Brevet FR2761361A1 — publié le 19981002

La présente invention a pour objet l'identification d'un marqueur de la résistance à Sclerotinia sclerotiorum. Les plantes cultivées peuvent être attaquées par de nombreux organismes pathogènes comprenant des virus, bactéries, champignons, nématodes et plantes parasites. Les modalités d'infection et de développement de la maladie dépendent de la plante et du parasite mis en jeu. Cependant, les plantes ont développé des systèmes de résistance qui leur permettent de se défendre contre ces parasites. Généralement, on distingue deux types d'interaction entre les plantes et leurs parasites: les interactions obéissant à un modèle dit "gène-pour-gène" et les interactions o l'existence d'un système gène-pour-gène n'est pas démontrée. Le concept "gène-pour-gène" a été développé par Flor en travaillant sur la rouille du lin et postule qu'à un gène de résistance chez la plante correspond un gène d'avirulence chez le parasite (Flor, 1971). La résistance chez les plantes est généralement dominante par rapport à la sensibilité. Chez les parasites, c'est l'avirulence qui est dominante par rapport à la virulence. L'interaction entre le produit du gène de résistance et celui du gène d'avirulence conduit à une réaction rapide et localisée au site de pénétration du parasite. Cette réaction est dite réaction hypersensible (HR). Dans ce système, le déclenchement du processus de résistance est sous contrôle monogénique et un gène végétal donné confère la résistance à une race spécifique du parasite. On dit également que cette résistance est race- spécifique. Par ailleurs, il existe des interactions plantes-pathogènes o il n'y a pas de reconnaissance dépendant d'une spécificité génotype du parasite / génotype de l'hôte. Toutes les souches du parasite peuvent attaquer tous les génotypes de la plante. Dans ce cas, la résistance est généralement partielle (souvent on parle de tolérance) et surtout sous contrôle polygénique. Selon Van der Planck, cette résistance est dite "horizontale" (1968). Dans ce cas, il n'y aurait pas de gène d'avirulence chez le parasite. Depuis quelques années, de nombreux gènes de résistance ont été clones chez différentes espèces végétales. Parmi ces gènes de résistance, le gène Hml chez le maïs est particulier car il code pour une enzyme qui inactive la toxine produite par le champignon parasite Helmintosporium carbonum (Johal et Briggs, 1992). Par contre, les autres gènes de résistance ne codent pas pour des enzymes de détoxification et peuvent être classés en différentes catégories: * le gène Pto chez la tomate qui est une protéine à fonction sérine thréonine kinase (Martin et al., 1993); * les gènes contenant un motif LRR (Leucin-rich repeats) et un motif NBS (Nucleotide Binding Site), c'est le cas du gène N chez le tabac (Whitham et al., 1994), L6 chez le lin (Lawrence et al., 1995), RPS2 et RPM1 chez Arabidopsis thaliana (Bent et al., 1994; Mindrinos et al., 1994; Grant et al., 1995); * les gènes contenant un motif LRR mais pas de motif NBS, c'est le cas des gènes Cf9 et CE2 che la tomate (Jones et al., 1994; Dixon et al., 1996); * le gène Xa21 chez le riz qui contient un motif sérine thréonine kinase (comme Pto) et un motif LRR (comme Cf9) (Song et al., 1995). Il est à noter que ces gènes (hormis Hml) interviennent dans des mécanismes de résistance nécessitant la reconnaissance spécifique entre le produit du gène de résistance et le produit du gène d'avirulence chez le parasite. Jusqu'à présent, il n'a pas été établi de relation directe entre une séquence génique identifiée et une région chromosomique intervenant dans le déclenchement d'un processus de résistance sous contrôle polygénique. Le genre Sclerotinia regroupe des espèces de parasites capables d'attaquer de nombreuses espèces de plantes cultivées. En effet, seules les graminées semblent épargnées par ce parasite. Plus particulièrement, Sclerotinia sclerotiorum est l'agent de la pourriture blanche chez le tournesol. La résistance chez ce dernier est partielle et polygénique (Robert et al., 1987; Vear et Tourvieille, 1988). Cependant, Pirvu et al. (1985) ont proposé l'existence d'un gène récessif contrôlant la résistance à l'infection du capitule. Chaque organe du tournesol peut présenter un niveau de résistance différent (Castano et al., 1993). La présente invention a donc pour objet la mise en évidence et le séquençage d'un fragment génomique de plante coségrégeant avec un QTL (Quantitatif Trait Loci) majeur de résistance à Sclerotinia sclerotiorum. Tout d'abord, l'invention a pour objet deux séquences nucléotidiques correspondant à SEQ ID N 1 et SEQ ID N 2 respectivement, ainsi que leur utilisation pour la mise en évidence du susdit fragment génomique. Plus particulièrement, dans le cadre de la présente invention, l'une et/ou l'autre de ces deux séquences peut être utilisée en tant qu'amorce(s) pour la mise en oeuvre d'un procédé d'amplification en chaîne par polymérase (PCR) appliqué à de l'ADN de plante. En effet, les séquences en question constituent des amorces dégénérées dont le nombre de combinaisons de séquences possibles est tel qu'il en existe toujours au moins une dans chaque "série" d'amorces présentant une homologie suffisante (d'au moins 80 %) avec l'ADN de la plante à étudier susceptible de contenir le marqueur de la résistance à Sclerotinia sclerotioruni. L'invention concerne également le ou les fragments d'ADN obtenu(s) par la mise en oeuvre du procédé d'amplification en chaîne par polymérase ci-dessus. Dans le cadre de la présente invention, il s'est avéré qu'un fragment d'ADN ainsi obtenu présentait un intérêt tout particulier au niveau d'un site correspondant à un QTL de résistance au tournesol, ce fragment correspondant à SEQ ID N 3. Un autre objet de la présente invention est d'utiliser le susdit fragment d'ADN comme marqueur de résistance chez une plante à Sclerotinia sclerotiorum. A ce titre, le fragment d'ADN en question peut être utilisé pour la réalisation d'une hybridation moléculaire type Southern. Cette technique est tout à fait à la portée de l'homme du métier et consiste principalement à marquer le fragment d'ADN en question, par exemple radioactivement, à placer le fragment marqué au contact de l'ADN génomique de la plante préalablement digéré au moyen d'enzymes de restriction dans des conditions d'hybridation et à déterminer la présence d'une hybridation moléculaire au moyen par exemple d'une autoradiographie. L'utilisation du susdit fragment d'ADN comme marqueur de résistance à Sclerotinia sclerotiorum permet donc d'identifier des génotypes résistants dans le but d'identifier les plantes contenant l'allèle sensible ou résistant du fragment, mais également de mettre en oeuvre des programmes de sélection assistés par ledit marqueur pour introgresser la résistance à ce parasite dans des variétés sensibles. Ce type de démarche consiste en fait à croiser un matériel végétal que l'on sait résistant à Sclerotinia sclerotiorum avec un matériel végétal sensible mais présentant des qualités agronomiques recherchées, puis de sélectionner le matériel végétal issu de ce croisement à la fois présentant une résistance à Sclerotinia sclerotiorum et présentant les susdites qualités agronomiques. Ces programmes comprennent par exemple la construction de génotypes idéals et des programmes de back cross assistés par marqueurs. A partir de la séquence correspondant à SEQ ID N 3, un cadre de lecture ouvert a été identifié dont la traduction en acides aminés correspond à SEQ ID N 4. Par conséquent, la présente invention concerne également cette séquence peptidique ainsi que les séquences peptidiques présentant une homologie d'au moins 50 % avec SEQ ID N 4. En effet, une telle limite dans le degré d'homologie est tout à fait acceptable dans le cadre de la présente invention dans la mesure o sont conservées les parties de la séquence peptidique à l'origine des fonctions essentielles du peptide, comme par exemple le domaine sérine / thréonine kinase. L'invention concerne enfin les séquences nucléotidiques codant pour les séquences peptidiques ci- dessus. La présente invention sera mieux comprise à la lumière de l'exemple ci-après qui cependant n'est mentionné qu'à titre purement illustratif et ne constitue en aucune manière une limitation à l'invention. EXEMPLE I / Clonage de la séquence génique (PK) chez le tournesol a) Conditions d'amplification: Pour cloner ladite séquence, nous avons utilisé la technique PCR (Polymerase Chaine Reaction) avec des amorces dégénérées, RK1 et RK2 (SEQ ID N 1 et SEQID N 2 respectivement). Pour la réaction d'amplification, de l'ADN extrait à partir de la lignée de tournesol publique RHA266 a été utilisé dans les conditions suivantes: ADN 50 ng dNTP 200 el RK1 (10 gM) 2,5 [il RK2 (10 tM) 2,5 I1 Taq Pol (SU/!Il; Appligène France) 0,5 U H200 QSP 25 pl Dénaturation initiale 94 C pendant 5 minutes. cycles: 94 C pendant 30 secondes, C pendant 30 secondes, et 72 C pendant 1 minute 30 secondes. Après les 40 cycles, une étape d'élongation finale à 72 C pendant 10 minutes. Les produits d'amplification ont été vérifiés sur gel d'agarose selon les méthodes standard (Sambrook et al., 1989). b) Clonage et séauenca2e: Un fragment d'environ 300 pb a été cloné (Clone PK) en utilisant le kit de clonage PCRII (InVitrogen, Netherland). il a ensuite été séquence en utilisant la méthode Dye Terminator par la société Génome Express (Grenoble, France). La séquence obtenue correspond à SEQID N 3. I I / Caractéri6tiques de la séquence PK A partir de la séquence (SEQID N 3), un cadre de lecture ouvert a été identifié (ORF) dont la traduction en acides aminés donne la séquence correspondant à SEQ ID N 4. En utilisant le programme BLAST au NCBI (National Center of BioInformatique, USA) nous avons détecté des homologies avec des gènes sérine thréonine kinase d'autres plantes, notamment le gène Atlec chez Arabidopsis thaliana (Swarp et al., 1996) et AthLecRK également chez Arabidopsis thaliana (Hervé et al., 1996). III/Localisation d'un locus PK Le clone PK ainsi obtenu a été utilisé comme sonde dans des expériences d'hybridation Southern, dans les conditions suivantes a) Croisement: Un croisement entre des lignées publiques a été utilisé Croisement C1: entre la lignée SD, résistante à l'extension du mycelium et la lignée PAC1 résistante à la pénétration du champignon. 139 plantes F2 issues de ce croisement ont été étudiées. Croisement C3: entre la lignée GU sensible et la lignée PAC2 résistante. 161 plantes F2 issues de ce croisement ont été étudiées. b) Extraction. digestion et transfert de l'ADN: Quatre enzymes de restriction ont été utilisées pour digérer l'ADN des plantes F2 ainsi que celui des parents: EcoRI, EcoRV, HindIII et Bglll. L'ADN a été digéré, analysé sur gel d'agarose et transféré sur membrane de Nylon Hybond N+ (Amersham, France) selon les méthodes standard (Sambrook et al., 1989). La sonde PK a été marquée radioactivement en utilisant le kit de marquage "megaprime DNA labelling systems" (Amersham, France). c) Hybridation et rincages: Les conditions d'hybridation de la sonde PK avec l'ADN génomique et de rinçage sont celles déjà publiées (Gentzbittel et al., 1992). IV/ Localisation de PK sur la carte génétique du tournesol Nous avons utilisé le programme MAPMAKER/EXP (Lander et al., 1987) pour construire une carte génétique consensus des deux croisements avec les paramètres suivants: minimum LOD score = 3,0; maximum recombinant fraction = 0,40. Des sondes déjà localisées ont été utilisées comme ancres et la nomenclature suivie est celle de Gentzbittel et al., 1995. Un locus polymorphe a été détecté par cette sonde PK sur le groupe de liaison 1 de la carte génétique du tournesol obtenue au laboratoire (Gentzbittel et al., 1995), situé entre les loci S003H3 et S145H3-2. V/ Résistance à S. sclerotiorum: analyse QTL Les tests de résistance ont été effectués sur des plantes des générations F3 et F4 issues de deux croisements. a) Croisements utilisés C1: entre la lignée SD résistante à l'extension du parasite et la lignée PAC1 résistante à la pénétration du parasite. C2: entre la lignée CP73 sensible et la lignée PAC1 décrite ci-dessus. C3: entre la lignée GH sensible et la lignée PAC2 résistante. b) Tests de résistance Les plantes F3 et F4 ont été testées en 1994 (pour SD X PAC1) et 1995 (pour CP73 X PAC1) et dans 5 lieux différents. Plusieurs tests de résistance, correspondant à différentes formes d'attaque de S. sclerotiorum, ont été utilisés. Pour le croisement GH x PAC2, les plantes ont été testées en 1994 (génération F3) et 1995 (génération F4), dans un seul lieu, à Clermont- Ferrand. c) Test ascospores sur capitule (Tourvieille et Vear, 1984) La contamination est réalisée lorsque la face fertile du capitule présente 2 ou 3 rangs de fleurons ouverts. Environ 25 000 ascospores sont alors pulvérisées sur le capitule. Environ 3 semaines après contamination, chaque capitule est observé individuellement. Deux paramètres sont mesurés: - "l'indice de latence" qui exprime la durée de latence entre la date d'infection et la date d'apparition des premiers symptômes. Ce test permet d'estimer la résistance à l'extension du parasite, - le "pourcentage d'attaque" qui exprime le pourcentage de plantes attaquées par famille en comparaison avec des plantes témoins. Ce test permet d'estimer la résistance à la pénétration du parasite. Pour ce test ascospore sur capitule, deux répétitions ont été réalisées à Clermont-Ferrand et une répétition dans chacun des 4 autres lieux d'expérimentation. d) Test mycelium sur feuille (Castano et al., 1992) L'infection est faite fin juin-début juillet par dépôt d'une pastille de mycelium (8 mm de diamètre), à l'extrémité de la nervure principale sur deux feuilles par plante. La notation des symptômes est faite une semaine après infection. Le paramètre mesuré est la longueur de nécrose à la face inférieure du limbe qui traduit la vitesse d'extension du parasite. Les feuilles sont alors éliminées afin de permettre à la plante de poursuivre son développement normal. Ce test a été effectué sur deux répétitions de cinq plantes à Clermont-Ferrand. c) Test mycélium sur capitule (Vear et Guillaumin, 1977) Les capitules à infecter sont récoltés quand la face stérile du capitule est jaune et les bractées sont brunes (stade M2, 4 à 6 semaines après floraison). Trois implants mycéliens de 10 mm de diamètre sont déposés sur la face stérile de chaque capitule et maintenus par du papier collant. Les capitules infectés sont ensuite placés en conditions de survie, dans une chambre climatisée à 18 + 2 C (les tiges trempent dans des bacs remplis d'eau) et recouverts par des bâches en polyéthylène noir. Les notations s'effectuent 3 jours après infection en mesurant la surface des taches de pourriture apparues au niveau des sites d'infection. Le paramètre mesuré est un "indice mycélium" qui est calculé en rapportant la moyenne des surfaces des 3 taches à la moyenne des taches du témoin sensible. Ce test a été effectué sur deux répétitions de cinq plantes à Clermont-Ferrand. VI/ Analyse des résultats: La normalité et l'égalité des variances des données expérimentales ont été vérifiées et quand il a été nécessaire, ces données ont été transformées en utilisant loglO ou arcsin de la racine carrée. L'analyse QTL a été réalisée soit par une analyse de variance (ANOVA) à un facteur avec un seuil de signification de 0,001, soit par la méthode "interval-mapping" (MAPMAKER/QTL, Lincoln et al., 1992) avec un LOD score seuil de 3,0. La part de la variabilité phénotypique du caractère expliquée par la ségrégation du marqueur significatif est estimée par R2 = somme des carrés dus au facteur / somme des carrés totaux. Quand une sonde n'est pas polymorphe dans un croisement, son effet QTL est estimé en utilisant les marqueurs polymorphes les plus proches de l'intervalle o la sonde a été assignée. Les QTL ont été analysés pour les 4 tests de résistance, pour chaque essai (lieu d'expérimentation) et sur les moyennes de tous les essais. Une corrélation significative (r = 0,76) a été trouvée entre l'indice de latence et le pourcentage d'attaque. VII/ Détection de QTL, co-localisation de QTL et de PK Les méthodes d'analyse présentées ci-dessus ont permis de detecter un QTL majeur pour la résistance à S. sclerotiorum analysée par l'indice de latence et par le pourcentage d'attaque sur le groupe de liaison 1 de la carte génétique du tournesol. Il est également possible de détecter un QTL majeur pour l'indice mycélium sur feuilles, sur le groupe de liaison 1 de la carte génétique du tournesol. Figure 1: Scan montrant la colocalisation entre la sonde PK et le pic du QTL de résistance à S. sclerotiorum dans le croisement C1. Figure 2 Scan montrant la colocalisation entre la sonde PK et le pic du QTL de résistance à S. sclerotiorum dans le croisement C2. Figure 3 Scan montrant la colocalisation entre la sonde PK et le pic du QTL de résistance à S. sclerotiorum dans le croisement C3. Le QTL en question couvre la région de ce groupe englobant le locus PK. Ce dernier correspond au pic du QTL dans le croisement C1 (Figure 1); (LOD score = 5,1 pour le pourcentage d'attaque et LOD score = 5,28 pour l'indice de latence); dans ce croisement ce QTL explique 16 % de la variance phénotypique. Dans le croisement C2, l'effet QTL du locus PK a été estimé en utilisant les marqueurs voisins S003H3 et S145H3-1 (Figure 2); ce QTL explique plus de 50 % de la variance phénotypique. Dans le croisement C3, le QTL englobe également le locus PK, qui se situe approximativement au pic du QTL Dans ce croisement, le QTL explique 50 % de la variance phénotypique (LOD score = 8,5) pour la génération F4. La colocalisation, sur le groupe de liaison 1, entre le locus PK et le QTL correspondant à la résistance à S. sclerotiorum analysée par l'indice de latence et par le pourcentage d'attaque a été trouvée non seulement en utilisant la valeur moyenne de chaque caractère dans chaque croisement mais également en faisant l'analyse multi-lieux, dans trois lieux d'expérimentation sur cinq dans le croisement C1 (avec des LOD score entre 3,03 et 7,12) et dans les cinq lieux du croisement C2 (avec des LOD score entre 3,51 et 8,66). Pour le croisement C3, ce QTL apparaît dans les générations F3 (LOD score = 4,78) et F4 (cf. ci- dessus). Les tableaux rassemblent l'ensemble de ces résultats. TABLEAUX Liaison entre la sonde PK et des QTL de résistance du tournesol à Sclerotinia sclerotiorum Pourcentage d'attaque Indice de latence Groupe de C 1 C2 C3 C 1 C2 C3 liaison LOD R2 LOD R2 LOD R2 LOD R2 LOD R2 LOD R2 Sonde PK 1 5,10 15,7 [6,67] 59,6 1,80 8,9 5,28 16,4 [6,87] 52,0 1,66 6,4 o Mycelium sur feuilles Mycelium sur capitule Groupe de C 1 C2 C3 C 1 C2 C3 liaison LOD R2 LOD R2 LOD R2 LOD R2 LOD R2 LOD R2 Sonde PK 1 0,47 1,9 [0, 24] 1,3 8,48 49,9 1,38 5,4 [0,05] 0,5 0,06 0,2 C1: SD x PAC1 w C2: CP73 x PAC1 o C3: GH x PAC2 H Entre crochets dans le cas o la sonde n'est pas polymorphe dans le croisement étudié, l'effet du locus est estimé en utilisant des marqueurs adjacents. VIII/ Conclusions L'ensemble des résultats présentés ci-dessus démontre l'existence d'une association statistiquement significative entre un locus PK et un QTL de résistance à Sclerotinia sclerotiorum sur le groupe de liaison 1 du tournesol. Ce locus permet d'expliquer jusqu'à 50 % de la variance de cette résistance, pour les tests indice de latence et pourcentage d'attaque. Pour la résistance à la progression du champignon dans les feuilles, ce locus permet d'expliquer jusqu'à 50 % de la variance de cette résistance. s15 LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATIONS GENERALES: (i) DEPOSANT: (A) NOM: INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE (INRA) (B) RUE: 147 RUE DE L'UNIVERSITE (C) VILLE: PARIS CEDEX 07 (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 75338 (G) TELEPHONE: 01 42 75 90 00 (A) NOM: UNIVERSITE BLAISE PASCAL (B) RUE: 34 AVENUE CARNOT (C) VILLE: CLERMONT-FERRAND (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 63000 (ii) TITRE DE L' INVENTION:MARQUEUR DE LA RESISTANCE A SCLEROTINIA SCLEROTIORUM (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 4 (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.30 (OEB) (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 26 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: nonconnue (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:3 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Inosine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:6 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Inosine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:9 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Cytosine ou Thymine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:12 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Inosine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:15 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Adénine ou Cytosine ou Thymine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:18 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Inosine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:20 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Adénine ou Thymine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:21 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Cytosine ou Thymine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:24 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Adénine ou Guanine" (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: GGNGGNTTNG GNATNGTNTN NAANGG 26 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 23 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: nonconnue (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:3 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Inosine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:6 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Inosine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:8 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Guanine ou Thymine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:9 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Inosine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:15 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Inosine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:18 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Adénine ou Guanine" (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT:21 (D) AUTRES INFORMATIONS:/note= "N signifie Adénine ou Guanine" (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2: AANATNCNNG CCATNCCNAA NTC 23 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 277 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: nonconnue (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3: GGGGGGTTCG GGATTGTGTT CAAGGGTGAG TTGTTGTTGG TTTATGAGTT TATGGCTAAT 60 GGAAGTTTGG ATAAGTGTAT ATATAGTGGT AATAAGCCTA AATTGGTTTT GAGTTGGGAA 120 CAAAGGTTTA AGGTTATAAA AGATGTGGCA AATGGGTTAC TTTATTTGCC TGAAGGGTGG 180 GGAAAAACTG TGGTGCATAG AGATATTAAA GCAGGAAATG TGTTGTTGGA TTCGGATTTA 240 AATGGTAAGT TAGGCGACTT CGGAATGGCC CGCATCT 277 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 92 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: nonconnue (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4: Gly Gly Phe Gly Ile Val Phe Lys Gly Glu Leu Leu Leu Val Tyr Glu 1 5 10 15 Phe Met Ala Asn Gly Ser Leu Asp Lys Cys Ile Tyr Ser Gly Asn Lys 25 30 Pro Lys Leu Val Leu Ser Trp Glu Gln Arg Phe Lys Val Ile Lys Asp 40 45 Val Ala Asn Gly Leu Leu Tyr Leu Pro Glu Gly Trp Gly Lys Thr Val 55 60 Val His Arg Asp Ile Lys Ala Gly Asn Val Leu Leu Asp Ser Asp Leu 70 75 80 Asn Gly Lys Leu Gly Asp Phe Gly Met Ala Arg Ile 90 Références * Bent, A.F., Kunkel, 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REVENDICATIONS 1/ Séquence nucléotidique correspondant à SEQ ID N 1. 2/ Séquence nucléotidique correspondant à SEQID N 2. 3/ Utilisation de la séquence nucléotidique selon la revendication 1 et/ou la séquence nucléotidique selon la revendication 2, en tant qu'amorce(s) pour la mise en oeuvre d'un procédé d'amplification en chaîne par polymérase (PCR) appliqué à de l'ADN de plante. 4/ Fragment d'ADN obtenu par la mise en oeuvre du procédé d'amplification en chaîne par polymérase (PCR) selon la revendication 3. / Fragment d'ADN correspondant à SEQID N 3. 6/ Utilisation, à titre de sonde, d'un fragment d'ADN selon la revendications 4 ou 5 pour l'identification chez une plante du génotype résistant à Sclerotinia sclerotiorum, ladite identification consistant à: - marquer le fragment d'ADN, - placer le fragment d'ADN marqué au contact de l'ADN de la plante dans des conditions d'hybridation, - déterminer la présence d'une hybridation moléculaire. 7/ Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que la plante est le tournesol. 8/ Séquence peptidique correspondant à SEQID N 4 ou présentant au moins 50 % d'homologie avec elle. 9/ Séquences nucléotidiques codant pour une séquence peptidique selon la revendication 8.