Brevet FR2794746A1 — publié le 20001215

Nouveaux dérivés de l'échinocandine, leur procédé de préparation et leur application comme anti-fongiques. La présente invention concerne de nouveaux dérivés de l'échinocandine, leur procédé de préparation et leur application comme antifongiques. L'invention a pour objet, sous toutes les formes d'isomères possibles ainsi que leurs mélanges, les composés de formule (I) : dans lesquels ou bien RI représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle. R2 représente un radical cyclohexyle substitué par une amine, un radical CH2CH2NHCH3, un radical CH2CHCH3NH2, un radical un radical CHCH3CH2NH2, un radical-(CH2)aOH, a représentant un nombre entier compris entre 1 et 8, un radical (CH2)b -C # N b représentant un nombre entier compris entre 1 et 8, un radical CHCH3C6H5, un radical (CH2) -C(CH3)2NHCOCF3, un radical CHCH3(CH2)dOH, d représentant un nombre entier compris entre 1 et 8 ou bien RI et R2 forment avec l'azote qui les porte leur cycle à 3,4 ou 5 carbones éventuellement substitué par une amine R3 représente un atome d'hydrogène, un radical méthyle ou hydroxyle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle R représente une chaîne linéaire ou ramifiée ou cyclique renfermant jusqu'à 30 atomes de carbone, renfermant éventuellement, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs hétérocycles ou un radical acyle linaire, ramifié ou cyclique renfermant jusqu'à 30 atomes de carbone renfermant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes et/ou un ou plusieurs hétérocycles, T représente un atome d'hydrogène, un radical méthyle, un radical CH2CONH2, CH2C N, un radical (CH2) 2NH2 ou (CH2) 2Nalc+X-, X étant un atome d'halogène et alc un radical alkyle renfermant jusqu'à 8 atomes de carbonè, Y représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle ou un atome d'halogène ou un radical OS03H ou l'un des sels de ce radical, W représente un atome d'hydrogène ou un radical OH, Z représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, ainsi que les sels d'addition avec les acides des produits de formule (I) . Parmi les sels d'addition avec les acides, on peut citer ceux formés avec les acides minéraux, tels que les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique ou phosphorique ou avec les acides organiques comme l'acide formique, acétique, rifluoroacétique, propionique, benzoïque, maléique, fuma- rique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique, alcanesulfoniques, tels que les acides méthane ou éthane sulfoniques, arylsulfoniques tels que les acides benzène ou paratoluènesulfoniques. Parmi les composés préférés de l'invention, on peut citer tout particulièrement les composés de formule I dans lesquels T représente un atome d'hydrogène, ceux dans lesquels W représente un atome d'hydrogène, ceux dans lesquels Z représente un radical méthyle, ceux dans lesquels Y représente un atome d'hydrogène, ceux dans lesquels R3 représente un radical méthyle, ceux dans lesquels R4 représente un radical hydroxyle, et ceux dans lesquels R représente un radical L'invention a tout spécialement pour objet les composés de formule I dans lesquels R représente une chaîne ou une chaine Parmi les composés préférés de l'invention, on peut citer tout particulièrement les composés de formule I dans lesquels RI est un atome d'hydrogène, ceux dans lesquels R2 est un radical ceux dans lesquels R2 est un radical CH2CH(CH3)NH2, un radical ou un radical ou encore ceux dans lesquels R2 est un radical L'invention a tout spécialement pour objet les composés de formule, dont la préparation est donnée ci-après dans la partie expérimentale et notamment les produits des exemples 2 et 3. Les composés de formule (I) présentent d'intéressantes propriétés antifongiques ; ils sont notamment actifs sur Candida albicans et autres Candida comme Candida glabrata, krusei, tropicalis, pseudotropicalis, parapsilosis et Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Cryptococcus neoformans. Les composés de formule (I) peuvent être utilisés en tant que médicaments chez l'homme ou l'animal, pour lutter notamment contre les candidoses digestives, urinaires, vaginales ou cutanées, les cryptococcoses, par exemple les cryptococcoses neuroméningées, pulmonaires ou cutanées, les aspergilloses bronchopulmonaires et pulmonaires et les aspergilloses invasives de l'immunodéprimé. Les composés de l'invention peuvent être utilisés également dans la prévention des affections mycosiques chez les déprimés immunitaires congénitaux ou acquis. Les composés de l'invention ne sont pas limités à une utilisation pharmaceutique, ils peuvent être également utilisés comme fongicides dans d'autres domaines que pharmaceutiques. L'invention a donc pour objet à titre de composés antifongiques, les composés de formule (I) ainsi que leurs sels d'addition avec les acides. L'invention a également pour objet les composés de formule (I), à titre de médicaments. L'invention a tout particulièrement pour objet les compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables. Ces compositions peuvent être administrées par voie buccale, rectale, parentérale ou par voie locale en application topique sur la peau et les muqueuses, mais la voie préférée est la voie buccale. Elles peuvent être solides'ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine, comme par exemple, les comprimés simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les suppositoires, les préparations injectables, les pommades, les crèmes, les gels; elles sont préparées selon les méthodes usuelles. Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceuti ques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs. Ces compositions peuvent également se présenter sous forme d'une poudre destinée à être dissoute extemporanément dans un véhicule approprié, par exemple de l'eau stérile apyrogène. La dose administrée est variable selon l'affection traitée, le sujet en cause, la voie d'administration et le produit considéré. Elle peut être, par exemple, comprise entre 50 mg et 300 mg par jour par voie orale, chez l'adulte pour les produits des exemples 2 et 3. L'invention a également pour objet un procédé de préparation caractérisé en ce que l'on soumet un composé de formule (II) dans laquelle R, R3, R4, T, Y, W et Z conservent leur signification précédente, à l'action d'une amine ou d'un dérivé d'amine susceptible d'introduire #R1 le radical N# dans lequel RI et R2 #R2 conservent leur signification précédente et si désiré à l'action d'un agent de réduction et/ou d'un agent de fonctionnalisation de l'amine, et/ou d'un acide pour former le sel du produit obtenu, et/ou d'un agent de séparation des différents isomères obtenus, et obtient ainsi le composé de formule (I) recherché. Les composés de formule II peuvent être préparés selon un procédé caractérisé en ce que l'on soumet un composé de formule (III) dans laquelle les différents substituants conservent leur signification précédente à l'action d'un agent capable de remplacer NH2 par NHR, R conservant sa signification précédente pour obtenir le composé de formule (IV) que l'on soumet à l'action de l'iodure de triméthylsilyle pour obtenir le composé de formule (II) correspondant Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter Préparation 1 : "nucléus" de déoxymulundocandine On dissout 2 g de déoxymulundocandine dans 20ml de DMSO. On verse cette solution dans une suspension renfermant 120 g d'Actinoplanes utahensis FH2264 dans 870 ml d'un tampon KH2P04, K2HP04 (pH : 6. 8). On maintient le mélange réactionnel sous agitation pendant 70 heures à 30 C. On filtre. On lave le mycelium avec le tampon'de phosphate (pH : 6. 8). On réunit les liquides de lavage et le filtrat. On chromatographie le produit obtenu sur une résine DIAION HP 20.et obtient un produit que l'on utilise tel quel ci-après. EXEMPLE 1 Trifluoroacetate de 1-[4-[((2S)-2-amino-2-methylethyl)amino]- N2- [ [4' - (octyloxy) [1, l' -biphenyl] -4-yl] carbonyl] -L- ornithine] -4- [4- (4-hydroxyphenyl) -L-threonine] 5-L-serine- echinocandine B(isomère A et isomère B). Stade A : 1-[(4R,5R)-4,5-dihydroxy-N2-[[4'-(octyloxy)[1,1'- biphényl]-4-yl]carbonyl]-L-ornithine]-4-[4-(4-hydroxyphényl)- L-thréonine]-5-L-sérine échinocandine B 1- Préparation de l'ester On ajoute 632 mg de 2,3,4,5,6 pentafluorophénol et 695 mg de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide à 1 g d'acide 4'- octyloxy-[l,l'-biphényl]4-carboxylique dans 22 ml de tétrahydrofurane, agite 22 heures à température ambiante, filtre, élimine les solvants sous pression réduite, reprend le résidu dans l'éther, agite à 35 C environ, filtre évapore le solvant , sèche et récupère 1,46 g de produit attendu, utilisé tel quel. 2- Couplage On introduit 677 mg de " nucléus " de déoxymulundocandine obtenu à la préparation 1, dans 16 ml de DMF. On agite la solution obtenue pendant 5 minutes et ajoute 793 mg de 4'-(octyloxy)-[1,1'-biphényl]-4-carboxylate de pentafluoro-phényle obtenu ci-dessus. On maintient le mélange réactionnel sous agitation et atmosphère d'azote pendant 24 heures. On filtre et concentre. On reprend le résidu à l'éther, triture, maintient 25 minutes sous agitation, essore, lave à l'éther éthylique, chromatographie sur silice en éluant avec le mélange chlorure de méthylène, méthanol, eau (86/13/1) puis (80/20/1). On obtient ainsi le produit recherché. Rendement 73%. Stade B : 1-[N2-[[4'-(octyloxy)-[1,1'-biphényl]-4-yl] carbonyl]-4-oxo-L-ornithine]-4-[4-(4-hydroxyphényl)-L- thréonine]-5-L-serine-échinocandine B On ajoute 311 l d'iodure de triméthylsilyle dans une suspension renfermant 809 mg de produit du stade A et 19 ml d'acétonitrile. On maintient le mélange réactionnel sous agitation pendant 15 minutes à 60 C et sous atmosphère d'azote. On verse le mélange dans une solution saturée en thiosulfate de sodium. On évapore et chromatographie sur silice le résidu obtenu, en éluant avec le mélange chlorure de méthylène-méthanol eau 86/13/1. On obtient le produit recherché. Rendement 55%. Stade C : Trifluoroacetate de 1-[4-[((2S)-2-amino-2-methylethyl)amino]N2- [[4'-(octyloxy)[1,1'-biphenyl]-4-yl]carbonyl]-Lornithine]-4-[4-(4-hydroxyphenyl)-L-threonine]5-L-serine- echinocandine B(isomère A et isomère B). On agite quelques minutes à 20 C une solution renfermant 62,5 mg de (S)-(-) dichlorhydrate de diaminopropane, 2,25 ml de méthanol, de la triethylamine pour obtenir un pH de 6, quelques grains de siliporité activée, et 150 mg du produit du stade précédent. On introduit 6 mg de NaBH3CN. On agite pendant 15 heures à 20 C et obtient après purification HPLC semi-préparative (éluant : CH3CN,H20TFA(50-50-0,02), 11,5 mg d'isomère A, 13 mg d'isomère B. EXEMPLE 2 : Trifluoroacetate de 1-[4-[[(lH-benzimidazol-2- yl) methyl) amino] -N2- [ [4"- (pentyloxy) [1, l' :4' , 1"-terphenyl] -4- yl] carbonyl] -L-ornithine] -4- [4- (4-hydroxyphenyl) -L- threonine]5-L-serine-echinocandine B(isomère B). En opérant comme précédemment à partir du nucléus de deoxymulundocandine préparé à la préparation 1 en obtenant comme produit intermédiaire le 1-[(4R,5R)-4,5-dihydroxy-N2- [ [4' ' - (pentyloxy) [1, l' . 4' , l' ' -terphényl] -4-yl] carbonyl] -L- ornithine]-4-[4-(4-hydroxyphényl)-L-thréonine]-5-L-sérine- échinocandine B et le dérivé 4-oxo correspondant, on a obtenu le produit recherché.Isomère A = 7,4 mg, isomère B = 1,2 mg. EXEMPLE 3 : Trifluoroacetate de trans 1-[4-[(2-aminocyclohexyl)amino]-N2- [ [4"- (pentyloxy) [1, l' :4' , 1"-terphenyl] -4-yl] carbonyl] -L- ornithine] -4- [4- (4-hydroxyphenyl) -L-threonine] 5-L-serine- echinocandine B(isomère A). En opérant comme précédemment, à partir de 166 mg du dérivé 4-oxo préparé ci-dessus et de 78 mg de (1R, 2R)1-2diaminocyclohexane, on obtient 462 mg de produit brut que l'on chromatographie sur silice en éluant avec le mélange chlorure de méthylène, méthanol, H20, acide acétique 86/13/2/1. On obtient 100 mg de produit que l'on purifie par HPLC semi-préparative à nouveau avec le mélange CH3CN/H20/TFA 50/50/0,1. On obtient 55 mg de l'isomère A, 5,2 mg de l'isomère B. EXEMPLE 4 : Trifluoroacetate de 1-[4-[(2(S)aminopropyl)amino]-N2-[[4"- (pentyloxy)[1,1':4',1"-terphenyl]-4-yl]carbonyl]-Lornithine]-4-[4-(4-hydroxyphenyl)-L-threonine]5-L-serineechinocandine B(isomère A). En opérant comme précédemment on a obtenu le produit recherché. EXEMPLE : Composition pharmaceutique : On a préparé des comprimés renfermant : - Produit de l'exemple 3 isomère A............... 150 mg - Excipient q.s.p............................. 1 g (Détail de l'excipient : amidon, talc, stéarate de magnésium) . ETUDE PHARMACOLOGIQUE A - Inhibition de la glucane synthase de Candida albicans. On purifie des membranes de Candida albicans selon le procédé décrit par Tang et al Antimicrob. Agents Chemother 35,99- 103,1991. 22,5 g de protéines membranaires sont incubées dans un mélange de 2Mm de 14C-UDP glucose (activité spécifique = 0,34 mCi. /mmol, 50 g d'a-amylase, 1Mm de dithiotreitol (DTT), 1Mm EDTA, 100Mm NaF, 7 M de GTP-y-S, 1M de sucrose et 50Mm DE Tris-HCL (pH 7,8) dans un volume de 100/il. Le milieu est incubé à 25 C pendant 1 heure et la réaction terminée par addition de TCA à une concentration finale de 5%. Le mélange réactionnel est transféré sur un filtre de fibre de verre pré-humidifié. Le filtre est lavé, séché et sa radioactivité est comptée. La mulundocandine est utilisé comme contrôle positif. Le contrôle du véhicule est effectué avec la même quantité de DMSO 1%. Les résultats obtenus montrent que les produits de l'invention présentent sur ce test une bonne activité en particulier les produits de l'exemple 3 isomère A. B - activité sur l'enzyme d'Aspergillus fumigatus. L'enzyme est préparée selon le procédé de Beaulieu et al.(Antimicrob. Agents Chenother 38,937-944, 1994. Le protocole utilisé est identique au protocole décrit cidessus pour l'enzyme de Candida albicans sauf que l'on n'utilise pas de dithiotreitol dans le mélange réactionnel. Les produits présentent sur ce test une bonne activité. REVENDICATIONS 1) Sous toutes les formes d'isomères possibles ainsi que leurs mélanges, les composés de formule (I) : dans lesquels ou bien RI représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle. R2 représente un radical cyclohexyle substitué par une amine, un radical CH2CH2NHCH3, un radical CH2CHCH3NH2, un radical un radical CHCH3CH2NH2, un radical-(CH2)aOH, a représentant un nombre entier compris entre 1 et 8, un radical (CH2)b -C # N b représentant un nombre entier compris entre 1 et 8, un radical CHCH3C6H5, un radical (CH2) -C(CH3)2NHCOCF3, un radical CHCH3(CH2)dOH, d représentant un nombre entier compris entre 1 et 8 ou bien RI et R2 forment avec l'azote qui les porte un cycle à 3,4 ou 5 carbones éventuellement substitué par une amine R3 représente un atome d'hydrogène, un radical méthyle ou hydroxyle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle R représente une chaîne linéaire ou ramifiée ou cyclique renfermant jusqu'à 30 atomes de carbone, renfermant éventuellement, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs hétérocycles ou un radical acyle linaire, ramifié ou cyclique renfermant jusqu'à 30 atomes de carbone renfermant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes et/ou un ou plusieurs hétérocycles, T représente un atome d'hydrogène, un radical méthyle, un radical CH2CONH2, CH2C N, un radical (CH2) 2NH2 ou (CH2) 2Nalc+X-, X étant un atome d'halogène et alc un radical alkyle renfermant jusqu'à 8 atomes de carbone, Y représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle ou un atome d'halogène ou un radical OS03H ou l'un des sels de ce radical, W représente un atome d'hydrogène ou un radical OH, Z représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, ainsi que les sels d'addition avec les acides des produits de formule (I) . 2) Les composés de formule (I) définis à la revendication 1 dans lesquels T représente un atome d'hydrogène. 3) Les composés de formule (I) définis à la revendication 1 ou 2 dans lesquels W représente un atome d'hydrogène. 4) Les composés de formule (I) définis à l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lesquels Z représente un radical méthyle. 5) Les composés de formule (I) définis à l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans lesquels Y représente un atome d'hydrogène. 6) Les composés de formule (I) définis à l'une quelconque des revendications 1 à 5 dans lesquels R3 représente un radical méthyle. 7) Les composés de formule définis à l'une quelconque des revendications 1 à 6 dans lesquels R4 représente un radical hydroxyle. 8) Les composés de formule (I) définis à l'une quelconque des revendications 1 à 7 dans lesquels R représente un radical 9) Les composés de formule (I) définis à la revendication 8, dans lesquels R représente une chaîne 10) Les composés de formule (I) définis à la revendication 8, dans lesquels R représente une chaîne 11) Les composés de formule (I) définis à une quelconque des revendications 1 à 10 dans lesquels R1 est un atome d'hydrogène. 12) Les composés de formule (I) définis à une quelconque des revendications 1 à 11 dans lesquels R2 est un radical 13) Les composés de formule (I) définis à l'une des quelconques renvendications 1 à 11 dans lesquels R2 est un radical CH2CH(CH3)NH2, un radical ou un radical 14) Les composés de formule (I) définis à l'une des quelconques renvendications 1 à 11 dans lesquels R2 est un radical 15) Procédé de préparation des composés de formule (I) définis à l'une des quelconques revendications 1 à 14 caractérisé en ce que l'on soumet un composé de formule (II) dans laquelle R, R3, R4, T, Y, W et Z conservent leur signification précédente, à l'action d'une amine ou d'un dérivé d'amine susceptible d'introduire R1 le radical N/ dans lequel RI et R2 R2 conservent leur signification précédente et si désiré à l'action d'un agent de réduction et/ou d'un agent de fonctionnalisation de l'amine, et/ou d'un acide pour former le sel du produit obtenu, et/ou d'un agent de séparation des différents isomères obtenus, et obtient ainsi le composé de formule (I) recherché. 16) A titre de composés antifongiques, les composés de formule (I) définis à l'une quelconque des revendications 1 à 14, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides. 17) Les compositions pharmaceutiques renfermant à titre de médicament au moins un composé de formule (I) défini à l'une quelconque des revendications 1 à 14, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables.