Brevet FR2739869A1 — publié le 19970418

FERMENT LACTIQUE, POUR L'OBTENTION DE PRODUITS ANTI DIARREElQUES La présente Invention est relative à l'utilisation d'un ferment lactique, et de produits laitiers fermentés obtenus à partir dudit ferment, pour le traitement des diarrhées. Il est connu que des bactéries lactiques du genre Lactobacillus, sont présentes dans la flore intestinale de l'homme et contribuent à son équilibre. L'effet éventuel de ces bactéries sur certaines pathologies digestives (troubles gastro-intestinaux, gastro-entérites perturbation du transit) a également été étudié. Plusieurs études ont montré chez l'enfant l'effet bénéfique de ferments lactiques sous forme de laits fermentés ou sous forme de poudre, sur la durée de la diarrhée. TOUHAMI et al., [Ann. Pédriatr. (Paris) 39, nO 2, p. 79-86 (1992)] ont comparé l'effet du lait et du yoghourt chez l'enfant atteint de diarrhée persistante. 78 enfants hospitalisés présentant une diarrhée persistante depuis au moins 15 jours ont été alimentés par du lait ou du yoghourt. L'échec du traitement étant défini comme une non rémission de la diarrhée au bout de 5 jours, le nombre d'échecs était significativement plus bas dans le groupe yoghourt (15t) que dans le groupe lait (45W). Ce résultat traduit indirectement une diminution de la durée de l'épisode diarrhéique avec le yoghourt. ISOLAURI et al., [Pediatrics, vol. 88 (1), p.90-97 (1991)], ont procédé à une étude chez des enfants atteints de diarrhée aigue depuis moins de 7 jours. 71 enfants au total, ont reçu du L. casei GG (L. casei subsp. rhamnosus) sous forme lyophilisée, ou un lait fermenté par L. casei GG ou un yoghourt thermisé. La durée de la diarrhée après traitement était alors de 2,4 jours dans le groupe témoin contre 1,4 jours dans le groupe L. casei GG sous forme lyophilisée ou sous forme d'un lait fermenté, soit une diminution significative de 42%. Selon le même modèle, cette équipe a également étudié sur les diarrhées à rotavirus l'effet de l'administration de L. casei GG sous forme de poudre, par rapport à 2 produits du commerce, l'un étant une préparation de L. casei rhamnosus (Lactophilus) et l'autre un lait fermenté avec les ferments du yoghourt et contenant L. casei rhamnosus (YALACTA) [MAJAMAA et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition (USA), Apr.1995, 20(3) p. 333-8]. L'étude montre une réduction significative de la durée de la diarrhée à rotavirus dans le groupe L. casei GG (1,8 jours) par rapport aux groupes Lactophilus (2,8 jours) et YALACTAX (2,6 jours).Cela se traduit par une réduction de 36% par rapport à Lactophilus et de 31 par rapport à YALACTA. Les deux études précédentes montrent l'intérêt de L. casei s'1bsp. rhamnosus dans la réduction de la durée de la diarrhée, du moins dans le cas de diarrhée aigué ou à rotavirus. L'intérêt de la cofermentation de L. casei avec les ferments du yoghourt n'a cependant pas été montré dans le traitement des diarrhées. Il a également été montré, chez l'enfant atteint de diarrhée, que la consommation de yoghourt réduit significativement le volume des selles par rapport à la consommation de lait [BHAN et al., Les laits fermentés. Actualités de la Recherche, John LIBBEY Eurotext Lid, P. 233-239 (1989)]. Le travail de [LING et al., Ann. Nutri. Metab. 36, p. 162-166, (1992)] chez des personnes âgées (non atteintes de diarrhée) montre qu'un lait fermenté par L. casei GG normalise la consistance des selles en comparaison avec un groupe contrôle ne consommant pas ce lait fermenté. La demande FR 95 00003 du 2 janvier 1995 a pour objet un ferment lactique qui comprend un mélange des bactéries lactiques Streptococcus thermophilus DN-001 147, Streptococcus thermophilus DN-001 339, Lactobacillus bulgaricus DN-100 182, et Lactobacillus paracasei s'1bsp. paracasei DN-114 001, déposées selon le Traité de Budapest le 30 décembre 1994, auprès de la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) tenue par l'institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, à Paris, sous les numéros respectifs I-1520, I-1521, I-1519, et I-1518, ainsi que des préparations de lait fermenté susceptibles d'être obtenues en utilisant ce ferment. Or les Inventeurs ont maintenant constaté que les préparations à base dudit ferment lactique possédaient des propriétés anti-diarrhéiques supérieures à celles des préparations de même type connues dans l'art antérieur. La présente Invention a pour objet un ferment lactique comprenant un mélange des trois bactéries lactiques Streptococcus thermophilus DN-001 147, Streptococcus thermophilus DN-001 339, et Lactobacillus bulgaricus DN100 182, en association avec Lactobacillus case, et en particulier avec Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001, pour l'utilisation comme anti-diarrhéique. La présente Invention a également pour objet une préparation de lait fermenté, susceptible d'être obtenue en utilisant le ferment lactique tel que défini cidessus, pour l'utilisation comme anti-diarrhéique. Des préparations de lait fermenté convenant pour la mise en oeuvre de la présente Invention sont en particulier celles qui font l'objet de la Demande FR 95 00003. La présente Invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples démontrant les propriétés anti diarrhéiques de préparations de lait fermenté telles que définies ci-dessus. Il doit être bien entendu toutefois que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. PREPARATIONS UTILISEES La préparation "Lait" est un lait gélifié, dont la composition est la suivante - Saccharose 6 g - Guar 0,6 g - Carraghenane 0,15 g - Lait entier QSP 100 ml. Cette préparation a été traitée à 1300C pendant quelques secondes. Pour l'obtention de la préparation "Yoghourt", et de la préparation "B.C." (lait fermenté selon l'invention), on ajoute de la poudre de lait à 1 litre de lait entier, à raison de 4 grammes de poudre pour 100 grammes de lait. Après homogénéisation, le mélange est pasteurisé 10 minutes à 950C puis refroidi à 380C, avant d'être ensemencé avec des cultures actives des souches utilisées pour obtenir la préparation souhaitée. La préparation "Yoghourt" est ensemencée avec le mélange des souches : Streptococcus thermophilus DN-001 147 (5x104 cellules par ml), Streptococcus thermophilus DN-001 339 (5x103 cellules par ml), et Lactobacillus bulgaricus DN-100 182 (1x105 cellules par ml). L'incubation est réalisée à 370C ; après environ 1 heure, le pH atteint 4,7, et la préparation est transférée à 40C. Les concentrations dans le produit fermenté sont Strep- tococcus thermophilus DN-001 147 Streptococcus thermophilus DN-001 339 (5x108 cellules parmI.), et Lactobacillus bulgaricus DN-100 182 (7x106 cellules par ml). La préparation "B. C." est ensemencée avec le mélange des souches suivantes : Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001 (2x107 cellules par ml), Streptococcus thermophilus DN-001 147 (5x104 cellules par ml), Streptococcus thermophilus DN-001 339 (5x103 cellules par ml), et Lactobacillus bulgaricus DN-100 182 (lux105 cellules par ml). L'incubation est réalisée à 370C ; après environ 12 h d'incubation, le pH atteint 4,7 et la préparation est transférée à 40C.Les concentrations dans le produits fermenté sont Lactobacillus paracasei s'1bsp. paracasei DN-114 001 (6x108 cellules par ml) Streptococcus thermophilus DN-001 147 et Streptococcus thermophilus DN-001 339 (5x108 cellules par mil), et Lactobacillus bulgaricus DN-100 182 (1x107 cellules par ml). EXEMPLE 1: INFLUENCE DES DIFFERENTES PREPARATIONS SUR LA DUREE DE LA DIARRKEE L'étude est réalisée sur une population de 265 enfants en crèche. Les enfants ont été répartis en 3 groupes par randomisation et ont consommé régulièrement 125 g (enfants de 6 à 18 mois), ou 250 g (enfants de plus de 18 mois) soit de lait gélifié (préparation "Lait"), soit de yoghourt (préparation "Yoghourt"), soit de lait fermenté selon l'invention (préparation "B.C."), pendant 3 périodes successives de 1 mois, entrecoupées de périodes sans supplémentation de 1 mois. L'essai a été conduit en double aveugle. L'analyse est effectuée sur la population d'enfants ayant présenté au moins un épisode diarrhéique (n = 62) au cours de la période d'observation (6 mois). La durée de la diarrhée est définie comme le temps écoulé entre l'apparition de la diarrhée (3 selles liquides par jour) et la disparition des selles liquides. Plus pratiquement, cela représente le nombre de jours après apparition de l'épisode diarrhéique, pendant lesquels l'enfant présente encore au moins une selle liquide. Les résultats sont représentés dans le Tableau I ci dessous. TABLEAU I Produit Nombre d'enfants Nombre de jours de diarrhée Lait 20 3,8 + 1,8 Yoghourt 24 3,1 + 1,7 B. C. 18 2,9 + 2,6 Total 62 3,3 + 2,0 Ces résultats montrent que, chez les enfants présentant des diarrhées, la supplémentation de l'alimentation avec le yoghourt ou le lait fermenté selon l'invention réduit le nombre de jours de diarrhée par rapport au lait. Cette réduction est de 18% dans le cas du yoghourt, et de 24% dans le cas du lait fermenté selon l'invention. EXEMPLE 2 - INFLUENCE DES DIFFERETTES PREPARATIONS SUR LA DUREE DE NORMALISATION DES SELLES L'analyse est effectuée sur la même population d'enfants (n = 62) que l'exemple 1. La durée de normalisation des selles est le temps écoulé entre la dernière selle liquide et le retour à des selles moulées. Plus pratiquement, cela représente la durée requise pour un retour à un transit normal. Les résultats sont représentés dans le Tableau II ci dessous. TABLEAU II Nombre de jours Produit Nombre d'enfants avant normalisa tion Lait 20 ~ 2,6 + 2,4 ~ Yoghourt 24 2,0 + 1,6 B. C. 18 1,2 + 1,0 Total 62 1,9 + 1,8 Ces résultats montrent que chez les enfants ayant présenté des diarrhées, la supplémentation de l'alimentation avec le lait fermenté selon l'invention réduit significativement le temps de normalisation des selles par rapport au lait ; la réduction observée est de 54W. Le temps de normalisation des selles est plus rapide avec le lait fermenté selon l'invention (1,2 + 1,0) qu'avec le yoghourt (2,0 + 1,6). wtwxPLE 3 - INFLUENCE DES DIFFERENTES PREPARATIONS SUR LA DUREE TOTALE DE L'EPISODE DIARRIZIQUE. L'analyse est effectuée sur la même population d'enfants (n = 62) que l'exemple 1. La durée totale de l'épisode diarrhéique est le temps écoulé entre le début de la diarrhée ( > trois selles liquides par jour) et la fin de la période de normalisation (retour à des selles moulées). Si un enfant a présenté plus d'un épisode diarrhéique, cette analyse prend en compte l'épisode où ce délai calculé est le plus grand. Les résultats sont représentés dans le Tableau III ci dessous TABLEAU III Produit Nombre d'enfants durée totale de l'épisode diar rhéique (jours) Lait 20 6,9 + 3,0 Yoghourt 24 4,8 i 2,3 B. C. 18 3,9 i 2,4 Total 62 5,2 i 2,8 Ces résultats montrent que chez les enfants ayant présenté des diarrhées, la supplémentation de l'alimentation avec le lait fermenté selon l'invention réduit significativement la durée totale de l'épisode diarrhéique ; la réduction observée est de 44 par rapport au lait et de 19 par rapport au yoghourt. La durée totale de l'épisode diarrhéique est plus courte avec le lait fermenté selon l'invention (3,9 + 2,4) qu'avec le yoghourt (4,8 + 2,3). EXEMPLE 4 - INFLUENCE DES DIFFERENTES PREPARATIONS SUR LE NOMBRE TOTAL DE JOURS OU LES ENFANTS PRESENT UN TRAN SIT INTESTINAL PERTURBE. L'analyse est effectuée sur la même population d'enfants (n = 62) que l'exemple 1. Le nombre total de jours où les enfants présentent un transit intestinal perturbé est calculé en sommant le nombre de jours où les enfants ont présenté une ou plusieurs selles anormales en consistance ou en fréquence. Lorsque l'enfant a présenté plusieurs épisodes diarrhéiques, l'analyse prend en compte l'ensemble de ces épisodes. Les résultats sont représentés dans le Tableau IV ci dessous TABLEAU IV Perturbation du Produit Nombre d'enfants transit intesti nal (jours) lait 20 8,0 + 5,3 Yoghourt 24 5,3 + 2,5 B. C. 18 4,3 + 2,7 Total 62 5,9 + 3,9 Ces résultats montrent que chez les enfants ayant présenté des diarrhées, la supplémentation de l'alimentation avec le lait fermenté selon l'invention réduit significativement le nombre total de jours où le transit intestinal de l'enfant est perturbé par rapport au lait ; la réduction observée est de 46%. Le nombre de jours avec des selles anormales en consistance ou en fréquence est plus faible avec le lait fermenté selon l'invention (4,3 + 2,7), qu'avec le yoghourt (5,3 i 2,5). Conclusion Les préparations conformes à l'Invention permettent donc de réduire la durée totale de l'épisode diarrhéique, en diminuant la durée pendant laquelle l'enfant présente une ou plusieurs selles liquides par jour et en diminuant la durée pendant laquelle l'enfant présente des selles molles. La propriété anti-diarrhéique se traduit également par une diminution du nombre de jours pendant lesquels l'enfant présente des selles de consistance ou de fréquence anormales. REVENDICATIONS 1) Ferment lactique comprenant un mélange des trois bactéries lactiques Streptococcus thermophilus DN001 147, Streptococcus thermophilus DN-001 339, et Lactobacillus bulgaricus DN-100 182, en association avec au moins une souche de Lactobacillus casei, pour l'utilisation comme anti-diarrhéique. 2) Ferment lactique, pour l'utilisation comme anti-diarrhéique selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite souche de Lactobacillus case, est la souche Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001 3) Préparation de lait fermenté, susceptible d'être obtenue en utilisant un ferment lactique tel que défini dans une quelconque des revendications 1 ou 2, pour l'utilisation comme anti-diarrhéique.