Brevet FR2800075A1 — publié le 20010427

La présente invention concerne de nouveaux limonoïdes, leur procédé de purification, ainsi que de préparation, et leur utilisation, en particulier dans le traitement du cancer, ou le traitement du paludisme. Ces nouveaux limonoïdes peuvent être isolés à partir des organes végétaux de certaines plantes, en particulier du genre Harrisonia, mais aussi de toute autre genre, qui pourrait les contenir. On trouve les plantes du genre Harrisonia, appartenant à la famille des simaroubacées principalement en Asie du Sud-Est. Par exemple, l'espèce Harrisonia perforata Merr. se rencontre au Viêt-nam, en Chine du Sud, au Laos, au Cambodge, en Thaïlande, aux Philippines, et en Indonésie. Cette espèce s'est montrée particulièrement apte à être utilisée en tant que matériel de départ dans la présente invention, mais il est évident que les procédés mis en #uvre dans la présente invention pourront être utilisés avec d'autres espèces, de la même famille botanique, ou d'autres familles. Les limonoïdes sont des composés déjà décrits dans la littérature, et peuvent être trouvés dans de nombreuses espèces végétales. Quelques représentants de ce type de composés ont été signalés dans des plantes du genre Harrisonia (Kubo et al. Heterocycles, 1976, 5, 485-98 ; Rajab et al. J Nat. Prod., 1997, 60, 822-5 ; Koike et al. Tetrahedron, 1993, 49, 2209-16 ; Mitsunaga et al. Phytochemistry, 1994,37, 1443-6) et des limonoïdes différents de ceux décrits dans la présente invention ont été isolés d'Harrisonia perforata (Byrne et al. Austr. J. Chem. 1991,44, 165-9 ; Wei et al. Jiegou Huaxue, 1985, 4, 281-7 ; TranVan et al. Phytochemistry, 1995, 38, 213-5 ; Kamiuchi et al. Heterocycles, 1996, 43, 653-64). C'est un des objets de la présente invention que de caractériser les nouveaux liminoïdes isolés de plantes d'un tel genre, ainsi que de fournir un procédé d'extraction. Ces nouveaux liminoïdes peuvent être modifiés, et les produits obtenus par les modifications chimiques sont également des objets de la présente invention, de même que les procédés de modification. Il est connu que les liminoïdes peuvent avoir un effet contre certains types de cancer, ou dans le traitement du paludisme. La Demanderesse a montré que certains des produits selon l'invention possèdent une activité cytotoxique remarquable contre la prolifération cellulaire. Ainsi, l'utilisation des composés selon l'invention dans le traitement du cancer ou du paludisme, ou pour la préparation de médicaments pour une telle utilisation est également un des objets de l' invention. Les composés selon l'invention sont obtenus à partir de plantes du genre Harrisonia, de manière préférée Harrisonia perforata, suivant un procédé simple et bon marché. Le procédé de l'invention consiste essentiellement à traiter des organes végétaux de Harrisonia perforata, en particulier les feuilles desséchées, réduites en poudre au préalable, par une solution hydroalcoolique, ce qui fournit une solution hydroalcoolique de principes actifs amers. Cette solution est ensuite traitée par une solution aqueuse d'acétate de plomb et le précipité formé est séparé par filtration. Le filtrat obtenu est traité par une solution aqueuse de sulfate de sodium. Après décantation et filtration on obtient un filtrat hydroalcoolique de principes amers que l'on peut traiter de deux façons différentes. 1. Le filtrat hydroalcoolique est traité, sous agitation, par du charbon actif qui absorbe les principes amers. On recueille le charbon par filtration. Ce charbon est desséché à 50 et réduit en poudre. Les principes amers retenus par cette poudre de charbon sont extraits par du chloroforme. L'extrait chloroformique est évaporé à sec. On obtient l'extrait brut de principes actifs. 2. Le filtrat hydroalcoolique est évaporé à sec sous vide. L'extrait brut est extrait au chloroforme. La solution chloroformique, évaporée à sec, fournit l'extrait brut de principes actifs L'extrait brut ainsi obtenu, contenant un mélange de nombreux principes actifs est également un des objets de l'invention, ainsi que les composés susceptibles d'être isolés à partir de cet extrait brut. On effectue alors un traitement complémentaire de cet extrait brut pour en isoler les limonoïdes purs par chromatographie, soit sur colonne soit sur plaque de silice, en utilisant différents solvants, en particulier les toluène, cyclohexane, heptane, chloroforme, éther, acétate d'éthyle, éthanol, méthanol, chlorure de méthylène. Les limonoïdes ainsi obtenus peuvent ensuite être modifiés en adaptant des procédés chimiques connus de l'homme du métier, afin de substituer certains radicaux, dans le but, par exemple, d'obtenir des composés possédant des stéréochimies différentes, ou une activité biologique améliorée. Ainsi, les exemples 7 et 10 décrivent certaines modifications connues de l'homme du métier. Les composés selon l'invention possèdent tous des centres d'asymétrie et peuvent donc exister sous forme d'isomères optiques. La présente invention comprend aussi bien tous ces isomères, soit séparément, soit en tant que mélange. Les composés selon l'invention auront de préférence une formule générale : dans laquelle B représente, soit le radical : du carbone porteur de R4, soit B forme avec R3 un composé de formule et dans laquelle # les pointillés représentent, de façon indépendante, des simples liaisons ou des doubles liaisons, # R6 à R13, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur en CI-C4, linéaire ou ramifié, substitué ou non, de préférence un groupe méthyle, # RI est le groupe OH, ou forme avec R2 un pont de structure # R2 est le groupe =0 ou forme avec RI un pont comme défini ci- dessus, # lorsque R3 est présent, R3 est choisi parmi l'atome d'hydrogène ou un groupe OH, ou forme avec R5 un pont de structure # R4 est le groupe OH ou le groupe OCOCH3 ou R4 est absent afin de former la double liaison telle qu'indiquée en pointillé, # R5 est un atome d'hydrogène ou forme avec R3 le pont tel que décrit précédemment, ainsi que leurs dérivés, sous forme libre, ou sous forme de sels pharmaceutiquement acceptables. Par dérivés , on entend tous les intermédiaires métaboliques produits lors de la synthèse biochimique de ces composés par le végétal, c'est-à-dire les composés qui peuvent être obtenus en aval de la voie métabolique, ainsi que les composés présents en amont de cette même voie, et les composés qui en découlent. Par sels pharmaceutiquement acceptables , on entend les sels pouvant être formés à partir de ces composés, en particulier par association avec des bases classiques et non toxiques, organiques ou minérales. Les sels dérivés de bases minérales incluent les sels d'aluminium, de cuivre, de fer ferreux ou ferrique, de lithium, de manganèse, de zinc, et plus particulièrement les sels d'ammonium, de calcium, de potassium, de magnésium et de sodium. Les sels dérivés de bases organiques incluent les sels d'amines primaires, secondaires ou tertiaires, d'amines substitués, d'amines cycliques ou de résines échangeuses d'ions basiques, comme l'arginine, la bétaïne, la caféine, la choline, l'éthylènediamine, la diéthylamine, la triéthylamine, la tripropylamine, la triméthylamine, la trométhamine, la lysine, l'arginine, la méthylglucamine, la pipérazine, la pipéridine, les résines de polyamine, les purines, la N-éthylpipéridine, la glucamine, ou la glucosamine. On préférera tout particulièrement les composés de formule (I), ayant pour formule particulière : ou Parmi les dérivés des composés de formule générale (I), on entend comprendre les composés qui peuvent également être extraits du végétal considéré, font partie de la même voie métabolique que les composés de formule générale I, et font donc partie de l'invention. Les exemples montreront que les composés suivants, qui possèdent la même structure que les composés de formule générale (I), peuvent être isolés et caractérisés à partir de l'extrait brut. Ils font donc partie de l'invention. Les compositions pharmaceutiques contenant un composé selon l'invention, et des excipients pharmaceutiquement acceptables font également partie de l'invention. Ces compositions peuvent être formulées pour l'administration aux mammifères, y compris l'homme. On pourra ainsi utiliser toute sorte de d'agents liant, tensioactif, d'enrobage, de dispersion, de mouillage afin de favoriser la stabilité, la conservation, et la libération de ces composés. En particulier, on utilisera des excipients classiques, par exemple la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique, ou analogues. On pourra ainsi définir toutes sortes de compositions pharmaceutiques, en particulier injectables, ou permettant une prise orale. Les compositions permettant une prise orale pourront être des comprimés, des gélules, des poudres, des granules ou des suspensions ou solutions orales. Elles comprennent également les formes d'administration sublinguale et buccale. Les compositions injectables pourront l'être par voie sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intranasale ou intraoculaire. L'utilisation d'un composé selon l'invention pour la préparation d'un médicament, en particulier destiné au traitement du cancer ou du paludisme fait également partie de l'invention. La posologie varie selon le traitement et selon l'affection en cause. Les exemples qui suivent servent à illustrer l'invention, sans qu'ils ne représentent une quelconque limitation à l'invention. Il est entendu que les méthodes d'extraction chromatographiques peuvent être optimisées. En particulier, l'homme du métier reconnaîtra qu'un changement dans les solvants décrits dans ces exemples pourra éventuellement permettre d'obtenir les mêmes composés. * EXEMPLE 1 : 1 000 g de feuilles séchées et pulvérisées de Harrisonia perforala sont mis en macération avec de l'éthanol aqueux titrant 25 , à la température du laboratoire. On extrait ensuite, par lixiviation, avec au total, 10 L d'alcool titrant 25 . Le lixiviat hydroalcoolique est traité par 400 ml de solution aqueuse d'acétate de plomb à 30%. Il se forme un précipité que l'on élimine par filtration. Le filtrat obtenu est ensuite traité par 120 ml d'une solution aqueuse de sulfate de sodium à 15%. Le précipité de sulfate de plomb qui s'est formé est éliminé par filtration. On obtient ainsi une solution hydroalcoolique de principes actifs. Cette solution est traitée, en trois fois, par agitation avec du charbon végétal (en tout 30 g de charbon ) qui retient les principes actifs. Le charbon est séparé par filtration et séché à 50 pendant 24 h. Ce charbon renfermant les principes actifs est introduit dans un Soxhlet et extrait par du chloroforme. On évapore l'extrait chloroformique à sec sous vide pour obtenir 2,42 g d'extrait sec, nommé extrait N 1. Le rendement en extrait sec est de 0,25%. * EXEMPLE 2 : L'extrait N 1 obtenu selon l'exemple 1 (175 g) est dissous dans du toluène (400 ml) et soumis à un traitement chromatographique sur colonne de silice 60 H. On effectue une élution de la colonne de silice (1 kg) par des fractions de 1 L d'un mélange de toluène-éther (1: 1). Chaque fraction est évaporée à sec sous vide et pesée. Les différentes fractions sont analysées par chromatographie en couche mince de silice (CCM). La première fraction F1 (4 L) par évaporation sous vide à sec fournit un résidu de 74,80 g nommé extrait N 2. Par cristallisation dans le méthanol ce résidu fournit l'haperforine A (HA, composé 11.2) (1,30 g) qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine A : C31H36O14 = 632, F 238 -240 (MeOH), [a]D = + 51,8 (CHCI,, c = 1,05); HR ICSM : MH' 633,2180 (cale. 633,2183 pour C31H37O14); Analyse : % tr. C 58,84, H 5,74, 0 35,42, cale. C 58,86, H 5,74, 0 35,42 pour C31H36014 ; UV :1max (EtOH) : 272,6 nm (e = 13750); IR Inm: 3468 (OH), 1743 (C=O), 1712 (C=O conjugué), 1243 (C-O), 1200 (C-O),1050 (C-O); 'H RMN d ppm, J Hz, CDCI3: 1,18 (3H, s, CH3), 1,28 (3H, s, CH3-18), 1,40 (6H, s, 2 CH3), 1,58 (3H, s, CH,), 2,0 (3H, s, COCH3), 2,50 (3H, s, COCH3), 3,0 (1H, d, J= 4, H-9), 3,80 ((3H, s, COICH3), 4,30 (in, s, H-15), 5,16 (1H, d, J = 4, H-12), 5,80 et 6,08 (2H, AB J = 12, H-5 et H-6), 5,86 (1H, t, J = 4, H-1 I), 6,0 (1H, s, H-17), 6,30 (in, s, H-22), 7,30 (1H, s, H-23), 7,40 (1H, s, H-21) ; "C RMN d ppm : 16,09 (CH3-18), 16,50 (CH3), 19,41 (CH,), 21,45 (COCH3), 21,60 (COCH,), 24,50 (CH,), 27,92 (CH3), 42,77 (C), 48,47 (CH-9), 49,83 (C), 51,09 (C), 52,69 (OCH3), 54,99 (CH- 15), 63,89 (CH-11), 66,53 (C), 71,77 (CH-12), 75,90 (CH-17), 81,68 (C), 87,85 (C), 108,49 (C-3), 109,87,34 (CH-22), 120,14 (C-20), 123,98 (CH-6), 142,04 (CH-23), 144,25 (CH-21), 152,17 (CH-5), 167,20 (C=O ), 167,44 (C=O), 170,07 (C=O), 170,50 (C=O), 204,17 (C=O, C-l). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY 'H-'H et "C-'H. La deuxième fraction F2 (7 L) est évaporée à sec sous vide et redissoute dans le méthanol. Les cristaux formés séparés et purifiés fournissent 12,05 g d'haperforine E (HE, composé IV) L'haperforine E présente les caractéristiques suivantes : Haperforine E : CZ,H3,08= 486; F 225-226 (EtOH), [a], = - 52 (CHC13, c = 1); HR ICSM : MH' 487,2343 (cale. 487,2331 pour C27H35O8); Analyse : % tr. C 66;18 H 7,01, 0 26,82 cale. C 66,65, H 7,05, 0 26,32 pour C27H340S ;UV : 1 (EtOH) : ; IR (laque) n cm-1 : 1767 et 1744 (C=O), 1658 (C=C), 1507 et 3136 (furanne), 1405,1250, 1039 (C-O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 0,86 (3H, s, CH,), 1,04 (3H, s, CH3), 1,16 (1H, m, H-12a), 1,50 (3H, s, CH,), 1,62 (3H, s, CH3), 1,83 (2H, m, CH2-12b, CH2-1 la),),2,04 ((1H, m, Chez-1 Ib), 2, 24 (IH, dd, J = 6, l' = 1 I, H-3), 2,40 (2H, m, CH2-6), 2, 50 (1H, d, J = 4, H-9), 2, 78 et 2,87 (2H, AB, J = 18, CH2-15), 2,92 (lH, ABX, J = 11, J' = 18, H-2a), 3,32 (IH, dd, J = 6, J' = 18, H- 2b), 3,62 (1H, dd, J = 4, J' = 10, H-5), 3,70 ((3H, s, OCH3), 4,90 (1H, s, H-30a), 5,18 (1H, s, H-30b), ), 5,62 (1H, s, H-17), 6,38 (IH, s, H-22), 7,38 (1H, s, H-23), 7,45 (1H, s, H-21) ; 13 C RMN d ppm : 14,52 (CH,), 24,80 (CH,), 26,35 (CH2-1 1), 26,72 (CH3), 30,28 (CH2-12), 32,65 (CH2-15), 33,19 (CH3), 33,70 (CH2-2), 35,08 (CH2-6), 41,52 (C), 48,04 (C), 48,82 (CH-9), 50,80 (CH-3), 52,32 (OCH3), 78,42 (CH-5), 79,56 (CH-17), 81,95 (C), 87,59 (C), 109,78 (CH-22), 111,72 (CH2-30), 120,76 (C-20), 140,60 (CH-23), 142,88 (CH-21), 146,50 (C-8), 169,81 (C=O ), 171,28 (C=O ), 175,44 (C=O). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY 'H-'H et "C-'H. * EXEMPLE 3 : L'extrait N 2 (91 g) de l'exemple 2 est dissous dans le toluène et soumis à un traitement chromatographique sur colonne de silice 60 H (1 kg). La colonne de silice est éluée par des fractions de solvants de 1 L (toluène-éther (1:1). La troisième fraction de 1 L est évaporée à siccité sous pression réduite et conduit à un résidu N 3 ( 52 g ) qui sera décrit dans l'exemple 4. La quatrième fraction (4 L) par cristallisation du méthanol fournit l'haperforine E ( 6,20 g) décrite dans l'exemple 2. * EXEMPLE 4 : Les résidus des chromatographies des exemples 2 et 3 (127 g) sont dissous dans du toluène (400 ml) et soumis à un traitement chromatographique sur colonne de silice 60 H (lkg). La colonne de silice est éluée par fraction de 1 000 ml d'un mélange de toluène-éther (7 : 3). Chaque fraction est évaporée à sec sous vide et pesée. La fraction 1 (2 L) fournit un résidu de 4 g, que l'on dissout dans du méthanol. Les cristaux, formés après concentration et repos à basse température (3 ) sont séparés et purifiés par recristallisation dans ce même solvant, fournissent l'haperforine A (225 mg), décrite dans l'exemple 2. La fraction 3 ( 7 L) évaporée à sec ( 91 g) est traitée selon l'exemple 5. * EXEMPLE 5 : Chromatographie N 1 La fraction 3 ( 91 g) obtenue dans l'exemple 4 est dissoute dans du toluène (400 ml) et la solution obtenue est soumise à un traitement chromatographique sur colonne de silice 60 H (lkg). La colonne de silice est éluée par fraction de 1 000 ml d'un mélange de toluène-éther (7 : 3). Chaque fraction est évaporée à sec sous vide et pesée. La fraction 1 (2 L) fournit un résidu de 1,55 g. La fraction 2 (1 L) fournit un résidu de 10,95 g. Par cristallisation dans le méthanol, on obtient l'haperforine A2(210 mg) qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine AZ : C29HJ2013= 588. F 222 (MeOH), [a]o = + 77,8 (CHCI,, c = 1), ; HR ICSM : MH' 589,1955 (cale. 575,1921 pour C29H33OI3) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 1,16 (3H, s, CH3), 1,25 (3H, s, CH,), 1,32 (3H, s, CH,), 1,46 (3H, s, CH3), 1,70 (3H, s, CH,), 2,14 (3H, s, COCH3), 3,40 (2H, s), 3,70 (3H, s, OCH,), 3,88 ( 1 H, s, OH), 3,93 ( 1 H, s), 4,30 ( H, s), 5,03 ( 1 H, s), 5,17 (1 H, s, OH), 5,67 et 5,92 (1H, AB, J = 12), 5,90 (1H, s), 6,26 (1H, S, H-22), 7,30 (1H, s, H-23), 7,35 (III, s, H-21) ; "C RMN d ppm : 16,73(CH3), 17,34 (CH,), 18,58 (CH3), 20,65 (COCH3), 23,66 (CH,), 26,87 (CH2), 42,65 (C), 48,98 (C), 50,53 (C), 51,91 (CH?), 54,24 (OCH,), 59,75 (CH), 65,54 (C), 73,96 (CH), 75,07 (CH), 81,27 (C), 87,16 (C), 105,56 (C), 109,01 (CH-22), 118,90 (C-20), 121,76 (CH), 141,58 (CH-23), 143,55 (CH-21), 151,56 (CH), 166,30 (C=O), 168,15(C=O), 199,67 (C=O ), 215,58 (C=O ). Par recristallisation des eaux-mères, on obtient l'haperforine A1 (200 mg). Par ailleurs, la cristallisation du résidu restant dans le méthanol fournit l'haperforine A (440 mg). L'haperforine AI présente les caractéristiques suivantes : Haperforine A, : C29H34012 = 574 F 265 (MeOH), [a], = + 47,5 (CHCI;, C = 0,9),; HR ICSM : MH+ 575,2175 (cale. 575,2128 pour C29H35O12), 557,2007 (cale. 557,2022 pour CZ9H"O"), 529,2118 (cale. pour C28H3,0,0 529,2073), 515,1941 (cale. 515,1917 pour C27H3101O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCI3: 1,18 (3H, s, CH3), 1,22 (3H, s, CH3), 1,29 (3H, s, CH3), 1,38 (3H, s, CH3), 1,47 (3H, s, CH3), 1,64 (1H, s, OH), 1,79 ( 1 H, t, J = 14, Ha de CH2), 2;26 (3H, s, COCH3), 2,28 ( 1 H, m, He de CH2), 2,90 (1H, dd, J = 14, J' = 6, CH),3,69 (1H, s), 3,80 (3H, s, OCH3), 4,27,95 ( 1 H, s), 4,78 (in, d, J = 8), 5,13 (li, s), 5,77 et 5,93 (1 H, AB, J = 12), 6, 03 ( 1 H, s), 6,17 (1H, S, H-22), 7,35 (1H, s, H-23), 7,41 (1H, s, H-21); 13C RMN d ppm : 13,65 (CH3), 16,38 (CH3), 16,60 (CH,), 20,79 (COCH3), 23,49 (CH,), 25,48 (CH2), 26,80 (CH3), 41,90 (C), 45,41 (CH), 48,85 (C), 49,12 (C), 51,52 (OCH3), 54,78 (CH), 66,22 (C), 72,01 (CH), 74,65 (CH), 80,54 (C), 87,82 (C), 107,77 (C), 108,50 (CH-22), 119,42 (C-20), 122,93 (CH), 140,69 (CH-23), 143,08 (CH-21), 152,44 (CH), 166,06,166,54, 169,32 et 215,90 (4 C=O ). Chromatographie N 2 Les eaux mères de la fraction 2 de l'exemple 5 sont évaporées à sec, et le résidu obtenu (8,5 g), redissout dans l'heptane est soumis à une chromatographie sur colonne de silice (450 g). L'éluat heptane-acétate d'éthyle ( 4 : 1) est recueilli par fraction de 25 ml dans des tubes. On évapore les fractions 13-15à sec. Leur cristallisation dans le mélange de solvants, heptane-acétate d'éthyle (4:1)permet d'obtenir 373 mg d'haperforine A3 qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine A, : C27H32010 = 516, F 146-147 (MeOH) ; HR ICSM : MH' 517,2051 (cale. 517,2073 pour Cz7H,;O,p) ; ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 1,17 (3H, s, CH3), 1,19 (3H, s, CH3), 1,28 (3H, s, CH,), 1,37 (3H, s, CH3), 1,47 (3H, s, CH3), I, 51 (1H, m, partie de CH2), 1,75 (2H, m, parties de CH2), 1,85 (IH, m, partie de CH2), 1,97 (1 H, s, OH), 2,14 (1H, s, OU), 2,98 ( 1 H, dd, J = 6, J' = 14, CH), 3,64 (1H, s, OH), 3,80 (3H, s, OCH,), 4,30 (1 Il, s), 5,07 (1H, s), 5,68 (1H, s), 5,46 et 6,01 ( 1 H, AB, J = 12), 5, 80 ( 1 H, s), 6,34 ( 1 H, s, H-22), 7,42 (in, s, H-23), 7,43 (1H, s, H-21) ; "C RMN d ppm : 14,37(CH,), 14,84 (CHz), 15,34 (CH3), 17,43 (CH3), 24,27 (CH3), 26,47 (CH2), 27,55 (CH,), 39,72 (C), 46,97 (CH), 49,88 (C), 50,13(C), 52,17 (OCH3), 57,50 (CH), 68,74 (C), 78,57 (CH), 81,08 (C), 88,78 (C), 108,46 (C), 110,04 (CH-22), 121,18(C-20), 123,32 (CH), 141,32 (CH-23), 143,14 (CH-21), 154,04 (CH), 166,83 (C=O), 167,95 (C=O), 217,09 (C=O ). * EXEMPLE 6 : L'extrait N 1 obtenu selon l'exemple 1 CI ,48 g ) est dissous dans le chlorure de méthylène (40 ml ) et soumis à un traitement chromatographique sur colonne de silice (75 g). L'éluat dans un mélange de chlorure de méthylène-acétate d'éthyle (90:10) est collecté par fractions de 8 ml. On réunit les fractions (62-102), et on les évapore sous vide à sec (833 mg). Le produit obtenu (833 mg) est dissous dans le toluène et chromatographié sur la silice 60 H (30 g). L'éluat obtenu avec le mélange toluène-éther (50: 50) est évaporé à sec sous vide, pour donner 350 mg de résidu. Ce résidu (350 mg) est chromatographié ensuite sur une colonne de silice (lOg). L'éluat constitué par le mélange toluène-éther (95:5) est recueilli par fraction de 4 ml. Les fractions (51-90) évaporées à sec fournissent 137 mg de résidu. Ce résidu (137 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, l'éther étant utilisé comme éluant. Cette opération conduit à l'obtention de 57 mg d'haperforine B (HB, composé 1.5) qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine B : C27H3009 = 498, non cristallisé, HR ICSM : MH' 499, 1935 (cale, 499,1967 pour C27H3IO9) ; IR (CHC13) n cm-': 2993 (CH), 1756, 1731, 1700, 1668 (C=O), 1310, 1025 (C-O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCl3: 1,06 (3H, s, CH,), 1,16 (3H, s, CH3), 1,36 (3H, d, J = 6, CH3), 1,46 (1H, d, J = 7, H-12b), 1,59 (3H, s, CH,), 1,62 (3H, s, CH,), 1,80 ((2H, m, CHz-1 I), 2,60 (2H, m, H-9, H-I2a), 3,49 (1H, s, H-15), 3,75 (3H, s, C02CH)), 3,85 (1H, m, H-10), , 5,48 (IH, d, J = 2, H-2), 5,96 (1 H, d, J = 2, H-5), 6,92 (1 H, s, H-22), 7,40 ( 1 H, s, H-23), 8,42 ( 1 H, s, H-21) ; '3C RMN d ppm : 16,06 (CH,), 19,0 (CH,-111), 20,46 (CHrl9), 24,23 (CH,), 30,25 (CH3), 30,40 (CH3), 36,92 (CH2-12), 50,20 (CH), 52,95 (OCH3), 53,02 (C-13), 54,56 (C) ?, 58,79 (CH-15), 69,52 (C-8), 78.65 (CH-10), 79,23 (C-I4), 91,39 (CH- 2), 111,18 (CH-22), 123,35 (C-lou C-3)?, 126,16 (C-20), 126,40 (CH-5), 140,98 (C-3 ou 1), 142,99 (CH-23), 149,73 (CH-21), 165,36 (C=O ), 166,45 (C=O ), 168,37 (C=O), 196,58 (C=O C-17). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY 'H-'H et "C-'H. Les fractions (103-134) évaporées à sec fournissent 230 mg de résidu. Ce résidu (230 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, en utilisant le mélange (chlorure de méthylène - méthanol : 95 / 5) en tant qu'éluant. Cette opération conduit à l'obtention de 71 mg d'haperforine F (HF, composé V) qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine F C2 H 3z 0 to - 51 Haperforine F : C27H320,o = 5 16, F 224 (MeOH), [a]D = + 16,9 (CI ICI,, C = 0,93), ; HR ICSM : MH' 517,2101 (cale. 517,2073 pour C27ILOIO) ; IR (laque) n cm-': 1762, 1740, 1690, 1658 (C=O), 1272 ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCI,: 1,45 (3H, s, CH,), 1,48 (IH, m, CHZ-1la), 1,53 (3H, s, CH,), 1,61 (3H, s, CH3), 1,67 (3H, s, CH,), 1,77 (IH, m, CH2- 1 2a), 1,85 (3H, s, CH,), 2,0 (1 H, dm, J = 12, CHZ-1 lb), 2,26 (in, tt, J = 12, J' = 2, H-12b), 2,54 (1 H, dd, J = 12, J' = 2, H-9), 2,82 et 3,05 (2H, AB, J = 20, CH2-2), 2,96 et 3,15 (2H, ABX, J = 17, JA,, = 7, Jnx = 9, CII,-6), 3,44 (1H, t, J = 8, H-5), 3,76 (3H, s, OCH3), 3,95 (iii, s, OH), 6,77 (li, s, H-22), 7,44 (1H, s, H-23), 7,99 (1 H, s, H-21); "C RMN d ppm : 21,71 (CI 13), 24,08 (CH2- II), 26,54 (CH3), 27,58 (CH3), 27,60 (CH3), 27,84 (CH3), 32,32 (CH2-6), 35,23 (CHr12), 46,02 (CH-2), 50,05 (CH-5), 53,08 (OCH,), 56,14 (C),56,61 (C), 59,30 (CH-9), 59,55 (C), 81,56 (C), 87,68 (C), 94,59 (C), 110,02 (CH-22), 124,87 (C-20), 142,85 (CH-23), 145,76 (CH-21), 171,97 (C=O), 172,06 (C=O), 174,21 (C=O ), 196,47 (C=O C-17), 208,93 (C=O C-15). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY 'H-'H et "C-'H. * EXEMPLE 7 : L'extrait N 1 obtenu selon l'exemple 1 (3,24 g) est dissous dans du toluène et soumis à un traitement chromatographique sur colonne de silice (150g). L'éluat constitué par le mélange toluène-éther est récolté par fraction de 8 ml. On réunit les fractions (161-174) et on les évapore à sec pour obtenir un résidu de 503 mg. Ce résidu (503 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, l'éther étant utilisé comme éluant. On obtient ainsi deux produits purs : l'haperforine B2 non cristallisée et l'haperforine Ci. L'haperforine B2 (83 mg) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine B2 : Cz5HZ80,= 440 non cristallisé, HR ICSM : MH+ 441,1926 (calc. 441,1913 pour CZSH290,), 423,1808 (cale. 423,1807 pour Cz5H2,06) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCI,: 0,69 (3H, s, CH3), 1,14 (3H, s, CH,), 1,51 (3H, s, CH3), 1,54 (3H, s, CH,), 1,55 ( 1 H, m), I ;68 (2H, m), 2,10 ( 1 H, m), 2,45 ( I H, dd, J = 14, J' = 6, CH), 2,60 (IH, d, J = 14), 3,30 (lH,m), 5,30 (1H, s), 5,68 (1H, q, J = 3), 5,88 (IH, d, J = 6), 6,60 ( I H, s, H-22), 7,30 ( 1 H, d, J = 6), 7,43 ( 1 H, s, H-23), 7,45 ( 1 H, s, H- 21) ; "C RMN d ppm : 13,03(CH,), 22,17 (CH,), 23,78 (CH,), 25,13 (CH,), 31,90 (CH,), 32,60 (CH2), 39,75 (CH2), 40,80 (CH2), 52,68 (CH), 82,55 (C), 83,54 (CH), 83,62 (C), 87,43 (C), 110,17 (CH-22), 120,05 (CH), 122,03 (CH), 122,33 (C-22), 132,66 (C), 141,62 (CH-23), 143,15 (CH-21), 152,44 (CH), 161,15 (C=O), 172,50. L'haperforine C1 (19 mg) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine C, : C15H1807 = 440 non cristallisé; HR ICSM : MH4 441,1944 (calc. 441,1913 pour Cz5H1907) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 0,77 (3H, s, CH3), 1,14 (3H, s, C H3), 1,31 (3H, s, Cl;), 1,50 (3H, s, C H3), 1,75 (2H, m), 2,10 (2H, m), 2,35 (2H, m ), 2,60 ( I H, d, J = 14), 3,20 ( I H,m), 4,99 ( 1 H, s), 5,75 ( I H, q, J = 3), 6,01 I ( 1 H, d, J = 6), 6,58 (1 H, s, H-22), 7,42 ( 1 H, d, J = 6), 7,43 (2H, s, H-23 et H- 21). Les fractions (201-225) sont réunies et évaporées à sec pour donner un résidu de 308 mg. Ce mélange (308 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, l'éther est utilisé comme éluant. On obtient deux produits purs : l'haperforine B3 et l'haperforine C. L'haperforine B3 (HB3, composé Il. 1) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine B 3 C 24 H 39 013 = 590 Haperforine B, : C24H)4013 = 590; F 185 (MeOH), [a]D = + 49 (CHCI3, c = 0,9); HR ICSM : MH' 591,2119 (cale. 591,2077 pour C29H35O13), 573, 2006 (cale. 573, 1972 pour C29H33012, MH'-H20), 555, 1848 (cale- 555, 1866 pour C29H3,O,,, MH'-H,O-H,O); UV : lmav (EtOH) : ; IR (laque) n cm1: 3440 (OH), 1729 (C=O), 1622 (C=C), 1436, 1390, 1271 (C-O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCl3: 1,16 (3H, s, CH,), 1,18 (3H, s, CH,), 1,38 (3H, s, CH,), 1,40 (3H, s, CH,), 1,65 (3H, s, CH3), 2,18 (3H, s, COCH,), 2;34 (li, d, J = 4, OH), 2,98 ( 1 H, d, J = 7, H-9), 3,89 ( 1 H, s , OH), 3,93 (3H, s, OCH,), 3,98 (1H, dd, J = 7, J' = 4, H-12a), 4,24 (1H, s, H-15), 5,12 ( I H, s large, OH), 5,40 ( 1 H, t, J = 7, H- I 1 ), 5,80 (li, d, J = 12, H-6), 6,08 ( I H, d, J = 12, H-5), 6,28 (li, s, H-17), 6,45 ( 1 H, s, H-22), 7,40 (li, s, H-23), 7,50 (1H, s, H-21) ; "C RMN d ppm : 16,14(CH,), 16,80 (CH,), 19,83 (CH,), 22,04 (COÇH3), 24,55 (CH3), 27,98 (CH3), 43,64 (C), 49,03 (CH-9), 49,56 (C), 51,15 (C), 52,75 (OCH,), 54,82 (CH-15), 65,90 (CH ?), 67,51 (CH-II), 70,42 (CH), 76,53 (CH), 88,06 (C-2), 108,54 (C-3), 110,47 (CH-22), 120,83 (C-20), 124,0 (CH-6), 142,0 (CH-23), 143,80 (CH-21), 152,55 (CH-5), 167,17 (C=O ), 168,20 (C=O ), 170,83 (C=O), 196,0 (C=O C-17), 205 (C=O). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSEY '1-1-111 et I1C-lll. L'acétylation de l'haperforine B3 selon le procédé suivant éonduit à l'obtention de l'acétyl-haperforine B3 : Une solution d'haperforine B3 (22 mg) dans l'anhydride acétique (0,5 ml) et la pyridine (0,5 ml) est laissée à la température ambiante pendant 24 h. Après addition d'eau (5 ml), les produits organiques sont extraits par de l'éther (3 fois 3 ml). La phase éthérée lavée, séchée sur MgS04 et évaporée sous pression réduite fournit un résidu qui, purifié par chromatographie sur plaque de silice (éluant éther), fournit l'acétylhaperforine B3 (5 mg) dont les caractéristiques physiques ('H RMN, SM, CCM) sont identiques à celles de l'haperforine A. L'haperforine C (HC, composé 1.2) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine C C29 H 36 O11=560 Haperforine C : C29H)6011 = 560, non cristallisée, [a]D = - 87 (CHC13, c = 1); HR ICSM : MH+ 561,2366 (cale. 561,2335 pour CZ9H;,0") ; UV : (ETOH) IR (laque) n cm-': 1742, 1655 (C=O), 1237 (C-O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCI,: 0,91 (3H, s, CH3), 1,06 (3H, s, CH,), 1,23 (3H, d, J = 6, CH3), 1,32 (3H, s, CH3), 1,35 (IH, m, CH2-12a), 1,40 (3H, s, CH,), 1,80 ((2H, m, Chez-11), 2,10 (3H, s, COCU,), 2,42 (1H, m, H-9), 2,58 (2H, m, H-3, H-12b), 2,80 (2H, ABX, J = 18, J' = 8, H-6), 3,55 (1H, s, OH), 3,66 (1H, dd, J = 10, J' = 6, H-10), 3,82 (3H, s, C02CH,), 3,98 ( 1 H, d, J = 4, H-2), 4, 72 ( 1 H, td, J = 8, J' = 1, H-7), 5,08 (1 H, s, H-15), 6,92 ( 1 H, d, J=2, H-22), 7,38 (IH, dd, J=2, J'=l, H-23), 8,35 (IH, d, J=l, H-21) ; "C RMN d ppm : 14,98 (CH,), 19,29 (CH2-11), 20,67 (CH3-19), 23,93 (CH3), 27,23 (CH,), 28,73 (CH,), 34,72 (CH2-6), 37,11 (CH2-12), 46,15 (CH-3), 51,69 (C-13), 52,15 (CH-9), 52,45 (OCH,), 52,80 (C-8), 59,04 (CH-15), 69,88 (C-4), 71.98 (CH-7), 72,63 (CH-2), 75,66 (CH-10), 79,43 (C-14), 110,59 (CH-22), 117,30 (C-1), 125,59 (C-20), 142,61 (CH-23), 149,34 (CH-21), 167,83 (C=O), 170,40 (C=O ), 197,42 (C=O C-17). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY 'H-'H et "C-'H. Les fractions (226-270), réunies et évaporées à sec, donnent un résidu de 97 mg. Ce mélange (97 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, l'éther étant utilisé comme éluant. On obtient ainsi 34 mg d'haperforine BI (HB1, composé 1.1) qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine B1 C 27 H 32 09 = 500 Haperforine B, : CZ,H,ZO9= 500, F 200 (MeOH), [a]p = - 72,8 (CHCI,, c 1,02); HR ICSM : MH' 501,2116 (cale. 501,2124 pour C27HJJ09); UV : Imax (EtOH) : 272,6 nm (e = 13750); IR (laque) n cm-': 3437 (OH), 1757, 1728, 1714, 1651 (C=O), 1302,1124 (C-O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCl3: 0,96 (3H, s, CH3), 1,19 (3H, s, CH,), 1,24 (3H, d, J = 6, CH,), 1,34 (1H, d, J = 7, H-12b), 1,50 (3H, s, CH3), 1,57 (3H, s, CH,), 1,66 ((2H, m, Cvh2-1 1), 2,47 (1H, dd, J= 7, J' = 3, H-12a), 2;56 (IH, t; J = 8, H-9), 3,30 (IH, m, H-10), 3,49 (11I, s, H-15), 3,79 ((3H, s, CO,CH,), 5,25 ( 1 H, s, OH), 6,06 (1 H, dd, J = 10, J' = 2, H-6), 6,32 (1 H, s, H-2), 7,01 (1 H, s, H-22), 7,46 (li, s, H-23), 7,68 (1 H, d, J = 10, H-5), 8,53 ( 1 H, s, H-21); "C RMN d ppm : 15,39 (CH,), 22,77 (CH2-11), 23,33 (CH,-19), 24,39 (CH,), 29,14 (CH,), 29,72 (CH3), 34,93 (CH2-12), 49,69 (CH-9), 51,65 (C-13), 52,72 (OCH,), 56,07 (C- 8), 58,74 (CH-15), 69,87 (CH-10), 70,44 (C-14), 83,45 (C-4), 110,34 -(CH-22), 122,63 (CH-6), 126,55 (C-20), 127,42 (CH-2), 138,16 (CH-5), 143,60 (CH-23), 145,88 (C-3), 149,21 (CH-21), 163,80 (C=O ester C-16), 166,27 (C=O lactone C- 7), 196,0 (C=O C-17), 204,85 (C=O, C-1). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY 'H-'H et "C-'H. Les fractions (330-406), réunies et évaporées à sec, donnent un résidu de 63mg. Ce mélange (63 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, l'éther est utilisé comme éluant. On obtient ainsi l'haperforine H qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine H : Cz5H2g0, - , F 2080 (MeOH) ; HR ICSM : MH+ 441,1939 (cale. 441,1913 pour Cz5H29O7) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCI, : 0,96 (3H, s, CH,), 1,25 (3H, s, CH3), 1,48 (3H, s, CH,),1,56 (3H, s, CH,), 2,66 (1H, t, J = 8), 2,75 et 3,25 (2H, ABX, J = 16, J' = 2, J" = 1), 4,25 ( 1 H, m), 4,96 (1H, s), 6,03 ( 1 H, d, J = 5), 6,31 ( I H, s large, H-22), 7,41 (1 H, d, J = 5), 7,45 ( 1 H, s large, H-23), 7,46 ( 1 H, s large, H-21). * EXEMPLE 8 : On soumet l'extrait N 1obtenu selon l'exemple 1 (10g) à un traitement chromatographique sur colonne de silice (350 g). L'éluat constitué d'un mélange d'heptane-acétate d'éthyle (80: 20) est recueilli par fraction de 20 ml Les fractions (311-330), réunies et évaporées à sec, donnent un résidu de 530 mg qui, après dissolution et cristallisation dans le méthanol, fournit 100 mg d'haperforine C2 (HC2, composé 111.2) qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine C2 C25 H26 07 = 438 Haperforine C2: C25H26O7= 438, F 270 (MeOH), [a]D = - 284 (CHCI,, c = 0,9); HR ICSM : MH+ 439,(calc. 439,pour Cz5Hz,0,) ; UV : lmax (EtOH) : ; IR (laque) n cm-': 1768, 1712, 1668 (C=O), 1381, 1306, 1131, 1025,1000 (C-O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 0,90 (3H, s, CH,), 1,25 (3H, s, CH,), 1,40 (3H, s, CH,), 1,68 (3H, s, CH,), 1,74 ((2H, m, CH2-12), 1,94 (2H, m, H-9, H-11 a), 2,13 ( I H, m, H-llb), 3,07 ( 1 H, s, H-6), 3,48 ( 1 H, s, H-14), 5,0 ( 1 H, s, H-17), 5, 76 ( 1 H, s, H- 30), 5,92 et 6,14 (2H, AB, J = 15, H-1et H-2), 6,20 (1H, s, H-22), 7,30 (IH, s, H- 23), 7,37 (1H, s, H-21) ; "C RMN d ppm : 20,22(CH3), 25,04 (CH,), 26,77 (CH3), 27,68 (CH3), 28,25 (CH2-11), 37,02 (CH2-12), 47,93 (C), 48,52 (C), 53,86 (CH-9), 58,35 (CH-6), 64,34 (CH-14), 72,13 (CH-17), 83,09 (C-4), 83.40 (C-5), 109,03 (CH-22), 121,26 (C-20), 123,58 (CH-1), 126,82 (CH-30), 140,48 (CH-23), 144,56 (CH-21), 148,97 (CH-2), 150,47 (C-8), 165,37 (C=O), 174,73 (C=O ), 197,03 (C=O C-7). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY 'H-'H et 13C-1H. * EXEMPLE 9 : On dissous l'extrait N 1 obtenu selon l'exemple 1 (6,40 g) dans du toluène et on le soumet à un traitement chromatographique sur colonne de silice 60 H. On élue par fractions de volume de 300 ml. Eluat 1 = (toluène-éther ; 80 :20); Eluat 2 (toluène-éther ; 70 :30); Eluat 3 (toluène-éther ; 60 :40); Eluat 4 (toluène-éther ; 50:50); Eluat 5 (toluène-éther ; 40 :60). L'éluat 5 évaporé à sec fournit un résidu de 500 mg. Ce mélange (500 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, l'éther est utilisé comme éluant. On obtient ainsi deux produits: l'haperforine D et l'haperforine DI. L'haperforine D (HD, composé 1.4) (66 mg) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine D C27H 34 O10= 518 Haperforine D : C21HI101 = 518, F 2390 (EtOH), [a]D = - 98 (CHCI3, c = 0,98); HR ICSM : MH+ 519,2244 (cale. 519,2230 pour C27H3501O)' 501, 2099 (cale. 501, 2124 pour CZ,H"09, MH±H20); UV : Ima% (EtOH) : ; IR (CHCI3) n cm"1 : 1762, 1725, 1662 (C=O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 1,0 (3H, s, CH3), 1,06 (3H, s, CH3), 1,24 (3H, d, J = 6, CH3), 1,32 (3H, s, CH,), 1,40 (1H, m, CH2-12a), 1,48 (3H, s, CH3), 1,80 ((2H, m, CH,-l 1), 2,42 (1H, m, H-9), 2,58 (2H, m, H-3, H-12b), 2,80 (2H, ABX, J = 18, J' = 8, H-6), 3,55 (1H, s, OH), 3,66 (1H, dd, J = 10, J' = 6, H-10), 3,82 (3H, s, CO2CH3), 3,98 ( 1 H, d, J = 4, H-2), 4,72 ( 1H, td, J = 8, J' = 1, H-7), 5,08 (1H, s, H-15), 6,92 (1H, s, H-22), 7,38 (1H, s, H-23), 8,35 (1H, s, H-21) ; 13C RMN d ppm : 14,35 (CH3), 19,08 (CHz-I I), 20,67 (CH,-19), 23,93 (CH3), 27,23 (CH3), 28,73 (CH3), 34,72 (CH2-6), 37,11 (CH2-12), 46,15 (CH-3), 51,69 (C-13), 52,15 (CH-9), 52,45 (OCH3), 52,80 (C-8), 59,04 (CH-15), 69,88 (C-4), 71. 98 (CH- 7), 72,63 (CH-2), 75,66 (CH-10), 79,43 (C-14), 110,59 (CH-22), 117,30 (C-l), 125,59 (C-20), 142,61 (CH-23), 149,34 (CH-21), 167,83 (C=O), 169,51 (C=O ), 196,46 (C=O C-l 7). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY H-H et 3C-H. L 'haperforine Du (83 mg) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine D, : C25H28O7= 440,F 208 (MeOH) ; ICSM : MH4 441, 423 ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCl3: 0,98 (3H, s, CH3), 1,28 (3H, s, CH3), 1,35 (1H, m), 1,46 (3H, s, CH3),1,46 (lH,m), 1,60 (3H, s, CH3), 1,80 (1H, m), 1, 855 et 2,0 (2H, ABX, J = 13, J' = 7), 2,20 (1H, m), 2,70 (1H, dd, J =14, J' = 7), 2,97 et 3,10 (2H, ABX, J = 19, J' = 3, J" = 2),3,69 (IH, s), 4,48 (IH, td, J = 6, J' = 2), 4,88 (1H, s), 6,03 ( I H, d, J = 6), 6,38 (IH, s, H-22), 7,42 ( I H, d, J = 6), 7,44 ( 1 H, s, H-23), 7,48 (IH, s, H-21) ; "C RMN d ppm : 22,55(CH3), 23,33 (CH,), 24,80 (CI-13), 27,77 (CH2), 28,27 (CH2), 31,42 (CH,), 36,68 (CH2), 38,97 (CH2), 43,25 (C), 52,39 (CH), 74,67 (CH), 81,51 (CH), 83,18 (C), 86,83 (C), 108,50 (CH-22), 110,28 (C), 119,36 (C-20), 119,48 (CH), 126,19 (C), 139,68 (CH-23), 143,09 (CH-21), 151,98 (C), 160,40 (CH), 167,96 (C=O), 171,85. Eluat 9 (toluène - éther; 40 : 60) : l'éluat 9 évaporé à sec fournit un résidu de 440 mg. Ce mélange (440 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, le mélange (chlorure de méthylène - méthanol ; 95 : 5) étant utilisé comme éluant. On obtient ainsi deux produits: l'hapelforine E, et l'haperforine G. L'haperforine E1 (32 mg) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine E, : C25H30O7 = 442, non cristallisée ; HR ICSM : MH+ 443,2076 (cale. 443,2063 pour C25H31O7), 425,2002 (cale. 425,1963 pour C25H29O6) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 0,94 (3H, s, CH,), 1,10 (3H, s, CH,), 1,30 (3H, s, CH3), 1,32 (3H, s, CH,), 1,50 (2H, m), 2,1 (IH, m), 2,40 (1H, dd, j = 15, J' = 6), 2,60 ( I H, m), 2,60 et 2,75 (2H, ABX, J = 20, J' = 1, J" = 6), 3,69 (I H, s), 2,65 ( I H, dd, J = 4, J' = 10), 2,90 (1 H, s large), 3, 28 ( 1 H, d, J = 18), 3,65 ( 1 H, td, J = 6, J' = 2), 3,72 ( I H, t, J = 3), 4,18 ( 1 H, d, J = 6), ), 5,22 ( 1 H, s), 5,74 ( I H, q, J = 2), 6,3 0 ( 1 H, s, H-22), 7,40 ( I H, s, H-23), 7,45 ( 1 H, s, H-21). L'haperforine G (HG, composé III.1) (38 mg) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine G c25 r2g ob= aza Haperforine G : C2sH2806 = 424, , F 25 1 (CH2CI2 / AcOEt), [a]D = + 24,1 (CHCI,, c = 0,9); HR ICSM : MH+ 425, 1972 (cale. 425, 1963 pour C25H2gO6) ; IR (laque) n cm-': 3650 (OH), 1764,1707 (C+O), 1271,1201, 1089 (C-O) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCI,: 0,89(3H, s, CH3), 1,42 (3H, s, CH3), 1,55 (3H, s, CH3), 1,72 ((2H, m, CH2-1 la, CH2-12a), 1,91 (3H, s, CH,-30), 2,04 (1H, dd, J = 10, J' = 5, CH2- 1), 2,30 (2H, m, H-l lb, H- ), 2,35 (1H, s, OH), 2,61 (1H, dd, J = 16, J' = 2, CH2-), 2,88 et 3,04 (2H, AB, J = 21, CH2-7), 3,48 (1H, m, H-9), 4,96 (1H, s, H-17), 5,39 ( 1 H, s, H-1), 6,34 ( 1 H, s, H-22), 7,44 (1H, s, H-23), 7,47 ( 1 H, s, H-21) ; "C RMN d ppm : 18,58 (CH2), 21,42 (CH,), 23,45 (CH3), 27,44 (CH,), 28,59 (CH,), 31,27 (CH2), 38,30 (CH2), 42,44 (C), 46,33 (CH2), 46,99 (CH), 48,20 (CH-), 61,30 (C), 82,83 (C), 83.63 (CH-17), 85,26 (C), 107,96 (CH-22), 118,77 (CH-1), 119,84 (C- 20), 125,65 (C), 139,34 (CH-23), 143,08 (CH-21), 145,38 (C), 151,77 (C), 168,14 (C=O), 168,76 (C=O). Les attributions ont été réalisées à l'aide d'expériences de RMN 2D, COSY 'H-'H et 13C-1H. Eluat 10 (toluène - éther ; 40 : 60). L'éluat 10 évaporé à sec fournit un résidu de 350 mg. Ce mélange (350 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, le mélange (chlorure de méthylène - méthanol ; 95 : 5 ) étant utilisé comme éluant. On obtient ainsi l'haperforine F1 (9 mg) qui présente les caractéristiques suivantes : Haperforine F, : C27H32O9 = 500 ; 209 (MeOH) ; HR ICSM : MH+ 501,2122 (cale. 501,2124 pour C2,H"09), 483,2021 (cale. 483,2018 pour C27H31O8) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 0,98 (3H, s, CH3), 1,25 (3H, s, CH3), 1,38 (3H, s, CH3),1,55 (3H,s, CH3),), 1,66 (3H, s, CH,), 2,10 (111, m), 2,18 (III, d, J =14), 2,61 (1H, dt, J = 14, J' = 2), 3,20 (1H, d, J = 14), 3,82 (3H, s OCH,), 6,18 et 6,36 (2H, AB, J = 18), 6,92 (1H, s, H-22), 7,38(1H, s, H-23), 8,60 (1H, s, H-21). Eluat 11(toluène - éther ; 40 : 60). L'éluat 11évaporé à sec fournit un résidu de 320 mg. Ce mélange (320 mg) est purifié par chromatographie préparative sur plaque de silice, le mélange (chlorure de méthylène - méthanol 95 : 5) étant utilisé comme éluant. On obtient ainsi deux produits : l'haperforine F3 et l'haperforine F6. L'haperforine F3 (Il mg) cristallisée dans l'éthanol présente les caractéristiques suivantes : Haperforine F3 : C27H32O10= 516 F > 220 (MeOH) ; HR ICSM : MH+ 517,2098 (cale. 517,2073 pour C27H33O10) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDC13: 1,42 (3H, s, CH,), 1,52 (3H, s, CH3), 1,62 (3H, s, CH3),1,65 (3H,s, CH3), 1,80 (1H, m), 2, 02 (1H, td, J = 14, J' = 3), 2,56 et 2,96 (1H, AB, J = 18), 2,85 (1H, m), 3,42 (1H, dd, J = 4, J' = 9), 3,78 (3H, s, OCH3), 4,25 (lH,s,), 6,25 et 6,80 (2H, AB, J = 10), 6,76 (1 H, d, J = 1, H-22), 7,21 (1 H, t, J = 1, H-23), 8,0 ( 1 H, s, H-21). L'haperforine F6 (27 mg) présente les caractéristiques suivantes : Haperforine F6 : C37H34O9 = 502, non cristallisée; HR ICSM : MH+ 503,2281 (cale. 503,2280 pour C27H)s09), 485,2191 (cale. pour C27I-I))OS 485,2175) ; 'H RMN d ppm, J Hz, CDCl3 : 0,86 (3H, s, CH3), 0,98 (3H, s, CH3), 1,56 (3H, s, CH,),1,77 (3H, s, CH3), 1,97 (1H, td, J = 14, J' = 6), 2,22 (IH, t, J = 10), 2,47 (2H, m), 2,87 (2H, m), 3,25 (1H, dd, J = 10, J' = 18), 3,67 (3H, s, OCH3), 5,07 et 5,58 (2H, 2s, =CH2), 5,45 (1H, s), 6,35(1H, s large, H-22), 7,38 (1H, s large, H-23), 7,41 (li, s large, H-21) ; '3C RMN d ppm C,H,N : 14,98 (CH3), 22,10 (CH3), 25,27 (CH3), 31,21 (CH2), 32,83 (C), 33,84 (CH2), 34,62 (CH2), 36,06 (CH2), 37,89 (CH2), 41,48 (C), 52,92 (OCH3), 53,59 (CH), 53,22 (C), 77,78 (CH), 79,79 (CH), 80,36 (CH), 83,51(C), 89,05 (C), 110,17 (CH-22), 110,35 (CH2), 121,25 (C-20), 141,16 (CH-23), 143,56 (CH-21), 150,48 (C), 171,66 (C=O). Eluat 13 (chlorure de méthylène). L'éluat 13 évaporé à sec fournit un résidu de 66mg. Par cristallisation dans le chlorure de méthylène, on obtient ainsi l'haperforine F déjà décrite dans l'exemple 6. * EXEMPLE 10 : Traitement de l'haperforine C A une solution de diisopropylamidure de lithium (0,3 ml d'une solution 0,35M dans le THF, soit 0,10 mM), on ajoute à -78 C une solution d'haperforine C (25 mg, 0,05 mM). Après lh, la réaction est neutralisée par addition d'acide acétique (15 mM). De l'éther est ajouté et la solution organique lavée successivement avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et de l'eau, est évaporée à sec sous pression réduite. On obtient un mélange 1 Il d'haperforine C et du produit de retroMichaël de l'haperforine C dénommée isohaperforine C. Ce mélange est purifié par chromatographie sur plaque préparative. On obtient ainsi l'isohaperforine C pure qui présente les caractéristiques suivantes: Isohaperforine C : CZ9 H,6 0" = 560, F 186 (MeOH), [a]p = + 12 (CHC13, c = 0,52) spectre de 'H RMN du mélange d ppm, J Hz, CDC13: 0,92 (3H, s, CH,), 1,0 (3H, s, CH3), 1,28 (3H, d, J = 6, CH3), 1,35 (6H, s, CII3), 2,10 (3H, s, COCH3), 3,40 (in, m, H-3), 3,82 (3H, s, CO,CH3), 5,02 ( 1 H, s large, H-2), 5, 88 ( 1 H, dd, J = 9, J' = 2, H-6), 5,08 (1 H, dd, J = 9, J' = 4, H-7), 6,92 ( 1 H, d, J = 2, H-22), 7,38 8 ( 1 H, dd, J = 2, J' = 1, H-23), 8,35 (1H, d, J=l, H-21). * EXEMPLE 11 : Utilisation des haperforines contre la prolifération cellulaire Le pouvoir anti-turnoral exercé in vitro par une famille de produits contenant une vingtaine d'exemples fut évalué à l'aide du test colorimétrique MTT sur 6 lignées cancéreuses humaines. Le principe du test MTT est basé sur la réduction réalisée au niveau d'enzymes mitochondriales (de cellules vivantes puisque métaboliquement actives) du produit MTT (3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrazolium bromide) de couleur jaune en un produit de couleur bleue, le formazan. La quantité de formazan ainsi obtenue est directement proportionnelle à la quantité de cellules vivantes dans le milieu de culture. Cette quantité de formazan est mesurée par spectrophotométrie. Six lignées cellulaires cancéreuses humaines ont été utilisées, à savoir les modèles A172, U373 et U87 (glioblastomes), A549 (cancer du poumon non-à-petites-cellules), et HCT-15 et LoVo (cancers colorectaux). Ces lignées cellulaires ont été obtenues auprès d'une banque de tissus tumoraux située aux USA, à savoir l'American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). Le procédé expérimental consiste à ensemencer 20 000 à 50 000 (selon le type cellulaire utilisé) cellules/ml de milieu de culture dans des plaques multi-puits de 96 puits contenant chacun 100 l de milieu de culture avec la concentration cellulaire adéquate. Les cellules sont laissées au repos pendant 24 heures afin de favoriser au maximum leur adhérence sur le support de la plaque, puis on ajoute les différents produits dont on veut évaluer l'activité anti-tumorale. Chaque produit a été testé aux concentrations de 0.001, 0.01, 0.1, 1, 10 et 100 g/ml, chaque concentration de produit étant étudiée en hexaplicat. On effectue un contrôle, qui correspond à la condition expérimentale dans laquelle est ajouté le solvant. Dans le cas présent, le solvant est du DMSO utilisé à une concentration finale inférieure à 0.1% par rapport au volume total de culture cellulaire. En effet, on sait que des concentrations de DMSO allant jusqu'à 5% du volume totale de culture cellulaire ne perturbent pas la croissance des lignées utilisées pour le test. On laisse les cellules en présence des produits pendant 72 heures, puis on ajoute le produit MTT jaune et on laisse ce produit en présence des cellules pendant 3 heures. L'intensité de la coloration bleue résultant de la transformation du produit MTT jaune en formazan bleu par les cellules encore vivantes au terme de l'expérience est quantifiée par spectrophotométrie à l'aide d'un appareil de type DYNATECH IMMUNOASSA Y SYSTEM. Un logiciel intégré au spectrophotomètre calcule les valeurs moyennes de densité optique ainsi que les valeurs de déviation standard (Dév. Std. ) et d'erreur standard sur la moyenne (ESM). Les évaluations statistiques se font à l'aide de tests paramétriques (analyse de la variance selon le test de Student) ou non paramétriques (test de rang de Mann-Whitney) selon que les distributions de valeurs de densité optique répondent ou non à une distribution normale (testées par un test Chi2) et que les variances sont ou ne sont pas égales (testées par le test de Levene). Les résultats obtenus figurent dans le Tableau I, qui détaille l'activité observée pour 7 produits à chacune des concentrations testées pour chacune des 6 lignées utilisées dans le test. On observe donc que les composés selon l'invention possèdent une activité remarquable de cytotoxicité pour les cellules cancéreuses, le produit HBlse révélant le plus intéressant en termes d'inhibition de la croissance tumorale. Tableau I Produits Concentration Lignées cellulaires Moyenne s (mg/ml) A172 A549 HCT-15 LoVo U373 U87 ~ESM 100.0 3 4 5 5 4 1 4~1 HA 10. 0 99 125 72 69 118 49 8712 1. 0 117 132 93 96 92 98 1056 0.1 115 123 126 93 127 107 1156 100. 0 78 54 28 19 11 5 3312 HB 10. 0 109 109 103 96 108 110 1062 1. 0 119 109 106 110 116 125 1144 0. 1 121 102 106 113 103 131 1135 100.0 1 1 1 1 3 1 1~1 *HB1 10.0 42 62 13 34 15 Il 30~8 1. 0 90 112 76 109 101 43 8810 0. 1 91 113 68 105 114 101 997 100. 0 1 47 25 10 17 5 18~7 HC 10. 0 137 130 119 115 92 111 1178 1. 0 146 128 128 122 136 146 1344 0.1 147 124 106 119 152 174 13710 100.0 1 6 3 10 11 1 52 HE 10. 0 101 99 61 76 105 80 877 1.0 100 126 96 97 124 109 1096 0.1 107 123 88 89 113 98 1036 100. 0 144 101 85 92 114 5 1069 HF 10. 0 166 113 113 122 153 110 1329 1. 0 169 121 124 120 160 125 13810 0. 1 173 108 123 121 191 131 14814 100. 0 1 8 1 7 8 1 4~2 HF2 10. 0 106 109 84 88 89 92 957 1. 0 104 99 93 92 99 105 992 0.1 102 121 103 103 103 117 1084 * HB 1 = Ilaperfori ne B Les nombres figurant dans le tableau 1 représentent la valeur moyenne (calculée sur 6 valeurs pour chacune des conditions expérimentales) du pourcentage de cellules présentes en fin d'expérimentation par rapport à la condition contrôle. cette dernière étant calibrée à 100% de manière arbitraire. REVENDICATIONS 1. Composés ayant pour formule générale : dans laquelle # B représente, soit le radical : carbone porteur de R4, # soit B forme avec R3 un composé de formule et dans laquelle # les pointillés représentent, de façon indépendante, des simples liaisons ou des doubles liaisons, # R6 à R13, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur en Cl-C4, linéaire ou ramifié, substitué ou non, # RI est le groupe OH, ou forme avec R2 un pont de structure # R2 est le groupe =0 ou forme avec RI, un pont comme défini ci- dessus, # lorsque R3 est présent, R3 est choisi parmi l'atome d'hydrogène ou un groupe OH, ou forme avec R5 un pont de structure # R4 est le groupe OH ou le groupe OCOCH3, ou R4 est absent afin de former la double liaison telle qu'indiquée en pointillé, # R5 est un atome d'hydrogène ou forme avec R3 le pont tel que décrit précédemment, ainsi que leurs dérivés, sous forme libre, ou sous forme de sels pharmaceutiquement acceptables. 2. Composés selon la revendication 1, ayant pour formule : ou sous forme libre, ou sous forme de sels pharmaceutiquement acceptables. 3. Dérivés des composés de formule générale 1 selon la revendication 1, choisis parmi les dérivés de formule : sous forme libre, ou sous forme de sels pharmaceutiquement acceptables. 4. Composition pharmaceutique contenant un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, et des excipients pharmaceutiquement acceptables. 5. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement du cancer ou du paludisme. 6. Procédé d'extraction de produits actifs bruts de limonoïdes à partir de végétaux, caractérisé en ce que : a. les feuilles des végétaux sont réduites en poudre, b. on traite les feuilles par une solution hydroalcoolique, pour obtenir la dissolution des principes actifs amers dans ladite solution hydroalcoolique, c. on traite la solution hydroalcoolique de principes amers par une solution aqueuse d'acétate de plomb, d. on sépare le précipité formé par filtration, e. on traite le filtrat obtenu par une solution aqueuse de sulfate de sodium, f. on filtre après décantation pour obtenir un filtrat hydroalcoolique de principes amers, 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'étape (f) est suivi des étapes suivantes : g. on traite le filtrat hydroalcoolique, sous agitation, par du charbon actif pour absorber les principes amers h. on recueille le charbon par filtration, on le dessèche et le réduit en poudre. i. on extrait les principes amers retenus par la poudre de charbon par du chloroforme, que l'on évapore ultérieurement à sec pour obtenir l'extrait brut de principes actifs. 8. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'étape (f) est suivie des étapes suivantes : g. on évapore le filtrat hydroalcoolique à sec sous vide h. on extrait l'extrait brut au chloroforme, que l'on évapore ultérieurement à sec pour obtenir l'extrait brut de principes actifs. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendication 6 à 8, caractérisé en ce que les végétaux sont du genre Harrisonia, en particulier de l'espèce Harrisionia pe rforata. 10. Extrait brut susceptible d'être obtenu par un procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9. 11. Composés susceptibles d'être obtenus à partir de l'extrait brut selon la revendication 10.