Brevet FR2753707A1 — publié le 19980327

La présente invention a pour objet des complexes moléculaires nucléo-peptidiques obtenus par synthèse chimique, sous forme de conjugués peptidiques, liés physiquement ou chimiquement à des acides puriques en particulier des acides xanthiques et leurs dérivés. L'activité physiologique des nucléo-peptides faisant l'objet de la présente invention est préférentiellement orientée vers la synthèse et la stimulation des mélanines épidermiques et leur dispersion au niveau des couches superficielles de la peau - assurant ainsi une mélanisation très large de l'épiderme et une protection de haut niveau contre les "érythèmes" induits par les radiations solaires (UVA-UVB). Il est connu de l'homme de l'art, que le rôle des pigments mélanocytaires, secrétés par les cellules de l'épiderme humain "les mélanocytes", ainsi que leur dispersion au niveau des cellules kératinocytaires de la peau, a pour fonction physiologique essentielle la protection du derme, de l'épiderme et du système immunitaire cutané contre les radiations solaires, en particulier les UVA et UVB. I1 est également connu que le système mélanocytaire humain (coloration de la peau, cheveux, etc...) fonctionne de façon différente de celui des animaux. En particulier la sécrétion des mélanines par les mélanocytes et la dispersion de ces mélanines en surface de l'épiderme exige chez l'homme une coopération cellulaire entre les mélanocytes et les kératinocytes, qui s'exprime par un nombre défini de mélanocytes pour un kératinocyte, formant ainsi une entité physiologique fonctionnelle appelée "Epidermal Melanin Unit" spécifique de chaque type racial. "Dubertret L. et coll., J. Invest. Dermatol. (8) suppl. 2s-lOs-1983 - Dubertret L. et coll. J. Invest. Dermatol. 0022-202X-1986 - TB Fitzpatrick, G. Szabo, Michael M. Wick, Biochemistry and Physiology of Melanin Pigmentation 687, vol. II, Lowell A. Goldsmith, 1991 - Jimbow K, Uesugi T (1992), J. Invest. Dermato. 78-108-115, Lerch K. (1988) Avances in Pigment Cell Research 85-88". L'activité du système mélanocytaire est sous la dépendance de facteurs physiologiques tels que les hormones peptidiques, les facteurs de croissance, et en particulier, les facteurs d'induction et d'activation de la tyrosinase mélanocytaire et l'AMP cyclique Protéine Kinase dépendante. I1 est connu de l'homme de l'art que le métabolisme cellulaire des peptides, hormonaux ou non (neurotransmetteurs ou médiateurs), est sous la dépendance du cycle cellulaire de l'AMP cyclique appelé 2ème messager hormonal dont le rôle est d'amplifier la réponse cellulaire induite par un facteur peptidique spécifique (Rall et al. J. Biol. Chem. 224-463 (1957), Sutherland, Rall. IBID 232-1077 (1958)). Il a été également démontré que certaines substances sont capables de potentialiser fortement l'action de l'AMP cyclique prolongeant ainsi la stimulation de la Tyrosinase dans le métabolisme intracellulaire de la mélanogénèse. Parmi ces susbtances figurent des analogues de l'AMP cyclique tels que le dibutyryl AMPc, les prostaglandines El et en particulier les dérivés xanthiques (Halaban R, Pomerantz SH, Marshal S., Lambert DT et Lerner AB, J. Cell. Biol. 97, 480-488 (1983); Kowichi, Jimbow, Thomas B. Fitzpatrick Mick, M. Wick Biochemistry and Physiology of Melanin Pigmentation Oxfort U. Press (1991)). Un des objets de la présente invention concerne des complexes moléculaires sous forme de nucléo-peptides comprenant des conjugués peptidiques mélanotropes, inducteurs spécifiques de mélanogénèse cellulaire, liés chimiquement à des acides puriques ou leurs dérivés, de préférence à des acides xanthiques, stimulant la Tyrosinase mélanosomale par activation de l'AMP cyclique (2ème messager) dont le rôle est d'amplifier l'activité des systèmes cellulaires mélanocytaires, et en particulier la dispersion des mélanines au niveau des kératinocytes par activation des facteurs de croissance. Parmi les complexes peptidiques composant les nucléo-peptides selon l'invention, figurent préférentiellement des peptides comprenant une séquence d'au moins 3 acides aminés, lesdits acides aminés étant sous forme D, L ou DL, c'est-à-dire naturelle ou non. Ladite séquence est associée ou liée chimiquement ou physiquement, sous forme de sels, d'esters ou d'amides, à des acides puriques ou leurs dérivés de formule générale I: N-R1-COOH (I) dans laquelle N représente une base purique comprenant de 5 à 10 atomes de carbone, R1 représente un radical alkyl en C1 ou C3. Les acides de formule générale (I) sont choisis parmi les acides puriques ou dérivant des purines pour lesquels R1 représente un radical alkyl en C1 ou C3, et sont de préférence choisis parmi: - l'acide hypoxanthique (C7H5N403), - l'acide acétyl xanthique (C7H8N404) > - l'acide théobromine acétique (C9H8N404), et - l'acide théophyline acétique (CgHllN404). Les complexes peptidiques de l'invention comprennent de préférence une séquence de 3 acides aminés, en particulier l'une des séquences suivantes Ala-His-HPhé His-HPhé-Arg dans laquelle Hphé représente la dihydroxy-DPhénylalanine ou la DhomoPhénylalanine. D'une manière générale, les complexes peptidiques selon l'invention répondent à la formule générale AX-His-HPhé-Y dans laquelle: A est un acide purique de formule générale (I) telle que définie ci-dessus X représente un groupe Norleucine (Nle), ou l'un de ses dérivés sous forme acétylée (Acyl-Me) ou méthylée (MeNle), le groupe Nle-Ala ou Ala Y représente un groupe ArgZ ou Z dans lequel Z est Trp-Gly-OH, Trp-OH, OH, Trp-Gly-NH2, Trp-NH2 ou NH2; Hphé représente la dihydroxy-DPhénylalanine ou la DhomoPhénylalanine. La présente invention concerne plus particulièrement les dérivés peptidiques suivants: 1) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-Trp-Gly-NH2 2) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-Trp-NH2 3) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-NH2 4) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-NH2 5) A-Ala-His-DhomoPhé-NH2 6) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-Trp-Gly-OH 7) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-Trp-OH 8) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-OH 9) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-OH 10) A-Ala-His-DhomoPhé-OH 11) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-Trp-Gly-NH2 12) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-Trp-NH2 13) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-NH2 14) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-NH2 15) A-Ala-His-DihydroxyDPhé-NH2 16) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-Trp-Gly-OH 17) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-Trp-OH 18) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-OH 19) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-OH 20) A-Ala-His-DihydroxyDPhé-OH. Il est également possible que certains de ces acides aminés comportent des fonctions de glycosylation. I1 doit être entendu que la présente invention concerne l'ensemble de ces structures comprises dans la présente description. La présente invention concerne également des compositions galéniques, pharmaceutiques ou cosmétologiques comprenant, en tant que substance active, au moins un complexe nucléo-peptidique tel que défini précédemment, en association avec un support pharmaceutiquement ou cosmétologiquement acceptable. Ces compositions peuvent être réalisées sous forme d'émulsion, de crème, de spray, de solution, de lotion ou de gel, et comporter des excipients connus ainsi qu'éventuellement d'autres principes actifs. La présente invention comprend avantageusement des préparations à usage pharmaceutique, utilisables par voie injectable ou par voie topique, pour le traitement médical des troubles de la mélanogénèse, il s'agit de préférence des conjugués peptidiques avec des acides carboxyliques Elle a également pour objet des compositions cosmétologiques et/ou capillaires utilisées sous forme de solutions, de lotions, de sprays ou de crèmes ou de gels, utilisées comme activateur de la mélanogénèse cutanée, en l'absence de tout phénomène d'érythème, protégeant ainsi l'épiderme contre les traumatismes induits par les radiations solaires (UV). Les compositions cosmétologiques conformes à la présente invention peuvent également être utilisées pour le traitement préventif et curatif des érythèmes solaires. L'invention sera mieux comprise au vu des exemples suivants qui ne sont donnés qu'à titre purement illustratif. Exemple 1 : Synthèse du Peptide N 1 - Code M1 A = Acétyl Xanthique Mu=211,11 M1 = Peptide 1 = Nle - Ala - His - DhomoPhé - Arg - Trp - Gly - NH2 Les synthèses des complexes peptidiques selon l'invention ont été réalisées selon les techniques de Merrifield adaptées aux différentes structures peptidiques des complexes faisant l'objet de l'invention. Le principe général de la technique de Merrifield étant connu de l'homme de l'art, seules les phases spécifiques de chaque séquence peptidique seront décrites. D'une façon générale, on utilise une résine MBHA, comme groupement protecteur : les dérivés FMOC (Fluoroényl, Méthoxy Carbonyl), et comme agent de couplage: le BOP. Les acides aminés utilisés sous forme de dérivés FMOC sont les suivants dans l'ordre progressif: FMOC-Gly-OH, Trp-OH, Arg-OH, DhomoPhé OH, His-OH, Ala-OH et Nle-OH. Chaque acide aminé est utilisé en excès, ainsi que le BOP et les couplages répétés deux fois. L'acide acétyl xanthique est couplé de façon similaire. La déprotection est effectuée en deux phases 1 - Acide trifluoroacétique, 2 - Acide fluorhydrique anydre/para-crésol. Le composé obtenu avec un rendement de 75 % est repris dans l'acide acétique à 95,5 % et desséché par lyophilisation. Le conjugué N" 1 est obtenu avec un rendement de 82 % de pureté HPLC. 100 mg de ce conjugué sont à nouveau purifiés par HPLC sur colonne C18 et l'on obtient 70 mg de produit pur. Analytique Temps de rétention : 17 min, colonne C18, UV 210 nm, solvant tampon de phospate triéthylamine, acétonitrile. Acides aminés: Ala - 1; Gly 1,01; His - 1,00; Arg - 0,94; Dh.Phé 1,03. Spectre de masse (FAB+) 1075. Exemple 2 : Synthèse du Peptide N 2 - Code M2 A = Acide Théophyline acétique (CgHllN404) M2 = MeNle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-Trp-NH2 En opérant selon les techniques de Merrifield de l'exemple N" 1, on obtient le peptide M2 après traitement par HPLC avec un rendement de 65 %. Analytique MW= 1036 HPLC= 98%- Nucléosil C18 - 250 Acides aminés : MeNle = ++, His = 1,03/1, Arg = 1,01/1, Ala = 0,96/1, Dh-Phé = 1,05. ++ = MeNle = détecté. Exemple 3 : Synthèse du Peptide N 4 - Code M4 A = Acide acétique CH3COOH MW= 60,05 M4 = Nle - Ala- His - DHomo-Phé - NH2. En opérant selon les techniques décrites précédemment dans l'exemple N 1, on obtient le peptide N 4. Analytique MW=645 HPLC = 95 %- Nucléosil C18 - 244 Acides aminés: Me = ++, His = 1,03/1, Arg = 1,01/1, Ala = 0,96/1, Dh Phé = 1,05. ++ = Me = détecté. Exemple 4 : Synthèse du Peptide N 3 - Code M3 A = acide Théobromoacétique (C9H10N404) M3 = Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-NH2 L'acide Théobromoacétique est salifié avec le peptide. En opérant selon les techniques décrites précédemment dans l'exemple N 1, on obtient le peptide N 3. Analytique MW Peptide = 745 MW Théobromoacétique = 238,20 3,7 diméthyl purine acétique HPLC Peptide = 95 % Nucléosil C18 - 244 Acides aminés: His = 1,05, Arg = 1/1,02, Ala = 0,96, HydroxyDh-Phé = 1,18. Nle = détecté. Exemple 5: Etude in vitro de l'activité du Peptide M1 sur la stimulation de la Mélanine et de la Tyrosinase, sur Mélanocytes en culture comparativement à l'a MS H MATERIEL 1. Peptide M1 PM= 1075 10-7 M; 10-9M; 10-11 M 2. MSH - Sigma 10-7 M 3. Mélanocytes de Cloudman - Clone M3. METHODE Cultures de Mélanocytes en présence des solutions de Peptide M1, et de l'aMSH comme témoin culture sous 5 % de CO2 dans milieu de Ham F.10 supplémenté en sérum de cheval ( 15 %) et SVF ( 2, 5 %) en présence de Pénicilline-Streptomyc ine. DOSAGES = Dosage de la Mélanine selon Abdel Malek à 436 nm. = Dosage de la Tyrosinase/Ldopa à 475 nm. = Dosage des Protéines selon technique de Lowry. RESULTATS = Dosages de la Mélanine Le peptide M1 provoque une augmentation du taux de Mélanine de 92 % à la dilution de 10-7 M, et l'&alpha;MSH provoque une augmentation de la Mélanine de 11 % à la dilution de 10-7 M. RESULTATS = Dosages de la Tyrosinase % d'augmentation de Mélanine et de Tyrosinase &alpha;MSH M1 M1 M1 10-7 M 10-7 M 10-9 M 10-11 M Mélanine 11 % 92 % 80 % 51 % Tyrosinase 28 % 30 % 58 % 90 % COMMENTAIRES I - Mélanocytes de Cloudman Mélanocytes du Mélanome Murin de Cloudman, dont la propriété est de sécréter naturellement de la Tyrosinase et de la Mélanine. L'utilisation du Mélanome de Cloudman pour l'étude en screening primaire des substances mélanotropes, réside dans la réponse exponentielle de ce modèle expérimental, qui permet de différencier les activités des peptides mélanotropes dont les structures sont relativement proches. II - Relations doses/effets des peptides mélanotropes Dans le modèle expérimental par cultures monocellulaires, la réponse des peptides dépend de l'encombrement des récepteurs cellulaires qui répondent de façon plus intense, à des doses faibles et filées. Par ailleurs, on observe un décalage entre la réponse mélanotrope optimale du peptide Ml aux doses de 10-7 M et 10-9 M, et la réponse de la synthèse de la Tyrosinase, qui atteint son optimum à lUll. Ce phénomène s'explique par la libération de la Mélanine stockée dans les mélanosomes, alors que la synthèse de la Tyrosinase est induite après cette libération, pour compenser la sécrétion de Mélanine. Par ailleurs, il faut tenir compte du poids moléculaire des peptides testés comparativement au poids moléculaire de l'aMSH témoin. Par exemple, l'aMSH à 10-7 M indépendamment de son action ubiquitaire, n'est pas utilisable en thérapeutique compte tenu du prix de revient élevé de sa synthèse qui comprend 14 étapes, alors que le peptide M1 n'en comprend que 7 à la même puissance 10-7 M pour une activité 9 fois plus intense. Exemple 6: Etude in vitro de la synthèse de la Tyrosinase induite dans les mélanocytes en culture par le peptide M3 Mélanocytes humains clone M4Be INSERM U. 436 MATÉRTEL 1. Peptide M3 PM= 745 Employé aux dilutions de 10-7 M, 10-9 NI, 1011 M dans M20. 2. Peptide témoin de référence aMSH Sigma employé à la dilution de 10-7 M dans H2O. 3. Mélanocytes humains clone M4Be - INSERM U.436. 4. Les Mélanocytes M4Be sont des cellules tumorales provenant de l'Unité U 436/218 de 1'INSERM de Lyon. Ces cellules sont caractérisées par leur déficience en Tyrosinase (syndrome de Menkes). Elles représentent un modèle expérimental permettant d'apprécier l'activité des peptides, sur la synthèse de la Tyrosinase chez des sujets génétiquement déficients. Culture Témoin aMSH Lot 085H12461 Peptide M3 Cellules -Type:S9lCD - N passage: 21 - Inoculation, date: 72 - Inoculation, quantité : 1 x 10 5/puits, 3 plaques 6 puits Milieu Ham F10 + (10 % Sch, 2 %SVF, Péni-Strepto (l00U-100 llg/ml)). Contact produit (100 l + 0,9 ml milieu): - Durée: 24 heures - Rinçage: 2 Récupération cellules après : 24h Dosages Dosage de la Tyrosinase Ldopa à 475 nm. Dosage des Protéines selon la technique de Lowry. RÉSULTATS Dosage de l'activité tyrosine oxydase et des protéines au niveau de mélanocytes cultivés en présence d'&alpha;-MSH ou du peptide M3 Produit Tyrosinase Protéines Tyros./Prot. Moyenne Ecart-Type Stimulation U/ml g/ml x 1000 Tyros./prot. Tyros./prot. en % 0,178 48,4 3,68 Témoin 0,190 47,2 4,03 3,70 0,26 / 0,165 48,8 3,38 0,225 48,91 4,60 MSH (10-9 M) 0,237 47,12 5,03 4,63 0,54 25 0,206 48,70 4,23 0,287 66,6 4,31 10-5 M 0,262 66,0 3,97 4,23 019 15 0,266 60,3 4,41 0,270 53,9 5,01 10-7 M 0,245 56,8 4,31 4,67 0,28 27 0,254 54,3 4,68 0,304 46,3 6,57 M3 10-9 M 0,329 48,4 6,80 7,25 0,81 96 0,371 44,2 8,39 0,296 66,9 4,42 10-11 M 0,207 49,7 4,16 4,29 0,11 16 0,224 52,2 4,29 0,241 57,0 4,23 10-12 M 0,254 62,1 4,09 4,13 0,07 12 0,283 69,5 4.07 Dosages de la Tyrosinase Le peptide M3 stimule la sécrétion de la Tyrosinase de 96 % à la dose de 10-9 M, comparativement aux témoins non traités et à l'otMSH à la dose de 10-9 M. Exemple 9: Etude du pouvoir préventif des Peptides M2 contre l'érythème solaire Objectif: Evaluer le pouvoir protecteur du Peptide M2 en application topique, contre l'érythème solaire. MATERIELS 1. Peptide M2 en solution à 50 mg/l et 100 mg/l dans un gel de PEG. 2. Cobayes mâles Dunkin-Hartley de 300 g, 10 animaux par lot. METHODE Epilation des flancs des animaux à J-1, un côté reçoit le traitement, l'autre sert de témoin. Les animaux sont recouverts de papier métallique percé de 4 fenêtres au niveau des flancs. On applique sur un côté 1 ml de Gel de chacune des solutions de peptide M2. Après application, on expose les animaux à un rayonnement UVA et UVB délivrant 10,75 W/cm2, chaque fenêtre étant soumise à une exposition de durée croissante en progression géométrique de 1,25. Après 24 heures, on évalue le niveau d'érythème de chaque fenêtre. RESULTATS Pour chaque animal, on évalue le temps d'irradiation provoquant le premier érythème net (DEM). On calcule ensuite les rapports de DEM (zone traitée/zone non traitée). La moyenne de ces rapports constitue l'indice d'élévation du seuil d'érythème pour chaque dose. Gammes de Traitements temps DEM Indices d'élévations d'irradiation moyennes du seuil érythémal Ecart Témoins non traités 60 à 117 s 83,95 Moyenne type M2 50 mg/l 240 à 468 s 324,40 3,96 0,66 M2 100 mg/l 360 à 702s 495,6 5,94 0,99 CONCLUSION L'application du peptide M2 par voie topique prévient de façon hautement significative l'apparition de l'érythème solaire. En effet, des expositions 6 fois (pour 100 mg/l) et 4 fois (pour 50 mg/l) plus longues sont nécessaires pour donner un érythème équivalent à celui observé sur la partie non traitée. Aucun signe d'intolérance n'a été observé sur les zones ayant reçu M2 puis exposées aux rayons UV. Exemple 10: Etude clinique d'objectivation de l'activité comparative de deux formules galéniques de la série peptidique MELITANE RÉSUME Etudier comparativement l'action mélantotrope et antiérythémateuse de deux formules galéniques de peptides de la série MEUTANE, en application topique. MATÉRIEL Formule N" 10 = A-Peptide N" 4 Acyl-MeNle-Ala-His-DhomoPhé-NH2 Formule N" 11 = A-Peptide N" 3 3,7 - diméthyl purine acétique-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-NH2 Forme Galénique = gel de carboxyméthyl cellulose à 5 mg de peptide pour 100 g de gel. METHODOLOGIE L'analyse des résultats a porté sur un panel de 25 volontaires adultes de deux sexes, âgés de 18 à 50 ans. Les produits étudiés ont été appliqués quotidiennement, deux fois par jour, sur la face de flexion des avant-bras (un seul produit par avantbras) pendant deux semaines consécutives. L'analyse statistique a porté d'une part, sur les valeurs obtenues au niveau de chacune des zones traitées en comparaison aux valeurs obtenues au niveau de la zone témoin et d'autre part, sur les différences calculées entre les valeurs obtenues sur chacune des zones traitées ou témoin de la valeur obtenue sur la zone témoin propre à chacune des différentes zones, afin de comparer les deux produits étudiés à la zone témoin. Les moyennes des différences des coordonnées de chromaticité ont été également calculées pour l'ensemble de chacune des zones traitées et témoin. Une analyse de variance et le test de la différence la moins significative ( L.S.D. ) ont également permis d'effectuer les comparaisons multiples entre les valeurs obtenues au niveau de chacune des zones traitées et témoin. Les valeurs moyennes et les écarts obtenus par rapport à la moyenne (S.E.M.) des Doses Erythémateuses Minimales (D.E.M.), obtenues sur l'ensemble des volontaires, pour chacun des produits étudiés, sont répertoriées dans le tableau I. Les différences statistiques y sont également mentionnées, ainsi que le type de test effectué. Les valeurs moyennes et les écarts obtenus par rapport à la moyenne (S.E.M.) des différences de la coordonnée de chromaticité b* et de l'Angle Typologique Individuel (ITA"), obtenues sur l'ensemble des volontaires ayant participé à l'essai, pour chacun des produits étudiés, sont répertoriées dans les tableaux II, III, IV et V. Les différences statistiques y sont également mentionnées, ainsi que le type de test effectué. L'Angle Typologique Individuel IOTA", défini par Chardon & Col. pour déterminer le niveau de mélanisation de la peau, a été calculé de la façon suivante: IOTA" = (arc tangente (L*-50)/b*) 180/3.14159 avec : L* = variable de clarté et b* = coordonnée de chromaticité du bleu au jaune. TABLEAU I DOSES ERYTHEMATEUSES MINIMALES APRES UNE EXPOSITION AUX UV A ET B (moyennes et S.E.M., n = 25) DOSE EN J/cm2 ZONES TEMOIN | PRODUIT 10 PRODUIT 11 T 24 heures 1,5 # 0,1 1,8 # 0,1* 2,5 # 0,1* *: valeur statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de la zone témoin, au même temps de l'étude (test t de Student en séries non appariées, one-tail , significativité : p : valeur statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de l'autre zone traitée, au même temps de l'étude (LS.D. et test t de Student en séries appariées, onetail , significativité: p TABLEAU II VARIATION DE LA COORDONNEE DE CHROMATICITE b* APRES EXPOSITION SOLAIRE AUX UV A ET B T72 Heures (moyennes et S.E.M., n = 25) #b* Zones FLUX en TEMOIN PRODUIT 10 PRODUIT 11 med/min/cm2 0,82 0,3 # 0,1 0,7 # 0,2 0,9 # 0,2 1,02 0,4 # 0,1 0,9 # 0,2 1,4 # 0,2 1,28 0,3 # 0,1 1,3 # 0,2 1,6 # 0,2 1,60 0,5 # 0,1 1,5 # 0,2 1,9 # 0,2 2,00 0,4 # 0,1 2,1 # 0,2 2,6 # 0,2 2,50 0,5 # 0,1 2,5 # 0,2 2,9 # 0,2 MOYENNE 0,4 # 0,1 1,5 # 0,2* 1,8 # 0,2* *: différence statistique ment significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de l'autre zone traitée, pour le même flux (ANOVA et LS.D., significativité : p " : différence statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de la zone témoin, pour le même flux (test t de Student en séries appariées, one-tail , significativité : p TABLEAU III VARIATION DE L'I.T.A. APRES EXPOSITION SOLAIRE AUX UV A ET B T24 Heures (moyennes et S.E.M., n = 25) A I. T. A. Zones FLUX en TEMOIN PRODUIT 10 PRODUIT 11 Med/min/cm2 0,82 - 1,5 # 0,3 - 2,8 # 0,6 - 3,6 # 0,5 1,02 - 1,9 # 0,7 - 4,7 # 0,6 - 5,8 # 0,7 1,28 - 1,4 # 0,6 - 4,9 # 0,5 - 5,8 # 0,6 1,60 - 1,7 # 0,6 - 5,5 # 0,7 - 7,0 # 0,7 2,00 - 1,9 # 0,7 - 6,8 # 0,8 - 7,5 # 0,9 2,50 - 2 # 0,7 - 7,5 # 1,0 - 8 # 0,9 MOYENNE - 1,75 * 0,6 - 5,37 # 0,7*0 - 6,29 * 0,72* *: différence statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de l'autre zone traitée, pour le même flux (ANOVA et LS.D., significativité : p " : différence statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de la zone témoin, pour le même flux (test t de Student en séries appariées, one-tail , significativité : p TABLEAU IV VARIATION DE L'I.T.A. APRES EXPOSITION SOLAIRE AUX UV A ET B T72 Heures (moyennes et S.E.M., n = 25) # I. T. A. Zones FLUX en TEMOIN PRODUIT 10 PRODUIT 11 Med/min/cm2 0,82 - 1 # 0,4 - 2,5 # 0,6 - 3 # 0,7 1,02 - 1 # 0,5 - 3,3 # 0,6 - 5 # 0,8 1,28 - 1 # 0,5 - 4,4 # 0,7 - 6 # 1,0 1,60 - 2 # 0,5 - 5,5 # 0,9 - 7 # 0,8 2,00 - 2 # 0,6 - 7,9 # 0,8 - 8 # 0,9 2,50 - 3 # 0,5 - 8,1 # 0,9 - 10 # 0,7 MOYENNE - 1,66 t 0,5 - 5,29 s 0,75* - 6,5 t 0,82* *: différence statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de l'autre zone traitée, pour le même flux (ANOVA et LS.D., significativité : p différence statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de la zone témoin, pour le même flux (test t de Student en séries appariées, one-tail , significativité : p TABLEAU V VARIATION DE LA COORDONNEE DE CHROMATICITE b* et de l'I.T.A.' AU TEMPS DE 72 Heures (moyennes et S.E.M., n = 25) DOSE EQUNALENTE A 0,75 D.EM. PARAMETRE TEMOIN PRODUIT 10 PRODUIT 11 #b 0,5 # 0,1 2,5 # 0,1* 3,8 # 0,2* L L T. A. - 2,2 # 0,4 - 3,5 # 0,4* - 4,9 t 0,6* DOSE EQUIVALENTE A 1 D.M. PARAMETRE TEMOIN PRODUIT 10 PRODUIT 11 #b 0,6 # 0,1 1,7 # 0,2* 2,9 # 0,2* # I. T. A. - 1,6 # 0,5 - 2,9 # 0,6* - 3,4 # 0,6* DOSE EQUIVALENTE A 1,25 D.EM. PARAMETRE TEMOIN PRODUIT 10 PRODUIT 11 #b 0,8 # 0,1 1,9 # 0,2* 2,6 # 0,2* A I. T. A. - 3,8 # 0,6 - 2,6 t 0,7* - 1,5 t 0,6* *: valeur statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de la zone témoin, au même temps de l'étude (test t de Student en séries appariées, one-tail , significativité: p : : valeur statistiquement significative par rapport à la valeur obtenue au niveau de l'autre zone traitée, au même temps de l'étude (ANOVA et LS.D., significativité: p RÉSULTATS Les applications topiques des produits formule 10 et formule 11 pendant 15 jours consécutifs et dans les conditions expérimentales définies par le protocole ont donné les résultats suivants : 1. Augmentation hautement significative sur le plan statistique de la dose érythémateuse minimale chez le volontaire adulte, exprimant une activité anti-érythémateuse hautement significative en particulier pour la formule 11. 2. On observe également pour l'ensemble des panélistes une augmentation statistiquement significative des indices de chromaticité traduisant une élévation de haut niveau du degré de mélanisation de la peau après exposition solaire unique aux UV A et B. 3. La diminution hautement significative de l'I.T.A. confirme également l'intensité de mélanisation de la peau particulièrement marquée pour la formule 11. REVENDICATIONS 1/ Complexes nucléo-peptidiques obtenus par synthèse, comprenant une séquence d'au moins trois acides aminés sous la forme D, L ou DL, ladite séquence étant liée physiquement ou chimiquement à des acides puriques, ou leurs dérivés de formule générale l: N-Rî-COOH (I) dans laquelle N représente une base purique comprenant de 5 à 10 atomes de carbone, R1 représente un radical alkyl en C1 ou C3. 2/ Complexes nucléo-peptidiques selon la revendication 1, caractérisés en ce que les dérivés des acides puriques sont des acides xanthiques. 3/ Complexes nucléo-peptidiques selon la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce que la séquence d'acides aminés est liée à l'acide sous forme de sel, d'ester ou d'amide. 4/ Complexes nucléo-peptidiques selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que les acides puriques sont choisis dans le groupe comprenant: - I'acide hypoxanthique (C7H5N403) - I'acide acétyl xanthique (C7H8N4O4) - l'acide théobromine acétique (C9H8N4O4) - l'acide théophyline acétique (C9HllN404). 5/ Complexes nucléo-peptidiques selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que la séquence est constituée de 3 acides aminés, et est choisie dans le groupe comprenant: Ala-His-HPhé His-HPhé-Arg où Hphé représente la dihydroxy-DPhénylalanine, la DhomoPhénylalanine. 6/ Complexes nucléo-peptidiques selon la revendication 5, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale AX-His-HPhé-Y dans laquelle A est un acide purique de formule générale I telle que définie ci-dessus; X représente un groupe Norleucine (Nle), ou l'un de ses dérivés sous forme cétylée (Acyl-Me) ou méthylée (MeNle), le groupe Nle-Ala ou Ala Y représente un groupe ArgZ ou Z dans lequel Z est Trp-Gly-OH, Trp-OH, OH, rp-Gly-NH2, Trp-NH2 ou NH2; Hphé représente la dihydroxy-DPhénylalanine ou la DhomoPhénylalanine. 7/ Complexes nucléo-peptidiques selon la revendication 6, caractérisés en ce qu'ils sont choisis dans le groupe comprenant 1) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-Trp-Gly-NH2 2) A-Nle-Ala- His-DhomoPhé-Arg-Trp- NH2 3) A- Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-NH2 4) A-Nle-Ala-His-Dhomophé-NH2 5) A-Ala-His-DhomoPhé-NH2 6) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-Trp-Gly-OH 7) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-Trp-OH 8) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-Arg-OH 9) A-Nle-Ala-His-DhomoPhé-OH 10) A-Ala-His-DhomoPhé-OH 11) A-Nle-Ala-His-Dihy droxyDPhé-Arg-Trp-Gly-NH2 12) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-Trp-NH2 13) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-NH2 14) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-NH2 15) A-Ala-His-DihydroxyDPhé-NH2 16) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-Trp-Gly-OH 17) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-Trp-OH 18) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-Arg-OH 19) A-Nle-Ala-His-DihydroxyDPhé-OH 20) A-Ala-His-DihydroxyDPhé-OH. 8/ Complexes nucléo-peptidiques selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisés en ce que au moins un acide aminé constitutif de la séquence est glycosylé. 9/ Compositions cosmétologiques ou pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles comprennent, à titre de substance active, au moins un complexe nucléo-peptidique selon l'une des revendications 1 à 8, en association avec un support pharmaceutiquement acceptable. 10/ Compositions cosmétologiques ou pharmaceutiques selon la revendication 9, caractérisées en ce qu'elles sont sous forme de solutions, de lotions, de sprays, de crèmes ou de gel. 11/ Compositions pharmaceutiques selon la revendication 9, caractérisées en ce qu'elles sont sous forme de préparations injectables. 12/ Utilisation des compositions cosmétologiques selon la revendication 9 ou 10, comme activateur de la mélanogénèse cutanée. 13/ Utilisation des complexes selon l'une des revendications 1 à 8 pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 9 à 1 1 pour le traitement médical des troubles de la mélanogénèse. 14/ Compositions cosmétologiques, caractérisées en ce qu'elles comprennent, à titre de substance active, au moins un complexe nucléopeptidique selon l'une des revendications 1 à 8, en association avec un support cosmétologiquement acceptable. 15/ Compositions cosmétologiques selon la revendication 14, caractérisées en ce qu'elles sont sous forme de solutions, de lotions, de sprays, de crèmes ou de gel. 16/ Utilisation des compositions cosmétologiques selon la revendication 14 ou 15, par voie topique en vue de l'accélération de la mélanogénèse de la peau et des cheveux. 17/ Utilisation des compositions cosmétologiques selon la revendication 14 ou 15, par voie topique pour le traitement préventif et curatif des érythèmes solaires.