Brevet FR2752172A1 — publié le 19980213

La présente invention est relative à un support de filtration d'échantillons fluides, sur lequel des éléments particulaires, tels que des microorganismes et/ou d'autres cellules (lymphocytes, par exemple), éventuellement contenus dans lesdits échantillons, sont retenus, lors de la filtration; un tel support est destiné à être inclus dans des systèmes de détection et de dénombrement automatisés desdits éléments. Dans de tels systèmes, la détection et le dénombrement s'effectuent directement sur le support, généralement après marquage des particules retenues, par colorimétrie, fluorescence ou luminescence. C'est le cas, en particulier des analyseurs d'images ou encore du cytomètre à balayage laser ChemScanX tel que décrit dans le brevet EP 0 333 561. Ce dernier système permet, par exemple, un dénombrement immédiat de microorganismes retenus sur une membrane filtrante et rendus fluorescents aux moyen de marqueurs appropriés. Toutefois, dans de tels systèmes, I'automatisation des procédés de détection et/ou de dénombrement direct de micro-organismes ou d'autres cellules, après filtration, nécessaire pour leur utilisation en contrôle de routine, reste très limité, de par la difficulté de manipulation des médias filtrants utilisés, généralement des membranes souples de faible épaisseur (filtres calibrés, de types connus, en particulier sous les noms de marques de fabrique NUCLE0P0RE, MILLlPORE, CYCLGP0RE, SCHLEICHER & SCHUELL, GELMAN, SARTORlUS), qui doivent être manipulés avec précaution et dextérité, au moyen de pinces. En conséquence, pour mettre en oeuvre de tels filtres dans une méthode de détection et/ou de dénombrement, complètement automatisée, d'éléments particulaires et notamment de micro-organismes rendus fluorescents, retenus sur ces filtres, il est nécessaire de les rigidifier, afin de faciliter leur manipulation par un automate. Pour remédier à ce problème, il a été proposé de rigidifier le filtre, en le solidarisant avec un cadre, soit par thermocollage (ou thermosoudage), soit par l'utilisation de colles, ce qui permet effectivement une manipulation plus aisée du support filtrant. Toutefois, les filtres rigidifiés par ces méthodes ne sont pas complètement plans (absence de planéité parfaite), or, ce problème s'est posé de manière cruciale, en particulier dans le domaine de l'analyse d'image où les champs à analyser doivent être d'une planéité parfaite pour obtenir des résultats interprétables et fiables. Elle est assurée, le plus souvent par plaquage du dispositif d'observation au moyen d'un vide partiel (Demande internationale PCT WO 90/04802). En outre, aussi bien la structure que les propriétés optiques et physico-chimiques desdits filtres sont modifiées par l'ajout de colle ou le thermosoudage. Or, lorsque l'on veut dénombrer les éléments particulaires retenus sur un filtre après un marquage fluorescent, par exemple, les propriétés optiques de ce dernier ne doivent absolument pas être modifiées. En conséquence, la Demanderesse s'est donné pour but de fournir un support de filtration qui ne présente pas les inconvénients exposés ci-dessus et qui puisse être utilisé dans une méthode de détection automatisée de particules, notamment de micro-organismes marqués, directement sur le filtre (ou membrane filtrante). La présente invention a pour objet un support de filtration contenant une membrane filtrante, lequel support est caractérisé en ce que ladite membrane est disposée entre deux bagues destinées à s'emboîter l'une dans l'autre suivant un ajustement serré par concordance de formes, pour les rendre solidaires l'une de l'autre, et retenir la membrane tout en exerçant sur celle-ci, une tension suffisante pour la maintenir dans une position tendue; un tel support permet effectivement de conserver les propriétés intrinsèques de la membrane filtrante ou filtre. Selon un mode de réalisation avantageux dudit dispositif, ladite première bague présente un évidement qui délimite une gorge annulaire et ladite seconde bague présente, en saillie sur une face, une nervure annulaire ayant une forme complémentaire de celle de la gorge de la première bague. Conformément à l'invention, lesdites bagues présentent alors un diamètre extérieur et un diamètre intérieur délimités par respectivement la dite gorge et ladite nervure. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, ladite première bague présente un évidement qui débouche sur le côté intérieur de la bague. Une membrane filtrante, ainsi rigidifiée, présente les avantages suivants: - manipulation aisée, dans un procédé de dénombrement automatisé d'éléments particulaires, par exemple des micro-organismes, directement sur la membrane filtrante, - planéité parfaite dans la zone de détection utile, et - conservation des propriétés optiques et physico-chimiques initiales de la membrane filtrante (en particulier absence d'autofluorescence), ce qui permet de détecter et de dénombrer les éléments particulaires marqués, sans entraîner de bruit de fond supplémentaire. Conformément à l'invention, la membrane filtrante présente, de préférence, un diamètre sensiblement égal ou légèrement supérieur au diamètre extérieur desdites bagues. De manière avantageuse, lesdites bagues sont rigides, autoclavables dans la mesure où le matériau le permet, non fluorescentes et résistent aux désinfectants; on peut citer à titre d'exemple non limitatif des bagues en acier inoxydable, en PVC noir ou en polycarbonate. Également de manière avantageuse, les filtres (ou membranes filtrantes) sont de préférence des filtres en polycarbonate, en polyester ou en ester de cellulose. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre. L'invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre qui se réfère au dessins annexés dans lesquels - les figures 1 et 2 correspondent à une vue en coupe d'un mode de réalisation du support selon l'invention; dans la figure 1, les différents éléments du support sont dissociés, alors que dans la figure 2, ces différents éléments sont montés et solidaires - les figures 3 et 4 correspondent à une vue en coupe d'un autre mode de réalisation du support selon l'invention; dans la figure 3, les différents éléments du support sont dissociés, alors que dans la figure 4, ces différents éléments sont montés et solidaires; - les figures 5 et 6 correspondent à une vue en coupe d'un troisième mode de réalisation du support selon l'invention; dans la figure 5, les différents éléments du support sont dissociés, alors que dans la figure 6, ces différents éléments sont montés et solidaires. Il doit être bien entendu toutefois, que ces dessins et les parties descriptives correspondantes sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. Dans un premier mode de réalisation, le support de filtration 1, selon l'invention, illustré aux figures 1 et 2, comporte une membrane filtrante 2, montée entre une première bague 3 et une deuxième bague 4. A la figure 1, les différents éléments 2, 3 et 4 du support sont dissociés alors qu'à la figure 2, ces différents éléments sont montés et solidaires. La bague 3 présente un évidement 5, qui débouche sur le côté intérieur de la bague et qui délimite une gorge annulaire, alors que la bague 4 présente une saillie 6, ayant une forme complémentaire de celle de la gorge annulaire de la bague 3. A titre d'exemple non limitatif, les bagues 3 et 4 ont un diamètre extérieur de 32 mm et un diamètre intérieur de 26 mm; la membrane filtrante 2 présente, de préférence, un diamètre sensiblement égal au diamètre extérieur desdites bagues. La figure 2 représente ces différents éléments montés et solidaires; la membrane filtrante 2 présente une tension uniforme, qui lui assure une planéité parfaite, tout en lui conservant ses propriétés intrinsèques. L'emboîtement des deux bagues est réalisé de manière à éviter tout déchirement de la membrane 2. Dans un deuxième mode de réalisation, le support de filtration 10, selon l'invention, illustré aux figures 3 et 4, comporte une membrane filtrante 20, montée entre une première bague 30 et une deuxième bague 40. A la figure 3, les différents éléments 20, 30 et 40 du support sont dissociés alors qu'à la figure 4, ces différents éléments sont montés et solidaires. La bague 30 présente un évidement 50, qui délimite une gorge annulaire, alors que la bague 40 présente une saillie 60, creuse ou pleine, ayant une forme complémentaire de celle de la gorge annulaire de la bague 30. La figure 4 représente ces différents éléments montés et solidaires; la membrane filtrante 20 présente une tension uniforme qui lui assure une planéité parfaite. L'emboîtement des deux bagues est également réalisé de sorte à éviter tout déchirement de la membrane 20. Dans un troisième mode de réalisation le support de filtration 100, selon l'invention, illustré aux figures 5 et 6, comporte une membrane filtrante 200, montée entre une première bague 300 et une deuxième bague 400. A la figure 5, les différents éléments 200, 300 et 400 du support sont dissociés alors qu'à la figure 6, ces différents éléments sont montés et solidaires. La bague 300 est un simple anneau, alors que la bague 400 présente une saillie 600, qui s'emboîte dans la bague 300. De tels supports permettent de manipuler la membrane filtrante sans risque de l'abîmer. Lesdits supports peuvent également avantageusement coopérer avec un système détrompeur, en ménageant sur l'une desdites bagues des perforations ou des encoches. Dans le cadre de leur utilisation dans un automate de détection et/ou de dénombrement d'éléments particulaires, chaque support, correspondant généralement à l'analyse d'un échantillon, peut être identifié à l'aide de codes à barres, par exemple, ou de toute autre forme d'identification, apposés sur l'une ou l'autre desdites bagues et ce pour pouvoir reprendre le filtre pour réexaminer les éléments dont il est porteur, Si nécessaire. Le support de filtration conforme à l'invention peut être mis en oeuvre dans un appareil tel que décrit dans le brevet européen EP O 333 561 et peut remplacer avantageusement le support 50 tel que décrit aux figures 1 et 2 de ce brevet EP 0333 561. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1") Support de filtration (1, 10, 100) contenant une membrane filtrante, lequel support est caractérisé en ce que ladite membrane (2, 20, 200) est disposée entre deux bagues (3, 30, 300 ; 4, 40, 400) destinées à s'emboîter l'une dans l'autre suivant un ajustement serré par concordance de formes, pour les rendre solidaires l'une de l'autre, et retenir la membrane (2, 20, 200) tout en exerçant sur celle-ci, une tension suffisante pour la maintenir dans une position tendue. 2") Support de filtration selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite première bague (3, 30) présente un évidement (5, 50) qui délimite une gorge annulaire et ladite seconde bague (4, 40) présente, en saillie sur une face, une nervure (6, 60) annulaire ayant une forme complémentaire de celle de la gorge de la première bague (3,30).