Brevet FR2786103A1 — publié le 20000526

L'invention a pour objet l'utilisation du trioxyde d'arsenic de formule As203 pour la préparation d'un médicament destiné à traiter certaines hémopathies malignes. L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique, sous la forme d'une solution injectable, notamment destinée à traiter certaines hémopathies malignes, En dépit des progrès enregistrés au cours de ces dernières décennies, le traitement des affections néoplasiques du tissu hématopoïétique ne permet pour l'instant d'obtenir la guérison que d'une petite fraction des patients atteints. La probabilité de survie sans maladie à 5 ans est variable selon le type cytologique de l'hémopathie, mais reste bien souvent inférieure à 50% chez l'adulte. Le traitement des patients atteints d'hémopathies malignes réfractaires, en rechute ou en reprise évolutive, après un traitement de première ou de seconde ligne, est encore moins souvent couronné de succès, malgré les tentatives de traitements intensifs, tels que l'autogreffe ou l'allogreffe de cellules souches hématopoïétiques. Les rechutes ou les reprises évolutives après greffe autologue ou allogénique posent des problèmes thérapeutiques encore plus compliqués. Dans de telles conditions, l'investigation de nouvelles voies thérapeutiques est nécessaire. Au cours de ces dernières années, les progrès réalisés en biologie cellulaire, et notamment t'étude des mécanismes de différenciation et d'apoptose des cellules tumorales et de leurs contreparties normales, ont permis d'ouvrir de nouveaux champs de recherche thérapeutique. Un exemple désormais célèbre, du fait de ses remarquables résultats cliniques, a été la démonstration de l'efficacité de l'acide tout-trans rétinoïque (ATRA) dans un sous-type de leucémie aiguë (LA), la leucémie aiguë promyélocytaire (LAP). La supériorité d'un traitement associant ATRA et chimiothérapie conventionnelle à la chimiothérapie conventionnelle seule a pu tre confirmée par plusieurs équipes différentes. Les composés contenant l'arsenic sous forme inorganique ont été utilisés pour le traitement des cancers dans les années 1900. Par exemple, i'arsenic de potassium (solution de Fowler) fut utilisé pour contrôler le nombre de leucocytes dans les leucémies myéloïdes chroniques (Forkner et al, JAMA 97 : 305, 1931). Un autre composé contenant de l'arsenic sous forme inorganique, le trioxyde d'arsenic a été étudié pour son activité sur des patients atteints de leucémie aiguë promyélocytaire (LAP) : Sun et al, Chin. J. Intergrat. Chin. Wester Med. 12 : 170, 1992 ; G. Q. Chen et al., Blood, vol, 89, n 9 (May 1), 1997 : pp. 3345-3353 et Z. X. Shen et al., Blood, vol. 89, n 9, (May 1), 1997 : pp. 3354-3360). La composition utilisée n'a pas été divulguée. Le trioxyde d'arsenic est capable d'induire in vitro et in vivo une différenciation des blastes leucémiques de la LAP. Cette différenciation morphologique et phénotypique n'est toutefois pas terminale in vivo, probablement du fait de l'induction rapide d'une apoptose comme en témoigne les altérations morphologiques, étude de l'ADN en cytométrie de flux et par migration électrophorétique ainsi qu'une down-régulation de bcl- 2. La combinaison de ces deux effets est responsable de la disparition progressive des cellules leucémiques in vitro et in vivo. Ces auteurs ont notamment montré que l'As203 pouvait effectivement inhiber l'action de l'inhibiteur d'apoptose bcl-2 dans les cellules NB4 au niveau à la fois du RNA messager et des protéines. Néanmoins, ces mmes auteurs soulignent que la voie de régulation de l'expression du bcl-2 par As203 peut tre soit directe ou soit s'effectuer par l'intermédiaire d'autres molécules telles que la protéine PML-RARa. Ils ont également émis l'hypothèse que l'apoptose induite par As203 puisse tre provoquée par l'action combinée d'autres molécules telles que l'interleukine-1 j3-converting enzyme-like cysteine protein enzymes qui sont considérées comme essentielles à certaines apoptoses de cellules. Le mécanisme d'action de As203 sur les cellules malignes NB4 n'est donc pas expliqué. L'action de ce composé sur d'autres cellules malignes est en conséquence imprévisible. 11 est par ailleurs, hautement souhaitable de réaliser des médicaments pour des leucémies particulières choisies parmi la leucémie myéloïde chronique (LMC) ; la leucémie lymphoïde T de l'adulte (ATL) ; les proliférations lymphoïdes B (PLB). 1) La leucémie myéloïde chronique (LMC) est un syndrome myéloprolifératif caractérisé par la présence au sein de toutes les cellules leucémiques d'une anomalie cytogénétique acquise, la translocation t (9 ; 22) (q34 ; q11) ou chromosome Philadelphie (Ph1). Cette translocation se traduit au plan moléculaire par la présence d'un gène de fusion, BCR-ABL, codant pour une protéine hybride à activité tyrosine kinase anormalement élevée. BCR-ABL agit à la fois sur les voies de signalisation cellulaire (Ras, Myc, p53) et probablement sur l'inhibition de l'apoptose. Ces modifications s'accompagnent d'une amplification massive du compartiment myéloïde dont la différenciation terminale est conservée. Cette amplification clonale s'accompagne cependant de la persistance de cellules souches normales. L'âge médian des patients se situe entre 45 et 50 ans au diagnostic. Le pronostic sombre de la maladie est lié à l'évolution inéluctable vers la phase de transformation aiguë dans un délai de 3 à 5 ans et ce malgré les traitements par chimiothérapie conventionnelle par l'hydréa ou le busulfan. Pendant les dix dernières années, le taux de survie à 5 ans est passé de 20% à prés de 60% grâce aux bons résultats des greffes de moelle osseuse et du traitement par l'interféron alpha. L'allogreffe de moelle osseuse à partir d'un donneur de la fratrie, lorsqu'elle est pratiquée dans la première année de la première phase chronique, est associée à une survie actuarielle à 5 ans de 70%. 11 s'agit de la seule procédure thérapeutique à mme d'éradiquer le clone Ph1+. Toutefois, plus de 70% des patients ne peuvent tre greffés, mme lorsque l'on comptabilise les greffes phéno-identiques. L'interféron a augmente la survie des patients atteints de LMC lorsqu'une réponse cytogénétique est obtenue bien que le rôle de l'importance de la réponse cytogénétique n'ait pas été confirmée par certaines équipes. Dans le but d'augmenter la proportion des patients en réponse cytogénétique et ainsi la survie, d'autres approches ont été proposées. Les résultats du protocole LMC91 ont montré que l'association de l'interféron avec l'aracytine donne des résultats significativement supérieurs à ceux de l'interféron seul en matière de rémission complète à six mois (67 contre 54%), de rémission cytogénétique majeure à 12 mois (39 contre 22%) et de survie à 3 ans (88 contre 76%). L'autogreffe de moelle osseuse ou de cellules souches circulantes est aussi proposée dans le but de réduire la masse tumorale et d'obtenir une plus forte proportion de conversion cytogénétique sous interféron. Les études rétrospectives des groupes coopératifs montrent une survie à six ans supérieure à 50% pour t'élude nord-américaine et de 75% à 5 ans pour le registre européen. Ces résultats sont à valider par les essais comparatifs en cours. Au stade de transformation blastique, il n'y a pas de traitement efficace en dehors de l'allogreffe de moelle osseuse lorsqu'elle peut tre réalisée chez des patients jeunes après une phase de réduction tumorale, ce qui reste une situation rare. La survie médiane des patients traités par chimiothérapie est de 3 mois, la survie des patients répondeurs (essentiellement les transformations lymphoblastiques) étant de l'ordre de 8 mois. Au total, au stade de phase chronique seulement 40% des patients vont voir leur survie notablement augmentée par la greffe de moelle osseuse ou l'interféron alpha. II est donc hautement souhaitable de proposer d'autres solutions thérapeutiques chez les 60% des patients restants et tout particulièrement pour les phases d'accélération et de transformation blastique de la maladie. 2) La leucémie T de l'adulte ou ATL est une prolifération lymphoïde associée au rétrovirus HTLV-1. Le virus HTLV-1 est intégré de façon clonale dans les lymphocytes atypiques CD4+ caractéristiques de l'ATL. Ces lymphocytes atypiques, encore appelés"flower cells" (cellules au noyau hyperconvoluté et au cytoplasme basophile) portent des marqueurs d'activation tels que le CD25 ou chaîne alpha du récepteur à l'interleukine2 (IL-2), ou l'antigène DR. il existe plusieurs formes cliniques d'ATL : la forme aiguë, la forme subaiguë ou smouldering, la forme chronique et l'ATL lymphome. Retrouvée essentiellement dans les zones d'endémie d'HTLV-I, I'ATL présente dans sa forme aiguë un pronostic péjoratif avec une résistance ou une rechute précoce après des polychimiothérapies intensives ou une greffe de moelle. L'existence d'une hypercalcémie, d'un taux de LDH élevé, d'un indice de performance (PS) supérieur à 2, ou de localisations tumorales multiples notamment méningées aggravent le pronostic. Les polychimiotherapies ne sont pas efficaces dans l'ATL en raison d'une chimiorésistance intrinsèque aux cellules et de l'immunosuppression induite par le virus. Des traitements alternatifs à la chimiothérapie ont donc été essayés dans l'ATL : chimiothérapies alternatives (CPT-11, DCF), anticorps monoclonaux anti-récepteurs à l'IL-2, immunomodulateurs (interférons), traitements anti-viraux (AZT). Toutes ces approches n'ont pas permis d'augmenter les taux de réponses par rapport à la chimiothérapie conventionnelle, et ne permettent pas l'obtention de survies de longues durées. Deux études ont présenté des résultats particulièrement intéressants en utilisant l'association d'AZT (Zidovudine) et d'interféron a. La première étude américaine par Gill et al, (Novel antiviral therapy for adult T-cell leukemia secondary to HTLV1 infection. Blood 1992,80 (suppl. 1) : 74a) concerne 19 patients atteints d'ATL aiguë soit non traitées, soit en échec ou en rechute post-polychimiothérapie. Cette étude comporte l'association d'AZT aux doses conventionnelles et d'interféron a à la dose de 6 millions d'unités/m2/jour. Les résultats montrent un taux de rémission complète de l'ordre de 26% (5 patients) avec 6 rémissions partielles de bonne qualité (34%), pour un suivi médian supérieur à deux ans. La deuxième étude est celle réalisée en France sur 5 patients atteints d'ATL aiguë (Hermine et al, Treatment of HTLV-1 associated adult T-cell leukemia-lymphoma with a combination of zidovudine and alpha-interferon. N. Engl. J. Med. 1995, 332 : 1749). Les cinq patients ont répondu avec deux réponses complètes, deux réponses partielles supérieures S 75% et une réponse partielle a 50%. Malgré cette amélioration du pronostic par rapport à tous les traitements proposés dans l'ATL, les survies prolongées sont rares. II est donc nécessaire d'améliorer ces résultats par d'autres thérapeutiques. 3) L'introduction, dans les années 60, des agents alkylants, en particulier du melphalan (Alkéran (D), a permis une amélioration de l'espérance de vie spontanément très courte des malades ayant un myélome multiple (MM) symptomatique. Les chimiothérapies usuelles, qu'il s'agisse de la classique association melphalan prednisone ou de polychimiothérapies, ne permettent, cependant, d'obtenir que très rarement une rémission complète et jamais une guérison. Avec ces traitements, )'espérance de vie des malades reste de l'ordre de 3 ans. La démonstration, dans les années 80, de l'existence d'un effet-dose, a conduit à l'utilisation de fortes doses de chimiothérapie, éventuellement associées à une irradiation corporelle totale et généralement suivies d'une greffe. Cette approche paraît représenter un progrès important et est actuellement de plus en plus envisagée chez les malades les plus jeunes, chez lesquels elle permet d'espérer des survies médianes non plus de 3 ans mais de l'ordre de 5 à 6 ans. Le suivi des malades monte toutefois la survenue régulière de rechutes et laisse difficilement espérer la guérison, mme d'un petit nombre d'entre eux. Les rechutes survenant après traitement intensif et autogreffe pourraient tre provoquées ou favorisées par la réinjection de cellules tumorales contaminant le greffon. L'utilisation de techniques de sélection des précurseurs hématologiques exprimant l'antigène CD34 permet de réduire la contamination tumorale des greffons autologues et l'intért de cette approche pour diminuer l'incidence des rechutes et améliorer la survie des malades est en cours d'étude. L'origine des rechutes est cependant, très vraisemblablement, le plus souvent, une maladie résiduelle résistante au traitement intensif. Celle-ci reste fréquente, y compris après la répétition de séquences de fortes chimiothérapies incluant une irradiation corporelle totale, qui ne permet d'obtenir une rémission complète apparente que dans 40 à 50% des cas. Le contrôle des maladies résiduelles post-greffe doit faire envisager le développement de stratégies complémentaires utilisant, par exemple, des approches d'immunothérapie, dont certaines (induction d'une immunité anti-idiotypique) sont en cours d'étude dans des modèles animaux et, également, chez l'homme, dans le contexte particulier de l'allogreffe. En dehors des traitements intensifs, peu de progrès thérapeutiques ont été effectués au cours des dernières années. Les approches envisagées en relation avec les acquis réalisés dans la compréhension de la physiopathologie de la maladie myélomateuse, comme, par exemple, I'administration d'anticorps anti-interleukine 6, n'ont pas permis, pour l'instant, d'avancées thérapeutiques déterminantes. D'autres ont été empiriques comme l'utilisation d'un interféron, qui a paru un moment intéressant associée à la chimiothérapie initiale ou, surtout, à la phase de plateau, sans finalement s'avérer clairement bénéfique en terme de survie. Les études de phase 11 des cytostatiques récemment apparus (analogues des nucléosides, dérivés du taxol) ou de modulateurs des résistances aux drogues classiques se sont, pour l'instant, révélées décevantes. En fait, la seule acquisition thérapeutique récente importante est plus symptomatique que réellement anti-tumoral ; il sagit des bisphosphonates qui permettent d'envisager une meilleure prévention des complications osseuses de la maladie. En situation de rechute après une chimiothérapie de première ligne ou un traitement intensif, les malades reçoivent habituellement, d'emblée ou après reprise d'un traitement alkylant, une chimiothérapie de type VAD ou VAMP, associant des perfusions continues de vincristine et d'adriamycine à une corticothérapie fortement dosée utilisant soit la dexaméthasone (D) soit la méthyl-prednisolone (MP). Les maladies résistantes ou en rechute après VAD ou VAMP ne laissent, actuellement, que très peu de possibilités thérapeutiques et l'espérance de vie des malades est alors très limitée. La mise en évidence de nouveaux traitements efficaces reste donc un objectif très important chez les malades dans cette situation. En dehors du myélome, aucun des traitements actuellement utilisables des autres proliférations lymphoïde B, en particulier la leucémie lymphoïde chronique et les lymphomes B non-Hodgkiniens n'est curateur. L'invention concerne l'utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les affections néoplasiques chez un mammifère, lesdites affections étant choisies dans le groupe constitué par : -la leucémie myéloïde chronique, -la leucémie T de l'adulte liée au virus HTLV-1 (ATL), -les proliférations lymphoïdes B. Parmi les proliférations lymphoïdes B, on cite le myélome multiple, la leucémie lymphoïde chronique et d'autres proliférations lymphoïdes B en particulier les lymphomes B non-Hodgkiniens. Les essais effectués sur les patients atteints de myélome ont montré l'effet apoptotique du trioxyde d'arsenic sur les cellules des lignées myélomateuses NCI, LP-1 et U266. Ce composé a le mme effet sur les plasmocytes tumoraux prélevés dans le sang périphérique ou la plèvre de patients ayant un myélome ou une leucémie à plasmocytes. On a noté de manière inattendue que le présent traitement n'induisait aucun effet secondaire notable tel qu'encéphalopathie, toxicité CNS. L'invention concerne également les méthodes de traitement chez un mammifère des affections néoplasiques choisies dans le groupe constitué par : -la leucémie myéloïde chronique, -la leucémie T de l'adulte, liée au virus HTLV-1 (ATL), -les proliférations lymphoïdes B caractérisées en ce qu'on administre une dose efficace de trioxyde d'arsenic. Le trioxyde d'arsenic est actif in vitro et chez le mammifère à des concentrations allant de 10-6 à 10 mol/litre ce qui correspond aux concentrations pharmacologiques attendues in vivo. L'invention concerne également l'utilisation du trioxyde d'arsenic sous la forme d'une solution injectable. Parmi les solutions injectables qui peuvent tre utilisées, on a trouvé qu'il était particulièrement avantageux d'utiliser une nouvelle solution injectable qui constitue un autre objet de la présente invention. L'invention a donc également pour objet une composition pharmaceutique sous la forme d'une. solution injectable, notamment destinée à des affections néoplasiques chez un mammifère. Parmi ces maladies, on cite en particulier celles indiquées dans la présente description. II s'agit de préférence de solutions de trioxyde d'arsenic comprises entre 0, 1 et 2 g/l (0, 01 et 0,2 %), avantageusement 1 g/l (0, 1 %) en présence de cations sodium et d'anions chlorure apportés par addition d'hydroxyde de sodium et d'acide chlorhydrique de telle manière que le pH soit compris entre 5 et 7. Une solution injectable selon l'invention est fabriquée de la façon suivante : On remplit sous barbotage d'azote en ampoules de verre de type I les compositions suivantes : -Trioxyde d'arsenic 200 g -Solution d'hydroxyde de sodium 1 N 30 1 -Solution d'acide chlorhydrique 1 N qs pH = 5, 0 à 7,0 -Eau pour préparation injectable qs 200 litres On stérilise par chaleur humide à 121 C pendant 20 minutes. On obtient une solution limpide et incolore. -volume de remplissage 100 à 105 % -pH 5, 0à7, 0 -dosage 95, 0 à 105, 0 % de la théorie (exprimé en As III) -stérilité conforme -Endotoxines ! 1 Ul/ml Selon une variante préférée le trioxyde d'arsenic est administré par voie intraveineuse (IV) quotidiennement à raison d'une dose maximale d'environ 0,2 mg/kg et avantageusement supérieure à 0,1 mg/kg, de préférence environ 0,15 mg/kg dilué dans un sérum glucosé. De préférence, le trioxyde d'arsenic est administré par voie intraveineuse quotidiennement à raison d'une injection par jour d'une durée appropriée, notamment 1 à 4 heures, avantageusement environ 3 heures. Les essais effectués in vitro sur des cellules en lignée ou des cellules de malades atteints de leucémie myéloïde chronique, d'ATL, de myélome multiple ou d'autres PLB ont montré que le trioxyde d'arsenic permettait d'obtenir une inhibition de la croissance et la mort des cellules essentiellement par apoptose. Pour les cellules d'ATL, on a trouvé qu'une synergie pouvait tre observée avec l'interféron a. L'invention concerne donc, selon une variante, l'utilisation de l'association comprenant le trioxyde d'arsenic et l'interféron a sous forme séparée, simultanément ou de façon étalée dans le temps pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter la leucémie T de l'adulte liée au virus HTLV-1 (ATL). L'interféron a est notamment administré à raison de 9 MU/jour au maximum de manière séparée, simultanément ou de façon étalée dans le temps avec le trioxyde d'arsenic. La composition est de préférence administrée aux patients atteints d'ATL aiguë (leucémie ou lymphome) ; lymphome centro-faciaux HTLV-1 (intégration clonale du virus dans les cellules tumorales) ; lymphomes anaplasiques Ki-1 positifs associés à 1'HTLV-1 (intégration clonale du virus dans les cellules tumorales). Chez ces malades, il est avantageux d'associer au traitement une thérapie prophylactique, une fois tous les 14 jours pendant deux mois, notamment de methotrexate (15 mg par exemple) Aracytine (40 mg par exemple), Depomedral (40 mg par exemple). La composition est de préférence administrée aux patients atteints d'un myélome multiple sécrétant en échec après une ou plusieurs cures de chimiothérapie. Les exemples suivants illustrent : 1. Nouvelle utilisation du trioxyde d'arsenic pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les leucémies mvéloïdes chroniques Des études préliminaires ont permis de préciser le spectre d'activité des dérivés arsenicaux dans la lignée BCR-ABL positive K562 et sur les cellules CD34 positives de patients atteints de LMC. En présence d'As203 à 10-6 M on observe une inhibition de la croissance cellulaire à partir de J3 de l'ordre de 50%. Cet effet n'est pas retrouvé dans la lignée HL60 qui n'est pas porteuse du chromosome Ph1. Toutefois, le trioxyde d'arsenic se montre aussi efficace sur la lignée NB4 (porteuse de la translocation t (15 ; 17)) et sur des lignées pré-B. Les cellules CD34+ de patients atteints de LMC en phase chronique prolifèrent durant les premiers jours de culture en milieu liquide. En présence de trioxyde d'arsenic, cette croissance est fortement inhibée et de la mme façon, une synergie a pu tre observée avec l'interféron a. De plus, t'arsenic s'avère toxique pour ces cellules en six jours de culture. Toutefois, les cellules CD34+ contrôles sont aussi sensibles à l'action toxique de l'arsenic en culture en milieu liquide. L'effet des dérivés arsenicaux a aussi été testé dans un test de colonies en milieu semi-solide (cultures en méthylcellulose). L'arsenic ne modifie pas le nombre des colonies granuleuses des cellules CD34+ témoins, il semble avoir un effet inhibiteur sur les colonies érythroïdes. Sur les cellules CD34+ de LMC, le trioxyde d'arsenic a un effet surprenant d'augmentation du nombre de colonies granuleuses, la lignée rouge n'est pas modifiée. II pourrait s'agir d'une induction de la différenciation des progéniteurs Ph1+. Cet effet couplé à l'effet cytotoxique pourrait tre intéressant pour obtenir l'épuisement du clone Ph1+ sous traitement par les dérivés arsenicaux. 2. Nouvelle utilisation du trioxyde d'arsenic pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les leucémies lymphoïdes T de l'adulte liées au rétrovirus HLTV-1 (ATL). L'action du trioxyde d'arsenic a été testée en premier lieu in vitro. Le trioxyde d'arsenic exerce des effets inhibiteurs modérés sur les lignées établies d'ATL. Par contre en synergie avec l'interféron a, qui a peu d'action par lui-mme, l'As203 induit une apoptose massive de ces mmes cellules à 10-6 M (50% à 80% de cellules apoptotiques). Cet effet n'est pas retrouvé sur des lignées T non infectées par le virus. Sur des cellules primaires d'ATL prélevées chez deux patients, les mmes effets sont observés, bien que dans ce cas l'As203 est capable d'exercer à lui seul un effet apoptotique à 10 M (50% de cellules apoptotiques à 72h), effet qui est amplifié par l'interféron a (80% de cellules apoptotiques à 72h). Les contrôles effectués avec des PBL de donneurs sains (n=2), retrouvent un effet inhibiteur de l'association arsenic et interféron sur la prolifération des cellules T induites par l'IL-2, mais une apoptose modeste, aux alentours de 20%. Cet effet in vitro est nettement supérieur à celui de la combinaison zidovudine plus interféron a, qui n'agit que sur les ! ignées primaires, en inhibant le cycle mais avec une faible induction d'apoptose. Ainsi en plus de la combinaison AZT plus interféron a qui bloque la division cellulaire et l'infection d'autres cellules T par HTLV-1, I'As203 en synergie avec l'interféron a pourrait induire une apoptose massive des cellules transformées par le virus. 3. Nouvelle utilisation du trioxyde d'arsenic pour la préparation d'un médicament destiné à traiter tes mvétomes muttiptes 3.1.-Essai in L'efficacité du trioxyde d'arsenic a été testée en premier lieu in vitro sur des plasmocytes tumoraux. Le trioxyde d'arsenic induit l'apoptose des cellules myélomateuses, comme le montre, en particulier, l'aspect des noyaux cellulaires en cytologie classique et après réalisation d'une technique de type TUNEL (application de TdT et d'oligonucléotides marqués). Le trioxyde d'arsenic inhibe la prolifération (incorporation de thymidine radiomarquée) et induit la mort (prise d'un colorant vital) des cellules des lignées myélomateuses NCI, LP-1 et U266. II a le mme effet sur des plasmocytes tumoraux prélevés dans le sang périphérique ou la plèvre de malades ayant un myélome ou une leucémie à plasmocytes. L'effet est précoce, dose-dépendant et observé à des concentrations pharmacologiques (à partir de 107 M). L'efficacité in vitro paraît se vérifier in vivo, comme le suggèrent les premiers résultats du traitement par trioxyde d'arsenic de proliférations plasmocytaires humaines transplantées chez des souris SCID. 3. 2.-Essai in vivo Des souris SCID ont été irradiées avant l'injection intra-péritonéale (IP) de 3 à 5108 cellules de plasmocytes tumoraux purifiés provenant du sang périphérique de malades ayant une leucémie à plasmocytes. La prise de greffe a été vérifiée par des mesures bi-mensuelles de la concentration dans le sérum de la souris d'immunoglobuline monoclonale humaine (HuMIg) au moyen du test ELISA. Un traitement par AS203 (10 ig 5 jours par semaine par voie IP) a été débuté quand une croissance soutenue des cellules tumorales a pu tre mise en évidence par une augmentation progressive des quantités de HuMIg à 3 dosages successifs. Sur 23 souris traitées avec les cellules d'un seul patient, 13 ont développé la tumeur humaine ; 5 ont été utilisées en tant que témoin et n'ont reçu aucune injection IP. 5 souris ont été traitées par AS203 pendant 30 à 40 jours. Toutes ont présenté une rémission mise en évidence par une diminution significative du niveau de HuMlg qui est devenue indétectable dans le sérum de deux animaux. L'arrt du traitement a été suivi d'une rechute qui est survenue un à sept mois plus tard, y compris chez les deux souris ayant présenté une rémission complète apparente. Des données similaires ont été obtenues dans une autre série d'expériences effectuées en utilisant les cellules d'un second patient. Par contre, la croissance des plasmocytes tumoraux d'un troisième malade a été simplement retardée mais avec développement de la tumeur sous traitement. Aucune rémission spontanée n'a été observée chez les souris témoins à l'exception d'une seule. La durée de survie globale médiane de toutes les souris traitées a été de 156 jours, versus 105 jours pour la population témoin. La quantité de récepteurs de i'interleukine-6 humaine (HuIL-6R) a été mesurée par ELISA dans le serum de souris, en tant que marqueurs supplémentaires de la prolifération plasmocytaire humaine. Dans le sérum, des souris traitées et des témoins, les concentrations de HuIL-6R et HuMlg présentaient des variations. L'examen immuno-histologique d'échantillons de tissu provenant d'une souris morte en rémission n'a pas permis de trouver de cellules plasmocytaires humaines tandis que de nombreuses cellules anormales étaient aisément (principalement dans le foie, la rate et le mésentère des souris témoins), II n'a pas été mis en évidence de lésions toxiques dans aucun des organes étudiés, particulièrement dans le foie. Les quantités d'arsenic dans le sérum et les tissus des souris traitées étaient dans les zones pharmacologiques attendues. Les études de l'action du trioxyde d'arsenic chez les souris SCID transplantées avec des cellules de myélome humain confirment in vivo les résultats in vitro de ce composé. Ces résultats montrent que des médicaments à base de trioxyde d'arsenic sont actifs dans le traitement des patients atteints de myélome. Ces résultats sont repris de Rousselot et al Arsenic trioxyde and melarsoprol induce apoptosis in plasma cell lines and in plasma cells from myeloma patients , soumis pour publication. REVENDICATIONS 1. Utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les affections néoplasiques chez un mammifère, les dites affections étant choisies dans le groupe constitué par : -la leucémie myéloïde chronique (LMC), -la leucémie T de l'adulte, liée au virus HTLV-1 (ATL), -les proliférations lymphoïdes (PLB). 2. Utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'affection néoplasique est choisie dans le groupe constitué par le myélome multiple, la leucémie lymphoïde chronique, les lymphomes B non-Hodgkiniens 3. Utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'il est administré quotidiennement, notamment à une dose comprise entre 0,1 mg/kg à 0,2 mg/kg. 4. Utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) selon la revendication 3, caractérisée en ce que le trioxyde d'ammonium est administré quotidiennement à raison d'environ 0,15 mg/kg. 5. Utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'il est sous la forme d'une solution injectable. 6. Utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) selon la revendication 7, caractérisée en ce que la solution injectable comprend 0, 1 à 2 g/i de trioxyde d'arsenic, notamment environ 1 gel. 7. Utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) selon la revendication 6, caractérisée en ce que la solution injectable comprend 0,1 à 2 g/l de trioxyde d'arsenic, des cations sodium, des anions chlorure et présente un pH compris entre 5 et 7. 8. Utilisation du trioxyde d'arsenic (As203) selon les revendications 1, 3 à 7, pour la préparation d'un médicament destiné à traiter la leucémie lymphoïde T de l'adulte liée au rétrovirus HTLV-1, caractérisée en ce que le trioxyde d'arsenic est associé à l'interféron a sous forme séparée, pour une administration simultanée ou étalée dans le temps. 9. Composition pharmaceutique, sous la forme d'une solution injectable, notamment destinée à traiter les affections néoplasiques chez un mammifère, choisies dans le groupe constitué par : -la leucémie myéloïde chronique (LMC), -la leucémie T de l'adulte, liée au virus HTLV-1 (ATL), -les proliférations lymphoïdes (PLB), caractérisée en ce qu'elle comprend 0,1 à 2 g/l de trioxyde d'arsenic, des cations sodium, des anions chlorure et en ce qu'elle présente un pH compris entre 5 et 7. 10. Composition pharmaceutique selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle comprend 1 gel environ de trioxyde d'arsenic.