Brevet FR2756459A1 — publié le 19980605

PROCEDE ET DISPOSITIF POUR L'OBTENTION DE COCCINELLES INAPTES AU VOL, COCCINELLES OBTENUES PAR LEDIT PROCEDE ET LEURS UTILISATIONS. L'invention est relative à l'obtention de coccinelles inaptes au vol, et à leur utilisation pour la protection des cultures contre les ravageurs. Les insectes de la famille des Aphidiens (Hom., Aphidae) communément dénommés pucerons comprennent de multiples espèces, et sont des ravageurs très communs dans toutes les cultures de climat tempéré. Ils causent des dégâts très variés : diminution des rendements, altération de la qualité des productions, déformation des organes végétatifs ou même destruction de toute ou partie des plantes. De plus de nombreuses espèces transmettent des maladies virales parfois très graves pour l'avenir des cultures. Ils font donc l'objet d'une lutte chimique intensive, qui outre la pollution qu'elle peut entraîner, s'est rapidement traduite par l'apparition, chez certaines espèces, d'un phénomène de résistance croisée aux pesticides. I1 a été proposé, comme alternative au traitement chimique, d'utiliser des prédateurs naturels des pucerons, et en particulier les coccinelles (famille des Coccinellidae). Par exemple, l'équipe des inventeurs a testé sur le terrain une coccinelle aphidiphage provenant de Chine, Harmonia axyridis Pallas (Col.. Coccinellidae), qui, du fait de sa polyphagie, s'adapte à des applications très diverses, et peut par exemple être utilisée en serres (cultures maraîchères), dans les vergers (pêchers, cerisiers, pruniers etc..), et sur bien d'autres cultures (le houblon par exemple). Les Inventeurs ont également mis au point une technique d'élevage de cette coccinelle à l'échelle industrielle sur une proie de substitution, les oeufs d'Ephestia kuehniella Zeller (Lep., Pyralidae). [SCHANDERL et al., Entomol. exp. appl. nO 49, p. 235-244 (1988)]. Actuellement, tous les traitements biologiques sont réalisés avec de jeunes larves de troisième stade ; en effet, la réduction des populations aphidiennes sur la zone traitée résulte, en pratique, de l'activité prédatrice des larves de troisième et surtout de quatrième stade. L'utilisation de ces larves de ce stade présente deux inconvénients, qui majorent le coût de ce traitement et entravent son utilisation à grande échelle. Le premier concerne le conditionnement des larves, qui doit être prévu de manière à ce que celles-ci soient nourries pendant leur transport, afin de réduire le cannibalisme et/ou une certaine mortalité. Le second est la courte durée de l'activité prédatrice de ces larves, qui varie de 4 à 12 jours selon les conditions thermiques du milieu. Ces larves se transforment ensuite en nymphes, d'où émergent des adultes bons voiliers qui quittent rapidement la zone traitée ; ceci implique la nécessité de plusieurs traitements successifs au cours d'une même saison de culture. Pour remédier à ces inconvénients, il a été proposé d'utiliser des populations de coccinelles incapables de voler, ce qui permettrait d'en prolonger la présence sur la zone traitée. Jusqu'à présent, les seules coccinelles inaptes au vol qui ont été observées sont des mutants naturels, morphologiquement anormaux, et dépourvus de tout ou partie de leurs ailes et/ou élytres. MARPLES et al. [Entomol. Exp. Appl. 69, 69-73 (1993)] décrivent un mutant de ce type découvert dans une population naturelle de la coccinelle aphidiphage Adalia bipunctata (L.) ; ces auteurs indiquent qu'il s'agit d'une mutation récessive, et qu'il n'a pas été possible d'obtenir de descendants de croisements consanguins d'individus homozygotes pour cette mutation, ce qui rend problématique l'obtention et le maintien de populations de mutants. Les Inventeurs ont eu l'idée de chercher des mutants chez lesquels, contrairement aux mutants connus antérieurement, l'inaptitude au vol s'accompagnerait d'une morphologie alaire normale, et sont parvenus à obtenir et à isoler de tels mutants. La présente Invention a pour objet un procédé d'obtention de coccinelles inaptes au vol, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une étape où l'on sélectionne, à partir d'une population de coccinelles adultes, les individus inaptes au vol et morphologiquement normaux, au moyen d'un dispositif permettant le tri des coccinelles sur la base de leur aptitude au vol. Selon un mode de mise en oeuvre préféré du procédé conforme à l'invention, il comprend préalablement une étape a) où l'on procède au traitement d'une population de coccinelles par un agent mutagène ; pour la mise en oeuvre de cette étape a) on peut utiliser n'importe quel agent mutagène connu en lui-même ; on peut par exemple procéder à une mutagenèse par irradiation, ou à une mutagenèse chimique. Pour plus de commodité, on préférera un agent mutagène chimique pouvant être administré par voie orale, par exemple l'éthyl-méthyl sulfonate (EMS). Ce traitement mutagène est suivi d'une étape b), où l'on sélectionne conformément à l'invention les individus inaptes au vol et morphologiquement normaux, parmi une population constituée de descendants des coccinelles ayant subi le traitement mutagène. De préférence, le procédé de la présente invention comprend également au moins une étape c) où l'on croise entre eux des individus inaptes au vol et morphologiquement normaux issus d'une sélection effectuée conformément à l'Invention. Cette étape c) peut être répétée une plusieurs fois. Avantageusement, elle est suivie d'une étape d), où l'on sélectionne, parmi une population constituée de descendants de ce croisement, les individus inaptes au vol et morphologiquement normaux ; les étapes c) et d) peuvent être associées entre elles une ou plusieurs fois, jusqu'à obtention d'une population de coccinelles dans laquelle au moins 95% des adultes sont incapables de voler et présentent une morphologie alaire normale. Pour mettre en oeuvre le procédé conforme à l'invention, les Inventeurs ont mis au point un dispositif spécial, permettant le tri des coccinelles sur la base de leur aptitude au vol. Ce dispositif comprend au moins un support d'envol constitué par un élément long et étroit, de type tige ou baguette, disposé verticalement, d'environ 20 à 100 cm, de préférence 30 à 50 cm de hauteur, dont la section à l'extrémité supérieure est de l'ordre de quelques mm2 (cette section étroite incite les coccinelles à quitter le dispositif dès qu'elles sont parvenues à son sommet), et réalisé dans un matériau permettant son escalade par les coccinelles adultes, ledit ou lesdits support(s) étant entouré(s), à une distance variant entre 20 et 50 cm, par une enceinte verticale ouverte à sa partie supérieure, dont la hauteur est sensiblement égale, ou inférieure de quelques centimètres à celle du support d'envol, et dont la surface interne est conçue de manière à interdire son escalade par les coccinelles adultes. De préférence, le dispositif conforme à l'invention, comprend également des signaux visuels incitant à l'envol, disposés autour de l'enceinte et à l'extérieur de celle-ci. Pour améliorer encore la sélectivité du procédé conforme à l'invention, on opère la sélection en plaçant les coccinelles dans les conditions les plus favorables possibles au comportement d'envol. Dans ce but, il est préférable de placer le dispositif de tri dans les conditions ambiantes de température et d'éclairement les plus favorables à l'envol. Ces conditions ont été déterminées par des essais préliminaires sur une population des coccinelles sauvages dont sont issues les coccinelles mutantes que l'on cherche à isoler. Dans le même but, il est également préférable d'effectuer le tri sur une population constituée de coccinelles dont les conditions physiologiques (âge, conditions d'élevage) sont optimales pour l'envol ces conditions physiologiques optimales ont été également déterminées par des essais préliminaires sur la population sauvage de cette coccinelle. La présente Invention englobe également les coccinelles mutantes pouvant être obtenues et sélectionnées par le procédé conforme à l'invention. Ces mutants sont inaptes au vol, présentent une morphologie alaire normale, et présentent des caractéristiques biologiques, et en particulier une fertilité et une activité prédatrice comparables à celles des individus sauvages. La présente invention a également pour objet une population de coccinelles susceptible d'être obtenue par un procédé conforme à l'invention. De préférence, au moins 80%, et de manière tout à fait préférée, au moins 90% des individus de cette population sont inaptes au vol et présentent une morphologie alaire normale. La présente Invention a également pour objet l'utilisation de coccinelles susceptibles d'être obtenues par un procédé conforme à l'invention, pour la destruction d'insectes aphidiens. Ces coccinelles mutantes peuvent être utilisées aussi bien en serre, que pour le traitement des cultures de plein air (vergers, champs) où il ne peut pas être envisagé d'utiliser des coccinelles de type sauvage, du fait de leur départ rapide de la zone traitée. En particulier, la présente Invention a pour objet un procédé de lutte contre les insectes aphidiens ravageurs des récoltes, caractérisé en ce qu'il comprend le lâcher, sur la zone à traiter, de coccinelles susceptibles d'être obtenues par le procédé conforme à l'invention. Contrairement aux traitements pratiqués dans l'art antérieur, qui nécessitent le transport et le lâcher de larves sur la zone à traiter, le procédé conforme à l'invention peut être mis en oeuvre en lâchant des coccinelles adultes. Ceci facilite le transport, (absence de nourriture, pas de cannibalisme, résistance à la manipulation), et autorise une diminution du nombre d'individus lâchés, dans la mesure où ces adultes demeurent sur place et se reproduisent, ce qui en outre, assure la présence permanente pendant la durée de la culture, d'une population de prédateurs des pucerons. L'ensemble de ces avantages facilite le traitement, et en réduit le coût. La présente Invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples d'obtention et d'utilisation de populations de coccinelles conformes à l'invention. EXEMPLE 1 : MUTAGENESE D'UNE POPULATION DE COCCINELLES Une population de coccinelles Harmonia axyridis Pallas est élevée sur les oeufs (commercialisés par la société BIOTOP) d'Ephestia kuehniella Zeller selon la méthode décrite par SCHANDERL et al. [Entomol. exp. appl. nO 49, p. 235-244 (1988)]. 300 mâles et de 300 femelles sont prélevés, dès l'émergence, dans cette population, mis en élevage en groupe dans une boîte en plastique transparent, et alimentés pendant 3 jours avec les oeufs d'Ephestia kuehniella. Ils sont ensuite soumis pendant 16 heures + 3 heures à un jeûne total, à l'issue duquel on procède à la constitution de lots de 30 adultes. Chaque lot est isolé dans une boîte en plastique dont le fond porte des micro-gouttes d'une solution aqueuse contenant 25 mM d'éthyl-méthyl sulfonate (EMS) et 10% de miel liquide. Les adultes sont maintenus dans ces boites pendant 24 heures à la température du laboratoire; le mutagène est ainsi absorbé par voie orale. Après rinçage avec de liteau, les adultes ayant absorbé le mutagène sont mis en élevage dans les conditions suivantes : 20 0C ; 16 heures d'éclairement, alimentation avec les oeufs d'Ephestia kuehniella. Les mêmes conditions d'élevage sont utilisées pour leurs descendants. La sélection des adultes inaptes au vol est effectuée à partir de la première génération de descendants des coccinelles ayant subi le traitement mutagène. EXEMPLE 2 : SELECTION DE COCCINELLES INAPTES AU VOL La sélection est effectuée sur une population en conditions physiologiques optimales pour l'envol. Ces conditions, qui ont été préalablement déterminées sur une population sauvage d'Harmonia axyridis Paillas, sont les suivantes - élevage à 200C ; 16 heures de photopériode alimentation avec les oeufs d'Ephestia kuehniella - âge au moment du test 5 jours après l'émergence, suivis d'un jour de jeûne complet. Le dispositif d'envol comprend de l'intérieur vers l'extérieur 1 - 20 à 25 baguettes en bois (diamètre 2 mm, hauteur 31 cm) fixées verticalement sur un socle en polystyrène 2 - un tube cylindrique en plastique (diamètre : 30 cm, hauteur 25 cm) dont la paroi interne est badigeonnée de Fluon, substance qui empêche son escalade par les adultes, 3 - une arène carrée (hauteur 1 m, largeur : 1,5 m constituée par une feuille de papier Canson blanc disposée verticalement et portant à sa partie supérieure des étoiles de couleur noire. Les coccinelles sont placées dans le tube cylindrique en plastique, et l'ensemble du dispositif est installé dans une pièce aveugle dont les murs sont blancs, et dans des conditions ambiantes optimales pour l'envol, qui ont été préalablement déterminées sur une population sauvage d' Harmonia axyridis Pallas. Ces conditions sont les suivantes - température : 30 ; - éclairement 10 tubes néons (36 watts, blanc universel) ; durée de l'éclairement 24 heures. Les coccinelles qui sont encore dans le cylindre 24 heures plus tard, et qui présentent une morphologie alaire normale sont conservées. Dans les conditions expérimentales utilisées, 10% en moyenne des adultes de la population sauvage, et plus de 20% des adultes de la première génération de descendants des coccinelles ayant subi le traitement mutagène, demeurent à l'intérieur du cylindre. Les adultes conservées à l'issue de cette première étape de sélection sont croisées entre eux, et la même sélection est effectuée sur la population issue de ce croisement. Le croisement consanguin et la sélection sont répétés à chaque génération suivante. La Figure 1 illustre l'évolution du pourcentage des adultes inaptes au vol au cours des générations successives. Légende de la figure 1 : TTEST : population sauvage utilisée pour déterminer les conditions du test d'envol ; AG1 : première génération de descendants des coccinelles ayant subi le traitement mutagène ; AG2 seconde génération de descendants des coccinelles ayant subi le traitement mutagène, etc... A partir de la sixième génération, plus de 90% des adultes de cette population sont incapables de voler, et à la dixième génération, ce pourcentage dépasse 95%. EXEMPLE 3 : CARACTERISTIQUES DES MUTANTS SELECTIONNES 1) CARACTERISTIQUES BIOLOGIQUES Les principales caractéristiques biologiques et reproductrices des mutants ont été comparées à celles de la souche sauvage d'origine. * Développement larvaire Aucune différence significative n'a été observée entre les deux populations en ce qui concerne la mortalité (larves mutées : 2,7 ; larves témoins 2,0W) et la durée de la croissance (larves mutées : 16,6 + 0,8 jours, larves témoins : 18,8 + 6.2 jours). * Fertilité des oeufs La Figure 2 montre que le pourcentage d'éclosion des oeufs chez les mutants est sensiblement inférieur à celui de la souche témoin. Dans la population témoin, ce pourcentage est de l'ordre de 85% alors qu'il est de 70% dans la population mutée. La durée d'incubation des oeufs n'est pas significativement différente (t = 0,7) chez la souche mutée (2,9 + 0,4 jours) et la souche témoin (2,8 + 0,5 jours). * Fécondité La fécondité exprimée par le nombre total d'oeufs pondus en 30 jours est comparable (larves mutées :1174 + 348 oeufs ; larves témoins :1225 + 392 oeufs). Les pontes prélevées au cours de chaque génération ont permis de calculer le nombre moyen d'oeufs par ponte. Ce nombre n'est pas significativement différent entre les mutants et la souche témoin (Figure 3). * Poids des adultes Le poids des adultes de la souche mutée (femelles : 34,1 + 0,8 mg ; mâles : 29,6 + 0,9 mg) n'est pas significativement différent (F = 0,39) de celui des adultes témoins (femelles : 35,1 + 0,8 mg ; mâles : 28,1 + 10,9 mg). Cette similitude de poids des adultes indique que les capacités prédatrices des larves dont ils proviennent sont sensiblement identiques à celles des témoins. * Conclusion A l'exception de la fertilité des pontes dont la diminution est parfaitement acceptable dans le cadre d'un élevage de masse et d'une utilisation en lutte biologique, les paramètres biologiques des mutants sont très voisins de ceux observés chez les témoins. 2) CARACTERISTIQUES ETHOLOGIQUES * Comportement d'envol résiduel Le comportement d'envol de la souche mutée (appartenant à la 8ème génération) a été comparé, en extérieur, avec celui de la souche témoin. Le dispositif expérimental utilisé pour cette expérience a été placé à l'extérieur, en présence de cibles attractives (soleil, arbres divers). Il comprend a) une aire ouverte de 25 m2 divisée en carrés de 50 cm de côté référencés par un système (i ;j) de coordonnées (i de A à J ; j de 1 à 10) b) une bande extérieure (nommée OUT ) qui entoure l'aire précédente, et qui est également divisée en carrés de 50 cm de coté, dont chacun est référencé par les mêmes coordonnées que celles du carré intérieur immédiatement adjacent, accompagnées du terme out . c) le dispositif d'envol constitué notamment par une tige d'envol (H : 60 cm) placée au centre de l'aire, dans un cylindre de 6 cm de hauteur et 15 cm de diamètre, dont la paroi interne est recouverte de Fluon. Chaque expérimentation a été effectuée sur 100 adultes témoins et 100 adultes mutants, placés dans le dispositif par lots successifs de 20 individus (10 femelles, 10 mâles). Les lots d'adultes mutés et d'adultes témoins ont été testés en alternance. On surveille le comportement des adultes tout au long de l'expérience, et pour chacun d'entre eux on note soit les coordonnées de la case de l'aire intérieure dans laquelle il a touché le sol, soit les coordonnées de la case OUT au dessus de laquelle il est passé. Les résultats de cette expérimentation sont illustrés par la Figure 4 : l'aire intérieure et la bande extérieure out sont schématisées par un plan horizontal divisé en carrés ; l'emplacement de la tige d'envol est schématisé par un trait vertical ; pour chaque case, le nombre d'adultes ayant touché le sol dans cette case (pour les cases de l'aire intérieure), ou étant passés au dessus (pour les cases de la zone out ) est représenté par une barre verticale. La Figure 4a montre que 85% des adultes témoins quittent en volant la surface expérimentale avec une orientation privilégiée (A10 à J10) qui correspond à la direction des arbres. 15% d'entre eux ont atterri au voisinage de la tige d'envol (les adultes utilisés pour cette expérience n'ont pas été placés préalablement dans les conditions physiologiques les plus favorables au vol). La figure 4b montre que 100% des adultes mutés sont tombés à moins d'un mètre de la tige d'envol, et pour 99% d'entre eux, à moins de 50 cm. Les adultes de la souche mutée conservent les tactismes qui les conduisent à grimper sur des objets verticaux, ce qui leur permet de parvenir au sommet du dispositif d'envol. Ils se laissent ensuite tomber en écartant les élytres et les ailes (chutes amorties). EXEMPLE 4 : UTILISATION DES MUTANTS POUR LA DESTRUCTION DES PUCERONS L'essai a été réalisé dans deux serres (l'une pour les mutants, l'autre pour les témoins) contenant chacune 28 concombres cultivés en culture hors sol et uniformément infestés par le puceron Aphis gossypu Glover. Chacune d'elle a reçu 5 couples par plante (total par serre 140 femelles). L'évolution des populations de coccinelles, de leurs larves, et de pucerons, a été contrôlée deux fois par semaine. Les principaux résultats obtenus sont les suivants * Evolution des populations adultes dans les serres Les résultats sont illustrés par la Figure 5a, qui représente le nombre moyen d'adultes par plante en fonction du temps (en jours) après le lâcher (+ = souche mutée ; I = souche témoin) Dans les deux serres, les populations de coccinelles se réduisent de plus de la moitié au cours des 3 premiers jours après le lâcher, probablement en raison du conditionnement à la proie de substitution utilisée pour leur élevage. Par la suite, le nombre d'adultes dans la serre mutée reste significativement supérieur à celui de la serre témoin. Les adultes mutés sont encore présents en nombre non négligeable lors de l'apparition de leurs descendants (21 jours après le lâcher). Les adultes témoins ont totalement disparu de la serre le 14sème jour après le lâcher. * Evolution des pontes Les résultats sont illustrés par la Figure 5b, qui représente le nombre moyen de pontes par plante en fonction du temps (en jours) après le lâcher (+ = souche mutée ; I = souche témoin). Les deux souches déposent un nombre important d'oeufs principalement sur les plantes. Mais du fait de la meilleure sédentarisation des adultes mutés, la période de ponte de ces derniers est beaucoup plus longue. * Population larvaire Les résultats sont illustrés par la Figure 5c, ème qui représente le nombre moyen de larves de 4rem' stade par plante en fonction du temps (en jours) après le lâcher (+ = souche mutée ; I = souche témoin). Les deux souches ont donné naissance à une population larvaire très importante. Dans la serre contenant les mutants, au moment du pic de population, on a dénombré environ 4200 larves de 4ème stade, ce qui correspond à une multiplication par un facteur 30 par rapport au nombre initial de femelles lâchées. Les nymphes correspondantes ont été récoltées de façon à ne laisser qu'environ 5 à 7 couples par plante. * Activité reproductrice Les adultes mutés nés dans la serre ont présenté une activité reproductrice quantitativement comparable à celle de leurs parents. Les jeunes larves se sont développées mais à partir du troisième stade, elles ont quitté la serre en raison de la disparition totale des pucerons. Pour la même raison, les adultes mutés ont présenté progressivement le même comportement de fuite (comme le montre également la Figure 5a). * Efficacité du traitement : (Figure 6). Cette efficacité est évaluée par l'évolution des populations de pucerons au cours du temps ; les résultats sont illustrés par la figure 6. Les populations de pucerons sont échantillonnées à l'aide de classes d'infestation des feuilles (en ordonnée), allant de 1 à 7 (classe 1 : aucun puceron classe 2 : 25t de la feuille infestée ; classe 7 : feuille totalement infestée). Les résultats sont exprimés par la fréquence des feuilles dans chaque classe (en abscisse). Les graphiques 6a à 6e représentent les mesures effectuées à différents temps après le lâcher - 6a : Jour du lâcher - 6b : 7 jours après le lâcher - 6c : 17 jours après le lâcher - 6d : 25 jours après le lâcher - 6e : 38 jours après le lâcher. Le jour du lâcher, la serre était déjà fortement infestée (classes 2 à 5 dominantes). . La densité des proies a augmenté pendant la période de ponte et de développement des jeunes stades larvaires de la coccinelle, jusqu'à atteindre un niveau qui inhibe la production de concombres (7 jours après le lâcher). Toutefois, les observations ont montré que les jeunes larves de 1 et de 2 eue stade ont une certaine efficacité mais la méthode d'échantillonnage utilisée n'est pas suffisamment précise pour l'apprécier. A partir de 178"" jour après le lâcher, les populations d'A gossypii ne cessent de décroître sous l'action des larves des deux derniers stades et disparaissent complètement 40 jours après le lâcher. La production de concombres est ensuite redevenue normale. REVENDICATIONS 1) Procédé d'obtention de coccinelles inaptes au vol, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une étape de sélection, à partir d'une population de coccinelles adultes, des individus inaptes au vol et présentant une morphologie alaire normale, au moyen d'un dispositif permettant le tri des coccinelles sur la base de leur aptitude au vol. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend a) le traitement d'une population de coccinelles par un agent mutagène, suivi de b) la mise en oeuvre de l'étape de sélection parmi les descendants de la population traitée. 3) Procédé selon une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il comprend en outre c) le croisement entre eux des individus inaptes au vol et morphologiquement normaux issus de l'étape de sélection. 4) Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend en outre d) la mise en oeuvre de l'étape de sélection parmi les descendants du croisement c). 5) Procédé selon une quelconque des revendications 3 à 4, caractérisé en ce que les étapes c) et/ou d) sont répétées au moins une fois. 6) Dispositif pour le tri des coccinelles sur la base de leur aptitude au vol, caractérisé en ce qu'il comprend - au moins un support d'envol constitué par un élément long et étroit, de type tige ou baguette, disposé verticalement, d'environ 20 à 100 cm de hauteur, dont la section à l'extrémité supérieure est de l'ordre de quelques mm et réalisé dans un matériau permettant son escalade par les coccinelles adultes, ledit ou lesdits support(s) étant entouré(s), à une distance variant entre 20 et 50 cm, par une enceinte verticale ouverte à sa partie supérieure, dont la hauteur est sensiblement égale, ou inférieure de quelques centimètres à celle du support d'envol, et dont la surface interne est conçue de manière à interdire son escalade par les coccinelles adultes. 7) Dispositif selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend également des signaux visuels incitant les coccinelles à l'envol, disposés autour de l'enceinte et à l'extérieur de celle-ci. 8) Coccinelles mutantes susceptibles d'être obtenues par le procédé selon une quelconque des revendications 1 à 5. 9) Population de coccinelles susceptible d'être obtenue par le procédé selon une quelconque des revendications 1 à 5. 10) Utilisation de coccinelles mutantes selon la revendication 8 pour la destruction d'insectes aphidiens. 11) Procédé de lutte contre les insectes aphidiens, caractérisé en ce qu'il comprend le lâcher, sur la zone à traiter, de coccinelles mutantes selon la revendication 8.