Brevet FR2817349A1 — publié le 20020531

NOUVEAU PROCEDE DE CRIBLAGE DE MODULATEURS DE LA TRANSCRIPTION BACTERIENNE L'invention concerne un nouveau procédé de criblage de modulateurs de la transcription bactérienne, en particulier d'activateurs et d'inhibiteurs. L'invention concerne notamment un procédé de criblage d'activateurs et d'inhibiteurs de la liaison des facteurs de transcription avec l'ARN polymérase. L'invention concerne également un kit ou une trousse de détection de modulateurs de la transcription bactérienne ainsi que l'utilisation de ce procédé de criblage dans le cadre de la découverte d'antibiotiques, de médicaments antiviraux et anticancéreux. La transcription des gènes en molécules d'ARN correspondantes est un procédé complexe catalysé par l'ARN polymérase, dépendante de l'ADN, et qui implique de nombreuses protéines. L'ARN polymérase bactérienne se présente sous deux formes : l'enzyme minimum (ou"core enzyme") et l'holoenzyme, qui apparaît suite à la fixation du facteur de transcription sigma (o) sur l'enzyme minimum. C'est cette holoenzyme qui reconnaît et se lie au promoteur, ce qui permet l'initiation de la transcription à partir d'un site spécifique (Burgess et al., 1969 ; Reznikoff et al., 1985). L'enzyme minimum est incapable de reconnaître les séquences du promoteur ; c'est donc l'addition d'un facteur a qui spécifie la localisation de l'initiation de la transcription. Cette complexation entre le facteur a et l'ARN polymérase minimum est indispensable lors des premières étapes de la transcription bactérienne. Après ces étapes d'initiation, o quitte l'enzyme minimum et d'autres protéines, comme NusA, se lient à l'enzyme minimum. D'une façon générale, les facteurs a appartiennent à une famille de protéines qui possèdent les mêmes fonctions : ce sont des sous-unités de l'ARN polymérase, nécessaires à l'initiation de la transcription ; ces facteurs ont une importance primordiale quant à la sélection des sites de liaison de l'enzyme au niveau des promoteurs. Les facteurs NusA s'associent à l'ARN polymérase et favorisent les pauses ou la terminaison de la transcription au niveau de certaines séquences d'ADN. Par"pauses de la transcription", on définit de façon classique un ralentissement ou un arrêt transitoire de l'activité enzymatique. La recherche de nouvelles cibles pour des antibiotiques est une priorité pour garder une avance sur l'apparition de plus en plus fréquente de bactéries résistantes ou multirésistantes aux antibiotiques commercialisés (Courvalin, 1996). L'ARN polymérase procaryote est une cible importante. En effet, elle est vitale pour la bactérie et elle est déjà la cible d'antibiotiques utilisés en thérapeutique (rifampicine et dérivés). Elle est également une cible pour de nombreux microorganismes (Yang et al., 1995) et bactériophages (Kolesky et al., 1999) qui luttent contre les bactéries. La recherche de nouvelles cibles sur la polymérase est donc envisageable et souhaitable. Les ARN, les ADN polymérases ainsi que les transcriptases inverses eucaryotes, procaryotes et virales sont de bonnes cibles pour affecter le fonctionnement d'un organisme vivant. Ces activités enzymatiques sont en général relativement faciles à suivre, elles sont donc devenues des cibles de choix pour la recherche de nouvelles drogues antivirales, anticancéreuses ou antibiotiques. Cette forte activité industrielle a généré des tests d'activité plus rapides et plus fiables, adaptables aux nouvelles exigences du criblage haut débit. Ainsi, le brevet américain n 5 635 349 au nom de Tularik décrit une méthode d'identification d'un inhibiteur de l'activité d'une polymérase, en particulier l'ARN polymérase, dérivée par exemple d'un organisme pathogène infectieux. Cette méthode consiste à mesurer l'activité ARN polymérase en présence de molécules diverses dont on teste la capacité d'inhibition de l'activité de l'enzyme. A ce jour, la technique de base utilisée par la plupart des laboratoires consiste à mesurer l'incorporation de nucléotides radioactifs, témoins de l'activité de l'enzyme, en présence des inhibiteurs potentiels (Wu et al., 1997). Cette méthode permet de mettre en évidence globalement tous les inhibiteurs de la transcription (spécifiques comme la rifampicine, ou moins spécifiques comme les agents intercalants, les chélateurs d'ions divalents...). Cependant, ces tests d'activité ont un coût élevé et ils sont faussés par exemple par la présence d'ARNases et d'ADNases ainsi que d'agents interagissant avec l'ADN. Le brevet WO 96/38478 mentionne un procédé de détection de composés qui ont la capacité à inhiber l'association d'une sous-unité sigma avec l'ARN polymérase de Mycobacterium tuberculosis, laquelle méthode comprend la mise en contact d'un composé, avec la sous-unité sigma et l'ARN polymérase et la détection du complexe formé entre l'ARN polymérase et la sous-unité sigma. Dans ce cas, la méthode de détection a lieu par chromatographie ou par immunoprécipitation selon Lesley et al (1989) mais ces techniques de détection ne sont pas assez rapides pour faire du criblage haut débit. A ce jour, aucun des procédés de criblage à haut débit de l'art antérieur ne permet de mettre en évidence un composé qui affecte spécifiquement une étape de la transcription pour laquelle il n'y a pas encore d'inhibiteur précédemment décrit. A ce jour, aucun des procédés de l'art antérieur ne permet la mise en évidence facile de modulateurs de la liaison entre le facteur sigma et l'ARN polymérase, lesquels ne peuvent pas être mis en évidence par transcription in vitro. En effet, lors de la transcription in vitro, le complexe entre le facteur sigma et l'ARN polymérase étant déjà formé, il n'est pas possible de déterminer des modulateurs de la liaison entre les deux molécules car cette liaison a déjà eu lieu, avant l'intervention des modulateurs potentiels. Or, l'invention permet notamment d'apporter une solution à ces problèmes. Le but de l'invention est de fournir un nouveau procédé rapide et industriellement applicable permettant le criblage de produits intervenant au cours de la transcription. Le but de l'invention est de fournir un tel procédé qui soit utilisable dans le cadre d'un criblage à haut débit. Le but de l'invention est de fournir un nouveau test de complexation dans lequel les ARNases et les ADNases n'interfèrent pas avec la mesure de l'activité transcriptionnelle, en dégradant la matrice d'ADN ou l'ARN produit. Le but de l'invention est de fournir un nouveau procédé qui, en ciblant l'interface de complexation entre deux protéines, par exemple l'ARN polymérase et le facteur sigma, permet de limiter les risques de résistance par mutation de la cible. L'invention concerne un procédé de détection d'un composé modulateur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription, dans lequel : - on incube un mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, l'étape d'incubation étant effectuée dans des conditions permettant : * la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la susdite protéine et, . la formation d'une liaison d'une part entre le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, - on détecte, par un test de complexation, la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine par rapport à une valeur de contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout modulateur, et - on en déduit, lorsqu'il y a une variation significative telle que définie ci-dessus, qu'il y a eu liaison entre d'une part le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, ce qui se traduit par une modulation de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. Par"protéine intervenant au cours de la transcription", on désigne tout facteur protéique qui interagit physiquement avec l'ARN polymérase (a2, ss, ss') et modifie son activité transcriptionnelle. On désigne par"composé modulateur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription" : - soit un composé qui provoque une diminution de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, - soit au contraire un composé qui provoque une augmentation de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. Dans ce qui suit, on désigne par partenaires les deux éléments qui constituent le complexe. On désigne par premier partenaire celui qui apparaît en premier lieu dans le mélange et par deuxième partenaire celui qui intervient chronologiquement après le premier partenaire. Dans le cas très particulier de l'addition simultanée des deux éléments qui constituent le complexe, il va de soi que les deux partenaires correspondent indifféremment au premier partenaire et au deuxième partenaire. Par"test de complexation", on comprend une technique de révélation quantitative du complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. De façon avantageuse, ce test implique le marquage moléculaire d'au moins un des partenaires, à savoir l'ARN polymérase et/ou ladite protéine, par une substance. Ce marquage permet une mesure physique quantitative directe ou indirecte, par émission ou consommation de signal, spontanément ou après addition d'un substrat ou d'un signal. De façon avantageuse, ce test n'implique pas la présence, pour le complexe formé entre l'ARN polymérase et ladite protéine, d'une propriété physico-chimique particulière, telle que la taille moléculaire ou le point iso-électrique. Par conséquent, ce test est différent d'une chromatographie, qu'il s'agisse d'une technique par filtration/exclusion ou par effet de charge. Le marquage, tel que mentionné ci-dessus, peut s'effectuer en utilisant notamment un élément radioactif, un élément fluorescent, un élément luminescent, une enzyme, de la biotine pour une révélation indirecte par de l'avidine marquée, etc... Dans un mode de réalisation particulier, lorsque les deux partenaires, à savoir l'ARN polymérase et ladite protéine, peuvent être marqués par des substances capables entre elles d'échanges énergétiques (transferts), la détermination de la quantité de complexe (ou de sa variation) peut être faite en solution ; la formation du complexe s'accompagne du rapprochement des deux partenaires, ce qui permet le transfert d'énergie entre les deux marqueurs et entraîne alors une augmentation ou une diminution de l'intensité du signal de fluorescence émis par l'un des deux marqueurs. Dans un autre mode de réalisation, seul l'un des partenaires est marqué et l'autre est immobilisé sur une phase solide, soit préalablement à la mise en contact avec le partenaire marqué, soit ultérieurement. L'immobilisation peut être de nature physico- chimique, comme par exemple, par adsorption sur une surface plastique hydrophobe, ou de nature bio-spécifique : dans ce cas, un attracteur biologique, qui peut être un anticorps spécifique de l'un des partenaires ou de l'avidine capable d'immobiliser le partenaire préalablement revêtu de biotine, est lui-même préalablement immobilisé. Dans tous les cas, c'est le second partenaire qui permet de déterminer la quantité de complexe ou la variation de quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et ladite protéine par révélation quantitative de son marqueur, qui peut avoir été fixé par liaison chimique permanente (élément radioactif, élément fluorescent, élément luminescent, enzyme, biotine...) ou être introduit de façon bio-spécifique. Dans ce cas, il est possible d'utiliser un anticorps dirigé contre le second partenaire s'il est marqué directement ou indirectement ou bien de l'avidine marquée directement ou indirectement. Par ailleurs, ce test est également indépendant des techniques immunologiques dites ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) puisqu'il utilise un anticorps uniquement pour révéler l'un des partenaires d'une interaction bio-spécifique à laquelle cet anticorps est étranger. Ce test repose sur l'interaction entre l'ARN polymérase et ladite protéine, contrairement à un test ELISA, qui repose sur une interaction antigèneanticorps. De plus, dans ce test, l'anticorps est uniquement utilisé pour la détection et peut être remplacé, par exemple, par un marqueur fluorescent ou radioactif. Ce test est également différent d'une immunoprécipitation car l'anticorps n'est pas utilisé pour immunoprécipiter un complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription : il sert soit à capturer ce complexe sur une phase solide, soit à révéler l'un des partenaires du complexe. Pour obtenir la valeur de contrôle, correspondant à une absence de modulation, on effectue l'expérience suivante : - on incube un mélange comprenant l'ARN polymérase et une protéine telle que définie ci-dessus dans des conditions permettant la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la susdite protéine, et - on détecte la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine ; cette quantité correspondant à ladite valeur de contrôle. Par"variation significative de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription", on désigne une variation d'environ plus de 20% de la quantité de complexe formé, et de préférence d'au moins environ 50%. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel le composé modulateur est un composé activateur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription, et dans lequel : - on incube un mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, l'étape d'incubation étant effectuée dans des conditions permettant : . la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la susdite protéine et, * éventuellement la formation d'une liaison d'une part entre le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, - on détecte, par un test de complexation, la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine par rapport à une valeur de contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout activateur, et - on en déduit, lorsqu'il y a une variation significative telle que définie ci-dessus, qu'il y a eu liaison entre d'une part le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, ce qui se traduit par une activation de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. Par"composé activateur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription", on désigne un composé qui provoque une augmentation de la quantité de complexe. Ledit composé activateur provoque une complexation supérieure, c'est-à-dire une augmentation d'au moins 120% et de préférence supérieure à 150% par rapport au contrôle (pourcentage de 100%) correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout activateur. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel le composé modulateur est un composé inhibiteur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription, et dans lequel : - on incube un mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, l'étape d'incubation étant effectuée dans des conditions permettant : . la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la susdite protéine et, . éventuellement la formation d'une liaison d'une part entre le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, - on détecte, par un test de complexation, la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine par rapport à une première valeur de contrôle et/ou à une deuxième valeur de contrôle, l'une de ces valeurs contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout inhibiteur et l'autre de ces valeurs contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en présence d'un inhibiteur de référence, et - on en déduit, lorsqu'il y a une variation significative telle que définie ci-dessus, qu'il y a eu formation d'une liaison entre d'une part le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, ce qui se traduit par une inhibition de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. Par"composé inhibiteur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription", on désigne un composé qui provoque la diminution de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. Pour obtenir la première valeur de contrôle, on effectue l'expérience telle que décrite ci-dessus, correspondant à une absence d'inhibition. Pour obtenir la deuxième valeur de contrôle, correspondant à une inhibition de référence, on effectue l'expérience suivante : - on incube un mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine telle que définie ci-dessus et l'inhibiteur de référence, l'étape d'incubation étant effectuée dans des conditions permettant : . la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la susdite protéine et, . la formation d'une liaison entre l'inhibiteur de référence et l'ARN polymérase, - on détecte la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine ; cette quantité correspondant à la deuxième valeur de contrôle. Cette quantité sera inférieure à celle mesurée lors du premier contrôle en raison de la formation du complexe entre l'inhibiteur de référence et l'ARN polymérase et de sa conséquence négative sur la formation dudit complexe. L'inhibiteur de référence est par exemple un anticorps monoclonal, notamment l'anticorps monoclonal 3E10 (cf exemple). Un procédé de détection avantageux est un procédé de détection tel que défini cidessus comportant l'utilisation d'une seule valeur de contrôle, correspondant à l'incubation d'ARN polymérase seule avec la protéine intervenant au cours de la transcription en l'absence de tout inhibiteur (ce qui correspond à une absence d'inhibition). Pour obtenir cette valeur de contrôle, correspondant à une absence d'inhibition, on effectue l'expérience telle que décrite ci-dessus, qui comprend l'incubation d'ARN polymérase seule avec la protéine intervenant au cours de la transcription. Un procédé de détection avantageux est un procédé tel que défini ci-dessus, comportant l'utilisation de deux valeurs contrôle, l'une correspondant à l'incubation d'ARN polymérase seule avec la protéine intervenant au cours de la transcription en l'absence de tout inhibiteur (ce qui correspond à une absence d'inhibition) et l'autre correspondant à une incubation de l'ARN polymérase avec la protéine intervenant au cours de la transcription et avec un inhibiteur de référence (ce qui correspond à une inhibition de référence). Pour obtenir les deux valeurs contrôle, on effectue les deux expériences telles que décrites ci-dessus ; la première est obtenue en détectant la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription en l'absence d'inhibiteur et la deuxième en détectant la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription en présence de l'inhibiteur de référence. Un procédé de détection avantageux est un procédé tel que défini ci-dessus, en phase solide, comportant l'utilisation d'une première valeur de contrôle et/ou d'une deuxième valeur de contrôle et/ou d'une troisième valeur de contrôle, l'une correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout inhibiteur, l'autre correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en présence d'un inhibiteur de référence, et l'autre correspondant : - soit à l'absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, résultant de la mise en présence de la protéine intervenant au cours de la transcription fixée sur un support, de l'ARN polymérase et d'un excès de protéine intervenant au cours de la transcription, l'excès de protéine intervenant au cours de la transcription étant de préférence préalablement incubé avec l'ARN polymérase, l'absence du susdit complexe correspondant à une inhibition totale de la complexation entre l'ARN polymérase et la susdite protéine, - soit à l'absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, résultant de la présence seule d'ARN polymérase et de l'absence de protéine intervenant au cours de la transcription. Par procédé en phase solide, on désigne un procédé où l'un des partenaires, à savoir l'ARN polymérase ou la protéine intervenant au cours de la transcription, est immobilisé de façon covalente (réaction chimique) ou non covalente (adsorbtion non spécifique sur plastique, système avidine-biotine, anticorps) sur un support solide. Le second partenaire est incubé dans des conditions permettant la complexation entre les deux partenaires puis l'excès du second partenaire est éventuellement éliminé par lavage. Le complexe est ensuite soumis au procédé de détection. Pour obtenir la première valeur de contrôle, on effectue l'expérience telle que décrite ci-dessus, correspondant à une absence d'inhibition. Pour obtenir la deuxième valeur de contrôle, correspondant à une inhibition de référence, on détecte la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, en présence de l'inhibiteur de rrr référence. Pour obtenir la troisième valeur de contrôle, correspondant à une inhibition de référence, - soit on effectue l'expérience suivante correspondant à une incubation d'un support sur lequel est fixée la protéine intervenant au cours de la transcription avec de l'ARN polymérase et un excès de la protéine intervenant au cours de la transcription, l'excès de ladite protéine étant de préférence préincubé avec l'ARN polymérase, et qui provoque une inhibition totale de la complexation entre l'ARN polymérase et la susdite protéine, c'est-à-dire une absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine, - soit on effectue l'expérience suivante correspondant à une incubation d'un support avec l'ARN polymérase seule, ce qui entraîne une absence totale de la complexation entre l'ARN polymérase et la susdite protéine, c'est-à-dire une absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine. Un procédé de détection avantageux est un procédé tel que défini ci-dessus, en phase liquide, comportant l'utilisation d'une première valeur de contrôle et/ou d'une deuxième valeur de contrôle et/ou d'une troisième valeur de contrôle, l'une correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout inhibiteur, l'autre correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en présence d'un inhibiteur de référence, et l'autre correspondant à l'absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, résultant de la mise en présence de l'ARN polymérase, d'un excès de protéine non marquée intervenant au cours de la transcription et de ladite protéine marquée, l'absence du susdit complexe correspondant à une inhibition totale de la complexation entre l'ARN polymérase et la susdite protéine. Par procédé en phase liquide, on désigne un procédé où les partenaires sont en solution dans une solution tampon. L'un des partenaires ou les deux sont, par exemple, marqués avec une molécule fluorescente. Leur interaction est quantifiée par transfert ou polarisation de fluorescence. Pour obtenir la première valeur de contrôle, on effectue l'expérience telle que décrite ci-dessus, correspondant à une absence d'inhibition. Pour obtenir la deuxième valeur de contrôle, correspondant à une inhibition de référence, on détecte la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, en présence de l'inhibiteur de trr référence. Pour obtenir la troisième valeur de contrôle, correspondant à une inhibition de référence, on effectue l'expérience suivante correspondant à une incubation d'ARN polymérase, d'un excès de protéine non marquée intervenant au cours de la transcription et de la protéine intervenant au cours de la transcription, ce qui provoque une inhibition totale de la complexation entre l'ARN polymérase et la susdite protéine, c'est-à-dire une absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine. Un procédé de détection avantageux est un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel le mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et un composé soumis au procédé de détection est préparé : - soit en ajoutant simultanément l'ARN polymérase, la protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, - soit en ajoutant successivement : l'ARN polymérase, le composé soumis au procédé de détection et la protéine intervenant au cours de la transcription, ou successivement : la protéine intervenant au cours de la transcription, le composé soumis au procédé de détection et l'ARN polymérase, - soit en ajoutant ledit composé préalablement incubé avec l'ARN polymérase ou ladite protéine, et respectivement soit ladite protéine soit l'ARN polymérase, - soit en ajoutant ledit composé et l'ARN polymérase préalablement incubé avec ladite protéine. La préparation du mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et un composé soumis au procédé de détection en ajoutant simultanément l'ARN polymérase, la protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, peut permettre de rechercher les composés qui se lient à un complexe entre l'ARN polymérase et ladite protéine et qui dissocient le susdit complexe ainsi que les composés liant seulement l'un des deux partenaires, mais suffisamment efficaces pour entrer en compétition avec un complexe préformé. La préparation du mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et un composé soumis au procédé de détection en ajoutant successivement : l'ARN polymérase, le composé soumis au procédé de détection et la protéine intervenant au cours de la transcription, peut permettre de faciliter la détection de composés qui lient l'ARN polymérase. Ce mode de réalisation peut permettre de sélectionner, outre les ligands de l'ARN polymérase, les meilleurs ligands de ladite protéine qui sont, dans ce cas, désavantagés du point de vue cinétique. La préparation du mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et un composé soumis au procédé de détection en ajoutant successivement : la protéine intervenant au cours de la transcription, le composé soumis au procédé de détection et l'ARN polymérase, peut favoriser la détection de composés qui lient la molécule intervenant au cours de la transcription ainsi que la recherche de très bons ligands de l'ARN polymérase qui sont défavorisés du point de vue cinétique. La préparation du mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et un composé soumis au procédé de détection en ajoutant ledit composé préalablement incubé avec l'ARN polymérase à ladite protéine, peut faciliter la liaison dudit composé avec l'ARN polymérase avant l'ajout de la protéine intervenant au cours de la transcription. Ce mode de réalisation comprenant une préincubation peut favoriser la détection de molécules qui lient l'ARN polymérase. La préparation du mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et un composé soumis au procédé de détection en ajoutant ledit composé préalablement incubé avec ladite protéine à l'ARN polymérase, permet de faciliter la liaison entre ledit composé et la protéine intervenant au cours de la transcription avant l'ajout de l'ARN polymérase. Ce mode de réalisation peut favoriser la détection de molécules qui lient ladite protéine. La préparation du mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et un composé soumis au procédé de détection en ajoutant ledit composé et l'ARN polymérase préalablement incubée avec ladite protéine, permet de détecter les composés qui favorisent la dissociation du complexe formé entre l'ARN polymérase et ladite protéine. L'invention concerne également un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel on dépose sur un support solide, avant, pendant ou après l'étape d'incubation, soit l'ARN polymérase soit la protéine intervenant au cours de la transcription. Ce dépôt peut être opéré par intervention d'un lien covalent (physico-chimique) ou biospécifique entre le support solide et l'ARN polymérase ou ladite protéine. Lorsqu'on dépose, avant l'étape d'incubation, l'ARN polymérase sur un support solide, il est possible que l'ARN polymérase soit dénaturée. Lorsqu'on dépose, avant l'étape d'incubation, la protéine intervenant au cours de la transcription sur un support solide, il est possible que ladite protéine soit dénaturée. Un procédé de détection avantageux de l'invention est un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel on ajoute simultanément, non préalablement mélangés, l'ARN polymérase et le composé soumis au procédé de détection, à la protéine intervenant au cours de la transcription déposée sur un support. Ce mode de réalisation peut permettre de détecter à la fois les ligands de la protéine intervenant au cours de la transcription, ceux de l'ARN polymérase et également ceux du complexe formé entre ladite protéine et l'ARN polymérase. Ce mode de réalisation est très stringent pour les molécules qui inhibent l'association entre l'ARN polymérase et ladite protéine et peut également permettre de rechercher des composés qui dissocient le complexe formé entre l'ARN polymérase et ladite protéine. Un procédé de détection avantageux de l'invention est un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel on ajoute le composé soumis au procédé de détection préalablement incubé avec l'ARN polymérase à la protéine intervenant au cours de la transcription déposée sur un support. Ce mode de réalisation peut permettre de détecter à la fois les ligands de la protéine intervenant au cours de la transcription, ceux de l'ARN polymérase et également ceux du complexe formé entre ladite protéine et l'ARN polymérase. Ce mode de réalisation peut faciliter la liaison dudit composé avec l'ARN polymérase mais peut également servir à sélectionner les meilleurs ligands de ladite protéine qui sont, dans ce cas, cinétiquement désavantagés. Un procédé de détection avantageux de l'invention est un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel on ajoute simultanément, non préalablement mélangés, la protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, à l'ARN polymérase déposée sur un support. Ce mode de réalisation peut permettre de détecter à la fois les ligands de la protéine intervenant au cours de la transcription, ceux de l'ARN polymérase et également ceux du complexe formé entre ladite protéine et l'ARN polymérase. Ce mode de réalisation est très stringent pour les molécules qui inhibent l'association entre l'ARN polymérase et ladite protéine et peut également permettre de rechercher des composés qui dissocient le complexe formé entre l'ARN polymérase et ladite protéine. Un procédé de détection avantageux de l'invention est un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel on ajoute le composé soumis au procédé de détection préalablement incubé avec la protéine intervenant au cours de la transcription à l'ARN polymérase déposée sur un support. Ce mode de réalisation peut permettre de détecter à la fois les ligands de la protéine intervenant au cours de la transcription, ceux de l'ARN polymérase et également ceux du complexe formé entre ladite protéine et l'ARN polymérase. Ce mode de réalisation peut faciliter ainsi la liaison dudit composé avec ladite protéine avant l'incubation avec l'ARN polymérase et permet de rechercher des ligands de ladite protéine. Il peut servir à sélectionner les meilleurs ligands de l'ARN polymérase qui sont, dans ce cas, cinétiquement désavantagés. Un procédé de détection avantageux est un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel on ajoute l'un après l'autre le composé soumis au procédé de détection et l'ARN polymérase à la protéine intervenant au cours de la transcription déposée sur un support. Le dépôt de la protéine intervenant au cours de la transcription sur un support puis l'addition successive du composé soumis au procédé de détection et l'ARN polymérase, peut permettre de détecter les composés inhibant uniquement la protéine intervenant au cours de la transcription. En effet, si le composé tel que défini ci-dessus ne se fixe pas sur la protéine telle que définie ci-dessus, il est éliminé lors du lavage qui a eu lieu avant l'addition de l'ARN polymérase. Un procédé de détection avantageux est un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel on ajoute l'un après l'autre le composé soumis au procédé de détection et la protéine intervenant au cours de la transcription à l'ARN polymérase déposée sur un support. Le dépôt de l'ARN polymérase sur un support puis l'addition successive du composé soumis au procédé de détection et de la protéine intervenant au cours de la transcription, peut permettre de détecter les composés inhibant uniquement l'ARN polymérase. En effet, si le composé tel que défini ci-dessus ne se fixe pas sur l'ARN polymérase, il est éliminé lors du lavage qui a lieu avant l'addition de la protéine telle que définie ci-dessus. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel, au moment de l'étape d'incubation de l'ARN polymérase avec une protéine intervenant au cours de la transcription et avec un composé soumis au procédé de détection, une liaison se forme : - soit entre ledit composé et entre l'ARN polymérase, - soit entre ledit composé et entre ladite protéine, - soit entre ledit composé, entre ladite protéine et entre l'ARN polymérase. Lorsqu'une liaison se forme entre ledit composé et entre l'ARN polymérase, si le composé soumis au procédé de détection se fixe dans la région du site de complexation de ladite protéine, ledit composé empêche la protéine intervenant au cours de la transcription de se complexer à l'ARN polymérase tandis que la fixation dudit composé à côté du site de complexation de ladite protéine entraîne un changement de conformation et empêche également la complexation entre ladite protéine et l'ARN polymérase. Lorsqu'une liaison se forme entre ledit composé et entre ladite protéine, si ledit composé se fixe dans la région du site de complexation de l'ARN polymérase, ledit composé empêche l'ARN polymérase de se complexer à ladite protéine tandis que la fixation dudit composé à côté du site de complexation de l'ARN polymérase entraîne un changement de conformation et empêche également la complexation entre ladite protéine et l'ARN polymérase. Lorsqu'une liaison se forme entre ledit composé, entre ladite protéine et entre l'ARN polymérase, soit ledit composé lie l'ARN polymérase engagée dans le complexe avec ladite protéine et favorise la dissociation, soit le composé lie ladite protéine, change sa conformation et force la dissociation. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel, au cours de l'étape de détection de la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, on utilise un anticorps anti-ARN polymérase. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel la protéine intervenant au cours de la transcription a un poids moléculaire supérieur à environ 15 kDa ou est une protéine de fusion entre une protéine de poids moléculaire inférieur à 15 kDa et une autre protéine, telle que la GST (glutathione S transférase). Des exemples de telles protéines comprennent notamment des domaines du facteur sigma sous forme de fusion GST, et les protéines Gp33 ou 55 du bactériophage T4 sous forme de fusion GST. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel les concentrations de l'ARN polymérase sont comprises d'environ 1 fmole à environ 100 pmole/essai, notamment d'environ 1 fmole à environ 10 pmole/essai, celles de la protéine intervenant au cours de la transcription d'environ 10 fmole à environ 500 pmole/essai et celles du composé soumis au procédé de détection d'environ 1 pM à environ 1 uM, notamment d'environ 1 nM à environ 1 u. M. Les gammes de concentrations inférieures à la concentration la plus faible correspondent à la limite de détection tandis que les gammes de concentrations supérieures à la concentration la plus forte favorisent une liaison non spécifique et demandent trop de quantité de protéine, ce qui est très défavorable concernant les concentrations de composé soumis au procédé de détection, qu'il est nécessaire d'ajouter pour observer l'effet inhibiteur. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel l'ARN polymérase utilisée provient de cellules procaryotes, notamment d'E. coli. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel la protéine intervenant au cours de la transcription intervient soit au cours de l'étape d'initiation de la transcription, soit au cours de l'étape d'élongation, soit au cours de l'étape de terminaison de la transcription. Par"intervenant au cours de l'étape d'initiation de la transcription", on entend une protéine qui se lie à l'ARN polymérase, lui confère une spécificité pour un promoteur et permet l'initiation de la transcription. Des exemples de protéines intervenant au cours de l'initiation sont notamment la famille des facteurs sigma, notamment le facteur sigma 70, ainsi que les protéines Gp33, Gp45 et Gp55 du bactériophage T4. Par"intervenant au cours de l'étape d'élongation de la transcription", on entend une protéine qui se lie à l'ARN polymérase et change sa vitesse d'élongation. Des exemples de protéines intervenant au cours de l'élongation sont notamment les protéines NusA, greA et greB. Par"intervenant au cours de l'étape de terminaison de la transcription", on entend une protéine qui change le site de terminaison de la transcription. Des exemples de protéines intervenant au cours de la terminaison sont notamment les protéines NusA, NusB, NusG, Rho ou la protéine N du bactériophage lambda. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel la protéine intervenant au cours de la transcription est : - soit la protéine a0 ou une protéine équivalente, Par protéine équivalente, on comprend toute protéine qui lie l'ARN polymérase, lui confère une spécificité pour un promoteur et permet l'initiation. - soit la protéine NusA ou une protéine équivalente, Par protéine équivalente, on comprend toute protéine ayant entre 22 et 100% d'identité de séquence avec celle de la protéine NusA d'E. coli (Swiss Prot P03003). - soit des fragments d'une de ces deux protéines, - soit une de ces deux protéines sous forme de protéine de fusion, - soit des fragments d'une de ces deux protéines sous forme de protéine de fusion. L'invention concerne un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel : - on adsorbe la protéine intervenant au cours de la transcription sur un support, - on incube ledit support avec l'ARN polymérase et avec le composé soumis au procédé de détection, ce qui conduit à la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et ladite protéine et la formation éventuelle d'une liaison entre l'ARN polymérase et le susdit composé, - on incube ledit support avec un anticorps anti-ARN polymérase, - on détecte, par un test de complexation, la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine par rapport à une valeur de contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout modulateur, et - on en déduit, lorsqu'il y a une variation significative telle que définie ci-dessus, qu'il y a eu formation d'une liaison entre le susdit composé et l'ARN polymérase, ce qui correspond à une modulation de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. Par"modulation de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription", on comprend à la fois l'activation et l'inhibition de ladite complexation. L'invention concerne également un procédé de détection tel que défini ci-dessus, dans lequel : - on adsorbe la protéine intervenant au cours de la transcription sur un support, - on incube ledit support avec l'ARN polymérase et avec le composé soumis au procédé de détection, ce qui conduit à la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et ladite protéine et la formation éventuelle d'une liaison entre l'ARN polymérase et le susdit composé, - on incube ledit support avec un anticorps anti-ARN polymérase, - on détecte, par un test de complexation, la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine par rapport à une valeur de contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout inhibiteur, et - on en déduit, lorsqu'il y a une variation significative telle que définie ci-dessus, qu'il y a eu formation d'une liaison entre le susdit composé et l'ARN polymérase, ce qui correspond à une inhibition de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. L'invention concerne un kit ou une trousse de détection d'un composé modulateur, notamment d'un composé inhibiteur, de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription comprenant : - une ou des protéines intervenant au cours de la transcription, ladite protéine pouvant être sous forme de protéine de fusion et étant notamment : - soit la protéine a0 ou une protéine équivalente, - soit la protéine NusA ou une protéine équivalente, - soit des fragments d'une de ces deux protéines, - FARN polymérase, - des milieux ou des tampons nécessaires à la dilution, - éventuellement des moyens de lavage, - des milieux ou des tampons permettant la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription et la formation d'une liaison entre l'ARN polymérase et le composé modulateur, - des moyens de détection de la variation de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et entre la protéine intervenant au cours de la transcription. L'invention concerne également un kit ou une trousse de détection d'un composé inhibiteur, de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription comprenant : - une ou des protéines intervenant au cours de la transcription, - l'ARN polymérase, - des milieux ou des tampons nécessaires à la dilution, - des moyens de lavage, - des milieux ou des tampons permettant la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription et la formation d'une liaison entre l'ARN polymérase et le composé inhibiteur, - des moyens de détection de la variation de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et entre la protéine intervenant au cours de la transcription. Les milieux ou les tampons nécessaires à la dilution sont par exemple : - du PBS (137 mM NaCI, 2, 7 mM KCI, 4, 3 mM Na2HPO4, 1, 4 mM K2HPO4), - du PBS Tween BSA (0, 1% Tween 20, 1% BSA dans du PBS), Un moyen de lavage approprié est par exemple du PBS Tween (0, 1% Tween dans du PBS). Ainsi, on effectue trois lavages avec du PBS Tween. Les moyens de détection de la variation de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et entre la protéine intervenant au cours de la transcription s'effectuent par exemple en utilisant : - un anticorps antipolymérase fluorescent, ou - un anticorps antipolymérase marqué à la phosphatase alcaline ou à la peroxydase, ou - de la polymérase biotinylée, ou - un anticorps radiomarqué ou des protéines radiomarquées. L'invention concerne un kit ou une trousse de détection tels que définis ci-dessus, qui comprend un support sur lequel est adsorbée la protéine intervenant au cours de la transcription, ladite protéine pouvant être sous forme de protéine de fusion et étant notamment : - soit la protéine cy ou une protéine équivalente, - soit la protéine NusA ou une protéine équivalente, - soit des fragments d'une de ces deux protéines, L'invention concerne un kit ou une trousse de détection tels que définis ci-dessus, qui comprend un support sur lequel est adsorbée l'ARN polymérase. PARTIE EXPERIMENTALE L'invention a pour objet une nouvelle méthode qui permet le criblage d'une zone d'interaction de deux protéines indispensables à la vie de la cellule afin de limiter les résistances par mutation de la cible. L'invention a pour objet le criblage de banques de produits chimiques de synthèse ou de produits naturels, même contaminés par des activités RNases ou DNases. MATERIEL ET METHODES Détection de la liaison sigma70-polymérase Les protéines sigma70 et l'ARN polymérase d'E. coli sont exprimées et purifiées dans des conditions standards (Burgess et al., Biochemistry, 1975, Oct 21 ; 14 (21) : 4634-8 ; Burgess R., Methods Enzymol 1996 ; 273 : 145-9). La protéine sigma70 est stockée à-80 C dans (20 mM tris HCI pH 8 ; 5 M chlorure de guanidine ; 10 mM ss- mercaptoéthanol ; 50% de glycérol à une concentration de 100 uM). L'ARN polymérase minimum est stockée à-80 C dans (20 mM tris HCI pH 8,100 mM KCI, 10 mM ss-mercaptoéthanol, 50% glycérol) à une concentration de 1 uM. L'anticorps monoclonal antipolymérase a été obtenu et purifié par des techniques classiques (Short Protocols in Molecular Biology 2 d edition, John Wiley & Son) puis a été couplé chimiquement à la peroxydase activée (Boehringer Mannheim Biochemica réf. 1428861) selon les recommandations du fournisseur. Le test est basé sur l'adsorption de sigma70 sur une plaque d'ELISA pendant 12 heures à 4 C (6 pmoles de protéine diluée dans 100 ul de PBS par puits, sur des plaques Nunc-immuno plate, Maxisorp. ). Les dilutions de protéine et les tampons ont été optimisés pour réduire la liaison non spécifique de l'ARN polymérase. Après lavage de la plaque avec du PBS 0, 1% tween20, la plaque est saturée avec 200 ul de PBS 0, 1% tween20, 1% BSA puis est incubée pendant 1 heure à température ambiante avec de l'ARN polymérase d'E. coli (0,25 pmole d'ARN polymérase minimum dans 100 ul de PBS 0,1% tween 20,1% BSA, 10 mM MgCh) en présence ou en l'absence d'un inhibiteur éventuel. La plaque est ensuite lavée puis est incubée avec un anticorps antiARN polymérase couplé à la peroxydase pendant 30 minutes à température ambiante. Le complexe sigma70-ARN polymérase anticorps est détecté avec un substrat de la peroxydase, l'O-phénylènediamine, ou un autre moyen approprié. Alternativement, un autre protocole a été utilisé. Ce test est basé sur l'adsorption d'ARN polymérase minimum sur une plaque d'ELISA pendant 12 heures à 4 C (0, 5 pmoles de protéine diluée dans 100 u. l de PBS par puits sur des plaques Nunc-immuno plate Maxisorp). Après lavage de la plaque avec du PBS 0, 1% tween20, la plaque est saturée avec 200 jul de PBS 0, 1% tween20, 1% BSA, puis est incubée pendant 1 heure à température ambiante avec sigma70 comportant une étiquette polyhistidine C-terminale (1 pmole de sigma70 dans 100 u. l de PBS 0,1% tween20, 1% BSA, 10 mM MgCl2) en présence ou en l'absence d'un inhibiteur éventuel. La plaque est ensuite lavée puis est incubée avec un anticorps étiquette polyhistidine couplé à la peroxydase (Sigma réf. A7058 dilué au 1/2000 (v/v)) pendant 30 minutes à température ambiante. Le complexe sigma70-ARN polymérase anticorps est détecté avec un substrat de la peroxydase, 1'0- phénylènediamine ou un autre moyen approprié. Détection de la liaison NusA-polymérase Le gène codant pour la protéine NusA et comportant une étiquette polyhistidine C-terminale a été cloné dans un vecteur de type pet21. Après transfection dans des cellules BL21lamdaDE3, les cellules sont cultivées dans du milieu LB à 37 C sous agitation forte. La production de protéine est induite par l'addition de 1 mM IPTG. Après 3 heures de culture, les cellules sont récupérées par centrifugation et sont lysées selon (Burgess et al., Biochemistry, 1975 Oct 21 ; 14 (21) : 4634-8). Après centrifugation, le surnageant est passé sur une colonne de Ni NTA agarose (Quiagen) selon les recommandations du fournisseur. La protéine NusA est stockée à-80 C dans (20 mM tris HCI pH 8 ; 5 M chlorure de guanidine ; 10 mM ss-mercaptoéthanol ; 50% glycérol) à une concentration de 100 uM. Le test est basé sur l'adsorption de NusA sur une plaque d'ELISA pendant 12 heures à 4 C (6 pmoles de protéine diluée dans 100 uf de PBS par puits sur des plaques Nunc-immuno plate, Maxisorp. ). Les dilutions de protéine et les tampons ont été optimisés pour réduire la liaison non spécifique de l'ARN polymérase. Après lavage de la plaque avec du PBS 0, 1% tween20, la plaque est saturée avec 200pli de PBS 0, 1% tween20, 1% BSA, puis est incubée pendant 1 heure à température ambiante avec de l'ARN polymérase d'coli (0, 25 pmole d'ARN polymérase minimum dans 100 ui de PBS 0, 1% tween20, 1% BSA, 10 mM MgCl2) en présence ou en l'absence d'un inhibiteur éventuel. La plaque est ensuite lavée puis est incubée avec un anticorps antiARN polymérase couplé à la peroxydase pendant 30 minutes à température ambiante. Le complexe sigma70-ARN polymérase-anticorps est détecté avec un substrat de la peroxydase, l'O-phénylènediamine, ou un autre moyen approprié. PREPARATION DE L'INHIBITEUR DE REFERENCE Les souris sont immunisées avec de l'ARN polymérase d'E. coli. Après 3 rappels avec 100 ug, 50 u. g et 10 ug d'ARN polymérase en présence d'adjuvant complet de Freund, les lymphocytes immunitaires de la rate sont fusionnés avec les cellules du lymphome. Un groupe de 9 anticorps monoclonaux est sélectionné par ELISA en utilisant de l'ARN polymérase déposée sur des plaques. La production d'anticorps monoclonaux à partir de fluide ascite est effectuée selon les protocoles standards (Short Protocols in Molecular Biology). Les anticorps sont purifiés par chromatographie d'affinités sur une colonne de protéine A-sépharose selon la référence"Short Protocols in Molecular Biology". Ce résultat est confirmé par ELISA en utilisant du sigma70 déposé sur la plaque et incubé avec de l'ARN polymérase (0,1 pmole/point) en présence d'un excès de l'anticorps 3E10. La liaison de l'ARN polymérase avec le sigma70 déposé sur la plaque est détectée avec un anticorps monoclonal anti-ARN polymérase conjugué à de la peroxydase de raifort. REFERENCES - Burgess et al. (1969) Nature 221, 43-44, - Burgess et al. (1975) Biochemistry, Oct 21 ; 14 (21) : 4634-8, - Burgess (1996) Methods Enzymol 273 : 145-9, - Courvalin (1996) Antimicrob Chemother 37,855-69, - Kolesky et al. (1999) J Mol Bio1291, 267-81, - Lesley et al. (1989) Biochemistry 28,7728-7734, -Reznikoffet al. (1985) Annu. Rev. Genet. 19, 355-387, - Wu et al. (1997) Analytical Biochemistry 245, 226-230, - Yang et al. (1995) JBiol Chem 270,23930-3, - Short Protocols in Molecular Biology, 2nd Edition, John Wiley & Son. REVENDICATIONS 1. Procédé de détection d'un composé modulateur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription, dans lequel : - on incube un mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, l'étape d'incubation étant effectuée dans des conditions permettant : . la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la susdite protéine et, * la formation d'une liaison d'une part entre le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, - on détecte, par un test de complexation, la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine par rapport à une valeur de contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout modulateur, et - on en déduit, lorsqu'il y a une variation significative telle que définie ci-dessus, qu'il y a eu liaison entre d'une part le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, ce qui se traduit par une modulation de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. 2. Procédé de détection selon la revendication 1, dans lequel le composé modulateur est un composé activateur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription, et dans lequel : - on incube un mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, l'étape d'incubation étant effectuée dans des conditions permettant : . la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la susdite protéine et, 'éventuellement la formation d'une liaison d'une part entre le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, - on détecte, par un test de complexation, la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine par rapport à une valeur de contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout activateur, et - on en déduit, lorsqu'il y a une variation significative telle que définie ci-dessus, qu'il y a eu liaison entre d'une part le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, ce qui se traduit par une activation de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. 3. Procédé de détection selon la revendication 1, dans lequel le composé modulateur est un composé inhibiteur de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription, et dans lequel : - on incube un mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, l'étape d'incubation étant effectuée dans des conditions permettant : * la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la susdite protéine et, . éventuellement la formation d'une liaison d'une part entre le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, - on détecte, par un test de complexation, la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine par rapport à une première valeur de contrôle et/ou à une deuxième valeur de contrôle, l'une de ces valeurs contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout inhibiteur et l'autre de ces valeurs contrôle correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en présence d'un inhibiteur de référence, et - on en déduit, lorsqu'il y a une variation significative telle que définie ci-dessus, qu'il y a eu liaison entre d'une part le susdit composé et d'autre part l'ARN polymérase et/ou la protéine intervenant au cours de la transcription, ce qui se traduit par une inhibition de la complexation entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription. 4. Procédé de détection selon la revendication 3, comportant l'utilisation de deux valeurs contrôle, l'une correspondant à l'incubation d'ARN polymérase seule avec la protéine intervenant au cours de la transcription en l'absence de tout inhibiteur (ce qui correspond à une absence d'inhibition) et l'autre correspondant à une incubation de l'ARN polymérase avec la protéine intervenant au cours de la transcription et avec un inhibiteur de référence (ce qui correspond à une inhibition de référence). 5. Procédé de détection selon la revendication 3, en phase solide, comportant l'utilisation d'une première valeur de contrôle et/ou d'une deuxième valeur de contrôle et/ou d'une troisième valeur de contrôle, l'une correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout inhibiteur, l'autre correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en présence d'un inhibiteur de référence, et l'autre correspondant : - soit à l'absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, résultant de la mise en présence de la protéine intervenant au cours de la transcription fixée sur un support, de l'ARN polymérase et d'un excès de protéine intervenant au cours de la transcription, l'excès de protéine intervenant au cours de la transcription étant de préférence préalablement incubé avec l'ARN polymérase, l'absence du susdit complexe correspondant à une inhibition totale de la complexation entre l'ARN polymérase et la susdite protéine, - soit à l'absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, résultant de la présence seule d'ARN polymérase et de l'absence de protéine intervenant au cours de la transcription. 6. Procédé de détection selon la revendication 3, en phase liquide, comportant l'utilisation d'une première valeur de contrôle et/ou d'une deuxième valeur de contrôle et/ou d'une troisième valeur de contrôle, l'une correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en l'absence de tout inhibiteur, l'autre correspondant à la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la susdite protéine en présence d'un inhibiteur de référence, et l'autre correspondant à l'absence de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, résultant de la mise en présence de l'ARN polymérase, d'un excès de protéine non marquée intervenant au cours de la transcription et de ladite protéine marquée, l'absence du susdit complexe correspondant à une inhibition totale de la complexation entre l'ARN polymérase et la susdite protéine. 7. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 6, dans lequel le mélange comprenant l'ARN polymérase, une protéine intervenant au cours de la transcription et un composé soumis au procédé de détection est préparé : - soit en ajoutant simultanément l'ARN polymérase, la protéine intervenant au cours de la transcription et le composé soumis au procédé de détection, - soit en ajoutant successivement : l'ARN polymérase, le composé soumis au procédé de détection et la protéine intervenant au cours de la transcription, ou successivement : la protéine intervenant au cours de la transcription, le composé soumis au procédé de détection et l'ARN polymérase, - soit en ajoutant ledit composé préalablement incubé avec l'ARN polymérase ou ladite protéine, et respectivement soit ladite protéine soit l'ARN polymérase, - soit en ajoutant ledit composé et l'ARN polymérase préalablement incubée avec ladite protéine. 8. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 7, dans lequel on dépose sur un support solide, avant, pendant ou après l'étape d'incubation, soit l'ARN polymérase soit la protéine intervenant au cours de la transcription. 9. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 8, dans lequel, au moment de l'étape d'incubation de l'ARN polymérase avec une protéine intervenant au cours de la transcription et avec un composé soumis au procédé de détection, une liaison se forme : - soit entre ledit composé et entre l'ARN polymérase, - soit entre ledit composé et entre ladite protéine, - soit entre ledit composé, entre ladite protéine et entre l'ARN polymérase. 10. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 9, dans lequel, au cours de l'étape de détection de la variation significative éventuelle de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription, on utilise un anticorps anti-ARN polymérase. 11. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 10, dans lequel la protéine intervenant au cours de la transcription a un poids moléculaire supérieur à environ 15 kDa ou est une protéine de fusion entre une protéine de poids moléculaire inférieur à 15 kDa et une autre protéine telle que la GST (glutathione S transférase). 12. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 11, dans lequel les concentrations de l'ARN polymérase sont comprises d'environ 1 fmole à environ 100 pmole/essai, notamment d'environ 1 fmole à environ 10 pmole/essai, celles de la protéine intervenant au cours de la transcription d'environ 10 fmole à environ 500 pmole/essai et celles du composé soumis au procédé de détection d'environ 1 pM à environ 1 uM, notamment d'environ 1 nM à environ 1 uM. 13. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 12, dans lequel l'ARN polymérase utilisée provient de cellules procaryotes, notamment d'E. coli. 14. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 13, dans lequel la protéine intervenant au cours de la transcription intervient soit au cours de l'étape d'initiation de la transcription, soit au cours de l'étape d'élongation, soit au cours de l'étape de terminaison de la transcription. 15. Procédé de détection selon l'une des revendications 1 à 14, dans lequel la protéine intervenant au cours de la transcription est : - soit la protéine o0 ou une protéine équivalente, - soit la protéine NusA ou une protéine équivalente, - soit des fragments d'une de ces deux protéines, - soit une de ces deux protéines sous forme de protéine de fusion, - soit des fragments d'une de ces deux protéines sous forme de protéine de fusion. 16. Kit ou trousse de détection d'un composé modulateur, notamment d'un composé inhibiteur, de la complexation entre l'ARN polymérase et une protéine intervenant au cours de la transcription comprenant : - une ou des protéines intervenant au cours de la transcription, ladite protéine pouvant être sous forme de protéine de fusion et étant notamment : - soit la protéine a ou une protéine équivalente, - soit la protéine NusA ou une protéine équivalente, - soit des fragments d'une de ces deux protéines, - l'ARN polymérase, - des milieux ou des tampons nécessaires à la dilution, - éventuellement des moyens de lavage, - des milieux ou des tampons permettant la formation d'un complexe entre l'ARN polymérase et la protéine intervenant au cours de la transcription et la formation d'une liaison entre l'ARN polymérase et le composé modulateur, - des moyens de détection de la variation de la quantité de complexe formé entre l'ARN polymérase et entre la protéine intervenant au cours de la transcription.