Brevet FR2751342A1 — publié le 19980123

La présente invention concerne un dispositif et son mode d'utilisation pour prélever à partir de colonies bactériennes ou fongiques présentes sur un milieu de culture gélosé, une quantité reproductible de germes. Le problème posé est d'être capable de recueillir, pour mettre en place dans un milieu liquide, une quantité de germes reproductible et relativement faible. L'utilisation d'un inoculateur traditionnel (oese à fil de platine, pipette Pasteur bouclée par exemple) montre l'inconvénient de prélever à chaque utilisation des quantités de germes trop importantes et inreproductibles. L'inconvénient d'un inoculateur traditionnel réside dans le fait que la surface de l'inoculateur en contact avec la colonie bactérienne est variable selon l'adresse du manipulateur et que l'adhésion des bactéries sur l'inoculateur est variable en fonction du geste et de la matière de l'inoculateur. Le dispositif selon l'invention permet de remédier à ces inconvénients. En effet, son utilisation permet de standardiser le geste et de rendre reproductibles les surfaces en contact avec les germes. Par ailleurs, la matière utilisée est choisie en ce que les quantités de germes adhérentes à la surface de l'inoculum sont reproductibles selon les espèces bactériennes. Le dispositif comprend deux extrémités: - une extrémité correspond à la partie par laquelle l'objet est saisi manuellement. - I'autre extrémité correspond à un cylindre pour prélever les colonies bactériennes, rigide, de diamètre faible à section franche dans un matériau choisi pour favoriser l'adhérence des germes à prélever. L'utilisation est standardisée par le fait qu'en tenant l'objet verticalement, I'on pique l'extrémité cylindrique au centre d'une colonie jusqu'à entrer en contact avec le fond de la boîte gélosée. La surface en contact avec les germes est alors dépendante de la hauteur de milieu gélosé dans la boîte qui est une constante. Le retrait vertical du dispositif laisse sur celui-ci des quantités constantes de germes. Les dessins annexés illustrent l'invention: La figure 1 représente le dispositif de l'invention comportant une partie pour la préhension (1) et une partie qui rentre en contact avec les microorganismes (2). La figure 2a représente en coupe la partie cylindrique du dispositif (2) avant utilisation, placé verticalement au-dessus de la colonie à prélever (3); la colonie bactérienne est présente sur le milieu gélosé (4) dans la boîte plastique dont le fond est représenté en (5). La figure 2b représente en coupe le dispositif dans son utilisation lorsqu'il atteint le fond de la boîte (5) après avoir traversé la colonie bactérienne (3). Après retrait du dispositif, les germes (5) se sont déposés sur une surface fonction de la hauteur du milieu gélosé. A titre d'exemple, du fil de polyéthylène extrudé de diamètre 0,5 - 0,6 - 0,8 1 mm et du fil métallique en acier chromé de diamètre 0,6 - 0,8 - 1 mm est utilisé. Le dispositif est mis en forme (voir figure 1) dans ces différentes matières et utilisé pour différentes souches de bactéries prélevées après une culture de 18 h à 37 C sur gélose trypticase - soja. Après prélèvement, les souches sont reprises en agitant vigoureusement le dispositif pendant 30 s dans 5 ml de milieu liquide afin d'en détacher les bactéries. La suspension est ensuite numérée par dilution et ensemencement sur gélose trypticase soja. L'essai est effectué trois fois. L'un des dispositifs permet d'obtenir des résultats compris entre 1 et 5 106 Unités Formant Colonie par ml de suspension de reprise (voir tableau 1). Numération (x 106 UFC/ml) Souche Essai 1 Essai 2 Essai 3 C. diversus 4 3,8 3,5 C. freundii 2,9 3,5 2,7 E. clcxacae 3,1 3,6 2,9 E. coli 2,8 3,2 3,4 P. mirabilis 4,2 3,8 3,6 K. oxytoca 3,3 3,4 3,7 K. pneumoniae 3,8 4,2 4,0 M. morganii 4,5 4,1 4,3 P. stuartii 2,5 3,1 3,6 S. marcescens 3,5 3,8 3,8 REVENDICATIONS 1 - Un dispositif de géométrie et de composition définie pour prélever des colonies bactériennes ou fongiques sur un milieu de culture gélosé caractérisé en ce qu'il comporte une extrémité pour tenir manuellement le dispositif et une extrémité cylindrique pour prélever les colonies et en ce que son utilisation permette de standardiser le prélèvement. 2 - Un dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que le matériau est sélectionné de manière à obtenir un prélèvement reproductible. 3 - Un dispositif selon les revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le diamètre est sélectionné de manière à obtenir un prélèvement reproductible. 4 - Un dispositif selon les revendications 1 à 3, caractérisé en ce que son mode d'utilisation est défini par le choix d'une colonie de diamètre supérieur à celui de l'objet, puis un piquage vertical au centre de la colonie jusqu'au fond de la boîte, puis un retrait vertical de la gélose. 5 - Une application de l'utilisation du dispositif selon l'une des revendications 1 à 4 consistant à ensemencer un milieu liquide de manière reproductible en agitant vigoureusement le dispositif prélevé dans le milieu liquide pour en détacher les germes prélevés.