Brevet FR2810258A1 — publié le 20011221

La présente invention concerne un procédé de très longue conservation des gels d'électrophorèse. L'électrophorèse utilise les propriétés ioniques des molécules pour les séparer. Dans cette technique, on utilise des gels composés la plupart du temps de polymères d'agarose, constitués d'unités agarobiose, dont la formule développée est représentée en page 3, ou de copolymères d'acrylamide et de méthylène bisacrylamide, dont les formules développées sont indiquées en page 3. Les mélanges de molécules à séparer sont déposés dans des puits creusés dans ces gels qu'on soumet ensuite à un champ électrique pour obtenir la séparation. Les gels d'agarose et d'acrylamide sont très fragiles. De plus, leur conservation est problématique car ces gels se déshydratent irréversiblement quant ils sont au contact de l'air ambiant. Ils sont donc habituellement conservés à basse température (4 C ou moins) ou en solution pendant une durée limitée. Une fois les gels déshydratés pour leur analyse, ceux-ci le sont irréversiblement. L'invention présentée ici permet de transformer ces gels fragiles et peu conservables en solides réhydratables à tout moment, par simple réhydratation. Le procédé de l'invention consiste à polymériser les gels ; ensuite à les incuber dans une solution contenant du tréhalose dihydrate dont la formule développée est indiquée en page 3 ; puis à les déshydrater pour conduire à des solides secs dans un état vitreux. L'utilisation tréhalose permet, d'une part, la réhydratation des gels, ceux-ci recouvrant toutes leurs propriétés, et d'autre part, du fait de l'état vitreux, une conservation de très longue durée dans le temps, dans un état sec et à température ambiante. De plus, cet état solide responsable d'une très forte diminution de la fragilité des gels. Voici un mode de réalisation d'un tel gel > Peser 0,3 grammes d'agarose dans un erlenmeyer de 100 millilitres. > Ajouter 30 millilitres de tampon TBE contenant : tampon tris-HCl 89 millimolaire acide borique 89 millimolaire, EDTA 2 millimolaire, le tout dans de l'eau distillée. > Porter à ébullition sur une plaque électrique puis laisser refroidir 10 minutes. > Couler la solution obtenue dans une cuve en plexiglas de dimensions suivantes : 100 millimètres de longueur, 60 millimètres de largeur, 20 millimètres de hauteur. > Apposer un peigne en plexiglas à 10 millimètres d'un des bords le moins large; les dents plongeant de 3 millimètres dans le gel, perpendiculairement à sa surface. > Laisser polymériser 30 minutes puis retirer le peigne. > Préparer dans un erlenmeyer de 100 millilitres une solution 30 millilitres de tampon TBE contenant 8 grammes de tréhalose dihydrate. > Homogénéiser la solution grâce à un agitateur magnétique pendant 20 minutes. > Couler la solution dans une cuve en plastique de dimensions suivantes : 110 millimètres de longueur, 70 millimètres de largeur, 20 millimètres de hauteur. > Placer le gel dans cette cuve. > Laisser incuber 30 minutes. Retourner le gel et laisser à nouveau incuber 30 minutes. > Retourner le gel et laisser à nouveau incuber 30 minutes. > Prendre deux cadres en plastique carrés de 280 millimètres largeur; la largeur du pourtour étant de 20 millimètres. > Recouvrir un des cadres par une feuille de cellophane humide en la tendant. > Prendre le gel dans la cuve, le retourner et le déposer au centre de la feuille. > Chasser les bulles d'air. > Recouvrir par une feuille de cellophane humidifiée en la tendant. > Chasser les bulles d'air. Les deux feuilles doivent être bien tendues. > Apposer le deuxième cadre en face du premier. > Appliquer des pinces (quatre au total) au milieu de chaque côté des cadres. > Placer le montage sous hotte aspirante. Laisser la déshydratation se poursuivre pendant 16 heures. > Pour réhydrater le gel, découper le cellophane au bord de celui-ci. > Mettre le gel solide (qui adhère aux deux feuilles de cellophane) dans une cuve en plastique de dimensions suivantes : 150 millimètres de longueur, 100 millimètres de largeur, 50 millimètres de hauteur; cette cuve contenant 250 millilitres de tampon TBE. > Retirer le cellophane au bout de 10 minutes. > Changer le tampon au bout de 5 heures. Incuber à nouveau 5 heures. Changer le tampon. Le gel est prêt au bout de 5 minutes. Actuellement les gels sont livrés polymérisés. A l'échelle industrielle, on peut immerger les gels dans une solution de tréhalose. De plus, leur déshydratation est réalisable facilement par simple déshydratation à l'air. L'agarobiose correspond à la formule développée suivante L'acrylamide correspond ' la formule développée suivante Le méthylène bisacrylamide correspond à la formule développée suivante Le tréhalose dihydrate est D-glucopyranosyl(1-1)a-D-glucopyranoside et correspond à la formule développée suivante REVENDICATIONS 1) Procédé de longue conservation des gels d'électrophorèse, caractérise en ce qu'il consiste à polymériser les gels d'électrophorèse, à les incuber dans une solution de tréhalose dihydrate, puis à les déshydrater pour conduire à un solide sec dans un état vitreux qui peut finalement être réhydraté. 2) Procédé de longue conservation des gels d'électrophorèse selon la revendication 1 caractérisé en ce que le gel d'électrophorèse est un polymère d'agarose dont l'unité polymère est l'agaroblOSe formule 3) Procédé de longue conservation des gels d'électrophorèse selon la revendication 1 caractérisé en que le gel d'électrophorèse est un copolymère d'acrylamide de formule et de méthylène bisacrylamide de formule: 4) Procedé de longue conservation des gels d'électrophorèse selon la revendication 1 caractérisé en ce que le tréhalose dihydrate est l' a-D-glucopyranosyl(1-1)a-D-glucopyranoside de formule