Brevet FR2787808A1 — publié le 20000630

La présente invention a pour objet des nouvelles séquences d'ADN susceptibles d'être transférées par conjugaison, les plasmides contenant ces séquences, les bactéries contenant ces séquences d'ADN ou ces plasmides, ainsi que l'utilisation de ces bactéries. Les bactéries lactiques sont impliquées dans l'élaboration et la conservation d'un grand nombre de produits alimentaires, tels que les fromages, le beurre, les yaourts, le saucisson ou la choucroute. Parmi ceux-ci les produits laitiers occupent une place particulièrement importante. La transformation du lait par les bactéries lactiques est faite dans des cuves de plus en plus grandes. La compréhension des mécanismes de transfert de matériel génétique est essentielle afin d'améliorer les souches de bactéries lactiques utilisées dans ces fermentations. Les différents mécanismes de transfert de matériel génétique sont : la transformation, la transduction, la fusion de protoplastes et la conjugaison. La transformation consiste à faire pénétrer du matériel génétique dans une bactérie, par compétence naturelle, par protoplastisation ou électroperméation des cellules. La transduction consiste à faire pénétrer du matériel génétique dans une bactérie au moyen d'un bactériophage-vecteur. La fusion de protoplastes consiste à protoplastiser deux types cellulaires, de telle sorte qu'après contact, du matériel génétique d'une souche passe dans l'autre souche. La conjugaison consiste à mettre en contact deux types cellulaires, de telle sorte que du matériel génétique de l'une des souches passe dans l'autre souche grâce à des gènes naturels de conjugaison. On peut distinguer deux cas : soit le plasmide possède tous les gènes impliqués dans la conjugaison et il passe lui-même dans la souche récaptrice, soit le plasmide ne possède que les éléments génétiques suffisants pour son transfert, les autres éléments étant présent par exemple sur un autre plasmide (Mobilization of the relaxable Staphylococcus aureus plasmid pC221 by the conjugative plasmid pG01 involves three pC221 loci, S. J. Projan et G.L. Archer, J. Bacteriol. 1989 ; 171 : 1841-1845). Cette dernière situation présente un avantage : si le plasmide est transféré dans une souche réceptrice sans le plasmide conjugatif, il ne pourra plus être transféré de nouveau, ce qui évitera sa dissémination. Cette technique de transfert de plasmide par conjugaison présente également l'avantage de faire passer du matériel génétique dans des souches dans lesquelles cela est difficile par les techniques de transfert décrites précédemment. Quelques études ont déjà permis de mettre en évidence des systèmes de conjugaison chez les bactéries lactiques: - Genetic analysis of regions of the Lactococcus lactis subsp lactis plasmid pRS01 involved in conjugative transfer, D. A Mills, C K Choi, G M Dunny et L L McKay, Applied and Environ Microbiol 1994 ; 60 (12) : 4413-4420 ; - Splicing of a group Il intron involved in the conjugative transfer of pRS01 in lactococci, D A. Mills, L. L McKay et G.M Dunny , J Bacteriol 1996 ; 178 (12) : 3531-3538. Dans la présente demande, une séquence d'ADN comprenant au moins un mécanisme de transfert par conjugaison est décrite, cette séquence d'ADN comprend une partie fonctionnelle de 5333 pb présente dans la souche Lactococcus lactis FL877 déposée le 30 septembre 1998 à la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) sous le n I-2082. Cette séquence d'ADN de 5333 pb (SEQ ID N : 1) a été isolée à partir des plasmides contenus dans la souche FL877 Plus précisément, le fragment de 5333 paires de bases (pb) a été isolé par une digestion totale à l'aide de l'enzyme de restriction EcoRI des plasmides contenus dans la souche Lactococcus lactis FL877 Ce fragment est porteur d'un ou plusieurs mécanismes de transfert par conjugaison et est susceptible d'être transféré dans une autre souche, notamment une autre souche de L lactis, à partir par exemple de la souche MG1363 (GASSON M.J , J Bacteriol 1983 ; 154 1-9) Ce fragment est également porteur d'un système de réplication fonctionnelle chez L lactis. Puis, à partir de la séquence nucléotidique SEQ ID N : 1, la Demanderesse a isolé une séquence d'ADN de 2 590 pb, qui confère à elle seule la propriété à un plasmide d'être transféré dans une autre souche par conjugaison à partir notamment de la souche MG1363. Cette séquence de 2590 pb (SEQ ID N 2) peut être obtenue par la méthode de la PCR (polymerase chain reaction) à l'aide d'oligonucléotides appropriés Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention a pour objet une séquence d'acide nucléique susceptible d'être transférée par conjugaison, qui comprend la séquence SEQ ID N @2, son brin complémentaire, ou toute séquence dérivée de celle-ci ou de son brin complémentaire en raison de la dégénérescence du code génétique De préférence l'invention a pour objet une séquence d'acide nucléique susceptible d'être transférée par conjugaison, ladite séquence étant choisie parmi a) la séquence nucléotidique de 5333 pb (SEQ ID N : 1) ou son brin complémentaire ; b) toute séquence hybridant avec la séquence a) dans des conditions strictes ; ou c) les séquences dérivées des séquences a) et b) en raison de la dégénérescence du code génétique Plus particulièrement, l'invention concerne une séquence d'acide nucléique qui est choisie parmi a) la séquence nucléotidique de 2590 pb (SEQ ID N @2) ou son brin complémentaire ; b) toute séquence hybridant avec la séquence a) dans des conditions strictes ; ou c) les séquences dérivées des séquences a) et b) en raison de la dégénérescence du code génétique. Selon la présente invention, on entend par "hybridant dans des conditions strictes" une hybridation dans les conditions de stringence suivantes 4? C, dans un tampon phosphate de sodium 20 mM (pH 6,5) contenant 50 % de formamide, 5 x SSC, 1 x Denhardt's, 0,1 % de SDS et 100 g/ml d'ARN, puis lavage à 60 C dans un tampon 0,1 x SSC, 0,1 % SDS. L'invention a également pour objet les séquences d'ADN qui présentent un degré d'homologie élevé avec les séquences d'ADN ci-dessus Un degré d'homologie élevé signifie une homologie (rapport entre les nucléotides identiques et le nombre total de nucléotides) d'au moins 70%, de préférence d'au moins 80%, et de manière encore plus préférée d'au moins 90 %, des séquences de nucléotides, lorsqu'elles sont alignées d'après l'homologie maximale, selon la méthode d'alignement optimal des séquences de Needleman et Wunsch, J. Mol Biol 1970 , 48. 443-453 Cette méthode est notamment utilisée dans le logiciel UWGCG de l'Université du Wisconsin Devereux et al., Nucl Ac. Res. 1984 , 12 : 8711-8721 - option GAP. L'invention a également pour objet les plasmides transformés avec l'une des séquences d'ADN selon l'invention Ces plasmides peuvent être par exemple les plasmides pLDP1 (PREVOTS F et al, FEMS Microbiol. Lett 1996 , 142- 295- 299) et pLAB510, dérivé de pPF107-3 (PREVOTS F. et al FEMS Microbiol. Lett 1998 , 159 : 331-336) dans lesquels on a cloné, selon les techniques habituelles bien connues de l'homme de l'art, l'une des séquences d'ADN selon l'invention L'invention a également trait aux bactéries, notamment aux bactéries lactiques, de préférence appartenant à l'espèce Lactococcus lactis, qui contiennent au moins une des séquences d'ADN ou un plasmide tels que définis ci-dessus Ces bactéries peuvent être utilisées pour transmettre par conjugaison du matériel génétique, ayant notamment un intérêt industriel, à une souche d'intérêt industriel. Le mécanisme de transfert par conjugaison peut être porté par un plasmide ou par une autre partie du génome de la bactérie. En particulier, ces bactéries peuvent être utilisées pour transférer par conjugaison des propriétés telles que la résistance aux phages, l'aptitude à fermenter le lactose, la protéolyse, la peptidolyse, la production de bactériocines, et des gènes codant pour des protéines d'intérêt pharmaceutiques, à des souches d'intérêt industriel, en particulier dans l'industrie laitière, mais également dans l'industrie pharmaceutique Les souches d'intérêt industriel qui peuvent avantageusement recevoir du matériel génétique à l'aide des séquences d'ADN selon l'invention ou d'un plasmide les contenant sont par exemple les souches L lactis ssp lactis, L. lactis ssp cremons, S salivarius ssp thermophilus L'invention a donc également trait à ces souches d'intérêt industriel ayant intégré ledit matériel génétique L'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples ci-après, qui comprennent des résultats expérimentaux et une discussion de ceux-ci. Certains de ces exemples concernent des expériences effectuées dans le but de réaliser l'invention, d'autres concernent des exemples de réalisation de l'invention donnés bien sûr à titre purement illustratif. Une grande partie de l'ensemble des techniques décrites dans ces exemples, bien connu de l'homme de l'art, est exposée en détails dans l'ouvrage de Sambrook, Frittsch et Maniatis : "Molecular Cloning; a laboratory manual" publié en 1989 par les éditions Cold Srping Harbor Press à New York (2e édition). La description ci-après sera mieux comprise à l'aide des figures 1 et 2, ci-après qui représentent respectivement : Figure 1 : Sous-clonage de fragments internes du plasmide pLAB500. Dans cette figure, on utilise les abréviations suivantes : Rep+ ou - : fragment réplicatif (+) ou non (-) dans MG1363. Rel+ ou - : relaxation (+) ou non (-) dans MG1363. Mob+ ou - : (+) ou faible (-) efficacité de transfert du plasmide de MG1363 à LM2301. Par ailleurs, les chiffres au-dessus des séquences représentent la position en base sur le plasmide pLAB500. Figure 2 : Cinétique de transfert du plasmide pLAB500. Exemple 1 : séquence du fragment de 5333 pb. La technique de la PCR (polymerase chain reaction), décrite par exemple dans l'ouvrage de Maniatis, déjà cité, permet d'amplifier un fragment d'ADN compris entre 2 oligonucléotides convenablement choisis. Cet ADN amplifié peut être aisément ligaturé sur lui-même si des sites de restriction sont apportés par les oligonucléotides. En effet, les séquences de ces oligonucléotides peuvent comporter, à leur extrémité 5', une partie hétérologue de l'ADN à amplifier, constituée par exemple de 10 à 12 paires de bases, dont six constituent un site de restriction. Les oligonucléotides suivants ont été utilisés pour la construction d'un gène de résistance à l'érythromycine bordé de part et d'autre d'un site de restriction EcoRI : oligonucléotide 1 : TACATACGCGTCTCATATATACTTTAGATTG (SEQ ID N : 3) oligonucléotide 2 : TACATACGCGTGACTTAGAAGCAAACTTAAG (SEQ ID N : 4) oligonucléotide 3 : TTAAATGATCAGAGCTCCACCGCGGTGGCGG (SEQ ID N : 5) oligonucléotide 4 : TATTTTGATCAGAACAAAAGCTGGGTACCGG (SEQ ID N : 6) oligonucléotide 5 : ATTTATGATCATTTCCAGTCGGGAAACCTGT (SEQ ID N : 7) oligonucléotide 6 : AATTTTGATCAAGTATACCTAATAATTTATC (SEQ ID N : 8) oligonucléotide 7 : TATGTGAATTCGACTTAGAAGCAAACTTAAG (SEQ ID N : 9) oligonucléotide 8 : TATGTGAATTCAGTATACCTAATAATTTATC (SEQ ID N : 10) Les oligonucléotides 5 et 1 ont permis d'amplifier par PCR, à partir du plasmide pRC1 (LE BOURGEOIS P. et al., Gene 1992 ; 111 : 109-114) un fragment de 1,1 kb contenant l'origine de réplication. Les oligonucléotides 2 et 6 ont permis d'amplifier par PCR, à partir du plasmide pRC1, un fragment de 1 kb contenant le gène de résistance à l'érythromycine. Ces deux fragments ont été digérés par BclI et MluI, ligaturés, puis ont servis à transformer E. coli TG1 (GIBSON T. J., Studies on the Epstein-Barr genome, Ph. D thesis, Cambridge University, Cambridge, UK, 1984) pour donner le plasmide pRC1 int. Les oligonucléotides 3 et 4 ont permis d'amplifier par PCR, à partir du plasmide pRC1, un fragment de 0,3 kb contenant plusieurs sites uniques de restriction. Ce fragment a été digéré par BclI, puis ligaturé au plasmide pRC1 int lui-même digéré par BclI, Ce nouveau plasmide obtenu, contenant le gène de résistance à l'érythromycine, une origine de réplication fonctionnelle chez E. coli mais pas chez L. lactis et plusieurs sites uniques de restriction a été nommé pRC1 N. Les oligonucléotides 7 et 8 ont été utilisés pour amplifier par PCR, à partir du plasmide pRC1 N, un fragment de 939 pb contenant le gène de résistance à l'érythromycine. Ce fragment a ensuite été digéré par EcoRI puis ligaturé à l'ensemble des plasmides de la souche L lactis FL877 préalablement extraits et digérés par l'enzyme de restriction EcoRI La souche MG1363 a été transformé par ce mélange de ligation. L'ensemble des clones résistants à l'érythromycine ainsi obtenus a été utilisé comme souche donneuse dans une expérience de conjugaison (PREVOTS F. et al , FEMS Microbiol Lett 1994 ; 117 7-14) avec la souche réceptrice LM2301 (WALSH P. M et al , J Bacteriol. 1981 ; 146 937-944), résistante à la streptomycine et sensible à l'érythromycine Les transconjugants sont sélectionnés pour leur résistance à ces deux antibiotiques Les plasmides ayant été transférés par conjugaison dans cette souche LM2301 ont été extraits et ont servi à retransformer la souche MG1363 Le plasmide pLAB500 de 6,3 kb a ainsi été isolé, capable de se répliquer aussi bien dans les souches LM2301 et MG1363, et capable d'être transféré de la souche MG1363 à la souche LM2301 avec une haute efficacité Après digestion à l'enzyme de restriction EcoRI, ce plasmide donne 2 fragments de 1 kb et 5,3 kb Le premier fragment contient le gène de résistance à l'érythromycine Le dernier fragment de 5333 pb a été entièrement séquence par la méthode de Sanger et al. (PNAS - USA 1977,14 5463). L'analyse de la séquence a montré que le fragment de 5333 pb possède 5 phases de lecture ouverte complètes de plus de 150 pb (Fig 1). Exemple 2 diminution de la taille du plasmide pLAB500 La technique PCR a été appliquée en vue de déterminer quels sont les cadres ouverts de lecture impliqués dans la conjugaison, et ceux impliqués dans la réplication du plasmide. Pour cela, 9 oligonucléotides comprenant chacun un site de restriction EcoRI ou Hindiont été synthétisés La séquence de ces oligonucléotides est la suivante oligonucléotide 9 : TATAAGAATTCCGCTCGTGTCGTCGCACC (SEQ ID N . 11) oligonucléotide 10 TATAAGAATTCCATAAATCTACTCTATGC (SEQ ID N : 12) oligonucléotide 11 : TATAAGAATTCGTAGATGAGATTTTAAAGC (SEQ ID N : 13) oligonucléotide 12 : TATTAGAATTCTATTTAGGGGTATGTAAC (SEQ ID N : 14) oligonucléotide 13 : TATTAGAATTCCGTGATTTCTTTAGTGCTGTC (SEQ ID N : 15) oligonucléotide 14 : TATATAAGCTTAGTATACCTAATAATTTATC (SEQ ID N : 16) oligonucléotide 15 : TATATAAGCTTCACTTCGCAAAATTCGCG (SEQ ID N : 17) oligonucléotide 16 : TATATAAGCTTGAGGGTCGAGCTTGAGCG (SEQ ID N : 18) oligonucléotide 17 : TATATAAGCTTCACTCTTTATATGCTAATAC (SEQ ID N : 19) Les oligonucléotides 14 et 15 ont permis d'amplifier un fragment d'ADN de 2846 pb comportant le gène de résistance à l'érythromycine et l'ORF E sous la forme d'un fragment HindIII-HindIII, grâce aux sites de restriction apportés par les oligonucléotides, permettant une ligaturation de ce fragment sur lui-même. De la même manière, les oligonucléotides 14 et 16 ont permis d'amplifier un fragment d'ADN de 4808 pb comportant le gène de l'érythromycine et les ORF B, C, D et E. Enfin, les oligonucléotides 14 et 17 ont permis d'amplifier d'amplifier un fragment d'ADN de 5169 pb comportant le gène de l'érythromycine et les ORF B, C, D et E. Ces fragments d'ADN ont été amplifiés par PCR à partir d'une préparation de plasmide pLAB500 avec l'enzyme ELONGASE (BRL). Les produits de PCR ont été purifiés par une extraction au phénolchloroforme, précipités à l'éthanol, digérés par l'enzyme de restriction Hindi Il, ligaturés sur eux-mêmes. Le clonage de ces fragments sur eux-mêmes a conduit aux plasmides pLAB501, pLAB502 et pLAB503. Ces plasmides ont été construits dans la souche MG1363. Leur aptitude à se répliquer dans cette souche indique que l'ORF E code pour une protéine impliquée dans la réplication du plasmide. D'ailleurs, cette protéine montre 21,7 % d'homologie sur 230 acides aminés avec la protéine RepE impliquée dans la réplication du facteur F de E. coli Ces plasmides ont ensuite été testé pour leur aptitude à être transférés par conjugaison dans la souche LM2301 Les plasmides pLAB502 et pLAB503 ont une efficacité de transfert comparable à pLDP1, le témoin négatif On peut donc dire que ces plasmides ne possèdent pas la totalité de l'ADN nécessaire à leur transfert par conjugaison. Par contre, pLAB501 a une efficacité de transfert par conjugaison comparable à pLAB500 : l'ensemble de l'ADN nécessaire au transfert par conjugaison de pLAB500 doit donc être présent dans pLAB501 Exemple 3 : sous-clonage de fragments de pLAB500 dans le plasmide pLDP1. Les oligonucléotides 9 et 12 ont permis d'amplifier par PCR un fragment comportant les ORF C et D sous la forme d'un fragment EcoRI-EcoRI de 2068 pb Les oligonucléotides 9 et 13 ont permis d'amplifier par PCR un fragment comportant l'ORF C sous la forme d'un fragment EcoRI-EcoRI de 1201 pb. Les oligonucléotides 11 et 13 ont permis d'amplifier par PCR un fragment comportant les ORF B et C sous la forme d'un fragment EcoRI-EcoRI de 2136 pb Les oligonucléotides 10 et 12 ont permis d'amplifier par PCR un fragment comportant les ORF B, C et D sous la forme d'un fragment EcoRlEcoRI de 2602 pb Les oligonucléotides 10 et 13 ont permis d'amplifier par PCR un fragment comportant les ORF B et C sous la forme d'un fragment EcoRI-EcoRI de 1735 pb Chacun de ces fragments, après digestion par l'enzyme EcoRI, a été cloné dans pLDP1, donnant respectivement les plasmides pLAB504, pLAB505, pLAB506, pLAB507 et pLAB508. Parmi ces plasmides, seul pLAB507 a été transféré avec une efficacité significative, meilleure que les autres plasmides, mais cependant moins bonne que pLAB500 On peut donc dire que les ORF B, C et D sont nécessaires au transfert par conjugaison. Exemple 4 'sous-clonage d'un fragment de pLAB500 dans pLAB510 Les oligonucléotides suivants ont été utilisés dans ce sous-clonage : oligonucléotide 18 . AGGTTTCCCGACTGGAAATG (SEQ ID N : 20) oligonucléotide 19 TACGTGAATTCAGTTTTAAATCAATCTAAAG (SEQ ID N 21) oligonucléotide 20 TACGTGGATCCATCGGCATAATCGTTAAAAC (SEQ ID N @22) oligonucléotide 21 TACGTGAATTCAGAAGAACCCTTAACTAAAC (SEQ ID N : 23) Le plasmide pLDP1 est transféré par conjugaison avec une efficacité faible mais non nulle de MG1363 à LM2301 Afin d'éliminer l'apport de ce plasmide dans le transfert, le fragment de PCR obtenu avec les oligonucléotides 10 et 12 a été cloné dans un autre plasmide Le gène de résistance à l'érythromycine a d'abord été amplifié par PCR à partir du plasmide pRC1 N et des oligonucléotides 18 et 19, puis digéré par les enzymes de restriction BamHl et EcoRI Un fragment réplicatif du plasmide pPF107-3 (numéro d'accession GenBankY12675) a été amplifié grâce aux oligonucléotides 20 et 21 à partir de l'ADN total de la souche I-942 (déposée à la C N.C.M le 12 avril 1990), puis digéré par les enzymes de restriction BamHl et EcoRI Ces deux fragments de PCR ont été ligaturés et ont servi à transformer MG1363 Le nouveau plasmide obtenu, appelé pLAB510, a été digéré par EcoRI, puis ligaturé avec le fragment obtenu avec les oligonucléotides 10 et 12, obtenu par amplification PCR à partir du plasmide pLAB500, et digéré par EcoRI Cette ligature a servis à transformer MG1363 Ce nouveau plasmide, pLAB511, a été testé pour son aptitude à être transféré de MG1363 à LM2301 (tableau 1). On peut constater que ce nouveau plasmide pLAB511est bien transférable entre ces deux souches par conjugaison Tableau 1 Efficacité de transfert par conjugaison Plasmide ORF Efficacité Efficacité relative pLAB500 A,B,C,D,E 8,3 x 10-4 100 pLAB501 B, C, D, E 7,1 x 10-4 85 pLAB502 B,C,D,E 1,1 x 10-7 0,01 pLAB503 E 5 x 10-9 0,0006 pLAB504 C, D 1 x 10-7 0,01 pLAB505 C, D 5,7 x 10-8 0,007 pLAB506 B,C 5,7 x 10-8 0,007 pLAB507 B,C,D 4,5 x 10-5 5,4 pLAB508 B,C 4,2 x 10-7 0,05 pLDP1 / 9,2 x 10-8 0,01 pLAB510 / 5 x 10-9 0,0006 pLAB511 B,C,D 1,3 x 10-3 157 Efficacité = rapport du nombre de transconjugants sur le nombre de réceptrices. Efficacité relative = rapport de l'efficacité de conjugaison pour un plasmide donné sur l'efficacité de conjugaison pour pLAB500 x 100 ORF = phases de lecture ouverte entières contenues dans le plasmide. Exemple 5 'mise en évidence de la relaxation conféré par différents plasmides La relaxation (formation de formes circulaires ouvertes de plasmides à partir de plasmides à forme superenroulée) est impliquée dans le transfert de certains plasmides (Plasmid-protein relaxation complexes in Staphylococcus aureus , R. Novick , J Bacteriol 1976 ; 127 117-1187). Par les comparaisons avec les banques de données informatiques (GenBank) la protéine déduite de l'ORF C montre 35,2 % d'homologie avec Rlx, une relaxase de Staphylncoccus aureus On peut donc supposer que cette protéine déduite de l'ORF C est également une relaxase Les plasmides pLAB500 à pLAB508, pLAB510, pLAB511et pLDP1 ont donc été extraits et déposés sur gel d'agarose Après migration et parmi tous ces plasmides extraits de MG1363, seuls pLAB503, pLAB510 et pLDP1 ne présentent pas de forme circulaire ouverte l'ORF C est donc bien impliquée dans la relaxation de plasmides Exemple 6 : cinétique de transfert de pLAB500 Des conjugaisons entre MG1363 contenant pLAB500 et LM2301 ont été effectuées à différents temps afin d'évaluer à partir de quand avait lieu le transfert On constate (voir tableau 2 ci-après et figure 2) qu'après 1 heure, la conjugaison a déjà débuté et qu'un pic d'efficacité de transfert était atteint vers 4 heures Des conjugaisons de 10 minutes en 10 minutes entre 0 et une heure ont également montré qu'aucune conjugaison n'avait lieu avant une heure. Tableau 2 : de transfert de pLAB500. Temps de conjugaison (heures) Efficacité de conjugaison 0 1,1 x 10-8 1 6,6 x 10-5 2 9,8 x 10-5 3 1, 7 x 10-4 4 3,4 x 10-4 5 2,7 x 10-4 6 2,2 x 10-4 7 6,7 x 10-5 8 4,2 x 10-5 9 3,0 x 10-5 29 7,9 x 10-5 Efficacité de conjugaison = rapport du nombre de transconjugants sur le nombre de réceptrices. Exemple 7 conjugaison avec d'autres espèces : exemple de Streptococcus salivarius ssp thermophilus Trois souches de Streptococcus salivarius ssp thermophilus ont été utilisées comme réceptrices avec la souche MG1363 (pLAB500) comme donneuse dans une expérience de conjugaison pendant 24 heures à 30 C La sélection a été faite sur milieu Elli-4 + BCP + lactose + Erythromycine 5 g/ml à 30 C (PREVOTS F et al., FEMS Microbiol Lett. 1994 , 117 : 7-14) On constate que le plasmide pLAB500 a bien été transféré dans les trois souches de Streptococcus salivarius ssp thermophilus. On obtient pour les souches Streptococcus salivarius ssp thermophilus Therm 1, Therm2 et Therm3 une efficacité de transfert de, respectivement, 7,7 x 10-4, 2,4 x 10-4 et 3,3 x 10-4, ce qui est comparable à l'efficacité de transfert de pLAB500 entre MG1363 et LM2301 Les transconjugants ont été contrôlé par champ pulsé, par extraction de plasmides et par hybridation ADN/ADN : le profil d'ADN génomique correspond à celui des trois souches de Streptococcus salivarius ssp thermophilus, le plasmide pLAB500 est bien présent dans ces souches, avec la même taille et le même profil de restriction, et il donne un signal d'hybridation avec une sonde réalisé avec le fragment de PCR obtenu avec les oligonucléotides 10 et 12 LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATIONS GENERALES: (i) DEPOSANT: (A) NOM: SKW BIOSYSTEMS (B) RUE: 4,Place des Ailes (C) VILLE : Billancourt (E) PAYS : (F) CODE POSTAL : Cedex (G) TELEPHONE: 01 47 12 25 25 (H) TELECOPIE: 01 47 12 26 56 (ii) TITRE DE L' INVENTION : Séquences d'ADN comprenant un mécanisme de transfert d'ADN par mobilisation, plasmides contenant ces séquences et bactéries contenant ces plasmides (iii) NOMBRE DE SEQUENCES : (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT : disk (B) ORDINATEUR : PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION : (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.30 (OEB) (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : (génomique) (iii) HYPOTHETIQUE : NON (vi) ORIGINE: (B) SOUCHE : (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 1 : GAATTCAAAA ATATAATGCT TATTTTAGTA TTAGTAACCA TCTCTATAAT TTTAAATATA 60 TTAATTAACC GATTTATTAT TTTTCATCAC TTAGGGATAA TGAATAATCA AATTAATATT 120 GATAGTATAT TAAGTTCTTT ATCATGTTTA GGAAAAATTT TTGGTATTGC CTTATTAGCC 180 CCCATACTCG AAGAAAGTAT TTTCAGAGCG TCTATTTACC AAATCTTCAT TAATGATAAA 240 GTTTCTTTTC TTATCTCTAG CTTACTATTT GCATTTTTAC ATAGGGGTTA TAGTTGGGTT 300 TTCTTCACGT ATCTGCCAGT AAGTTT~TGT ATGACATTTA TCTATCATCG CAGAAAAATA 360 TTGACAGATT CCATTCTATT TCATTCGTTA TTTAATTTAT TAGTATTGGG TTTGAATTTT 420 TTAATATGAA ATAAATTTTA GAATAGTACT TACTTTTTGG ATAAATAGTA AAATTATAGA 480 AACGATTCAT TATTGGTTCT CAGATGTCTA TAGAGTTGGA CACTTTCAGT GTTTAGATAA 540 AAATTAGGAC TAACAAGTAA CTACTGAAAT ATTAACCAAT TATAGTTTAT AAAAAAACGA 600 AGGATAAATA TACATGCTAG ACATTTTAAA TAAAGCAAGA ATACATAAAA AATGGTTCCT 660 ATTTTCATAT TCAATTATCT CTTTTTGTAT TACAATTATT TATATTGTTT TTAATCACAC 720 ATTTTTTAAAGTTAATTGGG CAAAATATAA TAGCGATGAC AGCTATAAAA ATAAAGTAGA 780 TGAGATTTTA AAGCATGGAG TTTTCTGGAT TAATGGAAAT TTAACATCTA TTAGTTCGCC 840 ATTATTAATT TGCCTTTTCT TGCTTGGTGC ATTCTTTTCA TTAACTATTT TCTTCTTAAC 900 TTGGAGAAAT TTATCGACTA GAACATGGAC CCCAATTATA TCCTTTCTTG GATTTCTGAT 960 TCCATTTATT CATAGTGATG GAAATTTCAT AAATTTATTG ATTTTATCTT TTATTCTTAT 1020 ACTATTTGGG GCTATTTCCT CTGTTCCTAG TCTTAGATAT TTTTAAATAT TACAGCCCAA 1080 AATGAATACT TAAAAATATC ATTCACTCTT TATATGCTAA TACCCTTAAG AAGTCTCAAA 1140 TACGAACGAA AAATATTCTA ATAGGGTCAT CTATCACATA AATCTACTCT ATGCTAAAAA 1200 CAAAAATCTT ATTTAATAAT TATATTCTCA TTTCTATCTG TAGTGTTTAT TAATATTTTT 1260 GAAAGATAAA GATAGAAAGA ATTAATCATT AAACTATCAG AAATTACAAA AATGGCTAGC 1320 ATACTGCTTA GCCATTTTTA TTTTAATTCT GCGAACCGAG GGGGTTAAGG GTGGAGCTTT 1380 GCTCCCCCTT ACAAGCGCCA CAATAGCCAC GAAGTGGCTA GCTTGTGGGT TGCTTGCCAA 1440 GACTTTATCT TTATTCTAGC TTTTGAGGGT CGAGCTTGAG CGTCGGACAC GAAAAGTGCT 1500 AGAATAAAGA TATGGACGGA ACGTCCATGG AAAGGCGGGG GTTATGAGCG AACACTTAAA 1560 TATGGCTAGC ATTAAAAAGA AACAACCAAA TCGAAAAGAA CGAAAACAAA TAAGTTTCAG 1620 AGTGAGCGAA CCGGAATATT TAAACCTTGA GCGCTCAGCG AAAGTCTTAA ATATTTCGGT 1680 GCCGGCTTTT GTCAAAAAGA AGGCACAAGG CGCTCGTGTC GTCGCACCTA AAATTAATCC 1740 AGACGATTCA AAAGAAATGG CTCGCCAGTT GGCAGCACTT GGCAATAACG TGAATCAACT 1800 CGCTAAAAGG GTCAATCAGA TTGAATTTGC GGATAAGGAC ACGCAAGAGC GCCTATCAGC 1860 CGATTTAAGG CGCACCTTAC ACGGTCTGGG GGAAATATGG CGACAACTCA CATAAAACGC 1920 TCAAATGGCG CTTCTAGACT CGTCAACTAC GCTGAAAAAA GAGCGGTTCA AAAAGACGGC 1980 TATAATTTAG ACATTGAGTA TGCCAAATCT GAACTCAAAC AAGTTCGAGA AATTTACGGA 2040 AACAAAGGGG CAACGCAAGC CTACGCTTCA AGAGTGGCAT TCTCTCCGAA AGAATTTGAC 2100 CCTAAAAATG TAAAAGACCA ACTAAAGGCA CTAGAAATCG CTAAAGAAAT CTATTCAACC 2160 GCCTATCCCA ACCAACAAAT CGCAATGTAT GTTCACAACG ACACCGATTC CCTCCACGTT 2220 CACGCCGTGA TTGGCGCCAT TAACCTACTA ACAGGTAAAA AAATGCACGG CAATTGGCAA 2280 GAATACCGTG AAAGGCTCGT TAAAATAACG GATAAAGTCG TGGAGAAACA TGGCTTAACC 2340 GTAACCGTTC CTCATCCGCG ACCTGAAAAA AGAACCATGG CAGAACTAAA AATGAAAGCC 2400 CGCGGACAAG TCACCTGGAA AGACAAAATC AGACAAGCCG TCGATACAAC CATGCGAGAA 2460 GCTCATATTA GCGATTTTAA GAGCTTTAAA GAGAAACTTG GTGAACTAGC CGTCAATGTC 2520 ATTGAACGTG GCAGAGACCT CACATATACT CTCACAGGCA CTGATTATAA ATCACGGGGC 2580 GCAAAACTCG GAGAGGATTA CAAAAAGGAG ACCATTTTTT ATGAGCTGGA CAGAAGAAAC 2640 CAATTACAGT ACGGAACAAG TCGACAACGA CAAGGTCGCG CTTGGCTTGA AGGACGTGGA 2700 GAACGCCTTG AACAAGAACA ACGCGCTCGT CAAAACCTTG CAAAAAGAGC AGAAGACCTA 2760 CAAAGAAGAA CTCTCGAAAG CACTGAACAA TCAATTCAAC CAAGCCATCA ACGACCTCAA 2820 AAATCAAAAG AAAGAGGACT GGGAGGGCCT AGCCTCTAAT TTCGTTAATC GCCTCAATGA 2880 CAGCACTAAA GAAATCACGA ATAGCCAGCT TGAAACGGCA CAAGAGGAGA TAGACAAGAA 2940 CTTTGCACAA AAAGAACAAC GCTTAAATAA CCTTGTTTTT AACATTGAGA GCGCCGAACA 3000 AGCCTTAAAT TTTCTAAATA ACAGAATCAA TCACATCAAA TCAACCGAAA GATTGCAGAA 3060 ACAAAAGCAG TTCTTTCAAG AAATCGTCTT TATTTTGGGC GCAATCATGG CAAGCCTCGG 3120 AACATTACTC TTGGTCTTTG CCTTTTGTTC TGCCCTTTAT GGCTTTGGGT GGCATTCCAT 3180 TTGGAACTGG AAACAAATTA CTCCAGTCTA TGATGCTCCA ACCTTTCAAA AAGGATTATT 3240 TATCGTCATT AAAGCCATTT TAAGTCTTCT ATTCTTCATT TTTGGGGTAC TCGTTATGTT 3300 TTTCCCCTTG GCGATTTACC ACAAATTCCT AAATAGAATC AAAAATAGTT ACAGAGGTTT 3360 TGGGGGATGG CTCAATAAAG TATTCATCAG AAAGTAAGAC AGTTTTTCTG TCTTTTTTTT 3420 ATTGATCACT TCGCAAAATT CGCGAGCACA AAAATTAAAG ATAATGCAAA TTAAAAATTT 3480 CGTGTTGTGA GCCTTGGCGA ACTTTTCCTT TTGGCAACCT CGGAGAGTGG GGGAATTTTT 3540 GCGAAAGCAA AAAGGGGGCA AAGCCCCTTA AAATGCTTTT GGGAAAAATC TATGATTTTT 3600 GTCCTTTTTA AACCTCTTTT TTCAGAAGGG GGGAAATTTA AAAAATGAGG CTGAAAAATC 3660 CGAGGGTCTC TTTTATATTT CTTTTATAAA TCTTTTAAAC CTCTTTTAGG GGGCTGGGAA 3720 ACGTTGATAT CACTAGCGTG AAGCGTTGGT TACATACCCC TAAATAGGGT ACTACATACC 3780 CCTAAATAGG GTACTACATA CCCCTAAATA GGGTACTACA TACCCCTAAA TAGGGCGAGA 3840 AAGTTTATAA CCCCTTTTTA GGGTACTTCA TTTTTTTATA ACCCTTATTT AGGGTACTTC 3900 ATTTTTTTAT AACCCTTATT TAGGGTGACA AAAACCCCCG TTATAAAGGT GTTTTGCTTT 3960 TATAACCCCT TTTTAGGGTG CCTCTATAAC CCTTATTTAG GGTAGATATT TTATATAAAA 4020 ATTGCTATAA TTTTTATAAC CCTAAAGGGA TAAAGAAAGG AAGTATAATG GTTCATGAAA 4080 TAGTACAATA TCACAACGAT TTTAACACTG TTCCACTTAG AGGATTTAAT GAACGAGAAC 4140 GTAGAATTGT AATGGCATTA CTTCATCAAG TAAAAAATAA AGATGTCGAA GTGGTTCAAT 4200 TAGACTTTGA TACTTTGCGT GGATTATCTG GTTGGAATGA TACTTTAGCT AAATCTGAAA 4260 ATTCCAATGC TAAATTTAAC CGGTATCTTG AAAACTTGTC TGATAAAATT ATGACATTAC 4320 GAGGAACTCT AAGAAGTGAA GATGGTTTGC AAGTAGTTAA ATTTAGTCTC TTTCCAACAT 4380 TTATTATTGA TGGGAAAAAT ACTATGACCC TAAAAGTTCA AATTAACCCT ACTTTTAAAT 4440 ATCTTACTAA TATCTTTGAT ATGTTCACAG CTTTTGAATT AGATGATTAT AATCGTATGA 4500 ACACTAGCTA TGGGCAAGAA CTTTATAGAT TATTAAAACA GTATCGAACA TCTGGTTTTT 4560 ATCGTGTGAA GATAGAGGAC TTGCGACATC TATTATCAGT TCCTGAAAGC TATACCAATG 4620 CAAAAATGGA TCAAAAAGTA TTTTCAAAAA CTACTGTAAC TGACCTTACC AATGCTTTTC 4680 CGAATTTTAA AATCAAACAA GAACGAGGCA CTGGTCGAGG TCGACCAATA ATTGGTTACA 4740 CCTTCACTTT CGATAAAGAA GCCCCAAATA AGTATGAGCT AGACCGCAAA AAGCAAGAAC 4800 AAATTGCCCA ATTTTGGAAA TCAAATGACC CTGAGCCAAT GCCTAATGCA GTTGCTCAAA 4860 CGGAATATCA AAATCCTGAA TTACGAAAAG AAAAAGAAGA GCTCGAAAAA CATAACGCTA 4920 GTTTTGGAGA CTTATTAAAG GGCTGGTTCA AAAAATAGAT AAATATGAAA TTTAAAAAGA 4980 AAAATTATAC TCCTCAAGTA GATGAAAAAG ACTGTGGTTG TGCGGCATTA TCAATGATTT 5040 TAAAAACTTA CGAAACAGAA AAGTCACTTG CTTCATTTTT ATTGAATCAG AGGATAAAAA 5100 TGCATAAAGT ATTTGAAAAA ATTATTACAA TTTTTTTTGC CTTTTTTTTA TTTTTCATTT 5160 CTCAAATCCC AATATACTAC GTAAATTATA AAAATAAAGA AAATAATTTA TATGGAATAT 5220 CAAATAAAAT ATCATTACCT TTTATATTTA TTGCTTTATT TGTTATTATA ATAGCAGTTG 5280 CTCTAGGTAA AAAAAGAGGA TTTTACCATC ATTCGAAGAA AACATTAGAA TTC 5333 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : (génomique) (iii) HYPOTHETIQUE : NON (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 2 : CATAAATCTA CTCTATGCTA AAAACAAAAA TCTTATTTAA TAATTATATT CTCATTTCTA 60 TCTGTAGTGT TTATTAATAT TTTTGAAAGA TAAAGATAGA AAGAATTAAT CATTAAACTA 120 TCAGAAATTA CAAAAATGGC TAGCATACTG CTTAGCCATT TTTATTTTAA TTCTGCGAAC 180 CGAGGGGGTT AAGGGTGGAG CTTTGCTCCC CCTTACAAGC GCCACAATAG CCACGAAGTG 240 GCTAGCTTGT GGGTTGCTTG CCAAGACTTT ATCTTTATTC TAGCTTTTGA GGGTCGAGCT 300 TGAGCGTCGG ACACGAAAAG TGCTAGAATA AAGATATGGA CGGAACGTCC ATGGAAAGGC 360 GGGGGTTATG AGCGAACACT TAAATATGGC TAGCATTAAA AAGAAACAAC CAAATCGAAA 420 AGAACGAAAA CAAATAAGTT TCAGAGTGAG CGAACCGGAA TATTTAAACC TTGAGCGCTC 480 AGCGAAAGTC TTAAATATTT CGGTGCCGGC TTTTGTCAAA AAGAAGGCAC AAGGCGCTCG 540 TGTCGTCGCA CCTAAAATTA ATCCAGACGA TTCAAAAGAA ATGGCTCGCC AGTTGGCAGC 600 ACTTGGCAAT AACGTGAATC AACTCGCTAA AAGGGTCAAT CAGATTGAAT TTGCGGATAA 660 GGACACGCAA GAGCGCCTAT CAGCCGATTT AAGGCGCACC TTACACGGTC TGGGGGAAAT 720 ATGGCGACAA CTCACATAAA ACGCTCAAAT GGCGCTTCTA GACTCGTCAA CTACGCTGAA 780 AAAAGAGCGG TTCAAAAAGA CGGCTATAAT TTAGACATTG AGTATGCCAA ATCTGAACTC 840 AAACAAGTTC GAGAAATTTA CGGAAACAAA GGGGCAACGC AAGCCTACGC TTCAAGAGTG 900 GCATTCTCTC CGAAAGAATT TGACCCTAAA AATGTAAAAG ACCAACTAAA GGCACTAGAA 960 ATCGCTAAAG AAATCTATTC AACCGCCTAT CCCAACCAAC AAATCGCAAT GTATGTTCAC 1020 AACGACACCG ATTCCCTCCA CGTTCACGCC GTGATTGGCG CCATTAACCT ACTAACAGGT 1080 AAAAAAATGC ACGGCAATTG GCAAGAATAC CGTGAAAGGC TCGTTAAAAT AACGGATAAA 1140 GTCGTGGAGA AACATGGCTT AACCGTAACC GTTCCTCATC CGCGACCTGA AAAAAGAACC 1200 ATGGCAGAAC TAAAAATGAA AGCCCGCGGA CAAGTCACCT GGAAAGACAA AATCAGACAA 1260 GCCGTCGATA CAACCATGCG AGAAGCTCAT ATTAGCGATT TTAAGAGCTT TAAAGAGAAA 1320 CTTGGTGAAC TAGCCGTCAA TGTCATTGAA CGTGGCAGAG ACCTCACATA TACTCTCACA 1380 GGCACTGATT ATAAATCACG GGGCGCAAAA CTCGGAGAGG ATTACAAAAA GGAGACCATT 1440 TTTTATGAGC TGGACAGAAG AAACCAATTA CAGTACGGAA CAAGTCGACA ACGACAAGGT 1500 CGCGCTTGGC TTGAAGGACG TGGAGAACGC CTTGAACAAG AACAACGCGC TCGTCAAAAC 1560 CTTGCAAAAA GAGCAGAAGA CCTACAAAGA AGAACTCTCG AAAGCACTGA ACAATCAATT 1620 CAACCAAGCC ATCAACGACC TCAAAAATCA AAAGAAAGAG GACTGGGAGG GCCTAGCCTC 1680 TAATTTCGTT AATCGCCTCA ATGACAGCAC TAAAGAAATC ACGAATAGCC AGCTTGAAAC 1740 GGCACAAGAG GAGATAGACA AGAACTTTGC ACAAAAAGAA CAACGCTTAA ATAACCTTGT 1800 TTTTAACATT GAGAGCGCCG AACAAGCCTT AAATTTTCTA AATAACAGAA TCAATCACAT 1860 CAAATCAACC GAAAGATTGC AGAAACAAAA GCAGTTCTTT CAAGAAATCG TCTTTATTTT 1920 GGGCGCAATC ATGGCAAGCC TCGGAACATT ACTCTTGGTC TTTGCCTTTT GTTCTGCCCT 1980 TTATGGCTTT GGGTGGCATT CCATTTGGAA CTGGAAACAA ATTACTCCAG TCTATGATGC 2040 TCCAACCTTT CAAAAAGGAT TATTTATCGT CATTAAAGCC ATTTTAAGTC TTCTATTCTT 2100 CATTTTTGGG GTACTCGTTA TGTTTTTCCC CTTGGCGATT TACCACAAAT TCCTAAATAG 2160 AATCAAAAAT AGTTACAGAG GTTTTGGGGG ATGGCTCAAT AAAGTATTCA TCAGAAAGTA 2220 AGACAGTTTT TCTGTCTTTT TTTTATTGAT CACTTCGCAA AATTCGCGAG CACAAAAATT 2280 AAAGATAATG CAAATTAAAA ATTTCGTGTT GTGAGCCTTG GCGAACTTTT CCTTTTGGCA 2340 ACCTCGGAGA GTGGGGGAAT TTTTGCGAAA GCAAAAAGGG GGCAAAGCCC CTTAAAATGC 2400 TTTTGGGAAA AATCTATGAT TTTTGTCCTT TTTAAACCTC TTTTTTCAGA AGGGGGGAAA 2460 TTTAAAAAAT GAGGCTGAAA AATCCGAGGG TCTCTTTTAT ATTTCTTTTA TAAATCTTTT 2520 AAACCTCTTT TAGGGGGCTG GGAAACGTTG ATATCACTAG CGTGAAGCGT TGGTTACATA 2580 CCCCTAAATA 2590 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : 31 paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION: /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 3 : TACATACGCG TCTCATATAT ACTTTAGATT G 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 4 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE : (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : SEQ ID NO: 4 : TACATACGCG TGACTTAGAA GCAAACTTAA G 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 5 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 5 : TTAAATGATC AGAGCTCCAC CGCGGTGGCG G 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 6 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : 31 paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 6 : TATTTTGATC AGAACAAAAG CTGGGTACCG G 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 7 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 7 : ATTTATGATC ATTTCCAGTC GGGAAACCTG T 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 8 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 8 : AATTTTGATC AAGTATACCT AATAATTTAT C 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 9 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE : (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION: /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 9 : TATGTGAATT CGACTTAGAA GCAAACTTAA G 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 10 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE : (A) LONGUEUR : 31 paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : SEQ ID NO: 10 : TATGTGAATT CAGTATACCT AATAATTTAT C 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 11 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : /desc= "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 11 : TATAAGAATT CCGCTCGTGT CGTCGCACC 29 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 12 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE : (A) LONGUEUR : 29 paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : simple(D) CONFIGURATION : linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 12 : TATAAGAATT CCATAAATCT ACTCTATGC 29 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 13 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE: Autre acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 13 : TATAAGAATT CGTAGATGAG ATTTTAAAGC 30 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 14 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE : (A) LONGUEUR : 29 paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 14 : TATTAGAATT CTATTTAGGG GTATGTAAC 29 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 15 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : 32 paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 15 : TATTAGAATT CCGTGATTTC TTTAGTGCTG TC 32 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 16 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 16 : TATATAAGCT TAGTATACCT AATAATTTAT C 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 17 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION: /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : SEQ ID NO: 17 : TATATAAGCT TCACTTCGCA AAATTCGCG 29 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 18 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 18 : TATATAAGCT TGAGGGTCGA GCTTGAGCG 29 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 19 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : 31 paires de bases (B) TYPE : nucléotide(C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : SEQ ID NO: 19 : TATATAAGCT TCACTCTTTA TATGCTAATA C 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 20 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION: /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 20 : AGGTTTCCCG ACTGGAAATG 20 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 21 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : 31 paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : /desc= "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 21 : TACGTGAATT CAGTTTTAAA TCAATCTAAA G 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 22 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : /desc = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 22 : TACGTGGATC CATCGGCATA ATCGTTAAAA C 31 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 23 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : paires de bases (B) TYPE : (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : linéaire(ii) TYPE DE MOLECULE : acide nucléique (A) DESCRIPTION : = "oligonucléotide" (iii) HYPOTHETIQUE : OUI (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 23 : TACGTGAATT CAGAAGAACC CTTAACTAAA C 31 REVENDICATIONS 1 Séquence d'acide nucléique susceptible d'être transférée par conjugaison, qui comprend la séquence SEQ ID N : 2, son brin complémentaire, ou les séquences dérivées de la séquence SEQ ID N : 2 ou de son brin complémentaire en raison de la dégénérescence du code génétique. 2 Séquence d'acide nucléique selon la revendication 1, qui est choisie parmi - a) la séquence nucléotidique de 5333 pb (SEQ ID N : 1) ou son brin complémentaire ; b) toute séquence hybridant avec la séquence a) dans des conditions strictes ; ou c) les séquences dérivées des séquences a) et b) en raison de la dégénérescence du code génétique. 3. Séquence d'acide nucléique selon la revendication 1, qui est choisie parmi - a) la séquence nucléotidique de 2590 pb (SEQ ID N 2) ou son brin complémentaire ; b) toute séquence hybridant avec la séquence a) dans des conditions strictes ; ou c) les séquences dérivées des séquences a) et b) en raison de la dégénérescence du code génétique. 4. Plasmide comprenant une séquence selon l'une des revendications 1 à 3. 5. Plasmide selon la revendication 4, qui est choisi parmi le plasmide pLDP1 ou le plasmide pLAB510. 6 Bactérie qui contient une séquence selon l'une des revendications 1 à 3 ou un plasmide selon la revendication 4 ou 5 7 Bactérie selon la revendication 6, qui est une bactérie lactique 8. Bactérie lactique selon la revendication 7, qui appartient à l'espèce Lactococcus lactis. 9 Utilisation d'une bactérie selon l'une des revendications 6 à 8 pour transmettre par conjugaison du matériel génétique à une souche d'intérêt industriel 10 Procédé pour transmettre du matériel génétique à une souche d'intérêt industriel, qui consiste à transférer par conjugaison le matériel génétique d'une bactérie selon l'une des revendications 6 à 8 vers ladite souche d'intérêt industriel. 11. Souche d'intérêt industriel ayant intégré du matériel génétique selon le procédé de la revendication 10 12 Souche d'intérêt industriel selon la revendication 11, qui est choisi parmi les souches L lactis ssp lactis, L lactis ssp cremoris ou Streptococcus salivarius ssp thermophilus