Brevet FR2764799A1 — publié le 19981224

La présente invention concerne un produit cosmétique. Le produit cosmétique selon l'invention est notamment destiné à protéger l'épiderme des effets néfastes de la pollution atmosphérique. On sait que la pollution de l'air en milieu urbain peut engendrer des affections cutanées plus ou moins marquées chez les citadins, les automobilistes ou les personnes en contact prolongé avec les fumées d'usine ou de cigarette, par exemple. La gravité de ces affections est généralement fonction du niveau de pollution de l'air par rapport à un seuil déterminé de tolérance, pour une frange moyenne de la population. Un premier exemple d'agent polluant néfaste pour l'épiderme, que l'on retrouve avec la concentration la plus élevée en milieu urbain ou industriel, est le monoxyde de carbone. Cet agent polluant est notamment émis par les automobiles et par nombre de cheminées d'usine, Un second exemple d'agents polluants susceptibles d'altérer la couche superficielle de la peau est constitué par les micro-particules de carbone, les hydrocarbures et les composés organiques oxygénés, soufrés et azotés qui sont émis par les tuyaux d'échappement des automobiles. Un troisième exemple d'agent polluant pouvant altérer à la longue l'aspect de la peau est constitué par la fumée de cigarette, laquelle peut être à la source d'une augmentation des rides du visage, d'une peau devenant plus pâle, grisâtre ou d'une diminution de l'hydratation cutanee. Le but de la présente invention est de proposer un produit cosmétique qui permette de lutter efficacement contre les effets néfastes de la pollution atmosphérique sur l'épiderme. A cet effet, le produit cosmétique selon l'invention contient un extrait dune souche de micro-organismes marins appartenant au genre Phormidium. De préférence, ladite souche appartient à l'espèce Persicucum. De préférence, la proportion massique dudit extrait dans ledit produit est sensiblement de 0,1 %. Selon une autre caractéristique de l'invention, ledit produit est prévu pour préserver ou augmenter, en atmosphère polluée, la quantité d'ATP intracellulaire contenue dans les cellules de l'épiderme. Selon une autre caractéristique de l'invention, ledit produit est constitué d'une crème prévue pour être appliquée sur la peau. 2 2764799 Les caractéristiques de l'invention mentionnées ci-dessus, ainsi que d'autres, apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un exemple de réalisation. Un produit cosmétique selon l'invention est constitué d'une crème qui contient de préférence 0,1 % en poids d'un extrait d'une souche de micro-organismes marins, laquelle souche est connue par l'homme du métier sous la dénomination AE2. Ladite souche baigne dans un milieu de culture qui est prévu pour entretenir la vie de ses micro-organismes. La souche AE2 est constituée de micro-algues appartenant à la classe des cyanophycées et au genre Phormidium. De préférence, lesdites micro- algues appartiennent à l'espèce Phormidium Persicucum. Cependant, ces micro-algues pourraient également appartenir à une espèce du genre Phormidium autre que l'espèce Persicucum, en raison des propriétés voisines vis-à-vis des corps étrangers que présentent les espèces d'algues qui sont comprises dans le genre Phormidium. On pourra notamment se reporter aux articles suivants pour la description de telles propriétés pour deux autres espèces de micro- algues appartenant au genre Phormidium. Ces propriétés, communes à l'espèce Persicucum, concernent l'assimilation par les micro-algues Phormidium laminosum et Phormidium bohneri d'impuretés contenues dans des eaux usées: - Garbisu C., Hall D. O., & Serra J. L. - Nitrate and nitrite uptake by free- living and immobilized N-starved cells of Phormidium laminosum - J. Appl. Phycol. 4. 139-142 (1992). - Talbot P. & de la Noue J. - Tertiary treatment of waste water with Phormidium bohneri (Schmidle) under various light and temperature compositions - WaterRes. 27. 153-159 (1993). Ledit milieu de culture dans lequel baigne la souche AE2 est obtenu de la manière suivante. On prépare d'abord 1 litre d'une solution A qui comporte les ingrédients suivants: 3 2764799 INGREDIENTS SOLUTION A CONCENTRATION (g/ 1) NaCI 25 MgCI2, 6 H20 2 KCI 0,5 NaNO3 0,75 K2HPO4, 3H20 0,02 MgSO4, 7H20 3,5 CaCI2, 2HO20 0,5 Acide citrique 0,003 Ammonium citrate ferrique 0,003 EDTA-Na2 (Acide tétra- 0,0005 acétique éthylène diamine dissodique) Na2CO3 0,04 Puis on ajoute à ce litre de solution A obtenue 1 ml d'une solution B, laquelle comporte les ingrédients suivants: INGREDIENTS SOLUTION B CONCENTRATION (g/ 1) H3BO3 2,860 MnCI2, 4H20 1,810 ZnSO4, 7H20 0,222 Na2MoO4, 2H20 0,390 CuSO4, 5HO20 0,079 Co(NO3)2, 6H20 0,049 On ajuste ensuite le pH de la solution obtenue à 7,5, et l'on place celle-ci en autoclave. On laisse refroidir ladite solution pendant un temps déterminé et l'on y ajoute I ml d'une solution C, laquelle comporte les ingrédients suivants: INGREDIENTS SOLUTION C CONCENTRATIONS (g 1) Thiamine 0,1 Biotine 0,005 Vitamine B 12 0,005 4 2764799 On pourra se référer à la publication suivante pour une description détaillée dudit milieu de culture prévu pour entretenir la vie de la souche AE2: WATERBURY J. B., purification developmental patterns and properties of some fresh and marinecyanobacteria belonging to the orders Chamaesiphonales and Pleurocapsales, Ph. D. Thesis University of California Berkeley, 1976. On a testé in vitro le produit selon l'invention sur des cultures de kératinocytes humains (cellules de l'épiderme produisant la kératine), en l'absence et en présence d'agent polluant. On a procédé en deux temps de la manière suivante. Dans un premier temps, on a cherché à déterminer la concentration du produit selon l'invention dans les kératinocytes en culture qui est optimale pour la viabilité desdits kératinocytes. Pour ce faire, on a cultivé en mono-couche et jusqu'à confluence (état de tangence entre les cellules connu de l'homme du métier) des kératinocytes humains dans un milieu de culture qui leur est spécifique. Puis on a dilué le produit selon l'invention dans ce milieu de culture, ceci à différentes concentrations. On a ensuite conservé pendant quinze heures chaque échantillon constitué du produit selon l'invention présent avec une concentration donnée dans ledit milieu de culture contenant les kératinocytes. Au terme de ces quinze heures de mise en contact, on a rincé les kératinocytes de chaque échantillon et on les a mis à incuber dans une solution contenant 0,3 mg/ml d'un agent chimique connu sous la dénomination MTT. Le nom développé de cet agent est le 3-[4, 5diméthylthiazol-2-yl]-2, 5-diphényltétrazolium bromide. D'une manière générale, l'agent MTT est utilisé pour évaluer la cytotoxicité d'un produit vis-à-vis d'un milieu cellulaire. Au contact des déshydrogénases mitochondriales, qui sont des enzymes uniquement produites par les cellules vivantes, on sait que le sel de tétrazolium incolore contenu dans le MTT est réduit en cristaux bleus de formazan. Ces cristaux permettent donc de révéler les cellules vivantes. Suite à l'incubation des kératinocytes de chaque échantillon dans ladite solution contenant le MTT, on a lysé lesdits kératinocytes puis solubilisé les cristaux de formazan obtenus dans du diméthylsulfoxyde (DMSO), de manière à disposer d'une solution homogène. 2764799 On a ensuite procédé à des mesures de densité optique pour chaque échantillon étudié ainsi que pour un échantillon témoin n'ayant pas reçu de produit selon l'invention, en partant du fait que l'intensité de coloration bleue due au formazan est directement proportionnelle au nombre de kératinocytes vivants dans chaque échantillon étudié. Pour ce faire, on a utilisé un spectrophotomètre réglé à une longueur d'onde de 540 nm. Pour chaque échantillon étudié, on a calculé un taux de viabilité cellulaire qui est défini par la relation suivante: DO échantillon étudié Taux de viabilité cellulaire = DO échantillon témoin o DO échantillon étudié est la densité optique mesurée pour un échantillon ayant reçu le produit selon l'invention, et DO échantillon témoin est la densité optique mesurée pour l'échantillon témoin, lequel n'a pas reçu de produit particulier. Ces mesures ont fourni, pour la concentration optimale du produit selon l'invention dans le milieu de culture contenant les kératinocytes, une valeur de 0,05 % en poids. Dans un second temps relatif à ladite étude in vitro, on a cherché à quantifier, en présence de polluants fréquemment rencontrés en milieu urbain, l'action du produit selon l'invention sur les kératinocytes baignant dans le milieu de culture qui leur est propre, avec ladite concentration optimale dudit produit dans des cultures de kératinocytes. Pour ce faire, on a cultivé en mono-couche et jusqu'à pré-confluence des kératinocytes humains dans ledit milieu de culture, de manière à obtenir une première série d'échantillons ou série témoin. Puis on a recueilli sur un support du type papier filtre, par exemple, des gaz d'échappement provenant d'une voiture Diesel. On a ensuite incubé pendant huit heures ces gaz d'échappement dans le milieu de culture des kératinocytes tel que défini par ladite première série d'échantillons, et l'on a laissé ces gaz polluants au contact des kératinocytes pendant quinze heures. De plus, on a directement injecté du monoxyde de carbone à 50 ppm dans ledit milieu de culture ayant reçu les gaz d'échappement, 6 2764799 par l'intermédiaire d'une bouteille reliée à un manometre. De cette manière, on a obtenu une seconde série d'échantillons en milieu pollué. On a par la suite procédé à la dilution du produit selon l'invention dans ledit milieu de culture des kératinocytes ayant reçu les deux agents polluants précités, ceci en satisfaisant à la condition de concentration optimale en produit de 0,05 % en poids pour la viabilité des kératinocytes. On a ainsi obtenu une troisième série d'échantillons pour laquelle les kératinocytes, les polluants précités et le produit selon l'invention ont été mis en contact. Pour ces trois séries d'échantillons, on a procédé à un test connu sous le nom de dosage de l'ATP (adénosine-triphosphate) intracellulaire par bioluminescence. Ce test constitue une méthode indirecte pour la mesure du métabolisme énergétique des kératinocytes, et il consiste à faire réagir les kératinocytes de chaque série d'échantillons avec la Dextro-lucifénrine, en présence d'oxygène, de magnésium et de luciférase. Sous l'action de cette dernière enzyme, les réactifs précités donnent notamment lieu à l'émission de photons par bioluminescence. Du fait de l'égalité existant entre le nombre de photons émis et le nombre de moles d'ATP ayant réagi lors de la réaction précitée, on peut déterminer le nombre de moles d'ATP par kératinocyte par simple comptage desdits photons. Le tableau ci-dessous rend compte du nombre de moles d'ATP par kératinocyte pour chacune des trois séries d'échantillons testés: première seconde troisième série d'échantillons série d'échantillons série d'échantillons moyenne 0,433 0,330 0,525 du nombre de + + + moles d'ATP (en 0,011 0,037 0,028 femtomole/ cellule) variation (en %) par rapport 100 76 121 à la première série... Ces résultats montrent que la quantité moyenne d'ATP intracellulaire augmente de 21 % en présence de gaz d'échappement et de monoxyde de carbone, lorsque le milieu cellulaire constitué des kératinocytes en culture est additionné du 7 2764799 produit selon l'invention. A titre de comparaison, il apparaît que ladite quantité moyenne d'ATP diminue de 76 %, en l'absence de produit au contact desdits kératinocytes et desdits polluants. I apparaît donc que la diffusion du produit selon l'invention dans le milieu cellulaire épidermique permet au moins de conserver la même quantité d'ATP intracellulaire dans des kératinocytes placés au contact des polluants les plus répandus en milieu urbain. Il en résulte que le métabolisme énergétique desdits kératinocytes n'est pas altéré par un tel environnement pollué. Par conséquent, il semble bien que l'application cutanée du produit selon l'invention protège les cellules de l'épiderme des effets toxiques de la pollution en milieu urbain. 8 2764799 REVENDICATIONS 1) Produit cosmétique, caractérisé en ce qu'il contient un extrait d'une souche de micro-organismes marins appartenant au genre Phormidium. 2) Produit cosmétique selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite souche appartient à l'espèce Persicucum. 3) Produit cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la proportion massique dudit extrait dans ledit produit est sensiblement de 0,1 %. 4) Produit cosmétique selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est prévu pour préserver ou augmenter, en atmosphère polluée, la quantité d'ATP intracellulaire contenue dans les cellules de l'épiderme. 5) Produit cosmétique selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est constitué d'une crème prévue pour être appliquée sur la peau.