Brevet FR2757392A1 — publié le 19980626

L'invention concerne des utilisations d'un extrait de la plante Cordia dichotoma, dans les domaines cosmétique et pharmaceutique, notamment dermatologique. La plante Cordia dichotoma est une plante de la famille des Boraginaceae que l'on trouve en particulier en Nouvelle Calédonie. Celle plante est bien connue en médecine traditionnelle polynésienne pour ses applications comme anti-inflammatoire. On prépare en particulier à partir de cette plante des cataplasmes. Ses propriétés émollientes sont également bien connues ainsi que ses propriétés d'aseptsie. Les inventeurs de la présente demande ont maintenant découvert que des extraits de cette plante présentaient en outre d'excellentes propriétés antiélastasique, ce qui permet leur utilisation comme principe actif dans des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques, notamment dermatologiques, destinées à lutter contre toutes les manifestations liées au vieillissement de la peau. Plus précisément, I'invention résulte d'essais systématiques réalisés par les inventeurs en vue d'étudier les réactions enzymatiques des extraits de plante Cordia dichotoma. Ces essais systématiques ont permis de mettre en évidence une certaine activité de ses extraits sur l'élastase. Plus précisément, les essais systématiques réalisés par les inventeurs ont porté sur les enzymes suivantes : élastase, tyrosinase et 3',5'AMPcphosphodiestérase. L'élastase, enzyme de dégradation de l'élastine, est présente dans les cellules, notamment dans les cellules dermiques (fibroblastes) ainsi que, dans une moindre mesure, dans les cellules de l'épiderme (kératinocytes). On a observé que la quantité et l'activité de l'élastase augmentent au cours du processus de vieillissement cutané, aussi bien intrinsèque qu'actinique. Par une dégradation des fibres d'élastine, I'action de l'élastase a pour conséquence une perte de l'élasticité cutanée, un relâchement de la peau et l'apparition de rides. La 3',5'-AMPc-phosphodiestérase, désignée ci-après "phosphodiestérase" ou "PDE", est l'enzyme qui transforme l'AMPc, second messager qui intervient dans le contrôle du métabolisme cellulaire, en AMP inactif. L'inhibition de la PDE par un agent inhibiteur permet en conséquence de maintenir un taux intracellulaire élevé d'AMPc, ce qui a pour effet notamment d'activer les protéines kinases A, et, par ce processus, permet de favoriser la dégradation des lipides. De plus, il est également connu que l'AMPc intervient pour contrer certains processus inflammatoires (M. Hitchcock, J. Immunol. (1977) 188 557). Egalement, il a été décrit que la phosphodiestérase augmente avec l'âge (S.K. Puri et L. Volicer, Mechanisms of Aging and Dev. (1981) X 239). De ce fait, son inhibition contribuera à lutter contre les effets du vieillissement, en particulier au niveau cutané. La tyrosinase est l'enzyme clé de la synthèse de la mélanine et donc du métabolisme de la pigmentation cutanée. En cosmétique, son inhibition, par des agents appropriés, trouve des applications dans le traitement local des hyperpigmentations cutanées, telles que les tâches pigmentaires de sénescence. Ces tests ont montré la très nette activité d'extraits de la plante Cordia dichotoma sur l'inhibition de l'élastase, et ont conduit les inventeurs de la présente invention à la préparation de compositions cosmétiques ou dermatologiques utiles dans toutes les applications où l'on cherche à lutter contre le vieillissement de la peau. Ainsi, selon l'une de ces caractéristiques essentielles, l'invention concerne l'utilisation d'un extrait de la plante Cordia dichotoma comme principe actif d'une composition cosmétique destinée à lutter contre les effets du vieillissement sur la peau, notamment en préservant ou améliorant les qualités biomécaniques de la peau, en particulier son élasticité, en retardant l'apparition des rides ou en diminuant leur profondeur, et en améliorant la fermeté cutanée. Selon une autre caractéristique essentielle de l'invention, elle concerne également l'utilisation d'un extrait de la plante Cordia dichotoma pour la préparation d'une composition pharmaceutique, notamment dermatologique, destinée au traitement des effets du vieillissement intrinsèque ou actinique de la peau, ledit extrait étant incorporé dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Dans ces deux domaines d'application cosmétique et dermatologique, ce sont essentiellement les feuilles qui s'avèrent intéressantes pour la préparation des extraits de l'invention. L'extrait est avantageusement obtenu par macération de la partie de plante dans un solvant ou un mélange de solvants, suivie d'une filtration. Le solvant de la solution obtenue peut être au besoin évaporé pour obtenir l'extrait sec. De préférence, l'évaporation sera réalisée sous pression réduite. A titre de solvants avantageusement utilisés, on citera: - l'eau, - les alcools en C1 à C6, tels que le méthanol, l'éthanol et l'isopropanol - les polyols en C2 à C6, tels que le propylèneglycol ou le glycérol, et leurs mélanges. On pourra également obtenir l'extrait de la plante par la technique dite de l'extraction au dioxyde de carbone supercritique. Selon un mode de réalisation avantageux, cette composition cosmétique ou pharmaceutique comprend de 0,001 à 10 % en poids et en particulier de 0,02 à 1 % en poids d'extrait sec de la plante par rapport au poids total de la composition finale. Par ailleurs, les essais réalisés par les inventeurs ont clairement montré que, non seulement le rendement d'extraction était lié à la nature du solvant utilisé mais également l'activité enzymatique de l'extrait. Les exemples joints en annexe montrent clairement l'effet du choix du solvant sur l'activité enzymatique de l'extrait.. Les compositions cosmétiques selon l'invention peuvent être formulées selon toute forme acceptable pour leur emploi en cosmétologie. Il peut, en particulier, s'agir d'une composition sous forme appropriée pour une application topique, en particulier sous forme d'une crème ou d'un gel, en particulier d'une crème ou d'un gel pour le visage, les mains, le buste ou le corps. Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation de l'extrait de plante comme agent cosmétique, ledit agent étant incorporé dans une composition cosmétique telle que définie précédemment. Cet agent cosmétique sera notamment utilisé dans toutes les applications où l'on recherche, en particulier, à inhiber l'action de l'élastase. Les compositions cosmétiques de l'invention seront également utilisées en particulier pour lutter contre les effets du vieillissement sur la peau, notamment en préservant ou améliorant les qualités biomécaniques de la peau, en particulier son élasticité, en retardant l'apparition des rides ou en diminuant leur profondeur et en améliorant la fermeté cutanée. Ainsi, selon un autre aspect, l'invention concerne des compositions cosmétiques destinées au soin de la peau, en particulier pour lutter contre les effets du vieillissement cutané. Comme on l'a vu précédemment, l'efficacité des compositions cosmétiques aussi bien que dermatologiques précédemment décrites a pu être corrélée avec un certain nombre d'activités anti-élastasiques. Dans toutes les applications, les compositions utilisées sont de préférence des compositions à application topique destinées à être appliquée sur la peau. Les exemples qui suivent sont donnés à titre purement illustratif de l'invention. Sauf indication contraire, les proportions données dans les exemples de compositions sont exprimées en pourcentage en poids Exemple Préparation d'un extrait aqueux selon l'invention 1 g de feuilles de la plante Cordia dichotoma préalablement séchées et broyées est introduit dans 200 ml d'eau. La suspension est laissée, à température ambiante sous agitation modérée, pendant 4 heures. On filtre ensuite le mélange, puis on évapore le solvant du filtrat ainsi obtenu sous pression réduite. On récupère alors l'extrait sec. Pour préparer les compositions selon l'invention, il est possible d'utiliser soit la solution d'extrait de plante, éventuellement concentrée, soit l'extrait sec. Exemple2 Mise en évidence de l'activité inhibitrice des extraits sur différentes enzvmes 2.1 Extrait utilisés Les tests d'inhibition enzymatiques étant menés en milieu aqueux, il est nécessaire d'utiliser des solvants d'extraction miscibles avec l'eau. Ainsi, en procédant comme décrit dans l'exemple 1, on a réalisé trois extraits différents avec respectivement de l'eau, du méthanol et du DMSO. La concentration de ces extraits est ensuite ajustée à 0,5 % en extrait sec de plante, soit par ajout soit par évaporation du solvant d'extraction. Tous les tests décrits ci-après ont été réalisés en trois exemplaires. Les valeurs rapportées sont des moyennes arithmétiques. 2.2. Inhlbltlon de l'élastase a) Principe du test: Les techniques de mise en évidence de l'inhibition de l'élastase ont été décrites par différents auteurs (BAUMSTARK, J.S. et al., Biochim. Biophys. Acta (1963), 21 676; BIETH, B. et al., Biochem. Med., (1974), 11, 350; C. FRANCK, I. BYRJALSEN, Biol. Chem. Hoppe Seyler, (1988) Z2 (8) 677-82). Le principe actif est le suivant : un substrat est mis en présence d'élastase en milieu aqueux, puis, après incubation, on effectue une mesure des produits de la réaction. En l'occurrence, le substrat est le N-succinyl-(Ala)3-para- nitroanilide, disponible auprès de la Société Sigma (Réf.: S 4760) en solution à 0,5 mg/ml dans un tampon Tris-HCl 0,2 M à pH 8,8. L'élastase ajoutée au milieu réactionnel libère la para-nitroaniline et le résidu peptidique. L'évolution de la réaction est observée au spectrophotomètre Uvikon 9418 (Kontron S.A.) à la longueur d'onde X de 379 nm. La composition du milieu réactionnel est la suivante: - solution de substrat (0,5 mg/ml de tampon) : 200 1 - tampon Tris-HCl : 600 1 - solvant d'extraction : 100 M1 Le solvant d'extraction contient ou non l'effecteur, c'est-à-dire l'extrait de la plante Cordia dichotoma, à la concentration de 0,5 % en poids, selon qu'il s agit de l'essai avec effecteur, ou de l'essai sans effecteur (activité basale de l'enzyme). A ces 900 M1 de milieu réactionnel, on ajoute extemporanément 100 M1 de la solution d'enzyme à raison de 35 U/ml dans le tampon Tris-HCl. On mesure alors la cinétique de la libération de para-nitroaniline par l'absorption d'une lumière mono-chromatique de longueur d'onde 379 nom au moyen du spectrophotomètre, ce qui permet de calculer le pourcentage d'inhibition IE suivant la formule -ci-dessous: IE = #AbB / mn - #AbE / mn x 100 hAbB/mn dans laquelle hAbB / mn est la différence d'absorbance par minute du milieu réactionnel pour l'activité basale, et hAbE / mn, la différence d'absorbance du milieu réactionnel pour l'essai avec effecteur. Les valeurs d'absorbance prises en compte sont celles correspondantes à la période linéaire de l'évolution de l'absorbance en fonction du temps. Les résultats figurent au tableau I ci-après. 2.3 Inhlbltlon de la phosphodiestérase (PDE) Le principe de ce test est basé sur l'hydrolyse de la 3',5'-adénosine monophosphate cylcique (AMPC) en adénosine monophosphate (AMP). La formation d'AMP est mesurée par analyse HPLC. La composition du milieu réactionnel est indiquée ci-dessous. Les solutions des réactifs sont réalisées dans du tampon Tris-HCl 0,05 M à pH 7,5. - solution d'AMPC (substrat) à 0,25% dans le tampon 80 Fl - solvant, sans ou avec effecteur à 0,5% 80 ,ul - tampon Tris-HCl 480 il A ce milieu, on ajoute extemporanément 160 ,ul de PDE à 0,5 U/ml dans le tampon Tris-HCl. Au temps t = 5 minutes, on mesure la quantité d'AMP formée en calculant la surface d'intégration du pic de l'AMP sur le chromatogramme fourni par l'appareil HPLC (KONTION S.A.). On peut alors estimer le taux d'inhibition de la PDE IA par l'effecteur suivant la formule: 1A = SAMPh - SAMPe X100 SAMPb dans laquelle SAPPb représente la surface d'intégration du pic de l'AMP pour l'activité basale de l'enzyme (sans effecteur) et SAMPe représente la surface d'intégration du pic de l'AMP pour l'activité de l'enzyme en présence de l'effecteur. Les résultats obtenus figurent en Tableau I ci-après. 2.4 Inhlbltlon de la tyrosinase Le principe de ce test est basé sur la formation de dopachrome à partir de la L-tyrosine, par l'action de la tyrosinase. Il est rappelé que la L-tyrosine, en présence de tyrosinase et d'oxygène, s'oxyde en L-DOPA qui s'oxyde à son tour, encore par l'action de la tyrosinase, en dopaquinone. Celle-ci se cyclise alors en cyclodopa, qui s'oxyde en dopachrome, précurseur de mélanines et qui absorbe la lumière à la longueur d'onde de 480nm. tyrosinase tyrosinase L-tyrosine b L-DOPA ------ > dopachrome (h = 480 nm) V mélanines La formation de dopachrome peut donc être suivie par spectrophotométrie. Pour cette méthode, on pourra se reporter en particulier aux publications de S.H. Pomerantz. Arch. Biochem. Biophys. (1974) 160 73-82, ou de J. Barber, J. Invest. Dermtaol. (1984) 83 145-149. La composition du milieu réactionnel est indiquée ci-dessous. Les solutions des réactifs sont réalisées dans du tampon phosphate 0,02 M à pH 6,9. - solution de L-tyrosine (ler substrat) à 1 mM dans le tampon 333 ,ul - solution de L-DOPA (2ème substrat) à 1 mM dans le tampon 333 ,ul - solvant, sans ou avec effecteur à 0,5% 333 Ill A ce milieu réactionnel, on ajoute extemporanément 33 Fl de solution de tyrosinase à la concentration de 2400 U/ml dans le tampon phosphate. On mesure alors la cinétique de la formation de dopachrome par l'absorption d'une lumière monochromatique de longueur d'onde 480nm au moyen d'un spectrophotomètre Uvikon 941 (KONTION S.A.), ce qui permet de calculer, pour la partie linéaire de l'évolution de l'absorbance en fonction du temps, le pourcentage d'inhibition IT de la tyrosinase suivant la formule ci-dessous: A AbB/mn - A AbE/mn IT = A AbB/mn X 100 dans laquelle hAbB/mn est la différence d'absorbance par minute du milieu réactionnel pour l'activité basale de l'enzyme (sans effecteur), et hAbElmn, la différence d'absorbance du milieu réactionnel pour l'essai avec effecteur. Les résultats figurent au Tableau I ci-après. TABLEAU I TAUX D'INHIBITION ENZYMATIQUE POUR LES EXTRAITS DE L'INVENTION EXTRAITS Eeau Emethanol EDMSO IE(élastase) 96 1 14 1T (tyrosinase) 1 IA(PDE) 2 1 2 Eau : extrait aqueux, à 0,5 % Eméthanol : extrait méthanolique, à 0,5 % EDMSO : extrait au DMSO, à 0,5 % Les résultats figurant au Tableau I ci-dessus démontrent l'intérêt des extraits selon l'invention, dans les domaines de la cosmétique et de la pharmacie, notamment en dermatologie, dès qu'il s'agit de bloquer, de diminuer l'importance ou de réguler l'action de certaines enzymes. Plus précisement, il ressort clairement que l'action de l'extrait aqueux de Cordia dichotoma est particulièrement importante sur l'inhibition de l'élastase. Cependant, cet extrait ne présente aucune action d'inhibition de la tyrosinase ni de la phosphodiéstase. Les extraits méthanoliques et DMSO de cette plante ne semblent avoir aucun effet inhibiteur sur les autres enzymes testées. De ce fait, les extraits de Cordia dichotoma, en particulier les extraits aqueux, peuvent être avantageusement utilisés pour les différentes applications citées plus haut découlant de l'inhibition de l'élastase, telles que le raffermissement cutané et la lutte contre les effets du vieillissement de la peau, tels que l'apparition des rides. Exemple3 Gel cosmétique anti-rides - Extrait sec de l'exemple 1, selon l'exemple 2 0,05 g - Carbomer 0,3 g - Glycérine 3,0 g - EDTA tétrasodique 0,05 g - Eau florale d'Hammamelis 3,00 g - Polyméthylméthacrylate 1,00 g - Parfums, conservateurs, colorant, neutralisant qs - Eau distillée qsp 100 g Ce gel présente un effet anti-rides et apaisant. Exemple4 Crème anti-rides pour le visage - Extrait sec selon l'exemple 1, 0,5 g - Glycéryl stéarate + PEG 100 stéarate 5,0 g - Alcool cétylique 1,0 - Alcool stéarylique 1,0 - Cire d'abeille 1,50 - Squalane 3,0 - Polyisobutène hydrogéné 4,0 - Octanoate de cétéaryle 1,50 - Tricaprylate/caprate de glycérol 3,0 - Diméthicone 1,0 - Gomme xanthane 0,2 - Carbomer 0,15 - Glycérine 2,0 - Neutralisant, conservateur, parfums, colorants qs - Eau qsp 100 Exemple 5 Crème pour peau sensible - Extrait sec de familles de Cordia dichotoma préparé selon le procédé de l'exemple 1, 0,2 g - Méthylglucose sesquistéarate 3,0 - Cire d'abeille 3,0 - Alcool béhénique 3,0 - Octanoate d'octyle 5,0 - Huile minérale fluide 7,5 - Octanoate de cétostéaryle 5,0 - Glycérine 3,0 - Gomme xanthane 0,50 - Parfums 0,30 - Conservateur, colorants qs - Eau qsp 100 Cette crème est utilisée pour le raffermissement de la peau du visage et du cou. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un extrait de la plante Cordia dichotoma comme principe actif d'une composition cosmétique destinée à lutter contre les effets du vieillissement sur la peau, notamment en préservant ou améliorant les qualités biomécaniques de la peau, en particulier son élasticité, en retardant l'apparition des rides ou en diminuant leur profondeur, et en améliorant la fermeté cutanée. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit extrait de ladite plante est un extrait de feuilles. 3. Utilisation selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit extrait est obtenu par macération de ladite plante dans un solvant ou un mélange de solvants, suivie d'une filtration et, au besoin, d'une évaporation du solvant. 4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce ledit solvant est choisi dans le groupe constitué par l'eau, les alcools en C1 à C6, tels que le méthanol, méthanol et l'isopropanol, les polyols en C2 à C6, tels que le propylèneglycol et le glycérol, et leurs mélanges. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit extrait est obtenu par extraction au dioxyde de carbone supercritique. 6. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce ladite composition cosmétique comprend de 0,001 % à 10 % en poids, et en particulier de 0,02 % à 1 % en poids, d'extrait sec de ladite plante. 7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que ladite composition cosmétique se présente sous toute forme appropriée pour une application topique, en particulier sous forme d'une crème ou d'un gel, en particulier d'une crème ou d'un gel pour le visage, les mains, le buste ou le corps. 8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que ledit extrait contenu dans ladite composition présente une action inhibitrice de l'élastase. 9. Utilisation d'un extrait de la plante Cordia dichotoma pour la préparation d'une composition pharmaceutique, notamment dermatologique, destinée au traitement des effets du vieillissement intrinsèque ou actinique de la peau, ledit extrait étant incorporé dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que ledit extrait de plante est un extrait de feuille. 11. Utilisation selon l'une des revendications 9 ou 10, caractérisée en ce que la composition présente une activité inhibitrice de l'élastase. 12. Utilisation selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisée en ce que ladite composition contient de 0,001 % à 10 % en poids, et en particulier de 0,02 % à 1 % en poids, d'extrait sec de ladite plante. 13. Utilisation selon l'une des revendications 9 à 12, caractérisée en ce que ladite composition est formulée pour une application topique sur la peau. 14. Utilisation selon l'une des revendications 9 à 13, caractérisée en ce que ledit extrait est obtenu selon un procédé défini dans l'une des revendications 3 à S.