Brevet FR2789075A1 — publié le 20000804

COMPOSES 1,2-DIOXETANNES, LEUR PREPARATION ET LEUR UTILISATION POUR LE DOSAGE DE THIOLS ET DE L'ACETYLCHOLINESTERASE. DESCRIPTION Domaine technique La présente invention a pour objet de nouveaux composés 1,2-dioxétannes, utilisables de façon générale pour doser des fonctions thiols, et plus particulièrement pour mesurer l'activité de l'acétylcholinestérase par mesure de luminescence. Elle s'applique en particulier aux dosages immuno-enzymatiques dans lesquels l'enzyme utilisée est l'acétylcholinestérase. État de la technique antérieure A l'heure actuelle, la technique de choix pour mesurer l'activité de l'acétylcholinestérase est la méthode colorimétrique d'Ellman. Celle-ci est fondée sur l'utilisation d'acétylthiocholine et de 5-5'dithiobisnitrobenzoate (DTNB) selon le schéma réactionnel qui suit : Dans un premier temps, l'acétylthiocholine apportée dans le milieu est hydrolysée par l'acétylcholinestérase en thiocholine. La thiocholine réagit ensuite sur le pont disulfure du DTNB pour donner du DTNB réduit. Cette molécule présente la particularité d'absorber fortement dans le visible (# = 412 nm, # = 13600 cm-1mol-1 et produit une coloration jaune. Si la concentration de thiocholine formée excède celle du DTNB (ce qui est en rarement le cas), la thiocholine formée en excès réagit une nouvelle fois avec le disulfure mixte obtenu en produisant une nouvelle molécule de DTNB réduit. Par colorimétrie, on peut ainsi détecter jusqu'à 1,5.10-6 mole de thiocholine et jusqu'à 1,85.10-18 mole d'acétylcholinestérase de Gymnote (EP-A-0 139 552 [5]). Depuis une dizaine d'années, des procédés de détection de l'activité enzymatique de certaines enzymes par mesure de luminescence, ont été développés. Ainsi, les documents EP-A-0 254 051 [1] et WO-A-88/00695 [2] décrivent l'utilisation de dérivés 1,2-dioxétannes stables, non luminescents, qui sous l'action d'une enzyme telle que la phosphatase alcaline, produisent un intermédiaire instable se décomposant en émettant de la lumière. Dans le cas de la phosphatase alcaline, on peut utiliser comme dioxétanne l'ester phosphorique de l'AMPPD qui réagit avec cette enzyme selon le schéma réactionnel donné cidessous : L'hydrolyse enzymatique de l'ester phosphorique de l'AMPPD génère de l'AMPD- instable qui se scinde en deux produits dont l'un, l'anion méthyl moxybenzoate émet de la lumière en présence d'un amplificateur de luminescence. Cette lumière est observée pendant plusieurs heures (glow luminescence). Par cette technique, on peut détecter jusqu'à 10-20 mole de phosphatase alcaline. A l'heure actuelle, il n'existe pas de technique équivalente pour déterminer l'activité de l'acétylcholinestérase (AchE). En effet, on ne dispose pas de substrat luminescent susceptible d'être pris en charge par le site catalytique de l'AchE qui n'est accessible qu'au travers d'une étroite gorge . Exposé de l'invention La présente invention a précisément pour objet de nouveaux composés 1,2-dioxétannes susceptibles de convenir pour mesurer l'activité de l'AchE par luminescence. Selon l'invention, les composés 1,2dioxétanne répondent à la formule : dans laquelle : - R1 est un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi les groupes alkyle, alcoxy, hydroxyalkyle, aryloxy, dialkylamino, arylamino, trialkylsiloxy, arylsiloxy, aryle, aralkyle, alkaryle, hétéroalkyle, hétéroaryle, cycloalkyle et cyclohétéroalkyle ; - R2 est choisi parmi les groupes aromatiques bivalents éventuellement substitué par un groupe amino, alkylamino, dialkylamino, alcoxy, alkyle, hydroxyalkyle, aryloxy, arylamino, diarylamino, halogène, aryle, hétéroalkyle ou hétéroaryle ; - X représente 0 ou S ; - R3 représente un groupe phényle ou un groupe polyaromatique, substitué en ortho et/ou en para du soufre par au moins un groupe choisi parmi les groupes alkylcarbonyle, arylcarbonyle, carboxyle, azido, nitro, cyano, acyle, alkylsulfonyle, arylsufonyle, acide sulfonique -S03H, alkyl sulfinyle ou aryl sulfinyle ; et - R4 et R5 sont des groupes alkyle ou aryle qui peuvent former ensemble un groupe cycloalkyle, polycycloalkyle, aryle, aryle polycyclique lié au cycle dioxétanne par une jonction spirannique. Ces composés 1,2-dioxétannes sont conçus non pas pour réagir directement avec l'AchE, mais pour réagir avec le produit obtenu par hydrolyse enzymatique de l'acétylthiocholine par l'AchE, c'est-à-dire la thiocholine. En effet, cette thiocholine peut réagir avec le pont SX du composé 1, 2-dioxétanne pour générer un anion instable du type : qui comme son homologue oxygéné AMPD est instable et génère de la lumière. Selon l'invention, dans la formule (I) cidessus, les groupes alkyle utilisés dans R1, soit seuls, soit en combinaison dans d'autres groupes, peuvent être linéaires ou ramifiés, et comprennent de préférence 1 à 8 atomes de carbone. Les groupes cycloalkyle et cyclohétéroalkyle utilisés pour R1 ont de préférence 2 ou 3 à 14 atomes de carbone. Les groupes aryle utilisés pour R peuvent comporter un ou plusieurs cycles, et de préférence 6 à 14 atomes de carbone. A titre d'exemples de tels groupes, on peut citer les groupes phényle, diphényle, naphtyle. Les groupes hétéoaryle utilisés pour R1 peuvent être par exemple les groupes pyrrolyle et pyrazolyle. Selon l'invention, R représente un groupe aromatique comportant un ou plusieurs noyaux aromatiques ayant par exemple 6 à 30 atomes de carbone. A titre d'exemple, on peut utiliser les groupes phényle, diphényle, naphtyle. Ce groupe aromatique est substitué par au moins un groupe choisi parmi les groupes mentionnés précédemment. Lorsque les groupes substituants comprennent un groupe aryle ou alkyle, le groupe alkyle comprend généralement de 1 à 10 atomes de carbone. Le groupe aryle peut comporter un hétéroatome tel que 0, S ou N, et à généralement 5 à 10 atomes de carbone. Dans la formule (I), R2 est un groupe aromatique bivalent qui peut être substitué. A titre d'exemple de groupes aromatiques utilisables, on peut citer les groupes phénylène, diphénylène et naphtylène. De préférence, selon l'invention, R2 représente un groupe phénylène éventuellement substitué en position para par rapport à X, par l'un des groupes mentionnés ci-dessus. Dans ce cas, le composé 1,2dioxétanne répond à la formule : dans laquelle R , R3, R4, R et X sont tels que définis ci-dessus, Y représente un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi les groupes amino, alkylamino, dialkylamino, alkyloxy, halogène, aryle ou alkyle. Selon l'invention, R4 et R5 forment de préférence ensemble un groupe cycloalkyle ayant par exemple 6 à 12 atomes de carbone dans le cycle, éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes alkyle en C1 à C7 ou groupes comportant un hétéroatome comme le groupe carbonyle, ou un groupe polycycloalkyle, par exemple de 6 à 30 atomes de carbone ayant deux ou plusieurs cycles fusionnés de 5 à 12 atomes de carbone chacun, lié au cycle dioxétanne par une jonction spirannique. A titre d'exemple, R et R peuvent former ensemble le groupe adamantyle. De préférence, R représente un groupe alcoxy de 1 à 4 atomes de carbone. Dans les composés de formule (I) et (II) de l'invention, R est choisi en fonction des propriétés que l'on veut obtenir. En effet R joue le rôle d'un noyau modulateur car en modifiant la nature des groupements présents sur ce noyau, on peut jouer à la fois sur le potentiel d'oxydoréduction du pont S-X et sur la solubilité du substrat luminescent dans l'eau. De préférence, R3 représente le groupe dinitrophényle. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, le composé 1,2-dioxétanne est un composé de formule (I) dans laquelle X représente S. A titre d'exemple d'un tel composé, on peut citer celui répondant à la formule : Selon un second mode de réalisation de l'invention, le dioxétanne répond à la formule (I) dans laquelle X représente 0. A titre d'exemple d'un tel composé, on peut citer celui répondant à la formule : Les dioxétannes répondant à la formule (I) dans laquelle X représente S, peuvent être préparés par un procédé comprenant les étapes suivantes : a) réaction d'un composé de formule : dans laquelle R1 et R2 sont tels que définis ci-dessus et R représente un groupe alkyle, avec une cétone de formule : dans laquelle R4 et R5 sont tels que définis ci-dessus, pour obtenir le composé de formule : b) réaction du composé de formule (VII) avec un composé de formule : R3 SCI (VIII) , R3SCN ou R3 SBr dans laquelle R est tel que défini ci-dessus, pour obtenir un composé de formule : c) réaction du composé (IX) avec de l'oxygène singulet pour obtenir le composé 1,2dioxétanne de formule (I) avec X représentant S. L'oxygène singulet utilisé dans l'étape c) peut être obtenu par décomposition à 35 C du composé d'oxydation du thriphényl phosphite avec de l'ozone. Le composé de formule (V) utilisé comme produit de départ dans ce procédé, peut être préparé par réaction d'un composé de formule : avec un composé d'étain de formule : dans laquelle R8 est tel que défini ci-dessus. Dans le cas des composés 1,2-dioxétannes de formule (I) dans laquelle X représente 0, on peut préparer les composés par un procédé comprenant les étapes suivantes : a) réaction d'un composé de formule : dans laquelle R et R2 sont tels que définis ci-dessus et R9 est un groupe protecteur d'une fonction hydroxyle, avec une cétone de formule : dans laquelle R4 et R5 sont tels que définis ci-dessus, pour obtenir le composé de formule : b) réaction de déprotection du composé de formule (XIII) pour obtenir le composé de formule : c) réaction du composé de formule (XIV) avec le composé de formule R3SC1 (VIII), R3 SCN ou R3 SBr dans laquelle R est tel que défini ci-dessus, pour obtenir un composé de formule : et d) réaction du composé de formule (XV) avec de l'oxygène singulet pour obtenir le composé 1,2- dioxétane de formule (I) dans laquelle X représente 0. Comme précédemment, l'oxygène singulet utilisé dans la dernière étape peut être obtenu par réaction de triphénylphosphite avec de l'ozone. Par ailleurs, le groupe protecteur R du composé XII peut être un groupe trialkyl silyle. La présente invention a encore pour objet un procédé de dosage d'un thiol dans un échantillon liquide, qui consiste à ajouter à l'échantillon une solution d'un composé 1,2-dioxétanne de formule (I) décrit ci-dessus, et à mesurer la lumière émise par l'échantillon due à la décomposition du composé 1,2- dioxétanne par le thiol. De préférence, la solution du composé 1,2- dioxétanne comprend de plus un amplificateur de luminescence. L'emploi d'un tel amplificateur, a pour but d'amplifier l'émission de lumière et d'éviter une extinction trop rapide par le milieu des phénomènes d'émission de lumière. Le signal lumineux peut être augmenté de 10 fois à 500 fois suivant l'amplificateur utilisé. L'amplificateur peut être une solution aqueuse micellaire contenant un sel d'ammonium quaternaire à longue chaîne hydrocarbonée et une molécule fluorescente possédant également une longue chaîne. Après ajout de cet amplificateur, le composé 1,2-dioxétanne diffuse à l'intérieur d'une micelle au sein de laquelle il possède un environnement totalement hydrophobe. Lors de la dégradation du dioxétanne, la molécule activée formée peut alors retourner à son état fondamental en transférant son énergie lumineuse aux molécules fluorescentes voisines. On obtient ainsi une amplification du signal lumineux. Des amplificateurs de luminescence appropriés sont par exemple ceux décrits dans les documents EP-B-352 713 [3] et WO-A-94/21821 [4]. La solution de composé 1,2-dioxétanne utilisée pour ce dosage peut être une solution du composé dans l'éthanol absolu et un tampon appropriée, à laquelle on ajoute une solution de l'amplificateur de luminescence dans un tampon approprié. La concentration en composé 1,2-dioxétanne de la solution peut varier dans une large gamme. Généralement, on utilise des concentrations finale de 10à 10-4M. L'invention a encore pour objet, un procédé de dosage de l'acétylcholinestérase, qui comprend les étapes suivantes : 1) addition d'acéthylthiocholine à un échantillon contenant l'acétylcholinestérase à doser et incubation du mélange pour former de la thiocholine par hydrolyse enzymatique, 2) addition au mélange d'une solution d'un composé 1,2-dioxétanne de formule (I) décrit ci-dessus, et 3) mesure de la lumière émise dans l'échantillon par réaction de la thiocholine avec le composé 1,2dioxétanne. Dans ce procédé, on peut ajouter le composé 1,2-dioxétanne en même temps que l'acétylthiocholine au contact de l'acétylcholinestérase. De préférence, la solution du composé 1,2dioxétanne comprend de plus un amplificateur de luminescence. Les amplificateurs de luminescence utilisés peuvent être du même type que ceux décrits ci-dessus pour le dosage d'un thiol. La solution du composé 1,2dioxétanne peut être également du même type que celle utilisée pour le dosage d'un thiol. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture de la description qui suit d'exemples de réalisation, donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence aux dessins annexés. Brève description des dessins La figure 1 représente le schéma réactionnel utilisé pour préparer un composé 1,2dioxétanne conforme au premier mode de réalisation de l'invention. La figure 2 représente le schéma réactionnel utilisé pour préparer un composé 1,2dioxétanne conforme au second mode de réalisation de l'invention. La figure 3 est un diagramme illustrant l'évolution de l'absorbance en fonction du rapport thiocholine/composé de l'invention dans le dosage de la thiocholine. La figure 4 est un diagramme représentant l'évolution du rendement lumineux RLu en fonction du rapport thiocholine/composé 1,2-dioxétanne utilisé pour le dosage de la thiocholine. La figure 5 est un diagramme illustrant l'évolution du rendement lumineux en fonction de la concentration en acétylcholinestérase, pour le dosage de l'AchE. La figure 6 est un diagramme illustrant l'évolution du rendement lumineux en fonction du temps d'incubation (en minutes) pour le dosage de l'acétylcholinestérase. Exposé détaillé des modes de réalisation Exemple 1 : Synthèse du dioxétanne 1 Pour cette synthèse, on suit le schéma réactionnel représenté sur la figure 1. a) préparation de l'ester éthylique d'acide 3-iodo benzoique 3 : 1,5 ml (9,37 mmole, 1 éq.) de 3-bromo benzoate d'éthyle 2 est ajouté à une solution contenant 23,3 g (0,14 mole, 15 éq. ) de KI et 8,92 g (0,047 mole, 5 éq. ) de Cul dans 56 ml de hexaméthylphosphoramide (HMPT). On chauffe le tout à 155 C pendant 3 jours. Après avoir laissé la température du milieu réactionnel descendre à température ambiante, le mélange est versé dans une solution aqueuse de NaCl saturée (200 ml). Les deux phases obtenues sont séparées, puis la phase aqueuse est extraite à l'éther (3x100 ml). Les différentes phases organiques sont ensuite rassemblées, séchées sur MgS04, et concentrées sous pression réduite. Le produit brut résultant est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane / acétate d'éthyle 95/ 5). On obtient ainsi le 3-iodo benzoate d'éthyle 3 avec un rendement de 92% sous forme d'une huile incolore. CgHgIOz = 276 huile incolore rendement : 92% CCM (SiOz) : hexane/ acétate d'éthyle 90/ 10 Rf=0,5 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 8, 22 (m, 1H, Harom) : 7, 85 (m, 1H, Harom); 7,70 (m, 1H, Harom); 7,01 (m, 1H, Harom); 4, 24 (q, J=9,3 Hz, 2H, -OCHz) ; 1,27 (t, J=9,3Hz, 3H, -CH3) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 164,72 (CO); 141,51 ; 138,25 ; 132,28 ; 130,05 ; 128,62 ; 93,87 (CI) ; 61,26 (-OCH2-); 14,35 (-CH3) SM (IC / NH3, m/z) : 294 [M+NH4]+ 311 [M+NH4+NH3]+ + b) Préparation du tert-butylsulfanyltributyl étain 4 : Sous atmosphère d'argon, 4,1 ml (15,1 mmoles, 1 éq. ) de Bu3SnCl sont ajoutés à une solution contenant 1,704 ml (15,1 mmoles, 1 éq. ) de tert-butylthiol et 2,53 ml (18,12 mmole, 1,2 éq.) de triéthylamine dans 100 ml de CCl4. Après une nuit d'agitation, le milieu réactionnel est filtré, lavé avec une solution aqueuse d'acide acétique à 5% (100 ml) puis avec de l'eau (100 ml). La phase organique est séchée sur MgS04 puis concentrée sous pression réduite. Le produit brut réactionnel est propre. Il est utilisé tel quel pour la suite. C16H36SSn = 378,7 solide blanc rendement : 98% CCM (Si.02) : dégradation sur silice RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 1,49-1,37 (m, 6H, -CH2-); 1,28 (s, 9H, -C(CH3)3) ; 1,23- 1,12 (m, 6H, -CH2-); 1,02-0,97 (m, 6H, -CH2-); 0,76 (t, J=9,7Hz, 9H, -CH2CH3) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 43,11 (-C(CH3)3) ; 36,60; 28,64; 26,97; 14,31; 13,51 c) Préparation de l'ester éthylique de l'acide 3-tert-butylsulfanyl-benzoique 5 : 83,66 mg (0,072 mmole, 0,1 éq.) de Pd(PPh3)4 sont ajoutés dans une boite à gant à une solution contenant 0,2 g (0,72 mmole, 1 éq.) de 3-iodo benzoate d'éthyle 3 dans 20 ml de toluène anhydre. Sous atmosphère d'argon, 0,302 g (0,79 mmole, 1,1 éq. ) du composé 4 dissous dans 5 ml de toluène anhydre est alors ajouté. Le milieu réactionnel est ensuite porté au reflux pendant 48 heures. Après retour à température ambiante, 50 ml d'éther et 50 ml d'une solution aqueuse de KF à 10% sont ajoutés. Les deux phases obtenues sont séparées, puis la phase aqueuse est extraite à l'éther (3x100 ml). Les différentes phases organiques sont ensuite rassemblées, séchées sur MgS04, et concentrées sous pression réduite. Le brut résultant est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane/ acétate d'éthyle 95/ 5). On obtient le composé 5. C13H18O2S = 238 huile jaune rendement : 75% CCM (Si02) hexane/ acétate d'éthyle 80/ 20 Rf=0,8 8 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 8,21 (m, 1H, Harom); 8, 04 (m, 1H, Harom) ; 7,72 (m, 1H, Harom) ; 7,42 (m, 1H, Harom)4,39 (q, J=9,3 Hz, 2H, -OCH2-); 1,40 (t, J=9,3 Hz, 3H, -CH3) ; 1,30 (s, 9H, -C (CH3) 3) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 166,19 (CO); 141,68; 138,25; 133,43; 131,02; 129,86; 128, 51; 61, 23 (-OCH2-) ; 31, 04 (-C (CH3) 3) ; 14, 41 (-CH2CH3) SM (IC/ NH3, m/z) : 256 [M+NH4]+ 273 [M+NH4+NH3]+ d) Préparation du 2-[(3-tert-butylsul- fanyl-phényl)-éthoxy-méthylène]-adamantane 7 : Dans une boite à gants sous azote, 4,36 g (28,26 mmoles, 10 éq.) de TiCl3 sont déposés dans un ballon de 250 ml préalablement purgé à l'argon. Le ballon est refroidi à 0 C et 35 ml de tétrahydrofuranne THF puis 14,1 ml (14,1 mmoles, 5 éq.) de LiAlH4 en solution 1M dans l'éther sont ajoutés. Après 10 minutes d'agitation à 0 C, 2,37 ml (16,9 mmoles, 6 éq.) de triéthylamine sont ajoutés. Le milieu réactionnel est porté au reflux pendant 1 heure puis 0,532 g (3,53 mmoles, 1,25 éq.) de 2-adamantanone 6 et 0,675 g (2,826 mmole, 1 éq.) de l'ester 5 en solution dans 8 ml de THF sont ajoutés goutte à goutte en 2,5 heures. Après une nuit d'agitation au reflux, 200 ml d'éther et 200 ml d'eau sont ajoutés dans le milieu réactionnel. Les deux phases obtenues sont séparées, puis la phase aqueuse est extraite à l'éther (3x200 ml). Les différentes phases organiques sont ensuite rassemblées, séchées sur MgSO, et concentrées sous pression réduite. Le brut ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane/ acétate d'éthyle 98/ 3). On obtient ainsi l'éther d'énol 7(60%) sous forme d'une huile incolore. C23H320S = 356 huile incolore rendement : 60% CCM (SiOz) : hexane/ acétate d'éthyle 90/ 10 Rf=0,7 7 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 7, 51 (m, 1H, Harom) ; 7, 44 (m, 1H, Harom); 7,37-7,31 (m, 2H, Harom) ; 3, 47 (q, J=9, 2 Hz, 2H, -OCH2-) ; 3, 29 (m, 1H, Hadam) ; 2, 63 (m, 1H, Hadam); 1,99-1,60 (m, 12H, (Hadam) ; 1, 31 (s, 9H, -C (CH3) 3) ; 1,15 (t, J=9,2 Hz, 3H, -CH2CH3) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 138,53 ; 136,39 ; 135,14 ; 132,31 ; 129,67;129,40; 128,20 ; 128,02 ; 64,74 (-OCH2-) 46,02; 39,32 ; 39,06 ; 37,32 ; 32, 53; 31, 09; 30, 46; 28,48; 15, 19 (-CH2CH3) SM (IC / NH3, m/z) : 357 [M+H]+ e) Préparation du 2-{[3-(2,4-dinitrophé- nylsulfanyl)-phenyl]-ethoxy-methylene}-adamantane 9 : Après avoir solubilisé 0,949 g (2,66 mmole, 1 éq. ) d'éther d'énol 7 dans 7 ml de THF distillé, 0,625 g (2,66 mmoles, 1 éq. ) de chlorure de 2,4dinitrobenzenesulfényle 8 est ajouté à température ambiante sous atmosphère d'argon. Le milieu réactionnel est alors agité pendant 2 heures puis concentré sous pression réduite. Le brut obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane/ acétate d'éthyle/ triéthylamine 95/ 5/ 0,1). On obtient ainsi le disulfure 9 avec un rendement de 17% sous forme d'une huile jaune. C25H26N2O5S2 = 498 huile jaune rendement : 17% CCM (SiOz) hexane acétate d'éthyle triéthylamine 95/ 5 / 0,1 Rf=0,25 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 9, 13 (m, 1H, Harom); 8,44 (m, 2H, Harom) ; 7,43 (m, 1H, Harom); 7,39-7,24 (m, 3H, Harom) ; 3,42 (q, J=9, 2 Hz, 2H, -OCH2-); 3, 24 (m, 1H, Hadam); 2,53 (m, 1H, Hadam) ; 1,96-1,70 (m, 12H, Hadam) ; 1,12 (t, J=9, 2 Hz, 3H, Hadam) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 145,90; 140,84; 137,79; 134,05; 133,47; 129,36; 128,97; 128,69; 127,57; 127,15; 121,65; 65,11; 39,32; 38,99; 37,15 ; 32,50 ; 30,59 ; 28,28 ; 15,20 SM (IC / NH3, m/z) : 499 [M+H] 516 [M+NH4]+ f) Préparation du dioxétanne 1 : Une solution de 0,0493 ml (0,188 mmole, 1,5 éq. ) de triphénylphosphite dans 1,5 ml de CH2Cl2 est refroidie à -78 C puis de l'ozone est bullé dans le mélange jusqu'à l'obtention d'une coloration bleue. Le milieu réactionnel est ensuite purgé avec de l'argon jusqu'à disparition de la coloration bleue. 0,0625 g (0,126 mmoles, 1 éq. ) du disulfure 9 dans 0,75 ml de CH2Cl2 est alors ajouté à -78 C puis on laisse remonter à température ambiante. Après concentration du milieu réactionnel sous pression réduite, le brut obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane acétate d'éthyle 90 10). On obtient ainsi le dioxétane recherché 1 avec un rendement de 22% sous forme d'une huile jaune. C25H26N207S2 = 530 huile jaune rendement : 22% CCM (Si02) hexane/ acétate d'éthyle 95 / 5 Rf=0, 2 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 9, 13 (m, 1H, Harem); 8,43 (m, 2H, Harom) ; 8,10-7,4 (m, 2H, Harom); 7,52 (m, 1H, Harom); 7,41 (m, 1H, Harom); 3, 53 (dt, J=9,3 Hz, J=21, 7 Hz, 1H, -OCH2-) ; 3, 15 (dt, J=9,3 Hz, J=21,7 Hz, 1H, -OCH2-); 3,05 (m, 1H, Hadam) 1,92 (m, 1H, Hadam); 1,82-1,50 (m, H, Hadam) ; 1,43-1,38 (m, 1H, Hadam); 1,23 (t, J=9, 3 Hz, 3H, -CH3) ; 1,15-1,11 (m, 1H, Hadam) ; 0, 91-0, 82 (m, 2H, Hadam) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 145,96; 145,27; 137,66; 134,31; 129, 60; 129,32; 128,87; 127,54; 121,89 ; 111,03 ; 95,40 ; 58,51 ; 36,38 ; 34,86 ; 33,33; 33,08; 32,20; 31,91; 31,68; 29,78; 26,06; 25,99; 15,30 UV : =304 nm (s=9010 éthanol). Exemple 2 : Synthèse du dioxétanne 10. Pour cette synthèse, on suit le schéma réactionnel représenté sur la figure 2. a) Préparation de l'ester méthylique de l'acide 3-(tert-butyl-dimethyl-silanyloxy)-benzoique 12 2,28 g (15 mmoles, 1 éq. ) de (3-hydroxy)benzoate de méthyle 11 et 2,55 g (37,5 mmoles, 2,5 éq.) d'imidazole séché sont dissous succesivement dans 4 ml de DMF anhydre. 2,71 g (18 mmoles, 1,2 éq.) de diméthyl-tert-butyl-chlorosilane TBDMSC1 sont ensuite ajoutés après une dizaine de minutes d'agitation. Après 14 heures d'agitation, 100 ml d'une solution aqueuse de NaHC03 (5%) sont ajoutés dans le milieu. Le tout est extrait au pentane (3x100 ml) puis les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgS04 et concentrées sous pression réduite. Le résidu est chromatographié sur colonne de silice (éluant : pentane/ éther 90 / 10). On obtient ainsi 3,39 g d'une huile incolore. huile incolore rendement : 84% CCM (Si02) pentane/ acétate d'éthyle 99 1 Rf=0,25 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 7, 60 (d, J=8 Hz, 1H, , Harom) ; 7,48 (t, J=2 Hz, 1H, , Harom); 7,25 (t, J=8 Hz, 1H, , Harom) ; 6,99 (dd, J=8 Hz, J=2 Hz, 1H, , Harom) ; 3, 66 (s, 3H, -OCH3) ; 0, 97 (s, 9H, -C (CH3) 3) ; 0, 18 (s, 6H, -SiCH3) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 168,54 ; 155,44 ; 131,28 ; 129,08 ; 124,48; 122,13 ; 120,73 ; 51,73; 25,36; 13,91; -4,6 b) Préparation de [3-(adamantan-2-ylidène- méthoxy-méthyl)-phénoxy]-tert-butyl-diméthyl-silane 14: Dans une boite à gants sous azote, 4,36 g (28,26 mmoles, 10 éq. ) de TiCl3 sont déposés dans un ballon de 250 ml préalablement purgé à l'argon. Le ballon est refroidi à 0 C et 35 ml de THF puis 14,1 ml (14,1 mmoles, 5 éq.) de LiAlH4 en solution 1M dans l'éther sont ajoutés. Après 10 minutes d'agitation à 0 C, 2,37 ml (16,9 mmoles, 6 éq. ) de triéthylamine sont ajoutés. Le milieu réactionnel est porté au refux pendant 1 heure puis 0,532 g (3,53 mmoles, 1,25 éq.) d'adamantanone 13 et 0,752 g (2,826 mmole, 1 éq.) d'ester silylé 12 en solution dans 8 ml de THF sont ajoutés goutte à goutte en 2,5 heures. Après une nuit d'agitation au reflux, 200 ml d'éther et 200 ml d'eau sont ajoutés dans le milieu réactionnel. Les deux phases obtenues sont séparées, puis la phase aqueuse est extraite à l'éther (3x200 ml). Les différentes phases organiques sont ensuite rassemblées, séchées sur MgS04, et concentrées sous pression réduite. Le brut ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane/ acétate d'éthyle 98/ 3) . On obtient ainsi l'éther d' énol 14 (59%) sous forme d'une huile incolore. C24H36O2Si = 385 huile incolore rendement : 59% CCM (Si02) hexane/ acétate d'éthyle 95 / 5 Rf=0,4 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 7,09 (m, 1H, , Haro.) ; 6, 81 (m, 1H, , Harom) ; 6,70 (m, 2H, , Harom) ; 3, 20 (s, 3H, -OCH3) ; 3, 14 (m, 1H, Hadam) 2,54 (m, 1H, Hadam); 1,87-1,67 (m, 12H, Hadam) ; 0, 91 (s, 9H, -C(CH3)3); 0,14 (s, 6H, -SiCH3) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 155,45; 143,55; 136,83; 131,17; 129,00; 122,62; 121,16; 119,43 ; 57,60 ; 39,32 ; 39,18 ; 38,99 ; 37,37 ; 32,88 ; 30,49 ; 28,49; 25,80 ; 18,32 ; -4,70 c) Préparation du 3-(adamantan-2-ylidèneméthoxy-méthyl)-phénol 15 : Dans un ballon sous agitation magnétique et sous atmosphère d'argon sont placés successivement 150 mg (0,39 mmole, 1 éq. ) de composé 14 dans 2,5 ml de THF anhydre puis goutte à goutte 0,430 ml (0,43 mmole, 1,1 éq. ) de fluorure de tétrabutylammonium 1M dans du THF. Après 15 minutes, le mélange est repris dans un large excès d'éther (100 ml), lavé à l'eau (50 ml), séché sur MgS04, filtré sur Büchner et concentré sous pression réduite. On obtient ainsi l'éther d'énol 15 avec un rendement de 83% sous forme d'une huile incolore. C18H22O2 = 270 huile incolore rendement : 83% CCM (Si02) : hexane/ acétate d'éthyle/ triéthylamine 90 / 10 / 1 Rf=O,4 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 7, 22 (m, 1H, , Harom); 6, 92 (m, 1H, , Harom); 6,89 (m, 1H, , Harom); 6,83 (m, 1H, , Harom) ; 3, 37 (s, 3H, -OCHJ) 3, 27 (m, 1H, Hadam) 2, 68 (m, 1H, Hadam) ; 1,97-1,79 (m, 12H, Hadam) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 156,09; 142,88; 136,73; 132,75; 129, 29; 121,91; 116,09; 114,90; 57,89;,39,26; 39,13; 37,25; 32,41; 30,46; 28,38 d) Préparation de l'éther d'énol 17 : Sous atmosphère inerte et à 0 C, 0,316 g (1,34 mmole, 1 éq.) de chlorure de 2,4dinitrobenzènesulfényle 16 est ajouté à une solution contenant 0,365 g (1,34 mmole, 1 éq.) d'éther d'énol 15 et 0,188 ml (1,34 mmole, 1 éq.) de triéthylamine dans 20 ml de CH2Cl2. Le mélange est ensuite agité à 0 C pendant 1 heure. Après ajout de 50 ml d'eau, les deux phases obtenues sont séparées, puis la phase aqueuse est extraite au dichlorométhane (3x75 ml). Les différentes phases organiques sont ensuite rassemblées, séchées sur MgS04, et concentrées sous pression réduite. Le brut ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane acétate d'éthyle 90 10). Le produit désiré 17 est obtenu avec un rendement de 77% sous forme d'une huile jaune. La cétone correspondant au produit d'hydrolyse de l'éther d'énol est observé comme produit secondaire dans cette réaction. C24H24N2O6S = 468 huile jaune rendement : 77% CCM (Si02) hexane acétate d' éthyle 90 10 Rf=0,4 4 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 9, 15 (d, J=2,9 Hz, 1H, Harom); 8,46 (dd, J=2,9 Hz, J=12,l Hz, 1H, Harom) ; 7,88 (d, J=12,l Hz, 1H, Harom); 7, 35-7, 27 (m , 1H, Harom) ; 7,18-7,09 (m, 3H, Harom) ; 3, 30 (s, 3H, -OCH3) ; 3, 23 (m, 1H, Hadam) ; 2, 60 (m, 1H, Hadam); 1,95-1,73 (m, 12H, Hadam) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 157,52; 153,27; 145,19; 142,65; 139,77; 137,87; 133,21; 129,58 ; 128,25 ; 125,49 ; 124,21 ; 121,01 ; 116,80 ; 115,47 ; 58,05; 39,25; 39,08; 37,16; 32,42; 31,68; 30,41; 28,30 SM (IC / NH3, m/z) : 469 [M+H]+ e) Préparation dioxétane 10 : Une solution de 0,131 ml (0,5 mmole, 1 éq.) de triphénylphosphite dans 8 ml de CHzClz est refroidie à -78 C puis de l'ozone est bullé dans le mélange jusqu'à l'obtention d'une coloration bleue. Le milieu réactionnel est ensuite purgé avec de l'argon jusqu'à disparition de la coloration bleue. 0,234 g ( 0, 5 mmoles, 1 éq. ) de l'éther d' énol 17 dans 4 ml de CH2Cl2 est alors ajouté à -78 C puis on laisse remonter à température ambiante. Après concentration du milieu réactionnel sous pression réduite, le brut obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane acétate d'éthyle 90 10). On obtient ainsi le dioxétane 10 recherché avec un rendement de 18% sous forme d'une huile jaune. C24H24N2O8S = 500 huile jaune rendement : 18% CCM (Si02) . hexane/ acétate d'éthyle 90/ 10 Rf=0,35 RMN 1H (CDC13/ TMS, 300 MHz) : 9,15 (d, J=3,l Hz, 1H, Harom); 8, 42 (dd, J=3,l Hz, J=12,l Hz, 1H, Harom); 7,81 (d, J=12,l Hz, 1H, , Harom) ; 7,65-7,20 (m, 2H, Harom) ; 7,43-7,41 (m, 1H, Harom) ; 7,28-7,24 (m, 1H, Harom); 3, 19 (s, 3H, -OCH3) ; 3, 00 (m, 1H, Hadam); 2, 07 (m, 1H, Hadam) : 1,95-1,50 (m, 8H, Hadam); 1,46-1,42 (m, 1H, Hadam) : 1,27-1,22 (m, 1H, Hadam) ; 0,93-0,84 (m, 2H, Hadam) RMN 13C (CDC13/ TMS, 75 MHz) : 157,79; 152,83; 145,27; 139,88; 137,54; 130,03; 128, 27; 123,98 ; 121,08 ; 117,40 ; 111,59 ; 95,52,50,10; 36,54 ; 36,41; 34,83; 33,31; 33,14; 32,37; 31,76; 31,57; 26,04 UV : =320 nm (s=4755 éthanol) SM ( IC / NH3, m/z) : 518 [M+NH4]+ Exemple 3 : dosage d'un thiol. Dans cet exemple, on utilise le composé 1 pour doser un thiol constitué par la thiocholine. Pour ce dosage, on utilise la réaction suivante : On vérifie tout d'abord que cette réaction a bien lieu en ajoutant 60 l d'une solution éthanolique comprenant 1,2.10 3 mol/1 du dioxétanne 1, à 1,2 ml d'une solution de thiocholine à 5.10 mol/1 dans un tampon phosphate (10-2 M, pH = 7,4). Juste après mélange, on observe très rapidement, en 2 minutes environ, la disparition de la bande à la longueur d'onde = 374 nm correspondant au dioxétanne de départ, et l'apparition simultanée d'une nouvelle bande à une longueur d'onde X = 402 nm. Cela montre bien que le pont disulfure se coupe et que l'on a formation du thiolate dinitré qui absorbe dans le visible. On a ensuite étudié l'influence du rapport thiocholine/composé 1,2-dioxétanne sur l'absorbance afin de vérifier la réaction. Dans ce cas, on a utilisé 50 l d'une solution de thiocholine ayant une concentration en thiocholine de 4,8.10- à 6.10-5 mol/1 dans un tampon phosphate (10-2 M, pH = 7,4), 25 l de tampon EIA (essai immunoenzymatique) : pH = 7,4 ; K2HP04 0, 08 M ; KH2P04 0, 02 M ; NaCL 0, 15 M ; Sérum albumine bovine 145 pM ; NaN3 1,5 mM, 100 l du produit Sapphire qui est un amplificateur de luminescence commercialisé par Tropix, et 100 l du composé dioxétanne 1 de l'exemple 1 à une concentration de 1,2.10- M dans un mélange d'éthanol et du tampon fourni avec l'amplificateur de luminescence commercialisé par TROPIX (1 : 9 en volume). Pour chaque concentration de thiocholine, on détermine l'absorbance à 414 nanomètres après une nuit d'agitation à la température ambiante. La figure 3 illustre les résultats obtenus c'est-à-dire l'absorbance UV du milieu à 414 nm en fonction du rapport thiocholine/composé 1. Sur cette figure, on remarque que l'absorbance chute pour devenir quasiment nulle dès que le rapport thiocholine/composé 1 devient inférieur à 1. Sur la figure 4, on a représenté les résultats obtenus dans les mêmes conditions, mais en mesurant la lumière émise au lieu de l'absorbance. Comme précédemment, immédiatement après l' addition de la thiocholine, on observe une lumière instantanée qui continue à être observée même lorsque le rapport thiocholine/dioxétanne est bien inférieur à 1. Ces résultats montrent bien que l'addition du thiol se fait d'abord sur l'atome de soufre directement porté par le noyau moduleur R défini précédemment, le thiolate produit par la rupture du pont disulfure se décompose en produisant de la couleur. La présence de l'amplificateur de luminescence est intéressante car elle permet de minimiser l'extinction directe par le milieu aqueux de cette luminescence. Exemple 4 : Dosage de l'acétylcholinestérase au moyen du composé 1. Dans cet exemple, on réalise le dosage de l'acétylcholinestérase en utilisant le composé 1,2dioxétanne 1 de l'exemple 1, comme substrat luminescent. Dans ce but, on ajoute 50 l d'une solution d'acétylthiocholine à une concentration de 2,5.10 mol/1 dans du tampon phosphate (10 -2 M, pH = 7,4) à 25 l d'acétylcholinestérase dans du tampon EIA. Après 30 minutes de réaction sous agitation à la température ambiante, on ajoute 25 l de tacrine à une concentration de 1,2.10- M dans du tampon phosphate (10-2 M, pH = 7,4), puis 100 l du dioxétanne 1 et 100 l de l'amplificateur de luminescence Sapphire commercialisé par Tropix. La solution de dioxétanne utilisée est formée à partir du mélange de 100 l de solution-mère à 1,2.10' mol/1 de dioxétanne 1 dans l'éthanol absolu avec 900 l de tampon EIA. L'addition de tacrine est effectuée pour stopper l'activité de l'acétylcholinestérase avant d'observer la luminescence. Cette procédure est effectuée pour diverses concentrations en acétylcholinestérase allant de 0,001 à 0,5 unité Ellman/ml. Cette unité Ellman (UE11) est définie comme la quantité d'enzyme produisant un accroissement d'absorbance d'une unité à 414 nm pendant 1 minute, dans un volume de 1 ml de milieu d'Ellman, pour 1 cm de trajet optique à 25 C. Une UEll/ml correspond à 7,35.10-z unité enzymatique, l'unité enzymatique UE étant défini comme la quantité d'enzyme catalysant l'hydrolyse d'une pmole de substrat pendant 1 minute à 25 C. Une UEll/ml correspond environ à 10-10 mol/1 d'acétylcholinestérase sous forme monomérique. Comme dans l'exemple précédent, on observe une flash luminescence pour les différentes concentrations en enzyme. Cette luminescence est quantifiée en regardant la valeur du maximum d'intensité. Les résultats obtenus sont représentés sur la figure 5. Sur cette figure, on voit que le dosage présente une très bonne sensibilité, puisque l'on peut détecter par luminescence jusqu'à environ 8.10 UEll/ml d'acétylcholinestérase, soit à peu près la même limite de sensibilité qu'avec le réactif d'Ellman. On a observé que l'on peut améliorer la sensibilité du dosage en augmentant la durée de réaction de l'acétylthiocholine avec l'acétylcholinestérase. Dans ce but, on a effectué un dosage d'acétylcholinestérase en utilisant 75 l d'une solution à 10 3 mol/1 d'acétylthiocholine dans du tampon phosphate (10-2 M, pH = 7,4), 25 l d'acétylcholinestérase à une concentration correspondant à 8,3.10- UEll/ml dans du tampon EIA, 100 l de la solution de dioxétanne utilisée précédemment et 100 l d'amplificateur de luminescence sapphire. Dans cet essai, on utilise des temps d'incubation différents pour vérifier l'influence du temps de réaction sur le signal luminescent. La figure 6 illustre les résultats obtenus. Ainsi, on remarque que la lumière émise après l'ajout du substrat luminescent 1 s'avère proportionnelle au temps d'incubation. Ainsi, en doublant ou triplant le temps de réaction, on double ou triple la quantité de lumière émise. Il est donc possible d'améliorer la sensibilité du dosage en utilisant un temps d'incubation plus long. REFERENCES CITEES [1] EP-A-0 254 051 [2] : WO-A-88/00695 [3] : EP-B-352 713 [4] : WO-A-94/21821 [5] : EP-A-0 139 552 REVENDICATIONS 1. Composé 1,2-dioxétanne de formule : dans laquelle : - R est un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi les groupes alkyle, alcoxy, hydroxyalkyle, aryloxy, dialkylamino, arylamino, trialkylsiloxy, arylsiloxy, aryle, aralkyle, alkaryle, hétéroalkyle, hétéroaryle, cycloalkyle et cyclohétéroalkyle ; - R est choisi parmi les groupes aromatiques bivalents éventuellement substitués par un groupe par un groupe amino, alkylamino, dialkylamino, alcoxy, alkyle, hydroxyalkyle, aryloxy, arylamino, diarylamino, halogène, aryle, hétéroalkyle ou hétéroaryle ; - X représente 0 ou S ; - R représente un groupe phényle ou un groupe polyaromatique, substitué en ortho et/ou en para du soufre par au moins un groupe choisi parmi les groupes alkylcarbonyle, arylcarbonyle, carboxyle, azido, nitro, cyano, acyle, alkylsulfonyle, arylsufonyle, acide sulfonique -S03H, alkyl sulfinyle ou aryl sulfinyle ; et - R4 et R5 sont des groupes alkyle ou aryle qui peuvent former ensemble un groupe cycloalkyle, polycycloalkyle, aryle, aryle polycyclique lié au cycle dioxétanne par une jonction spirannique. 2. Composé 1,2-dioxétanne selon la revendication 1, qui répond à la formule : dans laquelle R1, R3, R4, R5 et X sont tels que définis ci-dessus, Y représente un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi les groupes amino, alkylamino, dialkylamino, alkyloxy, halogène, aryle ou alkyle. 3. Composé 1,2-dioxétane selon la revendication 1 ou 2 dans lequel R et R forment ensemble le groupe adamantyle. 4. Composé 1,2-dioxétane selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel R représente un groupe alcoxy de 1 à 4 atome de carbone. 5. Composé 1,2-dioxétanne selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel R représente le groupe dinitrophényle. 6. Composé 1,2-dioxétanne selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel X représente S. 7. Composé 1,2-dioxétanne selon la revendication 6, répondant à la formule : 8. Composé 1,2-dioxétanne selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel X représente 0. 9. Composé 1,2-dioxétanne selon la revendication 8, répondant à la formule : 10.Procédé de préparation d'un composé 1,2dioxétanne de formule : dans laquelle X représente S et R1, R2, R3, R4 et R5 sont tels que définis dans la revendication 1, comprenant les étapes suivantes : a) réaction d'un composé de formule : dans laquelle Ret R2 sont tels que définis ci-dessus et R représente un groupe alkyle, avec une cétone de formule : dans laquelle R4et R5 sont tels que définis ci-dessus, pour obtenir le composé de formule : b) réaction du composé de formule (VII) avec un composé de formule : dans laquelle R3 est tel que défini ci-dessus pour obtenir un composé de formule : c) réaction du composé (IX) avec de l'oxygène singulet pour obtenir le composé 1,2dioxétanne de formule (I) avec X représentant S. 11. Procédé selon la revendication 10, dans lequel on prépare le composé de formule (V) par réaction d'un composé de formule : avec un composé d'étain de formule : dans laquelle R8 est tel que défini dans la revendication 10. 12. Procédé de préparation d'un composé 1,2-dioxétanne de formule : dans laquelle X représente 0 et R1,R2, R3, R4et R5sont tels que définis dans la revendication 1, qui comprend les étapes suivantes : a) réaction d'un composé de formule : dans laquelle R1 et R2 sont tels que définis ci-dessus et R9 est un groupe protecteur d'une fonction hydroxyle, avec une cétone de formule : dans laquelle R4 et R5 sont tels que définis ci-dessus, pour obtenir le composé de formule : b) réaction de déprotection du composé de formule (XIII) pour obtenir le composé de formule : c) réaction du composé de formule (XIV) avec le composé de formule R3SC1 (VIII), R3 SCN ou R3 SBr dans laquelle R3 est tel que défini ci-dessus, pour obtenir un composé de formule : et d) réaction du composé de formule (XV) avec de l'oxygène singulet pour obtenir le composé 1,2dioxétane de formule (I) dans laquelle X représente 0. 13. Procédé de dosage d'un thiol dans un échantillon liquide consistant à ajouter à l'échantillon, une solution d'un composé de 1,2dioxétanne selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, et à mesurer la lumière émise par l'échantillon due à la décomposition du composé 1,2-dioxétanne par le thiol. 14. Procédé selon la revendication 13, dans lequel la solution du composé 1,2-dioxétanne comprend de plus un amplificateur de luminescence. 15. Procédé de dosage de l'acétylcholinesterase, qui comprend les étapes suivantes : 1) addition d'acéthylthiocholine à un échantillon contenant l'acétylcholinestérase, à doser et incubation du mélange pour former de la thiocholine par hydrolyse enzymatique, 2) addition au mélange d'une solution d'un composé 1,2-dioxétanne selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, et 3) mesure de la lumière émise dans l'échantillon par réaction de la thiocholine avec le composé 1,2dioxétanne. 16. Procédé selon la revendication 15, dans lequel le composé 1,2-dioxétanne est ajouté en même temps que l'acétylthiocholine au contact de l'acétylcholinestérase. 17. Procédé selon la revendication 15 ou 16, dans lequel la solution du composé 1,2-dioxétanne comprend de plus un amplificateur de luminescence.