Brevet FR2747308A1 — publié le 19971017

La présente invention concerne de nouvelles associations comprenant des extraits de l'arbre Azadirachta indica, du (-) hydroxycitrate et des céramides, et leur utilisation dans des compositions pharmaceutiques, parapharmaceutiques, cosmétiques et diététiques. Les extraits de diverses parties d'Azadirachta indica ou Media Azadirachta ou encore Neem contiennent des principes actifs, notamment l'azadirachtine, l'azadirachtinin, le nimbin, le nimbinene, le nimbidinin, le sugiol. Cet arbre pousse dans les régions les plus sèches et arides de l'Inde et l'Afrique. Les extraits aqueux de feuilles et l'huile âcre, amère, d'un jaune profond et au parfum désagréable fournie par les graines sont largement utilisés en médecine traditionnelle indienne pour le traitement de diverses maladies ainsi qu'en tant que pesticide ( voir Isman KO et al, Properties and uses ofneem, Azadirachta indica. Can. J. Bot. 68, 1-11, 1990 et Rao DVK et al, In vitro antibacterial activity of Neem oil, Indian J. Med. Res. 84 314-316, 1986). Une pâte dentifrice contenant des extraits aqueux de feuilles d'Azadirachta indica est commercialisée depuis plus de 20 ans en Inde. Des activités pharmacologiques connues et des procédés de préparation d'extraits d'Azadirachta indica sont déjà décrits dans la littérature . On peut citer par exemple Ara I. et al, Tricyclic diterpenoids from the stem bark of Azadirachta indica, J.Nat. Prod. 51 (6), 1054-1061, 1988. Le (-) hydroxycitrate est extrait des fruits de Garcinia cambogia; cet isomère (-) est utilisé dans le traitement de l'obésité. Appliqué localement, ce composé est très irritant. C'est pourquoi les compositions commerciales renferment au plus 0,2% en poids de ce composé. En outre sa pénétration cutanée est très faible. Les Céramides sont des sphingolipides présents dans toutes les structures cellulaires. Les Céramides sont un des constituants des membranes cytoplasmiques des cellules. Ainsi on les retrouve dans la peau, le système nerveux central et la moelle épinière. Les Céramides sont également présents dans les végétaux, les sources essentielles étant le blé, le riz, le soja, le millet et les épinards. Les Céramides sont d'un point de vue chimique issus de la formation d'une liaison amide entre un acide gras et une sphingosine, ou une phytosphingosine dans le cas des Céramides végétales. Grâce à leurs propriétés de biodisponibilité dues à leurs caractéristiques amphiphiles, les Céramides sont utilisés comme des vecteurs pour plusieurs principes actifs, plus particuliérement en dermocosmétologie. Des activités pharmacologiques et des procédés de préparation des Céramides sont déjà décrits dans la littérature. La vitamine A est une vitamine essentielle présente dans le foie, le beurre cru, le lait, les oeufs, le fromage et sous forme de provitamine (bêtacarotène) dans de nombreux légumes. La vitamine A favorise la formation des mucopolysaccharides-sulfates, intervenant dans la synthèse des stéroïdes sexuels et joue un rôle important au niveau des membranes cellulaires. Une carence entraîne une perte de la vision probablement liée à une diminution du pourpre rétinien ou rhodopsine. Après de longues recherches, la demanderesse a découvert que l'association d'extrait, notamment aqueux, d'écorce d'Azadirachta indica avec du (-) hydroxycitrate et des céramides présente notamment de remarquables propriétés anti-cholestérolémiantes. En outre, en application locale, une telle association n'est pas irritante et pénètre bien le derme. C'est pourquoi la présente invention a pour objet une association, caractérisée en ce qu'elle comprend - un extrait d'écorce d'Azadirachta indica, notamment un extrait aqueux - du (-) hydroxycitrate et - des céramides et, optionnellement - un composé à propriété antilipidique tel que la caféine, ou encore une vitamine telle que la vitamine E ou la vitamine A sous forme d'acide ou de bêta carotène. Les extraits d'Azadirachta indica sont de préférence des extraits d'écorce bien que des extraits de feuilles ou l'huile des grains puissent être utilisés. Un fournisseur est par exemple la société HEMA (INDE). Le (-) hydroxycitrate peut se présenter sous forme de poudre, ou d'extrait de Garcinia cambogia par exemple. Un fournisseur est par exemple ia société GREENTECH (St Beauzire - FRANCE) qui fournit des extraits renfermant de 6% à 30% de (-) hydroxycitrate. Un fournisseur de céramides est par exemple la société INOCOSM (Chatenay- Malabry- FRANCE). La vitamine A utilisée optionnellement est de préférence sous forme d'acide, en particulier d'acide rétinoïque ou d'isotrétinoïne, forme 13-cis de cet acide Des associations préférées selon l'invention comprennent un extrait aqueux d'Azadirachta indica, du (-) hydroxycitrate et des céramides dans les proportions pondérales suivantes, dont les valeurs sont rapportées à un produit fini, une crème par exemple -.extrait aqueux d'Azadirachta indica de 0,002% à 0,16%, - (-) hydroxycitrate de 0,025% à 0,7%, - céramides de 0,025% à 3%. Des associations particulièrement préférées ci-dessus selon l'invention comprennent un extrait aqueux d'Azadirachta indica, du (-) hydroxycitrate et des céramides dans les proportions pondérales suivantes: -.extrait aqueux d'Azadirachta indica de 0,008% à 0,04%, - (-) hydroxycitrate de 0,05% à 0,5%, - céramides de 0,05% à 1%. On retient tout particulièrement des associations ci-dessus qui comprennent un extrait aqueux d'Azadirachta indica, du (-) hydroxycitrate et des céramides dans les proportions pondérales suivantes: -.extrait aqueux d'Azadirachta indica de 0,008% à 0,04%, - (-) hydroxycitrate de 0,1% à 0,25%, - céramides de 0,1% à 0,25%. La présente invention a encore pour objet un concentré comprenant les trois constituants ci-dessus dans les proportions précitées. Dans la présente demande, lorsque l'on parle d'extrait d'Azadirachta indica, on entend un extrait sec, c'est à dire concentré au maximum ; en général le taux de solvant(s) résiduel, eau ou alcool tel qu'méthanol par exemple, est inférieur à 15%, notamment à 10%. A titre illustratif, dans le cas d'un extrait aqueux, l'extrait est un extrait aqueux dont on a éliminé l'eau par exemple par évaporation , dans le cas d'un extrait obtenu par action d'un solvant organique, il s'agit d'un extrait sans ou avec peu de solvant. La quantité totale d'extrait aqueux d'écorce d'Azadirachta indica dans la composition finale est de préférence inférieure à 0,1%, notamment inférieure à 0,04%. Une association préférée se présente sous la forme d'une composition comprenant environ 8 mg d'Azadirachta indica avec environ 250 mg de (-) hydroxycitrate et 100 mg de céramides pour un poids de 100 g ; cette composition est de préférence un gel. Un tel produit peut contenir en outre environ 15 mg de Vitamine A ou 2 g de caféine. Les associations objet de la présente invention possèdent de très intéressantes propriétés pharmacologiques. Elles sont douées notamment de remarquables propriétés anti-cholestérolémiantes. Les associations ci-dessus sont en particulier capables de diminuer les dépôts lipidiques locaux ou généraux. Ces propriétés sont illustrées plus loin dans la partie expérimentale. Elles justifient l'utilisation des associations ci-dessus décrites à titre de médicament, en cosmétique et en diététique. A ce titre, les associations ci-dessus peuvent être incorporées dans des compositions pharmaceutiques, parapharmaceutiques, cosmétiques et diététiques destinées à la voie digestive ou topique. Ces compositions peuvent être, par exemple, solides, semi-solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques ou cosmétiques couramment utilisées en médecine humaine, comme par exemple les comprimés simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les caramels, les suppositoires, les préparations injectables, les crèmes, les pâtes, les lotions, les tampons imprégnés, les gels; elles sont préparées selon les méthodes usuelles. Les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs. L'invention a donc aussi pour objet les compositions pharmaceutiques, parapharmaceutiques, cosmétiques et diététiques qui renferment au moins une association ci-dessus décrite, à titre de principe actif. Dans ces compositions, le principe actif est avantageusement présent à des doses physiologiquement efficaces; les compositions précitées renferment notamment une dose anti-cholestérolémiante efficace d'au moins un principe actif ci-dessus. La présente invention a encore pour objet un procédé de préparation d'une composition ci-dessus décrite caractérisé en ce que l'on mélange, selon des méthodes connues en elles mêmes le ou les principes actifs avec des excipients acceptables, notamment pharmaceutiquement acceptables. Les associations ou médicaments selon la présente invention trouvent leur emploi par exemple dans le traitement tant curatif que préventif de l'hypercholestérolémie et des pathologies induites par l'augmentation du taux de cholestérol telles que la sténose vasculaire, les stries lipidiques, la formation d'athérome, la thrombose, les maladies cardio-vasculaires affectant tant la macro- que la micro-circulation ainsi que par le stress par application locale ou par voie orale. Tout particulièrement, les applications préférées concernant les produits ci-dessus visent le traitement de l'hypercholestérolémie ou surcharge pondérale, ou surcharge graisseuse, hyperlipidemie pour diminuer les dépôts lipidiques locaux ou généraux ou accumulation graisseuse. Les doses usuelles, variables selon le sujet à traiter et l'affection en cause, peuvent être, par exemple, journellement de 20 à 300 mg chez l'homme d'extrait d'Azadirachta indica associé à 300 à 1000 mg de (-) hydroxycitrate et à 50 à 500 pg de céramides par voie orale pour le traitement de l'hypercholestérolémie. En application locale (contre l'acné, les boutons, les surcharges pondérales, les inflammations et les infections locales) sous forme de crème, gel, lotion, pâte ou émulsion, on peut appliquer par exemple sur les cuisses 2 g du gel décrit dans les exemples 2 fois par jour. La présente invention a encore pour objet une association cidessus décrite pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique, curatif ou préventif du corps humain ou animal. La présente invention a enfin pour objet l'utilisation d'une association ci-dessus décrite pour la préparation d'un médicament destiné au traitement d'une affection citée ci-dessus et notamment le traitement de l'hypercholestérolémie pour diminuer les dépôts lipidiques locaux ou généraux. Les exemples qui suivent illustrent la présente invention. PARTIE EXPERIMENTALE 1. Etude pharmacologique: Les effets des Céramides (dose de 4 mg/Kg/Jour) chez des lapins rendus hyper-cholestérolémiques on été testés. Les céramides testés ont été des céramides issus de blé, obtenus auprès de la Société INOCOSM Les résultats d'analyse biochimique obtenus après 4 semaines de traitement sont les suivants PARAMETRES HDL LDL Cholestérol total Cholestérol LOT (girl) (g/L) X /HDL (quotient) total (g/L) Témoin (n = 10) 0.224 5.17 : 5.55 26.78 Céramides (n = 10) 0.263 3.42 3.87 14.30 (+ 17 %) (- 33.8 %) (- 29.6 %) (- 46.6 %) Effets des Céramides sur les dépôts de graisses sur les parois internes de l'aorte de lapins SCORE Diminution par rapport aux témoins Témoins 25.5 Céramides (4 mg/Kg/jour) 15.0 - 40 % Les résultats obtenus montrent que les Céramides ont induit une diminution très importante des LDL (Low Density Lipoproteins ou mauvais cholestérol) et une augmentation plus ou moins importante des HDL (High Density Lipoproteins ou bon cholestérol) par rapport aux lapins témoins recevant une nourriture riche en cholestérol mais sans Céramides ajoutés. Une très forte diminution du dépôt de graisse sur la paroi vasculaire a été mise en évidence avec les Céramides (40 %). On a aussi noté que ces traitements ont induit une forte diminution du poids des glandes surrénales (- 35.5 % avec des Céramides). Comme il est bien connu, le stress se manifeste par l'augmentation de la sécrétion d'adrénaline et en conséquence l'augmentation du poids des glandes surrénales. Ces effets bénéfiques des Céramides ne sont pas encore connus, ils pourraient être liés à la diminution du taux en cholestérol et donc à l'amélioration des pathologies des animaux. 2. Etude de tolérance : Effets d'Azadirachta indica, des Céramides et du (-) hydroxycitrate sur l'irritation locale et la pénétration dermique. a) Méthodes: Irritation dermique : Après avoir rasé trois lapins en quatre emplacements sur le dos de leurs arrière-trains, les produits à tester (lg) ont été appliqués en une application unique ; I'irritation dermique a été mesurée en utilisant un système de cotation allant de O à 4 (classification selon l'indice de scores publié dans le Journal Officiel de la République Française du 1er Février 1982), aux temps 1, 2, 4, 24 H et quotidiennement jusqu'à une durée de 7 jours (Tests Bonnes Pratiques de Laboratoire OCDE). Irritation oculaire . On a instillé dans l'oeil droit de trois lapins 0,5 g de vaseline codex contenant des quantités appropriées du produit à tester. L'irritation oculaire a été mesurée en utilisant un système de cotation allant de 0 à 4 (classification selon l'indice de scores publié dans le Journal Officiel de la République Française du 10 Juillet 1982), aux temps 1, 2, 4, 24 H et quotidiennement jusqu'à 7 jours après l'application. Pénétration intradermique Des cellules épidermiques humaines en multicouches (modèle de Rosdy) ont été fixées à une cellule de Franz. On a alors appliqué 0,05 g du produit à tester dans de la vaseline sur la surface des kératinocytes, et on a mesuré le passage du produit à tester de l'autre côté de la couche épidermique en utilisant la technique de chromatographie liquide à haute performance. On a ainsi dosé la quantité de produit testé présente dans le milieu circulant de l'autre côté de la couche épidermique par rapport à celui où sont appliqués les produits à tester. La mesure a été faite 6 H après l'application du produit, et chaque expérimentation a été répétée trois fois. Les résultats obtenus dans les différents tests sont les suivants IRRITATION DERMIQUE ET OCULAIRE CHEZ LES LAPINS Score d'irritation moyen (n=3) PRODUIT Concentration PEAU YEUX Classification Azadirachta indica 0,04 % 0 0 Non-irritant Céramides 0,10 % o o Non-irritant (-) hydroxycitrate 0,25 % 2,25 3,50 Irritant Azadirachta indica 0,04 % + Céramides 0,01 % 0 0,25 Non-irritant + (-) hydroxycitrate 0,25 % Azadirachta indica 0,08 % + Céramides 0,01 % 0 0 Non-irritant + Céramides 0,0 O + (-) hydroxycitrate 0,25 % On observe que les compositions et associations selon la présente invention sont remarquablement bien tolérées, alors que le (-) hydroxycitrate est un produit irritant. PENETRATION INTRADERMIQUE Produit testé Concentration % de pénétration Azadirachta indica 0,04 % 0 Céramides 0,1 % Très faible à indétectable (-) hydroxycitrate 0,25 % 7,5 % Azadirachta indica 0,01 % + Céramides 0,1 % 29 % + (-) hydroxycitrate 0,25 % Ces résultats montrent que les associations et compositions selon l'invention ont une remarquable pénétration intradermique qui permet aux composés actifs d'aller agir au niveau de leur site d'action. 3. Exemples de compositions Exemple 1: Crème On a préparé une crème répondant à la formule suivante: Extrait aqueux d'écorce d'Azadirachta indica 0,04% (-) hydroxycitrate 0,1% Acide rétinoïque 0,01% Céramides de soja 0,1% Excipient à base de Carbopol qsp 100 g Exemple 2: Gel amincissant On a préparé un gel répondant à la formule pondérale suivante: Extrait aqueux d'écorce d'Azadirachta indica 0,008% (-) hydroxycitrate 0,25% Caféine 2% Céramides de blé 0,1% Excipient pour gel qsp 100 g Exemple 3: Comprimés On a préparé des comprimés répondant à la formule pondérale suivante: Extrait aqueux d'écorce d'Azadirachta indica 20 mg Extrait de Garcinia cambogia renfermant 50% de (-) hydroxycitrate 400 mg Céramides de blé 70 mg Excipient: q.s. pour un comprimé terminé à 600 mg (détail de l'excipient: lactose, amidon, talc, stéarate de magnésium) REVENDICATIONS 1. Une association caractérisée en ce qu'elle comprend - un extrait d'écorce d'Azadirachta indica, - du (-) hydroxycitrate et - des céramides. 2. Une association selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un composé à propriétés antilipidiques tel que la caféine ou une vitamine telle la vitamine E, que la vitamine A sous forme d'acide ou de bêta carotène. 3. Une association selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait aqueux d'Azadirachta indica, du (-) hydroxycitrate et des céramides dans les proportions pondérales suivantes, rapportées à un produit fini: -.extrait aqueux d'Azadirachta indica de 0,002% à 0,16%, (-) hydroxycitrate de 0,025% à 0,7%, céramides de 0,025%. à 3%, ou un concentré comprenant les trois constituants ci-dessus dans lesdites proportions. 4. Une association selon la revendication 1, 2, ou 3, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait aqueux d'Azadirachta indica, du (-) hydroxycitrate et des céramides dans les proportions pondérales suivantes, rapportées à un produit fini: -.extrait aqueux d'Azadirachta indica de 0,008% à 0,04%, (-) hydroxycitrate de 0,05% à 0,5%, céramides de 0,05% à 1%, ou un concentré comprenant les trois constituants ci-dessus dans lesdites proportions. 5.. Une association selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait aqueux d'Azadirachta indica, du (-) hydroxycitrate et des céramides dans les proportions pondérales suivantes, rapportées à un produit fini: -.extrait aqueux d'Azadirachta indica de 0,008% à 0,04%, (-) hydroxycitrate de 0,1% à 0,25%, céramides de 0,1% à 0,25%%, ou un concentré comprenant les trois constituants ci-dessus dans lesdites proportions. 6 .Une association selon l'une des revendications 1 à 5 pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique, curatif ou préventif du corps humain ou animal. 7. Une composition pharmaceutique, parapharmaceutique, cosmétique ou diététique caractérisée en ce qu'elle renferme au moins une association selon la revendication 6, à titre de principe actif. 8. Une composition selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'elle renferme environ 8 mg d'Azadirachta indica avec environ 250 mg de (-) hydroxycitrate et environ 100 mg de céramides pour un poids de 100 g. 9. Une composition selon la revendication 7 ou 8 comprenant en outre environ 15 mg de Vitamine A ou environ 2 g de caféine. 10. Utilisation d'une association telle que définie à l'une des revendications 1 à 5, pour la préparation d'un médicament, d'un produit cosmétique, d'un produit d'hygiène bucco-dentaire, d'un produit diététique, d'un complément alimentaire ou nutritionnel.