Brevet FR2800874A1 — publié le 20010511

A la lumière de nombreux travaux,publiés dans le monde au cours de ces trente dernières années,il a été démontré que la dégradation oxydative des acides gras insaturés,qu'elle soit au niveau de la membrane cellulaire comme au niveau alimentaire, constitue un danger pour la santé. I1 est en effet connu,que la dégradation oxydative conduit à de multiples états pathologiques,que les lipoperoxydes se dégradent en générant diverses substances,formant des associations nouvelles avec les protèines,comme les bases de SCHIFF et les lipopigments.Parmi les substances les plus réactives,issues de cette dégradation,il faut citer le malondialéhyde (ou MDA) qui comporte 3 carbones et deux fonctions aldéhydiques de forte activité réactionnelle. O=CH-CHz-CH=O On sait aujourd'hui,que le MDA urinaire est la réponse à l'intervention des radicaux libres;il est un indice de peroxydation lipidique in vivo.Il peut être la conséquence d'une alimentation comportant des lipoperoxydes,ou d'un dysfonctionne ment métabolique,ou encore d'une déficience en antioxydants endogènes ou exogènes. La recherche du MDA dans l'urine présente donc un intérêt considérable,elle permet de constater soit l'existence d'une alimentation oxydative dangereuse pour la santé,pouvant conduire à des perturbations biologiques exprimées par diverses pathologies (cardiovasculaires,cataracte,cancer etc..),soit de remonter jusqu'aux pathologies elles-mêmes. Ce test permet de déterminer rapidement l'existence d'une perturbation métabolique,pouvant être liée soit à l'alimentation soit à un état pathologique. La détermination du MDA urinaire,représente un élément important d'informations pour le medecin comme pour le nutritionniste.Or la recherche du MDA urinaire nécessite de coûteuses opérations analytiques,qui ne peuvent être effectuées qu'en laboratoire. Ce nouveau procédé,simple,rapide et fiable,peut être utilisé par quiconque et permet entre deux et trois minutes,de mettre en évidence la présence de MDA aussi bien dans l'urine que dans des produits alimentaires ou des préparations cosmétiques. I1 consiste simplement à déposer sur un papier réactif,une goutte d'urine ou de matière grasse pour mettre en évidence le MDA. D'autre part,on pourra également,en ayant recours à des solutions étalons de MDA,réaliser une échelle à différentes concentrations pour connaître sa concentration urinaire par exemple. Cette technique peut être utilisée pour la recherche du MDA dans les matières grasses,telle que les huiles utilisées pour l'alimentation. Dans ce cas,du fait de la faible quantité de substance hydrophyle (MDA) dans une forte quantité d'huile lipophyle,on ajoutera un peu d'eau à l'huile,le mélange étant fortement agité pour obtenir une émulsion temporaire.On dépose sur le papier réactif une petite goutte de l'émulsion.La présence de MDA se manifeste par une couronne rouge se situant au centre de la diffusion de l'huile sur le papier. On peut également laisser décanter la phase aqueuse qui sera prélevée,puis une goutte en sera déposée sur la papier test.On obtiendra une couronne caractéristique allant du rose au rouge mettant en évidence la présence de MDA.Si une certaine quantité d'huile est entraînée,on obtient un disque rougeâtre diffus. On pourra également se servir de ce test pour contrôler l'absence de MDA dans différents corps gras et émulsions utilisés dans l'industrie cosmétique. L'invention est caractérisée en ce qu'elle comporte un papier filtre,imprégné du réactif bien connu:l'acide thiobarbiturique, en presence d'un acide organique dont la capacité acide est voisine de celle de l'acide acétique,généralement employé anhydre pour solubiliser l'acide thiobarbiturique,à un pH se situant entre 1,0 et 3,0 et éviter ainsi les interférences. L'acide thiobarbiturique réagit avec le MDA pour donner un chromogène rouge. Parmi les acides organiques expérimentés,l'acide glycolique a conduit à une grande sensibilité du test,permettant d'obtenir à l'endroit de la goutte versée,une couronne rouge très caractéristique,alors que la couronne reste blanche quand l'urine est exempte de MDA.Les autres acides comme l'acide fumarique,l'acide citrique,l'acide tartrique ne permettent pas d'obtenir des couronnes nettes caractéristiques. Dans le cadre de l'invention,on imprègne des bandes de papier filtre d'une solution contenant 0,5g % d'acide thiobarbiturique, 10g$ d'acide glycolique,complétée à 100 ml d'eau distillée.Les bandes sont séchées à l'étuve vers 80 C et conservées à l'abri de l'air et de la lumière. L'utilisation d'un tel test est peu onéreuse,et fiable,il suffit de présenter la bande comportant la goutte d'urine à une source de chaleur: étuve à 100 C,vapeur issue de l'ébullition de l'eau ou encore en approchant le papier d'une ampoule électrique.On voit apparaître en moins de trois minutes un cercle allant du rose au rouge,d'intensité variable selon la concentration en MDA du produit tésté. Dans le cas d'absence de MDA,le cercle est blanchâtre. REVENDICATIONS 1-Procédé permettant de mettre rapidement en évidence le malondialdéhyde (MDA) dans l'urine,dans des produits alimentaires,et dans des produits cosmétiques,caractérisé en ce qu'on utilise une bande de papier réactif sur lequel on dépose soit une goutte d'urine,soit une goutte d'huile ou d'un extrait aqueux d'un produit alimentaire ou cosmétique,suivi d'une exposition à une source de chaleur,révélant un chromogène rouge issu de la réaction de l'acide thiobarbiturique avec le malondialdéhyde. 2-Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que les bandes de papier filtre sont imprégnées d'acide thiobarbiturique solubilisé dans une solution d'acide glycolique à un pH se situant entre 1 et 3 et séchées vers 80 C,conservées à l'abri de l'air et de la lumière. 3-Procédé selon les revendications 1 et 2,caractérisé en ce que la présence de MDA urinaire est mise en évidence par la formation d'une couronne rouge dont l'intensité est liée à la concentration. 4-Procédé selon les revendications 1 et 2 caractérisé en ce que, le présence de MDA dans les matières grasses alimentaires ou cosmétiques est mise en evidence,soit par une couronne rouge se situant au centre de la diffusion de l'huile sur le papier,soit par une couronne caractéristique allant du rose au rouge,soit par un disque rougeâtre plus ou moins diffus.