Brevet FR2780901A1 — publié le 20000114

La présente invention concerne essentiellement des particules, en particulier micro- ou nanoparticules de monosaccharides et oligosaccharides réticulés, leurs procédés de préparation et compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou alimentaires en contenant. Ces particules sont avantageusement de faible dimension. En outre, ces particules sont avantageusement utilisées pour l'incorporation ou encapsulation de diverses substances hydrophiles ou lipophiles, et en particulier des substances utilisables dans les secteurs pharmaceutiques, cosmétiques et alimentaires. Dans le cadre de la présente description et des revendications, les termes "particule (s) de faible dimension" signifient aussi bien des microparticules que des nanoparticules et les termes "microparticules" ou "nanoparticules" concernent tout aussi bien des microsphères ou des nanosphères que des microcapsules ou des nanocapsules. D'autre part, les termes de "microsphères" ou "nanosphères" visent des particules comprenant une structure essentiellement uniforme dans la totalité de leur masse, tandis que les termes "microcapsules" ou "nanocapsules" visent des particules comprenant une paroi réticulée entourant un noyau ou espace interne rempli d'un milieu solide, gélifié, liquide ou gazeux. Etat de la technique antérieure L'encapsulation de substances actives dans des particules offre des avantages intéressants tels que par exemple la protection de la substance encapsulée, ou encore sa libération lente au site d'utilisation pour un effet prolongé. Lorsque les particules sont destinées à être utilisées dans les domaines cosmétique, pharmaceutique ou alimentaire, elles doivent être constituées d'un matériau biocompatible tel que les protéines et les polysaccharides. La préparation de microcapsules à partir de polysaccharides, carbohydrates de poids moléculaire élevé, a été largement décrite dans la littérature antérieure (voir par exemple P. B. Deasy : and related processes, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, vol 20,1984, Marcel Dekker). Ces composés peuvent notamment être utilisés seuls dans des procédés de microencapsulation basés sur la coacervation simple, ou associés à des polymères polycationiques dans des procédés basés sur la formation de complexes polyélectrolytes. Des microcapsules ont été également préparées par réticulation interfaciale de polysaccharides au moyen d'isocyanates polyfonctionnels, comme décrit par exemple dans le document FR-A-2 275 250, qui concerne des microcapsules préparées à partir d'hydroxypropylcellulose, ou dans le document US 4 138 362, qui s'applique à des gommes naturelles ou à du chitosane. Par ailleurs, des microcapsules à paroi formée de glycosaminoglycanes et de collagène co-réticulés sont décrites dans le document FR-A-2 642 329, qui concerne l'application à des mélanges de glycosaminoglycanes et de collagène de la réticulation interfaciale au moyen de chlorures de diacides. La réticulation interfaciale en systèmes d'émulsions au moyen de chlorures de diacides a été également appliquée à la préparation de particules à partir de polysaccharides dans le document EP-0 630 287 BI, les pH de réaction utilisés ne dépassant pas pH 10. Dans ces divers procédés de préparation de microcapsules, les carbohydrates utilisés sont des polysaccharides, c'est-à-dire des molécules de poids moléculaire élevé, supérieur à 5000 daltons, constituées de l'association d'un grand nombre d'unités osidiques. En effet, il est bien connu que les macromolécules telles que les protéines et les polysaccharides ont des propriétés d'adsorption particulières aux interfaces. Voir par exemple les pages 317 à 335 de l'ouvrage : properties of food macromolecules" édité par Mitchell J. R. et Ledward D.A., Elsevier, London, 1986. Ces phénomènes d'adsorption aux interfaces, qui se traduisent par la formation d'un film interfacial, sont un élément particulièrement favorable dans la préparation de particules par réticulation interfaciale de biopolymères tels que les polysaccharides. Concernant les carbohydrates de poids moléculaire inférieur à 5000 Daltons, on relève dans la littérature antérieure des procédés de préparation de billes de polymères à partir de cyclodextrines, ohgosaccharides cycliques présentant une cavité hydrophobe susceptible de piéger diverses molécules de géométrie compatible. L'agent réticulant le plus employé est l'épichlorhydrine, comme par exemple dans l'article de Wiedenhof N. et al. (Die Stârke, 1969,21, 119-123). Concernant l'utilisation de dichlorures d'acides, le document US 3,472,835 décrit la préparation de résines de cyclodextrines par réticulation en milieu homogène (DMF ou DMSO). Cependant les conditions de préparation sont drastiques, la réaction s'effectuant à 100 C pendant un temps prolongé (6h). En outre, la diffusion des substances à piéger s'effectue difficilement dans ces billes compactes. Des améliorations ont été proposées pour améliorer la porosité des polymères, soit en générant une dégagement de C02 in situ (dans le document US 4,958,015), soit en réalisant la réticulation à la surface d'un oxyde minéral poreux (US 4,902,788). Dans le document US 4,902,788, il est indiqué (p. 3, colonne 3, lignes 54-55) que l'inconvénient principal des dichlorures d'acides aromatiques est de donner des rendements relativement bas de résine. Ainsi, dans l'art antérieur, il n'y a aucune description ou suggestion concernant la préparation de particules par réticulation interfaciale de monosaccharides ou d'oligosaccharides tels que les cyclodextrines, au moyen de dichlorures d'acides en systèmes d'émulsion. Buts de l'invention L'invention a pour but principal de résoudre un nouveau problème technique consistant à fournir des particules stables biocompatibles et biodégradables, éventuellement incorporant diverses substances hydrophiles ou lipophiles, et utilisables dans les secteurs pharmaceutiques, cosmétiques et alimentaires. L'invention a encore pour but principal de résoudre un nouveau problème technique consistant à fournir des particules biocompatibles et biodégradables selon une méthode de fabrication particulièrement simple permettant d'obtenir des particules de qualité constante de préférence à partir de substances de composition chimique parfaitement définie et qui soient, en outre, avantageusement capables d'être dissoutes en particulier en phase aqueuse à température ambiante. La présente invention a pour but principal de résoudre un nouveau problème technique consistant en la fourniture de nouvelles particules de faible dimension, biocompatibles et biodégradables, à partir de monosaccharides et d'oligosaccharides. La présente invention a encore pour but de résoudre un nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de préparer des particules de faible dimension, stables, à partir de monosaccharides et d'oligosaccharides, tout en permettant éventuellement l'encapsulation d'une ou plusieurs substances actives à l'état de solution, de suspension ou d'émulsion. La présente invention a encore pour but de résoudre un nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de préparer à partir de cyclodextrines, en particulier de B-cyclodextrines, de nouvelles particules insolubles de faible dimension, biocompatibles et biodégradables, aisément isolables d'un milieu liquide, et ayant conservé les capacités de piégeage spécifiques de ces cyclodextrines. La présente invention a encore pour but de résoudre un nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de préparer à partir de cyclodextrines, en particulier de B-cyclodextrines, de nouvelles particules insolubles de faible dimension, biocompatibles et biodégradables, poreuses, que l'on peut aisément charger en diverses molécules actives, puis incorporer à des particules de taille supérieure, également biocompatibles et biodégradables, de manière à permettre une libération ralentie et prolongée de la molécule active par diffusion au travers du matériau de la dite particule de taille supérieure. La présente invention a encore pour but de résoudre un nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de préparer un produit à partir de dihydroxyacétone (DHA), qui, incorporé à une composition n'en altère pas la stabilité, en particulier la stabilité de couleur, et qui appliqué sur la peau libérera la DHA, capable de se combiner avec les aminoacides de la peau pour donner une pigmentation. La présente invention a encore pour but de prévenir toute altération, en particulier toute modification de couleur au cours du temps d'une composition contenant de la DHA. La présente invention a encore pour but de résoudre un nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de préparer des particules de faible dimension, stables, à partir d'oligosaccharides ou de monosaccharides ou des polyols ou aminosucres dérivés, et capables de libérer le composé de départ par hydrolyse enzymatique, constituant ainsi un type particulier de précurseur susceptible d'une libération lente d'un composé présentant une activité biologique intéressante. La présente invention a encore pour but de résoudre un nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de préparer des particules de faible dimension, stables, à partir d'hétérosides dont la partie osidique comporte une ou plusieurs molécules osidiques, et capables de libérer l'hétéroside par hydrolyse enzymatique, constituant ainsi un type particulier de précurseur ou prodrogue. La présente invention a encore pour but de résoudre les nouveaux problèmes techniques énoncés ci-dessus avec l'utilisation de procédés de fabrication simple, utilisables à l'échelle industrielle, en particulier dans l'industrie cosmétique, pharmaceutique, alimentaire. De préférence, cette solution doit permettre de préparer des particules de faible dimension ayant une taille de particules réglable à volonté, en particulier dans une plage de dimensions allant du nanomètre à plus du millimètre, en particulier d'environ 10 nanomètres à environ 2 mm. L'invention a encore pour but principal de résoudre les nouveaux problèmes techniques ci-dessus énoncés à partir de composés de départ ayant une parfaite innocuité et à un prix peu élevé, en permettant ainsi une large utilisation par l'industrie pharmaceutique, cosmétique et alimentaire. Résumé de l'invention Ainsi, selon la présente invention, il a été découvert, de manière parfaitement inattendue, que l'on pouvait obtenir des particules, en particulier des micro- ou nano-particules, stables à partir de monosaccharides ou d'oligosaccharides, en déclenchant une réaction de réticulation interfaciale entre un monosaccharide ou un oligosaccharide et un agent réticulant acylant polyfonctionnel, en particulier un halogénure de diacide, de préférence un chlorure de diacide, à l'interface des phases d'une émulsion, en particulier de type "eaudans-l'huile", de préférence à la température ambiante. Pour fabriquer ces particules, on peut selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, émulsionner, de préférence à la température ambiante, tout d'abord une phase aqueuse alcaline contenant le monosaccharide ou l'oligosaccharide au sein d'une phase hydrophobe, puis on ajoute la solution d'agent réticulant à l'émulsion. On constate alors qu'il se forme à l'interface des gouttelettes aqueuses, par suite de l'établissement de liaisons ester entre l'agent réticulant et des groupements hydroxyle du monosaccharide ou de l'oligosaccharide, des membranes constituées de molécules réticulées du carbohydrate. L'invention permet aussi de préparer des particules d'un grand intérêt par réticulation interfaciale de monosaccharides et d'oligosaccharides au moyen d'agents acylants bifonctionnels en systèmes d'émulsion, de préférence à la température ambiante. En effet, les monosaccharides et oligosaccharides sont des substances de composition chimique parfaitement définie, et donc de qualité constante, ne présentant pas, comme les polysaccharides à poids moléculaire élevé de risque de variation de composition selon les fournisseurs, et selon les lots de produit. De plus, à la différence des polysaccharides, qui sont souvent difficilement solubles dans les phases aqueuses utilisables dans ces procédés et qui imposent souvent un chauffage de la phase aqueuse pour la dissolution, les monosaccharides comme le glucose, les oligosaccharides comme le lactose ou le saccharose, sont très solubles dans l'eau à température ambiante. Ajoutons que beaucoup de ces composés, tels que le saccharose ou le lactose, sont largement utilisés dans l'industrie alimentaire et disponibles à des prix peu élevés. En outre, ces composés sont d'une parfaite innocuité. Ils apparaissent donc d'une manière générale susceptibles de conduire à des particules biocompatibles et biodégradables, incorporant diverses substances hydrophiles ou lipophiles, utilisables dans les secteurs pharmaceutique, cosmétique et alimentaire. Par ailleurs, la réticulation interfaciale de certains de ces composés peut permettre d'atteindre à des buts particuliers tels que: - la stabilisation d'une substance altérable, comme c'est le cas pour la dihydroxyacétone (DHA) qui donne au cours du temps des produits de dégradation colorés, - et/ou l'obtention d'un précurseur sous forme particulaire, susceptible de libérer une forme active après attaque enzymatique: - par exemple la DHA, capable de se combiner aux amino-acides de la peau pour lui conférer une pigmentation, - ou un hétéroside, tel que le saponoside ou la streptomycine, dans le cas ou la partie osidique de l'hétéroside, constituée d'une ou plusieurs molécules osidiques contenant au moins une fonction alcool primaire, a permis de préparer des particules par réticulation interfaciale. Notons que le principe de précurseurs-esters de molécules actives est développé en thérapeutique pour des médicaments destinés à être appliqués sur la peau (Viala K. H. et al., Drug Dev. Ind. Pharm., 1985,11, 1133-1173), ou en cosmétologie (Forestier J.P., Int. J. Cosmetic Sci., 1992, 14, 47-63. - ou encore la réalisation de particules insolubles et poreuses de cyclodextrines qui permettent d'accéder à des applications particulières basées sur le piégeage de molécules, pour en débarrasser un milieu liquide, ou pour les récolter, ou encore pour libération lente de la molécule piégée au site d'action. Or, si l'on applique à des monosaccharides ou à des oligosaccharides les conditions décrites dans les documents antérieurs tels que le document EP-0 630 287 BIappliqué aux polysaccharides, c'est-à-dire si l'on effectue la réticulation interfaciale avec dichlorures d'acides dans des systèmes d'émulsion où la phase aqueuse utilisée pour dissoudre les carbohydrates a un pH ne dépassant pas 9,8, il n'est pas possible d'obtenir des particules stables. Les particules sont obtenues avec un rendement nul ou très faible et l'examen microscopique montre de nombreux débris ce qui traduit la grande fragilité du matériau réticulé. Dans le cadre de l'invention, , il a été découvert, de manière parfaitement inattendue, que l'on peut obtenir des particules, en particulier des micro ou des nanoparticules, stables, d'oligosaccharides ou de monosaccharides réticulés, en utilisant pour dissoudre les carbohydrates une phase aqueuse alcaline de pH supérieur à 10, et en déclenchant la réaction de polycondensation au moyen d'un dihalogénure, en particulier un dichlorure d'acide à l'interface d'une émulsion. Les particules obtenues sont suffisamment stables pour résister à une incubation prolongée à l'étuve à 45 C à l'état de suspension aqueuse sans destruction de leur structure. Elles sont également suffisamment stables pour subir une lyophilisation sans aucune destruction de leur structure, et reprennent une forme sphérique après réhydratation, ce qui constitue encore un avantage technique déterminant de l'invention. Les particules sont progressivement détruites après incubation dans du plasma humain, ce qui montre leur biodégradabilité, en particulier sous l'action des estérases. Selon les conditions choisies pour l'émulsification, la taille des particules peut varier de moins de 1 micromètre, c'est-à-dire de taille nanométrique, par exemple en utilisant un homogénéiseur haute pression, à plusieurs centaines de micromètres, et même à plus d'lmm. Il a été également découvert que l'on pouvait obtenir des particules en déclenchant la réaction de polycondensation au sein d'une émulsion de type "huile-dans-l'eau". Dans ce cas, on émulsionne une phase hydrophobe contenant un agent réticulant, de préférence un halogénure de diacide, en particulier un chlorure de diacide, au sein d'une phase aqueuse alcaline contenant le monosaccharide ou l'oligosaccharide, et utilisée comme phase dispersante. On laisse la réaction se développer à l'interface, et on maintient l'agitation pendant un temps convenable. On constate qu'il se forme une membrane autour des gouttelettes hydrophobes dispersées, donnant ainsi des particules à contenu hydrophobe, ici consistant en des capsules. Description détaillée de l'invention Selon un premier aspect, la présente invention couvre des particules caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés au moyen d'une réticulation interfaciale en émulsion, de préférence à la température ambiante, entre le ou les monosaccharide(s) ou oligosaccharide (s) au moins un groupement alcool primaire et un agent réticulant polyfonctionnel acylant, de préférence un halogénure de diacide, en particulier un chlorure de diacide, réalisant des liaisons ester entre des groupements hydroxyle acylable (s) l'alcool(s) primaire(s) du monosaccharide ou de l'oligosaccharide et les groupements acyle de l'agent polyfonctionnel acylant. Dans le cadre de l'invention, tout monosaccharide ou oligosaccharide de poids moléculaire inférieur à 5000 daltons, porteur d'au moins une fonction alcool primaire peut être utilisé sans limitation. De même, tout agent réticulant polyfonctionnel à au moins deux fonctions acylantes peut être utilisé sans limitation. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, des dérivés de monosaccharides ou d'oligosaccharides, tels que les polyols résultant de l'hydrogénation des fonctions aldéhydiques ou cétoniques des oses, les acides aldoniques dérivant des aldoses et des lactones correspondantes, les esters phosphoriques d'oses, les osamines, ou encore les hétérosides dont la partie osidique est constituée d'un ou plusieurs oses et comporte au moins une fonction alcool primaire, sont utilisables. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, les particules précitées peuvent être préparées à partir d'un seul monosaccharide ou oligosaccharide de faible poids moléculaire, ou à partir de mélanges. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, les monosaccharides précités peuvent être des cétoses, tels que la dihydroxyacétone (DHA), l'érythrulose, le ribulose, le xylulose, le fructose, le sorbose, ainsi que leurs dérivés. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, les monosaccharides précités peuvent être des aldoses, tels que l'érythrose, le thréose, le xylose, l'arabinose, le ribose, le désoxyribose, le glucose, le mannose, le galactose, ainsi que leurs dérivés. Parmi les dérivés de monosaccharides utilisables, seuls ou en mélanges, dans les procédés selon l'invention, on trouve notamment les polyols correspondants, tels que le sorbitol, le mannitol, le xylitol, l'arabitol, le dulcitol, le lactitol, le galactitol, l'érythritol, le thréitol, des aminosucres comme la glucosamine, la galactosamine, la glucosamine sulfate, la galactosamine sulfate, des acides aldoniques ou des lactones, comme l'acide gluconique, l'acide galactonique, la gluconolactone, la galactonolactone. Appartiennent aussi à ce groupe les préparations du commerce renfermant des polyols, tels que par exemple le Néosorb 70# ("sorbitol 70%", Roquette). Parmi les oligosaccharides, utilisables, seuls ou en mélanges, dans les procédés selon l'invention, on trouve des disaccharides tels que notamment le saccharose, le lactose, le maltose, le cellobiose, le tréhalose, le mélibiose, des oligosaccharides comme le raffinose, les dextrines, ou produits d'hydrolyse partielle de l'amidon, les cyclodextrines telles que l'alpha-cyclodextrine, la bétacyclodextrine, la gamma-cyclodextrine, les dérivés de cyclodextrines tels que l'hydroxyéthyl B-cyclodextrine, les hydroxypropyl-13-cyclodextrines (2-HP-ss-CD, 3-HP-13-CD, 2,3-HP-13-CD), les cyclodextrines branchées telles que la glucosyl ssCD, la diglucosyl ss-CD, la maltosyl 13-CD, la dimaltosyl 13-CD, ou encore des mélanges d'oligosaccharides tels que par exemple les produits commercialisées sous le nom de Glucidex 8 par la société Roquette, contenant des proportions variables de glucose, maltose et maltodextrines. Parmi les dérivés d'oligosaccharides utilisables, seuls ou en mélanges, dans les procédés selon l'invention, on trouve notamment les polyols correspondants, tels que le maltitol et le lactitol, ou les préparations commerciales contenant des polyols et obtenues par hydrogénation des produits d'hydrolyse partielle de l'amidon. Aux dérivés de monosaccharides et d'oligosaccharides, se rattachent également les hétérosides ou les glycosides, molécules constituées d'une partie osidique liée à une partie non osidique. Les hétérosides utilisables dans les procédés selon l'invention ont une partie osidique comportant une ou plusieurs unités osidiques et contenant au moins une fonction alcool primaire. La fraction non osidique ou aglycone a de préférence une structure cyclique, comportant un ou plusieurs cycles, aromatiques ou non, pouvant inclure un ou plusieurs hétéroatomes tels que des atomes d'azote, d'oxygène ou de soufre. Parmi les hétérosides utilisables dans les procédés selon l'invention, on trouve notamment les p-D xylosides tels que le 4-méthyl umbelliferyl ss-D xyloside, le p-nitrophényl p-D xyloside, ou la riboflavine, ou les nucléosides naturels consistant en ribonucléosides comme la guanosine, l'adénosine, l'uridine, la cytidine, ou les désoxyribonucléosides tels que la désoxyguanosine, la désoxyadénosine, la désoxycytidine, la thymidine, ou les nucléosides anti-viraux ou anti-cancéreux de synthèse, analogues structuraux des nucléosides naturels, tels que les analogues de l'adénosine, les analogues de la désoxycytidine, ou les mononucléotides, les désoxymononucléotides, ou les oligonucléotides, les désoxyoligonucléotides, ou les antibiotiques du groupe des aminoglycosides tels que la streptomycine, la dihydrostreptomycine, les kanamycines, l'amikacine, la dibékacine, la tobramycine, les néomycines, la paromomycine, ou les saponosides avec aglycone stéroidique comme les saponosides du Lierre, ou les saponosides avec aglycone triterpénique, comme le saponoside du bois de Panama, ou les hétérosides cardiotoniques avec aglycone stéroidique, tels que la digitoxine. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, la présente invention couvre également des particules caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins en surface une paroi formée de cyclodextrines, en particulier de 6-cyclodextrines réticulées. Les inventeurs ont découvert de manière particulièrement inattendue que les particules préparées à partir de cyclodextrines ont conservé d'intéressantes capacités de piégeage, qu'elles sont aisément séparées des milieux contenant la substance à piéger, et qu'elles peuvent être réutilisées après décharge de la substance piégée. Ainsi, lorsque l'on veut retirer par complexation un constituant d'un mélange, l'utilisation d'une telle forme insoluble permettra de séparer facilement le complexe, et même de décharger la molécule complexée de la forme insoluble de cyclodextrine afin de pouvoir la réutiliser. Ainsi, selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, on peut imprégner ou charger les particules de cyclodextrines réticulées selon l'invention avec une substance actif, en particulier une substance cosmétiquement active, une substance pharmaceutiquement active, une substance diététiquement active, une substance agroalimentaire, une substance agroindustrielle. Cette imprégnation ou chargement de ladite substance ou principe actif peut avoir lieu de manière très simple. Par exemple, les particules de cyclodextrines réticulées sont baignées ou incubées dans une solution contenant le principe actif pendant un temps suffisant pour permettre l'imprégnation ou chargement ou piégeage d'au moins une partie du principe actif par les particules. Le pH de la solution aqueuse de principe actif est proche de la neutralité ou légèrement acide et ne doit pas dépasser 8, c'est-àdire de préférence compris entre environ 4,5 et 8, de sorte à éviter une hydrolyse des liaisons esters et une dégradation des particules. Grâce à cette imprégnation ou chargement en substances actives ou principes actifs, on obtient un système de libération lente de cette substance ou principe actif à l'extérieur du système. Cette libération lente ou retardée peut encore être améliorée de la manière suivante. Ainsi, selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, on peut enfermer les particules de cyclodextrines réticulées selon l'invention et chargées de principe actif, à l'intérieur de particules de taille supérieure formées d'une protéine réticulée ou d'un mélange de protéines et de polysaccharides coréticulés, afin d'obtenir un système à libération lente. Dans ce cas, pour fabriquer ces particules, on prépare dans un premier temps des particules de cyclodextrines réticulées selon l'invention. Ces particules sont ensuite incubées dans une solution de principe actif pendant un temps suffisant pour permettre un piégeage d'une partie du principe actif par les particules, comme cela vient d'être décrit précédemment pour le piégeage ou le chargement d'une substance active ou principe actif dans les particules de cyclodextrines réticulées. On dissout ensuite dans la suspension de particules réticulées des protéines ou un mélange de protéine et de polysaccharide, et on utilise le mélange obtenu comme phase aqueuse pour la préparation de particules par réticulation interfaciale de la protéine ou du mélange de protéine et de polysaccharide, en émulsion de type Eau-dans-Huile, au moyen d'un dihalogénure d'acide, de préférence un dichlorure, selon les brevets précédents du déposant, par exemple le brevet US-A-5,395,620, ou le brevet FR-A-97 08968. Le mélange est alors dispersé dans une phase hydrophobe de manière à obtenir une émulsion, puis on ajoute à l'émulsion un dihalogénure d'acide, de préférence un dichlorure, et on laisse développer la réaction pendant un temps suffisant pour que se forment, autour des particules de cyclodextrines réticulées préalablement selon l'invention, des particules de taille supérieure, par acylation des groupements fonctionnels acylables de la protéine ou du mélange de protéine et de polysaccharide. On obtient finalement des particules de plus grande taille renfermant les particules intactes de cyclodextrines réticulées selon l'invention, et contenant du principe actif en partie complexé par des particules de cyclodextrines réticulées. Le matériau réticulé constitutif des particules de plus grande taille permettra une libération lente du principe actif à l'extérieur du système. En ce qui concerne les protéines utilisables avantageusement dans le cadre de l'invention, on citera les protéines animales, tels que le collagène, l'atélocollagène, la gélatine, la sérumalbumine, l'ovalbumine, l'hémoglobine, les protéines du lait incluant la caséine et les protéines du lactosérum, la lactabumine, les globulines, le fibrinogène ; les protéines végétales extraites notamment de légumineuses, en particulier des plantes suivantes : soja, lupin, pois, pois chiche, luzerne, féverole, lentille, haricot, colza, tournesol, ou encore de céréales comme le blé, le maïs, l'orge, le malt, l'avoine, le seigle. En ce qui concerne les polysaccharides avantageusement utilisables, on préfère les glycosaminoglycannes, parmi lesquels avantageusement le chondroïtine 4-sulfate, le chondroïtine 6-sulfate, le dermatane sulfate, l'héparane sulfate et le kératane sulfate ainsi que l'héparine et ses dérivés, en particulier l'héparine de faible poids moléculaire ayant un poids moléculaire compris entre environ 2 000 et 10 000 et les sels d'héparine cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables, tels que les sels de sodium et de calcium, les gommes naturelles, les carraghénanes, les glucomannanes, les galactomannanes, l'amylose ou l'amylopectine ou leurs mélanges, les dérivés hydroxyalkylés de polysaccharides tels que l'hydroxyéthylamidon ou l'hydroxyéthylcellulose. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, la présente invention couvre également des particules caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins en surface une paroi formée de cyclodextrines, en particulier de ss-cyclodextrines réticulées, chargées d'une substance active, et enfermées dans des particules biocompatibles et biodégradables de taille supérieure, telles que par exemple des particules de protéines réticulées, ou de protéines et polysaccharides coréticulés, afin de constituer un système à libération lente. Dans ce cas, pour la fabrication de ces particules, on ajoute une protéine éventuellement additionnée d'un polysaccharide à la suspension de particules de cyclodextrines dans la solution de substance active et cette phase aqueuse est utilisée pour la fabrication de particules par réticulation interfaciale selon les brevets précédents du déposant, par exemple, le brevet USA 5,395,620, ou le brevet FRA 9708968. On sait que les cyclodextrines sont des oligosaccharides cycliques formés de 6 à 8 unités glucose. Ces molécules présentent des propriétés intéressantes liées à l'hydrophobie de leur cavité interne. Elles peuvent notamment augmenter la solubilité dans l'eau de principes actifs (cas en particulier des ss-cyclodextrines et de leurs dérivés hydrophiles), piéger diverses molécules et ainsi les stabiliser contre la chaleur, l'oxydation, la lumière, l'évaporation, (huiles essentielles, arômes, vitamines liposolubles par exemple). De plus, certains dérivés de cyclodextrines permettent d'obtenir une libération prolongée ou retardée de la molécule piégée (Uekama K. et al., In: New Trends in Cyclodextrins and Derivatives, D. Duchêne ed., Editions de Santé, Paris, 1991, chap 12,411-446). C'est le cas notamment pour des dérivés hydrophobes de B-cyclodextrines tels que les diéthyl- et triéthyl-B-cyclodextrines, qui diminuent la solubilité aqueuse de principes actifs très solubles dans l'eau (libération prolongée), ainsi que pour des dérivés ionisables de f3-cyclodextrines, tels que la carboxyméthyl éthyl ss-cyclodextrine, composé peu soluble en milieu acide, et dont la solubilité augmente avec le pH par ionisation des groupements carboxyméthyle (libération évitée en milieu gastrique, retardée jusque dans l'intestin). Cependant, ces dérivés sont d'un prix relativement élevé par comparaison avec les cyclodextrines initiales. Pour ce qui concerne les cyclodextrines initiales, leur solubilité dans l'eau représente un problème lorsqu'on désire les utiliser dans un système de libération destiné à être au contact de l'eau, cette solubilité rendant difficile le contrôle de la libération de la molécule complexée (Friedman R.B, In: New Trends in Cyclodextrins and Derivatives, D. Duchêne ed., Editions de Santé, Paris, 1991, chap 4,157-177) . De même la solubilité dans l'eau gêne l'isolement des complexes lorsqu'on veut procéder à l'élimination spécifique d'un constituant d'un mélange en milieu aqueux, et la récupération des cyclodextrines libres lorsqu'on veut procéder à leur recyclage commercial. La préparation de polymères contenant des cyclodextrines apporte une solution à ces problèmes. Ainsi, on peut obtenir une libération ralentie d'une substance active en la complexant avec un polymère porteur de B-cyclodextrines, et en interposant une membrane dialysante entre le polymère et le milieu de libération. Ainsi par exemple, Behar N. et al. (S.T.P. Pharma, 1987,3, 237-247), montrent que des polymères de synthèse, l'un hydrosoluble (polyéthylène-imine), l'autre insoluble (préparé à partir de polychloroformiate de vinyle), porteurs de molécules de cyclodextrines et chargés d'une substance active très soluble dans l'eau comme le propranolol, lorsqu'on les place dans un tube de dialyse, permettent de ralentir la diffusion du principe actif dans le compartiment aqueux externe, le polymère et le complexe ne pouvant traverser la membrane. Les inventeurs ont également pu observer de manière inattendue, le même phénomène lors d'expériences de dialyse effectuées avec du propranolol en présence de particules parfaitement biocompatibles et biodégradables de cyclodextrines réticulées selon la présente invention. Sur le même principe, Fenyvesi, E.(J. Inclusion Phenom., 1988,6, 537-545) rapporte qu'un système constitué de microcapsules contenant un principe actif complexé avec un polymère soluble de cyclodextrine permet de retarder la libération du principe actif, le polymère ne pouvant traverser la membrane des microcapsules. Les inventeurs sont également parvenus à obtenir ce résultat remarquable avec des microcapsules parfaitement biocompatibles de protéine réticulée contenant du bleu de méthylène complexé avec des quantités croissantes de particules de ss-cyclodextrines réticulées. Des expériences de libération in vitro montrent un ralentissement de la libération par rapport à des microcapsules ne contenant pas de particules de cyclodextrines. Le ralentissement est d'autant plus prononcé que la quantité de particules de cyclodextrines encapsulées augmente. Les inventeurs ont également montré que les particules de DHA réticulée étaient parfaitement stables tout en permettant l'apparition d'une pigmentation après application sur la peau, ce qui montre qu'elles sont biodégradables et peuvent régénérer la substance de base avec son activité spécifique intacte après dégradation enzymatique. Selon un deuxième aspect, la présente invention couvre un procédé de fabrication de particules de faible dimension comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés, caractérisé en ce qu'il comprend : a) la préparation d'une phase aqueuse à un pH compris entre 10,5 et environ 14, dans laquelle on dissout au moins un monosaccharide ou au moins un oligosaccharide ; b) la préparation d'une phase hydrophobe essentiellement non miscible à l'eau et contenant éventuellement un tensioactif ; c) la dispersion de la phase aqueuse dans la phase hydrophobe par agitation de manière à former une émulsion de type Eau-dans-Huile ; d) l'addition à l'émulsion d'une solution de l'agent polyfonctionnel acylant et le maintien de l'agitation pendant une période de temps suffisante pour réaliser une réticulation du monosaccharide ou de l'oligosaccharide à l'interface des gouttelettes dispersées de ladite émulsion et former ainsi des particules ; e) éventuellement la séparation desdites particules du milieu réactionnel. La présente invention couvre également un procédé de fabrication de particules de faible dimension comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés, caractérisé en ce qu'il comprend : a) la préparation d'une phase aqueuse à un pH compris entre 10,5 et environ 14, dans laquelle on dissout au moins un monosaccharide ou au moins un oligosaccharide ; b) la préparation d'une phase hydrophobe essentiellement non miscible à l'eau et contenant un agent réticulant polyfonctionnel acylant ; c) la dispersion de la phase hydrophobe dans la phase aqueuse par agitation de manière à former une émulsion de type Huile-dans-Eau, et le maintien de l'agitation pendant une période de temps suffisante pour réaliser une réticulation du monosaccharide ou de l'oligosaccharide à l'interface des gouttelettes dispersées de ladite émulsion et former ainsi des particules, en particulier des capsules ; d) éventuellement la séparation desdites particules du milieu réactionnel. La présente invention couvre également un procédé de fabrication de particules de faible dimension de cyclodextrines réticulées, enfermées dans des particules de taille supérieure, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Tout d'abord, on prépare des particules de cyclodextrines réticulées selon l'invention en système d'émulsion de type Eau-dans-Huile que l'on récupère; b) On introduit ou incube ensuite ces particules dans une solution aqueuse d'un principe actif de pH compris entre environ 4,5 et environ 8, pendant un temps suffisant pour permettre un piégeage du principe actif par les particules ; c) On dissout ensuite dans la suspension de particules une protéine ou un mélange de protéine et de polysaccharide ; d) On disperse le mélange par agitation dans une phase hydrophobe de manière à obtenir une émulsion de type Eau-dans-Huile ; e) On ajoute à l'émulsion une solution d'un agent polyfonctionnel acylant et on maintient l'agitation pendant un temps suffisant pour que se forment, autour des particules de cyclodextrines réticulées selon l'invention, des particules de taille supérieure, par acylation des groupements fonctionnels acylables de la protéine ou du mélange de protéine et de polysaccharide ; f) Eventuellement, on sépare les particules de plus grande taille obtenues renfermant les particules intactes de cyclodextrines réticulées selon l'invention, et contenant du principe actif en partie complexé par les cyclodextrines des particules de cyclodextrines réticulées. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, cette solution aqueuse peut être constituée d'un tampon tel qu'un tampon carbonate ou phosphate ajusté à un pH supérieur à 10,5, par exemple à un pH de 11, ou encore à une solution d'un agent alcalin tel que la soude, par exemple une solution de soude 1M. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la concentration du monosaccharide ou de l'oligosaccharide dans la phase aqueuse est comprise entre 3% et 80%, de préférence entre 10 et 30%. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent réticulant polyfonctionnel acylant précité est de préférence constitué par au moins un dihalogénure d'acide, de préférence choisi parmi le groupe consistant de dihalogénure de phtaloyle, de téréphtaloyle, de sébacoyle, de glutaryle, d'adipoyle, et de succinyle, ou un anhydride de ces acides. On préfère utiliser un dichlorure de ces acides. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, les microcapsules précitées sont préparées par réticulation interfaciale à partir d'une émulsion, de préférence à la température ambiante, dont la phase dispersée à encapsuler renferme une ou plusieurs substances actives hydrosolubles, liposolubles ou insolubles, incorporées à l'état de solution, de suspension ou d'émulsion. Selon un troisième aspect, la présente invention couvre également l'utilisation de ces particules. Les applications générales des particules de mono et oligosaccharides réticulés sont les suivantes: Dans les domaines cosmétiques, pharmaceutiques et alimentaires, ces particules biocompatibles et biodégradables permettent l'incorporation de substances hydrosolubles ou liposolubles, à l'état de solutions, de suspensions ou d'émulsions. Les particules selon l'invention présentent un intérêt supplémentaire particulier en cosmétique, lié à la libération in situ après hydrolyse, du constituant de base, dont l'activité spécifique sur la peau peut être recherchée, par exemple l'effet hydratant des monosaccharides et disaccharides (lactose), et des polyols dérivés (mannitol, sorbitol), stimulateur de la synthèse des glycosaminoglycannes et effet antirides (glucosamine sulfate, galactosamine sulfate, dérivés de betaxylosides). On notera aussi l'intérêt d'encapsuler des gouttelettes hydrophobes dans une membrane très hydrophile constituée par exemple de saccharose ou de sorbitol réticulé. Les applications des particules de cyclodextrines réticulées sont les suivantes : *Telles quelles, non chargées : capter un constituant du milieu sous forme de complexe d'inclusion: - pour des applications technologiques telles que séparer des stéréoisomères, catalyser des réactions chimiques, extraire des molécules amères, de la caféine, du cholestérol, de la phénylalanine. Elles peuvent ainsi constituer un adsorbant solide à utiliser par exemple pour remplir des colonnes que l'on fera traverser par le liquide à purifier. - pour la détoxification de milieux liquides, biologiques ou non, de l'eau, notamment pour extraction d'amines aromatiques, de phénols, de bilirubine, de toxines. La biocompatibilité des particules est ici un avantage important. - pour récupérer une substance à partir d'un milieu liquide - pour des applications analytiques : particules permettant d'améliorer la détection de substances en les concentrant - dans le domaine de la cosmétique, les propriétés de piégeage des cyclodextrines sont utilisables pour absorber les lipides en excès sur la peau (effet matifiant), pour absorber les composés de dégradation de la sueur (produits déodorants) ou les substances responsables de la mauvaise haleine (effet anti-bad breath dans des dentifrices ou des solutions de rinçage buccal). La biocompatibilité des particules est ici encore un avantage important. *Chargées de substances actives sous forme de complexes d'inclusion, et incorporées à des systèmes permettant un diffusion lente, en particulier à des particules, notamment à des particules de protéines réticulées ou de protéines et polysaccharides co-réticulés: - dans le domaine de la cosmétologie : une libération ralentie et prolongée de la substance active, permettant une prolongation d'action, avec une amélioration de la tolérance cutanée pour des principes actifs présentant un effet irritant, tels que par exemple l'acide rétinoïque, l'acide salicylique etc.. - dans le domaine de la thérapeutique, pour la fabrication de médicaments ou de compositions pharmaceutiques ayant une libération ralentie et prolongée de la substance active, permettant une prolongation d'action, par toutes voies d'administration, et permettant une amélioration de la tolérance cutanée et muqueuse. Les applications des particules de DHA réticulées sont liées à la stabilisation de la DHA, permettant une incorporation à des préparations cosmétiques variées, et libérant après dégradation enzymatique à la surface de la peau, la DHA capable de se combiner avec les amino-acides de la peau en donnant une pigmentation. Les particules d'hétérosides réticulés ont des applications notamment liées au fait qu'elles représentent des précurseurs nouveaux de type particulaire: - utilisables en cosmétique pour la libération lente, par dégradation enzymatique de la particule, de l'hétéroside constitutif, qui va exercer ensuite son activité spécifique (exemple: particules de saponoside réticulé) - utilisables en thérapeutique : particules constituent alors un nouveau type de vecteurs ou prodrogues particulaires qui permettent à la fois : - une protection du principe actif, une libération lente, par dégradation enzymatique de la particule, de l'hétéroside constitutif, pour un effet prolongé et/ou une amélioration de la biodisponibilité et/ou une amélioration de la tolérance cutanée ou muqueuse, un ciblage, lié à la nature particulaire de la prodrogue. Selon la taille des particules, on pourra par exemple préparer des particules ayant un diamètre compris entre environ 10 et 100 m, par exemple environ 15 um à partir d'un antibiotique comme la streptomycine, qui peuvent permettre après injection intra-veineuse le ciblage des capillaires du poumon selon un principe connu de vectorisation par blocage capillaire (Davis S.S. et Illum L., Acta Pharm. Technol., 1986, 32, 4-9) et la libération lente de l'antibiotique in situ pour une meilleure efficacité. Ou bien on préparera des nanoparticules de substance active qui seront captées par les cellules, en particulier par les cellules, du système réticulo-endothélial, et permettront d'en traiter les maladies telles que les maladies bactériennes ou parasitaires. Ou bien encore la réalisation de particules de taille nanométrique à partir d'oligonucléotides ou oligodésoxynucléotides peut permettre d'obtenir directement une forme vectorisée et stable de ces oligonucléotides ou oligodésoxynucléotides, directement internalisable par les cellules, capable de libérer dans la cellule l'oligonucléotide ou l'oligodésoxynucléotide initial notamment pour utilisation dans le cadre de la thérapie antivirale ou anticancéreuse, ou dans le cadre de la thérapie génique ou pour utilisation dans le cadre général de la transfection de cellules ou transfert de matériel génétique, évitant ainsi l'emploi de vecteurs viraux ou de vecteurs synthétiques. Ou bien encore la réalisation de particules de taille nanométrique à partir de nucléosides antiviraux ou anticancéreux peut permettre d'obtenir directement une forme vectorisée et stable de ces nucléosides, directement internalisable par les cellules et capable de libérer dans la cellule le nucléoside initial. Selon un quatrième aspect, la présente invention couvre également une composition, notamment choisie parmi le groupe consistant d'une composition cosmétique, d'une composition pharmaceutique et d'une composition alimentaire, caractérisée en ce qu'elle comprend comme l'un de ses composants ou principes actifs des particules précitées comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés, en particulier au moyen d'une réticulation interfaciale en émulsion, de préférence à la température ambiante, entre le ou les monosaccharide (s) ouoligosaccharide(s) comprenant au moins un groupement alcool primaire et un agent réticulant polyfonctionnel acylant, de préférence un halogénure de diacide, en particulier un chlorure de diacide, réalisant des liaisons esters entre des groupements hydroxyles acylables de (s) l'alcool (s) primaire (s) du monosaccharide ou de l'oligosaccharide et les groupements acyles de l'agent polyfonctionnel acylant. D'autres caractéristiques de ces particules résultent de la description précédente, ainsi que de la description suivante en relation avec les exemples. Selon un cinquième aspect, la présente invention couvre aussi un procédé de traitement cosmétique ou thérapeutique, caractérisé en ce qu'il comprend l'apport à un site concerné d'un mammifère, de préférence un être humain, d'une quantité cosmétiquement ou thérapeutiquement efficace de particules précitées comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés, en particulier au moyen d'une réticulation interfaciale en émulsion, de préférence à la température ambiante, entre le ou les monosaccharide (s) ou oligosaccharide (s) au moins un groupement alcool primaire et un agent réticulant polyfonctionnel acylant, de préférence un halogénure de diacide, en particulier un chlorure de diacide, réalisant des liaisons esters entre des groupements hydroxyles acylables de(s) l'alcool(s) primaire(s) du monosaccharide ou de l'oligosaccharide et les groupements acyles de l'agent polyfonctionnel acylant. D'autres caractéristiques de ces particules résultent clairement de la description précédente et suivante, notamment en référence aux exemples et même concernant les utilisations cosmétiques ou thérapeutiques précédemment indiquées, notamment relativement à la description du deuxième aspect. Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique d'un mammifère, de préférence un être humain, caractérisé en ce qu'il comprend l'application topique sur une zone de la peau, du cuir chevelu ou des cheveux concernés, des particules telles que précédemment définies, et en particulier des particules pouvant contenir en outre au moins une substance cosmétiquement active. Selon un mode de réalisation avantageux, l'invention couvre aussi un procédé de traitement thérapeutique, caractérisé en ce qu'il comprend l'apport à un site concerné d'un mammifère, de préférence un être humain, d'une quantité thérapeutiquement efficace de particules précitées comprenant au moins en surface une paroi formée de cyclodextrines, en particulier de P-cyclodextrines réticulées, chargées d'une substance active et enfermées dans des particules biocompatibles et biodégradables de taille supérieure, telles que des particules de protéines réticulées ou de protéines et polysaccharides co-réticulés, ces particules doubles constituant un système à libération lente administrable par toutes voies d'administration, telles que la voie orale, la voie parentérale, la voie rectale, la voie vaginale, la voie pulmonaire, la voie cutanée, la voie ophtalmique, la voie nasale. Selon un mode de réalisation avantageux, l'invention couvre aussi un procédé de traitement thérapeutique, caractérisé en ce qu'il comprend l'apport à un site concerné d'un mammifère, de préférence un être humain, d'une quantité thérapeutiquement efficace de particules précitées comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs hétérosides réticulés, lesdites particules se comportant comme des prodrogues ou précurseurs particulaires de(s) l'hétéroside (s) actif (s), susceptibles de libérer in vivo le principe actif sous l'action d'enzymes telles que des estérases, administrables par toutes voies d'administration, telles que la voie orale, la voie parentérale, la voie rectale, la voie vaginale, la voie pulmonaire, la voie cutanée, la voie ophtalmique, la voie nasale, et permettant une protection du principe actif, ou une libération lente, ou une amélioration de la biodisponibilité, ou une amélioration de la tolérance cutanée ou muqueuse, ou un ciblage vers un organe, un tissu, un territoire vasculaire, ou encore, dans le cas de nanoparticules, une internalisation du principe actif par les cellules-cibles pour une thérapeutique antibiotique, antivirale, ou anticancéreuse, ou pour le transfert de matériel génétique dans des cellules. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à la lumière de la description explicative qui va suivre, faite en référence à plusieurs exemples de réalisation de l'invention donnés simplement à titre d'illustration, et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention, et en référence aux figures annexées dans lesquelles: Description des figures - La Figure 1 représente un cliché obtenu en microscopie électronique à balayage de particules de l'invention préparées à partir de 13-cyclodextrines à la concentration de 10 % en utilisant une vitesse d'agitation de 2000 rpm, en référence à l'exemple 7. - La Figure 2 représente les spectres en infra-rouge obtenus respectivement à partir de B-cyclodextrines non réticulées (a), et à partir de particules de 8-cyclodextrines réticulées de l'invention, préparées à partir de 13cyclodextrines à la concentration de 7,5 % en utilisant une vitesse d'agitation de 5000 rpm (b), en référence à l'exemple 7. - La Figure 3 présente les résultats de l'expérience de diffusion du propranolol à travers une membrane de dialyse telle que décrite à l'exemple 11. Cette figure regroupe trois courbes représentant les quantités de propranolol libéré à différents temps et exprimées en pourcentage de la quantité initiale, l'une de ces courbes correspondant à un essai réalisé sans ajout de particules de 13cyclodextrines (témoin), et les deux autres à deux essais conduits avec ajout respectivement de 10 mg ou de 50 mg de particules de B-cyclodextrines réticulées de l'invention. - La Figure 4 présente les résultats de l'expérience de libération du bleu de méthylène à partir de microcapsules de sérumalbumine réticulée telle que décrite à l'exemple 12. Cette figure regroupe cinq courbes représentant les quantités de bleu de méthylène libéré à différents temps et exprimées en pourcentage de la quantité initiale (valeurs moyennes écart types), l'une de ces courbes correspondant à un essai réalisé sans ajout de 13-cyclodextrines (témoin), une autre à un essai conduit avec ajout de 50 mg de 13-cyclodextrines non réticulées, et les trois autres à trois essais conduits avec ajout respectivement de 20 mg, 50 mg ou 100 mg de particules de ss-cyclodextrines réticulées de l'invention. Dans les exemples qui suivent, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire. De même, sauf indication contraire, la température est la température ambiante et la pression est la pression atmosphérique. Exemple 1 : Protocole-type de préparation de particules d'oligosaccharides ou monosaccharides réticulés dans un système d'émulsion de type "Eau-dansHuile". a) On prépare un solution à 10% d'oligosaccharide ou de monosaccharide dans la soude 1 M. b) 6 ml de cette solution sont émulsionnés dans 30 ml de cyclohexane contenant 5% de Span 85 par agitation mécanique de 5 min à une vitesse de 2000 rpm. c) Sans arrêter l'agitation, on ajoute à l'émulsion 40 ml d'une solution de chlorure de téréphtaloyle à 5% dans un mélange chloroforme cyclohexane 1 :4 (v/v) et l'agitation est poursuivie pendant 30 min. En fin de réaction, le milieu réactionnel est dilué par addition de 40 ml de cyclohexane et poursuite de l'agitation pendant 2-3 min. d) Les microcapsules sont ensuite séparées par décantation naturelle ou par centrifugation e) Le sédiment est lavé par remise en suspension successivement dans différents milieux, cyclohexane, éthanol à 95% additionné de 2% de Tween 20, dans de l'éthanol à 95%, dans de l'eau distillée. Ce protocole a été appliqué avec succès aux composés suivants ((Sigma, sauf précisions contraires) donnés à titre d'exemples: Ex. 1.1. ss-cyclodextrines Ex. 1. 2. Dextrines (Glucidex 40 #, ou Glucidex 47 #, Roquette) Ex. 1.3. Raffinose Ex. 1.4. Cellobiose Ex. 1.5. Saccharose Ex. 1.6. Maltose Ex. 1.7. Lactose Ex. 1.8. Tréhalose Ex. 1. 9. Dihydroxyacétone (DHA) Ex. 1.10. D- fructose Ex. 1.11. Sorbose Ex. 1.12. D- ribose Ex. 1.13. D-désoxyribose Ex. 1.14. D-xylose Ex. 1.15. Paranitrophényle beta-D-Xyloside Ex. 1. 16. D-arabinose Ex. 1.17. D-glucose Ex. 1.18. D-mannose Ex. 1.19. D-galactose Ex. 1.20. Xylitol Ex. 1.21. Erythritol Ex. 1.22. Arabitol Ex. 1.23. Sorbitol Ex. 1. 24. Mannitol Ex. 1.25. Dulcitol (galactitol) Ex. 1.26. Maltitol Ex. 1. 27. Acide gluconique Ex. 1.28. Gluconolactone Ex. 1.29. D-glucosamine, Ex. 1.30. D-galactosamine Ex. 1. 31. D-glucosamine sulfate, Ex. 1. 32. D-galactosamine sulfate Ex. 1. 33. Saponine de l'écorce de Quillaya Ex. 1.34. Guanosine Ex. 1. 35. Streptomycine sulfate Ex. 1. 36. Riboflavine Ex. 1. 37. Acide désoxyribonucléique (DNA) de sperme de hareng (oligonucléotides bruts) Ex. 1.38. Uridine Ex. 1.39 Lactitol. Des microparticules sphériques, de taille comprise entre quelques micromètres et quelques dizaines de micromètres (20 à 90 m) ont été obtenues. Exemple 2 : Variantes de préparation de particules d'oligosaccharides ou de monosaccharides réticulés dans un système d'émulsion de type "Eau-dansHuile". 1) La concentration de l'oligosaccharide ou du monosaccharide dans la phase aqueuse peut varier entre 2% à 80%. 2) La solution de soude 1 M peut être remplacée par des solutions de soude, ou d'un autre agent alcalin tel que la potasse, plus concentrées (2M, 5M...) ou plus diluées, ou encore par des tampons, amenés à un pH supérieur à 10, par exemple un tampon carbonate ou phosphate de pH 11. 3) L'oligosaccharide ou monosaccharide utilisé est préférentiellement choisi parmi le groupe des composés donnés à l'exemple 1 consistant de la bétacyclodextrine, des dextrines, du raffinose, des disaccharides tels que notamment du cellobiose, du saccharose, du maltose, du lactose, du tréhalose, des monosaccharides comprenant des cétoses, tels que la dihydroxyacétone (DHA), le fructose, le sorbose, ou des aldoses, tels que le ribose, le désoxyribose, le xylose, l'arabinose, le glucose, le mannose, le galactose, des dérivés d'oligosaccharides ou de monosaccharides, comprenant notamment les polyols correspondants, tels que le maltitol, ou les préparations commerciales contenant des polyols et obtenus par hydrogénation des produits d'hydrolyse partielle de l'amidon, le xylitol, l'érythritol, l'arabitol, le sorbitol, le mannitol, le dulcitol, le lactitol, ou le galactitol, des aminosucres comme la glucosamine, des acides ou lactones dérivés tels que l'acide gluconique, la gluconolactone, des hétérosides tels que la saponine, ou des antibiotiques tels que la streptomycine, ou la riboflavine, ou la guanosine ou l'adénosine, ou des oligonucléotides ou des oligodésoxynucléotides. On peut utiliser aussi : - d'autres cyclodextrines telles que l'alpha-cyclodextrine, la gammacyclodextrine, les dérivés de cyclodextrines tels que l'hydroxyéthyl sscyclodextrine, les hydroxypropyl-ss-cyclodextrines (2-HP-13-CD, 3-HP-6-CD, 2,3- HP-B-CD), les cyclodextrines branchées telles que la glucosyl 6-CD, la diglucosyl ss-CD, la maltosyl ss-CD, la dimaltosyl ss-CD, - des mélanges d'oligosaccharides tels que par exemple les produits commercialisés sous le nom de Glucidex 8 par la société Roquette, contenant des proportions variables de glucose, maltose et maltodextrines, - les préparations du commerce renfermant des polyols, telles que par exemple le Néosorb 70 # ("sorbitol 70%", Roquette) - les désoxyribonucléosides tels que la désoxyguanosine, la désoxycytidine, les nucléosides antiviraux ou antitumoraux de synthèse, analogues structuraux des nucléosides naturels, tels que les analogues de l'adénosine de la désoxyadénosine, les analogues de la cytidine, de la désoxycytidine, les mononucléotides et oligonucléotides, les monodésoxynucléotides et oligodésoxynucléotides. 4) La phase hydrophobe peut être constituée d'un autre solvant organique ou mélange de solvants, ou d'huiles fixes telles que le cocoate d'éthyl-2-hexyle ou autres mélanges bien connus de l'homme de l'art. La nature et le pourcentage de tensioactif ajouté peuvent également varier. 5) La taille des particules est ajustée par variations de la nature et le pourcentage de tensioactif et/ou de la vitesse d'agitation. Elle peut être de 1 m ou moins pour des vitesses de rotation de 15 000-20 000 rpm. Exemple 3 : Essais de stabilité de particules d'oligosaccharides ou monosaccharides réticulés dans un système d'émulsion de type "Eau-dansHuile". Conduite de l'essai: Des échantillons de particules en suspension dans l'eau distillée sont placés à l'étuve à 45 C. A intervalles réguliers, on observe les échantillons pour déceler toute modification de couleur et d'aspect et pour vérifier la limpidité du surnageant. L'intégrité des particules est contrôlée par examen microscopique. Résultats Les particules suivantes ont été étudiées: *Particules: de B-cyclodextrines réticulées, selon l'exemple 1.1. de saccharose réticulé, selon l'exemple 1.5. de DHA réticulée, selon l'exemple 1.9. de fructose réticulé, selon l'exemple 1.10. de mannitol réticulé, selon l'exemple 1.24. de glucosamine réticulée, selon l'exemple 1.29. de saponine réticulée, selon l'exemple 1.33. Pour la plupart des particules, une stabilité de plus de trois mois est observée : la couleur du sédiment de particules est inchangée (blanche ou crème), le surnageant est limpide et incolore, et l'examen microscopique montre des particules intactes. Pour les particules de DHA, la stabilité est de plus de 4 mois, pour les particules de mannitol réticulé, de plus de 6 semaines. *Particules de ss-cyclodextrines réticulées, selon l'exemple 1. 1, mais avec des concentrations de 7,5% ou 5% en cyclodextrines: une stabilité de plus de trois mois est observée. *D'autres particules ont été préparées selon l'exemple 1, mais en remplaçant la soude 1M par un tampon carbonate de pH 11, par exemple particules : de 13-cyclodextrines réticulées, préparées avec 10% ou 5% de cyclodextrines : stabilité de plus de 10 semaines de saccharose réticulé : de plus d'un mois de DHA réticulée : de plus de 3 mois. Exemple 4 : Essais de biodégradabilité de particules d'oligosaccharides ou monosaccharides réticulés dans un système d'émulsion de type "Eau-dans- Huile". Les particules sont préparées comme décrit à l'exemple 1, mais en augmentant la vitesse d'agitation à 5000 rpm. a) Dégradation desparticules dans le plasma sanguin: Protocole de l'essai: On utilise du plasma humain congelé (Centre de Transfusion Sanguine de Reims), décongelé au moment de l'emploi. Dans un tube à essais, 50 mg de particules fraîches essorées sont introduites et dispersées dans 5 ml de plasma sanguin. Le tube est placé au bain-marie à 37 C. Une agitation magnétique est installée. On suit la dégradation au microscope optique par comparaison avec un tube témoin préparé en dispersant 50 mg de particules dans un tampon phosphate de pH 7,4. Résultats: *Particules de B-cyclodextrines réticulées : Début de dégradation après 5h. Après 24 h, très nombreux débris et des particules ouvertes. Par comparaison, aucune dégradation n'est constatée dans le tube témoin renfermant le tampon pH 7,4. *Particules de saccharose réticulé : de dégradation après 3h. Après 24 h, très nombreux débris de particules. Dégradation très nette par rapport au tube témoin où les particules sont intactes. *Particules de DHA réticulée : lente qui entraîne l'apparition d'une teinte marron, très nette après 48 h, et témoignant de la réaction de la DHA libérée avec les protéines plasmatiques. * Particules de glucose réticulé : 1 h, les particules perdent leur forme sphérique et deviennent de forme ellipsoïdale. Une dégradation lente est observée. Après 24 h, de petits fragments sont visibles ainsi que des microcapsules ouvertes. *Particules de mannitol réticulé : de dégradation après 3h. Après 24 h, très nombreux débris, des particules ouvertes. Aucune dégradation dans le tube témoin. *Particules de glucosamine réticulée : dégradation lente, présence de débris après 24h. * Particules de saponine réticulée : de dégradation après 2 h : de débris. Après 24 h, toutes les particules sont dégradées en petits fragments. Ces expériences montrent que les particules objet de l'invention sont biodégradables. Tandis qu'elles sont intactes après incubation prolongée dans un tampon de pH 7,4, elles sont dégradées d'une manière générale dans le plasma sanguin, ce qui montre une sensibilité à l'action des estérases plasmatiques qui rompent les liaisons ester formées par l'agent réticulant avec les groupements hydroxyle des monosaccharides ou oligosaccharides ou de leurs dérivés. b) Dégradation des particules de saccharose réticulé par l'invertase: Réactifs: Invertase (Grade V, bakers yeast, SIGMA), utilisée sous forme d'une dispersion à 1% dans un tampon acétate de pH 4,9. Protocole de l'essai: Dans un tube à essais, 50 mg de particules fraîches essorées sont introduites et additionnées de 5 ml de la dispersion d'invertase à 1 % dans le tampon acétate. Le tube est placé au bain-marie à 37 C. Une agitation magnétique est installée. On suit la dégradation au microscope optique par comparaison avec un tube témoin préparé en dispersant 50 mg de particules dans le tampon acétate de pH 4,9. De plus on met en évidence l'apparition de glucose dans le milieu à l'aide du test Clinistix (BAYER) : la coloration rose d'une bandelette réactive à la glucose-oxydase vire au violet en présence de glucose. Résultat: Après 6 h : de dégradation des particules visible au microscope optique. Le test Clinistix est positif: coloration violette, résultat : Après 24 h, il reste quelques rares particules intactes. Le test Clinistix donne un résultat plus positif: la coloration est d'un violet franc, résultat ++. Les particules de saccharose réticulé, intactes après incubation dans le tampon seul, sont attaquées par l'invertase, enzyme capable de dégrader le saccharose en glucose et fructose. Exemple 5 : de préparation de particules d'oligosaccharides ou monosaccharides réticulés dans un système d'émulsion de type "Huile-dansEau". a) Préparation de la phase huileuse à encapsuler: On ajoute 0,6 ml de chlorure de sébacoyle à 5,4 ml d'huile d'olive et on mélange. b) Préparation de la phase aqueuse : On prépare 30 ml d'une solution de saccharose à 20 % dans la soude 1 M. c) Emulsion-réticulation On émulsionne 6 ml du mélange huileux dans les 30 ml de la phase aqueuse par agitation à 2000 rpm et on maintient l'agitation pendant 1 heure. d) Les particules sont séparées du milieu réactionnel, par exemple par centrifugation. e) Lavages : particules sont lavées plusieurs fois à l'eau distillée. Exemple 6 : Caractéristiques de particules d'oligosaccharides ou monosaccharides réticulés dans un système d'émulsion de type "Huile-dansEau". Préparation des particules On prépare les lots de particules suivantes: * Lot 1: particules de saccharose réticulé selon l'exemple 5 * Lot 2 : particules de saccharose réticulé selon l'exemple 5, mais en augmentant à 30% la concentration de saccharose dans la phase aqueuse, et la vitesse à 5000 rpm. * Lot 3 : comme le lot 1, mais en remplaçant le saccharose par le mannitol (20%), et en augmentant la vitesse d'agitation à 5000 rpm. * Lot 4 : comme le lot 2, mais en remplaçant le saccharose par le sorbitol, en augmentant la concentration à 30%, et en augmentant la vitesse d'agitation à 5000 rpm. Caractéristiques des particules Dans tous les cas, on obtient un surnageant de couleur crème formé de microcapsules renfermant chacune une gouttelette d'huile. L'examen microscopique montre que toute l'huile a été encapsulée. Les microcapsules apparaissent comme des sphères de diamètre compris entre 20 et 150 m, à membrane distincte de couleur grise. Si on exerce une pression forte sur la lamelle d'observation microscopique, on fait éclater les microcapsules, ce qui libère l'huile encapsulée et permet d'observer la membrane, laquelle se présente alors comme un sac transparent déchiré. Essai de stabilité à 45 C L'essai est conduit comme décrit à l'exemple 3, sur les lots 2 et 4. Résultats : Les microcapsules du lot 2 sont stables au moins pendant 5 semaines à 45 C, les microcapsules du lot 4, au moins pendant 3 semaines. Exemple 7 : des microparticules de ss-cyclodextrines (ss-CD) réticulées en fonction des paramètres de fabrication 1) Morphologie Elle est étudiée en microscopie optique et microscopie électronique à balayage - Microscopie optique: Les particules préparées selon l'exemple 1 (10% de ss-CD, 2000 rpm) se présentent sous forme d'un sédiment blanc. Celui-ci est formé de particules sphériques avec un contenu piqueté et une membrane distincte. Avec 7,5% de ssCD (NP 143), les particules présentent un aspect comparable. Avec 5% de 13-CD, (NP 50 bis), on obtient des vésicules avec un contenu clair. Si on remplace la soude 1M par un tampon de pH 11, on obtient également des particules sphériques avec un contenu granuleux. - Microscopie électronique à balayage: Cet examen est effectué sur des particules lyophilisées. Dans toutes les conditions ci-dessus, l'examen révèle des particules à membrane continue, collapsées du fait de la lyophilisation. La figure 1 présente à titre d'exemple des microparticules préparées dans les conditions de l'exemple 1. Il faut noter que lorsque ces particules lyophilisées sont remises en suspension dans de l'eau, elles reprennent rapidement leur forme sphérique en se gonflant d'eau. 2) Taille Elle est déterminée par une technique de diffraction laser (Granulomètre Coulter LS 200, Coultronics). Les résultats sont exprimés en volume/ diamètre des particules (SD). Résultats : % de ss-CD Phase aqueuse Vitesse d'agitation Taille moyenne m (SD) 10 % Soude 1 M 2000 rpm 34,26 (22,9) 10 % Soude 1 M 5000 rpm 11,28 (5,98) 7,5 % Soude 1 M 2000 rpm 21,65 (10,6) 7,5% Soude 1M 5000 rpm 8,40 (4,25) 5 % Soude 1M 2000 rpm 20,69 (12) Comme attendu, la taille des particules diminue lorsque la vitesse d'agitation augmente. De plus, la taille des particules diminue quand la concentration de sscyclodextrines diminue. 3) Spectre infra-rouge Méthode : Les spectres infrarouges ont été déterminées par la technique de la pastille de KBr à l'aide d'un spectromètre infra-rouge à transformée de Fourier (BOMEM, MB-series). Résultats : A titre d'exemple, la figure 2 compare le spectre IR obtenu avec la ss-CD non réticulée (spectre a) et le spectre IR de particules préparées selon l'exemple 1 mais avec une concentration de 7,5% de ss-CD et une vitesse d'agitation de 5000 (spectre b). Les principales différences entre les deux spectres concernent l'apparition de bandes à 1724 cm-1, 1280 cm-1, et 731 cm-1 dans le spectre des particules (b), reflétant la formation d'esters à partir de groupements hydroxyles des ss-CD. 4) Teneur en ss-CD des particules: détermination en polarimétrie Méthode: La quantité de ss-CD contenue dans les particules a été mesurée en exploitant le pouvoir rotatoire de la 13-CD, comme décrit par exemple par Behar N. et al., (S. T.P. Pharma, 1987, 3, 237-247) dans une étude concernant des ss-CD fixées sur des polymères. On procède au préalable à une hydrolyse complète des particules lyophilisées (60 mg) dans la soude 0,5 M (3 ml), après agitation de 45 min à 20 C. On neutralise par ajout d'HCl 0,25 M et on complète à 12 ml avec de l'eau distillée. On filtre ensuite la solution (correspondant à 0,5% de particules) sur membrane 0,22 m. La solution est étudiée en polarimétrie par comparaison avec la ss-CD non réticulée. Il a été vérifié avec la 13-CD non réticulée que le traitement par la soude 0,5 M ne modifie pas les résultats des mesures polarimétriques. L'essai a été conduit sur 2 lots de particules préparées selon l'exemple 1 mais avec une solution à 7,5% de ss-CD et une vitesse d'agitation de 5000 rpm. L'humidité résiduelle de ces deux lots a été déterminée au moyen d'une balance à humidité (type HR 73 Halogen Moisture Analyzer, Mettler Toledo), de manière à rapporter les résultats au poids de particules sèches. Résultats: Teneur des particules en ss-CD (en % du poids sec) Lot 1 68,7 % Lot 2 67,4 % Moyenne 68 % Ainsi les particules renferment, en poids , 68% de 13-CD et 32 % de téréphtalate, ce qui, en rapportant aux masses moléculaires, correspond à une moyenne de 3,2 moles de téréphtalate pour 1 mole de ss-CD. Exemple 8 : Evaluation des propriétés de complexation des particules de sscyclodextrines réticulées vis-à-vis du paranitrophénol, et influence des paramètres de préparation. 1) Propriétés de complexation d'un lot de référence: variations de la prise d'essai et du temps de complexation *Le lot de référence choisi est préparé selon l'exemple 1 mais avec 7,5% de 13- cyclodextrines (7,5% de ss-CD dans la soude 1M, vitesse d'agitation : rpm). *Diverses prises d'essai de microparticules sont incubées à 20 C dans une solution de paranitrophénol (pNP) 1mM tamponnée à pH 4, avec agitation, puis, à des temps échelonnés, on procède au dosage spectrophotométrique du pNP résiduel dans le surnageant jusqu'à ce que l'équilibre soit atteint. Des mesures de densité optique, on déduit la concentration résiduelle en pNP, à partir de laquelle on calcule la quantité de pNP fixée par les microcapsules. Elle est exprimée d'une part en pourcentage de la quantité de pNP initiale, d'autre part en moles fixées par gramme de microcapsules. Protocole: Des masses croissantes de microparticules (10, 20,50 et 100 mg) sont incubées à température ambiante dans 10 ml d'une solution de pNP 1 mM dans un tampon acétate pH 4, pendant des temps croissants, avec agitation magnétique, à l'abri de la lumière. On effectue une incubation par masse et par temps de contact, et chaque essai est dupliqué. Après incubation, la suspension est centrifugée. A 300 ul du surnageant sont ajoutés 2,7 ml de tampon acétate pH 4, puis 3 ml de soude 0,25 M. Le mélange est filtré sur membrane de porosité 0,22 m. La densité optique est mesurée à 405 nm contre un blanc préparé sans pNP. L'ensemble de l'expérience est répété sur un nouveau lot de microparticules. Résultats: Fixation de paranitrophénol par les microparticules de ss-CD réticulées : influence de la prise d'essai et du temps d'incubation pNP fixé : %/ moles par g de particules * Temps d'incubation 5 min 10 min 30 min 1 h 24 h Prise d'essai 10 mg 13 / 128 12/119 13 / 134 14/145 Il / 111 20 mg 19/96 20/98 21/106 24/121 21/103 50 mg 36/72 38/76 35/69 42/83 42/83 100 mg 55/55 53/53 54/54 57/57 61/67 *Moyenne de 4 déterminations Comme attendu, lorsque les quantités de microcapsules mises en jeu augmentent, les quantités de pNP fixées, exprimées en % de la quantité initialement présente, augmentent. On note également que si l'on exprime les quantités de pNP fixées en moles par gramme de microcapsules, ces quantités diminuent au fur et à mesure que le poids de microcapsules mises en jeu augmente : le pNP se répartit davantage entre les particules lorsque leur nombre augmente. On observe enfin que l'équilibre est atteint rapidement : les valeurs varient peu après 5 min de contact, le plateau étant atteint après lh. 2) Influence des paramètres de préparation des microparticules sur les propriétés de complexation (avec lh d'incubation) Protocole: On adopte pour cette étude les conditions suivantes : d'essai : mg, durée de l'incubation à 20 C: 1 h. Pour chaque paramètre étudié, les propriétés complexantes des microcapsules ont été évaluées sur deux lots différents, en réalisant pour chaque lot deux incubations différentes. On a pu ainsi vérifier la reproductibilité des résultats obtenus. A partir du lot de référence (7,5% de ss-CD, 2000 rpm), reproduit deux fois (Lots 1 et 2), les variations suivantes ont été étudiées: - Variations de la concentration de 13-CD dans la phase aqueuse : à 10% (lots 3 et 4) et diminution à 5 % (lots 5 et 6) - Augmentation de la vitesse d'agitation à 5000 rpm (Lots 7 et 8) - Diminution de la concentration en chlorure de téréphtaloyle à 2. 5% (Lots 9 et 10) Le diamètre moyen de tous ces lots de particules a été déterminé à l'aide du granulomètre Coulter LS 200. Résultats: a) Fixation de pNP en 1 h par les lots de référence : 1 et 2 (7,5 % de ss-CD ; CT: 5%; v: 2000 rpm) Lots Lot 1 Lot 2 Taille moyenne (SD) 28,02 (17,1) 24,8 (13,7) Essai 1 Essai 2 Essai 1 Essai 2 pNP fixé : mol/g 83,6 83,6 82,6 84,5 Moyenne lots 1 et 2 83 b) Fixation de pNP en lh par les lots 3 et 4 : de la concentration en ss-CD (10 % de ss-CD ; CT: 5%; v : 2000 rpm) Lots Lot 3 Lot 4 Taille moyenne (SD) 34,26 (22,9) 35,3 (20,4) Essai 1 Essai 2 Essai 1 Essai 2 pNP fixé: mol/g 79,8 72,2 79,4 75,4 Moyenne lots 3 et 4 77 c) Fixation de pNP en lh par les lots 5 et 6 : de la concentration en 13-CD (5 % de ss-CD ; CT: 5%; v : 2000 rpm) Lots Lot 5 Lot 6 Taille moyenne (SD) 20,69 (12) 22,4 (10) Essai 1 Essai 2 Essai 1 Essai 2 pNP fixé: mol/g 93,4 91,6 93,4 89,8 Moyenne lots 5 et 6 92 d) Fixation de pNP en lh par les lots 7 et 8: augmentation de la vitesse d'agitation ( 7,5 % de ss-CD ; CT: 5%; v: 5000 rpm) Lots Lot 7 Lot 8 Taille moyenne (SD) 11,36 (10) 10,43 (7,37) Essai 1 Essai 2 Essai 1 Essai 2 pNP fixé: mol/g 99,0 97,0 97,4 97,6 Moyenne lots 7 et 8 98 e) Fixation de pNP en lh par les lots 9 et 10 : de la concentration en chlorure de téréphtaloyle à 2.5% ( 7,5 % de ss-CD, v : 2000 rpm) Lots Lot 9 Lot 10 Taille moyenne (SD) 29,53 (14,7) 30,4 (16,2) Essai 1 Essai 2 Essai 1 Essai 2 pNP fixé: mol/g 87,6 85,8 82,2 84,8 Moyenne lots 9 et 10 85 Ainsi, par rapport au lot de référence qui fixe 83 umol/g, on note que les propriétés de complexation varient avec la concentration de ss-CD dans la phase aqueuse : elles sont diminuées (77 umol/g) pour 10% et augmentées (92 mol/g) pour 5%. Par ailleurs l'augmentation de la vitesse d'agitation, qui fournit des microcapsules de plus petite taille, donc développant une plus grande surface, est un facteur favorable (98 umol/g).En revanche, l'abaissement de la concentration en agent réticulant à 2,5% ne modifie pas les propriétés de complexation. Exemple 9 : des propriétés de complexation des particules de ss- cyclodextrines réticulées vis-à-vis du propranolol Le propranolol est un médicament bloquant du système adrénergique. Il a été choisi pour cette étude en fonction de sa solubilité élevée dans l'eau et de son affinité élevée pour la 13-CD due au groupement naphtalène de la molécule qui s'adapte à la cavité hydrophobe des ss-CD (Behar et al., S. T.P. Pharma, 1987,3, 237-247). Protocole: Des particules de 13-CD ont été préparées à partir d'une solution à 7,5% dans la soude 1 M, avec une vitesse d'agitation de 5000 rpm. Les propriétés de complexation ont été évaluées après agitation d'une prise d'essai de 10 mg de particules lyophilisées dans 10 ml d'une solution de propranolol 1mM ou 2mM dans un tampon phosphate pH 7,4, à l'abri de la lumière. Après ce contact la suspension est centrifugée, le surnageant est récupéré, et le propranolol non fixé est dosé par spectrophotométrie UV à 290 nm. Pour chacune des deux concentrations de propranolol, deux lots ont été étudiés et deux essais par lots ont été effectués. Les résultats sont exprimés en moles de propranolol fixé par g de microcapsules sèches. Résultats: Propranolol fixé (en mol/g) par des microparticules de ss-CD après lh d'incubation dans 10 ml de solution de propranolol 1mM ou 2mM. Titre solution propranolol 1 mM 2 mM Lots N 1 2 3 4 Propranolol fixé (ssmol/g) Essai 1 509 492 835 794 Essai 2 495 485 805 811 Moyenne 495 811 Ces résultats sont inchangés si l'incubation est prolongée pendant 2 h ou 3 h. Exemple 10 : réversibilité de la complexation du propranolol par les particules de 8-cyclodextrines réticulées et réutilisation Les particules de 13-CD sont préparées comme décrit à l'exemple 9 et lyophilisées. Protocole d'étude: 1) Stade de complexation: Une prise d'essai de 10 mg de microcapsules est incubée dans 10 ml de solution de propranolol 1 mM dans un tampon phosphate de pH 7,4. Après 1 h d'agitation, la suspension est centrifugée et le propranolol est dosé dans le surnageant. 2) Stade de décomplexation Les microparticules séparées par centrifugation sont dispersées dans 50 ml de tampon phosphate pH 7,4 et soumises à une agitation magnétique pendant 15 min. Elles sont alors séparées du milieu. On dose le propranolol libéré dans le surnageant. Les particules sont alors redispersées dans 50 ml de tampon neuf. Après 15 min d'agitation magnétique, elles sont séparées du milieu et soumises à une nouvelle incubation dans 50 ml de tampon neuf. A la suite de ce traitement, la détermination spectrophotométrique du propranolol libéré dans le tampon montre que tout le propranolol a été libéré à partir du complexe avec les ss-CD réticulées. 3) Réutilisation des microparticules pour une nouvelle complexation Les microparticules précédentes débarrassées du propranolol, sont à nouveau incubées dans 10 ml de solution de propranolol 1 mM dans un tampon phosphate de pH 7,4. Après 1 h d'agitation, la suspension est centrifugée et le propranolol est dosé dans le surnageant. L'essai est dupliqué. Résultats: *Essai N 1 : -Quantité de propranolol fixé par les 10 mg de particules pendant le 1er stade de complexation: 514 umol/g de particules sèches. - Quantité de propranolol fixé par les 10 mg de particules au stade 3 de réutilisation, après les 3 lavages du stade de décomplexation : 517umol/g. *Essai N 2: -Quantité de propranolol fixé par les 10 mg de particules pendant le 1 er stade de complexation : 512 umol/g de particules sèches. - Quantité de propranolol fixé par les 10 mg de particules au stade 3 de réutilisation, après les 3 lavages du stade de décomplexation : 523gmol/g. Cette expérience démontre que les particules de B-CD peuvent être chargées d'une substance puis déchargées et réutilisées, avec la même capacité de piégeage. Exemple 11: Essai de dialyse d'une solution de propranolol contenant des masses croissantes de particules de B-cyclodextrines réticulées : mise en évidence d'une libération ralentie du principe actif Behar et al.(S.T.P. Pharma, 1987,3, 237-247), utilisant le propranolol, ont montré que des 13-CD fixées sur des polymères, solubles ou insolubles, permettaient de ralentir la diffusion de ce principe actif à travers une membrane de dialyse, le polymère (et le complexe principe actif-ss-CD fixé sur polymère) ne pouvant traverser la membrane. Une expérience comparable a été réalisée avec les microparticules de 6-CD réticulées, préparées comme à l'exemple 9. Protocole: 1) Stade de complexation du propranolol par les particules Une prise d'essai de 10 mg ou de 50 mg de microparticules lyophilisées est incubée dans 10 ml de solution de propranolol 2 mM dans un tampon phosphate de pH 7,4. L'agitation est maintenue pendant 1 h à température ambiante, à l'abri de la lumière. 2) Etude de la diffusion du propranolol à travers la membrane de dialyse Les 10 ml de suspension de microparticules de ss-cD dans la solution de propranolol sont introduits dans un tube de dialyse (SPECTRA POR : d'ester de cellulose, seuil de rétention moléculaire : diamètre : mm), préalablement rincée avec du tampon phosphate pH 7,4. Le tube est fermé à l'aide de 2 pinces, dont l'une, inférieure, est magnétique et permet l'agitation du système. Puis ce tube est placé dans un bêcher contenant 140 ml de tampon phosphate pH 7,4. L'ensemble est introduit dans un bain-marie à 37 C et l'agitation magnétique est déclenchée. A intervalles de temps régulier, on prélève du milieu de libération afin de doser le propranolol qui a diffusé par spectrophotométrie UV à 290 nm. Après dosage, le prélèvement est réintroduit dans le milieu pour maintenir constant le volume à 140 ml. Pour chacune des deux prises d'essais de particules : mg et 50 mg, trois déterminations sont effectuées. Les résultats sont exprimés en pourcentages moyens (avec écart-type) de propranolol libérés par rapport à la quantité introduite dans le tube de dialyse. Une série de 3 essais est également effectuée avec le propranolol sans ajout de microparticules (essai-témoin). Résultats: Diffusion du propranolol à travers la membrane de dialyse, effet de l'addition de particules de ss-CD Propranolol libéré % : valeur moyenne (écart-type) après: 30 min lh lh30 2h 3h 4h 5h 6h 7h 8h Témoin 21,1 37,8 50,1 60,2 74,7 82,2 87,1 90 91,7 93,3 sans particules (2) (1,5) (1,6) (0,7) (0,5) (0,6) (0,7) (0,7) (0,5) (0,2) 10 mg 12,9 24,2 33 40,9 52,6 59,7 65,1 68,9 71,7 74 de particules (0,6) (0,5) (0,7) (1,2) (1,7) (1,9) (1,8) (2,1) (2,5) (2,6) 50 mg 3,5 6,9 10,2 13,1 17,9 22,8 25,8 28,5 31,3 33,5 de particules (0,4) (0,3) (0,4) (0,7) (0,6) (0,8) (0,6) (0,8) (0,9) (1,1) Les chiffres obtenus permettent de tracer les courbes de libération de la figure 3. Cette série d'expériences montre que les particules de 13-CD réticulées permettent effectivement de ralentir la diffusion d'une molécule très soluble à travers une membrane semi-perméable, et ceci d'autant plus que la quantité de particules est plus élevée. Ainsi, après 6h, le témoin a libéré 90% du propranolol, tandis que les essais avec 10 mg puis 50 mg de particules en ont libéré respectivement 68,9 % et 28,5%. Exemple 12 : en évidence d'une libération ralentie d'un traceur, le bleu de méthylène, encapsulé avec des masses croissantes de particules de sscyclodextrines réticulées, dans des microcapsules de sérumalbumine réticulée. Sur la base des résultats précédents un nouveau système pour libération ralentie a été réalisé. Ici, la membrane de dialyse est remplacée par la membrane semi-perméable de microcapsules de protéine réticulée. On encapsule donc les microparticules de ss-CD avec le bleu de méthylène, choisi comme traceur. Protocole: 1) Préparation des lots témoins de microcapsules de sérumalbumine réticulée On utilise de la sérumalbumine humaine (HSA). - Préparation de la phase aqueuse: on dissout 10 mg de bleu de méthylène (FLUKA) dans 10 ml de tampon acétate de pH 7,4. Puis on dissout dans cette solution 1 g D'HSA. - Emulsification: on disperse les 10 ml de phase aqueuse dans 50 ml de cyclohexane à 2% de span 85. On agite pendant 5 min à 2000 rpm. - Réticulation: on ajoute 60 ml de solution de chlorure de téréphtaloyle à 2,5% dans le cyclohexane. On agite pendant 30 min à 2000 rpm. Les microcapsules sont ensuite séparées par centrifugation, lavées 4 fois avec du cyclohexane, débarrassées du cyclohexane par évaporation dans un évaporateur rotatif, congelées et lyophilisées. Résultat: belles microcapsules de couleur bleue, parfaitement rondes, avec une membrane épaisse, de taille 10 à 60 m. Après lyophilisation, on obtient 2 g d'une poudre fine formée de microcapsules intactes, qui se disperse parfaitement en milieu aqueux. 2) Préparation de lots de microcapsules d'HSA réticulée renfermant des quantités croissantes de microparticules de ss-CD. a) Incubation: Une prise d'essai variable (20mg, 50 mg ou 100 mg) de microparticules de 13-CD préparées comme à l'exemple 9 et lyophilisées, est dispersée dans 10 ml de solution de bleu de méthylène à 0,1% dans le tampon acétate de pH 7,4. Une agitation est maintenue pendant 1 h à température ambiante, à l'abri de la lumière. b) Encapsulation en microcapsules d'HSA réticulée - Préparation de la phase aqueuse : les 10 ml de la suspension précédente de particules de ss-CD après 1 h d'incubation, on dissout 1 g d'HSA. - Emulsification: on disperse les 10 ml de phase aqueuse dans 50 ml de cyclohexane à 2% de span 85. On agite pendant 5 min à 2000 rpm. - Réticulation : ajoute 60 ml de solution de chlorure de téréphtaloyle à 2,5% dans le cyclohexane. On agite pendant 30 min à 2000 rpm. Les microcapsules sont ensuite séparées par centrifugation, lavées 4 fois avec du cyclohexane, débarrassées du cyclohexane par évaporation dans un évaporateur rotatif, congelées et lyophilisées. Résultat: On obtient de belles microcapsules de couleur bleue. L'observation microscopique montre qu'elles sont parfaitement sphériques avec une membrane épaisse, de taille 10 à 70 m, et qu'elle contiennent les microparticules de ss-CD qui sont fortement colorées par le bleu de méthylène. Quelle que soit la prise d'essai (20 mg, 50 mg ou 100 mg de microparticules de B-CD), il y a une encapsulation totale de ces microparticules. Après lyophilisation, on obtient 2 g à 2,1 g d'une poudre fine formée de microcapsules intactes, qui se disperse parfaitement en milieu aqueux. 3) Préparation de lots de microcapsules d'HSA réticulée renfermant 50 mg de ssCD non réticulées Pour comparaison, 3 lots de microcapsules ont été préparés en ajoutant à la solution de bleu de méthylène 50 mg de 13-CD non réticulées, au lieu de particules de ss-CD réticulées. Comme décrit ci-dessus, une agitation est maintenue pendant lh à température ambiante. Ensuite l'encapsulation, la séparation, le séchage sont réalisés comme décrits ci-dessus. Il faut noter que le complexe bleu de méthylène-ss-CD absorbe à la même longueur d'onde que le bleu de méthylène libre. De plus, il a été vérifié qu'après 1 h d'incubation, le mélange renfermant le bleu de méthylène et les 50 mg de ssCD a une absorbance égale à celle mesurée sans ajout de ss-CD. 4) Essais de libération du bleu de méthylène Protocole: On utilise un appareil pour essai de dissolution à palette tournante (appareil ERWEKA, conforme à la Pharmacopée), thermostaté à 37 C, avec une vitesse de rotation de la pale de 50 tpm. Le lot entier de microcapsules lyophilisées est dispersé dans 500 ml de tampon phosphate de pH 7,4. A intervalles de temps réguliers, 5 ml de la suspension sont prélevés et centrifugés. Le surnageant est filtré sur membrane de porosité 0,2 m. La densité optique du filtrat est mesurée à 668 nm. Les microcapsules sédimentées dans le tube à centrifuger sont remises en suspension dans 5 ml de tampon phosphate et réintroduites dans le milieu de libération. Chaque essai de libération (essai témoin, essais avec 20 mg, 50 mg et 100 mg de particules de ss-CD, essai avec 50 mg de ss-CD non réticulées) est tripliqué. Résultats: Les quantités de bleu de méthylène libéré par ces différents lots de microcapsules après différents temps, exprimées en % de la quantité mise en jeu dans l'essai, sont regroupés dans le tableau suivant. Bleu de méthylène libéré % [Moyenne (écart type) ] à partir de microcapsules d'HSA réticulée, effet de l'addition de particules de 13-CD ou de ss-CD non réticulées : Témoin 20 mg 50 mg 100 mg 50 mg sans particules particules particules particules ss-CD Temps 15 min 7,21(0,22) 5,66 (0,06) 4,36 (0,13) 3,22 (0,19) 8,89 (0,12) 30 min 9,43 (0,14) 7,12 (0,17) 5,23(0,08) 3,68(0,24) 11,48 (0,39) 45 min 11,55 (0,17) 8,51 (0,07) 6,14 (0,21) 4,10 (0,31) 13,85 (0,36) 1 h 12,95 (0,25) 9,61 (0,20) 6,80 (0,26) 4,60 (0,48) 15,56 (0,41) lh 15 14,37 (0,20) 10,55 (0,16) 7,36 (0,05) 4,88 (0,23) 16,61 (0,37) lh 30 15,15 (0,11) 11,11 (0,53) 7,68(0,32) 4,98 (0,13) 17,44 (0,35) 2 h 16,11 (0,34) 12,06 (0,13) 8,44 (0,20) 5,28(0,09) 19,14 (0,44) 2 h 30 17,79 (0,12) 12, 71 (0,06) 8,57 (0,21) 5,28 (0,09) 20,12 (0,58) 3 h 18,05 (0,12) 12,82 (0,19) 8,79 (0,10) 5,70(0,19)20,81(0,51) 4 h 19,31 (0,19) 13,84 (0,20) 9,23(0,21) 5,73 (0,37) 21,89 (0,37) 5 h 19,83 (0,09) 14,13 (0,19) 9,37 (0,09) 5,81 (0,20) 22,83 (0,40) 6 h 20,2 (0,38) 14,2 (0,09) 9,57 (0,22) 5,81 (0,13) 23,10 (0,44) 8 h 20,13 (0,43) 14,21 (0,14) 9,79 (0,05) 6,06 (0,28) 23,27 (0,40) Les chiffres obtenus permettent de tracer les courbes de libération présentées sur la figure 4. Ces résultats, en accord avec les résultats de l'étude de dialyse de l'exemple 11, montrent que les particules de ss-CD réticulées, après encapsulation dans une membrane semi-perméable, permettent effectivement d'obtenir une libération ralentie d'une substance hydrosoluble. Ici encore, le ralentissement est d'autant plus prononcé que la quantité de particules de ss-CD encapsulée est plus élevée. Comme attendu, l'incorporation de ss-CD non réticulées ne permet pas de ralentir la libération. En effet, le complexe diffuse librement à travers la membrane des microcapsules du fait de sa solubilité et de sa faible masse moléculaire. Au contraire, on voit que, en présence de ss-CD non réticulée, la libération du bleu de méthylène est plus rapide que pour les microcapsules des lots témoins préparées sans ajout de ss-CD. L'explication tient sans doute au fait que dans les microcapsules des lots témoins, une certaine proportion du traceur se fixe à la protéine à l'intérieur des microcapsules, ce qui freine la libération. Lorsque la solution de bleu de méthylène est additionnée de ss-CD, une partie du traceur se trouve sous forme de complexe, diminuant d'autant la proportion de traceur susceptible de se lier à la protéine dans les microcapsules. La vitesse de libération se trouve donc légèrement augmentée. Il en est conclu que, tandis que les ss-CD non réticulées ne peuvent ralentir la diffusion du traceur, l'insolubilisation des ss-CD sous forme de microparticules de ss-CD réticulées apporte un avantage décisif en permettant de ralentir la vitesse de libération de substances solubles, et ce, d'autant plus que la quantité de microparticules incorporées est plus élevée. Exemple 13 : Particules de DHA réticulée : Essais in vitro de combinaison avec les aminoacides 1 ) Préparation des microparticules de DHA réticulée *Des microparticules de DHA réticulée sont préparées comme décrit à l'exemple 1, mais en remplaçant la soude 1 M par un tampon carbonate pH 11: - en conservant la vitesse d'agitation de 2000 rpm (Lot 1) - en augmentant la vitesse d'agitation à 5000 rpm (Lot 2). - en augmentant la vitesse d'agitation à 5000 rpm, et en diminuant la concentration de DHA à 5% (Lot 3) . 2 ) Essai de combinaison in vitro avec les aminoacides Principe des essais: Il a été observé que les microcapsules de DHA réticulée peuvent se dissoudre progressivement dans des mélanges renfermant d'une part une solution diluée de carbonate disodique (par exemple 1%), et d'autre part un polyéthylène glycol comme le PEG 200. Il s'agit d'une alcoolyse des liaisons ester présentes dans les particules, laquelle libère la DHA. Celle-ci est alors capable de réagir avec les amino-acides pour donner une coloration brune caractéristique. Nous avons comparé l'intensité des colorations obtenues en présence de glycine avec des microparticules préparées dans les conditions définies ci-dessus, à celle obtenue avec la DHA non réticulée, par lecture de la densité optique à 420 nm après 48 h. Protocole des essais: *Préparation du tube essai microparticules Tl : 20 mg de particules lyophilisées sont introduites dans 4 ml d'un mélange composé de 90% v/v de PEG 200 et 10% v/v d'une solution de carbonate disodique à 1%. On ajoute 100 l d'une solution de glycine 0,66 M et le tube est placé dans un bain thermostaté à 32 C. Après 48 h, on procède à une détermination de la densité optique après dilution au 1/4 avec de l'eau distillée. ** Préparation du tube microparticules sans glycine T2: On procède comme pour le tube Tl, mais en ajoutant 100 l d'eau distillée au lieu de la solution de glycine. * Préparation du tube témoin DHA non réticulée avec glycine T3: On procède comme pour Tl, en remplaçant les microparticules par 20 mg de DHA. * Préparation du tube témoin DHA non réticulée sans glycine T4: On procède comme pour T2, en remplaçant les microparticules par 20 mg de DHA. Résultats: Ils sont regroupés sur le tableau suivant: Essais de combinaisons in vitro des particules de DHA réticulée avec la glycine : couleur, mesure de la DO après 48h, comparaison avec la DHA libre. Avec glycine Sans glycine Couleur DO 48h Couleur DO 48 h Témoins DHA non réticulée 30 min : pale 30 min : pale 2 h : 48 h : noir 1,169 48 h : jaune 0,154 Microparticules Lot 1 lh30: reflet marron 2 h : 48 h : orangé 0,494 48 h : clair 0,056 Microparticules Lot 2 lh : reflet marron 24 h : jaune 48 h : orangé 0,616 48 h : jaune 0,025 Microparticules Lot 3 30 min : reflet marron 24 h : reflet jaune 48 h : 0,756 48 h : jaune clair 0,081 Ainsi, bien que donnant lieu à une coloration moins foncée que la DHA libre, les microparticules donnent lieu à l'apparition d'une coloration marron après 48 h en présence de glycine. Ceci montre que ces particules sont susceptibles de libérer de la DHA capable de se combiner avec les aminoacides. Les microcapsules des lots 2 et 3, préparées avec une plus grande vitesse d'agitation, donc de plus petite taille, donnent les colorations les plus foncées. La coloration la plus intense est obtenue avec les particules préparées avec 5% de DHA (lot 3). Exemple 14: Particules de DHA réticulée : Effet bronzant sur peaux reconstruites Les microsphères DHA préparées, tel que décrit dans l'exemple 13 pour le lot N 3, ont été lyophilisées et stérilisées au rayonnement beta à 25 Kgray. Elles ont ensuite été suspendues à 2,5% dans un milieu stérile. Par ailleurs, des solutions stériles contenant des concentrations de DHA comprises entre 0 et 5% sont réalisées. Ces deux préparations sont ensuite appliquées sur des peaux reconstruites, constituées de kératinocytes et de fibroblastes humains normaux ensemencés respectivement à la surface et à l'intérieur d'une matrice extra-cellulaire réalisée par lyophilisation d'un gel de collagène (Coletica). Ces peaux reconstruites permettent de mimer une application sur animal ou sur volontaire humain. Après application de chacune des préparations à tester (10ul/cm2) sur la surface de ces peaux reconstruites, l'évaluation de l'apparition de la couleur marron, caractéristique de la réaction de la DHA avec des acides aminés, est suivie et comparée à celle de chacun des échantillons de la gamme témoin. Après 8,24, 48,96 heures d'incubation à 37 C et sous mélange de gaz C02/02 utilisé de façon traditionnelle en culture cellulaire, cette couleur est observée et une cotation est réalisée. Tout d'abord, on peut constater que la coloration augmente au cours du temps d'incubation, et qu'elle augmente également en fonction de la quantité de DHA appliquée sur peau reconstruite. Par ailleurs, après 96 heures d'incubation, il est possible de constater que les microsphères de DHA, utilisées à 2,5% en suspension dans un milieu stérile, ont systématiquement permis de colorer les peaux reconstruites, de façon aussi intense qu'une solution de 5% de DHA. A concentration identique, l'activité de coloration obtenue avec les microsphères de DHA est donc deux fois plus intense que celle obtenue avec la DHA utilisée sous forme libre, ce qui s'explique par une meilleure disponibilité de la DHA lorsqu'elle est utilisée sous forme de microsphères. La libération prolongée (ou effet retard) obtenu avec les microsphères de DHA permettent par conséquent d'expliquer les différences de comportement observées sur la DHA. Ces effets retards permettent de manière plus générale d'envisager l'utilisation sous ces formes de micro ou de nanosphères, d'actifs irritants, toxiques, peu biodisponibles ou pénétrant très rapidement dans les tissus cutanés, dans des applications cosmétiques, pharmaceutiques ou agro-alimentaires. Exemple 15 : Utilisation des produits de l'invention dans des formulations cosmétiques ou pharmaceutiques de type émulsion huile dans eau Formulation 15a A . Eau déminéralisée qsp 100 . Butylène Glycol 2 . Glycérine 3 . Sodium Dihydroxycétyle Phosphate, 2 Isopropyle Hydroxycétyle Ether B . Glycol Stéarate SE 14 . Triisononaoine 5 . Cocoate d'octyle 6 C . Butylène Glycol 2 Méthylparabène, Ethylparabène, Propylparabène, pH ajusté à 5,5 D . Produits de l'invention 0,01 - 10 % Formulation 15b A . Eau qsp 100 . Butylène Glycol 2 . Glycérine 3 . Polyacrylamide, 2,8 Isoparafine Ether d'heptaéthylène glycol/alcool laurique (Laureth-7) B .Butylène Glycol, Méthylparabène, 2 Ethylparaben, Propylparabène . Phénoxyéthanol, Méthylparabène, 2 Propylparabène, Butylparabène, Ethylparabène .Butylène Glycol 0,5 C .Produits de l'invention 0,01 - 10 % Formulation 15c A . Polymère carboxyvinylique (Carbomer) 0,50 . Propylène Glycol 3 . Glycérine 5 . Eau déminéralisée qsp 100 B . Cocoate d'octyle 5 . Bisabolol 0,30 . Diméthicone 0,30 C . Hydroxyde de sodium 1,60 D . Phénoxyéthanol, Méthylparabène, 0,50 Propylparabène, Butylparabène, Ethylparabène E Parfum 0,3 F ). Produits de l'invention 0,01 - 10 % Exemple 16 de l'invention : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de e eau dans huile A . PEG 30 - dipolyhydroxystéarate 3 . Triglycérides Capriques 3 . Octanoate de cétéaryle 4 . Adipate de dibutyle 3 . Huile de grains de raisins 1,5 . Huile de Jojoba 1,5 . Phénoxyéthanol, Méthylparabène, Propyl- 0,5 parabène, Butylparabène, Ethylparabène B . Glycérine 3 . Butylène Glycol 3 . Sulfate de magnésium 0,5 . EDTA 0,05 . Eau déminéralisée qsp 100 C . Cyclométhicone 1 . Diméthicone 1 DParfum 0,3 E . Produit de l'invention 001 - 10 % Exemple 17 de l'invention : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de e shampooing ou el douche A . Gomme de Xanthane 0,8 . Eau déminéralisée qsp 100 B . Butylène Glycol, Méthylparabène, 0,5 Ethylparabène, Propylparabène . Phénoxyéthanol, Méthylparabène, 0,5 Propylparabène, Butylparabène, Ethylparabène C . Acide citrique 0,8 D . Sodium lauryl sulfate 40,0 E .Produit de l'invention 0,01 - 10 % Exemple 18 de l'invention : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de e rougeà lèvres et autres produits anhydres A . Cire minérale 17,0 . Isostéaryl Isostéarate 31,5 . Propylène Glycol Dipélargonate 2,6 . Propylène Glycol Isostéarate 1,7 . PEG 8 Cire d'abeille 3,0 . Huile de Palme et de Palmiste 3,4 . Huile de lanoline 3,4 . Huile de sésame 1,7 . Tribéhénine 1,7 . Cétyl Lactate 1,7 . Huile minérale, Alcool de la lanoline 3,0 B . Huile de castor qsp 100 . Pigments (totaux) 3,9 '{Dioxyde de titane, Rouge Covanor W360A# (Wackherr), Bromo de Phloxine 27# (Wackherr), Rouge Covalac W 1510 (Wackherr), Oxydes de fer} C . Produit de l'invention 0,01-5 Exemple 19 de l'invention : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de gels aqueux (contours de l'oeil, amincissants, etc...) A . Eau déminéralisée qsp 100 . Polymère carboxyvinylique (Carbomer) 0,5 . Butylène Glycol 15 . Phénoxyéthanol, Méthylparabène, Propyl- 0,5 parabène, Butylparabène, Ethylparabène B . Produit de l'invention 0,01-10 Exemple 20 : Etudes toxicologiques réalisées sur les produits de l'invention a) Toxicicité orale Les tests ont été effectués en suivant le protocole en accord avec la ligne directrice de l'OCDE concernant l'étude de la toxicité orale aiguë (n 401 du 24 février 1987) à des doses maximales de 5 g/kg de poids corporel et n'ont provoqué aucune lésion macroscopique pouvant être rapportée à un effet toxique du produit. Les produits de l'invention (exemples 1) utilisés oralement en dose inférieure à 5 g/kg présentent donc une toxicité nulle. b) Irritation oculaire Les tests ont été effectués selon la méthode officielle par l'arrêté du 3 mai 1990 (Journal Officiel de la République Française du 14 novembre 1990) avec les produits de l'invention (exemples 1) et n'ont provoqué aucune lésion de l'iris ou de la cornée. Les produits de l'invention (exemples 1) instillés purs sont apparus non irritants et la tolérance oculaire peut être considérée comme très bonne. c) Irritation cutanée Les tests ont été effectués selon la méthode officielle par l'arrêté du 1er février 1982 (Journal Officiel de la République Française du 21 février 1982) avec les produits de l'invention (exemples 1 ) et n'ont provoqué aucun phénomène irritatif. Les produits de l'invention (exemples 1) instillés purs sont apparus non irritants et la tolérance cutanée peut être considérée comme excellente. REVENDICATIONS 1. Particules, caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés au moyen d'une réticulation interfaciale en émulsion, de préférence à la température ambiante, entre le ou les monosaccharide (s) oligosaccharide(s) comprenant au moins un groupement alcool primaire et un agent réticulant polyfonctionnel acylant, de préférence un halogénure de diacide, en particulier un chlorure de diacide, réalisant des liaisons ester entre le (les) hydroxyle (s) de(s) l'alcool(s) primaire (s) du monosaccharide ou de l'oligosaccharide et les groupements acyle de l'agent polyfonctionnel acylant. 2. Particules selon la revendication 1, caractérisées en ce que les monosaccharides ou oligosaccharides précités présentent un poids moléculaire inférieur à 5000 daltons et sont porteurs d'au moins une fonction alcool primaire. 3. Particules selon la revendication 1 ou 2, caractérisées en ce que le monosaccharide ou d'oligosaccharide précité est présent sous forme de dérivés, par exemple avec au moins un composé choisi parmi le groupe consistant de polyols résultant de l'hydrogénation des fonctions aldéhydiques ou cétoniques des oses, d'acides aldoniques dérivant des aldoses, et des lactones correspondantes, des esters phosphoriques d'oses, des osamines, ou encore des hétérosides dont la partie osidique est constituée d'un ou plusieurs oses et comporte au moins une fonction alcool primaire. 4. Particules selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisées en ce qu'elles sont préparées à partir d'un seul monosaccharide ou oligosaccharide de faible poids moléculaire, ou à partir de mélanges. 5. Particules selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisées en ce que les monosaccharides précités sont choisis parmi le groupe consistant de cétoses, d'aldoses, de polyols, d'aminosucres ou osamines, ou d'acides aldoniques, et des lactones correspondantes. 6. Particules selon la revendication 5, caractérisées en ce que les cétoses précitées sont choisies parmi la dihydroxyacétone, l'érythrulose, le ribulose, le xylulose, le fructose, le sorbose, ainsi que leurs dérivés ; les aldoses précitées sont choisies parmi le groupe consistant de l'érythrose, le thréose, le xylose, l'arabinose, le ribose, le désoxyribose, le glucose, le mannose, le galactose ; les polyols précités sont choisis parmi le groupe consistant de sorbitol mannitol, xylitol, arabitol, le dulcitol ou galactitol, l'érythritol, le thréitol ; aminosucres ou osamines sont choisis parmi le groupe consistant de la glucosamine, la galactosamine, la glucosamine sulfate, la galactosamine sulfate ; les acides aldoniques sont choisis parmi l'acide gluconique, l'acide galactonique ; et les lactones sont choisies parmi les gluconolactones et les galactonolactones. 7. Particules selon l'une des revendications précédentes, caractérisées en ce que l'oligosaccharide précité est choisi parmi le groupe consistant d'un disaccharide tel que le saccharose, le lactose, le maltose, le cellobiose, le tréhalose, le mélibiose, le raffinose, d'une dextrine ou produit d'hydrolyse partielle de l'amidon ; ou de préférence d'une cyclodextrine telle que l'alpha-cyclodextrine, la béta-cyclodextrine, la gamma-cyclodextrine, les dérivés de cyclodextrines tels que l'hydroxyéthyl B-cyclodextrine, les hydroxypropyl-13-cyclodextrines (2-HP-f3- CD, 3-HP-ss-cyclodextrine, 2,3-HP-B-cyclodextrine), les cyclodextrines branchées telles que la glucosyl ss-cyclodextrine, la diglucosyl B-cyclodextrine, la maltosyl sscyclodextrine, la dimaltosyl ss-cyclodextrine, ou encore des mélanges d'oligosaccharides ; le polyol dérivé d'oligosaccharide est choisi parmi le groupe consistant du lactitol, du maltitol, des préparations commerciales contenant des polyols obtenues par hydrogénation des produits de l'hydrolyse partiels de l'amidon. 8. Particules selon l'une des revendications 3 à 7, caractérisées en ce que l'hétéroside comprend une partie osidique comportant une ou plusieurs unités osidiques et contenant au moins une fonction alcool primaire et une fraction non osidique ou aglycone ayant de préférence une structure cyclique, comportant un ou plusieurs cycles, aromatiques ou non, pouvant inclure un ou plusieurs hétéroatomes tels qu'atomes d'azotes, d'oxygène ou de soufre l'hétéroside étant de préférence choisi parmi le groupe consistant de ss-D xylosides tel que le 4-méthyl umbelliferyl ss-D xyloside, le p-nitrophényl ss-D xyloside, ou la riboflavine, ou les nucléosides naturels consistant en ribonucléosides comme la guanosine, l'adénosine, l'uridine, la cytidine, ou les désoxyribonucléosides tels que la désoxyguanosine, la désoxyadénosine, la désoxycytidine, la thymidine, ou les nucléosides anti-viraux ou anti-cancéreux de synthèse, analogues structuraux des nucléosides naturels, tels que les analogues de l'adénosine, les analogues de la désoxycytidine, ou les mononucléotides, les désoxymononucléotides, ou les oligonucléotides, les désoxy-oligonucléotides, ou les antibiotiques du groupe des aminoglycosides tels que la streptomycine, la dihydrostreptomycine, les kanamycines, l'amikacine, la dibékacine, la tobramycine, les néomycines, la paromomycine, ou les saponosides avec aglycone stéroidique comme les saponosides du Lierre, ou les saponosides avec aglycone triterpénique, comme le saponoside du bois de Panama, ou les hétérosides cardiotoniques avec aglycone stéroidique, tels que la digitoxine. 9. Particules selon l'une des revendications précédentes, caractérisées en ce qu'il s'agit de microparticules, en particulier de microcapsules ou des microsphères. 10. Particules selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisées en ce que lesdites particules sont des nanoparticules, en particulier des nanocapsules ou des nanosphères. 11. Particules selon l'une des revendications précédentes, caractérisées en ce que lesdites particules comprennent au moins en surface une paroi formée de cyclodextrines, en particulier de p-cyclodextrines réticulées. 12. Particules selon la revendication 11, caractérisées en ce que les particules de cyclodextrines précitées sont chargées d'une substance active, en particulier une substance cosmétique, une substance pharmaceutique, une substance diététique, une substance agroalimentaire, une substance agroindustrielle. 13. Particules selon la revendication 11 ou 12, caractérisées en ce que les particules de cyclodextrines sont enfermées dans des particules biocompatibles et biodégradables de taille supérieure, telles que des particules de protéines réticulées ou de protéines et polysaccharides coréticulés, en constituant ainsi des particules doubles formant un système à libération lente. 14. Particules selon la revendication 13, caractérisées en ce que la protéine précitée est choisie parmi le groupe consistant de : animales, tels que le collagène, l'atélocollagène, la gélatine, la sérumalbumine, l'ovalbumine, l'hémoglobine, les protéines du lait incluant la caséine et les protéines du lactosérum, la lactabumine, les globulines, le fibrinogène ; les protéines végétales extraites notamment de légumineuses, en particulier des plantes suivantes : soja, lupin, pois, pois chiche, luzerne, féverole, lentille, haricot, colza, tournesol, ou encore de céréales comme le blé, le maïs, l'orge, le malt, l'avoine, le seigle ; le polysaccharide précité est choisi parmi le groupe consistant de : avantageusement utilisables, on préfère les glycosaminoglycannes, parmi lesquels avantageusement le chondroïtine 4-sulfate, le chondroïtine 6-sulfate, le dermatane sulfate, l'héparane sulfate et le kératane sulfate ainsi que l'héparine et ses dérivés, en particulier l'héparine de faible poids moléculaire ayant un poids moléculaire compris entre environ 2 000 et 10 000 et les sels d'héparine cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables, tels que les sels de sodium et de calcium, les gommes naturelles, les carraghénanes, les glucomannanes, les galactomannanes, l'amylose ou l'amylopectine ou leurs mélanges, les dérivés hydroxyalkylés de polysaccharides tels que l'hydroxyéthylamidon ou l'hydroxyéthylcellulose. 15. Particules selon l'une des revendications précédentes, caractérisées en ce que le monosaccharide précité est la dihydroacétone. 16. Utilisation des particules telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 15, comme agent cosmétique, ou pour la fabrication d'une composition pharmaceutique ou d'une composition alimentaire, lesdites particules permettant l'incorporation éventuelle de substances hydrosolubles ou liposolubles, à l'état de solution, de suspension ou d'émulsion. 17. Utilisation selon la revendication 16, caractérisée en ce que ladite composition comprend de 0,1à 20 % en poids desdites particules par rapport au poids final de la composition, de préférence entre 0,1 et 5 % en poids par rapport au poids final de la composition. 18. Procédé de fabrication de particules de faible dimension comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés, caractérisé en ce qu'il comprend : a) la préparation d'une phase aqueuse à un pH compris entre 10,5 et environ 14, dans laquelle on dissout au moins un monosaccharide ou au moins un oligosaccharide ; b) la préparation d'une phase hydrophobe essentiellement non miscible à l'eau et contenant éventuellement un tensioactif ; c) la dispersion de la phase aqueuse dans la phase hydrophobe par agitation de manière à former une émulsion de type Eau-dans-Huile ; d) l'addition à émulsion d'une solution de l'agent polyfonctionnel acylant et le maintien de l'agitation pendant une période de temps suffisante pour réaliser une réticulation du monosaccharide ou de l'oligosaccharide à l'interface des gouttelettes dispersées de ladite émulsion et former ainsi des particules ; e) éventuellement la séparation desdites particules du milieu réactionnel. 19. Procédé de fabrication de particules de faible dimension comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés, caractérisé en ce qu'il comprend : a) la préparation d'une phase aqueuse à un pH compris entre 10,5 et environ 14, dans laquelle on dissout au moins un monosaccharide ou au moins un oligosaccharide ; b) la préparation d'une phase hydrophobe essentiellement non miscible à l'eau et contenant un agent réticulant polyfonctionnel acylant ; c) la dispersion de la phase hydrophobe dans la phase aqueuse par agitation de manière à former une émulsion de type Huile-dans-Eau, et le maintien de l'agitation pendant une période de temps suffisante pour réaliser une réticulation du monosaccharide ou de l'oligosaccharide à l'interface des gouttelettes dispersées de ladite émulsion et former ainsi des particules, en particulier des capsules ; d) éventuellement la séparation desdites particules du milieu réactionnel. 20. Procédé de fabrication de particules de faible dimension de cyclodextrines réticulées, enfermées dans des particules de taille supérieure, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Tout d'abord, on prépare des particules de cyclodextrines réticulées selon l'invention en système d'émulsion de type Eau-dans-Huile que l'on récupère ; b) On introduit ou incube ensuite ces particules dans une solution aqueuse d'un principe actif de pH compris entre environ 4,5 et environ 8, pendant un temps suffisant pour permettre un piégeage du principe actif par les particules ; c) On dissout ensuite dans la suspension de particules une protéine ou un mélange de protéine et de polysaccharide ; d) On disperse le mélange par agitation dans une phase hydrophobe de manière à obtenir une émulsion de type Eau-dans-Huile ; e) On ajoute à l'émulsion une solution d'un agent polyfonctionnel acylant et on maintient l'agitation pendant un temps suffisant pour que se forment, autour des particules de cyclodextrines réticulées selon l'invention, des particules de taille supérieure, par acylation des groupements fonctionnels acylables de la protéine ou du mélange de protéine et de polysaccharide ; f) Eventuellement, on sépare les particules de plus grande taille obtenues renfermant les particules intactes de cyclodextrines réticulées selon l'invention, et contenant du principe actif en partie complexé par les cyclodextrines des particules de cyclodextrines réticulées. 21. Procédé selon l'une des revendications 18 à 20, caractérisé en ce que la solution aqueuse est constituée d'un tampon tel qu'un tampon carbonate ou phosphate, ajusté à un pH supérieur à 10,5, par exemple un pH d'environ 11 ; ou une solution d'un agent alcalin tel que la soude, par exemple une solution de soude 1 M. 22. Procédé selon l'une des revendications 18 à 21, caractérisé en ce que la concentration du monosaccharide ou de l'oligosaccharide précité dans la phase aqueuse est comprise entre 3 % et 80 %, de préférence entre 10 et 30 %, en poids. 23. Procédé selon l'une des revendications 18 à 22, caractérisé en ce que l'agent réticulant polyfonctionnel acylant précité est constitué par au moins un dihalogénure d'acide ; ou un anhydride d'acide, de préférence choisi parmi le groupe consistant de dihalogénure de phtaloyle, de téréphtaloyle, de sébacoyle, de glutaryle, d'adipoyle et de succinyle. 24. Procédé de traitement cosmétique, caractérisé en ce qu'il comprend l'apport à un site concerné d'un mammifère, de préférence un être humain, d'une quantité cosmétiquement efficace de particules telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 15, comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs monosaccharides ou oligosaccharides réticulés, en particulier au moyen d'une réticulation interfaciale en émulsion, de préférence à la température ambiante, entre le ou les monosaccharide (s) oligosaccharide(s) comprenant au moins un groupement alcool primaire et un agent réticulant polyfonctionnel acylant, de préférence un halogénure de diacide, en particulier un chlorure de diacide, réalisant des liaisons esters entre le(s) groupement(s) hydroxyle (s) acylable (s) de (s) l'alcool (s) primaire (s) du monosaccharide ou de l'oligosaccharide et les groupements acyles de l'agent polyfonctionnel acylant. 25. Utilisation des particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique constituant un système à libération lente administrable par toutes voies d'administration, telles que la voie orale, la voie parentérale, la voie rectale, la voie vaginale, la voie pulmonaire, la voie cutanée, la voie ophtalmique, la voie nasale. 26. Utilisation des particules selon la revendication 8, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique, lesdites particules comprenant au moins en surface une paroi formée d'un ou plusieurs hétérosides réticulés, lesdites particules se comportant comme des prodrogues ou précurseurs particulaires de(s) l'hétéroside (s) actif(s), susceptibles de libérer in vivo le principe actif sous l'action d'enzymes telles que des estérases, administrables par toutes voies d'administration, permettant une protection du principe actif, ou une libération lente, ou une amélioration de la biodisponibilité, ou une amélioration à la tolérance cutanée ou muqueuse, ou un ciblage vers un organe, un tissu, un territoire vasculaire, ou encore, dans le cas de nanoparticules, une internalisation du principe actif par les cellules-cibles pour une thérapeutique antibiotique, antivirale, ou anticancéreuse, ou pour le transfert de matériel génétique dans des cellules.