Brevet FR2780651A1 — publié le 20000107

Procédé pour activer une solution inactive et à très faible concentration d'une substance déterminée biologique et/ou chimique dans un solvant. La présente invention concerne un procédé d'activation d'une solution inactive et à très faible concentration d'une substance déterminée biologique et/ou chimique dans un solvant. La présente invention concerne également les applications dudit procédé d'activation. On désigne sous le terme de "très faible concentration", des concentrations comprises entre 10 - 6 et zéro moles par litre (M). On connaît des méthodes de préparation de solution "hautement diluée" par dilution et agitation successive. Une des méthodes de préparation employée traditionnellement en homéopathie (méthode d'Hannemahn) consiste, à partir d'une solution relativement concentrée réalisée à l'aide d'une teinture mère (de concentration supérieure à 10 - 6 M), à procéder à une dilution d'un facteur 10 ou 100, puis à une agitation mécanique (appelée "dynamisation"). On constate après chaque opération que la solution est restée active en ce sens qu'elle déclenche une réaction au sein d'un système biologique sensible. A titre d'exemples de solutions qui ont été préparées par la méthode ci- dessus décrite, on peut citer toutes les préparations homéopathiques. A titre d'exemples de systèmes biologiques sensibles permettant de tester le caractère actif de telles solutions on peut citer: le coeur isolé de cobaye (expérience de Langendorff) ou le test cutané réalisé sur la peau d'un cobaye ou d'un lapin vivant. La nécessité de partir d'une solution active avant de procéder à une dilution puis à une agitation paraissait incontournable pour obtenir des solutions diluées actives. Les dilutions effectuées jusqu'à 10 ' 6 M et au delà, sans mettre en oeuvre ce processus d'agitation et de dilution successives, n'ont pas permis jusqu'à présent d'obtenir de solutions actives. Il n'est pas sans intérêt non plus de rappeler que la technique d'agitation et de dilution mise en oeuvre par Hannemann a été extrapolée sans que l'on puisse jusqu'à présent montrer les vertues de telles hautes dilutions au delà de facteur 5 CH. Or les inventeurs, qui sont connus pour leurs travaux sur les hautes dilutions ( Nature 1988: "Dégranulation des Basophiles humains déclenchée par une solution à haute dilution d'anticorps anti-IgE"), ont constaté de manière surprenante qu'il était de possible d'obtenir une solution active à partir d'une solution inactive et à très faible concentration d'une substance déterminée biologique et/ou chimique dans un solvant. Ils ont montré qu'une solution à très faible concentration dont l'activité est inexistante au départ, peut être rendue active par des procédés particulièrement simples à mettre en oeuvre. Ainsi, ils ont conçu un procédé qui permet de rendre active des solutions à très faible concentration sans qu'il soit nécessaire de les préparer préalablement par la technique traditionnelle des dilutions et agitations successives. Ils ont ainsi résolu un problème dont les implications industrielles sont considérables. En effet: - il est désormais possible de déceler des substances déterminées biologiques et/ou chimiques en solution à très faible concentration dans un solvant, - il est désormais possible de concevoir et réaliser des médicaments mettant en oeuvre des substances déterminées biologiques et/ou chimiques en solution à très faible concentration dans un solvant, - il est désormais possible de contrôler la production de produits à très faible concentration notarmmnent des produits homéopathiques. La présente invention a donc pour objet un procédé pour activer une solution à très faible concentration d'une substance déterminée biologique et/ou chimique dans un solvant. Ledit procédé comprend l'étape de placer ladite solution dans un champ d'excitation mécanique. Le champ d'excitation mécanique pourrait être créé, par exemple, par une onde de choc se propageant dans la solution, par des ultrasons ou des ondes sonores diffusées dans la solution, par des vibrations transmises par le récipient contenant la solution. De préférence, le champ d'excitation mécanique résulte d'une agitation violente notamment obtenue au moyen d'un agitateur de type Vortex constitué d'un disque qui tourne rapidement jusqu'à ce qu'un vortex se forme dans la colonne de liquide en cours d'agitation. Avantageusement, ladite solution est soumise à un champ d'excitation mécanique pendant au moins 15 secondes. A titre d'exemples de substances en de solution qui ont été activées par la méthode ci-dessus décrite, on peut citer: l'arnica, l'ovalbumine, l'acétylcholine, le calcium ionophore. Le procédé selon l'invention ne présente d'intérêt que lorsque la concentration de ladite substance déterminée dans ladite solution est inférieure à 10-6 moles par litre. En effet au dessus de 106 moles par litre la solution est déjà active (pharmacologie traditionnelle). Avantageusement, la concentration de ladite substance déterminée dans ladite solution est comprise dans une fourchette inférieure à 106 moles par litre et supérieure à 1016 moles par litre. De préférence également ledit solvant contient au moins 5% d'eau. Il est en effet apparu qu'en deçà d'une certaine proportion d'eau dans le solvant la solution soumise à un champ d'excitation mécanique reste inactive. Il est également apparu qu'un pourcentage d'alcool d'au moins 2% dans le solvant a pour effet que la solution reste active pendant une plus longue période. Le procédé selon l'invention comprend en outre l'étape de contrôler l'état actif de ladite solution en mettant en oeuvre un protocole expérimental identique ou semblable à celui que l'on mettrait en oeuvre pour rendre compte de la présence de ladite substance déterminée dans un milieu qui la contiendrait. A titre d'exemple de système biologique sensible permettant de tester le caractère actif des solutions des substances déterminées suivantes: calcium-ionophore, acétylcholine, histamine, ovalbumine (chez l'animal rendu sensible), arnica, bradykinine, anticorps anti-IgE, on peut citer: l'expérience de Langendorff (coeur de cobaye isolé) ainsi que le test cutané réalisé sur une peau de cobaye ou de lapin vivant. Ainsi par exemple, pour contrôler l'état actif de la solution d'acétylcholine on vérifie qu'une injection de celle-ci, sous la peau d'un cobaye notamment, provoque des réactions cutanées. La présente invention concerne aussi l'application du procédé à la détection d'une substance déterminée, diluée en très faible concentration. En effet dès lors que la solution est activée, il est possible de procéder à des tests d'identification en mettant en oeuvre un protocole expérimental identique ou semblable à celui que l'on mettrait en oeuvre pour rendre compte de la présence de ladite substance déterminée dans un milieu qui la contiendrait. A titre d'exemple des substances déterminées que l'on peut détecter en solution, on peut citer les substances suivantes: calcium- ionophore, caféine, nicotine, toxines et endotoxines bactériennes; et les tests d'identification suivants: l'expérience de Langendorff (coeur de cobaye isolé) ainsi que le test cutané réalisé sur une peau de cobaye ou de lapin vivant. La présente invention concerne aussi l'application du procédé à la production de médicaments mettant en oeuvre des substances biologiques et/ou chimiques à très faible concentration. En effet, dès lors qu'il est possible de préparer des solutions actives à très faible concentration de substances déterminées biologiques et/ou chimiques, de nouvelles applications thérapeutiques de ces substances deviennent envisageables. A titre d'exemple de médicaments que l'on peut ainsi produire, on peut citer les médicaments suivants: vasodilatateurs coronariens (ex trinitroglycérine), bétabloquant (propranolol), caféine, nicotine. La présente invention concerne aussi l'application du procédé au contrôle de la production de produits à très faible concentration, notamment des produits homéopathiques. En effet, l'un des problèmes à résoudre lorsque l'on fabrique des produits homéopathiques est celui du contrôle en production des dilutions successives. Le procédé selon l'invention permet de tester l'activité des produits homéopathiques lors des différentes phases de leur processus de fabrication. A titre d'exemple de produits homéopathiques dont on peut ainsi contrôler la production on peut citer les médicaments suivants: arnica 5 à 30 CH, histaminum 5 à 30 CH, acétylcolinum 5 à 30 CH, apis mellifica 5 à 30 CH. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description de variantes de réalisation de l'invention, données à titre d'exemple indicatif et non limitatif, ainsi qu'à la lecture des exemples d'expérimentations ayant permis de valider le procédé d'activation, objet de la présente invention, et qui se réfèerent aux dessins annexés dans lesquels: - la figure 1 représente une vue en perspective d'une variante de réalisation du système d'agitation. - la figure 2 représente une vue en perspective d'un système permettant de tester l'activité de la solution (expérience de Langendorff). - la figure 3 représente une image de la peau d'un cobaye On va maintenant décrire la figure 1 qui représente une vue en perspective d'une variante de réalisation du système d'agitation. Un galet en caoutchouc 2 est monté pivotant autour d'un axe vertical. La galet en caoutchouc est mis en rotation autour de l'axe vertical par un moteur électrique (non représenté), situé à l'intérieur du boitier 3. Le moteur électrique est alimenté par un cable 10. La vitesse de rotation du galet est contrôlée par un potentiomètre 4. Le tube 1 contient la solution 6 de acétylcholine à la concentration de lpM, devant être agitée violemment. L'opérateur 5 maintient l'extrémité inférieure 7 du tube appliquée contre le galet 2 en appuyant à la partie supérieure 8 du tube 1. L'extrémité inférieure 7 du tube 1 décrit un cercle 9. Il en résulte qu'un vortex se produit au sein de la solution 6. Ce vortex agite et mélange violement la solution. A titre d'exemple, on va maintenant décrire en se référant à la figure 2 le test réalisée à partir d'un coeur de cobaye isolé perfusé, connu depuis 1897 ( sous le nom de 1' " Expérience de Langendorff ") et décrit dans les livres de pharmacologie traditionnelle, notamment dans " L'expérimentation animale en cardiologie " - Médecine - Science Inserm - Flammarion, Bernard SWYNGHEDAUW, Chapitre 3.1 P. 81 " Organe isolé: coeur isolé selon Langendorff ". Le collecteur de fraction collecte les tubes à raison de un tube par minute et mesure ainsi le débit du coeur de cobaye minute par minute. Voici les résultats provenant des expériences effectuées avec les substances suivantes, après qu'elles aient vortexées (agitées) comme il a été décrit en se référant à la figure 1, dans un tube de 15 ml contenant 10 nml de solution: - pour la première, un mélange d'acétate-choline (A-C) lpM (acétate de sodium 1 pM + chlorure de choline 1 pM) vortexée pendant 15 secondes, - pour la deuxième, de l'acétylcholine (ACh) lpM vortexée pendant 15 secondes, - pour la troisième, de l'acétylcholine (ACh) lpM vortexée pendant 5 secondes - pour la troisième, de l'acétylcholine (ACh) lpM vortexée pendant 2 secondes - pour la troisième, de l'acétylcholine (ACh) lpM vortexée pendant 1 secondes La solution tampon avait la composition suivante: Ca 2+ 2mM, NaHCO3 mM. Le solvant employé dans les cinq cas était de l'eau. Le tableau ci-après indique (en ml) la quantité de solution tampon récupérée dans les tubes collecteurs au cours du temps. Exp 1 Exp 2 Exp 3 Exp 4 Exp 5 Temps acétate acétylcholine acétylcholine acétylcholine acétylcholine (minutes) choline (ACh) (ACh) (ACh) (ACh) (A-C) Vortex 15s Vortex 15s Vortex 5s Vortex 2s Sans Vortex 1 3,7 2,9 3,5 3,7 3,6 2 3,8 3,0 3,6 3,8 3,7 3 3,7 3,0 3,6 3,7 3,7 4 3,8 2,9 3,5 3,7 3,6 3,7 2,8 3,3 3,8 3,8 6 3,7 3,3 3,8 3,6 3,8 7 3,6 3,3 3,8 3,5 3,7 8 3,6 3,4 3,7 3,5 3,6 9 3,7 3,3 3,6 3,6 3,6 3,8 3,2 3,5 3,5 3,7 1 3,7 3,0 3,4 3,5 3,7 12 3,7 2,9 3,5 3,6 3,8 13 3,6 3,1 3,4 3,5 3,7 14 3,7 3,0 3,4 3,5 3,6 3,7 2,9 3,4 3,6 3,6 3,6 2,8 3,3 3,5 3,6 3,7 2,8 3,2 3,5 3,7 3,6 2,8 3,2 3,5 3,6 Ce tableau met en évidence plusieurs choses: a) dans le protocole expérimental les solutions sont testées avant d'être vortexées afin de vérifier qu'elles sont inactives. Les résultats de l'expérience 5 illustrent l'un de ces tests. La solution est bien inactive avant d'être vortexée. En effet la variation de débit de 0,2ml/min (min=3,6; max=3,8) correspond aux incertitudes de mesure et aux variations normales de débit du système biologique qu'est le coeur de cobaye isolé perfusé. b) la comparaison des résultats de l'expérience 1 avec l'expérience 2 montre que l'action d'agiter n'est pas suffisante en elle- même: encore faut-il que des molécules auxquelles le système biologique est sensible soient présentes. En effet un produit très voisin de l'acétylcholine, l'acétate-choline, préparée dans les mêmes conditions que l'acétylcholine, ne déclenche pas de réaction (Exp 1). c) la série des expériences 2, 3, et 4 a été réalisée sur le même coeur de cobaye et montre l'influence du temps d'agitation à l'aide du Vortex sur l'activité produite dans la substance. Ainsi pour une agitation de 2 secondes on obtient une variation maximale de débit de 0,3 ml/min (min=3,5; max=3,8) alors que pour une agitation de 15 secondes on obtient une variation maximale de débit de 0,6 ml/min (min=2,8; max=3,4) A titre d'autres exemples voici les résultats provenant des expériences effectuées avec comme substance de l'acétylcholine lpM, vortexée 15 secondes pour différentes teneurs en éthanol dans le solvant. Les expériences ont été réalisées 9 jours après l'agitation de la solution. % variation du débit de variation du débit de éthanol l'artère coronarienne l'artère coronarienne (en ml/min) (rapporté au débit moyen) 1% 0,6 10% 2% 0,7 14% % 0,9 18% % 1,1 26% Ce tableau met en évidence que la teneur en éthanol favorise la conservation de l'activité dans l'eau. On va maintenant décrire en se référant à la figure 3 le test cutané chez le cobaye Nous utilisons un cobaye vivant, auquel on injecte par voie veineuse un colorant bleu (bleu d'Evans) qui se fixe sur l'albumine sanguine. L'albumine ne sort pas des vaisseaux, sauf s'il y a inflammation, donc vasodilatation et perméation des vaisseaux, l'exemple typique d'une telle réaction chez l'homme étant l'urticaire. Le test est réalisé en injectant sous la peau de l'animal ainsi préparé 0.1 mi de la solution dont il convient de contrôler l'activité. On mesure ensuite le diamètre des taches bleues apparues autour des points d'injection. A cet effet on scanne la peau, puis on enregistre le fichier bitmap. Ensuite on mesure la dimension en pixels des taches bleues dues à la réaction. Les numéros 3, 4, 10, 11 qui figurent dans la première colonne du tableau ci-après correspondent aux références de la figure 3. N Solution injectée Total Pixels en milliers 3 ACh lpM vortexée 1 949 4 ACh lpM non vortexée 43 A-C lpM vortexée 25 11 ACh 1 gM non vortexée 1 154 - L'injection numéro 3 montre que la solution vortexée à très faible concentration (lpM) du neuromédiateur acétylcholine (ACh) déclenche une réaction cutanée importante (1 949 103 pixels) par rapport à la même solution non vortexée qui ne déclenche pas de réaction comme le montre l'injection numéro 4 (43 103 pixels). - La comparaison de l'injection numéro 3 (1 949 103 pixels) et de l'injection numéro 11 (1 154 103 pixels) montre que l'activité d'une solution à très faible concentration vortexée est toute à fait comparable à celle d'une solution non vortexée à concentration plus élevée (lgMI, concentration habituelle en pharmacologie traditionnelle) - L'injection numéro 10 est réalisée avec une solution vortexée picomolaire (lpM) d'un produit proche de l'acétylcholine mais inactif: le mélange acétate/choline (A-C). Cette injection montre que la réaction cutanée du cobaye est bien spécifique de la nature de la substance en solution car cette solution d' acétate/choline vortexée dans les mêmes conditions que l'injection numéro 1 ne présente aucun effet (25 103 pixels). Revendications 1. Procédé pour activer une solution inactive et à très faible concentration d'une substance déterminée biologique et/ou chimique dans un solvant, ledit procédé comprenant l'étape: - de placer ladite solution dans un champ d'excitation mécanique. 2. Procédé selon la revendication 1, ledit procédé comprenant l'étape: - de soumettre ladite solution à une agitation pour créer ledit champ d'excitation mécanique. 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, tel que la concentration de ladite substance déterminée dans ladite solution est inférieure à 10' moles par litre. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, tel que la concentration de ladite substance déterminée dans ladite solution est comprise dans une fourchette inférieure à 10 -6 mole par litre et supérieure à -16 mole par litre, 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, tel que ledit solvant contient au moins 5% d'eau. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, tel que ledit solvant contient au moins 2% d'alcool, (de sorte que la solution reste active pendant une plus longue période). 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, ledit procédé comprenant l'étape: - de soumettre ladite solution à un champ d'excitation mécanique pendant au moins 15 secondes. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 comprenant en outre l'étape: - de contrôler l'état actif de ladite solution en mettant en oeuvre un protocole expérimental identique ou semblable à celui que l'on mettrait en oeuvre pour rendre compte de la présence de ladite substance déterminée dans un milieu qui la contiendrait. 9. Procédé selon la revendication 8 tel que pour contrôler l'état actif de ladite solution on vérifie qu'une injection de celle-ci provoque des réactions cutanées 10. Application du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 à la détection d'une substance détermninée, diluée en très faible concentration. 11. Application du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 à la production de médicaments. 12. Application du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 au contrôle de la production de produits à très faible concentration, notamment des produits homéopathiques.