Brevet FR2808535A1 — publié le 20011109

La présente invention est relative à de nouvelles séquences nucléiques et de nouvelles séquences protéiques déduites d'origine humaine. L'invention est également relative à la détection et/ou à l'utilisation desdites séquences nucléiques et desdites séquences protéiques correspondantes, dans le cadre d'applications liées au développement, en particulier musculaire. L'invention est également relative à la détection et/ou à l'utilisation desdites séquences nucléiques et desdites séquences protéiques correspondantes, dans le cadre d'applications diagnostiques, prophylactiques, pronostiques et thérapeutiques, en particulier pour des pathologies affectant le développement, en particulier dans le cas de cancers, en particulier dans des pathologies affectant le muscle squelettique et le muscle cardiaque. L'invention concerne aussi l'obtention de sondes nucléiques double brins et simple brin anti-sens, des molécules recombinantes correspondantes et des anticorps associés. Les facteurs qui permettent de moduler, inhiber ou activer, l'expression d'un ou plusieurs gènes appartiennent à différentes familles de protéines qui présentent les caractéristiques attendues pour ce type de molécules qui sont à la fois engagées dans la reconnaissance de séquences nucléiques, par l'intermédiaire d'interactions protéine-acides nucléiques et dans des interactions avec d'autres facteurs protéiques par l'intermédiaire d'interactions protéine-protéine. Parmi les domaines d'interactions protéine-acides nucléiques, on identifie une famille de molécules possédant un ou plusieurs domaines dactyles à zinc (Rhodes, D et Klug, A. (1993) Sci. Am. 268 : et 62-65), dont les gènes pourraient représenter jusqu'à un pour cent des gènes de mammifères. Ces protéines sont couramment engagées dans la régulation de l'expression des gènes (Coleman, J. E. (1992), Annu. Rev. Biochem. 61 : en tant que facteurs de transcription ou dans les processus de transduction du signal. Chaque domaine dactyle à zinc est généralement composé d'une trentaine d'acides aminés qui forment une coordination tétraédrique avec un atome de zinc. Le site de fixation du zinc est composé de quatre ligands formés par la chaîne latérale d'une cystéine, d'une histidine, ou occasionnellement d'un acide aspartique ou d'un acide glutamique. La fixation du zinc permet d'assurer une structure contrainte prenant grossièrement la forme d'un doigt, qui définit ainsi une unité d'interaction, en particulier avec les acides nucléiques. Les domaines dactyles à zinc sont classés suivant le nombre et la position des résidus engagés dans la coordination des atomes de zinc. Par exemple les domaines dactyles à zinc possédant deux cystéines et deux histidines pour la coordination du zinc, appartiennent à une famille répertoriée sous plusieurs dénominations: facteurs à doigts de zinc de type C2-H2, ou doigts de zinc de type Krüppel, car initialement identifiés dans la famille de facteurs de type Krüppel ou TFIIIA (Miller, J. et coll., (1985) EMBO J. 4 : 1609-1614). Ces domaines présentent en dehors des acides aminés coordinés au zinc, des acides aminés invariants souvent hydrophobes qui constituent un élément d'interaction protéique alors que les acides aminés variables permettent de moduler les spécificités d'interactions avec d'autres molécules ou des séquences nucléiques particulières. Les domaines dactyles à zinc sont plus généralement associés en tandem et les motifs de liaison qui les relient entre eux, présentent parfois une forte conservation, comme le domaine de liaison canonique de type Krüppel. La combinatoire des séquences d'acides aminés au sein des domaines dactyles associée au nombre variable et à l'arrangement de ces différents domaines dactyles permet d'établir la spécificité des interactions. Ces domaines dactyles peuvent interagir avec les séquences nucléiques, double ou simple brin ou hétéro- duplex (Shi, Y. et coll. (1995) Science, 268 : isolément ou en association avec d'autres domaines. La spécificité et la fonctionnalité des facteurs de régulation de l'expression des gènes, implique l'association des motifs dactyles avec un domaine d'interaction protéine-protéine qui permet d'élaborer des complexes protéiques hétéro ou homodimériques. Des domaines supplémentaires peuvent aussi être identifiés, par exemple des sites de localisation nucléaire favorisant le transport vers le noyau, par exemple des motifs modulant la stabilité de la protéine (domaines PEST) ou de son transcrit. L'ensemble de ces caractéristiques structurales permet de conférer à la fois une spécificité d'interactions protéiques et nucléiques ainsi qu'une spécificité fonctionnelle et spatio-temporelle. La découverte de polynucléotides codant pour de nouvelles protéines dactyles à zinc et les facteurs eux mêmes, fournit de nouveaux moyens d'investigations sur les processus de régulation cellulaire, par exemple au cours du développement normal et pathologique. La découverte de nouveaux facteurs à domaines BTB/POZ et domaines dactyles remplit les conditions requises pour rechercher d'autres facteurs appartenant à la même famille et pour établir de nouveaux diagnostics ou engager de nouvelles maneuvres thérapeutiques utiles pour le traitement de pathologies et/ou le pronostic. Avant la description des séquences nucléotidiques, des séquences protéiques déduites et des méthodes, il est bien compris que cette invention ne se limite pas aux méthodologies particulières, aux protocoles, aux types cellulaires ou tissulaires, aux vecteurs, aux réactifs, dans la mesure où ceux-ci peuvent faire l'objet de variations. Il est aussi bien compris que la terminologie utilisée ici correspond à un exemple particulier, sans la volonté de réduire la portée de la présente invention qui est uniquement limitée par la teneur des revendications. Il peut être noté que l'emploi du singulier, comme "le", "la", "un" ou "une" indu des réalitées plurielles et/ou à caractère général, à moins que le contraire soit formellement spécifié. Par exemple, "le vecteur" ou "la cellule hôte" concernent l'ensemble des vecteurs possibles ou l'ensemble des cellules hôtes ou encore la référence à un anticorps fait référence à l'ensemble des anticorps équivalents et réalisés selon l'état de l'art. A moins d'une spécification contraire, toutes les techniques et les termes scientifiques utilisés ont le même sens que le sens couramment employé par les utilisateurs de ces techniques. Toutes méthodes similaires ou équivalentes à celles décrites ou leurs évolutions peuvent être employées en pratique pour tester la présente invention. Le terme "Séquence nucléique" se réfère ici à un oligonucléotide, à un polynucléotide, à un ADN ou à un ARN d'origine génomique ou synthétique, soit simple-brin, soit double-brin et représentant soit la séquence sens soit la séquence anti-sens et soit un fragment ou une portion de ladite séquence. De la même manière le terme "séquence en amino-acides" ou des termes similaires comme "peptide", "polypeptide" ou "protéine" se réfèrent à des fragments ou à des portions de la dite séquence déduite d'origine naturelle ou synthétique. Myoneurine, tel qu'utilisé ici se réfère à des séquence en acides aminés, et par extension les séquences nucléiques correspondantes. L'invention est fondée sur la découverte d'une séquence d'acides nucléiques purifiée, caractérisée en ce qu'elle comprend tout ou partie d'une séquence codant pour un ou plusieurs transcrits, qui code pour une protéine contenant des domaines présentant le consensus des facteurs de transcription à doigts de zinc et des facteurs à domaine BTB/POZ, répondant à la SEQ ID NO:1ou à une séquence présentant un niveau d'homologie avec ladite séquence SEQ ID NO:1 supérieur ou égal à 70%. On entend par séquence homologue, aussi bien une séquence qui présente une identité complète ou partielle avec la séquence SEQ ID NO:1précitée, qu'une séquence qui présente une similarité partielle avec ladite séquence SEQ ID NO:1, comme par exemple la SEQ ID NO: 64. Selon un mode de réalisation avantageux dudit fragment, il présente à la fois des motifs correspondant à un domaine BTB/POZ et un domaine correspondant à des motifs dactyles de type Krüppel et arrangés en tandem, ou à une séquence présentant un niveau d'homologie supérieur ou égal à 70% avec tout ou partie de ladite séquence SEQ ID NO:1. Lesdits fragments constituent une nouvelle séquence appelée Myoneurine ; fragments selon la présente invention présentent: - une région 5' non-codante de 1761 nt (SEQ ID NO: 2). Les régions communes à SEQ ID NO:1 et SEQ ID NO:2 sont soulignées. - un long cadre de lecture ouvert de 1830 nt (positions 137 nt- 1967 nt sur la séquence ID NO: 1) codant pour une protéine de séquence inédite de 610 acides aminés (SEQ ID NO:52 et figure 3). Le codon d'initiation de la protéine déduite remplit les critères attendus d'un site d'initiation de la traduction (Kozak, M. (1991) J. Biol. Chem. 266 : 19870). On retrouve à l'intérieur de cette séquence protéique un domaine N-terminal présentant le consensus d'un domaine BTB/POZ (Bardwell, V. J. et Treisman, R. (1994) Genes Dev. 8: 1664- 1677- Zollman et coll. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 : 10721), reconnu pour présenter des fonctions d'interactions protéiques hétéro- ou homodimériques et que l'on retrouve associé à des domaines dactyles à zinc dans des facteurs de transcription ou de régulation de l'expression des gènes. Un domaine composé de 8 motifs dactyles à zinc associés en tandem qui présentent la séquence consensus des motifs dactyles appartenant à la famille des facteurs de transcription de type Krüppel (Rosenberg, U. B. et coll. (1986) Nature, 319,336-339) ou C2-H2 est identifié dans le même cadre de lecture. Les motifs dactyles dactyles à zinc sont joints par des motifs de liaison de 6 acides aminés dit His-Cys link , et qui sont également de type Kriippel. La région entre les acides aminés 112 et 302, présente 2 enchaînements d'acides aminés basiques, 174KKSSQTKKKKKATNSPK190 et 257KRKRGK262, analogues aux sites de localisation nucléaire rencontrés dans des facteurs de régulation de l'expression des gènes. Ces différents motifs sont caractéristiques d'un facteur de transcription ou de régulation de l'expression des gènes. - une région 3' non-codante comprise à la fois dans la SEQ ID NO:1 et dans la SEQ ID NO:3. La SEQ ID NO:3 prolonge de 1045 nt la SEQ ID NO:1. La région 3' noncodante contient trois sites signaux de polyadénylation, dont un signal de polyadénylation situé au nucléotide 2041 de SEQ ID NO: 1 et qui est utilisé par le transcrit correspondant au clone 1 (figure 1). Les régions communes à SEQ ID NO:1 et SEQ ID NO:3 sont soulignées. La présente invention englobe les séquences appartenant à la Myoneurine telle que définie ci-dessus (présence de la séquence SEQ ID NO: 1 ou associées telles que SEQ ID NO:2 et/ou SEQ ID NO:3, ou d'une séquence homologue telle que SEQ ID N0: 64 ; elle englobe également les séquences nucléiques inverses complémentaires des précédentes ainsi que les fragments issus des régions codantes des séquences précédentes correspondant à un cadre glissant supérieur ou égal à 14 nucléotides ou leurs séquences complémentaires. Ces différents fragments peuvent avantageusement être utilisés comme amorces ou sondes. Parmi ces fragments on peut citer de préférence les fragments suivants: Amorces humaines: - EXOR: 5'CGAGAATGAGTGATAAGAGA3' (SEQ ID NO: 4) - MN5R: S'GGTGCTCACAGTGGTGCGAATACTGCAT3' (SEQ ID NO: 5) - MZ3S: 5'GGCATTcrrCTcrTAATGCTATGCTATr3' (SEQ ID NO: 6) - ZATG7: 5'ATCAAGGGTAAAATTCCATTCTGA3' (SEQ ID NO: 7) - ZTGA9: S'ATGATATCTTAGCAATTCCAATATT3' (SEQ ID NO: 8) - YTS86: S'CACATTGGCITGGCCITGGAATA3' (SEQ ID NO: 9) - KZR4: 5'çATGAATcTrGAGATrGOEAGAA3' (SEQ ID NO: 10) - 6855: 5'CCGGTGGAAACrGCrGCATGT3' (SEQ ID NO: 11) - 5BZ3: 5'AACACTTCTACCACcnTcrc#3' (SEQ ID NO: 12) - STY68: 5'GGTATTCCAAGGCCAAGCCAAT3' (SEQ ID NO: 13) - 6Z63: 5'TTCCrTGCTATATCTGTGG\ATT3' (SEQ ID NO: 14) - ZRP35: 5'ACACATCAATAAGrGACGGTGAA3' (SEQ ID NO: 15) - PEZ35: 5'ccAAcTGTAcc-TcAGmccAAG3' (SEQ ID NO: 16) - ZDE53: 5'GGCTGAGTCTGAACGGATCC3' (SEQ ID NO: 17) - EDZ35: 5'CGACGCTCAGTCTCCAGG3' (SEQ ID NO: 18) - GBZ35: S'TGGTGGACATGGGACTGAC1TA3' (SEQ ID NO: 19) - TA55Z: S'GCATCCCAGACTTCrGTCACCAG3' (SEQ ID NO: 20) - 193GBZ: S'GCCAATCAAACAGCATGGTGATA3' (SEQ ID NO: 21) - GBZI 83-.5'cTwTATcATrcrAAcAcrcATA3' (SEQ ID NO: 22) - RPBZ4: 5'GGTGCTCACAGTGGTGCGAATA3' (SEQ ID NO: 23) - HZNC: S'CCTCfGTTACTCCTGTTATCGA3' (SEQ ID NO: 24) - ZPR3: S'CGCrAACGCCCCrrGTrrAGGATTTGCC3' (SEQ ID NO: 25) - ZD27: 5'GGAGGCCAGCACATTOcrATGAGcrrT3' (SEQ ID NO: 26) - ZH5: S'CCATCAGCCITCACCI'GACTCTGATCAA3' (SEQ ID NO: 27) - ZFl: S'GCAACITACAGTTTGCAACTTCr3' (SEQ ID NO: 28) - ZF2: 5'CTGGTAAGGTGCATATATTCATA3' (SEQ ID NO: 29) - ZF3: 5'GAGAGAAATCAGAAGTATCTACA3' (SEQ ID NO: 30) - ZF4: 5'AATAGAGAAATAGCACAATTCTT3' (SEQ ID NO: 31) - ZF5: 5'CGTAAGGTTTGACTCCTTTATGT3' (SEQ ID NO: 32) - ZF6: 5'GGAAGGCATTTGCTGTCTCTAG3' (SEQ ID NO: 33) - ZF7: 5'CCGTTTCACTGTAACATGTGC3' (SEQ ID NO: 34) Amorces génomiques humaines - EIMl: 5'CTITAAATCTTGACAGGTAAAGTACACACA3' (SEQ ID NO: 35) - IEM1: 5'TTTCCTTGCAGTTGGAATGTTA3' (SEQ ID NO: 36) - EIM2: 5'AAGAACTCATACAGGTGAGACGGGTGTG3' (SEQ ID NO: 37) - IEM2: 5'TTGTTCCnTAGGTGAGAAGCCAT3' (SEQ ID NO: 38) - EIM3: 5'AAGATTCATGCAAGGTAAAAAACCAAAT3' (SEQ ID NO: 39) - IEM3: 5'C'TTTATTTACTAACAGGAAGCATAGTG3' (SEQ ID NO: 40) - EIM4: 5'CGAAAACATACAGGTAAGTTGACAGGGA3' (SEQ ID NO: 41) - IEM4: 5'TTTTATTTTCCATCTAGGTGAAAAACCA3' (SEQ ID NO: 42) - EIMS: 5'TTTCGGTCCCATACAGGTCTGTGTTT3' (SEQ ID NO: 43) - IEM5: 5'CAGGAGAAAGACCATTTATCTGCG3' (SEQ ID NO: 44) - EIM6: 5'AAAACAAAAGTCCATTCTGGTAAA3' (SEQ ID NO: 45) - IEM6: 5'TTCTAGGTGCAGATAAAACTCTAG3' (SEQ ID NO: 46) Amorces murines: - 27 MZ: 5'GGCAAGCACATTCCTATGCGCCTT3' (SEQ ID NO: 47) - MOZ-5: 5'GTTTCCCTTGGGCGGCTACG3' (SEQ ID NO : -METMO: 5'ATCAAGGGTGAAATCCCATTCTGC3' (SEQ ID NO: 49) - ZR/2856: S'GCtITGAATCITGAGGTTGC1'AGAAG3' (SEQ ID NO: 50) - ZS 119: 5'TCTGCGAGGACGGCCTAGCAA3' (SEQ ID NO: 51) Tous les oligonucléotides sont conçus pour pouvoir générer une amorce sens et une amorce anti-sens par un décalage de la séquence de l'amorce de référence de 1 à 9 nucléotides vers le côté 5' ou vers le côté 3': la modification de la séquence de l'amorce peut entraîner une modification de la taille de l'amorce. Les amorces choisies peuvent être optimisées selon les cas par un raccourcissement ou un allongement portant sur 1 à 9 nucléotides vers le côté 5' et/ou vers le côté 3'. De manière préférée, l'hybridation, le clonage, le sous-clonage, la détection, la préparation, la purification et l'analyse des acides nucléiques, des peptides ou des protéines, ainsi que l'hybridation in situ et l'immunohistochimie sont réalisées dans les conditions décrites dans les ouvrages suivants, ou dans les références qu'ils citent - Current Protocols in Molecular Biology. Eds. F.M Ausubel, R. Brent & R. E Kingston et coll. Green Publishing associates and Wiley Interscience. - Molecular Cloning: a laboratory manual. Eds. J. Sambrook, E. F. Fritsch & T. Maniatis. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor. - Manipulating the Mouse Embryo. A laboratory manual. Eds. B. Hogan, R. Beddington, F. Constantini, E. Lacy. 2ndédition. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor. 1994. - The Practical Approach series. Eds. D. Rickwood & B. D. Ames. IRL Press and Oxford University Press. En particulier, antibodies 1 & II; DNA cloning I, II, III; Nucleic acid and protein séquence analysis ; Nucleic acid hybridization; Nucleic acid sequencing ; Oligonucleotide synthesis ; purification applications ; purification methods ; Protein sequencing ; and translation ; electrophoresis of nucleic acids ; Gels electrophoresis of proteins; Genome analysis ; HPLC of macromolecules ; genetic diseases; Microcomputing in biology ; neurobiology ; testing; Essential molecular biology 1 & II. - PCR Protocols. A guide to Methods and Applications. Eds. M. A. Innis, D. H. Gelfand, J. J. Sninsky, T. J. White. Académie Press, Inc., San Diego, California. - The DIG System User's Guide for Filter Hybridization. Boehringer Mannheim. - Nonradioactive in situ Hybridization. Application Manual. Second edition. Boehringer Mannheim. - Proteome research : frontiers in functional genomics. Eds M.R. Wilkins & coll.. Springer. Des séquences polypeptidiques générées par ces transcrits peuvent donc être potentiellement produites (SEQ ID NO: 52- 63 et figures 2-4) et des fonctions biologiques peuvent donc être envisagées ; exemple des interactions protéine-protéine avec des facteurs de transcription par l'intermédiaire du domaine BTB/POZ, ou encore des interactions avec les acides nucléiques par l'intermédiaire des domaines dactyles. Des différences de séquences observées et d'éventuelles modifications de l'expression normales ou pathologiques seraient à même de modifier la fonction. Toutefois les séquences selon la présente invention se distinguent des séquences à domaines BTB/POZ ou à domaines dactyles antérieurement décrites en ce que ces séquences, selon l'invention sont significativement différentes selon les critères précédemment définis et en fonction de certaines caractéristiques spécifiques, par exemple la région intermédiaire entre le domaine BTB/POZ et les motifs dactyles. Dans le contexte d'application à des pathologies, les molécules de la famille de la Myoneurine, comme par exemple la forme alternative SEQ ID N0:64, pourraient être associées par exemple, à des pathologies affectant les tissus où s'exprime la Myoneurine, par exemple, le muscle squelettique, le testicule, l'ovaire, le coeur, le placenta, le thymus, le colon, les leucocytes, la prostate, le cerveau, l'intestin, le pancréas, le rein, le poumon et la rate. Leur action pourrait porter sur la déclaration, l'aggravation d'une pathologie, la modification du calendrier d'activation ou du patron d'expression de certains gènes, ou encore la protection vis-à-vis de la maladie, ou encore la participation ou la contribution à la restauration d'une structure altérée. Dans le contexte d'application à des pathologies neuromusculaires (comme par exemple, des dystrophies, des polymyosites, des rhabdomyosarcomes, des lésions musculaires), on peut relever que la myoneurine se surexprime après une lésion (comme par exemple, une dénervation), ou une altération ou une lésion de l'innervation périphérique ou du muscle squelettique lui-même (comme par exemple, un écrasement nerveux ou musculaire). La surexpression dans la fibre musculaire est observé à la fois au niveau du sarcoplasme, mais aussi au niveau l'ensemble des noyaux (comme par exemple, les noyaux sous-synaptiques, les noyaux des cellules satellites, les noyaux de la jonction myotendineuse, les noyaux du fuseau). La myoneurine s'exprime dans la moelle, en particulier au niveau des motoneurones et de leurs prolongements ; myoneurine s'exprime aussi au niveau des nerfs, en particulier au niveau de la cellule de Schwann et de l'axone ; myoneurine pourrait en conséquence jouer un rôle dans la régulation de certains gènes associés au système neuromusculaire. Il est remarquable de constater qu'un retour à l'état initial est observé après restauration du tissu, par exemple lorsque la lésion a été réparée. A cet égard, on peut relever que la myoneurine s'exprime au niveau de régions clés du muscle, comme par exemple la jonction neuromusculaire, la jonction myotendineuse, les cellules satellites, la région du fuseau. Les structures selon l'invention sont à même de réguler l'expression de gènes synaptiques, par exemple lors de processus d'innervation ou encore de réinnervation normaux ou pathologiques. Il est remarquable de constater que le facteur abrupt qui appartient à la famille des protéines à domaines BTB et dactyles, contrôle la spécificité des connections musculaires chez la Drosophile (Hu S. et. coll. (1995) Genes Dev. 9: 2936-2948). De même, l'aptitude à activer des cellules satellites quiescentes, par exemple par l'intermédiaire de marqueurs précoces d'activation, pourrait jouer un rôle dans la régénération de la fibre musculaire, par exemple en modulant la prolifération, ou la différenciation des cellules satellites, ou encore la fusion des cellules satellites en myotubes multinucléés, puis leur maturation afin de remplacer la fibre endommagée, ou modifier la structure musculaire. De même, l'expression de la myoneurine au niveau des noyaux de la jonction myotendineuse, qui constitue une région de renouvellement musculaire très actif, en particulier d'allongement des myotubes et de la fibre musculaire, serait à même de favoriser un processus régénératif, en particulier lors d'un arrachement ligamentaire ou tendineux. A cet égard, il est remarquable de constater que le facteur Broad-complex, qui appartient à la famille des protéines à domaines BTB et dactyles, joue un rôle essentiel dans la régulation de l'attachement des muscles thoraciques de la Drosophile (Sandstrom, D. J. et coll. (1997) Dev. Biol. 181 : 168-185). D'une manière générale, la Myoneurine ou des formes tronquées ou partielles ou apparentées pourraient être impliquées dans des pathologies affectant les cellules satellites, comme par exemple la maladie de Steinert, qui se caractérise par une immaturité des cellules satellites. De même, la Myoneurine s'exprime au niveau de la région du fuseau neuromusculaire. A cet égard, on peut remarquer que les séquences décrites selon l'invention s'expriment dans une région cruciale pour la régulation sensorimotrice responsable des sensations de mouvement et de position du corps. D'une manière générale, la Myoneurine ou des formes tronquées ou partielles ou apparentées pourraient être impliquées dans des pathologies affectant le fuseau, comme par exemple des dystonies. La détection rendue possible de domaines appartenant à la myoneurine suggère des applications possibles à la fois au niveau prophylactique, du pronostic et du diagnostic; par exemple des approches immunologiques ou d'amplification génique permettant de comparer des individus normaux servant de référence avec des patients, seraient à même de favoriser le dépistage, d'améliorer la détection précoce de la déclaration de la maladie et/ou de suivre l'évolution d'une pathologie chez des patients pouvant présenter une susceptibilité ou ayant déclaré la maladie, ou encore chez des individus considérés comme normaux, sur les critères anatomo-pathologiques classiques, ou les critères cliniques actuels. De même, l'action de la Myoneurine sur certains de ses gènes cibles, selon un mode normal ou conditionnel, serait à même de favoriser un processus de régénération cellulaire ou tissulaire et à terme de restauration fonctionnelle. De même, et de manière avantageuse, la détection de la Myoneurine serait à même de constituer un test d'évaluation précoce de l'efficacité d'un traitement. L'invention a également pour objet les transcrits générés à partir des séquences précitées ainsi que celles présentant éventuellement des modifications avec les séquences de référence décrites dans l'invention lorsqu'ils sont exprimés chez certains patients. D'une manière avantageuse, la modification de l'expression de la Myoneurine serait à même d'influer sur la structure et la masse musculaire. Les sondes nucléiques et immunologiques spécifiques , telles que définies dans la présente invention sont à même de favoriser l'identification et la détection de motifs anormalement exprimés dans le cadre de pathologies associées au développement cellulaire ou tissulaire, au premier rang desquelles des pathologies affectant la sphère neuromusculaire. Des manoeuvres thérapeutiques peuvent être envisagées par usage de certaines des séquences nucléiques contenues dans le gène de la Myoneurine et les séquences de la même famille, comme par exemple la SEQ ID NO:64, ou des structures polypeptidiques déduites ou par utilisation de peptides ou protéines, ou d'anticorps spécifiques. La présente invention a également pour objet des séquences nucléiques hybrides, caractérisées en ce qu'elles comprennent des séquences ou des motifs appartenant à la Myoneurine ou d'éléments appartenant à la famille de la Myoneurine, avec des motifs similaires présents dans des facteurs analogues ; telles séquences hybrides sont vraisemblablement à même d'acquérir de nouvelles potentialités, en particulier au niveau du ciblage cellulaire ou tissulaire, de l'interaction avec de nouvelles molécules, en particulier des facteurs de transcription ou des récepteurs hormonaux, ou encore d'interagir avec de nouvelles séquences nucléiques cibles et par conséquent de nouveaux gènes. De telles séquences hybrides sont vraisemblablement à même de pouvoir déclencher, ou aggraver un processus pathologique ou au contraire de favoriser une protection ou une rémission partielle ou une guérison totale et définitive. La présente invention a également pour objet un réactif de diagnostic pour la détection différentielle de séquences nucléiques complètes ou partielles de la Myoneurine, présentant des motifs sélectionnés parmi les séquences SEQ ID NO:1 et/ou SEQ ID NO:2 et/ou SEQ ID NO:3, caractérisé en ce qu'il est sélectionné dans le groupe constitué par les séquences SEQ ID NO: 1- 51, les séquences nucléiques complémentaires des séquences précédentes, par les fragments nucléotidiques capables de définir ou d'identifier les séquences SEQ ID NO:1 et/ou SEQ ID NO:2 et/ou SEQ ID NO:3 et toute séquence flanquante ou les chevauchants ainsi que par les fragments issus des régions codantes des séquences SEQ ID NO: 52-63, correspondant à un cadre glissant supérieur ou égal à 14 nucléotides ou leurs séquences complémentaires, éventuellement marquées avec un marqueur approprié. Les séquences des sondes nucléiques, ribonucléiques ou oligonucléotidiques utilisées seront choisies dans les régions définies par les séquences SEQ ID NO:1 et/ou SEQ ID NO:2 et/ou SEQ ID NO:3 ou leurs régions flanquantes et/ou toute séquence normalement ou pathologiquement insérée ou délétée, par exemple par épissage alternatif; par exemple la SEQ ID NO:64. Par exemple, les oligonucléotides amorces seront choisis dans les régions définies par les séquences SEQ ID NO:1et/ou SEQ ID NO:2 et/ou SEQ ID NO:3, ainsi que dans toutes séquences adjacentes (amont ou aval) ou insérées capables de permettre une amplification spécifique. Parmi les marqueurs appropriés, on peut citer, les isotopes radioactifs, les enzymes, les fluorochromes, des marqueurs chimiques (biotine), les haptènes (digoxygénine) et les anticorps ou les analogues de bases appropriés. De manière préférée: - ledit réactif est sélectionné parmi les séquences SEQ ID NO: 4-51 et est apte à être utilisé comme amorce. - ledit réactif est sélectionné parmi les séquences suivantes : un fragment amplifié par le couple d'amorces SEQ ID NO:20 et SEQ ID NO:26 (amorces TA55Z et ZD27). un fragment amplifié par le couple d'amorces SEQ ID NO:7 et SEQ ID NO:9 (amorces ZATG7 et YTS86) et est apte à être utilisé comme sonde. un fragment amplifié par le couple d'amorces SEQ ID NO:29 et SEQ ID N0:31(amorces ZF2 et ZF4) et est apte à être utilisé comme sonde. un fragment de restriction EcoRI- Styl de 0. 75 kb (sonde a de la figure 1) appartenant à la région 5' de SEQ ID:1 et est apte à être utilisé comme sonde. un fragment de restriction EcoRI- Styl de 0. 8 kb (sonde b de la figure 1) appartenant à la région centrale de SEQ ID:1 et est apte à être utilisé comme sonde. un fragment de restriction Dral-EcoRI de 0. 45 kb ( sonde c de la figure 1) appartenant à la région 3' de SEQ ID:1et est apte à être utilisé comme sonde. La présente invention a également pour objet un procédé de détection rapide et différentiel des séquences nucléiques de Myoneurine et/ou de leurs variants normaux ou pathologiques, par hybridation et/ou amplification génique, réalisé à partir d'un échantillon biologique, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend: (a) une étape dans laquelle l'on met en contact un échantillon biologique à analyser avec au moins une sonde telle que définie ci-dessus et (b) une étape dans laquelle on détecte par tout moyen approprié, le ou les produits résultant de l'interaction séquence nucléotidique-sonde. Conformément au dit procédé, il peut comprendre: * préalablement à l'étape (a): . une étape d'extraction de l'acide nucléique à détecter, et . au moins un cycle d'amplification génique et * postérieurement à l'étape (b): . une étape de comparaison des séquences nucléiques obtenues dans ledit échantillon biologique avec les séquences nucléiques selon l'invention par tout moyen approprié et notamment par séquençage, Southem-blot, coupure de restriction, SSCP ( Single-Stranded Conformational Polymorphism ou toute autre méthode permettant d'identifier une insertion ou une délétion ou encore une simple mutation entre les différentes séquences comparées. Conformément à l'invention, les séquences de Myoneurine selon l'invention sont ainsi comparées aux séquences nucléiques présentes dans l'échantillon biologique à analyser et permettent la détection de séquences homologues de patients atteints de pathologies, susceptibles de mettre en jeu une modification de leur génome. De manière avantageuse, lesdites comparaisons géniques sont menées à partir d'ADN génomique provenant d'individus témoins et de patients. Une amplification génique classique par PCR menée à l'aide d'amorces 5'sens et 3'- antisens encadrant ou comprenant la zone à étudier. Également de manière avantageuse, les séquences des sondes nucléiques, ribonucléiques et oligonucléotidiques utilisées sont choisies dans les régions du gène de la Myoneurine ou ses régions flanquantes: par exemple les oligonucléotides amorces pour la Myoneurine seront choisis dans la SEQ ID NO: 1, ainsi que dans toute séquence adjacente (amont ou aval), comme par exemple SEQ ID NO:2 et/ou SEQ ID NO:3, capables de permettre une amplification spécifique, comme précisé ci-dessus. Elles sont de préférence sélectionnées dans le groupe constitué par : un fragment de restriction EcoRI- Styl de 0. 75 kb (sonde a de la figure 1) appartenant à la région 5' de SEQ ID:1et est apte à être utilisé comme sonde. un fragment de restriction EcoRI- Styl de 0. 8 kb (sonde b de la figure 1) appartenant à la région centrale de SEQ ID:1et est apte à être utilisé comme sonde. un fragment de restriction Dral-EcoRI de 0. 45 kb ( sonde c de la figure 1) appartenant à la région 3' de SEQ ID:1et est apte à être utilisé comme sonde. L'étape d'amplification génique est notamment réalisée à l'aide d'une des techniques d'amplification génique suivante : la Qss-réplicase, PCR (Polymerase Chain Reaction), LCR (Ligase Chain Reaction)... La présente invention a également pour objet un procédé de détection des transcrits, tels que définis ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend : - le prélèvement des ARN messagers provenant de tissus témoins et de tissus prélevé chez des patients et - l'analyse qualitative et/ou quantitative desdits ARNm, par hybridation in situ, par dot-blot, Northem-blot, cartographie à l'ARNase ou RT-PCR, à l'aide d'un réactif de diagnostic tel que défini ci-dessus. La présente invention a également pour objet des produits de traduction, caractérisés en ce qu'ils sont codés par une séquence nucléotidique telle que définie ci-dessus. La présente invention a également pour objet un peptide, caractérisé en ce qu'il est susceptible d'être exprimé à l'aide d'une séquence nucléotidique sélectionnée dans le groupe constitué par les séquences SEQ ID NO:1-3 et 64, telles que définies ci-dessus. Ledit peptide englobe également les peptides dérivés comprenant entre 5 et 610 aminoacides (SEQ ID NO: 52-63 et leurs fragments d'au moins 5 aminoacides). Lesdits peptides sont traduits à partir des séquences nucléiques telles que définies ci-dessus, selon les combinaisons offertes par l'usage des différents cadres de lecture possibles. Selon un mode de réalisation avantageux desdits peptides, ils sont notamment sélectionnés parmi les séquences SEQ ID NO: 52-63. Selon un autre mode de réalisation avantageux desdits peptides, ils sont obtenus à partir des séquences nucléiques telles que définies ci-dessus, dans lesquelles au moins un codon non-sens peut être remplacé par un codon codant pour l'un des aminoacides suivants : Phe (F), Leu (L), Ser (S), Tyr (Y), Cys (C), Trp (W), Gin (Q), Arg (R), Lys (K), Glu (E) ou Gly (G). Selon un autre mode de réalisation avantageux desdits peptides, ils sont obtenus à partir des séquences nucléiques telles que définies ci-dessus, dans lesquelles un acide aminé peut être remplacé par un acide aminé homologue, selon les règles classiques rappelées ci-après : (K) ou Arg (R), Asp (D) ou Glu (E) ou Asn (N) ou Gln (Q), Ala (A) ou Gly (G), Ile (I) ou Leu (L) ou Val (V), Thr (T) ou Ser (S), Phe (F) ou Tyr (Y) ou Try (W). L'invention englobe ainsi les peptides déduits ou les protéines déduites correspondant à tout ou partie des séquences nucléiques décrites dans l'invention, et présentant éventuellement des modifications avec les séquences de références décrites dans l'invention, lorsqu'ils sont exprimés chez certains patients. En particulier, l'invention englobe les séquences complètes ou partielles obtenues selon les 3 cadres de lecture sens et les 3 cadres de lecture inverses et complémentaires. De manière avantageuse la Myoneurine selon l'invention présente : - un domaine N-terminal de la famille des domaines d'interactions protéineprotéine de type BTB/POZ. Ce type de domaine a la caractéristique de pouvoir permettre des interactions hétéro ou homodimériques, en particulier lorsqu'il appartient à un facteur de transcription. - deux sites putatifs de localisation nucléaire, identifiés dans deux enchaînements peptidiques commençant au niveau des acides aminés 174 (KKSSQTKKKKKATNSPK) et 257 (KRKRGK). Ces sites pourraient être responsables de la localisation nucléaire de la myoneurine (Nigg, E. A. et coll (1991) Cell, 66,15-22),. - six sites de type PEST, que l'on retrouve dans de nombreuses protéines régulatrices. Ces sites permettraient d'assurer une dégradation spécifique de la Myoneurine. - 4 motifs "S/T-P", situés de part et d'autre des domaines dactyles. Les domaines S/T-P , sont préférentiellement représentés dans les protéines régulatrices des gènes. - 8 domaines de type dactyle à zinc de la famille des facteurs de type Krüppel, ainsi que des sites de liaison dits H-C, qui assurent la liaison entre les domaines dactyles, et qui appartiennent aussi à la famille des facteurs de type Krüppel. Lesdits peptides ou protéines peuvent présenter avantageusement les caractéristiques structurales requises pour permettre une interaction avec des acides nucléiques et/ou des peptides ou des protéines, et en conséquence être aptes à interagir avec des gènes ou des facteurs régulateurs modulant l'expression desdits gènes. Lesdits peptides ou protéines peuvent présenter avantageusement des propriétés biologiques. Les produits protéiques générés par les séquences nucléiques SEQ ID NO: 1-3 ou produits parallèlement peuvent avantageusement être caractérisés par des microméthodes d'analyse et de quantification des peptides et des protéines: HPLC/FPLC ou équivalent, électrophorèse capillaire ou équivalent, techniques de microséquençages (méthode d'Edman ou équivalent, spectrométrie de masse ou équivalent...). L'invention a également pour objet des anticorps dirigés contre l'un ou plusieurs des peptides décrits ci-dessus et leur utilisation pour la mise en #uvre d'une méthode de détection in vitro, notamment différentielle de la présence d'une telle séquence chez un individu. Lesdits anticorps sont avantageusement des anticorps polyclonaux ou monoclonaux obtenus par une réaction immunologique d'un organisme humain, mammifères, oiseaux ou autres espèces vis-à-vis des protéines, telles que définies ci-dessus. La présente invention a pour objet un procédé de dépistage immunologique différentiel de la Myoneurine et des membres de sa famille normaux ou pathologiques, caractérisé en ce qu'il comprend la mise en contact d'un échantillon biologique avec un anticorps selon l'invention, la lecture du résultat étant révélée par un moyen approprié, notamment EIA ( Enzyme ImmunoAssay ), ELISA ( Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay ), RIA ( Radio-ImmunoAssay ), fluorescence. A titre d'illustration, une telle méthode de diagnostic in vitro selon l'invention comprend la mise en contact d'un échantillon biologique prélevé chez un patient, avec des anticorps selon l'invention et la détection à l'aide de tout procédé approprié, notamment à l'aide d'anti-immunoglobulines marquée, des complexes immunologiques formés entre les protéines produites normalement ou pathologiquement et les anticorps. Des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, produits à partir d'antigènes correspondants à des peptides de synthèse, de polypeptide ou protéines recombinants, permettent de suivre l'expression des peptides ou protéines produits normalement ou pathologiquement. L'analyse est de préférence effectuée par ELISA, ou équivalent, Westernblot ou équivalent, ou par immunohistochimie. La présente invention a également pour objet un procédé d'identification et de détection de motifs appartenant à la Myoneurine ou à sa famille, anormalement exprimés dans le cadre de pathologies associées au développement, en particulier dans le cas de cancer, en particulier au niveau de la sphère neuromusculaire, au premier rang desquelles la synapse, les cellules satellites, la jonction myotendineuse, ou la région du fuseau caractérisé en ce qu'il comprend l'analyse comparée des séquences extraites d'un échantillon biologique avec les séquences selon l'invention. La présente invention a aussi pour objet l'application des séquences nucléiques ou des séquences protéiques selon l'invention au diagnostic, au pronostic, à l'évaluation de la susceptibilité génétique, à toute action thérapeutique, à toutes maladies humaines induites, innées ou acquises, en particulier celles à composantes cancéreuses, en particulier celles associées à la synapse, aux cellules satellites, au fuseau, ou à la jonction myotendineuse, les syndromes associés où intervient tout ou partie des séquences nucléiques selon l'invention et des formes apparentées. La présente invention a aussi pour objet l'utilisation de séquences nucléiques pour la préparation de compositions destinées à la thérapie génique ou à des modifications géniques, par exemple à visée réparatrice dans le domaine médical, ou à usage vétérinaire et/ou agro-alimentaire, caractérisées en ce qu'elles comprennent des séquences ou motifs nucléiques selon l'invention. La présente invention a en outre pour objet des séquences nucléiques hybrides, caractérisées en ce qu'elles comprennent des séquences ou motifs nucléiques selon l'invention, combinés avec des séquences similaires appartenant à d'autres facteurs, par exemple des domaines BTB/POZ ou dactyles à zinc. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en #uvre du procédé objet de la présente invention ainsi qu'aux dessins annexés, dans lesquels : - Figure 1. Stratégie du clonage de la Myoneurine humaine. Les rectangles correspondent aux cadres de lecture ouverts. Les flèches indiquent la position et l'orientation des oligonucléotides utilisés pour la détermination de l'extrémité 5' du transcrit de la Myoneurine. La boite hachurée correspond au domaine BTB/POZ. La boite avec des pointillés aux 8 domaines dactyles à zinc. (A) 17 indique l'existence d'une extrémité polyadénylée pour le clone 1. Les sites de restriction indiqués sur le clone 1, D pour Dral, S pour Styl, X pour Xhol, correspondent aux sites de restriction utilisés pour générer les sondes nucléiques a, b et c. - Figure 2. Séquence nucléotidique et protéique déduite du transcrit codant pour la structure protéique complète de la Myoneurine. Les régions codantes sont en majuscules. La position 1 correspond à la méthionine associée au codon d'initiation de la traduction. Trois codons non-sens situés en amont de la région codante et dans le même cadre de lecture, ainsi que les sites signaux de polyadénylation situés dans la région 3' noncodante, sont soulignés. Une astérisque spécifie un site de polyadénylation effectivement utilisé dans le clone 1. - Figure 3. Alignement du domaine BTB/POZ de la Myoneurine avec les domaines correspondants identifiés dans d'autres facteurs à domaines BTB/POZ. Les numéros d'accession à GenBank sont indiqués. Les acides aminés identiques sont dans des boites noires. Des acides aminés homologues identifiés dans plus de 50% des séquences alignées sont dans des boites grisées. Un triangle noir indique des séquences surnuméraires. - Figure 4. Alignement des 8 domaines dactyles à zinc de la Myoneurine. Les boites noires précisent les acides aminés invariants. Les boites en grisé indiquent les acides aminés homologues. - Figure 5. Northern de différents tissus humains : (1), cerveau (2), placenta (3), poumon (4), foie (5), muscle squelettique (6), rein (7), pancréas (8), rate (9), thymus (10), prostate (11), testicule (12), ovaire (13), intestin (14), colon (15), leucocytes (16). 3 g d'ARN polyadénylés sont déposés dans chaque puit. L'hybridation est effectuée à l'aide de la sonde a (figure 1 ). - Figure 6. Caractérisation des jonctions intron-exon du gène de la Myoneurine. Les régions appartenant aux exons sont en majuscules, et les introns sont en minuscules. Les introns sont indiqués par des pointillés et leur taille est spécifiée. - Figure 7. Comparaison des séquences protéiques des Myoneurines humaine (H) et murine (M). Les acides aminés identiques sont spécifiés par 2 points et les acides aminés homologues sont indiqués par un point. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1 : de clones ADNc codant pour la SEQ ID NO: 1. Un anticorps polyclonal obtenu chez le lapin et dirigé contre une fraction protéique de plasma séminal humain retenue sur une colonne d'héparine, a été utilisé pour cribler une banque d'expression d'ADNc testiculaire humain cloné dans le phage #gt11. Les protocoles classiques de détection immunologique ont été utilisés (Huynh, T. V. et coll. (1985). Deux clones ont été isolés. Le clone 1 possède une extrémité 3' non-codante courte avec une queue polyadénylée de 111 nt, en tenant compte l'extrémité polyadénylée. Le clone 2 présente une extrémité 3' non-codante de 870 nt. Le clone 3 a été obtenu après criblage d'une banque d'ADNc testiculaire humain cloné dans #gt10, à l'aide d'une sonde nucléotidique de 750 pb couvrant l'extrémité 5' du clone 1 et marquée à la digoxigénine (selon le protocole classique de Boehringer-Mannheim). L'extrémité 5' du transcrit a été déterminée par PCR à partir de la banque ADNc #gt11. Une amorce oligonucléotidique spécifique de #gt11 (Rgtll: TTGACACCAGACCAACTGGTAATG) est utilisée en association avec l'amorce externe 3' HZ33, puis une seconde amplification est menée secondairement, dans le cadre d'une PCR nichée, à l'aide de l'amorce interne ZD27. Les clones ADNc 1,2 et 3, ainsi que les produits d'amplification de PCR ont été séquences manuellement à l'aide du kit de T7-ADN polymérase Sequenase II (Amersham Pharmacia Biotech Inc. ) ou à l'aide d'un séquenceur automatique ABI 377 et du kit de séquençage DYEnamic ET (Amersham Pharmacia Biotech Inc.). La stratégie de clonage est indiquée dans la Figure 1. La superposition des différentes séquences nucléotidiques a permis de reconstituer une séquence nucléique (Figure 2) codant pour un nouveau transcrit humain (SEQ ID NO: 1). Cette séquence nucléique présente un unique et long cadre de lecture ouvert de 1830 nt qui code pour une séquence protéique déduite complète inédite de 610 acides aminés (SEQ ID NO: 52), dont la masse moléculaire apparente est évaluée à 68 kDa. Une analyse de la séquence protéique déduite met en évidence dans la région Cterminale, un motif caractéristique, dit à doigts de zinc mettant en jeu 2 cystéines et 2 histidines. Ce motif C2H2, est répété 8 fois en tandem (SEQ ID NO: 54- 62). Le motif consensus déterminé pour les domaines dactyles de la myoneurine humaine est comparé avec la séquence consensus des facteurs de type, TFIIIA et Krüppel: (Myoneurine) Y/F-X-C-X2 - C-X3-F-X5-L-X2-H-X3 - H-XS-6 (Krüppel) Y/F-X-C-X2-4-C-X3-F-X5-L-X2-H-X3-4-H-X5 On peut noter que: - les domaines dactyles sont séparés par 7 motifs dits "liens H-C", spécifiques des facteurs nucléaires de type Krüppel (Rosenberg, U. B. et coll. (1986) Nature, 319,336-339). On peut dénombrer 4 motifs strictement consensuels avec la séquence de liaison de type Krüppel T/SGEKPYE/K, - l'extrémité N-terminale de la protéine (SEQ ID NO:53) présente un consensus parfait avec la région N-terminale de protéines régulatrices. Ce nouveau motif appelé domaine BTB/POZ est structuré autour de plusieurs acides aminés invariants qui signent la caractéristique de la famille: D (11-13 x) A/G H (3 x) L (3 x) S (32-36 x) Y (20 x) L EXEMPLE 2. Obtention de sondes nucléiques et ribonucléiques codant pour la SEQ ID NO 1. Les fragments de restriction ou de PCR obtenus sont respectivement sous clonés dans les plasmides pGEM-4Z ou pGEM-T (Promega) possèdent de part et d'autre de leur site de polyclonage, les séquences promotrices pour les ARN polymérases SP6 et T7. La méthode de compétence utilisée est l'électroporation. Le plasmide et le fragment de PCR sont hybridés dans un rapport de 50 ng de vecteur pour 100 ng de fragment à sous-cloner. L'incubation a lieu une nuit à 22 C, dans le tampon de ligation (66 mM TrisHCI pH 7,5,5 mM MgCI2, 1 mM dithioerythritol, 1mM ATP) en présence de 1 u. de T4 ADN ligase puis est arrêtée par dénaturation 10 minutes à 65 C. Parallèlement, la souche d'E. coli JM 109 est ensemencée une nuit à 37 C dans du milieu LB. Cette préculture est diluée au 1/500 et placée à 37 C jusqu'à une DO600 égale à 1. Pour la suite du mode opératoire les cellules seront toujours conservées au froid. Après une centrifugation de 5 minutes à 3500g à 4 C, le culot cellulaire est resuspendu dans 1/4 vol. d'eau glacée ultra-pure. Cette étape est répétée 5 à 6 fois. Puis le culot est resuspendu dans 1/4000 vol. d'eau ; de glycérol stérile sont ajoutés permettant la conservation des cellules électrocompétentes, par aliquots de 10 l à -20 C. A 50 l de cellules électrocompétentes est ajouté 1 l de la ligation ; tout est soumis à une décharge électrique de 12,5 kV/cm, appliquée pendant 5,8 ms. Les cellules sont rapidement remises en suspension dans le milieu SOC, incubées 1 heure à 37 C, puis étalées, en présence de 2% X-Gal dans du diméthylformamide, et 10 mM d'IPTG, sur une boîte de gélose LB-agar supplémentée en ampicilline (100 g/ml). Après une nuit à 37 C, les clones blancs potentiellement recombinants, sont repiqués de manière ordonnée sur une boîte LB/ampicilline et parallèlement sur un filtre de nylon déposé sur une boîte LB/ampicilline. Ces deux boîtes sont incubées une nuit à 37 C. Les clones recombinants sont alors repérés par hybridation avec une sonde nucléique selon SEQ ID NO: 1, marquée à la digoxygénine. Les clones recombinants sont cultivés dans 50 ml de milieu LB/ampicilline (100 g/ml) en agitation pendant une nuit à 37 C. Après une centrifugation à 3500g pendant 15 minutes à 4 C, le culot bactérien est repris dans 4ml de tampon P1 (50 mM Tris-HCl, 10mM EDTA, 400 g/ml RNase A, pH 8) et 4ml de tampon P2 (200 mM NaOH, 1% SDS). Le mélange est incubé à température ambiante pendant 5 minutes. Après adjonction de 4ml de tampon P3 (2,55M d'acétate de potassium, pH 4,8) le mélange est centrifugé à 12000g pendant 30 minutes à 4 C. Le surnageant est appliqué sur une colonne Qiagen-type 100, prééquilibrée avec 2ml de tampon QBT (750 mM NaCl, 50 mM MOPS, 15% éthanol, pH 7), la colonne est lavée avec 2 fois 4ml de tampon QC (1M NaCl, 50 mM MOPS, 15% éthanol, pH 7) et l'ADN est élué avec 2ml de tampon QF (1,2M NaCl, 50mM MOPS, 15% éthanol, pH 8). L'ADN est précipité avec 0,8 vol. d'isopropanol, et centrifugé à 12000g à 4 C pendant 30 minutes. Le culot est lavé avec de l'éthanol à 70% glacé, puis l'ADN plasmidique est repris par 2 fois 150 l de tampon TE. Les sondes ribonucléiques sont utilisées comme sondes spécifiques, en particulier pour la détection des transcrits exprimés par les séquences analogues (SEQ ID NO: 2-3) ou correspondant à la (SEQ ID NO: 1) selon l'invention. EXEMPLE 3 : de l'expression des transcrits codant pour la SEQ ID NO: 1. La préparation des ARN s'effectue selon la technique classique de Chomczynski et Sacchi ou ses variantes (RNeasy, Qiagen). La séparation des ARNm par électrophorèse et leur transfert sur une membrane de nylon, sont réalisées selon les techniques classiques (Cf. Maniatis). L'hybridation des Northern est effectuée à partir de Northern normalisés vis-à-vis de la -actine. Les sondes nucléiques utilisées proviennent des fragments de restriction EcoRI-Styl, Styl- Dral, et Dral-EcoRI, du clone 1 (sondes a, b, c sur la figure 1) et sousclonées dans pGEM-4Z. Les sondes sont marquées par la technique de marquage aléatoire (méthode dite du random-priming en présence de dATP et de dCTP marqués au P32). Le tampon de marquage est une solution contenant une solution saline de 5X SSPE, du 2X Denhardt, du SDS à 0.5 %, et de l'ADN de laitance de saumon à 100 mg/ml. Après une hybridation réalisée pendant 18 heures à 42 C, en présence des sondes marquées à 2.106 cpmlml, les filtres sont lavés pendant 2 fois 15 min. à température ambiante, par une solution de 2X SSC, 0.5% SDS. Puis, 4 lavages de 15 min. à 50 C sont réalisés dans une solution de 0.1X SSC, 0. 1 % SDS, puis exposés pendant 72 heures à - 70 C, pour une autoradiographie en présence d'un Hyperfilm-MP (Amersham Pharmacia Biotech). L'analyse des tissus humains normaux adultes (coeur, cerveau, colon, foie, intestin, leucocytes, muscle squelettique, pancréas, placenta, ovaire, poumon, prostate, rate, rein, testicule et thymus), montre une forte expression des ARNm au niveau du muscle (Figure 5), d'ou le nom de myoneurine donné à cette nouvelle molécule (Figure 2). Des transcrits codant pour la myoneurine sont aussi observés au niveau du testicule, de l'ovaire, du coeur, du placenta et du thymus. Une expression plus limitée est détectée au niveau du colon, du sang périphérique, de la prostate, de l'intestin, du pancréas, du rein, du poumon et de la rate. Trois transcrits de 5000,3200 et 2500 nucléotides sont spécifiquement reconnus à haute stringence, sauf au niveau du thymus où un transcrit de 7 kb est observé. La représentation relative des trois ARNm est variable selon le tissu étudié. Le transcrit de 2500 nucléotides est majoritairement exprimé dans le muscle et le testicule, alors que les transcrits sont équitablement représentés dans l'ovaire. La spécificité des signaux observé et des sondes utilisées a été mise en évidence par les résultats similaires obtenus avec les 3 types de sondes couvrant les différentes régions de la myoneurine, y compris celle correspondant aux domaines dactyles (Figure 1 ; a, b, c). EXEMPLE 4 : des régions introniques, des jonctions introns- exons, et des régions 5' et 3' flanquantes du gène de la myoneurine. Une banque génomique humaine de type EMBL3-SP6/T7 (Clontech) est criblée à l'aide des sondes nucléiques a et c décrites plus haut (figure 1) et selon la technique classique de criblage des banques phagiques à l'aide de sondes nucléiques marquées à la digoxygénine- 11-dUTP et selon les indications du fournisseur (Boehringer Mannheim). Sur les 3 clones génomiques isolés, l'un d'entre eux, le clone génomique HMG9 dont la taille est évaluée à 16 kb, hybride à la fois les sondes a et c. L'ADN phagique de HMG9, purifié par les techniques classiques (Maniatis), est digéré par EcoRI afin d'isoler les régions génomiques internes, puis redigéré par Xhol afin d'isoler les régions flanquantes du clone. Les fragments obtenus sont sous-clonés dans les vecteurs pUC 18 et 19 et séquencées selon la technique de Sanger à l'aide d'amorces oligonucléotidiques relais. La taille des introns est déterminée, par Southern, et/ou PCR et/ou séquençage. Les jonctions intron-exon et la taille des introns sont indiquées dans la figure 6. Les régions flanquantes (SEQ ID NO:2) et (SEQ ID NO:3) correspondent respectivement aux extrémités 5' et 3' flanquantes du gène de la myoneurine et chevauchent la SEQ ID NO:1. On remarque la présence d'un intron totalement identifié dans la SEQ ID NO: 2 et situé entre les 2 régions exoniques présentes dans la SEQ ID NO: 1. EXEMPLE 5: Biosynthèse de la myoneurine par génie génétique. Le fragment de restriction Dral/ HindIII provenant de la construction Dral/ Xhol a été sous-cloné au site Smal/ HindIII dans le vecteur d'expression pQE-30 (Qiagen). Cette construction, dite DX, qui code pour la région 86-235 de la myoneurine est propagée dans la souche E. coli M15, contenant le plasmide pREP4. La surexpression est obtenue en présence d'IPTG. La protéine hybride, présente une extrémité N-terminale composée de 6 histidines qui favorisent la purification par chromatographie d'affinité sur une colonne de nickel chélaté (Ni-NTA agarose) en suivant les indications du fournisseur (Qiagen). La protéine chimérique obtenue présente la structure suivant: MRGSHHHHHHGSACELGTPN.......L DLQACKL. La région protéique de 150 acides aminés de la myoneurine, est représentée par des pointillés flanqués des motifs codant pour les acides aminés N- et C-terminaux, qui sont soulignés. Les acides aminés en italiques correspondent au vecteur. De la même manière le fragment de restriction SacI- EcoRV est sous-cloné dans le vecteur d'expression pQE-30 coupé par les enzymes de restriction Sac 1 et Sma I. Le peptide, dit SE, ainsi obtenu, est biosynthétisé par génie génétique, et permet de couvrir de manière avantageuse la région C-terminale de la myoneurine. EXEMPLE 6 : d'anticorps polyclonaux et analyse par Western-blot. De manière avantageuse les protéines chimériques DX, d'une part, et SE, d'autre part, décrites précédemment sont injectées à 2 lapins, selon les protocoles d'immunisation classique. La protéine chimérique DX qui correspond à la région couverte par les acides aminés 86 à 235 de la myoneurine, a été choisie pour sa grande spécificité, car elle ne présente que quelques acides aminés appartenant au domaine N-terminal BTB/POZ, et se trouve totalement dépourvue de motifs dactyles. Le caractère non-immunogène des séquences surnuméraires est vérifié sur un Western-blot, à l'aide d'un sérum obtenu après une immunisation effectuée à partir d'un polypeptide synthétisé dans le même vecteur d'expression et selon le même cadre de lecture, mais dépourvu de la région surnuméraire correspondant à la myoneurine. Les échantillons de tissus qui sont analysées par Western-blot, sont homogénéisés dans le tampon d'extraction (Tris-HCl 20 mM pH 7.5, NaCl 150 mM, EDTA 0. 5 mM, 0. 2 % Triton-XlOO) auquel on ajoute extemporanément 500 g/ml d'ADNase et 1/20 du cocktail d'antiprotéases LAP20. L'homogénéisation s'effectue dans la glace à l'aide d'un potter verre-verre, puis l'homogénat est centrifugé à 100.000 rpm pendant 6 min. à 4 C. La concentration de l'échantillon est évaluée par la technique de Bradford ou son équivalent (technique BCA de Pierce). L'équivalent de 100 g de protéine est déposé sur un gel d'acrylamide-SDS réalisé selon la technique de Laemmli. Le contenu du gel est ensuite transféré sur une membrane de nitrocellulose par la technique d'electro-transfert semi-sec. La membrane est saturée à l'aide d'une solution de blocage contenant 2% de lait en poudre dans du TBS. L'incubation de la membrane en présence d'antisérum ou d'anticorps dilués au 1/1000 dans du tampon d'incubation (0. 2 % de Triton, 1% de lait en poudre dans du TBS) s'effectue pendant 1 nuit à 4 C ou 90 min. à température ambiante Après 3 lavages de 20 min. dans 0. 02% de tween-20 dans du TBS, puis 30 min. dans du TBS, la membrane est incubée en présence d'un anticorps secondaire anti-lapin conjugué à la péroxydase et dilué au 1/2000 dans un tampon TBS-gélatine 0.1%. Après 1 lavage de 15 min. dans du TBS-tween20 0. 02% et 4 lavages de 5 min. dans du TBS, la membrane est révélée par la technique ECL (Amersham Pharmacia Biotech). Les 2 antiséra obtenus chez le lapin, dirigés contre les polypeptides chimériques DX et SE, et analysés par Western-blot sur du muscle squelettique, selon la technique décrite plus haut, montrent la présence d'une bande spécifique de masse moléculaire apparente équivalente à 68 kDa et correspondant à la taille déduite attendue. La masse moléculaire apparente de 68 kDa a été vérifiée sur des extraits protéiques de muscle squelettique humain, et sur des extraits de muscle squelettique de souris. EXEMPLE 7 : d'une forme homologue de Myoneurine chez la souris. La séquence de la forme murine de la myoneurine est établie par la séquence par une stratégie d'amplification génique à partir d'une banque ADNc synthétisée de manière à permettre l'identification des extrémités 5' et 3' des transcrits ( Marathon Ready cDNA , Clontech) d'un embryon de souris de 17 jours. Selon le protocole décrit par Clontech, la banque ADNc utilise des adaptateurs fixés aux deux extrémités des ADNc double-brins synthétisés à partir de l'échantillon d'ARNm, afin d'amplifier par PCR les deux extrémités 5' et 3' du transcrit. Dans une première PCR, l'amorce nucléotidique API (Clontech), correspondant à l'adaptateur utilisé pour la synthèse des ADNc, est employée en association avec une amorce antisens KZR4 (5'CATGAATCTTGAGATTGCTAGAA3') de myoneurine humaine, afin de déterminer l'extrémité 5' du transcrit. La PCR est effectuée sur 40 cycles, avec une étape d'hybridation à 57 C pendant 1 min., puis une extension de 3' à 72 C et enfin une dénaturation de 1 min. à 94 C. Le fragment de PCR obtenu est séquence et son extrémité 5' permet de concevoir l'amorce murine MOZ-5 (5'GTTTCCCTTGGGCGGCTACG3'), De la même manière et dans les mêmes conditions expérimentales décrites précédemment, une PCR est effectuée avec l'amorce sens d'origine humaine STY (5'GGTATTCCAAGGCCAAGCCAAT3') et l'amorce antisens d'origine murine ZS119 (5'TCTGCGAGGACGGCCTAGCAA3'), qui a été identifiée dans une séquence étiquette murine (? d'accession à GenBank: AA 119157). Enfin une dernière PCR s'appuyant sur les amorces MOZ-5 et ZR2856 est réalisée dans des conditions comparables à celles décrites précédemment, à la différence que la température d'hybridation est de 62 C. Les PCR ont été dupliquées en utilisant comme polymérase, soit la DyNazyme II DNApolymerase (Finnzymes OY, Finlande), soit la Taq DNApolymérase (Appligene-Oncor, Illkirch, France). Les produits de PCR sont sous-clonés dans le vecteur pGEM-T, avant séquençage par un séquenceur automatique ABI 377 et à l'aide du kit de séquençage DYEnamic ET (Amersham Pharmacia Biotech Inc.). Les séquences nucléiques obtenues, en utilisant l'une ou l'autre des ADN polymérases, sont identiques. Une comparaison au niveau nucléique des formes humaine et murine de la myoneurine montre une homologie de 88 % et qui peut s'élever à 95 % si l'on compare les séquences en amino-acides (SEQ ID NO:63 et figure 7). EXEMPLE 8: Analyse immunohistochimique de l'expression de la myoneurine. Une étude immunohistochimique a été effectuée sur des coupes cryostatées non fixées de 6 m de muscle gastrocnémien de souris adulte (souche 129 ReJ). Les tissus sont congelés dans de l'isopentane. Les coupes sont directement incubées durant une heure à température ambiante avec un antisérum dirigé contre la myoneurine et dilué au 1/100 dans du PBS contenant 3% de sérum albumine bovine et ou un anticorps dirigé contre la mérosine, lui aussi dilué au 1/100 dans du PBS contenant 3% de sérum albumine bovine. Les coupes sont lavées dans du PBS, contenant du Tween-20 à 0.1%, puis incubées pendant une heure à température ambiante, soit avec un anticorps secondaire couplé à la péroxydase et dilué au 1/400 , soit incubées avec de l'a-bungarotoxine-rhodaminée (Molecular Probes, Eugene, OR, USA) et diluée au 1/10000 dans du PBS contenant de la sérum albumine bovine à 3%. Le lavage est effectué dans du PBS contenant du Tween-20 à 0.1%. Les anticorps primaires and-myoneurine et anti-mérosine sont mélangés pour les doubles marquages ; simple marquage effectué sur des coupes consécutives, permet de vérifier la validité des résultats obtenus en double-marquage. Les coupes sont montées en présence de Mowiol-glycérol et observées sur un microscope à fluorescence Zeiss Axiophot. La spécificité du signal immunofluorescent est vérifiée en substituant les anticorps ou les immunséra par des IgGs non immuns. La coloration par le réactif d'Hoechst est effectuée selon les techniques classiques et seulement 5 min avant le montage de la coupe. Un triple marquage utilisant le réactif d'Hoechst spécifique du noyau, un anticorps dirigé contre la myoneurine et l'a-bungarotoxine rhodaminée, permet de localiser la myoneurine au niveau des noyaux sous-synaptiques de la jonction neuromusculaire. Un marquage est observé au niveau des cellules satellites et au niveau des noyaux périphériques de la jonction myotendineuse. EXEMPLE 9 : de la myoneurine au cours de l'ontogenèse. Une analyse par RT-PCR de l'ARNm provenant de muscle squelettique d'embryons humains, par amplification spécifique de la région 3' non-codante et de la région codante située en 5' du motif dactyle, à l'aide respectivement des amplimères ZF2-ZF4 et ZF3-ZF5. 37 cycles de PCR sont effectués, avec des conditions d'hybridation de 52 C pendant 1 min., et des conditions d'extension et de dénaturation de 1 min. à des températures respectives de 72 C et 94 C. La spécificité de l'amplification a été vérifiée par Southem, avec les sondes nucléiques correspondantes. Les transcrits codant pour la myoneurine ont été identifiés sur les embryons humains à partir de 13 semaines d'aménorrhée. Le développement embryonnaire a été suivi chez la souris aux stades E 10, E 12, E 14, E 18 au niveau des membres postérieurs et au niveau du gastrocnémien chez l'adulte. Jusqu'à E 14 aucun marquage n'est détecté, la myoneurine apparaît à E 16 à la jonction neuromusculaire, ce qui est vérifié par une co-localisation partielle avec un marquage du récepteur de l'acétylcholine rhodaminée. La localisation s'amplifie niveau de la jonction neuromusculaire à partir de E 18. A la naissance et chez l'adulte le marquage persiste à la synapse périphérique avec un marquage confiné au niveau du noyau sous-synaptique adjacent identifié par l'alpha-bungarotoxine rhodaminée et le réactif d'Hoechst, spécifique d'un marquage nucléaire. EXEMPLE 10 : de la myoneurine dans des pathologies expérimentales Une étude immunohistochimique et par hybridation in situ permet de suivre l'expression de la myoneurine au cours de processus pathologiques. Une étude immunohistochimique a été effectuée sur des coupes cryostatées non fixées de 6 m de muscle gastrocnémien de souris adulte (souche 129 ReJ) soumis à une dénervation. La technique utilisée est similaire à celle décrite plus haut. Une étude en hybridation in situ est réalisée sur des coupes cryostatées de 12 m, fixées directement pendant 15 min. dans du PBS (pH 7. 4) contenant 4% de paraformaldéhyde, puis lavées dans du PBS, puis progressivement déshydratées par des concentrations croissantes d'éthanol. Les sondes ribonucléoditiques sens et anti-sens sont marquées en présence de digoxygénine dUTP au moyen des ARN polymérases SP6 ou T7, selon les conditions décrites par le fournisseur (Boehringer). Les coupes sont pré-traitées par un passage au micro-onde, puis pré-hybridées 1 heure à 42 C dans 100 l de la solution de pré-hybridation (4XSSC, 2X Denhardt, formamide 50%, 1 g/ml d'ADN de laitance de saumon, et 1 jj,g/ml d'ARNt de levure). L'hybridation est réalisée toute la nuit à 42 C dans une chambre scellée dans 50 fil de tampon de pré-hybridation et la sonde sens ou anti-sens marquée à la digoxygénine (10 ng/ml). Les coupes sont lavées à température ambiante par du 2X SSC (3 fois 20 min. ), puis lavées 2 fois 15 min. à 60 Cpar une solution de lavage 0.4X SSC, 40% formamide, 2 fois rapidement dans du 2X SSC à température ambiante et enfin 2 fois 30 min. dans du 0.1X SSC à 60 C. La détection du marquage s'effectue selon le protocole du fournisseur (Boehringer) en utilisant le fragment Fab de l'anti-digoxygénine de mouton conjugué à la phosphatase alcaline et en présence des substrats X-phosphate et NBT. L'analyse en microscopie électronique est effectuée sur des coupes cryostatées de muscle préfixées dans du tampon phosphate de Sorensen (pH 7. 4) contenant 3% de formaldéhyde et 0. 05% de glutaraldéhyde. Les coupes sont post-fixées dans de l'acétone pendant 90 sec., puis rincées dans la solution de lavage et traitées par la solution de blocage selon le protocole du fabricant du kit Auroprobe One immunogold and silver staining (Amersham). Les coupes sont incubées pendant 12 heures à 4 C, avec l'anticorps primaire dilué au 1/50 dans la solution de lavage, puis incubées 1 heure avec l'anticorps secondaire conjugué aux particules d'or colloïdal (Auroprobe One, Amersham) et dilué dans le même tampon. Les échantillons sont ensuite traités avec le réactif de coloration à l'argent IntenSE, selon le protocole du fournisseur. Les coupes sont ensuite post-fixées dans du tampon phosphate de Sorensen (pH 7. 4) contenant 2. 5% de glutaraldéhyde et traitées par du tétroxyde d'osmium à 2%, puis déshydratées et insérées dans de l'Epon. Les sections ultrafines sont alors colorées par de l'acétate d'uranyl et du citrate de plomb et observées sur un microscope électronique Philipps 410. Après 5 jours de dénervation, on observe clairement une surexpression de la myoneurine au niveau des noyaux musculaires, des cellules satellites, des noyaux soussynaptiques, mais aussi au niveau du sarcoplasme de la fibre musculaire et des myofibrilles du fuseau. L'étude réalisée en microscopie électronique, à l'aide de particules d'or colloïdal, montre une expression dans des régions chromatiniennes où règne une intense activité génique à la frontière des régions d'euchromatine et d'hétérochromatine, en particulier au niveau des régions périnucléaires, ce qui conforte le potentiel régulateur de ce facteur nucléaire. De plus, une surexpression est observée au niveau du fuseau : s'agit d'un des rares exemples mettant en évidence une surexpression d'un facteur musculaire dans une région cruciale pour la régulation sensorimotrice. L'analyse par hybridation in situ révèle une brusque augmentation de la quantité des transcrits après la dénervation, en particulier au niveau du sarcoplasme. De plus, tous les noyaux identifiés sont marqués à la fois au niveau péri-nucléaire et intra-nucléaire, contrairement à ce qui peut être observé sur le témoin de muscle intact. Une étude similaire a été menée afin de déterminer l'expression de la myoneurine au cours d'un processus de dénervation/réinervation. Les animaux sont anesthésiés puis soumis à un écrasement du nerf sciatique avec une pince fine. Trois jours après l'altération partielle du nerf sciatique par écrasement, la rétractation effective du nerf est vérifiée par une absence de réactivité immunologique vis-à-vis d'un anticorps spécifique des neurofilaments. Trois jours après la lésion, on utilise le protocole de détection immunologique de la myoneurine décrit plus haut. Une surexpression de la myoneurine est observée au niveau du noyau, et du sarcoplasme. Un retour progressif à la normale intervient après restauration de l'innervation au 15èmejour. Une étude a été menée après traitement par la toxine botulique, qui permet de mimer un processus de régénération et de synaptogenèse induite. La paralysie musculaire est réalisée sur des souris NMRI Swiss-Webster, par une seule injection (0. 55 pg de toxine botulique-A) dans la région antéro-latérale du membre postérieur gauche d'une souris adulte (poids 22- 25g). La paralysie complète du muscle EDL (extendor digitorum longus) apparaît dans les 18 heures suivant l'injection, en utilisant une technique electrophysiologique classique d'évaluation de l'activité musculaire. Le muscle EDL est prélevé à 25 jours et 135 jours après l'injection de la toxine. Une analyse immunohistochimique comparable à celle décrite plus haut, montre initialement et jusqu'au 25ème jour une expression nucléaire croissante de la myoneurine, suivie d'une surexpression à la fois nucléaire et sarcoplasmique jusqu'au 70 ème jour. Au 135ème jour qui correspond au stade de récupération fonctionnelle, le marquage nucléaire n'est plus observé, seul persiste un marquage cytoplasmique résiduel, ultime trace de l'activation de la myoneurine. EXEMPLE 11: Expression de la myoneurine dans une myopathologie humaine Une analyse immunohistochimique similaire à celle décrite plus haut a été effectuée sur une biopsie prélevée chez un patient présentant une polymyosite inflammatoire. Bien que la coupe présente la structure musculaire d'un muscle normal, on observe que contrairement à ce qui peut être observé sur un muscle normal, la région périnucléaire et le cytoplasme de certaines fibres musculaires sont intensément marquées, alors que ces fibres présentent la morphologie anatomopathologique d'une fibre normale. Cette observation très précoce pourrait permettre de poser le diagnostic de la pathologie bien avant l'apparition des premières altérations tissulaires. Bibliographie : - Bardwell, V. J., and Treisman, R. 1994. The POZ domain: A conserved protein-protein interaction motif. Genes & Dev. 8,1664-1677. - Coleman J.E. 1992. Zinc proteins : storage proteins, transcription factors, and replication proteins. Annu Rev Biochem. 61,897-946. - Hu, S., Fambrough, D.,. Atashi, J. R., Goodman, C. S., and Crews, S. T. 1995. The Drosophila abrupt gene encodes a BTB-zinc finger regulatory protein that controls the specificity of neuromuscular connections. Genes & Dev. 9,2936-2948. - Huynh T. V., Young R. A., and Davies R. W. 1985. In: "DNA cloning. A practical approach". Vol. 1 (Glover D.M., ed) 49-78 , IRL Press, Oxford. - Kozak, M. (1991). Structural features in eukaryotic mRNAs that modulate the initiation of translation. J. Biol. Chem. 266,19867-19870. - Knipple D. C., Seifert E., Rosenberg U. B., Preiss A., Jackle H.1985. Spatial and temporal patterns of Kruppel gene expression in early Drosophila embryos. Nature 317,40-44. - Miller J., McLachlan A. D, Klug A, 1985. Répétitive zinc-binding domains in the protein transcription factor IIIA from Xenopus oocytes. EMBO J. 4,1609-1614. - Nigg E.A., Baeuerle P. A., Luhrmann R., 1991. Nuclear import-export : in search of signais and mechanisms. Cell 66, 15-22. - Rhodes D. and Klug A. 1993. Zinc fingers. Sci Am. 268,56-59,62-65. - Rosenberg U. B. et al., 1986. Structural homology of the product of the Drosophila Krüppel gene with Xenopus transcription factor IIIA. Nature, 319,336-339. - Sandstrom, D. J., Bayer, C. A., Fristrom, J. W., and Restifo, L. L. 1997. BroadComplex transcription factors regulate thoracic muscle attachment in Drosophila. Dev. Biol. 181, 168-185. - Sanger F., Nicklen S., and Coulson R. 1980. Cloning in single-stranded bacteriophage as an aid to rapid DNA sequencing. J Mol. Biol. 143,161-178. - Shy Y. and Berg J. M. 1995. Specific DNA-RNA hybrid binding by zinc finger proteins. Science, 268, 282-284. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux des modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1 ) Fragment d'acide nucléique purifié, caractérisé en ce qu'il comprend tout ou partie d'une séquence codant pour une séquence de Myoneurine humaine, qui présente des domaines BTB/POZ et dactyles à zinc, répondant à la séquence SEQ ID NO:1 ou à une séquence présentant un niveau d'homologie avec ladite séquence SEQ ID NO:1 supérieur ou égal à 70%. 2 ) Fragment d'acide nucléique, caractérisé en ce qu'il comprend un segment d'une séquence selon la revendication 1 et notamment les séquence SEQ ID NO:2-3 et 64, les séquences nucléiques complémentaires et les séquences inverses complémentaires des séquences précédentes ainsi que les fragments issus des régions codantes des séquences précédentes correspondant à un cadre glissant supérieur ou égal à 14 nucléotides ou leurs séquences complémentaires. 3 ) Transcrits, caractérisé en ce qu'ils sont générés à partir des séquences selon l'une quelconque des revendications 1 et 2. 4 ) Réactif de diagnostic pour la détection différentielle de séquences nucléiques humaines complètes ou partielles, présentant des motifs , sélectionnés parmi les séquences SEQ ID NO:1- 3 et/ou SEQ ID NO:64, caractérisé en ce qu'il est sélectionné dans le groupe constitué par les séquences SEQ ID NO:1-51, les séquences nucléiques complémentaires et les séquences inverses complémentaires des séquences précédentes, par les fragments nucléotidiques qui s'hybrident aux séquences SEQ ID NO:1-3 et/ou SEQ ID NO:64, et toute séquence flanquante ou les chevauchants ainsi que par les fragments issus des régions codantes des séquences SEQ ID NO: 1-3 et/ou SEQ ID NO:64, correspondant à un cadre glissant supérieur ou égal à 14 nucléotides ou leurs séquences complémentaires, éventuellement marquées avec un marqueur approprié. 5 ) Réactif selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il est sélectionné parmi les séquences SEQ ID NO:4-51 et en ce qu'il est apte à être utilisé comme amorce. 6 ) Réactif selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il est sélectionné parmi les séquences suivantes : un fragment amplifié par le couple d'amorces SEQ ID NO:20 et SEQ ID NO:26 (amorces TA55Z et ZD27) et est apte à être utilisé comme sonde. un fragment amplifié par le couple d'amorces SEQ ID NO:7 et SEQ ID NO:9 (amorces ZATG7 et YTS86) et est apte à être utilisé comme sonde. un fragment amplifié par le couple d'amorces SEQ ID NO:29 et SEQ ID NO:31 (amorces ZF2 et ZF4) et est apte à être utilisé comme sonde. 7 ) Procédé de détection rapide et différentiel des séquences nucléiques de Myoneurine de leurs variants normaux ou pathologiques, par hybridation et/ou amplification génique, réalisé à partir d'un échantillon biologique, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend : (a) une étape dans laquelle l'on met en contact un échantillon biologique à analyser avec au moins une sonde sélectionnée parmi les séquences SEQ ID NO: 1-51 et SEQ ID NO:64, ou une telle que définie selon la revendication 6 et (b) une étape dans laquelle on détecte par tout moyen approprié le ou les produits résultants de l'interaction séquence nucléotidique-sonde. 8 ) Procédé de détection selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il comprend : * préalablement à l'étape (a): . une étape d'extraction de l'acide nucléique à détecter, et . au moins un cycle d'amplification génique mis en #uvre à l'aide d'au moins un réactif selon l'une quelconque des revendications 4 et 5 * postérieurement à l'étape (b): . une étape de comparaison des séquences nucléiques obtenues dans ledit échantillon biologique avec les séquences de myoneurine humaine selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, par tout moyen approprié et notamment par séquençage, Southem-blot, coupure de restriction, SSCP ou toute autre méthode permettant d'identifier une insertion ou une délétion ou encore une simple mutation entre les différentes séquences comparées. 9 ) Procédé de détection des transcrits selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend: - le prélèvement des ARN messagers provenant de tissus témoins et de tissus prélevé chez des patients et - l'analyse qualitative et/ou quantitative desdits ARNm, par hybridation in situ, par dot-blot, Northem-blot, cartographie à l'ARNase ou RT-PCR, à l'aide d'un réactif de diagnostic selon l'une quelconque des revendications 4 à 6. 10 ) Produits de traduction, caractérisés en ce qu'ils sont codés par une séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 2. 11 ) Peptide, caractérisé en ce qu'il est exprimé à l'aide d'une séquence nucléotidique sélectionnée dans le groupe constitué par les séquences SEQ ID NO: 1-3 et 64 selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, selon les combinaisons offertes par l'usage des différents cadres de lecture possibles. 12 ) Peptide selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'il englobe les peptides dérivés comprenant entre 5 et 610 aminoacides. 13 ) Peptide selon la revendication 11ou la revendication 12, caractérisé en ce qu'il est sélectionné parmi les séquences SEQ ID NO : 53-63. 14 ) Peptide selon l'une quelconque des revendications 11 à 13, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir des séquences nucléiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, dans lesquelles au moins un codon non-sens peut être remplacé par un codon codant pour l'un des aminoacides suivants : (F), Leu (L), Ser (S), Tyr (Y), Cys (C), Trp (W), Gln (Q), Arg (R), Lys (K), Glu (E) ou Gly (G). 15 ) Peptide selon l'une quelconque des revendications 11 à 14, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir des séquences nucléiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, dans lesquelles un acide aminé peut être remplacé par un acide aminé homologue, selon les règles classiques rappelées ci-après : (K) ou Arg (R), Asp (D) ou Glu (E) ou Asn (N) ou Gln (Q), Ala (A) ou Gly (G), Ile (I) ou Leu (L) ou Val (V), Thr (T) ou Ser (S), Phe (F) ou Tyr (Y) ou Try (W). 16 ) Anticorps, caractérisé en ce qu'il est dirigé contre l'un ou plusieurs des peptides selon l'une quelconque des revendications 11 à 15. 17 ) Procédé de dépistage immunologique différentiel de séquences de Myoneurine normales ou pathologiques, caractérisé en ce qu'il comprend la mise en contact d'un échantillon biologique avec un anticorps selon la revendication 16, la lecture du résultat étant révélée par un moyen approprié, notamment EIA, ELISA, RIA, fluorescence. 18 ) Procédé d'identification et de détection d'un motif de Myoneurine choisi parmi l'une quelconque des séquences SEQ ID NO: 1-3, et/ou SEQ ID NO: 64, et/ou SEQ ID NO: 52- 63, anormalement exprimés dans le cadre de pathologies associées au développement cellulaire ou tissulaire, au premier rang desquelles des pathologies associées au cancer ou affectant la sphère neuromusculaire caractérisé en ce qu'il comprend l'analyse comparée des séquences extraites d'un échantillon biologique avec les séquences selon l'une quelconque des revendications 7,8, 9 et 17. 19 ) Utilisation de séquences selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 ou 10 à 15 pour préparer une composition destinée au diagnostic, au pronostic, à l'évaluation de la susceptibilité génétique, à toutes maladies humaines induites, innées ou acquises en particulier celles à composantes cancéreuses, ou affectant la sphère neuromusculaire où intervient tout ou partie des séquences selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 et des formes apparentées. 20 ) Séquences nucléiques hybrides, caractérisées en ce qu'elles comprennent des séquences ou motifs selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, combinés avec des séquences ou motifs présentant des caractéristiques structurales analogues. 21 ) Utilisation de séquences, caractérisées en ce qu'elles comprennent des séquences ou motifs nucléiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, pour la préparation de compositions destinées à la thérapie génique ou à des modifications géniques, par exemple à visée réparatrice dans le domaine médical, ou à usage vétérinaire et/ou agroalimentaire.