Brevet FR2764611A1 — publié le 19981218

La présente invention concerne la mise en évidence de gènes humains comportant des séquences à triplets répétés CAG/CTG ou CGG/GCC, ainsi que l'utilisation de ces gènes dans le diagnostic et l'éventuel traitement de certaines maladies monogéniques ou maladies polygéniques à composante héréditaire. Le polymorphisme anormal de séquences à triplets répétés CAG/CTG ou CGG/GCC constitue une mutation impliquée dans au moins dix maladies humaines héréditaires (appelées maladies à triplet répété) qui sont principalement, mais non exclusivement, des maladies neurodégénératives. L'expansion (plusieurs triplets surnuméraires chez les malades) de séquences à triplet répété CAG/CTG est impliquée notamment dans l'atrophie spinobulbaire (SBMA), la dystrophie myotonique (DM), l'ataxie spinocérébelleuse (SCA) SCA1, SCA2, SCA3, et SCA6, l'atrophie dendatorubro-pallydoluysiane (DRPLA), et la maladie de Huntington (1 à 3). L'expansion de séquences à triplet répété CGG/GCC est notamment impliquée dans le syndrome du X fragile (1). Enfin, le polymorphisme restreint de séquences à triplet répété CAG/CTG (par exemple un seul triplet surnuméraire chez les malades) est notamment impliquée dans la maladie de Behçet, une maladie autoimmune pour laquelle le passage de 5 à 6 codons GCT codant pour une polyalanine est associé à la maladie (4). L'expansion des CAG/CTG ou CGG/GCC (appelée également mutation dynamique) est souvent associée à un phénomène d'anticipation, la taille des répétitions étant souvent corrélée de façon inverse avec l'âge de la survenue et/ou la sévérité des symptômes. L'expansion des répétitions CAG/CTG peut apparaître dans les régions non codantes (DM) ou codantes (par exemple SBMA, HD, DRPLA, SCAs) des transcrits. Ces transcrits sont parfois exprimés dans les tissus autres que le cerveau et lorsqu'ils sont traduits conduisent à des produits de gènes plus grands et portant un domaine polyglutamine anormalement allongé (1 à 3). L'expansion de triplets répétés CAG/CTG peut être très importante (par exemple DM; plusieurs centaines de triplets), modérée (par exemple HD ou SCA1; en général plus de 35 triplets),voire très modérée (par exemple SCA6; en général moins de 35 triplets). A l'état normal, ces répétitions peuvent être hautement polymorphiques (par exemple HD ou SCAI) ou faiblement à très faiblement polymorphiques (par exemple SCA2 et SCA6) (I à 3). Une variation d'un seul triplet à l'intérieur d'un triplet répété court et faiblement polymorphique peut aussi causer une maladie (4). La mise en évidence d'expansion CAG/CTG dans l'ADN génomique de patients (5) et/ou l'anticipation dans les familles à risque a suggéré que les mutations dynamiques sont impliquées dans SCA4, SCA5, l'ataxie cérébrale dominante autosomale (ADCA de type 2, aussi désignée sous le sigle SCA7), et dans les forme familiales de la psychose maniaco-dépressive (PMD) et de la schizophrénie (6, 7). Dans le cas de SCA7, la mise en évidence d'expansions de polyglutamine a suggéré que le triplet répété impliqué est du type triplet répété CAG dans une région codante (8). L'autisme et la démence familiale qui montrent des variabilités dans l'âge de la survenue ou dans la sévérité des symptômes pourraient également être causées par des mutations dynamiques. Un assez grand nombre de maladies pourraient également avoir pour origine ou impliquer des mutations dynamiques - la maladie de Parkinson, - les paraplégies spastiques, - les ataxies cérébrospinale non répertoriées précédemment, - les cataractes zonulaires, - les tremblements incontrôlables, - les neuropathies amyloides familiales, - les arthrites granulomateuses familiales (maladie de Blau), - les microsomies hémifaciales, - certaines anémies et glaucomes, - les désordres obsessionnels. Ce qui précède démontre l'importance considérable des triplets répétés pour le diagnostic et le traitement de plusieurs maladies. La présente invention repose sur une étude systématique des répétitions CAG/CTG ou CGG/GCC (qui seront ci-après désignées par "[CAG]n" et "[CGG] n" respectivement, n étant le nombre de répétitions du triplet), cette étude ayant été réalisée avec des banques d'ADNc humains, celles-ci ayant subi un premier criblage général, puis les séquences retenues ayant été sélectionnées sur la base d'un certain nombre de critères permettant de s'assurer que les séquences en cause appartenaient à de nouveaux gènes humains et pouvaient, avec une grande probabilité, être impliquées dans des maladies à triplet répété. Enfin, les séquences sélectionnées ont fait l'objet d'une étude plus complète destinée à permettre leur localisation. Dans le cadre de la présente invention, deux ensembles d'ADNc provenant de cerveaux humains ont été étudiés pour analyser la présence de répétitions CAG en utilisant l'hybridation d'oligonucléotides sur des membranes à haute densité. Les deux librairies ont été obtenues à partir de ARNms à l'aide d'amorce oligo-dT, 1 5 l'une des librairies étant constituée de clones d'ADNc de cerveau foetal (FB) et l'autre librairie étant constituée de clones d'ADNc normalisés de cerveau de nouveau-né (NIB). De façon générale, la présente invention repose sur la mise en évidence de certaines séquences susceptibles d'être impliquées dans les maladies à triplet répété obtenues dans des conditions d'hybridation permettant de sélectionner des ADNc qui contiennent un nombre de séquences [CAG] ou [CGG] supérieur à 7, lesquelles sont plus susceptibles d'être polymorphes dans une population malade. Les conditions complètes d'analyse et de sélection de ces différentes séquences ne seront pas détaillées ci-après, seuls seront fournis les éléments permettant de les localiser et de les réisoler grâce, notamment, aux amorces PCR qui seront décrites ci-après. Plus particulièrement, la présente invention concerne une séquence d'ADN transcrit riche en triplet répété CAG/CTG ou CGG/GCC correspondant aux séquences A à L du tableau, ainsi que leurs allèles normaux et mutés et les séquences complémentaires. Par "allèles normaux" on entend désigner les allèles tels qu'ils ont été isolés ou tels qu'il peuvent être isolés de prélèvements d'individus normaux, les "allèles mutés" étant les allèles des gènes portant les séquences [CAG]n ou [CGG]n anormalement répétées. Il est important de noter que, bien que certaines de ces séquences soient, totalement ou en partie, publiques, les séquences en cause sont pour la première fois identifiées comme faisant partie d'un gène pouvant présenter une mutation, lesdits gènes n'ayant, par ailleurs, en eux-mêmes jamais été décrits. Les séquences mises en évidence présentent des pourcentages d'hétérozygotie (HTZ) très variables allant de 0 à 0,75 %. Les séquences monomorphiques (pour lesquelles HTZ = 0) sont au moins autant susceptibles d'être impliquées dans des maladies à triplet répété que les séquences polymorphes. Bien entendu, comme cela est mentionné précédemment, ces séquences sont identifiées dans le tableau et pourront, si besoin est, être réisolées en utilisant les amorces suivantes: SEQ ID I à 24, les amorces 1 à 24 correspondant, par paire, aux séquences A à L mentionnées précédemment. Les séquences ainsi mises en évidence peuvent, tout d'abord, être utilisées dans le cadre du diagnostic, et plus exactement d'un pronostic. En effet, comme un grand nombre de maladies ayant un support génétique, la mise en évidence de la présence d'une séquence présentant un nombre de répétitions anormal de triplet [CAG]n ou [CGG]n ne peut en elle-même assurer de la survenue de la maladie, mais doit être interprétée en fonction d'un ensemble d'autres informations pour permettre, soit un diagnostic très précoce, soit éventuellement une surveillance spécifique, surtout dans les familles à risque. Ce diagnostic peut être effectué en comparant la séquence d'ADN selon l'invention du patient avec une séquence normale pour détecter la présence de répétitions trinucléotidiques supplémentaires. Plus particulièrement, la présente invention concerne un procédé de mise en évidence des risques d'apparition d'une maladie à répétition trinucléotidique chez un patient, caractérisé en ce qu'on compare la séquence d'ADN conforme à l'invention dudit patient à une séquence normale pour détecter la présence de répétitions trinucléotidiques supplémentaires. Bien entendu, il existe un grand nombre de méthodes qui permettent la mise en évidence de triplets surnuméraires par rapport à des séquences normales, par exemple il est possible de mettre en évidence des différences de poids moléculaires en utilisant des gels et une méthode de type RFLP. Mais, les méthodes les plus efficaces consistent à pratiquer préalablement à la mise en évidence des différences une opération d'amplification, par toute méthode appropriée, notamment la méthode dite "PCR", même si d'autres méthodes sont utilisables. Il n'est pas nécessaire ici de décrire en détail la méthode PCR, celle- ci permet d'amplifier de façon considérable une séquence spécifique comprise entre deux séquences appelées "amorces". Parmi les amorces utilisables dans le cadre des procédés selon l'invention, il faut citer les amorces des SEQ ID I à 24 qui constituent deux par deux des paires d'amorces pour chacune des séquences objet de l'invention. En utilisant les amorces décrites précédemment, on amplifie les séquences selon la présente invention et il est alors possible, par comparaison avec un échantillon normal et/ou étalon, de mettre en évidence la présence des triplets surnuméraires et donc la possibilité de survenue d'une maladie liée à ce type de mutation dynamique. Il est également intéressant de noter que certaines maladies à triplet répété sont connues pour être associées à des variations modérées à très faibles du nombre de triplets répétés, comme par exemple, SCA6 et la maladie de Behçet. Dans ces conditions, la méthode diagnostic peut permettre, non seulement un bon pronostic de la survenue de la maladie, mais également d'évaluer le moment o cette maladie surviendra et/ou son éventuelle sévérité. La présente invention concerne également les gènes et leurs allèles qui portent, au moins en parties, ces séquences, lesdits gènes étant, bien entendu, impliqués directement dans la survenue de la maladie. Elle a également pour objet une cellule transformée exprimant tout ou partie des susdits gènes, une protéine obtenue à partie d'une telle cellule, une protéine interagissant avec la protéine précédemment mentionnée ainsi qu'un vecteur exprimant l'une de ces protéines. Les gènes correspondant pourront être exprimés dans des cellules par des moyens connus afin de produire les protéines correspondantes. Il est possible d'envisager l'utilisation desdites protéines dans certains kits de diagnostic par exemple. De façon générale, ces protéines étant impliquées dans la maladie, on souhaitera en diminuer la quantité, soit en bloquant leur expression par des méthodes appropriées au niveau des gènes ou des éléments de régulation, soit en les fixant ou en les inactivant, par exemple en utilisant des protéines réceptrices jouant le rôle de leurres. Là encore, ces protéines réceptrices ou inactivées pourront être générées in situ par expression des séquences d'ADN correspondantes. i 5 Il est également possible de prévoir la réalisation d'anticorps monoclonaux correspondant à ces protéines afin d'envisager le blocage desdites protéines lorsque cela est souhaité, l'ensemble de ces opérations pouvant être réalisé directement in vivo par exemple, en utilisant des techniques de thérapie génique, en particulier en utilisant des vecteurs qui porteront les séquences d'expression des gènes. On a mis en évidence le fait que les protéines présentant des domaines polyglutamines anormalement étendus avaient des propriétés d'aggrégation anormales, tant entre elles, qu'avec d'autres protéines (11, 12). Les aggrégats ainsi créés sont probablement impliqués dans la genèse des maladies à triplet répété, c'est pourquoi il est également possible de prévoir une thérapie dans laquelle les agents thérapeutiques viendraient empêcher l'aggrégation, soit en bloquant la molécule comme décrit précédemment, soit en se fixant à la molécule pour empêcher le rapprochement avec d'autres protéines. On peut, dans le cadre de la thérapie, prévoir d'utiliser des variants complets ou délétés de ces protéines, normales ou non (quant au domaine [CAG]n ou [CGG]n). Les séquences selon la présente invention peuvent être obtenues grâce aux informations figurant au tableau et aux références qui y sont données et en utilisant les séquences d'amorce qui sont décrites dans les identificateurs de séquence ci- joints. Les deux librairies utilisées sont - une première librairie (5) contenant 60 000 ADNc non normalisés de cerveau foetal humain (clones FB) (Laboratoire du Dr. Hans Lehrach, Max Plank Institute for Molecular Genetics, Berlin, Allemagne) sous-clonés dans le vecteur p- SPORT-1 (Life Technologies, Inc., Gaithesburg, MA, USA), et - la seconde librairie contient 40 128 ADNc normalisés de cerveau de nouveau-né (clones NIB) sous-clonés dans un vecteur lafmid (6) et qui est une partie des ressources du consortium IMAGE (Lawrence Livermore Lab., Livermore, CA,) et du programme EST Merck WU (Washington University, St-Louis, LO, USA). D'autre part, un certain nombre d'autres informations ont été recueillies en utilisant Genbank Database (NCBI Bethesda, MA, USA). Les méthodes de sélection et d'analyse qui ont été mises en oeuvre ne font pas en elles-mêmes partie de la présente invention puisque l'invention a essentiellement pour objet les séquences ainsi obtenues et leur utilisation, notamment, dans des méthodes de diagnostic ou des méthodes de traitement thérapeutique. Dans la présente analyse, on a retenu, non seulement les séquences [CAG]n ou [CGG]n parfaites, mais également les séquences [CAG]n ou [CGG]n complexes, c'est-à-dire celles qui sont ponctuées par des insertions de triplets; en effet cette présence de triplets insérés s'observe notamment dans le cas de SCA1, alors que tel n'est pas le cas pour SBMA, MD et HD. D'autre part, les nouveaux clones sélectionnés à partir de librairies NIB sont distincts de ceux sélectionnés dans le groupe FB. Ceci est en accord avec le fait que le cerveau humain exprime un grand nombre de gènes distincts à des stades de développement différents. Enfin, des présentes observations il ressort que des séquences [CAG]n ou [CGG]n sont rares dans les ADNc humains représentatifs des régions 3' des ARNm. Bien que dans l'état actuel de la présente invention, les séquences qui constituent l'objet de l'invention n'aient pas été reliées directement à des affections héréditaires, la présence d'extensions anormales CAG ou CGG peut être reliée avec le risque de survenue d'une maladie, en particulier lorsqu'il y a une composante familiale. Il existe un assez grand nombre de maladies qui actuellement n'ont pas été localisées et trouveront probablement à être reliées avec les séquences selon la présente invention. Parmi les éléments additionnels qui ont été pris en compte pour étudier la pertinence des séquences retenues figure l'existence éventuelle d'un cadre de lecture ouvert (ORF) dans lequel les séquences [CAG]n ou [CGG]n codent pour une extension polyglutamine. TABLEAU Séquence Nom du clone Triplet 5'-3' Hétérozygotie Nombre d'alleles Localisation (CEPH) (nombre de triplets) A 1.45 (CTG)9* aucune 1 14 B 2.52 (CAG)il * aucune 1 18 C 2.99 (CAG)28* aucune 1 X D 2.122 (CTG)13* aucune 1 6 CD E 3.58 (CTG)II* aucune 1 7 F i.10 (CAG)7 0.025 2(7, 8) 1 G i.12 (CTG)ll* 0.75 2(11,13) X H i.34 (CAG)9* aucune 1 10, 16 I i. 111 (CTG)13* aucune 1 X j i.129 (CTG)7(ATG)lo 0.675 4 (17-20) 12 K 1.85 (CGG)14* aucune 1 2 L 2.296 (GCC)14* aucune 1 -J * structure imparfaite 2764611 LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATIONS GENERALES: (i) DEPOSANT: (A) NOM: FONDATION JEAN DAUSSET 6 CE:TRE D'ETUDES DU POLYMORPHISME HUMAIN (CEPH) (B) RUE: 27 RUE JULIETTE DODU (C) VILLE: PARIS (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 75010 (ii) TITRE DE L' INVENTION: SEQUENCES D'ADN RICHES EN TRIPLET REPETE UTILES DANS LE DIAGNOSTIC DE MALADIES A REPETITION TRINUCLEOTIDIQUE (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 24 (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release)1.0, Version #1.30 (OEB) (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 17 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for N-:!ecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehracth, eor, AIlemagne (B) CLONE: ICRFp507K15223 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 1.45 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID N:O:!: CGCTCCTTCC TCTCAAG 17 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 paires de bases B) TYPE: nucleotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple ID) CONFIGURATION: ine-aire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, B Allemagne (B) CLONE: ICRFp507K15223 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 1.45 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2: CTCAGCATGG GGTAAAAG 18 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berlin, Allemagne (B) CLONE: ICRFp507M22190 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 2.52 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3: CTACAACAGA AATTCCGAC 19 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: lineaire (il) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berlin, Allemagne (B) CLONE: ICRFp507M22190 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 2.52 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID O: 4: 3?.A'CGACTG G.kACAG 16 2) INFORMATIONS POUR LA SEO ID NO: 5: (1) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 21 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc 12 2764611 (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berlin, Allemagne (B) CLONE: ICRF p507F12249 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 2.99 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5: CATGGGGTTG CCGAAGAGGA G 21 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 6: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 20 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berlin, Allemagne (B) CLONE: ICRFpS07F12249 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 2.99 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6: CGCCCTTCTG GAAGGCTCAG 20 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 7: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 paires de bases (B) TYPE: nucleotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berlin, Allemagne (B) CLONE: ICRFp507C15296 (i:-:) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 2.122 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 7: ?GGCAGAATG GATTTGTG!8 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 8: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 paires de bases 13 2764611 (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Nolecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berlin, Allemagne (B) CLONE: ICRFp5O7C15296 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 2.122 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8: CCATCTTGAA GAAGTACTT 19 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 9: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 paires de bases (B) TYPE: nucleotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berlin, Allemagne (B) CLONE: ICRFp507L13177 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 3.58 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 9: TCACTCCTCC ATTGTCTGC 19 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 10: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE:: Ma>: Plank inst i tue For M:lecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berl-n, Allemagne (B) CLONE: ICRFo507L13177 (i>:) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 3.58 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 10: 14 2764611 CTGTCCGAGG AGGTATCG 1l (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 11: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 paires de bases (B) TYPE: nucleotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 35570 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.10 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 11: ACCTTGTCCA GTCCATTG 18 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 12: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 21 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Larence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 35570 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 1.10 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID N'O: 12: GTTGTCTTTA TAAAACACAG A 2! (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 13: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 17 padres de bases (3) TYPE: nucleotlde (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATiON: 1!neaire (i-) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore Na.iona! Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 43014 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.12 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 13: CCCAAGTCCC ACAATAG 17 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 14: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 paires de bases (B) TYPE: nucleotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 43014 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.12 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 14: GCGTCAGTGG CAGAAG 16 (2) MFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 15: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 paires de bases (B) TYPE: nucleotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 54662 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.34 (:-:i) DESCRIPTION DE LA SEQUjENCE: SEN ID:' 1': -7TA-SA. CCTGGTTC l 2 N:FOR;-!ATIONS POUR LA SE? 'D NO:!6: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc 16 2764611 (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 54662 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.34 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 16: TGTGTTAGGT CCTAGAAG 18 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 17: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 42315 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.111 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 17: CCTCCAGCAG GGTATGGC 18 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 18: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 maires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 42315 (::CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.111 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:!: 2G.ACGGACC TGGG.ACTG 19 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 19: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 paires de bases 17 2764611 (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 52900 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.129 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 19: TCTGCCCCTG GAGGTGGG 18 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 20: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 27 paires de bases (B) TYPE: nucleotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Reseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (B) CLONE: 52900 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: i.129 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 20: CTTCACTGGC GCTTTTTCTT CAGCTTC 27 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 21: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 paires de bases (B) TYPE: nucleotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: lineaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (ai) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEOUE: Max Pank insz:..ue f' >k:ileular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, 3e (A) NOM/CLE: 1.85 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 21: 18 2764611 GAACAGCCTA TCTCATTCC 19 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 22: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 32 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Berlin, Allemagne (B) CLONE: ICRFp507P041188 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 1.85 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 22: TCAGAAGTAA CTTGAATAAA TAATCATATT CG 32 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 23: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vii) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Ma>: Plank Institute f-or 'oilecular Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrazn, Be2rin, Al lemagne (B) CLONE: ICRFp5O7B16262 (i:x:) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 2.296 * (>xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 23: CACTTGGAAT CCACAC 16 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 24: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOM:BRE DE BRINS: simple (D) CO. :FIGURAT!ON":!inéaire (i) TYPE DE:OLECULE: ADNc (vîi) SOURCE IMMEDIATE: (A) BIBLIOTHEQUE: Ma>: Plank Institute 'Dr::olezu!ar Genetics, Laboratory of Dr hans Lehrach, Beri:n, Allemagne (B) CLONE: ICRFp507B16262 19 2764611 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: 2.296 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 24: AGAGATCCTG AAGGAC 16 REFERENCES 1. Paulson, H.L. and Fishbeck, KH. Trinucleotide repeats in neurogenetic disorders Annu Rev NeuroSci 19, 79-107 (1996). 2. Zohgbi, H. The expanding world of ataxins. Nature Genet. 14, 237- 238 (1996). 3. Zuchenko O, Bailey J, Bonnen P. Ashizawa T, Stockton DW, Amos C, Dobyns WB, Subramony SH, Zoghbi HY, and Lee CC. Autosomal dominant cerebellar ataxia (SCA6) associated with small glutamine expansion in the alpha 1 A-voltage-dependent calcium channel. Nature Genet 15, 62-69 (1997). 4. Mizuki, N. et al. Triplet repeat polymorphism in the transmembrane region of the MICA gene: a strong association of six GCT repetitions with Behçet disease. Proc Natl Acad Sci USA 94, 1298-1303 (1997). 5. Schalling M, Hudson TJ, Buetow KH, Housman DE. Direct detection of novel expanded trinucleotide repeats in the human genome. Nature Genet 4, 135-139, 1993. 6. O'Donovan MC, Guy C, Craddock N, Murphy KC, Cardno AG, Jones LA, Oven MJ McGuffin P. Expanded CAG repeats in schizophrenia and bipolar disorders. Nature Genet 10, 380-381 (1995). 7. Morris AG, Gaitonde E, McKenna PJ, Mollon JD, Hunt DM. CAG repeat expansions and schizophrenia: association with disease in females and with early age-at-onset. Hum Mol Genet 4, 1957-1961 (1995). 8. Trottier, Y. et al. Polyglutamine expansion as a pathological epitope in Huntington's disease and four dominant cerebellar ataxia. Nature 378, 403-406 (1995). 9. Meier-Ewert, S., Maier, E., Ahmadi, A., Curtis, J. and Lebrach, H. An Automated approach to generating expressed sequence catalogues. Nature 361, 375 (1993). 10. Soares, M.B., Bonaldo, M.F., Jelene, P., Su, L., Lawton, L. & Efstratiadis, A. Construction and characterization of a normalized cDNA library. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91, 9228-9232 (1994). I11. Haad, D., Perry, M.J. and Haynes, L. Cellular transglutaminases in neural development. Int. J. Devl Neuroscience 11, 709-720 (1993). 12. Li X-J, Li S-H, Sharp AH, Nucifora Jr FC, Schilling G, Lanahan A, Worley P. Snyder SH, Ross CA. A Hungtintin-associated protein enriched in brain with implications for pathology. Nature 378, 398-402 (1995). REVENDICATIONS 1) Séquence d'ADN transcrit riche en triplet répété CAG/CTG ou CGG/GCC correspondant aux séquences A à L selon le tableau ainsi que leurs allèles normaux et mutés et les séquences complémentaires. 2) Séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle porte au moins en partie une séquence selon la revendication 1. 3) Procédé de mise en évidence des risques d'apparition d'une maladie à répétition trinucléotidique chez un patient, caractérisé en ce qu'on compare la séquence d'ADN selon la revendication 1 dudit patient à une séquence normale pour détecter la présence de répétitions trinucléotidiques supplémentaires. 4) Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'on effectue une amplification de tout ou partie des séquences selon la revendication 1 et que l'on met en évidence dans le produit d'amplification la présence de répétitions trinucléotidiques supplémentaires. ) Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'amplification des séquences est effectuée avec les amorces décrites SEQ ID I à 24 correspondant aux séquences A à L respectivement. 6) Cellule transformée exprimant tout ou partie d'un gène selon la revendication 2. 7) Protéine obtenue à partir d'une cellule transformée selon la revendication 6. 8) Protéine interagissant avec une protéine selon la revendication 7. 9) Anticorps monoclonal correspondant à une protéine selon l'une des revendications 7 ou 8. ) Vecteur exprimant une protéine selon l'une des revendications 7 ou 8. 11) Utilisation d'une protéine selon l'une des revendications 7 ou 8, d'un anticorps selon la revendication 9 ou d'un vecteur selon la revendication 10 pour la préparation d'un médicament.