Brevet FR2790641A1 — publié le 20000915

LIQUIDE DE CONSERVATION DE TISSU HUMAIN OU ANIMAL, NOTAMMENT DE VEINES. L'invention concerne un liquide de conservation de tissu humain ou animal. Elle se rapporte notamment, mais de façon limitative, à un liquide de conservation de veines, d'artères et vaisseaux. Dans la suite de la description, l'invention sera plus particulièrement illustrée en relation avec la conservation des veines saphènes situées dans le membre inférieur. De façon connue, ces veines sont au nombre de deux, à savoir: * la veine saphène externe, qui remonte le long de la face externe de la jambe pour aboutir dans la veine poplitée; + la veine saphène interne, qui remonte le long de la face interne de la jambe, puis de la cuisse, pour aboutir dans la veine fémorale. Ces veines en réagissant à l'augmentation d'une pression intramusculaire, peuvent se dilater formant ainsi des varices. Le traitement de ces varices peut consister en une opération chirurgicale dénommée saphénectomie, selon laquelle on résèque la totalité ou partie de la saphène.20 Dès lors, les veines saphènes prélevées lors de ces opérations peuvent être après sélection utilisées en tant qu'allogreffes. On s'intéresse plus particulièrement aux veines rectilignes, prélevées dans les varices dites tubulaires, lesquelles présentent une paroi relativement solide. En pratique, il est nécessaire après prélèvement de ladite veine et de son entourage tissulaire de repérer et d'isoler les segments de veines susceptibles de constituer les greffes, puis de supprimer les tissus graisseux périphériques et enfin,30 de ligaturer les branches latérales. Une fois ces opérations terminées, après contrôle d'étanchéité, puis mesure de la porosité de la veine retenue sous légère pression, les allogreffes sont ensuite présentées sur un mandrin de verre et disposées dans une solution de conservation. Les conditions de conservation doivent être telles que l'allogreffe, tout en étant dépourvue de toute viabilité cellulaire, garde ses propriétés caractéristiques, à 2 savoir: élasticité de la paroi, propriétés hémostatiques, pouvoir de recolonisation des cellules du receveur, etc.... Pour parvenir à cet objectif, on a proposé des traitements physicochimiques du greffon, notamment au moyen de glutaraldéhyde. Toutefois, le glutaraldéhyde est toxique et présente un risque de relargage et tanne les tissus en entraînant ainsi la perte de leurs propriétés mécaniques. On a également proposé de conserver les greffons veineux sous forme congelée à - 196 C en azote liquide. Toutefois, on a constaté que les greffes cryo- conservées faisaient l'objet de sténoses, notamment dans la partie proximale de l'allogreffe, en aval de l'anastomose supérieure. On souligne également que ce type de greffon induit une réaction immunologique et évolue vers la formation de sténoses proximales postanastomosiques.15 On a enfin proposé dans le document WO 97/22244 de conserver des organes ou des tissus dans une solution de conservation à base de calcium et de nitroglycérine à une température comprise entre 0,5 et 8 C. Toutefois, dans le cas de la conservation de veines, est également conservé l'endothélium, ce qui n'est pas20 toujours souhaité. En d'autres termes, le problème que se propose de résoudre l'invention est de fournir un liquide de conservation de tissu humain ou animal, dont la composition et les conditions d'utilisation permettent au tissu de conserver leur intégrité et leurs25 propriétés mécaniques. Pour ce faire, l'invention propose un liquide de conservation de tissu humain ou animal, notamment de veines, caractérisé en ce qu'il comprend dans une solution de chlorure de sodium:30 a au moins un antibiotique choisi dans le groupe comprenant la famille des polymyxines, la famille des aminoglycosides et la famille des lincosanides; * et au moins un anti-fongique choisi dans le groupe comprenant la famille des polyènes. En d'autres termes, l'invention réside dans la sélection d'un certain nombre de familles d'antibiotiques et anti-fongiques qui, lorsqu'ils sont mélangés, présentent un effet synergique permettant d'assurer la conservation des tissus après leur prélèvement.5 En pratique, ce liquide de conservation est utilisé à une température comprise entre 1 et 7 C, avantageusement 4 C. Selon une autre caractéristique de l'invention, l'antibiotique choisi dans la famille des polymyxines est la colistine. En pratique, la concentration de colistine est comprise entre 500 000 et 1 500 000 unités par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement i 000 000 d'unités par litre. Pour une concentration inférieure à 500 000 unités par litre, l'effet bactéricide n'est pas satisfaisant. Pour une concentration supérieure à 1 500 000 unités par litre, l'activité bactéricide se stabilise. Par ailleurs et avantageusement, l'antibiotique choisi dans la famille des aminoglycosides est la gentamycine. En pratique, la concentration de gentamycine est comprise entre 200 et 300 mg par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement 240 mg par litre. De même que précédemment, pour des concentrations inférieures à 200 ou supérieures à 300 mg par litre, l'effet bactéricide n'est pas obtenu ou maximum. De même, l'antibiotique choisi dans la famille des lincosanides est avantageusement la lincomycine. En pratique, la concentration de lincomycine est comprise entre 50 et 150 mg par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement 102 mg par litre. Enfin, comme déjà dit, le liquide de conservation comprend en outre un agent anti-fongique choisi dans la famille des polyènes, avantageusement l'amphotéricine B. En pratique, l'amphotéricine B est utilisée à raison de 10 à 90 mg par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement 50 mg par litre. Pour éviter la formation d'oedèmes tissulaires et cellulaires, le liquide de conservation de l'invention comprend en outre du polyéthylène glycol (PEG) permettant de garantir la pression oncotique. Avantageusement, le polyéthylène glycol utilisé est un polyéthylène glycol purifié de poids moléculaire moyen égal à 35 000. Dans la suite de la description et des revendications, par polyéthylène glycol purifié, on désigne une poudre de polyéthylène glycol exempte de toute molécule de poids moléculaire inférieur à 15 000. On a en effet constaté que les PEG de poids moléculaire inférieur à 8 000 provoquaient une intoxication similaire à celle de l'éthylène glycol, alors que les dérivés de haut poids moléculaire supérieur à 15 000 étaient atoxiques. En pratique, la concentration de polyéthylène glycol dans le liquide de conservation est comprise entre 0,1 et 0,3 mM par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement 0,25 mM. L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des exemples de réalisation suivants. Exemple 1 On prépare un liquide conservation dont la composition est reproduite dans le tableau ci-après. Nom Commercial Laboratoire Principe Actif Concentration par litre de CINa 0,9 % Colimycine Bellon RPR Colistine 1 000 000 U/L Gentalline Schering-plough (Gentamicine 250 mg/L Lincocine Upjohn Lincomycine 100 mg/L Amphotéricine B Sigma Amphotericine B 50 mg/L Comme déjà dit, les prélèvements de veines saphènes sont exclusivement réalisés par des chirurgiens en salles d'opération. En pratique, une malette de prélèvement est mise à la disposition du service préleveur, cette mallette renfermant 8 flacons stériles remplis de liquide de conservation de l'invention, des15 tubes pour prélèvements sanguins ainsi que des étiquettes prénumérotées pour l'identification. Les flacons stériles sont maintenus à une température de 4 C et la mallette contenant les allogreffes est retournée vers la banque au maximum 15 jours après son expédition. En pratique, les veines saphènes prélevées sont utilisées pour constituer des abords vasculaires pour l'hémodialyse ou encore pour la revascularisation du membre inférieur. Exemple 2 On a étudié l'activité du liquide de conservation de l'invention sur les souches suivantes: * Staphylococcus épidermidis 459924,54 IE/ml * Saccharomyces cerevisiae 760,89 IE/ml * Bordetela bronchiseptica 78557,71 IE/ml Les avantages de l'invention ressortent bien de la description ci-avant. On notera en particulier l'originalité de l'association d'antibiotiques et d'anti-fongiques à partir de familles spécifiques permettant ainsi d'assurer la conservation de tissus et notamment de veines, et ainsi maintenir leur intégrité et leurs propriétés mécaniques. REVENDICATIONS 1/ Liquide de conservation, notamment de veines, caractérisé en ce qu'il comprend dans une solution de chlorure de sodium: * au moins un antibiotique, choisi dans le groupe comprenant la famille des polymyxines, la famille des aminoglycosides et la famille des lincosanides; e et au moins un anti-fongique, choisi dans le groupe comprenant la famille des polyènes. 2/ Liquide de conservation selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'antibiotique choisi dans la famille des polymyxines est la colistine. 3/ Liquide de conservation selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'antiobiotique choisi dans la famille des aminoglycosides est la gentamycine. 4/ Liquide de conservation selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'antibiotique choisi dans la famille des lincosanides est la lincomycine. / Liquide de conservation selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'anti-fongique choisi dans la famille des polyènes est l'amphotéricine B.25 6/ Liquide de conservation selon la revendication 2, caractérisé en ce que la concentration en colistine est comprise entre 500 000 et 1 500 000 unités par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement 1 000 000 d'unités par litre.30 7/ Liquide de conservation selon la revendication 3, caractérisé en ce que la concentration de gentamycine est comprise entre 200 et 300 milligrammes (mg) par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement 240 mg par litre.35 8/ Liquide de conservation selon la revendication 4, caractérisé en ce que la concentration de lincomycine est comprise entre 50 et 150 milligrammes (mg) par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement 102 mg par litre. 9/ Liquide de conservation selon la revendication 5, caractérisé en ce que la concentration de amphotéricine B est comprise entre 10 et 90 milligrammes (mg) par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, avantageusement 50 mg par litre. O10/ Liquide de conservation selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend en outre du polyéthylène glycol. 11/ Liquide de conservation selon la revendication 10, caractérisé en ce que le polyéthylène glycol est purifié et présente un poids moléculaire moyen de 35 000. 12/ Liquide de conservation selon la revendication précédente, caractérisé en ce que la concentration en polyéthylène glycol est comprise entre 0,1 et 0,3 millimoles (mM) par litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %,20 avantageusement 0,25 mM. 13/ Utilisation du liquide de conservation selon l'une des revendications 1 à 12 à une température comprise entre 1 et 7 C, avantageusement 4 C.