Brevet FR2810995A1 — publié le 20020104

Compositions et méthodes pour le traitement ou la détection de pathologies neurodégénératives La présente invention concerne le domaine de la biologie, de la génétique et de la médecine. Elle concerne notamment de nouvelles méthodes pour la détection, la caractérisation et/ou le traitement (ou la prise en charge) de pathologies neurodégénératives, notamment de la sclérose latérale amyotrophique. L'invention concerne également des méthodes pour l'identification ou le screening de composés actifs dans ces pathologies. io L'invention concerne également les composés, gènes, cellules, plasmides ou compositions utiles pour la mise en oeuvre des méthodes ci- dessus. L'invention décrit notamment le rôle de calcineurine dans ces pathologies et son utilisation comme cible thérapeutique, diagnostique ou expérimentale. i5 De nombreuses pathologies neurodégénératives ont été décrites comme ayant une composante ou un stade lié au phénomène d'excitotoxicité. C'est le cas de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, de la sclérose en plaques et de la chorée de Huntington. La sclérose amyotrophique latérale (SAL ou ALS pour Amyotrophic Lateral Sclerosis) est une maladie neurodégénérative, associée à différents types d'inclusions tels les corps de Lewis et caractérisée par une apoptose des motoneurones spinaux et corticaux dont l'issue fatale est parfois associée à une démence frontale. Des formes sporadiques, sans aucune mutation décrite, coexistent avec des formes familiales (FALS) associées à des mutations dans le gène SOD1 codant pour la superoxide dismutase. La majorité des cas est sporadique, les formes familiales (FALS) étant très rares. Il est vraisemblable qu'une longue période asymptomatique précède l'apparition des symptômes cliniques qui sont variés et dont la classification est complexe. Les futurs développements thérapeutiques substitueront aux traitements de la symptomatologie des stratégies basées sur les causes moléculaires de la pathologie. Au niveau cellulaire, ces symptômes sont associés à une mort des motoneurones corticaux et des motoneurones spinaux. Cette mort neuronale a été reliée à différents phénomènes qui constituent la base de plusieurs pathologies neurodégénératives. C'est le cas de l'excitotoxicité liée au glutamate, du stress oxydatif, d'une certaine auto immunité dirigée contre des marqueurs neuronaux (les canaux calciques dans le cas de l'ALS) ainsi que d'anomalies du cytosquelette. Si ces phénomènes sont décrits, la ou les causes de ces maladies, dont l'ALS, sont obscures. Même si les FALS sont liées à des mutations dans le gène SOD1 qui code pour la superoxide dismutase, les mécanismes qui engagent les neurones vers la mort cellulaire dont au moins îo une composante est l'apoptose sont inconnus. Identifier les événements moléculaires impliqués dans les différents phénomènes impliqués dans la mort cellulaire permettra de mettre en place de nouvelles stratégies thérapeutiques. L'étude de ces événements est difficilement réalisable à partir de biopsies humaines. Ces biopsies proviennent évidemment d'échantillons post-mortem dont la qualité est difficilement contrôlable et ne représentent que des états pathologiques représentatifs des phases tardives de la maladie. Les modèles animaux donnent accès à des échantillons biologiques qui permettent d'analyser différentes étapes du développement d'une pathologie et de comparer ces étapes à des témoins sains. A cet égard, des souris transgéniques qui expriment le gène humain SOD1 portant l'une des mutations qui prévaut dans les FALS (mutation G93A) sont disponibles auprès de Jackson Laboratory, sous condition de prise d'une licence d'utilisation auprès de la NorthWestern University. Ce modèle reproduit en 120 jours l'issue fatale de la maladie avec des symptômes comparables à ceux de la maladie humaine. L'apparition des symptômes d'ALS liés à la mutation G93A dans SOD1 n'est pas la conséquence d'une réduction de l'activité superoxyde dismutase mais d'un gain de fonction qui augmente la capacité de l'enzyme à générer des radicaux libres. Malgré ces informations, les événements moléculaires qui président aux différentes étapes de l'ALS sont mal connus. La complexité de ces événements moléculaires reflète l'évolution de la pathologie: Dans le modèle transgénique étudié, aucune dérégulation neuronale ou manifestation clinique n'a été rapportée à 30 jours. 60 jours correspondent à un stade qui précède de peu les premiers symptômes, mais qui est déjà caractérisé au niveau cérébral par des changements dans la physiologie cellulaire tels qu'une altération du métabolisme mitochondrial, un stress et une mort neuronale associés à un phénomène d'excitotoxicité. A 90 jours, 50% des motoneurones corticaux et spinaux sont morts et un processus actif d'apoptose neuronale est engagé parallèlement à une activation astrocytaire. Le phénomène io d'excitotoxicité n'est plus observé à ce stade. La mort neuronale y est associée à l'activation de caspases qui ne semblent pas impliquées dans les phases précoces de la pathologie. Identifier les différents événements moléculaires spécifiques des différentes phases de la pathologie doit permettre d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques aussi bien que de nouveaux marqueurs diagnostiques. L'une des approches les plus efficaces pour réaliser cette identification consiste à identifier les gènes et les protéines dont l'expression caractérise un état physiopathologique. La présente invention décrit à présent l'identification d'événements génétiques impliqués dans les phénomène d'excitotoxicité et de mort neuronale. La présente invention fournit ainsi de nouvelles approches thérapeutiques et diagnostiques des pathologies associées à ces phénomènes, ainsi que de nouvelles cibles pour l'identification de composés actifs. Plus particulièrement, une analyse qualitative différentielle a été effectuée à partir d'ARN extraits d'échantillons de cerveau et de moelle épinière sans isolement préalable des neurones afin de prendre en compte un maximum d'événements d'épissages alternatifs liés au développement de la pathologie. Cette analyse a été effectuée par criblage différentiel qualitatif selon la technique DATAS (décrite dans la demande n WO99/46403), qui présente des avantages inégalés. La présente demande de brevet découle notamment de la construction par la demanderesse d'un répertoire des altérations d'épissage dans le cerveau des animaux modèles de l'ALS âgés de 60 jours. Ce répertoire qui contient plus de séquences distinctes, implique des acteurs clefs du phénomène d'excitotoxicité tels que les canaux potassiques et le récepteur NMDA. Des séquences dérivées d'ARNs codant pour des protéines impliquées dans la io réponse au stress, dont des protéines de choc thermique, font également partie de ce répertoire, soulignant l'implication de cette réponse dans les phases précoces de I'ALS. Une altération du métabolisme énergétique apparaît clairement affecter les motoneurones corticaux des animaux qui développent la pathologie. Par exemple, I'intron 6 de la forme mitochondriale de la créatine kinase est isolé spécifiquement à partir des ARN messagers exprimés en conditions pathologiques chez les animaux âgés de 60 jours. Cette interruption de la séquence codante par cette rétention d'intron aboutit à un ARN messager qui code pour une forme inactive de l'enzyme. Cette observation est en accord avec les observations biochimiques qui ont montré une diminution de l'activité créatine kinase mitochondriale corrélée avec une diminution de la quantité de cette enzyme dans les neurones des animaux du même modèle transgénique. La spécificité des séquences qui constituent ce répertoire est attestée par le fait que la même analyse différentielle qualitative de l'expression génétique réalisée sur des animaux âgés de 90 jours aboutit à un répertoire différent dont sont absents notamment les différents marqueurs de l'excitotoxicité. L'analyse des modifications d'épissage confirme que les événements moléculaires sont différents selon le stade de la pathologie. La réalisation de DATAS sur des ARN d'animaux contrôles et transgéniques âgés de 60 jours a permis d'isoler un fragment d'ADNc dérivé de l'ARNm de la sous-unité catalytique de la calcineurine. Ce fragment correspond à un fragment d'exon spécifiquement présent dans les animaux contrôles et donc spécifiquement délété dans les animaux transgéniques pour SOD1G93A au stade 60 jours. Ce fragment recouvre les nucléotides 1348 à 1579 référencés à partir de I'ATG. Cette région est essentiellement codante et contient un domaine auto-inhibiteur de l'enzyme situé à l'extrémité Cterminale de l'enzyme. Par des expériences de RT PCR, une nouvelle isoforme de la sous-unité catalytique de la calcineurine a été mise en évidence. Cette isoforme courte se distingue de la forme longue par une délétion des nucléotides 1341 à 1743 et par conséquent des acides aminés 447 à 547, le codon stop de la calcineurine correspondant au nucléotide 1641 (la séquence complète de la calcineurine et son ADN, d'origine 0o murine ou humaine, est disponible sur banque de données, notamment GeneBank). Des expériences de mutagenèse et de délétions ont montré que le domaine auto-inhibiteur de la calcineurine correspond aux acides aminés 492 à 547 et que l'absence de ce domaine aboutit à une activation constitutive de la calcineurine. La calcineurine est impliquée dans le relais des voies de i signalisation qui dépendent du calcium et de la calmoduline. L'interaction de la calmoduline avec la calcineurine stimule l'activité de cette dernière. La délétion du domaine auto-inhibiteur de la calcineurine augmente le niveau basal d'activité de cette enzyme mais la maintient susceptible à l'activation par la calmoduline. La présente invention décrit donc un événement moléculaire original et nouveau (un épissage), qui aboutit à une activation constitutive de la calcineurine et qui est corrélé au phénomène d'excitotoxicité et/ou de mort neuronale. L'invention montre également, pour la première fois, qu'une activation constitutive de la calcineurine est associée aux stades précoces de l'ALS. La calcineurine constitue donc une cible thérapeutique nouvelle et importante dans le développement de thérapeutiques de ces pathologies, utilisables notamment à des phases précoces de leur développement, et s'adressant aux véritables bases moléculaires de la pathologie et non aux symptômes ou composantes immunitaires associées. Un premier objet de l'invention réside plus particulièrement dans l'utilisation d'un acide nucléique comprenant tout ou partie d'une séquence dérivée de l'ARN messager de la sous-unité catalytique de la calcineurine pour la mise en oeuvre d'une méthode de diagnostic ou de détection d'une situation de stress neuronal et plus particulièrement la situation d'excitotoxicité. L'invention réside, généralement, dans l'utilisation d'un acide nucléique complémentaire de tout ou partie du gène ou du messager de la calcineurine, pour la détection d'événements pathologiques de type excitotoxicité, stress ou mort neuronale, etc. Il s'agit plus particulièrement d'acides nucléiques capables de mettre en évidence la forme délétée de l'ARNm de la calcineurine, notamment un variant d'épissage dans lequel un domaine auto-inhibiteur est délété, en particuler les résidus 1341-1743 (ou la région correspondante du gène ou ADN humain). Avantageusement, l'acide nucléique comprend tout ou partie de la séquence codant le domaine auto-inhibiteur de la calcineurine (compris entre les nucléotides 1348 et 1579 à partir de l'ATG, pour la formue murine, ou des résidus homologues dans la séquence humaine), ou de la séquence résultant de la jonction entre les régions non délétées, ou une séquence complémentaire de celles-ci. L'invention est applicable au diagnostic ou la détection de différentes pathologies telles que la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaques, la chorée de Huntington ou l'ischémie cérébrale. Elle peut être utilisée pour la détection précoce, la mise en évidence d'une prédisposition, le choix et l'adaptation d'un traitement, le suivi de l'évolution de la pathologie, etc. Elle est particulièrement adaptée à la détection à un stade précoce de la sclérose en plaques. Un autre objet de l'invention réside dans l'utilisation d'un composé capable d'inhiber ou de réduire l'expression ou l'activité de la calcineurine, pour la préparation d'une composition destinée au traitement des maladies neurodégénératives. Dans le contexte de l'invention, le terme " traitement " désigne le traitement préventif, curatif, palliatif, ainsi que la prise en charge des patients (réduction de la souffrance, amélioration de la durée de vie, ralentissement de la progression de la maladie), etc. Le traitement peut en outre être réalisé en combinaison avec d'autres agents ou traitements, notamment adressant les événements tardifs de la pathologie, tels que des inhibiteurs de caspases ou autres composés actifs. Dans un mode de réalisation particulier, le composé est acide nucléique anti- sens, capable d'inhiber la transcription du gène de la calcineurine ou la traduction du messager correspondant. L'acide nucléique anti-sens peut comprendre tout ou partie de la séquence du gène de la calcineurine, d'un fragment de celle-ci, du messager de la calcineurine, ou d'une séquence complémentaire à celles-ci. L'antisens peut notamment comprendre une région complémentaire de la forme d'épissage identifiée, et inhiber (ou réduire) sa traduction en protéine. Selon un autre mode de réalisation, le composé est un composé chimique, d'origine naturelle ou synthétique, notamment une molécule organique ou inorganique, d'origine végétale, bactérienne, virale, animale, eucaryote, synthétique ou semi-synthétique, capable de moduler l'expression ou l'activité de la calcineurine. A titre d'exemple préféré, le composé est choisi parmi le FK506 et la cyclosporine A. Un travail antérieur réalisé in vitro et in vitro à l'aide de lymphocytes T a montré que la superoxyde dismutase (SOD) protège la calcineurine de son inactivation. Toutefois, une étude plus récente a montré qu'une forme mutée de SOD1 qui correspond à une mutation retrouvée dans les formes familiales de l'ALS n'a pas un tel impact sur la calcineurine. Un lien direct entre ALS et augmentation de l'activité de la calcineurine est donc exclu par ces enseignements. Plusieurs inhibiteurs de la calcineurine ont été décrits dans l'art antérieur. s Certains de ceux-ci sont des médicaments disponibles commercialement. C'est le cas du tacrolimus (ou FK506) et de la cyclosporine A. Ces deux composés sont des immuno-suppresseurs qui se lient à des immunophilines, respectivement la protéine FKBP12 (FK506 binding protein 12) et la cyclophiline A. L'inhibition de la calcineurine, lors de l'administration de ces composés, se 0o fait par formation d'un complexe entre le composé, I'immunophiline qu'il cible et la sous-unité catalytique de la calcineurine. Ces immunophilines sont des peptidyl-prolyl-cis/transrotamases dont l'activité est inhibée également par leurs ligands chimiques. Certains rapports sont disponibles sur l'action neuroprotectrice de certains immunosuppresseurs in vitro. Les rapports les plus récents documentent que ces effets neuroprotecteurs, de même que les effets neurotrophiques de ces composés sont obtenus avec des immunophillines non immunosuppressives qui ont perdu la capacité d'inhiber la calcineurine. De même, les résultats obtenus chez l'animal en ischémie confirment les résultats in vitro. Ainsi, aucun effet significatif des composés cyclosporine A ou FK506 n'a été décrit en modèle animal de l'ALS ou chez des patients atteints de cette maladie. A notre connaissance aucun essai n'a été mené sur le modèle murin et l'absence de résultats probants chez l'homme est parfaitement compatible avec notre observation que la calcineurine serait activée aux stades précoces du développement de la pathologie, lors de l'excitotoxicité, et non aux stades tardifs. En l'absence de diagnostic précoce, les patients enrôlés dans l'étude clinique étaient des patients présentant déjà des manifestations cliniques et donc vraisemblablement engagés dans les phases tardives de la maladie. Aujourd'hui, il n'existe donc pas d'évidence selon laquelle l'inhibition de la calcineurine par le FK506 ou la cyclosporine A pourrait ralentir la progression de l'ALS. D'autre part, il est à souligner qu'aucune étude n'a été entreprise en pathologie humaine ou à l'aide d'un modèle animal pour tirer partie de la capacité du FK506 et de la cyclosporine A à inhiber l'activité de la calcineurine. Les différents essais, y compris ceux entrepris pour traiter les syndrômes neurodégénératifs, tendaient à inhiber la composante immunitaire associée à ces pathologies. La présente invention propose donc, pour la première fois, la calcineurine comme cible thérapeutique pour le traitement des événements moléculaires io associés à l'exitotoxicité. Selon des modes de mise en oeuvre particuliers, l'invention peut être utilisée pour inhiber ou réduire l'excitotoxicité neuronale en phase précoce des maladies neurodégénératives. Elle est applicable notamment au traitement de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, de la sclérose en plaques, de la chorée de Huntington ou de lI'ischémie cérébrale. D'autres objets de l'invention résident dans: I'utilisation des composés ci-dessus pour le traitement de l'ALS, notamment pour réduire l'excitotoxicité neuronale en phase précoce de l'ALS, 20. I'utilisation de la cyclosporine A pour la préparation d'une composition destinée à inhiber l'activité de la calcineurine chez les patients atteints d'ALS, ou I'utilisation de FK506 pour la préparation d'une composition destinée à inhiber l'activité de la calcineurine chez les patients atteints d'ALS. D'autres objets de l'invention concernent des méthodes de sélection, identification, ou caractérisation de composés actifs sur les pathologies associées à l'excitotoxicité, ou au stress neuronal, comprenant la mise en contact de composés tests avec une cellules exprimant le variant d'épissage de la calcineurine dépourvu de domaine auto-inhibiteur, et la mise en évidence des composés inhibant l'expression ou l'activité de cette protéine. Un autre objet de l'invention concerne un polypeptide dérivé de la calcineurine, dépourvu du domaine auto-inhibiteur, en particulier des acides aminés 492-547, de préférence 447-547. Ce polypeptide peut être d'origine variée, notamment murine, humaine, synthétique ou semisynthétique, etc. Un autre objet de l'invention concerne tout acide nucléique codant un polypeptide tel que défini ci-dessus, les vecteurs le contenant, cellules recombinantes, et utilisations. io D'autres aspects et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Mode opératoire: L'analyse qualitative différentielle a été effectuée à partir d'ARN poly adénylés (poly A+) extraits d'échantillons de cerveaux d'animaux correspondant aux différents stades, sans isolement préalable des neurones afin de prendre en compte un maximum d'évènements d'épissages alternatifs liés au développement de la pathologie. Les ARN poly A+ sont préparés selon des techniques connues de l'homme de métier. Il peut s'agir en particulier d'un traitement au moyen d'agents chaotropiques tels que le thiocyanate de guanidium suivi d'une extraction des ARN totaux au moyen de solvants (phénol, chloroforme par exemple). De telles méthodes sont bien connues de l'homme du métier (voir Maniatis et al., Chomczynsli et al., Anal. Biochem. 162 (1987) 156), et peuvent être aisément pratiquées en utilisant des kits disponibles dans le commerce. A partir de ces ARN totaux, les ARN poly A+ sont préparés selon des méthodes classiques connues de l'homme de métier et proposées par des kits commerciaux. Ces ARN poly A+ servent de matrice à des réactions de transcription inverse à lI'aide de reverse transcriptase. Avantageusement sont utilisées des reverse transcriptases dépourvues d'activité RNase H qui permettent d'obtenir des premiers brins d'ADN complémentaire de tailles supérieures à ceux obtenus Il avec des reverse transcriptases classiques. De telles préparations de reverse transcriptases sans activité RNase H sont disponibles commercialement. Pour chaque point de la cinétique de développement de la pathologie (30 jours, jours et 90 jours) les ARN poly A+ ainsi que les ADNc simple brins sont préparés à partir des animaux transgéniques (T) et des animaux contrôles syngéniques (C). Conformément à la technique DATAS, pour chaque point de la cinétique sont réalisées des hybridations d'ARNm (C) avec des ADNc (T) et des hybridations réciproques d'ARNm (T) avec des ADNc (C). o10 Ces hétéroduplex ARNm/ADNc sont ensuite purifiés selon les protocoles de la technique DATAS. Les séquences d'ARN non appariées avec un ADN complémentaire sont libérées de ces hétéroduplex sous l'action de la RNase H, cette enzyme dégradant les séquences d'ARN appariées. Ces séquences non appariées représentent les différences qualitatives qui existent entre des ARN par ailleurs homologues entre eux. Ces différences qualitatives peuvent être localisées n'importe o sur la séquence des ARN, aussi bien en 5', 3' ou à l'intérieur de la séquence et notamment dans la séquence codante. Selon leur localisation, ces séquences peuvent être non seulement des modifications d'épissage mais également des conséquences de translocations ou de délétions. Les séquences d'ARN représentant les différences qualitatives sont ensuite clonées selon les techniques connues de l'homme de métier et notamment celles décrites dans le brevet de la technique DATAS. Ces séquences sont regroupées au sein de banques de cDNA qui constituent des banques qualitatives différentielles. Une de ces banques contient les exons et les introns spécifiques de la situation saine; les autres banques contiennent les événements d'épissage caractéristiques des conditions pathologiques. L'expression différentielle des clones a été vérifiée par hybridation avec des sondes obtenues par reverse-transcription à partir d'ARN messagers extraits des différentes situations étudiées. Les clones hybridant de façon différentielle ont été retenus pour analyse ultérieure. Les séquences identifiées par DATAS correspondent à des introns et/ou à des exons exprimées de façon différentielle par épissage entre les situations pathologiques et la situation saine. Ces évènements d'épissage peuvent être spécifiques d'une étape donnée du développement de la pathologie ou caractéristiques de l'état sain. La comparaison de ces séquences avec les banques de données permet de classifier les informations obtenues et de proposer une sélection raisonnée des séquences selon leur intérêt diagnostique ou thérapeutique. Cette étude a permis de mettre en évidence une nouvelle isoforme de la sous- unité catalytique de la calcineurine, spécifique des cellules (ou échantillons biologiques) pathologiques. Cette isoforme courte se distingue de la forme longue par une délétion des nucléotides 1341 à 1743 et par conséquent des acides aminés 447 à 547, le codon stop de la calcineurine correspondant au nucléotide 1641. L'administration de FK506 et de cyclosporine A à des souris transgéniques modèles de I'ALS ralentit la progression de la pathologie. Les deux composés sont administrés selon trois voies, intrapérinonéale, intraveineuse et orale à différentes doses selon des protocoles connus de l'homme de métier et dérivés des protocoles utilisés pour mettre à profit leurs propriétés immuno-suppressives, dès les animaux âgés de 8 jours. Les résultats indiquent clairement que le résultat optimal obtenu avec chacun des composés est une prolongation de la survie de ces animaux de 30 jours (soit d'un quart par rapport aux animaux contrôles traités par le seul véhicule). La mort survient à 150 jours au lieu de 120 jours. Aucune modification de la cinétique n'est observée si le traitement est interrompu à 90 jours, c'est à dire lorsque le phénomène d'excitotoxicité n'est plus présent et lorsque l'activation constitutive de la calcineurine n'est plus révélée par détection de son isoforme courte délétée de son domaine auto-inhibiteur. L'implication de l'inhibition de la calcineurine dans la spécificité de l'effet thérapeutique est soulignée par le fait que (i) des immunosuppresseurs qui agissent par d'autres mécanismes, notamment la rapamycine, n'ont aucun effet sur le modèle étudié (ii) un dérivé non immuno-suppresseur de la cyclosporine qui n'inhibe pas la calcineurine mais inhibe l'activité romatase de la cyclophiline A ne produit aucun effet dans le modèle étudié. D'autres object et applications de l'invention résident notamment dans: l'utilisation de tout ou partie d'une séquence dérivée de I'ARN messager de la sous-unité catalytique de la calcineurine à des fins de diagnostic ou de dépistage ou de caractérisation de pathologies neurodégénératives ayant une composante ou un stade lié au phénomène d'excitotoxicité, telles que la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaques, la chorée de Huntington ou l'ischémie cérébrale, - I'utilisation de tout fragment d'acide nucléique y compris des ARN anti- sens is dans le but d'inhiber l'expression de la calcineurine chez les patients atteints de telles pathologies, -l'utilisation de tout composé chimique, notamment de la cyclosporine A ou du composé FK506, ou de toute composition pharmaceutique les contenant, dans le but d'inhiber l'activité de la calcineurine chez les patients atteints de telles pathologies, -l'utilisation de tout ou partie d'une séquence dérivée de l'ARN messager de la sous-unité catalytique de la calcineurine à des fins de caractérisation du tissu et de la situation ischémique Revendications 1. Utilisation d'un acide nucléique comprenant tout ou partie d'une séquence dérivée de l'ARN messager de la sous-unité catalytique de la calcineurine pour la mise en oeuvre in vitro ou ex vivo d'une méthode de diagnostic ou de détection d'une situation de stress neuronal et plus particulièrement la situation d'excitotoxicité. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'acide nucléique 1o comprend tout ou partie de la séquence codant le domaine auto-inhibiteur de la calcineurine, ou de la séquence résultant de la jonction entre les régions non délétées, ou une séquence complémentaire de celles-ci. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour le diagnostic ou la détection de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, de la sclérose en plaques, de la chorée de Huntington ou de l'ischémie cérébrale. 4. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour la détection à un stade précoce de la sclérose en plaques. 5. Utilisation d'un composé qui inhibe ou réduit l'expression ou l'activité de la calcineurine, pour la préparation d'une composition destinée au traitement des maladies neurodégénératives. 6. Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que le composé est acide nucléique anti-sens, capable d'inhiber la transcription du gène de la calcineurine ou la traduction du messager correspondant. 7. Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que le composé est un composé chimique, d'origine naturelle ou synthétique. 8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que le composé est choisi parmi le FK506 et la cyclosporine A. 9. Utilisation selon l'une des revendications 5 à 8, pour inhiber ou réduire I'excitotoxicité neuronale en phase précoce des maladies neurodégénératives. s 10. Utilisation selon l'une des revendications 5 à 9, pour le traitement de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, de la sclérose en plaques, de la chorée de Huntington ou de l'ischémie cérébrale. 11. Utilisation selon l'une des revendications 5 à 10, pour le traitement de l'ALS, o0 notamment pour réduire l'excitotoxicité neuronale en phase précoce de l'ALS. 12. Utilisation de la cyclosporine A pour la préparation d'une composition destinée à inhiber l'activité de la calcineurine chez les patients atteints d'ALS. i5 13. Utilisation de FK506 pour la préparation d'une composition destinée à inhiber l'activité de la calcineurine chez les patients atteints d'ALS.