Brevet FR2765887A1 — publié le 19990115

TRANSFERT DE GENE DANS DES ADIPOCYTES Arrière-plan de l'invention La présente invention concerne des méthodes de transfert de matériau génétique dans des adipocytes, le criblage de gènes, ainsi que les produits de l'expression de tels gènes, potentiellement impliqués dans la régulation de la croissance et du métabolisme des adipocytes. L'obésité peut être définie comme la présence d'un excès de tissu adipeux. L'obésité affecte 30 à 50 % de la population nord américaine et un pourcentage substantiel de la population mondiale. On estime que les effets de l'obésité, par exemple le diabète non-insulino-dépendant, les maladies des artères coronaires et l'hypertension, ont engendré en 1990 des coûts directs d'un montant de 45,8 milliards de dollars, auxquels il convient d'ajouter 23 milliards supplémentaires de coûts indirects liés aux arrêts maladies. Gibbs, W.W., Août 1996, Scientific American, p. 88-94. En outre, on estime que 30 milliards de dollars sont dépensés chaque année dans des produits pour perdre du poids. Gura, T., 1997, Science, 275 : 751-753. Des évolutions de la manifestation de l'obésité au cours du temps, chez les populations comme chez les individus, laissent supposer que les facteurs environnementaux jouent un rôle dans le développement de l'obésité. On sait également que des facteurs génétiques exercent une forte influence sur l'obésité. Les indices de masse corporelle, une mesure de l'obésité, sont généralement similaires chez les membres d'une même famille. L'indice de masse corporelle d'un enfant adopté, par exemple, est proche de celui de ses parents biologiques, et non de celui de ses parents adoptifs. Des études détaillées de jumeaux monozygotes montrent que d'autres mesures de l'obésité, telles que l'épaisseur des plis cutanés, la masse graisseuse et la masse non graisseuse, sont également similaires. Srensen, T.l.A. 1995, Metabolism, 44: 4-6, suppl. 3. L'excès de tissu adipeux s'accumule par un déséquilibre entre la prise énergétique et la dépense énergétique. Les thérapies de l'obésité manipulent traditionnellement la prise alimentaire pour corriger ce déséquilibre. Différents programmes thérapeutiques contre l'obésité existent, qui consistent à réduire l'ingestion calorique par une éducation du patient, mais leur taux d'échec est environ égal à 90 % après un suivi de cinq à dix années. D'autres programmes comportent des formules de valeur nutritive afin de suppléer ou de remplacer les aliments normaux. De façon type, le patient reprend du poids dès qu'il interrompt la prise de supplément. Pi-Sunyer, F.X., 1996, Clinical Therapeutics, 18(6): 1006-1035 La plupart des thérapies pharmacologiques courantes de l'obésité ont pour cible la zone hypothalamique du cerveau, résultant en une perte de poids conséquente. Une fois la thérapie interrompue cependant, les patients reprennent fréquemment le poids perdu. Davis, R., 1996, Drugs, 5265): 696-724; Ryan, D.H., 1996, Endocrinology & Metabolism Clinics of North America, 25(4): 989-1004. Le coût de telles thérapies est élevé, un suivi par un médecin et des prescriptions à vie étant nécessaires. De plus, ces thérapies peuvent avoir des effets secondaires très fâcheux. L'utilisation de médicaments inhibiteurs d'appétit, particulièrement des dérivés de fenfluramine, est liée à un risque accru d'hypertension pulmonaire primaire chez les patients dont la prise des médicaments est supérieure à trois mois. Abenhaim, L. et al. 1996, N. Engl. J. Med., 335: 609-616. D'autres effets secondaires, y compris des anomalies du rythme cardiaque et des troubles de la conscience, ont été décrits pour de telles thérapies. Davis, R., 1996, Drugs, 52(5): 696-724. On a également évalué les effets des antagonistes des récepteurs B3 adrénergiques en tant que thérapeutique éventuelle contre l'obésité, mais les effets se sont révélés décevants chez les humains étudiés en raison du faible profil d'effets secondaires et du manque de preuve de leur efficacité à long terme. La chirurgie est un autre traitement possible de l'obésité. Une chirurgie par pontage gastrique tente de limiter l'ingestion d'aliments chez le patient en réduisant la taille de son estomac, tout en conservant une digestion et une absorption normales. Un taux de mortalité chirurgicale élevé (5 %) et des complications postopératoires limitent ce traitement à des patients à obésité morbide. Peu d'attention a été prêtée à l'explication de la régulation génétique dans les adipocytes ou le tissu adipeux, I'organe cible de l'obésité, et au rôle qu'une telle régulation pourrait jouer dans la survenue ou la prévention de l'obésité. Etant donné que l'intervention thérapeutique concernant l'obésité s'est concentrée sur le système nerveux central, peu de thérapies ayant pour cible les adipocytes ou le tissu adipeux ont été développées. Etant donné que les adipocytes et le tissu adipeux sont les sites de stockage des lipides et du métabolisme complexe des lipides, il serait utile d'identifier les gènes qui sont impliqués dans la régulation de la croissance et du métabolisme des graisses, de l'obésité, et de développer un système de modèle utile pour expliquer le rôle de tels gènes dans la régulation des adipocytes. Un tel système de modèle peut fournir la base des thérapies ciblant le tissu adipeux dans le traitement ou la prévention de l'obésité. Résumé de l'invention La présente invention fournit un système de modèle utile pour l'étude de la régulation génétique de la croissance et du métabolisme adipocytaires, et pour l'étude des effets biologiques des produits d'expression protéinique de gènes ou de séquences d'acide nucléique présentant un intérêt. Telle que divulguée ici, la présente invention fournit une méthode de transfert d'une séquence d'acide nucléique dans un adipocyte de façon telle qu'un produit d'expression de la séquence d'acide nucléique est produit dans l'adipocyte. Le produit d'expression peut ensuite être mis en corrélation avec un effet physiologique, tel qu'une augmentation ou une diminution de la réserve des graisses. La présente invention fournit également des méthodes permettant de modifier la croissance et/ou le métabolisme des adipocytes chez des mammifères, des méthodes pouvant être utilisées sur le plan thérapeutique pour traiter l'obésité ou pour favoriser le stockage des graisses, en fonction des besoins particuliers de chaque patient. Selon un premier aspect, la présente invention caractérise une méthode in vivo de transfert d'une séquence d'acide nucléique dans un adipocyte. La méthode implique l'étape consistant à mettre en contact du tissu adipeux d'un mammifère avec un véhicule de transfert contenant la séquence d'acide nucléique. Le véhicule de transfert, par exemple un adénovirus ou un liposome, est capable de pénétrer dans l'adipocyte et contient une séquence d'acide nucléique. Un produit d'expression est produit à partir de la séquence d'acide nucléique lorsqu'elle est transférée dans l'adipocyte. La méthode peut en outre comprendre l'étape consistant à détecter la présence du produit d'expression et mettre en corrélation la présence du produit d'expression avec un effet physiologique dans l'adipocyte. Un exemple d'une séquence d'acide nucléique montrée ici, devant être transférée in vivo dans des adipocytes et devant produire un effet physiologique, est une séquence d'acide nucléique codant pour le facteur MCSF (macrophage colony stimulating factor). La séquence d'acide nucléique qui est transférée dans les adipocytes en accord avec la présente invention peut être une séquence connue pour être à régulation différentielle, y compris une séquence connue pour être à régulation différentielle dans les adipocytes blancs par rapport aux adipocytes bruns. La protéine découplante UCP-1 ou une portion de celle-ci est un exemple d'une séquence d'acide nucléique connue pour être régulée de façon différentielle entre adipocytes blancs et adipocytes bruns. Selon un autre aspect, la présente invention caractérise des adipocytes contenant un véhicule de transfert avec une séquence d'acide nucléique qui est régulée de façon différentielle dans les adipocytes, et caractérise en outre un tissu adipeux isolé sur un mammifère, dans lequel un tel tissu adipeux contient au moins un adipocyte hébergeant un véhicule de transfert contenant une séquence d'acide nucléique qui est régulée de façon différentielle dans les adipocytes. Selon un autre aspect encore, la présente invention caractérise une méthode de modification de la régulation de la croissance et du métabolisme des adîpocytes chez un mammifère. Cette méthode comprend l'étape consistant à mettre en contact du tissu adipeux du mammifère avec une quantité efficace d'un véhicule de transfert contenant une séquence d'acide nucléique, dans laquelle le véhicule de transfert est capable de pénétrer dans un adipocyte du mammifère. La production d'un produit d'expression à partir de la séquence d'acide nucléique dans l'adipocyte modifie la croissance et la régulation métabolique de l'adipocyte. Des séquences d'acide nucléique appropriées comprennent des gènes ou portions de gènes qui sont régulés de façon différentielle dans les adipocytes blancs et bruns. Un exemple illustrant une telle séquence d'acide nucléique est l'UCP-1 ou une portion d'UCP-1. Cette méthode fournit la base de l'intervention thérapeutique permettant de traiter l'obésité ou de favoriser la croissance ou la prolifération du tissu adipeux chez un patient. Selon un autre aspect, la présente invention concerne une méthode d'identification des produits d'expression de l'acide nucléique qui modifient la croissance et la régulation métabolique dans un adipocyte. Une séquence d'acide nucléique candidat est transférée dans du tissu adipeux de mammifère. Un produit est exprimé à partir de la séquence d'acide nucléique et on surveille les modifications de la croissance et de la régulation métabolique de l'adipocyte. L'examen d'une modification de la masse de tissu adipeux est une méthode préférée permettant de surveiller la croissance et la régulation métabolique des adipocytes. Telle que décrite ici, la présente invention présente plusieurs avantages. Le système de modèle fourni par la présente invention permet de cribler in vivo des séquences d'acide nucléique pouvant être impliquées dans la régulation métabolique et de la croissance des adipocytes dans l'adipocyte et le tissu adipeux, qui sont l'organe final de l'obésité. Le criblage in vivo permet d'évaluer les séquences d'acide nucléique candidat dans un cadre physiologique, où les effets des produits d'expression ne sont pas isolés d'autres procédés physiologiques et biochimiques chez le mammifère, comme ils le seraient dans un système de culture in vitro. L'identification des séquences d'acide nucléique impliquées dans la régulation métabolique et de la croissance des adipocytes fournit de nouvelles cibles pour des thérapies, que ce soit pour traiter l'obésité ou pour traiter des patients souffrant d'un déficit du tissu adipeux ou des lipides stockés. Brève description des schémas La figure 1 est un dépôt graisseux d'un lapin transfecté avec de la ss-galactosidase et coloré au Xgal. La figure 2A est un buvardage de northern d'ARN total d'adipocyte humain sondé avec un ARN antisens pour le MCSF. La figure 2B est un buvardage de western d'une protéine d'adipocyte humain. La figure 2C dépeint l'amplification de MCSF à partir d'adipocytes de lapin et d'adipocytes humains, et d'une banque d'ADN complémentaire d'adipocyte humain. La figure 2D dépeint l'immunotransfert de MCSF humain dans du tissu adipeux en présence (i) et en l'absence (ii) d'anticorps monoclonaux de MCSF humain. La figure 2E est un buvardage de northern d'ARN total, extrait d'adipocytes mésentériques distants de et adjacents à une inflammation de l'intestin, sondés avec de 'ARN antisens pour le MCSF. La figure 2F est un immunotransfert d'adipocytes mésentériques distants de et adjacents à une inflammation de l'intestin, colorés avec Ponceau S et exposés à des anticorps de MCSF. La figure 3 est un graphique montrant le pourcentage de graisses dans des carrés de tissu de 2 x 2 cm excisés sur du tissu adipeux de lapin transfecté avec de la ss-galactosidase et du MCSF. La figure 4 montre une coloration au Xgal d'adipocytes issus de tissus adipeux de lapin transfectés avec de la ss-galactosidase. La figure 5 est un buvardage en tache de tissu de lapin transfecté avec du MCSF et de la p-galactosidase, et coloré pour un anticorps de MCSF humain. Les figures 6A et 6B dépeignent l'immunotransfert de tissu adipeux de lapin transfecté avec du MCSF et de la p-galactosidase. La figure 7 montre l'immuno-coloration de tissu adipeux de lapin, transfecté avec de la ss-galactosidase et du MCSF, avec un marqueur prolifératif MIB-1. La figure 8 montre la coloration au Xgal d'adipocytes humains transfectés avec de la ss-galactosidase in vitro. La figure 9 montre la coloration au Xgal de tissu adipeux humain transfecté avec de la ss-galactosidase ex vivo. Description des formes de réalisation préférées La présente invention concerne une méthode d'examen des effets biologiques des produits d'expression de l'acide nucléique dans des adipocytes et du tissu adipeux in vivo. Dans cette méthode, le matériau génétique est transféré dans des adipocytes du tissu adipeux de mammifères par contact avec un véhicule de transfert contenant le matériau génétique. Après avoir pénétré dans l'adipocyte, un produit est exprimé à partir du matériau génétique. Les adipocytes, les cellules qui stockent les lipides, sont une cible potentielle pour la thérapie contre l'obésité, qui n'a pas encore été exploitée. Etant donné que l'obésité est définie comme la présence d'un excès de tissu adipeux, ce tissu représente l'organe final de la maladie. Les adipocytes forment plus de 90 % du tissu adipeux. Le tissu stromal, I'autre composant principal, comprend des bandes fibreuses qui organisent les adipocytes en zones localisées, des vaisseaux sanguins, des nerfs et des lymphatiques. Des facteurs génétiques ont été impliqués dans la prédisposition à l'obésité, suggérant que des événements biologiques au sein de l'adipocyte, tels qu'une surrégulation ou une surexpression du gène, jouent un rôle ou du moins reflètent la prédisposition à stocker un excès de calories dans les adipocytes, sous la forme de graisses. On observe chez tous les mammifères des différences de la localisation du dépôt de tissu adipeux. Chez les humains, un dépôt régional de tissu adipeux annonce la morbidité métabolique associée à l'obésité. Allant dans le sens de ces observations, des études ont décrit une variabilité marquée de l'activité métabolique et de l'expression du gène entre différents sites de stockage des graisses, ou "dépôts". Un certain nombre d'indications vont dans ce sens pour suggérer que le tissu adipeux peut s'accumuler d'une façon locale. D'abord, lorsque les humains prennent du poids, la taille des dépôts de tissu adipeux déjà existants augmente. Ensuite, si le tissu adipeux est éliminé d'un site local par opération chirurgicale, la réaccumulation locale de tissu adipeux se produit au niveau de ce site. Troisièmement, l'inflammation de l'intestin et de la peau sont associées à une croissance localisée du tissu adipeux autour de ces régions d'inflammation. Les facteurs favorisant le dépôt local de tissu adipeux n'ont toujours pas été identifiés. On trouve les adipocytes dans le tissu sous-cutané et dans la moelle osseuse. On sait que les adipocytes de la moelle osseuse synthétisent un certain nombre de cytokines, y compris le TNFa (tumor necrosis factor oc), le GCSF (granulocyte colony stimulating factor), le MCSF (macrophage colony stimulating factor) et différentes interleukines. Les cytokines sont essentielles à l'hématopoïèse et à la différenciation terminale des cellules souches pluripotentes. Yoshikubo, T. 1994, Blood, 84 : 415-420. Histologiquement, les adipocytes de la moelle osseuse et du tissu adipeux sous-cutané sont similaires, les lipides formant 95 % du volume cellulaire. On a traditionnellement considéré le tissu adipeux sous-cutané comme un tissu de stockage, mais on sait aujourd'hui qu'il sécrète des hormones et des cytokines et qu'il répond à de tels signaux. Une prise de poids et une augmentation de la masse d'adipocytes s'accompagnent d'une augmentation de l'expression du TNF-a dans les adipocytes sous-cutanés, alors qu'une perte de poids s'accompagne d'une diminution de l'expression du TNF-a. Hotamisligil, G.S. et al. 1993, Science, 259: 87-91. Les adipocytes sous-cutanés sécrètent également la leptine, une hormone impliquée dans un moyen de contrôle de poids chez les rongeurs. Saladin, R. et al., 1996, Hormone & Metabolic Research, 28(12): 638-641. Deux types d'adipocytes différents, blancs et bruns, sont présents chez les mammifères et constituent le tissu adipeux blanc et brun respectivement. Les adipocytes blancs stockent les graisses sous la forme de grandes gouttelettes uniques de lipides coalescents, et les libèrent ultérieurement en fonction des besoins nutritionnels. Les adipocytes bruns stockent les lipides dans des micro-gouttelettes et sont une source de thermogenèse chez certains mammifères et chez les nouveau-nés humains. La protéine découplante UCP-1, de masse moléculaire valant 33 kDa, une protéine propre à la membrane mitochondriale des adipocytes bruns, découple la respiration de la phosphorylation oxydative pour générer de la chaleur. L'expression de l'UCP-1 est régulée par le système nerveux sympathique en réponse au froid et à un excès de prise calorique. Sears, l.B., 1996, Mol. Cell. Biol., 16(3): 3410-3419. Dans une forme de réalisation de la présente invention, on fournit une méthode in vivo de transfert de séquences d'acide nucléique dans des adipocytes situés dans le tissu adipeux sous-cutané des mammifères. La méthode comprend l'étape consistant à mettre en contact du tissu adipeux de mammifère avec un véhicule de transfert capable de pénétrer dans les adipocytes. Le véhicule de transfert contient une séquence d'acide nucléique, et un produit d'expression est produit à partir de la séquence d'acide nucléique après transfert dans un adipocyte. Cette méthode fournit un système de modèle performant pour l'identification et l'évaluation de séquences d'acide nucléique dont les produits d'expression modifient la croissance et la régulation métabolique des adipocytes. L'expression "véhicule de transfert", telle qu'utilisée ici, fait référence à tout agent capable de pénétrer dans un adipocyte par contact et de déposer des acides nucléiques à l'intérieur de la cellule. Des exemples non limitatifs de tels agents comprennent des adénovirus recombinants et des liposomes. Les adénovirus recombinants sont facilement manipulés en laboratoire, ne nécessitent pas de prolifération pour le transfert de gène, et s'intègrent rarement dans le génome hôte. Smith, T.A. et al., 1993, Nat. Genet., 5: 397-402, Spector, D.J. et Samaniego, L.A., 1995, Meth. Mol. Genet., 7: 3144. On a utilisé des adénovirus pour la transduction in vitro de plusieurs types de cellules, y compris les kératinocytes, les hépatocytes, les cellules épithéliales et, très récemment, les adipocytes à différenciation terminale. Gnudi, L., 1997, Mol. Endo., 11 (1): 67-76, Frevert, E.U. et Kahn, B.B., 1997, Mol. Cell. Biol., 17(1):190-198 Les liposomes sont des vésicules à membrane artificielle qui sont utiles en tant que véhicules de transfert in vitro et in vivo. En plus des cellules des mammifères, les liposomes ont été utilisés pour libérer des séquences d'acide nucléique dans des cellules végétales, de levures et bactériennes. La composition du liposome est habituellement une combinaison de phospholipides, particulièrement de phospholipides à point de transition de phase élevé, habituellement en combinaison avec des stéroïdes, particulièrement le cholestérol. D'autres phospholipides ou d'autres lipides peuvent également être utilisés. Les caractéristiques physiques des liposomes dépendent du pH, de la force ionique et de la présence de cations divalents. L'expression séquence d'acide nucléique", telle qu'utilisée ici, fait référence à une séquence nucléotidique qui code pour une protéine entière ou pour des portions de celle-ci. Une séquence d'acide nucléique en accord avec la présente invention peut se présenter sous la forme d'ARN ou sous la forme d'ADN, y compris d'ADN complémentaire (ADNc), d'ADN synthétique ou d'ADN génomique. L'ADN peut être double-brin ou simple-brin. Les séquences d'acide nucléique appropriées pour cette méthode peuvent comprendre toute séquence présentant un intérêt, et peuvent comprendre des séquences de gènes connus pour être régulés de façon différentielle dans les adipocytes d'un individu, y compris à partir de différents types d'adipocytes, tels que les adipocytes bruns présents dans les graisses brunes et les adipocytes blancs présents dans les graisses blanches. L'expression "régulé de façon différentielle", telle qu'utilisée ici, fait référence à des séquences d'acide nucléique qui sont soumises à des contrôles de transcription, de traitement, de transport, de stabilité de l'ARN messager ou de traduction à l'intérieur d'une cellule, donnant des profils différents des produits d'expression dans des cellules différentes. Les séquences d'acide nucléique connues pour être régulées de façon différentielle dans des adipocytes comprennent par exemple celles codant pour la lipoprotéine lipase, la leptine et l'UCP-I. Des exemples de méthodes de mise en contact de tissu adipeux de mammifère avec un tel véhicule de transfert, en accord avec la présente invention, sont indiqués dans les exemples ci-après. En règle générale, le tissu adipeux du mammifère est mis en contact localement avec le véhicule de transfert par le biais d'une injection. Des méthodes alternatives de mise en contact, telle qu'un contact dermique par le biais d'un timbre ou d'une lotion, peuvent également être utilisées. Suite au contact du tissu adipeux avec le véhicule de transfert, un produit d'expression est produit à partir de la séquence d'acide nucléique. Des buvardages de northern, par exemple, peuvent être utilisés pour détecter l'ARN messager codant pour le produit d'expression. En outre, la présence d'un produit d'expression peut être détectée, par exemple, par une technique de buvardage de western ou d'immunotransfert. Le contact local du véhicule de transfert et l'expression ultérieure du produit d'expression de l'acide nucléique permet de simuler des réponses biologiques hautement spécifiques. De plus, I'administration locale peut minimiser les effets secondaires fâcheux. Après confirmation de l'expression, la présence du produit d'expression peut être mise en corrélation avec un effet biologique ou physiologique tel qu'une augmentation de la prolifération, de la croissance ou du stockage des lipides. Le tissu adipeux et les adipocytes comprenant un véhicule de transfert contenant une séquence d'acide nucléique qui est régulée de façon différentielle dans les adipocytes peuvent être obtenus à partir de biopsies de tissu transfecté. Les adipocytes peuvent être maintenus en culture primaire en utilisant des méthodes standard. Ces adipocytes sont utiles pour analyser les effets physiologiques du produit exprimé et pour cribler des composants pouvant modifier l'effet physiologique. Dans une autre forme de réalisation, on fournit une méthode de modification de la régulation de la croissance et du métabolisme des adipocytes chez un mammifère. La régulation métabolique et de la croissance des adipocytes peut être modifiée, par exemple, chez un sujet obèse qui a besoin de diminuer sa masse adipeuse, ou chez un sujet atteint de diabète, d'un cancer ou du SIDA, qui a besoin d'augmenter sa masse adipeuse. La méthode comprend l'administration d'une quantité efficace d'un véhicule de transfert qui est capable de pénétrer dans un adipocyte d'un mammifère. De préférence, une quantité efficace d'un véhicule de transfert transfecte un nombre maximum de cellules ciblées. En utilisant les méthodes données en exemple par la suite, par exemple, un véhicule de transfert peut transfecter au moins environ 9 % à au moins environ 30 % ou plus de cellules ciblées. Le véhicule de transfert contient une séquence d'acide nucléique, dans laquelle un produit d'expression est produit à partir de la séquence d'acide nucléique dans l'adipocyte et modifie la régulation de la croissance et du métabolisme de l'adipocyte. La séquence d'acide nucléique peut provenir d'un gène connu pour être régulé de façon différenciée dans les adipocytes. L'expression "modification de la croissance et du métabolisme" fait référence à une augmentation ou à une diminution de la croissance, du stockage, de la prolifération et du métabolisme des adipocytes. Selon un autre aspect, la présente invention concerne une méthode d'identification de produits d'expression de l'acide nucléique qui modifient la régulation métabolique et de croissance dans un adipocyte. Cette méthode comprend l'identification des séquences d'acide nucléique candidat et le transfert des séquences d'acide nucléique dans le tissu adipeux d'un mammifère, en accord avec les méthodes de transfert décrites ci-avant. Une séquence d'acide nucléique candidat peut être identifiée et sélectionnée à partir de toute source, et un véhicule de transfert contenant une telle séquence d'acide nucléique candidat peut être construit en utilisant les méthodes connues de la technique. Par exemple, la séquence d'acide nucléique peut être identifiée à partir d'une base de données, telle que la GenBank ou la banque de données EMBL. Un produit d'expression est produit à partir de la séquence d'acide nucléique. Les modifications de la croissance et du métabolisme d'un adipocyte peuvent être mesurées de différentes façons, y compris par dosage biologique ou examen visuel. Des exemples non limitatifs de telles mesures comprennent, par exemple, I'examen d'une modification de la quantité (par exemple de la masse) de tissu adipeux, ou la mesure d'une augmentation de la génération de chaleur. Comme alternative, la morphologie des adipocytes transfectés peut être comparée à celle de témoins. Par exemple, les adipocytes bruns ont de très grandes mitochondries et stockent les lipides sous la forme de micro-gouttelettes, alors que les adipocytes blancs stockent les lipides sous forme de grande goutte unique de liquide coalescent. La présente invention sera maintenant illustrée au moyen des exemples suivants. Exemple I Transfert de gène in vivo dans des adipocytes On a utilisé des vecteurs d'adénovirus recombinant pour transférer in vivo des séquences d'acide nucléique dans du tissu adipeux de lapin. Construction des vecteurs adénoviraux- On a préparé un vecteur adénoviral contenant de l'ADNc de lacZ couplé à un promoteur de CMV selon la méthode de Spector and Samaniego, Meth. Mol. Genet., 1995, Vol.7, p. 31-44. On a cloné l'ADNc de lacZ dans un plasmide navette dont l'extrémité gauche du génome adénoviral présente une délétion Ela. Ce plasmide contient également une origine de réplication, des signaux d'encapsidation redondante d'ADN, et la portion activateur de la région de contrôle de la transcription Pela. On a co-transfecté le plasmide navette et l'ADN adénoviral imparfait dans 293 cellules de rein embryonnaire humain, et les adénovirus recombinants ont été résolus par recombinaison homologue. Le produit du gène lacZ, la p-galactosidase, donne une couleur bleue en présence de 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ss-D-galactoside (Xgal). Confirmation du transfert de gène - On a anesthésié un lapin blanc de Nouvelle-Zélande, pesant 3,4 kg, avec de la kétamine. Une incision de l'aine, de 6 cm, a exposé le dépôt graisseux antérieur au quartier postérieur droit. Des particules virales, 1 x 1011 ufp (unités formatrices de plages), ont été injectées dans un volume de 500 pI de saline tamponnée au phosphate (PSB) dans le dépôt graisseux. Après 10 jours, on a sacrifié l'animal et excisé le dépôt graisseux pour le découper en environ 12 morceaux de 500 mg. On a détecté l'activité de la ss-galactosidase en fixant le tissu avec 2 % de paraformaldéhyde, 0,2 % de glutaraldéhyde dans PBS, pendant 30 mn à 4 "C, puis on a coloré en présence de 1 mg/ml de Xgal pendant 90 minutes à 37 "C. Un morceau unique de tissu adipeux, positif pour l'activité de la ss-galactosidase, est présenté à la figure 1. Cela indique que le transfert de gène a été efficace et hautement localisé. Exemple 2 Expression du MCSF dans des adipocytes du tissu sous-cutané humain On a détecté la protéine MCSF dans des adipocytes sous-cutanés et des adipocytes isolés à partir de tissus adipeux à croissance rapide entourant les régions de l'estomac enflammé. On a isolé des adipocytes à partir d'une biopsie de tissu adipeux humain. Un buvardage de northern de 15 pg d'ARN total, sondé avec une sonde d'ARN antisens pour les paires de bases 845-1460 de l'ARN messager du MCSF (GenBank, M64592), est présenté à la figure 2a. Aucun message n'a été détecté. Un buvardage de western de protéine d'adipocytes humains, incubé avec un anticorps monoclonal de MCSF (MAB216, R & D Systems), a permis la détection de la protéine MCSF; il est présenté à la figure 2b. On a réalisé une amplification génétique (PCR) de transcription inverse sur de l'ARN messager extrait d'adipocytes humains et de lapin. Après traitement de l'ARN messager avec de la DNase (Gibco) pendant 15 minutes à 25 "C, la transcription inverse hexamère aléatoire avec une transcriptase inverse de Moloney-Murine Leukemia Virus (MMLV) a généré des ADNc. Sambrook et al., (1989) Molecular Cloning, seconde édition, Cold Spring Harbor Laboratory, Plainview, NY. L'ADNc de MCSF a été amplifié sur 35 cycles PCR de dénaturation (95 "C pendant 30 secondes), annelage (62"C pendant 2 minutes) et extension (72 "C pendant 40 secondes) en utilisant des amorces spécifiques du MCSF humain (amorce = GTC AAG GAC AGC ACC ATC GGT G (ID NO SEQ: 1), nucléotides 805-826 de MCSF humain, amorce inverse = GCT GTA CCA GTT ACA TCT GCC (ID NO SEQ : 2), nuciéotides 1077-1097 de MCSF humain). Un produit d'environ 300 paires de bases était attendu de la réaction. Comme montré à la figure 2c, on a détecté un message dans les adipocytes humains, mais pas dans les adipocytes de lapin. Les réactions des témoins contenant de I'ARNm non soumis à transcription inverse étaient négatives. L'amplification d'ADNc à partir d'une banque d'adipocytes humains (Clontech) en utilisant les mêmes amorces de MCSF a également généré un produit, présenté dans le panneau central de la figure 2C. Des sections de tissu adipeux humain congelé ont été colorées pour le MCSF en utilisant un anticorps monoclonal de MCSF humain (MAB2î6, R & D Systems). La figure 2d montre la coloration en présence (i) d'anticorps. Aucune coloration n'a été détectée en l'absence (ii) d'anticorps. On a obtenu de la graisse mésentérique sur deux patients présentant une maladie inflammatoire de l'estomac. Dans chaque cas, on a prélevé du tissu adipeux sur un site adjacent à l'estomac enflammé et sur une région de graisse mésentérique reliée à l'estomac à apparence normale et distante de plus de 30 cm du site d'inflammation. Une analyse par buvardage de northern (telle que décrite précédemment) des adipocytes isolés à partir des échantillons est présentée à la figure 2e. L'ARN de MCSF était uniquement détectable dans les tissus adjacents à l'intestin enflammé, indiquant que le MCSF était surrégulé dans les régions entourant l'intestin enflammé. Un immunotransfert d'extraits cellulaires d'adipocytes colorés avec Ponceau S et exposés à des anticorps de MCSF (MAB21 6, R & D Systems) est présenté à la figure 2f et indique que l'expression de la protéine MCSF a été surrégulée dans les régions du tissu adipeux entourant l'intestin enflammé. Exemple 3 Transfert de gène de MCSF et de ss-galactosidase in vivo dans des adipocytes de lapin sous-cutanés On a utilisé des adénovirus recombinants pour transférer in vivo du MCSF et de la ss-galactosidase dans des tissus adipeux de lapin. Construction virale - On a préparé une construction adénovirale contenant de I'ADNc de MCSF humain (Genbank, M64592), tel que décrit à l'exemple 1. Conception de l'expérience - Six lapins blancs de Nouvelle-Zélande, mâles, pesant entre 3,4 et 4,0 kilos (moyenne 3,6 kg), ont été utilisés dans les expériences de transfert de gène décrites. On a anesthésié chaque lapin à la kétamine et on les a placés sur le dos, les quatre pattes étant attachées. On a rasé les poils de l'abdomen et nettoyé la peau avec un antiseptique. Dans des conditions stériles, on a pratiqué une incision abdominale de 2 cm en partie centrale à travers la peau, la graisse sous-cutanée et les couches fasciales. On a utilisé un instrument tranchant pour disséquer la partie gauche de l'abdomen afin de diviser le plan fascial. La peau, la graisse sous-cutanée et le fascia ont ensuite été levés de la musculature abdominale. On a utilisé une aiguille d'insuline de 1/3 ml pour déterminer la profondeur de la peau, de la graisse sous-cutanée et de la couche fasciale en différents points d'une rangée, à 1 cm de la ligne médiane. On a formé quatre points de suture bleus en une rangée, à 3 cm de la ligne médiane, à travers la peau, la graisse sous-cutanée et la couche fasciale, à 3 cm, 5 cm, 6 cm et 8 cm du pli de l'aine pour créer deux régions de 2 cm de long, bordées par des points de suture et séparées de 1 cm. Dans une région, on a injecté, à une profondeur comprise entre 1,5 et 2 mm, 25 lul de 2,5 x 1010 unités formatrices de plages (ufp) de particules virales contenant la construction virale de ss-galactosidase décrite à l'exemple 1. On a répété les injections quatre fois. Quatre échantillons de 25 Cil de 2,5 x 1010 ufp de particules virales contenant la construction virale de MCSF ont été injectés dans l'autre région. On a fermé l'incision et replacé le lapin dans sa cage. Après 5 jours, on a répété la procédure sur le côté droit de l'animal. On a inversé les positions relatives des deux échantillons. Après cinq jours supplémentaires, on a anesthésié l'animal et on l'a placé sur le dos en lui attachant les pattes. On a utilisé un crayon pour tracer un rectangle de 2 cm de large autour de la rangée de points de suture sur le côté gauche de l'animal. Le rectangle s'étendait 1 cm en-dessous et I cm au-dessus des points de suture supérieur et inférieur, respectivement. On a découpé au scalpel le rectangle de peau, de la graisse sous-cutanée et de fascia, et on les a immédiatement placés sur une feuille plastique sur de la glace sèche. On a découpé le rectangle de tissu au niveau des points de suture pour former deux carrés de tissu de 2 cm de côté: un transfecté avec des virus contenant de la ss-galactosidase et l'autre avec des virus contenant de la MCSF. Les deux morceaux de tissu ont été photographiés et pesés. On a photographié chaque morceau de tissu dérivé de chaque morceau rectangulaire excisé, puis on les a divisés en trois sections pour une fixation dans 10 % de formaldéhyde, une découpe en lamelles et un stockage dans de l'azote liquide. La même procédure a été répétée pour le côté droit de l'abdomen de l'animal, puis l'animal a été sacrifié. On a obtenu au total quatre carrés de tissu sur chaque animal. Masse des carrés de tissu - On a comparé la masse des carrés de tissu (à cinq et 10 jours) des échantillons transfectés avec du MCSF à celle des témoins transfectés avec de la ss-galactosidase; les résultats sont présentés au Tableau I. On a trouvé, par rapport aux échantillons témoins transfectés avec de la p-galactosidase, une augmentation de 150 % de la masse des carrés de tissu pour les échantillons transfectés avec du MCSF après cinq jours. Concernant les échantillons à 10 jours, la masse des échantillons transfectés avec du MCSF avait augmenté de 200 % par rapport à celle des témoins transfectés avec de la ss-galactosidase. L'extraction au chloroforme des lipides des échantillons de tissu a permis de confirmer que l'augmentation de la masse des échantillons transfectés avec du MCSF était le résultat d'une augmentation de la teneur en lipides. Comme montré à la figure 3, on a constaté une augmentation statistiquement significative de la teneur en lipides dans les tissus adipeux transduits avec du MCSF à 5 jours (p Tableau I Masse des dépôts graisseux (g) avant et après induction avec MCSF/virus Jour5 JOUR 10 Lapin basal MCSF bgal | MCSF I 2,4 4,0 2,0 6,4 2 2,5 2,9 2,4 4,7 3 1,4 2,2 1,4 3,4 4 1,6 1,5 1,2 3,8 5 1,5 2,0 1,7 3,6 6 2,7 5,4 2,9 7,9 Moyenne 2,02 3,00 1,93 4,38 SD 0,28 1,46 0,64 1,23 SE 0,24 0,60 0,26 0,50 Evaluation histologique des carrés de tissu Une coloration à l'hématoxyîine et à l'éosine a été utilisée pour évaluer de façon histologique les carrés de tissu. La coloration était cohérente avec des tissus adipeux normaux, bien qu'il y avait dans certaines sections du tissu un grand nombre de cellules inflammatoires aiguës et chroniques. Taille de cellule des adipocytes - on a compté les cellules issues de morceaux du tissu coupés en lamelles et congelés (n = 100) pour déterminer si la taille moyenne des cellules était différente entre les échantillons transfectés avec du MCSF et les témoins transfectés avec de la p-galactosidase. Aucune différence de taille moyenne des cellules n'a été observée. Détection de l'expression du gène de ss-galactosidase On a soumis des sections de 200 M d'épaisseur à digestion par 0,5 % de collagénase (Sigma) pendant 30 minutes. On a séparé les adipocytes en utilisant une tête rotative de 2 000 g sur 5 minutes, on les a fixés et colorés avec Xgal tel que décrit à l'exemple 1. Le produit du gène lacZ, la ss-galactosidase, a donné une couleur bleue en présence de Xgal. On a examiné les cellules au microscope optique pour observer la coloration bleue intracellulaire. Comme montré à la figure 4, la coloration bleue est représentée par des adipocytes colorés de façon plus sombre. Dans les tissus transfectés avec de la 13-galactosidase, la coloration bleue était présente dans 12,5 % des cellules après 5 jours et dans 9,3 % des cellules après 10 jours (tableau Il). On n'a pas observé de coloration positive dans les cellules isolées à partir de tissu transfecté avec du MCSF. TABLEAU Il Pourcentage de cellules bleues après coloration au Xgal JOUR 5 JOUR 10 Lapin I b-gal MCSF bgal MCSF t 13 0 9 0 2 9 0 11 0 3 17 0 Il 0 4 16 0 9 0 5 Il 0 7 0 6 9 0 9 0 Moyenne 12,5 o 9,3 0 SE 1,4 0,61 Détection de l'expression du gène de MCSF dans des tissus adipeux transduits avec du MCSF - On a extrait de I'ARN total à partir de sections des tissus stockés dans de l'azote liquide par lyse au thiocyanate de guanidine et homogénéisation, puis on a réalisé une extraction au chloroforme. On a récupéré l'ARN du surnageant en l'appliquant à une colonne RNA Easy Column (Qiagen). Après traitement à la DNase (Gibco) pendant 15 minutes à 25 C, on a utilisé une transcription inverse hexamère aléatoire avec transcriptase inverse MMLV pour générer des ADNc. Sambrook et al., (1989) Molecular Cloning, seconde édition, Cold Spring Harbor Laboratory, Plainview, NY. On a amplifié l'ADNc de MCSF par 35 cycles PCR de dénaturation (95 "C pendant 30 s), annelage (62 "C pendant 2 minutes) et extension (72 "C pendant 40 s) (amorce = GTC AAG GAC AGC ACC ATC GGT G (ID NO SEQ: 1), amorce inverse = GCT GTA CCA GTT ACA TCT GCC (ID NO SEQ : 2). Un produit d'environ 300 paires de bases était attendu de la réaction. On a séparé les produits de la PCR par électrophorèse en gel. Des bandes spécifiques de longueur prévue ont été excisées du gel, récupérées par filtration via une tête rotative, et séquencées. Une comparaison entre séquence obtenue à partir de la réaction d'amplification génétique (PCR) et séquence de MCSF humain connue a indiqué que le fragment amplifié était homologue à environ 95 % pour chacun des lapins. Dans les échantillons transfectés avec de la 13-galactosidase, on a amplifié une bande de taille similaire, mais elle ne correspondait pas aux gènes de la base de données de la GenBank. Elle était à 46,6 % identique au MCSF humain dans une région 208 nt. Ces données confirment la transduction réussie de tissu adipeux de lapin avec du MCSF humain. Détection de l'expression de la protéine MCSF humain - On a utilisé des buvardages en taches pour détecter l'expression de la protéine MCSF humain. On a isolé une protéine d'adipocyte à partir de 80 mg d'adipocytes (dans 500 pI d'eau) en utilisant une répétition de cycles congeler/dégeler et de sonication. On a éliminé la majorité des lipides par enlèvement de la masse flottante. L'homogénat (2 cul) a été appliqué sur une membrane de nitrocellulose (Protran) et bloqué pendant 2 heures dans 0,75 % de BSA. La membrane bloquée a été exposée à un anticorps monoclonal spécifique pour le MCSF humain (MAB216, R & D Systems) pendant 90 minutes, puis à un anticorps anti-souris standard (R & D Systems) pendant 45 minutes. On a détecté la liaison de l'anticorps secondaire avec ECL (Amersham) en utilisant des méthodes standard. Le buvardage en tache présenté à la figure 5 indique que la protéine MCSF a été uniquement détectée dans des tissus inoculés avec l'adénovirus de MCSF. Détection de la protéine MCSF d'adipocyte dans des tissus adipeux transduits avec du MCSF - On a utilisé une immunocytochimie pour détecter l'expression de MCSF intracellulaire. On a coloré des morceaux de tissus découpés en lamelles selon une procédure d'immunotransfert de biotine-streptavidine marquée. Hsu, S.M. et al., 1981, J. Histochem. Cytochem., 29: 577-580; Giorno, R., 1984, Diagnostic Immunol. 2:161-166. Comme montré aux figures 6A et 6B, la protéine MCSF a été uniquement détectée dans les tissus inoculés avec I'adénovirus de MCSF. Détection de la prolifération adipocytaire - On a comparé la prolifération adipocytaire de tissus transfectés au MCSF avec celle de témoins à ia ss-galactosidase par immunotransfert avec un marqueur de prolifération nucléaire (MIB - 1), en utilisant des méthodes standard. La figure 7 montre l'augmentation de coloration dans la graisse sous-cutanée transduite avec du MCSF, à 10 jours. Le tableau III montre l'augmentation statistiquement significative du pourcentage de noyaux à coloration positive dans les tissus transfectés avec du MCSF, à 5 et à 10 jours. TABLEAU III Pourcentage d'adipocytes colorés au MIB - 1 JOUR 5 JOUR 10 Lapin b-gal MCSF bgal MCSF I 2 11 2 Il 2 2 1 6 1 16 3 3 9 0 12 4 3 18 5 15 5 2 15 3 12 6 5 12 4 10 Moyenne 2,67 11,83 2,50 12,67 SE 0,56 1,74 0,76 0,95 Exemple 4 Transfert de gène in vitro dans des adipocytes humains Des adénovirus recombinants se sont montrés capables de transférer des séquences d'acide nucléique dans des adipocytes humains isolés par biopsie de tissus adipeux. Un morceau de 5 g de graisse sous-cutanée d'humain a été découpée dans un échantillon chirurgical et soumis à une digestion par la collagénase tel que décrit à l'exemple 3. On a isolé les adipocytes par enlèvement de la masse flottante tel que décrit à l'exemple 3, et on les a divisés en deux lots. Dans un lot, 35 Cil de 1 x 1011 ufp d'adénovirus contenant de la p-galactosidase ont été ajoutés à 3 ml d'adipocytes (1 x 107 cellules/ml). Dans le lot d'adipocytes témoin, on a ajouté 35 lul de PSB. Après 1 heure, on a ajouté 3 ml de DMEM (Gibco) aux deux lots d'adipocytes, et on a fait incuber une nuit à 37 "C dans un bain d'eau à agitation lente. Après 24 heures, les adipocytes ont été fixés et colorés avec Xgal tel que décrit à l'exemple 1. Environ 18 % à 28 % des cellules traitées à I'adénovirus étaient positives pour l'activité de ss-galactosidase, tel qu'indiqué par la coloration sombre de la figure 8. Les cellules témoin étaient négatives pour la 13-galactosidase. Exemple 5 Transfert de gène ex vivo dans des adipocytes humains Des adénovirus recombinants se sont montrés capables de transférer des séquences d'acide nucléique dans des tissus adipeux humains ex vivo. Trois échantillons de 400 mg de graisse sous-cutanée humaine ont été prélevés à partir d'un échantillon chirurgical. On a injecté dans deux des échantillons 50 lul de 1 x 1011 ufp d'adénovirus contenant de la p-galactosidase. On a injecté dans le troisième échantillon 50 ,ul de PSB. Les morceaux de tissu ont été laissés dans un incubateur à 37 OC pendant 24 heures, dans 3 ml de DMEM (Gibco). Après 24 heures, on a soumis les tissus à une digestion par la collagénase et on a isolé les adipocytes par enlèvement de la masse flottante tel que décrit à l'exemple 3. Après 10 minutes de fixation dans 2 % de paraformaldéhyde, 0,2 % de glutaraldéhyde, les cellules ont été colorées au Xgal pendant 90 minutes et visualisées au microscope. Un exemple d'adipocyte coloré au Xgal est montré à la figure 9. Environ 11 à 19 % des cellules transfectées avec le virus étaient positives pour la coloration à la p-galactosidase. Le tissu et les adipocytes témoin étaient négatifs pour l'activité de 13-galactosidase. Autres formes de réalisation II convient de comprendre que, quoique la présente invention ait été décrite en combinaison avec la description détaillée de celle-ci, la description précédente vise à illustrer et non à limiter l'étendue de la présente invention, qui est définie par l'étendue des revendications annexées. D'autres aspects, avantages et modifications entrent dans l'étendue des revendications annexées. LISTE DE SEQUENCAGE (1) INFORMATIONS GENERALES (i) DE POSANT: Mayo Foundation for Medical Education and Research (ii) TITRE DE L'INVENTION : Transfert de gène dans des adipocytes (iii) NOMBRE DE SEQUENCES 2 (iv) ADRESSE DE CORRESPONDANCE: (A) DESTINATAIRE: Fisch & Richardson P.C., P.A. (B) RUE : 60 South Sixth Street, Suite 3300 (C) VILLE : Minneapolis (D) éTAT: MON (E) PAYS : USA (F) CODE POSTAL: 55402 (v) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT : disquette (B) ORDINATEUR: compatible IBM (C) SYSTEME D'EXPLOITATION : DOS (D) LOGICIEL : FastSEQ for Windows Version 2.0 (vi) DONNEES PORTANT SUR LE DEPOT EN COURS: (A) NUMERO DE DEPOT: (B) DATE DE DEPOT: (C) CLASSIFICATION: (vii) DONNEES PORTANT SUR LES DEPOTS ANTERIEURS: (A) NUMERO DE DEPOT: 08/890,467 (B) DATE DE DEPOT: 09 juillet 1997 (viii) INFORMATIONS MANDATAIRE/AGENT: (A) Nom: Ellinger, Mark S (B) NUMERO D'ENREGISTREMENT: 34,812 (C) NUMERO DE REFERENCE/REGISTRE 07039/042FR1 (ix) INFORMATIONS DE TELECOMMUNICATION: (A) TELEPHONE : 612-335-5070 (B) TELECOPIE : 612-288-9696 (C) TELEX: (2) INFORMATIONS SUR L'ID NO SEQ:1: (i) CARACTERISTIQUES DE SEQUENCE (A) LONGUEUR: 22 paires de bases (B) TYPE : acide nucléique (C) TYPE DE BRIN : simple (D) TOPOLOGIE : linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE : Autre (xi) DESCRIPTION DE SEQUENCE: ID NO SEQ:1 GTCAAGGACA GCACCATCGG TG (2) INFORMATIONS SUR L'ID NO SEQ : 2: (i) CARACTERISTIQUES DE SEQUENCE (A) LONGUEUR: 21 paires de bases (B) TYPE : acide nucléique (C) TYPE DE BRIN : simple (D) TOPOLOGIE : linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE : Autre (xi) DESCRIPTION DE SEQUENCE: ID NO SEQ :2 GCTGTACCAG TTACATCTGC C Revendications 1. Une méthode de transfert in vivo d'une séquence d'acide nucléique dans un adipocyte, comprenant l'étape consistant à mettre en contact le tissu adipeux d'un mammifère avec un véhicule de transfert contenant ladite séquence d'acide nucléique, ledit véhicule de transfert étant capable de pénétrer dans ledit adipocyte, dans lequel un produit d'expression est produit à partir de ladite séquence d'acide nucléique lorsqu'elle est transférée dans ledit adipocyte. 2. La méthode selon la revendication 1, comprenant en outre l'étape consistant à détecter la présence dudit produit d'expression. 3. La méthode selon la revendication 2, comprenant en outre l'étape consistant à mettre en corrélation la présence dudit produit d'expression avec un effet physiologique au sein dudit adipocyte. 4. La méthode selon la revendication 1, dans laquelle ledit véhicule de transfert comprend un adénovirus. 5. La méthode selon la revendication 1, dans laquelle ledit véhicule de transfert comprend un liposome. 6. La méthode selon la revendication 1, dans laquelle ladite séquence d'acide nucléique code pour un facteur MCSF (macrophage colony stimulating factor) ou une portion de celui-ci. 7. La méthode selon la revendication 1, dans laquelle ladite séquence d'acide nucléique est régulée de façon différentielle dans les adipocytes. 8. La méthode selon la revendication 7, dans laquelle ladite séquence d'acide nucléique est régulée de façon différentielle dans les adipocytes blancs et dans les adipocytes bruns. 9. La méthode selon la revendication 8, dans laquelle ladite séquence d'acide nucléique code pour une protéine découplante UCP-1 ou une portion de celle-ci. 10. Un adipocyte transfecté comprenant un véhicule de transfert contenant une séquence d'acide nucléique qui est régulée de façon différentielle dans des adipocytes. 11. Du tissu adipeux, dans lequel au moins un adipocyte dudit tissu adipeux comprend un véhicule de transfert contenant une séquence d'acide nucléique qui est régulée de façon différentielle dans des adipocytes. 12. Une méthode de modification de la régulation métabolique et de la croissance des adipocytes chez un mammifère, comprenant l'étape consistant à mettre en contact du tissu adipeux dudit mammifère avec une quantité efficace d'un véhicule de transfert contenant une séquence d'acide nucléique, dans laquelle ledit véhicule de transfert est capable de pénétrer dans un adipocyte dudit mammifère, et dans laquelle un produit d'expression obtenu à partir de ladite séquence d'acide nucléique dans ledit adipocyte modifie la régulation de la croissance et du métabolisme dudit adipocyte. 13. La méthode selon la revendication 12, dans laquelle ladite séquence d'acide nucléique est régulée de façon différentielle dans des adipocytes. 14. La méthode selon la revendication 12, dans laquelle ladite séquence d'acide nucléique est régulée de façon différentielle dans des adîpocytes blancs et dans des adipocytes bruns. 15. La méthode selon la revendication 14, dans laquelle ladite séquence d'acide nucléique est la protéine découplante UCP-1. 16. Une méthode d'identification d'un produit d'expression qui modifie la régulation de la croissance et du métabolisme dans un adipocyte, comprenant les étapes consistant à a) transférer une séquence d'acide nucléique candidats dans du tissu adipeux des mammifères, dans lequel ledit produit d'expression est produit à partir de ladite séquence d'acide nucléique candidats à l'intérieur dudit adipocyte ; et .b) surveiller les modifications de la régulation de la croissance et du métabolisme dans ledit adipocyte. 17. La méthode selon la revendication 16, dans laquelle la surveillance des modifications du métabolisme adipocytaire comprend l'examen d'une modification de la quantité de tissu adipeux.