Brevet FR2746016A1 — publié le 19970919

La présente invention concerne le domaine de la thérapie génique et cellulaire. Elle concerne en particulier des combinaisons d'enzymes, utilisables pour la destruction de cellules, notamment de cellules prolifératives. Elle concerne Ègalement des vecteurs permettant le transfert et l'expression intracellulaire de ces combinaisons d'enzymes, ainsi que leur utilisation thérapeutique, en particulier en thérapie génique anti-cancéreuse. La thérapie génique, qui consiste à introduire dans un organisme ou une cellule une information génétique, a connu ces dernières années un développement extraordinaire. L'identification de gènes impliqués dans des pathologies, la mise au point de vecteurs d'administration de gènes, le developpement de systèmes d'expression controles ou tissu-spécifiques notamment ont contribué au developpement de ces nouvelles approches thérapeutiques. Ainsi, au cours des 5 dernières années, de nombreux éssais cliniques de thérapie génique ou cellulaire ont été entrepris en Europe comme aux Etats-Unis, dans des domaines tels que les maladies monogéniques (hémophilie, mucoviscidose), le cancer, les pathologies cardiovasculaires ou encore les troubles du système nerveux. Dans le domaine des pathologies liées à une hyperproliferation cellulaire (cancer, resténose, etc), différentes approches ont été developpées. Certaines reposent sur l'utilisation de genes suppresseur de tumeurs (p53, Rb), d'autres sur l'emploi d'antisens diriges contre des oncogenes (myc, Ras), d'autres encore sur l'immunotherapie (administration d'antigenes tumoraux ou de cellules immunitaires specifiques, etc). Une autre approche consiste a introduire dans les cellules concernées un gene toxique ou suicide capable d'induire la destruction des dites cellules. De tels genes sont par exemple des genes susceptibles de sensibiliser les cellules a un agent pharmaceutique. Il s'agit genéralement de gènes codant pour des enzymes non mammifères et non toxiques qui, lorsqu'ils sont exprimés dans des cellules de mammifères, transforment une prodrogue, initialement peu ou pas toxique, en un agent hautement toxique. Un tel mécanisme d'activation de prodrogues est avantageux à plusieurs titres: il permet d'optimiser l'indice thérapeutique en ajustant la concentration en prodrogue ou l'expression de l'enzyme, d'interrompre la toxicité en n'administrant plus la prodrogue et d'évaluer le taux de mortalité. En outre, I'utilisation de ces genes suicide offre l'avantage de ne pas etre specifique pour un type particulier de tumeur, mais d'application generale. Ainsi, les strategies basées sur l'utilisation de genes suppresseurs de tumeurs ou d'antisens antioncogene sont applicables uniquement aux tumeurs presentant une deficience dans ledit gene suppresseur ou une surexpression dudit oncogene. De meme, les approches basées sur l'immunotherapie doivent etre developpes patient par patient, pour tenir compte des restrictions et des competences immunitaires. Au contraire, une strategie basée sur l'emploi d'un gene suicide est applicable a tout type de tumeur, et, plus generalement, a pratiquement tout type de cellule. De nombreux gènes suicides sont décrits dans la littérature comme par exemple les gènes codant pour la cytosine désaminase, la purine nucléoside phophorylase ou la thymidine kinase comme par exemple les thymidines kinases du virus de la varicelle ou du virus de l'herpès simplex de type 1. La cytosine désaminase de Escherichia coli est capable de catalyser la désamination de la cytosine en uracile. Les cellules qui expriment le gène de E. coli sont donc capables de convertir la ifluorocytosine en ifluorouraale, qui est un métabolite toxique (Mullen et coll. 1992 Proc. Natl. Acad. USA 89 p33). La purine nucléoside phophorylase de Escherichia coli permet la conversion d'analogues non toxiques de déoxyadénosine en analogues d'adénine très toxiques. Comme l'enzyme eucaryote ne présente pas cette activité, si les cellules mammifères expriment le gène bactérien les analogues de déoxyadénine tels que le 6-méthyle-purine-2'-déoxyribo-nucléoside est transformé en produit toxique pour ces cellules (Sorscher et coll. 1994 Gene Therapy 1 p233). La thymidine kinase du virus de la varicelle permet la monophosphorylation du Sméthoxypurine arabinoside. Si les cellules mammifères expriment ce gène viral, ce monophosphate est produit puis métabolisé par les enzymes cellulaires en un composé toxique (Huber et coll. 1991 Proc. Natl. Acad. USA 88 p8039). Parmi ces gènes, le gène codant pour la thymidine kinase (TK) est tout particulièrement intéressant sur le plan thérapeutique car, à la différence des autres gènes suicides, il gènère une enzyme capable d'éliminer spécifiquement les cellules en cours de division, puisque la prodrogue est transformée en un produit non diffusible qui inhibe la synthese d'ADN. La thymidine kinase virale, et notamment les thymidines kinases du virus de la varicelle ou du virus de l'herpès simplex de type 1 ont une spécificité de substrat différente de l'enzyme cellulaire, et il a été montré qu'elles etaient la cible d'analogues de guanosine tels que l'acyclovir ou le ganddovir (Moolten 1986 Cancer Res. 46 p5276). Ainsi, le ganddovir est phosphorylé en ganddovir monophosphate uniquement quand les cellules mammifères produisent l'enzyme HSV1-TK, puis des kinases cellulaires permettent la métabolisation du gandelovir monophosphate en diphosphate puis triphosphate qui provoque l'arrêt de la synthèse d'ADN et conduit à la mort de la cellule (Moolten 1986 Cancer Res. 46 p5276; Mullen 1994 Pharmac. Ther. 63 p199). Le meme mecanisme se produit avec d'autres thymidine kinases et d'autres analogues de guanosine. Par ailleurs, un effet de toxicite propagée (effet "by-stander") a été observe lors de l'utilisation de la TK. Cet effet se manifeste par la destruction non seulement des cellules ayant incorpore le gene TK, mais egalement des cellules avoisinnantes. Le mécanisme de ce processus peut s'expliquer de trois façons: i) la formation de vésicules apoptotiques qui contiennent du ganciclovir phosphorylé ou la thymidine kinase, provenant des cellules mortes, puis la phagocytose de ces vésicules par les cellules voisines; ii) le passage de prodrogue métabolisée par la thymidine kinase, par un processus de coopération métabolique des cellules contenant le gène suicide vers les cellules ne le contenant pas et/ou iii) une réponse immunitaire liée à la régression de la tumeur (Marini et coll. 1995 Gene Therapy 2 p655). Pour l'Homme de l'art, l'utilisation du gène suicide codant pour la thymidine kinase du virus de l'herpès est très largement documentée. En particulier, les premières études in vivo sur des rats ayant un gliome montrent des régressions de tumeur lorsque le gène HSV1-TK est exprimé et que des doses de 150 mg/kg de gancidovir sont injectées [K. Culver et coll. 1992 Science 256 p1550]. Toutefois, ces doses sont hautement toxiques chez la souris [T. Osaki et coll. 1994 Cancer Research 54 p5258] et donc totalement proscrites en thérapie génique chez l'Homme. Un certain nombre d'essais therapeutiques sont egalement en cours chez l'homme, dans lesquels le gene TK est delivre aux cellules au moyen de dîfferents vecteurs tels que notamment des vecteur retroviraux ou adenoviraux. Dans les essais diniques de thérapie génique chez l'Homme, ce sont des doses beaucoup plus faibles qui doivent être administrées, de l'ordre de 5 mg/kg et pour une durée du traitement courte (14 jours) (E. Oldfield et coll. 1995 Human Gene Therapy 6 p55). Pour des doses plus élevées ou des traitements plus prolongés dans le temps, des effets secondaires indésirables de toxidte sont en effet observes. Pour remedier a ces inconvenients, il a été propose de synthetiser des derives de la thymidine kinase plus specifiques ou plus actifs pour phosphoryler les analogues de guanosine. Ainsi ont été décrits des dérivés obtenus par mutagénèse dirigée. Toutefois, aucune caractérisation biochimique précise sur les enzymes pures n'a été réalisée, aucun test cellulaire utilisant ces mutants n'a été publié et aucune amelioration fonctionnelle n'a été rapportée (W095/30007; Black et coll., 1993 Biochemistry 32 pi 1618). En outre, l'expression inductible d'un gène HSV1-TK, délété de ses 45 premiers codons, a été réalisée dans des cellules eucaryotes mais les doses en prodrogue utilisées demeurent comparables à celles décrites dans tous les essais de la littérature (B. Salomon et coîl. 1995 Mol. Cell. Biol. 15 p5322). En conséquence, aucun des variants décrits jusqu'ici ne présente une activité améliorée à l'égard de la thymidine ou vis à vis du ganciclovir. La presente invention propose une methode ameliorée de thérapie génique par gène suicide. La presente invention decrit en particulier une methode permettant d'ameliorer l'efficacite de phosphorylation des analogues de guanosine par les thymidine kinase et ainsi, d'ameliorer le potentiel therapeutique de ce traitement. La présente invention propose notamment une méthode pour triphosphoryler des analogues de nudéosides tels que le ganddovir ou l'acydovir pour que la triphosphorylation de ces analogues soit très significativement augmentée à des doses de ganddovir (resp. acydovir) i) significativement plus faibles; ii) ou susceptibles de provoquer un effet "bystander" plus prononcé; iii) ou bien ne conduisant pas à une toxicité cellulaire qui pourrait se produire lorsque la thymidine kinase sauvage est surexprimée. Cette methode peut etre appliquée au cancer, aux maladies cardiovasculaires, ou à toute application nécessitant la mort de certaines cellules telles que des cellules infectées par un virus; ce virus peut être un virus de type VIH (virus d'immunodéficience humain), CMV (cytomegalovirus) VCR (virus respiratoire syncytial). La presente invention repose en particulier sur l'utilisation d'une combinaison d'enzymes, permettant d'ameliorer in vivo la reaction de phosphorylation des analogues de nudeosides. Un premier objet de l'invention reside donc dans une composition comprenant: - une enzyme capable de phosphoryler un analogue de nucleoside, pour generer un analogue monophosphate, - une enzyme capable de phosphoryler ledit analogue monophosphate, pour generer un analogue diphosphate, et, - une enzyme capable de phosphoryler ledit analogue diphosphate, pour generer un analogue triphosphate toxique. Plus particulierement, l'enzyme capable de phosphoryler un analogue de nudeoside, pour generer un analogue monophosphate est une thymidine kinase, l'enzyme capable de phosphoryler ledit analogue monophosphate, pour generer un analogue diphosphate est une guanylate kinase et l'enzyme capable de phosphoryler ledit analogue diphosphate pour generer un analogue triphosphate est une nucléoside diphosphate kinase. Par ailleurs, les compositions selon l'invention peuvent comprendre, non pas directement l'enzyme, mais un acide nucleique codant pour l'enzyme. A cet egard, l'invention a egalement pour objet une composition utilisable pour la delivrance et la production in vivo d'une combinaison d'enzymes, comprenant: un premier acide nudeique codant pour une enzyme capable de phosphoryler un analogue de nudeoside, pour generer un analogue monophosphate, - un deuxieme acide nudeique codant pour une enzyme capable de phosphoryler ledit analogue monophosphate, pour generer un analogue diphosphate, et, - un troisieme acide nudeique codant pour une enzyme capable de phosphoryler ledit analogue diphosphate, pour generer un analogue triphosphate toxique. Avantageusement, le premier acide nucleique code pour une thymidine kinase, le deuxieme acide nudeique code pour une guanylate kinase et le troisieme acide nudeique code pour une nudéoside diphosphate kinase. L'analogue de nucléoside est generalement un analogue de guanosine, tel que par exemple le ganadovir, l'acydovir ou le penddovir. D'autres analogues de nucleosides sont par exemple des composés de type trifluorothymidine, 1-[2deoxy, 2-fluoro, beta-D-arabino furanosyl]-Siodouraol, ara-A, 1-beta-Darabinofuranosyl thymidine (araT), Séthyl-2'déoxyuridine, iodouridine, AZT, AIU, didéoxycytidine, AraC et le bromovinyldésoxyuridine (BVDU). Les analogues preferes sont le ganddovir, l'acyclovir, le penddovir et le BVDU, de preference le ganddovir et l'acyclovir. La forme triphosphatée est toxique en ce sens qu'elle entraine, directement ou indirectement, la mort cellulaire. Lorsque les cellules de mammifères, modifiées pour exprimer la thymidine kinase (HSV1-TK par exemple), sont mises en presence d'un analogue de nucleoside (ganoclovir par exemple), elles deviennent capables d'effectuer la phosphorylation du ganciclovir pour conduire au ganciclovir monophosphate. Ultérieurement, des kinases cellulaires permettent la métabolisation de ce ganddovir monophosphate sucessivement en diphosphate puis triphosphate. Le ganddovir triphosphate ainsi généré, produit alors des effets toxiques en s'incorporant à l'ADN et inhibe en partie l'ADN polymérase alpha cellulaire ce qui provoque l'arrêt de la synthèse d'ADN et donc conduit à la mort de la cellule. Dans ce mecanisme, l'etape de monophosphorylation de l'analogue de nucleoside est considerée comme l'etape limitante. C'est pour cette raison que differentes approches ont été decrites dans l'art anterieur pour tenter d'ameliorer les proprietes intrinseques de la thymidine kinase (creation de mutants de la TK, recherche de systemes d'expression et d'administration plus performants, etc). La presente invention montre maintenant qu'il est possible d'ameliorer l'efficadte du traitement en administrant, en combinaison avec une thymidine kinase, d'autres enzymes impliquées dans la phosphorylation des analogues de nudeosides. La presente invention a ainsi pour objet differentes combinaisons d'enzymes permettant d'optimiser la reaction intracellulaire de triphosphorylation d'analogues de nudeosides. Un autre aspect de la presente invention concerne des vecteurs permettant l'introduction et l'expression intracellulaire de ces combinaisons d'enzymes. Il peut s'agir en particulier de plusieurs vecteurs permettant chacun la production d'une enzyme, ou d'un ou plusieurs vecteurs permettant chacun la production de plusieurs enzymes ou de toutes les enzymes. La presente invention concerne egalement un procede de triphosphorylation d'analogues de nudeosides en presence d'une combinaison d'enzymes, eventuellement produites in situ par expression de genes correspondants, ainsi qu'un procede pour la destruction de cellules proliferatives. La phosphorylation des nudéosides monophosphates en nudéosides diphosphates puis triphosphates a été documentée in vitro. Ces phosphorylations sont effectuées en présence i) de lysat d'érythrocytes humains dans le cas du ganddovir (Cheng et coll. 1983 J. Biol. Chem. 258 pal2460) ou ii) de préparations enzymatiques de la guanylate kinase et de la nucléoside diphosphate kinase d'érythrocytes humains, dans le cas du ganddovir et de l'acydovir (Miller et coll. 1980 J. Biol. Chem. 255 p720 ; Smée et coll. 1985 Biochem. Pharmac. 34 plu49). Bien que la phosphorylation des nucléosides monophosphates en diphosphates puis triphosphates ait été mise en évidence dans les cellules mammifères, ces conversions ne semblent pas totales avec le ganddovir monophosphate ou l'acydovir monophosphate (Agbaria et coll. 1994 Mol. Pharmacol. 45 p777; Caruso et coll. 1995 Virology 206 p495; Salomon et tell. 1995 Mol. Cell. Biol. 15 p5322). La presente demande décrit maintenant des compositions permettant d'ameliorer l'efficacite therapeutique d'un thymidine kinase in vivo. La premiere enzyme utilisée dans les compositions et methodes selon l'invention, capable de phosphoryler un analogue de nudeoside pour generer un analogue monophosphate, est avantageusement une thymidine kinase non mammifere. Il s'agit preferentiellement d'une thymidine kinase d'origine virale, et en particulier herpetique. Parmi les thymidine kinases herpetiques on peut mentionner notamment la thymidine kinase du virus de I'herpes simplex de type 1 (HSV1-TK), la thymidine kinase du virus de l'herpes simplex de type 2 (HSV2-TK), la thymidine kinase du virus de la varicelle (VZV-TK), la thymidine kinase du virus d'Eppstein Barr (EBV-TK), ou encore la thymidine kinase de virus herpetiques d'origine bovine (Mittal et al., J. Virol 70 (1989) 2901), equine Robertson et al., NAR 16 (1988) 11303), feline (Nunberg et al., J.Virol. 63 (1989) 3240) ou simienne (Otsuka et al., Virology 135 (1984) 316). La séquence du gène codant pour l'enzyme thymidine kinase du virus de l'herpès simplex de type 1 a été décrite dans la littérature (voir notamment McKnight 1980 Nucl. Acids Res. 8 p5931). Il en existe des variants naturels conduisant à des protéines ayant une activité enzymatique comparable sur la thymidine, ou le ganddovir (M. Michael et coll. 1995 Biochem. Biophys. Res. Commun 209 p966). La séquence du gène codant pour l'enzyme thymidine kinase du virus de l'herpès simplex de type 2 a egalement été décrite (Swain et al., J. Virol. 46 (1983) 1045). La thymidine kinase utilisée dans la presente invention peut etre une thymidine kinase native (la forme naturelle de l'enzyme ou un de ses variants naturels), ou une forme derivée, c'est a dire resultant de modification(s) structurale(s) de la forme native. Comme indique d-avant, differents mutants ou derives ont été décrits dans la litterature. Bien que leurs proprietes intrinseques ne semblent pas significativement modifiées, ces molecules peuvent etre utilisées dans le cadre de la presente invention. Il s'agit par exemple de mutants possedant une modification proche de la region DRH du site d'interaction d'un nucleoside (W095/30007). La region DRH correspond aux residus aspartique, arginine et histidine aux positions 163, 164 et 165 de la TK. Ces trois positions sont tres conservées entre les TK herpetiques. Differents mutants ont été decrits sur les positions 16S162 et 16S170 (W095/30007). D'autres variant artificiels possedent une modification au niveau du site de liaison de l'ATP (FR96 01603). Par ailleurs, d'autres derives de TK peuvent etre prepares selon les techniques classiques de la biologie moleculaire, et utilises dans les combinaisons de l'invention. Ces mutants peuvent etre prepares par exemple par mutagenese sur un acide nucleique codant pour une thymidine kinase native, de preferenoe herpetique, ou un de ses variants. De nombreuses méthodes permettant de réaliser la mutagénèse dirigée ou au hasard sont connues de l'homme de l'art et on peut citer la mutagénèse dirigée par PCR ou par oligonucléotide, la mutagénèse au hasard in vitro par des agents chimiques comme par exemple l'hydroylamine ou in vivo dans des souches de E. coli mutatrices (Miller "A short course in bacterial genetics", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1992). Les sequences ainsi mutées sont alors exprimées dans un systeme cellulaire ou acellulaire et le produit d'expression est teste pour la presence d'une activite de type thymidine kinase, dans les conditions decrites notamment dans les exemples. Toute enzyme resultant de ce procede, ayant la capacite de phosphoryler un analogue de nucleoside, pour generer un analogue monophosphate, peut etre utilisée dans la presente invention. Preferentiellement, on utilise dans le cadre de la presente invention une TK issue de la thymidine kinase du virus de l'herpes simplex de type 1 (HSV1- TK) ou un acide nudeique codant correspondant Il s'agit plus particulierement de la HSV1-TK ou un de ses variants, tels que les variants naturels ou les variants artificiels. Parmi les variants artificiels, on peut citer plus particulierement les variants P155A/F161V et F161I (Biochemistry 32 (1993) p.11618), le variant A168S (Prot. Engin. 7 (1994) p.83) ou les variants possedant une modification au niveau du site de liaison de l'ATP tel que le variant M60I. Encore plus preferentiellement, on utilise un acide nucleique codant pour la thymidine kinase du virus de l'herpes simplex de type 1 (HSV1-TK). La deuxieme enzyme utilisée dans les compositions et methodes selon l'invention, capable de phosphoryler un analogue de nucleoside monophosphate pour generer un analogue diphosphate, est avantageusement une guanylate kinase. La guanylate kinase (GMPK) a été purifiée a partir de différents organismes (homme, rat, boeuf, levure). Le gène codant pour la GMPK a été donné egalement dans differents types cellulaires, et notamment dans la levure Saccharomyces cerevisae gène GUK1 (M. Konrad 1992 J. Biol. Chem. 267 p25652). A partir de ce gene, l'enzyme GMPK de 20 kDa a egalement été purifiée. Le gene de la GMPK, designe , a egalement été isolé et surexprimé chez Escherichia coli (D. Gentry et coll. 1993 J. Biol. Chem. 268 p14316). Cette enzyme est différente de l'enzyme de S. cerevisae en terme de coopérativité et d'oligomérisation, alors que les séquences présentent de fortes régions d'identité 46,2% sur 182 résidus. La séquence A11042, identifiée comme codant pour un facteur ayant une activité de potentialité de croissance de cellules hématopoéitiques (EP0274560), présente 51,9% d'identité sur 180 résidus avec le gène GUK1 de S. cerevisae. et semble constituer l'homologue humain de la GMPK, bien qu'aucune donnée biochimique n'ait été publiée. La troisieme enzyme utilisée dans les compositions et methodes selon l'invention, capable de phosphoryler un analogue de nucleoside diphosphate pour generer un analogue triphosphate, est avantageusement une nucléoside diphosphate kinase. La nucléoside diphosphate kinase (NDPK) est une enzyme à large spécificité de subtrat et a été purifiée à partir de sources très variées (M. Inouye et coll. 1991 Gene 105 p31). Pour divers organismes (Myxococcus xanthus, Drosophila melanogaster, Dictyostelium discoideum, rat, boeuf, homme, E. coli et S. cerevisae) le gène codant pour la NDPK a été donné et les enzymes correspondantes sont très homologues (K. Watanabe et coll. 1993 Gene 29 p141). Néanmoins seules les enzymes des eucaryotes supérieurs possèdent une séquence "leucine zipper". Les gènes humains décrits codant pour une activité NDPK sont en particulier nm23-H1 H1 et nm23-H2. Il est suggéré que le gène nm23-H2 code pour une protéine bifonctionnelle avec deux fonctions indépendantes qui sont activité NDPK et facteur de transcription (E. Postel et coll. 1994 J. Biol. Chem. 269 p8627). Le gène YNK de S. cerevisae n'est pas un gène essentiel pour la levure et code pour la NDPK qui est probablement une protéine tétramérique dont le poids moléculaire des monomères est de 19 kDa (A. Jong et coll. 1991 Arch. Biochem. Biophys. 291 p241). Les séquences nucléiques codant pour la GMPK ou la NDPK utilisées dans le cadre de l'invention peuvent être d'origine humaine, animale, virale, synthétique ou semisynthétique. D'une manière générale, les séquences nudéiques de l'invention peuvent être préparées selon toute technique connue de l'homme du métier. A titre illustratif de ces techniques on peut notamment mentionner: - la synthèse chimique, en utilisant les séquences décrites dans la litterature et par exemple un synthétiseur d'acides nucléiques, - le criblage de banques au moyen de sondes spécifiques, notamment telles que décrites dans la litterature, ou encore - les techniques mixtes incluant la modification chimique (élongation, délétion, substitution, etc) de séquences criblées à partir de banques. Avantageusement, les séquences nucléiques utilisées dans le cadre de l'invention sont des sequences d'ADNc ou d'ADNg. Les sequences d'ADNc sont des sequences depourvues d'introns, obtenues a partir d'ARN. Les sequences d'ADNg sont des regions de chromosome. Chez les eucaryotes, elles comprennent un ou plusieurs introns. Les sequences d'ADNg utilisées dans le cadre de l'invention peuvent comprendre tout ou partie des introns presents dans le gene naturel, ou un ou plusieurs introns artificiellement introduits dans un ADNc pour augmenter par exemple l'efficacite d'expression dans les cellules mammiferes. Les acides nudeiques peuvent coder pour les enzymes natives ou pour des variants ou derives presentant une activite de meme type. Ces acides nucleiques analogues peuvent etre obtenus par les techniques dassiques de la biologie moleculaire, bien connues de l'homme du metier. Il peut s'agir de mutagenese, dirigée ou non, d'hybridation a partir de banques, de deletion ou d'insertion, de la construction de molecules hybrides, etc. Generalement, les modification portent sur moins de 20% des bases de l'acide nudeique. La fonctionnalite des acides nucleiques analogues est determinée comme décrit dans les exemples par dosage de l'activite enzymatique du produit d'expression. Une composition particuliere au sens de l'invention comprend un premier acide nudeique codant pour une thymidine kinase et un second acide nudeique codant pour une nucléoside diphosphate kinase. Dans ce mode de realisation, la nucléoside diphosphate kinase est preferentiellement d'origine eucaryote non-humaine. On entend par enzyme non-humaine une enzyme non presente naturellement dans les cellules humaines. Il peut s'agir d'une enzyme virale, animale, ou issue d'un organisme eucaryote inferieur (tel qu'une levure). Il peut egalement s'agir d'un derive non naturel d'une enzyme humaine, presentant une ou plusieurs modifications structurales. Plus preferentiellement, elle la NDPK utilisée dans la presente invention est choisie parmi la NDPK de levure ou de boeuf. Ces compositions peuvent en outre comprendre un acide nucleique codant pour une guanylate kinase, comme par exemple une guanylate kinase de levure. Une autre composition particuliere au sens de l'invention comprend un premier acide nucleique codant pour une thymidine kinase et un second acide nudeique codant pour une guanylate kinase non humaine. La GMPK nonhumaine peut etre choisie parmi les GMPK de rat, de beouf, de levure, de bacterie, ou des derives de cellesci. Preferentiellement, la GMPK est issue d'un eucaryote inferieur, notamment de levure. Selon un mode de realisation particulierement avantageux, la nudéoside diphosphate kinase utilisée dans le cadre de la presente invention est d'origine eucaryote ou animale. Encore plus preferentiellement, il s'agit d'une nudéoside di phosphate kinase de levure ou de boeuf. La demanderesse a en effet mis en évidence que, de maniere surprenante, la nucléoside diphosphate kinase de levure, et notamment de Saccharomyces cerevisae ou celle de boeuf, permettaient de phosphoryler des analogues de nudéosides diphosphates, tels que le gancidovir diphosphate ou l'acyclovir diphosphate, en nudéosides triphosphates. En outre, les resultats presentes dans les exemples montrent clairement que ces enzymes possedent sur ces substrats une activité tres superieure a l'enzyme humaine. Ainsi, en presence de 0,675 zg d'enzyme humaine, le pourcentage de GCV triphosphate obtenu est de 1,5%, alors qu'en presence de 0,75 g d'enzyme de levure, il est de 82.9%. De meme, en presence de 6,75 llg d'enzyme humaine, le pourcentage de GCV triphosphate obtenu est de 24%, alors qu'en presence de 1,5 g d'enzyme de levure, il est de 91.1% et en presence de 5 llg d'enzyme de boeuf, il est de 92 %. Les memes resultats sont obtenus avec un autre analogue de nucleoside, l'acyciovir. Ainsi, en presence de 6,75 pg d'enzyme humaine, le pourcentage d'ACV triphosphate obtenu est inferieur a 0.4%, alors qu'en presence de 1,5 zg d'enzyme de levure, il est de 8%, en presence de 15 g d'enzyme de levure, il est de 81% et en presence de 5 g d'enzyme de boeuf, il est de 1.3%. Ces resultats mettent clairement en evidence l'avantage d'utiliser, dans les combinaisons selon l'invention, une nudéoside di phosphate kinase de levure ou de boeuf. Ces resultats montrent egalement que la premiere etape de phosphorylation de l'analogue en monophosphate n'est pas forcement l'etape limitante du processus et que l'utilisation d'une combinaison d'enzymes selon l'invention permet d'augmenter le potentiel therapeutique du traitement. Par ailleurs, la demanderesse a egalement montre que la guanylate kinase de levure, et notamment de Saccharomyces cwevisae. permettait egalement de phosphoryler des analogues de nucléosides monophosphates, tels que le gancidovir monophosphate ou l'acyciovir monophosphate, en nucléosides diphosphates avec une bonne activité. Ainsi, en presence de 2,5 g d'enzyme de levure, le pourcentage de GCV diphosphate obtenu peut depasser 92% et en presence de 74 llg d'enzyme de levure, le pourcentage d'ACV diphosphate obtenu est de 54%. De plus, les resultats presentes montrent que la guanylate kinase de levure présente une vitesse de phosphorylation du GCVMP 2 fois supérieure à l'enzyme humaine. De même, son affinité pour le GCVMP est supérieure d'un facteur au moins égal à 2 à l'affinité que présente l'enzyme humaine pour ce substrat. Au total, la valeur du Vmax/Km de l'enzyme de levure pour le GCVMP est 4,4 fois supérieure à la valeur que présente l'enzyme humaine. Pour l'ACVMP, la valeur du Vmax/Km de l'enzyme de levure est 7 a 9 fois supérieure à la valeur que présente l'enzyme humaine pour ce substrats La demanderesse a aussi mis en évidence qu'un couplage de ces deux enzymes non-humaines avec une thymidine kinase, par exemple la thymidine kinase du virus de herpès de type I permettait de phosphoryler des analogues de nucdéosides tels que le gancidovir ou l'acyciovir en dérivés triphosphates, avec une efficacite tres importante. Selon un mode de realisation prefere, les compositions de l'invention comprennent des sequences codant pour la guanylate kinase (EC-2.7.4.8) et/ou la nucléoside diphosphate kinase (EC-2.7.4.6) de levure. Plus preferentiellement, il s'agit des enzymes de la levure S. cerevisae. Ces sequences sont utilisées simultanément avec une séquence (HSV1-TK) codant pour la thymidine kinase du virus de l'herpès simplex de type 1 (EC-2.7.1.21) pour permettre de triphosphoryler les analogues de nudéosides tels que le gancidovir ou l'acydovir. Comme indique ci-avant, les compositions selon l'invention peuvent comprendre une combinaison d'enzymes ou d'acides nudeiques permettant la production in vivo des enzymes. Il s'agit avantageusement d'acides nudeiques. Ce mode de mise en oeuvre est prefere puisqu'il permet une production in vivo de niveaux superieurs d'enzymes et ainsi un effet therapeutique plus important. Selon un premier mode de realisation, dans les composition de l'invention, les acides nucleiques sont portes par un meme vecteur d'expression. Ce mode de realisation est particulierement avantageux car il suffit d'introduire un seul vecteur dans une cellule mammifere pour obtenir l'effet therapeutique recherche. Dans ce mode de realisation, les dîfferents acides nudeiques peuvent constituer trois cassettes d'expression distinctes au sein du meme vecteur d'expression. Ainsi, les differents acides nudeiques peuvent chacun etre place sous le controle d'un promoteur transcriptionnel, d'un terminateur transcriptionnel et de signaux de traduction distincts. Il est egalement possible d'inserer plusieurs acides nudeiques sous forme d'un polycistron dont l'expression est dirigée par un seul promoteur et un seul terminateur transcriptionnels. Ceci peut etre realise notamment par l'utilisation de sequences IRES ("Internal Ribosome Entry Site") positionnées entre les sequences nucleiques. A cet egard, les vecteurs d'expression de l'invention peuvent comprendre une unite bicistronique dirigeant l'expression de deux acides nucleiques, et eventuellement un acide nudeique separe codant pour la troisieme enzyme. Les vecteurs de l'invention peuvent egalement comprendre une unite tricistronique dirigeant l'expression des trois acides nucleiques. Ces differents modes de realisation sont illustres dans les exemples. Des vecteurs d'expression preferes au sens de l'invention sont notamment: - Un vecteur comprenant: un premier acide nudeique codant pour une thymidine kinase, et, un deuxieme acide nudeique codant pour une guanylate kinase nonhumaine. Il s'agit preferentiellement d'une guanylate kinase de levure. - Un vecteur comprenant: un premier acide nudeique codant pour une thymidine kinase, et, un deuxieme acide nudeique codant pour une nudéoside diphosphate kinase. Il s'agit preferentiellement d'une nudéoside diphosphate kinase eucaryote non-humaine. Plus preferentielement, il s'agit d'une NDPK d'origine bovine ou levure. Avantageusement, ce vecteur comprend en outre un acide nucleique codant pour une guanylate kinase. La thymidine kinase utilisée dans les vecteurs de l'invention est avantageusement une thymidine kinase d'origine virale, notamment herpetique. Il s'agit preferentiellement d'une thymidine kinase issue de la TK du virus HSV1 ou HSV-2. Comme indique ci-avant, dans les vecteurs selon l'invention, les differents acides nucléiques peuvent etre places sous le controle de promoteurs disctincts, ou constituer une unite polycistronique sous le controle d'un promoteur unique. Selon un autre mode de realisation, dans les composition de l'invention, les acides nudeiques sont portes par plusieurs vecteurs d'expression. Comme indique ci-apres, les vecteurs d'expression peuvent etre d'origine plasmidique ou virale. S'agisant de vecteurs d'origine virale, il s'agit avantageusement de retrovirus ou d'adenovuus. Differents promoteurs peuvent etre utilises dans le cadre de l'invention. Il s'agit de sequences permettant l'expression d'un acide nucleique dans une cellule mammifere. Le promoteur est avantageusement choisi parmi les promoteurs fonctionnels dans les cellules humaines. Plus préférentiellement, il s'agit d'un promoteur permettant l'expression d'une séquence d'acide nudéique dans une cellule hyperproliférative (cancéreuse, resténose, etc). A cet égard, différents promoteurs peuvent être utilisés. Il peut s'agir par exemple du propre promoteur du gène considere (TK, GMPK, NDPK). Il peut également s'agir de régions d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Il peut ainsi s'agir de tout promoteur ou séquence dérivée stimulant ou réprimant la transcription d'un gène de façon spécifique ou non, inductible ou non, forte ou faible. On peut citer notamment les séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule cible. Parmi les promoteurs eucaryotes, on peut utiliser en particulier de promoteurs ubiquitaires (promoteur des gènes HPRT, PGK, a-actine, tubuline, DHFR etc), de promoteurs des filaments intermédiaires (promoteur des gènes GFAP, desmine, vimentine, neurofilaments, kératine, etc), de promoteurs de gènes thérapeutiques (par exemple le promoteur des gènes MDR, CFTR, Facteur VIII, ApoAI, etc), de promoteurs spécifiques de tissus (promoteur du gène pyruvate kinase, villine, protéine intestinale de liaison des acides gras, alpha-actine du muscle lisse, etc), des promoteurs cellules spécifiques de type cellules en division comme les cellules cancéreuses ou encore de promoteurs répondant à un stimulus (récepteur des hormones stéroïdes, récepteur de l'acide rétinoïque, récepteur de glucocorticoides, etc) ou dits inductibles. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus, tel que par exemple les promoteurs des gènes E1A et MLP d'adénovirus, le promoteur précoce du CMV, ou encore le promoteur du LTR du RSV, etc. En outre, ces régions promotrices peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, ou permettant une expression tissu-spécifique ou majoritaire. Un autre objet de l'invention concerne un produit comprenant une combinaison d'enzymes capables de triphosphoryler un analogue de guanosine, et ledit analogue de guanosine, en vue d'une administration simultanée, separée, ou etalée dans le temps. L'invention concerne egalement une composition pour la production in vivo d'un analogue de nucleoside triphosphate toxique comprenant, conditionnes separement ou ensemble: - un analogue de nudeoside - un acide nucleique codant pour une thymidine kinase - un acide nucleique codant pour une guanylate kinase, et, - un acide nucleique codant pour une nucléoside diphosphate kinase. L'invention a encore pour objet une composition comprenant une combinaison d'enzymes impliquées dans la phosphorylation de nucleosides, eventuellement generées in situ par expression de sequences nucleiques, l'une au moins de ces enzymes etant d'origine eucaryote non-humaine. La combinaison d'enzyme comprend notamment une TK et une NDPK; une TK et une GMPK ou une TK, une GMPK et une NDPK. La presente invention concerne encore une methode pour la destruction de cellules proliferatives comprenant l'administration auxdites cellules d'une combinaison d'enzymes comprenant une TK et une NDPK. Preferentiellement, la combinaison comprend en outre une guanylate kinase. L'invention concerne egalement une methode pour la destruction de cellules proliferatives comprenant l'administration auxdites cellules d'une combinaison d'enzymes comprenant une TK et une GMPK. Selon cette methode, les cellules sont mises en contact avec un analogue de nucleoside, de preference un analogue de guanosine, qui est converti dans les cellules exprimant la combinaison d'enzymes en un compose toxique. Selon l'invention, les enzymes peuvent etre administrées aux cellules par administration d'acides nucleiques codant pour lesdites enzymes. L'invention reside egalement dans l'utilisation de la nucléoside diphosphate kinase ou d'un acide nucleique codant pour celleci, en combinaison avec une thymidine kinase ou un acide nucleique codant pour une thymidine kinase, pour la preparation d'une compositioon pharmaceutique destinée a la destruction des cellules proliferatives. L'invention concerne encore un procede de triphosphorylation d'un analogue de nucleoside comprenant la mise en presence dudit analogue avec une combinaison d'enzymes, l'une au moins d'entre elles etant d'origine eucaryote non-humaine. La présente invention fournit maintenant de nouveaux agents thérapeutiques permettant d'interférer avec de nombreux dysfonctionnements cellulaires. Dans ce but, les acides nucléiques ou cassettes selon l'invention peuvent être injectés tels quels au niveau du site à traiter, ou incubés directement avec les cellules à détruire ou traiter. I1 a en effet été décrit que les acides nucléiques nus pouvaient pénétrer dans les cellules sans vecteur particulier. Néanmoins, on préfère dans le cadre de la présente invention utiliser un vecteur d'administration, permettant d'améliorer (i) l'efficacité de la pénétration cellulaire, (ii) le ciblage (iii) la stabilité extra- et intracellulaires. Dans un mode de mise en oeuvre particulièrement préféré de la présente invention, les séquences nudéiques sont incorporées dans un vecteur de transfert. Le vecteur utilisé peut être d'origine chimique, plasmidique ou virale. Par vecteur chimique, on entend couvrir au sens de l'invention, tout agent non viral capable de promouvoir le transfert et l'expression de séquences nucléiques dans des cellules eucaryotes. Ces vecteurs chimiques ou biochimiques, synthétiques ou naturels, représentent une alternative intéressante aux virus naturels en particulier pour des raisons de commodité, de sécurité et également par l'absence de limite théorique en ce qui concerne la taille de l'ADN à transfecter. Ces vecteurs synthétiques ont deux fonctions principales, compacter l'acide nucléique à transfecter et promouvoir sa fixation cellulaire ainsi que son passage à travers la membrane plasmique et, le cas échéant, les deux membranes nudéaires. Pour pallier à la nature polyanionique des acides nudéiques, les vecteurs non viraux possèdent tous des charges polycationiques. A titre représentatif de ce type de techniques de transfection non virales, actuellement développées pour l'introduction d'une information génétique, on peut ainsi mentionner celles impliquant des complexes d'ADN et de DEAE-dextran (Pagano et al., J.Virol. 1 (1967) 891), d'ADN et de protéines nudéaires (Kaneda et al., Science 243 (1989) 375), d'ADN et de lipides (Felgner et al., PNAS 84 (1987) 7413), l'emploi de liposomes (Fraley et al., J.Biol.Chem. 255 (1980) 10431), etc L'emploi de virus comme vecteurs pour le transfert de gènes est apparu comme une alternative prometteuse à ces techniques physiques de transfection. A cet égard, différents virus ont été testés pour leur capacité à infecter certaines populations cellulaires. En particulier, les rétrovirus (RSV, HMS, MMS, etc), le virus HSV, les virus adéno-associés, et les adénovirus. L'acide nudéique ou le vecteur utilisé dans la présente invention peut être formulé en vue d'administrations par voie topique, orale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intraoculaire, transdermique, etc. De préférence, la séquence nudéique ou le vecteur est utilisé sous une forme injectable. Il peut donc être mélangé à tout véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable, notamment pour une injection directe au niveau du site à traiter. Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables. Une injection directe de la séquence d'acides nudéiques dans la tumeur du patient est intéressante car elle permet de concentrer l'effet thérapeutique au niveau des tissus affectés. Les doses en séquences nudéiques utilisées peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du vecteur, du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée ou encore de la durée du traitement recherchée. L'invention concerne également toute composition pharmaceutique comprenant une combinaison d'enzymes telle que définie å-avant. Elle concerne également toute composition pharmaceutique comprenant au moins un vecteur tel que défini ci-avant. Elle concerne aussi l'utilisation d'une NDPK d'origine levure ou d'une GMPK d'origine levure pour la phosphorylation in vivo d'analogues de nucleosides. En raison de leurs propriétés antiprolifératives, les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont tout particulièrement adaptées pour le traitement des désordres hyperprolifératifs, tels que notamment les cancers et la resténose. La présente invention fournit ainsi une méthode particulièrement efficace pour la destruction de cellules, notamment de cellules hyperprolifératives. Elle est ainsi applicable à la destruction des cellules tumorales ou des cellules de muscle lisse de la paroi vasculaire (resténose). Elle est tout particulièrement appropriée au traitement des cancers. A titre d'exemple, on peut citer les adénocarcinomes du colon, les cancers de la thyroide, les carcinomes du poumon, les leucémies myêloïdes, les cancers colorectaux, les cancers du sein, les cancers du poumon, les cancers gastriques, les cancers de l'oesophage, les lymphômes B, les cancers ovariens, les cancers de la vessie, les glioblastomes, les hépatocarcinomes, les cancers des os, de la peau, du pancréas ou encore les cancers du rein et de la prostate, les cancers de l'oesophage, les cancers du larynx, les cancers tête et cou, les cancers ano génitaux HPV positifs, les cancers du nasopharynx EBV positifs, etc Elle peut être utilisée in vitro ou ex vivo. Ex vivo, elle consiste essentiellement à incuber les cellules en présence d'une séquence nucléique (ou d'un vecteur, ou cassette ou directement du dérivé). In vivo, elle consiste à administrer à l'organisme une quantité active d'un vecteur (ou d'une cassette) selon l'invention, de préférence directement au niveau du site à traiter (tumeur notamment), préalablement, simultanément et/ou après l'injection de la prodrogue considérée c'est à dire le ganciclovir ou un analogue nudéoside. A cet égard, l'invention a également pour objet une méthode de destruction de cellules hyperprolifératives comprenant la mise en contact desdites cellules ou d'une partie d'entre elles avec une combinaison d'enzymes ou de séquences nucléiques telles que définies ci-avant, en presence d'un analogue de nucleoside. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples et figures qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. LEGENDE DES FIGURES: Figure 1 : Représentation schématique du vecteur pcDNA3-TK Figure 2: Représentation schématique du vecteur pXL2854 Figure 3: Représentation schématique du vecteur pXL2967 Tableau 1 : Constantes cinetiques des GMPK de levure et d'erythrocytes humaine sur le GCVMP et l'ACVMP. Valeurs pubiées: [D.F.Smée et al. (1985) Biochem.Pharmacol. 34:1049-1056] a; [R. E. Boehme (1984) J. Biol. Chem. 259:1236 12349] b; [W. H. Miller and R. L. Miller (1980) J. Biol. Chem. 255:7204-7207]c Tableau 2: Couplage TK-GMPK-NDPK: % des produits formes MATERIELS ET METHODES Abréviations ACV: acydovir GCV : ganciclovir GMPK: guanylate kinase HSV1-TK: thymidine kinase du virus de l'herpès simplex de type 1. NDPK: nucléoside diphosphate kinase Techniques générales de biologie moléculaire Les méthodes dassiquement utilisées en biologie moléculaire telles que les extractions préparatives d'ADN plasmidique, la centrifugation d'ADN plasmidique en gradient de chlorure de césium, l'électrophorèse sur gels d'agarose ou d'acrylamide, la purification de fragments d'ADN par électroélution, les extraction de protéines au phénol chloroforme, la précipitation d'ADN en milieu salin par de l'éthanol ou de l'isopropanol, la transformation dans Escherichia coli sont bien connues de l'homme de métier et sont abondamment décrites dans la littérature (Sambrook et coll. "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; Ausubel et coll. "Current Protocoles in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, 1987). Les plasmides de type pUC et les phages de la série M13 sont d'origine commerciale (Bethesda Research Laboratories), les plasmides pBSK ou pBKS proviennent de Stratagen. L'amplification enzymatique de fragments d'ADN par la technique dite de PCR IPolymerasecatalyzed Chain Reaction] peut être effectuée en utilisant un "DNA thermal cycler" (Perkin Elmer Cetus) selon les recommandations du fabricant. L'électroporation d'ADN plasmidique dans des cellules de E. coli peutêtre réalisée à l'aide d'un électroporateur (Bio-Rad) selon les recommandations du fournisseur. La vérification des séquences nucléotidiques peut être effectuée par la méthode développée par Sanger et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74 (1977) 546 5467] en utilisant le kit distribué par Amersham ou celui distribué par Applied Biosystems. EXEMPLE 1 - Construction des vecteurs d'expression des combinaisons d'enzymes Cet exemple décrit differentes methodes pour la construction de vecteurs d'expression et de transfert des séquences nucléiques de l'invention in vitro ou in vivo. 1.1 - Construction de vecteurs plasmidiques Pour la construction de vecteurs plasmidiques, differents types de vecteurs d'expression peuvent etre utilises. 2 types de vecteurs sont plus particulierement preferes: - Le vecteur pSV2, décrit dans DNA Cloning, A practical approach Vol.2, D.M. Glover (Ed) IRL Press, Oxford, Washington DC, 1985. Ce vecteur est un vecteur d'expression eucaryote. Les acides nucléiques codant pour les combinaisons d'enzymes de l'invention peuvent etre insérés dans ce vecteur aux sites HpaI EcoRV. Ils sont ainsi placés sous le controle du promoteur de l'enhancer du virus SV40. - Le vecteur pCDNA3 (Invitrogen). Il s'agit également d'un vecteur d'expression eucaryote. Les séquences nucléiques codant pour les enzymes ou les combinaisons d'enzymes de l'invention sont placées, dans ce vecteur, sous le controle du promoteur précoce du CMV. 1.2 - Construction de vecteurs viraux Selon un mode particulier, l'invention réside dans la construction et l'utilisation de vecteurs viraux permettant le transfert et l'expression in vivo des acides nucléiques tels que définis ci-avant. S'agissant plus particulièrement d'adénovirus, différents sérotypes, dont la structure et les propriétés varient quelque peu, ont été caractérisés. Parmi ces sérotypes, on préfère utiliser dans le cadre de la présente invention les adénovirus humains de type 2 ou 5 (Ad 2 ou Ad 5) ou les adénovirus d'origine animale (voir demande W094/26914). Parmi les adénovirus d'origine animale utilisables dans le cadre de la présente invention on peut citer les adénovirus d'origine canine, bovine, marine, (exemple : Mavl, Beard et al., Virology 75 (1990) 81), ovine, porcine, aviaire ou encore simienne (exemple: SAV). De préférence, l'adénovirus d'origine animale est un adénovirus canin, plus préférentiellement un adénovirus CAV2 [souche manhattan ou A26/61 (ATCC VR-800) par exemple]. De préférence, on utilise dans le cadre de l'invention des adénovirus d'origine humaine ou canine ou mixte. Préférentiellement, les adénovirus défectifs de l'invention comprenent les ITR, une séquence permettant l'encapsidation et un acide nucléique selon l'invention. Encore plus préférentiellement, dans le génome des adénovirus de l'invention, la région El au moins est non fonctionnelle. Le gène viral considéré peut être rendu non fonctionnel par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par suppression totale, substitution, délétion partielle, ou addition d'une ou plusieurs bases dans le ou les gènes considérés. De telles modifications peuvent être obtenues in vitro (sur de l'ADN isolé) ou in situ, par exemple, au moyens des techniques du génie génétique, ou encore par traitement au moyen d'agents mutagènes. D'autres régions peuvent également être modifiées, et notamment la région E3 (W095/02697), E2 (W094/28938), E4 (W094/28152, W094/12649, W095/02697) et L5 (W095/02697). Selon un mode préféré de mise en oeuvre, l'adênovirus selon l'invention comprend une délétion dans les régions El et E4. Selon un autre mode de réalisation préféré, il comprend une délétion dans région El au niveau de laquelle sont insérés la région E4 et la séquence nucléique de l'invention (Cf FR94 13355). Dans les virus de l'invention, la délétion dans la région El s'étend préférentiellement des nucléotides 455 à 3329 sur la séquence de l'adénovirus Ad5. Les adénovirus recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par toute technique connue de l'homme du métier (Levrero et al., Gene 101 (1991) 195, EP 185 573; Graham, EMBO J. 3 (1984) 2917). En particulier, ils peuvent être préparés par recombinaison homologue entre un adénovirus et un plasmide portant entre autre une séquence nudéique ou une combinaison de séquences nudéiques de l'invention. La recombinaison homologue se produit après co-transfection desdits adénovirus et plasmide dans une lignée cellulaire appropriée. La lignée cellulaire utilisée doit de préférence (i) être transformable par lesdits éléments, et (ii), comporter les séquences capables de complémenter la partie du génome de l'adénoviuus défectif, de préférence sous forme intégrée pour éviter les risques de recombinaison. A titre d'exemple de lignée, on peut mentionner la lignée de rein embryonnaire humain 293 (Graham et al., J. Gen. Virol. 36 (1977) 59) qui contient notamment, intégrée dans son génome, la partie gauche du génome d'un adénovirus Ad5 (12 %) ou des lignées capables de complémenter les fonctions El et E4 telles que décrites notamment dans les demandes n" WO 94/26914 et W095/02697 ou dans Yeh et al., J. Virol. 70 (1996) 559. Ensuite, les adénovirus qui se sont multipliés sont récupérés et purifiés selon les techniques classiques de biologie moléculaire, comme illustré dans les exemples. Concernant les virus adéno-associés (AAV), il s'agit de virus à ADN de taille relativement réduite, qui s'intègrent dans le génome des cellules qu'ils infectent, de manière stable et site-spécifique. Ils sont capables d'infecter un large spectre de cellules, sans induire d'effet sur la croissance, la morphologie ou la différenciation cellulaires. Par ailleurs, ils ne semblent pas impliqués dans des pathologies chez l'homme. Le génome des AAV a été cloné, séquencé et caractérisé. Il comprend environ 4700 bases, et contient à chaque extrémité une région répétée inversée (ITR) de 145 bases environ, servant d'origine de réplication pour le virus. Le reste du génome est divisé en 2 régions essentielles portant les fonctions d'encapsidation: la partie gauche du génome, qui contient le gène rep impliqué dans la réplication virale et l'expression des gènes viraux; la partie droite du génome, qui contient le gène cap codant pour les protéines de capside du virus. L'utilisation de vecteurs dérivés des AAV pour le transfert de gènes in vitro et in vivo a été décrite dans la littérature (voir notamment WO 91/18088; WO 93/09239; US 4,797,368, US5,139,941, EP 488 528). Ces demandes décrivent différentes constructions dérivées des AAV, dans lesquelles les gènes rep et/ou cap sont délétés et remplacés par un gène d'intérêt, et leur utilisation pour transférer in vitro (sur cellules en culture) ou in vivo (directement dans un organisme) ledit gène d'intérêt. Les AAV recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par co-transfection, dans un lignée cellulaire infectée par un virus auxiliaire humain (par exemple un adénovirus), d'un plasmide contenant une séquence nucléique ou une combinaison de séquences nucléiques de l'invention bordée de deux régions répétées inversées (ITR) d'AAV, et d'un plasmide portant les gènes d'encapsidation (gènes rep et cap) d'AAV. Une lignée cellulaire utilisable est par exemple la lignée 293. D'autres systemes de production sont décrits par exemple dans les demandes W095/14771; W095/13365; W095/13392 ou W095/06743. Les AAV recombinants produits sont ensuite purifiés par des techniques classiques. Concernant les virus de l'herpès et notamment le MoMuLV ("murine Moloney leukemia virus"; encore désigné MoMLV), le MSV ("murine Moloney sarcoma virus"), le HaSV ("Harvey sarcoma virus"); le SNV ("spléen necrosis virus"); le RSV ("Rous sarcoma virus") ou encore le virus de Friend. Pour construire des rétrovirus recombinants selon l'invention comportant une séquence nucléique nucléique ou une combinaison de séquences nucléiques selon l'invention, un plasmide comportant notamment les LTR, la séquence d'encapsidation et ladite séquence nucléique est construit, puis utilisé pour transfecter une lignée cellulaire dite d'encapsidation, capable d'apporter en trans les fonctions rétrovirales déficientes dans le plasmide. Généralement, les lignées d'encapsidation sont donc capables d'exprimer les gènes gag, pol et env. De telles lignées d'encapsidation ont été décrites dans l'art antérieur, et notamment la lignée PA317 (US4,861,719); la lignée PsiCRIP (WO90/02806) et la lignée GP+envAm-12 (W089/07150). Par ailleurs, les rétrovirus recombinants peuvent comporter des modifications au niveau des LTR pour supprimer l'activité transcriptionnelle, ainsi que des séquences d'encapsidation étendues, comportant une partie du gène gag (Bender et al., J. Virol. 61 (1987) 1639). Les rétrovirus recombinants produits sont ensuite purifiés par des techniques classiques. Pour la mise en oeuvre de la présente invention, il est tout particulièrement avantageux d'utiliser un adénovirus ou un rétrovirus recombinant défectif. Ces vecteurs possèdent en effet des propriétés particulièrement intéressantes pour le transfert de gènes suicides dans les cellules tumorales. 1.3 - Vecteurs chimiques Les acides nucleiques ou les vecteurs d'expression plasmidiques decrits dans cet exemple (1.1) et dans l'exemple 2 peuvent etre administres tels quels in vivo ou ex vivo. Il a en effet été montre que les acides nucleiques nus pouvaient transfecter les cellules. Cependant, pour ameliorer l'efficaote de transfert, on prefere utiliser dans le cadre de l'invention un vecteur de transfert. Il peut s'agir d'un vecteur viral (exemple 1.2.) ou d'un agent de transfection synthetique. Parmi les vecteurs synthétiques développés, on préfère utiliser dans le cadre de l'invention les polymères cationiques de type polylysine, (LKLK)n, (LKKL)n, (PCT/FR/00098) polyéthylène imine (W096/02655) et DEAE dextran ou encore les lipides cationiques ou lipofectants. Ils possèdent la propriété de condenser l'ADN et de promouvoir son association avec la membrane cellulaire. Parmi ces derniers, on peut citer les lipopolyamines (lipofectamine, transfectcm, etc) différents lipides cationiques ou neutres (DOTMA, DOGS, DOPE, etc) ainsi que des peptides d'origine nucléaire. En outre, le concept de la transfection ciblée a été développé, médiée par un récepteur, qui met à profit le principe de condenser l'ADN grâce au polymère cationique tout en dirigeant la fixation du complexe à la membrane grâce à un couplage chimique entre le polymère cationique et le ligand d'un récepteur membranaire, présent à la surface du type cellulaire que l'on veut greffer. Le ciblage du récepteur à la transferrine, à l'insuline ou du récepteur des asialoglycoprotéines des hépatocytes a ainsi été décrit. La préparation d'un composition selon l'invention utilisant un tel vecteur chimique est réalisée selon toute technique connue de l'homme du métier, généralement par simple mise en contact des différents composants. EXEMPLE 2 - Clonage de HSV1-TK et/ou de la guanylate kinase et/ou de la nucléoside diphosphokinase dans un vecteur d'expression eucaryote Cet exemple decrit un mode particulier de realisation de l'invention, utilisant un systeme de vecteur d'expression plasmidique pour produire in situ les combinaisons d'enzymes de l'invention. L'expression de gènes procaryotes ou eucaryotes dans les cellules mammifères est connue de l'homme du métier. Pour optimiser cette expression, les vecteurs de l'invention decrit ci-apres comportent les signaux suivants i) un promoteur/enhanceur tel que le promoteur CMV qui est bien exprimé dans les cellules humaines; ii) une séquence de Kozak, dont le consensus est (G/A)NNAUG(G/A); iii) le gène à exprimer; suivi iv) d'une séquence de polyadénylation (V. Chisholm 1995 DNA cloning Vol.4, ed. D. Glover et B. Hames p1). De telles constructions sont possibles à l'aide de vecteurs commerciaux tels que les vecteurs pZeoSV, pcDNA3... et ont été réalisées avec les gènes codant pour HSV1-TK, GMPK et NDK de S. cerevisae. 2.1 - Vecteur d'expression de HSV1-TK Le gène HSV1-TK codant pour la thymidine kinase du virus de l'herpès simplex de type 1, issu du plasmide pHSV-106 (Gibco-BRL) a été donné dans le vecteur d'expression eucaryote pcDNA3 (Invitrogen). Ce plasmide pcDNA3-TK de 6936 bp a été construit en introduisant l'insert EcoRI-NotI de 1,5 kb provenant de pBTK1 entre les sites EcoRI et NotI du pcDNA3, voir figurel. Le plasmide pBTK1 a été obtenue de la maniere suivante: Après avoir rendu les extrémités franches, l'insert BglII-NcoI de 1,5 kb provenant de pHSV-106 et contenant le gène HSV1-TK, dont la séquence est publiée par McKnight 1980 Nucl. Acids Res. 8 p5931, a été donné au site SmaI du pBSK. L'insert du plasmide pcDNA3-TK contient i) 60 bp en amont du gène HSV1-TK comprenant la séquence Kozak (CGTATGG), ii) la séquence du gène (1,13 kb) qui est identique à celle publiée par McKnight 1980 Nucl. Acids Res. 8 p5931, iii) la séquence 3' au gène (0,3 kb) qui est décrite aussi par McKnight. 2.2 Vecteur d'expression de la guanylate kinase Le gène GUK1 de 561 pb codant pour la guanylate kinase de S. cerevisae issu de pGUK-1 (voir exemple 3), a été donné dans le vecteur d'expression eucaryote pcDNA3 (Invitrogen) après avoir introduit un consensus Kozak. Ce plasmide pXL2854 a été obtenu de la façon suivante. L'insert XbaI-BamHI du pGUK-1 contenant le gène GUK1 a été donné dans le plasmide pSL301 (Invitrogen) entre les sites XbaI-BamHI de telle sorte que le gène GUK1 peut alors être excisé par les enzymes HindIII et BamHI et être cloné entre les sites HindIII et BamHI du pcDNA3 pour générer un plasmide pcDNA3-GUK1. Entre les sites HindIII et PflMI de ce plasmide est donné un fragment HindIII-PflMI de 150 bp contenant un consensus Kozak et la région 5' de GUK1 pour former le plasmide pXL2854 de 6001 pb voir figure 2. Le fragment HindIII-PflMI de 150 bp a été isolé à partir d'un fragment de 280 bp amplifié par PCR à l'aide du plasmide pGUK-1 et des oligonudéotides sens 6915 S'(GAG AAG CTT GCC ATG GCC CGT CCT ATC GTA A)3' (SEQ ID n. 1) et antisens 6916 S'(GAG GAT CCG TTT GAC GGA AGC GAC AGT A)3' (SEQ ID n.2), l'hybridation ayant lieu à 45"C (le consensus Kozak étant souligné sur l'oligonudéotide 6915). La séquence nucléique amplifiée par PCR a été séquencée et présente deux différences par rapport à la séquence publiée (M. Konrad 1992 J. Biol. Chem. 267 p25652) correspondant aux changements S2A (Serine en position 2 remplacée par une alanine) et V34A (Valine en position 34 remplacée par une alanine). L3 - Vecteur d'expression de la nucléoside diphosphokinase Le gène YNK codant pour la nucléoside diphosphokinase de S. cerevisae issu du plasmide pAD1-YNK (K. Watanabe et coll. 1993 Gene 29 p141), a été doné dans le vecteur d'expression eucaryote pcDNA3 (Invitrogen) après avoir introduit un consensus Kozak. Ce plasmide pXL2967 a été obtenu de la façon suivante. Une amplification par PCR a été effectuée avec le plasmide pAD1-YNK pour matrice et les oligonucléotides sens 7017 5'(AAG GAT CCA CCA TGG aA GTC AAA CAG AAA)3' (SEQ ID n. 3.) et antisens 7038 5' (AAG AAT TCA GAT Ctr CAT TCA TAA ATC CA)3' (SEQ ID n. 4) à la température d'hybridation de 40"C (le consensus Kozak étant souligné sur l'oligonudéotide 7017). Le fragment amplifié de 477 bp est digéré par BamHI et EcoRI puis donné entre les sites BamHI et EcoRI du pcDNA3 pour générer le plasmide pXL2967 de 5861 pb, voir figure 3. La séquence du fragment amplifié par PCR est la même que celle publiée pour le gène YNK sauf à la position 4 ce qui correspond à un changement S2A S2A (Serine en position 2 remplacée par une alanine) pour la protéine NDPK (K. Watanabe et coll. 1993 Gene 29 pu41). 2.4 - Vecteur pour la co-expression de 2 genes La coexpression de genes peut etre realisée de plusieurs facons connues de l'homme du metier. Une mode de mise en oeuvre prefere consiste a introduire, entre les sequences a exprimer, des sites internes d'entrée des ribosomes, sequences IRES (Mountford et al., TIG 11 (1995) 179). Une séquence IRES et le gène YNK sont introduits en 3 du gène GUK1 donné dans pcDNA3 pour generer un vecteur permettant la co-expression de GUK1 et YNK, sous forme d'une unite bicistronique (vecteur pGUK1-YNK). La meme approche est utilisée pour generer un vecteur coexprimant la TK et la YNK (vecteur pTK-YNK). ou la TK et la GUK1 (vecteur pTK-GUK1). 2.5 - Vecteur pour la co-expression de 3 genes La sequence codant pour la TK est inserée dans le vecteur pGUK1-YNK de l'exemple 2.4 ci-dessus pour generer un vecteur capable d'exprimer les 3 activites enzymatiques (vecteur pTK-GUK1-YNK). 2.6 - Transfert et expression in vivo Les vecteurs decrits dans les exemples 2.1 a 2.5 sont utilises pour le transfert et l'expression in vivo de combinaisons d'enzymes selon l'invention. Dans ce but, differentes compositions comprenant lesdits vecteurs sont preparées: - une composition comprenant le vecteur pcDNA3-TK, le vecteur pXL2854 et la Lipofectamine, - une composition comprenant le vecteur pcDNA3-TK, le vecteur pXL2967et la Lipofectamine, - une composition comprenant le vecteur pcDNA3-TK, le vecteur pXL2854, le vecteur pXL2967 et la Lipofectamine - une composition comprenant le vecteur pTK-GUK1 et la Lipofectamine, eventuellement en combinaison avec le vecteur pXL2967, - une composition comprenant le vecteur pTK-YNK et la Lipofectamine, eventuellement en combinaison avec le vecteur pXL2854, et, - une composition comprenant le vecteur pTK-GUK1-YNK et la Lipofedamine La Upofectamine peut etre remplacée par un autre vecteur chimique tel que decrit dans l'exemple 1.3. Ces differentes compositions sont utilisées in vivo ou ex vivo pour le transfert et l'expression intracellulaires de combinaisons d'enzymes selon l'invention. Elles peuvent egalement etre utilisées sur cultures cellulaires, et par exemple sur cultures de cellules de fibroblastes NIH3T3 ou de cellules de carcinome humain du colon, HCT116. Apres transfert des vecteurs, l'analogue de nucleoside est adrninistre et la destruction cellulaire est mise en evidence. EXEMPLE 3 - Purification de la guanylate kinase Les extraits acellulaires des souches de E. coli surexprimant la GMPK de S. cerevisae peuvent être préparés de diverses façons, parmi lesquelles on peut citer, la lyse au lysozyme en présence d'EDTA, l'utilisation d'appareils de broyage de type Menton-Golin, French Press, X-Press, ou l'action des ultrasons. Plus particulièrement, les extraits acellulaires des souches de E. coli surexprimant la GMPK de S. cerevisae ont été préparés de la façon suivante: La souche de E. coli BL21 (DE3) pGUK-1 est cultivée comme cela est décrit par M. Konrad dans J. Biol. Chem. 267 p25652 en 1992. Après centrifugation (5000 x g; 20min), les cellules obtenues à partir de 1 1 de culture sont resuspendues dans 20 ml de tampon Tris/HCl 20mM pH 7.5, contenant 1mM EDTA et soniquées durant 4 min à 4"C. Après centrifigation (50 000 x g; lh) le surnageant est injecté sur une colonne MONO Q HR 10/10 (Pharmacia) équilibrée dans le tampon Tris/HCl 20 mM pH 7.5. Les proteines sont éluées avec un gradient linéaire de O à 500 mM NaCl dans le tampon Tris/HCl 20mM pH 7.5. Les fractions contenant l'activité GMPK sont regroupées et concentrées, puis chromatographiées sur une colonne de Superdex 75 HR16/10 (Pharmacia) éluée par du tampon Tris/HCl 50mM pH 7.5, 150 mM NaCl. Les fractions contenant l'activité GuK sont regroupées. Après cette étape la préparation présente une seule bande visible en SDS-PAGE, après révélation au Bleu de Coomassie, et cette bande migre avec un poids moléculaire apparent de 21000 environ. L'activité de la GMPK est classiquement dosée en utilisant un protocole de dosage décrit dans la littérature, Agarwal et coli. 1978 Meth. Enzymol. vol.LI p 483. EXEMPLE 4 - Détermination des constantes cinétiques de la guanylate kinase de S. cerevisae. Les constantes cinétiques de la GMP kinase de levure purifiée comme décrit à l'exemple 3 sont déterminées dans les conditions de dosage enzymatique suivantes: La GMP kinase de levure est incubée durant 10 min à 30"C dans 100 p1 de tampon Tris/HCl 50 mM pH 7,8 contenant 4 mM ATP, 10 mM Mg C12, 100 mM KCl, 1 mg/ml BSA (albumine bovine sérique) et 5100 pM [8-3H]GCVMP (40 nCi/nmol) ou 200-3200 pM [8-3H]ACVMP (40 nCi/nmol). La réaction est stoppée par chauffage du mélange réactionnel durant 3 min à 80"C, 50 ;;l de tampon 10 mM phosphate de potassium pH 3,5 sont ajoutés, et après centrifugation durant 2 min à 10 000 x g, 100 p1 de surnageant sont analysés par chromatographie liquide haute pression (CLHP) dans le système suivant: Phase stationnaire: Partisphère SAX (WHATMAN) - diamètre des particules: 5pm - Dimensions 4,6 x 125 mm. Phase mobile: Tampon A: KH2P04 0,01 M pH3,5 (ajusté à l'aide de H3P04 concentré) Tampon B: KH2P04 0,75 M pH3,5 (ajusté à l'aide de H3P04 concentré) Débit: lml/min Gradient: Minute %A %A O 100 O 5 100 0 30 0 100 40 O 100 42 100 O 45 100 O Détection: UV: 265 nm Radiochimique: détection du tritium débit du scintillant (Optisafe 1 de Berthold) lml/min our le calcul des constantes cinétiques, la quantité de GMP kinase de levure introduite dans la réaction enzymatique est ajustée de façon à transformer au maximum 10% du substrat introduit au départ. Les courbes de Michaelis sont ajustées aux points expérimentaux à l'aide du logiciel Grafit (Sigma). Les resultats sont presentes dans le Tableau 1. Ils montrent que la GMP kinase de levure est capable de phosphoryler le GCVMP et l'ACVMP. De plus, elle présente une vitesse de phosphorylation du GCVMP 2 fois supérieure à l'enzyme humaine. De même, son affinité pour le GCVMP est supérieure d'un facteur au moins égal à 2 à l'affinité que présente l'enzyme humaine pour ce substrat. Au total, la valeur du Vmax/Km de l'enzyme de levure pour le GCVMP est 4,4 fois supérieure à la valeur que présente l'enzyme humaine. Pour des substrats entrant en compétition, la constante Vmax/Km détermine la spécificité de l'enzyme vis à vis de ces substrats. Elle est connue sous le nom de 'specificity constant" [A. Fersht, Enzyme Structure and Mechanism, 1985, W. H. Fréeman an Co., London]. De la même manière, la GMP kinase de levure présente un capacité à phosphoryler l'ACVMP très supérieure à l'enzyme humaine. La valeur du Vmax/Km de l'enzyme de levure pour l'ACVMP est 7 a 9 fois supérieure à la valeur que présente l'enzyme humaine pour ce substrat. EXEMPLE 5 - Couplage des activité enzymatiques TK. GMPK et NDK: Dans un mode préférentiel de couplage, l'incubation est effectuée dans 100 p1 de tampon Tris/HCl 50mM pH 7.8, contenant lmg/ml de BSA (albumine sérique bovine), 5mM ATP, 4mM MgCl2, 12mM KCl, 2mM DTT, 60OpM EDTA, 100pM [ & 3H]-GCV (40nCi/nmol) ou 1()OpM [2-3H]-ACV 40nCi/nmol et differentes quantites de TK, GuK et NDPK (Cf Tableau 2). Les NDPK de 3 organismes ont été utilisées (enzymes commercialisées par SIGMA), comme indiqué dans le tableau 2. Le couplage des enzymes HSV1-TK et GMPK de S. cerevisae permet une phosphorylation à 90% du gancidovir en ganåclovir diphosphate. Et la nucléoside diphosphokinase de levure de boulanger, c'est-à-dire de S. cerevisae. couplée aux enzymes HSV1-TK et GMPK, permet la phosphorylation en ganciclovir triphosphate avec une meilleure activité que ne le permet la nucléoside diphosphokinase humaine d'érythrocytes. Des résultats comparables sont obtenus avec l'acyclovir. Ces resultats demontrent clairement (a) que la combinaison d'enzymes selon l'invention apporte une amelioration significative de la phosphorylation, indiquant que la seule modification de la TK ne pourrait suffire pour ameliorer les proprietes du systeme, (b) que le systeme de l'invention permet d'augmenter l'efficacite de traitement par gene suicide TK (c) que certaines enzymes non-humaines possedent une meilleure activite pour les analogues de nucleosides, rendant leur utilisation particulierement avantageuse. L'ensemble de ces resultats demontre clairement l'interet therapeutique de la presente invention, permettant a la fois de diminuer les doses de nudeoside et d'enzymes et d'obtenir un benefice pharmacologique important. REVENDICATIONS 1. Composition pour la delivrance et la production in vivo d'une combinaison d'enzymes, comprenant: - un premier acide nudeique codant pour une enzyme capable de phosphoryler un analogue de nucleoside, pour generer un analogue monophosphate, - un deuxieme acide nucleique codant pour une enzyme capable de phosphoryler ledit analogue monophosphate, pour generer un analogue diphosphate, et, - un troisieme acide nucleique codant pour une enzyme capable de phosphoryler ledit analogue diphosphate, pour generer un analogue triphosphate toxique. 2. Composition selon la revendication 1 caracterisée en ce que le premier acide nucleique code pour une thymidine kinase. 3. Composition selon la revendication 1 caracterisée en ce que le deuxieme acide nucleique code pour une guanylate kinase. 4. Composition selon la revendication 1 caracterisée en ce que le troisieme acide nucleique code pour une nucléoside diphosphate kinase. 5. Composition selon la revendication 1 caracterisée en ce que les acides nucleiques sont portes par un meme vecteur. 6. Composition selon la revendication 1 caracterisée en ce que les acides nucleiques sont portes par plusieurs vecteurs. 7. Composition selon la revendication 5 ou 6 caracterisée en ce que les vecteurs sont des vecteurs plasmidiques ou viraux. 8. Composition comprenant un acide nucleique codant pour une thymidine kinase et un second acide nucleique codant pour une nucléoside diphosphate kinase. 9. Composition selon la revendication 8 caracterisée en ce que la nucléoside diphosphate kinase est d'origine eucaryote non-humaine. 10. Composition selon la revendication 9 caracterisée en ce que la nucléoside diphosphate kinase est choisie parmi la NDPK de levure ou de boeuf. 11. Composition selon la revendication 8 comprenant en outre un acide nudeique codant pour une guanylate kinase. 12. Composition selon la revendication 11 caracterisée en ce que l'acide nucieique code pour une guanylate kinase de levure. 13. Composition comprenant un acide nudeique codant pour une thymidine kinase et un second acide nudeique codant pour une guanylate kinase non humaine. 14. Composition selon la revendication 13 caracterisée en ce que la guanylate kinase est d'origine levure. 15. Composition selon l'une des revendications 1 a 14 caracterisée en ce que la thymidine kinase est d'origine virale. 16. Vecteur comprenant: - un premier acide nudeique codant pour une thymidine kinase, et, - un deuxieme acide nudelque codant pour une guanylate kinase nonhumaine. 17. Vecteur comprenant: - un premier acide nudeique codant pour une thymidine kinase, et, - un deuxieme acide nudeique codant pour une nudéoside diphosphate kinase. 18. Vecteur selon la revendication 17 caracterise en ce que la nucléoside diphosphate kinase est d'origine eucaryote non-humaine, de preference bovine ou levure. 19. Vecteur selon la revendication 17 ou 18 caracterise en ce qu'il comprend en outre un acide nudeique codant pour une guanylate kinase. 20. Vecteur selon l'une des revendications 16 a 19 caracterise en ce que la thymidine kinase est d'origine virale. 21. Vecteur selon les revendications 16 a 20 caracterise en ce que les differents acides nucléiques sont places sous le controle de promoteurs disctincts. 22. Vecteur selon les revendications 16 a 20 caracterise en ce que les differents acides nudeiques forment une unite polycistronique sous le controle d'un promoteur unique. 23. Vecteur selon les revendications 16 a 22 caracterise en ce qu'il s'agit d'un vecteur plasmidique ou viral. 24. Composition comprenant une combinaison d'enzymes capables de triphosphoryler un analogue de nudeoside, et ledit analogue de nudeoside, en vue d'une administration simultanée, separée, ou etalée dans le temps. 25. Composition pour la production in vivo d'un analogue de nucléoside triphosphate comprenant, conditionnes separement ou ensemble: - un analogue de nudeoside - un acide nudeique codant pour une thymidine kinase - un acide nucléique codant pour une guanylate kinase, et, - un acide nudeique codant pour une nudéoside diphosphate kinase. 26. Composition pour la production in vivo d'un analogue de nucléoside triphosphate comprenant, conditionnes separement ou ensemble: - un analogue de nudeoside - un acide nudelque codant pour une thymidine kinase, et - un acide nudeique codant pour une nudéoside diphosphate kinase. 27. Composition selon les revendications 24 a 26 caraderisée en ce que l'analogue de nucleoside est un analogue de guanosine. 28. Composition selon la revendication 27 caracterisée en ce que l'analogue de guanosine est choisi parmi le gancidovir, l'acydovir et le penåclovir. 29. Composition comprenant une combinaison d'enzymes impliquées dans la phosphorylation de nucleosides, l'une au moins de ces enzymes etant d'origine eucaryote non-humaine. 30. Methode pour la destruction de cellules proliferatives in vitro comprenant l'administration auxdites cellules d'une combinaison d'enzymes comprenant une TK et une NDPK et d'un analogue de nudeoside. 31. Methode selon la revendication 30 caracterisée en ce que la combinaison comprend en outre une guanylate kinase. 32. Methode pour la destruction de cellules proliferatives in vitro comprenant l'administration auxdites cellules d'une combinaison d'enzymes comprenant une TK et une GMPK non-humaine et d'un analogue de nucleoside. 33. Methode selon les revendications 30 a 32 caracterisée en ce que l'analogue de nucleoside est un analogue de guanosine. 34. Methode selon la revendication 33 caracterisée en ce que l'analogue de guanosine est choisi parmi le ganciclovir, lacyclovir et le pencidovir. 35. Methode selon les revendications 30 a 34 caracterisée en ce que les enzymes sont administrées aux cellules par administration d'acides nucleiques codant pour lesdites enzymes. 36. Procede de triphosphorylation d'un analogue de nucleoside comprenant la mise en presence dudit analogue avec une combinaison d'enzymes, l'une au moins d'entre elles etant d'origine levure. 37. Utilisation de la nucléoside diphosphate kinase ou d'un acide nucleique codant pour celleci, en combinaison avec une thymidine kinase ou un acide nucleique codant pour une thymidine kinase et un analogue de nucleoside, pour la preparation d'une composition pharmaceutique destinée a la destruction des cellules proliferatives.