Brevet FR2774765A1 — publié le 19990813

L'invention concerne un procédé d'analyse du sang, et plus particulièrement un procédé pour effectuer une étape de dilution dans un appareil d'analyse du sang, l'étape de dilution portant sur un petit volume défini d'un échantil- lon de sang contenu dans un tube capillaire et le procédé comprenant les étapes dans lesquelles on utilise un adapta- teur destiné à recevoir le tube capillaire, on raccorde l'adaptateur à un conduit pour liquide de dilution, on dirige un écoulement de liquide de dilution dans le conduit et l'adaptateur et au moins partiellement le tube capillaire reçu dans celui-ci, et on recueille le volume défini d'échan- tillon de sang et le liquide de dilution dans un récipient. L'invention concerne aussi un appareil d'analyse du sang conçu pour effectuer une dilution d'un petit volume défini d'un échantillon de sang contenu dans un tube capillaire, l'appareil comportant un adaptateur introduit dans un conduit à liquide de dilution de l'appareil, l'adaptateur étant agencé pour recevoir le tube capillaire de façon qu'un écoulement du liquide de dilution dans le conduit passe au moins en partie par le tube capillaire. Lorsqu'on utilise un appareil d'analyse du sang, un échantillon de sang est normalement prélevé par ponction veineuse. Le sang est introduit dans un petit tube contenant, par exemple, 5 ml. Du sang est aspiré depuis ce tube dans un tube de chargement de l'appareil. L'aspiration est arrêtée lorsque le sang atteint un détecteur indiquant qu'une quantité suffisante de sang a été introduite dans l'appareil. Un volume bien défini d'échantillon de sang, habituellement microlitres, est chassé par un volume défini, habituel- lement 5 ml, d'un liquide de dilution dans un récipient de mélange o l'échantillon est prédilué habituellement à 1:200. L'échantillon dilué est soumis à une dilution supplémentaire de 1:200 pour atteindre un rapport de dilution de 1:40 000 pour le comptage des cellules rouges de sang et de 1:1 pour atteindre un rapport de dilution de 1:400 pour le comptage des cellules blanches du sang. Cependant, lorsqu'un échantillon de sang est prélevé au bout d'un doigt, ce qui est souvent pratiqué dans le cas d'enfants, le volume de sang est faible et il n'est pas suffisant pour être aspiré dans l'appareil pour une dilution comme décrit ci-dessus. On pratique plutôt un processus de dilution manuel. L'échantillon de sang est recueilli manuellement dans un petit récipient et un volume défini de celui-ci, habituellement 25 microlitres, est introduit dans un tube de verre de faible diamètre, c'est-à- dire un tube capillaire souvent appelé "microcapsule", ou bien "minipipette" ou "micropipette", qui aspire l'échantil- lon par action capillaire. Le volume contenu dans le tube capillaire est prédilué à 1:200 au moyen d'un distributeur séparé. Cet échantillon prédilué est ensuite aspiré dans l'appareil, après quoi une dilution finale a lieu comme dans le cas d'une analyse par ponction veineuse. Cependant, ce processus est secondaire par le fait qu'il exige une inter- vention manuelle supplémentaire. Il serait donc souhaitable de simplifier le processus lors de l'exécution d'analyses de sang par ponction au bout d'un doigt, et l'objet de la présente invention est de proposer un procédé et un dispositif pour permettre ceci. Conformément à l'invention, l'échantillon de sang est initialement introduit, comme précédemment, dans un tube capillaire. Le tube capillaire est placé dans un adaptateur, lequel est placé dans un conduit allant d'une soure de liquide de dilution jusqu'à un récipient de mélange o l'échantillon est directement prédilué, habituellement à 1:200. L'étape manuelle de prédilution devient donc inutile. Le tube capillaire peut rester à l'intérieur de l'adaptateur jusqu'à ce qu'un autre tube capillaire ayant un nouvel échantillon soit introduit, car le tube capillaire utilisé peut être considéré simplement comme un tube de verre vide. L'invention sera décrite plus en détail en regard des dessins annexés à titre d'exemples nullement limitatifs et sur lesquels: la figure 1 est une coupe transversale schémati- que d'un appareil d'analyse de sang de l'art antérieur; la figure 2 est une représentation correspondante d'un appareil perfectionné d'analyse de sang selon l'inven- tion ayant un adaptateur produit dans un conduit de l'appa- reil; la figure 3 est une représentation correspondante à celle de la figure 2, mais montrant un adaptateur introduit dans un conduit de l'appareil en un emplacement plus avanta- geux; la figure 4 est une vue transversale schématique d'un adaptateur dans un état désassemblé; et la figure 5 est une coupe correspondante de l'adaptateur de la figure 4 dans un état assemblé de travail. Pour faciliter la compréhension de la présente invention, on se réfère en premier à l'agencement typique de l'art antérieur montré sur la figure 1 sur laquelle on désigne en llb une valve tournante ayant un corps 12 de valve tournante, en 13 un récipient de mélange et en 14 une seringue comprenant un cylindre 15 et un piston 16 mobile axialement dans le cylindre. Le corps 12 de la valve tournante est traversé par un canal 17 et peut être placé dans au moins deux positions différentes. Dans une première position (montrée sur la figure 1), une première extrémité 17a du canal traversant 17 communique avec un conduit 18, qui est un conduit d'aspiration ou de charge, une seconde extrémité 17b du canal traversant communique avec le conduit 19 comportant un robinet 20 et menant à un dispositif d'aspiration, non représenté, tel qu'une seringue. Dans une seconde position du corps 12 de la valve, la première extrémité 17a du canal traversant 17 communique avec un conduit 21 menant à la seringue 14, et la seconde extrémité 17b communique avec un conduit 22 menant au récipient 13 de mélange. La seringue 14 comporte, dans son extrémité, une valve 23 qui peut placer sélectivement le cylindre 15 en communication avec le conduit 21 et avec un conduit 24 menant à une source, non représen- tée, de liquide de dilution. Le fonctionnement du dispositif de l'art anté- rieur lors de l'exécution d'une analyse de sang par ponction veineuse est le suivant: le corps de valve 12 est placé dans la position montrée sur la figure 1, et un échantillon de sang est aspiré dans le conduit 18, dans le canal traversant 17 et dans le conduit 19 au moyen du dispositif d'aspiration, non représenté. Dès que l'échantillon atteint un détecteur 25 placé dans le conduit 19, le robinet 20 est fermé et l'aspi- ration est arrêtée. A présent, le canal traversant contient un volume d'échantillon de sang défini avec précision, habituellement 25 microlitres. Lors d'une rotation du corps de valve 12 pour placer ses extrémités et donc le volume défini d'échantillon de sang en communication avec les conduits 21 et 22, le piston 16 est déplacé de façon à déplacer, à son tour, un volume défini (habituellement 5 ml) de liquide de dilution contenu dans le cylindre 15 en passant par le conduit 21, le canal traversant 17 et le conduit 22 jusque dans le récipient 13 de mélange, amenant ainsi le volume défini d'échantillon de sang contenu dans le canal traversant 17 à être mélangé avec et dilué par le liquide de dilution dans le récipient de mélange. Comme décrit dans le préambule, lors du prélève- ment d'un échantillon de sang au bout d'un doigt, le volume n'est pas suffisant pour être aspiré dans le canal traversant 17. Par contre, une prédilution manuelle a lieu à l'extérieur de l'appareil, et l'échantillon prédilué est introduit dans le récipient 13 de mélange en passant par un conduit 26, puis cet échantillon est encore dilué par le volume de liquide de dilution contenu dans le cylindre 15. Pour éviter l'étape de dilution manuelle, qui est longue et qui peut provoquer une contamination de l'échantil- ion tout en faisant courir un risque de transmission d'une infection, l'invention propose d'introduire un adaptateur dans un circuit d'écoulement du liquide de dilution, l'adaptateur comprenant un moyen destiné à recevoir un tube capillaire ou collecteur analogue d'échantillon de sang. La figure 2 montre un emplacement d'un adaptateur 27 entre des parties 22a, 22b du conduit 22, et la figure 3 montre un autre emplacement avantageux de cet adaptateur entre des parties 26a, 26b du conduit 26. La figure 4 montre une forme de réalisation d'un adaptateur selon la présente invention dans un état désas- semblé. L'adaptateur 27 comprend une partie fixe 28 et une partie mobile 29. La partie fixe comporte un corps 30 en forme de bloc ayant des faces opposées 31 et 32, au moins la face 32 étant avantageusement plate. Un moyen d'entrée et un moyen de sortie conçus pour être raccordés au conduit 26 (figure 3) ou au conduit 22 (figure 2), par exemple sous la forme de tubulures 33, 34, respectivement, sont disposés à la face 31. La tubulure d'entrée 33 communique avec un alésage 35 s'étendant à travers le corps 30 pour déboucher à sa face 32. Coaxialement à l'alésage 35, un évidement épaulé 36 est formé dans la face 32. L'évidement comporte une partie 37 relativement étroite et profonde et une partie 38 relati- vement large et peu profonde. De plus, la tubulure 34 de sortie communique avec un alésage 39 s'étendant à travers le corps 30 pour déboucher à sa face 32. A partir de la face 32, l'alésage 39 comporte une partie élargie et profonde 40 et une partie 41 davantage élargie et relativement peu profonde. La face 31 présente une ouverture relativement large 42 centrée entre les alésages 35 et 39. Un alésage 43 s'étend depuis le fond de l'ouverture 42 pour déboucher centralement dans la face 32. Deux lames de contact 44, 45 sont montées centralement dans l'ouverture 42 et ont des extrémités formant bornes 46, 47, respectivement, faisant saillie à l'extérieur de la face 31, et des bords de contact espacés 48, 49, respectivement, situés dans la zone du fond de l'ouverture 42, à des distances sensiblement égales de l'axe de l'alésage 43. Les axes des alésages 35, 43 et 39 sont parallèles entre eux, perpendiculaires à la face 32 et situés dans un plan commun. La partie mobile 29 de l'adaptateur est consti- tuée de la même manière par un corps 50 en forme de bloc ayant une face plate 51. Une broche centrale 52 fait saillie perpendiculairement de la face 51. Son diamètre correspond à celui de l'alésage 43 et sa longueur dépasse quelque peu la distance comprise entre la face 32 et les bords de contact 48, 49. Au moins une partie extérieure de la broche 52 est électriquement conductrice. Un canal intérieur 53 ayant des embouchures 54, situées dans la face 51 en des emplacements espacés de la broche 52 par des distances correspondant aux écartements entre, d'une part, l'alésage 33 et l'alésage 43 et, d'autre part, l'alésage 39 et l'alésage 43, est situé à l'intérieur du bloc 50. L'axe de la broche 52 et les axes des embouchures 54 et 55 sont parallèles entre eux, perpendiculaires à la face 51 et situés dans un plan commun. Dans la zone de l'embouchure 54, le canal 53 comporte une partie élargie dans laquelle est introduit un tube de raccordement 56 ayant un diamètre correspondant à celui de la partie 37 de l'évidement 36 et faisant saillie vers l'extérieur de la face 51 sur une distance correspondant à la profondeur de l'évidement 36. Une bague d'étanchéité 57 ayant un diamètre extérieur correspondant à celui de la partie large 38 de l'évidement 36 est disposée autour du tube 56. De façon correspondante, dans la zone de l'embou- chure 55, le canal 53 comporte une partie élargie dans laquelle est introduit un tube relativement long 58 de raccordement ayant un diamètre correspondant à celui de la partie 40 de l'évidement 36 et faisant saillie vers l'exté- rieur de la face 51 sur une distance quelque peu inférieure à la profondeur de la partie profonde 40 de l'évidement. Une bague d'étanchéité 59 ayant un diamètre extérieur correspon- dant à celui de la partie 41 de l'alésage 39 est disposée autour du tube 58. Le tube 58 de raccordement est conçu pour recevoir intérieurement un tube capillaire 60, de façon à servir également de gaine protectrice pour le tube capil- laire. Conformément à l'invention, il est avantageux que le diamètre intérieur du tube de raccordement soit plus grand que le diamètre extérieur du tube capillaire comme montré par la partie en coupe de la paroi du tube de raccordement sur la figure 4. Le tube capillaire est introduit dans le tube de raccordement soit à partir de son extrémité libre, soit à travers une fente longitudinale située dans la paroi latérale de ce tube, correspondant sensiblement à la coupe montrée sur la figure 4. Le tube capillaire n'est en aucune manière maintenue centralement à l'intérieur du tube de raccordement, mais il peut se déplacer librement à l'intérieur des limites de sa paroi intérieure. Le tube capillaire est maintenu longitudinalement de façon à ne pas pouvoir se déplacer vers le canal intérieur 53 par tous moyens convenables d'arrêt ou par le fait que la section transversale de ce canal est inférieur à la section transversale du tube capillaire. Après qu'un tube capillaire chargé d'un échantil- lon de sang a été introduit dans le tube de raccordement 58, la partie mobile 29 de l'adaptateur est assemblée avec la partie fixe 28 par introduction du tube de raccordement 58, avec le tube capillaire 60, dans la partie d'alésage 40, de la broche 52 dans l'alésage 43 et du tube de raccordement 56 dans la partie 37 de l'alésage 35, de façon que les bagues d'étanchéité 57, 59 s'appliquent de manière étanche contre les parties évidées respectives 38, 41. Dans cette position, montrée sur la figure 5, tout mouvement longitudinal du tube capillaire vers l'alésage 39, ou son introduction dans cet alésage 39, est limité par tout moyen convenable d'arrêt ou par le fait que la section transversale de l'alésage 39 est5 inférieure à la section transversale du tube capillaire. L'adaptateur est à présent préparé pour une étape de dilution dans laquelle un liquide de dilution est introduit par l'intermédiaire de la tubulure d'entrée 33 et est ensuite guidé dans l'alésage 35, le tube de raccordement 56 et le canal 53 jusqu'au tube de raccordement 58. Là, un liquide de dilution peut s'écouler librement autour du tube capillaire ainsi qu'à travers celui-ci, chassant ainsi du tube capil- laire l'échantillon de sang qu'il contient pour le mélanger avec le liquide de dilution dans le récipient 13 de mélange. L'étape de dilution est déclenchée avantageuse- ment par l'entrée en contact d'une extrémité avant, électri- quement conductrice, de la broche 52 avec les bords de contact 48, 49 des lames de contact 44, 45 dont les extrémi- tés formant bornes 46, 47 sont connectées par un câblage20 convenable à un moyen de commande de l'appareil d'analyse de sang (non représenté). Dans la forme de réalisation de la figure 2, pour effectuer une étape de pré-dilution, un premier volume de liquide de dilution est chassé à force par le piston 16 dans le conduit 21, le canal traversant 17 et la partie de conduit 22a, à travers l'adaptateur 27 et dans la partie de conduit 22b jusque dans le récipient 13 de mélange. Ensuite, la valve 23 est basculée pour permettre le rechargement de la seringue avec un autre volume de liquide de dilution. Dans la forme avantageuse de réalisation de la figure 3, o l'adaptateur 27 est inséré dans le conduit 26 entre ses deux parties 26a, 26b, une extrémité d'un conduit 61 de liquide de dilution est raccordée au conduit 26b, alors que son autre extrémité est raccordée à une valve 62 en T située dans le conduit 21. Un robinet 63 est également prévu pour séparer l'extrémité ouverte du conduit 26 (qui est utilisé pour l'introduction d'un échantillon de sang dilué manuellement) de la partie 26b de conduit. Dans l'étape de pré-dilution, le liquide de dilution est chassé à force par le piston 16 à travers la valve 62 jusque dans le conduit 61, dans la partie de conduit 26b, dans l'adaptateur 27 et dans le tube capillaire pour entrer dans le récipient 13 de mélange. L'étape de dilution finale est ensuite effectuée avec le corps de valve 12 dans la position montrée sur la figure 3 et la valve 62 basculée de façon à diriger le liquide de dilution depuis la seringue 14 dans le conduit 21, le canal traversant 17 et le canal 22 jusque dans la chambre de mélange 13 pour le mélanger alors à l'échantillon de sang préalablement dilué. Du fait de la différence entre les sections transversales du tube de raccordement 58 (diamètre intérieur) et du tube capillaire 60 (diamètre extérieur), il n'est pas nécessaire d'enlever le tube capillaire après qu'un étape de dilution a été effectuée (à moins qu'une autre dilution par tube capillaire doive être réalisée), car il reste une section transversale suffisante pour permettre un écoulement dans n'importe quel sens par le tube capillaire. Il va de soi que de nombreuses modifications peuvent être apportées au procédé et à l'appareil décrits et représentés sans sortir du cadre de l'invention. REVENDICATIONS 1. Procédé pour effectuer une étape de dilution dans un appareil d'analyse de sang, portant sur un petit volume défini d'un échantillon de sang contenu dans un tube capillaire (60), caractérisé en ce qu'il comprend les étapes dans lesquelles on utilise un adaptateur (27) destiné à recevoir le tube capillaire, on raccorde l'adaptateur à un conduit (22; 26) pour un liquide de dilution; on dirige un écoulement de liquide de dilution dans le conduit et dans l'adaptateur et au moins en partie dans le tube capillaire reçu dans cet adaptateur; et on collecte le volume défini d'échantillon de sang et le liquide de dilution dans un récipient 13. 2. Appareil d'analyse de sang conçu pour effec- tuer une dilution d'un petit volume défini d'un échantillon de sang contenu dans un tube capillaire (60), caractérisé en ce qu'il comporte un adaptateur (27) introduit dans un conduit (22; 26) de liquide de dilution de l'appareil, l'adaptateur (27) étant agencé pour recevoir le tube capil- laire (60) de façon qu'un écoulement du liquide de dilution dans le conduit (22; 26) passe au moins en partie dans le tube capillaire (60). 3. Appareil selon la revendication 2, caractérisé en ce que le conduit (22; 26) de liquide de dilution est un conduit menant d'une source (14) de liquide de dilution jusqu'à un récipient (13) de mélange. 4. Appareil selon l'une des revendications 2 et 3, caractérisé en ce que l'adaptateur (27) comprend des premier et second moyens de raccordement (33, 34) pour un raccordement au conduit (22a, 22b; 26a, 26b) de liquide de dilution. 5. Appareil selon l'une quelconque des reven- dications 2 à 4, caractérisé en ce que l'adaptateur (27) comprend une partie fixe (28) pourvue des premier et second35 moyens de raccordement (33, 34), et une partie mobile (29) pourvue d'un moyen de réception (58) pour le tube capillaire et pouvant être reliée à la partie fixe (28) dans une position permettant un écoulement de liquide de dilution au moins en partie dans le tube capillaire (60). 6. Appareil selon la revendication 5, caractérisé en ce que la partie fixe (28) comporte des premier et second moyens à canaux (35, 39) communiquant avec les premier et second moyens de raccordement (33, 34), respectivement, en ce que la partie mobile (29) comprend des troisième et quatrième moyens de raccordement (56, 58) et un troisième moyen à canal (53) situé entre eux, et en ce que les troisième et quatrième moyens de raccordement (56, 58) sont conçus pour être raccordés aux premier et deuxième moyens à canaux (35, 39), respectivement, lorsque la partie mobile (29) est reliée à la partie fixe (28). 7. Appareil selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'un (58) des troisième et quatrième moyens de raccordement constitue le moyen de réception pour le tube capillaire (60). 8. Appareil selon la revendication 7, caractérisé en ce que ledit moyen (58) de raccordement faisant partie des troisième et quatrième moyens de raccordement est un moyen de raccordement de sortie de la partie mobile (29). 9. Appareil selon l'une des revendications 6 et 7, caractérisé en ce que le moyen de réception est un corps tubulaire (58) ayant une section transversale intérieure plus grande que la section transversale extérieure du tube capillaire. 10. Appareil selon l'une quelconque des reven- dications 5 à 9, caractérisé par des moyens d'actionnement (48, 49, 52) destinés à amorcer un écoulement de liquide de dilution depuis la source (14) de liquide de dilution, dans le conduit (22; 26) de liquide de dilution, les moyens d'ac- tionnement réagissant à l'action consistant à relier la partie mobile (29) à la partie fixe (28).