Brevet FR2773487A1 — publié le 19990716

La présente invention concerne l'utilisation d'extraits bruts aqueux, hydroalcooliques et acétoniques de géraniums pour la préparation de médicaments analgésiques de type central non morphinique. L'invention concerne également l'utilisation de la géraniine ou de composés apparentés pour la préparation de médicaments analgésiques de type central non morphinique. Il est connu que la géraniine et ses dérivés présentent de nombreuses propriétés pharmacologiques. Ces propriétés comprennent par exemple l'inhibition d'enzymes telles que l'ADN-topoisomérase et la protéinekinase, une activité antitumorale, un effet sur la motilité intestinale et un effet sur la douleur. Miguel et al. dans Planta Med., 1996, 62(2), 146-149 montrent que la géraniine et la furosine, extraites à l'éthanol des feuilles et tiges de l'euphorbe Phyllanthus sellowianus, inhibent, chez la souris, la constriction abdominale induite par l'acide acétique, de sorte qu'elles sont utiles en tant qu'analgésique de type périphérique. Filho et al. dans J. Pharm. Pharmacol., 1996, 48: 1231-1236 montrent la même activité avec l'extrait hydroalcoolique de l'euphorbe Phyllantus caroliniensis. Récemment, Zhu et al. dans Phytochemistry, 1977, 44(3): 441-447 ont testé in vitro des composés phénoliques, dont la géraniine, pour leur capacité à inhiber la liaison de radioligands spécifiques à des récepteurs du système nerveux central tels que les récepteurs opiacés. Ils en déduisent que la géraniine a une faible affinité pour les récepteurs opiacés. D'autres récepteurs du système nerveux central semblent impliqués dans la régulation des phénomènes nociceptifs tels que le récepteur central de la nicotine. Un nouveau principe actif, le ABT-594, exerçant une activité analgésique centrale comparable à celle de la morphine, mais dénué des effets indésirables (constipation, dépression respiratoire, phénomènes de dépendance physique et de manque) observés avec cette molécule, a été développé par Bannon et al. (Science, 1998, 279: 77-81). La présente invention a donc pour objet l'utilisation d'extraits bruts aqueux, hydroalcooliques et acétoniques de géraniums pour la préparation de médicaments analgésiques de type central non morphinique. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation d'extraits bruts aqueux, hydroalcooliques et acétoniques de Geranium robert ou de Geranium thunbergii pour la préparation de médicaments analgésiques de type central non morphinique. Les extraits bruts selon l'invention peuvent être obtenus par infusion, macération ou décoction dans un solvant approprié. De tels procédés sont bien connus de l'homme du métier et sont décrits notamment dans la Pharmacopée Française et dans Journal of Chromatography, 1979, 171, 313. L'invention a également pour objet l'utilisation, pour la préparation de médicaments analgésiques de type central non morphinique, de la géraniine ou de composés apparentés. Ces composés répondent à la formule I ci-après: R1 CH2 R2 O-R5 (I) R. 03 0 R4 dans laquelle * R5 est l'hydrogène ou le groupement OR, -.CO OR5. OR5. R5, Rs. et R5., identiques ou différents, étant choisis indépendamment parmi l'hydrogène, les groupements alkylc en C1-C4 ct le groupement OH -CO - OH OH Ri et R2, ensemble, et R3 ct R4, ensemble, forment indépendamment un groupement choisi parmi: (A) R8 R10 R6 RR11 CO CO l I R6 à RI représentant indépendamment -OH, -O-(alkyle en C,-C4) ou -O-CO- (alkyle en C]-C4), (B) CO CO R19R12 R1 R17 15 14 R12 et Rl3 représentant indépendamment -OH, -O-(alkyle en C,-C4) ou -OCO- (alkyle en C]-C4), R,4 représentant -OH, R,6 et R,7 représentant indépendamment H ou -OH, ou bien R14 avec RI6 formant cnscmble -O- et R17 représentant H ou -OH, ou bien encore RI4 avec R17 formant ensemble - Oet R,6 représentant H ou -OH, R15 et RI8 représentant indépendamment -OH, -O-(alkyle en C,-C4), -CH2CO- (alkyle en C,-C4) ou -CH2-CO-phényle et RI9 représentant =O, et (C)I I CO CO R21 N R 23 R22 R2., et R2] représentant indépendammcnt -OH, -O-(alkyle en C,-C4) ou -OCO- (alkyle en C,-C4) R22 et R2. représentant indépendamment -OH ou -O(alkyle en C,-C4), ou bien R2 et R23 formant ensemble -O-, * ou bien R] et R2 forment ensemble un groupement choisi parmi (A), (B) et (C) et R3 et R4 représentent H, * ou bien R1 et R2 représentent H et R3 et R4 forment ensemble un groupement choisi parmi (A), (B) et (C). On entend par "alkyle en C,-C4" les groupes alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone tels que, par exemple, méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, isobutyle et t-butyle, le méthyle étant préféré. Les composés de formule I particulièrement préférés sont les composés de formule I dans laquelle les radicaux R. à R5 ont les significations données ci-après: Géraniine (forme (la) et forme (lb)): R5 représente OH -CO Q OH OH (motif appelé ensuite dans la description "motif Galloyle"), R. et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à Rj représentent -OH (motif appelé ensuite dans la description "motif HHDP") et R3 et R4 forment ensemble un groupement (B) o R12, R13, Rj5, R16 et Rs représentent -OH, R,9 représente =O et RI4 et R17 forment ensemble -O- (géraniine de forme (la)) ou bien o Rl2, R, 13 R5, R ?7 et R18 représentent -OH, Rj9 représente =O et R4 et R,6 forment ensemble -O-, géraniine de forme (lb) (motif appelé ensuite dans la description "motif DHHDP"); * Géraniine-phénazine B: Rs représente OH -...co -CO {ô:-OH OH oo OH RI et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à Rj représentent -OH, et R3 et R4 forment ensemble un groupement (C) o R20 à R23 représentent -OH; * Déshydrogéraniine: R5 représente OH -CO Q OH OH Ra et R2, ensemble, et R3 et R4, ensemble, forment un groupement (B) o R12, R,3, R,5, R16 et RI8 représentent -OH, R,9 représente =O et R,4 et R17 forment ensemble -O-; * Furosinine: R5 représente H, R. et R2, ensem et, et R3 et R4, ensemble, forment un groupement (B) o R12, R13, R15, R16 et R,8 représentent -OH, R19 représente =O et R., et R,7 forment ensemble -O-; * Furosine: R5 représente OH - CO Q OH OH R1 et R2 représcntent l'hydrogène et R3 et R4 forment ensemble un groupement (B) o R12, R13, Rls, R16 et R,8 représentent -OH, RI9 représente =O et R,4 et R,7 forment ensemble O- * Phyllanthusine D: R5 représente OH / -co --OH OH R, et R2 formcnt cnscmble un groupcmcnt (A) o R6 à R" représentent -OH et R3 et R4 forment ensemble un groupement (B) o R,2, R13, R15 et R17 représentent -OH, R18 représente -CH2-CO-CH3, R19 représente =O et R, 4 et R16 forment ensemble -O-; * Corilagine: R5 représente OH -CO Q OH OH RI et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à R" représentcnt -OH, et R3 et R4 représentent l'hydrogène; Galloyl-géraniine: R5 représente HO OH QOH CO O OH -CO O-CO Q OH OH OH RI et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à RI représentent -OH et R3 et R4 forment ensemble un groupement (B) o R12, R13, R,5, R16 et RI8 représentent -OH, R,9 représente =O et R,4 et R17 forment ensemble O- (galloyl-géraniine de forme (a)) ou bien o R12, R13, R15, R17 et R,8 représentent -OH, R,9 représente =O et R,4et R,6 forment ensemble-O-, (galloyl- géraniine de forme (b). Les composés de formule I peuvent être facilement obtenus par des procédés bien connus de l'homme du métier. Ils peuvent soit être obtenus directement par extraction/purification et isolement à partir de plantes, telles que celles de la famille du Geranium, du Phyllanthus, du Spondias, du Punica et du Cercidiphyllum, soit être obtenus par modifications chimiques des motifs DHHDP, HHDP et Galloyle de la géraniine ou des composés apparentés isolés à partir de plantes comme indiqué ci-dessus. Des exemples de composés de formule I qui sont isolés à partir de plantes sont indiqués ci-après. Ces composés ainsi que leur obtention sont décrits en détail dans l'art antérieur mentionné ci-après. * la géraniine isolée à partir de Geranium thunbergii (Journal of the Chemical Society Perkin Trans 1,1982, 9); * la déshydrogéraniine isolée à partir de Geranium thunbergii (Journal of the Chemical Society Perkin Trans 1,1989, 2289-2296); * la furosinine isolée à partir de Geranium thunbergii (Journal of the Chemical Society Perkin Trans 1,1989, 2289-2296); * la furosine isolée à partir de Geranium thunbergii (Journal of the Chemical Society Perkin Trans 1,1989, 2289-2296); * la phyllanthusine D (également appelée acétonyl-géraniine) isolée à partir de Phyllanthus amarus (Phytochemistry, 1992, 31(2), 711-713); * l'amariine isolée à partir de Phyllanthus amarus (Phytochemistry, 1993, 33(2), 487-491); * la galloyl-géraniine isolée à partir de Spondias mombin (Phytochemistry, 1991, (4), 1129-1130); * la granitine B isolée à partir de Punica granatum (Phytochemistry, 1985, 24(9), 2075-2078); et * la corilagine isolée à partir de Cercidiphyllum japonicum (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1989, 37, 50). Les autres composés de formule I peuvent être obtenus par modifications chimiques de l'un quelconque des motifs DHHDP, HHDP et Galloyle de l'un quelconque des composés de formule I cités ci-dessus. Ces modifications chimiques font appel à des procédés bien connus de l'homme du métier et sont décrites en détail dans les documents indiqués ci- après pour chaque modification. On rappelera que les motifs DHHDP, HHDP et Galloyle sont les motifs ayant les formules ci-après: Motif LDHHDE CO CO CO CO ^ ^ ^ ^H > OHO 6o /.\OH Motif HHDP HO OH HO OH 56 65 HO 4 / OH 3 2 2 3 GO CO I I Motif Galloyle OH CO 4OH OH A. Modifications chimiques de la structure du motif DHHDP A.1 Transformation du motif DHHDP en motif HHDP: Cette transformation peut être obtcnuc: - par hydrogénation catalytique du motif DHHDP sur le catalyseur Pd/C (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1990, 38, 861), par réduction du motif DHHDP en utilisant une solution aqueuse de Na2SO4 à % (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1990, 38, 1218) ou - par réduction du motif DHHDP cn utilisant une solution de dithionite de sodium dans le méthanol à 40% (Journal of the Chemical Society Perkin Trans 1, 1982, 9). A.2. Transformation du motif DHHDP en motifs de type phénazine A ou ph nazine B(Journal of the Chemical Society Perkin Trans 1,1989, 2289) Cette transformation permet d'obtcnir par exemple la géraniine-phénazine A et la géraniine-phénazine B à partir de la géraniine. A.3 Réaction de condensation du motif DHHDP avcc les composés de type cétonique: réaction de tvpe "acétonvlation" (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1992, 40, 2937) On peut notamment utiliser dans cette réaction l'acétone, l'acétophénone ou la pentanone-2. On notera par excmple que la phyllantusine D peut être obtenue par réaction de la géraniine avec l'acétone. A.4 Réaction de condensation du motif DHHDP avec les solvants de type alcoolique (tel que méthanol et éthanol): greffage d'un groupement alcoxy. tel que par exemple méthoxy ou éthoxy. cn positions 5 et 6 (Journal of Chromatography, 1988, 435,285). B. Hydrolyse du motif Gallovl sous l'action de la tannase Sous l'action de cette enzyme, il y a clivage spécifique du groupement "galloyl ester" lié au glucose (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1982, 30, 1113). On peut ainsi obtenir des composés de formule I dans laquelle R5 est l'hydrogène. C. Clivage du groupement DHHDP par hydrolyse en milieu aqueux La corilagine peut être obtenue à partir de la géraniine par hydrolyse drastique et prolongée en milieu aqueux (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1977, 25:1862). D. Alkvlation sur les groupements hydroxyle substituant les différents cycles aromatiques D.1 Méthylation des dérivés de type phénazine La méthylation exhaustive de la déshydrogéraniine-phénazine B n'induisant pas de modification de la structure des noyaux phénazine dans le solvant EtOH anhydre en présence d'un excès de diazométhane est décrite dans Journal of the Chemical Society Perkin Trans I, 1989, 2289. Différents exemples de méthylation de la géraniine-phénazine A aboutissant à différents types de structure sont décrits dans Journal of the Chemical Society Perkin Trans I, 1982, 9 (sous certaines conditions, il y a coupure d'une des liaisons ester entre le glucose et le noyau phénazine). Cctte publication décrit par exemple que la géraniine-phénazine B peut être méthylée totalement dans l'acétone anhydre en utilisant une solution dc diazométhane dans de l'éther séché préalablement sur des cristaux d'hydroxyde de potassium. D.2 Méthodes générales de méthvlation des composés polyphénoliques: application aux composés préscntant une similitude dc structure avec la géraniine (présence des motifs HHDP et Gallovyle simultanément) La méthylation des motifs HHDP et Galloyle de plusieurs composés polyphénoliques est largement décrite dans la littérature. Ainsi, la méthylation de la corilagine, sans méthylation des deux groupements hydroxyle libres fixés au glucose, dans le solvant MeOH et en présence de l'agent méthylant solution éthérée de diazométhane est décrite dans Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1977, 25, 1862. La méthylation de la corilagine et de la punicafoline dans le solvant acétone anhydre et en présence de l'agent méthylant Me2,SO4-K2CO3 anhydre (sous reflux) ou dans le solvant MeOH et en présence du réactif de méthylation diazométhane éthéré est décrite dans Phytochemistry, 1981, 24, 2075. La méthylation totale de la mallotusinine, sans ouverture ni rupture du cycle estérifiant le glucose dans sa partie basse, dans le solvant acétone anhydre et en présence de l'agent méthylant Me2SO4-K2CO3 anhydre (sous reflux) est décrite dans Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1989, 37, 2063. Et la méthylation de la cuspinine et la cercidinine A dans le solvant acétone anhydre et en présence de l'agent méthylant Me2SO4-K2CO3 anhydre (sous reflux) est décrite dans Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1989, 37, 50. Les procédés décrits ci-dessus sont des procédés de méthylation. En suivant les mêmes modes opératoires, l'homme du métier pourra aisément réaliser l'alkylation sur les groupements hydroxyle en faisant appel à ses connaissances techniques générales. E. Acétylation sur les groupemcnts hvdroxyle substituant les différents cycles aromatiques L'acétylation exhaustive de la géraniine-phénazine A ou B, indistinctivement, en présence des réactifs anhydridc acétique et solvant pyridine, conduisant dans les deux cas à une structure de type géraniine-phénazine B o tous les groupements hydroxyle sont acétylés (rupture du pont oxydique et réarrangement dans le cas de la géraniine-phénazine A) est décrite dans Journal of the Chemical Society Perkin Trans I, 1982, 9. Toutes ces modifications chimiques permettent d'obtenir tous les composés de formule I qui ne peuvent pas être obtenus directement par isolement à partir de plantes. On notera toutefois que certains composés peuvent êtres obtenus à la fois directement après isolement de plantes et après modifications chimiques des motifs DHHDP, HHDP et Galloyle de la géraniine ou des composés apparentés. On citera à titre d'exemple la phyllanthusine D et la corilagine. L'activité analgésique centrale non morphinique a été étudiée sur différents extraits de plantes et sur différents composés de formule I. Les extraits de plantes utilisés dans ces tests sont les extraits bruts aqueux et les extraits bruts acétoniques de Geranium robert. Les extraits aqueux sont préparés de la façon suivante: on coupe finement les feuilles sèches de Geranium robert séparées des tiges par gravimétrie (procédé de ventilation). Les moutures obtenues, destinées à l'extraction, sont soit infusées quelques minutes à l'eau bouillante, puis mises à macérer à l'étuve à 44 C pendant 24 heures (infusion-macération), soit placées dans un bécher en milieu aqueux, puis chauffées de 20 C à 80 C en 15 à 20 minutes sur une plaque chauffante (décoction) selon la méthode décrite par OKUDA et al. (Joumrnal of Chromatography, 1979, 171, 313). Les jus d'extraction sont filtrés grossièrement sur un tamis chinois en veillant à exprimer la totalité de la plante, puis sur filtre de polyester de 50 pm et 20,um. Après lyophilisation des jus d'extraction, les extraits bruts aqueux sont obtenus à l'état de poudres sèches fortement hygroscopiques. Les extraits acétoniques de Geranium robert sont obtenus de la façon suivante: de la poudre de feuilles sèches coupées finement est soumise à des macérations successives à température ambiante dans un mélange acétone/H20 (80/20; v/v). Trois cycles d'extraction de 24 heures sont nécessaires pour épuiser la matière première. Après filtration des jus acétoniques sur un tamis en Inox de /um, puis évaporation de l'acétone sous pression réduite, le résidu est filtré sur du polyester de 50,um et lyophilisé. On obtient ainsi 80 g d'extrait sec, soit un rendement de 8,9 % exprimé par rapport à la matière sèche. Ce procédé s'applique également à Geranium thunbergii qui, traité dans les mêmes conditions, permet d'obtenir à partir de parties aériennes (tiges et feuilles) 20,3 g d'extrait sec lyophilisé, soit un rendement d'environ 12,2% exprimé par rapport à la matière sèche. L'activité analgésique centrale non morphiniquc de ces différents extraits bruts et des fractions purifiées de géraniums est évaluée sur des animaux de laboratoire (souris mâles ou femelles) à l'aide du test du bécher (test de LESPAGNOL et MERCIER modifié) dont le principe est le suivant: Placée dans un bécher mis dans un bain-marie à 56 C, une souris réagit à la chaleur par une tentative d'évasion ou par un léchage des pattes antérieures en un temps variant de 5 à 12 secondes (seuil initial de réaction). Après administration d'un analgésique de type central non morphiniquc, le délai de l'apparition du réflexe s'allonge. Chaque souris est son propre témoin. Ce test est réalisé sur des lots de souris présentant des seuils initiaux de réaction similaires. L'homogénéité des lots est vérifiée par le test de Fisher- Snedecor (analyse de la variance monofactorielle sur les lectures de base). L'activité analgésique centrale non morphinique est évaluée en calculant le pourcentage d'allongement du temps par rapport au seuil initial de réaction selon la formule suivante: (Tr - Ti) x 100 % allongement - (TrTi x100 Ti' Tr représentant le temps moyen de réaction déterminé sur l'ensemble du lot considéré et Ti représentant le temps initial. L'existence de cette activité analgésique centrale non morphinique de ces extraits ou composés a également été vérifiée par la recherche d'un antagonisme à l'aide d'un antagoniste spécifique des récepteurs centraux impliqués dans les phénomènes nociceptifs. La présente invention va maintenant être illustrée par les exemples suivants qui ne présentent aucun caractère limitatif. Exemple 1: Extraction/purification de la géraniine L'isolement de la géraniine a été réalisé à partir de l'extrait sec acétonique de feuilles de Geranium robert (80 g) par extractions liquide-liquide successives à l'éther, puis à l'acétate d'éthyle dans une ampoule à décanter. L'extrait à l'acétate d'éthyle, ainsi obtenu ou "brut de géraniine non purifié" (12 g) a été analysé qualitativement par Chromatographie sur Couche Mince (CCM) sur gel de silice et chromatographié sur colonne Sephadex LH 20 (5x50 cm) afin de séparer quantitativement la géraniine des flavonoiïdes et des autres composés. Dans ce cas l'élution est réalisée par un gradient eau-méthanol (H20 100 %, McOH 30 %, MeOH 60 %, MeOH 100 %o) en recueillant des fractions de 200 à 800 ml. Un contrôle par CCM sur gel de silice de la pureté et de la nature des différentes fractions gouverne le changement de polarité de l'éluant. Le bilan de fractionnement sur colonne est donné dans le tableau 1 ciaprès. Tableau 1 Bilan du fractionnement sur colonne de l'extrait à l'acétate d'éthyle: purification de la géraniine Fractions Eluant Composés Fractions Eluant Composés H20O 100% MeOH 100% 1 600 ml 21 200 ml 2 600 ml Composés 22 200 ml Flavonoides 3 600 ml divers de 23 200 ml (traces) 4 600 ml forte 24 200 ml + autres 600 ml polarité 25 200 ml composés 6 700 ml 26 200 ml 3,7 1 27 200 ml 28 200 ml MeOH 30% 29 200 ml 7 500 ml 30 200 ml Géraniine 8 500 ml 31 200 ml 9 200 ml Autrcs 32 200 ml 500 ml composés + 33 200 ml il11 500 ml (traces de 34 200 ml Composés 12 500 ml flavonoïdes) 35 200 ml divers de 13 500 ml 36 200 ml faible 14 800 ml 37 200 ml polarité 4,0 1 38 1 1il 4,41 MeOH 60% Acétone oo100% 500 ml 16 500 ml Flavonoïdes 39 1,25 1 Non contrôlé 17 500 ml en très forte 18 500 ml proportion 19 500 ml 500 ml 3,0 1 L'analyse par CCM de la composition des fractions 28 à 32 révèle la présence d'un composé fortement majoritaire: tache sombre d'atténuation de fluorescence à un Rf voisin de 0,50, qui correspond à la géraniine. On extrait et purifie ainsi de la géraniinc sous forme de cristaux jaunâtres, solubles dans l'acétone et dans le méthanol, insolubles dans l'eau et présentant une pureté d'approximativement 90 % (évaluée par CCM). Le rendement est de 3,7 % par rapport à l'extrait acétonique de base, soit une teneur de 0,33 % exprimée par rapport à la plante sèche. Exemple 2: Synthèse de la géraniinc-phénazine B On traite 100 mg de géraniine, mis en solution dans 2 ml de MeOH anhydre, par 6 ml d'une solution de o-phénylène-1,2-diéthylamine (4 mg/ml dans l'acide acétique 50 %). On laisse en contact pendant 5 heures sous agitation et à l'abri de la lumière. On évapore le solvant de réaction sous pression réduite (T ml d'eau distillée et on filtre la suspension sur papier-filtre. On lave le précipité par 2x20 ml d'eau distillée, on le redissout dans une petite quantité de méthanol et on recristallise le mélange en présence d'un excès de chloroforme. Il se forme un trouble (cristaux en suspension). On filtre le mélange sur papier, on lave le précipité au chloroforme et on le reprend dans du méthanol. Après évaporation du méthanol sous pression réduite, on obtient 40,3 mg de géraniine-phénazine B sous forme de cristaux orangés insolubles dans l'eau et dans le chloroforme, solubles dans le méthanol et dans l'acétone. L'analyse par CCM du produit montre qu'il existe une très nette différence entre son Rf (0,60) et le Rf de la géraniine (0,48). Exemple 3: Mesure de l'activité pharmacologique L'activité analgésique centrale non morphinique est évaluée à l'aide du test de bécher décrit précédemment. a. Animaux utilisés On utilise des souris mâles ou femelles de 18 à 25 g, stabuléces 5 jours au minimum avec accès libre à l'eau et à la nourriture, ainsi qu'un cycle lumière 7-19 heures. b. Sélection des animaux On détermine tout d'abord le seuil initial de réaction de chaque souris en mesurant le temps entre le moment o on place la souris dans un bécher plongé au 2/3 dans un bain-marie régulé à 56 C et le moment o la souris présente un réflexe de réaction à la chaleur. Le temps initial de réaction est appelé ti. On ne conserve pour le test que les animaux réagissant entre 5 et 12 secondes. Chaque animal retenu est repéré: coloration, poids, temps initial de réaction. Les animaux sont alors répartis dans des cages par 5 et mis au repos, minutes au minimum, 120 minutes si possible. A la fin de la sélection, le nombre de souris disponibles permet de répartir les animaux en lots en fonction du nombre de produits à tester. En général, un lot comporte environ 10 animaux qui présentent des mesures de temps initiaux équilibrées. c. Vérification de l'homogénéité des lots On teste l'homogénéité des lots en utilisant le test de Fisher-Snedecor. On mesure la variance des lectures de base, à savoir dans ce cas le temps initial de réaction, et on calcule le rapport suivant: G-, F= la variance la plus élevée se trouvant au numérateur. On lit F sur la table de Snedecor présentant p nombre de mesure. On considère alors qu'il n'y a pas de différence significative dans le lot pour p d. Test du bécher On administre les principes actifs au temps tO selon deux modes d'administration: par voie intra-péritonéale et par voie orale. Pour la voie intra-péritonéale, les principes actifs, mis en suspension extemporanément dans la carboxyméthylcellulose (CMC) 0,1% dans l'eau, sont injectés à raison de 10 ml/kg. Pour la voie orale, les principes actifs, mis en suspension extemporanément dans la CMC 0,1% dans l'eau, sont administrés par sonde intra-gastrique à raison de 20 ml/kg. , 60 et 90 minutes après l'injection par voie intra-péritonéale ou 45, et 135 minutes après administration par voie orale, on place les souris dans les béchers au bain-marie et on détermine les seuils de réaction ou temps de réaction après traitement, appelés tr. Il est important pour la bonne marche de l'essai de retirer les souris dès que 30 secondes de contact dans le bécher sont atteintes (brûlure). Arbitrairement, ce chiffre correspond à une analgésie totale. e. Traitement statistique des résultats On réalise la moyenne de l'ensemble des temps (ti et tr) obtenus pour les souris traitées par le même produit. On obtient ainsi les temps moyens Tr et Ti, respectivement, qui seront utilisés pour calculer le pourcentage d'allongement, et leur écart type ac et a, respectivement. A chacun des différents temps de lecture, les moyennes Ti et Tr sont comparées par le test des moyennes appariées de Student grâce à la formule suivante Ti - Tr TSident = i r O r ni et nr représentant le nombre de valeurs de ti et tr. On lit ensuit T sur la table de Student présentant p valeur indiquée dans le tableau. f. Résultats On a mesuré le pourcentage d'allongement du temps de réaction après administration des extraits aqueux ou acétoniques de Geranium robert ou thunbergii par comparaison au chlorhydrate dc morphine (ce dernier composé, administré sous forme de suspension dans la CMC à 0,1 % dans l'eau, constitue le témoin positif). Les résultats obtenus avec les différents extraits de géraniums sont présentés dans le tableau 2 ci-après: Tableau 2 Activité analgésique centrale non morphinique de différents extraits bruts de géraniums après administration par voie intrapéritonéale Principesactifs Dose administrée % d'augmentation Seuil de (type d'extrait) (m/kg en i.p.) du temps de probabilité réaction Geranium robert (extrait aqueux; 60 97,0 p E th - Nm Ac correspondant à l'activité analgésique centrale non morphinique, Nm correspondant au nombre dc moles. Il est à noter que cette formule est obtenue en prenant arbitrairement comme égale à 1 l'efficacité thérapeutique de la géraniine. Les résultats sont indiqués dans le tableau 3 ci-après: Tableau 3 Activité analgésique centrale non morphinique et efficacité thérapeutique des principes actifs Principes Doses Masse Nombre de Activité Efficacité actifs administrées moléculaire moles (Nm) analgésique thérapeu- mg/kg centrale non tique (E th) morphinique (Ac) Géraniine 60 952 6,3 1065,77 % 1 Géraniine- phénazine B 60 1006 5,96 10-5 115,7 % 1, 86 Morphine (HCI) 5 321,8 1,55 10-5 66,63 % 4 Il est évident d'après ce tableau que la géraniine présente une activité analgésique centrale non morphinique. De plus, la géraniinc-phénazine B montre une activité analgésique supérieure à celle de la géraniine pour une dose administrée identique (60 mg/kg). Exemple 4: Mesure de l'antagonisme La recherche d'un antagonisme par un antagoniste spécifique des récepteurs centraux impliqués dans les phénomènes nociceptifs permet d'établir, de façon formelle, qu'on est bien en présence d'une activité de type central. Pour ce faire, on utilise l'antagoniste Naloxone, connu pour agir plus spécifiquement sur les récepteurs morphiniques. On sélectionne les souris comme pour le test du bécher. On les répartit à raison de 5 par cage et on les met au repos, 60 minutes au minimum, avant de réaliser le lotage. On réalise deux séries d'expérience en administrant par voie intra- péritonéale et par voie orale. a. Administration par voie intra-péritonéale Au temps t-5 minutes, c'està-dire 5 minutes avant l'administration du principe actif (composé de l'invention ou morphine), on traite les souris par la Naloxone à la dose choisie (2,5 ou 4 mg/kg) à raison de 10 ml/kg. Au temps t=0, on traite les souris par injection du principe actif (composé de l'invention ou morphine), mis extemporanément en suspension dans la CMC 0,1 % dans l'eau, à raison de 10 ml/kg. Au temps t=30 minutes, on place les souris dans le bécher et on mesure les temps de réaction tr. Les résultats sont donnés dans le tableau 4 ci après. Tableau 4 Antagonisme de l'activité analgésique centrale non morphinique par la Naloxone après administration par voie intrapéritonéale Principes actifs Dose de % d'augmentation % d'inhibition Seuil de Naloxone du temps de par la probabilité mg/kg réaction Naloxone Morphine 5 mg/kg 0 54,3 - p Naxolone à la dose choisie (5 mg/kg) à raison dc 10 ml/kg. Au temps t=0, on traite les souris à l'aide d'une sonde oesophagienne en administrant le principe actif (composé dc l'invention ou morphine), mis extemporanément en suspension dans la CMC 0,1% dans l'eau, à raison de ml/kg. Au temps t=45 minutes, on place les souris dans le bécher et on mesure les temps de réaction tr. Les résultats sont donnés dans le tableau 5 ci après. Tableau 5 Antagonisme de l'activité analgésique centrale non morphinique par la Naloxone après administration par voie orale Principes actifs Dose de % d'augmentation % d'inhibition Seuil de Naloxone du temps de par la probabilité mg/kg réaction Naloxone Morphine 10 mg/kg 0 90,2 - p partielle et apparaît plus spécifique pour la morphine que pour la géraniine. Exemple 5: Comparaison des profils pharmaco-toxicologiques des produits de l'invention et de la morphine Des modifications des paramètres physiologiques (augmentation de la température, diminution de la motilité intestinale se traduisant par une nette réduction de la quantité de fécès) et du comportement sont observées après administration de morphine. Le phénomène de Straub (raideurs de la queue des souris) et le test d'Haffner négatif (absence de retournement de la souris et /ou de cris lorsqu'une pince à clamp est placée à la base de la queue), notamment, sont décrits comme des réactions caractéristiques de la morphine ou des dérivés *opiacés. Les animaux traités avec une dose de 400 mg/kg d'un extrait de Geranium de l'invention ne présentent pas les modifications comportementales observées après une administration de morphine à la dose de 40 mg/kg et en particulier aucun phénomène de Straub marqué et un test d'Haffner positif. De plus, on n'observe pas de diminution de la quantité de fécès ni d'augmentation de la température, comme dans le cas de la morphine. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'extraits bruts aqueux, hydroalcooliques et acétoniques de géraniums pour la préparation de médicaments analgésiques de type central non morphinique. 2. Utilisation d'extraits bruts selon la revendication 1, caractérisée en ce que les extraits proviennent de Geranium robert ou de Geranium thunbergii. 3. Utilisation des composés de formule 1: R1 O CH2 R2 oO ) O-R5) R3 1 R4 dans laquelle R5 est l'hydrogène ou le groupemcnt OOR, --CO -ORs- OR5. R5s, Rs. et Rs-, identiques ou différcnts, étant choisis indépendamment parmi l'hydrogène, les groupements alkylc en C,-C4 et le groupement OH -CO - OH OH * R. et R2, ensemble, et R3 et R4, enscmble, forment indépendamment un groupement choisi parmi: _2 (A) R8 R9 R7 R R 1 CO CO I I R6 à R" représentant indépendamment -OH, -O-(alkyle en C,-C4) ou -O-CO- (alkyle en C,-C4), (B) i I CO CO R1 R xg R13 R17 R16 15 14R, R12 et R13 représentant indépcndammcnt -OH, -O-(alkyle en C,-C4) ou -OCO- (alkyle en CI-C4), R,4 représentant -OH, R16 et R17 représentant indépendamment H ou -OH, ou bien R14 avec R,6 formant cnsemble -O- et R1, représentant H ou -OH, ou bien encore R,4 avec R1. formant enscmble -O- ct R16 représentant H ou -OH, Rs et RI8 représentant indépendammcnt -OH, -O-(alkyle en C,-C4), -CH2-CO- (alkyle en C,-C4) ou -CH2-CO-phényle et Rj9 représentant =O, et (C) {N= 23 22 R20 et R2, représentant indépendamment -OH, -O-(alkyle en -C,-4) ou -OCO- (alkyle en C,-C,), R22 et R23 représentant indépendamment -OH ou -O(alkyle en C,-C4), ou bien R22 et R23 formant ensemble -O-, * ou bien R. et R2 forment ensemble un groupement choisi parmi (A), (B) et (C) et R3 et R 4 représentent H, a ou bien R, et R2 représentent H et R3 et R4 forment ensemble un groupement choisi parmi (A), (B) et (C), pour la préparation de médicaments analgésiques dc type central non morphinique. 4. Utilisation des composés de formule I selon la revendication 3, caractérisée en ce que lesdits composés sont tels que R5 représente OH -Co OOH OH RI et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à RI1 représentent -OH et R3 et R4 forment ensemble un groupement (B) o R12, R13, R15, R16 et R18 représentent -OH, R19 représente =O et R,4 et R17 forment ensemble -O- (géraniine de forme (la)), ou bien o R12, R13, R15, Rl7 et R1s représentent -OH, Rl9 représente =O et R14 et R16 forment ensemble -O- (géraniine de forme (lb)). 5. Utilisation des composés de formule I selon la revendication 3, caractérisée en ce que lesdits composés sont tels que: R5 représente OH -CO, OH OH RI et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à RI, représentent -OH et R3 et R4 forment ensemble un groupement (C) o R:o à R23 représentent -OH (géraniine-phénazine B). 6. Utilisation des composés de formule I selon la revendication 3, caractérisée en ce que lesdits composés sont tels que: R5 représente OH -CO OH RI et R2, ensemble, et R3 et R4, ensemble, forment un groupement (B) o Rl2, Rl3, R,5, R16 et RI8 représentent -OH, R,9 représentc =O et R,4 et R,7 forment ensemble -O- (déshydrogéraniine). 7. Utilisation des composés de formule I selon la revendication 3, caractérisée en ce que lesdits composés sont tels que: R5 représente H et R. et R2, ensemble, et R3 et R4, ensemble, forment un groupement (B) o R12, R13, R15, R16 et R18 représentent -OH, R19 représente =O et R24 et R,7 forment ensemble -O- (furosinine). 8. Utilisation des composés de formule I selon la revendication 3, caractérisée en ce que lesdits composés sont tels que: R5 représente OH -CO OH OH RI et R2 représentent l'hydrogène et R3 et R4 forment ensemble un groupement (B) o R12, R13, Rls, R]6 et R,8 représentent -OH, R19 représente =O et R,4 et R,7 forment ensemble -O- (furosine). 9. Utilisation des composés de formule I selon la revendication 3, caractérisée en ce que lesdits composés sont tels que Rs représente OH -CO Q C-OH OH R. et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à R" représentent OH, et R3 et R4 forment ensemble un groupement (B) o R,2, R23, R,5 et R, 7 représentent -OH, R,8 représente -CH2-CO-CH3, R,9 représente =O ct R,4 et R26 forment ensemble -O- (phyllanthusine D). 10. Utilisation des composés de formule I selon la revendication 3, caractérisée en ce que lesdits composés sont tels que R5 représente OH -CO- - OH OH OH RI et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à R" représentent -OH et R3 et R4 représentent l'hydrogène (corilagine). 11. Utilisation des composés de formule I selon la revendication 3, caractérisée en ce que lesdits composés sont tels que: R5 représente HO OH O OH CO O OH / / /bYo-oo..OH CO 04,, 0.H C O 70X-O-C0 O 0 H OH OH RI et R2 forment ensemble un groupement (A) o R6 à R11 rcprésentent -OH ct R3 et R4 forment ensemble un groupcment (B) o R12, R13, R,5, R16 et R18 représentent -OH, R19 représente =O et Rl4 et R17 forment ensemble -O(galloyl- géraniine de forme (a)) ou bien o R12, R13, Rs15, R17 et RI8 représentent -OH, R19 représente =O ct Rl4 et R16 forment ensemble -O-, (galloyl- géraniine de forme (b)).