Brevet FR2776521A1 — publié le 19991001

La présente invention concerne l'obtention de préparations immunisantes qui soient efficaces lors d'une administration par voie nasale. Elle se rapporte donc à l'utilisation de protéines porteuses susceptibles d'améliorer la réponse immunitaire à un haptène, lorsque le conjugué haptène-protéine porteuse est administré par voie nasale. L'utilisation de vaccin par voie orale ou par voie nasale aurait une grande influence sur l'éradication de germes pathogènes. En effet, toute modification d'un vaccin lui permettant d'être utilisé avec une plus grande flexibilité (thermostabilité, distribution sans seringue, ) aurait pour conséquence une vaccination plus efficace et plus étendue. D'autre part, l'immunisation par les voies muqueuses permet d'induire une immunité locale constituant la première barrière à l'invasion par un micro-organisme. Actuellement, les vaccins oraux sur le marché ne concernent que des vecteurs vivants atténués ou recombines: - vaccin oral tétravalent contre la polio, - vaccin oral contre la fièvre typhoide. Des approches de vaccination par voie nasale ou orale sont déjà décrites dans la littérature. Des essais ont ainsi été effectués sur des administrations mucosales de la PspA qui correspond à la protéine de surface A de Pneumocoque (Briles D.E., brevet EP 682 950), sur les filaments d'hémaglutinine (Capron A., brevet FR 2 718 750; Kimura A., brevet EP 471 177; Shahin R.D., brevet US 7532327), sur un fragment de la toxine tétanique (Dougan G., brevet WO 93/21950), sur la choléra toxin B (CTB). Une protéine de la membrane externe de Neisseria meningitidis est utilisée mélangée à l'haptène en tant qu'adjuvant pour une immunisation par voie nasale (Van de Verg L.L., Infection and immunity, 1996, 64: 5263-5268). De manière inattendue, la Demanderesse a maintenant trouvé qu'une protéine de membrane provenant d'une autre bactérie permet, lorsqu'elle est administrée conjointement avec un antigène par la voie nasale, d'induire une réponse immunitaire d'intensité et de qualité satisfaisante pour l'obtention d'un vaccin. C'est pourquoi la présente invention a pour objet l'utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane OmpA d'entérobactérie pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à être administrée par voie nasale, pour améliorer l'immunité d'un mammifère vis- à-vis d'un antigène ou d'un haptène. Dans la présente description, on entend désigner par OmpA les protéines de la membrane externe de type A (OmpA pour "Outer membrane protein A"). L'invention a également pour objet l'utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane de Klebsiella pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à être administrée par voie nasale, pour améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène. De préférence, la protéine de membrane est une protéine OmpA de Klebsiella pneumoniae. Avantageusement, ledit fragment de la protéine de membrane OmpA d'entérobactérie ou de la protéine de membrane Klebsiella selon l'invention est obtenu par voie recombinante. De manière très avantageuse, ladite protéine de membrane ou son fragment obtenu par voie recombinante est, après extraction, renaturée en présence de détergent choisi parmi le Zwittergent 3-14, le Zwittergent 3-12 et l'octylglycopyrannoside, de préférence en présence de Zwittergent 3-14 à une concentration comprise entre 0,05 % et 2 % (p/v), de manière très préférée à une concentraiton voisine de 0,1. La demande WO 96/14415 a montré que la protéine membranaire majeure de Klebsiella pneumoniae, OmpA baptisée P40, couplée à des antigènes sous unitaires peptidiques est très immunogénique par voie systémique. La protéine P40 recombinante, exprimée chez E. Coli sous forme de corps d'inclusion, est baptisée rP40. Dans le cadre de la présente invention, une protéine particulièrement adaptée comporte la séquence SEQ ID nO 1. La Demanderesse a démontré qu'une réponse anticorps anti-P40 est retrouvée chez tous les adultes, l'entéro- bactérie Klebsiella pneumoniae étant un pathogène très répandu. Cette sensibilisation est favorable à une augmentation de la réponse anticorps dirigée contre un antigène ou un haptène qui est administré couplé à la protéine porteuse P40. L'administration s'effectue par voie nasale en absence d'adjuvant. Ledit antigène ou haptène selon l'invention peut être choisi dans le groupe comprenant les protéines, les peptides, les polysaccharides, les oligosaccharides et les acides nucléiques. Avantageusement, il est d'origine bactérienne ou virale. La présente invention est ainsi appropriée pour la préparation de vaccin dirigé contre tout micro-organisme responsable de pathologies des voies aériennes tel que par exemple les micro-organismes choisis parmi le VRS, le para influenzae virus (PIV), l'influenza virus, l'hantavirus, les streptocoques, les pneumocoques et les méningocoques. L'antigène ou l'haptène selon l'invention comprendra au moins un fragment dudit micro-organisme, tel qu'un fragment protéique, que l'homme de l'art saura déterminer pour sa capacité à conférer l'immunité recherchée par des techniques standards telles que celles décrites dans les exemples ci-après. En particulier, la présente invention est appropriée pour la préparation de vaccin dirigé contre le VRS (ou virus respiratoire syncytial), notamment humain ou bovin. Dans ce cas, l'antigène ou l'haptène selon l'invention comprend au moins un fragment protéique du virus VRS, et notamment au moins un fragment de la protéine G du VRS. Les séquences de tels fragments ont été notamment décrites dans la demande WO 95/27787. De préférence, lesdits fragments protéiques du virus VRS sont choisis parmi les fragments ayant pour séquences d'acides aminés les séquences SEQ ID n 2 à SEQ ID n 73. Des séquences convenant à la préparation d'un vaccin selon l'invention sont les séquences SEQ ID n 2 à SEQ ID n 73. Les conjugués chimiques issus d'un couplage de peptides à au moins un fragment d'une protéine membranaire de Klebsiella, telle que la rP40, donnent de bons résultats, et une évaluation de la réponse immunitaire montre des réponses anticorps contre ces peptides très fortes après pré-sensibilisation à Klebsiella pneumoniae. Avantageusement, le fragment protéique provenant de protéine de membrane OmpA d'entérobactéries ou de protéine de membrane de Klebsiella est couplé de façon covalente avec l'antigène ou l'haptène, tel qu'un fragment protéique du VRS. L'invention comprend également l'utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane OmpA d'entéro- bactéries ou d'une protéine de membrane de Klebsiella selon l'invention, caractérisée en ce que ledit fragment est couplé de façon covalente avec ledit antigène ou haptène. Selon l'invention, il est possible d'introduire un ou plusieurs éléments de liaison, notamment des acides aminés pour faciliter les réactions de couplage entre le fragment de protéine de membrane et l'antigène ou l'haptène. Le couplage covalent de l'antigène ou l'haptène selon l'invention peut être réalisé à l'extrémité N- ou C- terminale du fragment de la protéine de membrane selon l'invention. Les réactifs bifonctionnels permettant ce couplage seront déterminés en fonction de l'extrémité du fragment de la protéine de membrane choisie pour effectuer le couplage et de la nature de l'antigène ou l'haptène à coupler. Ces techniques de couplage sont bien connues de l'homme de l'art. Les conjugués issus d'un couplage de peptides à au moins un fragment d'une protéine membranaire OmpA d'entérobactéries ou d'une protéine membranaire de Klebsiella, peuvent être préparés par recombinaison génétique. La protéine hybride (conjugué) peut en effet être produite par des techniques d'ADN recombinant par insertion ou addition à la séquence d'ADN codant pour le fragment de protéine de membrane, d'une séquence codant pour le ou les peptides antigènes ou haptènes. Ces techniques de préparation de protéine hybride par recombinaison génétique sont bien connues de l'homme de l'art (cf. par exemple S.C. MAKRIDES, 1996, Microbiologicals Reviews, 60, 3, 512-538) et ne seront pas développées dans la présente description. Ainsi, l'invention comprend également l'utilisation, selon l'invention, caractérisée en ce que la protéine hybride, obtenue après couplage entre le fragment d'une protéine de membrane et l'antigène ou l'haptène, de type protéique, est préparée par recombinaison génétique. La Demanderesse a également montré qu'en absence de sensibilisation à Klebsiella pneumoniae, l'administration d'un haptène couplé à au moins un fragment d'une protéine membranaire, telle que la protéine rP40, par voie nasale en absence d'adjuvant induisait une réponse anticorps anti- haptène. L'invention concerne l'utilisation, selon l'invention, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique contient un fragment d'une protéine de membrane couplé avec un antigène ou un haptène selon l'invention, ou une cellule hôte transformée capable d'exprimer une protéine recombinante hybride contenant un fragment de protéine de membrane couplé avec l'antigène ou l'haptène selon l'invention, notamment en absence d'adjuvant. Parmi les cellules hôtes transformées capables d'exprimer ladite protéine hybride, on préfère les bactéries à gram négatifs telles que Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli type K12 couramment utilisée dans la fermentation ou E. coli transformée par un plasmide vecteur d'expression renfermant un promoteur fort tel que l'opéron du promoteur tryptophane (trp). Sont également préférées, les bactéries à gram positifs telles que les staphylocoques non pathogènes, S. carnosus et S. xylosus, dans la mesure o ces bactéries ne produisent pas de LPS (lipopolysaccharides) à la surface membranaire. Ces staphylocoques peuvent être transfectés par des vecteurs d'expression renfermant des promoteurs tels que le trp, ou le signal de sécrétion de Lipase ou encore le signal de sécrétion de la protéine A ou encore le signal du promoteur de l'OmpA de Klebsiella pneumoniae. Enfin, l'invention concerne un procédé de préparation d'une protéine ou un de ses fragments par voie recombinante, caractérisé en ce que la protéine ou son fragment est, après extraction, renaturée en présence d'une solution contenant un détergent choisi parmi le Zwittergent 3-14, le Zwittergent 3-12 et l'octylglucopyrannoside, et en ce que ladite protéine recombinante n'est pas l'interféron À. De préférence, ladite protéine est une protéine de membrane d'entérobactérie, notamment de type OmpA. De manière très préférée, ladite protéine est une OmpA de Klebsiella pneumoniae. Dans le procédé selon l'invention, le Zwittergent 3-14 sera de préférence à une concentration comprise entre 0,05 % et 2 % de manière plus préférée voisine de 0,1 %. Les exemples qui suivent sont destinés à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée. Dans ces exemples, on se référera aux figures suivantes: Figure 1: Analyse par électrophorèse SDS-PAGE de la protéine rP40 après purification. A: révélation au bleu de Coomassie - piste 1: lot 1, 2 Mg - piste 2: lot 1, 10 /g - piste 3: lot 2, 2 Mg - piste 4: lot 2, 10 pg - piste 5: lot 3, 2 Mg - piste 6: lot 3, 10 pg B: immunoblot et révélation à l'aide d'un sérum polyclonal de lapin anti-P40 - std: standard de masse moléculaire piste 1: rP40 dénaturée, 100 ng - piste 2: rP40 native, 100 ng. Figure 2: Répartition des patients selon la D.O. (Densité Optique) correspondant aux anticorps anti-P40, mesurés par ELISA. Figure 3: Réponse anticorps anti-Gl'. Figure 4: Réponse anticorps anti-rP40. Figure 5: Réponse anticorps anti-Gl' de type IgA. Figure 6: Isotypage des immunoglobulines anti-Gl' obtenues en réponse secondaire. Figure 7: Isotypage des immunoglobulines anti-Gl' obtenues en réponse tertiaire. Figure 8: Réponse anticorps sériques anti-Gl' de type IgG totales. Figure 9: Isotypage des immunoglobulines anti-Gl' sériques après trois immunisations. Figure 10: Isotypage des immunoglobulines anti-Gl' des lavages broncho-alvéolaires après trois immunisations. Exemple 1: clonage de rP40 Clonage du gène rP40: Le gène codant pour rP40 a été obtenu par amplification par PCR (Réaction en Chaîne à la Polymérase) à partir de l'ADN chromosomal de la souche Klebsiella pneumoniae IP I145 (décrit dans le brevet WO 96/14415). Après identification par séquençage ADN, le fragment correspondant à rP40 est cloné dans divers vecteurs d'expression, en particulier celui sous le contrôle du promoteur de l'opéron trp, en amont de 9 acides aminés du peptide leader (MKAIFVLNA). La séquence peptidique de rP40 est représentée dans la liste des séquences par la séquence SEQ ID n 1. Dans différentes souches E. coli K12, la protéine rP40 est produite sous forme de corps d'inclusion avec un rendement important (> 10 %, g protéines / g de biomasse sèche). Fermentation de protéines de fusion rP40: Dans un erlenmeyer contenant 250 ml de milieu TSB (Tryptic Soy Broth, Difco) avec de l'Ampicilline (100 pg/ml, Sigma) et de la Tétracycline (8 Mg/ml, Sigma), on inocule avec E. coli K12 transformé avec le plasmide pvaLP40. On incube pendant 16 heures à T = 37 C sous agitation. 200 ml de cette culture sont inoculés dans un fermenteur (CHEMAP CF3000, ALFA LAVAL) contenant 2 litres de milieu de culture. Le milieu contient (g/l): glycérol, ; sulfate d'ammonium, 2,6; dihydro-génophosphate de potassium, 3; hydrogénophosphate dipotassium, 2; citrate de sodium 0, 5; extrait de levure, 1; Ampicilline, 0,1; Tétracycline 0,008; Thiamine, 0,07; sulfate de magnésium, 1 et 1 ml/l de solution de traces éléments et 0,65 ml/l de solution de vitamines. Les paramètres contrôlés durant la fermentation sont: le pH, l'agitation, la température, le taux d'oxygénation, l'alimentation de sources combinées (glycérol ou glucose). Le pH est régulé à 7,0. La température est fixée à 37 C. La croissance est contrôlée en alimentant en glycérol (87 %) à un débit constant (12 ml/h) pour maintenir le signal de tension de l'oxygène dissous à 30 %. Lorsque la turbidité de la culture (mesurée à 580 nm) atteint la valeur de 80 (après environ 24 heures de culture), la production des protéines est induite par addition de l'acide indole acrylique (IAA) à la concentration finale de 25 mg/l. Environ 4 heures après induction, les cellules sont récoltées par centrifugation. La quantité de biomasse obtenue est d'environ 200 g, exprimée en biomasse humide. Exemple 2: extraction et purification de rP40 Matériel et méthodes Extraction de la rP40 Après centrifugation du bouillon de culture (4000 rpm, 10 min, 4 C), les cellules sont remises en suspension dans un tampon Tris-HCl 25 mM pH 8,5. Un traitement par le lysozyme (0,5 g/l, 1 heure / température ambiante / agitation douce) permet la libération des corps d'inclusion. Le culot de corps d'inclusion obtenu par centrifugation (25 min à 10 000 g à 4 C) est repris dans un tampon Tris-HCl 25 mM pH 8,5 contenant 5 mM MgCl2, puis centrifugé (15 min à 10 000 g). La dénaturation de la protéine est obtenue par incubation des corps d'inclusion à 37 C pendant 2 heures dans un tampon Tris-HC1 25 mM pH 8,5 contenant 7 M urée (agent dénaturant) et 10 mM dithiothréitol (réduction des ponts disulfure). Une centrifugation (15 min à 10 000 g) permet d'éliminer la partie insoluble des corps d'inclusion. Après dilution par 13 volumes d'un tampon Tris-HC1 mM pH 8,5 contenant du NaCl (8,76 g/l) et du Zwittergent 3-14 (0,1 %, p/v), le mélange est laissé pendant une nuit à température ambiante sous agitation au contact de l'air (renaturation de la protéine par dilution et réoxydation des ponts disulfure). Purification de la protéine rP40 Etape de chromatoqraphie d'échange d'anions. Après une nouvelle centrifugation, l'échantillon est dialysé contre un tampon Tris-HCl 25 mM pH 8,5 contenant 0,1 % Zwittergent 3-14 (100 volumes de tampon) pendant une nuit à 4 C. Le dialysat est déposé sur une colonne contenant un support de type échangeur d'anions forts (gel Biorad Macro Prep High Q) équilibrée dans le tampon décrit ci-dessus à un débit linéaire de 15 cm/h. Les protéines sont détectées à 280 nm. La protéine rP40 est éluée, avec un débit linéaire de 60 cm/h, pour une concentration de 0,6 M en NaCl dans le tampon Tris/HC1 25 mM pH 8,5; 0,1 % Zwittergent 3-14. Etape de chromatoqraphie d'échange de cations. Les fractions contenant la protéine rP40 sont rassemblées et concentrées par ultrafiltration à l'aide d'un système de cellule à agitation Amicon utilisé avec une membrane Diaflo de type YM10 (seuil de coupure 10 kDa) pour des volumes de l'ordre de 100 ml, ou à l'aide d'un système de filtration à flux tangentiel Minitan Millipore utilisé avec des plaques de membranes possédant un seuil de coupure kDa pour des volumes supérieurs. La fraction ainsi concentrée est dialysée pendant une nuit à 4 C contre un tampon citrate 20 mM pH 3,0, à 0,1 % de Zwittergent 3-14. Le dialysat est déposé sur une colonne contenant un support de type échangeur de cations forts (gel Biorad Macro Prep High S) équilibrée dans le tampon citrate 20 mM pH 3,0, à 0,1 % de Zwittergent 3-14. La protéine rP40 est éluée (vitesse 61 cm/h) pour une concentration 0,7 M en NaCl. Les fractions contenant la rP40 sont rassemblées et concentrées comme décrit précédemment. Résultats A partir d'une culture de 1 litre, un cycle de dénaturationrenaturation permet d'obtenir 300 mg de protéine (estimation par dosage selon la méthode de Lowry). mg de rP40 sont purifiés après les deux étapes chromatographiques. Comme précédemment, la protéine rP40 est concentrée après purification afin d'atteindre une concentration finale comprise entre 5 et 10 mg/ml. Les profils électrophorétiques montrent un degré de pureté de l'ordre de 95 % (figure 1A). Après immunoblot la protéine est spécifiquement reconnue par un anticorps monoclonal anti- P40 naturelle obtenu chez la souris (figure lB). L'état de la protéine est suivi par SDS-PAGE. Selon sa forme, dénaturée ou native, la protéine P40 extraite de la membrane de Klebsiella pneumoniae possède un comportement électrophorétique (migration) caractéristique. La forme native (structure en feuillets f) présente en effet une masse moléculaire plus faible que la forme dénaturée (structure en hélices a) sous l'action d'un agent dénaturant, tel que l'urée ou le chlorhydrate de guanidine, ou par chauffage à 100 C en présence de SDS (figure lB). La protéine rP40 n'est pas correctement renaturée en fin de renaturation, que celle-ci soit réalisée en absence ou en présence de 0,1 % (p/v) Zwittergent 3-14. Par contre une renaturation totale est obtenue après dialyse contre un tampon Tris/HCl 25 mM pH 8,5 contenant 0,1 % (p/v) Zwittergent 3-14. Toutefois, il faut noter que cette renaturation n'est obtenue que lorsque l'étape de dilution et le traitement à température ambiante sont réalisés eux- mêmes en présence de Zwittergent 3-14 (résultats négatifs en absence de détergent). Exemple 3: couplage du peptide Gi' sur rP40 Matériel et méthodes Le peptide Gi' est un peptide synthétique de 15 acides aminés, dont la séquence est la suivante: N1SIDSNNPTOWAISKCis5C Sans le résidu Cys (Cystéine) ajouté en position C- terminale, ce peptide (partie 1-14) correspond à la partie 174-187 de la protéine G du virus respiratoire syncytial et présente, par rapport au peptide natif, deux modifications majeures qui sont: - le remplacement en position 13 du résidu Cys par un résidu Ser (Sérine), - le remplacement en positions 3 et 9 des résidus Cys, formant un pont disulfure, par respectivement des résidus Asp (acide aspartique) et Orn (Ornithine) formant un pont de type lactame. Ces modifications sont introduites dans le but d'éliminer les résidus Cys du peptide natif afin de pouvoir réaliser un couplage univoque de ce dernier sur la protéine grâce au résidu Cys introduit en position C-terminale, tout en maintenant la structure du peptide à l'aide de l'introduction d'un pont lactame. Le couplage du peptide sur la protéine est réalisé à l'aide du réactif BHA ou bromo-N-hydroxysuccinimide acétate (Svenson et al., 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1347, Bernatowicz and Matsueda, 1986, Anal. Biochem. 155, 95). Ce réactif hétérobifonctionnel permet une activation des résidus Lys (Lysine) de la protéine par bromoacétylation, puis un couplage du peptide par le groupement thiol libre porté par le résidu Cys. Dans un premier temps, la protéine rP40 est activée par le BHA. La rP40 est dialysée contre un tampon phosphate 0,1 M pH 7 contenant 0,1 % Zwittergent 3-14 pendant 24 heures à + 4 C. Après dialyse, la concentration est ajustée à 5 mg/ml à l'aide du même tampon avant addition du BHA à raison de 1,2 mg (50 gl) / mg de rP40. L'ensemble est placé à l'obscurité pendant une heure sous agitation et à température ambiante. La rP40 activée est ensuite dessalée par chroma- tographie de gel-filtration (élution par le tampon précédemment cité). Les fractions contenant la protéine bromoacétylée sont rassemblées. Pour le couplage, le peptide (10 mg/ml en tampon phosphate 0,1 M pH 7 contenant 0,1 % Zwittergent 3-14) est additionné à la protéine activée à raison de 0,4 mg / mg de protéine. Après saturation sous courant d'azote, le tube est placé à nouveau à l'obscurité pendant 2 heures sous agitation et à température ambiante. Le peptide non fixé peut être éliminé à l'aide d'une étape de dialyse ou de chromatographie de tamisage moléculaire. Résultats Le conjugué obtenu est caractérisé par dosage de protéine (méthode BCA ou LOWRY) et par électrophorèse SDS- PAGE. Le taux de couplage du peptide sur la protéine est estimé par dosage du résidu carboxyméthylcystéine: le dosage des acides aminés libérés par hydrolyse (HCl 6N) est réalisé par HPLC après dérivatisation à l'aide du PITC (méthode Pico-Tag, Waters). Le taux de couplage déterminé par cette méthode est d'environ 10 peptides Gl'/mole de rP40. Exemple 4: Immunité naturelle chez l'adulte Des sérums humains issus d'une étude clinique sont analysés par dosage ELISA pour déterminer la présence d'anticorps anti-P40. Les résultats sont représentés sur la figure 2. Parmi 113 sérums testés après dilution au 1/400, 110 sérums donnent un signal colorimétrique révélant les IgG anti-P40. Il existe chez tous les patients des anticorps anti-P40 circulant avec des taux plus ou moins élevés selon le patient considéré. Exemple 5: Réponse anticorps anti-Gl' après des sensibilisations et des immunisations rapprochées Des souris BALB/c ont été ou non sensibilisées 2 fois avec une souche de Klebsiella pneumoniae I145 afin de reproduire la séropositivité retrouvée chez l'homme. Les souris sont par la suite immunisées par voie nasale en l'absence d'adjuvant 7 jours après la sensibilisation. Cette immunisation est effectuée avec un faible taux d'antigène, les souris recevant 10 gg d'équivalent Gl' couplé à rP40. Les souris reçoivent un rappel 10 et 20 jours après la première immunisation. Une ponction est pratiquée au sinus rétro-orbital des souris 9 jours après la première immunisation et 10 jours après chaque rappel (réponses secondaire et tertiaire). Les anticorps anti-Gl' (Figure 3) et antiporteur (Figure 4) sériques sont dosés par méthode ELISA. 5.1 Dosaqe des IqG sériques anti-Gl' Les résultats sont représentés sur la figure 3. En réponse primaire, les souris présensibilisées avec Klebsiella pneumoniae et immunisées avec rP40-G1' sont les seules à produire des anticorps anti-Gi' Le taux d'anticorps anti-Gl' retrouvé chez les souris présensibilisées avec Klebsiella pneumoniae et immunisées avec rP40-Gl' est augmenté après une seconde immunisation. En absence de présensibilisation, une seconde immunisation en présence des conjugués rP40-Gl' induit une réponse anticorps anti-Gli'. Après trois immunisations, la réponse anticorps anti- Gi' est augmentée chez les souris présensibilisées ou non. 5.2 Dosage des IgG sériques anti-rP40 Les résultats sont représentés sur la figure 4. La réponse anticorps anti-P40 montre que les souris ont été sensibilisées à Klebsiella pneumoniae de façon identique quel que soit le lot considéré. L'immunisation en présence de conjugués rP40-Gl' augmente faiblement la réponse anticorps anti-rP40. 5.3 Dosage des IqA sériques anti-Gl' Dans un second temps nous avons dosé la réponse anticorps anti-Gl' de type IgA sérique: immunoglobuline caractéristique d'immunisations effectuées par les voies muqueuses (nasales ou orales). Les résultats sont représentés sur la figure 5. Après une seule immunisation les IgA ne sont pas détectées. Après deux immunisations, des IgA anti-Gl' sont détectées essentiellement chez des souris présensibilisées à Klebsiella pneumoniae et immunisées avec rP40-Gl'. Cette réponse est augmentée par la troisième immunisation. En absence de sensibilisation des IgA anti-Gl' sont détectées chez des souris après deux immunisations avec des conjugués rP40-Gl'. Ce- taux d'IgA est augmenté par la troisième immunisation. 5.4 IsotypvDae des immunoglobulines sériques anti-Gl' Deux types de réponses peuvent être observées, Thl et Th2. Ces réponses diffèrent par le profil de cytokines produites et par leurs fonctions dans la réponse immunitaire. Les IgG1 sont caractéristiques d'une réponse de type Th2 et les IgG2a d'une réponse Thl. Un profil mixte de réponse Thl et Th2 est retrouvé uniquement chez les souris immunisées avec les conjugués rP40-Gl' qu'elles soient ou non présensibilisées avec Klebsiella pneumoniae (Figure 6). Après trois immunisations (Figure 7), le profil reste mixte chez les souris immunisées avec les conjugués rP40- Gl'. Exemple 6: Réponse anticorps anti-G1' après des sensibilisations et des immunisations éloignées. Par rapport au protocole précédent, la première immunisation est séparée de la dernière sensibilisation par une période de 3 semaines au lieu d'une semaine. Les anticorps anti-Gl' sont dosés dans les sérums et en réponse tertiaire dans les lavages broncho-alvéolaires par méthode ELISA. 6.1 Dosage des IqG sériques anti-Gl' Comme on le voit sur la figure 8, 7 jours après la première immunisation des anticorps sériques anti-Gl' de type IgG totales sont détectés chez les souris présensibilisées à Klebsiella pneumoniae et immunisées en présence des conjugués rP40-Gl'. Cette réponse anticorps est augmentée par les deux autres immunisations. 6.2 Isotypage des immunoglobulines sériques Les résultats sont représentés sur la figure 9. Dans ce cas nous observons également une réponse mixte, nous obtenons eneffet le même titre en IgG1 qu'en IgG2a (Figure 9). De plus, un taux élevé d'IgA est retrouvé chez les souris présensibilisées à Klebsiella pneumoniae et immunisées trois semaines après en présence des conjugués rP40-Gl'. 6.3 Isotypage des immunoqlobulines des lavages broncho- alvéolaires Dans les lavages broncho-alvéolaires, on retrouve les 4 types d'immunoglobulines uniquement chez les souris sensibilisées à Klebsiella pneumoniae et immunisées 3 fois en présence des conjugués rP40-Gl' (Figure 10). LISTE DE SÉQUENCES Information pour la SEQ ID N0: 1 rP40 TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 344 acides aminés, 1032 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine i 12 N - Met Lys Ala Ile Phe Val Leu Asn Ala Ala Pro Lys '- AZG AAA GE A2T TIC GIA CIG AAT GCG GCT CJ3 AAA Asp Asn Thr Trp Tyr Ala Gly Gly Lys Leu Gly Trp Ser Gln Tyr His Asp Thr GAT AAC ACC TG TAT G (A GT GGT AAA CI 31G GT lIZC CAG TAT CA G@C ACC 48 Gly Phe Tyr Gly Asn Gy Phe Gln Asn Asn Asn Gly Pro Thr Arg Asn Asp Gln GG TI TAC GGT AAC 3 TIC CAG AAC AAC AAC GG 1 ACC =3T AAC GAT CG Leu GLy Ala Gly Ala Phe Gly Gly Tyr Gin Val Asn Pro Tyr Leu Gly Phe Glu CIT GCT GeT W3 G33 TIC G CT TA C C aC GIT AAC 33 TAC CrC 3T TIC GAA Met Gly Tyr Asp Trp Leu Gly Arg Met Ala Tyr Lys Gly Ser Val Asp Asn Gly ATG GG3T mT G;C IG CrG G3C C(T AIG GCA LTA AAA G3C AGC GIT GC AAC GGT Ala Phe Lys Ala Gln Gly Val Gln Leu Thr Ala Lys Leu Gly Tyr Pro Ile Thr 0CT TIC AAA GCr CAG GGC GIT CG G CIG 02T AAA CrG GC TAC CG ATC ACT Asp Asp Leu Asp Ile Tyr Mir Arg Leu Gly Gly Met Val Trp Arg Ala Asp Ser GAC GAr cIG G^C AL TC rCC or CIG G3C GGC A7GOT 3r co3 GCor GAc TCC 138 Lys Gly Asn Tyr Ala Ser T'br Gly Val Ser Arg Ser Glu His Asp Thr Gly Val AAA G3C AAC TAC GCr TCr ACC G3C GIT TCC C=T AGC GA CGC G(p AT GGC GIT Ser Pro Val Phe Ala Gly Gly Val Glu Trp Ala Val -hr Arg Asp Ile Ala Thr 1TCC OC GIA TIT GCr (3C G3C GIA GAG MGG3 GIT ACT =AT GrC ATC GCr AOC Arg Leu Glu Tyr Gln Tp Val Asn Asn Ile Gly Asp Ala Gly Thr Val Gly Thr GrT CIG GAA TAC CrG TMG GIT AAC AAC ATC MC GAC GCG G3C ACT GI Gr ACC Arg Pro Asp Asn Gly Met Leu Ser Leu Gly Val Ser Tyr Arg Phe Giy Gln Glu caTera c GU C A7G CIGCIG PC GC 3 GIT = TAc C3TIC Cr cs GRA Asp Ala Ala Pro Val Val Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro (Glu Val Ala Thr GT C3Cc GCl CM GIT GIT GCT CM GCT CG GCT( CEG GCT CC GIA GIG GCT ACC 228 Lys His Phe 1hr Leu Lys Ser Asp Val Leu Phe As Phe Asn Lys Ala Ihr Leu APG CC Trc ALC CIG APAG W @ G IT cIG TIc AAC TIC AAC AAA.TV ACC CIG Lys Pro Glu Gly Gln (1n Ala Leu Asp Gln Leu Tyr Thr Gin Leu Ser Asn Met AAA CM GAA 318 Ser Asn Pro Val Thr Gly Asn MIr Cys Asp Asn Val Lys Ala Arg Ala Ala Leu TCC AAC CM GT AlCT GoC AAC ACC T GAC AAC GIG AAA GCT CI3C OCET GoCC CIG Ile Asp Cys Leu Ala Pro Asp Arg Arg Val Glu Ile Glu Val Lys CGly Tyr Lys 3 0 ATIC GT TC CIG'CEG CM GAT 0I = GIA GAG A[C GA GIT AAA (GXC TAC AAA Glu Val Val Thr Gln Pro Gin Ala GA GTrr GIA ACT CG acr CG GCT Information pour la SEQ ID NO: 2 G2A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 101 acides aminés, 303 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 130 N - IUr Val Lys Ihr Lys Asn Ihr Ihr r nr n ir Glnin Pro Ser Lys Pro ihr Mhr Lys '-Aoe GIG AA AOC AAAC C; AICI PAoeCACG L CGG cM A3o AAA3; CB î CC AAA Gin Arg GnALys Pro Pro Asn Lys Pro Asn A Asp he Ris Pe Glu Val Phe Asn Pe CA CTJ C@G APC AA CM CM AAC IAMCAA APC APCr G rec C = GrA GIAG = ATZ 171 173 176 182 186 Val Pro Cys Ser IleCys Ser As Asn Pro hr Cs Trp a lae CysLys Arg Ile Pro Asn G 3 z A IG GMC C AC Coe AC AC CM AC C T M GCGAC A C r PACTAC cm Ac Lys Lys Pro Gly Lys lys r hr thr Lys Pro r Lys Lys Pro Thr Phe Lys hr hr Lys AAA A aM; GX AA AM PL P3 PoL AAA CM C CAA AAAA Om CTIC AAA ( Ar AAA 213 230 LysAsp HisLys Pro Gln hr hrLysPro Lys Glu Val Pr hr Thar Lys Pro -C AAAGAT CT AAA CmG L AM AAA c AAAGA GIG cm Ae e AAA Cm - 3' Information pour la SEQ ID N0: 3 G2B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 101 acides aminés, 303 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N-UTrAaGlnTrLysGlyA gIle hrSo rThrGln hrAsn Lys ProSer Tr Lys '- Ao OCS o GC oe AAAGC CTr AIC AoCCoe A C /G Al AAOCA0 oCAoeAA 150 Ser Ag Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe AXC GT.oC AAA AC OCM CM AAA AAA CM APA GPT GT C CAC T G% GIG TC AhC 171 173 176 182 186 Val ProCys Ser Ile Cys (Gly A Asn GLn Leu Cs lys Ser Ile Cys Lys r Ile Pro Ser GI; CM MC A3C AGC AC MC GG P AAC CaG CIG Poe APA ?W AM a:oe AAA NiD AC Cm AOC Asn Lys Pro Lys Lys Lys Pro Thr Ile Lys Pro Thr Asn Lys Pro Thr ir Lys nlr hr Asn AAC AAA CM AAA APG AAA CM AC AMC AAA CM ( e AAC AAA fM AC o AAAAo Aoe AAC 213 230 Lys Arg Asp Pro Lys Thr Pro Ala Lys Met Pro Lys Lys Glu Ile le eIhr Asn C AAA = GAT CE AAA AIO CCL G AAA ANTG CM APG AAG %A AC AIC Ao AAC - 3' Information pour la SEQ ID NO: 4 G2A6Cys TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 101 acides aminés, 303 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 130 N - lr Val Lys nt Lys AI hx ir Thr qTr GIn hr Gln Pro Ser Lys Pro r nTr Lys '- AoC GIG A AA AAA AAA AC C API AC o CG AC GCG 3C PA AM C oC P AAA Gln Arg Gin Asn Lys Pro Pro Asn Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe C r CGAAC AAA î G AAA CIC î AAC AEC CT TIC CGT TIC GAA GIG TIC AAC TIC 171 173 176 182 186 Val Pro Ser Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro lhr Cys Tp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn GIG G Aî AiC A=C IC C A PC APAC C AOC GMC lUG (0 AIC AGC AAA CT ATC CM AAC Lys Lys Pro Gly Lysys Ihr Ir IrLys Lys ro hr Lys Lys Pro hr Phe Lys 7hr Ir Lys AAA î 213 230 Lys Asp His Lys Pro (Gin Thr qlhr Lys Pro Lys Glu Val Pro tir Thr Lys Pro - C AAA GAT CkT AAA Cm Cps AiC Ao2 AAA CCG AAA GAA GIG Cî PCo Aoe AAA Cm 3' Information pour la SEQ ID NO: 5 G2BÈCys TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 101 acides aminés, 303 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ihr Ala Gln Thr Lys Gly Arg Ile lhr 'hr Ser hr Gln hr Asn Lys Pro Ser nr Lys 5'- ACCI G33 G AC ACAA AG C0 AICC A oC AC C ACCG Ao APC AA CM PAo AC AAA Ser Arg Ser Lys Asn Pro ProLysLys Pro Lys Aspsp Tyr His Phe Glu Val he Asn Pe P.: CL AOC AM APC CM CM M AAA AMC AA GU;1:T IPC CAC TIC GA GIG TIC A TIC 171 173 176 182 186 Val Pro Ser Ser Ile COys Gly A Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Ihr Ile Pro Ser GIG CM A oe G C AA CAG GCG P ACAA 3I AAC APC ACAA AACA C C03 A:C Asn Lys Pro Lys Lys Lys Pro Ihr Ile Lys Pro Ihr Asn Lys Pro hr Ihr Lys Ihr Thr Asn AAC AM CG AAC A AAG A 3 AAAW AAA PC AMC AAC ACEAA CMA33 Ae AAAAoe aC AAC 213 230 Lys Ag Asp Pro Lys nr Pro Ala Lys Mt Pro Lys Lys Glu le Ile hr Asn - C A1A CGT Ge 0CM AAA to]CG G,33 AAA A2G I32 AtG AG (GAA ATC ACe AAC - 3' Information pour la SEQ ID N0: 6 GlACys TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - Ser Ile Cys SerAsnAsn Pro Thr Cys TrpAla Ile Cys Lys - C '- A A3CA TI A3ACAACAAC GACC13 GTCG33 ATC ioe AAA- 3' Information pour la SEQ ID NO: 7 GlBCys TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - Ser Ile Cys GlyAAsn AsnGlnLeu Cys Lys Ser le Cys Lys - C '- A3C ATC IGC GOECAAC AAC G CI IGIGCAAA PC ATC TIGC AAA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 8 G1A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - Ser Ile CysSerAsnAsn ProThr Cys TrpAla Ile SerLys - C '- AGCATC Te GC CAAC AAC C3 GACC C TGG GG ATC AC AAA - 3' Information pour la SEQ ID N0: 9 G1B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 * N - Ser leCys GlyAsnAsn OGlnLeuCysLys Ser Ile SerLys - C '- ACATCG = o3CC AACAAC GCIG CAAAAC ATC ACAAA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 10 Gl'A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - Ser IleAspSerAsn Asn Pro hr Orn TrpAla Ile CysLys - C Information pour la SEQ ID NO: 11 G1'B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N- Ser IleAspGlyAn AsnGln Leu Crn Lys Ser Ile Cys Lys -C Information pour la SEQ ID N0: 12 G1'A6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - Ser IleAspSerAsnAsnProThrOCnTrpAla Ile Ser Lys - C Information pour la SEQ ID NO: 13 G1'B6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - Ser Ile Asp Gly AsnAsn Gln Leu Onm Lys Ser Ile Ser Lys - C Information pour la SEQ ID N0: 14 G2AÈCF TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 101 acides aminés, 303 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N- irVal Lys hrLysAhrrrr XGln r Gln ProSerLysProhrhrLys '- AC GIG AAA AM APAA AAC 32AI A AMCPr PlI CP D G P CM P AAAM O L PDC AAA 163 165 168 170 Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn Lys Pro Asn Asn Asp Ser His Ser Glu Val Ser Asn Ser CA aCr CA AAC AAA C00 CC AAC AYA CA AAC AAC GUT =CT 1U @A GIA G C AAC oe 171 173 176 182 186 Val Pro Ser Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro hr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn GIG 033 OC P3C A A oC CA CAACA AC CM Aoe TOC GM AC} e AAA ACr AICM AAC Lys Lys Pro Gly Lys Lys Ihr Ibr Ihr Lys Pro Ihr Lys Lys Pro Mhr Phe Lys Ihr Ihr Lys AAA AAA C? G3C NV2 AM AOAAC AAA 0 A MGE AAA AAA cm 2 TC AA A C TI C P AAAA 213 230 Lys Asp His Lys Pro Gln 1wr'lhr Lys Pro Lys Glu Val Pro Ihr r Lys Pro - C AAA GAT C TAAA CI CYA;o AC AAA CA AAA GA GIG CCG AC C APA ACG - 3' Information pour la SEQ ID NO: 15 G4A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val Pro Cys Ser Ile Cys SerAsnAsn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys - C '- GIG cI A3C ATIC ' AOC? C AAC cm Aoe 'e '1 G03 ATC I AAA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 16 G4A6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val Pro Ser Ser Ile Cys SerAsnAsnProThr Cys '1Tp Ala IleSer Lys - C 'GIG C23Apoe? ATIGCAGC A1CeAAC C3A AoCm C'C'1oG A7C AAAA- 3' Information pour la SEQ ID NO: 17 G4B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECUTLE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val ProCys Ser Ile CysGlyAsnAsnGlnLeu Cys Lys Ser IleCysLys - C ' GIG C CTGC A/C ATC SCG C AAC AAC C CIG IC AAA At A CC AAA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 18 G4B6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val Pro SerSer Ile Cys Glysn AsnGlnLeuCys Lys Ser Ile Ser Lys - C ' -GIG CC AC AGC AC AC GC AACAACC CAG C T AA AGC ATC AC AAA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 19 G4'A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val ProAspSer IleAspSerAsn AsnProT hrOrn TrpAla IleOrn Lys- C Information pour la SEQ ID NO: 20 G4'A6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val ProSer Ser IleAsp SerAmAsnPro TrOrn TrpAla IleSerLys - C Information pour la SEQ ID N0: 21 G4'B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val ProAspSer IleAsp GlyAsnAsnGn Leu rn Lys Ser IleOrn Lys - C Information pour la SEQ ID N0: 22 G4'B6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val Pro SerSer IleAspGlyAsnAsn GlnLeuOrn Lys Ser IleSerLys - C Information pour la SEQ ID N0: 23 G200A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 61 acides aminés, 183 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Tr Lys GLn Arg GlnAsn Lys Pro Pro Asn 5'- CnGA C CA =G Ce 2AAA AC AC AAA CAG Ci CAG AACAAA G CM AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys AAA C3 AAC AAC GATIC CT TIC GA GIG TIC AAC TIC GIG CC3 GC AC ATC ToC 177 182 186 Ser AsnAsn Pro ir Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys ProGly AC AACAAC OCACC TWC GCG ATCCoe AAA T ATC AAC AAA AAA 3GGC 196 200 Lys Lys Thr Thr Thr - C AAAAAA eAOMG ACC- 3' Information pour la SEQ ID NO: 24 G198A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 59 acides aminés, 177 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gln Thr Gn Pro Ser Lys Pro Tnr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn '- CPG ACC CG CG AAA CM APL AC AAA CA C= CTG AAC AAA CCG CC AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe (Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys AAA CG AAC AAC GT TIC CATTrC GA GIG TIC AAC TIC GIG CEG TCC AoC ATC TGC 177 182 186 Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala lIe Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly ACC AAC AAC C0G ACC IGC TOG GCG ATC 7C AAA CGT ATC CCG AAC AAA AAA COG GGC 196 198 Lys Lys Thr - C AA AAA AoC- 3' Information pour la SEQ ID N0: 25 G196A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 57 acides aminés, 171 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 140 N - Gn TrGl n Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn '- CG ACC CAG OC3 G AAA w3 ACC XC ACAAAG CGT CAC AAA CG C AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe (Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys AAA CCG AAC AAC (T TI= C.T T1 GA GIG TIC AAC TIC GIG CG ICC AW3 AIC 'oeC 177 182 186 SerAsnAsn Pro Thr Cys Trp Ala le Cys Lys Arg le Pro Asn Lys Lys Pro Gly PLCAAC AAC CG ALCCTC GG1CATC IGC AAA Cr AT CM AAC AAAAAA G 3C Lys- C AAA - 3' Information pour la SEQ ID N0: 26 G194A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 55 acides aminés, 165 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - n Thr Gln Pro Ser Lys Pro r Mr Lys nArg nAsn Lys ProPoAn '- CG Aoe CG CC GPGCAAA AO ACAC AAA CG =GT C AACAAA CmG AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys AAA OC AAC AAC GAT TIC CT TIC GAA GIG TIC AAC TIC GITG Cm TC AGC ATC TC 177 182 186 194 Ser AsnAsn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro - C A 3CAAC AAC OCM ACoe TGCTG 03G ATC T AAA (-- AT2C O AAC AA AAA C(3 - 3' Information pour la SEQ ID NO: 27 G192A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 52 acides aminés, 156 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 140 N - G(n Thr Gn Pro Ser Lys Pro hr hr Lys Gln Arg GiLn Asn Lys Pro Pro Asn '- CAG A CG CM AGC AAA CG ACC Aoe AMA ' îI CPG AAC AAA C Cm AAC 158 173 176 Lys Pro AsnAsn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys AAA CM AAC AAC G@T TrC CAT TrC GA GIG TIC AAC TC GIG CM KTX GC ATC IGC 177 182 186 192 SerAsn Asn Pro Thr Cys Trp Ala le Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys - C AC AACAAC G3 ACCoe IC IGG03 A TGC AAA CGT ATC G AACAAA - 3' Information pour la SEQ ID N0: 28 G6A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 51 acides aminés, 153 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gin Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr hr Lys GlnArg GlnAsn Lys Pro ProAsn '- CG3AEC CAG EC3G A CAAA G3 LCACoe AAA CG CAACAAA C C1M AAC 158 173 176 Lys Pro Asn AsnAsp Phe His FPhe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys SerIle Cys AAA CwG AAC ACGAT TrC C TrC GA GIG TIC AAC TrC GTG C3 TGCA CA C UC 177 182 186 190 Ser AsnAsn Pro Thr Cys p Ala Ile Cys LysArg Ie Pro - C AGCAACAAC CEG AC 3 I GGG03ATC AAA C'GTATC CG - 3' Information pour la SEQ ID N0: 29 G7A TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 33 acides aminés, 99 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 158 173 N - Lys Pro AsnAsn Asp Phe His FPhe Glu Val PheAsn Phe Val Pro Cys Ser Ile '-AAA C3GAAC AACGA T C TIC TTICGA A AC GITG ACMTGG 3 PT3CA ATC 176 182 186 190 Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Tp Ala Ile Cys Lys Arg Tle Pro - C ToC AC AAC AAC CMAoe TC T OG3CG AC A M A TC CA AT - 3' Information pour la SEQ ID NO: 30 G200A6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 61 acides aminés,,183 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gn Thr Gln Pro Ser Lys Pro nr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn ' - GG Aoe CC CAAA OAA o CC A AAA M CG r CG AAC AAA CCG CMG AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys AAA AC AAC AAC Ga TIC CT TIC GAA GIrG AACTI A TC GIG CM AGC PC ATC C 177 182 186 Ser Asn Asn Pro hr Cys Trp Ala ne Ser Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly AC AAC AAC C03 ACC 7W GC G3 AIC GC AAA CGT ATC G AAC AAA AA C3G GC 196 200 Lys Lys Thr Thr Thr - C AAAAAAACC AQ ACC- 3' Information pour la SEQ ID N0: 31 G198A5C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 59 acides aminés, 177 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - (n Tnhr Gln Pro Ser Lys Pro Tnr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn 5'- CAG ACC CG C AOC AAA GG AL ACC AAA C = ( AAC AAA C( G C(I AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe (Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys AAA CM AAC AAC GAT TIC cT TIC GAA GIM TIC AAC TIC GIG GG AGC? ? ATC TGC 177 182 186 Ser Asn Asn Pro Thr Oys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly AG AAC AAC C33 AC IGCGoe TM G AC AGC AAA CT ACM G AAC AAA AAA CCG GC 196 198 Lys Lys Tnr - C AAAAAAAoe - 3' Information pour la SEQ ID NO 32 G196A6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 57 acides aminés, 171 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn '- L CA G ALC 33 CPGC AAA CM33AL Aoe AAA AG ci CPT AAC AAA CCM C AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys AAA CG3 AAC AAC GA TIC (AT TIC GA GIG TIC AAC TIC GIG (IG C A( TC TC 177 182 186 Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn LysLys Pro Gly AGC AAC AAC C IGC 13M (M3 ATC A(C AAA 0T AC CA G AAC AAA AAA CCG GGC Lys - C AAA - 3' Information pour la SEQ ID N0: 33 G194ASC TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 55 acides aminés, 165 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn '- CAG3 AoeCC AG 3 CCA AAA UC eACCo CAAA CAG r CAG AAC AAA ACC C AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys AAA C A3 AAC AACGAT TIC CAT TIC GA GG TIC AAC TIC GIG AGC AGC ATC T3GC 177 182 186 194 Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro C ACAAC AAC C33 ACe =C 7GCTGG ATC AGC AAA r A C AAC AAAAAA CG - 3' Information pour la SEQ ID NO: 34 G192ASC TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 52 acides aminés, 156 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg GlnAsn Lys Pro ProAsn '- CP3G ACC CPG CX AGDCAA ACI AoC AC CACCA AACGf C AAC APA CM CC AAC 158 173 176 Lys ProAsn AsnAsp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro SerSer Ile Cys AAA C AAC AAC GAT TICAT T ICGA GIGTIC AAC T GIGI3 C AGC P ATCTGC 177 182 186 192 Ser Asn Asn Pro Ihr Cys Trp Ala Te Ser Lys Arg Ie Pro Asn Lys - C A AAC AAC CI3 ACoe I 7 GG3 ATC AoC AAA CT ATC C33 AAC AAA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 35 G6A6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 50 acides aminés, 150 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro hr 'Ihr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro ProAsn 5'- C G AL (M G AOACAAAIA AAA CAG GT ACGAAAA CCG3 03AAC 158 173 176 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys AAA C AAC AAC GAT TG C eCAT TIC GAA GIG TIC AAC TC GIG =3 AC AC C Toe 177 182 186 190 SerAsnAsnProThr CysTrpAla e Ser Lys ArgIle Pro - C ACAACAAC IC CAC IGC I3OG G ATCA3CAAA CGT AC CGG - 3' Information pour la SEQ ID NO: 36 G7A6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 33 acides aminés, 99 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 158 173 N - Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile '- AAA CG AAC AAC GAT TIC TTICGAA GIG TC AAC TIC GIG CEG o AGCAE ATC 176 182 186 190 Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro - C ToC ACC AAC AAC CG ACC IT TI GCG AG c AOC AA CT ATC CG - 3' Information pour la SEQ ID N0: 37 G200B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 61 acides aminés, 183 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser ir Gln 'rl AsnLys Pro Ser hr Lys Ser ArgSer LysAsn Pro Pro LysLys Pro 'Aoe o CG ACC AAC AAA CM3 GC ACC AAA AA2 rCT G AAAAAC C CM3AAAAAA CG 160 173 176 Lys Asp Asp 'yr His th Glu Vl Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly As Asn Gln AAA GAT GTT CC TIC GA GIG TIC AC TIC GIG GC GCW AGC AMC T GC AC A AA2 CD 182 186 200 Leu Cys Lys Ser IleCys Lys lhrIle Pro SerAsn Lys Pro Lys Lys Lys Pro lhr Ile- C CIG GC AA; Y ATC G AAAAC 3AIC C0 AC AC AAA / A AA AM A AAA NAAACAC- 3 Information pour la SEQ ID N0: 38 G198B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 59 acides aminés, 177 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N- Ser Thr Gn hr AsnLys Pro Ser IhrLys SerArg Ser LysAsn Pro Pro Lys Lys Pro ' - AW PIo PGCIG A APC APA PAOC Ae AAA AeC cT 7 AM AA CM CM AMP AAA 0PA 173 176 Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Pe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln AAA GPT GAT MC CAC TIC GIA GIG TIC AA TC GIG CI OE ATC G3C AC AA2 CPG 182 186 198 LeuCysLysSerIle CysLys ir Ile ProSerAsn Lys ProLys LysLys Pro- C CIG Ie PAA A A MC TAA AA AMC IoC AAC CAA CM AMAAG AA3AA CM - 3' Information pour la SEQ ID N0: 39 G196B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 57 acides aminés, 171 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 140 N- Ser Thr Gn hr Asn Lys Pro Ser Lys Ser Arg Ser LysAsn Pro Pro Lys Lys Pro - KW AoCK GAACAAACA W AAA CGTW 3C AAA AP CI o A AAA C3 173 176 Lys Asp Asp Tyr is FAe Glu Val PPe An Ph Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn AsnGln AAA GAT GT TA CTIC= CA GIG TIC TICG 3 CTC CA AMTC 0C2 A3 AC CAG 182 186 196 Leu Cys Lys Ser Ile CysLys hr IlePro Ser Asn Lys Pro Lys Lys - C CIG TC2 AAA Aoe AM MC A1b oP AC CM D2 ACf AAA CI.AAA AAG - 3' Information pour la SEQ ID N0: 40 G194B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 55 acides aminés, 165 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser Tr Gln r An Lys ProSer lir LysSerAg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro ' Poe3C P OCE ACAC AA 0 3C Aoe AAA AP CT A3CA APAC CM 03 AAA AAA 033 173 176 Lys Asp Asp Tyr His e Glu l Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Am AGln AAA GT GAT C CA TIC GA GIG TIC AAc TIC GI C TW A3C C A= 0C APC AAC CP 182 186 194 Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys hr Ile Pro Ser Asn Lys Pro - C CIG e A e AM CT AAACA CACAAC AAAC - 3' Information pour la SEQ ID NO: 41 G192B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 53 acides aminés, 159 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser tlr Gln hr Asn Lys Pro Ser hr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro 5'- AGC Aoe CG AC AAC AAA CCG PC ACA AAAG 3oCr = PTl AAAAAC 3 CI30 AAA AA I03 173 176 Lys Asp Asp Tyr His Fhe Glu Val Phe As Phe Val Pro Cys Ser Ile C9s Gly Asn Asn Gln AAA GAT GAT TC CA IC =TGA GIG TIC ATIC GIG C3 32 PL3C AM C32 î3G C AAC AACG 182 186 192 Leu CysLysSer IleCysLys hr IleProSerAa - C CIG IC AAA DACe G Coe AAA PIoe AT Ce3 APC - 3' Information pour la SEQ ID NO: 42 G6B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 51 acides aminés, 153 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser tlhr Gln hr Asn Lys Pro Ser 'lhr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro LysLys Pro '- A3C PC C7G Ao APC APAAA CU; P C OAG CAAA7Cf Tr A AAA AAC CM (33 AAA AA CMD 173 176 Lys Asp Asp Tyr His e Glu Val Phe Asn PheVal Pro Cys Ser le CysGlyAsnAsnGln AAA G.T GCT TC CAC TIC GPA GIG TC AAC TIC GIG O! 3C AC A C GGC AC AAC CG 182 186 190 Leu Cys Lys Ser IleCys Lys 'r IlePro - C CIG Goe AA AC ATC MC AAA XAIC CM - 3' Information pour la SEQ ID NO: 43 G7B TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 33 acides aminés, 99 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 158 173 176 N - Lys Pro Lys Ap Asp Tr is Phe GluVal Phe A snPhe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly ' - AAAC03 AAAAGAT Gc TC CC TICG AGIGTIC AAC TIC GIG 2TC e A C AT G 182 186 190 Asn Asn Gln Leu Cys sSerIleCysLysT ir IlePro- C APC AC AG CI I TC APA AGC ATC T G AA A AI2A C C- 3' Information pour la SEQ ID N0: 44 G200BdC TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 61 acides aminés, 183 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser r GlnMhrAsnLys ProSer rM Lys SerArg Ser LysAsn Pro ProLysLys Pro ' - oe X2Co G PC AAC AA C APAC A AAA A3 CGr 3 AAA AAC CM O C3 AMA AAA CMI 173 176 LysAspAspTyrH is Pe GluVal PheAsn PheeValPro SerSerIle CysGly A Asn Gn AAA GAT GAT C CC =TI A GIG TIC A2 TIC GIG CZ CAoeG A T C AAA CP 182 186 200 Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys hr Ile Pro Ser As ysPro ysLys Lys Pro T1r neC CIGT G AA e2C Poe AAA A ASC C Ke ACAM A AG AA C Aoe AC- 3' Information pour la SEQ ID NO: 45 G198B6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 59 acides aminés, 177 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser thr Gln hr Asn Lys Pro Ser h Lys Ser Arg Ser Lys Asn P ro ProLys Lys Pro ' - P@3C C CP: AAPC AAA M PY3 Coe AAA P0GC =T Pe AA APC CM3 CM: AA APA O3 160 173 176 Lys Asp Asp Tyr His e Glu Val Phe A Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Am Am Gln AAA GAT GAT U C TIC =GA GIG TIC AAC TIM GIG CC AWC ADC AWT GC A3 C PAC AG2 A 182 186 198 Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Mhr Ile Pro Ser Am Lys Pro Lys Lys Lys Pro - C CIG MC AAAG C A_ C AGC AA APC ATC PCG/C AG AAA A II AAA AM Information pour la SEQ ID NO: 46 G196B5C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 57 acides aminés, 171 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser Thr Gln nhr Asn Lys Pro Ser Ihr Lys Ser Arg Ser Lys As Pro Pro Lys Lys Pro 5, - A7C A2C 2 ACD AAC AAAA CM AO ACA CGT A AAA AP2 CM1 (I AAA AAA o3 173 176 Lys Asp Asp Tyr His Eh Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln AAA GAT GAT TAC CC TIC GA GIG TIC AAC TIC GIG 0C AWC C AIC ' 1GC A2 C APC CG 182 186 196 LeuCysLysSer leSerLys rePro Ser Ams Pro LysPLsL -C CIG 1132C AA A3C ACC Pe AAA ACC AIC O]G AC AAC AAM OM AAA ANG - 3' Information pour la SEQ ID NO: 47 G194B8C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 55 acides aminés, 165 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser Tr Gln MIr Asn Lys Pro Ser hr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro LysLys Pro '- P3C;2 CG Pe AAC AAA CAG P AIM AAA;Ce T P0C A AAAfC CIM AA AAA c03 160 173 176 Lys Asp Asp Tyr His ne Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln AAA GAT GT C C TIC G@A GI TICG AAC TC G CC U AW AoC AIC TC GC A"C AAC 182 186 194 Leu Cys Lys Ser ne Ser Lys hr le Pro Ser Asn Pro - C CIGGC AAS C P APA ACC CC A AAC AAA =/ - 3' Information pour la SEQ ID N0: 48 G192B6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 53 acides aminés, 159 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser trGln hrAsnLys Pro Ser r Lys Ser Arg Ser LysAsn Pro Pro Lys Lys Pro 5' - AGC;o CG Ao AAE AAA CG Pe Aoe AAA AC = Ac AAA AAC c cm AAA AM Cm 173 176 Lys Asp Asp Tyr His he Glu Val Phe A Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly As Asn Gln AAA GAT GAT ZC ( TIC =GA GI TIC AE TIC GIG C2 PCoe AC ATC GGC AE AAC Ca 3 182 186 192 LeuCys LysSer le Ser Lys 'hr le Pro SerAsn -C CIG TCAAACA TCA DAA A AS CMIA5CAC- 3' Information pour la SEQ ID NO: 49 G6B56C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 51 acides aminés, 153 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Ser hr Gln 11. Asn Lys Po Ser lr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro ' - PDe PD1C CA ACIC 1W2 AAA al; AC PCîr AAA A CGT AXe A APAC CM CM APA PAM CM 173 176 Lys Asp Asp Tyr His Ehe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly AsnAsn Gln AAA. GAT GAT T CPC TI GPA GIGT 1 AC I= GIGC PIOC Poe A CP G3CAnEAWAC 182 186 190 LeuCys LysSerIleSer Lys hrIle ePro - C CIG 1 AAA AC AOCA AAA AM OrCI; - 3' Information pour la SEQ ID NO: 50 G7B6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 33 acides aminés, 99 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 158 173 176 N-Lyrs ProLys Asp A yrHis Phe GuVal PheAs Pe Val Pro Ser Ser ne eCys Gly '- AAA AI AAA GAT GAT WCACT = GI = AIC ET GIG ICC ACP Aoe C'TC GGC( 182 186 190 AnAsnGn TLeu C Lys Ser le Ser Ly nr Ile Pro-C AAC AN CA2 CIG T AAAAGC ATC A AAIDATC CM - 3' Information pour la SEQ ID NO: 51 G2V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 101 acides aminés, 303 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gn Asn ArgLys Ile LysGly Gln Ser Ir L Pro Ala hrArgLys ProPro IleAsn ' - CAA AAICAAA AAT A PC ATMA CIA a GC AM AAM (IC CI AT AAT Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His Gn Asp His A Asn Phe Gln r Leu ProTyr cI TMA AC C A CC GP A AIC ar @A GPC MC ACC AW A CAA 3A, CIC C11C 171 173 176 182 186 Val Pro Cys Ser hr Cys Glu Gly Asn Le Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu ihr Glu Grr COC 'tC;r A r GAA Wr AAT C= Gr To EC TM CIC TGoer CAT AT, Arg Ala Pro Ser Ag ALa Pro Thr Ile Ihr Leu Lys yls /r Pro Lys Pro Lys Thr Ihr Lys A( GCA O Pe AG% GCA CM AM A7C Aoe CIC AAPG A CM AAA CM. AAA aoPL AAA. 213 230 Lys Pro Mr Lys 7hr lhr Ile His His Arg 1r Ser Pro Glu hir Lys Leu Gin - C APG CMA; AAG A AM ATC CAT %C AM AGoe PC CM GA XC AAA CIG CA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 52 G2V6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 101 acides aminés, 303 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Gln Asn Arg Lys Ile Lys Gly Gln Ser Thr Leu Pro Ala ihr Arg Lys Pro Pro Ile Asn '- CA A1g2 A AAA ATC AAA 150 Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His Gln Asp His As Asn Pe GLnhr leu Pro T'yr cIA 'IA GA Poe AIC GA CCIA GA AAC CAT A GC2 GC AP2 AAC TIC CA A CIC GcC TLT 171 173 176 182 186 Val Pro Ser Ser lhr Cys Glu Gly Asn lu Ala Cys lu Ser Lau Ser is Ile Glu MXr Glu GIT CCC ÄOE;Gr A, 7Gr GAA oer AAT CIT GCA = TIA T 7I CIC zSC CAT AT1r FG PúG GA krg Ala Pro Ser Arg Ala Pro Ihr Ile Ihr Leu Lys lys Ir Pro Lys Pro Lys 'Ir MIr Lys PiG GCGA CAe AG1 G% CA; = AC r/ CIC AAA A XS M CI AAA CAc AAA AG C AAA 213 230 Lys Pro Thrn Lys Ihr Ihr Ile His His Arg Ihr Ser Pro Glu lhr Lys Leu Gln C AAG CM Aoe PJA P AM AIC OT MC;IG AoC Aoe CGS GAA 1Y AAA CIG CDA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 53 G200V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 61 acides aminés, 183 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N- Leu ProAla hr rg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His '- CIA A GCCACAAA AAA CI C ATr AAT ICM A TG ATC CCMA CGA AA CCAT 160 173 176 Gln Asp His Asm Am Pe Gln 'r Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser Thr Cys Glu Gly AS Leu CA G CA C AACTIC CCA PL CIC CM aT Grr CST ACG ATM GAA GT AAT CIT 182 186 200 Ala Cys Lu Se Leu Cys His le GluZ rGluArgAlaProSerArgAla Pro nwr Ile - C GCA T CTI T CIC Toe CCT AT AM GAA A AOC AGA GCC AcM - 3 Information pour la SEQ ID N0: 54 G198V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 59 acides aminés, 177 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N -Leu Pro Ala r kArg Lys Pro Pro Ile Asn Pro SerGly Ser Ile ProPro GluAsn His 5'-C IA 0IA OGOAACA AAA O CI AIT AATI CA T GG Z AC CIM CM GAAACATO 173 176 Gln Asp His Asn A he Gln Tihr Leu Pro Tyr Val Pro qys Ser hr Cs Glu Gly Asn Leu CAA GC CC AAC AAC TIC C@A PCA CIC 0CM =T GIT CC l AC lG GAA GTr AAT COT 182 186 198 Ala Cys LeuSer Leu CysHis IleGlu hrGluArgAlaProSerArg AlaPro- C GC i TIA ICT CIC GC CrAT AT GG AM GPAA AG CM IAPC A GC CM - 3 Information pour la SEQ ID NO: 55 G196V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 57 acides aminés, 171 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 140 N - La Pro Ala hr ArgLysProProIleAsn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro GluAsn His '- CIz CM Oe ACAGA AAA 0Q AIT PATC TA GG oe ATC a% CM @GAA APC CAT 173 176 aGlhn Asp is Asn As ne n r Lau Pro yr Val ProCys Ser Mhr Cys Glu Gly Asnm u CA GC CACA TA ICA @CIA AM CI CS TGIT / TMC i AGr AC TGTA TAAT Crr 182 186 196 Ala Cys leu Ser Leu Cys His le Glu lr GuArgAla Pro Ser Arg - C GCM =I TIA TMCIC TG CCO TATG A G GA CMX AG C - 3' Information pour la SEQ ID NO: 56 G194V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 55 acides aminés, 165 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N -Leu Pro Ala Ihr ArgLys Pro Pro IleAsn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asm His S'- ( CIA GG ACAGA AAGA O ACTAAT CMTTM GA loe AIC CA CIA GAA E CAT 173 176 Gln Asp His Asn Asi e Gan r Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser hr Cys Glu Gly ASm Lu CAA GA CC AAC AAC TI GCA A CrC 0A AT GT CO A3C T ACA*T GA MT AAT CIT 182 186 194 Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ie Glu hr GuAlgAla Pro - C GCTIe TM M CIC MCCTAT AIT GG AAC @A GCM - 3' Information pour la SEQ ID NO: 57 G192V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 52 acides aminés, 156 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Leu Pro Ala r Ag Lys ProPro Ile Asn Pro SerGly Ser Ile Pro ProGlu Asn His 5'- CIA O% GCCAM AP AMAA (CM ATAAT CI TM OA /3CAICC I C A AAC CAT 173 176 Gln Asp His Asn As e Gn hr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser hr Cys Glu Gly Asn Leu CPA GC " A"AC TIC aAA PAM CrC T aGT 2 CGOC r A = @A r GAAT c 182 186 192 Ala Cys LuSerLeu CysHis IleGlu rGlu Arg - C GC =C TI =C C AT G C GA ACT GPA GA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 58 G6V LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 51 acides aminés, 153 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Leu Pro Ala Ag Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His 5' - CIA aI G3 PA MAA IEIATTAAT CA TIM G3 A C A A C CI O A AC CAT 173 176 Gln AspHisAsnAsa he Gln MrLeu Pro Tyr Val ProCys Se Thr CysGluGly Asn Leu CAGEC CAAC AC ATAC TCrCC A T CIC T arT A TGAAT ArT CT 182 186 190 AlaCysLeuSerL Cys His IleGlu hr- C GA C TIA TM CI GCCAT AZTGGAG - 3' Information pour la SEQ ID N0: 59 G7V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 33 acides aminés, 99 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 158 173 176 N - Asn His GIn Asp His As AsnPhe Gln Ihr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser hr Cys '- AAC CfT CfA GC CAC A AC C TIC CA AM =CIC =C =T CO 1T2 GC TAMT *182 186 190 GluGlyAsnLeu AlaCysLeuSerLeu CysHis IleGlu 7r- C GA ( AAT ITG CA GC TIA A C cTG CT AT GAM - 3' Information pour la SEQ ID N0: 60 G200V6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 61 acides aminés, 183 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Lu Pro Ala Tr Arg Lys Pro ProIle Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His '- CIA CM GGC PA AP A OA AT AAT E TC CA 12 C A/CA C G, AANC CR 173 176 Gln Asp His An An Ebe Gn hr ILeu Pro yr Val Pro Ser Ser Ihr Cys Glu Gly Asn Ieu CA GPL GC AAC Al TIC CCA A IC CSCT G1IT =C( T Ao;Gr T =GPA Gr AAT OIT 182 186 200 A.la Cys Leu Ser Le Ser His Ile Glu r Gu Ag Ala Pro Ser ArgAla Pro IhrIle - C GC IQC TI TM C CIC PCAT ATT G3 AD GA G CI OA C GA O CMA AM C P - 3' Information pour la SEQ ID NO: 61 G198VSC TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 59 acides aminés, 177 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 140 N - Leu Pro Ala Mr Arg Lys Pro ProIle Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His '- CIA = G03 A A;% AAA CM CM AT A1 OCA (M ATC AC TA CA GCA AAC COT 173 176 Gln Asp HisAsn Amne Gln hr Lu Pro y Val o Ser Ser r Cys Glu GlyAsn Leu TJT Jf ML, E i lJ.'T TF DM; TFDm J 9LI ELT 091 )D k D o %WD DIV %Df tD L %' If IM'%R %D VWf %f f oD %D M ID -,S 0ú STH usf nhD o3d oId GI aS kD -MS O d uWV DlI Od o sq fur 5,W Z elU O3d alI - N 09I otvi auvjoad: 'Il3:sIOw S3a sdXL.L ITlE9uTl: NOIJVúS/II. 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Ze C I TF IM, DL CDI) DID V7 W)% DI MW DW Ob D;) 182 186 194 Ala Cys Leu Ser LIu Ser His le Glu hr Glu Arg Ala Pro - C GC TG TIM TM CIC AOC CAT ATT G AM G(A PA GCA CCA - 31 Information pour la SEQ ID NO: 64 G192VSC TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 52 acides aminés, 156 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Leu Pro Ala 5wr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu As His ' - CIA oA GC ACP A AAA OE CM ATr AAT CI TC G3;o2 AMTC CMA GA AAC2 (T 173 176 Gln Asp His Asn An Pne Gln Ihr Leu Pro Tyr Val Pro Ser Ser Ihr Cys Glu Gly Asn Leu CAA GC CAC A"C TIC CAA P CIc C{ = T GIT r Coe;oC AM =T GA rT AAT crr 182 186 192 Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu Thr Glu Azg - C GC TC TI TM CIC P f3 C AT GPG A/ GAA Pf - 3' Information pour la SEQ ID N0: 65 G6VÈC LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 51 acides aminés, 153 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine N - Leu Pro Ala 7lr Arg Lys Pro Pro Ile Asa Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn Mis '- CIA CI Goe AGc % AA1A CIA Ca] ATT AAT OI 1T GG ACO ATC C GCA 6A AAC cT 173 176 Gln Asp His As As e Gin Ahr Leu Pro 7yr Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu CAA G AC APC AAC TIC CAA A CIC CM T GIT Coe 3 T A A GT = A CT AAT OCrIT 182 186 190 Ala Cys Leu Ser lai Ser His Ile Glu Thr - C GCA TCM I T CIC JoC CAT AIT GPG A - 3' Information pour la SEQ ID NO: 66 G7V6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 33 acides aminés, 99 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: protéine 158 173 176 N - AHis nA s Ps A e Gan hr u ProrVal Pzo SerSer TrCys 5'- A C ACCT GTA GACCAC AEAACTCAAICCC T GITC/3 A CA TGT 182 186 190 u Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu lhr- C GA GT AAT OCIT GCAC TIA7 I OIC= CCAT ATr GA - 3' Information pour la SEQ ID NO: 67 G4V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés, 51 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val Pro Cys Ser Thr CysGluGlyAsn LeuAla Cys Leu SerLeu CysHis - C '- GIT C ITC AGT ACA TT GA AAT CIT GA IGC TIA ITC CI TGC CAT - 3' Information pour la SEQ ID N0: 68 G4V6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés, 51 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Ser His C '- GIT e AC AE AL / TAfT GTA A- AAT CIT GC( l TA ITA Cr AGC CAT - 3' Information pour la SEQ ID NO: 69 G4'V TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val Pro AspSer ThrAsp Glu Gly AsnLeuAlaOrn LeuSerLeuOrnHis- C Information pour la SEQ ID NO: 70 G4'V6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 17 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 171 173 176 182 186 187 N - Val Pro Ser Ser Thr Asp lu Gly Asn Leu Ala Orn Ieu Ser Leu Ser His - C Information pour la SEQ ID NO: 71 GlV TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés, 42 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - SerThr Cys Glu GlyAsnLeuAla CysLeuSer Leu CysHis - C '- Pr AC = A f GTGAST AATCIT OE GC TIA CACIIGC oe CAT - 3' Information pour la SEQ ID NO: 72 GlV6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés et nucléotides LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - Ser Tihr Cys Glu Gly Asn Leu Ma Cys LeuSer Leu SerHis - C '- TAGCAMT GTA G TAAT CIT GC TIA ICACIC AGC CAT - 3' Information pour la SEQ ID N0: 73 G1'V6C TYPE DE SEQUENCE: acides aminés LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 14 acides aminés NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: peptide 174 176 182 186 187 N - Ser Thr Asp Glu Gly Asn Leu MAla rn LeuSer Leu Ser His - C REVENDICATIONS 1. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane OmpA d'entérobactérie pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à être administrée par voie nasale pour améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à- vis d'un antigène ou d'un haptène. 2. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane de Klebsiella pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à être administrée par voie nasale, pour améliorer l'immunité d'un mammifère vis- à-vis d'un antigène ou d'un haptène. 3. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane selon la revendication 2, caractérisée en ce que la protéine de membrane est une OmpA de Klebsiella pneumoniae. 4. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ladite protéine de membrane ou son fragment est obtenue par voie recombinante. 5. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane selon la revendication 4, caractérisée en ce que ladite protéine de membrane recombinante ou son fragment est renaturée en présence de détergent choisi parmi le Zwittergent 3-14, le Zwittergent 3-12 et l'octylglucopyrannoside. 6. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'au moins un fragment présente la séquence SEQ ID n0 1. 7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'antigène ou l'haptène sont choisis dans le groupe comprenant les protéines, les peptides, les polysaccharides, les oligosaccharides et les acides nucléiques. 8. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l'antigène ou l'haptène provient d'un virus ou d'une bactérie. 9. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que l'antigène ou l'haptène comprend au moins un fragment protéique de micro-organisme responsable de pathologies des voies aériennes. 10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que ledit micro-organisme responsable de pathologies des voies aériennes est choisi parmi le VRS, le para influenza virus (PIV), l'influenza virus, l'hantavirus, les streptocoques, les pneumocoques et les méningocoques. 11. Utilisation d'au moins un fragment d'une protéine de membrane selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que l'antigène ou l'haptène comprend au moins un fragment protéique du virus respiratoire syncytial (VRS) humain ou bovin. 12. Utilisation selon la revendication 11, carac- térisée en ce que l'antigène ou l'haptène comprend au moins un fragment de la protéine G du vRS. 13. Utilisation selon l'une des revendications 11 et 12, caractérisée en ce que l'antigène ou l'haptène comprend au moins l'une des séquences SEQ ID n 2 à SEQ ID n 73. 14. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce que ledit fragment d'une protéine de membrane est couplé de façon covalente avec ledit antigène ou haptène. 15. Utilisation selon la revendication 14, carac- térisée en ce qu'il est introduit un ou plusieurs éléments de liaison dans le fragment de protéine membranaire et/ou de l'antigène ou de l'haptène pour faciliter le couplage. 16. Utilisation selon la revendication 15, carac- térisée en ce que l'élément de liaison introduit est un acide amine. 17. Utilisation selon la revendication 14, carac- térisée en ce que la protéine hybride, obtenue après couplage entre le fragment d'une protéine de membrane et l'antigène ou l'haptène, lorsque ledit antigène ou haptène est de type protéique, est préparée par recombinaison génétique. 18. Utilisation selon l'une des revendications 14 à 17, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique contient un fragment d'une protéine de membrane couplé avec un antigène ou un haptène. 19. Utilisation selon la revendication 17, carac- térisée en ce que la composition pharmaceutique contient une cellule hôte transformée capable d'exprimer une protéine hybride contenant ledit fragment de protéine de membrane couplé avec ledit antigène ou haptène. 20. Utilisation selon l'une des revendications 18 et 19, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique ne contient pas d'adjuvant.