Brevet FR2765481A1 — publié le 19990108

-1 - Complexe amino-lipidique vitaminé. La présente invention concerne une composition cosmétique particulière appelée ci-après "complexe amino-lipidique vitaminé", qui stimule la synthèse in-situ des lipides épidermiques et en augmente ainsi leur taux au niveau de la couche cornée. Elle vise également son utilisation sous des formes cosmétiques s'appliquant directement sur la peau, telle que crème, lait, gel,...,en vue du traitement cosmétique, physiologique ou dermatologique, de la peau.. Il est bien connu de nos jours que les lipides synthétisés dans les cellules de la couche cornée ou coméocytes, puis excrétés dans l'espace extracellulaire, jouent un rôle important dans la cohésion desdites cellules entre elles (et, par opposition, pour leur desquamation), dans la lutte contre la pénétration dans les couches de l'épiderme des substances étrangères (ou perméabilité du stratum cornéum), et le maintien de l'hydratation de l'épiderme (ou régulation des flux hydriques cutanés). Ces lipides épidermiques représentent 10 à 12 % du poids total de l'épiderme sec. Ils sont de différents types (dérivé du cholestérol, céramide, cérébroside, phospholipides, triglycérides, diglycérides et acides gras), certains jouant un rôle plus important que d'autres, dans les phénomènes susmentionnés. Les lipides épidermiques à l'exception des phospholipides et des glycérides, s'appellent d'ailleurs des lipides de cohésion (céramides, cérébroside, cholestérol, cholestérol sulfate). En effet, le cholestérol sous la forme sulfate de cholestérol en présence de calcium augmente la cohésion entre les cellules; par contre, sous sa forme non sulfaté, il permet la desquamation des coméocytes. Il a été prouvé également que le cholestérol sulfate prévient l'apparition de carcinomes cutanés (cancer des épithéliums) dès les premiers stades (promotion), (Cancer res., 55:4865-9, 1995 Nov. 1). En outre, lors de la modification de la barrière cutanée, par un solvant par exemple, il a été démontré le rôle essentiel du cholestérol pour la restauration de la fonction barrière de la peau. En ce qui concerne les céramides, sept types différents ont été recensés à ce jour. La proportion relative d'un type par rapport aux autres dans l'épiderme est fonction de divers paramètres, comme l'âge, l'état de la peau, le type et l'intensité 2 - des agressions subies par la peau. Dans le cas d'une peau normale, les cellules épidermiques resynthétisent le type de céramide qui est déficient. Toutefois, sous certaines conditions, et notamment avec l'âge, il a été démontré que la capacité de resynthétiser les lipides par les cellules épidermiques diminue. Beaucoup de cosmétologues ont essayé d'apporter à la peau des céramides de type différent. Certains pensent que le type 2 améliore la peau, d'autres qu'il augmente avec l'âge et qu'au contraire le type 3 est plus indiqué. Enfin, il existe des travaux montrant également que les céramides pourraient avoir un rôle de détoxification en complexant certains lipides très réactifs (sphingosines). De nombreux cosmétiques contenant des céramides sont déjà disponibles sur le marché. Plusieurs brevets français et étrangers publiés dévoilent également l'utilisation de céramides sans en dissocier forcément le type, dans des compositions cosmétiques. Or, il est important de souligner que la peau, pour bien fonctionner, n'a pas besoin exclusivement de céramides mais de tous les lipides épidermiques. En outre, tout apport exagéré d'un type de lipide ou d'un autre peut provoquer un déséquilibre au niveau des taux naturels des différents lipides de la peau et/ou aggraver ledit déséquilibre existant, notamment, l'application directe sur la peau, de sulfate de cholestérol procure un état important de peau squameuse (ichtyose). Il apparaît par conséquent plus intéressant de fournir à la peau, les éléments qu'elle utilise pour synthétiser de nouveau ses lipides épidermiques selon ses besoins, plutôt que de lui imposer ou de la déséquilibrer par un apport exogène d'un type de lipide plutôt que d'un autre. Ce concept de stimuler les cellules épidermiques a déjà été mis à profit par l'invention décrite dans le document WO-94/23694. Selon ce document, l'application d'un ou de plusieurs précurseurs de la biosynthèse des céramides sur la peau permet d'augmenter dans l'épiderme, le taux de céramide. Toutefois, l'utilisation de sphingosine ou de tous autres précurseurs à la sphingosine comme le tétraacétyl phytosphingosine permet l'augmentation in-situ du taux des céramides uniquement, mais a l'inconvénient, comme le montre l'étude chimique, d'avoir peu d'effet sur le taux du couple cholestérol / cholestérol sulfate et sur -3- celui des acides gras. Or, la fonction remplie par chacun des lipides épidermiques est spécifique, de sorte que tout excès d'un type de lipide (exemple: céramide), par rapport à un autre ne permet pas de compenser la déficience d'un autre type de lipide épidermique (autre que de la céramide). L'objectif de l'invention est donc de remédier à cet inconvénient en proposant un complexe amino lipidique vitaminé qui, utilisé seul ou dans une formulation cosmétique d'application topique, permet l'augmentation in-situ de tous les lipides épidermiques. Ce complexe amino-lipidique vitaminé que l'on désignera le plus souvent sous le nom de "complexe ALV" dans un but de concision, dans la suite du présent exposé, est remarquable par le fait qu'il est constitué principalement des 4 éléments suivants, à savoir: - sérine ou un précurseur de la biosynthèse de la sérine; - acide palmitique; - la vitamine B6; - l'huile végétale. Grâce au précurseur de la serine, la néosynthèse de la serine s'effectue in-situ, de sorte que la sérine synthétisée, est utilisée par la cellule en tant que substrat de la biosynthèse des céramides. La vitamine B6, joue un rôle également dans la biosynthèse des céramides en tant que cofacteur d'une de ces réactions. Toutefois, c'est grâce au complexe formé par les quatre éléments dudit complexe amino-lipidique vitaminé: la serine, la vitamine B6, I'acide palmitique et l'huile végétale, que peut s'effectuer de façon surprenante après son application sur la peau, en plus de la néosynthèse des céramides, celle de l'ensemble des lipides épidermiques, par les cellules de la peau. On observe en outre, après l'application cutanée du complexe amino-lipidique vitaminé selon l'invention, une forte augmentation de la synthèse du cholestérol et du cholestérol- sulfate, et de la cérébroside. L'application cutanée de ce complexe ALV présente donc l'avantage majeur d'apporter les substrats nécessaires à la cellule pour synthétiser tous les lipides épidermiques. Toutefois la cellule ne produira spécifiquement que ceux dont elle -4 - a besoin. La peau compense ainsi ses déficiences en lipides dues à divers paramètres, tels que les conditions environnementales et physiologiques, dans lesquelles elle se trouve. En reconstituant les lipides épidermiques au niveau des coméocytes, la peau garde son hydratation, sa "bonne santé" et sa beauté. Grâce à une telle stimulation adaptée et spécifique aucun déséquilibre des taux adéquats des lipides épidermiques présents dans la couche cornée n'est occasionnée. En outre, ce complexe amino-lipidique vitaminé peut être additionné à toutes les formulations cosmétiques classiques d'usage topique, et être ainsi facile d'application et d'utilisation et de meilleure conservation. L'invention concerne également une méthode de traitement des peaux sèches et/ou sensibles, et/ou atopiques, et/ou âgées, selon laquelle on applique sur la peau de la personne, ledit complexe amino-lipidique vitaminé seul ou inséré dans toute formulation cosmétiquement acceptable. En permettant la synthèse des différents lipides épidermiques, ce complexe amino-lipidique vitaminé permet, en effet, de lutter contre les signes du vieillissement, à savoir notamment la perte de souplesse de la peau liée à une diminution de l'hydratation cutanée, et régule en outre la desquamation des couches superficielles de l'épiderme. Il empêche également l'apparition de carcinomes cutanés, lors notamment d'un contact direct de la peau avec un promoteur cancérigène (le 12-0-tétradécanoylphorbol13- acétate ou tout autre promoteur) en permettant la synthèse du couple cholestérol/cholestérol sulfate au niveau des cellules épidermiques. L'utilisation du dit complexe ALV peut également être préconisée à titre préventif desdits cancers cutanés. Les buts, caractéristiques et avantages ci-dessus et d'autres encore ressortiront mieux de la description qui suit. Le complexe amino-lipidique vitaminé selon l'invention, comporte de façon la plus simple, au moins un précurseur de la biosynthèse de la serine ou de la serine elle-même, de la vitamine B6, au moins un acide palmitique et de l'huile végétale. Les précurseurs de la serine peuvent être la phosphosérine, I'acide -5hydroxypyruvique, la glycine. Ces précurseurs donnent grâce à la machinerie cellulaire, de la sérine selon les réactions spécifiques cidessous: Phosphosérine + H20 phosphatase > Phosphate + sérine Acide hydroxypyruvique transaminase > sérine Glycine sérine (par interconversion) La sérine et la vitamine B6 sont des éléments nécessaires pour la synthèse de tous les types de céramide comme le montre le schéma réactionnel ci-dessous; la sérine étant un précurseur des céramides et la vitamine B6 jouant un rôle de cofacteur dans la réaction entre la sérine et le palmitoylcoenzyme A. Ce dernier est le produit de la réaction entre un acide palmitique et un coenzyme A. CH(CHj1rFOOH + CoA Sphinganine CIzOH Acide Palmitique H-C-NH FAD I I ].5 CIiCH, carboxylase CHzOH Cl I O0 1I C-H CH H C-NH2 I I CH2ICHI14C-S-CoA Palmitoyl CoA H- -OH + i O C CH2OH I CH, CH2 I C- H I H - -NH2 L-Sérine C CH2 CH2 COOH CH,2 I synthétase I CH, CH2 CoA._. , Vltamine B6 dépendante CH2 I I CoA CH, CHz Có,OH CHz I HII C---NHz Déshydrosphinganine CH CH2 - CH2 Sphingasine I I Cç 1I CH2 CH, CHz I I CH3 CH2 I IC NADPHq'IICIi H NAPH9 Ré&dudase I CCH2,JCHC-S-CoA PalmitoyI-CoA CH2 CH, NADPH Réduclase CH2 CjH NADP I CH2 CH2 CH20H CH2 Acétyl CoA I I carboxylas CH CH, H- C-NH2 Sphinganine CHz carboxylase CH2 H-C-OH CHz CH, Il CH2 CH'{CH2)14COOH + CoA J I [C Hlu14 Acide palmitiquc CH, CH] CH2 CH2 (ou acide gras CH 31 essentlel. céramide CH2 CH3 -6- Le coenzyme A étant régénéré à l'étape suivante de la biosynthèse des céramides, il n'est donc pas nécessaire de l'apporter à la cellule avec ce complexe amino-lipidique vitaminé. L'acide palmitique quant à lui, est apporté par le complexe amino-lipidique vitaminé. L'huile végétale composée d'acides gras insaturés joue un rôle dans la synthèse de tous les lipides épidermiques ainsi que dans la néosynthèse des céramides. Ces acides gras insaturés peuvent être fournis par toute huile végétale. De façon avantageuse, I'huile végétale est de l'huile de pépins de cassis qui comporte en plus des acides gras insaturés essentiels de l'acide palmitique. Les acides gras essentiels nécessaires à la synthèse notamment des céramides à partir de la sphingosine sont apportés par cette huile. Il est à noter que l'acide palmitique, tout comme les acides gras insaturés apportés par l'huile végétale, ne sont pas des précurseurs exclusifs des céramides et que les réactions illustrées ci-dessus ne sont pas les seules stimulées par les 4 éléments présents dans ce complexe amino-lipidique vitaminé. En effet, après application de ce dernier sur la peau tous les types de lipides sont synthétisés par les cellules de la couche cornée selon leur besoin. Pour obtenir les résultats escomptés, la proportion des composés dudit complexe amino-lipidique vitaminé doit être comprise entre: acide palmitique........................................................ 0,5 à 40 % serine ou un de ses précurseurs.................................. 3 à 30 % huile végétale de pépins de cassis.............................40 à 80 % vitamine B6....................................................... 3 à 10 % De façon préférentielle, les pourcentages sont acide palmitique................................................................ .DTD: .. 1% sérine ou un de ses précurseurs.................................. . 16 % huile végétale de pépins de cassis................................. .DTD: .. 77 % vitamine B6................................................DTD: ........................ 6 % -7- Le dit complexe ALV peut être appliqué directement sur la peau, après agitation,..DTD: par effleurement ou par massage léger. Toutefois, un véhicule physiologiquement acceptable (pH physiologique 7) peut être additionné au dit complexe afin que ce dernier soit appliqué sur la peau à une concentration adéquate. Le véhicule ou excipient a pour rôle de faciliter l'application dudit complexe. Il conditionne généralement le genre du produit final (émulsion, gel, lotion...). Le véhicule peut être une émulsion H/E, E/H ou même un gel si le gélifiant est autoémulsionnable (Permulen TR1 (Marque déposée), Permulen TR2 (Marque déposée)). Le véhicule est d'ordinaire inerte ou peut posséder en plus d'autres fonctions. La fonction recherchée en priorité est d'augmenter la pénétration dudit complexe dans la peau, pour améliorer son action in situ. D'autres composés peuvent avantageusement être additionnés à ce complexe amino-lipidique vitaminé comme, les vitamines, par exemple la vitamine A pour ses fonctions bénéfiques sur les cellules cutanées (régulateur de la prolifération, antivieillissement...), la vitamine E pour son rôle antioxydant, ainsi que bien sûr des conservateurs, des oligo-éléments (Mg et Zn), des inhibiteurs enzymatiques (tels que l'inhibiteur de la 5 a réductase), ainsi que d'autres acides gras, des dérivés d'acide gras ou des produits permettant la dispersion du complexe amino-lipidique vitaminé et la formation de liposomes. Les émulsionnants quant a eux sont choisis pour donner des émulsions sous la forme H/E ou E/H. Une formulation intéressante de la composition finale du produit comprenant le complexe amino-lipidique vitaminé selon l'invention, est une émulsion dans laquelle la phase huileuse correspond à la partie huileuse dudit complexe amino- lipidique vitaminé (huile végétale et acide palmitique), la phase aqueuse à sa partie aqueuse (c'est-à-dire la vitamine B6 et la serine). Ces deux phases sont maintenues ensemble grâce à des émulsionnants, il est bien connu que l'émulsionnant est choisi selon sa balance hydrophile lipidique ou HLB, et détermine ainsi si le produit final est sous la forme d'une émulsion huile dans I'eau (HIE) ou eau dans l'huile (E/H). Ce complexe amino-lipidique vitaminé peut également être additionné à des formulations cosmétiques classiques, type huile dans l'eau I eau dans l'huile / crème / lait I lotion I gel, à un taux adéquat -8 - permettant son actionà savoir à un taux compris entre 0; 5 et 10% et de préférence entre 1 et 5%. Il constitue de façon avantageuse 3 % du produit final. Le conditionnement final du produit est souvent en rapport avec la formulation de ce dernier, ainsi par exemple, quand la composition du produit final est sous la forme d'une crème (émulsion H/E ou E/H) cette dernière est stockée dans un petit récipient non déformable (pot) ou déformable (comme des tubes). A titre d'exemple non limitatif, I'invention peut être illustrée par les exemples de formulations de produits cosmétiques contenant le complexe amino-lipidique vitaminé selon l'invention. Lorsque le produit final est sous la forme d'une crème-huile dans l'eau-, une telle crème peut être formulée comme ci-après: Monostéarate de sorbitan................................................................. .......... 3,26 % Phosphate de cétyl + cétyl phosphate de diéthanolamine.............................2,72 % Stéarate d'isocétyle.... .DTD: ......................................................................... DTD: .. 4,00 % Huile de pépins de cassis...................................... DTD: ...................................... 0,80 % Acide palmitique........... DTD: ......................................................................... DTD: ..0,20 % Dicaprylate / Dicaprate de propylène glycol..................... DTD: ........................... 4,00 % Polyéthylène glycol 1500.........DTD: .................................................................. 1, 00 % Triglycérides d'acides gras saturés.................................. .DTD: ........................... 4,00 % Copolymère de l'acide acrylique....... DTD: ...................................................... 0,25 % Vitamine B6........................................................................ .DTD: ..................... 0,06 % Triéthanolamine 98-99 %..................... DTD: ....................................................... 0,25 % Sérine.................................................................... .DTD: ...................................... 0,16 % Eau/conservateurs.......... DTD: .............................................................. q.s. 100,00 9- Le deuxième exemple de formulation cosmétique contenant le complexe ALV..DTD: selon l'invention est une émulsion -eau dans l'huilesous la forme d'une crème. Une telle émulsion peut avoir la formule suivante: Décaméthylcyclopentasiloxane/Diméthylsiloxane glycol copolymère.......... 18,00 % Diméthyle silicone /Triméthylsiloxysilicate.............. ................................... 5,00 % Décaméthylcyclopentasiloxane/aluminium magnésium stéarate................ DTD: ...1,50 % Diméthyle silicone............................................. DTD: ...........................................3,60 % Acide palmitique....... DTD: ......................................................................... DTD: ............ 0,40 % Huile de pépins de cassis............................ DTD: ................................................2,00 % Vitamine B6............................................................... .DTD: ....................................0,03 % Sérine........................ DTD: ......................................................................... DTD: ........ 0,03 % Chlorure de sodium....................................... DTD: .................................................1,00 % Eau/conservateurs......................................................... .DTD: ........................q.s. 100,00 Un inhibiteur de la 5 alpha réductase peut avantageusement être ajouté aux formulations susmentionnées à un taux compris entre 0,5 et 5%, et de préférence à3%. Le troisième exemple concerne un lait de type émulsion-eau dans l'huile- qlui peut être formulé comme ci-après: Mono-oléate de sorbitan/huile de ricin hydrogénée éthoxylée/huile de ricin hydrogénée/cire d'abeille................................................. .DTD: ................... 4,00 % Huile de ricin hydrogénée P.O.E. (7).......... DTD: .................................................. 2,00 % Huile de vaseline fluide........................................................... .DTD: ................... 10,00 % Palmitate d'isopropyle...............DTD: ................................................................... 5, 00 % Triglycérides d'acide caprique/caprylique............................ .DTD: .......................10,00 % Huile de pépins de cassis................. DTD: ........................................................... 0,77 % Acide palmitique.......................................................... .DTD: ..................................0,01 % Vitamine B6.................... DTD: ................................................................ 0,03 % Sérine...........................................................DTD: ............................................ 0,03 % Sulfate de magnésium 7H20....................................................DTD: .................... 0,70 % Eau/conservateurs............................ DTD: ......................................................q.s. 100,00 -10-.. DTD: Le quatrième exemple donné concerne un lait de type émulsion-huile dans l'eau. Un tel lait peut être formulé comme ci-après: Monostéarate de sorbitan... .................................................................. 2, 82 % Palmitate d'isopropyle........................................DTD: ........................................... 9,00 % Huile de vaselineépaisse.................................................. .DTD: ...........................1,00 % Alcool cétylique............DTD: ......................................................................... DTD: .....0,50 % Éther cétyliqueP.O.E. (20)............................DTD: ............................................ 2,18 % Méthyl phényl polysiloxane....................................................... .DTD: .........0,50 % Huile de pépins de cassis.................DTD: ............................................................ 3,00 % Acide palmitique..................................................DTD: .......................................... 1,00 % Polymère de l'acideacrylique....................................................... .DTD: .............. 0,18 % VitamineB6...............................DTD: ........................................................... 0,30 % Sérine.................................................................... .DTD: ...................................... 0,50 % Triéthanolamine98-99 %.................................................... .DTD: ..................... 0,18 % Eau/conservateurs........DTD: ......................................................................... DTD: .q.s. 100,00 Un cinquième exemple de produit cosmétique contenant le complexe ALV peut être donné. Il peut s'agir d'une crème aux liposomes qui peut être formulée comme ci-après: Alcool céthyliquepolyglycérol... DTD: ................................................................... 3, 80 % B-sitostérol..............................................DTD: .................................................... 3,80 % Dicétyl phosphate....................................................... .DTD: ................................ 0,40 % Huile de tournesol................................................................. .DTD: ................... 33,00 % Huile de pépins de cassis.................................................................... DTD: ......... 2,00 % Acide palmitique.................................DTD: ........................................0,05 % Polymère de l'acideacrylique.......................................................... .DTD: ............ 0,20 % Vitamine B6..........................DTD: ...................................................................... 0,30 % Sérine.....................................................DTD: ........................................................0,50 % Triéthanolamine98-99 %.................................................. .DTD: .......................... 0,20 % Eau/conservateurs......DTD: ......................................................................... DTD: .. q.s. 100,00..DTD: - 11 - Ce produit final peut également être sous forme d'un gel émulsionné qui peut être formulé comme ci-après: Polymère de l'acide acrylique.......... ......................................................... 0,60 % Décaméthylcyclopentasiloxane.............................................. .DTD: ................... 3,00 % Cétyl/Stéaryl 2-Ethylhexanoate...........DTD: ......................................................... 7,00 % Huile de pépins de cassis....................................................... .DTD: .................... 0,77 % Acide palmitique............................. DTD: .............................................................. 0,01 % Vitamine B6............................................................... .DTD: ................................. 0,03 % Sérine.......................... DTD: ......................................................................... DTD: .... 0,06 % Triéthanolamine 98-99 %.................................DTD: ............................................ 0,60 % Eau/conservateurs.... DTD: ......................................................................... DTD: ... q.s. 100,00 La composition cosmétique comportant le complexe amino- lipidique vitaminé selon l'invention est un produit d'application locale sur la peau afin de maintenir ou d'augmenter sa barrière cutanée en stimulant la synthèse des lipides épidermiques. Ce produit est particulièrement avantageux pour traiter les peaux sèches, âgées, endommagées, car il réduit la perte d'hydratation, augmente la souplesse de la couche cornée et améliore de façon générale la qualité de la peau. L'utilisation est simple et pratique, une petite quantité de crème, ou de lait, ou de gel..., est appliquée au niveau des endroits de la peau les plus exposés (visage, cou, mains). L'application se fait soit, directement avec les doigts, soit..DTD: par l'intermédiaire de spatule ou de coton.... Les tests cliniques développés ci- après prouvent que des résultats notables sont obtenus, après application, sous 48 heures. Une seule application dudit produit peut ne pas suffir pas, il faut utiliser ce produit de façon continue, plusieurs jours consécutifs. En effet, le produit final (excipient + complexe ALV) sous la forme d'une crème a été testé par des études in vivo et in vitro. La mesure in vitro de la biosynthèse des lipides épidermiques a été obtenue en mettant en présence des peaux avec un précurseur radiomarqué de la biosynthèse lipidique (l'acétate radiomarqué) puis en évaluant l'incorporation de -12- la radioactivité dans les lipides épidermiques extraits après 24H ou 48H d'application de la crème (complexe ALV + véhicule). L'évaluation de l'effet sur le métabolisme des lipides épidermiques du complexe amino-lipidique vitaminé avec son excipient sous la forme de crème a été effectuée parallèlement à celle de son excipient pris isolément par une étude in- vitro dans un modèle d'explants de peau humaine. Un prélèvement de peau humaine a été obtenu à partir d'une plastie abdominale réalisée chez une femme âgée de 30. Des explants de 8 mm de diamètre ont été effectués à l'aide d'un emporte-pièce. Les explants de peau ont été cultivés dans un milieu de culture de base c'est-à- dire le milieu MEM complété par 10 mg/ml de glutamine, lg/l de glucose, 1 mg/ml d'albumine sérique bovine, 50 Ul/ml de pénicilline, 50 pg/ml de streptomycine et 0,2 % de bicarbonate de sodium mais dépourvu de sérine, d'acide palmitique, de vitamine B6 et d'acides gras essentiels. Pour chaque condition expérimentale, quatre explants ont été réalisés. Les produits à l'essai (complexe amino-lipidique vitaminé additionné au véhicule ou crème et véhicule seul) ont été déposés purs à la surface des explants, à raison de 20 mg/cm2, pendant 24 ou 48 heures. Les incubations se sont déroulées à 37 C dans une atmosphère contenant 5% de C02. Trois pCi acétate marqué au carbone 14 (AMERSHAM, activité spécifique: 57 mCi/mmole) ont été ajoutées par ml de milieu de culture, 24 heures avant la fin de chaque incubation afin de suivre la fabrication des lipides. A la fin de chaque incubation, les explants de peau humaine ont abondamment été rincés avec le tampon PBS. Pour trois des quatre explants de chaquegroupe expérimental, I'épiderme a été dissocié du derme par un choc thermique contrôlé (eau MilliQ, 1 min, 60 C). Chaque épiderme a ensuite été pesé. De façon classique le quatrième explant a été fixé dans du formaldéhyde 10% (v/v) pour un contrôle histologique de la morphologie des explants. Il a été coupé en plusieurs plans de coupe afin de rechercher si des altérations morphologiques existaient. -13 - Echelles de temps Incubation de 24 Heures To T24 I 0 A O Incubation de 48 Heures To T24 T48 lo 1' A 1: application topique des produits à l'essai A: ajout d'acétate marqué au carbone 14 dans le milieu de culture l: dissociation derme/épiderme et évaluation des effets O: histologie Les lipides épidermiques totaux néosynthétisés, marqués au carbone 14C, ont été extraits par partition entre une phase organique (méthanol/chloroforme, 1/4, v/v) et une phase aqueuse (chlorure de potassium à 0,25 M). La phase organique a été évaporée sous azote et les résidus ont été repris dans un mélange chloroforme/méthanol, 2/1 (v/v). La radioactivité de chaque échantillon, correspondant à la quantité d'acétate incorporé dans les lipides néosynthétisés et extraits, a été mesurée en scintillation liquide. Les résultats ont été exprimés en cpm/mg d'épiderme. La mesure de l'incorporation d'acétate radiomarquée au carbone 14C dans les lipides épidermiques totaux est complétée par l'analyse en chromatographie en couche mince (CCM) pour séparer les principales classes de lipides épidermiques radiomarquées néosynthétisées. -14- A partir des échantillons de lipides extraits, des aliquotes de 20 pl, correspondant à 40 000 cpm environ, ont été déposés sur des plaques de chromatographie de silice. Celles-ci ont été développées dans 3 solvants successifs: - chloroforme/acétone/méthanol, 38/2/10 (v/v/v); chloroforme/acétone/méthanol, 40/5/5 (v/v/v); - chloroforme/acétate d'éthyl/éther/méthanol, 36/14/3/1 (vIvIvIvl); Ce système permettait de séparer le cholestérol sulfate, les cérébrosides, les céramides, le cholestérol, les triglycérides plus les diglycérides. Les lipides polaires qui restent au point de dépôt correspondaient majoritairement aux phospholipides, ils ont été appelés "lipides très polaires". Les plaques de silice ont ensuite été mises en opposition avec des films pour autoradiographie pendant 8 jours (AMERSHAM, hyperfilm 13 max). La position des différentes classes de lipides - lipides très polaires, cholestérol sulfate, cérébrosides, céramides, cholestérol, triglycérides plus les diglycérides, a été déterminée à l'aide des standards correspondants. La radioactivité des spots séparés a été comptée avec un analyseur de radioactivité argon-méthane sur couche mince (HERTHOLD). Les résultats obtenus correspondaient aux pourcentages de la radioactivité totale de chaque échantillon déposé sur la CCM. Chacun de ces pourcentages a été multiplié par la radioactivité totale obtenue pour chaque épiderme. (seul est représenté dans les tableaux ci-après la moyenne des résultats obtenus avec les trois explants). Pour traiter les données,les groupes de données (groupe témoin et groupes traités) ont été comparés par une analyse de la variance à un facteur (ANOVA 1), suivie par un test de Donnett. -15- Effet des produits à l'essai sur la néosynthèse des lipides totaux épidermiques dans les explants cutanés, après 24 et 48 heures d'incubation TEMPS TEMOIN CREME EXCIPIENT 6033 7980* 6513 24 heures +1- +/- +/- 1158 567 793 132 108 6537 13317* 7170 48 heures +/- +1- +/ 1747 3490 2019 204 110 Les résultats sont exprimés en cpm/mg d'epiderme en gras: moyenne des résultats obtenus dans les trois explants cutanés et écart type correspondant en italique: pourcentage du groupe témoin *: moyenne significativement différente du groupe témoin (p observé en présence de l'excipient seul. Après 48 heures d'incubation, I'augmentation significative d'un facteur 2 de la néosynthèse des lipides épidermiques totaux a été observée en présence de la crème (complexe amino-lipidique vitaminé + excipient). Cet effet n'a pas été observé en présence de l'excipient de la crème seul. En résumé, dans les conditions expérimentales retenues, la crème augmente significativement la néosynthèse des lipides épidermiques totaux dans des -16- explants de peau humaine. Cet effet est plus important après 48 heures d'incubation qu'après 24 heures. Pour déterminer la nature des lipides épidermiques néosynthétisés, ces derniers ont été séparés en grandes classes par chromatographie en couche mince. Les lipides très polaires, principalement des phospholipides, et les triglycérides + diglycérides représentaient les pics majeurs. -17 - Effet des produits à l'essai sur la néosynthèse des lipides polaires du dépôt, du cholestérol sulfate, des cérébrosides, des céramides, du cholestérol et des triqlyvcérides + diqlycérides. après 24 heures d'incubation LIPIDE TEMOIN CREME EXCIPIENT Lipides polaires 2195 3707 * 2551 du dépôt +1- +1- +/- 626 305 286 169 116 385 558 281 Sulfate de +1- +1- +/- cholestérol 84 158 57 145 73 Cérébrosides 765 783 694 +1- +1- + -'1 212 77 110 100 102 91 Céramides 216 203 180 +1- +1- +/- 9 35 39 94 83 Cholestérol 240 261 186 +/- +1- +/- 28 37 35 109 77 Triglycérides 2232 3048 * 2279 + +1- +1- +/- Diglycérides 277 216 277 137 102 Les résultats sont exprimés en cpm/mg d'épiderme en gras: moyenne des résultats obtenus avec les trois explants cutanés et écart type correspondants en italique pourcentage du groupe témoin *:moyenne significativement différente du groupe témoin (p - 18 - Après 24 heures d'incubation, le complexe ALV avec son excipient n'avait pas d'effet significatif sur la néosynthèse des autres lipides épidermiques par rapport aux explants témoins cultivés dans le milieu de base. La crème augmentait d'un facteur 1,7 la néosynthèse des lipides très polaires, d'un facteur 1,4 la néosynthèse du sulfate de cholestérol et d'un facteur 1,4 la néosynthèse des triglycérides et diglycérides. Ces effets n'étaient pas observés en présence de l'excipient de la crème (seul). - 19 - Effet des produits à l'essai sur la néosynthèse des lipides polaires du dépôt, du cholestérol sulfate, des cérébrosides, des céramides, du cholestérol et des triglycérides + diqlycérides, après 48 heures d'incubation LIPIDE TEMOIN CREME EXCIPIENT Lipides polaires 2214 4488 * 2484 du dépôt +/- +1- +/- 932 1799 856 203 11 304 1060* 338 Sulfate de +1- +/- +/- cholestérol 52 488 186 348 11 Cérébrosides 430 366 618 +1- +1- +/- 108 301 200 85 144 Céramides 115 117 69 +/- +1- +/- 72 54 33 101 60 Cholestérol 146 389 * 207 +1- +1- +/- 43 127 55 266 142 Triglycérides 3228 7987 * 3556 + +1- +1- +/- Diglycérides 871 2866 844 247 110 Les résultats sont exprimés en cpm/mg d'épiderme en gras: moyenne des résultats obtenus avec les trois explants cutanés et écart type correspondants. en italique pourcentage du groupe témoin *:moyenne significativement différente du groupe témoin (p - 20 - Après 48 heures d'incubation, la crème augmentait d'un facteur 2 la néosynthèse des lipides très polaires, d'un facteur 3,5 la néosynthèse du sulfate de cholestérol, d'un facteur 2,7 celle du cholestérol et d'un facteur 2,5 celle des triglycérides + diglycérides. Ces effets n'étaient pas observés en présence de lI'excipient de la crème. Effet des produits à l'essai sur la néosynthèse des cérébrosides. du cholestérol sulfate de cholestérol et de l'ensemble des lipides de la cohésion, après 24 heures d'incubation LIPIDE TEMOIN CREME EXCIPIENT Cérébrosides 981 986 874 + +/- +1- +/- Céramides 213 42 117 101 89 Cholestérol 625 819 467 + +1- +1- +/- Sulfate de 97 194 87 cholestérol 100 131 75 Total des lipides 1606 1805 1341 précédents +/- +1- +/- = 306 219 203 Lipides de la 100 112 83 cohésion Les résultats sont exprimés en cpm/mg d'épiderme en gras moyenne des résultats obtenus avec les trois explants cutanés et écarts types correspondants en italique pourcentage du groupe témoin -21 - Effet des produits à l'essai sur la néosynthèse des cérébrosides. du cholestérol + sulfate de cholestérol et de l'ensemble des lipides de la cohésion, après 48 heures d'incubation LIPIDE TEMOIN CREME EXCIPIENT Cérébrosides 546 482 689 + +1-. +1- +1- Céramides 158 321 217 88 126 Cholestérol 450 1449* 545 + +1- +/- +/- Sulfate de 78 572 230 cholestérol 100 322 121 Total des lipides 996 1932* 1233 précédents +1- +/- +1 - = 220 433 416 Lipides de la 100 194 124 cohésion Les résultats sont exprimés en cpm/mg d'épiderme en gras moyenne des résultats obtenus avec les trois explants cutanés et écarts types correspondants en italique pourcentage du groupe témoin *:moyenne significativement différente du groupe témoin (p tableaux ci dessus. -22 - En conclusion, I'augmentation de la néosynthèse des lipides épidermiques totaux 22% à 24H et de 85% à 48H provoquée par la crème résulte majoritairement d'une augmentation de la néosynthèse des phospholipides (lipides polaires du dépôt), les triglycérides et diglycérides, du cholestérol et du sulfate de cholestérol. Ces effets étaient plus importants après 48 heures d'incubation qu'après 24 heures. L'excipient de la crème était sans effet. Par application de ladite crème, la qualité de la peau est ainsi grandement améliorée dans sa partie lipidique. On constate que la néosynthèse de ces lipides épidermiques est favorisée. La peau ne s'accoutume pas à cette crème ( complexe + excipient) et reste très active, prête à synthétiser de nouveau tout ce dont elle a besoin, et ce, dans le cas extrême o elle serait coupée de ses sources d'approvisionnement naturelles comme le montre cette expérience sur de la peau féminine sortie de son contexte. Tout ce passe comme si, après un traitement avec cette crème, la synthèse des lipides épidermiques est améliorée au grand bénéfice des peaux sèches, sensibles ou atopiques. De plus, les peaux grasses peuvent également l'utiliser, car l'augmentation de la dite synthèse lipidique ne concerne pas les lipides synthétisés par les glandes sébacées mais seulement les lipides synthétisés par les kératinocytes (cellules épidermiques).La néosynthèse du couple cholestérol/cholestérol sulfate par la dite crème permet également la prévention des carcinomes cutanés. La dite crème peut être utilisée à titre préventif et aussi lorsque de manière accidentelle la personne a été exposée à un promoteur cancérigène. Une étude in vivo sur un panel de 30 femmes a également été réalisée. Ces dernières ont utilisé cette crème contre son placebo en association avec un gel contenant deux oligo-éléments (Mg et Zn) ainsi qu'un composé inhibant la 5 a réductase, enzyme responsable de la production cutanée de la dihydrostérone, molécule fortement androgénique. -23 - Les résultats de cette étude utilisant les échelles analogiques pour qualifier l'effet de ce traitement associant la crème contenant le complexe amino-lipidique vitaminé et un gel inhibant l'activité androgénique cutanée montrent: () une diminution des rides d'expression en faveur du groupe traité (GT) par rapport au groupe placebo (GP) c> 35 % pour GT et 5,18 % pour GP; (O) une amélioration de la qualité générale de la peau > 8,82 % pour GT et - 9,10 % pour GP; () une résistance de la peau aux agressions extérieures 34,43 % pour GT et 12,14 % pour GP; une peau plus lisse * 29,78 % pour GT et - 13,49 % pour GP; ( une peau plus douce r 24,77 % pour GT et -7,29 % pour GP; () un teint plus lumineux > 70 % pour GT et 16,86 % pour GP; une diminution du duvet de la peau du visage > 23,93 % pour GT et 11,26 % pour GP; ( une diminution des marques de fatigue ó 54,26 % pour GT et 2,66 % pour GP. L'ensemble de ces résultats montrent que les effets mis en évidence ex vivo se confirment in vivo, et ce particulièrement pour les paramètres (rides, qualité générale, résistance aux agressions, luminosité du teint et peut être diminution de la fatigue). Cet effet est amplifié par l'inhibition de l'activité androgénique qui procure une peau plus lisse, plus douce, avec moins de duvets disgracieux. -24- REVENDICATIONS 1. Complexe amino-lipidique vitaminé constitué notamment par des précurseurs de la biosynthèse des céramides caractérisé en ce qu'il comporte de la sérine ou un précurseur de la serine, de la vitamine B6, de l'huile végétale et de l'acide palmitique. 2. Complexe amino-lipidique vitaminé constitué notamment par des précurseurs de la biosynthèse des céramides selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'huile végétale est l'huile de pépins de cassis. 3. Complexe amino-lipidique vitaminé constitué notamment par des précurseurs de la biosynthèse des céramides selon la revendication 1 ou 2 caractérisé en ce que l'acide palmitique est compris entre 0, 5 et 40% en ce que la serine ou son précurseur est à une concentration de 3 à 30 %, en ce que l'huile végétale est comprise entre 40 et 80 % et en ce que la vitamine B6 est comprise entre 3 et 10 %. 4. Complexe amino-lipidique vitaminé constitué notamment par des précurseurs de la biosynthèse des céramides selon la revendication 3 caractérisé en ce que les concentrations respectives des éléments du complexe amino-lipidique vitaminé sont: acide palmitique: 1%, sérine: 16 %, huile végétale: 77 %, vitamine B6: 6 %. 5. Composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle comporte le complexe amino-lipidique vitaminé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 a un taux compris entre 0,5 et 10% et de préference entre 1 et 5%. 6. Composition cosmétique selon la revendication 5 caractérisée en ce qu'elle comporte le complexe amino-lipidique vitaminé a un taux de 3 %. -25- 7. Composition cosmétique selon la revendication5 caractérisée en ce qu'il s'agit d'une émulsion eau dans l'huile sous la forme d'une crème dont la formule est de préférence la suivante: Décaméthylcyclopentasiloxane/Diméthylsiloxane glycol copolymère.......... 18,00 % Diméthyle silicone /Triméthylsiloxysilicate................. ................................ 5,00 % Décaméthylcyclopentasiloxane/aluminium magnésium stéarate................ CLMF: ...1,50 % Diméthyle silicone............................................. CLMF: .......................................... 3,60 % Acide palmitique....... CLMF: ......................................................................... CLMF: ............ 0,40 % Huile de pépins de cassis............................ CLMF: .............................................. 2,00 % Vitamine B6...CLMF: ......................................................................... CLMF: ........................0,03 % Sérine.................................... CLMF: ...................................................................... 0,03 % Chlorure de sodium................................................. .CLMF: ......................................1,00 % Eau/conservateurs........... CLMF: .................................................................... q. s. 100,00 8. Composition cosmétique selon la revendication5 caractérisée en ce qu'il s'agit d'une émulsion huile dans l'eau sous la forme d'une crème dont la formule est de préférence la suivante: Monostéarate de sorbitan.................................................. .CLMF: .......................3,26 % Phosphate de cétyl + cétyl phosphate de diéthanolamine.............................2,72 % Stéarate d'isocétyle............................................................... .CLMF: ........................4,00 % Huile de pépins de cassis................. CLMF: ............................................................ 0,80 % Acide palmitique.......................................................... .CLMF: .............................. 0,20 % Dicaprylate / Dicaprate de propylène glycol..................................................4,00 % Polyéthylène glycol 1500.................................................. .CLMF: ............ 1,00 % Triglycérides d'acides gras saturés.............CLMF: ............................................... 4,00 % Copolymère de l'acide acrylique......................................................... .CLMF: .... 0,25 % Vitamine B6.................................................. CLMF: ................................................. 0,06 % Triéthanolamine 98-99 %................................................... .CLMF: .................... 0,25 % Sérine....................................... CLMF: ................................................................. 0,16 % Eau/conservateurs................................................CLMF: .............................. q.s. 100,00 -26- 9. Composition cosmétique selon la revendication7 ou 8 caractérisée en ce qu'un inhibiteur de la 5 alpha réductase est ajouté à un taux compris entre 0, 5 et 5 %, et de préférence de 3% 10. Composition cosmétique selon la revendication 5 caractérisée en ce qu'il s'agit d'une émulsion eau dans l'huile sous la forme d'un lait dont la formule est de préférence la suivante: Mono-oléate de sorbitan/huile de ricin hydrogénée éthoxylée/huile de ricin hydrogénée/cire d'abeille................... CLMF: ..................................................4,00 % Huile de ricin hydrogénée P.O.E. (7)...................................... .CLMF: ..................... 2,00 % Huile de vaseline fluide.................... CLMF: ............................................................10,00 % Palmitate d'isopropyle.................................................... .CLMF: ....................... 5,00 % Triglycérides d'acide caprique/caprylique................................................. 10,00 % Huile de pépins de cassis......................................... .CLMF: ....................................0,77 % Acide palmitique.........CLMF: ......................................................................... CLMF: ........ 0,01 % Vitamine B6.............................................. CLMF: ..................................................... 0,03 % Sérine...... CLMF: ......................................................................... CLMF: ............................ 0,03 % Sulfate de magnésium 7H20...CLMF: ................................................................ 0,70 % Eau/conservateurs....................................................... .CLMF: ................... q.s. 100,00 -27- 11. Composition cosmétique selon la revendication 5 caractérisée en ce qu'il s'agit d'une émulsion huile dans l'eau sous la forme d'un lait dont la formulation est de préférence la suivante: Monostéarate de sorbitan..................................... .CLMF: ........................................2,82 % Palmitated'isopropyle................................................. CLMF: ........................... 9,00 % Huilede vaseline épaisse................................................................... .CLMF: ..........1,00 % Alcool cétylique...............CLMF: ......................................................................... CLMF: 0,50 % Éther cétyliqueP.O.E. (20).................CLMF: ...........................................................2,18 % Méthyl phényl polysiloxane............................CLMF: ............................................. 0,50 % Huilede pépins de cassis......................CLMF: ..................................................... 3,00 % Acide palmitique..................................................... CLMF: ....................................... 1,00 % Polymère de l'acideacrylique............................................ CLMF: ......................... 0,18 % Vitamine B6...........CLMF: ......................................................................... CLMF: ........... 0,30 % Sérine...................................CLMF: ......................................................................... CLMF: 0,50 % Triéthanolamine 98-99 %.................CLMF: ..................................................... 0,18 % Eau/conservateurs......................................................... .CLMF: ........................q.s. 100,00 12. Composition cosmétique selon la revendication 5 caractérisée en ce qu'il s'agit d'une crème au liposomes dont la formulation est de préférence la suivante: Alcool cétyliquepolyglycérol.............................................. .CLMF: ............3,80 % B-sitostérol...................................... CLMF: ......................................................... 3,80 % Dicétyl phosphate................................................CLMF: .................................... 0,40 % Huilede tournesol................................................................. .CLMF: .................... 33,00 % Huilede pépins de cassis.......................................................... .CLMF: ................ 2,00 % Acide palmitique........CLMF: ......................................................................... CLMF: ....... 0,05 % Polymère de l'acideacrylique................CLMF: ..................................................... 0,20 % Vitamine B6............................................................... .CLMF: .................................. 0,30 % Sérine.................................................................... .CLMF: ............................. 0,50 % Triéthanolamine 98- 99 %...................................................................... .CLMF: ...... 0,20 % Eau/conservateurs........................CLMF: ........................................................ q.s. 100,00 - 2813. Composition cosmétique selon la revendication 5 caractérisée en ce qu'il s'agit d'un gel dont la formulation est de préference la suivante: Polymère de l'acide acrylique................................... .CLMF: ................................. 0,60 % Décaméthylcyclopentasiloxane.... CLMF: .............................................................. 3,00 % Cétyl/Stéaryl 2-Ethylhexanoate......................................... CLMF: .............................7,00 % Huile de pépins de cassis............ CLMF: ..................................................................0,77 % Acide palmitique........................................................ .CLMF: ................................. 0,01 % Vitamine B6..................... CLMF: ......................................................................... CLMF: .. 0,03 % Sérine......................................................... CLMF: ................................................ 0,06 % Triéthanolamine 98-99 %................................................... .CLMF: ........................ 0,60 % Eau/conservateurs........................ CLMF: ..........................................................q.s. 100,00 14. Procédé de synthèse des lipides épidermiques in vivo caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer sur la peau, une composition cosmétique selon l'une..CLMF: quelconque des revendications 5 à 13 ou bien le complexe amino-lipidique vitaminé après agitation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 15. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 5 à 13, et complexe amino-lipidique vitaminé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisés en ce qu'ils sont utilisés à titre préventif des cancers cutanés. 16. Procédé cosmétique caractérisé en ce que l'on applique sur la peau de façcon simultanée la composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 5 à 8 et 10 à 13, ou bien le complexe ALV après agitation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, et un gel contenant au moins un inhibiteur de la 5 alpha réductase.