Brevet FR2777903A1 — publié le 19991029

L'invention a trait d'une manière générale à la détection des micro- organismes tels que les bactéries, levures ou moisissures. On sait que pour effectuer cette détection, on utilise des récipients contenant une couche de gélose pour recevoir des micro-organismes issus de l'environnement que l'on souhaite contrôler, le récipient étant ensuite mis à incuber à la température et pendant le temps requis pour permettre aux micro- organismes reçus de se développer sous forme de colonies visibles à l'oeil nu, de façon qu'on puisse les compter et les identifier. L'invention vise à améliorer les conditions de développement, et donc de comptage et d'identification, des organismes reçus sur la couche de gélose. Elle propose à cet effet un procédé de détection de micro- organismes caractérisé en ce qu'on utilise un récipient de culture comportant une couche de gélose dont une première surface d'extrémité donne sur une première chambre et dont la seconde surface d'extrémité, opposée à la première, donne sur une seconde chambre, et en ce qu'il comporte une opération de mise en surpression de ladite première chambre par rapport à ladite seconde chambre. La différence de pression existant alors entre les deux surfaces d'extrémité de la couche de gélose permet, au cas o son degré d'humidité serait devenu hétérogène, de produire une diffusion de liquide à l'intérieur de cette couche ayant pour effet de la réhomogénéiser, en particulier au niveau de la surface recevant les micro-organismes. L'invention permet ainsi de supprimer, ou alors de réduire très fortement, I'hétérogénéité de la couche de gélose qui nuit au développement des micro-organismes et par voie de conséquence à leur comptage et identification. Selon des caractéristiques préférées, on prévoit ledit récipient pour que ladite première chambre soit étanche, ladite opération de mise en surpression comportant une opération de fermeture de cette chambre étanche. L'opération de mise en surpression est ainsi particulièrement facile et commode à mettre en oeuvre, la surpression résultant d'une certaine compression du volume d'air emprisonné lors de la fermeture de la chambre et/ou de la dilatation de l'air emprisonné dans la chambre lors de l'élévation de température due au placement dans un incubateur, au cas o la chambre étanche a été fermée dans un environnement à une température inférieure à celle de l'incubateur. Selon d'autres caractéristiques préférées, le procédé selon l'invention comporte, préalablement à ladite opération de mise en surpression, une opération de frappe de ladite seconde surface d'extrémité de la couche de gélose par des jets d'air. Une telle opération de frappe de jets d'air s'effectue dans certains appareils d'analyse de l'air afin d'impacter les micro-organismes présents dans l'air sur la couche de gélose. La mise en oeuvre de l'opération de mise en surpression est particulièrement intéressante après une telle opération de frappe, les jets d'air créant des cratères sur la couche de gélose et desséchant celle-ci, la mise en surpression de la surface opposée à celle qui a été frappée par les jets d'air induisant une diffusion de liquide vers la surface desséchée, et donc la réhomogénéisation de la couche de gélose. Selon d'autres caractéristiques préférées, le procédé selon l'invention comporte une opération de dépôt d'un volume prédéterminé de solution réhydratante sur ladite première surface d'extrémité de la couche de gélose préalablement à ladite opération de mise en surpression. Un tel apport en solution réhydratante, qui va se diffuser dans la couche de gélose grâce à la mise en surpression, est particulièrement intéressant dans le cas o la couche de gélose a subi un certain dessèchement, I'existence de la surpression permettant une excellente diffusion de cette solution, largement supérieure à celle susceptible d'être obtenue par le simple jeu de la gravité. La solution réhydratante peut être simplement de l'eau, ou alors de I'eau additionnée de substances nutritives et/ou colorantes spécifiques. La diffusion procurée par la surpression permet de répartir ces substances nutritives et/ou colorantes dans la gélose. L'on peut ainsi, à partir d'un récipient contenant initialement de la gélose standard, modifier ses propriétés pour obtenir une gélose spécifique permettant de compter et d'identifier sélectivement certains micro-organismes prédéterminés. Selon d'autres caractéristiques préférées, le récipient de culture utilisé comporte une grille enrobée par la couche de gélose qui est orientée parallèlement à ladite grille. La présence d'une telle grille est particulièrement intéressante pour fournir une armature à la couche de gélose (l'on ne peut compter sur un maintien de la couche de gélose par l'intermédiaire d'une surface d'extrémité, puisque chacune de ces surfaces d'extrémité doit donner sur une chambre). L'invention vise également, sous un deuxième aspect, une cassette pour la culture de micro-organismes, comportant un corps présentant une grille et une paroi annulaire orientée transversalement à ladite grille et l'entourant, et comportant une couche de gélose orientée parallèlement à ladite grille et l'enrobant, caractérisé en ce que, pour convenir à la mise en oeuvre du procédé tel qu'exposé ci-dessus, ledit corps comporte, entre ladite paroi annulaire et ladite grille, une couronne pleine présentant vers l'intérieur une surépaisseur formant un bourrelet. Ce bourrelet en surépaisseur, du fait qu'il est présent vers l'intérieur, reste enrobé par la couche de gélose, même lorsque celle-ci a subi un certain retrait qui a eu pour effet de décoller son pourtour de la paroi annulaire du corps. Etant donné que le bourrelet reste enrobé et que la couronne est pleine, il n'y a pas de passage possible entre le pourtour de la couche de gélose et le corps, de sorte que les espaces situés à l'intérieur du corps respectivement de part et d'autre de la couche de gélose sont séparés de manière étanche, ce qui rend possible la différence de pression entre les deux surfaces d'extrémité de la couche de gélose. Selon des caractéristiques préférées, pour des raisons de simplicité et de commodité de fabrication de la cassette et de mise en oeuvre du procédé: la cassette comporte un fond amovible adapté à s'emmancher sur ledit corps pour délimiter une chambre étanche sur laquelle donne une première surface d'extrémité de ladite couche de gélose; et de préférence ledit fond s'emmanche extérieurement sur ladite paroi annulaire dudit corps et comporte une surface interne venant en contact avec la surface d'extrémité de ladite paroi annulaire située du côté du fond; et/ou de préférence ledit corps et ledit fond sont en matière plastique moulée, ledit fond étant plus souple que ledit corps; et/ou - la cassette comporte un couvercle amovible adapté à s'emmancher sur ledit corps pour délimiter une chambre en communication avec l'extérieur sur laquelle donne une seconde surface d'extrémité de ladite couche de gélose; et de préférence ledit couvercle comporte au moins un trou permettant une communication entre l'intérieur et l'extérieur du couvercle lorsque celui-ci est emmanché sur ledit corps; et/ou de préférence ledit couvercle s'emmanche extérieurement sur ladite paroi annulaire dudit corps et comporte une surface interne venant en contact avec la surface d'extrémité de ladite paroi annulaire située du côté du couvercle; et/ou de préférence ledit corps et ledit couvercle sont en matière plastique moulée, ledit couvercle étant plus souple que ledit corps. Selon d'autres caractéristiques préférées, pour faciliter le comptage des colonies une fois la culture effectuée, ladite grille est à mailles carrées, et éventuellement d'une couleur contrastant avec la couche de gélose. L'exposé de l'invention sera maintenant poursuivi par la description d'un exemple de réalisation, donnée ci-après à titre illustratif et non limitatif, en référence aux dessins annexés. Sur ceux-ci: - la figure 1 est une vue en élévation-coupe prise dans une cassette conforme à l'invention; - la figure 2 est une vue de dessus de cette cassette dans laquelle le couvercle, le film et la couche de gélose ne sont pas représentés; - la figure 3 est une vue en élévation-coupe de la cassette, en position retournée et sans le fond - la figure 4 est une vue en élévation-coupe montrant cette cassette, dont le couvercle et le film ont été enlevés, en place dans un appareil de prélèvement d'un échantillon d'air et d'impact sur la couche de gélose des micro- organismes présents dans cet échantillon; - la figure 5 est une vue partielle en élévation-coupe montrant la coopération des oreilles de la cassette avec cet appareil; et - la figure 6 est une vue en élévation- coupe montrant cette cassette à nouveau munie de son couvercle, en position retournée, avec son fond enlevé pour déposer sur la couche de gélose un volume prédéterminé de solution réhydratante. La cassette 1 illustrée comporte un corps 2, une couche de gélose 3, un film 4, un couvercle 5 et un fond 6. Le corps 2 est en matière plastique moulée relativement rigide. Il présente une grille 7 et une paroi annulaire 8 orientée transversalement à la grille 7 et l'entourant. La grille 7 est formée par des brins à section circulaire, ainsi qu'on le voit notamment sur la figure 1 et elle est à mailles de forme carrée, c'est-à-dire à quatre côtés ayant chacun la même longueur, ainsi qu'on le voit sur la figure 2. La périphérie de la grille 7 est reliée à la paroi 8 par l'intermédiaire d'une couronne pleine 9 présentant vers l'intérieur, c'est-à-dire vers la grille 7, une surépaisseur formant un bourrelet 10, cette surépaisseur étant ici présente uniquement du côté qui regarde le fond 6 (il n'y a aucune saillie du côté qui regarde le film 4). La paroi annulaire 8 est d'épaisseur constante et a la forme générale d'un tube à section circulaire relativement court. Entre sa surface d'extrémité du côté du film 4 et la couronne 9, la paroi 8 s'étend sur une longueur prédéterminée correspondant sensiblement à la moitié de l'épaisseur prévue pour la couche 3 de gélose, alors qu'elle s'étend sur une longueur à peu près deux fois plus importante entre la couronne 9 et sa surface d'extrémité située du côté du fond 6. Des oreilles saillantes 11 s'étendent transversalement à partir de la surface externe de la paroi 8, la distance entre les oreilles 11 et la surface d'extrémité de la paroi 8 située du côté du film 4 étant précisément identique pour chacune des oreilles. Des perforations sont pratiquées dans chacune des oreilles 11. Ces dernières sont ici au nombre de quatre qui présentent chacune trois perforations. Le film 4 est en matière plastique souple et étanche. Il a initialement la forme d'un carré aux angles arrondis, de côté largement supérieur au diamètre de la surface externe de la paroi 8. Une fois le couvercle installé, les coins du film forment des protubérances qui en facilitent la préhension. Le couvercle 5 est en matière plastique moulée semi-rigide, et donc plus souple que la matière de corps 8. Il a la forme générale d'une cuvette dont la paroi latérale est constituée par deux tronçons tubulaires à section circulaire 12A et 12B et par un tronçon annulaire 13 orienté transversalement aux tronçons 12A et 12B entre lesquels il est disposé. Le tronçon 12A présente un diamètre interne très légèrement supérieur à celui du diamètre externe de la paroi 8 de sorte que le tronçon 12A peut être emmanché avec un certain serrage autour de la paroi 8 avec le film 4 interposé entre cette paroi et le tronçon 12A. Le tronçon 12B a un diamètre interne plus petit que celui du tronçon 12A, les surfaces internes des tronçons 12A et 12B étant raccordées par une surface annulaire fournie par le tronçon 13, le dimensionnement de cette surface annulaire correspondant a celui de la surface d'extrémité de la paroi 8 située du côté du film 4, de sorte que celui-ci puisse être appliqué intimement sur cette surface d'extrémité de la paroi 8 lorsque le couvercle 5 est enfoncé sur le corps 8 jusqu'en butée. Le couvercle 5 est fermé par un flasque 14 formé par une paroi plane se raccordant par sa périphérie à la surface interne du tronçon 12B de la paroi latérale, le flasque 14 étant orienté transversalement à ce tronçon. Le flasque 14 est disposé à une distance relativement importante de l'extrémité du tronçon 12B qui se raccorde au tronçon 13. Le tronçon 12B présente une portion située entre le flasque 14 et son extrémité libre dans laquelle sont ménagés des créneaux 15. Quatre petits trous 16 sont pratiqués dans le flasque 14 à sa jonction avec le tronçon 12B de la paroi latérale, respectivement au niveau du centre de chacun des créneaux 15. Le fond 6 est en matière plastique moulée semi-rigide, de même que le couvercle 5. Il a comme lui la forme générale d'une cuvette dont la paroi latérale est constituée par deux tronçons tubulaires 17A et 17B à section circulaire et par un tronçon annulaire 18 orienté transversalement aux tronçons 17A et 17B entre lesquels il est disposé. Le diamètre interne du tronçon 17A correspond au diamètre externe de la paroi 8 de sorte que le tronçon 17A puisse s'emmancher sur la paroi 8 avec sa surface interne qui est en contact intime avec la surface externe de la paroi 8. Des créneaux sont ménagés à l'extrémité du tronçon 17A pour permettre de loger les oreilles 11, ainsi qu'on le voit sur la droite de la figure 1 et sur la figure 5. Le diamètre interne du tronçon 17B est plus petit que celui du tronçon 17A, les surfaces internes des tronçons 17A et 17B étant reliées par une surface annulaire orientée transversalement aux surfaces internes des tronçons 17A et 17B, cette surface annulaire étant fournie par le tronçon 18 et étant prévue pour entrer en contact intime avec le surface d'extrémité de la paroi 8 du côté du fond 6. Un flasque 19 à centre bombé du côté intérieur ferme le fond 6, ce flasque se raccordant transversalement à l'extrémité du tronçon 17B opposé à celle par laquelle celui-ci se raccorde au tronçon 18. Lorsque le fond 6 est enfoncé jusqu'en butée sur le corps 8, c'est-à- dire avec les oreilles 11 logées dans les créneaux du tronçon 17A et le tronçon 18 en butée sur la paroi 8, il y a étanchéité entre le corps 2 et le fond 6. Il est également possible de positionner le couvercle 6 de sorte que ce ne soit plus les créneaux situés au bout du tronçon 17A qui sont en regard 1 5 des oreilles 11, mais les redents situés entre les créneaux, de sorte que le fond 6 s'enfonce sur le corps 2 seulement jusqu'à une position o l'extrémité libre des redents du tronçon 17A vient porter sur les oreilles 11. Dans cette position, les petites fentes 20 ménagées extérieurement dans la paroi 8 sur une certaine longueur à partir de son extrémité libre côté fond 6, ne sont plus entièrement masquées par le fond 6 (le tronçon 17A entoure la paroi 8 sur une distance moins grande que la longueur des fentes ) de sorte qu'il y a une communication avec l'extérieur par l'intermédiaire des fentes 20. On va maintenant expliquer comment l'on fabrique la cassette 1 et comment l'on procède à sa stérilisation. On dispose tout d'abord le film 4 sur la surface d'extrémité correspondante de la paroi 8, puis l'on procède à l'emmanchement de ce couvercle sur le corps 2, ce qui procure une mise en tension du film 4 du fait que la surface interne du tronçon 12A de la paroi latérale du couvercle 5 glisse sur le film au-delà de la surface d'extrémité de la paroi 8 et tend donc à entraîner le film le long de la surface externe de cette paroi, le film étant pris, à la fin du mouvement d'emmanchement, entre la surface externe de la paroi 8 et la surface interne du tronçon 12A et entre la surface d'extrémité de la paroi 8 et la surface annulaire qui se trouve entre les surfaces internes des tronçons 12A et 12B. Grâce aux petits trous 16, on évite qu'il y ait entre les deux côtés du film 4 une différence de pression susceptible de le déformer. Le film 4, qui est ainsi tendu et coincé par le couvercle 5, est en contact étanche avec la paroi 8. On emmanche ensuite le fond 6 dans la position o ce sont les redents du tronçon 17A qui viennent porter sur les oreilles 11, c'est-à-dire dans la position o les petites fentes 20 ne sont pas entièrement masquées. On place alors la cassette dans une enceinte contenant un gaz de stérilisation tel que l'ETO, ce gaz pénétrant à l'intérieur de la cassette par les trous 16 du couvercle 5 et par les fentes 20 de la paroi 8. Une fois la stérilisation effectuée, on se place en conditions aseptiques, on enlève le fond 6, on retourne l'ensemble corps 2, film 4 et couvercle 5 et on le pose sur la sorte de trépied que forme la partie du tronçon 12B située au-delà du flasque 14, puis on coule de la gélose, préalablement chauffée pour la rendre liquide, dans la cuvette formée le corps 8 et par le film 4, jusqu'à recouvrir la grille 7, comme montré sur la figure 3, et après refroidissement de la gélose on positionne le fond 6 pour que les créneaux du tronçon 17A soient en regard des oreilles 11 et on enfonce complètement le fond 6. La cassette 1 est alors dans la configuration montrée sur la figure 1. On notera que dans cette configuration, la couche de gélose 3 est gardée complètement stérile puisqu'elle est préservée de tout contact avec l'extérieur. Du fait que le bourrelet 10 de la couronne 9 ne présente aucune saillie du côté qui regarde le film 4, ce bourrelet ne gêne pas le remplissage de l'espace situé entre le film 4 et la couronne 9 lors de la coulée de la gélose. Le bourrelet 10, du fait qu'il est en saillie du côté interne de la couronne 9, reste entièrement enrobé par la couche de gélose 3, même si celle-ci subit un retrait ayant pour effet de décoller son pourtour de la paroi annulaire 8 du corps 2. Ainsi, un tel retrait ne provoque pas de rupture d'étanchéité à l'intérieur du corps 2 entre les espaces situés de part et d'autre de la couche de gélose 3. Grâce à cette étanchéité et à celle existant entre le corps 2 et le couvercle 6, I'espace que regarde la surface d'extrémité de la couche de gélose 3 opposée à celle délimitée par le film 4, forme une chambre étanche dans laquelle peut exister une certaine surpression, ainsi qu'expliqué ci-après. La cassette 1 a été conçue pour effectuer l'analyse d'un échantillon d'air avec l'aide de la machine 21 montrée partiellement sur la figure 4, qui sert à déposer les micro-organismes présents dans l'échantillon d'air sur la surface de la couche de gélose 3 délimitée par le film 4. La machine 21 comporte un manchon aérodynamique 22 sur lequel est monté un déflecteur 23 de sorte qu'il existe autour du déflecteur 23 un conduit 24 d'écoulement d'air vers une turbine d'aspiration non représentée. Un crible amovible 25 se monte sur le bout du manchon 22 qui est muni d'encoches 22' (figure 5) pour recevoir le bout des oreilles d'une cassette I dont le couvercle 5 et le film 4 ont été enlevés, le crible 25 présentant une paroi centrale 26 située exactement en regard de la surface de la couche de gélose 3 qui était délimitée par le film 4, une multitude de fines perforations étant pratiquée dans la paroi 26. Lorsque fonctionne la turbine (non représentée) de l'appareil 21, I'air extérieur est aspiré, comme montré par les flèches, à travers les perforations de la paroi 26 puis s'écoule vers la turbine dans le conduit 24, le bout du déflecteur 23 étant obturé par le fond 6. L'écoulement d'air entre la couche de gélose 3 et la paroi 26 se fait sous la forme d'une multitude de fins jets correspondant chacun à une perforation. Ces jets d'air viennent frapper la couche de gélose 3, les micro- organismes présents dans l'air qui frappe ainsi la couche de gélose se fixant sur celle-ci par impaction. On observera que l'écartement entre la couche de gélose 3 et la paroi perforée 26 du crible 25 a des caractéristiques géométriques qui se répètent d'une cassette à l'autre, l'utilisation du film 4 pour conformer la surface de la couche 3 permettant de fixer avec précision le positionnement de cette surface par rapport au corps 2, le positionnement de celui-ci par rapport à la paroi 26 étant répété d'une cassette à l'autre par la mise en place de la cassette sur le manchon 22 à l'aide des oreilles 11, de sorte que d'une cassette à l'autre, le débit d'air aspiré pour chaque tour de la turbine reste sensiblement le même, la vitesse de frappe sur la couche de gélose 3 restant par conséquent constante pour une même vitesse de rotation de la turbine, de même que le volume d'air aspiré reste constant pour un même nombre de tours effectués par la turbine. La coopération entre les oreilles 11 de la cassette 1 et leurs encoches de réception 22' situées au bout du manchon 22 procure à la fois un positionnement axial et un centrage de la cassette 1, seul le bout des oreilles 11, dont l'extrémité libre est incurvée, étant reçu dans ces encoches. Les oreilles 11 sont alors disposées en travers du conduit 24, mais les perforations, ici au nombre de trois, qui y sont pratiquées, permettent le passage de l'air vers la turbine. La coopération entre la cassette 1 et le déflecteur 23 se fait avec un certain jeu, suffisant pour obturer le déflecteur, le couvercle 6 s'y emmanchant intérieurement, le diamètre externe du tronçon 17B étant plus petit que le diamètre interne du bout du déflecteur 23. Une fois que le volume d'air requis a été aspiré, on enlève le crible 25 de la machine 21, on remet en place le couvercle 6 de la cassette 1 et on récupère celle-ci. Il n'y a plus qu'à effectuer, de façon classique, la culture des micro- organismes impactés sur la couche 3, en mettant la cassette dans un incubateur chauffé à une température prédéterminée telle que 32,5 C + 2, 5 C pendant le temps voulu, par exemple deux jours, la cassette 1 permettant, grâce aux trous 16 du couvercle 5, les échanges gazeux, notamment aérobies, nécessaires au développement des colonies. La cassette 1 est de préférence retournée pour effectuer la culture, en étant posée sur la sorte de trépied formé par la portion du tronçon 12B de paroi latérale qui s'étend au-delà du flasque 14, les créneaux 15 permettant la circulation de l'air, le fait que le flasque 14 soit situé en-dessous de la couche de gélose 3 (et non au-dessus) évitant de façon bien connue les phénomènes de condensation sur le couvercle. L'espace 27 délimité par la couche de gélose 3, la paroi 8 et le fond 6 formant une chambre étanche, I'air qui y est contenu a été mis en légère surpression lors de la fermeture du fond 6, et en outre il va se créer une surpression supplémentaire du fait que cet air se dilate lorsqu'il prend la température de l'incubateur, qui est en principe plus élevée que la température initiale de ce volume d'air. L'espace 28 délimité par la couche de gélose 3, la paroi 8 et le couvercle 5 étant en communication avec l'extérieur, notamment par les trous 16, il existe du fait de la surpression dans la chambre 27 une différence de pression entre les deux surfaces d'extrémité de la couche de gélose. Cette différence de pression favorise la réhomogénéinisation de la couche de gélose 3, en particulier au niveau de la surface qui a été impactée dans la machine 21. En effet, les jets d'air ayant frappé cette surface de la couche de gélose 3 ont pratiqué dans celle-ci des cratères et ont provoqué un certain assèchement qui en diminue les capacités nutritives. Cet assèchement est relativement important: on estime par exemple qu'il est courant de perdre 2 g d'eau pour un volume d'air échantillonné de 1 m3, ceci sur un total de 34 g pour la couche de gélose 3. Il est possible, plutôt que de compter exclusivement sur l'eau restant dans la couche de gélose 3 pour réhydrater la surface impactée, de déposer sur la couche 3, du côté opposé à la surface impactée, un certain volume de solution réhydratante 29, ainsi que montré sur la figure 6. Pour procéder à ce dépôt, on enlève le fond 6 et on dépose, avec une pipette 30, le volume requis de solution réhydratante 29, qui correspond par exemple à 80 ou 90 % de la déshydratation constatée par pesée de la cassette 1. La solution réhydratante va parvenir jusqu'à la surface opposée de la couche 3 grâce à la gravité, mais aussi et surtout grâce à la surpression dans la chambre étanche, qui favorise la diffusion de liquide, et notamment de la solution 29, dans la couche 3. La réhydratation de la surface impactée fait disparaître les cratères, ce qui est bénéfique au développement des colonies et donc facilite leur identification, le fait que la surface soit lisse favorisant en outre le comptage, et aussi le repiquage des colonies nécessitant une identification spécifique. Suivant les circonstances, la solution réhydratante comporte uniquement de l'eau ou alors de l'eau mélangée à des substances nutritives et/ou à des colorants spécifiques permettant une croissance ou une identification sélective des micro-organismes impactés sur la couche de gélose. On notera que la forme carrée des mailles de la grille 7 fournit avantageusement à l'utilisateur une indication de la taille de la surface sur laquelle se sont développées les colonies, chaque maille délimitant par exemple une surface de 1 cm2. La gélose étant transparente, il est préférable que la grille 7 soit colorée pour être facilement visible, le corps 2 étant par exemple moulé dans une matière plastique noire. Le couvercle 5 est transparent afin que la lecture puisse s'effectuer alors que la cassette 1 reste fermée. Il est bien entendu que la cassette selon l'invention peut être utilisée pour d'autres types d'analyses, par exemple pour déterminer la contamination d'un liquide, la surface de la couche de gélose 3 qui est délimitée initialement par le film 4 recevant une membrane au travers de laquelle on a fait passer le volume requis de liquide à analyser. Dans une variante non représentée, on utilise un récipient de culture sans film 4, celui-ci étant par exemple remplacé par un couvercle servant uniquement pour la fabrication et la conservation de la cassette, ce couvercle étant remplacé à l'utilisation par un couvercle du type du couvercle 5. De nombreuses autres variantes sont possibles en fonction des circonstances, et on rappelle à cet égard que l'invention ne se limite pas aux exemples décrits et représentés. REVENDICATIONS 1. Procédé de détection de micro-organismes caractérisé en ce qu'on utilise un récipient de culture (1) comportant une couche de gélose (3) dont une première surface d'extrémité donne sur une première chambre (27) et dont la seconde surface d'extrémité, opposée a la première, donne sur une seconde chambre (28), et en ce qu'il comporte une opération de mise en surpression de ladite première chambre (27) par rapport à ladite seconde chambre (28). 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on prévoit ledit récipient (1) pour que ladite première chambre (27) soit étanche, ladite opération de mise en surpression comportant une opération de fermeture de cette chambre étanche. 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il comporte, préalablement à ladite opération de mise en surpression, une opération de frappe de ladite seconde surface d'extrémité de la couche de gélose (3) par des jets d'air. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comporte une opération de dépôt d'un volume prédéterminé de solution réhydratante (29) sur ladite première surface d'extrémité de la couche de gélose (3) préalablement à ladite opération de mise en surpression. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'on utilise de l'eau comme solution réhydratante. 6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'on utilise comme solution réhydratante de l'eau additionnée de substances nutritives et/ou colorantes spécifiques. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que ledit récipient (1) comporte une grille (7) enrobée par la couche de gélose (3) qui est orientée parallèlement à ladite grille (7). 8. Cassette pour la culture de micro-organismes, comportant un corps présentant une grille et une paroi annulaire orientée transversalement à ladite grille et l'entourant, et comportant une couche de gélose orientée parallèlement à ladite grille et l'enrobant, caractérisé en ce que, pour convenir à la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, ledit corps (2) comporte, entre ladite paroi annulaire (8) et ladite grille (7), une couronne pleine (9) présentant vers l'intérieur une surépaisseur formant un bourrelet (10). 9. Cassette selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle comporte un fond (6) amovible adapté à s'emmancher sur ledit corps (2) pour délimiter une chambre étanche (27) sur laquelle donne une première surface d'extrémité de ladite couche de gélose (3). 10. Cassette selon la revendication 9, caractérisée en ce que ledit fond (6) s'emmanche extérieurement sur ladite paroi annulaire (8) dudit corps (2) et comporte une surface interne venant en contact avec la surface d'extrémité de ladite paroi annulaire (8) située du côté du fond (6). 11. Cassette selon l'une quelconque des revendications 9 ou 10, caractérisée en ce que ledit corps (2) et ledit fond (6) sont en matière plastique moulée, ledit fond (6) étant plus souple que ledit corps (2). 12. Cassette selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisée en ce qu'elle comporte un couvercle (5) amovible adapté à s'emmancher sur ledit corps (2) pour délimiter une chambre (28) en communication avec l'extérieur sur laquelle donne une seconde surface d'extrémité de ladite couche de gélose. 13. Cassette selon la revendication 12, caractérisée en ce que ledit couvercle (5) comporte au moins un trou (16) permettant une communication entre l'intérieur et l'extérieur du couvercle lorsque celui-ci est emmanché sur ledit corps (2). 14. Cassette selon l'une quelconque des revendications 12 ou 13, caractérisée en ce que ledit couvercle (5) s'emmanche extérieurement sur ladite paroi annulaire dudit corps (2) et comporte une surface interne venant en contact avec la surface d'extrémité de ladite paroi annulaire (8) située du côté du couvercle (5). 15. Cassette selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisée en ce que ledit corps (2) et ledit couvercle (5) sont en matière plastique moulée, ledit couvercle (5) étant plus souple que ledit corps (2). 16. Cassette selon l'une quelconque des revendications 8 a 15, caractérisée en ce que ladite grille (7) est à mailles carrées. 17. Cassette selon la revendication 16, caractérisée en ce que ladite grille (7) est d'une couleur contrastant avec ladite couche de gélose (3).