Brevet FR2797886A1 — publié le 20010302

La présente invention est relative à un dispositif de culture cellulaire permettant la culture in vitro sous perfusion de cellules notamment à usage thérapeutique. L'avènement des cultures in vitro de cellules directement transplantables chez l'homme est à l'origine du développement de poches flexibles pour le conditionnement desdites cultures. Depuis la démonstration du potentiel des cultures de monocytes humains et de cellules de moelle osseuse humaine dans une poche en Téflon [van der Meer et al. 1982 Immunology 47(4): 617-625 ; van der Meer et al. 1982 J. Reticuloendothel. Soc. 32 (5): 355-369], cette méthodologie s'est constamment développée dans le cadre de la préparation et/ou de l'activation ex vivo de cellules sanguines immunocompétentes telles que les macrophages, les cellules dendritiques, les lymphocytes et cellules LAK {lymphokine-activated !aller cells) [Mesler Muul et al. 1987 J. Immunol. Methods 101: 171-181 ; Wersall et al. 1990 Acta Oncol. 29(4): 431-437 ; Audran et al. 1994 Cancer Immunol. Immunother. 39 (5): 299-304 ; Coulon et al. 1997 Hematol. Cell Ther. 39 : 237-244 ; Dugast et al. 1997 J Leukoc. Biol. 61(4): 517-521 ; Toujas et al. 1997 Immunology 91(4): 635-642 ; Bernard et al. 1998 Hematol. Cell Ther. 40(1): 17-26 ; Goxe et al. 1998 Res. Immunol. 149 (7-8): 643-646; Lesimple et al. 1998 Res. Immunol. 149 (7-8): 663-671 ; Levine et al. 1998 J Hematother. 7 (5): 437-448]. Récemment, l'utilisation de poches de culture cellulaire s'est accrue dans le cadre du développement des protocoles cliniques d'expansion ex vivo des cellules souches hématopoïétiques issues de prélèvements de moelle osseuse, de sang périphérique comme de sang ombilical [Lemoli et al. 1992 Exp. Hematol. 20 (5): 569-575 ; Takaue et al. 1992 Ann. Hematol. 64 (5): 217-220 ; Shapiro et al. 1994 Blood 84(10): 3567-3574 ; Purdy et al. 1995 J. Hematother. 4 (6): 515-525 ; Williams étal. 1996 Blood 87 (5): 1687-1691 ; Bhatia et al. 1997 Exp. Hematol. 25 (9): 980-991 ; Briddell et al. 1997 J Hematother. 6 (2): 145-150 ; Giarratana et al. 1998 Bone Marrow Transplant. 22 : 707-715 ; McNiece et al. 1999 Hematol. Cell Ther. 41 : 82-86]. Ces protocoles visent principalement à augmenter la qualité et/ou la quantité des cellules transplantables. Contrairement aux dispositifs conventionnels utilisés pour la culture cellulaire in vitro tels que boîtes de Pétri ou flacons, une poche présente en effet de nombreux avantages. D'une part, elle constitue un système clos d'expansion cellulaire présentant des garanties notamment en matière de prévention des risques de contamination et des erreurs techniques de manipulation. D'autre part, le transfert des cellules adopte les contraintes et règles de bonne pratique approuvées pour les produits transfusables. Aux côtés de ces applications thérapeutiques, les poches de culture cellulaire connaissent également un développement dans le cadre de la culture in vitro de modèles cellulaires [Pinelli et al. 1998 J. Soc. Gynecol. Investig. 5 (4): 217-223] ainsi que dans le cadre de la production de métabolites cellulaires, en particulier la production d'anticorps monoclonaux [Lipski et al. 1998 Res. Immunol. 149(6): 547-552]. Traditionnellement, les poches de culture cellulaire définissent un compartiment utile dans lequel les cellules sont cultivées. Les films entrant dans la composition de ces poches sont en matériaux polymères perméables aux gaz le plus souvent à base de polymères fluorés (PTFE, FEP), de polyuréthane, de poly(éthylène-vinylacétate), de silicone, de poly (méthyl-pentène) de polyoléfines tel que le polyéthylène ou le polypropylène. Compte-tenu du caractère hydrophobe et non adhérent des matériaux entrant dans la composition des poches de culture cellulaire, celles-ci s'avèrent particulièrement adaptées à la culture in vitro de cellules en suspension dans un milieu de culture liquide. Cependant, la définition de ces poches de culture cellulaire impose des limites méthodologiques. A l'instar des dispositifs conventionnels de culture cellulaire in vitro tels que boîtes de Pétri ou flacons, ces poches ne permettent qu'un conditionnement stagnant du milieu de culture. Ainsi, l'amplification des cellules entraîne une dégradation au cours du temps des qualités du milieu de culture par épuisement des substances nutritives et accumulation des débris et des métabolites toxiques ou potentiellement inhibiteurs. Un tel conditionnement est préjudiciable au maintien de la qualité des cellules cultivées et constitue un facteur hautement limitant à la réalisation de cultures cellulaires à long terme et/ou à forte densité cellulaire. Il faut alors considérer un apport périodique de milieu frais avec ou sans retrait total ou partiel du milieu usagé. Cependant, un reconditionnement périodique du milieu de culture multiplie d'autant les risques de contamination et d'erreurs techniques de manipulation. Dans tous les cas, la qualité du milieu de culture ne peut être maintenue constante tout au long de la culture cellulaire. Des poches à plusieurs compartiments utiles ont été développées afin de pallier au conditionnement stagnant du milieu de culture. Notamment, différents concepts à deux compartiments définissent un compartiment de culture cellulaire et un compartiment réservoir adjacent de milieu de culture. Le compartiment de culture cellulaire est séparé du compartiment réservoir par une membrane semi-perméable. Cette membrane permet des échanges moléculaires par diffusion entre le milieu du compartiment de culture cellulaire et le milieu du compartiment réservoir selon le différentiel de concentration. Par exemple, ces concepts de poches à deux compartiments utiles ont été utilisés dans le cadre de la culture de lymphocytes humains [Shimizu et al. 1990 J. Clin. Lab. Immunol. 32(1): 41-47] ainsi que dans le cadre de la culture d'hybridomes pour la production d'anticorps monoclonaux [Nakamura et al. 1989 J. Immunol. Methods 118 : 31-35]. Cependant, les échanges moléculaires par simple diffusion au travers d'une membrane semi-perméable relèvent du phénomène de la dialyse. Passifs, ces échanges s'opèrent avec lenteur et jusqu'à l'équilibre des concentrations moléculaires entre le milieu de culture et le milieu du compartiment réservoir. De ce fait, la qualité du milieu de culture ne peut être maintenue constante. Il demeure toujours une concentration résiduelle de métabolites toxiques ou potentiellement inhibiteurs dans le milieu de culture. D'autre part pour être potentiellement efficace, ce phénomène de diffusion implique que le volume du compartiment réservoir soit très supérieur à celui du compartiment de culture cellulaire. Ainsi, pour un compartiment réservoir de 1000 cm3, la capacité maximum du compartiment de culture cellulaire n'est que de 20 cm3 [Nakamura et al. 1989 J Immunol. Methods 118: 31-35]. Cette restriction de volume du compartiment de culture cellulaire compromet fortement une exploitation clinique de ces concepts. Le niveau d'échanges gazeux dans une poche de culture cellulaire constitue également un facteur limitant. D'une part, la faible solubilité de l'oxygène dans un milieu liquide impose une limitation du volume de conditionnement de la culture. D'autre part, contrairement aux dispositifs conventionnels de culture cellulaire in vitro tels que boîtes de Pétri ou flacons, les échanges gazeux à l'interface air/milieu sont limités dans une poche par un film ou une membrane semi-perméable. Ainsi, pour les poches à un compartiment utile, le niveau d'échanges gazeux entre le milieu liquide contenu dans la poche et l'air ambiant de l'incubateur, est définit par le degré de perméabilité aux gaz des films délimitant la poche. Dans les concepts de poches à plusieurs compartiments utiles dont un compartiment réservoir des gaz, ce niveau d'échanges gazeux entre le milieu liquide du compartiment de culture cellulaire et les gaz du compartiment réservoir, est conditionné par le degré de perméabilité aux gaz d'une membrane semi-perméable séparant ces deux compartiments. La présente invention remédie aux limites méthodologiques préalablement invoquées et répond mieux aux besoins de la pratique que les dispositifs de l'art antérieur, notamment en ce qu'elle permet de perfuser le compartiment de culture cellulaire. Le dispositif selon l'invention est constitué d'une poche flexible de volume variable définissant un compartiment de culture cellulaire dans lequel les cellules sont cultivées dans un milieu liquide. II se caractérise par une membrane filtrante interne constituant la base dudit compartiment de culture cellulaire, dont la porosité garantit un maintien des cellules cultivées au sein dudit compartiment de culture cellulaire, et par au moins deux voies d'accès disposées de part et d'autre de ladite membrane filtrante permettant la circulation d'un milieu liquide au sein dudit dispositif. Le compartiment de culture cellulaire dudit dispositif est par conséquent perfusable. Pour cela, les voies d'accès disposées de part et d'autre de la membrane filtrante sont connectées à tout type de moyen de mise en circulation d'un milieu liquide, permettant ainsi la perfusion du compartiment de culture cellulaire. Selon une caractéristique avantageuse du dispositif selon l'invention, la perfusion de milieu de culture permet notamment le maintien de conditions stables de culture cellulaire par un apport continu ou intermittent de milieu frais et le retrait simultané du milieu usagé. On entend par milieu frais au sens du présent document, un milieu défini (sans sérum) ou non, contenant notamment des molécules, nutriments et/ou facteurs de croissance spécifiquement adaptés à la prolifération et/ou la différenciation et/ou l'activité métabolique des cellules cultivées. On entend par milieu usagé au sens du présent document, le milieu appauvri en sortie de culture cellulaire contenant des débris et des métabolites excrétés par les cellules dont certains sont inhibiteurs et/ou potentiellement toxiques pour la culture. Selon une caractéristique avantageuse du dispositif selon l'invention, la perfusion de milieu de culture permet aussi un apport contrôlé aux cellules de tout type de gaz dissous dans le milieu de culture. Selon une caractéristique avantageuse du dispositif selon l'invention, la perfusion de milieu de culture permet aussi un apport contrôlé aux cellules de toute molécule ou entité chimique ou biologique afin de déterminer l'activité desdites molécules ou entités et/ou influer sur le développement cellulaire et/ou modifier la nature même des cellules cultivées (l'apport de vecteurs de transfert de gènes à titre d'exemple non limitatif). La possibilité de faire circuler un milieu liquide au sein dudit dispositif permet aussi de définir une méthode pour cultiver des cellules notamment à usage thérapeutique caractérisée en ce que les cellules sont introduites dans le compartiment de culture cellulaire du dispositif, cultivées selon des conditions nutritionnelles, d'échanges gazeux et de température adaptées puis, lavées et resuspendues en milieu liquide directement au sein dudit dispositif. Selon une caractéristique avantageuse du dispositif selon l'invention, les cellules peuvent donc être manipulées sans transfert, de l'ensemencement jusqu'à la récolte. A titre d'exemple non limitatif d'application, des cellules hématopoïétiques à usage thérapeutique peuvent ainsi être cultivées, lavées, resuspendues dans un milieu injectable puis transplantées par voie intraveineuse chez un patient directement à partir du dispositif selon l'invention. Selon des modes particuliers de réalisation, le dispositif selon l'invention présente une ou plusieurs des caractéristiques suivantes : La membrane filtrante possède une surface non adhérente aux cellules. La membrane filtrante possède une surface permettant la fixation des cellules adhérentes. La membrane filtrante est constituée d'un film polymère poreux biocompatible. Le film polymère constituant la membrane filtrante est à base de polyester, polycarbonate ou polypropylène et présente une porosité comprise entre 0,1 et 12 m obtenue par bombardement ionique et dissolution chimique (technique du Track-Etched). La membrane filtrante est transparente ou translucide et permet une observation microscopique des cellules au sein du compartiment de culture cellulaire. La membrane filtrante est solidaire d'un cadre polymère assurant le maintien de la planéité de ladite membrane filtrante au sein dudit dispositif. Le cadre polymère est semi-rigide avec une épaisseur comprise entre 0,5 et 3 mm Le cadre polymère est indépendant des voies d'accès disposées de part et d'autre de la membrane filtrante. Le cadre polymère intègre les voies d'accès disposées de part et d'autre de la membrane filtrante. Le cadre polymère intégrant les voies d'accès disposées de part et d'autre de la membrane filtrante, constitue une pièce unique fabriquée par la technique d'injection/moulage. La poche est constituée de films polymères souples, biocompatibles et totalement imperméables aux liquides comme aux gaz. La poche est constituée de films polymères souples, biocompatibles, imperméables aux liquides mais au moins perméables aux gaz de type O2 et CO2. Les films constituant la poche sont transparents ou translucides et permettent une observation microscopique des cellules au sein dudit dispositif. Les voies d'accès disposées de part et d'autre de la membrane filtrante, sont compatibles avec les techniques de remplissage, d'échantillonnage et de transfert adoptant les contraintes et règles de bonne pratique approuvées pour les produits transfusables. Le dispositif est stérilisable par autoclavage. La figure annexée illustre un mode particulier de réalisation du dispositif selon l'invention. En référence à cette figure, le dispositif selon l'invention est constitué d'une poche flexible de volume variable définissant un compartiment de culture cellulaire (1) dans lequel les cellules sont cultivées dans un milieu liquide. Il se caractérise par une membrane filtrante interne (2) constituant la base dudit compartiment de culture cellulaire (1), dont la porosité garantit un maintien des cellules cultivées au sein dudit compartiment de culture cellulaire (1), et par deux voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de ladite membrane filtrante (2) permettant la circulation d'un milieu liquide au sein dudit dispositif. Dans la forme de réalisation du dispositif selon la figure annexée, la membrane filtrante (2) est solidaire d'un cadre polymère (4) assurant le maintien de la planéité de ladite membrane filtrante (2) au sein dudit dispositif. Le cadre polymère (4) intègre les voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de la membrane filtrante (2). La poche est constituée de films polymères souples (5) fixés de part et d'autre du cadre (4). Pour la clarté de la figure, les divers éléments constituant le dispositif illustré, ne sont pas en proportion les uns des autres. Les cellules qui peuvent être mises en culture dans le dispositif selon l'invention sont notamment les micro-organismes et les cellules humaines, animales ou végétales procaryotes et eucaryotes, normales ou modifiées. Le dispositif selon l'invention est particulièrement destiné à la production et manipulation ex vivo de cellules utilisées à des fins thérapeutiques dans le cadre de la transplantation desdites cellules, en particulier la transplantation des cellules hématopoïétiques. Cependant, il peut être également recommandé pour la culture in vitro de cellules normales ou lignées cellulaires dans le cadre de la recherche fondamentale, des études de toxicocinétique, de pharmacocinétique ou de biocompatibilité, de même que dans le cadre de la production de métabolites cellulaires et de tout type d'expérimentation basée sur la culture cellulaire in vitro en milieu liquide. Dans un mode préféré mais non limitatif de réalisation du dispositif selon l'invention, la membrane filtrante (2), constituant la base du compartiment de culture cellulaire (1), est constituée d'un film polycarbonate poreux. Elle présente une porosité précise de 2 m obtenue par la technique du Track-Etched. La membrane filtrante (2) est solidaire d'un cadre en polypropylène semi-rigide (4) d'une épaisseur minimale de 1 mm. L'association de la membrane filtrante (2) et du cadre (4) est obtenue par une soudure à impulsion thermique. Le cadre (4) intègre deux voies d'accès (3) opposées et disposées de part et d'autre de la membrane filtrante (2). Le cadre (4) intégrant les voies d'accès (3) est fabriqué par la technique d'injection/moulage. Le cadre (4) est conçu de manière à obtenir une parfaite horizontalité et stabilité du dispositif lors de son usage. Les voies d'accès (3) disposent de raccords externes du type Luer Lock, elles sont compatibles avec les techniques de remplissage, d'échantillonnage et de transfert adoptant les contraintes et règles de bonne pratique approuvées pour les produits transfusables. La poche est constituée de films souples (5) en polypropylène d'une épaisseur de 75 m, imperméables aux liquides mais perméables aux gaz de type O2 et CO2. Pour réaliser la poche, deux films (5) sont soudés de part et d'autre du cadre (4) par une soudure à impulsion thermique. Tous les éléments sont constitués d'un matériau biocompatible et stérilisable par autoclavage. La transparence des films (5) et de la membrane filtrante (2) permet une observation microscopique des cellules au sein du compartiment de culture cellulaire (1). La souplesse des matériaux permet de malaxer manuellement la suspension cellulaire lors de son inoculation et de sa récolte pour faciliter respectivement, un ensemencement cellulaire homogène dans le compartiment de culture cellulaire (1) puis le détachement et la récupération des cellules. Le dispositif selon l'invention a des dimensions externes de 10 cm pour la largeur, 18 cm pour la longueur et 2 cm pour la hauteur. La surface interne définie par la membrane filtrante (2) est de 75 cm2. Les dimensions du dispositif selon l'invention et par conséquent le volume de conditionnement du compartiment de culture cellulaire (1), sont aisément extrapolables, ce qui confère audit dispositif un potentiel d'application clinique. Dans le cadre de l'application d'une perfusion de milieu de culture dans le compartiment de culture cellulaire (1), chacune des deux voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de la membrane filtrante (2), est connectée par une tubulure à un réservoir de stockage adapté permettant respectivement l'alimentation en milieu frais et la collecte du milieu usagé. La circulation des milieux, du réservoir d'alimentation en milieu frais vers le compartiment de culture cellulaire (1) du dispositif selon l'invention puis vers le réservoir de stockage du milieu usagé, est assurée par une pompe péristaltique, par simple gravité ou tout autre moyen de mise circulation des milieux liquides. Un système de filtration et/ou d'élimination des bulles d'air peut être établi en sortie du réservoir d'alimentation. La circulation du milieu de culture peut être également réalisée suivant un circuit en boucle fermée sur lequel, tout type de moyen d'analyse et d'étalonnage de tout ou partie des paramètres du milieu variables au cours de la culture est connectable. Le dispositif selon l'invention ne se limite nullement aux modes de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; il s'adapte au contraire et de façon simple à toutes les variantes utiles à la réalisation et l'exploitation d'une culture cellulaire et/ou d'une expérimentation particulière. Selon une variante non illustrée, le dispositif selon l'invention est caractérisé en ce que le compartiment de culture cellulaire intègre tout type de support permettant une prolifération cellulaire tridimensionnelle. Dans un mode préféré mais non limitatif de réalisation de cette caractéristique, ledit support est constitué d'un matériau fibreux à base de polymères biocompatibles. Selon une caractéristique avantageuse du dispositif selon l'invention, un matériau fibreux offre une surface accrue de culture cellulaire. Il conditionne une prolifération cellulaire dans un espace tridimensionnel et favorise une culture à haute densité cellulaire et l'établissement de contacts cellule à cellule. Selon une caractéristique avantageuse du dispositif selon l'invention, le matériau fibreux peut aussi favoriser l'adhésion de fractions cellulaires stromales, la reconstitution d'un stroma cellulaire et moléculaire (matrice extracellulaire) et, l'établissement de contacts cellule à stroma. Selon une autre variante non illustrée, le dispositif selon l'invention est caractérisé en ce que le compartiment de culture cellulaire intègre un réseau d'apport gazeux, ledit réseau étant alimenté par tout type de moyen de mise en circulation ou diffusion des gaz. Dans un mode préféré mais non limitatif de réalisation de cette caractéristique, le réseau d'apport gazeux est constitué de membranes polymères sous la forme de capillaires ou fibres creuses au moins perméables aux gaz de type O2 et CO2. Selon une caractéristique avantageuse du dispositif selon l'invention, ce réseau permet un apport gazeux contrôlé directement au sein du compartiment de culture cellulaire et facilite des échanges gazeux rapides avec la culture cellulaire en ce qui concerne notamment l'apport d'oxygène et le retrait du dioxyde de carbone. Selon une autre caractéristique avantageuse du dispositif selon l'invention, ce réseau d'apport gazeux peut être utilisé simultanément avec la perfusion de milieu de culture dans le compartiment de culture cellulaire. Le dispositif selon l'invention est également caractérisé en ce qu'il peut être monté en série avec un ou plusieurs dispositifs selon l'invention, une même perfusion de milieu de culture s'effectuant successivement dans chacun desdits dispositifs. Selon une caractéristique avantageuse du montage conforme à l'invention, un montage en série permet notamment la culture simultanée de plusieurs types cellulaires et la circulation d'un milieu de culture conditionné d'un dispositif à l'autre c'est à dire, d'une culture cellulaire à une autre. Ainsi, l'activité métabolique d'une culture cellulaire peut alors alimenter et/ou influer sur le développement d'une autre culture cellulaire sans contacts directs entre les différentes populations de cellules. A titre d'exemple non limitatif, ce montage en série est favorable à la circulation de vecteurs de transfert de gènes issus d'un dispositif selon l'invention dans lequel des cellules productrices de ces vecteurs sont cultivées, vers un autre dispositif selon l'invention dans lequel les cellules cibles à modifier génétiquement sont cultivées. Le dispositif selon l'invention est également caractérisé en ce qu'il peut être monté en parallèle avec un ou plusieurs dispositifs selon l'invention, une même perfusion de milieu de culture s'effectuant simultanément dans chacun desdits dispositifs. Selon une caractéristique avantageuse du montage conforme à l'invention, un montage en parallèle permet notamment de conditionner plusieurs cultures cellulaires selon des conditions de perfusion de milieu de culture rigoureusement identiques. REVENDICATIONS 1) Dispositif pour cultiver in vitro des cellules notamment à usage thérapeutique, constitué d'une poche flexible de volume variable définissant un compartiment de culture cellulaire (1) dans lequel les cellules sont cultivées dans un milieu liquide, caractérisé par : a. une membrane filtrante interne (2) constituant la base dudit compartiment de culture cellulaire (1), dont la porosité garantit un maintien des cellules cultivées au sein dudit compartiment de culture cellulaire (1), b. au moins deux voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de ladite membrane filtrante (2) permettant la circulation d'un milieu liquide au sein dudit dispositif. 2) Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce que la membrane filtrante (2) possède une surface non adhérente aux cellules. 3) Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce que la membrane filtrante (2) possède une surface permettant la fixation des cellules adhérentes. 4) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que la membrane filtrante (2) est constituée d'un film polymère poreux biocompatible. 5) Dispositif selon la revendication 4 caractérisé en ce que le film polymère constituant la membrane filtrante (2) est à base de polyester, polycarbonate ou polypropylène et présente une porosité comprise entre 0,1 et 12 m obtenue par bombardement ionique et dissolution chimique (technique du Track-Etched). 6) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que la membrane filtrante (2) est transparente ou translucide et permet une observation microscopique des cellules au sein du compartiment de culture cellulaire (1). 7) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que la membrane filtrante (2) est solidaire d'un cadre polymère (4) assurant le maintien de la planéité de ladite membrane filtrante (2) au sein dudit dispositif. 8) Dispositif selon la revendication 7 caractérisé en ce que le cadre polymère (4) est semi-rigide avec une épaisseur comprise entre 0,5 et 3 mm 9) Dispositif selon l'une quelconque des revendications 7 à 8 caractérisé en ce que le cadre polymère (4) est indépendant des voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de la membrane filtrante (2). 10) Dispositif selon l'une quelconque des revendications 7 à 8 caractérisé en ce que le cadre polymère (4) intègre les voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de la membrane filtrante (2). 11) Dispositif selon la revendication 10 caractérisé en ce que le cadre polymère (4) intégrant les voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de la membrane filtrante (2), constitue une pièce unique fabriquée par la technique d'injection/moulage. 12) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la poche est constituée de films polymères (5) souples, biocompatibles et totalement imperméables aux liquides comme aux gaz. 13) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la poche est constituée de films polymères (5) souples, biocompatibles, imperméables aux liquides mais au moins perméables aux gaz de type O2 et CO2. 14) Dispositif selon l'une quelconque des revendications 12 à 13 caractérisé en ce que les films (5) constituant la poche sont transparents ou translucides et permettent une observation microscopique des cellules au sein dudit dispositif. 15) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que les voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de la membrane filtrante (2), sont compatibles avec les techniques de remplissage, d'échantillonnage et de transfert adoptant les contraintes et règles de bonne pratique approuvées pour les produits transfusables. 16) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce qu'il est stérilisable par autoclavage. 17) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le compartiment de culture cellulaire (1) intègre tout type de support permettant une prolifération cellulaire tridimensionnelle. 18) Dispositif selon la revendication 17 caractérisé en ce que le support est constitué d'un matériau fibreux à base de polymères biocompatibles. 19) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le compartiment de culture cellulaire (1) intègre un réseau d'apport gazeux, ledit réseau étant alimenté par tout type de moyen de mise en circulation ou diffusion des gaz. 20) Dispositif selon la revendication 19 caractérisé en ce que le réseau d'apport gazeux est constitué de membranes polymères sous la forme de capillaires ou fibres creuses au moins perméables aux gaz de type O2 et CO2. 21) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que les voies d'accès (3) disposées de part et d'autre de la membrane filtrante (2) sont connectées à tout type de moyen de mise en circulation d'un milieu liquide, permettant ainsi la perfusion du compartiment de culture cellulaire (1). 22) Dispositif selon la revendication 21 caractérisé en ce qu'il est monté en série avec un ou plusieurs dispositifs selon la revendication 21, une même perfusion de milieu de culture s'effectuant successivement dans chacun desdits dispositifs. 23) Dispositif selon la revendication 21 caractérisé en ce qu'il est monté en parallèle avec un ou plusieurs dispositifs selon la revendication 21, une même perfusion de milieu de culture s'effectuant simultanément dans chacun desdits dispositifs. 24) Méthode pour cultiver des cellules notamment à usage thérapeutique caractérisée en ce que les cellules sont introduites dans le compartiment de culture cellulaire (1) du dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, cultivées selon des conditions nutritionnelles, d'échanges gazeux et de température adaptées puis, lavées et resuspendues en milieu liquide directement au sein dudit dispositif.