Brevet FR2785909A1 — publié le 20000519

Domaine Technique : L'invention concerne un extrait de micro-algues possédant une activité antiradicalaire due à la présence de SOD (superoxidismutase) like, couplé avec la présence de polysaccharides sulfatés. Ces deux activités sont utilisées seules ou ensemble pour entrer dans des compositions utiles dans les domaines de la pharmacie, de la cosmétique, de la nutrition diététique ou alimentaire et dans la lutte contre les parasites de culture. Techniques antérieures : De nos jours beaucoup de travaux sont relatifs à l'obtention et aux propriétés de substances antiradicalaires. Les chercheurs ont récemment trouvé des sources à partir du monde végétal à cause des substances infectieuses risquant d'tre rencontrées dans les extraits animaux ou humains. Des techniques de clonage sont en étude. Une source moderne est mise en oeuvre avec la culture de micro-algues. L'objectif habituel consiste à extraire la biomasse algale pour trouver des composants intéressants. Ces cultures coûtent cher et sont longues. Le milieu de culture est jeté, ce qui explique une part importante du coût. La présente invention provient des propriétés inattendues que la demanderesse a trouvé non pas dans la biomasse, mais dans son milieu de culture. La biomasse étant préservée et servant à l'obtention connue de composants tels que protéines, lipides, vitamines, sels minéraux. De ce fait, l'invention en valorisant un rejet industriel en plus des propriétés inattendues rend plus économique l'exploitation des micro-algues en question. Description sommaire de l'invention : L'invention consiste en la préparation d'extrait contenu dans le milieu de culture de micro-algues. Ces cultures sont connues de l'homme de l'art. Mais dans le cas particulier de l'invention, des dispositions sont prises pour augmenter les défenses de l'algue afin d'augmenter la richesse des composants pouvant tre recherchés. La culture est réalisée en conditions contrôlées et de manière axénique, sans produit du type pesticide qui générerait la qualité de 1'extrait objectif de l'invention. De façon particulière après culture proprement dite et selon l'invention, l'algue subit un forçage métabolique. La réaction physiologique de l'algue à une sursaturation en 02 serait en fait la cause de la surproduction des composés antiradicalaires afin de se protéger contre l'oxygène afin d'éviter des dégradations structurales comme les péroxydations lipidiques. La demanderesse a mis au point son invention à partir de cultures choisies dans le groupe des Rhodophycae et notamment le Porphyridium cruentum (PC). L'extrait obtenu présente deux activités biologiques dues aux superoxydismutases like SODL et aux polysaccharides (PS). L'intért de 1'extrait réside dans la présence simultané des deux activités. Elles interviennent en synergie, la composante SODL agissant comme anti-inflammatoire facilitant de ce fait la reconstitution tissulaire amenée par les PS, notamment pour des applications cosmétiques. Ces deux effets sont distincts en effet, on peut préparer deux extraits, I'un contenant seulement l'acteur SODL, l'autre contenant les PS. Les mesures d'activités spécifiques montrent qu'elles sont présentes isolément, mais que leur réunion ou utilisation simultanée amplifie chacun des effets antiinflammatoires et régénérants. Ainsi et selon l'invention on peut concevoir des compositions traitantes contenant en quantité efficace : 1) Un extrait du milieu de culture de micro-algues présentant une activité SOD like d'au moins 30 U/ml. 2) Un extrait du milieu de culture de micro-algues présentant une teneur en polysaccharides sulfatés au moins égale à 1 mg par ml. 3) Un extrait de culture de micro-algues présentant une activité SOD like d'au moins 30 U/ml et une teneur en polysaccharides sulfatés au moins égale à 1 mg par ml. L'extrait peut donc valablement et en quantité efficace entrer dans des compositions à usage cosmétologique, diététique, pharmaceutique destinées à ! a prévention ou au traitement du vieillissement et de la dégénérescence et dans les pathologies liées au stress oxydatif pour l'homme ou l'animal. L'extrait peut intervenir en renforçant les activités anti-oxydantes d'autres extraits végétaux. Ainsi avec des extraits à activité péroxydasique, il a été constaté une augmentation nette de cette activité en leur rajoutant 10 % environ de l'extrait selon l'invention. Cette propriété est intéressante dans la lutte biologique contre les parasites des cultures. Manières de réaliser l'invention : L'invention bien que simple dans sa description sera bien comprise à l'aide des exemples qui illustrent ses multiples applications et ses : Exemple 1. Obtention de 1'extrait à partir de PC Dans un réacteur de 150 litres, l'algue est cultivée dans un milieu type Conway eau de mer artificielle. L'inoculation est faite par 5 1 de culture à 5 millions de cellules par millilitre. L'agitation et la fourniture de C02 se fait par bullage d'air. L'éclairage est de 50 à 100 micromoles m-2 S-1. Au bout de 12 jours, lorsque la densité cellulaire est optimale, on rajoute 100 mg par litre de KH C03. La gaine en polyéthylène est fermée, et on laisse la culture se poursuivre pendant 2 jours afin de créer un forçage métabolique. Les algues sont séparées par centrifugation du milieu de culture. L'extrait s'obtient alors par filtration à partir du milieu de culture. Celui-ci contient par litre 30 unités de SOD like, mesuré au kit SOD-525 et environ 1 mg de PS par ml. Une moitié de l'extrait est déshydraté par lyophilisation pour préparer des compositions telles que comprimés. L'autre moitié est stérilisée à 120 C pendant 20 minutes et conditionnée dans des flacons stériles, sans que cette opération ne modifie l'activité SOD, ni la teneur en polysaccharides sulfatés. Exemple 2 : Séparation des activités : A partir de 10 litres d'extraits de l'exemple 1, on sépare par précipitation solvant (alcool éthylique) la partie SOD like. On obtient ainsi 1'extrait sous deux sous-variantes, 1'une contenant l'activité antiradicalaire non altérée par la séparation, l'autre la présence des polysaccharides. Comme à l'exemple 1 et par déshydratation, 1'extrait et ses variantes peut se conserver liquide ou sous forme de poudre soluble. Exempt 3 ; Crème anti-âge selon la formulation : PEG-8 BEESWAX 8 OCTYDODECYL MYRISTATE 10 ISOSTEARYL ISOSTERATE 10 EXTRAIT SELON EX 1 10 SODIUM HYDROXIDE 0,4 ETHOXYDIGLYCOL 5 EAU PARFUM, CONSERVATEUR QS Exemple 4 : Objectivation in vitro de la crème anti-âge. On constate une prolifération de fibroplastes, mme en présence d'agents anti-prolifératifs qui indiquerait un effet trophique et donc pro-reconstituant. Exemple 5 : Composition diététique anti-stress oxydati On réalise des gélules de 250 mg de poudre selon l'exemple 1, destinées à la nutraceutique ou à la parapharmacie. Sur rat, on mesure dans le plasma l'augmentation des substances antiradicalaires induite par le gavage journalier de 5 mg de poudre. Exemple 6 : Brumatiseur adoucissant pour peau fragilisée Le liquide de 1'exemple 1 est placé dans un flacon propulseur à l'azote. Exemple 7 : Préparation d'un collyre anti-inflammatoire Selon la formulation suivante : Gluconate de chlorhexidine 0,005 g Inosine phosphate disodique dihydrate 0,5 g Extrait liquide selon exemple 1 q. s. q 100 ml Exemple 8 : Extrait anti-oxydant dans un produit alimentaire On rajoute à un concentré à 50 brix de tomates 0,1 % de la poudre obtenue à 1'exemple 1. Exemple 9 : Extrait pour lutter contre les parasites des cultures On rajoute 10 % de 1'extrait liquide de 1'exemple 1 à un extrait végétal ayant une activité péroxydasique de 460 nKat/ml. Après une journée de stockage à température ambiante l'activité est de 800nKat/ml au lieu de 300 nKat/ml sans rajout. Au bout de 4 jours on mesure les activités : L'extrait péroxydasique seul : 207 nKat/ml Avec addition de 10 % 501 Kat/ml REVENDICATIONS 1. Extrait de milieu de culture de micro-algues caractérisé en ce qu'il présente une activité SOD like d'au moins 30 unités par ml. 2. Extrait de culture de micro-algues présentant une teneur en polysaccharides sulfatés au moins égale à 1 mg par millilitre. 3. Extrait selon les revendications 1 et 2 obtenu par forçage métabolique en fin de ladite culture dans des conditions induisant une surproduction de composés antiradicalaires. 4. Extrait selon les revendications 1 à 3 caractérisé en ce que la micro-algue est choisie parmi le groupe des Rhodophycae et notamment le Porphyridium cruentum. 5. Extrait selon les revendications 1 à 4 caractérisé en ce que les composés responsables de l'activité SOD like ont un poids moléculaire inférieur à 30 000. 6. Extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisé en ce qu'il est thermostable et supporte une température au moins égale à 120 C pendant au moins 20 minutes. 7. Composition traitante choisie parmi le groupe comprenant en quantité : a) Un extrait du milieu de culture de micro-algues présentant une activité SOD like d'au moins 30 U/ml. b) Un extrait du milieu de culture de micro-algues présentant une teneur en polysaccharides sulfatés au moins égale à lmg par ml. c) Un extrait du milieu de micro-algues présentant une activité SOD like d'au moins 30 U/ml et une teneur en polysaccharides sulfatés au moins égale à 1 mg/ml. 8. Composition selon la revendication 7 caractérisée en ce que 1'extrait de milieu de culture subit un forçage métabolique en fin de culture dans des conditions induisant une surproduction des composés antiradicalaires. 9. Composition contenant 1'extrait selon les revendications 7 et 8 caractérisée en ce que la micro-algue est le Porphyridium cruentum. 10. Utilisation d'un extrait de milieu de culture de micro-algues présentant une activité SOD like d'au moins 30 U/ml et une teneur en polysaccharides sulfatés au moins égale à lmg/ml en quantité efficace pour la préparation de compositions à usage cosmétologique, diététique, pharmaceutique destinées à la prévention ou au traitement du vieillissement et de la dégénérescence. 11. Utilisation d'un extrait de milieu de culture de micro-algues selon la revendication 10 dans les pathologies liées au stress oxydatif. 12. Utilisation d'un extrait de culture de micro-algues selon la revendication 10 dans la lutte contre les parasites de cultures, en l'associant à d'autres extraits végétaux à activité antioxydante. 13. Utilisation d'un extrait de milieu de culture de micro-algues selon les revendications 10 et 11 pour l'homme ou l'animal.