Brevet FR2794024A1 — publié le 20001201

PREPARATION A BASE DE TANIN(S) DESTINEE AU TRAITEMENT DE LA COCCIDIOSE La présente invention concerne l'utilisation de tanins pour la préparation d'une composition destinée au traitement de la coccidiose et une telle composition. La coccidiose est une maladie des intestins dont l'agent pathogène est un protozoaire qui envahit peu à peu l'épithélium intestinal, empêchant l'absorption des nutriments et entraînant ainsi une perte de poids chez l'individu contaminé pouvant même aboutir, à terme, à son décès. La coccidiose atteint aussi bien les mammifères, tels que le bétail ou l'homme, que les oiseaux chez lesquels, en raison de la faible longueur de leur intestin, elle s'avère rapidement mortelle. Chez l'homme, elle peut également s'avérer dangereuse en particulier en cas d'affaiblissement du système immunitaire. On utilise couramment pour traiter la coccidiose des antibiotiques ou des composés ionophores. En plus de leur prix de revient élevé, ces deux types de traitement génèrent des effets secondaires ainsi que l'apparition d'une résistance du protozoaire, notamment dans le cas des antibiotiques. En particulier, le traitement par antibiotiques du bétail destiné à la boucherie s'avère extrêmement gênant du fait de l'accumulation des antibiotiques dans l'organisme de l'animal. En effet, plusieurs cas de décès chez l'humain ont été recensés et attribués à des prises d'antibiotiques sur une trop longue période qui pourraient être causées, non pas par un quelconque traitement thérapeutique, mais bien par l'ingestion de viandes contenant de fortes doses d'antibiotiques. En remplacement des traitements précités, le document WO 97101348 préconise pour le traitement de la coccidiose du poulet, provoquée par la présence dans l'intestin du poulet de protozoaires du groupe Eimeria (E. tenella, E acervilina, E. colhici, E. duodenalis, E. mitri, E. fasiani etc.), l'utilisation d'une préparation pharmaceutique à base d'huiles essentielles contenant entre 55% et 70% en masse de thymol et de carvacrol, la proportion carvacol/ thymol étant d'au moins 10. Cette préparation à base d'huiles essentielles naturelles facilement assimilables ou dégradables par l'organisme présente peu ou pas d'effets secondaires et surtout ne cause aucune accumulation de substances actives dans les tissus. Le but de la présente invention est de proposer une composition permettant de traiter la coccidiose en remplacement des traitements déjà connus par antibiotiques ou composés ionophores, qui soit sans effets secondaires et dont l'utilisation soit économiquement intéressante. Ce but est atteint en utilisant comme principe actif au moins un tanin pour la préparation d'une composition destinée au traitement de la coccidiose. Dans la cadre de la présente invention, sauf précision, le terme "traitement" désigne un traitement préventif empêchant la prolifération des coccidies et/ou un traitement curatif qui permet de réduire le nombre des coccidies présentes voire de les éliminer. Le document WO 97/01348 précité suggère également l'addition à la préparation pharmaceutique, de 1% en masse de tanin obtenu à partir des résidus végétaux issus de l'extraction des huiles essentielles, uniquement dans le cas du traitement de diarrhées provoquées par des bactéries telles que Salmonella, Staphylococcus, Pasteurelia et Escheria Coli. En revanche, le tanin n'est pas utilisé en combinaison avec les huiles essentielles pour le traitement de la coccidiose ce qui suggère que ce dernier n'a aucun effet sur l'agent pathogène responsable de la coccidiose. C'est donc le mérite de la présente invention que d'avoir vaincu ce préjugé et d'avoir, en dépit des conclusions qui pouvaient être déduites du document précité, tenté des essais visant à tester l'efficacité des tanins sur le protozoaire responsable de la coccidiose. La présente invention concerne également une préparation contenant au moins 0,1 % en masse de tanin(s) et destinée au traitement de la coccidiose. De préférence, cette préparation contient au moins 0,150 % en masse de tanin(s). De préférence, la préparation contient entre 0, 1 % et 1 % en masse de tanin(s). Le Demandeur a par ailleurs mis en évidence qu'une préparation contenant environ 0,150 % en masse de tanin(s) s'avérait particulièrement efficace pour le traitement de la coccidiose. Le mécanisme d'action du tanin sur le protozoaire n'étant pas encore élucidé à l'heure actuel, les tanins utilisés peuvent être soit des tanins catéchiques encore dénommés "condensés", non hydrolysables, soit des tanins galliques, c'est-à-dire hydrolysables. Néanmoins, de préférence, on utilise un ou des tanins galliques, hydrolysables. Les tanins utilisés peuvent être d'origine naturelle ou d'origine synthétique. En raison de leur facilité d'extraction par lixiviation, on utilise de préférence, les tanins contenus dans le bois tel que le bois de chêne ou le bois de châtaignier. La présente invention sera mieux comprise et ses caractéristiques et avantages apparaîtront mieux à la lecture de l'exemple qui suit présenté à titre d'exemple non limitatif. En vue de déterminer l'action des tanins sur le protozoaire Eimeria sp. responsable de la coccidiose chez le poulet, le Demandeur a tout d'abord effectué des expérimentations visant à déterminer l'influence du tanin sur la prise de poids des poulets. Ensuite, des expérimentations ont été effectuées pour déterminer l'effet préventif du tanin sur la prolifération des coccidies chez le poulet, Le tanin utilisé dans les exemples particuliers qui suivent est un tanin ou un mélange de tanins extrait(s) du bois de châtaignier. Préparation du tanin Le tanin utilisé est obtenu par lixiviation à la vapeur de copeaux de bois de châtaignier. La solution est ensuite évaporée et atomisée pour obtenir un extrait sec qui représente 95% (± 1 %) en masse de la solution aqueuse initiale. Cet extrait sec contient 77% en masse de tanin(s) de châtaignier. Cet extrait de bois de châtaignier est mélangé à la nourriture des poulets en sorte d'obtenir un mélange contenant 0,2% en masse d'extrait de bois de châtaignier à 77 % de tanin(s) soit un pourcentage de 0, 1 54% en masse de tanin(s) de châtaignier. 1 Etude de l'influence du tanin sur la prise de poids chez le poulet Chaque traitement a été effectué sur trois groupes de 30 poulets de batterie, mâles et femelles de la race "Ross 208", âgés de 360 jours. Les poulets ont été nourris avec les compositions nutritionnelles indiquées dans le tableau 1, dans des conditions de température, d'éclairement et de ventilation standard. La période de départ s'étend de 0 à deux semaines après le début de l'expérience tandis que la période d'engraissement s'étend de 2 à 6 semaines après le début de l'expérience. Les poulets ont par ailleurs, été vaccinés contre le virus Newcasttle (par spray Hitchner) et contre la bronchite (par spray H l 20). La nourriture et l'eau ont été fournies à volonté. Les compositions nutritionnelles comprennent de plus des agents prévenant la prolifération des coccidies contenus dans le mélange Prémix . Le tableau 2 regroupe les quatre groupes et le pourcentage d'extrait de châtaignier qui a été respectivement intégré dans les compositions nutritionnelles. Le tableau 3 fournit une analyse statistique des résultats. Ces résultats statistiques prouvent qu'une nourriture contenant une proportion de tanin(s) de châtaignier inférieure ou égale à 0,154% en poids n'empêche pas la prise de poids du poulet ce qui prouve qu'une dose de tanin de châtaignier inférieure ou égale à 0,154% en poids n'a aucun effet toxique sur le poulet. il Etude de l'influence du tanin sur la prolifération des coccidies Animaux utilisés Des oiseaux de type Leghorn ont été obtenus à partir d'#ufs couvés Lohmann exempts de tout germe pathogène. Des examens sanguins du sang des poussins ont confirmé qu'ils n'étaient pas contaminés notamment par Salmonella. Conditions expérimentales Les animaux sont isolés durant toute l'expérimentation. Les cages sont ventilées et la pression est régulée de manière adaptée à l'âge des poussins. La nourriture est disposée dans des mangeoires et l'eau est disponible à volonté. Nourriture La nourriture est une nourriture pour poulets âgés de 8 semaines ne contenant aucun agent de croissance et à base principalement de froment, de manioc, de fèves de soja, de tourteau de soja et de graisses animales. Cette nourriture est, dans un cas, mélangée avec de l'extrait de bois de châtaignier pour obtenir un mélange contenant 0,154% de tanin(s) et utilisée telle quelle dans l'autre cas. Recherche et groupes expérimentaux 192 poussins éclos d#ufs exempts de germes pathogènes ont été élevés dans les conditions les préservant de toute contamination bactérienne, sur des copeaux de bois mélangés avec de la litière conventionnelle exempte de toute colonisation par Salmonella. Les poussins ont été divisés en quatre groupes principaux. Chacun de ces groupes principaux a ensuite été divisé en deux sous groupes de 24 poussins (respectivement 1 CS, 1TS, 2CS, 2TS, 3CC, 3TC, 4CC, 4TC) ce qui permet de combiner des sous-groupes de poussins ayant reçu de l'extrait de châtaignier dans la même cage mais dans des compartiments séparés. Cette stratégie permet de déterminer l'influence des conditions envi ronnementa les sur les analyses statistiques des résultats obtenus. Les animaux des groupes 1TS, 2TS, 3TC et 4TC ont été nourris avec une nourriture contenant 0,2% en poids d'extrait de châtaignier. Les animaux des groupes 1 CS, 2CS, 3CC et 4CC ont été nourris avec la même nourriture mais ne contenant pas l'extrait de châtaignier. Mode de contamination par Eimeria sp Afin de réaliser une colonisation naturelle et rapide par Eimeria sp, on mélange aux copeaux de bois non contaminés par Salmonella, de la litière contenant des ceufs d'Eimeria sp, le premier jour après l'éclosion, (environ 10g de litière contaminée pour 500 g de copeaux de bois). Les 29èm" et 36ème jours après l'éclosion, on mélange à la nourriture, de la litière contenant des #ufs d'Eimeria sp (environ 1 g de litière contaminée pour 1 kg de nourriture ; la quantité totale de nourriture étant de 5 kg). Les déjections des poussins sont recueillies tous les cinq jours sur du papier placé sous les cages. Méthodes micro-biologiques utilisées L'action de l'extrait de châtaignier sur l'éjection d'Eimeria sp. a été étudiée sur les déjections de poussins prélevées à cinq jours d'intervalles. Les déjections sont ensuite analysées quantitativement par flottation afin de déterminer le nombre d'oeufs d'Eimeria sp qu'elles contiennent. Détection d'Eimeria sp dans les déiections des poulets Des échantillons de 2g de déjections sont placés dans des Béchers de 1000ml. On ajoute ensuite 60ml d'une solution de sucrose saturée en sel, préparée en dissolvant 333g de chlorure de sodium et 200g de sucrose dans 1 litre d'eau distillée. Le mélange est homogénéisé et filtré trois fois sur une passoire à thé afin d'ôter les débris les plus grossiers. Le filtrat est homogénéisé par transvasements successifs dans un autre Bécher (répété 10 fois) et introduit dans une chambre McMaster à l'aide d'une pipette pasteur. La chambre est laissée au repos durant 2 minutes puis placée sous un microscope. Le grossissement utilisé est de 100x. Les ceufs d'Eimeria sp sont alors comptés Le nombre total d'#ufs dEimeria sp. est obtenu en multipliant par 50 le nombre total d'#ufs d'Eimeria sp. déterminé dans la chambre. La sensibilité du test est de 50. Résultats Le tableau 4 représente les subdivisions au sein de chaque sous- groupe ; les poussins sont placés dans des boîtes de quatre compartiments contenant chacun 6 oiseaux. Les groupes 1 et 2 ont de plus été contaminés par injection de 104 cfu/ poussin de Salmonella Enteridis PT4 ( NIDO 76Sa88) par gavage à l'âge de 6 jours. 27 jours après l'inoculation de Salmonella Enteridis, tous les groupes de poulets ont été contaminés par Eimeria sp., ce qui se traduit par la présence doeufs d'Eimeria sp. dans les déjections des poussins. Le graphe 1 représente le nombre total d'oeufs d'Eimeria sp recueillis respectivement pour le groupe de contrôle et les groupes traités avec du tanin. On remarque qu'à 41 jours après la naissance des poussins les groupes ayant ingéré du tanin sont moins infectés par les Eimeria sp. Le graphe 2 représente le nombre d'#ufs d'Eimeria sp recueillis dans les déjections des poussins contaminés par la Salmonelle. On remarque que dans ce cas, les poussins ayant ingéré du tanin sont moins contaminés par Eimeria sp que les poussins qui n'ont pas ingéré de tanin. Le tableau 5 regroupe le nombre doeufs recueillis dans les déjections de chacun des groupes définis dans le tableau 4. TABLEAU5 GROUPE 2 7 12 17 22 34 41 JOURS JOURS JOURS JOURS JOURS JOURS JOURS 1 TS 0 0 0 0 0 2650 18750 2 TS 0 0 0 0 41650 10300 266250 ics 0 0 0 0 0 114500 47500 2CS 0 0 0 0 2100 29400 1 954700 3TC 0 300 0 0 0 50 73900 4TC 0 0 0 100 0 550 800 3CC 0 0 0 0 0 700 1 650 4 CC 0 0 0 0 0 0 978600 Le graphe 3 montre bien que les deux groupes ayant absorbé du tanin qu'ils soient ou non contaminés par Salmonella sont moins infectés par Eimeria sp. Une analyse statistique du nombre d'#ufs d'Eimeria sp. détectés (en utilisant une régression de Poisson) a révélé une différence significative (P 0,05) entre les groupes de poussins dont la nourriture contient des tanins et les groupes de poussins dont la nourriture est exempte de tanins. (confère graphe 2) En conclusion, la présence de tanins dans la nourriture réduit de manière significative l'excrétion d'oeufs d'Eimeria sp. chez le poussin ce qui prouve l'action des tanins sur ce protozoaire. Le graphe 4 représente la prise de poids des différents groupes de poussins âgés de 55 jours. On remarque que les groupes CS et TS qui ont absorbés du tanin ont une prise de poids moyenne plus importante que les groupe n'ayant pas été traités avec du tanin. Il semblerait donc que, même dans le cas d'une contamination par Salmonella, l'ingestion de tanin favorise la prise de poids des individus sans néanmoins avoir d'influence directe sur la Salmonelle elle-même. (*) Le Premix fournit 100 mg de monensine (pour la période de 0-2 semaines), 1 mg de diclazuril (-Clinacox) (pour la période de 2-6 semaines) et 15 mg de virginiamycine par kg de nourriture. TABLEAU 2 TRAITEMENT % EXTRAIT DE % DE TANIN DE CHATAIGNIER CHATAIGNIER 1 0 0 2 0,05 0,0385 3 0,10 0,077 4 0,20 0,154 Poids Période Période du de de poulet à 15-35 0-35 35 jours jours jours masse gain de Efficacité masse gain de Efficacité journalière poids nutrition- journalière poids nutrition de journalier nelle de journalier nelle nourriture (g/animal (g1g) nourriture (glanimal (g/g) absorbée /jour) absorbée fj o u r) (glanimal (g/animal /jour) /jour) M2VA Ul A-CT (n=4) 0,2 3,8 2,5 0,8 0,5 2,1 0,5 B-Sexe (n=2) 11 4,5'* 222,9' 801,0-- 19,7- 172,6*** 334,5*** 12,5** A*13 il 0,5 0,5 0,1 2,0 0'l 0,8 méthode LSD test mr(2) A-CT 1 1668 a 108,6a 62,4a 1,744a 77,3a 46,5a 1 668a 2 1667 a 108,7a 62,3a 1,748a 77,2a 46,4a 1:664a 3 1642 a 107,5a 61,6a 1,749a 76,3a 45,7a 1,669a 4 1657 a 109,4a 61,9a 1,771 a 77,6a 46,2a 1,684a LSD (P:0.05) 74 3,4 3,0 0,041 2,4 2,1 0,039 B-Sexe 1-males 1789 a 1 16,9a 67,8a 1,724a 82,3a 49,9a 1,649a 2- femelles 1528 b 100,2a 56,3b 1,782b 71,9b 42,5b 1,639a LSD (P:0.05) 52 2,4b 2,1 0,029 1,7 1,5 0,027 *** significativement différent à 0.001 ** significativement différent à 0.01 GROUPE SOUS-GROUPE SUBDIVISIONS 1 ICS 1 CS A (n=6) 1 CS C (n=6) (contaminé par 1 CS B (n=6) 1 CS D (n=6) Salmonella) 1TS (0, 1 54% de tanins) 1 TS A (n=6) 1 TS C (n=6) 1 TS B (n=6) 1 TS D (n=6) 2 2CS 2 CS A (n=6) 2 CS C (n=6) (contaminé par 1 CS B (n=6) 1 CS D (n=6) Salmonella) 2TS (0, 1 54 % de tanins) 2 TS A (n=6) 2 TS C (n=6) 2 TS B (n=6) 2 TS D (n=6) 3 3 CC 3 CC A (n=6) 3 TC C (n=6) 3 CC B (n=6) 3 TC D (n=6) 3 TC 3 TC A (n=6) 3 TC C (n=6) (0, 1 54 % de tanins) 3 TC B (n=6) 3 TC D (n=6) 4 4 CC 4 CC A (n=6) 4 TC C (n=6) 4 CC B (n=6) 4 TC D (n=6) 4 TC 4 TC A (n=6) 4 TC C (n=6) (0, 1 54 % de tanins) 4 TC B (n=6) 4 TC D (n=6) REVENDICATIONS 1 Utilisation d'au moins un tanin en tant qu'agent actif pour la préparation d'une composition destinée au traitement de la coccidiose. 2. Préparation destinée au traitement de la coccidiose, caractérisée en ce qu'elle contient au moins 0,1 % en masse d'au moins un tanin. 3. Préparation destinée au traitement de la coccidiose, caractérisée en ce qu'elle contient au moins 0, 150 % en masse d'au moins un tanin. 4. Préparation selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle contient entre 0,1 % et 1 % en masse d'au moins un tanin. 5. Préparation selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle contient entre 0, 150 % et 1 % en masse d'au moins un tanin. 6. Préparation selon l'une quelconque des revendications 2 à 5 caractérisée en ce que ledit tanin est un tanin gallique hydrolysable. 7. Préparation selon la revendication 6, caractérisée en ce que ledit tanin est extrait par lixiviation du bois, de préférence, du bois de chêne ou de châtaignier.