Brevet FR2748206A1 — publié le 19971107

La présente invention est relative à une nouvelle utilisation du bromure de Pinaverium dans les pathologies gastrointestinales, maladies inflammatoires digestives (IBD), colites, ulcères, maladie de Crohn ou colopathies fonctionnelles (IBS), au cours desquelles apparaissent des phénomènes prolifératifs entraînant des complications pathologiques. Le renouvellement constant et rapide de l'épithélium du tractus digestif est un élément important pour le maintien de l'intégrité de la muqueuse mais il l'est aussi pour le développement de tumeurs et d'hypertrophies. On observe toujours dans ces derniers cas une prolifération anormale des cellules épithéliales et un nombre accru des zones prolifératives ; ceci se retrouve également chez les patients à risques familiaux de cancer du colon, ou chez les patients souffrant de maladies prédisposant au cancer du tube digestif (gastrites chroniques, maladies inflammatoires digestives, maladie de Crohn, colites ulcératives, polypes coloniques...). Par ailleurs, il a été montré que l'inflammation de l'intestin peut provoquer à la fois une hypertrophie des cellules musculaires lisses, et une hyperplasie. I1 en résulte un épaississement de la paroi musculaire et donc une altération de la motilité, entraînant l'apparition de complications nécessitant des traitements chirurgicaux. De plus, l'inhibition de la prolifération des cellules cancéreuses est un facteur déterminant pour la prévention et le traitement des cancers du tube digestif ainsi que des métastases. Le bromure de Pinaverium est le seul antagoniste calcique sélectif du tractus intestinal, à activité spasmolytique qui est prescrit en traitement chronique des troubles fonctionnels digestifs ("Irritable Bowel Syndrome" ou IBS). Ce composé a notamment été décrit dans le brevet français 2 097 032. De façon surprenante, les auteurs de la présente invention ont maintenant montré par des études réalisées in vitro que le bromure de Pinaverium est capable d'inhiber la prolifération de cellules cancéreuses et hyperplasiques du tube digestif et ce, de façon supérieure à un autre antagoniste calcique, le Verapamil. Par ailleurs, une étude réalisée in vivo a permis de montrer également l'efficacité du bromure de Pinaverium sur la diminution de tumeurs induites chez l'animal. Le bromure de Pinaverium peut donc être utilisé en tant que médicament préventif d'un cancer du tube digestif chez le sujet sain comme chez le sujet atteint de pathologie digestive, tel que l'IBS. I1 exercera alors chez ce dernier un effet préventif ou curatif complémentaire de son effet sur 1'IBS. Ce composé peut également être utilisé en traitement curatif de l'hépatocarcinome ou du cancer du pancréas et plus généralement de tout cancer du tractus hépatodigestif. La présente invention a donc pour objet l'utilisation du bromure de Pinaverium pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou le traitement des maladies du tractus hépatodigestif dues à une prolifération excessive des cellules de celui-ci. Plus particulièrement, l'invention a pour objet l'utilisation du bromure de Pinaverium pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou le traitement des hyperplasies cellulaires intestinales liées aux maladies inflammatoires digestives, ou à la prévention des hypertrophies de la paroi des cellules musculaires lisses du tractus intestinal et des troubles de la motricité dues aux maladies inflammatoires du tube digestif ("Inflammatory Bowel Disease" ou IBD, maladie de Crohn, colite ulcérative) caractéristiques de 1'IBS. L'invention vise également l'utilisation du bromure de Pinaverium pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement d'un cancer du tractus hépatodigestif comprenant le cancer du colon et de l'estomac, l'hépatocarcinome et le cancer du pancréas. Elle a également pour objet l'utilisation du bromure de Pinaverium pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention et au traitement du cancer du tractus hépatodigestif chez des patients souffrant de syndromes du colon irritable ("Irritable Bowel Syndrome" ou IBS), en traitement complémentaire et simultané de celui des symptomes caractéristiques de 1'IBS. L'invention comprend également une méthode de traitement préventif ou curatif des maladies du tractus hépatodigestif dues à une prolifération excessive des cellules de celui-ci, consistant à administrer à un patient un médicament contenant à titre de principe actif du bromure de Pinaverium. Elle vise enfin l'utilisation du bromure de Pinaverium pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des maladies inflammatoires digestives telles que 1'IBD (maladie inflammatoire intestinale ou "Inflammatory Bowel Disease"), la maladie de Crohn ou la colite ulcérative, généralement associées à l'épaississement de la muqueuse. Préférentiellement, dans le cadre de la présente invention, le bromure de Pinaverium est utilisé en étant administré en une quantité journalière comprise entre 50 mg à 450 mg. L'administration est réalisée par voie orale, ou par voie injectable, à partir d'une solution dosée à 0,2 à 1 mg/ml. Les avantages de l'invention apparaissent de façon plus détaillée dans les essais décrits ci-après. Par ailleurs, la figure suivante montre l'effet du bromure de Pinaverium ( - ) sur l'inhibition de la croissance de cellules carcinoïdes pancréatiques comparé à celui du Verapamil (-0-). Essai 1 : Inhibition de la prolifération des cellules du cancer du colon par le bromure de Pinaverium comparée à celle induite par un autre inhibiteur calcique (Verapamil) La lignée cellulaire de cancer du colon HT29 utilisée (à l'origine isolée à partir d'adénocarcinome humain du colon) a été obtenue auprès de l'ATCC (American Type Culture Collection). Les cellules sont cultivées à raison de 104 ou 5 x 104 cellules dans un puits de 200 ul de milieu de culture composé de RPMI 1460 supplémenté de 10 % de sérum de veau foetal, 2 mM de I-glutamine et 25 uM de gentamicine. Le bromure de Pinaverium (ou le Verapamil), mis en solution dans l'éthanol à 50 % ou le DMSO, est ajouté à la culture de cellule à diverses concentrations, et le pourcentage d'inhibition de la prolifération cellulaire est évalué par la mesure de l'incorporation de la thymidine tritiée (3HThdR) celle-ci étant ajoutée dans chaque puits à raison de 37 KBq (1 psi), les puits sont prélevés et comptés 15 heures plus tard au moyen de "Filter Mate Cell Harvester et Matrix 9600TM Direct Beta Counter" (Packard). Les résultats sont les suivants Concentration du I % Inhibition % Inhibition produit testé bromure de Verapamil (% en poids) Pinaverium 3H1 hdR 0,025 78 17 0,05 82 17 0,1 86 27 L'action inhibitrice du bromure de Pinaverium est de 3 à 5 fois supérieure à celle du Verapamil. Essai 2: Action du bromure de Pinaverium sur les cellules d'hépatocarcinome Les cellules d'hépatocarcinome de rat LFC (VPR42, Villejuif) sont cultivées à raison de 104 ou 5 x 104 cellules dans un puits de 200 ul de milieu de culture. Les produits à tester (bromure de Pinaverium et Verapamil) sont mis en solution dans l'éthanol à 50% et utilisés aux concentrations de 0,1% et 1% en poids. L'inhibition de la prolifération cellulaire est évaluée à l'aide de thymidine tritiée tel que décrit dans l'essai 1. L'évaluation est faite comparativement au produit de référence qui est le Verapamil. Les résultats montrent un pourcentage d'inhibition de prolifération de 85 à 88% pour le bromure de Pinaverium et de 72% pour le Verapamil. Essai 3 Effet du bromure de Pinaverium sur la croissance des cellules intestinales carcinoïdes STC-1 Les lignées de cellules de cancer intestinal de souris STC-1 sont cultivées dans un milieu DMEM contenant 15 % de sérum de cheval et 2,5 % FCS. Les produits à étudier sont ajoutés à la culture et la croissance cellulaire évaluée par comptage des cellules ou plus souvent par technique de fluorescence, basée sur l'hydrolyse enzymatique cellulaire du substrat fluorogenetic, le 4-méthylumbelliferyl heptanoate (MUH); en effet, les cellules vivantes incubées avec MUH génèrent un signal fluorescent proportionnel à leur nombre et déterminé à l'aide d'un "Titentec Fluoroscan II" (Flow Laboratory), et donné en unité arbitraire de fluorescence. Le bromure de Pinaverium s'est montré dans le test deux fois plus actif que le Verapamil. (DE50 PINAVERIUM = 7 luM ; DE50 VERAPAMIL = 13 ,uM) Essai 4 Etude de l'inhibition de la croissance des cellules carcinoïdes pancréatiques BON par le bromure de Pinaverium Les lignées de cellules humaines carcinoïdes pancréatiques BON sont cultivées dans un milieu DMEM / F12K (1/1) additionné de 10 % FCS. Le Verapamil et le bromure de Pinaverium sont ajoutés à la culture et la croissance cellulaire est déterminée au bout de 8 jours par une technique de fluorescence telle que décrite dans l'essai 3. Les résultats reportés sur la figure montrent l'efficacité du bromure de Pinaverium dans l'inhibition de la croissance des cellules carcinoïdes pancréatiques BON, et sa supériorité sur le Verapamil (DE50 PINAVERIUM = 7,2 uM ; DE50 VERAPAMIL + 43,6 uM). EssaiS: Inhibition par le bromure de Pinaverium de l'hyperplasie des cellules du muscle lisse intestinal de rat induite par le PDGF (Platelet Derived Growth Factor) Les cellules musculaires lisses intestinales sont cultivées dans un milieu de culture contenant 10 % de sérum foetal bovin, puis sont exposées au PDGF (facteur de croissance retrouvé au cours des inflammations) pendant 20 heures. La croissance cellulaire est évaluée par l'incorporation de thymidine tritiée. Le bromure de Pinaverium (10-5 M) inhibe totalement la croissance des cellules musculaires lisses intestinales induites par le facteur a'inflammation PDGF. Il a donc un effet bénéfique sur les phénomènes d'inflammation du tube digestif. Essai 6 : Effet du bromure de Pinaverium sur le diamètre des tumeurs induites chez la souris nude " Les tumeurs sont induites par injection souscutanée de cellules de cancer du colon HT29 chez des souris u nude ". Le bromure de Pinaverium est injecté par voie intra-péritoneale quelques heures avant l'injection des cellules HT29. L'évolution tumorale est évaluée par la mesure du diamètre de la tumeur locale induite en fonction de la durée de 1expérimentation qui est de 44 jours. On observe une réduction du diamètre des tumeurs de 30 % à partir du 25ème jour de l'expérimentation. REVENDICATIONS 1. Utilisation du bromure de Pinaverium pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement des maladies du tractus hépatodigestif dues à une prolifération excessive des cellules de celui-ci. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'il s'agit d'hyperplasie cellulaire intestinale ou d'hypertrophie de la paroi des cellules musculaires lisses du tractus intestinal et des troubles de la motilité dus aux maladies inflammatoires du tube digestif ("Inflammatory Bowel Disease" ou IBD, maladie de Crohn, colite ulcérative) caractéristiques des syndromes du colon irritable (lES). 3. Utilisation selon la revendication 1 pour la préparation d'un médicament destinée à la prévention ou au traitement d'un cancer du tractus hépatodigestif comprenant le cancer du colon et de l'estomac, l'hépatocarcinome et le cancer du pancréas. 4. Utilisation selon la revendication 1 pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention et au traitement du cancer du tractus hépatodigestif chez des patients souffrant de syndromes du colon irritable ("Irritable Bowel Syndrome" ou IBS), en traitement complémentaire et simultané de celui des symptomes caractéristiques de 1'IBS. 5. Utilisation du bromure de Pinaverium pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des maladies inflammatoires digestives telles que la maladie inflammatoire intestinale ("Inflammatory Bowel Disease" ou IBD), la maladie de Crohn ou la colite alcérative, généralement associées à 1 l'épaississement de la muqueuse. 6. Utilisation selon la revendication 1 dans laquelle le bromure de Pinaverium est utilisé en quantité suffisante pour être administré à raison de 50 à 450 mg par jour par voie orale, ou bien par voie injectable, à partir d'une solution dosée à 0,2 à 1 mg/ml.