Brevet FR2821241A1 — publié le 20020830

DESCRIPTION L'invention concerne une nouvelle utilisation de peptaibols pour la stimulation des défenses naturelles des plantes contre les pathogènes fongiques et/ou bactériens et/ou viraux. Les produits les plus répandus dans ce type d'action sont les éliciteurs. Ils peuvent être d'origine : - chimique : notamment les ions mercuriques, cuivriques et aluminiques, les acides arachidonique, phosphoreux, salicylique, fulvique et humique ; - biochimique : notamment les oligosaccharidiques extraits des animaux et végétaux tels que le chitosan, les fucosides et ceux issus d'algues ; - bactérienne : notamment à base de broyats complets de bactéries inactivées, mais aussi d'extraits peptidiques de Pseudomonas, Clavibacter et Xanthomonas tels que l'harpine et autres polypeptids ; - fongique : notamment des types protéiniques, enzymatiques et même oligopeptidiques. Ces derniers sont essentiellement des élicitines issus de Phytophtora et Pythium. Leur composition en acides aminés de la partie N-terminale est variable, et ce critère permet de les classer en diverses familles. L'oligandrine, qui ne contient pas certains résidus (tryptophane, histidine, arginine), contient en abondance d'autres résidus comme la Thréonine et la sérine dans sa partie N-terminale. Ceci constitue une caractéristique clé dans la reconnaissance de l'empreinte d'une élicitine. On peut citer les élicitines déjà décrites à partir de Phytophtora (crytogéine, cinnamomine, dreschlerin, megaspermine, capsciceine, parasiticeine, cactoreine, infestine) et à partir de Pythium (vexines et oligandrines). Les éliciteurs selon l'invention sont des petits peptides d'une vingtaine d'acides aminés spécifiques (oligopeptides). Leur composition comprend au moins un acide aminé choisi parmi l'aminoisobutyrique (Aib), l'isovaline (Iva), le valinol, le tryptophanol, le phenylalaminol, la pipérazine. Ils sont classés sous le nom spécifique de peptaibols)). Les peptaibols sont actuellement connus pour leurs propriétés biologiques, antibiotiques dans des applications médicales. Alors que les peptaibols, selon l'invention, sont utilisés comme stimulateur des défenses naturelles des plantes entières par application foliaire, racinaire ou par injection, contre les pathogènes des cultures des types fongiques et/ou bactériens et/ou viraux et/ou ravageurs. Lesdits peptaibols sont incorporés à un véhicule autorisé en agriculture de type mouillant et pénétrant. La composition en question peut se présenter sous la forme : - liquide, notamment sous la forme de solution aqueuse ; - solide, notamment sous la forme de poudres, granulés ou en enrobage de semences. Ils peuvent être obtenus à partir : - de champignons filamenteux, notamment le Trichoderma ; - selon un processus non-ribosomal qui se présente sous la forme de templat protéinique dénommé peptides synthétases ; - par voie de synthèse peptidique. Par rapport aux enzymes et aux polypeptides, la production de peptaibols comprenant 7 à 10 acides aminés permet un gain de productivité important (en énergie et en temps). En outre, la concentration à pulvériser à l'hectare est beaucoup plus faible (économie de produit). Enfin, leur dégradabilité dans la nature est beaucoup plus rapide. Par rapport aux éliciteurs (oligopeptides) connus, les peptaibols comportent une structure hélicoïdale qui possède un pouvoir de pénétration plus prononcé favorisant la perforation des membranes des cellules avec pour conséquence une efficacité de destruction plus importante. Les caractéristiques et les avantages de l'invention vont être exposés ci-après de manière détaillée. DEFINITION DES PEPTAIBOLS Les peptaibols sont des peptides linéaires de nature hydrophobe dont la masse est comprise entre 1 et 2 kDa. Ils sont composés de 7 à 20 aminoacides. Ces derniers sont représentés par de fortes proportions de glycins C '' disubstitués : l'acide a-aminoisobutyrique (Aib), isovaline (Iva), valinol, tryptophanol, phenylalaminol, pipérazine. Ils possèdent un groupe acyl en extrimité N-terminale et un a-aminoalcool dans la partie C-terminale. Il existe tout de même quelques exceptions, par exemple, récemment un peptaibol ayant à son extrémité C-terminale un aminoacide cyclique (pipérazine) a été isolé. Selon le nombre et la nature des résidus, les peptaibols forment trois sous-classes : 1-les peptaibols à chaîne longue avec 18-20 résidus comme l'alaméthicine isolé de Trichoderma viride ; 2-les peptaibols ayant une séquence courte constituée de 11 à 16 résidus ; 3-les lipopeptaibols avec 11 résidus et une chaîne lipidique en extrémité N-terminale. Les peptaibols en question sont des produits naturels d'origine fongique. Ils sont produits comme métabolites secondaires, surtout par le genre Trichoderma connu pour son antagonisme en latte biologique. La biosynthèse des peptaibols n'est pas directement codée par le matériel génétique microbien comme dans le cas des protéines. Le système métabolique responsable de leur synthèse n'est pas constitutif, mais il est induit chez l'organisme producteur par la présence d'autres champignons compétiteurs. L'assemblage des acides aminés constituants les peptaibols est donc assuré par un processus non-ribosomal qui se présente sous forme de templat protéinique appelé peptides synthétases. La synthèse de la chaîne peptidique est généralement terminée par l'attachement de l'acide aminoalcool. Cependant il existe certaines exceptions comme c'est le cas de l'aibellin qui possède en son extrimité C-terminale un aminoalcool modifié ou les trichobachines qui ont une glycine à l'extrémité C-terminale et les clonostachines contenant un sucre lié au carboxyle terminal par une liaison ester. En plus, plusieurs peptides contenant l'Aib sont apparentés aux peptaibols, comme par exemple les efrapeptines, les aminolipopeptides leucinostatines, trichoplines, et helioferines. Ces peptides contiennent à leurs extrémités c-terminales des résidus inhabituels de forme cyclique ou linéaire. L'hétérogénéité des séquences peptidiques représentant les peptaibols peut s'expliquer par la non spécificité du système enzymatique envers les différents acides aminés. La détermination de la structure des protéines peut être prédit par la traduction de l'ARN messager codant pour leur biosynthèse. Mais, dans le cas des peptaibols cela n'est pas possible puisque leur synthèse n'est pas directement codée par les gènes, et les méthodes chimiques s'avèrent nécessaires. PROPRIETES BIOLOGIQUES DES PEPTAIBOLS Les acides aminés qui constituent les peptaibols sont responsables de leur comportement physicochimique. Ainsi, ils adoptent une structure linéaire, hélicoïdale et un caractère amphiphile qui leur permet d'interagir avec les bicouches phospholipidiques en perturbant leur organisation. Utilisée à une concentration de 25-50 mM, l'alamethecine (mélange de peptaibols issus de Trichoderma viride dont le composé majoritaire contient 8 résidus Aib et 2 prolines) augmente la perméabilité des membranes cellulaires et mitochondriales, et de certaines bactéries de la panse des ruminants. De même les trichorzianes A et B inhibent la croissance de l'amibe Dictyostelium discoideum dont la lyse intervient à des concentrations de 7 et de 25 uM de trichorzianine neutre (TA Il c) et trichorzianine acide (TB Illc). Tout récemment, on a attribué aux peptaibols des activités biologiques très intéressantes, comme l'action antibiotique contre le virus de la mosaïque du tabac attaquant des jeunes plants de haricots de Lima. OLIGOPERTIDES DU TYPE PEPTAIBOLS CONNUS Ils sont connus sous les appellations suivantes : Aibellin, Alamethicin-F-30, Ampullosporin, Antiamoebin-I, Atroviridin-A, Bergofungin-A, Boletusin, ChrysosperminA, Clonostachin, Emerimicin-D-A, Harzianin-HB-I, Hypelcin-A, Hypomurocin-A-I, Leu1Zervamicin, Longhibrachin-A-I, LP237-F7, NA-VII, Paracelsin-A, Peptaibolin, Peptaivirin-A, Polysporin-A, Pseudokinin-KLIII, Samarosporin-I, Saturnisporin-I, Saturnisporin-SA-I, Stilbellin-t, Suzukacillin, Trichocellin-TC-A-I, Trichodecenin-TD-I, Trichogin-A-IV, Trichokindin-la, Trichokonin-la, Trichokonin-lb, Trichokonin-Xa, Trichokonin-Ilb, Trichokonin-Ilc, Tricholongin-BI, Trichorovin-TV-la, Trichorozin- !, Trichorzianine-TA-Illc, Trichorzin-HA-I, Trichosporin-TS-B-la-1, Trichotoxin-A-40, Trikoningin-KA-V, Tylopeptin-A, XR586, Zervamicin-A-1-16. EXEMPLE DE TRAVAUX DE PRODUCTION ET DE DÉTECTION DE PEPTAIBOLS À PARTIR DE CULTURES DE CHAMPIGNONS Le screening des microorganismes a été réalisé sur une collection de souches fongiques. Les souches sont repiquées sur un milieu de malt gélosé (30 g de malt, 15g d'agar et 1 litre d'eau distillée). Les tubes de culture sont incubés dans une étuve thermostatée pendant quelques jours, et la conservation est faite à 4 C. Les cultures sont réalisées en fioles de Roux sur milieu synthétique liquide (170 ml de milieu par fiole d'un litre). Après stérilisation, l'ensemencement est effectué par 2 ml d'une suspension de spores et les préparations sont portées à l'incubation. 1-Composition des milieux de culture pour Trichoderma harzianum pep 10 g de dihydrogénophosphate de potassium (KH2PO4) ; 10,8 g de nitrate de potassium (KNO3) ; 7,5 g de sulfate de magnesium (MgS04) ; 3 g de phosphate de calcium monobasique (Ca (P04H2) 2 ; 0,15 g de sulfate de manganèse (MnSO4,5H2O) ; 0,15 g de sulfate de zinc (ZnS04, 7H2O) ; 0,075 de sulfate de cuivre (Cu S04, 5H2O) ; 0,015 de sulfate de fer (FeSO4, 7H2O) ; 75 g de glucose ; 15 litres d'eau distillée. 2-Extraction-Purification Les préparations de cultures sont filtrées sur des dispositifs de filtration ayant une porosité de 0,2 microns. Le mycellium est lavé au n-butanol, et le filtrat est extrait 3 fois avec le même solvant. La phase organique est concentrée par élimination du solvant sous vide. Le résidu obtenu est repris dans du méthanol et refiltré sur une membrane de 0, 1 microns. La présence de peptaibols est révélée en CCM. On utilise comme système de développement, un mélange de solvants composé de dichlorométhane/ méthanol (80/20), et comme réactif de révélation la solution suivante : acide acétique/acide sulfurique/p-anisaldéhyde : 50 ml/1 ml/1 ml. Le résidu méthanolique est chromatographié sur une colonne de gel de Séphadex LH20 avec le méthanol comme éluant. Les fractions ainsi obtenues sont de nouveau chromatographiées sur une colonne de gel de silice. Le système d'élution utilisé est constitué d'un gradient de méthanol dans le dichlorométhane. 3-Microséquençage d'un peptaibol La détermination de la séquence d'aminoacides composant une protéine repose sur l'emploi de deux méthodes complémentaires : a) Séquençage chimique par la méthode d'Edmans-Matsudaira [A practical guide to protein and peptide purification for microsequencing. Academic Press, Inc., NY, Edmans-Matsudaira (eds.) 1989]. Cette méthode est automatisée et efficace pour un polypeptide ne dépassant pas les 100 résidus. b) Coupure enzymatique à l'aide d'endopeptidases. On obtient des fragments peptidiques assez courts qui sont faciles à analyser par la méthode chimique. La séquence peptidique peut être obtenue en recoupant les informations issues de différentes méthodes : - enzymes spécifiques coupant la liaison entre deux acides aminés bien précis ; - enzymes qui libèrent l'acide aminé N-terminal ; - enzymes qui libèrent l'acide aminé C-terminal ; - réactifs chimiques qui coupent la liaison dans laquelle est engagé le carboxyle d'un acide aminé bien déterminé. Ce qui est le cas pour certaines enzymes. 4-Élucidation Les différents peptaibols sont ensuite séparés par HPLC semi-préparative, en utilisant une colonne de silice greffée C-18 de type Sphérisorb ODS2 et un collecteur de fractions. Le débit est fixé à 2 ml/min. L'éluant est composé d'un mélange eau/ méthanol (90/10). La détection est effectuée sous UV à une longueur d'onde (lambda : 220 nm). Les structures chimiques des peptides sont caractérisées par Spectrométrie de masse (SM) et RMN. En SM, les peptaibols contenant la liaison Aib-Pro sont caractérisés par la rupture de celle-ci. En effet, le caractère basique de l'azote sur la proline rend cette liaison labile. Après fixation d'un proton, une rupture de la liaison Aib-Pro intervient et génère deux fragments caractéristiques. Deux modes d'ionisation sont applicables : La méthode FAB où les ions sont formés par bombardement avec des atomes accélérés de Xénon ayant une énergie de 8 Kev. La technique d'ionisation par électrospray en mode positif et négatif. En Résonance Magnétique Nucléaire, les spectres RMN du proton et carbone 13C sont obtenus sur des spectromètres Bruker, AC 300 et AM 400 équipés respectivement de calculateurs Aspect 3000 et X 32. Les déplacements chimiques sont déterminés par rapport au TMS. Les expériences RMN 2D sont réalisés à l'aide du logiciel Bruker DIS NMR 89. L'élucidation de la structure peptidique exacte de chaque peptaibol est assurée par le recoupement des informations obtenues lors de l'hydrolyse acide totale avec celles fournies par les méthodes spectrales. Ainsi, la SM nous permet d'établir les séquences peptidiques alors qu'à l'aide des différentes expériences en RMN bidimensionnelle, on peut différencier entre deux acides aminés ayant le même poids moléculaire. EXEMPLE DE SYNTHÈSE CHIMIQUE DES PEPTAIBOLS Il faut pour cela surmonter les problèmes dus aux encombrements stériques des acides aminés alpha-alpha disubstitués (couplage incomplet, racémisation, etc...) et aux dégradations des liaisons acido-labiles du type Aib-Pro. La synthèse en phase solide semble apporter la solution à ce genre de problèmes. Par exemple, la synthèse totale de l'alamethicine a été réalisée par le remplacement de tous les résidus Aib dans la séquence par des Leucines. Les Fmoc-aminoalcools sont facilement fixés sur une résine commerciale de type 2chlorotrityle, par l'utilisation d'un mélange binaire de dichlorométhane et de DMF et d'une base comme la pyridine. La résine peut fixer jusqu'à 0.24mM/g de Fmoc-aminoalcool après 6 heures de réactions. Les résines ainsi chargées, sont utilisées pour l'assemblage progressif des acides aminés dans un synthétiseur automatisé. Le clivage de la liaison éther entre les peptides et la résine est réalisé pendant 45 minutes à l'aide d'un mélange constitué de 50% TFA/DCM, 2% d'isopropylsilane, 5% H20 et 5% de phénol. Sous ces conditions, tous les groupes protecteurs sont clivés sans affecter la liaison acidolabile Aib-Pro. Les peptides sont ensuite purifiés par HPLC préparative et leurs séquences déterminées par !'analyse des acides aminés à la spectrographie de masse. La racémisation des acides aminés à été étudiée selon la méthode de Kusumoto et al (1981). On fixe des aminoalcools sur la résine chlorotritylé. La fixation du Fmoc-aminoalcool sur la résine chlorotrityle est effectuée comme suit : 250 mg de résine (0, 32mmol) et 0, 96 mmole de Fmoc-aminoalcool et 1, 92 mmole de pyridine sont agités pendant 6,24, 48 et 72 heures dans 1,5 ml de dichlorométhane anhydre. On ajoute 4 ml de méthanol et on laisse agiter pendant 30 minutes pour que la réaction soit complète. La résine chargée et lavée et le clivage du groupe Fmoc est réalisé par un traitement de la résine avec une solution de 20% pyridine dans du DMF pendant 15 minutes. La charge de la résine est déterminée par l'analyse aux U. V. Réactifs d'activation et dérivées d'acides aminés : Préparation du Fmoc-valinol et du Fmoc-phenylaminol : 20 mMole d'aminoalcool ; 24 mmole de 9-fluorenylméthyl chloroformate ; 20 mMole de triéthylamine dans 50 ml de dichlorométhane anhydre. Ces réactifs sont agités ensemble à température adéquate pendant 1 minute On évapore le CH2CI2 sous vide et le résidu obtenu est lavé à l'éther, 10% d'acide citrique et à l'eau. Le solide est dissout dans l'acétate d'éthyle et séché sur MgSo4. Après évaporation du solvant et précipitation dans de l'hexane, on, récupère un solide blanc. C'est le peptaibol dont la structure est confirmée par les méthodes analytiques classiques. EFFETS PHYSIOLOGIQUES DES PEPTAIBOLS Après avoir essayé des peptaibols selon l'invention, il a été conclu que ces derniers induisent la biosynthèse de produits volatils, ce qui n'est pas le cas de certains peptides connus pour leurs propriétés de former des canaux ioniques ou de transporter des ions. 1-Choix des marqueurs biochimiques sur plantes entières a) Mesure de l'activité peroxydasique (enzyme endogène aux plantes) Les peroxydases tiennent en effet une place prépondérante dans les mécanismes de résistance des plantes. Elles participent à la production d'espèces actives de l'oxygène à la fois toxiques pour les agents pathogènes et impliquées dans la formation de la réaction d'hypersensibilité (HR). Elles interviennent également dans la modification de la paroi cellulaire résultant d'une augmentation de la synthèse de la lignine et/ou de subérine (barrières mécaniques) ainsi que dans la réalisation de pontages covalents entre les protéines de la paroi cellulaire. Elles permettent l'oxydation de phénols en quinones très toxiques et l'incorporation des flavonoïdes dans les parois (barrière chimique). Compte tenu du rôle primordial des peroxydases dans la résistance des plantes, nous avons utilisé l'activité peroxydasique comme marqueur de la résistance suite aux traitements par des éliciteurs. Afin de doser les activités peroxydasiques, les feuilles sont broyées en milieu tampon tris-maléate pH6. L'extrait est ensuite mis en présence de gaïacol et de l'eau oxygénée et une réaction rapide se fait : le gaïacol est transformé en tétragaïacol. L'apparition du tétragaiacol dans le milieu, nous permet de calculer l'activité peroxydasique. Les dosages sont effectués dans ce même tampon en utilisant le gaïacol comme substrat. Les résultats sont exprimés en ADO/Mn/gMF. b) Mesure de l'activité chitinasique Afin de vérifier que les mécanismes de résistance sont déclenchés, nous avons également dosé une activité enzymatique apparaissant dans les situations de résistance : l'activité chitinasique (enzyme synthétisée dès l'attaque des parasites, qui dégrade la chitine, constituant des parois des champignons phytopathogènes). - Réaction colorimétrique utilisée : Para Nito Phénol PNP analogue de substrat 10 p (2mg 1 ml) + extrait enzymatique brut + tampon acétate qsp 0, 5 ml/50 mM/pH5. - 7 incubation 2 h au bain-marie 37 C - 7 + 0, 5 ml Na2Co3 (0, 2 M) - 7 mesure colorimétrique au spectrophotomètre coef. d'extinction 7. 10-3 n cm-1 à 410 nm Activité chitinasique exprimée en nM de PNP par g de matière fraîche par heure 2-Matériel végétal utilisé Toutes les plantes testées sont des jeunes plants obtenus par semis ou par bouturages. On pratique des pulvérisations, des formulations obtenues à partir de peptaibols. Ces formulations contiennent divers mouillants ou pénétrants capables de véhiculer la matière active peptaibols jusqu'aux cellules. EFFETS DE PROTECTION ANTI-PATHOGENIQUE DES PEPTAIBOLS 1-Effets à l'encontre des fusarioses du melon La pulvérisation de peptaibols formulés sur des plantes de melon de sept jours et inoculés de Fusarium oxysporum fsp metonis quatre jours avant, permet d'obtenir certains résultats. Parallèlement, un lot de plantules a vu ses feuilles pulvérisées avec de l'eau. Dix jours après l'inoculation, les symptômes apparaissent uniquement chez les plants inoculés traités avec de l'eau. Trois semaines après l'infection, les jeunes plants infectés se dessèchent et meurent. Les plants inoculés et traités avec le peptaibol ne présentent pas de symptômes avant six semaines et continuent ensuite à se développer normalement. Ces résultats expriment clairement le pouvoir éliciteur du peptaibol sur la résistance des plants de melon vis-à-vis du Fusarium sp. 2-Effets contre les maladies aériennes - Du melon : En pulvérisant du peptaibol sur les plants de melon, on observe un effet similaire de protection par rapport à l'oïdium. En effet, cinq jours après l'inoculation de l'oïdium, les symptômes apparaissent sur les plants traités préalablement avec de l'eau, et jaunissent peu à peu. Les plants traités avec le peptaibol ne présentent que peu ou pas de symptômes et continuent de se développer normalement trois semaines après l'inoculation. - De la vigne : La pulvérisation du peptaibol sur les feuilles de vigne provoque également une forte augmentation d'activité peroxydasique. L'invention concerne donc l'utilisation de peptaibols comprenant au moins un acide aminé choisi parmi l'aminoisobutyrique (Aib),l'isovaline (Iva), le valinol, le tryptophanol, le phenylalaminol, la pipérazine, comme stimulateur des défenses naturelles des plantes entières par l'application foliaire, racinaire ou par injection, contre les pathogènes des cultures des types fongiques et/ou bactériens et/ou viraux. Lesdits peptaibols sont incorporés à un véhicule autorisé en agriculture de type mouillant et pénétrant. La composition précitée se présente : - soit sous la forme liquide, notamment sous la forme de solution aqueuse ; - soit sous la forme solide, notamment sous la forme de poudres, granulés ou en enrobage de semences. La production d'un peptaibol, selon l'invention peut être obtenu : - soit à partir de champignons filamenteux, notamment le Trichoderma ; - soit selon un processus non-ribosomal qui se présente sous la forme de templat protéinique dénommé peptide synthétase ; - soit par voie de synthèse peptidique. L'utilisation de peptaibols, selon l'invention a pour effet de réduire, lorsqu'ils sont appliqués : - aux céréales, notamment le blé, le maïs et le riz, l'attaque des oïdiums, des septorioses, des rouilles, des fusarioses, des pyricularioses et des maladies bactériennes et virales ; - aux arbres fruitiers, notamment le poirier et le pommier, l'attaque des oïdiums, des tavelures, des monilioses, des maladies bactériennes et virales te)) es que) a"Sharka" ; - à la vigne, l'attaque de l'oïdium, du mildiou, du Botrytis, des maladies du bois, des maladies telluriques et virales telles que le"Court-Noué" ; - aux gazons et en horticulture, les attaques des pythiacés, champignons à sclérotes, fusarioses, oïdiums, maladies bactériennes et virales ; - aux oléagineux, notamment le soja, le tournesol, les melons, les carottes, le choufleur et les pommes de terre, l'attaque des oïdiums, des mildious des pythiacées (Phytophtora, Pythium), des champignons à sclérotes (Rhizoctonia, Sclerotinia, Pyrenochaeta), des champignons vasculaires (Fusarium, Verticillium), des maladies bactériennes et virale. La composition, selon l'invention, comporte au moins un peptaibol comprenant au moins un acide aminé choisi parmi l'aminoisobutyrique (Aib), l'isovaline (Iva), le valinol, le tryptophanol, le phenyialaminol, la pipérazine. REVENDICATIONS 1-Utilisation de peptaibols comprenant au moins un acide aminé choisi parmi l'aminoisobutyrique (Aib), l'isovaline (Iva), le valinol, le tryptophanol, le phenylalaminol, comme stimulateur des défenses naturelles des plantes entières par l'application foliaire, racinaire ou par injection, contre les pathogènes des cultures des types fongiques et/ou bactériens et/ou viraux. 2-Utilisation, selon la revendication1, caractérisée en ce que les peptaibols sont incorporés à un véhicule autorisé en agriculture de type mouillant et pénétrant. 3-Utilisation, selon la revendication 2, caractérisée en ce que la composition précitée se présente sous la forme liquide, notamment sous la forme de solution aqueuse. 4-Utilisation, selon la revendication 2, caractérisée en ce que la composition précitée se présente sous la forme solide, notamment sous la forme de poudres, granulés ou en enrobage de semences. 5-Production d'un peptaibol, selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir de champignons filamenteux, notamment le Trichoderma. 6-Production d'un peptaibol, selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est obtenu selon un processus non-ribosomal qui se présente sous la forme de templat protéinique dénommé peptide synthétase. 7-Production d'un peptaibol, selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'il est obtenu par voie de synthèse peptidique. 8-Utilisation d'un peptaibol, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il a pour effet de réduire, lorsqu'il est appliqué : - aux céréales, notamment le blé, le maïs et le riz, l'attaque des oïdiums, des septorioses, des rouilles, des fusarioses, des pyricularioses et des maladies bactériennes et virales ; - aux arbres fruitiers, notamment le poirier et le pommier, l'attaque des oïdiums, des tavelures, des monilioses, des maladies bactériennes et virales telles que la"Sharka" ; - à la vigne, l'attaque de l'oïdium, du mildiou, du Botrytis, des maladies du bois, des maladies telluriques et virales telles que le"Court-Noué" ; - aux gazons et en horticulture, les attaques des pythiacés, champignons à sclérotes, fusarioses, oïdiums, maladies bactériennes et virales ; - aux oléagineux, notamment le soja, le tournesol, les melons, les carottes, le choufleur et les pommes de terre, l'attaque des oïdiums, des mildious des pythiacées (Phytophtora, Pythium), des champignons à sclérotes (Rhizoctonia, Scierotinia Pyrenochaeta), des champignons vasculaires (Fusarium, Verticillium), des maladies bactériennes et virale. 9-Composition, produite selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins un peptaibol comprenant au moins un acide aminé choisi parmi l'aminoisobutyrique (Aib), l'isovaline (Iva), le valinol, le tryptophanol, le phenylalaminol.