Brevet FR2764304A1 — publié le 19981211

NOUVELLE CLASSE D'AGENTS TRANSFECTANTS CATIONIQUES DES ACIDES NUCLEIQUES La présente invention se rapporte à une nouvelle classe d'agents transfectants cationiques, à des compositions pharmaceutiques les contenant, leurs applications pour la transfection in vivo et/ou in vitro d'acides nucléiques et des procédés de préparation. Les Biotechnologies permettent actuellement de transférer des acides nucléiques dans les cellules. L'efficacité de ces transferts apparaît nécéssaire pour la correction de défauts d'expression et/ou d'expression anormale d'acides nucléiques impliqués dans de nombreuses maladies génétiques. Cependant, l'intérêt des tranferts d'acides nucléiques ne se limite pas à la thérapie génique. En outre, ce dernier peut être utile pour l'étude de la régulation de l'expression de gènes, le clonage de gènes, pour toute autre manipulation in vitro impliquant les acides nucléiques aussi bien que pour la production de protéines recombinantes. Il peut également s'agir du transfert d'acides nucléiques in vivo, par exemple pour l'obtention d'animaux transgéniques, la réalisation de vaccins, des études de marquage de molécules. Par ailleurs, le transfert d'acide nucléique peut être réalisé dans des cellules ex vivo, dans des approches de greffes de moelle osseuse, d'immunothérapie ou d'autres méthodes impliquant le transfert de gènes dans des cellules prélévées d'un organisme en vue d'être réadministrées ultérieurement. Aujourd'hui, plusieurs méthodes sont proposées pour la délivrance intracellulaire de ce type d'information génétique. L'une d'entre elles, en particulier, repose sur l'emploi de vecteurs chimiques ou biochimiques. Les vecteurs synthétiques ont deux fonctions principales, complexer 1' ADN à transfecter et promouvoir sa fixation cellulaire ainsi que son passage à travers la membrane plasmique et, le cas échéant, à travers les deux membranes nucléaires. Parmi les vecteurs synthétiques développés, les polymères cationiques de type polylysine et DEAE dextran ou encore les lipofectants sont les plus avantageux. Un progrès important a été accompli dans ce mode de transfection avec le développement d'une technologie basée sur l'emploi d'agents de transfection cationiques de type lipofectants et plus précisément de lipides cationiques. Il a ainsi été mis en évidence qu'un lipide cationique chargé positivement, le chlorure de N-[1(2,3-dioleyloxy)propyl] -N,N ,N-triméthylammonium (DOTMA), interférait, sous la forme de liposomes ou de petites vésicules, spontanément avec de l'ADN, qui est chargé négativement, pour former des complexes lipides-ADN, capables de fusionner avec les membranes cellulaires, et permettait ainsi la délivrance intracellulaire de l'ADN. Depuis le DOTMA, d'autres lipides cationiques ont été développés sur ce modèle de structure : groupe lipophile associé à un groupement amino via un bras dit "spacer". Parmi ceux-ci, on peut plus particulièrement citer ceux comprenant à titre de groupement lipophile deux acides gras ou un dérivé du cholestérol, et comportant, en outre, le cas échéant, à titre de groupement amino, un groupement d'ammonium quaternaire. Les DOTAP, DOBT ou le ChOTB peuvent notamment être cités à titre représentatifs de cette catégorie de lipides cationiques. D'autres composés, comme les DOSC et ChOSC, se caractérisent par la présence d'un groupement choline à la place du groupement d'ammonium quaternaire. Une autre catégorie de lipofectants, les lipopolyamines, a également été décrite. De manière générale, il s'agit d'une molécule amphiphile comprenant au moins une région hydrophile polyamine associée par une région dite spacer à une région lipophile. La région polyamine des lipopolyamines, chargée cationiquement, est capable de s'associer de manière réversible avec l'acide nucléique, chargé négativement. Cette interaction compacte fortement l'acide nucléique. La région lipophile rend cette interaction ionique insensible au milieu externe, en recouvrant la particule nucléolipidique formée d'une pellicule lipidique.Dans ce type de composés, le groupement cationique peut être représenté par le radical L-Scarboxyspermine qui contient quatre groupements d'ammonium, deux primaires et deux secondaires. Les DOGS et DPPES en font notamment partie. Ces lipopolyamines sont tout particulièrement efficaces pour la transfection de cellules endocrines primaires. A titre représentatif de cette dernière famille de composés on peut plus particulièrement faire état des lipopolyamines décrites notamment dans les demandes de brevet WO96/17823 et PCT/FR96/017774. Toutefois, l'efficacité de ces vecteurs synthétiques reste à améliorer notamment en matière de densité de charge et de rigidité de la molécule transfectante. En effet, il est admis que l'activité de ces produits dépend de la densité de charge qu'ils font intervenir. Cependant, l'augmentation des charges sur des chaînes aliphatiques est à l'origine de l'apparition de la toxicité. Une stabilisation de la densité de charge des chaînes aliphatiques préviendrait l'apparition de facteurs toxiques. De plus, l'efficacité de la transfection serait accrue par une augmentation de la densité de charge dans une région autre que les chaines aliphatiques. Par ailleurs, le flexibilité de la molécule utilisée pour le transfert d'un acide nucléique peut être un obstacle à une interaction suffisamment étroite entre le dit acide nucléique et l'agent transfectant, empêchant d'obtenir un compactage optimal de la molécule d'acide nucléique, condition préalablement nécéssaire à toute transfection. Une rigidité accrue de la molécule d'agent tranfectant asssurerait une interaction plus efficace avec l'acide nucléique, améliorant ainsi la transfection. Ainsi, il serait particulièrement intéressant de disposer d'agents tranfectants présentant un haut pouvoir transfectant et possédant une toxicité reduite ou nulle. La présente invention a précisément pour objectif de proposer une classe d'agents transfectants de concept nouveau au niveau de la région hydrophile cationique. La présente invention est relative à une molécule d'agent transfectant comprenant au moins une région hydrophile cationique associée à une région lipophile, la dite region cationique étant constituée d'un hétérocycle à 5 ou 6 atomes contenant des groupements aminés. La région hydrophile chargée cationiquement est capable de s'associer de manière reversible à un acide nucléique, chargé négativemenent. Cette interaction compacte fortement l'acide nucléique. En outre, la structure originale de la partie cationique confère à la molécule une rigidité accrue. La région hydrophile cationique des molécules de l'invention est plus particulièrement représentée par la formule générale (I): dans laquelle: y, indépendamment l'un de l'autre, est un nombre entier égal à 0 ou 1, X représente un atome d'oxygène, d'azote, de soufre ou de selenium, les groupements Z représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène, un groupement OR dans lequel R est représenté par un atome d'hydrogène, un groupement méthyl, ou un groupement (CH2) n ~ N R1R2 dans lequel n est un nombre entier compris entre 1 et 6 et préférentiellement entre 2 et 4 inclus; R1 et R2 représentent indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement (CH2)q - NH2 q pouvant varier entre 1, 2, 3, 4, 5, 6 de manière indépendante entre Rl et R2; un groupement (CH2)m-N R,R2, dans lequel m est un nombre entier compris entre 0 et 6 et R, et R2 étant définis tel que précédemment, ou un groupement espaceur permettant la liaison de la région hydrophile cationique à la région lipidique, étant entendu que l'un au moins des groupements Z porte une fonction amine. Dans un mode de réalisation préféré, les agents transfectants selon l'invention comportent une région hydrophile cationique de formule générale (I) dans laquelle X représente avantageusement un atome d'oxygène. La partie cationique est ainsi constituée d'un glycoside de forme pyranose ou furanose. La forme pyranose est particulièrement intéressante et a été décrite de manière non limitative dans les exemples. De manière préférée, les agents transfectants de la présente invention comprennent une région hydrophile cationique de formule générale (I) composée d'un glycoside aminé, dans lequel y est égal à 1, X est un atome d'oxygène et au moins un des groupements Z comporte une fonction amine. Encore plus préférentiellement, au moins deux des groupements Z comportent une fonction aminée. Selon un mode préféré, la région hydrophile cationique est composée d'un glycoside aminé de formule (I), dans lequel y est égal à 1, X est un atome d'oxygène, deux des groupements Z sont des atomes d'hydrogène, deux groupements Z sont des groupements azotés et préférentiellement des groupements NH2 et le dernier groupement Z comporte un groupement OR, R étant défini tel que précédement. De manière préférée, le groupement OR est placé en position 1 sur l'hetérocycle composant la région hydrophile cationique des agents transfectants. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, la région hydrophile cationique est composée d'un glycoside aminé, dans lequel y est égal à 1, X est un atome d'oxygène, au moins deux groupements Z correspondent à des groupements O- (CH2)2-NH2 et au moins un des groupements Z comporte un groupement OR, R étant défini tel que précédement. A titre représentatif d'intermédiaires utiles pour la synthèse de molécules selon l'invention, on peut citer plus particulièrement les composés (5) et (14) dont les formules sont respectivement les suivantes: De manière générale, les agents transfectants au sens de la présente invention comportent au moins une région lipophile associée à la région hydrophile cationique telle que définie ci-dessus. Les molécules de la region lipophile convenant à l'invention peuvent être choisies parmi toutes molécules lipophiles connues de l'Homme de métier. Avantageusement, la région lipophile est représentée par une chaine aliphatique saturée ou non, halogénée ou non, linéaire ou ramifiée de préférence en C10 à C22, ou par un composé stéroidien de type cholestérol, acide cholique.... De manière préférée, la région lipophile cationique est composée d'au moins une chaine aliphatique en C13 à C18 et encore plus préférentiellement en C18, ou une chaîne stéroïdienne. Selon un mode préféré, la région hydrophile cationique est associée à la région lipophile par une molécule intermédaire dite spacer. Selon l'invention la région spacer peut être décrite de manière descriptive mais non limitative comme un groupement acide ou aminé comportant des fonctions hydrolysables, connus de l'homme du métier. De manière préférée, la région spacer comporte une chaine aliphatique ou aromatique. Préférentiellement, la région spacer est choisie parmi les groupements amide, carbamate, ester, éther ou cycles aromatiques. A titre représentatif d'agents transfectants selon l'invention, on peut citer plus particulièrement les composés (16), (8a) et (8b) dont les formules sont respectivement les suivantes: La présente invention vise également un procédé de préparation d'une nouvelle classe de composés utilisables dans la transfection d'acides nucléiques, caractérisé en ce que l'agent transfectant comporte en outre une chaine lipophile mono- ou multicaténaire et aussi une région cationique comportant un hétérocycle à 5 ou 6 atomes. Plus précisément, elle se rapporte à un procédé de préparation des dits agents tranfectants à partir d'un hétérocycle couplé à une fonction aminée auxquels est adjoint une region lipidique par l'intermédiaire de la région spacer, préalablement incorporé à l'hétérocycle. Le premier mode de réalisation de l'invention a donné lieu à une première série de composés obtenus à partir du methyl-benzyloxy-6-galactopyranoside (1) trialkoxylé par l'action du bromoacétate d'éthyle en présence de potasse et d'éther couronne. I1 convient de signaler que le produit obtenu est le triacide (2) et non le triester comme on pouvait s'y attendre. La réduction sélective des fonctions acides par le borane-dimethyl sulfure ou l'hydrure de lithium aluminium conduit au dérivé triol (3). L'azidation des fonctions alcooliques par l'action de l'acide hydrazoique en présence de triphényl phosphine et de diethyl-azodicarboxylate donne le triazide correspondant (4). La réduction de ces groupes s'effectue en présence de l'hydrure de lithium aluminium et les fonctions amines obtenues sont protégées sous forme de ter-butyloxycarbamates par l'action du di-ter-butyl dicarbonate en présence d'une base. L'hydrogènolyse du groupement benzyl en présence d'hydrogène et de palladium sur carbone (10tu) permet de libérer la fonction alcoolique en -6. Ce même produit peut également être obtenu en deux étapes par la réduction et l'hydrogènolyse simultanée des groupes azides et benzyl (5), suivie du blocage sélectif des amines par des terbutyloxy-carbamates (6). Le branchement de la chaîne grasse va s'effectuer sur cette position. Une amine grasse telle que la dioctadecylamine préalablement transformée en monophtalate ou monosuccinate par les anhydrides correspondants peut ensuite être condensée sur cette fonction hydroxyle par une réaction de déshydratation catalysée (Bop, Pybop, DCC, etc...), (8a; 8b). Un second mode de réalisation de l'invention procure une deuxième série de composés diffèrents de la première par la position relative des amines sur le sucre et leur nombre. Un glycal tel que le triacetyl glucal (9) est alxylé dans une réaction de Ferrier par le phtalimido-propanol-3 pour donner le glycoside (10) insaturé correspondant. Celui-ci est hydrogéné en présence de Palladium sur carbone (11) puis désacétylé par le méthylate de sodium dilué (12). Le diol ainsi obtenu est transformé en diazide (13) par l'action de l'acide hydrazoique en présence de diéthyl azodicarboxylate et de triphényle phosphine. L'hydrazinolyse du groupement protecteur phtalimide libère la fonction amine de l'aglycone. Ce produit (14) va être ensuite utilisé pour la condensation avec différentes chaînes grasses avant d'être réduit en diamine ce qui donnera le produit final (16). L'intérêt de cette nouvelle série réside principalement dans le peu d'étapes nécessaires à la synthèse et dans la versatilité du synthon aminé obtenu. Une même tête cationique peut ainsi être condensée avec différents substituants hydrophobes. La présente invention a également pour objet l'utilisation des composés décrits ci-avant pour le tranfert d'acide nucléique dans les cellules. Avantageusement, ces agents transfectants augmentent l'efficacité de la transfection avec une toxicité cellulaire nulle ou très reduite aux doses de vecteur décrits dans les exemples. En outre, les résultats obtenus nous montrent que la transfection in vitro est efficace lorsque l'ADN est exprimé dans un rapport de 0,1 à 50 nanomoles de vecteur par g d'ADN. Avantageusement, le rapport se situe entre 2 et 20 nanomoles de vecteur par Crg d'ADN et de manière préférée entre 4 et 12 nanomoles de vecteur par ,ug d'ADN. Préférentiellement, l'efficacité de la transfection in vitro est optimale pour un rapport de 8 à 12 nanomoles de vecteur par tg d'ADN. De manière très avantageuse, les agents transfectants selon la présente invention sont utilisables dans des applications thérapeutiques soit directement soit contenus dans des compositions pharmaceutiques. Dans les compositions de la présente invention, l'acide nucléique complexé avec l'agent transfectant cationique peut être aussi bien un acide désoxyribonucléique qu'un acide ribonucléique. Il peut s'agir de séquences d'origine naturelle ou artificielle, et notamment d'ADN génomique, d'ADNc, d'ARNm, d'ARNt, d'ARNr, de séquences hybrides ou de séquences synthétiques ou semi-synthétiques d'oligonucléotides modifiés ou non. Ces acides nucléiques peuvent être d'origine humaine, animale, végétale, bactérienne, virale, etc. Ils peuvent être obtenus par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par criblage de banques, par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques. Ils peuvent être modifiés chimiquement. Concernant plus particulièrement les acides désoxyribonucléiques, ils peuvent être simple ou double brin de même que des oligonuléotides courts ou des séquences plus longues. En particulier, les acides nucléiques sont avantageusement constitués par des plasmides, vecteurs, épisomes, cassettes d'expression, etc.... Ces acides désoxyribonucléiques peuvent porter des gènes thérapeutiques, des séquences régulatrices de la transcription ou de la réplication, des séquences antisens modifiées ou non, des régions de liaison à d'autres composants cellulaires, etc. Au sens de l'invention, on entend par gène thérapeutique notamment tout gène codant pour un produit protéique ayant un effet thérapeutique. Le produit protéique ainsi codé peut être une protéine, un peptide, etc. Ce produit protéique peut être homologue vis-à-vis de la cellule cible (c'est-à-dire un produit qui est normalement exprimé dans la cellule cible lorsque celle-ci ne présente aucune pathologie). Dans ce cas, l'expression d'une protéine permet par exemple de pallier une expression insuffisante dans la cellule ou l'expression d'une protéine inactive ou faiblement active en raison d'une modification, ou encore de surexprimer ladite protéine. Le gène thérapeutique peut aussi coder pour un mutant d'une protéine cellulaire, ayant une stabilité accrue, une activité modifiée, etc. Le produit protéique peut également être hétérologue vis-à-vis de la cellule cible. Dans ce cas, une protéine exprimée peut par exemple compléter ou apporter une activité déficiente dans la cellule, lui permettant de lutter contre une pathologie, ou stimuler une réponse immunitaire. Parmi les produits thérapeutiques au sens de la présente invention, on peut citer plus particulièrement les enzymes, les dérivés sanguins, les hormones, les lymphokines : interleukines, interférons, TNF, etc (FR 9203120), les facteurs de croissance, les neurotransmetteurs ou leurs précurseurs ou enzymes de synthèse, les facteurs trophiques : BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, HARP/pléiotrophine, etc la dystrophine ou une minidystrophine (FR 9111947), la protéine CFTR associée à la mucoviscidose, les gènes suppresseurs de tumeurs : p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev, etc (FR 93 04745), les gènes codant pour des facteurs impliqués dans la coagulation: Facteurs VII, VIII, IX, les gènes intervenant dans la réparation de l'ADN, les gènes suicides (thymidine kinase, cytosine déaminase), les gènes de l'hémoglobine ou d'autres transporteurs protéiques, les gènes correspondant aux protéines impliquées dans le métabolisme des lipides, de type apolipoprotéine choisie parmi les apolipoprotéines A-I, A-II, A-IV, B, C-I, C-II, C-III, D, E, F, G, H, J et apo(a), les enzymes du métabolisme comme par exemple la lipoprotéine lipase, la lipase hépatique, la lécithine cholestérol acyltransférase, la 7 alpha cholestérol hydroxylase, la phosphatidique acide phosphatase, ou encore des protéines de transfert de lipides comme la protéine de transfert des esters de cholesterol et la protéine de transfert des phospholipides, une protéine de liaisons des HDL ou encore un récepteur choisi par exemple parmi les récepteurs LDL, récepteurs des chylomicrons-remnants et les récepteurs scavenger.etc. L'acide nucléique thérapeutique peut également être un gène ou une séquence antisens, dont l'expression dans la cellule cible permet de contrôler l'expression de gènes ou la transcription d'ARNm cellulaires. De telles séquences peuvent, par exemple, être transcrites dans la cellule cible en ARN complémentaires d'ARNm cellulaires et bloquer ainsi leur traduction en protéine, selon la technique décrite dans le brevet EP 140 308. Les gènes thérapeutiques comprenent également les séquences codant pour des ribozymes, qui sont capables de détruire sélectivement des ARN cibles (EP 321 201). Comme indiqué plus haut, l'acide nucléique peut également comporter un ou plusieurs gènes codant pour un peptide antigénique, capable de générer chez l'homme ou l'animal une réponse immunitaire. Dans ce mode particulier de mise en oeuvre, l'invention permet donc la réalisation soit de vaccins soit de traitements immunothérapeutiques appliqués à l'homme ou à l'animal, notamment contre des microorganismes, des virus ou des cancers. Il peut s'agir notamment de peptides antigéniques spécifiques du virus d'Epstein Barr, du virus HIV, du virus de l'hépatite B (EP 185 573), du virus de la pseudo-rage, du "syncitia forming virus", d'autres virus ou encore spécifiques de tumeurs (EP 259 212). Préférentiellement, l'acide nucléique comprend également des séquences permettant l'expression du gène thérapeutique et/ou du gène codant pour le peptide antigénique dans la cellule ou l'organe désiré. Il peut s'agir des séquences qui sont naturellement responsables de l'expression du gène considéré lorsque ces séquences sont susceptibles de fonctionner dans la cellule infectée. Il peut également s'agir de séquences d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Notamment, il peut s'agir de séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus. A cet égard, on peut citer par exemple les promoteurs des gènes E1A, MLP, CMV, RSV, etc. En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, etc. Il peut aussi s'agir de promoteur, inductible ou répressible. Par ailleurs, l'acide nucléique peut également comporter, en particulier en amont du gène thérapeutique, une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé dans les voies de sécrétion de la cellule cible. Cette séquence signal peut être la séquence signal naturelle du produit thérapeutique, mais il peut également s'agir de toute autre séquence signal fonctionnelle, ou d'une séquence signal artificielle. L'acide nucléique peut également comporter une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé vers un compartiment particulier de la cellule. Dans un autre mode de mise en oeuvre, les compositions revendiquées peuvent comprendre en outre un adjuvant de type dioleoylphosphatidyléthanolamine (DOPE), l'oléoyl-palmitoylphos-phatidyléthanolamine (POPE), les di-stéaroyl, palmitoyl, -mirystoyl phosphatidyléthanolamines ainsi que leurs dérivé N-méthylés 1 à 3 fois; les phosphatidylglycérols, les diacylglycérols, les glycosyldiacylglycérols, les cérébrosides (tels que notamment les galactocérébrosides), les sphingolipides (tels que notamment les sphingomyélines) ou encore les asialogangliosides (tels que notamment les asialoGM1 et GM2). Très récemment, la demanderesse a démontré qu'il était également particulièrement avantageux d'employer à titre d'adjuvant dans des compositions transfectantes, un composé intervenant, directement ou non, au niveau de la condensation d"acides nucléiques. Ce composé est constitué, en tout ou partie, de motifs peptidiques (KTPKKAKKP) et/ou (ATPAKKAA), le nombre des motifs pouvant varier entre 2 et 10. Un tel agent peut également dériver d'une partie d'une histone, d'une nucléoline, d'une protamine et/ou de l'un de leurs dérivés. (W096/25508). Un tel composé peut être avantageusement incorporé dans la composition revendiquée. Les compositions selon l'invention peuvent également mettre en oeuvre un ou plusieurs éléments de ciblage permettant de diriger les complexes nucléiques vers des recepteurs ou des ligands à la surface de la cellules. A titre d'exemple, la composition de la présente invention peut comprendre un ou plusieurs anticorps dirigés contre des molécules de la surface cellulaire, ou encore un ou plusieurs ligands de recepteurs membranaires comme l'insuline, la transferrine, l'acide folique ou tout autre facteur de croissance, cytokines ou vitamines. Avantageusement, la composition peut utiliser des lectines, modifiées ou non, afin de cibler des polysaccharides particuliers à la surface de la cellule ou sur la matrice extracellulaire avoisinante. Des protéines à motif RGD, des peptides contenant un tandem de motifs RGD, cyclique ou non, ainsi que des peptides polylysine peuvent ainsi être utilisés. Plus récemment, il a également été décrit des peptides ligands, naturels ou synthétiques, intéressants notamment pour leur sélectivité vis à vis de cellules spécifiques et capables de promouvoir efficacement l'internalisation au niveau de ces cellules. (Bary et al. Nature Medicine, 2, 1996, 299-305). Ces agents de ciblages sont généralement conjugués à l'agent transfectant cationique considéré. Les compositions selon l'invention peuvent être formulées en vue d'administrations par voie topique, cutanée, orale, rectale, vaginale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intraoculaire, transdermique, etc. De préférence, les compositions pharmaceutiques de l'invention contiennent un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable, notamment pour une injection directe au niveau de l'organe désiré, ou pour une administration par voie topique (sur peau et/ou muqueuse). Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables. Les doses d'acide nucléique utilisées pour l'injection ainsi que le nombre d'administrations peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée, du gène à exprimer, ou encore de la durée du traitement recherchée. En ce qui concerne plus particulièrement le mode d'administration, il peut s'agir soit d'une injection directe dans les tissus ou les voies circulatoires, soit d'un traitement de cellules en culture suivi de leur réimplantation in vivo, par injection ou greffe. La présente invention fournit des méthodes particulièrement intéressantes sur le plan thérapeutique comprenant l'administration in vivo et/ou in vitro d'un acide nucléique, capable de corriger une maladie, associé à un agent transfectant tel que décrit précédemment. En particulier, le traitement de maladies résultant d'une déficience en produit protéique ou nucléique est envisagé. Par la présente invention, qui permet une meilleure transfection d'acide nucléique au niveau cellulaire, l'acide nucléique administré codant pour le produit protéique ou contenant l'acide nucléique compensera les déficiences observées. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples et figures qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Liste des heures: Figurel: Synthèse des composés (1) à (5) Figure 2:. Synthèse des composés (6) à (8a) et (8b) Figure 3: Synthèse des composés (9) à (16) Figure 4: Mesure de l'efficacité de la transfection in vitro dans les cellules Hela (4a) et NIH 3T3 (4b) suivant des quantités de vecteur / > g d'ADN variables. MATERIELS et METHODES Les purifications sur HPLC ont été effectuées avec un appareil Waters LC 4000, sur une colonne Vydac C4 éluée par un gradient d'acétonitrile dans l'eau. - Les mesures de fluorescence sont réalisées sur Perkin Elmer LS50B, en utilisant des longueurs d'onde d'excitation et d'émission respectivement de 260 nm et 590 nm. Les largeurs de fentes pour l'excitation et l'émission sont réglées à 5 nm. La valeur de fluorescence est enregistrée après ajout de 5 g de Bromure d'étidium/ml en concentration finale. - Les spectres de résonance magnétique nucléaire sont enregistrés, à 300,13 MHz pour le proton ou à 75,47 MHz pour le carbone, sur un appareil Bruker MSL 300 dans le chloroforme deutérié. EXEMPLE 1: Synthèse du composé 8 (a) à partir du methyl-benzyloxy-6galactopyranose. a > Synthèse du Méthyl-benzyloxy-6-tri-O-(carboxy-2'-eth -2,3,4-ss-D- galactopyranoside (2) Du methyl-benzyloxy-6-b-D-galactopyranoside (1) ( CAS-RN: 67393-10-6); (28,4g; 0,1mol) est dissous dans le THF (400mL) et placé à OOC sous agitation, on ajoute de la potasse finement broyée (32g; 5,7 eq), de l'ether couronne 18-Cr-6 (0,5g; 2%) et du bromo acétate d'éthyle (32,5mL; 1,5 eq -OH). Apr b) Synthèse du Méthyl-benzyloxy-6-tri-O-(hydroxy-2 '-éthyle) -2,3 ,4-frD galactopyranoside (3) Le triacide précédent (2) (30g; 0,065mol) est dissous dans le THF (400mL) et placé à 0 C sous azote. On ajoute goutte à goutte tout en agitant du borane-dimethyle sulfure (40mL). On laisse encore deux heures à température ambiante puis ajoute avec précautions un excès de méthanol. On concentre et reprend plusieurs fois dans le méthanol. Le produit final (3) est purifié sur colonne de silice éluée par l'acétate d'éthyle (24,5g; 90tu). c) Synthèse du Méthyl-benzyloxy-6-tri-O- (azido-2'-ethyle) -2,3,4-FD-galacto- pyranoside (4) Le triol (3) (20g; 0,048 mol) est dissous dans du THF (500mL), on ajoute de la triphenyle phosphine (40g; 3,2eq) et une solution d'acide hydrazoique dans le toluène (1,1M; 160mL; 3,7eq), puis du diéthyle azodicarboxylate (24,2mL; 3,2eq). Après une heure la solution est évaporée et purifiée sur une colonne de silicagel éluée par heptane/acétate d'éthyle (6:4). Le rendement du produit (4) obtenu est de 17,6g; 90% Rmnft: 6, 128,47; 127,80; 98,23; 79,05; 76,27; 73,55; 71,92; 70,15; 69,95; 68,77; 68,14; 55,37; 51,41; 51,11; 50,87. d) Synthèse du Méthyl-tri-O- (amino-2'-ethyle) -2,3,4- I3-D-galactopyranoside, tris chlorhydrate (5) Le triazide (4) (15g; 0,03mol) est mis en solution dans l'éthanol (200mL), on ajoute de l'acide chlorhydrique ( 12N; 7,5mL) puis on traite par l'hydrogène en présence de palladium sur carbone pendant 3 heures. Après filtration le solvant est évaporé et le résidu (5) obtenu (12,6g; 95%) est utilisé directement dans l'étape suivante. e) Synthèse du Méthyl-tri-O- Le chlorhydrate (5) ( 12g; 0,028mol) est mis en solution dans un mélange de dioxanne (100mL) et d'hydroxide de sodium (1N; 85mL), on ajoute du di tert butyl dicarbonate (18,7g; 3,3eq) et agite à température ambiante pendant deux heures. Le milieu réactionnel est concentré puis extrait par du dichlorométhane (3 x 50mL). Les phases organiques sont combinées puis séchées sur sulfate de sodium et évaporées. Le résidu (6) est purifié sur colonne de silicagel élué par de l'acétate d'éthyle (15,56g; 90%). f) Synthèse du Méthyl-dioctadecylamido-succinyl-6-tri-O- Le produit précédent (6) (long; 0,016mol) est dissous dans le dichlorométhane (300mL), on ajoute successivement de l'acide dioctadecylamido succinique (14,6g; 1,5eq), de la dimethyl amino pyridine (1,95g; leq) et de la dicyclohexyle carbodiimide (6,5g; 2eq). l'acide dioctadecylamido succinique est obtenu par réaction de la dioctadécyle amine et de l'anhydride succinique. Après une nuit on ajoute avec précaution une solution d'acide oxalique dans le méthanol (1,7g; îOmL) et laisse agir une heure (dégagement de CO). On filtre la solution, concentre et purifie sur colonne de silicagel éluée par de l'heptane/acétate d'éthyle (7:3). Rendement: 12,8g; 65% g) Synthèse du Méthyl-dioctadecylamido-succinyl-6-tri-O-(amino-2'-ethyle)- 2,3,4-ss-D-galactopyranoside, tris trifluoroacétate (8a) Le produit (7a) (long; 0,008mol) est dissous dans de l'acide trifluoroacétique à 90% (20mL). Après une demi-heure on concentre et reprend par du toluène (3 x 20 mL). Le résidu (8a) est purifié par HPLC (RP4; eau/acétonitrile; 0- > 100 o; 20min). Le rendement est de 9,7g; 95%. Masse 1304 (nospectre RP 145598) EXEMPLE 2: Synthèse du composé 8 (b) à partir du methyl-benzyloxy-6galactopyranose. Les premières phases de synthèse sont identiques à celles décrites dans l'exemple 1 a) à e) f) Synthèse du Méthyl-dioctadecylamido-phtalyl-6-tri-O-(tert butyl-carbamido2' -ethyle) - 2,3,4- ss-D-galactopyranoside (7b) Ce produit est obtenu de la même manière que le produit (7a) mais en utilisant l'acide dioctadecylamido phtalique. g) Synthèse du Méthyl-dioctadecylamido-phtalyl-6-tri-O-(amino-2'-ethyle)-2,3,4 ss-D-galactopyranoside, tris trifluoroacétate (8b) Ce produit est obtenu à partir de (7b) de la même manière que le produit (8a). Masse: 1317 (nO spectre RP: 144231) EXEMPLE 3: Synthèse du composé 16 à partir du triacétyl glucal a) Synthèse du Phtalimidopropyl-di-O-acetyl-4,6-bisdesoxy-2,3-b- D-erythro-hexeno-2-pyranoside. (10) Le triacetyl-D-glucal (9) (13,17g; 0,048 mol) est dissous dans du dichlorométhane (250mL), on ajoute le phtalimidopropanol (ils; 1,1eq) et de l'etherate de trifluorure de bore (1,56mL; 0,26eq). Après une heure à température ambiante on neutralise par une solution saturée de bicarbonate de sodium, décante, sèche et concentre. On purifie le produit (10) ainsi obtenu par chromatographie sur colonne de silicagel éluée par de l'heptane/acétate d'éthyle (5:5). Rendement: 16g; 80% b) Synthèse du Phtalimidopropyl- di-O-acetyl- 4,6-bisdesoxy-2,3- FDglucopyranoside (11) Le glycoside (10) (16g; 0,038mol) est dissous dans l'ethanol (200mL), on ajoute du palladium à 10% sur carbone (0,16g) et traite par l'hydrogène pendant deux heures. Après filtration la solution est concentrée (15,78g; 99nô). c) Synthèse du Phtalimidopropyl- bisdesoxy-2,3- FD-glucopyranoside (12) Le produit précédent (11) (15g; 0,036mol) est dissous dans le méthanol (250mL) on ajoute du méthylate de sodium (1N; 3,5mL; O,leq). Après deux heures on neutralise par de la résine amberlite IR120, le produit (12) est filtré et concentré (11,5g; 96%). d) Synthèse du Phtalimidopropyl- diazido-4,6-tetra-desoxy-2,3,4,6- ss-D- glucopyranoside (13) Le produit désacetylé (12) (ils; 0,033mol) est dissous dans le THF (250mL), on ajoute successivement de la triphenyle phosphine (21,5g; 2,5eq), de l'acide hydrazoique (1,li; toluène; 110,5mL; 3,7eq) en agitant. Le diethyl azodicarboxylate (12,88mL; 2,5eq) est ajouté à une vitesse telle que la température ne dépasse pas 30"C. Après une heure la solution est concentrée et le produit (13) est purifié sur colonne de silicagel éluée par de l'heptane/acétate d'éthyle (8:2). Rendement: 7,2g; 57% e) Synthèse de l'Aminopropyl- diazido-4,6-tetra-desoxy-2,3 ,4,6- ss-D- glucopyranoside (14) Le produit (13) (7g; 0,018mol) est dissous dans l'éthanol (5OOmL), on ajoute de l'hydrate d'hydrazine (2,6mL) et agite à 40"C pendant deux heures. Après évaporation on reprend par le dichlorométhane et laisse cristalliser le phtalyl hydrazide qui s'est formé. On filtre et concentre pour obtenir le produit (4,17g; 90%). fl Synthèse du (Cholesteryl-O-formamidopropyl)-diazido-4,6-tetra-desoxy2,3,4,6-ss-D-glucopyranoside (15) Le cholesteryl chloroformiate (6,34g; 0,9eq) et le produit (14) (4g; 0,016mol) sont mis en solution dans de l'ether éthylique (200mL). Un précipité se forme aussitôt, on ajoute alors de la soude (1N; 50mL). Après quelques minutes la solution redevient limpide, on laisse encore 30 minutes sous agitation, décante, lave à l'eau (2 x 50mL) et concentre. Le produit (15) est purifié sur colonne éluée par de l'heptane/acétate d'éthyle (6:4). Rendement: 9,4g; 90%. g) Synthèse du (Cholestelyl-O-formamidopropyl)-diamino-4,6-tetra-desoxy. 2,3,4,6-*D-glucopyranoside (16) Le diazide (15) (9g; 0,013mol) est dissous dans du THF à 80% (150mL), on ajoute de la triphenyle phosphine (14,2g; 4eq) et chauffe à 500C pendant une heure. Après refroidissement on porte sur une colonne de résine anionique IRC-50 COOH et lave avec du THF à 80%. Le produit est ensuite élué sous forme d'acétate par le mélange THF/eau/acide acétique (64:16:10). Le rendement pour le produit (16) est de : 8,9g; 90%. Rmn 13C 6, 176,55; 156,65; 139,84; 132,02; 128,46; 125,46; 122,44; 97,11; 74,28; 56,66; 56,12; 50,02; 43,70; 42,30; 39,51; 38,57; 36,98; 36,55; 36,16; 35,76; 31,87; 30,30; 29,89; 28,18; 23,82; 22,78; 22,53; 21,03; 19,31; 18,70; 11,84. EXEMPLE 4: Association des agents transfectants de l'invention 8 (a) et 8 (b) avec I'ADN. La nature de l'association entre les agents transfectants de l'invention et l'ADN ainsi que la formation d'un complexe ont été étudiées. Les agents transfectants selon l'invention ont été mis en solution dans l'eau à 10 mM. Les solutions ainsi obtenues sont transparentes et correspondent vraisemblablement à une organisation sous forme de micelles de lipide cationique. Les complexes agent tranfectant/ADN ont été réalisés suivant un rapport de 6 nmoles d'agent/microgramme ADN. L'association de l'agent tranfectant 8 (b) avec l'ADN procure un complexe de taille égale à 92 nm ± 27 et une fluorescence de 7 Go dans l'eau et de 60 % dans le NaCl 300 mM. L'agent transfectant de l'invention 8 (a), associé avec l'ADN permet la formation d'un complexe de taille voisine de 98 nm ± 20 et une fluorescence de 6% dans l'eau et 55 % dans le NaCl 300 mM. Ces résultats montrent que les agents transfectants selon l'invention sont capables de s'associer avec de l'ADN et de former des particules dont le diamètre moyen est environ de 100 nm. Cette association est relativement stable à l'augmentation de la force ionique. En effet, à 300 mM encore plus de 50 % de l'ADN est associé avec les agents tranfectant de l'invention. EXEMPLE 5: Transfection d'ADN in vitro avec les agents transfectants de l'invention 8(a) et 8(b) L'efficacité de la transfection est recherchée in vitro à différentes doses de vecteurs/g d'ADN. Le matériel génétique utilisé pour ces expériences est une construction de plasmide pCMV-Luc comportant le gène rapporteur luciférase , dérivée du plasmide pGL2basic Vector [Promega] par insertion d'un fragment Mlu I-Hind III contenant le promoteur du Cytomegalovirus humain (CMV) extrait du plasmide pcDNA3 [Invitrogen]. Des solutions d'acide nucléique diluées à 40 llg/ml dans du sérum physiologique (NaCI 0,15M) ont également été utilisées. Les produits décrits dans l'invention sont mis en solution dans l'eau à concentration variant de 80 à 800 > M et mélangés volume à volume avec la solution d'ADN ; la concentration saline finale est de 75 mM afin de préparer extemporanément des solutions cytofectantes. Pour la transfection, les cellules sont cultivées dans les conditions appropriées en microplaques de 24 puits (2 cm2/puits) et sont transfectées alors qu'elles sont en phase exponentielle de croissance et à 50-70 % de la confluence. Les cellules sont lavées par 2 fois 500 Fl de milieu dépourvu de protéines sériques et remise en croissance en milieu sans sérum ; 50 Fl de mélange cytofectant [1llg ADN/puits] sont ajoutés aux cellules [3 puits/condition vecteur-DNA]. Le milieu de croissance est supplémenté par la quantité appropriée de sérum 2 heures après la transfection. L'efficacité de transfection est évaluée à 48 heures post-transfection par une mesure de l'expression de la luciférase selon les recommandations données pour l'utilisation du kit Promega [Luciferase Assay System]. La toxicité des mélanges cytofectants est estimée par une mesure des concentrations protéiques dans les lysats cellulaires. Les résultats obtenus, décrits dans la figure 4, nous montrent que la transfection est efficace lorsque l'ADN est exprimé dans un rapport de 0,1 à 50 nanomoles de vecteur par \Lg d'ADN avec les cellules HeLa et NIH 3T3. Avantageusement, le rapport se situe entre 2 et 20 nanomoles de vecteur par g d'ADN. Les résultats présentés montre que pour les deux types cellulaires utilisés, le rapport est de manière préférée entre 4 et 12 nanomoles de vecteur par ,ug d'ADN. Encore plus préférentiellement, l'efficacité de la transfection obtenue est optimale pour un rapport de 8 à 12 nanomoles de vecteur par g d'ADN avec des cellules HeLa et NIH 3T3. Les histogrammes rendant compte de l'effet dose des vecteurs sont superposables pour les produits 8(a) et 8(b) quel que soit le type cellulaire considéré. Les deux produits de l'invention sont non toxiques aux doses de vecteur étudiées pour les cellules NIH 3T3 et nous n'observons qu'une perte maximum de 20% des protéines cellulaires pour des doses 2 à 8 nanomoles de vecteur par échantillon de cellules transfectées. REVENDICATIONS 1. Agent transfectant comprenant au moins une région lipophile et une région hydrophile cationique caractérisé en ce que la région hydrophile cationique est formée par au moins un hétérocycle à 5 ou 6 atomes contenant des groupements aminés. 2. Agent transfectant selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend une région hydrophile cationique de formule générale: dans laquelle, y, indépendamment l'un de l'autre, est un nombre entier égal à 0 ou 1, X représente un atome d'oxygène, d'azote, de soufre ou de selenium, les groupements Z représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène, un groupement OR dans lequel R est représenté par un atome d'hydrogène, un groupement méthyl, ou un groupement (CH2) n - N R1R2 dans lequel n est un nombre entier compris entre 1 et 6 inclus; R1 et R2 représentent indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement (CH2) q - NH2 q pouvant varier entre 1, 2, 3, 4, 5, 6 de manière indépendante entre Rl et R2; un groupement (CH2) ,-N R,R2, dans lequel m est un nombre entier compris entre 0 et 6 et Rl et R2 étant définis tel que précédemment, ou un groupement spacer permettant la liaison de la région hydrophile cationique à la région lipidique, étant entendu que l'un au moins des groupements Z porte une fonction amine. 3. Agent transfectant selon la revendication 2 caractérisé en ce que, dans le groupement (CH2) , - N R1R2, n est un nombre entier compris entre 2 et 4 inclus. 4. Agent transfectant selon la revendication 2 caractérisé en ce que la région hydrophile cationique est composée préférentiellement d'un glycoside aminé. 5. Agent transfectant selon la revendication 2 caractérisé en ce que X est préférentiellement un atome d'oxygène et y est égal au nombre entier 1. 6. Agent transfectant selon la revendication 2 caractérisé en ce que la région hydrophile cationique est composée d'un glycoside aminé, dans lequel y est égal à 1, X est un atome d'oxygène et au moins un des groupements Z comporte une fonction amine. 7. Agent transfectant selon la revendication 6 caractérisé en ce que au moins deux des groupements Z comportent une fonction aminée. 8. Agent transfectant selon la revendication 6 caractérisé en ce que deux des groupements Z sont des atomes d'hydrogène, deux groupements Z sont des groupements azotés et préférentiellement des groupements NH2 et le dernier groupement Z comporte un groupement OR, R étant défini comme dans la revendication 2. 9. Agent transfectant selon la revendication 8 caractérisé en ce que le groupement OR est placé préférentiellement en position 1 sur l'hetérocycle composant la région hydrophile cationique. 10. Agent transfectant selon la revendication 6 caractérisé en ce que au moins deux groupements Z correspondent à des groupements O- (CH2) 2-NH2 et au moins un des groupements Z comporte un groupement OR, R étant défini comme dans la revendication 2. 11. Agent transfectant selon la revendication 1 caractérisé en ce que la région lipophile est représentée par une chaine aliphatique saturée ou non, halogénée ou non, linéaire ou ramifiée, de préférence en C10 à C22, ou par un composé stéroidien de type cholestérol ou acide cholique. 12. Agent transfectant selon la revendication 11 caractérisé en ce que la région lipophile est représentée par une chaine aliphatique saturée ou non, halogénée ou non, linéaire ou ramifiée de préférence en C13 à C18. 13. Agent transfectant selon la revendication 12 caractérisé en ce que la région lipophile est représentée par une chaine aliphatique saturée ou non, halogénée ou non, linéaire ou ramifiée en C18. 14. Agent transfectant selon la revendication 1 caractérisée en ce que la région lipophile est reliée à la région hydrophile cationique par un spacer représenté par un groupe acide ou aminé comportant des fonctions hydrolysables. 15. Agent transfectant selon la revendication 14 caractérisée en ce que le spacer comporte une chaine aliphatique ou aromatique. 16. Agent transfectant selon la revendication 14 caractérisé en ce que le spacer est choisi parmi les amides, les esters, les ethers, les carbamates et les cycles aromatiques. 17. Agent transfectant selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il est représenté par l'un des composés (16), (8a) ou (8b) dont les formules sont les suivantes: 18. Agent transfectant selon la revendication 17 caractérisé en ce que le dit agent est obtenu à l'aide de l'un des intermédiaires (5) et (14) dont les formules sont les suivantes: 19. Procédé de préparation d'un agent transfectant selon les revendications 1 à 18 caractérisé en ce qu'il met en oeuvre le couplage de la région lipophile et de l'hétérocycle après avoir fixé la partie spacer sur le dit hétérocycle. 20. Utilisation d'un agent transfectant selon la revendication 1 pour le transfert d'acide nucléique dans les cellules in vitro. 21. Utilisation selon la revendication 20 caractérisé en ce que le rapport agent/acide nucléique est compris entre 0,1 et 50 nanomoles d'agent par pg d'ADN. 22. Utilisation selon la revendication 20 caractérisé en ce que le rapport agent/acide nucléique est compris entre 2 et 20 nanomoles d'agent par \i% d'ADN. 23. Utilisation selon la revendication 20 caractérisé en ce que le rapport agent/acide nucléique est compris entre 4 et 12 nanomoles d'agent par \i% d'ADN. 24. Utilisation de l'agent transfectant selon la revendication 20 caractérisé en ce que le rapport agent/acide nucléique est compris entre 8 et 12 nanomoles d'agent par llg d'ADN. 25. Composition caractérisée en ce qu'elle comprend un agent transfectant selon la revendication 1 et au moins un acide nucléique. 26. Composition selon la revendication 25 caractérisé en ce que l'acide nucléique est un acide desoxyribonucléique. 27. Composition selon la revendication 25 caractérisé en ce que l'acide nucléique est un acide ribonucléique. 28. Composition selon la revendication 25 caractérisée en ce que l'acide nucléique est chimiquement modifié. 29. Composition selon la revendication 25 caractérisée en ce que l'acide nucléique est choisi parmi les plasmides, les vecteurs, les épisomes et les cassettes d'expression. 30. Composition selon la revendication 25 caractérisée en ce que l'acide nucléique comporte un gène thérapeutique.