Brevet FR2797274A1 — publié le 20010209

GENE MUTANT DE LA FAMILLE GRAS, ET PLANTES A DEVELOPPEMENT REDUIT COMPRENANT LEDIT GENE. L'invention est relative à l'obtention de végétaux à développement réduit, et notamment de crucifères. L'emploi de plantes naines dans le cadre des productions agricoles présente de nombreux avantages ; par exemple, chez les céréales, l'utilisation de plantes mutantes à paille courte a permis d'obtenir des cultures tolérant des quantités importantes d'engrais azotés, moins affectées par les conditions climatiques, et notamment plus résistantes à la verse que les plantes de taille normale. En outre, la petite taille des plantes facilite l'entretien des cultures, notamment l'application des traitements phytosanitaires, ainsi que leur récolte. Des mutants nains de végétaux autres que les céréales ont également été décrits dans la littérature. On mentionnera en particulier ci-après des mutants présentant des caractéristiques similaires à celles induites par une déficience en gibbérellines, et insensibles à l'apport de gibbérellines exogènes. De tels mutants ont notamment été décrits chez Arabidopsis [KOORNNEEF et al., Physiol. Plant., 65,33-39, (1985)]. Ces mutants, dénommés gai (pour Gibberellic Acid Insensitive) ont une taille réduite et ne répondent pas aux applications exogènes de gibbérellines. La mutation gai est une mutation du type gain de fonction , semidominante. Les mutants hétérozygotes GAI/gai ont un phénotype intermédiaire entre celui des mutants nains gai/gai et des plantes sauvages GAI/Gai. Des mutants présentant les mêmes caractéristiques que les mutants gai d'Arabidopsis ont été décrits par ZANEWICH et al. [J. Plant Growth Regul., 10,121-127, (1991) ], chez Brassica napus (mutation dwfl) et Brassica rapa (mutations dénommées dwfl et dwf2). L'équipe des Inventeurs a obtenu un mutant nain de B. rapa [FOISSET et al., Theor. Appl. Genet., 91, 756-761, (1995) ]. La mutation, dénommée bzh présente des caractéristiques de semi-dominance et d'insensibilité aux gibbérellines similaires à celles de la mutation gai. Une lignée de colza dénommée ISN1770, homozygote pour l'allèle mutant bzh, a fait l'objet d'un Certificat d'Obtention Végétale, déposé le 18 mai 1998, auprès du CPOV (11 rue Jean Nicaud, 75007 PARIS) sous la référence 10751. Un hybride de colza, dénommé LUTIN (B017), et comprenant dans son génome l'allèle mutant bzh sous forme hétérozygote a été proposé à l'inscription au Catalogue Français des Obtentions Végétales le 31 juillet 1999, sous la référence 072426. Le gène GAI d'Arabidopsis a récemment été cloné et séquence [PENG et al., Genes and development, 11,3194-3205, (1997) ; Demande PCT WO 97/29123 au nom de JOHN INNES CENTRE INNOVATIONS LTD]. Ce gène code pour une protéine (GAI) de 532 aa. L'allèle gai, responsable du nanisme, contient une délétion de 51 paires de bases en phase avec le cadre de lecture, qui conduit à l'absence de 17 aa situés près de l'extrémité N-terminale de la protéine GAI. La protéine GAI est impliquée dans la perception et la réponse aux gibbérellines, et agirait chez les plantes sauvages, comme un régulateur négatif de l'élongation cellulaire en absence de gibbérellines. La comparaison de la séquence de GAI avec celle des produits de traduction d'autres gènes connus a permis de la rattacher à la famille dénommée GRAS [PYSH et al., The Plant Journal, 18(1), 11-119, (1999)] ou VHIID [SCHUMACHER et al., P. N.A.S., 96, 1, 290-295, (1999)]. Cette famille englobe, outre GAI, les gènes RGA (SILVESTRONE et al., Genetics, 146,1087-1099, (1998)], et SCARECROW [DI LAURENZIO et al., Cell, 86, 423-433, (1996)] d'Arabidopsis, ainsi que le gène LS (Lateral suppressor) de la Tomate [SHUMACHER et al., P. N.A.S., 96,1, 290-295, (1999) ]. A l'heure actuelle, une vingtaine de gènes rattachés à la famille GRAS ont été identifiés chez Arabidopsis. Les protéines constituant la famille GRAS présentent une partie N-terminale très variable et une partie C-terminale très conservée avec cinq motifs reconnaissables, notamment le motif VHIID. Les fonctions biologiques de la plupart de ces protéines ne sont pas encore précisément connues mais leur rôle comme facteurs de transcription est fortement supposé. Les travaux effectués sur les 4 gènes les mieux étudiés à l'heure actuelle (SCR, GAI, RGA et LS) montrent que ces gènes codent des facteurs de transcription impliqués dans le contrôle de la perception et de la réponse aux gibbérellines, et indiquent l'importance probable de cette famille sur le contrôle de la morphogènèse et du développement des plantes supérieures. Les Inventeurs ont maintenant caractérisé et séquence le gène BZH de B. napus, et son allèle mutant bzh, associé au phénotype nain précédemment observé par FOISSET et al.(1995, publication précitée). La séquence du gène BZH sauvage est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 1, et la séquence de son produit de traduction est représentée sous le numéro SEQ ID NO: 2. La séquence de l'allèle mutant bzh est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 3, et la séquence de son produit de traduction est représentée sous le numéro SEQ ID NO: 4. La portion codante du gène BZH est de 1716 pbs et la protéine correspondante est de 572 acides aminés. L'analyse des séquences du gène BZH et de son produit de traduction permet de le rattacher à la famille GRAS, et notamment au sous-groupe comprenant GAI, RGA et RGA-like. L'alignement des séquences polypeptidiques déduites des gènes BZH avec d'autres gènes de la famille GRAS, à savoir les gènes GAI, RGA, RGA-LIKE, SCARECROW et LS, est représenté sur la Figure 1. L'analyse des séquences de l'allèle mutant bzh et de son produit de traduction montre que la mutation bzh est une subtitution G # A en position 1695 de la séquence codante. Elle conduit à un changement d'acide aminé acide glutamique # Lysine en position 546 de la séquence polypeptidique. De manière surprenante, la mutation bzh est totalement différente de la mutation gai d' Arabidopsis. En particulier, alors que la mutation gai d'Arabidopsis affecte une région située dans la portion N-terminale de la protéine GAI, la mutation bzh affecte une région située dans la portion C-terminale de la protéine BZH. La présente invention a pour objet une séquence d'acide nucléique obtenue par mutation d'une séquence codant une protéine végétale de la famille GRAS comprenant la séquence peptidique (I) suivante : Gly Tyr Xi Val Glu Glu (I) dans laquelle Xi représente l'arginine ou l'asparagine, caractérisée en ce que ladite mutation résulte en une modification de ladite séquence (I). Par modification de la séquence (I) on entend notamment la substitution d'un ou plusieurs acides aminés de ladite séquence, l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés à l'intérieur de cette séquence, ou la délétion de tout ou partie de ladite séquence. Des protéines végétales de la famille GRAS comprenant la séquence peptidique (I) sont notamment les protéines BZH du colza, ainsi que les protéines des sousfamilles GAI ou RGA décrites ci-dessus. Selon un mode de réalisation préféré d'une séquence d'acide nucléique conforme à la présente invention, elle code une protéine mutante comprenant la séquence peptidique (II) suivante Gly Tyr X1 Val Glu X2 (II) dans laquelle X1 est tel que défini ci-dessus, et X2 représente un acide aminé autre que l'acide glutamique. Avantageusement, X2 représente un acide aminé basique, de préférence une lysine. L'invention englobe notamment les séquences d'acide nucléique codant le polypeptide représenté dans la liste de séquence en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 4, par exemple la séquence de l'allèle mutant bzh qui est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO:3. L'invention a également pour objet des plantes à développement réduit comprenant une ou plusieurs copies d'une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention. Ceci englobe en particulier : - des plantes mutantes obtenues à partir de plantes sauvages par les techniques classiques de mutagenèse, par exemple en traitant des semences par un agent mutagène physique ou chimique, en sélectionnant parmi les plantes issues des semences traitées, les plantes présentant un nanisme insensible aux gibbérellines, et en recherchant parmi celles-ci, par des techniques classiques de détection d'hybridation des acides nucléiques, celles qui présentent une mutation au niveau de la séquence d'acide nucléique codant la séquence peptidique (I). On peut également introduire la mutation souhaitée dans un fragment préalablement cloné du gène concerné, et réinsérer la séquence mutée dans le gène original en remplacement de l'ADN sauvage correspondant ; - des plantes transgéniques obtenues par transgenèse d'une plante hôte avec une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention ; - les descendants, pouvant être obtenus par reproduction sexuée ou multiplication végétative, des plantes mutantes ou des plantes transgéniques mentionnées ci- dessus. Avantageusement, des plantes conformes à l'invention sont des crucifères, et en particulier des brassicacées, telles par exemple que le colza, le chou, la navette, la moutarde brune, ou la moutarde d'Ethiopie. Les plantes exprimant une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention présentent, par rapport aux plantes sauvages, une réduction de taille plus ou moins importante selon le niveau d'expression dans ladite plante de la séquence d'acide nucléique conforme à l'invention. Ce niveau d'expression dépend en particulier du nombre de copies de la séquence. Par exemple, dans le cas du colza, les plants hétérozygotes BZHlbzh ont une taille intermédiaire entre celle des plants nains homozygotes bzh/bzh et celle des plants sauvages BZH/BZH. Les plantes conformes à l'invention présentent, notamment dans le cas du colza, les avantages suivants : - possibilité de semis très précoces, permettant l'assimilation des nitrates, sans risque d'élongation de la tige avant l'hiver ; - meilleure résistance au froid ; - meilleur suivi de la culture, du fait d'une taille plus courte facilitant les traitements phytosanitaires ; - très bonne résistance à la verse ; - facilité de la récolte. La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples non limitatifs décrivant la caractérisation du gène BZH de colza, et d'une séquence conforme à l'invention dérivée dudit gène. EXEMPLE 1 : CARACTERISATION ET SEQUENÇAGE DU GENE BZH SAUVAGE ET DU GENE MUTANT bzh: Le gène BZH a été isolé sur un fragment d'ADN de 2352 paires de bases obtenu à partir de la lignée de colza STELLAR . Ce fragment contient une séquence codante de 1716 pbs, et la séquence polypeptidique déduite est de 572 acides aminés. La séquence codante et la séquence polypeptidique déduite sont respectivement représentées sur la liste de séquence en annexe sous les numéros SEQ ID NO: 1 et 2. Pour comparer la séquence du gène sauvage et de l'allèle mutant bzh, 5 lignées ont été étudiées: PRIMOR sauvage (PS), PRIMOR nain (PN), DARMOR sauvage (DS), DARMOR nain (DN) et STELLAR sauvage (STE). Les fragments d'ADN correspondant au locus BZH ont été amplifiés sur ces lignées, à l'aide d'amorces dérivées de la séquence du SEQ ID NO: 1. La comparaison des séquences des produits d'amplification obtenus a permis d'établir que la seule différence commune à PRIMOR nain et DARMOR nain par rapport aux génotypes sauvages est une substitution G # A en position 1695 de la séquence codante. Cette substitution conduit à un changement d'acide aminé Glu--+Lys en position 546 de la séquence peptidique. La séquence codante portée par le fragment d'acide nucléique amplifié à partir de la lignée primur nain, et la séquence peptidique correspondante sont respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO: 3 et 4. EXEMPLE 2 : DETECTION DE L'ALLELE MUTANT bzh CHEZ DES PLANTES NAINES. 49 lignées issues du croisement : DARMOR nain X YUDAL, ainsi que les couples de lignées isogéniques [sauvage]/[bzh] suivants : ISL1770/ISN1770, DOUBLOL/DOUBLOL-Bzh, GASPARD/GASPARD-Bzh, TAPIDOR/ TAPIDOR-Bzh, ont été analysées par amplification PCR d'une région de 400 pb environ de la séquence codante, correspondant à la portion C-terminale de la protéine, et électrophorèse sur gel de polyacrylamide des produits d'amplification. Les lignées de phénotype nain présentaient sur le gel une bande caractéristique de la présence de la substitution G # A. LISTE DE SEQUENCES INRA GENE MUTANT DE LA FAMILLE GRAS, ET PLANTES A DEVELOPPEMENT REDUIT COMPRENANT LEDIT GENE MJPcb539-95 4 PatentIn Ver. 2.1 1 1779 ADN Brassica napus CDS (60)..(1778) 1 caacccagaa caaaaccaga ccgatctgag agattaacta tatcttaacc agatcagaa 59 atg aag agg gat ctt cat cag ttc caa ggt ccc aac cac ggg aca tca 107 Met Lys Arg Asp Leu His Gin Phe Gin Gly Pro Asn His Gly Thr Ser 1 5 10 15 atc gcc ggt tct tcc act tct tcc cet gcg gtg ttt ggt aaa gac aag 155 Ile Ala Gly Ser Ser Thr Ser Ser Pro Ala Val Phe Gly Lys Asp Lys 20 25 30 atg atg atg gtc aaa gaa gaa gaa gac gac gag ctt cta gga gtc ttg 203 Met Met Met Val Lys Glu Glu Glu Asp Asp Glu Leu Leu Gly Val Leu 35 40 45 ggt tac aag gtt agg tct tcg gag atg gct gag gtt gcg ttg aaa ctc 251 Gly Tyr Lys Val Arg Ser Ser Glu Met Ala Glu Val Ala Leu Lys Leu 50 55 60 gag cag ctt gag acg atg atg ggt aac gct caa gaa gac ggt tta gct 299 Glu Gin Leu Glu Thr Met Met Gly Asn Ala Gin Glu Asp Gly Leu Ala 65 70 75 80 cac ctc gcg acg gat act gtt cat 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Ala Leu Asn Pro Glu Ile Asn Asn Asn Asn Asn Asn Ser 115 120 125 Phe Phe Thr Gly Gly Asp Leu Lys Ala Ile Pro Gly Asn Ala Val Cys 130 135 140 Arg Arg Ser Asn Gln Phe Ala Phe Ala Val Asp Ser Ser Ser Asn Lys 145 150 155 160 Arg Leu Lys Pro Ser Ser Ser Pro Asp Ser Met Val Thr Ser Pro Ser 165 170 175 Pro Ala Gly Val Ile Gly Thr Thr Val Thr Thr Val Thr Glu Ser Thr 180 185 190 Arg Pro Leu Ile Leu Val Asp Ser Gln Asp Asn Gly Val Arg Leu Val 195 200 205 His Ala Leu Met Ala Cys Ala Glu Ala Val Gln Ser Ser Asn Leu Thr 210 215 220 Leu Ala Glu Ala Leu Val Lys Gln Ile Gly Phe Leu Ala Val Ser Gin 1) 1) on T3c 1) Il Ala Gly Ala Met Arg Lys Val Ala Thr Tyr Phe Ala Glu Ala Leu Ala 245 250 255 Arg Arg Ile Tyr Arg Leu Ser Pro Pro Gln Thr Gln Ile Asp His Ser 260 265 270 Leu Ser Asp Thr Leu Gln Met His Phe Tyr Glu Thr Cys Pro Tyr Leu 275 280 285 Lys Phe Ala His Phe Thr Ala Asn Gln Ala Ile Leu Glu Ala Phe Glu 290 295 300 Gly Lys Lys Arg Val His Val Ile Asp Phe Ser Met Asn Gln Gly Leu 305 310 315 320 Gin Trp Pro Ala Leu Met Gin Ala Leu Ala Leu Arg Glu Gly Gly Pro 325 330 335 Pro Ser Phe Arg Leu Thr Gly Ile Gly Pro Pro Ala Ala Asp Asn Ser 340 345 350 Asp His Leu His Glu Val Gly Cys Lys Leu Ala Gin Leu Ala Glu Ala 355 360 365 Ile His Val Glu Phe Glu Tyr Arg Gly Phe Val Ala Asn Ser Leu Ala 370 375 380 Asp Leu Asp Ala Ser Met Leu Glu Leu Arg Pro Ser Glu Thr Glu Ala 385 390 395 400 Val Ala Val Asn Ser Val Phe Glu Leu His Lys Leu Leu Gly Arg Thr 405 410 415 Gly Gly Ile Glu Lys Val Phe Gly Val Val Lys Gln Ile Lys Pro Val 420 425 430 Ile Phe Thr Val Val Glu Gin Glu Ser Asn His Asn Gly Pro Val Phe 435 440 445 Leu Asp Arg Phe Thr Glu Ser Leu His Tyr Tyr Ser Thr Leu Phe Asp 450 455 460 Ser Leu Glu Gly Ala Pro Ser Ser Gln Asp Lys Val Met Ser Glu Val 465 470 475 480 Tyr Leu Gly Lys Gin Ile Cys Asn Leu Val Ala Cys Glu Gly Pro Asp 485 490 495 Arg Val Glu Arg His Glu Thr Leu Ser Gin Trp Ser Asn Arg Phe Gly 500 505 510 Ser Ser Gly Phe Ala Pro Ala His Leu Gly Ser Asn Ala Phe Lys Gin 515 520 525 Ala Ser Thr Leu Leu Ala Leu Phe Asn Gly Gly Glu Gly Tyr Arg Val 530 535 540 Glu Glu Asn Asn Gly Cys Leu Met Leu Ser Trp His Thr Arg Pro Leu 545 550 555 560 Ile Thr Thr Ser Ala Trp Lys Leu Ser Ala Val His 565 570 3 1779 ADN Brassica napus CDS (60)..(1778) 3 caacccagaa caaaaccaga ccgatctgag agattaacta tatcttaacc agatcagaa 59 atg aag agg gat ctt cat cag ttc caa ggt ccc aac cac ggg aca tca 107 Met Lys Arg Asp Leu His Gln Phe Gln Gly Pro Asn His Gly Thr Ser 1 5 10 15 atc gcc ggt tct tcc act tct tcc cet gcg gtg ttt ggt aaa gac aag 155 Ile Ala Gly Ser Ser Thr Ser Ser Pro Ala Val Phe Gly Lys Asp Lys 20 25 30 atg atg atg gtc aaa gaa gaa gaa gac gac gag ctt cta gga gtc ttg 203 Met Met Met Val Lys Glu Glu Glu Asp Asp Glu Leu Leu Gly Val Leu 35 40 45 ggt tac aag gtt agg tct tcg gag atg gct gag gtt gcg ttg aaa ctc 251 Gly Tyr Lys Val Arg Ser Ser Glu Met Ala Glu Val Ala Leu Lys Leu 50 55 60 gag cag ctt gag acg atg atg ggt aac gct caa gaa gac ggt tta gct 299 Glu Gln Leu Glu Thr Met Met Gly Asn Ala Gln Glu Asp Gly Leu Ala 65 70 75 80 cac ctc gcg acg gat act gtt cat tac aac ccc gct gag ctt tac tcg 347 His Leu Ala Thr Asp Thr Val His Tyr Asn Pro Ala Glu Leu Tyr Ser 85 90 95 tgg ctt gat aac atg ctc acg gag ctt aac cca ccc gct gca acg acc 395 Trp Leu Asp Asn Met Leu Thr Glu Leu Asn Pro Pro Ala Ala Thr Thr 100 105 110 gga tct aac gct ttg aac ccg gag att aat aat aat aat aat aac tcg 443 Gly Ser Asn Ala Leu Asn Pro Glu Ile Asn Asn Asn Asn Asn Asn Ser 115 120 125 ttt ttc acc gga ggc gac ctc aaa gcg att cet gga aac gcg gtt tgt 491 Phe Phe Thr Gly Gly Asp Leu Lys Ala Ile Pro Gly Asn Ala Val Cys i " cgc aga tct aat cag ttc gcg ttt gcg gtt gat tcg tcg agt aat aag 539 Arg Arg Ser Asn Gln Phe Ala Phe Ala Val Asp Ser Ser Ser Asn Lys 145 150 155 160 cgt ttg aaa ccg tcc tcg agc cet gat tcg atg gtt aca tct cca tca 587 Arg Leu Lys Pro Ser Ser Ser Pro Asp Ser Met Val Thr Ser Pro Ser 165 170 175 cet gct gga gtt ata gga acg acg gtt aca acc gtg acc gag tca act 635 Pro Ala Gly Val Ile Gly Thr Thr Val Thr Thr Val Thr 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Ile Leu Glu Ala Phe Glu 290 295 300 ggg aag aag aga gtc cac gtc atc gat ttc tcg atg aac caa ggg ctt 1019 Gly Lys Lys Arg Val His Val Ile Asp Phe Ser Met Asn Gln Gly Leu 305 310 315 320 cag tgg ccc gcg ctt atg caa gcc ctt gcg ttg agg gaa gga ggt cet 1067 Gln Trp Pro Ala Leu Met Gln Ala Leu Ala Leu Arg Glu Gly Gly Pro 325 330 335 ccg agt ttc agg tta acc gga att ggt cet ccc gcg gcg gat aac tcc 1115 Pro Ser Phe Arg Leu Thr Gly Ile Gly Pro Pro Ala Ala Asp Asn Ser 340 345 350 gat cat ctc cat gaa gtt gga tgt aag ttg gct cag ctc gcg gag gcg 1163 Asp His Leu His Glu Val Gly Cys Lys Leu Ala Gln Leu Ala Glu Ala 355 360 365 att cac gtc gag ttt gag tat cgt ggc ttt gtt gct aat agc tta gct 1211 Ile His Val Glu Phe Glu Tyr Arg Gly Phe Val Ala Asn Ser Leu Ala 370 375 380 gat ctt gat gcc tcg atg ctt gag ctt aga ccg agt gaa acc gaa gct 1259 Asp Leu Asp Ala Ser Met Leu Glu Leu Arg Pro Ser Glu Thr Glu Ala 385 390 395 400 gtg gcg gtt aac tct gtt ttc gag ctc cac aag ctc cta ggc cgt acc 1307 Val Ala Val Asn Ser Val Phe Glu Leu His Lys Leu Leu Gly Arg Thr 405 410 415 ggt ggg ata gag aaa gtc ttc ggc gtt gtg aaa cag att aaa ccg gtg 1355 Gly Gly Ile Glu Lys Val Phe Gly Val Val Lys Gln Ile Lys Pro Val 420 425 430 att ttc acg gtt gtt gag caa gaa tcg aat cat aac ggt ccg gtt ttc 1403 Ile Phe Thr Val Val Glu Gln Glu Ser Asn His Asn Gly Pro Val Phe 435 440 445 tta gac cgg ttt act gaa tcg ctg cat tat tat tcg acg ttg ttt gat 1451 Leu Asp Arg Phe Thr Glu Ser Leu His Tyr Tyr Ser Thr Leu Phe Asp 450 455 460 tcc ttg gaa ggt gct ccg agt agc caa gat aaa gtt atg tcg gaa gtt 1499 Ser Leu Glu Gly Ala Pro Ser Ser Gln Asp Lys Val Met Ser Glu Val 465 470 475 480 tat tta ggg aaa cag att tgc aat ctg gtg gct tgc gaa ggt ccg gac 1547 Tyr Leu Gly Lys Gln Ile Cys Asn Leu Val Ala Cys Glu Gly Pro Asp 485 490 495 cgt gtt gag aga cat gag acg ctg agt caa tgg tcg aac cgg ttc ggt 1595 Arg Val Glu Arg His Glu Thr Leu Ser Gln Trp Ser Asn Arg Phe Gly 500 505 510 tcg tcc ggt ttt gcg ccg gcg cat ctc ggg tct aac gcg ttt aag caa 1643 Ser Ser Gly Phe Ala Pro Ala His Leu Gly Ser Asn Ala Phe Lys Gln 515 520 525 gcg agt acg ctt ttg gct ttg ttt aat gga ggc gaa ggt tat cgt gtg 1691 Ala Ser Thr Leu Leu Ala Leu Phe Asn Gly Gly Glu Gly Tyr Arg Val 530 535 540 gag aag aat aat ggg tgt ttg atg ttg agt tgg cac act cga ccg ctc 1739 Glu Lys Asn Asn Gly Cys Leu Met Leu Ser Trp His Thr Arg Pro Leu 545 550 555 560 ata acc acc tcc gct tgg aag ctc tcg gcg gtg cac tga g 1779 Ile Thr Thr Ser Ala Trp Lys Leu Ser Ala Val His 565 570 4 572 PRT Brassica napus 4 Met Lys Arg Asp Leu His Gln Phe Gln Gly Pro Asn His Gly Thr Ser 1 5 10 15 Ile Ala Gly Ser Ser Thr Ser Ser Pro Ala Val Phe Gly Lys Asp Lys 20 25 30 Met Met Met Val Lys Glu Glu Glu Asp Asp Glu Leu Leu Gly Val Leu 35 40 45 Gly Tyr Lys Val Arg Ser Ser Glu Met Ala Glu Val Ala Leu Lys Leu 50 55 60 Glu Gln Leu Glu Thr Met Met Gly Asn Ala Gln Glu Asp Gly Leu Ala 65 70 75 80 His Leu Ala Thr Asp Thr Val His Tyr Asn Pro Ala Glu Leu Tyr Ser 85 90 95 Trp Leu Asp Asn Met Leu Thr Glu Leu Asn Pro Pro Ala Ala Thr Thr 100 105 110 Gly Ser Asn Ala Leu Asn Pro Glu Ile Asn Asn Asn Asn Asn Asn Ser 115 120 125 Phe Phe Thr Gly Gly Asp Leu Lys Ala Ile Pro Gly Asn Ala Val Cys 130 135 140 Arg Arg Ser Asn Gln Phe Ala Phe Ala Val Asp Ser Ser Ser Asn Lys 145 150 155 160 Arg Leu Lys Pro Ser Ser Ser Pro Asp Ser Met Val Thr Ser Pro Ser 165 170 175 Pro Ala Gly Val Ile Gly Thr Thr Val Thr Thr Val Thr Glu Ser Thr 180 185 190 Arg Pro Leu Ile Leu Val Asp Ser Gln Asp Asn Gly Val Arg Leu Val 195 200 205 His Ala Leu Met Ala Cys Ala Glu Ala Val Gln Ser Ser Asn Leu Thr 210 215 220 Leu Ala Glu Ala Leu Val Lys Gln Ile Gly Phe Leu Ala Val Ser Gln 225 230 235 240 Ala Gly Ala Met Arg Lys Val Ala Thr Tyr Phe Ala Glu Ala Leu Ala 245 250 255 Arg Arg Ile Tyr Arg Leu Ser Pro Pro Gln Thr Gln Ile Asp His Ser 260 265 270 Leu Ser Asp Thr Leu Gln Met His Phe Tyr Glu Thr Cys Pro Tyr Leu 275 280 285 Lys Phe Ala His Phe Thr Ala Asn Gln Ala Ile Leu Glu Ala Phe Glu 290 295 300 Gly Lys Lys Arg Val His Val Ile Asp Phe Ser Met Asn Gln Gly Leu 305 310 315 320 Gin Trp Pro Ala Leu Met Gin Ala Leu Ala Leu Arg Glu Gly Gly Pro 325 330 335 Pro Ser Phe Arg Leu Thr Gly Ile Gly Pro Pro Ala Ala Asp Asn Ser 340 345 350 Asp His Leu His Glu Val Gly Cys Lys Leu Ala Gln Leu Ala Glu Ala 355 360 365 Ile His Val Glu Phe Glu Tyr Arg Gly Phe Val Ala Asn Ser Leu Ala 370 375 380 Asp Leu Asp Ala Ser Met Leu Glu Leu Arg Pro Ser Glu Thr Glu Ala 385 390 395 400 Val Ala Val Asn Ser Val Phe Glu Leu His Lys Leu Leu Gly Arg Thr 405 410 415 Gly Gly Ile Glu Lys Val Phe Gly Val Val Lys Gln Ile Lys Pro Val 420 425 430 Ile Phe Thr Val Val Glu Gin Glu Ser Asn His Asn Gly Pro Val Phe 435 440 445 Leu Asp Arg Phe Thr Glu Ser Leu His Tyr Tyr Ser Thr Leu Phe Asp 450 455 460 Ser Leu Glu Gly Ala Pro Ser Ser Gin Asp Lys Val Met Ser Glu Val 465 470 475 480 Tyr Leu Gly Lys Gin Ile Cys Asn Leu Val Ala Cys Glu Gly Pro Asp 485 490 495 Arg Val Glu Arg His Glu Thr Leu Ser Gln Trp Ser Asn Arg Phe Gly 500 505 510 Ser Ser Gly Phe Ala Pro Ala His Leu Gly Ser Asn Ala Phe Lys Gln 515 520 525 Ala Ser Thr Leu Leu Ala Leu Phe Asn Gly Gly Glu Gly Tyr Arg Val 530 535 540 Glu Lys Asn Asn Gly Cys Leu Met Leu Ser Trp His Thr Arg Pro Leu 545 550 555 560 Ile Thr Thr Ser Ala Trp Lys Leu Ser Ala Val His 565 570 REVENDICATIONS 1) Séquence d'acide nucléique obtenue par mutation d'une séquence codant une protéine végétale de la famille GRAS comprenant la séquence peptidique (I) suivante : Gly Tyr X1 Val Glu Glu (I) dans laquelle Xi représente l'arginine ou l'asparagine, caractérisée en ce que ladite mutation résulte en une modification de ladite séquence (I). 2) Séquence d'acide nucléique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle code une protéine mutante comprenant la séquence peptidique (II) suivante Gly Tyr X1 Val Glu X2 (II) dans laquelle X1 est tel que défini ci-dessus, et X2 représente un acide aminé autre que l'acide glutamique. 3) Séquence d'acide nucléique selon la revendication 2, caractérisée en ce que X2 représente un acide aminé basique, de préférence une lysine. 4) Séquence d'acide nucléique selon la revendication 3, caractérisée en ce qu'elle code le polypeptide représenté dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 4 5) Plante à développement réduit comprenant une ou plusieurs copies d'une séquence d'acide nucléique selon une quelconque des revendications 1 à 4. 6) Plante selon la revendication 5 caractérisée en ce qu'il s'agit d'une crucifère. 7) Plante selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une Brassicacée. 8) Plante selon la revendication 7, choisie parmi le colza, le chou, la navette, la moutarde brune, et la moutarde d'Ethiopie.