Brevet FR2747041A1 — publié le 19971010

La présente invention concerne l'utilisation des composés répondant à la formule I donnée ci-après et de leurs sels, pour la fabrication de médicaments destinés au traitement des neuropathies périphériques et des maladies neurodégénératives centrales, dans laquelle R1 représente un groupe -CORS ou CH2OH, R6 représente un radical ou un radical -OR,, R, représentant un atome d'hydrogène, un radical alkyle ayant de 1 à 20 atomes de carbone, un radical monohydroxyalkyle, ou un radical polyhydroxyalkyle, r' et r" représentant un atome d'hydrogène, un radical alkyle inférieur, un radical mono ou polydroxyalkyle, un radical aryle éventuellement substitué ou un reste d'amino-acide ou de sucre aminé ou encore pris ensemble forment un hétérocycle, -R2 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle, ramifié ou non, ayant de I à 15 atomes de carbone, un radical alcoxy ayant de 1 à 4 atomes de carbone, ou un radical cycloaliphatique, - R3 représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical alkyle, ramifié ou non, ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un radical alcoxy ayant de I à 10 atomes de carbone, un radical cycloaliphatique substitué ou non, un radical thio-cycloaliphatique ou un radical de formule -OSi(CH3) -R?, R? représentant un radical alkyle inférieur linéaire ou ramifié, - Rq et R5, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène,un radical alkyle inférieur, un radical hydroxyle ou un radical acyloxy inférieur. L'étude des composés (I) dans plusieurs tests de mesure de l'activité neurotrophe a été effectuée. Effets des composés sur la production de NGF par des astrocytes en culture Les cultures primaires d'astrocytes sont préparées à partir de cortex cérébral de rats nouveau-nés de 1 à 2 jours. Après dissection, les cortex sont dissociés mécaniquement par un passage au travers d'un nylon Blutex (maille de 83 AM). Les cellules sont cultivées dans un milieu DMEM/F12 (Gibco, Brl 1:1) contenant 10 % de sérum de veau foetal, 2,5 mM de Lglutamine, 100 U/ml de penicilline et 100 rug/ml de streptomycine (1 cortex pour 30 ml) dans des boîtes Corning 12 puits à raison de 1 ml de préparation cellulaire par puits. Les boîtes sont placées à 37 OC dans un incubateur saturé à 5 % de CC2, le milieu est remplacé tous les trois jours et les cultures sont utilisées le 7ème jour de culture (80-90 % de confluence.). Les traitements avec les différents composés sont alors réalisés avec 500 pi par puits de milieu décrit ci-dessus pendant 40 h. A la fin du traitement, le NGF, sécrété dans le milieu, est dosé par dosage immunoenzymatique et le taux des protéines membranaires est évalué par la technique de Bradford à l'aide du bleu de coomassie. Dosage du NGF Les taux de NGF sont évalués par une technique immunoenzymatique. Des plaques de 96 puits sont traitées 2h à 37 "C par un anticorps monoclonal anti-NGF (0,67 ,ug/ml) solubilisé dans du tampon Na2C03 50 mM à pH 9,6. Les plaques vidées sont ensuite incubées 1 h à température de la pièce avec 1 % de sérum albumine bovine solubilisée dans le même tampon, et lavées avec un tampon Tris-HCl 50 mM (pH 7,0) contenant 200 mM de NaCl, 10 mM de Cal2, 0,1 E de Triton X100 et 0,05 % de NaN3 (Tampon A). Le milieu des astrocytes dilué au 9/10ème dans un tampon d'extraction (50 mM Tris-HCl, pH 7, 200 mM NaCl, 1 % de BSA, 0,1 i de Triton X-100, 4 ug/ml aprotinin, 2 mM EDTA, 0,1 mM benzethonium chloride et 0,05 % NaN3) et les standards de NGF (gamme de 10 à 320 pg/ml) sont alors ajoutés en duplicata (0,1 ml/puits). Les plaques sont incubées environ 16 h à 4 "C. Après un lavage avec le tampon A, les plaques sont incubées 4 h à 37 "C avec un deuxième anticorps monoclonal anti-NGF couplé à la ss-galactosidase (0,13-0,15 U/ml). Après lavage avec le tampon A, les plaques sont incubées de 2 à 3 h à 37"C avec le substrat de la :- galactosidase, le chlorophénol rouge-ss-D-galactopyranoside (2 mg/ml), préparé dans 10 mM d'HEPES (pH 7,0) contenant 150 mM NaCi, 2 mM MgCl2, 0,1 % de NaN3 et 1 % de BSA. Le produit de la réaction est mesuré à 570 nM par un lecteur de plaque Bio Kinetics Reader EL 340. Résultats Les composés de l'invention augmentent la production de NGF. A la concentration de 100 nM, les composés de l'invention les plus actifs augmentent la production de NGF jusqu'à plus de 70! par rapport aux témoins. Effets des composés sur la neuritogenèse et la croissance neuritique de ganglions de la racine dorsale Les ganglions de la racine dorsale (DRG) sont prélevés sur des foetus de rat âgés de 14 jours. Les prélèvements sont effectués à 3 niveaux différents de la moelle (cervical, thoracique et sacré) . Les DRG sont cultivés pendant 24 h dans un milieu DMEM (Gibco, Brl) contenant 5 i de sérum de veau foetal, 100 U/ml de pénicilline et 100 ug/ml de streptomycine, plus ou moins le composé à étudier dans un incubateur saturé à 5 t de CO2 Le milieu est ensuite remplacé par un milieu identique dépourvu de sérum de veau foetal et contenant 1 AM de cytosine arabinoside (SIGMA) pour inhiber la prolifération des cellules non neuronales. Les effets des composés sur la neuritogenèse et la croissance neuritique sont évalués 48 h après la mise en culture par une technique morphométrique à l'aide d'un système d'analyse d'images BIOCOM. Résultats Plusieurs composés de l'invention augmentent la neuritogenèse d'explants de ganglions de la racine dorsale de plus de 100 % par rapport aux témoins, à la concentration de 100 nM. Les résultats montrent que les composés de l'invention présentent une activité neurotrophe qui peut trouver une application pour le traitement des neuropathies périphériques de type traumatique, ischémique, métabolique, infectieux, alcoolique, iatrogénique ou génétique, et dans le traitement des maladies affectant les motoneurones, comme la sclérose latérale amyotrophique et les amyotrophies spinales. Ils peuvent aussi être utilisés pour la préparation de médicaments utiles dans le traitement des rétinopathies, de la sénilité cérébrale, de la démence consécutive aux infarctus multiples, de la démence vasculaire, de la sclérose en plaques, dans le traitement de l'atrophie olivo-pontocérébelleuse et d'autres maladies neuro-dégénératives, par exemple la maladie d'Alzheimer, la maladie de Pick ou la chorée de Huntington. Les composés de l'invention peuvent aussi trouver une application dans la prévention de la mort neuronale faisant suite à un accident cérébro-vasculaire ou à un traumatisme médullaire ou crânien. Les composés les plus actifs répondent à la formule suivante dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical alkyle ramifié ou non ayant de 1 à 4 atomes de carbone ou un radical alcoxy de 1 à 4 atomes carbone. L'acide 6-[3-(1-adamantyl)-4-méthoxyphényl]-2-naphtoïque, ses esters (en particulier l'ester méthylique) et ses amides sont les composés préférés. Les composés peuvent être présentés sous toutes formes pharmaceutiques adaptées à l'administration entérale, parentérale ou locale, en association avec des excipients appropriés, par exemple sous forme de comprimés, dragées, gélules, capsules, suppositoires, patches, solutions ou suspensions buvables ou injectables. L'administration journalière peut varier de 0,01 à 100 mg de principe actif. Revendications 1. Utilisation des composés répondant à la formule I et de leurs sels, formule dans laquelle R1 représente un groupe -CORS ou un groupe -CH2OH, R6 représente un radical ou un radical -OR7, R7 représentant un atome d'hydrogène, un radical alkyle ayant de 1 à 20 atomes de carbone, un radical monohydroxyalkyle, ouun radical polyhydroxyalkyle, r' et r" représentant un atome d'hydrogène, un radical alkyle inférieur, un radical mono ou polydroxyalkyle, un radical aryle éventuellement substitué ou un reste d'amino-acide ou de sucre aminé ou encore pris ensemble forment un hétérocycle, -R2 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle, ramifié ou non, ayant de 1 à 15 atomes de carbone, un radical alcoxy ayant de 1 à 4 atomes de carbone, ou un radical cycloaliphatique, - R3 représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical alkyle, ramifié ou non, ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un radical alcoxy ayant de 1 à 10 atomes de carbone,un radical cycloaliphatique substitué ou non, un radical thio-cycloaliphatique ou un radical de fornule -O Si(CH3)2-R8, R8 représentant un radical alkyle inférieur linéaire ou ramifié, - Rq et R5, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène,un radical alkyle inférieur, un radical hydroxyle ou un radical acyloxy inférieur, pour la fabrication de médicaments utiles dans le traitement des neuropathies périphériques et des maladies neurodégénératives centrales. 2. Utilisation des composés répondant à la formule dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical alkyle ramifié ou non ayant de 1 à 4 atomes de carbone ou un radical alcoxy de 1 à 4 atomes carbone, pour la fabrication de médicaments utiles dans le traitement des neuropathies périphériques et des maladies neurodégénératives centrales. 3. Utilisation de l'acide 6-[3-1-adamantyl)-4-méthoxyphényl]- 2-naphtoique, de ses esters et/ou de ses amides pour la fabrication de médicaments utiles dans le traitement des neuropathies périphériques et des maladies neurodégénératives centrales. 4. Utilisation de l'ester méthylique de l'acide 6-[3-1adamantyl)-4-méthoxyphényl]-2-naphtoïque pour la fabrication de médicaments utiles dans le traitement des neuropathies périphériques et des maladies neurodégénératives centrales.