Brevet FR2779739A1 — publié le 19991217

La présente invention concerne un fragment d'ADN, un ADN recombiné contenant ce fragment et permettant d'obtenir une espèce tel que le mais ou le riz ayant une résistance aux basses températures, et une plante transformée avec cet ADN. On a observé qu'il existe une relation significative entre la résistance d'une plante aux basses températures et le degré d'insaturation des acides gras entrant dans la composition de ses biomembranes. La demanderesse a mis en évidence expérimentalement qu'un tabac transformé acquiert une plus grande résistance aux basses températures lorsque le gène FAD7 d'une enzyme d'insaturation des acides gras issu d'une arabidopsis est hautement exprimé dans cette plante. Lorsque l'on souhaite produire une certaine protéine dans une cellule végétale, on utilise un promoteur fonctionnant de manière constitutive et ayant une grande activité promotrice. Toutefois, un tel promoteur fonctionne de manière continue, ce qui est inutile pour la plante. Par exemple, un promoteur constitutif est employé aussi pour l'expression phénotypique d'une protéine conférant à une plante une résistance aux basses températures. De ce fait, même aux températures ordinaires, il se produit une expression forcée et superflue de cette protéine, ce qui donne des résultats défavorables. Pour ces raisons, le développement d'un promoteur spécifique de site et inductible est devenu nécessaire. En particulier, il est nécessaire que l'expression d'un gène spécifique soit renforcée seulement aux basses températures pour produire un corps mère intermédiaire de production dans lequel un gène exprimant une enzyme d'insaturation d'un acide gras et d'autres gènes de structure contribuant à une résistance aux basses températures sont exprimés de manière inductible en réponse à de basses températures, ou pour permettre la production d'une protéine fonctionnelle instable au moyen d'une cellule végétale. Ainsi, la présente invention a pour but de produire un promoteur capable de renforcer l'expression d'un gène d'enzyme d'insaturation d'acide gras et d'autres gènes de structure contribuant à une résistance aux basses températures en réponse à de basses températures. La présente invention a aussi pour but de produire une espèce ayant une résistance aux basses températures au moyen du promoteur ci-dessus. La présente invention a également pour but d'utiliser le promoteur dans un système de production inductible d'une protéine fonctionnelle dans une cellule végétale spécifique aux basses températures. L'invention concerne donc un fragment d'ADN comprenant la séquence de bases (a) ou (b) décrite ci-dessous: (a) la séquence de bases comportant les nucléotides n 1-3794 de la séquence représentée dans la suite; (b) la séquence de bases (a) dont une partie est délétée ou remplacée par une autre séquence de bases, ou à laquelle une autre séquence de bases est ajoutée. La présente invention concerne également un ADN recombiné contenant le fragment d'ADN ci-dessus et une plante transformée contenant cet ADN recombiné et présentant une résistance aux basses températures. La présente invention concerne aussi un fragment d'ADN présentant une activité promotrice en réponse aux basses températures qui comprend la séquence de bases (c), (d) ou (e) décrite ci-dessous: (c) la séquence de bases comprenant les nucléotide n 1-2797 de la séquence nucléotidique présentée ci-dessous; (d) une partie de la séquence de bases (c) présentant une activité promotrice en réponse aux basses températures; (e) la séquence de bases (c) ou (d) dont une partie est délétée ou remplacée par une autre séquence de bases, ou à laquelle une autre séquence de bases est ajoutée. La présente invention concerne en outre un ADN recombiné qui inclut le fragment d'ADN comprenant la séquence de bases (c), (d) ou (e) décrit ci-dessus et une plante transformée avec cet ADN recombiné et exprimant au niveau phénotypique une protéine spécifique en réponse à de basses températures. La présente invention concerne aussi un fragment d'ADN présentant une activité promotrice qui comprend la séquence de bases (f), (g) ou (h) décrite ci-dessous: (f) la séquence de bases comportant les nucléotides n 1-2271 dans la séquence nucléotidique représentée ci- dessous; (g) une partie de la séquence de bases (f) présentant une activité promotrice; (h) la séquence de bases (f) ou (g) dont une partie est délétée ou remplacée par une autre séquence de bases, ou à laquelle une autre séquence de bases est ajoutée. La présente invention concerne aussi un fragment d'ADN conférant des propriétés de réactivité aux basses températures, et qui comprend la séquence de bases (i), (j) ou (k) décrite ci-dessous: (i) la séquence de bases comprenant les nucléotides n 2272-2797 dans la séquence nucléotidique représentée ci-dessous; (j) une partie de la séquence de bases (i) qui confère des propriétés de réactivité aux basses températures; (k) la séquence de bases (i) ou (j) dont une partie est délétée ou remplacée par une autre séquence de bases, ou à laquelle une autre séquence de bases est ajoutée. Comme le gène liLp 19 inductible à basse température du riz et le gène miipo 1 inductible à basse température du mais codent un facteur de liaison d'ADN, on considère qu'il s'agit de gènes contrôlant la transcription d'autres groupes de gènes induits ou réprimés sous l'effet des basses températures. La demanderesse a mis en évidence une unité fonctionnelle d'un promoteur inductible à basse température dans le gène mlip 15 du mais et ont montré que cette unité fonctionnelle est active aussi dans une plante transformée. La demanderesse a isolé un clone génomique du gène mlip 15 du mais au moyen d'un procédé courant. La détermination de la séquence nucléotidique montre que ce gène ne contient pas d'introns (voir la séquence nucléotidique représentée dans la suite). Dans le gène mliplS, 2,8 kb d'une séquence nucléotidique (0,6 kb d'une région non traduite à l'extrémité 5' et 2,2 kb d'une séquence nucléotidique liée en amont, dans l'ADNc de mlip lS) et 2,2 kb d'une séquence nucléotidique (la séquence nucléotidique qui reste après avoir soustrait 0,6 kb de la région non traduite à l'extrémité 5' de 2,8 kb de la séquence nucléotidique) sont liés respecti- vement à un gène de la 3-glucuronidase en tant que gène reporter pour produire des ADN recombinés. Chaque ADN recombiné est introduit dans un cal issu d'un scutellum (cotylédon) de riz au moyen d'un canon à particules. On constate alors que le premier ADN recombiné ainsi obtenu conserve une réactivité pour les basses températures, tandis que le second ADN recombiné a perdu cette réactivité, ce qui montre que le fragment de 2,8 kb contenant 0,6 kb de la région non traduite à l'extrémité 5' présente une fonction promotrice sensible aux basses températures. Selon la présente invention, il est possible d'employer par exemple un plasmide comme vecteur pour produire un ADN recombiné. De plus, comme plante utilisée pour introduire l'ADN recombiné, on utilise de préférence une plante cultivée monocotylédone utile commne le mais, le riz, le blé, l'orge, l'avoine, le millet italien ou le millet japonais. La protéine produite par induction du promoteur selon la présente invention peut être une enzyme d'insaturation d'un acide gras c)-3. En outre, la présente invention concerne une séquence de bases dont un ou plusieurs nucléotides ont été délétés ou remplacés par une autre séquence de bases, ou à laquelle une autre séquence de bases a été ajoutée, à condition qu'elle conserve la fonction promotrice selon la présente invention. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée qui suit et se réfère au dessin annexé dans lequel la figure I représente schémati- quement la région du gène mlip 15. Isolement du clone génomique nlip15 et détermination de la séquence nucléotidique On soumet à une digestion partielle avec l'enzyme de restriction Sau3A un ADN génomique issu d'un mais (variété: honey bantam), puis on sépare les fragments obtenus par centrifugation en gradient de densité de saccharose pour obtenir une fraction d'ADN de 9,7- 22 kb que l'on insère dans un phage X-EMBL3 digéré avec BamHI pour produire ensuite des particules phagiques par empaquetage au moyen du kit Giga-packGoldII. En utilisant comme hôte pour ces particules phagiques Escherichia coli XL1-Blue MRA (P2), on obtient 1 x 107 plages de lyse (pfu) ml d'une banque. On crible cette banque en utilisant comme sonde l'ADNc de longueur intégrale de mlip15 pour obtenir 3 clones positifs, parmi lesquels on constate qu'un clone appelé "XH1" comprend 11,5 kb d'un fragment contenant l'ADNc de mlipl5, kb d'un fragment à l'extrémité 5' du précédent et 5 kb d'un fragment à l'extrémité 3' du précédent. La séquence nucléotidique de 3 794 pb représentée dans la suite est un fragment EcoRI-BamHI correspondant à l'ADNc de longueur intégrale de mlipl5. La séquence d'acides aminés supposée au niveau de la région codant la protéine mlip51 est représentée par des lettres en majuscule sous la séquence de bases et les nucléotides correspondant à la séquence d'acides aminés supposée portent les numéros 2798-3205. Le codon terminal de cette séquence de bases est indiqué par un astérisque et la séquence nucléotidique dont on suppose qu'elle constitue la boîte TATA est soulignée. Le point d'initiation de la transcription de mlip 15 est T et porte le numéro de nucléotide 2272. Construction d'un ADN recombiné destiné à être introduit dans un cal de riz On amplifie par le procédé PCR ou ACP (amplification en chaîne par polymérase) un fragment comportant les nucléotides n 1-2797 et un fragment comportant les nucléotides n 1-2271 en utilisant comme matrice le clone génomique mlip 15 de mais. Le fragment comportant les nucléotides n 1-2797 est la séquence génomique mentionnée ci-dessus de 2,8 kb qui consiste en 0,6 kb de la région non traduite à l'extrémité 5' et en 2,2 kb de la séquence génomique en amont des 0,6 kg de la région non traduite à l'extrémité 5', dans l'ADNc de mlipl5. Le fragment comportant les nucléotides n 1-227 1 est la séquence génomique mentionnée ci-dessus de 2,2 kb qui consiste en les 2,8 kb de la séquence nucléotidique auxquels on a soustrait 0,8 kb de la région non traduite à l'extrémité '. Les nucléotides n 2798-3205 représentent la région codant la protéine mlipl 5. Dans l'amplification par PCR ci-dessus, on utilise comme enzyme la Taq polymérase LA qui une activité de détection et de correction des erreurs. Chaque amorce est alors conçue de manière que la séquence de bases comportant les nucléotides n 1-6 devienne un site Hind mI (AAGCTT) et que la séquence de bases comportant les nucléotides n 2792-2797 et la séquence de bases comportant les nucléotides n 2266-2271 respectivement deviennent un site BamHI (GGATCC) pour obtenir chaque amorce. On intègre chaque fragment amplifié entre les sites BamHIl et HindI du vecteur plasmidique pUC 18 utilisé pour Escherichia coli et on confirme chaque séquence de bases. En utilisant chacun des plasmides ainsi obtenus, on reproduit chaque fragment BamHI-HindII consistant respectivement en 2 797 pb et 2 271 pb et on les intègre entre les sites BamHI et HindII de pBI 221. Les plasmides recombinés ainsi obtenus sont appelés respectivement pBImp28 (car il contient 2,8 kb de la région promotrice dans mlip lS) et pBImp22 (car il contient 2,2 kb de la région promotrice dans mlip 15). La région promotrice de mlipl 15 est représentée schématiquement sur la figure 1 ainsi que la région promotrice de mlip 15 contenue dans les plasmides recombinés ci-dessus. Le symbole "+1" indique le point d'initiation de la transcription (nucléotide n 2272), la flèche indique le sens de transcription et le symbole "ATG" indique la position du codon d'initiation de la traduction (nucléotide n 2798). Un gène de, 3-glucuronidase (en abrégé GUS) est utilisé comme gène reporter (son échelle n'est pas correcte sur la figure). Réactivité aux basses températures du plasmide introduit Au moyen d'un canon à particules (produit par BIO-RAD Co., Ltd.), on a introduit chaque plasmide ci-dessus dans un cal issu d'un scutellum de riz (variété: Notohikari). Après l'introduction, on incube le cal pendant 24 h à l'obscurité à 25 C puis on le divise en deux parties de manière homogène. Après avoir incubé pendant 24 h supplémentaires une partie à 25 C et l'autre à 5 C, on réalise un test au moyen du gène de la 3- glucuronidase (GUS). Sur la base de l'activité GUS, on estime la présence d'une réactivité aux basses températures en calculant le rapport du nombre de points bleus par scutellum sur le substrat X-Gluc à 5 C au nombre de points bleus par scutellum sur le substrat X-Gluc à 25 C. On répète ce test trois fois sur les deux plasmides, et on obtient les résultats présentés dans le tableau 1 ci-dessous. TABLEAU 1I Plasmide Réactivité aux basses températures introduit Rapport des activités GUS (5 C/25 C) pBImp28 expérience 1 2,7 expérience 2 6,0 expérience 3 4,7 pBImp22 expérience 1 1,1 expérience 2 0,62 expérience 3 0,57 Quand on introduit le plasmide pBImp28, on obtient une haute activité GUS, mais quand on introduit le plasmide pBImp22, l'activité GUS est inférieure, de sorte que l'on peut en déduire les résultats suivants. (a) Dans le fragment d'ADN comportant les nucléotides n 1-3794 du clone génomique mlipL 5 de mais, la région promotrice concernant les propriétés de réactivité aux basses températures est présente en amont de la séquence nucléotidique supposée codant la protéine mlip 15. (b)Le fragment comportant les nucléotides n 1-2797 contient la région promotrice concernant les propriétés de réactivité aux basses températures. (c) On s'attend à ce que le fragment comportant les nucléotides n 1- 2271 joue le rôle de promoteur, mais ce fragment lui-même réagit peu aux basses températures. Le fragment comportant les nucléotides n 2272-2797 présentent des propriétés de réactivité aux basses températures est illustre l'expression du promoteur. Séquence génomique double brin linéaire du gène mlipl5 de la variété de mais honey bantarn 1 GMTTCCGAATAACGCGCCCCGCAACCAGATAGCGGATCMCGGCGCTAAACTCA 60 61 GAGGGAACAATTGCCGGAAGT CGGCGTGCAAGAATAACATAAGTAGATAAGATTTCA 120 121 CGATCTATAAAAGGAIATCTCCCTAGTCGGCTATATAAGGCTAGAGGTACCCAAAC 180 181 AACGAATCACTCTCTTTCACCACCATAACGCC AGTAGACTATATGAGATCTCATC 240 241 CACCGTCACCCGCGAATCATCTGTA/CCAACACTCAATACCCAACATCACACATGA 300 301 CTTAGGGTATTACGCATTTMAGGCGACCCGAACCTGTATMTTTTCTTGTGTTTCAACGTG 360 361 CACCTGCACGTACCATCGAGTTGCGATTAACGTCGCCGTCCTCCCAAAAATACTGGTGGT 420 421 CCTCCCMAAACTCGACCGGACGATAGAAATAGTGTATGGCTAAGTAGAGCAAGGTGGCG 480 481 TTTGGTCCGCGGCTATGATGAGAATCCAGTAGACTGAATCCACGTGCTAAACCAAACATC 540 541 ACTGGTTTTGGCTGCATCTTCTCGGATTACGTGTGTTGTGCAAATTCTCATAATCCACGG 600 601 CAACCAGACGGGGGCGCAACCAATTGGTGTTTCTTAGGAAGCCCCCGCGTTACATTGGAT 660 661 CATAGGATGATTCAAGGGTTATGATTT1IAGCTACTAATTGGTTGTCATCATGGTTTAT 720 721 AGGTGAAGATTGTTATTCAATCAAAGGGCGACATATCCCTCCGCGTTTAGAGACTTGCGT 780 781 GTAGTGTAAACATGGATGTMTTGTGCTACCMTAATAGAGTCCCTTAGCTCTTCAAAAA 840 841 CMAAATCTTATTATATATTAATTACTAGTCCATCCATTTTATTCTAATTTAGTTTCGAAAT 900 901 TACTAAATATAGAAAATAAMTAGAGTTTTAGTAGCAATTATGAAAACTGAAATATAGTT 960 961 TTAATTTCCGTATTTAGTGATTTAAATACTAAAATATAATAAAATGGAGAGACTAAAAAC 1020 1021 TAGTCCCTATAAACCAAACATTCTTTAAATAAAGCCCCGTGGCTAGGACAATGACCTATT 1080 1081 TTTTTCTCGCAACCGGAAGAATAAAAAATTCACCGTAACMCTTTCM1 CTTCTT A 1140 1141 TGCGAAAGAAGATAGTTGCMGAGACGAMTCCAGAGTTTATCTGGAAGAAGAGTTCCTAA 1200 1201 TCCTCCTCCTTCCCTGTAGATATTATCAGCAAGGCAAGCGTGTCACGGCTTCTTGCTTGA 1260 1261 GTMTCCGCTCCTATMTTTTTTGGGC TTCCTACCGGCTTCGCTTCTMAC 1320 1321 GGTGGGCAAATTTGGTACGATAGAAAAGAGGAGGACGAGTGGGAGGGCACTTCTGG 1380 1381 AAAAAACTTTTAATGAGCTGGACCAAGCAGCTGGGCAAGCTGTCACTAGGACTGGACAA 1440 1441 AATACTCGTGGCTCGATAACTCGCTCGACTCGGCTCGTTAGTAGCTCAGCTCGACTCGGC 1500 1501 TCGTTTMTTTGTAGCGAGCCAAGCTAGCATTCTAGCTCGATTCTCTMTCGACCAGC 1560 1561 TCGGTTAGCGTGAGCTAGCTCGCGAGCCAAACGAGCTAAGCCA, ACACATTTGT 1620 1621 CTAGTCATTGATGTCGTCTCATCTCTCATAGTCTTGTTTTCTCGTAGTTATGATCTGTGA 1680 1681 TATGGACATGTGTGGATGTGCCATGTGCTTAATAMTTATATTATTGCATGGCTACATGT 1740 1741 TTGTAGTGTTAAATACTTAAAATATAATITTCGGTTATAAATATATMTATGTACATAGA 1800 1801 TATTTATATTTAGTTGTGTGGCTCACGAGCCTAACGAGCTGGCTCGAGCTTCCTAACGAG 1860 1861 CCGAGCCGAGCCAGCTAMTAGCTCGTTAGTATAACGAGCCGAGCCGAGCTGGCTCGTTA 1920 1921 TAGTAACGAGCCATAACGAGCCGAGCCATAACGAGCCAAGCTGGTTCGATATCCACCCCT 1980 1961 AGCTGTCACCGTCGCCCAGTCCGCTTCGTTCGGTCAGCGGGCCCCACCTCATCTGCATTC 2040 2041 TTCCATTCTCGTCCTCCGACCTCATCTGCATTTTCCCAGCCAAGTAGTAGGTAAACTAGT 2100 2101 GGCGGTCCCGTGGCCGTGGCATCAGGAAAAGAATATGCCGTCCCAGCCCACCATCCCCCC 2160 2161 ACCGTCCCGAAATTCCAGAACTACCCTCGGCTCCAGCTATAAATAGCCGCCCCCGGGAGA 2220 Boite TATA supposée 2221 CGTTCGAAACCTTCCCCATCTCCGGATAAAAGATAAGGAGTGTCTCTCCTCTC1TMCAGC 2280 Site d'initiation d'ADNc 2281 TAAGTCCCTGCTCCCTCTCTTTTTCTTACATTCAGGTCCTCGCAGCTCCTCTCTTTTTTC 2340 2341 TTGTTTCTTTCTTTCGATCTGCGAGCCGTCCAGGTCCAGTACTCTCCMTCCGTGAAGGA 2400 2401 ACTCTTGCAGCCGGCCCCTCTGGTTTCCTCGAATTCTTGTTCCCCGGTCCCTCCTCCTGT 2460 2461 CCCCGCGTAGATCCGTCCGTCCGAGGAGCACACCGCCCCACCCCCATGTTTACCCACCA 2520 2521 GTTCCTCTGACGGCCGCCGTGCTCCGATGAAGCTGAGCGTGCTCCGTATCC GCCGCTCCC2580 2581 ACTCCTTCTCCGTCGCCTTCCTCTACTGGTTCTACGTCTTCTCATGAACGCATCGCCCCT 2640 2641 CTCCACCTGCTGATCCTTCGCCATCTCTCCATCTCTCTTTCTCTCTGAGATAGTCTTTCG 2700 2701 MTCCATCTCTAGGGCTCTTGTTCTCCCCATCCTCCCCCCACCCCACCCCCCACCAAAC 2760 2761 ACAAGTCCCCTTGTTCAAMTCCGACAAGACAAGCATCCATGTCGTCGTCACGCCGGAGCTC 2820 M S S S R R S S 2821 CCGATGCTGTCCAACAG 2880 S P D S N D T T D E R K R K R M L S N R 2881 GGAGTCC GGTAG TGGAGGAGCTGGTGCGCGA2940 E S A R R S R A R K 0 0 R L E E L V A E 2941 GGTGGCCCCTGCAGGCGGAGMCGCG A GGCAC C C TGGAGCG 3000 V A R L a A E N AA T O A R T A A L E R 3001 CGACCTGGGCAGGGTGGACGGCGACMCGCGGTCGTGCGCGCCCGCCACGCCGAGCTGGC 3060 D L G R V D G D N A V V R A R H A E L A 3061 CGGCCGCCTGCAGTCGCTGGGCGGCGTCCTCGAGGTGCTCCAGATGGCCGGCGCCGCCGT 3120 G R L O S L G G V L E V L Q M A G A A V 3121 CGACATCCCGGAGATGGTCACCGACGACCCCATGCTCCGCCCCTGGCAGCCGTCCTTCCC 3180 D I P E M V T D D P O L R P W 0 P S F P 3181 CCCGATGCAGCCCATCGGGTTCTGAGAATCTGAGCCTCAGCCGGCGGGAGAGAGCCMTT 3240 P M Q P I G F * 3241 TCTGTCGTCGTGCCGCTGTCTATCTCGTATTGGTATATCTATTCATAAATCATCCTTGTC 3300 3301 ATGGTTTGCTCTTCTTGTTCAGTGTTATMAMTTTGCTTCTTGTTAGTGTTATAAATT'GG 3360 3361 CCATCGGAAAGGATGTGTTTGTAGTTGTMTATCTTGTTTGGAGTTGTMTATCTTATCT 3420 3421 TGCTTATGAAATCGAATATGCCTATATATATATGTTATGCTGTACGAGTATGTGGCTCCA 3480 Site polyA supplémentaire 3481 AATTTGTGAGCCTTCTGTCTGTTATGGTGAGGCGATGAATCCAATTTGTGAGCACACATG 3540 3541 AATCAAMTTTCGAGATTCGACATGTCAAGTTGATCGTTGCAGGAAGGACGGTIT'rGTATG 3600 3601 GACGGACATACCAAGTTACTGCATITACTTMAATATCTCACTTATTTTTTAGATCGGC 3660 3661 ATTTCTCCACTCGTTAGATTTCTTGTTCTGAGTCAGAAGATMCTACAGCATGTCATAT 3720 3721 CTCAATTGGMTACCATTAGGGTCCCTCATCTTAACCTATT'CATCTCTTTTMTACGTA 3780 3781 GATTTTTTGGATCC 3794 REVENDICATIONS 1. Fragment d'ADN caractérisé en ce qu'il comprend la séquence de bases (a) ou (b) décrite ci-dessous: (a) la séquence de bases comportant les nucléotides n 1-3794 de la séquence nucléotidique représentée en annexe; (b) la séquence de bases (a) dont une partie est délétée ou remplacée par une autre séquence de bases, ou à laquelle une autre séquence de bases est ajoutée. 2. Fragment d'ADN selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend le gène mli 15 de mais inductible aux basses températures. 3. Fragment d'ADN présentant une activité promotrice ayant des propriétés de réactivité aux basses températures, caractérisé en ce qu'il comprend la séquence de bases (c), (d) ou (e) décrites ci-dessous: (c) la séquence de bases comportant les nucléotides n 1- 2797 dans la séquence nuléotidique représentée en annexe; (d) une partie de la séquence de bases (c) présentant une activité promotrice ayant une réactivité aux basses températures; (e) la séquence de bases (c) ou (d) dont une partie est délétée ou remplacée par une autre séquence de bases, ou à laquelle une autre séquence de bases est ajoutée. 4. Fragment d'ADN présentant une activité promotrice, caractérisé en ce qu'il comprend la séquence de bases (f), (g) ou (h) décrite ci-dessous: (f) la séquence de bases comportant les nucléotides n 1-2271 dans la séquence nucléotidique représentée en annexe; (g) une partie de la séquence de bases () présentant une activité promotrice; (h) la séquence de bases (f) ou (g) dont une partie est délétée ou remplacée par une autre séquence de bases, ou à laquelle une autre séquence de bases est ajoutée. 5. Fragment d'ADN présentant des propriétés de réactivité aux basses températures, caractérisé en ce qu'il comprend la séquence de bases (i), (j) ou (k) décrite ci-dessous: (i) la séquence de bases comportant les nucléotides n 2272-2797 dans la séquence nucléotidique représentée en annexe; Il (j) une partie de la séquence de bases (i) présentant une réactivité aux basses températures; (k) la séquence de bases (i) ou (j) dont une partie est délétée ou remplacée par une autre séquence de bases, ou à laquelle est ajoutée une autre séquence de bases. 6. ADN recombiné, caractérisé en ce qu'il comprend un fragment d'ADN selon la revendication 1. 7. ADN recombiné, caractérisé en ce qu'il comprend un fragment d'ADN selon la revendication 3. 8. Plante transformée ayant une résistance aux basses températures, caractérisée en ce qu'elle contient un ADN recombiné comprenant un fragment d'ADN selon la revendication 1. 9. Plante transformée, caractérisée en ce qu'elle exprime au niveau phénotypique une protéine spécifique en réponse à de basses températures, et contient un ADN recombiné comprenant un fragment d'ADN selon la revendi- cation 3.