Brevet FR2797202A1 — publié le 20010209

EQUIPEMENT POUR L'EXTRACTION AUTOMATIQUE D'ACIDES NUCLEIQUES. La présente invention concerne le domaine de l'analyse biologique, et plus particulièrement le domaine des équipements pour l'extraction automatique d'acides nucléiques à partir d'échantillons biologiques distincts. Il est connu de réaliser des équipements comportant un rotor supportant des tubes pendulaires. De tels équipements de centrifugation permettent de réaliser une des étapes de l'analyse. Il nécessite de nombreuses manipulations pour l'apport de réactifs, pour le prélèvement ou le lavage, et pour la récupération des échantillons. L'objet de la présente invention est de proposer un équipement permettant d'automatiser un protocole d'analyse et de réaliser simultanément, sans intervention manuelle, une pluralité d'extraction à partir de plusieurs échantillons distincts. A cet effet, l'invention concerne dans son acception la plus générale un équipement comportant des moyens pour provoquer le basculements des tubes indépendamment de la force centrifuge. Cette caractéristique permet de procéder aux transferts de réactifs dans les tubes sans qu'il soit nécessaire de les retirer du rotor de la centrifugeuse. Avantageusement, l'équipement selon l'invention comporte au moins une butée mobile selon une direction radiale pour provoquer le basculement du tube placé sur l'axe de déplacement de ladite butée mobile. Selon une variante de réalisation, la butée est formée par une plaquette inclinée mobile selon un axe radial incliné par rapport à un axe horizontal. Avantageusement, les tubes sont mobiles en rotation de 180 environ entre une position verticale et une position renversée. 2 2797202 Selon un mode de réalisation particulier, le rotor est fermé par un couvercle traversé par des buses pour déposer des réactifs dans un tube au moins. Selon un mode de réalisation spécifique, l'équipement selon l'invention comporte un réceptacle annulaire pour recevoir les liquides déversés par les tubes lors de leur basculement. Selon une autre variante, il comporte un organe pour l'actionnement des bouchons fermant les tubes en vue de leur bouchage ou débouchage. De préférence, l'équipement présente des moyens de thermorégulation. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit, se référant aux dessins annexés correspondant à un exemple non limitatif de réalisation, o: - la figure unique représente une vue schématique en coupe de l'équipement. L'équipement selon l'invention comporte un rotor de centrifugation, supportant des tubes (1) pendulaire. De façon connue, ces tubes s'inclinent sous l'effet de la force centrifuge. Toutefois, contrairement aux dispositifs de l'art antérieur, les tubes peuvent également être inclinés indépendamment de la force centrifuge, sous l'effet d'une butée mobile (2) entraînée par un vérin ou un moteur25 électrique et d'une vis sans fin. Cette butée mobile est inclinée d'un angle d'environ 60 par rapport à un plan horizontal. Elle se déplace selon un axe radial (3) incliné d'un angle d'environ 30 par rapport à la vertical. Cette butée vient en contact avec le fond (4) du tube (1), et provoque son basculement, jusqu'à un renversement complet. L'axe de déplacement (3) coupe l'axe médian (5) du tube en décalage par rapport au point de pivotement (6) afin de provoquer le renversement complet du tube (1). 3 2797202 La butée mobile peut prendre la forme d'une couronne conique montant et descendant sous l'action d'un moteur électrique. La butée peut prendre la forme d'une couronne mobile verticalement. Un collecteur (7) permet le recueil des échantillons. Les tubes peuvent présenter à leur extrémité inférieure un téton de guidage pouvant se positionner dans une fente ondulée prévue sur un disque mobile en hauteur entre une position écartée o les tubes peuvent basculer librement, et une position de travail dans laquelle le téton de chaque tube est positionné dans la fente ondulée pour assurer une oscillation du tube pendant la rotation du rotor. La fente présente une largeur correspondant sensiblement à la section du téton. Elle forme un chemin annulaire, oscillant de part et d'autre d'une ligne circulaire avec un pas correspondant à l'écartement de deux tubes consécutifs. Lorsque le téton est positionné dans la fente ondulée, la rotation du rotor provoque le basculement des tubes de part et d'autre d'une position verticale. L'équipement peut également comporter une caméra destinée à acquérir une image d'un tube en vue de la mesure automatique de la hauteur de niveaux, de la position d'un ménisque ou d'une zone de séparation de deux composants, ou de vérification de la présence d'un tube à une position du rotor. L'équipement comporte un calculateur pour la programmation des différentes étapes. A titre d'exemple, un protocole d'extraction sera décrit dans ce qui suit:30 On remplit des tubes de 50 ml de contenance avec 15 ml de sang au maximum; On ajoute du PBS pour atteindre un volume de 40 ml et on mélange; On procède à une centrifugation pendant 5 minutes à 2000 g en portant la température à 4 C; 4 2797202 On procède ensuite au basculement des tubes pour vider le surnageant; On peut éventuellement répéter les étapes précédentes à partir de l'étape d'ajout de PBS; On remplit ensuite à hauteur de 35 ml avec un réactif composé de 9,54g de NH4CL, 0,237 g de NH4HCO3 et Qsp ml d'eau; On laisse incuber pendant 20 minutes à température ambiante; On procède ensuite à une centrifugation pendant 10 minutes à 2000 G à 4 C; On vide à nouveau le surnageant; On procède ensuite au rinçage du tube avec le réactif susvisé; On remet le surnageant en suspension avec le même réactif; On procède à une nouvelle centrifugation pendant 10 minutes à 400 g ou moins à 4 C; On chauffe ensuite à 50 C jusqu'à équilibrage de la température; On ajoute une solution de Protéinase K à lmg/l final, préchauffé à 50 C; On incube à 50 C pendant 3 ou 4 heures en agitant de temps en temps; On précipite à l'éthanol (2 volumes) ou à l'isopropanol (0,6 volume); On centrifuge à 7000 ou 8000 tours par minutes pendant 15 minutes à 4 C; On lave à l'éthanol à 70%; On égoutte et on sèche le culot. Ces étapes sont toutes réalisées dans l'équipement selon l'invention, sans retirer les tubes du rotor. 2797202 REVENDICATIONS 1 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques à partir de plusieurs échantillons distincts, comportant un rotor supportant des tubes pendulaires, caractérisé en ce qu'il comporte des moyens pour provoquer le basculement des tubes indépendamment de la force centrifuge. 2 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comporte au moins une butée mobile pour provoquer le basculement du tube placé sur l'axe de déplacement de ladite butée mobile. 3 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon la revendication 2 caractérisé en ce que la butée est formé par une plaquette inclinée mobile selon un axe radial incliné par rapport à un axe horizontal. 4 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon la revendication 2 caractérisé en ce que la butée est formé par une couronne mobile venant en appui contre les tubes. - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon la revendication 1 caractérisé en ce que les tubes présentent à leur surface inférieur un téton pouvant se positionner dans une fente ondulée prévue sur un30 plateau mobile, afin de provoquer un basculement oscillant des tubes. 6 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que les tubes sont mobiles en 6 2797202 rotation de 180 environ entre une position verticale et une position renversée. 7 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le rotor est fermé par un couvercle traversé par des buses pour déposer des réactifs dans un tube au moins. 8 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce qu'il comporte un réceptacle annulaire pour recevoir les liquides déversés par les tubes lors de leur basculement.15 9 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce qu'il comporte un organe pour l'actionnement des bouchons fermant les tubes en vue de leur20 bouchage ou débouchage. - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce qu'il présente des moyens de25 thermorégulation. 11 - Equipement pour l'extraction automatique d'acides nucléiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce qu'il comporte une caméra pour30 l'acquisition d'une image d'un tube