Brevet FR2801593A1 — publié le 20010601

L'invention concerne des polypeptides qui exercent l'activité biologique de récepteurs B du GABA ainsi que des acides nucléiques qui codent ces polypeptides et en particulier leur utilisation pour la recherche de substances actives pour la protection des plantes. L'acide gamma-aminobutyrique (GABA) est le neurotransmetteur inhibiteur le plus important présent dans le système nerveux de vertébrés et d'invertébrés. Les récepteurs du GABA peuvent être divisés en deux sousfamilles, les récepteurs A du GABA et les récepteurs B du GABA. Parmi eux, les récepteurs A du GABA sont des canaux ioniques sous l'influence de ligands tandis que les récepteurs B du GABA sont des récepteurs métabotropes couplés à la protéine G. Les récepteurs B du GABA exercent une influence sur la libération de divers neurotransmetteurs ainsi que sur l'activité de canaux ioniques. Les récepteurs B du GABA ont été principalement bien étudiés chez les vertébrés. On en connaît alors deux sous-types (GABA-B1 et GABA-B2) qui sont fonctionnellement actifs comme hétérodimères (Jones et al., 1998 ; Kaupmann et al., 1998 ; White et al., 1998). Chez les insectes, le GABA est le neurotransmetteur inhibiteur le plus important du système nerveux central. En conséquence, des récepteurs du GABA peuvent être mis en évidence par voie électrophysiologique sur des préparations de ganglions centraux d'insectes. Les récepteurs A tout comme les récepteurs B du GABA représentent le point d'ancrage moléculaire de composés insecticides importants naturels et synthétiques (Sattelle, 1990 ; Fukunaga et al., 1999). La séquence des protéines d'un certain nombre de récepteurs A du GABA chez des insectes est déjà connue. Ainsi, par exemple, les séquences de trois sous-unités différentes ont été décrites pour Drosophila melanogaster (ffrench-Constant et al., 1991 ; Harvey et al., 1994 ; Henderson et al., 1993). En conséquence, la préparation de récepteurs B du GABA d'insectes revêt une grande importance pratique, par exemple pour la recherche d'insecticides nouveaux. La présente invention est donc principalement basée sur le problème de préparer des récepteurs B du GABA d'insectes et des systèmes d'essai fondés sur ces récepteurs et doués d'un haut débit de composés d'essai (High Throughput Screening Assays ; HTS-Assays). Ce problème est résolu par la préparation de polypeptides qui exercent au moins une activité biologique de récepteur B du GABA et qui possèdent une séquence d'amino-acides qui présente une identité d'au moins 70 %, de préférence une identité d'au moins 80 %, plus particulièrement une identité d'au moins 90 % et notamment une identité d'au moins 95 %, avec une séquence selon SEQ ID N : 2, SEQ ID n : 4 ou SEQ ID N : 6 sur une longueur d'au moins 20, de préférence d'au moins 25, notamment d'au moins 30 amino-acides successifs et très préférentiellement sur toutes leurs longueurs. Le degré d'identité des séquences d'amino-acides est déterminé de préférence à l'aide du programme GAP du progiciel GCG, version 9. 1 avec les réglages prédéfinis (Devereux et al., 1984). Le terme "polypeptides", tel qu'on l'utilise ici, se rapporte aussi bien à de courtes chaînes d'amino-acides qui sont habituellement appelées peptides, oligopeptides ou oligomères, qu'à des chaînes d'amino-acides plus longues qui sont habituellement appelées protéines. Ce terme englobe des chaînes d'amino-acides qui peuvent être modifiées soit par des processus naturels, comme une maturation posttraductionnelle, soit par des procédés chimiques qui appartiennent à l'état de la technique. De telles modifications peuvent se produire en plusieurs endroits et plusieurs fois dans un même polypeptide, par exemple sur l'arête dorsale du peptide, au niveau de la chaîne latérale des aminoacides, à l'extrémité terminale amino et/ou à l'extrémité terminale carboxy. Il s'agit par exemple d'acétylations, d'acylations, d'ADP-ribosylations, d'amidations, de liaisons covalentes avec des flavines, des fractions d'hèmes, des nucléotides ou des dérivés de nucléotides, des lipides ou des dérivés de lipides ou le phosphatidylinositol, de cyclisations, de formations de ponts disulfure, de déméthylations, de formations de cystine, de formylations, de gamma-carboxylations, de glycosylations, d'hydroxylations, d'iodations, de méthylations, de myristoylations, d'oxydations, de processus protéolytiques, de phosphorylations, de sélénoylations et d'additions d'amino-acides sous la médiation d'ARNt. Les polypeptides conformes à l'invention peuvent se présenter sous la forme de protéines "matures", ou comme parties de protéines plus grandes, par exemple comme protéines de fusion. En outre, ils peuvent présenter des séquences de sécrétion ou des séquences "leader", des pro-séquences, des séquences qui permettent une purification simple, comme des restes histidine multiples, ou des amino-acides additionnels stabilisants. L'activité biologique des récepteurs B du GABA est de préférence obtenue par hétérodimérisation des polypeptides conformes à l'invention. Par exemple, les polypeptides conformes à l'invention ayant une séquence d'amino-acides selon SEQ ID N : 2 et SEQ ID N : 4, SEQ ID N : 2 et SEQ ID N : 6 ou SEQ ID N : 4 et SEQ ID N : 6 peuvent acquérir par dimérisation une activité de récepteurs. Les polypeptides conformes à l'invention ne constituent pas obligatoirement des récepteurs entiers, mais ils peuvent aussi n'en être que des fragments, dans la mesure où ils présentent encore au moins une activité biologique des récepteurs entiers. Des polypeptides qui, comparativement à des récepteurs B du GABA qui sont constitués des polypeptides conformes à l'invention avec une séquence d' amino-acides selon SEQ ID N : 2 et SEQ ID N : 4, exercent une activité élevée ou réduite de 50 %, sont encore considérés comme conformes à l'invention. Les polypeptides conformes à l'invention ne doivent alors pas être dérivables de récepteurs B du GABA de Drosophila melanogaster. On considère aussi comme conformes à l'invention des polypeptides qui correspondent aux récepteurs B du GABA par exemple des invertébrés suivants ou des fragments de ces polypeptides qui peuvent encore exercer l'activité biologique de ces récepteurs : arthropodes, nématodes, mollusques. Comparativement à la région correspondante de récepteurs B du GABA existant naturellement, les polypeptides conformes à l'invention peuvent présenter des délétions ou des substitutions d'amino-acides, dans la mesure ou ils exercent encore au moins une activité biologique des récepteurs entiers. Des substitutions conservatrices sont préférables. De telles substitutions conservatrices comprennent des variations, avec remplacement d'un amino-acide par un autre amino-acide du groupe suivant : 1. petits restes aliphatiques non polaires ou peu polaires : Ala, Ser, Thr, Pro et Gly ; 2. restes polaires chargés négativement et leurs amides : Asp, Asn, Glu et Gln ; 3. restes polaires chargés positivement : His, Arg et Lys ; 4. grands restes aliphatiques non polaires . Met, Leu, Ile, Val et Cys ; 5. restes aromatiques : Phe, Tyr et Trp. La liste suivante indique des substitutions conservatrices préférentielles : Reste initial Substitution Ala Gly, Ser Arg Lys Asn Gln, His Asp Glu Cys Ser Gln Asn Glu Asp Gly Ala, Pro His Asn, Gln Ile Leu, Val Leu Ile, Val Lys Arg, Gln, Glu Met Leu, Tyr, Ile Phe Met, Leu, Tyr Ser Thr Thr Ser Trp Tyr Tyr Trp, Phe Val Ile, Leu L'expression "activité biologique d'un récepteur B du GABA", telle qu'on l'utilise dans le présent mémoire, désigne la fixation du GABA. Des formes de réalisation, appréciées, des polypeptides conformes à l'invention sont représentées par des récepteurs B du GABA de Drosophila melanogaster, qui possèdent la séquence d'amino-acides selon SEQ ID N : 2, SEQ ID N : 4 ou SEQ ID N : 6. L'objet de la présente invention réside aussi dans des acides nucléiques qui codent les polypeptides conformes à l'invention. Les acides nucléiques conformes à l'invention sont en particulier des acides désoxyribonucléiques (ADN) à brin unique ou à double brin, ou des acides ribonucléiques (ARN). Des formes de réalisation appréciées sont des fragments d'ADN génomique qui peuvent contenir des introns, et des ADNc. Des formes de réalisation appréciées des acides nucléiques conformes à l'invention résident dans des ADNc qui possèdent une séquence nucléotidique selon SEQ ID N : 1, SEQ ID N : 3 ou SEQ ID N : 5. Des acides nucléiques qui s'hybrident dans des conditions stringentes aux séquences selon SEQ ID N : 1, SEQ ID N : 3 ou SEQ ID N : 5 rentrent également dans le cadre de la présente invention. Le terme "hybridation", au sens où on l'utilise ici, définit le processus dans lequel une molécule d'acide nucléique à brin unique entre en combinaison avec un brin complémentaire pour produire un appariement des bases. En procédant de la sorte et en partant de l'information révélée ici concernant les séquences, on peut par exemple isoler des fragments d'ADN d'insectes autres que Drosophila melanogaster, qui codent des polypeptides ayant l'activité biologique de récepteurs B du GABA. Des conditions appréciées d'hybridation sont indiquées ci-après : solution d'hybridation : 6X SSC/0 % de formamide, solution d'hybridation préférée 6X SSC/25 % de formamide. Température d'hybridation : 34 C, température d'hybridation préférée : 42 C. Première étape de lavage : 2X SSC à 40 C. Seconde étape de lavage 2X SSC à 45 C ; seconde étape de lavage préférée : 0,6X SSC à 55 C ; seconde étape de lavage particulièrement appréciée : 0,3X SSC à 65 C. La présente invention comprend en outre des acides nucléiques qui présentent une identité d'au moins 70 %, avantageusement une identité d'au moins 80 %, mieux encore une identité d'au moins 90 % et de façon tout particulièrement appréciée une identité d'au moins 95 %, avec une séquence selon SEQ ID N : 1, SEQ ID N : 3 ou SEQ ID N : 5 sur une longueur d'au moins 20, de préférence d'au moins 25, mieux encore d'au moins 30 nucléotides successifs et, de façon tout particulièrement appréciée sur leurs longueurs totales. Le degré d'identité de séquences d'acides nucléiques est avantageusement déterminé à l'aide du programme GAP tiré du progiciel GCG, version 9. 1 avec les réglages prédéfinis. Les séquences selon les numéros d'accès (Acc.No.) de banque génomique AC002502, AF145639 et AC004420, sont par référence un élément de la présente description. L'objet de la présente invention réside en outre dans des produits de synthèse d'ADN qui comprennent un acide nucléique conforme à l'invention et un promoteur hétérologue. L'expression "promoteur hétérologue", au sens où on l'utilise dans le présent mémoire, se rapporte à un promoteur qui possède des propriétés autres que celles du promoteur qui contrôle dans l'organisme originel l'expression du gène concerné. Le terme "promoteur", au sens où il est utilisé ici, se rapporte généralement à des séquences de contrôle d'expression. Le choix de promoteurs hétérologues dépend de ce qu'on les utilise pour l'expression de cellules procaryotiques ou eucaryotiques ou de systèmes dépourvus de cellules. Des exemples de promoteurs hétérologues sont le promoteur précoce ou tardif du virus SV40, de l'adénovirus ou du cytomégalovirus, le système lac, le système trp, les régions opérateur principal et promoteur du phage lambda, les régions de contrôle de la protéine enveloppe des phages fd, le promoteur de la 3-phosphoglycérate-kinase, le promoteur de la phosphatase acide et le promoteur du facteur a d'appariement de la levure. L'objet de l'invention réside en outre dans des vecteurs qui contiennent un acide nucléique conforme à l'invention ou un produit de synthèse d'ADN conforme à l'invention. On peut utiliser comme vecteurs tous plasmides, phasmides, cosmides, chromosomes YAC ou chromosomes artificiels employés dans des laboratoires de biologie moléculaire. L'objet de l'invention réside aussi dans des cellules-hôtes qui contiennent un acide nucléique conforme à l'invention, un produit de synthèse d'ADN conforme à l'invention ou un vecteur conforme à l'invention. L'expression "cellule-hôte", au sens où on l'utilise ici, se rapporte à des cellules qui ne contiennent pas naturellement les acides nucléiques conformes à l'invention. On peut utiliser comme cellules-hôtes aussi bien des cellules procaryotiques que des bactéries des genres Bacillus, Pseudomonas, Streptomyces, Streptococcus, Staphylococcus, de préférence E. coli, que des cellules eucaryotiques telles que des levures, des cellules de mammifères, d'amphibiens, d'insectes ou de végétaux. Des cellules-hôtes eucariotiques appréciées sont des cellules HEK-293-, Schneider S2-, Spodoptera Sf9-, Kc-, CHO-, COS1-, COS7-, HeLa-, C127-, 3T3- ou BHK et en particulier des ovocytes de Xenopus. L'objet de l'invention réside en outre dans des anticorps qui se lient spécifiquement aux polypeptides, autrement dit aux récepteurs mentionnés ci-dessus. La préparation de ces anticorps est effectuée d'une manière classique. Par exemple, de tels anticorps peuvent être produits par l'injection à un hôte sensiblement immunocompétent d'une quantité efficace pour la production d'anticorps d'un polypeptide conforme à l'invention ou d'un fragment de ce polypeptide, suivie de la séparation de cet anticorps. On peut en outre obtenir d'une manière connue une lignée cellulaire immortalisée, qui produit des anticorps monoclonaux. Les anticorps peuvent éventuellement être marqués avec un réactif de détection. Des exemples appréciés d'un tel réactif de détection sont des enzymes, des éléments marqués par la radio-activité, des substances chimiques fluorescentes ou la biotine. Au lieu de l'anticorps entier, on peut aussi utiliser des fragments qui possèdent les propriétés souhaitées de liaison spécifique. Par conséquent, le terme "anticorps", au sens où on entend l'utiliser dans le présent mémoire, s'étend également à des parties d'anticorps entiers telles que les fragments Fa-, F(ab')2- ou Fv- qui sont encore capables de se lier aux épitopes des polypeptides conformes à l'invention. Les acides nucléiques conformes à l'invention peuvent être utilisés en particulier pour produire des invertébrés transgéniques. Ces derniers peuvent être utilisés dans des systèmes expérimentaux qui se basent sur une expression des polypeptides conformes à l'invention qui s'écarte du type sauvage. En outre, on peut produire, sur la base des informations révélées ici, des invertébrés transgéniques pour lesquels une altération de l'expression des polypeptides conformes à l'invention se manifeste par modification d'autres gènes ou promoteurs. La production des invertébrés transgéniques est effectuée par exemple dans le cas de Drosophila melanogaster par transfert génétique sous la médiation de l'élément P (Hay et al., 1997) ou chez Caenorhabditis elegans par transfert génétique sous la médiation de- transposons (par exemple par Tcl ; Plasterk, 1996). L'objet de l'invention réside donc également dans des invertébrés transgéniques qui contiennent au moins l'un des acides nucléiques conformes à l'invention, de préférence des invertébrés transgéniques des espèces Drosophila melanogaster ou Caenorhabditis elegans, ainsi que leurs descendants transgéniques. Les invertébrés transgéniques contiennent de préférence les polypeptides conformes à l'invention sous une forme s'écartant du type sauvage. L'objet de la présente invention réside en outre dans un procédé de production des polypeptides conformes à l'invention. Pour la production des polypeptides qui sont codés par les acides nucléiques conformes à l'invention, on peut cultiver dans des conditions appropriées des celluleshôtes qui contiennent l'un des acides nucléiques conformes à l'invention. L'acide nucléique à exprimer peut alors être adapté au "Codon Usage" des cellules-hôtes. Les polypeptides voulus peuvent ensuite être isolés d'une manière clas- sique des cellules ou du milieu de culture. Les polypeptides peuvent aussi être produits dans des systèmes in vitro. Un procédé rapide d'isolement des polypeptides conformes à l'invention qui sont synthétisés par les cellules-hôtes avec utilisation d'un acide nucléique conforme à l'invention débute par l'expression d'une protéine de fusion dont le partenaire de fusion peut être purifié par affinité d'une manière simple. Le partenaire de fusion peut par exemple être la glutathion S-transférase. La protéine de fusion peut ensuite être purifiée sur une colonne de chromatographie d'affinité vis-à-vis du glutathion. Le partenaire de fusion peut être séparé par coupure protéolytique partielle par exemple sur des linkers entre le partenaire de fusion et le polypeptide de l'invention à purifier. Le linker peut se présenter de façon telle qu'il comprend des amino-acides-cibles, tels que des restes d'arginine et de lysine, qui définissent des sites de coupure par la trypsine. Pour produire de tels linkers, on peut utiliser des techniques classiques de clonage faisant intervenir des oligonucléotides. D'autres procédés classiques de purification sont basés sur l'électrophorèse préparative, la FPLC, la HPLC (par exemple avec utilisation de colonnes de filtration sur gel, d'inversion de phase ou de colonnes légèrement hydrophobes), filtration sur gel, précipitation différentielle, chromatographie par échange ionique et chromatographie d'affinité. Etant donné que les récepteurs B du GABA sont des protéines membranaires, on effectue de préférence, dans les opérations de purification, des extractions au détergent, par exemple en utilisant des détergents qui n'influent pas ou n'influent que peu sur les structures secondaires et tertiaires des polypeptides, comme des détergents non ioniques. La purification des polypeptides conformes à l'invention peut comprendre l'isolement de membranes à partir de cellules-hôtes qui expriment les acides nucléiques conformes à l'invention. Ces cellules expriment de préférence les polypeptides conformes à l'invention en un nombre suffisant de copies, de manière que la quantité de polypeptides dans une fraction de membrane soit au moins dix fois supérieure à celle que l'on rencontre dans des membranes comparables de cellules qui expriment naturel- lement les récepteurs B du GABA ; laquantité est très avantageusement au moins cent fois supérieure et de façon tout particulièrement appréciée au moins mille fois supérieure. Les termes "isolement ou purification", au sens où on les utilise ici, signifient que les polypeptides conformes à l'invention sont séparés d'autres protéines ou d'autres macromolécules de la cellule ou du tissu. Une composition contenant les polypeptides conformes à l'invention, en ce qui concerne sa teneur en protéine par rapport à une préparation obtenue à partir des cellules-hôtes, est enrichie d'un facteur au moins égal à dix et notamment d'un facteur au moins égal à cent. Les polypeptides conformes à l'invention peuvent aussi être purifiés par affinité sans partenaire de fusion, à l'aide d'anticorps qui se fixent aux polypeptides. L'objet de la présente invention réside aussi dans des procédés de production des acides nucléiques conformes à l'invention. Les acides nucléiques de l'invention peuvent être produits d'une façon simple. Par exemple, les molécules d'acides nucléiques peuvent être synthétisées par voie entièrement chimique. On peut aussi ne synthétiser chimiquement que de courts tronçons des séquences conformes à l'invention et marquer ces oligonucléotides par la radioactivité ou avec un colorant fluorescent. Les oligonucléotides marqués peuvent être utilisés pour explorer des banques d'ADNc établies à partir d'ARNm d'insectes ou des banques génomiques établies à partir d'ADN génomique d'insectes. Des clones auxquels s'hybrident les oligo- nucléotides marqués sont choisis en vue de l'isolement de l'ADN concerné. Après caractérisation de l'ADN isolé, on obtient de façon simple les acides nucléiques conformes à l'invention. Les acides nucléiques conformes à l'invention peuvent aussi être produits par le procédé PCR avec utilisation d'oligonucléotides synthétisés chimiquement. Le terme "oligonucléotide(s)", au sens où on l'utilise ici, désigne des molécules d'ADN qui sont constituées de 10 à 50 nucléotides, de préférence de 15 à 30 nucléotides. Ces molécules sont synthétisées par voie chimique et peuvent être utilisées comme sondes. A l'aide des acides nucléiques ou polypeptides conformes à l'invention, on peut identifier des substances actives nouvelles pour la protection des plantes ou des substances actives pharmaceutiques pour le traitement de l'homme et de l'animal, telles que des composés chimiques qui modifient en tant que modulateurs, notamment en tant qu'agonistes ou antagonistes, les propriétés des récepteurs B du GABA conformes à l'invention. A cet effet, on incorpore à une cellule-hôte appropriée une molécule d'ADN recombiné qui comprend au moins un acide nucléique conforme à l'invention. La cellule-hôte est cultivée en présence d'un composé ou d'une sonde qui comprend une multiplicité de composés, dans des conditions qui permettent l'expression des récepteurs conformes à l'invention. Une altération des propriétés des récepteurs peut par exemple être détectée de la manière décrite dans l'exemple 2 ci-après. Il est ainsi possible de déceler par exemple des substances insecticides. Les récepteurs B du GABA modifient, de préférence après activation, la concentration de l'AMPc intracellulaire par une interaction avec des protéines G. Des modifications des propriétés des récepteurs par des composés chimiques peuvent par conséquent être mesurées après expression hétérologue, par exemple par mesure des concentrations en AMPc intracellulaire directement au moyen de systèmes d'essai ELISA (Biomol, Hamburg, Allemagne) ou des systèmes d'essai RIA (NEN, Schwalbach, Allemagne) selon la technique HTS. Une mesure indirecte de la concentration en AMPc est possible à l'aide de gènes reporters (par exemple Luciferase), dont l'expression dépend de la concentration en AMPc (Stratowa et al., 1995). La co-expression de récepteurs B du GABA avec des protéines G particulières, par exemple Gal5, G[alpha]15 ou d'autres protéines G chimères, dans des systèmes hétérologues avec mesure de l'augmentation du calcium, par exemple avec des colorants fluorescents ou l'équorine, constitue une autre possibilité de dépistage (Stables et al., 1997 ; Conklin et al., 1993). En outre, la liaison du GTP à la protéine G activée peut être utilisée comme système d'affichage pour la détection de substances. On peut aussi utiliser des essais de liaison avec du GABA marqué en vue du dépistage. Le terme "agoniste", au sens où on l'utilise ici, se rapporte à une molécule qui active les récepteurs B du GABA. Le terme "antagoniste", au sens où on l'utilise ici, se rapporte à une molécule qui déplace un agoniste de son site de liaison. Le terme "modulateur", au sens où on l'utilise ici, représente la notion d'agoniste ou d'antagoniste. Des modulateurs peuvent être de petites molécules de chimie organique, des peptides ou des anticorps qui se lient aux polypeptides conformes à l'invention. En outre, des modulateurs peuvent être de petites molécules de chimie organique, des peptides ou des anticorps qui se lient à une molécule se liant à son tour aux polypeptides conformes à l'invention, et exerçant ainsi une influence sur leur activité biologique. Des modulateurs peuvent constituer des mimétiques de ligands et de substrats naturels. Les modulateurs constituent de préférence des composés de chimie organique à petites molécules. La liaison des modulateurs aux polypeptides conformes à l'invention peut modifier les processus cellulaires d'une manière qui conduit à la destruction des insectes traités avec eux. La présente invention s'étend par conséquent à l'utilisation comme insecticides de modulateurs des polypeptides conformes à l'invention. Les acides nucléiques ou polypeptides conformes à l'invention permettent aussi la détection de composés qui se lient aux récepteurs conformes à l'invention. On peut également les utiliser comme insecticides sur des plantes. Par exemple, des cellules-hôtes, qui contiennent les acides nucléiques conformes à l'invention et qui expriment les récepteurs ou polypeptides correspondants, ou les produits géniques eux-mêmes sont mis en contact avec un composé ou un mélange de composés dans des conditions qui permettent l'action mutuelle d'au moins un composé avec les celluleshôtes, les récepteurs ou les polypeptides individuels. Par l'utilisation de cellules-hôtes ou d'invertébrés transgéniques qui contiennent les acides nucléiques conformes à l'invention, il est aussi possible de détecter des substances qui modifient l'expression des récepteurs. Les acides nucléiques conformes à l'invention décrits ci-dessus, des vecteurs et des régions régulatrices peuvent en outre être utilisés pour la détection de gènes qui codent des polypeptides participant, chez des insectes, à l'élaboration de récepteurs B du GABA de fonctionnalité similaire. On considère comme récepteurs de fonctionnalité similaire, conformément à la présente invention, des récepteurs qui comprennent des polypeptides qui, bien qu'ils se distinguent par leur séquence d'amino-acides des polypeptides décrits dans le présent mémoire, ont cependant principalement les mêmes fonctions. Explications relatives au protocole des séquences et aux figures : SEQ ID N : 1, SEQ ID N : 3 et SEQ ID N : 5 montrent les séquences des nucléotides et des amino-acides des ADNc de GABA-B isolés. SEQ ID N : 2, SEQ ID N : 4 et SEQ ID N : 6 montrent en outre les séquences d'aminoacides des protéines dérivées des séquences d'ADNc de GABA-B. La figure 1 représente une courbe d'efficacité en fonction de la dose de GABA et 3-APMPA sur le récepteur B du GABA de Drosophila constitué des polypeptides conformes à l'invention avec des séquences d'amino-acides selon SEQ ID N : 2 et SEQ ID N : 4, exprimé dans des ovocytes de Xenopus. La figure 2 illustre le couplage fonctionnel des D-GABA-B récepteurs R1/R2 co-exprimés constitués des polypeptides conformes à l'invention avec des séquences d'amino-acides selon SEQ ID N : 2 et SEQ ID N : 4 au système intracellulaire AMPc. Des cellules HEK293 Luc transfectées avec les D-GABA-B récepteurs R1/R2 (D-GABA Rl/2) et des cellules témoins non transfectées (témoins) ont été stimulées avec de la forskoline seule, de la forskoline et du GABA ainsi que du GABA seul et la concentration intracellulaire en AMPc a été mesurée. Les cellules transfectées avec les D-GABA-B récepteurs Rl/2 montrent une nette réduction de la réponse de l'AMPc induite par la forskoline, tandis que les cellules témoins ne réagissent pas. Exemples : Exemple 1 Isolement des séquences polynucléotidiques décrites. La manipulation de polynucléotides a été effectuée selon des méthodes classiques de la technologie de recombinaison de l'ADN (Sambrook et al., 1989). Le traitement bio-informatique de séquences de nucléotides et de protéines a été effectué avec le progiciel GCG version 9.1 (GCG Genetics Computer Group, Inc., Madison Wisconsin, Etats-Unis d'Amérique). Exemple 2 Génération des vecteurs d'expression Les domaines de séquences de SEQ ID N : 1, SEQ ID N : 3 et SEQ ID N : 5 ont été amplifiés au moyen de la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) et incorporés par clonage au vecteur pcDNA3. 1/Neo (Invitrogen, Groningen). Expression hétérologue Des cellules HEK293 ont été cultivées en milieu Eagles modifié Dulbeccos contenant 10 % de sérum foetal de veau en présence de 5 % de CO2 et à une température de 37 C. Pour le transfert de gènes, on s'est servi de MBS (Stratagene, La Jolla, Etats-Unis d'Amérique) selon les indications du fabricant. Les cellules ont été ensemencées à diverses densités dans des plaques de microtitrage 24 heures à 48 heures après le transfert des gènes. Les cellules génétiquement modifiées ont été sélectionnées pendant 3 à 4 semaines par croissance en milieu Eagles modifié Dulbeccos contenant 10 % de sérum foetal de veau et 700 g/ml de généticine (G418, Life Technologies, Karlsruhe) comme marqueur de sélection. Les clones individuels résistants ont été analysés de la manière décrite ci-dessous. L'expression fonctionnelle des récepteurs B du GABA provenant d'insectes a été effectuée également dans des ovocytes de Xenopus. A cet effet, des canaux calcium activables par la protéine G (GIRK1 et GIRK4) ont été coexprimés afin de mesurer l'activation des récepteurs B du GABA (White et al., 1998). Mesures d'AMPc Pour déterminer la concentration en AMPc, on a utilisé des souches de cellules HEK293. D'une part, les cellules HEK293 ont co-exprimé de façon stable les deux récepteurs D-GABA-B RI et D-GABA-B R2 (D-GABA Rl/2) de Drosophila melanogaster. D'autre part, des cellules témoins non transfectées ont été incluses dans le test (témoins) . Les cellules ont été ensemencées à une densité de 20 000 cellules par cavité dans des plaques à 96 puits. Des cellules témoins ont été maintenues en incubation pendant 48 heures à 37 C jusqu'à une densité cellulaire d'environ 80 % dans un milieu de culture (DMEM, 10 % de sérum foetal de veau, pénicilline et streptomycine, 50 U/ml et 50 g/ml (Life Technologies)) et des cellules exprimant les récepteurs D-GABA Rl/2 dans un milieu de sélection (milieu de culture additionné de 0,5 mg/ml de généticine (G418, Life Technologies)). Ensuite, le milieu a été enlevé et les cellules ont été lavées une fois avec du milieu DMEM sans additions. Après une période d'incubation de 30 minutes en présence d'IBMX (300 M) à 37 C, on a effectué une stimulation de 30 minutes avec du GABA (100 M) et/ou de la forskoline (10 M) à 37 C. Toutes les étapes d'incubation ont été conduites en milieu DMEM (Life Technologies) sans additions. Ensuite, on a procédé à l'élimination du milieu de stimulation et à une lyse des cellules avec 50 l de HCl (0,1 N) par cavité. Les cellules ont été lysées pendant 20 minutes à la température ambiante sous agitation par secousses et les concentrations en AMPc des lysats cellulaires ont été déterminées en triple exemplaire avec le kit d'immuno-essai enzymatique (EIA) AK-200 (Biomol, Hamburg, Allemagne) en suivant les consignes du fabricant. Mesures des ovocytes 1. Préparation des ovocytes Les ovocytes provenaient d'une grenouille Xenopus laevis femelle adulte (Firme Horst Kâhler, Hamburg, Allemagne). Les grenouilles ont été maintenues dans un réservoir de grandes dimensions avec circulation d'eau à une température de l'eau de 20-24 C. Des parties de l'ovaire de grenouille ont été prélevées sous anesthésie totale par une petite incision pratiquée dans l'abdomen (environ 1 cm). Ensuite l'ovaire a été traité sous agitation constante par secousses pendant environ 140 minutes dans 25 ml de collagénase (Typ I, C-0130, SIGMAALDRICH CHEMIE GmbH, Deisenhofen, Allemagne ; 355 U/ml, en solution de Barth sans calcium avec ajustement en mM : NaCl 88, KC1 1, MgS04 0,82, NaHC03 2,4, chlorhydrate de Tris 5, pH 7,4. Les ovocytes ont ensuite été lavés avec de la solution de Barth sans calcium. Des ovocytes au stade de maturation V (Dumont, 1972) ont seuls été choisis pour la suite du traitement et ont été transférés dans des plaques de microtitrage (plaques MicroWellTM Nunc, n de catalogue 245128 + 263339 (couvercle), Nunc GmbH & Co. KG, Wiesbaden, Allemagne), chargées de solution de Barth (en mM : NaCl 88, KC1 1, MgS04 0,82, Ca(NO3)2 0,33, CaCl2 0,41, NaHC03 2,4, chlorhydrate de Tris 5, pH 7,4) ainsi que de gentamicine (sulfate de gentamicine, G-3632, SIGMA-ALDRICH CHEMIE GmbH, Deisenhofen, Allemagne ; 100 U/ml). Les ovocytes ont ensuite été conservés à 19,2 C dans un incubateurrefroidisseur (type KB 53, WTB Binder Labortechnik GmbH, Tuttlingen, Allemagne). 2. Injection des ovocytes On a préparé des électrodes d'injection ayant un diamètre de 10-15 m avec un système de pipetage (type L/M- 3P-A, List-electronic, Darmstadt-Eberstadt, Allemagne). Avant l'injection, on a décongelé des fractions aliquotes contenant respectivement du D-GABA-B-ADN et du GIRK1/4-ADN et on les a diluées avec de l'eau à une concentration finale de 10 ng/l. Les sondes d'ADN ont été centrifugées pendant 120 secondes à 3200xg (type Biofuge 13, Heraeus Instruments GmbH, Hanau, Allemagne). Ensuite, on a utilisé comme tuyau de transfert, un tuyau en polyéthylène étiré afin de remplir les pipettes par derrière. Les électrodes d'injection ont été fixées à une unité de translation X, Y, Z (centre de traitement EP1090, isel-automation, Eiterfeld, Allemagne). A l'aide d'un ordinateur Macintosh, on a fait arriver des ovocytes dans les cavités des plaques de microtitrage et en exerçant de courtes pressions (0,5-3,0 bars, 3-6 secondes), on a injecté dans les ovocytes environ 50 ml de solution d'ADN. 3. Mesures électrophysiologiques Pour les mesures électrophysiologiques, on a réalisé un montage de tension à deux électrodes avec un amplificateur TURBO TEC-10CD (npi electronic GmbH, Tamm, Allemagne). Les micropipettes nécessaires à cet effet ont été réalisées par double traction en verre à l'aluminosilicate (tube capillaire, article n 14 630 29,1 = 100 mm, 0a = 1,60 mm, 0i = 1,22 mm, Hilgenberg GmbH, Malsfeld, Allemagne) (Hamill et al., 1981). Les électrodes de courant et de tension avaient un diamètre de 1-3 m et elles ont été chargées de KCl 1,5 M et d'acétate de potassium 1,5 M. Les pipettes avaient une résistance capacitive de 0,2-0,5 MW. Pour les mesures électrophysiologiques, les ovocytes ont été transférés dans une chambre de faible volume qui était continuellement balayée par un courant de solution de Rimland normale (en mM : KCl 90, MgCl2 3, HEPES 5, pH 7,2). Pour une application de substance, la solution de perfusion était échangée contre une solution de substance de même composition contenant en outre la concentration en substance souhaitée. La réussite de l'expression du D-GABAB-ADN a été contrôlée au bout d'une semaine à un potentiel de borne de-60 mV. Les ovocytes sans réaction ont été jetés. Tous les autres ont été utilisés pour tester la substance. Les données ont été établies au moyen d'un appareil enregistreur YT (YT-Schreiber, modèle BD 111, Kipp & Zonen Delft BV, AM Delft, Pays-Bas). Lorsque les substances testées ont été éprouvées à des concentrations en série, ces mesures ont été effectuées sur au moins deux ovocytes différents et à au moins cinq concentrations différentes. L'antagonisme des substances a été étudié directement et sans incubation préalable en présence de GABA (acide gamma-amino-N-butyrique, A2129, SIGMA-ALDRICH CHEMIE GmbH, Deisenhofen, Allemagne). Les valeurs individuelles ont été introduites dans le logiciel Origin (logiciel d'analyse Microcal Origin, Microcal Software, Inc., Northampton, MA 01060-4410 USA) (Additive GmbH, Friedrichsdorf/Ts, Allemagne). On a calculé avec le logiciel Origin les valeurs moyennes, l'écart-type, les valeurs CI50 et les courbes CI50. Ces mesures ont été effectuées au moins deux fois. Littérature Conklin et al. (1993) Substitution of three amino acids switches receptor specificity of Gq alpha to that of Gi alpha, Nature 363,274-276 Devereux et al. (1984) Nucleic Acids Research 12, 387 Dumont, J. N. (1972) Oogenesis in Xenopus laevis (Daudin). 1. Stages of oocyte development in laboratory maintained animais, J. Morphol. 136,153-180 Fukunaga, A. et al. (1999) Insecticidal properties of 3-aminopropyl- (methyl) phosphinic acid and its effect on K±evoked release of acetylcholine from cockroach synaptosomes, Comp. Biochem. and Pysiol. Part C 122, 283-286 ffrench-Constant, R. H. et al. (1991) Molecular cloning and transformation of cyclodiene resistance in Drosophila : invertebrate gamma-aminobutyric acid subtype A receptor locus, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S.A. 88,7209-7213 Hamill, O. P. et al. (1981) Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches, Pfügers Arch. 391, 85- 100 Harvey, R. J. et al. (1994) Sequence of a Drosophila ligand-gated ion-channel polypeptide with an unusual amino-terminal extracellular domain, J. Neurochem. 62, 2480-2483 Hay et al. (1997) P element insertion-dependent gene activation in the Drosophila eye, Proceedings of The National Academy ofSciences of The United States of America 94 (10), 5195-5200 Henderson, J. E. et al. 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(1998) Heterodimerization is required for the formation of a functional GABA (B) receptor, Nature 396,679-682 PROTOCOLE DESEQUENCES Bayer Aktiengesellschaft RécepteursB duGABA Le A 34 074 DE 199 55 408.0 1999-11-18 6 PatentIn Ver. 2.1 1 2523 DNA Drosophila melanogaster CDS (1)..(2520) 1 atg cgc aaa gat atg aca agt gat ggt gct gtt acg ttt tgg ata ttt 48 Met Arg Lys Asp Met Thr Ser Asp Gly Ala Val Thr Phe Trp Ile Phe 1 5 10 15 ttg ctt tgt tta atc gcc tcg ccg cac ctg caa ggg ggc gtg gcc ggg 96 Leu Leu Cys Leu Ile Ala Ser Pro His Leu Gln Gly Gly Val Ala Gly 20 25 30 agg ccc gat gaa ctg cac atc ggc ggc atc ttt ccg ata gcc ggc aaa 144 Arg Pro Asp Glu Leu His Ile Gly Gly Ile Phe Pro Ile Ala Gly Lys 35 40 45 gga gga tgg cag ggc ggc cag gcg tgt atg cet gcc aca aga ctg gcg 192 Gly Gly Trp Gln Gly Gly Gln Ala Cys Met Pro Ala Thr Arg Leu Ala 50 55 60 ttg gat gat gtc aac aag cag ccg aat ctg ctg ccg ggc ttc aag ctc 240 Leu Asp Asp Val Asn Lys Gln Pro Asn Leu Leu Pro Gly Phe Lys Leu 65 70 75 80 atc ctg cac agc aac gac agc gag tgt gag ccc ggt ttg ggc gcc agc- 288 Ile Leu His Ser Asn Asp Ser Glu Cys Glu Pro Gly Leu Gly Ala Ser 85 90 95 gtg atg tac aat ctg ctc tat aat aaa ccg caa aag ctg atg ctg ttg 336 Val Met Tyr Asn Leu Leu Tyr Asn Lys Pro Gln Lys Leu Met Leu Leu 100 105 110 gca gga tgc agc acg gtc tgc acc act gta gcc gag gct gcc aaa atg 384 Ala Gly Cys Ser Thr Val Cys Thr Thr Val Ala Glu Ala Ala Lys Met 115 120 125 tgg aat cta att gtg ctc tgc tac ggg gcc tcg agt ccg gct ctt tcg 432 Trp Asn Leu Ile Val Leu Cys Tyr Gly Ala Ser Ser Pro Ala Leu Ser 130 135 140 gat cgc aaa cga ttc ccc act cta ttc cgc acc cat cca tcg gcc acg 480 Asp Arg Lys Arg Phe Pro Thr Leu Phe Arg Thr His Pro Ser Ala Thr 145 150 155 160 gtg cac aat cca acg cgc atc aag ctg atg aag aaa ttc ggc tgg tcc 528 Val His Asn Pro Thr Arg Ile Lys Leu Met Lys Lys Phe Gly Trp Ser 165 170 175 cgg gtg gcc att ctg cag cag gcg gag gag gtc ttt ata tcg acc gta 576 Arg Val Ala Ile Leu Gln Gln Ala Glu Glu Val Phe Ile Ser Thr Val 180 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Gln Asn 290 295 300 aat cag aca act ata tcc gga atg act gca gag gaa ttt cga cat cga 960 Asn Gln Thr Thr Ile Ser Gly Met Thr Ala Glu Glu Phe Arg His Arg 305 310 315 320 ctg aat cag gcg cta atc gag gag ggt tac gac att aac cac gat cgc 1008 Leu Asn Gln Ala Leu Ile Glu Glu Gly Tyr Asp Ile Asn His Asp Arg 325 330 335 tat ccg gag gga tat cag gag gcg cca ctc gcc tac gat gca gtg tgg 1056 Tyr Pro Glu Gly Tyr Gln Glu Ala Pro Leu Ala Tyr Asp Ala Val Trp 340 345 350 agt gtg gct ttg gct ttc aac aag acc atg gaa cga ttg aca acc ggg 1104 Ser Val Ala Leu Ala Phe Asn Lys Thr Met Glu Arg Leu Thr Thr Gly 355 360 365 aag aaa tct ctg agg gat ttt acc tat acg gac aag gag att gcc gat 1152 Lys Lys Ser Leu Arg Asp Phe Thr Tyr Thr Asp Lys Glu Ile Ala Asp 370 375 380 gaa atc tac gct gcc atg aac tcc aca caa ttt ctg ggt gta tcg ggt 1200 Glu Ile Tyr Ala Ala Met Asn Ser Thr Gln Phe Leu Gly Val Ser Gly 385 390 395 400 gtg gtg gca ttc agt tct cag ggc gat cgt att gct ctt aca cag atc 1248 Val Val Ala Phe Ser Ser Gln Gly Asp Arg Ile Ala Leu Thr Gln Ile 405 410 415 gaa cag atg ata gac ggc aag tac gag aag ttg ggt tac tac gat act 1296 Glu Gln Met Ile Asp Gly Lys Tyr Glu Lys Leu Gly Tyr Tyr Asp Thr 420 425 430 cag ttg gat aac cta tcc tgg ttg aat act gaa cag tgg att ggt ggc 1344 Gln Leu Asp Asn Leu Ser Trp Leu Asn Thr Glu Gln Trp Ile Gly Gly 435 440 445 aag gtt cet caa gat cgc aca att gtc acc cat gtt cta cgc acc gtg 1392 Lys Val Pro Gln Asp Arg Thr Ile Val Thr His Val Leu Arg Thr Val 450 455 460 tcc ttg cca tta ttt gtg tgc atg tgc aca ata tcc agt tgt ggc ata 1440 Ser Leu Pro Leu Phe Val Cys Met Cys Thr Ile Ser Ser Cys Gly Ile 465 470 475 480 ttc gtt gcc ttc gcc ttg atc atc ttt aat ata tgg aat aag cat aga 1488 Phe Val Ala Phe Ala Leu Ile Ile Phe Asn Ile Trp Asn Lys His Arg 485 490 495 aga gta ata caa tcc tcg cat ccc gtt tgc aat acg atc atg tta ttt 1536 Arg Val Ile Gln Ser Ser His Pro Val Cys Asn Thr Ile Met Leu Phe 500 505 510 ggt gtc atc atc tgt cta ata tct gtc atc tta ctg ggc atc gac gga 1584 Gly Val Ile Ile Cys Leu Ile Ser Val Ile Leu Leu Gly Ile Asp Gly 515 520 525 cgc ttt gtc agc ccc gag gaa tat cca aag ata tgt caa gcg cgg gct 1632 Arg Phe Val Ser Pro Glu Glu Tyr Pro Lys Ile Cys Gln Ala Arg Ala 530 535 540 tgg tta cta tcc acc ggt ttt aca cta gca tac ggt gct atg ttc agc 1680 Trp Leu Leu Ser Thr Gly Phe Thr Leu Ala Tyr Gly Ala Met Phe Ser 545 550 555 560 aag gtc tgg cgt gtg cat cgt ttt aca aca aaa gca aaa act gac cca 1728 Lys Val Trp Arg Val His Arg Phe Thr Thr Lys Ala Lys Thr Asp Pro 565 570 575 aag aaa aaa gtg gaa cet tgg aag cta tac acc atg gtt tcg ggg cta 1776 Lys Lys Lys Val Glu Pro Trp Lys Leu Tyr Thr Met Val Ser Gly Leu 580 585 590 tta tca ata gat tta gtg ata tta ctc tca tgg cag atc ttt gat ccg 1824 Leu Ser Ile Asp Leu Val Ile Leu Leu Ser Trp Gln Ile Phe Asp Pro 595 600 605 ctg cag cgt tat ctc gaa aca ttc cca ctc gaa gat cca gta tct act 1872 Leu Gln Arg Tyr Leu Glu Thr Phe Pro Leu Glu Asp Pro Val Ser Thr 610 615 620 act gat gat att aaa ata cgt cca gag ctt gag cat tgt gaa agt 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tcg aaa tac aat ccc gat tca 2256 Ile Arg His Pro Lys Asp Lys Ala Glu Ser Lys Tyr Asn Pro Asp Ser 740 745 750 gcc ata tcg aaa gag gac gaa gaa cgc tat cag aaa ctt gtt ace gaa 2304 Ala Ile Ser Lys Glu Asp Glu Glu Arg Tyr Gln Lys Leu Val Thr Glu 755 760 765 aac gag caa ttg caa cga tta ata aca cag aag gag gaa aag att cga 2352 Asn Glu Gln Leu Gln Arg Leu Ile Thr Gln Lys Glu Glu Lys Ile Arg 770 775 780 gtc ctg cga cag cgt ctg gtg gag cgg ggc gac gcc aag ggc aca gaa 2400 Val Leu Arg Gln Arg Leu Val Glu Arg Gly Asp Ala Lys Gly Thr Glu 785 790 795 800 ctg aat ggt gca aca ggt gtc gcc tcc gcc gcc gtt gca aca act tcg 2448 Leu Asn Gly Ala Thr Gly Val Ala Ser Ala Ala Val Ala Thr Thr Ser 805 810 815 cag ccc gct tcc ctc atc aac tca tca gca cat gcc acg ccc gca gcc 2496 Gln Pro Ala Ser Leu Ile Asn Ser Ser Ala His Ala Thr Pro Ala Ala 820 825 830 aca ctc gca atc aca caa ggt gag tag 2523 Thr Leu Ala Ile Thr Gln Gly Glu 835 840 2 840 PRT Drosophila melanogaster 2 Met Arg Lys Asp Met Thr Ser Asp Gly.Ala Val Thr Phe Trp Ile Phe 1 5 10 15 Leu Leu Cys Leu Ile Ala Ser Pro His Leu Gln Gly Gly Val Ala Gly 20 25 30 Arg Pro Asp Glu Leu His Ile Gly Gly Ile Phe Pro Ile Ala Gly Lys 35 40 45 Gly Gly Trp Gln Gly Gly Gln Ala Cys Met Pro Ala Thr Arg Leu Ala 50 55 60 Leu Asp Asp Val Asn Lys Gln Pro Asn Leu Leu Pro Gly Phe Lys Leu 65 70 75 80 Ile Leu His Ser Asn Asp Ser Glu Cys Glu Pro Gly Leu Gly Ala Ser 85 90 95 Val Met Tyr Asn Leu Leu Tyr Asn Lys Pro Gln Lys Leu Met Leu Leu 100 105 110 Ala Gly Cys Ser Thr Val Cys Thr Thr Val Ala Glu Ala Ala Lys Met 115 120 125 Trp Asn Leu Ile Val Leu Cys Tyr Gly Ala Ser Ser Pro Ala Leu Ser 130 135 140 Asp Arg Lys Arg Phe Pro Thr Leu Phe Arg Thr His Pro Ser Ala Thr 145 150 155 160 Val His Asn Pro Thr Arg Ile Lys Leu Met Lys Lys Phe Gly Trp Ser 165 170 175 Arg Val Ala Ile Leu Gln Gln Ala Glu Glu Val Phe Ile Ser Thr Val 180 185 190 Glu Asp Leu Glu Asn Arg Cys Met Glu Ala Gly Val Glu Ile Val Thr 195 200 205 Arg Gln Ser Phe Leu Ser Asp Pro Thr Asp Ala Val Arg Asn Leu Arg 210 215 220 Arg Gln Asp Ala Arg Ile Ile Val Gly Leu Phe Tyr Val Val Ala Ala 225 230 235 240 Arg Arg Val Leu Cys Glu Met Tyr Lys Gln Gln Leu Tyr Gly Arg Ala 245 250 255 His Val Trp Phe Phe Ile Gly Trp Tyr.Glu.Asp Asn Trp Tyr Glu Val 260 265 270 Asn Leu Lys Ala Glu Gly Ile Thr Cys Thr Val Glu Gln Met Arg Ile 275 280 285 Ala Ala Glu Gly His Leu Thr Thr Glu Ala Leu Met Trp Asn Gln Asn 290 295 300 Asn Gln Thr Thr Ile Ser Gly Met Thr Ala Glu Glu Phe Arg His Arg 305 310 315 320 Leu Asn Gln Ala Leu Ile Glu Glu Gly Tyr Asp Ile Asn His Asp Arg 325 330 335 Tyr Pro Glu Gly Tyr Gln Glu Ala Pro Leu Ala Tyr Asp Ala Val Trp 340 345 350 Ser Val Ala Leu Ala Phe Asn Lys Thr Met Glu Arg Leu Thr Thr Gly 355 360 365 Lys Lys Ser Leu Arg Asp Phe Thr Tyr Thr Asp Lys Glu Ile Ala Asp 370 375 380 Glu Ile Tyr Ala Ala Met Asn Ser Thr Gln Phe Leu Gly Val Ser Gly 385 390 395 400 Val Val Ala Phe Ser Ser Gln Gly Asp Arg Ile Ala Leu Thr Gln Ile 405 410 415 Glu Gln Met Ile Asp Gly Lys Tyr Glu Lys Leu Gly Tyr Tyr Asp Thr 420 425 430 Gln Leu Asp Asn Leu Ser Trp Leu Asn Thr Glu Gln Trp Ile Gly Gly 435 440 445 Lys Val Pro Gln Asp Arg Thr Ile Val Thr His Val Leu Arg Thr Val 450 455 460 Ser Leu Pro Leu Phe Val Cys Met Cys Thr Ile Ser Ser Cys Gly Ile 465 470 475 480 Phe Val Ala Phe Ala Leu Ile Ile Phe Asn Ile Trp Asn Lys His Arg 485 490 495 Arg Val Ile Gln Ser Ser His Pro Val Cys Asn Thr Ile Met Leu Phe 500 505 510 Gly Val Ile Ile Cys Leu Ile Ser Val. Ile Leu Leu Gly Ile Asp Gly 515 520 525 Arg Phe Val Ser Pro Glu Glu Tyr Pro Lys Ile Cys Gln Ala Arg Ala 530 535 540 Trp Leu Leu Ser Thr Gly Phe Thr Leu Ala Tyr Gly Ala Met Phe Ser 545 550 555 560 Lys Val Trp Arg Val His Arg Phe Thr Thr Lys Ala Lys Thr Asp Pro 565 570 575 Lys Lys Lys Val Glu Pro Trp Lys Leu Tyr Thr Met Val Ser Gly Leu 580 585 590 Leu Ser Ile Asp Leu Val Ile Leu Leu Ser Trp Gln Ile Phe Asp Pro 595 600 605 Leu Gln Arg Tyr Leu Glu Thr Phe Pro Leu Glu Asp Pro Val Ser Thr 610 615 620 Thr Asp Asp Ile Lys Ile Arg Pro Glu Leu Glu His Cys Glu Ser Gln 625 630 635 640 Arg Asn Ser Met Trp Leu Gly Leu Val Tyr Gly Phe Lys Gly Leu Ile 645 650 655 Leu Val Phe Gly Leu Phe Leu Ala Tyr Glu Thr Arg Ser Ile Lys Val 660 665 670 Lys Gln Ile Asn Asp Ser Arg Tyr Val Gly Met Ser Ile Tyr Asn Val 675 680 685 Val Val Leu Cys Leu Ile Thr Ala Pro Val Gly Met Val Ile Ala Ser 690 695 700 Gln Gln Asp Ala Ser Phe Ala Phe Val Ala Leu Ala Val Ile Phe Cys 705 710 715 720 Cys Phe Leu Ser Met Leu Leu Ile Phe Val Pro Lys Val Ile Glu Val 725 730 735 Ile Arg His Pro Lys Asp Lys Ala Glu Ser Lys Tyr Asn Pro Asp Ser 740 745 750 Ala Ile Ser Lys Glu Asp Glu Glu Arg Tyr Gln Lys Leu Val Thr Glu 755 760 765 Asn Glu Gln Leu Gln Arg Leu Ile Thr.Gln Lys Glu Glu Lys Ile Arg 770 775 780 Val Leu Arg Gln Arg Leu Val Glu Arg Gly Asp Ala Lys Gly Thr Glu 785 790 795 800 Leu Asn Gly Ala Thr Gly Val Ala Ser Ala Ala Val Ala Thr Thr Ser 805 810 815 Gln Pro Ala Ser Leu Ile Asn Ser Ser Ala His Ala Thr Pro Ala Ala 820 825 830 Thr Leu Ala Ile Thr Gln Gly Glu 835 840 3 3663 DNA Drosophila melanogaster CDS (1)..(3660) 3 atg ttc cgg cca agt tgg ttt cca ttc gcc agc ctg ctg ttc ctg ctc 48 Met Phe Arg Pro Ser Trp Phe Pro Phe Ala Ser Leu Leu Phe Leu Leu 1 5 10 15 ctt tgg agc acc gcc tgt ggc agg aca gcc aag aga tcg gac gtc tac 96 Leu Trp Ser Thr Ala Cys Gly Arg Thr Ala Lys Arg Ser Asp Val Tyr 20 25 30 ata gcg gga ttc ttc ccg tac ggg gat ggc gtg gaa aac tcc tac acc 144 Ile Ala Gly Phe Phe Pro Tyr Gly Asp Gly Val Glu Asn Ser 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Ala Pro 145 150 155 160 cga ctg gcc ttg ctg aag gag ttc aat tgg acc aga gtg ggc act gtc 528 Arg Leu Ala Leu Leu Lys Glu Phe Asn Trp Thr Arg Val Gly Thr Val 165 170 175 tac cag aat gag cca cgc tat tcg ctg ccc cac aat cac atg gtg gct 576 Tyr Gln Asn Glu Pro Arg Tyr Ser Leu Pro His Asn His Met Val Ala 180 185 190 gac ctg gat gcc atg gag gtc gag gtg gtg gaa acg cag agc ttc gtc 624 Asp Leu Asp Ala Met Glu Val Glu Val Val Glu Thr Gln Ser Phe Val 195 200 205 aac gat gtg gct gaa tca ttg aag aaa ctg cgc gag aag gac gtg agg 672 Asn Asp Val Ala Glu Ser Leu Lys Lys Leu Arg Glu Lys Asp Val Arg 210 215 220 atc att ctg ggc aac ttt aac gag cac ttt gca cgc aag gca ttc tgt 720 Ile Ile Leu Gly Asn Phe Asn Glu His Phe Ala Arg Lys Ala Phe Cys 225 230 235 240 gag gct tat aaa ttg gat atg tat ggc aga gcc tat caa tgg ctg atc 768 Glu Ala Tyr Lys Leu Asp Met Tyr Gly Arg Ala Tyr Gln Trp Leu Ile 245 250 255 atg gct acc tat tcc acg gat tgg tgg aat gtc acg cag gac agc gag 816 Met Ala Thr Tyr Ser Thr Asp Trp Trp Asn 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Gly Val Thr Gly Pro Val Arg Phe Tyr Asn 370 375 380 aac gag cgc aag gcc aac atc ctg atc aat cag ttt cag ctg gga caa 1200 Asn Glu Arg Lys Ala Asn Ile Leu Ile Asn Gln Phe Gln Leu Gly Gln 385 390 395 400 atg gaa aag atc ggg gaa tac cac tca cag aag tca cac ttg gat tta 1248 Met Glu Lys Ile Gly Glu Tyr His Ser Gln Lys Ser His Leu Asp Leu 405 410 415 agc ttg gga aaa cca gtc aaa tgg gtg ggg aaa act cet ccc aag gat 1296 Ser Leu Gly Lys Pro Val Lys Trp Val Gly Lys Thr Pro Pro Lys Asp 420 425 430 cgc act ttg atc tac atc gag cac agt cag gtc aat cca acc ata tat 1344 Arg Thr Leu Ile Tyr Ile Glu His Ser Gln Val Asn Pro Thr Ile Tyr 435 440 445 att gta tcg gct agt gct tcg gtc att gga gtg att att gcc aca gtt 1392 Ile Val Ser Ala Ser Ala Ser Val Ile Gly Val Ile Ile Ala Thr Val 450 455 460 ttt ctg gcc ttt aac att aag tat cgc aat caa aga tac atc aag atg 1440 Phe Leu Ala Phe Asn Ile Lys Tyr Arg Asn Gln Arg Tyr Ile Lys Met - 465 470 475 480 tcc agt ccc cat ttg aac aat ctg atc att gtg ggc tgt atg att ace 1488 Ser Ser Pro His Leu Asn Asn Leu Ile Ile Val Gly Cys Met Ile Thr 485 490 495 tat ttg age atc att ttc ctg ggt ctc gat ace aca tta agt agt gtg 1536 Tyr Leu Ser Ile Ile Phe Leu Gly Leu Asp Thr Thr Leu Ser Ser Val 500 505 510 gca gct ttt ccc tat atc tgc aca gct cga gcc tgg atc ttg atg gct 1584 Ala Ala Phe Pro Tyr Ile Cys Thr Ala Arg Ala Trp Ile Leu Met Ala 515 520 525 gga ttc agt ctc agt ttt gga gcc atg ttc tcg aag acg tgg cgg gtg 1632 Gly Phe Ser Leu Ser Phe Gly Ala Met Phe Ser Lys Thr Trp Arg Val 530 535 540 cat tcg ata ttc ace gat ctg aag ctc aat aag aag gtg atc aag gac 1680 His Ser Ile Phe Thr Asp Leu Lys Leu Asn Lys Lys Val Ile Lys Asp 545 550 555 560 tat caa ttg ttt atg gtt gtg ggc gtg ctt ttg gcc att gat ata gcc 1728 Tyr Gln Leu Phe Met Val Val Gly Val Leu Leu Ala Ile Asp Ile Ala 565 570 575 att ata ace ace tgg cag att gcc gat ccc ttt tac cgc gaa act aaa 1776 Ile Ile Thr Thr Trp Gln Ile Ala Asp Pro Phe Tyr Arg Glu Thr Lys 580 585 590 cag ttg gaa ccc ttg cat cac gag aat att gat gat gtc ttg gtg atc 1824 Gln Leu Glu Pro Leu His His Glu Asn Ile Asp Asp Val Leu Val Ile 595 600 605 ccc gaa aac gag tac tgc cag tct gag cac atg ace ata ttc gtt age 1872 Pro Glu Asn Glu Tyr Cys Gln Ser Glu His Met Thr Ile Phe Val Ser 610 615 620 att att tat gcc tac aag gga ctg ttg ttg gtt ttt ggc gcc ttt ttg 1920 Ile Ile Tyr Ala Tyr Lys Gly Leu Leu Leu Val Phe Gly Ala Phe Leu 625 630 635 640 gcc tgg gaa act cga cat gtt tct ata ccg gct ctg aac gat tcc aag 1968 Ala Trp Glu Thr Arg His Val Ser Ile Pro Ala Leu Asn Asp Ser Lys 645 650 655 cat att ggt ttc tcc gtt tat aac gtg ttc atc act tgt ctg gcc gga 2016 His Ile Gly Phe Ser Val Tyr Asn Val Phe. 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Ala Lys Gln Arg Gln Ser Pro 1045 1050 1055 cgg aac tac gcc agt ccg cag cgc tgt gcg gaa cat cat ggc ggc cac 3216 Arg Asn Tyr Ala Ser Pro Gln Arg Cys Ala Glu His His Gly Gly His 1060 1065 1070 ggg atg acc tat gac ccg aac acc acc tcg ccc atc cag cgg tcc gtc 3264 Gly Met Thr Tyr Asp Pro Asn Thr Thr Ser Pro Ile Gln Arg Ser Val 1075 1080 1085 tcc gag aag aac cgc aac aaa cat cgg cca aaa ccg caa aag ggc ace 3312 Ser Glu Lys Asn Arg Asn Lys His Arg Pro Lys Pro Gln Lys Gly Thr 1090 1095 1100 gtt tgc cag agc gag acg gac agc gaa cgg gaa cga gat ccg ccg ccc 3360 Val Cys Gln Ser Glu Thr Asp Ser Glu Arg Glu Arg Asp Pro Pro Pro 1105 1110 1115 1120 aac agt cag ccg tgc gtc cag ccg cgt aag gtc agc cgg agc tct aac 3408 Asn Ser Gln Pro Cys Val Gln Pro Arg Lys Val Ser Arg Ser Ser Asn 1125 1130 1135 atc cag cac gcc gcc cac cac cac agt tcg ccc aat gtg gcg ccc gat 3456 Ile Gln His Ala Ala His His His Ser Ser Pro Asn Val Ala Pro Asp 1140 1145 1150 aag cag cgg agc agg cag cgc ggc aag cag gat agc agc atc tac ggc 3504 Lys Gln Arg Ser Arg Gln Arg Gly Lys Gln Asp Ser Ser Ile Tyr Gly 1155 1160 1165 gcc agc agc gag acg gaa ctg ctc gag ggc gag acg gca att ttg ccc 3552 Ala Ser Ser Glu Thr Glu Leu Leu Glu Gly Glu Thr Ala Ile Leu Pro 1170 1175 1180 atc ttc cgg aaa ctc ctc acc gag aag agt ccc aac tat cgg ggc cgc 3600 Ile Phe Arg Lys Leu Leu Thr Glu Lys Ser Pro Asn Tyr Arg Gly Arg 1185 1190 1195 1200 agt gcc gtg ggc cag agc tgt ccg aat ata tcc atc aaa tgc gat atc 3648 Ser Ala Val Gly Gln Ser Cys Pro Asn Ile Ser Ile Lys Cys Asp Ile 1205 1210 1215 gtc gag tac ttg tag 3663 Val Glu Tyr Leu 1220 4 1220 PRT Drosophila melanogaster 4 Met Phe Arg Pro Ser Trp Phe Pro Phe Ala Ser Leu Leu Phe Leu Leu 1 5 10 15 Leu Trp Ser Thr Ala Cys Gly Arg Thr Ala Lys Arg Ser Asp Val Tyr 20 25 30 Ile Ala Gly Phe Phe Pro Tyr Gly Asp Gly Val Glu Asn Ser Tyr Thr 35 40 45 Gly Arg Gly Val Met Pro Ser Val Lys Leu Ala Leu Gly His Val Asn 50 55 60 Glu His Gly Lys Ile Leu Ala Asn Tyr Arg Leu His Met Trp Trp Asn 65 70 75 80 Asp Thr Gln Cys Asn Ala Ala Val Gly Val Lys Ser Phe Phe Asp Met 85 90 95 Met His Ser Gly Pro Asn Lys Val Met Leu Phe Gly Ala Ala Cys Thr 100 105 110 His Val Thr Asp Pro Ile Ala Lys Ala Ser Lys His Trp His Leu Thr 115 120 125 Gln Leu Ser Tyr Ala Asp Thr His Pro Met Phe Thr Lys Asp Ala Phe 130 135 140 Pro Asn Phe Phe Arg Val Val Pro Ser Glu Asn Ala Phe Asn Ala Pro 145 150 155 160 Arg Leu Ala Leu Leu Lys Glu Phe Asn Trp Thr Arg Val Gly Thr Val 165 170 175 Tyr Gln Asn Glu Pro Arg Tyr Ser Leu Pro His Asn His Met Val Ala 180 185 190 Asp Leu Asp Ala Met Glu Val Glu Val Val Glu Thr Gln Ser Phe Val 195 200 205 Asn Asp Val Ala Glu Ser Leu Lys Lys Leu Arg Glu Lys Asp Val Arg 210 215 220 Ile Ile Leu Gly Asn Phe Asn Glu His-Phe Ala Arg Lys Ala Phe Cys 225 230 235 240 Glu Ala Tyr Lys Leu Asp Met Tyr Gly Arg Ala Tyr Gln Trp Leu Ile 245 250 255 Met Ala Thr Tyr Ser Thr Asp Trp Trp Asn Val Thr Gln Asp Ser Glu 260 265 270 Cys Ser Val Glu Glu Ile Ala Thr Ala Leu Glu Gly Ala Ile Leu Val 275 280 285 Asp Leu Leu Pro Leu Ser Thr Ser Gly Asp Ile Thr Val Ala Gly Ile 290 295 300 Thr Ala Asp Glu Tyr Leu Val Glu Tyr Asp Arg Leu Arg Gly Thr Glu 305 310 315 320 Tyr Ser Arg Phe His Gly Tyr Thr Tyr Asp Gly Ile Trp Ala Ala Ala 325 330 335 Leu Ala Ile Gln Tyr Val Ala Glu Lys Arg Glu Asp Leu Leu Thr His 340 345 350 Phe Asp Tyr Arg Val Lys Asp Trp Glu Ser Val Phe Leu Glu Ala Leu 355 360 365 Arg Asn Thr Ser Phe Glu Gly Val Thr Gly Pro Val Arg Phe Tyr Asn 370 375 380 Asn Glu Arg Lys Ala Asn Ile Leu Ile Asn Gln Phe Gln Leu Gly Gln 385 390 395 400 Met Glu Lys Ile Gly Glu Tyr His Ser Gln Lys Ser His Leu Asp Leu 405 410 415 Ser Leu Gly Lys Pro Val Lys Trp Val Gly Lys Thr Pro Pro Lys Asp 420 425 430 Arg Thr Leu Ile Tyr Ile Glu His Ser Gln Val Asn Pro Thr Ile Tyr 435 440 445 Ile Val Ser Ala Ser Ala Ser Val Ile Gly Val Ile Ile Ala Thr Val 450 455 460 Phe Leu Ala Phe Asn Ile Lys Tyr Arg Asn Gln Arg Tyr Ile Lys Met 465 470 475 480 Ser Ser Pro His Leu Asn Asn Leu Ile. 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act ccg 240 Ser Pro Pro Gly Glu Ser Ala Ser Thr Val Thr Ala Gly Gly Thr Pro 65 70 75 80 att cca ccg cgc tcc gat tgg aag tac aaa cgg acg aaa gtc aaa cgc 288 Ile Pro Pro Arg Ser Asp Trp Lys Tyr Lys Arg Thr Lys Val Lys Arg 85 90 95 cgg cag cag cgc ctc aat tcg cac agc aat ctg ccc gga agc acc aat 336 Arg Gln Gln Arg Leu Asn Ser His Ser Asn Leu Pro Gly Ser Thr Asn 100 105 110 gcc tcc cac gct cac cac ctc ctc aat ctg ccc ccc agg cag cga tac 384 Ala Ser His Ala His His Leu Leu Asn Leu Pro Pro Arg Gln Arg Tyr 115 120 125 ttg aag gtc aac cag gtg ttc gaa agc gaa cgc cgc atg tcg ccg gcc 432 Leu Lys Val Asn Gln Val Phe Glu Ser Glu Arg Arg Met Ser Pro Ala 130 135 140 gaa atg cag cgc aat cat ggc aaa atc gtg ctg ctc gga ctc ttt gag 480 Glu Met Gln Arg Asn His Gly Lys Ile Val Leu Leu Gly Leu Phe Glu 145 150 155 160 ctg tcc aca tcg cgg gga cca cgt ccg gat ggt ctg agc gaa ttg gga 528 Leu Ser Thr Ser Arg Gly Pro Arg Pro Asp Gly Leu Ser Glu Leu Gly 165 170 175 gct gcc acc atg gcc gtg gaa cac atc aac cgc aag cgc ctg ctg ccg 576 - Ala Ala Thr Met Ala Val Glu His Ile Asn Arg Lys Arg Leu Leu Pro 180 185 190 ggc tac acc ctc gag ctc gtg acc aac gat act cag tgt gat cet gga 624 Gly Tyr Thr Leu Glu Leu Val Thr Asn Asp Thr Gln Cys Asp Pro Gly 195 200 205 gtg ggc gtg gat cgc ttc ttc cac gcc atc tac aca cag ccc tcg acg 672 Val Gly Val Asp Arg Phe Phe His Ala Ile Tyr Thr Gln Pro Ser Thr 210 215 220 agg atg gtg atg ctg ctg gga tcg gcc tgc tcg gag gtc acc gag agc 720 Arg Met Val Met Leu Leu Gly Ser Ala Cys Ser Glu Val Thr Glu Ser 225 230 235 240 ctg gcg aag gtg gtg ccc tac tgg aac atc gtg cag gta tcc ttc ggt 768 Leu Ala Lys Val Val Pro Tyr Trp Asn Ile Val Gln Val Ser Phe Gly 245 250 255 tcc aca tcg ccg gcg ttg agc gac agg cgg gag ttc ccc tac ttc tac 816 Ser Thr Ser Pro Ala Leu Ser Asp Arg Arg Glu Phe Pro Tyr Phe Tyr 260 265 270 agg aca gtg gcc ccg gac tcc tca cac aat ccg gcg cgc atc gct ttc 864 Arg Thr Val Ala Pro Asp Ser Ser His Asn Pro Ala Arg Ile Ala Phe 275 280 285 att cgg aag ttt ggc tgg ggc acg gtg acc act ttc tcg cag aac gag 912 Ile Arg Lys Phe Gly Trp Gly Thr Val Thr Thr Phe Ser Gln Asn Glu 290 295 300 gag gtt cac tcg ctg gcg gtg aac aac ctg gtc acc gaa ctg gag gcg 960 Glu Val His Ser Leu Ala Val Asn Asn Leu Val Thr Glu Leu Glu Ala 305 310 315 320 gcc aac ata tcc tgt gcc gcc acc atc acc ttt gcg gcc acc gac ttc 1008 -Ala Asn Ile Ser Cys Ala Ala Thr Ile Thr Phe Ala Ala Thr Asp Phe 325 330 335 aag gag cag ctg ctg cta ctt agg gag acg gac acg cgc atc atc atc 1056 Lys Glu Gln Leu Leu Leu Leu Arg Glu Thr Asp Thr Arg Ile Ile Ile 340 345 350 ggc agc ttc tcg cag gag ctg gcc ccc cag atc ctg tgc gag gcc tac 1104 Gly Ser Phe Ser Gln Glu Leu Ala Pro Gln Ile Leu Cys Glu Ala Tyr 355 360 365 agg ctt cga atg ttc ggg gcg gac tac gcc tgg atc ctc cac gag agc 1152 Arg Leu Arg Met Phe Gly Ala Asp Tyr Ala Trp Ile Leu His Glu Ser 370 375 380 atg ggg gct ccg tgg tgg ccg gac cag cgc acc gcc tgc tct aac cac 1200 Met Gly Ala Pro Trp Trp Pro Asp Gln Arg Thr Ala Cys Ser Asn His 385 390 395 400 gaa ctg cag ctg gcc gtc gag aac ctc atc gtg gtc tca acg cac aac 1248 Glu Leu Gln Leu Ala Val Glu Asn Leu Ile Val Val Ser Thr His Asn 405 410 415 agc atc gtt gga aat aac gtc agc tat agt gga ctg aac aat cac atg 1296 Ser Ile Val Gly Asn Asn Val Ser Tyr Ser Gly Leu Asn Asn His Met 420 425 430 ttc aac tcc cag ctg cgc aag caa tcc gcc cag ttc cac ggc cag gat 1344 Phe Asn Ser Gln Leu Arg Lys Gln Ser Ala Gln Phe His Gly Gln Asp 435 440 445 gga ttt ggc tcc ggt tat ggt ccc agg atc agt atc gct gca acg caa 1392 Gly Phe Gly Ser Gly Tyr Gly Pro Arg Ile Ser Ile Ala Ala Thr Gln 450 455 460 tct gac tct cgt cgg cgg agg aga agg ggc gtg gta ggc acc agc gga 1440 Ser Asp Ser Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly Val Val Gly Thr Ser Gly 465 470 475 480 ggg cac ctc ttt ccg gag gcg atc tcg cag tac gcg ccg caa acc tac 1488 Gly His Leu Phe Pro Glu Ala Ile Ser Gln Tyr Ala Pro Gln Thr Tyr 485 490 495 gac gcc gtg tgg gcc atc gcc ctg gcc ttg aga gcc gct gag gag cac 1536 Asp Ala Val Trp Ala Ile Ala Leu Ala Leu Arg Ala Ala Glu Glu His 500 505 510 tgg cgg cgg aac gag gag cag tcg aag ctg gac gga ttc gat tac acc 1584 Trp Arg Arg Asn Glu Glu Gln Ser Lys Leu Asp Gly Phe Asp Tyr Thr 515 520 525 cgc agc gac atg gcc tgg gag ttc ctg cag caa atg ggc aag ctc cac 1632 Arg Ser Asp Met Ala Trp Glu Phe Leu Gln Gln Met Gly Lys Leu His 530 535 540 ttc ctg gga gtg tcg ggc ccc gtt tcc ttc agc ggc cca gat cgc gtt 1680 Phe Leu Gly Val Ser Gly Pro Val Ser Phe Ser Gly Pro Asp Arg Val 545 550 555 560 ggc ace act gcc ttc tat caa atc cag cgc ggt ttg ctg gaa ccg gtg 1728 Gly Thr Thr Ala Phe Tyr Gln Ile Gln Arg Gly Leu Leu Glu Pro Val 565 570 575 gcc ctc tac tat ccg gcc acg gat gcc ctg gac ttc cgg tgt ccc cgc 1776 Ala Leu Tyr Tyr Pro Ala Thr Asp Ala Leu Asp Phe Arg Cys Pro Arg 580 585 590 tgc cgg ccg gtg aag tgg cac age ggg cag gta ccc atc gcc aag cgg 1824 Cys Arg Pro Val Lys Trp His Ser Gly Gln Val Pro Ile Ala Lys Arg 595 600 605 gtg ttc aag ctg cgg gtg gcg ace atc gct cca ctg gcc ttc tac acc 1872 Val Phe Lys Leu Arg Val Ala Thr Ile Ala Pro Leu Ala Phe Tyr Thr 610 615 620 atc gcc ace ctc tcc agc gtg gga atc gct ctg gcc atc ace ttc ctg 1920 Ile Ala Thr Leu Ser Ser Val Gly Ile Ala Leu Ala Ile Thr Phe Leu 625 630 635 640 gcg ttc aat ctg cac ttt cgg aag ctg aag gca att aaa ctt tcc age 1968 Ala Phe Asn Leu His Phe Arg Lys Leu Lys Ala Ile Lys Leu Ser Ser 645 650 655 ccg aag ctg age aac atc ace gca gtg ggc tgc atc ttt gtg tac gcc 2016 Pro Lys Leu Ser Asn Ile Thr Ala Val Gly Cys Ile Phe Val Tyr Ala 660 665 670 ace gtc atc ctt ttg ggc ttg gac cac tcg acg ctg ccc tcg gcg gag 2064 Thr Val Ile Leu Leu Gly Leu Asp His Ser Thr Leu Pro Ser Ala Glu 675 680 685 gac tct ttc gca acg gtc tgc acg gcc cgc gtc tat ctg ctc tcc gcc 2112 Asp Ser Phe Ala Thr Val Cys Thr Ala Arg Val Tyr Leu Leu Ser Ala 690 695 700 gga ttc tcg ttg gcc ttt gga tcg atg ttt gcc aag acc tac aga gtg 2160 Gly Phe Ser Leu Ala Phe Gly Ser Met Phe Ala Lys Thr Tyr Arg Val 705 710 715 720 cat cgg ata ttc act cgt acc ggc agc gtt ttc aag gac aag atg ctg 2208 His Arg Ile Phe Thr Arg Thr Gly Ser Val Phe Lys Asp Lys Met Leu 725 730 735 cag gac att caa ctg atc ttg ctc gtc ggc gga ttg ctt ctg gtg gat 2256 Gln Asp Ile Gln Leu Ile Leu Leu Val Gly Gly Leu Leu Leu Val Asp 740 745 750 gcg ctg ctc gta acc ctt tgg gtg gtc acc gat cca atg gag cgc cat 2304 Ala Leu Leu Val Thr Leu Trp Val Val Thr Asp Pro Met Glu Arg His 755 760 765 ctt cac aac ctg acg ctc gag atc agt gcg act gat aga agt gtc gtt 2352 Leu His Asn Leu Thr Leu Glu Ile Ser Ala Thr Asp Arg Ser Val Val 770 775 780 tac cag cet cag gtt gaa gtt tgc cgt tcg cag cac acg caa acg tgg 2400 Tyr Gln Pro Gln Val Glu Val Cys Arg Ser Gln His Thr Gln Thr Trp 785 790 795 800 ttg agt gtc ctg tac gcc tac aaa ggc ctt ctt ctt gtg gtg ggt gtc 2448 Leu Ser Val Leu Tyr Ala Tyr Lys Gly Leu Leu Leu Val Val Gly Val 805 810 815 tat atg gcc tgg gag acg cgc cac gta aaa ata cet gct ctc aat gac 2496 Tyr Met Ala Trp Glu Thr Arg His Val Lys Ile Pro Ala Leu Asn Asp 820 825 830 tcg cag tac atc gga gtg tct gta tac agt gtg gtc atc acc agc gcc 2544 Ser Gln Tyr Ile Gly Val Ser Val Tyr Ser Val Val Ile Thr Ser Ala 835 840 845 atc gtc gtg gtg ctg gcc aac ttg att tcg gag cga gtc acc ctg gcc 2592 Ile Val Val Val Leu Ala Asn Leu Ile Ser Glu Arg Val Thr Leu Ala 850 855 860 ttc atc aca atc aca gct ctg att tta acc agc acc act gca acc ctt 2640 Phe Ile Thr Ile Thr Ala Leu Ile Leu Thr Ser Thr Thr Ala Thr Leu 865 870 875 880 tgt ctg ctt ttc atc cca aaa ctc cat gat att tgg gca aga aac gat 2688 Cys Leu Leu Phe Ile Pro Lys Leu His Asp Ile Trp Ala Arg Asn Asp 885 890 895 att atc gat ccg gtt atc cac agt atg ggc ctt aag atg gag tgc aac 2736 Ile Ile Asp Pro Val Ile His Ser Met Gly Leu Lys Met Glu Cys Asn 900 905 910 aca cgc cga ttc gtg gtc gat gat cgc cga gaa ctg cag tat cga gtg 2784 Thr Arg Arg Phe Val Val Asp Asp Arg Arg Glu Leu Gln Tyr Arg Val 915 920 925 gag gtg caa aac agg gtc tat aag aag gaa atc cag gct ctg gac gcc 2832 Glu Val Gln Asn Arg Val Tyr Lys Lys Glu Ile Gln Ala Leu Asp Ala 930 935 940 gag att cga aag ctg gag agg cta ctc gag tcg gga cta ace ace ace 2880 Glu Ile Arg Lys Leu Glu Arg Leu Leu Glu Ser Gly Leu Thr Thr Thr 945 950 955 960 tcc acc aca act tcg tcg tcc aca tca ctc tta act ggg gga ggt cat 2928 Ser Thr Thr Thr Ser Ser Ser Thr Ser Leu Leu Thr Gly Gly Gly His 965 970 975 cta aag cca gaa ctg acg gta ace agt ggc atc tcg cag act ccg gct 2976 Leu Lys Pro Glu Leu Thr Val Thr Ser Gly Ile Ser Gln Thr Pro Ala 980 985 990 gca agt aaa aac aga act cca agt atc tcg gga ata ctg ccc aat ctc 3024 Ala Ser Lys Asn Arg Thr Pro Ser Ile Ser Gly Ile Leu Pro Asn Leu 995 1000 1005 ctg ctt tcc gtg ctg cet cet gtg att cca cgg gcc agt tgg ccg tca 3072 Leu Leu Ser Val Leu Pro Pro Val Ile Pro Arg Ala Ser Trp Pro Ser 1010 1015 1020 gca gag tac atg cag atc ccg atg agg cgt tct gtt ace ttt gcc tcc 3120 Ala Glu Tyr Met Gln Ile Pro Met Arg Arg Ser Val Thr Phe Ala Ser 1025 1030 1035 1040 cag ccc caa tta gag gag gcc tgc ctg cet gca cag gac ttg att aac 3168 Gln Pro Gln Leu Glu Glu Ala Cys Leu Pro Ala Gln Asp Leu Ile Asn 1045 1050 1055 ctc cgt tta 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Thr Lys Asp 1155 1160 1165 ccg aat ttc ctg cet atc ccc act att tct ggc ggt gaa cag ggg gac 3552 Pro Asn Phe Leu Pro Ile Pro Thr Ile Ser Gly Gly Glu Gln Gly Asp 1170 1175 1180 caa acg ttg ggt gga aag tat gtg aaa ctg ctg gag ace aag gtg aac 3600 Gln Thr Leu Gly Gly Lys Tyr Val Lys Leu Leu Glu Thr Lys Val Asn 1185 1190 1195 1200 ttc caa ttg ccc agc aac cgg aga cet tcg gtg gtg cag cag cca ccc 3648 Phe Gln Leu Pro Ser Asn Arg Arg Pro Ser Val Val Gln Gln Pro Pro 1205 1210 1215 agt tta agg gaa agg gta agg ggt tcg cca cgc ttt cca cac cgc atc 3696 Ser Leu Arg Glu Arg Val Arg Gly Ser Pro Arg Phe Pro His Arg Ile 1220 1225 1230 ctg ccg ccc act tgc agt ctc age gcc ctg gcc gaa tcc gag gac cgt 3744 Leu Pro Pro Thr Cys Ser Leu Ser Ala Leu Ala Glu Ser Glu Asp Arg 1235 1240 1245 ccc gga gat age ace tct atc ttg ggc agc tgc aag tcc ata cet cgc 3792 Pro Gly Asp Ser Thr Ser Ile Leu Gly Ser Cys Lys Ser Ile Pro Arg 1250 1255 1260 att tcg ctg cag cag gtc ace agt gga ggc ace tgg aaa tcg atg gaa 3840 Ile Ser Leu Gln Gln Val Thr Ser Gly Gly Thr Trp Lys Ser Met Glu 1265 1270 1275 1280 aca gtg ggc aag tcg agg ctt tcc ctc ggc gat tcc cag gaa gag gag 3888 Thr Val Gly Lys Ser Arg Leu Ser Leu Gly Asp Ser Gln Glu Glu Glu 1285 1290 1295 cag cag gcg cet gcg aat ggc ace gaa taa 3918 Gln Gln Ala Pro Ala Asn Gly Thr Glu 1300 1305 6 1305 PRT Drosophila melanogaster 6 Met Arg Ile Ile Gln Pro Val Gln Gly Thr Arg Tyr Gly Pro Trp Pro 1 5 10 15 Ala Val Gly Leu Arg Leu Val Leu Ala Leu Ala Trp Ala Thr Ser Ala 20 25 30 Ala Ala Ala Met Glu Ser Ser Ala Glu Leu Gln Ala Leu Gly His Glu 35 40 45 Ala Ile Arg Pro Gly Ala Ala Ser Ile Ser Thr Ser Ser Pro Ser Ser 50 55 60 Ser Pro Pro Gly Glu Ser Ala Ser Thr Val Thr Ala Gly Gly Thr Pro 65 70 75 80 Ile Pro Pro Arg Ser Asp Trp Lys Tyr Lys Arg Thr Lys Val Lys Arg 85 90 95 Arg Gln Gln Arg Leu Asn Ser His Ser Asn Leu Pro Gly Ser Thr Asn 100 105 110 Ala Ser His Ala His His Leu Leu Asn Leu Pro Pro Arg Gln Arg Tyr 115 120 125 Leu Lys Val Asn Gln Val Phe Glu Ser Glu Arg Arg Met Ser Pro Ala 130 135 140 Glu Met Gln Arg Asn His Gly Lys Ile Val Leu Leu Gly Leu Phe Glu 145 150 155 160 Leu Ser Thr Ser Arg Gly Pro Arg Pro Asp Gly Leu Ser Glu Leu Gly 165 170 175 Ala Ala Thr Met Ala Val Glu His Ile Asn Arg Lys Arg Leu Leu Pro 180 185 190 Gly Tyr Thr Leu Glu Leu Val Thr Asn Asp Thr Gln Cys Asp Pro Gly 195 200 205 Val Gly Val Asp Arg Phe Phe His Ala Ile Tyr Thr Gln Pro Ser Thr 210 215 220 Arg Met Val Met Leu Leu Gly Ser Ala Cys Ser Glu Val Thr Glu Ser 225 230 235 240 Leu Ala Lys Val Val Pro Tyr Trp Asn Ile Val Gln Val Ser Phe Gly 245 250 255 Ser Thr Ser Pro Ala Leu Ser Asp Arg Arg Glu Phe Pro Tyr Phe Tyr 260 265 270 Arg Thr Val Ala Pro Asp Ser Ser His Asn Pro Ala Arg Ile Ala Phe 275 280 285 Ile Arg Lys Phe Gly Trp Gly Thr Val Thr Thr Phe Ser Gln Asn Glu 290 295 300 Glu Val His Ser Leu Ala Val Asn Asn Leu Val Thr Glu Leu Glu Ala 305 310 315 320 Ala Asn Ile Ser Cys Ala Ala Thr Ile Thr Phe Ala Ala Thr Asp Phe 325 330 335 Lys Glu Gln Leu Leu Leu Leu Arg Glu Thr Asp Thr Arg Ile Ile Ile 340 345 350 Gly Ser Phe Ser Gln Glu Leu Ala Pro Gln Ile Leu Cys Glu Ala Tyr 355 360 365 Arg Leu Arg Met Phe Gly Ala Asp Tyr Ala Trp Ile Leu His Glu Ser 370 375 380 Met Gly Ala Pro Trp Trp Pro Asp Gln Arg Thr Ala Cys Ser Asn His 385 390 395 400 Glu Leu Gln Leu Ala Val Glu Asn Leu Ile Val Val Ser Thr His Asn 405 410 415 Ser Ile Val Gly Asn Asn Val Ser Tyr Ser Gly Leu Asn Asn His Met 420 425 430 Phe Asn Ser Gln Leu Arg Lys Gln Ser Ala Gln Phe His Gly Gln Asp 435 440 445 Gly Phe Gly Ser Gly Tyr Gly Pro Arg Ile Ser Ile Ala Ala Thr Gln 450 455 460 Ser Asp Ser Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly Val Val Gly Thr Ser Gly 465 470 475 480 Gly His Leu Phe Pro Glu Ala Ile Ser Gln Tyr Ala Pro Gln Thr Tyr 485 490 495 Asp Ala Val Trp Ala Ile Ala Leu Ala Leu Arg Ala Ala Glu Glu His 500 505 510 Trp Arg Arg Asn Glu Glu Gln Ser Lys Leu Asp Gly Phe Asp Tyr Thr 515 520 525 Arg Ser Asp Met Ala Trp Glu Phe Leu Gln Gln Met Gly Lys Leu His 530 535 540 Phe Leu Gly Val Ser Gly Pro Val Ser Phe Ser Gly Pro Asp Arg Val 545 550 555 560 Gly Thr Thr Ala Phe Tyr Gln Ile Gln Arg Gly Leu Leu Glu Pro Val 565 570 575 Ala Leu Tyr Tyr Pro Ala Thr Asp Ala Leu Asp Phe Arg Cys Pro Arg 580 585 590 Cys Arg Pro Val Lys Trp His Ser Gly Gln Val Pro Ile Ala Lys Arg 595 600 605 Val Phe Lys Leu Arg Val Ala Thr Ile Ala Pro Leu Ala Phe Tyr Thr 610 615 620 Ile Ala Thr Leu Ser Ser Val Gly Ile Ala Leu Ala Ile Thr Phe Leu 625 630 635 640 Ala Phe Asn Leu His Phe Arg Lys Leu Lys Ala Ile Lys Leu Ser Ser 645 650 655 Pro Lys Leu Ser Asn Ile Thr Ala Val Gly Cys Ile Phe Val Tyr Ala 660 665 670 Thr Val Ile Leu Leu Gly Leu Asp His Ser Thr Leu Pro Ser Ala Glu 675 680 685 Asp Ser Phe Ala Thr Val Cys Thr Ala Arg Val Tyr Leu Leu Ser Ala 690 695 700 Gly Phe Ser Leu Ala Phe Gly Ser Met Phe Ala Lys Thr Tyr Arg Val 705 710 715 720 His Arg Ile Phe Thr Arg Thr Gly Ser Val Phe Lys Asp Lys Met Leu 725.730 735 Gln Asp Ile Gln Leu Ile Leu Leu Val Gly Gly Leu Leu Leu Val Asp 740 745 750 Ala Leu Leu Val Thr Leu Trp Val Val Thr Asp Pro Met Glu Arg His 755 760 765 Leu His Asn Leu Thr Leu Glu Ile Ser Ala Thr Asp Arg Ser Val Val 770 775 780 Tyr Gln Pro Gln Val Glu Val Cys Arg Ser Gln His Thr Gln Thr Trp 785 790 795 800 Leu Ser Val Leu Tyr Ala Tyr Lys Gly Leu Leu Leu Val Val Gly Val 805 810 815 Tyr Met Ala Trp Glu Thr Arg His Val Lys Ile Pro Ala Leu Asn Asp 820 825 830 Ser Gln Tyr Ile Gly Val Ser Val Tyr Ser Val Val Ile Thr Ser Ala 835 840- 845 Ile Val Val Val Leu Ala Asn Leu Ile Ser Glu Arg Val Thr Leu Ala 850 855 860 Phe Ile Thr Ile Thr Ala Leu Ile Leu Thr Ser Thr Thr Ala Thr Leu 865 870 875 880 Cys Leu Leu Phe Ile Pro Lys Leu His Asp Ile Trp Ala Arg Asn Asp 885 890 895 Ile Ile Asp Pro Val Ile His Ser Met Gly Leu Lys Met Glu Cys Asn 900 905 910 Thr Arg Arg Phe Val Val Asp Asp Arg Arg Glu Leu Gln Tyr Arg Val 915 920 925 Glu Val Gln Asn Arg Val Tyr Lys Lys Glu Ile Gln Ala Leu Asp Ala 930 935 940 Glu Ile Arg Lys Leu Glu Arg Leu Leu Glu Ser Gly Leu Thr Thr Thr 945 950 955 960 Ser Thr Thr Thr Ser Ser Ser Thr Ser Leu Leu Thr Gly Gly Gly His 965 970 975 Leu Lys Pro Glu Leu Thr Val Thr Ser Gly Ile Ser Gln Thr Pro Ala 980 985' 990 Ala Ser Lys Asn Arg Thr Pro Ser Ile Ser Gly Ile Leu Pro Asn Leu 995 1000 1005 Leu Leu Ser Val Leu Pro Pro Val Ile Pro Arg Ala Ser Trp Pro Ser 1010 1015 1020 Ala Glu Tyr Met Gln Ile Pro Met Arg Arg Ser Val Thr Phe Ala Ser 025 1030 1035 1040 Gln Pro Gln Leu Glu Glu Ala Cys Leu Pro Ala Gln Asp Leu Ile Asn 1045 1050 1055 Leu Arg Leu Ala His Gln Gln Ala Thr Glu Ala Lys Thr Gly Leu Ile 1060 1065 1070 Asn Arg Leu Arg Gly Ile Phe Ser Arg Thr Thr Ser Ser Asn Lys Gly 1075 1080 1085 Ser Thr Ala Ser Leu Ala Asp Gln Lys Gly Leu Lys Ala Ala Phe Lys 1090 1095 1100 Ser His Met Gly Leu Phe Thr Arg Leu Ile Pro Ser Ser Gln Thr Ala 105 1110 1115 1120 Ser Cys Asn Ala Ile Tyr Asn Asn Pro Asn Gin Asp Ser Ile Pro Ser 1125 1130 1135 Glu Ala Ser Ser His Pro Asn Gly Asn His Leu Lys Pro Ile His Arg 1140 1145 1150 Gly Ser Leu Thr Lys Ser Gly Thr His Leu Asp His Leu Thr Lys Asp 1155 1160 1165 Pro Asn Phe Leu Pro Ile Pro Thr Ile Ser Gly Gly Glu Gln Gly Asp 1170 1175 1180 Gln Thr Leu Gly Gly Lys Tyr Val Lys Leu Leu Glu Thr Lys Val Asn 185 1190 1195 1200 Phe Gln Leu Pro Ser Asn Arg Arg Pro Ser Val Val Gln Gln Pro Pro 1205 1210 1215 Ser Leu Arg Glu Arg Val Arg Gly Ser Pro Arg Phe Pro His Arg Ile 1220 1225 1230 Leu Pro Pro Thr Cys Ser Leu Ser Ala Leu Ala Glu Ser Glu Asp Arg 1235 1240 1245 Pro Gly Asp Ser Thr Ser Ile Leu Gly Ser Cys Lys Ser Ile Pro Arg 1250 1255 1260 Ile Ser Leu Gln Gln Val Thr Ser Gly Gly Thr Trp Lys Ser Met Glu 265 1270 1275 1280 Thr Val Gly Lys Ser Arg Leu Ser Leu Gly Asp Ser Gln Glu Glu Glu 1285 1290 1295 Gln Gln Ala Pro Ala Asn Gly Thr Glu 1300 1305 REVENDICATIONS 1. Polypeptide caractérisé en ce qu'il exerce l'activité biologique d'un récepteur B du GABA et comprend une séquence d'amino-acides qui présente une identité à 70 % au moins avec une séquence selon SEQ ID N : 2, SEQ ID N : 4 ou SEQ ID N : 6. 2. Polypeptide suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la séquence d'amino-acides correspond à une séquence selon SEQ ID N : 2, SEQ ID N : 4 ou SEQ ID N : 6. 3. Acide nucléique caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique qui code un polypeptide suivant la revendication 1. 4. Acide nucléique suivant la revendication 3, caractérisé en ce qu'il est un ADN ou un ARN simple brin ou double brin. 5. Acide nucléique suivant la revendication 4, caractérisé en ce qu'il consiste en segments d'ADN ou d'ADNc génomique. 6. Acide nucléique suivant la revendication 3, caractérisé en ce que la séquence nucléotidique correspond à une séquence selon SEQ ID N : 1, SEQ ID N : 3 ou SEQ ID N : 5. 7. Acide nucléique suivant la revendication 3, caractérisé en ce qu'il s'hybride dans des conditions stringentes aux séquences selon SEQ ID N : 1, SEQ ID N : 3 ou SEQ ID N : 5. 8. Produit de synthèse d'ADN caractérisé en ce qu'il comprend un acide nucléique suivant l'une quelconque des revendications 3 à 7 et un promoteur hétérologue. 9. Vecteur caractérisé en ce qu'il comprend un acide nucléique suivant l'une quelconque des revendications 3 à 7 ou un produit de synthèse d'ADN suivant la revendication 8. 10. Vecteur suivant la revendication 9, caractérisé en ce que l'acide nucléique est en liaison fonctionnelle avec des séquences régulatrices qui assurent l'expression de l'acide nucléique dans des cellules procaryotiques ou eucaryotiques. 11. Cellule-hôte caractérisée en ce qu'elle contient un acide nucléique suivant l'une quelconque des revendications 3 à 7, un produit de synthèse d'ADN suivant la revendication 8, ou un vecteur suivant la revendication 9 ou 10. 12. Cellule-hôte suivant la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle consiste en une cellule procaryotique, notamment en E. coli. 13. Cellule-hôte suivant la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle consiste en une cellule eucaryotique, notamment en une cellule de mammifère ou d'insecte. 14. Anticorps caractérisé en ce qu'il se lie spécifiquement à un polypeptide suivant la revendication 1. 15. Invertébré transgénique caractérisé en ce qu'il contient un acide nucléique suivant l'une quelconque des revendications 3 à 7. 16. Invertébré transgénique suivant la revendication 15, caractérisé en ce qu'il consiste en Drosophila melanogaster ou en Caenorhabditis elegans. 17. Les descendants transgéniques d'un invertébré suivant la revendication 15 ou 16. 18. Procédé de production d'un polypeptide suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste : (a) à cultiver une cellule.-hôte selon l'une des revendications 11 à 13 dans des conditions qui assurent l'expression de l'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 3 à 7, ou (b) à exprimer un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 3 à 7 dans un système in vitro, et (c) à extraire le polypeptide de la cellule, du milieu de culture ou du système in vitro. 19. Procédé de production d'un acide nucléique suivant l'une quelconque des revendications 3 à 7, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : (a) synthèse chimique totale d'une manière connue, ou (b) synthèse chimique d'oligonucléotides, mar- quage des oligonucléotides, hybridation des oligonucléotides sur l'ADN d'une banque génomique ou d'une banque d'ADNc qui a été établie à partir d'ADN génomique ou d'ARNm de cellules d'insectes, sélection de clones positifs et isolement de l'ADN hybridé de clones positifs, ou (c) synthèse chimique d'oligonucléotides et amplification par réaction en chaîne de polymérase de l'ADN cible. 20. Procédé de production d'un invertébré transgénique suivant la revendication 15 ou 16, caractérisé en ce qu'il comprend l'introduction d'un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 3 à 7 ou d'un vecteur suivant la revendication 9 ou 10. 21. Procédé de mise en évidence de substances actives nouvelles pour la protection des plantes, notamment de composés qui modifient les propriétés de polypeptides selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : (a) préparation d'une cellule-hôte selon l'une des revendications 11 à 13, (b) culture de la cellule-hôte en présence d'un composé chimique ou d'une sonde qui comprend une multiplicité de composés chimiques, et (c) détection de propriétés modifiées. 22. Procédé de mise en évidence d'un composé chimique qui se lie à un polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : (a) mise en contact d'un polypeptide suivant la revendication 1 ou d'une cellule-hôte suivant l'une des revendications 11 à 13 avec un composé chimique ou un mélange de composés chimiques dans des conditions qui permettent l'interaction d'un composé chimi- que avec le polypeptide, et (b) détermination du composé chimique qui se lie spécifiquement au polypeptide. 23. Procédé de mise en évidence d'un composé chimique qui modifie l'expression d'un polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : (a) mise en contact d'une cellule-hôte selon l'une des revendications 11 à 13 ou d'un invertébré transgénique selon la revendi- cation 15 ou 16 avec un composé chimique ou un mélange de composés chimiques, (b) détermination de la concentration du poly- peptide selon la revendication 1, et (c) détermination du composé chimique qui influe spécifiquement sur l'expression du poly- peptide. 24. Utilisation d'un polypeptide suivant la revendication 1, d'un acide nucléique suivant l'une quelconque des revendications 3 à 7, d'un vecteur suivant la revendication 9 ou 10, d'une cellule-hôte suivant l'une des revendications 11 à 13, d'un anticorps suivant la revendication 14 ou d'un invertébré transgénique suivant la revendication 15 ou 16 pour la mise en évidence de substances actives nouvelles pour la protection des plantes ou pour la mise en évidence de gènes qui codent des polypeptidc qui participent à l'édification de récepteurs B du GABA de fonctionnalité identique chez des insectes. 25. Utilisation d'un modulateur d'un polypeptide suivant la revendication 1 comme insecticide.