Brevet FR2805744A1 — publié le 20010907

Notre peau est la première image que chacun de nous offre au regard des autres. De tout temps, son aspect a été un sujet de préoccupation. La connaissance actuelle de sa physiologie permet maintenant de proposer des solutions cosmétiques aux différents dysfonctionnements induits par les agressions extérieures ou par le vieillissement. Bien que souvent négligée, la qualité de la circulation lymphatique est un des éléments majeurs qui permet à la peau de garder toutes ses qualités esthétiques et physiologiques (par exemple Lubach et al; (1996) Br; J Dermatol. 135:733-737; Brand & Braathen (1 996) Dermatology 196:283 -2 8 8). Dans l'organisme, le système lymphatique joue de multiples rôles complexes qui couvrent des domaines comme la nutrition ou l'immunologie. Des études sur son rôle dans le vieillissement cutané a été démontré (par exemple Andriushin & Trofimova (1976) Senile changes in the intraorganie bed of human facial skin Arkh. Anat. GistoL EmbrioL 71:114-117) En ce qui concerne cette demande de brevet, comme approche physiologique théorique, on peut considérer schématiquement que le système lymphatique est un système de drainage qui régule les différents liquides physiologiques en collectant les excès de liquide extracellulaire et son contenu pour en favoriser le retour dans la circulation sanguine (environ 3 litres par j our). Il se compose de trois éléments distincts: les capillaires situés dans les espaces extracellulaires, les ganglions et les vaisseaux. C'est au niveau des capillaires que se fait la collecte des liquides extracellulaires. La paroi de ces capillaires est faite de cellules endothéliales qui se recouvrent mutuellement. Sous la pression du liquide extracellulaire, ces cellules qui se chevauchent basculent légèrement vers l'intérieur, à la manière de portes tournantes qui ne fonctionneraient que dans un sens. Le liquide qui pénètre dans le capillaire ne peut en ressortir. Ensuite, une succession de valves tout au long du système lymphatique empêche le reflux de la lymphe vers les capillaires. La lymphe est un liquide clair, dont la composition est proche de celle du sang à l'exception des globules rouges, qui transporte des lymphocytes, des nutriments, des hormones et des métabolites. La lymphe n'est pas pompée comme le sang mais elle circule dans le système lymphatique grâce à la compression des vaisseaux lymphatiques par les muscles qui l'entourent. La régulation de la circulation lymphatique est sous la dépendance de nombreux neuromédiateurs par le biais de récepteurs spécifiques, dont la bradykinine, qui agissent soit sur la fréquence soit sur l'intensité des contractions qui font progresser la lymphe par péristaltisme dans le système lymphatique. Il est donc possible de corriger pharmacologiquement les dysfonctionnements (fréquence et/ou intensité) de ce péristaltisme lymphatique (par exemple Yokoyama et Benoit (1996) Am. J Physiol.270:G752-756). Dans un tout autre domaine, le recrutement de nouveaux adipocytes est le résultat d'une rétro-autorégulation initiée par l'adipocyte lui même. Schématiquement (Negrel in Progress in obesity research Proceedings of the gth International Congress on Obesity, Paris, 1998: 8; Schling et al. (l 999) Int. J Obes. Relat. Metab. Disord. 23:336-341), l'adipocyte mature, saturé de triglycérides stockés, libère de l'angiotensinogène qui sera classiquement clivée en angiotensine II par l'enzyme de conversion. La rétro-régulation a lieu par le biais de cette angiotensine II qui, recaptée par l'adipocyte, va provoquer la libération de prostacycline dans le milieu extérieur. A ce signal extracellulaire, les préadipocytes voisins induisent un mécanisme complexe qui aboutit à une différentiation cellulaire et à la formation de nouveaux adipocytes. La masse du tissu adipeux augmente alors par l'augmentation du nombre d'adipocytes présents ainsi que par l'augmentation de leur taille en cas de stockage excessif de réserves graisseuses. Parmi toutes les activités recherchée, Endustrie Cosmétique est toujours en quête de produits capables d'améliorer la silhouette et l'aspect de la peau. La solution, cosmétique habituellement proposée consiste à réduire la taille des adipocytes, et donc celui du tissu adipeux en activant la lipolyse par différents mécanismes biochimiques. Celle relative à l'aspect de la peau consiste la plupart du temps à améliorer l'hydratation cutanée ou à remodeler les couches cutanées par action sur le collagène. L'invention faisant l'objet de cette demande de brevet réside dans le fait que nous avons découvert, que le dipeptide Val-Trp, répond parfaitement à ces exigences. En effet, nous avons découvert que ce dipeptide, connu par ailleurs pour sa capacité d'inhiber l'enzyme de conversion (Dobbins D.E. et al (1990) Microcirc Endothelium Lymphatics 6:409-425), est non seulement capable de réduire significativement le recrutement de nouveaux adipocytes (et donc de réduire progressivement la masse du tissu adipeux) mais qu'il est aussi capable d'améliorer le drainage lymphatique par l'augmentation de la circulation de la lymphe, vraisemblablement par celle du péristaltisme lymphatique, dont l'effet aboutit à une peau lavée de l'intérieur des liquides et catabolites néfastes. En accord avec les données précédentes, l'explication de ces effets réside dans les mécanismes suivants: La bradykinine, qui stimule la fréquence du pompage lymphatique, est métabolisée par l'enzyme de conversion de l'angiotensine (EC 3.4.15.1). Les inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine (peptidiques comme le Val-Trp, l'énalaprile ou le captopril@ par exemple ou non peptidiques) augmentent donc la concentration de bradykinine circulante. En ralentissant sa dégradation, les inhibiteurs de cette enzyme de conversion de l'angiotensine augmentent d'autant la durée d'action de la bradykinine, et donc l'efficacité du drainage lymphatique. Par ailleurs, cette même enzyme de conversion transforme l'angiotensine 1 en angiotensine II. Les inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine, (peptidiques ou non), diminuent donc la concentration circulante d'angiotensine II, ce qui explique l'utilisation des deux derniers produits dans le traitement de l'hypertension. Comme l'angiotensine II stimule la différentiation des préadipocytes en adipocytes pour en accroître le nombre et donc la masse graisseuse, les inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine, réduisent le recrutement de nouveaux adipocytes et donc diminuent la masse graisseuse par son non-renouvellement. Ainsi, appliqués de manière topique, les inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine, (peptidiques comme le Val-Trp ou non peptidiques), par ces deux mécanismes d'augmentation du drainage lymphatique et la diminution de la capacité de stockage des graisses, produisent des effets qui ne sont pas seulement additifs mais présentent une synergie, conduisant ainsi à une remarquable efficacité sur la prévention et l'amélioration des dysfonctionnements et de leurs répercussions cutanés dus au vieillissement naturel de l'organisme et/ou au mode de vie (alimentation et obésité, .... ), et ceci par une approche mécanistique tout à fait nouvelle. Les inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine connus ne peuvent pas tous être utilisés en cosmétiques pour différentes raisons: tolérance ou toxicité, législation, compatibilité galénique, biodisponibilité. Il est donc évident que quelques modifications chimiques (hydrophile ou lipophilisation pour augmenter la solubilité ou la capacité de pénétration cutanée) peuvent être apportées aux molécules, pour autant qu'elles gardent leur activités initiale d'inhibition de l'enzyme de conversion. Dans les cas particulier du peptide Val-Trp, il est possible d'estérifier le groupe carboxyle avec un alcool, linéaire ou branché, hydroxylé ou non, conduisant aux composés H-Val-Trp-ORI, soit par amidation avec une amine conduisant aux composés H-Val-Trp-NR2R3, avec Rj=une chaîne alkyle de CI à C24, préférentiellement soit Ci à CI Soit C14 à C18 et avec R2R3 étant indépendamment l'un de l'autre H ou une chaîne alkyle de 1 à 12 atomes de carbone, préférentiellement de 1 à 3 atomes de carbone, sans modifier en quoi que soit son activité sur l'enzyme de conversion. Par contre, il faut noter que toute modification chimique de la partie N-terminale du dipeptide Val-Tryp lui fait perdre toute son activité initiale vis-à-vis de l'enzyme de conversion comme le démontre l'exemple N'3 de cette demande. Le dipeptide, objet de cette demande de brevet, peut être obtenu soit par synthèse chimique classique (en phase hétérogène ou en phase homogène), soit par synthèse enzymatique (Kullman et al., J. Biol. Chem. 1980, 255, 8234) à partir des acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. En raison de sa nature même de dipeptide, la dimension de sa séquence permet d'en faire la synthèse industrielle, à un coÛt avantageux. Sa grande activité démontrée en autorise l'utilisation commerciale dans un grand nombre de produits cosmétiques ou dermopharmaceutiques financièrement acceptables. Le dipeptide, peut être obtenu également par fermentation d'une souche de bactéries, modifiées ou non par génie génétique, pour produire les séquences recherchées ou leurs différents fragments. Enfin, le dipeptide peut être obtenu par extraction de protéines d'origine animale ou végétale, préférentiellement végétale (dont le blé et le riz où sa présence a été démontrée - Saito-1993), susceptibles de contenir ces séquences au sein de leur structure, suivie d'une hydrolyse contrôlée, enzymatique ou non, fermentative, ou non, qui libère le fragment peptidique de séquence Val-Trp dans les plantes qui sont susceptibles de contenir ces séquences au sein de leur structure. L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces fragments peptidiques. Pour réaliser l'invention, il est possible, mais non nécessaire, d'extraire soit les protéines concernées d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier les fragments peptidiques ensuite. On peut également utiliser l'hydrolysat sans en extraire les fragments peptidiques en question, en s'assurant toutefois d'avoir arrêté la réaction enzymatique d'hydrolyse à temps et de doser la présence des peptides en question par des moyens analytiques appropriés (traçage par radioactivité, immunofluorescence ou immunoprécipitation avec des anticorps spécifiques, etc.). D'autres procédés plus simples ou plus complexes, conduisant à des produits moins chers ou plus purs sont facilement envisageables par l'homme de l'art connaissant le métier d'extraction et de purification des protéines et peptides. A titre d'exemple illustrant l'invention, on cite quelques formules cosmétiques représentatives mais non limitatives de l'invention: Exemple n' 1: Gel Carbomer 0,3 Propylène glycol 2,0 Glycérine l'o Vaseline blanche 1,5 Cylomethicone 6,0 Crodacol C90 0,5 LubrajelR MS 10 Triéthanolamine 0,3 Val-Trp 0,05 Eau, conservateurs, parfum qsp 100 g Exemple nO2: Crème Volpo S2 2.4 Volpo S20 2.6 Prostéaryl 15 8.0 Cire d'abeille 0.5 Stéaroxy dimethicone 3.0 Propylène glycol 3.0 Carbomer 0.25 Triéthanolamine 0.25 Val-Trp-OEt 0,005 Eau, conservateurs, parfums qsp 100 g Les activités décrites au début de cette demande sont illustrées par les exemples suivants. Exemple nO 3: Perte d'activité du dipeptide Val--Trp après N-acylatio Le test (dérivé de la méthode Sigma Diagnostics N'305-UV). L'enzyme de conversion (EC 3.4.15. 1) décompose le tripeptide synthétique FAPGG en FAP + glycylglycine. La mesure de la variation de densité optique (A D.O.), à 340 nin est directement proportionnelle à la disparition du FAPGG , ce qui permet de quantifier l'activité de l'enzyme de conversion. La recherche d'un effet inhibiteur d'une molécule se réalise alors selon le même principe , mais en présence de différentes concentrations des molécules à tester. Le tableau suivant montre les résultats (moyenne, écart-type) obtenus après cinq essais différents: Peptide testé Concentration A D.O. Ecart type Inhibition Aucun 0,110 0.008 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------- Val-Trp 0'l ppm. 0,080 0,010 27,3% ---------------------------------------------------------------------------------------------------------- N-Palmitoyl-Val-Trp 0'l ppm 0,112 0,012 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------- Val-Trp l'o ppm 0,036 0,012 67,3% ---------------------------------------------------------------------------------------------------------- N-Palmitoyl-Val-Trp l'o ppm 0,107 0,008 2,7% ---------------------------------------------------------------------------------------------------------- Val-Trp 10,0 ppm 0,018 0,008 83,4% ---------------------------------------------------------------------------------------------------------- N-Palmitoyl-Val-Trp 10,0 ppm 0,108 0,010 1,8% Ces résultats démontrent clairement que la modification chimique testée fait perdre toute l'activité inhibitrice du dipeptide Val-Trp sur l'enzyme de conversion. Pour augmenter leur passage cutané et donc leur disponibilité et de faciliter leur incorporation dans les compositions cosmétiques et dennopharmaceutiques, il est avantageux de conférer à ce peptide, hydrophile par nature, des propriétés lipophiles par estérification de son groupe carboxyle. Le dipeptide de ce brevet, estérifié ou non, peut être obtenu par synthèse chimique, par voie enzymatique, par fermentation, par extraction de protéines d'origine végétale, par synthèse peptidique classique en phase homogène ou hétérogène ou par synthèse enzymatique à partir des acides aminés constitutifs. Le dipeptide de ce brevet, estérifié ou non, peut être obtenu par extraction de protéines de plantes, suivie d'hydrolyse, enzymatique ou non enzymatique, de façon à générer des fragments peptidiques de taille moyenne comprise entre 300 et 1200 daltons, une partie des fragments libérés devant contenir la séquence Val-Trp. Le dipeptide de ce brevet, estérifié ou non, peut être utilisé à des concentrations variant entre 0,1 et 10.000 ppm (p/p), préférentiellement entre 1 et 1.000 ppm (p/p) dans le produit cosmétique ou dermophannaceutique fini. Le dipeptide de ce brevet, estérifié ou non, peut être utilisé sous forme de solution, de dispersion, d'émulsion, ou encapsulé dans des vecteurs comme les macro-, micro- ou nanocapsules, des liposomes ou des chylomicrons, ou inclus dans des macro-, micro- ou nanoparticules, ou dans des microéponges, ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux. Le dipeptide de ce brevet, estérifié ou non, peut être utilisé dans toute forme galénique: émulsions H/E et Effl, laits, lotions, pommades, lotions capillaires, shampooings, savons, poudres, sticks et crayons, sprays, huiles corporelles. Le dipeptide de ce brevet, estérifié ou non, peut être utilisé avec tout autre ingrédient habituellement utilisé: lipides d'extraction et/ou de synthèse, polymères gélifiants et viscosants, tensioactifs et émulsifiants, principes actifs hydro- ou liposolubles, extraits végétaux, extraits tissulaires, extraits marins, filtres solaires, antioxydants. Le dipeptide de ce brevet, estérifié ou non, peut être utilisé dans les applications cosmétiques ou dennophannaceutiques, destinées à faciliter le drainage lymphatique et diminuer la masse adipeuse. Les inhibiteurs, de nature peptidiques ou non, de l'enzyme de conversion de l'Angiotensine sont utilisés seuls ou incorporés dans des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques pour la préparation d'un médicament destiné à faciliter le drainage lymphatique et diminuer la masse adipeuse. Les inhibiteurs, de nature peptidiques ou non, de l'enzyme de conversion de l'Angiotensine sont utilisés seuls ou incorporés dans des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques, liés ou incorporés ou absorbés ou adsorbés sous forme de macro-, micro- et nanoparticules, que les macro-, micro- et nanocapsules, dans les textiles, fibres synthétiques ou naturelles, laines et tout matériaux susceptibles d'être utilisé pour réaliser des vêtements et sous-vêtements de jour ou de nuit, directement au contact de la peau ou de des cheveux pour en permettre une délivrance topique continue. Revendications 1. Utilisation d'inhibiteurs, de nature peptidiques ou non, de l'enzyme de conversion de l'Angiotensine pour la préparation de compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques destinées à pour faciliter le drainage lymphatique et diminuer la masse adipeuse. 2. Compositions cosmétiques selon la revendication N'l caractérisées en ce que l'inhibiteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine est choisi parmi le captopril, l'énalapril et en particulier le dipeptide Val-Trp. 3. Compositions cosmétiques selon la revendication N'2 caractérisées en ce que la disponibilité et le passage cutané du dipeptide Val-Trp sont améliorés grâce a l'augmentation de sa lipophilie par l'estérification du groupe carboxyle avec un alcool, linéaire ou branché, hydroxylée ou non, conduisant aux composés H- Val-Trp-ORI, soit par amidation avec une amine conduisant aux composés H- Val-Trp-NR2R3, avec Rl=une chWine alkyle de Cl à C24, préférentiellement soit CI à C3, Soit C14 à C18 et avec R2R3 étant indépendamment l'un de l'autre H ou une chaîne alkyle de 1 à 12 atomes de carbone, préférentiellement de 1 à 3 atomes de carbone. 4. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 3, caractérisées en ce que le dipeptide est obtenu par synthèse chimique, par voie enzymatique, par fermentation ou par extraction de protéines d'origine végétale. 5. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisées en ce que le dipeptide est obtenu par synthèse peptidique classique en phase homogène ou hétérogène ou par synthèse enzymatique à partir des acides aminés constitutifs. 6. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisées en ce que le dipeptide est obtenu par extraction de protéines de plantes, dont le blé ou le riz, suivie d'hydrolyse contrôlée, enzymatique ou non enzymatique, fermentative ou non, de façon à générer des fragments peptidiques de taille moyenne comprise entre 300 et 1200 daltons, une partie des fragments libérés devant contenir la séquence Val- Trp. 7. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 6 caractérisées en ce que le dipeptide est utilisé à des concentrations variant entre 0,1 et 10.000 ppm (p/p), préférentiellement entre 1 et 1.000 ppm (p/p) dans le produit fini. 8. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 7 caractérisées en ce que le dipeptide est utilisé sous forme de solution, de dispersion, d'émulsion, ou encapsulé dans des vecteurs comme les macro-, micro- ou nanocapsules, des liposomes ou des chylomicrons, ou inclus dans des macro-, micro- ou nanoparticules, ou dans des microéponges, ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux. 9. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 8 caractérisées en ce que le dipeptide est utilisé dans toute forme galénique: émulsions H/E et Effl, laits, pommades, lotions capillaires, shampooings, savons, poudres, sticks et crayons, sprays, huiles corporelles. 10. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 2 à 9 caractérisées en ce que le dipeptide est utilisé avec tout autre ingrédient habituellement utilisé: lipides d'extraction et/ou de synthèse, polymères gélifiants et viscosants, tensioactifs et émulsifiants, principes actifs hydro- ou liposolubles, extraits végétaux, extraits tissulaires, extraits marins, filtres solaires, antioxydants. Il. Utilisation d'inhibiteurs, de nature peptidiques ou non, de l'enzyme de conversion de l'Angiotensine selon la revendication 1 ou des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications 2 à 10 pour la préparation d'un médicament destiné à faciliter le drainage lymphatique et diminuer la masse adipeuse. 12. Utilisation d'inhibiteurs, de nature peptidiques ou non, de l'enzyme de conversion de l'Angiotensine selon la revendication 1 ou des compositions cosmétiques ou dennopharmaceutiques selon les revendications 2 à 10, liés ou incorporés ou absorbés ou adsorbés sous forme de macro-, micro- et nanoparticules, que les macro-, micro- et nanocapsules, dans les textiles, fibres synthétiques ou naturelles, laines et tout matériaux susceptibles d'être utilisé pour réaliser des vêtements et sous-vêtements de jour ou de nuit, directement au contact de la peau ou de des cheveux pour en permettre une délivrance topique continue.