Brevet FR2784030A1 — publié le 20000407

UTILISATION DE BLOQUEURS DES CANAUX CALCIQUES ET/OU cGMP-DEPENDANTS POUR LE TRAITEMENT DE PATHOLOGIES DE LA RETINE La présente invention a pour objet l'utilisation de composés bloqueurs des canaux calciques et/ou de canaux activés par la guanosine monophosphate cyclique 3' 5' (cGMP) dans le cadre du traitement de pathologies de la rétine, et plus particulièrement des maladies de la rétine dues à une dégénérescence des photorécepteurs, chez l'homme ou l'animal, telles que la rétinite pigmentaire ou autres pathologies touchant semblablement les photorécepteurs, notamment la dégénérescence maculaire liée à l'âge. La rétinite pigmentaire désigne un ensemble de ces maladies dégénératives des photorécepteurs (Berson, 1996) conduisant à la cécité. De nombreuses mutations affectant différentes protéines des bâtonnets, et susceptibles d'être à l'origine de cette maladie, ont été mises en évidence. Parmi ces mutations, on peut citer celles affectant les gènes de protéines impliquées dans la cascade de la phototransduction, telles que la rhodopsine, la transducine, la phosphodiestérase, l'arrestine, ou de protéines structurales, telle que la périphérine. La souris rd (retinal degeneration) a été étudiée pendant plus de 70 ans comme modèle de la rétinite pigmentaire (Farber et coll., 1994) car le processus de dégénérescence rétinienne est similaire à celui observé dans la rétine pigmentaire, la mort des bâtonnets de la rétine étant suivie par une perte inexpliquée des cônes de la rétine. De plus, la mutation causale a été localisée dans le gène codant pour la sous-unité P de la cGMP-phosphodiestérase (PDE) (Bowes et coll., 1990), comme dans certaines familles affectées par la maladie (Mc Laughlin et coll., 1993). La PDE est activée durant la cascade de phototransduction par la chaîne a de la transducine, elle-même activée par la rhodopsine stimulée par la lumière. La PDE activée hydrolyse le cGMP, réduisant ainsi la concentration de cGMP et donc le nombre des canaux cGMP-dépendants ouverts, la conséquence finale étant une diminution de la conductance aux cations tels que Na+ et Ca2+ d'où une réduction du courant de dépolarisation des photorécepteurs dans l'obscurité. Chez la souris rd, Farber et Lolley (1974) ont montré qu'une augmentation anormale de la concentration de cGMP précède la dégénérescence des photorécepteurs. La toxicité du cGMP à forte concentration a ensuite été établie sur des photorécepteurs normaux (Lolley et Farber, 1977; Ulshafer et coll., 1980). Quelques approches thérapeutiques destinées à prévenir la perte de photorécepteurs sont actuellement en cours d'investigation sur les souris rd. Il a ainsi été décrit que la thérapie génique in vivo permet de retarder la mort des photorécepteurs pendant six semaines après injection sous-rétinienne d'un adénovirus recombinant à réplication défectueuse qui contient l'ADNc codant la PDE murine (Bennett et coll., 1996). La transplantation de photorécepteurs (Gouras et coll., 1994, Silverman et coll., 1989) a été décrite comme permettant de préserver les photorécepteurs des cônes (Mohand-Said et coll., 1997). L'interprétation de cet effet en tant que mécanisme paracrine est en corrélation avec l'augmentation de la survie des photorécepteurs observée en coculture avec des photorécepteurs sains (Mohand-Said et coll., 1998) ou après application in vivo ou in vitro de facteurs trophiques tels que les facteurs de croissance fibroblastiques ou neuronaux (LaVail et coll., 1998). Cependant, aucun traitement des maladies de la rétine dues à une dégénérescence des photorécepteurs, n'est actuellement disponible, mise à part la prescription de vitamine A pour la rétinite pigmentaire (Berson, 1996). La présente invention a précisément pour but de fournir des compositions pharmaceutiques utilisables dans le cadre du traitement de maladies de la rétine dues à une dégénérescence des photorécepteurs chez l'homme ou l'animal. En effet, la présente invention découle de la mise en évidence par les Inventeurs du fait que les composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants, tels que le chlorhydrate de diltiazem, permettent non seulement de ralentir la dégénérescence des bâtonnets dans la souris rd, mais également de préserver la capacité des cellules rétiniennes à répondre aux stimuli lumineux. Ainsi, la présente invention a pour objet l'utilisation de composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des pathologies liées à la dégénérescence des photorécepteurs de la rétine, et plus particulièrement de la rétinite pigmentaire, ou de pathologies touchant semblablement les photorécepteurs, telle que la dégénérescence maculaire liée à l'âge. Par composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants on entend tout composé capable de réduire la conductance ionique de ces canaux. De préférence, les composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMPdépendants utilisés dans le cadre de la présente invention, sont choisis parmi : a) le diltiazem de formule suivante ainsi que ses sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables, notamment le malate ou le chlorhydrate de diltiazem, b) l'autre énantiomère du diltiazem, ou le racémate du diltiazem, ainsi que leurs sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables, notamment le chlorhydrate de l'isomère cis(-) de formule suivante : c) les métabolites du diltiazem et de l'autre énantiomère, ainsi que leurs sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables, notamment les métabolites du diltiazem de formules suivantes : Avantageusement, les composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants susmentionnés sont utilisés pour la préparation de compositions pharmaceutiques se présentant sous une forme administrable par toute voie, notamment par voie orale, intramusculaire, intraveineuse, intraoculaire, ou sous forme de collyre. De préférence les compositions pharmaceutiques de l'invention comprennent, sous forme unitaire, environ 0,1à environ 100 mg d'un composé bloqueur des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants, tel que défini ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'invention sera davantage illustrée à l'aide des figures 1 et 2 suivantes. La figure 1 illustre la survie des bâtonnets au 25 jour et au 36 jour postnatal chez les souris rd traitées par le chlorhydrate de diltiazem. Les injections de chlorhydrate de diltiazem ont débutés au 9 jour postnatal qui correspond à la période d'apparition des premiers signes de dégénérescence des bâtonnets. Les doses de chlorhydrate de diltiazem (2,5 mg/ml dans une solution physiologique) ont été augmentées graduellement à partir de 50 I par jour jusqu'à 100 I deux fois par jour suivant la croissance de l'animal. Puisque les électrorétinogrammes (ERG) ont été mesurés avant le sacrifice des animaux, la dernière injection a été donnée 48 heures avant la mesure physiologique. Après fixation des rétines, les bâtonnets ont été marqués par des anticorps antirhodopsine (rho-4D2) (Hicks and Molday, 1986) et leur nombre a été estimé par stéréologie sur les rétines mises à plat en utilisant une procédure d'échantillonnage aléatoire (Mohand-Said et coll., 1998). Seules les rétines droites ont été prises en considération afin d'obtenir des résultats indépendants. Le traitement au chlorhydrate de diltiazem a augmenté de 86 % la survie des bâtonnets au 25 jour, et de 148 % au 36 jour chez les animaux traités par rapport aux souris rd de contrôle. Des injections répétées de solution physiologique seule n'ont pas affecté de façon significative la survie des bâtonnets (7416 ~ 1291, s. e.m., n = 5) par rapport aux animaux non traités (7648 ~ 774, s. e.m., n = 4). Ces observations montrent donc que le traitement des souris rd par le chlorhydrate de diltiazem induit une survie des bâtonnets. La figure 2 illustre le fait que la survie des photorécepteurs est accompagnée d'améliorations physiologiques chez les souris rd traitées par le chlorhydrate de diltiazem. Cette démonstration a été effectuée par mesure des ERG chez les souris rd traitées et les souris rd de contrôle. Chez des souris rd non traitées, les amplitudes des ondes a et b des ERG diminuent régulièrement à partir du 12 jour postnatal jusqu'à extinction au 24 jour postnatal. En revanche, tous les animaux traités présentent des signaux ERG AU 25 jour postnatal (n = 7). Au 36 jour postnatal, 4 animaux traités sur 10 présentent des signaux ERG pouvant être mesurés dans les deux yeux. Ces observations montrent que le traitement par le chlorhydrate de diltiazem non seulement permet aux bâtonnets de survivre mais protège aussi les fonctions visuelles de la rétine. Légende des figures : - Figure 1 : du nombre de bâtonnets chez des souris rd de 25 jours et de 36 jours traitées par le chlorhydrate de diltiazem, par rapport aux souris rd de contrôle non traitées. - Figure 2 : du chlorhydrate de diltiazem sur l'ERG mesuré chez les souris rd. A) représentation des enregistrements d'ERG mesurés chez les souris rd traitées et de contrôle au 25 et au 36 jour postnatal. B) effet du chlorhydrate de diltiazem sur l'onde b de l'ERG ; la courbe correspondant à la mesure de l'amplitude de l'onde b en fonction du temps chez les souris rd de contrôle est représentée à l'aide de cercles creux, tandis que celle correspondant à cette même mesure chez les souris rd traitées par le chlorhydrate de diltiazem est représentée à l'aide de carrés noirs. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Bennett J., Tanabe T., Sun D., Zeng Y., Kjeldbye H., Gouras P., Maguire A.M. ; "Photoreceptor cell rescue in retinal degeneration (rd) mice by in vitro gene therapy", Nat. Med. 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Utilisation de composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMPdépendants selon la revendication 1, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de la rétinite pigmentaire, ou de pathologies touchant semblablement les photorécepteurs, telle que la dégénérescence maculaire liée à l'âge. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, de composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants choisis parmi le diltiazem de formule suivante ainsi que ses sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables, notamment le malate ou le chlorhydrate de diltiazem. 4. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, de composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants choisis parmi l'autre énantiomère du diltiazem, ou le racémate du diltiazem, ainsi que leurs sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables. 5. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, de composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants choisis parmi les métabolites du diltiazem et de l'autre énantiomère, ainsi que leurs sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables, tels que les métabolites du diltiazem de formules suivantes : 6. Utilisation de composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMPdépendants selon l'une des revendications 1 à 5, pour la préparation d'un médicament se présentant sous une forme administrable par voie orale, intramusculaire, intraveineuse, intraoculaire, ou sous forme de collyre.