Brevet FR2764801A1 — publié le 19981224

l La présente invention concerne une composition dié- tétique ou médicamenteuse absorbable renfermant des bactéries propioniques susceptibles de dégager des quantités importantes de monoxyde d'azote dans l'intestin humain ou animal.5 Pendant de nombreuses décennies, on a totalement ignoré que le monoxyde d'azote constitue l'un des éléments né- cessaires à la vie et à son maintien; par suite jusqu'à ces quatre ou cinq dernières années, les chercheurs ne se sont pas penchés sur les bienfaits associés à la présence de cet oxyde,10 que ce soit en médecine, en nutrition ou en physiologie. Ce n'est que tout dernièrement que l'on a attribué au monoxyde d'azote un nombre impressionnant de fonctions phy- siologiques et que l'on a émis l'hypothèse que ce gaz pouvait être impliqué au premier chef dans des fonctions aussi diverses que le contrôle de la pression artérielle, la fonction cyto- toxique non spécifique des macrophages, l'agrégation plaquet- taire et la neurotransmission ou encore le contrôle de la motricité du tube digestif. A partir de cette supposition, les recherches por- tant sur le monoxyde d'azote se sont multipliées et l'importance de ce gaz a pu être confirmée. Il est connu que le monoxyde d'azote, qui est un gaz très instable (demivie inférieure à 5 secondes dans les systèmes biologiques), est produit par biosynthèse au sein de l'organisme humain ou animal à partir de la L-arginine par un groupe d'enzymes dénommées NO-synthases (NOS) dont il existe deux types principaux, à savoir d'une part des NOS constituti- ves qui sont exprimées notamment dans les cellules endothélia- les, les plaquettes sanguines et les neurones et, d'autre part, les NOS inductibles qui sont exprimées principalement par cer- taines cellules du système immunitaire (macrophages et polynu- cléaires notamment) par le muscle lisse vasculaire et les cellules endothéliales. Il est à noter que la production de NO par les NOS inductibles est, de plusieurs ordres de grandeurs, supérieure à la production de NO par les NOS constitutives, mais que dans tous les cas, cette production demeure relativement faible. Or, et compte tenu du rôle bénéfique susmentionné du monoxyde d'azote, il serait souhaitable de pouvoir augmenter cette production en particulier en utilisant la voie naturelle du métabolisme alimentaire.5 On n'a cependant jusqu'à présent jamais proposé de moyens permettant de parvenir à ce résultat. L'objet de l'invention est de combler cette lacune. Conformément à l'invention, on a pu parvenir au but recherché en constatant que, de manière surprenante, un type particulier de bactéries, les bactéries propioniques, sont sus- ceptibles de produire du monoxyde d'azote, et que parmi ces bactéries, certaines espèces et certaines souches parmi ces es- pèces en produisent de grandes quantités. Il s'agit là de bactéries propioniques qui, bien que n'appartenant pas au groupe des bactéries lactiques ou bi- fidobactéries classiquement introduites dans l'organisme par le biais de desserts lactés ou autres produits laitiers fermentés, sont néanmoins présentes en alimentation humaine depuis des siècles: ce sont en effet elles qui permettent l'obtention des trous lors de la fabrication du fromage dénommé " emmental " qui en fin d'affinage renferme environ 10 cellules/g de bacté- ries propioniques. Il est à noter que la fermentation de ces bactéries produit entre autre de l'acide propionique, de l'acide acétique et du dioxyde de carbone. La constatation susmentionnée est d'autant plus surprenante que l'on a pu vérifier que des bactéries lactiques, des bifidobactéries et/ou des levures, utilisées couramment dans le domaine agro-alimentaire, ne produisent pas de monoxyde d'azote. L'invention se rapporte, en conséquence, a l'utilisation de bactéries propioniques pour l'obtention d'une composition diététique ou médicamenteuse absorbable susceptible de dégager des quantités importantes de monoxyde d'azote dans l'intestin humain. Conformément à l'invention, cette composition peut être constituée par une préparation liquide fermentée ou encore par une préparation déshydratée. Dans ce dernier cas, elle se présente, avantageuse- ment, sous forme de fractions individuelles renfermant la dose de bactéries devant être absorbée quotidiennement. Ces fractions peuvent être ingérées directement ou être préalablement diluées dans un liquide; elles peuvent être conditionnées sous une forme permettant de faciliter l'absorption: comprimés, sachets de poudre granulée, liquide, On a vérifié que de telles préparations déshydra- tées concentrées de bactéries propioniques conservées deux an- nées à + 4 C voient leur concentration baisser de moins de un Log. L'expérience a prouvé que des gélules gastrorésis- tantes ou non correspondent à un type de conditionnement parti- culièrement avantageux. Selon une autre caractéristique de l'invention, chaque fraction individuelle renferme un grand nombre de bacté- ries, de préférence plus de 10 bactéries. Diverses expérimentations (résumées ci-dessous) ont permis de vérifier indirectement l'aptitude toute particulière des bactéries propioniques à produire du NO à partir de la me- sure de l'accumulation d'ions nitrites NO2 par différentes souches bactériennes au cours de leur culture. 1 - Essais préliminaires comparatifs Différentes souches bactériennes (inoculum yaourt, bifidobactéries, lactobacillus) ont été cultivées en pré- sence d'un milieu lait reconstitué (100 ml) supplémenté par un extrait de levures (10 g/l) puis incubées à 38 C. L'accumulation de nitrite a été mesurée au cours du temps. Ces essais préliminaires ont été réalisés dans les conditions suivantes: * incubation à 38 C pendant 0, 4, 7 ou 10 heures, * 3 répétitions, * dosage des nitrites par système Bran-Luebbe, * estimation de la fermentation de chaque culture mesurée par lecture de l'absorbance à 650 nm. En raison de la nature des extraits à analyser, une étape de purification des échantillons a été successivement mise en oeuvre par une double centrifugation (2 x 10 min., 4 C, 15 000 rpm), suivie d'une ultrafiltration sur cartou- che miniprep 10 (rétention des protéines de PM > lOkD) puis d'une purification partielle par passage de l'échantillon sur résine Waters C18 (55-105 gm). Cette méthode a, dans un premier temps, été testée sur des échantillons étalons de nitrite (Figure 1), puis sur des extraits de culture de Lactobacillus incubés 7 heures auxquels a été ajoutée ou non une quantité connue de nitrite (Figure 2). La figure 1 représente les profils colorimétriques obtenus sur une chaîne d'analyse automatique Bran Luebbe: (1) d'un milieu de culture de bifidobactéries après heures d'incubation, (2) d'une solution standard de nitrite, (3) de cette même solution ultrafiltrée, (4) de cette même solution ultrafiltrée et passée sur ré- sine C18. La figure 2 représente les profils colorimétriques obtenus sur une chaîne d'analyse automatique Bran Luebbe: (1) d'un milieu de culture de Lactobacillus après heures d'incubation à 38 C, (2)(3) d'une solution standard contenant 410 gg de ni- trite/l, (4)(5) d'un milieu de culture de Lactobacillus après heures d'incubation à 38 C auxquels a été ajoutée une quantité connue de nitrite afin d'obtenir une solution à 820 Mg/l de nitrite (4) de cette même solution ultrafiltrée et passée sur ré- sine C18. Ces échantillons ont été purifiés par centrifuga- tion ultrafiltration et passage sur résine C18 dans les conditions décrites précédemment. Conformément à ces essais, aucune accumulation de nitrite n'a pu être détectée que ce soit à partir d'inoculum de yaourt, de bifidobactéries ou de Lactobacil- lus, ce quel que soit le temps d'incubation (0, 4, 7 ou heures). 2 - Mesures de l'accumulation de nitrite par des cultures de bactéries propioniques - Analyse de l'inhibition de l'enzyme NO synthase Des cultures de bactéries propioniques (1 g de lyo- philisat pour 100 ml de milieu YEL) ont été mises en con- tact de différentes concentrations de N-méthyl-L-arginine qui est un inhibiteur connu de l'enzyme NO synthase. Ces essais ont été mis en oeuvre dans les condi- tions suivantes: * incubation à 30'C pendant 24, 48 ou 72 heures, * 5 concentrations d'inhibiteur, * 3 répétitions pour l'incubation de 24 heures, * arrêt de l'incubation par ébullition, * purification du produit par centrifugation et passage de l'extrait sur résine C18, * dosage des nitrites dans le milieu par analyse sur sys- tème Bran-Luebbe. Dans un premier temps, on a dosé les nitrites accu- mulés par les bactéries propioniques en l'absence d'inhibiteur afin d'établir une cinétique d'accumulation des nitrites en fonction du temps d'incubation des bacté- ries sur milieu YEL. La figure 3 représente, d'une part, les variations de la quantité de nitrite produite (en gg/g de bactéries) en fonction du temps d'incubation (en heures) ( maximale à 24 heures puis diminue ensuite de façon signifi- cative après 48 et 72 heures d'incubation. On peut raisonnablement penser que cette chute ré- sulte de la réduction du nitrite en ammonium par la nitrite réductase à une période o les substrats azotés nécessaires à la croissance bactérienne sont de moins en moins abon- dants, comme le prouve la courbe de turbidité. Ces essais sont bien de nature à prouver que des cultures de bactéries propioniques sur milieu YEL permet- tent d'obtenir une accumulation de nitrite dans le milieu. Pour vérifier que cette accumulation de nitrite ré- sulte de la production de NO par voie enzymatique, on a mis en oeuvre des essais similaires pour différents temps d'incubation, et en ajoutant différentes concentrations d'inhibiteur N-méthyl-L-arginine avant chaque incubation. Les tableaux I, Il et III indiquent les effets de différentes concentrations de N-méthyl-L-arginine sur la production de nitrite et la croissance bactérienne (turbidité estimée par absorbante à 650 nm, respectivement pour des durées d'incubation de 24 heures, 48 heures et 72 heures). Dans le cas du tableau I, chaque valeur est la moyenne l'écart type pour les trois mesures. TABLEAU I Incubation 24 heures N-méthyl -2 -1 L arginine O 1.10 1.10 1 3 6 L arginine en (mM) Nitrite (NO2_) (ieg/g bact.) 62 + 2,6 61 + 2,9 69 + 7,6 59 + 2,8 63 + 3 23 (g/g bact.) Inhibition 63 % en % de 0 mM Turbidité ET OT*T OT'T 0 t- PITA1Pl-N seaneq EL uoTqeqnouI 8c'i úS'T O'T 86S'T úúI' (T-,zOS9SEV> pqTpTqanl % 9L %rL _N 0 ap % Ua uox. TqT. qui 9 (. qorq S/571) O) 9 TT, STN (NU) ue C T OT'T OT'T 0 T- TX RU-N Saneq 89, uOT. qTDnI I' l nv4'i'r CF,i Les valeurs de la turbidité prouvent que la crois- sance bactérienne n'est pas affectée significativement par l'apport d'inhibiteur, quelle que soit la concentration mise en oeuvre et le temps d'incubation. En revanche, l'effet de l'inhibiteur sur l'accumulation de nitrite est évident quel que soit le temps d'incubation. Cependant, pour une concentration don- née, cette inhibition est d'autant plus forte que le temps de culture est élevé: ainsi, l'inhibition la plus élevée est obtenue avec 6 mM de N-méthyl L-arginine pour 24 h de culture (tableau I) et seulement 1 mM et 100 gM pour 48 h de culture (tableau II) et 72 h de culture (tableau III) respectivement. On peut expliquer cet effet, en considérant d'une part que l'on est en présence d'une inhibition de type com- pétitif (l'inhibiteur étant un analogue structural du subs- trat) et d'autre part que la concentration en substrat diminue progressivement puisqu'utilisée par les bactéries. En conclusion, ces effets suggèrent fortement que l'accumulation de nitrite observée résulte de l'activité NO synthase, c'est-à-dire de la production de monoxyde d'azote par voie enzymatique. Compte tenu de ces observations, l'invention se rapporte également à une composition diététique ou médicamen- teuse absorbable, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une préparation déshydratée renfermant une quantité importante de préférence plus de 10 cellules/g, de souches de bactéries propioniques sélectionnées en fonction de leur capacité à déga- ger du monoxyde d'azote à raison d'au moins environ 50 gg/g de bactéries. Conformément à l'invention, on a en effet pu prou- ver que l'accumulation de NO dépend des espèces ou souches de bactéries propioniques mises en oeuvre. Cette situation a été vérifiée par les essais résu- més ci-dessous: 3 - Comparaison des accumulations de nitrite dans le milieu de culture dans le cas de 9 souches de 4 espèces différentes de bactéries propioniques Conformément à cet essai, on a étudié les souches P20, P23, 2408, 2410, 2500 et 2501 de l'espèce P.freudenreichii et les souches TL221, TL223 et TL207 ap- partenant respectivement aux espèces P. thoenii, P.acidipropionici et P.jensenii. Il est à noter que les souches TL (technologie lai- tière) sont des souches appartenant à 'INRA, tandis que la souche P23 a été enregistrée à la Collection Nationale des Cultures de Microorganismes (CNCM) de l'Institut pasteur sous le numéro 1-1804 en date du 18.12.96. Les différentes souches de bactéries propioniques (1 g de lyophilisat ou 5 ml de culture fraîche) ont été cultivées sur 100 ml de milieu YEL selon les conditions suivantes: * incubation à 30 C pendant 12, 24, 36 ou 48 heures, * 3 répétitions, * arrêt de l'incubation par ébullition, * purification du produit par centrifugation et passage de l'extrait sur résine C18, * accumulation de nitrite dans le milieu, mesurée par ana- lyse sur système Bran-Luebbe, * estimation de la fermentation de chaque culture mesurée par lecture de l'absorbance à 650 nm. Les résultats obtenus pour chaque souche sont ras- semblés sur la figure 4. Celle-ci représente, dans chaque cas, les varia- tions de l'accumulation de nitrite (El) et de la turbidité du milieu de culture (O) en fonction de la durée d'incubation. Chaque valeur correspond à la moyenne l'écart type de la moyenne pour n = 3. Il convient de noter que les échelles d'accumulation du nitrite sont 25 fois plus grandes dans le cas des souches P23 et TL223. Ces résultats prouvent que la croissance bacté- rienne, estimée d'après l'évolution de la turbidité du mi- Il lieu de culture, est proche pour l'ensemble des souches étudiées, atteignant environ 2 à 2,5 DO après 48 heures d'incubation, à l'exception de la souche TL221 pour laquelle la turbidité n'atteint que 0,6 DO après 2 jours. En revanche, il existe des différences hautement significatives quant à l'accumulation de nitrite en fonc- tion du temps. En effet, les souches 2500, 2408, P20, 2501, 2410, TL207 et TL221 accumulent une quantité relativement peu im- portante de nitrite, le maximum (0,1 gg de NO2 /ml) étant atteint respectivement après 36, 12, 36, 12, 12, 24 et 24 heures d'incubation. A l'opposé, une accumulation beaucoup plus forte de nitrite a été obtenue avec des souches P23 et TL223 qui ac- cumulent, au maximum, 1,8 lg de NO2 /ml après, respective- ment, 36 et 24 heures d'incubation. Il est à noter que la souche de bactéries propioni- ques analysée dans le second essai susmentionné (figure 3; tableaux I, II et III) avait une position intermédiaire avec une accumulation maximale de NO2, d'environ 0,5 gg/ml. Ces essais ont donc permis de constater qu'il existe des différences significatives entre les quantités de nitrite pouvant être produites par différentes souches de bactéries propioniques de quatre espèces différentes, ces différences étant indépendantes de la croissance de ces souches. Ces résultats ont pu être confirmés par l'étude pour chaque souche de l'évolution de la concentration en nitrite du milieu de culture en fonction de sa turbidité et donc approximativement de la croissance bactérienne. Les résultats de ces derniers essais sont rapportés sur la figure 5 sur laquelle chaque valeur correspond à la moyenne l'écart type de la moyenne pour n = 3. Compte tenu de ces résultats, l'invention se rap- porte également à une composition diététique ou médicamen- teuse absorbable du type susmentionné, caractérisée en ce qu'elle renferme des bactéries propioniques appartenant à la souche P23 de l'espèce P.freudenreichii. L'invention concerne également une composition dié- tétique ou médicamenteuse absorbable de ce type, caractéri- sée en ce qu'elle renferme des bactéries propioniques appartenant à la souche TL223 de l'espèce P. acidipropionici. Les essais susmentionnés ont été de nature à éta- blir que, parmi les souches étudiées, la souche TL223 est la plus fortement accumulatrice de nitrite. Cette souche a donc été retenue dans le cadre d'un essai complémentaire portant sur la mesure directe de la production de monoxyde d'azote. 4 - Mesure de la production de NO par la souche TL223 sous at- mosphère d'hélium Conformément à ces essais, les cultures ont été réalisées dans des tubes de 10 ml contenant 5 ml de milieu YEL et 0,25 ml de culture fraîche de la souche TL223. L'atmosphère des tubes a été immédiatement évacuée par un flux d'hélium (100 ml/min.) pendant 100 secondes. L'accumulation de NO dans l'atmosphère des tubes a ensuite été mesurée au cours du temps dans les conditions suivantes: * incubation à 30 C pendant 24, 48 ou 72 heures, * 4 répétitions, * mesure de l'accumulation de NO par analyse en spectromé- trie de masse, * estimation de la fermentation de chaque culture mesurée par lecture de l'absorbance à 650 nm. Lors d'un essai préliminaire, le système purifica- tion de gaz (Roboprep G+) - spectromètre de masse (Twenty- Twenty) a été calibré par des quantités croissantes de mo- noxyde d'azote. Ce gaz a été généré à partir de NaNO2 en présence d'une solution de KI et H2SO4. L'identification et la quantification du monoxyde 14 16 d'azote ont été réalisées par sa masse: 30 pour N 0 et 16 14 17 31 pour N O et N O. Cette identification a ensuite été confirmée par la mesure du rapport isotopique: 16 14 17 14 16 31/30 = [1 N O60 + N O]/ N O. Il est à noter que le rap- port isotopique théorique 31/30 du NO est de 0,00367 en 1.7 l'absence de contamination par 1' o. Les résultats de cet essai préliminaire sont rap- portés sur la figure 6 sur laquelle la partie gauche (A) correspond à la courbe d'étalonnage du spectromètre de masse utilisé pour la quantification du monoxyde d'azote tandis que la partie droite (B) correspond à la mesure du rapport isotopique 31/30. Les résultats proprement dits de cet essai sont rapportés sur la figure 7. Plus précisément, la figure 7A représente les va- riations de l'accumulation de NO dans l'atmosphère des tu- bes en fonction de la turbidité du milieu tandis que la figure 7B représente les variations de cette accumulation en fonction du temps d'incubation. Les barres verticales ou horizontales indiquent, lorsqu'elles sont plus larges que le symbole, l'écart type de la moyenne pour n = 4. Une comparaison de la figure 7B (qui représente l'évolution au cours du temps de la turbidité du milieu de culture sous hélium) avec la figure 4 (qui représente cette même évolution à l'air) montre que la croissance de la sou- che TL223 n'est pas affectée significativement par une at- mosphère constituée essentiellement d'hélium. On a également pu établir que la vitesse d'accumulation du monoxyde d'azote dans l'atmosphère est constante durant environ les 45 premières heures d'incubation, puis s'infléchit ensuite (figure 7B), ce qui correspond à une turbidité proche de 1,5 DO (figure 7A). Après environ 65 heures d'incubation (turbidité su- périeure à 1,7 DO), environ 1,5;g de NO sont accumulés dans l'atmosphère d'hélium pour 1 ml du milieu de culture. On peut supposer que ce chiffre et les dosages de NO pourraient être légèrement sous-estimés en raison d'une contamination faible mais constante par l'oxygène de l'air lors de l'analyse en spectrométrie de masse (oxydation du monoxyde d'azote en nitrite). L'ordre de grandeur obtenu est néanmoins compatible avec les teneurs en nitrite mesurées dans le milieu pour des cultures au contact de l'air (essai n 2). Dans ce dernier cas, on avait en effet pu constater (figure 5) que la souche TL223 accumulait au maximum 1,8 mg de NO2 /ml pour une turbidité de 1,5 DO, ce qui correspond à environ 1,2 yg de NO/ml. Ces résultats semblent prouver que la procédure utilisée (atmosphère d'hélium) ne bloque pas totalement la transformation du NO en nitrite au sein du milieu. On au- rait, en effet, pu s'attendre à ce que la quantité de NO retrouvée dans l'atmosphère d'hélium (phénomène cumulatif) soit très largement supérieure à la quantité de nitrite ac- cumulée dans le milieu (phénomène transitoire). Néanmoins, les valeurs obtenues pour le dégagement * de monoxyde d'azote en atmosphère aérobie doivent être con- sidérées comme significatives. Il est à noter que, conformément à une autre carac- téristique de l'invention, il peut être avantageux d'ajouter un supplément d'arginine ou d'un produit riche en arginine à la composition conforme à l'invention. Selon une autre caractéristique de l'invention, cette composition peut également renfermer d'autres bactéries telles que des bifidobactéries et/ou des bactéries lactiques. Les avantages associés à l'ingestion de bactéries propioniques ont, en outre, été vérifiés par des investigations réalisées in vivo chez l'homme sain. - Etude de l'effet de l'ingestion de bactéries propioniques sur le transit intestinal chez l'homme sain Cette étude a été réalisée en milieu hospitalier au CHU de Caen sur une série de 19 sujets masculins volontai- res sains. Au début de ce test, on a fait absorber quotidien- nement à chaque volontaire 10 marqueurs radio opaques, ce pendant 8 jours consécutifs, conformément au protocole dé- crit dans les publications Arhan P, Devroede G, Jehannin B et coll. Dis Colon Rectum 1981; 24:625-9. et Bouchoucha M, Devroede G. Arhan P et coll. Dis Colon Rectum 1992; :773-82. Selon ce protocole, l'étude du transit est effec- tuée par comptage des marqueurs radio opaques ingérés dans les différentes aires de la cavité abdominale répartis sur un cliché d'abdomen de face. Ces aires (côlon droit, côlon gauche et rectosigmoide) sont définies par des lignes fic- iême tives joignant la 5 vertèbre lombaire au contour de la cavité pelvienne. Le temps de transit est calculé selon la formule T = 1/N. n. At; N étant égal à 10 marqueurs, n représentant le nombre de marqueurs comptés dans une région et At étant égal à 24 heures. Le jour suivant cette ingestion, c'est-à-dire le ième 9 jour, on a fait subir aux volontaires une radiogra- phie de l'abdomen de face sans préparation. A partir du jour suivant, c'est-à-dire du i me jour, on a fait ingérer quotidiennement à chaque vo- lontaire, ce pendant 2 semaines, une gélule contenant 10 bactéries propioniques issues d'une banque de sou- ches utilisées dans l'industrie fromagère, donc parfaite- ment inoffensives pour l'homme. Une seconde étude du temps de transit similaire à la première a été effectuée durant la seconde semaine d'ingestion des propioniques, c'est-à-dire du 17i au 26 ième jour. Cette étude a révélé un ralentissement significatif du temps de transit du côlon gauche (p Test.); les temps de transit du colon droit et du recto- sigmoïde n'ont pas été significativement modifiés par l'ingestion des propioniques. Cette étude a donc permis de prouver que l'inges- tion de bactéries propioniques a une influence sur la mo- tricité intestinale; on peut supposer que ces résultats sont liés à la synthèse de monoxyde d'azote par les bacté- ries propioniques. R E V E ND I C A T IONS 1 ) Utilisation de bactéries propioniques pour l'obtention d'une composition diététique ou médicamenteuse absorbable sus- ceptible de dégager des quantités importantes de monoxyde5 d'azote dans l'intestin humain. 2 ) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition diététique ou médicamenteuse absorbable est10 constituée par une préparation déshydratée. 3 ) Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que la composition se présente sous forme de fractions individuel- les renfermant la dose de bactéries devant être absorbée quoti- diennement. 4 ) Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que chaque fraction individuelle renferme plus de 10 bactéries. ) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition diététique ou médicamenteuse absorbable est constituée par une préparation liquide fermentée. 6 ) Composition diététique ou médicamenteuse absorbable, caractérisée en ce qu' elle est constituée par une préparation déshydratée renfermant une quantité importante de préférence plus de 10 cellules/g de souches de bactéries propioniques sélectionnées en fonction de leur capacité à dégager du monoxyde d'azote à raison d'au moins au moins 50 gg/g de bactéries. 7 ) Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce qu' elle renferme des bactéries propioniques appartenant à la sou- che TL223 de l'espèce P.acidipropionici. 8 ) Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce qu' elle renferme des bactéries propioniques appartenant à la sou- che P23 de l'espèce P. freudenreichii.5 9 ) Composition selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisée en ce qu' elle renferme en outre un supplément d'arginine ou d'un produit10 riche en arginine. ) Composition selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, caractérisée en ce qu' elle renferme en outre d'autres bactéries telles que des bifi- dobactéries et/ou des bactéries lactiques