Brevet FR2767334A1 — publié le 19990219

KINASE ACTIVATRICE DES PROTEINE-KINASES CYCLINE DEPEN DANTES, ET SES UTILISATIONS La présente Invention est relative à une nouvelle kinase de Candida albicans, activatrice des protéine-kinases cycline dépendantes, et à ses utilisations. Les protéine-kinases cycline dépendantes (Cdk) sont des régulateurs du cycle de division cellulaire chez les eucaryotes, essentiels aussi bien au niveau de la transition G1/S que de la transition G2/M du cycle cellulaire. La CDC28 de Saccharomyces cerevisae et la CDC2 de Schizosaccharomyces pombe sont les premières Cdk qui ont été identifiées. L'activation des Cdk nécessite à la fois la fixation d'une molécule de cycline, et la phosphorylation de la Cdk sur un résidu thréonine conservé, situé dans une région appelée : boucle T . Il a été montré que cette phosphorylation est effectuée par une kinase dénommée : kinase activatrice des Cdk (CAK), qui, chez les vertébrés, se présente sous forme d'un hétérotrimère comprenant une sous-unité catalytique dénommée Cdk7, une sous-unité de type cycline, dénommée cycline H, et un facteur MAT-1 [pour revue, cf. SOLOMON, Trends Biochem. Sci. 19, 496-500 (1994)]. Le complexe Cdk7-cycline H est en outre un composant du complexe TFIIH, nécessaire à la transcription basale des gènes par l'ARN polymérase II, et intervient dans la phosphorylation des séquences répétées du domaine carboxy-terminal (CTD) de la grande sous-unité de cette polymérase. Chez la levure scissipare Schizosaccharomyces pombe, un complexe similaire à Cdk7-cycline H, comprenant une sous-unité catalytique dénommée Crkl, et une cycline régulatrice dénommée Mcs2 a été identifié. Il a été montré que le gène Crkl était essentiel pour la viabilité cellulaire, et il a été observé in vitro que le complexe Crkl-Mcs2 était associé à l'activité CAK et à l'activité CTD-kinase [BUCK et al., EMBO J., 14(24), 6173-83 (1995) DAMAGNEZ et al., EMBO J., 14(24), 6164-72, (1995)]. Chez la levure bourgeonnante Saccharomyces cerevisiae, un complexe comprenant une kinase (Kin28) et une cycline (Ccll) respectivement apparentées, au niveau de leur séquence, aux kinases Cdk7 et Crkl, et aux protéines régulatrices cycline H et Mcs2 a également été identifié. Le complexe Kin28-Ccll fait partie du complexe TFIIH et possède une activité CTD-kinase, mais n'intervient pas dans l'activité CAK. Récemment, les inventeurs ont identifié une kinase responsable de l'activité CAK chez Saccharomyces cerevisiae. Cette kinase a été dénommée CIV1 (CAK in vivo), et le gène correspondant a été dénommé CIVî (THURET et al., Cell, 86(4), 1996). Ces résultats ont été confirmés par d'autres équipes [KALDIS et al., Cell, 86(4), 553-564 (1996) ; ESPINOZA et al., Science, 273(5282), 1714-1717 (1996)]. La CAK de Saccharomyces cerevisiae est globalement apparentée à la famille des sérine-thréonine-kinases, et en particulier aux protéine-kinases CDC2 et CDC28, et se différencie des CAK précédemment identifiées chez d'autres organismes par l'absence du motif conservé riche en glycines GxGx(Y/F)GxV, qui est présent dans la plupart des protéine-kinases, la présence d'insertions de 5 à 29 acides aminés, situées entre les éléments de structure secondaire conservés dans la famille des Cdk, et par le fait que son activité CAK ne nécessite pas son incorporation dans un complexe enzymatique. L'activité CAK de CIV1 étant essentielle pour la survie et la division cellulaire, les Inventeurs ont entrepris de rechercher s'il existait, chez des levures pathogènes, des gènes homologues à CIVE, codant pour des protéine-kinases possédant une activité CAK. En effet, dans ce cas, l'obtention de moyens de régulation de cette activité, et en particulier d'inhibiteurs, présenterait un grand intérêt sur le plan industriel ou thérapeutique, principalement pour l'obtention de fongicides. Dans ce but, les Inventeurs ont d'abord entrepris le criblage de banques d'ADN de la levure pathogène Candida albicans, en utilisant des sondes dérivées des différentes régions du gène CIV1 de Saccharomyces cerevisiae. Cependant, aucune des sondes utilisées n'a permis de détecter la présence de séquences homologues dans le génome de Candida albicans. Les Inventeurs ont toutefois recherché si Candida albicans possédait éventuellement un analogue fonctionnel de la CAK de Saccharomyces cerevisiae, en cherchant s'il existait chez Candida albicans un ou des gènes capables de restaurer chez Saccharomyces cerevisiae la fonction CAK dans un mutant thermosensible du gène Cil1. Ils sont ainsi parvenus à identifier un gène de Candida aibicans capable de complémenter à lui seul la fonction CAK déficiente du mutant. La séquence de ce gène, dénommé CaCIV1, a été déterminée ; elle est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO:1 ; la séquence de son produit de traduction, dénommé CaCIV1, est représentée sous le numéro SEQ ID NO:2. La figure 1 représente la comparaison de la séquence d'acides aminés (code l-lettre) de CaCIV1, avec celle de la CAK de Saccharomyces cerevisiae (dénommée ScCIV1), et avec celle de la kinase CDC28 de Saccharomyces cerevisiae (dénommée ScCDC28). Les résidus conservés chez ScCIV1 et CaCIV1 sont en caractères gras. Légende des annotations de la figure 1 : k = résidu conservé dans la plupart des protéine-kinases = résidu souvent présent dans la famille des Cdk o = résidu toujours présent dans la famille des Cdk + = résidu présent dans la famille des Cdk et dans ScCIVl Structures secondaires : a = hélice a ; b = feuillet ss. CaCIV1 ne présente au niveau de la séquence globale en acides aminés, qu'une identité de 28% avec la CAK de Saccharomyces cerevisiae, ScCIV1. Cependant, les similitudes constatées entre ScCIV1 et CaCIV1 permettent de définir une famille de kinases, dénommée ci-après CIV1, regroupant des protéines possédant les caractéristiques suivantes - elles sont dépourvues du motif GxGx(Y/F)GxV, dans lequel G représente la glycine, x représente un acide aminé quelconque, Y/F représente soit la tyrosine soit la phénylalanine, V représente la valine. - elles possèdent une activité CAK non-cycline dépendante. La présente invention englobe les protéinekinases appartenant à la famille CIV1 telle que définie ci-dessus, à l'exception de la CAK ScCIV1 de Saccharomyces cerevisiae. Selon un mode de réalisation préféré de la présente invention, ladite protéine-kinase est susceptible d'être obtenue à partir d'un ascomycète, avantageusement un hémiascomycète, et de préférence Candida albicans. Une protéine-kinase conforme à l'invention est par exemple représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO:2. La présente Invention a également pour objet une séquence d'acide nucléique codant pour une protéinekinase conforme à l'invention. Une séquence d'acide nucléique conforme à 1V invention est par exemple constituée par la séquence SEQ ID NO:1 de la liste de séquences en annexe. La présente invention a également pour objet des fragments d'acide nucléique d'au moins 18 pb, homologues ou complémentaires d'une séquence d'acide nucléique codant pour une séquence peptidique spécifique de la CAK conforme à l'invention. Ces fragments peuvent en particulier être utilisés comme sondes d'hybridation, et/ou amorces d'amplification, pour isoler et/cloner à partir de Candida aibicans, une séquence d'acide nucléique codant pour une CAK conforme à l'invention. La présente invention englobe également des fragments d'acide nucléique d'au moins 15 pb, de préférence au moins 18 pb, homologues ou complémentaires d'une séquence d'acide nucléique codant pour une séquence peptidique conservée dans la famille de protéine-kinases définie par la CAK CaCIV1 conforme à l'invention, et la CAK ScCIV1 de Saccharomyces cerevisiae. Ces fragments peuvent en particulier être utilisés comme sondes d'hybridation, et/ou amorces d'amplification, pour détecter l'existence, chez des organismes autres que Saccharomyces cerevisiae et Candida albicans, de séquences codant pour des kinases apparentées aux CAK CaCIV1 et ScCIV1 et pour isoler et/ou cloner les gènes ainsi identifiés. L'invention englobe également les séquences d'acide nucléique obtenues de la sorte, et les protéine-kinases de la famille des CAK CaCIV1 et ScCIV1 codées par ces séquences. La présente invention a également pour objet tout vecteur recombinant, et en particulier tout vecteur d'expression, résultant de l'insertion d'au moins une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention dans un vecteur approprié. Le choix d'un vecteur approprié peut être effectué aisément par l'homme du métier, parmi les nombreux vecteurs disponibles, selon la cellule-hôte choisie pour multiplier et/ou exprimer un acide nucléique conforme à l'invention. L'invention englobe également des cellules procaryotes ou eucaryotes transformées par une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention. Ces cellules transformées peuvent être utilisées en particulier pour exprimer une kinase conforme à l'invention, par exemple afin de la purifier à partir des cultures cellulaires, par exemple en utilisant des techniques similaires à celles précédemment décrites par les Inventeurs pour la CIV1 de Saccharomyces cerevisiae, (THURET et al., 1996, publication citée ci-dessus), ou bien afin de détecter son activité par un test approprié de viabilité cellulaire. La mise en évidence par les Inventeurs de l'homologie fonctionnelle des kinases ScCIV1 et CaCIV1 permet d'envisager de nombreuses applications pour cette famille de kinases. En particulier, du fait qu'il apparaît que l'activité CAK non cycline-dépendante de cette famille de kinases est essentielle pour la survie et la division cellulaire, des substances inhibitrices de cette activité peuvent être utilisables comme fongicides, soit en tant que médicaments, soit sur le plan industriel. Par exemple, pour cribler des substances fongicides, telles que des substances actives sur Candida aibicans, on mesure l'activité kinase de CaCIV1, ou de l'un de ses homologues fonctionnels constitué par une CAK non cycline-dépendante de la famille CIV1, en présence de chacun des produits dont on souhaite déterminer les propriétés fongicides, et l'on sélectionne les produits ayant un effet inhibiteur sur cette activité. On peut effectuer un tel criblage en mesurant l'activité kinase d'une CAK de la famille CIV1, en présence d'activateurs ou d'inhibiteurs potentiels à tester. L'activité kinase peut par exemple être mesurée in vitro, soit directement en détectant la phosphorylation d'un peptide ou d'une protéine substrat, par exemple CDC28 ou Cdk2, ou la protéine MBP (myelin basic protein), dans un mélange réactionnel approprié, soit indirectement, en détectant et/ou mesurant l'activité de la protéine substrat lorsque celle-ci dépend de la phosphorylation. L'activité kinase peut également être mesurée in vivo, par un test de viabilité cellulaire ; par exemple, l'activité kinase de CaCIV1 peut avantageusement être mesurée dans des cellules d'un mutant de Saccharomyces cerevisiae n'exprimant pas la CAK ScCIV1, transformées par le gène CaCIVl. L'invention englobe également l'utilisation, d'un produit sélectionné comme indiqué ci-dessus pour ses propriétés inhibitrices d'une CAK non cycline-dépendante de la famille CIV1 pour l'obtention d'un fongicide La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à un exemple illustrant la mise en évidence de l'activité CAK de CaCIV1, et le clonage du gène correspondant. Exemple La souche de Saccharomyces cerevisiae, CMY975 (génotype CIV1-2 ura3 leu2 trpl lys2 ade2 ade3) porte une mutation thermosensible du gène CIV1 et, de ce fait, pousse à 240C, mais pas à 370C. Une culture de cette souche a été transformée par la méthode à l'acétate de lithium [SCHIESTL et GIETZ, Current Genetics, 16, 339-346, (1989)] avec une banque de fragments génomiques Sau3A de Candida albicans clonés dans le site BamHI du vecteur YEp24 (multicopie- URA3) [Botstein et al., Gene 8, 17-24, (1979)]. Les cellules CMY975 sont étalées sur des boîtes contenant un milieu synthétique dépouvu d'uracile, et cultivées à 370C. Dix colonies de CMY975 poussant dans ces conditions ont été obtenues. Les plasmides YEp24 contenant des inserts de Candida aibicans ont été récupérés à partir de chacune ces colonies, et amplifiés chez Escherichia coli. La carte de restriction de chacun de ces plasmides a été établie, et a permis de constater que tous les inserts provenaient d'une même région du génome de Candida abiicans. Le séquencage de cette région a permis de mettre en évidence un même cadre ouvert de lecture codant pour une protéine kinase de 339 acides aminés, ce qui montre que les 10 inserts obtenus séparément correspondent à un seul et même gène de Candida albicans. Ce gène a été dénommé CaCIVl. La séquence de CaCIVl est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 1, et celle de la protéine CaCIV1 est représentée sous le numéro SEQ ID NO: 2. La comparaison de la séquence de la protéine CaCIV1 avec les séquences disponibles sur les bases de données fait apparaître que cette protéine possède seulement 28% d'acides aminés identiques avec la CAK de Saccharomyces cerevisiae ScCIV1, et 24% d'acides aminés identiques avec les Cdk ScCDC28 de Sacchaomyces cerevisiae et la CaCDC 28 de Candida albicans. Un flragment génomique BamHI-Clal de 3 kb contenant le gène Ca Ci Vi a été sous-cloné dans le plasmide centromérique TRP1 pRS414 (SIKORSKI, R.S. et Hieter, P., [Genetics, 122, 19-27 (1989)] ). Ce plasmide a été utilisé pour transformer un mutant de Saccharomyces cerevisiae dans lequel la séquence ScClVl est délétée du génome et contenant le gène ScClVl sur un plasmide réplicatif portant également le gène de sélection URA3 (souche CMY116 du génome ura3 leu2 trpl lys2 civil LEU2/pJG43 (URA3-ScCiVi). Les cellules transformées avec le plasmide pRS414-CaClV1 sont viables après la contresélection et la perte du plasmide pJG43 (URA3-ScClVl), ce qui confirme que le gène CaClV1 peut fonctionner à la place du gène essentiel ScClVl. Donc, CaClVl code pour un homologue fonctionnel de ScC1V1, et suffit à restaurer l'activité CAK. LISTE DE SEQUENCES (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1020 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: cDS (B) EMPLACEMENT:1..1020 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: ATG AAG TTG TCA GAT TAT TAT ATA GAC AAG GAA TTA ATT TAC AAT AGT 48 Met Lys Leu Ser Asp Tyr Tyr Ile Asp Lys Glu Leu Ile Tyr Asn Ser 1 5 10 15 GCC ATT TCT GAT ATA TAT ACG GCT ATT GAT AAG TTT AAT AAC TTA CCA 96 Ala Ile Ser Asp Ile Tyr Thr Ala Ile Asp Lys Phe Asn Asn Leu Pro 20 25 30 GTA TGT CTT AAA ATA GTT GAT GAA GAT TTC AGT CTT CCA CCA CAT TCA 144 Val Cys Leu Lys Ile Val Asp Glu Asp Phe Ser Leu Pro Pro His Ser 35 40 45 ATC CAT CGA GAA GTT CTT ATA CTT AAA ACT TTG AAA CCA CAT CCA AAC 192 Ile His Arg Glu Val Leu Ile Leu Lys Thr Leu Lys Pro His Pro Asn 50 55 60 ATA ATT GAA TAT TTT AAT GAT CTT AAA ATT TGT GAC GAT ATT ATA TTA 240 Ile Ile Glu Tyr Phe Asn Asp Leu Lys Ile Cys Asp Asp Ile Ile Leu 65 70 75 80 GTC ACC AAA TTG TAT CGT TAT GAT TTG AGT CAA TTG ATT GAA ATT ACA 288 Val Thr Lys Leu Tyr Arg Tyr Asp Leu Ser Gln Leu Ile Glu Ile Thr 85 90 95 AAA TAT TGT AAA CGA ACA ACA CGA TTT ATT TAT GGT ATT AAT GGT AAT 336 Lys Tyr Cys Lys Arg Thr Thr Arg Phe Ile Tyr Gly Ile Asn Gly Asn 100 105 110 CTT GTT AGT AAT CAA TAT ACA CTT GCT AAT GAA ATT GAA GAA AAA GAT 384 Leu Val Ser Asn Gln Tyr Thr Leu Ala Asn Glu Ile Glu Glu Lys Asp 115 120 125 ATC AAA TTA TGG TTA AAA TCA ATG AGT TCA GGA CTT GAA TTT ATT CAT 432 Ile Lys Leu Trp Leu Lys Ser Met Ser Ser Gly Leu Glu Phe Ile His 130 135 140 TCA CAA GGG ATA ATT CAT CGT GAT ATA AAA CCC AGT AAT ATT TTC TTT 480 Ser Gln Gly Ile Ile His Arg Asp Ile Lys Pro Ser Asn Ile Phe Phe 145 150 155 160 GCC CGG GAT GAT ATA ACA CAA CCG ATT ATT GGA GAT TTT GAT ATT TGT 528 Ala Arg Asp Asp Ile Thr Gln Pro Ile Ile Gly Asp Phe Asp Ile Cys 165 170 175 TAT GAT TTA AAA CTG CCA CCT AAA GAT GAA CCC CCT ATG GCG AAA TAT 576 Tyr Asp Leu Lys Leu Pro Pro Lys Asp Glu Pro Pro Met Ala Lys Tyr 180 185 190 ATT GAT GTA TCT ACA GGT ATT TAT AAA GCA CCA GAA TTG ATT CTT GGT 624 Ile Asp Val Ser Thr Gly Ile Tyr Lys Ala Pro Glu Leu Ile Leu Gly 195 200 205 ATA ACT AAT TAT GAA TAT GAA ATT GAT ATT TGG TCA TTG GGT ATA ATT 672 Ile Thr Asn Tyr Glu Tyr Glu Ile Asp Ile Trp Ser Leu Gly Ile Ile 210 215 220 TTG ACT GGT TTA TAT TCA GAA AAT TTT CAA AGT GTT TTA GTC AAA GAT 720 Leu Thr Gly Leu Tyr Ser Glu Asn Phe Gln Ser Val Leu Val Lys Asp 225 230 235 240 GAT AAA GAA TTG ACT AAT GAT TCT CAT GTT AGT GAT TTA TAT TTA TTA 768 Asp Lys Glu Leu Thr Asn Asp Ser His Val Ser Asp Leu Tyr Leu Leu 245 250 255 AAT CAA ATA TTT GAA AAT TTC GGT ACA CCC AAT TTA ACT GAT TTT GAA 816 Asn Gln Ile Phe Glu Asn Phe Gly Thr Pro Asn Leu Thr Asp Phe Glu 260 265 270 GAT GAA TTA TTT TGT GAT GAA TAT AAT AAT GAA AAC TTG CAT TTT AAA 864 Asp Glu Leu Phe Cys Asp Glu Tyr Asn Asn Glu Asn Leu His Phe Lys 275 280 285 AAA TTC AAT TTA CAA AAA TAT CCT AGA AAA GAT TGG GAT ATT ATT TTA 912 Lys Phe Asn Leu Gln Lys Tyr Pro Arg Lys Asp Trp Asp Ile Ile Leu 290 295 300 CCT CGA TGC AAT GAT GAT TTC ATG AAA GAA ATT TTT ACC AAG ATG ATT 960 Pro Arg Cys Asn Asp Asp Phe Met Lys Glu Ile Phe Thr Lys Met Ile 305 310 315 320 AGA TAT GAT CGA AGT AAA AGA ATA ACT TCT AAA GAA ATC TTA CAA TTA 1008 Arg Tyr Asp Arg Ser Lys Arg Ile Thr Ser Lys Glu Ile Leu Gln Leu 325 330 335 ATG TTA GAT TGA 1020 Met Leu Asp * 340 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 340 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2: Met Lys Leu Ser Asp Tyr Tyr Ile Asp Lys Glu Leu Ile Tyr Asn Ser 1 5 10 15 Ala Ile Ser Asp Ile Tyr Thr Ala Ile Asp Lys Phe Asn Asn Leu Pro 20 25 30 Val Cys Leu Lys Ile Val Asp Glu Asp Phe Ser Leu Pro Pro His Ser 35 40 45 Ile His Arg Glu Val Leu Ile Leu Lys Thr Leu Lys Pro His Pro Asn 50 55 60 Ile Ile Glu Tyr Phe Asn Asp Leu Lys Ile Cys Asp Asp Ile Ile Leu 65 70 75 80 Val Thr Lys Leu Tyr Arg Tyr Asp Leu Ser Gln Leu Ile Glu Ile Thr 85 90 95 Lys Tyr Cys Lys Arg Thr Thr Arg Phe Ile Tyr Gly Ile Asn Gly Asn 100 105 110 Leu Val Ser Asn Gln Tyr Thr Leu Ala Asn Glu Ile Glu Glu Lys Asp 115 120 125 Ile Lys Leu Trp Leu Lys Ser Met Ser Ser Gly Leu Glu Phe Ile His 130 135 140 Ser Gln Gly Ile Ile His Arg Asp Ile Lys Pro Ser Asn Ile Phe Phe 145 150 155 160 Ala Arg Asp Asp Ile Thr Gln Pro Ile Ile Gly Asp Phe Asp Ile Cys 165 170 175 Tyr Asp Leu Lys Leu Pro Pro Lys Asp Glu Pro Pro Met Ala Lys Tyr 180 185 190 Ile Asp Val Ser Thr Gly Ile Tyr Lys Ala Pro Glu Leu Ile Leu Gly 195 200 205 Ile Thr Asn Tyr Glu Tyr Glu Ile Asp Ile Trp Ser Leu Gly Ile Ile 210 215 220 Leu Thr Gly Leu Tyr Ser Glu Asn Phe Gln Ser Val Leu Val Lys Asp 225 230 235 240 Asp Lys Glu Leu Thr Asn Asp Ser His Val Ser Asp Leu Tyr Leu Leu 245 250 255 Asn Gln Ile Phe Glu Asn Phe Gly Thr Pro Asn Leu Thr Asp Phe Glu 260 265 270 Asp Glu Leu Phe Cys Asp Glu Tyr Asn Asn Glu Asn Leu His Phe Lys 275 280 285 Lys Phe Asn Leu Gln Lys Tyr Pro Arg Lys Asp Trp Asp Ile Ile Leu 290 295 300 Pro Arg Cys Asn Asp Asp Phe Met Lys Glu Ile Phe Thr Lys Met Ile 305 310 315 320 Arg Tyr Asp Arg Ser Lys Arg Ile Thr Ser Lys Glu Ile Leu Gln Leu 325 330 335 Met Leu Asp * 340 REVENDICATIONS 1) Protéine-kinase, appartenant à la famille dénommée CIV1 définie par les caractéristiques suivantes - elle est dépourvue du motif GxGx(Y/F)GxV, dans lequel G représente la glycine, x représente un acide aminé quelconque, Y/F représente soit la tyrosine soit la phénylalanine, V représente la valine - elle possède une activité CAK non-cycline dépendante à l'exception de la CAK ScCIV1 de Saccharomyces cerevisiae. 2) Protéine-kinase selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue à partir de Candida albicans. 3) Protéine-kinase selon une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle répond à la séquence représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO:2. 4) Acide nucléique codant pour une protéinekinase selon une quelconque des revendications 1 à 3. 5) Vecteur recombinant, résultant de l'insertion d'un acide nucléique selon la revendication 4 dans un vecteur approprié. 6) Procédé de criblage de produits fongicides, caractérisé en ce qu'il comprend une étape où l'on mesure l'activité kinase d'une CAK non cycline-dépendante de la famille CIV1 définie dans la revendication 1, en présence de chacun des produits dont on souhaite déterminer les propriétés fongicides, et l'on sélectionne les produits ayant un effet inhibiteur sur cette activité. 7) Utilisation d'un produit sélectionné par le procédé selon la revendication 6 pour l'obtention d'un fongicide.