Brevet FR2759701A1 — publié le 19980821

L'invention concerne l'utilisation des protéines dénommées ULIP/POP dans le diagnostic et la thérapie des cancers et des syndromes neurologiques paranéoplasiques. Les syndromes neurologiques paranéoplasiques (SNP) surviennent à l'occasion d'un cancer, souvent avant sa découverte et ne sont liés ni à la prolifération tumorale elle-même (envahissement direct, métastases) ni à la thérapie. Leur fréquence est globalement estimée à environ 1 % des cancers. Plusieurs tableaux cliniques ont été depuis longtemps individualisés (encéphalomyélite, neuropathie sensitive de Denny Brown, atrophie cérébelleuse, encéphalite limbique, opsoclonus, ..) correspondant en fait à l'atteinte soit élective soit préférentielle de certains groupes de neurones. La fréquence des cellules inflammatoires au voisinage des lésions avait fait évoquer depuis de nombreuses années la possibilité d'un processus auto-immun ou viral. La mise en évidence, plus récente, d'auto-anticorps dans le sérum et le liquide céphalorachidien (LCR) de patients souffrant de SNP, spécifiques du type de tumeur et du type de neurones qui dégénèrent, a relancé l'hypothèse d'une participation de l'auto-immunité dans la genèse de cette pathologie (Graus et al., 1985; Greenlee et al., 1983). Outre la présence d'un titre élevé de ces anticorps dans le sang et le LCR des patients, il existe plusieurs arguments suggérant que les SNP relèvent de mécanismes auto-immuns. Ainsi, les antigènes reconnus dans le système nerveux central sont aussi présents dans les tumeurs des patients (Anderson et al., 1987). Au sein du tissu tumoral, on retrouve des anticorps spécifiquement dirigés contre ces antigènes ainsi que des lymphocytes B et T (Hetzel et al., 1990). Ces données suggèrent que le processus auto-immun serait déclenché par l'expression d'antigènes tumoraux. Un processus d'immunité croisée provoquerait les lésions du système nerveux central. D'autres arguments indiquent en outre que les lésions cérébrales résultent de la réponse auto-immune. Ainsi, dans le cerveau des patients, le titre des anticorps spécifiques est supérieur à celui du sérum et du LCR (Dalmau et al., 1991). De plus, dans le cas des encéphalomyélites associées aux anticorps anti-Hu, il existe une réaction lymphocytaire intense, composée de cellules B et T, située à proximité de neurones en voie de destruction (Dalmau et al., 1991; Graus et al., 1990). Plusieurs types d'auto-anticorps permettant des regroupements syndromiques précis en fonction de critères immunologiques, neurologiques et carcinologiques ont été décrits. Ainsi, les anticorps anti-Yo sont retrouvés dans le sérum et le LCR de femmes présentant une atrophie cérébelleuse paranéoplasique et un cancer gynécologique (ovaire, sein ou utérus) (Greenlee et al., 1983; Jaeckle et al., 1985). Ces anticorps reconnaissent deux protéines cytoplasmiques de 34 et 62 kDa spécifiques des cellules de Purkinje du cervelet. Les anticorps anti-Ri sont retrouvés dans le sérum et le LCR de patients (principalement des femmes) présentant un opso-myoclonus, un syndrome cérébelleux et un cancer du sein. Ces anticorps reconnaissent deux protéines de 50 et 80 kDa spécifiques des neurones du système nerveux central (Luque et al., 1991). Les anticorps anti-Hu sont les plus fréquemment rencontrés au cours des SNP. Ils sont retrouvés dans le sérum et le LCR de patients présentant un syndrome de Denny-Brown ou une encéphalomyélonévrite et un cancer du poumon à petites cellules (Graus et al., 1985; Dalmau et al., 1992). Ces auto-anticorps reconnaissent plusieurs protéines de 37 à 45 kDa exprimées spécifiquement par l'ensemble des neurones du système nerveux. Récemment a été identifié chez des patients présentant un SNP un autre type d'auto-anticorps: les anticorps anti-CV2 (Antoine et al., 1993; Honnorat et al., 1996). Ces derniers sont atypiques, en ce sens que la cible antigénique reconnue à l'sage adulte est essentiellement non neuronale, alors que l'analyse du cerveau post-mortem de quatre patients permet d'objectiver une perte neuronale, une gliose et un processus inflammatoire caractéristique des SNP. L'originalité de la découverte de ces auto-anticorps réside, d'une part, dans leur mise en évidence. Ces derniers avaient échappé à l'ensemble des investigations habituelles qui consistaient à révéler les antigènes reconnus par immunohistochimie sur du cerveau post-mortem. L'antigène reconnu est en effet soluble et disparaît du cerveau post-mortem dans la plupart des conditions de fixation. Seule une fixation du tissu post-mortem humain par immersion dans le paraformaldéhyde ou in situ par perfusion de paraformaldéhyde chez l'animal, a permis de révéler la présence de ces anticorps dans le LCR ou le sérum des patients atteints de SNP (Antoine et al., 1993; Honnorat et al., 1996). Les auto-anticorps anti-CV2 présents dans les sérums de patients atteints de syndrome neurologique paranéoplasique (SNP) ont été définis par leur capacité à reconnaitre, par immunohistochimie indirecte, un antigène cytoplasmique exprimé spécifiquement, dans le cerveau de rat adulte, par une sous-population d'oligodendrocytes du tronc cérébral, de ia moelle et du cervelet. L'originalité de ces auto-anticorps réside, d'autre part, dans leur intérêt diagnostique. Leur présence dans le sérum ou le LCR de patients a valeur diagnostique puisqu'elle permet de préciser l'origine paranéoplasique d'un syndrome neurologique. La découverte de ces anticorps lorsqu'elle précède celle du cancer, oriente la recherche de celui-ci et permet sa découverte. Tel a été le cas pour six patients sur 19 présentant des anticorps anti-CV2. Les troubles cliniques étaient différents suivant les patients, certains présentaient un tableau d'encéphalite limbique, d'autres une encéphalomyélonévrite et d'autres un syndrome de Lambert-Eaton. Néanmoins, dans plus de 60 % des cas, le syndrome cérébelleux était prédominant. La tumeur la plus fréquemment associée était le cancer du poumon à petites cellules (60 % des cas). Des expériences sur des cerveaux de rats nouveaux-nés ont montré que ces anticorps anti-CV2 réagissaient avec une protéine de 66 kDa (Honnorat et al., 1996). Cet antigène se situe dans le cerveau adulte dans une souspopulation d'oligodendrocytes ou dans des cellules qui gardent des capacités de différenciation dans le cerveau adulte (bulbe olfactif, gyrus dent6). L'antigène reconnu jouerait un rôle dans la survie neuronale, via des interactions Neurone/Oligodendrocyte, comme le suggère la perte des neurones observée dans le cerveau post-mortem de patients atteints de SNP. Son expression très restreinte à l'âge adulte contraste avec une expression très forte et transitoire dans le système nerveux central et périphérique en développement, suggérant le rôle probable de cet antigène dans le développement du système nerveux. La Demanderesse a caractérisé l'antigène cible des autoanticorps anti-CV2 qui correspond à une protéine ci-après désignée par POP-66 pour paraneoplastic oligodendrocyte protein 66 kDa . De manière surprenante, il a été découvert que la protéine POP46 appartient à la famille des protéines dites ULIP (pour Unc-33 like phosphoprotein), impliquée dans le contrôle du développement neuronal et le transport axonal, (T. Byk et al., 1996) et étudiée aussi sous la forme des protéines CRMP (Goshima et al., 1995, Wang et ail., 1996), TOAD-64 (Minturn et al., 1995) et DRPs (Hamajima et al., 1996). Plus précisément, POP66 a été identifiée comme étant en fait la forme humaine de ULIP4. L'ensemble des données décrit ci-après souligne la complexité de cette famille de protéines, I'existence d'un spectre d'expression très large des membres de cette famille dans le cerveau au cours de l'ontogénèse, mais très restreint chez l'adulte, ainsi que la spécificité des anticorps anti-CV2 pour un membre de cette famille protéique ULIP, qui est en fait POP-66. Ainsi, la Demanderesse a montré que la protéine reconnue par les anticorps anti-CV2 de patients atteints de SNP est POP-66/ULIP4 et a établi l'implication des protéines ULIP dans les syndromes neurologiques paranéoplasiques et les cancers associés. Outre leur rôle dans les cancers associés aux SNP, la Demanderesse a également découvert que les protéines de la famille ULIP pourraient jouer un rôle dans toute autre forme de cancer, non associée aux SNP. Plus particulièrement, les protéines ULIP seraient notamment impliquées dans les cancers de tissus ayant une origine embryonnaire commune avec le système nerveux central. La présente invention a donc pour objet un polypeptide purifié ULIP, dérivé ou fragment polypeptidique dudit polypeptide purifié, comprenant une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID n" 2, n" 4, n" 6 et n" 8. De manière préférentielle, la présente invention a pour objet un polypeptide purifié, dérivé, ou fragment polypeptidique biologiquement actif dudit polypeptide purifié, comprenant la séquence d'acides aminés SEQ ID n" 8, ledit polypeptide étant désigné par POP-66/UL1P-4 . Dans la description de l'invention, on utilise les définitions suivantes: - dérivé: tout polypeptide variant du polypeptide de séquence SEQ ID n" 2, n" 4, n" 6 ou n" 8 ou toute autre molécule résultant d'une modification de nature génétique etlou chimique de la séquence SEQ ID n" 2, n" 4, n" 6 ou n" 8, c'est-à-dire obtenue par mutation, délétion, addition, substitution etlou modification chimique d'un seul ou d'un nombre limité d'acides aminés, ainsi que toute séquence isoforme, c'est-à-dire une séquence identique à la séquence SEQ ID n" 2, n 4, n 6 ou n 8 à l'un de ses fragments ou séquences modifiées, contenant un ou plusieurs acides aminés sous la forme d'énantiomère D, lesdites séquences variantes modifiées ou isoformes ayant conservé au moins l'une des propriétés les rendant biologiquement actives. - Biologiquement actif: présentant des propriétés d'induction etlou de contrôle du développement neuronal eVou des propriétés antigéniques. L'invention a également pour objet une séquence d'acides nucléiques isolée choisie parmi SEQ iD n" 1, n" 3, n" 5 et n" 7 ou une séquence dérivée des séquences SEQ ID n" 1, n" 3, n" 5 et n" 7 du fait de la dégénérescence du code génétique. Les différentes séquences nucléotidiques de l'invention peuvent être d'origine artificielle ou non. Il peut s'agir de séquences d'ADN ou d'ARN, obtenues par criblage de banques de séquences au moyen de sondes élaborées sur la base des séquences choisies parmi SEQ ID n" 2, n" 4, n" 6 et n" 8. De telles banques peuvent être préparées par des techniques classiques de biologie moléculaire, connues de l'homme de l'art. Les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent également être préparées par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage des banques. Ces séquences nucléotidiques permettent la réalisation de sondes nucléotidiques, capables de s'hybrider fortement et spécifiquement avec une séquence d'acides nucléiques, d'un ADN génomique ou d'un ARN messager, codant pour un peptide selon l'invention ou un fragment biologiquement actif de celuici. Les conditions d'hybridation appropriées correspondent aux conditions de température et de force ionique usuellement utilisées par l'homme du métier (Sambrook et al., 1989), de préférence à des conditions de température comprises entre (Tm moins 5"C) et (Tm moins 30"C) et de préférence encore, à des conditions de température comprises entre (Tm moins 5"C) et (Tm moins 10 C) (forte stringence), Tm étant la température théorique de fusion, définie comme étant la température à laquelle 50 % des brins appariés se séparent. De telles sondes font également partie de l'invention. Elles peuvent être utilisées comme outil de diagnostic in vitro pour la détection, par des expériences d'hybridation, de transcrits spécifiques des polypeptides de l'invention dans des échantillons biologiques ou pour la mise en évidence de synthèses aberrantes ou d'anomalies génétiques résultant d'un polymorphisme, de mutations ou d'un mauvais épissage. Les sondes de l'invention comportent au minimum 10 nucléotides, et au maximum comportent la totalité d'une séquence nucléotidique choisie parmi SEQ ID n" 1, n" 3, n" 5 et n" 7 ou de leur brin complémentaire. Les méthodes de diagnostic in vitro dans lesquelles ces sondes nucléotidiques sont mises en oeuvre pour la détection de synthèses aberrantes ou d'anomalies génétiques, telles que la perte d'hétérozygotie et le réarrangement génétique, au niveau des séquences nucléiques codant pour un polypeptide ULIP selon l'invention ou un fragment biologiquement actif, sont incluses dans la présente invention. Un tel type de méthode comprend: - la mise en contact d'une sonde nucléotidique de l'invention avec un échantillon biologique dans des conditions permettant la formation d'un complexe d'hybridation entre ladite sonde et la susdite séquence nucléotidique, éventuellement après une étape préalable d'amplification de la susdite séquence nucléotidique; - la détection du complexe d'hybridation éventuellement formé; - éventuellement le séquençage de la séquence nucléotidique formant le complexe d'hybridation avec la sonde de l'invention. Les sondes d'ADNc de l'invention sont en outre avantageusement utilisables pour la détection d'anomalies chromosomiques. Les séquences nucléotidiques selon l'invention sont également utiles pour la réalisation et l'utilisation d'amorces oligonucléotidiques sens et/ou antisens pour des réactions de séquençage ou d'amplification spécifique selon la technique dite de PCR (réaction de polymérisation en chaîne) ou toute autre variante de celleci. Les séquences nucléotidiques selon l'invention ont par ailleurs des utilisations dans le domaine thérapeutique, pour la réalisation de séquences anti sens, capables de s'hybrider spécifiquement avec une séquence d'acide nucléique, y compris un ARN messager, utilisables en thérapie génique. L'invention a ainsi pour objet des séquences antisens capables d'inhiber, au moins partiellement, la production d'un polypeptide selon l'invention, tel que défini précédemment. Elles sont plus particulièrement utiles dans le traitement des désordres du système nerveux central et périphérique et de la vision, notamment dans le traitement des syndromes neurologiques paranéoplasiques, ainsi que dans le traitement anticancéreux, notamment des tumeurs associées à des syndromes neurologiques paranéoplasiques. Les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent par ailleurs être utilisées pour la production de protéines recombinantes ULIP selon l'invention. Ces protéines peuvent être produites à partir des séquences nucléotidiques définies ci-dessus, selon des techniques de production de produits recombinants connues de l'homme du métier. Dans ce cas, la séquence nucléotidique utilisée est placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans un hôte cellulaire. Un système efficace de production d'une protéine recombinante nécessite de disposer d'un vecteur, par exemple d'origine plasmidique ou virale, et d'une cellule hôte compatible. L'hôte cellulaire peut être choisi parmi des systèmes procaryotes, comme les bactéries, ou eucaryotes, comme par exemple les levures, cellules d'insectes, CHO (cellules d'ovaires de hamster chinois) ou tout autre système avantageusement disponible. Un hôte cellulaire préféré pour l'expression des protéines de l'invention est constitué par la bactérie E. coli. Le vecteur doit comporter un promoteur, des signaux d'initiation et de terminaison de la traduction, ainsi que les régions appropriées de régulation de la transcription. II doit pouvoir être maintenu de façon stable dans la cellule et peut éventuellement posséder des signaux particuliers spécifiant la sécrétion de la protéine traduite. Ces différents signaux de contrôle sont choisis en fonction de l'hôte cellulaire utilisé. A cet effet, les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent être insérées dans des vecteurs à réplication autonome au sein de l'hôte choisi, ou des vecteurs intégratifs de l'hôte choisi. De tels vecteurs seront préparés selon les méthodes couramment utilisées par l'homme du métier, et les clones en résultant peuvent être introduits dans un hôte approprié par des méthodes standard, telles que par exemple l'électroporation. L'invention vise en outre les cellules hôtes transfectées par ces vecteurs précédents. Ces cellules peuvent être obtenues par l'introduction dans des cellules hôtes d'une séquence nucléotidique insérée dans un vecteur tel que défini ci-dessus, puis la mise en culture desdites cellules dans des conditions permettant la réplication et/ou l'expression de la séquence nucléotidique transfectée. Ces cellules sont utilisables dans une méthode de production d'un polypeptide recombinant selon l'invention ou tout fragment ou dérivé biologiquement actif de celui-ci. La méthode de production d'un polypeptide de l'invention sous forme recombinante est elle-même comprise dans la présente invention, et se caractérise en ce que l'on cultive les cellules transfectées dans des conditions permettant l'expression d'un polypeptide recombinant selon l'invention ou de tout fragment ou dérivé biologiquement actif de celui-ci, et que l'on récupère ledit polypeptide recombinant. Les procédés de purification utilisés sont connus de l'homme du métier. Le polypeptide recombinant peut être purifié à partir de lysats et extraits cellulaires, du surnageant du milieu de culture, par des méthodes utilisées séparément ou en combinaison, telles que le fractionnement, les méthodes de chromatographie, les techniques d'immunoaffinitè à l'aide d'anticorps mono ou polyclonaux spécifiques, etc. Une variante consiste à produire un polypeptide recombinant fusionné à une protéine "porteuse" (protéine chimère). L'avantage de ce système est qu'il permet une stabilisation et une diminution de la protéolyse du produit recombinant, une augmentation de la solubilité au cours de la renaturation in vitro et/ou une simplification de la purification lorsque le partenaire de fusion possède une affinité pour un ligand spécifique. L'exploitation des protéines ULIP, et en particulier POP-66/ULIP4, ainsi que des anticorps dirigés contre ces protéines, est prometteuse dans divers domaines. Ainsi, la détection de l'auto-anticorps anti-CV2 par immunofluorescence sur cerveau animal fixé est utilisée actuellement comme test diagnostic. La production de protéine recombinante POP-66/ULIP4 selon l'invention permet la fabrication d'un test (de type Elisa ou Western Blot) rapide et fiable, pour détecter les anticorps anti-CV2. De tels tests existent déjà pour les anticorps anti-Hu, anti-Yo et anti-Ri. Le test pour détecter les anti-CV2 dans le sérum des patients pourrait être prescrit en cas de suspicion de syndrome neurologique paranéoplasique et inclurait par conséquent les anticorps anti-CV2 au même titre que les autres anticorps identifiés dans les SNP tels que précédemment cités. L'invention vise donc également une méthode pour le diagnostic des syndromes neurologiques paranéoplasiques et/ou pour le diagnostic précoce de la formation de tumeurs d'origine cancéreuse, caractérisée en ce que l'on met en évidence dans un échantillon de sang prélevé chez un individu des auto-anticorps dirigés contre une protéine POP-66/ULIP4 par - la mise en contact un échantillon de sang prélevé chez un individu avec un polypeptide purifié (POPâ6), dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif de POP-661ULIP-4 éventuellement fixé sur un support dans des conditions permettant la formation de complexes immunologiques spécifiques entre ledit polypeptide et les auto-anticorps éventuellement présent dans l'échantillon de sérum, et - la détection des complexes immunologiques spécifiques éventuellement formés. L'invention a également pour objet un kit pour le diagnostic des syndromes neurologiques paranéoplasiques et pour le diagnostic précoce de la formation des tumeurs à partir d'un prélèvement biologique comprenant: - au moins un polypeptide purifié POP46/ULIP4, dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif de POP46/ULIP4, éventuellement fixé sur un support, - des moyens de révélation de la formation de complexes antigène/anticorps spécifiques entre un auto-anticorps anti-POP-66 et ledit polypeptide purifié POP66, dérivé ou fragment polypeptidique et/ou des moyens de quantification de ces complexes. L'invention a également pour objet les anticorps mono- ou polyclonaux ou leurs fragments, anticorps chimériques ou immunoconjugués, obtenus à partir d'un polypeptide purifié ULIP comprenant une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID n" 2, n" 4, n" 6 et n" 8, dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif de ULIP et leur utilisation, pour la purification ou la détection d'une protéine ULIP dans un échantillon biologique. Des anticorps polyclonaux peuvent être obtenus à partir du sérum d'un animal immunisé contre la protéine, produite par exemple par recombinaison génétique suivant la méthode décrite ci-dessus, selon les modes opératoires usuels. Les anticorps monoclonaux peuvent être obtenus selon la méthode classique de culture d'hybridomes décrite par Kôhler et Milstein. Les anticorps peuvent être des anticorps chimériques, des anticorps humanisés, des fragments Fab et F(ab')2. Ils peuvent également se présenter sous forme d'immunoconjugués ou d'anticorps marqués. L'invention porte également sur l'utilisation d'anticorps dirigés contre une protéine de la famille ULIP pour la mise en évidence d'une protéine ULIP dans des néoplasmes, et des syndromes neurologiques paranéoplasiques à des fins de diagnostic. De manière préférentielle, I'invention porte sur l'utilisation d'anticorps monoclonaux obtenus à partir du sérum polyclonal anti-CV2 de patients par immortalisation de lymphocytes, selon les techniques usuelles connues de l'homme du métier. Ainsi, les anticorps dirigés contre une protéine de la famille ULIP sont utiles pour détecter une expression anormale de protéine ULIP chez des patients présentant des syndromes neurologiques, chez qui aucun cancer n'a été diagnostiqué par les méthodes classiques. Cette expression anormale de protéine ULIP pourra être corrélée à l'existence d'un cancer qui n'avait pas été repéré. Ainsi, les anticorps dirigés contre une protéine ULIP, notamment contre POP-66/ULIP-4, sont utiles pour le diagnostic précoce d'un cancer. L'invention a également pour objet une méthode de détermination d'une variabilité allélique, d'une mutation, d'une délétion, d'une insertion, d'une perte d'hétérozygotie ou d'une anomalie génétique du gène POP46/ULIP4, situé sur le chromosome 10 dans la région 26q pouvant être impliquées dans des pathologies, caractérisée en ce qu'elle met en oeuvre au moins une séquence nucléotidique SEQ ID n" 7. Parmi les méthodes de détermination d'une variabilité allélique, d'une mutation, d'une délétion, d'une insertion, d'une perte d'hétérozygotie ou d'une anomalie génétique du gène POP46/ULIP4, on préfère une méthode comprenant au moins une étape d'amplification par PCR de la séquence nucléique de POP46/ULIP4 susceptible de présenter un polymorphisme, une mutation, une délétion ou une insertion, à l'aide de couple d'amorces de séquences nucléotidiques, une étape au cours de laquelle on procède au traitement des produits amplifiés à l'aide d'enzymes de restriction appropriées et une étape au cours de laquelle on procède à la détection ou au dosage d'au moins l'un des produits de la réaction enzymatique. De manière avantageuse, on peut rechercher les mutations associées audit chromosome 10 en relation avec le cancer, notamment les tumeurs cancéreuses périphériques et les tumeurs cérébrales primitives d'origine gliale par exemple. L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant au moins une protéine purifiée de la famille ULIP, fragment polypeptidique ou dérivé biologiquement actif de celles, une séquence ou fragment de séquence nucléotidique codant pour ladite protéine, une séquence anti-sens capable de s'hybrider spécifiquement avec une séquence nucléotidique codant pour ladite protéine, ou un anticorps dirigé contre ladite protéine, associée à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'invention comprend de manière préférentielle des compositions pharmaceutiques comprenant comme principe actif un polypeptide POP66 purifié, dérivé ou fragment polypeptidique de POP66, préférentiellement sous forme soluble, associé à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. De telles compositions offrent une nouvelle approche pour traiter les désordres du système nerveux central et périphérique et de la vision, et notamment les syndromes neurologiques paranéoplasiques. Par ailleurs, elles sont utiles pour traiter les désordres neurologiques liés à une perte neuronale et/ou une sous-expression des protéines ULIP dans le système nerveux. Ainsi, POP-66/ULIP-4 révèle aussi un intérêt dans des pathologies neurodégénératives tel les que les atrophies multisystémiques qui sont des affections similaires à celles des SNP et pour lesquelles une anomalie d'une sous-population oligodendrocytaire a été détectée (Papp et al., 1992). Les compositions selon l'invention sont par ailleurs utiles en thérapie anticancéreuse. Les anticorps dirigés contre une ou plusieurs protéines ULIP peuvent être associés à des agents antinéoplasiques, permettant ainsi le ciblage des médicaments vers les cellules tumorales. Ils peuvent en outre être associés à un groupe chimique hydrophile choisi de manière à passer ou non la barrière hématoencéphalique, selon le type de tumeur. Les protéines ULIP et en particulier POP46 ainsi que les séquences nucléotidiques codant pour lesdites protéines et les séquences ou oligonucléotides anti-sens, peuvent être utiles dans la thérapie de tout type de cancer dans lequel un gène codant pour une protéine ULIP est impliqué. Parmi des exemples de cancers, on peut citer les tumeurs périphériques, telles que le cancer du poumon à petites cellules, le thymome, le cancer du sein et de l'ovaire, ainsi que les tumeurs cérébrales, de préférence les tumeurs cérébrales primitives d'origine gliale. L'expression de POP-66 dans les cellules non prolifératives du cerveau normal, son absence dans des tissus normaux tels que poumon ou thymus par exemple, sa réexpression différentielle lors de la tumorigénèse de ces tissus et la modulation de son expression dans une lignée tumorale au cours de la différenciation suggèrent à cet égard que POP46 pourrait être un gène suppresseur de tumeur. Préférentiellement, les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être administrées par voie systémique, de préférence par voie intraveineuse, par voie intramusculaire, intradermique ou par voie orale. Leurs modes d'administration, posologies et formes galéniques optimaux peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement thérapeutique adapté à un patient comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement et les effets secondaires constatés, etc. L'invention comprend enfin l'utilisation d'une protéine purifiée de la famille ULIP, fragment polypeptidique ou dérivé biologiquement actif de celle-ci, une séquence ou fragment de séquence nucléotidique codant pour ladite protéine, une séquence anti-sens capable de s'hyb Les exemples et les figures dont les légendes sont présentées ci-après sont donnés à titre illustratif. LEGENDE DES FIGURES - La fiaure 1 représente un profil d'électrophorèse à deux dimensions obtenu à partir d'extraits protéiques de cerveaux de rats nouveaux-nés enrichis en POP66. A: coloration à l'argent de l'ensemble des protéines. B: immunoempreinte avec le sérum anti-CV2 de patients. Les flèches indiquent les taches correspondant à POP66, révélées avec les anticorps anti-CV2. - La fiaure 2 représente un profil d'électrophorèse à deux dimensions obtenue à partir d'extraits protéiques de cerveaux de rats nouveaux-nés. Immunoempreinte avec A- I'anticorps antipeptide 3 et B I'anticorps anti-CV2. - La figure 3 représente une électrophorèse à une dimension obtenue à partir d'extraits protéiques de cerveaux de rats nouveaux-nés. Immunoempreinte avec a: sérum préimmun pour peptide 3 Immunoempreinte avec b: sérum anti-peptide 3 Immunoempreinte avec c: sérum anti-peptide 4 Immunoempreinte avec d: sérum préimmun pour peptide 4. - La figure 4 représente un marquage immunohistochimique de coupes de cerveaux de rats adultes avec A: sérum anti-CV2 de patient atteint de SNP B : sérum de lapin avec des anticorps anti-peptide 3 C : sérum de lapin avec des anticorps anti-peptide 4. - La figure 5 représente un marquage histologique de coupes de cervelet de raton à 8 jours post-natal. A: coloration au bleu de toluidine; ge = couche granulaire externe; m = couche moléculaire (x400). B: Immunomarquage après incorporation de BrdU (bromodéoxyuridine). Les cellules ayant incorporé le BrdU sont pratiquement toutes situées dans la zone la plus externe de la couche granulaire externe (ge). Quelques cellules positives sont situées dans la couche granulaire interne (x400). C: Immunoperoxydase indirecte avec un sérum de patient contenant un anticorps anti-CV2 (x400). L'immunoréactivité est concentrée dans la partie interne de la couche granulaire externe (future couche moléculaire (m)). Quelques cellules sont immunoréactives dans la couche granulaire interne. Les cellules de Purkinje (p) sont négatives ainsi que les cellules de la partie externe de la couche granulaire externe (ge). D: Immunoperoxydase indirecte avec un sérum de patient contenant un anticorps anti-CV2 (x1000). L'immunomarquage est surtout concentré dans la partie interne de la couche granulaire externe (future couche moléculaire (m)). On note une cellule réactive dans la couche granulaire interne (gi) (flèche). - La fiaure 6 représente un marquage immunohistochimique de coupes d'hippocampe humain post-mortem (coloration HPS). A: cerveau de patient témoin, B: cerveau de patient présentant une encéphalite limbique, et anticorps circulant anti-CV2. On peut noter la disparition des cellules granulaires. - La figure 7 représente un profil d'électrophorèse à deux dimensions avec la protéine ULIP-2 (A) contrôle et la protéine ULIP4 (B). La figure 7C représente le modèle de profil de migration des protéines ULlP-1, 2, 3 et 4 comme référence. Les protéines sont révélées: a) par autoradiographie pour localiser les protéines traduites in vitra (traduction); b) par immunoempreinte avec le sérum anti-CV2. - La figure 8 représente un profil de migration de l'ARNm de C-22/ULIP-3 (8A) et TOAD-64/ULIP-2 (8B) amplifié par RT-PCR exprimé dans différents types cellulaires: pistes 1-3: tumeur à petites cellules du poumon piste 2: tumeur à petites cellules du poumon avec du sérum anti-CV2 piste 4: cDNA contrôle. piste 5: médulloblastome traité par infection HTLV1 pistes 6-7: médulloblastome piste 8: lignée C6 de cellules gliales chez la souris piste 9: contrôle piste 10: néant piste 11: échelle kb. Les flèches noires correspondent à POP66, les flèches blanches correspondent au standard de poids moléculaire. - La figure 9 représente la séquence nucléotidique d'ULIP-2 chez la souris (SEQ ID N" 1), ainsi que la séquence en acides aminés déduite (SEQ ID N" 2). - La figure 10 représente la séquence nucléotidique d'ULIP-3 chez la souris (SEQ ID N" 3), ainsi que la séquence en acides aminés déduite (SEQ ID N" 4). - La figure 11 représente la séquence nucléotidique d'ULIP4 chez la souris (SEQ ID N" 5), ainsi que la séquence en acides aminés déduite (SEQ ID N" 6). - La figure 12 représente la séquence nucléotidique d'ULIP4 chez l'homme (SEQ ID N" 7), ainsi que la séquence en acides aminés déduite (SEQ ID N" 8). Un codon stop erroné dans la séquence ULIP4 homme (astérisque) provient d'une faute de la transcriptase inverse dans la production de la banque. En comparant avec ULIP4 de rat et de souris, il est presque certain que la séquence TAG codant pour un stop soit en fait un codon AAG, codant pour une lysine comme chez le rat et la souris. De plus, la région autour de cet acide aminé est entièrement conservée dans les trois espèces. La séquence d'acides aminés a été complétée sur la SEQ ID n" 8 par 15 acides aminés en C-terminal (n" 554 à n" 568). Cette région C-terminale manquante sur la figure 12 est très bien conservée entre ULIP4 rat et souris ainsi qu'entre les différentes ULIP. EXEMPLE 1 Purification de POP-66 et séquençage: La purification de POP-66 est réalisée selon le matériel et les méthodes décrits dans l'article de Honnorat et al., 1996, incorporé par référence, à partir de sérum de patients atteints de SNP. Pour identifier la protéine POP46, on a choisi une stratégie de purification qui permette d'obtenir un séquençage partiel. Le criblage d'une banque d'expression d'ADNc de cerveau ou la purification de la protéine par immunoaffinité étaient exclus en raison des quantités limitées de sérums liées au décès des patients. Une méthode de purification biochimique a pu être développée à partir de cerveaux de rats nouveauxnés grâce aux sérums humains anti-CV2 qui ont permis de suivre chaque étape de purification. Les tissus, conservés à -70" C avant utilisation, ont été traités par une solution contenant DTT (dithiothreitol) (Sigma) 0,2 M, Ampholine 3-10 (Pharmacia) 2 %, Triton X-100 (Merck) 2 % et placés à 2-4" C. Immédiatement avant l'utilisation, de l'urée solide (Pharmacia) a été ajoutée pour obtenir une solution 8M. La protéine POP-66 est soluble, au moins en partie, et précipite entièrement à une concentration de 40 % de sulfate d'ammonium. Une centrifugation à 100 000 (fois) g et une précipitation au sulfate d'ammonium (éliminant les protéines précipitant en-dessous de 20 % et au-dessus de 40 % de sulfate d'ammonium) permettent d'obtenir des extraits protéiques enrichis en POP46. Les protéines de cet extrait sont alors séparées, après dialyse, par isofocalisation sur gel d'agarose (Peltre et al., 1982). Après transfert sur membrane, les anticorps anti-CV2 reconnaissent plusieurs bandes de points isoélectriques compris entre 5,85 et 6,55. L'ensemble de ces bandes correspond à la protéine POP-66 reconnue par les anticorps anti-CV2. Ce spectre suggère la possibilité de modifications transcriptionnelles (phosphorylations et/ou glycosylations) de la protéine. A partir du gel d'agarose, la zone des protéines comprise entre 5,85 et 6,55, de pl, est utilisée pour une nouvelle migration électrophorétique en milieu dénaturant sur gel de polyacrylamide préalablement équilibré avec une solution d'équilibration (0,05 mol/l Tris/HCI, pH 6,8, urée 6M, glycérol 30 %, SDS 1 % poids/volume pendant 2 x 10 minutes) à laquelle on ajoute du DTT (0,25 % poids /volume) et du bleu de bromophénol. Deux modes de détection sont utilisés: - la coloration à l'argent. Immédiatement après la fin de la migration, le gel est immergé dans une solution fixatrice (40 % d'éthanol, 10 % d'acide acétique) pendant 30 minutes; il est ensuite placé dans une solution d'incubation (30 % d'éthanol, 7 % poids/volume d'acétate de sodium, 0,1 % de glutaraldéhyde, 0,2 % poidslvolume de thiosulfate de sodium) pendant 30 minutes ou une nuit. Après lavage, le gel est placé dans une solution d'argent (0,1 % poids/volume de nitrate d'argent + formaldéhyde) et développé (2,5 % poids/volume de carbonate de sodium + formaldéhyde). La réaction est arrêtée avec I'EDTA-Na2 (1,5 % poids/volume). Les gels sont conservés dans une solution de glycérol. - transfert sur membrane de PVDF (Immobilon-PB, Millipore). Les protéines séparées sont transférées sur une membrane de PVDF en utilisant un tampon CAPS (Sigma) 100 mM pH 11. Les transferts sont incubés pendant une heure dans du tampon TBS (Tris buffer saline) avec 5 % de caséine (lait) et 18 heures dans du tampon TBS (+ 1 % de caséine) contenant de l'anticorps (sérum anti-CV2 1/500). Après lavage avec TBS-caséine (15 minutes), la révélation est effectuée en incubant les transferts pendant 1 heure et demie avec les anticorps anti-lgG biotinylés (1/1000) et pendant 1 heure et demie avec le complexe streptavidine-peroxydase (1/2000). Les transferts sont ensuite révélés avec du DAB (diaminobenzidine 0,06 % poids /volume dans Tris 0,05 M) et avec H202 (0,02 pglml). Une seule bande correspondant à une protéine de 66 kDa est visible. Celle-ci est spécifiquement marquée par les anticorps anti CV2 (figure 1). On a effectué alors un séquençage N-terminal de cette protéine, après digestion trypsique. Sept peptides, présentant les séquences suivantes, ont été obtenus: 1- X-Met-Tyr-Asp-Gly-Pro 2 - X-Phe-Asn-Leu-Tyr-Pro-Arg 3- X-Val-Leu-Glu-Asp-Gly-Thr-Leu-His-VaI-Thr-Gl u-Gly 4- X-lle-Gly-X-X-Ala-Gln-Val-(His ?)-Ala-Glu-Asn-Gly-X-lle-lle-Ala-Glu- Glu-Gln 5- X-X-Glu-Asn-Gln-Phe-Val-Ala-Val-Thr 6 - X-Val-Asn-Asp-(Asp ?)-Gln-Ser-Phe-Tyr-Ala-Asp-lle-Tyr-Met-Glu- (Asp ?)-(Gly ?)-Leu-lle 7- X-X-X-Phe-Val-Thr-X-Pro-X-Leu-X-Pro X: correspond à un acide aminé non déterminé, ( : correspond à un acide aminé probable mais non certain. D'après l'analyse des banques de données disponibles en 1994, aucune protéine connue ne correspondait à ces séquences. EXEMPLE 2 Clonage de l'ADNc de POP-66 ou des protéines apparentées: Le clonage de l'ADNc de la protéine POP66 ou des protéines apparentées a été entrepris en utilisant des sondes oligonucléotidiques dégénérées obtenues à partir de fragments de deux peptides: lle-lle-Ala-Glu-Glu-Gln Tyr-Ala-Asp-lle-Tyr-Met-Glu-(Asp ?) Quatre jeux d'amorces ol igonucléotidiques dégénérées (sens/anti-sens) sont donc déterminés (AT( C/T)ATTGC(T/A)GA(AlG)CA ; TG( C/T)TC(T/C )AC(T/A)G CAT(A/G )AT; TATGC(A/T)GA(C/T)AT(C/T)ATGGA GA ;TC CAT(G/A)TA(G/A) CT(T/A)G CAT A) et utilisés pour une amplification PCR. La matrice est préparée sous forme d'ADNc double-brin (Promega kit) à partir d'ARNpoly(A+) extrait du cerveau de rats âgés de 10 jours (Zivic-Miller, USA) en utilisant le kit d'isolement de l'ARNm Fast Track (Invitrogen). Les conditions d'amplification par PCR sont les suivantes: 35 cycles à 94"C, 1 minute pour la dénaturation, 55"C, 1 minute pour l'hybridation et 72"C, deux minutes pour l'extension. Les produits de PCR sont analysés en électrophorèse sur gel d'agarose à 1 %, électroélués, clonés dans un vecteur de clonage TA (Invitrogen) et séquencés en utilisant les sites des amorces des promoteurs T7 et SP6. La séquence d'acides aminés déduite du clone MFB-17 concorde avec les séquences des deux peptides originaux de POP-66 déterminés par l'analyse de la séquence d'acides aminés. Une analyse comparée des séquences d'acides nucléiques utilisant les bases de données Genbank et EMBL révèle que MFB-17 est un ADNc partiel avec une séquence nucléotidique identique à celle d'un segment de TOAD-64, une protéine neuronale de rat (Minturn et al., 1995). La séquence d'acides aminés déduite à l'ADNc de TOAD-64 concorde avec les séquences des sept peptides déterminés par l'analyse des séquence partielles de la protéine reconnue par les anticorps anti CV2 après purification par électrophorèse. Le poids moléculaire, le point isoélectrique, le profil immunohistochimique et la régulation de TORD64 sont similaires à ceux de l'antigène POP-66. Le clone MFB-1 7 ne présentant pas la région codante complète, il a été nécessaire de produire une protéine recombinante intacte pour poursuivre les recherches concernant la protéine CV2. Pour obtenir une protéine complète TOAD64, on a amplifié la matrice ADNc-ds de cerveaux de rats avec deux jeux d'amorces situées aux extrémités 5' et 3' des régions codantes (sens: GGCATATGTCTTATCAGGGGAAG; anti-sens GCGAATTCTTAGCCCAGGCTGATG). Cette approche a permis de produire deux clones différents, I'un correspondant à la séquence TOAD64 et l'autre à un clone désigné par C-22. EXEMPLE 3 Comparaison de la séquence d'acides aminés déduite de C-22 avec les protéines ULIP: La séquence d'acides aminés déduite à partir du cadre de lecture ouverte, indique que ce clone C-22 appartient à la super-famille de gènes ULIP représentée par plusieurs gènes des séquences EST. La séquence d'acides aminés déduite de C-22 présente une homologie de 30 % avec la séquence d'acides aminés de la protéine unc33 de Caenorhabditis elegans. Récemment, quatre gènes différents homologues à la protéine unc-33 ont été décrits chez les mammifères et le poulet. Une analyse des séquences par les bases de données Genbank et banques de protéines a permis de proposer une classification des protéines unc-33 like (ULIP) en quatre différents sous-groupes (Byk et al. 1996). Pourtant, comme les fonctions réelles de ces protéines ne sont pas clairement connues, la classification proposée est basée simplement sur le pourcentage d'identité d'acides aminés. ULIP-1 est représentée par une phospho-protéine unc-33 like de souris qui présente une homologie de 76 % avec TOAD64, Crmp62, et Munc, une séquence de souris récemment disponible sur Genbank. ULIP-2 est composée de TOAD-64, Crmp-62 et Munc qui présentent entre eux une identité de 97 % d'acides aminés. Les séquences partielles humaines EST, c'est-à-dire hcrmp1, qui présentent une identité de 75 % avec ULIP-1 ou ULIP-2 ont été trouvées. Elles appartiennent à un troisième groupe appelé ULlP-3. Le dernier groupe identifié appelé SLIP4, comprend r-CRMP-3 chez le rat et les formes ULIP4 chez la souris et POP66/ULIP4 chez l'homme. La comparaison de la séquence d'acides aminés des trois gènes ULIP, à savoir TOAD-64 chez le rat, Crmp62 chez le poulet, et ULIP-1 chez la souris, avec la séquence d'acides aminés déduite du cadre de lecture ouvert du présent clone C-22, en utilisant le logiciel d'alignement Clustal V, révèle que C-22 présente une identité de 74% avec ULlP-1, 77 % avec Crmp62 et 76 % avec TOAD-64. La séquence nucléotidique C-22 a une identité de 97 % avec la séquence partielle EST, hCrmp-1, et définit ainsi le troisième membre du groupe ULlP-3. Les gènes TOAD-64, Crmp-62 et C-22 codent chacun pour une protéine de 572 acides aminés de longueur, tandis que la séquence d'acides aminés déduite à partir d'ULIP-1 donne une protéine de 570 acides aminés. L'analyse de la séquence d'acides aminés de C-22 ne montre aucune séquence de signal ou de domaine transmembranaire suggérant que le ou les produits du gène C-22 pourraient être localisés dans le cytoplasme des cellules. Plusieurs sites consensus de phosphorylation par la protéine kinase C (S/T X R/K) apparaissent le long du produit du gène C-22. Ces observations suggèrent que C-22 est une phospho- protéine et que de légères différences dans la phosphorylation pourraient dicter l'activité ou le rôle des différents membres de cette famille de protéines tout au long du cycle cellulaire. Tableau 1: Récapitulation des protéines présentant une homologie avec les ULIP. Famille Espèces N EMBL Unc-33 nematode Nematode Z14146 Dihydropyrimidinase Hu DHPase humain 078011 Ra DHPase rat D63704 groupe ULIP-1 Ulip souris X87817 Hu DRP3 humain D78014 r-CRMP-1 rat U52102 Hu-Ulip humain Y07818 groupe ULIP-2 ULIP-2 souris SEQ ID n 2 Tord64 rat Z46882 CRMPS2 poulet Uni 7277 Munc souris X87242 hCRMP-2 humain U17279 Hu DRP-2 humain D78013 r-CRMP-4 rat U52104 groupe ULIP-3 ULIP-3 souris SEQ ID n 4 hCRMP-1 humain U17278 rCRMP-1 rat U52102 C-22 rat U52095 Hu DRP-1 humain D78012 groupe ULIP-4 ULIP4 souris SEQ ID n 6 POP-66/ULIP-4 homme SEQ ID n 8 r-CRMP-3 rat U52103 EXEMPLE 4 Régulation de l'expression du gène C-22: L'évaluation des altérations dans l'expression du gène C-22 pourrait avoir une importance considérable pour la connaissance des aspects fonctionnels de la protéine C-22. Par conséquent, la Demanderesse a étudié la possible régulation de l'expression du gène C-22 au cours du développement. L'ARN total est extrait et séparé par l'électrophorèse sur gel d'agarose à 1 % et transféré sur membrane Nytran (Duchemin et al. 1987). Les transferts sont hybridés avec une séquence codante C-22 marquée au 32. P, un tampon phosphate 0,5 mM et 5 % de SDS à 65"C pendant 16 heures. A la fin de l'hybridation, les transferts sont lavés successivement trois fois avec 2xSSC, 0,1 % SDS à température ambiante, puis 1xSSC, 0,1 % SDS à 65"C pendant 60 minutes, et exposés aux rayons X. Dans les conditions utilisées, on a détecté une seule bande à 3,8 kb représentant I'ARNm C-22 qui est aussi le plus petit transcrit de la famille de gènes unc-33 des vertébrés. La taille du transcrit reste la même durant les périodes pré et post-natales. La cinétique du gène C-22 dans le cerveau de rats au cours du développement montre que le messager est détectable au cours de la période embryonnaire au jour E17. La quantité de transcrits C-22 augmente jusqu'au jour 7 post-natal puis décroît rapidement à partir de la seconde semaine après la naissance jusqu'à un niveau pratiquement indétectable chez l'adulte. Aux environs de la naissance, un signal de régulation encore inconnu est probablement reçu, ce qui augmente l'expression du gène C-22, ce signal étant lié temporairement à la différenciation neuronale et au développement axonal. L'ARNm de C-22 n'a pas pu être détecté par analyse Northern Blot dans plusieurs régions du cerveau telles que le cortex frontal , le cerveau moyen et le thalamus chez l'adulte et le rat âgé de plus de deux ans. De plus, on n'a pas pu détecter l'ARNm de C-22 dans des tissus non neuronaux, tels que le coeur, le poumon, le foie, le rein chez des rats d'une semaine et des rats adultes. Les données sur le profil de l'expression l'ARNm de C-22 suggèrent un rôle prépondérant de la protéine C-22 dans le développement du cerveau. EXEMPLE 5 Immunoempreinte de POP-66: Des anticorps contre quatre des peptides séquencés (cf. exemple 1) ont été produits. Deux des sérums se sont avérés particulièrement intéressants. L'un contient des anticorps (Ac anti-pep3) qui reconnaissent plusieurs membres de la famille ULIP en éléctrophorèse à deux dimensions d'extraits protéiques de cerveau de rat nouveau né (figure 2) et sur électrophorèse à une dimension (figure 3). Un autre anticorps (Ac anti-pep4) reconnaît en Western Blot une seule bande de 66 kDa susceptible de correspondre à un seul membre de la famille (figure 3). EXEMPLE 6 Immunohistochimie: Les préparations de tissus pour l'immunohistochimie sont obtenues à partir de cerveaux de rats nouveaux-nés et de cerveaux humains post-mortem, fixés à 4" C dans du paraformaldéhyde à 4 % et 0,2 % d'acide picrique dilués dans du tampon phosphate (0,1 M, pH =7,4), puis cryoprotégés. L'immunocytochimie peut être réalisée par la technique d'immunofluorescence indirecte. Des coupes de 12 pm d'épaisseur sont réalisées au cryostat puis montées sur lame recouverte de gélatine, traitées pendant 2 heures dans du tampon PBS et 1 % de sérumalbumine bovine (BSA) avec 0,1 % de Triton X100 et incubées 12 h avec le sérum de patients anti-CV2 dans du PBS-1% BSA à température ambiante (dilution du sérum 1/100). Après plusieurs lavages avec PBS-1 % BSA, les coupes sont incubées pendant 2 h avec un anti-sérum anti-humain de lapin conjugué à la fluorescéine diluée à 1 % (Dakopatts) dans du PBS-1 % BSA. Après lavage dans le PBS les lames sont examinées au microscope. Les coupes contrôle sont incubées avec soit l'anti sérum IgG anti-humain conjugué à la fiuorescéine seule, soit le PBS-1 % BSA seul, soit le sérum de patient seul, soit enfin le sérum contrôle (patients non atteint de SNP) et anticorps conjugué à la fluorescéine à la même dilution. Pour confirmer l'immunofluorescence on peut utiliser le marquage indirect par immunoperoxydase. Les coupes de tissus congelés fixés au paraformaldéhyde sont incubées avec 0,3 % d'H202 (pour détruire l'activité peroxydase intrinsèque) et 10 % de sérum normal de lapin (pour éviter la liaison non spécifique des IgG de lapin) ou 1 % BSA. Après incubation 12 h avec des sérums de patients dilués à 1/1000 et lavage, les coupes sont incubées 2 h avec de l'anti sérum IgG anti-humain de lapin biotinylé dilué à 1/1000 dans PBS-1% BSA. Les IgG humains liés sont visualisés par incubation avec un complexe avidine-biotineperoxydase (Vectastain ABC complex, Vector) et développés avec 0,05 % DAB (Sigma). Les coupes contrôle sont obtenues avec des sérums de 15 patients sans SNP selon le même protocole. A - Localisation des protéines de la famille ULIP à l'aide d'anticorps antipeptides: Un marquage immunohistochimique a été réalisé sur coupe de cerveaux de rats nouveaux-nés et adultes. L'anticorps antipeptide-3 reconnaît un (des) antigènes présent(s) dans plusieurs types cellulaires sur coupe de cerveaux de rats nouveau-nés et adultes (fig. 4). Comme le sérum anti-CV2 de patient, les anticorps anti-peptide-4 ne permettent la mise en évidence d'aucun antigène sur coupe de cerveau de rat nouveau né alors qu'ils marquent spécifiquement une sous-population d'oligodendrocytes dans le cerveau de rat adulte (fig. 4). B - Expression de POP-66 au cours du développement normal du cerveau: La figure 5 montre que les cellules nerveuses prolifératives des zones progénitrices du système nerveux mises en évidence par l'accumulation de bromodéoxyuridine (BrdU) n'expriment pas POP-66 alors que les cellules non prolifératives qui correspondent aux cellules nerveuses en différenciation ou en migration l'expriment. EXEMPLE 7 Rôle de POP-66 dans la survie neuronale: La figure 6 permet de comparer des coupes de cerveaux humains de patients sains et de patients atteints de SNP. Chez les patients atteints d'un SNP et présentant des anticorps circulant anti-CV2, on observe une disparition des neurones du gyrus dentatus et des neurones pyramidaux (bande de cellules centrale), ainsi qu'une réaction astrocytaire intense. EXEMPLE 8 Caractérisation de la protéine POP-66 - Identification avec ULIP-4: Matériels et méthodes a) Purification partielle d'ULIP-1 ULIP-1 partiellement purifiée a été obtenue à partir de cerveaux de souris nouveaux-nés par trois étapes de purification. Ces cerveaux ont été homogénéisés dans 4 volumes de tampon d'homogénéisation (25 mM phosphate de sodium, pH 7,8,1 mM EGTA, 10 ,ug/ml de leupeptine, 25 ,ug/ml d'aprotinine, et 10 ,ug/ml de pepstaine. Les homogénats ont été centrifugés pendant 10 minutes à 400 x g. Les culots ont été resuspendus dans 2 volumes de tampon d'homogénéisation, homogénéisés, et de nouveau centrifugés. Les surnageants issus des deux centrifugations ont été rassemblés, soniqués et centrifugés pendant 1 heure à 100.000 x g. Le surnageant (S2) a été chargé sur une colonne CL6B de DEAE-Sepharose (1,75 cm2 x 26 cm) équilibré avec 100 ml de tampon A (25 mM de phosphate de sodium, pH 7,8,1 mM d'EGTA) à une flux de 30 ml par heure. Les protéines ont été éluées dans 300 ml d'un gradient linéaire de chlorure de sodium 0-250 mM dans du tampon A et des échantillons de 5 ml ont été recueillis. Les fractions contenant ULIP ont été collectées et du sulfate d'ammonium solide a été ajouté jusqu'à 20 % de saturation. Ce pool a été chargé sur une colonne CL4B de phényl-Sepharose (1,75 cm2 x 22 cm) qui a été préalablement équilibré avec 100 ml de tampon B (10 mM de phosphate de sodium, pH 7,8, 1 mM d'EGTA) contenant 20 % de sulfate d'ammonium saturé. Les protéines ont été éluées dans un gradient linéaire décroissant de 20 à 0 % de sulfate d'ammonium saturé dans du tampon B. Les fractions contenant ULIP ont été recueillies, dialysées deux fois contre 20 volumes de tampon A. Les protéines ont été concentrées sur une petite (10 ml) colonne Cl6B de DEAE-Sepharose et éluées avec 400 mM de chlorure de sodium dans du tampon A. L'éluat a été dessalé sur une colonne Sephadex G-25 (NAP-10) et concentré dans un volume final de 0,5 ml par évaporation. Dans la dernière étape de purification, la fraction concentrée a été chromatographiée en trois étapes successives, sur deux colonnes de FPLC (Fast Protein Liquid Chromotagraphy) Superose 12 montées en série, dans du tampon C (50 mM de phosphate de sodium, pH 7,2, 150 mM de chlorure de sodium) à un débit de 0,3 ml/minute. Les fractions (0,6 ml) ont été recueillies et les fractions enrichies en ULIP ont été analysées. La présence d'ULIP dans les étapes successives de purification a été testée par un Western Blot à une dimension en utilisant un anticorps anti-stathmine capable de réactivité croisée. Les protéines ont été quantifiées selon la méthode de Bradford. b) Miaration sur ael d'électroDhorèse: Une électrophorèse à une dimension a été effectuée sur des gels de polyacrylamide 13 % selon la méthode de Laemmli. Les électrophorèses PAGE à deux dimensions ont été effectuées tel que décrit précédemment. Les gels d'isoélectrofocalisation contenaient 2 % d'ampholines total, pH 6-8 et 3-10 selon un rapport de 4 :1. La seconde dimension avait été menée sur des gels d'acrylamide à 10 %. Les protéines ont été soit soumises à une immuno-empreinte soit colorées par l'argent. c) Analvse Western Blot: Les protéines ont été transférées à partir des gels sur de la nitrocellulose dans du tampon contenant Tris 48 mM, glycine 39 mM et 5% de méthanol. La membrane a été saturée avec de la caséine (2,5 %) dans la solution d'immuno-empreinte (12 mM de Tris-HCI, pH 7,4, 160 mM de Na Cl, 0,1 % de Triton X-100) et testée avec un antisérum dirigé contre le peptide I de la stathmine de rat (dilution 1/10.000) ou un antisérum dirigé contre la protéine ULIP recombinante (dilution 1/20.000) dilué dans une solution d'immuno-empreinte contenant 1 % de caséine. Les anticorps liés ont été détectés soit avec une protéine A marquée à 1"251 et autoradiographiés soit avec des anticorps anti-lapin liés à la peroxydase en utilisant le kit ECL (Amersham). d) Analvse de la séquence protéique: Les fractions enrichies en ULIP ont été séparées sur les gels de polyacrylamide à deux dimensions. Les gels sont fixés pendant 30 minutes dans 25 % d'éthanol et 10 % d'acide acétique et colorés pendant 3 minutes dans 0,1 % de noir amido dans 1 % d'acide acétique et 40 % de méthanol. Les gels ont été décolorés dans 1 % d'acide acétique et les taches correspondant à la forme principale de ULIP ont été découpées dans ces trois gels, recueillies et digérées avec 2 mg/ml d'endoprotéase Lys C. Les peptides élués du gel ont été ensuite séparées par HPLC sur colonne DEAE-C18 avec un gradient de 0-55 % d'acétonitrile dans 0,1 % d'acide trifluoroacétique. Les peptides ont ensuite été séquencés selon la dégradation automatique d'Edman. e) Expression in vitro chez un mammifère 1 pg du plasmide Bluescript contenant l'ADNc entier codant pour ULlP-1, ULlP-2, ULIP-3 ou ULIP4 a été utilisé pour réaliser la transcription et la traduction in vitro avec le système Reticulocyte lysate (Promega) selon le protocole décrit par le fabricant. 5 pg du mélange de 25 ,ul total de transcription/traduction ont été analysés sur gel d'électrophorèse à deux dimensions. Résultats Ni la protéine recombinante ULIP-1, ni les protéines recombinantes TOAD64 (ULIP-2) et C-22 (ULIP-3) ne sont reconnues par les sérums anti-CV2. De plus, le profil de distribution des taches correspondant à POP66 reconnues par les anticorps anti-CV2 en électrophorèse à deux dimensions ne correspond pas aux taches reconnues par les anticorps anti-ULIP-1. Or, POP66 est un membre de la famille ULIP puisque les trois taches POP66 sont reconnues par l'Ac anti-pep3. POP46 correspond donc à un membre de la famille de pHi plus basique. Après traduction in vitro des quatre protéines(ULIP-1, 2, 3, 4), on a montré que ULIP-4 a le même profil électrophorétique 2D que POP66 et est reconnue par les anticorps anti-CV2 (figure 7). Pour cela, la protéine ULIP-4 et, comme contrôle, la protéine ULIP-2 ont été traduites in vitro en présence de méthionine 35S à partir de clones d'ADNc codants pour les protéines entières. Les protéines ont été séparées par électrophorèse à deux dimensions (en présence d'un extrait de cerveau fournissant les repères essentiels), transférées sur nitrocellulose et révélées: - par autoradiographie pour localiser les protéines traduites in vitro (traduction); - par immunoempreinte avec le sérum CV2. La figure 7 montre que les trois taches de la traduction in vitro d'ULIP4 correspondent aux taches reconnues par CV2. Ces taches ne sont pas reconnues dans la traduction d'ULIP-2. Le sérum CV2 reconnaît donc spécifiquement ULlP. Ceci a permis d'identifier POP66 comme ULlP-4. EXEMPLE 9 Localisation chromosomique de la protéine POP-661ULIP-4: L'ADNc d'ULIP-4 humain étant cloné, il est alors possible de déterminer la localisation chromosomique du gène POP66/ULIP-4 par cartographie génique par hybridation in situ isotopique (Levy et Mattei et al., 1995). L'hybridation in situ est menée sur des préparations de chromosomes obtenues à partir de lymphocytes humains stimulés par la phytohémagglutinine mis en culture pendant 72 heures. De la 5bromodéoxyuridine a été ajoutée pendant les 7 dernières heures de la culture (60 pg/ml de milieu), pour assurer une image de bandes chromosomiques post-hybridation de bonne qualité. Le clone contenant un insert de 1300 paires de bases codant pour ULIP-4 dans le vecteur Bluescript est marqué au tritium par translation de coupure ( nick translation ) avec une activité spécifique de 1x108 dpm. pg-1. La sonde radiomarquée a été hybridée au stade métaphase à une concentration finale de 200 ng par ml de solution d'hybridation. Après recouvrement par une émulsion Kodak NTB2 les lames ont été exposées pendant 20 jours à +4"C puis développées. Pour éviter le décalage des grains d'argent pendant le processus, les étalements de chromosomes ont été préalablement marqués avec une solution tampon de Giemsa et les métaphases ont été photographiées. La révélation des bandes a été effectuée par la méthode fluorochrome-photolyse Giemsa (FPG) et les métaphases ont été rephotographiées avant analyse. Sur les 100 cellules en métaphase examinées après hybridation in situ, on a dénombré 246 grains d'argent associés aux chromosomes et 54 parmi ceux-ci (21,9 /O) étaient localisés sur le chromosome 10. La distribution des grains sur ce chromosome n'était pas aléatoire: 39 sur 54 (72,2 % de ceux-ci) étaient localisés sur la région q25.2-q26 du bras long du chromosome 10. Le gène POP66/ULlP4 se trouve donc situé sur le chromosome 10 dans la région q25.2-q26. Cette région a été décrite comme étant délétée dans certains cas de glioblastomes. Cette localisation chromosomique confirme l'intérêt d'étudier POP66/ULIP4 en relation avec la pathologie tumorale. EXEMPLE 10 Expression de POP-661ULIP-4 et des membres de la famille ULIP dans les cancers a - Matériels et méthodes : expériences de RT-PC R: L'ARN total a été extrait en utilisant 1 ml de RNAZOLrMB (Bioprobe) selon la méthode de Chomczynski et Sacchi. La quantité d'ARN a été déterminée par densité optique mesurée à 260 nm et sa pureté a été déterminée à partir du rapport des absorbances mesurées à 260 et 280 nm (rapports 1,8-2,0). L'intégrité des préparations d'ARN a été en outre vérifiée par électrophorèse sur gel d'agarose à 1 % dans du TBE (0,45 M de Tris-borate, 10 mM d'EDTA, pH 8). La spécificité des amorces a été analysée en comparant leurs séquences avec les diverses banques de données de gènes (EMBL et FASTA). Pour une quantification relative, le gène codant pour la G3PDH (glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase, Clontech), gène ubiquitaire exprimé dans de nombreux tissus incluant le cerveau, a été co-amplifié avec l'ARNm testé en tant que standard interne pour vérifier l'égalité des quantités d'ARN des échantillons et pour tester l'efficacité de l'étape de transcription inverse pour les différents échantillons d'ARN. Les amorces 5', 3' et les oligonucléotides des sondes internes de G3PDH ont été synthétisées et purifiées par Eurogentec. L'ARNm total (1 pg) a été dénaturé (15 minutes à 65" C) et transcrit en ADNc simple brin (1 heure et demie, 42" C) dans un volume final de 20 pi de tampon (50 mM de Tris-HCI, 75 mM de KCI, pH 8,3, Gibco BRL) contenant 5 ng par lul d'amorce oligo Tris-HCI, 0,1 % de Triton X100, 0,4 % de glycérol et 800 pM de NaCI, Ph 9), dans lequel a été ajouté 40 pM de DTT, 3 mM de MgC12, 0,2 mM de chaque dNTP, 0,4 pM de chaque amorce sélectionnée et 2 unités de l'AmpliTaq ADN polymérase (Promega) dans un volume final de 50 ,ul. Les échantillons ont ensuite été placés dans un thermocycleur (Biomed Hybaid), dénaturés à 95"C pendant 5 minutes et amplifiés pendant 35 cycles (un cycle = dénaturation 95" C pendant 65 secondes, hybridation des amorces 60 C pendant 45 secondes, extension 72" C pendant 4 minutes et allongement finale 15 minutes à 72" C. Les produits ont été séparés par électrophorèse sur gel d'agarose-Seakem à 1 % et les bandes tests des produits de RT-PCR de taille attendue ainsi que l'échelle de marqueur de poids moléculaire (100 paires de base) (Promega) ont été visualisés en utilisant la coloration au bromure d'éthidium. Composition des sondes oligonucléotidiques utilisées pour la PCR ULIP-3 5' ATAGAGGAGCGGATGACG (899)3' GCTGTTATGGTCTTCAACTTGTCGG (1092) GGCCTGTTATGGTCTTCAACTTGTCG (1093) Composition des sondes oligonucléotidiques utilisées pour la PCR ULIP-2 5' AGGAGGAGTGAAGACCATCG 5227) 3' CTTATGCCACTCGCTGATGTCC (509). B - Résultats Les expériences de RT-PCR montrent que TOAD-64 (ULIP-2) et C-22 (ULIP-3) sont exprimés dans certaines tumeurs du poumon à petites cellules (cf. figure 8) et absents dans d'autres notamment dans celles des patients qui développent des syndromes neurologiques paranéoplasiques de meilleur pronostic. La protéine POP-66/ULIP4 ainsi que les protéines de la famille ULIP pourraient être exprimées dans les tumeurs périphériques (tumeur du poumon à petites cellules, thymome, cancer du sein et de l'ovaire). Leur présence pourrait donc être corrélée à un pronostic. La localisation du gène de POP-66/ULIP-4 sur la partie distale du chromosome 10 le confirme dans le cas des tumeurs cérébrales. Ainsi, I'expression différentielle des membres de la famille ULIP dans des tumeurs telles que le cancer à petites cellules du poumon, alors que le gène ULIP correspondant est absent dans un tissu sain, ainsi que la modulation de l'expression des membres de la famille ULIP obtenus lors de la différenciation par le rétrovirus humain HTLV1 d'une lignée de médulloblastome, suggèrent l'implication des ULIP dans les tumeurs cancéreuses. BIBLIOGRAPHIE - Anderson et al., CRC Crit. Rev. Neurobiol., 1987, vol. 3, pp 245-99 - Antoine J.C. et al., Journal of the Neurological Sciences, 1993 vol. 117, pp 215-223 - Byk et al., Journal of Neuroscience, 1996, vol. 16(2), pp 688-701 - Dalmau et al., Neurology, 1991, vol. 41, pp 175764 - Duchemin et al., Dev Neurosci, 1987, vol. 9, pp 61-67 - Graus et al., Neurology, 1985, vol. 35, pp 538-543 - Graus et al., Neurology, 1990, vol. 40, pp 219-22 - Greenlee et al., Ann. Neurol., 1983, vol. 14, pp 609-13 - Hamajima et al., Gene, 1996, vol. 180, pp. 157-163 - Hetzel et al., Mayo Clin. Proc., 1990, vol. 65, pp 1558-63 - Honnorat J. et al., Journal of Neurology, Neurosurgery and Psychiatry, 1996, vol. 61, pp 270-278 - Jaeckle et al., Ann. Neurol., 1985, vol. 18, pp 592-600 - Kôhler et Milstein, Nature, 1975, vol. 256, pp 495497 - Levy N., Mattei MG., 1995, Geneprobs il, a practical approch. BD Hames and SJ Higgins, Oxford University Press, pp 211-243 - Luque et al., Ann. Neurol., 1991, vol. 29, pp 241-51 - Minturn et al., J. 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Neurosci., 1996, vol. 16(9), pp 61976207 LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATION GENERALE: (i) DEPOSANT: (A) NOM: Institut National de la Santé et de la recherche médicale (B) RUE: 101, rue de Tolbiac (C) VILLE: Paris (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 75013 (G) TELEPHONE: 0144236000 (H) TELECOPIE: 0145856856 (ii) TITRE DE L' INVENTION: Utilisation des Ulip dans les SNP et les cancers associés (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 8 (iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (C) SYSTEME D'EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB) (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1817 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Mus musculus (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: CTTCCTCCCG CCCCCCGGAG AGATGTCTTA TCAGGGGAAG AAAAATATTC CACCCATCAC 60 GAGCGATCGT CTTCTGATCA AAGGTGGCAA GATTGTGAAT GATGACCAGT CCTTCTATGC 120 AGACATATAC ATGGAAGATG GGTTGATCAA GCAAATAGGA GAAAACCTGA TTGTACCAGG 180 AGGGGTGAAG ACCATCGAAG CCCACTCCAG AATGGTGATT CCCGGAGGAA TTGACGTGCA 240 TACTCGCTTC CAGATGCCTG ACCAGGGAAT GACATCCGCT GATGACTTCT TCCAGGGAAC 300 CAAGGCGGCC CTGGCCGGGG GAACCACCAT GATCATTGAC CATGTTGTTC CTGAGCCCGG 360 GACGAGCCTA TTGGCTGCCT TTGATCAGTG GAGGGAGTGG GCTGACAGCA AGTCCTGCTG 420 TGACTATTCG CTGCACGTGG ACATCACTGA GTGGCACAAG GGCATCCAGG AGGAGATGGA 480 AGCTCTGGTG AAGGACCACG GGGTAAACTC CTTCCTCGTG TACATGGCTT TCAAAGATCG 540 ATTCCAGCTG ACGGATTCCC AGATCTATGA AGTGCTGAGC GTGATCCGGG ATATCGGTGC 600 CATAGCTCAA GTCCACGCAG AGAATGGTGA CATCATTGCT GAGGCACAGC AGAGGATCCT 660 GGATCTGGGC ATCACGGGCC CCGAGGGACA CGTGTTGAGC CGGCCAGAGG AGGTCGAGGC 720 TGAAGCTGTG AACCGGTCCA TCACTATTGC CAACCAGACC AACTGCCCTC TGTATGTCAC 780 CAAAGTGATG CCCAAGAGTG CGGCTGAAGT CATCGCTCAG GCACGGAAGA AGGGAACTGT 840 GGTGTATGGT GAGCCCATCA CGGCCAGCCT GGGGACTGAT GGCTCTCATT ACTGGAGCAA 900 GAACTGGGCC AAGGCTGCGG CCTTTGTCAC CTCCCCACCC TTGAGCCCCG ACCCAACCAC 960 TCCAGACTTT CTCAACTCGT TGCTGTCCTG TGGAGACCTC CAAGTCACTG GCAGTGCCCA 1020 CTGCACCTTC AACACTGCCC AGAAGGCTGT GGGGAAGGAC AACTTCACCT TGATTCCCGA 1080 GGGCACCAAC GGCACTGAGG AGCGGATGTC TGTCATTTGG GATAAAGCTG TGGTCACTGG 1140 GAAGATGGAT GAGAATCAGT TTGTGGCTGT GACCAGCACC AACGCAGCCA AAGTCTTCAA 1200 CCTTTACCCC CGGAAAGGTC GCATCTCGGT GGGATCTGAT GCTGACTTGG TCATCTGGGA 1260 CCCTGACAGT GTGAAGACCA TCTCTGCCAA GACACACAAC AGTGCTCTTG AGTACAACAT 1320 CTTTGAAGGC ATGGAGTGTC GCGGCTCCCC ACTGGTGGTC ATCAGCCAGG GCAAGATTGT 1380 CCTGGAGGAC GGCACACTTC ATGTCACTGA AGGCTCAGGA CGCTACATTC CCCGGAAGCC 1440 CTTCCCTGAC TTTGTGTACA AACGCATCAA AGCAAGGAGC AGGCTGGCTG AGCTGAGAGG 1500 GGTCCCTCGT GGCCTGTATG ACGGACCGGT ATGCGAGGTG TCTGTGACGC CCAAGACGGT 1560 GACTCCAGCC TCATCAGCTA AGACATCCCC TGCCAAGCAG CAGGCACCAC CTGTTCGGAA 1620 CCTGCACCAG TCTGGATTCA GCTTGTCTGG TGCTCAGATT GACGACAACA TTCCCCGCCG 1680 CACCACCCAG CGCATCGTGG CACCCCCTGG TGGCCGTGCC AACATCACCA GCCTGGGCTA 1740 AAGCCCCTAG GCCTGCAGGC CACTTGGGGA TGGGGGATGG GACACCTGAG GACATTCTGA 1800 GACTTCCTTT CTTCCAT 1817 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 572 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Mus musculus (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2: Met Ser Tyr Gln Gly Lys Lys Asn Ile Pro Pro Ile Thr Ser Asp Arg 1 5 10 15 Leu Leu Ile Lys Gly Gly Lys Ile Val Asn Asp Asp Gln Ser Phe Tyr 20 25 30 Ala Asp Ile Tyr Met Glu Asp Gly Leu Ile Lys Gln Ile Gly Glu Asn 35 40 45 Leu Ile Val Pro Gly Gly Val Lys Thr Ile Glu Ala His Ser Arg Met 50 55 60 Val Ile Pro Gly Gly Ile Asp Val His Thr Arg Phe Gln Met Pro Asp 65 70 75 80 Gln Gly Met Thr Ser Ala Asp Asp Phe Phe Gln Gly Thr Lys Ala Ala 85 90 95 Leu Ala Gly Gly Thr Thr Met Ile Ile Asp His Val Val Pro Glu Pro 100 105 110 Gly Thr Ser Leu Leu Ala Ala Phe Asp Gln Trp Arg Glu Trp Ala Asp 115 120 125 Ser Lys Ser Cys Cys Asp Tyr Ser Leu His Val Asp Ile Thr Glu Trp 130 135 140 His Lys Gly Ile Gln Glu Glu Met Glu Ala Leu Val Lys Asp His Gly 145 150 155 160 Val Asn Ser Phe Leu Val Tyr Met Ala Phe Lys Asp Arg Phe Gln Leu 165 170 175 Thr Asp Ser Gln Ile Tyr Glu Val Leu Ser Val Ile Arg Asp Ile Gly 180 185 190 Ala Ile Ala Gin Val His Ala Glu Asn Gly Asp île Ile Ala Glu Ala 195 200 205 Gln Gln Arg Ile Leu Asp Leu Gly Ile Thr Gly Pro Glu Gly His Val 210 215 220 Leu Ser Arg Pro Glu Glu Val Glu Ala Glu Ala Val Asn Arg Ser Ile 225 230 235 240 Thr Ile Ala Asn Gln Thr Asn Cys Pro Leu Tyr Val Thr Lys Val Met 245 250 255 Pro Lys Ser Ala Ala Glu Val Ile Ala Gln Ala Arg Lys Lys Gly Thr 260 265 270 Val Val Tyr Gly Glu Pro Ile Thr Ala Ser Leu Gly Thr Asp Gly Ser 275 280 285 His Tyr Trp Ser Lys Asn Trp Ala Lys Ala Ala Ala Phe Val Thr Ser 290 295 300 Pro Pro Leu Ser Pro Asp Pro Thr Thr Pro Asp Phe Leu Asn Ser Leu 305 310 315 320 Leu Ser Cys Gly Asp Leu Gln Val Thr Gly Ser Ala His Cys Thr Phe 325 330 335 Asn Thr Ala Gln Lys Ala Val Gly Lys Asp Asn Phe Thr Leu Ile Pro 340 345 350 Glu Gly Thr Asn Gly Thr Glu Glu Arg Met Ser Val Ile Trp Asp Lys 355 360 365 Ala Val Val Thr Gly Lys Met Asp Glu Asn Gln Phe Val Ala Val Thr 370 375 380 Ser Thr Asn Ala Ala Lys Val Phe Asn Leu Tyr Pro Arg Lys Gly Arg 385 390 395 400 Ile Ser Val Gly Ser Asp Ala Asp Leu Val Ile Trp Asp Pro Asp Ser 405 410 415 Val Lys Thr Ile Ser Ala Lys Thr His Asn Ser Ala Leu Glu Tyr Asn 420 425 430 Ile Phe Glu Gly Met Glu Cys Arg Gly Ser Pro Leu Val Val Ile Ser 435 440 445 Gln Gly Lys Ile Val Leu Glu Asp Gly Thr Leu His Val Thr Glu Gly 450 455 460 Ser Gly Arg Tyr Ile Pro Arg Lys Pro Phe Pro Asp Phe Val Tyr Lys 465 470 475 480 Arg Ile Lys Ala Arg Ser Arg Leu Ala Glu Leu Arg Gly Val Pro Arg 485 490 495 Gly Leu Tyr Asp Gly Pro Val Cys Glu Val Ser Val Thr Pro Lys Thr 500 505 510 Val Thr Pro Ala Ser Ser Ala Lys Thr Ser Pro Ala Lys Gln Gln Ala 515 520 525 Pro Pro Val Arg Asn Leu His Gln Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Ala 530 535 540 Gln Ile Asp Asp Asn Ile Pro Arg Arg Thr Thr Gln Arg Ile Val Ala 545 550 555 560 Pro Pro Gly Gly Arg Ala Asn Ile Thr Ser Leu Gly 565 570 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2297 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Mus musculus (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3: GCTGTCTGTC TTCAGCGCCC TCCTCTCGCC CTGCCTCTCC CTCCTCCTCC CGCCCTCCTT 60 GCCAAGCCGG GCGGTGCAGG CAGCCGGAGC AGCGGCGGCG GGCCGAGCAG CGGGGAGTGG 120 GCAGCGGTGG GAGCCGAGCT TCTGTCCTTT CTTTCATCCC TCCCTGGCCT TTGTCGCCGC 180 TCTCACGAGT AGCGCCGCCG GGAGAGACCC GGGTAGAGCG CCAGGCAGAC GTTAGTTCCA 240 GCGGCCGGGC GGAGGGCTCC AGAGGGGCCA TGTCTCATCA GGGGAAGAAG AGCATCCCGC 300 ACATCACCAG TGACCGGCTC CTCATCAGAG GTGGACGCAT CATCAATGAT GACCAGTCCT 360 TCTACGCCGA TGTCTACCTA GAAGATGGAC TCATAAAACA AATAGGAGAG AACCTGATTG 420 TTCCTGGTGG AGTGAAGACC ATCGAGGCGA ATGGCCGAAT GGTCATTCCC GGTGGCATTG 480 ATGTCAACAC TTACCTGCAG AAGCCCTCCC AGGGCATGAC CTCGGCTGAT GACTTCTTCC 540 AGGGCACTAA AGCAGCGCTG GCAGGTGGAA CCACGATGAT CATTGACCAC GTTGTTCCTG 600 AACCTGGGTC CAGCTTGTTG ACTTCCTTTG AGAAATGGCA CGAAGCAGCA GACACCAAAT 660 CCTGCTGTGA CTATTCCCTC CACGTGGACA TCACAAGCTG GTATGATGGT GTTCGGGAAG 720 AGCTGGAGGT GCTGGTGCAG GACAAAGGTG TCAACTCCTT CCAAGTCTAC ATGGCGTATA 780 AGGACCTGTA CCAGATGTCT GACAGCCAGC TGTATGAAGC CTTCACCTTC CTTAAGGGTT 840 TGGGAGCTGT GATCTTAGTC CATGCAGAAA ATGGAGATTT GATAGCTCAG GAACAAAAAC 900 GGATCCTGGA GATGGGCATC ACGGGTCCCG AGGGTCATGC TCTGAGCAGA CCCGAGGAGC 960 TGGAGGCCGA GGCTGTGTTC CGGGCTATTG CCATTGCAGG CCGGATCAAT TGCCCTGTGT 1020 ACATCACCAA GGTCATGAGC AAGAGTGCAG CGGACATCAT CGCACTGGCC AGGAAGAAAG 1080 GCCCTCTTGT CTTCGGTGAG CCCATAGCCG CCAGCCTGGG AACCGATGGC ACCCACTACT 1140 GGAGCAAGAA CTGGGCCAAG GCAGCTGCAT TTGTGACTTC CCCTCCCCTG AGCCCAGACC 1200 CCACCACTCC TGACTACTTG ACCTCCTTGC TGGCCTGTGG AGACTTGCAG GTCACAGGTA 1260 GTGGCCACTG TCCCTACAGT ATTGCTCAGA AGGCTGTGGG CAAGGACAAC TTCACTCTGA 1320 TCCCTGAGGG TGTCAATGGT ATAGAAGAGC GGATGACCGT TGTCTGGGAC AAGGCAGTGG 1380 CTACTGGCAA GATGGATGAG AACCAGTTTG TAGCCGTCAC CAGCACCAAC GCAGCCAAGA 1440 TCTTCAACCT GTACCCGAGG AAAGGTCGGA TCGCTGTGGG CTCCGATGCT GACGTAGTCA 1500 TCTGGGACCC AGATAAGATG AAGACCATAA CAGCCAAAAG CCATAAATCA ACTGTGGAGT 1560 ACAACATCTT TGAGGGCATG GAGTGCCACG GCTCCCCCCT GGTGGTCATC AGTCAGGGCA 1620 AGATTGTCTT TGAGGATGGA AACATCAGTG TCAGCAAGGG CATGGGCCGC TTCATCCCTC 1680 GGAAGCCATT CCCAGAGCAT CTCTACCAGC GTGTCAGGAT CAGAAGCAAG GTTTTCGGGT 1740 TGCATAGTGT TTCCAGGGGC ATGTACGATG GGCCTGTGTA CGAGGTGCCA GCTACACCCA 1800 AACATGCTGC TCCTGCTCCT TCTGCCGAAT CCTCGCCTTC TAAACACCAA CCCCCACCCA 1860 TCCGGAACCT CCACCAGTCC AACTTCAGCT TATCAGGTGC CCAGATAGAT GACAACAATC 1920 CAAGGCGTAC AGGCCACCGC ATTGTGGCGC CCCCTGGTGG CCGCTCCAAC ATCACCAGCC 1980 TCGGTTGACC TCAGATGAGC CAGATATGCA AGAGTGAAGG ATTATGGGAA AACGTCCATT 2040 CCTTTTCCGT GTTTTTGAAG CCCACAGTTT TAGTTGGTAC TGACGGAGGG GAGATTGAGC 2100 GATGCTCTTT CCTTCTCTGT TTAGGAAGAA GTGGTACTAG TGTGGTGTGT TTGCCTGGAA 2160 GTCCCTCGCC CACAGTGTGT GTTCACACCG ACTCCACCTC AGAGCATGGT GCCGTCCGTT 2220 TTCCCTTCCT AGTGACCCCA GGTTTAGCAT CGTCCTATAC TGTTCCCTCC ACTCCTCCAT 2280 GACCCTCTGA GTGATGG 2297 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 572 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Mus musculus (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4: Met Ser His Gln Gly Lys Lys Ser Ile Pro His Ile Thr Ser Asp Arg 1 5 10 15 Leu Leu Ile Arg Gly Gly Arg Ile Ile Asn Asp Asp Gln Ser Phe Tyr 20 25 30 Ala Asp Val Tyr Leu Glu Asp Gly Leu Ile Lys Gln Ile Gly Glu Asn 35 40 45 Leu Ile Val Pro Gly Gly Val Lys Thr Ile Glu Ala Asn Gly Arg Met 50 55 60 Val Ile Pro Gly Gly Ile Asp Val Asn Thr Tyr Leu Gln Lys Pro Ser 65 70 75 80 Gln Gly Met Thr Ser Ala Asp Asp Phe Phe Gln Gly Thr Lys Ala Ala 85 90 95 Leu Ala Gly Gly Thr Thr Met Ile Ile Asp His Val Val Pro Glu Pro 100 105 110 Gly Ser Ser Leu Leu Thr Ser Phe Glu Lys Trp His Glu Ala Ala Asp 115 120 125 Thr Lys Ser Cys Cys Asp Tyr Ser Leu His Val Asp Ile Thr Ser Trp 130 135 140 Tyr Asp Gly Val Arg Glu Glu Leu Glu Val Leu Val Gln Asp Lys Gly 145 150 155 160 Val Asn Ser Phe Gln Val Tyr Met Ala Tyr Lys Asp Leu Tyr Gln Met 165 170 175 Ser Asp Ser Gln Leu Tyr Glu Ala Phe Thr Phe Leu Lys Gly Leu Gly 180 185 190 Ala Val Ile Leu Val His Ala Glu Asn Gly Asp Leu Ile Ala Gln Glu 195 200 205 Gln Lys Arg Ile Leu Glu Met Gly Ile Thr Gly Pro Glu Gly His Ala 210 215 220 Leu Ser Arg Pro Glu Glu Leu Glu Ala Glu Ala Val Phe Arg Ala Ile 225 230 235 240 Ala Ile Ala Gly Arg Ile Asn Cys Pro Val Tyr Ile Thr Lys Val Met 245 250 255 Ser Lys Ser Ala Ala Asp Ile Ile Ala Leu Ala Arg Lys Lys Gly Pro 260 265 270 Leu Val Phe Gly Glu Pro Ile Ala Ala Ser Leu Gly Thr Asp Gly Thr 275 280 285 His Tyr Trp Ser Lys Asn Trp Ala Lys Ala Ala Ala Phe Val Thr Ser 290 295 300 Pro Pro Leu Ser Pro Asp Pro Thr Thr Pro Asp Tyr Leu Thr Ser Leu 305 310 315 320 Leu Ala Cys Gly Asp Leu Gln Val Thr Gly Ser Gly His Cys Pro Tyr 325 330 335 Ser île Ala Gln Lys Ala Val Gly Lys Asp Asn Phe Thr Leu Ile Pro 340 345 350 Glu Gly Val Asn Gly Ile Glu Glu Arg Met Thr Val Val Trp Asp Lys 355 360 365 Ala Val Ala Thr Gly Lys Met Asp Glu Asn Gln Phe Val Ala Val Thr 370 375 380 Ser Thr Asn Ala Ala Lys Ile Phe Asn Leu Tyr Pro Arg Lys Gly Arg 385 390 395 400 Ile Ala Val Gly Ser Asp Ala Asp Val Val Ile Trp Asp Pro Asp Lys 405 410 415 Met Lys Thr Ile Thr Ala Lys Ser His Lys Ser Thr Val Glu Tyr Asn 420 425 430 Ile Phe Glu Gly Met Glu Cys His Gly Ser Pro Leu Val Val Ile Ser 435 440 445 Gln Gly Lys Ile Val Phe Glu Asp Gly Asn Ile Ser Val Ser Lys Gly 450 455 460 Met Gly Arg Phe Ile Pro Arg Lys Pro Phe Pro Glu His Leu Tyr Gln 465 470 475 480 Arg Val Arg Ile Arg Ser Lys Val Phe Gly Leu His Ser Val Ser Arg 485 490 495 Gly Met Tyr Asp Gly Pro Val Tyr Glu Val Pro Ala Thr Pro Lys His 500 505 510 Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Glu Ser Ser Pro Ser Lys His Gln Pro 515 520 525 Pro Pro Ile Arg Asn Leu His Gln Ser Asn Phe Ser Leu Ser Gly Ala 530 535 540 Gln Ile Asp Asp Asn Asn Pro Arg Arg Thr Gly His Arg Ile Val Ala 545 550 555 560 Pro Pro Gly Gly Arg Ser Asn Ile Thr Ser Leu Gly 565 570 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:5: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1920 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Mus musculus (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5: GCTGACTAAT ATGCTTAAAT TCAGCGGGTC GCCACGTCTG GTCGGTACGT CCACGCCCGC 60 GCAGCCCCTA CCGAGGACAC TCAGCCCGCC CGTGTATCAG GATGTCCTTC CAAGGCAAGA 120 AGAGCATTCC CCGGATAACG AGCGACCGCC TTCTCATCAA AGGTGGGAAG ATTGTGAACG 180 ATGACCAGTC CTTTCATGCT GATCTGTATG TGGAAGACGG TCTGATTAAA CAAATTGGAG 240 AAAATCTCAT CGTCCCTGGG GGCATCAAAA CCATCGATGC TCATGGCCTG ATGGTGCTGC 300 CTGGGGGAGT TGACGTTCAC ACCCGGCTGC AGATGCCTGT GATGGGCATG ACCCCAGCTG 360 ATGATTTCTG TCAGGGCACC AAGGCGGCTC TAGCAGGCGG GACCACCATG ATATTGGACC 420 ATGTGTTTCC TGACGCTGGT GTGAGCCTGC TGGCAGCCTA TGAGCAGTGG CGGGACGGAG 480 CAGACAGCGC GGCCTGCTGT GACTACTCCT TACATGTGGA CATTCCTCGC TGGCACGAGA 540 GCACCAAAGA AGAGCTGGAG GCCCTAGTCA GGGACAAAGG TGTGAACTCC TTCCTGGTCT 600 TCATGGCATA CAAGGACAGG TGCCAGTGTA CTGACGGTCA GATATATGAA ATCTTCAGCC 660 TCATCCGGGA CCTGGGAGCT GTGGCCCAGG TGCACGCAGA AAATGGGGAC ATCGTGGAGG 720 AGGAACAGAA GCGCCTGCTG GAGCAAGGCA TCACTGGTCC TGAGGGCCAT GTGCTCAGCC 780 ACCCAGAAGA GGTAGAGGCC GAGGCTGTGT ACAGAGCAGT CACCATTGCC AAGCAGGCCA 840 ACTGCCCACT ATACGTCACC AAGGTGATGA GCAAGGGTGC AGCTGACATG GTTGCCCAAG 900 CCAAGCGCAG GGGGGTGGTC GTCTTTGGGG AACCTATCAC TGCCAGCCTG GGCACTGATG 960 GCTCACACTA CTGGAGCAAG AACTGGGCCA AGGCTGCAGC CTTTGTCACT TCACCCCCTA 1020 TCAACCCGGA CCCTACTACT GCAGACCACC TCACCTCTCT GCTGTCCAGT GGGGACCTCC 1080 AGGTGACAGG CAGTGCCCAC TGCACCTTCA CTACTGCCCA GAAGGCTGTT GGCAAAGACA 1140 ACTTCACACT GATCCCCGAG GTAGTCAACG GTATAGAAGA GCGCATGTCT GTGGTCTGGG 1200 AGAAATGTGT GGCTTCAGGG AAAATGGACG AGAATGAGTT CGTTGCCGTG ACCAGCACAA 1260 ATGCTGCCAA AATCTTCAAT TTTTACCCCA GGAAGGGGCG TGTGGCCGTG GGCTCTGATG 1320 CTGACCTGGT CATCTGGAAC CCCAGGGCCA CGAAAGTCAT CTCTGCCAAG AGCCATAACC 1380 TGAATGTAGA GTACAACATC TTTGAAGGAG TGGAGTGCCG AGGAGTGCCC ACGGTGGTCA 1440 TAAGTCAGGG CAGAGTGGTG CTGGAGGACG GAAACCTGCT TGTCACTCCA GGGGCTGGCC 1500 GCTTCATTCC CCGGAAGACG TTCCCGGACT TTGTCTATAA GAGGATAAAG GCTCGCAACA 1560 GGCTAGCAGA GATCCACGGT GTGCCTCGAG GCCTGTACGA CGGGCCTGTG CATGAAGTGA 1620 TGTTACCTGC CAAGCCAGGA AGTGGCACAC AGGCCCGTGC ATCCTGTTCA GGCAAGATCT 1680 CAGTGCCACC CGTGCGCAAC CTGCACCAGT CGGGGTTCAG CCTATCTGGC TCTCAGGCTG 1740 ACGATCACAT TGCCAGACGT ACGG (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 6: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 572 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Mus musculus (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6: Met Ser Phe Gln Gly Lys Lys Ser Ile Pro Arg Ile Thr Ser Asp Arg 1 5 10 15 Leu Leu Ile Lys Gly Gly Lys Ile Val Asn Asp Asp Gln Ser Phe His 20 25 30 Ala Asp Leu Tyr Val Glu Asp Gly Leu Ile Lys Gln Ile Gly Glu Asn 35 40 45 Leu Ile Val Pro Gly Gly Ile Lys Thr Ile Asp Ala His Gly Leu Met 50 55 60 Val Leu Pro Gly Gly Val Asp Val His Thr Arg Leu Gln Met Pro Val 65 70 75 80 Met Gly Met Thr Pro Ala Asp Asp Phe Cys Gln Gly Thr Lys Ala Ala 85 90 95 Leu Ala Gly Gly Thr Thr Met Ile Leu Asp His Val Phe Pro Asp Ala 100 105 110 Gly Val Ser Leu Leu Ala Ala Tyr Glu Gln Trp Arg Asp Gly Ala Asp 115 120 125 Ser Ala Ala Cys Cys Asp Tyr Ser Leu His Val Asp Ile Pro Arg Trp 130 135 140 His Glu Ser Thr Lys Glu Glu Leu Glu Ala Leu Val Arg Asp Lys Gly 145 150 155 160 Val Asn Ser Phe Leu Val Phe Met Ala Tyr Lys Asp Arg Cys Gln Cys 165 170 175 Thr Asp Gly Gln Ile Tyr Glu Ile Phe Ser Leu Ile Arg Asp Leu Gly 180 185 190 Ala Val Ala Gln Val His Ala Glu Asn Gly Asp Ile Val Glu Glu Glu 195 200 205 Gln Lys Arg Leu Leu Glu Gln Gly Ile Thr Gly Pro Glu Gly His Val 210 215 220 Leu Ser His Pro Glu Glu Val Glu Ala Glu Ala Val Tyr Arg Ala Val 225 230 235 240 Thr Ile Ala Lys Gln Ala Asn Cys Pro Leu Tyr Val Thr Lys Val Met 245 250 255 Ser Lys Gly Ala Ala Asp Met Val Ala Gln Ala Lys Arg Arg Gly Val 260 265 270 Val Val Phe Gly Glu Pro Ile Thr Ala Ser Leu Gly Thr Asp Gly Ser 275 280 285 His Tyr Trp Ser Lys Asn Trp Ala Lys Ala Ala Ala Phe Val Thr Ser 290 295 300 Pro Pro Ile Asn Pro Asp Pro Thr Thr Ala Asp His Leu Thr Ser Leu 305 310 315 320 Leu Ser Ser Gly Asp Leu Gln Val Thr Gly Ser Ala His Cys Thr Phe 325 330 335 Thr Thr Ala Gln Lys Ala Val Gly Lys Asp Asn Phe Thr Leu Ile Pro 340 345 350 Glu Val Val Asn Gly Ile Glu Glu Arg Met Ser Val Val Trp Glu Lys 355 360 365 Cys Val Ala Ser Gly Lys Met Asp Glu Asn Glu Phe Val Ala Val Thr 370 375 380 Ser Thr Asn Ala Ala Lys Ile Phe Asn Phe Tyr Pro Arg Lys Gly Arg 385 390 395 400 Val Ala Val Gly Ser Asp Ala Asp Leu Val Ile Trp Asn Pro Arg Ala 405 410 415 Thr Lys Val Ile Ser Ala Lys Ser His Asn Leu Asn Val Glu Tyr Asn 420 425 430 Ile Phe Glu Gly Val Glu Cys Arg Gly Val Pro Thr Val Val Ile Ser 435 440 445 Gln Gly Arg Val Val Leu Glu Asp Gly Asn Leu Leu Val Thr Pro Gly 450 455 460 Ala Gly Arg Phe Ile Pro Arg Lys Thr Phe Pro Asp Phe Val Tyr Lys 465 470 475 480 Arg Ile Lys Ala Arg Asn Arg Leu Ala Glu Ile His Gly Val Pro Arg 485 490 495 Gly Leu Tyr Asp Gly Pro Val His Glu Val Met Leu Pro Ala Lys Pro 500 505 510 Gly Ser Gly Thr Gln Ala Arg Ala Ser Cys Ser Gly Lys Ile Ser Val 515 520 525 Pro Pro Val Arg Asn Leu His Gln Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Ser 530 535 540 Gln Ala Asp Asp His Ile Ala Arg Arg Thr Ala Gln Lys Ile Met Ala 545 550 555 560 Pro Pro Gly Gly Arg Ser Asn Ile Thr Ser Leu Ser 565 570 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 7: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1690 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Homo sapiens (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 7: GCCGCCCCTA CCAGAGACCC CCAGGAGCAG GATGTCCTTC CAGGGCAAGA AAAGCATCCC 60 CCGGATCACG AGTGACCGCC TTCTGATCAG AGGTGGGAGG ATCGTGAATG ACGACCAGTC 120 CTTTTACGCT GATGTGCACG TGGAAGATGG CTTGATAAAA CAAATCGGAG AAAACCTCAT 180 CGTCCCTGGG GGCATCAAGA CCATTGACGC CCACGGCCTG ATGGTCCTTC CTGGTGGCGT 240 TGACGTCCAC ACAAGGCTGC AGATGCCTGT CCTGGGCATG ACACCGGCTG ACGACTTCTG 300 TCAGGGCACC AAGGCAGCGC TAGCAGGAGG AACCACCATG ATCTTGGACC ACGTCTTCCC 360 CGACACGGGT GTGAGCCTGC TGGCGGCCTA CGAGCAGTGG CGGGAGCGGG CGGACAGCGC 420 GGCCTGCTGC GACTACTCCC TGCACGTGGA CATCACCCGA TGGCATGAGA GCATCAAGGA 480 GGAGCTGGAG GCCCTGGTCA AGGAGAAGGG TGTGAACTCC TTCCTGGTCT TCATGGCATA 540 CAAGGACCGG TGCCAGTGCA GCGACAGCCA GATGTACGAG ATCTTCAGCA TCATCCGGGA 600 CCTGGGGGCC TTGGCCCAGG TGCACGCTGA GAACGGGGAC ATCGTGGAGG AGGAGCAGAA 660 GCGGTTGCTG GAGCTCGGCA TCACTGGCCC CGAGGGCCAC GTGCTCAGCC ACCCCGAGGA 720 GGTGGAGGCT GAGGCGGTGT ACCGAGCTGT CACCATCGCC AAGCAGGCAA ACTGCCCGCT 780 GTACGTCACC AAGGTGATGA GCAAGGGGGC GGCCGACGCC ATCGCTCAGG CCAAGCGCAG 840 AGGGGTGGTC GTGTTTGGGG AGCCCATCAC CGCCAGCCTG GGCACCGACG GTTCACACTA 900 CTGGAGCAAG AACTGGGCCA AGGCTGCAGC CTTCGTCACA TCACCCCCTG TCAACCCAGA 960 CCCCACCACG GCAGACCACC TCACCTGCTT GCTGTCCAGC GGGGACCTCC AGGTGACAGG 1020 CAGCGCCCAC TGCACCTTCA CCACTGCCCA GAAGGCTGTG GGCAAGGACA ACTTCGCGCT 1080 GATCCCCGAG GGCACCAACG GCATTGAGGA GCGCATGTCG ATGGTCTGGG AGAAATGTGT 1140 GGCCTCTGGG AAGATGGACG AGAATGAGTT CGTCGCGGTG ACCAGTACAA ATGCTGCCAA 1200 AATCTTCAAT TTTTACCCAA GGAAGGGGCG AGTGGCTGTG GGCTCTGACG CTGACCTGGT 1260 CATATGGAAC CCCAAGGCCA CCAAGATCAT CTCTGCCAAG ACCCACAATC TGAACGTGGA 1320 GTACAACATC TTCGAGGGAG TGGAGTGCCG GGGAGCGCCT GCCGTGGTCA TAAGTCAGGG 1380 CCGAGTGGCG CTGGAGGACG GGAAGATGTT TGTCACCCCG GGGGCGGGCC GCTTCGTCCC 1440 TCGGAAAACA TTCCCGGACT TTGTCTACAA GAGGATCAAA GCTCGCAACA GGCTGGCGGA 1500 GATCCACGGT GTGCCCCGTG GGCTGTATGA CGGGCCCGTC CACGAGGTGA TGGTGCCTGC 1560 CAAGCCAGGG AGTGGCGCTC CGGCCCGCGC GTCCTGCCCA GGCAAGATCT CCGTGCCTCC 1620 TGTGCGCAAC CTACATCAGT CGGGGTTCAG CCTATCTGGG TCTCAGGCTG ATGACCACAT 1680 CGCCCGACGC 1690 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 8: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 572 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Homo sapiens (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8: Met Ser Phe Gln Gly Lys Lys Ser Ile Pro Arg Ile Thr Ser Asp Arg 1 5 10 15 Leu Leu Ile Arg Gly Gly Arg Ile Val Asn Asp Asp Gln Ser Phe Tyr 20 25 30 Ala Asp Val His Val Glu Asp Gly Leu Ile Lys Gln Ile Gly Glu Asn 35 40 45 Leu Ile Val Pro Gly Gly Ile His Thr Ile Asp Ala His Gly Leu Met 50 55 60 Val Leu Pro Gly Gly Val Asp Val His Thr Arg Leu Gln Met Pro Val 65 70 75 80 Leu Gly Met Thr Pro Ala Asp Asp Phe Cys Gln Gly Thr Lys Ala Ala 85 90 95 Leu Ala Gly Gly Thr Thr Met Ile Leu Asp His Val Phe Pro Asp Thr 100 105 110 Gly Val Ser Leu Leu Ala Ala Tyr Glu Gln Trp Arg Glu Arg Ala Asp 115 120 125 Ser Ala Ala Cys Cys Asp Tyr Ser Leu His Val Asp Ile Thr Arg Trp 130 135 140 His Glu Ser Ile Lys Glu Glu Leu Glu Ala Leu Val Lys Glu Lys Gly 145 150 155 160 Val Asn Ser Phe Leu Val Phe Met Ala Tyr Lys Asp Arg Cys Gln Cys 165 170 175 Ser Asp Ser Gln Met Tyr Glu Ile Phe Ser Ile Ile Arg Asp Leu Gly 180 185 190 Ala Leu Ala Gln Val His Ala Glu Asn Gly Asp Ile Val Glu Glu Glu 195 200 205 Gln Lys Arg Leu Leu Glu Leu Gly Ile Thr Gly Pro Glu Gly His Val 210 215 220 Leu Ser His Pro Glu Glu Val Glu Ala Glu Ala Val Tyr Arg Ala Val 225 230 235 240 Thr Ile Ala Lys Gln Ala Asn Cys Pro Leu Tyr Val Thr Lys Val Met 245 250 255 Ser Lys Gly Ala Ala Asp Ala Ile Ala Gln Ala Lys Arg Arg Gly Val 260 265 270 Val Val Phe Gly Glu Pro Ile Thr Ala Ser Leu Gly Thr Asp Gly Ser 275 280 285 His Tyr Trp Ser Lys Asn Trp Ala Lys Ala Ala Ala Phe Val Thr Ser 290 295 300 Pro Pro Val Asn Pro Asp Pro Thr Thr Ala Asp His Leu Thr Cys Leu 305 310 315 320 Leu Ser Ser Gly Asp Leu Gln Val Thr Gly Ser Ala His Cys Thr Phe 325 330 335 Thr Thr Ala Gln Lys Ala Val Gly Lys Asp Asn Phe Ala Leu Ile Pro 340 345 350 Glu Gly Thr Asn Gly Ile Glu Glu Arg Met Ser Met Val Trp Glu Lys 355 360 365 Cys Val Ala Ser Gly Lys Met Asp Glu Asn Glu Phe Val Ala Val Thr 370 375 380 Ser Thr Asn Ala Ala Lys Ile Phe Asn Phe Tyr Pro Arg Lys Gly Arg 385 390 395 400 Val Ala Val Gly Ser Asp Ala Asp Leu Val Ile Trp Asn Pro Lys Ala 405 410 415 Thr Lys Ile Ile Ser Ala Lys Thr His Asn Leu Asn Val Glu Tyr Asn 420 425 430 Ile Phe Glu Gly Val Glu Cys Arg Gly Ala Pro Ala Val Val Ile Ser 435 440 445 Gln Gly Arg Val Ala Leu Glu Asp Gly Lys Met Phe Val Thr Pro Gly 450 455 460 Ala Gly Arg Phe Val Pro Arg Lys Thr Phe Pro Asp Phe Val Tyr Lys 465 470 475 480 Arg Ile Lys Ala Arg Asn Arg Leu Ala Glu Ile His Gly Val Pro Arg 485 490 495 Gly Leu Tyr Asp Gly Pro Val His Glu Val Met Val Pro Ala Lys Pro 500 505 510 Gly Ser Gly Ala Pro Ala Arg Ala Ser Cys Pro Gly Lys Ile Ser Val 515 520 525 Pro Pro Val Arg Asn Leu His Gln Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Ser 530 535 540 Gln Ala Asp Asp His Ile Ala Arg Arg Thr Ala Gln Lys Ile Met Ala 545 550 555 560 Pro Pro Gly Gly Arg Ser Asn Ile Thr Ser Leu Ser 565 570 REVENDICATIONS 1. Polypeptide purifié, dérivé ou fragment polypeptidique dudit polypeptide purifié biologiquement actif, comprenant une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID n" 2, n" 4, n" 6 et n" 8. 2. Polypeptide purifié, dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif dudit polypeptide purifié, selon la revendication 1 comprenant la séquence d'acides aminés SEQ ID n" 8, ledit polypeptide étant désigné par POP46 . 3. Séquence nucléotidique isolée, comprenant: - une séquence choisie parmi SEQ ID n" 1, n" 3, n" 5 et n" 7 codant pour un polypeptide de séquence d'acides aminés respectivement SEQ ID n" 2, n" 4, n" 6 et n" 8; - ou une séquence dérivée d'une séquence choisie parmi SEQ ID n" 1, n" 3, n 5 et n 7 du fait de la dégénérescence du code génétique. 4. Séquence nucléotidique selon la revendication 3, comprenant la séquence nucléique SEQ ID n 7 codant pour un polypeptide selon la revendication 2. 5. Vecteur de clonage et/ou d'expression contenant une séquence d'acides nucléiques selon l'une des revendications 3 et 4. 6. Cellule hôte transfectée par un vecteur selon la revendication 5. 7. Anticorps mono- ou polyclonaux obtenus à partir d'un polypeptide selon l'une des revendications 1 et 2, purifié, dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif dudit polypeptide purifié, ainsi que les fragments, les anticorps chimériques ou les immunoconjugués desdits anticorps mono- ou polyclonaux. 8. Composition utile pour le diagnostic des syndromes neurologiques paranéoplasiques et/ou pour le diagnostic précoce de la formation des tumeurs, caractérisée en ce qu'elle comprend un polypeptide purifié POP-66, dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif de POP-66 selon la revendication 2. 9. Utilisation d'un polypeptide purifié POP 66, dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif de POP66 selon la revendication 2 ou d'une séquence nucléotidique selon la revendication 4 pour détecter la présence d'anticorps anti-CV2 dans un échantillon biologique. 10. Utilisation d'anticorps mono- ou polyclonaux ou leurs fragments, anticorps chimériques ou immunoconjugués selon la revendication 7, pour la purification ou la détection d'une protéine ULIP correspondante dans un échantillon biologique. 11. Utilisation d'anticorps dirigés contre une protéine de la famille ULIP pour la mise en évidence d'une protéine ULIP dans des néoplasmes et les syndromes neurologiques paranéoplasiques, à des fins de diagnostic. 12. Utilisation selon la revendication 11, les anticorps étant des anticorps monoclonaux obtenus à partir du sérum polyclonal anti-CV2 de patients. 13. Méthode pour le diagnostic des syndromes neurologiques paranéoplasiques et/ou pour le diagnostic précoce de la formation des tumeurs cancéreuses, caractérisée en ce que l'on met en évidence dans un échantillon de sang prélevé chez un individu des autoanticorps dirigés contre une protéine POP-66 par - la mise en contact un échantillon de sang prélevé chez un individu avec un polypeptide purifié (POP66), dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif de POP-66 selon la revendication 2, éventuellement fixé sur un support dans des conditions permettant la formation de complexes immunologiques spécifiques entre ledit polypeptide et les auto-anticorps éventuellement présents dans l'échantillon de sang, et - la détection des complexes immunologiques spécifiques éventuellement formés. 14. Kit pour le diagnostic des syndromes neurologiques paranéoplasiques et pour le diagnostic précoce de la formation des tumeurs à partir d'un prélèvement biologique comprenant: - au moins un polypeptide purifié POP66, dérivé ou fragment polypeptidique biologiquement actif de POP46, selon la revendication 2 éventuellement fixé sur un support, - des moyens de révélation de la formation de complexes antigène/anticorps spécifiques entre un auto-anticorps anti-POP-66 et ledit polypeptide purifié POP-66, dérivé ou fragment polypeptidique et/ou des moyens de quantification de ces complexes. 15. Composition pharmaceutique, comprenant au moins une protéine purifiée de la famille ULIP, fragment polypeptidique ou dérivé biologiquement actif de celle-ci, une séquence ou fragment de séquence nucléotidique codant pour ladite protéine, une séquence anti-sens capable de s'hybrider spécifiquement avec une séquence nucléotidique codant pour ladite protéine, ou un anticorps dirigé contre ladite protéine, associée à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 16. Composition pharmaceutique selon la revendication 15, comprenant au moins un polypeptide purifié POP46 selon la revendication 2, fragment polypeptidique ou dérivé biologiquement actif de celui-ci, une séquence ou fragment de séquence nucléotidique codant pour ledit polypeptide, une séquence anti-sens capable de s'hybrider spécifiquement avec une séquence nucléotidique codant pour ledit polypeptide, ou un anticorps dirigé contre ledit polypeptide, associé à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 17. Utilisation d'une protéine purifiée de la famille ULIP, fragment polypeptidique ou dérivé biologiquement actif de celle-ci, une séquence ou fragment de séquence nucléotidique codant pour ladite protéine, une séquence anti-sens capable de s'hybrider spécifiquement avec une séquence nucléotidique codant pour ladite protéine, ou un anticorps dirigé contre ladite protéine, pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter les maladies neurodégénératives et les néoplasmes.