Brevet FR2756289A1 — publié le 19980529

NOUVEAUX COMPLEXES DU PLATINE (II) UTILES COMME AGENTS ANTI TUMORAUX. La présente invention porte sur de nouveaux complexes du platine (Il), utiles comme agents anti-tumoraux, ainsi que sur un procédé permettant de les préparer. Plus particulièrement, les nouveaux complexes de la présente invention sont actifs à l'encontre des lignées cellulaires de leucémie murine L 1210 et P 388, en inhibant ainsi la croissance de néoplasmes malins chez les mammifères. Divers composés du platine ont été montrés posséder une activité anti-tumorale. Ceci a été mis en lumière par l'utilité clinique du cisplatine (A) dans le traitement des tumeurs humaines. Cependant, en raison de la toxicité sérieuse, en particulier de la néphrotoxicité, qui est associée à l'utilisation thérapeutique du cisplatine, un certain nombre d'analogues supplémentaires du platine (II) et du platine (IV) ont été synthétisés et évalués pour l'activité anti-tumorale. Ainsi, dans le brevet américain US-A-4 169 846, sont décrits des complexes du platine (II) qui manifestent une activité anti-tumorale chez les souris, ces complexes étant représentés par la formule dans laquelle - la stéréo-isomérie du 1,2-diaminocyclohexane est cis-, trans-d-, ou trans-l ; et - R1 et R2 représentent les mêmes atomes d'halogène, ou bien R1 et R2 peuvent, lorsqu'ils sont pris ensemble, former un groupe représenté par la formule où R3 représente un groupe > CH2, un groupe > CHCH3 ou un groupe > CHCH2CH3. De plus, ce brevet porte sur des complexes d'uracile et de cis[platine (II) - cis, trans-d-, ou trans-l-1,2diaminocyclohexane]. Dans la demande de brevet européen EP-A-0 098 121, sont décrits des complexes du platine (II) qui manifestent une activité anti-tumorale chez les souris, ces complexes étant représentés par la formule dans laquelle - X est un atome d'halogène ; et - G est un reste d'acide glucuronique. Cependant, les précédents complexes du platine (II) souffrent des inconvénients d'une solubilité dans l'eau insuffisante et d'une néphrotoxicité. Pour surmonter ces inconvénients, les inventeurs ont synthétisé de nouveaux complexes du platine (Il) contenant du 1,2-diaminocyclohexane (DACH) en tant que ligand support et un bis(diphénylphosphino)alcane en tant que groupe partant. La présente invention a pour but de proposer de nouveaux composés qui possèdent une bonne activité antitumorale, notamment in vitro à l'encontre des lignées cellulaires de leucémie L-1210 et P-388. De plus, les composés de la présente invention manifestent une très faible néphrotoxicité. Cet objectif est atteint par des complexes du platine (II) ayant la formule suivante (I) ou par leurs sels nitrates dans laquelle - n est un entier égale à 2 ou 3 ; et représente le 1, 2-diaminocyclohexane (DACH) choisi dans le groupe constitué par le trans-l DACH, le trans-d-DACH et le cis-DACH. De plus, la présente invention se rapporte à une composition pharmaceutique pour inhiber la croissance de néoplasmes chez les mammifères, comprenant une quantité efficace pour lutter contre les néoplasmes d'un complexe du platine (II) de Formule (I), tel que défini ci-dessus, en combinaison avec un support pharmaceutiquement acceptable. Les composés de formule (I) de la présente invention peuvent être préparés conformément au schéma réactionnel suivant Dans le schéma ci-dessus, le DACH est celui choisi dans le groupe constitué par le trans-l-DACH, le trans-d-DACH et le cis-DACH. De plus, DPPP désigne le 1,3-bis(diphénylphosphino)propane, et DPPE désigne le 1,2-bis(diphénylphosphino)éthane. Un composé optiquement actif ou diastéréoisomère est obtenu en tant que produit final conformément au stéréoisomère de DACH utilisé comme matière de départ. Activité anti-tumorale L'activité anti-tumorale in vitro des complexes de Pt(II) de la présente invention est testée à l'encontre des lignées cellulaires de leucémie L-1210, P-388 et de la lignée cellulaire de mélanome M-14, à l'aide de l'essai colorimétrique au MTT [bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2yl)-2,5-diphényl tétrazolium] pour la survie et la prolifération des cellules. 2 x 106 cfu de lignée cellulaire de leucémie L-1210 et P-388 sont inoculés dans 20 ml de milieu RPMI (contenant 10% de FBS et 10 unités/l de pénicilline G et de streptomycine). Au bout de 3 jours d'incubation, les cellules sont recueillies par centrifugation. Ensuite, le milieu est échangé. Finalement, les cellules incubées sont diluées à une concentration de 106 cellules/ml. Les composés suivants de la présente invention (i) Pt(II)(trans-l-DACH)(DPPE) 2NO3 (Matière I) (ii) Pt(II)(cis-DACH)(DPPP) . 2NO3 (Matière II) (iii)Pt(II)(cis-DACH)(DPPE) 2NO3 (Matiere III) sont utilisés comme matières d'essai. Ces matières sont préparées chacune à une concentration de 500 uM, 50 ,uM et 5 pM. 0,1 ml de solution de dilution de cellules et 0,1 ml de chaque concentration de matière d'essai sont placés dans une plaque de titration à 96 puits. Au bout de 48 heures d'incubation, 0,05 ml de solution de MTT est ajouté. Au bout de 4 heures supplémentaires d'incubation, le surnageant est retiré. Le résidu obtenu est dissous avec 0,05 ml de DMSO. Finalement, l'absorption à 630 nm est mesurée par un lecteur ELISA. L'activité anti-tumorale est mesurée par l'équation suivante Activité anti-tumorale (%) = Absorption de la matière d'essai (1 - ) x 100 Absorption du témoin Dans cette expérience, le témoin est préparé par mise en solution de cellules sans matière d'essai. De plus, du cisplatine est utilisé comme matière comparative pour mesurer l'activité antitumorale des matières d'essai. Le Tableau 1 présente l'activité anti-tumorale à l'encontre de la lignée cellulaire de leucémie L-1210 des composés de la présente invention. Tableau 11 Activité anti-tumorale in vitro à l'encontre de la lignée cellulaire de leucémie L-1210 Composés Concentration des Composés 500 pM 50 pM 5 pM Matière I 92,35 + 0,31 80,56 + 1,00 50,82 + 2,27 Matière II 90,89 + 0,45 82,77 + 0,37 56,64 + 0,58 Matière III 91,95 + 0,64 84,88 + 0,64 57,19 + 3,57 Cisplatine 89,89 + 0,21 79,79 + 0,36 39,70 + 3,84 Le Tableau 2 présente l'activité anti-tumorale à l'encontre de la lignée cellulaire de leucémie P-388 des composés de la présente invention. Tableau 21 Activité anti-tumorale in vitro à l'encontre de la lignée cellulaire de leucémie P-388 Composés Concentration des Composés 500 pM 50 pM 5 pM Matière I 89,55 + 0,66 71,71 + 1,32 43,26 + 1,39 Matière II 97,47 + 0,24 74,45 + 1,86 50,16 + 0,41 Matière III 91,26 + 0,60 73,30 + 4,03 47,43 a 3,37 Cisplatine 88,97 + 0,56 72,72 i 1,80 33,67 + 1,75 Le Tableau 3 présente l'activité anti-tumorale à l'encontre de la lignée cellulaire de mélanome M-14 des composés de la présente invention. [Tableau 3] Activité anti-tumorale in vitro à l'encontre de la lignée cellulaire de mélanome M-14 Composés Concentration des Composés 500 pM 50 uM 5 uM Matière I 52,78 + 0,36 32,00 + 1,50 7,41 + 2,12 Matière II 47,48 + 0,51 34 96 # 0,82 8,03 # 1,07 Matière III 46,74 + 0,55 28 37 # 1,47 5,53 + 1 32 Cisplatine 49 96 # 0,40 30,65 # 1,03 3,21 # 0,59 Comme présenté dans ces tableaux, l'activité antitumorale des composés de la présente invention à l'encontre des lignées cellulaires de leucémie est supérieure à celle du cisplatine. Cependant, à la fois ces composés et le cisplatine sont inactifs à l'encontre de la lignée cellulaire de mélanome M-14. Néphrotoxicité Un lapin pesant 1,8-2,0 kg est sacrifié par dislocation cervicale, et un rein est prélevé et lavé avec une solution saline de tampon phosphate (PBS pH : 7,4). Par mise en place dans du milieu DME/F12, la partie de peau du rein est recueillie et homogénéisée à l'aide d'un homogénéiseur Dounce. Après homogénéisation, les cellules de tube contourné proximal du rein du lapin sont recueillies par élimination des autres cellules à l'aide d'une barre d'agitation magnétique. Les cellules de tube contourné proximal qui sont obtenues sont incubées pour l'essai de toxicité. Pour mesurer la néphrotoxicité, on utilise le même essai MTT que celui utilisé pour la mesure de l'activité anti-tumorale. Egalement, les mêmes composés : Matière I, Matière Il, Matière III et cisplatine sont utilisés pour cet essai. Le Tableau 4 montre l'activité cytotoxique sur les cellules de tube contourné proximal du rein de lapin. tableau 41 Activité cytotoxique sur les cellules de tube contourné proximal du rein de lapin Composés Concentration des Composés 500 pM 50 uM 5 WM Matière I 51,71 + 0,32 28,24 + 0,97 10,81 + 0,64 Matière II 46,63 + 0,39 16,24 + 0,65 5,92 + 0,86 Matière III 32,26 + 0,71 10,42 + 0,65 3,08 + 0,43 Cisplatine 95,28 + 0,21 71,36 + 0,60 39,21 + 1,08 Comme présenté dans ce Tableau 4, les composés de la présente invention n'ont pas de néphrotoxicité significative. Par conséquent, les composés de la présente invention possèdent une toxicité relativement moindre et une activité anti-tumorale plus grande que le cisplatine. L'action des composés de 1' invention est comparable à l'action du cisplatine en tant que substance active connue en médecine, avec cependant les différences suivantes meilleure efficacité, spectre d'action différent, pratiquement pas de néphrotoxicité. Les indications qui pourraient être considérées pour les composés de l'invention sont la chimiothérapie des désordres malins (cancer). Les sortes de cancers humains pour lesquels les complexes du platine sont considérés utiles comprennent les tumeurs dans les testicules mâles, le cancer de la prostate, le carcinome ovarien, le carcinome de l'utérus et les tumeurs de la tête et du cou. Les formulations pharmaceutiques contiennent en général entre 1 et 2000, de préférence 10 à 1000 mg du ou des composant(s) actif(s) de l'invention. L'administration peut, par exemple, se faire sous la forme de comprimés, capsules, pilules, comprimés enrobés de sucre, suppositoires, pommades, gels, crèmes, poudres, poudres fines, aérosols ou sous une forme liquide. Les formes d'application liquides qui peuvent, par exemple, être utilisées comprennent les solutions huileuses ou alcooliques ou aqueuses ainsi que les suspensions et les émulsions. Les formes d'application préférées sont les comprimés qui contiennent entre 100 et 1000 mg ou les lyophilisats (par exemple pour la préparation des solutions) contenant entre 10 et 200 mg de substance active. (Exemple 1) Préparation du nitrate de Fî.3- bis(diphénylphosphino)propanel (trans-l-1,2- cyclohexanediamine) platine (II) (Etape 1) 2,50 g (6,02 mmoles) de K2PtCl4 (masse moléculaire = 415,11), dissous avec 80 ml d'eau distillée, ont été placés dans un réacteur, et 1,13 g de trans-l-(l,2- cyclohexane-diamine) e 2HC1, dissous dans 20 ml d'eau distillée, ont également été ajoutés dans le réacteur. La réaction a été effectuée, avec ajustement du pH à 6,5 avec 5% de NaOH, pendant 1 heure à la température ambiante. La poudre cristalline jaune obtenue a été séparée par filtration et purifiée avec une petite quantité d'eau distillée. Finalement, on a obtenu 1,84 g de [Pt(trans-l-DACH)Cl2] (masse moléculaire = 380,2). (Rendement : 80,4%). (Etape 2) 1 g du (Pt(trans-l-DACH)Cl2) obtenu a été mis en suspension avec 150 ml d'eau distillée. 0,89 g d'AgNO3 dissous dans 10 ml d'eau distillée a été ajouté, et mis à réagir pendant 24 heures à la température ambiante. Après filtration du mélange réactionnel et élimination du résidu, la solution filtrée a été concentrée sous pression réduite et lyophilisée. La poudre cristalline blanche obtenue a été purifiée. Finalement, on a obtenu 0,81 g de [Pt(trans-lDACH).(NO3)2] (masse moléculaire : 433,2). (Rendement : 71,7%). (Etape 3) 500 mg du [Pt(trans-l-DACH) e (NO3)2] obtenu ont été dissous dans 150 ml d'eau distillée. 480 mg de 1,3-bis(diphénylphosphino)propane (DPPP) dissous dans 30 ml d'acétone ont été ajoutés avec agitation. Au bout de 5 heures de réaction, la matière ayant réagi est distillée sous pression réduite et lyophilisée. La poudre cristalline blanc-jaune obtenue a été purifiée. Finalement, on a obtenu 456 mg de [Pt(trans-l-DACH)(DPPP)](NO3)2 H2O. Cette matière est soluble dans l'eau, l'acétone et l'éthanol. (Rendement : 45,9%). IR(KBr) : 3298, 3182(NH2), 1440, 1162 (P-C), 1392(nô3) cm-l RMN du carbone (DMSO) : 6 18,0 21,8 24,1 32,4 60,4 125,8 128,8 129,1 132,0 132,2 133,1 ppm Analyse : C33H42N4PtP207 Calculé : H 4,90 C 45,89 N 6,49 (*) Trouvé : H 4,92 C 45,68 N 6,38 (%) (Exemple 2) Préparation du nitrate de F1,2- bis(diphénvlphosphino)éthanel (trans-l-l,2- cyclohexanediamine)platine (II) 500 mg de [Pt(trans-l-DACH) e (NO3)2], obtenu à l'étape 2 de l'Exemple 1, ont été dissous dans 150 ml d'eau distillée, puis 460 mg de DPPE, dissous dans 30 ml d'acétone ont été ajoutés. On a procédé ensuite de la même façon qu'à l'Etape 3 de l'Exemple 1. Finalement, on a obtenu 425 mg de [Pt(trans-l-DACH)(DPPE)](NO3)2 e 2H20 (masse moléculaire = 867,7). (Rendement = 42,6%). IR(KBr) : 3141, 3050(NH2), 1441, 1180(P-C), 1393(NO3) cm1 RMN du carbone (DMSO) : 6 24,1 24,3 31,6 60,8 126,3 129,4 132,2 132,4 133,1 134,6 ppm Analyse : C32H42N4PtP2O8 Calculé : H 4,88 C 44,30 N 6,46 (%) Trouvé : H 4,90 C 45,00 N 6,50 (%) (Exemple 3) Préparation du nitrate de F1,3- bis(diphénolphosphino)propanel(trans-d-1 2- cyclohexanediamine) platine (II) (Etape 1) La réaction a été effectuée de la même manière qu'à l'Etape 1 de l'Exemple 1, excepté que du trans-d-DACH e 2HCl a été utilisé au lieu du trans-l-DACH e 2HCl. On a obtenu 1,92 g de (Pt(trans-d-DACH)Cl2]. (Rendement : 83,9%). (Etape 2) A l'aide du [Pt(trans-d-DACH)Cl2], on a effectué la réaction de la même manière que l'Etape 2 de l'Exemple 1. On a obtenu 0,89 g de tPt(trans-d-DACH)(NO3)2]. (Rendement : 78,1%). (Etape 3) A l'aide du [Pt(trans-d-DACH)(NO3)2], on a effectué la réaction de la même manière que l'Etape 3 de l'Exemple 1. On a obtenu 459 mg de (Pt(trans-d-DACH)(DPPP)] e (NO3)2. (Rendement : 47,2%). IR(KBr) : 3298, 3182(NH2), 1440, 1162(P-C), 1392(NO3) cm1 RMN du carbone (DMSO) : ô 18,0 21,8 24,1 32,4 60,4 125,8 128,8 129,1 132,0 132,2 133,1 ppm Analyse : C33H40N4PtP2O6 Calculé : H 4,77 C 46,87 N 6,62 (%) Trouvé : H 4,70 C 46,89 N 6,39 (%) (Exemple 4) Préparation du nitrate de bis(diphénylphosphino)éthane](trans-d-1,2- coclohexanediamine)platine (II) 500 mg de [Pt(trans-d-DACH) e (NO3)2] obtenu à l'Etape 2 de l'Exemple 3 ont été dissous avec 150 ml d'eau distillée, puis 460 mg de DPPE dissous avec 30 ml d'acétone ont été ajoutés. On a procédé ensuite de la même façon qu'à l'Etape 3 de l'Exemple 1. Finalement, on a obtenu 412 mg de [Pt(trans-d-DACH)(DPPE)] (NO3)2 e H2O (masse moléculaire = 849,7). (Rendement = 42,2%). IR(KBr) : 3141, 3050(NH2), 1441, 1180(P-C), 1393(NO3) cm-l RMN du carbone (DMSO) : 6 24,1 24,3 31,6 60,8 126,3 129,4 132,2 132,4 133,1 134,6 ppm Analyse : C32H40N4PtP2o7 Calculé : H 4,75 C 45,23 N 6,59 (%) Trouvé : H 4,68 C 45,10 N 6,62 (%) (Exemple 5) Préparation du nitrate de F1,3- bis(diphénylphosphino)propanei(cis-1,2- cyclohexanediamine)platine (II) (Etape 1) 2,50 g (6,02 mmoles) de K2PtCl4 (masse moléculaire 415,11), dissous dans 80 ml d'eau distillée, ont été introduits dans un réacteur, et 1,13 g de cis-(1,2cyclohexane-diamine) e 2HCl, dissous dans 20 ml d'eau distillée, ont également été ajoutés dans le réacteur. La réaction a été effectuée, avec ajustement du pH à 6,5 avec 5% de NaOH, pendant 1 heure à la température ambiante. La poudre cristalline jaune obtenue a été séparée par filtration et purifiée avec une petite quantité d'eau distillée. Finalement, on a obtenu 1,92 g de [Pt(cis-DACH)Cl2] (masse moléculaire = 380,2). (Rendement : 83,9%). (Etape 2) 1 g du [Pt(cis-DACH)Cl2] obtenu a été mis en suspension dans 150 ml d'eau distillée. 0,89 g d'AgNO3 dissous dans 10 ml d'eau distillée a été ajouté, et mis à réagir pendant 24 heures à la température ambiante. Après filtration du mélange réactionnel et élimination du résidu, la solution filtrée a été concentrée sous pression réduite et lyophilisée. La poudre cristalline blanche obtenue a été purifiée. Finalement, on a obtenu 0,91 g de (Pt(cis- DACH)(NO3)2] (masse moléculaire = 433,2). (Rendement : 71,7%). (Etape 3) 500 mg du [Pt(cis-DACH) e (NO3)2] obtenu ont été dissous dans 150 ml d'eau distillée. 480 mg de 1,3-bis(diphénylphosphino)propane (DPPP), dissous dans 30 ml d'acétone, ont été ajoutés avec agitation. Au bout de 5 heures de réaction, la matière ayant réagi est distillée sous pression réduite et lyophilisée. La poudre cristalline blanc-jaune obtenue a été purifiée. Finalement, on a obtenu 457 mg de [Pt(cis-DACH)(DPPP)](NO3)2 H20. Cette matière est soluble dans l'eau, l'acétone et l'éthanol. (Rendement : 46,0%). IR(KBr) : 3298, 3182(NH2), 1440, 1162(P-C), 1392(NO3) cm-l RMN du carbone (DMSO) : 6 18,0 21,8 24,1 32,4 60,4 125,8 128,8 129,1 132,0 132,2 133,1 ppm Analyse : C33H42N4PtP207 Calculé : H 4,90 C 45,89 N 6,49 (%) Trouvé : H 4,92 C 45,68 N 6,38 (%) (Exemple 6) Préparation du nitrate de F1,2- bis(diphénylphosphino )éthanel(cis-1,2- cyclohexanediamine )platine (II) 500 mg de [Pt(cis-DACH) e (NO3)2], obtenu à l'Etape 2 de l'Exemple 1, ont été dissous dans 150 ml d'eau distillée, puis 460 mg de DPPE dissous dans 30 ml d'acétone ont été ajoutés. On a ensuite procédé comme à l'Etape 3 de l'Exemple 1. Finalement, on a obtenu 425 mg de EPt(cis- DACH)(DPPE)](NO3)2 e 2H20. (Rendement = 42,8%). IR(KBr) : 3141, 3050(NH2), 1441, 1180(P-C), 1393(NO3) cm1 RMN du carbone (DMSO) : ô 24,1 24,3 31,6 60,8 126,3 129,4 132,2 132,4 133,1 134,6 ppm Analyse : C33H42N4PtP208 Calculé : H 4,88 C 44,30 N 6,46 (%) Trouvé : H 4,93 C 44,84 N 6,39 (%) REVENDICATIONS 1 - Complexe du platine (Il), ayant la formule (I) suivante ou sel nitrate de celui-ci dans laquelle - n est un entier égal à 2 ou 3 ; et représente le 1,2-diaminocyclohexane (DACH) choisi dans le groupe constitué par le trans-l-DACH, le trans-d-DACH et le cis-DACH. 2 - Procédé de préparation du composé de formule (I), tel que défini à la revendication 1, caractérisé par le fait que l'on conduit les réactions conformes au schéma réactionnel suivant dans lequel - n est un entier égal à 2 ou 3 - DACH est choisi dans le groupe constitué par le trans-l DACH, le trans-d-DACH et le cis-DACH - DPPP est le 1,3-bis(diphénylphosphino)propane ; et - DPPE est le 1,2-bis(diphénylphosphino)éthane. 3 - Composition pharmaceutique pour inhiber la croissance de néoplasmes chez les mammifères, caractérisée par le fait qu'elle comprend une quantité efficace pour lutter contre les néoplasmes d'un complexe du platine (II) de formule (I), tel que défini à la revendication 1, en combinaison avec un support pharmaceutiquement acceptable.