Brevet FR2788696A1 — publié le 20000728

Dans le cadre de la recherche de composés pouvant favoriser la régénération des axones des cellules nerveuses périphériques après lésion, il a été identifié, parmi les composés de la demande de brevet internationale PCT/FR98/01667, une sous-classe de composés de formule générale (I) dans laquelle X représente un atome d'halogène, Y représente un ou plusieurs atomes ou groupes choisis parmi l'hydrogène, les halogènes et les groupes méthyle, méthoxy et nitro, R1 représente un groupe (C1-C4) alkyle, R2 et R3 représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C4)alkyle, ou bien R2 et R3 forment, avec l'atome d'azote qui les porte, un groupe pyrrolidinyle, pipéridinyle ou morpholinyle. Ces composés possèdent une forte affinité pour les récepteurs périphériques des benzodiazépines (sites p), et certains induisent une augmentation significative de la vitesse de régénération du nerf façial lésé chez le rat. Un composé particulièrement intéressant pour l'utilisation selon l'invention est, par exemple, le 7-chloro-N,N,5- triméthyl-4-oxo-3-phényl-3,5-dihydro-4H-pyridazino[4,5-b]- indole-1-acétamide. Ce dernier peut-être préparé selon le mode opératoire suivant, donné à titre d'exemple. Exemple 1. 6-Chloro-l-méthyl-lH-indole-2-carboxylate d'éthyle. On agite pendant 2 h à température ambiante une suspension de 1,8 g (45 mmoles) d'hydrure de sodium à 60% (préalablement lavé à l'éther de pétrole) et de 8,0 g (35,8 mmoles) de 6-chloro-lH-indole-2-carboxylate d'éthyle dans 80 ml de N,N-diméthylformamide, on ajoute ensuite 2,8 ml (45 mmoles) de iodométhane et on agite le mélange à température ambiante pendant 4 H. On ajoute 5 ml d'éthanol absolu et on évapore le solvant sous pression réduite. On reprend le résidu par de l'eau et on extrait le mélange par du dichlorométhane, on sèche la phase organique, on filtre, on évapore le solvant sous pression réduite et on purifie le résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice. On isole 8,5 g (35,7 mmoles) d'un composé blanc cristallin. Point de fusion : 75,5-76,5 C. 2. 6-Chloro-2-(éthoxycarbonyl)-1-méthyl-a-oxo-lH-indole-3- acétate d'éthyle. A une solution de 4 ml (36 mmoles) de chlorooxoacétate d'éthyle dans 100 ml de 1,2-dichloroéthane, on ajoute 4 ml (36,4 mmoles) de tétrachlorure de titane. On agite le mélange réactionnel pendant 30 min à température ambiante, puis on ajoute 7,8 g (32,8 mmoles) de 6-chloro-l-méthyl-lHindole-2-carboxylate d'éthyle et on agite le mélange réactionnel pendant 4 h à température ambiante. On refroidit le milieu, on ajoute 200 ml de dichlorométhane et 100 ml d'eau. On décante la phase organique, on la lave à l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium, on la filtre, on concentre le filtrat sous pression réduite et on purifie le résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice. On isole 9,4 g (29,0 mmoles) de produit. Point de fusion : 94-95 C. 3. 7-Chloro-5-méthyl-4-oxo-3-phényl-3,5-dihydro-4H- pyridazino[4,5-jb]indole-l-carboxylate d'éthyle. A une solution de 4,6 g (13,6 mmoles) de 6-chloro-2- (éthoxycarbonyl)-1-méthyl-a-oxo-1H-indole-3-acétate d'éthyle dans 120 ml d'acide acétique, on ajoute à température ambiante 4 ml (40,6 mmoles) de phénylhydrazine. On agite le mélange réactionnel pendant 30 min à température ambiante, puis pendant 4 h au reflux. On refroidit le milieu, on ajoute 350 ml de dichlorométhane et 100 ml d'eau. On décante la phase organique, on la lave avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, puis avec de l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium, on la filtre, on la concentre sous pression réduite et on purifie le résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice. On isole 4,1 g (10,7 mmoles) de produit. Point de fusion : 216-218,5 C. 4. 7-Chloro-1-(hydroxyméthyl)-5-méthyl-3-phényl-3,5- dihydro-4H-pyridazino[4,5-b]indol-4-one. A une solution de 4,04 g (10,6 mmoles) de 7-chloro-5méthyl-4-oxo-3-phényl-3,5-dihydro-4H-pyridazino[4,5- b]indole-1-carboxylate d'ethyle dans 150 ml de tétrahydrofuranne, on ajoute 2,5 g (66,1 mmoles) de borohydrure de sodium. Sous agitation, on ajoute progressivement 2,25 ml de méthanol, puis on chauffe le mélange au reflux durant 5 h. On verse le mélange sur une solution glacée d'acide chlorhydrique 1 M, on isole un insoluble par filtration sur verre fritté, que l'on lave à l'eau et à l'éther diéthylique, puis on le sèche. On isole 3,3 g (9,7 mmoles) de composé sous forme d'un solide blanc qu'on utilise tel quel dans l'étape suivante. Point de fusion : 219-220,5 C. 5. 7-chloro-5-méthyl-4-oxo-3-phényl-3,5-dihydro-4H- pyridazino[4,5-b]indole-1-carboxaldéhyde. A une solution de 3,3 g (9,7 mmoles) de 7-chloro-1- (hydroxyméthyl)-5-méthyl-3-phényl-3,5-dihydro-4Hpyridazino[4,5-b]indol-4-one dans 300 ml de dichlorométhane, on ajoute 5,7 g (65,6 mmoles) de dioxyde de manganèse et on agite le mélange réactionnel pendant 24 h à reflux. On refroidit le milieu, on le filtre sur membrane Téflon', on rince le solide avec du dichlorométhane, puis on concentre le filtrat sous pression réduite. On isole 2,88 g (8,53 mmoles) de composé sous forme d'un solide blanc qu'on utilise tel quel dans l'étape suivante. Point de fusion . 235-236 C. 6. 7-Chloro-5-méthyl-4-oxo-3-phényl-3,5-dihydro-4H- pyridazino [4 , 5-Jb] indole-1-acétonitrile . A une solution de 2,14 g (10,96 mmoles) de 1-[(isocyanométhyl)sulfonyl]-4-méthylbenzène dans 50 ml de 1,2-diméthoxyéthane, on ajoute, par petites portions, 1,27 g (10,96 mmoles) de 1,1-diméthyléthylate de potassium, on agite le mélange réactionnel pendant 30 min à -60 C, on ajoute 2,88 g (8,53 mmoles) de 7-chloro-5-méthyl-4-oxo-3- phényl-3,5-dihydro-4 H-pyridazino[4,5-b]indole-1-carbox- aldéhyde et on agite le mélange réactionnel durant 3 h 30 min à -60 C. On ajoute 9 ml de méthanol et on agite encore le mélange réactionnel 30 min à température ambiante et 1 h à reflux. On refroidit le milieu, on le concentre sous pression réduite, on ajoute au résidu de l'eau, 5 ml d'acide acétique et 200 ml de dichlorométhane, on décante la phase organique et on extrait la phase aqueuse avec du dichlorométhane. On réunit les phases organiques, on les lave à l'eau, on les sèche sur sulfate de sodium, on les filtre, on les concentre sous pression réduite et on purifie le résidu par chromatographie sur gel de silice. On isole 1,87 g (5,36 mmoles) de composé sous forme d'un solide blanc qu'on utilise tel quel dans l'étape suivante. Point de fusion : 305-315 C. 7. 7-Chloro-5-méthyl-4-oxo-3-phényl-3,5-dihydro-4H- pyridazino[4,5-jb]indole-l-acétate de méthyle. A une solution de 1,83 g (5,25 mmoles) de 7-chloro-5- méthyl-4-oxo-3-phényl-3,5-dihydro-4H-pyridazino[4,5- b]indole-1-acétonitrile dans 250 ml de méthanol, on ajoute du chlorure d'hydrogène jusqu'à saturation de la solution et on agite le mélange réactionnel pendant 4 h à reflux. On refroidit le milieu, on concentre le mélange réactionnel sous pression réduite, on ajoute au résidu 25 ml d'eau et 25 ml de méthanol. Après agitation on recueille l'insoluble par filtration, on le lave à l'eau et à l'éther diéthylique, on le sèche et on le purifie par chromatographie sur colonne de gel de silice. On isole 1,00 g (2,62 mmoles) de composé sous forme d'un solide blanc. Point de fusion : 188,5-190 C. 8. 7-Chloro-N,N,5-triméthyl-4-oxo-3-phenyl-3,5-dihydro-4H- pyridazino[4,5-,b]indole-1-acetamide. Sous argon, à une solution de 0,49 g (6 mmoles) de chlorhydrate de diméthylamine dans 80 ml de toluène, on ajoute, à 0 C, 3 ml (6 mmoles) de triméthylaluminium (2M dans le toluène) et on agite le mélange réactionnel pendant lh 30 min à température ambiante. On ajoute 0,21 g (0,55 mmoles) de 7-chloro-5-méthyl-4-oxo- 3-phényl-3,5-dihydro-4H-pyridazino[4,5-b]indole-1-acétate de méthyle et on agite le mélange réactionnel pendant 6 h à reflux. On refroidit le milieu à 4 C, on ajoute 10 ml d'eau et 100 ml de dichlorométhane, on filtre la solution, et on concentre le filtrat sous pression réduite. On ajoute au résidu de l'eau, de d'acide chlorhydrique 1M et 150 ml de dichlorométhane, on sépare la phase organique, on la lave à l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium, on la filtre, on la concentre sous pression réduite et on purifie le résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice. Après recristallisation dans un mélange de dichlorométhane et d'acétate d'éthyle, on isole 0,2 g (0,51 mmoles) de composé sous forme d'un solide blanc à l'aspect cotonneux. Point de fusion : 229,5-230 C. Le tableau qui suit illustre les structures chimiques et les propriétés physiques de quelques composés utilisables selon l'invention. Légende du tableau "Me" et "Et", désignent, respectivement, un groupe méthyle et éthyle. "pyrrolid", "piperid" et "morph" désignent, respectivement, un groupe pyrrolidinyle, pipéridinyle et morpholinyle. Tableau N X y Ri ! -- NRzR3 ~~i F (OC) 1 ci H Me NMe2 ' 229,5-230 2 Cl H Me NEt2 167-168 3: Cl H Me pyrrolid 260-263 4 Cl H Me morph 273,5-274,5 5 1 ci 3-Me Me NMe2 204-205,5 6 Cl 3-Me Me NEt2 200,5-201 7 Cl 3-Me Me pyrrolid 268-269,5 8 Cl 3-Cl Me NMe2 231-232 9 Cl 3-Cl Me NEt2 202,5-203 10 Cl 3-ci Me pyrrolid 257-258,5 11 Cl 3-Cl Me piperid 218-219 12 Cl 2-Cl Me NMe2 253-255 13 Cl 2-Cl Me NEt2 206-208 14 Cl 2-ci Me pyrrolid 295-297 15' Cl 4-C1 Me NMe2 235-237 16 Cl 4-C1 Me NEt2 223,5-224,5 17 Cl 4-C1 Me pyrrolid 265-266 18 Cl 3-OMe Me NMe2 200,5-202,5 ' 19 Cl 3-OMe Me NEt2 201-202 20 Cl 3-OMe Me pyrrolid 240-242 21 Cl 3-NO2 Me NMe2 275-277,5 22. Cl 3-NO2 Me NEt2, ' 228-228,5 23' Cl 3-NO2 Me pyrrolid 261-263 24 Cl 3-F Me NMe2 225-226,5 25 Cl 3-F Me NEt2 171-172 26' Cl 3-F Me , pyrrolid 270-271,5 27' Cl 3, 5- (C1) Me NEt2 239-240,5 28 Cl 4-ci Me NMeEt 216,5-217,5 Les protocoles et les résultats des essais qui ont été réalisés sont décrits ci-après. Etude de la liaison [3H]Ro5-4864 aux sites benzodiazé- piniquespériphériques (p). L'affinité des composés de l'invention pour les sites p (sites de liaison type périphérique pour les benzodiazépines) a été déterminée. Les récepteurs sites p peuvent être marqués sélectivement dans des membranes de rein de rat incubées en présence de [3H]Ro5-4864. Les composés ont fait l'objet d'une étude in vitro quant à leur affinité pour ces récepteurs. Les animaux utilisés sont des rats mâles Sprague Dawley (Iffa Credo) de 180 à 300 mg. Après décapitation, on prélève le rein et le tissu est homogénéisé à 4 C au moyen d'un homogénéiseur Polytron pendant 2 min à 6/10 de la vitesse maximale dans 35 volumes de tampon phosphate Na2HPO4 50 mM à un pH ajusté à 7,5 avec du NaH2PO4. L'homogénat membranaire est filtré sur gaze et dilué 10 fois avec du tampon. Le [3H]Ro5-4864 (Activité spécifique . 70-90 Ci/mmole ; NewEngland Nuclear), à une concentration de 0,5 nM, est incubé en présence de 100 /il de l'homogénat membranaire dans un volume final de 1 ml de tampon contenant le composé à tester. Après une incubation de 3 h à 0 C, on récupère les membranes par filtration sur filtres Whatman GF/B qu'on lave avec 2 fois 4,5 ml de tampon d'incubation froid (0 C). On mesure la quantité de radioactivité retenue par le filtre par scintigraphie liquide. Pour chaque concentration de composé étudié, on détermine le pourcentage d'inhibition de la liaison du [3H]Ro5-4864, puis la concentration CI50, concentration qui inhibe 50% de la liaison spécifique. Les CI50 des composés les plus actifs vont de 0,6 nM à 20 nM. Etude de l'activité neurotrophe. L'activité neurotrophe est évaluée chez le rat dans le test de régénération du nerf facial lésé par mesure de la récupération fonctionnelle du réflexe palpébral, selon une modification de la méthode de K. Kujawa et al., Experimental Neurology (1989) 105 80-85. La lésion du nerf facial par congélation locale entraîne une dégénérescence de la partie distale du nerf facial et une perte de la fonction du clignement de la paupière. Les produits à étudier sont administrés par voie intrapéritonéale ou orale 2 fois par jour avec un décalage de 6 à 8 h, tous les jours pendant 10 jours (durée de l'expérience). Le premier traitement est administré 30 min avant la lésion. Observation des animaux La récupération de la fonction des paupières chez les animaux lésés est observée tous les jours, une fois le matin de JO à J5 et 2 fois (matin et soir avec 6 à 8 h de décalage) de J6 à J10, avant chaque traitement, selon un score théorique allant de 0 jusqu'à 4. Score 0 : oeil ouvert, score 1 : oeil fermé avec un degré inférieur à la moitié de l'oeil ; score 2 : degré de fermeture compris entre 1/2 et 3/4 ; score 3 : degré de fermeture supérieur à 3/4 ; score 4 : oeil complètement fermé. Les résultats sont exprimés par le rapport des AUC ("area under the curve") du groupe traité et du groupe témoin. Les rapports d'AUC des composés les plus actifs se situent entre 1,12 et 1,20. Ces composés augmentent donc de 12 à 20% la récupération du réflexe palpébral après lésion du nerf facial. Les résultats des essais montrent que les composés de formule générale (I) favorisent la régénération nerveuse. Les composés de formule générale (I) peuvent donc être utilisés pour la préparation de médicaments destinés à la prévention et au traitement des neuropathies périphériques de différent types, comme les neuropathies traumatiques ou ischémiques, neuropathies infectieuses, alcooliques, médicamenteuses ou génétiques, ainsi que des affections du motoneurone, telle que les amyotrophies spinales et la sclérose latérale amyotrophique. Ces médicaments trouveront également une application dans le traitement des maladies neurodégénératives du système nerveux central, soit de type aigu comme les accidents vasculaires cérébraux et les traumatismes crâniens et médullaires, soit de type chronique comme les maladies autoimmunes (sclérose en plaques), la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson et toute autre maladie dans laquelle l'administration de facteurs neurotrophes est censée avoir un effet thérapeutique. Les médicaments utilisables selon l'invention peuvent contenir un composé de formule générale (I) seul, ou bien un tel composé associé avec d'autres composés neurotrophes, neuroprotecteurs ou immunomodulateurs. A cet effet ils peuvent être présentés sous toutes formes galéniques, associés à des excipients appropriés, pour l'administration entérale ou parentérale, par exemple sous forme de comprimés, dragées, gélules, capsules, solutions ou suspensions buvables ou injectables telles que sirops ou ampoules, timbres transdermiques, suppositoires, etc, dosés pour permettre une administration journalière de 0,3 à 1000 mg de substance active. Revendications 1. Utilisation d'un composé de formule générale (I) dans laquelle X représente un atome d'halogène, Y représente un ou plusieurs atomes ou groupes choisis parmi l'hydrogène, les halogènes et les groupes méthyle, méthoxy et nitro, R1 représente un groupe (C1-C4) alkyle, R2 et R3 représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C4)alkyle, ou bien R2 et R3 forment, avec l'atome d'azote qui les porte, un groupe pyrrolidinyle, pipéridinyle ou morpholinyle, pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention et au traitement des neuropathies périphériques et maladies dégénératives du système nerveux central. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé de formule générale (I) est le 7-chloro- N,N,5-triméthyl-4-oxo-3-phényl-3,5-dihydro-4H-pyridazino- [4,5-b]indole-1-acétamide.