Brevet FR2795414A1 — publié le 20001229

La présente invention concerne un nouveau polypeptide ICBP 90 et ses fragments, le clonage de l'ADNc et les polynucléotides codant pour lesdits polypeptides, des vecteurs de clonage et/ou d'expression incluant lesdits polynucléotides, des cellules transformées par lesdits vecteurs et des anticorps spécifiques dirigés contre lesdits polypeptides. L'invention concerne également des procédés et des kits de diagnostic des cancers, un procédé et un kit de criblage de ligands du polypeptide de l'invention et des composés utilisables à titre de médicament pour la prévention et/ou le traitement des cancers. Les ADN topoisomérases sont des protéines nucléaires hautement conservées au cours l'évolution dont le rôle principal est de contrôler la conformation et la topologie de l'ADN dans le noyau, qui sont constamment altérées par les différents processus biologiques impliquant l'ADN tels par exemple la transcription et la réplication. Les topoisomérases exercent leur action en coupant l'ADN et en reliant ces lésions après avoir réalisé le changement conformationnel adéquat. Chez les mammifères et l'homme en particulier, il existe à l'heure actuelle au moins cinq gènes différents codant pour une topoisomérase et au moins deux pseudogènes additionnels (pour revue, voir Nitiss 1998). Ainsi, la topoisomérase I, codée par le gène TOP1 retire les supertours présents dans l'ADN en ne coupant qu'un seul brin. Les deux topoisomérases de type II existant chez l'homme appelées TopIIa et TopIIp, altèrent la topologie de l'ADN en introduisant des clivages double brin transitoires (pour revue, voir Wang 1996). Enfin, il existe deux topoisomérases de type III codées par deux gènes localisés en 17p 11.2- 12 et 22qll-12et qui agissent uniquement contre les supertours négatifs de l'ADN. Dans les cellules tumorales, les topoisomérases de type II jouent un rôle très important ; dans ces cellules en croissance et en division rapide, il existe un grand besoin de maintenir les molécules d'ADN dans une conformation correcte puisque des taux de transcription et de réplication élevés sont nécessaires. Ainsi, les taux de toposiomérases II sont en général plus élevés dans les cellules tumorales humaines que dans les tissus normaux de même origine. Cependant, le taux d'expression élevé de la topoisomérase II[alpha] dans les cellules tumorales peut variés entre deux tumeurs de nature différente affectant un même tissu. Par exemple, le noyau des cellules de carcinome du poumon à petites cellules présente un taux plus élevé de topoisomérase II[alpha] que le noyau des cellules de carcinomes pulmonaires à cellules de taille normale (Guinee et al., 1996). De la même manière, le taux de topoisomérase IIa dans les cellules A549 est trois fois plus élevé que dans les cellules PC3, ces deux lignées cellulaires provenant d'adénocarcinome de l'épithélium pulmonaire (Yamasaki et al., 1996). Ces constatations donnent à penser que la topoisomérase II[alpha] peut être considérée comme un marqueur de prolifération cellulaire pour certains types de cancer. Le processus cancéreux se caractérisant par une prolifération cellulaire anormale due en partie à la perte de l'inhibition de contact, la topoisomérase II[alpha] apparaît donc comme une cible privilégiée des drogues chimiothérapeutiques pour le traitement du cancer (Pommier et al. 1994), et les traitements anticancéreux actuels font largement appel aux inhibiteurs de topoisomérases. La plupart de ces inhibiteurs exercent leurs effets cytotoxiques en stabilisant le complexe de clivage de l'ADN. Des drogues comme les anthracyclines [doxorubicine (adriamycine) ou épipodophyllotoxines (tel l'étoposide (VP-16) ou le téniposide (VM26))], les acridines (tel que le mAMSA) et les anthracendiones (e.g. mitoxantrone) sont des exemples de drogues inhibitrices de topoisomérases II qui stabilisent le complexe de clivage. Plus récemment, une nouvelle classe d'inhibiteurs de topoisomérases II a été développée ; ces inhibiteurs agissent au niveau de l'activité catalytique et non plus en stabilisant le complexe de clivage. La drogue fostriécine en est un exemple (Boritzki et al., 1988). Aujourd'hui ces différentes drogues sont utilisées dans des traitements anti-cancéreux curatifs et palliatifs. Néanmoins, l'un des problèmes majeurs rencontré dans les traitements anti-cancéreux actuels utilisant les inhibiteurs des topoisomérases est l'émergence d'une résistance aux drogues (Kubo et al., 1995). Ces résistances sont soit le fait d'une surexpression de pompes permettant l'efflux de drogues à l'extérieur de cellules avant qu'elles n'atteignent leur cible (e. g ; P-glycoprotéine, protéine associée à la multirésistance aux drogues (MRP)), soit le fait de changement du taux d'expression de la topoisomérase II[alpha] (Deffie et al., 1989 ; Fry et al., 1991), soit des deux (pour revue, voir Isaacs et al., 1998). L'un des aspects de la présente invention est donc de comprendre les mécanismes de régulation de l'expression du gène de la topoisomérase II[alpha], afin de développer une alternative au phénomène de résistance aux drogues observé pour certains cancers, et ce, dans l'optique d'améliorer le traitement préventif et curatif des cancers. Il existe deux types de topoisomérases de type II qui diffèrent dans leur profil d'expression ; la topoisomérase II[alpha] (Top II[alpha]) (170 kD), essentiellement localisée dans le nucléoplasme au niveau du centromère des chromosomes mitotiques, intervient dans les processus biologiques fondamentaux que sont la réplication, la condensation des chromosomes et la transcription. La topoisomérase IIss (Top 11(3) (180 kD) est semble-t-il plutôt impliquée dans la transcription des ARN ribosomiques étant donné la localisation nucléolaire de cette enzyme. Les deux topoisomérases de type II humaines sont localisées sur deux chromosomes différents (17q21-22 pour la topoisomérase II[alpha] et 3p24 pour la topoisomérase IIss) (Tsai-Plugfelder et al., 1988 ; Drake et al., 1989 ; Chung et al., 1989 ; Jenkins et al., 1992 ; Austin et al., 1993). Contrairement à la topoisomérase IIss dont l'expression se caractérise par une relative constance, la topoisomérase II[alpha] présente une variation d'expression en fonction de l'état de prolifération des cellules et de leur position dans le cycle cellulaire. L'expression de l'ARN messager (ARNm) est plus élevée dans les cellules en prolifération que dans les cellules arrêtées en confluence. L'expression de la topoisomérase II[alpha] augmente au cours de la phase S du cycle cellulaire pour atteindre un maximum en fin de phase G2/M (Goswami et al., 1996), le niveau d'ARN messager étant dix fois plus élevé en fin de phase S que pendant la phase Gl. Egalement, il semble exister un couplage entre la synthèse et la dégradation de la topoisomérase II[alpha] et la condensation/décondensation chromosomique (Heck et al., 1988). Les connaissances actuelles concernant la régulation du gène de la topoisomérase II[alpha] restent somme toute assez sommaires. Récemment, une région promotrice d'environ 650 paires de bases a été décrite par Hochhauser et al. (1992), elle présente toutes les caractéristiques d'un gène domestique, absence de boîte TATA et richesse modérée en sites GC (présence notamment d'une boîte Spl1 pouvant remplacer la boîte TATA) en sont deux exemples. La présence de 5 boîtes CCAAT inversées ou ICB (Inverted CCAAT box) est une autre particularité de ce type de promoteur. Des facteurs de transcription interagissant avec le promoteur du gène de la topoisomérase II[alpha] humaine ont été décrits ; on peut citer cmyb (Brandt et al., 1997), p53 (Sandri et al., 1996), ATF (Lim et al., 1998), Splet Sp3 (Kubo et al., 1995). Quoi qu'il en soit, en dehors de NF-Y (également appelé CBF, ACF et CP1, références dans Isaacs et al., 1996) les facteurs de transcription agissant sur les séquences ICB du promoteur du gène de la topoisomérase II[alpha] humaine ne sont pas encore tous identifiés et caractérisés ; Herzog et Zwelling (1997) ont cependant mis en évidence deux protéines d'un poids moléculaire apparent de 90 kD et de 140 kD qui lient respectivement ICB à ICB4 et ICB5. Isaacs et ses collaborateurs (1996) ont proposé que le NFY ainsi qu'une autre protéine non identifiée reconnaissent une boîte ICB de la région promotrice du gène de la topoisomérase II[alpha] ; ils ont également montré que les mutations de ICB2 abrogeaient complètement la diminution de l'activité promotrice normalement observée dans des cellules arrêtées à confluence (Isaac et al., 1996). Ils ont identifié NFY comme un composant d'un complexe induit par la prolifération et qui se lie in vitro à la séquence ICB2 du promoteur du gène de la topoisomérase II[alpha] humaine, bien que NF-Y soit toujours détectable dans les cellules arrêtées à confluence (Isaac et al., 1996). Ils ont proposé que ICB2 agisse comme un régulateur négatif du promoteur du gène de la topoisomérase II[alpha] des cellules arrêtées à confluence et que cette répression puisse être supprimée dans les cellules prolifératives. La boîte ICB2 du promoteur du gène de la topoisomérase II[alpha] joue donc un rôle primordial dans l'arrêt du processus prolifératif normal lorsque les cellules arrivent à confluence. Des facteurs de transcription se liant à la séquence ICB ainsi que la séquence ICB elle-même constituent donc des cibles moléculaires pour contrôler le taux d'expression de la topoisomérase lia. En intervenant sur ces facteurs, il est possible d'envisager de contrôler l'expression du gène de la topoisomérase II[alpha] et par voie de conséquence la prolifération cellulaire. La présente invention a pour objet la mise en évidence de nouveaux facteurs de transcription se liant la boite ICB impliquée dans le contrôle de la prolifération cellulaire. Une technique récente appelée système simple-hybride qui permet d'isoler des clones ADNc codant pour des protéines de liaison à l'ADN spécifique de certaines séquences a été utilisée. Ce système présente un double avantage car il est capable non seulement de mettre à jour des interactions ADN-protéine in vivo chez la levure mais aussi de donner directement accès aux ADN complémentaires (ADNc) codant les protéines candidates ayant une activité de facteur transcription. Le système repose principalement sur la construction d'une souche de levure test selon le principe mis au point par Wang et Reed (1993). Cette souche de levure permet le criblage de banques d'ADNc en mettant en évidence l'interaction ADN-protéine in vivo par le biais de l'activation d'un gène rapporteur intégré au génome de la levure test. La présente invention a donc pour objet un polypeptide isolé dénommé ICBP90 (inverted CCAAT box binding protein) de séquence d'acides aminés SEQ ID N 2. Cette séquence comprend : a) un domaine ubiquitine comprenant la séquence d'acides aminés 1 à 75 de la séquence SEQ ID N 2 ; b) un domaine doigt de zinc de type C4HC3 comprenant la séquence d'acides aminés 310 à 366 de la séquence SEQ ID N 2 et un domaine "doigt de zinc" de type C3HC4 comprenant la séquence d'acides aminés 724 à 763 de la séquence ID n 2 ; c) un domaine leucine zipper putatif comprenant la séquence d'acides aminés 58 à 80 de la séquence SEQ ID N 2 ; d) deux domaines de localisation nucléaire potentiels comprenant les séquences d'acides aminés 581 à 600 et 648 à 670 de la séquence SEQ ID N 2 ; e) un site de phosphorylation par une tyrosine kinase comprenant la séquence d'acides aminés 452 à 458 de la séquence SEQ ID N 2 ; des sites de phosphorylation par une protéine kinase cAMP/cGMP dépendante comprenant les séquences d'acides aminés 246 à 249,295 à 298 et 648 à 651 de la séquence SEQ ID N 2 ; g) des sites de phosphorylation par une caséine kinase II comprenant la séquence d'acides aminés 23 à 26,57 à 60,91 à 94,109 à 112, 165 à 168, 265 à 268,354 à 357 et 669 à 672 de la séquence SEQ ID N 2 ; h) des sites de phosphorylation par une protéine kinase C comprenant la séquence d'acides aminés 82 à 84,104 à 106, 160 à 162,173 à 175,251 à 253,301 à 303,380 à 382,393 à 395,504 à 506,529 à 531,625 à 627 et 639 à 641 de la séquence SEQ ID N 2 . La présente invention porte également sur un polypeptide isolé caractérisé en ce qu'il comprend un polypeptide choisi parmi : a) un polypeptide de séquence SEQ ID N 2, SEQ ID N 4, SEQ ID N 6 ou SEQ ID N 8 ; b) un polypeptide variant de polypeptide de séquences d'acides aminés défini en a) ; c) un polypeptide homologue au polypeptide défini en a) ou b) et comportant au moins 80 % d'homologie, de préférence 90 % avec ledit polypeptide de a) ; d) un fragment d'au moins 5 acides aminés consécutifs d'un polypeptide défini en a), b) ou c) ; e) un fragment biologiquement actif d'un polypeptide défini en a), b) ou c). Il doit être compris que l'invention concerne les polypeptides obtenus par purification à partir de sources naturelles, ou bien obtenues par recombinaison génétique, ou encore par synthèse chimique et pouvant alors comporter des acides aminés non naturels. Dans la présente description, on utilisera le terme polypeptide pour désigner également une protéine ou un peptide. On entendra par polypeptide variant l'ensemble des polypeptides mutés pouvant exister naturellement, en particulier chez l'être humain, et qui correspondent notamment à des troncatures, substitutions, délétions et/ou additions de résidus d'amino-acides. Les polypeptides homologues selon l'invention conserve au moins un domaine choisi parmi le domaine de liaison à l'ADN et/ou le domaine d'interaction avec une autre protéine. Par polypeptide homologue, on entendra désigner les polypeptides présentant, par rapport au polypeptide naturel ICBP90, certaines modifications comme en particulier une délétion, addition ou substitution d'au moins un acide aminé, une troncature, un allongement et/ou une fusion chimérique. Parmi les polypeptides homologues, on préfère ceux dont la séquence d'acides aminés présente au moins 80 % d'homologie, de préférence 90 %, de manière préférée 95 %, et de manière encore préférée 97 % d'homologie avec les séquences d'acides aminés des polypeptides selon l'invention. Dans le cas d'une substitution, un ou plusieurs acides aminés consécutifs ou non consécutifs, sont remplacés par des acides aminés équivalents . L'expression acide aminé équivalent vise ici à désigner tout acide aminé susceptible d'être substitué à l'un des acides aminés de la structure de base sans cependant modifier les caractéristiques ou propriétés fonctionnelles essentielles, comme leurs activités biologiques, des polypeptides correspondants telles que l'induction in vivo d'anticorps capables de reconnaître le polypeptide dont la séquence d'acides aminés est comprise dans la séquence d'acides aminés SEQ ID N 2, ou l'un de ses fragments ci-dessus définis et notamment la séquence d'acides aminés SEQ ID N 4, SEQ ID N 6 et SEQ ID N 8 . Ces acides aminés équivalents peuvent être déterminés soit en s'appuyant sur leur homologie de structure avec les acides aminés auxquels ils se substituent, soit sur les résultats des essais d'activité biologique croisée auxquels les différents polypeptides sont susceptibles de donner lieu. A titre d'exemple, on mentionnera les possibilités de substitutions susceptibles d'être effectuées sans qu'il en résulte une modification approfondie des activités biologiques des polypeptides modifiés correspondants, les remplacements, par exemple, de la leucine par la valine ou l'isoleucine, de l'acide aspartique par l'acide glutamique, de la glutamine par l'asparagine, de l'arginine par la lysine etc., les substitutions inverses étant naturellement envisageables dans les mêmes conditions. Par fragment biologiquement actif, on entendra désigner en particulier un fragment de séquence d'acides aminés de polypeptide selon l'invention présentant au moins une des caractéristiques ou propriétés fonctionnelles des polypeptides selon l'invention, notamment en ce que : (i) il est capable d'être reconnu par un anticorps spécifique d'un polypeptide selon l'invention ; (ii) il présente au moins l'un des domaines ou régions tels que définis ci-après ; (iii) il est capable de se lier à l'ADN et notamment aux boîtes CCAAT et/ou CCAAT inversée ; (iv) il est capable de moduler le taux d'expression du gène de la topoisomérase lia ; (v) il est capable de moduler la prolifération cellulaire. Par fragment de polypeptide, on entend désigner un polypeptide comportant au minimun 5 acides aminés, de préférence 7 acides aminés, de manière préférée 10 et de manière encore préférée 15 acides aminés. Les fragments de polypeptide selon l'invention obtenus par clivage dudit polypeptide par une enzyme protéolytique, par un réactif chimique, ou encore en plaçant ledit polypeptide dans un environnement très acide font également partie de l'invention. Le polypeptide selon l'invention peut également s'associer à d'autres polypeptides par des interactions protéine-protéine. On entend désigner par interactions protéine-protéine, des associations mettant directement en contact au moins deux protéines. Ainsi, le polypeptide de l'invention peut se dimériser pour former des homodimères ou des hétérodimères, ou s'associer sous la forme d'homomultimères ou d'hétéromultimères. Le polypeptide selon l'invention peut également interagir avec un autre polypeptide pour exercer son action ; ainsi, le polypeptide selon l'invention peut posséder, en plus de son domaine de liaison à l'ADN, un domaine d'action sur la transcription qui exerce son action via des interactions protéine-protéine avec d'autres composants protéique de la machinerie transcriptionnelle. On entend désigner par composant protéique de la machinerie transcriptionnelle tous les facteurs de transcription nécessaires à la réalisation et à la régulation de la réaction de transcription. Le polypeptide selon l'invention est caractérisé en ce qu'il est capable de se lier à une séquence d'ADN et en ce qu'il est comporte au moins un domaine de fixation à l'ADN sélectionné dans le groupe composé d'un domaine doigt de zinc (zinc-finger) et d'un domaine leucine zipper ;la séquence d'ADN sur laquelle se lie ledit polypeptide est une boite CCAAT, de préférence une une boite CCAAT inversée (inverted CCAAT box : ICB). On entend désigner par liaison à une séquence d'ADN, une interaction spécifique entre le polypeptide de l'invention et une séquence d'ADN au moyen d'une série de liaisons faibles contractées entre les acides aminés de la protéine et les bases. Le polypeptide selon l'invention possède au moins un domaine de liaison à l'ADN qui contient au moins un des motifs protéiques connus susceptibles d'interagir avec l'ADN, c'est-à-dire la structure en doigt de gant à laquelle est associée un atome de zinc ( zinc-finger ), la structure hélice-tour-hélice, la structure hélice-boucle-hélice et la fermeture éclair à leucines ( leucine-zipper ). Par motif en doigt de gant ( zinc-finger ), on entend désigner une séquence d'une vingtaine d'acides aminés ayant dans l'espace une forme de doigt de gant. Il en existe deux types : ceux qui contiennent quatre cystéines (C4) et ceux qui contiennent deux cystéines et deux histidines (C2H2). Ces acides aminés définissent la nature du doigt de gant et sont situés à sa base et un ion Zn++ est situé au centre du carré formé par ces quatre acides aminés. Le polypeptide selon l'invention possède potentiellement deux motifs de type C4. Par motif de type leucine zipper , on entend désigner des motifs appartenant à des facteurs de transcription dimérique qui sont soit des homodimères, soit des hétérodimères. Le monomère est constitué d'une séquence à caractère basique qui interagit de manière spécifique avec l'ADN et d'un domaine hydrophobe en hélice a qui interagit avec le domaine homologue de l'autre chaîne. Dans ce domaine se trouve une leucine tous les 7 aminoacides, c'est-à-dire à chaque tour d'hélice. Toutes ces leucines sont alignées et l'interaction se fait à leur niveau entre les deux monomères. Le polypeptide selon l'invention possède potentiellement un motif de type leucine zipper . L'invention concerne également un polynucléotide isolé caractérisé en ce qu'il code pour un polypeptide de séquence SEQ ID N 1tel que défini précédemment. De manière préférée, le polynucléotide selon l'invention possède la séquence SEQ ID N 1. L'invention concerne également le polynucléotide isolé caractérisé en ce qu'il comprend un polynucléotide choisi parmi : a) un polynucléotide de séquence SEQ ID N 1, SEQ ID N 3, SEQ ID N 5 ou SEQ ID N 7 ou dont la séquence est celle de l'ARN correspondant à la séquence SEQ ID N 1, SEQ ID N 3, SEQ ID N 5 ou SEQ ID N 7 ; b) un polynucléotide dont la séquence est complémentaire de la séquence d'un polynucléotide défini en a), c) un polynucléotide dont la séquence comporte au moins 80% d'homologie avec un polynucléotide défini en a) ou b), d) un polynucléotide hybridant dans des conditions de forte stringence avec une séquence de polynucléotide défini en a), b) ou c), e) un fragment d'au moins 15 nucléotides consécutifs, de préférence 21nucléotides consécutifs, et de manière préférée 30 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide défini en a), b), c) ou d) à l'exception des séquences SEQ ID N 9, N 10 et N 11 correspondant respectivement aux EST humains N AI 083 773, N AA 811055, N AA 488 755, N AA 129 794 et N AA 354 253 présentes dans les bases de données d'EST humains ( human dbest). Dans la présente description, on entendra désigner par polynucléotide, oligonucléotide, séquence de polynucléotide, séquence nucléotidique ou acide nucléique un fragment d'ADN, aussi bien un ADN double brin, un ADN simple brin que des produits de transcription desdits ADNs, et/ou un fragment d'ARN, lesdits fragments naturels isolés, ou de synthèse, comportant ou non des nucléotides non naturels, désignant un enchaînement précis de nucléotides, modifiés ou non, permettant de définir un fragment ou une région d'un acide nucléique. Par polynucléotide de séquence complémentaire, on entend désigner tout ADN dont les nucléotides sont complémentaires de ceux de la SEQ ID N 1, SEQ ID N 3, SEQ ID N 5, SEQ ID N 7 ou d'une partie de la SEQ ID N 1, SEQ ID N 3, SEQ ID N 5, SEQ ID N 7 et dont l'orientation est inversée. Par pourcentage d'homologie au sens de la présente invention, on entend un pourcentage d'identité entre les bases de deux polynucléotides, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux polynucléotides étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Selon l'invention, les polynucléotides de séquence nucléique homologue présentent un taux d'homologie d'au moins 80 %, de préférence 90 %, de manière préférée 95 %, de manière encore préférée 97 %. Une hybridation dans des conditions de forte stringence signifie que les conditions de température et de force ionique sont choisies de telle manière qu'elles permettent le maintien de l'hybridation entre deux fragments d'ADN complémentaires. A titre illustratif, des conditions de forte stringence de l'étape d'hybridation aux fins de définir les fragments polynucléotidiques décrits ci-dessus, sont avantageusement les suivantes : L'hybridation ADN-ADN ou ADN-ARN est réalisée en deux étapes : (1) préhybridation à 42 C pendant 3 heures en tampon phosphate (20 mM, pH 7,5) contenant 5 x SSC (1 x SSC correspond à une solution 0,15 M NaCl + 0,015 M citrate de sodium), 50 % de formamide, 7 % de sodium dodécyl sulfate (SDS), 10 x Denhard's, 5 % de dextran sulfate et 1 % d'ADN de sperme de saumon ; (2) hybridation proprement dite pendant 20 heures à une température dépendant de la taille de la sonde (i.e. : 42 C, pour une sonde de taille > 100 nucléotides) suivie de 2 lavages de 20 minutes à 20 C en 2 x SSC + 2 % SDS, 1 lavage de 20 minutes à 20 C en 0,1x SSC + 0,1% SDS. Le dernier lavage est pratiqué en 0,1x SSC + 0,1% SDS pendant 30 minutes à 60 C pour une sonde de taille > 100 nucléotides. Les conditions d'hybridation de forte stringence décrites ci-avant pour un polynucléotide de taille définie, seront adaptées par l'homme du métier pour des oligonucléotides de taille plus grande ou plus petite, selon l'enseignement de Sambrook et al., 1989. Avantageusement, un fragment nucléotidique répondant à la définition précédente aura au moins 15 nucléotides consécutifs, de préférence au moins 21 nucléotides, et encore plus préférentiellement au moins 30 nucléotides consécutifs de la séquence dont il est issu. Par EST ( expressed séquence tag ), on entend désigner des séquences exprimées, caractérisées dans une banque d'ADN complémentaire (ADNc) et utilisées comme balise cartographique de l'ADN génomique. Selon un mode de réalisation de l'invention, le polynucléotide selon l'invention se caractérise en ce qu'il est marqué directement ou indirectement par un composé radioactif ou un composé non radioactif. Utilisation d'un polynucléotide selon l'invention en tant qu'amorce pour l'amplification ou la polymérisation de séquences nucléiques ; l'invention porte également sur l'utilisation d'un polynucléotide selon l'invention en tant que sonde pour la détection de séquences nucléiques. Selon l'invention, les fragments de polynucléotides pouvant être utilisés comme sonde ou comme amorce dans des procédés de détection, d'identification, de dosage ou d'amplification de séquence nucléique, présenteront une taille minimale de 9 bases, de préférence de 18 bases, et de manière plus préférée 36 bases. Enfin, l'invention porte sur l'utilisation d'un polynucléotide selon l'invention en tant que séquence d'acide nucléique sens ou antisens pour contrôler l'expression du produit protéique correspondant. Les séquences de polynucléotides selon l'invention non marquées peuvent être utilisées directement comme sonde, amorce ou oligonucléotide ; cependant les séquences utilisées sont généralement marquées pour obtenir des séquences utilisables pour de nombreuses applications. Le marquage des amorces, des sondes, des oligonucléotides selon l'invention est réalisé par des éléments radioactifs ou par des molécules non radioactives ; parmi les isotopes radioactifs utilisés, on peut citer le 32P, le 33P, le 3@S, le 3H ou le 123I. Les entités non radioactives sont sélectionnées parmi les ligands tels la biotine, l'avidine, la streptavidine, la dioxygénine, les haptènes, les colorants, les agents luminescents tels que les agents radioluminescents, chémiluminescents, bioluminescents, fluorescents, phosphorescents. Les polynucléotides selon l'invention peuvent ainsi être utilisés comme amorce et/ou sonde dans des procédés mettant en oeuvre notamment- la technique PCR (réaction en chaîne à la polymérase)(Erlich, 1989 ; Innis et al., 1990, et Rolfs et al., 1991). Cette technique nécessite le choix de paires d'amorces oligonucléotidiques encadrant le fragment qui doit être amplifié. On peut, par exemple, se référer à la technique décrite dans le brevet américain U.S. N 4 683 202. Les fragments amplifiés peuvent être identifiés, par exemple après une électrophorèse en gel d'agarose ou de polyacrylamide, ou après une technique chromatographique comme la filtration sur gel ou la chromatographie échangeuse d'ions. La spécificité de l'amplification peut être contrôlée par hybridation moléculaire en utilisant comme sonde les séquences nucléotidiques de polynucléotides de l'invention, des plasmides contenant ces séquences ou leurs produits d'amplification. Les fragments nucléotidiques amplifiés peuvent être utilisés comme réactifs dans des réactions d'hybridation afin de mettre en évidence la présence, dans un échantillon biologique, d'un acide nucléique cible de séquence complémentaire à celle desdits fragments nucléotidiques amplifiés. L'invention vise également les fragments nucléotidiques susceptibles d'être obtenus par amplification à l'aide d'amorces selon l'invention. D'autres techniques d'amplification de l'acide nucléique cible peuvent être avantageusement employées comme alternative à la PCR (PCR-like) à l'aide de couple d'amorces de séquences nucléotidiques selon l'invention. Par PCR-like on entendra désigner toutes les méthodes mettant en oeuvre des reproductions directes ou indirectes des séquences d'acides nucléiques, ou bien dans lesquelles les systèmes de marquage ont été amplifiés, ces techniques sont bien entendu connues, en général il s'agit de l'amplification de l'ADN par une polymérase ; lorsque l'échantillon d'origine est un ARN il convient préalablement d'effectuer une transcription inverse. Il existe actuellement de très nombreux procédés permettant cette amplification, comme par exemple la technique SDA (Strand Displacement Amplification) ou technique d'amplification à déplacement de brin (Walker et al., 1992), la technique TAS (Transcription-based Amplification System) décrite par Kwoh et al. en 1989, la technique 3SR (Self-Sustained Sequence Replication) décrite par Guatelli et al. en 1990, la technique NASBA (Nucleic Acid Sequence Based Amplification) décrite par Kievitis et al. en 1991, la technique TMA (Transcription Mediated Amplification), la technique LCR (Ligase Chain Reaction) décrite par Landegren et al. en 1988 et perfectionnée par Barany et al. en 1991, qui emploie une ligase thermostable, la technique de RCR (Repair Chain Reaction) décrite par Segev en 1992, la technique CPR (Cycling Probe Reaction) décrite par Duck et al. en 1990, la technique d'amplification à la Q-béta-réplicase décrite par Miele et al. en 1983 et perfectionnée notamment par Chu et al. en 1986 et Lizardi et al. en 1988, puis par Burg et al. ainsi que par Stone et al. en 1996. Dans le cas où le polynucléotide cible à détecter est un ARN, par exemple un ARNm, on utilisera avantageusement, préalablement à la mise en oeuvre d'une réaction d'amplification à l'aide des amorces selon l'invention ou à la mise en oeuvre d'un procédé de détection à l'aide des sondes de l'invention, une enzyme de type transcriptase inverse afin d'obtenir un ADNc à partir de l'ARN contenu dans l'échantillon biologique. L'ADNc obtenu servira alors de cible pour les amorces ou les sondes mises en oeuvre dans le procédé d'amplification ou de détection selon l'invention. Les sondes nucléotidiques selon l'invention hybrident spécifiquement avec une molécule d'ADN ou d'ARN de polynucléotide selon l'invention, plus particulièrement avec la séquence SEQ ID N 1 codant pour le polypeptide ICBP90, dans des conditions d'hybridation de forte stringence telles que données sous forme d'exemple précédemment. La technique d'hybridation peut être réalisée de manières diverses (Matthews et al., 1988). La méthode la plus générale consiste à immobiliser l'acide nucléique extrait des cellules de différents tissus ou de cellules en culture sur un support (tel que la nitrocellulose, le nylon, le polystyrène) et à incuber, dans des conditions bien définies, l'acide nucléique cible immobilisé avec la sonde. Après l'hybridation, l'excès de sonde est éliminé et les molécules hybrides formées sont détectées par la méthode appropriée (mesure de la radioactivité, de la fluorescence ou de l'activité enzymatique liée à la sonde). Selon un autre mode de mise en oeuvre des sondes nucléiques selon l'invention, ces dernières peuvent être utilisées comme sonde de capture. Dans ce cas, une sonde, dite sonde de capture , est immobilisée sur un support et sert à capturer par hybridation spécifique l'acide nucléique cible obtenu à partir de l'échantillon biologique à tester et l'acide nucléique cible est ensuite détecté grâce à une seconde sonde, dite sonde de détection , marquée par un élément facilement détectable. Dans un mode préféré de réalisation, l'invention comprend l'utilisation d'un oligonucléotide sens ou antisens pour contrôler l'expression du produit protéique correspondant. Parmi les fragments d'acides nucléiques intéressants, il faut citer en particulier les oligonucléotides anti-sens, c'est-à-dire dont la structure assure, par hybridation avec la séquence cible, une inhibition de l'expression du produit correspondant. Il faut également citer les oligonucléotides sens qui, par interaction avec des protéines impliquées dans la régulation de l'expression du produit correspondant, induiront soit une inhibition, soit une activation de cette expression. Les oligonucléotides selon l'invention présentent une taille minimale de 9 bases, de préférence de 18 bases, et de manière plus préférée 36 bases. L'invention concerne un vecteur recombinant de clonage d'un polynucléotide selon l'invention et/ou d'expression d'un polypeptide selon l'invention caractérisé en ce qu'il contient un polynucléotide selon l'invention tel que précédemment décrit. Le vecteur selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comporte les éléments permettant l'expression éventuellement la sécrétion desdites séquences dans une cellule hôte. Ces vecteurs sont utiles pour transformer des cellules hôtes afin de cloner ou d'exprimer les séquences nucléotidiques de l'invention. Des vecteurs particuliers sont par exemple des vecteurs d'origine virale ou plasmidique. Parmi ces vecteurs, on préfère ceux de la série pGEX (Pharmacia) pour l'expression dans les bactéries ou pSGS (Stratagene, La Jolla, CA USA) pour l'expression en système eucaryote. L'invention comprend en outre les cellules hôtes, notamment les cellules eucaryotes et procaryotes, caractérisées en ce qu'elles sont transformées par les vecteurs selon l'invention. De préférence, les cellules hôtes sont transformées dans des conditions permettant l'expression d'un polypeptide recombinant selon l'invention. L'hôte cellulaire peut être choisi parmi les cellules bactériennes (Olins et Lee, 1993), mais également les cellules de levure (Buckholz, 1993), de même que les cellules animales, en particulier les cultures de cellules de mammifères (Edwards et Aruffo, 1993), mais également les cellules d'insectes dans lesquelles on peut utiliser des procédés mettant en oeuvre des baculovirus par exemple (Luckow, 1993). Ces cellules peuvent être obtenues par l'introduction dans des cellules hôtes d'une séquence nucléotidique insérée dans un vecteur tel que défini ci-dessus, puis la mise en culture desdites cellules dans des conditions permettant la réplication et/ou l'expression de la séquence nucléotidique transfectée. L'invention concerne également une méthode de préparation d'un polypeptide caractérisé en ce qu'il met en #uvre un vecteur selon l'invention. Plus particulièrement, l'invention porte sur une méthode de préparation d'un polypeptide recombinant caractérisé en ce que l'on cultive des cellules transformées selon l'invention dans des conditions permettant l'expression dudit polypeptide recombinant et que l'on récupère ledit polypeptide recombinant. Le polypeptide selon l'invention est susceptible d'être obtenu selon un procédé de l'invention et selon les techniques de production de polypeptides recombinants connues de l'homme du métier. La présente invention concerne donc le polypeptide recombinant susceptible d'être obtenu par la méthode ci-dessus présentée. Dans ce cas, la séquence d'acide nucléique utilisée est placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans un hôte cellulaire. Un système efficace de .production d'un polypeptide recombinant nécessite de disposer d'un vecteur, par exemple d'origine plasmidique ou virale, et d'une cellule hôte compatible. Le vecteur doit comporter un promoteur, des signaux d'initiation et de terminaison de la traduction, ainsi que des régions appropriées de régulation de la transcription. Il doit pouvoir être maintenu de façon stable dans la cellule et peut éventuellement posséder des signaux particuliers spécifiant la sécrétion du polypeptide traduit. Ces différents signaux de contrôle sont choisis en fonction de l'hôte cellulaire utilisé. A cet effet, les séquences d'acide nucléique selon l'invention peuvent être insérées dans des vecteurs à réplication autonome au sein de l'hôte choisi, ou des vecteurs intégratifs de l'hôte choisi. De tels vecteurs seront préparés selon les méthodes couramment utilisées par l'homme du métier, et les clones en résultant peuvent être introduits dans un hôte approprié par des méthodes standards telles par exemple la transfection par précipitation au phosphate de calcium, la lipofection, l'électroporation, le choc thermique. Les polypeptides recombinants obtenus comme indiqué cidessus, peuvent aussi bien se présenter sous forme glycosylée que non glycosylée et peuvent présenter ou non la structure tertiaire naturelle. Les polypeptides obtenus par synthèse chimique et pouvant comporter des acides aminés non naturels correspondant auxdits polypeptides recombinants, sont également compris dans l'invention. Les peptides selon l'invention peuvent également être préparés par les techniques classiques, dans le domaine de la synthèse des peptides. Cette synthèse peut être réalisée en solution homogène ou en phase solide. Les procédés de purification de polypeptide recombinant utilisés sont connus de l'homme du métier. Le polypeptide recombinant peut être purifié à partir de lysats et extraits cellulaires, du surnageant du milieu de culture, par des méthodes utilisées individuellement ou en combinaison, telles que le fractionnement, les méthodes de chromatographie, les techniques d'immuno-affinité à l'aide d'anticorps mono ou poiyclonaux spécifiques, etc. Une variante préférée consiste à produire un polypeptide recombinant fusionné à une protéine porteuse (protéine chimère). L'avantage de ce système est qu'il permet une stabilisation et une diminution de la protéolyse du produit recombinant, une augmentation de la solubilité au cours de la renaturation in vitro et/ou une simplification de la purification lorsque le partenaire de fusion possède une affinité pour un ligand spécifique. L'invention concerne également un anticorps monoclonal ou polyclonal et ses fragments, caractérisés en ce qu'ils lient spécifiquement un polypeptide selon l'invention. Les anticorps chimériques, les anticorps humanisés et les anticorps simple chaîne font également partie de l'invention. Les fragments d'anticorps selon l'invention sont de préférence des fragments Fab ou F(ab')2. Les polypeptides selon l'invention permettent de préparer des anticorps monoclonaux ou polyclonaux. Les anticorps monoclonaux pourront avantageusement être préparés à partir d'hybridomes selon la technique décrite par Kohler et Milstein en 1975. Les inventeurs ont employé cette technique pour obtenir un hybridome produisant un nouvel anticorps monoclonal hautement spécifique d'un épitope de la protéine ICBP90. Les anticorps polyclonaux pourront être préparés, par exemple par immunisation d'un animal, en particulier une souris, avec un polypeptide selon l'invention associé à un adjuvant de la réponse immunitaire, puis purification des anticorps spécifiques contenus dans le sérum des animaux immunisés sur une colonne d'affinité sur laquelle a préalablement été fixé le polypeptide ayant servi d'antigène. Les anticorps polyclonaux selon l'invention peuvent aussi être préparés par purification sur une colonne d'affinité, sur laquelle a préalablement été immobilisé un polypeptide selon l'invention. L'invention porte également sur un anticorps monoclonal spécifique de la protéine ICBP90 humaine et capable d'inhiber l'interaction entre ICBP90 et -la séquence d'ADN sur laquelle se lie spécifiquement la protéine ICBP90. Selon un autre mode de réalisation, l'anticorps monoclonal selon l'invention et spécifique de la protéine ICBP90 humaine est capable d'inhiber l'interaction entre ICBP90 et les protéines avec lesquelles ICBP90 interagit, lesdites protéines étant de préférence ICBP90 elle-même ou des protéines du complexe transcriptionnel. Par protéines du complexe transcriptionnel, on entend désigner toutes les protéines intervenant dans la réaction de la transcription que se soit l'initiation, l'élongation ou la terminaison de la transcription. Les anticorps de l'invention pourront également être marqués de la même manière que décrit précédemment pour les sondes nucléiques de l'invention et de manière préférée avec un marquage de type enzymatique, fluorescent ou radioactif. Par ailleurs, outre leur utilisation pour la purification des polypeptides, les anticorps de l'invention, en particulier les anticorps monoclonaux, peuvent également être utilisés pour la détection de ces polypeptides dans un échantillon biologique. Ils constituent ainsi un moyen d'analyse de l'expression de polypeptide selon l'invention, par exemple par immunofluorescence, marquage à l'or, immunoconjugués enzymatiques. Plus généralement, les anticorps de l'invention peuvent être avantageusement mis en oeuvre dans toute situation où l'expression d'un polypeptide selon l'invention doit être observée, et plus particulièrement en immunocytochimie, en immunohistochimie ou dans des expériences de western blotting . Ainsi, l'invention concerne une méthode de détection et/ou de dosage d'un polypeptide selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes de mise en contact de l'échantillon biologique avec des anticorps selon l'invention puis de mise en évidence du complexe antigène-anticorps formé. Cette méthode peut être utilisée en immunocytochimie pour la localisation cellulaire du polypeptide selon l'invention et en immunohistochimie pour évaluer la prolifération cellulaire. Entre également dans le cadre de l'invention, un nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'un polypeptide selon l'invention dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants : (i) un anticorps monoclonal ou polyclonal tel que décrit précédemment ; (ii) le cas échéant, les réactifs pour la constitution du milieu propice à la réaction immunologique ; (iii) les réactifs permettant la détection des complexes antigène-anticorps produits par la réaction immunologique. Ce kit est notamment utile à la réalisation d'expériences de Western Blotting ; celles-ci permettent d'étudier la régulation de l'expression du polypeptide selon l'invention à partir de tissus ou de cellules. Ce kit est également utile aux expériences d'immunoprécipitation pour mettre en évidence notamment les protéines interagissant avec le polypeptide selon l'invention. Toute procédure classique peut être mise en oeuvre pour réaliser une telle détection et/ou dosage. A titre d'exemple, une méthode préférée met en jeu des processus immunoenzymatiques selon la technique ELISA, par immunofluorescence, ou radio-immunologique (RIA) ou équivalent. L'invention comprend également une méthode de détection et/ou de dosage d'acide nucléique selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes : (i) d'isolement de l'ADN à partir de l'échantillon biologique à analyser, ou obtention d'un ADNc à partir de l'ARN de l'échantillon biologique ; (ii) d'amplification spécifique de l'ADN codant pour le polypeptide selon l'invention à l'aide d'amorces ; (iii) d'analyse des produits d'amplification. L'invention comprend en outre un nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'un acide nucléique selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants : (i) un couple d'amorces nucléiques selon l'invention, (ii) les réactifs nécessaires pour effectuer une réaction d'amplification d'ADN, et éventuellement (iii) un composant permettant de vérifier la séquence du fragment amplifié, plus particulièrement une sonde selon l'invention. L'invention comprend aussi une méthode de détection et/ou de dosage d'acide nucléique selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes : (i) de mise en contact d'une sonde selon l'invention avec un échantillon biologique ; (ii) de détection et/ou de dosage de l'hybride formé entre ladite sonde et l'ADN de l'échantillon biologique. L'invention comprend également un nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'acide nucléique selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants : (i) une sonde selon l'invention, (ii) les réactifs nécessaires à la mise en oeuvre d'une réaction d'hybridation, et le cas échéant, (iii) un couple d'amorces selon l'invention, ainsi que les réactifs nécessaires à une réaction d'amplification de l'ADN. L'invention concerne particulièrement les procédés selon l'invention et décrits ci-dessus, pour la détection et le diagnostic de prolifération cellulaire, et plus particulièrement de prolifération cellulaire d'origine cancéreuse. L'invention concerne également une méthode de criblage de ligands susceptibles d'affecter l'activité transcriptionnelle d'un gène dont le promoteur comporte des boites CCAAT et/ou CCAAT inversées susceptibles de lier un polypeptide selon l'invention, ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comporte les étapes suivantes de mise en contact dudit polypeptide et d'un ou plusieurs ligand(s) potentiel (s) en présence de réactifs nécessaires à la mise en #uvre d'une réaction de transcription ou de détection et/ou de mesure de l'activité transcriptionnelle. C'est également un des objets de l'invention de fournir un kit ou un nécessaire pour le criblage de ligands susceptibles d'affecter l'activité transcriptionnelle d'un gène dont le promoteur comporte des boites CCAAT et/ou CCAAT inversées susceptibles de lier un polypeptide selon l'invention caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants : (i) un polypeptide selon l'invention ; (ii) un ligand ; (iii) les réactifs nécessaires à la mise en #uvre d'une réaction de transcription. Par ligand, on entend définir tous les composés susceptibles d'interagir avec le polypeptide selon l'invention pour former un complexe susceptible d'affecter l'activité transcriptionnelle, c'est-à-dire d'augmenter, de diminuer, de moduler ou d'annuler la transcription d'un gène sous le contrôle d'un promoteur contenant une séquence d'ADN à laquelle se lie le polypeptide de l'invention. On entend définir également par ligand tout composé susceptible de se lier à la séquence d'ADN de liaison du polypeptide selon l'invention. Un tel ligand constitue un inhibiteur compétitif du polypeptide selon l'invention pour la liaison à la séquence d'ADN. De préférence, l'échantillon biologique selon l'invention dans lequel est réalisé la détection et le dosage est constitué par un fluide corporel, par exemple un sérum humain ou animal, du sang, ou par des biopsies. Selon un autre aspect, l'invention concerne un composé caractérisé en ce qu'il est choisi parmi un anticorps, un polypeptide, un ligand, un polynucléotide, un oligonucléotide ou un vecteur selon l'invention à titre de médicament et notamment en tant que principes actifs de médicament ; ces composés seront préférentiellement sous forme soluble, associés à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Par véhicule pharmaceutiquement acceptable, on entend désigner tout type de véhicule employé habituellement dans la préparation de compositions injectables, c'est-à-dire un diluant, un agent de suspension tel une solution saline isotonique ou tamponnée. De préférence, ces composés seront administrés par voie systémique, en particulier par voie intraveineuse, par voie intramusculaire, intradermique ou par voie orale. Leurs modes d'administration, posologies et formes galéniques optimaux peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement adapté à un patient comme par exemple l'àge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement et les effets secondaires constatés, etc. Selon un mode préféré de réalisation, le composé selon l'invention est utilisé à titre de médicament destiné à la prévention et/ou au traitement du cancer. Le composé selon l'invention est utilisé pour la préparation d'un médicament destiné à moduler, à augmenter ou à diminuer la prolifération cellulaire. L'invention porte également sur une composition pharmaceutique pour le traitement préventif et curatif du cancer caractérisée en ce qu'elle contient une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé selon l'invention et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Selon un mode préféré de réalisation, la composition pharmaceutique est caractérisée en ce qu'elle contient un anticorps selon l'invention en tant qu'agent de ciblage conjugué à au moins un agent sélectionné parmi le groupe des agents antiprolifératifs, antinéoplastiques ou cytotoxiques. Ces agents sont des radioisotopes ou des entités non isotopiques. La conjugaison de l'anticorps de la présente invention à un agent antiprolifératif, antinéoplastique ou cytotoxique peut être utilisé pour arrêter le développement des cancers et pour induire une régression et/ou une élimination de la masse tumorale. De préférence, l'anticorps ou le fragment d'anticorps ainsi conjugué est introduit dans le patient atteint de cancer et délivré aux sites tumoraux par voie orale ou parentérale dans un liquide transporteur pharmaceutiquement acceptable tel qu'une solution de sel physiologique. Alternativement, une solution ou une suspension d'anticorps ou de fragment d'anticorps conjugué à un agent peut être perfusée directement dans le tissu épithélial malin, cette méthode étant utilisée de préférence dans le cas où le cancer n'est pas métastasé. Les radioisotopes préférés conjugués aux anticorps monoclonaux employés pour la thérapie sont des radioisotopes émetteurs de rayons gamma et de préférence l'Iode131, l'Yttrium90, l'Or199, le Palladium 1 , le Cuivre67, le Bismuth217 et l'Antimoine211. Les radioisotopes émetteurs de rayons beta et alpha peuvent également être utilisés pour la thérapie. Les entités non isotopiques conjuguées aux anticorps monoclonaux employés pour la thérapie sont multiples et variés ; peut citer : les antimétabolites telles les agents anti-folate, le méthotrexate, (ii) les analogues des purines et des pyrimidines (mercaptopurine, fluorouracile, 5-azacytidine), (iii) les antibiotiques, (iv) les lectines (ricine, abrine) et (iv) les toxines bactériennes (toxine diphtérique). L'anticorps selon l'invention peut également être utilisé en tant qu'agent de ciblage pour cibler des cellules cytotoxiques telles les cellules T humaines, les monocytes ou les cellules NK sur le lieu de la tumeur métastasée ou non. Les cellules cytotoxiques peuvent être attachées à l'anticorps via le récepteur Fc situé à la surface de ces cellules ou via un anticorps intermédiaire présentant une double spécificité par exemple ; tels anticorps bispécifiques pour le ciblage des cellules cancéreuses peuvent être produits en fusionnant une cellule immunitaire produisant l'anticorps de la présente invention ou l'hydridome de la présente invention avec une cellule produisant un anticorps dirigé contre la cellule cytotoxique à cibler. Des anticorps bispécifiques peuvent également être produits par couplage chimique de deux anticorps ayant la spécificité désirée. L'anticorps selon l'invention permet également de cibler des véhicules de délivrance d'agents antiprolifératifs, antinéoplastiques ou cytotoxiques sur le lieu de la tumeur métastasée ou non. Par véhicules de délivrance on entend désigner les liposomes et les particules virales. Dans certains cas, on pourra prévoir des éléments de ciblage assurant une expression spécifique de certains tissus ou cellules de façon à pouvoir limiter les zones d'expression des polypeptides selon l'invention. L'invention concerne également un produit comprenant au moins un composé selon l'invention et au moins un agent anticancéreux comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie anticancéreuse. Enfin, l'invention concerne une composition pour la détection, la localisation et l'imagerie des cancers, comprenant un anticorps selon l'invention, tel que l'anticorps est marqué directement ou indirectement avec un marqueur générateur de signal sélectionné parmi les isotopes radioactifs et les entités non isotopiques tels que définis précédemment. L'invention a également pour objet une méthode de détection, de localisation et d'imagerie du cancer, comprenant (i) les étapes d'injection parentérale chez un être humain d'une composition selon l'invention ; (ii) l'accumulation après un temps suffisant au niveau des çellules cancéreuses de l'anticorps marqué puis pénétration de l'anticorps marqué à l'interieur desdites cellules, sans que ledit anticorps ne se lie de manière substantielle aux cellules normales ; et(iii) la détection du signal au moyen d'un détecteur de signal ; (iv) la conversion du signal détecté en une image des cellules cancéreuses. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaissent dans la suite de la description avec les exemples représentés ci-après. Dans ces exemples on se référera aux figures suivantes. Figure 1 : de la protéine ICBP90 dans les cellules HeLa (cellules tumorales) et dans les fibroblastes pulmonaires humains en culture primaire (cellules non tumorales). La détection de la protéine endogène ICBP90 a été réalisée sur des extraits totaux de protéines de cellules HeLa à confluence (piste 1) ou en prolifération (piste 2) et sur des extraits totaux de protéines de fibroblastes pulmonaires humains en culture primaire à confluence (piste 3) ou en prolifération (piste 4). Après migration sur gel de polyacrylamide 8% en présence de SDS, les protéines sont transférées sur membrane de nitrocellulose par électrotransfert. La révélation est réalisée à l'aide de l'anticorps 1RC1C-10 dilué au 1/4000 (concentration initiale 2 mg/ml) et d'un anticorps secondaire couplé à la phosphatase alcaline et dirigé contre les chaines lourdes d'anticorps de souris. Dans les pistes correspondant aux extraits de cellules HeLa, on observe une bande majeure à 97 kDa ; pour les cellules HeLa en prolifération, des bandes supplémentaires de tailles inférieures à 97 kDa apparaissent (piste 2). Dans les fibroblastes pulmonaires humains à confluence, la protéine endogène n'est pas exprimée (piste 3) et apparaît lorsque les cellules se mettent à proliférer (piste 4). Ces observations suggèrent que la protéine endogène ICBP90 est un marqueur de prolifération cellulaire pour des cellules normales (fibroblastes) tandis que pour les cellules .tumorales elle serait un marqueur quelque soit le stade cellulaire. Figure 2 : Immunoprécipitation de la protéine endogène L'immunoprécipitation est réalisée sur des extraits protéiques totaux de cellules MOLT-4. L'anticorps 1RC1C-10 est fixé sur des billes de protéine G sépharose, puis mis en contact avec les extraits protéiques pendant 2 heures à température ambiante. Après lavage les complexes billes/1RC1C-10/protéine sont précipités par centrifugation et analysés par migration sur gel de polyacrymalide 8% en présence de SDS, puis transfert sur membrane de nitrocellulose et révélation comme indiqué dans la figure 1. On observe une bande unique de 97 kDa, ainsi qu'une bande de 45 kDa qui correspond à la chaine lourde de 1RC1C- 10. Figure 3 : Localisationnucléaire de la protéine endogène Nous avons utilisé des cellules HeLa pour examiner l'expression endogène de la protéine ICBP90 in situ à l'aide de l'anticorps 1RC1C-10 et d'un anticorps secondaire antisouris couplé au fluorochrome CY3. Le marquage est localisé exclusivement dans le noyau. Le nucléole et le cytoplasme ne sont pas marqués. Figure 4 : de l'ICBP59 endogène dans les cellules en prolifération Nous avons observé la protéine endogène sur des coupes en paraffine d'appendice humain. Après déparaffinage et prétraitement par chauffage en tampon acide (démasquage des sites antigéniques), les coupes sont incubées pendant 16 heures avec l'anticorps 1RC1C-10 dilué au 1/-10000 (concentration initiale de 2 mg/ml). La révélation se fait par mise en contact avec un anticorps secondaire biotinylé, puis incubation avec le complexe streptavidine-péroxydase. Une contre coloration des noyaux à l'hématoxyline de Harris est également réalisée. Le marquage par 1RC1C-10 est localisé essentiellement dans des zones de prolifération cellulaire. Les cellules marquées se trouvent dans les cryptes glandulaires (CG) ainsi que dans les zones germinatives (ger). Figure 5 : Expression de ICBP-59 dans divers tissus humains Nous avons évalué le niveau d'expression de l'ARNm correspondant à ICBP59 sur un dot blot d'ARN comportant 50 tissus humains différents. Le blot a été hybridé pendant 16 heures à 68 C avec une sonde d'ADNc radioactive (32P) de 679 pb dans une solution d'hybridation ExpressHyb (Clontech). Après lavages, on réalise une révélation par autoradiographie (exposition une semaine à 80 C). Les tissus présentant le plus haut niveau d'expression sont le thymus adulte et f#tal, ainsi que la moelle osseuse adulte et le foie foetal. Figure 6 : Séquence nucléotidique de ICBP90 L'ADNc codant pour ICBP90 comporte 2379 pb. Les portions de séquence indiquées en gras sont celles qui n'apparaissent pas dans les bases de données d'EST humains (human dbest). Les autres parties de la séquence existent dans diverses EST: de 1 à 325 : EST n AI083773. de 367 à 865 : EST n AA811055. de 940 à 1857 : EST n AA488755, EST n AA 129794 et EST n AA354253. Figure 7 : Séquence protéique de ICBP90 La séquence en acides aminés de ICBP90 est déduite par traduction de la séquence nucléotidique de la figure 6. ICBP90 comporte 793 résidus et présente un poids moléculaire théorique de 89,758 kDa. Le pKi est de 7,7. Les acides aminés indiqués en gras correspondent à ICBP-59. EXEMPLE 1 : EN EVIDENCE D'UNE NOUVELLE PROTEINE DE LIAISON A LA SEQUENCE ICB 1.1. Construction reportrice pour le criblage de la banque Le système du simple hybride est une technique puissante qui permet de détecter in vivo chez la levure l'interaction de protéines avec des séquences d'ADN spécifiques en criblant des banques d'ADNc. Ceci permet d'évaluer directement l'ADNc correspondant de la protéine à lier. Plusieurs études ont permis d'identifier la nouvelle protéine dans cette méthode. Ces méthodes décrivent très bien les protocoles utilisés (Inouye et al., 1994 ; Wang et Reed, 1993). Brièvement, les oligonucléotides suivants ont été synthétisés 5'- AATTCGATTGGTTCTGATTGGTTCTGATTGGTTCTT-3 ' et 5'CTAGAAGAACCAATCAGAACCAATCAGAACCAATCG-3'. Ces nucléotides sont ensuites hybridés. Selon les instructions du fabricant (Clontech, Palo Alto, CA), la construction reportrice cible possède trois copies en tandem de la séquence ICB2 (ICB2X3). Comme mentionné plus haut, une copie de ICB2 est soulignée et les séquences CCAAT sont représentées en gras. Pour déterminer la spécificité de liaison des protéines à la boîte ICB, les oligonucléotides suivants qui contiennent trois copies en tandem de la boîte GC1(GC1X3) et également présents dans le promoteur ont été synthétisés et hybridés: 5'- AATTCGGGGCGGGGCCGGGGCGGGGCCGGGGCGGGGCT-3' 5'- CTAGAGCCCCGCCCCGGCCCCGCCCCGGCCCCGCCCCGG-3' Les fragments d'ADN cible résultant sont clonés dans le polylinker d'un plasmide intégratif pHISi-1 (Clontech) par ligation des extrémités cohésives au niveau du site EcoRI et XbaI, en amont du promoteur minimal du gène his3. La souche de levure YM4271 (Clontech) est utilisée pour la transformation et des colonies de levure ayant intégrées le plasmide dans leur génome sont sélectionnées sur un milieu synthétique Dropout ne contenant pas d'histidine. Deux clones ont été isolés : un pour ICB2 et un pour la boite GC1. 1. 2. Criblage de la banque Une banque d'ADNc de la lignée cellulaire Jurkat clonée au site d'EcoRI du polylinker en aval de GAL4-AD du vecteur pGAD 10 (Clontech) est utilisée pour le criblage selon les instructions du fabricant. Des clones positifs sont sélectionnés puis cultivés sur un milieu sélectif déplété en histidine et en leucine. L'ADN plasmidique de ces clones est récupéré et introduit par électroporation dans des bactéries Escherichia coli XLl-blue. Le séquençage des inserts a été réalisé sur une matrice d'ADN plasmidique purifiée à partir d'une culture d'1,5 ml utilisant un kit de mini préparation (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Une banque d'ADNc de thymus humain cloné dans #gt 10 (Clontech) a été criblée par hybridation sur une plaque, pour récupérer un ADNc codant la partie N-terminale de la protéine. 1. 3. Découverte de ICBP-59 Les ADNc de quatre clones ayant rempli les critères de sélection du système simple hybride ont été séquences, et les profils analysés à l'aide de bases de données informatiques (Genbank, EMBL, PDB, Swissprot) afin de déterminer la nature des protéines codées. Deux clones correspondent à des protéines ribosomales (hRS12 et hRS4), un à une sérine-thréonine kinase (STPLK-1) et le quatrième à une protéine humaine d'un poids moléculaire théorique de 59 kDa (calculé à partir de la séquence traduite) et non répertoriée. Les ADNc, codant pour hRS4, hRS12 et ICBP-59 et obtenus par digestion par EcoRI des clones positifs obtenus dans le vecteur pGAD 10, ont été clonés au site EcoRI du vecteur d'expression pGEX-4T- 1 (Pharmacia). Les ADN recombinants sont ensuite transformés dans une souche d'Escherichia coli adaptée (BL21). 500 ml de culture du clone sélectionné ont été utilisés lorsque une densité optique de 0,5 a été atteinte. La surexpression des protéines d'intérêt a été induite par l'IPTG (lmM) pendant 2h à 37 C. Le vecteur pGEX-4T-1 conduit à l'obtention de grandes quantités de protéines sous forme fusionnée à la glutathion-S-transférase (GST). Les protéines de fusion avec la glutathione-S-transférase (GST) sont ensuite purifiées en utilisant des billes de sépharose couplé au glutathion (Pharmacia) suivi par une coupure durant la nuit avec de la thrombine (0,05 U/ml) à 4 C (Pharmacia). Pour tester l'aptitude de la protéine de poids moléculaire de 59 kDa à lier spécifiquement les boites ICB1et/ou ICB2, trois copies en tandem de ICB2 (ICB2X3, séquences décrites précédemment) ont été marquées au niveau terminal au phosphore 32P en utilisant la polynucléotide kinase T4 (New England Biolabs) et du [y32P]ATP (160 mCi/mmol, ICN Irvine, CA, USA). Pour examiner la spécificité de la liaison, des oligonucléotides contenant seulement une copie de la boite CCAAT ont été synthétisés : ICB 1: 5'-AGTCAGGGATTGGCTGGTCTG-3'; 5'- CAGACCAGCCAATCCCTGACT-3' ICB2 : 5'-AAGCTACGATTGGTTCTTCTG-3'; 5'-CAGAAGAACCAATCGTAGCTT-3'. La protéine ICBP-59 purifiée (1 g) est incubée avec 1 ng d'oligonucléotide marqué à son extrémité terminale par du phosphore 32P dans 12% de glycérol, 12 mM d'HEPES-NaOH (pH 7,9), 60 mM KCI, 4 mM Tris-HCI (pH 7,9), 100 ng BSA, 0,6 mM DTT et 100 ng de poly(dI/dC) dans 20 fil (Inouye et al., 199-1). Après 30 minutes d'incubation à température ambiance, le mixte réactionnel est chargé sur des gels de polyacrylamide à 6%. Dans les expériences de compétition, la quantité indiquée d'oligonucléotides non marqués est ajoutée au mixte réactionnel 10 min avant l'addition de protéines. Pour examiner les propriétés de liaison de l'ICBP90 à la boite ICB2, le même protocole est utilisé à la différence que l'oligonucléotide marqué contient seulement une copie de la séquence CCAAT telle que décrite ci-dessous: ICB2:5'-ATAAAGGCAAGCTACGATTGGTTCTTCTGGACGGAGAC-3' 5'-GTCTCCGTCCAGAAGAACCAATCGTAGCTTGCCTTTTAT-3' La spécificité de liaison est étudiée en utilisant un nucléotide non marqué contenant une boite GC du promoteur du gène de la topoisomérase II[alpha] humaine : 5'-GAATTCGAGGGTAAAGGGGCGGGGTTGAGGCAGATGCCA-3' 5'-TGGCATCTGCCTCAACCCCGCCCCTTTACCCTCGAATTC-3'. Ces expériences de retard de migration sur gel d'acrylamide, nous ont permis de mettre en évidence que la nouvelle protéine humaine de 59 kDa est capable de lier une séquence d'ADN de type ICB, et ce de manière spécifique. Nous avons appelé cette protéine ICBP-59 (pour Inverted CCAAT Box Binding Protein of 59 kDa). EXEMPLE 2 : CARACTERISATION DE LA PROTEINE ICBP90 2. 1. Synthèse d'anticorps Les anticorps monoclonaux de souris sont synthétisés dans notre Laboratoire par injection de la protéine ICBP-59 par les méthodes traditionnelles (Brou et al., 1993) ; la protéine a été au préalable purifiée par un système de fusion GST. Deux anticorps monoclonaux de 1RC1C- 10 et 1RC1H-12 ont été sélectionnés pour leur performance à détecter la protéine endogène correspondant à la protéine ICBP-59 à la fois dans des expériences de Western blotting et dans des expériences d'immunocytochimie. Avant utilisation, les anticorps sont purifiés sur colonne DEAE-cellulose (DE52, Whatmann) à partir des liquides d'ascites. 2. 2. Mise en évidence de la protéine endogène par Western Blotting Afin de détecter la protéine endogène correspondant à ICBP-59, nous avons dans un premier temps utilisé 1RC1C-10 en Western blot (0,4 g/ml d'anticorps monoclonal 1RC1C-10) sur des extraits nucléaires de.cellules HeLa en situation de prolifération et de confluence (Figure 1). Les cellules COS-1 et HeLa sont cultivées tel que décrit précédemment (Brou et al., 1993 ; Gaub et al., 1998 ; Rochette-Egly et al., 1997). Les cellules MOLT-4 sont cultivées dans de l'air à 100% dans du RPMI -supplémenté par 10% de sérum de veau fetal. Les fibroblastes pulmonaires humains en culture primaire sont préparés et cultivés dans du DMEM/F12 tel que décrit précédemment (Kassel et al., 1998). Des extraits nucléaires de cellules Jurkat ont été achetés chez Sigma alors que ceux de MOLT-4 et HL60 ont été préparés tel que décrit auparavant (Lavie et al., 1999). Les cellules HeLa en phase de croissance et les fibroblastes pulmonaires humains sont obtenus par déplétion de la culture en sérum pendant 30 h suivi par la réintroduction pendant 16 heures par 10% de sérum de veau fétal (v/v). La prolifération est arrêtée lorsque la confluence atteint 60 à 70%. Les cellules arrêtées à confluence (confluence de 100%) sont obtenues de manière concomitante en omettant l'étape de déplétion en sérum. Pour ces deux types cellulaires, des lysats cellulaires bruts sont préparés en récoltant les cellules dans du PBS (phosphate buffer saline) suivi d'une étape de sonication. Pour les expériences d'immunotransfert des lysats de cellules totales et des extraits nucléaires sont chargés sur des gels de polyacrylamide SDS à 8% pour réaliser une électrophorèse en une dimension. Les protéines sont transférées sur des membranes de nitrocellulose bloquées avec un réactif de blocage 10% (Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Germany) et incubées avec l'anticorps monoclonal purifié (1RC1C-10) à la concentration de 0,5 g/ml. Un anticorps anti-souris de mouton couplé à la phosphatase alcaline (fragments Fab, Roche Molecular Biochemicals) est utilisé à une dilution de 1/2 500. Des signaux sont détectés en utilisant le chlorure de 4-nitro blue tetrazolium/5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate comme substrat. Ces expériences montrent que la protéine endogène présente un poids moléculaire apparent d'environ 97 kDa. En outre, on observe que les formes de la protéine varie en fonction de la nature tumorale ou non-tumorale des cellules ainsi que de l'état de confluence ou de prolifération des cellules. En effet, dans les pistes correspondant aux extraits de cellules HeLa, on observe une bande majeure à 97 kDa ; pour les cellules heLa en prolifération, des bandes supplémentaires de tailles inférieures à 97 kDa apparaissent (piste 2). Dans les fibroblastes pulmonaires humains à confluence, la protéine endogène n'est pas exprimée (piste 3) et apparaît lorsque les cellules se mettent à proliférer (piste 4). Ces observations suggèrent que la protéine endogène ICBP90 est un marqueur de prolifération cellulaire pour des cellules normales (fibroblastes) tandis que pour les cellules tumorales elle serait un marqueur quelque soit le stade cellulaire. L'utilisation de l'anticorps monoclonal dans des expériences d'immunoprécipitation sur des extraits de protéines nucléaires, suivies d'un Western blot, conduit de la même manière à la mise en évidence d'une protéine de 97 kDa (Figure 2). Les résultats obtenus en Western blot, aussi bien pour les extraits de protéines nucléaires que pour les immunoprécipitations, montrent que la protéine de 59 kDa isolée à l'aide du système simple hybride ne constitue qu'un fragment de la protéine endogène humaine correspondante, en l'occurrence le fragment C-terminal à partir du résidu D263. II nous a donc fallu entreprendre un nouveau criblage de banque d'ADNc. 2. 3. Analyse en Dot Blot d'ARN de multiples tissus humains Afin de choisir une banque nous donnant le plus de chance possible d'isoler la protéine complète, nous avons voulu identifier un tissu humain exprimant l'ARN messager (ARNm) correspondant en quantité importante. A l'aide d'une sonde d'ADNc recouvrant une partie de la séquence de ICBP59 et marquée au 32P, nous avons testé l'expression de l'ARNm d'intérêt dans 50 tissus humains différents sur un dot blot d'ARN. Brièvement, une sonde longue de 678 paires de bases correspondant à la séquence en acides aminés 269 à 500 de ICBP90 a été synthétisée par PCR en utilisant de la Taq polymérase (Sigma, St Louis, MO, USA). La sonde marquée par random priming en utilisant du dCTP-a 32P est purifiée sur colonnes Sephadex G50 (Pharmacia, Uppsala, Suède). Un dot blot d'ARN de multiples organes contenant de l'ARN poly(A)+ de 50 tissus humains différents est hybridé 20 heures dans des conditions de forte stringence dans un milieu ExpressHyb (Clontech) à 68 C avec une sonde marquée au 32P. Des lavages à haute stringence sont réalisés dans du 0,1 x SSC, 0,1% SDS à 68 C (De Vries et al., 1996). Les réultats obtenus (figure 5) montrent que les tissus exprimant le plus fortement l'ARNm de la protéine ICBP-59 sont le thymus adulte et f#tal, ainsi que la moelle osseuse adulte et le foie foetal. Pour isoler la protéine entière, notre choix s'est donc porté sur une banque d'ADNc de thymus adulte. 2. 4. Criblage de la banque et clonage de ICBP90 Le criblage de la banque nous a permis d'obtenir plusieurs clones d'environ 4000 paires de bases (pb) comportant un cadre de lecture ouvert de 2379 pb (Fig. 6). Cette séquence code pour une protéine de 793 acides aminés (Fig. 7) dont le poids moléculaire théorique (calculé à partir de la séquence traduite) est de 89,758 kDa. Nous avons appelé cette protéine ICBP90 (pour Inverted CCAAT Box Binding Protein of 90 kDa) par analogie avec l'appellation utilisée pour la protéine initiale de 59 kDa. L'ADNc ICBP90 (2379 bp) a été synthétisé par PCR en utilisant l'ADN polymérase Deep Vent (New England Biolabs, Beverly, MA, USA) et les oligonucléotides utilisés au cours de cette réaction de PCR étaient voisins du site de EcoRI. Le produit de réaction a été par la suite souscloné dans un vecteur pGEX-4T-1 (Pharmacia) pour l'expression de la protéine de fusion GST dans BL21. La surexpression est induite par IPTG (1mM) pendant 4h à 25 C. La protéine ICBP 90 est ensuite purifiée. 2. 5. Immunocytochimie et immunohistochimie. L'observation directe de la protéine ICBP90 sur des cellules et tissus a été également mise en #uvre. Des cellules COS-1 ont été transfectées comme décrit précédemment (Brou et al., 1993 ; Gaub et al., 1998) avec le vecteur pSG5 (Stratagene, La Jolla, CA) dans lequel l'ADNc de ICBP90 (2379 bp) a été sous-cloné dans le site de restriction EcoRI. L'ADNc est synthétisé par réaction de polymérisation en chaine (PCR) utilisant la polymérase Deep Vent (New England Biolabs) et des oligonucléotides flanquants le site de restriction EcoRI. La construction plasmidique est vérifiée par séquençage. L'immunomarquage des cellules HeLa et des cellules COS- 1 transfectées est réalisé tel que décrit précédemment (Brou et al., 1993) avec respectivement les anticorps monoclonaux 1 RC 1 C-10 et 1 RC 1 H- 12. Un marquage indirect à l'immunopéroxidase de ICBP90 et de topoisomérase II[alpha] est réalisé comme décrit précédemment (Rio et al., 1987, Devys et al., 1993). Les appendices humains ont été inclus dans la paraffine et fixés dans du formalin 10% tamponé (Sigma). Des coupes sériées (3 m) sont incubées durant la nuit à température ambiante avec l'anticorps 1 RC 1 C-10 et avec l'anticorps anti-topoisomérase II[alpha] (NeoMarkers, Union City, CA, USA). Des anticorps liés de manière spécifique sont visualisés par un complexe utilisant la streptavidine biotine (LAB/LSAB method, Dako LSAB2 System kit ; DAKO, Carpinteria, CA, USA). En immunocytochimie, l'anticorps 1RC1C-10 marque le noyau des cellules HeLa tandis que le nucléole et l'ensemble du cytoplasme ne sont pas marqués (Figure 3). En immunohistochimie, des coupes en paraffine d'appendice humain montrent un marquage localisé essentiellement dans des zones de prolifération cellulaire (Figure 4). En effet, les cellules marquées sont logées dans les cryptes glandulaires (CG) ainsi que dans les zones germinatives (Ger). Un marquage identique est obtenu lorsqu'on utilise un anticorps anti-topoisomérase lia qui est une enzyme uniquement exprimée dans des cellules en prolifération (résultats non illustrés). 2. 6. Recherches BLAST et prédiction de domaines Les études sur BLAST en ligne ont été réalisées à partir des informations du National Center for Biotechnology Information au National Institute of Health (Bethesda, MD, USA). SCANPROSITE et PROFILESCAN sont utilisés pour l'analyse protéique (Infobiogen, Villejuif, France). ICBP90 comporte un domaine ubiquitin-like dans ses 80 premiers acides aminés, deux sites de localisation nucléaires potentiels dans la partie C-terminale et deux domaines en doigt de zinc ( zincfinger ), dont l'un serait impliqué dans la liaison à l'ADN et l'autre dans des interactions protéine-protéine. Plusieurs sites potentiels de phosphorylation par la protéine kinase C, la caséine kinase II ainsi que par une tyrosine kinase sont également présents. La production et la purification de ICBP90 à l'aide du système de fusion GST (même procédé que celui utilisé pour ICBP-59) nous a finalement permis de tester la capacité de la protéine complète à lier les séquences d'ADN de type ICB. Son comportement est en tous points identique à celui observé pour ICBP-59. En définitive, nous avons isolé une nouvelle protéine humaine que nous avons appelée ICBP90 pour les raisons évoquées ci-dessus. Son poids moléculaire théorique est de 89,758 kDa et son poids moléculaire apparent sur gel d'acrylamide est de 97 kDa. Cette protéine est non seulement localisée exclusivement dans le noyau des cellules humaines, mais elle présente également la capacité à lier des séquences d'ADN de manière spécifique, en l'occurrence des séquences de type CCAAT. Pour ces raisons, nous pensons que ICBP90 a la possibilité de moduler l'expression des gènes dont le promoteur est pourvu de boites CCAAT, éventuellement en position inversée (ICB). Le gène de la topoisomérase II[alpha] humaine qui nous intéresse plus particulièrement, et qui comporte cinq séquences ICB dans son promoteur, nous semble être une des cibles privilégiées de ICBP90. Ces expériences ont permis de mettre en évidence les caractéristiques remarquables de l'anticorps 1RC1C-10 qui ne marque uniquement que les cellules en prolifération dans le cas de cellules non cancéreuses ; il marque les cellules cancéreuses en prolifération ou en quiescence ; il est utilisable dans 4 techniques différentes (Western blotting, immunocytochimie, immunohistologie, immunoprécipitation) ; il possède une très bonne affinité et permet d'utiliser une dilution de 1/ 150 000 en immunohistochimie (i.e. 13 ng/ml) ; son utilisation ne génère quasiment pas de bruit de fond. Les applications futures de 1RC1C-10 se situent en premier lieu dans les domaines du diagnostique et de la recherche fondamentale. Pour le diagnostique en anatomo-pathologie par exemple, il serait tout à fait possible de rendre compte de l'état prolifératif d'un tissus cancéreux donné. Concernant la recherche fondamentale, des investigations sont en cours dans notre laboratoire afin de déterminer la contribution exacte de ICBP90 dans les mécanismes de prolifération des cellules normales et des cellules cancéreuses. Or, pour l'étude de l'expression de ICBP90 en fonction du cycle cellulaire, de sa localisation nucléaire précise et de son interaction avec d'autres protéines cellulaires, l'utilisation de l'anticorps sera incontournable. Pour l'instant nous n'avons pas étudié l'expression de l'ICBP90 en fonction du cycle cellulaire. Néanmoins, dans le cas ou des lignées de cellules cancéreuses sont confluentes ou lorsqu'elles sont en prolifération nous ne pouvons détecter de différences significatives de l'expression de l'ICBP90 (Fig. 1) du moins en ce qui concerne la forme à 97 kDa. Par contre, dans des cellules confluentes non cancéreuses (cellules musculaires lisses bronchiques humaines) l'expression de l'ICBP90 est difficilement détectable (résultats non illustrés). Ceci est confirmé sur les coupes histologiques où aucune cellule en quiescence n'est marquée par l'anticorps. Il est par conséquent possible que l'ICBP90 soit exprimée quelque soit la phase du cycle cellulaire dans des cellules cancéreuses alors que son expression varierait en fonction de chaque phase dans des cellules non cancéreuses. Ceci rend donc l'utilisation de l'anticorps extrêmement intéressante, en ce sens que nous aurions à disposition un marqueur de la prolifération cellulaire de tissus cancéreux qui ne dépendrait pas de la phase du cycle cellulaire contrairement à d'autres marqueurs de prolifération cellulaire tels que le Ki-67, la topoisomérase II[alpha], la cycline E et la cycline B1. En effet, la fin de la phase S est caractérisée par une très faible expression de Ki- 67, la cycline E marque les cellules en fin de phase G1 jusqu'au milieu de la phase S et la cycline Bl marque les cellules en phase G2/M (pour revue Darzynkiewicz et al., 1994). Par ailleurs, il a été montré que PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) surestime le nombre de cellules en prolifération dans certains types de tissus (Roskell and Biddolph, 1999). ICBP90 joue un rôle important dans la prolifération cellulaire en régulant l'expression de gènes tels que celui de la topoisomérase II[alpha]. Différentes stratégies visant à bloquer l'action de cette protéine doivent permettre de modifier la prolifération cellulaire. Ainsi, l'utilisation de l'anticorps IRCIC-10 ainsi que l'utilisation de peptides mimant l'interaction ADN/ICBP90 sans pour autant engendrer d'effet physiologique subséquent constitue une possibilité intéressante. Le design de ses peptides s'inspirerait directement de la séquence protéique de ICBP90 que nous avons décrite. Une forme tronquée corrspondant à ICBP59 pourrait par exemple être un des premiers candidats. Le blocage pur et simple de l'expression de ICBP90 dans le but d'éliminer complètement son influence sur les gènes et par extension sur la prolifération cellulaire peut être envisagé ; il peut se faire soit par une approche classique en obtenant des inhibiteurs de la protéine, soit en utilisant une approche plus moderne correspondant à la technique d'interférence par l'ARN double brin (RNA interférence ou RNAi) telle que décrit récemment par Kennerdell & Carthew (1998). REFERENCES Austin, C. A., Sng, J.-H., Patel, S. and Fisher,L.M. (1993), Biochim. Biophys. Acta, 1172, 283-291. Barany, F., (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88,189-193. Boritzki, T. J., et al (1988), Biochem. Pharmacol. 37,4063-4068. Brandt,T.L., Fraser,D.J., Leal,S., Halandras,P.M., Kroll,A.R. and Kroll,D.J. 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LISTAGE DE SEQUENCE ADEREGEM POLYPEPTIDE ICBP90 ET SES FRAGMENTS ET POLYNUCLEOTIDES CODANT LESDITS POLYPEPTIDES ET APPLICATIONS AU DIAGNOSTIC ET AU TRAITEMENT DU CANCER D18243 11 PatentIn Vers. 2.0 1 2382 ADN Homo sapiens CDS (1)..(2382) 1 atg tgg atc cag gtt cgg acc atg gat ggg agg cag acc cac acg gtg 48 Met Trp Ile Gin Val Arg Thr Met Asp Gly Arg Gin Thr His Thr Val 1 5 10 15 gac tcg ctg tcc agg ctg acc aag gtg gag gag ctg agg cgg aag atc 96 Asp Ser Leu Ser Arg Leu Thr Lys Val Glu Glu Leu Arg Arg Lys Ile 20 25 30 cag gag ctg ttc cac gtg gag cca ggc ctg cag agg ctg ttc tac agg 144 Gin Glu Leu Phe His Val Glu Pro Gly Leu Gin Arg Leu Phe Tyr Arg 35 40 45 ggc aaa cag atg gag gac ggc cat acc ctc ttc gac tac gag gtc cgc 192 Gly Lys Gln Met Glu Asp Gly His Thr Leu Phe Asp Tyr Glu Val Arg 50 55 60 ctg aat gac acc atc cag ctc ctg gtc cgc cag agc ctc gtg ctc ccc 240 Leu Asn Asp Thr Ile Gln Leu Leu Val Arg Gln Ser Leu Val Leu Pro 65 70 75 80 cac age acc aag gag cgg gac tcc gag ctc tcc gac acc gac tcc ggc 288 His Ser Thr Lys Glu Arg Asp Ser Glu Leu Ser Asp Thr Asp Ser Gly 85 90 95 tgc tgc ctg ggc cag agt gag tca gac aag tcc tcc ace cac ggt gag 336 Cys Cys Leu Gly Gin Ser Glu Ser Asp Lys Ser Ser Thr His Gly Glu 100 105 110 gcg gcc gcc gag act gac agc agg cca gcc gat gag gac atg tgg gat 384 Ala Ala Ala Glu Thr Asp Ser Arg Pro Ala Asp Glu Asp Met Trp Asp 115 120 125 gag acg gaa ttg ggg ctg tac aag gtc aat gag tac gtc gat gct cgg 432 Glu Thr Glu Leu Gly Leu Tyr Lys Val Asn Glu Tyr Val Asp Ala Arg 130 135 140 gac acg aac atg ggg gcg tgg ttt gag gcg cag gtg gtc agg gtg acg 480 Asp Thr Asn Met Gly Ala Trp Phe Glu Ala Gin Val Val Arg Val Thr 145 150 155 160 cgg aag gcc ccc tcc cgg gac gag ccc tgc agc tcc acg tcc agg ccg 528 Arg Lys Ala Pro Ser Arg Asp Glu Pro Cys Ser Ser Thr Ser Arg Pro 165 170 175 gcg ctg gag gag gac gtc att tac cac gtg aaa tac gac gac tac ccg 576 Ala Leu Glu Glu Asp Val Ile Tyr His Val Lys Tyr Asp Asp Tyr Pro -180 185 190 gag aac ggc gtg gtc cag atg aac tcc agg gac gtc cga gcg cgc gcc 624 Glu Asn Gly Val Val Gln Met Asn Ser Arg Asp Val Arg Ala Arg Ala 195 200 205 cgc ace atc atc aag tgg cag gac ctg gag gtg ggc cag gtg gtc atg 672 Arg Thr Ile Ile Lys Trp Gln Asp Leu Glu Val Gly Gln Val Val Met 210 215 220 etc aac tac aac ccc gac aac ccc aag gag cgg ggc ttc tgg tac gac 720 Leu Asn Tyr Asn Pro Asp Asn Pro Lys Glu Arg Gly Phe Trp Tyr Asp 225 230 235 240 gcg gag atc tcc agg aag cgc gag acc agg acg gcg cgg gaa ctc tac 768 Ala Glu Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Arg Thr Ala Arg Glu Leu Tyr 245 250 255 gcc aac gtg gtg ctg ggg gat gat tct ctg aac gac tgt cgg atc atc 816 Ala Asn Val Val Leu Gly Asp Asp Ser Leu Asn Asp Cys Arg Ile Ile 260 265 270 ttc gtg gac gaa gtc ttc aag att gag cgg ccg ggt gaa ggg agc ccc 864 Phe Val Asp Glu Val Phe Lys Ile Glu Arg Pro Gly Glu Gly Ser Pro 275 280 285 atg gtt gac aac ccc atg aga cgg aag agc ggg ccg tcc tgc aag cac 912 Met Val Asp Asn Pro Met Arg Arg Lys Ser Gly Pro Ser Cys Lys His 290 295 300 tgc aag gac gac gtg aac aga ctc tgc agg gtc tgc gcc tgc cac ctg 960 Cys Lys Asp Asp Val Asn Arg Leu Cys Arg Val Cys Ala Cys His Leu 305 310 315 320 tgc ggg ggc cgg cag gac ccc gac aag cag ctc atg tgc gat gag tgc 1008 Cys Gly Gly Arg Gln Asp Pro Asp Lys Gln Leu Met Cys Asp Glu Cys 325 330 335 gac atg gcc ttc cac atc tac tgc ctg gac ccg ccc ctc agc agt gtt 1056 Asp Met Ala Phe His Ile Tyr Cys Leu Asp Pro Pro Leu Ser Ser Val 340 345 350 ccc agc gag gac gag tgg tac tgc cet gag tgc cgg aat gat gcc agc 1104 Pro Ser Glu Asp Glu Trp Tyr Cys Pro Glu Cys Arg Asn Asp Ala Ser 355 360 365 gag gtg gta ctg gcg gga gag cgg ctg aga gag agc aag aag aat gcg 1152 Glu Val Val Leu Ala Gly Glu Arg Leu Arg Glu Ser Lys Lys Asn Ala 370 375 380 aag atg gcc tcg gcc aca tcg tcc tca cag cgg gac tgg ggc aag ggc 1200 Lys Met Ala Ser Ala Thr Ser Ser Ser Gln Arg Asp Trp Gly Lys Gly 385 390 395 400 atg gcc tgt gtg ggc cgc acc aag gaa tgt acc atc gtc ccg tcc aac 1248 Met Ala Cys Val Gly Arg Thr Lys Glu Cys Thr Ile Val Pro Ser Asn 405 410 415 cac tac gga ccc atc ccg ggg atc ccc gtg ggc acc atg tgg cgg ttc 1296 His Tyr Gly Pro Ile Pro Gly Ile Pro Val Gly Thr Met Trp Arg Phe 420 425 430 cga gtc cag-gtc agc gag tcg ggt gtc cat cgg ccc cac gtg gct ggc 1344 Arg Val Gln Val Ser Glu Ser Gly Val His Arg Pro His Val Ala Gly 435 440 445 atc cat ggc cgg agc aac gac gga tcg tac tcc cta gtc ctg gcg ggg 1392 Ile His Gly Arg Ser Asn Asp Gly Ser Tyr Ser Leu Val Leu Ala Gly 450 455 460 ggc tat gag gat gat gtg gac cat ggg aat ttt ttc aca tac acg ggt 1440 Gly Tyr Glu Asp Asp Val Asp His Gly Asn Phe Phe Thr Tyr Thr Gly '465 470 475 480 agt ggt ggt cga gat ctt tcc ggc aac aag agg acc gcg gaa cag tct 1488 Ser Gly Gly Arg Asp Leu Ser Gly Asn Lys Arg Thr Ala Glu Gln Ser 485 490 495 tgt gat cag aaa ctc acc aac acc aac agg gcg ctg gct ctc aac tgc 1536 Cys Asp Gln Lys Leu Thr Asn Thr Asn Arg Ala Leu Ala Leu Asn Cys 500 505 510 ttt gct ccc atc aat gac caa gaa ggg gcc gag gcc aag gac tgg cgg 1584 Phe Ala Pro Ile Asn Asp Gln Glu Gly Ala Glu Ala Lys Asp Trp Arg 515 520 525 tcg ggg aag ccg gtc agg gtg gtg cgc aat gtc aag ggt ggc aag aat 1632 Ser Gly Lys Pro Val Arg Val Val Arg Asn Val Lys Gly Gly Lys Asn 530 535 540 agc aag tac gcc ccc gct gag ggc aac cgc tac gat ggc atc tac aag 1680 Ser Lys Tyr Ala Pro Ala Glu Gly Asn Arg Tyr Asp Gly Ile Tyr Lys 545 550 555 560 gtt gtg aaa tac tgg ccc gag aag ggg aag tcc ggg ttt ctc gtg tgg 1728 Val Val Lys Tyr Trp Pro Glu Lys Gly Lys Ser Gly Phe Leu Val Trp 565 570 575 cgc tac ctt ctg cgg agg gac gat gat gag cet ggc cet tgg acg aag 1776 Arg Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Asp Asp Glu Pro Gly Pro Trp Thr Lys 580 585 590 gag ggg aag gac cgg atc aag aag ctg ggg ctg acc atg cag tat cca 1824 Glu Gly Lys Asp Arg Ile Lys Lys Leu Gly Leu Thr Met Gln Tyr Pro 595 600 605 gaa ggc tac ctg gaa gcc ctg gcc aac cga gag cga gag aag gag aac 1872 Glu Gly Tyr Leu Glu Ala Leu Ala Asn Arg Glu Arg Glu Lys Glu Asn 610 615 620 agc aag agg gag gag gag gag cag cag gag ggg ggc ttc gcg tcc ccc 1920 Ser Lys Arg Glu Glu Glu Glu Gin Gin Glu Gly Gly Phe Ala Ser Pro 625 630 635 640 agg acg ggc aag ggc aag tgg aag cgg aag tcg gca gga ggt ggc ccg 1968 Arg Thr Gly Lys Gly Lys Trp Lys Arg Lys Ser Ala Gly Gly Gly Pro 645 650 655 agc agg gcc ggg tcc ccg cgc cgg aca tcc aag aaa ace aag gtg gag 2016 Ser Arg Ala Gly Ser Pro Arg Arg Thr Ser Lys Lys Thr Lys Val Glu 660 665 670 ccc tac agt ctc acg gcc cag cag agc agc ctc atc aga gag gac aag 2064 Pro Tyr Ser Leu Thr Ala Gin Gin Ser Ser Leu Ile Arg Glu Asp Lys 675- 680 685 ag aac gcc aag ctg tgg aat gag gtc ctg gcg tca ctc aag gac cgg 2112 Ser Asn Ala Lys Leu Trp Asn Glu Val Leu Ala Ser Leu Lys Asp Arg 690 695 700 ccg gcg agc ggc agc ccg ttc cag ttg ttc ctg agt aaa gtg gag gag 2160 Pro Ala Ser Gly Ser Pro Phe Gin Leu Phe Leu Ser Lys Val Glu Glu 705 710 715 720 acg ttc cag tgt atc tgc tgt cag gag ctg gtg ttc cgg ccc atc acg 2208 Thr Phe Gin Cys Ile Cys Cys Gin Glu Leu Val Phe Arg Pro Ile Thr 725 730 735 acc gtg tgc cag cac aac gtg tgc aag gac tgc ctg gac aga tcc ttt 2256 Thr Val Cys Gin His Asn Val Cys Lys Asp Cys Leu Asp Arg Ser Phe 740 745 750 cgg gca cag gtg ttc agc tgc cet gcc tgc cgc tac gac ctg ggc cgc 2304 Arg Ala Gin Val Phe Ser Cys Pro Ala Cys Arg Tyr Asp Leu Gly Arg 755 760 765 agc tat gcc atg cag gtg aac cag cet ctg cag * ace gtc ctc aac cag 2352 Ser Tyr Ala Met Gin Val Asn Gin Pro Leu Gin Thr Val Leu Asn Gin 770 775 780 ctc ttc ccc ggc tac ggc aat ggc cgg tga 2382 Leu Phe Pro Gly Tyr Gly Asn Gly Arg 785 790 2 793 PRT Homo sapiens 2 Met Trp Ile Gin Val Arg Thr Met Asp Gly Arg Gin Thr His Thr Val 1 5 10 15 Asp Ser Leu Ser Arg Leu Thr Lys Val Glu Glu Leu Arg Arg Lys Ile 20 25 30 Gin Glu Leu Phe His Val Glu Pro Gly Leu Gin Arg Leu Phe Tyr Arg 35 40 45 Gly Lys Gin Met Glu Asp Gly His Thr Leu Phe Asp Tyr Glu Val Arg 50 55 60 Leu as Asp Thr Ile Gin Leu Leu Val Arg Gin Ser Leu Val Leu Pro 65 70 75 80 His Ser Thr Lys Glu Arg Asp Ser Glu Leu Ser Asp Thr Asp Ser Gly 85 90 ' 95 Cys Cys Leu Gly Gln Ser Glu Ser Asp Lys Ser Ser Thr His Gly Glu 100 105 110 Ala Ala Ala Glu Thr Asp Ser Arg Pro Ala Asp Glu Asp Met Trp Asp 115 120 125 Glu Thr Glu Leu Gly Leu Tyr Lys Val Asn Glu Tyr Val Asp Ala Arg 130 135 140 Asp Thr Asn Met Gly Ala Trp Phe Glu Ala Gln Val Val Arg Val Thr 145 150 155 160 Arg Lys Ala Pro Ser Arg Asp Glu Pro Cys Ser Ser Thr Ser Arg Pro 165 170 175 Ala Leu Glu Glu Asp Val Ile Tyr His Val Lys Tyr Asp Asp Tyr Pro 180 185 190 Glu Asn Gly Val Val Gln Met Asn Ser Arg Asp Val Arg Ala Arg Ala 195 200 205 Arg Thr Ile Ile Lys Trp Gln Asp Leu Glu Val Gly Gln Val Val Met 210 215 220 Leu Asn Tyr Asn Pro Asp Asn Pro Lys Glu Arg Gly Phe Trp Tyr Asp 225 230 235 240 Ala Glu Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Arg Thr Ala Arg Glu Leu Tyr 245 250 255 Ala Asn Val Val Leu Gly Asp Asp Ser Leu Asn Asp Cys Arg Ile Ile 260 265 270 Phe Val Asp Glu Val Phe Lys Ile Glu Arg Pro Gly Glu Gly Ser Pro 275 280 285 Met Val Asp Asn Pro Met Arg Arg Lys Ser Gly Pro Ser Cys Lys His 290 295 300 Cys Lys Asp Asp Val Asn Arg Leu Cys Arg Val Cys Ala Cys His Leu 305 310 315 320 Cys Gly Gly Arg Gln Asp Pro Asp Lys Gln Leu Met Cys Asp Glu Cys 325 330 335 Asp Met Ala Phe His Ile Tyr Cys Leu Asp Pro Pro Leu Ser Ser Val 340 345 350 Pro Ser Glu Asp Glu Trp Tyr Cys Pro Glu Cys Arg Asn Asp Ala Ser 355 360 365 Glu Val Val Leu Ala Gly Glu Arg Leu Arg Glu Ser Lys Lys Asn Ala 370 375 380 Lys Met Ala Ser Ala Thr Ser Ser Ser Gin Arg Asp Trp Gly Lys Gly 385 390 395 ' 400 Met Ala Cys Val Gly Arg Thr Lys Glu Cys Thr Ile Val Pro Ser Asn 405 410 415 His Tyr Gly Pro Ile Pro Gly Ile Pro Val Gly Thr Met Trp Arg Phe 420 425 430 Arg Val Gin Val Ser Glu Ser Gly Val His Arg Pro His Val Ala Gly 435 440 445 Ile His Gly Arg Ser Asn Asp Gly Ser Tyr Ser Leu Val Leu Ala Gly 450 455 460 Gly Tyr Glu-Asp Asp Val Asp His Gly Asn Phe Phe Thr Tyr Thr Gly 465 470 475 480 Ser Gly Gly Arg Asp Leu Ser Gly Asn Lys Arg Thr Ala Glu Gin Ser 485 490 495 Cys Asp Gin Lys Leu Thr Asn Thr Asn Arg Ala Leu Ala Leu Asn Cys 500 505 510 Phe Ala Pro Ile Asn Asp Gin Glu Gly Ala Glu Ala Lys Asp Trp Arg 515 520 525 Ser Gly Lys Pro Val Arg Val Val Arg Asn Val Lys Gly Gly Lys Asn 530 535 540 Ser Lys Tyr Ala Pro Ala Glu Gly Asn Arg Tyr Asp Gly Ile Tyr Lys 545 550 555 560 Val Val Lys Tyr Trp Pro Glu Lys Gly Lys Ser Gly Phe Leu Val Trp 565 570 575 Arg Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Asp Asp Glu Pro Gly Pro Trp Thr Lys 580 585 590 Glu Gly Lys Asp Arg Ile Lys Lys Leu Gly Leu Thr Met Gin Tyr Pro 595 600 605 Glu Gly Tyr Leu Glu Ala Leu Ala Asn Arg Glu Arg Glu Lys Glu Asn 610 615 620 Ser Lys Arg Glu Glu Glu Glu Gin Gin Glu Gly Gly Phe Ala Ser Pro 625 630 635 640 Arg Thr Gly Lys Gly Lys Trp Lys Arg Lys Ser Ala Gly Gly Gly Pro 645 650 655 Ser Arg Ala Gly Ser Pro Arg Arg Thr Ser Lys Lys Thr Lys Val Glu 660 665 670 Pro Tyr Ser Leu Thr Ala Gin Gin Ser Ser Leu Ile Arg Glu Asp Lys 675 680 685 Ser Asn Ala Lys Leu Trp Asn Glu Val Leu Ala Ser Leu Lys Asp Arg 690 695 700 Pro Ala Ser Gly Ser Pro Phe Gin Leu Phe Leu Ser Lys Val Glu Glu 705 710 715 720 Thr Phe Gin Cys Ile Cys Cys Gln Glu Leu Val Phe Arg Pro Ile Thr 725 730 735 Thr Val Cys Gin His Asn Val Cys Lys Asp Cys Leu Asp Arg Ser Phe 740 745 750 Arg Ala Gin Val Phe Ser Cys Pro Ala Cys Arg Tyr Asp Leu Gly Arg 755 760 765 Ser Tyr Ala Met Gln Val Asn Gin Pro Leu Gln Thr Val Leu Asn Gln 770 775 780 Leu Phe Pro Gly Tyr Gly Asn Gly Arg 785 790 3 45 ADN Homo sapiens CDS (1)..(45) 3 acc cac ggt gag gcg gcc gcc gag act gac agc agg cca gcc gat 45 Thr His Gly Glu Ala Ala Ala Glu Thr Asp Ser Arg Pro Ala Asp 1 5 10 15 4 15 PRT Homo sapiens 4 Thr His Gly Glu Ala Ala Ala Glu Thr Asp Ser Arg Pro Ala Asp 1 5 10 15 5 78 ADN Homo sapiens CDS (1)..(78) 5 atg gtt gac aac ccc atg aga cgg aag agc ggg ccg tcc tgc aag cac 48 Met Val Asp Asn Pro Met Arg Arg Lys Ser Gly Pro Ser Cys Lys His 1 5 10 15 tgc aag gac gac gtg aac aga ctc tgc agc 78 Cys Lys Asp Asp Val Asn Arg Leu Cys Ser 20 25 6 26 PRT Homo sapiens 6 Met Val Asp Asn Pro Met Arg Arg Lys Ser Gly Pro Ser Cys Lys His 1 5 10 15 Cys Lys Asp Asp Val Asn Arg Leu Cys Ser 20 25 7 525 ADN Homo sapiens CDS (1)..(525) 7 cga gag aag gag aac agc aag agg gag gag gag gag cag cag gag ggg 48 Arg Glu Lys Glu Asn Ser Lys Arg Glu Glu Glu Glu Gln Gln Glu Gly 1 5 10 15 ggc ttc gcg tcc ccc agg acg ggc aag ggc aag tgg aag cgg aag tcg 96 Gly Phe Ala Ser Pro Arg Thr Gly Lys Gly Lys Trp Lys Arg Lys Ser 20 25 30 gca gga ggt ggc ccg agc agg gcc ggg tcc ccg cgc cgg aca tcc aag 144 Ala Gly Gly Gly Pro Ser Arg Ala Gly Ser Pro Arg Arg Thr Ser Lys 35 40 45 aaa ace aag gtg gag ccc tac agt ctc acg gcc cag cag agc agc ctc 192 Lys Thr Lys Val Glu Pro Tyr Ser Leu Thr Ala Gln Gln Ser Ser Leu 50 55 60 atc aga gag gac aag agc aac gcc aag ctg tgg aat gag gtc ctg gcg 240 Ile Arg Glu Asp Lys Ser Asn Ala Lys Leu Trp Asn Glu Val Leu Ala 65 70 75 80 tca ctc aag gac cgg ccg gcg agc ggc agc ccg ttc cag ttg ttc ctg 288 Ser Leu Lys Asp Arg Pro Ala Ser Gly Ser Pro Phe Gln Leu Phe Leu 85 90 95 agt aaa gtg gag gag acg ttc cag tgt atc tgc tgt cag gag ctg gtg 336 Ser Lys Val Glu Glu Thr Phe Gln Cys Ile Cys Cys Gln Glu Leu Val 100 105 110 ttc cgg ccc atc acg ace gtg tgc cag cac aac gtg tgc aag gac tgc 384 Phe Arg Pro Ile Thr Thr Val Cys Gln His Asn Val Cys Lys Asp Cys 115 120 125 ctg gac aga tcc ttt cgg gca cag gtg ttc agc tgc cet gcc tgc cgc 432 Leu Asp Arg Ser Phe Arg Ala Gln Val Phe Ser Cys Pro Ala Cys Arg 130 135 140 tac gac ctg ggc cgc agc tat gcc atg cag gtg aac cag cet ctg cag 480 Tyr Asp Leu Gly Arg Ser Tyr Ala Met Gln Val Asn Gln Pro Leu Gln 145 150 155 160 ace gtc ctc aac cag ctc ttc ccc ggc tac ggc aat ggc cgg tga 525 Thr Val Leu Asn Gln Leu Phe Pro Gly Tyr Gly Asn Gly Arg 165 170 175 8 174 PRT Homo sapiens 8 Arg Glu Lys Glu Asn Ser Lys Arg Glu Glu Glu Glu Gln Gln Glu Gly 1 5 10 15 Gly Phe Ala Ser Pro Arg Thr Gly Lys Gly Lys Trp Lys Arg Lys Ser - 20 25 30 Ala Gly Gly Gly Pro Ser Arg Ala Gly Ser Pro Arg Arg Thr Ser Lys 35 40 45 Lys Thr Lys Val Glu Pro Tyr Ser Leu Thr Ala Gln Gln Ser Ser Leu 50 55 60 Ile Arg Glu Asp Lys Ser Asn Ala Lys Leu Trp Asn Glu Val Leu Ala 65 70 75 80 Ser Leu Lys Asp Arg Pro Ala Ser Gly Ser Pro Phe Gln Leu Phe Leu 85 90 95 Ser Lys Val Glu Glu Thr Phe Gln Cys Ile Cys Cys Gln Glu Leu Val 100 105 110 Phe Arg Pro Ile Thr Thr Val Cys Gln His Asn Val Cys Lys Asp Cys 115 120 125 Leu Asp Arg Ser Phe Arg Ala Gln Val Phe Ser Cys Pro Ala Cys Arg 130 135 140 Tyr Asp Leu Gly Arg Ser Tyr Ala Met Gln Val Asn Gln Pro Leu Gln 145 150 155 160 Thr Val Leu Asn Gln Leu Phe Pro Gly Tyr Gly Asn Gly Arg 165 170 9 324 ADN Homo sapiens 9 atgtggatcc aggttcggac catggatggg aggcagaccc acacggtgga ctcgctgtcc 60 aggctgacca aggtggagga gctgaggcgg aagatccagg agctgttcca cgtggagcca 120 ggcctgcaga ggctgttcta caggggcaaa cagatggagg acggccatac cctcttcgac 180 tacgaggtcc gcctgaatga caccatccag ctcctggtcc gccagagcct cgtgctcccc 240 cacagcacca aggagcggga ctccgagctc tccgacaccg actccggctg ctgcctgggc 300 cagagtgagt cagacaagtc ctcc 324 10 495 ADN Homo sapiens 10 gaggacatgt gggatgagac ggaattgggg ctgtacaagg tcaatgagta cgtcgatgct 60 cgggacacga acatgggggc gtggtttgag gcgcaggtgg tcagggtgac gcggaaggcc 120 ccctcccggg acgagccctg cagctccacg tccaggccgg cgctggagga ggacgtcatt 180 taccacgtga aatacgacga ctacccggag aacggcgtgg tccagatgaa ctccagggac 240 gtccgagcgc gcgcccgcac catcatcaag tggcaggacc tggaggtggg ccaggtggtc 300 atgctcaact acaaccccga caaccccaag gagcggggct tctggtacga cgcggagatc 360 tccaggaagc gcgagaccag gacggcgcgg gaactctacg ccaacgtggt gctgggggat 420 gattctctga acgactgtcg gatcatcttc gtggacgaag tcttcaagat tgagcggccg 480 ggtgaaggga gcccc 495 11 915 ADN Homo sapiens 11 gtctgcgcct gccacctgtg cgggggccgg caggaccccg acaagcagct catgtgcgat 60 gagtgcgaca tggccttcca catctactgc ctggacccgc ccctcagcag tgttcccagc 120 gaggacgagt ggtactgccc tgagtgccgg aatgatgcca gcgaggtggt actggcggga 180 gagcggctga gagagagcaa gaagaatgcg aagatggcct cggccacatc gtcctcacag 240 cgggactggg gcaagggcat ggcctgtgtg ggccgcacca aggaatgtac catcgtcccg 300 tccaaccact acggacccat cccggggatc cccgtgggca ccatgtggcg gttccgagtc 360 caggtcagcg agtcgggtgt ccatcggccc cacgtggctg gcatccatgg ccggagcaac 420 gacggatcgt actccctagt cctggcgggg ggctatgagg atgatgtgga ccatgggaat 480 tttttcacat acacgggtag tggtggtcga gatctttccg gcaacaagag gaccgcggaa 540 cagtcttgtg atcagaaact caccaacacc aacagggcgc tggctctcaa ctgctttgct 600 cccatcaatg accaagaagg ggccgaggcc aaggactggc ggtcggggaa gccggtcagg 660 gtggtgcgca atgtcaaggg tggcaagaat agcaagtacg cccccgctga gggcaaccgc 720 tacgatggca tctacaaggt tgtgaaatac tggcccgaga aggggaagtc cgggtttctc 780 gtgtggcgct accttctgcg gagggacgat gatgagcctg gcccttggac gaaggagggg 840 aaggaccgga tcaagaagct ggggctgacc atgcagtatc cagaaggcta cctggaagcc 900 ctggccaacc gagag 915 REVENDICATIONS 1. Polypeptide isolé dénommé ICBP90 (inverted CCAAT box binding .protein 90) de séquence d'acides aminés SEQ ID N 2. 2. Polypeptide isolé caractérisé en ce qu'il comprend un polypeptide choisi parmi : a) un polypeptide de séquence SEQ ID N 2, SEQ ID N 4, SEQ ID N 6 ou SEQ ID N 8 ; b) un polypeptide variant de polypeptide de séquences d'acides aminés défini en a) ; c) un polypeptide homologue au polypeptide défini en a) ou b) et comportant au moins 80 % d'homologie, de préférence 90 % avec ledit polypeptide de a) ; d) un fragment d'au moins 5 acides aminés consécutifs d'un polypeptide défini en a), b) ou c) ; e) un fragment biologiquement actif d'un polypeptide défini en a), b) ou c). 3. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 2 caractérisé en ce qu'il est comporte au moins un domaine de fixation à l'ADN sélectionné dans le groupe composé d'un domaine doigt de zinc et d'un domaine leucine zipper . 4. Polypeptide selon la revendication 3 caractérisé en ce que la séquence d'ADN sur laquelle se lie ledit polypeptide est une boite CCAAT, de préférence une boite CCAAT inversée (Inverted CCAAT Box : ICB). 5. Polynucléotide isolé caractérisé en ce qu'il code pour un polypeptide selon la revendication 1. 6. Polynucléotide selon la revendication 5 de séquence SEQ ID N 1. 7. Polynucléotide isolé caractérisé en ce qu'il comprend un polynucléotide choisi parmi : a) un polynucléotide de séquence SEQ ID N 1, SEQ ID N 3, SEQ ID N 5 ou SEQ ID N 7 ou dont la séquence est celle de l'ARN correspondant à la séquence SEQ ID N 1, SEQ ID N 3, SEQ ID N 5 ou SEQ ID N 7 ; b) un polynucléotide dont la séquence est complémentaire de la séquence d'un polynucléotide défini en a), c) un polynucléotide dont la séquence comporte au moins 80% d'homologie avec un polynucléotide défini en a) ou b), d) un polynucléotide hybridant dans des conditions de forte stringence avec une séquence de polynucléotide défini en a), b) ou c), e) un fragment d'au moins 15 nucléotides consécutifs, de préférence 21 nucléotides consécutifs, et de manière préférée 30 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide défini en a), b), c) ou d) à l'exception des séquences SEQ ID N 9, N 10 et N 11correspondant respectivement aux EST humains N AI 083 773, N AA 811 055, N AA 488 755, N AA 129 794 et N AA 354 253. 8. Polynucléotide selon la revendication 7 caractérisé en ce qu'il est marqué directement ou indirectement par un composé radioactif ou un composé non radioactif. 9. Utilisation d'un polynucléotide selon la revendication 7 ou 8 en tant qu'amorce pour l'amplification ou la polymérisation de séquences nucléiques. 10. Utilisation d'un polynucléotide selon la revendication 7 ou 8 en tant que sonde pour la détection de séquences nucléiques. 11. Utilisation d'un polynucléotide selon la revendication 7 ou 8 en tant que oligonucléotide sens ou antisens pour contrôler l'expression du produit protéique correspondant. 12. Vecteur recombinant de clonage d'un polynucléotide selon l'une des revendications 5 à 8 et/ou d'expression d'un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il contient un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 5 à 8. 13. Vecteur selon la revendication 12 caractérisé en ce qu'il comporte les éléments permettant l'expression éventuellement la sécrétion dudit polypeptide dans une cellule hôte. 14. Cellule hôte, caractérisée en ce qu'elle est transformée par un vecteur selon l'une des revendications 12 et 13. 15. Procédé de préparation d'un polypeptide recombinant caractérisé en ce que l'on cultive une cellule hôte selon la revendication 14 dans des conditions permettant l'expression et éventuellement la sécrétion dudit polypeptide recombinant et que l'on récupère ledit polypeptide recombinant. 16. Polypeptide recombinant susceptible d'être obtenu par un procédé selon la revendication 15. 17. Anticorps monoclonal ou polyclonal et ses fragments caractérisé en ce qu'il lie spécifiquement un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 4 et 16. 18. Anticorps monoclonal selon la revendication 17 spécifique de la protéine ICBP90 humaine et capable d'inhiber l'interaction entre ICBP90 et la séquence d'ADN sur laquelle se lie spécifiquement la protéine ICBP90. 19. Anticorps monoclonal selon la revendication 17 spécifique de la protéine ICBP90 humaine et capable d'inhiber l'interaction entre ICBP90 et des protéines avec lesquelles ICBP90 interagit, lesdites protéines étant de préférence ICBP90 elle-même ou des protéines d'un complexe transcriptionnel. 20. Procédé de détection et/ou de dosage d'un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 4 et 16, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) mise en contact de l'échantillon biologique avec un anticorps selon l'une des revendications 17 à 19 ; b) mise en évidence du complexe antigène-anticorps formé. 21. Nécessaire pour la mise en #uvre d'un procédé selon la revendication 20 dans un échantillon biologique par réaction immunologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants : a) un anticorps monoclonal ou polyclonal selon l'une des revendications 17 à 19 ; b) le cas échéant, les réactifs pour la constitution du milieu propice à la réaction immunologique ; c) les réactifs permettant la détection du complexe antigène-anticorps produit par la réaction immunologique. 22. Procédé de détection et/ou de dosage d'un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 5 à 8 dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes : a) isolement de l'ADN à partir de l'échantillon biologique à analyser, ou obtention d'un ADNc à partir de l'ARN de l'échantillon biologique ; b) amplification spécifique de l'ADN à l'aide de polynucléotides selon la revendication 7 ou 8 utilisés en tant qu'amorces ; c) analyse des produits d'amplification. 23. Nécessaire pour la mise en #uvre d'un procédé selon la revendication 22 dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants : a) un couple de polynucléotide selon la revendication 7 ou 8 utilisé en tant qu'amorce ; b) les réactifs nécessaires pour effectuer une réaction d'amplification d'ADN ; c) éventuellement un composant permettant de vérifier la séquence du fragment amplifié, plus particulièrement un polynucléotide selon la revendication 7 ou 8 utilisé en tant que sonde. 24. Procédé de détection et/ou de dosage d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 5 à 8 dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes : a) Mise en contact d'un polynucléotide selon la revendication 7 ou 8 utilisé en tant que sonde avec un échantillon biologique ; b) Détection et/ou dosage de l'hybride formé entre ladite sonde et l'ADN de l'échantillon biologique. 25. Nécessaire pour la mise en #uvre d'un procédé selon la revendication 24 dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants : @ a) un polynucléotide selon la revendication 7 ou 8 utilisé en tant que sonde ; b) les réactifs nécessaires à la mise ' en #uvre d'une réaction d'hybridation. 26. Procédé selon les revendications 20,22 et 24 pour le diagnostic de prolifération cellulaire. 27. Procédé de criblage de ligands susceptibles d'affecter l'activité transcriptionnelle d'un gène dont le promoteur comporte des boites CCAAT et/ou CCAAT inversées (ICB) susceptibles de lier un polypeptide selon les revendications 1 à 4 et 16 et qui comporte les étapes suivantes : a) mise en contact dudit polypeptide et d'un ou plusieurs ligand(s) potentiel (s) en présence de réactifs nécessaires à la mise en #uvre d'une réaction de transcription; b) détection et/ou mesure de l'activité transcriptionnelle. 28. Nécessaire pour la mise en oeuvre d'un procédé selon la revendication 27 dans un échantillon biologique caractérisé en ce qu'il çomprend les éléments suivants : a) un polypeptide selon les revendications 1 à 4 et 16 ; b) un ligand ; c) les réactifs nécessaires à la mise en #uvre d'une réaction de transcription. 29. Composé selon l'une des revendications 1 à 8,12 à 14 et 16 à 19 à titre de médicament. 30. Composé selon la revendication 29 à titre de médicament destiné à la prévention et/ou au traitement du cancer. 31. Utilisation d'un composé selon les revendications 29 et 30 pour la préparation d'un médicament destiné à moduler, à augmenter ou à diminuer la prolifération cellulaire. 32. Composition pharmaceutique pour le traitement préventif et curatif du cancer caractérisée en ce qu'elle contient une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé selon l'une des revendications 29 et 30 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 33. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un anticorps selon l'une des revendications 17 à 19 en tant qu'agent de ciblage conjugué à au moins un agent sélectionné parmi le groupe des agents antiprolifératifs, antinéoplastiques ou cytotoxiques. 34. Produit comprenant au moins un composé selon les revendications 29 et 30 et-au moins un autre agent anticancéreux comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie anti-cancéreuse. 35. Composition pour la détection, la localisation et l'imagerie des cancers, comprenant un anticorps selon l'une quelconque des revendications 17 à 19, l'anticorps est marqué directement ou indirectement avec un marqueur générateur de signal sélectionné parmi les isotopes radioactifs et les entités non isotopiques. 36. Méthode de détection, de localisation et d'imagerie du cancer, comprenant les étapes de: a) injection parentérale chez un être humain d'une composition selon la revendication 35; b) accumulation après un temps suffisant au niveau des cellules cancéreuses de l'anticorps marqué puis pénétration de l'anticorps marqué à l'intérieur desdites cellules, sans que ledit anticorps ne se lie de manière substantielle aux cellules normales ; d) détection du signal au moyen d'un détecteur de signal ; e) conversion du signal détecté en une image des cellules cancéreuses.