Brevet FR2741088A1 — publié le 19970516

La présente invention concerne une méthode permettant le traitement de plusieurs maladies neurodégénératives et en particulier de la maladie de Huntington. Elle concerne plus particulièrement un anticorps monoclonal capable de reconnaître et d'inactiver les longues chaines homopolymére de glutamines dans les protéines spécifiquement associées à ces maladies. La présence de séquences répétées dans l'ADN est un phénomène connu. Ces séquences peuvent être de différentes natures comme des séquences signal ou enhancer. Il peut également s'agir de séquences codant pour un homopolymére faisant partie d'une structure protéique de plus grande taille. Dans le cas précis de la maladie de Huntington il s'agit d'une séquence répétée de codons CAG codant pour une chaine homopolymére de glutamine (polyglutamine). Il a été montré que cette séquence est bien exprimée dans les protéines traduites. L'implication de ces protéines dans le déclenchement ou le développement de la maladie dépend essentiellement du nombre de résidus glutamine enchainés dans la protéine. Plus celui-ci est important plus la maladie sera sévère et précoce. On a pour l'instant dénombré au moins cinq maladies neurodégénératives humaines génétiques associées à la présence de ces chaines de résidus glutamine l'atrophie musculaire spino-bulbaire associée au chromosome X ou maladie de Kennedy, la maladie de Huntington dominante autosomale, I'ataxie spinocérébeleuse de type 1, I'atrophie dentarorubral-pallidoluysienne et l'ataxie spinocérébeleuse de type 3 ou maladie de Machado-Joseph. Dans les gènes codant pour les protéines responsables de ces maladies, le nombre de triplets CAG répétés est três variable. Par exemple dans le gêne responsable de la maladie de Huntington, ce nombre varie, entre 10 et 35 unités chez les sujets non atteints et de 37-40 jusqu'à 60-120 chez les malades. De plus chez les malades on observe une instabilité de ce nombre de répétitions d'une génération à l'autre.Une explication à cette variabilité repose sur les phénoménes de recombinaison et d'amplification se produisant lors des divisions cellulaires au cours de la gamétogenése. Ces phénoménes peuvent soit conduire à une augmentation du nombre de répétitions soit, plus rarement, à une diminution. Dans la plupart des cas le nombre de triplets CAG augmente chez les descendants et l'on observe que cette amplification de taille se fait surtout sur les allèles paternels du gène concerné. Le nombre de recombinaisons subies par l'ADN lors de la spermatogenèse est en effet plus élevé que celui des recombinaisons survenant lors de l'ovogenêse. Ceci est dû au nombre trés élevé de méioses survenant au cours de la spermatogenèse. Une étude, réalisée au sein de plusieurs familles atteintes de la maladie de Huntington, a permis de comparer sur plusieurs générations quelques paramètres tels que . la longueur de ces séquences répétées, l'âge auquel se développe la maladie et la sévérité de celle-ci. Les résultats obtenus font apparaître une corrélation inverse entre le nombre de triplets CAG (déterminant la longueur de la chaîne polyglutamine) d'une part et l'âge d'apparition et la gravité des symptômes d'autre part. Ceci permet d'expliquer la plus grande précocité et la plus grande sévérité de ces maladies de génération en génération. A ce jour il n'existe aucun outil thérapeutique pour le traitement de la maladie de Huntington et des maladies neurodégénératives associées à une répétition de glutamine. La présente invention a précisément pour objet de proposer une méthode de traitement de ces maladies. Elle est fondée sur l'utilisation d'un anticorps capable de se fixer sur les formes pathogènes des protéines responsables des maladies associées à une répétition de glutamine. Plus précisément, la demanderesse s'est intéressée à la caractérisation d'un système capable de se lier in vitro à des chaînes polyglutamine dont la longueur correspond à celle présente dans les protéines responsables de maladies neurodégénératives. Ceci l'a conduit à rechercher un anticorps monoclonal à même de reconnaître spécifiquement les chaines polyglutamine contenant un nombre de résidus supérieur à 37 ce qui correspond à la valeur limite inférieure de la longueur de la chaîne polyglutamine dans les protéines pathogènes. De manière inattendue, la demanderesse à mis en évidence qu'un anticorps monoclonal spécifique, I'anticorps monoclonal 1C2 (mAclC2), possède une affinité optimale pour les chaîne polyglutamines de grande taille en particulier pour les chaînes de plus de 37 résidus. Avantageusement, cet anticorps s'avère capable de discriminer les protéines pathogènes des protéines normales en fonction de la longueur de leurs chaînes polyglutamines respectives. L'anticorps monoclonal 1C2 est déjà connu pour son affinité pour un facteur de transcription se liant aux séquences TATA (TATA-binding protéin TBP). Jusqu'à présent le peptide LEEQQRQQQQQQ, localisé à l'extrémité N-terminale de la chaîne homopolymère de glutamine de la TBP, était considéré comme l'épitope pour lequel l'affinité de cet anticorps était la plus importante (Lescure A et al. EMBO Journal 13, 1166-1175(1995)). De manière tout à fait surprenante la demanderesse a montré que cet anticorps possédait en fait une très forte affinité pour les séquences polyglutamine même en l'absence du peptide décrit ci-dessus. Cette affinité est, de plus, proportionnelle à la longueur de la chaine polyglutamine. Son affinité pour ces dernières est d'autant plus importante que les chaînes sont longues. Pour les chaines de longueur normale elle est nulle pour un temps d'exposition normal à l'anticorps et très faible si l'on augmente cette durée. De ce fait l'anticorps I C2 est capable de reconnaître les longues chaînes polyglutamine des allèles mutés des protéines responsables de la maladie de Huntington et des ataxies spinocerebelleuses I et 3 comme épitope pathologique.Avantageusement, il permet le diagnostic précoce des sujets qui vont développer l'une de ces maladies ainsi que des familles à risques qui expriment des protéines dont la chaîne polyglutamine comprend un nombre de résidus à la limite du pathologique. L'anticorps monoclonal I C2 reconnaît spécifiquement les formes pathologiques des protéines pathogènes dans la maladie de Huntington et les maladies associées à une répétition de triplets. Il peut être utilisé afin d'inactiver spécifiquement les formes pathogènes de ces protéines, la liaison de 1C2 entraînant - un changement de conformation de la protéine lui faisant perdre ses propriétés pathogènes, ou, - une plus grande sensibilité aux systèmes de dégradation aussi bien intracellulaires qu'extracellulaires. Un premier objet de la présente invention est par conséquent l'utilisation de l'anticorps 1C2 ou d'un fragment ou d'un dérivé de l'anticorps 1C2 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement préventif ou curatif des maladies neurodégénératives associées à une répétition de glutamine. Les fragments ou dérivés d'anticorps sont par exemple les fragments Fab ou F(ab)'2, les régions VH ou VL d'un anticorps ou encore des anticorps simple chaine (ScFv) comprenant une région VH liée à une région VL par un bras. Ce type de domaine est particulièrement avantageux puisqu'il peut être dirigé contre toute molécule. Les anticorps, molécules de la superfamille des immunoglobulines, sont constitués de différentes chaînes (2 lourdes (H) et 2 légères (L)) elles mêmes composées de différents domaines (domaine variable (V) domaine de jonction (J), etc.).Le fragment ou dérivé d'anticorps selon l'invention comprend au moins le site de liaison de l'anticorps aux séquences polyglutamines. Ce fragment peut être soit le domaine variable d'un chaîne légère (VL) ou lourde (VH), éventuellement sous forme de fragment Fab ou F(ab')2 ou, préférentiellement, sous forme d'anticorps simple chaîne (ScFv). Les anticorps simple chaîne sont constitués d'un peptide correspondant au site de liaison de la région variable de la chaîne légère d'un anticorps relié par un bras peptidique à un peptide correspondant au site de liaison de la région variable de la chaine lourde d'un anticorps.La construction de séquences d'acides nucléiques codant pour de tels anticorps modifiés selon l'invention a été décrite par exemple dans le brevet US4,946,778 ou dans les demandes W094/02610, W094/29446. Ce type de molécule c'est à dire comprenant le site de liaison de la région variable de la chaîne légère de l'anticorps 1C2 relié par un bras peptidique au site de liaison de la région variable de la chaîne lourde de l'anticorps 1 C2, constitue également un objet de la présente invention. Pour inactiver les dites protéines pathogènes l'anticorps peut être administré tel quel dans le système nerveux des patients, par voie stéréotaxique. Dans ce cas l'anticorps sera dirigé contre les molécules pathologiques sécrétées par les cellules malades. La fixation de l'anticorps entraîne l'inactivation de ces protéines, et entraîne leur dégradation et permet aussi d'éviter leur accumulation à l'extérieur des cellules, une des causes possibles de la maladie. Ces anticorps ou des fragments de ces anticorps peuvent également pénétrer à l'intérieur des cellules et ainsi inactiver les protéines qui ne sont pas sécrétées.Ils sont particulièrement avantageux pour le traitement des maladies telles que par exemple la maladie de Huntington, I'ataxie spinocerebelleuse de type 1, 2 ou 3, I'atrophie musculaire spino-bulbaire associée au chromosome X ou maladie de Kennedy, I'atrophie dentarorubral-pallidoluysienne et l'ataxie spinocerebelleuse autosomale dominante. Un autre mode d'utilisation de l'anticorps consiste à le faire agir directement a l'intérieur de la cellule. Pour ce faire on utilise les méthodes connues de transfert de gènes. Un mode particulier de réalisation de l'invention consiste à faire exprimer dans les cellules du patient un acide nucléique codant pour l'anticorps 1C2 ou pour un fragment ou dérivé l'anticorps 1 C2 comme par exemple un fragment ScFv.de cet anticorps. La séquence d'acides nucléiques codant pour l'anticorps 1 C2 ou un fragment ou un dérivé de l'anticorps 1 C2 peut être administrée telle quelle, sous forme d'ADN nu selon la technique décrite dans la demande WO 90/11092. Elle peut également être administrée sous forme complexée, par exemple avec du DEAE-dextran (Pagano et al., J.Virol. 1(1967) 891), avec des protéines nucléaires (Kaneda et al., Science 243 (1989) 375), avec des lipides (Felgner et al., PNAS 84 (1987) 7413), sous forme de liposomes (Fraley et al., J.Biol.Chem. 255 (1980) 10431), etc. Préférentiellement, la séquence utilisée dans le cadre de l'invention fait partie d'un vecteur.L'emploi d'un tel vecteur permet en effet d'améliorer l'administration de l'acide nucléique dans les cellules à traiter, et également d'augmenter sa stabilité dans lesdites cellules, ce qui permet d'obtenir un effet thérapeutique durable. De plus, ii est possible d'introduire plusieurs séquences d'acide nucléique dans un même vecteur, ce qui augmente également l'efficacité du traitement. Le vecteur utilisé peut être d'origine diverses, des lors qu'il est capable de transformer les cellules animales, de préférence les cellules humaines. Dans un mode préféré de mise en oeuvre de l'invention, on utilise un vecteur viral, qui peut être choisi parmi les adénovirus, les rétrovirus, les virus adéno-associés (AAV) ou le virus de l'herpes. A cet égard, la présente invention a également pour objet tout virus recombinant comprenant, inséré dans son génome, un acide nucléique codant pour un fragment ScFv de l'anticorps I C2. Préférentiellement, les virus utilisés dans le cadre de l'invention sont défectifs, c'est-à-dire qu'ils sont incapables de se répliquer de façon autonome dans la cellule infectée. Généralement, le génome des virus défectifs utilisés dans le cadre de la présente invention est donc dépourvu au moins des séquences nécessaires à la réplication dudit virus dans la cellule infectée.Ces régions peuvent être soit éliminées (en tout ou en partie), soit rendues non-fonctionnelles, soit substituées par d'autres séquences et notamment par la séquence codant pour un fragment ScFv de l'anticorps 1 C2. Préférentiellement, le virus défectif conserve néanmoins les séquences de son génome qui sont nécessaires à l'encapsidation des particules virales. S'agissant plus particulièrement d'adénovirus, différents sérotypes, dont la structure et les propriétés varient quelque peu, ont été caractérisés. Parmi ces sérotypes, on préfère utiliser dans le cadre de la présente invention les adénovirus humains de type 2 ou 5 (Ad 2 ou Ad 5) ou les adénovirus d'origine animale (voir demande W094/26914). Parmi les adénovirus d'origine animale utilisables dans le cadre de la présente invention on peut citer les adénovirus d'origine canine, bovine, murine, (exemple Mav 1, Beard et al., Virology 75 (1990) 81), ovine, porcine, aviaire ou encore simienne (exemple SAV). De préférence, I'adénovirus d'origine animale est un adénovirus canin, plus préférentiellement un adénovirus CAV2 [souche manhattan ou A26/61 (ATCC VR-800) par exemple]. De préférence, on utilise dans le cadre de l'invention des adénovirus d'origine humaine ou canine ou mixte. Préférentiellement, les adénovirus défectifs de l'invention comprennent les ITR, une séquence permettant l'encapsidation et la séquence codant pour un fragment ScFv de l'anticorps I C2. Encore plus préférentiellement, dans le génome des adénovirus de l'invention, la région El au moins est non fonctionnelle. Le gène viral considéré peut être rendu non fonctionnel par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par suppression totale, substitution, délétion partielle, ou addition d'une ou plusieurs bases dans le ou les gènes considérés. De telles modifications peuvent être obtenues in vitro (sur de l'ADN isolé) ou in situ, par exemple, au moyens des techniques du génie génétique, ou encore par traitement au moyen d'agents mutagènes.D'autres régions peuvent également être modifiées, et notamment la région E3 (W095/02697), E2 (W094/28938), E4 (W094/28152, W094/12649, W095/02697) et L5 (W095/02697). Selon un mode préféré de mise en oeuvre, l'adénovirus selon l'invention comprend une délétion dans les régions El et E4. Dans les virus de l'invention, la délétion dans la région El s'étend préférentiellement des nucléotides 455 à 3329 sur la séquence de l'adénovirus Ad5. Les adénovirus recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par toute technique connue de l'homme du métier (Levrero et al., Gene 101 (1991) 195, EP 185 573; Graham, EMBO J. 3 (1984) 2917). En particulier, ils peuvent être préparés par recombinaison homologue entre un adénovirus et un plasmide portant entre autre la séquence d'ADN codant pour un fragment ScFv de l'anticorps 1C2. La recombinaison homologue se produit après co-transfection desdits adénovirus et plasmide dans une lignée cellulaire appropriée. La lignée cellulaire utilisée doit de préférence (i) être transformable par lesdits éléments, et (ii), comporter les séquences capables de complémenter la partie du génome de l'adénovirus défectifs, de préférence sous forme intégrée pour éviter les risques de recombinaison.A titre d'exemple de lignée, on peut mentionner la lignée de rein embryonnaire humain 293 (Graham et al., J. Gen. Virol. 36 (1977) 59) qui contient notamment, intégrée dans son génome, la partie gauche du génome d'un adénovirus Ad5 (12 %). Des stratégies de construction de vecteurs dérivés des adénovirus ont également été décrites dans les demandes n" FR 93 05954 et FR 93 08596. Ensuite, les adénovirus qui se sont multipliés sont récupérés et purifiés selon les techniques classiques de biologie moléculaire, comme illustré dans les exemples. Concernant les virus adéno-associés (AAV), il s'agit de virus à ADN de taille relativement réduite, qui s'intègrent dans le génome des cellules qu'ils infectent, de manière stable et site-spécifique. Ils sont capables d'infecter un large spectre de cellules, sans induire d'effet sur la croissance, la morphologie ou la différenciation cellulaires. Par ailleurs, ils ne semblent pas impliqués dans des pathologies chez I'homme. Le génome des AAV a été cloné, séquencé et caractérisé. Il comprend environ 4700 bases, et contient à chaque extrémité une région répétée inversée (ITR) de 145 bases environ, servant d'origine de réplication pour le virus.Le reste du génome est divisé en 2 régions essentielles portant les fonctions d'encapsidation la partie gauche du génome, qui contient le gène rep impliqué dans la réplication virale et l'expression des gènes viraux, la partie droite du génome, qui contient le gène cap codant pour les protéines de capside du virus. L'utilisation de vecteurs dérivés des AAV pour le transfert de gènes in vitro et in vivo a été décrite dans la littérature (voir notamment WO 91/18088; WO 93/09239; US 4,797,368, US5,139,941, EP 488 528). Ces demandes décrivent différentes constructions dérivées des AAV, dans lesquelles les gènes rep et/ou cap sont délétés et remplacés par un gène d'intérêt, et leur utilisation pour transférer in vitro (sur cellules en culture) ou in vivo (directement dans un organisme) ledit gène d'intérêt.Les AAV recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par co-transfection, dans un lignée cellulaire infectée par un virus auxiliaire humain (par exemple un adénovirus), d'un plasmide contenant la séquence codant pour un fragment ScFv de l'anticorps 1C2 bordé de deux régions répétées inversées (ITR) d'AAV, et d'un plasmide portant les gènes d'encapsidation (gènes rep et cap) d'AAV. Les AAV recombinants produits sont ensuite purifiés par des techniques classiques. Concernant les virus de l'herpès et les rétrovirus, la construction de vecteurs recombinants a été largement décrite dans la littérature voir notamment Breakfield et al., New Biologist 3 (1991) 203; EP 453242, EP178220, Bernstein et al. Genet. Eng. 7 (1985) 235; McCormick, BioTechnology 3 (1985) 689, etc. En particulier, les rétrovirus sont des virus intégratifs, infectant sélectivement les cellules en division. Ils constituent donc des vecteurs d'intérêt pour des applications cancer. Le génome des rétrovirus comprend essentiellement deux LTR, une séquence d'encapsidation et trois régions codantes (gag, pol et env). Dans les vecteurs recombinants dérivés des rétrovirus, les gènes gag, pol et env sont généralement délétés, en tout ou en partie, et remplacés par une séquence d'acide nucléique hétérologue d'intérêt. Ces vecteurs peuvent être réalisés à partir de différents types de rétrovirus tels que notamment le MoMuLV ("murine moloney leukemia virus"; encore désigné MoMLV), le MSV ("murine moloney sarcoma virus"), le HaSV ("harvey sarcoma virus"); le SNV ("spleen necrosis virus"); le RSV ("rous sarcoma virus") ou encore le virus de Friend. Pour construire des rétrovirus recombinants selon l'invention comportant un acide nucléique selon l'invention, un plasmide comportant notamment les LTR, la séquence d'encapsidation et ledit acide nucléique est construit, puis utilisé pour transfecter une lignée cellulaire dite d'encapsidation, capable d'apporter en trans les fonctions rétrovirales déficientes dans le plasmide. Généralement, les lignées d'encapsidation sont donc capables d'exprimer les gènes gag, pol et env.De telles lignées d'encapsidation ont été décrites dans l'art antérieur, et notamment la lignée PA317 (US4,861,719); la lignée PsiCRIP (WO90/02806) et la lignée GP+envAm-12 (W089/07150). Par ailleurs, les rétrovirus recombinants peuvent comporter des modifications au niveau des LTR pour supprimer l'activité transcriptionnelle, ainsi que des séquences d'encapsidation étendues, comportant une partie du gène gag (Bender et al., J. Virol. 61 (1987) 1639). Les rétrovirus recombinants produits sont ensuite purifiés par des techniques classiques. Pour la mise en oeuvre de la présente invention, il est tout particulièrement avantageux d'utiliser un adénovirus ou un rétrovirus recombinant défectif Ces vecteurs possèdent en effet des propriétés particulièrement intéressantes pour le transfert de gènes. L'adénovirus est particulièrement préféré pour le transfert de gènes dans le système nerveux (W094/08026). Avantageusement, dans les vecteurs de l'invention, la séquence codant pour un fragment ScFv de l'anticorps 1C2 est placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans les cellules nerveuses. Préférentiellement, il s'agit de signaux d'expression hétérologues, c'est-à-dire de signaux différents de ceux naturellement responsables de l'expression de l'anticorps. Il peut s'agir en particulier de séquences responsables de l'expression d'autres protéines, ou de séquences synthétiques. Notamment, il peut s'agir de séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus, y compris du virus utilisé. A cet égard, on peut citer par exemple les promoteurs E1A, MLP, CMV, LTR-RSV, etc. En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, ou permettant une expression tissu-spécifique. La présente invention concerne également toute composition pharmaceutique comprenant soit l'anticorps 1C2, un fragment ou dérivé de cet anticorps soit un ou plusieurs vecteurs tels que décrits précédemment. Ces compositions pharmaceutiques peuvent être formulées en vue d'administrations par voie topique, orale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intraoculaire, transdermique, intracérébral stéréotaxique, etc. De préférence, les compositions pharmaceutiques de l'invention contiennent un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable, notamment pour une injection directe dans le cerveau du patient.Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables. L'injection directe dans le cerveau du patient est avantageuse car elle permet de concentrer l'effet thérapeutique au niveau des tissus affectés. Les compositions selon l'invention sont tout particulièrement utiles pour le traitement des maladies neurodégénératives associées à la présence d'une protéine portant une chaîne homopolymère de glutamine. Les doses de virus recombinant défectif utilisées pour l'injection peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du vecteur viral, du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée ou encore de la durée du traitement recherchée. D'une manière générale, les adénovirus recombinants selon l'invention sont formulés et administrés sous forme de doses comprises entre et 1014 pfu/ml, et de préférence 106 à 1010 pfu/ml. Le terme pfu ("plaque forming unit") correspond au pouvoir infectieux d'une solution de virus, et est déterminé par infection d'une culture cellulaire appropriée, et mesure, généralement après 48 heures, du nombre de plages de cellules infectées Les techniques de détermination du titre pfù d'une solution virale sont bien documentées dans la littérature.Concernant les rétrovirus, les compositions selon l'invention peuvent comporter directement les cellules productrices, en vue de leur implantation. Sur le plan thérapeutique il serait également nécessaire de disposer d'un outil de diagnostique fiable. Un tel outil serait en outre particulièrement avantageux pour le diagnostic des prédispositions familiales à développer ce type de maladies. La présente invention a donc d'autre part pour objet de proposer une méthode de diagnostic de la maladie de Huntington fondée sur un test biologique. La demanderesse s'est également intéressée à d'autres applications possibles de l'anticorps 1C2 dans le cadre de l'identification d'agents responsables de maladies neurodégénératives. Bien que les symptômes cliniques manifestés soient souvent très différents la demanderesse a observé que certaines maladies neurodégénératives présentent en revanche de nombreux points communs, quant à leur mode de développement, avec la maladie de Huntington. Ces ressemblances sont surtout une apparition des symptômes de plus en plus précoce au cours des générations, une sévérité accrue ainsi qu'une transmission reliée préférentiellement à l'allèle paternel. Les agents pathologiques responsables de ces maladies ne sont pas connus et sont souvent difficilement identifiables. Il est particulièrement intéressant de rechercher s'il existe dans ces maladies un agent pathogène ressemblant dans sa structure à la protéine responsable de la maladie de Huntington. Il est alors très avantageux d'utiliser l'anticorps monoclonal 1C2 pour détecter chez des sujets atteints de ces maladies la présence de longues chaînes polyglutamine. Ceci rend possible l'identification des protéines portant ces longues chaînes qui sont susceptibles d'être les agents pathologiques recherchés. L'identification des protéines responsables de ces maladies conduit tout naturellement à leur séquençage. A partir de là, il est possible d'envisager la construction de sondes d'ADN appropriées, pour l'identification du gène responsable et la mise en oeuvre de traitements de thérapie génique tels que décrit ci-dessus. En conséquence l'utilisation de l'anticorps monoclonal I C2 peut etre généralisée pour le diagnostic précoce de sujets susceptibles de développer toute maladie neurodégénérative liée à l'expression d'une protéine ayant dans sa structure une longue chaîne polyglutamine, ainsi que des familles à risques qui expriment des protéines dont la chaîne polyglutamine comprend un nombre de résidus à la limite du pathologique. Pour procéder à ces différents diagnostics on utilise un anticorps monoclonal 1C2. Cet anticorps est mis en contact avec un extrait cellulaire obtenu à partir de cellules du patient exprimant la protéine recherchée. L'anticorps interagit avec cette protéine au niveau de l'épitope représenté par la longue chaîne polyglutamine. Les complexes Anticorps-Antigènes sont ensuites révélés par tout moyen connu de l'homme du métier (marquage de l'anticorps, utilisation d'un deuxième anticorps fluorescent anti-lC2, ELISA, etc.). L'intensité de l'interaction est déterminée. C'est en fonction de cette dernière que l'on peut établir le diagnostic. La méthode objet de la présente invention ouvre la voie à de nouvelles méthodes de traitement des maladies neurodégénérative basées sur une meilleure connaissances des protéines pathologiques qui en sont responsables. La présente invention sera décrite plus en détail à l'aide des exemples qui vont suivre et qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. EXEMPLES: Techniques générales de biologie moléculaire Les méthodes classiquement utilisées en biologie moléculaire telles que la technique de Western Blot, le marquage d'anticorps etc. sont bien connues de l'homme de métier et sont abondamment décrites dans la littérature [Maniatis T. et al., "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982; Ausubel F.M. et al. (eds), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, 1987]. Exemple I . Mise en évidence de l'affinité spécifique de l'anticorvs monoclonal 1C2 pour les chaine polyglutamine. Afin de mettre en évidence que mAclC2 était capable de reconnaître des protéines possédant une chaîne homopolymére de glutamine, nous l'avons tout d'abord analysé en "Western Blot" sur des extraits de lignées cellulaires lymphoblastoïdes (ciaprès LCL) provenant d'individus normaux et d'individus atteint de la maladie de Huntington présentant des longueurs variées de chaînes polyglutamines dans les HDP (Huntington Disease Protein). Ces différentes protéines sont tout d'abord mises au contact d'un anticorps monoclonal anti HDP. On observe lors de l'analyse en Western Blot que l'on discrimine très facilement les protéines normales de celles ayant une chaîne polyglutamine allongée, grâce à leur différence de poids moléculaire. Par contre lorsque le même lot est analysé avec l'anticorps monoclonal 1C2 seules les protéines HDP à longue chaîne polyglutamine sont détectées les protéines normales ne donnant pas de réponse. La réponse obtenue avec mAclC2 est spécifique des protéines pathologiques. Il est également très intéressant de constater que l'intensité du signal dépend de la longueur de la chaîne polyglutamine. Cette intensité est très forte pour les chaines de plus de 50 unités et minimale pour des chaînes de 39-40 unités. Exemple 2. Mise en évidence d'une corrélation entre la longueur de la chaîne polyglutamine et l'augmentation de l'affinité de I C2 pour celle-ci Cette relation entre intensité du signal et longueur de chaîne a ensuite été examinée à l'aide d'échantillons ordonnés en ordre de longueurs de chaînes décroissantes en partant du plus grand allèle. On observe que la valeur de l'affinité de l'anticorps monoclonal 1C2 pour les formes mutantes de HDP dépend clairement de la longueur de la chaîne de polyglutamine. En effet l'intensité du signal est plus forte pour les protéines ayant une chaîne de 60 à 85 résidus que pour les protéines ayant une chaîne de 39 ou 40 résidus cette dernière étant elle-même plus forte que celle observée pour des chaînes plus courtes. On observe également qu'une durée d'exposition à l'anticorps prolongée permet la détection des protéines ayant une chaîne dont la longueur se situe à la limite supérieure des protéines normales (128). Une comparaison semi-quantitative de l'intensité du signal détecté avec des HDP comprenant 39, 60 et 85 résidus glutamine a été effectuée à partir d'une série de dilutions d'extraits de LCL. L'intensité du signal HDP observée est 2 à 4 fois plus importante avec des chaînes de 85 résidus qu'avec des chaînes de 60 résidus et de 10 à 20 fois plus importante avec des chaînes de 60 résidus qu'avec des chaînes de 39 résidus. Exemple 3 Mise évidence que l'épitope reconnu par mAc i C2 est uniquement la chaîne polyglutamine. Lorsqu'on procède au séquençage de la protéine HDP on remarque que le peptide LEEQQRQQQQQQ de TBP qui est reconnu par l'anticorps n'est pas présent dans les séquences qui entourent la chaine de résidus glutamine dans HDP. On en déduit que I'épitope de HDP qui est reconnu par l'anticorps monoclonal 1C2 est bien uniquement la chaîne polyglutamine et que l'intensité du signal est uniquement dépendante de la longueur de celle-ci. Une expérience de vérification a été faite avec différents allèles de TBP qui possèdent également des chaînes polyglutamine dont la longueur varie de 29 à 42 résidus. L'analyse en Western Blot, après exposition à I C2, a permis de discriminer les allèles en fonction de leur taille. Là aussi l'intensité du signal est plus importante avec les chaînes de grandes tailles et les chaînes comprenant entre 27 et 30 résidus ne sont pas détectées. L'anticorps 1C2 est donc capable de reconnaître spécifiquement une séquence polyglutamine. L'intensité du signal obtenu dépend de la longueur de ladite séquence plus celle-ci est longue plus l'intensité est forte Exemple 4 Détection d'un épitope pathologique dans les ataxies spinocerebelleuses SCIAI et SCA3. Pour mettre en évidence la capacité de mAclC2 à détecter sélectivement d'autres protéines pathogènes comprenant une longue chaîne polyglutamine nous avons analysé en Western Blot des extraits de LCL provenant de patients atteints de SCAI et SCA3. Lors de l'expérience de liaison avec mAclC2 une protéine de 100 kD a été spécifiquement détectée dans les extraits provenant de patients atteints de SCIAI alors qu'elle était absente des extraits provenant de patients atteint de SCA3. Cette protéine correspond à l'ataxine 1, la protéine responsable de SCAI. Inversement, dans les extraits de LCL provenant de patients atteints de SCA3 on a détecté au moins 4 protéines (une bande majeure correspondant à une protéine de 68 kD et trois bandes mineures correspondant à des protéines de 64 74 et 87 kD) qui sont absentes des extraits provenant de patients atteints de SCAI. Un contrôle effectué sur 9 LCL provenant de sujets sains ne montre aucune de ces bandes.Dans tout les cas, aussi bien chez les sujet sains que chez les sujets atteints, on retrouve une bande correspondant à la TBP et une autre correspondant à une protéine d'environ 230 kD. On peut en conclure que mAclC2 est spécifique des protéines responsables de SCIAI et SCA3 et peut donc être utilisé dans le diagnostic de ces deux maladies. Exemple 5 . Mise en évidence de la présence de protéine contenant une longue chaîne polyglutamine dans d'autres maladies neurodégénératives grâce à mAc1C2. Les caractéristiques phénotypiques communes à toutes les maladies auxquelles nous nous sommes intéressés se retrouvent dans d'autres maladies neurodégénératives comme l'ataxie cérébelleuse autosomale dominante (ADCA) et la paraplégie spasmodique familiale (FSP) pour lesquelles la/les protéine(s) responsables ainsi que le(s) gène(s) correspondant n'ont pas encore été mis en évidence. On a testé en aveugle des extraits de LCL provenant de sujets atteints de ces deux maladies ainsi de SCAI, SCA3 et la maladie de Huntington. Sur les 9 LCL testées, 4 montrent une bande correspondant à une protéine spécifique de 130 kD ou de 150 kD, 3 ne montrent aucun signal spécifique et les deux autres présentent des bandes correspondant aux protéines mutées responsables de SCAI et appartiennent aux témoins. Nous avons comparé nos résultats aux dossiers médicaux des sujets de l'expérience. Les colonnes portant la bande pour une protéine de 130 kD correspondent à des échantillons provenant de patients atteints d'ADCA de type II entraînant une dégénération rétinienne. Des expériences de cartographie chromosomique ont permis de localiser le gène correspondant à cette protéine de 130 kD sur le chromosome 3p ce locus correspond au locus présumé responsable de la maladie. On a également retrouvé cette même protéine dans d'autres patients atteints d'ADCA de type II appartenant à d'autres familles La protéine de 150 kD a été recherchée chez d'autres patients atteints d'ADCA portant une mutation dans le gène SCA2 ainsi que chez des personnes de la même famille n'ayant pas développé la maladie.La protéine est toujours présente mais chez les sujets sains la longueur de la chaîne polyglutamine est plus petite. On peut donc en déduire que cette protéine de 150 kD est bien responsable d'une maladie neurodégénérative associé à l'allongement d'une chaîne polyglutamine dans une protéine normale qui présente les même caractéristiques de transmission que la maladie de Huntington. Exemple 6. localisation intracellulaire des protéines pathologiques. L'anticorps mAclC2 a également été utilisé pour déterminer la localisation intracellulaire de la protéine responsable de SCA3 ainsi que celle des protéines nouvellement identifiées et qui sont liées à l'ADCA de type II et à SCA2. L'analyse des fractions cellulaire est effectuée selon la technique du Western Blot. On utilise des fractions enrichies provenant des différents compartiments cellulaires le compartiment cytoplasmique et le compartiment nucléoplasmique. L'hybridation est réalisée avec mAclC2 marqué. Les ataxines 2 et 3 ainsi que la HDP mutante ont été localisées dans la fraction cytoplasmique. La protéine de 130 kD liée à l'ADCA de type II a quant à elle été localisée dans la fraction nucléoplasmique. Des tests de contrôle effectué avec la TBP dont la localisation cellulaire est connue ont permis de valider ces résultats. REVENDICATIONS 1. Utilisation de l'anticorps 1C2 ou d'un fragment ou d'un dérivé de l'anticorps 1C2 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement préventif ou curatif des maladies neurodégénératives associées à une répétition de glutamine. 2. Utilisation selon la revendication I caractérisée en ce qu'elle met en oeuvre l'anticorps 1C2. 3. Utilisation selon la revendication I caractérisée en ce qu'elle met en oeuvre un fragment ScFv de l'anticorps 1C2. 4. Utilisation d'un acide nucléique codant pour un fragment ScFv de l'anticorps 1C2 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement préventif ou curatif des maladies neurodégénératives associées à une répétition de glutamine. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 pour le traitement des maladies telles que par exemple la maladie de Huntington, I'ataxie spinocerebelleuse de type 1, 2 ou 3, I'atrophie musculaire spino-bulbaire associée au chromosome X ou maladie de Kennedy, I'atrophie dentarorubral-pallidoluysienne et l'ataxie spinocerebelleuse autosomale dominante. 6. Molécule comprenant le site de liaison de la région variable de la chaîne légère de l'anticorps 1C2 relié par un bras peptidique au site de liaison de la région variable de la chaîne lourde de l'anticorps I C2. 7. Séquence d'acide nucléique caractérisée en ce qu'elle code pour la molécule selon la revendication 6. 8. Vecteur comprenant la séquence selon la revendication 7 sous contrôle d'un promoteur fonctionnel dans les cellules de mammifères. 9. Vecteur selon la revendication 8 caractérisé en ce qu'il s'agit d'un adénovirus recombinant défectif. 10. Vecteur selon la revendication 8 caractérisé en ce qu'il s'agit d'un rétrovirus recombinant défectif. 11. Vecteur selon la revendication 8 caractérisé en ce qu'il s'agit d'un virus adéno associé recombinant défectif. 12. Vecteur selon la revendication 8 caractérisé en ce qu'il s'agit du virus de l'herpès recombinant défectif. 13. Composition pharmaceutique comprenant l'anticorps IC2, un fragment ou dérivé de cet anticorps. 14. Composition pharmaceutique comprenant un vecteur selon l'une quelconque des revendications 8 à 12. 15. Composition pharmaceutique destinée au traitement des maladies neurodégénératives associées à la présence d'une protéine portant une chaîne homopolymère de glutamine caractérisée en ce qu'elle comprend l'anticorps IC2, un fragment ou dérivé de cet anticorps, ou un vecteur selon l'une quelconque des revendications 8 à 12. 16. Méthode de diagnostic des maladies neurodégénératives caractérisée en ce que l'on détecte in vitro au moyen de l'anticorps IC2 la présence de protéines portant une chaîne polyglutamine de longueur pathologique. 17. Méthode selon la revendication 16 caractérisée en ce que la détection de ces protéines est réalisée par mise en contact d'un extrait cellulaire avec l'anticorps monoclonal 1C2 et révélation des complexes anticorps-antigènes formés. 18. Méthode selon l'une des revendications 16 ou 17 caractérisée en ce que la détection est réalisée sur un extrait de cellules sanguines. 19. Méthode selon l'une quelconque des revendications 16 à 18 pour la mise en évidence de prédisposition à la maladie de Huntington ou à une ataxie spinocerebelleuse I ou 3. 20. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes 16 à 18 pour la mise en évidence de maladies dégénératives du système nerveux central causées par la présence d'une longue chaîne polyglutamine dans une protéine exprimée.