Brevet FR2762911A1 — publié le 19981106

DISPOSITIF ET METHODE D'ANALYSE DE PREPARATIONS CYTOLOGIOUES La présente invention a pour objet un dispositif d'analyse de préparations cytologiques permettant de déceler des anomalies cellulaires sur un prélèvement effectué sur au moins un individu. L'objet de l'invention concerne également une méthode permettant d'obtenir des analyses avec un résultat plus fiable. Un autre objet de l'invention est de procurer un dispositif et une méthode d'analyse de préparations cytologiques dont la mise en oeuvre permet un nombre élevé d'analyses par unité de temps sans nécessairement recourir à l'aide d'un automate. Dans son application préférée, l'invention concerne un dispositif et une méthode d'analyse permettant de déceler des anomalies cellulaires précancéreuses, précoces, voire des cancers avancés, sur des prélèvements cellulaires effectués au niveau du col de l'utérus. De façon connue, les analyses cytologiques consistent à prélever, sur le corps humain ou dans une cavité de celui-ci, un échantillon contenant des cellules, un tel prélèvement étant par exemple pratiqué au niveau du col de l'utérus, puis à effectuer en une ou plusieurs étapes des élutions/centrifugutions dans le but final d'obtenir une préparation ne contenant que les cellules devant être analysées. Cette préparation cytologique doit ensuite être déposée sur une lame de microscope pour former une empreinte obtenue par évaporation ou aspiration des éluants, ladite empreinte étant ensuite traitée par des réactifs colorés connus de l'homme l'art pour détecter par un examen ultérieur sous microscope d'éventuelles anomalies cellulaires. Le dépôt à la spatule d'une préparation cytologique sur une lame a l'inconvénient bien connu de détériorer ou de masquer des cellules pouvant être des cellules anormales, voire malignes, qui ne seront alors plus décelables par les préparations et observations microscopiques ultérieures. En outre seulement une partie de la population cellulaire prélevée se trouve sur la lame, le reste (environ 80%) étant jeté avec la spatule. Dans un laboratoire d'analyse, outre son aspect peu fiable (20 à 25% de faux négatifs), ce procédé n'a pas l'avantage d'être très rapide. Pour palier à ces inconvénients, divers dispositifs ou méthodes ont été proposés pour effectuer le dépôt et la sédimentation d'une préparation cytologique sur une lame. Ces dispositifs consistent essentiellement à utiliser un tube, ou chambre, plaqué sur une lame de microscope pour former sur celle-ci une seule empreinte d'une préparation cytologique. Un tel dispositif correspond par exemple à celui décrit dans le document DE-U-91 04 438. Pour pouvoir effectuer un plus grand nombre d'analyses par unité de temps, divers fabricants ont proposé des automates réunissant, dans une ou plusieurs barquettes, plusieurs assemblages chambres/lames de façon à effectuer successivement sur le dispositif mis en place les opérations de sédimentation et de coloration des cellules par des étapes dans lesquelles se succèdent des élutions et des aspirations du surnageant. Un tel dispositif de ce type est par exemple décrit dans le document EP 0 590 506. De tels dispositifs ont l'avantage de procurer un temps de traitement par lame plus court, mais ont l'inconvénient de nécessiter un investissement coûteux en matériel. De plus, l'élimination du surnageant par aspiration, opération devant être répétée une dizaine de fois, peut soustraire des cellules à l'observation ultérieure sous microscope et conduire à un diagnostic faussement négatif. La présente invention a donc pour objet de proposer une méthode d'analyse de préparations cytologiques pouvant être mise en oeuvre sans nécessairement faire appel à un automate, grâce à un dispositif relativement simple et peu coûteux, permettant en outre d'obtenir des diagnostics avec une plus grande fiabilité. A cette effet l'invention a pour objet un dispositif d'analyse pour déposer sur des lames de microscope des préparations cytologiques d'au moins un prélèvement de cellules, comprenant - un ensemble de chambres cylindriques en un matériau plastique, pourvues chacune d'une ouverture supérieure et d'une ouverture inférieure munie d'une collerette; - un ensemble de lames de microscope sur lesquelles seront formées des empreintes de préparations cytologiques; - un bâti supérieur rigide, de forme générale parallélipipédique, pourvu d'autant d'ouvertures que de chambres, destinées à maintenir lesdites chambres et à positionner leurs ouvertures inférieures dans un même plan, et - un bâti inférieur rigide, de forme générale parallélipipédique, pourvu à sa surface d'autant de logements que de lames de microscope, ledit dispositif d'analyse étant caractérisé en ce que le bâti supérieur est configuré pour positionner les chambres par paires au dessus de chaque lame disposée dans un logement du bâti inférieur, et en ce que le bâti supérieur et le bâti inférieur comportent des moyens d'assemblage / désassemblage permettant d'assurer le positionnement et l'étanchéité de la jonction entre l'ouverture inférieure d'une chambre et la surface d'une lame. Ainsi le dispositif permet d'avoir sur une unique lame deux empreintes, ce qui peut conduire à un diagnostic plus fiable comme cela sera exposé plus loin. Pour obtenir ces deux empreintes sur une même lame il est avantageux de réunir en un même module les deux chambres devant former l'empreinte sur une unique lame, ce qui réduit d'autant le coût de ce support jeté après usage. Pour faciliter les opérations d'assemblage du dispositif il est également avantageux de prévoir des protubérances, tel que des ailettes assurant le coincement des chambres dans le bâti supérieur pour en permettre une manipulation plus facile pour assembler ledit bâti supérieur sur le bâti inférieur. Bien que la pression exercée par le système d'assemblage puisse être suffisante pour établir l'étanchéité nécessaire entre l'ouverture inférieure d'une chambre et la lame, il est également avantageux d'établir à ce niveau un moyen d'étanchéité additionnel. Le moyen le plus usuel consiste à prévoir dans le pourtour de ladite partie inférieure une rainure destinée à recevoir un O-ring, ce qui peut nécessiter une manipulation supplémentaire pour le mettre en place. Selon la présente invention, cet inconvénient peut être éliminé en formant lors de la fabrication des chambres ou des paires de chambres, soit une lèvre inclinée vers l'intérieur de la chambre, soit un bourrelet compressible. Le dispositif selon l'invention, ses caractéristiques et avantages apparaîtront plus clairement à la lecture de la description détaillée ciaprès donnée à titre d'exemple illustratif et non limitatif en référence aux figures annexées dans lesquelles - la figure 1 est une vue éclatée en perspective de l'ensemble du dispositif; - la figure 2 est une vue en perspective d'une lame et d'une paire de chambres, et - les figures 3 et 4 sont des représentations en coupe selon les lignes III-III et IV-IV de la figure 2 au niveau de la jonction lame/chambre. La figure 1 représente une vue en perspective éclatée de l'ensemble du dispositif, la partie médiane arrachée montrant que le nombre d'empreintes réalisables avec ledit dispositif n'est limité que par la longueur dudit dispositif. De préférence, la longueur dudit dispositif doit permettre de mettre en place 12 lames de microscope de format standard, et donc de réaliser 24 empreintes. Ce dispositif comporte essentiellement deux bâtis 10, 20 permettant d'assembler et d'assurer l'étanchéité entre les chambres la, lb et les lames associées 2 pour réaliser sur chaque lame deux empreintes 3a, 3b. Le bâti supérieur en forme de U comporte deux séries parallèles d'ouvertures lia, lîb sur sa face de jonction, et des ouvertures 17 sur ses flancs. Les ouvertures lia, llb sont destinées à recevoir la partie tubulaire extérieure des chambres la, lb. Les ouvertures 17, qui peuvent avoir une forme quelconque, sont destinées d'une part à alléger le dispositif dans son ensemble, d'autre part à faciliter la circulation d'air ventilé pour la formation des empreintes. Ce bâti supérieur comporte en outre à chacune de ses extrémités un dispositif d'assemblage 15, formé par un perçage 15a qui servira au positionnement et un crochet 15b d'un système de verrouillage dit "à grenouillère". Ce dispositif de verrouillage est supporté par un renforcement 18 prévu entre les deux flancs de la structure en U. Le bâti 10 peut être réalisé, soit par usinage ou moulage d'un métal, soit par assemblage de différentes pièces. Le bâti inférieur 20 également en forme de U, mais inversé par rapport au bâti supérieur 10, comporte à sa surface orientée vers le bâti 10 des logements 22 destinés à recevoir les lames 2. Afin de faciliter la manipulation des lames 2, chaque logement 22 comporte sur le bord du bâti un évidemment 23. On observera en outre que, selon le mode de réalisation représenté, la largeur du bâti inférieur 20 est sensiblement la même que la longueur des lames de microscope, mais supérieure à la largeur du bâti supérieur 10. Cette configuration permet en effet de laisser apparente une portion 4 de l'extrémité de chaque lame 2 pour apposer sur ladite portion des moyens d'identification des préparations cytologiques soumises à analyse, par exemple sous forme d'un code-barre, comme cela est plus visible sur la figure 2. Elle permet aussi de mettre en place une barrette 30 réalisée en un matériau ferromagnétique et destinée à coopérer avec des aimants disposés à chaque extrémité libre du bâti 20 pour maintenir les lames 2 sur ledit bâti lors du désassemblage. Les extrémités du bâti 20 comportent également les éléments complémentaires de verrouillage 25 destinés à coopérer avec ceux portés par le bâti 10, à savoir une goupille 25a et une boucle 25b du dispositif à grenouillère. Le bâti inférieur 10 peut être réalisé comme indiqué précédemment pour le bâti supérieur 10 et comporte de façon équivalente dans ses flancs des ouvertures référencées 27, ayant une fonction équivalente à celle des ouvertures 17 du bâti 10. En se référant maintenant plus particulièrement aux figures 2, 3 et 4, on a représenté les produits à usage unique du dispositif selon l'invention. A la figure 2 on voit notamment en vue perspective de dessous, deux chambres la, lb réunies par une même base 5, la représentation en pointillés figurant les collerettes 5a, 5b à la partie inférieure desdites chambres si celles-ci étaient séparées. Les figures 3 et 4 sont des coupes agrandies de modes de réalisation du moyen additionnel d'étanchéité. A la figure 3 on a représenté un bourrelet 8 formé en même temps que la chambre la, mais avec un matériau ayant une plus grande élasticité. A la figure 3 ce moyen d'étanchéité consiste en une lèvre 7 inclinée vers l'intérieur de la chambre et venant de matière avec celle-ci. Les figures 3 et 4 montrent également un mode de réalisation d'un moyen de coincement des chambres dans le bâti supérieur 10. Ce moyen de coincement consiste en des ailettes 6 s'étendant radialement entre une portion de la paroi extérieure d'une chambre et une portion de la collerette 5a, 5b. Après avoir décrit la structure du dispositif, nous indiquons ci-après la méthode d'analyse que ledit dispositif permet de mettre en oeuvre, en référence essentiellement à la figure 1. On effectue d'abord de façon connue, à partir d'un prélèvement effectué sur le corps humain ou dans une cavité de celui-ci, une préparation cytologique en milieu liquide par exemple de l'eau distillée, ne contenant plus de matériel biologique indésirable. On dispose des lames de microscope 2 dans les logements 22 du bâti inférieur 20, chaque lame ayant préalablement été pourvue d'un moyen de repérage, tel qu'un code-barre. On bloque les chambres cylindriques, ou paires de chambres la, lb dans les ouvertures correspondantes lla, llb du bâti supérieur 10, permettant ainsi une manipulation facile de l'ensemble bâti supérieur/chambre pour son positionnement sur le bâti inférieur 20 au moyen des goupilles 25a. L'étanchéité de l'ensemble est ensuite assurée par verrouillage du dispositif à grenouillère 15b, 25b. On dépose alors dans chaque paire de chambres disposée au dessus d'une même lame une partie alignote d'une même préparation cytologique. Après avoir laissé reposer environ 15 minutes pour obtenir une sédimentation des cellules, le surnageant est éliminé et on procède au séchage dans une étuve ventilée à 50-600C. Ces opérations étant terminées, les lames 2 peuvent être retirées du dispositif par déverrouillage des bâtis 10, 20, les lames étant au cours de cette opération de préférence maintenues par la barrette 30 à fixation magnétique. Chaque lame comporte alors deux empreintes correspondant à un unique prélèvement correspondant à un nombre moyen de 115000 cellules, c'est-à-dire un nombre très supérieur à celui obtenu avec les méthodes ne permettant de réaliser qu'une seule empreinte par lame. Après avoir effectué les colorations, qui ne seront pas décrites ici comme étant bien connues de l'homme de l'art, l'observation sous microscope s'en trouve facilitée. La fiabilité du diagnostic résultant de cette observation est encore accrue si chacune des deux chambres est remplie avec une partie alignote correspondant à une dilution différente, par exemple 1/3. On conçoit que le dispositif qui vient d'être décrit est susceptible, de la part de l'homme de métier, de nombreuses variations, tant au niveau des bâtis que du matériel jetable après usage et notamment des chambres ou paires de chambres, sans sortir du cadre de la présente invention. REVENDICATIONS 1. Dispositif d'analyse pour déposer sur des lames de microscope des préparations cytologiques d'au moins un prélèvement de cellules, comprenant - un ensemble de chambres cylindriques (la, lb) en un matériau plastique, pourvues chacune d'une ouverture supérieure et d'une ouverture inférieure munie d'une collerette (5a, 5b); - un ensemble de lames (2) de microscope sur lesquelles seront formées des empreintes (3a, 3b) de préparations cytologiques; - un bâti supérieur (10) rigide, de forme générale parallélipipédique, pourvu d'autant d'ouvertures (lia, llb) que de chambres (la, lb), destinées à maintenir lesdites chambres et à positionner leurs ouvertures inférieures dans un même plan, et - un bâti inférieur (20) rigide, de forme générale parallélipipédique, pourvu à sa surface d'autant de logements (22) que de lames (2) de microscope, caractérisé en ce que le bâti supérieur (10) est configuré pour positionner les chambres (la, lb) par paires au dessus de chaque lame (2) disposée dans un logement (22) du bâti inférieur (20), et en ce que le bâti supérieur (10) et le bâti inférieur (20) comportent des moyens d'assemblage / désassemblage (15, 25) permettant d'assurer le positionnement et l'étanchéité de la jonction entre l'ouverture inférieure d'une chambre (la, lb) et la surface d'une lame (2). 2. Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé en ce que chaque paire de chambres (la, lb) est solidaire d'une même base (5) ayant sensiblement la même largeur qu'une lame (2) et une longueur sensiblement inférieure à celle-ci, ladite base étant formée par l'extension et la réunion des collerettes (5a, 5b). 3. Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé en ce que chaque chambre (la, lb) comporte des moyens de coincement dans les ouvertures (lla, llb) du bâti supérieur (10) formés par des ailettes (6) s'étendant radialement entre une portion de la paroi extérieure d'une chambre et une portion de la collerette (5a, 5b). 4. Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé en ce que chaque chambre (la, lb) comporte en outre un moyen d'étanchéité sur tout le pourtour de son ouverture inférieure. 5. Dispositif d'analyse selon la revendication 4, caractérisé en ce que le moyen d'étanchéité de chaque chambre (la, lb) est formé par une lèvre (7) inclinée vers l'intérieur de la chambre et venant de matière avec celleci. 6. Dispositif d'analyse selon la revendication 4, caractérisé en ce que le moyen d'étanchéité de chaque chambre (la, lb) est formé par un bourrelet (8) en un matériau plastique compressible solidaire de ladite chambre. 7. Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé en ce que les moyens d'assemblage / désassemblage comprennent à chaque extrémité une goupille (25a) solidaire d'un bâti et coopérant avec un perçage (15a) ménagé dans l'autre bâti pour les positionner l'un par rapport à l'autre et un système de serrage dévérouiable (15b, 25b). 8. Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte en outre un moyen de maintien des lames (2) sur le bâti inférieur (20) lors de l'opération de désassemblage formé par une barre (30), en un matériau magnétique, ayant la même longueur que ledit bâti et coopérant avec des aimants (26a, 26b) disposés dans ledit bâti. 9. Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé en ce que les bâtis (10, 20) ont un conformation en U permettant d'assurer leur rigidité, les flancs de chaque bâti étant pourvus d'ouvertures (17, 27). 10. Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé en ce que les lames (2) ont sensiblement la même longueur que la largeur du bâti inférieur (20), ladite dimension étant supérieure à la largeur du bâti supérieur (10) de façon à laisser une portion (4) de lame (2) apparente pour apposer sur ladite portion (4) des moyens d'identification de la préparation cytologique. 11. Méthode pour former des empreintes de préparations cytologiques sur des lames de microscope avec un appareil selon la revendication 1 consistant à - disposer des lames (2) de microscope dans les logements (22) du bâti inférieur (20); - bloquer les chambres cylindriques (la, lb) dans les ouvertures (lia, llb) du bâti supérieur (10); - positionner et verrouiller le bâti supérieur (10) sur le bâti inférieur (20) avec les moyens d'assemblage (15, 25), et - déposer dans une paire de chambres (la, lb) une partie aliquote d'une préparation cytologique de façon à former sur chaque lame deux empreintes (3a, 3b) distinctes. 12. Méthode selon la revendication 11, caractérisée en ce que les parties aliquote déposées dans chaque chambre (la, lb) correspondent à des dilutions différentes d'un même prélèvement de cellules.