Brevet FR2776388A1 — publié le 19990924

A UTILISATION DE RECEPTEURS DE LA FAMILLE ROR POUR LE CRIBLAGE DE SUBSTANCES UTILES POUR LE TRAITEMENT DE L'ATHEROSCLÉROSE. La présente invention concerne l'utilisation de récepteurs ROR pour le criblage de composés ayant une activité anti-athérosclérotique. L'invention concerne plus particulièrement les différentes méthodes de criblage permettant d'identifier des substances utiles pour le traitement et/ou la prévention de l'athérosclérose. L'invention concerne aussi l'utilisation des substances ainsi identifiées pour la préparation de composition thérapeutiques destinées au traitement et/ou à la prévention de l'athérosclérose. Les récepteurs orphelins ROR (Retinoic acid receptor related Orphan Receptor) aussi appelés RZR (17-19) constituent une sous-famille des récepteurs orphelins pour lesquels aucun ligand n'a été identifié. Les récepteurs ROR existent sous trois formes ROR , P,Y (17, 19, 20). Les récepteurs ROR se lient sous forme monomèrique chacun à un élément de réponse constitué par une séquence riche en A T précédant une séquence du type PuGGTCA (17, 21, 22). A la suite d'un épissage alternatif, le gène RORX conduit à 4 isoformes al, 52, a3 et RZRa (17-19) qui diffèrent par leur domaine N-terminal et montrent des reconnaissances d'ADN et des propriétés de transactivation distinctes (17). On entendra ci-après par récepteurs ROR, tant les récepteurs ROR que RZR, de même que, sauf indication contraire, les différentes isoformes de RORa, al, a2, a3 et RZRa. L'invention concerne tout récepteur ROR de mammifère mais les récepteurs ROR humains sont plus particulièrement envisagés. Les récepteurs ROR sont des récepteurs nucléaires, qui lorsqu'ils sont activés par un ligand se fixent sur un site de fixation de l'ADN et modulent la transcription d'un gène. Les ligands des récepteurs ROR modulent les propriétés de transactivation de ceux-ci et font varier l'expression du gène qui est sous leur contrôle. La découverte de ligand de la famille des récepteurs orphelins en général et des récepteurs RORen particulier constitue un thème de recherche dont' l'intérêt est fondamental pour la compréhension des phénomènes de la régulation des gènes, notamment des gènes impliqués dans certaines pathologies (DN & P 9(3), Avril 1996). La mélatonine a été proposé comme ligand d'un récepteur de la famille des récepteurs nucléaires orphelins ROR/RZR (Becker-André et al., J.Biol.Chem. 1994, 269: 28531-4.). De même, la demande de brevet internationale PCT publiée sous le numéro W095/27202, fondée sur l'enseignement de l'article de Becker-André et al., décrit l'utilisation de récepteurs RZR/RORX pour le criblage de substances possédant une activité du type mélatonine, anti-arthritique, anti-tumorale, ou anti- autoimmune. Toutefois des études récentes (Becker-André et al, J. Biol. Chem., 272, 26, page 16707) contestent la capacité effective de la mélatonine à agir comme un ligand de la famille des récepteurs nucléaires RZR/RORa. Il n'existe donc à l'heure actuelle aucune substance dont la capacité à agir comme un ligand d'un récepteur de la famille RZR/RORx est clairement établie. On connait dans l'art antérieur plusieurs gènes dont l'expression est régulée par les récepteurs nucléaires. Parmi ceux-ci, on peut citer des travaux récents montrant que les récepteurs RORa sont impliqués dans la régulation de l'expression du gène de l'apo A-I chez la souris et le rat (VuDac N., Gervois P., Grotzinger T., De Vos P., Schoonjans K., Fruchart J.C., Auwerx J., Mariani J., Tedgui A., Staels B., Tanscriptional Regulation of apo A-I gene expression by nuclear receptor ROR alpha, J. Biol.Chem., 1997, vol 272, Iss 36, pp. 22401-22404). Les travaux réalisés sur la régulation de l'expression du gène de l'apo A-I chez la souris montrent que le mécanisme de la régulation de l'apo- lipoprotéine A-I chez la souris n'est pas transposable chez l'homme. Les Inventeurs ont maintenant découvert, de manière surprenante, que les récepteurs RORc sont impliqués dans la régulation de l'expression du gène de l'apo C-III à la fois chez la souris et chez l'homme. L'apolipoprotéine C-III est une glycoprotéine de 79 acides aminés sythétisée dans le foie et dans une moindre mesure dans l'intestin. Or l'apolipoprotéine C-III, aussi désignée ci-après apo C- III, est un produit clé du métabolisme plasmatique des triglycérides. Il a été montré que les concentrations plasmatiques d'apo C-III sont corrélées au niveau plasmatique de triglycérides, aussi bien dans une population normale que chez des patients hypertriglycéridémiques (1-4). En outre, il a été montré que les lipoprotéines, et plus particulièrement l'apo C-III, jouent un rôle important dans l'apparition des maladies cardiovasculaires. En effet, l'accroissement des concentrations d'apo C-III dans les particules lipoprotéiques contenant de l'apo B (apo C-III-LpB) est associé à un accroissement du risque de maladies cardiaques coronariennes (5). I1 a aussi été rapporté qu'une déficience en apo C-III entraînait un accroissement du catabolisme des particules de VLDL, alors qu'un accroissement de la synthèse de l'apo C-III a été observé chez des patients présentant une hypertriglyceridémie (6, 7). L'apo C-III est donc directement liée au catabolisme des triglycérides plasmatiques. Par ailleurs, des études génétiques ont mis en évidence une association entre certains polymorphismes du gène de l'apo C-III et des concentrations plasmatiques élevées en apo C-III et triglycérides (8,9). De même, la surexpression de l'apo C-III humaine dans des animaux transgèniques a pour conséquence le développement d'une hypertriglycéridémie, alors qu'une élimination du gène de l'apo C-III endogène par recombinaison homologue chez la souris conduit à la diminution des concentrations plasmatiques d'apo C-III et protège les animaux contre l'hypertriglycéridémie post-prandiale (10, 11). En outre le croisement de souris porteuses du transgène de l'apo C-III humain avec des souris hétérozygotes déficientes en récepteurs de LDL résulte en l'acquisition de plusieurs caractéristiques de l'hyperlipidémie familiale combinée et entraine une sensibilité accrue à l'athérosclérose: le gène de l'apo C-III est capable d'induire le développement de l'athérosclérose (Masucci-Magoulas et al, A Mouse Model with Features of Familial Combined Hyperlipidemia, Science, 1997, 275, 391-394). En outre, les résultats d'études in vitro et in vivo indiquent que l'apo C-III agit principalement en retardant le catabolisme des particules riches en triglycérides par le biais d'une inhibition de leur fixation sur la surface endothéliale et leur lipolyse par des lipases spécifiques des lipoprotéines, ainsi qu'en interférant avec la clairance de particules résiduelles du plasma par le récepteur de l'apo E (12- 16). La présente invention est fondée sur la mise en évidence d'une nouvelle propriété des récepteurs ROR comme régulateur positif de la transcription du gène de l'apo C-III tant chez la souris que chez l'homme. Ces résultats sont notamment fondés sur l'observation faite par les inventeurs que l'expression du gène de l'apo C- III était sévèremment réprimée chez les souris staggerer connues pour porter une délétion du gène de RORa entrainant la synthèse d'une protéine non fonctionnelle (27). Ces résultats ont permis d'établir que les récepteurs ROR constituent un nouveau facteur de régulation de l'expression de gènes impliqués dans le catabolisme des triglycérides et donc dans l'athérosclérose. En conséquence, le but de l'invention est d'offrir les moyens permettant d'identifier de nouveaux ligands des récepteurs RORacapables de moduler la transcription du gène de l'apo C-III et donc capables d'influer sur l'athérosclérose, tant en ce qui concerne sa prévention que son traitement. La présente invention concerne donc l'utilisation des récepteurs ROR et/ou de leur élément de réponse ou encore d'un équivalent fonctionnel de ceux-ci pour le criblage de substances possédant des propriétés anti-athérosclérotiques. On entend par équivalent fonctionnel de ROR, toute protéine possédant à la fois: - un site de fixation possédant une sélectivité comparable à celle de RORO pour un ligand donné de celui-ci, et - un site de fixation sur l'ADN reconnaissant le même éléement de réponse que RORa ou un élément de réponse possédant une séquence d'acides nucléiques proche. On entend aussi par équivalent fonctionnel de ROR, une protéine chimère possédant: - un site de fixation possédant une sélectivité comparable à celle de RORc pour un ligand donné de celui-ci, et - un site de fixation sur l'ADN reconnaissant un élément de réponse d'un gène rapporteur. On entend par équivalent fonctionnel de l'élément de réponse du récepteur ROR, toute séquence d'acide nucléique sur laquelle peut se fixer le récepteur RORx et plus particulièrement une séquence dérivant de l'élément de réponse du récepteur RORO. On préfère plus particulièrement dans l'utilisation de l'invention le récepteur RORO et l'élément de réponse du récepteur RORa. La présente invention a également pour objet un procédé de criblage de substances possédant des propriétés anti-athérosclérotiques consistant à mettre en contact la substance à tester avec un récepteur ROR et/ou un élement de réponse du récepteur ROR, ou un équivalent fonctionnel de ceux-ci, puis à mesurer par tout moyen approprié la fixation de ladite substance sur le récepteur ROR ou la fixation du complexe formé de ladite substance et du récepteur ROR sur son élement de réponse. La mesure de la fixation de la substance sur le récepteur ROR ou la fixation du complexe formé de ladite substance et du récepteur ROR sur son élement de réponse peut être réalisée par toutes méthodes directes ou indirectes connues de l'homme du métier, comme celles utilisant un gène rapporteur, les tests de binding,... Afin de préciser l'utilité de la substance testée comme antiathérosclérotique, le procédé de l'invention comprend une étape supplémentaire visant à déterminer par tout moyen approprié l'effet de ladite substance sur l'expression de l'apo C-III. La détermination de l'effet de la substance testée sur l'expression de l'apo C-III peut être réalisée par toutes méthodes directes ou indirectes connues de l'homme du métier, comme une transfection, une analyse des ARNm in vitro et sur des modèles in vitro et in Vi VO. On préfère plus particulièrement dans le procédé de criblage de l'invention, utiliser le récepteur RORX ou l'élément de réponse du récepteur RORc. Un exemple de procédé de criblage selon la présente invention comprend les étapes suivantes: a) on transfecte un hôte cellulaire avec un fragment d'ADN codant pour un récepteur ROR ou l'un de ses équivalents fonctionnels, b) on cotransfecte l'hôte de l'étape (a) avec une construction comprenant un élément de réponse dudit récepteur ROR et au moins un gène rapporteur, c) on additionne à l'hôte de l'étape (b) le composé à tester, d) on mesure l'expression du gène rapporteur. Les travaux de recherche réalisés par les Inventeurs ont montré que l'élément de réponse du récepteur RORa est situé au niveau du promoteur distal du gène de l'apo C-III. Il est compris dans la séquence - 1415/+24 du promoteur du gène de l'apo C-III (Ogami K. et al, J. Biol. Chem., 265, (17), 9808-9815 (1990)). La mise en évidence par les Inventeurs que le récepteur RORa active le promoteur de l'apo C-III humaine est notamment fondée sur les travaux réalisés à partir de cellules dans lesquelles une construction comportant le gène de RORa est cotransfecté avec un plasmide rapporteur contenant une grande partie du promoteur de l'apo C-III, et o il a été observé une augmentation de la transcription du gène rapporteur. La présente invention concerne également les dites constructions comportant le gène codant pour le récepteur ROR ou un élément de réponse du récepteur ROR associé à un gène rapporteur. L'activité de RORo sur le promoteur de l'apo C-III humaine a été comparée avec l'activité de RORa sur le promoteur proximal de l'apo C- III humaine ou sur le promoteur de la thymidine kinase du virus Herpes simplex. Or, seule l'activité du promoteur distal de l'apo C-III humaine est augmentée par RORc. Ces résultats signifient d'une part, qu'un élément de réponse au récepteur nucléaire RORa est présentdans le promoteur distal du gène de l'apo C-II et d'autre part que l'effet de RORa sur le promoteur de l'apo C-III humaine est spécifique. Tout gène rapporteur permettant de mesurer l'activité de récepteurs nucléaires sur la séquence comprenant leur élément de réponse peut être utilisé dans le procédé de criblage selon l'invention. Parmi ceux- ci, on peut citer par exemple le gène de la chloramphénicol acétyltransférase (CAT), le gène de la luciférase (Luc), le gène de la phosphatase alcaline secrétée (PAS) ou celui de la béta-galactosidase (p- Gal). L'activité des protéines codées par ces gènes peut être facilement mesurée par des méthode classiques et permet de connaitre l'effet des récepteurs nucléaires sur l'expression des gènes en mesurant la quantité de protéines produite et ou leur activité enzymtique. L'action des récepteurs ROR et plus particulièrement du récepteur RORa sur le gène de l'apo C-III rapportée par les Inventeurs permet bien entendu d'utiliser, dans les constructions de l'invention et les procédés de criblages les mettant en oeuvre, le gène de l'Apo C-III comme gène rapporteur. Dans le procédé de criblage de l'invention, on entend par hôte cellulaire, tout type cellulaire adapté à l'expression des gènes cidessus, comme notamment des cellules de mammifères, des bactéries ou des levures ou encore des cellules d'insectes. Les vecteurs utilisés sont bien entendu adaptés au type cellulaire transfecté, on peut citer des plasmides, des virus ou des chromosomes artificiels. D'autres méthodes de criblage selon l'invention consiste: - à transformer un hôte cellulaire comme défini précédemment, avec une construction portant un gène codant pour le récepteur ROR ou un élement de réponse du récepteur ROR, puis à utiliser lesdits hôtes cellulaires ou des extraits de ceux-ci dans des essais de "binding" fondés sur le déplacement compétitif entre un ligand froid et un ligand marqué. - à utiliser les récepteurs ROR dans un test de criblage de type CARLA signifiant en anglais "Co- Activator-dependent Receptor Ligand Assay" (G. Krey et ai., Molecular Endocrinology, 1997, vol. 11 (6) 779-791) fondé sur les interactions du récepteur ROR avec des coactivateurs transcriptionnels. La présente invention a aussi pour objet les substances sélectionnés par une méthode de criblage selon la présente invention, ainsi que l'utilisation de ces substances pour la préparation d'une composition notamment pharmaceutique ayant une action sur l'expression de l'apo C-III et donc destinée au traitement et/ou à la prévention de l'athérosclérose chez l'homme ou l'animal. En effet, les composés possédant des propriétés anti-athérosclérotiques sont sélectionnés sur la base de leur capacité à agir sur l'expression de l'apo C-III, et peuvent être des ligands de ROR ou des analogues de ROR, dont les propriétés sont mises en évidence soit directement à partir du niveau d'expression de l'apo C-III, soit par le biais de l'expresion d'un gène rapporteur, ou encore par leur capacité à former un complexe avec le récepteur ROR. L'invention concerne donc plus généralement l'utilisation d'une substance capable de moduler l'expression de l'apo C-III pour la préparation d'une composition notamment pharmaceutique utile pour le traitement et/ou à la prévention de l'athérosclérose chez l'homme ou l'animal. Plus particulièrement l'invention se rapporte à l'utilisation d'une substance capable de se fixer au récepteur ROR ou à son élement de réponse pour la préparation d'une composition pharmaceutique utile pour le traitement et/ou à la prévention de l'athérosclérose chez l'homme ou l'animal. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront des exemples qui suivent décrivant l'activation du promoteur de l'apo C-III par le récepteur RORahumain. I. MÉTHODES. 1. Culture cellulaire et analyse d'ARN. La souche d'hépatome humaine, HepG2, et les cellules RK13 ont été fournies par E.C.A.C.C. (Porton down, Salisbury,U.K.). Les cellules sont maintenues dans des conditions de culture standard (milieu de culture essentiel minimum de Dulbecco modifié selon Eagle, supplémenté avec 10% de sérum foetal de veau à 37 C dans une atmosphère humidifiée à 5% C02 / 95% air). Le milieu est renouvelé tous les deux jours. 2. Clonaae et construction des plasmides recombinants. L'activité du promoteur de l'apo C-III humaine a été étudiée par la méthode classique du gène rapporteur. Dans les résultats présentés les constructions suivantes ont été utilisées. Un fragment génomique contenant la séquence -1415/+24 du promoteur du gène de l'apo C-III humaine a été préparé par une digestion par EcoRI et PvuII, rendu franc et cloné dans le site HincII de pUC18. Puis le promoteur de l'apo C- III a été excisé par une digestion par HindIII et BamHI et sous cloné dans la cassette de clonage du vecteur d'expression pBLCAT5 (29) générant le plasmide -1415/+24CIII-CAT. Le vecteur d'expression contenant le promoteur sauvage de l'apo C-III -198/+24 a été obtenu par digestion par PstI et religation au vecteur sauvage correspondant - 1415/+24CIII-CAT. Le gène Luc+ de la luciférase du plasmide pGL3 (Proméga) (SacI-BamHI) a été dans un premier temps sous-cloné entre les sites correspondants du vecteur pBKCMV (Stratagene) générant le plasmide (pBKCMV-Luc+). Le gène rapporteur CAT a été excisé des vecteurs - 1415/+24CIII-CAT et -198/+24CAT par action de KpnI et BamHI et remplacé par un fragment KpnI-BGLII du plasmide pBKCMV-Luc+ pour créer les vecteurs -1415/+24CIII-Luc+ -198/+24-Luc+. 3. Expériences de transfection L'activité des récepteurs nucléaires a été étudiée par la méthode standard de gène rapporteur/cotransfection. L'ADN peut être introduit dans les cellules par toute méthode de transfection connue (phosphate de calcium, électroporation, lipofection,...). Le plasmide pCMX-hRORa a été utilisé pour l'expression du récepteur nucléaire correspondant. Le vecteurs natif pCMX a été utilisé comme contrôle négatif. Dans les expériences présentées les transfections ont été réalisées à 50- 60% de confluence par la méthode de coprécipitation au phosphate de calcium avec un ensemble de plasmides qui comprend en plus des plasmides rapporteurs Luc+ (0,5 ggpar bote de culture de 60 mm de diamètre) et des vecteurs d'expression (0,1-1 gg), 0,1 gg du vecteur d'expression pCMV--gal contenant le gène de la5-galactosidase comme contrôle de l'efficacité de la transfection (30). Après à 6 heures, les cellules ont été lavées au PBS et incubées pendant 36 heures dans du milieu de culture frais contenant 10% de sérum foetal de veau. Après transfection, les cellules ont été lysées et l'activité luciférase a été mesurée selon les protocoles standards (31). Toutes les expériences de transfection ont été réalisées au moins trois fois. 4. Les souris. La souris mutante homozygote staggerer (sg/sg) développe, par rapport au type sauvage C57BL/6 +/+, une ataxie cérébrale et une neurodégénération (23, 24) ainsi que des anormalités immunitaires, comme l'hyperproduction de cytokines inflammatoires (26, 25). Les souris sg/sg portent une délétion sur le gène RORa. Cette délétion empêche la traduction du domaine putatif de fixation du ligand, perturbant de cette manière le ]0 fonctionnement de ce facteur de transcription (27). La mutation staggerer étant maintenue dans le génome C57BL/6 qui permet l'analyse du développement de lésions athérosclérotiques après soumission à un régime athérogénique, les profils en lipoprotéines et apolipoprotéines plasmatiques, l'étendue des plaques de corps gras dans l'aorte et l'incidence de l'athérosclérose dans les artères coronaires ont été déterminés en soumettant des souris sg/sg à un régime athérogénique riche en corps gras et en les comparant à des souris C57BL/6 +/+. Les résultats ont montré que les souris sg/sg développent une athérosclérose sévère, ce qui suggère le rôle important de RORa dans les maladies cardiovasculaires. Les souris mâles et femelles C57BL/6 (agées de 6 à 8 semaines) ont été obtenues du CERJ (France), les souris mutantes staggerer (sg/sg) ont été obtenues en croisant des hétérozygotes connus (+/sg) et en identifiant la descendance homozygote par leur ataxie. La mutation sg a été développée sur un background C57BL/6. 5. Analyse des ARN. Les souris sont tuées par overdose d'éther. Les extractions d'ARN, les hybridations "northern" et "dot blot", les mesures des niveaux d'ARN messager de l'apo C-III sont effectués comme décrits précédemment (32). Le clone d'ADNc 36B4 (33) codant pour la phosphoprotéine ribosomale acide humaine PO (34) est utilisée comme contrôle. Les sondes d'ADNc sont marquées en utilisant des hexamères aléatoires comme amorce (Boehringer Mannhreim). Les filtres sont hybridés avec 1,5 x 106 cpm/ml de chaque sonde comme décrit (35). Ils sont lavés une fois dans 0,5xSSC et 0,1% SDS pendant 10 minutes à température ambiante et deux fois pendant 30 minutes à 65 C puis subséquemment exposées à un film à rayon-X (X-OMAT-AR, Kodak). Les autoradiogrammes sont analysés par densitométrie à balayage quantitatif (densitomètre Biorad GS670) et les résultats sont normalisés par rapport aux niveaux d'ARN messagers 36B4 (35). II. RESULTATS. 1. hRORxactive le promoteur de l'apo C-III humaine dans les cellules HepG2. La figure 1 illustre la capacité du plasmide pCMX-hRORaà augmenter l'activité du gène rapporteur lorsqu'il est cotransfecté dans des cellules HepG2 avec un plasmide rapporteur contenant une grande partie du promoteur de l'apo C-III en amont du gène rapporteur luciférase (plasmide -1415/+24WTLuc+). La figure 2 illustre l'augmentation de l'effet du plasmide pCMX-hRORasur l'activité du gène rapporteur luciférase en fonction de la quantité d'ADN transfectée. Les figures 1 et 2 suggèrent la présence d'un élément de réponse au récepteur nucléaire hRORadans le promoteur distal du gène de l'apo C-II humaine. 2. hRORaactive le promoteur de l'apo C-III humaine dans les cellules RK13. Afin de déterminer si l'activation du promoteur distal de l'apo C-III humaine par hRORo dépend du contexte cellulaire et afin d'identifier un modèle expérimental plus commode, l'expérience est répétée sur les cellules RK13. Des résultats similaires sont obtenus (figure3). Ce modèle est donc utilisé dans les expériences suivantes car son phénotype est plus stable que celui des cellules HepG2. 3. L'effet de hRORQ sur le promoteur de l'apo C-III humaine est spécifique La figure 4 montre que l'effet de hRORc sur le promoteur distal du gène de l'apo C-III humaine est spécifique. L'activité de hRORc sur ce promoteur est comparée à son activité sur le promoteur proximal de l'apo C-III humaine ou sur le promoteur de la thymidine kinase du virus Herpes simplex. Seule l'activité du promoteur distal de l'apo C-III humaine est augmentée par hRORa. Son effet est donc spécifique. 4. La perturbation de hRORx dans les souris sq/sq est associée à une expression réduite de l'apo C- III dans le foie. La figure 5 montre que l'expression du gène de l'apo C-III de souris est considérablement réduite dans les souris mutantes par rapport aux souris du type sauvage. Afin d'évaluer si les preuves apportées in vitro restent pertinentes in vivo, l'expression du gène de l'apo C-III de souris est analysée dans des échantillons de foie prélevés sur des souris sg/sg et comparée à son expression dans des échantillons de foie du type sauvage C57BL/6. Ce résultat conforte la pertinence physiologique des observations initiales et suggère que le récepteur RORC est aussi important pour l'expression de l'apo C-III' chez les rongeurs. RÉFÉRENCES 1. Cury M. D., McConathy W.J., Fesmire J.D., Alaupovic P. 1980. Quantitative determination of human apolipoprotein C-III by electroimmunoassay. Biochim. Biophys. Acta. 617:503-513. 2. Schonfeld G., Georges P.I., Miller J., Reilly P., Witztum J. 1979. Apolipoprotein C-II and C- III levels in hypolipoproteinemia Metabolism.28:1001- 3. Stocks J., Holdsworth G, Galton D.J. 1979. Hypertriglycerideamia associated wih an abnormal trigycerid rich liporpotein carrying excess apolipoprotein C-III. Lancet. ii:667-671. 4. LA N.A., Gibson J.C., Ginsberg H.N. 1998. INdependant regulaton of plasma aolipoprotein C-II and C-III concentrations in very low density and high densitylipoproteins: implicaions for the regulation of the catabolism of these lipoproteins. J. Lipid. Res. 29:669-677. 5. 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REVENDICATIONS 1) Utilisation des récepteurs ROR et/ou de leur élément de réponse ou encore d'un équivalent fonctionnel de ceux-ci pour le criblage de substances possédant des propriétés anti-athérosclérotiques. 2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le récepteur ROR et l'élément de réponse du récepteur ROR sont le récepteur RORX ou l'élément de réponse du récepteur RORo. 3) Procédé de criblage de substances possédant des propriétés antiathérosclérotiques caractérisé en ce que l'on met en contact la substance à tester avec un récepteur ROR et/ou un élement de réponse du récepteur ROR, ou un équivalent fonctionnel de ceux- ci, puis l'on mesure par tout moyen approprié la fixation de ladite substance sur le récepteur ROR ou la fixation du complexe formé de ladite substance et du récepteur ROR sur son élement de réponse. 4) Procédé de criblage selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) on transfecte un hôte cellulaire avec un fragment d'ADN codant pour un récepteur ROR ou l'un de ses équivalents fonctionnels, b) on cotransfecte l'hôte de l'étape (a) avec une construction comprenant un élément de réponse dudit récepteur ROR et au moins un gène rapporteur, c) on additionne à l'hôte de l'étape (b) le composé à tester, d) on mesure l'expression du gène rapporteur. ) Procédé de criblage selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) on transforme un hôte cellulaire avec une construction portant un gène codant pour le récepteur ROR ou un élement de réponse du récepteur ROR, puis b) on utilise lesdits hôtes cellulaires ou des extraits de ceux-cidans des essais de binding fondés sur le déplacement compétitif entre un ligand froid et un ligand marqué. 6) Procédé de criblage selon l'une quelconque des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que la construction portant un gène codant pour le récepteur ROR ou un élement de réponse du récepteur ROR comprend également un gène rapporteur. 7) Procédé de criblage selon la revendication 6, caractérisé en ce que le gène rapporteur est choisi parmi le gène de la chloramphénicol acétyltransférase, le gène de la luciférase, le gène de la phosphatase alcaline secrétée, le gène de la béta-galactosidase ou le gène de l'Apo C- III. 8) Procédé de criblage selon l'une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisé en ce que l'hôte cellulaire est choisi parmi les cellules de mammifères, les bactéries ou des levures ou encore les cellules d'insectes. 9) Procédé de criblage selon l'une quelconque des revendications 3 à 8, caractérisé en ce qu'en outre on détermine par tout moyen approprié l'effet de ladite substance sur l'expression de l'apo C- III. ) Procédé de criblage selon l'une quelconque des revendications 3 à 9, caractérisé en ce le récepteur ROR et l'élément de réponse du récepteur ROR sont le récepteur RORO ou l'élément de réponse du récepteur RORa. 11) Utilisation d'une substance sélectionnée par un procédé de criblage selon l'une quelconque des revendications 3 à 10 pour la préparation d'une composition pharmaceutique utile pour le traitement et/ou à la prévention de l'athérosclérose chez l'homme ou l'animal. 12) Utilisation d'une substance capable de se fixer au récepteur ROR ou à son élément de réponse pour la préparation d'une composition pharmaceutique utile pour le traitement et/ou à la prévention de l'athérosclérose chez l'homme ou l'animal.