Brevet FR2778665A1 — publié le 19991119

L'invention concerne une nouvelle séquence d'acides nucléiques et la séquence protéique correspondante. L'invention concerne également les applications prophylactiques, thérapeutiques et diagnostiques de celles-ci. Les auteurs de la présente invention ont identifié le produit de transcription d'un nouveau gène ainsi que la protéine correspondante. Ce gène PRAX-1 a été isolé par la technique du double hybride comme codant pour une protéine interagissant spécifiquement avec le récepteur periphérique des benzodiazépines (PBR). La présente invention est donc relative à une protéine purifiée PRAX-1, ou des fragments biologiquement actifs de celle-ci. L'invention concerne également des séquences d'acides nucléiques isolées codant pour ladite protéine ou ses fragments biologiquement actifs et des oligonucléotides spécifiques obtenues à partir de cette séquence. Elle vise en outre les vecteurs de clonage et/ou d'expression contenant au moins l'une des séquences nucléotidiques définies ci-dessus, et les cellules hôtes transfectées par ces vecteurs de clonage et/ou d'expression dans des conditions permettant la réplication et/ou l'expression de l'une desdites séquences nucléotidiques. Les méthodes de production de protéines recombinantes PRAX-1 ou de ses fragments biologiquement actifs par les cellules hôtes transfectées font également partie de l'invention. L'invention comprend également des anticorps ou des dérivés d'anticorps spécifiques des protéines définies ci-dessus. L'invention concerne également tout inhibiteur ou activateur de l'activité spécifique du PRAX-1, mais aussi de toute interaction protéine-protéine faisant intervenir le PRAX-1. Elle concerne aussi des séquences oligonucléotidiques antisens, spécifiques des séquences d'acides nucléiques ci-dessus, pouvant moduler in vivo l'expression du gène PRAX-1. Elle concerne des séquences oligonucléotidiques définies a partir des séquences d'acides nucléiques ci-dessus, sonde ou amorce utilisable en diagnostic de pathologies o le PRAX-1 est impliqué. L'invention a enfin pur objet l'utilisation dans une méthode de thérapie génique d'une séquence nucléotidique selon l'invention, dans laquelle des vecteurs tels que par exemple des vecteurs viraux inactives capables de transférer des séquences codantes pour une protéine selon l'invention sont injectés dans des cellules déficientes pour cette protéine. La présente invention a pour objet un polypeptide purifié dont la séquence d'acides aminés est la séquence SEQ ID n 2 ou toute séquence biologiquement active dérivée de SEQ ID n 2. Dans la description de l'invention, on utilise les définitions suivantes: - protéine PRAX-1: un polypeptide comprenant une séquence d'acides aminés choisie entre la séquence SEQ ID n 2 ou tout fragment ou dérivé de celui-ci biologiquement actif. - dérivé: tout polypeptide variant du polypeptide de séquence SEQ ID n 2 ou toute molécule résultant d'une modification de nature génétique et/ou chimique de la séquence SEQ ID n 2 c'est-à-dire obtenue par mutation, délétion, addition, substitution et/ou modification chimique d'un seul ou d'un nombre limité d'acides aminés, ainsi que toute séquence isoforme, c'est-à-dire une séquence identique à la séquence SEQ ID n 2 à l'un de ses fragments ou séquences modifiées, contenant un ou plusieurs acides aminés sous la forme d'énantiomère D, lesdites séquences variantes, modifiées ou isoformes ayant conservé au moins l'une des propriétés les rendant biologiquement actives et/ou lesdites séquences étant immunologiquement apparentées à la séquence SEQ ID n 2. - biologiquement actif: capable d'interagir avec le récepteur périphérique des benzodiazépines. - immunologiquement apparenté: capable d'être reconnu par les anticorps spécifiques du polypeptide de séquence SEQ ID n 2 et/ou capable d'induire des anticorps qui reconnaissent ce polypeptide. La fabrication de dérivés peut avoir différents objectifs, dont en particulier celui d'améliorer ses taux de production, d'augmenter sa résistance à des protéases, de modifier ses activités biologiques ou de lui conférer de nouvelles propriétés pharmaceutiques et/ou biologiques. Avantageusement, I'invention vise un polypeptide comprenant le domaine d'interaction avec PBR de l'un des polypeptides précédents. Ce domaine correspond à la séquence comprise entre le résidu 1564 et le résidu 1857 de la séquence SEQ ID n 2. La présente invention a également pour objet les séquences d'acides nucléiques codant pour une protéine PRAX-1 ou des fragments ou dérivés de celle-ci biologiquement actifs. Plus préférentiellement, I'invention a pour objet des séquences d'acides nucléiques isolées choisies parmi a) la séquence SEQ ID n 1, b) la séquence complémentaire de la séquence SEQ ID n 1, c) les séquences d'acides nucléiques capables de s'hybrider spécifiquement à la séquence SEQ ID n 1 ou à leurs séquences complémentaires, ou de s'hybrider spécifiquement à leurs séquences proximales, d) les séquences dérivées des séquences a), b) et c), du fait de la dégénérescence du code génétique. Selon un mode de réalisation préféré, I'invention a pour objet la séquence nucléotidique SEQ ID n 1 correspondant à l'ADNc de la protéine humaine de séquence SEQ ID n 2. Les différentes séquences nucléotidiques de l'invention peuvent être d'origine artificielle ou non. Il peut s'agir de séquences d'ADN ou d'ARN, obtenues par criblage de banques de séquences au moyen de sondes élaborées sur la base de la séquence SEQ ID n 1. De telles banques peuvent être préparées par des techniques classiques de biologie moléculaire, connues de l'homme de l'art. Les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent également être préparées par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques. Ces séquences nucléotidiques permettent la réalisation de sondes nucléotidiques, capables de s'hybrider fortement et spécifiquement avec une séquence d'acides nucléiques, d'un ADN génomique ou d'un ARN messager, codant pour le polypeptide selon l'invention ou un fragment biologiquement actif de celui-ci. De telles sondes font également partie de l'invention. Elles peuvent être utilisées comme outil de diagnostic in vitro pour la détection, par des expériences d'hybridation, de transcrits spécifiques des polypeptides de l'invention dans des échantillons biologiques ou pour la mise en évidence de synthèses aberrantes ou d'anomalies génétiques au niveau des séquences d'acides nucléiques codant pour un polypeptide tel que défini ci-dessus telles que la perte d'hétérozygotie ou le réarrangement génétique, résultant d'un polymorphisme, de mutations ou d'un épissage différent. A cet effet, une sonde nucléotidique selon l'invention est mise en contact avec un échantillon biologique dans des conditions permettant la formation d'un complexe d'hybridation entre la sonde et la séquence nculéotidique d'intérêt, éventuellement après une étape préalable d'amplification de ladite séquence nucléotidique; le complexe d'hybridation éventuellement formé est détecté et la séquence nucléotidique formant le complexe d'hybridation avec la sonde de l'invention est éventuellement séquence. Les séquences nucléotidiques de l'invention peuvent également être utilisées pour la fabrication d'un médicament utile en thérapie génique. Les sondes de l'invention comportent au moins 10, de préférence au moins 16 nucléotides, et au maximum comportent la totalité de la séquence du gène PRAX-1 ou de son ADNc contenu par exemple dans un cosmide. Parmi les sondes les plus courtes, c'est-à-dire d'environ 10 à 20 nucléotides, les conditions d'hybridation appropriées correspondent aux conditions stringentes usuellement utilisées par l'homme de métier, notamment de forte stringence telles que définies par Sambrook et al. dans Molecular Cloning, a laboratory manual, 2nd edition, ColdSpring Harbor Laboratory Press, 1989. La température utilisée est de préférence comprise entre Tm -5 C à Tm -30 C, de préférence encore entre Tm -5 C et Tm -10 C, Tm étant la température de fusion, température à laquelle 50 % des brins d'ADN appariés se séparent. De manière avantageuse, les conditions d'hybridation utilisées sont les suivantes: - température: 65 C, - tampon d'hybridation: BSA 1%, SDS 7% NaH2PO4 0,5M, EDTA 1mM, telles que décrites dans l'exemple VII. Avantageusement, ces sondes sont représentées par les oligonucléotides suivants ainsi que les nucléotides de séquence complémentaire correspondants: SEQIDn 3: GCTCTG TTT GACTATGACCC SEQ ID n 4: AACTTG AAT CCAATGAGC AA SEQ ID n 5: TCT GCT GAC CTG AAA GCT CC SEQ ID n 6: CCA TCA GGG GGC ACA GGC TC SEQ ID n 7: TGG GCC TTG TAC CCC CAG CT SEQ ID n 8: TCC TCC TGA GGA GCT GCT TC SEQ ID n 9: CCC CTG CCC GGA AGG GCA GC SEQ ID n 10: TTG ACC AAG GTC ACT GAG CC SEQ ID n 11: GGG CCT GCT GGC CCC TGT AA SEQ ID n 12: GCC ATC GGC ATC CTT GTC CC SEQ ID n 13: CCT CTC CGG TCT CTG TTG CCC G SEQ ID n 14: AGG CCC AGG GGG CCT CCG AAG GC SEQ ID n 15: CGC TGC CCG CCT CCT GCT CAT CCT C SEQ ID n 16: TCC TCC AGG GCT GGA GAC TGC CT SEQ ID n 17: GGT TCC AGG ACT TGC TCC TTC CAG AAG SEQ ID n 18: CAG CTC CCT CAC TGG CCA AG SEQ ID n 19: TGG CTC CGG CCA GCC TGC C SEQ ID n 20: TCC GGG TCA CAG GCT ATG CCA T SEQ ID n 21: CC CAG TAC CTA CTG GGC CAC CT SEQ ID n 22: GCT TCC ATA TCT GTG TGA ATG GG SEQ ID n 23: GGT AAG GCA CGG CAG GAG GCT C SEQ ID n 24: GCT GGC TCC TTC TCA CAC TG SEQ ID n 25: GGA GAG CTC ATG GAT GGC CGA AG SEQ ID n 26: CCA GTG AGG TAG AGG AGC TGG SEQ ID n 27: TCC ATT CCC CAG CCT TGC CGG GG SEQ ID n 28: GCT CGA AGA ACA GTG CCG CAG CC SEQ ID n 29: TCG CAA GAG CCA GGG CCT GCA GA SEQ ID n 30: GCTGGAATCGGAGCTCAGCAAG SEQ ID n 31: CCC GTG ATT CTA GGG GAG CCA GAG SEQ ID n 32: GAGTGC AGG GAG CTG CAG GCCA SEQ ID n 33: GGCTGAAGC GGAAGAACG CCGAG SEQ ID n 34: CAA TCT GGA GCT GCT GAG GG SEQ ID n 35: TGAGGTCTGAGGAGAGTTCCAAG SEQ ID n 36: ATG GAG CCA TGG GCA CTG CCC Préférentiellement, les sondes de l'invention sont marquées, préalablement à leur utilisation. Pour cela, plusieurs techniques sont à la portée de l'homme du métier (marquage fluorescent, radioactif, chimioluminescent, enzymatique, etc.). Les méthodes de diagnostic in vitro dans lesquelles ces sondes nucléotidiques sont mises en oeuvre, sont incluses dans l'objet de la présente invention. Ces méthodes concemrnent par exemple la détection de synthèses anormales (ex. accumulation de produits de transcription) ou d'anomalies génétiques, telles que la perte d'hétérozygotie et le réarrangement génétique, et les mutations ponctuelles au niveau des séquences nucléotidiques d'acides nucléiques codant pour une protéine PRAX-1, selon la définition donnée précédemment. Les séquences nucléotidiques de l'invention sont également utiles pour la fabrication et l'utilisation d'amorces oligonucléotidiques pour des réactions de séquenç,age ou d'amplification spécifique selon la technique dite de PCR ou toute variante de celle-ci (Ligase Chain Reaction (LCR),...). Des paires d'amorces préférées sont constituées par des amorces avantageusement d'au moins 16 nucléotides, choisies sur la séquence nucléotidique: SEQ ID n 1: séquence humaine de 7033 nucléotides. Avantageusement, ces amorces sont représentées par les couples suivants: couple n : amorce sens: GCT CTG TTT GAC TAT GAC CC (SEQ ID n 3) amorce antisens: AAC TTG AAT CCA ATG AGC AA (SEQ ID n 4) - couple n 2: amorce sens: TCT GCT GAC CTG AAA GCT CC (SEQ ID n 5) amorce antisens: TCC TCC TGA GGA GCT GCT TC (SEQ ID n 8) - couple n 3: amorce sens: TTG ACC AAG GTC ACT GAG CC (SEQ ID n 10) amorce antisens: AAC TTG AAT CCA ATG AGC MAA (SEQ ID n 4) - couple n 4: amorce sens: GCT CTG TTT GAC TAT GAC CC (SEQ ID n 3) amorce antisens: GCC ATC GGC ATC CTT GTC CC (SEQ ID n 12) - couple n 5: amorce sens: GCT CTG TTT GAC TAT GAC CC (SEQ ID n 3) amorce antisens: TCC TCC TGA GGA GCT GCT TC (SEQ ID n 8) les amorces "sens" allant de 5' en 3' et les amorces "anti-sens" de 3' en 5'. Ces amorces correspondent aux séquences respectivement comprises entre les: - nucléotide n 5091 et nucléotide n 5110 sur SEQ ID n 1 pour SEQ ID n 3 - nucléotide n 6700 et nucléotide n 6719 sur SEQ ID n 1 pour SEQ ID n 4. - nucléotide n 5475 et nucléotide n 5494 sur SEQ ID n 1 pour SEQ ID n 5 - nucléotide n 5939 et nucléotide n 5958 sur SEQ ID n 1 pour SEQ ID n 8 nucléotide n 6226 et nucléotide n 6245 sur SEQ ID n 1 pour SEQ ID n 10 - nucléotide n 5188 et nucléotide n 5207 sur SEQ ID n 1 pour SEQ ID n 12 Les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent par ailleurs être utilisées pour la production de protéines recombinantes PRAX-1, selon la définition qui a été donnée à ce terme. Ces protéines peuvent être produites à partir des séquences nucléotidiques définies ci-dessus, selon des techniques de production de produits recombinants connues de l'homme du métier. Dans ce cas, la séquence nucléotidique utilisée est placée sous le contrôle de signaux permettant sa transcription et son expression dans un hôte cellulaire. Un système efficace de production d'une protéine recombinante nécessite de disposer d'un vecteur, par exemple d'origine plasmidique ou virale, et d'une cellule hôte compatible. L'hôte cellulaire peut être choisi parmi des systèmes procaryotes, comme les bactéries, ou eucaryotes, comme par exemple les levures, cellules d'insectes, de mammifères, notamment CHO (cellules d'ovaires de hamster chinois) ou tout autre système avantageusement disponible. Un hôte cellulaire préféré pour l'expression des protéines de l'invention est constitué par la bactérie E. colt, notamment la souche MC 1061 (Clontech). Le vecteur doit comporter un promoteur, des signaux d'initiation et de terminaison de la traduction, ainsi que les régions appropriées de régulation de la transcription. Il doit pouvoir être maintenu de façon stable dans la cellule et peut éventuellement posséder des signaux particuliers spécifiant la sécrétion de la protéine traduite. Ces différents signaux de contrôle sont choisis en fonction de l'hôte cellulaire utilisé. A cet effet, les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent être insérées dans des vecteurs à réplication autonome au sein de l'hôte choisi, ou des vecteurs intégratifs de l'hôte choisi. De tels vecteurs seront préparés selon les méthodes couramment utilisées par l'homme du métier, et les clones en résultant peuvent être introduits dans un hôte approprié par des méthodes standard, telles que par exemple l'électroporation. Les vecteurs de clonage et/ou d'expression contenant au moins I'une des séquences nucléotidiques définies ci-dessus font également partie de la présente invention. Un vecteur de clonage et d'expression employé est le plasmide pZeoSV2(+) (Invitrogen, V850-01) qui comporte à la fois les éléments nécessaires pour son utilisation comme vecteur de clonage dans E.coli (origine de réplication dans E. coli et gène de résistance à la Zeocin), et comme vecteur d'expression dans les cellules animales (promoteur, signal de polyadenylation, origine de réplication du virus SV40), ainsi que les éléments permettant sa copie en simple brin dans un but de séquençage (origine de réplication du phage fl). L'intégration des ADNc provenant des séquences d'acides nucléiques de l'invention est par ailleurs décrite dans les exemples ciaprès. Selon un mode de réalisation préféré, les protéines de l'invention sont sous forme de protéines de fusion, notamment sous forme de protéine fusionnée avec la glutathione S-transférase (GST). Un vecteur d'expression désigné dans ce cas est représenté par le vecteur plasmidique pGEX-4T-2 (Pharmacia ref-27.4581-01). L'invention vise en outre les cellules hôtes transfectées par ces vecteurs précédents. Ces cellules peuvent être obtenues par l'introduction dans des cellules hôtes d'une séquence nucléotidique insérée dans un vecteur tel que défini ci-dessus, puis la mise en culture desdites cellules dans des conditions permettant la réplication et/ou l'expression de la séquence nucléotidique transfectée. Ces cellules sont utilisables dans une méthode de production d'un polypeptide recombinant de séquence SEQ ID n 2 ou de tout fragment ou dérivé biologiquement actif de celui-ci. La méthode de production d'un polypeptide de l'invention sous forme recombinante est elle-même comprise dans la présente invention, et se caractérise en ce que l'on cultive les cellules transfectées dans des conditions permettant l'expression d'un polypeptide recombinant de séquence SEQ ID n 2 ou de tout fragment ou dérivé biologiquement actif de celui-ci, et que l'on récupère ledit polypeptide recombinant. Les procédés de purification utilisés sont connus de l'homme du métier. Le polypeptide recombinant peut être purifié à partir de lysats et extraits cellulaires, du surnageant du milieu de culture, par des méthodes utilisées individuellement ou en combinaison, telles que le fractionnement, les méthodes de chromatographie, les techniques d'immunoaffinité à l'aide d'anticorps mono ou polyclonaux spécifiques, etc. Une variante préférée consiste à produire un polypeptide recombinant fusionné à une protéine "porteuse" (protéine chimère). L'avantage de ce système est qu'il permet une stabilisation et une diminution de la protéolyse du produit recombinant, une augmentation de la solubilité au cours de la renaturation in vitro et/ou une simplification de la purification lorsque le partenaire de fusion possède une affinité pour un ligand spécifique. Avantageusement, les polypeptides de l'invention sont fusionnés avec la glutathion S-transférase en position N-terminale (système "GST" Pharmacia). Le produit de fusion est dans ce cas détecté et quantifié grâce à l'activité enzymatique de la GST. Le réactif colorimétrique utilisé est un accepteur de glutathion, substrat de la GST. Le produit recombinant est purifié sur un support de chromatographie auquel ont été préalablement couplées des molécules de glutathion. Les anticorps mono ou polyclonaux spécifiquement dirigés contre une protéine PRAX-1 selon la définition donnée précédemment font également partie de l'invention. Des anticorps polyclonaux peuvent être obtenus à partir du sérum d'un animal immunisé contre la protéine, produite par exemple par recombinaison génétique suivant la méthode décrite ci-dessus, selon les modes opératoires usuels. Les anticorps monoclonaux peuvent être obtenus selon la méthode classique de culture d'hybridomes décrite par Kohler et Milstein, Nature, 1975, 256, 495-497. Des anticorps avantageux sont des anticorps dirigés contre des épitopes localisés dans la région comprise entre le résidu 1564 et le résidu 1857 pour la séquence SEQ ID n 2. Les anticorps selon l'invention peuvent se présenter sous forme d'immunoconjugués ou d'anticorps marqués. Par ailleurs, outre leur utilisation pour la purification des polypeptides recombinants, les anticorps de l'invention, en particulier les anticorps monoclonaux, peuvent également être utilisés pour la détection de ces polypeptides dans un échantillon biologique. Ils constituent ainsi un moyen d'analyse immunocytochimique ou immunohistochimique de l'expression de la protéine PRAX-1 sur des coupes de tissus spécifiques, par exemple par immunofluorescence, marquage à l'or, immunoconjugués enzymatiques. Plus généralement, les anticorps de l'invention peuvent être avantageusement mis en oeuvre dans toute situation o l'expression d'une protéine PRAX-1 doit être observée. L'invention concerne donc également un procédé de diagnostic in vitro d'états pathologiques corrélés à une expression ou une accumulation anormale de protéines PRAX-1, à partir d'un prélèvement biologique, caractérisé en ce que l'on met en contact au moins un anticorps de l'invention avec ledit prélèvement biologique, dans des conditions permettant la formation éventuelle de complexes immunologiques spécifiques entre une protéine PRAX-1 et le ou lesdits anticorps et en ce que l'on détecte quantitativement les complexes immunologiques spécifiques éventuellement formés. L'invention concerne également un kit pour le diagnostic in vitro d'une expression ou une accumulation anormale de la protéine PRAX-1 dans un prélèvement biologique et/ou pour la mesure du taux d'expression de celle-ci dans ledit prélèvement comprenant: - au moins un anticorps spécifique de la protéine PRAX-1, éventuellement fixé sur un support, - des moyens de révélation de la formation de complexes antigènes/anticorps spécifiques entre la protéine PRAX-1 et ledit anticorps et/ou des moyens de quantification de ces complexes. L'invention vise également toute méthode de diagnostic par la mise en évidence dans le sérum d'un individu, d'auto-anticorps dirigés contre la protéine PRAX-1. Une telle méthode de diagnostic précoce est caractérisée en ce que l'on met en contact un échantillon de sérum prélevé chez un individu avec un polypeptide de l'invention, éventuellement fixé sur un support, dans des conditions permettant la formation de complexes immunologiques spécifiques entre ledit polypeptide et les auto-anticorps éventuellement présents dans l'échantillon de sérum, et en ce que l'on détecte les complexes immunologiques spécifiques éventuellement formés. L'invention a également pour objet une méthode de détermination d'une variabilité allélique, d'une mutation, d'une délétion, d'une insertion, d'une perte d'hétérozygotie ou d'une anomalie génétique du gène PRAX-1, pouvant être impliquées dans des pathologies, caractérisée en ce qu'elle utilise au moins une séquence nucléotidique décrite ci-dessus. Parmi les méthodes de détermination d'une variabilité allélique, d'une mutation, d'une délétion, d'une insertion, d'une perte d'hétérozygotie ou d'une anomalie génétique du gène PRAX-1, on préfère une méthode comprenant au moins une étape d'amplification par PCR de la séquence nucléique cible de PRAX-1 susceptible de présenter un polymorphisme, une mutation, une délétion ou une insertion à l'aide de couple d'amorces de séquences nucléotidiques définies ci-dessus, une étape au cours de laquelle on procède au traitement des produits amplifiés à lI'aide d'enzymes de restriction appropriées et une étape au cours de laquelle on procède à la détection ou au dosage d'au moins l'un des produits de la réaction enzymatique. L'invention comprend également des compositions pharmaceutiques comprenant comme principe actif un polypeptide répondant aux définitions précédentes, préférentiellement sous forme soluble, associé à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Ces compositions pharmaceutiques sont destinées à être administrées à des sujets ayant une expression déficiente en protéine PRAX-1, associée à des états pathologiques ou encore présentant un état pathologique impliquant PRAX-1 ou son récepteur. Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent également contenir un inhibiteur ou inactivateur de l'activité de PRAX-1 et de toute interaction protéine-protéine faisant intervenir PRAX-1, notamment un polypeptide dérivé d'un polypeptide tel que défini précédemment. Préférentiellement, ces compositions peuvent être administrées par voie systémique, de préférence par voie intraveineuse, par voie intramusculaire, intradermique ou par voie orale. Leurs modes d'administration, posologies et formes galéniques optimaux peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement thérapeutique adapté à un patient comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement et les effets secondaires constatés, etc. L'invention est illustrée par les exemples suivants pour lesquels on se référera à la figure annexée qui est une représentation schématique avec une carte de restriction partielle du plasmide pZeoSV2(+ ) contenant le PRAX-1 (2H) humain. EXEMPLE I Isolement et identification de PRAX-1 1) Stratégie double hybride La technique du double hybride est une méthode de clonage par interaction in vivo chez la levure Saccharomyces cerevisiae. L'objet de cette technique est de détecter in vivo les interactions protéine-protéine et rechercher les partenaires protéiques d'une protéine donnée utilisée comme appât. L'appât utilisé est défini sur la séquence protéique de PBR. La définition de l'appât PBR doit se limiter aux régions hydrophiles de la protéine selon des contraintes de la technique du double hybride. Comme la protéine PBR est fortement hydrophobe, avec 5 régions transmembranaires, localisée sur la membrane mitochondriale externe, nous définissons l'appât PBR à partir du motif C-terminal de la protéine, région démontrée cytosolique et accessible à d'éventuels partenaires protéiques par l'existence d'un anticorps monoclonal anti-PBR dirigé contre cette région de la protéine. Un appât PBR construit sur la base de ce motif C-terminal, par juxtaposition trois fois des 14 acides aminés C-terminaux de PBR a été sélectionné. 2) Construction de l'appât PBR L'appât PBR est une construction synthétique qui juxtapose trois fois le motif C-terminal de PBR, domaine aa156 à 169, séparé par des linkers de glycine: séquence protéique appât: RDNHGWHGGRRLPE-gly-gly-RDNHGWHGGRRLPE-gly-gly- RDNHGWHGGRRLPE soit 46 acides aminés. La séquence nucléotidique codant pour l'appât PBR est clonée dans le vecteur pGBT9 (Clontech) en sites EcoRI et Xhol. 3) Criblage des banques de fusion La lignée HF7c est d'abord transformée par le plasmide appât puis par la banque de fusion choisie (cerveau foetal, Matchmaker library, Clontech) selon la méthode définie par Schiestl et ai. Curr. Genet., 1989, 16, 339-346. Le criblage double hybride est réalisée sur 2.106 cellules. Les clones HIS+ et LacZ+ sont repérés et testés pour leur spécificité en remplaçant l'appât PBR par d'autres constructions non relevantes. Les tests de sélection et de spécificité, réalisés dans les conditions définies dans Matchmaker Library User Manuel (Clontech), permettent d'isoler 4 clones positifs. 4) Identification de PRAX incomplète: il manque le codon ATG codant pour la méthionine initiale en 5'. L'obtention de la séquence complète de PRAX-1 est décrite dans l'exemple Il. EXEMPLE II Obtention de la séquence entière et clonage de l'ADNc de la protéinehumaine PRAX-1 1) Criblage de la banque a) La banque La banque sélectionnée est une banque lamda Zap cDNA cortex frontal (Stratagène). b) Préparation des membranes Les clones de la banque sont étalés sur du milieu LB gélosé, maltose 0,2%, MgSO4 lOmM (boîtes de petri diamètre 150) revêtu de membranes Hybond (Amersham). Après une nuit à 37 C, les clones sont transférés par contact sur de nouvelles membranes. Ces dernières sont traitées en les déposant sur du papier Whatman 3 mm imbibé des solutions suivantes NaOH 0.5 N, NaCI 1.5 M pendant 2 minutes puis Tris HCI 0.5 M pH 8, NaCI 1.5 M pendant 5 minutes, enfin 30 sec sur Tris HCI 0,2M pH 7,5, SSC 2X. Les membranes sont séchées puis incubées au four sous vide à 80 C pendant 2 heures. c) Préparation des sondes PRAX-1 Différentes sondes PRAX-1 sont successivement employées définies sur la séquence nucléotidique SEQ ID n 1. Les sondes sont marquées au oE 32p en utilisant le kit RTS Rad Prime DNA labeling system (Gibco BRL). Les sondes sont préparées avec une activité spécifique de 5 108 dpm/pg en moyenne. d) Préhybridation et hybridation Les membranes préparées en b) sont préhybridées 30 minutes à 42 C dans 6 x SSC, 5 x Denhart's, 0,1 % SDS puis hybridées pendant la nuit dans le même tampon additionné de la sonde préparée en c) à raison de 106 dpm/ml. e) Lavage et exposition des membranes Les membranes sont lavées deux fois à température ambiante dans le tampon 2 x SSC/SDS 0.1 % puis une heure à 56 C en 6 x SSC/SDS 0.1 %. Les clones hybrides sont révélés par autoradiographie et sélectionnés après multiple screening. 2) Séquençage des clones obtenus PRAX-1 Le criblage séquentiel de la banque lambda Zap a permis d'isoler des clones contenant l'ADNc codant pour la protéine entière PRAX-1. La séquence est obtenue à l'aide du kit ABI PRISMTM Dye Terminator cycle sequencing Ready reaction Kit, selon les instructions définies dans le protocole d'utilisation, sur séquenceur Applied Biosystems model 373A. La séquence nucléotidique complète codante pour PRAX-1 est de 7033pb, présentée en annexe. Elle code pour un polypeptide de 1857 acides aminés, de poids moléculaire 200 kDa. La portion isolée par double hybride est l'extrémité C- terminale, de 294 acides aminés C-terminaux, correspondant sur la séquence codante SEQ ID n 1 à la région 4887 à 7033. La portion de PRAX- 1 isolée dans le screening double hybride est référencée PRAX-1 (2H) et correspond au domaine s'étendant des acides aminés 1564 à 1857 sur SEQ ID n 2. EXEMPLE III 1) Production de protéine recombinante PRAX-1 dans E. Co/i a) Construction du plasmide d'expression Elle consiste à insérer la séquence codante pour la portion 2H de PRAX-1 (294 acides aminés C- terminaux de PRAX-1) en phase avec la glutathione S-transférase (GST) dans le vecteur pGEX 4T2 (Pharmacia). Pour cela l'insert correspondant (pb 4887 à 7033) est cloné en site Smal dans le vecteur pGEX 4T2. L'insert et le plasmide sont digérés puis purifiés après migration sur gel d'agarose 1% à l'aide du kit Geneclean (Bio1 01). Après ligation avec 100ng d'insert et 10ng de vecteur déphosphorylé et transformation par choc thermique, les clones E. coli recombinants sont vérifiés par séquenç,age à l'aide du kit Applied Biosystem (Perkin Elmer). b) Expression et purification de la protéine de fusion GST-PRAX- 1(2H) Cette étape a été réalisée en utilisant le kit " Bulk GST purification module " (Pharmacia). Un clone recombinant a été mis en culture à 37 C dans un litre de milieu de culture LB (bactotryptone 10g/l, extrait de levure 5g/l, NaCI 10g/l) + ampicilline 100pg/ml. A DO6onm 0,8, I'expression est induite avec 0,5mM d'IPTG pendant 2h à 37 C. Après centrifugation, le culot cellulaire est repris dans du PBS froid puis soniqué par ultrasons. Après centrifugation à 12000g, pendant 10 min à 4 C, on récupère le surnageant. La purification est ensuite réalisée sur une colonne de chromatographie d'affinité glutathion sepharose 4B. La fixation et le lavage sont réalisés en tampon PBS et l'élution est réalisée par compétition avec du glutathion réduit. La concentration finale en protéine de fusion GST- PRAX-1 (2H) est variable entre 0,5 et 1 mg/ml selon les préparations. 2) Production de protéine recombinante PRAX-1 dans les cellules Jurkat a) Construction du plasmide d'expression L'insert codant pour l'extrémité C-terminale de PRAX-1 est sorti du plasmide de la banque cerveau foetal pActll-PRAX-1(2H) par digestion par Bglll. Cette digestion permet de laisser en 5' de l'insert codant pour PRAX1(2H), la séquence codante pour l'épitope HA (hémagglutinine). L'insert ainsi digéré est clone dans pZeo SV2+ en site BamHl. Le vecteur de clonage linéarisé et l'insert sont ligués. Des bactéries "choc thermique" compétentes sont transfectées par cette construction. La construction est vérifiée par séquenç,age (Cf figure en annexe). b) Cellules Jurkat Les cellules Jurkat (leucémie humaine T) sont cultivées dans le milieu RPMI 1640 (Gibco) supplémente avec 50mg/ml de gentamycine et de % de sérum de veau foetal (Gibco). c) Transformation des cellules Jurkat Les cellules Jurkat sont transfectées par électroporation à l'aide de l'appareil Biorad Gene Pulser (Biorad), 320V, 250pFr, 5ms. La sélection des clones transfectés est réalisée par Zéocin 500pg/ml en milieu RPMI 1640, 20% SVF. d) Les cellules transfectées sont mises en culture en milieu RPMI1640, 20% SVF, Zéocin 500pg/ml. La production de protéine recombinante HA-PRAX-1 (2H) est vérifiée en utilisant l'anticorps anti-HA (Boerhinger Mannheim) ou anti-PRAX-1. 3C EXEMPLE IV Préparation d'anticorps spécifiques polyclonaux Des peptides immunogènes de 20 acides aminés sont sélectionnés sur la séquence protéique PRAX-1 SEQ ID n 2, dans les portions hydrophiles de la protéine. 5mg de chaque peptide couplé KLH sont utilisés pour immuniser 2 lapins (mâle de 1,5 à 2kg environ, New Zealand). Quatre immunisations ont été effectuées à 15 jours d'intervalle selon le protocole décrit par Vaitukaitis, Methods in enzymology, 1981, 73, 46. Les serums sont recueillis un mois après la première immunisation puis 2 fois successivement à 1 mois et 15 jours d'intervalle. Chaque sérum recueilli est testé en western immunoblotting pour la reconnaissance de la protéine PRAX-1. Les sérums immuns sont purifiés sur colonne d'affinité Affigel (Biorad). La spécificité de reconnaissance de PRAX-1 par les anticorps a été vérifiée par déplacement du marquage obtenu, en présence du peptide immunogène correspondant. Un anticorps polyclonal a ainsi été obtenu. Sa cible est le peptide AA1772-1792 sur la séquence SEQ ID n 2. EXEMPLE V Détection de la protéine PRAX-1 par western immunoblotting (immunoempreinte) 1) Matériels utilisés pour l'immunoempreinte a) Lignées cellulaires utilisées pour l'immunoempreinte Les lignées cellulaires ont été cultivées, comme décrit dans le 3 astrocytaire), SHSY5Y (neuroblastome), NHA (astrocytes normaux), Jurkat, Molt- 4 (leucémie T), Daudi, U937 (lymphome B), SW480 (adénocarcinome de colon), DU145 (carcinome prostatique), Hacat, SVK14, WS1, NCTC2544, A431, VA ES BJ (kératinocytes). Lignée murine: J744-A1 (monocytes-macrophage). Lignée de rat: C62b (Gliome). b) E. caoli exprimant GST-PRAX-1(2H) ou protéine PRAX-1(2H) traduite in vitro La protéine de fusion GST-PRAX-1(2H) est préparée comme indiquée dans l'exemple III. PRAX-1(2H) est préparée en lysat de réticulocytes avec le kit TNT T7/T3 Coupled reticulocyte Lysate system (Promega réf. L5010) selon le protocole d'utilisation défini dans le kit. Le plasmide employé dans ce système est un plasmide pBluescript-PRAX-1(2H) construit par insertion de la séquence codante pour PRAX-1(2H) (nucléotides 4887 à 7033 sur SEQ ID n 1) dans le vecteur pBluescript (Stratagène) en site BamHl. 2) Préparation des échantillons protéiques à partir des cultures cellulaire Après culture, les cellules sont lavées avec du PBS puis lysées dans le tampon de lyse (6M urée, 50mM Tris HCI pH 6,8, 2% SDS, 10% glycérol, mM DTT, 0,1% bleu de bromophénol). Les lysats sont soniqués par ultrasons à 4 C pendant 2min, chauffés 10min à 100 C et conservés à -20 C. 3) Western Blot Les échantillons calibrés pour leur contenu protéique sont déposés sur gel SDS-PAGE 4-12% ou 4-20% puis electrotransférés sur une membrane de nitrocellulose. 4) Révélation par l'anticorps anti-PRAX-1 La membrane est incubée pendant 1 h minimum dans le tampon de blocage TBST (Tris HCI 10mM pH 8, NaCI 150mM, 0,1% Tween 20) additioné de % de lait à température ambiante. La membrane est successivement mise en presence de l'anticorps anti- PRAX-1 dans le même tampon, pendant 3 h à température ambiante, lavée 3 fois pendant 10 min avec du TBST, puis incubée pendant 45 min avec un second anticorps anti-immunoglobuline de lapin couplé à la peroxidase (SIGMA) dans du tampon TBST lait 5%. Après 3 lavages en TBST de 15min, la révélation est réalisée en utilisant le kit ECL (Amersham) par chimioluminescence. ) Résultats Figure en annexe: Les immunoempreintes obtenues avec l'anticorps anti PRAX-1 montrent que celui-ci reconnaît spécifiquement les protéines recombinantes et endogènes. L'analyse des lignées cellulaires humaines montre une expression de la protéine PRAX-1 détectée dans toutes les lignées testées. Exemple VI Localisation chromosomique La localisation chromosomique du gène PRAX-1 a été réalisée par hybridation in situ selon la procédure décrite par Heng et a/. Proc. Natl Acad. Sci. USA (1992), 89, 9509-9513 et Chromosoma (1993), 102, 325-332. La sonde cDNA employée est une sonde de 3,5Kb définie sur la séquence SEQ ID n 1, comprenant l'extrémité 3' du cDNA isolé par double hybride. 100 mitoses ont été analysées, 73 images mitotiques montrent des doubles spots localisés sur une paire de chromosome. Les résultats permettent de localiser le gène PRAX-1 dans la région q22-q23 sur le chromosome 17. EXEMPLE VII Expression de l'ARNm PRAX-1 humain L'analyse de l'expression de I'ARNm PRAX-1 a été réalisée sur membrane Multiple Tissue Northern Blot et RNA Master Blot (Clontech) portant des ARN poly A+ de tissus humains séparés par électrophorèse ou déposés en dot. Les membranes sont préhybridées 1h à 65 C en tampon Church (BSA 1%, SDS 7%, NaH2PO4 0,5M, EDTA l1mM), hybridées dans le même tampon contenant la sonde cDNA PRAX-1, à 65 C pendant la nuit. Les membranes sont lavées pendant 5 min en tampon SDS 5%, BSA 0,5%, NaH2PO4 mM, EDTA lmM. Les marquages sont révélés par autoradiographie après 24h d'exposition. Une sonde PRAX-1 de 837pb est préparée par PCR en utilisant les amorces SEQ ID n 3 et SEQ ID n 8. La sonde purifiée sur gel par geneClean (Bio101) est radiomarquée au a 32p avec le kit Radprime labeling kit (Gibco) dans les conditions définies par le protocole de marquage du kit. Les résultats montrent une expression majoritaire du transcrit PRAX-1 dans le cerveau humain. Le transcrit majoritaire visible est de 7,5Kb en accord avec la taille du cDNA déterminée après criblage des banques cDNA. Le transcrit PRAX-1 présente donc une forte expression dans le système nerveux central, avec une expression variable selon les régions du cerveau. En périphérie le thymus, I'hypophyse se distinguent des autres tissus o l'expression est plus faible. Parmi les tissus foetaux, le cerveau foetal donne un signal fort, suivi par le coeur, le rein, le thymus et le poumon. LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATION GENERALE: (i) DEPOSANT: (A) NOM: Sanofi (B) RUE: 32-34 rue Marbeuf (C) VILLE: PARIS (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 75008 (ii) TITRE DE L'INVENTION: Polypeptide PRAX-1 (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 2 (iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (C) SYSTEME D'EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB) (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 7033 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Homo sapiens (ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: CDS (B) EMPLACEMENT: 198..5768 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: GGCTCCAGCT CCAGCAGCCA TGGCGCCTTG TGCAGCCTCC TTTGTGGGTG GAGAAGAGCT 60 CAGCCAACCT TGGATGGAGC GTCGGTGAAG CAAGAGCTCA GAGGGGAGAG GGGCTGGCCT 120 GGCATGACCG TCGCCAGTCC CCCCACCTGG CTGGGTGATG TCCCCCGGCC CGGGTTCTGG 180 GGCCCCTTGG CAGTACC ATG GAG CAA CTG ACA ACC CTC CCA CGG CCT GGG 230 Met Glu Gln Leu Thr Thr Leu Pro Arg Pro Gly 1 5 10 GAC CTT GGA GCC ATG GAG CCA TGG GCA CTG CCC ACC TGG CAT AGC TGG 278 Asp Leu Gly Ala Met Glu Pro Trp Ala Leu Pro Thr Trp His Ser Trp 20 25 ACT CCA GGT CGA GGG GGT GAA CCT AGC AGT GCA GCC CCA AGC ATC GCT 326 Thr Pro Gly Arg Gly Gly Glu Pro Ser Ser Ala Ala Pro Ser Ile Ala 35 40 GAT ACT CCT CCG GCA GCT CTG CAG CTT CAA GAA CTG AGG TCT GAG GAG 374 Asp Thr Pro Pro Ala Ala Leu Gln Leu Gln Glu Leu Arg Ser Glu Glu 50 55 AGT TCC AAG CCC AAA GGA CAC GGG AGC TCC AGG CCC GTG GGG GGA ACT 422 Ser Ser Lys Pro Lys Gly His Gly Ser Ser Arg Pro Val Gly Gly Thr 65 70 75 GAC CCT GAA GGA GCA CAG GCT TGT CTG CCC AGC CTG GGC CAG CAA GCA 470 Asp Pro Glu Gly Ala Gln Ala Cys Leu Pro Ser Leu Gly Gln Gln Ala 85 90 TCC AGC TCT GGA CCC GCC TGC CAG AGG CCA GAG GAT GAG GAA GTG GAG 518 Ser Ser Ser Gly Pro Ala Cys Gln Arg Pro Glu Asp Glu Glu Val Glu 100 105 GCT TTC CTG AAG GCC AAG CTG AAT ATG AGC TTT GGG GAC AGG CCC AAT 566 Ala Phe Leu Lys Ala Lys Leu Asn Met Ser Phe Gly Asp Arg Pro Asn 115 120 CTG GAG CTG CTG AGG GCC CTG GGG GAG CTG CGG CAG CGC TGT GCC ATC 614 * Leu Glu Leu Leu Arg Ala Leu Gly Glu Leu Arg Gln Arg Cys Ala Ile 130 135 CTT AAG GAG GAA AAC CAG ATG CTG AGG AAG AGC AGC TTC CCT GAG ACA 662 Leu Lys Glu Glu Asn Gln Met Leu Arg Lys Ser Ser Phe Pro Glu Thr 145 150 155 GAA GAG AAG GTG CGG AGG CTG AAG CGG AAG AAC GCC GAG CTG GCG GTC 710 Glu Glu Lys Val Arg Arg Leu Lys Arg Lys Asn Ala Glu Leu Ala Val 165 170 ATT GCC AAG CGC CTG GAG GAG AGG GCC CGA AAG CTG CAG GAA ACG AAC 758 Ile Ala Lys Arg Leu Glu Glu Arg Ala Arg Lys Leu Gln Glu Thr Asn 180 185 CTG AGG GTG GTG AGT GCC CCC TTG CCC CGG CCG GGG ACC AGC TTG GAG 806 Leu Arg Val Val Ser Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Thr Ser Leu Glu 195 200 TTG TGT CGG AAG GCC CTA GCC CGC CAG CGA GCC CGG GAC CTC AGT GAG 854 Leu Cys Arg Lys Ala Leu Ala Arg Gln Arg Ala Arg Asp Leu Ser Glu 205 210 215 ACA GCC AGT GCA CTG CTG GCC AAG GAC AAG CAG ATT GCT GCC TTG CAG 902 Thr Ala Ser Ala Leu Leu Ala Lys Asp Lys Gin Ile Ala Ala Leu Gln 220 225 230 235 CGG GAG TGC AGG GAG CTG CAG GCC AGG CTC ACT CTG GTG GGC AAG GAG 950 Arg Glu Cys Arg Glu Leu Gln Ala Arg Leu Thr Leu Val Gly Lys Glu 240 245 250 GGT CCC CAG TGG CTC CAC GTG CGG GAC TTC GAT CGG CTG CTG CGC GAG 998 Gly Pro Gln Trp Leu His Val Arg Asp Phe Asp Arg Leu Leu Arg Glu 255 260 265 TCC CAG CGG GAG GTG CTG CGG CTG CAG AGG CAG ATC GCG CTG CGC AAC 1046 Ser Gln Arg Glu Val Leu Arg Leu Gln Arg Gln Ile Ala Leu Arg Asn 270 275 280 CAG CGG GAG ACG CTC CCG CTC CCG CCG TCC TGG CCC CCG GGC CCT GCT 1094 Gln Arg Glu Thr Leu Pro Leu Pro Pro Ser Trp Pro Pro Gly Pro Ala 285 290 295 CTC CAG GCC AGA GCA GGG GCG CCT GCT CCC GGG GCC CCG GGA GAG GCC 1142 Leu Gin Ala Arg Ala Gly Ala Pro Ala Pro Gly Ala Pro Gly Glu Ala 300 305 310 315 ACG CCC CAG GAG GAT GCG GAC AAC CTA CCC GTG ATT CTA GGG GAG CCA 1190 Thr Pro Gln Glu Asp Ala Asp Asn Leu Pro Val Ile Leu Gly Glu Pro 320 325 330 GAG AAA GAG CAG AGG GTG CAG CAG CTG GAA TCG GAG CTC AGC AAG AAG 1238 Glu Lys Glu Gln Arg Val Gln Gln Leu Glu Ser Glu Leu Ser Lys Lys 335 340 345 CGG AAG AAA TGC GAG AGC CTG GAG CAG GAA GCC CGG AAA AAG CAG AGG 1286 Arg Lys Lys Cys Glu Ser Leu Glu Gln Glu Ala Arg Lys Lys Gln Arg 350 355 360 CAA TGT GAG GAG CTG GAA CTG CAG CTG AGA CAA GCG CAG AAT GAG AAT 1334 Gln Cys Glu Glu Leu Glu Leu Gln Leu Arg Gln Ala Gln Asn Glu Asn 365 370 375 GCC CGC CTG GTG GAG GAG AAC TCC CGG CTC AGT GGG AGA GCC ACA GAG 1382 Ala Arg Leu Val Glu Glu Asn Ser Arg Leu Ser Gly Arg Ala Thr Glu 380 385 390 395 AAG GAG CAG GTG GAG TGG GAG AAT GCG GAG CTG AGG GGC CAG CTC CTG 1430 Lys Glu Gln Val Glu Trp Glu Asn Ala Glu Leu Arg Gly Gln Leu Leu 400 405 410 GGG GTG ACA CAG GAG AGG GAC TCA GCC CTT CGC AAG AGC CAG GGC CTG 1478 Gly Val Thr Gln Glu Arg Asp Ser Ala Leu Arg Lys Ser Gln Gly Leu 415 420 425 CAG AGC AAG CTG GAG AGC CTG GAG CAA GTG CTG AAG CAC ATG CGG GAG 1526 Gln Ser Lys Leu Glu Ser Leu Glu Gln Val Leu Lys His Met Arg Glu 430 435 440 GTG GCC CAG CGG CGG CAG CAG CTG GAG GTG GAG CAT GAA CAG GCT CGG 1574 Val Ala Gin Arg Arg Gln Gin Leu Glu Val Glu His Glu Gin Ala Arg 445 450 455 CTC AGC CTA CGG GAG AAG CAG GAG GAG GTC CGG AGA CTG CAG CAG GCC 1622 Leu Ser Leu Arg Glu Lys Gin Glu Glu Val Arg Arg Leu Gln Gln Ala 460 465 470 475 CAG GCT GAA GCC CAG AGG GAA CAT GAA GGA GCC GTG CAG CTG CTG GAG 1670 Gln Ala Glu Ala Gin Arg Glu His Glu Gly Ala Val Gin Leu Leu Glu 480 485 490 TCT ACC TTG GAT TCC ATG CAG GCC CGG GTT CGA GAG CTC GAA GAA CAG 1718 Ser Thr Leu Asp Ser Met Gin Ala Arg Val Arg Glu Leu Glu Glu Gln 495 500 505 TGC CGC AGC CAA ACC GAG CAG TTC AGC CTC CTG GCA CAA GAA CTC CAG 1766 Cys Arg Ser Gln Thr Glu Gln Phe Ser Leu Leu Ala Gln Glu Leu Gln 510 515 520 GCT TTC CGC CTG CAC CCG GGC CCC TTG GAT CTG CTC ACA TCT GCC CTG 1814 Ala Phe Arg Leu His Pro Gly Pro Leu Asp Leu Leu Thr Ser Ala Leu 525 530 535 GAC TGT GGG AGC CTT GGA GAC TGC CCA CCA CCC CCC TGC TGC TGC TCC 1862 Asp Cys Gly Ser Leu Gly Asp Cys Pro Pro Pro Pro Cys Cys Cys Ser 540 545 550 555 ATT CCC CAG CCT TGC CGG GGG TCT GGC CCC AAA GAC CTT GAC CTC CCG 1910 Ile Pro Gln Pro Cys Arg Gly Ser Gly Pro Lys Asp Leu Asp Leu Pro 560 565 570 CCG GGC TCC CCT GGG CGC TGC ACC CCA AAG TCT TCC GAG CCT GCC CCT 1958 Pro Gly Ser Pro Gly Arg Cys Thr Pro Lys Ser Ser Glu Pro Ala Pro 575 580 585 GCC ACT CTC ACT GGG GTC CCT CGA AGG ACA GCC AAG AAG GCA GAG TCT 2006 Ala Thr Leu Thr Gly Val Pro Arg Arg Thr Ala Lys Lys Ala Glu Ser 590 595 600 CTC TCC AAC TCC TCC CAC TCC GAG TCC ATC CAC AAC AGC CCC AAG TCA 2054 Leu Ser Asn Ser Ser His Ser Glu Ser Ile His Asn Ser Pro Lys Ser 605 610 615 TGC CCT ACA CCT GAG GTG GAC ACA GCC AGT GAG GTA GAG GAG CTG GAG 2102 Cys Pro Thr Pro Glu Val Asp Thr Ala Ser Glu Val Glu Glu Leu Glu 620 625 630 635 GCA GAC AGT GTC TCC CTG CTC CCA GCT GCG CCA GAG GGC AGC CGG GGA 2150 Ala Asp Ser Val Ser Leu Leu Pro Ala Ala Pro Glu Gly Ser Arg Gly 640 645 650 GGA GCC AGG ATC CAG GTC TTC CTA GCA CGT TAT AGC TAC AAC CCC TTT 2198 Gly Ala Arg Ile Gln Val Phe Leu Ala Arg Tyr Ser Tyr Asn Pro Phe 655 660 665 GAG GGT CCC AAT GAG AAT CCA GAA GCA GAG CTT CCG CTG ACA GCT GGC 2246 Glu Gly Pro Asn Glu Asn Pro Glu Ala Glu Leu Pro Leu Thr Ala Gly 670 675 680 GAG TAC ATC TAC ATC TAT GGC AAC ATG GAT GAG GAT GGC TTT TTT GAA 2294 Glu Tyr Ile Tyr Ile Tyr Gly Asn Met Asp Glu Asp Gly Phe Phe Glu 685 690 695 GGA GAG CTC ATG GAT GGC CGA AGG GGC CTG GTC CCT TCC AAT TTT GTA 2342 Gly Glu Leu Met Asp Gly Arg Arg Gly Leu Val Pro Ser Asn Phe Val 700 705 710 715 GAG CGT GTG TCG GAT GAT GAC CTC CTG ACC TCC CTC CCT CCA GAG CTG 2390 Glu Arg Val Ser Asp Asp Asp Leu Leu Thr Ser Leu Pro Pro Glu Leu 720 725 730 GCC GAT TTG TCC CAC AGC TCA GGC CCT GAA CTC AGT TTC CTG AGT GTA 2438 Ala Asp Leu Ser His Ser Ser Gly Pro Glu Leu Ser Phe Leu Ser Val 735 740 745 GGT GGG GGT GGC AGC AGT AGC GGG GGC CAA AGC AGT GTG AGA AGG AGC 2486 Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Gln Ser Ser Val Arg Arg Ser 750 755 760 CAG CCC AGA CCT GAG GAG GAG GAT GCA GGG GAC GAG CTC AGT CTG AGC 2534 Gln Pro Arg Pro Glu Glu Glu Asp Ala Gly Asp Glu Leu Ser Leu Ser 765 770 775 CCA TCA CCG GAG GGC CTG GGC GAG CCT CCT GCC GTG CCT TAC CCC CGC 2582 Pro Ser Pro Glu Gly Leu Gly Glu Pro Pro Ala Val Pro Tyr Pro Arg 780 785 790 795 CGT CTG GTG GTC CTC AAG CAG CTG GCC CAC AGC GTG GTG CTG GCC TGG 2630 Arg Leu Val Val Leu Lys Gln Leu Ala His Ser Val Val Leu Ala Trp 800 805 810 GAG CCG CCT CCT GAG CAA GTG GAG CTA CAC GGC TTC CAT ATC TGT GTG 2678 Glu Pro Pro Pro Glu Gln Val Glu Leu His Gly Phe His Ile Cys Val 815 820 825 AAT GGG GAG CTG CGA CAG GCC CTG GGG CCT GGG GCG CCA CCC AAG GCC 2726 Asn Gly Glu Leu Arg Gln Ala Leu Gly Pro Gly Ala Pro Pro Lys Ala 830 835 840 GTG CTG GAG AAC CTG GAC CTG TGG GCC GGG CCC CTT CAC ATT TCT GTC 2774 Val Leu Glu Asn Leu Asp Leu Trp Ala Gly Pro Leu His Ile Ser Val 845 850 855 CAG GCC CTG ACT AGC CGG GGC AGC TCT GAC CCA CTG CGC TGT TGC TTG 2822 Gln Ala Leu Thr Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Cys Cys Leu 860 865 870 875 GCG GTG GGT GCC CGG GCC GGA GTG GTG CCC AGC CAG CTG CGG GTC CAT 2870 Ala Val Gly Ala Arg Ala Gly Val Val Pro Ser Gln Leu Arg Val His 880 885 890 CGG TTG ACA GCC ACA TCT GCT GAG ATC ACC TGG GTG CCC GGC AAT AGC 2918 Arg Leu Thr Ala Thr Ser Ala Glu Ile Thr Trp Val Pro Gly Asn Ser 895 900 905 AAC TTG GCC CAT GCC ATC TAC CTC AAT GGG GAA GAA TGC CCA CCT GCC 2966 Asn Leu Ala His Ala Ile Tyr Leu Asn Gly Glu Glu Cys Pro Pro Ala 910 915 920 AGC CCC AGT ACC TAC TGG GCC ACC TTC TGC CAC TTA CGG CCT GGC ACA 3014 Ser Pro Ser Thr Tyr Trp Ala Thr Phe Cys His Leu Arg Pro Gly Thr 925 930 935 CCC TAT CAG GCC CAA GTG GAG GCT CAG CTC CCA CCC CAA GGG CCC TGG 3062 Pro Tyr Gln Ala Gln Val Glu Ala Gln Leu Pro Pro Gln Gly Pro Trp 940 945 950 955 GAA CCA GGC TGG GAG AGG CTG GAG CAG CGG GCT GCC ACC CTG CAG TTC 3110 Glu Pro Gly Trp Glu Arg Leu Glu Gln Arg Ala Ala Thr Leu Gln Phe 960 965 970 ACC ACA CTC CCA GCA GGC CCA CCT GAT GCC CCT CTG GAT GTG CAG ATC 3158 Thr Thr Leu Pro Ala Gly Pro Pro Asp Ala Pro Leu Asp Val Gln Ile 975 980 985 GAG CCT GGG CCC TCC CCT GGG ATC TTG ATC ATC AGT TGG CTC CCA GTC 3206 Glu Pro Gly Pro Ser Pro Gly Ile Leu Ile Ile Ser Trp Leu Pro Val 990 995 1000 ACC ATC GAT GCT GCT GGC ACA TCC AAC GGT GTC CGG GTC ACA GGC TAT 3254 Thr Ile Asp Ala Ala Gly Thr Ser Asn Gly Val Arg Val Thr Gly Tyr 1005 1010 1015 GCC ATC TAC GCT GAT GGG CAG AAG ATC ATG GAG GTG GCC TCA CCC ACG 3302 Ala Ile Tyr Ala Asp Gly Gln Lys Ile Met Glu Val Ala Ser Pro Thr 1020 1025 1030 1035 GCA GGC AGT GTA CTG GTG GAG TTG TCC CAG CTG CAG CTG CTG CAG GTG 3350 Ala Gly Ser Val Leu Val Glu Leu Ser Gln Leu Gln Leu Leu Gln Val 1040 1045 1050 TGT CGT GAG GTG GTC GTG CGC ACC ATG TCG CCC CAC GGG GAG TCG GCG 3398 Cys Arg Glu Val Val Val Arg Thr Met Ser Pro His Gly Glu Ser Ala 1055 1060 1065 GAC TCC ATC CCG GCT CCT ATC ACT CCC GCC CTG GCT CCG GCC AGC CTG 3446 Asp Ser Ile Pro Ala Pro Ile Thr Pro Ala Leu Ala Pro Ala Ser Leu 1070 1075 1080 CCA GCC CGA GTC TCC TGC CCC TCA CCG CAC CCA AGC CCA GAG GCC AGA 3494 Pro Ala Arg Val Ser Cys Pro Ser Pro His Pro Ser Pro Glu Ala Arg 1085 1090 1095 GCG CCC CTT GCT TCA GCC TCC CCA GGG CCT GGA GAC CCC AGC TCT CCT 3542 Ala Pro Leu Ala Ser Ala Ser Pro Gly Pro Gly Asp Pro Ser Ser Pro 1100 1105 1110 1115 CTC CAG CAC CCT GCT CCC CTT GGA ACT CAA GAG CCT CCA GGA GCA CCC 3590 Leu Gln His Pro Ala Pro Leu Gly Thr Gln Glu Pro Pro Gly Ala Pro 1120 1125 1130 CCT GCA AGC CCT TCC AGA GAG ATG GCA AAA GGG TCC CAC GAG GAC CCT 3638 Pro Ala Ser Pro Ser Arg Glu Met Ala Lys Gly Ser His Glu Asp Pro 1135 1140 1145 CCA GCA CCT TGC TCC CAG GAG GAG GCT GGG GCA GCA GTG CTG GGC ACC 3686 Pro Ala Pro Cys Ser Gln Glu Glu Ala Gly Ala Ala Val Leu Gly Thr 1150 1155 1160 TCA GAG GAG AGG ACA GCC AGC ACA TCT ACC CTG GGT GAG AAG GAC CCT 3734 Ser Glu Glu Arg Thr Ala Ser Thr Ser Thr Leu Gly Glu Lys Asp Pro 1165 1170 1175 GGC CCC GCA GCT CCC TCA CTG GCC AAG CAG GAG GCC GAG TGG ACT GCA 3782 Gly Pro Ala Ala Pro Ser Leu Ala Lys Gln Glu Ala Glu Trp Thr Ala 1180 1185 1190 1195 GGA GAG GCC TGT CCG GCC TCC AGC TCC ACC CAG GGA GCA CGG GCC CAG 3830 Gly Glu Ala Cys Pro Ala Ser Ser Ser Thr Gln Gly Ala Arg Ala Gln 1200 1205 1210 CAG GCG CCA AAT ACC GAG ATG TGC CAA GGA GGA GAC CCA GGG TCT GGG 3878 Gln Ala Pro Asn Thr Glu Met Cys Gln Gly Gly Asp Pro Gly Ser Gly 1215 1220 1225 CTG AGG CCC AGG GCT GAG AAG GAG GAC ACA GCA GAG CTT GGG GTT CAT 3926 Leu Arg Pro Arg Ala Glu Lys Glu Asp Thr Ala Glu Leu Gly Val His 1230 1235 1240 CTG GTG AAC TCC CTC GTG GAC CAC GGC CGC AAC TCA GAC CTG TCA GAC 3974 Leu Val Asn Ser Leu Val Asp His Gly Arg Asn Ser Asp Leu Ser Asp 1245 1250 1255 ATC CAG GAG GAA GAG GAA GAG GAG GAG GAG GAG GAG GAA GAG GAG CTG 4022 Ile Gln Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Leu 1260 1265 1270 1275 GGT TCC AGG ACT TGC TCC TTC CAG AAG CAG GTT GCT GGC AAC AGC ATC 4070 Gly Ser Arg Thr Cys Ser Phe Gln Lys Gln Val Ala Gly Asn Ser Ile 1280 1285 1290 AGG GAG AAT GGG GCC AAG TCC CAG CCC GAC CCC TTT TGT GAG ACT GAC 4118 Arg Glu Asn Gly Ala Lys Ser Gln Pro Asp Pro Phe Cys Glu Thr Asp 1295 1300 1305 AGC GAT GAG GAG ATC TTG GAG CAG ATC CTG GAG CTG CCC CTC CAG CAG 4166 Ser Asp Glu Glu Ile Leu Glu Gln Ile Leu Glu Leu Pro Leu Gln Gin 1310 1315 1320 TTC TGT AGC AAG AAG CTC TTT AGC ATC CCG GAG GAG GAG GAA GAG GAA 4214 Phe Cys Ser Lys Lys Leu Phe Ser Ile Pro Glu Glu Glu Glu Glu Glu 1325 1330 1335 GAG GAG GAC GAG GAG GAG GAG AAG TCT GGG GCA GGC TGT TCT TCC CGA 4262 Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Lys Ser Gly Ala Gly Cys Ser Ser Arg 1340 1345 1350 1355 GAC CCT GGC CCG CCT GAA CCT GCA TTG CTG GGG CTG GGC TGT GAC AGT 4310 Asp Pro Gly Pro Pro Glu Pro Ala Leu Leu Gly Leu Gly Cys Asp Ser 1360 1365 1370 GGT CAG CCC CGA AGA CCT GGC CAG TGT CCC TTG TCT CCT GAG TCC TCC 4358 Gly Gln Pro Arg Arg Pro Gly Gln Cys Pro Leu Ser Pro Glu Ser Ser 1375 1380 1385 AGG GCT GGA GAC TGC CTG GAA GAC ATG CCT GGA TTA GTT GGT GGA AGC 4406 Arg Ala Gly Asp Cys Leu Glu Asp Met Pro Gly Leu Val Gly Gly Ser 1390 1395 1400 AGC CGG AGG AGA GGA GGG GGC TCC CCT GAG AAG CCC CCA AGC CGC AGG 4454 Ser Arg Arg Arg Gly Gly Gly Ser Pro Glu Lys Pro Pro Ser Arg Arg 1405 1410 1415 CGG CCT CCA GAT CCC CGA GAA CAC TGC AGC CGA CTT CTC AGC AAC AAT 4502 Arg Pro Pro Asp Pro Arg Glu His Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asn Asn 1420 1425 1430 1435 GGG CCC CAG GCC TCT GGA CGA CTG GGC CCC ACA CGG GAG AGG GGT GGC 4550 * Gly Pro Gin Ala Ser Gly Arg Leu Gly Pro Thr Arg Glu Arg Gly Gly 1440 1445 1450 CTC CCC GTA ATT GAG GGC CCC AGG ACT GGA CTA GAG GCT AGC GGG AGA 4598 Leu Pro Val Ile Glu Gly Pro Arg Thr Gly Leu Glu Ala Ser Gly Arg 1455 1460 1465 GGC CGG CTG GGC CCT TCC CGG AGG TGC TCC CGT GGC CGG GCG CTG GAG 4646 Gly Arg Leu Gly Pro Ser Arg Arg Cys Ser Arg Gly Arg Ala Leu Glu 1470 1475 1480 CCT GGC CTG GCC AGC TGC CTT TCC CCC AAG TGC TTG GAA ATC AGC ATT 4694 Pro Gly Leu Ala Ser Cys Leu Ser Pro Lys Cys Leu Glu Ile Ser Ile 1485 1490 1495 GAA TAT GAT TCG GAG GAT GAG CAG GAG GCG GGC AGC GGG GGC ATC AGC 4742 Glu Tyr Asp Ser Glu Asp Glu Gln Glu Ala Gly Ser Gly Gly Ile Ser 1500 1505 1510 1515 ATC ACC AGC TCC TGC TAC CCT GGA GAT AGG GAG GCC TGG GGC ACA GCA 4790 Ile Thr Ser Ser Cys Tyr Pro Gly Asp Arg Glu Ala Trp Gly Thr Ala 1520 1525 1530 ACT GTA GGA AGG CCC AGG GGG CCT CCG AAG GCC AAT TCA GGC CCC AAG 4838 Thr Val Gly Arg Pro Arg Gly Pro Pro Lys Ala Asn Ser Gly Pro Lys 1535 1540 1545 CCC TAC CCA CGC CTC CCA GCC TGG GAG AAA GGG GAA CCA GAG CGG AGA 4886 Pro Tyr Pro Arg Leu Pro Ala Trp Glu Lys Gly Glu Pro Glu Arg Arg 1550 1555 1560 GGC CGC AGT GCG ACG GGC AGA GCC AAG GAG CCA CTC TCC CGG GCA ACA 4934 Gly Arg Ser Ala Thr Gly Arg Ala Lys Glu Pro Leu Ser Arg Ala Thr 1565 1570 1575 GAG ACC GGA GAG GCC AGA GGG CAG GAC GGC TCT GGG CGG AGG GGC CCC 4982 Glu Thr Gly Glu Ala Arg Gly Gln Asp Gly Ser Gly Arg Arg Gly Pro 1580 1585 1590 1595 CAG AAG AGA GGT GTC CGA GTC CTC AGG CCA AGC ACT GCA GAG CTA GTC 5030 Gln Lys Arg Gly Val Arg Val Leu Arg Pro Ser Thr Ala Glu Leu Val 1600 1605 1610 CCT GCG AGG AGC CCC TCA GAA ACA CTG GCT TAC CAG CAC CTA CCC GTC 5078 Pro Ala Arg Ser Pro Ser Glu Thr Leu Ala Tyr Gln His Leu Pro Val 1615 1620 1625 AGG ATC TTT GTG GCT CTG TTT GAC TAT GAC CCC GTG TCA ATG TCG CCC 5126 Arg Ile Phe Val Ala Leu Phe Asp Tyr Asp Pro Val Ser Met Ser Pro 1630 1635 1640 AAT CCT GAT GCT GGA GAA GAA GAG CTT CCC TTC CGA GAG GGT CAG ATC 5174 Asn Pro Asp Ala Gly Glu Glu Glu Leu Pro Phe Arg Glu Gly Gln Ile 1645 1650 1655 CTG AAG GTG TTT GGG GAC AAG GAT GCC GAT GGC TTC TAC CAG GGC GAA 5222 Leu Lys Val Phe Gly Asp Lys Asp Ala Asp Gly Phe Tyr Gln Gly Glu 1660 1665 1670 1675 GGT GGG GGC CGG ACA GGC TAC ATT CCC TGC AAC ATG GTG GCT GAG GTG 5270 Gly Gly Gly Arg Thr Gly Tyr Ile Pro Cys Asn Met Val Ala Glu Val 1680 1685 1690 GCT GTG GAC AGC CCT GCT GGG AGA CAG CAA CTG CTC CAG CGG GGT TAT 5318 Ala Val Asp Ser Pro Ala Gly Arg Gln Gln Leu Leu Gln Arg Gly Tyr 1695 1700 1705 TTG TCC CCA GAT ATT CTC CTT GAG GGC TCA GGG AAT GGT CCG TTT GTG 5366 Leu Ser Pro Asp Ile Leu Leu Glu Gly Ser Gly Asn Gly Pro Phe Val 1710 1715 1720 TAC TCC ACA GCC CAC ACA ACT GGG CCT CCT CCC AAG CCC CGC CGC TCC 5414 Tyr Ser Thr Ala His Thr Thr Gly Pro Pro Pro Lys Pro Arg Arg Ser 1725 1730 1735 AAG AAA GCT GAG TCG GAA GGC CCT GCC CAG CCC TGT CCA GGC CCC CCT 5462 Lys Lys Ala Glu Ser Glu Gly Pro Ala Gln Pro Cys Pro Gly Pro Pro 1740 1745 1750 1755 AAG CTG GTC CCC TCT GCT GAC CTG AAA GCT CCC CAC TCC ATG GTG GCT 5510 Lys Leu Val Pro Ser Ala Asp Leu Lys Ala Pro His Ser Met Val Ala 1760 1765 1770 GCA TTT GAC TAC AAC CCC CAG GAG AGT TCC CCC AAT ATG GAC GTG GAG 5558 Ala Phe Asp Tyr Asn Pro Gln Glu Ser Ser Pro Asn Met Asp Val Glu 1775 1780 1785 GCA GAG CTG CCC TTC CGG GCA GGG GAT GTC ATT ACT GTG TTT GGG GGC 5606 Ala Glu Leu Pro Phe Arg Ala Gly Asp Val Ile Thr Val Phe Gly Gly 1790 1795 1800 ACG GAC GAT GAC GGT TTC TAC TAT GGG GAA TTA AAT GGA CAA AGG GGC 5654 Thr Asp Asp Asp Gly Phe Tyr Tyr Gly Glu Leu Asn Gly Gln Arg Gly 1805 1810 1815 CTG GTT CCA TCC AAC TTC CTG GAG GGC CCT GGG CCT GAG GCA GGC GGC 5702 Leu Val Pro Ser Asn Phe Leu Glu Gly Pro Gly Pro Glu Ala Gly Gly 1820 1825 1830 1835 CTG GAC AGG GAA CCC AGG ACA CCC CAG GCT GAG AGT CAG AGA ACG AGG 5750 Leu Asp Arg Glu Pro Arg Thr Pro Gln Ala Glu Ser Gln Arg Thr Arg 1840 1845 1850 AGG AGA AGA GTC CAG TGC TAGATGGAGA TAGATATATG TAGAGAGAGC 5798 Arg Arg Arg Val Gln Cys AACATGACTG GGGCTGCACC ACACAAGGGT CCCCAGGGCC CCCAGGTGGG CCTTGTACCC 5858 CCAGCTCTGG CAGCGCCCCC AGGATTGAAC GTGGGGAGCC CCAGGGCAGA AGCGAGAAGG 5918 TGTGGGTTTT TTTCCAAGGG GAAGCAGCTC CTCAGGAGGA TGGGCTCTGG GAAGAAGGAG 5978 TGAAGCTGTG GCCCATCCTG CAGGCAGAAG AGGCCCTGAG AGGCCCCCAG ATCACTGTTT 6038 TTGCTGAGCA GGGAAGGCTC AGAATGGGCC CAGAGCCCCC GTTCTTTTGC GTTAACACTG 6098 TGGCATTCAG AGGGAATCAA AGAGCCTTGG TGAAGGTCAG AGCTAAATGG CTCCTTAAGG 6158 ATGAACTTTT TAGAGAAGCA CCTTCCTCCT ACAGGAGGGG AAACTGAGCC CACAGTGAGT 6218 ATGTAACTTG ACCAAGGTCA CTGAGCCAGG ACTGGACCCA GGACCCTCGC GTCCTGGTCC 6278 ACCCACCTCG TCTACTAGTG TCCCACAGTG CTGCGCTAGT CCCTTTTGCC ACCCTTCCCA 6338 GTCCCAGGAC GGGCCCTGGA GGGAGAAAGG AGCCTGTGCC CCCTGATGGC TCTGGCTGTC 6398 CTGATCCTGT CTTCCCTCCC CTGAAGGAAA GTTTGCACTG GATTTTATTG GAGCCCCATC 6458 TCCCCAGCGG GCAGGCGGGC GGAGCCTGTA TATATGTATA TACTCAGTGC CTCAGTTCAG 6518 CTTCCTCCAC CTCGCTTCCA CTGCACAGGC CCAGGAAGGA GAAAGGCCAA GCCAAAGTGG 6578 GCCCCACCCT GCCCCCGTCG TGCTCCATCC TTCCCTGCCG GGGCCTGCTG GCCCCTGTAA 6638 GGTCCCGCCC CCAAAGACCC TGGGGCCAGC GGGGCCGAAA GCGGAGTTGG GTTTGCTTAT 6698 TTTGCTCATT GGATTCAAGT TCTTTTGCAT AGTTTTTTTC TAACCCCTGT TGGAGTCCAG 6758 GGGCTGGAGA AAAGGACAGA TTTATGCAGC TATTTTCATA CATTCCCTGT TCAGAGTGGG 6818 GTAGGGGTTT TCCGCCGTTA CCCGATCCAA TCCATCCCCC ACCCTTTGAG GGGTGAGTGT 6878 GTCTTTGCAT GTTTCCTTTG CTGTGGTGGG AGATAGTTTG ACTGAACCCC CACCTTGACC 6938 TTGGTCTCCA GGGGTGTGGA ATGGTGGGGG AATTTGTTTA AAAAGACATT TTATTATAAT 6998 AAAGTCTATT TTCACAAAAA AAAAAAAAAA AAAAA 7033 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1857 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2: Met Glu Gln Leu Thr Thr Leu Pro Arg Pro Gly Asp Leu Gly Ala Met 1 5 10 15 Glu Pro Trp Ala Leu Pro Thr Trp His Ser Trp Thr Pro Gly Arg Gly 25 30 Gly Glu Pro Ser Ser Ala Ala Pro Ser Ile Ala Asp Thr Pro Pro Ala 40 45 Ala Leu Gin Leu Gln Glu Leu Arg Ser Glu Glu Ser Ser Lys Pro Lys 55 60 Gly His Gly Ser Ser Arg Pro Val Gly Gly Thr Asp Pro Glu Gly Ala 70 75 80 Gln Ala Cys Leu Pro Ser Leu Gly Gln Gln Ala Ser Ser Ser Gly Pro 90 95 Ala Cys Gln Arg Pro Glu Asp Glu Glu Val Glu Ala Phe Leu Lys Ala 105 110 Lys Leu Asn Met Ser Phe Gly Asp Arg Pro Asn Leu Glu Leu Leu Arg 120 125 Ala Leu Gly Glu Leu Arg Gln Arg Cys Ala Ile Leu Lys Glu Glu Asn 135 140 Gln Met Leu Arg Lys Ser Ser Phe Pro Glu Thr Glu Glu Lys Val Arg 150 155 160 Arg Leu Lys Arg Lys Asn Ala Glu Leu Ala Val Ile Ala Lys Arg Leu 170 175 Glu Glu Arg Ala Arg Lys Leu Gln Glu Thr Asn Leu Arg Val Val Ser 185 190 Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Thr Ser Leu Glu Leu Cys Arg Lys Ala 200 205 Leu Ala Arg Gln Arg Ala Arg Asp Leu Ser Glu Thr Ala Ser Ala Leu 210 215 220 Leu Ala Lys Asp Lys Gln Ile Ala Ala Leu Gln Arg Glu Cys Arg Glu 225 230 235 240 Leu Gln Ala Arg Leu Thr Leu Val Gly Lys Glu Gly Pro Gln Trp Leu 245 250 255 His Val Arg Asp Phe Asp Arg Leu Leu Arg Glu Ser Gin Arg Glu Val 260 265 270 Leu Arg Leu Gln Arg Gin Ile Ala Leu Arg Asn Gln Arg Glu Thr Leu 275 280 285 Pro Leu Pro Pro Ser Trp Pro Pro Gly Pro Ala Leu Gin Ala Arg Ala 290 295 300 Gly Ala Pro Ala Pro Gly Ala Pro Gly Glu Ala Thr Pro Gln Glu Asp 305 310 315 320 Ala Asp Asn Leu Pro Val Ile Leu Gly Glu Pro Glu Lys Glu Gin Arg 325 330 335 Val Gln Gln Leu Glu Ser Glu Leu Ser Lys Lys Arg Lys Lys Cys Glu 340 345 350 Ser Leu Glu Gln Glu Ala Arg Lys Lys Gln Arg Gln Cys Glu Glu Leu 355 360 365 Glu Leu Gln Leu Arg Gln Ala Gln Asn Glu Asn Ala Arg Leu Val Glu 370 375 380 Glu Asn Ser Arg Leu Ser Gly Arg Ala Thr Glu Lys Glu Gln Val Glu 385 390 395 400 Trp Glu Asn Ala Glu Leu Arg Gly Gln Leu Leu Gly Val Thr Gln Glu 405 410 415 Arg Asp Ser Ala Leu Arg Lys Ser Gln Gly Leu Gln Ser Lys Leu Glu 420 425 430 Ser Leu Glu Gln Val Leu Lys His Met Arg Glu Val Ala Gln Arg Arg 435 440 445 Gln Gln Leu Glu Val Glu His Glu Gln Ala Arg Leu Ser Leu Arg Glu 450 455 460 Lys Gln Glu Glu Val Arg Arg Leu Gln Gln Ala Gln Ala Glu Ala Gln 465 470 475 480 Arg Glu His Glu Gly Ala Val Gln Leu Leu Glu Ser Thr Leu Asp Ser 485 490 495 Met Gln Ala Arg Val Arg Glu Leu Glu Glu Gln Cys Arg Ser Gln Thr 500 505 510 Glu Gln Phe Ser Leu Leu Ala Gln Glu Leu Gln Ala Phe Arg Leu His 515 520 525 Pro Gly Pro Leu Asp Leu Leu Thr Ser Ala Leu Asp Cys Gly Ser Leu 530 535 540 Gly Asp Cys Pro Pro Pro Pro Cys Cys Cys Ser Ile Pro Gln Pro Cys 545 550 555 560 Arg Gly Ser Gly Pro Lys Asp Leu Asp Leu Pro Pro Gly Ser Pro Gly 565 570 575 Arg Cys Thr Pro Lys Ser Ser Glu Pro Ala Pro Ala Thr Leu Thr Gly 580 585 590 Val Pro Arg Arg Thr Ala Lys Lys Ala Glu Ser Leu Ser Asn Ser Ser 595 600 605 His Ser Glu Ser Ile His Asn Ser Pro Lys Ser Cys Pro Thr Pro Glu 610 615 620 Val Asp Thr Ala Ser Glu Val Glu Glu Leu Glu Ala Asp Ser Val Ser 625 630 635 640 Leu Leu Pro Ala Ala Pro Glu Gly Ser Arg Gly Gly Ala Arg Ile Gln 645 650 655 Val Phe Leu Ala Arg Tyr Ser Tyr Asn Pro Phe Glu Gly Pro Asn Glu 660 665 670 Asn Pro Glu Ala Glu Leu Pro Leu Thr Ala Gly Glu Tyr Ile Tyr Ile 675 680 685 Tyr Gly Asn Met Asp Glu Asp Gly Phe Phe Glu Gly Glu Leu Met Asp 690 695 700 Gly Arg Arg Gly Leu Val Pro Ser Asn Phe Val Glu Arg Val Ser Asp 705 710 715 720 Asp Asp Leu Leu Thr Ser Leu Pro Pro Glu Leu Ala Asp Leu Ser His 725 730 735 Ser Ser Gly Pro Glu Leu Ser Phe Leu Ser Val Gly Gly Gly Gly Ser 740 745 750 Ser Ser Gly Gly Gln Ser Ser Val Arg Arg Ser Gln Pro Arg Pro Glu 755 760 765 Glu Glu Asp Ala Gly Asp Glu Leu Ser Leu Ser Pro Ser Pro Glu Gly 770 775 780 Leu Gly Glu Pro Pro Ala Val Pro Tyr Pro Arg Arg Leu Val Val Leu 785 790 795 800 Lys Gln Leu Ala His Ser Val Val Leu Ala Trp Glu Pro Pro Pro Glu 805 810 815 Gln Val Glu Leu His Gly Phe His Ile Cys Val Asn Gly Glu Leu Arg 820 825 830 Gln Ala Leu Gly Pro Gly Ala Pro Pro Lys Ala Val Leu Glu Asn Leu 835 840 845 Asp Leu Trp Ala Gly Pro Leu His Ile Ser Val Gin Ala Leu Thr Ser 850 855 860 Arg Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Cys Cys Leu Ala Val Gly Ala Arg 865 870 875 880 Ala Gly Val Val Pro Ser Gln Leu Arg Val His Arg Leu Thr Ala Thr 885 890 895 Ser Ala Glu Ile Thr Trp Val Pro Gly Asn Ser Asn Leu Ala His Ala 900 905 910 Ile Tyr Leu Asn Gly Glu Glu Cys Pro Pro Ala Ser Pro Ser Thr Tyr 915 920 925 Trp Ala Thr Phe Cys His Leu Arg Pro Gly Thr Pro Tyr Gln Ala Gln 930 935 940 Val Glu Ala Gln Leu Pro Pro Gln Gly Pro Trp Glu Pro Gly Trp Glu 945 950 955 960 Arg Leu Glu Gln Arg Ala Ala Thr Leu Gln Phe Thr Thr Leu Pro Ala 965 970 975 Gly Pro Pro Asp Ala Pro Leu Asp Val Gln Ile Glu Pro Gly Pro Ser 980 985 990 Pro Gly Ile Leu Ile Ile Ser Trp Leu Pro Val Thr Ile Asp Ala Ala 995 1000 1005 Gly Thr Ser Asn Gly Val Arg Val Thr Gly Tyr Ala Ile Tyr Ala Asp 1010 1015 1020 Gly Gln Lys Ile Met Glu Val Ala Ser Pro Thr Ala Gly Ser Val Leu 1025 1030 1035 1040 Val Glu Leu Ser Gln Leu Gln Leu Leu Gln Val Cys Arg Glu Val Val 1045 1050 1055 Val Arg Thr Met Ser Pro His Gly Glu Ser Ala Asp Ser Ile Pro Ala 1060 1065 1070 Pro Ile Thr Pro Ala Leu Ala Pro Ala Ser Leu Pro Ala Arg Val Ser 1075 1080 1085 Cys Pro Ser Pro His Pro Ser Pro Glu Ala Arg Ala Pro Leu Ala Ser 1090 1095 1100 Ala Ser Pro Gly Pro Gly Asp Pro Ser Ser Pro Leu Gin His Pro Ala 1105 1110 1115 1120 Pro Leu Gly Thr Gln Glu Pro Pro Gly Ala Pro Pro Ala Ser Pro Ser 1125 1130 1135 Arg Glu Met Ala Lys Gly Ser His Glu Asp Pro Pro Ala Pro Cys Ser 1140 1145 1150 * Gln Glu Glu Ala Gly Ala Ala Val Leu Gly Thr Ser Glu Glu Arg Thr 1155 1160 1165 Ala Ser Thr Ser Thr Leu Gly Glu Lys Asp Pro Gly Pro Ala Ala Pro 1170 1175 1180 Ser Leu Ala Lys Gln Glu Ala Glu Trp Thr Ala Gly Glu Ala Cys Pro 1185 1190 1195 1200 Ala Ser Ser Ser Thr Gln Gly Ala Arg Ala Gln Gln Ala Pro Asn Thr 1205 1210 1215 Glu Met Cys Gln Gly Gly Asp Pro Gly Ser Gly Leu Arg Pro Arg Ala 1220 1225 1230 Glu Lys Glu Asp Thr Ala Glu Leu Gly Val His Leu Val Asn Ser Leu 1235 1240 1245 Val Asp His Gly Arg Asn Ser Asp Leu Ser Asp Ile Gln Glu Glu Glu 1250 1255 1260 Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gly Ser Arg Thr Cys 1265 1270 1275 1280 Ser Phe Gln Lys Gln Val Ala Gly Asn Ser Ile Arg Glu Asn Gly Ala 1285 1290 1295 Lys Ser Gln Pro Asp Pro Phe Cys Glu Thr Asp Ser Asp Glu Glu Ile 1300 1305 1310 Leu Glu Gln Ile Leu Glu Leu Pro Leu Gln Gln Phe Cys Ser Lys Lys 1315 1320 1325 Leu Phe Ser Ile Pro Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu 1330 1335 1340 Glu Glu Lys Ser Gly Ala Gly Cys Ser Ser Arg Asp Pro Gly Pro Pro 1345 1350 1355 1360 Glu Pro Ala Leu Leu Gly Leu Gly Cys Asp Ser Gly Gln Pro Arg Arg 1365 1370 1375 Pro Gly Gln Cys Pro Leu Ser Pro Glu Ser Ser Arg Ala Gly Asp Cys 1380 1385 1390 Leu Glu Asp Met Pro Gly Leu Val Gly Gly Ser Ser Arg Arg Arg Gly 1395 1400 1405 Gly Gly Ser Pro Glu Lys Pro Pro Ser Arg Arg Arg Pro Pro Asp Pro 1410 1415 1420 Arg Glu His Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asn Asn Gly Pro Gin Ala Ser 1425 1430 1435 1440 Gly Arg Leu Gly Pro Thr Arg Glu Arg Gly Gly Leu Pro Val Ile Glu 1445 1450 1455 Gly Pro Arg Thr Gly Leu Glu Ala Ser Gly Arg Gly Arg Leu Gly Pro 1460 1465 1470 Ser Arg Arg Cys Ser Arg Gly Arg Ala Leu Glu Pro Gly Leu Ala Ser 1475 1480 1485 Cys Leu Ser Pro Lys Cys Leu Glu Ile Ser Ile Glu Tyr Asp Ser Glu 1490 1495 1500 Asp Glu Gln Glu Ala Gly Ser Gly Gly Ile Ser Ile Thr Ser Ser Cys 1505 1510 1515 1520 Tyr Pro Gly Asp Arg Glu Ala Trp Gly Thr Ala Thr Val Gly Arg Pro 1525 1530 1535 Arg Gly Pro Pro Lys Ala Asn Ser Gly Pro Lys Pro Tyr Pro Arg Leu 1540 1545 1550 Pro Ala Trp Glu Lys Gly Glu Pro Glu Arg Arg Gly Arg Ser Ala Thr 1555 1560 1565 Gly Arg Ala Lys Glu Pro Leu Ser Arg Ala Thr Glu Thr Gly Glu Ala 1570 1575 1580 Arg Gly Gln Asp Gly Ser Gly Arg Arg Gly Pro Gln Lys Arg Gly Val 1585 1590 1595 1600 Arg Val Leu Arg Pro Ser Thr Ala Glu Leu Val Pro Ala Arg Ser Pro 1605 1610 1615 Ser Glu Thr Leu Ala Tyr Gln His Leu Pro Val Arg Ile Phe Val Ala 1620 1625 1630 Leu Phe Asp Tyr Asp Pro Val Ser Met Ser Pro Asn Pro Asp Ala Gly 1635 1640 1645 Glu Glu Glu Leu Pro Phe Arg Glu Gly Gln Ile Leu Lys Val Phe Gly 1650 1655 1660 Asp Lys Asp Ala Asp Gly Phe Tyr Gln Gly Glu Gly Gly Gly Arg Thr 1665 1670 1675 1680 Gly Tyr Ile Pro Cys Asn Met Val Ala Glu Val Ala Val Asp Ser Pro 1685 1690 1695 Ala Gly Arg Gln Gln Leu Leu Gln Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Ile 1700 1705 1710 Leu Leu Glu Gly Ser Gly Asn Gly Pro Phe Val Tyr Ser Thr Ala His 1715 1720 1725 Thr Thr Gly Pro Pro Pro Lys Pro Arg Arg Ser Lys Lys Ala Glu Ser 1730 1735 1740 Glu Gly Pro Ala Gln Pro Cys Pro Gly Pro Pro Lys Leu Val Pro Ser 1745 1750 1755 1760 Ala Asp Leu Lys Ala Pro His Ser Met Val Ala Ala Phe Asp Tyr Asn 1765 1770 1775 Pro Gln Glu Ser Ser Pro Asn Met Asp Val Glu Ala Glu Leu Pro Phe 1780 1785 1790 Arg Ala Gly Asp Val Ile Thr Val Phe Gly Gly Thr Asp Asp Asp Gly 1795 1800 1805 Phe Tyr Tyr Gly Glu Leu Asn Gly Gln Arg Gly Leu Val Pro Ser Asn 1810 1815 1820 Phe Leu Glu Gly Pro Gly Pro Glu Ala Gly Gly Leu Asp Arg Glu Pro 1825 1830 1835 1840 Arg Thr Pro Gln Ala Glu Ser Gln Arg Thr Arg Arg Arg Arg Val Gln 1845 1850 1855 Cys REVENDICATIONS 1. Polypeptide purifié, comprenant une séquence d'acides aminés choisie parmi: a) la séquence SEQ ID n 2; b) une séquence biologiquement active dérivée de SEQ ID n 2; et c) un fragment de la séquence SEQ ID n 2 ayant une activité biologique de même nature que celle du polypeptide de séquence SEQ ID n 2, ou immunologiquement apparenté au polypeptide de séquence SEQ ID n 2. 2. Polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend la séquence comprise entre: le résidu 1564 et le résidu 1857 de SEQ ID n 2. 3. Polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il résulte d'un épissage alternatif de l'ARN messager du gène correspondant. 4. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un polypeptide recombinant produit sous la forme d'une protéine de fusion. 5. Séquence d'acides nucléiques isolée codant pour un polypeptide selon l'une quelconque des revendications précédentes. 6. Séquence d'acides nucléiques isolée selon la revendication , caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi: a) la séquence SEQ ID n 1; b) la séquence complémentaire de la séquence SEQ ID n 1; c) les séquences d'acides nucléiques capables de s'hybrider spécifiquement à la séquence SEQ ID n 1, ou à leurs séquences complémentaires, ou de s'hybrider spécifiquement à leurs séquences proximales. d) les séquences dérivées des séquences a), b) et c), du fait de la dégénérescence du code génétique, de mutation, de délétion, d'insertion, d'un épissage alternatif ou d'une variabilité allélique. 7. Vecteur de clonage et/ou d'expression contenant une séquence d'acides nucléiques selon l'une quelconque des revendications 5 et 6. 8. Vecteur selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il s'agit du plasmide pZeoSV2+. 9. Cellule hôte transfectée par un vecteur selon la revendication 7 ou 8. 10. Cellule hôte transfectée selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'il s'agit de E. coi MC 1061. 11. Séquence nucléotidique utilisable comme sonde ou amorce caractérisée en ce qu'elle s'hybride spécifiquement avec l'une quelconque des séquences selon les revendications 5 et 6 ou leurs séquences complémentaires ou les ARN messagers correspondants ou les gènes correspondants. 12. Séquence nucléotidique selon la revendication 11 utilisable comme sonde ou amorce, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins 16 nucléotides. 13. Séquence nucléotidique selon la revendication 12 utilisable comme sonde, caractérisée en ce qu'elle comprend l'intégralité de la séquence du gène codant pour l'un des polypeptides de la revendication 1. 14. Sonde ou amorce nucléotidique choisie parmi les oligonucléotides suivants ou leurs complémentaires: SEQ ID n 3: GCT CTG TTT GAC TAT GAC CC SEQ IDn 4: AACTTG AATCCAATGAGC AA SEQ ID n 5: TCT GCT GAC CTG AAA GCT CC SEQ ID n 6: CCA TCA GGG GGC ACA GGC TC SEQ ID n 7:TGG GCCTTGTAC CCC CAG CT SEQ ID n 8: TCC TCC TGA GGA GCT GCT TC SEQ ID n 9: CCC CTG CCC GGAAGG GCA GC SEQ ID n 10: TTG ACC AAG GTC ACT GAG CC SEQ ID n 11: GGG CCT GCT GGC CCC TGT AA SEQ ID n 12: GCC ATC GGC ATC CTT GTC CC SEQ ID n 13: CCT CTC CGG TCT CTG TTG CCC G SEQ ID n 14: AGG CCC AGG GGG CCT CCG MAAG GC SEQ ID n 15: CGC TGC CCG CCT CCT GCT CAT CCT C SEQ ID n 16: TCC TCC AGG GCT GGA GAC TGC CT SEQ ID n 17: GGT TCC AGG ACT TGC TCC TTC CAG AAMG SEQ ID n 18: CAG CTC CCT CAC TGG CCAAG SEQ ID n 19: TGG CTC CGG CCA GCC TGC C SEQ ID n 20: TCC GGG TCA CAG GCT ATG CCA T SEQ ID n 21: CC CAG TAC CTA CTG GGC CAC CT SEQ ID n 22: GCT TCC ATA TCT GTG TGA ATG GG SEQ ID n 23: GGT MAAG GCA CGG CAG GAG GCT C SEQ ID n 24: GCT GGC TCC C TC TCA CAC TG SEQ ID n 25: GGA GAG CTC ATG GAT GGC CGA AG SEQ ID n 26: CCA GTG AGG TAG AGG AGC TGG SEQ ID n 27: TCC ATT CCC CAG CCT TGC CGG GG SEQ ID n 28: GCT CGA AGA ACA GTG CCG CAG CC SEQ ID n 29: TCG CMAA GAG CCA GGG CCT GCA GA SEQ ID n 30: GCT GGA ATC GGA GOT CAG CMAA G SEQ ID n 31: CCC GTG ATT CTA GGG GAG CCA GAG SEQ ID n 32: GAG TGC AGG GAG CTG CAG GCC A SEQ ID n 33: GGC TGA AGC GGA AGA ACG CCG AG SEQ ID n 34: CMAA TCT GGA GCT GCT GAG GG SEQ ID n 35: TGA GGT CTG AGG AGA GTT CCA AG SEQ ID n 36: ATG GAG CCA TGG GCA CTG CCC 15. Utilisation d'une séquence selon l'une quelconque des revendications 5 et 6 pour la fabrication d'amorces oligonucléotidiques pour des réactions de séquenç,age ou d'amplification spécifique selon la technique de PCR ou toute variante de celle-ci. 16. Couples d'amorces nucléotidiques choisies parmi les séquences suivantes: - couple n 1 amorce sens: GCT CTG TTT GAC TAT GAC CC (SEQ ID n 3) amorce antisens: MAAC TTG AAT CCA ATG AGC AA (SEQ ID n 4) - couple n 2: amorce sens: TCT GCT GAC CTG AAA GCT CC (SEQ ID n 5) amorce antisens: TCC TCC TGA GGA GCT GCT TC (SEQ ID n 8) - couple n 3: amorce sens: TTG ACC AAG GTC ACT GAG CC (SEQ ID n 1 0) amorce antisens: AAC TTG AAT CCA ATG AGC MAA (SEQ ID n 4) - couple n 4: amorce sens: GCT CTG TTT GAC TAT GAC CC (SEQ ID n 3) amorce antisens: GCC ATC GGC ATC CTT GTC CC (SEQ ID n 12) - couple n 5: amorce sens: GCT CTG TTT GAC TAT GAC CC (SEQ ID n 3) amorce antisens: TCC TCC TGA GGA GCT GCT TC (SEQ ID n 8) 17. Utilisation d'une séquence selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, pour la fabrication d'un médicament utilisable en thérapie génique. 18. Utilisation d'une séquence selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, pour la réalisation de sondes ou d'amorces nucléotidiques de diagnostic, ou de séquences antisens utilisables pour la fabrication d'un médicament utilisable en thérapie génique. 19. Utilisation d'amorces nucléotidiques selon l'une quelconque des revendications 11 et 12 pour le séquençage. 20. Utilisation d'une sonde ou amorce selon l'une quelconque des revendications 11 à 16, comme outil de diagnostic in vitro pour la détection, par des procédures d'hybridation, de séquences d'acides nucléiques codant pour un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans des échantillons biologiques, ou pour la mise en évidence de synthèses aberrantes ou d'anomalies génétiques. 21. Méthode de diagnostic in vitro pour la détection de synthèses aberrantes ou d'anomalies génétiques au niveau des séquences d'acides nucléiques codant pour un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle comprend: - la mise en contact d'une sonde nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 11 à 16 avec un échantillon biologique dans des conditions permettant la formation d'un complexe d'hybridation entre ladite sonde et ladite séquence nucléotidique, éventuellement après une étape préalable d'amplification de ladite séquence nucléotidique; - la détection du complexe d'hybridation éventuellement formé; éventuellement, séquenç,age de la séquence nucléotidique formant le complexe d'hybridation avec la sonde de l'invention. 22. Utilisation d'une séquence d'acides nucléiques selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, pour la production d'un polypeptide recombinant selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 23. Méthode de production d'une protéine recombinante PRAX-1 ou fragment ou dérivé biologiquement actif de celle-ci ou fragment immunologiquement apparenté à celle-ci, caractérisée en ce que l'on cultive des cellules transfectées selon la revendication 9 ou 10 dans des conditions permettant l'expression d'un polypeptide recombinant de séquence SEQ ID n 2 ou fragment ou dérivé biologiquement actif de celui- ci, et que l'on récupère ledit polypeptide recombinant. 24. Anticorps mono ou polyclonaux ou leurs fragments, anticorps chimériques ou immunoconjugués, caractérisés en ce qu'ils sont spécifiquement dirigés contre un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 25. Utilisation des anticorps selon la revendication précédente, pour la purification ou la détection d'un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans un échantillon biologique. 26. Procédé de diagnostic in vitro de pathologies corrélées à une expression ou une accumulation anormale de protéines PRAX-1, à partir d'un prélèvement biologique, caractérisé en ce que l'on met en contact au moins un anticorps selon la revendication 24 avec ledit prélèvement biologique, dans des conditions permettant la formation de complexes immunologiques spécifiques entre une protéine PRAX-1 et le ou lesdits anticorps et en ce que l'on détecte les complexes immunologiques spécifiques éventuellement formés. 27. Kit pour le diagnostic in vitro d'une expression ou une accumulation anormale de protéines PRAX-1 dans un prélèvement biologique et/ou pour la mesure du taux d'expression de celles-ci dans ledit prélèvement comprenant: - au moins un anticorps selon la revendication 24, éventuellement fixé sur un support, - des moyens de révélation de la formation de complexes antigènes/anticorps spécifiques entre une protéine PRAX-1 et ledit anticorps et/ou des moyens de quantification de ces complexes. 28. Méthode de détermination d'une variabilité allélique, d'une mutation, d'une délétion, d'une insertion, d'une perte d'hétérozygotie ou d'une anomalie génétique du gène PRAX-1 caractérisée en ce qu'elle met en oeuvre au moins un nucléotide ayant une séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 5 ou 6. 29. Composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 30. Composition pharmaceutique selon la revendication précédente, caractérisée en ce qu'elle comprend un polypeptide selon la revendication 2. 31. Composition pharmaceutique contenant un inhibiteur ou un activateur de l'activité du PRAX-1 et de toute interaction protéine- protéine faisant intervenir PRAX-1. 32. Composition pharmaceutique contenant un polypeptide dérivé d'un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il est un inhibiteur ou un activateur du PRAX-1, ou de toute interaction protéine-protéine faisant intervenir PRAX-1.