Brevet FR2802419A1 — publié le 20010622

PROCEDE D'EXTRACTION D'UN PRINCIPE ACTIF A PARTIR DE TOURNESOL, PRINCIPE ACTIF OBTENU ET COMPOSITON ADAPTEE POUR LUTTER CONTRE LE VIEILLISSEMENT CUTANE La présente invention concerne un procédé d'extraction d'un principe actif d'origine végétale, en l'occurrence à partir de graines de tournesol déshuilé en sorte de lutter contre le vieillissement cutané. L'invention couvre aussi le principe actif obtenu et les compositions adaptées. On sait que la réaction de glycation protéique aussi appelée réaction de Maillard est impliquée dans le processus de vieillissement moléculaire et tissulaire. Cette réaction de glycation est en fait un ensemble de réactions successives. En l'absence d'enzymes adaptées, une réaction se produit entre une fonction amine primaire libre et une fonction réductrice d'un sucre réducteur comme le glucose pour conduire à une protéine glyquée. Celle-ci peut alors subir une action de glycooxydation. Ces réactions conduisent à des composés terminaux très stables riches en doubles liaisons qui en s'ouvrant arrivent à des liaisons croisées irréversibles. Il convient de lutter contre ce vieillissement accéléré, notamment au niveau cutanée en limitant ou en retardant ce phénomène de glycation car les protéines glyquées ainsi pontées perdent leur fonctionnalité biologique, les tissus se rigidifient et se sclérosent. Par ailleurs, il existe un autre facteur bien connu qui contribue aussi au vieillissement cutané, ce sont les radicaux libres. En effet, les protéines glyquées réagissent avec l'oxygène et provoquent la formation de radicaux libres tels que les superoxydes. Ces composés peuvent initier la dégradation de certaines protéines et/ou altérer les structures membranaires. De même, I'accumulation de radicaux libres dans un tissu catalyse aussi la réaction de glycation des protéines qui perdent leurs propriétés biologiques. La réaction de glycation peut aussi modifier les propriétés des macromolécules constitutives de la matrice extra-cellulaire comme les protéoglycanes, les glycoprotéines, I'élastine et les collagènes. La formation de liaisons croisées irréversibles rendent les molécules de collagène fibrillaire par exemple, plus cassantes et les composés terminaux de la réaction de glycation modifient aussi la synthèse des macroprotéines de la matrice extra-cellulaire. Ces composés modifient le métabolisme des fibroblastes. Les protéines glyquées deviennent aussi résistantes à l'action des protéases, le collagène résiste à l'action de la collagénase et le renouvellement du collagène n'est plus assuré, ce qui conduit à des tissus cassants et altérés. Le principe actif selon l'invention a pour but de lutter contre ces actions néfastes de glycation par deux actions: - action anti-oxydante et anti-radicalaire puissante par la présence d'acides phénoliques qui piègent les radicaux libres et limitent les réactions d'oxydation, et occupation par des glycopeptides des sites protéiques impliqués dans les liaisons spécifiques glucose/protéines, désamorçant les pontages pour faire avorter la réaction de glycation. La présente invention couvre un procédé d'extraction d'un principe actif de graines de tournesol déshuilé ainsi que le principe actif obtenu. L'invention couvre aussi les compositions obtenues. Les différentes figures annexées regroupent les résultats obtenus lors des différents essais de caractérisation du principe actif extrait et de son activité. - la figure 1 montre la répartition des différents sucres, - la figure 2 montre la courbe d'activité anti-oxydante, et - la figure 3 montre les effets inhibiteurs vis à vis des réactions de glycation. Le procédé d'extraction selon la présente invention est maintenant décrit en détail, suivi de la caractérisation du principe actif et des tests d'efficacité cosmétique. I/ Procédé d'extraction Le procédé d'extraction du principe actif selon la présente invention consiste en la succession des étapes suivantes: - broyage de graines de tournesol pour obtenir d'une part une huile et d'autre part une farine déshuilée, - solubilisation aqueuse de cette farine obtenue, à raison de 10 à 40% en volume, hydrolyse de protéines en présence d'une protéase à pH acide, i15 séparation des phases soluble et insoluble, par décantation, par centrifugation ou par filtration, - inactivation de cette solution hydrolysée à pH compris entre 2,0 et 8,0, et une température au moins égale à 45 C, - filtration pour purifier les molécules actives, et - filtration stérilisante sur membrane afin de limiter la présence de micro- organismes, de flore mésophile totale, de levures, et de moisissures. Il/ Caractérisation du principe actif: Le principe actif issu de ce procédé se caractérise par la composition suivante et par les caractéristiques suivantes 1/ Matière sèche: Le taux de matière sèche est supérieur à 10 g/l, notamment compris entre 10 et 100 g/I et plus particulièrement entre 25 et 38 g/I. Cette plage est déterminée par passage à l'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant. 2/pH: La valeur du pH est comprise entre 3,0 et 10,0, plus particulièrement entre 5,0 et 6,0, obtenue par la méthode potentiométrique. 3/ Teneur en protéines La teneur est comprise entre 5 et 30 g/I plus particulièrement entre 6 et g/I. L'azote total est déterminé par la méthode KJELDAHL ( officiai method of analysis of the A.O.C 1975, 12th ed W.Horwitz, N.Y, pi 5-60) 4/ Teneur en sucres totaux: La méthode utilisée est la méthode de DUBOIS (DUBOIS, M et ai, (1956) Analytical chemistry, 28, N 3 p 350-356). En présence de phénol et d'acide sulfurique concentré, les sucres réducteurs donnent un composé coloré jaune-orangé et la lecture au spectrophotomètre donne une valeur qui, à partir de la courbe DO=f(conc) obtenue pour des étalons (comprenant 1/3 de mannose, 1/3 de glucose et 1/3 de galactose), permet de déduire une valeur de sucres totaux supérieure à 2 g/I et plus précisément comprise entre 2 et 30 g/I, notamment entre 6 et 12 g/I. i15 On peut aussi caractériser la longueur des chaînes glycosylées par une chromatographie en couche mince sur gel de silice. Des solutions témoins suivantes sont disposées sur la plaque et migrent pour donner un référentiel - galactose, - glucose, et - acide galacturonique. On fait également migrer le principe actif selon l'invention et après révélation, on obtient la plaque de la figure 1 qui montre la présence de monosaccharides et d'oligosaccharides dans le principe actif de ladite invention. / Polyphénols totaux Le taux est supérieur à 0,2 g/l, notamment compris entre 0,2 et 5 g/I, plus particulièrement 0,4 à 0,8 g/l, exprimé en acide gallique. La détermination des composés phénoliques est réalisée par lecture comparée des résultats obtenus avec l'échantillon dilué par rapport à une gamme étalon d'acide gallique allant de 0,04 à 0, 1 2 g/I. L'intensité de la coloration est en effet proportionnelle à la quantité de composés phénoliques. III/ Effets du principe actif extrait pour la lutte contre le vieillissement cutané 1/ Activité anti-radicalaire Le protocole opératoire consiste à mesurer l'action protectrice du principe actif de ladite invention sur des cultures cellulaires de kératinocytes. On mesure la viabilité cellulaire après une agression chimique. Les résultats sont indiquées sur la figure 2 qui représente la courbe du pourcentage d'activité anti-radicalaire en fonction de la concentration en principe actif selon la présente invention. Le principe actif selon l'invention présente une activité antiradicalaire de %. L'effet protecteur s'exerce sur les kératinocytes. 2/ Activité anti-glycation: Pour reproduire la réaction de glycation, réaction lente, non enzymatique qui se déroule dans l'environnement extracellulaire, il convient de créer un modèle in vitro qui repose sur la mesure de la formation des dérivés de la réaction de glycation entre la lysine et le glucose-6-phosphate. Parallèlement, une molécule de référence est testée: I'acide chlorogénique. Le mélange réactionnel contient de la L-lysine et du D-glucose-6- phosphate dans une solution tampon de phosphate de sodium. On ajoute à ce mélange 5% d'acide chlorogénique ou 3, 5 et 7 % de principe actif extrait selon le procédé de l'invention. Les systèmes sont laissés ainsi 8 jours à 37 C à l'abri de la lumière. Les résultats sont regroupés dans le tableau de la figure 3. On constate une bonne inhibition de la réaction de glycation en présence du principe actif extrait selon la présente invention. La présente invention couvre aussi toute composition cosmétique sous forme galénique adaptée qui intègre pour une part le principe actif concentré ou séché, extrait selon le procédé de l'invention, en vue de lutter contre le vieillissement accéléré de la peau. La présente invention couvre en outre un procédé de lutte contre le vieillissement accéléré de la peau en vue de lutter contre les radicaux libres et les réactions de glycation qui consiste à disposer préventivement sur la peau une telle composition cosmétique à raison de 0, 01 à 50% de principe actif et de préférence 0,5% à 10%. Une composition cosmétique pour lutter contre les radicaux libres formés peut comprendre pour une part du principe actif selon la présente invention, concentré ou séché, associé à toute forme galénique adaptée. REVENDICATIONS 1. Procédé d'extraction d'un principe actif en vue d'une action anti- radicalaire et anti-glycation pour lutter contre le vieillissement cutané, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - broyage de graines de tournesol pour obtenir d'une part une huile et d'autre part une farine déshuilée, - solubilisation aqueuse de cette farine obtenue, à raison de 10 à 40% en volume, - hydrolyse de protéines en présence d'une protéase à pH acide, - séparation des phases soluble et insoluble, inactivation de cette solution hydrolysée à pH compris entre 2,0 et 8,0 à une température au moins égale à 45 C, - filtration pour purifier les molécules actives, et - filtration stérilisante sur membrane afin de limiter la présence de micro- organismes, de flore mésophile totale, de levures, et de moisissures. i15 2. Principe actif obtenu par le procédé la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend: - taux de matières sèches supérieur à 10 g/l, notamment compris entre et 100 g/I et plus particulièrement 25 à 38 g/l, - pH compris entre 3,0 et 10,0, plus particulièrement entre 5,0 et 6,0, - taux de protéines compris entre 5 et 30 g/l plus particulièrement entre 6 et 10 g/l, - taux de sucres totaux supérieur à 2 g/I et plus précisément compris entre 2 et 30 g/l, notamment entre 6 et 12 g/l, - taux de polyphénols totaux supérieur à 0,2 g/l, notamment compris entre 0,2 et 5 g/l, plus particulièrement 0,4 à 0,8 g/I, exprimé en acide gallique. 3. Composition cosmétique pour lutter contre les réactions de glycation, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins pour une part du principe actif selon la revendication 2, concentré ou séché, associé à toute forme galénique adaptée. 4. Composition cosmétique pour lutter contre les radicaux libres formés, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins pour une part du principe actif selon la revendication 2, concentré ou séché, associé à toute forme galénique adaptée. 5. Procédé de lutte contre le vieillissement accéléré de la peau en vue de lutter contre les radicaux libres et les réactions de glycation, caractérisé en ce que l'on dispose préventivement sur la peau une composition cosmétique selon la revendication 3 ou 4 à raison de 0,01 à 50% de principe actif. 6. Procédé de lutte contre le vieillissement accéléré de la peau en vue de lutter contre les radicaux libres et les réactions de glycation, caractérisé en ce que l'on dispose préventivement sur la peau une composition cosmétique selon la revendication 3 ou 4 à raison de 0,5 à 10% de principe actif.