Brevet FR2808196A1 — publié le 20011102

NOUVEAUX MÉDICAMENTS A BASE DE MÉLANGES DE SESQUITERPENES L'invention a pour objet de nouveaux médicaments à base de "langes de sesquiterpénes. Les sesquiterpènes sont formés de répétitions d'unités isoprénoïdes en CS et constituent pour bon nombre d'entre eux des principes actifs d'essences naturelles. Les travaux antérieurs des inventeurs avaient montré l'existence dérivés de tels composés, plus spécialement de géranyl-farnésyl, dans les produits d'extraction obtenus à partir de masses tumorales (source tumorale proprement dite ou source métastasique). Ces résultats ont été rapprochés de données expérimentales montrant l'intérêt d'isoprénoïdes en C15 et C2o dans la formation de dérivés protéiques liés à la cellule tumorale, telle que la protéine 21 ras. Ainsi, le blocage de la farnésylation des protéines pourrait permettre de transformer l'activité oncogénique de la protéine 21 ras et par suite de détruire la cellule tumorale par apoptose. Les inventeurs ont à présent constaté un effet synergique de certains mélanges de sesquiterpènes de grand intérêt en cancérologie, pour des indications thérapeutiques spécifiques. Ces indications thérapeutiques sont liées à l'accumulation spécifique de ces sesquiterpènes au niveau des masses tissulaires à renouvellement rapide, de type physiologique ou pathologique, telles les masses tumorales. L'invention a donc pour but de fournir de nouveaux médicaments à effet antitumoral spécifique à base de mélanges de sesquiterpènes. Selon un autre aspect, elle vise également l'utilisation de ces compositions pour l'élaboration de médicaments pour la prévention et/ou le traitement de tissus épithéliaux ou de tissus conjonctifs. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont caractérisées ce qu'elles renferment, le cas échéant en association avec un véhicule pharmaceutiquement inerte, une quantité thérapeutiquement efficace mélange d'a-bisabolol et de farnésol et/ou de géraniol. L'a-bisabolol est un sesquiterpène cyclique de formule La farnésol est un sesquiterpène linéaire répondant à la formule (CH3) 2 - C = CH - (CH2) 2 - C (CH3) = CH - (CH2) 2 - C (CH3) = CH - CH20H. Le géraniol est également un sesquiterpéne linéaire et répond à la formule (CH3) 2 - C = CH - (CH2) 2 - C (CH3) = CH - OH Des compositions pharmaceutiques avantageuses selon l'invention renferment, dans leur principe actif, de 99 à 1 % d'a-bisabolol et, respectivement, de 1 à 99% de farnésol et/ou de géraniol, et notamment de 90 à 10% d'a-bisabolol et, respectivement, de 10 à 90% de farnésol et/ou de géraniol. Dans les mélanges formés d'a-bisabolol et de farnésol et/ou de géraniol, l'a-bisabolol est avantageusement présent selon des proportions au moins égales à celles du farnésol, ou supérieures. L'invention vise ainsi en particulier les compositions pharmaceutiques renfermant dans leur principe actif 99 à 50% d'a-bisabolol et, respectivement 1 à 50% de farnésol, et notamment 90 à 50% d'a-bisabolol et, respectivement, 10 à 50% de farnésol, comme avec le géraniol. Dans les compositions renfermant, en mélange avec l'a-bisabolol, du farnésol et du géraniol, le géraniol est généralement proportions plus faibles, ou au plus égales à celles du farnésol. Ces sesquiterpénes sont ainsi par exemple notamment dans des rapports de 35,35, au 40,20,40% ou 20,40,40% respectivement en farnésol, géraniol et a bisabolol. Les compositions pharmaceutiques définies ci-dessus peuvent renfermer en outre un ou plusieurs autres sesquiterpénes linéaires ou cycliques. Il s'agit par exemple de sesquiterpénes à noyau bisabolane comme le lancéol, ou encore à noyau guai ane, avec le groupe guaïanolides et les dérivés à noyau patchoulane. Ces composés peuvent représenter de 1 à 5% dans les compositions définies ci-dessus, étant entendu que leur proportion toujours inférieure à celle du farnésol du géraniol et du a-bisabolol. Les formes énantiomères ou diastéréoisomères des sesquiterpénes mis en oeuvre dans les mélanges de l'invention font également partie des modes de réalisation de cette dernière. Les formes lévogyres sont particulièrement préférées pour les applications en thérapeutique, les autres formes étant plus spécialement utilisées comme réactifs de laboratoire. On sait que les sesquiterpénes des mélanges selon l'invention sont largement utilisés en parfumerie et sont donc aisément disponibles comme produits commerciaux. Comme évoqué plus haut ils peuvent être également obtenus par synthèse ou par extraction à partir de végétaux. Par synthèse chimique, un ou plusieurs de leurs groupes -OH peuvent être bloqués avec avantage par un groupement protecteur en opérant selon techniques classiques. En variante, ou le cas échéant en combinaison avec la disposition précédente, un ou plusieurs de ces groupes -OH peuvent être fonctionnalisés pour conférer des propriétés particulières aux composés, et notamment pour permettre leur utilisation comme prodrogues. On citera comme exemples les esters, notamment les acétates, et les éthers, notamment les éthers d'alcoyle de 1 à 4 atomes de carbone, ou les dérivés glycosylés. Les études toxicologiques de ces composés ont permis de mettre évidence leur grande inocuité. On notera à cet égard que l'a-bisabolol répond au système G.R.A.S aux Etats-Unis. Les mesures de toxicité aigue chez la souris mâle et la souris femelle, ainsi que chez le rat mâle et le rat femelle (doses administrées de 600, 800 et 1 200 g de mélange de sesquiterpènes par kg de poids vif) montrent que la DL5o est nettement supérieure à 5g/kg. Par voie orale, la DLSp est ainsi de 7,5g/kg chez la souris mâle, supérieure à 9,75 glkg chez le rat mâle ou le rat femelle, et de 12g/kg chez la souris femelle. Par voie i.p., la DLSO mesurée est supérieure à lg/kg (1,25 g/kg chez la souris mâle, 1,3 g/kg chez la souris femelle et 1,80 g/kg chez le rat femelle, 1,90 g/kg chez le rat mâle). A l'autopsie des animaux, on n'observe aucune atteinte au niveau des organes. Des études de toxicité nutritionnelles à long terme ont été également réalisées chez des rats, avec contrôle de la prise alimentaire, et évaluation du poids des animaux. Il s'agit de rats ayant reçu pendant une période de 3, 12 et 24 mois alimentation normale avec incorporation de 0,400 g de composition à base de sesquiterpénes comme définie plus haut pour 100 g de nourriture. résultats des études anatomo-pathologiques n'ont pas permis de relever de quelconques anomalies physiologiques ou pathologiques. En particulier, aucun développement tumoral spontané n'a été observé, permettant de conclure à l'absence de toxicité nutritionnelle à long terme. Ces propriétés avantageuses permettent de mettre pleinement à profit les effets synergiques, démontrés dans les exemples, des activités antitumorales des mélanges de sesquiterpènes définis ci-dessus, dans des applications antitumoral es spécifiques chez l'homme et l'animal. Dans ces applications, les compositions pharmaceutiques renferment le échéant des principes actifs d'autres médicaments. On citera notamment leur association avec les vitamines hydrosolubles et liposolubles, acides aminés tels que la (3-alanine et avec des anti-tumoraux. Comme agents antimitotiques utilisables, on citera à titre d'exemple, des alkylants, des nitrosourées, des organoplastines, des antifoliques, des antipuriques, des antipyrimidiques, des inhibiteurs topoisomérases, des agents de fuseau, et des agents cytostatiques hormonaux et non hormonaux. Ces associations peuvent également comprendre des antibiotiques comme les penicillines, les céphalosporines, les bêtalactamines, les aminosides, les lincosamides, les polymyxines, les quinolones, les nitroso-5-amidazoles, les sulfamides, les teicoplanines, la vincomycine (ou tout autre agent antitumoral actif). On utilisera également avec avantage les compositions pharmaceutiques de l'invention en association avec des composés facilitant leur assimilation tels que des sucres comme le glucose, des protéines par exemple hydrolysats de protéines animales, notamment de poisson, ou des lipides, comme les huiles alimentaires, telles que celles de colza, de tournesol ou d'olive. Il est également avantageux d'associer suivant la localisation de la tumeur un traitement chirurgical et/ou une thérapeutique de chimiothérapie ou radiothérapie au traitement avec administration de compositions selon l'invention. L'emploi des différents mélanges a pour conséquence de diminuer les doses actives en chimiothérapie ou en radiothérapie, et par suite diminuer les effets secondaires iatrogènes plus ou moins toxiques. Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont administrables sous différentes formes. On peut ainsi les administrer par voie orale, cutanée,ou injectable, en sous-cutanée, par voie veineuse, ou par voie intramusculaire ou encore par voie rectale. Pour l'administration par voie orale, on a recours en particulier à des ampoules, comprimés, pilules, tablettes, gélules, gouttes, sirop. Ces compositions renferment avantageusement de 7 à 25 g de principe actif par unité de prise, de préférence de 5 à 10 g (correspondant à des prises allant de 0,1 à 0,7 au 0,8 g/kg de poids corporel) Pour l'administration par voie cutanée, sous forme de pommades, de crème, de gel ou de toute autre forme galénique topique adaptée, les doses sont comprises entre 2 et 15 g en une ou plusieurs applications. D'autres formes d'administration comprennent des solutions injectables par voie intraveineuse, sous-cutanée ou intramusculaire, élaborées à partir de solutions stériles ou stérilisables, et réparties dans différents conditionnements par exemple de 10, 50, 100, 500 et 1000 ml. Il peut s'agir également de suspensions ou d'émulsions. Ces formes injectables renferment, par unité de prise, 10 à 50 g de principe actif, de préférence de 10 à 25 g. Pour l'administration par voie rectale, on utilise des suppositoires comme formes galéniques. L'étude des effets des compositions selon l'invention chez le rat normal a montré que les mélanges de sesquiterpénes des principes actifs se fixent et s'accumulent au niveau des tissus à renouvellement cellulaire rapide. Les compositions de l'invention sont donc tout spécialement appropriées pour le traitement de tout cancer : cancers digestifs, uterins, vaginaux, tumeurs du pharynx et de larynx, mélanomes de la peau, cancers du pancréas, lymphome, poumons, prostate, vessie, os, etc. L'application des compositions pharmaceutiques de l'invention pour prévenir tout développement tumoral potentiel dans les cancers énumérés ci-dessus entre également dans le champ de l'invention. A titre indicatif, la posologie utilisable chez l'homme, pour le traitement de tumeurs mammaires ou de tumeurs pulmonaires, correspond aux doses suivantes : 7 à 25 g/jour (0,1 à 0,7 g/kg) de principe actif à base de mélanges de sesquiterpènes, en une ou plusieurs prises. Selon un autre aspect, l'invention vise l'utilisation des mélanges de sesquiterpènes définis plus haut pour l'élaboration médicaments antitumoraux. Elle vise également leur utilisation comme réactifs de laboratoire servant de référence dans des études d'activités antitumorales de produits à tester. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront dans les exemples qui suivent, en se référant aux figures 1 à 6, représentent l'effet, sur des cellules en culture, respectivement - les figures 1 à 3, d'un mélange de farnésol et d'a-bisabolol d'une part, de ses constituants d'autre part, à 0,5mM (figure 1) et 0,1 (figure 2, échelle de 0 à 14000 et figure 3, échelle de 0 à 400), - la figure 4, d'un mélange de farnésol et d'oc-bisabolol â différentes concentrations,par rapport au farnésol seul, - la figure 5, d'un mélange de géraniol et d'oc-bisabolol à différentes concentrations, par rapport au géraniol seul, et - la figure 6, d'un mélange farnésol / géraniol / oc-bisabolol à différentes concentrations. Exemple 1 : Etude comparative de l'activité sur la lignée MCF7 du farnésol (F) d'une part et d'un mélange selon l'invention de farnésol et d'a- bisabolol (F+B) d'autre part Les cellules de la lignée MCF7 sont des cellules d'adénocarcinome mammaire à croissance rapide. Les doses testées au cours de ces essais sont de 0,1.10-3 et 0,5.10-3M. Des dilutions 1/100 sont faites extemporanément dans le RPMI seul et agité de façon à obtenir une émulsion homogène au moment de l'emploi. Le nombre moyen de cellules ensemencées est de 10 millions environ pour chacun des essais. Premier essai : recherche d'un effet sur les cellules MCF7 à la doses de 0,5 mm. Lors du 11 "' repiquage des cellules, ont été ensemencées: - une boîte de cellules MCF7 pour culture, - une boîte de cellules MCF7 témoin, - une boîte avec le même nombre de cellules +(F), 0,5mM, - une boîte avec le même nombre de cellules + (17+13), 0,5mM. - une boîte avec le même nombre de cellules + B, 0,5mM. Les boîtes ont été placées à l'étuve, les bouchons dévissés, les milieux changés tous les deux jours. Le huitième jour après lavage avec 5 ml de PBS, les cellules sont décollées avec du PBS-EDTA, récupérées à l'aide de 10 ml de RPMI 10% SVF, puis comptées à l'aide d'une cellule Malassez. Second essai : recherche d'un effet sur les cellules MCF7 à la dose de 0,1 MM. On opère comme précédemment mais en ensemençant au 12"e repiquage des cellules et en utilisant des doses de 0,1 mM de (F), (17+B) et (B). Résultats Premier essai : Test à la dose de 0,5 mM (les résultats sont donnés sur la figure 1 - les boîtes de cellules en culture présentent un lit adhérent homogène de cellules avec quelques cellules mortes, le milieu est de teinte orangée. - la boîte contenant F 0,5 mM montre peu de cellules adhérentes et grand nombre de cellules flottantes (mortes), le milieu est de teinte violine. - la boîte contenant un mélange F + B 0,5 mM montre des cellules agglomérées, flottantes (mortes) en grand nombre, le milieu est de teinte violine. Il n'y a que de rares cellules adhérentes. - la boîte contenant B 0,5 mM montre peu de cellules adhérentes et grand nombre de cellules flottantes (mortes), le milieu est de teinte violine Cet aspect est comparable à celui de la culture avec F seul. Après comptage, les résultats suivants sont obtenus témoin repiquage : 12570.103 témoin essai : 13500.103 seul 0,5 mM : 370.103 'lange F + B 0,5 mM (50150): 70.103 0,5 mM : 250.103 Ces résultats sont représentés sur la figure 1. Second essai : Test à la dose de 0,1 mM - la boîte cellules en culture (témoin) présente un lit adhérent homogène de cellules avec quelques cellules mortes, le milieu est de teinte orangée. - les boîtes contenant B présentent un lit adhérent homogène de cellules avec quelques cellules mortes, le milieu est de teinte orangée. aspect est comparable à celui de la boîte témoin. - la boîte contenant F seul 0,1 mM montre peu de cellules adhérentes et un grand nombre de cellules flottantes (mortes), le milieu est de teinte violine. - la boîte contenant un mélange F +B 0,1 mM montre peu cellules adhérentes un grand nombre de cellules flottantes (mortes), le milieu est de teinte violine. Après comptage, les résultats suivants sont obtenus témoin essai : 12780.103 F seul 0,1 mM : 385.103 mélange F + B 0,1 mM (50150): 190.103 B 0,5 mM : 8930.103 Les résultats obtenus mettent en évidence une altération de l'adhérence des cellules MCF7 en culture par F seul, le mélange F + B, et B seul, à la dose de 0,5 mM. Cette altération se retrouve lors de l'essai effectué à la dose de 0,1 mM pour F seul et le mélange. Concernant B, l'altération est très faible. Le comptage montre un nombre de cellules inférieur à celui des témoins, mais l'aspect macroscopique de la boîte culture est comparable à la boîte témoin. Lors des deux essais, le mélange F + montre une altération plus importante que celle obtenue avec F seul quelle que soit la dose observée. Lors des ces essais, l'activité du mélange + B vis-à-vis des cellules MCF7 d'adénocarcinome mammaire en culture apparaît comme étant supérieure à celle de F seul ou de B seul à même dose. Ces résultats sont représentés dans les graphes des figures 2 et 3 avec des échelles, respectivement, de 0 à 14 000 et à 400. Exemple 2 : Etude comparative de l'activité sur des cellules RIN 5mF du farnésol (F) ou du géraniol (G) d'une part et mélanges selon l'invention, respectivement, de farnésol et d'a,-bisabolol (F+B) ou de géraniol et d'a,- bisabolol (G + B) On opère dans les conditions rapportées dans l'exemple 1. Les résultats obtenus sont les suivants a-EffetdeFetdeF+B produit (0,1 mM) nombres de cellules (x 103) - F 0,1 mM.................................................................................. 70. 10 3 - F + B (90/10) ........................................................................... 62. 103 - F + B (50/50)................................................ ...................... 60.103 # 3 - témoin......................................................................................12000 . 10 On constate à l'examen de ces résultats, également illustrés par la figure 4, que le mélange selon l'invention, à différentes doses, permet de réduire nombre de cellules d'au moins 10% dans les conditions de l'essai par rapport au farnésol seul. b-Effet deGetdeG+B rproduit 0,1 mM) nombre de cellules (x 103) - G................................................................................................ 6900.103 - G + B(90/10)............................................................................. 1240. 103 - G + B (50150)............................................................................ 245. 103 - témoin........................................................................................11600 . 10 3 On observe là encore l'effet avantageux des mélanges selon l'invention particulier aux proportions 50150 (voir également la figure 5). On notera avec intérêt que lors des études en culture de cellules, où des cellules tumorales pancréatiques ont été associées à des cellules pancréatiques non-tumorales, les diverses compositions de farnésol, géraniol et a-bisabolol, n'ont détruit sélectivement que les cellules pancréatiques tumorales. c-Effet deF+G+B Produit (0,1 mM) nombre de celllules (x 103) - F + G + B (35/35/30)................................................................. 80. 103 - F + G + B (40/20/40)................................................................. 30. 103 - F + G + B (20/40/40)................................................................. 2.103 3 - temoin........................................................................................10850 . 10 Ces résultats mettent en évidence l'effet antimitotique des mélanges de l'invention, particulièrement avantageux avec les compositions ternaires riches en a-bisabolol. Exemple 3 : Application des mélanges selon l'invention au traitement de malades atteints de cancers Traitements Chop. : (sur 1 semaine) On administre au patient les produits suivants - OncovinR : 0,6 à 1,4 mg/m2 - Adriamycine : 50 à 300 mg/j - Endoxan : 100 à 500 mg/m2 - Prednisoné : traitement habituel Traitement couplé : ( sur 1 semaine) - Déticéné : 50 à 250 g/m2 - Doxorubiciné : 10 à 75 mg/m2 Cycle court : (3 à 4 jours) -Zophrèné : 1 ou '/2 comprimé de 4 à 8 mg/j associe a - Holoxan: 0,5 et 3 g/m2 - Cis-platine : 10 à 120 mg/m2 - Pionalidé : 100 et 400mg/j Les effets bénéfiques des mélanges selon l'invention ont pu être constatés dans le cadre d'essais cliniques effectués sur des malades cancéreux avec leur consentement éclairé. Ces essais ont confirmé la non toxicité des mélanges sur 6 mois de traitement et ont montré la disparition des métastases osseuses en 4 à 6 mois (analyse et scanner). On rapportera par exemple des cas de guérison 6 mois, chez six patients atteints, respectivement, d'un cancer généralisé et soumis à une chimiothérapie pendant 1 an, d'un cancer des cordes vocales, d'un cancer du sein avec métastases osseuses (à l'issue traitement, les analyses effectuées ont montré l'absence de nodules et la disparition des métastases), d'un lymphome, et d'une tumeur la vessie avec métastases au sacrum. REVENDICATIONS 1. Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment, le cas échéant en association avec un véhicule pharmaceutiquement inerte une quantité thérapeutiquement efficace d'un mélange d'a-bisabolol et farnésol et/ou de géraniol. 2. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 1, caractérisées en ce qu'elles renferment, dans leur principe actif, de 99 à 1 % d'a- bisabolol et, respectivement, de 1 à 99% de farnésol et/ou de géraniol, et notamment de 90 à 10% d'a-bisabolol et, respectivement, de 10 à 90% farnésol et/ou de géraniol. 3. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 2, caractérisées en ce qu'elles renferment dans leur principe actif un mélange d'a-bisabolol et de farnésol, l'a-bisabolol étant présent en proportion au moins égale a celle du farnésol ou supérieure. 4. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 3, caractérisées en ce qu'elles renferment dans leur principe actif 99 à 50% d'a-bisabolol et, respectivement 1 à 50% de farnésol, et notamment 90 à 50% d'a- bisabolol et, respectivement, 10 à 50% de farnésol et ou de géraniol. 5. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 2, caractérisées en ce que la proportion de géraniol est plus faible, ou au plus égale à celle du farnésol dans les compositions renfermant ces deux sesquiterpènes. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 5, caractérisées ce qu'elles renferment le farnésol, le géraniol, et l'a-bisabolol dans des rapports de 35/35/30, ou 40/20/40, ou 20/40/40. Compositions pharmaceutiques selon l'une quelconque revendications 1 à 6, caractérisées en ce qu'elles renferment en outre un plusieurs sesquiterpénes linéaires ou cycliques. Compositions pharmaceutiques selon l'une quelconque revendications 1 à 7, caractérisées en ce que les sesquiterpènes présentent sous leurs formes énantiomères et/ou diastéréoisomères, et particulier sous forme lévogyre. Compositions pharmaceutiques selon l'une quelconque revendications 1 à 8, caractérisées en ce qu'elles sont administrables par voie orale, cutanée, injectable ou, rectale. 0. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 9, caractérisées ce qu'elles sont destinées à une administration par voie orale et présentent sous forme de tablettes, comprimés, gélules, pilules, gouttes, sirop et qu'elles renferment de 7 à 25g de principe actif par unité de prise, re érence de 5 à 10g. p 'f 1. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 9, caractérisées ce qu'elles sont destinées à une administration par voie cutanée, et présentent sous forme de pommades, crème, ou gel, les doses étant comprises entre 2 et 15 g, en une ou plusieurs applications. 12. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 9, caractérisées en ce qu'il s'agit de solutions injectables, par voie intraveineuse, sous- cutanée ou intramusculaire, ces solutions renfermant avantageusement par unité de prise de 7 à de principe actif, de préférence de 10 à 25 g. 13. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 9, caractérisées en ce qu'elles sont destinées à une administration par voie rectale et se présentent sous forme suppositoires. 14. Compositions pharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 utilisées comme médicaments antitumoraux pour traiter tout type de cancers épithéliaux et de tissus conjonctifs. 15. Utilisation de mélanges de sesquiterpénes définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour l'élaboration de médicaments pour traiter tout type cancers épithéliaux et de tissus conjonctifs.