Brevet FR2782519A1 — publié le 20000225

DESCRIPTION La présente invention concerne des polypeptides constitués d'une partie des 85 acides aminés constituant l'extrémité C-terminale de la protéine de capside ORF 65 du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8). Ce polypeptide permet de détecter directement ou indirectement la présence du virus humain du virus HHV 8 dans un échantillon biologique. Le huitième herpesvirus humain (HHV 8), encore dénommé herpès humain associé au sarcome de Kaposi (KSHV), a été découvert chez des patients infectés par le virus de l'immunodéficience humaine (HIV) et développant des lésions de maladie de Kaposi. On sait maintenant que ce virus se retrouve dans toutes les formes épidémiologiques de maladies de Kaposi. Il est aussi associé à certains processus lymphomateux tels que les lymphomes primitifs des séreuses, récemment caractérisés. Le virus HHV 8 est également associé à la maladie de Castleman, prolifération lymphocytaire atypique associée à la survenue d'une maladie de Kaposi. Il s'agit d'un gamma-herpesvirus dont le génome est d'environ 140 kilobases (kb). Certains de ces gènes sont potentiellement impliqués et/ou participent à la transformation cellulaire. Les études de prévalence réalisées montrent que ce virus, contrairement aux autres herpesvirus, ne présente pas d'ubiquité. L'analyse de la séquence du génome du virus a permis de mettre en évidence des homologies avec deux autres herpesvirus qui sont le virus d'Epstein-Barr (EBV), chez l'homme, et le virus Saimiri (HVS), chez certaines espèces de singes. L'état de la technique montre qu'il existe déjà des procédés permettant de détecter la présence du virus HHV 8 chez un patient, susceptible d'être infecté. Ainsi la demande de brevet WO-A-97/24057 revendique des tests pour détecter le virus HHV 8 qui utilise des anticorps spécifiques de la protéine de capside ORF 65 du virus. Ce brevet revendique également une séquence correspondant à ladite protéine et au gène codant laditeprotéine. Toutefois, il est évident que seules certaines régions de la protéine ORF 65 ont des propriétés immunogéniques. L'utilisation de la protéine entière, pour la détection d'anticorps anti-HHV 8, rend le procédé peu efficace compte tenu du fait que la reconnaissance est parfois délicate, les épitopes pouvant être confinés à l'intérieur de la structure tridimensionnelle de la protéine. De plus, un encombrement stérique peut se produire entre les anticorps qui sont des molécules volumineuses. De même, la protéine ORF 65 ayant une homologie importante avec la protéine de capside BFRF3 du virus Epstein-Barr (EBV), le risque de détecter ce virus à la place du virus HHV 8 est très élevé lorsque l'on utilise la protéine entière. La demande de brevet WO-A-98/11132 revendique un déterminant immunogénique consistant en une séquence d'acides aminés correspondant à l'extrémité C-terminale, située entre les acides aminés 86 et 170, ou substantiellement homologue à cette séquence, permettant de diagnostiquer la présence du virus HHV8 chez un patient et donc le sarcome de Kaposi. A propos de cette demande de brevet, la sélection de l'extrémité C-terminale dans son intégralité, afin de détecter les anticorps anti-HHV 8, ne permet pas de diminuer les risques de réactivité croisée entre le HHV 8 et l'EBV. En effet, l'extrémité C-terminale de ORF 65 possède une forte homologie avec l'extrémité C-terminale de BFRF3. Cette homologie est de quatorze (14) acides aminés sur les quatre-vingt-cinq (85) qui constituent l'extrémité C-terminale de ORF65 par rapport à BFRF3 de l'EBV. De plus, l'utilisation d'une séquence homologue à la région C-terminale de ORF 65, comme réactifde détection, favoriser la détection de EBV par rapport à HHV 8. Ce problème est d'autant plus important que le virus EBV possède une prévalence plus importante que le virus HHV 8, puisqu'il est considéré comme un virus ubiquitaire présent dans le génome de près de 70 % de la population de race caucasienne. Ainsi, il est très probable de trouver le virus EBV chez des patients qui sont suspectés d'être infectés par le virus HHV 8. Le risque de détecter le virus EBV à la place du virus HHV 8 étant important, ces patients vont donc être considérés, à tort, comme séropositifs pour le virus HHV 8. Le procédé de détection de ce virus, tel que revendiqué dans l'état de la technique, ci-dessus mentionné, ne peut donc pas être considéré comme fiable. Conformément à la présente invention, le polypeptide revendiqué dans la présente demande de brevet et appartenant à l'extrémité C-terminale, correspond à une zone qui est fortement immunodominante, mais qui est surtout une zone très faiblement homologue avec la protéine du virus EBV. Deux (2) des vingt-quatre (24) acides aminés du polypeptide sont homologues, lorsque l'on compare l'extrémité C-terminale de l'ORF65 par rapport à BFRF3 à l'EBV. Cette homologie, beaucoup plus faible pour le polypeptide de vingt-quatre (24) acides aminés que pour le polypeptide de quatrevingt-cinq (85) acides aminés, permet de pallier le manque de spécificité pour HHV 8 et donc le manque de fiabilité des techniques exposées plus haut. La possibilité d'avoir des épitopes croisés entre ORF65 et BFRF3 est plus faible lorsque l'on utilise notre polypeptide de vingt-quatre (24) acides aminés que le polypeptide de quatre-vingt-cinq (85) acides aminés. En effet, notre polypeptide peut être utilisé pour révéler directement la présence d'anticorps anti-ORF65 de HHV8 dans un échantillon biologique à tester, ou pour révéler indirectement cette présence, en permettant de produire des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, qui permettent de détecter spécifiquement le virus HHV 8 chez des patients. Bien entendu cette détection est possible, que les patients soient ou non infectés par le virus EBV. A cet effet, la présente invention concerne un polypeptide comprenant une séquence peptidique appartenant à la séquence des 85 acides aminés de la partie Cterminale de la protéine de capside ORF 65 du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), caractérisé par le fait que le polypeptide comprend une séquence peptidique ou une séquence antigénique équivalente à ladite séquence peptidique, qui présente une réactivité immunologique vis-à-vis du virus HHV 8 et qui ne présente aucune réactivité immunologique vis-à-vis du virus d'Epstein-Barr (EBV). Plus précisément, le polypeptide se compose des 24 acides aminés C-terminaux de ladite protéine, selon SEQ ID NO1. Selon une variante, le polypeptide est constitué uniquement par une séquence peptidique ou par une séquence antigénique équivalente à ladite séquence peptidique, qui présente une réactivité immunologique vis-à-vis du virus HHV 8 et qui ne présente aucune réactivité immunologique vis-à-vis du virus d'Epstein-Barr (EBV). Plus précisément, le polypeptide est constitué uniquement par les 24 acides aminés C-terminaux de ladite protéine, selon SEQ ID NO1. Selon une autre variante, le polypeptide est constitué uniquement par une séquence peptidique, dont au moins un des acides aminés constitutifs présente des propriétés chimiques identiques ou analogues à celles de l'acide aminé homologue présent dans SEQ ID NO1, ou par une séquence antigénique équivalente à cette séquence peptidique. L'invention concerne également un réactif de détection du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), qui comprend à titre de substance réactive, un polypeptide tel que décrit ci-dessus. La présente invention concerne aussi un moyen de détection du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), dans lequel un réactif, décrit au-dessus, est solidarisé à un support solide, immunologiquement compatible avec ledit réactif. L'invention concerne encore un premier procédé de détection d'anticorps antiHHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, qui comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un réactif immobilisé sur un support solide, déjà exposé ci-dessus, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et des anticorps anti-HHV 8. L'invention concerne un second procédé de détection d'anticorps anti-HHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, qui comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un réactif immobilisé sur un support solide, décrit plus haut, iii) des anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre ledit réactif et entrant en compétition avec des anticorps anti-HHV 8 susceptibles d'être présents dans l'échantillon, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et les anticorps anti-HHV 8, qu'ils soient d'origine exogène ou endogène par rapport à l'échantillon. L'invention concerne un troisième procédé de détection d'anticorps antiHHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un premier réactif immobilisé sur un support solide, selon la revendication 7, ou issu de toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8, et un second réactif issu de toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV8, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé aux réactifs, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre les réactifs et des anticorps anti-HHV 8. L'invention concerne enfin un quatrième procédé de détection d'anticorps antiHHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un premier réactifimmobilisé sur un support solide, selon la revendication 7, ou issu de toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8, et un second réactif issu de toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV8, iii) des anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre ledit réactif et entrant en compétition avec des anticorps anti-HHV 8 susceptibles d'être présents dans l'échantillon, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et les anticorps anti-HHV 8, qu'ils soient d'origine exogène ou endogène par rapport à l' échantillon. Dans un mode préférentiel d'utilisation, le procédé est caractérisé en ce que toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8 contient le polypeptide, qui est décrit ci-dessus selon SEQ ID NO 3. Quel que soit le cas de figure, la détection s 'effectue par l'ajout dans le mélange d'anticorps marqués, monoclonaux ou polyclonaux, dirigés contre les anticorps antiHHV 8. Selon un mode préférentiel de mise en #uvre, la détection s'effectue par l'intermédiaire d'un test ELISA ( Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay). Les figures ci-jointes sont données à titre d'exemple explicatif et n'ont aucun caractère limitatif. Elles permettront de mieux comprendre l'invention. La figure 1 représente la séquence de la protéine de capside ORF 65 du virus HHV 8 et le positionnement des peptides R22T et L22K qui ont été synthétisés pour la détection des anticorps dans le sérum des patients. La figure 2 représente un histogramme présentant les résultats du test ELISA réalisés sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide R22T, d'une part, et en présence du peptide L22K, d'autre part. Enfin, la figure 3 représente un histogramme présentant les résultats comparatifs avec et sans inhibition du test ELISA réalisés sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide L22K. Conformément à la figure 1, deux peptides ont été synthétisés : - le peptide R22T, SEQ ID NO 2, s'étendant de l'arginine 78 à la thréonine 101, qui est partiellement inclus dans la partie C-terminale de la protéine ORF 65, SEQ ID NO 1, de HHV8, et - le peptide L22K, SEQ ID NO 3, s'étendant de la leucine 147 à la lysine 170 et faisant partie intégrante de l'extrémité C-terminale de cette protéine. 1 - Détection des anticorps anti-HHV 8 par ELISA : La réactivité des peptides R22T et L22K vis-à-vis de sérums de patients sains ou souffrant de la maladie de Kaposi associée ou non à une infection par le HIV, est mesurée en ELISA. Les puits d'une plaque de microtitration de marque NUNC maxisorb sont saturés par 100 l d'une solution contenant le peptide (lOug/ml) durant 2 heures à 37 C. La plaque est ensuite vidée puis lavée à l'aide d'un tampon de lavage contenant 0,05 % de Tween 20. Les puits sont saturés par lOOul de tampon de lavage additionné de 10 % de sérum de chèvre (v/v), puis incubés pendant 30 minutes à 37 C, puis lavés à nouveau comme précédemment. Les sérums à analyser sont dilués à la dilution approprié avec le tampon de saturation. L'incubation des sérums est de 1 heure à 37 C. Les puits sont à nouveau lavés. La solution de conjugué (IgG de chèvre anti IgG humain marquées par la péroxydase), à une dilution de 1/1000 dans le tampon de saturation, est alors ajoutée et l'incubation dure 90 minutes à 37 C. Après lavages, la solution de substrat orthophénylène-diamine est ajoutée. Après 10 minutes, la réaction est stoppée par 50 l d'H2SO4 et la densité optique est lue à 492 nm. Il est à noter que tous les tests ont été réalisés en double. Les valeurs obtenues sont regroupées dans les tableaux 1 et 2 et correspondent à la densité optique (D. O.) mesurée à 492 nm et multipliée par mille. Dans le tableau 1, les expériences ayant été réalisées avec des dilutions différentes de sérums, les valeurs de D.O. ont été ramenées à une même valeur de dilution (1/100) afin de pouvoir comparer les résultats. Code patient Renseignements DO Dilution DO (dilution 1/100) ~~~~~~~~~~~~~~~ Patient 1 Négatif 23 1/100 23 Patient 2 Négatif 11 1/100 11 Patient 3 EBV + 12 1/50 24 Patient 4 EBV + 35 1/100 35 Patient 5 HIV + 120 1/100 120 Patient 6 Homme 38 ans Kaposi HIV+ et Sida + 40 1/800 5 Patient 7 Homme 46 ans Kaposi HIV+ et Sida + 0 1/2000 0 Patient 8 Homme 67 ans Kaposi HIV + Sida + 40 1/2000 2 Patient 9 Homme 83 ans Kaposi stade 3 40 1/2000 2 Patient 10 Homme 80 ans Kaposi stade 1 0 1/8000 0 Patient 11 Femme 70 ans Kaposi stade 1 200 1/2000 10 Patient 12 Homme 80 ans Kaposi stade 1 20 1/1000 2 Tableau 1 : du test ELISA réalisés sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide R22T Dans le tableau 2, les expériences sont identiques à celles effectuées dans le tableau 1 précédent. Néanmoins, la réactivité du peptide L22K étant plus forte que celle du peptide R22T, certaines valeurs de D. O. sont supérieures à 2 et sont donc indéterminées, c'est le cas pour les patients 6 à 12. On a donc réalisé des dilutions adaptées à chaque sérum, afin d'obtenir des valeurs de D. O. chiffrables. Code patient Renseignements DO (x1000) Dilution DO (x1000) (dilution ~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 1/100) ~~~~~~~ ~~~~~~~~~ Patient 1 Négatif 15 1/100 15 Patient 2 Négatif 8 1/100 8 Patient 3 EBV + 6 1/100 6 Patient 4 EBV + 30 1/100 30 Patient 5 HIV + 107 1/100 107 Patient 6 Homme 38 ans Kaposi HIV+ et Sida + > à 2000 1/800 286 Patient 7 Homme 46 ans Kaposi HIV+ et Sida + > à 2000 1/2000 1296 Patient 8 Homme 67 ans Kaposi HIV + Sida + > à 2000 1/2000 468 Patient 9 Homme 83 ans Kaposi stade 3 > à 2000 1/2000 295 Patient 10 Homme 80 ans Kaposi stade 1 > à 2000 1/8000 988 Patient 11 Femme 70 ans Kaposi stade 1 > à 2000 1/2000 410 Patient 12 Homme 80 ans Kaposi stade 1 > à 2000 1/1000 205 Tableau 2 : Résultats du test ELISA réalisés sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide L22K On constate, tout d'abord que les résultats sont très différents d'un peptide à l'autre. En effet, il apparaît clairement que les résultats obtenus avec le peptide R22T ne permettent pas de différencier les patients atteints du sarcome de Kaposi, et donc contaminer par le virus HHV 8, par rapport aux patients sains puisque les valeurs de D. O. ne différent pas significativement. Il apparaît donc que le peptide R22T ne permet pas de détecter spécifiquement les anticorps anti-HHV 8, bien que ce peptide soit majoritairement inclus dans la partie C-terminale de la protéine ORF 65. Concernant le peptide L22K, on constate que les valeurs de D. O. sont bien supérieures pour les sérums de patients infectés par le virus HHV 8 que pour les sérums de patients sains ou infectés par un autre virus, et notamment le virus EBV. Ces résultats montrent clairement que le peptide L22K possède une bonne immunoréactivité vis-à-vis des anticorps anti-HHV 8. Ce peptide est donc un bon candidat pour la détection des anticorps anti-HHV 8 dans le sérum de patients. II - Test d'inhibition : Toutefois afin de confirmer ces résultats, il est nécessaire de montrer que la fixation des anticorps anti-HHV 8 est bien spécifique. Pour cela, des expériences d'inhibition ont été réalisées par réaction en phase liquide des sérums avec le peptide L22K, suivie de la réaction des anticorps restants avec ledit peptide adsorbé sur les microplaques. Le peptide inhibiteur est incubé à une concentration de 0,1 mg/ml, avec les sérums de la dilution appropriée. La suite de la manipulation est identique à celle décrite pour le test ELISA. Les résultats de cette expérience sont regroupés dans le tableau 3. On y trouve les valeurs de D. O. mesurées, multipliées par mille, avec et sans inhibition par le peptide L22K. Code Renseignements Dilution DO DO Pourcentage patient (xlOOO) (xlOOO) d'inhibition sans avec inhibition inhibition par L22K à 10 g/ml par L22K Patient 1 Négatif 1/50 80 - 79 1,2% Patient 2 Négatif 1/50 146 122 16,4% Patient 3 EBV+ 1/50 101 111 0% Patient 4 EBV+ 1/50 199 211 0% Patient 5 HIV + 1/50 248 234 5,6% Patient Homme 38 ans Kaposi HIV+ et Sida + 1/400 745 141 81% Patient 7 Homme 46 ans Kaposi HIV+ et Sida + 1/4000 956 108 88,7% Patient 8 Homme 67 ans Kaposi HIV + Sida + 1/1000 1259 144 88,6% Patient 9 Homme 83 ans Kaposi stade 3 1/1000 932 55 94% Patient 10 Homme 80 ans Kaposi stade 1 1/4000 1183 143 87,9% Patient 11 Femme 70 ans Kaposi stade 1 1/1000 894 19 97,8% Patient 12 Homme 80 ans Kaposi stade 1 1/400 832 198 76,2% Tableau 3 : comparatifs avec et sans peptide inhibiteur du test ELISA réalisé sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide L22K On constate que les pourcentages d'inhibition sont très élevés pour les sérums de patients 6 à 12 infectés par le virus HHV 8, alors qu'ils sont très faibles, voir nuls, pour les sérums de patients sains 1 et 2 ou infectés par un autre virus que le HHV 8, patients 3 à 5, et notamment le virus EBV, patients 3 et 4, dont la protéine de capside BFRF3 présente une homologie avec la protéine ORF 65. Cette expérience permet de mettre en évidence la spécificité de reconnaissance du peptide L22K par les anticorps anti-HHV 8 présents dans le sérum. Le peptide L22K apparaît donc comme un candidat intéressant pour détecter la présence du virus HHV 8 chez des patients. Une autre protéine utilisée pour la détection du virus HHV 8 est la protéine ORF 73. Cette protéine a déjà été décrite dans une technique de détection par immunofluorescence. Il apparaît donc comme intéressant de comparer les résultats obtenus avec la protéine ORF 73 et le peptide L22K pour la détection d'anticorps antiHHV 8 dans des sérums identiques. III - Comparaison des résultats obtenus par ELISA avec L22K et par Immunofluorescence avec ORF 73 : Le test d'immunofluorescence est pratiqué sur des cellules infectées par le virus HHV8. Le tableau 4 regroupe les résultats obtenus avec le test ELISA, pour le peptide L22K, et le test d'immunofluorescence, pour la protéine ORF 73 de HHV 8, pour les patients 13 à 48. Les résultats sont mis sous la forme de résultats positifs ou négatifs et non pas de valeurs numériques. Les résultats du test ELISA avec le peptide L22K sont présentées et une correspondance en résultats positifs ou négatifs a été effectuée afin de faciliter la comparaison avec ceux d'immunofluorescence. L'ensemble des résultats de l'ELISA sont donnés avec une dilution au 1/100 pour tous les échantillons. Code patient Renseignements L22K, DO Résultats Résultats (xlOOO) L22K IF ORF73 Patient 13 négatif 62 Patient 14 négatif 38 Patient 25 Kaposi + HIV+T1I1S1 3000 +Patient 26 Kaposi + HIV+TOIOSO 1668 +Patient 27 Kaposi + HIV+T1I1S0 616 +Patient 28 Kaposi + HIV+T0T1S0 3000 +Patient 32 Kaposi + HIV+TOIOSO 3000 +Patient 34 Kaposi + HIV+T1I1S0 3000 +Patient 36 Kaposi + HIV+TOI 1 SI 3000 + Patient 38 Kaposi + HIV+T1I0S0 2497 +Patient 41 Kaposi + HIV+TOIOSO 1565 +Patient 42 Kaposi + HIV+T0I1S1/CAST 3000 + Patient 43 Kaposi + HIV+T0I1S1/LNH 3000 +Patient 44 Kaposi+HIV+T1I1S0 917 +Patient 45 Kaposi + HIV+TOIOSO 3000 +Patient 46 castleman 3000 +Patient 19 classique 1 HIV- 67- + Patient 20 classique 1 HIV- petit Kaposi 102- + Patient 23 classique 1 HIV- prelvt au début 142- + Patient 35 Kaposi + HIV+TOIOSO 191- + Patient 48 castleman 192- + Patient 15 classique II HIV- 3000 + + Patient 16 classique 1 HIV- 3000 + + Patient 17 classique II HIV- 3000 + + Patient 18 classique 1 HIV- 2236 + + Patient 21 classique 1 HIV- 675 + + Patient 22 classique I HIV- 519 + + Patient 24 classique II HIV- 3000 + + Patient 29 Kaposi + HIV+TOIOSO/CAST 3000 + + Patient 30 Kaposi + HIV+T1I0S0 3000 + + Patient 31 Kaposi + HIV+T1I1S0 632 + + Patient 33 Kaposi + HIV+TOIOSO 356 + + Patient 37 Kaposi + HIV+T0I1S0 3000 + + Patient 39 Kaposi + HIV+T1I0S0 3000 + + Patient 40 Kaposi + HIV+T1I0S0/CAST 334 + + Patient 47 castleman 3000 + + Tableau 4 : comparatifs de deux techniques différentes de détection de la présence du virus HHV 8 : 1 ) test ELISA en présence du peptide L22K - 2 ) test d'immunoflorescence vis-à-vis de la protéine ORF 73 Premièrement, on constate que les deux tests donnent des résultats identiques et négatifs pour les deux sérums de patients sains (patients 13 et 14). Deuxièmement, quatorze sérums diagnostiqués non contaminés par le test d'immunofluorescence sont reconnus HHV 8-positifs par le test ELISA (patients 25 à 28,32, 34, 36, 38, 41 à 46 ). Troisièmement, à l'inverse, cinq sérums dans lesquels des anticorps anti-HHV 8 ont été détectés par le test d'immunofluorescence, ont été diagnostiqués HHV 8négatifs par les tests ELISA (patients 19, 20, 23, 35 et 48). Dans les autres cas (patients 15 à 18, 21, 22, 24, 29 à 31,33, 37, 39, 40 et 47), les résultats des tests donnent des résultats identiques et positifs pour les sérums de patients. Cette différence de résultats peut être expliquée par le fait que l'utilisation d'une seule protéine ou d'un seul peptide ne permet de couvrir la reconnaissance de toutes les spécificités d'anticorps anti-HHV 8. Il est donc possible que certains types d'anticorps ne soient pas détectés par l'une ou l'autre des méthodes. Toutefois, on constate que pour tous les sérums testés, l'utilisation conjointe des deux techniques permet d'obtenir un diagnostic correct puisque tous les sérums sains sont diagnostiqués négatifs par les deux techniques et les sérums contaminés ont été détectés positifs par au moins une technique. Ce qui montre les insuffisances d'un test d'immunofluorescence basé sur l'utilisation de la protéine ORF 73. La demanderesse a donc mis au point un procédé de détection qui combine deux polypeptides. Ainsi le réactif, constitué par le polypeptide L22K immobilisé sur un support solide, est associé à un réactif issu de toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV 8. L'utilisation conjointe du peptide L22K et de toute ou partie de la protéine ORF 73 dans la détection des anticorps anti-HHV 8 apparaît comme la solution la plus efficace et la plus fiable pour diagnostiquer l'infection des patients par le virus HHV 8. Le procédé peut également associer toute ou partie de la protéine de capside ORF 65 du virus HHV 8 et toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV 8. Préférentiellement, ladite protéine de capside ORF 65 du virus HHV 8 ou la partie de cette protéine, qui est utilisée dans le procédé, contient le polypeptide L22K. LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATIONS GENERALES: (i) DEPOSANT: (A) NOM : MERIEUX (B) RUE : DE L'ORME (C) VILLE : MARCYL'ETOILE (E) PAYS : (F) CODE POSTAL : (ii) TITRE DE L' INVENTION : CONSTITUANT UN REACTIF, UN MOYEN DE DETECTION DIRECTE OU INDIRECTE DU VIRUS HHV8 (iii) NOMBRE DE SEQUENCES : (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT : disk (B) ORDINATEUR : PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION : PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.30 (OEB) (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : 170 acides aminés (B) TYPE : aminé (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : non-connue(ii) TYPE DE MOLECULE : peptide(iii) HYPOTHETIQUE : NON (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 1 : Met Ser Asn Phe Lys Val Arg Asp Pro Val Ile Gln Glu Arg Leu Asp 1 5 10 15 His Asp Tyr Ala His His Pro Leu Val Ala Arg Met Asn Thr Leu Asp 20 25 30 Gln Gly Asn Met Ser Gln Ala Glu Tyr Leu Val Gln Lys Arg His Tyr 35 40 45 Leu Val Phe Leu Ile Ala His His Tyr Tyr Glu Ala Tyr Leu Arg Arg 50 55 60 Met Gly Gly Ile Gln Arg Arg Asp His Leu Gln Thr Leu Arg Asp Gln 65 70 75 80 Lys Pro Arg Glu Arg Ala Asp Arg Val Ser Ala Ala Ser Ala Tyr Asp 85 90 95 Ala Gly Thr Phe Thr Val Pro Ser Arg Pro Gly Pro Ala Ser Gly Thr 100 105 110 Thr Pro Gly Gly Gln Asp Ser Leu Gly Val Ser Gly Ser Ser Ile Thr 115 120 125 Thr Leu Ser Ser Gly Pro His Ser Leu Ser Pro Ala Ser Asp Ile Leu 130 135 140 Thr Thr Leu Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp 145 150 155 160 Ala Arg Lys Pro Pro Ser Gly Lys Lys Lys 165 170 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : acides aminés (B) TYPE : aminé (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : non-connue(ii) TYPE DE MOLECULE : peptide(iii) HYPOTHETIQUE : NON (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 2 : Leu Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp Ala Arg 1 5 10 15 Lys Pro Pro Ser Gly Lys Lys Lys 20 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : acides aminés (B) TYPE : aminé (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : non-connue(ii) TYPE DE MOLECULE : peptide(iii) HYPOTHETIQUE : NON (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 3 : Leu Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp Ala Arg 1 5 10 15 Lys Pro Pro Ser Gly Lys Lys Lys 20 REVENDICATIONS 1. Polypeptide comprenant une séquence peptidique appartenant à la séquence des 85 acides aminés de la partie C-terminale de la protéine de capside ORF 65 du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), caractérisé par le fait que le polypeptide comprend une séquence peptidique ou une séquence antigénique équivalente à ladite séquence peptidique, qui présente une réactivité immunologique vis-à-vis du virus HHV 8 et qui ne présente aucune réactivité immunologique vis-à-vis du virus d'Epstein-Barr (EBV). 2. Polypeptide, selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il se compose des 24 acides aminés C-terminaux de ladite protéine, selon SEQ ID NO1. 3. Polypeptide, selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait que le polypeptide est constitué uniquement par une séquence peptidique ou par une séquence antigénique équivalente à ladite séquence peptidique, qui présente une réactivité immunologique vis-à-vis du virus HHV 8 et qui ne présente aucune réactivité immunologique vis-à-vis du virus d'Epstein-Barr (EBV). 4. Polypeptide, selon la revendication 3, caractérisé par le fait qu'il est constitué uniquement par les 24 acides aminés C-terminaux de ladite protéine, selon SEQ ID NO1. 5. Polypeptide, selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que le polypeptide est constitué uniquement par une séquence peptidique, dont au moins un des acides aminés constitutifs présente des propriétés chimiques identiques ou analogues à celles de l'acide aminé homologue présent dans SEQ ID NO1, ou par une séquence antigénique équivalente à cette séquence peptidique. 6. Réactif de détection du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), caractérisé par le fait qu'il comprend à titre de substance réactive, un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 7. Moyen de détection du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), caractérisé par le fait qu'un réactif, selon la revendication 6, est solidarisé à un support solide, immunologiquement compatible avec ledit réactif. 8. Procédé de détection d'anticorps anti-HHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, caractérisé en ce qu'ilcomprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un réactif immobilisé sur un support solide, selon la revendication 7, ou issu de toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et des anticorps anti-HHV 8. 9. Procédé de détection d'anticorps anti-HHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un réactif immobilisé sur un support solide, selon la revendication 7, ou issu de toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8, iii) des anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre ledit réactif et entrant en compétition avec des anticorps anti-HHV 8 susceptibles d'être présents dans l'échantillon, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et les anticorps anti-HHV 8, qu'ils soient d'origine exogène ou endogène par rapport à l' échantillon. 10. Procédé de détection d'anticorps anti-HHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, caractérisé en ce qu'ilcomprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un premier réactif immobilisé sur un support solide, selon la revendication 7, ou issu de toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8, et un second réactif issu de toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV8, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé aux réactifs, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre les réactifs et des anticorps anti-HHV 8. 11. Procédé de détection d'anticorps anti-HHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, caractérisé en ce qu'ilcomprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un premier réactif immobilisé sur un support solide, selon la revendication 7, ou issu de toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8, et un second réactif issu de toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV8, iii) des anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre ledit réactif et entrant en compétition avec des anticorps anti-HHV 8 susceptibles d'être présents dans l'échantillon, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et les anticorps anti-HHV 8, qu'ils soient d'origine exogène ou endogène par rapport à l' échantillon. 12. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisé en ce que toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8 contient le polypeptide, selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 13. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 8 à 12, caractérisé par le fait que la détection s'effectue par l'ajout dans le mélange d'anticorps marqués, monoclonaux ou polyclonaux, dirigés contre les anticorps anti-HHV 8. 14. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 8 à 13, caractérisé par le fait que la détection s'effectue par l'intermédiaire d'un test ELISA ( Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay).