Brevet FR2804960A1 — publié le 20010817

La présente invention concerne des nouvelles séquences oligonucléotides ainsi que leurs dérivés. Ces nouvelles séquences oligonucléotides sont capables de s'hybrider avec les gènes ou avec les produits des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la tyrosinase related-protein 1 (TRP-1 ). La présente invention concerne également l'utilisation de ces nouvelles séquences oligonucléotides comme agent dépigmentant ou blanchissant dans une composition cosmétique ou dans une composition dermatologique. Chez l'homme, la pigmentation résulte de la synthèse et de la distribution des pigments mélaniques dans la peau, les follicules ou les yeux. La pigmentation est génétiquement prédéfinie mais elle est régulée par de nombreux facteurs internes ou externes. Les mélanines produites par les mélanocytes ainsi que le nombre de mélanocytes, leur activité tyrosinasique et leur capacité à exporter les mélanines, vont conditionner la couleur de la peau humaine. Certaines personnes voient apparaître sur leur peau au niveau du visage ou des mains des zones et/ou des taches plus foncées et/ou plus colorées conférant à la peau une hétérogénéité. Ces taches sont dues à une concentration importante de mélanine dans les kératinocytes de l'épiderme. Le mécanisme de formation de la pigmentation cutanée fait intervenir la synthèse des mélanines. Ce mécanisme est particulièrement complexe et fait intervenir schématiquement les principales étapes suivantes : Tyrosine 111'- Dopa 111'- Dopaquinone III. Dopachrome 111'- Mélanines La tyrosinase et la tyrosinase-related-protein 1 (TRP-1) sont les enzymes essentielles intervenant dans cette suite de réactions. Elles catalysent notamment la réaction de transformation de la tyrosine en Dopa (Dihydroxyphénylalanine) et la réaction de transformation de la Dopa en Dopaquinone conduisant à la formation des pigments mélaniques. Une molécule est reconnue comme dépigmentante si elle agit directement sur les mélanocytes épidermiques où se déroule la mélanogénèse et/ou si elle interfère avec une des étapes de la biosynthèse des mélamines. C'est le cas notamment lorsque la molécule inhibe une des enzymes impliquées dans la mélanogénèse ou lorsqu'elle interfère avec les composés chimiques de la chaîne de synthèse des mélanines. Les substances dépigmentantes connues sont notamment l'hydroquinone et ses dérivés, l'acide ascorbique et ses dérivés, des extraits placentaires, l'acide kojique, l'arbutine, les iminophénols (WO 99/22707), l'association de carnitine et de quinone (DE 19806947), les dérivés amides d'amino-phénol (FR 2 772 607), et les dérivés de benzothiazole (WO 99/24035). Ces substances peuvent présenter certains inconvénients Elles peuvent être instables, nécessiter une utilisation à des concentrations élevées, manquer de spécificité quant à leur mode d'action, ou présenter un pouvoir cytotoxique ou irritant. L'utilisation topique de substances dépigmentantes efficaces et inoffensives est particulièrement recherchée en cosmétique et en dermatologie. On utilise notamment ces substances pour traiter des hyperpigmentations régionales par hyper-activité mélanocytaire telles que les mélasmas idiopathiques, les hyperpigmentations localisées par hyperactivité et prolifération mélanocytaire bénigne telles que les taches pigmentaires séniles (lentigo actiniques), les hyperpigmentations accidentelles telles que la photosensibilisation ou la cicatrisation postlésionnelle, ainsi que certaines leucodermies telles que le vitiligo. Dans ces derniers cas, à défaut de pouvoir repigmenter la peau, on achève la dépigmentation des zones résiduelles pour donner à la peau une couleur homogène. Le problème posé aux professionnels est donc la conception, la fabrication ou l'isolement de nouveaux agents blanchissant de la peau humaine, des poils et/ou des cheveux ne présentant pas les inconvénients des substances connues, c'est-à-dire qui soient non irritants, non toxiques et/ou non allergisants pour la peau et stable dans une composition. L'utilisation d'un oligonucléotide antisens pour traiter les maladies dues à un dysfonctionnement des mélanocytes, en particulier le Vitiligo et d'autres maladies dépigmentantes, a été décrite dans WO 99/25819. Dans ces pathologies cutanées, l'hypopigmentation résulte d'une teneur anormalement élévée en ténascine. Les oligonucléotides décrits dans ce document agissent contre l'hypopigmentation en régulant l'expression de la ténascine. Au contraire, l'objet de la présente invention consiste à fournir un agent dépigmentant destiné à lutter contre l'hyperpigmentation cutanée. Les inventeurs de la présente invention ont trouvé de manière tout à fait inattendue que des oligonucléotides pouvant s'hybrider avec les gènes ou les produits des gènes (tels que les ARN) codant pour la tyrosinase et/ou avec les gènes ou les produits des gènes codant pour la tyrosinase-related-protein 1 (TRP-1) présentent une activité dépigmentante. Cette activité existe même à très faible concentration, ce qui augmente l'intérêt de ces oligonucléotides. De plus, les oligonucléotides selon l'invention ne présentent aucune cytotoxicité. Les oligonucléotides selon l'invention interviennent en amont des mécanismes de la mélanogénèse en modulant l'expression de la tyrosinase et/ou de la TRP-1 dans les mélanocytes. Les oligonucléotides selon l'invention offrent une solution idéale aux problèmes posés par les substances utilisées classiquement. Les substances connues qui inhibent l'activité de la tyrosinase ou de la TRP-1 (notamment l'hydroquinone et ses dérivés, l'acide ascorbique et ses dérivés, des extraits placentaires, l'acide kojique, l'arbutine) présentent de multiples effets secondaires inacceptables du fait de leur faible spécificité. La présente invention résout donc les problèmes rencontrés par les chercheurs antérieurs en modulant la production des enzymes au lieu d'inhiber directement les enzymes pour obtenir l'effet dépigmentant. Les oligonucléotides selon l'invention sont nouveaux en tant que tels et nouveaux en tant que médicaments. La présente invention concerne un oligonucléotide comportant un nombre de nucléotides compris entre 7 et 25, par exemple entre 9 et 25, entre 12 et 25, entre 15 et 25 ou entre 18 et 25, de préférence égale à 20, capable de s'hybrider avec les gènes ou les produits des gènes codant pour la tyrosinase, et/ou avec les gènes ou les produits des gènes codant pour la tyrosinase-related-protein 1 (TRP1), notamment un oligonucléotide dont la séquence est choisie parmi les SEQ ID NO.1 à SEQ ID N0.11 ayant la signification suivante : - SEQ ID NO.1 5'-GCAAAACAAAGACCTGGTTT-3' - SEQ ID NO.2 5'-AGACCTGGTTTGCAGCTCTT-3' - SEQ ID NO.3 5'-TGCTTGAAATAAGAGTGCAA-3' - SEQ ID NO.4 5'-AAAATCCAGCTCACAATCCT-3' - SEQ ID NO.5 5'-AGGAGCACTCATTCTGCTTG-3' - SEQ ID NO.6 5'-AGGAACTGGCTAATTGGAGT-3' - SEQ ID NO.7 5'-CAAGGTCTGCAGGAACTGGC-3' - SEQ ID NO.8 5'-CCTCACAAGGTCTGCAGGAA-3' - SEQ ID NO.9 5'-CTACAGACAATCTGCCAAGA-3' - SEQ ID N0.10 5'-GCATTCTTCCTCTAGTCCTC-3' - SEQ ID N0.11 5'-TTCCAGTACCTCACAATCCT-3' Selon un mode de mise en oeuvre de la présente invention, les oligonucléotides de séquence SEQ ID NO.1 à 6, notamment les SEQ ID NO.1, SEQ ID NO.2, SEQ ID NO.5 et SEQ ID NO.6, sont préférés. La présente invention a également pour objet un oligonucléotide en tant que produit nouveau dont la séquence est l'une des séquences SEQ ID NO.1 à N0.11décrites ci-dessus, en particulier les SEQ ID NO.1 à 6, et préférentiellement la SEQ ID NO.1, la SEQ NO.2, la SEQ ID NO.5 ou la SEQ ID NO.6. Dans le cadre de la présente invention, on entend par gène codant pour la tyrosinase , la séquence génomique du gène de la tyrosinase. De même, on entend par gène codant pour la TRP1 , la séquence génomique du gène de la TRP1. Les rôles clés de la tyrosinase et de la TRP-1 dans la mélanogénèse sont connus. L'utilisation d'oligonucléotides dirigés contre un ARN messager codant pour une enzyme ou une protéine afin d'en moduler l'expression est également connue. Cependant, la technique élaborée par les inventeurs de la présente invention n'avait jamais été utilisée comme moyen de dépigmentation. Les oligonucléotides selon l'invention sont déterminés pour s'hybrider directement à l'ARN messager ou au gène. Ils permettent ainsi de réaliser une modulation ultime de la quantité de tyrosinase ou de TRP- 1 produite par les gènes. Dans le présent document, le terme "Hybridation" est utilisé pour désigner la formation de liaisons hydrogènes, aussi connue comme appariement Watson-Crick entre les bases complémentaires, usuellement sur deux brins d'acide nucléique pour former un duplex en double hélice. Le degré de complémentarité entre deux séquences d'acide nucléique de longueur identique est déterminé en comparant, après alignement, la première séquence avec la séquence complémentaire de la seconde séquence. Le degré de complémentarité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide est identique entre les deux séquences ainsi comparées, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions et en multipliant le résultat obtenu par 100 pour obtenir le degré de complémentarité entre ces deux séquences. Le terme "Hybridation spécifique" signifie en particulier qu'il existe un degré de complémentarité suffisant pour éviter la fixation non spécifique de l'oligonucléotide sur une séquence non ciblée dans les conditions où la fixation spécifique est souhaitée. Il est compris que l'oligonucléotide n'a pas besoin d'être 100% complémentaire de sa séquence d'acide nucléique cible pour s'hybrider spécifiquement. En particulier, un oligonucléotide présentant un degré de complémentarité au moins égal à 80 % environ est capable de s'hybrider spécifiquement avec l'acide nucléique choisi comme cible. Les oligonucléotides selon l'invention s'hybrident de préférence spécifiquement avec les gènes ou les produits des gènes codant pour la tyrosinase et/ou les gènes ou les produits des gènes codant pour la TRP1. En particulier, les oligonucléotides de l'invention sont capables de s'hybrider avec l'ADN des gènes qui codent pour la tyrosinase ou l'ADN des gènes qui codent pour la TRP-1, et/ou avec l'ARNm dérivant de ces gènes. Les oligonucléotides selon l'invention comportent un nombre de nucléotides suffisant en identité et en nombre pour s'hybrider de façon spécifique. Cette propriété est couramment appelée "antisens". La présente invention a donc pour objet des oligonucléotides qui s'hybrident spécifiquement en amont de et/ou avec la région présentant le codon d'initiation de la traduction des gènes. La présente invention a aussi pour objet des oligonucléotides qui s'hybrident spécifiquement avec la région 5' non codante et/ou la région présentant le codon d'initiation des gènes, ou la région codante et/ou la région 3' non codante des gènes codant pour la tyrosinase ou la tyrosinase-related-protein 1. La présente invention a aussi pour objet des oligonucléotides qui s'hybrident spécifiquement avec l'ADN et/ou l'ARN messager qui codent pour la tyrosinase ou la TRP-1. Dans le cadre de la présente invention, on entend par ADN qui codent pour la tyrosinase , aussi bien les exons que les introns, en particulier les exons. La présente invention a aussi pour objet des oligonucléotides, comprenant une ou plusieurs modifications chimiques au niveau de leurs parties sucres, leurs parties nucléobases ou leur squelette internucléotidique qui confèrent des caractéristiques physico-chimiques souhaitables aux oligonucléotides selon l'invention telles qu'une biodisponibilité accrue, l'augmentation de l'affinité pour les séquences cibles, l'augmentation de l'internalisation cellulaire ou une meilleure stabilité biologique ou l'augmentation de la stabilité en présence de nucléases cellulaires. A titre d'exemple, les modifications pouvant conférer ces caractéristiques sont les dérivés 2'-O-alkyle et 2'-O-fluoro sur la partie sucre du nucléoside, et les dérivés phosphorothioates ou les dérivés méthylphosphonates au niveau du squelette internucléotidique. Dans le présent document, le terme "oligonucléotide" se réfère à des polynucléotides formés à partir de nucléobases naturelles et de groupements pentafuranosyles (sucre) formant des nucléosides qui sont reliés entre eux par liaisons phosphodiesters natives. Le terme "oligonucléotides" se réfère donc aux espèces naturelles ou aux espèces synthétiques formés à partir de sous unités naturelles ou de leurs homologues proches. Le terme "oligonucléotides" peut se référer aussi aux parties qui ont des fonctions similaires aux oligonucléotides naturels mais qui peuvent présenter des portions non naturelles. Les oligonucléotides peuvent avoir des parties sucres, des parties nucléobases ou des liaisons internucléotidiques modifiées. Parmi les modifications possibles, les modifications préférées sont les dérivés 2'-O-alkyle sur la partie sucre, en particulier les dérivés 2'-O-éthyloxyméthyle ou 2'-O-méthyle, et/ou les phosphorothioates ou les méthylphosphonates pour le squelette internucléotidique. Les oligonucléotides chimériques sont compris dans les modifications préférentielles de l'invention. Les oligonucléotides contiennent au moins deux régions chimiquement différentes, chacune comprenant au moins un nucléotide. Typiquement, une ou plusieurs régions comprenant un nucléotide modifié qui confère une ou plusieurs propriétés bénéfiques comme par exemple une meilleure stabilité biologique, une biodisponiblité accrue, l'augmentation de l'internalisation cellulaire ou l'augmentation de l'affinité pour l'ARN cible. De façon préférée, le squelette internucléotidique peut être en tout ou partie phosphodiesters, ou phosphorothioates, ou méthylphosphonates ou les combinaisons de liaisons phosphodiesters et/ou phosphorothioates et/ou méthylphosphonates. Le terme " oligonucléotides " peut également se référer à des oligonucléotides auxquels on a greffé un vecteur d'administration circulaire de type plasmidique ou un vecteur d'administration linéaire de type acide nucléique ou peptidique. Les oligonucléotides de l'invention sont nouveaux en tant que médicaments. La présente invention a aussi pour objet une composition cosmétique ou dermatologique contenant au moins un oligonucléotide décrit précédemment et un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. Une telle composition peut contenir en outre, un ou plusieurs actifs visant à renforcer les effets recherchés. La présente invention a également pour objet l'utilisation d'une séquence oligonucléotide dirigée contre les produits de transcription des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la TRP-1 dans et/ou pour la fabrication d'une composition cosmétique ou dermatologique pour dépigmenter et/ou blanchir la peau humaine et/ou enlever les taches pigmentaires de la peau humaine. La présente invention se rapporte également à l'utilisation d'oligonucléotides capables de s'hybrider spécifiquement avec les gènes codant pour la tyrosinase et/ou la tyrosinase-related-protein 1 comme agent cosmétique, notamment pour dépigmenter ou blanchir la peau, les poils et/ou les cheveux humains. La présente invention a aussi pour objet l'utilisation d'une séquence oligonucléotide dirigée contre les produits de transcription des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la TRP-1 dans et/ou pour la fabrication d'une composition cosmétique ou dermatologique comme inhibiteur de la synthèse des mélanines. La présente invention se rapporte également à l'utilisation des oligonucléotides décrits précédemment pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention des maladies se traduisant par la surexpression de la tyrosinase ou de la tyrosinaserelated-protein 1, par voie topique. Ce médicament peut être destiné à inhiber la synthèse de mélanine, notamment à dépigmenter ou à blanchir la peau, mais également pour le traitement ou la prévention des hyperpigmentations régionales par hyper-activité mélanocytaire telles que les mélasmas idiopathiques, des hyperpigmentations localisées par hyper-activité et prolifération mélanocytaire bénigne telles que les taches pigmentaires séniles (lentigo actiniques), des hyperpigmentations accidentelles telles que la photosensibilisation ou la cicatrisation postlésionnelle, et pour le traitement de certaines leucodermies telles que le vitiligo. La présente invention a aussi pour objet l'utilisation d'une séquence oligonucléotide dirigée contre les produits de transcription des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la TRP-1 dans une composition cosmétique dépigmentante et/ou blanchissante de la peau humaine. La présente invention concerne aussi l'utilisation des oligonucléotides décrits précédemment pour moduler l'expression de la tyrosinase et/ou de la tyrosinase-related-protein 1. La présente invention a encore pour objet l'utilisation d'une séquence oligonucléotide dirigée contre les produits de transcription des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la TRP-1 pour la fabrication d'une composition dermatologique dépigmentante et/ou blanchissante de la peau humaine. La présente invention se rapporte également à un procédé cosmétique ou dermatologique de dépigmentation et/ou de blanchiment de la peau humaine consistant à appliquer sur la peau pigmentée une composition cosmétique comprenant une séquence oligonucléotide dirigée contre les produits de transcription des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la TRP-1. La présente invention a aussi pour objet une composition dépigmentante caractérisée en ce qu'elle contient, dans un milieu cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, une séquence oligonucléotide dirigée contre les produits de transcription des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la TRP-1. La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention est appropriée pour une utilisation topique et contient donc un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau. La séquence oligonucléotide selon l'invention peut être présente en quantité allant de 0,00001% à 10% et de préférence de 0,0003% à 3% du poids total de la composition. La composition de l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile dans eau ou eau dans huile ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion d'huile dans une phase polymérique telle que les nanosphères et les nanocapsules ou mieux des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non-ionique tels que décrit dans le brevet français FR 2534487. Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte ou d'une mousse. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide pulvérulent ou non, par exemple sous forme stick. Elle peut encore se présenter sous la forme de patchs, de crayons, de pinceaux et d'applicateurs autorisant une application localisée sur les taches du visage ou des mains. Elle peut être utilisée comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage. De façon connue, la composition de l'invention peut contenir également les adjuvants habituels dans les domaines cosmétique et dermatologique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les pigments, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse, dans les vésicules lipidiques et/ou dans les nanoparticules. Lorsque la composition cosmétique ou dermatologique de l'invention est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 à 80% en poids, et de préférence de 5 à 50% en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les émulsionnants et les co- émulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. L'émulsionnant et le co-émulsionnant sont présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3% à 30% en poids, et de préférence de 0,5% à 20% en poids par rapport au poids total de la composition. Comme huiles utilisables en association avec les oligonucléotides selon l'invention, on peut citer les huiles minérales (huile de vaseline), les huiles d'origine végétale (huile d'avocat, huile de soja), les huiles d'origine animale (lanoline), les huiles de synthèse (perhydrosqualène), les huiles siliconées (cyclométhicone) et les huiles fluorées (perfluoropolyéthers). On peut aussi utiliser comme matière grasses des alcools gras (alcool cétylique), des acides gras, des cires (cire de Carnauba, ozokérite). Comme émulsionnants et coémulsionnants utilisables en association avec les oligonucléotides selon l'invention, on peut citer par exemple les esters d'acide gras et de polyéthylène glycol tels que le stéarate de PEG-20 et les esters d'acide gras et de glycérine tels que le stéarate de glycéryle. Comme gélifiants hydrophiles utilisables en association avec les oligonucléotides selon l'invention, on peut citer en particulier les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides, les gommes naturelles et les argiles. Comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras, la silice hydrophobe et les polyéthylènes. La présente invention a pour objet une composition cosmétique ou dermatologique contenant au moins un oligonucléotide décrit précédemment et un ou plusieurs agents actifs. La présente invention concerne également l'utilisation d'un oligonucléotide tel que décrit précédemment pour la fabrication d'un médicament destiné à être administré de façon simultanée, séparée ou étalée dans le temps en association avec un ou plusieurs actifs. Lesdits actifs utilisables en association avec les oligonucléotides selon l'invention, utilisés purs ou provenant d'extraits renfermant ces molécules, sont notamment les composés suivants: l'acide ellagique et ses dérivés ; l'hydroquinone ; l'arbutine ; le résorcinol et ses dérivés ; la vitamine C et ses dérivés ; le pantothénate sulfonate et ses dérivés ; l'acide kojique ; les extraits placentaires ; des molécules interférant directement ou indirectement avec l'alpha-mélanocyte stimulating hormone (a-MSH) ou son récepteur ou l'hormone adrénocorticotropique (ACTH) ; les polyols tels que la glycérine le glycol ou le propylène glycol ; les vitamines ; les agents kératolytiques et/ou desquamants tels que l'acide salicylique et ses dérivés ; les alpha-hydroxyacides tels que l'acide lactique ou l'acide malique, seuls ou greffés , l'acide ascorbique et ses dérivés ; l'acide rétinoïque ; le rétinaldéhyde ; le rétinol et ses dérivés tels que le palmitate, le propionate ou l'acetate, en préparation liposomique ou non ; des agents antiglycations et/ou antioxydants pris seuls ou en association tels que le tocophérol et ses dérivés, la thiotaurine, l'hypotaurine, l'aminoguanidine, la thiamine pyrophosphate, la pyridoxamine, la lysine, l'histidine, l'arginine, la phénylalanine, la pyridoxine, l'adénosine triphosphate ; les agents anti-inflammatoires tels que le stéaryl glycyrrhétinate ; les agents apaisants et leurs mélanges, les filtres solaires chimiques ou physiques tels que le méthoxycinnamate d'octyle, le butyl-méthoxydibenzoyl-méthane, l'oxyde de titane et l'oxyde de zinc ; et les acides désoxyribonucléiques et/ou nucléiques. En cas d'incompatibilité, ces actifs et/ou les oligonucléotides peuvent être incorporés dans des sphérules, notamment des vésicules ioniques ou non ioniques telles que décrites dans le brevet français FR 2534487 et/ou des nanoparticules. Les exemples suivants illustrent la présente invention sans toutefois la limiter. Exemple 1 : Synthèse des Oligonucléotides Les oligonucléotides ont été synthétisés avec un synthétiseur automatique (Perseptive Biosystems Expedite modèle 8909) en utilisant la chimie standard des dérivés phosphoramidites en utilisant les protocoles du constructeur. Les (3-cyanoéthyldiisopropylphosphoramidites ont été fournis par le société Perseptive Biosystems. Pour les oligonucléotides non modifiés l'étape d'oxydation du phosphite a été effectuée avec une solution d'iode. En ce qui concerne les oligonucléotides phosphorothioates, l'étape d'oxydation du phosphite a été effectuée en utilisant une solution 0,05 M de 3H-1,2-benzodithiol-3one 1,1-dioxide dans de l'acétonitrile anhydre. Après clivage de la colonne (Controlled Pore Glass, Perseptive Biosystems) et déprotection totale de la séquence par un traitement de 18h à 55 C par une solution d'ammoniaque à 33%, les oligonucléotides ont été purifiées par précipitation dans l'éthanol en présence d'acétate de sodium. Des contrôles par chromatographie liquide haute pression ont été ensuite réalisés par chromatographie échangeuses d'ions avec élution par un gradient de chlorure de sodium et par chromatographie en phase inverse C18 avec élution par un gradient d'acétonitrile en présence d'acétate de triéthylammonium. Les oligonucléotides étudiés sont décrits dans la table 1. Dans la table 1, les numéros mentionnés sous les séquences indiquent la position de l'oligonucléotide dans la séquence d'origine. Les séquences proviennent, de la séquence de l'ADNc publiée par Cohen et al., Nucl. Acides Res. 18 : 2807 (1990) ; Genbank accession number X 51420, de la séquence de l'ADNc publiée par Shibahara et al., Tohoku J. Exp. Med. 156: 403 (1988) Genbank accession number M 27160, de la séquence de l'ADN publié par Box et al., Mamm. Genome 9 : 50 (1998), Genbank accession number AF 001295. TABLE 1 SEQ ID SEQUENCE OLIGONUCLEOTIDE LOCUS NO. 1. 5'-GCAAAACAAAGACCTGGTTT-3' HSTYRRP 111 92 2.5'-AGACCTGGTTTGCAGCTCTT-3' HSTYRRP 102 83 3. 5'-TGCTTGAAATAAGAGTGCAA-3' HSTYRRP 127 108 4. 5'-AAAATCCAGCTCACAATCCT-3' HSTYRRP 53 34 5. 5'-AGGAGCACTCATTCTGCTTG-3' HSTYRRP 141 122 6. 5'-AGGAACTGGCTAATTGGAGT-3' H U MTYRA 475 457 7.5'-CAAGGTCTGCAGGAACTGGC-3' HUMTYRA 485 466 8.5'-CCTCACAAGGTCTGCAGGAA-3' H U MTYRA 490 471 9. 5'-CTACAGACAATCTGCCAAGA-3' HUMTYRA 1332 1313 10 5'-GCATTCTTCCTCTAGTCCTC-3' HUMTYRA 506 487 11. 5'-TTCCAGTACCTCACAATCCT-3' AF001295 5875 5856 12. 5'-TTCTCGACGTTTGGTCCAGA-3' CONTROLE SENS SEQ ID NO.2 13. 5'-ACGTTTCTCGCCTAGTGATG-3' CONTROLE BROUILLE SEQ ID NO.2 Exemple 2 : Effet dépigmentant des oligonucléotides sur des mélanocytes humains normaux d'enfants Les mélanocytes sont obtenus à partir de peau de prépuce d'un donneur de race blanche. Les fragments de peau sont rincés au PBS (Gibco, Paisley, GB), puis à l'éthanol à 70%. Après un dernier lavage au PBS, la peau est découpée en fines bandelettes de 1 mm comportant un minimum de derme. Le derme et l'épiderme sont dissociés par incubation des bandelettes dans une solution de trypsine à 0,25% (Gibco, Paisley, GB) pendant une nuit à 4 C. Après incubation, les cellules épidermiques sont récupérées en grattant les cellules au scalpel. L'action de la trypsine est stoppée en plaçant les cellules dans un milieu E-199 (Gibco, Paisley, GB) contenant 10% (VN) de sérum de veau foetal (Gibco, Paisley, GB). Après homogénéisation et élimination des cornéocytes flottant en surface, la suspension cellulaire est filtrée, centrifugée et le culot est repris dans un milieu d'adhérence (Milieu 1) dont la composition est présentée dans le tableau suivant. COMPOSITION DU MILIEU 1 Concentration Composé Fabricant, référence finale dans le milieu E-199 Gibco, 31150-022 - Sérum de veau foetal Gibco 10 % - Hydrocortisone Sigma, H-0135 0,4 g/ml - L-GIN Gibco, 2 mM - EGF Sigma, E-4127 10 ng/ml Après dénombrement de la population cellulaire, les cellules sont ensemencées en flasques à raison de 200000/cm2. Les cultures sont maintenues à 37 C, en atmosphère saturée en humidité et avec 5% C02. Après adhésion des cellules, le milieu d'adhérence est remplacé par du milieu KSFM (Gibco , Paisley, GB), qui sera renouvelé toutes les 48h. Les cellules épidermiques ainsi mises en culture vont permettre l'obtention d'une coculture Kératinocytes-Mélanocytes. Dès que cette coculture est à environ 70% de confluence, le milieu KSFM est remplacé par un milieu sélectif (Milieu 2) favorisant la croissance des mélanocytes. COMPOSITION DU MILIEU 2 Concentration Composé Fabricant, référence finale dans le milieu E-199 Gibco, 31150-022 - Sérum de veau foetal Gibco 10 % - L-GIN Gibco, 25030-024 0,4 g/ml - IBMX Sigma, I-5879 2 mM - PMA Sigma, P-8139 10 ng/ml - Généticine Gibco, 066-01811 Y 100 g/ml 48 à 72 h après, les cellules sont décollées de la flasque à l'aide d'un mélange trypsine 0,1 %-EDTA 0,05% (Gibco, Paisley, GB) pendant 1 à 2 minutes à température ambiante. La suspension cellulaire obtenue est centrifugée et remise en milieu sélectif. Les cellules sont à nouveau traitées 24 à 48h plus tard avec le mélange trypsine-EDTA (0,1%-0,05%), pendant 1 à 2 minutes à température ambiante, puis réensemencées dans un milieu de prolifération spécifique des mélanocytes (Milieu 3). Le Milieu 3 est composé de 10 % de Milieu 2 et de 90 % de Milieu A. Le Milieu A est le milieu kératinocyte SFM (Gibco, 17005-034). A ce stade, la population cellulaire obtenue est pure, constituée exclusivement de mélanocytes humains normaux. Avant l'étude, les mélanocytes humains normaux (MHN) sont placés une semaine dans un milieu ne contenant aucun activateur métabolique puissant tels les esters de phorbol ou l'IBMX (Milieu 4). Le Milieu 4 est composé de 10 % de Milieu B et 90 % de Milieu A décrit précédemment. La composition du milieu B est décrite dans le tableau ci-dessous. COMPOSITION DU MILIEU B Concentration Composé Fabricant, référence finale dans le milieu - E-199 Gibco, 31150-022 - Sérum de veau foetal Gibco 10 % - L-GIN Gibco, 25030-024 2 mM Les MHN sont ensemencés en microplaques 96 puits (Falcon, Franklin Lakes, NJ, USA), à raison de 10000 par puits, dans 200 l de milieu 4. Les oligonucléotides à tester sont préparés extemporanément dans le milieu d'étude, à des concentrations de 10 nM, 100 nM, 250 nM, 500 nM, 1 M. Les traitements avec les différents oligonucléotides sont réalisés chaque jour pendant 7 jours. Pour chaque condition, 3 essais sont réalisés. En fin de traitement, des mesures de l'activité tyrosinase ou dopa-oxydase sont réalisées. La tyrosinase est également dénommée dopa-oxydase en raison de sa nature multifonctionnelle. Elle remplit en effet la même fonction que la dopa-oxidase au cours de l'oxydation de la tyrosine en dopa. Mesure de vitesses de réaction de l'activité dopa-oxydase : Les cellules sont rincées au PBS puis 50 l de tampon de lyse (Triton 100X (Sigma, T-9284) à 0,5 % dans du PBS (Gibco, 14190-094)) sont ajoutés dans les puits et la plaque est mise sous agitation pendant une heure à 4 C. La réaction est démarrée en ajoutant 50 l de substrat (L-DOPA 10 mM, Sigma) à chaque puits. L'apparition du dopachrome est mesurée toutes les 2 minutes à 450 nm pendant une heure et à 37 C, sous agitation régulière. Les vitesses de réaction ainsi obtenues sont exprimées en 10-4 Unité DO/mn. (a : écart-type) et présentés dans la table 2. TABLE 2 Numéros d'identification Vitesses de Vitesses de % de variation par réaction réaction (témoin rapport au témoin sans ODN) SEQ ID NO.1 10 nM 21,8 # = 1,0 26,4 # = 1,8 -17,4 100 nM 23,3 a = 0,4 26,4 # = 1,8 -11,7 250 nM 20,3o=0,3 26,4 cr = 1 , 8 -23,1 500 nM 1g,5 a = 2,9 26,4 cr = 1 8 -26,1 1 NM 23,9 a= 1,4 26,4 a= 1,8 -9 4 SEQ ID NO.2 10 nM 20,5 # = 1,7 26,4 a= 1,8 -22,3 100 nM 18,8 or=1,5 26,4 # = 1,8 -28,8 250 nM 19,2 # = 0,7 26,4 a= 1,8 -27,3 500 nM 19,7 # = 1,7 26,4 ci= 1,8 -25,4 1 NM 22,9 c=1,1 26,4 6 = 1,8 -13,3 SEQ ID NO.3 10 nM 23,7 a = 3,1 26,4 6 = 1,8 -10,2 100 nM 20 # = 0,7 26,4 # = 1,8 -24,2 250 nM 21,1 # = 0,6 26,4 a= 1,8 -20,1 500 nM 19,9 # = 1,7 26,4 a= 1,8 -24,6 1 M 23,6 # = 0,6 26,4 # = 1,8 -10,6 SEQ ID NO.4 10 nM 22,9 # = 1,2 26,4 ci= 1,8 -13,3 100 nM 19,9 # = 1,6 26,4 # = 1,8 -24,6 250 nM 20,9 # = 1,4 26,4 # = 1,8 -20,8 500 nM 21,2 # = 1,7 26,4 # = 1,8 -19,7 1 M 20 a = 1,2 26,4 a = 1,8 -24,2 SEQ ID NO.5 10 nM 23,5 a = 0,7 26,4 # = 1,8 -10,9 100 nM 19,3 a = 0,9 26,4 # = 1,8 -26,9 250 nM 17,9 # = 1,7 26,4 cr = 1,8 -32,2 500 nM 20,5 a = 0,6 26,4 ci = 1,8 -22,4 1 M 21,3 # = 0,8 26,4 # = 1,8 -19,3 SEQ ID NO.6 10 nM 20,7 # = 1,8 26,4 o=1,8 -21,6 100 nM 22,0 # = 0,6 26,4 o=1,8 -16,7 250 nM 20,1 a = 2,5 26,4 a = 1,8 -23,9 500 nM 18,7 a = 2,6 26,4 a = 1,8 -29,2 1 M 20,5 # = 1,1 26,4 # = 1,8 -22,4 SEQ ID N0.7 10 nM 26,6 a = 2,2 25,0 a = 0,9 +6,4 100 nM 25,3 # = 1,1 25,0 ci = 0,9 +1,2 250 nM 23,8 # = 1,3 25,0 a = 0,9 -4,8 500 nM 21,7 a = 0,9 25,0 a = 0,9 -13,2 1 M 22,6 a = 0,7 25,0 a = 0,9 -9,6 SEQ ID N0.8 10 nM 24,1 a = 0,1 25,0 a = 0,9 -3,6 100 nM 23,7 a = 0,6 25,0 ci = 0,9 -2,5 250 nM 25,1 a = 1,0 25,0 ci = 0,9 +0,4 500 nM 23,4 a = 0,6 25,0 a = 0,9 -6,4 1 M 23,7 a = 0,2 25,0 a = 0,9 -5,2 SEQ ID N0.9 10 nM 27,1 a = 0,7 25,0 a = 0,9 +8,4 100 nM 22,3 a = 0,6 25,0 # = 0,9 -10,8 250 nM 22,6 # = 0,2 25,0 # = 0,9 -9,6 500 nM 23,2 a = 0,5 25,0 # = 0,9 -7,2 1 M 25,0 a = 0,7 25,0 a = 0,9 0 SEQ ID NO.10 10 nM 26,4 a = 0,9 25,0 a = 0,9 +5,6 100 nM 24,9 a = 0,5 25,0 a = 0,9 -0,4 250 nM 23,1 ci = 0,3 25,0 # = 0,9 -7,6 500 nM 23,3 a = 0,6 25,0 a = 0,9 -6,8 1 M 26,9 a = 0,7 25,0 a = 0,9 +7,6 SEQ ID NO.11 10 nM 25,7 a = 0,9 25,0 a = 0,9 +2,8 100 nM 24,8 a = 0,3 25,0 a = 0,9 -0,8 250 nM 25,8 a = 0,7 25,0 a = 0,9 +3,2 500 nM 22,1 # = 4,4 25,0 a = 0,9 -11,6 1 M 23,9 a = 0,8 25,0 # = 0,9 -4,4 Exemple 3 : Effet dépigmentant de l'oligonucléotide SEQ ID NO.2 sur des mélanocytes humains normaux d'adultes Les mélanocytes utilisés ici sont obtenus à partir de peau de cuisses d'un donneur adulte métisse. Les fragments de peau sont rincés au PBS (Gibco, Paisley, GB) puis lavés avec de l'éthanol 70% (VA/) dilué à 50% dans du PBS. Après lavage au PBS, les fragments de peau sont grattés à l'aide d'un coupe-cors. Les morceaux obtenus sont grattés dans de la trypsine 0,05% (Difco Laboratories, West Molesy, GB) pendant une heure à 37 C afin de permettre leur dissociation. L'épiderme est alors recueilli dans du milieu E-199 (Gibco, Paisley, GB) contenant 10% de sérum de veau foetal (SVF, Gibco, Paisley, GB). Après homogénéisation et élimination des fragments de couche cornée flottant en surface, la suspension cellulaire est filtrée puis centrifugée. Le culot cellulaire obtenu est repris dans du milieu 1. Les cellules sont dénombrées et une mesure de la viabilité cellulaire est réalisée sur cellule de Thoma par le test d'exclusion du bleu trypan. Les cellules épidermiques sont finalement ensemencées dans du milieu 1, en flasques à raison de 80000 cellules/cm2. Les cultures sont maintenues à 37 C, en atmosphère saturé en humidité et avec 5% de CO2. Le milieu 1 est remplacé par un milieu 6 dont la composition est précisée ci-dessous. COMPOSITION DU MILIEU 6 Concentration finale Composé Fabricant, référence dans milieu dans le milieu E-199 Gibco, 31150-022 - Insuline Sigma, H-0888 0,5 g / ml - EGF Sigma, E-4127 10 ng / ml - B-FGF Gibco, 13256-029 10 ng / ml - PdBu Sigma, P-1269 0,25 g / ml - Ca++ Prolabo, 22317297 1,8 mM Ce milieu est renouvelé toutes les 48 heures pendant une à deux semaines. Après cette sélection des mélanocytes, on favorise la prolifération des MHN, en remplaçant le milieu 6 par le milieu 7. Le Milieu 7 est composé de 10 % de milieu C et 90 % de milieu A décrit précédemment, complémenté par PdBu (Sigma, P-1269) dont la concentration finale dans le milieu est de 0,25 g / ml. COMPOSITION DU MILIEU C Concentration Composé Fabricant, référence finale dans le milieu - E-199 Gibco, 31150-022 - Sérum de veau foetal Gibco 10 % - L-GIN Gibco, 25030-024 2 mM - IBMX Sigma, I-5879 10-4 M - Génécitine Gibco, 066-01811 Y 100 g / ml A ce stade, la population cellulaire obtenue est pure, constituée exclusivement de mélanocytes humains normaux adultes. Les MHN sont ensemencés en microplaques 96 puits (Falcon, Franklin Lakes, NJ, USA) dans du milieu 6. Après 24h, le milieu est remplacé par du milieu 8 qui servira pendant toute la fin de cette étude. La composition du Milieu 8 est décrite ci-dessous. COMPOSITION DU MILIEU 8 Concentration finale Composé Fabricant, référence dans le milieu MCDB-153 Sigma, M-7403 - Sérum de veau foetal Gibco 2 % - Insuline Sigma, I-6634 5 / ml - Transferrine Sigma 10 g / ml - a-Tocophérol Sigma 1 g / ml - Pénicilline/ Sigma 0,4% Streptomycine L'oligonucléotide SEQ ID NO.2 est ajouté extemporanément dans le milieu d'étude, à des concentrations de 50 nM, 100 nM, 250 nM, 500 nM, 1 M. Les traitements sont effectués chaque jour pendant 7 jours. Pour chaque condition, 6 essais sont réalisés. En fin de traitement, des mesures de l'activité dopa-oxydase sont réalisées. Mesure de vitesses de réaction de la dopa-oxydase : Les vitesses de réaction ainsi obtenues sont exprimées en 10-4 Unité DO/mn. (a : écart type) et présentées dans la table 3. TABLE 3 % de variation Numéros Vitesses de Vitesses de réaction d'identification réaction (témoin sans ODN) par rapport au témoin SEQ ID NO.2 50 nM 33,8 # = 3,4 33,0 ci = 3,5 +2,4 100 nM 29,8 # = 1,3 33,0 # = 3,5-9,7 250 nM 29,6 a = 2,2 33,0 # = 3,5 -10,3 500 nM 28,3 # = 1,5 33,0 # = 3,5 -14,2 1 M 27,6 a = 2,9 33,0 # = 3,5 -16,3 Exemple 4 : Etude de l'inhibition de la mélanogenèse UV-induite, sur des mélanocytes humains normaux d'adultes par l'oligonucléotide SEQ ID NO.2. Les mélanocytes utilisés ici sont obtenus à partir de peau de plastie mammaire d'un donneur adulte de race blanche. La technique d'obtention de ces mélanocytes adultes est la même que celle utilisée et décrite dans l'exemple 3. L'expérience est réalisée en boîtes 35 mm. Les mélanocytes sont ensemencés en boîtes 35 mm (Falcon, Franklin Lakes, NJ, USA) à raison de 250000 MHN et 2 ml de milieu 8 par boîte. Les traitements avec l'oligonucléotide SEQ ID NO.2 ainsi que les irradiations UVB (BioEnergie, Vilbert-Lourmat, Marne-la-Vallée, France) à 8 mJ/cm2 commencent 24h après l'ensemencement. Avant chaque irradiation UVB, les MHN sont placés dans du PBS (2ml/boîte). Après irradiation, les cellules sont replacées dans 2 ml de milieu 8 contenant ou non l'oligonucléotide SEQ ID NO.2. L'oligonucléotide SEQ ID NO.2 est ajouté extemporanément dans le milieu d'étude (milieu 7 de l'exemple 3), à des concentrations de 50 nM, 100 nM, 250 nM, 500 nM, 1 M. Les traitements sont effectués chaque jour pendant 9 jours. Les irradiations ont lieu chaque jour, sauf les jours 5 et 6. Pour chaque condition, 3 essais sont réalisés. En fin de traitement, soit après 9 jours de traitement avec l'oligonucléotide SEQ ID NO.2 et 7 irradiations, chacune de 8 mJ/cm2 en UVB, des mesures de l'activité dopa-oxydase sont réalisées. Mesure de vitesses de réaction de la dopa-oxydase : En fin de traitement, les MHN sont décollées des boîtes 35 mm à l'aide de 500 l de trypsine 0,1 % - EDTA 0,05%, puis reprises dans 1,5 ml de milieu E-199 sans rouge de phénol (Gibco) et supplémentés par 10 % de Sérum de veau foetal. Une portion aliquote de cette suspension cellulaire est utilisée pour un dénombrement cellulaire une autre est centrifugée et le culot de mélanocytes obtenu est repris dans 50 l de tampon de lyse (Annexe 5) pour la mesure de la vitesse de réaction de la dopa-oxydase comme décrit exemple 2. Mesure de l'activité Dopa-oxydase : L'activité Dopa-oxydase est exprimée en 10-4 Unité DO / mn / 106 MHN. (a: écart-type) et présentée dans la table 4. TABLE 4 %de %de variation variation Activité DopaNuméros d'identification par rapport par rapport oxydase au témoin au témoin non irradié irradié Témoin non irradié 368,2 a = 19,9 0 Témoin irradié (8 mJ/cm2, 7 fois) 409,1 # = 32,6 + 11,1 % 0 Irradiation + SEQ ID NO.2 100 nM 328,1 # = 44,8 -19,8% Irradiation + SEQ ID NO.2 250 nM 325,3 a = 43,1 - 20,5 % Irradiation + SEQ ID NO.2 500 nM 327,4 # = 49,5 - 20 % Exemple 5 : Etude de l'inhibition de la mélanogénèse par les SEQ ID N0.12 et SEQ ID NO.13 sur mélanocytes humains normaux d'enfants. Les mélanocytes utilisés ici sont obtenus à partir de peau de prépuce d'un donneur de race blanche. La technique d'obtention de ces mélanocytes est la même que celle utilisée et décrite dans l'exemple 2. Les oligonucléotides SEQ ID NO.12 et SEQ ID NO.13 sont ajoutés extemporanément dans le milieu d'étude, à des concentrations de 10 nM, 100 nM, 250 nM, 500 nM, 1 M. Les traitements sont réalisés chaque jour pendant 7 jours. En fin de traitement, les mesures de l'activité dopa-oxydase sont réalisées. Mesure de vitesses de réaction de la dopa-oxydase : Cette mesure est effectuée telle que décrit dans les exemples précédents. Les résultats sont présentés dans la table 5. TABLE 5 Numéros Vitesses de Vitesses de % de variation par d'identification réaction réaction (témoin rapport au témoin sans ODN) SEQ ID NO. 12 50 nM 34,6 # = 1,0 32,5 # = 1,4 + 6,5 100 nM 33,2 a = 0,7 32,5 # = 1,4 + 2,2 150 nM 33,9 6 = 0,7 32,5 o=1.4 + 4,3 SEQ ID NO.13 50 nM 33,5 # = 1,2 32,5 # = 1,4 +3,1 100 nM 36,3 a = 0,6 32,5 # = 1,4 +11.7 150 nM 34,0 # = 1,2 32,5 # = 1,4 + 4,6 Exemple 6 : Poudre blanchissante Les concentrations sont données en pourcentage en poids Microcellulose 20,00% Sodium lauryl sulfoacetate 15,00% Oligonucléotides (SEQ ID NO.5) 1,00% Parfum, colorants, conservateurs qs. Talc qsp. 100% Exemple 7 : Emulsion-gel visage après soleil Les concentrations sont données en pourcentage en poids Glycérine 5,00% triglycérides caprylique/caprique/succinique 5,00% Méthoxycinnamate d'octyle 1,00% Diméthicone copolyol 0,50% Acrylates / C10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0,50% Oligonucléotides SEQ ID NO.3 0,01% Neutralisant qs. Conservateurs, parfum, colorants qs. Eau qsp. 100% Exemple 8 : Fluide protecteur SPF 30 Les concentrations sont données en pourcentage en poids Pentacyclométhicone volatile 49,00% Dioxyde de titane 15,00% Méthoxycinnamate d'octyle 7,50% Glycérine 5,00% Phényltriméthicone 5,00% Diméthicone copolyol 3,00% Polyméthylméthacrylate 2,50% Butyl méthoxydibenzoyle méthane 1,00% Oligonucléotides SEQ ID NO.2 0, 1% Neutralisant, Parfum, Conservateurs, antioxydants qs. Eau qsp. 100% Exemple 9 : Crème visage dépigmentante Les concentrations sont données en pourcentage en poids Glycéryl stéarate + Peg-100 stéarate 5,00% Polyisobutène hydrogéné 4,00% Magnésium ascorbyl phosphate 3,30% Tricaprylate /caprate de glycérol 3,00% Squalane 3,00% Glycérine 2,00% Cire d'abeille 1,50% Cétéaryl octanoate 1,50% Alcool cétylique 1,00% Alcool stéarylique 1,00% Diméthicone 1,00% Gomme xanthane 0,30% Acide éthylène diamine tétracétique 0,20% Acide citrique 0,10% Citrate de sodium 0,10% Oligonucléotides SEQ ID NO.6 0,10% Neutralisant, Parfum, Conservateurs qs. Eau qsp. 100% Exemple 10 : Lotion Les concentrations sont données en pourcentage en poids Alcool dénaturé (Ethanol) 30,00% PPG-3 Myristyl éther 5,00% Glycérine 2,00% Carbomer 0,20% Polysorbate 20 0,20% Oligonucléotides SEQ ID NO.4 0,01% Neutralisant, Parfum, Conservateurs qs. Eau qsp. 100% LISTE DE SÉQUENCES LVMH RECHERCHE UTILISATION D'OLIGONUCLÉOTIDES MODULANT L'EXPRESSION DE LA TYROSINASE ET DE LA TYROSINASE-RELATED-PROTEIN-1 COMME AGENTS DÉPIGMENTANTS D18673 13 PatentIn Ver. 2.2 1 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 111-92 de l'ADNc du gène codant pour la protéine apparentée à la tyrosinase humaine (TRP - Genbank locus HSTYRRP). 1 gcaaaacaaa gacctggttt 20 2 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 102-83 de l'ADNc du gène codant pour la protéine apparentée à la tyrosinase humaine (TRP - Genbank locus HSTYRRP). 2 agacctggtt tgcagctctt 20 3 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 127-108 de l'ADNc du gène codant pour la protéine apparentée à la tyrosinase humaine (TRP - Genbank locus HSTYRRP). 3 tgcttgaaat aagagtgcaa 20 4 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 53-34 de l'ADNc du gène codant pour la protéine apparentée à la tyrosinase humaine (TRP - Genbank locus HSTYRRP). 4 aaaatccagc tcacaatcct 20 5 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 141-122 de l'ADNc du gène codant pour la protéine apparentée à la tyrosinase humaine (TRP - Genbank locus HSTYRRP). 5 aggagcactc attctgcttg 20 6 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 475-457 de l'ADNc du gène codant pour la tyrosinase humaine (Genbank locus HUMTYRA). 6 aggaactggc taattggagt 20 7 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 485-466 de l'ADNc du gène codant pour la tyrosinase humaine (Genbank locus HUMTYRA). 7 caaggtctgc aggaactggc 20 8 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 490-471 de l'ADNe du gène codant pour la tyrosinase humaine (Genbank locus HUMTYRA). 8 cctcacaagg tctgcaggaa 20 9 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 1332-1313 de l'ADNc du gène codant pour la tyrosinase humaine (Genbank locus HUMTYRA). 9 ctacagacaa tctgccaaga 20 10 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 506-487 de l'ADNe du gène codant pour la tyrosinase humaine (Genbank locus HUMTYRA). 10 gcattcttcc tctagtcctc 20 11 20 ADN Séquence artificielle Oligonucléotide antisens, complémentaire de la séquence nt 5875-5856 de l'ADN codant pour la protéine 1 apparentée à la tyrosinase humaine (TRP1 - Genbank locus AF 001295). 11 ttccagtacc tcacaatcct 20 12 20 ADN Séquence artificielle Contrôle antisens de la séquence ID NO.2. 12 ttctcgacgt ttggtccaga 20 13 20 ADN Séquence artificielle Combinaison aléatoire de la séquence ID NO.2 13 acgtttctcg cctagtgatg 20 REVENDICATIONS 1. Oligonucléotide comportant un nombre de nucléotides compris entre 7 et 25, de préférence égal à 20, capable de s'hybrider avec les gènes ou les produits des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la tyrosinase-related-protein 1 (TRP1). 2. Oligonucléotide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est capable de s'hybrider de façon spécifique avec les gènes ou les produits des gènes codant pour la tyrosinase et/ou la tyrosinase- related-protein 1. 3. Oligonucléotide selon la revendication 1 ou 2, capable de s'hybrider spécifiquement avec l'ADN et/ou l'ARNm codant pour la tyrosinase et/ou la tyrosinase-related-protein 1. 4. Oligonucléotide selon l'une des revendications 1 à 3, capable de s'hybrider de façon spécifique avec - la région 5' non codante et/ou la région présentant le codon d'initiation des gènes, ou - la région codante et/ou la région 3' non codante des gènes codant pour la tyrosinase ou la tyrosinase-related-protein 1. 5. Oligonucléotide selon l'une des revendications précédentes, dont la séquence est l'une des séquences SEQ ID NO.1à N0.11 ayant la signification suivante : - SEQ ID NO.1 5'-GCAAAACAAAGACCTGGTTT-3' - SEQ ID NO.2 5'-AGACCTGGTTTGCAGCTCTT-3' SEQ ID NO.3 5'-TGCTTGAAATAAGAGTGCAA-3' - SEQ ID NO.4 5'-AAAATCCAGCTCACAATCCT-3' - SEQ ID NO.5 5'-AGGAGCACTCATTCTGCTTG-3' SEQ ID N0.6 5'-AGGAACTGGCTAATTGGAGT-3' SEQ ID NO 7 5'-CAAGGTCTGCAGGAACTGGC-3' SEQ ID NO.8 5'-CCTCACAAGGTCTGCAGGAA-3' SEQ ID NO.9 5'-CTACAGACAATCTGCCAAGA-3' SEQ ID N0.10 5'-GCATTCTTCCTCTAGTCCTC-3' SEQ ID N0.11 5'-TTCCAGTACCTCACAATCCT-3' 6 Oligonucléotide selon la revendication 5, dont la séquence est l'une des SEQ ID NO.1 à 6 7. Oligonucléotide selon la revendication 6, dont la séquence est la SEQ ID NO.1 ou la SEQ ID NO.2 ou la SEQ ID NO.5 ou la SEQ ID NO 6 8. Oligonucléotide en tant que produit nouveau dont la séquence est l'une des séquences ID NO.1à NO 11 ayant la signification suivante - SEQ ID NO.1 5'-GCAAAACAAAGACCTGGTTT-3' - SEQ ID NO 2 5'-AGACCTGGTTTGCAGCTCTT-3' - SEQ ID NO 3 5'-TGCTTGAAATAAGAGTGCAA-3' - SEQ ID NO 4 5'-AAAATCCAGCTCACAATCCT-3' - SEQ ID NO.5 5'-AGGAGCACTCATTCTGCTTG-3' - SEQ ID NO 6 5'-AGGAACTGGCTAATTGGAGT-3' - SEQ ID NO.7 5'-CAAGGTCTGCAGGAACTGGC-3' - SEQ ID NO 8 5'-CCTCACAAGGTCTGCAGGAA-3' - SEQ ID NO 9 5'-CTACAGACAATCTGCCAAGA-3' - SEQ ID N0.10 5'-GCATTCTTCCTCTAGTCCTC-3' - SEQ ID N0.11 5'-TTCCAGTACCTCACAATCCT-3'. 9. Oligonucléotide selon la revendication 8, dont la séquence est l'une des SEQ ID NO 1 à 6 10. Oligonucléotide selon la revendication 9 dont la séquence est la SEQ ID NO.1 ou la SEQ ID NO.2 ou la SEQ ID NO.5 ou la SEQ ID NO.6. 11.Oligonucléotide selon l'une des revendications précédentes, comprenant une ou plusieurs modifications chimiques au niveau de ses parties sucres, ses parties nucléobases ou son squelette internucléotidique, lesdites modifications conférant des caractéristiques physico-chimiques souhaitables telles qu'une biodisponibilité accrue, l'augmentation de l'affinité pour les séquences cibles, l'augmentation de l'internalisation cellulaire ou une meilleure stabilité biologique ou l'augmentation de la stabilité en présence de nucléases cellulaires. 12.Oligonucléotide selon la revendication 11, caractérisé en ce que sa partie sucre comprend un substituant 2'-O-fluoro ou 2'-O-alkyle, préférentiellement un substituant 2'-O-éthyloxyméthyle ou 2'-0- méthyle. 13.Oligonucléotide selon la revendication 11 ou 12, caractérisé en ce qu'une partie des groupements phosphodiesters de son squelette internucléotidique est remplacée par des groupements phophorothioates. 14.Oligonucléotide selon la revendication 11 ou 12, caractérisé en ce qu'une partie des groupements phosphodiesters de son squelette internucléotidique est remplacée par des groupements méthylphosphonates. 15.Oligonucléotide selon la revendication 13, caractérisé en ce que tous les groupements phophodiesters sont remplacés par des groupements phosphorothioates.