Brevet FR2778312A1 — publié le 19991112

La présente invention a trait aux procédés pour l'augmentation sélective de dérivés de glucosinolate anti- carcinogènes dans l'espèce Brassica, et aux espèces Brassica ayant des teneurs améliorées en dérivés de gluco- sinolate anticarcinogènes et en particulier aux légumes Brassica comestibles avec des teneurs élevées en dérivés de glucosinolate anticarcinogènes d'isothiocyanate de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou isothiocyanate de 3-méthyl- sulfinylpropyle. La présente invention fournit également des procédés de sélection de combinaisons génétiques de brocoli contenant des teneurs élevées en dérivés de glucosinolate anticarcinogènes et des procédés pour évaluer les propriétés anticarcinogènes de ces combinaisons génétiques. L'invention a trait de plus aux compositions de matière comprenant des légumes Brassica avec des concen- trations en glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou glucosinolate de 3-méthylsulfinylpropyle comprises entre 10 et 100 jmoles/g de poids sec. La présente invention fournit des procédés pour la production de légumes B.rassica avec des teneurs élevées en glucosinolates spécifiques et leurs dérivés. En particulier l'invention fournit des procédés pour la production et la sélection de légumes Brassica avec des teneurs élevées en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle et/ou 4-méthyl- sulfinylbutyle. Ces glucosinolates sont convertis par l'activité de l'enzyme myrosinase en dérivés isothiocyanate que l'on a démontrés être des inducteurs puissants d'enzymes de détoxification de phase II, dont l'activité élevée est associée avec une sensibilité réduite aux effets néoplasiques de carcinogènes. L'invention fournit des combinaisons génétiques qui 1.) présentent des teneurs élevées en glucosinolate de 4méthylsulfinylbutyle et/ou glucosinolate de 3-méthylsulfinylpropyle et 2. ) présentent une faible activité de l'allèle GSL-ALK qui code une activité capable de convertir ces glucosinolates en dérivés alcényliques, qui ne possèdent pas les propriétés anticarcinogènes des dérivés isothiocyanate de ces gluco- sinolates et 3.) présentent une activité myrosinase appropriée capable de produire des dérivés isothiocyanate desdits glucosinolates. En conséquence, ces combinaisons génétiques fournissent des teneurs élevées en gluco- sinolates spécifiques, une production réduite de dérivés alcényliques de ces glucosinolates et une production favorisée de dérivés isothiocyanate desdits glucosinolates. L'invention a trait de plus à l'utilisation de marqueurs génétiques pour sélectionner les combinaisons génétiques décrites ci-dessus. On sait qu'une alimentation riche en légumes est associée à une réduction du risque de certains types de cancers et donc il est souhaitable d'inclure une quantité significative de légumes dans l'alimentation humaine. L'activité anticarcinogène des légumes a été associée avec la présence de plusieurs classes de métabolites secon- daires. Une preuve va en croissant que certains de ces métabolites secondaires sont impliqués dans la réduction du risque de certains types de cancers et donc sont considérés comme anticarcinogènes. En conséquence, l'amélioration de la teneur en métabolites anticarcinogènes fournit une stratégie utile pour la réduction du risque de cancer, en complémentation avec le conseil diététique afin d'augmenter la consommation de légumes. Le mécanisme précis grâce auquel des légumes fournissent un risque diminué de nombreux types de cancers n'est pas connu avec certitude mais il existe plusieurs lignes de preuves qui soutiennent l'implication de légumes dans la prévention de cancer. En particulier, le rôle des légumes crucifères dans la prévention du cancer est largement soutenu par des études épidémiologiques et plus récemment par des études biochimiques. Une classe de métabolites secondaires qui sont impliqués dans les effets bénéfiques de légumes crucifères sont les dérivés isothiocyanate de certains glucosinolates. Quatre éléments de preuve supplémentaires suggèrent que les isothiocyanates proviennent de l'hydrolyse de glucosinolates de méthyl- sulfinylalkyle trouvés dans les crucifères et peuvent être importants dans l'alimentation humaine en vue de diminuer le risque de cancer. (1.) Une alimentation de légumes crucifères protège les rongeurs contre les cancers induits par voie chimique (Wattenberg, L. W. (1985) Cancer Res. 45, 1-8). (2.) Les isothiocyanates de méthylsulfinylalkyle sont connus pour être des inducteurs puissants des enzymes de détoxification de phase II dans des cellules murines d'hépatome Hepa lclc7 en culture (Zhang, Y., Talalay, P., Cho, C. - G., & Posner, G. H. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 2399-2403 et Tawfiq, N., Heaney, R. K., Plumb, J. A., Fenwick, G. R., Musk, S. R. R., & Williamson, G. (1995) Carcinogenesis 16, 1191-1194), qui sont associés avec une sensibilité réduite des mammifères et de cultures de cellules mammifères aux effets toxiques et néoplasiques de carcinogènes. (3.) Le sulforaphane (isothiocyanate de 4- méthylsulfinylbutyle) bloque la formation de tumeurs mammaires chez des rats Sprague-Dawley traités avec du 9,10-diméthyl-l,2-benzanthracène (Zhang, Y., Kensler, T. W., Cho, C.-G., Posner, G. H., & Talalay, P. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 3147-3150). (4.) Des études épidémiologiques montrent qu'une population avec des teneurs élevées de légumes dans son alimentation est moins sensible au cancer (Block, G., Patterson, B., & Suber, A. (1992) Nutr. and Cancer 18, 1-19). Ainsi, les effets bénéfiques d'une alimention à teneur élevée en certains glucosinolates peut inclure une réduction du risque de cancer. Toutefois, il apparaît que seuls certains glucosinolates et plus précisément, certains dérivés de glucosinolate spécifiques peuvent être principalement responsables de l'effet bénéfique. Il existe de nombreux glucosinolates individuels dans les plantes crucifères. Les glucosinolates ont une fraction glycone commune et une chaîne secondaire (latérale) aglycone variable. La structure de la chaîne secondaire du glucosinolate varie en longueur et en composition chimique. Les glucosinolates sont formés par l'action d'un certain nombre d'enzymes, codées par un petit nombre d'allèles biosynthétiques de glucosinolate (allèles GSL). Dans la voie des glucosinolates, la méthionine est convertie en homométhionine et en dihomo-méthionine par l'activité de l'allèle GSL-ELONG. L'homo-méthionine est ultérieurement convertie en glucosinolate de 3-méthyl- thiopropyle suivie par la conversion en glucosinolate de 3- méthylsulfinylpropyle par l'activité de l'allèle GSL-OXID et finalement en glucosinolate de 2-propényle par l'activité de l'allèle GSL-ALK. La dihomo-méthionine est convertie en glucosinolate de 4-méthylthiobutyle, puis en glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle par l'activité de l'allèle GSL-OXID, puis en glucosinolate de 3-butényle par l'activité de l'allèle GSL-ALK et finalement convertie en glucosinolate de 2-hydroxy-3-butényle par l'activité de l'allèle GSL-OH. En général, les glucosinolates de 3-méthyl- sulfinylpropyle et les glucosinolates de 4-méthylthiobutyle produisent des isothiocyanates non volatils et ainsi leurs glucosinolates particuliers contribuent peu à la saveur. Au contraire, les dérivés alcényle volatils peuvent contribuer à la saveur, à la fois positivement et négativement, en fonction de l'espèce végétale et en particulier le dérivé de glucosinolate. Dans les légumes B. oleracea, les glucosinolates ont une chaîne secondaire de trois ou quatre carbones. Les glucosinolates peuvent être hydrolysés par l'action de la myrosinase qui est souvent induite lors de lésions tissu- laires. De nombreux légumes possèdent des glucosinolates d'alcényle (2propényle et 3-butényle) qui entraînent la production de produits volatils lors d'une hydrolyse par l'intermédiaire de l'action de la myrosinase. Quelques légumes contiennent un glucosinolate de 2-hydroxy-3- butényle appelé progoitrine. Ce glucosinolate produit un isothiocyanate instable qui se cyclise spontanément pour produire des oxazolidone-2thiones, qui sont indésirables dans l'alimentation du fait de leurs propriétés goitro- gènes. Les isothiocyanates provenant de glucosinolates d'alcényle et d'hydroxyalcényle peuvent avoir à la fois des effets positifs ou négatifs sur la saveur. Les brocolis accumulent de faibles teneurs en glucosinolates avec des chaînes secondaires 4-méthyl- sulfinylbutyle et 3-méthylsulfinylpropyle puisque le brocoli possède une activité grandement réduite de l'allèle GSL-ALK, responsable de la conversion des glucosinolates en dérivés alcényle. On pense que la popularité du brocoli en tant que légume est due en partie à la contribution relativement modeste au goût fait par les dérivés de glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et de 3-méthyl- sulfinylpropyle en contraste avec les odeurs fortes communiquées par d'autres glucosinolates, en particulier les dérivés volatils de glucosinolates. Ainsi, des procédés pour augmenter la quantité alimentaire de dérivés isothiocyanate spécifiques de certains glucosinolates peuvent fournir des légumes avec des propriétés anticarcinogènes améliorées sans altérer le goût et/ou la sapidité du légume. Toutefois, l'art antérieur ne fournit pas de moyens pour augmenter de façon commode les teneurs en glucosinolates spécifiques dans les légumes crucifères. De plus, l'art antérieur ne fournit pas un moyen commode pour assurer que ces glucosinolates ne sont pas convertis en dérivés alcényle, mais plutôt en dérivés isothiocyanate qui possèdent des propriétés anticarcino-gènes. Parmi les nombreux glucosinolates qui peuvent être produits par des légumes Brassica, on a identifié le glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle et le glucosinolate de 3- méthylsulfinylpropyle comme étant les précurseurs en dérivés isothiocyanate anticarcinogènes les plus puissants. L'état de la technique ne fournit pas de moyens commodes pour augmenter ces glucosinolates spécifiques d'une façon spécifique tout en prévenant la formation d'autres glucosinolates ou dérivés de glucosinolate qui peuvent avoir des caractéristiques de saveur indésirables. On a trouvé le glucosinolate de 4-méthylsulfinyl- butyle et le glucosinolate de 3-méthylsulfinylpropyle dans de nombreux légumes crucifères, mais ils sont le plus abondants dans les variétés de brocolis (syn. calabrese: Brassica oleracea L. var. italica) dans lesquels manque un allèle fonctionnel au locus GSL-ALK. La présence d'un allèle GSL-ALK fonctionnel convertit ces glucosinolates en leurs homologues alcényle, qui sont de médiocres inducteurs d'enzymes de phase II (Tawfiq, N., Heaney, R. K., Plumb, J. A., Fenwick, G. R., Musk, S.R. R., & Williamson, G. (1995) Carcinogenesis 16, 1191-1194). En conséquence, la présence d'un allèle GSL-ALK fonctionnel interdit la possibilité de produire une variété avec des teneurs élevées en ces isothiocyanates anticarcinogènes puisque les glucosinolates seront convertis en dérivés alcényle. De plus, la production d'isothiocyanates à partir de glucosinolates requiert l'activité de l'enzyme myrosinase. Ainsi, la production améliorée de ces isothiocyanates spécifiques dépend à la fois des teneurs en précurseurs glucosinolates (qui sont influencés par l'activité codée par l'allèle GSL- ALK) et les teneurs ou activité de myrosinase qui produit les dérivés isothiocyanate de glucosinolates. En conséquence, une combinaison génétique qui spécifie la production de teneurs élevées en glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou des glucosinolates de 3- méthylsulfinylpropyle est souhaitable, mais la production des dérivés isothiocyanate anticarcinogènes de ces glucosinolates nécessite des combinaisons génétiques supplémentaires. Ainsi, des procédés pour réaliser ces compositions génétiques fournissent des compositions nouvelles de matière qui n'existent pas actuellement dans des légumes crucifères cultivés dans le commerce. La présente invention décrit des procédés pour réaliser ces combinaisons génétiques. Les teneurs en glucosinolates dans des brocolis cultivés dans le commerce sont relativement faibles comparées à celles trouvées dans des cultures de salades telles que "rocket" (Eruca Sativa), qui accumule le glucosinolate de 4-méthylthiobutyle, et le cresson (Rorippa nasturtium-aquaticum), qui accumule le glucosinolate de phénéthyle (Fenwick, G. R., Heaney, R. K., & Mullin, W. J. (1983) Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 18, 123-201). L'exposition à des teneurs accrues en glucosinolate 4- méthylsulfinylbutyle et/ou en glucosinolate 3-méthyl- sulfinylpropyle dans les brocolis permet d'espérer une amélioration du pouvoir d'induction des enzymes de phase II lorsqu'on les ingère. Ainsi, le brocoli ayant des teneurs accrues en isothiocyanate de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou en isothiocyanate de 3-méthylsulfinylpropyle anticarcinogènes serait un additif précieux à une alimentation qui est conçue pour abaisser le risque de cancer. De plus, de tels changements ne devraient pas conduire à réduire la sapidité puisque les glucosinolates de méthylsulfinyl- alkyle ne sont pas volatils et possèdent une contribution relativement faible à la saveur, au contraire de la majorité des autres isothiocyanates trouvés dans les légumes et cultures de salades (Fenwick, G. R., Heaney, R. K., & Mullin, W. J. (1983) Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 18, 123-201). Ainsi, en modifiant les teneurs de ces gluco- sinolates spécifiques on ne changera pas le goût des légumes crucifères qui portent les combinaisons génétiques codant la caractéristique. De nombreux membres sauvages du complexe de l'espèce Brassica oleracea (nombre de chromosomes, n = 9) possèdent des teneurs élevées en glucosinolates aliphatiques indivi- duels (Mithen, R., Lewis, B. G., & Fenwick, G. R. (1987) Phytochemistry 26, 1969-1973 et Giamoustaris, A. & Mithen, R. (1996) Theor. Appl. Genet. 93, 1006-1010). Des études sur la génétique de glucosinolates dans ces taxons ont été instrumentales dans l'élucidation du chemin génétique pour la biosynthèse des glucosinolates. Il est évident que certaines espèces de ce taxon pourraient être précieuses dans des programmes d'amélioration génétique de Brassica conçus pour améliorer spécifiquement le glucosinolate de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou le glucosinolate de 3-méthyl- sulfinylpropyle et, en conséquence, le potentiel anti- carcinogène de la plante. Toutefois, l'état de la technique ne fournit pas de procédés pour accroître la concentration en glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou glucosinolate de 3- méthylsulfinylpropyle par l'intermédiaire de combi-naisons génétiques ni ne fournit un moyen approprié grâce auquel les propriétés anticarcinogènes des légumes contenant lesdites combinaisons génétiques peuvent être évaluées. La présente invention fournit ces procédés et combinaisons génétiques. En premier lieu parmi celles-ci on trouve des combinaisons génétiques qui incorporent des gènes provenant de membres du complexe B. villosarupestris provenant de Sicile, qui possèdent un allèle GSL-ALK non fonctionnel et qui peuvent être les progéniteurs sauvages de brocolis cultivés. Ainsi, la présente invention utilise des parentées et progéniteurs sauvages de brocolis commerciaux comme source des gènes nécessaires pour en déduire une combinaison génétique capable de produire des teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle et la combinaison génétique qui favorise la production de dérivés isothiocyanate de ces glucosinolates plutôt que de dérivés alcényliques. L'isothiocyanate de 4-méthylsulfinylbutyle (également désigné par sulforaphane), provenant du glucosinolate correspondant trouvé dans quelques espèces Brassica, a été précédemment identifié comme un inducteur puissant d'enzymes de détoxification de phase II (par exemple QR; la quinone-réductase [NADP(H): quinone-accepteur] oxydo- réductase) dans des cellules murines d'hépatome Hepa lclc7. De façon similaire, l'isothiocyanate de 3-méthylsulfinyl- propyle est un inducteur fort d'enzymes de phase II. Une mesure de l'induction de QR dans des cellules murines d'hépatome Hepa lclc7 fournit un indicateur rapide et fiable de la capacité d'extraits végétaux à induire des enzymes de phase II dans des cellules mammifères (Prochaska, H. J., Santamaria, A. B., & Talalay, P. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 2394-2398), et donc d'activité anticarcinogène putative. On a utilisé ce dosage pour évaluer le potentiel d'isothio-cyanates synthétiques (Zhang, Y., Talalay, P., Cho, C.-G., & Posner, G. H. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 2399-2403 et Talalay, P., De Long. M. J., & Prochaska, H. J. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 8261-8265), d'extraits provenant de légumes crucifères (Tawfiq, N., Wanigatunga, S., Heaney, R. K., Musk, S. R. R., Williamson, G., & Fenwick, G. R. (1994) Exp. J. Cancer Prev. 3, 285-292) et de glucosinolates traités par myrosinase (Tawfiq, N., Heaney, R. K., Plumb, J. A., Fenwick, G. R., Musk, S. R. R., & Williamson, G. (1995) Carcinogenesis 16, 1191-1194). Toutefois, on n'a pas rapporté en général la teneur en glucosinolate/isothio- cyanate des extraits végétaux, de même on n'a pas rapporté le potentiel anticarcinogène relatif des divers légumes crucifères. Dans la présente invention, on a utilisé ce dosage pour déterminer la relation entre la capacité à induire une activité QR (potentiel anticarcinogène) et la teneur en glucosinolate de trois membres sauvages du complexe B. oleracea, qui possèdent des teneurs élevées respectivement en glucosinolates de 3-méthylthiopropyle (B. drepanensis), 3-méthylsulfinylpropyle (B. villosa) et 2-propényle (B. atlantica), quand on les combine avec des cultivars de brocolis commerciaux par l'intermédiaire de croisements et d'hybrides classiques entre les accessions sauvages et les lignées de brocoli haploïde double commerciales. En conséquence on en a déduit des procédés et compositions qui identifient les compositions génétiques nécessaires pour la production stable de glucosinolates spécifiques (par exemple, de glucosinolates de 4-méthyl-sulfinylbutyle et/ou 3- méthylsulfinylpropyle) et la production des dérivés isothiocyanate correspondants. Ces combinaisons génétiques fournissent des lignées utiles pour la production de variétés commerciales de brocolis et autres légumes crucifères qui possèdent 10 à 100 fois les teneurs de ces composés anticarcinogènes, telles que trouvées habituellement dans des variétés cultivées commercialement. On a trouvé par exemple, qu'une augmentation de dix fois de la teneur en glucosinolate de 4-méthylsulfinyl- butyle est obtenue en croisant des cultivars de brocolis avec un taxon sauvage sélectionné du complexe Brassica oleracea (nombre de chromosome, n = 9). On observe des augmentations similaires de la teneur en glucosinolate de 3-méthylsulfinylpropyle. Un tissu provenant de ces hybrides présente une augmentation de 100 fois dans la capacité à induire la quinone-réductase dans des cellules Hepa lclc7 par rapport aux cultivars de brocoli cultivés pour le commerce due à la fois à une augmentation en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3méthylsulfinylpropyle et la conversion accrue de glucosinolate de 4-méthylsulfinyl- butyle en sulforaphane. En conséquence, l'invention fournit des procédés et des compositions génétiques pour la production de légumes crucifères précieux sur le plan commercial contenant des teneurs élevées en métabolites secondaires anticarcinogènes. L'invention considère de plus le développement de lignées de brocoli avec une activité anticarcinogène améliorée. La sélection de lignées avec des teneurs élevées en composés anticarcinogènes est encore facilitée grâce à l'utilisation de marqueurs moléculaires pour établir l'emplacement chromosomal des gènes de bio-synthèse de glucosinolate et pour aider dans la sélection de lignées de rétrocroisement ("backcross") qui contiennent la composition génétique d'utilité plus grande pour les besoins d'améliorer les teneurs en composés anti- carcinogènes dans brocoli. La présente invention fournit des procédés pour augmenter les teneurs en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle et/ou de 3-méthylsulfinylpropyle dans des légumes Brassica à l'aide de moyens génétiques. Ces moyens comprennent le croisement d'espèces Brassica sauvages avec des espèces de brocoli, la sélection de lignées avec une teneur élevée en glucosinolates de 4méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle et une évaluation des propriétés anticarcinogènes desdites combinaisons génétiques en mesurant le pouvoir d'extraits de cellules végétales pour induire des enzymes de phase II. On peut utiliser des marqueurs RFLP pour sélectionner des lignées dans des croisements qui possèdent une proportion élevée de fond génétique de brocoli et pour établir la position des gènes de la biosynthèse de glucosinolate pertinents sur la carte du génome de Brassica. Des hybrides entre des cultivars de brocoli commerciaux et les deux espèces sauvages B. villosa et B. drepanensis sont pleinement fertiles et des populations de rétrocroisement sont faites. Des lignées de brocoli avec des teneurs améliorées en glucosinolate de 4-méthyl- sulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle et associées à une activité anticarcinogène sont développées à partir de ces populations. L'efficacité du développement de ces lignées est considérablement améliorée par la disponibilité de marqueurs moléculaires pour sélectionner à la fois la teneur en glucosinolate et en fond génétique souhaité. C'est un objet de la présente invention de fournir un légume crucifère comestible avec des teneurs élevées en composés anticarcinogènes, à savoir isothiocyanate de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou isothiocyanate de 3-méthyl- sulfinylpropyle. C'est un autre objet de la présente invention de fournir des procédés pour l'augmentation sélective de dérivés de glucosinolate anticarcinogènes dans l'espèce Brassica, et de fournir une espèce Brassica avec des teneurs améliorées en dérivés de glucosinolate anti- carcinogènes et en particulier des légumes Brassica comestibles avec des teneurs élevées en dérivés de gluco- sinolate anticarcinogènes, isothiocyanate de 4-méthyl- sulfinylbutyle et/ou isothiocyanate de 3-méthylsulfinyl- propyle. C'est encore un autre objet de la présente invention de fournir des procédés pour sélectionner des combinaisons génétiques de brocoli contenant des teneurs élevées en dérivés de glucosinolate anticarcinogènes et des procédés pour évaluer les propriétés anticarcinogènes de ces combi- naisons génétiques. C'est encore un autre objet de la présente invention de fournir des compositions contenant des légumes Brassica avec des concentrations en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle compri- ses entre 10 et 100 Mmoles/g de poids sec. Ceux-ci et d'autres objets de la présente invention sont fournis par une ou plusieurs des formes de réalisation décrites ci-dessous. La sélection de brocoli avec des teneurs élevées en glucosinolates anticarcinogènes n'est pas possible dans le présent fond génétique commercial utilisé pour développer des cultivars de brocolis commerciaux. Basée sur le modèle génétique de biosynthèse de glucosinolate présenté dans la figure 1, la production de glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle dépend d'un certain nombre de facteurs génétiques. Ceux-ci incluent une faible activité de l'allèle GSL-ALK et des teneurs correctes d'activités codées par les allèles GSLOXID et d'autres allèles responsables de la production de précur- seurs de glucosinolate. On pense que le goût relativement doux du brocoli est associé avec des teneurs relativement faibles en glucosinolates en général, et des teneurs faibles en glucosinolates volatils en particulier. Ceci est évident quand les profils de glucosinolates totaux de brocolis commerciaux et de parentées sauvages sont compares. Ainsi des procédés pour dériver des brocolis avec des caractéristiques de saveur souhaitables et des teneurs élevées en glucosinolates anticarcinogènes doivent englober la sélection de lignées avec la combinaison génétique correcte qui ne produit pas de glucosinolates alcényle fortement odorants. De même il est souhaitable de maintenir de faibles teneurs en autres glucosinolates afin d'éviter la production de mauvais goût. Ainsi des procédés pour réaliser l'élévation spécifique de glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle ne doivent pas conduire à une production globale de glucosinolates ou une production de glucosinolates d'alcényle. La présente invention fournit des procédés pour réaliser ces buts. Dans des conditions de champs normales, il est peu probable que le B. oleracea de type sauvage fertilise par croisement avec du B. oleracea cultivé. On pense en effet que les caractéristiques de compatibilité disparaissent lorsque les cultivars fleurissent. La présente invention considère également l'utilisa- tion de marqueurs génétiques pour faciliter la sélection de lignées qui contiennent la combinaison génétique souhaitée. L'utilisation de marqueurs RFLP, ou de sondes d'ADN qui ségrègent avec des caractéristiques spécifiques, est bien connue dans la technique, toutefois la présente invention décrit des sondes spécifiques d'ADN que l'on a montrées être utiles pour la sélection de combinaisons génétiques qui conduisent à des teneurs élevées en glucosinolates de 4méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle dans Brassica oleracea. En outre, une analyse RFLP fournit un moyen utile pour évaluer la portion du génome d'une plante hybride qui provient de brocoli ou d'espèces sauvages. Ainsi, l'utilisation de RFLP ou de sondes d'ADN trouve une utilité dans la sélection rapide de plantes qui contiennent la proportion souhaitée d'espèce sauvage et de génomes de brocoli. Ainsi, une sélection de brocoli avec des teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthyl-sulfinylpropyle comprenant un pourcentage élevé du génome commercial souhaité est grandement facilitée grâce à l'utilisation de marqueurs d'ADN pour analyser des plantes hybrides à la suite d'un croisement de brocoli avec des espèces sauvages. La présente invention décrit également des procédés pour l'évaluation des propriétés anticarcinogènes de brocoli contenant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3- méthylsulfinylpropyle par l'intermédiaire de dosages de l'induction d'enzymes de phase II. Bien que les effets anticarcinogènes à long terme des dérivés spécifiques de glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle ne peuvent être déterminés précisément et dépendront de nombreux facteurs supplémentaires, del'alimentation et autres, l'utilisation du dosage d'induction fournit une preuve très forte pour les effets anticarcinogènes des dérivés d'iso- thiocyanate des glucosinolates spécifiques. Ainsi, la présente invention décrit des procédés qui permettent la sélection de Brassica sp. avec des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle, des procédés pour évaluer les effets anticarcinogènes de ladite espèce végétale, et des procédés et compositions qui permettent la dérivation de lignées de brocoli avec des propriétés anticarcinogènes. L'invention concerne plus particulièrement un procédé pour la production de Brassica oleracea ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthyl-sulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3méthylsulfinyl-propyle, ou les deux, qui comprend: (a) le croisement d'espèce(s) sauvage(s) de Brassica oleracea avec des lignées de Brassica oleracea; et (b) la sélection d'hybrides ayant des teneurs en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en glucosino- lates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux, élevées au- dessus de celles initialement trouvées dans les lignées de Brassica oleracea. L'invention concerne en outre un procédé pour la production de Brassica oleracea ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinyl-propyle, ou les deux, qui comprend: (a) le croisement d'espèce(s) sauvage(s) de Brassica oleracea avec des lignées de brocoli; (b) la sélection d'hybrides ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en gluco- sinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux; (c) le rétrocroisement avec des lignées de brocoli; et (d) la sélection des plantes avec des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en gluco- sinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux. Avantageusement, le procédé comprend de plus une étape (e) de sélection d'une lignée de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux, capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. Le procédé de l'invention comprend donc le croisement d'espèce(s) sauvage(s) avec (une ou) des lignées de Brassica (lignées établies et/ou cultivées, notamment commerciales). Dans une forme de réalisation de la présente invention, on utilise un procédé pour sélectionner des lignées de brocoli avec des teneurs élevées en gluco- sinolates spécifiques qui comprend: I.) le croisement d'espèces sauvages avec des lignées de brocoli haploide double; II.) l'analyse d'hybrides F1, la sélection des hybrides avec la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3- méthylsulfinylpropyle et le rétrocroisement avec les lignées de brocoli; III.) l'analyse des glucosinolates dans des plantes individuelles de la génération B1 (rétrocroisement 1); IV.) un ou deux tours supplémentaires de rétro- croisement (B2, B3) avec sélection des plantes ayant la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle, test de l'anticarcinogénicité des individus sélectionnés par induc- tion d'enzymes de phase II; V.) analyse de la population B3 (rétrocroisement 3) avec sélection des plantes ayant la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3- méthylsulfinylpropyle, test de l'anticarcinogénicité des indi-vidus sélectionnés par induction d'enzymes de phase II; VI.) sélection d'une lignée de brocoli avec des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle qui porte la caractéristique anticarcinogène capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. Ainsi, le procédé permet la sélection de lignées de brocoli avec des teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle. Les teneurs élevées en ces glucosinolates spécifiques sont corrélées avec la propriété anticarcinogène grâce à une évaluation d'une induction des enzymes de phase II. En employant un rétrocroisement, des combinaisons génétiques sont générées qui contiennent le caractère anticarcinogène dans un fond génétique trouvé dans les brocolis commerciaux. En conséquence, la production de gluco- sinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinyl- propyle dans des cultivars commerciaux de brocolis est réalisée, donnant lieu à une composition de brocoli nouvelle et précieuse. Dans une autre forme de réalisation de la présente invention, la capacité anticarcinogène des lignées est en plus combinée avec des allèles spécifiques pour une auto- incompatibilité qui est utile dans des stratégies de production de semences. Il est connu que certaines espèces de crucifères portent divers allèles pour une auto- incompatibilité et ces allèles sont souvent employés pour la production de semences hybrides. Ainsi, on peut produire des brocolis hybrides qui portent la combinaison génétique qui produit des teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle. C'est un autre objet de la présente invention de sélectionner des lignées de brocoli présentant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthyl- sulfinylpropyle et une combinaison spécifique d'allèles d'autoincompatibilité (SI). Dans quelques cas, il peut être possible d'utiliser une sonde moléculaire pour l'identification d'allèles SI, telle que la sonde pW150 (disponible chez Dr. Tom Osborne, Department of Agronomy, University of Wisconson, Madison, WI, 53706 et décrite dans Toroser et al., Theoretical and Applied Genetics, 91:802- 808.1995), ou une analyse de la protéine SI réelle peut fournir une sélection de l'allèle SI souhaité. Ainsi, l'invention concerne aussi un procédé de production de Brassica ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinyl- propyle, ou les deux, et des allèles SI spécifiques qui comprend: (a) le croisement d'une espèce sauvage avec des lignées de brocoli haploïde double contenant des allèles SI specifiques; (b) la sélection d'hybrides ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en gluco- sinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux; et (c) le criblage des allèles SI spécifiques avec des marqueurs RFLP. Ce procédé comprend avantageusement, en plus, (bl) le rétrocroisement et la sélection de plantes ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinyl- propyle, ou les deux; et (d) la sélection d'une lignée de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinyl- butyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux, et les allèles SI corrects, qui est capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. Plus préférentiellement, le procédé comprend avantageusement: (a) le croisement d'une espèce sauvage avec des lignées de brocoli haploïde double, (b) l'utilisation de sondes d'ADN pour sélectionner des hybrides ayant une combinaison génétique codant l'expression de teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthyl- sulfinylpropyle, ou les deux; (c) le rétrocroisement et la sélection de plantes ayant la combinaison génétique codant l'expression de teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinyl- butyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux; et (d) la sélection d'une lignée de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinyl- butyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux, capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. Dans une forme de réalisation de la présente invention, on utilise un procédé pour générer et/ou sélectionner des lignées de brocoli avec des teneurs élevées en glucosinolates spécifiques et en allèles SI qui comprend: I.) le croisement d'espèces sauvages avec des lignées de brocoli haploide double contenant des allèles SI spécifiques; II.) l'analyse des hybrides F1, la sélection des hybrides ayant la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle et le rétrocroisement avec des lignées de brocoli, sélection pour des allèles SI avec des marqueurs RFLP, sélection des individus avec une combi-naison souhaitée des allèles SI contrastants; III.) l'analyse de glucosinolates dans des plantes individuelles de la génération B1 (rétrocroisement 1); IV.) un ou deux tours supplémentaires de rétro- croisement avec sélection des plantes ayant la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle, criblage pour les allèles SI corrects avec des marqueurs RFLP, test de l'anticarcino- génicité d'individus sélectionnés, par induction d'enzymes de phase II; V.) l'analyse d'une population B3 (rétrocroisement 3) avec sélection de plantes ayant la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3- méthylsulfinylpropyle, test de l'anticarcinogénicité d'in- dividus sélectionnés par induction d'enzymes de phase II; VI.) sélection d'une lignée de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle et en allèles SI corrects, qui porte la caractéristique anticarcinogène capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. Ainsi, des lignées de brocoli sont dérivées qui portent des allèles SI spécifiques utiles pour le croisement dans un schéma de production de semence hybride. En conséquence, la semence de brocoli hybride qui porte la combinaison génétique pour des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthyl- sulfinylpropyle peut être produite par croisement avec le parent approprié. Ladite semence est précieuse puisque le brocoli hybride porte également de nombreuses combinaisons génétiques importantes pour un rendement agronomique. Comme autre forme de réalisation de la présente invention, on décrit un procédé qui emploie l'utilisation de marqueurs ADN qui ségrègent avec des profils de glucosinolate spécifiques. Dans ce procédé, l'utilisation de marqueurs ADN, ou plus spécifiquement des marqueurs connus comme les QTL (loci de caractéristique quantitative) sont utilisés pour sélectionner la combinaison génétique dans le brocoli qui conduit à des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3- méthylsulfinylpropyle. En particulier, l'utilisa-tion de marqueurs connus comme pW176, pW207 et pW141 situés sur le chromosome 2 et les marqueurs connus comme pW224, pW114, pW145, pW123, pW138, pW197, pW228, pW106 situés sur le chromosome 5 est décrite (disponible chez Dr. Tom Osborne, Department of Agronomy, University of Wisconson, Madison, WI, 53706 et décrite dans Toroser et al., Theoretical and Applied Genetics, 91:802-808, 1995 et décrite dans Ferreira et al., Theoretical and Applied Genetics 89:615-621, 1994). On a trouvé que deux régions du génome (trouvées sur les chromosomes 2 et 5) de Brassica oleracea sauvage sont nécessaires pour l'expression de teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthyl- sulfinylpropyle. L'utilisation des marqueurs facilite grandement la sélection des lignées à partir d'hybrides et de rétrocroisement entre brocoli et d'espèces sauvages qui contiennent la combinaison génétique responsable de la production de teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle. En outre, on a trouvé que le QTL situé sur le chromosome 5 réduit spécifiquement les teneurs en glucosinolate de 3- méthylsulfinylpropyle et possède un léger effet sur les teneurs en glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle. Ainsi, il est possible de manipuler les teneurs en glucosinolate de 3-méthylsulfinylpropyle et glucosinolate de 4-méthyl- sulfinylbutyle indépendamment, par l'utilisation de sondes moléculaires en plus de la sélection de lignées. Ainsi, dans les procédés de l'invention, la sélection des hybrides, plantes, lignées et/ou cellules ayant une teneur élevée en glucosinolates particuliers comprend avantageusement l'utilisation de marqueurs ADN, tels que décrits ci-avant, notamment de sondes RFLP. Dans une forme de réalisation de la présente invention, on décrit un procédé pour produire un brocoli avec des teneurs élevées en glucosinolates de 4- * méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle qui comprend: I.) le croisement d'espèces sauvages avec des lignées de brocoli haploïde double; II.) l'analyse des hybrides F1 et la sélection des hybrides ayant la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle par criblage avec des sondes RFLP associées avec la production de glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthyl- sulfinylpropyle, et le rétrocroisement de lignées sélection- nées avec des lignées de brocoli; III.) l'analyse des glucosinolates dans des plantes individuelles de la génération B1 (rétrocroisement 1); IV.) un ou deux autres tours de rétrocroisement avec sélection des plantes ayant la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthyl- sulfinylpropyle par criblage avec des sondes RFLP associées avec la production de glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle, test de l'anticarcinogénicité d'individus sélectionnés par induction d'enzymes de phase II; V.) l'analyse de la population B3 (rétrocroisement 3) avec sélection des plantes ayant la teneur la plus élevée en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3- méthylsulfinylpropyle par criblage avec des sondes RFLP associées avec la production de glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle de profils de glucosinolate, test de l'anticarcinogénicité d'individus sélectionnés par induction d'enzymes de phase II; VI.) la sélection d'une lignée de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle, qui porte le caractère anti- carcinogène capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. Ainsi, l'utilisation de sondes RFLP pour l'iden- tification de régions spécifiques du génome de Brassica oleracea sauvage (par exemple les dénommés QTL) responsable de la production de teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthylsulfinylpropyle facilite grandement la production de brocolis comestibles avec des propriétés anticarcinogènes. Les formes de réalisation précédentes permettent la production (et la sélection) de lignées, plantes, végétal et cellules (notamment d'inflorescence) de brocoli avec des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthyl-sulfinylpropyle, de préférence un brocoli avec une composi-tion comprenant des concentrations en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle et/ou 3- méthylsulfinylpropyle comprises entre 10 et 100 gmoles/g de poids sec. De plus, les formes de réalisation précédentes permettent la production (et la sélection) de lignées de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle et/ou 3-méthyl-sulfinylpropyle capables d'entraîner une augmentation de 10 à 100 fois l'induction d'enzymes de phase II quand on les compare aux cultivars de brocoli communément trouvés dans le commerce. L'invention concerne aussi les parties comestibles d'une plante brocoli produite selon l'invention, les semences d'une telle plante, et ses inflorescences. L'homme du métier comprendra que les procédés décrits dans l'invention peuvent également être appliqués à l'obtention de légumes crucifères B. oleracea autres que le brocoli, incluant le choux, tels que les choux blanc, les choux verts, tels que les choux de Savoie, les choux-fleur, les choux de Bruxelles, les choux frisés, les choux-raves et autres. On considère de plus que le rutabaga (B. napus) et le navet (B. rapa) peuvent également être manipulés selon le procédé et les combinaisons génétiques de la présente invention. Les exemples suivants illustrent le procédé mais en aucun cas ne limitent le domaine de l'invention. Léaende des Figures Figure 1: modèle génétique de biosynthèse de gluco- sinolate aliphatique dans Brassica. Figure 2: induction de l'activité QR (enzymes de phase II) dans des cellules murines d'hépatome Hepa lclc7 utilisant des extraits provenant d'un cultivar Marathon et sulforaphane synthétique (isothiocyanate de 4-méthyl- sulfinylbutyle). Figure 3: effet d'extraits de B. drepanensis; B. villosa; et B. atlantica sur l'induction de QR (enzymes de phase II) dans des cellules murines d'hépatome Hepa lclc7. Figure 4: l'effet d'extraits du cultivar de GD DH et des hybrides récupérés de croisements avec des espèces sauvages [GD DH x B. drepanensis]; [GD DH x B. villosa]; et [GD DH x B. atlantica]; sur l'induction de QR (enzymes de phase II) dans des cellules d'hépatome Hepa lclc7. Figure 5: profil de chromatographie en phase gazeuse des glucosinolates provenant d'un extrait d'un hybride [GD DH x B. drepanensis]. Exemple 1. Procédés pour la mesure de la teneur en glucosinolate dans des espèces Brassica sauvages commer- ciales et leurs hybrides. On a fait pousser une lignée de brocoli haploïde double provenant du cultivar de Green Duke (référencé comme GD DH, Bouhuon, E. J. R., Keith, D. J., Parkin, I. A. P., Sharpe, A. G., & Lydiate, D. J. (1996) Theor. Appl. Genet. 93, 833-839), trois cultivars commerciaux (Trixie, Green Comet et Marathon) et trois espèces Brassica sauvages: B. drepanensis Caruel (syn. B. villosa Biv. sous-espèce drepanensis), B. villosa Biv. et B. atlantica (Coss.) O. E. Schultz, dans une serre dans des conditions classiques comme décrit précédemment (Magrath, R., Herron, C., Giamoustaris, A., & Mithen, R. (1993) Plant Breed. 111, 55- 72). On a croisé chacune des espèces sauvages avec la lignée GD DH, on a obtenu des semences F1 et on les a faites pousser dans des conditions classiques. On a effectué un dépôt des semences du dérivé de cultivar de GD DH le 11 février 1999 auprès de National Collection of Industrial and Marine Bacteria Limited (NCIMB) à Aberdeen, Ecosse, et on a donné le n de dépôt NCIMB 41008. On a récolté les inflorescences des cultivars après 8 à 12 semaines et les hybrides après 12 à 16 semaines, on les a immédiatement congelés dans de l'azote liquide et lyophilisés. Le sulforaphane synthé-tique était gracieusement fourni par le Professeur P. Talalay, The John Hopkins University School of Medicine, Baltimore, MD. On a extrait des glucosinolates de la matière lyophilisée, on les a convertis en désulfoglucosinolates et on les a analysés par CLHP comme précédemment décrit (Magrath, R., Herron, C., Giamoustaris, A., & Mithen, R. (1993) Plant Breed. 111, 55-72) en utilisant du gluco- sinolate de benzyle comme étalon interne. On a évalué des extraits provenant de la matière lyophilisée pour leur activité d'induction dans des cellules murines d'hépatome Hepa lclc7. On a humidifié approximativement 0,1 g de matière lyophilisée broyée en ajoutant 2 ml d'eau, on a homogénéisé et laissé à la température ambiante pendant 1 h avec mélange occasionnel. On a ajouté 3 ml de méthanol chaud à 70 % (v/v) et on a mélangé minutieusement avant incubation pendant 15 minutes à +70 C. On a refroidi les homogénats à la température ambiante et on a centrifugé pendant 5 minutes à 3 000 tr/mn. On a éliminé les surnageants et on a réduit le volume dans une centrifugeuse sous vide à approximativement un cinquième du volume initial. On a filtré les concentrés résultants à travers des filtres apyrogènes stériles (0,22 gm) et on a stocké à -70 C avant essai. On a exprimé les concentrations de chaque extrait en poids sec de la matière d'origine pour chaque ml du milieu de culture. On a mesuré l'induction selon les procédés publiés (Tawfiq, N., Heaney, R. K., Plumb, J. A., Fenwick, G. R., Musk, S. R. R., & Williamson, G. (1995) carginogenesis 16, 1191-1194, Prochaska, H. J., & Santamaria, A. B. (1988) Anal. Biochem. 169, 328-336, Williamson, G., Plumb, G. W., Uda, Y., Price, K. R., & Rhodes, M. J. C. (1996) Carcinogenesis 17, 2385-2387) avec les modifications suivantes. On a analysé chaque échantillon à huit concentrations en utilisant quatre duplicatas pour chaque concentration. On a utilisé b- naphtoflavone comme témoin positif à une concentration de 0,2 mM. Ceci produit typiquement une induction de trois fois (CD; 0,02 mM), comparable aux déterminations précédentes. On a extrait chaque cultivar/hybride sur trois occasions et on a analysé séparément. On a analysé les composants non volatils et volatils des produits d'éclatement hydrolytiques des cultivars, des espèces sauvages et des hybrides, avec une SM-CG utilisant un appareil HP Chemstation GP800A équipé avec une colonne de méthylsilane réticulé HP1 de 30 m x 0,25 mm (Hewlett Packard Co. Palo Alto, CA. USA). Typiquement, on a chauffé la colonne de +60 C à +250 C à raison de 20 C/minute et on a balayé le spectre de masse de 35 à 250 m/z. On a humidifié approximativement 0,1 g de la matière lyophilisée avec de l'eau, on l'a mélangée minutieusement et incubée pendant 1 h avec mélange occasionnel. On a extrait les produits hydrolytiques non volatils des échantillons avec du chlorure de méthylène et on a filtré avant analyse. Afin d'analyser les produits volatils, on a humidifié 0,1 g de matière lyophilisée avec 0,5 ml d'eau, on a immédiatement scellé le flacon de verre et on a recueilli les produits volatils à partir de l'espace de tête du flacon avec une sonde d'extraction à matrice en phase solide (SPME) (Supelco Inc., Bellefonte, PA, USA). Exemple 2. Teneur en glucosinolate des lignées Brassica. Le tableau 1 ci-dessous montre la teneur en gluco- sinolate des cultivars de brocoli commerciaux Green Comet, Marathon et Trixie, des espèces B. oleracea sauvages et des hybrides entre une lignée à haploïde double du cultivar commercial Green Duke et d'espèces Brassica sauvages. TABLEAU 1 Teneur en glucosinolate aliphatique individuelle et totale (gmoles/g de poids sec 1 écart type) de cultivars de brocoli, d'espèces Brassica sauvages et d'hybrides produits à partir des croisements entre GD DH et les espèces Brassica sauvages. MSP* MSB PROP BUT MTP OH-BUT TOTAL Green Comet 0,1 0,1 0,8 0,5 0,2 0,1 0,0 2,7 0,5 0,5 0,3 4,3 0,5 GD DH 0,2 0,2 4,6 1,1 0,0 0,0 2,3 0,6 0,0 7,1 1,1 Marathon 1,0 0,3 5,4 1,1 0,2 0,1 0,0 4,1 0,7 0,0 10,7 1,8 Trixie 0,4 0,2 11,1 2,1 0,2 0,1 0,0 4,9 1,2 0,0 16,6 2,6 B. atlantica 0,9 0,7 0,0 92,8 25,4 0,5 0,3 1,111,0 0,0 95,3 26,6 B. drepanensis 11,0 1,7 0,0 0,0 0,0 51,6 9,3 0, 0 62,6i10,9 B. villosa 119 18 1,4 0,2 0,0 0, 1 0,1 3,4 0,9 0,1 0,1 124 19 GD+ x B. atlantica 2,2 0,8 5, 3 1,4 76,9 20,8 23,6 6,3 2,0 0,7 43,7 6,7 154 30 GD x B. drepanensis 26,2 2,9 76,5 8,9 0,0 0,0 1,9 0,4 0,0 105 12 GD x B. villosa 26,4 2,7 81,8 5,0 0,0 0,0 1,0 0,3 0,0 109 7 MSP: 3-méthylsulfinylpropyle, MSB: 4- méthylsulfinylbutyle, PROP: 2-propyènyle, BUT: 3-butényle, MTP: 3-méthylthiopropyle, OH-BUT: 2-hydroxy-3-butényle. + GD:GD DH. Co ---% La teneur en glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle dans les cultivars de brocoli était similaire à celle précédemment rapportée (Carlson, D. G., Daxenbichler, M. E., van Etten, C. H., Kwolek, W. F., & Williams, P. H. (1987) J. Amer. Soc. Hort. Sci. 112, 173- 178). L'espèce sauvage avait approximativement une teneur dix fois plus grande en glucosinolates aliphatiques totaux que les cultivars. B. villosa, B. drepanensis et B. atlantica avaient de façon prédominante des glucosinolates de 3- méthylsulfinylpropyle, 3-méthylthiopropyle et 2-propényle. Les différences dans les profils de glucosinolate étaient attribuées à des différences dans les allèles au niveau des loci GSL-OXID et GSL-ALK (Giamoustaris, A. & Mithen, R. (1996) Theor. Appl. Genet. 93, 1006- 1010). Dans les hybrides [GD DH x B. drepanensis] et [GD DH x B. villosa] le 4-méthylsulfinylbutyle était le glucosinolate le plus abondant dû à la nature dominante des allèles GSL-ELONG et GSL-OXID trouvés dans GD DH et aux allèles GSL-ALK nuls chez les deux parents. Dans l'hybride [GD DH x B. atlantica] le 3- buténylglucosinolate était le glucosinolate prédominant. Le glucosinolate de 2-hydroxy-3-butényle était également présent dû à l'action fonctionnelle de l'allèle GSL-OH dans la lignée GD DH (non publiée), qui n'est pas habituellement évidente dû à l'allèle nul GSL- ALK empêchant la biosynthèse du glucosinolate de 3-butényle. Exemple 3. Induction d'enzymes de phase II. On a utilisé le sulforaphane synthétique comme témoin positif pour quantifier l'induction de QH dans des cellules Hepa lclc7. C'était un inducteur puissant et il produisait une induction de trois fois à 1,6 mM (CD; 0,4 mM), comparable aux déterminations précédentes. On n'a observé aucune cytotoxicité pour tout échantillon à toutes concentrations essayées. Les extraits provenant de tous les cultivars était des inducteurs médiocres sur la gamme de concentrations de 0,001 mg/ml à 0,125 mg/ml. Toutefois, l'induction était moindre que supposée si 100 % des glucosinolates avaient été convertis en isothiocyanates, et pas en autres produits tels que des dérivés thiocyanate ou nitrile (Fenwick, G. R., Heaney, R. K., & Mullin, W. J. (1983) Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 18, 123-201). Par exemple, Marathon contenait 5,4 mmoles de glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle/g de poids sec (tableau 1). En conséquence, un extrait contenant 75 mg/ml de Marathon pourrait être supposé avoir une concentration en isothiocyanate de 4-méthylsulfinylbutyle de 0,4 mM qui aboutirait à une induction de deux fois. Toutefois, on n'a observé aucune induction significative à cette concen- tration. En effet, 2,5 mg/ml d'extrait de Marathon sont nécessaires pour une induction de deux fois, qui, si 100 % du glucosinolate était converti en isothiocyanate, est équivalent à 13,5 mM d'isothiocyanate de 4-méthylsulfinyl- butyle. Ainsi, soit une faible proportion du glucosinolate a été convertie en isothiocyanate de 4-méthylsulfinyl- butyle, soit l'induction de l'activité QR était réduite par d'autres composants dans l'extrait végétal. Pour tester quant à la présence d'un inhibiteur, on a contrecarré l'extrait de Marathon (0,125 mg/ml) avec du sulforaphane synthétique avant l'application aux cellules Hepa lclc7. L'induction observée était similaire à celle du sulforaphane pur seul (figure 2), ce qui démontrait qu'il n'existait aucun effet inhibiteur par d'autres composants dans les extraits. Dans la figure 2, on présente l'induc- tion de QR dans les cellules Hepa lclc7 en utilisant sulforaphane (A); l'extrait de Marathon (0,125 mg/ml) avec du sulforaphane ajouté (M) ou un extrait de Marathon (0,001 mg/ml à 0,125 mg/ml), (O). La concentration en iso- thiocyanate estimée de l'extrait de Marathon a été basée sur une hypothèse que 100 % du glucosinolate parent est converti en isothiocyanate. Ainsi, l'extrait de Marathon (1 mg/ml) est équivalent à 5,4 jM d'isothiocyanate de 4- méthylsulfinylbutyle. Les résultats pour Marathon (0,125 mg/ml) avec du sulforaphane ajouté ont été enregistrés par rapport à la concentration de sulforaphane synthétique ajouté seule, puisque l'extrait de Marathon seul n'avait aucun effet significatif sur l'activité d'induction. En conséquence, il est possible que, dans Marathon (et également dans d'autres cultivars), seulement une proportion du glucosinolate a été convertie en isothio- cyanate. Les extraits de B. villosa et B. drepanensis étaient de puissants inducteurs de l'activité QR. Au contraire, les extraits de B. atlantica n'induisaient pas d'activité QR, en dépit de la teneur élevée en glucosinolate (figure 3). Dans la figure 3, on présente les effets des extraits de: B. drepanensis (M); B. villosa (+); et B. atlantica (O) sur l'induction de QR dans des cellules murines d'hépatome Hepa lclc7. Si l'on suppose que 100 % du glucosinolate dans ces taxons a été converti en isothiocyanate et pas en d'autres produits d'éclatement hydrolytiques possibles (dérivés thiocyanate et nitrile), les valeurs apparentes CD pour l'isothiocyanate de 3-méthylthiopropyle et l'isothio- cyanate de 3-méthylsulfinylpropyle valent respectivement 1,6 mM et 0,5 mM. Ces valeurs sont toutes deux plus faibles que celles rapportées pour les isothiocyanates synthétiques de 3,5 mM et 2,4 mM, comme illustré dans le tableau 2. En effet, si moins de glucosinolates ont été convertis en isothiocyanates, les valeurs apparentes CD pourraient être même plus faibles. Le tableau 2 ci-dessous illustre l'induction de l'activité QR (enzymes de phase II) dans des cellules Hepa lclc7 par des extraits végétaux. TABLEAU 2 Puissance d'induction de QR dans des cellules murines Hepa lclc7 par des extraits végétaux. Valeur de CD pour Isothiocyanate Valeur un isothiocyanate prédominant apparente synthétique (jM) de CD* (pM) (voir Zhang (2)) B. drepanensis 3méthylthiopropyle 1,6+ 3,5 B. villosa 3-méthylsufinylpropyle 0,5+ 2,4 GDt x B. drepanensis 4-méthylsulfinylbutyle 0,3+ 0,4 à 0,8 GD x B. villosa 4-méthylsulfinylbutyle 0,3+ 0,4 à 0,8 Sulforaphane synthétique 4-méthylsulfinylbutyle 0,3 0, 4 à 0,8 * Valeur CD: concentration en glucosinolate parent nécessaire pour doubler l'activité d'induction de QR. + Les valeurs indiquées étaient calculées en supposant 100 % de conversion des glucosinolates parents en isothiocyanate correspondant. IGD: GD DH. D'autres études avaient noté une valeur CD de 0,2 gM. Voir Prochaska (10). oD La différence en puissance pourrait être due soit à des différences chimiques entre les isothiocyanates naturels et synthétiques (par exemple nature des stéréoisomères) soit à d'autres facteurs dans les extraits végétaux qui peuvent inclure des effets synergiques de faibles teneurs en autres isothiocyanates. Le manque d'activité d'extraits provenant de B. atlantica souligne l'importance de la structure de la chaîne secondaire du glucosinolate. Les extraits provenant à la fois de [GD DH x B. villosa] et [GD DH x B. drepanensis] étaient des inducteurs puissants d'activité QR (figure 4). Dans la figure 4, on présente l'effet des extraits du cultivar de GD DH (); et les croisements hybrides [GD DH x B. drepanensis] (M); [GD DH x B. villosa] (0); et [GD DH x B. atlantica] (A); sur l'induction de QR dans des cellules murines d'hépatome Hepa lclc7. En se basant sur 100 % de conversion des glucosinolates en isothiocyanates, les valeurs CD appa- rentes des deux extraits étaient 0,3 mM (équivalent glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle), ce qui est simi- laire à celle du sulforaphane pur (ci-dessus) et à celles rapportées dans des études précédentes. Ainsi, tandis qu'il existait une augmentation approximative de dix fois dans les teneurs en glucosinolate de 4-méthylsulfinylbutyle dans [GD DH x B. villosa] et [GD DH x B. drepanensis] comparées à Marathon et GD DH, il existait une différence de plus de fois en capacité d'induire une activité QR (à savoir il nécessite au moins cent fois la quantité de tissu de Marathon pour induire une activité QR équivalente comparée aux hybrides GD DH). Afin d'examiner la composition et la nature des produits hydrolytiques, on a analysé les extraits par SM-CG (figure 5). Dans la figure 5, on présente un profil de chromatographie gazeuse d'un extrait provenant de [GD DH x B. drepanensis]. Une spectrométrie de masse confirmait les pics tels que (1), nitrile de 3-méthylsulfinylpropyle; (2), nitrile de 4-méthylsulfinylbutyle; (3), isothio- cyanate de 3-méthylsulfinylpropyle; (4), isothiocyanate de 4-méthylsulfinylbutyle. L'hydratation de feuilles lyophili- sées de B. drepanensis et B. atlantica conduisait à la production de grandes quantités d'isothiocyanates de 3- méthylthiopropyle et 2-propényle volatils. On a détecté l'isothiocyanate de 3-méthylsulfinylpropyle dans des extraits au chlorure de méthylène à partir de B. villosa, ce qui était cohérent avec les profils de glucosinolate. Dans les extraits de [GD DH x B. villosa] et [GD DH x B. drepanensis], l'isothiocyanate dominant était l'isothio- cyanate de 4-méthylsulfinylbutyle comme escompté. On a également détecté des teneurs relativement faibles en iso- thiocyanate de 3-méthylsulfinylpropyle et en dérivés nitrile. Au contraire, on n'a détecté que des traces d'iso- thiocyanate de 4-méthylsulfinylbutyle dans les cultivars. Ceci indiquait que la différence de 100 fois en capacité à induire une activité QR entre les deux hybrides et les cultivars est due à la fois à l'augmentation en gluco- sinolate de 4-méthylsulfinylbutyle et à une conversion plus grande en isothiocyanate. REVENDICATIONS 1. Procédé pour la production de Brassica oleracea ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinyl- propyle, ou les deux, qui comprend: (a) le croisement d'espèce(s) sauvage(s) de Brassica oleracea avec des lignées de Brassica oleracea; et (b) la sélection d'hybrides ayant des teneurs en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en glucosino- lates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux, élevées au- dessus de celles initialement trouvées dans les lignées de Brassica oleracea. 2. Procédé pour la production de Brassica oleracea ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinyl- propyle, ou les deux, qui comprend: (a) le croisement d'espèce(s) sauvage(s) de Brassica oleracea avec des lignées de brocoli; (b) la sélection d'hybrides ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en gluco- sinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux; (c) le rétrocroisement avec des lignées de brocoli; et (d) la sélection des plantes avec des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en gluco- sinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux. 3. Procédé selon la revendication 2 qui comprend en plus: (e) la sélection d'une lignée de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinyl- butyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux, capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. 4. Procédé pour la production de Brassica oleracea ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinyl- propyle, ou les deux, et des allèles SI spécifiques qui comprend: (a) le croisement d'une espèce sauvage avec des lignées de brocoli haploïde double contenant des allèles SI spécifiques; (b) la sélection d'hybrides ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou en gluco- sinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux; et (c) le criblage des allèles SI spécifiques avec des marqueurs RFLP. 5. Procédé selon la revendication 4 qui comprend de plus: (bl) le rétrocroisement et la sélection de plantes ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinyl- propyle, ou les deux; et (d) la sélection d'une lignée de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinyl- butyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux, et les allèles SI corrects, qui est capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. 6. Procédé pour la production de Brassica oleracea ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinyl- propyle, ou les deux, qui comprend: (a) le croisement d'une espèce sauvage avec des lignées de brocoli haploïde double, (b) l'utilisation de sondes d'ADN pour sélectionner des hybrides ayant une combinaison génétique codant l'expression de teneurs élevées en glucosinolates de 4- méthylsulfinylbutyle, ou en glucosinolates de 3-méthyl- sulfinylpropyle, ou les deux; (c) le rétrocroisement et la sélection de plantes ayant la combinaison génétique codant l'expression de teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinyl- butyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux; et (d) la sélection d'une lignée de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 4-méthylsulfinyl- butyle, ou en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou les deux, capable de provoquer une induction forte d'enzymes de phase II. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel seule la teneur en glucosinolate de 4- méthylsulfinylbutyle est élevée. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel seule la teneur en glucosinolate de 3- méthylsulfinylpropyle est élevée. 9. Végétal Brassica comestible produit selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 6. 10. Portion comestible d'une plante brocoli produite selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 6. 11. Semence d'une plante brocoli produite selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 6. 12. Procédé selon la revendication 6, dans lequel les sondes d'ADN utilisées sont choisies dans le groupe comprenant: pW176, pW141, pW207, pW224, pW114, pW145, pW123, pW138, pW197, pW228 et pW106. 13. Plante brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou en gluco- sinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou les deux. 14. Plante brocoli selon la revendication 13, dans laquelle la concentration en glucosinolates de 3-méthyl- sulfinylpropyle, ou en glucosinolates de 4-méthylsulfinyl- butyle, ou les deux, est comprise entre 10 et 100 gmoles par gramme de poids sec. 15. Inflorescence de brocoli ayant des teneurs élevées en glucosinolates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou en glucosinolates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou les deux. 16. Inflorescence de brocoli selon la revendication 15, dans laquelle la concentration en glucosinolates de 3- méthylsulfinylpropyle, ou en glucosinolates de 4-méthyl- sulfinylbutyle, ou les deux, est comprise entre 10 et gmoles par gramme de poids sec. 17. Cellule de plante Brassica ayant une teneur élevée en glucosinates de 3-méthylsulfinylpropyle, ou en glucosinates de 4-méthylsulfinylbutyle, ou les deux. 18. Cellule de plante selon la revendication 17, caractérisée en ce que la cellule est une cellule d'inflorescence.