation de l'As (III) par les bactéries, conformément à l'invention, ne nécessite qu'une très faible production de matière organique bactérienne. Par conséquent, les quantités de nutriments à apporter pour le développement des bactéries (azote, phosphore) sont également très faibles, elles sont capables de réduire la concentration résiduelle en As (III) à moins de 50 pg. l*. L'invention vise également un procédé de sélection des bactéries décrites ci-dessus. Ce procédé est caractérisé en ce qu'il comprend le traitement d'un échantillon susceptible de renfermer de telles bactéries, en particulier prélevé sur un matériau contaminé par de l'arsenic, avec un milieu de sélection à raison de 50 à 500 mg/1 d'arsenic, ne contenant pas de source de carbone ajoutée et ne fournissant que l'As (III) comme source d'énergie aux bactéries. Le procédé de sélection est réalisé en conditions stériles. L'inoculum représente 5 à 20 % de la masse finale de culture. La température d'incubation est de l'ordre de l'ambiante. Le matériau contaminé provient par exemple d'un site minier ou industriel. La culture est repiquée lorsque tout l'As (III) a été oxydé. Etant donné que le milieu d'enrichissement est inoculé avec un échantillon susceptible de contenir des composés pouvant permettre la croissance de bactéries indésirables, il est préférable de réaliser des repiquages successifs afin de diluer les composés gênants. Les repiquages sont avantageusement effectués à raison d'environ 4 semaines pour les 3 premiers, puis 1 semaine pour les suivants. Le milieu de sélection permet d'accroître progressivement la proportion de bactéries autotrophes oxydant l'As (III) en As (V) par rapport à la proportion des autres bactéries présentes ou indésirables. On observera qu'étant donné la concentration en As (III), seules les bactéries résistant à l'As (III) pourront en effet se développer. De plus, l'absence de source de carbone ajoutée assure également le développement des seules bactéries autotrophes pouvant se développer en utilisant C02 atmosphérique comme source de carbone. Enfin, l'absence de source d'énergie autre que l'As (III) contribue à l'élimination des bactéries indésirables. Un tel milieu de sélection est nouveau et, en tant que tel, entre également dans le champ de l'invention. Il est également utilisable pour la conservation des bactéries. Pour la croissance des bactéries, ce milieu renferme avantageusement en solution aqueuse des sels minéraux, et/ou des oligo-éléments et/ou des vitamines, étant entendu que ces nutriments ne doivent pas constituer un pool de composés oxydables qui pourrait être utilisé par les bactéries indésirables comme source d'énergie. Les éléments minéraux comprennent avantageusement de l'azote, du phosphore, du potassium, du magnésium, du calcium, du sodium et un chlorure. Un milieu approprié pour la sélection des bactéries selon l'invention comprend ainsi les composés suivants : ammonium : La croissance des bactéries conformes à l'invention est corrélée à l'oxydation de As (III) comme montré dans les exemples. L'invention vise également un procédé de traitement de milieux renfermant de l'arsenic pour oxyder les arsénites en arséniates caractérisé par l'inoculation de ces milieux, dans un bioréacteur, avec une population bactérienne essentiellement constituée par des bactéries telles que définies plus haut. On opère avantageusement en milieu aqueux. Les bactéries sont inoculées à raison de 100 mil/1, de préférence de l'ordre de 106 bactéries/ml. Les bactéries peuvent être au moins en partie concentrées dans le bioréacteur par un support de fixation. Lorsqu'on souhaite accélérer l'oxydation, on ajoute dans le milieu aqueux à traiter des sels minéraux servant d'éléments nutritifs et/ou on injecte de l'air lorsque la concentration d'air dans le milieu à traiter est limitante (ce qui dépend de la concentration initiale en As (III)). Les éléments minéraux sont utilisés à raison d'environ 0, 1 à 0,5 g/1, notamment de 0,01 à 0,1 g/l. Ces éléments sont choisis avantageusement parmi N, P, K et Mg. Le traitement microbiologique est démarré en mode batch : l'As (III) contenu dans la solution à traiter est oxydé par les bactéries. On peut ensuite alimenter le bioréacteur par du milieu à traiter en mode continu. Ce milieu sera additionné le cas échéant d'éléments minéraux comme indiqué ci-dessus. De manière avantageuse, on opère dans des conditions autorisant un contact homogène et efficace du milieu aqueux avec les bactéries. A cet effet, on soumet par exemple le milieu réactionnel à agitation, en utilisant un bioréacteur équipé d'un dispositif d'agitation. En variante, on utilise un bioréacteur colonne à lit bactérien fixé. La mise en oeuvre de ce procédé permet de réduire la toxicité du milieu, en conduisant à des concentrations résiduelles en As (III) inférieures à 50 Mg/1, et même à 10 Mg/1, comme requis par la directive européenne du 3 novembre 1998 en ce qui concerne la valeur limite de concentration en arsenic des eaux destinées à la consommation humaine. Les arséniates formés pourront être aisément éliminés grâce à leur mobilité plus faible que celle des arsénites. La solution récupérée à partir du bioréacteur, qui contient principalement de l'arsenic sous forme As (V) et une concentration résiduelle en As (III) inférieure à la concentration initiale en As (III) dans le milieu traité, est dirigée vers un dispositif d'élimination de l'As (V). Ce dispositif permet d'effectuer par exemple une coprécipitation par les sels de fer ou des sels d'aluminium ou une co-précipitation lors des traitements de décarbonatation à la chaux, une osmose inverse, une adsorption sur colonnes, ou tout autre procédé ou association de procédés conduisant à l'élimination de l'As (V). Le procédé de l'invention est en particulier utilisable pour traiter les eaux destinées à la consommation humaine, distribution collective ou forages privés, ainsi que les effluents qu'ils soient miniers ou industriels. Ces milieux sont de préférence riches en arsenic. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont donnés dans les exemples qui suivent et portent à titre illustratif, mais non limitatif, sur une souche isolée conformément à l'invention et qui sera désignée ci-après CAs01. Dans ces exemples il sera fait référence aux figures 1 et 2, qui représentent respectivement, la concentration en As (V) en fonction du temps et la vitesse d'oxydation d'As (III) en fonction du temps. Exemple 1 : Identification moléculaire d'une population bactérienne utilisée pour le traitement de l'arsenic . Techniques utilisées Principe de l'inventaire moléculaire L'identification réalisée repose sur l'analyse de la sous-unité ribosomiale bactérienne ARN 16S, et de la séquence d'ADN 16S dont il est transcrit, comme base de comparaison avec d'autres bactéries. On rappelle qu'il est admis à cet égard qu'une divergence de 3 % correspond à la distinction phénotypique entre deux expèces. Après amplification, on procède au clonage dans E. coli de l'ADNr 16S de chaque bactérie présente dans l'échantillon, puis au séquençage, séquençage partiel de 500 pb dans tous les cas et séquençage complet de 1500 pb si la diversité est faible. Les séquences obtenues sont d'abord comparées entre elles à l'aide d'un logiciel informatique pour distinguer chaque espèce présente sur la base du pourcentage de divergence. Une interrogation de banques de données permet ensuite d'identifier les microorganismes les plus apparentés aux séquences représentatives de chaque espèce inventoriée. GenBank et Ribosomal data Project ont été ainsi interrogées. Les séquences représentatives des espèces inventoriées ont été une nouvelle fois comparées avec celles des microorganismes apparentés sur la base du pourcentage de divergence. Analyse SSCP La technique SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) est basée sur la conformation secondaire qu'adopte un fragment d'ADN simple brin en conditions nondénaturantes (grâce principalement à des attractions de types van der Waals) et qui est dépendante de sa structure primaire (séquence). Une région particulière de l'ADNr 16S (région V3 située environ entre la position 300 et 500) des microorganismes présents est amplifiée, dénaturée pour séparer les brin d'ADN, puis analysée par électrophorèse sur gel d'électrophorèse en conditions non-dénaturantes. Le profil d'analyse SSCP de la population globale permet de déterminer sa complexité et de différencier chaque micro-organisme présent grâce à la vitesse migratoire de son fragment d'ADNr. L'assignation de chaque pic est ensuite réalisée par comparaison avec les profils d'analyse SSCP individuels de chaque clone représentatif des espèces recensées lors de l'inventaire moléculaire. . Résultats - stabilisation des échantillons A partir d'un échantillon de 15 ml, contenant environ 2x109 bactéries/ml, on prélève 7 ml d'échantillon qu'on centrifuge aussitôt et le culot est repris dans 250 pl de guanadine thiocyanate et 37,5 pl de N-lauryl sarcosine 10%. L'échantillon ainsi stabilisé est conservé à -20oC jusqu'à l'étape d'extraction de l'ADN total. - analyse et inventaire de la population bactérienne L'ADN extrait de l'échantillon a été soumis à une réaction d'amplification de la région V3 des ADNr 16S présents et a été analysé selon la technique SSCP. L'électrophorégramme SSCP indique qu'une espèce est essentiellement majoritaire puisqu'un seul pic apparaît sur le profil SSCP de la population globale. L'analyse ultérieure des séquences des clones pour l'inventaire de la population bactérienne ainsi que les analyses SSCP individuelles de clones confirment cette observation. Pour effectuer l'inventaire, une librairie de 54 clones a été constituée contenant chacun un fragment d'ADNr 16S bactérien. Un criblage pour différencier les différentes populations présentes a été réalisé grâce à une digestion avec l'enzyme de restriction Hae III du fragment d'ADNr 16S de chaque clone suivie d'une électrophorèse sur gel d'agarose. Les 54 clones analysés ont montré un profil de digestion identique. Ce résultat confirme la présence fortement majoritaire d'une seule espèce telle que seul l'ADNr de cette espèce est amplifié et est décelable. La recherche sur les deux banques de données indique que la population majoritaire et exclusivement décelée par les techniques ci-dessus n'appartient d'un point de vue phylogénétique à aucune espèce déjà connue et répertoriée sur les banques de données. En effet, l'espèce la plus apparentée est Thiomonas thermosulfata (Proteobacteria ; sous-division bêta ; Thiomonas) avec un pourcentage de divergence relativement élevé puisque compris entre 7,9 et 7,3% dans le meilleur des cas (Tableau 1). Tableau 1. Clones dont l'ADNr 16S a été séquencé et divergence en % avec l'organisme le plus apparenté d'un point de vue phylogénétique. Espèce apparentée Clone Divergence (%) avec l'espèce . apparentée* Proteobacterium Espèce apparentée Clone Divergence (%) avec l'espèce apparentée* | Proteobacterium sous-division bêta Thiomonas Thiomonas C06 7, ..............|........................................... C19 7, 7 C16 7, 7 C26 7,9 C30 7,7 C30 7,7 C35 7,3 C37 7,3 C43 7,5 C43 7,5 C45 7,3 C53 7,3 C56 7,8 # : une divergence de moins de 3% correspondant à la même espèce. - analyse SSCP individuelle des clones et assignation Une analyse SSCP a été réalisée sur 4 clones pris au hasard comptes tenu d'une part de la simplicité du profil SSCP de la population globale et d'autre part de la conservation parfaite de la région V3 de l'ADNr 16S des clones dont la séquence a été analysée. Les profils SSCP des 4 clones analysés se superposent exactement sur le pic du profil SSCP de la population globale confirmant ainsi définitivement la détection exclusive d'une espèce de bactérie. - analyses complètes des séquences d'ADNr 16S Compte tenu de la divergence importante des 500 premiers nucléotides de la séquence d'ADNr 16S de l'espèce détectée dans l'échantillon (3,7 à 7,9%) avec les séquences répertoriées dans les banques de données, une analyse de la séquence complète de l'ADNr 16S des 2 groupes de séquences majoritaires répertoriés, à savoir les groupes C6 et C2 a été réalisée. Bien que le pourcentage de divergence sur les 500 premiers nucléotides de l'ADNr 16S soit considéré comme représentatif de la divergence sur la totalité de la séquence, ces données complémentaires permettront ainsi de confirmer l'originalité phylogénétique de l'espèce détectée. L'analyse complète de l'ADNr 16S des clones C02 (groupe C2) et C19 (groupe C6) montre d'une part que les séquences sont divergentes entre elles de seulement 0,1% (tableau 2) et d'autre part qu'après comparaison avec les banques de données ces séquences appartiennent bien à une espèce différente de celles actuellement connues et répertoriées. Tableau 2. Divergence en % des ADNr 16S des clones C02 et C19 avec ceux des micro-organismes les plus apparentés**. Clone Clone Espèce apparentée C02 C19 6,3 Thiomonas tjhermosujfata 6, 2 63 Bacterie dégradant l'acide déhydroabiétique Bactérie dégradant l'acide déhydroabiétique 7,7 7,8 Leptothrix discophora 7,5 7,7 Leptothrix discophora 7,5 Leptothrix mobilis 7,9 8,1 Leptothrix mobilis ** : une divergence de moins de 3% correspond à la même espèce. GenBank indique que la séquence la plus proche répertoriée est celle d'une bêta Protéobactérie de la famille des Comamonadaceae dénommée dehydroabletic acid-degrading bacterium DhA-7. RDP indique que les séquences les plus apparentées sont celles de Leptothrix discophora str. SS-1 et de Leptothrix mobilis str. Feox-1 également des Comamonadaceae. L'étude d'inventaire moléculaire réalisée sur la population de l'échantillon CAs01 montre donc qu'une seule population a été détectée et les micro-organismes qui sont les plus apparentés d'un point de vue phylogénétique sont les bêta Protéobactéries Thiomonas thermosulfata, Dehydroabietic acid-degrading bacterium DhA-71, Leptothrix discophora str. SS-1 et Leptothrix mobilis str. Feox-1. La détection d'une seule espèce de micro-organisme dans l'échantillon CAs01 indique que le milieu de l'échantillon est extrêmement sélectif et proche des conditions d'une culture pure (aucune autre espèce contaminante n'a été détectée parmi les 54 clones analysés). Les travaux de comparaisons montrent que la population de CAs01 est nouvelle puisqu'aucune bactérie connue et répertoriée dans les différentes banques de données ne possède une divergence au moins inférieure à 6, 2% avec l'organisme inventorié. Exemple 2 : Composition d'un milieu de sélection l - Préparation du milieu de culture # Milieu de base Le milieu de base est composé d'une solution A et d'une solution B. Solution A : KH2PO4 0,5 g K2HPO4 0, 5 g NaCl 0, 5 g (NH4) 2SO4 0, 05 g Eau déminéralisée 500 ml La solution A est préparée dans un flacon en verre de 1 litre. Le pH de la solution est ajusté à pH 6. Solution B : MgSO4, 7 H20 0,1 g CaCl2, 2 H20 0, 1 g Eau déminéralisée 500 ml La solution B est préparée dans un flacon en verre de 500 ml. Les solutions A et B sont stérilisées par autoclavage pendant 20 minutes à 120oC. # Solution d'arsenic (III) Une solution aqueuse de As203 à 13 g. l-l, correspondant à une solution à 10 d'As (III) est préparée de la façon suivante. L'As203 étant peu soluble dans l'eau, il est nécessaire de procéder à une dissolution à chaud en milieu basique (0,55 g de NaOH dans 100 ml d'eau à ébullition). La solution d'As (III) est placée dans un flacon de 1 litre stérile. # Solution d'oligo-éléments HCl en solution à 25% 6,5 ml FeC12, 4 H20 1, 5 g H3BO3 60 mg MnS04, H20 117 mg Col2, 6 H2O 25 mg ZnCl2 70 mg NiCl2, 6 H20 25 mg CuC12, 2 H20 15 mg Na2MoO4, 2 H20 25 mg Eau déminéralisée 1000 ml La solution d'oligo-éléments est stérilisée par filtration à 0,45 Mm dans un flacon en verre stérile. 'Solution de vitamines Acide p-amino-benzoïque 10 mg Biotine 10 mg Acide folique 4 mg Pyridoxine-HCl 2 mg Riboflavine 10 mg Thiamine 10 mg Acide nicotinique 10 mg Acide pantothénique 10 mg Vitamine B12 0, 2 mg Eau déminéralisée 1000 ml La solution de vitamines est stérilisée par filtration à 0, 45 om. II-Préparation du milieu complet En conditions stériles, il est nécessaire de compléter le milieu avec les solutions suivantes. Milieu de base 1000 ml Solution d'oligo-éléments 1 ml Solution de vitamines 10 ml Solution d'As (III) 10 ml Le milieu est stocké à température ambiante. Exemple 3 : Procédé d'oxydation de l'As (III) en batch par les bactéries constituant la population CAs01. contenant 100 mg. 1-1 d'As (III). Les expérimentations sont réalisées dans des erlenmeyers de 500 ml en verre stérile, placés sur une table d'agitation animée d'un mouvement de va et vient, thermostatée à une température de 25. C. Ces erlenmeyers contenant 250 ml de milieu de l'exemple 2, sont ensemencés avec 10% de suspension bactérienne CAs01. Sans phase d'adaptation préalable, cette population bactérienne est utilisée pour inoculer des milieux contenant entre 100 et 1000 mg. 1-1 d'As (III). Les cinétiques d'oxydation de l'As (III) en As (V) ainsi obtenues sont représentées par le graphe de la figure 1, où l'axe des ordonnées représente la concentration en As (V) généré par l'oxydation de l'As (III), en mg. l1, et l'axe des abscisses représente le temps en heures. Lorsque le milieu est ajusté initialement à pH 6, l'oxydation de As (III) en As (V) est corrélée à une chute de pH. Cet exemple montre que la population bactérienne CAROL conserve sa capacité à oxyder l'As (III) lorsqu'elle est placée dans une solution contenant 1000 mg. 1-1 d'As (III), soit dix fois la concentration en As (III) présente dans son milieu de culture habituel. Exemple 4 : Procédé d'oxydation de l'As (III) en continu par les bactéries constituant la population CAsOl. La population bactérienne CAsOl, sélectionnée avec le milieu de l'exemple 2, est utilisée pour inoculer un réacteur muni d'un axe d'agitation équipé d'une hélice, et d'un système d'aération. Ce bioréacteur est rempli avec une solution contenant 100 mg. 1-1 d'As (III). Après la phase batch, au cours de laquelle les bactéries oxydent entièrement l'As (III) en As (V), le bioréacteur est alimenté en continu avec une solution contenant 100 mg. 1-1 d'As (III). Le débit d'alimentation en solution chargée en arsenic est progressivement accru. Le temps de résidence de la solution dans le bioréacteur est ainsi réduit de 150 heures à 10 heures. Le pourcentage d'oxydation de l'arsenic (III) par le bioréacteur est toujours supérieur à 99 %. L'augmentation de la vitesse d'oxydation de l'As (III) dans le bioréacteur est représentée par le graphe de la figure 2, où l'axe des ordonnées représente la vitesse d'oxydation de l'As (III) en mg. 1-1. h-1. et l'axe des abscisses représente le temps en heures. REVENDICATIONS 1.-Bactéries, caractérisées en ce qu'il s'agit de bactéries isolées, autotrophes, aérobies, capables d'oxyder As (III) en As (V) en utilisant CO2 comme seule source de carbone et As (III) comme seule source d'énergie et qu'elles présentent des séquences d'ADNr 16S répondant à SEQ ID N 1 ou à SEQ ID NO2. 2.-Bactéries, caractérisées en ce qu'elles présentent les caractéristiques suivantes : - elles supportent jusqu'à 1 g. 1-1 au moins d'As (III) atteint sans perdre leur aptitude à oxyder l'As (III), - la vitesse d'oxydation de l'As (III) par ces bactéries en bioréacteur atteint au moins 12 mg. l". h-1, - leur activité spécifique d'oxydation de l'As (III) atteint au moins 5x10-7 mg d'As (III) par bactérie et par heure, elles sont capables de réduire la concentration résiduelle en As (III) à moins de 50 pg. 1-l. 3.-Procédé, caractérisé en ce qu'il comprend le traitement d'un échantillon susceptible de renfermer des bactéries selon la revendication 1 ou 2, cet échantillon étant en particulier prélevé sur un matériau contaminé par de l'arsenic, avec un milieu de sélection à raison de 50 à 500 mg/1, ne contenant pas de source de carbone ajoutée et ne fournissant que l'As (III) comme source d'énergie aux bactéries. 4.-Milieu pour la sélection des bactéries selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend les composés suivants : - ammonium : 14 mg/1, soit 10 mg/1 d'azote phosphates de di-et de mono-potassium, qui servent également de tampon de pH : #0,5 5 g/l sel de magnésium non biologiquement oxydable, comme le sulfate de magnésium : #0,1 l g/l sel de calcium non biologiquement oxydable, comme le chlorure de calcium : 5.-Procédé de traitement de milieux renfermant de l'arsenic pour oxyder les arsénites en arséniates, caractérisé par l'inoculation de ces milieux, dans un bioréacteur, avec une population bactérienne essentiellement constituée par des bactéries selon la revendication 1 ou 2. 6.-Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que les bactéries sont inoculées à raison de 100 ml/1, de préférence de l'ordre de 106 bactéries/ml. 7.-Procédé selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce que les bactéries sont au moins en partie concentrées dans le bioréacteur par un support de fixation. 8.-Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que, pour accélérer l'oxydation, on ajoute dans le milieu aqueux à traiter des sels minéraux servant d'éléments nutritifs et/ou on injecte de l'air. 9.-Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 8, caractérisé en ce que le traitement microbiologique est effectué en mode batch ou en continu. 10.-Application du procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 9, pour traiter les eaux destinées à la consommation humaine, distribution collective ou forages privés, ainsi que les effluents miniers ou industriels.