Brevet FR2776927A1 — publié le 19991008

La présente invention concerne le domaine de la biologie, et notamment du transfert de composés dans les cellules. Elle concerne plus particulièrement de nouveaux vecteurs et compositions pour le transfert de molécules d'intérêt, notamment d'acides nucléiques, dans les cellules in vitro, ex vivo ou in vivo. La présente invention possède de nombreuses applications dans les domaines de la biologie expérimentale, clinique ou médicale. La possibilité de transférer efficacement des molécules d'intérêt dans les cellules constitue un des défis principaux dans le développement de la biologie et des biotechnologies. Ce transfert permet par exemple, in vitro, la réalisation d'expérimentations biologiques ou biochimiques (étude de régulation de l'expression de gènes, mutagenèse, création de plasmides, études génomiques, etc.), la production de protéines ou peptides recombinants, notamment d'intérêt pharmaceutique ou agro-alimentaire, ou encore la production de virus recombinants. Ex vivo ou in vivo, ce transfert peut permettre la réalisation d'études de marquage, de biodisponibilité, d'expression tissulaire, la création d'animaux transgéniques exprimant des gènes étrangers par exemple, ou encore des applications biologiques ou médicales (vaccinations, thérapies, etc.). II est donc particulièrement important de pouvoir disposer d'un système de transfert de molécules d'intérêt efficace, applicable aux populations de cellules visées, et non-toxique pour les cellules ou les organismes utilisés. Différentes approches ont été développées dans l'art antérieur pour transférer des molécules d'intérêt dans les cellules. II s'agit par exemple de vecteurs d'origine virale, dont l'efficacité de transfert d'acides nucléiques dans les cellules est remarquable. Néanmoins, ce type de vecteur présente également certains inconvénients potentiels, liés notamment à leur préparation, leur innocuité, leur capacité de clonage, etc. Parallèlement à ces vecteurs viraux, de très nombreux systèmes synthétiques ont été avancés pour la vectorisation (i.e., le transfert) de molécules d'intérêt, notamment des acides nucléiques. Ces systèmes synthétiques sont, la plupart du temps, cationiques de manière à interagir avec les acides nucléiques, chargés négativement (Legendre, 1996). Toutefois, dans la plupart des cas (polylysine, polymères cationiques, polyamines, etc.), il est considéré que les complexes acides nucléiques/vecteurs pénètrent par endocytose, ce qui pose le problème (i) du relargage ultérieur des acides nucléiques hors des vésicules d'endocytose afin de leur permettre d'atteindre la cible et (ii) de la dégradation des acides nucléiques dans ces compartiments cellulaires. En outre, ces systèmes ne procurent pas toujours une efficacité satisfaisante in vitro. Pour remédier à ce problème, il a été proposé d'ajouter différents adjuvants aux formulations initiales, de manière à court-circuiter l'endocytose et permettre une libération directe de l'acide nucléique dans le cytoplasme. Les auteurs envisagent en général un mécanisme d'entrée par fusion de ces complexes avec les membranes endosomales ou plasmiques (ou par destabilisation transitoire de ces membranes). Sont très utilisés, par exemple des peptides fusiogènes ou la dioléoylphosphatidylcholine (DOPE). Récemment, des effecteurs induisant spécifiquement une perméabilité membranaire ont été envisagés. II s'agit d'abord de la gramicidine S (ou de la tyrocidine) associée à des vésicules de DOPE (Legendre et Szoka, 1993) formulation néanmoins inactive en présence de sérum. On trouve aussi un peptide perturbant la perméabilité membranaire à bas pH, associé à un autre peptide amphiphile (Ohmori, BBRC, 1997). Cette formulation est moins active que la Lipofectine, composé de référence, et présente une toxicité non négligeable. Ces dernières formulations présentent en outre l'inconvénient d'avoir plusieurs composants, ce qui donne des mélanges hétérogènes et instables dans les fluides biologiques. Pour ce qui est des systèmes à un seul composant on trouve, toujours dans le but d'agir sur la perméabilité membranaire, un peptide amphipatique cationique (Wyman, 1997) susceptible de causer la fuite transmembranaire au bas pH rencontré dans les endosomes. On trouve aussi la dioléoylmélittine (Legendre 1997) qui présente l'avantage d'être active en présence de sérum. En dépit des efforts entrepris, les systèmes décrits dans l'art antérieur présentent des inconvénients liés à une faible activité in vivo, des effets secondaires in vivo, des spectres d'activité étroits in vitro, et/ou des coûts prohibitifs. La présente invention conceme un nouveau système de vectorisation de molécules d'intérêt dans les cellules. Le système de l'invention est adapté à la vectorisation (au transfert) dans les cellules de molécules chargées négativement, plus particulièrement d'acides nucléiques. Le système de l'invention repose plus particulièrement sur la mise au point et/ou l'utilisation de composés comprenant une partie cationique, susceptible d'interagir avec les molécules d'intérêt chargées négativement, et une partie active particulière permettant le transfert dans les cellules. Plus particulièrement, les composés utilisés dans la présente invention sont des composés macrolides polyéniques cationiques, comprenant des antibiotiques macrolides polyéniques et des dérivés (en particulier cationiques) de ceux-ci. Les compositions selon l'invention présentent l'avantage d'une préparation simple, d'une faible toxicité, d'une activité conservée en présence de sérum, d'une bonne efficacité, et d'une compatibilité avec un usage pharmacologique. La présente invention décrit également de nouveaux composés dérivés d'antibiotiques macrolides polyéniques (tels que de l'amphotéricine B), utilisables notamment pour la vectorisation de molécules d'intérêt. La présente invention apporte donc une alternative aux systèmes décrits dans l'art antérieur pour la vectorisation de molécules d'intérêt. Un premier objet de l'invention réside donc dans une composition comprenant: - une molécule d'intérêt chargée négativement, et, - un composé macrolide polyénique cationique susceptible d'interagir avec ladite molécule. Comme indiqué plus haut, I'invention vise des composés ou compositions permettant le transfert dans les cellules de "molécules d'intérêt". II s'agit essentiellement de molécules chargées négativement, compte tenu du caractère cationique des composés de vectorisation utilisés. On peut citer à titre d'exemple de telles molécules chargées négativement des protéines, peptides ou polypeptides, les PNA ou les acides nucléiques par exemple. II s'agit avantageusement d'acides nucléiques. A cet égard, les acides nucléiques peuvent être des acides désoxyribonucléiques (ADN) ou ribonucléiques (ARN). S'agissant d'ADN, on peut citer des ADN complémentaire, génomique, synthétiques ou semi-synthétiques. Les ARN peuvent être des ARN messagers, de transfert, ribosomaux ou synthétiques. Les acides nucléiques peuvent être d'origine humaine, animale, végétale, virale, bactérienne ou artificielle par exemple. II peut s'agir d'oligonucléotides, (ayant par exemple une longueur comprise entre 3 et 80-mères), ou de phases codantes, gènes, régions génomiques ou chromosomes entiers. II peut s'agir d'acides nucléiques simple- ou double-brin. II peut s'agir en particulier d'acides nucléiques antisens (ou anti-gène), c'est-à-dire capables d'interférer, par hybridation, avec l'activité d'un gène ou d'un ARN ou d'une région génomique particulière. II peut également s'agir d'acides nucléiques comprenant une région codant pour un produit peptidique d'intérêt (polypeptide ou protéine ayant une activité biologique intéressante sur le plan immunologique, pharmaceutique ou alimentaire). Par ailleurs, ces acides nucléiques peuvent être sous forme de plasmide, linéaire ou circulaire. Les acides nucléiques peuvent être obtenus par toutes les techniques connues de l'homme du métier, telles que la synthèse artificielle, le criblage de banques, I'isolement à partir de plasmides, etc., ainsi que toute combinaison de ces techniques classiques ou de toute autre technique de la biologie moléculaire. Comme indiqué ci-avant, le système de l'invention repose avantageusement sur l'utilisation d'antibiotiques macro ides polyén iques et de dérivés (en particulier cationiques) de ceux-ci. La famille des antibiotiques macrolides polyéniques comporte essentiellement deux groupes : les composés macrolides polyéniques aromatiques et les composés macrolides polyéniques non aromatiques. Les premiers sont souvent isolés de microorganismes sous une forme portant une certaine charge nette positive à pH neutre. Parmi ceux-ci, on peut citer notamment les composés macrolides heptaéniques suivants : hamycine, trichomycine, candicidine, vacidine A (syn. partricine B), gédamycine (syn. partricine A) ou encore la périmycine, notamment la périmycine A. Les composés du second groupe (non-aromatiques) sont des composés zwitterioniques, et donc globalement neutres, à l'exception de la liénomycine. Dans ce second groupe, entre notamment l'amphotéricine B. L'amphotéricine B est couramment utilisée en clinique comme antifongique sous forme de FungizoneX (amphotéricine B associée à du désoxycholate). L'amphotéricine B est par ailleurs connue pour interagir avec les membranes contenant des stérols et pour former, à concentration sublétale, des pores transmembranaires aussi bien dans les cellules fongiques que, à concentration plus forte, dans les cellules de mammifères (Hartsel et Bolard, 1996). Néanmoins, I'utilisation de ces composés macrolides polyéniques ou de dérivés cationiques de ceux-ci, en particulier de composés macrolides heptaéniques cationiques, pour la vectorisation de molécules d'intérêt n'a jamais été rapportée. En particulier, nombre des antibiotiques macrolides polyéniques sont globalement non chargés et, de ce fait, ne peuvent pas permettre la réalisation d'un complexe acide nucléique/vecteur. Tel est le cas par exemple de l'amphotéricine B, qui, en tant que telle, ne semble pas capable d'interagir avec les acides nucléiques. La présente invention montre maintenant qu'il est possible d'utiliser des composés macrolides polyéniques, naturels, synthétiques ou hémisynthétiques, porteurs d'un groupement chargé positivement pour le transfert de molécules négatives, notamment d'acides nucléiques. La présente invention montre en particulier qu'il est possible d'utiliser des dérivés de composés macrolides polyéniques, tels l'amphotèricine B par exemple, pour former des complexes avec des acides nucléiques, et que ces complexes peuvent être vectorisés efficacement dans les cellules, c'est-à-dire que (i) une liaison électrostatique s'établit entre ce composé macrolide et les charges négatives de l'acide nucléique, et (ii) la partie polyénique du complexe conserve son activité membranaire. La présente invention montre également que de tels complexes permettent de protéger les acides nucléiques de la dégradation par le sérum, et donc d'augmenter l'efficacité du transfert dans des conditions de sérum, notamment in vivo ou ex vivo. Selon un mode particulier de réalisation, I'invention concerne une composition telle que définie ci-avant dans laquelle le composé macrolide polyénique cationique est un antibiotique macrolide heptaénique aromatique. Avantageusement, le composé est la périmycine. Selon un autre mode particulier de réalisation, I'invention concerne une composition telle que définie ci-avant dans laquelle le composé macrolide polyénique cationique est un dérivé d'antibiotique macrolide polyénique comprenant un ou plusieurs groupes fonctionnels cationiques. Le terme "dérivé" désigne au sens de l'invention toute forme modifiée chimiquement par introduction au moins d'un groupe fonctionnel cationique. Par ailleurs, I'expression "groupe fonctionnel cationique" inclut tout groupe susceptible de devenir cationique par protonation, selon le milieu utilisé (notamment le pH du milieu) ainsi que tout groupe porteur d'une ou plusieurs charges positives permanentes. Comme indiqué ci-avant, le ou les composés utilisés dans le cadre de la présente invention sont susceptibles d'interagir avec la molécule d'intérêt du fait de la présence de groupes fonctionnels cationiques. Ces groupes sont généralement liés de manière covalente sur le composé macrolide polyénique. La fonction cationique des composés utilisés dans l'invention peut être composée plus particulièrement de tout groupement chargé positivement susceptible d'interagir avec la ou les molécules d'intérêt. L'expression "susceptible d'interagir" signifie que la partie cationique peut s'associer avec la molécule d'intérêt anionique, notamment un acide nucléique. L'interaction entre les composés et l'acide nucléique est essentiellement une interaction ionique, non-covalente, de type liaison électrostatique, qui s'établit entre les charges positives de la partie cationique du composé et les charges négatives de la molécule d'intérêt (I'acide nucléique). A cette interaction ionique peuvent s'ajouter des interactions de type van der Waals ou hydrophobe. Le caractère non-covalent de l'interaction est important dans la mesure où il permet la dissociation du complexe dans la cellule, et donc la libération des molécules d'intérêt dans les cellules. En outre, ce type de liaison permet une mise en oeuvre simplifiée puisqu'il est suffisant de mettre en présence les composés et les molécules d'intérêt pour former les complexes. A la différence des systèmes dans lesquels l'acide nucléique est directement lié à la partie active de l'effecteur membranaire et doivent donc inhiber sa spécificité, la présente invention décrit une formulation où l'acide nucléique est lié au vecteur, toujours d'une manière électrostatique, mais laisse libre la partie active ce qui peut permettre de garder intacte son efficacité. De plus, aux concentrations utilisées, I'activité perméabilisante obtenue avec les compositions de l'invention est sans doute transitoire et ne doit pas être toxique pour la cellule. Plus préférentiellement, dans les compositions de l'invention, le composé est un dérivé d'antibiotique macrolide heptaénique. II s'agit plus particulièrement d'un dérivé cationique de l'amphotéricine B, de la candidine, de la mycoheptine ou de la vacidine. II peut s'agir aussi d'un dérivé de la nystatine. Plus préférentiellement encore, le composé est un dérivé d'antibiotique macrolide heptanéique non aromatique, de préférence un dérivé de l'amphotéricine B. Préférentiellement, le composé utilisé porte au moins deux charges positives. Les groupements fonctionnels chargés positivement qui peuvent être liés sur les composés macrolides polyéniques sont par exemple des esters, (poly)amides, hydrazide, polyamines, N-alkyl, N-amino acyl, polylysines, guanidines, ou des combinaisons de ceux-ci, ou plus généralement tout groupement hydrocarboné possédant une ou plusieurs charges positives, qui peuvent être apportées notamment par des atomes d'azote. On peut citer à titre d'exemples spécifiques de partie cationique adaptée pour les composés de l'invention les groupes alkylester (par exemple méthyl-, éthyl- ou propylester), alkylammonium (notamment triméthylammonium), lysil, ornithyl, guanidino, amidique, spermidique. Le ou les groupes fonctionnels cationiques peuvent être liés sur le composé macrolide en différentes positions. Dans un premier mode de mise en oeuvre, la partie cationique est introduite sur une fonction amine du macrolide polyénique, et en particulier sur la fonction aminée du groupe mycosamine de la molécule. Dans un autre mode de mise en oeuvre, la partie cationique est introduite sur la fonction acide carboxylique du groupe aglycone de la molécule. II est par ailleurs possible d'introduire la partie cationique par modification de ces deux positions de la molécule (voir Schnaffner et al. (1987) incorporé à la présente par référence, ainsi que les exemples qui suivent). II est également entendu que la partie cationique peut être insérée sur d'autres positions de la molécule. Dans un mode particulier de mise en oeuvre, I'invention concerne donc une composition telle que définie ci-dessus dans laquelle le dérivé d'antibiotique macrolide polyénique comprend un ou plusieurs groupes fonctionnels cationiques liés de manière covalente sur la fonction carboxylique du groupe aglycone et/ou sur la ou les fonctions amine de l'antibiotique macrolide polyénique. Par ailleurs, il est entendu que le composé dérivé d'antibiotique macrolide polyénique selon l'invention peut comprendre, en plus de groupe(s) fonctionnel(s) cationique(s), d'autre(s) modification(s) structurale(s), dès lors que le composé obtenu conserve son activité, c'est-àdire (i) la capacité d'interagir avec les acides nucléiques et (ii), la capacité de transférer des molécules. Cette dernière propriété permet en effet aux composés de l'invention de délivrer des molécules d'intérêt aux cellules, éventuellement par perméabilisation membranaire sans passer par la voie endocytique. Cette propriété est assurée dans les composés de l'invention par l'utilisation originale de macrolides polyéniques, tels que l'amphotéricine B ou ses dérivés. L'utilisation de cette partie active originale pourrait permettre avantageusement d'induire la perméabilisation transitoire des cellules pour permettre le passage des molécules d'intérêt. L'utilisation des composés selon l'invention est donc particulièrement avantageuse puisque les cellules ne sont pas perturbées de manière significative par le transfert de la molécule. Cette "partie active" peut en particulier être constituée de l'amphotéricine B (dont la formule est représentée sur la Figure 1), ou de tout variant de celle-ci ou antibiotique heptaénique macrolide, possédant des propriétés de solubilité, de toxicité, de biodisponibilité et/ou de perméabilisation modifiées. De tels variants ont été décrits par exemple dans Schaffner et al (1987), Malewicz et al. (1980); Binet et al. (1988), Chéron et al., (1989) ou encore Brajtburg et al. (1990) notamment, qui sont incorporés à la présente par référence. Dans un mode particulièrement préféré de mise en oeuvre, la présente invention concerne une composition comprenant une molécule d'intérêt chargée négativement, telle qu'un acide nucléique, et un dérivé cationique de l'amphotéricine B. Selon une première variante particulière, le dérivé cationique est un amide primaire, secondaire ou tertiaire de l'amphotéricine B (voir Figure 2). A cet égard, on peut citer plus particulièrement les aminoalkyl amides, tels le diméthylaminopropyl amide, les amides de polyamines en particulier de la spermine, les amides de polyaminoacyl esters, notamment de dilysil methylester, ou encore les amides d'amines hétérocycliques telles que de Nméthyl pipérazine, 2-pyridyl éthyl amine ou 2-morpholine éthylamine. Selon une autre variante particulière, le dérivé cationique est un ester de l'amphotéricine B, de préférence un choline ester ou un diméthylaminopropyl ester (voir Figure 3). Selon une variante supplémentaire particulière, le dérivé cationique est un hydrazide de l'amphotéricine B, de préférence le N-méthyl pipérazine hydrazide de l'amphotéricine B (voir Figure 4). Toujours selon une variante particulière, le dérivé cationique est un dérivé N-alkyl de l'amphotéricine B, de préférence un dérivé N',N',N'-triméthyl ou N',N'-diméthylaminopropyl succinimidyl de l'amphotéricine B méthyl ester (voir Figure 5). Dans une autre variante particulière, le dérivé cationique est un dérivé N-aminoacyl de l'amphotéricine B, de préférence le N-ornithyl-, N-diaminopropionyl-, N-lysil-, N-hexaméthyllysil-, N-tétraméthyllysil-, N-pipéridine-propionyl-, N-pipéridine-acétyl-, N'N'-méthyl-1 -pipérazine- propionyl- et N,N'-méthyl-1-pipérazine-acétyl-amphotéricine B méthylester (voir Figure 6). Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le dérivé cationique de l'amphotéricine B comporte un groupe cationique fonctionnel simultanément sur les positions carboxyl et amino de l'amphotéricine B (voir Figure 7). De tels dérivés sont par exemple le N-ornithyl amphotéricine B diméthylamino propyl amide ou le Npiperidino acétyl amphotéricine B-(4-méthyl)piperazide. Par ailleurs, dans les compositions de l'invention, les composés ci-dessus peuvent être sous forme de sels, tels que notamment de chlorure, aspartate, glutamate ou ascorbate. Dans un autre mode préféré de mise en oeuvre, la présente invention concerne une composition comprenant une molécule d'intérêt chargée négativement, telle qu'un acide nucléique, et un dérivé cationique d'un antibiotique macrolide heptaénique choisi parmi la nystatine, la candidine et la vacidine (voir Figure 8). De tels composés sont par exemple l'amide de la diméthylaminopropyl nystatine, l'amide de la diméthylaminopropyl candidine, I'amide de la diméthylaminopropyl vacidine ou le N'-diméthylaminoacétylvacidine-diméthylamino propylamide. Des exemples particuliers de composés préférés selon l'invention sont: - I'amphotéricine B diméthylaminopropylamide (AMA). L'AMA correspond au composé (I) représenté sur la Figure 2. Ce composé est constitué de l'amphothéricine B sur laquelle un groupe cationique diaminé (HN-(CH2)3-NH(CH3)2 a été lié en position 16 (fonction acide carboxylique du groupe aglycone). Ce composé comporte deux charges cationiques. - I'amphotéricine B sperminylamide (AMSA). L'AMSA correspond au composé (II) représenté sur la Figure 2. - I'amphotéricine B N2-lysyllysinemethylester amide (AMDLA). L'AMDLA correspond au composé (III) représenté sur la Figure 2. - I'amphotéricine B4-méthylpiperazine amide (AMPA). L'AMPA correspond au composé (IV) représenté sur la Figure 2. - I'amphotéricine B pirydilethylamide (AMPEA). L'AMPEA correspond au composé (V) représenté sur la Figure 2. - I'amphotéricine B-2-morpholine ethylamide (AMMEA). L'AMMEA correspond au composé (Vl) représenté sur la Figure 2. - I'amphotéricine B choline ester (AMCE). L'AMCE correspond au composé (VIl) représenté à la Figure 3. - I'amphotéricine B diméthylaminopropyl ester (AMPE). L'AMPE correspond au composé (VIII) représenté sur la Figure 3. - I'amphotéricine B méthylester (AME). L'AME correspond au composé (IX) représenté à la Figure 3. Ce composé est constitué de l'amphotéricine B dans laquelle la fonction acide carboxylique du groupe aglycone a été estérifiée. Ce composé comporte une charge cationique. - I'amphotéricine B-N-méthyl-pipérazine hydrazide (HAMA). L'HAMA correspond au composé (X) représenté à la Figure 4. - N,N,N-triméthylammonium AME (DMS-AME). Le DMS-AME correspond au composé (Xl) représenté sur la Figure 5. Ce composé est constitué de l'amphotéricine B sur laquelle deux groupes cationiques ont été greffés: un groupe méthyester en position 16 (fonction acide carboxylique du groupe aglycone) et un groupe triméthylammonium en position 19 (sur le fonction amine du groupe mycosamine). Ce composé comporte deux charges cationiques. - N'N'-diméthylaminopropyl-succinimido amphotéricine B méthyl ester (SAME). Le SAME correspond au composé (XII) représenté sur la Figure 5. - N-omithyl AME (OAME). L'OAME correspond au composé (XIII) représenté sur la Figure 6. - N-diaminopropionyl AME. Le DAME correspond au composé (XIV) représenté sur la Figure 6. - N-lysil-AME (LAME). Le LAME correspond au composé (XV) représenté sur la Figure 6. Ce composé est constitué de l'amphotéricine B sur laquelle deux groupes cationiques ont été greffés : un groupe méthyester en position 16 (fonction acide carboxylique du groupe aglycone) et un groupe diaminé en position 19 (sur le fonction amine du groupe mycosamine). Ce composé comporte deux charges cationiques. - N-tetraméthyllysil AME (MLAME). Le MLAME correspond au composé (XVI) représenté sur la Figure 6. - N4-methyl-1-piperazineacétyl AME (PNAME). Le PNAME correspond au composé (XVII) représenté sur la Figure 6. - N-piperidineacetyl AME (PAME). Le PAME correspond au composé (XVIII) représenté sur la Figure 6. - N-omithyl-AMA (OAMA). L'OAMA correspond au composé (XIX) représenté sur la Figure 7. - N4-méthyl-1-piperazineacetyl AMPA (PAMPA). Le PAMPA correspond au composé (XX) représenté sur la Figure 7. nystatine Al N'-diméthylaminopropyl amide (NYA). Le NYA correspond au composé (XXI) représenté sur la Figure 8. - Candidine N'-diméthylaminopropyl amide (CAA). Le CAA correspond au composé (XXII) représenté sur la Figure 8. - Vacidine A N'-diméthylaminopropyl amide (VAA). Le VAA correspond au composé (XXIII) représenté sur la Figure 8. - Vacidine A (VAGA). Le VAGA correspond au composé (XXIV) représenté sur la Figure 8. Comme illustré dans les exemples, ces composés chargés positivement et notamment ceux possédant au moins 2 charges positives tels l'AMA, ont permis d'obtenir les résultats suivants - par interaction avec le composé, les oligonucléotides sont protégés de la dégradation induite par le sérum; - I'internalisation cellulaire d'oligonucléotides marqués à la fluorescéine dans les cellules (MCF7 et 3T3), est fortement augmentée par le composé. En particulier, comparée à l'action d'un composé de référence (la Lipofectine), I'AmA induit une distribution intracellulaire homogène et non pas ponctuée, et la majorité de la population cellulaire est ciblée; - I'expression du gène MDR1 dans les fibroblastes transfectés par MDR1, est fortement réduite par des oligonucléotides phosphorothioates antisens anti-MDR1 vectorisés par le composé; - le composé permet aussi la vectorisation de gènes : nous avons pu, grâce à son utilisation, transfecter le gène GFP (green fluorescent protein). Ces exemples montrent que les composés de l'invention tels que l'AmA, présentent des caractéristiques intéressantes de vecteur pour le transfert d'acides nucléiques dans les cellules (gènes, oligodesoxyribonucléotides antisens ou antigène). Dans les compositions de l'invention, les quantités respectives de composé et d'acide nucléique sont de préférence choisies de sorte que le rapport des charges positives du composé sur les charges négatives de l'acide nucléique (R) soit compris entre 0,1 et 20. Plus préférentiellement, ce rapport est compris entre 0,5 et 15. 11 est entendu que ce rapport peut être adapté par l'homme du métier en fonction de l'acide nucléique et du composé utilisés, des applications envisagées et du type cellulaire visé. Les compositions de l'invention sont généralement préparées par incubation (par exemple mise en contact, en solution) du/des composés avec le/les molécules d'intérêt (acides nucléiques) pendant une période de temps suffisante pour permettre leur interaction. Le temps d'incubation est également fonction des composés utilisés et des conditions de l'incubation (milieu, agitation, etc.). Avantageusement, I'incubation est réalisée pendant une période comprise par exemple entre 15 minutes et 2 heures. Le procédé comprend en outre une étape de formation d'un complexe entre le/les composés et le/les molécules (acides nucléiques), qui peut être suivie de différentes manières, et notamment par mesure du spectre d'absorption de la solution, ainsi qu'illustré dans les exemples. L'incubation peut être réalisée dans différents milieux, de préférence en l'absence de sérum pour éviter la dégradation des acides nucléiques avant la complexation. II peut s'agir de solutions salines, tampons (PBS), etc., dans lesquelles les composés/acides nucléiques sont solubles. Des milieux adaptés sont par exemple les milieux DMEM, RPMI ou tout milieu compatible avec un usage in vitro, ex vivo ou in vivo. Le choix du milieu peut bien évidemment être adapté par l'homme du métier. Les composés utilisés dans l'invention peuvent être synthétisés selon différentes voies possibles, connues de l'homme du métier. Ainsi, il est possible de synthétiser ces composés à partir de l'amphotéricine B, par couplage de la ou des parties cationiques selon les méthodes classiques de la chimie. On peut à cet égard utiliser les méthodes de synthèse décrites par Falkowski et coll. (J. Antibiot. 33 (1980)103 ; J. Antibiot 35 (1982) 220 J. Antibiot. 28 (1975) 244 et J. Antibiot. 31 (1979) 1080), Schaffner et coll. (Antibiot. Chemother. il (1961) 724), Mechlinski et coll. (J. Antibiot. 25 (1972) 256) ou encore Pandey et coll. (J. Antibiot. 30 (1977) 158), incorporés à la présente par référence. II est également possible de produire ces composés en partant d'autres antibiotiques polyéniques macrolides. II heptaéniques macrolides sur laquelle sont liés, de manière covalente, un ou plusieurs groupements ou combinaisons de groupements chargés positivement, ces groupements n'ayant pas été utilisés antérieurement pour des modifications chimiques des antibiotiques polyéniques. Ils ont été choisis notamment parmi les groupements suivants : choline, polyamine, hydrazide, N-acyl, etc. De tels composés sont représentés par exemple par les produits AMPEA, AMMEA, AMSA, AMDLA, AMPA, AMCE, AMPE, SAME, PNAME, PAME, MLAME, OAMA, PAMPA et VAGA tels que définis ci-avant. Les structures de tous les dérivés sont représentés dans les figures sous une forme ionisée, afin d'indiquer la position et le nombre de charges positives acquises à pH physiologique ou par interaction avec des acides, y compris des acides nucléiques (protonation). Les composés avec des ammoniums quaternaires portent des charges positives permanentes. Les composés/compositions de l'invention peuvent être utilisés pour le transfert de molécules d'intérêt dans différents types de cellules, tissus ou organes, in vitro, ex vivo ou in vivo. En particulier, ces composés/compositions peuvent être utilisés pour le transfert dans tous les types cellulaires sensibles aux antibiotiques macrolides polyéniques utilisés, notamment à l'amphotéricine B, c'est-à-dire sur lesquels ce ou ces antibiotiques exercent une activité de perméabilisation membranaire. Préférentiellement, il s'agit de cellules contenant dans leur membrane des groupes ergosterol ou des précurseurs de celui-ci. On peut citer par exemple les protozoaires parasites (par exemple leishmanies) ou les cellules fongiques, qui sont la cible privilégiée des antibiotiques polyéniques tels que l'amphotéricine B. Parmi les cellules fongiques on peut citer notamment les cellules de candida, de cryptococcus ou d'aspergillus. On peut citer également des cellules de levure telles que Saccharomyces, Kluyveromyces, etc. Par ailleurs, les composés selon l'invention sont également capables de vectoriser des molécules dans des cellules somatiques du type fibroblaste, hépatique, musculaire, nerveuse, hématopoïétique, etc. Comme le montrent les exemples, ces composés sont notamment efficaces sur des fibroblastes (3T3) et sur des cellules cancéreuses humaines (MCF-7), ce qui montre leur large spectre d'activité. II est entendu que dans le cadre du transfert de molécules dans les cellules, les doses de composé(s) utilisées sont de préférence non toxiques pour les cellules. Un autre objet de l'invention concerne également les cellules modifiées par une composition telle que décrite ci-avant. Au sens de l'invention, on entend par "cellule modifiée" toute cellule comprenant une molécule d'intérêt vectorisée par une composition ou un composé tel que défini ci-avant. Comme indiqué ci-avant, les cellules peuvent être des cellules fongiques, des protozoaires parasites (par exemple: leishmanies) ou des cellules de mammifères, notamment des cellules humaines. Les cellules modifiées de l'invention peuvent être obtenues par un procédé comprenant l'incubation de cellules en présence d'une composition de l'invention, in vitro, ex vivo ou in vivo. In vitro ou ex vivo, l'incubation peut être réalisée dans tout dispositif approprié (plaque, boite, fermenteur, etc). In vivo, l'incubation peut être réalisée par administration d'une composition selon l'invention à un sujet (de préférence un mammifère), dans des conditions connues de l'homme du métier. II peut s'agir en particulier d'une administration par voie topique, orale, parentérale, nasale, intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intraoculaire, transdermique, etc. Pour ce type d'applications, les compositions selon l'invention comprennent avantageusement un véhicule physiologiquement acceptable, tel que par exemple des solutions salines (phosphate monosodique, disodique, chlorure de sodium, potassium, calcium ou magnésium, etc, ou des mélanges de tels sels), stériles, isotoniques, ou des compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés administrables. Les applications des compositions de l'invention sont multiples et comprennent par exemple la production de protéines recombinantes, l'étude de la régulation de l'expression de gènes, des études de marquage ou de biodisponibilité, la création d'animaux non-humains transgéniques, ou différentes applications médicales. A cet égard, les exemples montrent l'efficacité des compositions de l'invention dans le cadre de stratégies antisens dirigée contre la résistance aux antitumoraux ou dans le cadre du transfert de gènes marqueurs. Ces résultats peuvent être étendus notamment: - à la résistance multiple aux antifongiques : les cellules fongiques étant la cible privilégiée des antibiotiques polyéniques, la vectorisation d'oligonucléotides ou de gènes dirigés contre la résistance y trouve là une application de choix. Une résistance est en effet en train d'apparaître aux nouveaux antifongiques comme les dérivés azolés et présente une menace sérieuse pour l'avenir si des mesures préventives ne sont pas menées. A cet égard, un objet particulier de l'invention réside dans l'utilisation d'une composition telle que définie ci-avant pour la préparation d'un médicament destiné au transfert, dans une cellule fongique, d'un acide nucléique réduisant les résistances aux antibiotiques de ladite cellule. - à toute approche antisens ou anti-gène, notamment intracellulaire, - à la production de protéines ex vivo ou in vivo, notamment de protéines choisies parmi des hormones, enzymes, facteurs de croissance, facteurs trophiques, facteurs de coagulation, lipoprotéines, lymphokines, etc; - à la transfection pour la thérapie génique. Les avantages des composés/compositions de l'invention sont par exemple: - leur préparation simple et peu coûteuse, - leur faible toxicité, - leur activité en présence de sérum et d'antibactériens, - une large utilisation en clinique de la Fungizone, qui servira de référence aux études cliniques sur les dérivés, - leur sélectivité : meilleure que la plupart de celle des effecteurs membranaires, quant à l'action sur la perméabilité des membranes : la formation de pores transmembranaires transitoires et réversibles et non pas action lytique déstabilisatrice. La présente invention sera décrite plus en détail à l'aide des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. DESCRIPTION DES FIGURES FIGURE i: Structure de l'amphotéricine B. FIGURE 2: Structure des dérivés amide de l'amphotéricine B. FIGURE 3: Structure des dérivés ester de I'amphotéricine B FIGURE 4: Structure des dérivés hydrazides de l'amphotéricine B. FIGURE 5: Structure des dérivés N-alkyl de l'amphotéricine B. FIGURE 6: Structure des dérivés N-aminoacyl de l'amphotéricine B. FIGURE 7: Structure des dérivés multiples de l'amphotéricine B. FIGURE 8 : Structure des dérivés d'autres polyènes macrolides cationiques. FIGURE 9 : Spectre d'absorption de l'AmA (5.10M) avant et après addition d'oligonucléotide (ODN, 1OS M). FIGURE 10 : Spectre d'absorption de l'AmE (10-5M) avant et après addition d'oligonucléotide (ODN, 1,85.10-6M). FIGURE Il : Dichroïsme circulaire d'AmA (2x10-5 M) en présence (b) et en absence (a) de pGFP. FIGURE 12 : Effet de l'AmA seule ou en présence d'oligonucléotide (AS, 20 mères, 0,5pu) sur la viabilité des cellules 3T3 traitées pendant 4 h à 37"C. FIGURE 13 : Internalisation dans des cellules 3T3 d'un oligonucléotide marqué à la fluorescéine (ODN, 20-mères) selon qu'il est non-vectorisé (A), ou vectorisé par la LipofectineX (B) ou par l'AmA (C et D). FIGURE 14 : Internalisation dans des cellules MCF-7 d'un oligonucléotide marqué à la fluorescéine (ODN, 20 mères) selon qu'il est non vectorisé (A), ou vectorisé par la LipofectineX (B), par l'AmE (C) ou par l'AmA (D). FIGURE 15 : Autoradiographie du gel (polyacrylamide 20%-urée 7M) sur lequel ont été déposés de l'ODN en l'absence ou en présence (+/- = 10) d'AmA après différents temps d'incubation (0,4,8 et 16 h respectivement) dans du tampon Hépès contenant 10% (v/v) de sérum de veau foetal. FIGURE 16 : Niveaux d'expression de la P-glycoprotéine (P-gp) dans les cellules 3T3 R (colonnes 1 et 3-8) ou 3T3 S (colonne 2) après quarante huit heures de traitement. Les différents traitements, préparés dans du milieu DMEM sans sérum de veau foetal, sont les suivants: témoins: 1 - 3T3 R non traitées 2- 3T3 S non traitées recherche d'un effet antisens: 3- 3T3 R / AS5995 (1 M) vectorisé par la LipofectineR (20 g/mL) 4- 3T3 R / CTL (1 M) vectorisé par la LipofectineR (20 g/mL) 6- 3T3 R / AS5995 (1 M) vectorisé par l'AmA (5.10-6M) 7- 3T3 R / CTL (1 M) vectorisé par l'AmA (5.10-6M) 9- 3T3 R / AS5995 (1 M) non vectorisé recherche d'un éventuel effet propre du vecteur: 5- 3T3 R / LipofectineR (20pg/mL) 8- 3T3 R/AmA 10-5M) EXEMPLE 1 Etude du spectre d'absorption de dérivés cationiques de l'amphotéricine B en presence d'oligonucléotides. A un mélange de 22 l d'AmA (solution stock dans le DMSO à 7x10 M), et 16 ,ul d'un oligonucléotide 20-mères (Genosys Biotechnologies, The Woodland, England) (solution stock à 1,9 x 101 M dans l'eau), ont été ajoutés 3 mL de milieu RPMI dépourvu de rouge phénol (Gibco BRL, Life Technologies, S.A., Cergy Pontoise, France). La solution a été incubée à température ambiante pendant 30 minutes. La séquence de l'oligonucléotide (CCATCCCGACCTCGCGCTCC) a été choisie à partir de Alahari et al (Alahari, Dean et al. 1996) et correspond à un oligonucléotide antisens dirigé contre l'ARN du gène MDR1 et donc destiné à inhiber l'expression du gène MDR1. Les spectres d'absorption de ces solutions ont été mesurés sur un spectrophotomètre 8452A Hewlett-Packard UV-visible. Les spectres ont été également mesurés à partir d'un mélange de 15 p1 de AmE (solution stock dans l'eau à 10-2 M), 3 mL de tampon PBS pH 7,4, et 28 l d'un oligonucléotide 27 mères (Genosys Biotechnologies, The Woodland, England) (solution stock à 2x104 M). La séquence de cet oligonucléotide a été déterminée à partir de Quattrone et al. (Quattrone et al., 1994) et correspond à un oligonucléotide anti-gène dirigé contre le gène MDR1, c'est à dire un oligonucléotide capable d'inhiber l'expression du gène MDR1 (5'-TGT GTT TTT GTT TTG TTG GTT TTG TTT - 3') Les antibiotiques polyèniques présentent des bandes d'absorption spécifiques entre 300 et 450 nm. Dans les conditions de cette expérience (5x106 M d'antibiotique) I'AmE libre ou I'AmA libre présente une bande à 330 nm et un épaulement à 420 nm, caractéristiques des formes auto-associées de l'antibiotique, et quatre bandes à 345, 365, 385 et 409 nm. Avec I'AmA, en présence de l'oligonucléotide (10ô M), un bruit de fond apparaît, l'intensité des bandes de monomères à 385 et 409 nm diminue, et la bande à 330 nm est augmentée et déplacée vers le rouge (voir figure 9). Avec l'AmE, en présence de l'oligonuclèotide, l'intensité des bandes à 345 et 420 nm augmente tandis que celle des bandes à 409 et 385 nm décroît (voir figure 10). Dans les deux cas, ces changements indiquent qu'une interaction entre l'antibiotique et l'oligonucléotide s'est produite et que l'état d'autoassociation de l'antibiotique est modifié. Le spectre de I'oligonucléotide autour de 255 nm ne change pas, si l'augmentation de l'absorption résultant de l'augmentation du bruit de fond est prise en considération. EXEMPLE 2 Spectre de dichroisme circulaire de AmA en présence du plasmide pGFP emd-c FR]. A un mélange de 30 ,ul d'une solution stock de AmA à 103 M dans le DMSO, et 6 ,ul de plasmide pGFP emd-c [R] (Packard, Instrument Company, Meriden, USA) (1 pg/ml), ont été ajoutés à 1,5 ml de milieu RPMI dépourvu de rouge phénol. La solution a été incubée à température ambiante pendant 30 minutes. Les spectres de dichroïsme circulaire de ces solutions ont été mesurés sur un dichrographe Jobin-Yvon Mark V. Les antibiotiques polyéniques présentent un doublet spécifique autour de 320 nm. En présence du plasmide pGFP emd-c [R], ce doublet est déplacé vers le rouge et son intensité diminue (voir figure 11). Ces caractéristiques indiquent une interaction entre AmA et le plasmide conduisant à une modification de l'état d'auto-association de l'antibiotique. EXEMPLE 3 Étude de la toxicité de AmA en présence d'oligonucléotides antisens sur les cellules 3T3. Un oligonucléotide 20-mères a été obtenu de Genosys Biotechnologies (The Woodlands1 England). Sa séquence a été choisie d'après Alahari et al. et correspond à un oligonucléotide antisens permettant l'inhibition de l'expression du gène MDR1 (voir exemple 1). Les fibroblastes 3T3 ont été obtenus à I'ATCC (American Type Culture Collection). La toxicité a été mesurée sur des solutions contenant des concentrations en AmA s'étalant de 106 M à 5x10-5 M en présence ou en absence d'oligonucléotides à une concentration finale de 104 M. Dans toutes les expériences le mélange a été incubé pendant 30 minutes à température ambiante et préparé dans un milieu DMEM dépourvu de sérum. Les cellules ont ensuite été ensemencées dans un milieu DMEM et placées dans des microplaques de 96 puits à raison de 4x104 cellules/mL. Après 24 heures, les cellules sont rincées avec un milieu DMEM sans sérum, et 200 gul de la solution Ama/oligonucléotides préparée juste avant sont ajoutés par puits. Après incubation pendant 4 heures à 37 , la viabilité cellulaire a été mesurée par test colorimétrique en utilisant du MTT, selon la méthodologie déjà décrite dans la littérature (Mosmann, 1983). Les résultats sont présentés sur la figure 12 et montrent que en deçà de 2x105 M, aucune toxicité n'est observée. De plus, ces résultats montrent également que en deçà de iO5 M, la croissance cellulaire semble être stimulée. EXEMPLE 4: Internalisation d'oligonucléotides antisens marqués au FITC dans les cellules 3T3. Un oligonucléotide 20-mères marqué au FITC a été obtenu de Genosys Biotechnologies (The Woodlands, England). Sa séquence a été déterminée d'après Alahari et al. (1995) et correspond à un oligonucléotide antisens permettant l'inhibition de l'expression du gène MDR1. La LipofectineX a été obtenue de Gibco (Life Technologies, Cergy-Pontoise, France). La lipofectines a été utilisée comme molécule de référence pour le transfert d'oligonucléotides à une concentration de 20 pg/mL dans des conditions recommandées par le fabricant. Les fibroblastes 3T3 ont été obtenus de l'ATCC. Des aliquots d'une solution de AmA à 5,6x10-3 M dans le DMSO ont été mélangés à 82 pL d'une solution d'oligonucléotides à 2,4x104 M et à du milieu DMEM de manière à obtenir des solutions ayant une concentration en AmA de 1x10'5 et 2x105 M et un volume final de 2 mL. Les solutions ont été incubées pendant 30 minutes à température ambiante. Les cellules à 80% de confluence dans les boîtes de petri (35 mm de diamètre) ont été rincées avec du milieu sans sérum et traitées avec 2 mL de solutions AmAoligonucléotides. Après une incubation de 4 heures, les cellules ont été rincées avec un tampon PBS et l'internalisation de l'oligonucléotide fluorescent a été détectée avec un microspectrofluorimètre à laser confocal mis au point dans le laboratoire. Les longueurs d'ondes d'excitation et d'émission étaient respectivement de 488 et 520 nm. 30 cellules ont été choisies au hasard et leur intensité de fluorescence a été mesurée. Dans la figure 13, est montrée la distribution des cellules en fonction de cette intensité (échelle de fluorescence arbitraire). Les résultats obtenus montrent qu'une internalisation beaucoup plus importante est observée en présence de AmA comparée à celle observée en présence de AmE, de lipofectineX ou d'oligonucléotides seuls. La fluorescence apparaît comme étant distribuée de manière homogène à l'intérieur des cellules. Aucune différence significative d'intensité n'a été observée entre le noyau et le cytoplasme. EXEMPLE 5 Internalisation d'oligonucléotides anti-gènes marqués au FITC dans les cellules MCF 7. Un oligonucléotide de 27 mères marqué au FITC, a été obtenu de la Société Genosys Biotechnologies, The Woodlands, England). Sa séquence a été choisie d'après Quattrone et al. (1994), et correspond à un oligonucléotide anti-gène permettant l'inhibition de l'expression de MDR1 (voir exemple 1). Les cellules MCF-7 sont des cellules d'un carcinome mammaire humain. Des aliquots d'une solution de AmE ou AmA à 10-3 M dans l'eau, ont été mélangés à 12 pL d'une solution stock d'oligonucléotides à 1,6x104 M et à 1 mL d'un tampon Hépès de 10mM à pH 7,4, de manière à obtenir des solutions ayant une concentration en AmE ou AmA respectives de 2,7x1 04 M et 1,35x10 4 M. Le rapport des charges positives (du composé vecteur) sur les charges négatives (de l'acide nucléique) était de 5 dans les deux séries d'expériences. Toutes les autres conditions expérimentales étaient identiques à celles de l'exemple 4. La figure 14 montre la distribution des cellules en fonction de l'intensité de fluorescence (échelle de fluorescence arbitraire). Ces résultats montrent une internalisation beaucoup plus importante en présence de AmA en comparaison à celle observée en présence de AmE, lipofectineX ou d'oligonucléotides libres. EXEMPLE6 Dégradation sérique in vitro de l'oligonucîéotide vectorisé. Un oligonucléotide (ODN) de vingt sept mères est rendu radioactif par marquage en 5' au 32P selon la procédure standard (Pharmacia) utilisant la T4 polynucléotide kinase et du 32(&gamma;)ATP. Une petite quantité de cet ODN marqué au 32P est mélangée à de l'ODN froid. On ajoute I'AmA à une concentration telle que l'on a un rapport des charges +/- de 10 et on laisse le complexe se former à température ambiante pendant 30 minutes. Un échantillon ne contenant pas d'AmA constitue un témoin (ODN non vectorisé). La dégradation de l'ODN est déclenchée, au temps 0, par l'addition à 37"C de 10% (V/V) de sérum de veau foetal dont l'activité enzymatique est essentiellement 3'exonucléasique (Sirotkin, Cooley et al., 1978). Des prélèvements au sein desquels on stoppe l'action des enzymes par l'addition de formamide et en mettant le tube dans la glace sont effectués au cours du temps. La réaction est ainsi arrêtée après 4, 6, 8 et 16 heures d'incubation avec le sérum. On fait ensuite migrer les échantillons sur un gel dénaturant (urée 7M) de polyacrylamide à 20%. L'autoradiographie du gel révèle (Figure 15) que la dégradation sérique de l'oligonucléotide non vectorisé est très rapide, en effet au temps quatre heures la forme initiale de 27 mères a totalement disparu au profit de produits de dégradation plus courts. En revanche, la vectorisation par l'AmA permet de ralentir cette dégradation : elle ne commence qu'au temps seize heures et la forme majoritaire est encore la forme initiale de 27 mères. Ces résultats montrent que les composés selon l'invention permettent de protéger les acides nucléiques de la dégradation par le sérum. EXEMPLE 7 Diminution de l'expression de la P-gp par un oligonucléotide antisens vectorisé par l'AmA dans les cellules NIH MDR-G185. Les cellules NIH-MDR-G185 sont des fibroblastes murins 3T3 transfectés par le plasmide contenant le gène MDR1 humain (pSK1 MDR). En conséquence, ces cellules surexpriment la glycoprotéine P(P-gp) et présentent donc le phénotype de résistance multidrogue. Cet exemple montre qu'il est possible d'inhiber l'expression de cette protéine par l'utilisation de l'oligonucléotide phophorothioate antisens (AS5995) qui a pour cible l'ARN messager qui code pour la P-gp (Alahari, Dean et aI. 1996). Pour ce faire, on ensemence les cellules 3T3 R (résistantes) et 3T3 S (sensibles, non transfectées) en boîtes de pétri dans du milieu DMEM complet. Au bout de vingt-quatre heures, lorsqu'elles atteignent 80 à 90 % de confluence, elles sont traitées pendant 48 heures. Les traitements sont tous préparés dans du milieu DMEM sans sérum de veau foetal. Au bout de 48 heures, la glycoprotéine P est quantifiée par la technique de western-blot à l'aide de l'anticorps monoclonal C219 (Dako S.A., Trappes, France). Cet anticorps, une IgG 2A kappa de souris, reconnaît un épitope intracellulaire localisé dans la partie carboxy terminale de la glycoprotéine P. On procède tout d'abord à l'extraction des protéines. Les cellules contenues dans chaque boîte de pétri sont trypsinées, rincées par du tampon PBS et centrifugées. On ajoute à chaque culot cellulaire 100ul de tampon de lyse RIPA additionné extemporanément d'inhibiteurs de protéases. La lyse est effectuée sur la glace, pendant 30 min, en vortexant toutes les 5 minutes. Le mélange est ensuite centrifugé à 12000 tours par minute, à 4"C pendant 15 min et le surnageant contenant les protéines extraites est récupéré. La concentration en protéines totales est déterminée par la technique de Bradford. Des échantillons contenant une quantité identique (40 mg) de protéines totales sont préparés, ils sont mis à migrer par électrophorèse en gel linéaire SDS-PAG E (Sodium Dodécyl Sulfate-polyacrylamide Gel Electrophoresis) avec une concentration finale en polyacrylamide de 7,5%. A la fin de la migration, les protéines sont électro-transférées sur une membrane de cellulose (Immobilon-P, Millipore). La membrane est incubée pendant 1 h, dans du tampon blocking (lait écrémé 5%, TBS Tween 0,05%) afin de saturer les sites non spécifiques. On ajoute ensuite l'anticorps C219 anti-P-gp dilué au 1/200e dans du tampon blocking, pendant 2 h. Après deux lavages au TBS Tween 0,05%, une dernière incubation est réalisée avec le deuxième anticorps couplé à la peroxydase, pendant 1 h. II s'agit d'une immoglobuline de chèvre anti-immunoglobuline de souris (Dako S.A., Trappes, France), utilisé en conditions saturantes (dilution au 1/5000e) dans du tampon blocking. Après trois lavages au TBS-Tween 0,05 % et un lavage au Tris-HCI (pH8), la révélation est faite par chimioluminescence (kit ECL, Amersham). La quantité de P-gp est proportionnelle à l'intensité du spot. Les résultats obtenus sont présentés sur la figure 16. Ces résultats montrent que I'AS5995 inhibe l'expression de la P-gp de manière significative lorsqu'il est vectorisé par la Lipofectine, vecteur servant de référence, (colonne 3) ou par I'AmA à une concentration de 5.10-6M (colonne 6), alors qu'il est inactif en l'absence de vecteur (résultat non présenté ici). L'oligonucléotide contrôle (même séquence que l'AS5995 mais à l'envers) est inactif quelque soit le vecteur utilisé (colonne 4 et 7). L'apport de l'AmA par rapport à la LipofectineX est qu'elle n'inhibe pas elle-même la synthèse de la P-gp (colonnes 5 et 8). BIBLIOGRAPHIE Binet, A., Bolard, J. (1988). "Recovery of hepatocytes from attack by the pore former amphotericin B." Biochem. J. 253: 435440. Brajtburg, J., W. G. Powderly, et al. (1990). "Amphotericin B: current understanding of mechanisms of action." Antimicrob. Ag. Chemother. 34: 183-188. Bruzzesse, T., I. Binda, et al. (1972). "Patricin methyl ester, a semisynthetic polyene antibiotic." Experientia 28: 1515-1516. Chéron, M., B. Cylowska, et al. (1988). "Quantitative structure-activity relationships in amphotericin B derivatives." Biochem Pharmacol. 37:827836. Falkowski, L., B. Stefanska, et al. (1979). "Methylesters of trimethylammonium derivatives of polyene macrolide antibiotics." l Antibiotics 31:1080-1081. Hartsel, S. And J. Bolard (1996). "Amphotericin B: New Life for an Old Drug." TIPS: Hidaka, K., G. An, et al. (1985). "Amphotericin B enhances efficiency of DNA-mediated gene transfer in mammalian cells." Somatic Cell and Molecular Genetics 11 (2):109-115. Jarzebski, A., L. Falkowski, et al. (1982) "Synthesis and structureactivity relationships of amides of Amphotericin B." J. Antibiotics 35(2):220229. Kumar, B.V., G. Medoff, et al (1974). "Uptake of Echerichia coli DNA into HeLa cells enhanced by amphotericin B." Nature 250:323-325. Legendre, J.-Y. and F.C. Szoka Jr (1993). "Cyclic amphipatic peptide DNA complexes mediate high efficiency transfection of adherent mammalian cells." 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Composition selon la revendication 2 caractérisée en ce que l'acide nucléique est un oligonucléotide antisens ou anti-gène. 4. Composition selon la revendication 2 caractérisée en ce que l'acide nucléique comprend une région codant pour un polypeptide ou une protéine d'intérêt. 5. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé macrolide polyénique cationique est un antibiotique macrolide heptaénique aromatique, de préférence la périmycine. 6. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé macrolide polyénique cationique est un dérivé d'antibiotique macrolide polyénique comprenant un ou plusieurs groupes fonctionnels cationiques ou susceptible de le devenir. 7. Composition selon la revendication 6 caractérisée en ce que l'antibiotique macrolide polyénique est un antibiotique macrolide heptanéique non aromatique, de préférence l'amphotéricine B, la candidine ou la mycoheptine. 8. Composition selon la revendication 6 ou 7 caractérisée en ce que le dérivé est un dérivé ester, amide, hydrazide, N-alkyl ou N-amino acyl. 9. Composition selon l'une des revendications 6 à 8 caractérisée en ce que le dérivé d'antibiotique macrolide polyénique comprend un ou plusieurs groupes fonctionnels cationiques liés de manière covalente sur la fonction carboxylique du groupe aglycone et/ou sur la ou les fonctions amine de l'antibiotique macrolide polyénique. 10. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé est un amide primaire, secondaire ou tertiaire de l'amphotéricine B. 11. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé est un ester de l'amphotéricine B, de préférence un choline ester ou un diméthylaminopropyl ester. 12. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé est un hydrazide de l'amphotéricine B, de préférence le N-méthyl pipérazine hydrazide de l'amphotéricine B. 13. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé est un dérivé N-alkyl de I'amphotéricine B, de préférence un dérivé N',N',N'-triméthyl ou N',N'-diméthylaminopropyl succinimidyl de l'amphotéricine B méthyl ester. 14. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé est un dérivé N-aminoacyl de l'amphotéricine B, de préférence le N-ornithyl-, N-diaminopropionyl-, N-lysil-, N-hexaméthyllysil-, N-pipéridinepropionyl et N,N'-méthyl-1-pipérazine-propionyl amphotéricine B méthylester. 15. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé est un dérivé cationique de l'amphotéricine B comportant simultanément un groupe cationique fonctionnel sur les positions carboxyl et amino de l'amphotéricine B. 16. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le composé est un dérivé cationique de la nystatine, la candidine, la mycoheptine ou la vacidine. 17. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que les quantités respectives de composé et d'acide nucléique sont choisies de sorte que le rapport des charges positives du composé sur les charges négatives de l'acide nucléique (R) soit compris entre 0,1 et 20. 18. Dérivé amide primaire, secondaire ou tertiaire de l'amphotéricine B choisi parmi les aminoalkyl amides, les amides de polyamines, les amides de polyaminoacyl esters et les amides d'amines hétérocycliques. 19. Dérivé cationique d'antibiotique macrolide polyénique choisi parmi l'amphotéricine B pirydilethylamide (AMPEA), I'amphotéricine B-2morpholine ethylamide (AMMEA), l'amphotéricine B sperminylamide (AMSA), amphotéricine B N2-lysyllysinemethylester amide (AMDLA), I'amphotéricine B4-méthylpiperazine amide (AM PA), I'amphotéricine B choline ester (AMCE), I'amphotéricine B diméthylaminopropyl ester (AMPE), le N'N'diméthylaminopropyl-succinimido amphotéricine B méthyl ester (SAME), le N4-methyl-1-piperazineacétyl AME (PNAME), le N-piperidineacetyl AME, le N-tetraméthyllysil AME (MLAME), le N-ornithyl-AMA (OAMA), le N4-méthyl1-piperazineacetyl AMPA (PAMPA) et la Vacidine A (VAGA) telle que représentée sur la Figure 8. 20. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 17 ou d'un composé selon l'une des revendications 18 ou 19 pour le transfert de molécules d'intérêt chargées négativement dans les cellules in vitro. 21. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 17 pour la préparation d'une composition destinée au transfert d'un acide nucléique dans une cellule, un tissu ou un organe in vivo ou ex vivo. 22. Utilisation selon la revendication 20 ou 21 pour le transfert d'acides nucléiques dans les cellules fongiques, protozoaires parasites, et levures. 23. Utilisation selon la revendication 20 ou 21 pour le transfert d'acides nucléiques dans les cellules de mammifère. 24. Utilisation selon la revendication 20 ou 21 pour le transfert du gène MDR. 25. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 17 pour la préparation d'un produit destiné au transfert, dans une cellule fongique ou du parasite leishmania, d'un acide nucléique réduisant les résistances aux antibiotiques de ladite cellule. 26. Procédé de préparation d'une composition selon la revendication 1 comprenant la mise en contact, en solution, de la molécule d'intérêt avec le composé. 27. Procédé selon la revendication 26 comprenant en outre une étape de formation de complexes entre ladite molécule et ledit composé. 28. Cellule modifiée par une composition selon la revendication 1. 29. Utilisation d'un composé macrolide selon la revendication 1 pour la protection de la dégradation des acides nucléiques par le sérum. 30. Sels des dérivés cationiques selon les revendications 18 et 19, de préférence des chlorures, des aspartates, des glutamates, ascorbates.