Brevet FR2741238A1 — publié le 19970523

La présente invention a pour objet l'utilisation du chlorure d'aluminium comme agent éliciteur de la synthèse du resvératrol dans les plantes cultivées et leurs produits à usage alimentaire, et en particulier la vigne, le raisin, le jus de raisin et le vin. On sait que certaines plantes, comme en particulier la vigne, peuvent synthétiser, en réponse à un stress tel qu'une irradiation par les rayons ultra-violets ou une infection parasitaire, des molécules naturelles leur permettant de s'adapter à ce stress. L'un des constituants principaux de ces molécules naturelles est le resvératrol (trans-3,5,4'-trihydroxystilbène). On sait aussi que le resvératrol présente des propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes, notamment utilisables dans la prévention ou le traitement de certaines maladies humaines. Ainsi, cette molécule qui peut être également extraite des racines de Polygonum cuspidatum est utilisée notamment en médecine populaire traditionnelle chinoise et japonaise dans le traitement des hyperlipémies, de l'arthériosclérose, des maladies inflammatoires et allergiques. Diverses études ont en effet montré que le resvératrol diminue l'agrégabilité plaquettaire et exerce un effet protecteur vis-à-vis de l'oxydation des lipoprotéines plasmatiques, ces deux derniers facteurs étant impliqués dans les mécanismes de l'athérothrombogenèse pouvant conduire à l'infarctus du myocarde. L'effet protecteur du resvératrol vis-à-vis de l'oxydation des lipoprotéines plasmatiques est particulièrement élevé, puisqu'il a été montré que cet effet est beaucoup plus important que celui procuré par la vitamine E (atocophérol) qui est considérée comme un puissant anti-oxydant naturel. I1 a également été suggéré que le resvératrol pourrait fournir une protection vis-à-vis du cancer en raison de ses propriétés anti-radicalaires vis-àvis des radicaux libres impliqués dans les phénomènes de cancérisation cellulaire. Compte tenu du rôle bénéfique susceptible d'être exercé par le resvératrol dans le domaine de la santé humaine, il semble intéressant de pouvoir disposer d'un moyen simple permettant d'augmenter la teneur en resvératrol de certains produits à usage alimentaire. I1 a été découvert, de façon tout à fait inattendue et surprenante que le chlorure d'aluminium est susceptible d'induire la synthèse du resvératrol dans des plantes cultivées avec lesquelles il est mis en contact ainsi que dans leurs produits transformés. La présente invention s'applique plus particulièrement à la vigne et ses produits que sont le raisin, le jus de raisin et le vin. Elle peut bien entendu s'appliquer également à toute plante cultivée produisant naturellement du resvératrol parmi lesquelles on citera notamment l'arachide. Cette plante peut être un arbrisseau, comme dans le cas de la vigne, ou bien encore un arbre. L'expression "produit" utilisée dans le cadre de la présente invention désigne tout produit provenant naturellement de la plante, comme notamment le fruit ainsi que tout produit résultant de traitements de transformation ultérieurs de celui-ci. Selon une caractéristique particulière de l'utilisation conforme à l'invention, le chlorure d'aluminium est appliqué par voie foliaire et/ou dans le cas des arbres ou arbrisseaux, par injection dans les troncs. Avantageusement, le chlorure d'aluminium est appliqué en une quantité de 0,1 à 100 kilos et de préférence de 10 à 50 kilos par hectare de sol cultivé et par traitement. Bien entendu, les doses actives utilisables varieront notamment en fonction de la plante, des conditions climatiques et de la voie d'application choisie. Dans le cas de la vigne, le chlorure d'aluminium sera appliqué de préférence par voie foliaire et en une quantité de 0,5 à 50 kilos et de préférence de 5 à 25 kilos par hectare et par traitement. Le chlorure d'aluminium peut être appliqué à tout stade de la culture des plantes concemées. Dans le cas particulier de la vigne, il sera appliqué de préférence de la floraison à la maturité de la baie de raisin. Avantageusement, et notamment dans tous les cas où l'on souhaite utiliser le chlorure d'alumunium sous forme de solution aqueuse, celui-ci se présentera sous forme hydratée et notamment héxahydratée. Selon une autre caractéristique particulière, l'utilisation selon l'invention comprend la préparation d'une composition contenant une quantité efficace de chlorure d'aluminium éventuellement incorporée à un support ou véhicule acceptable en agriculture. D'une façon générale, cette composition peut se présenter sous forme solide, notamment de poudres en particulier mouillables ou de granulés, ou encore et de préférence, sous forme liquide, notamment sous forme de solution aqueuse. Dans une forme de réalisation particulière, cette composition peut en outre contenir au moins une substance additionnelle choisie parmi les fongicides, les insecticides, les herbicides, les hormones de croissance, les éléments correcteurs de carence ainsi que des algues ou des extraits d'algues. Les extraits d'algues susceptibles d'être utilisés dans le cadre de l'invention sont par exemple une crème d'algues, telle qu'obtenue par la mise en oeuvre du brevet français numéro 7435162. Avantageusement, une composition utilisée dans le cadre de la présente invention se présentera sous forme solide et contiendra de 0,2 à 55 % en poids de chlorure d'aluminium. D'une façon générale, les compositions susceptibles d'être utilisées dans le cadre de l'invention, seront préparées par mélange du chlorure d'aluminium sous forme de poudre avec des additifs usuels, par exemple des charges solides et/ou des solvants. On utilisera également, si cela est nécessaire, des substances tensioactives, des agents dispersants ou des agents émulsifiants. En tant que charge solide pour la préparation de poudres mouillables ou de granulés, on peut utiliser par exemple du kaolin ou de l'argile finement divisé. Lorsqu'elles se présentent sous forme liquide, ces compositions seront de préférence obtenues par dilution du chlorure d'aluminium hydraté dans de l'eau. On peut également envisager la préparation de compositions pulvérisables à base d'huiles ou de concentrés émulsifiables, notamment dans le cas de mélanges avec des substances additionnelles non solubles dans l'eau. La présente invention sera mieux comprise à la lecture des exemples suivants, donnés uniquement à titre non limitatif. Dans ces exemples, les pourcentages sont donnés en poids, sauf indications contraires. Exemple 1 Mise en évidence des propriétés du chlorure d'aluminium Pour mettre en évidence les propriétés du chlorure d'aluminium vis-àvis de la synthèse du resvératrol, diverses expériences ont été réalisées sur la vigne. Plus précisément, des extrémités de rameaux de sept mois, issus de boutures cultivées en serres, et comprenant sept entrenoeuds jusqu'à l'apex, ont été plongés dans des solutions aqueuses à différentes concentrations en chlorure d'aluminium pendant des temps prédéterminés et sous obscurité. La présence de resvératrol peut être observée sous ultra-violets à 366 nm, le resvératrol émettant une fluorescence bleue pâle dans ces conditions. On a ensuite déterminé la quantité de resvératrol produit dans les feuilles. A cet effet, les feuilles ont été prélevées et broyées dans du méthanol à 80%. Le broyât de feuilles ainsi obtenu est filtré sur verre fritté n0 4. Le filtrat est ensuite récupéré et passé sur une colonne de type seppack de 1 centimètre de longueur. Le filtrat ainsi obtenu est évaporé sous vide à +40 C et le résidu obtenu est dilué dans 20 millilitres de méthanol à 95% par gramme de poids frais de l'échantillon. La solution est ensuite placée au congélateur à -200C. Toutes ces manipulations ont été réalisées à l'abri de la lumière. La quantité de resvératrol extraite est quantifiée par chromatographie. Le système de chromatographie se compose d'un contrôleur de gradient quaternaire, d'un injecteur automatique, d'un spectrofluorimètre et d'un détecteur UV visible à barrettes de diodes. On réalise une chromatographie sur une colonne C18 (25 cm x 4.6 mm granulométrie : 4 ,am). La phase stationnaire (silice greffée) retient alors les molécules organiques. Pour ces analyses, une solution d'acétronitrile (40 %) et d'eau ultrapure (60 %) avec un débit de 0,6 mUmn a été utilisé. Le resvératrol est détecté simultanément en spectrophotométrie U.V. à 307 nm et en fluorimétrie (exitation 340 nm et émission à 374 nm). Afin d'étalonner le chromatographe, on a réalisé une courbe de calibration en injectant plusieurs solutions de resvératrol de synthèse à différentes concentrations (10 ng - 20 ng - 50ng - 100 ng - 200 ng). La droite obtenue présente un excellent coefficient de corrélation R2 = 0,9950. Les résultats obtenus exprimés en microgrammes de resvératrol par gramme d'extrait sont reportés dans les tableaux 1 à 5 ci-après. Dans chaque tableau sont reportés les résultats de tests réalisés sur deux espèces de vigne, à savoir Vitis Rupestris et Vitis Vinifera. Les résultats reportés au Tableau 1 ont été obtenus après neuf heures de trempage dans la solution de chlorure d'aluminium, tandis que les résultats reportés aux Tableaux 2, 3, 4, 5 ont été obtenus respectivement pour des durées de trempage de 15 heures 15, 17 heures 30, 22 heures et 26 heures. Ces résultats illustrent clairement le pouvoir éliciteur du chlorure d'aluminium vis-à-vis de la synthèse du resvératrol dans la vigne, l'effet observé étant particulièrement intense vis-à-vis de l'espèce Vitis Rupestris. Ces résultats permettent également de prévoir l'effet éliciteur du chlorure d'aluminium vis-à-vis de la synthèse du resvératrol dans le raisin et le vin, puisqu'il existe une corrélation entre la production du resvératrol dans les feuilles et dans les grappes de raisin. Il a en particulier été montré que les raisins (et en particulier la pellicule du raisin) produisent du resvératrol et qu'il existe une relation étroite entre la production de resvératrol dans les feuilles et dans les grappes tout au long du cycle végétatif de la vigne. TABLEAU I QUANTTTE DE RESVERATROL EXPRIMEE EN yg / g DE L'EXTRAIT FRAIS DE: Concentration AlCl3 V.rupestris V.vinifera en% Tem. 0,454 0,80 0,6 61,51 1,60 0,8 118,474 113,70 1 217,604 | 1,94 1,5 52,80 2 57,64 88,46 3 122,52 69,70 4 ~~~~~~~~~~~ 88,86 101,30 TABLEAU fi QUANTITE DE RESVERATROL EXPRIMEE En /g g DE L'EXTRAIT FRAIS DE:: Concentration AIC13 V. rupestris V. vinifera en % Tem. 0,06 0,06 0,3 177,34 0,06 0,4 173,72 6,46 0,6 350,26 70,9 0,8 279,84 119,47 1 143,39 175,17 1,5 222,03 94,01 2 246,54 111,96 3 112,67 136,12 4 95,48 TABLEAU m QUANTTTE DE RESVERATROL EXPRIMEE EN g/g DE L'EXTRAIT FRAIS DE: Concentration AlCl3 V.rupestris V.vinifera en % Tem. 0,06 0,06 0,3 120,9 2,02 0,4 236,6 3,01 0,6 88,67 19,17 0,8 275,91 32,04 1 298,13 79,51 1,5 106,64 121,396 2 292,88 92,58 3 344,45 98,76 4 116,76 171,39 TABLEAU IV QUANTITE DE RESVERATROL EXPRIMEE EN g I g DE L'EXTRAIT FRAIS DE: Concentration AICI3 V. rupestris V. vinifera en % Tem. 0,06 0,06 0,3 0,1 0,1 0,4 426,63 97,67 0,6 37,93 47,03 0,8 35,51 88,25 1 133,22 62,4 1,5 251,1 149,14 2 150,33 3 184,02 4 199,21 174,25 TABLEAU V QUANTITE DE RESVERATROL EXPRIMEE EN g/g DE L'EXTRAIT FRAIS DE: Concentration AlCl3 V.rupestris V.vinifera en % Tem. 0,06 0,06 0,6 208,11 0,10 0,8 547,43 1 188,78 1 138,15 47,60 1,5 188,61 2 41,02 3 383,00 Exemple 2 On trouvera ci-après trois exemples de compositions à base de chlorure d'aluminium (sous forme solide ou liquide), susceptibles d'être utilisées dans le cadre de l'invention. Composition N 1 Pour Kg de poudre: #AlCl3, 6H2O 0,800 #Kaolin 0,200 Composition N*2 Pour 1 Kg de solution: #AlCl3, 6H2O 0,400 Extrait d'algues brunes 0,250 (crème d'algue) Eau 0,350 Composition N 3 Pour 1 litre de solution: #AlCl3, 6H2O 0,400 Huile minérale 0,200 #Kidan#(iprodione) Rhône Poulenc 0,200 Eau 0,200 REVENDICATIONS 1- Utilisation du chlorure d'aluminium comme agent éliciteur de la synthèse du resvératrol dans les plantes cultivées et leurs produits à usage alimentaire, et en particulier la vigne, le raisin, le jus de raisin et le vin. 2-Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le chlorure d'aluminium est appliqué par voie foliaire et/ou dans le cas des arbres ou arbrisseaux, par injection dans les troncs. 3-Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le chlorure d'aluminium est appliqué en une quantité de 0,1 à 100 kilos par hectare de sol cultivé et par traitement. 4-Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le chlorure d'aluminium précité est hexahydraté. 5-Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle comprend la préparation d'une composition contenant une quantité efficace de chlorure d'aluminium éventuellement incorporée à un support ou véhicule acceptable en agriculture. 6- Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que la composition précitée se présente sous forme solide, notamment de poudres ou de granulés ou sous forme liquide, notamment sous forme de solution aqueuse. 7-Utilisation selon la revendication 5 ou 6, caractérisée en ce que la composition précitée contient en outre au moins une substance additionnelle choisie parmi les fongicides, les insecticides, les herbicides, les hormones de croissance, les éléments correcteurs de carence ainsi que des algues ou des extraits d'algues. 8- Utilisation selon une des revendications 5 à 7, caractérisée en ce que la composition précitée se présente sous forme solide et contient de 0,2 à 55 % en poids de chlorure d'aluminium.