Brevet FR2785989A1 — publié le 20000519

PROCEDE ET DISPOSITIF DE CONTROLE CELLULAIRE DIRECT La présente invention concerne le domaine du contrôle cellulaire direct dans les liquides biologiques, notamment pour le contrôle de la qualité du lait cru et l'évaluation du taux de leucocytes sanguins au lit du patient. On connaît dans l'état de la technique différents procédés pour le contrôle cellulaire, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang. On connaît en particulier la cytométrie de flux, consistant à marquer les cellules cibles avec un réactif fluorescent, et à détecter le passage des cellules marquées dans un tube capillaire. On connaît également la détection sur filtre, consistant à compter les cellules marquées sur un filtre à l'aide d'un microscope et d'un équipement d'imagerie. Il s'agit de procédés relativement complexes, dont la mise en oeuvre nécessite l'intervention d'un opérateur expérimenté, et dont le coût est relativement élevé. De plus, le délai de réponse n'est pas immédiat car la préparation de l'échantillon et notamment le marquage des cellules recherchées prend du temps. Pour ces raisons, le contrôle de la qualité du lait s'effectue en laboratoire spécialisé, à partir de prélèvements périodiques. Un tel contrôle périodique ne permet pas d'éviter la consommation de lait contaminé par des cellules somatiques lorsqu'une infection se produit entre deux analyses. Le but de l'invention est de remédier à ces inconvénient en proposant un procédé de contrôle facile et économique, permettant une vérification systématique et immédiate du niveau de cellules somatiques ou de leucocytes. A cet effet, l'invention concerne dans son acception la plus générale un procédé de contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang, caractérisé en ce que l'on aspire une fraction du liquide biologique à travers un filtre sélectif et en ce que l'on détermine le degré de colmatage dudit filtre sélectif. Selon une première variante, on prélève un échantillon de lait à contrôler, que l'on aspire secondairement ledit échantillon à travers un filtre sélectif et en ce que l'on évalue le degré de colmatage dudit filtre sélectif. Selon une deuxième variante, on dérive durant la traite une fraction du lait à contrôler, que l'on aspire ladite fraction à travers un filtre sélectif et en ce que l'on évalue ainsi le degré de colmatage dudit filtre sélectif. L'invention concerne également un dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang caractérisé en ce qu'il comporte un filtre sélectif, un moyen d'aspiration du lait à contrôler à travers ledit filtre sélectif, et un moyen pour l'estimation du degré de colmatage du filtre sélectif. Selon une première variante, le moyen d'aspiration est formé par pompe comportant un piston actionné par un ressort calibré, le filtre sélectif étant placé entre ladite pompe et l'embout d'aspiration, le moyen pour 1'estimation du degré de colmatage étant constitué par un indicateur de déplacement du piston. Avantageusement, le filtre est disposé dans une cartouche jetable apte à tre fixée sur le conduit d'aspiration. Selon une autre variante, le dispositif comporte une prise de prélèvement d'une fraction de lait sur un circuit principal, ladite prise de prélèvement étant reliée par un conduit à une pompe d'aspiration, ledit dispositif comportant un module de filtration comportant une pluralité de filtres supportés par une bande. Selon un mode de mise en oeuvre particulier, il comporte un capteur de pression pour la mesure du colmatage du filtre. Selon une troisième variante, le dispositif selon l'invention comporte un module de filtration propre à recevoir au moins un filtre sélectif, et un conduit pour le raccordement à une source de dépression, et une platine pour recevoir au moins un réceptacle d'un échantillon de lait. Selon un mode de réalisation particulier, le réceptacle d'un échantillon de lait est constitué par un récipient conique jetable. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit, concernant des exemples non limitatifs de réalisation, où : -la figure 1 représente une vue en coupe d'un premier exemple de réalisation d'un dispositif de contrôle selon l'invention ; -la figure 2 représente la courbe de réponse d'un tel dispositif ; -la figure 3 représente une vue schématique d'un deuxième exemple de réalisation d'une installation de contrôle selon l'invention ; -les figures 4 et 5 représentent une vue en perspective et en coupe agrandie d'un troisième exemple de réalisation d'un dispositif de contrôle selon l'invention. Le dispositif de contrôle représenté en figure 1 est un dispositif manuel comportant principalement une chambre tubulaire (1) muni d'un piston (2), un support de filtre (3) et un ressort calibré (4). La chambre tubulaire (1) et le piston (2) forment une seringue assurant l'aspiration du lait à travers un embout (5) de la cartouche de filtration (3). Cette cartouche de filtration (3) comporte un filtre sélectif (6), une membrane destinée dans son usage nominal à l'épuration du sang humain, par exemple une membrane commercialisée sous le nom commercial LEUKOSORB par la société PALL. Cette cartouche de filtration (3) est interchangeable et à usage unique. Elle vient se fixer sur l'embout d'aspiration (7) prolongeant le chambre d'aspiration (1). Le piston est actionné par un ressort calibré (4) exerçant une force de traction constante et prédéterminée. Un mécanisme comprenant une gâchette (8), un loquet de verrouillage (9) et un levier d'armement (10) permet de déclencher l'aspiration. Ce mécanisme est logé dans une poignée (11) facilitant la manipulation du dispositif. Le fonctionnement est le suivant : On arme le mécanisme à l'aide du levier d'armement (10), ce qui provoque l'allongement du ressort calibré (4). LE lait ne subit aucune préparation pour le contrôle, en particulier ne fait l'objet d'aucun marquage ni d'aucun traitement préalable. On plonge 1'embout (5) de la cartouche de filtration (3) dans le lait à contrôler. En appuyant sur la gachette, on libère le ressort calibré (4) qui exerce sur le piston (2) une traction de force constante. Lorsque le lait contient des cellules somatiques, celles-ci viennent colmater le filtre sélectif (6), qui vient alors obturer le conduit d'aspiration. Le piston reste alors bloqué dans une position intermédiaire, fonction de la concentration en cellules somatiques. La position d'arrt du piston donne une indication de la concentration de cellules somatiques. Le volume de lait filtré avant colmatage donne une indication relativement reproductible de la concentration des cellules somatiques. La figure 2 représente la courbe de réponse du dispositif. En abscisse est représenté le volume de lait filtré avant que le colmatage ne viennent obturer le filtre. En ordonnées est représentée la concentration de cellules somatiques. La concentration a été vérifiée par ailleurs par les méthodes d'analyses de l'état de la technique. La figure 3 représente une vue schématique d'une installation de contrôle automatique. L'installation comprend une dérivation (20) pour le prélèvement d'une fraction du lait circulant dans un conduit principal (21), par exemple le conduit provenant d'un équipement de traite automatique et de collecte de lait. Une vanne à trois voies (22) permet de faire circuler dans l'installation alternativement le lait prélevé ou un liquide de rinçage provenant d'un réservoir (23). Une pompe d'aspiration électrique (24) assure l'aspiration à travers un module de filtration (25). Un tube calibré (26) permet de mesurer le volume de lait aspiré avant colmatage du filtre. Ce tube calibré (26) comporte une vanne (27) pour le vidage après mesure. Un détecteur de niveau (30) déclenche un signal électrique lorsque le volume de lait filtré atteint une valeur prédéterminée. Ce signal peut déclencher une vanne pour le transfert du lait circulant dans le circuit principal (21) vers le réservoir de collecte, jusqu'à la traite de l'animal suivant, et la vidange du tube calibré (26) ainsi que le rinçage de l'installation. Dans le cas où le volume de lait filtré n'atteint pas la valeur prédéterminée dans un temps fixé, le lait circulant dans le conduit principal (21) est dirigé vers un réservoir de collecte de lait de moindre qualité cellulaire, par exemple pour la production de lait en poudre pour l'alimentation pour animaux. Le module de filtration (25) est constitué par un boîtier étanche (28) présentant une ouverture pour le passage d'une bande de filtration (29) constitué par un film de guidage perforé sur lequel sont positionnés des pastilles de filtration formées par des membranes filtrantes, ou un filtre continu en bande. Le colmatage peut tre vérifié également par un dispositif comportant une fuite contrôlée et un capteur de pression placé entre la source de vide et la fuite contrôlée. Une telle variante évite l'utilisation d'un tube calibré et de son système de vidange. Les figures 4 et 5 représentent des vues schématiques d'une autre variante de réalisation d'une installation de contrôle selon l'invention. Le dispositif comprend une platine de filtration (30) présentant à sa partie supérieure une pluralité de puits de filtration (31) débouchant dans une fente (32) dans laquelle peut tre introduite une membrane de filtration (33). Un cadre mobile de serrage (34) assure l'étanchéité du filtre. Un conduit (35) permet de créer une dépression sous la membrane de filtration (33). Les échantillons à vérifier sont introduits dans des cônes jetables (36) qui sont positionnés dans les puits (31). Une bille (37) est placé sur la surface de l'échantillon à contrôler, pour éviter la mise à l'air libre et la chute de pression qui en résulterait. Pour chaque cône, le niveau de la bille après le cycle de filtration donne une indication du degré de concentration en cellules somatiques. Eventuellement, l'échantillon de lait est légèrement chauffé, à une température de l'ordre de 25 à 30 , pour éviter le colmatage du filtre par les graisses contenues dans le lait. REVENDICATIONS 1-Procédé de contrôle cellulaire direct, notamment pour 1'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang caractérisé en ce que l'on aspire une fraction au moins de l'échantillon direct à travers un filtre sélectif et en ce que l'on détermine le degré de colmatage dudit filtre sélectif. 2-Procédé de contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on prélève un échantillon à contrôler, que l'on aspire ledit échantillon à travers un filtre sélectif et en ce que l'on évalue le degré de colmatage dudit filtre sélectif. 3-Procédé de contrôle cellulaire direct, notamment pour 1'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on dérive une fraction du lait à contrôler, que l'on aspire ladite fraction à travers un filtre sélectif et en ce que l'on évalue le degré de colmatage dudit filtre sélectif. 4-Procédé de contrôle cellulaire direct, notamment pour 1'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon l'une au moins des revendications précédentes caractérisé en ce que le degré de colmatage est déterminé par la mesure du volume de l'échantillon aspiré avant que le colmatage n'obture le filtre sélectif. 5-Dispositif pour le contrôle bactériologique, notamment pour 1'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang caractérisé en ce qu'il comporte un filtre sélectif, un moyen d'aspiration de l'échantillon à contrôler à travers ledit filtre sélectif, et un moyen pour l'estimation du degré de colmatage du filtre sélectif. 6-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon la revendication 5 caractérisé en ce que le moyen d'aspiration est formé par pompe comportant un piston actionné par un ressort calibré, le filtre sélectif étant placé entre ladite pompe et l'embout d'aspiration, le moyen pour l'estimation du degré de colmatage étant constitué par un indicateur de déplacement du piston. 7-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon la revendication 5 ou 6 caractérisé en ce que le filtre est disposé dans une cartouche jetable apte à tre fixée sur le conduit d'aspiration. 8-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon la revendication 5 caractérisé en ce qu'il comporte une prise de prélèvement d'une fraction du liquide à analyser sur un circuit principal, ladite prise de prélèvement étant reliée par un conduit à une pompe d'aspiration, ledit dispositif comportant un module de filtration comportant une pluralité de filtres supportés par une bande. 9-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon la revendication 5 caractérisé en ce qu'il comporte un module de filtration propre à recevoir au moins un filtre sélectif, et un conduit pour le raccordement à une source de dépression, et une platine pour recevoir au moins un réceptacle d'un échantillon de liquide à analyser. 10-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon la revendication 9 caractérisé en ce que le réceptacle d'un échantillon du liquide à analyser est constitué par un récipient conique jetable. 11-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon l'une au moins des revendications 5 à 10 caractérisé en ce qu'il comporte un moyen de mesure du volume du liquide à analyser filtré avant colmatage du filtre. 12-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon l'une au moins des revendications 5 à 10 caractérisé en ce qu'il comporte un capteur de pression pour la mesure du colmatage du filtre. 13-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour 1'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait selon l'une au moins des revendications 5 à 12 caractérisé en ce que le filtre sélectif est constitué par une membrane nominalement destinée à l'épuration du sang humain. 14-Dispositif pour le contrôle cellulaire direct, notamment pour l'estimation du nombre de cellules somatiques dans le lait ou du taux de leucocytes dans le sang selon l'une au moins des revendications 5 à 13 caractérisé en ce que le niveau cellulaire et déterminé par une analyse du filtre après coloration stchiométrique des ADN cellulaires.