Brevet FR2768516A1 — publié le 19990319

Domaine de l'invention La présente invention est du domaine des procédés de détection de traces de polluants dans des milieux aqueux. Elle concerne un nouveau procédé de dérivation des thiols, phénols, oximes et amines primaires et secondaires en solution aqueuse en vue de leur dosage par les méthodes de l'art telle que celle connue de l'homme du métier sous le nom de HPLC (High Performance Liquid Chromatography - Chromatographie liquide haute performance). Art antérieur La détection de nombreux composés présents à l'état de traces dans des milieux aqueux ou aquaorganiques est souhaitable que ce soit pour mettre en évidence des composés utiles dont on veut déterminer la concentration ou la présence, ou des composés contaminants, en fait des "micro-polluants" dont des concentrations même extrêmement faibles peuvent avoir un impact négatif sur l'environnement et la santé publique. Parmi ces composés, la détection et la quantification de composés porteurs de fonctions nucléophiles est particulièrement intéressante, par exemple les phénols, oximes, thiols, amines. Les industries chimiques entre autres, utilisant des composés à base de soufre, des phénols, oximes ou amines, sont naturellemen des sources importantes de ces produits. Ces éléments peuvent donc être présents dans l'environnement soit sous forme libre, soit dans des composés chimiques précurseurs. Une source importante est constituée par les pesticides. Certains pesticides contiennent en effet les fonctions nucléophiles citées plus haut. sous forme libre ou de précurseur. Lorsque ces fonctions sont libérées par hydrolyse dans l'environnement, elles peuvent conduire à des métabolites plus toxiques que les polluants initiaux. De nombreuses molécules d'intérêt biologique (hormones, acides aminés, neurotransmetteurs etc.) sont également porteurs de ces fonctions. Ces composés sont par exemple trouvés dans les produits des industries agro-alimentaires et les liquides physiologiques des organismes vivants. Dans chacun de ces cas, le dosage de ces fonctions nucléophiles est souhaitable pour des raisons de diagnostic médical, de qualité des aliments, ou d'indice de pollution. Lorsque leur concentration est élevée (supérieure à O,lg/l), leur dosage peut être direct. De nombreuses méthodes sont alors connues dans ce domaine et couramment utilisées. Par contre, lorsque leur concentration est plus faible (typiquement inférieure au milligramme par litrc) ct qu'une grande précision de dosage est nécessaire, la dérivation des fonctions nucléophiles recherchées apporte une solution efficace. La dérivation consiste en la création d'une liaison covalente entre la fonction étudiée et un autre groupement chimique dans le but de constituer une nouvelle entité, qui elle soit dosable par une méthode classique. L'accroissement de détectabilité est lié aux propriétés physicochimiques du composé derivant (augmentation du coefficient d'extinction molaire, augmentation de fluorescence, etc.). Actuellement, la quantification et l'iden.ification des espèces chimiques présentes à l'état de traces en milieu humide n'est pas facilement réalisée en routine, en ce qui concerne les phénols, thiols, oximes. Dans ce cas on a recours à des méthodes globales qui permettent par exemple une estimation de la concentration totale des phénols sans qu'il soit possible d'identifier les différentes molécules en présence. En ce qui concerne les amines, plusieurs méthodes classiques de dérivation sont connues. Les fonctions chimiques généralemen. utilisées pour dériver ces amines en vue de leur dosage sont les aldéhydes, les chlorures d'acides, les anhydrides d'acides, les carbamates (en tant que fonction chimique). Ces méthodes présentent des limites et inconvénients variables, tels que faible stabilité des produits de départ et des dérivés obtenus, réactivité spécifique à certaines amines, besoin de matériel coûteux exclusivement dédié à ces analyses. De plus, aucune méthode de dérivation simultanément applicable à l'ensemble des thiols, phénols, oximes, amines n'existe. Obiectifs de l'invention La présente invention entend donc remédier à ces carences en proposant un nouveau procédé de dérivation des composés organiques porteurs de fonctions nucléophiles à l'état de traces en milieu aqueux ou aquaorganique en vue de leur dosage par les méthodes séparatives classiques. Selon un second but de l'invention, un dispositif simple utilisant ce procédé et économique à fabriquer, peut être conçu. Enfin, selon un troisième objectif de l'invention, le dosage d'une très large palettes de composés présents en milieu humide à l'état de traces est réalisable. Exposé de l'invention L'objet de la présente invention est l'utilisation d'isocyanates pour réagir sur les fonctions nucléophiles de molécules présentes a l'état de traces en milieu humide, lesdites fonctions nucléophiles comprenant entre autres les phénols, les thiols, les oximes et les amines. Etant connue la très forte réactivité sur l'eau des isocyanates, il était totalement inattendu de constater une réactivité encore plus forte des isocyanates sur les fonctions nucléophiles, et donc leur possible réaction sur des molécules présentes à l'état de traces dans un milieu humide. Dans la littérature, il existe un préjugé très fort contre l'utilisation d'isocyanates dans un milieu aqueux, du fait de leur réactivité très forte (rappelée par exemple dans "Organic Chemistry", 2nd Edition Ray P. Brewster 1953, pp559, et dans "Reactions of 1,3Bis(2-chloroethyl)-l-nitrosourea and 1-(2-chloroethyl)-3-cyclohexyl-l-nitrosourea in Aqueous Solution", Wcinkam, Huey Shin Lin, Journal of Medicinal Chemistry, 1979, Vol 22, n0 10, pp 1193-1198). De fait. il est recommandé d'utiliser les isocyanates uniquement dans des solvants sans eau, ni traces d'eau. Par ailleurs. la forte réactivité sur l'eau conduit à les stocker exclusivement en milieu anhydre, et de les tenir à l'abri de l'humidité pour les conserver. Ici, au contraire, I'invention utilise un effet totalement inattendu qui est celui de la réactivité prépondérante des isocyanates sur les fonctions nucléophiles, même à l'état de traces, en milieu humide. Ceci permet d'envisager des procédés de dosage très simples et économiques à fabriquer, basés sur cette utilisation. L'invention vise également l'utilisation de nitrosourée pour réagir sur la fonction nucléophile de molécules à l'état de traces en milieu humide. En effet, la nitrosourée, qui peut être considérée comme un isocyanate masqué stable, se comporte comme un réservoir d'isocyanate, du fait de sa décomposition en milieu humide en isocyanate intermédiaire (dans certaines conditions de pH basique qui ne sont pas les conditions environnementales), celui-ci réagit sur les fonctions nucléophiles comme on l'a dit. Les nitrosourées ont l'avantage de se prêter facilement à l'ingénierie moléculaire pouvant ainsi conduire à la synthèse d'isocyanates très variables adaptés à des besoins spécifiques, contrairement aux isocyanates librcs dont la fabrication est délicate. La nitrosourée est un précurseur d'isocyanates. Cette utilisation autorise de nombreuses applications industrielles, dont le dosage de diverses fonctions, et également la création de kit de dosage comportant des produits secs très stables au stockage et très bon marché à fabriquer. La présente invention vise également un procédé de dosage de fonctions nucléophiles en milieu humide caractérisé en ce qu'il comprend des phases - d'ajout d'isocyanates à une solution aqueuse de pH basique contenant la fonction nucléophile à doser, - de maintien de la solution pendant une durée de quelques minutes à quelques dizaines de minutes à une température inférieure à 1000C, - de dosage du carbamate, thiocarbamate, ou de l'urée obtenu. Le dosage est une application industrielle vaste de l'utilisation de la réactivité des isocyanates sur les fonctions nucléophiles en milieu aqueux. Conformément à ce qui a été dit plus haut, on a bien un procédé de dosage de fonctions nucléophiles, en dépit du fait que contrairement aux recommandations d'utilisation, on utilise des isocyanates en milieu aqueux. La durée de dosage sera fonction du type d'isocyanate utilisé. Selon une disposition particulière, le procédé de dosage de fonctions nucléophiles est caractérisé en ce que le dosage du carbamate (Rl-NH-CO-XR' avec X = O ou ON=C) du thiocarbarnate (Ri -NH-CO-SR') ou de l'urée obtenu (R1-NH-CO-NHR') est effectué par HPLC (chromatographie phase liquide haute performance). Cette disposition permet l'utilisation cyans le procédé d'une détection par une méthode séparative classique. L'invention vise également un dispositif de dosage de fonctions nucléophiles en milieu humide, utilisant un procédé conforme aux dispositions précédentes. Un tel dispositif, de typc "kit dc dosage" autorise la mise en oeuvre simple du procédé dans diverses utilisations, avec un stockage facilité ct durable de ces réactifs. Brève description des figures La description qui va suivrc, faite en regard des dessins et exemples annexés dans un but explicatif et nullement limitatif permet de mieux comprendre les avantages, buts et caractéristiques de l'invention. La figure I montre l'équation de décomposition de nitrosourée dans l'eau. La figure 2 montre l'équation de réaction d'un isocyanate sur une fonction thiol. La figure 3 représente le schéma réactionnel de la dérivation de l'histamine par la chloroéthylnitrosourée (CENU1). Description détaillée Selon ltéquation donnée figure l, le mécanisme de décomposition de nitrosourées dans l'eau à pH basique donnc un agent alkylant R2+ et un isocyanate R 1 -N=C=O qui s'hydrolyse en solution aqueuse pour conduire à l'amine correspondante. Comme on le voit sur la figure 2, le mécanisme de réaction d'un isocyanate sur un thiol difficilement détectable (ici le 2-isopropanethiol) conduit en milieu aqueux basique en température ambiante à la formation d'un thiocarbamate, ainsi rendu détectable. Compte tenu de la réactivité bien connue des isocyanates sur l'eau, il était peu vraisemblable d'imaginer que des traces de thiols, phénols, oximes, ou d'amines (de concentration comprise entre 10-' l et 10-2 M) en solution aqueuse, soient susceptibles de réagir quantitativement avec un isocyanate libre ou intermédiaire (provenant alors de la décomposition d'une nitrosourée), pour former une molécule détectable, de thiocarbamate, de carbamate ou d'urée. Selon le procédé de l'invention, il devient donc possible, en solution aqueuse, de dériver quantitativement des thiols, des phénols, des oximes ou des amines, seuls ou en mélange, en faisant réagir ces fonctions nucléophiles sur un isocyanate libre Rl-N=C=O ou masqué (nitrosourée de formule générale: RINH-CO-NONR2), pour obtenir un dérivé de formule générale: RlNH-CO-XR', avec XR' = NHR' ou OR' ou SR' ou O-N=R'. C'est ce dérivé qui est ensuite dosé par les méthodes connues de l'homme de l'art. Cette réaction autorise la mise en place par exemple de procédé de dosage de fonctions nucléophiles par utilisation soit d'isocyanates libres, soit de nitrosourée comme réservoir d'isocyanates. utilisés alors sous une forme masquée stable. Une série d'exemples de réactions basées sur ce procédé est donnée dans les pages suivantes. Dans les exemples, on utiliscra plusieurs termes dont les formules sont les suivantes: N-pNitrobenzoyl N' [N-(2chloroethyl)-N-nitroso] carbamoyl- l .4-diaminobutane Une réaction conforme à ce qui vient d'être exposé est illustrée figure 3 pour ce qui concerne le cas de la CENUl utilisée pour la dérivation d'histamine. N-2,4 DinitrobenzoylN' [N-(2chloroethyl)-N-nitroso] carbamoyl- 1,4diaminobutane Benzyl isocyanate: 3 - isopropenyl - a,a - diméthylbenzyl isocyanate 2,4 - dimethoxyph enyl isocyanatc Exemple 1 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse d'histamine (0.2 mM) dans un tube. On amène le pH à 10 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CELUI dans l'aeétonitrile (1.2 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. Au terme de ce temps, la dérivation est effectuée. La molécule à doser possède la structure présentée dans le schéma réactionnel. Le dosage est effectué en injectant 10 p1 de la solution obtenue précédemment en chromatographie liquide haute performance (colonne phase inverse C18, solvant d'élution acétonitrile/eau, isocratique 68%. acétonitrile pendant 10 minutes), détection U.V. à 271 nm. Le rendement de dérivation corrcspond au rapport entre les concentrations dosées après dérivation et celles théoriquement attendues. Le rendement est de 75,1% t 0,69% Exemple 2 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse d'histamine (0.2 mM) dans un tube. On amène le pH à 9 10.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CENUI dans l'acétonitrile (1.2 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 60 minutes à une température de 60"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est de 75% t 2,9%. Exemple 3 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse d'histamine (0.2 mM) dans un tube. On amène le pH à 9 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CENUI dans l'acétonitrile (1.2 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 75"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est de 75% t 3,7%. Exemple 4 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse d'histamine (0.3 mM) dans un tube. On amène le pH à 10 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CENUI dans l'acétonitrile (1.2 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 75"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est de 93,7%+ 0,35%. Exemple 5 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse d'histamine (0.3 mM) dans un tube. On amène le pH à 9 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CENUI dans l'acétonitrile (1.2 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 60 minutes à une température de 75"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est de 86,7% t 0,62%. Exemple 6 On prélève 20 ml d'une solution aqueuse d'histamine (18 uM) dans un tube. On amène le pH à 10 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 20 ml d'une solution de CELUI dans l'acétonitrile (2.16 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est supérieur à 99% t 6%. Le dosage est effectué de nouveau après 22 jours pour contrôler la stabilité du dérivé histaminique. Le rendement après 22 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est supérieur à 99% + 6%. Exemple 7 On prélève 20 ml d'une solution aqueuse d'histamine (135 pM) dans un tube. On amène le pH à 10 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 20 ml d'une solution de CELUI dans l'acétonitrile (2.16 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est supérieur à 99% + 6%. Le dosage est effectué de nouveau après 22 jours pour contrôler la stabilité du dérivé histaminique. Le rendement après 22 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est supérieur à 99% t 6%. Exemple 8 On prélève 20 ml d'une solution aqueuse d'histamine (270 ,uM) dans un tube. On amène le pH à 10 + 0.1 avec dc la soude 0.1 N. On ajoute 20 ml d'une solution de CELUI dans l'acétonitrile (2.16 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température dc 600C. le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est supérieur à 99% + 6%. Le dosage est effectué de nouveau après 22 jours pour contrôler la stabilité du dérivé histaminique. Le rendement après 22 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est supérieur à 99% t 6%. Exemple 9 On prélève 20 ml d'une solution aqueuse d'histamine (9.2 1M) dans un tube. On amène le pH à 10 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 20 ml d'une solution de CENU2 dans lacétonitrile (2.16 mM). I,e mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est supérieur à 99% t 18%. Le dosage est effectué de nouveau après 20 jours pour contrôler la stabilité du dérivé histaminique. Le rendement après 7 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est de 98% + 19%. Exemple 10 On prélève 20 ml d'une solution aqueuse d'histamine (270 pM) dans un tube. On amène le pH à 10 + 0.1 avec de la soude 0.t N. On ajoute 20 ml d'une solution de CENU2 dans l'acétonitrile (2.16 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est supérieur à 99% + 18%. Le dosage est effectué de nouveau après 8 jours pour contrôler la stabilité du dérivé histaminique. Le rendement après 7 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est de 9% + 19%. Exemple 11 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse de putrescine (22 I1M) dans un tube. On amène le pH à 10.9 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CENUI dans l'acètonitrile (2.75 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est supérieur à 99% t 4,4%. Le dosage est effectué dc nouveau après 14 jours pour controler la stabilité du dérivé. Le rendement après 14 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est de 93% + 4,8% (statistiquement identique au rendement mesuré immédiatement après dérivation sur 6 répétitions). Exemple 12 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse de putrescine (1 13 CLM) dans un tube. On amène le pH à 10.1 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CENUI dans l'acètonitrile (2.75 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est supérieur à 99% + 4,4%. Le dosage est effectué de nouveau après 14 jours pour contrôler la stabilité du dérivé. Le rendement après 14 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est supérieur à 99% t 4,8%. Exemple 13 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse de putrescine (340 pM) dans un tube. On amène le pH à 10 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CELUI dans l'acétonitrile (2.75 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est supérieur à 99% + 4,4%. Le dosage est effectué de nouveau après 14 jours pour contrôler la stabilité du dérivé. Le rendement après 14 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est supérieur à 99% t 4,8%. Exemple 14 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse de cadavérine (20 pM) dans un tube. On amène le pH à 10. t 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CELUI dans l'acétonitrile (2.75 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est de 50% + 2,6%. Le dosage est effectué de nouveau après 8 jours pour contrôler la stabilité du dérivé. Le rendement après 14 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est de 50% t 2%. Exemple 15 On prélève 10 ml d'une solution aqueuse de cadavérine (313 ,uM) dans un tube. On amène le pH à 10 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. On ajoute 10 ml d'une solution de CENUI dans l'acétonitrile (2.75 mM). Le mélange est agité par ultrasons pendant 15 minutes à une température de 60"C. Le dosage est effectué par chromatographie liquide haute performance. Le rendement de dérivation est de 55% + 2,6%. Le dosage est effectué de nouveau après 8 jours pour contrôler la stabilité du dérivé. Le rendement après 14 jours (stockage à température ambiante et à la lumière) est de 54% t 2%. Exemple 16 On ajoute 10 tjl de benzyl isocyanatc à 50 ml d'une solution aqueuse d'isopropoxyphénol (1.6 mM) préalablement basifiée à pH 10 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 heures par agitation mécanique classique. Après dosage par chromatographie liquide haute performance en détection U.V., le rendement de dérivation calculé est de 67% + 3%. Exemple 17 On ajoute 10 1ll de benzyl isocyanate à 50 ml d'une solution aqueuse d'isopropoxyphénol (1.6 mM) préalablement basifiée à pH 9 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 heures par agitation mécanique classique. Après dosage par chromatographie liquide haute performance en détection U.V., le rendement de dérivation calculé est de 36% + 2,9%. Exemple 18 On ajoute 10 Cil de benzyl isocyanate à 50 ml d'une solution aqueuse de naphtol (1.6 mM) préalablement basifiée à pH 8 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 heures par agitation mécanique classique. Après dosage par chromatographie liquide haute performance en détection U.V., le rendement de dérivation calculé est de 64% + 3,4%. Exemple 19 On ajoute 10 ul de benzyl isocyanate à 50 ml d'une solution aqueuse de naphtol (1.6 mM) préalablement basifiée à pH 8 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. Le mélange est agité à température ambiante pendant 6 heures par agitation mécanique classique. Après dosage par chromatographie liquide haute performance en détection U.V., le rendement de dérivation calculé est de 75% t 3,4%. Exemple 20 On ajoute 10 ul de benzyl isocyanate à 50 ml d'une solution aqueuse de naphtol (1.6 mM) préalablement basifiée à pH 9 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 heures par agitation mécanique classique. Après dosage par chromatographie liquide haute performance en détection U.V., le rendement de dérivation calculé est de 69% + 3,4%. Exemple 21 On ajoute 10 1ll de benzyl isocyanate a 50 ml d'une solution aqueuse d'oxime (1.62 mM) préalablement basifiée à pH 8 t 0.1 avec de la soude 0.1 N. Le mélange est agité à température ambiante pendant 5 heures par agitation mécanique classique. Après dosage par chromatographie liquide haute performance en détection U.V., le rendement de dérivation calculé est de 45% + 2,3%. Exemple 22 On ajoute 10 Cll de benzyl isocyanate à 50 ml d'une solution aqueuse d'oxime (1.62 mM) préalablement basifiée à pH 8 + 0.1 avec de la soude 0.1 N. Le mélange est agité à température ambiante pendant 20 heures par agitation mécanique classique. Après dosage par chromatographie liquide haute performance en détection U.V., le rendement de dérivation calculé est de 46% + 233%. Exemple 23 A un mélange d'isopropanethiol (1.8 mM) d'isopopylamine (1.75 mM) et d'acétone oxime (1.7 mM) en solution dans 50% acétonitrile et 50% de tampon double acide borique et tartrate de potassium ajusté à pH 10 avec de la soude N/5 on ajoute 25p1 de benzyl isocyanate. Le tout est agité 2 heures à température ambiante (agitation mécanique). Les rendements de dérivations obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont : supérieur à 99% t 5 /o, 33% + 8%, 86% t 10%, respectivement pour l'isopropylaminc, l'oxime ct l'isopropanethiol. Exemple 24 A un mélange d'isopropanethiol (0.93 mM) d'isopropylamine (0.87 mM) et d'acétone oxime (0.85 mM) en solution dans 50% acétonitrile et 50% de tampon double acide borique et tartrate de potassium ajusté à pH 10 avec de la soude N/5 on ajoute 25111 de benzyl isocyanate. Lc tout est agité 2 heures à température ambiante (agitation mécanique). Les rendements de dérivations obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont : supérieur à 99% t 5%, 42% + 8%, 85% t 6%, respectivement pour l'isopropylamine, L'oxime et l'isopropanethiol. Exemple 25 A un mélange d'isopropanethiol (1.8 mM) d'isopopylamine (1.75 mM) et d'acétone oxime (1.7 mM) en solution dans 50% acétonitrile et 50% de tampon double acide borique et tartrate de potassium ajusté à pH 9 avec de la soude N/5 on ajoute 25cul1 de benzyl isocyanate. Le tout est agité 2 heures à température ambiante (agitation mécanique). Les rendements de dérivations obtenus sont après dosage par chromatographie liquide haute performance: supérieur à 99% + 5%, 73% Exemple 26 A un mélange d'isopropanethiol (0.93 mM) d'isopopylamine (0.87 mM) et d'acétone oxime (0.85 mM) en solution dans 50% acétonitrile et 50% de tampon double acide borique et tartrate de potassium aiusté à pH 9 avec de la soude N/5 on ajoute 251l1 de benzyl isocyanate. Lc tout est agité 2 ligures à température ambiante (agitation mécanique). Les rendements de dérivations obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont : supérieur à 99% + 5%, 79% t 8%, 93% + 6%, respectivement pour lisopropylarninc, L'oxime et l'isopropanethiol. Exemplc 27 On prélève 10 ml d'une solution à 10% d'eau et 90% d'acétonitrile contenant 0.13 mM de méthylamine, 0.14 mM d'acétone oxime, 0.057 mM de diisopropylamine, 0.1 mM d'isopropanethiol et 0.067 de naphtol. On ajoute 24 Cll de 3-isopropenyl-&alpha;,&alpha;- diméthylbenzyl isocyanate et 18 ul de triéthylamine (pH - 10.7) et on agite mécaniquement la solution à température ambiante pendant 2 heures. Les rendements de dérivations obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont de: 72% + 2%, 7% t 5%, 9% t 2%, supérieur à 99% t 6% et 5% + 1%, respectivement pour la méthylamine, L'acétone oxime, l'isopropanethiol, la diisopropylamine et le naphtol. Exemple 28 On prélève 10 ml d'une solution à 30% d'eau et 70% d'acétonitrile contenant 0.14 mM d'acétone oxime, 0.057 mM de diisopropylamine, 0.1 mM d'isopropanethiol et 0.067 de naphtol. On ajoute 24 p1 de 3-isopropenyl-a,a-diméthylbenzyl isocyanate et 18 pI de triéthylamine (pH - 10.4) et on agite mécaniquement la solution à température ambiante pendant 2 heures. Les rendements de dérivations obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont de : 11% + 2%, 32% + 1,5%, 93% + 2%, 24% + 0,3%, respectivement pour l'acétone oxime, I'isopropanethiol, la diisopropylamine et le naphtol. Exemple 29 On prélève 10 ml d'une solution à 50% d'eau et 50% d'acétonitrile contenant 0.14 mM d'acétone oxime, 0.057 mM de diisopropylamine, 0.1 mM d'isopropanethiol et 0.067 de naphtol. On ajoute 24 p1 de 3-isopropenyl-&alpha;,&alpha;-diméthylbenzyl isocyanate ct 18 pi de triéthylamine (pH - 10.6) et on agite mécaniquement la solution à température ambiante pendant 2 heures. Les rendements de dérivations obtenus sont après dosage par chromatographie liquide haute performance de : 90% t 1%, 79% t 1,1%, supérieur à 99% t 2,8%, 83% + 2%, respectivement pour l'acétone oxime, l'isopropanethiol, la diisopropylamine, et le naphtol. Exemple 30 On prélève 10 ml d'une solution à 50% d'eau et 50% d'acétonitrile contenant 0.13 mM de méthylamine, 0.14 mM d'acétonc oxime, 0.057 mM de diisopropylamine, 0.1 mM d'isopropanethiol, 0.067 de naphtol et 0.076 mM d'isopropoxyphénol. On ajoute 0.06 mmole de 2,4-dimetoxyphényl isocyanate et 4 pl de triéthylamine (pH - 8.6) et on agite mécaniquement la solution à température ambiante pendant I heure. Les rendements de dérivations obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont de : 41% t 3%, 31% + 2,8%, 44% t 3%, 64% t 5%, 72% + 3,5%, 30% t 1,8% respectivement pour la méthyl amine, L'acétone oxime, la diisopropylamine, l'isopropanethiol et le naphtol et l'isopropoxyphénol. Exemple 31 On prélève 20 ml d'une solution à 50% d'eau et 50% d'acétonitrile contenant 0.013mM de méthylamine, 0.014 mM d'acétone oxime, 0.008 mM de diisopropylamine, 0.007 mM de naphtol. On ajoute 30p1 de 3 iso"ropenyl a,a diméthylbenzyl isocyanate et 20 1ll de triéthylamine (pH ~ 11.1) et on agite mécaniquement pendant 2 heures à température ambiante. Les rendements de dérivation obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont de : 87% + 2,7%, 22% + 2,6%, 82% + 3%, 99% + 8% respectivement pour la méthylamine, L'acétone oxime, le naphtol et la diisopropylamine. On procèdc à une extraction des composés contenus dans le restant du mélange par du sel (Ig de Nacl pour 10 ml de solution à 50% d'eau et 50% d'acétonitrile). Le sel provoque le passage des composés dans l'acétonitrile qui se sépare de l'eau. On mesure le volume d'acétonitrile ainsi séparé et on mesure de nouveau les composés dérivés par chromatographie après 29 heures de stockage à température ambiante. Les rendements calculés sont de : 87%, 44%, 83%, supérieur à 09% respectivement pour la méthylamine, I'acétone oxime, le naphtol et la diisopropylamine. L'extraction est donc totale et les composés sont stables. Exemple 32 On prélève 20 ml d'une solution à 50% d'eau et 50% d'acétonitrile contenant 0.13 mM de méthylamine, 0.14 mM d'acétone oxime, 0.103 mM d'isopropanethiol, 0.08 mM de diisopropylamine, 0.07 mM de naphtol. On ajoute 30p1 de 3 isopropenyl a,a diméthylbenzyl isocyanate et 20 Cll dc triéthylamine (pH - 11.1) et on agite mécaniquement pendant 2 heures à température ambiante. Les rendements de dérivation obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont de : 86% t 2,3%, 21% + 2,6%, supérieur à 99% + 5%, 75% + 3,2% et supérieur à 99% + 7% respectivement pour la méthylaminc, I acotone oxime, I'isopropanethiol, le naphtol et la diisopropylamîne. Après extraction avec du Nacl (1 g pour 10 ml de mélange), et 29 heures de stockage à température ambiante, les rendements obtenus sont statistiquement identiques à ceux initialement mesurés ce qui montre que les dérivés sont stables dans ces conditions. Exemple 33 On prélève 20 ml d'une solution à 50J/o d'eau et 50% d'acétonitrile contenant 0.066 mM de méthylamine, 0.072 mM d'acétone oxime, 0.052 mM d'isopropanethiol, 0.04 mM de diisopropylamine, 0.035 mM de naphtol. On ajoute 30111 de 3 isopropenyl a,a diméthylbenzyl isocyanate et 20 pI de triéthylamine (pH 11.1) et on agite mécaniquement pendant 2 heures à température ambiante. Les rendements de dérivation obtenus après dosage par chromatographie liquide haute performance sont de : 84% i 2,5%, 20% t 2%, supérieur à 99% + 6%, 76% + 3,1% et 98% + 6%, respectivenement pour la méthylamine, L'acétone oxime, I'isopropanethiol, le naphtol et la diisopropylamine. Après extraction avec du Nacl (1 g pour 10 ml de mélange), et 29 heures de stockage à température ambiante, les rendements obtenus sont statistiquement identiques à ceux initialement mesurés ce qui montre que les dérivés sont stables dans ces conditions. Mode de fonctionnement Le mode de fonctionnement du procédé découle directement de son exposé. Les composants d'un kit de dosage de l'histamine seront 1. Un flacon de N-2,4 Dinitrobenzoyl N'[N-(2chloroethyl)-N-nitroso] carbamoyl-1,4diaminobutane sous forme de poudre pure 99%. 2. Une solution de triéthylamine 99%. 3. Une colonne greffée C 18. 4. Un standard de dérivé histaminique pur avec son spectre RMN et UV. 5 Les solutions dans l'acétonitrile du dérivé histaminique standard à utiliser pour la calibration du système. 6. La méthode chromatographique avec un exemple de chromatogramme. 7. Le protocole d'utilisation du kit : comprenant le détail des opérations à effectuer et la précision des mesures (selon tests statistiques avec le matériel fourni). L'utilisation de ce kit de dosage, complété par du matériel de laboratoire courant (seringues, pipettes, etc...) est faite conformément aux exemples donnés plus haut. La température de réaction est comprise entre 5"C et 1000C et plus précisément entre 15"C et 80"C et la durée de réaction est comprise entre 10 et 120 minutes selon les exemples ou cas particuliers. Avantages de l'invention L'avantage majeur est la dérivation efficace en une seule réaction d'un grand nombre de composés porteurs de fonctions nucléophiles, devenant ainsi facilement détectables. Les composés qui peuvent etre dérivés par cette méthode sont par exemple * Les carbamates * Les thiocarbamates * Les dithiocarbamates * Les carbanilates * Les amides * les acides aminés * les protéines * Les amines aromatiques * Les amines biogènes * Les amines aliphatiques * Les urées et urées substituées * Les chlorophénols * Les phénols * Le pichloram et autres dérivés de la pyridine contenant une amine ou un phénol * Les triazines * Herbicides de la famille des uraciles * Les chloroacétamides * L'amitrole * Certaines dinitroanilines (Butralin, Penoxalin ...) Les composés qui peuvent être dosés par cette méthode sont de façon générale l'ensemble des produits contenant une des fonctions oxime, phénol, thiol ou amines primaire ou secondaire. Ces fonctions pouvant être libres ou masquées. Dans le cas de fonctions masquées (impliquées dans un liaison chimique covalente ou non), il faut être en mesure de les démasquer. Ainsi, dans le cas des carbamates qui sont une famille de pesticides, il est possible par simple hydrolyse basique à chaud (procédé connu) de libérer les dites fonctions nucléophiles. I1 est possible selon le procédé de l'invention de réaliser des dispositifs de dosage de polluants présents seulement à l'état de traces dans un milieu humide à un coût faible, et donc avec des applications potentiellement très nombreuses. En effet, il existe de nombreux "micropolluants" dans l'environnement possédant des fonctions thiols, phénols, oximes ou amines. Par exemple, la fabrication de kits de dosage adaptés à l'analyse de fraîcheur de produits alimentaires dérive directement de l'invention. De même, I'identification de traces de pesticides dans des produits ou milieux humides est réalisable. Enfin, comme on l'a vu plus haut, les agents dérivants connus sont fragiles au stockage, alors que l'utilisation de nitrosourée permet de créer des dispositifs stockables de façon longue sans détérioration des performances. Typiquement, il n'y a pratiquement pas de détérioration de nitrosourée stockée en poudre au cours du temps, et un stockage en solution ne provoque pas de détérioration sensible sur une durée de l'ordre d'un mois. La portée de la présente invention ne se limite pas aux modes de réalisation présentés mais s'étend au contraire aux perfectionnements et modifications à la portée de l'homme de l'art. Des applications à la purification ou à l'extraction de molécules sont par exemple directement dérivables des exemples décrits. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'isocyanates pour réagir sur la fonction nucléophile de molécules à l'état de traces en milieu humide, lesdites fonctions nucléophiles comprenant entre autres les phénols, les thiols les oximes et les amines 2. Utilisation de nitrosourée pour réagir sur la fonction nucléophile de molécules à l'état de traces en milieu humide. 3. Procédé de dosage de fonctions nucléophiles en milieu humide caractérisé en ce qu'il comprend des phases: - d'ajout d'isocyanates à une solution aqueuse de pH basique contenant la fonction nucléophile à doser, - de maintien de la solution pendant une durée de quelques minutes à quelques dizaines de minutes à une température inférieure à 1 00 C. - de dosage du carbamate, thiocarbamate ou de l'urée obtenu. 4. Procédé de dosage de fonctions nucléophiles en milieu humide selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'ajout d'isocyanates se fait par ajout de nitrosourée de formule générale RlNH-CO-N(ON)R2 à la solution aqueuse de pH basique contenant la fonction nucléophile à doser. 5. Procédé de dosage de fonctions nucléophiles selon l'une quelconque des revendications 3 ou 4, caractérisé en ce que le dosage est effectué par HPLC. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que les fonctions nucléophiles sont des phénols. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que les fonctions nucléophiles sont des thiols. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que les fonctions nucléophiles sont des oximes. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que les fonctions nucléophiles sont des amines primaires. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que les fonctions nucléophiles sont des amines secondaires. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que le radical R1 est de formule N-pNitrobenzoyl N'[N-(2chloroethyl)-N-nitroso] carbamoyl- 1 ,4-diaminobutane. 12. Procédé selon l'unie quelconque des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que le radical Ri est de formule N-2,4 DinitrobenzoylN'[N-(2chloroethyl)-N-nitroso] carbamoyl- I ,4-diaminobutane 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que le radical R2 est C1CH2-CH2-. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 13, caractérisé en ce que la température de réaction est comprise entre 5"C et 1000C et plus précisément entre 15"C et 80"C. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 14, caractérisé en ce que la durée de réaction est comprise entre 10 et 120 minutes. 16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 15, caractérisé en ce que la solution aqueuse contenant la fonction nucléophile à doser présente un pH compris entre 8 et 11. 17. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 16, caractérisé en ce que le milieu humide est un solvant aquaorganique. 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 17, caractérisé en ce que le milieu humide est de l'eau. 19. Dispositif de mise en oeuvre du procédé selon les revendications 3 à 18 caractérisé en ce qu'il comporte en particulier: 1. Un flacon de N-2,4 Dinitrobenzoyl N'(N-2chloroethyl)-N-nitroso) carbamoyl- 1 ,4-diaminobutane sous forme de poudre pure 99%. 2. Une solution de triéthylamine 99%. 3. Un standard de dérivé histaminique pur avec son spectre RMN et UV. 4. Les solutions dans l'acétonitrile du dérivé histaminique standard à utiliser pour la calibration du système. 20. Procédé de détection de traces de phénols, thiols, oximes, amines primaires et amines secondaires dans des milieux aqueux selon les revendications 3 à 18 caractérisé par l'utilisation d'isocyanates pour réagir sur ces fonctions nucléophiles de molécules en milieu humide.