Brevet FR2791348A1 — publié le 20000929

Le domaine de l'invention a trait aux transporteurs d'ions, en particulier aux co-transporteurs des ions phosphate et sodium. Arrière-plan de l'invention Le phosphore joue un rôle important dans la structure membranaire, le transport et le stockage de l'énergie. A pH physiologique normal (par exemple, pH de 7,4), le phosphate inorganique (Pi) dans le plasma est composé d'un mélange 4:1 de HP042- et de H2P04-. Des 700 g de phosphore présent dans le corps, 0,1% est présent dans le fluide extracellulaire sous une forme librement diffusible. On maintient la teneur plasmatique en Pi par la régulation d'absorption de Pi dans le petit intestin, sous l'influence de la vitamine D, et l'excrétion de Pi dans le rein, sous l'influence de l'hormone parathyroïde. L'absorption de Pi nécessite le transport transépithélial. Une étape critique du transport transépithélial de Pi est la prise de Pi dans les cellules épithéliales. Les co-transporteurs des ions phosphate et sodium présents sur la surface apicale des cellules épithéliales appropriées, par exemple, les cellules épithéliales intestinales et rénales, accomplissent la prise de Pi. On a identifié à ce jour une diversité de co- transporteurs des ions phosphate et sodium, incluant: NaPi-1 (lapin) ; NPT1 (humain) ; Nptl (souris) ; NaPi-2 (rat) ; NaPi-3 (humain) ; NaPi-4 (opossum); NaPi-5 (flet); NaPi-6 (lapin); NaPi-7 (souris) et NaPi des cellules NBL-1 (bovin). On associe une diversité d'états maladifs aux troubles dans le métabolisme du Pi, où de tels états maladifs incluent ceux caractérisés par la présence d'hypophosphatémie, par exemple, l'ostéomalacie, l'hypocalciurie et le rachitisme, et ceux caractérisés par la présence d'hyperphosphatémie, par exemple, l'hyperparathyroïdisme, l'hypocalcémie, la déficience en vitamine D, la calcification du tissu mou ou métastatique, et analogues. En particulier, l'hyperphosphatémie est une caractéristique de maladie et d'insuffisance rénale, et est une cause sous-jacente de nombreux symptômes délétères observés avec de telles complications rénales. Les procédés de traitement des anormalités dans le métabolisme de Pi sont variés. Par exemple, pour les états maladifs associés à la présence d'hypophosphatémie, les méthodologies du traitement incluent : changements dans le régime alimentaire pour inclure des aliments riches en phosphore, une complémentation avec des sels de phosphore, l'utilisation d'agents thérapeutiques, par exemple, le dipyridamole, et analogues. Pour ces états maladifs associés à l'hyperphosphatémie, le traitement en l'absence d'insuffisance rénale peut inclure l'hydratation et/ou l'utilisation d'antiacides à base d'aluminium qui lient le phosphore dans la lumière intestinale. Quand une insuffisance rénale est présente, les liants du phosphate et/ou une modification du régime alimentaire pour restreindre la prise de phosphore sont potentiellement utiles, mais on emploie typiquement la dialyse. A cause de cette large diversité d'états maladifs caractérisés par la présence d'un métabolisme de Pi anormal, il existe un intérêt continu dans l'identification des composants moléculaires responsables du métabolisme de Pi. D'intérêt particulier serait l'identification du transporteur intestinal responsable de l'absorption et de la prise de Pi dans l'intestin. Littérature connexe Hilfiker et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA (1998) 95 :14564-14569 décrit la séquence de l'acide nucléique Npt2B de la souris. Egalement d'intérêt est : et al., "Cloning and Characterization of a Sodium Dependent Phosphate Transporter Isoform Expressed in Human Small Intestine and Lung", publié le 24 décembre 1998, sous le n GenBank 4071357 et soumis par Smithkline Beecham Pharmaceuticals, 709 Swedeland Road, King of Prussia, PA 19406 le 7 décembre 1998). Les références décrivant les co-transporteurs des ions phosphate et sodium incluent : et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA (1991) 88 :9608-9612; et al., Genomics (1993) 28 :355-359; et al., Am. J. Physiol. (1995) 268: F1038-F1045; Magagnin et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA (1993) 90:5979-5983; Sorribas et al., J. Biol. Chem. (1994) 269 :6615-6621; Werner et al., Am. J. Physiol. (1995) 267:F311-F317; Verri et al., Am. J. Physiol. (1995) 268 :F626-F633; Collins et al., FASEB J. (1994) 8 :862-868; et Helps et al., Eur. J. Biochem. (1995) 228:927-930. WO 98/37198 est également d'intérêt. Les références fournissant une information d'arrière- plan sur le rôle des co-transporteurs des ions phosphate et sodium dans le métabolisme du phosphore incluent : J. Bone Min. Res. (1997) 12:159; et Harrison's Principles of Internai Medicine, 14ème éd. (1998), pages 2259 à 2263. Un nouveau co-transporteur des ions phosphate et sodium intestinal humain (à savoir, Npt2B) et les polypeptides y étant apparentés, ainsi que les compositions d'acide nucléique codant pour ceux-ci, sont fournis. Le polypeptide sujet et les compositions d'acide nucléique trouvent leur utilisation dans une diversité d'applications, incluant les applications à la recherche, au diagnostic et au criblage d'agents thérapeutiques, ainsi que dans les thérapies de traitement. Des procédés de traitement des états maladifs, associés à la fonction Npt2B intestinale, par exemple, les états caractérisés par des teneurs sériques en phosphate anormales, telles que l'hypo- et l'hyperphosphatémie, sont également fournis. La figure 1 fournit la séquence d'acides aminés de Npt2B humain. La figure 2 fournit la séquence d'un acide nucléique codant pour Npt2B humain. Description détaillée de l'invention On fournit un nouveau co-transporteur des ions phosphate et sodium intestinal humain (à savoir, Npt2B) et les polypeptides apparentés à ceux-ci, ainsi que des compositions d'acide nucléique codant pour ceux-ci. Le présent polypeptide et/ou les compositions d'acide nucléique trouvent une utilisation dans une diversité de différentes applications, incluant les applications à la recherche, au diagnostic et au criblage/découverte/préparation d'agents thérapeutiques. On fournit également des procédés pour traiter les états maladifs associés à la fonction Npt2B intestinale, par exemple, les états résultant de teneurs sériques en phosphate anormales, telles que l'hypo- et l'hyperphosphatémie. Avant de décrire plus encore la présente invention, on doit comprendre que l'invention n'est pas limitée aux formes de réalisation particulières de l'invention décrite ci-dessous, puisque l'on peut effectuer des variations des formes de réalisation particulières et qu'elles tombent toujours dans la portée des revendications jointes. On doit également comprendre que la terminologie employée est dans le but de décrire des formes de réalisation particulières, et n'est pas prévue pour s'y limiter. En fait, les revendications jointes vont établir la portée de la présente invention. Dans la description et les revendications jointes, les formes singulières "a", "an" et "the" incluent une référence de pluriel, à moins que le contexte l'explicite clairement. Sauf indication contraire, tous les termes techniques et scientifiques utilisés dans l'invention ont la même signification que celle couramment comprise par l'homme de métier auquel l'invention appartient. Compositions de polypeptides On fournit un nouveau co-transporteur des ions phosphate et sodium humain exprimé dans les cellules épithéliales intestinales, ainsi que des compositions de polypeptides apparentées à ceux-ci. Le terme "composition de polypeptides" tel qu'utilisé dans l'invention désigne à la fois la protéine humaine pleine longueur ainsi que ses portions ou fragments. Egalement incluses dans ce terme sont les variations de la protéine humaine d'origine naturelle, où de telles variations sont homologues ou sensiblement similaires à la protéine d'origine naturelle, comme décrit en plus amples détails ci-dessous. Dans la description suivante de la présente invention, on utilise le terme Npt2B pour désigner la molécule co-transporteur des ions phosphate et sodium intestinale humaine de type sauvage de la présente invention. La protéine Npt2B de la présente invention est une protéine membranaire ayant un certain nombre de régions transmembranaires, où le nombre de régions transmembranaires putatives basées sur la séquence d'acides aminés est de 10 (comme décrit en utilisant TMpred (www.Ch.embnet.org) basé sur TMbase (Tmbase-Une base de données de segments de protéine portée par une membrane. Biol. Chem. Hoppe-Seyler 347, 166). Npt2B est un co-transporteur des ions phosphate et sodium de type II. Dans son environnement naturel, Npt2B est un co-transporteur de cation sodium et d'anion phosphate. Npt2B est exprimé, entre autres, sur la surface des cellules épithéliales intestinales, à savoir, sur le côté de la lumière intestinale ou apicale des cellules épithéliales, et procure donc le transport des ions sodium et phosphate provenant de la lumière intestinale dans les cellules épithéliales intestinales. Npt2B est également exprimé dans les cellules alvéolaires de type II de poumon où il peut être impliqué dans le transport de phosphate dans les cellules pour satisfaire la demande accrue pour la synthèse glycoprotéinique de la mucine. Npt2B possède une identité de séquence d'acides aminés de 23%, NPT1 humain étant décrit dans Chong et al., "Molecular cloning of the cDNA encoding a human renal sodium phosphate transport protein and its assignment to chromosome 6p21.3-p23", Genomics (1993) 18 :355-359 et une identité de 52,5% au Npt2a humain décrit dans Maganin et al. "Expression Cloning of Human and Rat Renal Cortex Na/Pi co-transport", Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90:5979-5983 (comme mesuré par Meg Align, DNAstar (1998) en utilisant un algorithme clustal comme décrit dans D. G. Higgins et P.M. Sharp. Fast and Sensitive multiple Sequence Alignments on a Microcomputer. (1989) CABIOS, 5 :151-153. Les paramètres utilisés sont ktuple 1, gpa penalty 3, window, 5 et diagonals saved 5). D'autres caractéristiques Npt2B incluent : sites de glycosylation potentielle sur les boucles extracellulaires. Npt2B possède une séquence d'acides aminés comme présentée dans la figure 1 et identifiée comme SEQ ID N0:01. Npt2B possède une masse moléculaire basée sur sa séquence d'acides aminés d'environ 75 kDa, et plus particulièrement 75598,52 daltons (comme déterminé en utilisant Protean/DNAstar (1997) de H. Nakashima et al. Le type de repliement d'une protéine est apparenté à la composition d'acide aminé. J. Biochem (Tokyo) 99 :153-162). vraie masse moléculaire de Npt2B peut varier du fait de la glycosylation et/ou d'autres modifications post-traductionnelles. Comme telle, la masse moléculaire réelle de Npt2B est probablement dans la gamme d'environ 70 à 130 kDa. On fournit également des homologues ou des protéines Npt2B (ou leurs fragments) qui varient en séquence à partir de la séquence de type sauvage de la présente invention. Par homologue, on signifie une protéine ayant au moins environ 35%, habituellement au moins environ 40%, et plus habituellement encore au moins environ 60% d'identité de séquence d'acides aminés à la protéine Npt2B de la présente invention, (en utilisant MegAlign, DNAstar (1998) en utilisant l'algorithme clustal comme décrit dans D. G. Higgins et P.M. Sharp. Fast and Sensitive multiple Séquence Alignments on a Microcomputer (1989) CABIOS, 5 :151-153. paramètres utilisés sont ktuple 1, gpa penalty 3, window, 5 et diagonals saved 5). On fournit également les protéines Npt2B qui sont sensiblement identiques à la protéine hu Npt2B, où par sensiblement identique, on signifie que la protéine possède une identité de séquence d'acides aminés par rapport à la séquence de Npt2B d'au moins environ 60%, habituellement d'au moins environ 65% et plus habituellement d'au moins environ 70%. Les protéines de la présente invention sont présentes dans un environnement artificiel, par exemple, elles sont séparées de leur environnement d'origine naturelle. Dans certaines formes de réalisation, les présentes protéines sont présentes dans une composition qui est enrichie pour la présente protéine par rapport à son environnement d'origine naturelle. Par exemple, on fournit Npt2B purifié, où par "purifié", on signifie que Npt2B est présent dans une composition qui est sensiblement exempte de protéines non Npt2B, où par "sensiblement exempte", on signifie que moins de 90%, habituellement moins de 60%, et plus habituellement moins de 50% de la composition est composée de protéines non Npt2B. Les protéines de la présente invention peuvent également être présentes comme isolat, par lequel on signifie que la protéine est sensiblement exempte d'autres protéines et d'autres molécules biologiques d'origine naturelle, telles que les oligosaccharides, les polynucléotides et leurs fragments, et analogues, où le terme "sensiblement exempte" dans cet exemple signifie que moins de 70%, habituellement moins de 60% et plus habituellement moins de 50% de la composition contenant la protéine isolée est une autre molécule biologique d'origine naturelle. Dans certaines formes de réalisation, les protéines sont présentes sous forme sensiblement pure, où par "forme sensiblement pure", on signifie au moins 95%, habituellement au moins 97% et plus habituellement au moins 99% pur. En plus des protéines d'origine naturelle, on fournit également des polypeptides qui varient à partir des protéines d'origine naturelle, par exemple, les polypeptides Npt2B. Par "polypeptide Npt2B", on signifie une séquence d'acides aminés codée par un cadre de lecture ouvert (ORF) du gène codant pour Npt2B, décrit en plus amples détails ci-dessous, incluant la protéine Npt2B pleine longueur et ses fragments, en particulier les fragments biologiquement actifs et/ou les fragments correspondant aux domaines fonctionnels, par exemple, le domaine transmembranaire, et analogues ; incluant les fusions des présents polypeptides à d'autres protéines ou parties de celles-ci. Les fragments d'intérêt seront typiquement d'au moins environ 10 aa en longueur, habituellement d'au moins environ 50 aa en longueur, et peuvent être aussi longs que 300 aa en longueur ou plus, mais ne dépasseront pas habituellement environ 1 000 aa en longueur, où le fragment aura un étirement d'acides aminés qui est identique à la présente protéine d'au moins environ 10 aa, et habituellement d'au moins environ 15 aa, et dans de nombreuses formes de réalisation, d'au moins environ 50 aa en longueur. On peut obtenir les présentes protéines et les polypeptides à partir de sources d'origine naturelle ou produites synthétiquement. Par exemple, Npt2B provient généralement de cellules épithéliales de l'intestin, mais peut également provenir d'autres types de cellules ou tissus dans lesquels l'expression de Npt2B est identifiée, par exemple, le poumon, etc. Les présentes protéines peuvent également provenir d'un moyen synthétique, par exemple, en exprimant un gène recombinant d'intérêt codant pour une protéine chez un hôte approprié, comme décrit en plus amples détails ci-dessous. On peut employer tous procédés de purification protéinique commode, où les méthodologies de purification protéinique appropriées sont décrites dans Guide to Protein Purification, (Deuthser ed.)(Academic Pres, 1990). Par exemple, on peut préparer un lysat à partir de la source d'origine, par exemple, les cellules épithéliales intestinales ou l'hôte expression, et le purifier en utilisant CLHP, la chromatographie par exclusion, l'électrophorèse sur gel, la chromatographie d'affinité, et analogues. Compositions d'acide nucléique On fournit également des compositions d'acide nucléique codant pour les protéines Npt2B ou leurs fragments, ainsi que les homologues Npt2B de la présente invention. Par composition d'acide nucléique Npt2B, on signifie une composition comprenant une séquence d'ADN ayant un cadre de lecture ouvert qui code pour Npt2B, à savoir un gène Npt2B, et qui est capable, dans des conditions appropriées, d'être exprimé comme Npt2B. Sous ce terme, on envisage également les acides nucléiques qui sont homologues ou sensiblement similaires ou identiques aux acides nucléiques codant pour les protéines Npt2B. Ainsi, la présente invention fournit des gènes codant pour le Npt2B humain de la présente invention et leurs homologues. Le gène Npt2B humain possède la séquence d'acide nucléique présentée dans la figure 2 et identifiée comme SEQ ID N :02, ci-dessous. La source de gènes homologues peut être toute espèce, par exemple, les espèces de primates, en particulier l'homme; les rongeurs, tels que les rats et les souris, les canidés, les félins, les bovins, les ovins, les équidés, la levure, les nématodes, etc. Entre l'espèce mammifère, par exemple, l'homme et la souris, les homologues ont sensiblement une similarité de séquence, par exemple, au moins 75% d'identité de séquence, habituellement au moins 90%, plus habituellement au moins 95% entre les séquences de nucléotides. On calcule la similarité de séquence par rapport à une séquence de référence, qui peut être un sous-ensemble d'une séquence plus grande, telle qu'un motif conservé, une région codante, une région encadrante, etc. Une séquence de référence sera habituellement d'au moins environ 18 nt de long, plus habituellement d'au moins environ 30 nt de long, et peut s'étendre à la séquence complète que l'on compare. On connaît dans la technique les algorithmes pour l'analyse de séquence, tels que BLAST, décrit dans Altschul et al. (1990), J. Mol. Biol. 215 :403-10 (en utilisant les réglages par défaut). Les séquences fournies ici sont essentielles pour reconnaître les protéines apparentées à Npt2B et homologues, et les acides nucléiques codant pour ceux-ci, dans les recherches de base de données. Les acides nucléiques codant pour la protéine Npt2B et les polypeptides Npt2B de la présente invention peuvent être l'ADNc ou l'ADN génomique ou un de leurs fragments. Le terme "gène Npt2B" devrait être prévu pour signifier le cadre de lecture ouverte codant pour les protéines Npt2B spécifiques et les polypeptides, et les introns Npt2B, ainsi que les séquences nucléotides non codantes 5' et 3' impliquées dans la régulation d'expression, jusqu'à environ 20 kb au-delà de la région codante, mais probablement plus dans l'une ou l'autre direction. On peut introduire le gène dans un vecteur approprié pour le maintien extrachromosomique ou pour l'intégration dans un génome hôte. Le terme "ADNc" tel qu'utilisé est prévu pour inclure tous les acides nucléiques qui partagent l'arrangement des éléments de séquence trouvés dans les espèces d'ARNm matures d'origine, où les éléments de séquence sont des exons et des régions non codantes 5' et 3'. Normalement les espèces d'ARNm ont des exons contigus, avec les introns intervenant, quand présents, étant retirés par épissage d'ARN nucléaire, pour créer un cadre de lecture ouverte continu codant pour une protéine Npt2B. Une séquence génomique d'intérêt comprend l'acide nucléique présent entre le codon d'initiation et le codon d'arrêt, comme défini dans les séquences présentées, incluant tous les introns qui sont normalement présents dans un chromosome d'origine. Il peut de plus inclure les régions non traduites 5' et 3' trouvées dans l'ARNm mature. Il peut de plus inclure les séquences régulatrices transcriptionnelles et traductionnelles, telles que les promoteurs, les renforceurs-faciliteurs, etc., incluant environ 1 kb, mais probablement plus, d'ADN génomique encadrant à l'extrémité soit 5', soit 3' de la région transcrite. On peut isoler l'ADN génomique sous forme d'un fragment de 100 kbp ou moins; et sensiblement exempt de séquence chromosomique encadrante. L'ADN génomique encadrant la région codante, soit 3', soit 5', ou les séquences régulatrices internes, comme trouvé parfois dans les introns, contient des séquences nécessaires pour le tissu correct et l'expression spécifique à étapes. Les compositions d'acide nucléique de la présente invention peuvent coder tout ou partie de la présente protéine Npt2B. On peut obtenir des fragments double ou monobrin à partir de la séquence ADN en synthétisant chimiquement des oligonucléotides conformément aux procédé classiques, par restriction, digestion d'enzyme, par amplification PCR, etc. Pour la plus grande partie, des fragments d'ADN seront d'au moins 15 nt, habituellement d'au moins 18 nt ou 25 nt, et peuvent être d'au moins environ 50 nt. On isole les gènes Npt2B et on les obtient avec une pureté importante, généralement autrement que comme un chromosome intact. Habituellement, on obtiendra l'ADN sensiblement exempt d'autres séquences d'acide nucléique qui n'incluent pas une séquence Npt2B ou un de ses fragments, étant en général pur à au moins environ 50%, habituellement au moins environ 90% et sont typiquement "recombinants", à savoir, encadré un ou plusieurs nucléotides avec lesquels il n'est pas normalement associé sur un chromosome d'origine naturelle. Une forme de réalisation préférée de la présente invention est un polypeptide Npt2B avec une séquence d'acides aminés sensiblement identique, en particulier au moins 90% identique, à la séquence de SEQ ID N :01. En outre, on préfère également le polypeptide Npt2B ci-dessus comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID N : 01. Un autre aspect préféré de l'invention est une protéine ou un polypeptide comme ayant précédemment une activité de co-transport des ions phosphate et sodium. On préfère également un fragment du polypeptide Npt2B comme décrit précédemment. Un aspect préféré supplémentaire de la présente invention est un acide nucléique codant pour une protéine ou un polypeptide comme décrit ci-dessus, en particulier, dans lequel ledit acide nucléique a une séquence d'acide nucléique qui est sensiblement identique à la séquence de nucléotides de SEQ ID N :02. On préfère également un fragment dudit acide nucléique. En outre, un autre aspect préféré est un acide nucléique isolé ou mimétique de celui-ci qui s'hybride dans des conditions stringentes à l'acide nucléique, comme mentionné précédemment ou sa séquence complémentaire. Un autre aspect préféré est une cassette d'expression comprenant une région d'initiation transcriptionnelle fonctionnelle chez un hôte d'expression, un acide nucléique ayant une séquence de nucléotides trouvée dans l'acide nucléique comme précédemment dans la régulation transcriptionnelle de ladite région d'initiation transcriptionnelle, et une région à terminaison transcriptionnelle fonctionnelle chez ledit hôte d'expression. On préfère particulièrement une cellule comprenant une cassette d'expression comme précédemment sous forme d'une partie d'un élément extrachromosomique ou intégré dans le génome d'une cellule hôte en résultat de l'introduction de ladite cassette d'expression dans ladite cellule hôte. On préfère également particulièrement la descendance cellulaire de la cellule hôte comme décrit ci-dessus. Une forme de réalisation encore préférée de la présente invention est un procédé de production de Npt2B, ledit procédé consistant à faire croître une cellule comme décrit ci-dessus, exprimant ainsi ledit pt2B ; à isoler ledit Npt2B sensiblement exempt d'autres protéines. On préfère également un anticorps monoclonal se liant spécifiquement à Npt2B, en particulier l'anticorps, dans lequel ledit anticorps inhibe l'activité Npt2B et on préfère particulièrement ledit anticorps monoclonal, dans lequel ledit anticorps est un anticorps humanisé. Une autre forme de réalisation préférée de cette invention est un procédé pour moduler Npt2B chez un hôte, ledit procédé consistant à administrer une quantité efficace d'un agent modulateur de Npt2B audit hôte, de préférence, dans laquelle ledit agent modulateur est une petite molécule et en particulier, dans laquelle ledit agent modulateur est un anticorps. On préfère également l'utilisation d'un agent modulateur Npt2B pour la production d'un médicament pour moduler Npt2B chez un hôte. Un procédé de criblage pour identifier des agents modulateurs de Npt2B est un aspect encore préféré, dans lequel ledit procédé consiste à mettre en contact une cellule exprimant Npt2B fonctionnel sur sa surface avec un agent candidat en présence d'anion phosphoré; et à déterminer la quantité d'anion phosphoré prise par ladite cellule. On préfère particulièrement ce procédé, dans lequel ledit anion phosphoré est marqué d'une marque détectable et en particulier, dans lequel ladite marque est un isotope. Une autre forme de réalisation préférée de la présente invention est un modèle animal transgénique non humain capable d'exprimer Npt2B. En outre, on préfère l'utilisation d'une protéine ou d'un polypeptide comme défini précédemment pour le criblage des agents modulateurs de Npt2B. Un autre aspect préféré de cette invention est l'utilisation d'un agent modulateur de Npt2B pour la production d'un médicament destiné au traitement d'un hôte souffrant d'un état maladif associé à l'activité Npt2B. On préfère également un procédé pour traiter un hôte souffrant d'un état maladif associé à l'activité de Npt2B, ledit procédé consistant à administrer audit hôte un agent modulateur de Npt2B, de préférence, dans lequel ledit agent modulateur de Npt2B est un agoniste de Npt2B, particulièrement préféré, dans lequel ledit agent modulateur de Npt2B est un antagoniste de Npt2B. On préfère plus particulièrement le procédé décrit ci-dessus, dans lequel ledit état maladif est caractérisé par la présence d'hyperphosphatémie. Préparation de polypeptides Npt2B En plus de la pluralité d'utilisations décrites en plus amples détails dans les sections suivantes, les présentes compositions d'acide nucléique trouvent une utilisation dans la préparation de tout ou partie des polypeptides pt2B, comme décrit ci-dessus. Pour l'expression, on peut employer une cassette d'expression. Le vecteur d'expression fournira une région d'initiation transcriptionnelle et traductionnelle, qui peut être inductible ou constitutive, où la région codante est liée de façon utilisable sous la maîtrise transcriptionnelle de la région d'initiation transcriptionnelle, et une région à terminaison transcriptionnelle et traductionnelle. Ces régions témoins peuvent être originaires du gène Npt2B, ou peuvent provenir de sources exogènes. Les vecteurs d'expression ont généralement des sites de restriction commodes situés près de la séquence de promoteur pour fournir les séquences d'acide nucléique codant pour des protéines hétérologues. Un marqueur sélectionnable fonctionnant dans l'hôte d'expression peut être présent. On peut utiliser des vecteurs d'expression pour la production de protéines de fusion, où le peptide de fusion exogène fournit une fonctionnalité supplémentaire, à savoir, une synthèse de protéine, une stabilité, une réactivité avec des antisérums définis, un marqueur d'enzyme, par exemple la ssgalactosidase, etc. On peut préparer les cassettes d'expression comprenant une région d'initiation de transcription, le gène ou leur fragment, et une région à terminaison transcriptionnelle. D'intérêt particulier, est l'utilisation de séquences qui permettent l'expression d'épitopes ou de domaines fonctionnels, habituellement d'au moins environ 8 acides aminés en longueur, plus habituellement d'au moins environ 15 acides aminés en longueur, à environ 25 acides aminés, et jusqu'au cadre de lecture ouverte complet du gène. Après introduction de l'ADN, on peut choisir les cellules contenant la construction à l'aide d'un marqueur sélectionnable, les cellules développées puis utilisées pour l'expression. On peut exprimer les protéines Npt2B et les polypeptides dans des cellules prokaryotes ou eukaryotes selon des voies classiques, en fonction du but pour l'expression. Pour une production à grande échelle de la protéine, on peut utiliser, comme cellules hôtes d'expression, un organisme unicellulaire, tel que E.coli, B. subtilis, S. cerevisiae, les cellules insectes en combinaison avec les vecteurs baculovirus, ou les cellules d'un organisme supérieur tel que les vertébrés, en particulier les mammifères, par exemple, les cellules COS 7, HEK 293, CHO, Xenopus Oocytes, etc. Dans certaines situations, il est souhaitable d'exprimer le gène Npt2B dans les cellules eukaryotiques, où la protéine Npt2B bénéficiera de repliement d'origine et de modifications post- traductionnelles. On peut également synthétiser de petits peptides au laboratoire. On peut utiliser les polypeptides qui sont des sous-ensembles de la séquence Npt2B complète pour identifier et étudier les parties de la protéine importantes pour la fonction. Utilisations du présent polypeptide Npt2B et des compositions d'acide nucléique Le présent polypeptide et les compositions d'acide nucléique trouvent une utilisation dans une diversité de différentes applications, incluant les applications à la recherche, au diagnostic et au criblage/découverte/préparation d'agents thérapeutiques, ainsi que dans les compositions thérapeutiques et les procédés les employant. Applications de recherche Les présentes compositions d'acide nucléique trouvent une utilisation dans une diversité d'applications de recherche. Les applications de recherche d'intérêt incluent: l'identification des homologues Npt2B ; source de nouveaux éléments de promoteur ; des facteurs régulateurs d'expression de Npt2B ; sondes et amorces dans les applications d'hybridation, par exemple, PCR; l'identification des motifs d'expression dans les échantillons biologiques ; préparation de modèles cellules ou animaux pour la fonction Npt2B ; préparation de modèles in vitro pour la fonction Npt2B; etc. On identifie les homologues de Npt2B grâce à un certain nombre de procédés. On peut utiliser un fragment de l'ADNc fourni comme sonde d'hybridation contre une bibliothèque d'ADNc à partir de l'organisme cible d'intérêt, où on utilise des conditions stringentes faibles. La sonde peut être un grand fragment, ou une ou plusieurs amorces dégénérées courtes. On détecte des acides nucléiques ayant une similarité de séquence par hybridation dans de faibles conditions de stringence, par exemple, à 50 C et 6XSSC (chlorure de sodium 0,9 M/citrate de sodium 0,09 M) et restent liés quand on les soumet à un lavage à 55 C dans 1XSSC (chlorure de sodium 0,15 M/citrate de sodium 0,015 M). On peut déterminer l'identité de séquence par hybridation sous des conditions stringentes, par exemple, à 50 C, ou plus, et O,1XSSC (chlorure de sodium 15 mM/citrate de sodium 1,5 mM). Les acides nucléiques ayant une région d'identité importante par rapport aux séquences Npt2B fournies, par exemple des variants alléliques, des versions génétiquement modifiées du gène, etc., se lient aux séquences Npt2B fournies dans des conditions d'hybridation stringentes. En utilisant ces sondes, en particulier les sondes marquées de séquences d'ADN, on peut isoler des gènes homologues ou apparentés. On peut utiliser la séquence de la région encadrante 5' pour les éléments de promoteur, incluant les sites de liaison des renforceurs-faciliteurs, qui prévoient une régulation développementale dans les tissus où Npt2B est exprimé. L'expression spécifique au tissu est utile pour déterminer le motif d'expression, et pour fournir des promoteurs qui miment le motif d'origine de l'expression. Les polymorphismes d'origine naturelle dans la région des promoteurs sont utiles pour déterminer les variations naturelles en expression, en particulier celles qui peuvent être associées à une maladie. En variante, on peut introduire des mutations dans la région de promoteur pour déterminer l'effet modifiant l'expression dans des systèmes expérimentalement définis. On connaît, dans la technique, des procédés pour l'identification de motifs d'ADN spécifiques impliqués dans la liaison de facteurs transcriptionnels, par exemple, similarité de séquence aux motifs de liaison connus, études de retard sur gel, etc. Par exemple, voir Blackwell et al. (1995), Mol. Med. 1:194-205; Mortlock et al. (1996), Genome Res. 6 :327-33; et Joulin et Richard-Foy (1995), Eur. J. Biochem. 232 :620-626. On peut utiliser les séquences régulatrices pour identifier les séquences d'action cis nécessaires pour la régulation transcriptionnelle ou traductionnelle de l'expression du gène Npt2B, en particulier dans différents tissus ou étapes de développement, et pour identifier les séquences d'action cis et les facteurs d'action trans qui régulent ou se font par l'intermédiaire de l'expression du gène Npt2B. On peut lier de façon fonctionnelle de telles régions de régulation transcriptionnelle ou traductionnelle à un gène Npt2B afin d'activer l'expression du Npt2B modifié ou de type sauvage ou d'autres protéines d'intérêt dans des cellules cultivées, ou dans des tissus embryoniques, foetaux ou adultes, et pour la thérapie des gènes. De petits fragments d'ADN sont utiles comme amorces pour PCR, les sondes de criblage par hybridation, etc. De plus grands fragments d'ADN, à savoir, supérieurs à 100 nt sont utiles pour la production du polypeptide codé, comme décrit dans la section précédente. Pour une utilisation dans les réactions d'amplification géométrique, telles que PCR géométrique, on utilisera une paire d'amorces. La composition exacte des séquences amorces n'est pas critique à l'invention, mais pour la plupart des applications, les primères s'hybrideront à la séquence sujet dans des conditions stringentes, comme on le sait dans la technique. Il est préférable de choisir une paire d'amorces qui généreront un produit d'amplification d'au moins environ 50 nt, de préférence d'au moins environ 100 nt. On connaît en général les algorithmes pour le criblage de séquences d'amorces, et ils sont disponibles dans les progiciels commerciaux. Les amorces d'amplification s'hybrident aux brins complémentaires d'ADN, et amorceront une immunisation l'un vers l'autre. On peut également utiliser l'ADN pour identifier l'expression du gène dans un échantillon biologique. La manière dans laquelle on sonde des cellules pour la présence de séquences nucléotides particulières, comme l'ADN ou l'ARN génomique, est bien établie dans la littérature. En bref, on isole l'ADN ou l'ARNm d'un échantillon de cellule. On peut amplifier l'ARNm par RT-PCR, en utilisant la transcriptase inverse pour former un brin d'ADN complémentaire, suivi par l'amplification de réaction en chaîne de la polymérase en utilisant des amorces spécifiques pour les séquences d'ADN sujettes. En variante, on sépare l'échantillon d'ARNm par électrophorèse de gel, on le transfère dans un support approprié, par exemple, la nitrocellulose, le nylon, etc., puis on le sonde avec un fragment de l'ADN sujet comme sonde. D'autres techniques, telles que les dosages de ligaturation d'oligonucléotides, les hybridations in situ et l'hybridation aux sondes d'ADN rangées sur un copeau solide peuvent également trouver une utilisation. La détection d'ARNm s'hybridant à la séquence sujette est indicatrice de l'expression du gène Npt2B dans l'échantillon. On peut muter la séquence d'un gène Npt2B, incluant les régions de promoteur encadrantes et les régions codantes, de diverses manières connues dans la technique pour générer des changements ciblés dans la résistance de promoteur, la séquence de la protéine codée, etc. Le produit de la séquence d'ADN ou de la protéine d'une telle mutation sera habituellement sensiblement similaire aux séquences fournies dans l'invention, à savoir, différera d'au moins un nucléotide ou un acide aminé, respectivement, et peut différer d'au moins deux mais pas plus d'environ dix nucléotides ou acides aminés. Les changements de séquence peuvent être des substitutions, des insertions, des délétions, ou une de ces combinaisons. Les délétions peuvent de plus inclure des changements plus grands, tels que les délétions d'un domaine ou exon. D'autres modifications d'intérêt incluent l'étiquetage de l'épitope, par exemple, avec le système FLAG, HA, etc. Pour les études de localisation sous-cellulaire, on peut utiliser des protéines de fusion avec des protéines fluorescentes vertes (GFP). On connaît des techniques pour la mutagénèse in vitro de gènes clonés. On peut trouver des exemples de protocoles pour la mutagénèse spécifique de site dans Gustin et al. (1993), Biotechniques 14:22; Barany (1985), Gène 37 :111-23; Colicelli et al. (1985), Mol. Gen. Genet. 199 :537-9; et Prentki et al. (1984), Gène 29 :303-13. On peut trouver des procédés pour la mutagénèse spécifique de site dans Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press 1989, pages 15,3 à 15,108 ; Weiner et al. (1993), Gène 126:35-41; Sayers et al. (1992), Biotechniques 13 :592-6; Jones and Winistorfer (1992), Biotechniques 12:528-30; Barton et al. (1990), Nucleic Acids Res 18 :7349-55; and Tomich (1989), Gene Anal. Tech. 6 :67-70; et Zhu (1989), Anal Biochem 177 :120-4. On peut utiliser de tels gènes mutés pour étudier les relations structure-fonction de Npt2B, ou pour modifier les propriétés de la protéine qui affectent sa fonction ou sa régulation. On peut utiliser les acides nucléiques sujets pour générer des animaux non humains, transgéniques ou des modifications de gène spécifique au site dans des souches cellulaires. On peut fabriquer des animaux transgéniques par l'intermédiaire d'une recombinaison homologue, où le locus de Npt2B endogène est modifié. En variante, une construction d'acide nucléique est intégrée de façon aléatoire dans le génome. Les vecteurs pour l'intégration stable incluent les plasmides, les rétro-virus et d'autres virus animaux, les YAC, et analogues. Les cellules ou animaux modifiés sont utiles dans l'étude de la fonction et la régulation de Npt2B. L'utilisation de gènes Npt2B pour construire des modèles d'animaux transgéniques d'états maladifs apparentés à Npt2B, par exemple, l'hyper- ou l'hypophosphatémie, est d'intérêt. Ainsi, les modèles d'animaux transgéniques de la présente invention incluent les compétitions de Npt2B endogène, dans lesquels l'expression de Npt2B endogène est au moins réduite, si pas éliminée, où de tels animaux expriment également typiquement un peptide Npt2B de la présente invention, par exemple, la protéine Npt2B de la présente invention ou un de ses fragments. Quand on introduit un acide nucléique ayant une séquence trouvée dans le gène Npt2B humain, l'acide nucléique introduit peut être une séquence soit complète, soit partielle du gène Npt2B. On peut introduire un marqueur détectable, tel que 1acZ dans le locus Npt2B, où la régulation positive de l'expression de Npt2B aboutira à un changement facilement détecté dans le phénotype. On peut également prévoir l'expression du gène Npt2B ou ses variants dans les cellules ou les tissus où il n'est pas normalement exprimé, à des teneurs pas normalement présentes dans de telles cellules ou tissus. Les constructions d'ADN pour une recombinaison homologue comprendront au moins une portion du gène Npt2B de la présente invention, dans lequel le gène possède la ou les modifications génétiques souhaitées, et inclut des régions d'homologie au locus cible. Les constructions d'ADN pour une intégration aléatoire n'ont pas besoin d'inclure des régions d'homologie pour se faire par l'intermédiaire d'une recombinaison. De façon commode, on inclut des marqueurs pour une sélection positive et négative. On connaît dans la technique des procédés pour générer des cellules ayant des modifications de gène ciblé par l'intermédiaire d'une recombinaison homologue. Pour diverses techniques pour transfecter les cellules mammifères, voir Keown et al. (1990), Meth. Enzymol. 185 :527-537. Pour les cellules de tige embryonnaire (ES), on peut employer une souche cellulaire ES, ou bien on peut obtenir des cellules embryonnaires fraîchement à partir d'un hôte, par exemple, une souris, un rat, un cochon d'Inde, etc. On fait pousser de telles cellules sur une couche nourricièrefibroblastes appropriée ou bien on les fait pousser en présence de facteur inhibant la leucémie (LIF). Quand on a transformé ES ou les cellules embryonnaires, on peut les utiliser pour produire des animaux transgéniques. Après transformation, on plaque les cellules sur une couche nourricière dans un milieu approprié. On peut détecter les cellules contenant la construction en employant un milieu sélectif. Après un temps suffisant pour faire croître les colonies, on les recueille et on les analyse pour l'occurrence de recombinaison homologue ou d'intégration de la construction. Ensuite, on peut utiliser ces colonies, qui sont positives, pour la manipulation de l'embryon et l'injection de blastocyste. On obtient les blastocystes à partir de femelles sur-ovulées âgées de 4 à 6 semaines. Les cellules ES sont trypsinées, et on injecte les cellules modifiées dans le blastocèle du blastocyste. Après injection, on renvoie les blastocystes à chaque trompe utérine des femelles pseudo-gestantes. Ensuite, on laisse les femelles aller à terme et on sélectionne la descendance résultante pour la construction. En prévoyant un phénotype différent du blastocyste et des cellules génétiquement modifiées, on peut facilement détecter une descendance chimérique. On sélectionne les animaux chimériques en ce qui concerne la présence du gène modifié et les mâles et femelles ayant la modification sont accouplés pour produire une descendance homozygote. Si les modifications de gène produisent une létalité à un certain stade dans le développement, on peut maintenir les tissus ou les organes comme greffes ou transplants allogéniques ou congéniques, ou en culture in vitro. Les animaux transgéniques peuvent être tous mammifères non humains, tels que les animaux de laboratoire, les animaux domestiques, etc. On peut utiliser les animaux transgéniques dans des études fonctionnelles, criblage de médicaments, etc., par exemple, pour déterminer l'effet d'un médicament candidat sur l'activité Npt2B. Applications de diagnostic On fournit également des procédés diagnostiquant des états de maladie basés sur les teneurs observées de Npt2B ou le niveau de l'expression du gène Npt2B dans un échantillon biologique d'intérêt. Les échantillons, comme utilisés dans l'invention, incluent les fluides biologiques tels que le sang, le fluide cérébrospinal, les larmes, la salive, la lymphe, le fluide de dialyse, le sperme et analogues ; fluides dérivés de culture d'organe ou de tissu ; les fluides extraits de tissus physiologiques. Egalement inclus dans le terme sont les dérivés et les fractions de tels fluides. On peut dissocier les cellules, dans le cas de tissus solides, ou bien on peut analyser des sections de tissu. En variante, on peut préparer un lysat des cellules. Un certain nombre de procédés est disponible pour déterminer le niveau d'expression d'un gène ou de la protéine dans un échantillon particulier. On peut réaliser le diagnostic grâce à un certain nombre de procédés pour déterminer l'absence ou la présence ou les quantités modifiées de Npt2B normal ou anormal dans un échantillon de patient. Par exemple, la détection peut utiliser la coloration de cellules ou de sections histologiques avec des anticorps marqués, réalisée conformément aux procédés classiques. On perméabilise les cellules pour colorer les molécules cytoplasmiques. On ajoute les anticorps d'intérêt à l'échantillon de cellule, et on les incube pendant une durée suffisante pour permettre une liaison à l'épitope, habituellement au moins environ 10 minutes. On peut marquer l'anticorps avec des radioisotopes, des enzymes, des agents de fluorescence, des agents de chimioluminescence, ou d'autres marques pour la détection directe. En variante, on utilise un anticorps ou réactif de deuxième étape pour amplifier le signal. De tels réactifs sont bien connus dans la technique. Par exemple, on peut conjuguer l'anticorps principal à la biotine, l'avidine conjuguée à la peroxydase de raifort étant ajoutée comme réactif de deuxième étape. En variante, l'anticorps secondaire peut être conjugué à un composé fluorescent, par exemple, la fluorescéine, la rhodamine, Texas Red, etc. La détection finale utilise un substrat qui subit un changement de couleur en présence de la peroxydase. On peut déterminer l'absence ou la présence de liaison d'anticorps grâce à divers procédés, incluant la cytométrie en flux de cellules dissociées, la microscopie, la radiographie, le comptage par scintillation, etc. En variante, on peut se concentrer sur l'expression de Npt2B. On peut réaliser des études biochimiques pour déterminer si un polymorphisme de séquence dans une région codante ou des régions de régulation de Npt2B est associé à la maladie. Les polymorphismes associés à la maladie peuvent inclure la délétion ou la troncation du gène, des mutations qui modifient le niveau d'expression, qui affectent l'activité de la protéine, etc. On peut comparer les changements dans la séquence de promoteur ou de renforceur-faciliteur qui peut affecter les niveaux d'expression de Npt2B, aux niveaux d'expression de l'allèle normale par divers procédés connus dans la technique. Les procédés pour déterminer la résistance du promoteur ou du renforceur-faciliteur incluent la quantification de la protéine naturelle exprimée ; de l'élément témoin variant dans un vecteur avec un gène rapporteur tel que la ss-galactosidase, la luciférase, la chloramphénicol acétyltransférase, etc., qui fournit une quantification commode ; analogues. Un certain nombre de procédés est disponible pour analyser les acides nucléiques en ce qui concerne la présence d'une séquence spécifique, par exemple, un polymorphisme associé à la maladie. Quand de grandes quantités d'ADN sont disponibles, on utilise directement l'ADN génomique. En variante, on clone la région d'intérêt dans un vecteur approprié et on la fait croître en quantité suffisante pour analyse. On peut utiliser des cellules qui expriment Npt2B comme source d'ARNm, que l'on peut doser directement ou faire une transcription inverse en ADNc pour analyse. On peut amplifier l'acide nucléique par des techniques classiques, telles que la réaction en chaîne de la polymérase (PCR), pour fournir des quantités suffisantes pour analyse. On décrit l'utilisation de la réaction en chaîne de la polymérase dans Saiki, et al. (1985), Science 239 :487, et on peut trouver une revue de techniques dans Sambrook, et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press 1989, pages 14. 2 à 14. 33. En variante, on connaît divers procédés dans la technique qui utilisent la ligation d'oligonucléotides comme moyen de détection de polymorphismes, par exemple, voir Riley et al. (1990), Nucl. Acids Res. 18 :2887-2890; et Delahunty et al. (1996), Am. J. Hum. Genet. 58 :1239-1246. On peut inclure une marque détectable dans une réaction d'amplification. Les marques appropriées incluent les fluorochromes, par exemple, l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC), la rhodamine, Texas Red, la phycoérythrine, l'allophycocyanine, la 6-carboxyfluorescéine (6-FAM), la 2',7'-diméthoxy-4',5'-dichloro-6-carboxyfluorescéine (JOE), la 6-carboxy-X-rhodamine (ROX), la 6-carboxy-2',4',7',4,7hexachlorofluorescéine (HEX), la 5-carboxyfluorescéine (5-FAM) ou la N,N,N',N'-tétraméthyl-6-carboxyrhodamine (TAMRA), les marques radioactives, par exemple 32p, 35S, 3H; etc. La marque peut être un système à deux étapes, où l'ADN amplifié est conjugué à la biotine, aux haptènes, etc., ayant un partenaire de liaison à affinité élevée, par exemple, l'avidine, les anticorps spécifiques, etc., où le partenaire de liaison est conjugué à une marque détectable. On peut conjuguer la marque à un ou deux des amorces. En variante, l'ensemble des nucléotides utilisés dans l'amplification est marqué, de façon à incorporer la marque dans le produit d'amplification. L'acide nucléique échantillon, par exemple fragment amplifié ou cloné, est analysé par l'un d'un certain nombre de procédés connus dans la technique. On peut séquencer l'acide nucléique par le didéoxy ou d'autres procédés, et comparer la séquence de bases à une séquence de gène Npt2B de type sauvage. On peut également utiliser l'hybridation avec la séquence variante pour déterminer sa présence, par buvardage de SOUTHERN, buvardage de tâches, etc. On peut également utiliser le motif d'hybridation d'une séquence témoin et variante à une rangée de sondes d'oligonucléotides immobilisés sur un support solide, comme décrit dans US 5 445 934 ou dans WO 95/35505, comme moyen détectant la présence de séquences variantes. On utilise l'analyse du polymorphisme conformationnel monobrin (SSCP), l'électrophorèse sur gel à gradient de dénaturation (DGGE), et l'analyse hétéroduplex dans des matrices de gel pour détecter les changements conformationnels créés par la variation de séquence d'ADN en tant que modifications dans la mobilité électrophorétique. En variante, quand un polymorphisme crée ou détruit un site de reconnaissance pour une endonucléase de restriction, l'échantillon est digéré avec cette endonucléase, et on fractionne la taille des produits pour déterminer si le fragment a été digéré. On réalise le fractionnement par électrophorèse sur gel ou capillaire, en particulier l'acrylamide ou les gels d'agarose. La sélection concernant les mutations dans Npt2B peut être basée sur les caractéristiques fonctionnelles ou antigéniques de la protéine. Les dosages de troncation de protéine sont utiles en détectant des délétions qui peuvent affecter l'activité biologique de la protéine. On peut utiliser pendant la sélection divers immunodosages conçus pour détecter des polymorphismes dans les protéines Npt2B. Quand de nombreuses mutations génétiques diverses conduisent à un phénotype de maladie particulier, les dosages de protéine fonctionnelle se sont avérés être des outils de sélection efficaces. On peut déterminer l'activité de la protéine Npt2B codée par comparaison avec la protéine de type sauvage. Les procédés de diagnostic de la présente invention, dans lesquels le niveau d'expression du gène Npt2B est d'intérêt, impliqueront typiquement la comparaison de l'abondance d'acide nucléique Npt2B d'un échantillon d'intérêt avec celui d'une valeur témoin pour déterminer toutes différences relatives, quand on peut mesurer la différence qualitativement et/ou quantitativement, différences qui sont ensuite apparentées à la présence ou l'absence d'un motif d'expression du gène Npt2B anormal. L'homme de métier connaît une diversité de différents procédés pour déterminer l'abondance d'acide nucléique dans un échantillon, quand des procédés particuliers d'intérêt incluent ceux décrits dans : et al., Genome Res. (Juin 1996) 6 :492-503; et al., Gene (24 avril 1995) 156;207 à 213 ; Soares, Curr. Opin. Biotechnol. (octobre 1997) 8:542 à 546 ; Raval, J. Pharmacol Toxicol Methods (novembre 1994) 32:125 à 127 ; et al., Anal. Biochem (1 février 1994) 216 : à 304 ; & Tuan, Mol. Biotechnol. (décembre 1996) 6 :225 230); Hong et al., Bioscience Reports (1982) 2 :907; McGraw, Anal. Biochem. (1984) 143:298. Egalement d'intérêt sont les procédés décrits dans WO 97/27317, dont la description est incorporée ici par référence. Dosages de criblage Les polypeptides Npt2B sujets trouvent une utilisation dans divers dosages de criblage conçus pour identifier des agents thérapeutiques. Ainsi, on peut utiliser un modèle de cellule tel qu'une cellule hôte, par exemple, CHO, HEK293, COS7, Xenopus Oocyte, etc, qui a été transfectée de manière suffisante pour exprimer Npt2B sur sa surface. Ensuite, on peut mettre en contact la cellule avec un milieu comprenant des ions sodium et phosphate, et mesurer la quantité d'anions phosphates qui sont introduits dans la cellule, quand on prend des mesures à la fois dans les environnements témoins et les environnements d'essai, par exemple, en présence d'un composé modulateur Npt2B candidat, par exemple, un agoniste Npt2B ou un antagoniste ou inhibiteur Npt2B. Pour aider à la détection de prise de Pi, le phosphore marqué est présent dans le milieu, où on peut employer toute marque classique, telle qu'une marque isotope, par exemple, comme présente dans 32p ou 33p. En variante, on peut prendre des mesures courantes en utilisant des procédés électrophysiologiques bien connus (voir, par exemple, Electrophysiology, A practical Approach (IRL Press) (1993) ), à partir desquels on peut déterminer la prise de Pi. Des exemples de dosage pour mesurer la prise de Pi sont fournis dans: Maganin et al., Proc. Nat'l Acad. Sci USA (juillet 1993) 90 :5979-5983; Helps et al., Eur. J. Biochem. (1995) 228:927-930. Egalement d'intérêt dans les dosages de criblage sont les animaux transgéniques non humains qui expriment Npt2B fonctionnel, où de tels animaux sont décrits ci-dessus. Dans de nombreuses formes de réalisation, les animaux manquent de Npt2B endogène. En utilisant de tels animaux pour des applications de criblage, on administre un ou des composés de dosage à l'animal, et on compare les changements résultants dans le phénotype, par exemple, la teneur sérique en Pi, s'il y en a, avec un témoin. En variante, on peut préparer des modèles in vitro et les employer. Par exemple, on peut mesurer l'activité de liaison Npt2B dans un environnement in vitro dans lequel on contrôle les hypothèses de liaison entre Npt2B et les agents modulateurs de Npt2B candidats. Encore dans d'autres modèles in vitro, on prépare des bicouches lipidiques synthétiques incorporant le co-transporteur Npt2B sujet, on mesure un passage Pi d'un côté de la bicouche lipide vers l'autre. On peut trouver des exemples de tels dosages de bicouche lipidique synthétique dans : et al., Biochimica et Biophysica Acta (1995) 1236 :339 344 ; et al., Biophys. J. (1990) 58:289 à 297 ; etSuarez-Isla et al. Biochemistry (1983) 22:2319 à 2323. On peut inclure une diversité d'autres réactifs dans le dosage de criblage. Ceux-ci incluent des réactifs comme les sels, les protéines neutres, par exemple, l'albumine, les détergents, etc., que l'on utilise pour faciliter la liaison protéine-protéine optimale et/ou réduire les interactions non spécifiques ou d'arrière-plan. On peut utiliser des réactifs qui améliorent l'efficacité du dosage, tels que les inhibiteurs de protéase, les inhibiteurs de nucléase, les agents anti-microbiens, etc. On peut cribler une diversité de différents agents thérapeutiques candidats qui servent soit d'agonistes de Npt2B, soit d'antagonistes, grâce aux procédés ci-dessus. Les agents candidats englobent de nombreuses classes chimiques, bien qu'ils soient typiquement des molécules organiques, de préférence des petits composés organiques ayant une masse moléculaire supérieure à 50 et inférieure à environ 2 500 daltons. Les agents candidats comprennent des groupes fonctionnels nécessaires pour l'interaction structurelle avec des protéines, en particulier la liaison hydrogène, et incluent typiquement au moins un groupe amine carbonyle, hydroxyle ou carboxyle, de préférence au moins deux des groupes chimiques fonctionnels. Les agents candidats comprennent souvent des structures de carbone cyclique ou hétérocycliques et/ou des structures aromatiques ou polyaromatiques substituées par un ou plusieurs groupes fonctionnels ci-dessus. On trouve également des agents candidats parmi les biomolécules incluant les peptides, les saccharides, les acides gras, les stéroïdes, les purines, les pyrimidines, leurs dérivés, analogues structurels ou combinaisons. On obtient les agents candidats à partir d'une grande variété de sources incluant les bibliothèques de composés synthétiques ou naturels. Par exemple, de nombreux moyens sont disponibles pour la synthèse aléatoire et dirigée d'une grande variété de composés organiques et de biomolécules, incluant l'expression d'oligonucléotides et l'oligopeptides randomisés. En variante, des bibliothèques de composés naturels sous forme d'extraits bactériens, fongiques, de plantes et d'animaux sont disponibles ou facilement produites. De plus, les bibliothèques et les composés naturels ou produits synthétiquement sont facilement modifiés par des moyens chimiques, physiques et biochimiques classiques, et on peut les utiliser pour produire des librairies combinatoires. On peut soumettre les agents pharmacologiques connus à des modifications chimiques dirigées ou aléatoires, telles que l'acylation, l'alkylation, l'estérification, l'amidification, etc., pour produire des analogues structurels. D'intérêt particulier dans de nombreuses formes de réalisation, on trouve les procédés de criblage qui identifient des agents qui modulent sélectivement, par exemple inhibent, le Npt2B sujet et pas d'autres cotransporteurs des ions phosphate et sodium, tels que les cotransporteurs des ions phosphate et sodium rénaux, par exemple, Nptl. Pour identifier de tels agents, on peut réaliser un protocole de criblage à étapes multiples, où des agents qui inhibent Npt2B dans un premier dosage, sont ensuite dosés pour leur aptitude à inhiber des transporteurs non Npt2B. On peut employer tout dosage commode dans ce deuxième dosage à étape, tels que ceux décrits dans Maganin et al., Proc. Nat'l Acad. Sci USA (juillet 1993) 90 :5979 5983 ; Helps et al., Eur. J. Biochem. (1995) 228 :927 930. Compositions thérapeutiques d'acide nucléique et de polypeptides de Npt2B Les compositions d'acide nucléique de la présente invention trouvent également une utilisation comme agents thérapeutiques dans des situations où on souhaite favoriser l'activité Npt2B chez un hôte, par exemple, des états maladifs associés à l'hypophosphatémie. Les gènes Npt2B, les fragments de gène ou les fragments de protéine ou la protéine Npt2B codés sont utiles en thérapie génique pour traiter les troubles associés aux défauts de Npt2B. On peut utiliser des vecteurs d'expression pour introduire le gène Npt2B dans une cellule. De tels vecteurs ont généralement des sites de restriction commodes isolés près de la séquence de promoteur pour fournir l'insertion de séquences d'acide nucléique. On peut préparer des cassettes de transcription comprenant une région d'initiation de transcription, le gène cible ou un de ses fragments, et une région de terminaison transcriptionnelle. On peut introduire les cassettes de transcription dans une diversité de vecteurs, par exemple, le plasmide ; le rétrovirus, par exemple le lentivirus; l'adénovirus; et analogues, où les vecteurs sont capables d'être maintenus de façon transitoire ou stable dans les cellules, habituellement pendant une durée d'au moins environ un jour, plus habituellement pendant une durée d'au moins environ plusieurs jours à plusieurs semaines. On peut introduire le gène ou la protéine Npt2B dans des tissus ou des cellules hôtes d'un certain nombre de façons, incluant l'infection virale, la micro-injection, ou la fusion de vésicules. On peut également utiliser l'injection par jet pour l'administration intramusculaire, comme décrit par Furth et al. (1992), Anal Biochem 205:365 à 368.'On peut déposer l'ADN sur des microparticules d'or, et le délivrer par voie intradermique à l'aide d'un dispositif de bombardement de particules, ou un "pistolet à gène" comme décrit dans la littérature (voir, par exemple, Tang et al. (1992), Nature 356 :152 à 154), où des microprojectiles d'or sont revêtus avec l'ADN, puis bombardés dans les cellules de la peau. Procédés de modulation de l'activité de Npt2B La présente invention fournit des procédés consistant à moduler l'activité de Npt2B dans une cellule, incluant des procédés consistant à augmenter l'activité de Npt2B (par exemple, les procédés consistant à favoriser le transport de Pi), ainsi que des procédés consistant à réduire ou à inhiber l'activité de Npt2B, par exemple, les procédés consistant à arrêter ou limiter le transport de Pi. Dans de tels procédés, on met en contact une quantité efficace d'un agent modulateur de Npt2B avec la cellule. On fournit également des procédés de modulation, incluant le renforcement et l'inhibition de l'activité de Npt2B chez un hôte. Dans de tels procédés, une quantité efficace d'agent actif, qui module l'activité de Npt2B in vivo, par exemple, favorise ou inhibe habituellement l'activité de Npt2B, est administrée à l'hôte. L'agent actif peut être une diversité de composés différents, incluant un petit composé de molécule d'origine naturelle, ou synthétique, un anticorps, un fragment ou un de ses dérivés, une composition antisens, et analogue. Les agents qui réduisent l'activité de Npt2B, par exemple, le transport de Pi, d'au moins environ 10 fois, habituellement d'au moins environ 20 fois et de façon plus habituelle, d'au moins environ 25 fois, comme mesuré par le dosage de transport d'Oocyte, comme décrit dans Magagnin, ci-dessus, sont d'intérêt particulier dans certaines formes de réalisation. Dans de nombreuses formes de réalisation, l'utilisation de composés qui réduisent l'activité de Npt2B d'au moins 100 fois, par rapport à un témoin, est d'intérêt particulier. Egalement d'intérêt particulier est l'utilisation d'agents qui, tout en prévoyant une activité Npt2B réduite, qui ne réduisent pas sensiblement l'activité d'autres cotransporteurs des ions phosphate et sodium, par exemple Nptl, etc., s'il n'y en a pas du tout. Ainsi, les agents dans cette forme de réalisation sont des inhibiteurs sélectifs de Npt2B. On considère qu'un agent est sélectif s'il confère l'activité de Npt2B réduite ci-dessus, mais sensiblement aucune activité réduite d'au moins un autre type de co-transporteur des ions phosphate et sodium, où "sensiblement aucune" signifie inférieure à une réduction de 10 fois, habituellement inférieure à une réduction de 5 fois et dans de nombreux exemples inférieure à une réduction de 1 fois, où l'activité est mesurée comme décrit dans Magagnin, ci-dessus. De petits composés de molécule d'origine naturelle ou synthétiques d'intérêt incluent de nombreuses classes chimiques, bien qu'ils soient typiquement des molécules organiques, de préférence de petits composés organiques ayant une masse moléculaire supérieure à 50 et inférieure à environ 2 500 daltons. Les agents candidats comprennent les groupes fonctionnels nécessaires pour l'interaction structurelle avec les protéines, en particulier la liaison hydrogène, et incluent typiquement au moins un groupe amine carbonyle, hydroxyle ou carboxyle, de préférence au moins deux des groupes chimiques fonctionnels. Les agents candidats comprennent souvent des structures carbone hétérocycliques ou cycliques et/ou des structures aromatiques ou polyaromatiques substituées par un ou plusieurs des groupes fonctionnels ci-dessus. On trouve également des agents candidats parmi les biomolécules incluant les peptides, les saccharides, les acides gras, les stéroïdes, les purines, les pyrimidines, leurs dérivés, analogues structurels ou combinaisons. Egalement d'intérêt comme agent actif sont les anticorps qui réduisent au moins, s'ils n'inhibent pas, l'activité de Npt2B cible chez l'hôte. On obtient de tels anticorps appropriés en immunisant un animal hôte avec des peptides comprenant tout ou partie de la protéine cible, par exemple Npt2B. Les animaux hôtes appropriés incluent la souris, le rat, le mouton, la chèvre, le hamster, le lapin, etc. L'origine de l'immunogène de la protéine peut être la souris, l'homme, le rat, le singe, etc. L'animal hôte sera généralement une espèce différente de l'immunogène, par exemple Npt2B humain utilisé pour immuniser les souris, etc. L'immunogène peut comprendre la protéine complète, ou ses fragments et dérivés. Les immunogènes préférés comprennent tout ou partie de Npt2B, où ces résidus contiennent les modifications post-traductionnelles, telles que la glycosylation, trouvées sur la protéine cible d'origine. On produit les immunogènes comprenant le domaine extracellulaire dans une diversité de façons connues dans la technique, par exemple, l'expression de gènes clonés utilisant des procédés recombinants classiques, l'isolation à partir de HEC, etc. Pour la préparation d'anticorps polyclonaux, la première étape est l'immunisation de l'animal hôte avec la protéine cible, où la protéine cible sera de préférence sous forme sensiblement pure, comprenant moins d'environ 1% de contaminant. L'immunogène peut comprendre la protéine cible complète, ses fragments ou ses dérivés. Pour augmenter la réponse immune de l'animal hôte, on peut combiner la protéine cible avec un adjuvant, où les adjuvants appropriés incluent l'alun, le dextran, le sulfate, de grands anions polymères, les émulsions d'huile et d'eau, par exemple l'adjuvant de Freund, l'adjuvant complet de Freund, et analogue. On peut également conjuguer la protéine cible à des protéines porteuses synthétiques ou des antigènes synthétiques. On peut immuniser une diversité d'hôtes pour produire les anticorps polyclonaux. De tels hôtes incluent les lapins, les cochons d'Inde, les rongeurs, par exemple les souris, les rats, les moutons, les chèvres, et analogues. On administre la protéine cible à l'hôte, habituellement par voie intradermique, avec un dosage initial suivi par un ou plusieurs, habituellement au moins deux dosages de rappel supplémentaires. Suivant l'immunisation, on recueillera le sang provenant de l'hôte, suivi par la séparation du sérum d'avec les cellules de sang. Le Ig présent dans l'antisérum résultant peut de plus être fractionné en utilisant des procédés connus, tel que le fractionnement par sel d'ammonium, la chromatographie sur DEAE et analogues. On produit des anticorps monoclonaux à l'aide de techniques classiques. En général, la rate et/ou les ganglions lymphatiques d'un animal hôte immunisé fournissent une source de cellules de plasma. Les cellules de plasma sont immortalisées par fusion avec des cellules de myélome pour produire des cellules hybridomes. On sélectionne le surnageant de culture provenant d'hybridomes individuels en utilisant des techniques classiques pour identifier celles produisant des anticorps avec la spécificité souhaitée. Les animaux appropriés pour la production d'anticorps monoclonaux à la protéine humaine incluent la souris, le rat, le hamster, etc. Pour élever les anticorps contre la protéine de souris, l'animal sera généralement un hamster, un cochon d'Inde, un lapin, etc. On peut purifier l'anticorps à partir des surnageants de cellule d'hybridome ou de fluide ascitique par des techniques classiques, par exemple, la chromatographie d'affinité en utilisant Npt2B lié à sépharose de protéine A, un support insoluble, etc. On peut produire l'anticorps comme chaîne unique, au lieu de la structure multimère normale. On décrit les anticorps à chaîne unique dans Jost et al. (1994) J.B.C. 269 :26267 à 26273, et autres. Les séquences d'ADN codant pour la région variable de la chaîne lourde et la région variable de la chaîne légère sont ligaturées à un espaceur codant pour au moins environ 4 acides aminés de petits acides aminés neutres, incluant la glycine et/ou la sérine. La protéine codée par cette fusion permet l'assemblage d'une région variable fonctionnelle qui conserve la spécificité et l'affinité de l'anticorps initial. Pour une utilisation in vivo, en particulier pour une injection chez l'homme, il est souhaitable de diminuer l'anti-génicité de l'anticorps. Une réponse immune d'un receveur contre l'agent bloquant diminuera potentiellement la durée pendant laquelle la thérapie est efficace. On connaît dans la technique des procédés d'humanisation d'anticorps. L'anticorps humanisé peut être le produit d'un animal ayant des gènes de région constante d'immunoglobuline humaine transgénique (voir, par exemple, les demandes de brevet international WO 90/10077 et WO 90/04036). En variante, on peut construire l'anticorps d'intérêt par des techniques d'ADN recombinantes pour remplacer les domaines charnières CH1, CH2, CH3, et/ou le domaine du cadre de lecture avec la séquence humaine correspondante (voir WO 92/02190). On connaît dans la technique l'utilisation d'ADNc de Ig pour la construction de gènes d'immunoglobuline chimériques (Liu et al. (1987) P. N.A.S. 84 :3439 (1987) J. Immunol. 139:3521). On isole l'ARNm à partir d'un hybridome ou d'une autre cellule produisant l'anticorps et on l'utilise pour produire l'ADNc. On peut amplifier l'ADNc d'intérêt par la réaction en chaîne de la polymérase en utilisant des amorces spécifiques (brevets US n 4 683 195 et 4 683 202). En variante, une bibliothèque est fabriquée et criblée pour isoler la séquence d'intérêt. La séquence d'ADN codant pour la région variable de l'anticorps est ensuite fusionnée aux séquences de région constante humaines. On peut trouver les séquences des gènes de région constante humains dans Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, publication N.I.H. n 91-3242. Les gènes de région C humains sont facilement disponibles à partir de clones connus. Le choix de l'isotype sera guidé par les fonctions effectrices souhaitées, telles que la fixation de complément, ou l'activité de cytotoxicité cellulaire dépendant de l'anticorps. Les isotypes préférés sont IgGl, IgG3 et IgG4. On peut utiliser soit les régions constantes de chaîne légère humaine, kappa ou lambda. Ensuite, on exprime l'anticorps humanisé, chimérique à l'aide de procédés classiques. On peut préparer des fragments d'anticorps, tels que Fv, F(ab')2 et Fab par clivage de la protéine intacte, par exemple par clivage à l'aide de protéase ou chimique. En variante, on conçoit un gène tronqué. Par exemple, un gène chimérique codant pour une portion du fragment F(ab')2 inclurait les séquences d'ADN codant pour le domaine CH1 et la région charnière de la chaîne H, suivi par un codon d'arrêt traductionnel pour produire la molécule tronquée. On peut utiliser des séquences consensus des régions H et LJ pour concevoir des oligonucléotides pour une utilisation en tant qu'amorces pour introduire des sites de restriction utiles dans la région J pour une liaison ultérieure des segments de la région V aux segments de la région C humaine. On peut modifier l'ADNc de la région C par mutagénèse dirigée vers un site pour placer un site de restriction à la position analogue dans la séquence humaine. Les vecteurs d'expression incluent les.plasmides, les rétrovirus, les YAC, les épisomes dérivés d'EBV et analogues. Un vecteur commode est celui qui code une séquence d'immunoglobuline CH ou CL humaine fonctionnellement complète, avec des sites de restriction appropriés construits de sorte que toute séquence VH ou VL peut être facilement insérée et exprimée. Dans de tels vecteurs, l'épissage apparaît habituellement entre le site donneur d'épissure dans la région J insérée et le site accepteur d'épissure précédant la région C humaine, et également aux régions d'épissure qui apparaissent dans les exons CH humains. La polyadénylation et la terminaison de transcription apparaissent à des sites chromosomaux d'origine en aval des régions codantes. On peut joindre l'anticorps chimérique résultant à n'importe quel promoteur fort, incluant les LTR rétroviraux, par exemple le promoteur précoce SV-40, (Okayama et al. (1983) Mol. Cell. Bio. 3:280), le virus du sarcome Rous LTR (Gorman et al. (1982) P. N.A.S. 79 :6777), le virus de la leucémie murine de moloney LTR (Grosschedl et al. (1985) Cell 41:885); les promoteurs Ig d'origine, etc. Encore dans d'autres formes de réalisation de l'invention, l'agent actif est un agent qui module, et diminue ou régule négativement généralement, l'expression du gène codant pour la protéine cible chez l'hôte. Par exemple, on peut utiliser des molécules anti-sens pour réguler négativement l'expression de Npt2B dans les cellules. Le réactif anti-sens peut être des oligonucléotides anti-sens (ODN), en particulier ODN synthétique ayant des modifications chimiques provenant d'acides nucléiques d'origine, ou de constructions d'acide nucléique qui expriment de telles molécules anti-sens comme l'ARN. La séquence anti-sens est complémentaire à l'ARNm du gène ciblé, et inhibe l'expression des produits du gène ciblé. Les molécules anti-sens inhibent l'expression du gène à travers divers mécanismes, par exemple, en réduisant la quantité d'ARNm disponible pour la traduction, par l'activation de l'ARNase H, ou l'encombrement stérique. On peut administrer une molécule anti-sens ou une combinaison de molécules anti-sens, où une combinaison peut comprendre de multiples séquences différentes. On peut produire des molécules anti-sens par l'expression de tout ou partie de la séquence de gène cible dans un vecteur approprié, où l'initiation transcriptionnelle est orientée de sorte qu'un brin anti-sens est produit comme une molécule ARN. En variante, la molécule anti-sens est un oligonucléotide synthétique. Les oligonucléotides anti-sens seront généralement au moins environ 7, habituellement au moins environ 12, plus habituellement au moins environ 20 nucléotides en longueur, et pas plus d'environ 500, habituellement pas plus d'environ 50, plus habituellement pas plus d'environ 35 nucléotides en longueur, où la longueur est régie par l'efficacité d'inhibition, la spécificité, incluant l'absence de réactivité croisée, et analogues. On a trouvé que de courts oligonucléotides, de 7 à 8 bases en longueur, peuvent être des inhibiteurs forts et sélectifs d'expression de gène (voir Wagner et al. (1996), Nature Biotechnol. 14:840-844). Une ou des régions spécifiques de la séquence ARNm monobrin de sens direct endogène sont choisies pour être complétées par la séquence anti-sens. La sélection d'une séquence spécifique pour l'oligonucléotide peut utiliser un procédé empirique, où on dose plusieurs séquences candidates pour l'inhibition de l'expression du gène cible dans un modèle animal ou in vitro. On peut également utiliser une combinaison de séquences, où on choisit plusieurs régions de la séquence ARNm pour la complémentation anti-sens. On peut chimiquement synthétiser des oligonucléotides anti-sens grâce à des procédés connus dans la technique (voir Wagner et al. (1993), ci-dessus et Milligan et al., ci-dessus). On modifie chimiquement les oligonucléotides préférés à partir de la structure de phosphodiester d'origine, afin d'augmenter leur stabilité intracellulaire et l'affinité de liaison. On a décrit un certain nombre de telles modifications dans la littérature, qui modifient la chimie du squelette, des sucres ou des bases hétérocycliques. Parmi les changements utiles dans la chimie du squelette, on trouve les phosphorothioates ; phosphorodithioates, où les deux oxygènes non pontants sont substitués par le soufre; les phosphoroamidites ; alkylphosphotriesters et les boranophosphates. Les dérivés de phosphate achiral incluent le 3'-0'-5'-S-phosphorothioate, le 3'-S-5'-0-phosphorothioate, le 3'-CH2-5'-O-phosphonate et le 3'-NH-5'-0-phosphoroamidate. Les acides nucléiques peptidiques remplacent le squelette de phosphodiester de ribose entier avec une liaison peptidique. On utilise également des modifications du sucre pour favoriser la stabilité et l'affinité. On peut utiliser le G-anomère de déoxyribose, où la base est inversée par rapport au G-anomère naturel. On peut modifier le 2'-OH du sucre ribose pour former les sucres 2'-0-méthyle ou 2'-O-allyle, qui fournit une résistance à la dégradation sans comprendre l'affinité. La modification des bases hétérocycliques doit maintenir un appariement correct des bases. Certaines substitutions utiles incluent la déoxyuridine par la déoxythymidine ; 5-méthyl- 2'-déoxycytidine et la 5-bromo-2'-déoxycytidine par la déoxycytidine. On a montré que la 5-propynyl-2'-déoxyuridine et la 5-propynyl-2'-déoxycytidine augmentent l'affinité et l'activité biologique quand elles remplacent, respectivement, la déoxythymidine et la déoxycytidine. En variante aux inhibiteurs anti-sens, on peut utiliser des composés catalytiques d'acide nucléique, par exemple les ribozymes, les conjugués anti-sens, etc., pour inhiber l'expression du gène. On peut synthétiser les ribozymes in vitro et les administrer au patient, ou bien on peut les coder sur un vecteur d'expression, à partir duquel le ribozyme est synthétisé dans la cellule ciblée (par exemple, voir demande de brevet internationale WO 9523225, et Beigelman et al. (1995), Nucl. Acids Res. 23 :4434 à 4442). On décrit des exemples d'oligonucléotides ayant une activité catalytique dans WO 9506764. On décrit des conjugués d'ODN anti-sens avec un complexe métallique, par exemple terpyridylCu(II), capable d'aider l'hydrolyse d'ARNm dans Bashkin et al. (1995), Appl. Biochem. Biotechnol. 54 :43 à 56. Comme mentionné ci-dessus, on administre une quantité efficace de l'agent actif à l'hôte, où "quantité efficace" signifie un dosage suffisant pour produire un résultat souhaité. En général, le résultat souhaité est au moins une amélioration ou une réduction de l'absorption intestinale d'anion phosphate, comme mesuré par les teneurs plasmatiques en Pi, par rapport à un témoin. Dans les présents procédés, on peut administrer le ou les agents actifs à l'hôte en utilisant tout moyen commode capable d'aboutir à la modulation souhaitée de l'activité de Npt2B, par exemple la réduction souhaitée de l'absorption de Pi et des teneurs en Pi dans le plasma. Ainsi, on peut incorporer l'agent dans une diversité de formulations pour une administration thérapeutique. Plus particulièrement, on peut formuler les agents de la présente invention dans des compositions pharmaceutiques par combinaison avec des véhicules ou des diluants acceptables sur le plan pharmaceutique, appropriés, et on peut les formuler dans des préparations sous forme solide, semi-solide, liquide ou gazeuse, telles que des comprimés, des gélules, des poudres, des granulés, des pommades, des solutions, des suppositoires, des injections, des inhalations et des aérosols. Comme tel, on peut réaliser l'administration des agents de diverses façons, incluant l'administration par voie orale, buccale, rectale, parentérale, intrapéritonéale, intradermique, transdermique, intrachéale, etc. Dans les formes de dosage pharmaceutique, on peut administrer les agents sous forme de leurs sels acceptables sur le plan pharmaceutique, ou bien on peut également les utiliser seuls ou en association appropriée, ainsi qu'en combinaison, avec d'autres composés actifs sur le plan pharmaceutique. Les procédés suivants et les excipients sont simplement donnés à titre d'exemple et ne limitent en aucune façon l'invention. Pour les préparations par voie orale, on peut utiliser les agents seuls ou en combinaison avec des additifs appropriés pour fabriquer des comprimés, des poudres, des granulés ou des gélules, par exemple, avec des additifs classiques, tels que le lactose, le mannitol, l'amidon de maïs ou la fécule de pomme de terre ; des liants, tels que la cellulose cristalline, les dérivés de cellulose, la gomme arabique, l'amidon de maïs ou les gélatines ; des agents de délitement, tels que l'amidon de maïs, la fécule de pomme de terre ou la carboxyméthylcellulose de sodium ; des lubrifiants, tels que le talc ou le stéarate de magnésium ; et si souhaité, avec des diluants, des agents tampons, des agents humidifiants, des conservateurs et des agents de saveur. On peut formuler les agents dans les préparations pour une injection en les dissolvant, en les mettant en suspension ou en les émulsifiant dans un solvant aqueux ou non aqueux, tel que l'huile végétale ou d'autres huiles similaires, les glycérides d'acide aliphatique synthétique, les esters d'acides aliphatiques supérieurs ou de propylèneglycol ; si souhaité, avec des additifs classiques tels que les agents de solubilisation, les agents isotoniques, les agents de mise en suspension, les agents émulsifiants, les stabilisants et les conservateurs. On peut utiliser les agents de formulation d'aérosol pour les administrer par l'intermédiaire d'une inhalation. On peut formuler les composés de la présente invention avec des propulseurs acceptables pressurisés tels que le dichlorodifluorométhane, le propane, l'azote et analogues. En outre, on peut rendre les agents en suppositoires en mélangeant avec une diversité de bases telles que les bases émulsifiantes ou les bases hydrosolubles. On peut administrer les composés de la présente invention par voie rectale à l'aide d'un suppositoire. Le suppositoire peut inclure des véhicules tels que le beurre de cacao, les carbocires et les polyéthylèneglycols, qui fondent à la température corporelle, et qui sont encore solidifiés à la température ambiante. On peut fournir des formes de dosage unitaires pour l'administration par voie orale ou rectale telle que les sirops, les élixirs et les suspensions, dans lesquelles chaque unité de dosage, par exemple, une cuillerée à thé, une cuillerée à soupe, un comprimé ou un suppositoire, contient une quantité prédéterminée de la composition contenant un ou plusieurs inhibiteurs. De façon similaire, les formes de dosage unitaire pour l'administration par injection ou intraveineuse peuvent comprendre le ou les inhibiteurs dans une composition sous forme de solution dans de l'eau stérile, dans un sérum physiologique normal ou un autre véhicule acceptable sur le plan pharmaceutique. Le terme "forme de dosage unitaire", tel qu'utilisé dans l'invention, désigne des unités physiquement discrètes appropriées comme dosages unitaires pour des sujets humains et animaux, chaque unité contenant une quantité prédéterminée de composés de la présente invention calculée dans une quantité suffisante pour produire l'effet souhaité en association avec un diluant, porteur ou véhicule acceptable sur le plan pharmaceutique. Les spécifications pour les nouvelles formes de dosage unitaire de la présente invention dépendent du composé particulier employé et de l'effet à réaliser, et des pharmacodynamiques associés à chaque composé chez l'hôte. Les excipients acceptables sur le plan pharmaceutique, tels que les véhicules, les adjuvants, les porteurs ou les diluants, sont facilement disponibles au public. En outre, les substances auxiliaires acceptables sur le plan pharmaceutique, telles que les agents d'ajustement du pH et tampons, les agents d'ajustement de la tonicité, les stabilisants, les agents mouillants et analogues, sont facilement disponibles au public. Quand l'agent est un polypeptide, un polynucléotide, analogue ou mimétique, par exemple composition anti-sens, on peut l'introduire dans des tissus ou des cellules hôtes par un certain nombre de façons, incluant l'infection virale, la micro-injection ou la fusion de vésicules. On peut également utiliser l'injection par jet pour une administration intramusculaire, comme décrit par Furth et al. (1992), Anal Biochem 205 :365 à 368. On peut déposer l'ADN sur des microparticules d'or, et le délivrer par voie intradermique à l'aide d'un dispositif de bombardement de particules, ou un "pistolet à gène" comme décrit dans la littérature (voir, par exemple, Tang et al. (1992), Nature 356:152 à 154), où les micro-projectiles d'or sont revêtues avec l'ADN thérapeutique, puis bombardés dans les cellules de la peau. L'homme de métier appréciera facilement que les teneurs de dose peuvent varier en fonction du composé spécifique, de la gravité des symptômes et de la susceptibilité du sujet aux effets secondaires. Les dosages préférés pour un composé donné sont facilement déterminables par l'homme de métier grâce à une diversité de moyens. Les présents procédés trouvent une utilisation dans le traitement d'une diversité de différents états maladifs impliquant l'activité de Npt2B. Comme tels, les états maladifs traitables selon les présents procédés incluent les maladies caractérisées par une absorption de Pi anormalement élevée et les états maladifs caractérisés par une absorption de Pi anormalement faible. Les états maladifs provenant de l'activité Npt2B anormalement faible sont ceux caractérisés par la présence d'hypophosphatémie, et incluent: l'ostéomalacie, l'hypocalciurée, le rachitisme, et analogues. Les états maladifs provenant de l'activité de Npt2B anormalement élevée sont celles caractérisées par la présence d'hyperphosphatémie et incluent: l'hyperparathyroïdisme, l'hypocalcémie, la déficience en vitamine D, la calcification du tissu mou ou métastatique, et analogues. D'intérêt particulier est l'utilisation des présents procédés pour traiter l'hyperphosphatémie provenant de l'insuffisance rénale, par exemple, provoquée par maladie rénale aboutissant à au moins une fonction rénale détériorée, et analogues. Par traitement, on signifie au moins une amélioration des symptômes associés à l'état pathologique affligeant l'hôte, où on utilise l'amélioration dans un sens large pour désigner au moins une réduction dans l'amplitude d'un paramètre, par exemple symptôme, associé à l'état pathologique traité, tel que l'hyperphosphatémie. Comme tel, le traitement inclut également des situations où l'état pathologique, ou au moins les symptômes associés à celui-ci, sont complètement inhibés, par exemple sont empêchés de survenir, ou arrêtés, par exemple terminés, de sorte que l'hôte ne souffre plus de l'état pathologique, ou au moins des symptômes qui caractérisent l'état pathologique. Une diversité d'hôtes est traitable selon les présents procédés. En général, de tels hôtes sont des@"mammifères", où ce terme est utilisé au sens large pour décrire des organismes qui sont dans la classe des mammifères, incluant les ordres carnivore (par exemple, les chiens et les chats), les rongeurs (par exemple, les souris, les cochons d'Inde et les rats), et les primates (par exemple, l'homme, les chimpanzés et les singes). Dans de nombreuses formes de réalisation, les hôtes seront l'homme. On fournit des trousses avec des doses unitaires de l'agent actif, habituellement en doses orales ou injectables. Dans de telles trousses, en plus des récipients contenant les doses unitaires, on trouvera une notice d'informations décrivant l'utilisation et les avantages attendus des médicaments dans le traitement de l'état pathologique d'intérêt. Les composés préférés et les doses unitaires sont celles décrites ici ci-dessus. Les exemples suivants sont donnés principalement dans des besoins d'illustration. Il apparaîtra facilement à l'homme de métier que les formulations, dosages, procédés d'administration, et autres paramètres de cette invention peuvent être modifiés ou remplacés de diverses manières sans s'écarter de l'esprit, ni la portée de l'invention. Expérimentation A. Identification de la séquence Npt2B La comparaison des séquences de protéine co-transporteur des ions phosphate et sodium de type II à partir d'espèces différentes disponibles provenant de bases de données publiques a révélé que, alors que la plupart était très étroitement apparenté, les séquences bovine et de flet semblaient former une sous-famille distincte. On a ainsi recherché la base de donnée Incyte LifeSeq concernant des clones analogues à Npt2 qui ressemblaient plus étroitement à la séquence bovine que ne l'était l'homme. On a identifié un certain nombre de clones et on a obtenu trois d'entre eux et on a déterminé la séquence de l'ADN des inserts entiers. On a réalisé le séquençage d'ADN sur un séquenceur automatique (PE/Applied Biosystems Model 373A, Foster City, CA) en utilisant une trousse de séquençage à terminaison didéoxy à coloration du fournisseur. La comparaison des séquences a révélé qu'elles représentaient le même ADNc et que le plus long n'était qu'un clone partiel auquel manque approximativement 150 acides aminés à partir de la terminaison N, basé sur l'homologie à la protéine bovine. On a utilisé la séquence consensus pour sélectionner de plus la base de données LifeSeq et on a identifié un grand nombre de clones, incluant celui qui a semblé contenir la séquence codante pleine longueur. On a obtenu cette dernière chez Incyte et on l'a séquencée. Ceci a révélé la présence d'un cadre de lecture ouvert de 689 acides aminés qui a semblé être un élément humain de la sous-famille de co-transporteur de type II bovin/flet. La majorité des clones identifiés dans la base de données LifeSeq l'étaient à partir de bibliothèques provenant d'échantillons de tissu apparentés au poumons, toutefois, certains clones l'étaient à partir de bibliothèques du petit intestin et d'origine ovarienne. Ceci a suggéré que cet ADNc puisse être un candidat pour le cotransporteur des ions phosphate et sodium intestinal humain. Des expérimentations utilisant RT-PCR ont confirmé l'expression de ce gène dans l'ADNc provenant d'échantillons de l'intestin grêle humain (obtenus chez Clontech Corporation, Palo Alto, CA). Ultérieurement, on a renforcé l'affectation de cette séquence comme le transporteur intestinal humain par un degré élevé d'homologie à des séquences publiées pour les transporteurs intestinaux du Xenopus (A. Ishizuya-Oka et al. (1997) Temporal and Spatial Expression of an Intestinal Na+/PO43- Cotransporter Correlates With Epithelial Transformation During Thyroid Hormone-Dependent Frog Metamorphosis. Develoment Genetics 20:53 à 66) et de la souris (H. Hilfiker et al., Characterization of a murine type II sodium-phosphate cotransporter expressed in mammalian small intestine. PNAS 1998 95:14564 à 14569). B. Expression dans les cellules mammifères et protocole de dosage pour le transporteur Na/Pi L'ADNc Npt2B humain est cloné dans un vecteur d'expression mammifère constitutif approprié tel que ADNpc3.1 ou pREP9 (tous deux de chez Invitrogen, Carlsbad, Californie). Si nécessaire, l'ADNc est cloné dans un vecteur inductible tel que pLK-neo, un vecteur inductible au glucocorticoïde (de chez Prof. Nicholas Fasel, Institute of Biochemistry, University of Lausanne, Suisse ; décrit dans Gene, 111,199 à 206 (1992) ). On transfecte un certain nombre de souches cellules mammifères, par exemple HEK 293, CHO, MDCK, BHK et NIH 3T3, avec les constructions d'expression, et on les crible pour l'expression stable du transporteur recombinant utilisant une version du dosage décrite ci-dessous. On plaque les cellules exprimant le transporteur dans des plaques de culture de tissu à 96 puits à raison de 50 000 à 100 000 cellules par puits dans 200 l de milieux appropriés et on les laisse adhérer pendant 3 à 16 heures. Immédiatement avant le dosage, on lave les cellules trois fois avec un tampon d'eau exempt de sodium et de phosphate (N-méthyl-D-glucamine 137 nM, KC1 5,4 mM, CaCl2 2,8 mM, MgCl2 1,2 mM, HEPES 10 mM, pH ajusté à 7,4 avec HCl). Ensuite, on ajoute les composants suivants, (1) 50 l de tampon réactionnel (NaCl 137 mM, KCl 5,4 mM, CaCl2 2,8 mM, MgCl2 1,2 mM, KH2PO4 0,1 mM, HEPES 10 mM, pH ajusté à 7,4 avec KOH), (2) 40 l de composés d'essai dilués dans le tampon réactionnel et (3) 10 (il d'une solution de phosphate 10X (la concentration finale en phosphate est 100 M) contenant soit 32p (0,25 Ci) soit 33p (0,5 Ci) comme traceur. On incube les plaques à la température ambiante pendant 20 à 30 minutes, et on arrête la réaction en retirant la solution de prise et en lavant les cellules 3 fois avec une solution de trempe glacée (NaCl 137 mM, Tris-HCl 10 mM, pH 7,2). On détermine la radio-activité prise par les cellules par comptage après l'addition de 150 l de cocktail de scintillation. Les témoins se composent de cellules incubées sans composé d'essai (véhicule seul) et de cellules incubées avec la N-méthyl-D-glucamine dans le tampon réactionnel au lieu du sodium. L'activité inhibitrice est exprimée comme le pourcentage d'inhibition de prise dépendante du sodium du traceur. En utilisant le protocole ci-dessus, on crible des agents thérapeutiques candidats pour leur activité modulatrice de Npt2B. Il apparaît d'après les résultats et la discussion ci-dessus qu'un nouveau co-transporteur des ions phosphate et sodium intestinal humain, ainsi que des polypeptides apparentés à celui-ci et des compositions d'acide nucléique codant pour ceux-ci, sont fournis par la présente invention. Ces compositions polypeptidiques et d'acide nucléique trouvent une utilisation dans une variété de diverses applications, incluant les applications à la recherche, au diagnostic et au criblage d'agents thérapeutiques. Sont également fournis des nouveaux procédés de traitement des maladies associées aux anormalités des teneurs en phosphate du plasma, puisque l'identification du co-transporteur des ions phosphate et sodium sujet prévoit une cible supplémentaire pour des agents thérapeutiques pour de telles maladies. En conséquence, la présente invention prévoit une contribution significative au domaine. Toutes les publications et demandes de brevet citées dans cette description sont incorporées ici par référence comme si chaque publication individuelle ou demande de brevet était spécifiquement et individuellement indiquée pour être incorporée par référence. La citation de toute publication est pour cette description antérieure à la date de dépôt et ne devrait pas être considérée comme une reconnaissance que la présente invention n'est pas intitulée pour antidater une telle publication en vertu de l'invention antérieure. Bien que l'invention précédente ait été décrite en certains détails grâce à des illustrations et exemples à des fins de clarté de compréhension, il apparaît clairement à l'homme de métier, à la lumière des enseignements de cette invention, que certains changements et modifications peuvent y être effectués sans s'écarter de l'esprit ou de la portée des revendications jointes. REVENDICATIONS 1. Polypeptide Npt2B avec une séquence d'acides aminés sensiblement identique à la séquence SEQ ID NO:01. 2. Polypeptide Npt2B qui est au moins 90% identique au polypeptide selon la revendication 1. 3. Polypeptide Npt2B selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID N0:01. 4. Protéine ou polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, ayant une activité de co-transport des ions phosphate et sodium. 5. Fragment du polypeptide Npt2B selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 6. Acide nucléique codant pour une protéine ou un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 7. Acide nucléique selon la revendication 6, dans lequel ledit acide nucléique a une séquence d'acide nucléique qui est sensiblement identique à la séquence de nucléotides de SEQ ID N0:02. 8. Fragment de l'acide nucléique selon la revendication 6 ou 7. 9. Acide nucléique isolé ou son mimétique qui s'hybride dans des conditions stringentes à l'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 6 à 8 ou sa séquence complémentaire. 10. Cassette d'expression comprenant une région d'initiation transcriptionnelle fonctionnelle chez un hôte d'expression, un acide nucléique ayant une séquence de nucléotides trouvée dans l'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, sous la régulation transcriptionnelle de ladite région d'initiation transcriptionnelle, et une région de terminaison transcriptionnelle fonctionnelle chez ledit hôte d'expression. 11. Cellule comprenant une cassette d'expression selon la revendication 10, comme partie d'un élément extrachromosomique ou intégré dans le génome d'une cellule hôte comme résultat de l'introduction de ladite cassette d'expression dans ladite cellule hôte. 12. Descendance cellulaire de la cellule hôte selon la revendication 10 ou 11. 13. Procédé de production de Npt2B, ledit procédé comprenant la culture d'une cellule selon la revendication 11 ou 12, ainsi ledit Npt2B est exprimé ; à isoler ledit Npt2B sensiblement exempt d'autres protéines. 14. Anticorps monoclonal se liant spécifiquement à Npt2B. 15. Anticorps selon la revendication 14, dans lequel ledit anticorps inhibe l'activité de Npt2B. 16. Anticorps monoclonal selon la revendication 14 ou 15, dans lequel ledit anticorps est un anticorps humanisé. 17. Procédé pour moduler Npt2B chez un hôte, ledit procédé consistant à administrer une quantité efficace d'un agent modulateur de Npt2B audit hôte. 18. Utilisation d'un agent modulateur de Npt2B pour la production d'un médicament destiné à moduler Npt2B chez un hôte. 19. Procédé de criblage pour identifier des agents modulateurs de Npt2B, ledit procédé comprenant la mise en contact d'une cellule exprimant Npt2B fonctionnel sur sa surface avec un agent candidat en présence d'anion phosphore; et la détermination de la quantité de prise d'anion phosphore par ladite cellule. 20. Procédé selon la revendication 19, dans lequel ledit anion phosphore est marqué avec un marquage détectable. 21. Modèle selon la revendication 19 ou 20, dans lequel ledit marquage est un isotope. 22. Modèle animal transgénique non humain capable d'exprimer Npt2B. 23. Utilisation d'une protéine ou d'un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour le criblage d'agents modulateurs de Npt2B. 24. Invention telle que décrite précédemment.