Brevet FR2811996A1 — publié le 20020125

La présente invention a pour objet: - un procédé de réticulation, original, d'au moins un polymère choisi parmi les polysaccharides et leurs dérivés; - un procédé de préparation d'un hydrogel injectable d'au moins un tel polymère; - les polymères réticulés et hydrogels injectables, susceptibles d'être respectivement obtenus par chacun desdits procédés; un matériau de comblement, utile en chirurgie réparatrice ou en chirurgie esthétique, à base de tels hydrogels. On a préparé, à partir de polysaccharides et de leurs dérivés - notamment à partir de l'acide hyaluronique, de ses sels et de leurs mélanges - pas, peu ou fortement réticulés, des hydrogels, notamment des hydrogels injectables. La demande de brevet EP-A-0 161 887 décrit ainsi l'utilisation de tels hydrogels injectables pour traiter l'arthrite. Les demandes de brevet WO-A-96/33751 et WO-A-00/01428 décrivent, quant à elles, des compositions biphasiques injectables dont la phase continue est à base d'un tel hydrogel. Ladite phase continue intervient à titre de véhicule d'injection. D'après l'enseignement de ces documents (d'après l'enseignement de l'art antérieur, à la connaissance de la Demanderesse) la réticulation du polymère, et notamment celle de fibres de hyaluronate de sodium, est mise en oeuvre en présence d'un agent réticulant, notamment d'un polyépoxyde; ledit agent réticulant intervenant, en quantité contrôlée, sur ledit polymère, dissous, en milieu basique. La réaction en cause est une réaction gel / liquide. Elle vise à générer un produit réticulé, aussi homogène que possible, précureur d'un gel viscoélastique, facilement injectable, autant que faire se peut exempt de "paillettes", de surréticulations locales. La présence de ces "paillettes" est fortement préjudiciable à l'injectabilité du gel en cause. Lors de son injection, des forces plus importantes sont nécessaires à appliquer lorsqu'une telle "paillette" se bloque dans l'aiguille d'injection. Ce problème est d'autant plus critique, que des aiguilles d'injection, de diamètres très fins, peuvent être utilisées. C'est, en référence à ce problème technique de l'optimisation de l'injectabilité d'hydrogels, à base de tels polymères réticulés, que la présente invention a été développée. Ladite présente invention propose en fait une mise en oeuvre originale de la réticulation, le polymère réticulé conduisant alors, après hydratation, à un hydrogel, très homogène, (quasi) exempt de surréticulations locales, qu'il est possible d'injecter avec une grande précision. Le premier objet de la présente invention concerne donc un procédé de réticulation d'au moins un polymère choisi parmi les polysaccharides et leurs dérivés. De façon classique, la réticulation en cause est mise en oeuvre en présence d'au moins un agent réticulant polyfonctionnel (au moins bifonctionnel). Selon l'invention, le procédé est caractérisé en ce que ledit agent réticulant polyfonctionnel est mis à réagir, directement, sur ledit polymère, à l'état solide, en cours d'hydratation. Ledit polymère n'est donc pas, dans le cadre du procédé de l'invention, préalablement conditionné, au sens de l'art antérieur, par dissolution / gonflement. De manière tout à fait surprenante, dans les conditions de l'invention, la réticulation est une réaction solide / liquide qui génère un polymère réticulé de façon homogène, polymère précurseur d'un hydrogel de structure parfaitement homogène. De préférence, ledit agent réticulant polyfonctionnel intervient, sur ledit polymère solide, en solution basique. Ainsi, ledit agent réticulant polyfonctionnel peut être * soit mis en solution ou en suspension dans une solution basique, cette solution ou suspension est ensuite mise à réagir directement sur ledit polymère à l'état solide, soit mis à réagir directement sur ledit polymère à l'état solide, l'ajout de l'agent basique se faisant simultanément à l'ajout de l'agent réticulant mais par moyen d'introduction séparé, sur ledit polymère à l'état solide. Généralement, lorsque ledit agent réticulant est en solution basique, cette solution basique a un pH compris entre 10 et 12. A titre d'agent réticulant, on peut faire intervenir tout agent connu pour réticuler les polysaccharides et leurs dérivés, par l'intermédiaire de ses fonctions hydroxy - agent réticulant au moins bifonctionnel - et notamment un époxyde ou ses dérivés. A titre de tels agents réticulants, on peut notamment faire intervenir le 1,4-butanedioldiglycidyléther (ou 1,4-bis(2,3époxypropoxybutane ou encore 1,4- bisglycidyloxybutane = BDDE), le 1,2bis(2,3-époxypropoxy)éthylène et le 1(2,3- époxypropyl)-2,3époxycyclohexane. Il n'est pas exclu du cadre de l'invention de faire intervenir plusieurs agents réticulants. On préconise tout particulièrement de faire intervenir le 1,4-butanediol- diglycidyléther (BDDE). Ledit polymère en cause (les polymères en cause) est(sont) choisi(s) parmi les polysaccharides et leurs dérivés et leurs mélanges. Il(s) est(sont) notamment choisi(s) parmi l'acide hyaluronique et ses sels, les sulfates de chondroitine, les sulfates de kératane, l'héparine, l'acide alginique, l'amidon, le carbométhylcellulose, l'hydroxypropylméthylcellulose, le chitosane et leurs mélanges. On préfère particulièrement l'acide hyaluronique et ses sels et leurs mélanges. On préconise tout particulièrement le hyaluronate de sodium. La réticulation à mettre en oeuvre sur ledit polymère est à la portée de l'homme du métier. Pour chaque polymère l'homme du métier saura optimiser les conditions de cette réticulation à la nature dudit polymère et la réaliser à un taux optimisé. En effet, le taux de réticulation doit être suffisant pour que l'hydrogel, obtenu à partir de ce polymère réticulé, reste implanté au site d'injection sans diffusion excessive hors de ce site d'injection; il doit toutefois rester raisonnable pour une utilisation, en particulier, par injection. Cependant, de manière préférée, selon l'invention, le polymère est réticulé, via ses fonctions hydroxy, au moyen dudit agent réticulant à un taux de réticulation défini par le rapport: R Nombre total de fonctions réactives dudit agent réticulant Nombre total de motifs disaccharides des molécules d'acide hyaluronique compris entre 0,10 et 0,50. Le second objet de l'invention est le polymère réticulé susceptible d'être obtenu à l'issue de la mise en oeuvre du procédé de réticulation de l'invention tel que décrit ci-dessus, avec chacune de ses variantes. Le troisième objet de l'invention concerne un procédé de préparation d'un hydrogel injectable d'au moins un polymère réticulé choisi parmi les polysaccharides et leurs dérivés. De façon caractéristique, ce procédé comprend la réticulation dudit polymère selon le procédé de réticulation de l'invention décrit ci-dessus, dans toutes ses variantes, ladite réticulation étant suivie d'un gonflement dudit polymère réticulé, par hydratation. Le procédé de préparation d'un hydrogel injectable de l'invention est optimisé en référence à la présence de réticulation ou de surréticulations locales au sein dudit hydrogel. Ledit procédé de préparation dudit hydrogel est par ailleurs per se optimisé en référence à sa durée de mise en oeuvre. Selon l'invention, il est ainsi possible d'obtenir en 2 à 3 heures un hydrogel réticulé par une réaction en phase solide/liquide alors que selon l'art antérieur un hydrogel réticulé est obtenu en environ 5 h, par une réaction en phase gel/liquide. Ce gain de temps est appréciable per se. Il permet en effet l'obtention d'une meilleure qualité du produit final, la dégradation du polymère, qui se produit en particulier en milieu basique, étant alors limitée. De plus, on garantit une meilleure reproductibilité de la synthèse des gels obtenus en final. Ledit procédé comprend, de façon caractéristique, les étapes successives ci-après: - la réticulation d'un polymère ou d'un mélange de polymères, choisi(s) parmi les polysaccharides et leurs dérivés, selon le procédé de réticulation précédemment décrit, - le gonflement dudit(desdits) polymère(s) réticulé(s), - la purification dudit (desdits) polymère(s) réticulé(s), gonflé(s), - la stérilisation, si nécessaire, dudit (desdits) polymère(s) réticulé(s), gonflé(s), purifié(s). Les étapes de réticulation, de purification et de stérilisation sont des étapes per se connues de l'homme du métier. Ladite purification est nécessaire pour éliminer les produits n'ayant pas ou incomplétent réagis tels le(s) polymère(s) et le(s) agent(s) réticulant(s). Ladite étape de stérilisation est évidemment nécessaire si les étapes en amont n'ont pas été mises en oeuvre dans des conditions stériles. Le quatrième objet de l'invention est l'hydrogel injectable susceptible d'être obtenu à l'issue de la mise en oeuvre dudit procédé de préparation d'un hydrogel injectable selon le troisième objet de l'invention tel que décrit précédemment, dans ses différentes variantes. Cet hydrogel est caractérisé par la faible présence, voire l'absence, de surréticulations locales. L'hydrogel injectable, tel que décrit ci-dessus, tel qu'obtenu par le procédé ci-dessus, convient parfaitement pour la fabrication d'un gel de comblement, utile en chirurgie réparatrice ou esthétique. Le cinquième objet de l'invention est donc un gel de comblement utile en chirurgie réparatrice ou esthétique qui est à base d'un hydrogel selon le quatrième objet de l'invention et/ou tel qu'obtenu selon le procédé du troisième objet de l'invention. L'hydrogel de l'invention constitue au moins la phase continue dudit gel de comblement de l'invention. Ainsi ledit gel de comblement peut être constitué d'une seule phase qui est l'hydrogel réticulé de l'invention. Il peut également être bi- ou pluri-phasique c'est-à-dire qu'il peut être constitué de plusieurs phases dont au moins la phase continue est l'hydrogel réticulé de l'invention. La seconde et les autres phases peuvent être par exemple des billes elles- mêmes constituées de l'hydrogel réticulé de l'invention mais, dans ce cas, l'hydrogel constituant les billes aura un taux de réticulation plus élevé que le taux de réticulation de l'hydrogel réticulé constituant la phase continue du gel de comblement de l'invention. Les billes pourront également être en acrylique ou polymère acrylique. De préférence, le gel de comblement selon l'invention sera constitué d'un hydrogel réticulé selon l'invention et monophasique. Le(s) hydrogel(s) plus ou moins réticulé(s) formant la base du gel de comblement de l'invention pourront indifféremment être chargés ou non chargés. Ils pourront, par exemple, être chargés avec des antiseptiques et éventuellement d'autres substances, autres substances dont l'intervention est avantageuse dans les zones du corps humain ou animal concerné. Ainsi ledit hydrogel constituant au moins la phase continue de gel de comblement de l'invention renferme avantageusement de l'acide désoxyribonucléique (ADN). Ce produit est connu pour diminuer la réaction inflammatoire et favoriser la régénération tissulaire. Le gel de comblement de l'invention présente l'avantage d'être facilement injectable, c'est-à-dire injectable au travers d'aiguilles très fines de 26G à 30G, sans nécessiter de pics de pression, en raison du taux de réticulation homogène au travers de toute la masse de l'hydrogel réticulé utilisé et qui est obtenu par le procédé de l'invention. Cette homogénéité de réticulation conjuguée au taux de réticulation résulte en l'absence ou la quasi absence de "paillettes" plus réticulée dans le gel, et ce gel peut alors être injecté avec une force constante et ainsi avec une meilleure précision, au site voulu. Le gel de comblement de l'invention peut être utilisé en chirurgie esthétique, par exemple, pour le comblement des rides d'une manière plus précise, plus fiable et plus aisée car il a un niveau d'injectabilité très régulier, en contraste aux gels de comblements de l'art antérieur. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention seront maintenant illustrés par les exemples ci-après décrivant, en référence aux figures 1 et 2 annexées, la préparation d'un gel de comblement préféré selon l'invention, la préparation d'un gel de comblement de l'art antérieur et les tests d'injectabilités réalisés sur ces gels. Dans les figures: - la figure 1 montre la courbe d'injectabilité du gel de comblement selon l'invention préparé à l'exemple 1, c'est-à-dire la force nécessaire pour injecter ce gel en fonction de la durée d'injection, - la figure 2 montre la courbe d'injectabilité du gel de comblement selon l'art antérieur préparé à l'exemple 2, c'est-à-dire la force nécessaire pou injecter ce gel en fonction de la durée d'injection. Exemple 1: Préparation d'un gel de comblement selon l'invention * On pèse 1 g de fibres de hyaluronate de sodium (NaHa, de masse moléculaire Mw, 2106 Da) préalablement séchées, dans un premier récipient. Dans un récipient séparé, on dilue l'agent réticulant choisi, le 1,4- butanedioldiglycidyléther (BDDE), dans de la soude à 1% pour obtenir une solution basique de BDDE diluée au 1 OOèeme. * On ajoute alors 6,8 g de la solution de BDDE diluée au 100èeme précédemment préparée sur les fibres, toujours à l'état solide, de NaHa, et on procède à une homogénéisation mécanique du mélange, à la spatule. * Le mélange est ensuite placé dans un bain marie à 50 C + 2 C pendant 2 à 3 heures avec une nouvelle homogénéisation après 15 minutes d'immersion, pour provoquer la réticulation du polymère de NaHa. * Le polymère de NaHa réticulé obtenu est ensuite immergé dans un tampon phosphate (TP) pour stabiliser le pH. Cette étape correspond à l'étape de gonflement par hydratation du polymère de NaHa réticulé menant à l'obtention de l'hydrogel de l'invention. Le polymère de NaHa, réticulé, gonflé est ensuite purifié par immersion dans différents bains de tampon phosphate afin d'éliminer l'agent réticulant et le NaHa qui n'auraient pas réagis. * L'hydrogel obtenu est alors homogénéisé mécaniquement pour assurer l'homogénéité finale et conditionné dans des seringues qui sont stérilisées à l'autoclave. Comme on le voit dans cet exemple, le gel de comblement de l'invention est constitué uniquement de l'hydrogel obtenu ou susceptible d'être obtenu par le procédé de l'invention. Le gel obtenu est injectable avec une canule de 27G1/2 ou 30G1/2 pour une augmentation des volumes en sous cutané. Exemple 2: Préparation d'un gel de comblement selon le procédé de l'art antérieur On pèse 1 g de fibres de hyaluronate de sodium (NaHa, de masse moléculaire Mw 2106 Da), préalablement séchées, dans un récipient. On ajoute dans le même récipient contenant les fibres de NaHa, 6,7 g de soude à 1% et on laisse reposer à température ambiante pendant 2 h 30 à 3 h 00 avec homogénéisation toutes les 2 heures. Cette étape correspond à l'étape d'hydratation des fibres de NaHa. On obtient le polymère de NaHa non réticulé, sous forme de gel. * On ajoute ensuite 60 mg du même agent réticulant que celui utilisé à l'exemple 2, le BDDE, dans le même récipient contenant le gel de NaHa et la soude et on procède à une homogénéisation mécanique du BDDE dans le gel de NaHa. * Le mélange est ensuite placé dans un bain marie à 50 C + 2 C pendant 1 h45à2h30. Cette étape correspond à l'étape de réticulation du polymère de NaHa. * Le polymère de NaHa réticulé ainsi obtenu est ensuite immergé dans un tampon phosphate (TP) pour stabiliser le pH. Cette étape correspond à l'étape de gonflement par hydratation du polymère réticulé. * Le polymère de NaHa, réticulé, gonflé est ensuite purifié par immersion dans différents bains de tampon phosphate afin d'éliminer l'agent réticulant et le NaHa qui n'auraient pas réagis. L'hydrogel obtenu est alors homogénéisé mécaniquement pour assurer l'homogénéité finale conditionnée dans des seringues qui sont stérilisées à l'autoclave. Dans cette exemple également le gel de comblement est constitué uniquement de l'hydrogel réticulé, gonflé, purifié et stabilisé obtenu avec le procédé de l'art antérieur. Exemple 3: Tests d'injectabilité des gels de comblement obtenus Afin de comparer l'injectabilité du gel de comblement obtenu selon le procédé de l'invention à celle du gel de comblement obtenu selon le procédé de l'art antérieur, des essais d'injectabililté ont été effectués sur chacun d'eux. Ces essais d'injectabilité ont été effectués sur un appareil de traction Versatet (commercialisé par Mecmesin). Les gels ont été chacun injectés à travers une aiguille de 27G1/2 à une vitesse de compression de 12,5 mm/mn. La force nécessaire, en Newton pour injecter les gels est caractéristique du taux de réticulation et de la concentration en NaHa du gel, et la régularité de cette force est caractéristique de la facilité d'injection du gel ainsi que de son homogénéité. En effet, lorsque le gel comprend des paillettes plus réticulées, la force nécessaire pour injecter le gel augmente puis rediminue lorsque la paillette a traversé l'aiguille, ce qui se traduit par des pics au niveau de la force nécessaire pour maintenir la vitesse d'injection de 12,5 mm/mn. Les résultats des mesures effectuées sur le gel de comblement de l'invention sont montrés sur le graphe de la figure 1 et les résultats des mesures effectués sur le gel de comblement fabriqué selon le procédé de l'art antérieur sont montrés sur le graphe de la figure 2. Sur ces graphes, la force nécessaire en Newton (N) pour injecter le gel, est représentée en ordonnées et le temps d'injection, représenté par la longueur en mm de déroulement du papier, est représenté en abscisse. Il est à noter que sur ces figures, une augmentation de la force nécessaire pour injecter le gel de comblement se traduit par un pic descendant par rapport à la ligne de base. Comme on le voit sur les figures 1 et 2, la force nécessaire pour injecter le gel de comblement selon l'invention est beaucoup plus régulière: la force nécessaire est d'environ 27 Newton, en moyenne, sans présence de pics dus à la présence de paillettes. En contraste bien que la force moyenne pour injecter le gel de comblement fabriqué selon le procédé de l'art antérieur soit également d'environ 27 Newton, 2 pics importants d'une amplitude de 30 à 42 Newton apparaissent lors de l'injection du gel selon l'art antérieur. Ces pics sont caractéristiques de surréticulations locales. Ainsi, le gel obtenu par le procédé de l'invention présente une réticulation plus homogène que le gel fabriqué selon le procédé de l'art antérieur. sl -Revendications - 1. Procédé de réticulation d'au moins un polymère choisi parmi les polysaccharides et leurs dérivés, sous l'action d'au moins un agent réticulant polyfonctionnel, caractérisé en ce que ledit agent réticulant polyfonctionnel est mis à réagir sur ledit polymère, à l'état solide, en cours d'hydratation. 2. Procédé de réticulation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit agent réticulant polyfonctionnel intervient, sur ledit polymère solide, en solution basique. 3. Procédé de réticulation selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit agent réticulant polyfonctionnel est un époxyde, avantageusement choisi parmi le 1,4-butanedioldiglycidyéther, le 1,2bis(2, 3- époxypropoxy)éthylène et le 1-(2,3-époxypropyl)-2,3-époxycyclohexane. 4. Procédé de réticulation selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit agent réticulant polyfonctionnel consiste en le 1,4butanedioldiglycidyléther. 5. Procédé de réticulation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que ledit polymère est choisi parmi l'acide hyaluronique, ses sels et leurs mélanges; en ce que ledit polymère consiste avantageusement en le hyaluronate de sodium. 6. Procédé de réticulation selon la revendication 5, caractérisé en ce que ledit polymère est réticulé, via ses fonctions hydroxy, au moyen dudit agent réticulant à un taux de réticulation défini par le rapport: Nombre total de fonctions réactives dudit agent réticulant R= Nombre total de motifs disaccharides des molécules d'acide hyaluronique compris entre 0,10 et 0,50. 7. Procédé de préparation d'un hydrogel injectable d'au moins un polymère réticulé choisi parmi les polysaccharides et leurs dérivés, caractérisé en ce qu'il comprend la réticulation dudit polymère selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, suivie d'un gonflement dudit polymère réticulé par hydratation. 8. Procédé de préparation selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il comprend: - la réticulation dudit polymère selon l'une quelconque des revendications 1 à6; - le gonflement dudit polymère réticulé; - la purification dudit polymère réticulé gonflé; - la stérilisation, si nécessaire, dudit polymère réticulé gonflé purifié; 9. Polymère réticulé susceptible d'être obtenu à l'issue de la mise en oeuvre d'un procédé de réticulation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 10. Hydrogel injectable susceptible d'être obtenu à l'issue de la mise en oeuvre d'un procédé de préparation selon l'une des revendications 7 à 8. 11. Gel de comblement, utile en chirurgie réparatrice ou esthétique, caractérisé en ce qu'il est à base d'un hydrogel, chargé ou non, selon la revendication 10. 12. Gel de comblement selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'il consiste en un hydrogel, monophasique, selon la revendication 10.