Brevet FR2803523A1 — publié le 20010713

NOUVELLES COMPOSITIONS A BASE D'EXTRAITS DE DICTYOTALES ET LEUR UTILISATION La présente invention rapporte au domaine de la cosmétologie et plus précisément à un nouvel actif et à de nouvelles formulations destinées à des fins cosmétiques. Elle a plus particulièrement pour objet de nouvelles compositions topiques renfermant un extrait d'algues, qui ont la propriété d'activer la maturation des Kératinocytes. Elle a spécifiquement pour objet de nouvelles compositions à base d'extraits d'une algue de la famille des Dictyotales provoquant la maturation des Kératinocytes avec amplification de la synthèse des cytokératines, notamment des cytokératines CKl et CK10, et l'augmentation des protéines desmosomiales en vue de la consolidation de l'architecture stratifiée de l'épiderme, association ou en mélange avec un excipient ou un véhicule approprié pour l'utilisation par voie topique sur la peau, muqueuses ou les téguments. Cet extrait d'algue n'augmente pas la prolifération ni n'entraîne de vieillissement excessif cellules, et n'agit pas le métabolisme cellulaire des cellules de peau humaine. L'épiderme qui represente la partie superficielle de la peau est une succession de plusieurs couches de kératinocytes plus ou moins différenciés. Ainsi, au niveau de la couche basale, on trouve des kératinocytes de petite taille ayant une grande capacité de prolifération. Au-dessus de cette couche, se trouvent plusieurs couches suprabasales constituées de kératinocytes matures ou évolués, puis différenciés à la suite de leur migration sélective à partir de la couche basale. Cette architecture stratifiée des couches suprabasales de l'épiderme peut être modulée par plusieurs facteurs et notamment par le calcium soluble ou ionique - par opposition au calcium fixé : en présence de calcium en quantité suffisante, on assiste à une stimulation de la synthèse du cytosquelette et notamment des cytokératines, et de l'assemblage des cellules par les desmosomes, organismes de jonction constitués de protéines transcellulaires nécessaires à une meilleure communication entre les cellules. Ces desmosomes jouent un rôle important dans l'organisation du cytosquelette en se servant de sites d'ancrage pour l'attachement des cytokératines. Il a ' ' démontré aussi, par plusieurs auteurs, que les desmosomes étaient indispensables pour le processus de stratification en favorisant la migration sélective des cellules en phase finale différenciation, à partir de la couche basale vers les couches suprabasales. Au niveau du cytosquelette, on note une augmentation de l'expression des cytokératines, notamment des cytokératines 1 et 10 qui sont des marqueurs de différenciation terminale sous l'effet du calcium ionique. Les extraits de padine, algues de la famille des phéophycées, ont la propriété d'activer maturation des kératinocytes. La maturation des kératinocytes est observée au cours de différentes situations : c'est une étape essentielle de l'évolution des kératinocytes, l'épithélialisation des cellules épidermiques. Elle peut être ralentie lors de certaines maladies comme le psoriasis, ou activée de manière excessive dans d'autres pathologies. D'une manière générale, la maturation des kératinocytes est associée ' une amélioration des propriétés mécaniques de la peau. Cette amélioration est liée à la nature même de l'évolution des kératinocytes. La maturation des kératinocytes se traduit au niveau cellulaire par une augmentation protéines du cytosquelette impliquées dans les processus de maturation, principalement les cytokératines 1 et 10 et, en quantités plus faibles, les cytokératines 5 et 13. La maturation des kératinocytes se traduit au niveau tissulaire par une amélioration de l'attachement et de la cohésion des cellules liée à une augmentation de l'expression des protéines desmosomiales. La maturation des Kératinocytes est très active dans les peaux des sujets jeunes. La différenciation s'exprime rapidement dans les peaux des personnes âgées. Ces propriétés sont recherchées par l'industrie cosmétique, qui pourrait être incitée à mettre le marché des compositions qui permettraient de doter la peau d'une meilleure résistance. La maturation des cellules épithéliales est recherchée pour les greffes de peau et d'une maniere générale lors de la culture des kératinocytes. La maturation des kératinocytes se différencie du vieillissement cellulaire. Elle ne modifie ni la prolifération ni le métabolisme mitochondrial. Les substances habituellement utilisées pour provoquer la maturation des kératinocytes accélèrent la différenciation et ainsi le vieillissement. Dans un premier temps, elles accroissent la division des cellules, elles provoquent ensuite l'effondrement de la prolifération. Au niveau du métabolisme mitochondrial, elles augmentent la respiration cellulaire puis l'inhibent. A ce jour, les biologistes ne disposent pas de substances susceptibles d'améliorer la différenciation des kératinocytes sans provoquer à terme un vieillissement excessif des cellules. Le vieillissement biologique se traduit par une diminution et par un ralentissement métabolisme géneral et notamment par une baisse des potentiels de prolifération et de synthèse. Or, on vient de trouver, de manière surprenante, que les extraits éthanoliques ou acétoniques d'une Dictyotale appartenant aux phéophycées, la Padine, répertoriée sous le nom de Padina pavonica, sont sans effet sur la prolifération des cellules, que ces extraits n'ont aucune action les proto-oncogénes pan Ras, que ces mêmes extraits n'exacerbent, ni ne ralentissent métabolisme mitochondrial (Test XTT ou MTT), et que néanmoins ils amplifient la maturation des kératinocytes une meilleure expression des protéines desmosomiales et des cytokératines, notamment CK 1 et 10. L'extrait de Padina pavonica est défini par son procédé d'obtention selon lequel les algues séchées sont mises à macérer dans l'éthanol ou un autre solvant organique susceptible d'être évaporé. Cet extrait brut est caractérisé par son activité biologique sur les kératinocytes HPLC sur silice greffée C18. Eluée avec un débit d'un millilitre par minute par un mélange méthanol - eau (90-l0), la fraction active se situe entre 9 et 12 minutes de rétention. Cet extrait brut est concentré, puis la phase d'extrait brut est ajoutée en fonction de son niveau d'activité diluée dans un véhicule choisi parmi une huile, un glycol, une cire (huile de jojoba par exemple) et une paraffine ou dans un support solide comme la cellulose, la gélatine, la silice ou le talc. L'extrait brut de Padina pavonica est ainsi incorporé dans un excipient ou un véhicule propre réaliser les compositions selon l'invention. On dispose ainsi d'un extrait titré. A cette fin, l'extrait de Padina pavonica titré est mélangé ou incorporé à un ou plusieurs excipients inertes non toxiques adaptés pour l'usage cosmétique. On citera à cet égard des agents diluants, agents épaississants, des agents dispersants, des agents émulsionnants, des agents tensioactifs des agents d'aromatisation, des parfums et/ou des agents régulateurs de la viscosité et/ou agents de conservation. Les compositions selon l'invention pourront se présenter sous forme de crèmes, de suspensions, d'émulsions E/H, H/E ou Si/E, de gels, de pâtes, de pommades ou de poudres. D'une manière préférée, on utilisera des supports destinés à être dilués ou incorporés dans des préparations telles que des crèmes ou des gels où l'extrait de Padina pavonica est dispersé ou dilué avec son support inerte après évaporation du solvant et dilution avec un support inerte pour réaliser la préparation désirée, en une phase huileuse contenant éventuellement des agents tensioactifs non ioniques et/ou des silicones. La phase huileuse est ensuite additionnée d'une phase aqueuse contenant éventuellement un agent gélifiant ou un agent épaississant ou un régulateur de viscosité. Après agitation prolongée, on obtient ainsi émulsion que l'on incorpore dans une base cosmétique, grasse ou non grasse, pour réaliser une crème ou un gel. On procèdera de manière semblable pour les préparations à phase continue huileuse. On pourra également incorporer directement la poudre d'extrait sec de Padina pavonica dans une base grasse comme vaseline ou la lanoline pour former une pommade. On pourra tout aussi bien utiliser l'extrait alcoolique de Padina pavonica, l'incorporer une solution de polyéthylèneglycol contenant un agent dispersant ou tensioactif, et l'additionner d'une huile de silicone pour réaliser une émulsion fluide que l'on peut, si désiré, colorer ou parfumer à l'aide d'une essence de fleurs ou de plantes naturelle ou bien encore avec une substance odoriférante comme une ionone ou le lavendulol. Les compositions selon l'invention contiennent de 0,1 g à 200 g par Kg de préparation, en particulier de 4 à 1 g par Kg en fonction de l'activité de la préparation brute et des qualités du produit final. On precise ici qu'il s'agit de la concentration de l'extrait dosé en activité à 200 unités d'activité (UA) par litre. Les compositions selon l'invention sont destinées à être appliquées sur le corps et notamment sur les parties du corps les plus exposées à des problèmes de vieillissement comme le visage, les bras, le haut du corps et le décolleté. Les compositions pourront être appliquées de une à quatre fois par jour, de préférence de deux à trois fois par jour pendant une période s'échelonnant de 10 à 60 jours, de préférence de 15 à 30 jours. La teneur en principe actif s'échelonne de 20 UA/Kg à 80 000 UA/Kg de preparation galénique finale, et de préférence de 2 000 à 40 000 UA/Kg. La concentration est déterminée selon l'activité de préparation finale et en tenant compte du fait que le principe actif est constitué de l'extrait brut filtré. Bien que l'invention rapporte essentiellement à des préparations topiques destinées ' des fins cosmétiques, il n'est pas exclu qu'une administration par voie générale conduirait à des résultats similaires. Le titre de 200 000 Unités d'activité / litre signifie que 20 f d'extrait éthanolique rétablissent au moins 50 % de l'activité de synthèse des glycosaminoglycanes, de 200 000 fibroblastes (cellules extraites d'explants de peau provenant de sujets sains et adultes, cette variation étant induite par l'agent délétère résultant de l'addition d'une solution de 20 UI/L de xanthine oxydase à 0,25 mMol d'hypoxanthine. Ce système s'applique seulement à l'extrait brut. L'activité biologique des extraits de Dictyotales a été mise en évidence sur les tests suivants. L'extrait de Padine n'ait pas sur le métabolisme cellulaire des cellules de la peau humaine. Les Fibroblastes o Test XTT Tableau 1 Témoin 5 p1 10 @l #I l 50 pl Moyenne 0,269 0,250 0,272 241 0,261 Ecart type 0,014 0,008 0,015 ,011 0,013 Ces chiffres sont schématisés par l'histogramme sur le métabolisme mitochondrial des fibroblastes traités par un extrait de Dictyotales, à la Figure 1. L'extrait de Padine n'ait pas sur la prolifération cellulaire des cellules de la peau humaine. Les fibroblastes Numération des cellules après 48 heures de culture Tableau 2 Témoin T 5 p1 1041 20 50 u1 Moyenne 21 824 19 858 22 157 21 985 20 530 Ecart type 704 654 641 384- 518 Ces chiffres sont schématisés par l'histogramme sur la prolifération des fibroblastes traités par un extrait de Dictyotales, à la Figure 2. Les Kératinocytes Numération des cellules après 48 heures de culture Tableau 3 Témoin 5 p1 10 p1 20 p1 50 pl Moyenne 10249 10 184 9756 10911 10284 Ecarttype 655 507 587 584 445 Ces chiffres sont schématisés par 'histogramme sur la prolifération des kératinocytes traités par un extrait de Dictyotales, à la Figure 3. L'extrait de Padine agit sur la maturation des kératinocytes Analyse de la cytokératine 10 # Principes Les anticorps dirigés contre la cytokératine 10 sont révélés à l'aide d'un conjugué fluorescent. Tous les clichés sont pris au même grossissement et sont reproduits en annexe (figures 5 et 6). # Résultats - Valeurs Les clichés obtenus selon la méthode décrite sont numérisés par un ordinateur : il procède au comptage des pixels représentant les points de fluorescence ; le signal est calculé en tenant compte du nombre total de pixels cliché. Résultats Signal cytokératine Tableau 4 5 35 ans 50 ans Moyenne témoin 15 10 5 Ecart type 3 5 2 Extrait de Padine 58 62 55 Ecart type 3 4 8 L'extrait de Padine agit sur la maturation des kératinocytes Analyse des protéines desmosomiales. # Principes Les anticorps dirigés contre les protéines des desmosomes sont révélés à l'aide d'un conjugué fluorescent. Tous les clichés sont pris au même grossissement (figures 6 et 7). # Résultats - Valeurs Les clichés obtenus selon la méthode décrite sont numérisés par un ordinateur qui procede au comptage des pixels représentant les points de fluorescence ; le signal est obtenu par calcul en tenant compte du nombre total de pixels du cliché. Signal protéines des desmosomes Tableau 5 20 ans 40 ans 60 ans Moyenne temoin 120 105 55 Ecart type 20 15 17 Extrait de Padine 115 125 120 Ecart type 15 10 20 Ces chiffres sont schématisés par l'histogramme sur les protéines desmosomiales à à la Figure 4. EXEMPLE I Crème à base d'extrait de Padina pavonica Ingrédients 0/0 Phase A Stearate de glycéryle 10 Octanoate de cétéaryle 3 Glycérides de palme 3 (contenant des acides gras en C 12-C 14) Huile de tournesol 4 Huile de germe de blé 0,3 Phase B Glycérol 5 qsp 100 Phase C Acétate de DL-alpha-tocophérol 0,2 Conservateur 0,2 Extrait alcoolique de Padina pavonica titré à 200 000 Unités 4 d'activité / litre Pour fabriquer la crème, on chauffe séparément les phases A et B à 80 C, puis on verse la phase B dans la phase A sous forte agitation. On laisse refroidir ensuite le mélange jusqu'à 40 C sous agitation constante, on y incorpore la phase C sous vive agitation, puis on laisse refroidir jusqu'à la température ambiante sous agitation constante. EXEMPLE II Crème à base d'extrait de Padina pavonica titré à 200 000 Unités / litre Ingrédients 0/0 Phase A Alcool cétéarylique et Ceteareth-20 5 Alcool cétylique 5 Palmitate d'octyle Acetate de DL-a- Tocopherol 1 Phase Eau désionisée qsp 100 Phase Caséine - Gomme xanthane Phase Conservateur(s) Extrait de Padina pavonica titré à 200 000 Unités / litre Gomme xanthane Chauffer phase A à 75 C. Chauffer séparément la Phase B à 75 C. Additionner lentement la Phase A dans la Phase B sous forte agitation. Une fois mélange terminé, ajouter extemporanément la phase C toujours sous forte agitation pour l'homogénéisation. Laisser refroidir jusqu'à obtenir une température inférieure à 40 C et ajouter séparement les éléments de la phase D sous agitation plus faible. EXEMPLE III Gel à base d'extrait de Padina pavonica titré à 200 000 Unités / litre Ingrédients Phase A Glycérol Carbomère Phase B Eau désionisée qsp100 Phase C PEG-78-glyceryl cocoate Extrait de Padina pavonica titré à 200 000 Unités / litre Huile essentielle d'orange amère 0,1 Phase D Conservateur (s) 0,7 Phase E NaOH diluée à 10% qsp =6 Additionner la phase A dans la Phase B. Sous agitation additionner la Phase C. Puis ajouter la phase C sous agitation forte. Une fois homogénéisation complète, ajouter D. Stabiliser le pH à 5 -6 par de la soude diluée. EXEMPLE Lait à base d'extrait de Padina pavonica titré à 200 000 Unités / litre Ingrédients 0/0 Phase A Cetearyl glucoside + alcool cétéarylique 5 Huile d'amandes douces 10 Huile de Jojoba 5 Phase B désionisée qsp Tampon citrate/ citrique pH=5,5 Phase C Caséine-Gomme xanthane 1,5 Phase D Tocopherol 0,1 Extrait de padina pavonica titré à 200 000 U / litre 1 Conservateur(s) 0,7 Chauffer la phase A à 75 C. Chauffer séparément la Phase B à 75 C. Additionner lentement la Phase A dans la Phase B sous forte agitation. Une fois ce melange terminé, ajouter extemporanément la phase C toujours sous forte agitation pour l'homogénéisation. Laisser refroidir jusqu'à obtenir une température inférieure à 40 C et ajouter séparément les éléments de la phase D sous agitation plus faible. EXEMPLE V Crème à base d'extrait de Padina avonica titré à 200 000 Unités / litre Ingrédients 0/0 Phase A Huile de Paraffine 10 Alcool cétéarylique 1,5 Stéarate de sorbitane 1,5 Polysorbate 60 2,5 Phase B Eau désionisée qsp 100 Phase C Extrait de padina pavonica titré ' 200 000 unités/litre 10 Phase D Polyacrylamide et isoparaffine 13-C14 et Laureth-7 1,4 Conservateurs) 0,7 Chauffer la phase A à 75 C. Chauffer séparément la Phase B à 75 C. Additionner lentement la Phase A dans la Phase B sous forte agitation. Laisser refroidir sous agitation faible jusqu'à obtenir une température de 40 C et ajouter la phase C sous agitation forte. Lorsque le mélange est bien homogène, ajouter séparément les éléments de la Phase D. REVENDICATIONS 1. Nouvelles compositions à base d'extraits d'algue de la famille des Dictyotales, provoquant la maturation des Kératinocytes, avec amplification de la synthèse des cytokératines 1 et 10, et augmentation des proteines desmosomiales, caractérisées en ce que le principe actif un extrait de Padina pavonica en association ou en mélange avec un excipient ou un véhicule approprié pour l'utilisation sur la peau, les muqueuses et les téguments. 2. Nouvelles compositions topiques selon la revendication 1 caractérisées en ce que le principe actif est un extrait éthanolique ou acétonique de Padina pavonica. 3. Nouvelles compositions topiques selon la revendication 1 ou la revendication 2, caracterisées en ce que le principe actif contenu dans l'extrait de Padina pavonica a un temps de rétention en HPLC sur colonne silice greffée en C1$ de 9 à 12 minutes. 4. Nouvelles compositions topiques selon l'une des revendications 1 à 3, dans lesquelles, pour obtenir une activité contrôlée et titrée, l'extrait de Padina est évaporé à sec puis dispersé dans un support inerte, liquide ou solide et dilué par un support inerte, liquide ou solide. 5. Nouvelles compositions selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisées en ce que l'extrait de Padina est incorpore dans un support ou un véhicule approprié pour la réalisation en phase huileuse, aqueuse ou sèche, sous forme d'une crème, d'une suspension, d'une émulsion d'un gel, d'une pommade ou d'une poudre. 6. Nouvelles compositions selon l'une des revendications 1 à 5, dans lesquelles l'extrait titré de Padina pavonica est incorporé dans une solution de polyéthylèneglycol contenant un agent dispersant ou un agent tensioactif, et en ce que ladite solution est additionnée d'une huile de silicone, pour former une émulsion fluide. 7. Nouvelles compositions topiques selon l'une des revendications 1 à 6 dans laquelle la teneur en Padina pavonica s'échelonne de 20 à 80 000 Unités d'activité par Kg de préparation galénique finale 8. Nouvelles compositions topiques selon l'une des revendications précédentes, dans lesquelles on ajoute un agent colorant naturel ou synthétique. 9. Utilisation des compositions topiques selon l'une des revendications I à 8, en application sur le corps et notamment sur les parties du corps les plus exposées à des phénomènes de vieillissement. 10. Utilisation des compositions topiques selon l'une des revendications 1 à 8, pour augmenter la maturation des kératinocytes.