Brevet FR2767132A1 — publié le 19990212

La présente invention concerne de nouveaux composés de bis pyrido [4,3- b] carbazole, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. Les composés de la présente invention trouvent leur utilisation en thérapeutique grâce à leur activité antitumorale. Certains dérivés de la famille de l'olivacine ou de l'ellipticine sont déjà connus pour leurs propriétés anticancéreuses, cf la demande de brevet EP O 591 058 A1. Les besoins de la thérapeutique exigent le développement constant de nouveaux agents anticancéreux dans le but d'obtenir des molécules à la fois plus actives et plus spécifiques. La présente invention concerne des dérivés de l'olivacine ou de l'ellipticine, présentant par rapport aux composés les plus proches de l'art antérieur, une originalité structurale (puisque deux groupes, olivacine ou ellipticine identiques sont reliés par leur position 9 grâce à un enchaînement alkyl dicarboxy), qui s'accompagne d'une excellente activité antitumorale notamment dans le cas des tumeurs solides résistantes. La présente invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule I: CH3 O \"I O CH N-B-NH-C o 0 o R X/-B-NHR. R2 i'l l R2 Ri C-NH-B-N () CH3 NO-C-A-C-OH XN CH3 N NN N N N C3C3CH3 CH3 CH CH dans laquelle: RI et R2, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical méthyle; 2 2767132 A représente une chaîne hydrocarbonée, saturée, linéaire ou ramifiée contenant de 1 à 12 atomes de carbone pouvant éventuellement inclure un cycle hydrocarboné de 3 à 6 atomes de carbone; A peut également représenter un cycle hydrocarboné de 3 à 6 atomes de carbone; et B représente une chaîne hydrocarbonée, linéaire ou ramifiée, contenant de 1 à 8 atomes de carbone; ainsi que leurs éventuels isomères optiques, N oxydes et sels d'addition à un acide pharmaceutiquement acceptable. L'invention a également pour objet le procédé de préparation des composés de formule I 1O caractérisé en ce que l'on estérifie un composé de formule II: O CH3 o o Il Il I i R2 Ri C-NH-B-N HO-C-A-C-O N CH3 N CH 3 NN %.LN CH3 CH3 dans laquelle: RI, R2, A et B ont les significations précédemment définies, avec un composé de formule mII: O CH3 R2 R C-NH-B-N HO N CH3 N CH3 CH3 dans laquelle: RI, R2 et B ont les significations précédemment définies. Il est particulièrement avantageux de faire réagir les composés de formule II avec les composés de formule II en présence d'un agent de couplage tel que l'hexafluorophosphate de benzotriazol-1-yloxy tris pyrrolidino phosphonium et d'une amine tertiaire telle que la 3 2767132 triéthylamine dans un solvant aprotique polaire tel que le tétrahydrofurane, le diméthyl formamide ou la N-méthylpyrrolidone à une température comprise entre 0 et 80 C. Les composés II utilisés comme matières premières sont décrits dans la demande de brevet FR déposée sous le n 9616165. Les composés II utilisés comme matières premières sont décrits dans la demande de brevet EP 0 591 058 Ai ou dans la demande de brevet FR déposée sous le n 9616166. Les dérivés de formule I donnent des sels avec des acides physiologiquement tolérables, sels qui sont à ce titre inclus dans la présente invention. Certains dérivés de formule I renferment un ou plusieurs carbones asymétriques et de ce fait, donnent des énantiomères ou des diastéréoisomères qui font également partie de la présente invention. Les dérivés de la présente invention présentent des propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes, notamment une excellente cytotoxicité in vitro et une activité antitumorale in vivo supérieure à celle des produits de l'état antérieur de la technique, ce qui, permet leur utilisation en thérapeutique en tant qu'agents antitumoraux, particulièrement pour traiter les tumeurs solides résistantes. La présente invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif au moins un composé de la présente invention mélangé ou associé à un ou plusieurs excipients pharmaceutiques ou véhicules inertes non toxiques. Ces compositions pharmaceutiques sont généralement présentées sous forme dosée convenant pour l'administration par voie orale, rectale ou parentérale et notamment les comprimés, dragées, gélules, suppositoires et solutions injectables ou buvables. La posologie varie selon l'âge et le poids du patient, la voie d'administration, la nature de l'indication thérapeutique et les traitements éventuellement associés et s'échelonne entre 0,1 et 400 mg par jour en une ou plusieurs administrations. 4 2767132 Les exemples suivants illustrent la présente invention, les points de fusion étant déterminés au tube capillaire. La silice utilisée pour les purifications par chromatographie sur colonne est la silice Amicon (0,035-0,07 mm). La pression utilisée est 105 Pa. Exemple 1 Le Bis-[1-(2-diméthylaminoéthylcarbamoyl)-5,6,11-triméthyl-6H-pyrido [4, 3-b] carbazol -9- yl] ester de l'acide hexanedioique. CH 3 O il OCH3 O o N- (CH",)2'iNH', /CH 0 0i N (CH,-NH-C CH,3 l il CHI C-NH-(CH,),-N CH3 N O-C-(CH2)4-C- _ _ _ \CH3 N N CH3 CH3 CH3 CH3 On dissous 2,6 g de [1-(2-diméthylaminoéthylcarbamoyl)-5,6,11-triméthyl6H-pyrido [4,3-b] carbazol-9-yl] monoester de l'acide héxanedioïque, 2 g d'acide 9-hydroxy5,6,11-triméthyl- 6H-pyrido [4,3-b] carbazole- 1 -carboxylique (2-diméthylaminoéthyl)amide, 1,23 g de triéthylamine et 3,19 g d'hexafluorophosphate de benzotriazol- 1 -yloxy tris pyrrolidinophosphonium dans 40 ml de N- méthylpyrrolidone. On agite pendant 24 heures à température ambiante. On concentre à sec. On reprend le résidu dans un mélange de dichlorométhane, de solution aqueuse de carbonate de sodium et d'une quantité minimum de méthanol pour dissoudre l'insoluble. On décante, sèche la phase organique sur sulfate de sodium et concentre à sec. On chromatographie le résidu sur 280 g de silice en éluant avec un mélange de dichlorométhane, de méthanol et de triéthylamine (95-5-0,5). On concentre à sec les fractions contenant le produit et on lave le résidu à l'éthanol. On sèche à 40 C sous vide et obtient 1,6 g de produit souhaité. PF: 220-225 C. Exemples 2 à 4 En opérant comme décrit dans l'exemple 1, ont été préparés les composés objets des exemples suivants: 2) Le Bis [1-(2diméthylaminoéthylcarbamoyl)-5,6-diméthyl-6H-pyrido [4,3-b] carbazol-9yl] ester de l'acide hexanediolque. PF: 250-254 C. 2767132 3) Le Bis [1-(2-diméthylaminoéthylcarbamoyl)-5,6-diméthyl-6H-pyrido [4,3b] carbazol-9-yl] ester de l'acide octanediolque (gomme épaisse). 4) Le Bis [1-(2-diméthylaminoéthylcarbamoyl)-5,6,10-triméthyl-6H-pyrido [4,3-b] carbazol- 9-yl] ester de l'acide hexanedioique. PF: 260-265 C. s Exemple 5: Etude pharmacolo2ique A/ Etude de cytotoxicité Trois lignées cellulaires ont été utilisées - i leucémie murine L 1210, - 1 mélanome murin, B 16 - 1 carcinome pulmonaire humain, A 549. Les cellules sont cultivées dans du milieu de culture RPMI 1640 complet contenant 10 % de sérum de veau foetal, 2 mM de glutamine, 50 unités/ml de pénicilline, 50 fig/ml de streptomycine et 10 mM d'Hepes, pH = 7,4. Les cellules sont réparties dans des microplaques et exposées aux composés cytotoxiques. Les cellules sont ensuite incubées pendant 2 jours (L 1210) ou 4 jours (A 549, B 16). Le nombre de cellules viables est ensuite quantifié par un essai colorimétrique, le Microculture Tetrazolium Assay (Carmnichael J., DeGraff W.G., Gazdar A.F., Minna J.D. and Mitchell J.R., Evaluation of a tetrazolium-based semiautomated colorimetric assay: assessment of chemosensitivity testing, Cancer Res., 47, 936-942, 1987). Les résultats sont exprimés en IC50, concentration en cytotoxique qui inhibe à 50 % la prolifération des cellules traitées. Les résultats obtenus sur les lignées utilisées sont rassemblés dans le tableau ci-après. A titre d'exemple sont répertoriés ci-après les résultats obtenus avec le composé de l'exemple I particulièrement représentatif de l'invention et deux produits de référence: 6 2767132 le produit de référence A étant le composé objet de l'exemple I dans la demande de brevet EP 0 591 058 Ai, soit le 1-(N,N-diméthylaminoéthylaminocarbamoyl)-5,6diméthyl-9- hydroxy-6H-pyrido[4,3-b]carbazole, et le produit de référence B étant l'Adriamycine (ADR). Cytotoxicité Composés IC50so (nM) testés L 1210 B 16 A 549 Exemple I 73,5 3,0 17, 6 Référence A 7,8 5,1 30,5 Référence B 24,3 6,8 39,4 La cytotoxicité du produit de l'exemple 1 de la présente invention est plus élevé sur les lignées B 16 et A 549 que sur la lignée L 1210, ce qui indique une meilleure activité in vitro pour les tumeurs solides. Sur ces deux lignées (B 16 et A 549), le produit de l'exemple 1 de la présente invention est plus cytotoxique que les produits de référence A et B. B/ Activité in vivo: Activité antitumorale La lignée P 388 (leucémie murine) a été fournie par le National Cancer Institute (Frederick, USA). Les cellules tumorales (106 cellules) ont été inoculées au jour 0 dans la cavité péritonéale de souris BDF1 femelles (Iffa-Credo, France) pesant de 18 à 20 g (groupes de 6 ou 7 animaux). Les produits ont été administrés au jour I ou aux jours 1, 5, 9 aux doses indiquées, par voie intraveineuse. L'activité antitumorale est exprimée en % de T/C: Temps de survie médian des animaux traités x 100 %T/C= x 100 Temps de survie médian des animaux contrôles Les animaux survivants à 60 jours (survivants à long terme) sont indiqués. 7 2767132 La lignée B 16 (mélanome murin) a été fournie par le National Cancer Institute (Frederick, USA). Cette tumeur est maintenue par greffes successives de fragments tumoraux en sous cutané. Au jour 0, les tumeurs sont broyées et homogénéisées dans du NaCI à 0,9 % (1 g de tumeur dans 10 ml) et 0,5 ml de l'homogénat sont injectés dans la cavité péritonéale de chaque souris BDF1. Les produits ont été administrés aux doses indiquées, 1 fois par jour pendant 9 jours (J -9) par voie intra-péritonéale. L'activité antitumorale est exprimée en % de T/C, comme défini ci-dessus. Les animaux survivants à 90 jours (survivants à long terme) sont indiqués. Résultats Le produit de l'exemple 1 de la présente invention est plus puissant et aussi actif que le produit de référence A sur le modèle de la leucémie P 388. Sur le modèle du mélanome B 16, le produit de l'exemple 1 de la présente demande est très actif, il induit 3 survivants à long terme à la dose optimale, alors que le produit de référence A n'en induit aucun. Le produit de l'exemple 1 de la présente demande est donc très intéressant contre les tumeurs solides résistantes. Activité antitumorale in vivo Dose Survivants à long Tumeur Produit Schéma Voie optimale T/C, % terme / nb total de souris Exemple 1 J l i.v. 10 mg/kg 252 1/6 P 388 i.p J 1,5,9 i.v. 10 mg/kg > 582 3/6 Référence A J I i.v. 80 mg/kg 221 0/6 J 1,5,9 i.v. 80 mg/kg 320 2/6 B 16 i.p. Exemple 1 J 1-9 i.p. 5 mg/kg 429 3/7 Référence A J 1-9 i.p. 10 mg/kg 190 0/7 8 2767132 REVENDICATIONS 1- Les composés de formule I: CH3 O 0 CH \3 Il 0 il. N-B-NH-C R1 R2 il R2 R C-NH-B-N a / I I' 12 II II % K,, - - -,,Il I NCH' O-C-A-C-ON CH C N CHNN I I N N C CHH CH3 CH3 dans laquelle: RI et R2, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical méthyle; A représente une chaîne hydrocarbonée, saturée, linéaire ou ramifiée contenant de 1 à 12 atomes de carbone pouvant éventuellement inclure un cycle hydrocarboné de 3 à 6 atomes de carbone; A peut également représenter un cycle hydrocarboné de 3 à 6 atomes de carbone; et B représente une chaîne hydrocarbonée, linéaire ou ramifiée, contenant de 1 à 8 atomes de carbone; ainsi que leurs isomères optiques, N oxydes et sels d'addition à un acide pharmaceutiquement acceptable. 2- Un composé de la revendication I qui est le Bis-[1-(2diméthylaminoéthylcarbamoyl)- ,6,1 l-triméthyl-6H-pyrido [4,3-b] carbazol -9-yl] ester de l'acide hexanedioïque. 3- Le procédé de préparation des composés de la revendication 1 caractérisé en ce que l'on estérifie un composé de formule II: 9 2767132 0 CHI o o IIl il il R2 Ri C-NH-B-N HO-C-A-C-O U.N CH3 N N N C N CH3 CH3 dans laquelle: R1, R2, A et B ont les significations définies dans revendication 1, avec un composé de formule III: 0 CH3 R2 R, C-NH-B-N HO I I L--;,N NJ--. N ^ éCH3 CH3 dans laquelle: Ri, R2 et B ont les significations définies dans la revendication 1. 4- Les compositions pharmaceutiques, utiles comme agents antitumoraux, contenant comme principe actif au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, mélangé ou associé à un ou plusieurs excipients pharmaceutiques ou véhicules inertes non toxiques.