Brevet FR2736548A1 — publié le 19970117

La présente invention concerne de nouvelles applications de composés appartenant au groupe des rétinoldes. les rétinoldes constituent un groupe de composés dérivés du rétinol, ou vitamine Ae Parmi les composés représentatffs de ce groupe on peut citer les esters de rétinol, l'acide rétinoique, aussi appelé vitamine A acide, et le rétinal, sous forme de ses différents isomères. Ces produits ont déjà été proposés dans diverses applications. La demande EP 253 393 concerne des méthodes de traitement par les rétinordes des dommages provoqués par l'exposition de la peau au soleil et à la lumière. la demande EP 391 033 revendique l'utilisation de dérivés du rétinal pour le traitement d'un ensemble de troubles tels que les rides, les verrues, les désordres de la kératinisation et le vieillissement de la peau Le brevet US 4 034 114 avait déjà décrit la préparation de compositions topiques à base de rétinal pour le traitement des kératoses. De manière inattendue, la Demanderesse a maintenant trouvé que les rétinoides possèdent des propriétés antibactériennes, utiles en particulier pour des applications en dermatologie et/ou cosmétologie. Cette activité est particulièrement marquée sur les bactéries à Gram positif. Certains Gram positifs font partie de la flore cutanée physiologique, mais certaines souches peuvent devenir pathogènes lors de modifications physiologiques (perturbation de la puberté) ou modification de l'environnement. le germe le plus pathogene avec complications possibles, est le staphylocoque doré (Staphylococcus aureus). C'est un germe à haut potentiel de multiplication parfois porteur de facteurs de résistances antibiotiques. le portage de Staphylococcus aureus constitue un problème majeur. Il expose à des staphylococcies récidivantes, ainsi qu'à une transmission inter-humaine. il implique l'adhésion du germe à la peau, puis sa muldplication. les antibiotiques disponibles n'agissent que sur la multiplication, par exemple les sels d'éittthromycine, la clindamycine, l'acide fusidique. La bactéricidie d'un produit se quantifie en termes de chute logarithmique de la population microbienne par rapport au temps. Or, il faut par exemple 48 heures à l'érythromycine pour faire chuter la population microbienne de 2 Log 10(1). Les topiques antiseptiques peuvent également être utilisés, tels les sels d'ammonium quaternaires, les sels de chlorhexidine. Cependant ces produits présentent une activité cytotoxique intrinsèque, qui a pour conséquence de ralentir la cicatrisation cutanée. I1 existe donc bien un réel besoin pour un produit topique antistaphyloccique bactéricide c'est-à-dire à cinétique d'activité rapide sur le germe précité, qui posséderait, en plus, des propriétés trophiques pour la peau lésée. C'est pourquoi la présente invention a pour objet l'utilisation d'un rétinoide pour la préparation d'un médicament antibactérien, plus particulièrement d'un médicament bactéricide. Cependant, les rétinoides selon l'invention peuvent également etre utilisés pour préparer un médicament ayant une activité bactériostatique. Selon un de ses aspects, l'invention concerne l'utilisation d'un rétinoide comme décrit précédemment pour la préparation d'un médicament inhibant l'adhésion des bactéries aux cornéocytes. le médicament antibactérien selon l'invention se présentera de préférence sous forme d'une composition pharmaceudque comportant des excipients adaptés pour une application par voie topique. Selon l'un des aspects de l'invention, la composition contient en outre un adjuvant de pénétration, par exemple le méthylal. De préférence, les rétinoldes sont choisis dans le groupe comprenant le rétinaldéhyde tout trans, le 9 cis-rétinaldéhyde et le 13 cis- rétinaldéhyde. Les propriétés vitaminiques A et antibactériennes des compositions selon l'invention les rendent particulièrement adaptées pour corriger les lésions cutanées susceptibles de se surinfecter, les affections primitivement non microbiennes s'etant surinfectées, toutes lésions prurigineuses excoriées de l'adulte ou de l'enfant, les acnés surinfectés par un staphylocoque (doré ou epidermidis), certaines plaies microbiennes aux commissures des lèvres et du nez ; elles permettent aussi de traiter et de prévenir le portage de staphylocoques dorés dans les gites classiques. Cette dernière indication résulte de l'association de l'effet bactéricide et de l'effet d'inhibition d'adhésions aux cornéocytes. Elle pourra notamment etre mise en oeuvre dans le traitement des mains des infirmières. En outre, la Demanderesse a mis en évidence pour le rétinal un effet d'augmentation de la synthèse du collagène, et de la prolifération épidermique, qui favorisent la cicatrisation et la régénération tissulaire. L'invention fournit donc un moyen pour préparer un médicament bactéricide d'action rapide, en particulier sur les bactéries Gram positif et qui accélère la réparation des petites lésions. Ces propriétés nouvelles des rétinoides peuvent selon un autre aspect de l'invention etre mises en oeuvre dans une méthode de traitement cosmétique pour corriger les rougeurs cutanées, caractérisée en ce qu'on applique localement un composé appartenant au groupe des rétinotdeL le rétinoide est de préférence choisi dans le groupe comprenant rétinaldéhyde tout trans, 9 cis-rétinaldéhyde et 13 ciorétinaldéhyde. Dans les compositions conformes à l'invention, la concentration en rétinoides, particulièrement en rétinaldéhyde, est de préférence située dans l'intervalle compris entre 0,01 et 0,5 de préférence encore entre 0,01 et 0,0su Le rétinaldéhyde et ses Isomères dont le 9 et le 13 cis-rétinaldéhyde possèdent une activité ciblée sur les Gram positifs, en particulier du gent Staphylococcus dont le staphylocoque doré. De plus, le rétinaldéhyde possède une activité inhibant d'adhésion des Gram positifs aux cornéocytes pour des doses Infrabactériostatiques. L'efficacité a pu etre mise en évidence par le calcul des concentrations minimales inhibitrices et bactéricides sur des souches polyrésistantes issues de prélèvements cutanés isolés en milieu hospitalier et par études de l'adhésion du staphylocoque aux cornéocytes selon Cole et Silverber (1986). Le niveau d'efficacité, de l'ordre du microgramme, a été prouvé pour des souches de staphylocoques plurirésistantes notamment aux aminosides, tétracyclines et macrolides. L'efficacité bactéricide a pu être chiffffe. En effet, le rétinal à 0,1% a une D. value (temps necessaire pour faire chuter la population du nombre de germes) sur Staphylococcus aureus 6538 P de 14,8 minutes avec un coefficient de corrélation de 0,999 en ce qui concerne la droite de régression linéaire reliant la population de germes au temps de contact germe-rétinaldéhyde. Une utilisation de rétinoides selon l'invention comprend également toutes les étapes de formulation avec des excipients pharmaceutiquement et/ou cosmétologiquement acceptables connus de comme du métier tels que parfums, antioxydants, tensioactifs, conservateurs, stabilisants. On peut citer le BHT, BHA, ou les dérivés de tocophéroL les compositions peuvent notamment etre présentés sous forme de crème, lotion, émulsion, etc. Les exemples qui suivent sont destinés à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée. Exemple 1 Matériel et Méthode 1. Matériel Les souches Staphylococcus aureus 6538 P Staphylococcus aureus de pathologies cutanées Isolées de l'hôpital Rangueil Toulouse - (France) Les mitieux de culture Détermination de la CMI et D Value Bouillon Trypticase soja (Biomérieux) Détermination de la CMB et D. Value . Gélose Trypticase soja (Biomérieux) L'appareillage . Eau distillée stérile . Microplaques stériles Nunc R Nuncion à 96 puits . Tubes à essais stériles . Ensemenceur manuel type Denley stérilisé extemporanément . Micropipette rlterteck et cones stériles adaptés . Pipette Ependorff et cones stériles adaptés .Hotte à flux laminaire Bioblock Scientiflc . Etuve à 32 C Jouan . Spectrophotomètre PRIM et cuves adaptées . Bille de verre stériles Les produits Les solutions-mère des produits cités ci-dessous ont été préparées dans l'alcool puis dissoutes dans l'eau distillée stérile de façon à être en final à 200 g/ml et environ 10- éthanolique (sous lumière jaune). . Rétinal all Trans .Rétinal 9 Cis (Sigma R 5754 - lot 62 H 84 43) .Rétinal 13 Cis (Sigma R 6256 - lot 81 H 8440) 2. Méthode Concentration Minimale Inhibitrice = CMI Une distribution de 100 l de bouillon Trypticase soja est réalisée dans chaque microcupule de la microplaque stérile (A). Un témoin stérilité du milieu et un autre témoin de la vigueur de la souche sont réalisés en parallèle sur la microplaque. L'ensemencement de la microplaque (A) a lieu sous la hotte après préparation de l'inoculum bactérien comme suit: les souches ayant été préalablement repiquées la veille sur gélose Trypticase soja, un inoculum 108 germes/ml est dispersé dans l'eau distillée stérile puis agité au vortex. les billes de verre assurant une bonne dispersion des souches, la mesure de la densité permet de préparer un inoculum adéquat par rapport à un étalonnage pff-établi et validé. La répartition de la souche a lieu dans une deuxième microplaque (B) stérile par distribution de 100 ,ul d'inoculum par microcupule. L'ensemencement a lieu par un repiquage de la microplaque (B) vers la microplaque (A), il se réalise ainsi une dilution au 1/100 de l'inoculum : la microplaque A contenant 106 germes par ml, peut etre mise àltétuve24hà32-C. La lecture de la plus grande dilution donnant lieu à une clarté identique au témoin stérilité du milieu, constitue la concentration minimale inhibitrice. Concentration Minimale Bactéricide " CMB Le repiquage de la microplaque A sur une gélose trypticase soja préalablement coulée, permet après culture de 2448 h à 32- C, la lecture de la concentration CMB = plus petite concentration ne permettant pas de croissance sur la gélose. St. aureus St. epidermis RETINALDEHYDE 0,0003% 0,0001% ALL TRANS 0,0012% 0,0003% RETINAL 9 Cis 0,0003% 0,0001% 0,0025% 0,0006% RETINAL 13 Cis 0,0006% 0,0001% 0,0025% 0,0006% Ces résultats ont été confirmés sur 11 souches issues de pathologies cutanées et les moyennes des CMI et CMB sont: CMI = 2,26 + 0,77 g/ml CMB = 11,93 + 6,77 g/ml La D. value du Rétinal à 0,1 96 P/V dans une solution éthanolique à 20 96 V/V a été recherchée sur St. aureus 6538 P. La cinétique des prélèvements microbiens a été réalisée aux temps 15', 30', 60', 4h et 6h. L'inoculum de départ étant de 1,0.104 germes par ml, la neutralisation se réalise d'après les temps cités dans du Bouillon Trypticase Soja, supplémenté par 10 96 de Tween 80. Le neutralisant a été validé au préalable. Les résultats suivants sont obtenus: Temps 15 30 60 4h 6h D. value Rétinal 1,4.103 1,3.102 O 0 O 14,8 mn 0,196 r = 0,99 Log 3,15 2,11 Comme la molécule rétinal est difficile à stabiliser, le minimum d'excipients sera retenu. Ainsi, les excipients à propriétés antimicrobiennes complementaires du spectre, seront préférés. les isomères 9 Cis et 13 Cis présentant un meme niveau d'efficacité, une bonne rémanence microbienne cutanée, permettra une seule application par jour. Dans le cas de lésions, la molécule possédant des propriétés kératoplastiques, un effet cicatrisant complétera l'efficacité curative de la préparation. Exemple 2 Rétinaldéhyde 0,01 à 0,05 g Alcool à 30 QSP 100 Exemple 3 Afin d'améliorer la pénétration cutanée, un adjuvant pourra etre retenu. Rétinaldéhyde 0,01 à 0,05 g Méthylal qsp 100 Exemple 4 Rétinaldéhyde 0,01 à 0,05 g Propylène glycol ou Butylene glycol 15 à 20 g Eau distillée qsp 100 lies formules citées dans les exemples ne sont pas exhaustives et pourront etre complétées par les concentrations de 196 de BHT ou de 0,02 de BHA ou de dérivé de tocophérol. REFERENCES 1. lhabaut A. et Meyran M. (1989) Activité bactéricide comparée de quatorze antibiotiques sur staphylococcus aureus. Path. Biol. 37 : 321 - 328. 2 Cole G.W. ; Silvergerg N.L (1986) The adherence of staphylococcus aureus to human corneocytes. Arch. Dermatol. 122 : 166 - 169. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un rétinoide pour la préparation d'un médicament antibactérien. 2. Utilisation selon la revendication 1 pour la préparation d'un médicament bactéricide. 3. Utilisation d'un rétinoide selon l'une des revendications 1 ou 2 pour la préparation d'un médicament inhibant l'adhésion des bactéries aux cornéocytes. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le rétinolde est choisi dans le groupe comprenant le rétinaldéhyde tout trans, le 9 cis-rétinaldéhyde et le 13-cis rétinaldéhyde. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'il s'agit d'un médicament antibactérien actif par voie topique. 6. Utilisation d'un rétinoide selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le médicament est actif sur les bactéries gram positif, en particulier du genre Staphylococcus. 7. Méthode de traitement cosmétique pour corriger les rougeurs cutanées, caractérisée en ce qu'on applique localement un composé appartenant au groupe des rétinoldes. 8. Méthode selon la revendication 7, caractérisée en ce que le rétinoïde est choisi dans le groupe comprenant: rétinaldéhyde tout trans, 9 cis-rétinaldéhyde et 13 cis-rétinaldéhyde. 9. Méthode selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisée en ce que le composé rétinoide est administré dans une composition à une concentration de 0,01 à 0,05 % (p/v).