Brevet FR2809182A1 — publié le 20011123

L'invention est relative à une méthode de diagnostic des accouchements prématurés imminents par détection d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales. Dans l'exposé de la présente invention, on définit par : accouchement prématuré un accouchement avant 34 semaines d'aménorrhée : accouchement très prematuré un accouchement avant 32 semaines d'aménorrhée, et par : accouchement imminent un accouchement dans les 14 jours, de préférence dans les 7 jours suivant le test diagnostic. Les accouchements prématurés interviennent dans environ 10% des grossesses et sont responsables de 75% à de la morbidité et de la mortalité néonatale, en absence d'anomalies congénitales. En dépit des progrès réalisés ces dernières décennies dans la surveillance obstétrique et néonatale, le nombre de naissances prématurées est demeure constant, ou a augmenté. En effet, le diagnostic et la prise en charge therapeutique d'une menace d'accouchement prématuré (MAP) restent des problèmes cliniques non résolus. L'identification rapide des patientes à risque est difficile. Les méthodes traditionnelles de pronostic qui reposent sur l'analyse antécédents obstétriques, de facteurs démographiques et de symptômes prémonitoires ne sont ni objectives, ni sensibles ni spécifiques. D'autre part, du fait que les traitements préventifs proposés, basés sur l'utilisation massive d'agents tocolytiques, capables de retarder l'accouchement, s'avèrent peu efficaces, il est essentiel en cas de diagnostic de de prévoir également l'imminence de l'accouchement afin de programmer tout le dispositif de soin néonatal intensif permettant d'assurer la survie du prématuré. De nombreux travaux ont été effectués, afin de rechercher des marqueurs biochimiques corrélés à une MAP, qui permettraient un diagnostic fiable et rapide, utilisable pour effectuer le suivi des patientes à risques. L'infection intra-utérine est une de"s causes identifiées d'accouchement prématuré qui ne représente cependant que 10 % à 40 % des cas observés. Le rôle de l'inflammation et l'implication de certaines cytokines (IL8, IL1(3, 116 et TNF(x), dans le déclenchement de l'accouchement, qu'il soit à terme ou prématuré, est maintenant clairement établi. Par exemple dans une revue récente WINKLER et al. [J. Perinat. Med., 27, 45-60, (1999)] rapportent que la matrice extracellulaire du col de l'utérus joue un rôle essentiel dans le maintien de la grossesse. La dilatation rapide du col qui précède l'accouchement serait liée à la dégradation rapide de cette matrice, par des protéases induites par une réaction inflammatoire locale celle-ci s'accompagnerait de l'extravasation de neutrophiles et de leucocytes ainsi que de l'augmentation de la concentration de certaines cytokines IL8, IL1p, 116 et TNF(x). I1 a été proposé de doser ces cytokines, ainsi que des protéines de l'inflammation (fibronectine) dans le liquide amniotique afin de diagnostiquer le risque d'accouchement prématuré et/ou imminent. Par exemple, HILLIER et a1. [Obstetrics & Gynecology, 6, 941-948, (1993)] rapportent que des valeurs élevées d'IL6 dans le liquide amniotique permettent le diagnostic d'un accouchement imminent ( Cependant, l'amniocentèse est une technique invasive et potentiellement risquée, mal adaptée à un suivi médical des patientes à risque qui nécessite d'effectuer des tests réguliers (toutes les semaines). On a donc recherché si ces marqueurs étaient également présents dans les sécrétion cervico-vaginales, et si leur dosage permettrait d'évaluer le risque d'accouchement prématuré et/ou imminent. Les résultats rapportés sont divergents. Dans le cas de la fibronectine, INGLIS et a1. [Am. J. Obst Gynecol., 171, 5-10, (1994) ] ont étudié le dosage immunoenzymatique de la fibronectine totale et/ou de la fibronectine fcetale, dans les sécrétions vaginales. Les résultats obtenus ont montré que le dosage de la fibronectine totale permet de pronostiquer la survenue d'un accouchement dans les 2 à 3 semaines (délai trop long pour présenter un intérêt pour les cliniciens), et qu'il n'est pas spécifique d'un accouchement prématuré. Quant à la fibronectine foetale qui est normalement présente uniquement dans le liquide amniotique et le placenta, son dosage dans les sécrétions cervico-vaginales ne peut être utilisé que dans les cas de MAP où membranes ont été rompues ou endommagées. Dans le cas de l'IL8, TANAKA et [Am. J. Obstet. Gynecol., 179, 644-649, (1998)] considerent que son augmentation, ainsi que celle de l'IL1, dans sécrétions cervico-vaginales est associée à un risque accouchement prématuré. I1 a cependant été également rapporté que des quantités importantes d'IL-8 dans les sécrétions cervico- vaginales permettaient de diagnostiquer une infection intra- utérine avec une sensibilité élevée (80%), [RIZZO et a1., J. Perinat. Med., 25, 461-468, (1997) ; RIZZO et a1., Ultrasound Obstet. Gynecol., 12, 86-92, (1998)], mais ne semblaient pas constituer un marqueur fiable pour la prédiction d'un accouchement prématuré [RIZZO et a1., 1997, précité). En ce qui concerne l'IL6, plusieurs études [LOCKWOOD et a1., Am. J. Obst. Gynecol., 171, 1097-1102, (1994) ; INGLIS et a1., Am. J. Obst. Gynecol. , 5-10, (1994)] s'accordent pour conclure à une augmentation de la quantité d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales en cas d'accouchement prématuré mais divergent en ce qui concerne la valeur seuil à retenir. RIZZO et al. [Am. Obstet. Gynecol., 175, 812-817, (1996)] considèrent d'autre part que la quantité d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales constitue un marqueur de l'infection du liquide amniotique. Aucun lien n'a été établi entre la quantité d' dans les sécrétions cervico-vaginales et l'imminence de l'accouchement. L'interprétation des résultats est dans tous cas, rendue difficile par le fait que quantités variables, et parfois élevées d'IL6 ont été détectées dans prélèvements effectués sur les patientes contrôle. . Les Inventeurs ont entrepris d'étudier activation locale de l'immunité cellulaire chez des patientes, par rapport à des patientes témoins présentant une grossesse normale, sans risque de MAP, afin notamment de déterminer si des cytokines spécifiques présentes dans les sécrétions cervico-vaginales étaient produites localement. En effet, les sécrétions vaginales sont composées . d'une phase solide contenant des cellules épithéliales exfoliées et des leucocytes ainsi que des glycoprotéines polymérisées sécrétées dans le mucus cervical et des bactéries, et d'une phase liquide contenant des électrolytes ainsi que des protéines transsudées ou secrétées (immunoglobulines, glycoprotéines (cytokines), albumine et lactoferrine), [BELEC et a1., Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 2, 57 61, (1995)]. Dans ce but les Inventeurs ont recherché, par RT- PCR, la présence des ARNms des cytokines IL6, IL8, IL10 et IL13, dans des culots cellulaires obtenus à partir des sécrétions cervico-vaginales des 2 groupes de patientes. Ils ont ainsi constaté que les ARNms de l'IL8 de l'IL10 étaient détectables aussi bien chez les témoins (33,3% et 16, que chez les patientes à risque de MAP (40,3% et 48,1%), mais qu'en revanche, les ARNms de l'IL6 et de l'IL13 étaient présents chez respectivement 10,9% et 6,2% des patientes, mais n'étaient pas détectés chez les patientes du groupe témoin. Les inventeurs ont également constaté que l'expression d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales était un marqueur corrélé avec la prématurité (accouchement avant la 34ème semaine de gestation p=0,02) et la grande prématurité (accouchement avant la 32ème semaine de gestation p=0, ), et permettant le diagnostic d'un accouchement prématuré imminent dans un délai inférieur à 14 jours (p=0,001), voire dans un délai inférieur à 7 jours (p=0,036). En revanche, l'IL8 est corrélée avec l'infection de la mère et l'infection néonatale mais elle n'est pas corrélée avec un accouchement imminent. Comme ces résultats, et notamment l'absence d'IL6 chez les patientes du groupe témoin, ne concordaient pas avec les observations de l'art antérieur, qui rapportent la présence d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales, y compris dans le cas de patientes présentant une grossesse normale, les Inventeurs ont recherché les raisons de cette discordance. Ils ont supposé qu'elle pouvait être due à l'utilisation, dans l'art antérieur, de méthodes immunoenzymatiques de dosage de type ELISA. En effet, les sécrétions vaginales constituent un milieu complexe, peu homogène, où le bruit de fond découlant notamment de turbidité de l'échantillon, peut interférer avec les dosages ELISA. Les Inventeurs ont donc choisi de rechercher l'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales, en faisant appel à des méthodes d'immunodétection sur support solide, qui contrairement aux techniques ELISA, ne sont pas perturbées par des problèmes de bruit de fond. Les résultats obtenus ont confirmé l'absence d'IL6 dans les sécrétions cervico- vaginales des patientes ne présentant pas de MAP, et corrélation entre la présence d'IL6 et l'imminence de l'accouchement. Les inventeurs ont en outre observé que de l'IL6 était détectée dans les sécrétions cervico-vaginales même en l'absence de rupture des membranes placentaires, entraînant le passage de l'IL6 provenant du liquide amniotique. Ils ont ainsi constaté, que de manière surprenante, il existait une production locale d'IL6 par les leucocytes des muqueuses du vagin et du col de l'utérus, corrélée à la menace d'accouchement prématuré imminent. Ces résultats permettent de proposer une nouvelle méthode de prevision des risques d'accouchement prématuré, et notamment d'un accouchement prématuré imminent. La présente invention a pour objet un procédé de pronostic de l'imminence d'un accouchement prématuré, caractérisé ce qu'il comprend la détection de la présence ou de l'absence de l'expression d'IL6 dans un prélèvement de sécrétions cervico-vaginales obtenu à partir d'une patiente à tester. Classiquement le prélèvement des sécrétions cervico- vaginales est effectué. au niveau de l'exocol et du cul de sac vaginal posterieur. Conformément à l'invention, la détection de la présence ou de l'absence d'IL6 dans les sécrétions cervico- vaginales peut notamment être effectuée - par détection d'ARNm de l'IL6, ou - par détection directe de l'IL6. La détection d'ARNm de l'IL6 peut s effectuer par des méthodes classiques de biologie moléculaire, à l'aide d'oligonucléotides spécifiques de la séquence codant l'IL6, par exemple à partir de l'ARNm extrait d'un culot cellulaire obtenu par centrifugation des sécrétions cervico-vaginales. Avantageusement, on choisira une méthode de détection comprenant l'amplification spécifique, après rétrotranscription, de l'ARNm de l'IL6. La détection directe de l'IL6 peut s'effectuer notamment par immunodétection, de préférence a partir d'un surnageant de centrifugation des sécrétions cervico- vaginales. Les techniques de dosage immunoenzymatique de type ELISA décrites dans l'art antérieur ne permettent pas une détection fiable, pour les raisons de bruit de fond mentionnées ci-dessus. On choisira donc une technique de détection sur support solide par immunochromatographie, dont le principe général, connu en lui-même, est le suivant L'échantillon susceptible de contenir l'analyte recherché est mis en présence d'un premier anticorps (anticorps de révélation), dirigé contre ledit analyte, et marqué (généralement à l'aide de microparticules colorées). Le mélange ainsi formé est déposé sur support de chromatographie sur lequel est fixé un second anticorps (anticorps de capture), également dirigé contre ledit analyte. En cas de présence de l'analyte dans l'échantillon, le complexe analyte/anticorps de révélation marqué est détecté l'endroit où sa migration est stoppée par formation d'un second complexe avec l'anticorps de capture. Pour la mise en #uvre de la présente invention on choisira respectivement comme anticorps de révélation et anticorps de capture deux anticorps anti-IL6 reconnaissant des épitopes différents de la molécule d'IL6. Des anticorps convenant tout particulièrement sont choisis parmi les anticorps monoclonaux BE-4 (C.N.C.M I-911), BF-6 (C.N.C.M I- 912), et BE-8 (C.N.C.M I-913) décrits dans la Demande EP 0 430 193 nom du CENTRE NATIONAL DE TRANSFUSION SANGUINE de Besançon et de BIOTEST PHARMA GMBH. Avantageusement, on choisira comme anticorps de capture l'anticorps BE-8 et comme anticorps de révélation l'anticorps BE-4. Le marquage de l'anticorps de révélation, ainsi que fixation de l'anticorps de capture sur le support de chromatographie se font selon des méthodes connues en elles- mêmes l'homme de l'art. L'anticorps de révélation peut par exemple être marqué des microparticules de gélatine colorée, des liposomes des microparticules de métal, notamment d'or colloidal, etc. Dans le cadre de la présente invention, on peut utiliser différentes variantes et différents perfectionnements de la détection par immunochromatographie mentionnée ci-dessus. Par exemple, on peut utiliser des dispositifs prêts à l'emploi de détection par immunochromatographie, qui sont disponibles dans le commerce et peuvent être associés avec des anticorps choisis pour la détection d'un analyte donné. Généralement ces dispositifs se présentent sous forme de bandelettes comprenant un support de chromatographie (par exemple une membrane de nitrocellulose) auquel on peut fixer l'anticorps de capture, une zone de dépôt destinée à recevoir l'échantillon à analyser ; entre la zone de fixation de l'anticorps de capture et la zone de dépôt et adjacente à cette dernière, se trouve une zone destinee à recevoir l'anticorps de révélation marqué. Après fixation de l'anticorps de capture sur le support de chromatographie, et imprégnation avec l'anticorps de révélation de la zone destinée à le recevoir, le dispositif est pret à être utilisé pour l'analyse. Celle ci s'effectue simplement par le dépôt de l'échantillon à analyser sur zone prévue à cet effet ; la formation éventuelle du complexe analyte/anticorps de révélation s'effectue lors de migration de l'échantillon à travers la zone imprégnée avec cet anticorps de révélation ; ce complexe est ensuite détecte visuellement, après rinçage du support de chromatographie, sous forme d'une bande colorée au niveau où a été fixe l'anticorps de capture. La détection peut s'effectuer ainsi en quelques minutes. La détection de l'IL6 par immunochromatographie selon les modalités définies ci-dessus, constitue un mode mise en oeuvre de l'invention particulièrement bien adapté au suivi patientes à risque, car il ne nécessite pas d'équipement encombrant et coûteux, est facile à mettre en oeuvre le médecin ou le personnel médical au lit de la patiente et permet d'obtenir rapidement une réponse, et prendre ainsi les mesures nécessaires en cas de pronostic d'accouchement imminent. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en ceuvre de la méthode objet de la présente invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1: EXPRESSION DES ARNM DE CYTOKINES INFLAMMATOIRES DANS LES SECRETIONS CERVICO-VAGINALES DE PATIENTES PRESENTANT UNE MENACE D'ACCOUCHEMENT PREMATURE A-Matériels et méthodes 1-Description de la population étudiée La population étudiée est constituée de 307 patientes hospitalisées à la Maternité Port Royal (Paris) admises pour menace d'accouchement prématuré entre 13 et semaines d'aménorrhée (SA). Le groupe témoin est composé de trente femmes enceinte (de plus d'un trimestre) sans menace d'accouchement prématuré. Les critères d'inclusion sont définis d'après l'examen clinique et échographique. Parmi ces patientes, 258 (84%) ont des membranes intactes. 2-Caractéristiques obstétricales de la population étudiée Ces patientes ont été suivies jusqu'à l'accouchement pour déterminer - le délai entre le jour du prélèvement et la date de l'accouchement, - la prématurité ( Dans la population étudiée, 30,9% des patientes ont accouché prématurément ( 3-Prélèvement cervico-vaginal Les sécrétions cervico-vaginales ont été recueillies par aspiration au niveau de l'exocol et du cul de sac vaginal postérieur à l'aide d'une pipette plastique de prélèvement stérile à extrémité mousse. Les prélèvements hémorragiques macroscopiquement ont été exclus à cette étape. Les cellules ont été centrifugées à 1500rpm/5 min et lavées deux fois en tampon PBS. Les cellules épithéliales et les leucocytes ont été comptées sur cellules de Malassez. Le culot cellulaire a été ensuite resuspendu dans 500 u1 de TRI- REAGENT (EUROMEDEX, Souffelmeyersheim, France), en vue de l'extraction des ARN totaux. 4-Extraction des ARN totaux et transcription inverse Les ARN totaux des cellules des sécrétions vaginales ont été extraits par la technique à l'isothiocyanate de guanidine-phénol, puis traités à la DNAse I (BOEHRINGER MANHEIM, Meylan, France) afin d'éliminer toute trace d'ADN génomique. 3 ug d'ARN ont été transcrits en ADNc pendant deux heures à en présence de 6 UI de Reverse Transcriptase (PROMEGA Charbonnières, France), dans un volume final de 40 u1. 5-PCR 100 ng d'ADNc ont été ensuite amplifiés par PCR, en présence de 2 UI DNA polymérase (ATGC, Noisy le Grand) et d'oligonucléotides spécifiques : de l'actine humaine, de l'IL6, l' , de l'IL10 ou de l'IL13. Après une dénaturation initiale de 5 min à 94 C et 3 min d'hybridation à cycles d'amplification ont été réalisés dans les conditions suivantes (élongation : 30 sec à 72 C, dénaturation : sec à 94 C et hybridation : 30 sec à 57 C), suivis d'une élongation de 7 min à 72 C et du maintien produits à 4 C. Pour les échantillons positifs une quantification messagers est alors effectuée par compétitive, à l'aide d'un nombre connu de copies du plasmide compétiteur PQAl pour l'IL6 ou PQB2 pour l'actine). Apres séparation des produits par électrophorèse en gel d'agarose à 2% en présence bromure d'éthidium, le gel est photographié et l'intensité des bandes est mesurée à l'aide d'un densitométre (Vilbert- Loumat, Marne la Vallée, France). 6-Recherche d'une infection chez la mère et l'enfant L'infection chez la mère est appréciée sur la température, l'examen cyto-bactériologique urines, la CRP sérique, la numération formule sanguine (leucocytose), et le prélèvement vaginal. L'infection néonatale appréciée par fièvre, la CRP sérique, la numération formule sanguine, et prélèvements au niveau des orifices pour étude bactériologique. 7-Dosage de paramètres de l'inflammation (CRP et fibronectine totale) La CRP sérique est dosé par néphélométrie et la fibronectine foetale est quantifiée dans les sécrétions cervico-vaginales, par des techniques immunoenzymatiques classiques (ELISA), à l'aide de kits commerciaux. 8-Analyse statistique L'association des cytokines des sécrétions cervico-vaginales, à la prématurité, et au délai entre le jour du prélèvement et la date de l'accouchement a été effectuée par régression multiple. Les différences entre les groupes ont été déterminées à l'aide du x2 et du test exact de Fischer. B-Résultats 1-Mise en évidence des marqueurs spécifiques de MAP ` La production des cytokines IL6, IL8, IL10 et IL13 a été analysée par RT-PCR dans les sécrétions vaginales de 129 patientes à risque de MAP et de 30 patientes témoins enceintes sans risque de MAP. La présence ou l'absence de ces cytokines dans les échantillons des 2 groupes a été déterminée et les résultats obtenus, exprimés en pourcentage sont présentés dans le Tableau I ci-dessous. Tableau I MAP témoin IL6 _ 10,9 IL8 40,3 3 IL10 48,1 7 IL13 6,2 Ces résultats montrent que l'IL6 et l'IL13 sont des cytokines spécifiques de MAP, potentiellement utilisables pour le diagnostic. Le signal observé en RT-PCR avec IL13 étant beaucoup plus faible que celui observé avec l'IL6. L'IL6 a donc été retenue comme un marqueur plus sensible et donc potentiellement plus intéressant pour une application diagnostique. Le nombre de messagers de l'IL6 a été déterminé par quantitative, un nombre moyen de 230000 copies par échantillon positif a été observé, ce qui correspond à 100 à 1000 fois plus de copies que pour l'actine. 2-Association des différentes cytokines à l'accouchement prématuré Les résultats sont présentés dans le Tableau II, ci-dessous ; les associations significatives sont indiquées en gras avec leur seuil de signifiance. Tableau II Cytokines 32 SA 32 SA 34 SA > 34 SA 31,1% (p= 0,001) 2_6_,_3 _/o (p= 0,001) 4,25% 75,4% (p= 0,004) 64 ,2% 56,6% IL10 73,7% (p= 0,029) _48_,7% 60,4% IL13 14,75% 18,9% 17,9% Les résultats montrent une association significative entre la présence d'IL6, d'IL8, d'IL10 dans les sécrétions cervico-vaginales et la grande prématurité ( 3-Association des cytokines à l'accouchement dans les 7 jours ou 14 jours après l'admission. Les résultats sont présentés dans le tableau III, ci-dessous ; les associations significatives sont indiquées en gras avec leur seuil de signifiance. Tableau III Cytokine 7j 7j 14j > 14j IL6 33,3% (p=0,001) 39,7% (p=0,001) 4,4% IL8 81,2% (p= 0,005) 75,8% (p= 0,004) 55% IL10 72,7% 68,9% 59,8% IL13- 21,2% 18,97% 18,1% Les résultats montrent une association significative entre la présence d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales et l'accouchement dans les 7 jours ou les 14 jours suivant l'admission. En outre, dans la population de 258 patientes ayant des membranes intactes, la présence d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales est associée significativement un délai d'accouchement inférieur à 14 jours (p=0,003). L'ensemble des résultats démontre que la detection de l'ARNm de l'IL6, par RT-PCR, dans les sécrétions cervico-vaginales de patientes à risque de MAP représente donc un procédé fiable pour le pronostic d'un accouchement prématuré imminent [ LE DIAGNOSTIC D'UN ACCOUCHEMENT PREMATURE. A-Matériels et méthodes 1-Préparation du dispositif d'immunochromatographie Un dispositif d'immunochromatographie commercialisé par GELMAN SCIENCES a été utilisé. Le support de chromatographie est constitué par une membrane en polyéthersulfone, plus résistante, et donnant une plus grande sensibilité de détection que la nitrocellullose classiquement utilisée. Réactifs - Membrane (PREDATOR, PALL Gelman Sciences) - Laine de verre (PALL Gelman Sciences) - Papier absorbant (PALL Gelman Sciences) - Anticorps de révélation (BE-4, C.N.C.M. I-911) - Anticorps de capture (BE-8, C.N.C.M. I-913) - Anticorps de chèvre anti-IgG de souris (contrôle) - Citrate de sodium - Tampon Borax (20 mM ou 2mM Na2Bq07-2H20, pH 9,3) - BSA - Tween 20 2 Préparation de l'anticorps de révélation (anticorp couplé l'or colloïdal) a -Préparation de l'or colloïdal La solution est préparée dans un Erlenmeyer de 500 ml. 4 ml d'une solution de chlorure d'or à sont ajoutés à 200 ml d'eau distillée bouillante. Puis 12 ml d'une solution de citrate de sodium à 1% sont ajoutés en agitant vigoureusement. La solution obtenue est de nouveau portée à ébullition jusqu'à l'obtention d'une couleur se rapprochant de celle du vin (environ 3 minutes). La solution est ensuite stockée à température ambiante et à l'abri de la lumiere. b-Préparation de l'anticorps à coupler à l'or colloïdal (anticorps de révélation). L'anticorps BE-4 est dialysé une nuit contre de l'eau distillée, puis son contenu en protéines est dosé et il est conservé à -80 C. c-Couplage de l'anticorps à l'or colloïdal A 1 ml d'or colloïdal, sont ajoutés 25 ug d'anticorps BE-4 puis 100 u1 de tampon 20 mM BORAX. La solution obtenue est incubée 1 h à température ambiante. 100 u1 de tampon 20 mM BORAX, 1% BSA sont ajoutés et la solution est centrifugée 50 min à 1500 rpm. Après élimination du surnageant, le culot est resuspendu dans 1 ml de tampon 2 mM BORAX, 0,1% BSA et la solution est centrifugée 50 min à 1500 rpm. Après élimination du surnageant; le culot est repris dans 250 u1 de tampon 2 mM BORAX, 0,1% BSA. L'anticorps conjugué à l'or colloïdal est conservé à 4 C, à l'abri de la lumière. 3 Montage du dispositif d'immunochromatographie a -Préparation de 1a laine de verre contenant l'anticorps de révélation 250 u1 de l'anticorps BE-4 couplé l'or colloïdal sont ajoutés à 1 ml de tampon 100 mM Tris HCl pH 8,0 ; 0,5% BSA ; 0,1% Tween 20 et 5% sucrose. Les rectangles de laine de verre (L : 20 mm X 1 mm) sont plongés dans la solution d'anticorps couplé à l'or colloïdal puis séchés au four à 58 C, pendant min et conservés sous vide, à l'abri de l'humidité, à température ambiante. -Assemblage du dispositif Les 2 rectangles de papier absorbant sont découpés (L : 16 mm X 1 : 4 mm et L : 18 mm X 1 : 4 Une bandelette de membrane est découpée (L mm X 1 : 25 mm), 8 p1 d'anticorps de capture -8) et d'anticorps contrôle (anti-IgG de souris), à 1 mg/ml, sont déposés sur une ligne perpendiculaire à la membrane, puis la membrane est séchée au déssicateur. Des bandelettes 4 mm de largeur sont découpées et les différents éléments du dispositif d'immunochromatographie sont assemblés selon les instructions du fabricant. 4- Détection d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales, par immunochromatographie La population étudiée, les paramètres cliniques analysés, et les modalités du prélèvement des sécretions cervico-vaginales sont décrits dans l'exemple 1, ci-dessus. Les sécrétions sont diluées dans 300 u1 de tampon PBS pH 7,4, le mélange est agité puis centrifugé 5 à 2500 rpm. 200 u1 du surnageant sont déposés sur zone du dispositif d'immunochromatographie prévue à cet effet. On laisse la migration s'effectuer pendant 60 après rinçage de la membrane, l'apparition une bande brune à l'endroit où a été fixé l'anticorps de capture revèle présence d'IL6 dans l'échantillon. Résultats La présence d'IL6 a été analysée sur 41 échantillons de patientes présentant menace accouchement prématuré, incluses dans l'étude de l'exemple 1. Parmi ces patientes, 37 ont des membranes intactes et 4 présentent une rupture des membranes. 4 échantillons de patientes présentant une rupture des membranes donnent des résultats négatifs en RT- PCR et positifs en immunochromatographie. Ces résultats montrent une corrélation de 95% entre l'immunochromatographie et la RT-PCR. En l'absence de rupture des membranes, l'immunochromatographie est aussi sensible que la RT-PCR, pour la détection d'IL6 dans les sécrétions cervico- vaginales. En conséquence, le procédé de détection d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales par immunochromatographie, de l'invention, est aussi sensible que le procédé de détection de l'ARNm de l'IL6 par RT-PCR. REVENDICATIONS 1) Procédé de pronostic de l'imminence d'un accouchement prématuré, caractérisé en ce qu'il comprend la détection de la présence ou de l'absence d'IL6 dans un prélèvement de sécrétions cervico-vaginales obtenu partir d'une patiente à tester. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé ce que l'on effectue la détection de l'ARNm de l'IL6. 3) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on effectue la détection directe de l'IL6. 4) Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'IL6 est détectée par immunochromatographie. 5) Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il met en #uvre au moins deux anticorps monoclonaux anti-IL6 choisis parmi : BE-4 (C.N.C.M I-911), BF-6 (C.N.C.M I-912), et BE-8 (C.N.C.M I-913). 6) Procédé selon la revendication 5 caractérisé en ce que l'anticorps de capture est l'anticorps BE-8. 7) Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'anticorps de révélation est l'anticorps BE-4. 8) Utilisation d'un dispositif de détection par immunochromatographie, pour la détection d'IL6 dans les sécrétions cervico-vaginales en vue du pronostic d'un accouchement prématuré imminent.