Brevet FR2807944A1 — publié le 20011026

t La présente invention concerne une nouvelle utilisation de l'an éthole-dithiolethione anéthole trithione). Les quinolones et notamment les quinolones de deuxième génération, les fluoroquinolones sont des antibiotiques de synthèse qui, en raison de leur très grande activité, sont très largement utilisés. Ces produits sont relativement bien tolérés ; néanmoins un effet secondaire été relevé depuis les années 90. Il s'agit de tendinopathies, regroupant tendinites et ruptures tendineuses apparaissant dans la majorité des cas au niveau du tendon d'Achille, mais pouvant également toucher le tendon quadricipital, ou, ait niveau de l'épaule, le tendon du -épineux. La durée d'invalidité est en moyenne de 62 jours pour des tendinites simples et 98 jours pour des ruptures. D'autres molécules semblent avoir des effets similaires, telles , les statives. En effet, certains cas de tendinopathies et de ruptures de tendon ont été répertoriés a@ la simvastatine (Zocor(ou LodalesV) mais aussi avec les nouvelles générations de statives récement commercialisées. Ce phénomène de ténotoxicité était jusqu'à présent mal connu et les moyens ou produits pour y remédier inexistants. La cellule constitutive du tendon est le ténocyte ; dans le tendon, ces cellules sont organisées en colonnes entre les fibres de collagène. Les auteurs de la présente invention ont étudié dans un modèle cellulaire de ténocyte l'effet cytotoxique des fluoroquinolones. Ils ont ensuite constaté dans ce modèle que l'anéthole-dithiolethione (Sulfarlemo'), testé en prétraitement avant mise en contact avec ces xénobiotiques, protège de façon surprenante et unique contre cette ténotoxicité, montrant l'intérêt de cette molécule dans la prévention et le traitement de la ténotoxicité induite par des médicaments tels que les quinolones ou les statives. L'anéthole-dithiolethione peut donc être utilisée en tant que médicament administré seul ou en coadministration avec l'antibiotique ou la stative en prévention la ténotoxicité induite par des xénobiotiques tels que les quinolones ou les statives. La présente invention a donc pour objet l'utilisation de l'anéthole-dithiolethione pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention et au traitement de la ténotoxicité induite par des médicaments tels que les quinolones ou les statives, contenant l'anéthole-dithiolethione seule ou d'un mélange ou d'une association avec un médicament inducteur. ' anéthole-dithiolethione peut être utilisée sous une forme contenant de 10 à 200 mg et petit être administrée à des doses de 10 à 200 m-/jour. L'invention comprend également une méthode de traitement ou de prévention de la ténotoxicité induite par des médicaments tels que les quinolones ou les statines, consistant à administrer à un patient un médicament contenant de l'anéthole-dithiolethione associée ou non à un médicament inducteur. donnera ci-après des résultats d'essais mettant en évidence l'effet de protection de l'anéthole-dithiolethione. Le test effectué est un test MIFALC (Microtitration Fluorimetric Assay on Living Cens) de type Il ., c'est à dire que toutes les étapes y-compris la détection/ révélation , font sur cellules vivantes, le test utilisant une détection fluorimétrique en lumière froide afin d'obtenir la sensibilité et la spécificité de détection maximale nécessaire aux études intracellulaires. Les essais sont effectués sur une lignée de ténocvtes immortalisés, appelés TENO (Teno Cel1 Line). # Préparation des cultures Les cultures sont réalisées en flacons de 75 cm 3 pour la multiplication cellulaire et plaques de 96 puits à fond plat pour culture. Les ténocytes sont mis en suspension avec un peu de trypsine. Lorsque les cellules sont décollées, l'action de la trypsine est bloquée par addition de milieu de culture contenant du sérum de veau f#tal. Après centrifugation, le culot est repris par milieu complet HAM F-12, puis les cellules sont comptées à l'aide d'un hemocytomètre de Malassez ou de Thoma. On prépare ensuite une solution à 27 500 cellules / ml dans du milieu de culture complet et on en dépose 200u1 dans chacun des 60 puits centraux des microplaques de 96 puits.ll y a ainsi 5500 cellules par puits. Les plaques sont mises à incuber à 37 C en atmosphère humide air/CO, (95 % / 5 %).Le test est effectué après 48 h lorsque les cellules adhèrent au support. # Test Les différentes fluoroquinolones (ou statines) sont utilisées en solution allant de 0,1 pM à 1 rrllVl dans un solvant adapté dont l'innocuité a été préalablement vérifiée. La ténotoxicité de ces molécules a été étudiée selon différents protocoles: sans prétraitement ou avec prétraitement par l'anéthole-dithiolethione la dose de 20uM), 72 heures avant mise en contact avec les xénobiotiques; les cellules sont mises alors culture en microplaques directement en suspension dans les solutions de l'anéthole dithiolethione. jour du test, après avoir observé la confluence et l'état microscopique des cellules, on élimine le milieu de culture par retournement des plaques on distribue dans chaque puits 200u1 d'une solution 20 uMolaire de dihydro-dichlorofluoresceme diacetate (H?DCF-DA) , sonde fluorogène qui pénètre dans cellules et reste localisée dans leur cytosol; ce produit est utilisé en routine pour évaluer les radicaux libres produits par la cellule. Les plaques sont alors placées à l'étuve à 37 pendant 20 minutes. Après élimination de la sonde par retournement des plaques,les puits sont traités par les différentes solutions de xénobiotiques et mis à l'étuve . On place ensuite les plaques dans le fluorimètre équipé du filtre d'émission de 535 nm et du filtre d'excitation de 485 rim. Les unités de fluorescence sont lues après 40 minutes. Résultats Les résultats sont exprimés en pourcentage de fluorescence par rapport au témoin. Revendications 1. Utilisation de fanéthole-dithiolethione pour la fabrication d'un médicament pour la prévention ou le traitement de la ténotoxicité induite par un médicament inducteur. 2. Utilisation selon la revendication 1, pour la fabrication d'un médicament contenant de 10 à 200 mg d' anéthole-dithiolethione.