Brevet FR2811573A1 — publié le 20020118

PROCEDE DE PREPARATION D'UN EXTRAIT PUISSANT EN MATIERE D'ACTIVITES ANTI-INFLAMMATOIRE, ANTI-AGREGATION PLAOUETTAIRE ET ANTIFONGIQUE A PARTIR DE ZINGIBER OFFICINALE ET COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES CONTENANT LEDIT EXTRAIT La présente invention concerne un procédé de préparation d'un extrait puissant en matière d'activités anti-inflammatoire, anti-agrégation plaquettaire et antifongique à partir de Zingiber officinale. Les médicaments ou épices non raffinés chinois, par exemple Zingiber officinale, Eugenia caryophyllata, Allium sativum, ont été utilisés en médecine et pour rehausser le goût des aliments. Le gingembre brut est utilisé comme antiémétique, expectorant, antitussif et accélérateur de l'appareil digestif. Le gingembre brut vieux semi-séché est également utilisé pour les douleurs stomacales, les douleurs thoraciques, les douleurs rachidiennes, la toux, le rhume banal et en cure pour une forme d'oedème dite "rétention d'eau". La zingerone est le principal composant qui explique le caractère épicé du gingembre ; le gingerol et le shogaol sont d'autres composants piquants dans le gingembre. Le gingerol possède une action cardiotonique, il supprime la contraction de veines portes isolées chez des souris et il module la contraction de vaisseaux sanguins de souris et de rats induite par les eicosanoïdes. Le shogaol fait preuve d'une réponse qui augmente la tension artérielle. Le gingerol et le shogaol sont mutagènes, alors que le zinger et la zingerone se sont avérés faire preuve d'activité anti-mutagène. Le shogaol a une activité inhibitrice sur l'oedème de la patte induit par la carragénine et sur l'agrégation plaquettaire [brevet américain N 5 804 603, arrière plan de l'invention]. Jusqu'ici, de nombreux rapports ont démontré que Zingiber officinale faisait preuve de diverses activités physiologiques. Des exemples typiques comprennent un agent suppresseur des métastases cancéreuses, décrit dans la publication de brevet japonais N 7-258104 ; un activateur de synthèse pour le facteur neurotropique, qui est efficace pour les affections neurologiques dégénératives telles que la démence d'Alzheimer ou la maladie de Parkinson, décrit dans la publication de brevet japonais N 7-25777 ; un agent antirhumatismal, décrit dans la publication de brevet japonais N 6- 293653, dans les brevets américains N 5 494 668 et 5 683 698 ; une composition antimicrobienne, décrite dans la publication de brevet japonais N 6-227931 ; et une composition analgésique, décrite dans la publication de brevet japonais N 6-107556. Le gingembre contient de 1 à 4 % d'huile essentielle (oléorésine) . Au cours de ces 45 dernières années, de nombreuses études chimiques ont été réalisées sur les constituants de l'huile essentielle. En tout, plus de 200 substances volatiles différentes ont été identifiées dans l'huile essentielle, laquelle est le siège de l'activité pharmacologique. L'huile essentielle contient un mélange de divers terpènes ainsi que certains autres composés non terpéniques. Bien que ceci soit essentiellement spéculatif, les données et observations expérimentales laissent penser que le gingembre inhibe à la fois les produits de la cyclooxygénase et de la lipooxygénase, c'est-à-dire qu'il peut être un double inhibiteur de la synthèse des eicosanoïdes. En tout, 56 patients (28 souffrant de polyarthrite rhumatoïde, 18 d'ostéoarthrite et 10 de gêne musculaire) ont utilisé du gingembre en poudre contre leurs affections. Parmi les patients souffrant d'arthrite, plus des trois-quarts ont éprouvé, à divers degrés, un soulagement de la douleur et de l'#dème. Tous les patients souffrant de gêne musculaire ont observé un soulagement de la douleur. Aucun des patients n'a fait état d'effets secondaires pendant la période de consommation de gingembre, qui s'est étalée sur 3 mois à 2,5 ans. (Srivastava et Mustafa; Médical Hypothèses; 1992 ; 39 342-348). Les anti-inflammatoires non stéroïdiens possèdent trois actions majeures, dont toutes sont liées à l'inhibition de la cyclooxygénase conduisant à une diminution de la formation de prostanoïdes. Premièrement, une action anti-inflammatoire obtenue par une production diminuée de prostaglandines vasodilatatrices (PGE2, PGI2), ce qui signifie une vasodilatation moindre et, indirectement, un #dème moindre. Deuxièmement, un effet analgésique obtenu par une production diminuée de prostaglandines (sensibilisation moindre des terminaisons nerveuses nociceptives relativement aux médiateurs inflammatoires bradykinine et sérotonine). Troisièmement, un effet antipyrétique probablement dû à une diminution du médiateur PGE2 généré en réponse aux pyrogènes inflammatoires, beaucoup comme l'interleukine 1. Etant donné que le gingembre inhibe la synthèse des prostanoïdes et également des produits de la 5lipoxygénase, ses effets d'amélioration sur l'arthrite et sur les gênes musculaires pourraient être liés à une diminution de la formation de prostanoïdes et de leucotriènes. Du fait d'une telle possibilité, une diminution de la formation d'#dème induit par la carragénine dans la patte d'un rat après administration de 3 g d'extrait de gingembre a été démontrée et la puissance de l'extrait dans l'essai d'inflammation aiguë semble être comparable à celle dont fait preuve l'acide acétylsalicylique mentionné dans la même étude (Mascolo N. et al., Journal of Ethnopharmacology 1989,27, 129- 140) . Les Dermatophytes, en particulier Trichophyton rubrum et Trichophyton mentagrophytes, sont les agents pathogènes usuels de l'onychomycose et du pied d'athlète [Roberts DT., British Journal of Dermatology. 141 Suppl. 56 :1-4, Nov. 1999; Roldan YB et al., Mycoses, 43(5):181- 3,2000]. Pityrosporum ovale (Malassezia furfur) est l'agent étiologique du pityriasis versicolor, de la folliculite à Pityrosporum et de l'intertrigo à Malassezia. Plusieurs études indiquent une forte association entre Pityrosporum ovale et la dermatite séborrhéique et les pellicules, une forme moins sévère de la dermatite séborrhéique [Nenoff P. et al., Dermatology. 191(4):311-4, 1995; Bulmer AC. et al., Mycopathologia, 147 (2) 63-5, 1999] . La présente invention propose des extraits de rhizomes de gingembre qui font preuve d'une activité dans un essai d'anti-agrégation plaquettaire in vitro, d'une activité inhibitrice sur l'oedème de la patte induit par la carragénine et d'une activité antifongique contre Trichophyton mentagrophytes et Pityrosporum ovale. Les extraits sont préparés par extraction de rhizomes de gingembre avec un solvant organique (tel que l'éther éthylique, l'acétone, le méthanol et l'éthanol) ou avec du CO2 supercritique, ou par entraînement à la vapeur de rhizomes de gingembre pour obtenir un liquide brut, et en soumettant ledit liquide brut à une chromatographie en phase inverse pour obtenir les extraits contenant des shogaols, des gingerols et/ou de la déshydrogingerdione. Comme présenté dans l'arrière plan de l'invention, le gingembre a été utilisé pour son effet antiinflammatoire et dans le soulagement de la douleur. La présente invention consiste à proposer un procédé efficace de préparation d'un produit puissant en matière d'activités anti-inflammatoire, anti-agrégation plaquettaire et antifongique à partir de rhizomes de gingembre. Le produit puissant préparé conformément au procédé de la présente invention possède une composition sensiblement constante, de sorte que les effets pharmacologiques de celui-ci sont définis. Le procédé efficace de préparation d'un produit puissant en matière d'activités anti-inflammatoire, antiagrégation plaquettaire et antifongique à partir de rhizomes de gingembre conformément à la présente invention comprend les étapes suivantes consistant à : a) préparer un liquide brut à partir de rhizomes de gingembre ; b) introduire le liquide brut dans une colonne de chromatographie en phase inverse, et éluer la colonne avec de l'eau, avec un premier éluant et avec un deuxième éluant successivement, ledit deuxième éluant ayant une polarité plus faible que celle du premier éluant mais plus forte que celle du chloroforme, de sorte qu'un premier éluat résultant de l'élution avec le premier éluant et qu'un deuxième éluat résultant de l'élution avec le deuxième éluant sont obtenus ; c) éliminer le premier éluant du premier éluat par évaporation, de sorte qu'un premier éluat concentré est obtenu et peut être utilisé en tant que produit puissant ; et d) éliminer le deuxième éluant du deuxième éluat par évaporation, de sorte qu'un deuxième éluat concentré est obtenu et peut être utilisé en tant que produit puissant ; dans lequel l'étape a) comprend les étapes i) à iv), ou comprend l'étape I), l'étape I'), ou l'étape I"), lesdites étapes i) à iv) consistant à : i) hacher des rhizomes frais de gingembre et filtrer le mélange qui en résulte pour obtenir un filtrat et un résidu ; ii) extraire le filtrat avec un premier solvant organique, récupérer la solution d'extraction par le premier solvant organique résultante, et évaporer le premier solvant organique de la solution d'extraction pour obtenir une première solution d'extraction concentrée ; iii) extraire le résidu avec un deuxième solvant organique, récupérer la solution d'extraction par le deuxième solvant organique résultante, et évaporer le deuxième solvant organique de la solution d'extraction pour obtenir une deuxième solution d'extraction concentrée ; et iv) combiner la première solution d'extraction concentrée et la deuxième solution d'extraction concentrée pour obtenir le liquide brut ; ladite étape I) consistant à : I) extraire de la poudre de rhizomes de gingembre séchés avec le deuxième solvant organique, récupérer la solution d'extraction par le deuxième solvant organique résultante et évaporer le deuxième solvant organique de la solution d'extraction pour obtenir le liquide brut ; ladite étape Il) consistant à : I') soumettre à un entraînement à la vapeur de la poudre de rhizomes de gingembre séchés, et concentrer le distillat résultant par évaporation pour obtenir le liquide brut ; et ladite étape I") consistant à : I") extraire de la poudre de rhizomes de gingembre séchés avec du C02 supercritique, récupérer la solution d'extraction au C02 supercritique qui en résulte et évaporer le CO2 de la solution d'extraction pour obtenir le liquide brut. Le produit puissant en matière d'activités antiinflammatoire, anti-agrégation plaquettaire et antifongique préparé conformément au procédé de la présente invention comprend de préférence de 0 à 10 mg de 6-shogaol par gramme du produit, de 1 à 150 mg de 6gingerol par gramme du produit et de 0 à 40 mg de 6déshydrogingerdione par gramme du produit. La présente invention propose également une composition pharmaceutique puissante en matière d'activité anti-inflammatoire, anti-agrégation plaquettaire et antifongique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace dudit liquide brut préparé à l'étape a) du procédé de la présente invention, en tant que principe actif, en mélange avec un véhicule ou diluant pharmaceutiquement acceptable, pour le principe actif. La présente invention propose également une composition pharmaceutique puissante en matière d'activité anti-inflammatoire, anti-agrégation plaquettaire et antifongique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace dudit produit préparé conformément au procédé de la présente invention, en tant que principe actif, en mélange avec un véhicule ou un diluant pharmaceutiquement acceptable, pour le principe actif. De préférence, ledit produit préparé conformément au procédé de la présente invention est le premier éluat concentré préparé à l'étape c). En variante, ledit produit préparé conformément au procédé de la présente invention est le deuxième éluat concentré préparé à l'étape d) . De préférence, ledit premier éluant est le méthanol et ledit second éluant est l'acétone. De préférence, l'étape a) du procédé de la présente invention comprend les étapes i) à iv). De préférence, ledit premier solvant organique est l'éther éthylique. De préférence, ledit deuxième solvant organique est l'acétone, le méthanol, l'éthanol ou une combinaison de ceux-ci. De manière plus préférentielle, ledit deuxième solvant organique est l'acétone. De préférence, l'étape a) du procédé de la présente invention comprend l'étape I). De préférence, l'étape a) du procédé de la présente invention comprend l'étape I'). De préférence, l'étape a) du procédé de la présente invention comprend l'étape I"). Une colonne de chromatographie en phase inverse appropriée à une utilisation dans le procédé de la présente invention comprend (mais sans y être limité) une colonne de chromatographie en phase inverse garnie de résine poreuse, par exemple Diaion HP-20 (Mitsubishi Co.), Sephadex LH-20 (Pharmicia Co. ) et RP-18 (Nacalai tesque Co.). La composition pharmaceutique puissante en matière d'activité antifongique de la présente invention est appliquée de préférence par voie topique, par exemple sous la forme d'un shampooing, d'un gel pour le bain, d'un savon, d'une lotion corporelle, d'une crème pour le corps et d'un détergent. De préférence, la composition pharmaceutique puissante en matière d'activité antifongique de la présente invention est utilisée dans le traitement de maladies associées à Trichophyton mentagrophytes ou à Pityrosporum ovale, comprenant de manière non exhaustive le pied d'athlète (tinea pedis), la teigne tondante microscopique (tinea capitis), l'eczéma marginé (tinea cruris), la dermatophytose de la peau glabre (tinea glabrosa), l'onychomycose, le pityriasis capitis simplex, le pityriasis versicolor, la folliculite à pityrosporum, la dermatite séborrhéique et les pellicules. En particulier, la composition pharmaceutique antifongique de la présente invention se présente sous la forme d'un shampooing destiné à être utilisé dans le traitement des pellicules. Il est considéré que la description ci-dessus donne les moyens de réaliser la présente invention de manière adéquate. Les exemples spécifiques suivants doivent donc être interprétés comme étant uniquement illustratifs, et non pas limitatifs de quelque façon que ce soit quant au reste de la description. Détermination des principes actifs Dans les exemples suivants, la chromatographie liquide à haute performance (abrégée en CLHP) a été utilisée pour déterminer les principes actifs des produits préparés dans la présente. Les spectres de CLHP ont été enregistrés sur un instrument CLHP (HPLC Shimadzu LC-10AT, Japon) en utilisant une colonne Cosmosil 5C-18 (250 mm x 4,6 mm, garnie de particules de 5 m de diamètre) par un procédé d'élution. Un échantillon de CLHP a été préparé en diluant une quantité appropriée d'un produit avec une solution phase mobile (acide cyanhydrique : eau = 65 : 35, v/v) jusqu'à 25 ml, et on a fait suivre par une filtration sur une membrane de 0,25 lira. Le filtrat a été introduit dans la colonne de CLHP et a été élué avec la solution phase mobile. Un détecteur d'UV (Shimadzu SPD-6AV, Japon) a été utilisé pour détecter l'absorption de l'éluat à 230 nm. Exemple 1 : 2100 g de rhizomes frais de gingembre ont été hachés et filtrés pour obtenir un filtrat et un résidu. 500 ml du filtrat ont été extraits avec 500 ml d'éther éthylique à trois reprises, les couches de phase organique ont été séparées des couches de phase aqueuse, avant combinaison. On a fait s'évaporer l'éther éthylique de la solution d'extraction combinée sous vide pour obtenir un produit d'extraction à l'éther éthylique concentré (I-OE). Le résidu de gingembre a été extrait avec 3000 ml d'acétone à trois reprises, les solutions d'extraction ont été récupérées par filtration et combinées. On a fait s'évaporer l'acétone de la solution d'extraction combinée sous vide pour obtenir un produit d'extraction à l'acétone concentré (I-O) (14,5 g). Dans une colonne de chromatographie en phase inverse de 300 mm x 30 mm garnie de 180 g de résine Diaion HP-20 de diamètre de 500 m à 800 m, 7 g d'un mélange du produit d'extraction à l'éther éthylique concentré (I-OE) et du produit d'extraction à l'acétone concentré (1-0) ont été injectés. 1500 ml d'eau, 2500 ml de méthanol, 2000 ml d'acétone et 2000 ml de chloroforme ont été utilisés pour réaliser une élution. L'éluat aqueux, l'éluat méthanolique, l'éluat acétonique et l'éluat chloroformique ont été recueillis séparément et concentrés sous vide pour obtenir 0,27 g d'éluat aqueux concentré (I-OW), 1,45 g d'éluat méthanolique concentré (I-OM), 2,68 g d'éluat acétonique concentré (I-OA) et 0,83 g d'éluat chloroformique concentré (I-OC). Les quantités (mg) de 6-shogaol, de 6-gingerol et de 6déshydrogingerdione par gramme de I-O, I-OM et I-OA déterminées par CLHP sont énumérées dans le tableau 1. Tableau 1 Teneur (mg/g) I-O I-OM I-OA 6-shogaol 1,10 0,14 1,15 0,0- 6-gingerol 59,98 0,99 103,37 8,57 2,51 0,89 6-déshydrogingerdione 7,68 0,42 8,94 0,41- Exemple 2 : 500 g de rhizomes de gingembre séchés à l'ombre ont été réduits en poudre et la poudre résultante a été extraite avec 30 1 d'acétone à trois reprises (avec 10 1 à chaque fois). Les trois solutions d'extraction ont été combinées ensemble après filtration, puis concentrées sous vide pour obtenir 24 g de produit d'extraction à l'acétone concentré (II-O). Dans une colonne de chromatographie en phase inverse garnie de 600 g de résine Diaion HP-20, 20 g du produit d'extraction à l'acétone concentré (II-O) ont été injectés, lesquels ont ensuite été élués avec 4 1 d'eau, 6,5 1 de méthanol, 15 1 d'acétone et 5 1 de chloroforme successivement. L'éluat aqueux, l'éluat méthanolique, l'éluat acétonique et l'éluat chloroformique ont été recueillis séparément et concentrés sous vide pour obtenir 2,5 g d'éluat aqueux concentré (II-OW), 7,1 g d'éluat méthanolique concentré (II-OM), 6,9 g d'éluat acétonique concentré (II-OA) et 3,5 g d'éluat chloroformique concentré (II-OC). Les quantités (mg) de 6-shogaol, de 6-gingerol et de 6déshydrogingerdione par gramme de II-O, II-OM et II-OA déterminées par CLHP sont énumérées dans le tableau 2. Tableau 2 Teneur (mg/g) II-O II-OM II-OA 6-shogaol 1, 98 0,00 4, 96 ~ 0,00 - 6 -gingerol 43,06 0,84 70,87 1,85 2, 54 0, 00 6-déshydrogingerdione 9,33 0,85 19,15 4,57 2,35 0,28 Exemple 3 : 10 kg de rhizomes de gingembre séchés à l'ombre ont été réduits en poudre et la poudre résultante à été soumise à un entraînement à la vapeur pendant 5 heures. Le distillat a été concentré sous vide pour obtenir 410 g de distillat concentré (III-0). Dans une colonne de chromatographie en phase inverse garnie de 600 g de résine Diaion HP-20,20 g du distillat concentré (III-O) ont été injectés, lesquels ont ensuite été élués avec 4,5 1 d'eau, 4,5 1 de méthanol , 3 1 d' acétone et 5 1 de chloroforme successivement. L'éluat aqueux, l'éluat méthanolique, l'éluat acétonique et l'éluat chloroformique ont été recueillis séparément et concentrés sous vide pour obtenir 0,03 g d'éluat aqueux concentré (III-OW), 14,5 g d'éluat méthanolique concentré (III-OM), 0,85 g d'éluat acétonique concentré (III-OA) et 0,2 g d'éluat chloroformique concentré (III-OC). Le distillat concentré (III-0) ne contient pas de 6-shogaol, de 6-gingerol et de 6-déshydrogingerdione d'après la détermination par CLHP. Exemple 4 : 10 g de poudre de rhizomes de gingembre séchés à l'ombre ont été extraits avec 1000 ml d'acétone à 50 C pendant deux heures. La solution d'extraction a été séparée et concentrée sous vide (40 C, 75 mmHg) pour obtenir un produit d'extraction à l'acétone concentré (IV-O). La couleur et la viscosité du produit (IV-O), ainsi que son rendement, sont indiqués dans le tableau 3. Exemple 5 : 10 g de poudre de rhizomes de gingembre séchés à l'ombre ont été soumis à un entraînement à la vapeur et le distillat huileux, après avoir été séparé du distillat aqueux, a été lyophilisé pour obtenir un extrait huileux (V-O). La couleur et la viscosité de l'extrait huileux (V-0), ainsi que son rendement, sont indiqués dans le tableau 3. Exemple 6 : A 10 g de poudre de rhizomes de gingembre séchés à l'ombre, dans une chambre d' extraction de 250 ml, du CO2 a été introduit à un débit de 45 1/min. La pression de la chambre a été réglée à une pression absolue de 17225.103 à 27560.103 Pa avec une pompe à haute pression (modèle N EK-1, LEWA Co, Etats-Unis) et la température de la chambre a été maintenue à 35 - 60 C avec un échangeur de chaleur (Modèle N H-2410, HOTEC Co., Etats-Unis) et un système de circulation externe. L'extraction a été arrêtée lorsque le volume de CO2 introduit a atteint 300 1, et un produit d'extraction au C02 supercritique (VI-O) a été obtenu après évaporation du CO2. La couleur et la viscosité du produit (VI-O), ainsi que son rendement, sont indiqués dans le tableau 3. Les teneurs en composants piquants déterminées par CLHP sont indiquées dans le tableau 4. Tableau 3 IV-O V-O VI-O L* 87,6 80,4 96,3 A* -9,1-0,1 -9,6 B* 31,1 9,6 22,0 Viscosité (cps) 15,6 11,8 12,1 Rendement (%) 3,8 2,2 3,9 * : les valeurs de L, de A et de B ont été déterminées en utilisant un système colorimétrique #90 (Nippon Denshoku Inc, Co, Ltd., Japon), dans lequel L représente l'intensité, A la différence rouge/vert et B la différence jaune/bleu. Tableau 4 Teneur (mg/g) VI-O 6-shogaol 17,30 0,00 6-gingerol 26,29 0, 00 6-déshydrogingerdione 19,20 1,19 Exemple 7 : Essai antiplaquettaire Du sang, prélevé dans la veine marginale de l'oreille de lapins a été mélangé avec de l'EDTA (100 mM) selon un rapport en volume de 14 : 1, et a été centrifugé à 90 g pendant 10 minutes à la température ambiante pour obtenir du plasma riche en plaquettes. Ce dernier a de plus été centrifugé à 500 g pendant 10 minutes, la couche supérieure riche en plasma a été retirée de celui-ci, et la couche inférieure restante a été mise en suspension avec du liquide de Tyrode contenant 2 mM d'EDTA et pas de calcium. La suspension a encore été centrifugée à 500 g pendant 10 minutes et les plaquettes ont été mises en suspension dans du liquide de Tyrode sans EDTA. Après centrifugation dans les mêmes conditions, les plaquettes ont été mises en suspension dans du liquide de Tyrode ayant les compositions suivantes (mM) : NaCl (136,8), KCl (2,8), NaNCO3 (11,9), MgCl2 (1,1), NaH2PO4 (0,33), CaCl2 (1,0), glucose (11,2) et albumine de sérum de boeuf (0,35 %) . Les nombres de plaquettes ont été déterminés avec un compteur de Coulter (Modèle ZM) et ajustés à 4,5 x 108 plaquettes/ml. Tableau 5. Effets inhibiteurs des extraits de gingembre sur l'agrégation plaquettaire induite par de l'acide arachidonique et du collagène') Concentration pour un effet inhibiteur de 50 % (g/ml) Extrait de gingembreb) Acide arachidonique Collagène I-O 3,8 0,8 5,5 0,4 I-OM 1,7 0,3 2,7 0,4 II-O 3,1 0,5 6,5 1,2 II-OA 10,9 3,2 21,8 2,2 II-OC 6,9 0,7 16,6 4,3 II-OM 2,0 0,2 6,9 2,4 Les plaquettes ont été mises à incuber avec des extraits de gingembre ou avec du DMSO à 0,5 % (Témoin) à 37 C pendant 3 minutes, puis de l'acide arachidonique (100 M) ou du collagène (10 g/ml) a été ajouté pour déclencher l'agrégation. L'aspirine et l'indométacine sont des témoins positifs. Le pourcentage d'effet inhibiteur est calculé de la façon suivante : {[(degré d'inhibition du témoin)- (degré d'inhibition de l'extrait de gingembre) ] (degré d'inhibition du témoin)x 100 % Les valeurs sont présentées sous forme de moyenne écart type, n = 3-6. b) Préparé dans les exemples 1 et 2 Exemple 8 : Evaluation de l'activité inhibitrice sur l'oedème de la patte induit par la carragénine. Une étude sur l' activité inhibitrice sur l'#dème de la patte induit par la carragénine a été réalisée conformément au procédé mentionné par Winter, C.A. et al. (Winter C. A. et al., Proc. Soc. Exper. Biol. Med. 111: 544-547, 1962). Il a été injecté à des souris mâles Wistar pesant 150 20 g, sans alimentation pendant une nuit, au niveau des pattes arrière gauches de celles-ci, 0,1 ml d'une suspension à 1 % de carragénine, puis des échantillons d'essai ou un véhicule en tant que témoin ont été frottés sur les pattes arrière gauches uniformément (10 mg/patte). Trois heures plus tard, les volumes des pattes arrière ont été déterminés en utilisant un scanner volumétrique (Cat. #7150, UGO Basil, Italie), et la différence entre la patte arrière gauche et la patte arrière droite a été utilisée comme indication de l'oedème de la patte induit par la carragénine. Tableau 6. Activité inhibitrice des extraits de gingembre sur l'oedème de la patte induit par la carragéninea) Traitementb) Posologie Activité (mg/patte) inhibitrice sur 1 ' oedème de la patte induit par la carragénine (%) I-O 10 18 I-OE 10 19 I-OM 10 29 I-OA 10 25 II-O 10 18 II-OW 10 0 II-OM 10 26 II-OA 10 25 II-OC 10 8 III-O 10 0 III-OM 10 11 III-OA 10 15 [6]-déshydrogingerdione 5 2 6 a) L'activité inhibitrice sur l'#dème de la patte induit par la carragénine (%) a été calculée de la façon suivante : [(degré moyen d'#dème des souris du groupe témoin) - (degré moyen d'#dème des souris du groupe d'essai)/ (degré moyen d'#dème des souris du groupe témoin) ] x 100 % Les valeurs sont présentées sous forme de moyenne écart type, n = 3-6. b) Préparé dans les exemples 1,2 et 3 Exemple 9 : Evaluation de l'activité inhibitrice sur Trichophyton mentagrophytes ou sur Pityrosporum ovale. Essai anti-Trichophyton mentagrophytes La concentration minimale inhibitrice (CMI) d'extrait de gingembre a été déterminée conformément au procédé précédemment décrit par Edwards, J. R. et al. (Edwards, J. R. et al., Antimicrobial Agents Chemotherapy 33 : 215-222,1989). La substance à analyser a été dissoute et diluée en série dans un solvant (100 % DMSO) jusqu'aux concentrations de base souhaitées. Pour chaque concentration testée, une partie aliquote de 0,01 ml a été ajoutée à une plaque de 48 puits contenant 0,99 ml de bouillon de dextrose de pomme de terre (Potato Dextrose Broth)(DIFCO, Etats-Unis) avec 103-104 UFC/ml de Trichophyton mentagrophytes (Collection nationale américaine de culture de microorganismes ATCC 9533) . Les plaques ont été mises à incuber à 28 C pendant 72 heures et ont ensuite été examinées visuellement et cotées. Un véhicule-témoin a été utilisé comme témoin à blanc. Chaque concentration a été évaluée en double. Les résultats figurent dans le tableau 7. Essai anti-Pityrosporum ovale La concentration minimale inhibitrice (CMI) d'extrait de gingembre a été déterminée à l'aide du procédé mentionné ci-dessus (Edwards, J. R. et al., Antimicrobial Agents Chemotherapy 33 : 1989). La substance à analyser a été dissoute et diluée en série dans un solvant (100 % DMSO) jusqu'aux concentrations de base souhaitées. Pour chaque concentration testée, une partie aliquote de 0,01 ml a été ajoutée à une plaque de 48 puits contenant 0,99 ml de milieu de Sabouraud fluide (Fluid Sabouraud Medium) (DIFCO, Etats-Unis) avec 103-104 UFC/ml de Pityrosporum ovale (Collection nationale américaine de culture de microorganismes ATCC 38593). Les plaques ont été mises à incuber à 37 C pendant 48 heures et ont ensuite été examinées visuellement et cotées. Un véhicule-témoin a été utilisé comme témoin à blanc. Chaque concentration a été évaluée en double. Les résultats figurent dans le tableau 7. Tableau 7. Effets inhibiteurs des extraits de gingembre sur Pityrosporum ovale (Po) et sur Trichophyton mentagrophytes (Tm) CMI ( g/ml) Extrait de gingembre) Po Tm I-O 100 30 I-OM 100 30 II-O 500 30 II-OC 100 30 II-OM 100 30 III-O 500 100 Témoin à blanc b) b) ----] ')Préparé dans les exemples 1,2 et 3 b)Pas d'effet inhibiteur sur le développement REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation d'un produit puissant en matière d'activités anti-inflammatoire, anti-agrégation plaquettaire et antifongique, à partir de rhizomes de Zingiber officinale, comprenant les étapes suivantes consistant à : a) préparer un liquide brut à partir de rhizomes de Zingiber officinale ; b) introduire le liquide brut dans une colonne de chromatographie en phase inverse, et éluer la colonne avec de l'eau, avec un premier éluant et avec un deuxième éluant successivement, ledit deuxième éluant ayant une polarité plus faible que celle du premier éluant mais plus forte que celle du chloroforme, de sorte qu'un premier éluat résultant de l'élution avec le premier éluant et qu'un deuxième éluat résultant de l'élution avec le deuxième éluant sont obtenus ; c) éliminer le premier éluant du premier éluat par évaporation, de sorte qu'un premier éluat concentré est obtenu et peut être utilisé en tant que produit puissant ; et d) éliminer le deuxième éluant du deuxième éluat par évaporation, de sorte qu'un deuxième éluat concentré est obtenu et peut être utilisé en tant que produit puissant ; dans lequel l'étape a) comprend les étapes i) à iv), ou comprend l'étape I), l'étape I'), ou l'étape I"), lesdites étapes i) à iv) consistant à : i) hacher des rhizomes frais de Zingiber officinale et filtrer le mélange qui en résulte pour obtenir un filtrat et un résidu ; ii) extraire le filtrat avec un premier solvant organique, récupérer la solution d'extraction par le premier solvant organique résultante, et évaporer le premier solvant organique de la solution d'extraction pour obtenir une première solution d'extraction concentrée ; iii) extraire le résidu avec un deuxième solvant organique, récupérer la solution d'extraction par le deuxième solvant organique résultante, et évaporer le deuxième solvant organique de la solution d'extraction pour obtenir une deuxième solution d'extraction concentrée ; et iv) combiner la première solution d'extraction concentrée et la deuxième solution d'extraction concentrée pour obtenir le liquide brut ; ladite étape I) consistant à : I) extraire de la poudre de rhizomes séchés de Zingiber officinale avec le deuxième solvant organique, récupérer la solution d'extraction par le deuxième solvant organique résultante, et évaporer le deuxième solvant organique de la solution d'extraction pour obtenir le liquide brut ; ladite étape Il) consistant à : I') soumettre à un entraînement à la vapeur de la poudre de rhizomes séchés de Zingiber officinale, et concentrer le distillat résultant, par évaporation pour obtenir le liquide brut ; et ladite étape I") consistant à : I") extraire de la poudre de rhizomes séchés de Zingiber officinale avec du C02 supercritique, récupérer la solution d'extraction par le C02 supercritique résultante et évaporer le C02 de la solution d'extraction pour obtenir le liquide brut. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le produit puissant en matière d'anti-inflammation ou d'anti-agrégation plaquettaire comprend de 0 à 10 mg de 6-shogaol par gramme du produit, de 1 à 150 mg de 6gingerol par gramme du produit et de 0 à 40 mg de 6déshydrogingerdione par gramme du produit. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel ledit premier éluant est le méthanol et ledit deuxième éluant est l'acétone. 4. Procédé selon la revendication 1,2 ou 3, dans lequel l'étape a) comprend les étapes i) à iv). 5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel ledit premier solvant organique est l'éther éthylique. 6. Procédé selon la revendication 4, dans lequel ledit deuxième solvant organique est l'acétone, le méthanol, l'éthanol ou une combinaison de ceux-ci. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel ledit deuxième solvant organique est l'acétone. 8. Procédé selon la revendication 1,2 ou 3, dans lequel l'étape a) comprend l'étape I). 9. Procédé selon la revendication 8, dans lequel ledit deuxième solvant organique est l'acétone, le méthanol, l'éthanol ou une combinaison de ceux-ci. 10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel ledit deuxième solvant organique est l'acétone. 11. Procédé selon la revendication 1,2 ou 3, dans lequel l'étape a) comprend l'étape I'). 12. Procédé selon la revendication 1,2 ou 3, dans lequel l'étape a) comprend l'étape I"). 13. Procédé selon la revendication 1, dans lequel ladite colonne de chromatographie en phase inverse est garnie d'une résine poreuse. 14. Composition pharmaceutique anti-inflammatoire comprenant une quantité thérapeutiquement efficace dudit liquide brut préparé à l'étape a) du procédé selon la revendication 1, en tant que principe actif, en mélange avec un véhicule ou un diluant pharmaceutiquement acceptable pour le principe actif. 15. Composition pharmaceutique pour l'inhibition de l'agrégation plaquettaire, qui comprend une quantité thérapeutiquement efficace dudit liquide brut préparé à l'étape a) du procédé selon la revendication 1, en tant que principe actif, en mélange avec un véhicule ou un diluant pharmaceutiquement acceptable pour le principe actif. 16. Composition pharmaceutique antifongique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace dudit liquide brut préparé à l'étape a) du procédé selon la revendication 1, en tant que principe actif, en mélange avec un véhicule ou un diluant pharmaceutiquement acceptable pour le principe actif. 17. Composition pharmaceutique selon la revendication 14, 15 ou 16, dans laquelle l'étape a) comprend les étapes i) à iv) . 18. Composition pharmaceutique selon la revendication 14, 15 ou 16, dans laquelle l'étape a) comprend l'étape I). 19. Composition pharmaceutique selon la revendication 17, dans laquelle ledit premier solvant organique est l'éther éthylique. 20. Composition pharmaceutique selon la revendication 17, 18 ou 19, dans laquelle ledit deuxième solvant organique est l'acétone, le méthanol, l'éthanol ou une combinaison de ceux-ci. 21. Composition pharmaceutique selon la revendication 20, dans laquelle ledit deuxième solvant organique est l'acétone. 22. Composition pharmaceutique selon la revendication 14, 15 ou 16, dans laquelle l'étape a) comprend l'étape I'). 23. Composition pharmaceutique selon la revendication 14, 15 ou 16, dans laquelle l'étape a) comprend l'étape I"). 24. Composition pharmaceutique anti-inflammatoire comprenant une quantité thérapeutiquement efficace du produit préparé selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 13, en tant que principe actif, en mélange avec un véhicule ou un diluant pharmaceutiquement acceptable pour le principe actif. 25. Composition pharmaceutique pour l'inhibition de l'agrégation plaquettaire, qui comprend une quantité thérapeutiquement efficace du produit préparé selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 13, en tant que principe actif, en mélange avec un véhicule ou un diluant pharmaceutiquement acceptable pour le principe actif. 26. Composition pharmaceutique antifongique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace du produit préparé selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 13, en tant que principe actif, en mélange avec un véhicule ou un diluant pharmaceutiquement acceptable pour le principe actif. 27. Composition pharmaceutique selon la revendication 24, 25 ou 26, dans laquelle ledit produit est le premier éluat concentré préparé à l'étape c). 28. Composition pharmaceutique selon la revendication 24, 25 ou 26, dans laquelle ledit produit est le deuxième éluat concentré préparé à l'étape d). 29. Composition pharmaceutique selon la revendication 16 ou 26, qui est utilisée dans le traitement d'une maladie associée à Trichophyton mentagrophytes ou à Pityrosporum ovale. 30. Composition pharmaceutique selon la revendication 29, dans laquelle ladite maladie est sélectionnée dans le groupe comprenant le pied d'athlète, la teigne tondante microscopique, l'eczéma marginé, la dermatophytose de la peau glabre, l'onychomycose, le pityriasis capitis simplex, le pityriasis versicolor, la folliculite à pityrosporum, la dermatite séborrhéique et les pellicules. 31. Composition pharmaceutique selon la revendication 29, qui se présente sous la forme d'un shampooing, d'un gel pour le bain, d'un savon, d'une lotion corporelle, d'une crème pour le corps ou d'un détergent. 32. Composition pharmaceutique selon la revendication 31, qui se présente sous la forme d'un shampooing destiné à être utilisé dans le traitement des pellicules.