Brevet FR2813612A1 — publié le 20020308

UTILISATION D'IP3 KINASES POUR LA PREPARATION DE MEDICAMENTS, NOUVELLES IP3 KINASES ET SEQUENCES D'ADN CORRESPONDANTES L'invention concerne l'utilisation d'IP3 kinases pour la préparation de médicaments. L'invention concerne également de nouvelles IP3 kinases et les séquences d'ADN correspondantes. Les inositols phosphates et particulièrement IP3 (Ins (1,4,5) P3) ont été reconnus depuis longtemps comme des acteurs majeurs pour le contrôle des flux calciques cellulaires. IP3 se fixe sur des récepteurs IP3 (IP3R) présents dans la membrane du réticulum endoplasmique et une partie des stocks de calcium contenus dans le réticulum endoplasmique est libérée puis déversée dans le cytoplasme (Patel et al., 1999). Les IP3 kinases sont des enzymes susceptibles de catalyser la réaction suivante : ATP + ID-myo-inositol 1,4,5 triphosphate # ADP + ID-myo-inositol 1,3,4,5 tetrakisphosphate L'IP3 kinase (IP3K) phosphoryle IP3 en inositol tetrakiphosphate IP4 (Ins (1,3,4,5) P4). IP3K agit probablement à la fois en modifiant le niveau d'IP3 mais aussi en produisant un autre second messager IP4 dont le rôle fonctionnel est encore mal connu (Fukuda et al., 1997 ; Irvine et al., 1999) : il se fixe sur une protéine de la membrane cellulaire (protéine GAP1). La diminution de la concentration de IP3 induit une diminution de l'activité du récepteur IP3R. Chez la Drosophile, IP3R est exprimé dans les tissus musculaires et nerveux. L'absence du gène est létale. Son rôle est encore mal connu ; il est impliqué dans le déclenchement des métamorphoses larvaires mais pourrait l'être aussi dans le contrôle des processus neurosensoriels et dans le développement du muscle. Chez C.elegans, une mutation perte de fonction dans IP3K conduit à la suppression du phénotype de stérilité, indépendant de la voie ras, observé dans des mutants lin3- (EGF). Un gain de fonction de IP3K conduit a contrario à un défaut de contraction et de dilatation de la spermathèque lors du passage des ovules et à une stérilité associée (Clandinin et al., 1998). Le rôle fonctionnel mais aussi la spécificité des isoformes des IP3K chez les vertébrés sont encore mal connus. Cependant, plusieurs articles décrivent le clonage des kinases humaines IP3K-A, IP3K-B et IP3K-C (Takazawa et al., 1991 ; et al., 1991 et Communi et al., 1999). La référence Jun et al. (1998) concerne le rôle de l'IP3K-A chez la souris. D'après cet article, un résultat récent obtenu sur la souris prouve que l'IP3K-A joue un rôle important dans les neurones. Ceux-ci ont un grand nombre de récepteurs IP3 et les stocks de Ca2+ jouent un grand rôle dans la potentiation ou la dépression à long terme (LTP ou LTD). Chez la souris, le récepteur IP3 de type 1 est la forme neuronale majeure exprimée dans les cellules de Purkinje, la région CA1 de l'hippocampe, le noyau caudé et le cortex. Dans le développement de la souris, de hauts niveaux d'IP3Rl sont corrélés avec des tissus subissant l'apoptose. L'absence totale de ce gène conduit à une mort prématurée, souvent in utero, et à une sévère ataxie accompagnée de crises épileptiques. L'IP3K-B existe dans deux pools intracellulaires : l'un cytosolique, l'autre lié fortement au réseau étendu du réticulum endoplasmique et colocalisé avec rab2 (Soriano et al., 1997). Le domaine catalytique fait face au cytosol et l'association à la membrane dépend d'interactions protéine-protéine. En réponse à l'activation de récepteurs muscariniques dans les astrocytes, les IP3K-A et B sont activées par la phosphorylation de la Cam kinase II (calcium calmoduline dépendante) (Communi et al., 1997 et 1999). L'IP3K-B est aussi activée par la phosphorylation de la PKC (Communi et al., 1999). Le stress oxydatif est lié à la génération par les organismes aérobies d'espèces oxygénées réactives (EOR) qui peuvent provoquer des dommages intracellulaires en modifiant des macromolécules telles que les lipides, les protéines et l'ADN. Le site principal de production de ces EOR et notamment de 02 au cours de la respiration est la mitochondrie (Lenaz, 1998). H202 est généré par la conversion de 02' et par le métabolisme des lipides dans les peroxysomes. Puis 02- peut réagir avec H202, via une réaction de Haber-Weiss catalysée par les métaux, pour former le composé très réactif OH'. Les organismes ont développé de nombreuses défenses antioxydantes sous la forme d'enzymes comme les superoxydes dismutases et les catalases et sous la forme de composés antioxydants. Mais ces défenses sont parfois inefficaces lors d'états pathologiques ce qui entraîne des dommages cellulaires. Ainsi les EOR ont été impliqués dans de nombreux processus pathologiques tels que les maladies cardiovasculaires, les processus inflammatoires et les maladies neurodégénératives. Comme la surexpression des enzymes de détoxication protègent les cellules des effets délétères du stress oxydatif ainsi que, dans certains paradigmes, les animaux, ces enzymes ont été proposées comme outils thérapeutiques dans plusieurs pathologies (Ames et al., 1993 ; Gate et al., 1999; Ruef et al., 1999; Patel and Day, 1999). Néanmoins les résultats thérapeutiques sont limités, probablement du fait de la perméabilité limitée des cellules à ces molécules de grande taille. D'autres composés antioxydants tels les métalloporphyrines ont été développés et ont prouvé leur efficacité dans certains protocoles animaux (Patel and Day, 1999). Cependant, cette efficacité est très variable et ces composés ne passent pas la barrière hématoencéphalique. De plus, une des difficultés de mise en #uvre d'une détoxication directe des radicaux libres par surexpression d'enzymes de détoxication vient du fait que ces composants jouent aussi un rôle de second messager dans la cellule où ils sont utilisés dans de nombreux processus normaux (Remacle et al., 1995 ; Morel et al., 1999). Un autre type de stress impliqué dans de nombreuses maladies est le stress du réticulum endoplasmique (RE), qui a été très étudié chez la levure, où une voie génétique majeure, le stress UPR (unfolded protein response) a été mise en évidence (Kaufman, 1999). Le stress UPR est déclenché par la baisse du Ca2+ dans le RE, l'accumulation de protéines mal repliées ou la diminution du glucose. La réponse au stress UPR induit la production de chaperonnes résidentes du RE, notamment GRP78 ou la calciréticuline. Chez l'homme, des altérations dans cette voie sont susceptibles de conduire à de nombreuses pathologies ; si ce stress est trop important, cela entraîne la mort de la cellule. On a récemment mis en évidence l'implication du stress du réticulum endoplasmique dans les maladies neurodégénératives et la possibilité de les combattre par suractivation de la réponse UPR. Ainsi, il a été montré en culture de cellules que la réponse au stress UPR est réduite dans des mutants de la présélinine-1, qui correspondent aux plus fréquentes anomalies génétiques mises en évidence dans la maladie d'Alzheimer (Katayama et al., 1999). Par ailleurs des niveaux de GRP78 réduits sont observés dans les cerveaux de patients atteints de la maladie d'Alzheimer, le niveau de GRP78 étant corrélé avec la sévérité de la pathologie. Enfin, dans un modèle de Drosophile de neurodégénérescence induite par une forme mutante poly-glutamine de la protéine humaine impliquée dans l'ataxie spinocérébelleuse de type 3, il a été montré in vivo que la surexpression de la chaperonne HSP70 du RE provoque une forte réduction des phénotypes de neurodégénérescence (Warrick et al., 1999). L'invention a pour objet de nouvelles protéines IP3 kinases et leurs séquences d'ADN correspondantes. L'invention a également pour objet l'utilisation de protéines IP3 kinases, notamment dans le cadre de la résistance au stress oxydatif et au stress du réticulum endoplasmique. L'invention a également pour objet l'utilisation de protéines IP3 dans le cadre du traitement des maladies neurodégénératives, notamment rétiniennes. L'invention a également pour objet l'utilisation des séquences d'ADN codant pour les protéines IP3 kinases pour l'obtention d'animaux transgéniques non humains surexprimant l'une des nouvelles protéines IP3 kinases. L'invention a également pour objet l'utilisation des séquences d'ADN codant pour les protéines IP3 kinases pour l'obtention d'animaux transgéniques non humains, dans lesquels on a supprimé l'expression du gène codant pour l'une des nouvelles protéines IP3 kinases. L'invention concerne l'utilisation de protéines comprenant ou constituées par : - les séquences SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 7, - ou toute séquence dérivée des séquences SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 7, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs acides aminés, sous réserve qu'elle possède une activité IP3 kinase, - toute séquence homologue des séquences SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 7, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 50% avec les régions comprises entre les acides aminés en position (159) à (441), (360) à (669), (187) à (461), (195) à (472) et (331) à (604) des séquences SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO :4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 7 respectivement, sous réserve qu'elle possède une activité IP3 kinase, - ou tout fragment d'au moins environ 250 acides aminés contigus de l'une des séquences ci-dessus, sous réserve qu'il possède une activité IP3 kinase, pour la préparation de médicaments destinés au traitement de maladies liées au stress oxydatif ou au stress du réticulum endoplasmique, ou de maladies neurodégénératives, notamment rétiniennes. Par définition, on rappelle que les IP3 kinases sont des enzymes susceptibles de catalyser la réaction suivante : ATP + ID-myo-inositol 1,4,5 triphosphate # ADP + ID-myo-inositol 1,3,4,5 tetrakisphosphate L'activité IP3 kinase d'une protéine peut être mesurée par le test fonctionnel de Takazawa et al. (1990). La séquence SEQ ID NO :2 est une nouvelle protéine isolée chez Drosophila melanogaster, notée DIP3K1 et représentée sur la figure 1. La séquence SEQ ID NO :4 est une nouvelle protéine isolée chez Drosophila melanogaster, notée DIP3K2 et représentée sur la figure 2. La séquence SEQ ID NO : 5 est la protéine humaine IP3K-A représentée sur la figure 3. La séquence SEQ ID NO : 6 est la protéine humaine IP3K-B représentée sur la figure 4. La séquence SEQ ID NO : 7 est la protéine humaine IP3K-C représentée sur la figure 5. L'invention concerne une protéine caractérisée en ce qu'elle comprend ou est constituée par : - la séquence SEQ ID NO : 2, - ou toute séquence dérivée de SEQ ID NO :2, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs acides aminés, possédant une activité IP3 kinase, - toute séquence homologue de SEQ ID NO : 2, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 61 % avec la région comprise entre les acides aminés en position (159) et (441) de la séquence SEQ ID NO :2 et possédant une activité IP3 kinase, - ou tout fragment d'une des séquences définies ci-dessus, sous réserve qu'il possède une activité IP3 kinase, notamment tout fragment étant constitué d'au moins environ 250 acides aminés contigus de la séquence SEQ ID NO : 2. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la protéine de l'invention, telle que définie ci-dessus, est caractérisée en ce qu'elle comprend ou est constituée par la séquence SEQ ID NO : 2, représentée sur la figure 1. L'invention concerne également une protéine caractérisée en ce qu'elle comprend ou est constituée par : - la séquence SEQ ID NO : 4, - ou toute séquence dérivée de SEQ ID NO: 4, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs acides aminés, possédant une activité IP3 kinase, - toute séquence homologue de SEQ ID NO :4, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 71 % avec la région comprise entre les acides aminés en position (360) et (669) de la séquence SEQ ID NO :4 et possédant une activité IP3 kinase, - ou tout fragment d'une des séquences définies ci-dessus, sous réserve qu'il possède une activité IP3 kinase, notamment tout fragment étant constitué d'au moins environ 250 acides aminés contigus de la séquence SEQ ID NO : 4. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la protéine de l'invention, telle que définie ci-dessus, est caractérisée en ce qu'elle comprend ou est constituée par la séquence SEQ ID NO : 4, représentée sur la figure 2. L'invention concerne des fragments de protéines telles que définies ci-dessus choisis parmi les séquences délimitées : - de l'acide aminé en position (159) à l'acide aminé en position (441) de la séquence SEQ ID NO : 2, - de l'acide aminé en position (360) à l'acide aminé en position (669) de la séquence SEQ ID NO : 4, - de l'acide aminé en position (187) à l'acide aminé en position (461) de la séquence SEQ ID NO : 5, - de l'acide aminé en position (195) à l'acide aminé en position (472) de la séquence SEQ ID NO : 6, - de l'acide aminé en position (331) à l'acide aminé en position (604) de la séquence SEQ ID NO : 7. L'invention concerne une séquence nucléotidique codant pour l'une des protéines telles que définies ci-dessus. Une séquence d'ADN avantageuse de l'invention comprend ou est constituée par : - la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 1, - ou toute séquence nucléotidique dérivée, par dégénérescence du code génétique, de la séquence SEQ ID NO : 1 codant pour une protéine représentée par la séquence SEQ ID NO : 2, - ou toute séquence nucléotidique dérivée, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs nucléotides, de la séquence SEQ ID NO : 1 codant pour une protéine dérivée de la séquence SEQ ID NO : 2 possédant une activité IP3 kinase, - ou toute séquence nucléotidique homologue de la séquence SEQ ID NO: 1, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 50% avec 700 nucléotides contigus situés dans le domaine délimité du nucléotide en position (1425) au nucléotide en position (3969) de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour une protéine homologue de la séquence SEQ ID NO : 2 et possédant une activité IP3 kinase, - ou tout fragment de la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 1 ou des séquences nucléotidiques définies ci-dessus, ledit fragment étant de préférence constitué d'au moins environ 700 nucléotides contigus situés dans le domaine délimité au nucléotide en position (1425) au nucléotide en position (3969) de ladite séquence et codant pour une protéine qui possède une activité IP3 kinase, - ou toute séquence nucléotidique complémentaire des séquences ou fragments susmentionnés, - ou toute séquence nucléotidique susceptible d'hybrider dans des conditions stringentes avec la séquence complémentaire de l'une des séquences ou de l'un des fragments susmentionnés. Par conditions stringentes d'hybridation on entend par exemple : - température d'hybridation : 42 C, - milieu d'hybridation : 5X SSC, 50% formamide, 5X Denhardt, 0,1% de sodium dodécyl sulfate (SDS), - température de lavage : 42 C, - milieu de lavage : 0,1 X SSC (15 mM NaCI ; 1,5 mM citrate de sodium), 0,1% SDS. Une autre séquence d'ADN avantageuse de l'invention comprend ou est constituée par : - la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 3, - ou toute séquence nucléotidique dérivée, par dégénérescence du code génétique, de la séquence SEQ ID NO : 3 codant pour une protéine représentée par la séquence SEQ ID NO : 4, - ou toute séquence nucléotidique dérivée, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs nucléotides, de la séquence SEQ ID NO :3 codant pour une protéine dérivée de la séquence SEQ ID NO : 4 possédant une activité IP3 kinase, - ou toute séquence nucléotidique homologue de la séquence SEQ ID NO: 3, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 50% avec 700 nucléotides contigus situés dans le domaine délimité du nucléotide en position (3234) au nucléotide en position (6021) de la séquence SEQ ID NO : 3, codant pour une protéine homologue de la séquence SEQ ID NO : 4 et possédant une activité IP3 kinase, - ou tout fragment de la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 3 ou des séquences nucléotidiques définies ci-dessus, ledit fragment étant de préférence constitué d'au moins environ 700 nucléotides contigus situés dans le domaine délimité au nucléotide en position (3234) au nucléotide en position (6021) de ladite séquence et codant pour une protéine qui possède une activité IP3 kinase, - ou toute séquence nucléotidique complémentaire des séquences ou fragments susmentionnés, - ou toute séquence nucléotidique susceptible d'hybrider dans des conditions stringentes avec la séquence complémentaire de l'une des séquences ou de l'un des fragments susmentionnés. L'invention concerne un vecteur recombinant, notamment plasmide, cosmide, phage ou ADN de virus, contenant l'une des séquences nucléotidiques telles que mentionnées ci-dessus. L'invention concerne également un vecteur recombinant tel que défini ci-dessus, contenant les éléments nécessaires à l'expression dans une cellule hôte des polypeptides codés par les acides nucléiques tels que définis ci-dessus, insérés dans ledit vecteur. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le vecteur recombinant défini ci-dessus contient notamment un promoteur reconnu par l'ARN polymérase de la cellule hôte, en particulier un promoteur inductible et éventuellement une séquence de transcription, de terminaison, et éventuellement une séquence signal et/ou d'ancrage. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le vecteur recombinant, tel que défini ci-dessus, contient les éléments qui permettent l'expression d'une séquence nucléotidique, telle que définie ci-dessus, en tant que protéine mature ou protéine de fusion. L'invention concerne également une cellule hôte, choisie notamment parmi les bactéries, les virus, les levures, les champignons, les plantes ou les cellules de mammifères, ladite cellule hôte étant transformée, notamment à l'aide d'un vecteur recombinant tel que défini ci-dessus. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la cellule hôte, telle que définie ci-dessus, contient les éléments de régulation permettant l'expression de la séquence nucléotidique telle que définie ci-dessus. L'invention concerne également le produit de l'expression d'un acide nucléique exprimé par une cellule hôte transformée telle que définie ci-dessus. L'invention concerne également un anticorps caractérisé en ce qu'il est dirigé de manière spécifique contre une protéine de l'invention. On ne se limite pas aux anticorps polyclonaux ; l'invention concerne également tout anticorps monoclonal produit par tout hybridome susceptible d'être formé selon les méthodes classiques à partir, d'une part, de cellules de rate d'animaux, en particulier de souris ou de rat, les cellules de l'animal étant immunisées contre la protéine de l'invention, et d'autre part de cellules d'une lignée cellulaire de myélome, ledit hybridome étant susceptible d'être choisi selon la capacité de la lignée cellulaire à produire des anticorps monoclonaux reconnaissant la protéine utilisée au préalable pour l'immunisation des animaux. L'invention concerne également une sonde nucléotidique capable d'hybrider avec l'une quelconque des séquences nucléiques de l'invention. L'invention concerne également les oligonucléotides antisens ou ARN messager antisens dérivés des séquences nucléotidiques tels que définis ci-dessus. L'invention concerne également une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend une protéine ou un fragment de protéine tels que définis ci-dessus et un vecteur pharmaceutique acceptable. Une composition pharmaceutique avantageuse de l'invention comprend l'une des nouvelles protéines ou un fragment d'une des nouvelles protéines tels que définis cidessus et un vecteur pharmaceutique acceptable. Une autre composition pharmaceutique avantageuse de l'invention comprend l'une des protéines ou un fragment d'une des protéines déjà connues tels que définis ci-dessus et un vecteur pharmaceutique acceptable. L'invention concerne également l'utilisation de l'une des protéines telles que définies ci-dessus pour la préparation de médicaments destinés au traitement de maladies liées au stress oxydatif. Les pathologies concernées sont par exemple des infections chroniques comme l'arthrite ou certaines formes de cancers. L'invention concerne également l'utilisation de l'une des protéines telles que définies ci-dessus pour la préparation de médicaments destinés au traitement de maladies liées au stress du réticulum endoplasmique. Parmi les pathologies concernées, on peut citer comme exemples la fibrose cystique et la maladie d'Alzheimer. L'invention concerne également l'utilisation de l'une des protéines telles que définies ci-dessus pour la préparation de médicaments destinés au traitement de maladies neurodégénératives, notamment rétiniennes. Parmi les pathologies concernées, on peut citer comme exemples la maladie d'Alzheimer et la chorée de Hungtington ainsi que les rétinopathies pigmentaires. L'invention concerne également des cellules animales qui contiennent, dans leur génome, l'une des séquences nucléotidiques de l'invention. L'invention concerne également un animal transgénique non humain contenant des cellules telles que définies ci-dessus, et qui surexprime l'une des protéines de l' invention. En jouant non pas sur le niveau des radicaux libres dans la cellule mais sur les conséquences néfastes qu'ils entraînent, la surexpression de l'activité IP3K protège la cellule sans altérer l'homéostasie des radicaux libres dans la cellule qui peut être importante pour son fonctionnement normal. L'invention concerne également un animal transgénique non humain contenant des cellules telles que définies ci-dessus, dans lequel l'expression du gène, codant pour l'une des protéines de l'invention, est supprimée. Un tel mutant, obtenu par excision imprécise du transposon (un morceau d'ADN génomique est en même temps enlevé) permet de connaître les phénotypes associés à une perte complète du gène. Si son absence s'avère létale, la génération de clones somatiques permet de tester les conséquences de la perte totale de DIP3K1 dans les différents tissus de l'organisme, y compris dans les tissus nerveux où l'insertion UY530 est associée à de la neurodégénérescence. DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 représente la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 1 et la séquence protéinique correspondante SEQ ID NO : 2. La Figure 2 représente la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 3 et la séquence protéinique correspondante SEQ ID NO : 4. La Figure 3 représente la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 5. La Figure 4 représente la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 6. La Figure 5 représente la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 7. Les Figures 6A et 6B représentent la résistance au stress oxydatif de mâles (figure 6A) et de femelles (figure 6B) de contrôle (génotype daGAL4/+) ou surexprimant l'IP3K (génotype UY530/+ ;daGAL4/+) sur un milieu de concentration 1% en H2O2. On a représenté le pourcentage de survie en fonction du temps, exprimé en heures. La courbe avec les losanges correspond aux mouches de contrôle et la courbe avec les carrés correspond aux mouches qui surexpriment l'IP3 kinase. Les Figures 6C et 6D représentent la résistance au stress oxydatif de mâles (figure 6C) et de femelles (figure 6D) de contrôle (génotype daGAL4/+) ou surexprimant l'IP3K (génotype UY530/+ ; daGAL4/+) sur un milieu de concentration 3% en H202. On a représenté le pourcentage de survie en fonction du temps, exprimé en heures. La courbe avec les losanges correspond aux mouches de contrôle et la courbe avec les carrés correspond aux mouches qui surexpriment l'IP3 kinase. Les Figures 6E et 6F représentent la résistance au stress oxydatif de mâles (figure 6E) et de femelles (figure 6F) de contrôle (génotype daGAL4/+) ou surexprimant l'IP3K (génotype UY530/+ ; daGAL4/+) sur un milieu de concentration 5% en H202. On a représenté le pourcentage de survie en fonction du temps, exprimé en heures. La courbe avec les losanges correspond aux mouches de contrôle et la courbe avec les carrés correspond aux mouches qui surexpriment l'IP3 kinase. La Figure 7 représente le temps de développement avant l'émergence à 26 C. On compare le pourcentage de mouches émergées de différents génotypes en fonction du temps, exprimé en heures. La courbe avec les carrés noirs concerne les mouches femelles témoins de génotype daGAL4/+, la courbe avec les ronds noirs concerne les mouches mâles témoins de génotype daGAL4/+, la courbe avec les carrés blancs concerne les mouches femelles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ et la courbe avec les ronds blancs concerne les mouches mâles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+. La Figure 8A représente la résistance au stress oxydatif induit par H202. On a étudié chez des mouches de génotypes divers le pourcentage de survie sur un milieu contenant 1% de H202 en fonction du temps en heures. La courbe avec les losanges noirs concerne les mouches possédant une seule dose du récepteur IP3R (génotype itprl664/+) ; la courbe avec les ronds noirs concerne les mouches qui surexpriment DIP3K1 (génotype UY530/+ ; daGAL4/+) ; la courbe avec les carrés noirs concerne les mouches de contrôle (génotype daGAL4/+) ; la courbe avec les triangles noirs concerne les mouches homozygotes pour l'insertion dans DIP3K1 (génotype UY530/UY530). La Figure 8B représente la résistance au stress UPR induit par la tunicamycine. On a étudié chez des mouches de génotypes divers le pourcentage de survie sur un milieu contenant 3 M de tunicamycine en fonction du temps en heures. La courbe avec les losanges noirs concerne les mouches possédant une seule dose du récepteur IP3R (génotype itprl664/+) ; la courbe avec les ronds noirs concerne les mouches qui surexpriment DIP3K1 (génotype UY530/+ ; daGAL4/+) ; la courbe avec les carrés noirs concerne les mouches de contrôle (génotype daGAL4/+) ; la courbe avec les triangles noirs concerne les mouches homozygotes pour l'insertion dans DIP3K1 (génotype UY530/UY530). La Figure 9 représente la réduction de la longévité dans la souche homozygote pour l'insertion UY530 au début de l'unité transcriptionnelle de DIP3K. On a représenté le pourcentage de survie en fonction du temps en jours. Indiscernable du contrôle jusqu'à 19 jours le taux de survie de UY530/UY530 chute ensuite brutalement. Ceci est associé à une neurodégénérescence rétinienne. La courbe en pointillés concerne les mouches de contrôle (génotype daGAL4/+) et la courbe en trait plein concerne les mouches de la lignée UY530/UY530. La Figure 10 concerne la comparaison des lobes optiques sur des mouches de 25 à 27 jours de génotype daGAL4/+ (A, C) ou UY530/UY530 (B, D). Des vacuoles caractéristiques de dégénérescence neuronale, dont le nombre augmente avec l'âge, sont clairement visibles dans les lobes optiques des mouches homozygotes pour UY530. MATERIEL ET METHODES Différentes lignées mutantes utilisées On a utilisé des lignées déjà connues qui sont : - W ; da-GAL4 : lignée d'expression de la protéine GAL4 sous la dépendance du promoteur ubiquitaire du gène daughterless (Wodarz et al., 1995). - Itpr P1664/TM3: insertion hypomorphe du récepteur à l'IP3 (Venkatesh and Hasan, 1997). Cette lignée a été utilisée dans des tests de résistance après croisement avec une lignée w de référence pour donner des individus itprP1664/+. On a également utilisé les nouvelles lignées mutantes suivantes : - yw ; pP{Mae-UAS.6.11}UY530, qui est obtenue par l'insertion du transposon pP{Mae-UAS.6.11} 3 paires de bases en aval du début de l'unité de transcription correspondant de l'ADNc SD07279 codant pour la protéine D- IP3K1 (lignée notée UY530 dans le texte) - yw ; pP{Mae-UAS.6.11}UY530R2, yw ; pP{Mae-UAS.6.11}UY530R16, yw ; pP{Mae-UAS.6.11}UY530R21, obtenues à la suite d'excisions exactes (sans délétions chromosomiques adjacentes) du transposon pP{Mae-UAS.6.11}UY530 (lignées notées UY530R2, UY530R16, UY530R21 dans le texte) - W; PUAST-D-IP3K1-10A, W ; PUAST-D-IP3K1-32, W ; PUAST-D- IP3K1-37, qui sont des souches transgéniques permettant la surexpression de la protéine D-IP3K1. Mutagenèse La mutagenèse a été effectuée à partir d'un transposon pP{Mae-UAS.6.11} comprenant des séquences UAS et le gène marqueur yellow (y) donné par J. Merriam (Merriam, 1997). Des femelles de génotype yw, pP{Mae-UAS.6.11}sont croisées avec des mâles de génotype w ; A23, Sb/TM6. Les mâles descendants yw, pP{Mae- UAS.6.11} ; +/A23, Sb sont croisés en tubes individuels avec des femelles yw. Dans la descendance les mâles de phénotype {y+, Sb+} qui correspondent à des évènements de transposition indépendants sur un des deux autosomes sont sélectionnés et croisés individuellement avec des femelles yw avant de balancer le chromosome portant l'insertion selon des techniques standards. Les lignées résultantes, de génotype yw;pP{Mae-UAS.6.11}UYN (N désignant le numéro de la lignée) sont notées yw ; UYN dans ce qui suit par mesure de simplicité. Identification dupoint d'insertion du transposon UY530 L'ADN des mouches de la lignée yw ; est extrait, digéré par l'enzyme Msplpuis, après précipitation, le produit de cette digestion est ligué avec une ligase T4 et 2 (il utilisé pour une amplification par PCR avec les amorces OUY52 (ACACAACCTTTCCTCTCAACAA) et OUY31 (ATTGATTCACTTTAACTTGCAC) qui sont contenus dans le transposon. Le fragment résultant est séquence et la séquence comparée avec la séquence génomique de la Drosophile par le programme BLAST, permettant la localisation du point d'insertion du transposon et l'identification du gène D-IP3K1 adjacent. Excision du transposon Des femelles de génotype yw, UY530 sont croisées avec des mâles de génotype w ; CyO/+; A23, Sb/+. Les mâles descendants yw, UY530/CyO ; +/A23, Sb sont croisés en tubes individuels avec des femelles yw ; CyO/Sp. Dans la descendance les mâles de phénotype {y, w, Cy, Sb+, Sp+} qui correspondent à des évènements potentiels indépendants d'excision du transposon sont sélectionnés et croisés individuellement avec des femelles yw ; CyO/Sp pour établir les lignées révertantes notées UY530Ri (i = 2, 16, 21). Pour confirmer le type d'événement de révertion, l'ADN des mouches de chaque lignée révertante est alors extrait et utilisé pour une analyse par PCR et en vue d'un séquençage de la région d'insertion du transposon selon des techniques standards. Obtention de lignées transgéniques de surexpression de l'IP3K1 Un fragment EcoRI-Xholisolé du cDNA SD07279 a été clone dans le vecteur PUAST (Brand and Perrimon, 1993) et l'ADN résultant utilisé avec l'ADN d'un vecteur contenant la transposase A23 pour obtenir des lignées transgéniques selon des techniques standards. Trois lignées indépendantes ont été ainsi obtenues notées W ; PUAST-D-IP3K1-i ( i=10A, 32, 37). Tests de résistance Les mouches de même sexe âgées de 3 à 5 jours sont placées par groupes de 30 dans un tube de 50 ml contenant un milieu solide composé de 1,3% d'agarose à bas point de fusion, 1% de sucrose et du produit à tester pour la résistance (1% de peroxyde d'hydrogène ou 5mM de paraquat (produit Sigma) ou 3 M de tunicamycine (produit Sigma) selon le test effectué). Les tubes sont maintenus à 26 C et les mouches mortes sont comptées 2 fois par jour pour établir les courbes de survie. Test de longévité Pour chaque génotype les mâles nouveaux nés sont placés par groupes de 30 dans un tube de 50 ml maintenus à 26 C. Les mouches sont transférées tous les 2 ou 3 jours dans des tubes frais et les morts sont comptés à cette occasion pour établir les courbes de survie. Un minimum de 5 tubes indépendants sont utilisés pour s'assurer de la validité statistique des écarts observés. RESULTATS Tableau 1 (Figure 6A) Pourcentage de survie de Drosophiles mâles de génotype daGAL4/+ (mouches de contrôle) ou de génotype UY530/+; da-GAL4/+ sur un milieu contenant 1% de H202 % de survie des Drosophiles temps (heures) génotype daGAL4/+ génotype UY530/+ ; daGAL4/+ 0 100 100 39 98 98 51 92 98 66 43 96 75 18 91 88 1 69 97 0 53 118 0 29 138 0 20 160 0 11 182 0 7 256 0 4 289 0 2 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir d'un minimum de trois tubes de trente mouches. On constate une forte protection contre le stress oxydant induit par H2O2 des individus mâles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 88 heures passées sur le milieu à 1% de H202, seul 1% des individus de contrôle restent vivants contre 69% des individus surexprimant DIP3K1. Tableau 2 (Figure 6B) Pourcentage de survie de Drosophiles femelles de génotype daGAL4/+ (mouches de contrôle) ou de génotype UY530/+ ; da-GAL4/+ sur un milieu contenant 1% de H2O2 % de survie des Drosophiles temps (heures) génotype daGAL4/+ génotype UY530/+ ; daGAL4/+ 0 100 100 39 97 93 51 88 92 66 74 91 75 60 91 88 27 88 97 14 85 118 1 66 138 0 48 160 0 32 182 0 23 256 0 11 289 0 5 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir d'un minimum de trois tubes de trente mouches. On constate une forte protection contre le stress oxydant induit par H2O2 des individus femelles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 118 heures passées sur le milieu à 1% de H202, seul 1% des individus de contrôle restent vivants contre 66% des individus surexprimant DIP3K1. Tableau 3 (Figure 6C) Pourcentage de survie de Drosophiles mâles de génotype daGAL4/+ (mouches de contrôle) ou de génotype UY530/+ ; da-GAL4/+ sur un milieu contenant 3% de H202 % de survie des Drosophiles temps (heures) génotype daGAL4/+ génotype UY530/+ ; daGAL4/+ 0 100 100 39 94 98 51 46 98 66 5 84 75 1 55 88 0 30 97 0 21 118 0 4 138 0 1 160 0 0 182 0 0 256 0 0 289 0 0 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir d'un minimum de trois tubes de trente mouches. On constate une forte protection contre le stress oxydant induit par H202 des individus mâles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 75 heures passées sur le milieu à 3% de H2O2, seul 1% des individus de contrôle restent vivants contre 55% des individus surexprimant DIP3K1. Tableau 4 (Figure 6D) Pourcentage de survie de Drosophiles femelles de génotype daGAL4/+ (mouches de contrôle) ou de génotype UY530/+ ; da-GAL4/+ sur un milieu contenant 3% de H202 % de survie des Drosophiles temps (heures) génotype daGAL4/+ génotype UY530/+ ; daGAL4/+ 0 100 100 39 81 93 51 68 92 66 22 85 75 2 81 88 0 74 97 0 59 118 0 49 138 0 45 160 0 2 182 0 0 256 0 0 289 0 0 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir d'un minimum de trois tubes de trente mouches. On constate une forte protection contre le stress oxydant induit par H202 des individus femelles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 88 heures passées sur le milieu à 3% de H202, il ne reste plus d'individus de contrôle alors que 74% des individus surexprimant DIP3K1 restent vivants. Tableau 5 (Figure 6E) Pourcentage de survie de Drosophiles mâles de génotype daGAL4/+ (mouches de contrôle) ou de génotype UY530/+ ; da-GAL4/+ sur un milieu contenant 5% de H202 % de survie des Drosophiles temps (heures) génotype daGAL4/+ génotype UY530/+ ; daGAL4/+ 0 100 100 39 92 97 51 26 87 66 1 17 75 0 7 88 0 3 97 0 0 118 0 0 138 0 0 160 0 0 182 0 0 256 0 0 289 0 0 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir de deux tubes de trente mouches. On constate une forte protection contre le stress oxydant induit par H202 des individus mâles de génotype UY530/+ ;daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 66 heures passées sur le milieu à 5% de H202, seul 1% des individus de contrôle restent vivants contre 17% des individus surexprimant DIP3K1. Tableau 6 (Figure 6F) Pourcentage de survie de Drosophiles femelles de génotype daGAL4/+ (mouches de contrôle) ou de génotype UY530/+ ; da-GAL4/+ sur un milieu contenant 5% de H202 % de survie des Drosophiles temps (heures) génotype daGAL4/+ génotype UY530/+ ; daGAL4/+ 0 100 100 39 75 95 51 46 92 66 16 85 75 2 76 88 0 51 97 0 29 118 0 7 138 0 5 160 0 0 182 0 0 256 0 0 289 0 0 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir d'un minimum de trois tubes de trente mouches. On constate une forte protection contre le stress oxydant induit par H202 des individus femelles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 75 heures passées sur le milieu à 5% de H202, seuls 2% des individus de contrôle restent vivants contre 76% des individus surexprimant DIP3K1. Tableau 7 (figure 7) Comparaison des pourcentages de mouches émergées de différents génotypes en fonction du temps exprimé en heures % de Drosophiles émergées de différents génotypes Drosophiles mâles Drosophiles femelles temps (h) daGAL4/+ UY530/+ ; daGAL4/+ daGAL4/+ UY530/+ ; daGAL4/+ 200 0 0 0 0 208 7 0 11 0 210 17 0 34 0 213 33 0 71 4 214 40 0 75 8 217 58 5 80 22 218 59 8 81 24 219 81 8 90 48 221 83 32 91 60 223 88 38 93 78 234 88 41 94 82 237 89 60 94 84 238 91 60 97 84 239 98 94 100 94 240 98 95 100 94 243 @ 99 95 100 94 267 99 95 100 94 270 99 97 100 98 272 100 100 100 100 A 26 C, on constate un retard important d'émergence des individus mâles et femelles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 219 heures passées depuis la ponte des #ufs, 81% des individus mâles de contrôle ont émergé contre 8% des individus surexprimant DIP3K1. Tableau 8 (figure 8A) Pourcentage de survie en fonction du temps exprimé en heures de Drosophiles mâles de génotype daGAL4/+ (mouches de contrôle), de génotype UY530/+ ; daGAL4/+, de génotype UY530/UY530 et de génotype itprl664/+ sur un milieu contenant 1% de H202 % de survie des Drosophiles de différents génotypes temps (heures) daGAL4/+ UY530/+ ; daGAL4/+ UY530/UY530 itprl664/+ 0,0 100 100 100 100 38,0 86 95 88 98 46,0 83 92 68 98 62 53 86 37 94 70,7 35 74 24 85 86,0 3 33 2 40 95,5 1 12 0 19 110,0 0 1 0 4 118,5 0 0 0 2 134,8 0 0 0 2 143,3 0 0 0 2 162,0 0 0 0 2 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir d'un minimum de 3 tubes de trente mouches. On constate une forte protection contre le stress oxydant induit par H2O2 des mâles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 ou de génotype itprl664/+ ayant une réduction du niveau du récepteur IP3R par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 86 heures passées sur le milieu à 1% de H202, seuls 3% des individus de contrôle restent vivants contre 33% des individus surexprimant DIP3K1 et 40% des individus sousexprimant IP3R. La lignée homozygote UY530/UY530 est de façon reproductible plus sensible que la lignée témoin au stress oxydant induit par H202. Tableau 9 (figure 8B) Pourcentage de survie en fonction du temps exprimé en heures de Drosophiles mâles de génotype daGAL4/+ (mouches de contrôle), de génotype UY530/+ ; daGAL4/+, de génotype UY530/UY530 et de génotype itprl664/+ sur un milieu contenant de la tunicamycine à une concentration de 3 M % de survie des Drosophiles de différents génotypes temps (heures) daGAL4/+ UY530/+ ; daGAL4/+ UY530/UY530 itpr1664/+ 0,0 100 100 100 100 38,0 93 97 98 100 46,0 91 94 98 100 62 ! 67 84 76 100 70,7 56 75 66 100 86,0 37 60 36 100 95,5 20 40 17 98 110,0 2 12 1 52 118,5 0 2 0 18 134,8 0 1 0 0 143,3 0 0 0 0 162,0 0 0 0 0 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir d'un minimum de 3 tubes de trente mouches. On constate une forte protection contre le stress UPR induit par la tunicamycine des mâles de génotype UY530/+ ; daGAL4/+ surexprimant DIP3K1 ou de génotype itprl664/+ ayant une réduction du niveau du récepteur IP3R par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 95,5 heures passées sur le milieu à 3 M de tunicamycine, seuls 20% des individus de contrôle restent vivants contre 40% des individus surexprimant DIP3K1 et 98% des individus sousexprimant IP3R. Tableau 10 (figure 9) Pourcentage de survie à 26 C de Drosophiles mâles de génotype daGAL4/+ et de génotype UY530/UY530 en fonction du temps exprimé en jours sur un milieu standard % de survie des Drosophiles temps (jours) génotype da-GAL4/+ génotype UY530/UY530 0 100 100 1 100 100 2 100 99 3 100 98 4 98 98 97 97 97 97 7 97 96 8 96 94 95 94 10 95 94 11 95 94 12 94 94 13 94 93 14 94 93 15 93 91 16 92 89 17 90 89 18 90 88 19 90 86 20 89 83 21 88 79 22 87 76 23 87 70 24 86 63 25 85 54 26 85 47 27 83 40 28 81 33 29 79 26 30 78 20 31 78 17 32 77 14 33 76 12 34 75 9 35 74 7 36 73 6 37 72 5 38 72 5 39 70 3 40 68 3 41 65 2 42 64 2 43 61 2 44 58 1 45 56 0 46 52 0 47 48 0 48 44 0 49 40 0 50 37 0 51 35 0 52 34 0 53 32 0 54 30 0 55 27 0 56 24 0 57 19 0 58 17 0 59 15 0 60 13 0 61 10 0 62 9 0 63 8 0 64 7 0 65 6 0 66 6 0 67 4 0 68 4 0 69 3 0 70 2 0 71 2 0 72 2 0 73 2 0 74 2 0 75 1 0 76 1 0 77 1 0 78 1 0 79 1 0 80 0 0 Les moyennes sont établies selon les formules standards à partir de sept tubes de trente mouches. On constate une forte réduction de la longévité des mâles de génotype UY530/UY530 par rapport aux individus de contrôle de génotype daGAL4/+. Ainsi, par exemple, après 26 jours, moins de la moitié des individus de génotype UY530/UY530 restent en vie contre 85% des individus de contrôle. Au bout de 45 jours, lorsque tous les individus de génotype UY530/UY530 sont morts, il reste encore plus de la moitié des individus de contrôle. Il faut également noter que jusqu'à 18 jours, les taux de survie sont statistiquement indiscernables, ce qui suggère que les individus de génotype UY530/UY530 ne présentent pas un taux de mortalité initial particulièrement élevé. REFERENCES - Ames et al., Oxidants, antioxidants and the degenerative diseases of ageing, PNAS (1993) 90,7915-7922, - Brand, A. and Perrimon, N., Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. 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Utilisation de protéines comprenant ou constituées par : - les séquences SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 7, - ou toute séquence dérivée des séquences SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 7, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs acides aminés, sous réserve qu'elle possède une activité IP3 kinase, - toute séquence homologue des séquences SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 7, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 50% avec les régions comprises entre les acides aminés en position (159) à (441), (360) à (669), (187) à (461), (195) à (472) et (331) à (604) des séquences SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 7 respectivement, sous réserve qu'elle possède une activité IP3 kinase, - ou tout fragment d'au moins environ 250 acides aminés contigus de l'une des séquences ci-dessus, sous réserve qu'il possède une activité IP3 kinase, pour la préparation de médicaments destinés au traitement de maladies liées au stress oxydatif ou au stress du réticulum endoplasmique, ou de maladies neurodégénératives, notamment rétiniennes. 2. Protéine caractérisée en ce qu'elle comprend ou est constituée par : - la séquence SEQ ID NO : 2, - ou toute séquence dérivée de la séquence SEQ ID NO : 2, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs acides aminés, possédant une activité IP3 kinase, - toute séquence homologue de la séquence SEQ ID NO :2, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 61 % avec la région comprise entre les acides aminés en position (159) et (441) de la séquence SEQ ID NO : 2 et possédant une activité IP3 kinase, - ou tout fragment d'une des séquences définies ci-dessus, sous réserve qu'il possède une activité IP3 kinase, notamment tout fragment constitué d'au moins environ 250 acides aminés contigus de la séquence SEQ ID NO : 2. 3. Protéine caractérisée en ce qu'elle comprend ou est constituée par : - la séquence SEQ ID NO : 4, - ou toute séquence dérivée de la séquence SEQ ID NO : 4, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs acides aminés, possédant une activité IP3 kinase, - toute séquence homologue de la séquence SEQ ID NO :4, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 71 % avec la région comprise entre les acides aminés en position (360) et (669) de la séquence SEQ ID NO : 4 et possédant une activité IP3 kinase, - ou tout fragment d'une des séquences définies ci-dessus, sous réserve qu'il possède une activité IP3 kinase, notamment tout fragment constitué d'au moins environ 250 acides aminés contigus de la séquence SEQ ID NO : 4. 4. Fragments de protéine selon l'une des revendications 2 ou 3 choisis parmi les séquences délimitées : - de l'acide aminé en position (159) à l'acide aminé en position (441) de la séquence SEQ ID NO : 2, - de l'acide aminé en position (360) à l'acide aminé en position (669) de la séquence SEQ ID NO : 4, - de l'acide aminé en position (187) à l'acide aminé en position (461) de la séquence SEQ ID NO : 5, - de l'acide aminé en position (195) à l'acide aminé en position (472) de la séquence SEQ ID NO : 6, - de l'acide aminé en position (331) à l'acide aminé en position (604) de la séquence SEQ ID NO : 7. 5. Séquence nucléotidique codant pour une protéine telle que définie dans l'une des revendications 2 à 4. 6. Séquence d'ADN qui comprend ou est constituée par : - la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 1, - ou toute séquence nucléotidique dérivée, par dégénérescence du code génétique, de la séquence SEQ ID NO : 1 codant pour une protéine représentée par la séquence SEQ ID NO : 2, - ou toute séquence nucléotidique dérivée, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs nucléotides, de la séquence SEQ ID NO : 1 codant pour une protéine dérivée de la séquence SEQ ID NO : 2 possédant une activité IP3 kinase, - ou toute séquence nucléotidique homologue de la séquence SEQ ID NO: 1, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 50% avec 700 nucléotides contigus situés dans le domaine délimité du nucléotide en position (1425) au nucléotide en position (3969) de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour une protéine homologue de la séquence SEQ ID NO : 2 et possédant une activité IP3 kinase, - ou tout fragment de la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 1 ou des séquences nucléotidiques définies ci-dessus, ledit fragment étant de préférence constitué d'au moins environ 700 nucléotides contigus situés dans le domaine délimité au nucléotide en position (1425) au nucléotide en position (3969) de ladite séquence et codant pour une protéine qui possède une activité IP3 kinase, - ou toute séquence nucléotidique complémentaire des séquences ou fragments susmentionnés, - ou toute séquence nucléotidique susceptible d'hybrider dans des conditions stringentes avec la séquence complémentaire de l'une des séquences ou de l'un des fragments susmentionnés. 7. Séquence d'ADN qui comprend ou est constituée par : - la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 3, - ou toute séquence nucléotidique dérivée, par dégénérescence du code génétique, de la séquence SEQ ID NO : 3 codant pour une protéine représentée par la séquence SEQ ID NO : 4, - ou toute séquence nucléotidique dérivée, notamment par substitution, suppression ou addition d'un ou plusieurs nucléotides, de la séquence SEQ ID NO : 3 codant pour une protéine dérivée de la séquence SEQ ID NO : 4 possédant une activité IP3 kinase, - ou toute séquence nucléotidique homologue de la séquence SEQ ID NO: 3, ayant de préférence une homologie d'au moins environ 50% avec 700 nucléotides contigus situés dans le domaine délimité du nucléotide en position (3234) au nucléotide en position (6021) de la séquence SEQ ID NO : 3, codant pour une protéine homologue de la séquence SEQ ID NO : 4 et possédant une activité IP3 kinase, - ou tout fragment de la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 3 ou des séquences nucléotidiques définies ci-dessus, ledit fragment étant de préférence constitué d'au moins environ 700 nucléotides contigus situés dans le domaine délimité au nucléotide en position (3234) au nucléotide en position (6021) de ladite séquence et codant pour une protéine qui possède une activité IP3 kinase, - ou toute séquence nucléotidique complémentaire des séquences ou fragments susmentionnés, - ou toute séquence nucléotidique susceptible d'hybrider dans des conditions stringentes avec la séquence complémentaire de l'une des séquences ou de l'un des fragments susmentionnés. 8. Vecteur recombinant, notamment plasmide, cosmide, phage ou ADN de virus, contenant une séquence nucléotidique selon l'une des revendications 5,6 ou 7. 9. Vecteur recombinant selon la revendication 8, contenant les éléments nécessaires à l'expression dans une cellule hôte des polypeptides codés par les acides nucléiques selon l'une des revendications 5, 6 ou 7, insérés dans ledit vecteur. 10. Cellule hôte, choisie notamment parmi les bactéries, les virus, les levures, les champignons, les plantes ou les cellules de mammifères, ladite cellule hôte étant transformée, notamment à l'aide d'un vecteur recombinant selon l'une des revendications 8 ou 9. 11. Oligonucléotides antisens ou ARN messager antisens dérivés des séquences nucléotidiques selon l'une des revendications 5,6 ou 7. 12. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend une protéine ou un fragment de protéine selon l'une des revendications 2 à 4, en association avec un vecteur pharmaceutique acceptable . 13. Utilisation de l'une des protéines selon l'une des revendications 2 à 4, pour la préparation de médicaments destinés au traitement de maladies liées au stress oxydatif. 14. Utilisation de l'une des protéines selon l'une des revendications 2 à 4, pour la préparation de médicaments destinés au traitement de maladies liées au stress du réticulum endoplasmique. 15. Utilisation de l'une des protéines selon l'une des revendications 2 à 4, pour la préparation de médicaments destinés au traitement de maladies neurodégénératives, notamment rétiniennes. 16. Cellules animales qui contiennent, dans leur génome, une séquence nucléotidique codant pour l'une des protéines selon l'une des revendications 2 à 4, et notamment une séquence nucléotidique selon l'une des revendications 5 à 7. 17. Animal transgénique non humain contenant des cellules selon la revendication 16, et qui surexprime l'une des protéines définies dans l'une des revendications 2 à 4. 18. Animal transgénique non humain contenant des cellules selon la revendication 16, dans lequel l'expression du gène, codant pour l'une des protéines définies dans les revendications 2 à 4, est supprimée.