Brevet FR2758231A1 — publié le 19980717

La présente invention est relative à des semences bactérisées prêtes à l'emploi . Elle a en outre pour objet un procédé d'obtention de telles semences. Plusieurs genres et espèces bactériennes produisent des effets bénéfiques sur les plantes et leur environnement. Ainsi, les bactéries symbiotiques des légumineuses des genres Rhizobium et Bradyrhizobium fixent l'azote de l'air et, en le restituant aux plantes, améliorent la croissance de cellesci. De même, certaines bactéries non symbiotiques, telles que les Pseudomonas fluorescens et Ps. putida, les mutants avirulents des Pseudomonas (tels que Ps.solanacearum), les Agrobacterium antagonistes et A. t umefa ci ens, les Bacillus, les Azospirillum favorisent la croissance des plantes et les protègent vis-à-vis des parasites fongiques et bactériens directement par des mécanismes d'antagonisme ou indirectement en induisant une résistance systémique (DIGAT, 1994,C.R.Acad.Agric. Fr.80.2:113-122). Enfin, d'autres bactéries telles que Bacillus thuringiensis secrètent des toxines insecticides permettant une lutte biologique contre les insectes. Les plants au sens large tels que les graines, les tubercules, les bulbes, les rhizomes et les boutures constituent des cibles favorables pour la bactérisation, car ils représentent un matériel de multiplication individualisé pouvant être colonisé efficacement par des populations bactériennes bénéfiques. Jusqu'à présent, le procédé le plus couramment utilisé pour la bactérisation consiste à immerger le matériel végétal dans une suspension bactérienne aqueuse juste avant la plantation. Cependant, les semences bactérisées par ce procédé doivent être semées immédiatement car les cellules bactériennes ne peuvent survivre que quelques minutes à quelques heures à l'état déshydraté. Afin de prolonger la survie des micro-organismes, on a proposé de constituer des inoculants , ou inoculats bactériens en fixant les bactéries sur des supports tels que des particules de silice et de silicates, de sable, d'argile, de tourbe, de charbon poreux ou de sels minéraux tels que des sulfate, phosphate ou carbonate de calcium (SMITH , 1992, Can.J. Microbiol. 38, 485-492). La survie des bactéries dans et/ou sur ces supports est relativement satisfaisante lorsque ceux-ci sont humides (activité de l'eau AW > 0.9). Cependant, lors du mélange de ces inoculants avec les semences, on constate que, comme précédemment, la majorité de la population bactérienne ne survit pas plus de quelques heures à la surface des semences (BROCKWELL et BOTTOMLEY, 1995, Soil Biol. Biochem, 27, 45:683-697) dont l'AW est fréquemment inférieur à 0,5. Par conséquent, le mélange de ces inoculants ainsi conditionnés avec les graines doit être effectué juste avant le semis. Il en résulte des inconvénients majeurs et notamment une impossibilité de conserver les semences ainsi bactérisées. Dans ce domaine de la bactérisation, dite indirecte, une amélioration a été apportée grâce à l'utilisation de microgranulés à base d'argile, de tourbe, ou d'alginate enrichis éventuellement par une source de carbone (brevets FR-2.519.022 et FR-2.695.929). Ces moyens permettent d'augmenter quelque peu la survie bactérienne, mais les microgranulés doivent encore être inoculés par l'agriculteur au moment de leur emploi au champ, c'est-à-dire juste avant le semis, et être disposés à proximité des semences dans la raie de semis. Par ailleurs, afin d'améliorer l'adhérence des bactéries à la semence et leur résistance à la déshydratation, on a proposé de mélanger divers adhésifs et agents filmogènes, tels que des polymères artificiels (polyvinyle, polyacrylamide) ou naturels tels que les polysaccharides (cellulose et ses dérivés, alginates et ses dérivés, xanthane ) avec les bactéries. La plupart de ces agents filmogènes ayant une capacité de rétention en eau assez élevée, cette propriété a été mise à profit pour améliorer la survie des bactéries. On a aussi tenté d'améliorer la tolérance de certaines bactéries à la déshydratation en les cultivant dans des milieux contenant du mannitol, du sorbitol, du fructose de la dextrine ou de l'amidon (brevet européen 0.083.267). Cependant, ces deux dernières solutions n'entraînent pas une augmentation suffisante de la survie des bactéries. L'effet bénéfique sur les bactéries de diverses molécules osmorégulatrices a en outre été décrit, de manière générale, par exemple dans l'article de CSONKA (1989, Microbiol. Rev., 53, 121-147). Néanmoins, ces résultats ne concernent que des études effectuées sur des cultures bactériennes, c'est-à-dire des systèmes présentant des conditions différentes de celles rencontrées dans les pellicules protégeant les semences. Il ressort de l'analyse de l'état de la technique que l'on ne connaissait pas de moyen industriellement applicable permettant d'obtenir des semences présentant en surface des bactéries et pouvant être stockées pendant les périodes comprises entre leur fabrication et les semis, sans pour autant perdre leurs propriétés bénéfiques. Le demandeur s'est attaché à résoudre ce problème et a montré que des semences pelliculées par un polymère contenant un certain type d'agent augmentant la pression osmotique intracellulaire des bactéries, conservaient des bactéries viables jusqu'à leur semis. La présente invention a donc pour objet des semences bactérisées prêtes à l'emploi, pelliculées par un polymère filmogène biodégradable, hydrorétenteur et adhérant à la semence, ledit polymère comprenant les bactéries et en outre au moins un agent osmoprotecteur ou augmentant la pression osmotique intracellulaire des bactéries. Dans le contexte de la présente invention, le terme pelliculage doit être compris dans son sens habituel de la technique des semences, c'est-à-dire comme signifiant une couche fine, d'épaisseur généralement comprise entre environ 10 et 100Lm de préférence entre 20 et 50ptm, déposée sur la semence. Dans une semence pelliculée , la forme extérieure est peu modifiée par rapport à la semence d'origine, ce qui n'est pas le cas des semences dites enrobées , dans lesquelles la couche d'enrobage contenant la semence a une épaisseur supérieure à 1000 Hm et modifie la forme extérieure de la semence, qui devient alors approximativement sphérique. De manière préférentielle, l'agent augmentant la pression osmotique intracellulaire des bactéries est un acide aminé, tel que l'acide L-glutamique, la L-proline, la bétaïne, la L-sérine, ou l'un de leurs sels ou l'un de leurs dérivés. Il est préférentiellement l'acide L-glutamique. Cet agent peut être utilisé seul ou en mélange avec d'autres agents précités ayant la même fonction. Les bactéries susceptibles d'être incluses dans le pelliculage sont avantageusement des bactéries produisant des effets bénéfiques sur les plants issus des semences, ou sur leur environnement, et en particulier des bactéries symbiotiques ou non symbiotiques mentionnées ci-dessus, telles que les bactéries des genres Rhizobium, Bra dyrh i zobi um, Pseudomonas, Agrobacterium, Bacillus et Azospirillum. Ces bactéries peuvent avoir divers effets sur les plantes et leur environnement. Elles peuvent fixer l'azote de l'air, protéger les plantes des parasites fongiques et bactériens, ou encore sécréter des toxines insecticides. Le polymère formant la pellicule est avantageusement un polymère filmogène biodégradable. Il peut être en particulier un chitosan, un alginate , une cellulose ou un de leurs dérivés. Il est choisi en fonction du type d'exopolysaccharide (EPS) de la bactérie que l'on souhaite utiliser. Ainsi, pour les bactéries telles que les Pseudomonas et les Bacillus, on choisit un biopolymère cationique comme le chitosan ou mieux le chitosan-glutamate stérilisé par les rayons gamma. Ce dernier polymère forme à lui seul une microcapsule visible au microscope électronique autour des cellules bactériennes et confère rapidement aux bactéries la capacité de mieux résister à la déshydratation. Il contient des ions glutamate en excès sous forme de sels (de sodium, de potassium, de magnésium) qui s'accumulent très rapidement dans les cellules bactériennes. Pour d'autres bactéries, telles que les Rhizobium et Bradyrhizobium, on choisit de préférence un biopolymère anionique, tel qu'un sel d'alginate soluble auquel on adjoint de l'acide L-glutamique ou l'un de ses sels ou un autre acide aminé (L-proline, bétaïne, L-sérine) ou un de ses sels. Pour les Pseudomonas, les Bacillus, les Rhizobium et les Bradyrhizobiuin, il est aussi possible de choisir une cellulose ou l'un de ses dérivés auquel on adjoint de l'acide L-glutamique ou l'un de ses sels ou un autre acide aminé (Lproline, bétaïne, L-sérine) ou un des sels de ces acides. L'homme du métier peut à partir d'un simple test déterminer quel polymère doit être préférentiellement utilisé pour un type donné de bactérie. Un tel test peut consister dans un premier temps à mélanger le polymère et les bactéries puis à observer l'évolution de la solution. Si les bactéries s'aggrègent en floculant, le polymère est considéré comme n'étant pas compatible. Au contraire, si aucune floculation n'est observée on considère qu'il peut y avoir compatibilité. Cependant, pour vérifier précisément la compatibilité du polymère avec les bactéries, il est nécessaire de réaliser des tests selon des procédés standardisés bien connus de l'homme du métier afin de déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI) ou la concentration minimale bactéricide (CMB) du polymère. De manière avantageuse, le revêtement formé autour de la semence constitue une pellicule ou enrobage présentant une épaisseur généralement comprise entre environ 10 et lOOym, de préférence entre 20 et 50m. Dans les semences pelliculées selon l'invention, les concentrations d'agent augmentant la pression intracellulaire des bactéries, en particulier d'acide L-glutamique, peuvent varier entre de larges limites au sein du polymère de pelliculage. Des indications illustratives sont données dans les exemples qui suivent. Pour des essais préalables de routine, l'homme du métier peut optimiser la concentration par semence, en connaissant le nombre approximatif de semences par kg pour une espèce donnée et le volume de formulation nécessaire pour pelliculer un poids donné de semences Au sein de la formulation de pelliculage, les agents augmentant la pression intracellulaire des bactéries sont avantageusement à une concentration maximale. Préférentiellement, l'acide L-glutamique est présent dans le polymère de pelliculage à une concentration supérieure à environ 8 g/l. La proline est avantageusement comprise à une concentration supérieure à environ 150 g/l, la bétaïne à une concentration supérieure à environ 1600 g/l et la sérine à une concentration supérieure à environ 50 g/l. Dans les semences pelliculées selon l'invention, les quantités de bactéries par semence varient selon la nature des bactéries et la surface et le volume de la semence. Des essais de routine sont à la portée de l'homme du métier pour déterminer le nombre optimal de bactéries effectivement présentes dans la pellicule entourant la semence. La présente invention présente l'avantage de combiner: - d'une part la formation d'une microcapsule autour des cellules bactériennes ralentissant les échanges d'eau et de gaz avec le milieu extérieur, et - d'autre part le déclenchement d'une rapide élévation de la pression osmotique intracellulaire dans les cellules bactériennes. Les semences bactérisées peuvent être obtenues par un procédé de fabrication comprenant les étapes suivantes: - mélange du polymère et de l'agent osmoprotecteur, puis mélange avec les bactéries, - application sur les semences de la formulation ainsi obtenue , et par pelliculage et - séchage des semences. De manière avantageuse, l'application de la formulation et le séchage sont effectués dans un processeur à lit fluidisé ou dans une turbine de pelliculage. Selon un mode de mise en oeuvre particulier, les souches bactériennes sont conservées à l'état lyophilisé et doivent être réactivées dans un milieu nutritif riche avant d'ensemencer le milieu de culture définitif convenant à l'espèce bactérienne. Dans un fermenteur à grande capacité, le milieu de culture est agité en continu pour optimiser l'oxygénation. Les conditions de température et de pH sont déterminées pour chaque espèce bactérienne. L'inoculum bactérien est constitué lorsqu'on atteint la fin de la phase stationnaire : sa concentration finale doit être supérieure à 101 cfu/ml . Le biopolymère stérilisé est solubilisé dans l'eau stérile à sa concentration spécifique en présence du ou des agents augmentant la pression osmotique, par exemple d'acide glutamique à la concentration minimale de 8 g/l. Il est nécessaire d'ajuster le pH d'environ 6,2 à 6,5 (selon le polymère utilisé) préférentiellement à l'aide de KOH lON en évitant toute précipitation du polymère. Enfin, la suspension bactérienne concentrée contenant le ou les agents osmoprotecteurs à la même concentration que dans le polymère est doucement dissoute dans le polymère dans un rapport en volume voisin de 1:1. On laisse reposer au moins 1 heure à la température du laboratoire. Pour le pelliculage des semences, on utilise une turbine industrielle, ou mieux un processeur à lit fluidisé, ou tout autre appareil convenant à cette opération. Durant ces opérations il est nécessaire de veiller au réglage de la température, qui ne doit pas être supérieure à 300C, d'éviter tout colmatage de filtre ou de collage des semences entre elles.Le séchage doit être le plus rapide possible. La présente invention est illustrée sans pour autant être limitée par les exemples qui suivent, avec référence aux dessins annexés sur lesquels: La figure 1 représente la survie de bactéries Pseudomonas fluorescens G92 sur des semences de tournesol conservées à 120C en fonction du nombre de jours, les semences ayant été pelliculées en lit fluidisé. La figure 2 représente la survie de bactéries Pseudomonas putida TL5 sur des semences de tournesol conservées à 120C, les semences ayant été respectivement pelliculées en lit fluidisé et en turbine. Les figures 3A, 3B et 3C mettent en évidence les quantités de glutamate, déterminées par méthode enzymatique, dans différentes conditions, la figure 3A représentant l'évolution de la quantité moyenne d'acide L-glutamique, dans ou sur 1010 cellules bactériennes de Pseudomonas putida TL5, en fonction du temps d'incubation dans l'osmoprotecteur(1, 30, et 60 minutes), la figure 3B représentant le pourcentage moyen d'acide L-glutamique et de ses sels (glutamates) dans la formulation à pH 6,08 à deux concentrations en chitosan (3 et 6%), la figure 3C représentant la quantité d'acide Lglutamique et de ses sels (glutamates) présente sur des semences de tournesol pelliculées, après quatre mois de stockage, respectivement avec et sans bactéries Pseudomonas fluorescens G 92, la figure 4 illustre la survie de Bradyrhizobium japonicum G49 sur des semences de soja conservées à 120C , et pelliculées respectivement par un polymère d'alginate de sodium (Manucol) et un dérivé cellulosique (Sepiret). Les figures 5A et 5B illustrent la survie de bactéries Pseudomonas putida TL5, en présence et en absence d'acide Lglutamique, respectivement dans de l'alginate de sodium (Manucol) et dans un polymère cellulosique (Sepiret). Le nombre de bactéries est exprimé en cfu/ml. EXEMPLE 1 Bactérisation des semences par les Pseudomonas Afin de constituer l'inoculum, les bactéries sont cultivées dans le milieu LPG (extrait de levure 5 g/l, peptone 5 g/l, glucose 10 g/l) ou dans le milieu B de King (KING, WARD and RANEY, 1954, J. Lab. Clin. Med., 44:301-307) ou dans le milieu de MISAGHI (MISAGHI et GROGAN, 1969, Phytopathology 59: 1436-1450)à 26-270C durant 60 à 72 heures avec agitation en continu et pH régulé à 6,5-6,8. La fin de la phase stationnaire étant atteinte, on concentre la suspension bactérienne de façon à obtenir une concentration utile d'environ 1011 cfu/ml. On prépare une solution de chitosan-glutamate stérilisé (pureté > 95%) dans de l'eau stérile à la concentration de 6%. Le pH de la solution de biopolymère est ajusté à 6,2 à l'aide de KOH 10N. La suspension aqueuse bactérienne concentrée est mélangée doucement avec le biopolymère dans un rapport 1:1 en volume. On laisse reposer au moins 1 heure à la température du laboratoire. On mesure l'activité de l'eau (AW) ou l'humidité relative d'équilibre (HRE) d'un échantillon de semences à bactériser, l'optimum de AW à la fin de l'opération de pelliculage se situant vers 0,50. Les semences sont placées dans une turbine industrielle de type DUMOULIN ou dans un processeur à lit fluidisé muni d'une cuve WURSTER. On règle les paramètres suivants: * température de l'air à l'entrée: 300C, * température de l'air à la sortie : 200C, * pression de pulvérisation: 0,5 bar (lit fluidisé) ou 2 bars (turbine) * diamètre des buses de pulvérisation: 1,0 à 1,2 mm, * pression de ventilation: -115 Pa (lit fluidisé) ou 200 Pa (turbine) * débit moyen de la pompe: 10 ml/minute. Le volume de formulation nécessaire varie en fonction du type de semences. Ainsi 200 à 300 litres de formulation sont nécessaires pour pelliculer 1 tonne de semences de tournesol. Lorsque le pelliculage est terminé, on procède à la numération sur le milieu B de King gélosé de la population survivante sur la semence. On suit cette survie de la population bactérienne jusqu'à la commercialisation finale de façon à garantir à l'utilisateur une quantité de bactéries survivantes estimée suffisante pour produire l'effet biologique recherché. Les essais de pouvoir germinatif sont effectués selon les normes de 1'ISTA (International Seed Testing Association). Selon cet exemple, à 120C, la survie de Pseudomonas fluorescens G92 en surface des semences de tournesol, pelliculées à l'aide de la technologie du lit fluidisé selon le procédé décrit ci-avant, est suivie durant plus de 550 jours (figure 1). On observe qu'à cette date la perte de population est seulement d'1.5 log cfu. D'autre part, le pelliculage des semences de tournesol à l'aide de la même formulation contenant Pseudomonas putida 10 TL5 à 3 x 10 cfu/ml est effectué simultanément dans un processeur à lit fluidisé (marque GLATT) et dans une turbine (marque DUMOULIN) . La survie de la population bactérienne fixée sur les semences est suivie durant 70 jours (figure 2). On observe qu'à cette date la perte de population n'est que légèrement supérieure à 1 log cfu. La quantité d'acide L-glutamique et de glutamates a en outre été mesurée dans diverses conditions et à différents moments comme décrit par Bernt et Bergmeyer (1965, Bergmeyer, Methods of Enzymatic Analysis, 384-388, 2nd printing) . La figure 3A illustre l'évolution de la quantité d'acide Lglutamique absorbé ou adsorbé par 1010 cellules bactériennes en fonction du temps d'incubation dans la solution. La figure 3B représente la variation de la quantité d'acide glutamique et de glutamates dans la formulation en fonction de la concentration en chitosan.La figure 3C est une comparaison de l'évolution des quantités de glutamate respectivement sur des semences pelliculées sans et avec bactéries après 4 mois de stockage. EXEMPLE 2 Bactérisation des semences de Iésumineuses par Rhizobium et Bradvrhizobium Afin de constituer l'inoculum, les bactéries sont cultivées: pour les Rhizobium (exemple; Rhizobium meliloti souche 2011)dans le milieu YEM (VINCENT, 1970, A manual for practical study of root-nodule bacteria, IBP Handbook ne15, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 169 pp.) durant 6 jours à 280C en agitation continue, pH régulé à 7 et pour les Bra dyrh i zobi um (exemple:B japonicum souche G49, IARI SB16, New Delhi) dans le milieu de Burton (BURTON, 1976, Symbiotic nitrogen fixatio,ed. P.S. Nutman, Cambridge University Press, 175-189) durant 8 jours à 300C en agitation continue, pH s régulé à 6,5. La fin des phases stationnaires étant atteinte, les suspensions bactériennes sont concentrées de façon à obtenir une concentration utile d'environ 1011 cfu/ml. Pour la formulation, on utilise soit de l'alginate de sodium stérile (Manucol commercialisé par Kelco International) à la concentration de 1,0% , soit un dérivé cellulosique (Sepiret 07G commercialisé par Seppic) à 8% dans lesquels on ajoute de l'acide L-glutamique stérilisé (Sigma, pureté 99-100%) à la concentration finale de 0.86 W. On ajuste le pH de la solution à 6,4 à l'aide de KOH 10N. La suspension aqueuse bactérienne concentrée contenant l'acide glutamique à 0,86t est doucement mélangée à cette solution de polymère dans un rapport 1:1 en volume. On laisse reposer au moins 1 heure à la température du laboratoire. On procède aux mêmes étapes que dans l'exemple 1 pour le pelliculage. Le volume de formulation nécessaire varie en fonction du type de semence. Par exemple, pour pelliculer 1 tonne de semence de soja, environ 1000 litres de formulation sont nécessaires. Lorsque le pelliculage est terminé, on procède à la numération, respectivement sur milieu YEM ou milieu de BURTON gélosés, de la population survivante sur la semence et on réalise des tests de nodulation (en conditions contrôlées) en notant le nombre de nodosités apparues sur les plantes. Les essais de pouvoir germinatif sont effectués selon les normes de l'ISTA (International Seed Testing Association). Selon cet exemple, à 12"C, la survie de Bradyrhizobium japonicum G49 en surface des semences de soja pelliculées à l'aide d'un processeur à lit fluidisé selon le procédé décrit ci-dessus a été suivie durant 70 jours (figure 4). On observe qu'à cette date la perte de population est de 4 log environ dans les deux polymères (Manucol et Sepiret) utilisés pour la formulation. Chaque semence de soja devant être porteuse de 106 bactéries pour induire une nodulation suffisante, on estime que cette quantité est disponible jusqu'au 70ème jour. EXEMPLE 3: Influence de la présence d'acide glutamique dans le revêtement sur la survie des bactéries. Des tests comparatifs ont été effectués sur des supports inertes stériles représentés par des pastilles de Téflon de diamètre 10 mm afin de déterminer l'influence de l'acide L-glutamique sur la survie des bactéries. Dix microlitres d'un mélange d'alginate (Manucol) et de bactéries Pseudomonas putida TL5 à 104C cfu/ml, avec ou sans acide L-glutamique (8g/l) ont été déposés sur chaque pastille. Les pastilles ont été placées dans des boîtes de Nunclon delta stérilisées aux rayons gamma à raison de 12 pastilles par traitement (3 répétitions de 4). On a soumis les pastilles inoculées à 2 h et 4 h de déshydratation par ventilation d'air sec à 250C. Puis le nombre de bactéries (cfu/ml) a été déterminé par la méthode classique des dilutions sur le milieu B de King. Les résultats sont représentés sur la figure 5A. Ils montrent clairement que l'ajout d'acide Lglutamique à l'alginate permet la survie des bactéries après 4 h de déshydratation, alors qu'en absence d'acide Lglutamique les bactéries ne survivent pas. Des expérimentations comparables ont été effectuées avec la même souche bactérienne à 106 cfu/ml, dans un polymère cellulosique (Sepiret 07 G). La survie des bactéries a été estimée après 1 h et 2h de déshydratation dans les mêmes conditions que pour la figure SA. La conclusion est similaire pour ce polymère, l'acide L-glutamique exerçant un effet bénéfique très net sur la survie des bactéries, comme le montre la figure 5B. REVENDICATIONS 1. Semence bactérisée prête à l'emploi pelliculée par un polymère filmogène biodégradable, hydrorétenteur et adhérant à la semence, comprenant les bactéries, ledit polymère comprenant en outre au moins un agent osmoprotecteur ou augmentant la pression osmotique intracellulaire des bactéries. 2. Semence selon la revendication 1 caractérisée en ce que ledit agent est un acide aminé. 3. Semence selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que ledit agent est l'acide Lglutamique,la L-proline, la bétoine, la L-sérine ou l'un de leurs sels ou l'un de leurs dérivés, ou un mélange desdits acides, sels ou dérivés. 4. Semence selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisée en ce que ledit agent est l'acide L-glutamique, l'un de ses sels ou l'un de ses dérivés, et en ce qu'il est compris à une concentration supérieure à environ 8 g/l. 5. Semence selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que les bactéries sont du genre Rhizobium, Bradyrhizobium, Pseudomonas , Agroba cteri un, Bacillus ou Azospirillum. 6. Semence selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisée en ce que ledit polymère est un chitosan, un alginate, une cellulose, ou un de leurs dérivés. 7. Semence selon l'une des revendications 1 à 6 caractérisée en ce que la pellicule entourant la semence possède une épaisseur comprise entre environ 10 et 100pu, de préférence entre environ 20 et 50 Hm. 8.Procédé de fabrication de semences bactérisées selon l'une des revendications 1 à 7 comprenant les étapes suivantes: - mélange du polymère et de l'agent osmoprotecteur, puis mélange avec les bactéries, - application sur les semences par pelliculage de la formulation ainsi obtenue, - séchage des semences. 9.Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce que l'application et le séchage sont effectués dans un processeur à lit fluidisé ou dans une turbine industrielle.