Brevet FR2797767A1 — publié le 20010302

Utilisation d'acides aminés pour la fabrication de médicaments destinés au traitement des insulino-résistances L'invention vise l'utilisation d'acides aminés pour la fabrication de médicaments destinés au traitement des insulino-résistances. Ces dernières années, des progrès considérables ont été réalisés dans la compréhension des mécanismes moléculaires de l'action de l'insuline. Un schéma montrant les voies principales de transduction du signal insulinique est donné sur la figure 1. Le récepteur de l'insuline est un récepteur transmembranaire doué d'une activité tyrosine kinase intrinsèque (Combettes-Souverain M. et Issad T., Diab. Metab., 24, 477, 1998). La liaison de l'insuline à son récepteur entraîne son autophosphorylation sur les résidus tyrosine, ce qui stimule l'activité tyrosine kinase du récepteur envers un certain nombre de substrats intracellulaires tels que Insulin Récepteur Substrate 1 ou IRS-1 et Src homology collagen protein ou Shc. Cette activité tyrosine kinase joue un rôle déterminant dans la transmission du signal insulinique et elle est altérée dans de nombreuses situations de résistance à l'insuline (Ricort J.M. et coll., Diabetologia, 38, 1148 1995). Globalement les mécanismes cellulaires de l'insulino-résistance peuvent se situer au niveau de la liaison de l'hormone à son récepteur ou à étape plus distale de post-liaison au récepteur. Comme le montre le schéma de la figure 1, la phosphorylation sur les tyrosines des IRS et de par le récepteur à l'insuline permet l'activation de deux grandes voies de signalisation cellulaire, la voie des MAP kinases (MAPK) et la voie de la phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-K). inventeurs ont précédemment rapporté l'effet insulino-sécréteur d'acides aminés hydroxylés extraits de graines de fenugrec (Trigonella foenum graecum L.), en particulier de la 4-hydroxyisoleucine (4-OH-Ile) et/ou de la lactone correspondante (brevets FR 2 695 317 et 2 745 718 et brevets correspondants sous priorité). il s'avère que de tels composés sont également actifs au niveau récepteur à l'insuline des tissus périphériques, tels que le foie et le muscle et/ou de la cascade de signalisation que son activation déclenche. Les travaux réalisés, comme illustré par les exemples, ont montré l'effet ces composés au niveau de la cascade des phosphorylations mise en jeu sous le récepteur, notamment sur la phosphorylation d'une des principales protéines impliquée dans la transmission du signal insulinique, 1"'Insulin Receptor Substrate 1" ou IRS-1. La mesure de l'activité PI 3'-kinase (Phosphatidylinositol 3 kinase), enzyme activée par IRS-1 phosphorylée et jouant un rôle primordial dans la translocation du transporteur de glucose GLUT 4 a été également effectuée. L'invention a pour objet de tirer profit des résultats obtenus et vise l'utilisation, pour la fabrication de médicaments destinés au traitement insulino-résistances, d'acides aminés et/ou de leurs dérivés qui ne reconnaissent pas le récepteur de l'insuline, mais qui agissent au niveau post-récepteur, dans les conditions rapportées dans les exemples pour la 4- OH-Ile. L'invention vise ainsi l'utilisation d'acides aminés et/ou de leurs dérivés exerçant une activité PI-3-kinase au moins équivalente à celle de l'insuline. L'utilisation pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement insulino-résistances, selon l'invention, est alors caractérisée en ce qu'elle porte sur un acide aminé mono- ou polyhydroxylé, et/ou ses formes lactoniques. L'invention vise tout spécialement l'utilisation de la 4-hydroxyisoleucine de formule et/ou de sa forme lactonique. En particulier, l'invention vise l'utilisation de la 4-hydroxyisoleucine OH-Ile en abrégé) sous la forme de son isomère 2S, 3R, 4S, ou de la lactone correspondante. Compte tenu des effets observés, les médicaments fabriqués conformément à l'invention sont particulièrement appropriés pour combattre les syndromes liés à l'insulino-résistance. Or, on sait que la prise excessive de poids, la sédentarité, une alimentation mal équilibrée, le nombre de plus en plus important des personnes âgées sont des facteurs socio-économiques fréquemment rencontrés dans les pays occidentaux. Tous concourent au développement d'une insulino- resistance et d'une hyperinsulinémie compensatoire, souvent associée à l'obésité et potentiellement diabétogène. Ainsi, les acides gras libres sont parmi les premiers candidats avancés pour tenter d'expliquer l'étroite relation entre insulino-résistance, obésité et hyperinsulinisme (Mac J , J. Cell. Biochem., 555 , 29, l994). Cette évidente relation prend de nos jours la dimension d'un phénomène majeur sur le plan de la santé publique. Un faisceau de preuves, à fois cliniques et épidémiologiques, liant l'hyperinsulinémie au risque de futures maladies cardio-vasculaires, risque athérogène ou diabétogène a permis de dresser le tableau cohérent du syndrome X de Reaven (hyperinsulinémie, insulino-résistance, augmentation des triglycérides sériques, hypertension artérielle) et des risques morbides qui lui sont associés (Reaven G. Diabetes, 37, 1595, 1988). De plus, selon de récentes enquêtes, l'hyperinsulinémie en favorisant la prolifération de certaines cellules épithéliales (notamment du colon) apparaît associée au risque de cancer (Hu F.B. et coll., J. Natl. Cancer Inst., 91, 542, 1999). L'invention vise donc tout spécialement l'utilisation des composés définis ci-dessus pour la fabrication de médicaments à effet insulino-mimétique et/ou insu lino-sensibilisateur sur les tissus périphériques cibles l'insuline. De tels médicaments sont particulièrement appropriés pour lutter contre syndromes d'insulino-résistance, en particulier contre les hyperinsulinémies, l'insulino-résistance liée au vieillissement et contre des affections liées à l'obésité. Les médicaments fabriqués conformément à l'invention pourront être également utilisés pour contribuer à inhiber la prolifération de certaines lignées cellulaires associées au risque d'apparition de cancers. Les médicaments selon l'invention peuvent être administrés par voie orale, essentiellement, mais aussi par voie intraveineuse ou intramusculaire, et renferment des excipients qui sont choisis en fonction de la forme galénique adoptée. La posologie sera adaptée en fonction de la pathologie à traiter. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont donnés, à titre illustratif, dans les exemples qui suivent dans lesquels il est fait 'férence aux figures 2 à 5 (on rappelle que la figure 1 a été évoquée ci-dessus et donne le schéma des voies principales de transduction signal insulinique), ces figures 2 à 5 représentant respectivement - la figure 2, l'effet de la 4-OH-Ile sur l'activité PI 3-kinase du foie, - la figure 3, la liaison de l'insuline sur son récepteur dans la lignée de cellules hépatiques LMH, - la figure 4, l'effet de la 4-OH-Ile sur l'activité PI 3-kinase du muscle, - la figure 5, l'effet de la 4-OH-Ile sur l'insulinémie et la glycémie basales du rat. Mesure de l'activité PI 3-kinase L'activité PI 3-kinase a été mesurée sur des immunoprécipitats réalisés avec l'anticorps anti-IRS-1. Ceci a permis de déterminer l'activité enzymatique associée à l'action de l'insuline et de la comparer ' l'action induite par la 4-OH-Ile. Protocole expérimental Des rats normaux Wistar mâles (souche IFFA CREDO, France) reçu, par injection intrapéritonéale, soit de l'insuline ordinaire seule (100 U/kg) soit de la 4-OH-Ile seule (18 mg/kg), soit de l'insuline associée à la 4-OH- ILe aux mêmes posologies. Les rats témoins ont reçu par voie intrapéritonéale du chlorure de sodium à 9 /.. Quinze minutes après l'injection, les animaux ont été sacrifiés et les tissus périphériques (foie, muscle) immédiatement prélevés et congelés dans l'azote liquide. Pour la détermination de l'activité PI 3-kinase, les tissus sont broyés dans un tampon contenant les inhibiteurs de protéases et phosphatases ainsi qu'un agent solubilisateur (Triton), comme décrit par Taouis et coll., J. Biol. Chem., 269 , 14912, 1994. Après solubilisation, les surnageants sont immunoprécipités avec l'anti-IRS-1 et l'activité PI 3'-kinase est mesurée dans l'immunoprécipitat. En effet, la réaction est initiée par l'addition d'un substrat artificiel de l'enzyme : le phosphatidylinositol (PI) et (33P) gamma ATP. Le produit de la réaction est soumis à une chromatographie sur couche mince (TLC plate) et les niveaux de phosphorylation du PI sont mesurés par un phosphoimager STORM (Molecular Dynamics). L'activité est exprimée en unité arbitraire donnée par l'appareil (conversion de radioactivité en luminescence grâce à un faisceau laser). EXEMPLE 1 Comparaison des effets de l'insuline et de la 4-OH-Ile sur l'activité PI kinase du foie Les résultats en histogrammes sont donnés sur la figure 2. Sur ce schéma on observe que l'insuline mais aussi la 4-OH-Ile, seules, stimulent significativement (p On rapporte sur la figure 3 les résultats comparatifs concernant les liaisons de l'isoleucine et de la 4-OH-Ile. Les cellules LMH utilisées dans essais sont issues d'un hépatocarcinome de poulet (Kawaguchi T. et coll., Cancer Res., 4460, l987). EXEMPLE 2 Comparaison effets de l'insuline et de la 4-OH-Ile sur l'activité PI 3- kinase du muscle Les résultats en histogrammes sont reportés sur la figure 4. Sur ce schéma, on note que non seulement l'insuline stimule clairement l'activité PI 3- kinase, mais aussi que la 4-OH-Ile a un effet comparable. Ainsi, l'effet insulino-mimetique de la 4-OH-Ile observé au niveau hépatique est confirmé au niveau musculaire. On constate donc â l'examen des résultats des exemples 1 et 2 niveau du foie et du muscle, la 4-hydroxyisoleucine stimule indépendamment de l'insuline la voie IRS-1/PI 3-kinase qui est la voie majeure dans contrôle des actions métaboliques et mitogéniques de l'insuline. De plus, la 4- hydroxyisoleucine ne reconnaît pas le récepteur de l'insuline moins ne rentre compétition avec l'insuline pour la liaison sur le récepteur. EXEMPLE 3 L'effet bénéfique de la 4-hydroxyisoleucine contre relative hyperinsulinémie été recherché in vivo lors de l'administration chronique (pendant un mois) de l'acide aminé végétal (25 mg/kg/j voie intrapéritonéale) sur le rat rendu diabétique non insulino-dépendant (diabète de type 2) par les injections conjointes de nicotinamide et de streptozotocine (Masiello et coll., Diabètes, 47, 224, 1998). prises de sang régulières effectuées sur la veine caudale des rats ont permis d'évaluer par méthode radio-immunologique (Herbert et coll., J. Clin. Endocr., 25, 1375, 1965) le taux d'insuline plasmatique, 15 heures après l'injection du produit qui avait lieu à 17 h 30. Sur ces mêmes prélèvements, le taux plasmatique de glucose a été dosé par méthode enzymatique (Trinder P., J. Clin. Pathol. 22, 158, 1969). Les résultats obtenus sont rapportés sur la figure 5. On observe que l'administration quotidienne de 4-hydroxyisoleucine a pour effet d'abaisser significativement (p De plus, après l'arrêt du traitement, on peut constater que l'insuline plasmatique s'élève à nouveau pour rejoindre des valeurs proches de celles observées avant le traitement. Dans ces conditions, une légère diminution de la glycémie a été observée en fin de traitement. L'abaissement de l'insulinémie observée chez le rat après un traitement chronique par la 4- hydroxyisoleucine confirme in vivo l'effet insulino- mimétique et/ou insulino-sensibilisateur observé lors des expériences in vitro. EXEMPLE 4 Le médicament selon l'invention est particulièrement adapté au traitement symptomatique des états d'insulino-résistance, notamment des états d'insulino-résistance avec obésité. Il peut être préparé à partir d'un acide aminé mono- ou polyhydroxylé et/ou ses formes laconiques à l'aide de toute technique appropriée connue de l'homme du métier. Il peut être notamment réalisé à partir de 4- hydroxyisoleucine. Ce produit étant hydrosoluble, un tel 'dicament peut être aisément réalisé sous forme de solution (dans du sérum physiologique par exemple), ou sous forme galénique solide telle comprimé ou gélule. Les pathologies visées étant chroniques, l'administration par voie orale apparaît plus adaptée. De tels médicaments peuvent ainsi être aisément administrés à des posologies pluri-quotidiennes, adaptées au cas particulier du patient concerné, par exemple de l'ordre de 2 a 3 prises par jour. REVENDICATIONS 1) Utilisation d'un acide aminé mono- ou polyhydroxylé, et/ou ses formes lactoniques, pour la fabrication d'un médicament destiné traitement des insu lino-résistances. 2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'acide aminé est la 4-hydroxyisoleucine de formule et/ou sa forme lactonique. 3) Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que la hydroxyisoleucine se présente sous la forme de son isomère 2S, 3R, 4S ou de la lactone correspondante. 4) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 pour fabrication de médicaments à effet insulino-mimétique et/ou insulino sensibilisateur sur les tissus périphériques cibles de l'insuline. 5) Utilisation selon la revendication 4, pour la fabrication de médicaments pour lutter contre les syndromes d'insulino-résistance. 6) Utilisation selon la revendication 5, pour la fabrication de médicaments contre les hyperinsulinémies. 7) Utilisation selon revendication 5, pour la fabrication de médicaments contre l'insulino résistance liée au vieillissement. 8) Utilisation selon la revendication 5, pour la fabrication de médicaments, contre les affections liées à l'obésité. 9) Utilisation selon la revendication 5, pour la fabrication de médicaments, pour contribuer à inhiber la prolifération de certaines lignées cellulaires associées au risque d'apparition de cancers.