Brevet FR2764507A1 — publié le 19981218

La présente invention est relative à des compositions pulvérulentes de liposomes unilamellaires stabilisés, comportant au moins une phase lipidique externe et un noyau polaire aqueux interne gélifié à température ambiante, à leur procédé de préparation ainsi qu'à leurs applications comme compléments nutritionnels et dans des compositions pharmaceutiques (action sur la lipémie). Des liposomes à noyau interne gélifié, en suspension en milieu aqueux, contenant de faibles concentrations de substances gélifiantes, ont été décrits par J.C. Hauton, qui les a dénommés lipogélosomes . Il a, en particulier, mis au point un procédé permettant de fabriquer de tels liposomes ou lipogélosomes (Brevet européen 0 393 049), se différenciant des liposomes classiques par le fait que la phase aqueuse encapsulée se présente sous forme semi-solide de gel et non sous forme liquide, ce qui empêche les fusions des liposomes lors des collisions. De tels lipo- gélosomes sont produits uniquement à partir de substances naturelles, ce qui minimise les risques d'intolérances. En particulier, dans ce Brevet Européen 0 393 049, ces lipogélosomes sont constitués par une phase interfaciale en bicouche dans le cas des lipogélosomes unilamellaires ou d'une pluralité de phases interfaciales en bicouche superposées concentriquement, dans le cas des lipogélosomes multilamellaires et par une phase polaire aqueuse interne encapsulée gélifiée, dans laquelle la substance géli- fiée polymérisable ou non est sélectionnée parmi les polysaccharides, les polypeptides ou les polyacrylamides; par exemple la substance gélifiable non polymérisable est sélectionnée parmi la gélatine, l'agarose, ou les carraghénanes et la substance gélifiable polymérisable est sélectionnée parmi les gels de polyacrylamide. Ces lipogélosomes ont une stabilité significativement augmentée, par rapport aux liposomes de l'art antérieur, notamment en raison de l'absence de fusion interparticulaire pendant les collisions. Toutefois, ils ont l'inconvénient de se présenter sous une forme liquide, non adaptée à la préparation de formulations solides, de stockage et d'administration aisés. La Demanderesse a maintenant notamment trouvé qu'en sélection- nant les lipides de la phase lipidique externe d'une part et les gélifiants d'autre part, il est possible de préparer des lipogélosomess pulvérulents stabilisés, présentant des propriétés particulièrement intéressantes en tant que complément nutritionnel et en tant que médicament, dans la prévention des hyperlipémies, (hypercholestérolémies ou hypertriglycéridémies); en effet, de tels lipogélosomes pulvérulents stabilisés peuvent soit être administrés directement par voie orale, soit être aisément dissous dans une phase aqueuse, au moment de leur utilisation. Les maladies cardio-vasculaires sont la première cause de mortalité et de morbidité en France, comme dans tous les pays industrialisés, et représentent un véritable fardeau financier (30 milliards de francs en 1992). Les chiffres sont alar- mants: 36,4 % de tous les décès sont dus aux maladies cardio-vasculaires, dont 20 % pour la pathologie cardiaque et 12 % pour les accidents vasculaires cérébraux. A titre de comparaison, viennent ensuite les décès dus aux différents cancers et morts violen- tes (accidentelles ou volontaires), dans les proportions respectives de 24,2 % et 9,4 %. Une telle incidence des accidents cardio-cérébro-vasculaires, dans les civilisations occidentales, fait de l'athérosclérose le premier fléau socio-économique dans le domaine de la Santé. Une prophylaxie à long terme est donc nécessaire. Une diminution de la cholestérolémie peut s'obtenir par un régime hypolipidique, associé ou non à des produits pharmacologiques. Un moyen largement utilisé chez des sujets à risque (ayant une trop forte cholestérolémie) est de séquestrer dans l'intestin les sels biliaires par la cholestyramine, et des études ont montré qu'un traitement chronique par cette résine synthétique diminue la fréquence des accidents cardiaques (BM Rifkind, A thero- sclerosis reviews,1987, 18, 59-70). Toutefois, il semble difficile d'envisager une pro- phylaxie systématique à long terme avec un tel produit, en raison d'un maniement peu commode et d'effets secondaires mal acceptés par les patients. Un régime hypolipidique strict semble le moyen le plus efficace pour traiter une athérosclérose constituée, mais l'expérience montre que cela est le plus sou- vent impossible, car sacrifier le plaisir gastronomique représente une atteinte à la qua- lité de la vie et est d'ailleurs difficile à appliquer dans le contexte des activités quoti- diennes des sociétés modernes des pays développés. D'autres hypolipémiants qui agissent dans le milieu intérieur sont employés, tels que les inhibiteurs de HMG CoA réductase qui diminuent la synthèse du cholestérol endogène et augmentent les récepteurs hépatiques des lipoprotéines athéro- gènes, réduisant ainsi leur concentration plasmatique (MS Brown et al., Athero- sclerosis reviews, 1987, 18, 85-93). Mais appliquer des mesures de prévention médicamenteuse chez des sujets apparemment sains ayant un lipidogramme sanguin se situant dans des limites dites " normales " est contestable en raison des effets secondaires. Une prophylaxie à long terme de l'athérosclérose applicable à l'échelle d'une population implique qu'il faut disposer de produits efficaces à long terme, d'un maniement facile et présentant un minimum d'effets secondaires indésirables. Des mesures diététiques raisonnables doivent donc être complétées par des actions au niveau intestinal afin de diminuer la lipolyse des triglycérides en aci- des gras libres et monoglycérides et réduire la production de la phase micellaire, à partir de laquelle se fait leur absorption et celle du cholestérol. Les triglycérides alimentaires, dont l'hydrolyse commence dans l'es- tomac (lipases sublinguale et gastrique) et se poursuit dans le duodénum (lipase pan- créatique) s'organisent dans le milieu intestinal proximal sous forme d'une émulsion, dont la phase interfaciale en monocouche, formée majoritairement par les phospho- lipides alimentaires et biliaires (G Nalbone et al, Lipids, 1974, 9, 765770) incorpore les produits de la lipolyse (monoglycérides, acides gras libres) ainsi qu'une fraction des sels biliaires. La phase interfaciale intestinale ne peut se dissocier en micelles tant que la concentration en molécules détergeantes dans cette phase (sels biliaires, acides gras ionisés, lysophospholipides) n'atteint pas un certain seuil (concentration micellaire critique). Pour inhiber fortement la lipolyse intestinale des triglycérides et re- duire ou même supprimer la formation de la phase micellaire à partir de laquelle se fait l'absorption des produits de la lipolyse, J.C. Hauton a trouvé (Cah. Nutr. Diét., 1990, , 2, 87-91) qu'il faut: - détourner une partie des lipases digestives de la phase interfaciale des particules de l'émulsion lipidique en l'associant sur une phase interfaciale compéti- tive; et - détourner une quantité suffisante de sels biliaires sur ladite phase interfaciale compétitive pour abaisser leur concentration au-dessous d'un certain seuil afin d'empêcher la production de la phase micellaire. Le problème à résoudre consiste donc à faire parvenir dans l'intestin proximal durant la phase de digestion une phase interfaciale compétitive atoxique pré- sentant un maximum de surface sous le plus petit volume possible. La structure actuelle la mieux adaptée est celle des petits liposomes unilamellaires. Dans une optique industrielle, et pour des raisons de maniement et de conservation, de tels liposomes doivent être stables. Les compositions pulvérulentes de liposomes stabilisés selon l'invention, permettent effectivement de résoudre ce pro- blème, d'une part en raison de la présence du noyau aqueux interne gélifié et d'autre part du fait qu'ils se présentent sous la forme d'une poudre, qui peut soit être admi- nistrée directement par voie orale, soit être aisément dissoute dans une phase aqueuse, au moment de son utilisation. En conséquence, la Demanderesse s'est donné pour but de pourvoir à une composition pulvérulente stable, à base de liposomes, qui réponde mieux aux besoins de la pratique que les compositions de l'art antérieur en ce qu'outre une stabi- lité significativement améliorée, elle est efficace aussi bien dans la prévention que dans le traitement des hyperlipémies. La présente invention a pour objet une composition pulvérulente, caractérisée: - en ce qu'elle est essentiellement constituée de liposomes unilamel- laires comprenant une phase lipidique externe constituée essentiellement de lipides de classe 4 (phospholipides), à l'exclusion des substances de classe 3 (cholestérol, acides gras à longue chaîne non ionisés) et des substances de classe 5 (sels biliaires, dérivés de l'acide fusidique) et un noyau aqueux interne formant un gel aqueux thermo- réversible irradiant jusqu'à la phase lipidique externe, lequel noyau aqueux interne est constitué essentiellement d'un mélange M d'au moins deux agents gélifiants non-poly- mérisables G1 et G2, différents, et dont le point de transition de phase gel-sol est supé- rieur ou égal à 37 C, G1 étant un agent gélifiant sélectionné parmi les gélatines et des carraghénanes, tels que les kappa-carraghénanes et G2 étant sélectionné parmi des carraghénanes ayant des propriétés différentes des carraghénanes sélectionné pour GI, tels que les iota- carraghénanes et les celluloses, telles que l'hydroxypropylcellulose, lesquels liposomes ont un diamètre compris entre 20 nm et 1 gm, de préférence compris entre 50 nm et 500 nm; et - en ce qu'elle se présente sous la forme d'unités particulaires ayant un diamètre moyen compris entre 10 gm et 1 000 pgm, formées d'un ou plusieurs desdits liposomes, entourés d'une gangue sélectionnée dans le groupe constitué par un gel aqueux thermoréversible déshydraté identique au gel aqueux dudit noyau interne, des dextrines ou un mélange de ceux-ci, de telle sorte qu'elle comprend, en moyenne, 1016 à 1018 liposomes/g de poudre. L'utilisation de telles compositions pulvérulentes de liposomes en matière de prévention et de thérapie de l'athérosclérose et de l'obésité peut s'avérer d'une grande utilité en permettant de rendre moins sévères et donc plus acceptables les régimes hypolipidiques prescrits aux patients traités pour ces affections. De manière surprenante de telles compositions pulvérulentes conservent toute l'intégrité des lipogélosomes qu'elles contiennent et qui restent stables dans le temps, aussi bien sous forme pulvérulente que lorsqu'ils sont remis en suspension, du fait du maintien de l'intégrité des lipides constitutifs (pas de produit de dégradation) et du maintien de l'intégrité des caractéristiques des agents gélifiants, G1 et G2 (notamment viscosité, force en gel et à la rupture, masses moléculaires). Elles contiennent ainsi des lipogélosomes pulvérulents stabilisés. Les agents gélifiants G1 et G2 diffèrent notamment en ce qui concerne les paramètres suivants: viscosité, force en gel et à la rupture, masses molé- culaires. Selon un mode de réalisation avantageux de ladite composition, ledit noyau aqueux interne des liposomes comprend, en outre, au moins un agent stabilisant de nature osidique, et/ou au moins un agent de régulation de l'osmolarité du milieu et/ou au moins un agent tensioactif. De manière avantageuse, ladite composition pulvérulente comprend en % (m/m): 25 à 75 % de lipides de classe 4, 5 à 45 % d'agents gélifiants, 0 à 70 % d'agent stabilisant de nature osidique, 0 à 15 % d'agent de régulation de l'osmolarité du milieu, 0 à 20 % d'agents tensio-actifs et 0 à 15 % de dextrine (maltodextrine ou cyclodextrine essentiellement), de préférence 8 à 12 %. Conformément à l'invention, une fraction d'agent gélifiant est inclus dans la phase aqueuse interne desdits lipogélosomes, alors qu'une autre fraction d'agent gélifiant forme une gangue autour de la couche lipidique externe desdits lipo- gélosomes. Selon un autre mode de réalisation avantageux de ladite composition pulvérulente, elle comprend 70 à 95 % d'agent gélifiant G1 et 5 à 30 % d'agent géli- fiant G2. Selon un autre mode de réalisation avantageux de ladite composition pulvérulente selon l'invention, l'agent stabilisant de nature osidique est du saccharose, du tréhalose ou tout autre agent de protection. Selon un autre mode de réalisation avantageux de ladite composition pulvérulente selon l'invention, les lipides constituant la phase lipidique externe desdits liposomes, comprennent de préférence, 20 à 25 % de phosphatidylcholine, 10 à 18 % de phosphatidyléthanolamine et 9 à 15 % de phosphatidylinositol. Lesdits phospholipides sont essentiellement obtenus à partir de léci- thines de soja à teneur élevée en phospholipides. En variante, les phospholipides sont constitués par des phospholipi- des purifiés, seuls ou en mélange, de préférence dans les mêmes proportions que celles définies ci-dessus. La présente invention a également pour objet un procédé de prépara- tion d'une composition pulvérulente selon l'invention, dans laquelle la gangue externe des unités particulaires comprend une fraction de gel aqueux thermoréversible, carac- térisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: (1) préparation d'une dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomese) en phase aqueuse par (a) préparation d'une solution d'au moins un agent gélifiant convenable, notamment un mélange M d'agents gélifiants Gl et G2, par dissolution desdits agents gélifiants, sous agitation lente, à une température supérieure à la température de transition de phase gel-sol desdits agents gélifiants, dans une solu- tion aqueuse, (b) incorporation des lipides dans la solution obtenue en (a), sous agita- tion lente du mélange, pendant une période inférieure à 5 heures, de préférence sous vide et formation d'une émulsion et (c) obtention de la dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes) dans une phase aqueuse contenant lesdits agents géli- fiants, par agitation rapide de l'émulsion obtenue en (b), de préférence sous vide et (2) obtention du produit pulvérulent par séchage direct convenable de la dispersion obtenue. Selon un mode de réalisation avantageux dudit procédé, le séchage est réalisé par atomisation, coacervation, couche mince ou granulation. La présente invention a également pour objet un procédé de prépara- tion d'une composition pulvérulente selon l'invention, dans laquelle la gangue externe des unités particulaires comprend une fraction de gel aqueux thermoréversible et/ou une dextrine, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: (1) préparation d'une dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes) en phase aqueuse par (a) préparation d'une solution d'au moins un agent gélifiant convenable, notamment un mélange M d'agents gélifiants GI et G2, par dissolution desdits agents gélifiants, sous agitation lente, à une température supérieure à la température de transition gel-sol desdits agents gélifiants dans une solution aqueuse, (b) incorporation des lipides dans la solution obtenue en (a), sous agitation lente du mélange, pendant une période inférieure à 5 heures, de préférence sous vide et formation d'une émulsion et (c) obtention de ladite dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes ) en phase liquide aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, par agitation rapide de l'émulsion obtenue en (b), de préférence sous vide, (2) élimination, au moins en partie, de la phase liquide aqueuse contenant lesdits gélifiants, dans laquelle sont dispersés lesdits liposomes. (3) ajout d'au moins une dextrine convenable et (4) obtention du produit pulvérulent par séchage par atomisation de produit obtenu en (3). Selon un mode de mise en oeuvre avantageux de ce procédé, l'étape (2) d'élimination d'au moins une partie de la phase liquide aqueuse contenant lesdits agents gélifiants est réalisée par dilution et/ou par filtration. Conformément aux procédés de préparation selon l'invention, la solution aqueuse de l'étape (a) comprend en outre un agent de régulation de l'osmolarité du milieu (NaCI à 0,9 %, par exemple) et/ou un agent stabilisant de nature osidique et/ ou un agent tensioactif. De manière surprenante, de tels procédés permettent d'obtenir une composition pulvérulente de liposomes stables à phase interne gélifiée (lipogélosomes ) au cours d'une seule étape comportant une phase de maturation des constituants en phase aqueuse, à vitesse lente, puis une phase de dispersion (formation des lipogélo- somes ) à vitesse rapide, comprennent une étape au cours de laquelle on obtient une dispersion stable de lipogélosomes en phase liquide, de morphologie homogène, qui est apte à être soumise à l'étape de séchage; ladite dispersion de liposomes à noyau interne gélifié présente, en effet, la morphologie la suivante: structure vésiculaire de diamètre compris entre 20 nm et 1 jim, de préférence entre 70 et 200 nm, observations microscopiques en coloration négative, cryofracture, cryotransmission et microscopie de force atomique: vésicules ou assemblages de vési- cules d'aspect caractéristiques de bicouches phospholipidiques; la coloration négative permet d'observer la présence plus ou moins marquée de mélange M d'agents gélifiants enrobant la couche phospholipidique externe, et polydispersité des liposomes à noyau interne gélifié, comprise entre 10 et 55 %, de préférence entre 30 et 50 %. Un tel procédé a l'avantage d'être reproductible et parfaitement adaptable à l'échelle industrielle. Il présente en outre l'avantage d'être moins lourd à mettre en oeuvre que les procédés de l'Art antérieur dans lesquels une étape de sonication, d'extrusion ou d'élimination de détergents est nécessaire, comme décrites dans le Brevet Européen 0 393 049. Selon un autre mode de mise en oeuvre avantageux desdits procédés, l'étape (b) est effectuée, de préférence, à une vitesse de cisaillement inférieure à s'; de manière générale, la vitesse de cisaillement est donnée par le rapport suivant: vitesse du module d'agitation/écartement entre la paroi interne du réacteur et l'extrémité distale de la pale d'agitation (également appelé " entrefer "). La présente invention a également pour objet un complément nutri- tionnel apte à réguler la cholestérolémie et la triglycéridémie, caractérisé en ce qu'il comprend une composition pulvérulente telle que définie ci-dessus, éventuellement associée à un excipient approprié. La présente invention a également pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant une composition pulvérulente selon l'invention et au moins un véhicule approprié; de telles compositions sont particulièrement aptes à ré- guler la cholestérolémie et la triglycéridémie ou à servir d'adjuvant dans des traite- ments utilisant un ou plusieurs principes actifs provoquant l'augmentation des trans- aminases ou de tout autre marqueur toxique; en effet, de manière inattendue, les com- positions pulvérulentes de liposomes stabilisés selon l'invention s'opposent à l'augmentation, de manière significative, des taux de GOT et de GPT hépatiques. Aussi bien le complément nutritionnel que les compositions pharma- ceutiques peuvent se présenter soit sous une forme solide (gélule, comprimé, poudre à dissoudre dans l'eau), soit sous une forme liquide (composition pulvérulente selon l'invention redissoute dans une solution aqueuse). De telles formes sont adaptées à l'administration par voie orale; la solution aqueuse est en outre adaptée à d'autres voies d'administration: transdermi- que, pulmonaire, nasale, génitale, intra-veineuse, sous-cutanée ou oculaire, par exemple, selon l'excipient sélectionné. De manière avantageuse, aussi bien le complément nutritionnel que les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont destinées à être administrées à une dose unitaire correspondant à une dose unitaire de phospholipides constitutifs des lipogélosomes selon l'invention comprise entre 0,01 et 0,07 g/kg, soit une dose jour- nalière comprise entre 0,03 et 0,2 g de phospholipides constitutifs des lipogélosomes, par kg corporel, administrée en 2 ou 3 prises. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé objet de la présente invention ainsi qu'aux dessins annexés, dans lesquels: - la figure 1 illustre la distribution, en pourcentage, des classes lipi- diques (AG: acides gras; MG: monoglycérides; DG: diglycérides; TG: triglycé- rides) radiomarquees présentes dans le contenu stomacal des rats sacrifiés après 2 heures de digestion; - la figure 2 illustre les pourcentages de lipides radiomarqués retrou- vés dans la lumière intestinale par rapport à la quantité (en dpm) de lipides qui a été vidangée par l'estomac des rats sacrifiés après 2 heures de digestion (seg. int.: segment intestinal); - la figure 3 illustre la distribution, en pourcentage, des classes lipi- diques (AG: acides gras; MG: monoglycérides; DG: diglycérides; TG: triglycé- rides) radiomarquées présentes dans la lumière intestinale des rats sacrifiés après 2 heures de digestion (seg. int.: segment intestinal); la figure 4 illustre les pourcentages de lipides radiomarqués retrou- vés dans la muqueuse intestinale par rapport à la quantité (en dpm) de lipides qui a été vidangée par l'estomac des rats sacrifiés après 2 heures de digestion (seg. muq.: seg- ment de la muqueuse); - la figure 5 illustre les pourcentages de lipides radiomarqués retrou- vés dans le plasma par rapport à la quantité (en dpm) de lipides qui a été vidangée par l'estomac des rats sacrifiés après 2 heures de digestion; - la figure 6 illustre les pourcentages de lipides radiomarqués retrou- vés dans le foie par rapport à la quantité (en dpm) de lipides vidangée par l'estomac des rats sacrifiés après 2 heures de digestion; - la figure 7 illustre la quantité de lipides radiomarqués (en dpm) retrouvés dans le caecum et les fèces des rats sacrifiés après 24 heures de digestion. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1: Procédé de préparation d'une composition pulvérulente selon l'invention (LGS) (avec gangue externe constituée de gélifiants déshydratés). 1) Préparation d'une dispersion de liposomes à phase interne gélifiée (lipogélosomes ): - Constituants Lécithines de soja 11,915 kg (7,943 %) Gélatine B150 7,149 kg (4,766 %) Iota carraghénanes 1,565 kg (1,043 %) Kappa carraghénanes 0,222 kg (0,148 %) Saccharose 8,936 kg (5,957 %) Chlorure de sodium 1,073 kg (0,715 %) Eau purifiée 119,15 kg (79,43 %) TOTAL MATIERE 150,01 kg (100 %). a) Préparation d'une solution de gélifiants On dissout le chlorure de sodium dans un mélangeur, muni d'une turbine et d'un planétaire et contenant l'eau purifiée (15 minutes à 10 tours/minute), on monte le mélangeur à température jusqu'à 75 C (agitation à 10 tours/minute pendant 45 minutes), on ajoute dans le mélangeur à 75 C, les agents gélifiants (gélatine, iota carraghénanes, kappa carraghénanes), on met en marche la turbine d'agitation à 1500 tours/minutes; la durée de l'étape de dissolution est d'environ 30 minutes; la dissolu- tion est achevée lorsque la solution est limpide et ne contient pas de particules en sus- pension; les qualités de la solution sont vérifiées par prélèvements; puis, on ajoute l'agent stabilisant osidique (saccharose). b) Incorporation des phospholipides dans la solution obtenue en a): On ajoute les lécithines de soja dans le mélangeur, dans lequel le planétaire tourne à la vitesse de 10 tours/minute et la turbine à la vitesse de 1500 tours/minute, pendant 5 heures, sous vide (- formation d'une émulsion). - dispersion finale par augmentation des vitesses d'agitation du plané- taire (25 tours/minute) et de la turbine (2 500 tours/minute) un temps suffisant pour obtenir une polydispersité inférieure à 40 %. On obtient une dispersion de lipogélosomes en phase aqueuse. L'étude des échantillons prélevés en fin de dispersion montre des structures vésiculaires de diamètre 120 + 30 nm. Observations microscopiques en coloration négative, cryofracture, cryotransmission et microscopie de force atomique: vésicules ou assemblages de vési- cules d'aspect caractéristiques de bicouches phospholipidiques; la coloration négative permet d'observer la présence plus ou moins marquée de gélifiant extérieur selon le procédé de fabrication et/ou de séparation choisi. 2) Séchage de la dispersion obtenue: La dispersion des lipogélosomes en phase aqueuse obtenue est transvasée dans un sécheur sous vide (50-100 mbars) pendant environ 4 heures. On obtient une poudre assez homogène, de couleur jaune paille, très claire, contenant des grains de diamètre compris entre 0,1 gim et I mmi. D'autres méthodes de séchage peuvent êtres mises en ceuvre. Au niveau des observations de microscopie électronique, on constate une rétraction des vésicules lipidiques sur elles-mêmes, en raison de la déshydratation. De plus, on remarque que, alors que, à l'état liquide, les LGS sont souvent agrégés à l'intérieur d'une gangue gélifiée homogène dans un environnement de nombreuses structures vésiculaires isolées, l'étape de séchage transforme cette gangue gélatineuse en filaments de gélifiant secs à la surface des agrégats, mais aussi à la surface des structures vésiculaires isolées: la Demanderesse pense que cette différence de morpho- logie est probablement à l'origine des différences de comportement des structures sèches, comparativement à la forme LGS humide, vis-à-vis du métabolisme des lipides. En variante, le séchage est effectué comme suit: la dispersion de lipogélosomes en phase aqueuse est répartie directement sur un sécheur à cylindres tournants (température des cylindres: 120-150 C, vitesse de rotation 3-6 tours/min.). Les " copeaux " obtenus sont ensuite broyés et calibrés sur une grille adéquate. On obtient alors une poudre de lipogélosomes (également dénommés ci-après LGS), ayant les caractéristiques définies ci-dessus. EXEMPLE 2: Procédé de préparation d'une composition pulvérulente selon l'invention (LGS) (avec gangue externe comprenant des maltodextrines) 1) Préparation d'une dispersion de liposomes à phase interne gélifiée(lipogélosomes): - Constituants: Lécithines de soja 11,915 kg (7,943 %) Gélatine B150 7,149 kg (4,766%) Iota carraghénanes 1,565 kg (1, 043 %) Kappa carraghénanes 0,222 kg (0,148 %) Saccharose 8,936 kg (5,957 %) Chlorure de sodium 1,073 kg (0,715 %) Eau purifiée 119,15 kg (79,43 %) TOTAL MATIERE 150,01 kg (100 %). a) Préparation d'une solution de gélifiants On dissout le chlorure de sodium dans un mélangeur, muni d'une turbine et d'un planétaire et contenant l'eau purifiée (15 minutes à 10 tours/minute), on monte le mélangeur à température jusqu'à 75 C (agitation à 10 tours/minute pendant minutes), on ajoute dans le mélangeur à 75 C, les agents gélifiants (gélatine, iota carraghénanes, kappa carraghénanes), on met en marche la turbine d'agitation à 1500 tours/minutes; la durée de l'étape de dissolution est d'environ 30 minutes; la dissolu- tion est achevée lorsque la solution est limpide et ne contient pas de particules en suspension; les qualités de la solution sont vérifiées par prélèvements; puis, on ajoute l'agent stabilisant osidique (saccharose). b) Incorporation des phospholipides dans la solution obtenue en a): On ajoute les lécithines de soja dans le mélangeur, dans lequel le 0 planétaire tourne à la vitesse de 10 tours/minute et la turbine à la vitesse de 1500 tours/minute, pendant 5 heures, sous vide (---> formation d'une émulsion). - dispersion finale par augmentation des vitesses d'agitation du plané- taire (25 tours/minute) et de la turbine (2 500 tours/minute) un temps suffisant pour obtenir une polydispersité inférieure à 40 %. On obtient une dispersion de lipogélosomes en phase aqueuse. L'étude des échantillons prélevés en fin de dispersion montre des structures vésiculaires de diamètre 120 30 nm. Observations microscopiques en coloration négative, cryofracture, cryotransmission et microscopie de force atomique: vésicules ou assemblages de vési- cules d'aspect caractéristiques de bicouches phospholipidiques; la coloration négative permet d'observer la présence plus ou moins marquée de gélifiant extérieur selon le procédé de fabrication et/ou de séparation choisi. 2) La dispersion de LGS, en milieu gélifiant externe est diluée au 1/10 par une solution de NaCI) 0,9 %, puis filtrée sur filtre 300 kDa ou 500 kDa (système de filtration tangentielle " Open Channel ", PAL FILTRON), à 37 C. Après concen- tration des LGS, on obtient une dispersion dont la teneur en matière sèche varie entre 37 et 50 % (m/v). On rajoute une quantité équivalent à 4-6 % (m/m) de maltodextrine. Après dissolution et homogénéisation du mélange, on réalise une atomisation (par exemple, avec un atomiseur pilote NIRO). On obtient alors des unités particulaires, dans lesquelles la gangue externe comprend des maltodextrines et dont la composition est sensiblement la suivante: LGS concentré à 44,6 % de matière sèche 1500 g maltodextrine 80g Total atomisat de LGS théorique 830 g quantité obtenue 760 g (rendement 84 %). L'atomisation est réalisée dans les conditions suivantes: température d'entrée d'air: entre 180 C et 200 C température de sortie d'air: entre 80 C et 95 C pression en tête de turbine: 4 bars, environ température de sortie de la solution à atomiser: entre 20 C et 45 C. EXEMPLE 3: Effets de l'ingestion d'une composition pulvérulente selon l'exemple 1 sur l'absorption intestinale des lipides alimentaires chez le rat en période post-prandiale. Cette étude est réalisée chez le rat normolipidémique, en période postprandiale. La normolipidémie permet d'étudier les effets réels des lipogélosomes sans interaction avec les perturbations métaboliques engendrées par un état patholo- gique. La période post-prandiale permet l'étude des mécanismes, avec une " photographie " des effets des lipogélosomes à un moment donné de la digestion. MATERIELS ET METHODES Animaux et régimes * Animaux Les réglementations officielles françaises (n 87-848 du 19 octobre 1987) et européennes (no 86-609 du 24 novembre 1986) pour le soin et l'usage des animaux de laboratoire ont été respectées. Les animaux sont des rats mâles Wistar (Iffa-Crédo, l'Arbresle, France) pesant 300 grammes. Pendant une période d'adaptation de 10 jours, ils ont été mis en cage dans une salle climatisée (température de 21 C, 50 % d'humidité), avec un cycle lumière-obscurité de 12 h-12 h; l'eau et la nourriture ont été fournies ad libitum. 48 heures avant l'expérimentation, les rats sont placés en cage de contention avec un régime glucose à 50 g/l. 24 heures avant l'expérimentation, ils sont mis sous diète avec seulement de l'eau ad libitum, pour éviter la coprophagie. Ainsi, les estomacs des rats sont libres de tout matériel avant l'intu- bation des repas tests. Six groupes de rats sont constitués de façon aléatoire: deux groupes témoins (T), deux groupes "lipogélosomes " (LGS) et deux groupes "ingrédients" (I) qui sont sacrifiés, soit 2 heures après la digestion, soit 24 heures après la digestion. Le nombre de rats est variable, selon les groupes, en raison de contraintes expérimentales. * * Repas tests Chaque repas test est constitué d'une émulsion lipidique à laquelle ont été rajoutés extemporanément les lipogélosomes (groupe LGS), les ingrédients des lipogélosomes (groupe I) ou du chlorure de sodium (groupe T). - L'émulsion lipidique: 522,5 mg d'un mélange contenant de la trioléine, du cholestérol et des lécithines de soja (Tableau I), ont été ajoutés à une solution aqueuse de chlorure de sodium, saccharose et albumine. La préparation est émulsifiée par agitation magnétique et sonication. Elle est renouvelée chaque semaine. Le diamètre des particules de cette émulsion a été contrôlé tous les jours à l'aide d'un granulomètre (Capa 700, Horiba, Kyoto, Japon). Aucune différence n'a été observée d'un jour sur l'autre, avec un diamètre moyen de 2,97 l.m. Les radioactivités spécifiques de la trioléine-14C et du cholestérol-3H ont été, respectivement, de 68,45 kBq/mmol et 4,27 kBq/mmol dans chaque repas test. - Les lipogélosomes : Une composition pulvérulente, selon l'exemple 1, est remise en solu- tion dans de l'eau, afin d'obtenir une concentration en phospholipides de 39,47 mg/ml; le diamètre des lipogélosomes en suspension, contrôlé par granulométrie et par micro- scopie électronique est stable et d'environ 164,9 nm (valeur moyenne). - Les ingrédients des lipogélosomes : Les matières premières constitutives des lipogélosomes telles que précisées à l'exemple 1 sont utilisées. Les phospholipides et le mélange gélifiant ont été préparés séparément. - Administration des repas tests: Extemporanément, dans une seringue, 2, 2 ml de la préparation de lipogélosomes ou des ingrédients ont été mélangés à 1,5 ml de l'émulsion lipidique pour les groupes LGS et I. Du chlorure de sodium, en quantité équivalente, a été ajouté à l'émulsion lipidique pour les groupes T. Le rapport triglycérides/phospholipides alimentaires du total ingéré est de 40 pour tous les groupes et correspond au rapport observé dans l'alimentation humaine. Toutefois, pour tenir compte de cette valeur, les repas tests des animaux traités par LGS ou I ont un apport alimentaire en lipides diminué en conséquence. Les rats ont été intubés par sonde gastrique avec des cathéters en polyéthylène. Avant l'intubation de l'émulsion, deux aliquotes ont été prélevées pour quantifier exactement la radioactivité ingérée par les rats. TABLEAU I Compositions des repas tests* Eau distillée (mg) 1 500,00 Chlorure de sodium (mg) 13,50 Sucrose (mg) 800,00 Albumine sérique bovine (mg 200,00 1 5 Lécithines des lipogélosomes /ingrédients (+ ou -) (mg) 87,50 Mélange lipidique 522,50 Trioléine (mg) 500,00 Trioléine -14C (kBq) 37,00 Cholestérol (mg) 10,00 Cholestérol- H (kBq) 111,00 Lécithine de soja (mg) 12,50 * Albumine sérique bovine (pauvre en acides gras): Calbiochem, San Diego, CA. Trioléine (pure à 99 %): Serva, Heidelberg, FRG. Trioléine-14C (pure à 98,3 %), 4,1 Gbq/mmol: NEN research products, Dupont de Nemours, Paris, France. Cholestérol (pur à 99 %): Sigma, St Louis, MO. Cholestérol-3H (pur à 99%), 814 Gbq/mmol NEN Research products, Dupont de Nemours. Lécithine de soja (pure à 90 %) Frangis, St-Maur, France. Prélèvements Sang Après 2 ou 24 heures de digestion, les rats ont été anesthésiés par un mélange kétamine/xylamine (60 mg/kg/7, 5 mg/kg) puis sacrifiés par exsanguination. Le sang a été prélevé par ponction dans l'aorte abdominale et environ 10 ml ont été récoltés dans des tubes contenant de l'EDTA, afin d'empêcher leur coagulation. Le Tableau II ci-après présente les conditions des différents prélè- vements effectués. TABLEAU II Temps de Prélèvements Traitement des prélèvements Comptage de la digestion radioactivité Sang centrifugation pour séparer le en direct plasma foie dissolution en direct contenu de l'estomac - homogénéisation - en direct 2 heures - extraction des lipides et CCM - en milieu org. contenu de l'intestin - homogénéisation - en direct (par tiers) - extraction des lipides et CCM - en milieu org. muqueuse intestinale grattage et homogénéisation en direct (par tiers) contenu du caecum homogénéisation en direct sang centrifugation pour séparer le en direct 24 heures plasma foie dissolution en direct contenu de l'estomac homogénéisation en direct contenu de l'intestin homogénéisation en direct muqueuse intestinale grattage et homogénéisation en direct contenu du caecum homogénéisation en direct fèces lyophilisation et extraction des en milieu org. _lipides * CCM: chromatographie sur couche mince pour séparer les différentes classes de lipides ** org.: organique. Pour le temps de 2 heures de digestion, les résultats des mesures de la radioactivité directe ont été exprimés en pourcentage de la radioactivité retrouvée au-delà du pylore stomacal, afin de réduire l'influence de la vidange gastrique qui est variable au sein d'un même groupe. Cela n'a pas été nécessaire pour les rats sacrifiés à 24 heures de digestion puisque la vidange est alors de 99,9 % pour l'ensemble des rats. Les résultats sont donc exprimés en dpm. RESULTATS 1) Effets des lipogélosomes sur la lipolyse des lipides dans l'esto- mac Comme précédemment observé chez les animaux ainsi que dans l'espèce humaine, les lipides alimentaires sont partiellement hydrolyses dans l'estomac des rats. Au bout de deux heures de digestion, les contenus stomacaux des trois groupes T, I et LGS ne sont pas significativement différents, bien que légèrement moins importants en ce qui concerne les rats du groupe LGS (Tableau III). Ces résul- tats correspondent à des taux de vidange gastrique proches de ceux trouvés précé- demment chez des rats après la prise de repas tests (Gallaher D. et al., Am. J. Physiol., 1985, 249, 184-191). TABLEAU III Contenus de l'estomac et vidanges gastriques après 2 heures de digestion* Groupe Contenu stomacal (% dpm) vidange gastrique (% dpm) 1 5 Témoins (T) 50,8 + 8,3 49,1 + 8,3 ,7 + 4,8 49,3 + 4,8 Lipogélosomes (LGS) 43,6 5 56,4 5 44,3 + 4,8 55,7 + 4,8 2 0 Ingrédients (I) 52,6 + 4,1 47,4 + 4,1 51,9+3,5 48,1 +3,5 * Les résultats sont exprimés en pourcentage de la radioactivité (en dpm) intubée. La première ligne concerne les lipides-l4C, la deuxième ligne concerne le cholestérol-3H. 2 5 Aucune différence significative n'a été observée entre les groupes par le test de Fisher (p ou moins poussée. La figure 1 montre les pourcentages de triglycérides (TG), diglycé- rides (DG), monoglycérides (MG) et acides gras (AG) trouvés dans le contenu stoma- cal, deux heures après l'intubation du repas test contenant des triglycérides. La propor- tion des triglycérides est restée significativement plus importante en présence des ingrédients (+21,6 % par rapport au groupe T) et des lipogélosomes' (+31,3 %) dans le repas-test, contrairement à celles des diglycérides et des acides gras qui sont signifi- cativement plus faibles. La proportion des monoglycérides n'est pas significativement différente entre les trois groupes, cependant elle a subi une nette diminution dans le contenu stomacal des rats du groupe LGS (-48,5 % par rapport au groupe T). Les proportions des classes lipidiques dans le contenu stomacal des rats du groupe Ingrédients sont toujours intermédiaires avec celles des groupes Témoins et LGS. Le cholestérol reste inchangé, ne subissant aucune transformation au niveau stomacal. Sur cette figure 1, chaque histogramme est la moyenne i SEM des valeurs individuelles de chaque groupe (T: Témoins; I: Ingrédients; L: Lipogélo- somes ). Des lettres différentes indiquent des différences significatives (p avec le groupe Témoins par le test de Scheffé. 2) Effets des lipogélosomes dans le compartiment intestinal Comme pour le contenu stomacal, le contenu intestinal des rats sacrifiés après 2 heures de digestion ne présente pas de différence significative entre les groupes Témoins, Ingrédients et LGS en terme de quantité de lipides- '4C. La figure 2 montre que la répartition des lipides-14C dans les trois segments intestinaux est similaire pour les groupes Témoins et LGS, avec une décroissance de la quantité de lipides-14C de la partie supérieure à celle inférieure de l'intestin. Une quantité nettement plus faible (mais non significative) de lipides-14C est retrouvée dans le contenu intestinal du segment supérieur et de l'ensemble de l'intestin du groupe Ingrédients. A cette figure 2, chaque histogramme est la moyenne SEM des valeurs individuelles de chaque groupe (T: Témoins; I: Ingrédients; L: Lipogélosomes'). Des lettres différentes indiquent des différences significatives (p somes'. En raison d'une variabilité assez forte intra-groupe, les ingrédients et les lipo- gélosomes n'ont pas fait apparaître de différences significatives sur les contenus des segments intestinaux supérieur et moyen. A cette figure 3, chaque histogramme est la moyenne + SEM des valeurs individuelles de chaque groupe (T: Témoins; I Ingrédients; L: Lipogélosomes). Des lettres différentes indiquent des différences significatives (p rence significative (p Comme le montre la figure 2, la répartition du cholestérol le long de l'intestin a été modifiée par les ingrédients et les lipogélosomes . Les ingrédients ont diminué significativement le cholestérol dans le contenu intestinal du segment supérieur (-57,3 % par rapport au groupe T); les lipogélosomes ont augmenté significativement le cholestérol dans le contenu intestinal du segment inférieur, ainsi que dans la totalité du contenu intestinal (respectivement, +104,5 % et +34,4 % par rapport au groupe T). Les résultats pour les rats sacrifiés au bout de 24 heures de digestion ne présentent pas de différence entre les trois groupes. Les radioactivités mesurées ont été très faibles, l'intestin étant quasiment vide à ce temps de la digestion. 3) Effets des lipogélosomes sur l'absorption des triglvcérides et du cholestérol alimentaires Le contenu de la muqueuse intestinale n'a été prélevé et analysé que pour le temps de 2 heures de digestion; une telle analyse pour le temps de 24 heures n'aurait eu aucun intérêt, le temps de transit des lipides dans les entérocytes étant court. Le contenu en triglycérides des cellules de la muqueuse intestinale n'a pas présenté de différences significatives entre les groupes T, I et LGS (figure 4). L'absorption du cholestérol alimentaire est largement affectée par la présence des lipogélosomes dans le repas test et dans une moindre mesure par celle de leurs ingrédients (figure 4). L'absorption du cholestérol est diminuée significativement par les ingrédients au niveau du segment supérieur de la muqueuse intestinale. Les lipogélosomes ont entraîine une diminution significative de l'absorption du cholestérol vers les segments supérieur et inférieur de la muqueuse, ainsi que vers la totalité de la muqueuse intestinale (respectivement, -32,9%, -47% et - 16,8% par rapport au groupe T). A cette figure 4, chaque histogramme est la moyenne + SEM des valeurs indivi- duelles de chaque groupe (T: Témoins; I: Ingrédients; L: Lipogélosomes). Des lettres différentes indiquent des différences significatives (p Témoins par le test de Scheffé. 4) Effets des lipogélosomes sur les taux plasmatiques des lipides Les quantités de triglycérides-14C et de cholestérol-3H, dans le plasma des rats sacrifiés après 2 heures de digestion, sont représentées sur la figure 5. Les ingrédients et les lipogélosomes ont tendance à diminuer les triglycérides plasmatiques mais les différences observées ne sont pas significatives. Le cholestérol plasmatique est significativement abaissé par les lipo- gélosomes (- 42,6 % par rapport au groupe T). Les ingrédients ont un effet similaire mais non significatif par rapport au cholestérol plasmatique des rats du groupe Témoins. A cette figure 5, chaque histogramme est la moyenne + SEM des valeurs individuelles de chaque groupe (T: Témoins; I: Ingrédients; L Lipogélo- somes). Des lettres différentes indiquent des différences significatives (P avec le groupe Témoins par le test de Scheffé. Pour le temps de 24 heures, aucune différence entre les trois groupes n'est observée. 5) Effets des lipogélosomes sur le métabolisme lipidique hépa- tique Les ingrédients et les lipogélosomes ne présentent pas d'effet mar- qué sur le stockage des lipides-14C au niveau hépatique, au bout de deux heures de digestion (figure 6). Ils induisent, en revanche, une baisse, non significative en raison d'une forte variabilité intra-groupe, de la quantité de cholestérol stocké par le foie, en la diminuant respectivement de 35 % et 33 % par rapport au groupe T. A cette figure 6, chaque histogramme est la moyenne + SEM des valeurs individuelles de chaque groupe (T: Témoins; I: Ingrédients; L: Lipogélo- somes). Aucune différence significative n'a été observée par le test de Fisher (p Au temps de 24 heures de digestion, les quantités de lipides radio- marqués présents dans les foies ne présentaient aucune différence entre les trois groupes. 6) Lipides et cholestérol alimentaires dans le caecum et les fèces Le caecum des animaux sacrifiés au bout de deux heures de digestion ne contenait pas ou à des doses infimes de radioactivité en 14C comme en 3H. De plus, il n'y avait pas de fèces. Au temps de 24 heures de digestion (figure 7), les quantités de lipides14C retrouvées dans le caecum et les fèces sont significativement augmentées chez les rats ayant reçu un repas test contenant des lipogélosomes (+229,5 % par rapport au groupe T). L'effet est encore plus marqué en ce qui concerne les quantités de cholestérol alimentaire qui sont augmentées significativement à la fois pour les groupes Ingrédients et LGS (respectivement, +133,3 % et +229,4 % par rapport au groupe T). L'accroissement des quantités de cholestérol non absorbé par la muqueuse intestinale est plus faible pour le groupe I, comparativement au groupe LGS, et ceci de façon significative. A cette figure 7, chaque histogramme est la moyenne + SEM des valeurs individuelles de chaque groupe (T: Témoins; I: Ingrédients; L Lipogélo- somes'). Des lettres différentes indiquent des différences significatives (p les groupes par le test de Fisher et par le test de Scheffé. Cette étude montre que l'ingestion de lipogélosomes avec la ration alimentaire induit bien une diminution de l'absorption des lipides (triglycérides et cholestérol) alimentaires. L'hypothèse la plus vraisemblable, au vu des résultats, sur le mode d'action des lipogélosomes , est celle d'une réduction de la lipolyse des triglycé- rides dans la lumière intestinale, conduisant à une production moins importante de monoglycérides et d'acides gras libres. Cette baisse de la lipolyse aurait principalement deux conséquences: une diminution de l'absorption des monoglycérides et des acides gras libres; une diminution de la solubilisation du cholestérol dans la phase micellaire, entraînant ainsi une réduction de l'absorption du cholestérol. L'action des lipogélosomes sur la diminution de l'absorption du cholestérol par la muqueuse intestinale est plus importante que celle sur les mono- glycérides et les acides gras. Ceci peut être attribué au fait que le taux d'absorption du cholestérol est beaucoup plus faible que celui des triglycérides (respectivement 80 à % et40à60%). Ainsi, même dans les conditions "normales" de digestion, l'absorption du cholestérol est limitée. La modification d'un paramètre (baisse de la concentration en monoglycérides et en acides gras libres) entraîne alors une perturbation importante de l'absorption du cholestérol. De plus, il est possible que les lipogélosomes trappent une partie des sels biliaires. Cette action aurait pour conséquence une diminution de la solubilisation du cholestérol dans la phase micellaire conduisant à une baisse de son absorption. Ces résultats sont renforcés par ceux obtenus lors d'une étude sur les effets de l'ingestion chronique de lipogélosomes sur le métabolisme lipidique (exemple 3 ci-après). EXEMPLE 4: Effets de l'ingestion chronique de différentes quantités de LGS sur le métabolisme des lipides chez le rat. ANIMAUX ET REGIMES: 8 groupes de 10 rats Wistar (IFFA CREDO, L'Arbresle, France), âgés de 14 semaines, ont été aléatoirement constitués. Les animaux sont mis en cage dans une salle climatisée (température de 21 C, 50 % d'humidité), avec un cycle lumière-obscurité de 12h-12h. La nourriture et l'eau ont été fournies ad libitum. 8 régimes sont effectués manuellement. Les lipogélosomes (LGS), ainsi que les matières premières constitutives des LGS (I = ingrédients) sont identiques à ceux de l'exemple 1. La composition détaillée de chaque régime est présentée dans le Tableau IV. Les proportions des divers nutriments des régimes ont été calculés en tenant compte des apports lipidiques des lipogélosomes ou des ingrédients. 8 régimes ont été testés: PL - régime pauvre en lipides (4 % de triglycérides) RL - régime riche en lipides (25 % de triglycérides + 1,2 % de cholestérol) LGS 1 - régime riche en lipides dont 1,25 % de PL (LGS) LGS 2 - régime riche en lipides dont 2,5 % de PL (LGS) LGS 3 - régime riche en lipides dont 3,75 % de PL (LGS) I 1 - régime riche en lipides dont 1,25 % de PL (ingrédients LGS) I 2 - régime riche en lipides dont 2,5 % de PL (ingrédients LGS) I 3 - régime riche en lipides dont 3,75 % de PL (ingrédients LGS) Afin de ne pas dégrader les LGS, les régimes LGS 1, 2 et 3 ont été préparés extemporanément. Les autres régimes ont été congelés à -20 C. w w r-j K) u-i o o u1l o TABLEAU IV PL RL LGS 1 LGS2 LGS3 I 1 2 1 3 Caséine 25 17 17 17 17 17 17 17 Amidon 35 28,8 28,8 28,8 28,8 28,8 28,8 28,8 Glucose 20 11 11 11 11 11 11 11 Huile de mais 3 3 3 3 3 3 3 3 Saindoux 0 22 20,75 19,5 18,25 20,75 19,5 18,25 PLLGS 0 0 1,25 2,5 3, 75 0 0 0 Ingrédients PL LGS 0 0 0 0 0 1,25 2,5 3,75 Cholestérol 0 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 Cellulose 9 9 9 9 9 9 9 9 Vitamines I 1 1 1 1 1 1 1 Minéraux 7 7 7 7 7 7 7 7 Energie (Kcal/100 g) 347 452, 2 452,2 452,2 452,2 452,2 452,2 452,2 t'J Composition des régimes (g/100). PL = régime pauvre en lipides (3 %); RL = régime riche en lipides (25 %); LGS I = régime contenant % de lipides dont 1,25 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; LGS 2 = régime contenant 25 % de lipides dont 2,5 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; LGS 3 = régime contenant 25 % de lipides dont 3,75 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; I 1 = régime contenant 25 % de lipides dont 1,25 % de phospholipides; 1 2 = régime contenant 25 % de lipides dont 2,5 % de phospholipides; I 3 = régime contenant 25 % de lipides dont 3, 75 % de phospholipides. -. C; DEROULEMENT DE L'ETUDE: Le poids des rats est mesuré au début et à la fin de l'étude. L'ingéré est mesuré (sur 3 jours) après 2 semaines et à la fin de l'étude. Des prises de sang sont effectuées au début de l'étude et après 3 semaines de régime sur les groupes RL et LGS 3. Les fèces ont été récoltés (sur 4 jours) pendant l'avant dernière semaine, il ont été pesés et congelés à -20 C. La mesure du coefficient d'absorption du cholestérol est effectuée sur les fèces collectés au début de la dernière semaine. Après 6 semaines de régime, les animaux sont sacrifiés après un jour de jeûne, sous anesthésie: le foie (prise du poids puis congélation à - 20 C) et environ ml de sang (ponction à l'aorte abdominale) ont été prélevés. Le sérum est obtenu par centrifugation du sang total. Toutes les analyses sur sérums sont réalisées sur du sérum frais. ANALYSES: - Les triglycérides (G. BUCCOLO et al., Clin. Chem., 1973, 19, 476- 482), les phospholipides (M. TAKAYAMA et al., Clin. Chem. Acta., 1977, 79, 93-98), le cholestérol total (J. SIEDEL et al., Clin. Chem., 1983, 29, 1075- 1080) et le choles- térol libre (F. STAHLER et al., Med. Lag., 1973, 30, 29-37) de 20 rats (groupes RL et LGS 3) ont été dosés au temps initial et après 3 semaines de régime par méthodes enzymatique-colorimétrique. - Les triglycérides, les phospholipides, le cholestérol total et le cho- lestérol libre du sérum de chaque rat ont été dosés après 6 semaines de régime à l'aide des mêmes méthodes. - Les VLDL (very low density lipoproteins), LDL (low density lipo- proteins) et les HDL (high density lipoproteins) du sérum de chaque rat, ont été sépa- rées (T. BROUSSEAU et al., Clin. Chem., 1993, 39, 960-964) en fin d'étude par ultra- centrifugation séquentielle (VLDL: 436 000 g, 2,5h à 10 C; LDL: 436 000 g, 2,5 h à 10 C; HDL: 436 000 g, 5 h à 10 C) à l'aide d'une ultracentrifugeuse Beckman Optima TLX et du rotor TL- 100.2. Les triglycérides, les phospholipides, le cholestérol total et le cholestérol libre ont été dosés sur les différentes classes de lipoprotéines par les méthodes enzymatique-colorimétrique précitées. - Les activités enzymatiques toxicologiques y-GT (JP. PRESIJN et al., J. Clin. Chem. Biochem., 1976, 14, 421-427), GOT (G. KESSLER et al., 9th Int. Congr. Clin. Chem., Toronto, 1975), GPT (G. KESSLER et al., 9th Int. Congr. Clin. Chem., Toronto, 1975) et phosphatase alkaline (S. MORGENSTERN et al., Clin. Chem., 1965, 11, 876-881) ont été dosées sur le sérum des groupes RL et LGS 3 au temps initial et après 3 semaines de régime, et sur le sérum de chaque rat au bout de 6 semaines de régime. - Environ I g du foie de chaque rat a été broyé dans de l'éthanol. Les triglycérides (G. BUCCOLO et al., Clin. Chem., 1973, 19, 476-482) et les phospho- lipides (J. AMIC et al., Clin. Chem. Acta., 1972, 40, 107-114) ont été dosés après extraction par la méthode de Folch (J. FOLCH et al., J. Biol. Chem., 1957, 226, 498- 509). Le cholestérol total (J. SIEDEL et al., Clin. Chem., 1983, 29, 1075-1080) a été dosé après saponification, extraction par de l'éther de pétrole, lavage par de l'éthanol/eau, évaporation et dissolution dans de l'isopropanol (L. CARA et al., Nutr. Res., 1991, 11, 907-916). - Des aliquotes (préparations spécifiques) du foie de chaque rat ont été préparées afin de conserver des échantillons par congélation à -80 C pour des ana- lyses éventuelles (HMGCoA red., ACAT, 7 ax hydroxylase). RESULTATS EVOLUTION DU POIDS ET DE L'INGÉRÉ Au début de l'étude, les moyennes des poids de chaque groupe de rats n'étaient pas significativement différentes (de 325 2 g à 330 + 2 g). Après 6 semaines de régime, le poids des rats des groupes Il (419 + 7 g) et 13 (414 9 g) était significativement inférieur à celui du groupe LGS3 (444 + 7 g). Par contre, aucune différence significative n'apparaissait entre les groupes LGS, I et le régime témoin RL (425 8 g). Les mêmes différences significa- tives apparaissaient au niveau du gain de poids (RL: 95 + 9 g, LGS3: 116 9 g, Il: 92 +7g, I3:89 9g). Les valeurs de l'ingéré du groupe PL après 2 semaines (41,2 - 1,5 g) et 5 semaines (38,9 - 0,9 g) étaient significativement supérieures aux valeurs de l'ingéré des autres groupes (de 25,3 - 1,0 g à 31,7 + 1,0 g). Le régime PL contenant moins de calories par gramme de régime, les rats de ce groupe ont augmenté leurs ingérés. Les ingérés en LGS (en poudre) étaient les suivants: LGS 1: 0,51 g/j; LGS 2: 1,04 g/j; LGS 3: 1,67 g/j, ce qui correspond aux quantités suivantes de phospholipides: LGS 1: 0,28 g/j; LGS 2: 0,57 g/j; LGS 3: 0,92 g/j. VARIATIONS DES PARAMETRES LIPIDIQUES SERIQUES Le Tableau V présente les valeurs des paramètres sériques des rats après 6 semaines de régime. w W M N.) - U-1 o tn1 o tnI o ul TABLEAU V PL RL LGS 1 LGS2 LGS3 I 12 1 3 Triglycérides 1,83+0,2 la 0,4840,04b 0,484-0,04b 0,64 0,06t- 0,68+0, 060,454-0,03b 0,82-0,09 0,47+0,03b (mM) 1,62-0,18a 0,37 0, 04b 0,32 0,04': 0,464-0,06a 0,42 0,05' 0,24+0,02: 0,44-0,04 0,20+0, 04e Phospholipides 1,82+0,08a 1,24 0,07b 1,41+0,07 1,33-0,05k 1,26+0, 07r 1,34+0,03 1,42+0,06c 1,28+0,05 (mM) Cholestérol 1,91+0,08 2,02+0, 22 2,07+0,11 1,82+0,11 1,57+0,12 2,29+0,16c 1,81 0,09 1,80 0,06a Total (mM) 2,05 0,09' 2,120,24' 2,10 0,12 1,80+0,11ab 1,53+0,12a 2,40-0,18 1,950,09b 1,99-0,07b 4- aq_ a ah b- ah 4 Cholestérol 0,28+0,03a 0,28 0,05 0, 26+0,02 0,22+0,03 0,17+0,02 0,27 0,03 0,22+0,02 0,26 0,02 libre (mM) 0,33+0,03 0,31+0,05 0,30+0,03 0,24+0,03 0,18+0,02e 0,27+0, 03 0,29+0,04b 0,44+0,06a Cholestérol 1,63 0,074 1,74-0,18k 1,8140, 10 1,60 0,08 1,40+0,10a 2,02+0,13 1,60:0,09a 1,54 0,06 4 estérifié (mM) 1,70+0,064 1,81+0,20 1,81 0,11 1,58-0,09 1,36 0,11 2,14+0,16c 1,68+0,094 1,55+0,094 --, Pli O -J W -W IV- U1 0 UL 0 U CO U1 TABLEAU V (Suite) PL RL LGS 1 LGS 2 LGS 3 I 12 13 Ph. Alc 4- a' iPh. Al. 78,8+4,9a 88,8+8,1b 89,4+6,0 78,3+4,0 81,4+5, 0 71,2+4,0a 88,44,5b 80,1+3,4 (U/I) GOT 134+10O 206+39 186+20' 149 19ab 109-9c 15220ab' 155+ 18a- 144+13 (U/I) GPT 26,7+2,4a 74,9+36,1b 67,4+14,7 48,1+13,6b 30,9+5,4' 58,9 14,3' 54,4+14,9a 29,9 3,3' (UIT) y- GTI 0,30+0,21 0,00 0,00 0,00+0,00 0,50+0,22 0,00+0, 00 0,00+0,00 0,40+0,22 0,60+0,60 (u /o) _ _ _ _ o _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Les valeurs représentent la moyenne + SEM de 10 rats. Pour un paramètre, des lettres différentes indiquent des différences significatives. Pour un paramètre, deux lignes de valeurs indiquent que les dosages ont été effectués dans deux laboratoires différents. PL = régime pauvre en lipides (3 %); RL = régime riche en lipides (25 %); LGS 1 = régime contenant 25 % de lipides dont 1,25 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes; LGS 2 = régime contenant 25 % de lipides dont 2,5 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; LGS 3 = régime contenant 25 % de lipides dont 3,75 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; I 1 = régime contenant 25 % de lipides dont 1, 25 % de phospholipides; I 2 = régime contenant 25 % de lipides dont 2,5 % de phospholipides; 1 3 = régime contenant 25 % de lipides dont 3,75 % de phospholipides. C L'ingestion des régimes riches en lipides ont induit une diminution significative des triglycérides du sérum des rats par rapport au régime pauvre en lipides alimentaires (Tableau VI). Ce résultat a été trouvé dans d'autres études (JL. VIGNE et al., Br. J. Nutr., 1987, 58, 405-413; F. CHANUSSOT et al., Ann. Nutr. Metab., 1988, 32, 271-281; G. NALBONE et al., J. Nutr., 1988, 118, 809-817; G. NALBONE et ai., Lipids., 1989, 24, 179-186), mais l'amplitude des variations dépend de la composi- tion des régimes, de la souche de rats et de la durée des régimes. Le régime I2 a induit une augmentation significative des triglycérides du sérum par rapport aux régimes RL, LGS 1, I 1 etI3. L'analyse des lipides des différentes classes de lipoprotéines (Tableau VI) montre que l'augmentation de la triglycéridémie avec le régime PL était due princi- palement à une augmentation significative des triglycérides des VLDL, et secondaire- ment à une augmentation significative des triglycérides des LDL et des HDL. L'augmentation obtenue avec le régime I 2 est principalement due à une augmentation !5 des triglycérides des VLDL. Par rapport au régime RL, le régime LGS 3 a induit une augmentation significative des triglycérides des LDL; les régimes LGS 2, I 2 et I 3 ont provoqué une augmentation significative des triglycérides des HDL. L'augmentation de l'ingéré en LGS ou en I n'a induit que de faibles variations des triglycérides dans les différentes classes de lipoprotéines: il n'apparaît donc pas d'effet dose pour ce para- mètre. TABLEAU VI Composition lipidique des lipoprotéines après 6 semaines de régime CHOLESTEROL TOTAL (mM) CHOLESTEROL LIBRE (mM) VLDL LDL HDL VLDL LDL HDL PL 0,22a 0, 54bc 1,15 0,06ab 0,02a 0,19a +0,03 0,05 0,04 +4-0,02 O 0,01 =0,01 RL 0,66b 0,55ab 0,81bd 0,10b 0,07d 0,11bc +0,10 0,12 0,04 +0,02 0,04 0,02 LGS 1 0,42' 0,71- 0,94 0,06ad 0,07cd 0,14bc + 0,06 +0,07 -0,06 =0,01 0,01 i0,02 LGS 2 0, 36ad 0,50abc 0,96' 0,03acd 0,03- 0,16ab +0,04 +0,08 0,05 0,01 0,02 +0,01 LGS 3 0,37d 0,40b 0,80d 0,02c 0,01ab 0,14 b +0,05 +0,07 +0,06 +0,01 0,01 +0,01 I 1 0,93e 0,65e 0,70 0,07bd 0,10 0,10 +0,11 +0,09 +0,02 +0,01 +0,01 + 0,01 1 2 0,47d 0,49'ab 0,86' 0,03acd 0,02ac 0,16a' +0,03 +0,06 +0,03 +0,01 +0,01 +0,03 * 1 3 0,42d 0,36b 1,02w' 0,03ac 0,03 0,21a +0,04 0,06 +0,06 +0,0,0 0,01 = 0,02 TABLEAU VI (suite) CHOLESTEROL TRIGLYCERIDES PHOSPHOLIPIDES ESTERIFIE (mM) (mM) (mM) VLDL LDL HDL VLDL LDL HDL VLDL LDL HDL PL 0,16a 0,52 2 0,96a 1,03a 0,13a 0,67a 0,31 ade 0,51a 0,99a +0,02 +0,05 0,04 0,16 0,02 +0,06 +0,04 =0,03 +0,04 RL 0,56 0,48" 0,70 0,28' 0,07 0,14 0,26a 0,38 0,61 +0,08 +0,09 0,04 0,03 +0,01 +0,01 +0,02 =-0,05 0,03 1 0 LGS 1 0,36c 0,64a 0,80c 0,26 0,05b 0,17 0,23j 0,43 0,75d +0,05 +0,05 +0,04 +0,03 +0,01 +0,01 +0,02 0,03 0,05 LGS 2 0,33c 0,47 ad 0,80e 0,35bd 0,08- 0,22cd 0,21k 0,38b 0,74d +0,03 0,06 +0,04 +0,04 0,01 +0,02 0,02 +0,03 0,03 LGS 3 0,35C 0,39d 0,66b 0,38' 0,10O 0,20' 0,21' 0,36' 0,69bd 1 5 +0,04 0,06 0,04 0,04 +0,01 0,02 +0,02 +0,03 0,05 I 1 0,86 0,55- 0,60 0,24oe 0,08oe 0,13 0,32 0,50a 0,53- +0,10 +0,08 +0,02 +0,02 +0,01 0,01 0,02 +0,02 0,02 I 2 0,44 0,47a 0,70 0,46 0,09 0,26 0,28 0,42a 0,72 40,02 +0,05 +0,03 +0,05 0,01 +0,03 0,01 0,03 0,03 I 3 0,39c 0,33 0,81c 0,19e 0,06 0,22 0,20 0,30 0,78 +0,03 0,05 +0,06 0,02 0,01 +0,01 O 0,02 0,03 0,04 Légende du Tableau VII: Les valeurs représentent la moyenne 2 5 SEM (en italique) de 10 rats. Pour chaque colonne, des lettres différentes (en expo- sant) indiquent des différences significatives. VLDL = Very Low Density Lipoproteins; LDL = Low Density Lipoproteins; HDL = High Density Lipoproteins; PL = régime pauvre en lipides (3 % ); RL = régime riche en lipides (25 %); LGS 1 = régime contenant 25 % de lipides dont I,25 % de phospholipides sous forme de lipogélo- somes ; LGS 2 = régime contenant 25 % de lipides dont 2,5 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; LGS 3 = régime contenant 25 % de lipides dont 3,75 % de phospholipides sousforme de lipogélosomes ; I 1 = régime contenant 25 % de lipides dont 1,25 % de phospholipides; I 2 = régime contenant 25 % de lipides dont 2,5 % de phospholipides; I 3 = régime contenant 25 % de lipides dont 3,75 % de 3 5 phospholipides. Concernant les phospholipides du sérum (Tableau V), le régime pauvre en lipides a induit aussi une augmentation significative de ce paramètre par rapport aux régimes riches en lipides. Seul le régime I2 a provoqué une augmentation des phospholipides du sérum par rapport au régime RL. Après séparation des différentes classes de lipoprotéines (Tableau VI), on a constaté que l'augmentation des phospholipides du groupe PL était essentiel- lement due à une augmentation quantitative des phospholipides des HDL. Cette classe de lipoprotéines contenant le plus de phospholipides, il est normal que l'augmentation soit retrouvée à ce niveau. Concernant les effets des LGS et des I, on a noté une aug- mentation significative des phospholipides des HDL avec les régimes LGS 1, LGS 2, I 2 et I 3 par rapport au groupe RL. Le régime RL a induit une légère augmentation du cholestérol total du sérum par rapport au régime PL (Tableau V). Par rapport au régime RL, on a noté une diminution significative (-22,3 %) du cholestérol total du sérum avec le régime LGS 3. La diminution obtenue avec le régime I 3 a été moins importante (10,9 %). Le Tableau VI montre que la diminution du cholestérol total obtenue avec le régime LGS 3 est due à une diminution significative du cholestérol total des VLDL et secondairement à une tendance à la diminution du cholestérol total des LDL. Par rapport au régime RL, la diminution du cholestérol total des VLDL+ LDL à la suite de l'ingestion du régime LGS 3 était de 36,4 %. Par contre, aucune variation du choles- térol total des HDL n'a été notée à la suite de l'ingestion de ce régime. Chez l'animal, les effets des phospholipides alimentaires dépendent aussi de la méthodologie utilisée. Si on compare les effets des régimes LGS 3 et I 3, il est important de noter que le régime LGS 3 a induit deux fois plus de diminution de la cholestérolémie. D'autre part, ces effets des LGS sur la cholestérolémie sont fonction de la dose ingérée. L'augmentation de l'ingéré en lipides alimentaires n'a pas induit de variation significative (sauf pour le régime LGS 3) du cholestérol libre du sérum (Tableau V). Seul le régime LGS 3 a induit une diminution significative de 39 % du cholestérol libre du sérum par rapport au régime RL. Par contre, les résultats des lipides des différentes classes de lipo- protéines (Tableau VI) montrent que suivant le régime ingéré, la répartition du choles- térol libre est différente. La diminution du cholestérol libre du sérum à la suite du régime LGS 3 par rapport au régime RL est due à une diminution significative du cholestérol libre des VLDL et des LDL. Il faut aussi mentionner que, par rapport au régime RL, le régime I3 a induit une augmentation significative du cholestérol libre des HDL. Concernant les variations du cholestérol estérifé du sérum (Tableau V), on a observé une diminution significative de 20 % à la suite de l'ingestion du régime LGS 3 par rapport au régime RL. Les régimes LGS 2, I 2 et I 3 tendent à induire une diminution de ce paramètre mais de manière non significative. Avec le régime LGS 3, la diminution par rapport au régime RL est due à une diminution significative du cholestérol estérifié des VLDL et une tendance à la diminution au niveau des LDL et des HDL (Tableau VI). Toujours par rapport au régime RL, nous n'avons pas observé de variation significative du cholestérol estérifié des LDL et des HDL avec les régimes contenant des LGS ou des I. Le Tableau V (suite) présente les résultats des paramètres toxico- logiques du sérum des rats au bout de 6 semaines de régime. Avec le régime PL, l'addition de lipides dans les régimes n'a pas induit d'augmentation de la phosphatase alcaline. Par contre, le régime I 1 a induit une diminution significative de ce paramètre par rapport aux régimes RL, LGS 1 et I 2. Le régime RL a augmenté significativement l'activité GOT par rapport au régime PL. Les autres régimes n'ont pas modifié significativement l'activité de cette transaminase par rapport au régime PL. Par contre, on a noté une forte diminu- tion significative (47 %) avec le régime LGS 3 par rapport au régime RL. Une diminu- tion significative (30 %) a été aussi obtenue avec le régime I 3. Par rapport au régime PL, le régime RL a induit une augmentation de l'activité GPT. Les régimes contenant des LGS ou des I n'ont pas modifié significati- vement l'activité de cette transaminase par rapport aux régimes PL et RL. Là encore, les valeurs les plus faibles ont été obtenues à la suite de l'ingestion des régimes LGS 3 etI3. Concernant l'activité y-GT, la sensibilité de la méthode de dosage n'a pas permis de mesurer cette activité enzymatique, étant donné les trop faibles valeurs. Aucune activité de cette enzyme n'a été détectée quel que soit le régime ingeré. Les résultats des dosages toxicologiques montrent que chez le rat, l'ingestion de LGS à ces doses ne sont pas toxiques. Les LGS ont même tendance à présenter un effet hépato-protecteur. VARIATIONS DES PARAMETRES LIPIDIQUES DES FOIES. L'addition de lipides alimentaires dans les régimes induit une aug- mentation significative du poids des foies, alors que l'augmentation de la quantité de LGS tend à diminuer le poids des foies. Cette variation est plus prononcée avec l'augmentation de la quantité d'ingrédients (groupe I). Il faut rappeler qu'avec les groupes I, le poids des rats était plus faible. Il est donc normal que le poids des foies soit plus faible avec ces groupes. UJ J IN I U 1 0 U 11 U1 0C U1 0C TABLEAU VII Poids et lipides des foies des rats au bout de 6 semaines de régime PL RL LGS 1 LGS 2 LGS 3 I 1 2 1 3 Poids des foies 10,8 0,3 1,1,+,i Poids des foies I10, 8+O,3a 14'1+ 0s5br 14,1'0,9'9 13,3+0,4br 13,5+0,5r 12,6+0,2è 12,6+0,6ea 11,4+ 0,5e (g) Cholestérol total 3,7+0,3a 17,3+2,4' 22,5+2,3t' 22,0 2,5' 26,0+1,4a 36,7+2,5 33,4+2,7 24,7 1, lc (mg/g de foie) Cholestérol total 39+3a 244+36b 317+38t 299 41 i 352+24we 461+32a 429+45a 283 18' (mg/foie) Triglycérides 13,2+0,7a 18,7 1,3b 30,5+2,6a 27,1+1,7'i 38,9+2,2f 26,2 1, 7'i 34,31,6f 23,9+1,5e (mg/g de foie) Triglycérides 142+8a 260+15b 437+54' 365+32a 528+41 e 328 22' 439 35d 277+25' (mg/foie)_ Les valeurs représentent la moyenne + SEM de 10 rats. Pour un paramètre, des lettres différentes indiquent des différences significatives. PL = régime pauvre en lipides (3 %); RL = régime riche en lipides (25 %); LGS I = régime contenant 25 % de lipides dont 1,25 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; LGS 2 = régime contenant 25 % de lipides dont 2,5 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; LGS 3 = régime contenant 25 % de lipides dont 3,75 % de phospholipides sous forme de lipogélosomes ; I 1 = régime contenant 25 % de lipides dont 1, 25 % de phospholipides; I 2 = régime contenant 25 % de lipides dont 2,5 % de phospholipides; I 3 = cn régime contenant 25 % de lipides dont 3,75 % de phospholipides. Concernant le cholestérol total des foies, l'addition de lipides dans les régimes alimentaires induit une augmentation significative de la concentration (mg/g de foie) et de la quantité totale (mg/foie) en cholestérol total des foies (Tableau VI). Par rapport au régime RL, la concentration en cholestérol total a été augmentée significati- vement avec les régimes LGS 3, et les trois régimes I. Par contre, la quantité totale de cholestérol dans les foies n'est plus significative avec le régime I 3, alors qu'avec les autres groupes les différences significatives sont inchangées par rapport au régime RL. L'augmentation de la quantité de lipides alimentaires a induit une augmentation significative de la concentration et de la quantité totale des triglycérides des foies (Tableau VI). Par rapport au régime RL, l'addition de LGS ou d'I a augmenté la concentration (mg/g de foie) en triglycérides des foies. Par contre, étant donné que le poids des foies était différent suivant les groupes, nous n'avons plus noté de diffé- rence significative au niveau de la quantité (mg/foie) de triglycérides des foies avec les groupes I 1 et I 3. Les effets de différentes quantités de LGS ou des I sur les paramètres lipidiques des foies ne sont pas corrélés à la quantité ingérée. Dans cette étude, l'ingestion de LGS n'a pas induit de variation signi- ficative du poids des foies. Cependant, les résultats obtenus montrent que les lipogélosomes ont des effets différents de ceux des ingrédients. CONCLUSION Cette étude montre plusieurs résultats importants - Les quantités de LGS utilisées (de 1,25 à 3,75 % dans les régimes) ne sont pas toxiques. - Des effets métaboliques chez le rat sont obtenus avec 3,75 % de phospholipides sous forme de LGS dans les régimes (rapport triglycérides sur phos- pholipides alimentaires de: TG / PL = 5,7). La dose 2,5 % présente des effets moins marqués (TG / PL = 9). Étant donné que le rat dispose d'un métabolisme lipidique bien régulé, il est probable que chez l'homme des effets soient observés avec des doses de 2,5 %. Si nous considérons que l'homme ingère environ 100 g de triglycérides par jour, il faudrait ingérer environ 11 g de phospholipides sous forme de LGS pour espérer observer des effets (soit 20 g de LGS si les LGS contiennent 55 % de phospholipides). - Les principaux effets des LGS sont observés au niveau du cholesté- rol plasmatique et sont fonction de la dose ingérée (cholestérol total coefficient de corrélation R=0,91; cholestérol libre: R=0,98; cholestérol estérifié R=0,88). Les diminutions concernent principalement les VLDL et les LDL. - Une partie des effets induits par les LGS sur le métabolisme des lipides peuvent être comparés à ceux de la cholestyramine. Le Tableau VIII ci-après illustre les effets des LGS sur les sels biliaires et les stérols. TABLEAU VIII Groupes Excrétion Excrétion Excrétion Rapport Rapport fécale fécale fécale acides stérols journalière journalière journalière biliaires neutres 1i 5 d'acides de stérols de lipides primaires/ primaires/ biliaires neutres totaux acides stérols mg/j* mg/j* mg/j* biliaires neutres secondaires* secondaires* T 32,2+1,5 218,1+9,0 978,7+54,0 1,19-0,17 11,41+1, 01 RI LGS3 26,7+2,0a 295,7+8,8c 835,6+37,4a 0,60 0,10 b 1,27+0,23c R41 _ _ _ _ ___ * moyenne + SEM de 10 rats, a, b, c différent significativement de la rangée qui précède respectivement à p L'ensemble des résultats de cette étude montrent que les LGS pré- sentent, de maniere surprenante, les propriétés suivantes - Effets sur le métabolisme des lipides: Diminution du cholestérol total (Tableau V) entre le régime témoin (RL) et la plus forte dose de LGS (LGS 3). De manière plus précise, les LGS 3 entraînent une diminution signifi- cative du cholestérol plasmatique total de l'ordre de 22 % et du cholestérol estérifié, de l'ordre de 20 %. Ces diminutions sont dosesdépendantes. En outre, les LGS 3 entraînent une diminution du cholestérol total de VLDL de l'ordre de 44 % et du cholestérol total des LDL de l'ordre de 36 %. Les LGS induisent une répartition favorable des lipides des diffé- rentes classes de lipoprotéines (Tableau VI). - Absence de toxicité, effet hypotoxique: Diminution avec LGS 3 de GOT (Tableau V suite) par rapport au témoin (RL), tendance à la diminution avec GPT. - Dose efficace par voie orale: entre 2,5 et 3,75 % de phospholipides dans le régime. - Diminution des rapports sels biliaires primaires/secondaires et stérols neutres primaires/stérols neutres secondaires (Tableau VIII); ces résultats indiquent un changement de la quantité et/ou de la qualité des bactéries intestinales en présence de LGS. - On observe une augmentation de l'excrétion fécale des stérols neutres avec LGS 3, de l'ordre de +36 %, alors qu'il y a une diminution des acides biliaires fécaux de l'ordre de - 17 %. EXEMPLE 5: Comparaison qualitative et quantitative de la dispersion de lipogélosomes en phase aqueuse obtenue à l'étape 1 du procédé selon l'exemple 1, par rapport à une solution aqueuse reconstituée à partir d'une composition pulvérulente obtenue à l'étape 2 selon l'exemple 1. TABLEAU IX Dispersion LGS Solution Ecart reconstituée [PL] en g/g mat. sèche 0,359 + 0,020 0,341 i 0,017 -5,0 % (NS) [gélifiant] en g/g mat. sèche 0,344 + 0,028 0,315 - 0,014 -8,4 % (NS) [gélifiant]/[PL] 1,04 1,08 +3,8 % (NS) altération-profil lipidique NON NON 0 en nombre en nm polydispersité en % 183 i 3 180 - 27 -1,6 % (NS) aspect en microscopie 40,9 - 2,2 41,7 I 2,1 +2,0 % (NS) vésicules sphériques vésicules OUI rétractées [PL] = concentration en phospholipides (kit enzymatique Biomérieux); [gélifiant] = concentration en gélifiant total (méthode colorimétrique de Lowry); altération profil lipidique: d'après HPLC des PL; O nombre et polydispersité: d'après granulométrie 3 0 par SCP; aspect microscopie électronique: observations photographiques (microscopie électronique par coloration négative); (NS) = non significatif Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1 ) Composition pulvérulente, caractérisée: - en ce qu'elle est essentiellement constituée de liposomes unilamel- laires comprenant une phase lipidique externe constituée essentiellement de lipides de classe 4 (phospholipides), à l'exclusion des substances de classe 3 (cholestérol, acides gras à longue chaîne non ionisés) et des substances de classe 5 (sels biliaires, dérivés de l'acide fusidique) et un noyau aqueux interne formant un gel aqueux thermo- réversible irradiant jusqu'à la phase lipidique externe, lequel noyau aqueux interne est constitué essentiellement d'un mélange M d'au moins deux agents gélifiants non- polymérisables GI et G2, différents et dont le point de transition de phase gel-sol est supérieur ou égal à 37 C, GI étant un agent gélifiant sélectionné parmi les gélatines et les carraghénanes et G2 étant sélectionné parmi des carraghénanes ayant des propriétés différentes des carraghénanes sélectionnés pour G1, et les celluloses, lesquels lipo- somes ont un diamètre compris entre 20 nm et 1 gm, de préférence compris entre 50 nmet500nm;et - en ce qu'elle se présente sous la forme d'unités particulaires ayant un diamètre moyen compris entre 10 gm et 1 000 tim, formées d'un ou plusieurs desdits liposomes, entourés d'une gangue sélectionnée dans le groupe constitué par un gel aqueux thermoréversible déshydraté identique au gel aqueux dudit noyau interne, des dextrines ou un mélange de ceux-ci, de telle sorte qu'elle comprend, en moyenne, 1016 à 1018 liposomes/g de poudre. 2 ) Composition pulvérulente selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit noyau aqueux interne des liposomes comprend, en outre, au moins un agent stabilisant de nature osidique, et/ou au moins un agent de régulation de l'osmolarité du milieu et/ou au moins un agent tensioactif 3 ) Composition pulvérulente selon la revendication 1 ou la revendi- cation 2, caractérisée en ce qu'elle comprend en % (m/m): 25 à 75 % de lipides de classe 4, 5 à 45 % d'agents gélifiants, 0 à 70 % d'agent stabilisant de nature osidique, 0 à 15 % d'agent de régulation de l'osmolarité du milieu, 0 à 20 % d'agents tensio-actifs et 0 à 15 % de dextrines. 4 ) Composition pulvérulente selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle comprend 70 à 95 % d'agent gélifiant GI et 5 à % d'agent gélifiant G2. ) Composition pulvérulente selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 4, caractérisée en ce que l'agent stabilisant de nature osidique est du saccha- rose, du tréhalose ou tout autre agent de protection. 6 ) Composition pulvérulente selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 5, caractérisée en ce que les lipides constituant la phase lipidique externe desdits liposomes, comprennent de préférence, 20 à 25 % de phosphatidylcholine, 10 à 18 % de phosphatidyléthanolamine et 9 à 15 % de phosphatidylinositol. 7 ) Composition pulvérulente selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 5, caractérisée en ce que les lipides constituant la phase lipidique externe desdits liposomes, comprennent des phospholipides purifiés, seuls ou en mélange, de préférence dans les mêmes proportions que celles définies à la revendication 6. 8 ) Procédé de préparation d'une composition pulvérulente selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans laquelle la gangue externe des unités particulaires comprend une fraction de gel aqueux thermoréversible déshydraté, carac- térisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: (1) préparation d'une dispersion de liposomes à noyau interne gélifié en phase aqueuse par (a) préparation d'une solution d'au moins un agent gélifiant convenable, notamment un mélange M d'agents gélifiants G1 et G2, par dissolution desdits agents gélifiants, sous agitation lente, à une température supérieure à la tempé- rature de transition de phase gel-sol desdits agents gélifiants dans une solution aqueuse, (b) incorporation des lipides dans la solution obtenue en (a), sous agitation lente du mélange, pendant une période inférieure à 5 heures, de préférence sous vide et forma- tion d'une émulsion et (c) obtention de la dispersion de liposomes à noyau interne géli- fié dans une phase aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, par agitation rapide de l'émulsion obtenue en (b), de préférence sous vide et (2) obtention du produit pulvérulent par séchage direct convenable de la dispersion obtenue. 9 ) Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'étape (2) de séchage est réalisée par atomisation, coacervation, couche mince ou granulation ) Procédé de préparation d'une composition pulvérulente selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans laquelle la gangue externe des unités particulaires comprend une fraction de gel aqueux thermoréversible et/ou une dextrine, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: (1) préparation d'une dispersion de liposomes à noyau interne gélifié en phase aqueuse par (a) préparation d'une solution d'au moins un agent gélifiant convenable, notamment un mélange M d'agents gélifiants GI et G2, par dissolution desdits agents gélifiants, sous agitation lente, à une température supérieure à la tempé- rature de transition de phase gel-sol desdits agents gélifiants dans une solution aqueuse, (b) incorporation des lipides dans la solution obtenue en (a), sous agitation lente du mélange, pendant une période inférieure à 5 heures, de préférence sous vide et forma- tion d'une émulsion et (c) obtention de ladite dispersion de liposomes à noyau interne gélifié en phase liquide aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, par agitation rapide de l'émulsion obtenue en (b), de préférence sous vide, (2) élimination, au moins en partie, de la phase liquide aqueuse contenant lesdits gélifiants et dans laquelle sont dispersés lesdits liposomes (3) ajout d'au moins une dextrine convenable et (4) obtention du produit pulvérulent par séchage par atomisation de produit obtenu en (3). 11 ) Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que l'étape (2) d'élimination d'au moins une partie de la phase liquide aqueuse contenant lesdits agents gélifiants est réalisée par dilution et/ou par filtration. 12 ) Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisé en ce que la solution aqueuse de l'étape (a) comprend un agent de régula- tion de l'osmolarité du milieu (NaCI à 0,9 %, par exemple) et/ou un agent stabilisant de nature osidique. 13 ) Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 12, caractérisé en ce que l'étape (b) est effectuée, de préférence, à une vitesse de cisaille- ment inférieure à 200 s-'. 14 ) Complément nutritionnel apte à réguler la cholestérolémie et la triglycéridémie, caractérisé en ce qu'il comprend une composition pulvérulente selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, éventuellement associée à un excipient approprié. ) Compositions pharmaceutiques comprenant une composition pulvérulente selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 et au moins un véhicule approprié. 16 ) Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 pour la préparation d'un médicament pour le traitement des hyper- cholestérolémies et/ou des hypertryglycéridémies. 17 ) Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 pour la préparation d'un adjuvant des traitements utilisant un ou plusieurs principes actifs provoquant l'augmentation des transaminases ou de tout autre marqueur toxique. 18 ) Complément nutritionnel selon la revendication 14 ou composi- tions pharmaceutiques selon la revendication 15, caractérisés en ce qu'ils se présentent soit sous une forme solide (gélule, comprimé, poudre à dissoudre ans l'eau), soit sous une forme liquide, par redissolution des compostions selon l'une quelconque des revendications I à 7, dans une solution aqueuse. 19 ) Dispersion de liposomes à noyaux internes gélifiés dans une solution aqueuse contenant le mélange d'agents gélifiants tels que définis à la revendi- cation 1, dans laquelle lesdits liposomes présentent la morphologie suivante: structure vésiculaire de diamètre compris entre 20 nm et 1 gm, de préférence entre 70 et 200 nm, et polydispersité des liposomes à phase interne gélifiée comprise entre et 55 %, de préférence entre 30 et 50 %.