Brevet FR2778668A1 — publié le 19991119

La présente invention concerne notamment une séquence nucléotidique qui comprend au moins une séquence ayant au moins 80% d'identité avec le gène codant pour la sous-unité s2 du récepteur GABAA, le peptide correspondant à la sous-unité s2, une méthode de criblage de substances actives sur le système nerveux central, et une composition pharmaceutique comprenant lesdites substances. Le GABA (acide ganmma-aminobutyrique), principal neuromédiateur inhibiteur du système nerveux central, agit en se fixant soit sur les récepteurs ionotropiques de type A et C, soit sur les récepteurs de type B, qui sont des récepteurs métabotropiques associés via le système des second messagers (GTP binding protein) à des canaux cationiques (potassique ou calcique); (Bowery, 1993). La famille des récepteurs du GABA de type A (GABA4), appartient à la super-famille des canaux-récepteurs à ouverture dépendante de la fixation d'un ligand et comprend à ce jour, 6 sous-familles a, 1, y, 5, r et s dont 3 comportent plusieurs sous-types al-6, 131-3 et y1-3 (Olsen et Tobin, 1990; Sieghart, 1995; Davies et al., 1997; Garret et al. , 1997; Hedblom et al., 1997; Whiting et al., 1997). Toutes les sous- unités des récepteurs ionotropiques de GABA présentent des identités de séquences peptidiques de 70 à 80% à l'intérieur d'une sous-famille et de 30 à 40% entre les sous- familles. La fixation de GABA sur les recepteurs GABAA provoque le passage d'ions C1- à travers la membrane post-synaptique, ce qui in fine inhibe l'activité neuronale. Ces canaux-récepteurs sont des glycoprotéines oligomériques formant un pentamère qui délimite le canal ionique central. Il a été démontré que la distribution des ARNm des différents récepteurs GABAA varie très significativement d'une région à l'autre du système nerveux. Cette distribution différentielle corrèle avec l'hétérogénéité de la pharmacologie et le rôle physiologique distinct des familles et des sous-types de GABAA. Ainsi, la quizaine de sous-unités des récepteurs GABAA peut conduire par combinaison à une multitude de récepteurs fonctionnels ayant chacun une localisation bien particulière et une affinité plus spécifique pour certains ligands. Les récepteurs GABAA représentent des sites de liaison spécifique pour de nombreuses substances couramment utilisées pour le traitement des troubles du système nerveux et du physchisme. Les benzodiazépines sont particulièrement efficaces pour moduler l'activité de divers sous-types du récepteur GABAA. En conséquence, il est possible d'identifier de nouvelles molécules agissant spécifiquement sur une sous-unité du récepteur et pouvant servir notamment de régulateur des symptômes liés au système nerveux central, tels que l'anxiété, les troubles de la vigilance, de la mémoire, et du sommeil. Plus particulièrement, la caractérisation de nouvelles sous-unités, exprimées dans le cerveau au niveau du noyau sous-thalamique (NST), serait une nouvelle opportunité pour le traitement de la maladie de Parkinson. En effet, l'activité tonique (tension musculaire et activité motrice) du noyau sous- thalamique est impliquée dans l'apparition des tremblements et de l'akinésie dans la maladie de Parkinson. La stimulation à haute fréquence du NST ou l'application locale de GABA améliore spectaculairement ces symptômes. Ainsi, la caractérisation d'un nouveau type de récepteur exprimé dans cette structure permet d'envisager le développement de nouvelles thérapeutiques. De nombreux résultats de pharmacologie des récepteurs GABAA ont été obtenus à partir de membranes de cerveau entier ou de régions du cerveau. Ces résultats reflètent seulement les propriétés générales des récepteurs GABAA et ne permettent pas de mesurer l'hétérogénéité de ces récepteurs. Des expériences ont montrées que certains produits testés possèdent des affinités différentes pour les récepteurs GABAA issus de régions distinctes du cerveau. En outre, ces produits peuvent avoir des effets différents sur les courants induits par le GABA enregistrés sur différentes populations neuronales. Ainsi, certains sites allostériques ne sont donc pas nécessairement présents sur tous les récepteurs GABAA. Ainsi, ces récepteurs existent sous de multiples formes qui présentes des distributions régionales et cellulaires différentes. Une sous-unité du recepteur GABAA,récemment clonée, correspond à une nouvelle classe appelée s. Elle est exprimée dans le tissu conducteur du coeur (Garret et al., 1997). Il a également été montré par des expériences de Northern blot que le gène codant pour cette sous-unité s est exprimé dans le noyau sous-thalamique (NST) et à un moindre niveau dans l'amygdale (Davies et al., 1997; Whiting et al., 1997). Cette sous-unité E, que l'on nommera par la suite el, a fait l'objet d'une demande de brevet WO 96/06862. Mais des expériences d'hybridation in situ avec une sonde s'hybridant à ce gène sI montrent une absence de marquage dans le NST (Whiting et al., 1997 Garret et al., résultats non publiés). Pour comprendre cette contradiction entre les résultats obtenus par northern blot et par hybridation in situ, l'ADNc de NST de rat a été amplifié par PCR avec des oligonucléotides dérivés de la séquence de la sous-unité s 1 humaine. Or, de manière surprenante, la sous-unité sl, cidessus mentionnée, n'a pas été détectée dans le NST. En réalité, la sousunité, exprimée dans le NST, représente une nouvelle et distincte sousunité ú, appelée s2, qui est notamment l'objet de la présente invention. Ainsi, aucun document de l'art antérieur ne suggère, ni ne divulgue la présente invention telle que définie ci-dessous. Ainsi, la présente invention concerne une séquence nucléotidique comprenant au moins une séquence ayant au moins 80% d'identité avec le gène qui code pour la sous-unité s2 du récepteur GABAA. De préférence, ladite séquence nucléotidique comporte notamment la séquence SEQ ID n l. On entend par séquence nucléotidique, une séquence d'ADN simple brin ou double brin, codante ou non codante, sens ou anti-sens, ou une séquence d'ARN sens ou anti-sens. Ladite séquence comprend toutes les variations possibles codant pour la sous-unité s2 du récepteur GABAA afin de tenir compte de la dégénérescence du code génétique. Un autre aspect de la présente invention concerne un peptide caractérisé en ce qu'il comprend au moins une séquence peptidique ayant au moins 80% d'identité avec la sous-unité s2 du récepteur GABAA. De préférence, ledit peptide possède au minimum la séquence SEQ ID n 2. Les différents récepteurs, formés à partir de toute combinaison entre les sous-unité s2, cc, 3, y, ô et a, ainsi que toute protéine multimérique formée à partir de toute combinaison entre les sous-unité s2, a, 13, y, 8 et xe font aussi parti de l'invention. La présente invention a également pour objet un vecteur d'expression dudit peptide caractérisé en ce qu'il comporte une séquence nucléotidique telle que mentionnée ci-dessus. La séquence nucléotidique codante peut être fusionnée à un promoteur efficace dans les cellules procaryotes ou eucaryotes. Ce vecteur d'expression peut comporter en outre un ou des marqueurs de sélection et éventuellement un ou plusieurs gènes codant pour les sousunités a, 13, y, 8 et r du récepteur GABAA. Un aspect supplémentaire de l'invention vise une cellule transformée par ce vecteur, particulièrement une cellule transformée qui exprime à sa surface un protéine multimérique formée à partir de toute combinaison s2, ca, 3, y, b, ic. On entend par toute combinaison, l'ensemble des possibles associations dépendantes et indépendantes comportant au minimum ú2 et une autre sous-unité. De préférence, ladite cellule transformée exprime à sa surface un récepteur GABAA ayant la sous-unité s2. Une cellule peut être co- transfectée par plusieurs vecteurs, chacun exprimant une ou plusieurs sous- unités du récepteur GABAA Un mode de réalisation de la présente invention consiste en un procédé de fabrication dudit peptide caractérisé en ce qu'on fait exprimer ledit peptide par une cellule transformée telle que définie ci-dessus. Un autre aspect de la présente invention concerne un procédé de criblage de molécules susceptibles de posséder une activité pharmacologique consistant à tester l'affinité et/ou l'action de molécules sur ledit peptide et/ou sur le récepteur GABAA complet ayant en outre ú2. De surcroît, on peut tester l'affinité et/ou l'action desdites molécules sur une cellule telle que définie ci- dessus. La présente invention vise un anticorps contre ledit peptide, un agoniste ou un antagoniste dudit peptide et/ou du récepteur GABAA complet ayant en outre s2. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant ledit peptide, un agoniste, un antagoniste, ou un vecteur, tels qu'ils sont mentionnés ci-dessus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Cette composition est utile pour la fabrication d'un médicament, en particulier pour la fabrication d'un médicament destiné à l'inhibition d'un ou plusieurs récepteurs GABAA ayant la sous-unité ú2 ou à l'activation d'un ou plusieurs récepteurs GABAA ayant la sous-unité ú2, de préférence pour le traitement des troubles du système nerveux central, notamment de l'anxiété, de la nervosité, de l'angoisse, des troubles du comportement, de la vigilance, de la mémoire, et du sommeil. En outre, cette composition est utile pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des symptomes de tremblements et de l'akinésie, en particulier pour le traitement de la maladie de Parkinson. Le gène codant pour la sous-unité ú2 a été identifié et amplifié par PCR à partir de l'ADNc présent dans le noyau sous-thalamique de rat. La séquence amplifiée de 320 pb, possède 80% d'identité avec la sous-unité ú1 précédemment caractérisée dans le tissu conducteur du coeur, Garret et al., (1997), incorporée dans la description par référence. Ce pourcentage d'identité est observé entre les sous-unité d'une même famille, par exemple les six sous- unités a ont 80% d'identité entre elles. De plus, lorsqu'on compare la même sous-unité entre deux espèce différente (par ex: le rat et l'homme), le pourcentage d'identité dans le domaine des régions transmembranaire est de %. Par conséquent, la sous-unité caractérisée dans le NST de rat est identifiée comme le produit d'un nouveau gène et est identique s2 chez l'homme. L'ensemble des données bibliographiques infra montre que plusieurs sous- types de récepteurs GABAA sont présents dans le SNC. Les propriétés pharmacologiques de chaque sous-type de récepteur dépend de la composition en sous-unités. Par exemple, seule la co-expression des sous- unités a et f3 et d'une sous-unité y permet de trouver une réponse à l'ensemble des molécules de la famille des benzodiazépines. Une nouvelle sous-unité, E2, exprimée dans le noyau sous-thalamique, a été mise en évidence lors des expériences de la présente invention. La caractérisation moléculaire et électrophysiologique d'un nouveau récepteur GABA associé à cette sous-unité s2 doit conduire à la mise en évidence une nouvelle pharmacologie. De même on peut utiliser la sous- unité s2 conjointement avec les autres sous-unités a, 3,, ô, et x (multiples combinaisons) afin de définir précisément les fonctions du NST et d'identifier des substances ayant une spécificité d'action élevée. Une pharmacologie spécifique d'un récepteur exprimé dans une région du cerveau permet d'envisager de développer de nouvelles armes thérapeutiques dirigés contre un dysfonctionnement de cette structure ou contre le dysfonctionnement d'un circuit dans laquelle cette structure est impliquée. En l'espèce, considérant que le NST est un élément clé dans la maladie de Parkinson, l'identification et la caractérisation de la sous-unité s2, exprimée dans cette structure, est une avancée importante vers la mise au point de traitements efficaces et ciblés. Pour la suite de la description et des exemples, on se référera aux légendes des figures présentées ci-dessous. Figure 1: Identification de la sous-unité E2. Electrophorèse sur gel d'agarose 1,5% des produits PCR, avec les amorces M1U et M3D, réalisé sur: A, le cDNA de NST et B, le fragment d'ADN extrait du gel montré en A. Le fragment à la taille attendue de 310 pb est indiqué par une flèche. (M): marqueur de taille, fragment phiX174-HaelII. Figure 2: Comparaison entre les gènes ú2 et el. Séquence nucléotidique du fragment PCR obtenu a partir de cDNA de NST de rat (s2), comparaison avec la séquence correspondante de la sous-unité de récepteur GABAA sil humaine. L'identité de la séquence est indiqué à droite de la figure, les amorces M1U et M3D utilisées pour la PCR sont indiquées. Les positions conservées entre les deux séquences sont indiquées par un point. Figure 3: Comparaison entre les peptides ú2 et ú1. Séquence peptidique déduite de la séquence du fragment PCR obtenu a partir de cDNA de NST de rat (s2), comparaison avec la séquence correspondante de la sous-unité de récepteur GABAA s1 humaine. L'identité de la séquence est indiqué à droite de la figure, les régions correspondants aux amorces M1U et M3D utilisées pour la PCR sont indiquées. Les positions conservées entre les deux séquences sont indiquées par un point. La figure 1A montre l'analyse du produit PCR obtenu après amplification de l'ADNc de NST de rat avec les amorces MIU et M3D. Aucun fragment n'est visible à la taille attendue (310pb) après coloration au bromure d'ethidium. Deux bandes sont visibles au niveau des marqueurs 194 et 118 pb indiquant une amplification non spécifique. Après découpe de la bande d'agarose correspondant à 310 pb, une deuxième amplification permet d'obtenir un fragment d'ADN correspondant à s2 (figure lB). Le séquençage du produit PCR montre que le fragment amplifié est homogène, indiquant l'amplification d'une séquence unique. La séquence nucléotidique du produit PCR obtenu correspondant à s2 (figure 2) est homologue à la séquence cl à 80%. La séquence peptidique déduite de la séquence nucléotidique correspondant à s2 (figure 3) est homologue à la séquence cl avec 82% d'identité. Exemples 1: Préparation du tissu. Le cerveau est obtenu à partir de rats mâles Wistar de 20 à 28 jours. Un bloc de tissu contenant le NST est découpé en tranches coronales de 300400 AM, le NST est repéré à l'aide d'un atlas, Paxinos G. et Watson C. , (1986). Après dissection du NST, L'ARN total est extrait par la méthode de Chomezynski et Sacchi (1987). L'ADNc est synthétisé dans 20 AI à partir de 5 /g d'ARN total et 1 /g d'amorces au hasard (haxanucléotides) avec 200 U de reverse transcriptase (Superscript; BRL). Exemples 2: Amplification par PCR. La PCR est réalisée dans un volume de 50 M1 contenant 1 unité de Taq polymérase (Appligène, Illkirch, France) dans le tampon fourni par le fabricant, 1 /M de chaque amorce, 0.2 mM de chaque deoxynucleotide, et 1 /I de cDNA. Les amorces utilisées sont MIU (sens): ATGGTCATGACGATTTTCTTCAAT (SEQ ID 3) et M3D (antisens) TGTCTGGTT GTAGATCAGGAAGTTGAGC (SEQ ID 4). La PCR est réalisée d'abord avec 5 cycles: dénaturation pendant 30 s à 95 C, hybridation 30 s à 45 C et polymérisation 30 s à 72 C suivit par 30 cycles (30 s à 95 C, s à 50 C et 30 s à 72 C) puis 1 cycle (30 s à 95 C, 30 s à 50 C et 10 min. à 72 C). Une fraction de 8 /l du produit d'amplification est analysée sur gel d'agarose 1.5% en parallèle avec un marqueur de taille PhiX174-HaeII (Gibco). Une bande d'agarose correspondant à 310 pb est découpée, congelée et décongelée rapidement. Une fraction de milieu ainsi obtenu est utilisée pour une deuxième amplification dans les conditions décrites ci-dessus, excepté que les 5 cycles avec la température d'hybridation à 45 C sont omis. Exemples 3: Séquençage. Le produit d'amplification est purifié par centrifugation sur une colonne de séphadex S-400 (Pharmacia), et séquencé par PCR avec l'amorce M3D et un kit "dRhodamine termninator cycle sequencing" (PE Applied Biosystem) selon les instructions du fabricant. Le produit PCR est sous-cloné dans une plasmide (pT7 Blue, Novagen). Références Bowery N. G., (1993). GABAB receptor pharmacology. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 33, 109:147 Davies P. A., Hanna M. C., Hales T. G., and Kirkness E. F., (1997). Insensitivity to anaesthetic agents conferred by a class of GABAA receptor subunit. Nature 385, 820: 823 Garret M., Bascles L., Boue- Grabot E., Sartor P., Carron G., Bloch B., and Margolskee R. F., (1997). An mRNA encoding a putative GBA-gated chloride channel is expressed in the human cardiac conduction system. J Neurochem. 68, 1382: 1389. Hedblom E. and Kirkness E. F., (1997). A novel class of GABAA receptor subunit in tissues of the reproductive system. J. Biol. Chem. 272, 15346 Olsen W. and Tobin A. J., (1990). Molecular biology of GABAA receptors. FASEB J. 4, 1469:1480 Paxinos G. and Watson C. 1986: the rat brain in stereotaxic coordinates. Sydney: Academic Press Sieghart W., (1995). Structure anad pharmacology of y-aminobutiruc acid A receptor subtypes. Pharmacol. Rev. 47, 181: 234 Whiting P. J., McAllister G., Vasilatis D., Bonnert T. P., Heavens R. P., Smith D. W., Hewson L., O'Donnell R., Rigby M. R., Sirinathsinghji D. J. S., Marshall G., Thompson S. A. and Wafford, K. E., (1997). Neuronally restricted RNA splicing regulates the expression of a novel GABAA receptor subunit conferring atypical functional properties. J. Neurosci. 17, 5027: 5037 LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATIONS GENERALES: (i) DEPOSANT: (A) NOM: CENTRE NATIONAL DE RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) (B) RUE: 3 RUE MICHEL ANGE (C) VILLE: PARIS (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 75794 (ii) TITRE DE L' INVENTION: SOUS-UNITE EPSILON 2 DU RECEPTEUR GABA (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 4 (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.30 (OEB) (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 263 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: GTAAGCAGGA GGTTTGGCTT CATTGTCTTT CAAAACTATA TCCCTTCATC TGTTACCACA 60 ATGCTTTCCT GGGTGTCCTT CTGGATCAAG ATAGAAGCTG CTGCTGCCAG GGCCTCTGTA 120 GGGGTCAGTT CTGTGCTCAC CATGGCCACA CTGGGTACCT TTTCTCGTAA GAATTTCCCT 180 CGTGTCTCCT ATCTCACAGC TTTGGACTTC TATATTGCAA TTTGTTTCGT CTTGTGCTTC 240 TGTACTCTAC TAGAGTTCAC TGT 263 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 87 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2: Val Ser Arg Arg Phe Gly Phe Ile Val Phe Gln Asn Tyr Ile Pro Ser 1 5 10 15 Ser Val Thr Thr Met Leu Ser Trp Val Ser Phe Trp Ile Lys Ile Glu 25 30 Ala Ala Ala Ala Arg Ala Ser Val Gly Val Ser Ser Val Leu Thr Met 40 45 Ala Thr Leu Gly Thr Phe Ser Arg Lys Asn Phe Pro Arg Val Ser Tyr 55 60 Leu Thr Ala Leu Asp Phe Tyr Ile Ala Ile Cys Phe Val Leu Cys Phe 70 75 80 Cys Thr Leu Leu Glu Phe Thr (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 24 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (iv) ANTI-SENS: NON (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: MIU (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3: ATGGTCATGA CGATTTTCTT CAAT 24 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 28 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN il (iv) ANTI-SENS: OUI (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: M3D (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4: TGTCTGGTTG TAGATCAGGA AGTTGAGC 28 Revendications 1. Séquence nucléotidique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une séquence ayant au moins 80% d'identité avec le gène codant pour la sous-unité s2 du récepteur GABAA. 2. Séquence nucléotidique selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comporte au minimum la séquence SEQ ID n 1. 3. Peptide caractérisé en ce qu'il' comprend au moins une séquence peptidique ayant au moins 80% d'identité avec la sous-unité c2 du récepteur GABAA.' 4. Peptide selon la revendication 3 ayant au minimum la séquence SEQ ID n 2. 5. Protéine multiménrique formée à partir d'une combinaison entre le peptide selon la revendication 3 et les sous-unités appartenant aux familles ac, [,. ' et 7E. 6. Vecteur d'expression d'un peptide selon l'une des revendications 3 et 4 caractérisé en ce qu'il comporte une séquence nucléotidique selon l'une des revendications 1 à 2 fusionnée à un promoteur efficace dans les cellules procaryotes et/ou eucaryotes et éventuellement un ou des marqueurs de sélection. 7. Vecteur d'expression selon la revendication 6 exprimant en outre un ou plusieurs gènes codant pour les sous-unités a, [3, y, et 7E du récepteur GABAA. 8. Vecteur d'expression d'une protéine selon la revendication 5. 9. Cellule transformée par un vecteur selon l'une des revendications 6 à 8. 10. Cellule co-transfectée avec un vecteur selon la revendication 6 et un vecteur exprimant un ou plusieurs gènes codant pour les sous-unités a, 3, y, 5 et 7c du récepteur GABAA. 11. Cellule transformée selon l'une des revendications 9 à 10 caractérisée en ce qu'elle exprime à sa surface le récepteur GABAA ayant la sous-unité ú2. 12. Procédé de fabrication d'un peptide caractérisé en ce qu'on fait exprimer ledit peptide par une cellule selon l'une revendications 9 à 11. 13. Procédé de criblage de molécules susceptibles de posséder une activité pharmacologique consistant à tester l'affinité et/ou l'action desdites molécules sur un peptide et/ou une protéine selon l'une des revendications 3 à 5. 14. Procédé de criblage de molécules susceptibles de posséder une activité pharmacologique consistant à tester l'affminité et/ou l'action desdites molécules sur une cellule selon l'une des revendications 9 à 11. 15. Anticorps contre un peptide selon l'une des revendications 3 à 4 et/ou une protéine selon la revendication 5. 16. Agoniste d'un peptide selon l'une des revendications 3 à 4 et/ou d'une protéine selon la revendication 5. 17. Antagoniste d'un peptide selon l'une des revendications 3 à 4 et/ou d'une protéine selon la revendication 5. 18. Composition pharmaceutique comprenant un peptide selon l'une des revendications 3 à 4 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 19. Composition pharmaceutique comprenant un vecteur selon l'une des revendications 6 à 8, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 20. Composition pharmaceutique comprenant un antagoniste selon la revendication 17 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 21. Composition pharmaceutique comprenant un agoniste selon la revendication 16 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 22. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 18 à 21 pour la fabrication d'un médicament. 23. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 18 à 20 pour la fabrication d'un médicament destiné à l'inhibition d'un ou plusieurs récepteurs GABAA ayant la sous-unité s2. 24. Utilisation d'une composition selon la revendication 21 pour la fabrication d'un médicament destiné à l'activation d'un récepteur ou plusieurs récepteur GABAA ayant la sous-unité.2. 25. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 18 à 21 pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des troubles du système nerveux central. 26. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 18 à 21 pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des troubles du système nerveux centrale. 27. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 18 à 21 pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement de l'anxiété, de la nervosité, de l'angoisse, des troubles du comportement, de la vigilance, de la mémoire, et du sommeil. 28. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 18 à 21 pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des symptomes de tremblements et de l'akinésie, en particulier pour le traitement de la maladie de Parkinson.