Brevet FR2768430A1 — publié le 19990319

DESCRIPTION DE L'INVENTION La présente invention a pour objet, la description de trois procédés d'extraction d'une sapogénine de l'écorce de "BEDEHI qui est une plante de la famille des Combretaceae, genre Terminalia brownii connue sous le nom de BEDEYHI en Afrique. Cette dernière est relative à trois modes d'extraction d'une Sapogénine jamais décrite, que nous avons dénommée ACIDE BEDEHIQUE ou ACIDE NANCYLIOUE ou BEDEHIGENINE ou NANCYGENINE. correspondant à l'Acide oléan 12 ène, 28 orque, 2, 3,19, 24 tétrahydroxy 2a, 3p, 48, 19a. l-Extraction, fractionnement et purification de l' ACIDE BEDEHIQUE OU NANCYLIQUE ou BEDEHIGENINE ou NANCYGENINE. correspondant à l'Acide oléan 12 ène, 28 oïque, 2, 3,19, 24 tétrahydroxy 2a, 3ss, 4ss, 19a), à partir de l'extrait aqueux hydroéthanolique ou hydrométhanolique. 2 - Fractionnement et purification à partir de l'extrait butanolique. 3 - Fractionnement et purification à partir de l'extrait dichlorométanolique. A - EXTRACTION, FRACTIONNEMENT ET PURIFICATION DE L'ACIDE BEDEHIQUE, Â PARTIR DE L'EXTRAIT AQUEUX HYDROÉTHANOLIQUE OU HYDROMÉTHANOLIQUE. E(TRACTION: La poudre d'écorce du tronc de Termina brownii est macérée dans l'éther de pétrole ( 60 - 80 ) pendant 48 Heures, puis lixiviée; Le marc est ensuite maintenu en contact avec l'eau, l'ethanol 80 ou le méthanol 80 avant de subir une percolation. Le lixiviat obtenu est évaporé sous pression réduite jusqu'à l'obtention d'une poudre jaune ocre . Une partie de cet extrait est partagée entre le butanol et l'eau. FRACTIONNEMENT ET PURIFICATION: La fraction butanolique est traitée par une solution saturée de bicarbonate acide de sodium. On obtient ainsi une fraction acide et une fraction neutre. La fraction acide positive à la réaction de Liebermann-Buchard, caractéristique des triterpènes est soumise à une chromatographie sur gel de silice et éluée successivement par l'éther de pétrole, l'ether de pétrolechloroforme (1:1), le chloroforme, chloroforme- méthanol (19:1 et 9:1). L'éluat obtenu avec le sytème chloroforme-méthanol (19:1) subit une chromatographie préparative sur couche mince dans le système chloroforme-méthanol-eau (78:19:1) pour donner deux composés purs dont celui à Rf élevé (0,65) est l'acide oléan, 12ène, 28 osque, 2, 3, 19, 24, tétrahydroxy 2&alpha;, 3ss, 4ss, 19&alpha;,( poudre blanc laiteux hydrosoluble et alcoolosoluble) dénommée ACIDE BEDEHIQUE ou ACIDE NANCYLIQUE ou BEDEHIGENINE ou NANCYGENINE. B - EXTRACTION ET PURIFICATION A PARTIR DE L'EXTRAIT DICHLOMETHANOLIQUE EXTRACTION La poudre d'écorce du tronc de Terminalia brownii est macérée pendant 48 heures dans du dichlorométhane puis lixiviée. Le lixiviat est évaporé jusqu'à obtention d'un résidu résineux vert glauque. FRACTIONNEMENT ET PURIFICATION Ce dernier est chromatographié sur colonne ouverte de silice dans le système chloroforme-méthanol (10: 1)(v/v) pour donner trois fractions dont une seule, après contrôle par chromatographie sur couche mince dans le système CHCL3 - CH3OH - H2O (75 ; 7,5 ; 0,75) s'est révélée être l'ACIDE BEDEHIQUE ou ACIDE NANCYLIOUE ou BEDEHIGENINE ou NANCYGENINE. correspondant à l'Acide oléan 12 ène, 28 otique, 2, 3,19, 24 tétrahydroxy 2a, 3ss, 4ss, l9a.(Rf= 0,4). L'une des deux fractions restantes, rechromatographiée sur colonne ouverte de silice, puis sur colonne de séphadex a permis ltobtention du même acide. C - FRACTIONNEMENT ET PURIFICATION A PARTIR DE L'EXTRAIT BUTANOLIQUE EXTRACTION La poudre d'écorce du tronc de Terminalia brownii est macérée dans lixiviée. Le lixiviat est filtré sur charbon végétal. Le filtrat est évaporé à sec. La poudre jaune clair obtenue est partagée entre le butanol et l'eau. FRACTIONNEMENT ET PURIFICATION La fraction butanolique est traitée par une solution saturée de bicarbonate acide de sodium. On obtient ainsi une fraction acide et une fraction neutre. La fraction acide est soumise à une chromatographie sur gel de silice et éluée par l'éther de pétrole, l'éther de pétrole-chloroforme (1:1) (v/v), le chloroforme ; le chloroforme-méthanol (19/1 et 9:1). L'éluat obtenu avec le système chloroforme-méthanol (19:1) a subi une chromatographie préparatrice sur couche mince dans le système chloroforme-méthanol-eau (78-19-1) (v-v-v) pour donner deux fractions pures dont celle à plus grand Rf (Rf=0,65) est une poudre blanc laiteux identique à l' ACIDE BEDEHIQUE ou ACIDE NANCYLIQUE ou BEDEGENINE ou NANCYGENINE. correspondant à l'acide oléan 12ène, 28 oïque,2, 3, 19, 24 tétrahydroxy 2&alpha;, 3ss, 4ss, 19&alpha;,hydrosoluble et alcoolosoluble. Cet acide servira de principe actif dans les formules médicamenteuses. REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention de l'acide oléan 12ene, 28 oïque, 2, 3,19, 24 tétrahydroxy 2&alpha;, 3ss, 4ss, 19&alpha; à partir de l'extrait aqueux, éthanolique ou méthanolique de l'écorce de tronc de Terminalia brownii. Poudre d'écorce de Terminalia brownii éther de pétrole (60-SO"):Macération 48 h 1 A extrait éthére' Marc (eau, éthanol, ou méthanol): épuisement 1 B Marc Extrait aqueux, éthanolique ou méthanolique Evaporation de l'alcool C Extrait aqueux I Butanol: Extraction liquide-liquide D Phase aqueuse insoluble Extrait butanolique Hydrolyse acide: (bicarbonate acide de sodium) MM E Fraction neutre Fraction acide (Libermann-Buchard 4 Triterpènes) I Chromatographie sur gel de silice : éther de pétrole; F éther de pétrole-chloroforme ( 1/1 ); chloroforme; chloroforme-méthanol (19:1 et 9 :1) Eluat du système (19 :1) G Chromatographie préparative sur couche mince chloroforme-méthanol-eau (78 :19 :1) 1 H Acide oléan 12i"" 28 oïque, 2,3,1924 tétrahydroxy 2x. 3Q, 4ss, 19 Rf: 0,65. 25 Poudre blanc laiteux hydrosoluble et alcoolosoluble. 2 Procédé d'obtention et de purification de l'acide oléan 12ène, 28 osque, 2,3,19,24 tétrahydroxy 2&alpha;, 3ss, 4ss, 19&alpha; à partir de l'extrait dichlorométhanolique. Poudre d'écorce dc Terminalia brownii Dichlorométhane: Macération 48h 1 Lixiviation Marc Extrait dicholorméthanolique I. Evaporation 1 résidu résineux vert-glauque Chromatograpllie sur colonne de lo silice; Système : chloroforme: 10 (V) Méthanol: 1 (v) 1 3 fractions 1 Chromatographie sur couche mince: chloroforme 75 méthanol 7,5 eau 0,75 1 1 fonction impure 1 Chromatographie sur colonne de séphadex : Méthanol 1 Acide oléan 12eue 28 oïque 2,3,19,24 tétrahydroxy 2x, 3ss, 4p, 190c Rf: 0 1 3- Procédé d'obtention de l'acide oléan 12ène 28 orque 2,3,19,21 tétrahydroxy 2oc, 3ss, 4ss, 9&alpha; à partir de l'extrait butanolique de Terminalia brownii. Poudre d'écorce du tronc de Terminalia Méthanol : Macération Marc Lixiviat Charbon végétal 1 Filtrat Evaporation de l'alcool Extrait aqueux Biltanol E Fraction neutre Fraction acide (Liebermann-Buchard ++ Triterpènes) 1 Même traitement qu'en F, G, de la revendication 1. Acide oléan 12ène, 28 oïque, 2,3,19,24 tétrahydroxy 2&alpha;, 3ss, 4ss, 19&alpha; Rf : 0,65 Poudre blanc laiteux hydrosoluble, alcoolosoluble. Cet acide pourra servir de principe actif aux médicaments.