Brevet FR2804022A1 — publié le 20010727

OBJET DE L'INVENTION La présente invention a pour objet un composé de chondroïtine sulfate de bas poids moléculaire à activité cosmétique.Elle appartient à la classe A61K et aux sous-classes 7/36 - 7/40 - 7/48 - 33/06 - 33/32 et 35/56 de la classification internationale (6ème édition). PREAMBULE Les constituants de la matrice extracellulaire de la peau sont répartis dans différentes catégories qui comprennent principalement la laminine, les différents types de collagènes, l'élastine, la fibronectine ainsi que divers protéoglycanes dont les principaux sont l'héparan sulfate et les chondroitines sulfate. Ces protéoglycanes (Gallagher J.T., 1989. Current Biol., 1, 1201) sont constitués d'une partie protéique sur laquelle viennent se greffer des chaînes glycosylées aux motifs répétitifs, appelés glycosaminoglycans (GAG). Ils peuvent, suivant le type de peau (phanérogène ou glabre) présenter une répartition hétérogène ou homogène. Ils interviennent aussi comme constituants membranaires de la membrane plasmique, et certains sont directement associés aux fibrilles de collagène. Par leurs charges négatives, ils contribuent à créer autour d'eux un environnement capable de piéger des ions, de l'eau ainsi que divers métabolites. En outre, les chaînes GAG jouent un rôle essentiel par leur affinité pour les facteurs de croissance circulants. Les chondroïtines sulfates (CS) sont habituellement obtenus à partir de cartilages ou de peaux d'animaux et sont caractérisés par la présence d'un groupe sulfate sur l'unité disaccharide. Industriellement, les CS sont tirés essentiellement des cartilages aviaires, d'ovins, de bovins, de porcins et de squales. En raison du risque d'encéphalopathie bovine spongiforme, les cartilages de bovins et d'ovins ne sont pratiquement plus utilisés. I1 semble aussi que dans un avenir proche un plus grand nombre d'espèces de squales rentrent dans la catégorie des espèces protégées. ÉTAT DE LA TECHNIQUE Les procédés de préparation de CS bruts, c'est à dire de mélanges de différents CS et de leurs utilisations sous différentes formes pour le traitement d'inflammation, de la cicatrisation ou d'autres troubles de la peau sont bien connus (par exemple, brevets EP 0063973 du 3 novembre 1982, US 5364845 du 15 novembre 1994, FR 2756828 du 12 juin 1998, FR 2770777 du 10 novembre 1997, WO 98/22114 du 28 mai 1998, WO 98/26789 du 25 juin 1998, WO 98/27988 du 2 juillet 1998, US 5929050 du 27 juillet 1999). Le brevet US 4302577 publié le 24 novembre 1981 concerne un procédé de préparation de CS à partir de trachée de bovin par leur mise en solution à l'aide de soude concentrée, puis par formation d'un complexe chimique ou d'un passage de la solution sur des résines échangeuses d'ions. Différents traitements de purification sont ensuite appliqués. La durée totale du procédé dépasse, largement 72 heures, avec l'aide de réactifs à prix d'achat élevés. I1 en résulte une limitation des, applications des produits en raison de leur coût d'obtention très élevé. Le brevet FR 2756828 publié le 12 juin 1998 concerne un procédé de préparation de CS à partir de cartilages aviaires. Le CS est obtenu par réaction enzymatique à l'aide d'une alcalase pendant environ 8 heures, décantation, puis ultrafiltration. Le filtrat est ensuite soumis à une hydrolyse chlorhydrique afin de réduire le poids moléculaire du CS, pendant 5 à 6 heures. La solution est ensuite neutralisée à la soude, puis le CS est isolé par précipitation et double lavage à l'éthanol, l'opération durant environ 24 heures. Tous ces procédés utilisent, lors des phases de purification des produits ou des solvants organiques, ce qui les rend longs et coûteux. D'une manière générale, les compositions de CS qui ont été développées sont administrées par voie orale, sauf dans les cas de soins donnés pour des blessures ouvertes (coups ou brûlures) dans lesquelles l'accès des principes actifs aux couches profondes est possible. En effet, d'une part, l'administration par voie orale tient compte de la dégradation des CS qui se produit dans l'organisme et permet de véhiculer sur les sites ciblés, des molécules qui présentent alors des poids moléculaires plus faibles, et d'autre part l'application topique des compositions des CS dans le cas de plaies ouvertes ou de brûlures profondes est justifiée par des phénomènes de dégradation des macromolécules des CS qui se produisent in situ. Cependant, pour des applications topiques sans endommagement superficiel de la peau, en dehors de la mise en aeuvre des propriétés filmogènes des CS, les phénomènes de transport transcutané sont sans efficacité avec des macromolécules de poids moléculaires comparables à celui des CS, qui couvrent un domaine allant de 25000 à 150000 daltons. I1 n'est donc pas possible de traiter, par une application externe directe des CS, des troubles internes de la peau telles qu'une inflammation sous-cutanée, le vieillissement provoqué ou naturel, et d'autres troubles semblables pour lesquels les solutions tiennent habituellement à la stimulation du métabolisme des fibroblastes et à la reconstitution de structures d'hydratation de la matrice extracellulaire, généralement obtenus par la disponibilité in situ de fragments actifs des CS. En raison de toutes ces considérations, il était donc indispensable de mettre au point un composé de CS ou de fragments des CS, de préférence de bas poids moléculaire, à partir de matières premières provenant d'espèces ni protégées ou ni en voie de protection, garantissant l'absence de contaminations dangereuses pour l'homme, dans un procédé conduit exclusivement en voie aqueuse, à l'aide de techniques industrielles maîtrisées, qui conduisent, avec un coût et une durée réduits, auxdits CS ou fragments des CS, caractérisés par une activité métabolique précise afin d'obtenir des résultats d'application dermo-cosmétique améliorés. DESCRIPTION DE L'INVENTION La présente invention concerne un composé de chondroïtine sulfate de bas poids moléculaire à activité cosmétique, caractérisé en particulier par son efficacité d'incorporation in vitro de thymidine, de glucosamine et de leucine dans des macromolécules fibroblastiques du derme humain. L'application topique de ce composé à une concentration de 0,2% permet la stimulation des métabolismes de fibroblastes de mammifères, y compris de l'homme, et l'obtention d'au moins un des résultats suivants (i) augmentation de la croissance cellulaire de fibroblastes dermiques humains supérieure à 1,70%, déterminée par l'incorporation de thymidine ; (ii) augmentation de la croissance cellulaire de fibroblastes dermiques humains supérieure à 160%, déterminée par l'incorporation de glucosamine ; (iii) augmentation de la croissance cellulaire de fibroblastes dermiques humains supérieure à 70%, déterminée par l'incorporation de leucine ; L'invention concerne aussi un procédé de préparation dudit composé. Dans une réalisation selon l'invention, les matières premières utilisées proviennent d'animaux marins, en particulier de cartilages de sélaciens, tels que roussette, siki, etc ou d'arêtes de téléostéens, tels que cabillaud, lieu noir, lotte, flétan etc., et particulièrement de cartilages de raies. I1 est possible d'utiliser les animaux entiers-, mais d'une manière générale les matières premières utilisées dans la présente invention sont des sous-produits obtenus après valorisation des parties comestibles de ces espèces. Ces sous- produits sont constitués de la partie cartilagineuse proprement dite et de résidus de chair comprenant essentiellement des constituants protéiques, de matières grasses et de minéraux. Le procédé selon l'invention consiste donc à broyer des cartilages de raie, à les introduire dans un réacteur en présence d'eau déminéralisée dans un rapport cartilage/eau compris entre 10% et 60% en poids, de préférence compris entre 20% et 50% en poids, et à agiter à une température comprise entre 45 C et 65 C, de préférence entre 55 C et 60 C, température à laquelle on ajoute une protéase (par exemple, de la papaïne), la réaction étant poursuivie pendant une durée comprise entre 4 et 8 heures, de préférence entre 5 et 7 heures. Le pH est ensuite ajusté, à l'aide d'acide sulfurique concentré à une valeur comprise entre 0,7 et 2,2 de préférence entre 1,1 et 1,8, afin de précipiter les protéines et polypeptides et arrêter la réaction enzymatique. L'agitation est maintenue pendant une durée comprise entre 20 et 40 minutes, puis l'ensemble est neutralisé à l'aide d'hydroxyde de sodium pour obtenir un pH final compris entre 6,5 et 8,5, de préférence compris entre 7,0 et 8,0. L'ensemble est alors tamisé à l'aide d'un tamis métallique dont la maille est de préférence voisine de 200 microns. La matière sèche de la suspension est ajustée à l'aide d'eau déminéralisée à une concentration comprise entre 5% et 9% en poids, de préférence entre 6% et 8% en poids, afin de faciliter la décantation centrifuge des insolubles résiduels mise en oeuvre sur un décanteur centrifuge horizontal (type SDA de WESTFALIA). L'étape suivante consiste à éliminer la charge minérale ainsi que tous les composés de bas poids moléculaires contenus dans la solution par diafiltration d'eau déminéralisée maintenue à 50 C afin d'éviter toute contamination microbiologique. Cette opération est avantageusement effectuée à l'aide de membranes organiques en spirales (KOCH), montées dans un appareillage d'ultrafiltration, dont le seuil de coupure est compris entre 2000 et 10000 daltons, de préférence compris entre 4000 et 8000 daltons. Le déroulement de cette opération est suivi par la mesure de la conductivité de l'eau sortant des membranes. Une valeur de 300 #tSi est considérée comme satisfaisante. Le rétentat d'ultrafiltration est alors filtré sur des plaques de cellulose contenant du charbon actif, montées dans un filtre à plaque, de manière à parachever la décoloration et la désodorisation dudit rétentat. Le filtrat est ensuite concentré par évaporation de l'eau sous vide à une température d'environ 50 C l'évaporateur étant équipé d'un venturi permettant une injection d'un gaz neutre tel que l'azote, l'hélium ou l'argon, afin d'optimiser la désodorisation. Le gaz neutre a en effet pour rôle d'entrainer des composés volatils odorants. Le séchage du concentré est mené dans un appareil de lyophilisation. Le rendement en sec/brut est d'environ 2,5%. La substance obtenue montre une pureté en CS supérieure à 95%. Ces CS, sous forme de sel de sodium sont caractérisés par des poids moléculaires supérieurs à 100000 daltons. Dans une autre réalisation de l'invention, le rétentat d'ultrafiltration (diafiltration) est ramené à une teneur en matières sèches voisine de 1%, à l'aide d'eau déminéralisée, puis transféré dans un réacteur vitrifié dans lequel on acidifie, sous agitation rapide la solution des CS, à l'aide d'acide sulfurique jusqu'à amener cette solution à une normalité comprise entre 1 et 2, de préférence comprise entre 1,4 et 1,6. La température du mélange est ensuite amenée progressivement par injection de vapeur vive à une température comprise entre SO C et 70 C, de préférence entre SS C et 65 C. Cette étape est destinée à effectuer une hydrolyse ménagée des CS dont la conduite détermine les propriétés futures des CS de bas poids moléculaires. Cette étape est très délicate à mener, car il est primordial d'éviter des réarrangements et des réorientations de chaines souvent obtenus dans le cas de solutions pseudoplastiques. Cette dépolymérisation est suivie à l'aide d'un viscosimètre de type Ubbelohde par mesure des temps d'écoulement de la solution. On arrête la réaction lorsque la solution de départ présente, avec un viscosimètre équipé d'un capillaire de diamètre interne 0,5 mm, un temps d'écoulement compris entre 90 et 110 secondes, de préférence compris entre 95 et 105 secondes. L'obtention de ces temps d'écoulement correspond à une durée totale de réaction comprise entre 100 minutes et 140 minutes, de préférence comprise entre 110 et 130 minutes. La neutralisation de la solution est réalisée à l'aide d'hydroxyde de calcium. La suspension est alors refroidie ce qui permet d'obtenir un précipité sous forme de sulfate de calcium facile à éliminer par décantation centrifuge. Le surnageant est ensuite diafiltré sur membranes spirales qui présentent un seuil de coupure de 1000 daltons (OSMONICS), sous pression élevée, avec une alimentation en eau déminéralisée à une température de 50 C. Comme précédemment, le déroulement de cette opération est suivi par des mesures de la résistivité du perméat ; des valeurs inférieures à 100 #ISi permettent de considérer que la déminéralisation de la solution de Chondroïtine Sulfate Bas Poids Moléculaire "CSBP" est effective. Cette opération nécessite en eau de diafiltration, environ cinq fois le volume de la solution initiale à diafiltrer. Le rendement en CSBP lyophilisé est d'environ 50% sur la quantité sèche mise en réaction d'hydrolyse. Dans une réalisation préférée de la présente invention, il est possible d'obtenir un meilleur rendement des CSBP, une meilleure maîtrise de la réaction de dépolymérisation en évitant les problèmes de réarrangement de chaînes, une quantité d'eau de diafiltration bien inférieure, ainsi qu'une diminution de la surface nécessaire des membranes de diafiltration, ou bien de la durée de cette étape, au moyen d'une acidification préliminaire de la solution des CS par passage sur des résines échangeuses d'ions. On procède donc avantageusement en passant une solution des CS à une teneur en matières sèches comprise entre environ 2% et 6%, de préférence comprise entre 3% et 5% sur une colonne contenant une résine cationique forte (par exemple, IR 120 de ROHM et HAAS) dans des conditions qui permettent d'obtenir une solution des CS qui présente un pH voisin de 1. Dans ces conditions, on évite de manière avantageuse l'étape d'addition d'acide sulfurique dans le réacteur vitrifié, délicate à mettre en oeuvre en raison des caractéristiques précises recherchées des vitesses d'écoulement viscosimétrique de fin de réaction. De plus, dans ces conditions,- la réaction de dépolymérisation partielle est beaucoup plus lente, ce qui permet une meilleure maîtrise des caractéristiques des CSBP. Après chauffage de la solution des CS à une température comprise entre 60 C et 80 C, de préférence comprise entre 65 C et 75 C, à l'aide d'une injection de vapeur vive, la réaction d'hydrolyse des CS est poursuivie pendant une durée comprise entre 10 heures et 14 heures, de préférence entre 9 heures et 12 heures, de manière à obtenir, une vitesse d'écoulement au viscosimètre capillaire de 2.5 à 3.0 fois inférieure à celle obtenue avec le CS natif de l'invention, puis la solution est refroidie à une température comprise entre 30 C et 40 C, puis amenée à un pH voisin de 6,0 à l'aide d'hydroxyde de sodium après quoi elle est soumise à l'étape de diafiltration sur des membranes présentant un seuil de coupure qui est au plus de 1000 daltons. Dans une autre réalisation de l'invention, la neutralisation est effectuée à l'aide d'hydroxydes de sodium, de zinc, de manganèse, de lysine ou de magnésium. Les différentes étapes de cette réalisation préférée permettent avantageusement de ne mettre en jeu, dans cette étape, que deux volumes d'eau par volume initial de CSBP et d'obtenir, après lyophilisation, un rendement en CSBP sur sec voisin de 80%. Cette réalisation de la présente invention permet d'obtenir une substance de CSBP, dont le poids moléculaire moyen, déterminé par chromatographie d'exclusion de taille haute pression HPSEC (par exemple, sur colonne TSK SW 3000XL de TOSOHAS) par comparaison à des standards de pullulanes, de chondroïtine sulfate natif et de sucres de différentes masses molaires, est inférieur à 15000 daltons. L'exemple suivant, non limitatif, est décrit dans le but d'illustrer l'invention. EXEMPLE Dans un réacteur enzymatique, on introduit 400 kg de cartilages de raies broyés dans 600 litres d'eau déminéralisée. La température est portée à 58 C par injection de vapeur. On ajoute alors 2 kg de papaïne et on laisse la réaction se dérouler pendant 6 heures sous agitation. Le pH est ensuite ajusté à 1,2 à l'aide d'acide sulfurique à 96%. Après 30 minutes d'agitation, l'ensemble est neutralisé par de la soude à 30,5% pour obtenir un pH de 7,5. On tamise sur un tamis équipé de toiles dont les mailles sont de 200 microns, puis on centrifuge le passage sur un décanteur centrifuge SDA 230. Le surnageant est ensuite mis en diafiltration dans un appareil d'ultrafiltration muni de membranes spirales KOCH à pouvoir de coupure compris entre 30000 et 50000. Après passage de 2840 litres d'eau déminéralisée on récupère 472 kg de solution liquide à 2,25% de matière sèche que l'on concentre dans un évaporateur pour obtenir 265 kg à 4% de matière sèche. La lyophilisation d'un aliquot de cette solution montre que le chondroïtine sulfate natif obtenu présente une pureté supérieure à 95%. Les passages d'une solution à 2 mg/ml de ce produit et de solutions de même concentration de deux produits disponibles sur le marché, dans un appareillage HPSEC muni d'une colonne TSK SW 3000 XL (TOSOHAS) avec un éluant à l'acétate d'ammonium 0.1 M, donnent après étalonnage avec des pullulanes de *différents poids moléculaires, les résultats suivants (poids moléculaires moyens) CS natif commercial n 1 40000-daltons CS natif commercial n 2 50000 daltons CS natif de l'exemple 130000 daltons. 250 litres de la solution à 4% sont passés à travers une colonne contenant 7 litres de résine IR120 (ROHM et HAAS). On obtient à la sortie 250 litres à pH 1,0 et à 3,8% de matière sèche. Pour procéder à la dépolymérisation partielle du CS obtenu, on place ces 250 litres de solution avec 250 litres d'eau déminéralisée dans un réacteur vitrifié durant 10 heures, sous agitation, après avoir élevé la température de l'ensemble à 70 C. A la fin de la réaction de dépolymérisation, l'ajout de 3,75 litres d'hydroxyde de sodium à 30,5% permet de ramener le pH à 6,0. L'ensemble est ensuite introduit dans l'appareil à diafiltrer équipé de membranes spirales (KOCH) présentant un seuil de coupure de 1000 daltons. Après passage de 750 litres d'eau déminéralisée à 50 C, on obtient 400 litres de rétentat de conductivité 120gSi. Après filtration sur plaques de cellulose à charbon actif, puis concentration avec désodorisation par injection d'azote, on obtient 80 litres de solution à 10% de matière sèche. Soit un rendement de 2% sur la matière première de départ. Par chromatographie d'exclusion du produit lyophilisé, dans les mêmes conditions que ci-dessus, on obtient pour le poids moléculaire moyen le résultat suivant CSBP selon l'invention 10000 daltons Les tests d'écoulement capillaire décrits précédemment montrent que le produit obtenu présente une vitesse d'écoulement 2,8 fois plus faible que le CS natif selon l'invention et 1,9 fois plus faible qu'un CS natif commercial. Le CS dépolymérisé obtenu présente une pureté supérieure à 95%. Dans une autre réalisation de l'invention le CSBP obtenu dans le présent exemple est caractérisé par son efficacité à stimuler les métabolismes fondamentaux de fibroblastes dermiques humains, en particulier sur l'incorporation de différents marqueurs tels que la thymidine (croissance cellulaire), la leucine ( synthèse protéique) et la glucosamine (synthèse de GAG). Des essais réalisés in vitro sur des cultures de fibroblastes humains permettent d'évaluer les capacités du CSBP à stimuler les métabolismes fondamentaux de la matrice extracellulaire du derme. Dans des conditions classiques de culture en triplicate, le CSBP selon l'invention et des références positives (EGF, facteur de croissance de l'épiderme à 10 ng/ml, TGF-Z facteur b humain de transformation à 10 ng/ml et vitamine C à 20 mg/ml) ont été mis en contact avec les fibroblastes. Le marquage radioactif des métabolites spécifiques (acides aminés) permet de quantifier la néosynthèse. Deux concentrations de CSBP sont testées : 2 et 0,4 mg /ml. Les résultats obtenus dans le tableau ci-dessous ont été soumis au test de Dunnett MARQUEURS REFERENCE CSBP 0,4 mg ml CSBP 2,0 mg ml Thymidine EGF : 100 74 p 183 p p Leucine VIT C : 45 44 p 88 p p Glucosamine TGF : 200 57 p 178 p p Température : 37 C Atmosphère : 5% de C02 Ces tests montrent une activité caractéristique du CSBP de la présente invention sur la croissance de fibroblastes humains dans les différents métabolismes qui régissent l'équilibre physiologique du derme et qui permettent de contribuer indirectement à l'équilibre de l'épiderme. Des formulations d'applications comprennent, parmi d'autres, des gels et des émulsions des CSBP sous forme de sels de sodium, de zinc, de manganèse ou de magnésium. REVENDICATIONS 1. Composé de chondroitine sulfate de bas poids moléculaire (CSBP), extrait à partir de cartilages d'animaux marins au moyen d'un procédé conduit exclusivement en phase aqueuse, qui consiste principalement en une hydrolyse enzymatique , une dépolymérisation acide et une diafiltration, caractérisé en ce que ledit CSBP permet, in vitro, dans des conditions de cultures définies et à une concentration de 0,2%, l'obtention d'au moins un des résultats suivants (i) augmentation de la croissance cellulaire de fibroblastes dermiques humains supérieure à 170%, déterminée par l'incorporation de thymidine ; (ü) augmentation de la croissance cellulaire de fibroblastes dermiques humains supérieure à 160%, déterminée par l'incorporation de glucosamine ; (iii) augmentation de la croissance cellulaire de fibroblastes dermiques humains supérieure à 70%, déterminée par l'incorporation de leucine. 2. Composé de CSBP selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé est sous forme de sel de sodium, de zinc, de magnésium ou de manganèse. 3. Composé de CSBP selon les revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir de cartilages de raies. 4. Composé de CBSP selon les revendications 1 à 3, caractérisé en ce que son poids moléculaire est inférieur à 15000 daltons. 5. Procédé de préparation de composé de CSBP selon les revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les cartilages broyés sont introduits dans un réacteur dans un rapport cartilage/eau compris entre 10% et 60% en poids, de préférence compris entre 20% et 50% en poids. 6. Procédé de préparation de composé de CSBP selon la revendication 5, caractérisé en ce que la réaction enzymatique est effectuée à l'aide d'une protéase de papaine. 7. Procédé selon la revendications 6, caractérisé en ce que la réaction enzymatique est conduite à une température comprise entre 45 C et 65 C, de préférence entre 55 C et 60 C. 8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que la réaction enzymatique a une durée comprise entre 4 et 8 heures, de préférence entre 5 et 7 heures. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que le pH est ajusté à une valeur comprise entre 0,7 et 2,2 de préférence entre 1,1 et 1,8. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que le pH est ensuite ajusté à une valeur comprise entre 6,5 et 8 , 5 , de préférence compris entre 7,0 et 8,0. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que l'on décante la solution. 12. Procédé selon la revendication il, caractérisé en ce que l'on diafiltre la solution décantée sur des membranes organiques dont le seuil de coupure est compris entre 2000 et 10000 daltons, de préférence compris entre 4000 et 8000 daltons. 13. CS obtenus par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 5 à 12, caractérisé en ce que son poids moléculaire est supérieur à 100000 daltons. 14. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que la matière sèche de la solution aqueuse est comprise entre 2% et 6%, de préférence comprise entre 3% et 5%. 15. Procédé selon la revendications 14, caractérisé en ce que ladite solution est acidifiée par passage sur une résine échangeuse d'ions. 16. Procédé selon la revendication 15, en ce que ladite résine est une résine cationique forte. 17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que la solution sortant de ladite résine est portée à une température comprise entre 60 C et 800C, de préférence comprise entre 65 C et 75 C. 18. Procédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que la température est maintenue pendant une durée comprise entre 10 heures et 14 heures, de préférence entre 9 heures et 12 heures. 19. Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce que le pH de la solution est amené à une valeur de 6,0 après refroidissement à une température comprise entre 30 C et 40 C. 20. Procédé selon la revendication 19, caractérisé en ce que l'agent de neutralisation est un hydroxyde de sodium, de zinc, de manganèse, de lysine ou de magnésium. 21. Procédé selon la revendication 20, caractérisé en ce que l'on diafiltre la solution sur des membranes organiques dont le seuil de coupure est au plus de 1000 daltons. 22. Procédé selon la revendication 21, caractérisé en ce que, la solution diafiltrée est désodorisée sous vide par injection d'un gaz neutre. 23. Utilisation d'un composé de chondroïtine sulfate de bas poids moléculaire selon les revendications 1 à 4 dans des préparations à usage dermo-cosmétique.