Brevet FR2764891A1 — publié le 19981224

DERIVE DE L'ACIDE L-ASCORBIQUE STABLE DANS L'EAU, PROCEDE POUR SA PREPARATION ET COMPOSITION COSMETIQUE DE BLANCHIMENT DE LA PEAU LE CONTENANT CONTEXTE DE L'INVENTION 1. Domaine de l'invention La présente invention se rapporte à un dérivé de l'acide L-ascorbique possédant une stabilité dans l'eau améliorée et un procédé pour-sa préparation, ainsi qu'une composition cosmétique de blanchiment de la peau 5 contenant ledit dérivé comme principe actif. 2. Techniques apparentées L'acide L-ascorbique a une forte activité antioxydante qui favorise la biosynthèse du collagène et la 10 prolifération des fibroblastes. Il est notamment très efficace pour inhiber la formation de la mélanine et, de ce fait, il peut être utilisé en applications topiques dans le but d'éviter une pigmentation anormale telle que des taches de rousseur. 15 Toutefois, l'acide L-ascorbique est facilement décomposé par oxydation dans une base aqueuse, ce qui se traduit par une diminution de son activité en cas de stockage prolongé. Dans ces circonstances, les récentes études ont été 20 menées dans le but de proposer un nouveau dérivé qui soit stable dans une base aqueuse. Les dérivés proposés se présentent sous la forme d'un ester obtenu en estérifiant le groupe hydroxyle en position 2, 3, 5 ou 6 de l'acide L-ascorbique avec un groupe phosphorique ou sulfurique ou 25 avec un acide gras tel que l'acide stéarique et l'acide palmitique. La liaison ester de ces dérivés peut être facilement décomposée par une enzyme hydrolytique afin de libérer de l'acide L-ascorbique et fournir ainsi les actions physiologiques efficaces de l'acide L-ascorbique. On a par exemple le 2-phosphate d'acide ascorbique sel de 5 magnésium. Ce composé peut être facilement administré par voie percutanée en introduisant un groupe phosphorique afin de délivrer de l'acide L-ascorbique dans la couche dermique et il est lui-même stable dans une base aqueuse sans décoloration due à l'oxydation. C'est pourquoi ce 10 composé a été proposé comme principe actif pour des compositions cosmétiques de blanchiment de la peau (JP 1 283 208 A, JP 3 227 907 A) Toutefois, bien que le sel de magnésium d'acide L- ascorbique 2-phosphate ("ascorbic acid 2-phosphate 15 magnesium") présente une certaine amélioration de sa stabilité, il présente des inconvénients dans la mesure o il forme de lui-même des cristaux insolubles ou bien des précipités avec d'autres constituants tels que les polymères et les agents tensio-actifs anioniques dans une 20 base aqueuse. On suppose que cette précipitation est la conséquence d'une faible solubilité dans l'eau. Récemment, on a proposé le 2-O-c-glucoside d'acide ascorbique comme un nouveau matériau dénué des problèmes ou inconvénients précités. Ce dérivé est produit par 25 fermentation. Toutefois, à ce jour, sa pénétration percutanée et son action d'inhibition de la formation de mélanine sont incertaines. De plus, il est très coûteux du fait qu'il est obtenu par fermentation. C'est pourquoi les auteurs de la présente invention 30 ont réalisé des études afin de proposer un nouveau dérivé qui soit très stable en soi et qui ne provoque pas de précipitation dans une base aqueuse. Il se sont efforcés de trouver un groupe phosphorique destiné à se lier au groupe 2-hydroxyle de l'acide L-ascorbique. Pour ce groupe phosphorique, ils ont retenu l'acide 3- aminopropane phosphorique, qui présente une bonne solubilité dans l'eau, pour être utilisé dans tout type de compositions cosmétiques dans la mesure o celles-ci 5 contiennent de l'eau. En l'occurrence, ils ont introduit l'acide 3-aminopropane phosphorique dans le groupe 2- hydroxyle de l'acide L-ascorbique par une liaison ester phosphorique afin d'obtenir du L-ascorbate d'acide 2-(3aminopropane phosphorique) ("2-(3-aminopropane phosphoric 10 acid)-L-ascorbate"). Plus particulièrement, l'acide 3-aminopropane phosphorique est lui-même un matériau cosmétique actif capable d'augmenter l'aptitude de la peau à retenir l'humidité et son aptitude à récupérer vis-à-vis des 15 métamorphoses et du durcissement, ce qui a pour effet de retarder efficacement le vieillissement de la peau. En outre, il ne provoque pas d'irritation cutanée, sa stabilité permet de le formuler facilement dans les produits cosmétiques et il favorise la croissance 20 cellulaire et la biosynthèse du collagène de l'épiderme. Sur la base de ces effets et actions, des compositions cosmétiques contenant de l'acide 3-aminopropane phosphorique ont été proposées dans le brevet américain n 5 723 645. 25 Les auteurs de la présente invention ont confirmé que le L-ascorbate d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) est lui-même très stable, sans décoloration ni réduction de son activité par oxydation, et qu'il ne provoque pas de précipitation dans une base aqueuse. De plus, étant 30 donné que ce dérivé peut être facilement pénétré par voie percutanée par le groupe phosphorique et que, une fois absorbé, il peut être facilement décomposé par une enzyme hydrolytique afin de libérer de l'acide ascorbique et de l'acide 3-aminopropane phosphorique, on s'attend à ce qu'une composition cosmétique contenant ce dérivé puisse exercer sur la peau les actions physiologiques efficaces à la fois de l'acide L-ascorbique et de l'acide 3- aminopropane phosphorique. C'est sur la base de cette 5 attente que la présente invention a été réalisée. RESUME DE L'INVENTION La présente invention a donc pour objet de proposer 10 un nouveau dérivé de l'acide L-ascorbique représenté par la formule générale (I) ci-dessous, qui est en soi très stable et qui ne provoque pas de précipitation dans une base aqueuse : HO HO ' - O1 HO O-P-OCH2CH2CH2NH O(I) 15 De plus, un autre objet de la présente invention est de fournir un procédé de préparation dudit dérivé de l'acide L-ascorbique (I) et de proposer une composition cosmétique de blanchiment de la peau contenant comme principe actif ledit dérivé de l'acide L-ascorbique (I) 20 qui est capable d'inhiber la formation de mélanine, produisant ainsi un effet de blanchiment de la peau, et capable d'éviter le flétrissement de la peau, retardant ainsi efficacement le vieillissement de la peau. 25 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Le dérivé de l'acide L-ascorbique proposé par la présente invention est le L-ascorbate d'acide 2-(3- aminopropane phosphorique), représenté par la formule générale (I) suivante : HO H - O HO O-P-OCH 2C2C2NH3 OI(I O- Le dérivé de l'acide L-ascorbique (I) (dans la suite du texte, ce composé sera désigné par "AsA-APPA", nom 5 abrégé du diester phosphorique d'aminopropanol et d'acide ascorbique) est un composé dans lequel l'acide 3- aminopropane phosphorique est combiné au groupe 2- hydroxyle de l'acide ascorbique par une liaison ester phosphorique. Ce composé est très stable, sans 10 décoloration ni réduction de son activité par oxydation dans une base aqueuse, et il présente une bonne solubilité dans l'eau afin de ne provoquer aucune précipitation. De plus, il peut être facilement pénétré par voie percutanée par le groupe phosphorique et, une 15 fois absorbé, le composé peut être facilement décomposé par une enzyme hydrolytique afin de libérer de l'acide ascorbique et de l'acide 3-aminopropane phosphorique. Il en résulte que ce composé peut exercer une activité d'inhibition de la formation de mélanine par l'acide 20 ascorbique et une activité de retardement du vieillissement de la peau par l'acide 3-aminopropane phosphorique. Selon la présente invention, le procédé de préparation de l'AsA-APPA représenté par la formule (I) 25 comprend en partie un procédé de préparation de l'acide 3-aminopropane phosphorique (3-APPA) présenté dans le brevet américain n 5 723 645. Le procédé présenté pour la préparation du 3-APPA est simple et économique car il utilise un processus en deux étapes et de l'oxychlorure phosphoreux peu coûteux, de sorte qu'il peut être avantageusement appliqué à une échelle industrielle. Pour entrer dans le détail, le procédé de préparation du dérivé de l'acide L-ascorbique (I) selon la présente 5 invention comprend les étapes consistant à : (1) faire réagir du 3-amino-l-propanol avec de l'oxychlorure phosphoreux selon un rapport d'équivalence de 1/1 à 1/1,3 en présence d'une base organique, dans un solvant organique, à une température de l'ordre de 0 à 5 10 C pendant 1 à 2 heures, afin de produire le P-oxyde de 2-chlorotétrahydro-2H-l,3,2-oxazaphosporine ("2chlorotetrahydro-2H-1,3,2-oxazphosphorin P-oxide" en anglais) représenté par la formule générale (II) suivante : O\ C / \ P 15 NH ClII) (2) faire réagir ledit composé (II) de ladite étape (1) avec de l'acide L-ascorbique à groupes 5,6-hydroxyle protégés en présence d'une base organique, dans un solvant organique, afin de produire un dérivé de l'acide 20 L-ascorbique représenté par la formule générale (III) suivante : R0 0 0 HO O-P-O HN } (III) (3) hydrolyser le dérivé de l'acide L-ascorbique (III) de ladite étape (2) en y ajoutant de l'eau 25 distillée à une température de l'ordre de 5 à 100 aC pendant environ 3 heures, afin de produire du L-ascorbate d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) ; (4) recristalliser le produit de ladite étape (3) au moyen d'un solvant organique polaire ; et (5) le cas échéant, neutraliser le produit de ladite 5 étape (4) avec un alcali ou une base afin de produire un sel. Le procédé peut être représenté par un schéma réactionnel suivant : H2N"- " OH + POC13 NH Cl HO t HO 0_oo0 HO OH HO OH O- /\O lzo o - O0 HO O-P-O HN > HO HO- o o Il + HO O-P-OCHCH2CHNH- 10 O- Dans l'étape (1), il est préférable que la réaction entre le 3-amino-1-propanol et l'oxychlorure phosphoreux soit faite avec un rapport d'équivalence compris entre 1/1 et 1/1,3. Lorsque ce rapport est inférieur à 1/1, le 5 produit recherché ne peut pas être obtenu. A l'inverse, lorsque ce rapport est supérieur à 1/1,3, on obtient en plus du produit recherché des quantités excessives de sous-produits. Dans cette étape, on produit un complexe 1/1 10 intermédiaire de 3-amino-1-propanol et d'oxychlorure phosphoreux avec un rendement de 95 % ou plus, et on obtient en tant que sous-produit un complexe 2/1 de 3- amino-1-propanol et d'oxychlorure phosphoreux avec un rendement de 1 à 2 % ou inférieur. Toutefois, ce sous- 15 produit peut être éliminé par chromatographie ou par cristallisation avec du toluène. En particulier, deux des trois atomes de chlore de l'oxychlorure phosphoreux sont remplacés par des groupes hydroxyle et amino fonctionnels du 3-amino-1-propanol et cyclisés pour donner le P-oxyde 20 de 2-chlorotétrahydro-2H-1,3,2-oxazaphosporine. Le troisième atome de chlore est inactivé à une température basse de 5 C ou inférieure et il n'est pas remplacé. La raison est que l'atome de chlore du P-oxyde de 2- chlorotétrahydro-2H-1,3,2-oxazaphosporine est stable dans 25 un solvant inerte anhydre et qu'il n'est pas facilement remplacé par le 3-amino-1-propanol. De ce fait, il est préférable de réaliser la réaction de l'étape (1) à une température de 5 C ou inférieure de manière à empêcher la production du sous-produit 2/1 de 3-amino-1-propanol 30 et d'oxychlorure phosphoreux. Dans ce cas, étant donné que le troisième atome de chlore de l'oxychlorure phosphoreux n'a pas besoin d'être protégé, par exemple par des groupes esters ou des groupes amides, le processus peut se dérouler de manière simple et aisée. En effet, étant donné que la solubilité du réactant peut être diminuée et que la réaction peut se dérouler lentement et avec difficulté à une température inférieure à 0 C, la quantité de matériaux n'ayant pas réagi peut 5 augmenter, diminuant de ce fait le rendement. Par conséquent, il est préférable de réaliser la réaction de l'étape (1) à une température de 0 à 5 C. La base organique utilisée dans cette étape peut comprendre, de manière non limitative, de la pyridine et 10 de la triéthylamine. Parmi ces substances, on peut utiliser de préférence la triéthylamine. Par ailleurs, le solvant organique utilisé dans cette étape peut inclure, de manière non limitative, le dichlorométhane, le tétrahydrofurane, l'acétate d'éthyle, 15 l'acétonitrile, le chloroforme, l'éther éthylique, ainsi que d'autres solvants inertes. Parmi ceux-ci, on peut utiliser de préférence le dichlorométhane. A l'étape (2), les groupes 5,6-hydroxyle de l'acide L-ascorbique peuvent être masqués par un groupe 20 protecteur tel que le benzylidène, le phényléthylidène et l'isopropylidène. Parmi ceux-ci, on peut utiliser de préférence l'isopropylidène comme groupe protecteur. La base organique utilisée dans l'étape (2) peut être, de manière non limitative, la pyridine et la 25 triéthylamine. Parmi ces substances, on peut utiliser de préférence la triéthylamine. Par ailleurs, le solvant organique utilisé à l'étape (2) peut inclure, de manière non limitative, le dichlorométhane, le tétrahydrofurane, l'acétate d'éthyle, 30 l'acétonitrile, le chloroforme, l'éther éthylique, ainsi que d'autres solvants inertes. Parmi ceux-ci, on peut utiliser de préférence le chloroforme. Le composé (III) produit à l'étape (2) est un acide fort en solution aqueuse (par exemple à pH 2 dans une solution aqueuse à 1 %). Ainsi, le groupe protecteur des groupes 5,6-hydroxyle du fragment ascorbique et la liaison P-N du fragment cyclique oxazaphosphorine peuvent être facilement hydrolysés par ajout d'eau distillée sans 5 ajouter de catalyseur acide, suivi d'une agitation à une température de 5 à 100 C, de préférence de 50 C environ, pendant environ 3 heures. Le produit peut être purifié par recristallisation au moyen d'un solvant organique polaire. Le solvant polaire 10 peut être, de manière non limitative, le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol, l'acétone, le tétrahydrofurane, l'acétonitrile ou le dioxane. Par ailleurs, le produit AsA-APPA peut s'utiliser de préférence sous la forme d'un sel obtenu par 15 neutralisation avec un alcali ou une base, car le produit est lui-même acide. Un agent neutralisant utilisé dans cette étape (5) peut inclure, de manière non limitative, des oxydes d'alcalis ou de métaux tels que le carbonate de sodium, l'hydroxyde de sodium, le carbonate de 20 potassium, l'hydroxyde de potassium, l'hydroxyde de calcium, l'hydroxyde de magnésium, l'oxyde de calcium et l'oxyde de magnésium ; des acides aminés basiques tels que la lysine, l'arginine et l'histidine ; l'ammoniaque ou des amides tels que la triéthanolamine ; des polymères 25 cationiques tels que les polyquaterniums 4, 6, 7, 10, 11 et 16 ; ainsi que des agents de surface cationiques tels que le chlorure de lauryldiméthylbenzylammonium et le chlorure de stéaryldiméthylbenzylammonium. Par ailleurs, la présente invention propose une 30 composition cosmétique de blanchiment de la peau contenant du L-ascorbate d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) ou son sel, produits grâce au procédé décrit plus haut, comme principe actif capable d'inhiber la formation de mélanine, produisant ainsi un effet de blanchiment de la peau, et capable de favoriser la prolifération des fibroblastes, retardant ainsi efficacement le vieillissement de la peau. La composition peut contenir le L-ascorbate d'acide 2-(3-aminopropane 5 phosphorique) on son sel à raison de 0,005 à 10 % en poids, de préférence de 0,01 à 3 % en poids, cette proportion étant choisie en fonction des formulations ou des buts finaux de la composition. De plus, la composition peut être formulée de manière non limitative 10 sous la forme d'adoucissants corporels, d'astringents, d'eau de toilette nourrissante, de crème nourrissante, de crèmes de massage, d'essences, de crèmes pour les yeux, d'essences pour les yeux, de crèmes nettoyantes, de mousses nettoyantes, d'eau nettoyante, de pains ("packs" 15 en anglais), de poudres, de lotions pour le corps, de crèmes pour le corps, d'huiles pour le corps ou d'essences pour le corps. MODE DE REALISATION PREFERE DE L'INVENTION La présente invention va être décrite plus en détail au moyen des exemples ci-après. Toutefois, ces exemples sont donnés à titre purement illustratif et ne sauraient être considérés comme limitant le champ de la présente 25 invention, lequel est précisément défini dans les revendications ci-jointes. Préparation de P-oxyde de 2-chlorotétrahydro-2H-1,3,2- 30 oxazaphosporine : On dissout 34,1 ml (0,36 mole) d'oxychlorure phosphoreux dans 400 ml de dichlorométhane. La solution ainsi obtenue est ensuite refroidie entre 0 et 5 C dans un bain de glace. Dans un autre réacteur, on dilue 28 ml (0,36 mole) de 3-amino-l-propanol et 102 ml (0,73 mole) de triéthylamine avec 200 ml de dichlorométhane et on ajoute ce mélange progressivement, en 2 heures, à la solution ci-dessus. 5 Après cet ajout, on filtre le mélange ainsi obtenu afin d'éliminer le chlorure de triéthylammonium. On lave le filtrat avec 100 ml d'eau distillée puis on le sèche sur du sulfate de sodium anhydre, on le filtre et on le concentre sous pression réduite. Au produit ainsi obtenu, 10 on ajoute du toluène afin de former des cristaux, puis le produit est séché sous pression réduite, donnant 53 g du composé titre, qui est identifié par IR et RMN. Point de fusion : 79 à 82 C IR (CHCl3, cm-t) : 3254, 1477, 1274, 1092, 1036, 996 15 RMN 'H (CDCl3) : 6 (ppm) =1,7 (m, 1H), 1,1 (m, 1H) 3,3 (m, 2H) 4,4 (m, 2H), 4,9 (br, 1H) RMN 13C (CDCl3) : 6 (ppm) =25,78, 25,85, 42,05, 42,11, 71,69, 71,81 20 Préparation du L-ascorbate d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) : On dissout 10 g (0,046 mole) d'acide L-ascorbique dont les groupes 5,6-hydroxyle sont masqués par de 25 l'isopropylidène dans 100 ml de chloroforme, puis on y ajoute 12,9 ml (0,093 mole) de triéthylamine dans un bain de glace à 5 C. A la même température, on dissout 8,6 g (0,055 mole) de P-oxyde de 2-chlorotétrahydro-2H-1,3,2- oxazaphosporine produit dans l'exemple 1 dans 20 ml de 30 chloroforme et on l'ajoute progressivement à la solution ci-dessus. Après cet ajout, le mélange est agité pendant une nuit à température ambiante. On lave la couche organique avec une solution phosphorique aqueuse, puis on la sèche sur du sulfate de sodium anhydre et on la décolore avec du charbon actif. On filtre la solution et on la concentre sous pression réduite. On y ajoute 30 ml d'eau distillée et on la place sous agitation pendant 3 heures à une température 5 thermostatée de 50 C. Ensuite, on ajoute 150 ml d'isopropanol afin de produire des cristaux. Puis le produit est séché sous pression réduite, donnant 6 g du composé titre sous la forme d'une poudre blanche qui est identifiée par IR et RMN. 10 Point de fusion : 176 à 180 C IR (KBr, cm-') : 3407, 3322, 3101, 2914, 1747, 1673, 1664, 1533, 1364, 1218, 1072 RMN 1H (D20) : 5 (ppm) =1,9 (m, 2H), 3,05 (t, 2H), 3,62 (m, 2H), 3,98 (m, 3H), 4,90 (s, 1H) 15 RMN 13C (D20): 6 (ppm) =26, 76, 22,86, 32,35, 57,30, 59,77, 59,84, 64,15, 71,55, 71,72, 109,79, 109,88, 156.58, 156.63, 167.32, 167.38 20 Préparation de sels du L-ascorbate d'acide 2-(3- aminopropane phosphorique) : Dans chaque exemple, on dissout l'acide L-ascorbique et l'AsA-APPA produits dans l'exemple de préparation 2 dans 30 ml d'eau distillée et on ajoute ensuite une 25 solution aqueuse de carbonate de sodium à 5 % dans l'exemple de préparation 3, une solution aqueuse de carbonate de potassium à 5 % dans l'exemple de préparation 4, d'hydroxyde de calcium dans l'exemple de préparation 5, d'oxyde de magnésium dans l'exemple de 30 préparation 6 et une solution aqueuse de triéthanolamine à 5 % dans l'exemple de préparation 7, afin d'amener la solution à pH 7. Les solutions ainsi obtenues sont lyophilisées afin de donner les sels respectifs sous forme de solides blancs. Stabilité de l'AsA-APPA : On dissout l'acide L-ascorbique et l'AsA-APPA produits dans l'exemple de préparation. 2 dans des 5 solutions tampons à pH 7 pour obtenir des concentrations respectives de 50 pM et on les maintient à une température thermostatée de 50 C. A des intervalles constants, on mesure l'absorbance UV à 259 nm pour l'AsAAPPA et à 266 nm pour l'acide L-ascorbique afin d'évaluer 10 la stabilité des échantillons testés sous la forme de rapports résiduels (%). Les résultats figurent dans le tableau 1. 30 1h 3 h 6 h 24 h 6 j 10 j min AsA-APPA 100 100 100 100 99,1 95,5 93,5 Acide L- 17,2 1,0 0 0 0 0 0 ascorbique 15 Comme le montre le tableau 1 ci-dessus, l'acide Lascorbique est décomposé en 1 heure environ tandis que l'AsA-APPA de la présente invention est très stable en solution aqueuse neutre. 20 Stabilité de l'AsA-APPA dans une base aqueuse : On dissout 3 g de chacun des composés des exemples de préparation 3 et 6 et du sel de magnésium d'acide 25 L-ascorbique 2-phosphate sel de magnésium dans 100 ml d'eau distillée puis on maintient le mélange pendant 30 minutes sous température thermostatée à 50 C. On observe la précipitation et la décoloration à mesure que le temps passe. Les résultats sont indiqués dans le tableau 2. Jours écoulés 1 3 5 7 9 11 13 15 30 Ex. Précipitation - - - - - - - - - prép. n i éooaion - - - - - - - - - n 1 Décoloration _ _ _ _ _._ Ex. Précipitation - - - - - - - - - prép. n 2 Décoloration - - - - - - - - Ex. Précipitation - + + ++ ++ ++ +++ ++++++ comp. n 1 Décoloration - .. _ + (Note) Notation Précipitation Décoloration - Pas de précipitation Incolore ou jaune pâle + Légère précipitation Légère décoloration ++ Précipitation Décoloration sévère +++ Précipitation sévère Décoloration extrêmement sévère 5 Comme le montre le tableau 2, les composés de la présente invention n'ont provoqué aucune précipitation dans la base aqueuse ni précipitation avec le temps. Prolifération des fibroblastes 10 On traite de la peau provenant de tissu épidermique neuf avec de la collagénase de type I afin d'éliminer l'épiderme. Les fibroblastes ainsi obtenus sont mis en culture dans du DMEM (milieu d'Eagle modifié de Dulbecco). 15 On mesure la quantité de fibroblastes selon la méthode MTT. Le résultat est que le composé de l'exemple de préparation 2 montre une prolifération effective des fibroblastes à une concentration aussi faible que 10 mM. Sécurité de l'AsA-APPA vis-à-vis 5 de l'organisme : Etant donné que les produits cosmétiques sont appliqués sur la peau, leur sécurité vis-à-vis de l'organisme est très importante. Dans la présente invention, la toxicité et l'irritation de l'AsA-APPA vis- 10 à-vis de l'organisme ont été analysées par les expériences suivantes. Les résultats démontrent que l'AsA-APPA est sans danger pour l'organisme. (4-1) Essai de toxicité orale aiguë : 15 On dilue 10 ml/kg d'AsA-APPA de l'exemple de préparation 2 dans du sérum physiologique afin d'obtenir un échantillon de test à 50 %. Cet échantillon de test est administré par voie orale à dix (10) souris ICR ("ICR mice" en anglais) (cinq mâles et cinq femelles) pesant de 20 20 à 33 g (quantité d'AsA-APPA administrée : 5 g/kg PV). A titre de contrôle, on administre par voie orale 10 ml/kg de sérum physiologique à dix (10) souris ICR (cinq mâles et cinq femelles) pesant de 20 à 33 g (quantité d'AsA-APPA administrée : 0 g/kg PV). 25 Ce jour-là, on observe l'aspect général toutes les heures pendant 6 heures. A partir du lendemain jusqu'au 14ème jour, on observe quotidiennement l'aspect général (symptômes cliniques), les symptômes toxiques, la mortalité et autres. De plus, on mesure la variation de 30 poids à 1, 3, 7 et 14 jours. Les souris éventuellement mortes au cours de la période d'observation sont autopsiées et les souris survivantes sont sacrifiées et autopsiées à l'issue de la période d'observation. On observe les organes internes à l'oeil nu et, en cas de symptômes anormaux, on réalise un examen histopathologique. Résultat : aucune souris n'est morte et on n'observe aucune différence significative de variation de poids par 5 rapport aux témoins. Le rapport d'autopsie indique qu'aucun symptôme anormal n'a été observé. Suivant la méthode de Litchfield-Wilcoxon, la DL50 (dose létale) de l'AsA-APPA est de 5 g/kg après une exposition aiguë par voie orale. 10 (4-2) Essai de toxicité cutanée aiguë : On dilue 4 ml/kg d'AsA-APPA de l'exemple de préparation 2 dans du sérum physiologique afin d'obtenir un échantillon de test à 50 %. Cet échantillon de test 15 est administré par voie percutanée à dix (10) souris ICR (cinq mâles et cinq femelles) pesant de 20 à 33 g (quantité d'AsA-APPA administrée : 2 g/kg PV). A titre de contrôle, on administre par voie percutanée 4 ml/kg de sérum physiologique à dix (10) souris ICR (cinq mâles et 20 cinq femelles) pesant de 20 à 33 g (quantité d'AsA-APPA administrée : 0 g/kg PV). Avant 24 heures environ, on épile le dos de chaque souris sur une surface de 1,5 x 1,5 cm. Ensuite, chaque site épilé est recouvert d'une gaze mesurant 1 x 1 cm 25 appliquée avec l'un des échantillons de test et de contrôle et fixé avec un sparadrap non irritant, ce pendant une durée de 24 heures. Ce jour-là, on observe l'aspect général toutes les heures pendant 6 heures. A partir du lendemain 30 jusqu'au 14ème jour, on observe quotidiennement l'aspect général (symptômes cliniques), les symptômes toxiques, la mortalité et autres. De plus, on mesure la variation de poids à 1, 3, 7 et 14 jours. Les souris éventuellement mortes au cours de la période d'observation sont autopsiées et les souris survivantes sont sacrifiées et autopsiées à l'issue de la période d'observation. On observe les organes internes à l'oeil nu et, en cas de symptômes anormaux, on réalise un 5 examen histopathologique. Résultat : aucune souris n'est morte et on n'observe aucune différence significative de variation de poids par rapport aux témoins. Le rapport d'autopsie indique qu'aucun symptôme anormal n'a été observé. 10 Suivant la méthode de Litchfield-Wilcoxon, la DL50 (dose létale) de l'AsA-APPA est de 2 g/kg après une exposition aiguë par voie cutanée. (4-3) Essai d'irritation cutanée primaire : 15 L'essai est réalisé sur'douze (12) lapins mâles de race New Zealand White. On dilue 0,1 ml d'AsA-APPA de l'exemple de préparation 2 avec du sérum physiologique pour obtenir un échantillon de test à 50 %. L'échantillon de test est appliqué sur deux sites 20 (2,5 x 2,5 cm) sur le dos à droite (quantité d'AsA-APPA par site : 0,5 ml). A titre de contrôle, on traite deux sites (2,5 x 2,5 cm) sur le côté gauche du dos avec 1,0 ml de sérum physiologique. Chaque site d'essai est recouvert d'une gaze fixée à l'aide d'un sparadrap non 25 irritant. Au bout de 24 heures, on lave les sites testés avec du sérum physiologique. Résultat : on n'observe aucune anomalie de la peau telle que érythème et oedème 24 ou 72 heures après le retrait des patches. L'indice d'irritation primaire (IIP) 30 de Draize dû à l'érythème est de 0,13, ce qui signifie que l'AsA-APPA est non irritant ou très faiblement irritant. (4-4) Essai d'irritation oculaire : L'essai est réalisé sur neuf (9) lapins de race New Zealand White. On dilue 0,1 ml de l'AsA-APPA de l'exemple de 5 préparation 2 avec du sérum physiologique afin d'obtenir un échantillon de test à 10 %. On instille cet échantillon de test dans l'oeil droit de chaque lapin, l'oeil gauche servant de témoin. Au bout de 20 à 30 secondes, trois (3) lapins seulement sur les neuf sont 10 lavés de manière suffisante avec du sérum physiologique stérilisé. Au bout de 24 heures ou 48 heures, on n'observe aucune irritation au niveau de la cornée, de l'iris et de la conjonctive. Le taux d'irritation de la muqueuse 15 oculaire (I.M.O.) est de 0,0 dans les cas avec lavage comme dans les cas sans lavage. (4-5) Essai de sensibilisation cutanée :L'essai est réalisé sur six (6) cobayes (trois mâles 20 et trois femelles) de race Hartley Albinos pesant de 300 à 360 g selon le protocole de Maggnusson et Kligman (essai de maximisation sur le cobaye). Afin de déterminer les concentrations des échantillons de test à appliquer pour une irritation 25 légère dans le test d'induction et pour une irritation nulle dans le test d'épreuve, on prend pour trois (3) cobayes dans chaque test des irritations primaires avec respectivement 6,25 %, 12,5 % et 25,0 % des échantillons de test. Sur chaque animal, on traite chacun des sites 30 (2,5 x 2,5 cm) sur les côtés droit et gauche du dos avec trois concentrations des échantillons de test à raison de 0,5 ml d'AsA-APPA par site, puis on les recouvre pendant 24 heures avec une gaze fixée à l'aide de sparadrap non irritant. Ensuite, on injecte à deux cobayes (un mâle et une femelle) par voie intradermique 0,1 ml d'AsA-APPA à 25 % à l'aide d'une aiguille de 1,27 cm (1/2 pouce) taille 26. Au bout de 7 jours, on épile le même site et on effectue un prétraitement avec du SLS à 10 % dans du 5 pétrolatum. Ensuite, on traite chaque site testé avec 0,5 ml d'AsA-APPA par site et on le recouvre pendant 48 heures avec une gaze fixée à l'aide de sparadrap non irritant. Au bout de 2 semaines, on traite le côté gauche du dos du cobaye épilé avec l'échantillon de test et on 10 traite le côté droit avec du sérum physiologique. Au bout de 24 heures, on lave les sites testés avec du sérum physiologique. A titre de contrôle, on réalise le test avec du sérum physiologique au lieu de l'échantillon de test en suivant 15 la même procédure. Résultat : on n'observe aucune anomalie cutanée telle que de l'érythème ou un oedème 24, 48 et 72 heures après le retrait des patches. Suivant le critères de Kligman, on attribue à l'AsA-APPA la note 1, ce qui signifie que 20 l'AsA-APPA est sans aucun danger pour la peau. (4-6) Essai chez l'homme avec des patches : L'essai est réalisé sur trente (30) femmes en bonne santé âgées de 20 à 30 ans conformément à la directive de 25 la CTFA (The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 20023, 1991). Le dos des sujets est lavé avec de l'éthanol à 70 % et séché, puis on y applique une fine chambre contenant 20 pl de base de patch incorporant 10 % de l'AsA-APPA de 30 l'exemple de préparation 2. La chambre est fixée sur le site de test au moyen de sparadrap microporeux. Au bout de 24 heures, on retire le sparadrap et la chambre et on repère le site testé à l'aide d'un marqueur. Au bout de 24 heures ou 48 heures, on observe la réponse cutanée des sites testés et on évalue l'irritation cutanée suivant les critères de 1'ICDRG (International Contact Dermatitis Research Group). Résultat : on n'observe pratiquement aucune réponse 5 d'irritation primaire, hormis 1 % d'érythème, mais toute irritation a disparu au bout de 48 heures. La réponse moyenne est de 0,42. Echantillon Réponse (%), N = 30 24 heures 48 heures Réponse moyenne * AsA-APPA 1 0 0,42 Base de patch 1 0 0,42 * Réponse moyenne = Notedel'échantillon x100xl/2 4(note maximale)x30(nb.totald'éch.) 10 (4-7) Essai d'insulte répétée chez l'homme avec des patches : L'essai est réalisé sur vingt (20) femmes en bonne santé âgées de 20 à 30 ans conformément à la directive de 15 la CTFA (The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 20023, 1991). Le dos des sujets est lavé avec de l'éthanol à 70 % et séché, puis on y applique une fine chambre contenant 20 g1 de base de patch incorporant 10 % de l'AsA-APPA de 20 l'exemple de préparation 2. On répète les applications toutes les 24 heures pendant 3 semaines (période d'induction). Au bout de 2 semaines environ, on effectue l'épreuve au patch d'insulte ("Challenge Insult Patch" en anglais). A ce stade, on applique les patches sur les sites testés au cours de la période d'induction et sur de nouveaux sites pendant 48 heures. Ensuite, on retire les patches et on observe la réponse cutanée des sites testés 5 24, 48 et 72 heures après cela. On évalue l'irritation cutanée suivant les critères de l'ICDRG (International Contact Dermatitis Research Group). Résultat : on n'observe aucune irritation de répétition ni aucune irritation de sensibilisation. La 10 réponse moyenne est respectivement de 0,14 et de 0 pendant la période d'induction et pendant la période d'épreuve. Période Réponse Période Réponse d'induction moyenne d'épreuve moyenne Echantillon (semaines) (%) (heures) (%) n = 20 n = 20 1 2 3 24 48 72 AsA-APPA 1 - - 0,14 - - - 0 Base de - 1 0,14 - - - 0 patch 15 Les résultats des essais (4-1) à (4-7) sont récapitulés dans le tableau 5. Test Résultats Evaluation Essai de toxicité aiguë DL50 > 5 g/kg Non toxique par voie orale Essai de toxicité aiguë DL50 > 2 g/kg Non toxique cutanée Essai d'irritation IIP = 0,13 Peu irritant cutanée primaire Essai d'irritation IMO = 0 Non irritant oculaire Essai de sensibi- Note Kligman : Légèrement lisation cutanée 1 sensibilisant Essai chez l'homme avecRéponse moyenne Non irritant des patches = 0,42 Essai d'insulte répétéeRéponse moyenne Non irritant chez l'homme avec des = 0,14 patches Les expériences ci-dessus démontrent que l'AsA-APPA est un matériau sûr pour des applications locales sur la S peau. Crèmes : Matériaux Ex. Exemples comparatifs 1 1 2 3 4 5 Alcool cétostéarylique 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 Glycérol monostéarique 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 lipophile Polyoxyéthylène 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 monostéarique de sorbitane Glycérol monostéarique 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 auto-émulsifiant Triglycéride 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 caprylique/caprique Paraffine liquide 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 Squalane 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 Acétate de tocophéryle 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 Allantoine 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 Glycérol 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 Propylène glycol 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 Gomme de xanthane 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Conservateur qs qs qs qs qs qs Parfum qs qs qs qs qs qs Acide L-ascorbique (AsA) - - 0,5 - - 0,25 Acide 3-aminopropane - 0,5 - 0,25 phosphorique (3-APPA) AsA-APPA (exemple de 0,5 . . . préparation n 3) Sel de Mg d'acide L- - - - - 0,5 - ascorbique 2-phosphate Eau distillée 100 100 100 100 100 100 Adoucissants corporels : Matériaux Ex. 2 Exemples comparatifs 6 7 8 9 10 Eau distillée jusqu'à jusqu'àjusqu'àjusqu'àjusqu'àjusqu'à 100 100 100 100 100 100 Ether octyldodécylique 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 POE-16 Polysorbate 60 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Glycérol 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 Propylène glycol 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 Polyéthylène glycol 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 Allantoine 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 Carboxyméthylcellulose de 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 sodium Acide L-ascorbique (AsA) - - 0,5 - - 0,25 Acide 3-aminopropane - - 0,5 - 0,25 phosphorique (3-APPA) AsA-APPA (exemple de 0,5 _ .- - préparation n 3) Sel de Mg d'acide L - - - - 0,5 - ascorbique 2-phosphate Ethanol 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 Conservateur qs qs qs qs qs qs Parfum qs qs qs qs qs qs Sécurité pour la peau : 5 Afin d'évaluer la sécurité de compositions cosmétiques de blanchiment contenant de l'AsA-APPA sur la peau, on réalise un test classique au moyen de patches avec les compositions des exemples 1 et 2 et des exemples comparatifs 1 à 10 et on évalue le niveau d'irritation 10 cutanée selon la grille de notation suivante : +++ Irritation extrêmement sévère, produit considéré comme inapproprié pour un usage cosmétique ++ Irritation sévère, produit déconseillé pour un usage cosmétique + Légère irritation, produit utilisable avec précaution pour un cosmétique Légère irritation - Aucune irritation, produit considéré comme approprié pour les peaux sensibles = Aucune irritation dans l'essai d'application répétée Exemple Exemples comparatifs s 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Evaluation = - - _ + + _ + + + - 5 Comme le montre le tableau 6, les compositions qui contienne de l'AsA-APPA ne sont pas irritantes pour la peau. Effet de blanchiment : 10 Afin d'évaluer l'effet de blanchiment de la peau des compositions cosmétiques contenant de l'AsA-APPA, on réalise l'expérience suivante avec les compositions des exemples 1 et 2 et des exemples comparatifs 1 à 10. Sur la partie inférieure des deux bras de dix (10) 15 volontaires sains, on applique des patches ayant quatre (4) trous de 1,5 cm de diamètre et on les expose à un rayonnement UV au moyen d'une lampe TL20W/12UV (Philips) et d'une lampe TL20W/09UV (Philips) à une distance de 10 cm à une DEM de 1,5 ("1,5 MED" en anglais) une fois par jour pendant 2 jours. Ensuite, on répartit les sujets en 5 deux groupes, A et B. Le groupe A reçoit une application de chacune des crèmes préparées dans l'exemple 1 et dans les exemples comparatifs 1 à 5 et le groupe B reçoit une application de chacun des adoucissants corporels préparés dans l'exemple 2 et dans les exemples comparatifs 6 à 10, 10 deux fois par jour pendant 6 semaines. On observe l'effet de blanchiment de la peau à l'oeil nu et on l'évalue selon 3 classes : aucun effet, efficace et effet significatif. 15 Composition de Effet Efficace Aucun effet l'échantillon significatif Exemple 1 2 2 6 Exemple 2 1 3 6 Exemple comparatif 1 - - 10 Exemple comparatif 2 3 1 6 Exemple comparatif 3 - 1 9 Exemple comparatif 4 1 3 6 Exemple comparatif 5 1 2 7 Exemple comparatif 6 - - 10 Exemple comparatif 7 1 2 7 Exemple comparatif 8 - 1 9 Exemple comparatif 9 1 1 8 Exemple comparatif 10 - 1 9 Comme le montre le tableau 7, l'effet de blanchiment 20 de la composition contenant de l'AsA-APPA (exemple 1 ou exemple 2) est similaire à celui de la composition contenant du sel de magnésium d'acide L-ascorbique 2- phosphate (exemple comparatif 4 ou exemple comparatif 9), tandis qu'il est légèrement inférieur à celui de la composition contenant de l'AsA (exemple comparatif 2 ou exemple comparatif 7). REVENDICATIONS 1. L-ascorbate d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) représenté par la formule générale (I) ou son sel : HO H- O HO O-P-OCH2CH2CH2NH3 (I) 2. L-ascorbate d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) selon la revendication 1, dans lequel ledit sel est choisi dans un groupe comprenant des sels de métaux alcalins tels que le sodium et le potassium ; des sels de métaux alcalino-terreux tels que le calcium et le 10 magnésium ; des sels d'acides aminés basiques tels que la lysine, l'arginine et l'histidine ; des sels ammoniaques ou d'amides tels que la triéthanolamine ; des sels de polymères cationiques tels que les polyquaterniums 4, 6, 7, 10, 11 et 16 ; et des sels d'agents tensio-actifs 15 cationiques tels que le chlorure de lauryldiméthylbenzylammonium et le chlorure de stéaryldiméthylbenzylammonium. 3. Procédé de préparation dudit L-ascorbate d'acide 2- 20 (3-aminopropane phosphorique) selon la revendication 1, comprenant les étapes consistant à : (1) faire réagir du 3-amino-l-propanol avec de l'oxychlorure phosphoreux selon un rapport d'équivalence de 1/1 à 1/1,3 en présence d'une base organique, dans un 25 solvant organique, à une température de l'ordre de 0 à 5 C pendant 1 à 2 heures, afin de produire le P-oxyde de 2-chlorotétrahydro-2H-l,3,2-oxazaphosporine représenté par la formule générale (II) suivante : P NH Cl (I) (2) faire réagir ledit composé (II) de ladite étape 5 (1) avec de l'acide L-ascorbique à groupes 5,6-hydroxyle protégés en présence d'une base organique, dans un solvant organique, afin de produire un dérivé de l'acide L-ascorbique représenté par la formule générale (III) suivante : Eo) 0 P0 0 HO O-P-O HN 10 (III) (3) hydrolyser le dérivé de l'acide L-ascorbique (III) de ladite étape (2) en y ajoutant de l'eau distillée à une température de l'ordre de 5 à 100 C pendant environ 3 heures, afin de produire du L-ascorbate 15 d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) ; (4) recristalliser le produit de ladite étape (3) au moyen d'un solvant organique polaire ; et (5) le cas échéant, neutraliser le produit de ladite étape (4) avec un alcali ou une base afin de produire un 20 sel. 4. Procédé selon la revendication 3, dans lequel ladite base organique de ladite étape (1) est la pyridine ou la triéthylamine. 5. Procédé selon la revendication 3, dans lequel ledit solvant organique de ladite étape (1) est choisi dans le groupe comprenant le dichlorométhane, le tétrahydrofurane, l'acétate d'éthyle, l'acétonitrile, le 5 chloroforme, l'éther éthylique, ainsi que d'autres solvants inertes. 6. Procédé selon la revendication 3, dans lequel le groupe protecteur utilisé pour masquer les groupes 5,6- 10 hydroxyle de l'acide L-ascorbique est choisi dans un groupe comprenant le benzylidène, le phényléthylidène et l'isopropylidène. 7. Procédé selon la revendication 3, dans lequel ladite 15 base organique de ladite étape (2) est la pyridine ou la triéthylamine. 8. Procédé selon la revendication 3, dans lequel ledit solvant organique de ladite étape (2) est choisi dans le 20 groupe comprenant le dichlorométhane, le tétrahydrofurane, l'acétate d'éthyle, l'acétonitrile, le chloroforme, l'éther éthylique, ainsi que d'autres solvants inertes. 9. Procédé selon la revendication 3, dans lequel on forme un sel. 10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel l'agent neutralisant utilisé dans ladite étape (5) est choisi 30 dans le groupe comprenant des oxydes d'alcalis ou de métaux tels que le carbonate de sodium, l'hydroxyde de sodium, le carbonate de potassium, l'hydroxyde de potassium, l'hydroxyde de calcium, l'hydroxyde de magnésium, l'oxyde de calcium et l'oxyde de magnésium ; des acides aminés basiques tels que la lysine, l'arginine et l'histidine ; l'ammoniaque ou des amides tels que la triéthanolamine ; des polymères cationiques tels que les polyquaterniums 4, 6, 7, 10, 11 et 16 ; ainsi que des 5 agents tensio-actifs cationiques tels que le chlorure de lauryldiméthylbenzylammonium et le chlorure de stéaryldiméthylbenzylammonium. 11. Composition cosmétique de blanchiment de la peau 10 comprenant ledit L-ascorbate d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) ou son sel selon la revendication 1. 12. Composition cosmétique de blanchiment de la peau selon la revendication 11, contenant ledit L-ascorbate 15 d'acide 2-(3-aminopropane phosphorique) ou son sel en une quantité allant de 0,005 à 10 % en poids.