Brevet FR2799473A1 — publié le 20010413

ADN POLYMÉRASE À ACTIVITÉ DE MUTASE ET SON UTILISATION La présente invention concerne le domaine de la mutagénèse, et plus particulièrement une séquence d'ARNm codant pour une enzyme ADN polymérase à activité de mutase, ainsi que ladite ADN polymérase et les utilisations de cette enzyme, notamment celles fondées sur son activité de mutation générée sur les gènes des Ig pendant la réponse immune. L'hypermutation des gènes a été décrite il y a plus de trente ans. On la considère comme un mécanisme résultant de l'introduction de mutations aléatoires dans des gènes V réarrangés dans les cellules B soumises à une réponse immune. Ce processus provoque la "maturation" de la réponse, les cellules B exprimant des récepteurs de plus grande affinité spécifiques de l'antigène immunisant étant alors préférentiellement sélectionnés (Weigert et al., 1970). On était donc à la recherche de moyens pour réaliser une hypermutation à des fins de diagnostic, de production et de thérapie génique. On a maintenant trouvé une ADN polymérase mutagène, ci-après dénommée "mutase", qui apparaît être une enzyme responsable de telles mutations et on a mis au point selon l'invention des moyens pour produire une telle enzyme et pour l'utiliser dans diverses applications. L'invention a pour premier objet une ADN polymérase mutagène ou enzyme dénommée mutase, telle que définie plus loin. L'invention est décrite ci-après en référence à la liste de séquences ci-dessous, dans laquelle: SEQ ID N0:1 représente la séquence d'ARNm pour l'ADN polymérase selon l'invention, d'origine murine, SEQ ID NO: 2 représente la séquence d'ARNm pour l'ADN polymérase selon l'invention, d'origine humaine, SEQ ID NO:3 représente la séquence d'acides aminés caractérisant l'enzyme selon l'invention, d'origine murine, et SEQ ID NO:4 représente la séquence d'acides aminés caractérisant l'enzyme selon l'invention, d'origine humaine. Ces séquences ont été déterminées par des méthodes de séquençage appropriées. SEQ ID N0.:3 et SEQ ID NO: 4 sont représentées en écriture condensée normalisée, en lieu et place de l'écriture traditionnelle à trois lettres des acides aminés. L'invention procure en outre une séquence d'ARNm pour homologue de désoxynucléotidyltransférase terminale, codant pour une telle ADN polymérase mutagène ou mutase, ayant une séquence nucléotidique codant pour la séquence d' acides aminés selon SEQ ID NO: 3 et SEQ ID NO:4, respectivement pour l'enzyme murine et pour l'enzyme humaine. Cette séquence d'ARNm selon SEQ ID N0:1 et SEQ ID NO: 2 respectivement pour la souris et pour l'homme procure un moyen pour la préparation de l'enzyme selon la présente invention. L'invention concerne également, outre le gène codant pour l'enzyme d'environ 50-52.000 daltons, des dérivés de gène codant pour l'activité de mutase. L'enzyme mutagène exprimée par une séquence d'ARNm selon la présente invention catalyse la combinaison de désoxynucléotide triphosphates pour former un brin d'acide nucléique complémentaire d'un brin de matrice d'acide nucléique. L'enzyme purifiée exprimée à partir du dit ARNm peut être utilisée dans diverses réactions et divers procédés mettant en jeu des mutations et autres phénomènes liés. L'invention a également pour objets, outre l'enzyme susmentionnée ayant une masse moléculaire d'environ 50- 52. 000 daltons, un vecteur d'expression comprenant une séquence d'ARNm telle que décrite plus haut, et une cellule hôte contenant un tel vecteur, choisie par exemple parmi E. coli et une cellule lymphoïde murine, ainsi que des anticorps monoclonaux reconnaissant ladite ADN polymérase à activité de mutase, et plus particulièrement des anticorps monoclonaux reconnaissant les séquences d'acides aminés SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:4. Des variants de ladite mutase présentant une meilleure activité in vivo ont également été insérés dans un vecteur d'expression approprié et procurent des résultats significativement meilleurs dans les applications in vivo relatées plus loin. L'invention procure en outre un procédé pour la production de l'enzyme mutase susdite tel que défini plus loin, ainsi qu'un procédé pour la purification de l'enzyme mutase selon l'invention, qui comprend le traitement d'un mélange aqueux contenant l'enzyme mutase avec un support chromatographique d'interaction hydrophobe, dans des conditions qui promeuvent les interactions et l'élution de la mutase liée, à partir du dit support, avec un solvant qui atténue les interactions hydrophobes. Ledit procédé pour la production d'une ADN polymérase recombinante ou mutase peut comporter la mise en culture d'une cellule hôte telle qu'indiquée plus haut et l'isolement de la mutase recombinante du milieu de culture ou des cellules. L'enzyme selon l'invention s'est avérée être un homologue de désoxynucléotidyltransférase terminale. De tels homologues ont été synthétisés sur base murine et humaine respectivement, au moyen de méthodes de synthèse connues de l'homme du métier. Les applications déjà envisageables de cette enzyme sont: # chez l'homme, utilisation d'anticorps monoclonaux produits chez la souris hypermutante comme outil diagnostique ou thérapeutique chez l'homme, - thérapie génique destinée à restaurer un défaut de mutation à l'aide du gène réintroduit dans les cellules du système immunitaire, - amélioration des opérations de vaccination, par injection de ladite enzyme en même temps que l'agent immunogène, diagnostic de tumeurs impliquées dans des processus tumoraux, mutation d'une cellule tumorale pour la faire échapper à une tumeur, - amélioration des processus d'apprentissage sensoriel et cognitif dans le cerveau, et # chez la souris, élaboration d'une souris hypomutante, avec pour intérêt la récupération des anticorps "germline" de la souris, - élaboration d'une souris hypermutante, fabriquant des anticorps monoclonaux, des mutations appro- priées des oncogènes permettant alors de réaliser tous les modèles de tumeurs, à convenance, et # indifféremment chez l'homme et la souris, mutation d'un gène quelconque choisi à convenance dans une cellule avec une cassette d'accessibilité, mutation in vitro en tube de n'importe quel gène, - réalisation d'une mutagénèse au hasard dans une cellule, - réalisation d'une mutagénèse au hasard dans une levure ou une bactérie. Application à une cassette d'hypermutation: On a amélioré des protéines par une mutagénèse au hasard effectuée par ladite mutase selon l'invention. On a pour cela préparé de manière connue une cassette d'hypermutation d'un gène quelconque dans une cellule lymphoïde humaine. Il s'agissait de rendre la cellule Ramos (ou toute autre cellule lymphoïde B) hypermutante et de s'en servir pour produire toute une série de variants à partir d'un gène donné. A cet effet, on a utilisé une cellule lymphoïde B humaine Ramos qui mute à un taux faible ses gènes d'Ig en culture. On a alors introduit dans une cassette de mutations un gène X. Cette cassette comprenait le promoteur et le facilitateur ou amplificateur de la chaîne légère kappa des Ig. On a transfecté cette cassette avec le gène X dans des cellules Ramos, ainsi que la mutase décrite plus haut. Les cellules Ramos produisaient alors toute une variété de mutants du gène X. Les mutants ont été testés pour leur fonction. Les mutations permettant une amélioration du gène X ont pu être identifiées par séquence. Le vecteur utilisé pour hyper-exprimer ladite mutase dans la cellule Ramos était le vecteur commercialisé par la société Clontech sous la dénomination pIRES (pIRESpuro) contenant le site d'entrée du ribosome interne (en anglais Internal Ribosome Entry Site) du virus de l'encéphalomyocardite (ECMV), qui permet la translation de deux cadres de lecture ouverts d'un ARN messager. Ce vecteur contenait le gène de résistance à l'ampicilline et celui de résistance à un autre antibiotique (hygromycine, puromycine ou néomycine, par exemple). La particularité du dit gène était que le gène inséré et le gène de résistance étaient sous le contrôle du même promoteur (CMV, ou cytomégalovirus). Il ne s'agissait pourtant pas d'une protéine de fusion, car il y avait un site de réinitiation de la traduction en amont du gène codant pour l'antibiotique. On a ainsi pu sélectionner, en augmentant la dose d'antibiotique, des clones exprimant de façon élevée le gène d'intérêt et le gène de résistance. Ladite mutase une fois produite sous forme de protéine renaturée selon des modes opératoires et des protocoles classiques, connus de l'homme du métier des biotechnologies, a permis de muter, en présence d'autres facteurs choisis de manière appropriée, un segment quelconque d'ADN en tube à essai. Là encore, ces mutants pouvaient être clonés dans une bactérie, où l'on a pu produire la protéine correspondante. La production de ladite mutase dans E. coli se faisait selon le système dit pET, fabriqué et diffusé par la société Novagen, Inc., et tel que décrit dans "The pET System : Choice for Expression", R. Mierendorf, K. Yeager et R. Novy - Novagen, Inc., dans InNovations, No. 1, mai 1994. Les protéines mutées pouvaient être produites de la même façon. Selon ces deux modèles, toutes les protéines habituellement utilisées (par exemple en agronomie, en médecine humaine et vétérinaire, en biotechnologie, etc. ) ont pu être améliorées. Application au diagnostic chez l'homme: Pour une application à des fins diagnostiques en thérapie chez l'homme, on a produit des anticorps polyclonaux ou monoclonaux dirigés contre ladite mutase de l'homme. A partir de ces anticorps, on peut diagnostiquer chez l'homme un défaut d'hypermutation des gènes des Ig. On identifie ainsi l'absence de mutase comme étant la cause du défaut d'hypermutation, parmi d'autres causes a priori possibles. Application en thérapie chez l'homme: On a introduit le gène de la mutase décrite plus haut dans les cellules souches sanguines (CD 34+) de patients ne pouvant pas muter leurs gènes d'Ig et on a alors obtenu des mutations des dits gène d'Ig, dans des conditions de régularité et de répétabilité très satisfaisantes. On peut de même, lors des vaccinations, co-injecter le gène de ladite mutase afin que celui-ci s'intègre dans les cellules B du patient traité, et ainsi accélérer et améliorer la réponse immune. Applications à l'expression de ladite mutase en dehors du mécanisme de l'hypermutation somatique : 1. On a pu établir que ladite mutase était réactivée de façon non physiologique dans des processus tumoraux. Ceux-ci pouvaient être des processus lymphoïdes (Burkitt par exemple) et des processus nonlymphoïdes. Cette réactivation pouvait induire des mutations sur les oncogènes, amplifiant et facilitant ainsi le pronostic de la tumeur. 2. Une thérapeutique antisens ciblée sur le gène de ladite mutase pouvait arrêter ou freiner ce processus malin. 3. Ladite mutase des Ig a également pu être exprimée dans d'autres tissus de façon physiologique, notamment dans le système nerveux. On pouvait alors utiliser là encore les anticorps anti-mutase comme outil diagnostic et le gène ou la protéine comme outil thérapeutique. Application à une souris dite KO (hypomutante): Il s'agissait d'inactiver le gène de la mutase susdite sur les deux allèles d'une souris. Pour cela, on a commencé par annuler un allèle dans une cellule ES servant à la construction de la souris. Les souris hétérozygotes ont été croisées entre elles pour produire une souris présentant ses deux allèles de la mutase inactivés. On a utilisé un vecteur commercialisé par la société DuPont pour mettre en place la construction qui avait été injectée dans les cellules ES de souris, afin d'obtenir une recombinaison homologue sur un allèle de la mutase. Ce vecteur contenait le gène codant pour la résistance à la néomycine et le gène codant pour la thymidine kinase du virus HSV (herpès simplex). On a inséré respectivement dans les sites SAL 1 et XHO 1 deux fragments du gène codant pour la mutase de souris. Ces deux fragments ont ensuite été amplifiés par ACP (amplification en chaîne par polymérase) à partir de phages génomiques codant pour la mutase selon l'invention. Cette construction a permis, après recombinaison homologue, d'insérer le gène codant pour la résistance à la néomycine dans un exon de ladite mutase, ce qui permettait son inactivation. La souris KO pour la mutase permettait de produire tous les anticorps naturels chez la souris sans aucune mutation. Application à la production d'une souris transgénique hypermutante: Il s'agissait d'exprimer ladite mutase dans les cellules lymphoïdes d'une souris. Cette hyperexpression devait pouvoir augmenter le taux de mutations somatiques, ainsi que la cinétique de leur apparition après immunisation de ces mêmes souris avec un antigène particulier. La souris hypermutante ainsi obtenue, au moyen de techniques connues de l'homme du métier, est un outil très important pour la préparation d'anticorps monoclonaux contre tout type d'antigènes. Elle permet également d'améliorer ces anticorps. Les anticorps monoclonaux ainsi produits peuvent être utilisés pour la recherche, le diagnostic et le traitement après leur humanisation. L'humanisation des anticorps monoclonaux préparés chez la souris consiste à maintenir la partie liant l'antigène souris et à remplacer le corps de la molécule par une partie humaine. Cette humanisation permet d'éviter le rejet de ces anticorps lorsqu'ils sont inj ectés à l'homme. Le vecteur utilisé pour l'injection du gène codant pour ladite mutase de souris (ADNc) dans les blastocytes de souris, afin de construire les souris transgéniques, était construit selon la technique décrite par R. Dildrop, A. Ma, K. Zimmerman, E. Hsu, A. Tesfaye, R. DePinho et F. W. Alt, dans IgH enhancer-mediated deregulation of N-myc gene expression in transgenic mice: génération of lymphoid neoplasias that lack c-myc expression, EMBO J. 8 :1121, Ce vecteur contenait le promoteur de N-myc et le facilitateur (enhancer) de la chaîne lourde mu des Ig de souris. Il s'exprimait dans les cellules lymphoïdes B en prolifération. Cette souris hypermutante pouvait mimer un certain nombre d'événements oncogéniques. En effet, si l'on intègre dans le génome de cette souris un ou plusieurs oncogènes encadrés par le promoteur et le facilitateur de la chaîne légère kappa des Ig de souris, on peut faire muter rapidement ces oncogènes et ainsi obtenir de nombreux modèles différents de cancer. Ces souris mimant des processus tumoraux peuvent devenir des outils de recherche fondamentale et de recherche appliquée à des fins pharmacologiques. La mutase selon l'invention peut ainsi être appliquée notamment à des fins diagnostiques, ainsi que pour l'amélioration des protéines par mutagénèse et en thérapie humaine et vétérinaire, par action sur les mutations générées sur les gènes des Ig pendant une réponse immune. LISTAGE DES SÉQUENCES NOMBRE DE SÉQUENCES : 4INFORMATION POUR SEQ ID NO:1 LONGUEUR : 1604 bases TYPE : Acide nucléique NATURE DE BRIN : brin TOPOLOGIE : Linéaire TYPE DE MOLÉCULE: ARNm SOURCE D'ORIGINE: ORGANISME : Murin (Mus musculus) TYPE DE TISSU : B220+ PNAhigh DESCRIPTION DE LA SÉQUENCE : ID NO:1 1 gttctgcggc ttcctgtgct tccagagtcg gtgcccagat gcttccgaag cgacggcgag 61 tgcgagctgg gtccccacac agcgcggtag actcttccac gccgccctcg gtggtgcgct 121 tccctgatgt ggccatctac cttgcggagc cgcgaatggg ccgcagccgc cgggccttcc 181 tcacccgcct ggcgcggtcc aaaggcttcc gcgtcctaga tgcttacagc tcaaaggtga 241 cacatgtggt gatggaaggg acctcagcca aggaggccat ctgctggcag aagaacatgg 301 atgctctccc cacaggctgc ccacagccag ctctgctaga tattagctgg tttacagaaa 361 gcatggcagc tgggcagcct gtccctgagg agggccggca ccacctggag gtagctgagc 421 ccaggaagga gcccccagtc tcagcgtcga tgccagctta tgcctgtcag cgcccctcac 481 ctctcacaca ccataacact ctcctctcag aggctctgga gacgctagcg gaggcagcgg 541 gcttcgaagc caacgagggc cgtcttctct ccttctccag agcggcctcg gtgctcaagt 601 ccctgccctg ccctgttgca tctttgagcc agctgcatgg gctgccctac tttggagaac 661 attccactag agtaatccag gagctgctgg agcatggaac atgtgaagaa gtgaaacaag 721 tccgttgctc agaaaggtac cagaccatga agctcttcac ccaggtcttc ggggttgggg 781 tgaagactgc caaccggtgg taccaggaag gactacgaac cctggatgag ctcagagagc 841 agccccagag actgacgcag cagcagaaag cagggctcca atattaccag gacctgagca 901 ctccagttag acgagctgat gccgaggctc tgcagcagtt gatagaggca gctgtgagac 961 agaccctgcc cggagccact gtcacgctga ctggcggttt ccgaaggggg aagttacaag 1021 gccatgatgt agacttcctt atcacccacc cagaggaggg gcaagaagta gggctgctgc 1081 ccaaagtgat gagctgccta cagagccagg gactcgtcct gtatcaccag taccaccgca 1141 gccatttagc agactcagcc cacaacctgc ggcagcggag ctccaccatg gatgcttttg 1201 agaggagttt ctgcatcttg ggtttgccac aaccccaaca ggcagcttta gcgggggccc 1261 tgcctccctg cccaacttgg aaagctgtga gggtagatct tgtggtcacg cccagcagcc 1321 agttcccctt tgcccttctg ggctggactg gctcccagtt ctttgagcgg gagctacggc 1381 ggttcagccg tcaagagaag gggctgtggc ttaacagcca tgggctgttt gatcctgagc 1441 agaagagagt tttccatgca acttctgagg aagatgtttt cagactcctg ggcctcaagt 1501 accttcctcc agagcagaga aatgcctgaa ctgagaaatg cctgtgggct gccacaccca 1561 tccatacaaa atgaggggct gcctcttgct tgaccaggaa tgtt INFORMATION POUR SEQ ID NO:2 LONGUEUR : 2452 bases TYPE : Acide nucléique NATURE DE BRIN : brin TOPOLOGIE : Linéaire TYPE DE MOLÉCULE: ARNm SOURCE D'ORIGINE: ORGANISME : Humain (Homo sapiens) TYPE DE TISSU : cellulaire Ramos DESCRIPTION DE LA SÉQUENCE : SEQ ID NO:2 1 tccctctgcg ttcgctccgc gctgctggag gctgtcgtcc caatgctccc caaacggcgg 61 cgagcgcggg tcgggtcccc tagcggcgat gccgcttcct ccacgccgcc ctcgacgcgc 121 ttcccgggag tcgccatcta cctggtcgag cctcgcatgg gtcgcagccg ccgggccttc 181 ctcacaggcc tggcgcgctc caaaggcttc cgcgtccttg acgcctgcag ctccgaagcg 241 acacatgttg tgatggaaga gacctcagca gaggaggccg tcagctggca ggagcgcagg 301 atggcagctg ctcccccggg ttgcaccccc ccagctctgc tggacataag ctggttaaca 361 gagagcctgg gagctgggca gcctgtacct gtggagtgcc ggcaccgcct ggaggtggct 421 gggccaagga aggggcctct gagcccagca tggatgcctg cctatgcctg ccagcgccct 481 acgcccctca cacaccacaa cactggcctc tccgaggctc tggagatact ggccgaggca 541 gcaggctttg aaggcagtga gggccgcctc ctcaccttct gcagagcagc ctcggtgctc 601 aaggcccttc ccagccctgt cacaaccctg agccagctgc aggggcttcc ccactttgga 661 gaacactcct ctagggttgt ccaggagctg ctggagcatg gagtgtgtga ggaggtggag 721 agagttcggc gctcagagag gtaccagacc atgaagctct tcacccagat cttcggggtc 781 ggtgtgaaga ctgctgaccg gtggtaccgg gaaggactgc gaaccttaga tgacctccga 841 gagcagcccc agaaactaac ccaacagcag aaagcggggc tccagcacca ccaggacctg 901 agcaccccag tcctgcggtc cgatgtagat gccctgcagc aggtggtgga ggaagctgtg 961 gggcaggccc tgcctggggc caccgtcacg ctgaccggcg gcttccgcag ggggaagttg 1021 cagggccatg acgtggactt cctcatcacc caccccaagg agggtcagga ggcggggctg 1081 ctgcctagag tgatgtgccg cctgcaggac cagggcctca tcctgtacca ccagcaccag 1141 cacagctgct gtgagtcccc tacccgcctg gcccaacaga gccacatgga cgcttttgag 1201 agaagtttct gcattttccg cctaccacaa cctccagggg ctgctgtggg gggatccacg 1261 aggccctgcc catcctggaa ggccgtgaga gtggacttgg tagttgcacc cgtcagccag 1321 ttccctttcg ccctgctcgg ttggactggc tccaagcttt tccagcggga gctgcgccgc 1381 ttcagccgga aggagaaggg cctgtggctg aacagccatg ggctgtttga cccggagcag 1441 aagacatttt tccaagcggc ttcagaggaa gacatcttca gacacctggg ccttgagtac 1501 cttcctccag agcagagaaa cgcctgagcc tgcctgtgtc ccccacttcc actcaggaaa 1561 ttgggctgcc cccaacctgg ccactgaatg tctccaggca gatatgctgc cccctgaccc 1621 ccaccttcac ccctccccgc caaggcctgg ctcttcccgg aggtcaattg tgcctgcagg 1681 atcagttgag cccctgctgg tgtgctgcag ggtgtgatga ggtgggagcc ctcagtcctg 1741 cagtcatgaa tggcaagtgg tccctgatgt gcagtgtctc attagttgca ctgcagttaa 1801 ctgtggctcc tgcagggcac cctgcccaga atgcccagaa gagaaccatg catacctgca 1861 ctgcatttga gagccatgag ctggaggctg tggttcgtgc cagcaaggag cctactgtct 1921 ggtgtgctgt aggcatctgg agagggagag ggcctgggta ggagctggga ggaagataat 1981 tttcaactat ggggcttcag tactgcagcg ccccgagcca ggctctgtgc ttctgccttt 2041 aaggcctgtt ctcagcacaa tgtctcaaaa ataggtcata tcctgccact cccgtcgcag 2101 agccctttaa tggttccaaa ccctaagtcc acacatagcc cctggctctg gcatctctcc 2161 agccccactg gccccgagct gcttgactca ccggcttcct atttgatgca cccaggcccc 2221 cttgtggcca actccctccc cttctcactg aggcagaagc actgaggtgg gctggacatg 2281 ggtgccctcc acgtccctca tatccccagg cacactctgg cctcaggttt tgccctggcc 2341 atgtcatcta cctggagtgg gccctcccct tcttcaggcc ttgaatcaaa agccactttg 2401 ttaggcgagg atttcccaga ccactcatca cattaaaaaa tattttgaaa ac INFORMATION POUR SEQ ID NO:3 LONGUEUR : 496 TYPE : Acide aminé TOPOLOGIE : Linéaire TYPE DE MOLÉCULE : DESCRIPTION DE LA SÉQUENCE : ID NO:3 "MLPKRRRVRAGSPHSAVDSSTPPSWRFPDVAIYLAEPRMGRSR RAFLTRLARSKGFRVLDAYSSKVTHWMEGTSAKEAICWQKNMDALPTGCPQPALLDI SWFTESMAAGQPVPEEGRHHLEVAEPRKEPPVSASMPAYACQRPSPLTHHNTLLSEAL ETLAEAAGFEANEGRLLSFSRAASVLKSLPCPVASLSQLHGLPYFGEHSTRVIQELLE HGTCEEVKQVRCSERYQTMKLFTQVFGVGVKTANRWYQEGLRTLDELREQPQRLTQQQ KAGLQYYQDLSTPVRRADAEALQQLIEAAVRQTLPGATVTLTGGFRRGKLQGHDVDFL ITHPEEQEVGLLPKVMSCLQSQGLVLYHQYHRSHLADSAHNLRQRSSTMDAFERSFC ILGLPQPQQAALAGALPPCPTWKAVRVDLWTPSSQFPFALLGWTGSQFFERELRRFS RQEKGLWLNSHGLFDPEQKRVFHATSEEDVFRLLGLKYLPPEQRNA" INFORMATION POUR SEQ ID NO:4 LONGUEUR : 494 TYPE: Acide aminé TOPOLOGIE : Linéaire TYPE DE MOLÉCULE : DESCRIPTION DE LA SÉQUENCE: SEQ ID NO:4 "MLPKRRRARVGSPSGDAASSTPPSTRFPGVAIYLVEPRMGRSRR AFLTGLARSKGFRVLDACSSEATHWMEETSAEEAVSWQERRMAAAPPGCTPPALLDI SWLTESLGAGQPVPVECRHRLEVAGPRKGPLSPAWMPAYACQRPTPLTHHNTGLSEAL EILAEAAGFEGSEGRLLTFCRAASVLKALPSPVTTLSQLQGLPHFGEHSSRWQELLE HGVCEEVERVRRSERYQTMKLFTQIFGVGVKTADRWYREGLRTLDDLREQPQKLTQQQ KAGLQHHQDLSTPVLRSDVDALQQWEEAVGQALPGATVTLTGGFRRGKLQGHDVDFL ITHPKEGQEAGLLPRVMCRLQDQGLILYHQHQHSCCESPTRLAQQSHMDAFERSFCIF RLPQPPGAAVGGSTRPCPSWKAVRVDLVVAPVSQFPFALLGWTGSKLFQRELRRFSRK EKGLWLNSHGLFDPEQKTFFQAASEEDIFRHLGLEYLPPEQRNA" REVENDICATIONS 1. Séquence d'ARNm codant pour une ADN polymérase à activité de mutase, qui possède la séquence nucléotidique SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:2, codant pour la séquence d'acides aminés SEQ ID NO:3 et SEQ ID NO:4 respectivement. 2. Séquence d'ARNm selon la revendication 1, dans laquelle ladite mutase a une séquence d'acides aminés correspondant à la séquence SEQ ID NO:3 de 496 acides aminés. 3. Séquence d'ARNm selon la revendication 1, dans laquelle ladite mutase a une séquence d'acides aminés correspondant à la séquence SEQ ID NO:4 de 494 acides aminés. 4. Séquence d'ARNm selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle est d'origine murine. 5. Séquence d'ARNm selon l'une des revendications 1 ou 3, caractérisée en ce qu'elle est d'origine humaine. 6. Séquence selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle code pour une mutase qui est un homologue de désoxynucléotidyltransférase terminale. 7. ADN polymérase recombinante, dénommée mutase, caractérisée en ce qu'elle est homologue d'une désoxynucléotidyltransférase terminale et est une enzyme d'environ 50-52.000 daltons. 8. ADN polymérase selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'elle a une masse d'environ 50-52.000 daltons et respectivement une longueur de 496 acides aminés et la séquence d'acides aminés SEQ ID NO: 3 ou une longueur de 494 acides aminés et la séquence d'acides aminés SEQ ID NO:4. 9. Vecteur d'expression comprenant une séquence d'ARNm selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 10. Cellule hôte recombinante contenant un vecteur selon la revendication 9. 11. Cellule hôte recombinante selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'elle est E. coli. 12. Cellule hôte recombinante selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'elle est une cellule lymphoïde murine. 13. Anticorps monoclonal qui reconnaît l'ADN polymérase à activité de mutase selon la revendication 7. 14. Anticorps monoclonal selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il reconnaissant les séquences d'acides aminés SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:4. 15. Procédé pour la production d'une ADN polymérase recombinante selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce qu'il comporte la mise en culture d'une cellule hôte selon l'une quelconque des revendications 10 à 12 et l'isolement de la mutase recombinante du milieu de culture ou des cellules.