Brevet FR2757520A1 — publié le 19980626

DERIVE DE CYCLOSPORINE, SA PREPARATION ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES QUI LE CONTIENNENT La présente invention concerne un dérivé de cyclosporine de formule sa préparation et les compositions pharmaceutiques qui le contiennent. Ce dérivé est utile pour le traitement et/ou la prophylaxie des infections à rétrovirus, et plus particulièrement du SIDA (syndrome d'immuno-déficience acquise) et de syndromes associés [ARC (AIDS related complex)] . Il présente l'avantage d'être très faiblement immunosuppresseur. Des dérivés de cyclosporine modifiés en position -3 ont été précédemment décrits comme agents immunosuppresseurs, dans le brevet européen EP 194972. Des dérivés de cyclosporine diversement modifiés et notamment le dérivé 4'-hydroxy-MeLeu-4 cyclosporine, ont été précédemment décrits dans le brevet européen EP 484281 et dans Eur. J. Immunol., 17, 1359 (1987). Ces dérivés sont utiles pour le traitement du SIDA et ne sont pas immunosuppresseurs. Dans Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 6(1), 23-26 (1996) a été décrit le dérivé de cyclosporine de formule doué d'activité anti VIH-1. Il a été trouvé maintenant que le dérivé de la cyclosporine de formule (I), est particulièrement intéressant du fait de son activité puissante et de son caractère très faiblement immunosuppresseur. Selon la présente invention le produit de formule (I) peut être obtenu par action de disulfure de diméthyle sur un dérivé 4'-hydroxy MeLeu-4 cyclosporine de formule La réaction s'effectue généralement sous atmosphère inerte, par traitement par un dérivé organométallique (lithien notamment, comme le n-butyllithium, le diisopropyl amidure de lithium ou un mélange par exemple), suivi de l'addition du disulfure de diméthyle, dans un solvant organique tel qu'un hydrocarbure (hexane par exemple) ou un éther (diéthyléther, tétrahydrofurane ou t.butylméthyléther par exemple) à une température comprise entre -78 et OOC. De préférence on opère sous azote. Le dérivé 4'-hydroxy-MeLeu-4 cyclosporine de formule (II) peut être préparé comme décrit dans la demande de brevet européen EP 484281. Le nouveau dérivé de la cyclosporine de formule (I) peut être purifié le cas échéant par des méthodes physiques telles que la cristallisation ou la chromatographie. Le nouveau dérivé de cyclosporine selon la présente invention est particulièrement utile pour la prophylaxie et le traitement des affections à rétrovirus et plus particulièrement du SIDA et de syndromes associés. Par prophylaxie on sous-entend notamment le traitement des sujets qui ont été exposés aux virus VIHs, en particulier les séropositifs asymptomatiques qui présentent le risque de développer la maladie dans les mois ou les années à venir après la primoinfection. Le produit selon l'invention manifeste une activité anti-rétrovirus à des concentrations dépourvues d'effet cytotoxique ou cytostatique. L'activité du produit de formule (I) a été mise en évidence dans la technique décrite par J.F. Mayaux et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 91, 3564-68 (1994). Dans cette technique il s'est montré actif à une concentration de 84 nM. L'exemple suivant illustre la présente invention. Exemple La [(R)-méthylthio-Sar] 3-[4'-hydroxy-MeLeu]4-cyclosporine A est préparée selon la méthode suivante: A une solution de 25,2 cm3 de diisopropylamine (préalablement distillée sur hydrure de calcium) dans 330 cm3 de tétrahydrofuranne (préalablement distillé sur sodium) refroidie à une température voisine de -100C et sous azote, on ajoute en 20 minutes , 111 cm3 d'une solution de n-butyllithium 1,6 M dans l'hexane en maintenant la température à 0 C. Le mélange est agité à OOC pendant 20 minutes, puis refroidi à une température voisine de -780C. La solution ainsi obtenue est transférée sous azote, par une canne de transfert, sur une solution de 14,45 g de [4'-hydroxy-MeLeu]4-cyclosporine A dans 290 cm3 de tétrahydrofuranne préalablement refroidie à une température voisine de -780C en maintenant la température vers -680C. Le mélange résultant est agité à une température voisine de -760C pendant 20 minutes, puis 52 cm3 d'une solution de n-butyllithium 1,6 M dans l'hexane sont ajoutés en 10 minutes. L'agitation est maintenue 30 minutes puis 22 cm3 de disulfure de diméthyle sont ajoutés en 10 minutes en maintenant la température vers -750C. Le mélange est agité à une température voisine de -780C pendant 2 heures puis à 0 C pendant 18 heures. On verse lentement sur le mélange réactionnel un mélange de 300 cm3 d'eau distillée et de 37 cm3 d'acide chlorhydrique aqueux à 36%, puis le mélange est décanté. La phase aqueuse lavée par 200 cm3 d'éther diéthylique. Les extraits organiques sont réunis, lavés avec 100 cm3 de solution saturée en chlorure de sodium, séchés sur sulfate de sodium, filtrés et concentrés sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 400C. Le solide obtenu est trituré dans 200 cm3 de pentane, filtré, lavé au pentane puis purifié par chromatographie flash sur colonne de silice (0,04-0,063 mm) en éluant avec un gradient acétone (0 à 15% - acétate d'éthyle 100-85%, par volume de 500 cm3 par pas de 1 cm3) et en recueillant des fractions de 35 cm3. Les fractions contenant le produit attendu sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40 C pour donner un solide qui est concrété dans 20 cm3 de pentane. Après filtration, on obtient 2 g de [(R) méthylthio-Sar]3-[4'-hydroxy-MeLeu]4-cyclosporine A sous la forme d'un solide blanc fondant vers 1400C. Spectre de R.M.N. 1 H (400 Mliz, CDC13, 6 en ppm) : 1,27 (d, J = 7 Irez, 311 : CH3 8ss) ; ; 1,37 (d, J = 7,5 Hz, 3H : CII3 7ss) ; 1,64 (d, J = 5 Hz, 311 : CH3 en ly) ; de de 1.65 à 1.80 et 2,41 (respectivement mt et dd, J = 15 et 6,5 Hz, 111 chacun : CH2 4ss) ; 2,17 (s, 311 : SCH3 ; 2,47 (mt, 111 : CH 5(3) ; 2,71 - 3,13 - 3,18 - 3,27 - 3,46 et 3,52 (6 s, respectivement 6H - 3H - 311 - 311 - 3H et 311 : 7 NCH3) ; 3,70 (d, J = 6,5 Hz, 111 : OH en 1(3) ; 3,78 (mt, 111 : CH 123); 4,56 (mt, 1H : CII 7a) ; 4,67 (t, J = 9 llz, 1H : Cil Sa) ; 4,86 (mt, 111 : Cil 8a) ; 5,00 (dd, J = 9 et 6 llz, 1H CH a d'une leucine) ; de 5,05 à 5,15 (mt, 2H : CII 2a et CH a d'une leucine) ; 5,15 (d, J = 11 Irez, 1H : CH 11a) ; de 5,25 à 5,40 (mt, 2H CH=CH) ; 5,45 (t, J = 6,5 Hz, 111 : CH 4a) ; 5,52 (d, J = 6 Hz, 1H : CH 1a) ; 5,72 (dd, J = 10,5 et 4 Hz, 1H : CH a d'une leucine) ; 5,75 (s, 1H : CII 3a) ; 7,16 (d, J = 8 Hz, 1H : CONH en 8) ; 7,52 (d, J = 9 Hz, 1H : CONH en 5) ; 7,65 (d, J = 7,5 Hz, 1H : CONH en 7) ; 7,94 (d, J = 9,5 Hz, 1H : CONII en 2). La [4'-hydroxy-MeLeu]4-cyclosporine A peut être préparée selon la méthode décrite dans le brevet EP484281. La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques contenant le produit de formule (I) le cas échéant sous forme de sel, à l'état pur ou sous forme d'une association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables, ou avec un autre agent antirétrovirus, éventuellement destiné au traitement du SIDA, un agent antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien. La composition selon l'invention est capable de maintenir en vie les cellules infectées par un rétrovirus comme par exemple le VIH et donc de réduire la progression vers le SIDA ou de diminuer sa gravité chez les sujets déjà infectés en réduisant la mortalité des cellules infectées. Les compositions peuvent être utilisées par voie orale, parentérale, rectale ou en aérosols. Les compositions pharmaceutiques peuvent être utilisées à titre curatif ou à titre préventif chez des sujets présentant une immunodéficience et/ou infectés par un rétrovirus. Bien entendu, la constitution de ces compositions sera adaptée au cas particulier du tractus digestif des immunodéprimés. Comme compositions solides pour administration orale peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des gélules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions, le produit actif selon l'invention est mélangé à un ou plusieurs diluants ou adjuvants inertes, tels que saccharose, lactose ou amidon. Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium ou un enrobage destiné à une libération contrôlée. Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des solutions pharmaceutiquement acceptables, des suspensions, des émulsions, des sirops et des élixirs contenant des diluants inertes tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants. Les compositions pour administration parentérale, peuvent être des solutions stériles ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive, des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, isotonisants, émulsifiants, dispersants et stabilisants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable. Les compositions par administration rectale sont les suppositoires ou les capsules rectales, qui contiennent outre le principe actif, des excipients tels que le heurre de cacao, des glycérides semisynthétiques ou des polyéthylèneglycols. Les compositions peuvent également être des aérosols. Pour l'usage sous forme d'aérosols liquides, les compositions peuvent être des solutions stériles stables ou des compositions solides dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile apyrogène, dans du sérum ou tout autre véhicule pharmaceutiquement acceptable. Pour l'usage sous forme d'aérosols secs destinés à être directement inhalés, le principe actif est finement divisé et associé à un diluant ou véhicule solide hydrosoluble d'une granulométrie de 30 à 80 um, par exemple le dextrane, le mannitol ou le lactose. En thérapeutique humaine, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction d'un traitement préventif ou curatif, en fonction de l'âge, du poids, du degré de l'infection et des autres facteurs propres au sujet à traiter. Généralement, les doses comprises entre 5 et 30 mg/kg par voie orale pour un adulte. Il a de plus été montré que le dérivé de cyclosporine de formule (I) manifeste un effet de synergie lorsqu'il est associé à d'autres agents anti-viraux actifs sur les rétrovirus. La présente invention concerne également les associations synergisantes qui contiennent le dérivé de la cyclosporine de formule (I) et un principe actif connu pour son activité sur les rétrovirus. Les agents connus pour leur activité sur les rétrovirus qui peuvent être associés, sont choisis parmi des agents compatibles et inertes vis à vis du dérivé de cyclosporine de formule (I), aussi bien dans la catégorie des traitements pharmacologiques que dans la catégorie des traitements alternatifs tels que la thérapie génique ou antisens. A titre non limitatif ces agents sont choisis par exemple parmi des inhibiteurs de la reverse transcriptase [zidovudine (AZT), didanosine (DDI), didéoxycytidine (DDC), d4T et 3TC, névirapine ...], parmi des inhibiteurs de la protéase [comme par exemple le Saquinavir, le Ritonavir, l'Indinavir et le Nelfinavir], ou des inhibiteurs de l'intégrase [comme le AR177], ainsi que parmi les inhibiteurs de la réplication du VIH tels que les inhibiteurs de la protéine rev [comme par exemple le Rev M10], ou les inhibiteurs de la nucléocapside [comme par exemple les DIBAs]. Les compositions pharmaceutiques comprenant de telles associations, éventuellement en présence d'excipients pharmaceutiquement acceptables, entrent également dans le cadre de la présente invention. L'exemple suivant illustre une composition selon l'invention. Exemple On prépare une formulation administrable par voie orale et ayant la composition suivante [(R)-méthylthio-Sar]3-[4'-hydroxy-MeLeu]4-cyclosporine A .. 250 mg Stéarate de magnésium ............................. 3 mg Acidsol ............................. 15 mg Silice colloïdale ............................. 2 mg Lactose ............................. 130 mg REVENDICATIONS 1 - Un dérivé de la cyclosporine caractérisé en ce qu'il répond à la formule 2- Procédé de préparation d'un dérivé de cyclosporine selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir le disulfure de diméthyle, sur un dérivé 4'-hydroxy-MeLeu-4 cyclosporine de formule 3 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient le produit selon la revendication 1, à l'état pur ou en association avec tout diluant ou adjuvant compatible et pharmaceutiquement acceptable et/ou en association avec un autre principe actif antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien. 4 - Associations synergisantes caractérisées en ce qu'elles comprennent le dérivé de cyclosporine selon la revendications 1, et au moins un autre agent connu pour son activité anti-rétrovirus.