Brevet FR2799204A1 — publié le 20010406

La présente invention concerne une nouvelle classe de protéines ayant une partie N-terminale comprenant des motifs caracténstiques d'une protéine végétale de résistance à des agents pathogènes et une partie Cterminale comprenant un domaine de liaison à l'ADN. L'invention concerne aussi les acides nucléiques codant pour de telles protéines impliquées dans la résistance de plantes à divers pathogènes ainsi qu'à des moyens de détection de ces protéines et de ces acides nucléiques, tels que des anticorps ou encore des sondes et des amorces nucléotidiques L'invention est également relative à des vecteurs recombinants comprenant un acide nucléique codant pour un polypeptide appartenant à cette nouvelle classe de protéines, à des cellules hôtes transformées par un acide nucléique ou un vecteur recombinant selon l'invention, ainsi qu'à des plantes transgéniques dont une partie ou la totalité des cellules sont transformées avec un acide nucléique ou un vecteur recombinant selon l'invention L'invention a également trait à des moyens destinés à augmenter ou au contraire à inhiber l'expression d'un acide nucléique codant pour une protéine selon l'invention dans des plantes, dans le but d'augmenter la résistance desdites plantes à divers pathogènes L'invention concerne encore des procédés de criblage de substances candidates se fixant sur un polypeptide selon l'invention, ainsi que les substances candidates obtenues selon de tels procédés. L'amélioration de la résistance des plantes, et tout particulièrement des plantes d'intérêt agronomique, à différents pathogènes fait l'objet de recherches intenses en vue de combler les besoins techniques d'un secteur industriel agricole qui a recours de plus en plus systématiquement à des pratiques de culture intensive. L'identification de nouveaux gènes ou de nouvelles protéines capables de conférer à des plantes une résistance accrue à diverses bactéries, champignons ou virus revêt un intérêt économique important dans l'agriculture d'aujourd'hui, en permettant de mettre au point des végétaux de grande culture capables de résister naturellement à ces pathogènes et ne nécessitant en conséquence pas un apport massif en produits phytosanitaires, en particulier pesticides, qui présentent de nombreux inconvénients pour l'environnement. Le flétrissement bactérien est l'une des pathologies les plus répandues affectant les plantes d'intérêt agronomique. Il s'agit de l'une des phytobacténoses les plus importantes dans le monde qui est notamment provoquée par la bactérie Ralstonia solanacearum . Ce pathogène vasculaire, d'origine tellurique, affecte près de 200 espèces végétales telles que la tomate, le tabac, la pomme de terre ou encore le bananier, principalement dans les zones tropicales et subtropicales Récemment, en Europe, différentes souches de cet agent pathogène ont été détectées. Chez la tomate, l'étude de la résistance à Ralstonia solanacearum est rendue complexe de par sa nature polygénique Plusieurs gènes impliqués dans l'établissement de la résistance ont été mis en évidence. Récemment, une étude de DESLANDES et al. (1998) a permis d'identifier, chez la plante Arabidopsis thaliana un locus chromosomique portant un déterminant génétique impliqué dans la résistance à Ralstonia solanacearum. Ainsi, des lignées d'Arabidopsis thaliana, constituant la génération Fg, obtenues par croisement de lignées d'Arabidopsis thaliana respectivement sensibles et résistantes à Ralstonia solanacearum, ont été utilisées pour l'étude de la co-ségrégation de marqueurs de type RLFP avec l'expression du phénotype de résistance à ce pathogène responsable du flétrissement. Ces auteurs ont ainsi montré qu'un déterminant génétique de la résistance à Ralstonia solanacearum était localisé, sur le chromosome V d'Arabidopsis thaliana, entre les marqueurs RFLP mi83 et mi61, c'est-à-dire dans une région d'environ 6,8 cM (approximativement 1,7 à 3,4 Mb) de ce chromosome. Selon ces auteurs, les résultats de l'étude suggèrent que le locus d'intérêt localisé sur le chromosome V porte un ou plusieurs gènes, ces gènes pouvant soit conférer le phénotype de résistance, soit au contraire conférer le phénotype de sensibilité à Ralstonia solanacearum, bien que les bases génétiques de la résistance et/ou de la sensibilité à ce pathogène n'aient pas été identifiées chez Arabidopsis thaliana. En outre, DESLANDES et al. (1998) observent encore que la région chromosomique d'intérêt d'Arabidopsis thaliana était connue pour contenir de nombreux autres déterminants génétiques impliqués dans la reconnaissance à des pathogènes. Le demandeur a désormais identifié un déterminant génétique qui est capable de conférer la résistance à Ralstonia solanacearum chez Arabidopsis thaliana. Il s'agit d'un gène unique codant pour un polypeptide appartenant à une nouvelle classe structurale de protéines. Cette nouvelle classe de protéines identifiée selon l'invention est caractérisée en ce qu'elle possède une partie N-terminale ayant des motifs structuraux en commun avec plusieurs gènes de résistance connus et une partie C-terminale possédant des motifs structuraux en commun avec des protéines transactivatrices possédant un domaine de liaison à l'ADN, notamment désignées sous le nom de protéines WRKY ou encore facteurs de transcription WRKY. Il a ainsi été montré selon l'invention, que la transformation d'une plante Arabidopsis thaliana sensible à Ralstonia solanacearum avec un acide nucléique codant pour une protéine telle que définie ci-dessus était capable de conférer à la plante transformée une résistance à différentes souches de cet agent pathogène. L'invention a donc pour objet un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'une séquence nucléotidique codant pour une protéine de résistance d'une plante à un pathogène, ladite protéine comprenant a) une partie N-terminale comprenant au moins une séquence d'acides aminés riche en leucine et au moins un site de liaison aux nucléotides; et b) une partie C-terminale comprenant un domaine de liaison à l'ADN, ledit domaine de liaison comprenant la séquence d'acides aminés WRKYGQK . Préférentiellement, la partie N-terminale de cette protéine comprend en outre au moins un domaine TIR(TOLL/IL-1R), un tel domaine TIR étant notamment défini par son homologie de séquence avec les domaines cytoplasmiques de la protéine TOLL de drosophile ainsi qu'avec la protéine récepteur de l'Interleukine-1 de mammifère, dont la séquence consensus est décrite par HAMMOND-KOSACK et al (1997) De manière préférée, la partie N-terminale de cette protéine comprendra également une boucle P (P-LOOP), qui est un segment peptidique formant une boucle et capable de fixer un phosphate, que l'on retrouve dans les protéines kinases. Un tel domaine TIR aura préférentiellement la séquence en acides aminés DEEFVCISCVEEVRYSFVSHLSEALRRKGINNVWDVDIDDLLFKESQAKI EKAGVSVMVLPGNCDPSEVWLDKFAKVLECQRNNKDQAWSVLYGDSLL RDQWLSELDFRGLSRIHQSRKECSDSILVEEIVRDVYET Une telle boucle P aura préférentiellement la séquence en acides aminés CVGIWGMPGIGKTTLAKAV . Préférentiellement, la partie N-terminale comprend également un domaine de type NB-ARC, qui est un domaine conservé et caractéristique des protéines de résistance à des pathogènes ainsi qu'à des protéines impliquées dans les mécanismes d'apoptose. De manière préférée, ce domaine NB-ARC a la séquence en acides aminés représentée en gras et soulignée dans les figures 1 et 2. En outre, la partie N-terminale comprend préférentiellement un site de signalisation nucléaire de type NLS. De manière préférée, un tel domaine NLS a la séquence en acides aminés KKKLSEMETAFLKLKRRPP . Comme déjà indiqué, la partie C-terminale d'une protéine codée par un acide nucléique selon l'invention comprend un domaine WRKY caractéristique de certaines protéines transactivatnces, en particulier certains facteurs de transcription et caractérisé en ce qu'il comprend la séquence en acides aminés WRKYGQK . Préférentiellement, ce domaine WRKY comprend la séquence en acides aminés suivante: DXXXWRKYGQKXIXGXXXPRXYYXCXXXXXXXCXXXKXXXXXEXXXXXXX XXYXSXHXH , dans laquelle X représente l'un quelconque des 20 acides aminés naturels. En outre, la partie C-terminale comprend préférentiellement un domaine riche en leucine. La partie C-terminale comprend de préférence également un domaine caractéristique d'un site de signalisation nucléaire (NLS), ledit domaine de signalisation nucléaire ayant préférentiellement la séquence en acides aminés NFHCWAPGKWPKVRKD . De manière préférée, la partie C-terminale comprend aussi un motif de type leucine zipper , caractéristique d'un site de liaison aux protéines, qui a préférentiellement la séquence en acides aminés LRVSYDDLQEMDKVLFLYIASL . De manière tout à fait préférée, un acide nucléique selon l'invention code pour un polypeptide comportant, de l'extrémité N-terminale à l'extrémité C-terminale, (i) un domaine TIR, (ii) un motif P-LOOP, (iii) un motif NB-ARC, (iv) un domaine NLS, (v) une première région riche en leucine, (vi) une seconde région riche en leucine, (vii) un domaine NLS, (viii) un motif de type leucine zipper, (ix) un domaine WRKY, les domaines (i) à (ix) étant tels que définis précédemment. Fait également partie de l'invention un acide nucléique de séquence complémentaire. De manière préférée, un acide nucléique selon l'invention se présente sous une forme isolée et/ou purifiée. Le terme isolé au sens de la présente invention, désigne un matériel biologique (acide nucléique ou protéine) qui a été soustrait à son environnement originel (l'environnement dans lequel il est localisé naturellement). Par exemple, un polynucléotide présent à l'état naturel dans une plante ou un animal n'est pas isolé. Le même polynucléotide séparé des acides nucléiques adjacents au sein desquels il est naturellement inséré dans le génome de la plante ou de l'animal est considéré comme isolé . Un tel polynucléotide peut être inclus dans un vecteur et/ou un tel polynucléotide peut être inclus dans une composition et demeurer néanmoins à l'état isolé du fait que le vecteur ou la composition ne constitue pas son environnement naturel. Le terme purifié ne nécessite pas que le matériel soit présent sous une forme de pureté absolue, exclusive de la présence d'autres composés. Il s'agit plutôt d'une définition relative. Un polynucléotide est à l'état purifié après purification du matériel de départ ou du matériel naturel d'au moins un ordre de grandeur, de préférence 2 ou 3 et préférentiellement 4 ou 5 ordres de grandeur. Aux fins de la présente invention, l'expression séquence nucléotidique peut être employée pour désigner indifféremment un polynucléotide ou un acide nucléique L'expression séquence nucléotidique englobe le matériel génétique lui-même et n'est donc pas restreinte à l'information concernant sa séquence Les termes acide nucléique , polynucléotide , oligonucléotide ou encore séquence nucléotidique englobent des séquences d'ARN, d'ADN , d'ADNc ou encore des séquences hybrides ARN/ADN de plus d'un nucléotide, indifféremment sous la forme simple chaîne ou sous la forme de duplex. Le terme nucléotide désigne à la fois les nucléotides naturels (A, T, G, C) ainsi que des nucléotides modifiés qui comprennent au moins une modification telle que (1) Un analogue d'une purine, (2) un analogue d'une pyrimidine, ou (3) un sucre analogue, des exemples de tels nucléotides modifiés étant décrits par exemple dans la demande PCT N WO 95/04 064 Aux fins de la présente invention, un premier polynucléotide est considéré comme étant complémentaire d'un second polynucléotide lorsque chaque base du premier nucléotide est appanée à la base complémentaire du second polynucléotide dont l'orientation est inversée Les bases complémentaires sont A et T (ou A et U), ou C et G Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, les inventeurs pensent que les différents motifs caractéristiques de la classe de protéines selon l'invention sont de nature à lui conférer sa fonction biologique qui se traduit par l'observation d'un phénotype de résistance envers des pathogènes de plantes, en particulier envers la bactérie R. solanacearum Ainsi, la partie N-terminale, qui comprend les domaines TIR, NBARC et une ou plusieurs régions riches en leucine sont caractéristiques de nombreuses protéines de résistance aux pathogènes chez les plantes (protéines R), ces protéines étant supposées activer des voies métaboliques de signalisation en cascade qui coordonnent les réponses initiales de défense de la plante empêchant la progression des pathogènes. Le domaine WRKY de la partie C-terminale d'une protéine selon l'invention pourrait avoir une fonction de liaison à des séquences régulatrices localisées à proximité ou à l'intérieur de régions promotrices de gènes végétaux, la fixation d'une protéine selon l'invention à l'ADN étant ainsi susceptible de moduler l'activité d'autres gènes potentiellement impliqués dans la résistance des plantes aux pathogènes, et tout particulièrement à R solanacearum. Le demandeur a isolé et caractérisé un acide nucléique codant pour un polypeptide appartenant à la classe de protéines de résistance aux pathogènes végétaux définie plus haut, la protéine RRS1-R. Plus précisément, le demandeur a isolé, à partir du génome d'une plante d'Arabidopsis thaliana résistant à R. solanacearum, le gène RRS1-R qui est capable de conférer chez une plante un phénotype de résistance à R solanacearum, un tel acide nucléique constituant la séquence SEQ ID N 1. L'invention concerne un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'une séquence nucléotidique possédant au moins 40% d'identité en nucléotides avec un polynucléotide de séquence SEQ ID N 1, ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire. Selon l'invention, un premier acide nucléique ayant au moins 40% d'identité avec un second acide nucléique de référence, possédera au moins 60%, de préférence au moins 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% ou 99,5% d'identité en nucléotides avec ce second polynucléotide de référence, le pourcentage d'identité entre deux séquences étant déterminé comme décrit ci-après. Le pourcentage d'identité entre deux séquences de nucléotides ou d'acides aminés, au sens de la présente invention, peut être déterminé en comparant deux séquences alignées de manière optimale, à travers une fenêtre de comparaison La partie de la séquence nucléotidique ou polypeptidique dans la fenêtre de comparaison peut ainsi comprendre des additions ou des délétions (par exemple des gaps ) par rapport à la séquence de référence (qui ne comprend pas ces additions ou ces délétions) de manière à obtenir un alignement optimal des deux séquences. Le pourcentage est calculé en déterminant le nombre de positions auxquelles une base nucléique ou un résidu d'aminoacide identique est observé pour les deux séquences (nucléique ou peptidique) comparées, puis en divisant le nombre de positions auxquelles il y a identité entre les deux bases ou résidus d'aminoacides par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison, puis en multipliant le résultat par cent afin d'obtenir le pourcentage d'identité de séquence. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé de manière informatique à l'aide d'algorithmes connus contenus dans l'outil logiciel de la Société WISCONSIN GENETICS SOFTWARE PACKAGE, GENETICS COMPUTER GROUP (GCG), 575 Science Doctor, Madison, Wisconsin De manière tout à fait préférée, le pourcentage d'identité entre deux séquences est effectué à l'aide du logiciel BLAST (version BLAST 2. 06 de Septembre 1998), en utilisant exclusivement les paramètres par défaut (S F ALTSCHUL et al., (1990). SF ALTSCHUL et al.,1997). La séquence génomique du gène RRS1-R est référencée comme la séquence SEQ ID N 1. Un autre objet de l'invention est un acide nucléique qui comprend ou est constitué de la séquence SEQ ID N 1. L'invention est aussi relative à un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs du polynucléotide de séquence SEQ ID N 1 Chacun des acides nucléiques génomiques selon la présente invention peut être aisément obtenu par l'homme du métier qui en connaît sa séquence nucléotidique divulguée dans la présente description L'homme du métier peut également reproduire un quelconque des acides nucléiques génomiques selon l'invention en construisant, sur la base des séquences divulguées dans la présente description, des amorces oligonucléotidiques capables d'amplifier tout ou partie de ces acides nucléiques à partir d'un génome de plante, préférence d'un génome d'Arabidopsis thaliana, ou encore à partir d'une banque de vecteurs (YACS, BACS, cosmides) contenant des inserts génomiques d'une plante, et préférentiellement d'Arabidopsis thaliana. Après amplification à l'aide des amorces appropriées, les différents acides nucléiques amplifiés sont alors soumis à une étape de ligation dans un vecteur plasmidique en vue d'obtenir l'acide nucléique génomique désiré, selon des techniques bien connues de l'homme du métier. Par ailleurs, l'isolement du fragment d'ADN contenant l'insert génomique désiré peut être obtenu par sous-clonage à partir d'une banque (YACS, BACS, cosmides) contenant des inserts génomiques d'une plante, et préférentiellement d'Arabidopsis thaliana. La séquence du gène RRS1-R comprend sept exons et six introns, ainsi que des régions potentiellement régulatrices localisées respectivement du côté 5' du premier exon et du côté 3' du dernier exon, les caractéristiques structurales de ces exons et introns étant détaillées dans les tableaux 1 et 2 ci-après TABLEAU 1: Séquence des exons du gène RRSI-R EXON N POSITION DU NUCLEOTIDE EN POSITION DU NUCLEOTIDE EN 5' SUR LA SEQ ID N 1 3' SUR LA SEQ ID N 1 1 260 636 2 746 1856 3 1937 2236 4 2326 3249 5 3438 4291 6 5377 5499 7 6085 6532 L'invention est également relative à un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide exonique du gène RRSI-R, tels que les polynucléotides 1 à 7 décrits dans le tableau 1 cidessus, qui sont tous inclus dans l'acide nucléique de séquence SEQ ID N 1 De manière générale, un acide nucléique ayant au moins 15 nucléotides consécutifs d'une séquence selon l'invention possède avantageusement au moins 20,25, 30,35, 40,50, 75,100, 150,200, 300, 400,500, 1000, 2000, 3000,4000 nucléotides consécutifs de la séquence de référence, la longueur de nucléotides consécutifs étant naturellement limitée par la longueur de la séquence de référence. Un tel acide nucléique code pour au moins une partie du polypeptide RRS1-R et peut notamment être inséré dans un vecteur recombinant destiné à l'expression du produit de traduction correspondant dans une cellule hôte ou dans une plante transformée avec ce vecteur recombinant. Un tel acide nucléique peut aussi être utilisé pour la synthèse de sondes et d'amorces nucléotidiques destinées à la détection ou à l'amplification de séquences nucléotidiques comprises dans le gène RRS1-R dans un échantillon, le cas échéant de séquences des gènes RRS1-R portant une ou plusieurs mutations, préférentiellement une ou plusieurs mutations de nature à modifier le phénotype d'une plante portant un tel gène RRS1-R muté, par exemple en modifiant la régulation des mécanismes de résistance à des pathogènes, et préférentiellement des mécanismes de résistance à R. solanacearum. TABLEAU 2 Séquences régulatrices et introniques du gène RRS-IR Intron n Position du nucléotide en 5' sur Position du nucléotide en 3' sur la SEQ ID N 1 la SEQ ID N 1 1 637 745 2 1857 1936 3 2237 2325 4 3250 3437 5 4292 5376 6 5500 6084 L'invention est également relative à un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide intronique du gène RRS1-R, tels que les polynucléotides 1 à 6 décrits dans le tableau 2 cidessus, qui sont tous inclus dans l'acide nucléique de séquence SEQ ID N 1. Un tel acide nucléique peut être utilisé comme sonde ou amorce oligonucléotidique pour détecter la présence d'au moins une copie du gène RRS1-R dans un échantillon, ou encore pour amplifier une séquence cible déterminée au sein du gène RRS1-R. En outre, l'acide nucléique du gène RRS1-R de séquence SEQ ID N 1 comprend un codon ATG débutant au nucléotide en position 260 (1er Exon) et un signal de polyadénylation comprise entre les nucléotides en positions 6642 et 6647 comprises. L'acide nucléique du gène RRS1-R de séquence SEQ ID N 1 comprend des séquences régulatrices localisées respectivement du côté 5' de l'exon 1 et du côté 3' de l'exon 7. La région régulatrice 5' du gène RRS1-R comprend la séquence nucléotidique SEQ ID N 2 Le polynucléotide de séquence SEQ ID N 2 est localisé entre le nucléotide en position 1 et le nucléotide en position 259 de la séquence SEQ ID N 1 La séquence régulatrice 3' du gène RRSI-R comprend la séquence nucléotidique SEQ ID N 3 Le polynucléotide de séquence SEQ ID N 3 est localisé entre le nucléotide en position 6533 et le nucléotide en position 7936 de la séquence nucléotidique SEQ ID N 1 Le polynucléotide dérivé des régions régulatrices du gène RRS1-R ci-dessus est utile pour détecter la présence d'au moins une copie de ce gène dans un échantillon L'invention concerne également un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 2 ou SEQ ID N 3 Selon un autre aspect, l'invention est également relative à un acide nucléique comprenant un polynucléotide ayant au moins 80% d'identité en nucléotides avec un polynucléotide de séquence SEQ ID N 2 ou SEQ ID N 3, avantageusement au moins 90%, 95%, 98%, 99%, 99,5% et de manière tout à fait préférée 99,8% d'identité en nucléotide avec un polynucléotide choisi parmi les séquences SEQ ID N 2 et SEQ ID N 3, ou un fragment biologiquement actif de ce dernier. Des fragments préférés des séquences nucléotidiques SEQ ID N 2 ou SEQ ID N 3 ont avantageusement une longueur comprise entre 500, 100, 150,200 à 300, 400, 600, 1000 ou 2000 bases. Par fragment biologiquement actif d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 2 ou SEQ ID N 3 selon l'invention, on entend un polynucléotide comprenant ou consistant en un polynucléotide capable de réguler l'expression d'un acide nucléique placé à proximité de ce dernier, dans une cellule hôte recombinante. Aux fins de la présente invention, un acide nucléique constitue une région régulatrice fonctionnelle pour exprimer un acide nucléique placé à proximité de ce dernier, par exemple un acide nucléique codant pour un polypeptide ou un polynucléotide d'intérêt, si ce polynucléotide régulateur contient les séquences nucléotidiques contenant des signaux de régulation de la transcriptions et/ou de la traduction, et si les séquences sont localisées de telle manière à induire ou augmenter de manière effective la transcription ou la traduction dudit polypeptide ou polynucléotide d'intérêt Afin d'identifier les fragments biologiquement actifs des polynucléotides de séquence SEQ ID N 2 ou SEQ ID N 3, l'homme du métier peut se référer avantageusement à l'ouvrage de SAMBROOK et al (1989) qui décrit l'utilisation d'un vecteur recombinant portant un gène marqueur (par exemple ss-galactosidase, chloranphenicol acétyltransférase, etc .) dont l'expression est détectée en plaçant la séquence du gène marqueur sous le contrôle de fragments polynucléotidiques biologiquement actifs des séquences SEQ ID N 2 ou SEQ ID N 3. Les séquences génomiques localisées en amont du premier exon du gène RRS1-R sont clonées dans un vecteur approprié contenant un gène marqueur, tel que le gène GUS (Jefferson et al., 1987). Les fragments des polynucléotides de séquence SEQ ID N 2 ou SEQ ID N 3 selon l'invention peuvent être préparés à partir de l'une quelconque des séquences SEQ ID N 1, SEQ ID N 2 et SEQ ID N 3 par clivage à l'aide des endonucléases de restriction appropriées, comme décrit par exemple dans l'ouvrage de SAMBROOK et al. (1989) précité. Les fragments des polynucléotides régulateurs selon l'invention peuvent également être préparés par digestion de l'une quelconque des séquences SEQ ID N 1, SEQ ID N 2 et SEQ ID N 3 par une enzyme exonucléase, telle que par exemple Bal3l comme décrit par WABIKO et al. (1986) , WABIKO H. et al , 1986, DNA, volume 5 (4) : 305-314. De tels polynucléotides régulateurs peuvent également être préparés par synthèse chimique d'acides nucléiques selon des techniques bien connues de l'homme du métier, telles que les techniques au phosphoramidite précitées. Le niveau d'activité et la spécificité tissulaire des séquences régulatrices, en particulier les séquences promotrices du gène RRS1-R selon l'invention peuvent être déterminées par mesure des niveaux d'expression d'un polynucléotide détectable placé sous le contrôle de ces dernières dans différents types de cellules et tissus végétaux Le polynucléotide détectable peut être indifféremment un polynucléotide qui hybride spécifiquement avec une sonde oligonucléotidique de séquence prédéterminée, ou un polynucléotide codant une protéine détectable, y compris le polypeptide RRS1-R ou un fragment de ce dernier Un test permettant une telle vérification est bien connu de l'homme du métier et est notamment décrit dans les brevets US N 5,502,176 et US n 5,266,488, incorporés ici par référence. L'invention a donc également trait à un acide nucléique comprenant. a) un acide nucléique comprenant une séquence nucléotidique régulatrice d'au moins 50 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N 3 ou d'une séquence possédant au moins 80% d'identité en nucléotide avec la séquence SEQ ID N 2; b) un polynucléotide codant un polypeptide d'intérêt ou un polynucléotide d'intérêt dont la transcription et/ou la traduction est placée sous le contrôle de l'acide nucléique régulateur a); c) le cas échéant, un acide nucléique régulateur comprenant au moins 50 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N 3 ou d'une séquence ayant au moins 80% d'identité en nucléotide avec la séquence SEQ ID N 3. Le polypeptide d'intérêt codé par l'acide nucléique b) ci-dessus peut être de nature et d'origine variée ; il peut s'agit de protéine d'origine eucaryote ou procaryote Font partie des polypeptides d'intérêt les polypeptides toxiques, comme par exemple les élicitines, pour les cellules végétales, leur expression étant de nature à induire la mort de la cellule dans laquelle ils sont exprimés et en conséquence un confinement des pathogènes ayant infecté la plante, prévenant ainsi la propagation du pathogène à tous les organes de la plante . Par exemple, il est possible de générer des tabacs transgéniques présentant un niveau de résistance élevée à des pathogènes en exprimant des élicitines, petits peptides toxiques produits par un champignon phytopathogène selon la technique décrite par Keller et al (1999) L'acide nucléique d'intérêt mentionné au b) ci-dessus, généralement une molécule d'ARN, peut être complémentaire d'un polynucléotide cible, par exemple d'un polynucléotide localisé dans la région codante du gène RRS1-R, et peut être ainsi avantageusement utilisé comme polynucléotide antisens Il a été montré selon l'invention que le gène RRS1-R est transcrit sous la forme d'un ARN messager qui a été isolé et caractérisé Cet ARN messager comporte un cadre de lecture ouvert unique codant pour la protéine RRS1-R d'une longueur de 1378 acides aminés L'ARN messager du gène RRS1-R et l'ADNc correspondants, peuvent être aisément obtenus par l'homme du métier, par exemple par criblage d'une bande d'ADNc à l'aide d'une sonde adéquate ou par amplification rapide des extrémités de l'ADNc (PCR, RACE-PCR). L'homme du métier peut obtenir à nouveau l'ADNc du gène RRS1-R en utilisant les techniques décrites à l'exemple 6, ou encore par synthèse chimique directe. L'homme du métier peut aussi reproduire un acide nucléique selon l'invention par synthèse chimique directe, telle que la méthode au phosphodiester décrite par NARANG et al. (1979), la méthode au phosphodiester décrite par BROWN et al. (1979), la méthode au diéthylphosphoramidite décrite par BEAUCAGE et al. (1981), ainsi que la méthode sur support solide décrite dans la demande de brevet européen EP 0 707 592. De part et d'autre du cadre ouvert de lecture, cet ARN messager comprend respectivement une région 5' non traduite (5'-UTR) et une région 3' non traduite (3'-UTR) L'ADNc résultant de la transcnption du gène RRS1-R est référencé comme la séquence SEQ ID N 4. La séquence 5'-UTR de l'ARN messager transcrit par le gène RRS1-R est constituée de la séquence allant du nucléotide en position 1 au nucléotide en position 81 de la séquence SEQ ID N 4 La séquence 3'-UTR de l'ARN messager transcrit par le gène RRS1-R est constituée de la séquence allant du nucléotide en position 4219 au dernier nucléotide à l'extrémité 3' de la séquence SEQ ID N 4. L'invention concerne aussi un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide choisi parmi les séquences 5'-UTR et 3'-UTR de l'ARN messager du gène RRS1-R décrites ci-dessus, un polynucléotide ayant au moins 80% d'identité en nucléotides avec un tel acide nucléique ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire auxdits acides nucléiques ou auxdits polynucléotides. Fait également partie de l'invention un acide nucléique qui comprend, ou qui est constitué de la séquence nucléotidique SEQ ID N 4. Les régions 5'-UTR et 3'-UTR de l'ARN messager du gène RRS1-R sont susceptibles de contenir des éléments de régulation de la transcription et/ou de la traduction de ce gène, tels qu'un ou plusieurs sites de liaison au ribosome, un ou plusieurs sites de polyadénylation, les séquences permettant la stabilité de l'ARN messager ou encore tout ou partie de la région promotrice de la transcription. Le demandeur a également isolé et caractérisé, chez un écotype d'Arabidopsis thaliana sensible au pathogène R. solanacearum le gène correspondant au gène RRS1-R, comportant, par rapport à la séquence du gène RRS1-R, plusieurs additions et substitutions de nucléotides, le gène muté retrouvé chez l'écotype sensible d'Arabidopsis thaliana étant désigné RRS1-S aux fins de la présente description. Le gène RRS1-S comprend une première mutation dans la partie codant pour la région C-terminale de la protéine, conduisant au remplacement de la séquence en acides aminés SEASKLERL allant de l'acide aminé en position 704 à l'acide aminé en position 712 du polypeptide codé par le gène RRS1-R de séquence SEQ ID N 1 par la séquence en acides aminés SEELERL allant de l'acide aminé en position 704 à l'acide aminé en position 710 du polypeptide codé par le gène RRS1-S. Cette mutation conduit ainsi, d'une part, à la substitution du résidu alanine en position 706 de la protéine codée par le gène RRS1-R par un résidu d'acide glutamique en position 706 de la protéine codée par le gène RRS1-S et, d'autre part, à la délétion des acides aminés sérine et lysine respectivement en position 707 et 708 de la séquence en acides aminés de la protéine codée par le gène RRS1-R de séquence SEQ ID N 1. Une seconde mutation consiste en l'insertion d'un codon stop précoce retrouvé dans la région codante du gène RRS1-S, conduisant à une délétion des 90 acides aminés localisés à l'extrémité C-terminale de la protéine RRS1-R, le polypeptide codé par le gène RRS1-S étant en conséquence de 1288 acides aminés. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, le demandeur pense que les différentes mutations portées par le gène RRS1-S identifié chez l'écotype Col-5 d'Arabidopsise thaliana, qui est sensible au pathogène R. solanacearum, sont responsables du phénotype de sensibilité à R solanacearum observé dans cet écotype Il en résulte que les différentes modifications observées dans la séquence nucléotidique du gène RRS1-S par rapport à la séquence nucléotidique du gène RRS1-R sont de nature à altérer significativement l'activité biologique du polypeptide résultant En conséquence, la séquence nucléotidique du gène RRS1-S retrouvée chez l'écotype Col-5 d'Arabidopsis thaliana est utile notamment pour la mise au point de divers moyens de détection spécifiques du gène RRS1-S, de tels moyens de détection permettant à l'homme du métier de déterminer si une plante d'intérêt contient dans son génome le gène RRS1-S et est en conséquence sensible au pathogène bactérien R. solanacearum. La séquence génomique du gène RRS1-S est référencée comme la séquence SEQ ID N 5. Un autre objet de l'invention est un acide nucléique qui comprend où est constitué de la séquence SEQ ID N 5. L'invention est aussi relative à un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 5. L'invention concerne encore un acide nucléique possédant au moins 40% d'identité en nucléotides avec la séquence nucléotidique SEQ ID N 5 ou encore avec un polynucléotide comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs de la séquence nucléotidique SEQ ID N 5, ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire La séquence du gène RRS1-S comprend 7 exons et 6 introns, dont les caractéristiques structurales sont détaillées respectivement dans les tableaux 3 et 4 ci-après. TABLEAU 3 SEQUENCES EXONIQUES DU GENE RRS1-S Exon n Position du nucléotide en 5'sur Position du nucléotide en 3' sur la SEQ ID N 5 la SEQ ID N 5 1 1184 1560 2 1670 2780 3 2861 3160 4 3254 4171 5 4360 5213 6 6302 6424 7 6953 7136 L'invention est également relative à un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide exonique du gène RRS1-S, tels que les polynucléotides 1 à 7 décrits dans le tableau 3 cidessus, qui sont tous inclus dans l'acide nucléique de séquence SEQ ID N 5 Un tel acide nucléique code pour au moins une partie du polypeptide RRS1-S et peut notamment être inséré dans un vecteur recombinant destiné à l'expression du produit de traduction correspondant dans une cellule hôte ou dans une plante transformée avec ce vecteur recombinant Un tel acide nucléique peut aussi être utilisé pour la synthèse de sondes et d'amorces nucléotidiques destinées à la détection ou à l'amplification de séquences nucléotidiques comprises dans le gène RRS1-S dans un échantillon. TABLEAU 4 SEQUENCES INTRONIQUES DU GENE RRS1-S Intro n Position du nucléotide en 5' sur Position du nucléotide en 3' sur la SEQ ID N 5 la SEQ ID N 5 1 1561 1669 2 2781 2860 3 3161 3253 4 4172 4359 5 5214 6301 6 6425 6952 L'invention est également relative à un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide intronique du gène RRS1-S, tels que les polynucléotides 1 à 7 décrits dans le tableau 4 cidessus, qui sont tous inclus dans l'acide nucléique de séquence SEQ ID N 5 Un tel acide nucléique peut être utilisé comme sonde ou amorce oligonucléotidique pour détecter la présence d'au moins une copie du gène RRS1-S dans un échantillon, ou encore pour amplifier une séquence cible déterminée au sein du gène RRS1-S. De manière préférentielle, de telles sondes sont construites de manière à hybrider spécifiquement avec les régions du gène RRS1-S qui comprennent une ou plusieurs substitutions, additions ou délétions de base par rapport à la séquence nucléotidique du gène RRS1-R de séquence SEQ ID N 1. Préférentiellement, de telles amorces permettent d'amplifier les régions du gène RRS1-S comportant une ou plusieurs substitutions, additions ou délétions de base par rapport à la séquence nucléotidique du gène RRS1-R de séquence SEQ ID N 1. Le demandeur a également isolé et caractérisé les séquences nucléotidiques non transcrites localisées respectivement du côté 5' et du côté 3' des régions codantes du gène RRS1-S. Ces séquences 5' et 3' non transcrites sont susceptibles de porter des signaux de régulation de la transcription et/ou de la traduction du gène RRS1-S et font également partie de l'invention, et sont respectivement référencées en tant que séquences SEQ ID N 6 et SEQ ID N 7 L'invention concerne donc également un acide nucléique comportant au moins 50 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide régulateur du gène RRS1-S choisi parmi les séquences nucléotidiques SEQ ID N 6 et SEQ ID N 7 et les séquences ayant au moins 80% d'identité en nucléotides avec l'une des séquences SEQ ID N 6 et SEQ ID N 7, ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire auxdits acides nucléiques auxdits polynucléotides. L'invention concerne également un acide nucléique comprenant: a) un polynucléotide régulateur 5' du gène RRS1-S tel que défini cidessus, b) un polynucléotide codant pour un polypeptide ou un polynucléotide d'intérêt, c) le cas échéant, un polynucléotide régulateur 3' du gène RRS1-S tel que défini ci-dessus, l'acide nucléique codant pour le polypeptide ou le polynucléotide d'intérêt étant placé sous le contrôle du polynucléotide régulateur 5' du gène RRS1-S et, le cas échéant, également sous le contrôle du polynucléotide 3' du gène RRS1-S Le demandeur a montré que le gène RRS1-S est transcrit sous la forme d'un ARN messager qui a été isolé et caractérisé. Cet ARN messager comporte un cadre de lecture ouvert unique codant pour la protéine RRS1-S d'une longueur de 1288 acides aminés. De part et d'autre du cadre ouvert de lecture, cet ARN messager comprend respectivement une région 5' non traduite (5'-UTR) et une région 3' non traduite (3'UTR). L'ADNc du gène RRS1-S est référencé comme la séquence SEQ ID N 8 La séquence 5'-UTR de l'ARN messager transcrit par le gène RRS1-S est constituée de la séquence allant du nucléotide en position 1 au nucléotide en position 81 de la séquence SEQ ID N 8. La séquence 3'-UTR de l'ARN messager transcrit par le gène RRS1-S est constituée de la séquence allant du nucléotide en position 3949 au dernier nucléotide à l'extrémité 3' de la séquence SEQ ID N 8. L'invention concerne aussi un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide de séquence SEQ ID N 8 ou 15 nucléotides consécutifs d'une séquence ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec la séquence SEQ ID N 8, ainsi qu'une séquence complémentaire dudit acide nucléique. Les acides nucléiques selon l'invention, et en particulier les séquences nucléotidiques SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8, leurs fragments d'au moins 15 nucléotides, les séquences ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec au moins une partie des séquences SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8, ainsi que les acides nucléiques de séquences complémentaires, sont utiles pour la détection de la présence d'au moins une copie d'une séquence nucléotidique du gène RRS1-R ou RRS1-S ou encore d'un fragment ou d'un vanant allélique de ces dernières dans un échantillon. Font également partie de l'invention les sondes et amorces nucléotidiques hybridant, dans des conditions d'hybridation de forte stnngence, avec un acide nucléique choisi parmi les séquences SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8. Par conditions d'hybridation de forte stnngence au sens de l'invention, on entend les conditions d'hybridation suivantes: - l'ADN à tester est immobilisé sur des membranes de type HybondN+ (Amersham, Buckingamshire, Royaume-Uni) selon les instructions du fabriquant, en présence de 0,4 M NaOH pendant une nuit, - les membranes sont lavées avec un tampon 5 x SSC (1 x SSC et correspond à 0,15 M NaCI + 0,015 M citrate de sodium), puis les membranes sont traitées aux UV à 312 nm pendant 3 minutes, puis préhybridées pendant au moins 4 heures à 65 C dans un tampon d'hybridation (6 x SSC, 5 x Denhardt's, 100 g d'ADN simple brin de thymus de veau/ml et 0,5% de SDS [poids/volume]). Les sondes sont ajoutées aux membranes et incubées à 65 C pendant une nuit. Après l'étape d'hybridation, les membranes sont lavées dans 500 ml d'un tampon 2 x SSC, 1% SDS (poids/volume) à température du laboratoire pendant 30 minutes; - un second lavage est opéré dans 500 ml d'un tampon 0,1 x SSC, 0,1 % SDS (poids/volume) pendant 15 minutes à 42 C Les conditions d'hybridation décrites ci-dessus sont adaptées à l'hybridation dans des conditions de forte stringence, une molécule d'acide nucléique d'une longueur de 300 à 400 nucléotides. Il va sans dire que les conditions d'hybridation ci-dessus décrites peuvent être adaptées en fonction de la longueur de l'acide nucléique dont l'hybridation est recherchée ou du type de marquage choisi, selon des techniques connues de l'homme du métier. Les conditions convenables d'hybridation peuvent par exemple être adaptées selon l'enseignement contenu dans l'ouvrage de HAMES et HIGGINS (1985) ou encore dans l'ouvrage de AUSUBEL et al; (1989). Les sondes ou les amorces nucléotidiques selon l'invention comprennent au moins 15 nucléotides consécutifs d'un acide nucléique selon l'invention, en particulier d'un acide nucléique de séquence SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8 ou de sa séquence complémentaire, d'un acide nucléique ayant au moins 40% d'identité en nucléotide avec une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8 ou de sa séquence complémentaire ou encore d'un acide nucléique hybridant, dans des conditions d'hybridation de forte stnngence, avec une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8 ou de sa séquence complémentaire. De préférence, des sondes ou amorces nucléotidiques selon l'invention ont une longueur d'au moins 15,20, 25,30, 35,40, 50,75, 100, 150,200, 300, 400 ou 500 nucléotides consécutifs d'un acide nucléique selon l'invention, en particulier d'un acide nucléique de séquence nucléotidique choisi parmi les séquences SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8, ou d'un acide nucléique de séquence complémentaire. Selon un autre aspect une sonde ou une amorce du nucléotidique selon l'invention consistera et/ou comprendra des fragments d'une longueur de 15, 20, 25, 30,35, 40, 50,75, 100, 150, 200, 300, 400 ou 500 nucléotides consécutifs d'un acide nucléique selon l'invention, plus particulièrement d'un acide nucléique choisi parmi les séquences SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8, ou d'un acide nucléique de séquences complémentaires. Des exemples d'amorces et de couples d'amorces permettant d'amplifier différentes régions du gène RRS1-R sont par exemple les séquences SEQ ID N 11à SEQ ID N 61 représentées au tableau 6. Une amorce ou une sonde nucléotidique selon l'invention peut être préparée par toute méthode adaptée bien connue de l'homme du métier, y compris par clonage et action d'enzymes de restriction ou encore par synthèse chimique directe selon les techniques telles que les méthodes de phosphodiester de Narang et al. (1979) ou de Brown et al. (1979) précitées. Chacun des acides nucléiques selon l'invention, y compris des sondes et amorces oligonucléotidiques décrites ci-dessus, peuvent être marquées , si désiré, en incorporant un marqueur détectable par des moyens spectroscopiques, photochimiques, biochimiques, immunochimiques ou encore chimiques. Par exemple, de tels marqueurs peuvent consister en des isotopes radioactifs (32P,3H,35S), des molécules fluorescentes (5-bromodéoxyuridine, fluorescéine, acétylaminofluorène, digoxigènine) ou encore des ligands tels que la biotine. Le marquage d'un acide nucléique est réalisé de préférence par incorporation de molécules marquées au sein de ces nucléotides par extension d'amorces, ou bien par ajout sur les extrémités 5' ou 3'. Des exemples de marquage non radioactif de fragments d'acides nucléiques sont décrits notamment dans le brevet FR 78 19 175 ou encore dans les articles de URDEA et al. (1988), ou SANCHEZ-PESCADOR et al (1988). De manière avantageuse, les sondes selon l'invention peuvent avoir des caractéristiques structurelles de nature à permettre une amplification du signal, telles que les sondes décrites par URDEA et al, (1991) ou encore dans le brevet européen n EP 0 225 807 (Chiron). Les sondes oligonucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisées notamment dans des hybridations de type Southern à l'ADN génomique, ou encore dans des hybridations à l'ARN messager des gènes RRS1-R et RRS1-S, lorsque l'expression du transcrit correspondant est recherchée dans un échantillon. Les sondes selon l'invention peuvent aussi être utilisées pour la détection de produits d'amplification PCR ou encore pour la détection de mésappanements. Des sondes ou amorces nucléotidiques selon l'invention peuvent être immobilisées sur un support solide. De tels supports solides sont bien connus de l'homme du métier et comprennent des surfaces des puits de plaque de microtitration, des billes de polystyrène, des billes magnétiques, des bandes de nitrocellulose ou encore des microparticules telles que des particules de latex. La présente invention concerne également un procédé de détection de la présence d'un acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S dans un échantillon, ladite méthode comprenant les étapes de: - mettre en contact une sonde ou une pluralité de sondes nucléotidiques selon l'invention avec l'échantillon à tester; - détecter le complexe éventuellement formé entre la ou les sondes et l'acide nucléique présent dans l'échantillon. Selon un mode de réalisation particulier du procédé de détection selon l'invention, la ou les sondes oligonucléotidiques sont immobilisées sur un support Selon un autre aspect, les sondes oligonucléotidiques comprennent un marqueur détectable. L'invention concerne en outre un nécessaire ou kit pour la détection de la présence d'un acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S dans un échantillon, ledit nécessaire comprenant: a) une ou plusieurs sondes nucléotidiques, telles que décrites cidessus; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la réaction d'hybridation Selon un premier aspect, le nécessaire ou kit de détection est caractérisé en ce que la ou les sondes sont immobilisées sur un support Selon un second aspect, le nécessaire ou kit de détection est caractérisé en ce que les sondes oligonucléotides comprennent un marqueur détectable Selon un mode de réalisation particulier du kit de détection décrit cidessus, un tel kit comprendra une pluralité de sondes oligonucléotidiques conformes à l'invention qui pourront être utilisées pour détecter des séquences cibles d'intérêt du gène RRS1-R ou RRS1-S ou encore détecter des mutations dans les régions codantes ou les régions non codantes du gène RRS1-R, plus particulièrement des acides nucléiques des séquences SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8 où les acides nucléiques de séquences complémentaires. Les amorces nucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisées pour amplifier un fragment nucléotidique quelconque (ADNg, ADNc, ARNm) de RRS1-R ou RRS1-S, et plus particulièrement tout ou partie d'un acide nucléique de séquence SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8. Un autre objet de l'invention concerne un procédé pour l'amplification d'un acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S, et plus particulièrement un acide nucléique de séquence SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8 ou un fragment ou encore un acide nucléique de séquence complémentaire à ce dernier, contenu dans un échantillon, ledit procédé comprenant les étapes de . a) mettre en contact l'échantillon dans lequel la présence de l'acide nucléique cible est suspectée avec une paire d'amorces nucléotidiques dont la position d'hybridation est localisée respectivement du côté 5' et du côté 3' de la région de l'acide nucléique cible de RRS1-R ou RRS1-S dont l'amplification est recherchée, en présence des réactifs nécessaires à la réaction d'amplification et; b) détection de l'acide nucléique éventuellement amplifié. Selon le procédé d'amplification ci-dessus, on réalise au moins un cycle d'amplification de l'acide nucléique contenu dans l'échantillon préalablement à la détection de l'acide nucléique éventuellement amplifié, de préférence au moins 10, et de manière tout à fait préférée au moins 20, cycles d'amplification. Pour mettre en oeuvre le procédé d'amplification ci-dessus, on aura avantageusement recours à l'une quelconque des amorces nucléotidiques précédemment décrites L'invention a en outre pour objet un nécessaire ou kit pour l'amplification d'un acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S selon l'invention, et plus particulièrement tout ou partie d'un acide nucléique de séquence SEQ ID N 1 à SEQ ID N 8, ledit nécessaire ou kit comprenant a) un couple d'amorces nucléotidiques conformes à l'invention, dont la position d'hybridation est localisée respectivement du côté 5' et du coté 3' de l'acide nucléique cible du gène RRS1-R ou RRS1-S dont l'amplification est recherchée; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la réaction d'amplification. Un tel nécessaire ou kit d'amplification comprendra avantageusement au moins une paire d'amorces nucléotidiques telle que précédemment décrite Selon un mode de réalisation préféré, des amorces selon l'invention comprennent tout ou partie d'un polynucléotide choisi parmi des séquences nucléotidiques SEQ ID N 11à SEQ ID N 61 Le demandeur a montré que les plantes portant le gène RRS1-R présentaient un phénotype de résistance à R. solanacearum. En outre, le demandeur a également montré que l'insertion du gène RRS1-R ou encore de l'ADNc du gène RRS1-R dans le génome d'une plante initialement sensible à R. solanacearum confère à cette plante un phénotype de résistance à ce pathogène. L'invention a également trait à des procédés et des moyens destinés à inhiber ou bloquer l'expression du gène RRS1-S retrouvée chez les plantes sensibles à R.solanacearum, notamment en vue d'accroître leur résistance à différents pathogènes et ceci par toute technique connue de l'homme du métier. Afin d'inhiber ou de bloquer l'expression du gène RRS1-S chez une plante, l'homme du métier pourra recourir à l'utilisation de polynucléotides antisens Ainsi, l'invention concerne aussi un polynucléotide antisens, capable de s'hybrider spécifiquement à une région déterminée du gène RRS1-S et capable d'inhiber ou de bloquer sa transcription et/ou sa traduction. Un tel polynucléotide a la structure générale qui a été définie précédemment pour les sondes et les amorces selon l'invention. De préférence, un polynucléotide antisens selon l'invention hybride avec une séquence correspondant à une séquence localisée dans la région de l'extrémité 5' de l'ARN messager RRS1-S, et de manière tout à fait préférée à proximité du codon d'initiation de la traduction (ATG) du gène RRS1-S Selon un seconde mode de réalisation préférentiel, un polynucléotide antisens selon l'invention comprend une séquence correspondant à une des séquences localisées au niveau des jonctions exon/intron du gène RRS1-S et de manière préférée des séquences correspondant à un site d'épissage, qui peuvent être déterminées selon des techniques bien connues de l'homme du métier, sur la base de la description des séquences du gène RRS1-S de la présente description Pour synthétiser des polynucléotides antisens tels que définis cidessus, l'homme du métier pourra se référer aux tableaux 3 et 4 dans lesquels sont détaillées les positions des différents exons et introns du gène RRS1-S dans la séquence SEQ ID N 5. De manière générale, les polynucléotides antisens doivent avoir une longueur et une température de fusion suffisantes pour permettre la formation d'un hybride duplex intracellulaire ayant une stabilité suffisante pour inhiber l'expression de l'ARNm de RRS1-S. Des stratégies qui peuvent être mises en oeuvre par l'homme du métier pour construire des polynucléotides antisens sont notamment décrites par GREEN et al. (1986) et IZANT et WEINTRAIB (1984) Des méthodes de construction de polynucléotides antisens qui peuvent être mises en oeuvre par l'homme du métier sont également décrites par ROSSI et al. (1991) ainsi que dans les demandes PCT n WO 94/23 026, WO 95/04141, WO 92/18522 et dans la demande de brevet européen n EP 0 572 287 Avantageusement, un polynucléotide antisens selon l'invention a une longueur de 15 à 4000 nucléotides. Un polynucléotide antisens de l'invention a préférentiellement une longueur allant de 15 ,20, 25,30, 35, 40, 45 ou 50 à 75, 100, 200, 500, 1000, 2000, 3000 ou 4000 nucléotides Parmi les polynucléotides antisens selon l'invention, sont préférés ceux ayant respectivement une longueur d'environ 300 nucléotides ou une longueur d'environ 4000 nucléotides. Afin d'inhiber ou de bloquer l'expression du gène RRS1-S, on peut aussi avoir recours simultanément à une pluralité de polynucléotides antisens telle que définis ci-dessus, chacun des polynucléotides antisens hybridant avec une région distincte du gène RRS1-S ou de son ARN messager De manière tout à fait préférée, les polynucléotides antisens selon l'invention sont définis de telle manière à ce qu'ils hybrident avec une région du gène RRS1-S présentant, par rapport à la séquence correspondante du gène RRS1-R, une ou plusieurs substitutions, délétions, additions d'au moins une base. D'autres méthodes de mise en oeuvre des polynucléotides antisens sont par exemple celles décrites par SCZAKIEL et al. (1995). Une autre stratégie pour inhiber ou bloquer l'expression du gène RRS1-S consiste à utiliser des polynucléotides capables de former une triple hélice d'ADN avec la région génomique d'ADN double brin portant le gène RRS1-S En général, des séquences d'homopurine sont considérées comme les plus utiles dans ce type de stratégie, bien que des séquences d'homopyrimidine puissent aussi être employées. L'homme du métier peut avantageusement se référer à la séquence génomique SEQ ID N 5 de RRS1-S afin de sélectionner dans cette séquence des séquences d'homopurine ou d'homopyrimidine de 10 à 20 nucléotides de long, qui seront capables d'inhiber l'expression du gène RRS1-S Des méthodes d'inhibition de l'expression d'un gène par la technique triple hélice sont par exemple décrites par GRIFFIN et al. (1989) L'invention a donc également pour objet l'utilisation d'un polynucléotide antisens ou d'un polynucléotide homopyrimidine, tel que défini précédemment, ou d'un vecteur recombinant comprenant un tel polynucléotide, pour inhiber ou pour bloquer l'expression du gène RRS1-S dans une cellule de plante ou dans une plante entière. Comme déjà rappelé, des expériences de complémentation de plantes d'Arabidopsis thaliana appartenant à un écotype sensible à R solanacearum par un vecteur recombinant contenant la séquence génomique ou la séquence de l'ADNc du gène RRS1-R a permis d'observer, chez la plante ainsi transformée, l'apparition d'un phénotype de résistance à R. solanacearum. Afin de stimuler la résistance d'une plante à différents pathogènes, et plus particulièrement à R. solanacearum, il sera donc avantageux, soit d'introduire ou d'augmenter le nombre de copies du gène RRS1-R chez cette plante ou , soit de favoriser l'expression du gène RRS1-R, ces deux méthodes étant susceptibles d'empêcher le développement d'un tel pathogène Une forte expression du gène RRS1-R chez une plante peut être atteinte soit par la surexpression du gène RRS1-R, soit par l'insertion de multiples copies d'un polynucléotide codant pour la protéine RRS1-R dans la plante, soit encore par une combinaison de ces deux stratégies. Pour l'insertion de multiples copies d'un polynucléotide codant pour la protéine RRS1-R dans le génome d'une plante, on aura avantageusement recours à un vecteur recombinant selon l'invention. L'invention est également relative à un vecteur recombinant comprenant un acide nucléique selon l'invention. Avantageusement, un tel vecteur recombinant comprend un acide nucléique choisi parmi les acides nucléiques suivants- # un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'une séquence nucléotidique codant pour une protéine de résistance d'une plante à un pathogène, ladite protéine comprenant (i) une partie N-terminale comprenant au moins une séquence d'acides aminés riche en leucine et au moins un site de liaison aux nucléotides; et (n) une partie C-terminale comprenant un domaine de liaison à l'ADN comprenant la séquence d'acides aminés WRKYGQK , ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire; b) un acide nucléique comprenant une séquence ayant au moins 40% d'identité en nucléotide avec la séquence nucléotidique SEQ ID N 1, ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire; c) un acide nucléique comprenant une séquence possédant au moins 40% d'identité en nucléotide avec la séquence nucléotidique SEQ ID N 5, d) un acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide constitué de l'un des exons 1 à 7 du gène RRS1-R ou du gène RRS1-S, tels que définis ci-avant; e) un acide nucléique comprenant un polynucléotide d'au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide constitué de l'un des introns 1 à 7 du gène RRS1-R ou RRS1-S, tels que définis plus haut; f) un acide nucléique ayant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide régulateur du gène RRS1-R ou RRS1-S tels que définis plus haut; g) un polynucléotide antisens ou un polynucléotide homopurine ou homopynmidine, tel que défini plus haut, utile pour inhiber l'expression du gène RRS1-S, Par vecteur au sens de la présente invention, on entendra une molécule d'ADN ou d'ARN circulaire ou linéaire qui est indifféremment sous forme de simple brin ou double brin. Un vecteur recombinant selon l'invention est indifféremment un vecteur de clonage, un vecteur d'expression, ou plus spécifiquement un vecteur d'insertion, un vecteur de transformation ou un vecteur d'intégration Il peut s'agir d'un vecteur d'origine bactérienne ou virale Selon un premier mode de réalisation, un vecteur recombinant selon l'invention est utilisé dans le but d'amplifier l'acide nucléique qui y est inséré après transformation de transfection de l'hôte cellulaire désiré Selon un second mode de réalisation, il s'agit d'un vecteur d'expression comprenant, outre un acide nucléique codant pour un polypeptide conforme à l'invention, en particulier les polypeptides codés par les gènes RRS1-R et RRS1-S, des séquences régulatrices permettant d'en diriger la transcription et/ou la traduction Selon un mode de réalisation avantageux, un vecteur recombinant selon l'invention comprendra notamment les éléments suivants: 1) des éléments de régulation de l'expression de l'acide nucléique du gène RRS1-R ou du gène RRS1-S à insérer, tels que des promoteurs et des séquences activatrices ( enhancers ); 2) la séquence comprise dans l'acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S conforme à l'invention à insérer dans un tel vecteur, ladite séquence étant placée sous le contrôle des signaux de régulation décrits en (1) , et 3) des séquences d'initiation et d'arrêt de la transcription appropriée. En outre, les vecteurs recombinants selon l'invention pourront inclure une ou plusieurs origines de réplication chez les hôtes cellulaires dans lesquels leur amplification ou leur expression est recherchée ainsi que des marqueurs de sélection. Dans un mode de réalisation particulier, un vecteur recombinant selon l'invention comprend un polynucléotide antisens ou un polynucléotide homopurine ou homopyridine, tel que défini précédemment, le cas échéant placé sous le contrôle des séquences de régulation appropriées permettant d'en assurer l'expression dans une cellule hôte ou une plante choisie. Un tel vecteur recombinant est utilisé de préférence pour inhiber l'expression du gène RRS1-S dans la cellule ou dans la plante. Selon un autre mode de réalisation particulier, un vecteur recombinant selon l'invention comprend un polynucléotide codant pour le polypeptide RRS1-R ou un polypeptide ayant au moins 40% d'identité en acide aminé avec ce dernier et conservant l'activité biologique de RRS1-R, placé sous le contrôle de séquence (s) régulation permettant une expression à haut niveau de RRS1-R ou de son homologue dans une cellule hôte ou dans une plante choisie. Un tel vecteur recombinant est utile pour permettre un haut niveau d'expression de RRS1-R chez une plante . Selon un aspect avantageux, un tel vecteur recombinant est un vecteur intégratif permettant l'insertion de multiples copies de la séquence codante de RRS1-R dans le génome d'une plante A titre d'exemple, les promoteurs bactériens pourront être les promoteurs Lacl, LacZ, les promoteurs de l'ARN polymérase du bactériophage T3 ou T7, les promoteurs PR, ou PL du phage lambda. Des promoteurs pour l'expression d'un acide nucléique de RRS1-R ou RRS1-S selon l'invention dans les plantes sont le promoteur CaMV 35 S du virus de la mosaïque du chou-fleur Odell et al., (1985) ou encore le promoteur du gène de lactine 1 du riz McElroy et al (1990). D'autres promoteurs utiles à l'homme du métier pour l'expression d'un polynucléotide d'intérêt dans les plantes sont décrits dans les brevets n US 5,750,866 et US n 5,633,363. De manière générale, pour le choix d'un promoteur adapté, l'homme du métier pourra avantageusement se référer à l'ouvrage de Sambrook et al. (1989) précité ou encore aux techniques décrites par Fuller et al. (1996), et Ausubel et al. (1989). Les vecteurs bactériens préférés selon l'invention sont par exemple les vecteurs pBR 322 (ATCC N 37017) ou encore des vecteurs tels pAA223- 3 (Pharmacia Uppsala, Suède) et pGEM1 (Promega Biotech, Madison, WU, USA) et pUC19 (commercialisé par Boehringer Mannheim, Germany). On peut encore citer d'autres vecteurs commercialisés tels que les vecteurs pQE70, pQE60, pQE9 (Qiagen, psuX 174, pBluescript SA, pNH8A, pMH16A, pMH18A, pMH46A, pWLNEO, pSG2CAT, pOG44, pXTI, pSG (Stratagene) Il peut s'agir également de vecteurs de type baculovirus tel que le vecteur pVL1392/1393 (Pharmingen) utilisé pour transfecter les cellules de la lignée Sf9 (ATC N CRL 1711) dénvée de Spodoptera frugidera. Préférentiellement, on aura recours à des vecteurs spécialement adaptés pour l'expression de séquence d'intérêt dans des cellules de plantes, tels que les vecteurs suivants: # vecteur pBIN19 (Bevan et al , Nucleic Acids Research, Vol. 12:8711-8721, commercialisé par la Société Clotench , Palo Alto, Californie, USA); # vecteur pB101 (Jefferson 1987, Plant Molecular Biology Reporter, vol. 5- 387-405, commercialisé par la Société Clotench); # vecteur pBI121 (Jefferson et al. 1987, Plant Molecular Biology Reporter, vol. 5:387:405, commercialisé par la Société Clotench); ' vecteur pEGFP (Cormack BP et al. , 1996, commercialisé par la Société Clotench); # vecteurs SLJ75515 et SLJ75516 (don du Dr. J. Jones, The Sainsbury Laboratory, Norwich, UK); # vecteurs pDHB321 (don du Dr. Bouchez, INRA Versailles, France) # vecteurs pAOV, pOV2, pSOV, pSOV2, pkMB et pSMB (Mylne et al., 1996). Pour permettre l'expression des polynucléotides selon l'invention, ces vecteurs doivent être introduits dans une cellule hôte. L'introduction des polynucléotides selon l'invention dans une cellule hôte peut être réalisée in vitro, selon les techniques bien connues de l'homme du métier pour transformer ou transfecter des cellules, soit en culture primaire, soit sous la forme de lignées cellulaires. L'invention a en outre pour objet une cellule hôte transformée avec un acide nucléique ou par un vecteur recombinant selon l'invention. Une telle cellule hôte transformée est préférentiellement d'origine procaryote ou eucaryote, notamment bactérienne, fongique ou végétale. Ainsi, peuvent être notamment utilisées des cellules bactériennes de différentes de E. coli ou encore d'Agrobacterium tumefaciens De manière préférée, la cellule hôte transformée est une cellule de plante ou encore un protoplaste de plante. De manière tout à fait préférée, il s'agit d'une cellule ou d'un protoplaste de colza, de tabac, de maïs, de tomate, de pomme de terre ou d'Arabidopsis thaliana. L'invention concerne aussi un organisme multicellulaire végétal transformé, caractérisé en ce qu'il comprend une cellule hôte transformée ou une pluralité de cellules hôtes transformées avec un acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S ou avec un vecteur recombinant selon l'invention Selon un premier aspect, l'organisme multicellulaire végétal est transformé avec un ou plusieurs nucléotides antisens et/ou un plusieurs polynucléotides homopurine ou homopyrimidine afin d'inhiber ou de bloquer l'expression du gène RRS1-S chez cet organisme. Selon un second aspect, l'organisme multicellulaire végétal est transformé avec une ou plusieurs copies d'un polynucléotides codant pour la protéine RRS1-R ou pour un polypeptide ayant au moins 40% d'identité en acide aminé avec le polypeptide RRS1-R et conservant l'activité biologique permettant de conférer un phénotype de résistance à R solanacearum à l'organisme transformé. L'invention a encore pour objet une plante transgénique, c'est-àdire une plante transformée comprenant, préférentiellement sous une forme intégrée dans son génome, un acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S et préférentiellement un polynucléotide antisens ou un polynucléotide homopurine ou homopyrimidine ou encore un acide nucléique codant pour le polypeptide RRS1-S ou un polypeptide homologue, ledit acide nucléique ayant été inséré dans le génome de la plante par transformation avec un aide nucléique de RRS1-R ou RRS1-S ou un vecteur recombinant selon l'invention. Préférentiellement, une plante transformée selon l'invention est un colza, un tabac, un maïs, une tomate, une pomme de terre ou Arabidopsis thaliana. Selon un premier aspect, les plantes transgéniques telles que définies ci-dessus présentent une expression réduite, une expression indétectable ou une absence d'expression du gène RRS1-S et sont ainsi susceptibles de présenter une résistance accrue à des pathogènes tels que R. solanacearum. Selon un second aspect, les plantes transgéniques telles que définies ci-dessus ont la propriété d'exprimer fortement le polypeptide RRS1R et de posséder en conséquence un phénotype de résistance à différents pathogènes, et tout particulièrement à des pathogènes bactériens tels que R solanacearum. L'invention a en outre pour objet un procédé d'obtention d'une plante transgénique transformée avec un acide nucléique selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes. a) obtention d'une cellule hôte recombinante végétale telle que définie ci-dessus; b) régénération d'une plante entière à partir de la cellule hôte végétale transformée obtenue à l'étape a); c) sélection des plantes obtenues à l'étape b) ayant intégré l'acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S d'intérêt L'invention est également relative à un procédé d'obtention d'une plante transgénique, transformée avec un acide nucléique selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) transformer une cellule de plante avec un acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S ou avec un vecteur recombinant selon l'invention; b) régénérer une plante entière à partir de cellules de plantes transformées obtenues à l'étape a); c) sélectionner les plantes ayant intégré l'acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S d'intérêt. L'invention concerne aussi un procédé d'obtention d'une plante transformée, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) obtention d'une cellule hôte d'Agrobacterium tumefaciens transformée avec un acide nucléique ou un vecteur recombinant selon l'invention, b) transformation de la plante choisie par infection avec des cellules d'Agrobacterium tumefaciens obtenues à l'étape a); c) sélection des plantes ayant intégré l'acide nucléique selon l'invention L'un quelconque des procédés d'obtention d'une plante transgénique ci-dessus décrit peut en outre comporter les étapes additionnelles suivantes d) croisement entre elles des deux plantes transformées telles qu'obtenues à l'étape c); e) sélection des plantes homozygotes pour le transgène. Selon un autre aspect, l'un quelconque des procédés ci-dessus décrits pourra en outre comprendre les étapes suivantes: f) croisement d'une plante transformée obtenue à l'étape c) avec une plante de la même espèce; g) sélection des plantes issues du croisement de l'étape d) ayant conservé le transgène. L'homme du métier est capable de mettre en oeuvre de nombreux procédés de l'état de la technique afin d'obtenir des plantes transformées avec un acide nucléique du gène RRS1-R ou RRS1-S selon l'invention. L'homme du métier pourra se référer avantageusement à la technique décrite par BECHTOLD et al. (1993) afin de transformer une plante à l'aide de la bactérie Agrobacterium tumefaciens Les techniques utilisées dans d'autres types de vecteurs peuvent également être utilisées telles que les techniques décrites par BOUCHEZ et al. (1993) ou encore par HORSCH et al (1984). L'invention a en outre pour objet une plante transformée telle qu'obtenue selon l'un quelconque des procédés d'obtention décrits cidessus. L'invention concerne également une semence de plante dont les cellules constitutives comprennent un acide nucléique du gène RRS1-R ou du gène RRS1-S selon l'invention qui a été artificiellement insérée dans leur génome L'invention a encore pour objet une semence d'une plante transgénique telle que définie ci-avant. Un autre objet de l'invention consiste en l'utilisation d'un acide nucléique du gène RRS1-R ou du gène RRS1-S selon l'invention pour l'expression in vitro ou in vivo, de préférence in planta de la protéine RRS1-R ou RRS1-S ou d'un fragment peptidique de celle-ci. L'invention concerne aussi l'utilisation d'un acide nucléique antisens, ou d'un acide nucléique homopurine ou homopyrimidine selon l'invention pour inhiber ou pour bloquer l'expression du gène codant pour la protéine RRS1-R ou RRS1-S. De manière préférée, les utilisations ci-dessus sont caractérisées en ce qu'il s'agit d'une expression in vivo chez une plante transformée avec un tel acide nucléique. Comme déjà mentionné précédemment, le gène RRS1-R code pour un polypeptide de 1378 acides aminés de longueur. En outre, le polypeptide RRS1-R présente les caractéristiques structurales définies précédemment dans la description, à savoir la présence caractéristique de domaines fonctionnels retrouvés en combinaison pour la première fois dans la séquence en acides aminés d'un polypeptide, ce qui confère à la protéine RRS1-R la qualité de premier membre connu d'une nouvelle classe de protéines définie de la manière la plus générale comme des protéines comprenant a) une partie N-terminale comprenant au moins une séquence d'acides aminés riche en leucine et au moins un site de liaison aux nucléotides, et b) une partie C-terminale comprenant un domaine de liaison à l'ADN comprenant la séquence d'acides aminés WRKYGQK . Le polypeptide RRS1-R est référencé comme la séquence SEQ ID N 9. Comme déjà rappelé, le demandeur a montré que des mutations dans la séquence d'acides aminés du polypeptide RRS1-R pouvaient conduire à une protéine dépourvue de l'activité biologique de la protéine sauvage RRS1-R, l'expression de la protéine mutée chez une plante ne permettant plus d'observer de phénotype de résistance à certains pathogènes, tels que R. solanacearum. Un polypeptide représentatif des polypeptides mutés de RRS1-R altérés dans leur fonction biologique est le polypeptide RRS1-S dont la séquence d'acides aminés est référencée comme la séquence SEQ ID N 10. Selon un autre aspect l'invention concerne également un polypeptide codé par un acide nucléique du gène RRS1-R ou du gène RRS1-S, et de préférence un polypeptide comprenant au moins 5 acides aminés consécutifs d'une protéine choisie parmi RRS1-R et RRS1-S. De préférence, un tel polypeptide comprend au moins 10,15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90,100, 150,200, 250,300, 350,400, 450,500, 600,700, 1200 acides aminés consécutifs du polypeptide RRS1-R de séquence en acides aminés SEQ ID N 9 ou du polypeptide RRS1-S de séquence en acides aminés SEQ ID N 10. L'invention est également relative à un polypeptide comprenant les séquences en acides aminés ayant au moins 40% d'identité en acides aminés avec la séquence du polypeptide RRS1-R SEQ ID N 9, avec la séquence du polypeptide RRS1-S SEQ ID N 10, ou à un fragment peptidique de ces derniers Avantageusement, fait partie de l'invention un polypeptide ayant au moins 60%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99% d'identité en acides aminés avec la séquence du polypeptide RRS1-R de SEQ ID N 9, avec la séquence du polypeptide RRS1-S SEQ ID N 10, ou un fragment peptidique de ces derniers. De manière générale, les polypeptides selon l'invention se présentent sous une forme isolée ou purifiée. L'invention est également relative à un procédé pour la production du polypeptide RRS1-R de séquence SEQ ID N 9, du polypeptide RRS1-S de séquence SEQ ID N 10 ou d'un fragment peptidique de ces derniers, la méthode comprenant les étapes : a) insérer un acide nucléique codant pour le polypeptide RRS1-R, RRS1-S ou un fragment peptidique de ces derniers, dans un vecteur approprié, b) cultiver, dans un milieu de culture approprié, une cellule hôte préalablement transformée ou transfectée avec le vecteur recombinant de l'étape a), c) récupérer le milieu de culture conditionné ou lysé la cellule hôte transformée, par exemple par sonication ou par choc cosmétique; d) séparer et purifier à partir du milieu de culture ou encore à partir des lysats cellulaires obtenus à l'étape c), ledit polypeptide; e) le cas échéant, caractériser le polypeptide recombinant produit. Les peptides selon l'invention peuvent être caractérisés par fixation sur une colonne de chromatographie d'immunoaffinité sur laquelle les anticorps dirigés contre ces polypeptides où un fragment ou un variant de ces derniers ont été préalablement immobilisés. Selon un autre aspect, un polypeptide recombinant selon l'invention peut être purifié par passage sur une colonne de chromatographie selon les méthodes connues de l'homme de l'art et décrites par exemple par AUSUBEL F et al. (1989) précité. Un polypeptide selon l'invention peut être également préparé par les techniques classiques de synthèse chimique indifféremment en solution homogène ou en phase solide. A titre illustratif, un polypeptide selon l'invention pourra être préparé par la technique en solution homogène décrite par HOUBEN WEYL (1974) ou encore la technique de synthèse en phase solide décrite par MERRIFIELD (1965a, 1965b). Font également partie de l'invention des polypeptides dits homologues aux polypeptides RRS1-R ou RRS1-S , ou de leurs fragments De tels polypeptides homologues ont des séquences d'acides aminés possédant une ou plusieurs substitutions d'un acide aminé par un acide aminé équivalent, par rapport au polypeptide de référence. On entendra par acides aminés équivalents selon la présente invention, par exemple le remplacement d'un résidu sous la forme L par un résidu sous la forme D ou encore le remplacement d'un acide glutamique (E) par un acide pyro-glutamique selon des techniques bien connues de l'homme du métier. A titre illustratif, la synthèse de peptides contenant au moins un résidu sous la forme D est décrite par KOCH et al. (1977). Selon un autre aspect, sont également considérés comme des acides aminés équivalents deux acides aminés appartenant à la même classe, c'est-à-dire deux acides aminés acide, basique, non polaire ou encore polaire non chargé. Fait également partie de l'invention un polypeptide comprenant des modifications d'acides aminés de 1, 2, 3,4, 5,10 à 20 substitutions, additions ou délétions d'un acide aminé par rapport à la séquence d'acides aminés du polypeptide RRS1-R ou du polypeptide RRS1-S selon l'invention. De préférence, les polypeptides selon l'invention comprenant une ou plusieurs additions, délétions, substitutions d'au moins un acide aminé conservent leur capacité à induire la résistance à divers pathogènes, et tout particulièrement à R solanacearum Selon un autre mode préférentiel de réalisation, les polypeptides selon l'invention comprenant une ou plusieurs additions, délétions, substitutions d'au moins un acide aminé conservent leur capacité à être reconnus par des anticorps dirigés contre les polypeptides RRS1-R ou RRS1-S non modifiés. Un polypeptide dérivé de la protéine RRS1-R ou de la protéine RRS1-S est utile notamment pour la préparation d'anticorps destinés à la détection de la présence de l'un ou l'autre de ces polypeptides ou encore d'un fragment peptidique de ces derniers dans un échantillon. Outre la détection de la présence du polypeptide RRS1-R ou RRS1-S ou encore d'un fragment peptidique de ces derniers dans un échantillon, des anticorps dirigés contre ces polypeptides sont utilisés pour quantifier la synthèse de RRS1-R ou RRS1-S, par exemple dans les cellules d'une plante, et déterminer ainsi la capacité de cette plante à résister à certains pathogènes, et tout particulièrement à R. solanacearum. Des anticorps préférés selon l'invention sont les anticorps reconnaissant spécifiquement la séquence d'acides aminés allant de l'acide aminé en position 704 à l'acide aminé en position 712 de la séquence du polypeptide RRS1-R de SEQ ID N 9 Une seconde classe d'anticorps préférés selon l'invention sont les anticorps reconnaissant spécifiquement la séquence d'acides aminés allant de l'acide aminé en position 704 à l'acide aminé en position 710 de la séquence du polypeptide RRS1-S de SEQ ID N 10. Une troisième classe d'anticorps préférés selon l'invention sont les anticorps reconnaissant spécifiquement la séquence d'acides aminés allant de l'acide aminé en position 1291 à l'acide aminé en position 1378 du polypeptide RRS1-R de séquence SEQ ID N 9. Par anticorps au sens de la présente invention, on entendra notamment des anticorps polyclonaux ou monoclonaux ou des fragments (par exemple des fragments F (ab)'2, ou encore tout polypeptide comprenant un domaine de l'anticorps initial reconnaissant le polypeptide ou le fragment de polypeptide cible selon l'invention. Les anticorps monoclonaux peuvent être préparés à partir d'hybndomes selon la technique décrite par KOHLER et MILSTEIN (1975). La présente invention concerne également des anticorps dirigés contre un polypeptide tel que décrit ci-dessus ou un fragment ou un variant de ce dernier, tel que produit dans la technique du triome ou encore la technique d'hybridome décrit par KOZBOR et al. (1983). L'invention a également trait à des fragments d'anticorps simple chaîne Fv (ScFv) tels que décrits dans le brevet US N 4,946,768 ou encore par MARTINEAU et al. (1998). Les anticorps selon l'invention comprennent également des fragments d'anticorps obtenus à l'aide de banques de phages (RIDDER et al., 1995), REINMANN K. A. étal., 1997). Les préparations d'anticorps selon l'invention sont utiles dans des tests de détection immunologiques destinés à l'identification de la présence et/ou de la quantité de la protéine RRS1-R ou RRS1-S ou encore d'un fragment peptidique de l'une de ces protéines, présent dans un échantillon. Un anticorps selon l'invention pourra comprendre en outre un marqueur détectable isotopique ou non isotopique, par exemple fluorescent, ou encore être couplé à une molécule telle que la biotine, selon des techniques bien connues de l'homme du métier. Ainsi, l'invention a en outre pour objet un procédé pour détecter la présence d'un polypeptide RRS1-R, d'un polypeptide RRS1-S ou encore d'un fragment peptidique de l'un de ces polypeptides conformes à l'invention, dans un échantillon, ledit procédé comprenant les étapes de : a) mettre en contact l'échantillon à tester avec un anticorps tel que défini ci-dessus ; b) détecter le complexe antigène/anticorps formé. L'invention est également relative à un nécessaire ou kit de diagnostic pour la détection de la présence d'un polypeptide conforme à l'invention dans un échantillon, ledit nécessaire comprenant: a) un anticorps tel que défini ci-dessus; b) le cas échéant, un réactif permettant la détection des complexes antigène/anticorps formés L'invention est également relative à des protéines de fusion comprenant une séquence en acides aminés de l'un des deux domaines fonctionnels C-termmal ou N-terminal d'un polypeptide selon l'invention, d'une part, et , d'autre part, tout ou partie de la séquence en acides aminés d'un polypeptide hétérologue. Par polypeptide hétérologue , on entend aux fins de la présente description une séquence d'acides aminés qui n'est pas naturellement présente dans la séquence en acides aminés du polypeptide ou du fragment de polypeptide N-terminal ou C-terminal selon l'invention avec lequel cette séquence d'acides aminés hétérologue est liée covalemment, de préférence par une liaison peptidique. Selon un premier aspect, une protéine de fusion, ou chimère selon l'invention comprend (1) le domaine N-terminal d'un premier polypeptide appartenant à la nouvelle classe de protéines de résistance à des pathogènes végétaux selon l'invention, lié de manière covalente, préférentiellement par une liaison peptidique normale, à un second polypeptide comprenant le domaine C-terminal d'une seconde protéine appartenant également à la classe des protéines de résistance aux pathogènes végétaux selon l'invention. Le domaine N-terminal du premier polypeptide et le domaine Cterminal du second polypeptide peuvent être liés directement l'un à l'autre par une liaison peptidique. Selon un second aspect, le domaine N-terminal du premier polypeptide et le domaine C-terminal du second polypeptide peuvent être séparés, au sein de la protéine de fusion, par une séquence d'acides aminés espaceur qui peut être de toute nature. Une telle protéine chimère comprend donc un domaine N-terminal comprenant les motifs caractéristiques d'une protéine de résistance aux pathogènes, liée de manière covalente à un domaine C-terminal comprenant un site de liaison aux nucléotides susceptible d'avoir une spécificité différente de celle du domaine C-terminal que l'on retrouve naturellement présent au sein de la séquence d'acides aminés du polypeptide naturel duquel provient le domaine N-terminal de la protéine chimère. De telles protéines chimères constituent de nouveaux moyens permettant , par le choix du domaine N-terminal, de conférer chez une plante une résistance à un pathogène déterminé. En outre, le choix du domaine C-terminal de liaison aux nucléotides permet à l'homme du métier de cibler spécifiquement les séquences de régulation qui sont activées par une telle protéine chimère et de maîtriser ainsi à la fois le type et le niveau de résistance désirés Selon un second mode de réalisation, une protéine de fusion selon l'invention est constituée de (1) la séquence en acides aminés de tout ou partie d'une protéine dont les mécanismes d'induction de la synthèse chez une plante est connue et (2) (i) soit la séquence en acides aminés complète d'un polypeptide de résistance aux pathogènes selon l'invention, soit (ii) la séquence en acides aminés du domaine C-terminal comprenant un site de liaison aux nucléotides d'un polypeptide selon l'invention. De manière tout à fait préférée, la synthèse d'une telle protéine chimère est inductible par des signaux de stress de la plante, tels qu'un stress dû à une modification brutale de la température de l'environnement L'invention est également relative à un acide nucléique codant pour une protéine chimère telle que définie ci-dessus. Selon un mode de réalisation préféré, un tel acide nucléique comprend , à proximité, et avantageusement en amont de la région codante, un promoteur constitutif ou un promoteur inductible A titre illustratif, un tel acide nucléique comprend, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3' un promoteur de protéine de choc thermique végétal, (2) une séquence nucléotidique codant pour la partie N-terminale de la protéine de choc thermique dont la synthèse est naturellement régulée par le promoteur (1), (3) la séquence nucléotidique codant un polypeptide de résistance aux pathogènes végétaux ayant conservé sa fonction de facteur de transcription (domaine WRKY fonctionnel) selon l'invention A titre d'exemple, des promoteurs préférés sont ceux qui sont inductibles par : - La chaleur (Athsp 17.6; Prandl et al., 1995); - H202, auxine, acide salicylique (GST6; Chen et al., 1996), - l'acide salicylique (PR1;Lebel et al., 1998). Une protéine chimère selon l'invention peut être obtenue selon la technique décrite à l'exemple 7. Comme cela a été décrit précédemment un polypeptide de résistance à des pathogènes végétaux selon l'invention, possède, à la fois dans le domaine N-terminal et dans le domaine C-terminal des motifs caractéristiques de liaison à des protéines. Des protéines interagissant avec un polypeptide selon l'invention représentent donc également des moyens impliqués dans la résistance des plantes à l'infection par certains pathogènes, notamment par R.solanacearum. L'invention a également pour objet des procédés et des moyens destinés au criblage de substances ou molécules candidates susceptibles de se lier avec un polypeptide selon l'invention. L'invention concerne donc un procédé pour cribler une substance candidate se fixant sur un polypeptide selon l'invention, et tout particulièrement un polypeptide RRS1-R ou RRS1-S, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de a) préparer un polypeptide selon l'invention; b) obtenir une substance candidate à tester, c) mettre en contact le polypeptide de l'étape a) avec la substance candidate de l'étape b); d) détecter le complexe éventuellement formé entre le polypeptide de l'invention et la substance candidate. A titre illustratif, d'un procédé de criblage tel que défini ci-dessus, un polypeptide selon l'invention est immobilisé par adsorption ou par liaison covalente sur une surface appropriée, la surface d'un puits d'une plaque de microtitration. Le polypeptide de l'invention immobilisé est ensuite mis en contact avec la substance ou molécule candidate à tester. La détection de la fixation de la molécule candidate sur le polypeptide de l'invention immobilisé peut ensuite être réalisé par exemple avec un anticorps reconnaissant spécifiquement la molécule candidate à tester, ledit anticorps comprenant le cas échéant un marqueur détectable . Selon un autre mode de réalisation d'un procédé de criblage tel que défini ci-dessus, la substance ou molécule candidate est préalablement immobilisée sur la surface d'un support avant d'être mise en contact avec un polypeptide selon l'invention. La détection du complexe éventuellement formé entre le polypeptide selon l'invention et la molécule candidate immobilisée sur le support peut alors être réalisée à l'aide d'un anticorps reconnaissant spécifiquement un polypeptide selon l'invention, ledit anticorps étant éventuellement marqué. Pour réaliser un tel procédé de criblage, l'homme du métier pourra avantageusement se référer à la mise des techniques d'immunodétection de type ELISA L'invention concerne aussi un kit ou nécessaire pour cribler une substance candidate se fixant sur un polypeptide de l'invention, un tel kit ou nécessaire comprenant a) un polypeptide selon l'invention; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la détection des complexes formés entre le polypeptide de l'invention et la substance candidate à tester. Un procédé de criblage de molécules interagissant avec un polypeptide selon l'invention peut également être réalisé selon les techniques de double hybride. Des techniques de criblage de type doublehybride sont utilisées pour étudier les interactions protéines-protéines in vivo et reposent sur la fusion d'une protéine appât au domaine de liaison à l'ADN de la protéine de levure Gal4. La technique de double hybride est notamment décrite dans les brevets US N US 5,667,973 et US N 5,283 173, l'enseignement technique de ces deux brevets étant ici incorporé par référence. Le criblage de bandes d'ADNc contenant des inserts codant pour des produits de traduction interagissant potentiellement avec un polypeptide selon l'invention ou un fragment peptidique contenant un domaine de liaison aux protéines d'un polypeptide selon l'invention peut être réalisé comme décnt par HARPER et al. (1993), par CHO et al (1998), ou encore par FROMONT-RACINE et al. (1997). L'invention est également relative à un procédé de criblage d'une substance candidate se fixant sur un polypeptide selon l'invention, et tout particulièrement sur le polypeptide RRS1-R ou RRS1-S, ledit procédé comprenant les étapes de. a) obtenir un premier acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant une partie du polypeptide d'intérêt fusionné au domaine de liaison à l'ADN d'une protéine transactivatrice telle que Gal4; b) obtenir un second acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant la substance candidate fusionnée au domaine de transcription d'une protéine transactivatrice telle que Gal4; c) fournir un acide nucléique comprenant une séquence nucléotidique codant pour un marqueur détectable, placé sous le contrôle d'une séquence de régulation reconnue par la protéine transactivatrice telle que Gal4 Les acides nucléiques a), b) et c) étant insérés dans des vecteurs appropnés; et d) co-transfectées des cellules de levure simultanément avec lesdits vecteurs ; e) détecter l'expression de la séquence nucléotidique codant pour le marqueur détectable. Le procédé de criblage ci-dessus peut comporter en outre une étape supplémentaire f) au cours de laquelle la séquence nucléotidique et/ou la séquence en acides aminés de l'acide nucléique proie induisant l'expression du marqueur détectable est caractérisée. L'invention concerne aussi un kit ou nécessaire pour le criblage d'une substance candidate se fixant sur un polypeptide selon l'invention, et tout particulièrement le polypeptide RRS1-R ou RRS1-S, ledit kit ou nécessaire comprenant : a) un premier acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant une partie du polypeptide d'intérêt fusionné au domaine de liaison à l'ADN d'une protéine transactivatrice telle que Gal4, b) le cas échéant, un second acide nucléique comprenant une séquence nucléotidique codant pour un marqueur détectable, placé sous le contrôle d'une séquence de régulation reconnue par la protéine transactivatrice telle que Gal4; c) un troisième acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant la substance candidate fusionnée au domaine de transcription d'une protéine transactivatrice telle que Gal4 L'invention concerne aussi une substance capable de se fixer sur un polypeptide de l'invention, préférentiellement sur le polypeptide RRS1-R ou RRS1-S, cette substance étant caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue par un procédé de criblage tel que défini ci-dessus. * Une technique de criblage ayant recours à un système de type double hybride peut être aisément réalisée par l'homme du métier, notamment conformément à l'enseignement de l'exemple 8. Comme déjà décrit précédemment, un polypeptide selon l'invention comprend plusieurs domaines de liaison aux nucléotides à la fois dans sa partie N-terminale et dans sa partie C-terminale. Les séquences nucléotidiques auxquelles se lient ces différents domaines de liaison aux nucléotides revêtent donc une importance déterminante dans les mécanismes de résistance des plantes à différents pathogènes, et plus particulièrement à R solanacearum. L'isolement et la caractérisation des polypeptides de résistance aux pathogènes végétaux selon l'invention permet désormais à l'homme du métier de déterminer ces séquences nucléotidiques impliquées dans l'induction d'un phénotype de résistance aux pathogènes chez une plante L'invention a également trait à un procédé de criblage d'un acide nucléique interagissant avec un polypeptide selon l'invention, ledit procédé de criblage comprenant les étapes de a) obtenir une population statistique d'acides nucléiques de 20 à 50 nucléotides de longueur, b) mettre en contact la population d'acides nucléiques de l'étape a) avec un polypeptide selon l'invention; c) caractériser l'acide nucléique ou la pluralité d'acides nucléiques interagissant avec ledit polypeptide. Selon un tel procédé, il est d'abord préparé, par exemple par synthèse chimique directe, des acides nucléiques de 20 à 50 nucléotides de longueur, et de préférence de 20 à 30 nucléotides de longueur dont la séquence nucléotidique est statistique, chacun des acides nucléiques synthétisés étant en outre lié covalemment, à leur extrémité 5' ou 3', à une séquence nucléotidique unique et connue. Les acides nucléiques formant une population statistique d'acides nucléiques décrits plus haut sont ensuite mis en contact avec un polypeptide selon l'invention, ledit polypeptide pouvant avoir été préalablement immobilisé sur un support. Après une étape permettant d'éliminer les acides nucléiques n'ayant pas interagi avec le polypeptide selon l'invention, les complexes polypeptides/acides nucléiques sont mis en contact avec une amorce oligonucléotidique hybridant spécifiquement, dans des conditions d'hybridation déterminées, avec la séquence nucléotidique unique et connue commune à l'ensemble des acides nucléiques de la population statistique ciavant, puis il est procédé à au moins un cycle d'amplification à l'aide de l'amorce hybridant la séquence nucléotidique unique et connue de l'acide nucléique retenu par le polypeptide de l'invention, par exemple une amplification par PCR. Selon un mode de réalisation particulier de ce procédé de criblage, les acides nucléiques ainsi amplifiés et isolés sont à nouveau mis en contact avec un polypeptide selon l'invention, puis l'acide nucléique ou la pluralité d'acides nucléiques ayant formé un complexe avec ledit polypeptide sont à nouveau hybridés avec l'amorce nucléotidique hybridant avec la séquence nucléotidique unique et connue et un nouveau cycle d'amplification(s) est réalisé. Préférentiellement, le procédé de criblage tel que défini ci-dessus comporte de 1 à 10, et de manière tout à fait préférée de 1 à 5 cycles de mise en contact/amplification des acides nucléiques fixés sur le polypeptide de l'invention. Les acides nucléiques sélectionnés pour leur fixation spécifique à un polypeptide selon l'invention sont ensuite caractérisés, préférentiellement par séquençage. L'invention concerne en outre un kit ou nécessaire pour le criblage d'un acide nucléique interagissant avec un polypeptide selon l'invention, comprenant : a) un polypeptide selon l'invention; b) le cas échéant, une population statistique d'acides nucléiques de 20 à 50 nucléotides de longueur. L'invention est en outre illustrée, sans pour autant pour être limitée, par les figures et les exemples. La figure 1 illustre la séquence en acides aminés du polypeptide RRS1-R Les différents domaines caractéristiques sont représentés. La figure 2 illustre la séquence en acides aminés du polypeptide RRS1-S. Les différentes domaines caractéristiques sont représentés. La figure 3 illustre la représentation et la localisation des clones YACS, BACS et cosmides couvrant la région génomique d'intérêt de A. thaliana Matériel et Méthodes a. Analyse par Southern Blot L'ADN génomique a été isolé de feuilles de plantes ou de plantules d'Arabidopsis selon la technique décrite par Deslandes et al. (1998). Les expériences de type Southern sont réalisées comme décrit par Sambrook et al. (1989) en utilisant 2 g d'ADN génomique. b. Extraction de l'ADN de clones BAC, YAC, TAC, cosmidiques, et d'A. tumefaciens L'extraction d'ADN de clones BAC et TAC a été réalisée suivant une modification du protocole fourni par l'ABRC. 25 mL d'une culture de 12 heures d'un clone BAC dans l'antibiotique approprié sont centrifugés pendant 5 min à 6000 rpm. Le culot est resuspendu dans 4 mL d'un tampon contenant 50 mM Glucose, 10 mM EDTA, 25 mM Tris, pH 8. 0, 5 mg/mL de lyzozyme Après 5 min d'incubation à température ambiante, les cellules sont lysées par addition de 8 mL de 0,2 N NaOH, 1% SDS. Une nouvelle incubation de 5 min à température ambiante est suivie par l'addition de 6 mL d'acétate de Potassium 3M, pH 4.8. Le mélange est incubé à 0 C pendant 10 min puis centrifugé 15 min à 13000 rpm Le surnageant est récupéré, précipité par addition de 0.7 volume d'isopropanol, puis centrifugé 15 min à 13000 rpm Le culot obtenu est lavé par de l'éthanol 70%, séché 15 min à température ambiante puis resuspendu dans 0.6 mL de tampon TE (10mM tris, pH 8, 1 mM EDTA). La purification d'ADN de cosmide a été effectuée suivant le protocole de Sambrook et al (1989). L'extraction d'ADN d'A. tumefaciens a été réalisée suivant un protocole mis au point au laboratoire. 2 mL d'une culture de 12 heures dans du milieu L supplémenté par les antibiotiques appropriés sont centnfugés pendant 4 min à 13000 rpm. Le culot est resuspendu dans 700 l de tampon CTAB (100 mM Tris HCI, pH 8,1.4M NaCI, 20 mM EDTA, pH 8,2 % w/v CTAB (hexadecyltnméthylammonium bromide) auquel est rajouté extemporanément 0 07N de B-mercaptoéthanol. Le mélange incubé pendant 10 min à 65 C est ensuite extrait 2 fois par un volume égal de phénol/chloroforme (1V/1V) suivi par une extraction au chloroforme La phase aqueuse est ensuite précipitée par 0. 7 volume d'isopropanol, le mélange centrifugé pendant 10 min à 13000 rpm et le culot obtenu est resuspendu dans 50 L d'eau distillée c. Matériel végétal et protocole d'inoculation d'Arabidopsis par R. solanacearum La croissance de plantes d'Arabidopsis ainsi que les conditions d'inoculation de ces plantes par les différentes souches de R. solanacearum ont été décrites par Deslandes et al. (1998). d. Analyse des séquences d'ADN Le programme de recherche BLAST (Altschul et al 1990,1997) a été utilisé pour l'analyse de séquence et la comparaison dans des bases de données de Genbank, EMBL et Swissprot ainsi que dans des base de données sur Arabidopsis (AatDB Database Arabidopsis) Exemple 1) Clonage positionnel de RRS1 Ce clonage a été effectué sur l'écotype sensible Col-5 qui contient l'allèle RRS1. La résistance à la souche GMI1000 de Ralstoma solanacearum est, quant à elle, conférée par l'allèle rrs1 de l'écotype résistant Nd-1 Une série de clones YACs chevauchants (Yeast Artificial Chromosome) construit par le consortium japonais en charge du programme de séquençage du chromosome V d'Arabidopsis thaliana (http.//www kazusa.or.jp/arabi/chr5/pmap/P1~map~16.html) a été obtenu auprès de l'ABRC (Arabidopsis Biological Resource Center, Ohio State University, USA). Des marqueurs RFLP présentant un polymorphisme entre les écotypes parentaux Col-5 et Nd-1 ont été générés à partir des extrémités gauches et droites des inserts des clones YACs suivant le protocole de Schmidt et al (1996). Ces différents marqueurs, EW7G12LE (LE, Left End : généré à partir de l'extrémité gauche de l'insert du YAC), 11H2RE (RE, Right End . généré à partir de l'extrémité droite de l'insert du YAC), 11 H2LE, 4H11 RE ainsi qu'un marqueur T43968 (clone d'ADNc positionné sur le YAC CIC4E12 et obtenu de l'ABRC) ont été utilisés comme marqueurs RFLP afin de localiser plus précisément le locus RRS1. Deux de ces marqueurs (T43968 et EW7G12LE) se sont révélés polymorphes sur les écotypes parentaux et ont permis de restreindre la région contenant le locus RRS1 à une région d'environ 600 kb. Sur les 18 plantes recombinantes restantes, seules 11 lignées présentaient encore un événement de recombinaison entre ces 2 marqueurs et le locus RRS1. Par ailleurs, les marqueurs générés à partir des extrémités des clones YACs ont été utilisés pour réaliser le criblage d'une banque TAMU (Texas A & M University) de BACs (Bacterial Artificial Chromosome), banque obtenue par le biais de l'ABRC. Ce criblage réalisé suivant les conditions fournies par l'ABRC a conduit à l'isolement d'un nombre important de clones BACs Des marqueurs ont ensuite été générés à partir des extrémités de certains de ces BACs par les techniques de " plasmid rescue " et de PCR inverse (Woo et al., 1994). Ces marqueurs, 1H19LE, 2G14LE, 21F10LE, 9N23LE, 27P17LE et 29D23LE ont servi à positionner les différents BACs sélectionnés les uns par rapport aux autres (par digestion de l'ADN des différents BACs et hybridation avec chacune des extrémités isolées). Ces données ont permis de construire une série de clones BACs chevauchants Ultérieurement, nous avons d'autre part tiré parti de l'existence d'une série de clones TACs chevauchants (Transformation Artificial Chromosome) généré par le consortium japonais. Les clones TACs correspondants (K9E15, K18C1, K15122, K2N11) et le clone MFC19 (banque P1, Liu et al., 1995) ont été obtenus par l'ABRC. Parallèlement à ces études, le nombre de lignées présentant un événement de recombinaison étant relativement faible, 650 plantes F2 issues d'un croisement entre les 2 écotypes parentaux ont été testées afin de caractériser d'autres lignées présentant un tel événement entre les marqueurs T43968 et EW7G12LE et le locus RRS1. Dans ce but, l'ADN de quelques feuilles de chaque plante F2 a été extrait (Deslandes et al., 1998), digéré par l'enzyme de restriction Bglll qui permet d'observer un polymorphisme avec les marqueurs T43968 et EW7G12LE sur les 2 génotypes parentaux. Les plantes F2 ainsi sélectionnés ont ensuite été autofécondées et les graines obtenues (F3) semées. Le phénotype de ces plantes de troisième génération a été ensuite déterminé par inoculation de la souche GM11000. Cette approche a permis l'obtention de 15 familles F3 recombinantes entre les marqueurs T43968 et EW7G12LE. Les marqueurs correspondant aux extrémités de BACs ont ensuite été utilisés comme marqueurs RFLP sur les 11lignées RILs ainsi que sur les 15 familles F3. Le sous-clonage de BACs et de cosmides par différentes enzymes de restriction a par ailleurs permis de générer d'autres marqueurs RFLP (Tableau 5). Tableau 5Marqueurs RFLP utilisés pour cartographier le locus RRS1 sur 15 familles F3 issues du croisement Col-5 et Nd-1. Marqueurs 18 32 149 195 251 324 328 332 364 380 401 428 446 540 566 T43968 AB A AB A AB AB A AB A AB B AB A AB AB 1H19n 1 AB AB A AB AB A AB AB AB B AB AB AB AB #419 AB A A AB AB A AB AB AB B AB AB AB AB B1 B AB A- AB AB A AB AB AB B AB AB AB AB B1 n 4 - AB A A AB AB A AB AB - B AB AB AB AB #6 - AB A A AB AB A AB AB AB B AB AB AB AB RRS1 B AB A- AB AB A AB AB AB B AB AB AB A MFC5 - - - - - ABIA AB/A - - AB AB - - - - MFC61 B AB A A- A AB B- AB AB - - B MFC14- - - - - A ABIB - - AB/B - - - A 9N23 N 2 B AB A A AB- AB AB - B AB AB AB AB 9N23N 18 B ? AB A- - A - - 2G14LE B AB A A AB- AB B - B AB - - BEW7G12LE B AB A AB B B AB B AB B AB A AB B A Pour chaque famille F3, le génotype révélé par l'utilisation des différents marqueurs RFLP est indiqué dans ce tableau (A : génotype Col-5, B : Génotype Nd-1, AB : génotype hétérozygote). # T43968 : marqueur obtenu auprès de l'ABRC (Ohio, USA) # 1H19 n 1,, 9N23 N 2, 9N23 N 18 fragments des clones BACs T1H19 et T9N23 (digestion BamHI-Xhol) clonés dans le vecteur pKS (Stratagene, USA) # #419, B1 : cosmides issus des clones K18C1 et T29K4 respectivement # MFC5, MFC61 et MFC14: cosmides issus d'une digestion partielle BamHl du clone MFC19. # #6.1 phagemide issus d'une banque de phages Col-0 (zap, Stratagene, don du Pr Lescure). # B1 n 4 :sous-clone du cosmide B1 # EW7G12LE : extrémité gauche de l'insert du clone YAC EW7G12 (don de W Gassman) Ces expériences ont permis de localiser le gène RRS1 sur 3 clones BACs chevauchants (T29K4 , T25P9 et MFC19), couvrant une région d'environ 170 kb (Figure 3). Des contigs de cosmides couvrant l'ensemble des 2 BACs ont été obtenus par digestion partielle par l'enzyme BamHl et sous-clonage de l'ADN des 2 BACs dans le vecteur cosmidique SLJ75515 (don du Dr. J Jones, The Sainsbury Laboratory). L'utilisation de ces cosmides et de sousclones de ces cosmides obtenus par digestion avec l'enzyme Hindlllet insertion dans le vecteur pBlueScript a permis de localiser RRS1 sur un cosmide de 18 Kb, le cosmide B1 issu du clone BAC T29K4. Une banque d'ADNc de l'écotype Col-0 préparé dans le vecteur IZAP (don de B Lescure dans notre institut) a ensuite été criblée avec l'ADN de l'insert du cosmide B1 et a permis d'isoler plusieurs clones d'ADNc dont la séquence nucléotidique a été déterminée. Dans le même temps, la séquence nucléotidique d'un clone TAC, K9E15 qui recouvre le cosmide B1, a été délivrée dans les banques de données par le consortium japonais. Certains clones d'ADNc dont la séquence nucléotidique était connue, ont ainsi pu être localisés sur le cosmide B1 L'un deux, noté #6.1, utilisé comme marqueurs RFLP ainsi qu'un marqueur CAPS, B69. 1, ont permis de délimiter une région d'environ 10 kb du cosmide B1 contenant le locus RRS1. Connaissant la séquence du cosmide B1, il a été possible de générer plusieurs couples d'amorce afin d'identifier des marqueurs PCR de type CAPS Deux plantes F3 recombinantes, 324 et 566, présentant un événement de recombinaison au sein du cosmide B1 ont permis d'identifier le gène RRS1 . Exemple 2) Isolement et caractérisation de RRS1 Une banque de cosmides préparée à partir d'ADN de l'écotype Nd- 1 a été construite dans le vecteur SLJ75515 dans le groupe de J. Beynon (Horticultural Research International, Wellesbourne, GB) Cette banque nous a été gracieusement donnée et son criblage a été réalisé (selon les conditions d'hybridations de type Southern décrites par Deslandes et al., 1998) à l'aide de l'ADN du clone T1 H19 qui contient le locus RRS1 Plusieurs clones cosmidiques ont été isolés et caractérisés L'un d'entre eux, le clone H, a été sélectionné car il présente un profil de restriction identique à celui de B1, cosmide sur lequel RRS1-S a été localisé par clonage positionnel La séquence du gène RRS1-S étant connue, il a été possible de générer des amorces oligonucléotidiques qui ont permis de déterminer la séquence nucléotidique de la région correspondant à RRS1 du cosmide H. La détermination de la séquence nucléotidique a été réalisée sur un séquenceur Perkin-Elmer 373 (kit Dye Terminator) et les différentes séquences ont été assemblées en utilisant les programmes " Staden " d'assemblages de séquences, disponibles sur station UNIX (Roger Staden, MRC, Cambndge, UK). Les différentes amorces utilisées sont les amorces de la série " K " soit toutes les amorces dont le nom commence par la lettre " K " (voir Tableau 6). Exemple 3) Complémentation des écotypes sensibles et résistants par RRS1-R et RRS1-S a. Constructions Le vecteur cosmidique SLJ 75515 des clones H et B1 présente l'avantage d'être directement transférable chez Agrobacterium tumefaciens. Ce transfert de cosmides d'E. coli (souche XL1Blue pour le cosmide B1 et souche DH12S pour le cosmide H) dans A. tumefaciens (souche GV3101 contenant le plasmide helper pMP90) est réalisée par conjugaison triparentale à l'aide d'une troisième souche, pRK2013 (E. coli) d'après le protocole Tolmasky et al (1984). Les colonies d'A. tumefaciens contenant les cosmides H ou B1 sont sélectionnées sur un milieu L gélosé supplémenté par de la tétracycline (10 g/ml) et de la gentamycine (25 g/ml) Les boîtes sont ensuite incubées à 28 C pendant 3 jours. La présence de l'ADN cosmidique est contrôlée par amplification PCR à l'aide d'amorces spécifiques des inserts des clones H et B1 (couple RT1/RT2 par exemple) Par ailleurs, des expériences de type Southern permettent de vérifier la stabilité des ADN cosmidiques dans A. tumefaciens Par ailleurs, l'insert du cosmide B1 a été sous cloné à l'aide de l'enzyme BamH1 qui génère deux fragments : 9. 68 et 8. 03 kb. Pour le cosmide H, 2 fragments BamHl de taille comparable à ceux du cosmide B1 ont été obtenus Le site BamHl n'est présent qu'une seule fois dans les séquences génomiques de RRS1-R et RRS1-S. Chacun des 2 sousfragments issus des cosmides B1 et H a été introduit dans le vecteur binaire pDHB321. 1 fourni par le Dr. Bouchez (INRA Versailles). Après transformation dans une souche d'E. coli (XL1BlueMR, Stratagene, USA), l'ADN plasmidique est extrait (Maniatis 1978). La souche d'A tumefaciens GV3101 est ensuite transformée par la méthode du choc thermique (Holsters et al., 1978) Les colonies d'A. tumefaciens contenant les sousclones des cosmides B1 et H sont ensuite sélectionnées sur milieu L gélosé contenant de la gentamycine (25 g/ml) et de la Kanamycine (50 g/ml). Les boîtes sont ensuite incubées à 28 C pendant 48 h. La présence de l'ADN plasmidique est contrôlée par amplification PCR à l'aide d'amorces spécifiques des 2 sous-fragments des clones H et B1. Par ailleurs, des expériences de type Southern permettent de vérifier la stabilité des ADN plasmidiques dans A. tumefaciens. Ces constructions sont ensuite introduites dans le génome des plantes Col-5 et Nd-1. b. Transformation des écotypes Nd-1 et Col-5 par Agrobacterium tumefaciens Afin de démontrer la fonction des gènes candidats, des expériences de complémentation des phénotypes sensibles et résistants par les cosmides H et B1 ont été réalisées. Les techniques classiques de transformation d'Arabidopsis par A. tumefaciens (Clough et Bent 1999) ont été utilisées pour générer les plantes transgéniques décrites dans ce travail Les graines des plantes transformées par A. tumefaciens (génération T1) sont déposées dans des terrines contenant une couche de perlite (environ 2cm) recouverte d'une couche de sable de même épaisseur imbibées d'une solution de l'herbicide gluphosinate (nom commercial: BASTA) à une concentration de 15 mg/L Les terrines sont ensuite placées pendant 4 jours dans l'obscurité à 4 C, puis transférées en condition de jours longs (16h de jour/ 8h de nuit). Après environ 10 jours, les plantes résistantes sont sélectionnées et repiquées individuellement. La descendance T2 de chaque plante transgénique T1 obtenue par autofécondation est utilisée pour des expériences d'inoculation par l'agent pathogène c. Résultats obtenus c 1 Le gène RRS1-R confère la résistance à la souche GMI1000 de Ralstonia solanacearum. Des expériences de complémentation réalisées à l'aide du cosmide H contenant l'allèle RRS1-R introduites dans l'écotype Col-5 ont été effectuées Après sélection par l'herbicide BASTA, 12 plantes transgéniques ont pu être isolées (lignées notées CH1.1 à CH1 12) Ces plantes ont été autofécondées afin d'obtenir la descendance T2 de chacune d'elle.et 24 individus de chaque lignée transgénique obtenue ont été inoculés par la souche GMI1000 de R solanacearum. Alors que des plantes témoins (Col-5) ont flétri 7 jours après inoculation par le pathogène, les plantes transgéniques contenant l'allèle RRS1-R de Nd-1 n'ont quant à elles présenté aucun symptôme de flétrissement. Ces résultats indiquent donc que le gène RRS1-R peut conférer la résistance à la souche GMI1000 de R. solanacearum dans des plantes de fond génétique Col-5. L'expression de RRS1-R peut entraîner une diminution de la multiplication bactérienne dans la plante infectée, ce qui pourrait expliquer l'absence de symptômes c 2 Le gène RRS1-R confère la résistance à différentes souches de Ralstonia solanacearum. Un certain nombre de souches de R. solanacearum provoque des réponses (maladie ou absence de symptômes) identiques à celle de la souche GMI1000 sur les écotypes Nd-1 et Col-5. Ces souches isolées de plantes-hôtes très diverses (cf tableau) proviennent de différentes régions du globe La capacité du gène RRS1-R à conférer la résistance à ces différentes souches a donc été testée. Les plantes transgéniques Col-5 contenant le gène RRS1-R ont donc été infectées par ces différentes souches Alors que des plantes témoins (Col-5) ont flétri 7 jours après inoculation par le pathogène, les plantes transgéniques contenant l'allèle RRS1-R de Nd-1 n'ont quant à elles présenté aucun symptôme de flétrissement. Ce résultat indique que le gène RRS1-R est capable de conférer la résistance à différentes souches de R. solanacearum. c 3 Le gène RRS1-S confère-t-il la sensibilité à la souche GMI1000 de R. solanacearum La réponse de plantes Nd-1 transformées par le gène RRS1-S de l'écotype sensible Col-5 a été testée. 104 plantes ont été sélectionnées pour leur résistante au BASTA (B1.1 à B1.104) et autofécondées Ces plantes transgéniques ont été inoculées par la souche GM11000. Une seule lignée transgénique (B1.3) a développé des symptômes de flétrissement alors que les autres lignées n'ont présenté aucun symptôme dans des conditions provoquant le flétrissement total de plantes témoins Col-5 Exemple 4) Expériences de complémentation par des clones génomiques RRS1-S et RRS1-R. Une digestion Sphl du cosmide B1 a permis d'obtenir un fragment de 9393 pb (fragment allant de la base 6557 à la base 15950, d'après la numérotation de la séquence du clone BAC K9E15 publiée par le consortium japonais) couvrant la totalité du gène RRS1-S (promoteur, introns/exons, séquence de signal de polyadénylation). Ce fragment Sphl a été ligaturé dans un plasmide pUC19 digéré par l'enzyme Sphl et déphosphorylé. Cette construction a ensuite été introduite dans la souche DH5a d'E. coli. Ce clone est défini comme étant le clone génomique RRS1 et est appelé B1puc3. Le même type d'expérience a été réalisé à partir du cosmide H. Le clone génomique obtenu est appelé Hpuc2. En parallèle, le vecteur binaire pDHB321. 1 a été digéré par l'enzyme BamHl (site unique de clonage). La ligature des inserts (Sphl/Sphl) des clones B1puc3 et Hpuc2 (issus d'une digestion Sphl) dans le vecteur binaire (BamHI/BamHI) a donc nécessité l'utilisation d'un adaptateur afin de ligaturer les extrémités BamHl et Sphl entre elles. Deux amorces oligonucléotidiques interviennent dans la synthèse de cet adaptateur : il est constitué d'un mélange équimolaire (5 M) des amorces notées " BamSph " (5' -GAT CGC GGC CGC CAT G- 3') et " Not " (5' -GCG GCC GC-3'). Le mélange est soumis à une température de 95 C pendant 3 minutes. Le retour à une température ambiante s'effectue ensuite naturellement. A 100 ng de vecteur pDHB321.1 digéré par l'enzyme BamHl, 1 l de la solution d'adaptateur à 5 M est ajouté. La ligature du vecteur linéarisé et de l'adaptateur s'effectue dans un volume final de 10 l pendant 12 heures à 4 C. La réaction est alors arrêtée par dilution (ajout de 20 l d'eau) L'excès d'adaptateur est par la suite éliminé par un passage du mélange de ligature sur une colonne microspin S400 (Pharmacia, ref). L'ADN des clones B1puc3 et Hpuc2 est digéré par l'enzyme Sphl Après inactivation de l'enzyme à 65 C pendant 20 minutes, un aliquote de chaque digestion (environ 100 ng) est utilisé pour réaliser une ligature avec le vecteur pDHB321 1+adaptateur. Ces constructions sont alors introduites dans la souche DH5a d'E. coli et sélectionnés sur un milieu L gélosé contenant 50 g/ml de kanamycine (résistance conférée par le vecteur binaire) les clones qui contiennent l'insert provenant des clones B1 et H (environ 9400 pb) sont appelés B1MT9 et HMTB respectivement. L'ADN plasmidique extrait de ces clones est ensuite utilisé pour transformer la souche GV3101 d'A. tumefaciens par choc thermique. Les colonies sont sélectionnées sur un milieu L gélosé contenant 25 g/ml de gentamycine (résistance conférée par le plasmide helper pMP90) et 50 g/ml de kanamycine Les colonies d'A. tumefaciens transformées par l'ADN des clones B1MT9 et HMTB sont appelées B1 MT9.1 et HMTB2 respectivement. Exemple 5) Expression des gènes RRS1-S et RRS1-R par des expériences de type Northern L'expression des gènes RRS1-S et RRS1-R a été étudiée dans des plantes non infectées par des expériences de type Northern. Après extraction de l'ARN total par la technique décrite par Lummerzheim (1993), les ARNs polyadénylés ont été purifiés par utilisation du Kit Dynabeads (Dynal, USA). Après dosage à 260 nm, les ARNms ont été déposés sur gel en condition dénaturante (Marco et al. 1990), puis transférés sur une membrane de nitrocellulose (Hybond N+, Amersham Pharmacia Biotech). L'hybridation a été réalisée suivant le protocole donné par le fournisseur. Exemple 6) Obtention des clones d'ADNc pleine longueur par RACE PCR L'obtention de clones d'ADNc pleine longueur a nécessité l'utilisation d'un kit de RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) PCR Les détails des protocoles expérimentaux présentés ci dessous sont valables pour les clones d'ADNc issus des écotype Col-5 et Nd-1 a. RACE PCR (amplification rapide des extrémités d'ADNc) Les extrémités 5' et 3' des clones d'ADNc ont été générés par RACE PCR en utilisant le kit " Smart Race cDNA Amplification " (Clontech, USA). Les ARN totaux ont été extraits à partir de plantules des écotypes Col- 5 et Nd-1 âgées de deux semaines suivant le protocole de Lummerzheim et al (1993) Les réactions de transcriptase reverse ont été réalisées sur 1 pg d'ARN totaux d'après les conditions fournies par le fabricant Les premiers brins des ADNc ont été synthétisés grâce aux amorces suivantes : - 5'CDS et SMART Il oligo (Clontech) pour l'obtention des extrémités 5'. - 3'CDS (Clontech) pour l'obtention des extrémités 3'. Les amorces oligonucléotidiques utilisées pour l'amplification de l'extrémité 5' des ADNc RRS1 (Col-5) et rrs1 (Nd-1) sont : - l'amorce universelle UPM (Universal Primer Mix, kit Smart Race) - l'amorce anti-sens RT4, spécifique des ADNc RRS1-S/RRS1-R (voir tableau 2) Les amorces oligonucléotidiques utilisées pour l'amplification de l'extrémité 3' des ADNc RRS1 (Col-5) et rrs1 (Nd-1) sont. - l'amorce universelle UPM (Universal Primer Mix, kit Smart Race) - l'amorce RT6, spécifique des ADNc RRS1-S/RRS1-R (voir tableau 2) Les amorces RT4 et RT6 ont été choisies de sorte que les produits d'amplification des extrémités 5' et 3' aient en commun une région de 500 pb contenant un site unique de restriction BamHl. Les conditions d'amplifications des extrémités 5' et 3'sont les suivantes -5 cycles (94 C pendant 30 secondes, 72 C pendant 5 minutes) -5 cycles (94 C pendant 30 secondes, 70 C pendant 30 secondes, 72 C pendant 5 minutes) -30 cycles (94 C pendant 30 secondes, 68 C pendant 30 secondes, 72 C pendant 5 minutes) La taille des produits d'amplification des extrémités 5' et 3' est de 3708 pb et 1230 pb pour Col-5 ; 3714 et 1231 pb pour Nd-1 respectivement. Ces produits PCR ont été clonés dans le vecteur pGemT-easy (Promega). Le séquençage de ces clones a permis de déterminer précisément le début (5') et la fin (3') de la région transcrite non traduite des clones d'ADNc issus des écotypes Col-5 et Nd-1. La taille des clones d'ADNc pleine longueur issus des plantes Col-5 et Nd-1 est respectivement de 4336 et 4343 pb. b. Obtention des clones d'ADNc pleine taille Des clones d'ADNc pleine taille ont été générés (soit 4336 et 4343 pb) en réalisant une double digestion BamHl (site unique) et Notl (site présent au niveau du site multiple de clonage du vecteur pGemT-easy) sur un mélange de 2 plasmides dans le but d'exciser les inserts correspondants aux extrémités 5' et 3'. Les inserts 5' et 3' ont alors été ligaturés ensemble dans le plasmide pGemT-easy digéré par Notl et déphosphorylé. Après transformation de bactéries DH5a avec le mélange de ligature et étalement sur milieu sélectif (milieu L+ampicilline 50 ug/mL+ 0. 5 mM IPTG + 80 ug/mL X-Gal), les clones positifs contenant le clone d'ADNc pleine taille ont été sélectionnés en réalisant un criblage PCR sur colonies à l'aide des amorces K3 5 et RT2 (voir tableau 6) qui sont spécifiques de chacune des extrémités 5' et 3' respectivement. Une seconde expérience de RACE PCR a été réalisée sur les premiers brins des ADNc issus de la réaction de transcriptase reverse décrite ci-dessus dans le but d'introduire deux sites de restriction Sali, l'un étant situé juste en amont du codon initiateur ATG (point d'initiation de la traduction), l'autre étant situé après le signal de polyadénylation Les deux couples d'amorces utilisés pour amplifier les extrémités 5' et 3' sont 5'RRSall/ RT8 et 3'RRSall/ RT7 respectivement. Les conditions d'amplification, le clonage des produits PCR ainsi que la méthode d'obtention des clones d'ADNc pleine longueur sont les mêmes que celles décrites précédemment si ce n'est que le site unique de restriction commun aux extrémités 5' et 3' est un site Aflll L'introduction de sites Sali de part et d'autre de la séquence du clone d'ADNc a pour but de faciliter son clonage dans différents types de vecteurs Exemple 7) Expérience d'échange de domaine par obtention de clones chimères RRS1-S/RRS1-R L'ADN plasmidique utilisé pour réaliser les expériences d'échange de domaine provient des clones génomiques B1puc3 et Hpuc2 décrits précédemment. Ces 2 plasmides sont digérés par l'enzyme BamHl dont le site de restriction est localisé dans la région présentant des similitudes avec un gène de résistance (5'eme exon). Cette digestion génère 2 fragments, l'un de 4881 pb (clone B1puc3 contenant le gène RRS1-S) contenant la partie 5' du clone génomique (promoteur et partie codante du gène RRS1-S jusqu'au niveau du 5ieme exon) et un fragment de 7180 pb (clone B1 puc3) contenant quant à lui la partie 3' du clone génomique (4512 pb contenant la fin de la région présentant des similitudes avec le gène de résistance, la région similaire au gène codant un facteur de transcription de type WRKY et la région 3' transcrite non traduite ; 2668 pb de vecteur plasmidique pUC19) La taille des fragments générés par la digestion BamHl du plasmide Hpuc2 est du même ordre de grandeur que celle des fragments obtenus par digestion BamHl du plasmide B1puc3. Après digestion par l'enzyme BamHl, un aliquote de chacun des fragments d'ADN générés est déphosphorylé. Le reste est déposé sur gel afin de purifier les fragments correspondant à la partie 5' de chaque clone génomique. Le fragment d'ADN correspondant à la partie 5' du gène RRS1S est ensuite ligaturé avec la partie 3' du gène RRS1-R De même, le fragment d'ADN correspondant à la partie 5' du gène RRS1-R est ligaturé avec la partie 3' du gène RRS1-S. Ces constructions sont ensuite introduites chez E. coli (souche DH5a) et ont été respectivement appelées 3BH (5'RRS1-S/3'RRS1-R) et 6HB (5'RRS1-R/3'RRS1-S). Des amorces spécifiques des régions 5' et 3' des gènes RRS1-S et RRS1-R ont permis de vérifier les constructions L'ADN de chaque plasmide a été purifié, digéré par Sphl, enzyme permettant l'excision des gènes dans leur intégralité. Les inserts ont ensuite été ligaturés dans le vecteur plasmidique pDHB321. 1 digéré par l'enzyme BamHl et dont les extrémités ont été rendues compatibles avec des extrémités Sphl grâce à la présence d'un adaptateur (cf. plus haut). Ces constructions ont été successivement introduites dans la souche DH5[alpha] (les clones sont appelés 3BHMT7 (5'RRS1-S/3'RRS1-R) et 6HBMT2 (5'RRS1-R/3'RRS1-S)) puis dans la souche GV3101 d'A tumefaciens (clones appelés 3BHMT7.1 et 6HBMT2 1). Exemple 8) Recherche de protéines interagissant avec les protéines rrs1 et RRS1 par la technique de double hybride chez la levure Afin d'identifier des protéines interagissant avec les protéines RRS1-S et RRS1-R, le système de double hybride chez la levure sera utilisé (kit Clontech, Matchmaker Gal4 Two-Hybrid System 3) Les clones d'ADNc entiers correspondant aux gènes RRS1-S et RRS1-R ainsi que des sousfragments correspondant à certains domaines particuliers de ces gènes (domaines TIR, NBS, LRR,WRKY) seront utilisés pour cribler des banques d'ADNc dans le but d'isoler des gènes dont les produits interagissent avec les produits de ces fragments d'ADN Exemple 9) Modulation de l'expression des gènes RRS1-S et RRS1-R par approches sens et antisens En ce qui concerne les approches antisens, deux constructions différentes ont été réalisées. La première consiste en un fragment de 299 pb (position 3642 à 3941 de la séquence SEQ ID N 8) fragment correspondant au domaine WRKY de la protéine RRS1-1. Des amorces PCR (B1AS5' et B1AS3' qui permettent l'introduction d'un site Ncol et Sali respectivement) ont été générées pour amplifier ce fragment d'ADN. L'amplification a été réalisée sur des ADNc simple brin résultant de la " transcription reverse " d'ARN total de feuilles de plantes Col-5 âgées de 2 semaines. La polymérase utilisée est la Deep Vent (Biolabs, New England) et les conditions d'amplification sont celles décrites par le fabricant. Le produit d'amplification B1AS5'/B1AS3'est digéré par les enzymes Ncol et Sali et le produit de digestion déposé sur gel et purifié (Kit Jetsorb, Quantum Appligene). Ce fragment d'ADN est ensuite ligaturé dans le vecteur PA1 proterm 2 (don du Pr Lescure, notre institut) digéré par les enzymes Ncol et Sali. Cette construction a été introduite dans la souche DH5a d'E coli L'ADN plasmidique correspondant a été purifié, digéré par l'enzyme BamHl, ce qui permet l'excision d'un insert comprenant le promoteur du gène EF1a, les 299 pb du gène RRS1-S en orientation antisens ainsi que le terminateur du gène EF1a (Axelos et al , 1989). Ce fragment BamHI a ensuite été inséré par ligature dans le vecteur binaire pDHB321 1 digéré par BamHl. Cette nouvelle construction a été introduite dans la souche DH5a d'E. coli. L'ADN plasmidique purifié a servi à transformer la souche GV3101 d'A. tumefaciens. La seconde construction antisens a été réalisée en excisant un fragment EcoRI de l'insert du clone d'ADNc pleine longueur RRS1-R (séquence SEQ ID N 4). Le fragment d'ADN ainsi généré (taille d'environ 3930 pb) a été introduit dans le vecteur pKMB (Mylne et Botella, 1998) digéré par EcoRI. Ce vecteur contient quant à lui le promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou fleur (CaMV 35S) ainsi que le terminateur correspondant. Cette construction a été successivement introduite dans les souches DH5a d'E. coli et GV3101 d'A. tumefaciens par conjugaison triparentale Les souches d'A. tumefaciens obtenues (29B1ASMT2 :fragment de 299 pb et J1 : fragment de 3930 pb) ont permis la transformation des écotypes Nd-1 et Col-5. Tableau 6 : SI-'Q 11) Oligonllcl0ol1lb Séclticiice(5'--3') SEQ ID n 1 1 K0 AGC TCG AGA C TA TTC AGG SEQ ID n 1 K1 3 AAA CAC TGA TAG CTA ACG G SEQ ID n 1 K ATC TCT AAC GGT GGA TGG SEQ ID n 1 4 K2 3 TGC ATT CAA GAC CTC TAG G SEQ ID n 15 K2 CCG TTA GC T ATC AGT GTT T SI:0ID 16 K33 AGI CAT CAA GTG ACC ATC SEQ ID n 1 K3 CTA GAG GTC TTG AAT GCA C SEQ ID n 18 K4 GCA TCA CAG TAG TCC TCG SEQ ID n 19 K ACA TCC AAG TCA ATA CCG G SEQ ID n 20 K6 GCC AAT AGA GAT GTA CCA SEQ ID n 21 K7 TGG TAC ATC TCT AAT GGC SEQ ID n 22 K8 AGT AAC ACG TAA TGT AAC C SEQ ID n 23 K9 ACC AGC AAG TTT AGG ATG A SI:Q 11) n2.1 Kltl GATGGTCAC1TGATGACT SEQ ID n 25 1'. Il GGT GTA CAT AAA TCC TTG G SEQ ID n 26 K12 CCA AGG ATT TAT GTA CAC C SEQ ID n 27 K1 ACT CTT ATG GAG ATG CTC SEQ ID n 28 K14 CGC ATC CTT AAA CTA CTG SI-0IDn02') KI5 ATA TCT CCG GTr TCr1 ACC' SEQ ID n 30 K16 CCT TGG TGA GTA GCT CAC SEQ ID n 31 K17 CCA TAG ATC TCC CTC GTC SEQ ID n 32 K18 CCT TAT AGA ACT TCT CTC C SEQ ID n 33 K19 CTC TTC GAG TGC ATC AGG SEQ ID n 34 K20 CCG GTA TTG ACT TGG ATG T SI-0 1 1) K21 AGA TAC ACG TAC ACT GGC SEQ ID n 36 K22 TCC AGC CCA GAT ATC AGG SEQ ID n 37 K23 TGC ATA GGA AGC TTC TCC TABLEAU 6 suite: SE\) ID Oligonucléotides Séquence (5'-3') SEQ ID n 38 K24 TTC AGA GGA ACT TGA GCG SEQ ID n 39 K25 CCA AGC AAA TAA GCT TCC C SEQ ID n 40 K26 ATC GTC CTC AAC ATC TCC SE\) ID n 41 K27 AGG CGC AGA AGA CTG TGG SEQ ID n 42 K28 TTG ATG CTC CAA GGT TCC SI\) ID n 43 K29 GAG ATG TGT ACG AGA CGC SEQ ID n 44 K30 CAA TCT CCA GCA GCT TCG SEQ ID n 45 K31 TTG AGT GGT TGA ATG TCC SEQ ID n 46 K32 CAC ACG AAT TCC TCA TCC SEQ ID n 47 K33 TGA AGG AAC ACT CGT TGC SEQ ID n 48 K34Nd GTC TTT CAG AGG CCT CGA SEQ ID n 49 K35Col GGT AAG CAA TCT CTG ATA SEQ ID n 50 RTI ATG TTA TAT CGA CGT TGG SEQ ID n 51 RT2 GAG GAA GTG GAA CGA GTG SEQ ID n 52 RT3 AAC TCC TCC ATG TCC GTC Si'Q 11) RT4 ATCTCCCTCGTCTATAGCCGGTATGG SEQ ID n 54 RT5 GAT CAG GCT TCC GGG TCC TAG CCA GTC SEQ ID n 55 RT6 AGT GAT GTC AAC ATG CGC CCA AGT ACC SEQ ID n 56 RT7 AAC CTT CAA ACG TGC TCA GGG CTC TG SEQ ID n 57 R18 ACA TCT CCA GGT TCT TGG TTC CAC CC SFI) ID n=58 5'RRSaii GTC CiAC ATG ACC AA T TGT GAA AAG Gant GA SEQ ID n 59 3'RRSall GTC GAC CTT GTC TTG CAG TGA TGA GAG SEQ ID n 60 BIAS5' CTA TTC CAT GGA GGA GGA AGT GG SU) ID n061 BIAS3' TT A GTC GAC GAA GAA GA.A ACA 'L\G Références Bibliographiques .AXELOS, M , Bardet, C , Liboz, T., Le Van Thai, A , Curie, C. and Lescure, B 1989 The gene family encoding the Arabidopsis thaliana translation elongation factor EF-1amolecular cloning, characterization and expression. Mol Gen Genet. 219, 106-112. .ALSCHUL. S. F., Gish, W, Miller, W., Myers, E.W., and Lipman, D. 1990. Basic local alignment search tool. J Mol Biol 215, 403-410. .ALSHUL S F et al., (1997), Nucleic Acids Research, vol.25:33896-3402 .AUSUBEL et al., (1989), Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and WLILEY Interscience, New-York .AUSUBEL et al. Ets , John WILEY and BROWN E.L., (1979), Methods Enzymol vol 68:109-151, #BEAUCAGE et al, (1981), Tetrahedron Lett., vol.22:1859-1862 # BOUCHER, C.A , Barberis, P.A., Tngalet, A.P. and Demery, D. A 1985 Transposon mutagenesis of Pseudomonas solanacearum :isolation of Tn5induced avirulent mutants. J. Gen. Microbiol 131,2449-2457 # BECHTOLD N , ELLIS J., and PELLETIER G (1993) C. R. Acad. Sci Pris 316, 1194-1199. # BROWN EL. et al., (1979) Methods Enzymol , 68. 109-151. # BEVAN et al., Nucleic Acids Research, 12: 8711-8721 .BOUCHER et al., 1993 # CHEN W , CHAO G., SINGH KB (1996) Plant J 10, 955-966. # CLOUGH, S., and bent, A. 1999. Floral dip a simplified method for Agrobactenum-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J 16, 735-743 # CHO R. J. et al. (1998), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol.95 (7):3752 . CORMACK B , VALDIVIA R. H. FALKOW S. 1996. Gene 173, 33-38. #DESLANDES, L., Pileur, F., Liaubet, L., Camut, S., Can, C., Williams, K , holub, E., Beynon, J , Arlat, M. and Marco, Y. 1998. Genetic characterization of RRS1, a récessive locus in Arabidopsis thaliana that confers résistance to the bacterial soilborne pathogen, Ralstonia solanacearum #FULLER S A. et al. (1996), Immunology in Current Protocols in Molecular Biology #FORMONT-RACINE M et al. (1997) , Nature Genetics, vol.16 (3) 277-282. .GREEN et al. ,(1986) , Ann. Rev. Biochem., vol 55: 569-597. #GRIFFIN et al. (1989), Science, vol.245:967-971. -HOUBEN WEYL, (1974), In Methoder Organischen Chemie, E.Wunsch Ed vol 15-1 et 15-11, Thieme, Stuttgart. #HAMMOND-KOSACK K. E. et al., (1997), Annu Rev Plant Physiol. Plant Mol. Biol., vol.48: 575-607 #HAMES B. D. and HIGGINS S. J., (1985), Nucleic Acid Hybridization- The Practical Approach , HANES and HIGGINS Ed., IRL Press, Oxford .HAPPER J W. et al. (1993), Cell, vo1.75: 805-816, # HORSCH et al., (1984) #IZANT JJ, WEINTRAUB H., (1984), Cell, Vol.36 (4):1007-1015 . JEFFERSON R.A , KAVANACH, T.A , and BEVAN , M W. (1987) Embo J 3901-3907 # KELLER H , PAMBOUKDJIAN N, PONCHET M, POUPET A, DELON R VERRIER JL. ROBY D. and RICCI P. (1999). Plant Cell 11, 223-235 *KOCH Y. (1977), Biochem. Biophys. Res. Commun. Vol.74.488-491. .KOHLER G and MILSTEIN C., (1975) Nature, vol 256 495. #KOZBOR et al. (1983), hybndoma, vol.2 (1): 7-16 # LIU, Y G, Mitsukawa, N , Vazquez-Tello, A. and Whittier, F. 1995 Generation of a high quality P1 library of Arabidopsis suitable for chromosome walking Plant J. 7,351,358. #LUMMERZHEIM, M , de Olivera, D , Castresana, C., Miguens F. C , # LEBEL E. HEIFETZ P., THORNE L., UKNES S., RYALS, J. AND WARD E. (1998) Plant J. 16, 223-233. # LOUZADA, E., Roby, D., Van Montagu, M, Timmerman, B 1993 Identification of compatible and incompatible interactions between Arabidopsis thaliana and Xanthomonas campestris pv campestns and charactenzation of the hypersensitive response. Mol Plant Microbe Interact 6,532-544 #MARCO,Y, Ragueh, F , Godiard, L. and Froissard, D. 1990. Transcriptional activation of 2 classes of genes during the hypersensitive reaction of tobacco leaves infiltrated with an incompatible strain of the phytopathogenic bacterium, Pseudomonas solanacearum. Plant Mol Biol 15,145-154. .MYLNE, J., and Botella, J., R 1998. Binary vectors for sense and antisense expression of Arabidopsis ESTs Plant Molecular. Biology Reporter 16, p257-262. #MARTINEAU et al , JOHNS P. WINTER G.(1998), J Mol Biol., vol 280 (1):117-127 #MERRIFIELD RB, (1965a), Nature, vol.207 (1996: 522-523) #MERRIFIELD R. B., (1965b), Science, vol.150 (693): 178-185. # McELROY D., ZHANG W, CAO J, WU R (1990) Isolation of an efficient actin promoter for use in rice transformation. Plant Cell 2, p 163-171. #NARANG S A. et al , (1979), Methods Enzymol., vol 68,90-98. # ODELL JT, NAGY F CHUA NH. (1985). Identification of DNA séquences required for activity of the cauliflower mosaic virus 35S promoter. Nature 313, p. 810-812. . PRANDL R , KLOSKE E , SCHOFFL F. (1995). Plant Mol Biol.28,73-82. . PEARSON, W. T. and Lipman D. J. (1988). Improved tools for biological séquence comparison. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 2444-2448. #ROSSI et al (1991), Pharmacol. Ther., vol.5O:245-254 #RIDDER R et al , (1995), Biotechnology (NY), vol.13 (3) 255-260 ou encore des anticorps humanisés #REINMANN K. A. et al , (1997), Aids, Res. Hum. Retroviruses, vol 13 (11):933-943 ' SCHMIDT, R. West, J Cnops, G., Lov, K. Balestrazzi, A Dean C. 1996 Detailed description of four YAC contigs representing 17 Mb of chromosome 4 of Arabidopsis thaliana ecotype Columbia. Plant J. 9,5755-5765. .SAMBROOK J., FRITSCH E F. and T. MANIATIS, (1989), Molecular Cloning A Laboratory Manual 2ème ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor NEW YORK. #SCZAKIEL G. et al (1995) Trends. Microbiol., vol.3 (6).213-217 .SANDEZ-PESCADOR R., (1988), J. Clin. Microbiol , vol.26(10):1934, 1938 .TOLMASKY. M., E. and Crosa, J., H. (1984). Molecular cloning and expression of genetic determinants for the iron uptake system mediated by the Vibrio anguillarum plasmid pJM1. J Bacteriol 160, p860-866. .URDEA NS et al. (1988) , Nucleic Acids Research, vol.11: 4937-4957 #URDEA NS et al., (1991), Nucleic Acids Symp. Ser., vol.24:197-200 # WABIKO H et al., (1986), DBA, vol 5.(4): 305-314. #WOO, S -S, Jiang J , Gill, B. S., Paterson, A H and Wing, R. A 1994 Nuc Acid Res 22, p 4922-4931. LISTE DE SEQUENCES Institut National de la Recherche Agronomique (INRA) Centre National de la Recherche Scientifique (C.N.R.S) Nouvelle classe de protéines et leurs applications à la résistance de plantes à divers pathogènes INRA-RRS1 Résistance pathogènes 61 PatentIn Ver. 2.1 1 7936 ADN Arabidopsis thaliana 1 tccatggccc aaaagctttt tcccggtgta cttggacttt tcctcactgg tgtgcgttag 60 agtagcaaga atgtattgtt gactattctt ttctcttttt ttaaatacct ttttgttagt 120 ttttgctgtt ggaaaaatat caaatgtaaa aaaaacactg agatttgagt ggttgaatgt 180 ccaatgaaaa agcatcgtcg gcataaacaa aaattccggc gaaatctaag gttagttcaa 240 agtatcaaag cgcgaaatca tgaccaattg tgaaaaggat gaggaattcg tgtgcatcag 300 ctgcgtagaa gaggtacggt actctttcgt gagccacctc tctgaagctc tccgtcgaaa 360 aggcataaat aatgtggtcg tagatgtaga tatcgatgat ctgcttttca aggagtctca 420 ggcaaagatc gagaaagctg gggtttctgt gatggtttta cccggaaact gtgacccttc 480 cgaggtatgg cttgacaagt tcgccaaggt tctcgagtgc caaaggaaca acaaggacca 540 ggcggtggtt tcagtgttgt acggtgacag tctattacgg gaccaatggc ttagcgagct 600 ggatttcaga ggcttatcac gaattcacca atccaggttt tcgctttatt ctactctctg 660 cttttttttt ccttatgttg aaaattggta aaactttttg gatggctagt gtagtgtttt 720 caatatttga tgaaatatgg tgcaggaagg aatgtagtga ctctatactt gtagaagaga 780 ttgtgagaga tgtgtacgag acgcactttt atgttggacg aattggaatc tattcgaagc 840 tgctggagat tgaaaacatg gttaacaagc aaccgatagg catccgttgt gttggaattt 900 ggggtatgcc tggcatagga aagacaacac ttgctaaagc agtctttgac caaatgtcta 960 gcgcctttga tgcttcttgt tttatcgaag actatgacaa atcaattcat gagaagggtc 1020 tttattgttt gctggaggaa caacttttgc cgggtaatga tgcaaccatt atgaaactga 1080 gctcgctcag agacagattg aacagtaaga gagttcttgt tgttctcgat gacgtgtgca 1140 atgctctggt tgcagagtct tttctcgagg ggtttgactg gctaggaccc ggaagcctga 1200 tcatcataac ctctagagat aaacaagtgt ttcgcctttg cggaatcaat caaatatatg 1260 aggtccaggg tttaaatgag aaagaggctc gtcaactttt cttgctgtct gcgtctataa 1320 tggaggatat gggagagcag aatctccatg agttgtcagt gagagtaata agttacgcta 1380 atggaaaccc gttagctatc agtgtttatg gaagagagct gaaaggtaag aaaaaactct 1440 cagaaatgga gactgcattc ctcaaactca agcgacgtcc tccatttaag attgtcgatg 1500 catttaaaag cagctacgac acactcagtg acaacgaaaa gaacattttt ttggacatag 1560 cttgtttttt ccagggagaa aatgtcaact acgtgataca actgcttgag ggttgtggtt 1620 tctttccaca tgttgaaatt gatgtccttg ttgacaagtg tctggtgact atttcagaaa 1680 accgagtttg gttgcataag ctgacccagg atatcggccg agaaatcata aatggagaaa 1740 cagtacagat cgagaggcgc agaagactgt gggaaccttg gagcatcaaa tatttattag 1800 aatataatga acacaaagca aatggagaac ctaaaacaac cttcaaacgt gctcaggttt 1860 gttatatttt gatagtttca tatttattct actttatgag ccaacggcct aatatatcca 1920 cttccaatat tttcagggct ctgaagagat cgaaggcctg tttctagaca catcaaactt 1980 aagatttgat ctgcagccct ctgcctttaa gaatatgttg aaccttagat tgctcaaaat 2040 ttattgttcc aatcctgaag tccatcctgt aatcaatttc ccaacaggct ctctgcattc 2100 tcttcctaat gagctaagac tcctccattg ggagaactat cctctgaaat ctttgcctca 2160 gaattttgat cctaggcacc ttgtcgaaat caacatgccg tatagtcaac ttcagaaact 2220 ttggggtgga accaaggtaa gcaaactctg cgtctttcac atctatcatt acttgaaatt 2280 ttttgttgtt attcatttag cttgcttttg tttttgtctt ctcagaacct ggagatgttg 2340 aggacgatca ggctttgcca ttcccagcat ctagttgata tcgatgatct cttaaaagct 2400 gaaaatcttg aggtaattga tctccaaggt tgtacgagac tgcagaattt cccagccgca 2460 ggtcgattgc tacgtctacg agttgtaaat ctctcaggtt gcataaagat taaaagtgtc 2520 ctagaaattc caccaaatat tgagaaacta catctacagg gaactggcat attagcatta 2580 ccagtttcca ctgttaagcc aaaccataga gagcttgtga attttctaac agaaattccg 2640 ggtctttcag aggcctcgaa acttgagcgt ttaacaagtc tgctggaatc taactcatct 2700 tgtcaagatc ttgggaagct tatttgcttg gagctgaaag attgctcttg tttgcagagt 2760 ctgccaaaca tggctaattt agatcttaat gttcttgatc tctcgggttg ctcaagtctt 2820 aattctattc agggtttccc tcgttttctg aaacagttat atcttggtgg cactgcaata 2880 agagaagtgc cacaacttcc tcaaagtcta gaaatcttga atgcacatgg atcttgtttg 2940 cgaagtctgc caaacatggc taatttagaa tttctcaaag ttcttgatct ctctggttgc 3000 tcagagctcg agactattca gggttttcct cggaacctaa aagagttata ttttgctggc 3060 actacgttaa gagaagtgcc ccaacttcct ttaagcctag aggtcttgaa tgcacatggt 3120 tctgactcgg agaagcttcc tatgcattac aagttcaaca attttttcga tctatctcaa 3180 caagtggtca acgatttttt cttgaaagcg ctgacttatg taaaacacat accaagaggg 3240 tatacgcagg taatactctc tctccttctg cctctctctt gtctacttac ctctccatta 3300 gctctctttc tttccatcac cccctcaatc ctttctcttt ctctgtccgc ctatgtctcc 3360 cgctctctat agtgcctgtt atgtacaccc aaccacaccc tcctcatatc atatctgact 3420 tatttgtatt gcaacaggaa ctcatcaaca aagctccgac tttcagcttc agtgcgccct 3480 cacatacaaa tcaaaacgcc acatttgatc tgcaaccagg atcttctgta atgacacgac 3540 taaatcattc atggaggaac acgcttgtgg gatttggtat gctggtggaa gttgcatttc 3600 ccgaggacta ctgtgatgct acagatgttg gcataagttg tgtttgcaga tggagcaaca 3660 aagaaggccg ctcttgtagg atagaaagaa attttcattg ttgggcacca gggaaagttg 3720 ttccaaaagt tcgaaaggat catacgtttg tctttagtga tgtcaacatg cgcccaagta 3780 ccggtgaagg aaatgaccct gatatctggg ctggattagt tgtatttgag ttctttccta 3840 tcaatcagca gacaaagtgt ctaaatgata ggttcacagt gacaagatgt ggagtccgtg 3900 taataaatgt tgcaactggc aatacaagtc ttgagaacat atcactagtt ttgtctttgg 3960 atccagtgga ggtttctggt tatgaagtat tgagagtcag ctatgatgat ttacaggaga 4020 tggataaagt tctatttctt tacatagcgt ctttgttcaa tgacgaggat gttgattttg 4080 tggcaccact tattgccggt attgacttgg atgttagctc tgggctcaag gtcttagccg 4140 atgtgtctct cataagtgta tcatccaatg gggaaatagt gatgcatagt ttgcaaagac 4200 aaatgggcaa agaaatcctc catggacaat ccatgctgct gtctgattgt gagagttcca 4260 tgaccgagaa tttgtctgac gtaccaaaaa agtaagttct ctttttctat cagcttcata 4320 tacaaccgta gacttaaata aatttgaaaa tatttgagta catataatca cattaggtgc 4380 aatgaaaaaa cgtgtaattt attagattga actaaagttt acaaaaagcc attagagatg 4440 tatcagtatg ctaccttttc caagttgctt aataacatag gtttttcatg tttgtacttt 4500 ttagattaat ttaaaaatcc gtttttttct ccattcaaga ttttagaaaa gtttattttt 4560 tatttaatga aatattagat ttgttgtgaa aaagacatta atttacaatc agaggtaaaa 4620 tctctagaga catttggcat tttcgctcgg ctttctttgt taaatccttt tttcgtgagg 4680 attttagaaa agttgattgt gagctactca ccaaggtttc atctttttga aaaatactct 4740 tacataagat gtgtcaagga aatgttagtt tatctaacaa aaacccactt ctcaacgttt 4800 ccatatctat gtatcttttt actttcatga aaccatgaga gacatatatg cattatgaaa 4860 ttttctgaat tcttacattc cttatagaac ttctctccca cccacaaaga tttgggaatc 4920 attagtcttt tttttttttt ttcaattttc aattgatgtt tgcttttgtt ttacttctta 4980 ttatcatgtt aaaaactttt ttgatgccat aaaaataacc tttatacgta tgttgtaatc 5040 atttttatgg taacatacat tagattttta aactttgcca caaaaaaaaa aaaaaattag 5100 atttttaaaa ttctaaaagt agagttaaac tccgtgtcga tagcaaaaga gggttacatt 5160 acgtgttact ttttactttg tgtgattaat ctgcatttta gaggtagagg gtaaaattgc 5220 aaaaatttgg cgaatggaat ttttttttct tccacaaaac cttatcttaa accgaactga 5280 tcatggcaca cactaacatt gatcacagaa gtagctataa atcacaacat ataatcacat 5340 gggtttcgat atatgttata tcgacgttgg atgcagggag aagaaacatc gcgaaagtaa 5400 ggtaaagaaa gtggtttcca taccggctat agacgaggga gatctatgga cttggcgaaa 5460 gtacggtcaa aaagacatct taggttctcg ttttccaagg tacactcatg tatttttgta 5520 tatacatatt cctatatttg tgtatatatt atattcttta caaacataat aaatagttat 5580 acatataaac aaattattta aatccaacaa aaacaaaata gtattttaca ataggaaagt 5640 tttgtaacaa cttgcaaaac accatttttt atacacaaac gtaatcatcc taaacttgct 5700 ggtggcctgg taaaccttca tatgttgctg gaaaagtgaa tatttctaag aaaaaacaaa 5760 aattattaac cattgaaaaa gtcacattaa gcagaatctg cagactgcag ctttgttttt 5820 ccccttcact aacagtattg cagataaaat cattagcgtg aaactgtaaa atagaaagtt 5880 catttaatta tctacggcgc aaattataag cctttaaatt cttttttatg atgcagactt 5940 atcttataat cacaatattc catttgaagg atattataga tgtgtttttt tttttttaat 6000 ccagttgtgc gtaagtgatc aaattatggt tagttatgac ttttgatggt cacttgatga 6060 cttaattaat tatttgttcc tcaggggtta ctacaggtgc gcttacaagt tcacgcatgg 6120 ttgtaaagct acaaaacaag tccaacggag cgagaccgat tcaaacatgt tagctattac 6180 ttacctatct gagcataacc atccacggcc cactaaacgc aaggctctcg ctgactccac 6240 tcgttccact tcctcctcca tctgctcagc cataactacc tctgcctcat ctagagtctt 6300 ccaaaacaaa gacgaaccaa atcaacccca cttgccttcc tcctccactc ctcctagaaa 6360 cgcggctgtc ttgtttaaaa tgacggacat ggaggagttt caggacaata tggaggtgga 6420 taatgacgtc gtagatacac gtacactggc attgtttcca gagtttcaac atcagccgga 6480 ggaagaagac ccatggtcaa cattcttcga tgattataat ttttactttt gattgagctc 6540 actctcatca ctgcaagaca agaaaaaata accagtgaga tccaaggatt tatgtacacc 6600 caaggattta gtttttgcag tgtcaatgat tttcagccaa taataaatca ttaatttcaa 6660 ttaccagtcc tccccaacct gtaaacccat catgcctcca acatacggtg atctcgacaa 6720 attcgaaagc ctaataccaa ggatacatgt atcacagtag gatttctcaa tcctgatgca 6780 ctcgaagagg aatagatctt aagaaatcat taagccttat gaaagcaagg aaagaaatgg 6840 ctgagatgtc ttacgtacgt tgattacaaa tagaggcaat caacacaaca attgttttgt 6900 tgtgggtttt gtgtcgatat accattgcgg ttaagagcct gccaaatggg tatgtaagct 6960 agagatctct ctcatgtgtt tattctcttt gatttgtgta aagctttgaa ctttcctatt 7020 ttcaataaaa ccatagtctg aagaggtgaa tttcgttatc cctattttca actaaagatg 7080 tagtatatga aaattaccta aaatcttttt caaaatcctt tcttaaaagg tttgataatt 7140 tttgaataac aatggatttg atttgagttt cacaaatcat tgattgaata gaagaaaagg 7200 atggtaaatg attttgaatt attttacata aatcaataat taataacagg tgattaataa 7260 aaaagactcg aaatcttcaa agagcatctc cataagagta tcttaacaat aaaatgacat 7320 tatttctata gaatttagtt gtttaattaa atttaaattt gttacaaaat taacccaaca 7380 atcaagtgac atgggtaaaa tagagtttct aaatcataag tttctcaaaa gttacatgtg 7440 taatataccg gctatgcttt ggtttctgtt gtctgtgaag atgatccttc tggaaggtct 7500 cgaaggcttc ctctggactc cccttcgatt catgtttctg tattgacgcg atgtctagat 7560 cttccgtttg tgacatagtg aatgaattaa gaaggggttt gtttctttca gtagtttaag 7620 gatgcgtttt gtaacctcgg aattagtttg gactcggcca cttgtgtatt tctaagttct 7680 tagtatttga tctttggctt gctttgtggt tacctttcct tcaagcttta ggattttagt 7740 agttgagact cttgcagaag tttaggattg attggattgc actcatggct ccactgggtc 7800 gcgcgttaag tgtaaaggtt cctaggacgg gggttaagtg agagatttga tttgtcctct 7860 cttagtattt tattttctgc ttgaactttc tgatatatct cctctatgtc ttagatcctt 7920 cttagtttga tccatt 7936 2 259 ADN Arabidopsis thaliana 2 tccatggccc aaaagctttt tcccggtgta cttggacttt tcctcactgg tgtgcgttag 60 agtagcaaga atgtattgttgactattctt ttctcttttt ttaaatacct ttttgttagt 120 ttttgctgtt ggaaaaatat caaatgtaaa aaaaacactg agatttgagt ggttgaatgt 180 ccaatgaaaa agcatcgtcg gcataaacaa aaattccggc gaaatctaag gttagttcaa 240 agtatcaaag cgcgaaatc 259 3 1404 ADN Arabidopsis thaliana 3 ttgagctcac tctcatcact gcaagacaag aaaaaataac cagtgagatc caaggattta 60 tgtacaccca aggatttagt ttttgcagtg tcaatgattt tcagccaata ataaatcatt 120 aatttcaatt accagtcctc cccaacctgt aaacccatca tgcctccaac atacggtgat 180 ctcgacaaat tcgaaagcct aataccaagg atacatgtat cacagtagga tttctcaatc 240 ctgatgcact cgaagaggaa tagatcttaa gaaatcatta agccttatga aagcaaggaa 300 agaaatggct gagatgtctt acgtacgttg attacaaata gaggcaatca acacaacaat 360 tgttttgttg tgggttttgt gtcgatatac cattgcggtt aagagcctgc caaatgggta 420 tgtaagctag agatctctct catgtgttta ttctctttga tttgtgtaaa gctttgaact 480 ttcctatttt caataaaacc atagtctgaa gaggtgaatt tcgttatccc tattttcaac 540 taaagatgta gtatatgaaa attacctaaa atctttttca aaatcctttc ttaaaaggtt 600 tgataatttt tgaataacaa tggatttgat ttgagtttca caaatcattg attgaataga 660 agaaaaggat ggtaaatgat tttgaattat tttacataaa tcaataatta ataacaggtg 720 attaataaaa aagactcgaa atcttcaaag agcatctcca taagagtatc ttaacaataa 780 aatgacatta tttctataga atttagttgt ttaattaaat ttaaatttgt tacaaaatta 840 acccaacaat caagtgacat gggtaaaata gagtttctaa atcataagtt tctcaaaagt 900 tacatgtgta atataccggc tatgctttgg tttctgttgt ctgtgaagat gatccttctg 960 gaaggtctcg aaggcttcct ctggactccc cttcgattca tgtttctgta ttgacgcgat 1020 gtctagatct tccgtttgtg acatagtgaa tgaattaaga aggggtttgt ttctttcagt 1080 agtttaagga tgcgttttgt aacctcggaa ttagtttgga ctcggccact tgtgtatttc 1140 taagttctta gtatttgatc tttggcttgc tttgtggtta cctttccttc aagctttagg 1200 attttagtag ttgagactct tgcagaagtt taggattgat tggattgcac tcatggctcc 1260 actgggtcgc gcgttaagtg taaaggttcc taggacgggg gttaagtgag agatttgatt 1320 tgtcctctct tagtatttta ttttctgctt gaactttctg atatatctcc tctatgtctt 1380 agatccttct tagtttgatc catt 1404 4 4343 ADN Arabidopsis thaliana 4 gtccaatgaa aaagcatcgt cggcataaac aaaaattccg gcgaaatcta aggttagttc 60 aaagtatcaa agcgcgaaat catgaccaat tgtgaaaagg atgaggaatt cgtgtgcatc 120 agctgcgtag aagaggtacg gtactctttc gtgagccacc tctctgaagc tctccgtcga 180 aaaggcataa ataatgtggt cgtagatgta gatatcgatg atctgctttt caaggagtct 240 caggcaaaga tcgagaaagc tggggtttct gtgatggttt tacccggaaa ctgtgaccct 300 tccgaggtat ggcttgacaa gttcgccaag gttctcgagt gccaaaggaa caacaaggac 360 caggcggtgg tttcagtgtt gtacggtgac agtctattac gggaccaatg gcttagcgag 420 ctggatttca gaggcttatc acgaattcac caatccagga aggaatgtag tgactctata 480 cttgtagaag agattgtgag agatgtgtac gagacgcact tttatgttgg acgaattgga 540 atctattcga agctgctgga gattgaaaac atggttaaca agcaaccgat aggcatccgt 600 tgtgttggaa tttggggtat gcctggcata ggaaagacaa cacttgctaa agcagtcttt 660 gaccaaatgt ctagcgcctt tgatgcttct tgttttatcg aagactatga caaatcaatt 720 catgagaagg gtctttattg tttgctggag gaacaacttt tgccgggtaa tgatgcaacc 780 attatgaaac tgagctcgct cagagacaga ttgaacagta agagagttct tgttgttctc 840 gatgacgtgt gcaatgctct ggttgcagag tcttttctcg aggggtttga ctggctagga 900 cccggaagcc tgatcatcat aacctctaga gataaacaag tgtttcgcct ttgcggaatc 960 aatcaaatat atgaggtcca gggtttaaat gagaaagagg ctcgtcaact tttcttgctg 1020 tctgcgtcta taatggagga tatgggagag cagaatctcc atgagttgtc agtgagagta 1080 ataagttacg ctaatggaaa cccgttagct atcagtgttt atggaagaga gctgaaaggt 1140 aagaaaaaac tctcagaaat ggagactgca ttcctcaaac tcaagcgacg tcctccattt 1200 aagattgtcg atgcatttaa aagcagctac gacacactca gtgacaacga aaagaacatt 1260 tttttggaca tagcttgttt tttccaggga gaaaatgtca actacgtgat acaactgctt 1320 gagggttgtg gtttctttcc acatgttgaa attgatgtcc ttgttgacaa gtgtctggtg 1380 actatttcag aaaaccgagt ttggttgcat aagctgaccc aggatatcgg ccgagaaatc 1440 ataaatggag aaacagtaca gatcgagagg cgcagaagac tgtgggaacc ttggagcatc 1500 aaatatttat tagaatataa tgaacacaaa gcaaatggag aacctaaaac aaccttcaaa 1560 cgtgctcagg gctctgaaga gatcgaaggc ctgtttctag acacatcaaa cttaagattt 1620 gatctgcagc cctctgcctt taagaatatg ttgaacctta gattgctcaa aatttattgt 1680 tccaatcctg aagtccatcc tgtaatcaat ttcccaacag gctctctgca ttctcttcct 1740 aatgagctaa gactcctcca ttgggagaac tatcctctga aatctttgcc tcagaatttt 1800 gatcctaggc accttgtcga aatcaacatg ccgtatagtc aacttcagaa actttggggt 1860 ggaaccaaga acctggagat gttgaggacg atcaggcttt gccattccca gcatctagtt 1920 gatatcgatg atctcttaaa agctgaaaat cttgaggtaa ttgatctcca aggttgtacg 1980 agactgcaga atttcccagc cgcaggtcga ttgctacgtc tacgagttgt aaatctctca 2040 ggttgcataa agattaaaag tgtcctagaa attccaccaa atattgagaa actacatcta 2100 cagggaactg gcatattagc attaccagtt tccactgtta agccaaacca tagagagctt 2160 gtgaattttc taacagaaat tccgggtctt tcagaggcct cgaaacttga gcgtttaaca 2220 agtctgctgg aatctaactc atcttgtcaa gatcttggga agcttatttg cttggagctg 2280 aaagattgct cttgtttgca gagtctgcca aacatggcta atttagatct taatgttctt 2340 gatctctcgg gttgctcaag tcttaattct attcagggtt tccctcgttt tctgaaacag 2400 ttatatcttg gtggcactgc aataagagaa gtgccacaac ttcctcaaag tctagaaatc 2460 ttgaatgcac atggatcttg tttgcgaagt ctgccaaaca tggctaattt agaatttctc 2520 aaagttcttg atctctctgg ttgctcagag ctcgagacta ttcagggttt tcctcggaac 2580 ctaaaagagt tatattttgc tggcactacg ttaagagaag tgccccaact tcctttaagc 2640 ctagaggtct tgaatgcaca tggttctgac tcggagaagc ttcctatgca ttacaagttc 2700 aacaattttt tcgatctatc tcaacaagtg gtcaacgatt ttttcttgaa agcgctgact 2760 tatgtaaaac acataccaag agggtatacg caggaactca tcaacaaagc tccgactttc 2820 agcttcagtg cgccctcaca tacaaatcaa aacgccacat ttgatctgca accaggatct 2880 tctgtaatga cacgactaaa tcattcatgg aggaacacgc ttgtgggatt tggtatgctg 2940 gtggaagttg catttcccga ggactactgt gatgctacag atgttggcat aagttgtgtt 3000 tgcagatgga gcaacaaaga aggccgctct tgtaggatag aaagaaattt tcattgttgg 3060 gcaccaggga aagttgttcc aaaagttcga aaggatcata cgtttgtctt tagtgatgtc 3120 aacatgcgcc caagtaccgg tgaaggaaat gaccctgata tctgggctgg attagttgta 3180 tttgagttct ttcctatcaa tcagcagaca aagtgtctaa atgataggtt cacagtgaca 3240 agatgtggag tccgtgtaat aaatgttgca actggcaata caagtcttga gaacatatca 3300 ctagttttgt ctttggatcc agtggaggtt tctggttatg aagtattgag agtcagctat 3360 gatgatttac aggagatgga taaagttcta tttctttaca tagcgtcttt gttcaatgac 3420 gaggatgttg attttgtggc accacttatt gccggtattg acttggatgt tagctctggg 3480 ctcaaggtct tagccgatgt gtctctcata agtgtatcat ccaatgggga aatagtgatg 3540 catagtttgc aaagacaaat gggcaaagaa atcctccatg gacaatccat gctgctgtct 3600 gattgtgaga gttccatgac cgagaatttg tctgacgtac caaaaaagga gaagaaacat 3660 cgcgaaagta aggtaaagaa agtggtttcc ataccggcta tagacgaggg agatctatgg 3720 acttggcgaa agtacggtca aaaagacatc ttaggttctc gttttccaag gggttactac 3780 aggtgcgctt acaagttcac gcatggttgt aaagctacaa aacaagtcca acggagcgag 3840 accgattcaa acatgttagc tattacttac ctatctgagc ataaccatcc acggcccact 3900 aaacgcaagg ctctcgctga ctccactcgt tccacttcct cctccatctg ctcagccata 3960 actacctctg cctcatctag agtcttccaa aacaaagacg aaccaaatca accccacttg 4020 ccttcctcct ccactcctcc tagaaacgcg gctgtcttgt ttaaaatgac ggacatggag 4080 gagtttcagg acaatatgga ggtggataat gacgtcgtag atacacgtac actggcattg 4140 tttccagagt ttcaacatca gccggaggaa gaagacccat ggtcaacatt cttcgatgat 4200 tataattttt acttttgatt gagctcactc tcatcactgc aagacaagaa aaaataacca 4260 gtgagatcca aggatttatg tacacccaag gatttagttt ttgcagtgtc aatgattttc 4320 agccaataat aaatcattaa ttt 4343 5 9399 ADN Arabidopsis thaliana 5 gcatgcctcg aaaacttgcc ctgccacgtc ttatatagct ctttcaggag tgtggtttta 60 ccaattccgg gcatcccaac aactccaatg atacgagttc ccttgtattt atcacgatcc 120 aacttctctt ccaaatcttt taaccgttgt tcgtttccaa aagtctcatg ctttttgtct 180 cctgaggaag ttccagcgtt gctattacct aaagcaccca cgacggcgtt gtgacttccc 240 tccggtggta ttccggtcaa cgctgtcttc accgccttca caatttcatt gactttctca 300 ctctccacac tgcaatttca aggctaatga gatcatgacc tccctaagtt ccataaaagg 360 ttctagaagt attcatagat ctgtctacaa ttgtaatcta atcactactg tgtctaggtt 420 tgtaactgag tcaaaaaaaa taaaaaaaaa tggtaccttt tcttgtcaat gatgatgccc 480 ataatgttag gaatcaagtt aaaagcttcc ttccatttct ttttcctctc atcaccctta 540 gccatactcc taaatctatc accgaacttt cctttcaaat ctctaacggt ggatggctcc 600 agcttgtaga agattggaat cgcaacgagt gttccttcat ccgtacaatc tttgatcttc 660 tccagctctc tcacgcacca gactgactcg gtgtagttgc cggagaagat agccaaaacg 720 attttggact cctctatcct cttcagcagt acatctagag gttgacctct gtcttcatag 780 tcgtcgataa agacgttgat gttgttcaat ttcaaggccg ttacgagatg gctgacgaat 840 ctccggcgca aatctgcccc acggaaattg atgaacacct gatgctgcgg tggcttgtct 900 tccacagtgg aaatagatga tgtctccatg gcccaaaagc tttttcccgg tgtacttgga 960 cttttcctca ctggtgtgcg ttagagtagc aagaatgtat tgttgactat tcttttctct 1020 ttttttaaat acctttttgt tattttttgc tgttggaaaa atatcaaatg taaaaaaaca 1080 actgagattt gagtggttga atgtccaatg aaaaagcatc gtcggcataa acaaaaattc 1140 cggcgaaatc aaaggttagt tcaaagtatc aaagcgcgaa atcatgacca attgtgaaaa 1200 ggatgaggaa ttcgtgtgca tcagctgcgt agaagaggta cggtactctt tcgtgagcca 1260 cctctctgaa gctctccgtc gaaaaggcat aaataatgtg gtcgtagatg tagatatcga 1320 tgatctgctt ttcaaggagt ctcaggcaaa gatcgagaaa gctggggttt ctgtgatggt 1380 tttacccgga aactgtgatc cttccgaggt atggcttgac aagttcgcca aggttctcga 1440 gtgccaaagg aacaacaagg accaggcggt ggtttcagtg ttgtacggtg acagtctatt 1500 acgggaccaa tggcttagcg agctggattt cagaggctta tcacgaattc accaatccag 1560 gttttcgctt tattctactc tctgcttttt ttttccttat gttgaaaatt ggtaaaactt 1620 tttggatggc tagtgtagtg ttttcaatat ttgatgaaat atggtgcagg aaggaatgta 1680 gtgactctat acttgtagaa gagattgtga gagatgtgta cgagacgcac ttttatgttg 1740 gacgaattgg aatctattcg aagctgctgg agattgaaaa catggttaac aagcaaccga 1800 taggcatccg ttgtgttgga atttggggta tgcctggcat aggaaagaca acacttgcta 1860 aagcagtctt tgaccaaatg tctagcgcct ttgatgcttc ttgttttatc gaagactatg 1920 acaaatcaat tcatgagaag ggtctttatt gtttgctgga ggaacaactt ttgccgggca 1980 atgatgcaac cattatgaaa ctgagctcgc tcagagacag attgaacagt aagagagttc 2040 ttgttgttct cgatgacgtg cgcaatgctc tggttgggga gtcctttctc gaggggtttg 2100 actggctagg acccggaagc ctgatcatca taacctctag agataaacaa gtgttttgcc 2160 tttgcggaat caatcaaata tatgaggtcc agggtttaaa tgagaaagag gctcgtcaac 2220 ttttcttgct gtctgcgtct ataaaggagg atatgggaga gcagaatctc caggagttgt 2280 cagtgagagt aataaattat gctaatggaa acccgttagc tatcagtgtt tatggaagag 2340 agctgaaagg taagaaaaaa ctctcagaaa tggagactgc attcctcaaa ctcaagcgac 2400 gtcctccatt taagattgtc gatgcattta aaagcaccta tgacacactc agtgacaacg 2460 aaaagaacat ttttttggac atagcttgtt tcttccaggg agaaaatgtc aactacgtga 2520 tacaactgct tgagggttgt ggtttctttc cacatgttga aattgatgtc cttgttgaca 2580 agtgtctggt aactatttca gaaaaccgag tttggttgca taagctgacc caggatatcg 2640 gccgagaaat cataaatgga gaaacagtac agatcgagag gcgcagaaga ctgtgggaac 2700 cttggagcat caaatattta ttagaatata atgaacacaa agcaaatgga gaacctaaaa 2760 caaccttcaa acgtgctcag gtttgttata ttttgatagt ttcatatttt ttctacttta 2820 tgagccaacg gcctaatata tccacttcca atattttcag ggctctgaag agatcgaagg 2880 cctgtttcta gacacatcaa acttaagatt tgatctgcag ccctctgcct ttaagaatat 2940 gttgaacctt agattgctca aaatttattg ttccaatcct gaagtccatc ctgtaatcaa 3000 tttcccaaca ggctctctgc attctcttcc taatgagcta agactcctcc attgggagaa 3060 ctatcctctg aaatctttgc ctcagaattt tgatccaagg caccttgtcg aaatcaacat 3120 gccgtatagt caacttcaga aactttgggg tggaaccaag gtaagcaatc tctgatatgc 3180 gtcgttcacc cttatcatta cttgacaaat tttgttgtta ttcatttagc ttgctttttt 3240 tttgtcttct cagaacctgg agatgttgag gacgatcagg ctttgccatt cccaccatct 3300 agttgatatc gatgatctct taaaagctga aaatcttgag gtaattgatc tccaaggttg 3360 tacgagactg cagaatttcc cagccgcagg tcgattgcta cgtctacgag ttgtaaatct 3420 ctcaggttgc ataaagatta aaagtgtcct agaaattcca ccaaatattg agaaactaca 3480 tctacaggga actggcatat tagcattacc agtttccact gttaagccaa accatagaga 3540 gcttgtgaat tttctaacag aaattccggg tctttcagag gaacttgagc gtttaacaag 3600 tctgctggaa tctaactcat cttgtcaaga tcttgggaag cttatttgct tggagctgaa 3660 agattgctct tgtttgcaga gtctgccaaa catggctaat ttagatctta atgttcttga 3720 tctctcgggt tgctcaagtc ttaattctat tcagggtttc cctcgttttc tgaaacagtt 3780 atatcttggt ggcactgcaa taagagaagt gccacaactt cctcaaagtc tagaaatctt 3840 gaatgcacat ggatcttgtt tgcgaagtct gccaaacatg gctaatttag aatttctcaa 3900 agttcttgat ctctctggtt gctcagagct cgagactatt cagggttttc ctcggaacct 3960 aaaagagtta tattttgctg gcactacgtt aagagaagtg ccccaacttc ctttaagcct 4020 agaggtcttg aatgcacatg gttctgactc ggagaagctt cctatgcatt acaagttcaa 4080 caattttttc gatctatctc aacaagtggt caacgatttt ttattgaaaa cgctgactta 4140 tgtaaaacac ataccaagag ggtatacgca ggtaatactc tctctccttc tgcctctctc 4200 ttgtctactt acctctccat tagctctctt tctttccatc accccctcaa tcctttctct 4260 ttctctgttc gcctatgtct cccgctctct atagtgcctg ttatgtacac ccaaccacac 4320 cctcctcata tcatatctga cttatttgta ttgcaacagg aactcatcaa caaagctccg 4380 actttcagct tcagtgcgcc ctcacataca aatcaaaacg ccacatttga tctgcaatca 4440 ggatcttctg taatgacacg actaaatcat tcatggagga acacgcttgt gggatttggt 4500 atgctggtgg aagttgcatt tcccgaggac tactgtgatg ctacagatgt tggcataagt 4560 tgtgtttgca gatggagcaa caaagaaggc cgctcttgta ggatagaaag aaaatttcat 4620 tgttgggcac catggcaagt tgttccaaaa gttcgaaagg atcatacgtt tgtctttagt 4680 gatgtcaaca tgcgcccaag taccggtgaa ggaaatgacc ctgatatctg ggctggatta 4740 gttgtatttg agttctttcc tatcaatcag cagacaaagt gtctaaatga taggttcaca 4800 gtgagaagat gtggagtccg tgtaataaat gttgcaactg gcaatacaag tcttgagaac 4860 atagcactag ttttgtcttt ggatccagta gaggtttccg gttatgaagt attgagagtc 4920 agctatgatg atttacagga gatggataaa gttctatttc tttacatagc gtctttgttc 4980 aatgacgagg atgttgattt tgtggcacca cttattgccg gtattgactt ggatgttagc 5040 tctgggctca aggtcttagc cgatgtgtct ctcataagtg tatcatcaaa tggggaaata 5100 gtgatgcata gtttgcaaag acaaatgggt aaagaaatcc tccatggaca atccatgctg 5160 ctgtctgatt gtgagagttc catgaccgag aatttgtctg acgtaccaaa aaagtaagtt 5220 ctctttttct atcagcttca tatacaaccg tagacttaaa taaatttgaa aatatttgag 5280 tacataaaat cacattaggt gcaatgaaaa aacgtgcaat ttattagatt gaactaaagt 5340 ttacaaaaaa gccattagag atgtaccagt atgctacctt ttccaagttg cttaataaca 5400 taggtttttc atgtttgtac tttttagatt aatttaaaaa tccgtttttt actccattca 5460 agattttaga aaagtttatt ttttatttaa tgaaatatta gatttgttgt gaaaaagaca 5520 ttaatttaca atcagaggta aaatctctag agacatttgg catttttgct cggctttctt 5580 tgttaaatcc ttttttcgtg aggattttag aaaagttgat tgtgagctac tcaccaaggt 5640 ttcatctttt tgaaaaatac tcttacataa gatgtgtcaa ggaaatgtta gtttatctaa 5700 caaaaaccca cttctcaacg tttccatatc tatgtatctt tttactttca tgaaaccatg 5760 agagacatat atgcattatg aaattttctg aattcttaca ttccttatag aacttctctc 5820 ccacccacaa agatttggga atcattagtc ttttttattt tttttcaatt ttcaattgat 5880 gtttgctttt gttttacttc ttattatcat gttaaaaact tttttgatgc cataaaaata 5940 acctttatac gtatgttgta atcgttttta tggtaacata tattagattt ttaaactttg 6000 caaaaaaaaa aaaaaaaaaa acattagatt tttaaaattc taaaagtagg gttaaactcc 6060 gtgtcgatag caaaaaaggg ttacattacg tgttactttt tactttgtgt gattaatttg 6120 cattttagag gtagagggta aaattgcaaa aatttggcga atgaaaattt ttttttgcac 6180 aaaaccttat cttaaaccga actgatcatg gcacacacta acattgatca cagaactagc 6240 tataaatcac aatatataat cacatgggtt tcgatatatg ttatatcgac gttggatgca 6300 ggaagaagaa acatagcgaa agtagggtaa agaaagtggt ttccataccg gctatagacg 6360 agggagatct atggacttgg cgaaagtacg gtcaaaaaga catcttaggt tctcgttttc 6420 caaggtacac tcatgtattt ttgtatatac atattcctat atttgtgtat atattatatt 6480 ctttacaaac ataataaata gttatacata taaacaaatt atttaaatcc aacaaaaaca 6540 aaatagtatt ttacaaaagg aaagttttgt aacaacttgc aaaacaccat tttttataca 6600 caaacgtaat catcctaaac ttgctggtgg cctggtaaac cttcatatgt tgctggaaaa 6660 gtgaatattt ctaagaaaaa acaaaaatta ttaaccattg aaaaagtcac attaagcaga 6720 atactgcagc tttgtaaaat agaaagttca tttaattatc tacggcgcaa attataagcc 6780 tttaaattct tttttatgat gcagacttat cttataatca caatattcca tttgaaggat 6840 attatagatg tttttttttt tttttaatcc agttgtgcgt aagtgatcaa attatggtta 6900 gttatgactt ttgatggtca cttgatgact taattaatta tttgttcctc aggggttact 6960 acaggtgcgc ttacaagttc acgcatggtt gtaaagctac aaaacaagtc caacggagcg 7020 agaccgattc aaacatgtta gctattactt acctatctga gcataaccat ccacggccca 7080 ctaaacgcaa ggctctcgct gactccactc gttccacttc ctcctccatc tgctgagcca 7140 taactacctc tgcctcatct agagtcttcc aaaacaaaga cgaaccaaat caaccccact 7200 tgccttcctc ctccactcct cctggaaacg cggctgtctt gtttaaaatg acggacatgg 7260 aggagtttca ggacaatatg gaggtggata atgacgtcgt agatacacgt acactggcat 7320 tgtttccaga gtttcaacat cagccggagg aagaataccc atggtcaaca ttcttcgatg 7380 attataattt ttgtttttat tgagctcact ctcatcactg caagacaaga aaaaataacc 7440 agtgagatcc aaggatttat gtacacccaa ggatttagtt tttgcagtgt caatgatttt 7500 cagccaataa taaatcatta atttcaatta ccagtcctcc ccaacctgta aacccatcat 7560 gcctccaaca tatggtgatc tcgacaaatt cgaaagccta ataccaagga tacatgtatc 7620 acagtaggat ttctcaatcc tgatgcactc gaagaggaat agatcttaag aaatcattaa 7680 gccttatgaa agcaaggaaa gaaatggctg agatgtctta cgttgattac aaatagaggc 7740 aatcaacaca acaattgttt tgttgtgggt tttgtgtcga tataccattg cggttaagag 7800 cctgccaaat gggtatgtaa gctagagatc tctctcatgt gtttattctc tttgatttgt 7860 gtaaagcttt gaactttcct attttcaata aaaccatagt ctgaagaggt gaatttcttt 7920 atccctattt tcaactaaag atgtagtata tgaaaattac ctaaaatctt tttcaaaatc 7980 ctttcttaaa aggtttgata atttttgaat aacaatggat ttgatttgag tttcacaaat 8040 cattgattga atagaagaaa aggatggtaa atgattttga attattttac ataaatcaat 8100 aattaataac aggtgattaa taaaaaagac tctaaatctt caaagagcat ctccataaga 8160 gtatcttaac aataaaatga tattatttct atagaattta gttgtttaat taaatttaaa 8220 tttgttacaa aattaaccca acaatcaagt gacatgggta aaatagagtt tctaaatcat 8280 aagtttctca aaagttacat gtgtaatata ccggctatgc tttggtttct gttgtctgtg 8340 aagatgatcc ttctggaagg tctcgaaggc ttcctctgga ctccccttcg attcatgttt 8400 ctgtattgac gcgatgtcta gatcttccgt ttgtgacata gtgaatgaat taagaagggg 8460 tttgtttctt tcagtagttt aaggatgcgt tttgtaacct cggaattagt ttggactcgg 8520 ccacttgtgt atttctaagt tcttagtatt tgatctttgg cttgctttgt ggttaccttt 8580 ccttcaagct ttaggatttt agtagttgag actcttgcag aagtttagga ttgattggat 8640 tgcactcatg gctccgctgg gtcgcgcgtt aagtgtaaag gttcctagga cgggggttaa 8700 gtgagagatt tgatttgtcc tctcttagta ttttattttc tgcttgaact ttctgatata 8760 tctcctctat gtctttgatc cttcttagtt tgatccattt cttttgacct tgctaagatg 8820 gtttcaaggc ttaatttcat attttggcaa aaaacagatg gaatgcagtg ttatagtggg 8880 ttgaaaccgg agatattgag ttaatctctc ttccaccggt tgttgaaata ttttcaagcc 8940 tatggtaggt tttcatgtgc ccctttctcg taaaatcaac aagctgaagc actattggta 9000 tctcatgtag tgtttgaact actctcttat gtggtttaag attattaaga atttcacaat 9060 gcaaatcaca gatatgtaat cgagtagcta tgtgtttggc taaacaagag tttcgcattc 9120 caatgtatgg ttcctttgat tgatatataa aagttacact ttgtgaaaaa aaaaaaaaaa 9180 aaaaaacagg aatccttcac ttttttctat tacttttgaa attttttatt gtgattttag 9240 ataccctaat gaagatgcta taaagcaaat ccctctttct ttttatttct gctaaacaat 9300 atcaaaaatt ctgtgcacga acacatctct gcacaagttt gggtcgccat tttcaattat 9360 cccatattca ttggaggaaa tactaagaat agagcatgc 9399 6 1183 ADN Arabidopsis thaliana 6 gcatgcctcg aaaacttgcc ctgccacgtc ttatatagct ctttcaggag tgtggtttta 60 ccaattccgg gcatcccaac aactccaatg atacgagttc ccttgtattt atcacgatcc 120 aacttctctt ccaaatcttt taaccgttgt tcgtttccaa aagtctcatg ctttttgtct 180 cctgaggaag ttccagcgtt gctattacct aaagcaccca cgacggcgtt gtgacttccc 240 tccggtggta ttccggtcaa cgctgtcttc accgccttca caatttcatt gactttctca 300 ctctccacac tgcaatttca aggctaatga gatcatgacc tccctaagtt ccataaaagg 360 ttctagaagt attcatagat ctgtctacaa ttgtaatcta atcactactg tgtctaggtt 420 tgtaactgag tcaaaaaaaa taaaaaaaaa tggtaccttt tcttgtcaat gatgatgccc 480 ataatgttag gaatcaagtt aaaagcttcc ttccatttct ttttcctctc atcaccctta 540 gccatactcc taaatctatc accgaacttt cctttcaaat ctctaacggt ggatggctcc 600 agcttgtaga agattggaat cgcaacgagt gttccttcat ccgtacaatc tttgatcttc 660 tccagctctc tcacgcacca gactgactcg gtgtagttgc cggagaagat agccaaaacg 720 attttggact cctctatcct cttcagcagt acatctagag gttgacctct gtcttcatag 780 tcgtcgataa agacgttgat gttgttcaat ttcaaggccg ttacgagatg gctgacgaat 840 ctccggcgca aatctgcccc acggaaattg atgaacacct gatgctgcgg tggcttgtct 900 tccacagtgg aaatagatga tgtctccatg gcccaaaagc tttttcccgg tgtacttgga 960 cttttcctca ctggtgtgcg ttagagtagc aagaatgtat tgttgactat tcttttctct 1020 ttttttaaat acctttttgt tattttttgc tgttggaaaa atatcaaatg taaaaaaaca 1080 actgagattt gagtggttga atgtccaatg aaaaagcatc gtcggcataa acaaaaattc 1140 cggcgaaatc aaaggttagt tcaaagtatc aaagcgcgaa atc 1183 7 2263 ADN Arabidopsis thaliana 7 gccataacta cctctgcctc atctagagtc ttccaaaaca aagacgaacc aaatcaaccc 60 cacttgcctt cctcctccac tcctcctgga aacgcggctg tcttgtttaa aatgacggac 120 atggaggagt ttcaggacaa tatggaggtg gataatgacg tcgtagatac acgtacactg 180 gcattgtttc cagagtttca acatcagccg gaggaagaat acccatggtc aacattcttc 240 gatgattata atttttgttt ttattgagct cactctcatc actgcaagac aagaaaaaat 300 aaccagtgag atccaaggat ttatgtacac ccaaggattt agtttttgca gtgtcaatga 360 ttttcagcca ataataaatc attaatttca attaccagtc ctccccaacc tgtaaaccca 420 tcatgcctcc aacatatggt gatctcgaca aattcgaaag cctaatacca aggatacatg 480 tatcacagta ggatttctca atcctgatgc actcgaagag gaatagatct taagaaatca 540 ttaagcctta tgaaagcaag gaaagaaatg gctgagatgt cttacgttga ttacaaatag 600 aggcaatcaa cacaacaatt gttttgttgt gggttttgtg tcgatatacc attgcggtta 660 agagcctgcc aaatgggtat gtaagctaga gatctctctc atgtgtttat tctctttgat 720 ttgtgtaaag ctttgaactt tcctattttc aataaaacca tagtctgaag aggtgaattt 780 ctttatccct attttcaact aaagatgtag tatatgaaaa ttacctaaaa tctttttcaa 840 aatcctttct taaaaggttt gataattttt gaataacaat ggatttgatt tgagtttcac 900 aaatcattga ttgaatagaa gaaaaggatg gtaaatgatt ttgaattatt ttacataaat 960 caataattaa taacaggtga ttaataaaaa agactctaaa tcttcaaaga gcatctccat 1020 aagagtatct taacaataaa atgatattat ttctatagaa tttagttgtt taattaaatt 1080 taaatttgtt acaaaattaa cccaacaatc aagtgacatg ggtaaaatag agtttctaaa 1140 tcataagttt ctcaaaagtt acatgtgtaa tataccggct atgctttggt ttctgttgtc 1200 tgtgaagatg atccttctgg aaggtctcga aggcttcctc tggactcccc ttcgattcat 1260 gtttctgtat tgacgcgatg tctagatctt ccgtttgtga catagtgaat gaattaagaa 1320 ggggtttgtt tctttcagta gtttaaggat gcgttttgta acctcggaat tagtttggac 1380 tcggccactt gtgtatttct aagttcttag tatttgatct ttggcttgct ttgtggttac 1440 ctttccttca agctttagga ttttagtagt tgagactctt gcagaagttt aggattgatt 1500 ggattgcact catggctccg ctgggtcgcg cgttaagtgt aaaggttcct aggacggggg 1560 ttaagtgaga gatttgattt gtcctctctt agtattttat tttctgcttg aactttctga 1620 tatatctcct ctatgtcttt gatccttctt agtttgatcc atttcttttg accttgctaa 1680 gatggtttca aggcttaatt tcatattttg gcaaaaaaca gatggaatgc agtgttatag 1740 tgggttgaaa ccggagatat tgagttaatc tctcttccac cggttgttga aatattttca 1800 agcctatggt aggttttcat gtgccccttt ctcgtaaaat caacaagctg aagcactatt 1860 ggtatctcat gtagtgtttg aactactctc ttatgtggtt taagattatt aagaatttca 1920 caatgcaaat cacagatatg taatcgagta gctatgtgtt tggctaaaca agagtttcgc 1980 attccaatgt atggttcctt tgattgatat ataaaagtta cactttgtga aaaaaaaaaa 2040 aaaaaaaaaa caggaatcct tcactttttt ctattacttt tgaaattttt tattgtgatt 2100 ttagataccc taatgaagat gctataaagc aaatccctct ttctttttat ttctgctaaa 2160 caatatcaaa aattctgtgc acgaacacat ctctgcacaa gtttgggtcg ccattttcaa 2220 ttatcccata ttcattggag gaaatactaa gaatagagca tgc 2263 8 4336 ADN Arabidopsis thaliana 8 gtccaatgaa aaagcatcgt cggcataaac aaaaattccg gcgaaatcaa aggttagttc 60 aaagtatcaa agcgcgaaat catgaccaat tgtgaaaagg atgaggaatt cgtgtgcatc 120 agctgcgtag aagaggtacg gtactctttc gtgagccacc tctctgaagc tctccgtcga 180 aaaggcataa ataatgtggt cgtagatgta gatatcgatg atctgctttt caaggagtct 240 caggcaaaga tcgagaaagc tggggtttct gtgatggttt tacccggaaa ctgtgatcct 300 tccgaggtat ggcttgacaa gttcgccaag gttctcgagt gccaaaggaa caacaaggac 360 caggcggtgg tttcagtgtt gtacggtgac agtctattac gggaccaatg gcttagcgag 420 ctggatttca gaggcttatc acgaattcac caatccagga aggaatgtag tgactctata 480 cttgtagaag agattgtgag agatgtgtac gagacgcact tttatgttgg acgaattgga 540 atctattcga agctgctgga gattgaaaac atggttaaca agcaaccgat aggcatccgt 600 tgtgttggaa tttggggtat gcctggcata ggaaagacaa cacttgctaa agcagtcttt 660 gaccaaatgt ctagcgcctt tgatgcttct tgttttatcg aagactatga caaatcaatt 720 catgagaagg gtctttattg tttgctggag gaacaacttt tgccgggcaa tgatgcaacc 780 attatgaaac tgagctcgct cagagacaga ttgaacagta agagagttct tgttgttctc 840 gatgacgtgc gcaatgctct ggttggggag tcctttctcg aggggtttga ctggctagga 900 cccggaagcc tgatcatcat aacctctaga gataaacaag tgttttgcct ttgcggaatc 960 aatcaaatat atgaggtcca gggtttaaat gagaaagagg ctcgtcaact tttcttgctg 1020 tctgcgtcta taaaggagga tatgggagag cagaatctcc aggagttgtc agtgagagta 1080 ataaattatg ctaatggaaa cccgttagct atcagtgttt atggaagaga gctgaaaggt 1140 aagaaaaaac tctcagaaat ggagactgca ttcctcaaac tcaagcgacg tcctccattt 1200 aagattgtcg atgcatttaa aagcacctat gacacactca gtgacaacga aaagaacatt 1260 tttttggaca tagcttgttt cttccaggga gaaaatgtca actacgtgat acaactgctt 1320 gagggttgtg gtttctttcc acatgttgaa attgatgtcc ttgttgacaa gtgtctggta 1380 actatttcag aaaaccgagt ttggttgcat aagctgaccc aggatatcgg ccgagaaatc 1440 ataaatggag aaacagtaca gatcgagagg cgcagaagac tgtgggaacc ttggagcatc 1500 aaatatttat tagaatataa tgaacacaaa gcaaatggag aacctaaaac aaccttcaaa 1560 cgtgctcagg gctctgaaga gatcgaaggc ctgtttctag acacatcaaa cttaagattt 1620 gatctgcagc cctctgcctt taagaatatg ttgaacctta gattgctcaa aatttattgt 1680 tccaatcctg aagtccatcc tgtaatcaat ttcccaacag gctctctgca ttctcttcct 1740 aatgagctaa gactcctcca ttgggagaac tatcctctga aatctttgcc tcagaatttt 1800 gatccaaggc accttgtcga aatcaacatg ccgtatagtc aacttcagaa actttggggt 1860 ggaaccaaga acctggagat gttgaggacg atcaggcttt gccattccca ccatctagtt 1920 gatatcgatg atctcttaaa agctgaaaat cttgaggtaa ttgatctcca aggttgtacg 1980 agactgcaga atttcccagc cgcaggtcga ttgctacgtc tacgagttgt aaatctctca 2040 ggttgcataa agattaaaag tgtcctagaa attccaccaa atattgagaa actacatcta 2100 cagggaactg gcatattagc attaccagtt tccactgtta agccaaacca tagagagctt 2160 gtgaattttc taacagaaat tccgggtctt tcagaggaac ttgagcgttt aacaagtctg 2220 ctggaatcta actcatcttg tcaagatctt gggaagctta tttgcttgga gctgaaagat 2280 tgctcttgtt tgcagagtct gccaaacatg gctaatttag atcttaatgt tcttgatctc 2340 tcgggttgct caagtcttaa ttctattcag ggtttccctc gttttctgaa acagttatat 2400 cttggtggca ctgcaataag agaagtgcca caacttcctc aaagtctaga aatcttgaat 2460 gcacatggat cttgtttgcg aagtctgcca aacatggcta atttagaatt tctcaaagtt 2520 cttgatctct ctggttgctc agagctcgag actattcagg gttttcctcg gaacctaaaa 2580 gagttatatt ttgctggcac tacgttaaga gaagtgcccc aacttccttt aagcctagag 2640 gtcttgaatg cacatggttc tgactcggag aagcttccta tgcattacaa gttcaacaat 2700 tttttcgatc tatctcaaca agtggtcaac gattttttat tgaaaacgct gacttatgta 2760 aaacacatac caagagggta tacgcaggaa ctcatcaaca aagctccgac tttcagcttc 2820 agtgcgccct cacatacaaa tcaaaacgcc acatttgatc tgcaatcagg atcttctgta 2880 atgacacgac taaatcattc atggaggaac acgcttgtgg gatttggtat gctggtggaa 2940 gttgcatttc ccgaggacta ctgtgatgct acagatgttg gcataagttg tgtttgcaga 3000 tggagcaaca aagaaggccg ctcttgtagg atagaaagaa aatttcattg ttgggcacca 3060 tggcaagttg ttccaaaagt tcgaaaggat catacgtttg tctttagtga tgtcaacatg 3120 cgcccaagta ccggtgaagg aaatgaccct gatatctggg ctggattagt tgtatttgag 3180 ttctttccta tcaatcagca gacaaagtgt ctaaatgata ggttcacagt gagaagatgt 3240 ggagtccgtg taataaatgt tgcaactggc aatacaagtc ttgagaacat agcactagtt 3300 ttgtctttgg atccagtaga ggtttccggt tatgaagtat tgagagtcag ctatgatgat 3360 ttacaggaga tggataaagt tctatttctt tacatagcgt ctttgttcaa tgacgaggat 3420 gttgattttg tggcaccact tattgccggt attgacttgg atgttagctc tgggctcaag 3480 gtcttagccg atgtgtctct cataagtgta tcatcaaatg gggaaatagt gatgcatagt 3540 ttgcaaagac aaatgggtaa agaaatcctc catggacaat ccatgctgct gtctgattgt 3600 gagagttcca tgaccgagaa tttgtctgac gtaccaaaaa agaagaagaa acatagcgaa 3660 agtagggtaa agaaagtggt ttccataccg gctatagacg agggagatct atggacttgg 3720 cgaaagtacg gtcaaaaaga catcttaggt tctcgttttc caaggggtta ctacaggtgc 3780 gcttacaagt tcacgcatgg ttgtaaagct acaaaacaag tccaacggag cgagaccgat 3840 tcaaacatgt tagctattac ttacctatct gagcataacc atccacggcc cactaaacgc 3900aaggctctcg ctgactccac tcgttccact tcctcctcca tctgctgagc cataactacc 3960 tctgcctcat ctagagtctt ccaaaacaaa gacgaaccaa atcaacccca cttgccttcc 4020 tcctccactc ctcctggaaa cgcggctgtc ttgtttaaaa tgacggacat ggaggagttt 4080 caggacaata tggaggtgga taatgacgtc gtagatacac gtacactggc attgtttcca 4140 gagtttcaac atcagccgga ggaagaatac ccatggtcaa cattcttcga tgattataat 4200 ttttgttttt attgagctca ctctcatcac tgcaagacaa gaaaaaataa ccagtgagat 4260 ccaaggattt atgtacaccc aaggatttag tttttgcagt gtcaatgatt ttcagccaat 4320 aataaatcat taattt 4336 9 1378 PRT Arabidopsis thaliana 9 Met Thr Asn Cys Glu Lys Asp Glu Glu Phe Val Cys Ile Ser Cys Val 1 5 10 15 Glu Glu Val Arg Tyr Ser Phe Val Ser His Leu Ser Glu Ala Leu Arg 20 25 30 Arg Lys Gly Ile Asn Asn Val Val Val Asp Val Asp Ile Asp Asp Leu 35 40 45 Leu Phe Lys Glu Ser Gln Ala Lys Ile Glu Lys Ala Gly Val Ser Val 50 55 60 Met Val Leu Pro Gly Asn Cys Asp Pro Ser Glu Val Trp Leu Asp Lys 65 70 75 80 Phe Ala Lys Val Leu Glu Cys Gln Arg Asn Asn Lys Asp Gln Ala Val 85 90 95 Val Ser Val Leu Tyr Gly Asp Ser Leu Leu Arg Asp Gln Trp Leu Ser 100 105 110 Glu Leu Asp Phe Arg Gly Leu Ser Arg Ile His Gln Ser Arg Lys Glu 115 120 125 Cys Ser Asp Ser Ile Leu Val Glu Glu Ile Val Arg Asp Val Tyr Glu 130 135 140 Thr His Phe Tyr Val Gly Arg Ile Gly Ile Tyr Ser Lys Leu Leu Glu 145 150 155 160 Ile Glu Asn Met Val Asn Lys Gln Pro Ile Gly Ile Arg Cys Val Gly 165 170 175 Ile Trp Gly Met Pro Gly Ile Gly Lys Thr Thr Leu Ala Lys Ala Val 180 185 190 Phe Asp Gln Met Ser Ser Ala Phe Asp Ala Ser Cys Phe Ile Glu Asp 195 200 205 Tyr Asp Lys Ser Ile His Glu Lys Gly Leu Tyr Cys Leu Leu Glu Glu 210 215 220 Gln Leu Leu Pro Gly Asn Asp Ala Thr Ile Met Lys Leu Ser Ser Leu 225 230 235 240 Arg Asp Arg Leu Asn Ser Lys Arg Val Leu Val Val Leu Asp Asp Val 245 250 255 Cys Asn Ala Leu Val Ala Glu Ser Phe Leu Glu Gly Phe Asp Trp Leu 260 265 270 Gly Pro Gly Ser Leu Ile Ile Ile Thr Ser Arg Asp Lys Gln Val Phe 275 280 285 Arg Leu Cys Gly Ile Asn Gln Ile Tyr Glu Val Gln Gly Leu Asn Glu 290 295 300 Lys Glu Ala Arg Gln Leu Phe Leu Leu Ser Ala Ser Ile Met Glu Asp 305 310 315 320 Met Gly Glu Gln Asn Leu His Glu Leu Ser Val Arg Val Ile Ser Tyr 325 330 335 Ala Asn Gly Asn Pro Leu Ala Ile Ser Val Tyr Gly Arg Glu Leu Lys 340 345 350 Gly Lys Lys Lys Leu Ser Glu Met Glu Thr Ala Phe Leu Lys Leu Lys 355 360 365 Arg Arg Pro Pro Phe Lys Ile Val Asp Ala Phe Lys Ser Ser Tyr Asp 370 375 380 Thr Leu Ser Asp Asn Glu Lys Asn Ile Phe Leu Asp Ile Ala Cys Phe 385 390 395 400 Phe Gln Gly Glu Asn Val Asn Tyr Val Ile Gln Leu Leu Glu Gly Cys 405 410 415 Gly Phe Phe Pro His Val Glu Ile Asp Val Leu Val Asp Lys Cys Leu 420 425 430 Val Thr Ile Ser Glu Asn Arg Val Trp Leu His Lys Leu Thr Gln Asp 435 440 445 Ile Gly Arg Glu Ile Ile Asn Gly Glu Thr Val Gln Ile Glu Arg Arg 450 455 460 Arg Arg Leu Trp Glu Pro Trp Ser Ile Lys Tyr Leu Leu Glu Tyr Asn 465 470 475 480 Glu His Lys Ala Asn Gly Glu Pro Lys Thr Thr Phe Lys Arg Ala Gln 485 490 495 Gly Ser Glu Glu Ile Glu Gly Leu Phe Leu Asp Thr Ser Asn Leu Arg 500 505 510 Phe Asp Leu Gln Pro Ser Ala Phe Lys Asn Met Leu Asn Leu Arg Leu 515 520 525 Leu Lys Ile Tyr Cys Ser Asn Pro Glu Val His Pro Val Ile Asn Phe 530 535 540 Pro Thr Gly Ser Leu His Ser Leu Pro Asn Glu Leu Arg Leu Leu His 545 550 555 560 Trp Glu Asn Tyr Pro Leu Lys Ser Leu Pro Gln Asn Phe Asp Pro Arg 565 570 575 His Leu Val Glu Ile Asn Met Pro Tyr Ser Gln Leu Gln Lys Leu Trp 580 585 590 Gly Gly Thr Lys Asn Leu Glu Met Leu Arg Thr Ile Arg Leu Cys His 595 600 605 Ser Gln His Leu Val Asp Ile Asp Asp Leu Leu Lys Ala Glu Asn Leu 610 615 620 Glu Val Ile Asp Leu Gln Gly Cys Thr Arg Leu Gln Asn Phe Pro Ala 625 630 635 640 Ala Gly Arg Leu Leu Arg Leu Arg Val Val Asn Leu Ser Gly Cys Ile 645 650 655 Lys Ile Lys Ser Val Leu Glu Ile Pro Pro Asn Ile Glu Lys Leu His 660 665 670 Leu Gln Gly Thr Gly Ile Leu Ala Leu Pro Val Ser Thr Val Lys Pro 675 680 685 Asn His Arg Glu Leu Val Asn Phe Leu Thr Glu Ile Pro Gly Leu Ser 690 695 700 Glu Ala Ser Lys Leu Glu Arg Leu Thr Ser Leu Leu Glu Ser Asn Ser 705 710 715 720 Ser Cys Gln Asp Leu Gly Lys Leu Ile Cys Leu Glu Leu Lys Asp Cys 725 730 735 Ser Cys Leu Gln Ser Leu Pro Asn Met Ala Asn Leu Asp Leu Asn Val 740 745 750 Leu Asp Leu Ser Gly Cys Ser Ser Leu Asn Ser Ile Gln Gly Phe Pro 755 760 765 Arg Phe Leu Lys Gln Leu Tyr Leu Gly Gly Thr Ala Ile Arg Glu Val 770 775 780 Pro Gln Leu Pro Gln Ser Leu Glu Ile Leu Asn Ala His Gly Ser Cys 785 790 795 800 Leu Arg Ser Leu Pro Asn Met Ala Asn Leu Glu Phe Leu Lys Val Leu 805 810 815 Asp Leu Ser Gly Cys Ser Glu Leu Glu Thr Ile Gln Gly Phe Pro Arg 820 825 830 Asn Leu Lys Glu Leu Tyr Phe Ala Gly Thr Thr Leu Arg Glu Val Pro 835 840 845 Gln Leu Pro Leu Ser Leu Glu Val Leu Asn Ala His Gly Ser Asp Ser 850 855 860 Glu Lys Leu Pro Met His Tyr Lys Phe Asn Asn Phe Phe Asp Leu Ser 865 870 875 880 Gln Gln Val Val Asn Asp Phe Phe Leu Lys Ala Leu Thr Tyr Val Lys 885 890 895 His Ile Pro Arg Gly Tyr Thr Gln Glu Leu Ile Asn Lys Ala Pro Thr 900 905 910 Phe Ser Phe Ser Ala Pro Ser His Thr Asn Gln Asn Ala Thr Phe Asp 915 920 925 Leu Gln Pro Gly Ser Ser Val Met Thr Arg Leu Asn His Ser Trp Arg 930 935 940 Asn Thr Leu Val Gly Phe Gly Met Leu Val Glu Val Ala Phe Pro Glu 945 950 955 960 Asp Tyr Cys Asp Ala Thr Asp Val Gly Ile Ser Cys Val Cys Arg Trp 965 970 975 Ser Asn Lys Glu Gly Arg Ser Cys Arg Ile Glu Arg Asn Phe His Cys 980 985 990 Trp Ala Pro Gly Lys Val Val Pro Lys Val Arg Lys Asp His Thr Phe 995 1000 1005 Val Phe Ser Asp Val Asn Met Arg Pro Ser Thr Gly Glu Gly Asn Asp 1010 1015 1020 Pro Asp Ile Trp Ala Gly Leu Val Val Phe Glu Phe Phe Pro Ile Asn 1025 1030 1035 1040 Gln Gln Thr Lys Cys Leu Asn Asp Arg Phe Thr Val Thr Arg Cys Gly 1045 1050 1055 Val Arg Val Ile Asn Val Ala Thr Gly Asn Thr Ser Leu Glu Asn Ile 1060 1065 1070 Ser Leu Val Leu Ser Leu Asp Pro Val Glu Val Ser Gly Tyr Glu Val 1075 1080 1085 Leu Arg Val Ser Tyr Asp Asp Leu Gln Glu Met Asp Lys Val Leu Phe 1090 1095 1100 Leu Tyr Ile Ala Ser Leu Phe Asn Asp Glu Asp Val Asp Phe Val Ala 1105 1110 1115 1120 Pro Leu Ile Ala Gly Ile Asp Leu Asp Val Ser Ser Gly Leu Lys Val 1125 1130 1135 Leu Ala Asp Val Ser Leu Ile Ser Val Ser Ser Asn Gly Glu Ile Val 1140 1145 1150 Met His Ser Leu Gln Arg Gln Met Gly Lys Glu Ile Leu His Gly Gln 1155 1160 1165 Ser Met Leu Leu Ser Asp Cys Glu Ser Ser Met Thr Glu Asn Leu Ser 1170 1175 1180 Asp Val Pro Lys Lys Glu Lys Lys His Arg Glu Ser Lys Val Lys Lys 1185 1190 1195 1200 Val Val Ser Ile Pro Ala Ile Asp Glu Gly Asp Leu Trp Thr Trp Arg 1205 1210 1215 Lys Tyr Gly Gln Lys Asp Ile Leu Gly Ser Arg Phe Pro Arg Gly Tyr 1220 1225 1230 Tyr Arg Cys Ala Tyr Lys Phe Thr His Gly Cys Lys Ala Thr Lys Gln 1235 1240 1245 Val Gln Arg Ser Glu Thr Asp Ser Asn Met Leu Ala Ile Thr Tyr Leu 1250 1255 1260 Ser Glu His Asn His Pro Arg Pro Thr Lys Arg Lys Ala Leu Ala Asp 1265 1270 1275 1280 Ser Thr Arg Ser Thr Ser Ser Ser Ile Cys Ser Ala Ile Thr Thr Ser 1285 1290 1295 Ala Ser Ser Arg Val Phe Gln Asn Lys Asp Glu Pro Asn Gln Pro His 1300 1305 1310 Leu Pro Ser Ser Ser Thr Pro Pro Arg Asn Ala Ala Val Leu Phe Lys 1315 1320 1325 Met Thr Asp Met Glu Glu Phe Gln Asp Asn Met Glu Val Asp Asn Asp 1330 1335 1340 Val Val Asp Thr Arg Thr Leu Ala Leu Phe Pro Glu Phe Gln His Gln 1345 1350 1355 1360 Pro Glu Glu Glu Asp Pro Trp Ser Thr Phe Phe Asp Asp Tyr Asn Phe 1365 1370 1375 Tyr Phe 10 1288 PRT Arabidopsis thaliana 10 Met Thr Asn Cys Glu Lys Asp Glu Glu Phe Val Cys Ile Ser Cys Val 1 5 10 15 Glu Glu Val Arg Tyr Ser Phe Val Ser His Leu Ser Glu Ala Leu Arg 20 25 30 Arg Lys Gly Ile Asn Asn Val Val Val Asp Val Asp Ile Asp Asp Leu 35 40 45 Leu Phe Lys Glu Ser Gln Ala Lys Ile Glu Lys Ala Gly Val Ser Val 50 55 60 Met Val Leu Pro Gly Asn Cys Asp Pro Ser Glu Val Trp Leu Asp Lys 65 70 75 80 Phe Ala Lys Val Leu Glu Cys Gln Arg Asn Asn Lys Asp Gln Ala Val 85 90 95 Val Ser Val Leu Tyr Gly Asp Ser Leu Leu Arg Asp Gln Trp Leu Ser 100 105 110 Glu Leu Asp Phe Arg Gly Leu Ser Arg Ile His Gln Ser Arg Lys Glu 115 120 125 Cys Ser Asp Ser Ile Leu Val Glu Glu Ile Val Arg Asp Val Tyr Glu 130 135 140 Thr His Phe Tyr Val Gly Arg Ile Gly Ile Tyr Ser Lys Leu Leu Glu 145 150 155 160 Ile Glu Asn Met Val Asn Lys Gln Pro Ile Gly Ile Arg Cys Val Gly 165 170 175 Ile Trp Gly Met Pro Gly Ile Gly Lys Thr Thr Leu Ala Lys Ala Val 180 185 190 Phe Asp Gln Met Ser Ser Ala Phe Asp Ala Ser Cys Phe Ile Glu Asp 195 200 205 Tyr Asp Lys Ser Ile His Glu Lys Gly Leu Tyr Cys Leu Leu Glu Glu 210 215 220 Gln Leu Leu Pro Gly Asn Asp Ala Thr Ile Met Lys Leu Ser Ser Leu 225 230 235 240 Arg Asp Arg Leu Asn Ser Lys Arg Val Leu Val Val Leu Asp Asp Val 245 250 255 Arg Asn Ala Leu Val Gly Glu Ser Phe Leu Glu Gly Phe Asp Trp Leu 260 265 270 Gly Pro Gly Ser Leu Ile Ile Ile Thr Ser Arg Asp Lys Gln Val Phe 275 280 285 Cys Leu Cys Gly Ile Asn Gln Ile Tyr Glu Val Gln Gly Leu Asn Glu 290 295 300 Lys Glu Ala Arg Gln Leu Phe Leu Leu Ser Ala Ser Ile Lys Glu Asp 305 310 315 320 Met Gly Glu Gln Asn Leu Gln Glu Leu Ser Val Arg Val Ile Asn Tyr 325 330 335 Ala Asn Gly Asn Pro Leu Ala Ile Ser Val Tyr Gly Arg Glu Leu Lys 340 345 350 Gly Lys Lys Lys Leu Ser Glu Met Glu Thr Ala Phe Leu Lys Leu Lys 355 360 365 Arg Arg Pro Pro Phe Lys Ile Val Asp Ala Phe Lys Ser Thr Tyr Asp 370 375 380 Thr Leu Ser Asp Asn Glu Lys Asn Ile Phe Leu Asp Ile Ala Cys Phe 385 390 395 400 Phe Gln Gly Glu Asn Val Asn Tyr Val Ile Gln Leu Leu Glu Gly Cys 405 410 415 Gly Phe Phe Pro His Val Glu Ile Asp Val Leu Val Asp Lys Cys Leu 420 425 430 Val Thr Ile Ser Glu Asn Arg Val Trp Leu His Lys Leu Thr Gln Asp 435 440 445 Ile Gly Arg Glu Ile Ile Asn Gly Glu Thr Val Gln Ile Glu Arg Arg 450 455 460 Arg Arg Leu Trp Glu Pro Trp Ser Ile Lys Tyr Leu Leu Glu Tyr Asn 465 470 475 480 Glu His Lys Ala Asn Gly Glu Pro Lys Thr Thr Phe Lys Arg Ala Gln 485 490 495 Gly Ser Glu Glu Ile Glu Gly Leu Phe Leu Asp Thr Ser Asn Leu Arg 500 505 510 Phe Asp Leu Gln Pro Ser Ala Phe Lys Asn Met Leu Asn Leu Arg Leu 515 520 525 Leu Lys Ile Tyr Cys Ser Asn Pro Glu Val His Pro Val Ile Asn Phe 530 535 540 Pro Thr Gly Ser Leu His Ser Leu Pro Asn Glu Leu Arg Leu Leu His 545 550 555 560 Trp Glu Asn Tyr Pro Leu Lys Ser Leu Pro Gln Asn Phe Asp Pro Arg 565 570 575 His Leu Val Glu Ile Asn Met Pro Tyr Ser Gln Leu Gln Lys Leu Trp 580 585 590 Gly Gly Thr Lys Asn Leu Glu Met Leu Arg Thr Ile Arg Leu Cys His 595 600 605 Ser His His Leu Val Asp Ile Asp Asp Leu Leu Lys Ala Glu Asn Leu 610 615 620 Glu Val Ile Asp Leu Gln Gly Cys Thr Arg Leu Gln Asn Phe Pro Ala 625 630 635 640 Ala Gly Arg Leu Leu Arg Leu Arg Val Val Asn Leu Ser Gly Cys Ile 645 650 655 Lys Ile Lys Ser Val Leu Glu Ile Pro Pro Asn Ile Glu Lys Leu His 660 665 670 Leu Gln Gly Thr Gly Ile Leu Ala Leu Pro Val Ser Thr Val Lys Pro 675 680 685 Asn His Arg Glu Leu Val Asn Phe Leu Thr Glu Ile Pro Gly Leu Ser 690 695 700 Glu Glu Leu Glu Arg Leu Thr Ser Leu Leu Glu Ser Asn Ser Ser Cys 705 710 715 720 Gln Asp Leu Gly Lys Leu Ile Cys Leu Glu Leu Lys Asp Cys Ser Cys 725 730 735 Leu Gln Ser Leu Pro Asn Met Ala Asn Leu Asp Leu Asn Val Leu Asp 740 745 750 Leu Ser Gly Cys Ser Ser Leu Asn Ser Ile Gln Gly Phe Pro Arg Phe 755 760 765 Leu Lys Gln Leu Tyr Leu Gly Gly Thr Ala Ile Arg Glu Val Pro Gln 770 775 780 Leu Pro Gln Ser Leu Glu Ile Leu Asn Ala His Gly Ser Cys Leu Arg 785 790 795 800 Ser Leu Pro Asn Met Ala Asn Leu Glu Phe Leu Lys Val Leu Asp Leu 805 810 815 Ser Gly Cys Ser Glu Leu Glu Thr Ile Gln Gly Phe Pro Arg Asn Leu 820 825 830 Lys Glu Leu Tyr Phe Ala Gly Thr Thr Leu Arg Glu Val Pro Gln Leu 835 840 845 Pro Leu Ser Leu Glu Val Leu Asn Ala His Gly Ser Asp Ser Glu Lys 850 855 860 Leu Pro Met His Tyr Lys Phe Asn Asn Phe Phe Asp Leu Ser Gln Gln 865 870 875 880 Val Val Asn Asp Phe Leu Leu Lys Thr Leu Thr Tyr Val Lys His Ile 885 890 895 Pro Arg Gly Tyr Thr Gln Glu Leu Ile Asn Lys Ala Pro Thr Phe Ser 900 905 910 Phe Ser Ala Pro Ser His Thr Asn Gln Asn Ala Thr Phe Asp Leu Gln 915 920 925 Ser Gly Ser Ser Val Met Thr Arg Leu Asn His Ser Trp Arg Asn Thr 930 935 940 Leu Val Gly Phe Gly Met Leu Val Glu Val Ala Phe Pro Glu Asp Tyr 945 950 955 960 Cys Asp Ala Thr Asp Val Gly Ile Ser Cys Val Cys Arg Trp Ser Asn 965 970 975 Lys Glu Gly Arg Ser Cys Arg Ile Glu Arg Lys Phe His Cys Trp Ala 980 985 990 Pro Trp Gln Val Val Pro Lys Val Arg Lys Asp His Thr Phe Val Phe 995 1000 1005 Ser Asp Val Asn Met Arg Pro Ser Thr Gly Glu Gly Asn Asp Pro Asp 1010 1015 1020 Ile Trp Ala Gly Leu Val Val Phe Glu Phe Phe Pro Ile Asn Gln Gln 1025 1030 1035 1040 Thr Lys Cys Leu Asn Asp Arg Phe Thr Val Arg Arg Cys Gly Val Arg 1045 1050 1055 Val Ile Asn Val Ala Thr Gly Asn Thr Ser Leu Glu Asn Ile Ala Leu 1060 1065 1070 Val Leu Ser Leu Asp Pro Val Glu Val Ser Gly Tyr Glu Val Leu Arg 1075 1080 1085 Val Ser Tyr Asp Asp Leu Gln Glu Met Asp Lys Val Leu Phe Leu Tyr 1090 1095 1100 Ile Ala Ser Leu Phe Asn Asp Glu Asp Val Asp Phe Val Ala Pro Leu 1105 1110 1115 1120 Ile Ala Gly Ile Asp Leu Asp Val Ser Ser Gly Leu Lys Val Leu Ala 1125 1130 1135 Asp Val Ser Leu Ile Ser Val Ser Ser Asn Gly Glu Ile Val Met His 1140 1145 1150 Ser Leu Gln Arg Gln Met Gly Lys Glu Ile Leu His Gly Gln Ser Met 1155 1160 1165 Leu Leu Ser Asp Cys Glu Ser Ser Met Thr Glu Asn Leu Ser Asp Val 1170 1175 1180 Pro Lys Lys Lys Lys Lys His Ser Glu Ser Arg Val Lys Lys Val Val 1185 1190 1195 1200 Ser Ile Pro Ala Ile Asp Glu Gly Asp Leu Trp Thr Trp Arg Lys Tyr 1205 1210 1215 Gly Gln Lys Asp Ile Leu Gly Ser Arg Phe Pro Arg Gly Tyr Tyr Arg 1220 1225 1230 Cys Ala Tyr Lys Phe Thr His Gly Cys Lys Ala Thr Lys Gln Val Gln 1235 1240 1245 Arg Ser Glu Thr Asp Ser Asn Met Leu Ala Ile Thr Tyr Leu Ser Glu 1250 1255 1260 His Asn His Pro Arg Pro Thr Lys Arg Lys Ala Leu Ala Asp Ser Thr 1265 1270 1275 1280 Arg Ser Thr Ser Ser Ser Ile Cys 1285 11 18 ADN Homo sapiens 11 agctcgagac tattcagg 18 12 19 ADN Homo sapiens 12 aaacactgat agctaacgg 19 13 18 ADN Homo sapiens 13 atctctaacg gtggatgg 18 14 19 ADN Homo sapiens 14 tgcattcaag acctctagg 19 15 19 ADN Homo sapiens 15 ccgttagcta tcagtgttt 19 16 18 ADN Homo sapiens 16 agtcatcaag tgaccatc 18 17 18 ADN Homo sapiens 17 ctagaggtct tgaatgca 18 18 18 ADN Homo sapiens 18 gcatcacagt agtcctcg 18 19 19 ADN Homo sapiens 19 acatccaagt caataccgg 19 20 18 ADN Homo sapiens 20 gccaatagag atgtacca 18 21 18 ADN Homo sapiens 21 tggtacatct ctaatggc 18 22 19 ADN Homo sapiens 22 agtaacacgt aatgtaacc 19 23 19 ADN Homo sapiens 23 accagcaagt ttaggatga 19 24 18 ADN Homo sapiens 24 gatggtcact tgatgact 18 25 19 ADN Homo sapiens 25 ggtgtacata aatccttgg 19 26 19 ADN Homo sapiens 26 ccaaggattt atgtacacc 19 27 18 ADN Homo sapiens 27 actcttatgg agatgctc 18 28 18 ADN Homo sapiens 28 cgcatcctta aactactg 18 29 18 ADN Homo sapiens 29 atatctccgg tttcaacc 18 30 18 ADN Homo sapiens 30 ccttggtgag tagctcac 18 31 18 ADN Homo sapiens 31 ccatagatct ccctcgtc 18 32 19 ADN Homo sapiens 32 ccttatagaa cttctctcc 19 33 18 ADN Homo sapiens 33 ctcttcgagt gcatcagg 18 34 19 ADN Homo sapiens 34 ccggtattga cttggatgt 19 35 18 ADN Homo sapiens 35 agatacacgt acactggc 18 36 18 ADN Homo sapiens 36 tccagcccag atatcagg 18 37 18 ADN Homo sapiens 37 tgcataggaa gcttctcc 18 38 18 ADN Homo sapiens 38 ttcagaggaa cttgagcg 18 39 19 ADN Homo sapiens 39 ccaagcaaat aagcttccc 19 40 18 ADN Homo sapiens 40 atcgtcctca acatctcc 18 41 18 ADN Homo sapiens 41 aggcgcagaa gactgtgg 18 42 18 ADN Homo sapiens 42 ttgatgctcc aaggttcc 18 43 18 ADN Homo sapiens 43 gagatgtgta cgagacgc 18 44 18 ADN Homo sapiens 44 caatctccag cagcttcg 18 45 18 ADN Homo sapiens 45 ttgagtggtt gaatgtcc 18 46 18 ADN Homo sapiens 46 cacacgaatt cctcatcc 18 47 18 ADN Homo sapiens 47 tgaaggaaca ctcgttgc 18 48 18 ADN Homo sapiens 48 gtctttcaga ggcctcga 18 49 18 ADN Homo sapiens 49 ggtaagcaat ctctgata 18 50 18 ADN Homo sapiens 50 atgttatatc gacgttgg 18 51 18 ADN Homo sapiens 51 gaggaagtgg aacgagtg 18 52 18 ADN Homo sapiens 52 aactcctcca tgtccgtc 18 53 26 ADN Homo sapiens 53 atctccctcg tctatagccg gtatgg 26 54 27 ADN Homo sapiens 54 gatcaggctt ccgggtccta gccagtc 27 55 27 ADN Homo sapiens 55 agtgatgtca acatgcgccc aagtacc 27 56 26 ADN Homo sapiens 56 aaccttcaaa cgtgctcagg gctctg 26 57 26 ADN Homo sapiens 57 acatctccag gttcttggtt ccaccc 26 58 29 ADN Homo sapiens 58 gtcgacatga ccaattgtga aaaggatga 29 59 27 ADN Homo sapiens 59 gtcgaccttg tcttgcagtg atgagag 27 60 23 ADN Homo sapiens 60 ctattccatg gaggaggaag tgg 23 61 24 ADN Homo sapiens 61 ttagtcgacg aagaagaaac atag 24 REVENDICATIONS 1. Acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'une séquence nucléotidique codant pour une protéine de résistance d'une plante à un pathogène, ladite protéine comprenant : a) une partie N-terminale comprenant au moins une séquence d'acides aminés riche en leucine et au moins un site de liaison aux nucléotides ; et b) une partie C-terminale comprenant un domaine de liaison à l'ADN comprenant la séquence d'acides aminés " WRKYGQK ", ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire. 2 Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il possède au moins 40%, avantageusement 60%, préférentiellement 80% et de manière tout à fait préférée 90%, d'identité en nucléotides avec la séquence nucléotidique SEQ ID N 1 , ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire 3. Acide nucléique selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il possède au moins 40%, avantageusement 60%, préférentiellement 80% et de manière tout à fait préférée 90%, d'identité en nucléotides avec une séquence nucléotidique choisie parmi les séquences suivantes : a) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 260 au nucléotide en position 636 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. b) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 746 au nucléotide en position 1856 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. c) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 1937 au nucléotide en position 2236 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. d) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 2326 au nucléotide en position 3249 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. e) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 3438 au nucléotide en position 4291 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. f) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 5377 au nucléotide en position 5499 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. g) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 6085 au nucléotide en position 6532 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire. 4 Acide nucléique selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il possède au moins 40%, avantageusement 60%, préférentiellement 80% et de manière tout à fait préférée 90%, d'identité en nucléotides avec une séquence nucléotidique choisie parmi les séquences suivantes : a) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 637 au nucléotide en position 745 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. b) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 1857 au nucléotide en position 1936 de l'acide nucléique SEQ ID N 1 ; c) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 2237 au nucléotide en position 2325 de l'acide nucléique SEQ ID N 1; d) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 3250 au nucléotide en position 3437 de l'acide nucléique SEQ ID N 1 ; e) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 4292 au nucléotide en position 5376 de l'acide nucléique SEQ ID N 1; f) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 5500 au nucléotide en position 6084 de l'acide nucléique SEQ ID N 1. ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire 5 Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 15 nucléotides consécutifs de la séquence nucléotidique SEQ ID N 4, ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire. 6. Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il possède au moins 40%, avantageusement 60%, préférentiellement 80% et de manière tout à fait préférée 90%, d'identité en nucléotides avec la séquence nucléotidique SEQ ID N 5, ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire. 7 Acide nucléique selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il possède au moins 40%, avantageusement 60%, préférentiellement 80% et de manière tout à fait préférée 90%, d'identité en nucléotides avec une séquence nucléotidique choisie parmi les séquences suivantes : a) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 1184 au nucléotide en position 1560 de l'acide nucléique SEQ ID N 5. b) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 1670 au nucléotide en position 278 de l'acide nucléique SEQ ID N 5.; c) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 2861 au nucléotide en position 3160 de l'acide nucléique SEQ ID N 5; d) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 3254 au nucléotide en position 4171 de l'acide nucléique SEQ ID N 5; e) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 4360 au nucléotide en position 5213 de l'acide nucléique SEQ ID N 5: f) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 6302 au nucléotide en position 6424 de l'acide nucléique SEQ ID N 5; g) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 6953 au nucléotide en position 7136 de l'acide nucléique SEQ ID N 5 ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire 8 Acide nucléique selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il possède au moins 40%, avantageusement 60%, préférentiellement 80% et de manière tout à fait préférée 90%, d'identité en nucléotides avec une séquence nucléotidique choisie parmi les séquences suivantes : a) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 1561 au nucléotide en position 1669 l'acide nucléique SEQ ID N 5 ; b) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 2781 nucléotide en position 2860 l'acide nucléique SEQ ID N 5. , c) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 3161 nucléotide en position 3253 'acide nucléique SEQ ID N 5, d) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 4172 nucléotide en position 4359 l'acide nucléique SEQ ID N 5; e) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 5214 nucléotide en position 6301 l'acide nucléique SEQ ID N 5, f) la séquence nucléotidique allant du nucléotide en position 6425 nucléotide en position 6592 l'acide nucléique SEQ ID N 5 ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire. 9 Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 15 nucléotides consécutifs de la séquence nucléotidique SEQ ID N 8, ainsi qu'un acide nucléique de séquence complémentaire 10 Acide nucléique hybridant, dans des conditions d'hybridation de forte stringence, avec un acide nucléique selon l'une quelconques des revendications 1 à 9. 11 Sonde nucléotidique hybridant, dans des conditions d'hybridation de forte stringence avec un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 12. Amorce nucléotidique hybridant, dans des conditions d'hybridation de forte stringence avec un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 10. 13. Acide nucléique selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les polynucléotides de séquences SEQ ID N 11à 61. 14. Séquence nucléotidique anti-sens comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 10. 15. Vecteur recombinant, caractérisé en ce qu'il comprend un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 10. 16 Vecteur recombinant selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un vecteur d'expression fonctionnel dans un cellule hôte végétale. 17. Vecteur recombinant selon l'une des revendications 15 et 16, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un vecteur d'origine fongique, bactérienne ou virale. 18. Cellule hôte transformée avec un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 10 ou avec un vecteur recombinant selon l'une des revendications 15 à 17 19 Cellule hôte transformée selon la revendication 18, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une cellule d'origine procaryote ou eucaryote . 20. Cellule hôte transformée selon la revendication 19, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une cellule d'Agrobacterium tumefaciens. 21 Cellule hôte transformée selon la revendication 19, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une cellule végétale d'Arabidopsis thaliana, de colza, de maïs ou de tabac. 22. Organisme multicellulaire végétal recombinant, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une cellule hôte transformée selon l'une des revendications 18 à 21. 23 Plante transformée avec un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 10, une séquence nucléotidique selon la revendication 13 ou un vecteur recombinant selon l'une des revendications 15 à 17. 24 Plante transformée comprenant, sous une forme intégrée dans son génome, un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 10, une séquence nucléotidique selon la revendication 13 ou un vecteur recombinant selon l'une des revendications 15 à 17 25. Procédé d'obtention d'une plante transformée, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Obtention d'une cellule hôte transformée végétale selon l'une des revendications 19 ou 21 ; b) Régénération d'une plante entière à partir de la cellule hôte recombinante obtenue à l'étape a) ; c) Sélection des plantes obtenues à l'étape b) ayant intégré un polynucléotide d'intérêt choisi parmi les acides nucléiques selon l'une des revendications 1 à 10 26. Procédé d'obtention d'une plante transformée, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) obtention d'une cellule hôte d'Agrobacterium tumefaciens selon la revendication 20 ; b) transformation de la plante par infection avec des cellules d'Agrobacterium tumefaciens obtenues à l'étape a) ; c) sélection des plantes ayant intégré un polynucléotide d'intérêt choisi parmi les acides nucléiques selon l'une des revendications 1 à 10. 27. Procédé d'obtention d'une plante transformée, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) transfecter une cellule de plante avec un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 10 ou un vecteur recombinant selon l'une des revendications 15 à 17 ; b) régénérer une plante entière à partir des cellules de plante recombinantes obtenues à l'étape a) ; c) sélectionner les plantes ayant intégré l'acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 10 ou le vecteur recombinant selon l'une des revendications 15 à 17 28 Procédé d'obtention d'une plante transformée selon l'une des revendications 25 à 27, caractériser en ce qu'il comporte en outre les étapes de d) croisement entre elles de deux plantes transformées telles qu'obtenues à l'étape c) ; e) sélection des plantes homozygotes pour l'acide nucléique d'intérêt 29 Procédé d'obtention d'une plante transformée selon l'une des revendications 25 à 27, caractérisé en ce qu'il comprend en outre les étapes de d) croisement d'une plante transformée obtenue à l'étape c) avec une plante de la même espèce ; e) sélection des plantes issues du croisement de l'étape d) ayant conservé l'acide nucléique d'intérêt. 30 Plante transformée telle qu'obtenue selon le procédé selon l'une quelconque des revendications 25 à 29. 31 Semence d'une plante transformée selon l'une quelconque des revendications 23,24 et 29. 32 Semence de plante dont les cellules constitutives comprennent dans leur génome un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 10 33 Utilisation d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 10 pour l'expression in vitro ou in vivo d'un protéine choisie parmi la protéine RRS1-S RRS1-R d'un fragment peptidique de celle-ci 34 Utilisation selon la revendication 33, caractérisée en ce qu il s'agit d'une expression in vivo chez une plante transformée avec un tel acide nucléique 35 Utilisation d'une séquence nucléotidique selon la revendication 14, ou d'un vecteur recombinant comprenant une séquence nucléotidique selon la revendication 14, pour inhiber ou pour bloquer l'expression du gène codant pour la protéine RRS1-S ou pour la protéine RRS1-R. 36. Procédé de détection d'un acide nucléique constitutif du gène RRS1-S ou RRS1-R dans un échantillon, comprenant les étapes de a) mettre en contact une sonde ou une pluralité de sondes selon la revendication 11 avec l'acide nucléique susceptible d'être contenu dans l'échantillon ; b) détecter l'hybride éventuellement formé entre l'acide nucléique de l'échantillon et la ou les sondes. 37. Kit ou nécessaire de détection d'un acide nucléique constitutif du gène RRS1-S ou RRS1-R dans un échantillon, comprenant : a) une sonde ou une pluralité de sondes selon la revendication 11 ; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la réaction d'hybridation. 38 Procédé pour amplifier un acide constitutif du gène RRS1-S ou RRS1-R dans un échantillon, comprenant les étapes de : a) mettre en contact un couple d'amorces selon l'une des revendications 12 et 13 avec l'acide nucléique susceptible d'être contenu dans l'échantillon ; b) réaliser au moins un cycle d'amplification de l'acide nucléique contenu dans l'échantillon ; c) détecter l'acide nucléique éventuellement amplifié 39 Kit ou nécessaire pour l'amplification d'un acide nucléique dans un échantillon, comprenant : a) un couple d'amorces selon l'une des revendications 12 et 13, b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la réalisation de la réaction d'amplification. 40 Polypeptide codé par un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 10. 41. Polypeptide selon la revendication 40, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence en acides aminés SEQ ID N 9 ou un polypeptide ayant au moins 40% d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID N 9. 42 Polypeptide selon la revendication 40, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence en acides aminés SEQ ID N 10 ou un polypeptide ayant au moins 40% d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID N 10 43. Polypeptide comprenant des modifications d'acides aminés de 1,2, 3,4, 5,10 à 20 substitutions, additions ou délétions d'un acide aminé par rapport à la séquence d'acides aminés d'un polypeptide selon l'une des revendications 41 et 42 44. Polypeptide comprenant au moins 5 acides aminés consécutifs d'un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 43. 45 Polypeptide de fusion, caractérisé en ce qu'il comprend le partie N-terminale du polypeptide RRS1-S fusionnée avec la partie C-terminale du polypeptide RRS1-R 46. Polypeptide de fusion, caractérisé en ce qu'il comprend la partie N-terminale du polypeptide RRS1-R fusionnée avec la partie C-terminale du polypeptide RRS1-S. 47 Acide nucléique codant pour un polypeptide selon l'une des revendications 45 et 46. 48 Anticorps dirigé contre un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 46 49 Procédé pour détecter la présence d'un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 44 dans un échantillon, comprenant les étapes de a) mettre en contact l'échantillon avec un anticorps selon la revendication 48 ; b) détecter le complexe antigène/anticorps éventuellement formé 50 Kit ou nécessaire de diagnostic pour la détection de la présence d'un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 44 dans un échantillon, caractérisé en ce qu'il comprend : a) un anticorps selon la revendication 48; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la détection des complexes antigène/anticorps formés 51 Procédé pour cribler une substance candidate se fixant sur un polypeptide RRS1-S ou RRS1-R, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de a) préparer un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 44 , b) obtenir une substance candidate à tester c) mettre en contact le polypeptide de l'étape a) avec la substance candidate de l'étape b) ; d) détecter le complexe éventuellement formé entre le polypeptide et la substance candidate 52. Kit ou nécessaire pour cribler une substance candidate se fixant sur un polypeptide RRS1-S ou RRS1-R, comprenant : a) un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 44. b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la détection des complexes formés entre le polypeptide et une substance candidate à tester. 53 Procédé de criblage d'une substance candidate se fixant sur le polypeptide RRS1-S ou RRS1-R, comprenant les étapes de : a) obtenir un premier acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant une partie du polypeptide d'intérêt fusionné au domaine de liaison à l'ADN d'une protéine transactivatrice telle que Gal4 ; b) obtenir un second acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant la substance candidate fusionnée au domaine de transcription d'une protéine transactivatrice telle que Gal4 ; c) fournir un acide nucléique comprenant une séquence nucléotidique codant pour un marqueur détectable, placée sous le contrôle d'une séquence de régulation reconnue par la protéine transactivatrice telle que Gal4, les acides nucléiques a), b) et c) étant insérés dans des vecteurs appropriés , et d) co-transfecter des cellules de levure simultanément avec lesdits vecteurs : e) détecter l'expression de la séquence nucléotidique codant pour le marqueur détectable. 54 Kit ou nécessaire pour le criblage d'une substance candidate se fixant sur le polypeptide RRS1-S ou RRS1-R, comprenant a) un premier acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant une partie du polypeptide d'intérêt fusionné au domaine de liaison à l'ADN d'une protéine transactivatrice telle que Gal4 , b) le cas échéant, un second acide nucléique comprenant une séquence nucléotidique codant pour un marqueur détectable, placée sous le contrôle d'une séquence de régulation reconnue par la protéine transactivatrice telle que Gal4 ; c) un troisième acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant la substance candidate fusionnée au domaine de transcription d'une protéine transactivatrice telle que Gal4 ; 55 Substance capable de se fixer sur le polypeptide RRS1-S ou RRS1-R, caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue par une procédé selon l'une des revendications 51 et 53. 56 Procédé de criblage d'un acide nucléique interagissant avec un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 44, comprenant les étapes de a) obtenir une population statistique d'acides nucléiques de 20 à 50 nucléotides de longueur; b) mettre en contact la population d'acides nucléiques de l'étape a) avec un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 44, c) caractériser l'acide nucléique ou la pluralité d'acides nucléiques interagissant avec ledit polypeptide 57. Kit ou nécessaire pour le criblage d'un acide nucléique interagissant avec un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 44, comprenant : a) un polypeptide selon l'une des revendications 40 à 44; b) le cas échéant, une population statistique d'acides nucléiques de 20 à 50 nucléotides de longueur.