Brevet FR2779057A1 — publié le 19991203

i 2779057 L'invention concerne une utilisation d'au moins un sophorolipide sous forme lactone, en tant qu'agent stimulateur du métabolisme des cellules de fibroblastes du derme de la peau. Elle s'applique particulièrement aux domaines de la cosmétologie et de la dermatologie. Les sophorolipides sont des glycolipides; ils sont produits par fermentation à l'aide de levures de type Candida ou Torulopsis, telles que Torulopsis magnoliae, Candida bombicola, Candida apicola ou Candida bogoriensis. Le glucide constitutif des sophorolipides extracellulaires est le sophorose (2-O-3-D- glucopyranosyl -D-D- glucopyranose). Ce sucre peut être acétylé en position 6' et 6" et il est relié par une liaison acétale à un hydroxyacide gras en position o ou co -1. La fraction lipidique des sophorolipides est composée de plusieurs hydroxyacides gras, qui diffèrent par la longueur de leur chaîne, par le nombre et la position des insaturations, ainsi que par la position de l'hydroxylation. Pour chacun de ces hydroxyacides, il existe différentes formes structurales qui diffèrent les unes des autres, par une lactonisation (ou pas) du sophorose (principalement en position 4") ou bien encore par une acétylation (ou pas) des positions 6' ou 6". Les mélanges de sophorose lipides produits par fermentation peuvent être résolus et analysés en chromatographie liquide haute performance avec un gradient d'élution d'eau et d'acétonitrile. On note ainsi l'existence d'une vingtaine de composés individuels. Les sophorolipides sous leur forme brute sont constitués d'un mélange d'au moins un sophorolipide sous forme lactone et d'au moins un sophorolipide sous forme acide. Les contributions respectives de chacun des hydroxyacides constitutifs déterminés en chromatographie phase gazeuse, aux différentes classes de sophorolipides, ainsi que la répartition de ces classes, sont indiquées ci-après à titre d'exemple concernant l'hydroxyacide gras constitutif le plus abondant est l'acide 17-hydroxyoctadécénoïque (17- hydroxyoléique) Types Hydroxyacides gras % C 16:0 15 - OH Hexadécanoïque...........1,5 C 16: 0 16 - OH Hexadécanoïque........... 2,0 C 18: 0 17 - OH Octadécanoïque..... ..... 3,5..DTD: 2 2779057 C 18: 1 17 - OH Octadécénoïque............60,0 C 18: 1 18 - OH Octadécénoïque....... 12,0 C 18: 2 17 - OH Octadécadiénoïque....... 7,0 C 18: 2 18 - OH Octadécadiénoïque. .... 14,0 Les propriétés des sophorolipides forme brute et forme acide concernant la lutte contre le vieillissement cutané, à savoir leur action en tant qu'agent protecteur antiradicalaire et anti-élastasique ainsi que leur action réparatrice, restructurante et raffermissante, ont été décrites respectivement dans les demandes de brevets WO 95/34282 et FR..DTD: 96/16093. Par ailleurs, l'arrière-plan technologique est illustré par le brevet EPA-209783. En aucun cas, les propriétés concernant la stimulation du métabolisme des fibroblastes de la peau par la fraction lactone des sophorolipides, isolée et purifiée à partir du mélange obtenu en fermentation n'ont été décrites. C'est précisément l'objet de la présente invention. Les propriétés mécaniques de la peau sont en grande partie assurées par les fibres de collagène qui constituent la trame principale de la matrice du derme. Les collagènes constituent une famille d'une vingtaine de protéines distinctes dont la moitié est représentée dans le derme. Ce sont des protéines riches en proline et hydroxyproline, synthétisées par les fibroblastes. Lors du vieillissement, le métabolisme et/ou la structure des collagènes peuvent être modidiés. Une diminution de la synthèse des collagènes et une augmentation de la réticulation des fibres sont observées. Par ailleurs, lors du vieillissement cutané, le renouvellement cellulaire est ralenti. Les sophorolipides forme brute obtenus en fermentation selon le procédé décrit dans le brevet EP-B-516803 ont une action bénéfique sur la synthèse des collagènes par les fibroblastes dermiques, qui est décrite dans la demande de brevet de la Demanderesse FR 96/16093. La fraction lactonique des sophorolipides a été isolée et purifiée à partir du mélange sophorolipidique obtenu en fin de fermentation. La purification est pratiquée par précipitation et cristallisation dans l'éthanol selon un protocole décrit entre autres par A. P. Tulloch et ai, (Can. J. chem. 40, 1326 (1962)). 3 2779057 En fin de procédé de purification, la fraction lactone obtenue est un solide blanc. Le produit analysé en chromatographie couche mince se compose en général à 95 % de sophorolipides sous forme lactone dont la majorité est sous forme lactone diacétylée. On a constaté que cette fraction lactonique des sophorolipides comprenant une majeure partie de lactones diacétylées pouvait être utilisée d'une manière efficace en tant qu'agent stimulateur du métabolisme des cellules de fibroblastes du derme de la peau. De préférence, la fraction lactonique peut comprendre au moins 70 % en poids de lactones diacétylées et plus particulièrement au moins 80 % en poids. Elle est obtenue par une mise en solution des sophorolipides forme brute dans de l'éthanol, cristallisation puis filtration et recristallisation dans de l'éthanol puis filtration. Le produit recueilli est lavé puis séché. On emploiera de préférence une fraction lactonique comprenant un mélange de lactones de sophorolipides répondant à la formule ci-dessous, dans laquelle R est un groupe acétyle, et o R1 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle comportant 1 à 9 atomes de carbone lorsque R2 représente une chaîne comportant 7 à 16 atomes de carbone ou bien R1 est de l'hydrogène ou un groupe méthyle lorsque R2 représente une chaîne d'hydrocarbure saturé ou insaturé comportant 12 à 17 atomes de carbone. 6' H20R R1 I 6"CH2OR OH C=O 4 2779057 La fraction sophorolipidique purifiée sous forme lactone majoritairement diacétylée est active en tant qu'agent restructurant et réparateur du tissu conjonctif et donc contre le vieillissement cutané. Plus précisément, elle stimule la néosynthèse des collagènes in vitro et ce, avantageusement par rapport au mélange sophorolipidique brut obtenu en fermentation. La fraction sophorolipidique purifiée pourra être utilisée dans des gammes de concentrations variant de 0,01 ppm à 5 % (p/p) en matière sèche en formulation et notamment dans des émulsions de type eau/huile, huile/eau, gel, sérum, lotion, shampooing. Son utilisation se fera plus particulièrement dans des gammes de concentrations variant de 50 ppm à 1 % (p/p) en matière sèche. La fraction lactone ainsi purifiée, pourra être utilisée seule en formulation ou en association avec le mélange sophorolipide forme brute obtenu en fin de fermentation dont le pH sera compris entre 3 et 7,5, ou encore avec les sophorolipides sous forme acide désacétylée, préparés selon le brevet FR 96/16093, protonée et/ou forme acide au moins en partie sous forme de sels métalliques monovalents ou divalents. Les sophorolipides sous forme acide désacétylée peuvent aussi être utilisés sous une forme dérivée par exemple sous la forme ester. Dans ce cas, ils présentent leur fonction acide gras au moins en partie estérifiée par réaction avec un alcool linéaire ou ramifié de 1 à 18 atomes de carbone et de préférence 1 à 8 atomes de carbone. Ces derniers pourront être de même associés à la fraction sophorolipidique purifiée décrite dans le présent brevet. Associés à la fraction lactone purifiée selon l'invention, les sophorolipides forme brute peuvent être utilisés à une concentration variant de 0,01 ppm à 10 % (p/p) en matière sèche et plus particulièrement de 80 ppm à 2 % (p/p) en matière sèche. Lorsqu'ils sont sous la forme acide ou sous une forme dérivée, ils peuvent être utilisés à une concentration variant de 1 ppm à 10 % (p/p) de matière sèche et de préférence de 0,02 % à 1 % de matière sèche. En terme de restructuration, réparation et protection de la peau, il peut être intéressant d'associer en formulation la fraction lactone purifiée, mélangée préalablement ou non aux sophorolipides comme mentionné ci-dessus, à l'acide ascorbique pour ces propriétés restructurantes du derme, à la vitamine E et ses esters, pour son rôle actif dans la protection antiradicalaire, et/ou à la vitamine A et ses esters en particulier le 2779057 rétinyl palmitate, pour améliorer la réparation du tissu conjonctif et l'état des épidermes lors du phénomène de vieillissement actinique entre autre. Par ailleurs, il peut être avantageux d'associer le produit fraction lactone purifiée mélangée ou non à d'autres sophorolipides, à des alpha ou béta hydroxyacides de 2 à 7 atomes de carbone (acide lactique, malique, tartrique, glycolique, citrique, iso-citrique, salicylique...) salifiés ou non et leurs esters dont le rôle bénéfique est largement décrit en ce qui concerne le renouvellement de l'épiderme. L'invention sera mieux comprise au vu des exemples suivants: Exemple 1: Préparation d'une fraction lactone Les sophorolipides sous forme brute ont la composition suivante: -matière sèche: 230 % 2 % -pH: 7+0,5 minéraux: 2 2 % - sucres libres: 21 % - acides gras libres: 2 3 % cendres: 2 0,04 % - densité: 1,03 à 20 C - viscosité: 115,3 mPa. s à 20 C 62,4 mPa. s à 40 C Ils sont séchés sous vide à 110 C et repris à chaud par de l'éthanol. Ils sont ensuite cristallisés à plus de 6 C pendant 16 heures et filtrés. Les cristaux obtenus sont solubilisés dans de l'éthanol et la solution est recristallisée à + 6 C pendant 16 heures. Après filtration, on lave et on sèche la fraction lactone obtenue. Le solide blanc obtenu comprend 95 % en poids de lactones dont la répartition est la suivante: - lactones diacétylées 87,8 % - lactones monoacétylées 5,3 % - lactones non acétylées 1,9 % Le produit sous forme de poudre est utilisé en solution aqueuse à 50 mg/l, pH 5 + 0,5 pour la réalisation des tests. Tolérance cutanée et oculaire 6 2779057 Tolérance cutanée La tolérance locale du produit purifié a été étudiée sur des explants de peau humaine. Elle a été évaluée par un examen histologique des effets du produit sur la morphologie de l'épiderme. Les explants ont été incubés 18 h à 37 C dans une atmosphère contenant 5 % CO2 en présence de la fraction purifiée sophorolipidique. Les observations histologiques des explants dans ces conditions n'ont pas permis de mettre en évidence l'altération morphologique. Aussi, le produit ainsi testé peut être considéré comme non irritant. * Tolérance oculaire La tolérance oculaire du produit a été évaluée in vitro, selon la méthode PREDISAFE. Cette méthode a démontré un haut niveau de corrélation par rapport au test de Draize et de reproductibilité. Le score de toxicité des sophorolipides sous forme lactone purifiée est inférieur à 15 sur une échelle de tolérance oculaire arbitrairement graduée de 0 à 50. Selon la classification prédictive du produit au point de vue de la tolérance oculaire, le produit est en classe I, faiblement irritant. Exemple 2: Effets comparatifs des sophorolipides forme brute et de la fraction lactone purifiée des sophorolipides sur la néosynthèse des collagènes dans des cultures de fibroblastes dermiques humains normaux On s'intéresse ici à l'effet des lactones purifiées sur la synthèse des collagènes dans des cultures de fibroblastes dermiques humains normaux. Les collagènes sont quantitativement les protéines majeures du derme. La proline et l'hydroxyproline constituent 30 % des acides aminés constitutifs des collagènes (pourcentage élevé et très supérieur à celui de la plupart des autres protéines fibroblastiques). L'hydroxyproline n'est pas un acide aminé incorporé au cours de la synthèse des collagènes comme c'est le cas pour la proline. L'hydroxylation de la proline qui conduit à la présence d'hydroxyproline dans les collagènes, est un processus de maturation des collagènes qui se produit une fois la synthèse réalisée. La mesure de l'incorporation de proline tritiée dans les protéines fibroblastiques est donc un bon index de la néosynthèse des collagènes. Enfin, pour améliorer la spécificité de cet index, les protéines de haut poids moléculaire, correspondant quasi exclusivement aux collagènes, ont été séparées par ultrafiltration. La néosynthèse des collagènes a été mesurée en suivant l'incorporation de proline radiomarquée dans les protéines fibroblastiques nouvellement synthétisées. Ces 7 2779057 protéines fibroblastiques sont présentes (1) dans les cellules, (2) dans la matrice, déposées dans le support de culture (sous les cellules) et (3) dans le milieu de culture, sous forme de protéines sécrétées. Les fractions (1) et (2) ont été mesurées ensemble et regroupées sous l'intitulé "collagènes du tapis cellulaire". La fraction (3) est désignée par l'intitulé "collagènes sécrétés". Les effets du produit sur la divison cellulaire ont été évalués par des mesures d'ADN et de protéines dans les tapis cellulaires après 3 jours d'incubation. Les effets de la fraction sophorolipidique purifiée ont été comparés à ceux observés en présence du mélange initial de sophorolipides forme brute et de l'acide ascorbique utilisé comme produit de référence. Protocole Systèmes d'essai Les fibroblastes ont été isolés à partir du résidu opératoire d'une plastie abdominale réalisée chez une femme âagée de 19 ans. Les cellules ont été cultivées dans le milieu de culture des fibroblastes (MCF) à 37 C dans une atmosphère humide contenant 5 % de CO2 jusqu'à confluence des monocouches. Le milieu de culture utilisé était le milieu de culture des fibroblastes (MCF), constitué par du MEMIM199 (3/4, 1/4, v/v) additionné de pénicilline (50 UI/ml), de streptomycine (50 gtg/ml), de bicarbonate de sodium (0,2 %, p/v) et de SVF (10 %, v/v). Dilution des produits et incubation avec le système d'essai Le milieu d'incubation des fibroblastes (appelé MIF) avec les produits est constitué par du MNEM/M199 (3/4, 1/4, v/v) additionné de pénicilline (50UI/ml), de streptomycine (50 Ltg/ml), de bicarbonate de sodium (0,2 %, p/v) et de SVF (2 %, v/v). I1 contenait 1 gCi/ml de proline tritiée. La fraction lactone purifiée a été diluée dans le milieu MIF et a été testée à 0,02; 0,08 et 0,4,tg/ml (matière sèche). Les sophorolipides forme brute ont été testés à 0,08; 0,4 et 2 gg/ml. L'acide ascorbique a été testé à 100 ptg/ml (0,5 mM) dans le milieu MIF. Les cultures de fibroblastes ont été incubées pendant 3 jours à 37 C, dans une atmosphère humide contenant 5 % de CO2. 8 2779057 Des cultures témoins, incubées en absence des produits à tester, ont été réalisées en parallèle. Les essais ont été réalisés en triplicate. Mesure de la division cellulaire A la fin de l'incubation, les milieux d'incubation ont été prélevés puis les tapis cellulaires ont été rincés avec du PBS. Les cellules ont ensuite été lysées par action des ultrasons. Le dosage de l'ADN a été réalisé selon une méthode fluorimétrique utilisant le réactif HOECHST 33258. Le dosage des protéines du lysat cellulaire a été réalisé selon la méthode au bleu de Coomassie décrite par Bradford. Ces dosages permettent d'assurer une interprétation adéquate des résultats obtenus sur la néosynthèse des collagènes. Mesure de la néosynthèse des collagènes - Mesure de l'incorporation de proline tritiée dans les "collagènes du tapis cellulaire" L'incorporation de proline tritiée dans les protéines fibroblastiques néosynthétisées, protéines présentes dans les cellules et déposées dans la matrice extracellulaire, a été évaluée après 3 jours d'incubation. La radioactivité du lysat cellulaire obtenu comme décrit précédemment, a été mesurée en scintillation liquide avec un compteur de rayonnements P3. Les valeurs ont été exprimées en cpm par tapis cellulaire. - Mesure de l'incorporation de proline tritiée dans les "collagènes sécrétés" L'incorporation de proline tritiée dans les collagènes néosynthétisés et sécrétés dans le milieu de culture a été évaluée après 3 jours d'incubation. Le précurseur radioactif et les petites protéines ont été éliminés à l'aide de filtres Nanosep 30 kD. La radioactivité de la fraction protéique de poids moléculaire élevé (retenue sur les filtres) correspondant quasi exclusivement aux collagènes sécrétés a été mesurée en scintillation liquide avec un compteur de rayonnements f3. Les valeurs ont été exprimées en cpm par échantillon. - Traitement des données Les groupes de données (groupe témoin et groupes traités) ont été traités par une analyse de la variance à un facteur (ANOVA 1, p (p Résultats Après 3 jours d'incubation, les sophorolipides forme brute ne modifient pas le contenu en protéines du tapis cellulaire (tableau 1). La fraction lactone purifiée n'augmente ni la 9 2779057 quantité d'ADN, ni la quantité de protéines contenues dans les tapis cellulaires (tableaux 1 et 2). Effet des produits sur la néosynthèse des collagènes après 3 jours d'incubation Après 3 jours d'incubation, l'acide ascorbique à 100 ptg/ml augmente les "collagènes du tapis cellulaire" d'un facteur 1,68 et les "collagènes sécrétés" d'un facteur 1,81 (tableau 3). Ces résultats étaient attendus et valident cette partie de l'étude. Les sophorolipides forme brute à 0,08; 0,4 et 2 ptg/ml augmentent les "collagènes du tapis cellulaire" d'un facteur 1,63; 1,50 et 1,44 respectivement. Aux mêmes concentrations, ils augmentent les "collagènes sécrétés" d'un facteur 1, 39; 1,29 et 1,18. La fraction lactone purifiée testée à 0,02; 0,08 et 0,4 Lg/ml, n'a pas d'effet sur la quantité de collagènes contenus dans les tapis cellulaires (tableau 3). En revanche, à 0,02; 0,08 et 0,4,tg/ml, elle permet d'augmenter la quantité de "collagènes sécrétés" d'un facteur 2,12; 2,55 et 1,89 respectivement (tableau 3). 2779057 Tableau 1: Effet des produits sur le contenu protéique des tapis cellulaires après 3 jours d'incubation Sophorolipides Fraction lactone purifiée Acide forme brute (itml) (.g/ml) Ascorbique 0,08 0,4 2 0,02 0,08 0,4 100.g/ml Protéines du tapis cellulaire92 106 99 88 94 96 108 (en % du témoin) Tableau 2: Effet de la fraction lactone purifiée sur le contenu en ADN des fibroblastes dermiques humains normaux en culture après 3 jours d'incubation Témoin Acide ascorbique fraction lactone purifiée (to ml) Lg/ml 0,02 0,08 0,4 7 6 7 8.7 7,3 6 6 5 6.3 8 11 10 6 7 8 x = 8,35 7,5 6 7.3 7.8 +1- +/- +/- ± ± ± +/ c = 3 2,5 0,3 1,2 0,23 90 72 87 93,5 Les résultats sont exprimés en gtg/tapis cellulaire En gras: moyenne et écart type G En italique: pourcentage du témoin Tableau 3: Effet de la fraction lactone purifiée, des sophorolipides forme brute et de l'acide ascorbique sur la néosynthèse des "collagènes sécrétés" et des "collagènes du tapis cellulaire", après 3 jours d'incubation Sophorolipides Fraction lactone purifiée Acide forme brute (j. g/ml) (p.lg/ml) ascorbique 0,08 0,4 2 0, 02 0,08 0,4 100 Ltg/ml Tapis Collagènes Tapiuéollamoènes 163 %* 150%* 144 %* 11 6 7c 97 % 91% 168 %* cellulaire du tmoi Milieu Colla-enes MilieuCollanes l139 7* 129% 118% 212%* 255%(C* 189 '* 181 %(* de culture C témoin *: Résultat sinitatiement diffnmo du OUp min p apparaît plus disponible et plus active à faible dose que le mélange initial. Exemple 3: Formulation La fraction purifiée des sophorolipides sous forme lactone peut être utilisée dans des milieux cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptables, c'est à dire compatibles avec la peau, les muqueuses, les cheveux et le cuir chevelu. Elle peut être incorporée dans toutes les formes galéniques appropriées pour une application topique et notamment sous forme d'émulsions obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), d'émulsion eau/silicone, d'émulsion à structure lamellaire. Pour les préparations de solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses ou de gels aqueux, hydroalcooliques ou huileux, de sérum, de lotions, il sera judicieux de solubiliser la fraction lactone purifiée dans un solubilisant adapté ou encore dans le mélange sophorolipides forme brute. Le produit sophorolipides sous forme lactone purifiée de par son effet sur la stimulation des cellules du derme est intéressant pour la formulation de produits anti-âge, réparateurs et restructurants du derme. En favorisant la synthèse de nouvelles fibres de collagène, les sophorolipides sous forme lactone purifiée pourront être utilisés aussi à titre préventif contre le vieillissement de la peau et pourront être utilisés dans des crèmes de traitement ou de soin pour le visage, pour les mains, pour les pieds et pour le corps, et dans des laits corporels de soin, des lotions et des gels pour la peau. 12.2779057 1 - Crème de type huile/eau % Tefose 2561......................... ............................. 18,00 IsostéaryleIsostéarate............... DTD: .........................6,00 Cetiol V................................ DTD: ..............................4,00 Glycéryl stéarate..................... DTD: ...........................1,00 Fondix G................................. DTD: ...........................2,00 Sophorolipides fraction lactone purifiée............ 0,100 Eau qsp.................................... DTD: ........................... 100 Tefose 2561 PEG-6 stéarate/Ceteth20/Glycéryl stéarate/Stéareth-20 Cetiol V Decyl oléate Fondix G Propylèneglycol/Sodium méthylparaben/sodium déhydroacétate/Sorbique acide/tétrasodium EDTA 2 - Crème de type eau/silicone %..DTD: SPG 128 VP.......................................................10,00 Cyclom éthicone.................................................10,00 Cired'abeilles....................................................3,00 Polyglycéryl-3 stéarate.......................................2,00 NaCI.. ...............................................................2,00 Liquapar oil........................................................0,40 Sophorolipides fraction lactone purifiée............0,10 Eau qsp....DTD: ........................................................... 100 3 - Crème de type eau/huile % Plurol.......................................... .DTD: .......................5,00 Huile minérale.........................DTD: ........................... 19,00 NaCI................................... DTD: ................................1,00 M gSO4........................... DTD: ...................................1,00 Liquaparoil...................... DTD: ..................................0,30 Sophorolipides fraction lactone purifiée............0,10 Eau qsp....................................... DTD: ........................ 100..DTD: 13 2779057 4 - Crème à structure lamellaire % Méthylglucosesesquistéarate/Sorbitanstéarate.......5,00 Stéarine... .............................................................. 4,00 Cétéaryl alcohol...................................................... 1,80 Octyldodécanol.................................................... DTD: ... 9,00 Caprique/caprylique triglycérides.........................DTD: ..11,00 Isopropyl myristate.............................................. DTD: ... 6,00 Glycérol..........................................DTD: ........................ 3,00 Sophorolipides fraction lactone purifiée.................0,100 Eau qsp.................................... .DTD: ............................... 100 Fondre la phase grasse, y ajouter la phase aqueuse sous forte agitation (> 3000 rpm)..DTD: puis refroidir. - Crème à structure lamellaire % Méthylglucosesesquistéarate/Sorbitan stéarate.......5,00 Stéarine............................................. .................... 4,00 Cétéaryl alcohol.............................. DTD: ........................ 1,80 Octyldodécanol.......................DTD: ................................ 9,00 Capric/caprylic triglycérides................................... 11,00 Isopropyl myristate................................................. 6,00 Glycérol................................................................. . 3,00 Sépigel 305....................................................... DTD: ..... 0,20 Sophorolipides fraction lactone purifiée.................0, 100 Sophorolipides forme brute....................................1,00 Eau qsp............................................................... DTD: ..... 100 Sépigel 305 Polyacrylamide/C13-14 Isoparaffin/Laureth-7 6 - Gel aqueux à base de xanthane % Xanthan...DTD: ........................................................... 0,40 Sophorolipides fractionlactone purifiée............0,10..DTD: 14.2779057 Sophorolipides forme brute................................ 1,00 Eau qsp. ............................................................ 100..DTD: 2779057 REVENDICATIONS 1 Utilisation de sophorolipides sous forme lactonique comprenant une majeure partie de lactones diacétylées, en tant qu'agent stimulateur du métabolisme des cellules de fibroblastes du derme de la peau. 2 Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle les sophorolipides comprennent au moins 70 % de lactones diacétylées. 3 Utilisation selon l'une des revendications 1 et 2, dans laquelle les sophorolipides comprennent au moins 80 % de lactones diacétylées. 4 Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, dans laquelle la concentration desdits sophorolipides est comprise entre 0,01 ppm (partie par million) et 5 % (p/p) en matière sèche et de préférence entre 50 ppm et 1 % en matière sèche, en formulation. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, dans laquelle lesdits sophorolipides sont utilisés dans une émulsion de type eau/huile, huile/eau, gel, serum, lotion, et shampooing. 6 Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, dans laquelle lesdits sophorolipides sont utilisés seuls en formulation ou en association avec un mélange de sophorolipides sous forme brute, avec un mélange de sophorolipides sous forme acide désacétylée, ou avec un mélange de sophorolipides acides, dont la fonction acide est au moins, en partie sous la forme ester. 7 Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, dans laquelle lesdits sophorolipides sont associés à au moins un produit du groupe formé par l'acide ascorbique, la vitamine E et ses esters, la vitamine A et ses esters et les alpha ou béta hydroxyacides ayant de 2 à 7 atomes de carbone et leurs esters.