Brevet FR2813084A1 — publié le 20020222

La présente invention concerne une préparation de bactéries lactiques qui est extrêmement importante pour la santé des humains et des animaux, où l'utilisation simultanée de Lactobacillus clearans, qui a été isolée en premier par les inventeurs, appartient au genre Lactobacillus et a des caractéristiques spécifiques que l'on ne trouve pas dans les bactéries classiquement connues, et de cellules viables et/ou des cellules tuées de Enterococcus faecalis (Enterococcus), qui sont profondément impliquées dans le métabolisme des lipides, fait que les avantages de chacune d'elles ressortent plus clairement et plus efficacement. Il a été rapporté qu'il existe 300 espèces et 100 trillions de bactéries individuelles dans les intestins, pesant 1 kg au total et dépassant de loin le total de 60 trillions de cellules humaines. Plusieurs années d'études et de recherches en immunologie ont permis d'élucider progressivement leur implication significative dans la santé et diverses maladies chez l'homme et les animaux, et les spécialistes considèrent maintenant la flore intestinale comme une fonction organique vitale. Des bactéries avantageuses appartenant au groupe des bactéries lactiques, telles que le genre Bifidobacterium et le genre Lactobacillus, coexistent d'une façon équilibrée lorsqu'elles prédominent. Cet équilibre peut être rompu par divers facteurs, tels que des changements de la quantité et de la qualité du régime alimentaire journalier, le surmenage, l'insomnie, et le stress mental, ce qui conduit à la prolifération de bactéries nuisibles telles que le bacille de Welch et Veillonella. L'expulsion de bactéries bénéfiques conduit à une plus grande production de substances nuisibles, qui peuvent conduire à diverses maladies et à un vieillissement global accéléré, allant de troubles fécaux tels que la diarrhée et la constipation, à celles résultant d'un empoisonnement du sang, telles que la fatigue chronique, la peau gercée, un dysfonctionnement hépatique, l'hypertension et l'artériosclérose. Le Russe Metchnikoff (1845 - 1916) a posé comme théorie que la cause primaire du vieillissement était un empoisonnement par des toxines formées par une fermentation putréfiante intestinale, et a préconisé comme remède l'habitude consistant à boire des boissons contenant des bactéries lactiques, telles que le yaourt, pour aider à prévenir le vieillissement. A travers toutes les fantaisies de l'histoire des bactéries lactiques jusqu'à ce jour, il n'a pas été possible de saisir l'utilité pratique de ces bactéries. La raison en est que les faits à présent révélés par des études immunologiques et élucidés par des expériences n'ont pas pu être débrouillés. L'hypothèse de Metchnikoff a été confirmée et est maintenant couramment reconnue dans les sciences de la santé, puisque de récents progrès en microbiologie ont élucidé diverses fonctions importantes des bactéries intestinales bénéfiques, telles que la réduction de l'acidité intestinale et l'accentuation de la motilité intestinale pour faciliter la digestion d'aliments et l'absorption de nutriments, la suppression et la dégradation simultanées de substances nuisibles, la synthèse de vitamines et d'acides aminés, la protection contre des infections intestinales par des agents pathogènes, et un meilleur pouvoir immunologique. De plus, conjointement avec de récentes tendances dans le domaine de la santé, les bactéries lactiques se sont fermement implantées sous la forme de boissons et d'agents anti-flatulence chez de nombreuses personnes. On ne peut toutefois nier le fait que ces produits n'attirent pas les personnes qui recherchent des résultats positifs, après avoir échoué dans l'obtention d'une amélioration de la santé et des symptômes par ingestion ou utilisation journalière de bactéries lactiques. Malheureusement, les produits à base de bactéries lactiques restent consommés principalement à des fins rafraîchissantes, ou ont toujours tendance à être considérés comme une préférence, d'une façon similaire au café. Au vu de ce qui précède, il existe un besoin pour un produit qui puisse être rapidement administré pour produire de meilleurs effets, non obtenus avec des préparations ou boissons contenant des bactéries lactiques conventionnelles. Bien que les inventeurs aient antérieurement trouvé que la nouvelle espèce appelée Lactobacillus clearans était très efficace pour la santé, ils ont noté en particulier qu'il manquait à cette espèce une action de purification intestinale suffisante. Des efforts pour produire une souche plus puissante et analogue pour remédier à cet inconvénient ont conduit à la conclusion inévitable que l'utilisation de la bactérie par elle-même produisait des résultats limités. On a donc considéré l'utilisation simultanée d'une autre substance active pour rechercher une préparation de bactéries lactiques capable de fortifier les individus en bonne santé, et de renforcer la sensation de bien-être et de meilleure santé chez des individus pas en très bonne santé. Une recherche intensive pour trouver un partenaire biologique ou non biologique compatible afin de remédier aux inconvénients susmentionnés, a conduit les inventeurs à mettre au point la présente invention après avoir découvert, parmi les Enterococcus faecalis appartenant au même groupe de lactobacilles que Lactobacillus clearans, une espèce capable de réduire au moins l'un parmi les triglycérides et le cholestérol. Ainsi, la présente invention concerne une préparation de bactéries lactiques, comprenant des cellules viables de Lactobacillus clearans, et des cellules viables de Enterococcus faecalis capable de réduire un ou plusieurs parmi les triglycérides et le cholestérol. La présente invention a également pour objet une préparation de bactéries lactiques, comprenant des cellules viables de Lactobacillus clearans et des cellules tuées de Enterococcus faecalis capable de réduire un ou plusieurs parmi les triglycérides et le cholestérol. La présente invention a en outre pour objet une préparation de bactéries lactiques, comprenant des cellules viables de Lactobacillus clearans et des cellules viables et des cellules tuées de Enterococcus faecalis capable de réduire un ou plusieurs parmi les triglycérides et le cholestérol. La souche Lactobacillus clearans à laquelle on se réfère dans la présente invention est une souche nouvelle appartenant au genre Lactobacillus, et ayant les caractéristiques biochimiques 1,2, 3 et 4 qui suivent. De façon spécifique, elle comprend des souches du genre Lactobacillus qui 1) sont capables de réduire tant Na2S 9H20 que NH40H quand 0,5 g de NazS 9H20 et/ou 0,5 ml de NH40H est ou sont ajoutés à 5 g d'extrait de viande, 5 g de peptone, 1 g de glucose, 1 g de CaC03, et 1 litre d'eau (à pH neutre) ; 2) ne présentent pas d'action favorisant une croissance en dépit de l'addition de 0,5 g de Na2S*9H20 et/ou de 0,5 ml de NH40H durant la phase de croissance logarithmique de la culture bactérienne dans un milieu comprenant 1 g d'acide casaminé et des vitamines (A : 900 UI ; B1 : 1 mg ; B2 : 1 mg ; B6 . 1 mg ; B12 : 5 y ; nicotinamide : 16 mg ; pantothénate de calcium : 8 mg ; C : 64 mg ; et D2 : 120 UI) dans du milieu de Stephenson-Wetham ((abrégé en S-W) 1 g de KH2P04, 0,7 g de MgS04e7H20, 1 g de NaCl , 4 g de (NH4)2HP04, 0,03 g de FeS04e7H20, et 5 g de glucose) ; 3) ont une résistance, sous la forme de souches naturellement isolées, à Na2S#9H2O supérieure à celle de bactéries lactiques classiquement connues mais plus faible que celle de Lactobacillus deodorans ; et 4) sont Gram-positives, en forme de bâtonnets, non motiles, et négatives à la catalase, ne réduisent pas les nitrates et ne dégradent pas la gélatine, ne produisent ni indole ni sulfure d'hydrogène, ont une grande capacité de formation d'acide lactique à partir de glucose et de lactose, et ont une croissance favorisée par l'addition d'acide acétique (voir Publication (Kokoku) de brevet japonais H4-632) . Les avantages de Lactobacillus clearans, en plus de l'action des Lactobacillus courants, comprennent une action de purification intestinale puissante absente chez les Lactobacillus conventionnels, comme décrit dans le brevet japonais 1714413 et la demande de brevet japonais 11-15177, telle que : 1) une décomposition de substances malodorantes putréfiantes intestinales ; 2) des augmentations des bactéries bénéfiques telles que Bifidobacterium et Lactobacillus parmi la flore intestinale, avec des réductions considérables des bactéries nuisibles telles que le bacille de Welch et Veillonella, fournissant ainsi un meilleur équilibre de la flore intestinale pour améliorer l'environnement intestinal ; et 3) une suppression de la croissance principalement d'agents étiologiques provoquant des infections intestinales, et une diminution de la toxicité. Cette action va être décrite ci-dessous au moyen de tests. On a d'abord réalisé des tests in vitro. On a introduit 15 ml d'une dilution au lOème de fèces dans des tubes à essais (18 x 180 mm). Puis on a inoculé les tubes à essais avec des échantillons de bactéries 1) qui avaient été stérilisées sous haute pression pendant 15 minutes à 120 C et 2) qui n'avaient pas été stérilisées. On a bouché les tubes à essais avec des bouchons en caoutchouc pendant 72 heures de culture anaérobie à 37 C. Puis on a aspiré 1 ml d'air au moyen d'une seringue à partir de l'intérieur des tubes à essais, que l'on a injecté dans des sacs à odeur de 5 litres pour des tests olfactifs réalisés par un jury de 6 individus. On a évalué l'odeur sur la base des critères d'odeurs de fèces présentés dans le Tableau 1. Tableau 1 Critères d'odeur des fèces Note d'odeur Odeur 1 Odeur faible reconnaissable comme étant celle de fèces 2 Facilement reconnaissable comme étant une légère odeur de fèces 3 Nettement reconnaissable comme étant une faible odeur de fèces 4 Forte odeur reconnaissable comme étant celle de fèces non traitées 5 Odeur extrêmement forte plus prononcée que celle de fèces non traitées On a utilisé trois souches typiques de Lactobacillus clearans, de façon spécifique FERM BP-6972, FERM BP-6971, FERM BP-6973, pour tester la capacité désodorisante dans les tests in vitro susmentionnés. Les résultats du Tableau 2 montrent que les échantillons stérilisés sous pression élevée étaient nettement désodorisés, avec une odeur déterminée comme étant l'odeur faible ou légère des fèces. D'autre part, les échantillons non stérilisés présentaient moins de désodorisation que les échantillons stérilisés sous pression élevée, parce que des substances malodorantes étaient produites, peut-être en résultat de l'activité de nombreuses bactéries putréfiantes dans les fèces, mais eux-aussi étaient néanmoins nettement désodorisés. Les résultats pour les 3 souches typiques de Lactobacillus clearans dans le test susmentionnés étaient reproduits de façon similaire avec d'autres souches similaires. Tableau 2 Capacité désodorisante de Lactobacillus clearans (in vitro) Souche d'inoculum Odeur (valeur moyenne par jury) FERM BP N Stérilisation sous pression élevée Pas de stérilisation 6972 2,5 2,8 6971 2,3 2,5 6973 2,0 2,3 Pas d'inoculation 4,0 4,5 Dans des tests in vivo ultérieurs, on a fait ingérer 150 ml de yaourt préparé par utilisation de Lactobacillus clearans FERM BP-6973, une fois par jour, et on a déterminé l'odeur des fèces 20 à 30 jours, 50 à 60 jours, et 80 à 90 jours après ingestion, les moyennes étant présentées dans le Tableau 3. On a déterminé les résultats en introduisant des échantillons de fèces de 0,5 g provenant de 10 individus dans des sacs à odeur de 20 litres, stockés à la température ambiante pour l'évaluation de l'odeur par un jury de 6 individus au bout de 30 minutes. L'odeur moyenne des fèces pour 5 individus n'ayant pas ingéré de yaourt était notée 100. Bien que l'odeur des fèces variât considérablement en fonction des régimes alimentaires, l'odeur moyenne pour 10 individus ingérant du yaourt diminuait d'environ 50 % un mois après ingestion, de 70 % après 2 mois, et de 85 % après 3 mois. Toutefois, au bout de 3 mois, une ingestion continue conduisait à une réduction du pic d'odeur de 80 à 90 %. Tableau 3 Odeur des fèces après ingestion de yaourt préparé par utilisation de Lactobacillus clearans Odeur sans ingestion Odeur après ingestion de yaourt de yaourt 20 à 30 jours 50 à 60 jours 80 à 90 jours 100 50 30 15 En termes de corrélation entre la purification et les bactéries du monde naturel, les inventeurs ont réduit les substances analysées aux substances malodorantes facilement testables, qui ont été grossièrement classées en composés soufrés, composés azotés, et composés carbonés. Il a été trouvé que des bactéries capables de dégrader des composés du soufre malodorants tels que Na2S#9H2O, des composés azotés malodorants tels que NH3, et des composés carbonés malodorants tels que l'acide acétique, l'acide butyrique et des acides gras inférieurs similaires, étaient capables de dégrader la plupart des composés malodorants soufrés, azotés et carbonés de leurs polymères, ceci étant appelé la théorie SNC. On a réalisé les tests suivants conformément à cette théorie. On a ajouté 0,5 g de Na2S#9H2O ou 0,5 ml d'ammoniaque (NH40H) à 1 ml de milieu synthétique comprenant 5 g d'extrait de viande, 5 g de peptone, 3 g de butyrate de sodium, 5 g de glucose, et 3 g de CaC03, on a inoculé le milieu avec Lactobacillus clearans pour 72 heures de culture anaérobie à 37 C, et on a déterminé au cours du temps la diminution du Na2S#9H2O ou du NH40H qui avait été ajouté. On a mesuré le Na2Se9H20 par le procédé de titrage à l'iode de la norme JIS K0102-1985, et on a mesuré le NH40H par le procédé d'absorbance au bleu d'indole phénol de la norme JIS K0102-1985. Les résultats sont présentés dans les Tableaux 4 et 5. Les tableaux montrent que Lactobacillus clearans a la capacité de réduire les Na2S#9H2O et NH40H malodorants toxiques de 40 à 50 % en 72 heures. Ceci signifie qu'elle peut dégrader et assimiler la plupart des autres substances toxiques malodorantes. Tableau 4 Dégradation et assimilation du disulfure de sodium par Lactobacillus clearans Souche Concentration de Na2S#9H2O et pourcentage de diminution d'inoculum Concentration FERM BP N lors de l'addition 24 heures 48 heures 72 heures 400 ppm 350 ppm 300 ppm 6972 500 ppm diminution 20 % diminution 30 % diminution 40 % 380 ppm 330 ppm 275 ppm 6971 500 ppm diminution 24 % diminution 34 % diminution 45 % 350 ppm 300 ppm 250 ppm 6973 500 ppm diminution 30 % diminution 40 % diminution 50 % Tableau 5 Dégradation et assimilation de l'ammoniaque par Lactobacillus clearans Souche Concentration de NH40H et pourcentage de diminution d'inoculum Concentration FERM BP N lors de l'addition 24 heures 48 heures 72 heures 400 ppm 350 ppm 300 ppm 6972 500 ppm diminution 20 % diminution 30 % diminution 40 % 375 ppm 300 ppm 280 ppm 6971 500 ppm diminution 25 % diminution 40 % diminution 44 % 375 ppm 300 ppm 250 ppm 6973 500 ppm diminution 25 % diminution 40 % diminution 50 % On a décrit les analyses chimiques et les tests sensoriels in vitro ci-dessus en tant que procédés pour déterminer l'action désodorisante de Lactobacillus clearans. On a centrifugé les dilutions au lOème d'échantillons de fèces préparés à ce moment, avant culture et 72 heures après culture, on a recueilli 5 ml de surnageant que l'on a dilués au lOème pour déterminer les concentrations d'ions S2+ et NH4+, et on a calculé l'ampleur de leur diminution. Les résultats du Tableau 6 montrent que la diminution des ions S2+ et NH4+ dans les fèces était encore plus importante que la diminution dans le milieu synthétique susmentionné, indiquant que les fèces constituaient un milieu plus approprié pour Lactobacillus clearans. On a dosé les ions S2+ par le procédé de titrage à l'iode de la norme JIS K0102-1985, et on a dosé les ions NH4+ par le procédé d'absorbance au bleu d'indole phénol de la norme JIS K0102-1985. Tableau 6 Diminution de S2+et NH4+ par Lactobacillus clearans Concentration de S2+ et Concentration de NH4+ et Souche pourcentage de diminution pourcentage de diminution Dilution de d'inoculum Avant 72 heures de Avant 72 heures de fèces au 1/10 FERM BP N culture culture culture culture 6972 30 ppm 15 ppm 350 ppm 190 ppm diminution 50 % diminution 45 % Stérilisation ~~~~~~~ ~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~ ~~~~~~~~ 12 ppm 130 ppm sous pression 6971 30 ppm 350 ppm diminution 60 % diminution 63 % élevée ~~~~~~ ~~~~ ~~~~~~~ ~~~~~ ~~~~~~~~ 10 ppm 110 ppm 6973 30 ppm 350 ppm diminution 67 % diminution 68 % 6972 52 ppm 35 ppm 385 ppm 235 ppm diminution 33 % diminution 40 % Pas de 30 ppm 200 ppm 6971 52 ppm 385 ppm stérilisation diminution 42 % diminution 48 % 6973 52 ppm 25 ppm 385 ppm 165 ppm diminution 52 % diminution 57 % On a introduit 2 l du surnageant susmentionné dans un appareil de chromatographie gazeuse pour analyser les acides gras inférieurs. La chromatographie gazeuse impliquait l'utilisation de verre Col. Unisole F-200 30/60 (3 0 x 3 m) à un débit de gaz porteur de 50 ml/min (He), avec 152 kPa (0,55 kg/cm2 au manomètre) d'hydrogène et 152 kPa (0,55 kg/cm2 au manomètre) d'air, à une température de colonne de 140 C et d'injection de 200 C. Les substances analysées étaient l'acide acétique, l'acide propionique, l'acide isobutyrique, l'acide nbutyrique, l'acide isovalérique et l'acide n-valérique, les concentrations calculées étant présentées dans le Tableau 7. Le Tableau 7 montre que les concentrations d'acides gras inférieurs diminuaient de 50 à 75 % avec des échantillons stérilisés sous pression élevée, et de 40 à 60 % avec des échantillons non stérilisés. Tableau 7 Diminution des acides gras inférieurs par Lactobacillus clearans Dilution des Inoculum Concentration totale d'acides gras inférieurs et diminution fèces au 1/10 FERM BP N Avant culture 72 heures de culture 1500 ppm 6972 2850 ppm diminution 47 % Stérilisation sous 6g71 2850 960 ppm pression élevée 6971 2850 ppm diminution 66 % 750 ppm 6973 2850 ppm diminution 74 % 6972 3500 ppm 2100 ppm diminution 40 % Pas de 6971 3500 ppm 1800 ppm stérilisation diminution 48 % 1280 ppm 6973 3500 ppm diminution 63 % On a préparé des cellules lyophilisées de trois souches typiques de Lactobacillus clearans, à savoir FERM BP-6972,6971 et 6973, et on les a mélangées en parties égales pour former une préparation. On a soutiré en continu 2 g de la préparation (5 x 108 cellules/g), et on a mesuré au cours du temps les changements du compte de cellules (cellules/1 g de fèces) de Bifidobacterium et Lactobacillus (à l'exception de Lactobacillus clearans) qui sont connues comme étant des bactéries bénéfiques dans la flore intestinale, ainsi que ceux de bactéries nuisibles typiques telles que Veillonella et Clostridium perfringens (bacille de Welch). Le Tableau 8 montre les résultats de l'administration par voie orale à 20 individus en bonne santé, et le Tableau 9 montre les résultats de l'administration par voie orale à 20 individus de constitution fragile. v -H 0 '5 " actob s pou (U 0 voie orale d'une s en bonne santé -w ation d'ind -H (ti 4j d CQ a 4j 4-) ableau 8 ffets de a flore onne san Compte de cellules Compte de cellules après administration avant administration 1 mois 2 mois 3 mois 6 mois 12 mois Bactéries Bifidobacterium 1,2 x 10 1,5 x 1010 1,8 x 1010 2,1 x 1010 2,4 x 1010 2,8 x 1010 bénéfiques Lactobacillus 2 x 107 2,5 x 107 3 x 107 5 x 107 1 x 108 2 x 108 Bactéries Clostridium 1 x 105 8 x 104 7 x 104 5 X 104 2 X 104 1 X 104 nuisibles Veillonella 5 x 105 4,5 x 105 4 x 105 3 x 105 2 X 105 1 X 105 0 M 0) U 0 -H as e -H 4-) orale consti 0) (1) #H Ti ation par vo d'individus tion fragile #U Q) Ul r-I -H -H fC JJ - -r-I 4J ad es c d) #H g n J) [Q 'r) nj ih Compte de cellules Compte de cellules après administration avant administration 1 mois 2 mois 3 mois 6 mois 12 mois Bactéries Bifidobacterium 5 x 109 5 x 109 6 x 109 6,5 x 109 7,5 x 109 1 x 1010 bénéfiques Lactobacillus 1 x 10 1,2 x 107 1,5 x 107 2,5 x 107 3 x 107 7 x 107 Bactéries Clostridium 5 x 105 3,5 x 105 3 x 105 2,5 x 105 2 x 105 1 x 105 nuisibles Veillonella 2x1Q6 106 1,7 x 106 1,4 x 106 1,1 x 106 5 x 105 3 x 105 Les Tableaux 8 et 9 montrent qu'avant l'administration des préparations de Lactobacillus clearans, les bactéries bénéfiques de la flore intestinale étaient en moyenne 220 % plus nombreuses chez les individus en bonne santé que chez les individus de constitution fragile, tandis que les bactéries nuisibles ne représentaient qu'environ 22,5 %. Ceci montre que l'état de la flore intestinale est un indicateur de l'état de santé réel, c'est-à-dire de l'ampleur avec laquelle la flore intestinale est impliquée dans la santé. Une nouvelle découverte a été que l'ingestion de la préparation conduisait d'abord à une augmentation des bactéries bénéfiques chez les individus en bonne santé, et que, avec cette augmentation, il y avait une diminution progressive des bactéries nuisibles. Par contraste avec ce schéma, le schéma trouvé chez des individus de constitution fragile était tel que les bactéries nuisibles diminuaient d'abord, après quoi on notait une augmentation progressive des bactéries bénéfiques. Globalement, les changements moyens des bactéries bénéfiques et nuisibles reflétaient une augmentation des bactéries bénéfiques et une diminution correspondante des bactéries nuisibles. Cette tendance s'accélérait après 3 mois, les Bifidobacterium augmentant de 50 % après 6 mois et de 110 % après 1 an, et les Lactobacillus augmentant de 300 % après 6 mois et de 950 % après 1 an. Par contraste, les Clostridium diminuaient de 70 % après 6 mois et de 85 % après 1 an, cependant que les Veillonella diminuaient de 67,5 % après 6 mois et de 82,5 % après 1 an. On a cultivé Escherichia coli 0-157, Salmonella enteritidis et Shigella flexneri, seules et conjointement avec Lactobacillus clearans (FERM BP-6973) pour vérifier l'action de Lactobacillus clearans contre des pathogènes, et on a comparé les résultats. La composition du milieu utilisé pour les cultures comprenait 10 g d'extrait de viande, 10 g de peptone, 2 g de glucose, 2 g de NaCl, et 1 g de CaC03 par litre, le pH étant ajusté à 7,2. On a réalisé une culture anaérobie à 37 C, en répétant les sous-cultures toutes les 72 heures, point où l'on a dilué les plaques et réalisé des étalements pour surveiller les changements des comptes de cellules, déterminer si les colonies étaient du type S (original) ou avaient muté en type R avec une toxicité diminuée, déterminer leurs proportions, et analogues. Les pathogènes utilisés dans les tests étaient acquis auprès de Medic KK (institut de recherche sanitaire enregistré). Le Tableau 10 montre les résultats pour E. coli 0- 157 cultivée telle quelle, et le Tableau 11 montre les résultats d'une culture mixte de E. coli 0-157 et de Lactobacillus clearans. Le Tableau 10 montre que, dans les cultures de E. coli 0-157 seule, le compte de cellules était pratiquement constant, à 4 à 5 x 109 cellules/g pour la totalité des 20 sous-cultures, sans qu'apparaissent de types R. Le Tableau 11 montre que, dans les cultures mixtes de E. coli 0-157 et de Lactobacillus clearans, il y avait peu de changement du compte de cellules de Lactobacillus clearans, mais qu'il y avait des changements significatifs du compte de cellules de E. coli 0-157. Les types R apparaissaient à la 5ème sous-culture, et la proportion des types R augmentait avec l'accumulation des sous-cultures ultérieures, jusqu'à ce que toutes les cellules formassent de types R à la 18ème sous-culture. Il n'y avait pas de reconversion en type S dans les souscultures réalisées ultérieurement. Tableau 10 Résultat de cultures de E. coli 0-157 telle quelle E. coli 0-157 Nombre de Nombre de cellules Nombre de cellules Proportion de cellules sous-cultures de type S de type R de type R 1 5 x 109 0 0 % 3 4,5x109 0 0% 5 4,7x109 0 0% 7 4,4x109 0 0% 10 4,3x109 0 0% 12 4,5x109 0 0% 15 4x109 0 0% 18 3,8x109 0 0% 20 4,2 x 109 0 0 % Tableau 11 Résultats de cultures mixtes de E. coli 0-157 et de Lactobacillus clearans Compte de E. coli 0-157 Nombre de cellules de Nombre de Nombre de Proportion de sous-cultures FERM BP-6973 cellules de type S cellules de type R cellules de type R 1 1,2x109 5x109 0 0% 3 1,2x109 3,5x109 0 0% 5 1,4x109 0 1,9x109 100% 7 1x109 1x109 1x109 50% 10 7x108 1,2 x 109 2,2 x 109 65% 12 1,1x109 5x108 2x109 80% 15 1,2x109 2 x 108 3,2x109 94% 18 1,5x109 0 1,7x109 100% 20 1,3x109 0 1,2x109 100% Le Tableau 12 montre les résultats obtenus avec Salmonella enteritidis cultivée telle quelle, et le Tableau 13 montre les résultats obtenus avec des cultures mixtes de Salmonella enteritidis et de Lactobacillus clearans. Le Tableau 12 montre que, dans des cultures de Salmonella enteritidis seule, le compte de cellules était de 3 à 5 x 109 cellules/g. Les types R apparaissaient spontanément à la 14ème sous-culture, atteignant une proportion de 5 % à la 20ème sous-culture. La proportion augmentait dans les sous-cultures ultérieures, avec un pic à 23 % pour la 50ème sous-culture. La proportion des types R restait ensuite aux environs de 20 %. Le Tableau 13 montre que, dans des cultures mixtes de Salmonella enteritidis et Lactobacillus clearans, la proportion de types R était de 29 % à la Sème sous-culture, et que la proportion de types R augmentait avec l'accumulation des sous-cultures ultérieures, atteignant 50 % à la 10ème sous-culture, 90 % à la 20ème sous-culture, et 100 % à la 47ème sous-culture. La reconversion en type S dans des sous-cultures ultérieures était inférieure à 1 %. Après la 70ème sous-culture, tous les types S disparaissaient, sans aucune autre reconversion. Tableau 12 Résultats de cultures de Salmonella enteritidis telle quelle Salmonella enteritidis Nombre de Nombre de cellules Nombre de cellules Proportion de cellules sous-cultures de type S de type R de type R 1 5 x 109 0 0 % 5 4x109 0 0% 10 3x109 0 0% 15 3x109 1x108 3% 20 3x109 1,5 x 108 5% 25 3,5x109 2x108 5% 30 4x109 5 x 107 1 % 35 3,7 x 109 3 x 108 8 % 40 3,2x109 5x108 14% 47 3x109 7x108 19% 50 3,3 x 109 1x109 23% 55 2,8x109 8x108 22% 60 3x109 7x108 17% 65 3,2x109 5x108 14% 70 2,8 x 109 6 x 108 18% 75 3x109 7x108 19% 80 2,7 x 109 5 x 108 16 % Tableau 13 Résultats de cultures mixtes de Salmonella enteritidis et de Lactobacillus clearans Compte de Salmonella enteritidis Nombre de cellules de Nombre de Nombre de Proportion de sous-cultures FERM BP-6973 cellules de type S cellules de type R cellules de type R 1 1 x 109 5 x 109 0 0 % 5 5x108 2,5 x 109 1 x 109 29% 10 3 x 108 1 x 109 1 x 109 50 % 15 4x108 5x108 1,5x109 75% 20 3 x 108 2 x 108 2 x 109 90 % 25 3,5x108 1,5x108 2x109 93% 30 3x108 1,6 x 107 8x109 98% 35 2 x 108 1,5 x 108 1 x 109 87% 40 2,5x108 1x108 1,5x109 94% 47 3 x 108 0 2x109 100% 50 5x108 3 x 107 2x109 99% 55 6 x 108 0 2,1x109 100 % 60 5 x 108 1 x 107 1,8 x 109 99% 65 7,5x108 2x107 2x109 99% 70 8 x 108 0 2,2 x 109 100 % 75 7x108 0 2x109 100% 80 7,5 x 108 0 1,8 x 109 100 % Le Tableau 14 montre les résultats avec Shigella flexneri cultivée telle quelle, et le Tableau 15 montre les résultats d'une culture mixte de Shigella flexneri et de Lactobacillus clearans. Le Tableau 14 montre que, dans des cultures de Shigella flexneri seule, les types R apparaissaient spontanément à la 10mme sous-culture, atteignant une proportion de 9 % à la 20ème sous-culture. La proportion augmentait dans les sous-cultures ultérieures, avec un pic de 20 % à la 40ème sous-culture. La proportion de types R restait ensuite aux alentours de 10 à 20 %. Le Tableau 15 montre que, dans des cultures mixtes de Shigella flexneri et Lactobacillus clearans, les types R apparaissaient à la 5ème sous-culture, et que la proportion des types R augmentait avec l'accumulation de sous-cultures ultérieures, atteignant 100 % à la 80ème sous-culture. Il y avait une reconversion en type S dans les sous-cultures ultérieures, mais inférieure à 1 %. Après la 108ème sous-culture, tous les types S disparaissaient, sans aucune autre reconversion. Tableau 14 Résultats de cultures de Shigella flexneri telle quelle Shigella flexneri Nombre de Nombre de cellules Nombre de cellules Proportion de cellules sous-cultures de type S de type R de type R 1 5 x 109 0 0 % 5 5x109 0 0% 10 4x109 5x10 1 % 15 4x109 1x108 2% 20 4,2 x 109 4 x 108 9% 25 3,8 x 109 5x108 12% 30 3,7x109 6x108 14% 35 3,8x109 5x108 12% 40 4 x 109 1 x 109 20 % 45 4x109 7x108 15% 50 4,2 x 109 7x108 14% 55 4 x 109 1x108 20 % 75 3,6 x 109 8 x 108 18% 80 3,5x109 7x108 17% 90 3,5x109 6x108 15% 100 3,2x109 6x108 16% 110 3,7 x 109 7x108 16% Tableau 15 Résultats de cultures mixtes de Shiaella flexneri et de Lactobacillus clearans Compte de Shigella flexneri Nombre de cellules de Nombre de Nombre de Proportion de sous-cultures FERM BP-6973 cellules de type S cellules de type R cellules de type R 1 1,2x109 5x109 0 0% 5 8 x 108 3x109 2x108 6% 10 5 x 108 2,5 x 109 1 x 109 29% 15 3x108 2,5x109 1,5x109 38% 20 3x108 2x109 2x109 50% 25 3x108 1,8x109 2x109 53% 30 3,5 x 108 1,8x109 2,2x109 55% 35 3x108 1 x 109 2,5x109 71% 40 2,8x108 8x108 3x109 79% 45 2,6x108 5x108 3 x 109 85% 50 3x108 1 x 109 2,8 x 109 74 % 55 3,2x108 5x108 3 x 109 85% 75 3,5x108 3x107 3,3 x 109 99% 80 3,2 x 108 0 3,2x109 100 % 90 3 x 108 5 x 107 3 x 109 99 % 100 3x108 3x10 3x109 99% 110 3,2 x 108 0 3x109 100% On a administré par voie intrapéritonéale, à des groupes de dix souris mâles âgées de 8 semaines, 1 x 108 cellules par animal pour étudier la toxicité des types S et R de E. coli 0-157, de Salmonella enteritidis, et de Shigella flexneri. Pour les types S, on a utilisé des souches conservées, et pour les types R, on a utilisé des souches qui avaient été mutées en types R à 100 % par Lactobacillus clearans à ce moment. Les résultats du Tableau 16 montrent que tous les animaux mourraient dans les 4 jours avec les pathogènes de type S, tandis qu'aucun ne mourrait avec les types R, sauf pour Shigella flexneri qui conduisait à la mort au bout du 7ème jour. Tableau 16 Toxicité des types S et R de E. coli 0-157, de Salmonella enteritidis, et de Shigella flexneri chez les souris Type S Type R E. coli Mort après le 3ème jour Survie à l'administration 0-157 suivant l'administration (déroulement) (déroulement) pratiquement pas de mouvement pendant 2 jours, immobilisation le 2ème fourrure emmêlée, teint médiocre jour suivie de la mort 3ème à 5ème jours : alimentation et abreuvement occasionnels 5ème à 7ème jours : augmentation d'activité motile après le 7ème jour : activité normale Salmonella Mort après le 4ème jour Survie à l'administration (même déroulement que enteritidis suivant l'administration pour 0-157) (même déroulement que ci-dessus) Shigella Mort après le 3ème jour 7ème jour : mort flexneri suivant l'administration (déroulement) (même déroulement que stase virtuelle commençant le 2ème jour mais avec ci-dessus) abreuvement occasionnel 5ème jour : indisposition et mort subséquente On a administré par voie orale à des humains le yaourt préparé avec Lactobacillus clearans décrit cidessus, et on a analysé le sang une fois par mois pour étudier les changements de la flore intestinale. Les taux de cholestérol et de triglycérides ont chuté d'environ 10 % chez plus de 80 % des individus par comparaison à avant l'administration. Le Tableau 17 montre les différences de fonction entre Lactobacillus clearans de la présente invention et les souches de Lactobacillus conventionnelles. Tableau 17 Comparaison des fonctions entre Lactobacillus clearans et des souches de Lactobacillus conventionnelles Paramètre Lactobacillus clearans Souches de Lactobacillus conventionnelles Action contre les substances Dégrade, décompose et Dégrade et réduit les putréfiantes intestinales dénature la plupart des composés carbonés malodorantes toxiques telles composés malodorants malodorants, mais pas les que les composés soufrés, toxiques tels que les composés malodorants azotés et carbonés composés soufrés, azotés et toxiques tels que les carbonés pour les réduire composés soufrés et azotés Désodorisation des fèces +± à Action sur les bactéries Augmentations considérables Augmentations lors d'une intestinales bénéfiques ingestion continue chez certaines personnes Bifidobacterium 2 à 10 fois 1 à 3 fois Lactobacillus 10 à 100 fois Moins de 10 fois Action sur les bactéries Bactéries nuisibles fortement Action suppression, mais pas intestinales nuisibles supprimées du fait de pour toutes l'augmentation considérable Veillonella 1/20 à 1/100 1 à 1/5 Clostridium 1/20 à 1/100 1 à 1/5 Action anti-flatulente +± à + Exigences nutritionnelles Faibles à modérées Elevées Prolifération intestinale + - à + Capacité de fixation - à + intestinale Action sur des pathogènes Mutation en non pathogènes Pas d'effet coexistants (mutation de S en R) Salmonella Caractère pathogène perdu à Une coexistence avec de la 47ème sous-culture quelconques pathogènes Shigella flexneri Caractère pathogène perdu à cède en compétition avec des la 108ème sous-culture pathogènes durant la sousE. coli (0-157) Caractère pathogène perdu à culture la 18ème sous-culture Cholestérol et triglycérides Action faible, mais capable Aucune action d'une réduction Enterococcus faecalis est un groupe de bactéries constituant la flore intestinale, et appartient au groupe des bactéries lactiques, existant normalement en une quantité d'environ 1 x 107 cellules par gramme de fèces. Elles existent sous la forme sphérique ou ovoïde, ou sous la forme de chaînes courtes. Ce sont des cocci Grampositifs ayant une forte résistance à la chaleur, au dessèchement, au chlore, à l'acide gallique, et analogues, et croissent dans une plus large plage de température, de 10 à 45 C, par rapport aux streptocoques communs. Bien qu'il y ait certaines souches pathogènes, ils ne sont pas toxiques. Les cellules viables agissent comme des anti-flatulents, et sont disponibles dans le commerce depuis plus de 10 ans au Japon. Ils se sont avérés être non toxiques lorsqu'ils sont administrés par voie orale. Mis à part ces produits du commerce, des cellules viables et tuées de certaines souches se sont récemment avérées abaisser efficacement le cholestérol et les triglycérides dans le sang. Ainsi, elles tiennent leurs promesses dans la prévention ou le traitement de maladies se rapportant typiquement à l'adulte (maladies tirant leur origine dans des habitudes de style de vie), telles que l'hyperlipidémie, l'hypertension, et l'artériosclérose. Par Enterococcus faecalis auxquelles on se réfère dans la présente invention, on entend des souches ayant de telles fonctions. Ce qui suit est un exemple de procédé pour préparer des cellules viables de Enterococcus faecalis pour une utilisation dans la présente invention. Spécifiquement, on met des cellules, qui ont été cultivées et centrifugées par un procédé classique, en suspension dans de la solution saline physiologique, on les lave, on les centrifuge de nouveau, et on les recueille. On peut les lyophiliser en utilisant de l'amidon soluble à titre de conservateur. Comme exemple de procédé pour préparer des cellules tuées de Enterococcus faecalis, on peut traiter pendant 30 minutes dans de l'eau chaude à 100 C de l'amidon soluble et les cellules lavées et centrifugées, obtenues quand les cellules viables susmentionnées ont été collectées, et ensuite les lyophiliser. Bien que Enterococcus faecalis n'ait pas de capacité in vitro pour réduire le sulfure de sodium (Na2S#9H2O) ou l'ammoniac, elle a cependant une faible capacité désodorisante contre une dilution de fèces au lOème. Le Tableau 18 donne la capacité désodorisante de deux souches typiques de Enterococcus faecalis, à savoir FERM BP-7230 et FERM BP-7231. Le test était le même que pour Lactobacillus clearans, et les critères étaient les mêmes que ceux indiqués dans le Tableau 1. Tableau 18 Capacité désodorisante de Enterococcus faecalis (in vitro) Inoculum FERM Odeur (valeur moyenne par jury) BP N Stérilisation sous pression élevée Pas de stérilisation Cellules viables 3,0 3,5 7230 Cellules viables 3,0 3,5 Cellules tuées 4,0 4,0 Cellules viables 3,2 3,5 7231 Cellules viables 3,2 3,5 Cellules tuées 4,0 4,5 On a administré par voie orale les deux souches typiques de Enterococcus faecalis, en des quantités de 1 x 109 cellules/personne par jour. L'odeur des fèces avant administration était notée 100. On a déterminé l'odeur des fèces 20 à 30 jours, 50 à 60 jours, et 80 à 90 jours après ingestion, les résultats étant présentés dans le Tableau 19. Le Tableau 19 montre que l'odeur était réduite par Enterococcus faecalis, quoique faiblement. Tableau 19 Odeur des fèces durant l'ingestion de Enterococcus faecalis Inoculum Odeur avant Odeur après ingestion FERM BP N ingestion 20 à 30 jours 50 à 60 jours 80 à 90 jours Cellules viables 100 90 80 65 7230 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Cellules tuées 100 90 83 77 Cellules viables 100 85 75 70 7231 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Cellules tuées 100 90 80 75 On a préparé des cellules viables et tuées de deux souches typiques de Enterococcus faecalis, à savoir FERM BP-7230 et BP-7231, et on les a mélangées en parties égales de cellules viables et tuées pour produire une préparation. La préparation a été absorbée en une quantité de 1 x 109 cellules/jour/personne pendant 6 mois, et on a déterminé les changements du compte de cellules de la flore intestinale au cours du temps en mesurant les changements du compte de cellules (cellules/1 g de fèces) de Bifidobacterium et Lactobacillus (à l'exception de Lactobacillus clearans), qui sont connues pour être des bactéries bénéfiques typiques, ainsi que ceux de bactéries nuisibles typiques telles que Veillonella et Clostridium perfringens. Le Tableau 20 montre les résultats de l'administration par voie orale à 10 individus en bonne santé. Le Tableau 20 montre que les cellules viables avaient un taux d'amélioration légèrement supérieur à celui des cellules tuées. Les résultats étaient cependant bien inférieurs à ceux de Lactobacillus clearans. Tableau 20 Effet de l'administration par voie orale d'une préparation de Enterococcus faecalis sur la flore intestinale chez des individus en bonne santé Administration de cellules viables Administration de cellules tuées Compte de Compte de cellules avant Compte de cellules cellules avant Compte de cellules administration après 6 mois administration après 6 mois Bifido- 1 2 1010 1,5 x 10' Augmentation 1,5 x 10' 1,8 x 10' AugmentaBactéries bacterium VX1U 1|5X1U 25 % 1|5X1U 1|BX1U tion 20 % bénéfiques Lacto- 1 x 107 3 X 107 Augmentation 2 x 107 3 X 107 Augmenta- bacillus JX1U 67 % ~Z tion 50 % Bactéries Clostridium 1 x 105 0,7 x 105 Diminution 1,2 x 105 0,9 x 105 Diminution Bactéries 30 % 25 % nuisibles Veillonella 5,5 x 105 4,4 x 105 Diminution 6 x 105 5 x 105 Diminution one 20 % 17 % On a réalisé des cultures mixtes de Escherichia coli 0-157, de Salmonella enteritidis et de Shigella flexneri pour étudier l'action de Enterococcus faecalis contre des agents pathogènes. Les taux dans lesquels les pathogènes mutaient du type S au type R étaient pratiquement identiques aux taux de mutation naturelle. Les comptes de cellules pathogènes diminuaient progressivement à chaque sous-culture, jusqu'à disparition de Salmonella enteritidis à la 25ème sous-culture, disparition de Shigella flexneri à la 33ème sous-culture, et disparition de E. coli 0-157 à la 35ème sous-culture. Bien que ceci laissât à penser que la croissance de Enterococcus faecalis vînt à bout des pathogènes, la production potentielle de certaines substances physiologiquement actives, supprimant la croissance des pathogènes, n'a pas pu être écartée. On a ajouté à des aliments les préparations de cellules viables et tuées susmentionnées de Enterococcus faecalis, en des quantités de 1 x 109 cellules cellules/ 1 g d'aliment chacune. On a élevé des souris pendant 3 mois avec ces aliments et on a comparé les triglycérides et le cholestérol dans le sérum avec ceux de souris élevées avec une nourriture conventionnelle seulement. On a divisé les souris en groupes de 10, et on les a laissées s'alimenter librement. On a mesuré les triglycérides et le cholestérol au moyen des tests E-Test de Wako et C-Test de Wako, respectivement. La valeur moyenne pour les souris témoins était de 100 %. Les résultats sont présentés dans le Tableau 21. Le Tableau 21 montre que les souris ingérant de façon continue des cellules soit viables soit tuées présentaient une réduction de 20 à 40 % des taux pour les deux paramètres, ce qui ne laisse aucune place au doute quant à leur efficacité. Tableau 21 Effet de l'administration par voie orale d'une préparation de Enterococcus faecalis sur les taux sériques de triglycérides et de cholestérol chez les souris Inoculum Triglycérides Cholestérol FERM BP N Cellules viables Cellules tuées Cellules viables Cellules tuées 7230 72 % 80 % 65 % 70 % 7231 68 % 65 % 60 % 57 % On a divisé en 3 groupes quinze rats spontanément hypertendus (SHR) âgés de 8 semaines. On a alimenté les groupes avec de la nourriture contenant des préparations de cellules viables et tuées de Enterococcus faecalis en des quantités de 1 x 109 cellules/gramme de nourriture. On n'a administré aucune préparation de cellules au groupe témoin. On a élevé les animaux pendant 3 mois. Le Tableau 22 donne la pression sanguine au bout de 3 mois. Le Tableau 22 montre une diminution d'environ 10 % de la pression sanguine. Tableau 22 Effets de l'administration par voie orale d'une préparation de Enterococcus faecalis sur la pression sanguine chez les rats Pression sanguine après administration Inoculum Pression sanguine Pourcentage de FERM BP N avant administration Cellules viables Cellules tuées diminution 7230 205 mm Hg 185 mm Hg 178 mm Hg 9,7 à 13 % 7231 208 mm Hg 190 mm Hg 185 mm Hg 7,3 à 9,7 % Témoin 202 mm Hg 210 mm Hg Exemples L'action combinée de Lactobacillus clearans et de Enterococcus faecalis a permis, de façon surprenante, l'obtention rapide de résultats positifs. On décrit cidessous des procédés de fabrication et des exemples des préparations de la présente invention, mais la portée de la présente invention n'est pas limitée par ces exemples de fabrication et exemples de travail. Exemple de Fabrication 1 Production d'une préparation de Lactobacillus clearans On inocule avec Lactobacillus clearans pendant 72 heures de culture anaérobie, à 37 C, 10 litres de milieu comprenant 5 g d'extrait de viande, 5 g de peptone, 3 g d'acétate de sodium, 1 ml d'ammoniaque, 10 g de glucose, 0,5 g de cystine, et 2 g d'extrait de levure par litre de milieu. On centrifuge la culture résultante, ce qui donne 10 g de biomasse. On la lave avec 500 ml de solution saline physiologique et on la centrifuge, deux fois. On introduit la biomasse lavée dans 500 ml d'une solution comprenant 50 g de lait écrémé, 30 g de tréhalose et 0,5 g de taurine, et on agite soigneusement. On lyophilise le mélange par un procédé classique, ce qui donne 82,5 g de préparation de cellules (3 x 109 cellules/g). On la mélange avec 330 g de lait écrémé soigneusement déshydraté, ce qui donne une préparation de Lactobacillus clearans contenant 5 x 108 cellules viables par gramme. Exemple de Fabrication 2 Production d'une préparation de cellules viables de Enterococcus faecalis On inocule avec Enterococcus faecalis pendant 72 heures de culture anaérobie, à 37 C, 10 litres de milieu comprenant 5 g d'extrait de viande, 5 g de peptone, 2 g de chlorure de sodium, 2 g d'extrait de levure, et 10 g de glucose par litre de milieu. On centrifuge la culture résultante, ce qui donne 16 g de biomasse. On la lave avec 800 ml de solution saline physiologique et on la centrifuge, deux fois. On introduit la biomasse lavée dans 500 ml d'une solution comprenant 20 g de lait écrémé, 30 g d'amidon soluble et 0,5 g de glutamate de sodium, et on agite soigneusement. On lyophilise le mélange par un procédé classique, ce qui donne 54 g de préparation de cellules (5 x 109 cellules/g). On la mélange avec 486 g d'amidon soluble soigneusement déshydraté, ce qui donne une préparation de Enterococcus faecalis contenant 5 x 108 cellules viables par gramme. Exemple de Fabrication 3 Production d'une préparation de cellules tuées de Enterococcus faecalis On met la biomasse lavée obtenue dans l'Exemple de Fabrication 2 en suspension dans 500 ml de solution saline physiologique, puis on introduit 50 g d'amidon soluble, on stérilise thermiquement la solution pendant 15 minutes à 110 C, et on lyophilise la suspension par un procédé classique, ce qui donne 53 g de préparation de cellules (approximativement 5 x 109 cellules/g). On peut aussi produire des préparations de cellules tuées en rompant les cellules par des ultrasons ou analogues. Exemple de Fabrication 4 Production d'une préparation d'un mélange de Lactobacillus clearans et de Enterococcus faecalis Pour produire une préparation de mélange, on mélange en parties égales la préparation de Lactobacillus clearans produite dans l'Exemple de Fabrication 1 et la préparation de cellules viables de Enterococcus faecalis produite dans l'Exemple de Fabrication 2 ou la préparation de cellules tuées de Enterococcus faecalis produite dans l'Exemple de Fabrication 3. Dans ce cas, la préparation contient Lactobacillus clearans en une quantité de 2,5 x 108 cellules/g et Enterococcus faecalis en une quantité de 2,5 x 108 cellules/g, mais on peut faire varier le rapport entre les préparations de Lactobacillus clearans et de Enterococcus faecalis durant le processus de fabrication pour produire des mélanges contenant n'importe quel compte de cellules souhaité. La préparation peut être sous la forme de poudres, granules, capsules, ou autres formulations courantes avec un excipient convenable. Exemple 1 On introduit 15 ml d'une dilution au lOème de fèces dans des tubes à essai (18 x 180 mm). Puis on inocule les tubes à essais avec des échantillons de bactéries 1) qui ont été stérilisées sous pression élevée pendant 15 minutes à 120 C et 2) qui n'ont pas été stérilisées. On bouche les tubes à essai avec des bouchons en caoutchouc pendant 72 heures de culture anaérobie à 37 C. Puis on retire 1 ml d'air au moyen d'une seringue de l'intérieur des tubes à essai et on l'injecte dans des sacs à odeur de 5 litres pour des tests olfactifs par un jury de 6 individus. On détermine l'odeur sur la base des critères d'odeur de fèces indiqués dans le Tableau 1. Pour les préparations de cellules tuées de Enterococcus faecalis, on ajoute aux tubes à essai 0,1 g de la préparation produite dans l'Exemple de Fabrication 3. Les résultats du test, rassemblés dans le Tableau 23, montrent que l'odeur des fèces est considérablement atténuée, en particulier dans le cas de la dilution de fèces traitée avec des échantillons stérilisés sous pression élevée. Ceci apparaîtra de façon évidente d'une comparaison avec les résultats obtenus avec les lots testés inoculés avec Lactobacillus clearans seule, présentés dans le Tableau 2. Tableau 23 Test de désodorisation avec un mélange de Lactobacillus clearans et de Enterococcus faecalis (1) Cellules utilisées Test in vitro Lactobacillus clearans Enterococcus faecalis Stérilisées sous FERM BP N FERM BP N pression élevée Non stérilisées 6973 7230 (viables) 1,2 1,5 7230 (tuées) 1,3 1,7 Exemple 2 On administre en continu, à 10 individus, une combinaison de 1 g de préparation de cellules viables de Enterococcus faecalis (FERM BP-7230) ou 1 g de préparation de cellules tuées de Enterococcus faecalis (FERM BP-7230) et 100 ml de yaourt préparé avec Lactobacillus clearans FERM BP-6973 dans un milieu comprenant 100 g de lait écrémé, 50 g de saccharose et 2 g de gélose par litre, et on détermine en continu l'odeur des fèces 20 à 30 jours, 50 à 60 jours, et 80 à 90 jours après administration. On détermine les résultats en introduisant 0,5 g d'échantillon de fèces provenant des 10 individus dans des sacs à odeur de 20 litres, que l'on stocke à la température ambiante pour l'évaluation de l'odeur par un jury de 6 individus au bout de 30 minutes. On donne la note 100 à l'odeur de fèces moyenne pour 5 individus n'ayant pas ingéré de yaourt. Les valeurs moyennes dans le Tableau 24 montrent que l'administration par voie orale atténue de façon croissante l'odeur des fèces au cours du temps. Au bout de 90 jours, l'odeur a considérablement diminué et n'est plus désagréable. Les effets appréciables apparaîtront de façon évidente si on les compare aux résultats obtenus avec l'administration de Lactobacillus clearans seule, présentés dans le Tableau 3. Tableau 24 Test de désodorisation avec un mélange de Lactobacillus clearans et de Enterococcus faecalis (2) Cellules utilisées Test in vitro Lactobacillus clearans Enterococcus faecalis 20 à 30 50 à 60 80 à 90 FERM BP N FERM BP N jours jours jours 6973 7230 (viables) 20 10 5 7230 (tuées) 33 16 8 Exemple 3 De la même manière que dans l'Exemple 1, on inocule des tubes à essai contenant des dilutions de fèces au lOème avec des échantillons de bactéries 1) qui ont été stérilisées sous pression élevée pendant 15 minutes à 120 C et 2) qui n'ont pas été stérilisées. On bouche les tubes à essai avec des bouchons en caoutchouc pendant 72 heures de culture anaérobie à 37 C. Puis on centrifuge les cultures, on recueille 5 ml de surnageant pour chacune d'entre elles, que l'on dilue au lOème, et on détermine les concentrations d'ions soufre (S2+) et d'ions ammonium (NH4+) libres dans la solution de 50 ml résultante. On détermine aussi la concentration d'acides gras inférieurs par chromatographie gazeuse. Les Tableaux 25 et 26 donnent les résultats mesurés. Les tableaux montrent que des substances typiques dans les fèces sont réduites dans une large mesure, de 70 à 90 %, par les échantillons tant stérilisés que non stérilisés. Le taux de réduction apparaîtra de façon évidente par une comparaison avec les résultats obtenus après inoculation avec Lactobacillus clearans seule, présentés dans les Tableaux 6 et 7. (U E CQ 1) -t-) â S 4-4 nution e Ente sées) #H Ti -H i a) m dj a e qj fC -Q (U O 3 rH 4-' ruz -H OS rti T3 E-' Bactéries Résultats de l'étude de l'analyse chimique Lactobacillus clearans Enterococcus faecalis Avant culture (ppm) Après culture (ppm) FERM BP ? FERM BP 5~ # I NH4+ # r~ Acides # gras S2+ r- NH4+ # , Acides gras FERM BP N FERM BP N S2+ NH4+ Acides gras S2+ NH4+ Acides gras 6973 7230 (viables) 30 350 2800 - diminution 3 diminution 70 diminution 500 7230 (tuées) 30 350 2800 diminution 4 87 diminution 80 77 diminution 620 78 (U ni s toxiques p fC nces malodor calis (2) .w lU U diminution d et de Entero@ stérilisées) (lJ T (H C M a 26 - Test ( illus cleara @s de fèces 'r-{ 0 au ba ti (U 0 r-t 4J ri Tab Lac (di Bactéries ~~~~~~~~~~~ Résultats de l'étude de l'analyse chimique Lactobacillus clearans Enterococcus faecalis Avant culture (ppm) Après culture (ppm) FERM BP N FERM BP N S2+ NH4+ Acides gras S2+ NH4+ Acides gras 6973 7230 (viables) 50 370 3500 9 65 870 7230 (tuées) 50 370 3500 diminution 12 76 diminution 80 78 diminution 1020 76 Exemple 4 On administre en continu pendant 6 mois, à 20 individus en bonne santé et 20 individus de constitution fragile, 1 g de préparation de Lactobacillus clearans (5 x 108 cellules/g) comprenant un mélange à parties égales de trois souches typiques de Lactobacillus clearans, de façon spécifique FERM BP-6972, FERM BP-6971, FERM BP- 6973, et 1 g de préparation de cellules viables de Enterococcus faecalis (5 x 108 cellules/g) constituées de Enterococcus faecalis FERM BP-7230 ou 1 g de préparation de cellules tuées de Enterococcus faecalis (5 x 108 cellules/g) constituées de Enterococcus faecalis FERM BP- 7231. On surveille au cours du temps la flore intestinale, les résultats étant présentés dans les Tableaux 27 et 28. Les tableaux montrent que l'administration par voie orale de cellules viables ou tuées de Enterococcus faecalis en mélange avec Lactobacillus clearans augmente les bactéries bénéfiques et diminue les bactéries nuisibles plus rapidement que lorsque Lactobacillus clearans est administrée seule, comme le montrent les Tableaux 8 et 9. Ainsi, les améliorations sont environ 25 % plus rapides chez les individus en bonne santé, avec un compte de cellules bactériennes bénéfiques supérieur de 10 à 50 % et un compte de cellules bactériennes nuisibles inférieur de 20 à 40 %. Chez les individus de constitution fragile, les améliorations sont environ 30 % plus rapides, avec un compte de cellules bactériennes bénéfiques supérieur de 10 à 30 % et un compte de cellules bactériennes nuisibles inférieur de 20 à 50 %. On peut donc en conclure que l'amélioration de la flore intestinale est plus efficace chez les individus de constitution fragile. 5 to ococcus faecal (U (U et CQ (U Lactobacillus Enterococcus Compte de cellules Changement du compte de cellules après administration clearans faecalis avant administration 1 mois 2 mois 3 mois 6 mois Bifidobacterium 1,25 x 1010 1,65 x 1010 2,0 x 1010 2,3 x 1010 2,8 x 1010 FERM BP-7230 Lactobacillus 2,4 x 107 4,0 x 107 6,5 x 107 10 X 107 15 X 107 (cellules viables) Clostridium 1,2 x 105 0,8 x 105 0,5 x 105 0,3 x 105 0,1 x 105 FERM BP 6972 Veillonella 5,0 x 105 4,0 x 105 2,5 x 105 2,0 x 105 1,0 x 105 6971 6973 Bifidobacterium 1,25 x 1010 1,60 x 1010 1,90 x 1010 2,20 x 1010 2,65 x 1010 FERM BP-7231 Lactobacillus 2,4 x 107 3,5 X 107 5,8 X 107 8,5 x 107 14 x 107 (cellules tuées) Clostridium 1,2x105 1,0 x 105 0,7 x 105 0,4 x 105 0,13 x 105 Veillonella 5,0 x 105 4,0 x 105 3,0 x 105 2,3 x 105 1,2 x 105 ns et de Enterococcus faecalis s 'U v r# ci) 3 4-4 r-1 n -l-1 -Q 2 0 -'-' 4j (1) mélang ividus 44 4-) Tableau 28 - la flore int Lactobacillus Enterococcus Compte de cellules Changement du compte de cellules après administration clearans faecalis avant administration 1 mois 2 mois 3 mois 6 mois Bifidobacterium 4,5 x 109 5,5 x 109 7,0 x 109 8,0 x 109 10,0 x 109 FERM BP-7230 Lactobacillus 1,0 x 10 1,2 x 107 1,8 x 107 3,0 x 107 5,0 x 107 FERM BP (cellules viables) Clostridium 4,5 x 105 2,5 x 105 1,8x1Q5 1,4 x 105 1,0 x 105 6972 Veillonella 2,2 x 106 1,6 x 106 1,0 x 106 0,65 x 106 0,38 x 106 6971 Bifidobacterium 4,5 x 109 5,0 x 109 6,0 x 109 7,0 x 109 9,0 x 109 6973 FERM BP-7231 Lactobacillus 1,0 x 10 1,1 x 10 1,5 xi 2,3 x 10 4,5 x 10 (cellules tuées) Clostridium 4,5 x 105 2,8 x 105 2,0 x 105 1,5 x 105 1,0 x 105 Veillonella 2,20 x 106 1,70 x 106 1,20 x 106 0,75 x 106 0,4 x 106 Exemple 5 On ajoute des cellules viables ou tuées de Enterococcus faecalis à des cultures mixtes de Lactobacillus clearans, E. coli 0-157, Salmonella enteri tidis, ou Shigella flexneri pour une culture anaérobie à 37 C, et on répète des sous-cultures toutes les 72 heures, point où l'on dilue les plaques et réalise des étalements pour surveiller les changements des comptes de cellules et le taux de mutation S-R de E. coli 0-157, Salmonella enteritidis, et Shigella flexneri. Les résultats sont présentés dans les Tableaux 29, 30, 31, 32,33 et 34. On utilise la souche FERM BP-6973 de Lactobacillus clearans, et la souche FERM BP-7231 de Enterococcus faecalis. On ajoute la préparation de cellules tuées de Enterococcus faecalis susmentionnée en une quantité de 1 g par litre de milieu. La composition du milieu utilisé pour les cultures comprend 10 g d'extrait de viande, 10 g de peptone, 2 g de glucose, 2 g de NaCl, et 1 g de CaC03 par litre, le pH étant ajusté à 7,2, et on le stérilise sous pression élevée pendant 15 minutes à 120 C. Les tableaux ci-dessous révèlent que l'inoculation d'organismes pathogènes tels que E. coli 0- 157, Salmonella enteritidis et Shigella flexneri avec des cellules viables de Lactobacillus clearans et de Enterococcus faecalis diminue rapidement les comptes de cellules de ces organismes pathogènes et conduit à leur mutation en types R au cours de la sous-culture. E. coli 0-157 mute à 100 % en le type R au bout de la 13ème sousculture, et disparaît à la 15ème sous-culture. Salmonella enteritidis et Shigella flexneri disparaissent avant de muter à 100 % en le type R respectivement aux 13ème et 15ème sous-cultures. Quand on utilise Lactobacillus clearans telle quelle, comme le montrent les Tableaux 11, 13 et 15, ces organismes pathogènes mutent en les types R au cours de nombreuses sous-cultures, mais les bactéries conservent un compte de cellules constant, de 1 à 3 x 109 cellules/ml, sans disparaître. Bien que l'addition de Lactobacillus clearans et de cellules tuées de Enterococcus faecalis aux organismes pathogènes susmentionnés affiche les mêmes tendances que celles prévalant avec l'inoculation de cellules viables, la mutation en types R est plus lente que celle prévalant avec l'inoculation de cellules viables, et les comptes de cellules diminuent mais ne disparaissent pas. Néanmoins, le nombre de sous-cultures conduisant à une mutation de 100 % en types R est de 15 pour E. coli 0-157, de 30 pour Salmonella enteritidis, et de 15 pour Shigella flexneri, ce qui est bien plus rapide que lors de l'utilisation de Lactobacillus clearans seule en tant qu'inoculum. Tableau 29 Effets de Lactobacillus clearans (FERM BP-6973) et de cellules viables de Enterococcus faecalis (FERM BP-7231) sur E. coli 0-157 L. clearans E. faecalis E. coli 0-157 Nombre de FERM BP-6973 FERM BP-7231 Type S Type R Proportion sous-cultures cellules/ml cellules/ml cellules/ml cellules/ml de type R 1 1 x109 2x109 2x109 0 0 3 1 x 109 2,2 x 109 1,5 x 109 0 0 5 1,2x109 2,4x109 1x109 2x108 20% 7 1x109 2x109 2x108 3x108 60% 9 8 x 108 2,4 x 109 1 x 108 2 x 108 67% 11 1 x 109 2,5 x 109 0 1 x 108 100 % 13 1,2 x 109 2,3 x 109 0 4 x 107 100 % 15 1,2x109 2,5x109 0 0 Tableau 30 Effets de Lactobacillus clearans (FERM BP-6973) et de cellules viables de Enterococcus faecalis (FERM BP-7231) sur Salmonella enteritidis L. clearans E. faecalis Salmonella enteritidis Nombre de FERM BP-6973 FERM BP-7231 Type S Type R Proportion sous-cultures cellules/ml cellules/ml cellules/ml cellules/ml de type R 1 1 x 109 2,5 x 109 1,2 x 109 0 3 1,2x109 2,5x109 1x109 2x107 2% 5 1,5x109 2,2x109 8x108 5 x 108 38% 7 1,3x109 3x109 1x108 1x108 50% 9 1 x 109 3 x 109 7 x 107 8 x 107 53 % 11 1 x 109 3,2x109 3 x 107 5 x 107 63% 13 8x108 3x109 0 0 15 1 x 109 2,8 x 109 0 0 Tableau 31 Effets de Lactobacillus clearans (FERM BP-6973) et de cellules viables de Enterococcus faecalis (FERM BP-7231) sur Shicrella flexneri L. clearans E. faecalis Shigella flexneri Nombre de FERM BP-6973 FERM BP-7231 Type S Type R Proportion sous-cultures cellules/ml cellules/ml cellules/ml cellules/ml de type R 1 1,2x109 2x109 1,5x109 0 0 3 1 x 109 2,2 x 109 1 x 109 0 0 5 7x108 2,5x109 4x108 1 x 108 20% 7 5x108 2,8 x 109 2x108 2 x 108 50% 9 7 x 108 2,5 x 109 1 x 108 2x1Q8 67% 11 5 x 108 2,5x109 3x1Q7 6x10 67% 13 5x1Q8 2,7 x 109 2 x 106 6 X 106 70 % 15 6 x 108 2,5 x 109 0 0 17 8x108 3x109 0 0 Tableau 32 Effets de Lactobacillus clearans (FERM BP-6973) et de cellules tuées de Enterococcus faecalis (FERM BP-7231) sur E. coli 0-157 L. clearans E. coli 0-157 Nombre de FERM BP-6973 Type S Type R Proportion sous-cultures cellules/ml cellules/ml cellules/ml de type R 1 1,8 x 109 2,5 x 109 0 0 3 2 x 109 2 x 109 0 0 5 2x109 1,5x109 5x108 25% 7 1,8x109 8x109 1x109 56% 8 1,5x109 5 x 108 8x108 62% 11 1,5 x 109 1x108 5x108 82% 13 1,8x109 5x107 4,5x108 90% 15 2 x 109 0 2 x 108 100 % 18 2x109 0 2x108 100% Tableau 33 Effets de Lactobacillus clearans (FERM BP-6973) et de cellules tuées de Enterococcus faecalis (FERM BP-7231) sur Salmonella enteritidis L. clearans Salmonella enteritidis Nombre de FERM BP-6973 Type S Type R Proportion sous-cultures cellules/ml cellules/ml cellules/ml de type R 1 1,5x109 3x109 0 0 3 1,2 x 109 2,5 x 109 0 0 5 1,2x109 1,5x109 7x108 32% 7 1 x 109 1,2 x 109 1 x 108 45 % 9 1 x 109 8 x 108 1,2 x 109 60 % 11 8 x 108 5 x 108 8 x 108 61 % 13 8 x 108 5 x 108 5 x 108 50 % 15 5x108 2x108 8x108 80% 20 7 x 108 1 x 1 O8 9 x 1 O8 90 % 25 5 x 108 2 x 108 1 x 109 83 % 30 4 x 108 0 1,8 x 109 100% 35 5 x 108 0 1,5 x 109 100% 40 6 x 108 0 1 x 109 100 % Tableau 34 Effets de Lactobacillus clearans (FERM BP-6973) et de cellules tuées de Enterococcus faecalis (FERM BP-7231) sur Shigella flexneri L. clearans Shigella flexneri Nombre de FERM BP-6973 Type S Type R Proportion sous-cultures cellules/ml cellules/ml cellules/ml de type R 1 1,2 x 109 3,5 x 109 0 0 3 1 x 109 3 x 109 0 0 5 7x108 2,5x109 2x108 7,4% 7 6 x 108 2 x 109 3 x 108 13% 9 7 x 108 2 x 109 1 x 109 33 % 11 5 x 108 2 x 109 1 x 109 33 % 13 5x108 1,8x109 1,2x109 40% 15 4 x 108 1,8 x 109 1,5x109 45 % 20 5x108 1,5x109 1,8x109 55% 25 6 x 108 1 x 109 1,5 x 109 60% 30 4,5 x 108 8x108 1,8 x 109 69% 35 4 x 108 3 x 108 2 x 109 87 % 40 3,5x108 1x108 2x109 95% 45 4 x 108 0 2 x 109 100 % 50 4 x 108 0 2 x 109 100 % Exemple 6 On combine une préparation de cellules viables de Lactobacillus clearans FERM BP-6972 ou de Lactobacillus clearans FERM BP-6972 préparée par le procédé de l'Exemple de Fabrication 1, une préparation de cellules viables de Enterococcus faecalis FERM BP-7230 ou de Enterococcus faecalis 7231 préparée par le procédé de l'Exemple de Fabrication 2, et une préparation de cellules tuées de Enterococcus faecalis FERM BP-7230 ou de Enterococcus faecalis 7231 préparée par le procédé de l'Exemple de Fabrication 3, que l'on ajoute à un aliment que l'on donne à des groupes de cinq souris mâles âgées de 10 semaines. 1 g d'aliment contient 5 x 108 cellules de Lactobacillus clearans et 5 x 108 cellules de Enterococcus faecalis (2,5 x 108 cellules à chaque fois de cellules viables et de cellules tuées quand on les utilise en combinaison). On laisse les animaux s'alimenter librement pendant 3 mois. On mesure les triglycérides et le cholestérol dans le sérum pour les comparer aux taux chez des souris témoins nourries uniquement avec un aliment normal. On mesure les triglycérides au moyen du Triglycéride E-Test Wako, et on mesure le cholestérol au moyen du Triglycéride C-Test Wako. On obtient les valeurs moyennes pour chaque groupe. La valeur moyenne pour les souris du groupe témoin est de 100 %. Les résultats sont présentés dans le Tableau 35. Les Tableaux 35 et 21 montrent que l'addition individuelle de cellules viables ou tuées, ainsi que l'addition combinée de cellules viables et tuées, de Enterococcus faecalis, qui ont une action de diminution des triglycérides et du cholestérol, à Lactobacillus clearans, est bien plus efficace que lorsqu'on administre Enterococcus faecalis seule. Contrairement aux résultats obtenus avec l'administration individuelle, l'utilisation combinée de cellules tuées conduit à de meilleurs effets que les cellules viables. Par comparaison avec le groupe témoin, les taux diminuent d'environ la moitié. Tableau 35 Effet d'un mélange de Lactobacillus clearans et de Enterococcus faecalis sur les triglycérides et le cholestérol dans le sérum de souris Lactobacillus clearans Enterococcus faecalis FERM BP N FERM BP N Cellules viables Cellules tuées Triglycérides Cholestérol 6972 7230 60 % 55 % 6972 7230 55 % 47 % 6972 7230 7230 58 % 52 % 6971 7231 57 % 55 % 6971 7231 50 % 45 % 6971 7231 7231 52 % 50 % Exemple 7 On élève 7 groupes comprenant un total de trentecinq rats spontanément hypertendus (SHR) âgés de 8 semaines pendant 7 mois avec de la nourriture contenant les préparations de cellules de l'Exemple 6. On mesure la pression sanguine, avant et après administration, des groupes ayant reçu chaque type de préparation de cellules et du groupe témoin, les résultats étant présentés dans le Tableau 36. Les Tableaux 36 et 22 révèlent que la pression sanguine s'est améliorée, en moyenne, d'environ 15 % au bout de 3 mois. Les cellules tuées de Enterococcus faecalis ont une action plus efficace que les cellules viables, de la même manière que dans l'Exemple 6. La chute de pression sanguine est d'environ 10 à 20 %, résultats qui sont meilleurs que ceux obtenus par l'administration de Enterococcus faecalis telle quelle. Tableau 36 Effet d'un mélange de Lactobacillus clearans et de Enterococcus faecalis sur la pression sanguine chez les rats Lactobacillus Enterococcus faecalis Niveau moyen Niveau moyen après clearans FERM BP N avant adminis- administration (mm Hg) FERM BP N Cellules viables Cellules tuées tration (mm Hg) Diminution 6971 7230 210 180 14,3 % 6971 7230 203 168 17,2 % 6971 7230 7230 200 175 12,5 % 6973 7231 207 176 15,0 % 6973 7231 198 162 18,2 % 6973 7231 7231 205 178 13,1 % Témoin 202 210 Augmentation de 3,9 % Le Tableau 37 montre l'action sur diverses fonctions de l'utilisation de Lactobacillus clearans, de Enterococcus faecalis, et des deux. Tableau 37 Résumé Comparatif Lactobacillus L. clearans et E. Paramètre clearans Enterococcus faecalis faecalis Diminution des substances putréfiantes intestinales 0 à # A malodorantes toxiques Désodorisation des fèces # A Croissance de bactéries OàD A entériques bénéfiques Suppression de bactéries entériques nuisibles Action anti-flatulence 0 # Suppression de la # # # croissance des pathogènes Suppression de la toxicité 0 x des pathogènes Réduction des triglycérides # # à # Réduction du cholestérol # # à # Action hypotensive A # 0 à # Evaluation globale pour Résultats Résultats imperceptibles Résultats préserver la santé, stimuler perceptibles mais apparaissant rapides, la récupération, prévenir le avec un usage progressivement avec un perceptibles, vieillissement modéré usage modéré à prolongé très efficaces # : excellent ; 0 : bon ; # : ordinaire ; A : faible ; X : aucun effet L'entretien de la santé et les approches du même type ont progressivement changé dans notre société de plus en plus vieillissante. Notre époque, où le traitement de maladies aiguës et de maladies chroniques est considéré comme ayant une importance majeure, témoigne d'un déplacement, maintenant ou dans un futur proche, vers la "médecine préventive" et même une "thérapie nutritionnelle", au vu de notre société plus âgée. Il ne s'agit pas de traitements qui sont entrepris après apparition d'une maladie. Plutôt, les approches pour être en bonne santé par soi-même grâce à l'absorption de nourriture de façon plus raisonnée augmentent à l'heure actuelle dans le courant principal visant à prévenir les maladies par des méthodes naturelles. Ce n'est pas exagéré de suggérer que la prévention des maladies de façon à éviter la nécessité d'un quelconque traitement est une approche pionnière des traitements du 21ème siècle. L'administration par voie orale de la préparation de bactéries lactiques de la présente invention prolonge progressivement l'influence des bactéries intestinales bénéfiques, protège avec constance la muqueuse intestinale, produit des vitamines, et synthétise des acides aminés, tout en supprimant la croissance de bactéries étrangères et d'organismes pathogènes étrangers, diminuant leur toxicité, et activant des fonctions immunologiques sous la conduite des bactéries lactiques de ladite préparation. Les bactéries intestinales nuisibles sont donc notablement réduites, et la production de substances putréfiantes malodorantes est supprimée, ce qui conduit à des fèces significativement désodorisées. Comme lors d'une attaque, les bactéries lactiques de ladite préparation se nourrissent activement des substances putréfiantes intestinales, conduisant à un environnement intestinal plus propre et à une normalisation de la muqueuse intestinale et des vaisseaux et nerfs environnants. La purification des intestins, qui représente une source de bien-être pour la vitalité, l'énergie, le sang et la chair des humains, conduit à une meilleure absorption des substances vitales et, inversement, à une absorption plus faible de substances toxiques par l'intermédiaire des intestins. Ceci conduit inévitablement à une meilleure fonction hépatique, et donc à une diminution des triglycérides et du cholestérol dans le sérum, ainsi qu'à un sang plus propre. Un tel sang revitalisé conduit à une pression sanguine plus faible, si bien que les substances vitales telles que les hormones, les enzymes, les anticorps et les substances immunologiques ne sont pas empêchées d'être distribués dans tout le système corporel. Le métabolisme est donc amélioré, et toutes les fonctions systémiques sont revigorées. Ainsi, les intestins pollués sont nettoyés et peuvent revenir dans leur état "comme neuf", conduisant à une amélioration globale et à un état vital de la santé sans signe de maladie. On peut dire que la doctrine de Metchnikoff sur la longévité est maintenant réalisée, un siècle plus tard. La préparation de bactéries lactiques de la présente invention peut être conservée sans aucune perte de titre pendant 2 à 3 ans, ce qui permet de la produire sous la forme de produits transportables qui peuvent être facilement utilisés n'importe où et n'importe quand, et sa valeur est donc infinie. Dans des sociétés où les populations ont un âge de plus en plus avancé, de plus en plus d'individus âgés sont susceptibles d'être alités ; bien que la mise au rebut des déchets puisse devenir un problème, la désodorisation de ces déchets devrait rendre cette tâche bien moins désagréable, et pourrait rendre service aux personnes dispensant les soins. REVENDICATIONS 1. Préparation de bactéries lactiques, caractérisée en ce qu'elle comprend des cellules viables de Lactobacillus clearans, et des cellules viables de Enterococcus faecalis capable de réduire un ou plusieurs parmi au moins les triglycérides et le cholestérol. 2. Préparation de bactéries lactiques, caractérisée en ce qu'elle comprend des cellules viables de Lactobacillus clearans, et des cellules tuées de Enterococcus faecalis capable de réduire un ou plusieurs parmi au moins les triglycérides et le cholestérol. 3. Préparation de bactéries lactiques, caractérisée en ce qu'elle comprend des cellules viables de Lactobacillus clearans, et des cellules viables et des cellules tuées de Enterococcus faecalis capable de réduire un ou plusieurs parmi au moins les triglycérides et le cholestérol.