Brevet FR2745576A1 — publié le 19970905

Depuis 1980, on sait que les facteurs de dilatation et vasoconstriction sont produits par les cellules endothéliales en réponse à une stimulation qui peut être produite par exemple par l'interleukine-1, la thrombine, le TGF-ss, l'ester phorbol, l'angiotensine II, la vasopressine ou encore 1'hypoxie-anoxie, pour agir sur les cellules des muscles lisses. En 1988, M. YANAGISAWA découvrit ltendothéline-1 (ET-1) qui est un peptide bicyclique de 21 acides aminés secrété par les cellules endothéliales vasculaires. ET-1 possède une forte activité vasoconstrictive à des concentrations inférieures à une nanomole sur les artères coronaires in-vitro et augmente la pression sanguine après injection intraveineuse in vivo. ET-1 est un membre d'une famille d'hormones proches structuralement qui sont ltendothéline-2 et endothéline-3. Le clonage du gène de porc a permis de prédire la séquence d'une préproendothéline de 212 acides aminés qui est clivée successivement deux fois d'abord en proendothéline puis en big-endothéline (b-ET-1) avant d'être convertie en endothéline active. La séquence de la b-ET-1 est rappelée dans la figure 1 ci-après. Il a été montré que ET-1 est un agent vasoconstricteur 100 fois plus actif que b-ET-i. La dernière étape de formation de ET-1 est opérée par l'intermédiaire d'une enzyme de conversion de l'endothéiine (ECE) : ECE clive spécifiquement la liaison Trp21-Va122 de b-ET-1 (1-38) soit entre les acides aminés 21 et 22 de b-ET-l qui comporte 38 acides aminés, générant ainsi deux fragments l'un, N-terminal, ET-1 (1-21) et l'autre, C-terminal, cTF (22-38). De nombreux enzymes ont été décrits comme possédant l'activité ECE : les deux principaux sont d'une part une aspartyl-protéase ou cathepsin-like qui est active à pH acide et inhibée par la pepstatine A et d'autre part une métalloprotéase active à pH neutre et inhibée par le phosphoramidon. Les b-ET-1 et ET-1 ont été détectées dans le surnageant de culture de cellules endothéliales et dans le plasma alors qu'elles n'existent qu'à très faible concentration dans le milieu intracellulaire, suggérant que la conversion de b-ET-1 en ET-1 pourrait se produire dans le milieu extracellulaire. D'autres travaux tendraient à prouver que la conversion se ferait majoritairement à l'intérieur de la cellule. L'existence de ECE clivant la b-ET-l est attestée par des expériences démontrant in-vivo que l'administration de b-ET-1 est immédiatement accompagnée d'une augmentation de la quantité d'ET-1 plasmatique. Cependant, il n'a pas été possible de convertir b-ET-1 en ET-1 in vitro dans le plasma. De l'avis général, l'enzyme physiologique semble être la métalloprotéase. Une des clés du traitement de certaines pathologies pourrait être un traitement par inhibition de l'ECE : on peut ainsi citer le traitement de l'insuffisance cardiaque congestive, de l'infarctus du myocarde, de troubles ou lésions de reperfusion, de l'angine de poitrine, des spasmes vasculaires, du vasospasme consécutif à une hémorragie cérébrale, des spasmes coronariens, des spasmes vasculaires périphériques, de l'ulcère gastrique induit par des agents antiinflammatoires non stéroidiens, de la néphrotoxicité induite par la cyclosporine, des insuffisances rénales, de l'athérosclérose, de certaines formes d'hypertension comme notamment l'hypertension pulmonaire, le traitement de l'asthme, de l'endothoxémie, de la maladie de Raynaud, de certains désordres diabétiques, de certaines tumeurs secrétrices d'endothéline ainsi que la prévention des resténoses postangioplasties, des fibroses cardiaques et vasculaires. Ainsi disposer d'un bon test de sélection paraissait crucial au regard du développement de ces inhibiteurs de l'ECE. De plus, les progrès dans l'identification de l'ECE physiologique et sa purification ont été limités par l'absence d'un test efficace permettant une détection à la fois rapide, sélective et sensible. Les tests connus utilisant b-ET-1 et l'analyse du fragment peptidique obtenu à partir de b-ET-1 par HPLC, RIA ou SPA qui sont des techniques utilisées couramment sont soit très lents, soit peu spécifiques, ce qui les rend non adaptés au test de sélection d'un inhibiteur. L'HPLC nécessite une grande quantité de b-ET-1 et d'enzyme. Le RIA manque de sélectivité pour la reconnaissance de ET-1 en présence de b-ET-1. A.B. FAWZI (comme l'indique la publication Fawzi A.B., Clemen R.M. and Wright D.L. (1994) Anal. Biochem. 222, 342-350), a mis au point un test basé sur la conversion de b-ET marquée à l'iode 125 en 125I-ET et la détermination quantitative de 125I-ET produite par fixation sur le récepteur de l'endothéline. Les auteurs n'utilisent pas ce test pour la sélection d'inhibiteur mais pour l'identification de l'enzyme dans les tissus qui le contiennent. T. WARNER (comme l'indique la publication Warner T.D., Budzik J.P., Mitchell J.A., Juang Z-J., and Murad F. (1992) 20 (Sup 12) : S19-S21), a mis au point un biotest sélectif basé sur l'augmentation de GMPc induite par ET-1 dans les cellules épithéliales de rein LLC-PK1. Mais ce test nécessite beaucoup de temps et est trop élaboré pour un test de sélection. Il a maintenant été mis au point et c'est l'objet de la présente invention un test nouveau, simple et rapide qui est sélectif pour le test de sélection d'inhibiteurs de lECE. Lors de la mise en oeuvre du test, objet de la présente invention, un produit de formule (I) Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-ser- Z4 - Z5 - Z6 -COOH dans laquelle X représente un radical hydrocarboné comportant au moins un atome radioactif, Z11 Z21 Z4, Z5 et Z6 identiques ou différents représentent des acides aminés et Z3 représente soit l'acide aminé Asn, soit la paranitro-Phe, est clivé par l'ECE en produit de formule (II) dans laquelle X, Z1 et Z2 ont les significations indiquées ci-dessus, en présence du produit P dont on veut déterminer l'activité inhibitrice de l'ECE : cette activité inhibitrice de 1'ECE sera donc d'autant plus grande que la quantité de produit de formule (II) formé, déterminée par comptage de la radioactivité, sera plus faible. Le test de la présente invention est donc basé sur l'utilisation de nouveaux peptides de formule (I) dont la partie N-terminale est acylée ce qui présente au moins trois avantages : protéger du clivage par les aminopeptidases, renforcer l'hydrophobicité du fragment N-terminal qui sera généré par l'hydrolyse et permettre un marquage radioactif par acylation apportant au moins un atome radioactif et notamment par propionylation tritiée. La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (I) Pro-Tyr-Giy-Leu-Gly-Ser-Z4 -Z5-Z6-COOH dans laquelle X, Z1, Z2, Z3, Z4, Z5 et Z6 ont les significations indiquées ci-dessus. Z1, Z2 Z4, Z5 et Z6 sont choisis parmi les acides aminés connus tels que par exemple ceux appartenant à la séquence de la big-endothéline. Z3 représente soit l'acide aminé Asn soit la paranitrophénylalanine (commerciale). Notamment les produits de formule (I) sont tels que X représente un radical hydrocarboné comportant au moins un atome radioactif, Z1 et Z2 sont tels que soit Z1 et Z2 représentent une simple liaison, soit Z1 représente une simple liaison et Z2 représente l'acide aminé Asp, soit Z1 et Z2 représentent respectivement les acides aminés Leu et Asp, Z3 représente soit l'acide aminé Asn, soit la paranitro-Phe, et Z41 Z5 et Z6 sont tels que soit Z4, Z5 et Z6 représentent une simple liaison, soit Z5 et Z6 représentent une simple liaison et Z4 représente l'acide aminé Pro, soit Z6 représente une simple liaison et Z4 et Z5 représentent respectivement les acides aminés Pro et Arg, soit Z4, Z5 et Z6 représentent respectivement les acides aminés Pro, Arg et Ser. La présente invention a plus précisément pour objet les produits de formule (I) telle que définie ci-dessus, répondant à la formule Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-COOH dans laquelle X représente un radical hydrocarboné comportant au moins un atome radioactif. De tels produits de formule (I) peuvent aussi s'écrire Dans le radical le radical hydrocarboné que représente X peut être un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant au plus 4 atomes de carbone tel que le radical méthyle, éthyle, propyle ou butyle et de préférence éthyle ou encore un radical phényle. X peut ainsi renfermer un ou plusieurs atomes radioactifs notamment de tritium substitué à un ou plusieurs atomes d'hydrogène du radical alkyle ou phényle que représente X. La présente invention a particulièrement pour objet les produits de formule (I) telle que définie ci-dessus, dans laquelle le radical X comporte au moins un atome de tritium. peut notamment représenter le radical propionyle, qui peut renfermer de 1 à 5 atomes de tritium 3H et notamment 4 ou 2 atomes de tritium tel que dans le radical (2,3) 3H-propionyle. La présente invention a plus particulièrement pour objet les produits de formule (I) telle que définie ci-dessus, dans laquelle représente le radical (2,3)3H-propionyle. On définit ainsi le produit de formule (I) qui peut s'écrire ((2,3)3H)-propionyl-b-ET-1 (19-35) ou ((2,3)3H)-prop-b-ET-1 (19-35). La présente invention a aussi pour objet un procédé de préparation des produits de formule (I), telle que définie ci-dessus, caractérisé en ce que l'on soumet un produit de formule (III) Z1-Z2-Ile-Ile-Trp-Val-Z3-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Z4-Z5-Z6-COOH (III) dans laquelle Z11 Z2, Z3, Z4, Z5 et Z6 ont les significations indiquées ci-dessus, à une réaction d'acylation par un dérivé réactif de l'acide carboxylique de formule X-COOH dans laquelle X a la signification indiquée ci-dessus. Le dérivé réactif de l'acide carboxylique de formule X-COOR dans lequel R représente par exemple le radical succinimidyle, un radical norbornène ou encore tout composé d'estérification du radical carboxy, peut être trouvé dans le commerce, tel que notamment le N-succinimidyle-(2,3)3H-propionate, ou encore préparé selon les méthodes usuelles connues de l'homme du métier. Le radical X peut ainsi renfermer un ou plusieurs atomes de tritium. On peut citer par exemple parmi les composés X-COOR, le composé N-hydroxy-5-norbornène- (2,3) -dicarboximide-propionate formé à partir de l'acide N-hydroxy-5-norbornène-(2,3)dicarboximide et de l'acide propionique, qui peut ainsi selon le marquage de l'acide propionique, comporter 1 à 5 atomes de tritium et notamment 4 ou 2. La réaction d'acylation du produit de formule (III) en produit de formule (I) peut être réalisée dans les conditions usuelles connues de l'homme du métier. La b-ET-1 (19-35) utilisée comme produit de départ peut être préparée selon les méthodes usuelles telles que notamment par un synthétiseur automatique en phase solide tel que le modèle, par exemple, 431A de Applied Biosystems utilisant la technologie Fmoc, tel que décrit dans la référence ATHERTON, E. et SHEPPARD, R.C. (1989) Solid phase peptide synthesis : a pratical approach, IRL Press, Oxford. Un tel procédé est illustré ci-après au point I de la partie expérimentale. La présente invention a particulièrement pour objet l'utilisation d'un produit de formule (I), telle que définie ci-dessus, pour l'identification des inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'endothéline. La présente invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation telle que définie ci-dessus d'un produit radioactif de formule (I) telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce que l'on met en contact l'enzyme de conversion de l'endothéline, un produit P dont on veut déterminer l'activité inhibitrice de l'enzyme de conversion de l'endo- théline, et le produit de formule (I) telle que définie cidessus ; et après incubation, l'on arrête la réaction de clivage, extrait sélectivement le produit formé de formule (Il) dans laquelle X, Z1 et Z2 ont les significations indiquées ci-dessus, et détermine par comptage l'activité inhibitrice du produit P à tester. Le produit P tel que défini ci-dessus auquel on applique le test défini ci-dessus pour déterminer son activité inhibitrice de l'ECE peut être de nature diverse, sans limitation, et par exemple, peut être choisi parmi les phosphonimides, les phosphamides et les dérivés de ces produits, ou encore les inhibiteurs de métalloprotéinases tels que les dérivés thiol, carboxylates ou hydroxamates. On peut également citer comme produit P le phosphoramidon (domaine public) que l'on appelle ici Pi et le N-(phényléthylphosphonyl)-Leu-Trp (TAKEDA) que l'on appelle ici P2, dont les activités inhibitrices de l'ECE sont connues et auxquels peut être appliqué le test de la présente invention, ainsi qu'il est montré ci-après au point II de la partie expérimentale. L'ECE peut être obtenu, par exemple, selon les préparation et purification à partir de poumon de rat comme indiqué dans la référence : Takahashi M., Matsushita Y., Iijima Y. and Tanzawa K. (1993) J. Biol. Chem. 268, 21394-21398. La présente invention a tout particulièrement pour objet l'utilisation telle que définie ci-dessus caractérisée en ce que le produit solvant utilisé pour arrêter la réaction de clivage et extraire sélectivement le produit de formule (II), telle que définie ci-dessus est l'acétate d'éthyle. La présente invention a encore plus particulièrement pour objet l'utilisation telle que définie ci-dessus caractérisée en ce que l'on utilise un produit de formule (I) telle que définie ci-dessus dans laquelle représente de préférence un radical 3H-propionyle et notamment (2,3) 3H-propionyle. On obtient ainsi le produit de formule (II) telle que définie ci-dessus dans laquelle représente le radical 3H-propionyle et qui peut s'écrire 3H-prop-b-ET-l (19-21). Le test tel que défini ci-dessus peut notamment avoir pour produit de départ le produit de formule (I) 3H-prop-b-ET-l (19-35) pour obtenir le produit de formule (Il) 3H-prop-b-ET-l (19-21) dont on détermine la quantité par comptage de sa radioactivité. La présente invention a ainsi pour objet le test d'identification d'inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'endothéline, caractérisé en ce que ce test comprend un produit de formule (I) telle que définie ci-dessus. Un tel test qui permet d'identifier un inhibiteur de 1'ECE par une évaluation à la fois qualitative et quantitative de l'effet inhibiteur de ce produit, est décrit et illustré ci-après au point II de la partie expérimentale. On peut noter que la sensibilité du test tel que défini cidessus est augmentée lorsque dans les produits de formule (I) telle que définie ci-dessus, Z3 représente la paranitro-Phe et ce grâce à une augmentation de la vitesse de dégradation du substrat. La présente invention a ainsi pour objet à titre de produits industriels nouveaux - les produits de formule (III) Zl-Z2-Ile-Ile-Trp-Val-Z3-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val- Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Z4-Z5-Z6-COOH (III) - les produits de formule (Il) parmi lesquels de préférence le produit de formule (II) dans lequel représente le radical (2,3) H-propionyle, dans lesquelles formules, Z1, Z2, Z3, Z4 Z5, Z6 et X ont les significations indiquées ci-dessus. Les exemples suivants de préparation d'un produit de formule (I) et de mise en oeuvre du test illustrent l'invention sans toutefois la limiter. PARTIE EXPERIMENTALE I - Préparation du peptide tritié ((2,3)3H)-propionyl-b-ET-1 19-35) a - Synthèse de ((2 3)3H)-propionyl-b-ET-1 (19-35) Le N-succinimidyl-(2,3-3H)-propionate (Amersham code TRK.556) est en solution dans 5 ml de toluène à 1 mCi/ml, 99 mCi/mmol == > 5 mCi et 50 nmoles. On évapore le toluène jusqu'à obtenir une solution de 10 l puis ajoute 25 1 d'une solution de DMSO contenant 0,2 mg de b-ET-1(19-35), la b-ET-1(19-35) (MW=2014,2) ayant été préalablement séchée sur potasse une nuit. On continue à évaporer durant 10 mn puis agite la solution sous courant d'azote pendant 15 mn afin d'éliminer le toluène résiduel. On agite alors doucement durant 4 jours. Lorsqu'on est prêt à purifier, on ajoute 225 pl de tampon phosphate pH 6,5 et 50 tl d'acétonitrile puis agite 10 mn. b - Purification de ((2,3) H)-propionyl-b-ET-1 (19-35) La solution radioactive obtenue ci-dessus en a) est séparée en 2 injections de 150 ssl sur une colonne de Nucléosil C18 (150 x 4,6 mm). L'élution est effectuée avec un débit de 0,8 ml/mn par un gradient de O à 20 % d'acétonitrile en 20 mn puis 20 à 35 % en 50 mn. Analyses : L'analyse des fractions est effectuée par comptage du tritium au compteur à scintillation liquide (1 ssl dans 5 ml de scintillant HiSafe3) durant 60 secondes. Les fractions radioactives sont réunies et fractionnées en échantillons de 200 iii dans des tubes eppendorf siliconnés que l'on peut conserver à -800C ou -200C. Caractéristiaues du produit obtenu dpm = 1 067 274 560 correspondant à 0,5 mCi soit 18,5 MBq. Rendement radioactif : 10 %. Activité spécifique : (99 x 10)/30,5 = 32,5 Ci/mmol. II - Test d'identification d'inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'endothéline (ECE) 10 pl d'ECE soit 1 à 2 ssg d'ECE purifié sont pré-incubés pendant 30 minutes à 370C, dans 400 l d'un tampon de Trismaléate 50 mM pH = 6,5, 20 pl de chlorure de sodium 5M et 5 Al de produit P dont on veut tester l'activité inhibitrice, en solution à différentes concentrations comprises entre 1 AM et 100 mM (soit des concentrations finales en produit P entre 10 nM et 1 mM). La réaction est initiée par addition de 10 l de ((2,3) 3H) -propionyl-b-ET-i(19-35) préparé comme indiqué cidessus en I, à la concentration finale de 1,8.10 12M. Après une heure d'incubation à 37 0C, la réaction est arrêtée par addition de 600 pl d'acétate d'éthyle et le ((2,3) 3H) -propionyl-b-ET-i(19-21) est extrait par agitation mécanique pendant 2 minutes. On prélève 300 ssl de la phase organique et ajoute 5 ml de liquide scintillant et compte la radioactivité pendant 1 minute au compteur à scintillation liquide. Chaque mesure est réalisée en triplicate excepté pour le témoin d'ECE (témoin enzyme, sans produit dont on veut tester l'activité inhibitrice de l'ECE), pour lequel la mesure est réalisée en sextuplet. le pourcentage d'inhibition est calculé en faisant le rapport : produit testé - blanc témoin enzyme - blanc Le blanc est effectué à partir de la solution obtenue sans enzyme. Le tableau ci-après donne les résultats obtenus en utilisant comme produits P des inhibiteurs connus soit P1 qui est le phosphoramidon et P2 qui est le N-(phényléthylphosphonyl)-Leu-Trp (TAKEDA), dont on veut tester les activités inhibitrices de l'ECE. A partir de ce tableau et par tracé du graphique du pourcentage d'inhibition par rapport à la concentration en inhibiteur (nM), on calcule la CI50 qui correspond donc à la concentration provoquant une inhibition de 50 9s de 1'ECE. La constante d'inhibition (KI) d'un produit peut être obtenue par utilisation de la valeur de la constante de Michaelis KM qui est égale à 12,8 MM pour le substrat Ia ou X = (2,3) 3H-propionyle. Les résultats chiffrés obtenus sont indiqués dans le tableau ci-dessous cpm Inhibition (moyenne de triplicate) Blanc substrat 614 t 33 Témoin enzyme 3824 t 47 O (sextuplet) P1 : 1000 nM 636 99,3 100 nN 928 90,2 50 nN 1288 79 10 nN 1813 62,6 5 nN 2682 35,5 1 nN 3002 25,6 P2 : 1000 nN 672 98,2 100 nN 965 89,1 50 nN 1312 78,3 10 nM 2142 52,4 5 nK 2477 42 1 nM 3300 16,3 Conclusion : le présent test permet donc d'identifier des inhibiteurs de l'ECE car les résultats obtenus confirment l'activité des produits connus P1 et P2. REVENDICATIONQ 1) Produits de formule (I) Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Z4-Z5-Z6-COOH dans laquelle X représente un radical hydrocarboné comportant au moins un atome radioactif, Z1, Z2, Z4, Z5 et Z6 identiques ou différents représentent des acides aminés et Z3 représente soit l'acide aminé Asn, soit la paranitro-Phe. 2) Produits de formule (I) telle que définie à la revendication 1 dans laquelle X représente un radical hydrocarboné comportant au moins un atome radioactif, Z1 et Z2 sont tels que soit Z1 et Z2 représentent une simple liaison, soit Z1 représente une simple liaison et Z2 représente l'acide aminé Asp, soit Z1 et Z2 représentent respectivement les acides aminés Leu et Asp, Z3 représente soit l'acide aminé Asn, soit la paranitro-Phe, et Z4, Z5 et Z6 sont tels que soit Z4, Z5 et Z6 représentent une simple liaison, soit Z5 et Z6 représentent une simple liaison et Z4 représente l'acide aminé Pro, soit Z6 représente une simple liaison et Z4 et Z5 représentent respectivement les acides aminés Pro et Arg, soit Z4, Z5 et Z6 représentent respectivement les acides aminés Pro, Arg et Ser. 3) Produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 et 2, répondant à la formule (IA) Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-COOH dans laquelle X représente un radical hydrocarboné comportant au moins un atome radioactif. 4) Produits de formule (I) telle que définie à l'une des revendications 1 à 3 dans laquelle le radical X comporte au moins un atome de tritium. 5) Produits de formule (I) selon l'une des revendications 1 à 4 dans laquelle représente le radical (2,3) 3H-propionyle. 6) Procédé de préparation des produits de formule (I), telle que définie à l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'on soumet un produit de formule (III) Z1-Z2-Ile-Ile-Trp-Val-Z3-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Z4-Z5-Z6-cOOH (III) dans laquelle Z1, Z2, Z3, Z4, Z5 et Z6 ont les significations indiquées à la revendication 1, à une réaction d'acylation par un dérivé réactif de l'acide carboxylique de formule X-COOH dans laquelle X a la signification indiquée à la revendication 1. 7) Utilisation d'un produit de formule (I), telle que définie à l'une des revendications 1 à 5 pour l'identification des inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'endothéline. 8) Utilisation selon la revendication 7 d'un produit radioactif de formule (I) selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'on met en contact l'enzyme de conversion de I'endothéline, un produit P dont on veut déterminer l'activité inhibitrice de l'enzyme de conversion de l'endothéline, et le produit de formule (I) telle que définie ci-dessus ; et après incubation, l'on arrête la réaction de clivage, extrait sélectivement le produit formé de formule (Il) dans laquelle X, Z1 et Z2 ont les significations indiquées à la revendication 1, et détermine par comptage l'activité inhibitrice du produit P à tester. 9) Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que le produit solvant utilisé pour arrêter la réaction de clivage et extraire sélectivement le produit de formule (II), telle que définie à la revendication 8 est l'acétate d'éthyle. 10) Utilisation selon l'une des revendications 8 ou 9, caractérisée en ce que l'on utilise un produit de formule (I) telle que définie à l'une des revendications 1 à 5 dans laquelle représente de préférence un radical 3H-propionyle et notamment (2,3) 3H-propionyle. 11) Test d'identification d'inhibiteurs de l'enzyme de conversion de ltendothéline, caractérisé en ce que ce test comprend un produit de formule (I) telle que définie à l'une des revendications 1 à 5. 12) A titre de produits industriels nouveaux - les produits de formule (III) Z1-Z2-Ile-Ile-Trp-Val-Z3-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Z4-Z5-Z6-COOH (III) - les produits de formule (II) parmi lesquels de préférence le produit de formule (II) dans lequel représente le radical (2,3)- 3H-propionyle, dans lesquelles formules, Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6 et X ont les significations indiquées à l'une des revendications 1 à 5.