Brevet FR2800093A1 — publié le 20010427

La présente invention a pour objet une composi tion constituée d'une solution de culture d'Aureobasidium visqueuse et de couleur jaune clair comme additif alimen taire dont les propriétés physiques et la durée de conser vation sont améliorées, un procédé pour sa production et un mélange en poudre utilisant cette composition. La solution de culture d'Aureobasidium est un additif alimentaire figurant dans la notification n 120 du Ministère de la santé du Japon qui stipule qu' "elle consiste en une substance qui comprend du P-1,3,1,6-glucane obtenu à partir d`Aureobasidium comme constituant princi pal". Cette solution de culture d'Aureobasidium est une solution de culture qui comprend du (3-1,3,1,6-glucane qui est produit couramment en soumettant une souche microbienne du groupe Aureobasidium à une culture aérobie en milieu liquide. L'attention a été portée à ce type de solution de culture, qui est couramment indiquée comme additif alimen taire pour des soins de santé, notamment en raison de son effet carcinostatique. Par exemple, la description de la publication de brevet japonais n Hei 3-98201 décrit le procédé pour cultiver une souche microbienne du groupe Aureobasidium, et les substances polysaccharidiques ob tenues comme produit de culture de cette souche, comprenant du glucose comme constituant principal des saccharides constitutifs, comportant des liaisons consistant en des liaisons (3-1,3 de la chaîne principale et des liaisons @i- 1,6 des ramifications terminales non réductrices. Cependant, la solution de culture d'Aureobasidium disponible actuellement, moisit lors de son entreposage car il s'agit d'un liquide visqueux jaune clair permettant la multiplication de bactéries, ce qui pose un problème consistant en la difficulté de son stockage de longue durée. En ce qui concerne l'utilisation, il existe un autre problème consistant en la difficulté de manipulation en raison de la viscosité de cette solution. Bien que la solution de culture d'Aureobasidium ait un effet coagulant, l'effet coagulant de cette subs tance simple est relativement faible. Ainsi, elle est inca pable de provoquer la coagulation de substances huileuses telles que des matières grasses. La présente invention a été menée à bonne fin en prenant en considération les problèmes précités, et un objectif de la présente invention consiste à proposer une matière en poudre obtenue à partir de la solution de culture d'Aureobasidium afin d'améliorer l'aptitude à l'entreposage et la facilité de manipulation de la solution de culture d'Aureobasidium. Un autre objectif de la présente invention consiste à proposer un mélange qui comprend une matière en poudre obtenue à partir de la solution de culture d'Aureobasidium comme constituant principal, qui présente un effet coagulant supérieur sur des substances huileuses telles que des matières grasses. Les inventeurs de la présente invention ont eu l'idée de réduire en poudre la solution visqueuse de culture d'Aureobasidium et, après la discussion, l'étude, l'examen et l'évaluation de différentes techniques pour la réduction en poudre, ont trouvé qu'une technique de formation de clathrate utilisant de la cyclodextrine comme constituant incluant, a donné un résultat meilleur que prévu pour atteindre l'objectif de la présente invention, ce qui a permis d'amener la présente invention à bonne fin. Ainsi, conformément à la présente invention, il est proposé une matière en poudre à base d'Aurebasidium, dont les propriétés physiques et la durée de conservation ont été améliorées par formation d'un clathrate en poudre de cette solution de culture d'Aureobasidium comme constituant inclus qui a été traité avec de la cyclo- dextrine comme constituant incluant. Parmi les (x-, P- et y-cyclodextrines, il est préférable d'utiliser une cyclodextrine qui contient une quantité égale ou supérieure à 50 % en poids d'a-cyclo- dextrine. Le rapport pondéral de la solution de culture d'Aureobasidium à la cyclodextrine est choisi habituelle ment dans l'intervalle de 20:1 à 5:1. Lorsque la viscosité du mélange est trop forte, il est nécessaire d'ajuster la valeur de viscosité dans un intervalle approprié en ajoutant une quantité d'eau convenable. On sait que la solution de culture d'Aureobasidium présente une remarquable activité de coagu lation sur une solution de kaolin et réagit avec l'ion alu minium de manière quantitative en formant une bourre de fibres. Le sulfate d'aluminium est utilisé comme substance classique pour engendrer l'ion aluminium. Les présents inventeurs ont porté leur attention à la propriété coagulante de la solution de culture d'Aureobasidium et ont tenté de séparer des matières grasses et des huiles en utilisant cet effet coagulant. Cependant, l'effet coagulant remarquable de la solution de culture d'Aureobasidium est limité à des substances telles qu'une solution de kaolin, l'effet coagulant n'étant pas remarquable sur les matières grasses et les huiles. Cependant, il a été confirmé que la matière en poudre préparée en mélangeant de la solution de culture d'Aureobasidium et de la cyclodextrine, lorsqu'elle est mélangée à des matières grasses et des huiles conjointement avec du sulfate d'aluminium, a un effet coagulant remar quable sur les matières grasses et les huiles. Il est considéré que cela est dû à l'action simultanée de l'effet d'excellentes propriétés coagulantes de la solution de culture d'Aureobasidium et de la fonction de formation de clathrate de la cyclodextrine, provoquant la coagulation des matières grasses et des huiles. Cependant, le sulfate d'aluminium mentionné ci- dessus ne peut être considéré comme étant une substance comestible sans danger pour l'organisme humain. En conséquence, il est manifeste que le sulfate d'aluminium n'est en aucun cas une substance préférable à incorporer aux savons, aux détergents, etc., qui sont utilisés pour la coagulation et l'élimination des matières grasses et des huiles ou analogues. En conséquence, les présents inventeurs ayant effectué des recherches sur des substances, telles que le sulfate d'aluminium, qui se dissolvent dans l'eau en engendrant un ion positif et qui facilitent la propriété coagulante de la solution de culture d'Aureobasidium, il a été trouvé que le chitosane peut être utilisé à la place du sulfate d'aluminium, le chitosane étant un saccharide macromoléculaire qui a pour caractéristique de devenir chargé positivement lors de sa dissolution dans l'eau. Comme cela est bien connu, le chitosane est extrait classiquement des carapaces de crabes et, tel quel, est une substance comestible sans aucun danger pour l'organisme humain. Cette substance est un additif bien connu dans les produits alimentaires diététiques. Ces effets connus comprennent l'abaissement de la pression sanguine, la prévention des thrombus, la stimulation de l'immunocompétence, l'inhibition de la multiplication des bactéries ou des bacilles, la fonction d'absorption des matières grasses présentes dans les aliments ingérés et d'excrétion de ces matières grasses telles quelles, c'est- à-dire un effet amaigrissant, et un effet de rétention d'humidité dans les produits cosmétiques. D'après les connaissances précitées, un mélange en poudre constitué d'une solution de culture d'Aureobasidium sous forme d'un clathrate avec une poudre de cyclodextrine, désigné simplement ci-après sous le nom de "poudre de solution de culture d'Aureobasidium", auquel a été ajouté du chitosane, est proposé dans cette forme de réalisation de la présente invention. Il est préférable que le rapport de mélange de la poudre de solution de culture d'Aureobasidium au chitosane soit choisi dans l'intervalle de 10:1 à 1:5. De manière classique, afin de parvenir à un effet coagulant en utilisant la solution de culture d'Aureobasidium conjointement avec du sulfate d'aluminium, un procédé consistant à ajouter tout d'abord la solution de culture d'Aureobasidium et ajouter ensuite du sulfate d'aluminium à la solution était requis. Cependant, lorsque la solution de culture d'Aureobasidium a été transformée en un mélange en poudre par formation d'un clathrate avec de la cyclodextrine et mélangée à du chitosane dans le rapport de mélange précité, il a été possible de provoquer la condensation de matières grasses et d'huiles en ajoutant le mélange en poudre simultanément à des matières grasses et des huiles. I1 est considéré que la forte augmentation du rapport de mélange du chitosane à la solution de culture d'Aureobasidium en poudre comparativement au rapport classique, dans l'intervalle de l00:1 à 20:l, est utile. I1 est escompté que la substance obtenue en mélangeant la poudre de solution de culture d'Aureobasidium et le chitosane de cette manière ait d'excellents effets comme adjuvant médicamenteux ou aliment diététique, les effets du chitosane, tels que la stimulation de l'immunocompétence, l'abaissement de la pression sanguine et la prévention des thrombus, s'ajoutant aux effets médicaux de la solution de culture d'Aureobasidium. En outre, il est possible d'escompter que ce mélange en poudre ait un excellent effet d'élimination des graisses internes en raison de l'addition de la fonction d'amaigrissement due au chitosane à l'effet de coagulation des matières grasses et des huiles que possède la poudre de solution de culture d'Aureobasidium. En outre, il est possible d'escompter que des produits cosmétiques, des savons liquides pour le corps et des produits similaires de bonne qualité, qui sont constitués de ces ingrédients, aient d'excellents effets en raison de l'effet de rétention d'humidité du chitosane sur les cosmétiques, s'ajoutant à l'effet coagulant de la poudre de solution de culture d'Aureobasidium. Suivant un procédé de la présente invention, un clathrate en poudre est obtenu de la manière décrite ci- dessous. Une quantité appropriée de cyclodextrine est ajoutée à une solution de culture d'Aureobasidium pour obtenir un mélange liquéfié. Puis le mélange liquéfié obtenu est agité pour former un mélange liquide contenant des clathrates de la solution de culture d'Aureobasidium comme constituant inclus et la cyclodextrine comme constituant incluant. Le mélange liquide contenant les clathrates est soumis à un séchage par pulvérisation pour obtenir un clathrate en poudre. Le procédé d'agitation est de préférence mis en oeuvre par agitation énergique au moyen d'un agitateur à fort cisaillement, par exemple un homogénéisateur. Le temps d'agitation dépend de l'intensité d'agitation ; cependant un procédé convenable de formation de clathrate peut être habituellement mis en oeuvre à une vitesse d'agitateur de 500 à 10 000 tr/min pendant un temps de 10 à 90 minutes, de préférence à une vitesse de 2000 tr/min pendant un temps de 20 à 40 minutes. En outre, l'application d'ultrasons au mélange sous agitation pendant au moins une partie, de préférence pendant la totalité, du temps de ce procédé d'agitation donne un résultat préféré d'amélioration d'efficacité de mise en oeuvre, en activant considérablement le processus de formation de clathrate. Une fois achevée la mise en oeuvre d'une agitation de cette manière, le mélange est soumis au traitement de séchage par pulvérisation. La température du séchage par pulvérisation est comprise dans l'intervalle d'environ 150 C à 180 C, de préférence de 160 C à 175 C, d'après l'étude effectuée en ce qui concerne l'efficacité de séchage et l'inhibition de la dégradation du produit. La poudre obtenue par le séchage par pulvérisation présente un écoulement libre et une manipulation aisée. En conséquence, l'opération de pesée est facilitée. En outre, des essais de compression de la poudre à laquelle ont été ajoutés un excipient convenable et un lubrifiant de la manière requise ont indiqué qu'il était possible de parvenir à une résistance et une propriété de maintien de forme convenables pour différentes dimensions. En conséquence, des comprimés ayant des dimensions convenables pour l'absorption par voie buccale peuvent être produits. En outre, il a été également démontré que des produits satisfaisants peuvent être obtenus par compression sans aucun excipient pour des utilisations courantes. En outre, dans un essai d'entreposage au repos de longue durée, la période de temps la plus longue s'est écoulée avant de constater la croissance de moisissures dans le produit, comparativement à la substance témoin constituée de la solution non traitée de culture d'Aureobasidium. EXEMPLE Un mélange de 700 parties en poids d'une solution de culture d'Aureobasidium disponible dans le commerce ("RAKUSHO"TM, de Health Support Japan Corporation, Tokyo) et 300 parties en poids de cyclodextrine ("K-100"TM, de Ensuiko Sugar Refining Co., Ltd.) qui contient environ 70 en poids d'a-cyclodextrine a été mélangé à 1000 parties en poids d'eau et le mélange obtenu a été agité énergiquement au moyen d'un homogénéisateur. La vitesse d'agitation a été réglée à 4000 tr/min pendant les dix premières minutes et à 2000 tr/min pendant les quinze minutes suivantes. Par ce procédé d'agitation; il s'est formé des clathrates contenant la solution de culture d'Aureobasidium comme constituant inclus dans la cavité centrale de la cyclodextrine comme constituant incluant. Après la fin d'opération d'agitation, le mélange liquide a été séché par pulvérisation au moyen d'un appareil de séchage par pulvérisation ou d'un appareil similaire, à une température d'environ 170 C et une composition de solution de culture d'Aureobasidium en poudre a été obtenue. La poudre avait un effet coagulant suffisant lors de son utilisation conjointement avec du sulfate d'aluminium. Des expériences effectuées sur des poudres dans le cas où la solution de culture d'Aureobasidium a été mélangée respectivement à de l'a-CD, de la P-CD et de la y- CD ont été ensuite effectuées. Chaque poudre dans laquelle de l'a-CD, de la (3-CD ou de la y-CD a été utilisée dans des conditions identiques à celles de l'exemple 1 décrit ci- dessus, respectivement, a été utilisée conjointement avec du sulfate d'aluminium et il a été constaté la présence ou l'absence d'un effet coagulant. Les résultats sont présentés sur le Tableau 1. Sur le Tableau 1, "B" signifiant "bon" représente le cas où il a été constaté un effet coagulant, et "M" signifiant "mauvais" représente le cas où il a été constaté un léger, mais non remarquable, effet coagulant. TABLEAU 1 Solution de culture d'Aureobasidium a-CD (3-CD y-CD Evaluation de l'activité B M M Puis de l'a-CD a été mélangée au mélange de P-CD et de y-CD (1:1) et l'effet coagulant dans le cas où l'on fait seulement varier la proportion d'a-CD a été étudié. Les résultats sont présentés sur le Tableau 2. TABLEAU 2 a-CD ((3-CD) + (y-CD) Evaluation de _l'activité 10 (% en poids) 90 (% en poids) M 30 70 M 50 _ 50 B 70 30 B 80 20 B D'après les résultats précités, un bon effet coagulant peut être obtenu lorsque la solution de culture d'Aureobasidium est mélangée à de la cyclodextrine contenant une quantité égale ou supérieure à 50 % en poids d'a-CD. Essai de stabilité (1) Juste après production Afin de contrôler le maintien de stabilité des compositions de la solution de culture d'Aureobasidium sous forme d'un clathrate en poudre produit par le procédé de la présente invention, la propriété de coagulation ou gélification rapide par l'ion aluminium dans la solution de culture décrite dans le numéro précité de la Patent Office Gazette a été utilisée. Vingt parties en poids de la composition de solution de culture d'Aureobasidium en poudre (échantillon A) obtenue dans le présent exemple ont été mélangées à 100 parties d'eau, et le mélange a été agité efficacement jusqu'à obtention d'une solution. Lorsque 20 parties en poids de solution aqueuse à 25 % en poids de sulfate d'aluminium ont été ajoutées à cette solution, la solution a subi une gélification immédiatement et s'est transformée en une pâte analogue à de la gelée "konjak". A titre comparatif, le même essai utilisant la matière première (échantillon B témoin) de solution de culture d'Aureobasidium (100 parties) utilisée pour le présent exemple a été répété et une gélification similaire a été observée. En conséquence, les résultats montrent que la stabilité de la solution de culture est maintenue substantiellement et qu'il ne se produit aucune variation notable de qualité telle qu'une détérioration, une dégradation, etc., par les traitements de formation de clathrate et de séchage par pulvérisation conformément à la présente invention. (2) Après stockage Les échantillons A et B mentionnés ci-dessus ont été soumis à un essai identique à celui décrit dans le paragraphe (1) ci-dessus, sauf que ces échantillons avaient été stockés tels quels dans des bouteilles à large encolure maintenues ouvertes dans une pièce en été pendant trois mois, de la mi-juillet à la mi-septembre à Tokyo. L'échantillon A de la présente invention a présenté la formation d'un gel ayant une dureté égale à celle d'un gel frais. En ce qui concerne l'échantillon B, il a commencé à moisir en surface après une semaine de stockage et il s'est couvert de moisissure sur la totalité de sa surface, en engendrant une odeur nauséabonde en un temps de deux semaines. Cet échantillon n'était pas utilisable et il était manifeste que le contenu avait subi une variation de qualité, une détérioration ou une dégradation. En ce qui concerne l'échantillon A conforme à la présente invention, une légère croissance de moisissure a été observée juste avant la fin de la période d'étude, mais elle ne s'étendait pas sur la totalité de la surface et aucune production d'odeurs nauséabondes n'a été constatée. EXEMPLE 2 Le procédé de l'EXEMPLE 1 a été utilisé dans ce cas. En outre, les quantités de solution de culture d'Aureobasidium et de cyclodextrine utilisées dans l'EXEMPLE 1 ont été modifiées, des quantités respectivement égales à 900 parties en poids et 100 parties en poids étant utilisées, et des ultrasons à 90 kHz (puissance nominale 1 kW) ont été appliqués au cours de la dernière partie du procédé d'agitation, c'est à dire à 2000 tr/min pendant 15 minutes. La composition obtenue dans ce cas a donné un gel extrêmement dur lors de l'essai de stabilité. A l'exception de ce résultat, des résultats approximativement identiques à ceux de l'EXEMPLE 1 en terme d'essais de stabilité (1) et (2) et également d'essais de production de comprimés ont été obtenus. EXEMPLE 3 (1) Essai de coagulation de matières grasses et d'huiles 3 mg de "la yu" ou d'une huile au piment chinoise ont été ajoutés à 100 ml d'eau dans un bêcher et le mélange a été agité convenablement. Puis (i) une solution de culture d'Aureobasidium, (ii) de la cyclodextrine, (iii) une poudre de solution de culture d'Aureobasidium sous forme d'un clathrate avec de la cyclodextrine et (iv) du chitosane (produit de Koyo Chemical Co., Ltd.) ont été ajoutés chacun en une quantité de 10 mg, séparément ou sous forme d'un de leurs mélanges, et le mélange obtenu a été agité. Puis les états de coagulation de l'huile au piment ont été examinés. On notera que, dans le cas du mélange précité, le rapport de mélange était constant. La coagulation de l'huile au piment sous une forme sphérique d'un diamètre égal ou supérieur à 3 mm a été évalué par "B", pour "bonne", la coagulation sous forme de sphères d'un diamètre de plus de 2 mm à moins de 3 mm a été évaluée à "m" pour "moyenne" et la coagulation sous forme de sphères d'un diamètre inférieur à 2 mm a été évaluée par "M" pour "mauvaise". Les résultats sont présentés sur le Tableau 3. La raison pour laquelle l'huile au piment a été utilisée dans ces expériences consiste en le fait que l'huile au piment a une couleur rouge permettant une confirmation visuelle aisée d'une coagulation. TABLEAU 3 Exp. 1 Exp. 2 Exp. 3 Exp. 4 Exp. 5 Exp. 6 Exp. 7 Exp. 8 Exp. 9 (i) aj aj aj aj ( ii) aj aj aj aj a j aj ) _. aj aj _ aj a7 aj Indice M M - M M m m -- M M B Puis des expériences sur la coagulation ont été effectuées pour diverses proportions de mélange du chitosane. Dans ces expériences, la coagulation a été évaluée de la manière décrite précédemment en faisant varier seulement la quantité ajoutée de poudre de solution de culture d'Aureobasidium sous forme d'un clathrate avec de la cyclodextrine (poudre CD) pour différentes valeurs à 10 mg de chitosane. Les résultats sont présentés sur le Tableau 4. TABLEAU 4 Ch itosane (mg ) 10,0 1 0,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 Poudre CD (mg) 0,5 0,8 1,0 2,5 5,0 10,0 50,0 75,0 100 Indice M m B B B B B m M D'après les résultats ci-dessus, il a été constaté qu'il a été possible de parvenir à une bonne coagulation des matières grasses et des huiles lorsque du chitosane a été ajouté à la poudre de solution de culture d'Aureobasidium sous forme d'un clathrate avec de la cyclodextrine (poudre CD) en un rapport compris dans l'intervalle de 10:1 à 1:5. Bien que des cas d'utilisation d'huile au piment choisie comme huile soient indiqués dans les exemples expérimentaux mentionnés ci-dessus, la présente invention permet d'obtenir les mêmes résultats dans le cas d'utilisation d'autres huiles telles que l'huile de sésame, une huile pour salade, etc. La composition de la solution de culture d'Aureobasidium conforme à la présente invention présente des propriétés physiques et une durée de conservation améliorées sous forme de clathrate en poudre formé par traitement de la solution de culture d'Aureobasidium comme constituant inclus avec de la cyclodextrine comme constituant incluant. La transformation d'un liquide visqueux constitué de la solution usuelle de culture d'Aureobasidium en une poudre améliore à la fois l'aptitude à l'entreposage et la facilité de manipulation et étend considérablement son champ d'application et son domaine de perfectionnement. Le mélange en poudre formé de la composition de solution de culture d'Aureobasidium en poudre additionnée de chitosane présentant un effet coagulant remarquable sur les matières grasses et les huiles et le chitosane étant une substance comestible, le mélange est également extrêmement utile, ce qui fait qu'il est possible de prévoir son utilisation comme substance non seulement pour des savons, des produits cosmétiques et des produits similaires, mais également pour des médicaments, des aliments diététiques et des aliments pour régime amaigrissant. Il va de soi que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et que de nombreuses modifications peuvent y être apportées sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS 1. Composition de solution de culture d'Aureobasidium ayant des propriétés physiques et une durée de conservation améliorées, caractérisée en ce qu'elle est sous forme de clathrate en poudre dans lequel la solution de culture d'Aureobasidium servant de constituant inclus est incorporée à la cyclodextrine servant de constituant incluant. 2. Composition de solution de culture d'Aureobasidium suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la cyclodextrine contient une quantité égale ou supérieure à 50 % en poids d'a-cyclodextrine parmi les a-, et y-cyclodextrines. 3. Procédé pour la production d'une poudre de solution de culture d'Aureobasidium, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à ajouter une quantité appropriée de cyclodextrine à une solution de culture d'Aureobasidium pour obtenir un mélange liquéfié ; à agiter le mélange liquéfié pour former le mélange liquide contenant des clathrates de la solution de culture d'Aureobasidium comme constituant inclus et de la cyclodextrine comme constituant incluant ; et à sécher par pulvérisation le mélange liquide, sous forme d'un clathrate en poudre. 4. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que le mélange liquéfié est soumis à l'application d'ultrasons dans l'étape d'agitation. 5. Procédé suivant l'une quelconque des revendi cations 3 et 4, caractérisé en ce que le rapport pondéral de la solution de culture d'Aureobasidium à -la cyclo- dextrine est compris dans l'intervalle de 20:l à 5:1. 6. Mélange en poudre suivant l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que du chitosane est ajouté à la composition de solution de culture d'Aureobasidium en poudre. 7. Mélange en poudre suivant la revendication 6, caractérisé en ce que le rapport pondéral de mélange de la composition de la solution de culture d'Aureobasidium en poudre au chitosane est compris dans l'intervalle de 10:l à 1.5.