Brevet FR2759298A1 — publié le 19980814

La présente invention se rapporte à des associations agent(s) de transfection cationique(s)/ADN dont les particules sont stabilisées en taille à l'aide d'un agent de surface non ionique et à leurs utilisations en thérapie génique. De nombreuses maladies génétiques sont associées à un défaut d'expression et/ou une expression anormale, c'est à dire déficiente ou excessive, d'un ou plusieurs acides nucléiques. La thérapie génique a pour principal objectif de corriger ce type d'anomalies génétiques par le biais de l'expression cellulaire in vivo ou in vitro de gènes clonés. Aujourd'hui, plusieurs méthodes sont proposées pour la délivrance intracellulaire de ce type d'information génétique. L'une d'entre elles, en particulier, repose sur l'emploi de vecteurs chimiques ou biochimiques. Les vecteurs synthétiques ont deux fonctions principales, complexer l'ADN à transfecter et promouvoir sa fixation cellulaire ainsi que son passage à travers la membrane plasmique et, le cas échéant, à travers les deux membranes nucléaires. Parmi les vecteurs synthétiques développés, les polymères cationiques de type polylysine et DEAE dextran ou encore les lipofectants sont les plus avantageux. Un progrès important a été accompli dans ce mode de transfection avec le développement d'une technologie basée sur l'emploi d'agents de transfection cationiques de type lipofectants et plus précisément de lipides cationiques. Il a ainsi été mis en évidence qu'un lipide cationique chargé positivement, le chlorure de N-[1-(2,3- dioleyloxy)propyl]-N,N l\i'-trimethylammonium (DOTMA), interférait, sous la forme de liposomes ou de petites vesicules. spontanement avec de l'ADN, qui est chargé négativement, pour former des complexes lipides-ADN, capables de fusionner avec les membranes cellulaires, et permettait ainsi la délivrance intracellulaire de l'ADN. Depuis le DOTMA, d'autres lipides cationiques ont été développés sur ce modèle de structure groupe lipophile associé à un groupement amino via un bras dit "spacer" Parmi ceux-ci, on peut plus particulièrement citer ceux comprenant à titre de groupement lipophile deux acides gras ou un dérivé du cholestérol, et comportant, en outre, le cas échéant, à titre de groupement amino, un groupement d'ammonium quaternaire. Les DOTAP, DOBT ou le ChOTB peuvent notamment être cités à titre représentatifs de cette catégorie de lipides cationiques. D'autres composés, comme les DOSC et ChOSC, se caractérisent par la présence d'un groupement choline à la place du groupement d'ammonium quaternaire. Une autre catégorie de lipofectants, les lipopolyamines, a également été décrite. De manière générale, il s'agit d'une molécule amphiphile comprenant au moins une région hydrophile polyamine associée par une région dite spacer à une région lipophile. La région polyamine des lipopolyamines, chargée cationiquement, est capable de s'associer de manière réversible avec l'acide nucléique, chargé négativement. Cette interaction compacte fortement l'acide nucléique. La région lipophile rend cette interaction ionique insensible au milieu externe, en recouvrant la particule nucléolipidique formée d'une pellicule lipidique.Dans ce type de composés, le groupement cationique peut être représenté par le radical L-Scarboxyspermine qui contient quatre groupements d'ammonium, deux primaires et deux secondaires. Les DOGS et DPPES en font notamment partie Ces lipopolyamines sont tout particulierement efficaces pour la transfection de cellules endocrines primaires. A tire représentatif de cette derniere famille de composes on peut plus particulièrement faire état des lipopolyamines décrites notamment dans les demandes de brevet Wu96/17823 et PCT/FR96/017774. Toutefois, I'efficacité de ces vecteurs synthétiques reste à améliorer notamment en terme de complexation avec l'acide nucléique et plus précisément sur le plan de la stabilité des particules de ces complexes nucléolipidiques. En effet, avec les formulations classiques acides nucléiques/agent de transfection cationique on assiste fréquemment et rapidement à un phénomène d'aggrégation des particules de complexes. De tels agrégats possèdent évidemment une taille difficilement compatible avec une transfection thérapeutique. Une des solutions proposées jusqu'ci pour prévenir ce type de phénomène de précipitation, consiste à introduire dans la formulation, I'agent de transfection cationique, comme par exemple le lipofectant, en quantité excessive c'est à dire dans un rapport de charge lipofectant/acides nucléiques de l'ordre de 10 voire plus. Outre le fait qu'une telle solution n'est pas toujours efficace, elle n'est pas totalement satisfaisante sur le plan de l'innocuité. Les agent de transfection cationiques comme les lipofectants et polymères cationiques sont en soit des composés qui, en quantités importantes, risquent de présenter une toxicité relative pour les cellules les incorporant. Il serait donc particulièrement intéressant de disposer sur le plan thérapeutique de formulations agents de transfection cationiques/acides nucléiques possédant des rapports de charges réduits et néammoins stabilisées dans le temps sous la forme de particules non aggrégées. Or, comme il I'est énoncé précédemment, les zones de concentrations acides nucléiques/lipofectants répondant a de tels rapports de charges sont généralement associées a un état physique instable. On assiste rapidement à un phénomene d'aggrégation des particules nucléolipidiques. Qui plus est, on sait également que la présence d'un sel de type NaCI classiquement mis en oeuvre dans les formulations agents de transfection cationiques/acides nucléiques, peut induire à certaines concentrations, la précipitation des particules nucléolipidiques. Ainsi, la gamme de concentration en agent de transfection pour laquelle on observe la précipitation sera d'autant plus grande que la concentration en sel sera élevée. La présente invention a précisément pour objectif de valoriser ces zones de concentrations agent de transfection cationique/acides nucléiques, intéressantes sur le plan de l'innocuité pour leurs quantités réduites en vecteur et également sur le plan interférence avec d'autres protéines compte tenu de leur charge réduite. En effet, lorsque les complexes sont relativement peu chargés, le risque qu'ils interfèrent avec les protéines du sérum in vivo est significativement réduit. Ceci est bien entendu particulièrement avantageux pour le transfert d'acides nucléiques in vivo (Remy,J.S. Proc Natl Acad Sci USA 1995; 92, 1744-1748). De nombreux articles font état de ce type d'interactions entre les protéines du sérum et des liposomes (Senior,J.H. et al. Biochim Biophys Acta 1991, 1070, 173-179; Hernandez-Caselles, T et al. MoMolecular and cellular Biochemistry 1993, 120 119-126; Oku, N. et al. Biochim Biophys Acta 1996, 1280 149-154). Des données ont également été publiées sur l'activation du système du complément par des complexes à base d'ADN utilisés pour la thérapie génique. Le degré d'activation du complément dépend du rapport cation/ADN (ou rapport de charge) Ce dernier phénomène est surtout vrai pour les polycations comme les polylysines, les lipospermines (par ex DOGS). L'activation du complément est moins sensible au rapport de charge pour les ammoniums quaternaires comme le DOTAP, le DC Chol le DOTMA (Plank, C et al. Human Gene Therapy 1996, 7, 1437-1446) En consequence il serait particulierement intéressant de disposer sur le plan thérapeutique de formulations en complexes agents de transfection cationiques/acides nucléiques à concentration élevée en acides nucléiques et/ou à des rapport de charge réduits voire proches de la neutralité et qui soient en outre stabilisées sous une forme fluide de type colloïdale c'est à dire non agrégées, deux spécificités naturellement inconciliables semble t-il. De manière inattendue, la demanderesse a mis en évidence que l'adjonction d'un agent de surface non ionique à des particules de complexes agent(s) de transfection cationique(s)/acides nucléiques, naturellement instables c'est à dire susceptibles, d'évoluer rapidement vers la formation d'aggrégats, permettait de s'opposer efficacement à ce phénomène et donc de stabiliser les particules de complexes à une taille de particule inférieure à ou de l'ordre de 160nm. La présente invention a pour premier objet une composition utile en thérapie génique comprenant des particules de complexes agent(s) de transfection cationique(s)/acides nucléiques caractérisée en qu'elle incorpore en outre au moins un agent de surface non ionique en quantité suffisante pour stabiliser la tailles desdites particules à une dimension inférieure ou égale à 160nm. Au sens de l'invention, on entend désigner par des particules stabilisées, des particules dont la taille n'est pas susceptible d'évoluer au cours du temps, lorsque notamment ces particules sont maintenues en dispersion dans une solution. Contrairement aux formulations classiques, c'est à dire exempt d'agent de surface non ionique, les compositions revendiquées peuvent être conservées de manière plus prolongée dans le temps sans que puisse être notée une quelconque modification, de type aggrégation notamment, au niveau de cette dispersion. La taille des particules ainsi stabilisées évoluent generalement entre 50 et 160nm, de préférence entre 75 et 150nm En absence de l'agent de surface non ionique revendiqué, les particules de complexes présentes dans la composition revendiquée, conduisent spontanément à des aggrégats particulaires de taille supérieure à 160 nm. Les agents de surface non ioniques, conformes à la présente invention, possèdent de préférence au moins un segment hydrophobe et au moins un segment hydrophile. La partie hydrophobe peut etre aussi bien une chaîne aliphatique, un polyoxyalkylène, un polyester d'alkylidène, le cholestérol. Quant à la partie hydrophile, il peut s'agir d'un polyoxyalkylène, d'un mono- ou di-saccharide. De manière préférée, I'agent de surface mis en oeuvre dans le cadre de la présente invention est ou dérive d'un polyol non ionique et plus particulièrement d'un polyoxyalkyléne avec des groupements alkylêne de longueurs et/ou de conformations différentes ou non, au sein du polymère. Plus préférentiellement, il répond à la formule générale suivante: HO(CH2CH20)a(CH(CH3)CH20H)b(CH2CH20)CH avec a, b et c représentant indépendamment l'un de l'autre des nombres entiers pouvant varier entre 20 et 100. L'agent non ionique est de préférence présent dans les compositions selon l'invention à une concentration comprise entre 1% a 10% poids/volume de ladite composition et plus préférentiellement entre I et 5% poids/volume. La présence d'un tel agent de surface non ionique en association avec les complexes est avantageuse a plusieurs titres Selon l'invention, les agent(s) de transfection cationique(s) et acides nucléiques sont présents dans la composition dans un rapport de charge qui naturellement est propice au développement d'un phénomène d'aggrégation. Ceci sous entend que les charges positives portées par le ou les agent(s) de transfection cationique(s) ne sont qu'en léger excès comparativement aux charges négatives portées par l'acide nucléique complexé, voire au mieux les compensent totalement. Un tel rapport de charge est particulièrement avantageux sur le plan in vivo car moins préjudiciable en terme d'interaction avec le sérum ou autres protéines comme par exemple l'albumine et plus intéressant sur le plan innocuité. A titre illustratif, ce rapport de charge évolue de préférence entre 1 et 6 et plus préférentiellement est infërieur à 4. Enfin, cet agent de surface est tout à fait compatible avec une administration in vivo. Dans le cas des formulations conformes à l'invention il n'est en effet pas nécessaire de procéder à une élimination de cet agent de surface non-ionique, préalablement à leur injection dans les cellules à traitées. Enfin les compositions selon l'invention peuvent être avantageusement stockées. La présence de l'agent de surface non ionique s'oppose efficacement à tout phénomène de précipitation au sein de ladite composition. A titre d'agent de surface préféré selon l'invention on citera tout particulièrement le composé de formule générale OH(CH2CH20)a(CH(CH3)CH20H)b(CH2CH20)cH. avec a égal à 75, b à 30 et c à 75. Par agent de transfection cationique on désigne de préférence selon l'invention les polymeres cationiques et les lipofectants. En ce qui concerne plus particulièrement les lipofectants, on entend couvrir au sens de l'invention, sous cette dénomination, tout composé ou mélange à caractère lipidique et chargé positivement, déjà proposé à titre d'agent actif à l'égard de la transfection cellulaire d'acides nucléiques. De manière générale, il s'agit de molécules amphiphiles comprenant au moins une région lipophile associée ou non à une région hydrophile. A titre représentatif de la première famille de composés, on peut notamment proposer des mélanges lipidiques susceptibles de former des liposomes cationiques. Ces formulations peuvent ainsi contenir du POPC, phosphatidylserine, phosphatidylcholine, cholestérol, lipofectamine ou du maîéimidophénylbutyrylphosphatidyléthanolamine associé à un lipide cationique tel que défini ci-aprés. Selon un mode particulier de l'invention, I'agent lipofectant mis en oeuvre possède une région cationique. A titre illustratif de ce type de lipides cationiques construits sur le modèle de structure groupe lipophile associé à un groupement amino via un bras dit "spacer" on peut plus particulièrement citer le DOTMA et également ceux comprenant à titre de groupement lipophile deux acides gras ou un dérivé du cholestérol, et comportant, en outre, le cas échéant, à titre de groupement amino, un groupement d'ammonium quaternaire. Les DOTAP, DOBT ou le ChOTB peuvent notamment être cités à titre représentatifs de cette catégorie de lipides cationiques D'autres composés, comme les DOSC et ChOSC, se caractérisent par la présence d'un groupement choline a la place du groupement d'ammonium quaternaire. Avantageusement, les lipofectants convenant à l'invention peuvent également être choisis parmi des lipopolyamines dont la région polyamine répond à la formule générale H2N-(-(CH)m-NH-)n-H, dans laquelle m est un nombre entier supérieur ou égal à 2 et n est un nombre entier supérieur ou égal à 1, m pouvant varier entre les différents groupes de carbone compris entre 2 amines, cette région polyamine étant associée de manière covalente à une région lipophile de type chaîne hydrocarbonée, saturée ou non, du cholestérol, ou un lipide naturel ou synthétique capable de former des phases lamellaires ou héxagonales. Cette région polyamine est plus préférentiellement représentée par la sperinine, la thermine ou un de leurs analogues ayant conservé ses propriétés de liaison à l'acide nucléique. La demande de brevet EP 394 111 décrit des lipopolyamines de cette famille susceptibles d'être mises en oeuvre dans le cadre de la présente invention. A titre représentatif de ces lipopolyamines on peut plus particulièrement citer la dioctadécylamidoglycyl spermine (DOGS) et la 5-carboxyspermylamide de la palmitoylphosphatidylethanolamine (DPPES). Les lipopolyamines décrites dans la demande de brevet W096/17823 peuvent également etre utilisées avantageusement selon l'invention. Elles sont représentées par la formule générale dans laquelle R représente où -X et X' représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'oxygène, un groupement méthylène -(CH2)q- avec q égal à 0, 1, 2 ou 3, ou un groupement amino -NH- ou -NR'- avec R' représentant un groupement alkyle en C1 à C4, - Y et Y' représentent indépendamment l'un de l'autre un groupement méthylène, un groupement carbonyle ou un groupement C=S, - R3, R4 et R5 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un radical alkyle, substitué ou non, en C1 à C4, avec p pouvant varier entre 0 et 5, - R6 représente un dérivé du cholestérol ou un groupement alkyle amino -NRIR2 avec Rl et R2 représentant indépendamment l'un de l'autre un radical aliphatique, saturé ou non, linéaire ou ramifié en C12 à C22 A titre représentatif de ces lipopolyamines on peut tout particulièrement citer le (Dioctadécyl-carbamoylméthoxy)-acétate de 2-5 -bis-(3 -amîno-propylamino)-pentyle et le (Dioctadécyl-carbamoylméthoxy)-acétate de 1,3-bis-(3-amino-propylamino)-2 propyle. Enfin plus récemment, de nouvelles lipopolyamines, valorisables également dans le cadre de la présente invention, ont été décrites dans la demande de brevet PCT/FR 96/017474. Il s'agit de composés de formule générale comme suit Dans laquelle - R I, R2 et R3 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupement -(CH2)q-NRR' avec q pouvant varier entre 1, 2, 3, 4, 5 et 6 ceci de manière indépendante entre les différents groupements Rl, R2 et R3 et R et R' représentant indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupement -(CH2)q'-NH2 , q' pouvant varier entre 1, 2, 3, 4, 5 et 6 ceci de manière indépendante entre les différents groupements R et R', - m, n et p représentent, indépendamment l'un de l'autre, un nombre entier pouvant varier entre 0 et 6 avec lorsque n est supérieur à 1, m pouvant prendre des valeurs différentes et R3 des significations différentes au sein de la formule générale et -R4 représente un groupement de formule générale dans laquelle - R6 et R7 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un radical aliphatique, saturé ou non, en C10 à C22 avec au moins l'un des deux groupements étant différent de l'hydrogène, u est un nombre entier choisi entre 0 et 10 avec lorsque u est un entier supérieur à I R5, X, Y et r pouvant avoir des significations différentes au sein des différents motifs [ X-(CHR5)r-Y], -X représente un atome d'oxygène, de soufre ou un groupement amine monoalkylé ou non, - Y représente un groupement carbonyle ou un groupement méthylène, - R5 représente un atome d'hydrogène ou une chaine latérale d'acide aminé naturel , le cas échéant substituée et -r représente un entier variant entre 1 et 10 avec lorsque r est égal à 1, R5 représentant une chaine latérale d'acide aminé naturel substitué ou non et lorsque r est supérieur a 1, R5 représentant un atome d'hydrogene. A titre représentatif de ces lipopolyamines on peut plus particulièrement mentionner celles qui suivent: { H2N(CH2)3 } 2N(CH2)4N { (CH2)3 NH2 } (CH2)3 NHCH2COGlyN[(CH2) 17C143]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3 NHCH2COGlyN[(CH2) 1 8]2 H2N(CH2)3 NH(CH2)4NH(CH2)3 NHCH2COArgN[(CH2) 18]2 De manière particulièrement avantageuse, on peut utiliser dans le cadre de l'invention la lipofectamine, la dioctadécylamidoglycyl spermine (DOGS) la 5carboxyspermylamide de la palmitoylphosphatidylethanolamine (DPPES), le (Dioctadécyl-carbamoylméthoxy)-acétate de 2-5-bis-(3-amino-propylamino)-pentyle, le (Dioctadécyl-carbamoylméthoxy)-acétate de 1,3 -bis-(3 -amino-propylamino)-2 propyle, le (H2N(CH2)3 }2N(CH2)4N{ (CH2)3NH2 } (CH2)3 NHCH2COGlyN[(CH2) 1 7-CH312., le H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH 1812, le H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CH2) 1812 et/ou le H2N(CH2)3NH(CH2 )JNH(CH2)?NHCH2COGlyN[(CHZ) 17CH3]2. Il peut également s'agir de lipides cationiques incorporant un ou plusieurs groupements guanidinium et/ou amidinium, comme plus particulièrement ceux décrits par J.M. LEHN et al ( Proc. Natl. Acad. Sci. U S.A, 1996, 93, 9682-9686). Selon la présente invention, le polymère cationique susceptible d'être mis en oeuvre a titre d'agent de transfection cationique est de préférence un composé de formule generale I comme suit, dans laquelle - R peut être un atome d'hydrogène ou un groupe de formule - n est un nombre entier compris entre 2 et 10; - p et q sont des nombres entiers, étant entendu que la somme p+q est telle que le poids moléculaire moyen du polymère soit compris entre 100 et 107 Da. Il est entendu que, dans la formule (I) ci-dessus, la valeur de n peut varier entre les différents motifs p. Ainsi, la formule (I) regroupe à la fois les homopolymères et les hétéropolymères Plus préférentiellement, dans la formule (I), n est compris entre 2 et 5. En particulier, les polymères de polyéthylène imine (PEI) et polypropylène imine (PPI) présentent des propriétés tout à fait avantageuses. Les polymères préférés pour la mise en oeuvre de la présente invention sont ceux dont le poids moléculaire est compris entre I 103 et 5. 106 A titre d'exemple, on peut citer le polyéthylène imine de poids moléculaire moyen 50 000 Da (PEl50K), le polyéthylène imine de poids moléculaire moyen 22 000 Da (PE122K) ou le polyethylène imine de poids moleculaire moyen 800 000 Da (PE1800K). Les PEISOK, PEI22K et PE1800K sont accessibles commercialement. Quant aux autres polymères représentés par la formule générale I, ils peuvent être préparés selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR 94 08735. Dans les compositions de la présente invention, I'acide nucléique complexé avec l'agent de transfection cationique peut être aussi bien un acide désoxyribonucléique qu'un acide ribonucléique. II peut s'agir de séquences d'origine naturelle ou artificielle, et notamment d'ADN génomique, d'ADNc, d'ARNm, d'ARNt, d'ARNr, de séquences hybrides ou de séquences synthétiques ou semi-synthétiques d'oligonucléotides modifiés ou non. Ces acides nucléiques peuvent être d'origine humaine, animale, végétale, bactérienne, virale, etc. Ils peuvent être obtenus par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par criblage de banques, par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques. Ils peuvent être modifiés chimiquement. Concernant plus particulièrement les acides désoxyribonucléiques, ils peuvent être simple ou double brin de meme que des oligonuléotides courts ou des séquences plus longues Ces acides désoxyribonucléiques peuvent porter des gènes thérapeutiques, des séquences régulatrices de la transcription ou de la réplication, des séquences antisens modifiées ou non, des régions de liaison a d'autres composants cellulaires, etc. Au sens de l'invention, on entend par gene thérapeutique notamment tout gène codant pour un produit protéique ayant un effet thérapeutique. Le produit protéique ainsi codé peut etre une protéine. un peptide, etc. Ce produit protéique peut être homologue vis-a-vis de la cellule cible (c'est-a-dire un produit qui est normalement exprimé dans la cellule cible lorsque celle-ci ne présente aucune pathologie). Dans ce cas, l'expression d'une protéine permet par exemple de pallier une expression insuffisante dans la cellule ou l'expression d'une protéine inactive ou faiblement active en raison d'une modification, ou encore de surexprimer ladite protéine. Le géne thérapeutique peut aussi coder pour un mutant d'une protéine cellulaire, ayant une stabilité accrue, une activité modifiée, etc. Le produit protéique peut également être hétérologue vis-à-vis de la cellule cible. Dans ce cas, une protéine exprimée peut par exemple compléter ou apporter une activité déficiente dans la cellule, lui permettant de lutter contre une pathologie, ou stimuler une réponse immunitaire. Parmi les produits thérapeutiques au sens de la présente invention, on peut citer plus particulièrement les enzymes, les dérivés sanguins, les hormones, les lymphokines interleukines, interférons, TNF, etc (FR 9203120), les facteurs de croissance, les neurotransmetteurs ou leurs précurseurs ou enzymes de synthèse, les facteurs trophiques BDNF, CNTF, NGF, lGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, HARP/pléiotrophine, etc la dystrophine ou une minidystrophine (FR 9111947), la protéine CFTR associée à la mucoviscidose, les gènes suppresseurs de tumeurs p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev, etc (FR 93 04745), les gènes codant pour des facteurs impliqués dans la coagulation Facteurs Vll, VIII, IX, les gènes intervenant dans la réparation de l'ADN, les gènes suicides (thymidine kinase, cytosine déaminase), les gènes de l'hémoglobine ou d'autres transporteurs protéiques, les gènes correspondant aux protéines impliquées dans le métabolisme des lipides, de type apolipoprotéine choisie parmi les apolipoprotéines A-I, A-II, A-IV, B, C-I, C-II, C-III, D, E, F, G, H, J et apo(a), les enzymes du métabolisme comme par exemple la lipoprotéine lipase, la lipase hépatique, la lécithine cholestérol acyltransterase, la 7 alpha cholestérol hydroxylase la phosphatidique acide phosphatase, ou encore des protéines de transfert de lipides comme la protéine de transfert des esters de cholesterol et la protéine de transfert des phospholipides, une protéine de liaisons des HDL ou encore un récepteur choisi par exemple parmi les récepteurs LDL, récepteurs des chylomicrons-remnants et les récepteurs scavenger.etc. L'acide nucléique thérapeutique peut également être un gène ou une séquence antisens, dont l'expression dans la cellule cible permet de contrôler l'expression de gènes ou la transcription d'ARNm cellulaires. De telles séquences peuvent, par exemple, être transcrites dans la cellule cible en ARN complémentaires d'ARNm cellulaires et bloquer ainsi leur traduction en protéine, selon la technique décrite dans le brevet EP 140 308. Les gènes thérapeutiques comprenent également les séquences codant pour des ribozymes, qui sont capables de détruire sélectivement des ARN cibles (EP 321 201). Comme indiqué plus haut, I'acide nucléique peut également comporter un ou plusieurs gènes codant pour un peptide antigénique, capable de générer chez l'homme ou l'animal une réponse immunitaire. Dans ce mode particulier de mise en oeuvre, I'invention permet donc la réalisation soit de vaccins soit de traitements immunothérapeutiques appliqués à l'homme ou à l'animal, notamment contre des microorganismes, des virus ou des cancers. Il peut s'agir notamment de peptides antigéniques spécifiques du virus d'Epstein Barr, du virus HIV, du virus de l'hépatite B (EP 185 573), du virus de la pseudo-rage, du "syncitia forming virus, d'autres virus ou encore spécifiques de tumeurs (EP 259 212). Préférentiellement, I'acide nucléique comprend également des séquences permettant l'expression du gène thérapeutique et/ou du gene codant pour le peptide antigénique dans la cellule ou l'organe désiré. Il peut s'agir des séquences qui sont naturellement responsables de l'expression du gène considéré lorsque ces séquences sont susceptibles de fonctionner dans la cellule infectée Il peut également s'agir de séquences d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Notamment, il peut s'agir de séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus. A cet égard, on peut citer par exemple les promoteurs des gènes E1A, MLP, CMV, RSV, etc. En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, etc. Il peut aussi s'agir de promoteur, inductible ou répressible. Par ailleurs, I'acide nucléique peut également comporter, en particulier en amont du gène thérapeutique, une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé dans les voies de sécrétion de la cellule cible. Cette séquence signal peut être la séquence signal naturell transfectantes, un composé intervenant, directement ou non, au niveau de la condensation d"acides nucléiques. Ce composé est constitué, en tout ou partie, de motifs peptidiques (KTPKKAKKP) et/ou (ATPAKKAA), le nombre des motifs pouvant varier entre 2 et 10. Un tel agent peut également dériver d'une partie d'une histone, d'une nucléoline, d'une protamine et/ou de l'un de leurs dérivés. (W096/25508). Un tel composé peut être avantageusement incorporée dans la composition revendiquée. Les compositions selon l'invention peuvent également mettre en oeuvre un ou plusieurs éléments de ciblage permettant de diriger les complexes nucléiques vers des recepteurs ou des ligands à la surface de la cellules. A titre d'exemple, la composition de la présente invention peut comprendre un ou plusieurs anticorps dirigés contre des molécules de la surface cellulaire, ou encore un ou plusieurs ligands de recepteurs membranaires comme l'insuline, la transferrine, l'acide folique ou tout autre facteur de croissance, cytokines ou vitamines. Avantageusement, la composition peut utiliser des lectines, modifiées ou non, afin de cibler des polysaccharides particuliers à la surface de la cellule ou sur la matrice extracellulaire avoisinante. Des protéines à motif RGD, des peptides contenant un tandem de motifs RGD, cyclique ou non, ainsi que des peptides polylysine peuvent ainsi être utilisés. Plus récemment, il a également été décrit des peptides ligands, naturels ou synthétiques, intéressants notamment pour leur sélectivité vis à vis de cellules spécifiques et capables de promouvoir efficacement l'internalisation au niveau de ces cellules. ( Bary et al. Nature Medicine, 2, 1996, 299305). Ces agents de ciblages sont généralement conjugués à l'agent de transfection cationique considéré. La présente invention vise egalement un procédé de préparation des compositions revendiquées Plus précisement elle se rapporte a un procédé de préparation d'une composition comprenant des particules de complexes agent(s) de transfection cationique(s)/acides nucléiques, stabilisées en taille, caractérisé en ce que l'agent transfectant et l'acide nucléique sont mis en contact, en présence d'une quantité suffisante en agent de surface non ionique pour stabiliser les particules de complexes nucléiques ainsi formées à une taille inférieure à environ 160nm. Plus précisément, I'un des composants à savoir l'acide nucléique ou le lipofectant est au préalable mélangé à l'agent de surface non ionique avant d'etre mis en présence avec le second composant. On prévient ainsi la manifestation de tout phénomène d'aggrégation qui spontanément se serait manifesté en absence dudit agent de surface non ionique. Les compositions selon l'invention peuvent être formulées en vue d'administrations par voie topique, cutanée, orale, rectale, vaginale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intraoculaire, transdermique, etc. De préférence, les compositions pharmaceutiques de l'invention contiennent un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable, notamment pour une injection directe au niveau de l'organe désiré, ou pour une administration par voie topique (sur peau et/ou muqueuse). Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables. Les doses d'acide nucléique utilisées pour l'injection ainsi que le nombre d'administrations peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée. du gene a exprimer, ou encore de la durée du traitement recherchée En ce qui concerne plus particulierement le mode d'administration, il peut s'agir soit d'une injection directe dans les tissus ou les voies circulatoires, soit d'un traitement de cellules en culture suivi de leur réimplantation in vivo, par injection ou greffe. Les compositions selon l'invention sont particulièrement avantageuses sur le plan thérapeutique. On peut désormais envisager selon la présente invention d'administrer efficacement des complexes acides nucléiques de taille convenable et de rapport de charge réduits ce qui est particulièrement bénéfique sur le plan in vivo. Les interactions sérum/complexes nucléiques généralement observées sont avec les compositions revendiquées siginificativement atténuées. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples et figures qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Liste des figures: Figure 1 Effet du poloxalkol sur l'évolution de la taille des complexes RPR120535/ADN, au rapport 1,7 molRPR120535/mol bp, en fonction du temps. Figure 2. Effet du poloxalkol sur l'évolution de la taille des complexes RPR120531/ ADN, au rapport 1,7 molRPR120531/mol bp en fonction du temps. Figure 3. Effet du poloxalkol sur les associations RPR120535/ADN Figure 4 Effet du poloxalkol sur l'activité luciférase (rlu/Sul de lysat) des complexes RPR120535/ADN, au rapport 1,7 mol RPR120535/mol bp. MATERIELS - L'agent de surface mis en oeuvre dans les exemples ci-après est le poloxalkol de formule: OH(CH2CH20)75(CH(CH3)CH20H)30(CH2CH20)75H. Il est commercialisé sous la marque Pluronic F688. La solution mère de poloxalkol mise en oeuvre dans les exemples qui suivent est à 10 % (poids/volume) dans l'eau. - L'ADN utilisé pour réaliser les échantillons est le plasmide de pXL2774 décrit dans le PCT/FR 96/01414. Il est utilisé à une concentration de 0,7 mg/ml dans un tampon Tris/EDTA (l0inM/0,lmM) pH7, 5. - Les lipides cationiques utilisés sont: -H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3 NHCH2COGlyN[(CH2) 1 8]2 (lu) 120535) (sel d'acétate) et - H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3 NHCH2COArgN[(CH2) 1 s] (RP12053 1) (sel d'acide trifluoroacétique) tous deux décrits dans le PCT/FR 96/01774. Ils sont utilisés à une concentration de 5 mM dans de l'eau où ils sont solubilisés par chauffage à 50 "C pendant 25 minutes, les solutions étant ensuite refroidies à température ambiante. METHODES - La mesure du diamètre hydrodynamique est réalisée avec un Coulter N4Plus, en utilisant des cuves plastiques (quatre faces transparentes) remplies avec 800 Cil des différentes solutions, la mesure étant realisée a 90 C en mode unimodale. - Les mesures de fluorescence sont realisees sur Perkin Elmer LS50B, en utilisant des longueurs d'onde d'excitation et d'émission respectivement de 260 nm et 590 nm. Les largeurs de fentes pour l'excitation et l'émission sont réglées à 5 nm. La valeur de fluorescence est enregistrée après ajout de 5 g de Bromure d'étidium/ml en concentration finale. EXEMPLE 1 Influence du poljxalkol sur la taille des complexes RPR120535/ADN. Le plasmide (10 klg/ml) est mis dans une solution contenant 150 mM NaCI et différentes concentration en poloxalkol. Le lipofectant RPR120535 est ensuite ajouté pour obtenir un rapport 1,7 mol RPR120535/mol bp. La taille des complexes est ensuite mesurée par spectroscopie de corrélation de photons selon le protocole décrit en Méthodes. Les résultats sont présentés en figure 1. On note qu'en absence de poloxalkol (O), la taille des particules évolue de 274 nm à jusqu'à un maximum de 1000 nm en quelques dizaine de minutes. Puis on observe un précipité après quelques heures d'incubation. En revanche, en présence de 0,1 % (+) de poloxalkol, on observe une augmentation de la taille des complexes, taille qui demeure stable pour une concentration de 0,8 (O) et I % () de poloxalkol et n'évolue pas au delà de 1 50nm. L'incubation du lipofectant seul avec le poloxalkol à 1% (poids/volume) ne forme pas de particules détectables par Diffusion Quasi Elastique de la lumière. De même lorsque l'ADN est incubé avec le poloxalkol à 1% aucune particule ne peut être détectée. EXEMPLE 2 Influence de poloxalkol sur la taille des complexes RPR120531 /ADN. Pour ce faire I'exemple n=l 1 a été répeté avec le lipide cationique, RPR12053 1 Le plasmide (10 lig/ml) est mis dans une solution contenant 1 50 mM NaCI à différentes concentration en poloxalkol. Le RPR120531 est ensuite ajouté pour obtenir un rapport 1,7 mol RPR120535/mol bp. La taille des complexes est mesurée par spectroscopie de corrélation de photons (Coulter N4plus). Les résultats sont présentés en figure 2. On note qu en absence de poloxalkol la taille des complexes RPR 120531/ADN évolue de 234 nm à 590 nm en quelques heures alors qu'elle demeure stable en présence de 0,5% () et 0,9% (O) de poloxalkol. EXEMPLE 3 Contrôle du degré de compaction ADN/lipofectant en présence et en absence de poloxalkol. Il a été vérifié que les particules obtenues en présence de poloxalkol étaient bien des particules issues de l'association de l'ADN avec le lipide cationique. A ces fins, des expériences d'insertion d'une sonde, qui fluoresce lorsqu'elle est intercalée dans l'ADN ont été réalisées. Le niveau de fluorescence est important lorsque l'ADN est libre et en revanche faible lorsque celui-ci est inaccessible car compacté au lipide cationique. La figure 3 rend compte des résultats obtenus. On observe les niveaux de fluorescence obtenus après association de l'ADN au lipide cationique en présence et en absence de poloxalkol. Tout d'abord on note que la fluorescence du bromure d'éthidium intercalé à l'ADN n'est pas modifié par la présence ou l'absence de 1% de poloxalkol. Les niveaux de fluorescence des complexes lipide cationique/ADN (1,7 mol RPR120535/mol pb ADN) en présence ou en absence de 1% poloxalkol sont en effet du même ordre. Cette valeur de fluorescence residuelle indique que l'ADN n'est pas accessible pour la sonde. En conclusion . le poloxalkol n'empêche donc pas l'association de l'ADN avec le lipide cationique de se faire normalement EXEMPLE 4 Transfection in vitro avec de I'ADN ou du RPR120535 contenant 1 % de poloxalkol. Nous avons voulu vérifier quel était l'effet du poloxalkol lorsqu'il était mélangé à de l'ADN seul ou à du lipide cationique seul. Pour cela les deux échantillons suivants ont été préparés: Préparation des échantillons Echantillon 1: 10 g ADN/ml dans un milieu contenant 300 mM NaCI et 1 % (poids/volume) de poloxalkol. Echantillon 2: 60 KIM de RPR120535 dans un milieu contenant 300 mM NaCI et 1% poloxalkol. Ces échantillons sont préparés en mélangeant dans l'ordre pour l'échantillon 1: eau, NaCI, ADN, poloxalkol et pour l'échantillon 2, eau, NaCI, poloxalkol et RPR120535 dans les quantités figurant dans le tableau 1 ci-dessous. Essai H20 NaCI (SM) ADN (0.7 mg/ml) poloxalkol(10%) RPR120535(5 mM) 413 30 7.1 50 0 2 414 30 0 50 6 TABLEAU 1 L'activité biologique de ces deux échantillons est testée sur des cellules NIH 3T3. Un volume de 50 ttl des différents échantillons est déposé par puits sur plaque de 24 puits. La transfection est réalisée en absence de sérum de veau foetal Ce dernier est ajouté 2 heures après l'addition des complexes. Les resultats indiquent qu aucun transfert de gene n'est observe avec l'ADN en présence de 1 "o de poloxalkol. en absence de 10 Oo de sérum de veau foetal D'autre part le dosage des protéines totales démontre qu'il n'y a pas de toxicité apparente. EXEMPLE 5 Transfection in vitro avec des solutions de complexes lipofectant RPR120535/ADN stabilisées à différentes concentrations en poloxalkol. On a cherché à apprécier l'incidence de la stabilisation des particules par le poloxalkol sur l'efficacité de transfection de ces particules en présence de poloxalkol. Pour se faire, des échantillons contenant différentes concentrations en poloxalkol ont été préparés. Quatre échantillons de rapport 1,7 moles RPR120535/mol pb d'ADN sont préparés dans un milieu contenant 300 mM NaCI à différentes concentrations en poloxalkol (0, 0,5 %, 0,8 % et 1%; poids/volume): Echantillon 1:1,7 moles RPR120535/mol pb d'ADN, 300 mM NaCI Echantillon 2: 1,7 moles RPR120535/mol pb d'ADN, 300 mM NaCI, 0,5 % poloxalkol Echantillon 3 1,7 moles RPR120535/mol pb d ADN, 300 mM NaCI, 0,8 % poloxalkol Echantillon 4:1,7 moles RPR120535/mol pb d'ADN; 300 mM NaCI, 1 % poloxalkol Ces échantillons ont été préparés en mélangeant dans l'ordre: eau, NaCI, ADN, poloxalkol et RPR120535 dans les quantités figurant en tableau II ci-dessous. Essai H2() NaCI (5M) ADN (0.7 mg/ml) poloxaîkol (10%) RPR120535 (5 mM) l l l l l 737 4X 1 1.4 0 4 2 697 48 11.4 40 4 672 48 11.4 64 4 4 657 48 11.4 80 4 TABLEAU Il * L'échantillon í appartient à une gamme de concentration en lipide cationique où il n'y a pas de stabilité des particules en solution, c'est-à-dire que les particules s'agrègent les unes aux autres pour former de larges paquets d'agrégats qui possèdent des diamètres hydrodynamique important (supérieur à 1000 nm). * L'échantillon 2 a le même rapport lipide cationique/ADN que l'échantillon 1, mais le mélange est réalisé en présence de 0,5 % (poids)/volume de poloxalkol. Cependant cette concentration n'est pas suffisante pour assurer une stabilisation complète des particules (cf exemple N" I Influence d'un polymère non-ionique sur la taille des complexes RPR120535/ADN). * Les échantillons 3 et 4 sont stables, le diamètre hydrodynamique des particules restent aux alentours de 1 50 nm. L'activité biologique des différentes formulations est testée sur des cellules NIH 3T3. Un volume de 50 kil des différents échantillons (à 10 ug ADN/ml) est ajouté par puits. La transfection est réalisée en absence de sérum de veau foetal. Ce dernier est ajouté 2 heures après l'addition des complexes. Les résultats obtenus sont présentés en figure 4. On note en figure 4 que le poloxalkol, quelque soit sa concentration, n'altère pas la transfection iti ro des cellules NIH 3T3. Le poloxalkol ne modifie pas les propriétés de transfection en absence de sérum de veau foetal des complexes RPR120535/ADN au rapport 1,7 mol RPR120535imol bp ADN. REVENDICATIONS 1. Composition utile en thérapie génique comprenant des particules de complexes agent(s) de transfection cationique(s)/acides nucléiques stabilisées caractérisée en ce qu'elle incorpore en outre au moins un agent de surface non ionique en quantité suffisante pour stabiliser la taille desdites particules à une dimension inférieure ou égale à 160nm. 2. Composition selon la revendication I caractérisée en ce que l'agent de transfection cationique et l'acide nucléique y sont présents dans un rapport de charge compris entre 1 et 6. 3. Composition selon la revendication I ou 2 caractérisée en ce que l'agent de transfection cationique et l'acide nucléique y sont présents dans un rapport de charge inférieur à 4. 4. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'agent de surface comprend au moins un segment hydrophobe et au moins un segment hydrophile. 5. Composition selon la revendication 4 caractérisée en ce que le segment hydrophobe est choisi parmi les chaines aliphatiques, les polyoxyalkylènes, les polyesters d'alkylidène et le cholestérol. 6. Composition selon la revendication 4 ou 5 caractérisée en ce que le segment hydrophile est choisi parmi les polyoxyalkylènes et les mono- ou di-saccharides. 7 Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'agent de surface est un poloxalkylène de formule générale HO(CH2CH20)a(CH(CH3 )CH20H)b(CH2CH20)CH avec a, b et c représentant indépendamment l'un de l'autre des nombres entiers pouvant varier entre 20 et 100. 8. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle contient à titre d'agent de surface un composé de formule générale OH(CH2CH20)a(CH(CH3)CH20H)b(CH2CH20)cH. avec a égal à 75, b à 30 et c à 75. 9. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'agent de surface y est présent à une concentration comprise entre 1% à 10% poids/volume de ladite composition. 10. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'agent de surface y est présent à une concentration comprise entre I et 5% poids/volume de ladite composition. Il. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'agent de transfection cationique est un lipofectant. 12. Composition selon la revendication 11 caractérisée en ce que le lipofectant est une molécule amphiphile comprenant au moins une région lipophile associée ou non à une région hydrophile. 13. Composition selon la revendication 11 caractérisée en ce qu'il s'agit d'un mélange lipidique susceptible de former des liposomes cationiques. 14. Composition selon la revendication 11 ou 12 caractérisée en ce qu'il s'agit d'un lipide cationique 15.Composition selon la revendication 11 ou 12 caractérisée en ce qu'il s'agit d'un lipofectant comprenant au moins une region polyamine de formule générale H2N-(-(CH)m-NH-)n-H dans laquelle m est un nombre entier supérieur ou égal à 2 et n est un nombre entier supérieur ou égal à 1, m pouvant varier entre les différents groupes de carbone compris entre 2 amines, associée de manière covalente à une région lipophile de type chaîne hydrocarbonée, saturée ou non, du cholestérol, ou un lipide naturel ou synthétique capable de former des phases lamellaires ou héxagonales. 16. Composition selon la revendication 15 caractérisée en ce que la région polyamine est représentée par la spermine, la thermine ou un de leurs analogues ayant conservé ses propriétés de liaison à l'acide nucléique. 17. Composition selon la revendication 11 ou 12 caractérisée en ce qu'il s'agit d'un lipofectant de formule générale dans laquelle R figurant la région lipophile est représenté par la formule générale dans laquelle - X et X' représentent, indépendamment l'un de l'autre un atome d'oxygène, un groupement méthylène -(CH2)q- avec q égal à 0, 1, 2 ou 3, ou un groupement amino -NH- ou -NR'- avec R' représentant un groupement alkyle en C1 à C4, - Y et Y' représentent indépendamment l'un de l'autre un groupement méthylène, un groupement carbonyle ou un groupement C=S, - R3, R4 et R5 représentent independamment l'un de l'autre un atome d'hydrogene ou un radical alkyle, substitué ou non, en C1 à C4, avec p pouvant varier entre 0 et 5, - R6 représente un dérivé du cholestérol ou un groupement alkyle amino -NRIR2 avec R1 et R2 représentant indépendamment l'un de l'autre un radical aliphatique, saturé ou non, linéaire ou ramifié en C12 à C22. 18. Composition selon la revendication 1 1 ou 12 caractérisée en ce qu'il s'agit d'un lipofectant de formule générale Dans laquelle R 1, R2 et R3 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupement -(CH2)q-NRR' avec q pouvant varier entre 1, 2, 3, 4, 5 et 6 ceci de manière indépendante entre les différents groupements RI, R2 et R3 et R et R' représentant indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupement -(CH2)q'-NH2 , q' pouvant varier entre 1, 2, 3, 4, 5 et 6 ceci de manière indépendante entre les différents groupements R et R', m, n et p représentent, indépendamment l'un de l'autre, un nombre entier pouvant varier entre 0 et 6 avec lorsque n est supérieur à 1, m pouvant prendre des valeurs différentes et R3 des significations différentes au sein de la formule générale III et R4 représente un groupement de formule générale dans laquelle R6 et R7 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un radical aliphatique, saturé ou non, en C 10 a C22 avec au moins l'un des deux groupements étant différent de l'hydrogène, u est un nombre entier choisi entre 0 et 10 avec lorsque u est un entier supérieur à I R5, X, Y et r pouvant avoir des significations différentes au sein des différents motifs [ X-(CHR5)r-Y], X représente un atome d'oxygène, de soufre ou un groupement amine monoalkylé ou non, Y représente un groupement carbonyle ou un groupement méthylène, R5 représente un atome d'hydrogène ou une chaine latérale d'acide aminé naturel , le cas échéant substituée et r représente un entier variant entre I et 10 avec lorsque r est égal à 1, R5 représentant une chaine latérale d'acide aminé naturel substitué ou non et lorsque r est supérieur à 1, R5 représentant un atome d'hydrogène. 19. Composition selon l'une des revendications 11 ou 12 caractérisé en ce qu'il s'agit d'un lipide cationique porteur d'un ou plusieurs groupements guanidinium et/ou amidinium. 20.Composition selon l'une des revendications I à 10 caractérisée en ce que l'agent de transfection cationique est un polymère cationique. 21 Composition sleon la revendication 20 caractérisée en ce qu'il s'agit d'un composé de formule générale I, N(CH2)n R (I) p dans laquelle - R peut être un atome d'hydrogene ou un groupe de formule (CH2)n-N 9 - n est un nombre entier compris entre 2 et 10; - p et q sont des nombres entiers, étant entendu que la somme p+q est telle que le poids moléculaire moyen du polymère soit compris entre 100 et 107 Da. 22. Composition selon la revendication 20 ou 21 caractérisée en ce qu'il s'agit du polyéthyléne imine de poids moléculaire moyen 50 000 Da (PE150K), du polyéthylène imine de poids moléculaire moyen 22 000 Da (PEI22K), ou le polyéthylène imine de poids moléculaire moyen 800 000 Da (PEI800K). 23. Composition selon l'une des revendications 1 à 11 caractérisée en ce que l'agent de transfection cationique est de préférence choisi parmi la lipofectamine, la dioctadécylamidoglycyl spermine (DOGS) la 5 -carboxyspermylamide de la palmitoylphosphatidylethanolamine (DPPES), le (Dioctadécyl-carbamoylméthoxy)acétate de 2-5-bis-(3-amino-propylamino)-pentyle ou le (Dioctadécylcarbamoylméthoxy)-acétate de 1,3-bis-(3-amino-propylamino)-2 propyle, le H2N(CH2)3 }2N(CH2)4N t (CH2)3NH2 (CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2) 1 7-CH3]2. le H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2CoGlyN[(CH2) 1812, le 112N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CR2)i 812 et le H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)i 7CH3]2 24. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'acide nucléique est un acide désoxyribonucléique 25 Composition selon l'une des rexendications précédentes caractérisée en ce que l'acide nucleique est un acide ribonucleique 26. Composition selon la revendication 24 ou 25 caractérisée en ce que l'acide nucléique est modifié chimiquement. 27. Composition selon l'une des revendications 1 à 23 caractérisée en ce que l'acide nucléique est un antisens. 28. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'acide nucléique comporte un gène thérapeutique. 29. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un adjuvant de type dioleoylphosphatidyléthanolamine (DOPE), I'oléoyl-palmitoylphos-phatidyléthanolamine (POPE), les di-stéaroyl, palmitoyl, -mirystoyl phosphatidyléthanolamines ainsi que leurs dérivé N-méthylés 1 à 3 fois, les phosphatidylglycérols, les diacylglycérols, les glycosyldiacylglycérols, les cérébrosides (tels que notamment les galactocérébrosides), les sphingolipides (tels que notamment les sphingomyélines) ou encore les asialogangliosides. 30 Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle associe en outre à l'agent de transfection cationique un élément de ciblage. 31. Composition selon la revendication 30 caractérisée en ce que cet élément de ciblage est choisi parmi les anticorps dirigés contre des molécules de la surface cellulaire, des ligands de recepteurs membranaires comme l'insuline, la transferrine, I'acide folique ou tout autre facteur de croissance, cytokines ou vitamines. des lectines, modifiées ou non des protéines à motif RGD, des peptides contenant un tandem de motifs RGD, cyclique ou non, des peptides polylysine ainsi que des peptides ligands naturels ou synthetiques. 32. Procédé de préparation d'une composition comprenant des particules de complexes agent(s) de transfection cationique(s)/acides nucléiques caractérisé en ce que l'agent transfectant et l'acide nucléique sont mis en contact, en présence d'une quantité suffisante d'un agent de surface non ionique pour stabiliser les particules de complexes nucléiques ainsi formées à une taille inférieure à environ 160nm. 33. Procédé selon la revendication 32 caractérisé en ce que l'un des composants choisi parmi l'acide nucléique ou le lipofectant est au préalable mélangé à l'agent de surface non ionique avant d'être mis en présence avec le second composant. 34. Procédé selon la revendication 32 ou 33 caractérisé en ce que l'agent de surface y est défini selon les revendications 4 à 10.