Brevet FR2808445A1 — publié le 20011109

I L'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une protéine de membrane Omp, notamment une protéine de membrane OmpA de Klebsiella pneumoniae, associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues tout comme l'utilisation de ces compositions pour la prévention et le traitement du cancer. La vaccination est un moyen efficace de prévenir ou de réduire les infections virales ou bactériennes. Le succès des campagnes de vaccination dans ces domaines a permis d'étendre le concept de vaccin jusqu'alors utilisé dans le domaine de l'infectiologie aux domaines du cancer et des maladies auto-immunes. Les antigènes vaccinaux administrés seuls chez l'hôte ne sont souvent pas assez immunogéniques pour induire une réponse immunitaire, et doivent donc être associés à un adjuvant ou couplés à une protéine porteuse pour induire (ou augmenter) leur immunogénicité. Dans ces conditions, seule une réponse immune de type humorale peut être induite. Or, dans le cadre d'une thérapie antivirale, la génération de lymphocytes T cytotoxiques (CTL) capables de reconnaître et de détruire le virus est de toute importance (Bachmann et al., 1994, Eur. J. Immunol., 24, 22282236; Borrow P., 1997, J. Virol. Hepat., 4, 16-24), comme l'attestent de nombreuses études montrant, in vivo, le rôle protecteur des réponses dirigées contre les épitopes viraux (Arvin AM, 1992, J. Inf. Dis., 166, S35-S41; Koszinowski et al., 1987 Immunol. Lett., 16, 185- 192). L'importance des réponses CTL a aussi été fortement documentée dans les réponses antitumorales notamment celles dirigées contre les cellules de mélanome (revue dans Rivoltini et al., 1998, Crit. Rev. Immunol., 18, 5563). Le ou les épitopes CTL (séquences peptidiques interagissant avec les molécules de classe I et présentés aux lymphocytes T CD8+) ont été définis pour plusieurs antigènes. Cependant, la difficulté réside dans la génération de CTL in vivo, due à la faible immunogénicité de ces peptides (Melief, 1992, Adv. Cancer Res., 58, 143-175 Nandaz et Sercaz, 1995, Cell, 82, 13-17). Grâce à leur efficacité à présenter les antigènes et à stimuler le système immunitaire, les cellules dendritiques, par exemple, ont été utilisées pour générer des réponses CTL anticancéreuses (Nestle F.O. et al., 1998, Nat. Med., 4, 328-332). Les approches ont consisté à charger les cellules dendritiques ex vivo avec l'antigène d'intérêt (peptides ou lysat cellulaire) et réimplanter ces cellules chez le patient. D'autres approches consistent à transfecter ex vivo les cellules dendritiques avec le gène codant pour l'antigène d'intérêt et à réinjecter ces cellules transfectées (Gilboa E. et al., 1998, Cancer Immunol. Immunother., 46, 82-87). Ces approches ont été utilisées avec succès chez la souris et récemment chez l'homme (Hsu F.J. et al., 1996, Nat. Med., 2, 52-58) mais restent néanmoins complexes dans la mesure o ces cellules doivent être traitées ex vivo (transformation des cellules ou internalisation des antigènes) et transplantées dans l'organisme hôte. De même, l'utilisation de particules de type viral (Layton G.T. et al., 1993, J. Immunol., 151, 1097-1107) ou de l'adjuvant incomplet de Freund (IFA) (Valmori et al., Eur. J. Immunol., 1994, 24, 1458-1462) permet de générer des réponses CTL. Toutefois, une vaccination antitumorale réalisée avec des peptides correspondant à des épitopes CTL et en présence d'un tel adjuvant peuvent conduire à un état de tolérance spécifique qui peut conduire dans certains cas à l'effet contraire recherché, c'est-à-dire à une diminution de la réponse immune (Toes et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1996, 93, 7855- 7860). La demande de brevet internationale publiée le 5 avril 1990 sous le numéro WO 90/03183 décrit des vaccins immunothérapeutiques comprenant des antigènes provenant de lysat de cellules de mélanomes, un adjuvant, dénommé " DETOX " constitué d'une endotoxine détoxifiée de type monophosphoryl lipide A (MPL) dérivée de Salmonella minnesota et un porteur dérivé d'enveloppe cellulaire de Mycobacterium bovis, souche BCG. Les possibles effets secondaires du DETOX et de dérivé du BCG utilisés en vaccins immunothérapeutiques sont connus de l'homme du métier. L'objet de la présente invention consiste en de nouvelles compositions immunothérapeutiques améliorées qui présentent notamment l'avantage de permettre un traitement prophylactique et thérapeutique; - permettre un traitement dès l'apparition de tumeurs à un stade précoce avant l'apparition des symptômes liés aux stades avancés de la maladie; permettre un traitement non toxique présentant peu ou prou d'effets secondaires; - permettre d'inhiber la croissance de tumeurs. De manière surprenante, il a été mis en évidence qu'une protéine Omp, telle que la protéine P40 de Klebsiella pneumoniae, associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues, de préférence sans recours à l'addition d'un adjuvant ou d'un porteur, présentait les avantages ci-dessus mentionnés. Ces propriétés des Omp pourraient notamment s'expliquer par le fait que les protéines Omp, contrairement aux protéines porteuses classiquement utilisées, permettent de retenir de façon spécifique des antigènes et notamment de mieux retenir un plus grand nombre d'antigènes tumoraux comparativement aux porteurs classiques. Ainsi, la présente invention est relative à une composition pharmaceutique comprenant dans un milieu pharmaceutique acceptable au moins une protéine Omp, ou un de ses fragments, associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues. Les protéines dérivées de ladite protéine Omp dont la séquence d'acides aminés présente une homologie, telle que définie ci-après, d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 %, après alignement optimal avec la séquence de la protéine Omp de référence et qui sont capables de générer ou accroître une réponse CTL et/ou antitumorale peuvent être également utilisées comme protéine Omp dans les compositions pharmaceutiques selon la présente invention. Dans la présente invention, on entendra désigner par le terme " protéine " également les peptides ou les polypeptides et par le terme " Omp " (pour " Outer Membrane Protein "), les protéines de la membrane externe. On peut citer comme exemples d'Omp, les OmpA, les porines (notamment les OmpC et F) et l'OmpX d'E. coli. Dans un mode de réalisation préféré, l'Omp est choisie parmi les Omp d'entérobactéries. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, l'Omp est choisie parmi les OmpA, à savoir les protéines de la membrane externe de type A, et plus particulièrement celles de Klebsiella pneumoniae. Encore plus préférentiellement, on utilisera celle dénommée P40 telle que décrite dans les brevets WO 95/27787 et WO 96/14415. Par fragment d'une protéine Omp, on entend désigner en particulier tout fragment de séquence d'acides aminés compris dans la séquence d'acides aminés de la protéine Omp qui est capable de générer ou accroître une réponse CTL et/ou antitumorale, ledit fragment de la protéine Omp comprenant au moins 5 acides aminés, de préférence au moins 10 acides aminés ou de manière plus préférée au moins 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75 et 100 acides aminés consécutifs de la séquence de ladite protéine Omp. Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention comprend une protéine Omp ou l'un de ses fragments selon l'invention, caractérisée en ce que ladite protéine Omp, ou l'un de ses fragments, est obtenue par un procédé d'extraction à partir d'une culture de ladite entérobactérie. Les procédés d'extraction de protéines de membrane bactériennes sont connus de l'homme de l'art et ne seront pas développés dans la présente description. On peut citer par exemple, mais sans s'y limiter le procédé d'extraction décrit par Haeuw J.F. et al. (Eur. J. Biochem, 255, 446-454, 1998). Dans un autre mode de réalisation préféré, la composition selon l'invention comprend une protéine Omp ou l'un de ses fragments, caractérisée en ce que ladite protéine Omp ou l'un de ses fragments, est obtenue par voie recombinante. On préfère tout particulièrement les protéines Omp obtenues par voie recombinante. En effet ces protéines recombinantes sont particulièrement bien définies, et pourront ainsi être utilisées et commercialisées pour une administration chez l'homme plus facilement et rapidement notamment pour des raisons d'autorisation de mise sur le marché. Les méthodes de préparation de protéines recombinantes sont aujourd'hui bien connues de l'homme de l'art et ne seront pas développées dans la présente description. Parmi les cellules utilisables pour la production de ces protéines recombinantes, il faut citer bien entendu les cellules bactériennes (Olins P.O. et Lee S.C., 1993, Recent advances in heterologous gene expression in E. coli. Curr. Op. Biotechnology 4:520- 525), mais également les cellules de levure (Buckholz R.G., 1993, Yeast Systems for the Expression of Heterologous Gene Products. Curr. Op. Biotechnology 4:538-542), de même que les cellules animales, en particulier les cultures de cellules de mammifère (Edwards C.P. et Aruffo A., 1993, Current applications of COS cell based transient expression systems. Curr. Op. Biotechnology 4:558-563) mais également les cellules d'insectes dans lesquelles on peut utiliser des procédés mettant en oeuvre par exemple des baculovirus (Luckow V.A., 1993, Baculovirus systems for the expression of human gene products. Curr. Op. Biotechnology 4:564-572). De manière tout à fait préférée, la protéine Omp utilisée dans les compositions selon l'invention est la protéine OmpA de Klebsiella pneumoniae. En particulier, l'invention concerne l'utilisation dans les compositions selon l'invention, de la séquence d'acides aminés de ladite protéine OmpA de Klebsiella pneumoniae, ou l'un de ses fragments, qui comprend: a) la séquence d'acides aminés de séquence SEQ ID N 1; b) la séquence d'acides aminés d'une séquence présentant une homologie d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 %, après alignement optimal avec la séquence SEQ ID N 1; ou c) la séquence d'acides aminés d'un fragment d'au moins 5 acides aminés, de préférence 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75 et 100 acides aminés, d'une séquence telle que définie en a). Par séquence d'acide nucléique ou d'acides aminés présentant une homologie d'au moins 80 % après alignement optimal avec une séquence d'acide nucléique ou d'acides aminés déterminée, on entend désigner une séquence qui après alignement optimal avec ladite séquence déterminée comprend un pourcentage d'identité d'au moins 80 % avec ladite séquence déterminée. Par "pourcentage d'identité" entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés au sens de la présente invention, on entend désigner un pourcentage de nucléotides ou de résidus d'acides aminés identiques entre les deux séquences à comparer, obtenu après le meilleur alignement, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Les comparaisons de séquences entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés sont traditionnellement réalisées en comparant ces séquences après les avoir alignées de manière optimale, ladite comparaison étant réalisée par segment ou par "fenêtre de comparaison" pour identifier et comparer les régions locales de similarité de séquence. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé, outre manuellement, au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Smith et Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2:482], au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Neddleman et Wunsch (1970) [J. Mol. Biol. 48:443], au moyen de la méthode de recherche de similarité de Pearson et Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444], au moyen de logiciels informatiques utilisant ces algorithmes (GAP, BESTFIT, FASTA et TFASTA dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wl, ou encore par les logiciels de comparaison BLAST N ou BLAST P). Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés est déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale par fenêtre de comparaison dans laquelle la région de la séquence d'acide nucléique ou d'acides aminés à comparer peut comprendre des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide ou le résidu d'acide aminé est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison et en multipliant le résultat obtenu par 100 pour obtenir le pourcentage d'identité entre ces deux séquences. Par exemple, on pourra utiliser le programme BLAST, "BLAST 2 sequences", disponible sur le site http://www. ncbi.nlm.nih.gov/gorf/b12.html, les paramètres utilisés étant ceux donnés par défaut (en particulier pour les paramètres "open gap penaltie": 5, et "extension gap penaltie": 2; la matrice choisie étant par exemple la matrice "BLOSUM 62" proposée par le programme), le pourcentage d'identité entre les deux séquences à comparer étant calculé directement par le programme. Parmi lesdites séquences présentant une homologie d'au moins 80 % avec la séquence Omp de référence, ou parmi les séquences d'acides aminés de fragment de séquence Omp de référence, on préfère: - les séquences de peptides capables d'induire une activité CTL (Lymphocytes T Cytotoxiques), telle qu'elle peut être évaluée avec une méthode standard de mesure d'activité CTL basée par exemple sur la mesure de pourcentage de lyse spécifique de cellules co-incubées avec des lymphocytes effecteurs issus d'animaux immunisés avec un peptide dérivé de la séquence Omp de référence associé à un peptide relevant et/ou - les séquences de peptides capables de générer ou d'accroître une activité antitumorale, telle que mesurée notamment dans les exemples ci-après. De préférence, lesdits peptides homologues ou lesdits fragments d'Omp seront capables d'induire une activité CTL et/ou de générer ou d'accroître une activité antitumorale au moins égale à 10 %, de préférence 20 %, 30 %, 50 % et 75 %, de l'activité mesurée dans les mêmes conditions pour la séquence Omp de référence. L'autre élément essentiel des compositions pharmaceutiques selon l'invention concerne un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues. Au sens de la présente invention, on entend par cellules tumorales autologues, des cellules de tumeurs appartenant au sujet qui va recevoir les compositions selon l'invention. Par cellules tumorales hétérologues, il faut comprendre des cellules issues de tumeurs provenant d'un individu différent de celui à qui la composition selon l'invention est destinée. L'utilisation de cellules hétérologues permet d'obtenir des compositions pharmaceutiques permettant notamment de traiter des patients atteints de cancer chez qui un prélèvement de cellules tumorales n'est pas possible. L'utilisation de cellules hétérologues permet aussi d'obtenir des compositions selon l'invention standardisées comprenant des antigènes retrouvés dans de nombreux types de cancer et ainsi utilisables chez une majorité de patients. Les cellules tumorales peuvent être obtenues suite à un prélèvement de tissus cancéreux, par exemple suite à une biopsie ou résection chirurgicale. Ces cellules peuvent ensuite être utilisées telles quelles ou être mises en culture avant d'être lysées. Un lysat cellulaire peut être défini au sens de la présente invention comme un mélange d'antigènes intracellulaires et/ou membranaires, préférentiellement intracellulaires et membranaires. Parmi les lysats de cellules tumorales entrant dans la composition pharmaceutique selon l'invention, on préfère les lysats de cellules tumorales exprimant un antigène tumoral associé, notamment un antigène tumoral dont l'expression est induite par le caractère tumoral ou potentiellement tumoral de la cellule. Parmi lesdites cellules tumorales exprimant un antigène tumoral associé, on préfère en particulier les cellules tumorales de tumeurs issues de cancers à cellules tumorales exprimant un antigène tumoral associé, tels que cités ci-après. Ledit lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues selon l'invention peut-être obtenu par une lyse mécanique, chimique ou enzymatique de cellules tumorales. Pour lyser les cellules de façon mécanique on peut notamment citer les techniques connues de l'homme de métier, à savoir notamment la sonication, l'ultrasonication ou la congélation/décongélation. On préfère tout particulièrement la congélation/décongélation, et tout particulièrement l'utilisation de plusieurs cycles de congélation/décongélation. On peut aussi lyser les cellules en utilisant des composés chimiques ou des enzymes, comme par exemple un tampon de lyse à digitonine, du triton X100 ou du Nonidet P40. Toute méthode permettant de rompre la membrane cellulaire des cellules de tumeurs pourra être utilisée afin d'obtenir un lysat. La composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre en outre une cytokine ou un facteur de croissance, notamment l'interféron alpha ou gamma, le TNF, le GM-CSF (Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor), l'IL-2, l'IL- 4, I'IL-6 et IL-18, une HSP (Heat Shock Protein) telle que par exemple l'hsp70, l'hsp90, l'hsp96, qui permet de potentialiser la réponse immunitaire, et/ou des fibroblastes modifiés génétiquement de façon à relarguer une cytokine ou un facteur de croissance. On peut citer les fibroblastes exprimant du GM-CSF commercialisés par la société Immune Response Corporation. Dans un mode de réalisation de l'invention, les compositions selon l'invention peuvent contenir en outre des cellules présentatrices d'antigènes. Ces dernières peuvent être choisies notamment parmi les macrophages, les lymphocytes B ou les cellules dendritiques et préférentiellement parmi les macrophages. Les cellules présentatrices d'antigènes peuvent être obtenues par production in vitro à partir de cellules souches issues du sang humain ou de la moelle épinière (voir Inaba et Al, 1992, J. Exp. Med. 176:1693-1702). On pourra utiliser des macrophages humains obtenus à partir de cellules mononucléaires sanguines isolées préférentiellement du patient devant être traité. Le nombre de macrophages pourra être augmenté en utilisant du M-CSF (Macrophage Colony Stimulating Factor) . On pourra noter que l'utilisation de cellules présentatrices d'antigènes est facultative dans la présente invention. Ainsi, l'invention concerne aussi des compositions selon l'invention sans cellules présentatrices d'antigènes permettant un traitement thérapeutique qui ne nécessite pas de manipulations ex vivo de cellules présentatrices d'antigènes et dont la mise en oeuvre est ainsi plus aisée et plus simplifiée et ne présentant pas les possibles inconvénients de ceux utilisant des cellules présentatrices d'antigènes. Les compositions selon l'invention peuvent comprendre en outre un adjuvant permettant d'augmenter la réponse immunitaire, notamment choisi dans le groupe d'adjuvant comprenant le Qs21 (mélange de saponines commercialisé par la société Aquila), I'ISCOM (Immunostimularoty complexe commercialisé par la société CSL Ltd.), les CpG (séquences d'ADN de bactéries commercialisées par la société coley Pharmaceutical Group), Leif (Leishmania major Initiation Factor commercialisé par la société Corixa), la CT (toxine cholérique) ou la LT (LT pour " Heat labile enterotoxin " entérotoxine labile à la chaleur), tout comme les versions détoxifiées de la CT ou la LT. Sous un autre aspect, la composition selon l'invention est caractérisée en ce qu'elle ne contient aucun autre adjuvant permettant d'augmenter la réponse immunitaire tel que ceux mentionnés ci-dessus, hormis ladite protéine Omp, notamment ladite protéine OmpA d'enterobactérie, ou l'un de ses fragments. Au sens de la présente invention, le milieu pharmaceutiquement acceptable est le milieu dans lequel les composés de l'invention sont administrés, préférentiellement un milieu injectable chez l'homme. Il peut par exemple être constitué d'eau, d'une solution aqueuse saline ou d'une solution aqueuse à base de dextrose et/ou de glycérol. Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention contient en outre un détergent. Les compositions selon l'invention peuvent contenir en outre un détergent, et notamment tout type de tensioactif pharmaceutiquement acceptable, comme par exemple des tensioactifs anioniques, cationiques, non-ioniques ou amphotères. On utilise préférentiellement les détergents Zwittergent 3- 12 et l'octylglucopyrannoside et encore plus préférentiellement le Zwittergent 3-14. L'invention concerne également les compositions selon l'invention caractérisées en ce qu'elles sont véhiculées sous une forme permettant d'assurer et/ou d'améliorer leur stabilité, et ainsi comprendre en outre par exemple des vecteurs permettant d'assurer et/ou d'améliorer la stabilité de l'association protéine Omp ou l'un de ses fragments et du lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues, en particulier les vecteurs choisis parmi les liposomes, les virosomes, les nanosphères, les microsphères ou les microcapsules. L'invention comprend également l'utilisation d'une protéine Omp ou d'un de ses fragments associé à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à générer ou accroitre une réponse immunitaire contre une cellule tumorale. Dans une forme de réalisation préférée selon l'invention, la protéine Omp ou l'un de ses fragments est utilisée associée à un lysat de cellules tumorales autologues pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à générer ou accroître une réponse immunitaire contre ladite cellule tumorale autologue. Plus généralement, l'utilisation selon l'invention est relative à la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à traiter les cancers, de préférence les cancers associés à un antigène tumoral. Parmi les cancers dont les tumeurs expriment un antigène tumoral associé pouvant être prévenus ou traités par les utilisations selon la présente invention, on peut citer en particulier, mais sans s'y limiter: le cancer du sein, du poumon, du colon, et le carcinome gastrique (Kawashima et al., 1999, Cancer Res., 59:431-5); * le mésothéliome, l'ostéosarcome, les cancers du cerveau (Xie et al., 1999, J. Natl. Cancer. Inst., 91:169-75); * le mélanome (Zheuten et al., 1998, Bratilsl. Lek. Listy 99:426-34) * l'adénocarcinome pancréatique (Hammel et al., 1998, Eur. J. gastroenterol. Hepatol., 10:345-8); le cancer colorectal (Ogura et al., 1998, Anticancer Res., 18:3669-75) * le carcinome des cellules rénales (Jantzer et al., 1998, Cancer Res., 58:3078-86) et * le cancer de l'ovaire et du col de l'uterus (Sonoda et al., 1996, Cancer., 77:1501- 9). Un autre objet de l'invention est l'utilisation d'une protéine Omp ou d'un de ses fragments associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à inhiber la croissance de tumeurs. Ces différentes utilisations mettent en oeuvre les compositions précédemment décrites. La méthode thérapeutique de mise en oeuvre des compositions selon l'invention consiste notamment à: - évaluer chez un patient le type de cancer dont il est atteint; - à choisir en fonction du type de cancer un traitement utilisant des cellules tumorales autologues et/ou hétérologues; - le cas échéant à prélever des cellules tumorales - de façon facultative et non préférée à réaliser des cultures primaires ou secondaires desdites cellules tumorales; - à préparer les compositions selon l'invention avec des concentrations adéquates de protéine Omp ou d'un de ses fragments et de lysat de cellules tumorales; - à injecter au patient ladite composition, de préférence en sous-cutanée ou en intradermique; - si nécessaire à répéter ces injections plusieurs fois, de préférence 3 injections à un mois d'intervalle et par la suite un rappel tous les 3 à 6 mois. Les concentrations adéquates de protéine Omp ou d'un de ses fragments et de lysat de cellules tumorales pourront notamment être choisies de manière à obtenir des compositions comprenant par exemple de 0,01 à 50 mg, et préférentiellement de 0,1 à mg de lysat cellulaire, et de 0,1 à 50 mg, et préférentiellement de 1 à 25 mg d'Omp. Le rapport Lysat/Omp pouvant être compris entre 1/2 et 1/10, et préférentiellement entre 1/5 et 1/8. Quand des cellules présentatrices d'antigènes sont utilisées, ces dernières sont incubées in vitro avec la protéine Omp, ou un de ses fragments, associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues. Elles pourront par exemple être incubées à 37 C pendant une durée comprise entre 5 minutes et 24 heures. Les quantités et concentrations de cellules présentatrices d'antigènes devant être utilisées sont celles décrites dans l'art antérieur. On pourra ainsi utiliser par exemple 10' cellules présentatrices d'antigènes par ml. Les cellules présentatrices d'antigènes mises au contact de la protéine Omp, ou un de ses fragments, associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues sont ensuite injectées au patient, de préférence au patient dont elles sont issues. En fonction de la condition physique du patient, on pourra lui injecter par exemple de 106 à 1012 cellules présentatrices d'antigènes. L'invention a encore pour objet un dispositif adapté à la mise en oeuvre de la méthode thérapeutique cidessus mentionnée, tel que par exemple un kit, comprenant au moins l'Omp et les moyens nécessaires à préparer les compositions selon l'invention, tels que par exemple un protocole, un milieu pharmaceutiquement acceptable ou un tampon de lyse. Quand des cellules présentatrices d'antigènes sont utilisées, ce dispositif pourra aussi contenir ces cellules, préférablement purifiées. Enfin, l'invention a pour objet un procédé de mise en évidence d'antigènes tumoraux caractérisé en ce qu'il consiste à: - associer une protéine Omp ou l'un de ses fragments à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues de manière à former des complexes entre les protéines Omp ou leurs fragments et les antigènes tumoraux du lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues; - à isoler les complexes ainsi formés - à séparer de ces complexes les antigènes tumoraux; et - à identifier lesdits antigènes tumoraux. La première étape de ce procédé consiste à mélanger les extraits tumoraux aux protéines ou fragments d'Omp, notamment dans les quantités et proportions ci-dessus mentionnées. Préalablement à cette étape, il est possible de modifier les Omp ou leur fragment de manière à les rendre aptes à l'étape d'isolement des complexes Omp- antigènes, on pourra par exemple biotinyler les Omp. Pour isoler les complexes ainsi formés, on peut utiliser une colonne de chromatographie d'affinité puis en procédant à des élutions successives, les antigènes tumoraux seront séparés et isolés. On procède ensuite à des techniques classiques pour identifier lesdits antigènes, comme par exemple le séquençage desdits antigènes par des techniques connues de l'homme du métier utilisant la spectrométrie de masse, un Maldi-Tof et la bio- informatique. Les légendes des figures et exemples qui suivent sont destinés à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée. Légendes des figures: Figure 1: Mesure du volume des tumeurs suite à une immunisation avec un lysat B16.F10 avec ou sans P40. Figures 2A et 2B: Mesure du pourcentage d'yeux présentant la pathologie (Figure 2A) et du degré de pathologie (Figure 2B) chez des souris TRP/Tag suite à une immunisation avec un lysat d'yeux avec ou sans P40. Degré 0: pas de pathologie visible; Degré 1: pathologie moyenne; Degré 2 pathologie sévère. Figures 3A et 3B: Gel SDS-PAGE montrant les fractions des mélanges du lysat de B16.F10 avec P40-biotine (Figure 3A) ou TT-biotine (Figure 3B) éluées au détergent d'une colonne de streptavidine-sépharose. Exemple I: Mesure de l'activité antitumorale chez la souris C57BL/6 2 500 cellules du mélanome B16.F10 ont été implantées en sous-cutané au jour 0 dans des souris C57BL/6, dont les cellules B16.F10 ont été originalement dérivées. Egalement au jour 0, les souris C57BL/6 ont été immunisées en sous-cutané à la base de la queue avec P40 (350 /g) mélangée avec un lysat de 106 cellules B16.F10 (broyées avec un homogénéisateur Dounce, soniquées et passées sur un tamis en nylon) ou avec du lysat seul. Une deuxième immunisation à 10 jours d'intervalle avec la première a également été faite selon le même mode d'injection. A partir du jour 18 post-implantation, le volume de la tumeur sous-cutanée a été mesuré. Comme le montre la Figure 1, l'immunisation de souris C57BL/6 ayant reçu le même jour des cellules du mélanome B16F10 avec P40 mélangée au lysat de B16F10, mais pas avec le lysat seul, ralentit de façon significative le développement du mélanome sous-cutané. Exemple II: Mesure de l'activité antitumorale chez la souris TRP/Tag Les souris TRP/Tag développent des tumeurs dans les yeux, pouvant ainsi facilement être visualisables. Un mélange de P40 (350 /ug) et de lysat d'yeux tumoraux (broyés avec un homogénéisateur Dounce, soniqués et passés sur un tamis en nylon) ou du lysat seul ont été injectés en sous-cutané à la base de la queue chez les souris TRP/Tag à 4 semaines d'âge. La fréquence et la sévérité des tumeurs oculaires ont été mesurées quotidiennement. La fréquence et la sévérité des tumeurs oculaires chez les souris TRP/Tag sont significativement diminuées après immunisation avec le mélange de P40 et du lysat (voir Figures 2A et 2B). Par contre, aucun effet n'a été observé chez les souris traitées avec le lysat seul. Ce résultat est d'autant plus surprenant puisque le processus de transformation maligne de l'épithélium rétinal pigmenté chez les souris TRP/Tag débute dès avant la naissance, donc au moins 3 semaines avant la première immunisation. Ainsi, même lorsque la tumeur est déjà à un stade avancé, la présente invention permet d'obtenir une diminution significative de cette tumeur. Exemple III: Comparaison de la capacité à retenir des antigènes de P40 à celle de TT La biotinylation des protéines P40 ou TT s'effectue dans un mélange contenant 340 gl de P40 ou de TT à 6 milligrammes (mg)/ml, 100 gl de NaHCO3, 0,5 Mole/litre (M), pH 8.5, 100 g1 de S-NHS biotine (2 mg/ml) et 460 gl d'eau ultra pure. Le mélange est ensuite placé 2 heures (h) à 4 C afin d'arrêter la réaction de biotinylation puis est dialysé sur la nuit contre du PBS dans des cassettes de dialyses à température ambiante sous agitation magnétique afin d'éliminer la biotine en excès. Le mélange P40 biotine (2 mg/ml) + lysat (0,9x106 cellules par ml) ou TT biotine (2 mg/ml) + lysat (0,9x106 cellules par ml) est dialysé dans une cassette de dialyse contre de l'eau ultra pure une nuit, à température ambiante, sous agitation magnétique. Cette étape permet de favoriser les interactions hydrophobes entre P40 et le lysat. TT sert de contrôle négatif. Le support utilisé pour cette chromatographie d'affinité basse pression est une colonne analytique avec une phase stationnaire de sépharose-streptavidine haute performance préalablement saturée avec de la BSA afin d'éliminer toutes les interactions artéfactuelles. Les échantillons utilisés sont soit P40 biotine + lysat soit TT biotine + lysat obtenus après l'étape de dialyse et sont incubés avec la résine une demie heure à température ambiante afin que les interactions biotine streptavidine se fassent correctement. L'étape de lavage s'effectue avec cinq volumes colonne de PBS 1X et l'élution des protéines et peptides retenus par P40 se fait avec cinq volumes colonne de PBS 1X + 0,1 % de chaps. La résine est ensuite lavée avec 2 volumes colonne de PBS 1X. Les échantillons sont lyophilisés et repris dans du tampon Tris Glycine/SDS, chauffés à 99 C pendant 5 mn et centrifugés 1 mn à 13000 rpm. Les protéines sont analysées par électrophorèse dénaturante sur gel polyacrylamide. Après séparation, les protéines sont visualisées par coloration au nitrate d'argent. Comme le montrent les figures 3A et 3B, plusieurs protéines sont éluées au détergent dans le cas du mélange P40-lysat (figure 3A), mais pas dans le cas du mélange TT-lysat (figure 3B), démontrant l'existence d'interactions hydrophobes spécifiques des Omp. Ainsi, les protéines Omp, contrairement aux protéines porteuses classiquement utilisées telles que TT, permettent de retenir de façon spécifique des antigènes et de ce fait d'isoler et d'analyser ces derniers. Les Omp permettent donc d'isoler un plus grand nombre d'antigènes tumoraux comparativement aux porteurs classiques. REVENDICATIONS 1) Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend dans un milieu pharmaceutiquement acceptable au moins une protéine Omp, ou un de ses fragments, associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues. 2) Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite protéine Omp, ou l'un de ses fragments, est obtenue par un procédé d'extraction à partir d'une culture d'entérobactérie. 3) Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite protéine Omp, ou l'un de ses fragments, est obtenue par voie recombinante. 4) Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ladite protéine Omp est la protéine OmpA de Klebsiella pneumoniae. ) Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que la séquence d'acides aminés de ladite protéine OmpA, ou l'un de ses fragments, comprend: a) la séquence d'acides aminés de séquence SEQ ID N 1 b) la séquence d'acides aminés d'une séquence présentant une homologie d'au moins % avec la séquence SEQ ID N 1; ou c) la séquence d'acides aminés d'un fragment d'au moins 5 acides aminés d'une séquence telle que définie en a). 6) Composition selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que ledit lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues est un mélange d'antigènes intracellulaires et/ou membranaires, préférentiellement intra et membranaires. 7) Composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une cytokine et/ou un facteur de croissance ou des fibroblastes relarguant une cytokine et/ou un facteur de croissance. 8) Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre des cellules présentatrices d'antigènes et préférentiellement des macrophages. 9) Composition selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un adjuvant. ) Composition selon l'une des revendications 1 à 8, sans autre adjuvant permettant d'induire une réponse immunitaire. 11) Composition selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que ledit milieu pharmaceutiquement acceptable est constitué d'eau, d'une solution aqueuse saline ou d'une solution aqueuse à base de dextrose et/ou de glycérol. 12) Composition selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisée en ce que ladite composition contient en outre un détergent. 13) Composition selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique est véhiculée sous une forme permettant d'améliorer sa stabilité. 14) Utilisation d'une protéine Omp ou d'un de ses fragments associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à générer ou accroître une réponse immunitaire contre une cellule tumorale. ) Utilisation d'une protéine Omp ou d'un de ses fragments associée à un lysat de cellules tumorales autologues pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à générer ou accroitre une réponse immunitaire contre ladite cellule tumorale autologue. 16) Utilisation d'une protéine Omp ou d'un de ses fragments associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à traiter les cancers, de préférence les cancers associés à un antigène tumoral. 17) Utilisation d'une protéine Omp ou d'un de ses fragments associée à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à inhiber la croissance des tumeurs. 18) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 17, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique est telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 13. 19) Dispositif caractérisé en ce qu'il comprend au moins une Omp et un moyen nécessaire à la préparation des compositions selon l'invention telles que définies dans l'une quelconque des revendications 1 à 13. ) Procédé de mise en évidence d'antigènes tumoraux caractérisé en ce qu'il consiste à: - associer une protéine Omp ou un de ses fragments à un lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues de manière à former des complexes entre les protéines Omp ou leurs fragments et les antigènes tumoraux du lysat de cellules tumorales autologues et/ou hétérologues; - à isoler les complexes ainsi formés - à séparer de ces complexes les antigènes tumoraux; et - à identifier lesdits antigènes tumoraux.