Brevet FR2746924A1 — publié le 19971003

Cette invention concerne un dispositif de détection et/ou de dosage d'une substance d'intérêt dans un fluide, la préparation de ce dispositif, ainsi qu'un procédé de détection et/ou de dosage avec un tel dispositif. On sait que nombreux essais de diagnostic ou d'aide au diagnostic sont réalisés actuellement dans des puits de microplaques de nitration ou dans des tubes dont la surface est revêtue ou peut être revêtue d'un ligand approprié. Tous ces essais sont fondés sur l1af- finité d'un ligand pour une substance biologique d'intérêt, conduisant à l'immobilisation de la substance recherchée sur un support solide. I1 est alors possible de révéler la présence de la substance immobilisée, ou de la doser. Les techniques de révélation ou de dosage sont connues en soi. Les méthodes utilisées actuellement pour réaliser de tels essais présentent certains inconvénients. En premier lieu, les volumes de fluide testés sont nécessairement limités, d'où un éventuel manque de sensibilité des tests. Par ailleurs, les opérations de rinçage constituent des opérations délicates, avec des manipulations malaisées ou imposant l'utilisation de dispositifs laveurs de microplaques. D'autre part, lorsque le fluide à tester est le sang, il n'est pas possible de travailler avec du sang total. I1 convient d'effectuer une opération préliminaire de centrifugation pour éliminer les hématies. Dans certains cas, on utilise des systèmes dans lesquels le ligand immobilisé est remplacé par une biomolécule réactive ou un biocatalyseur (enzyme, ou même cellules bactériennes ou autres) immobilisé par exemple dans un hydrogel ; voir par exemple, W.R. Gombotz et A.S. Hoffman, "Immobilization of biomolecules and cells on and within synthetic polymeric hydrogels", in "Hydrogels in Medicine and Pharmacy", N. Peppas Ed., CRC Press, vol. 1, Chap. 5. Ces systèmes peuvent être utilisés pour détecter une substance d'intérêt notamment en la faisant réagir avec la molécule immobilisée, ou avec l'aide de la molécule immobilisée, pour obtenir un produit identifiable. Mais la préparation et la manipulation de tels systèmes est malaisée. La présente invention permet de remédier à ces inconvénients. Elle permet en outre de réaliser des tests de détection très sensibles malgré l'utilisation de faibles quantités de ligand. Grâce au dispositif de l'invention, on peut le cas échéant rechercher une substance d'intérêt dans un grand volume de fluide, sans les limita tions imposées par la géométrie d'un puits de microplaque ou d'un tube. Par ailleurs, le dispositif de l'invention permet, le cas échéant, de travailler avec du sang total. D'autres avantages du dispositif de l'invention ressortiront à la lecture de la description ci-après. L'invention a pour objet un dispositif de détection et/ou de dosage d'une substance d'intérêt dans un fluide, ledit dispositif comprenant - un support en forme d'anneau solidaire d'un organe de préhension, - et une pellicule solide plane comprenant une matrice polymère obturant ledit anneau. Pour pouvoir être utilisée conformément à l'invention, la pellicule du dispositif doit être associée avec au moins un réactif utilisable dans la détection et/ou le dosage de la substance d'intérêt. Lorsque le dispositif ne comprend pas un tel réactif, la pellicule est cependant susceptible d'être associée avec un tel réactif. Dire que la pellicule est associée avec un réactif signifie que ledit réactif se trouve fixé sur la pellicule et/ou dans la masse de celle-ci. Par exemple, le réactif peut être encapsulé dans la matrice polymère formant la pellicule. Il peut également être fixé sur au moins une face de la pellicule par établissement de liaisons covalentes, éventuellement par l'intermédiaire d'un bras espaceur. Le réactif peut également être fixé sur la pellicule par adsorption, notamment par interaction hydrophobe, par liaison(s) hydrogène, par interaction ionique, ou encore il peut être lié à une substance elle-même fixée sur la pellicule par tout moyen connu. Lorsque, dans le dispositif de l'invention, la pellicule n 'est pas associée avec un réactif utilisable dans la détection et/ou le dosage de la substance d'intérêt, le réactif doit être mis en place par l'utilisateur, ce qui présente un intérêt notamment lorsque l'utilisateur veut utiliser le dispositif pour rechercher des substances variées, et donc en utilisant des réactifs différents variant selon lesdites substances. Dans un tel cas, le réactif pourra être fixé sur la pellicule comme déjà indiqué ci-dessus. La pellicule peut aussi comporter des moyens pour immobiliser le réactif. Ces moyens sont par exemple des groupements fonctionnels portés par la matrice polymère et capables de réagir avec ledit réactif de façon à l'immobiliser, par exemple par formation d'une liaison covalente. Les groupements fonctionnels appropriés sont bien connus : il s'agit par exemple de groupements ou substituants halogène, amine, carboxyle, carbonyle, époxy, etc. Les moyens pour immobiliser le réactif comprennent aussi, comme précédemment, tout groupement fonctionnel permettant de fixer le réactif par formation d'interactions ioniques, d'interactions hydrophobes, de liaisons hydrogène, etc. Eventuellement, le groupement fonctionnel peut être situé à l'extrémité d'un bras espaceur dont l'autre extrémité est fixée sur la pellicule. Le réactif associé à la pellicule du dispositif de l'invention peut être notamment un ligand. Les ligands, qui ont pour fonction d'immobiliser sur la pellicule, ou dans la pellicule, la substance recherchée, peuvent être tous composés capables de réagir en formant une liaison (ou de se lier par affinité), de façon spécifique, avec une substance d'intérêt, y compris les substances recherchées dans les tests diagnostiques, bactériologiques ou similaires. La fixation de la substance d'intérêt sur la pellicule, par l'intermédiaire d'un ligand, peut ensuite être révélée selon les méthodes connues, par exemple à l'aide d'un agent révélateur approprié (notamment un agent chromogène donnant une réaction colorée). Le réactif peut donc être notamment un ligand choisi par exemple parmi les anticorps, les antigènes, les allergènes, y compris les allergènes minéraux, les virus et les microorganismes, y compris les cellules animales ou végétales, par exemple des hématies, ou encore une sonde nucléique. Les couples ligand-substance d'intérêt sont notamment des couples anticorps-antigène, anticorpshaptène, enzyme-substrat d'enzyme, sonde nucléique-polynucléotide, ou analogues. Dans d'autres modes de réalisation, le réactif associé avec la pellicule du dispositif de l'invention est un composé capable de réagir avec la substance d'intérêt, ou capable de réagir avec un produit réactionnel obtenu par réaction de la substance d'intérêt. Par exemple, si la substance d'intérêt est une enzyme, la pellicule du dispositif peut contenir comme réactif le substrat de l'enzyme, et éventuellement d'autres réactifs permettant de caractériser le produit de la réaction catalysée par l'enzyme (ou même le produit d'une ou plusieurs réactions subséquentes). Si la substance d'intérêt est un substrat d'enzyme, la pellicule du dispositif peut contenir comme réactif ladite enzyme, et éventuellement d'autres réactifs permettant de caractériser un produit de la réaction catalysée par l'enzyme, ou un produit d'une réaction subséquente. Parmi les autres réactifs pouvant être associés à la pellicule du dispositif, on citera notamment des agents révélateurs tels que des agents susceptibles de donner une réaction colorée, par exemple par oxydation ou sous l'influence d'un changement de pH. Ainsi, le réactif associé ou susceptible d'être associé avec la pellicule du dispositif de l'invention, peut être aussi, par exemple, une enzyme, une cellule utilisée comme biocatalyseur, un substrat d'enzyme, un agent chromogène, y compris un indicateur coloré, etc. Le polymère formant la matrice de la pellicule du dispositif de l'invention peut être tout polymère qui permet de fixer le réactif selon l'une des méthodes indiquées précédemment, qui conserve une structure cohérente et stable dans le milieu d'utilisation, et notamment tout polymère qui est insoluble dans un milieu liquide dans lequel le dispositif est susceptible d'être utilise. Les polymères utilisables peuvent être choisis dans chaque cas par des expériences de routine. En particulier, dans le cas où le dispositif est destiné à une utilisation dans l'eau, la matrice polymère peut être réalisée avec un polymère ou un copolymère hydrophobe qui est choisi, par exemple, parmi le polystyrène, un copolymère polystyrèneaminométhylstyrène, le polycarbonate et le polypropylène. On peut également utiliser des polymères pouvant être obtenus par hydrolyse et polycondensation de certains alkoxydes métalliques tels que des siloxanes. De tels polymères sont préparés de façon connue par les procédés dits sol-gel. On peut utiliser en particulier des polymères capables de se présenter sous la forme d'un gel, c'est-à-dire sous la forme d'une matière fluide ou semi-rigide incluant des molécules de solvant, et capables de se transformer en une matière rigide (gel durci, ou encore xérogel) par réticulation et/ou élimination partielle ou totale du solvant. Dans le cas où l'on souhaite immobiliser dans la pellicule, par encapsulation, une molécule biologiquement active, le polymère est de préférence un hydrogel. On sait que les hydrogels sont des matériaux polymères qui ont la propriété de gonfler dans l'eau et de retenir une proportion notable d'eau sans se dissoudre. L'intérêt des hydrogels est qu'ils forment un réseau tridimensionnel à travers lequel les petites molécules hydrophiles peuvent diffuser facilement, tandis que les grosses molécules (notamment des protéines) ou même des cellules, restent immobilisées à l'intérieur du réseau tout en conservant leur activité biologique. Les polymères capables de donner des hydrogels sont connus. On peut préparer de tels hydrogels notamment au départ de polymères qui sont solubles dans l'eau en donnant une solution visqueuse ou un gel. Une telle solution ou un tel gel peut ensuite être durci par réticulation. Les agents réticulants sont bien connus. Il s'agit généralement de composés bifonctionnels, par exemple des diamines, des composés dicarboxyliques, des composés dicarbonylés, etc. Les composés monocarbonylés, comme le formol, peuvent également être utilisés comme agents réticulants, notamment lorsque le polymère contient des groupements amines. On peut utiliser par exemple un gel à base de protéines, d'agarose, de polyacrylamide, etc. Pour la réticulation, on peut utiliser par exemple un aldéhyde (formol, glutaraldéhyde) dans le cas d'une protéine, le bisacrylamide dans le cas du polyacrylamide (en présence d'un initiateur tel que le persulfate de sodium), etc. On peut utiliser en particulier un gel à base de gélatine. L'anneau servant de support à la pellicule peut être réalisé en tout matériau approprié, tel que par exemple le polystyrène. Cet anneau est solidarisé avec un organe de préhension. Dans le dispositif de l'invention, l'organe de préhension est par exemple une tige solidarisée directement ou indirectement avec l'anneau, pour permettre la préhension et aussi la manipulation. Cette tige peut avoir une orientation quelconque par rapport à la pellicule. Selon un mode de réalisation particulièrement simple à réaliser, l'ensemble formé par l'anneau et ladite tige est une oese. On sait qu'une oese, constituée par une tige terminée par un anneau, est utilisée de façon courante, notamment en microbiologie, pour prélever, grâce aux forces de capillarité et de tension superficielle, un petit volume précis d'un liquide (quelques microlitres). L'invention a également pour objet un procédé de préparation du dispositif tel que défini ci-dessus. Ce procédé est principalement caractérisé par le fait - que l'on prépare une solution du polymère constituant de ladite matrice, - que l'on ajoute à ladite solution, si désiré, un agent réticulant, - que l'on immerge l'anneau dudit dispositif dans ladite solution de façon à prélever une fraction de celle-ci sous la forme d'une pellicule liquide obturant l'anneau, - et que l'on maintient ledit dispositif dans des conditions permettant la transformation de ladite pellicule liquide en pellicule solide par évaporation et/ou réticulation. Dans des modes d'exécution particuliers de ce procédé, on peut opérer par exemple comme indiqué ci-après. Lorsque le polymère précurseur de la matrice de la pellicule est soluble dans l'eau, on ajoute un agent réticulant, puis on prélève à l'aide de l'anneau une fraction de la solution, sous la forme d'une pellicule liquide, avant que la réaction de réticulation n'ait transformé le polymère dissous en un produit solide. Ainsi, au moins une partie de l'étape de réticulation s'effectue dans la pellicule formée qui se solidifie par réticulation. Lorsque le polymère précurseur de la matrice est soluble dans les solvants organiques, on peut en préparer une solution suffisamment visqueuse pour permettre le prélèvement avec l'anneau, puis on forme la pellicule solide par évaporation du solvant. On peut ensuite, le cas échéant, fixer le réactif, ou les réactifs, à la surface de la pellicule solide formée, selon les méthodes qui ont été indiquées ci-dessus, en opérant dans un milieu liquide approprié dans lequel le réactif, ou un précurseur du réactif, est dissous. On peut aussi immobiliser le réactif dans la matrice polymère, notamment en opérant de la façon suivante. On prépare une solution aqueuse du polymère de base (non réticulé). On incorpore le réactif (ou les réactifs), en quantité appropriée, dans cette solution. On ajoute en outre un réticulant, avant ou après l'addition du réactif, puis on immerge l'anneau du dispositif dans la solution de façon à prélever une fraction de celle-ci, comme indiqué plus haut. On maintient ensuite le dispositif, pendant un temps suffisant, dans des conditions permettant la transformation de la pellicule liquide en pellicule solide, sous l'effet de la réticulation. Les quantités de réactif à incorporer dans la matrice polymère de la pellicule, ou à fixer sur la pellicule, peuvent être déterminées aisément dans chaque cas par de simples expériences de routine, par exemple, en fonction de la gamme de concentrations attendue de la substance d'intérêt dans le fluide testé, et en fonction de la sensibilité de la méthode de révélation choisie. L'invention a également pour objet l'utilisation du dispositif décrit ci-dessus, et en particulier un procédé de détection et/ou de dosage d'une substance d'intérêt dans un fluide, à l'aide d'un dispositif tel que défini précédemment. Ce procédé est principalement caractérisé par le fait que (a) on associe, le cas échéant, ledit réactif avec ladite pellicule, (b) on immerge une partie du dispositif, comprenant la pellicule, dans le fluide à tester, dans des conditions permettant une interaction de ladite substance et dudit réactif, puis (c) on révèle la présence éventuelle de ladite substance, et/ou l'on dose ladite substance, selon des méthodes connues en soi. Dans le cas où le réactif est un ligand, ladite interaction entre la substance et le réactif est la fixation de la substance sur le réactif, et donc sur la pellicule. Lorsque le réactif n'est pas un ligand, l'interaction peut consister soit en une réaction entre le réactif et ladite substance, soit en une réaction entre le réactif et un produit réactionnel issu de la réaction de ladite substance avec un autre réactif, soit encore en la catalyse de l'une desdites réactions. Les conditions de durée, de milieu, etc. nécessaires pour que l'interaction puisse se produire sont connues ou peuvent être facilement déterminées par des expériences de routine. Dans des modes d'exécution particuliers, ce procédé d'utilisation du dispositif de l'invention peut encore être caractérisé par le fait - que ledit réactif est un ligand capable d'affinité pour ladite substance d'intérêt et qu'à l'étape (c) on révèle et/ou dose ladite substance immobilisée sur la pellicule, - ou que ledit réactif est capable de réagir avec ladite substance d'intérêt ou avec un produit réactionnel obtenu par réaction de celle-ci, et que l'on révèle la présence de ladite substance et/ou on la dose par révélation de la présence et/ou dosage d'un composé qui résulte soit d'une réaction entre ledit réactif et ladite substance, soit d'une réaction entre ledit réactif et ledit produit réactionnel. Le dispositif de l'invention est utilisable dans tout fluide, et notamment un liquide, dans lequel on désire rechercher une substance d'intérêt. Un tel fluide peut être notamment un fluide biologique (tel que sang total, sérum, plasma, urine, salive, broyat de cellules, etc.). Le ligand associé à la pellicule du dispositif de l'invention peut donc être choisi notamment parmi tout produit ayant une affinité pour une substance biologique d'intérêt. Lorsque le fluide est un liquide, on peut immerger la partie active du dispositif, c'est-à-dire la pellicule, dans un récipient contenant le liquide à tester ou un échantillon du liquide à tester. Pendant l'immersion dans le fluide à tester, on peut agiter ledit fluide et/ou ledit dispositif. On peut aussi, le cas échéant, introduire le dispositif dans un courant d'écoulement ou dans un jet dudit liquide. Le fluide peut être encore un gaz ambiant ou expiré par les poumons, une eau naturelle, une eau de consommation, une boisson, un effluent industriel, un milieu réactionnel liquide dans lequel a été effectuée, ou dans lequel se poursuit, une réaction chimique, etc., et la substance d'intérêt peut être par exemple un agent polluant, un réactif, le produit réactionnel d'une réaction chimique, une impureté présente (ou dont la présence est soupçonnée) dans un réactif, ou obtenue à côté d'un produit principal de réaction dans un milieu réactionnel, etc. Quand le fluide est un gaz, on peut introduire au moins la partie active du dispositif (c'est-à-dire la pellicule) dans une enceinte contenant ce gaz, ou placer ladite partie active dans un courant dudit gaz. Lorsque le fluide testé est un gaz, on peut imprégner la pellicule du dispositif avec de l'eau ou tout autre solvant approprié avant de disposer ledit dispositif dans un courant dudit gaz (par exemple l'air exhalé par une personne, en vue de détecter la présence éventuelle d'éthanol), cette imprégnation avec un solvant facilitant la réaction réactif-substance d'intérêt, et éventuellement les réactions ultérieures de révélation. Lorsque l'étape de révélation comporte l'utilisation d'au moins un agent révélateur, cet agent (par exemple substrat d'enzyme, indicateur coloré, etc.) peut le cas échéant être incorporé dans la matrice polymère, à côté du ligand, ou peut être ajouté dans le fluide examiné au moment où l'on effectue le test de recherche de la substance d'intérêt, ou encore peut, le cas échéant, être mis en contact avec la pellicule après que le ligand a été mis en contact avec la substance d'intérêt. Pour révéler la présence de la substance d'intérêt, par exemple lorsqu'elle est fixée sur la pellicule par l'intermédiaire du ligand, on peut utiliser toute méthode connue (méthode chimique, biochimique, spectroscopique ou isotopique, ou encore fluorescence, etc.), y compris les méthodes immunologiques bien connues utilisées dans le domaine du diagnostic pour les essais selon les techniques dites sandwich et les techniques de compétition. Parmi les techniques de révélation, qui sont connues en soi, on préfère celles qui donnent lieu à une réaction colorée ou un phénomène de chimioluminescence ou de phosphorescence. Par exemple, dans une technique de type sandwich, on révèle la présence de la substance d'intérêt, fixée, sur la pellicule par l'intermédiaire d'un premier ligand, à l'aide d'un second ligand capable d'affinité pour la substance d'intérêt fixée. Le second ligand est lui-même marqué à l'aide d'un agent traceur ou est luimême détectable à laide d'un réactif (notamment un anticorps antiimmunoglobuline) marqué capable d'affinité pour ledit second ligand. Par exemple, le second ligand est marqué par une enzyme dont le produit de réaction constitue le substrat d'une seconde enzyme incorporée dans la matrice de la pellicule ou immobilisée sur celle-ci L'agent traceur peut être tout marqueur utilisé classiquement, choisi parmi les marqueurs radio-actifs, enzymatiques, fluorescents, chemiluminescents, etc. Dans les méthodes par compétition, on révèle la présence de la substance par addition au fluide biologique à tester d'une quantité connue de ladite substance marquée, de façon à établir une compétition, pour la fixation sur le ligand lié à ladite pellicule, entre la substance éventuellement présente dans le fluide biologique et la substance marquée ajoutée. Le dispositif de l'invention permet notamment d'utiliser des volumes relativement importants de fluide dans lequel on recherche une substance d'intérêt, ce qui conduit à une augmentation de la sensibilité par concentration de la substance d'intérêt contenue dans un grand volume sur la pellicule dont la surface est relativement petite. On peut, pour faciliter cette concentration, intro duire le dispositif de l'invention dans un grand volume de fluide à tester, et agiter le dispositif de l'invention et/ou le fluide pour augmenter les chances de contact entre la substance d'intérêt et le ligand. Lorsque la pellicule du dispositif de l'invention est au moins partiellement transparente, on peut facilement observer un changement de couleur ou même réaliser une lecture d'une réaction colorée par les méthodes photométriques ou spectrophotométriques. Le dispositif de l'invention permet également de réaliser des dosages, notamment par comparaison avec des solutions étalons ou par comparaison avec des gammes de résultats établis préalablement avec des solutions étalons. Un avantage de l'invention est la possibilité d'archivage direct du dispositif après utilisation. Par exemple, lorsque la matrice polymère de la pellicule contient une enzyme, la diffusion dans la matrice d'un substrat soluble de ladite enzyme peut donner une réaction colorée, ou un produit de réaction capable de réagir avec un agent révélateur chromogène, en donnant un produit coloré précipitant dans la matrice. La coloration de la matrice est stable dans le temps et le dispositif peut alors être archivé tel quel. Lorsque ledit dispositif comporte une première enzyme incorporée dans la matrice polymère formant la pellicule, et un ligand couplé à une seconde enzyme, on peut choisir les enzymes de façon que le substrat de la seconde enzyme soit transformé en un produit qui est lui-même le substrat de la première enzyme. Cette seconde enzyme pouvant être incorporée en excès dans la matrice, la réaction colorée se trouve ainsi amplifiée. Un autre avantage de l'invention est de permettre de simplifier considérablement les manipulation de rinçage du dispositif qui peuvent être effectuées soit sous le jet d'un robinet d'eau, soit par une ou plusieurs immersions dans au moins un liquide de rinçage. En particulier, il est tout à fait possible d'utiliser le sang total comme fluide biologique. Un autre avantage encore est que certains réactifs dangereux peuvent être incorporés dans la pellicule, ou fixés sur celle-ci, au moment de la préparation du dispositif, ce qui évite la manipulation de ces réactifs, lors de l'utilisation du dispositif par du personnel non spécialisé ou dans des locaux inadaptés à de telles manipulations. Le procédé de l'invention peut être appliqué notamment à la recherche ou au dosage de toute substance pour laquelle un ligand existe ou est susceptible d'être préparé. Les substances d'intérêt peuvent être à titre d'exemples, dans le domaine biologique, les anticorps viraux ou bactériens, ou encore les anticorps irréguliers appelés agglutinines irrégulières (en utilisant comme ligand des hématies), les hormones, y compris des hormones de nidation ou de gestation, etc., les enzymes, les substrats d'enzymes, les produits du métabolisme, des polynucléotides, etc. Les exemples suivants illustrent l'invention. EXEMPLES EXEMPLE 1 : Recherche d'anticorps anti-virus grippal Préparation du support On chauffe à 80"C une solution aqueuse de gélatine (origine : SIGMA-USA) à 10 % (poids/volume). Après refroidissement à 35"C, on prélève 9,5 ml de la solution de gélatine et on ajoute 0,5 ml d'une solution de virus grippal à 10 pg/ml. Après homogénéisation, on ajoute 0,5 ml d'une solution aqueuse contenant du formaldéhyde (20 % en volume) et de l'éthanol (50 % en volume). On utilise des oeses réalisées en polystyrène, commercialisées par la Société NUNC (Danemark). On trempe l'extrémité des oeses dans la solution obtenue et on les retire immédiatement. Une partie de la solution visqueuse est retenue dans l'espace interne délimité par l'anneau. Les oeses sont alors placées à -20 C pendant 12 heures, puis amenées à +4"C et rincées à l'eau distillée. Elles sont conservées à +4"C soit dans l'eau, soit à l'air. Le disque de gélatine emprisonné dans l'anneau de l'oese à une épaisseur d'environ 0,2 mm et un diamètre (correspondant un diamètre intérieur de l'anneau de l'oese) de 4 mm. Immunoessai L'extrémité d'une oese est trempée pendant dix minutes dans un sérum humain dilué au 1/100, contenant des anticorps anti-virus grippal. L'oese est ensuite rincée à l'eau puis immergée dix minutes dans une solution contenant des anticorps anti-immunoglobulines humaines marqués à la peroxydase. Après lavage, l'extrémité de l'oese est placée dans un tube contenant le substrat de la peroxydase (chloronaphtol + peroxyde d'hydrogène) pendant dix minutes. L'apparition d'une couleur bleue sur la pellicule témoigne de la présence d'anticorps spécifiques anti-virus de la grippe. ExnoeLI 2 : Recherche d'anticorps anti-virus de la rougeole Préparation du support Les oeses sont préparées de la même manière qu'à l'exemple 1, à l'exception du fait que le virus n'est pas incorporé dans le gel. Après le dernier rinçage, les oeses sont placées dans un tube contenant une solution du virus de la rougeole (10 pg/ml) en présence d'un agent de couplage (l-éthyl-3-(3-diméthyl-aminopropyl)carbodiimide à 100 pg/ml dans un tampon phosphate de pH 7,4) pendant 30 minutes. Les oeses sont alors rincées à l'eau distillée. Le virus est greffé de façon covalente à la surface du disque de gélatine. Imunoossai La procédure est analogue décrite à celle de l'exemple 1. ExuwLs 3 : Recherche d'anticorps anti-VIH Préparation du support La préparation est identique à celle exposée à l'exemple 1. Le virus utilisé est cette fois le virus VIH. La préparation virale contient la souche BRU VIH 1, souche française, et un mélange de souches VIH 1 et VIH 2. Lors de l'incorporation du virus dans la matrice polymère, on incorpore aussi un indicateur coloré (bleu de bromophénol) à raison de 2 mg par ml. Inuunoessai L'extrémité de l'oese est immergée pendant 10 minutes dans un sérum dilué au 1/100 contenant des anticorps anti-VIH. Après lavage, l'oese est immergée dans une solution contenant des anticorps anti-immunoglobuline humaine marqués à l'uréase. Après un nouveau lavage, l'oese est placée dans un tube contenant de l'urée. En présence de ce substrat, l'uréase donne une réaction productrice d'ammoniac dont la présence provoque une variation du pH de la solution. Dans ces conditions, l'indicateur (incolore au départ) présent dans le gel prend une coloration bleue. Un dosage salivaire peut être effectué de la même façon après recueil de la salive de manière connue. ExnsLE 4 : Recherche d'anticorps irréguliers (Agglutinines irrégulières anti-D) Préparation du support On opère comme à l'exemple 1, mais le ligand incorporé dans la gélatine est constitué d'hématies D+ (rhésus) incorporées à raison de 108 hématies/ml. Inzunoessai L'essai est réalisé de la même façon qu'à l'exemple 1. Les anticorps recherchés ici sont des anticorps anti-D. L'essai peut être également réalisé sur un échantillon de sang total, avec des résultats semblables. EXEMPLE 5 : Détection d'hormones sshCG (B-gonadotrophine chorionique humaine) par une méthode sandwich Préparation du support On opère comme à l'exemple 1, mais le ligand incorporé est un anticorps monoclonal anti-phCG (20 pg/ml). I lunoessai L'extrémité de l'oese est immergée pendant dix minutes dans un sérum dilué au 1/10 contenant de l'hormone BhCG. Après lavage, l'oese est placée dans un tube contenant un deuxième anticorps monoclonal anti-sshCG marqué à la peroxydase. La révélation de l'activité enzymatique est réalisée comme décrit à l'exemple 1. Un dosage urinaire peut être effectué de façon analogue. EXIMPLI 6 : Dosage d'hormone sshCG par compétition Préparation du support Le support est identique à celui préparé à l'exemple précédent. Immunoessai On prépare diverses dilutions de sérum contenant de l'hormone BhCG. On ajoute à chaque dilution une quantité connue de sshCG marquée à la peroxydase. Les oeses sont trempées dans les solutions obtenues. Après lavage, l'activité enzymatique est révélée comme à l'exemple 1. Dans le cas présent, l'intensité de la coloration est inversement proportionnelle à la quantité de sshCG présente. Un dosage urinaire peut être effectué de façon analogue. EXEMPLE 7 : Dosage de la créatine kinase sérique La créatine kinase est l'indicateur le plus sensible des atteintes musculaires et cardiaques. Le dosage de cette enzyme est couramment pratiqué en diagnostic. L'enzyme en question peut être détectée par fluorimétrie selon les réactions enzymatiques suivantes créatine phosphate + ADP + créatine + ATP (enzyme : créatine kinase) ATP + D-glucose + glucose-6-phosphate + ADP (enzyme : hexokinase) glucose-6-phosphate + NADP + 6-phosphogluconate + NADPH (enzyme : glucose-6-phosphate déshydrogénase) Un gel de gélatine contenant les composés suivants est préparé de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1 - créatine phosphate : 100 mM - ADP : 10 mM - MgC12 : 50 mM - D-glucose : 100 mM - NADP : 10 mM - Hexokinase : 10.000 UI/litre - glucose-6-phosphate déshydrogénase : 5.000 UI/litre Les oeses sont immergées dans le gel et traitées comme à l'exemple 1. Le dispositif obtenu sert à détecter et/ou doser la créatine kinase sérique. Une oese ainsi préparée est immergée dans le sérum testé pendant 10 minutes. La production de NADPH peut être visualisée et/ou quantifiée en soumettant l'oese à une irradiation par un rayonnement ultraviolet à 340 nm. EXEbiPLE 8 : Recherche d'éthanol dans le sang (sérum ou plasma) Le principe de ce test enzymatique est celui décrit par MAJKIC N. et BERKES I., Anal. Chim. Acta 115:401-405 (1980), et par PRENCIPE L. et al. Clinical Chemistry, 33/4, 486-489 (1987). A un gel de gélatine préparé comme décrit dans l'exemple 1, sont ajoutés les composés suivants - alcool oxydase (5.000 U/1), extraite de Candida boidinii, commercialisée par BOEHRINGER MANNHEIM, - peroxydase de raifort (3.000 U/1), commercialisée par BOEHRINGER MANNHEIM, - 4 amino-antipyrine (0,7 mmole/l), commercialisée par SIGMA, - acide chromotropique (1,7 mmole/l), commercialisée par SIGMA. L'alcool oxydase catalyse la réaction suivante Ethanol + 2 + acétaldéhyde + H202 La peroxydase catalyse la réaction suivante H202 + 4 amino-antipyrine + acide chromotropique + dérivé coloré en bleu + H2O En présence d'éthanol à doser, la pellicule de l'oese se colore en bleu. Le dosage d'éthanol peut être effectué de façon analogue dans l'air expiré dont un volume précis est recueilli de manière connue. Avant utilisation, l'oese est immergée pendant 5 minutes dans du sérum physiologique (solution de chlorure de sodium à 9 g par litre). ExEMPLE 9 : Dosage de la protéine P27 dans les sérums de chat infectés par le virus FeLV On rappelle que le virus FeLV est l'agent étiologique de la leucose féline. Lors de l'infection, la protéine virale P27 est relarguée dans le sérum de l'animal. Cette protéine constitue un bon marqueur de l'infection à FeLV. On prépare une solution aqueuse à 10 % de gélatine (poids/volume). Comme décrit à l'exemple 1, on prélève 9,5 ml de cette solution et on ajoute 0,5 ml d'une solution aqueuse contenant du formaldéhyde. On trempe l'extrémité des oeses dans la solution obtenue et on les retire immédiatement. Au bout d'une minute (ou davantage), on rince à l'eau distillée, et on greffe de façon covalente un anticorps monoclonal anti-P27 (CM1, Custom Monoclonal, USA) de la façon suivante : l'oese est trempée dans une solution de 1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)- carbodiimide à 20 mg/ml pendant 30 minutes. L'oese est alors transférée sans rinçage dans une solution à pH 7,4 contenant l'anticorps CMî à 20 pg/ml, et maintenue dans cette solution pendant 1 heure. L'oese est ensuite rincée en solution tamponnée (pH 7,2). Inmnuioessai On immerge une oese préparée comme précédemment dans le sérum de chat à tester, dilué au 1/5ème. On ajoute un deuxième anticorps monoclonal anti-P27 marqué à la peroxydase (CM2, Custom Monoclonal, USA). Après 7 minutes d'incubation, l'oese est rincée à l'eau et placée dans une solution contenant un chromogène, comme décrit à l'exemple 1. On peut également placer l'oese dans un tube contenant une solution d'un révélateur chimio-luminescent (luminol). Le tube contenant 1'oese est placé dans un luminomètre qui enregistre le nombre de photons émis par le réactif. Le nombre de photons émis est proportionnel à la quantité de protéine P27. EXB16PLE 10 : Pellicule de polystyrène On dissout une feuille mince de polystyrène dans le tétrahydrofurane. L'oese est trempée dans la solution et retirée immédiatement. Le solvant est évaporé à l'air libre, le polystyrène formant ainsi une pellicule rigide. On fixe ensuite un anticorps par adsorption. Pour cela, l'oese est immergée dans un tampon carbonate (pH 9,2) contenant 5 pg/ml d'anticorps monoclonal CM1 (voir exemple 9). Après 2 heures d'incubation à température ambiante, l'oese est rincée avec une solution tamponnée de pH 7,2. Imunoessai On procède comme à l'exemple 9. REVENDICATIONS 1. Dispositif de détection et/ou de dosage d'une substance d'intérêt dans un fluide, ledit dispositif comprenant - un support en forme d'anneau solidaire d'un organe de préhension, - et une pellicule solide plane comprenant une matrice polymère obturant ledit anneau. 2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé par le fait que ladite pellicule est associée ou est susceptible d'être associée avec au moins un réactif utilisable dans la détection et/ou le dosage de ladite substance d'intérêt. 3. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que ladite pellicule est associée avec ledit réactif de façon que celui-ci soit immobilisé. 4. Dispositif selon la revendication 3, caractérisé par le fait que ledit réactif est encapsulé dans ladite pellicule. 5. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que ladite pellicule est associée avec des moyens pour immobiliser ledit réactif. 6. Dispositif la revendication 5, caractérisé par le fait que lesdits moyens sont des groupements fonctionnels portés par ladite matrice polymère et capables de réagir avec ledit réactif de façon à l'immobiliser. 7. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, caractérisé par le fait que ledit réactif est un ligand ayant une affinité pour ladite substance. 8. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, caractérisé par le fait que ledit réactif est capable de réagir avec ladite substance d'intérêt ou avec un produit réactionnel obtenu par réaction de ladite substance d'intérêt. 9. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 8, caractérisé par le fait que ledit réactif est un anticorps, un antigène, un allergène, une enzyme, un substrat d'enzyme, un indicateur coloré, un polynucléotide, un virus ou un microorganisme. 10. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que ladite matrice polymère est capable de former un hydrogel. 11. Dispositif selon la revendication 10, caractérisé par le fait que ladite matrice est un gel durci par réticulation. 12. Dispositif selon la revendication 11, caractérisé par le fait que ledit gel est à base de protéine, d'agarose ou de polyacrylamide. 13. Dispositif selon la revendication 11, caractérisé par le fait que ledit gel est à base de gélatine. 14. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait que ladite matrice polymère est réalisée avec un polymère hydrophobe. 15. Dispositif selon la revendication 14, caractérisé par le fait que ledit polymère hydrophobe est le polystyrène, le polycarbonate ou le polypropylène. 16. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que ledit organe de préhension est une tige. 17. Dispositif selon la revendication 16, caractérisé par le fait que l'ensemble formé par ledit anneau et ladite tige est constitué par une oese. 18. Procédé de préparation d'un dispositif tel que défini dans l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait - que l'on prépare une solution du polymère constituant de ladite matrice, - que l'on ajoute à ladite solution, si désiré, un agent réticulant, - que l'on immerge l'anneau dudit dispositif dans ladite solution de façon à prélever une fraction de celle-ci sous la forme d'une pellicule liquide obturant l'anneau, - et que l'on maintient ledit dispositif dans des conditions permettant la transformation de ladite pellicule liquide en pellicule solide par évaporation et/ou réticulation. 19. Procédé selon la revendication 18, caractérisé par le fait qu'en outre on immobilise dans la matrice polymère, ou à la surface de la pellicule, au moins un réactif utilisable dans la détection et/ou le dosage de ladite substance d'intérêt. 20. Procédé de détection et/ou de dosage d'une substance d'intérêt dans un fluide, à l'aide d'un dispositif tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisé par le fait que (a) on associe, le cas échéant, ledit réactif avec ladite pellicule, (b) on immerge une partie dudit dispositif, comprenant la pellicule, dans le fluide à tester, puis (c) on révèle la présence éventuelle de ladite substance, et/ou l'on dose ladite substance, selon des méthodes connues en soi. 21. Procédé selon la revendication 20, caractérisé par le fait que ledit réactif est un ligand capable d'affinité pour ladite substance d'intérêt et qu'à l'étape (c) on révèle et/ou dose ladite substance immobilisée sur la pellicule. 22. Procédé selon la revendication 20, caractérisé par le fait que ledit réactif est capable de réagir avec ladite substance d'intérêt ou avec un produit réactionnel obtenu par réaction de celle-ci, et que l'on révèle la présence de ladite substance et/ou on la dose par révélation de la présence et/ou dosage d'un composé qui résulte soit d'une réaction entre ledit réactif et ladite substance, soit d'une réaction entre ledit réactif et ledit produit réactionnel.