Brevet FR2737220A1 — publié le 19970131

La présente invention est relative à des séquences nucléiques codant pour des récepteurs de la mélatonine de xénope de type MEL i A, à des oligonucléotides compris dans lesdites séquences, à leurs applications en tant que sonde et pour l'expression de protéines et/ou de fragments de celles-ci ayant une activité de récepteur fonctionnel de la mélatonine de type MEL1 i A, aux vecteurs utiles pour ladite expres- sion, aux hôtes cellulaires contenant lesdits vecteurs ainsi qu'a un modèle d'étude des récepteurs de la mélatonine. La présente invention est également relative à un procédé de criblage de substances, à action agoniste ou antagoniste vis-à-vis des protéines ayant une action de récepteur de la mélatonine et à des trousses ou kits pour la détection du degré d'affinité de différentes substances pour lesdites protéines à activité de récepteur de la mélatonine. Un récepteur de la melatonine de Xenopus laevis a été décrit (EBISAWA T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, 91, 6133-6137). Il s'agit d'une protéine de 420 aminoacides. Toutefois, des amorces localisées dans la partie 3' des séquences nucléiques correspondantes n'ont pas permis d'amplifier la séquence codant pour cette protéine. C'est pourquoi la Demanderesse s'est donné pour but de rechercher des séquences nucléiques aptes à coder le récepteur de la mélatonine de type MELi A, lesquelles séquences étant aisément amplifiables dans leur intégralité. La présente invention a pour objet des séquences nucléiques codant pour des récepteurs fonctionnels de la melatonine, de type MELi A et de structure différente de celle dudit récepteur décrit dans EBISAWA et al. et présentant des propriétés de couplage et de régulation différentes de celles du récepteur antérieurement décrit, lesquelles séquences sont sélectionnées parmi les séquences SEQ ID N"1, SEQ ID N"3, SEQ ID N"5 ou SEQ ID N"7, telles que présentées dans la liste des séquences incluse dans la présente Demande. Ces séquences selon l'invention présentent, en 3' une séquence non codante plus ou moins longue (séquences longues: SEQ ID NO 1 et SEQ ID NO 5 séquences courtes: SEQ ID NO 3 et SEQ ID N" 7), qui intervient de manière cruciale sur la régulation de l'ARN: 1/2 vie de l'ARN, modifiée par rapport aux séquences de l'Art antérieur. En particulier, les SEQ ID N" 1 et SEQ ID N" 3 codent pour une protéine présentant 65 aminoacides en moins, par rapport à la séquence décrite dans l'Art antérieur, les 2 aminoacides en position C-terminale étant, en outre. différents. Cette protéine correspond au récepteur de la mélatonine dénommé MEL1 Aa. Les SEQ ID N" 5 et SEQ ID N 7 codent pour une protéine présentant également 65 aminoacides en moins, par rapport à la séquence décrite dans l'Art antérieur, en outre, 6 résidus d'aminoacides sont différents, par rapport à ladite séquence de l'Art antérieur. Cette protéine correspond au récepteur de la mélatonine dénommé MELi Ab. Aussi bien la séquence codant pour le récepteur MEL i Aa que la séquence codant pour le récepteur MELI Ab entraînent des modifications dans la régulation de l'ARN, en rapport avec la séquence non codante en 3' (régulation par un ligand agoniste, durée de vie de l'ARN). La présente invention a également pour objet les fragments desdites séquences, utiles soit pour une expression fonctionnelle du peptide correspondant au récepteur de la mélatonine correspondant. soit à la détection de la séquence codant pour ledit récepteur. Parmi lesdits fragments, l'invention englobe, entre autres - une séquence constituée d'un segment de 230 paires de bases nucléotidiques, correspondant aux nucléotides 1057-1286 des SEQ ID N 1 ou SEQ ID N"5 ; - une séquence constituée d'un segment de 69 paires de bases nucléotidiques, correspondant aux nucléotides 1057-1125 des SEQ ID N 3 ou SEQ ID N"7. La présente invention a également pour objet des sondes nucléotidiques, caractérisées en ce qu'elles s'hybrident avec les séquences nucléotidiques telles que définies ci-dessus. Des conditions d'hybridation convenables sont notamment les suivantes: l'hybridation est réalisée à 420C dans un tampon comprenant 4X SSC 40 % formamide, 0,2 % SDS et tampon Denhardt 5X. De telles sondes ont notamment l'avantage de permettre la caractérisation des différents variants du recepteur fonctionnel de la mélatonine de type MEL1 A(MEL1 Aa ou MEL1 Ab). La présente invention a également pour objet les protéines et/ou fragments de protéine, caractérisés en ce qu'ils sont codés par une séquence nucléotidique telle que définie ci-dessus et en ce qu'ils présentent une activité de récepteur de la mélatonine de type MELi fonctionnel. Conformément à l'invention, ladite protéine est sélectionnée parmi l'une quelconque des séquences SEQ ID N"2 (la SEQ ID N04 étant identique à la SEQ ID N"2) ou SEQ ID N"6 (la SEQ ID N"8 étant identique à la SEQ ID N 6), telles que présentées dans la liste de séquences incluse dans la présente Demande. Les SEQ ID N 2 et N 4 correspondent au récepteur de la mélatonine dénommé MET 1 Aa, les SEQ ID N 6 et N 8 correspondent au récepteur de la mélatonine dénommé MELi Ab. Ces 2 protéines dont la structure est différente de celle de la protéine de l'Art antérieur présentent, de manière inattendue, des réactions et des signaux biologiques différents de ceux antérieurement décrits, notamment en ce qui concerne le couplage aux protéines G. La présente invention a également pour objet un vecteur recombinant de clonage et/ou d'expression. caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique conforme à l'invention. On entend au sens de la présente invention, par vecteur recombinant aussi bien un plasmide, un cosmide qu'un phage. Selon un mode de réalisation avantageux dudit vecteur, il est constitué par un vecteur recombinant dans lequel est insérée une séquence nucléotidique telle que définie ci-dessus, lequel vecteur est un vecteur d'expression d'une protéine ayant une activité de récepteur fonctionnel de la mélatonine de type MEL i A, conforme à l'invention. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, ledit vecteur est constitué d'un plasmide pcDNA3 (Invitrogen), comprenant un promoteur RSV et la SEQ ID N 1. Un tel plasmide a été dénommé X-MELla et a été déposé sous le nO I-1583 en date du 7 juin 1995 aupres de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par l'institut Pasteur. Selon une autre disposition avantageuse de ce mode de réalisation, ledit vecteur est constitué d'un plasmide pcDNA3 (Invitrogen), comprenant un promo teur RSV et la SEQ ID N 5. Un tel plasmide a été dénommé X-MELlb et a été déposé sous le n" I-1584 en date du 7 juin 1995 auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par l'institut Pasteur. La présente invention a également pour objet une cellule hôte appropriée, obtenue par transformation génétique, caractérisée en ce qu'elle est transformée par un vecteur d'expression conforme à l'invention. Une telle cellule est capable d'exprimer une protéine, ayant une activité de récepteur fonctionnel de la melatonine, de type MEL i A. Selon un mode de réalisation avantageux, la cellule hôte est notamment constituée par les cellules de la lignée L. La présente invention a également pour objet un processus d'expression d'une protéine conforme à l'invention, caractérisé en ce que la cellule hôte, résultant de la transformation par un vecteur contenant une séquence nucléotidique selon l'invention codant pour une protéine ayant une activité de récepteur fonctionnel de la mélatonine de type MEL 1 A est cultivée de manière à produire et à transporter ladite protéine exprimée vers la membrane, de telle sorte que les séquences transmembranaires dudit récepteur soient exposees à la surface de la membrane de l'hôte cellulaire transformé. La présente invention a également pour objet un modèle d'étude des récepteurs de la mélatonine de type MEL1 A, caractérisé en ce qu'il est constitué par des cellules hôtes conformes à l'invention, c'est-à-dire exprimant un récepteur fonctionnel de la mélatonine de type MEL 1 A à la surface de leur membrane cellulaire. Un tel modèle permet l'étude, d'un point de vue pharmacologique, des récepteurs de la mélatonine, notamment en permettant l'identification des ligands spécifiques des récepteurs de type MEL1 A (agonistes et antagonistes) et ainsi la mise au point de médicaments actifs sur la régulation de l'horloge biologique, avec des applications particulièrement intéressantes, notamment dans le domaine cardiovasculaire (lipolyse) et en cancérologie (mise en phase des cellules). L'invention a egalement pour objet un procédé de détection de la capacité d'une substance à se comporter comme ligand vis-a-vis d'une protéine conforme à l'invention, lequel procedé est caractérisé en ce qu'il comprend - là mise en contact de ladite substance avec une cellule hôte préalablement transformée par un vecteur d'expression conforme à l'invention, laquelle cellule hôte exprime ladite protéine (récepteur de la mélatonine), et laquelle mise en contact est réalisée dans des conditions permettant la formation d'une liaison entre l'un au moins des sites spécifiques et ladite substance et - la détection de la formation éventuelle d'un complexe de type ligand-protéine. La présente invention a, de plus, pour objet un procédé pour l'étude de l'affinité d'une protéine conforme à l'invention pour un ou plusieurs ligands déterminés, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend - la transformation d'une cellule hôte appropriée par un vecteur conforme à l'invention, - la culture de la cellule hote transformée, dans des conditions permettant l'expression du récepteur de la mélatonine de type MEL1 A, codé par la séquence nucléotidique, et le transfert du récepteur de la mélatonine exprimé vers la membrane de ladite cellule de sorte que les séquences transmembranaires du récepteur fonctionnel de la mélatonine soient exposées à la surface de la cellule hôte transformée, - la mise en contact de ladite cellule avec les ligands déterminés et - la détection d'une réaction affine entre ladite cellule transformée et lesdits ligands déterminés. L'invention a, en outre, pour objet un kit pour la détection de l'affinité éventuelle d'un ligand pour une protéine conforme à l'invention, lequel kit est caractérisé en ce qu'il comprend - une culture de cellules hôtes transformées par un vecteur d'expression conforme à l'invention, - éventuellement, si nécessaire, des moyens physiques ou chimiques pour induire l'expression d'une proteine (récepteur de la mélatonine de type MEL1 A), codée par une séquence nucléotidique conforme à l'invention, contenue dans un vecteur dont le promoteur est inductible - un ou plusieurs ligands témoins ayant des affinités déterminées pour ladite protéine , et - des moyens physiques ou chimiques pour la caractérisation de l'activité biologique de la protéine exprimée. De manière inattendue, les récepteurs de la mélatonine de type MEL1 A selon l'invention sont effectivement des récepteurs fonctionnels et permettent la réalisation de toutes les applications précitées. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé objet de la présente invention, avec référence aux dessins annexés, dans lesquels - la figure 1 représente un schéma de la technique de clonage de l'ADNc du récepteur de la mélatonîne à partir de Xenopl(s lavis;; - la figure 2 illustre les différents fragments de clonage utilisés, - la figure 3 illustre les étapes de clonage et de séquençage des fragments d'ADNc du récepteur de la mélatonine, - la figure 4 illustre la partie codante de séquence d'ADNc codant pour le récepteur fonctionnel de la mélatomne de type MEL1 A (a ou b) en comparaison avec la séquence EBISAWA et al. (réfërence précitée) - la figure 5 illustre la liaison mélatonine-cellules L exprimant un récepteur selon l'invention (MELI Aa ou MEL1 Ab). Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1: Isolement et identification des 4 séquences fonctionnelles du récepteur de la mélatonine de type MEL1 A. a) Amplification de la partie codante du récepteur de la mélatonine de Xenopus laevis. L'ARN total de la peau de Xeziopus laevis est préalablement traité à la DNAse I de Promega pendant 20 min à 370C. Le cDNA est synthétisé à partir de 1'ARN total de la peau de Xenopus hie vis en utilisant la MMLV inverse transcriptase "Stratacript RNAse H-" de Stratagene (30 min à 37 C; 5 min à 95 C). Le cDNA est amplifié par PCR avec différents couples d'oligonucléotides spécifiques du récepteur de la mélatonine de Xéiiopzis hie vis. Les conditions de PCR sont les suivantes : DNA polymerase Pwo de Boehringer Mannheim avec son propre tampon (2 mM MgSO4) dans un volume de 50 ml.Le cDNA est denaturé 2 min à 94 C, amplifié 40 fois et suivi d'une élongation de 3 min à 72 C. Un cycle correspond 15 sec. à 94 C; 30 sec. à la température spécifique du couple d'oligonucléotide et 90 sec. à 72 C (GeneAmp PCR System 9600 de Perkin-Elmer Cetus). Les couples d'oligonucléotides sont (figure 2): fragment 1: 28S - 241AS, température spécifique de 54 C, fragment 2: 183 S - 462AS, température spécifique de 50 C, fragment 3+4: 391S - 1061AS, température spécifique de 50 C. b) Amplification de l'extrémité 3' du récepteur de la mélatonine du Xenopus laevis. L'ARN total de la peau de Xenopus laevis est préalablement traité à la DNAse I de Promega pendant 20 min à 37 C. Le cDNA est synthétisé à partir de l'ARN total de la peau de Xenopus laevis à l'aide du kit "3'-AmpliFINDERTMRACE" de Clonatech. Les oligonucléotides spécifiques du récepteur de la mélatonine de Xenopiles kievis utilisés pour l'amplification sont 929S et 972S à la température de 58 C. Plusieurs amorces ont été testées pour leur capacité à amplifier l'ADNc du récepteur de la mèlatonine (figure 2). Plus de 80 % de l'ADNc désiré a été amplifié en utilisant 4 paires différentes d'amorces qui comprennent des séquences chevauchantes (fragments 1-4). Tous les efforts pour amplifier l'ADNc du récepteur de la mélatonine en utilisant une amorce localisée à l'extrémité 3' de la région codante n'ont pas abouti. La partie restante (fragment 5) de l'ADNc du récepteur de la mélatonine a été isolée à l'aide d'une réaction PCR modifiée, en utilisant le site de polyadénylation, à l'extrémité 3' de l'ADNc en tant qu'amorce (principe décrit à la figure 3) et les amorces spécifiques du récepteur de la mélatonine (924 S et 972 S) localisées dans cette partie de la région codante, qui a pu ainsi être amplifiée par PCR. Deux fragments d'amplification (estimés à 250 pb (fragment court) et 450 pb (fragment long), respectivement) ont été obtenus en utilisant cette approche. La digestion de ces fragments avec deux enzymes de restriction montrent le profil de restriction attendu. Les fragments 1-5 ont été clonés séparément dans un vecteur et l'identité vérifiée par séquençage. Le fragment 1 correspond à la séquence 28-241 3 clones ont été séquencés, qui sont identiques avec la séquence publiée (EBISAWA et al.). Fragment 2 5 clones ont été séquencés qui ne sont pas identiques à la séquence publiée au niveau acide nucléique, mais ne changent pas la séquence en aminoacides. Fragments 3 + 4 3 clones ont été séquencés, I'un d'eux est identique à la séquence publiée, les deux autres diffèrent de la première, mais sont identiques entre eux. Plusieurs des remplacements au niveau acide nucléique changent également la séquence en aminoacides correspondante (voir figure 4). Fragment 5 (fragment court) (voir SEQ ID N" 5 et NO 7): tous les clones montrent une forte homologie avec la séquence publiée du récepteur de la méla toninejusqu'à la méthionine en position 3s3 Au-delà de la méthionine 353, deux aminoacides différents ont été détectés, c'est-à-dire tyrosine à la place de leucine et valine à la place de glycine, suivis par un codon stop, entraînant la perte de 65 aminoacides, si l'on compare avec la séquence publiée du récepteur de la mélatonine de XLinopus lac vis L'alignement en aminoacides dudit récepteur, à partir de Xenopus, de l'Homme et du mouton, montre que la séquence publiée du récepteur de la mélatonine à partir de Xenopus présente une queue C-terminale beaucoup plus longue que le récepteur de deux autres espèces (REPPERT et al., 1994). Contrairement à la séquence publiée, le récepteur de la mélatonine selon l'invention obtenue à partir de Xeiiopiis laevis présente la meme taille que le récepteur de la mélatonine obtenu a partir de l'Homme ou du mouton. Ceci est renforcé du fait qu'il n'était pas possible d'amplifier le récepteur de la mélatonine en utilisant des amorces PCR localisées dans la région 3' de la séquence publiée bien que l'on soit parti du meme matériau. 4 clones du tragment C (fragment court) ont été séquencés. 3 clones correspondent à la séquence publiée jusqu à la méthionine 353 et un clone présente une mutation qui ne change pas l'aminoacide correspondant. La région non codante peut etre isolée à partir des 2 clones jusqu'à la queue de polyadénylation. Fragment 5 long (voir SEQ ID N" 1 et NO 3) 4 clones ont été séquencés, I'un d'eux correspond à la séquence publiée jusqu'à la méthionine 353, 3 d'entre eux montrent le même changement que celui observé dans le fragment 5 court, jusqu'à la méthionine 353. Dans tous les clones, les aminoacides 354 et 355 sont modifiés par rapport à la séquence publiée et présentent un codon stop en position 356, comme visible dans le fragment 5 court. En plus, la région non codante en 3' du fragment long est identique avec celle du segment court, jusqu'à la queue de polyadénylation, il comprend, en outre, 160 pb, suivi par sa propre queue de polyadénylation (voir liste des séquences, SEQ ID N" 1 et N 3). Les différences de séquences retrouvées dans toute la séquence sont soulignées dans la figure 4. De manière inattendue, le séquençage du récepteur de la mélatonine obtenu par PCR-RT révèle deux séquences différentes (MEL1 Aa et MEL1 Ab). EXEMPLE 2 : Construction d'un vecteur pour l'expression du récepteur fonctionnel de la mélatonine de type MEL1 A. Le récepteur de la mèlatonine de Xenopus laevis a été cloné conformément à la méthode RT-PCR (voir figure 1). L'ARN est isolé de la peau de Xenopus et transcrit en ADNc à l'aide de la transcriptase inverse. Une amplification sélective de l'ADNc du récepteur de la mélatonine est réalisée en utilisant des amorces PCR spécifiques de ce récepteur. Le récepteur amplifié est cloné dans le vecteur d'expression pcDNA3-RSV et son identité a été vérifiée par séquençage, comme suit Des préligations successives des fragments entre eux, gracie à des enzymes de restriction commune deux a deux, a permis d'insérer la totalité du récepteur de la mélatonine dans le plasmide pcDNA3/RSV aux sites HindIII/ Bspl20I à bout franc, sous le controle du promoteur du joits sarcome virus (RSV). Les fragments 2 et 3+4 sont tout d'abord liés au niveau du site enzymatique commun "HindIII", en position 455 de la séquence codante. Ce dernier est ensuite lié avec le fragment 1 au site commun "Bsu36I" en position 202 et avec le fragment 5 au site commun "XbaI" en position 1016. Chaque fragment est préalablement coupé par les deux enzymes indispensable pour les ligations successives.Ce fragment purifié, composé des fragments 1,2,3+4,5, dont les extrémités 5' et 3' sont respectivement HindIII et EcoRI à bout franc, est enfin inséré dans pcDNA3/RSV. EXEMPLE 3: Pharmacologie du récepteur fonctionnel de la mélatonine de type MEL1 A. Le vecteur pcDNA3-RSV contenant la région codante et la région non-codante 3' du récepteur de la mélatonine du Xenopus hievis selon l'exemple 2, est transfecté dans les cellules L de souris. La veille 3x105 cellules sont passées dans les fiasks de 25 cm2 dans un milieu DMEM 4.5 g/l de glucose; 1 mM glutamax; 1 mM pyruvate; 10 % FCS (DMEM/FCS). Le jour de la transfection, le milieu est changé (6 ml de DMEM/FCS/flask) et les cellules sont incubées pendant 3 heures à 37 C. Parallèlement une coprécipitation de l'ADN et du CaPO4 est préparée de la manière suivante : dans une volume final de 500 ml, on mélange 30 mg d'ADN carrier (pGEM3Z de Promega), 2 mg du vecteur pcDNA3-RSV contenant la région codante et la région non-codante 3' du récepteur de la mélatonine du Xenopus laevis et du CaCl2 (250 mM final)(Solution A). 450 ml de cette Solution A sont rajoutés goutte à goutte, en vortexant, à 450 ml de HBS 2x (1,64 g NaCI; 1,19 g Hepes; 0,04 g Na2HP04-12H20 additionnés à 100 ml H2O) et le pH est ajusté à 7,12. Le mélange est laissé sans agitation à température ambiante pendant 45 min. 400 ml du coprecipité sont ajoutés dans une flask contenant les cellules L.Après 4 heures d'incubation à 37 C, les cellules sont lavées une fois avec 6 ml de DMEM et ensuite incubées 2 min dans 4 ml de glycérol à 15%. Ensuite les cellules sont lavées deux fois avec du DMEM et laissées dans 6 ml de DMEM/FCS, supplémenté avec 5 mM Nabutyrate à 37 C pendant une nuit. Le lendemain, le milieu est retiré, les cellules sont de nouveau lavées au DMEM/FCS puis incubées pendant une nuit dans du DMEM/FCS. Le troisième jour les cellules sont distribuées dans des plaques de 96 puits à différentes dilutions (1/2, 1/4. 1/8. 1/16, 1/32) dans DMEM/FCS, supplémenté avec 450 m/ml de Geneticin (G-418 Sulphate) de Gibco Life Technologies.Des clones résistants à la Geneticin sont testés pour l'expression du récepteur de la mélatonine par liaison avec la (125)Iodo-mélatonine (200 pM) dans un volume final de 250 ml (tampon: 50 mM Tris/HCl pH 7,4; 5 mM MgC12 ). La liaison non-spécifique est déterminée en presence de 10 mM mélatonine. Résultats Le Tableau suivant et la figure 5 illustrent les résultats. KD (pM) fmol/mg MELi Aa 226 537 MEL1 Ab 190 311 Les deux récepteurs lient la mélatonine avec une forte affinité, ce qui montre qu'il s'agit bien de récepteurs de sous-type MELi A. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite, elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATIONS GENERALES: (i) DEPOSANT: (A) NOM: ADIR (B) RUE: 1 RUE. CARLE HEBERT (C) VILLE: COURBEVOIE (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 92415 CEDEX (ii) TITRE DE L' INVENTION: RECEPTEURS DE LA MELATONINE (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 8 (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release 41.0, Version &num;1.30 (OEB) (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1311 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc pour AwNm (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE:CDS (B) EMPLACEMENT: 1.1065 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: ATG ATG GAG GTG AAT AGC ACT TGC TTG GAT TGC AGG ACA CCT GGT ACC 48 Met Met Glu Val Asn Ser Thr Cys Leu Asp Cys Arg Thr Pro Gly Thr 5 5 L.0 15 ATA CGA ACA GAG CAG GAT GCA CAG GAC AGC GCA TCT CAG GGA CTC ACC 96 Ile Arg Thr Glu Gln Asp Ala Gln Asp Ser Ala Ser Gln Gly Leu Thr 20 25 30 TCT GCC CTG GCG GTG GTT CTT ATA TTC ACC ATT GTT GTG GAT GTC CTG 144 Ser Ala Leu Ala Val Val Leu le Phe Thr le Val Val Asp Val Leu 35 40 45 GGC AAT ATA TTG GTC ATT TTG TCm GTC CTG AGG AAC AAG AAG CTG CAG 192 Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Leu Hrg Asn Lys Lys Leu Gln 50 , 60 iAT GCT GGA AAT CTC TTT GTT GTC AGT TTG TCT ATT GCC GAT CTG GTT 240 Asn Ala Gly Asn Leu Phe Val Val Ser Leu Ser Ile Ala Asp Leu Val 65 7C 70 75 80 GTT GCT GTG TAT CCC TAT CCG GTA ATT CTC ATA GCT ATT TTC CAG AAT 288 Val Ala Val Tyr Pro Tyr Pro Val Ile Leu Ile Ala Ile Phe Gln Asn 85 90 95 GGG TGG ACG CTT GGA AAT ATC CAT TGT CAG ATC AGT GGC TTC CTG ATG 336 Gly Trp Thr Leu Gly Asn Ile His Cys Gln Ile Ser Gly Phe Leu Met 100 105 110 GGA CTC AGC GTT ATT GGA TCA GTC TTC AAC ATA ACA GCC ATA GCT ATC 384 Gly Leu Ser Val Ile Gly Ser Val Phe Asn Ile Thr Ala Ile Ala Ile 115 120 125 AAC AGG TAT TGC TAC ATC TGC CAC AGC CTG AGA TAT GAC AAG CTT TAT 432 Asn Arg Tyr Cys Tyr Ile Cys His Ser Leu Arg Tyr Asp Lys Leu Tyr 130 135 140 AAT CAA AGA AGC ACC TGG TGC TAC CTT GGC CTG ACA TGG ATA CTA ACT 480 Asn Gln Arg Ser Thr Trp Cys Tyr Leu Gly Leu Thr Trp Ile Leu Thr 145 150 155 160 ATA ATT GCA ATC GTG CCA AAC TTT TTT GTT GGA TCA CTA CAG TAT GAC 528 Ile Ile Ala Ile Val Pro Asn Phe Phe Val Gly Ser Leu Gln Tyr Asp 165 170 175 CCC AGG ATT TTT TCT TGC ACA TTT GCG CAG ACA GTG AGT TCC TCA TAC 576 Pro Arg Ile Phe Ser Cys Thr Phe Ala Gln Thr Val Ser Ser Ser Tyr 180 185 190 ACC ATA ACA GTA GTG GTG GTG CAT TTT ATA GTC CCT CTT AGT GTT GTG 624 Thr Ile Thr Val Val Val Val His Phe Ile Val Pro Leu Ser Val Val 195 200 205 ACA TTC TGT TAC TTA AGA ATA TGG GTT TTA GTG ATC CAA GTC AAA CAC 672 Thr Phe Cys Tyr Leu Arg Ile Trp Val Leu Val Ile Gln Val Lys His 210 215 220 AGA GTT AGA CAA GAC TTC AAG CAA AAG TTG ACA CAA ACA GAC TTG AGA 720 Arg Val Arg Gln Asp Phe Lys Gln Lys Leu Thr Gln Thr Asp Leu Arg 225 230 235 240 AAT TTC TTG ACC ATG TTT GTG GTC TTT GTA CTT TTT GCA GTT TGC TGG 768 Asn Phe Leu Thr Met Phe Val Val Phe Val Leu Phe Ala Val Cys Trp 245 250 255 GCC CCC TTA AAC TTT ATC GGC CTT GCT GTG GCC ATT AAT CCG TTT CAT 816 Ala Pro Leu Asn Phe Ile Gly Leu Ala Val Ala Ile Asn Pro Phe His 260 265 270 GTG GCA CCA AAG ATT CCA GAA TGG CTG TTT GTT TTA AGC TAT TTC ATG 864 Val Ala Pro Lys Ile Pro Glu Trp Leu Phe Val Leu Ser Tyr Phe Met 275 280 285 GCC TAT TTT AAC AGT TGT CTC AAT GCT GTT ATA TAT GGT GTG CTA AAT 912 Ala Tyr Phe Asn Ser Cys Leu Asn Ala Val Ile Tyr Gly Val Leu Asn 290 295 300 CAA AAC TTC CGC AAG GAG TAC AAA ACA ATA CTG ATG TCC TTA TTG ACT 960 Gln Asn Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Arg Ile Leu Met Ser Leu Leu Thr 305 310 305 320 CCA AGA CCG TCG TTT CTT GAG ACA TCT AGA GGA GGA ACC GAG GGA TTG 1008 Pro Arg Leu Leu Phe Leu Asp Thr Ser Arg Gly Gly Thr Glu Gly Leu 325 330 335 AAA AGT AAG CCC TCG CCA GCT GTA ACC AAC AAC AAT CAA GCA GAT ACG 1056 Lys Ser Lys Pro Ser Pro Ala Val Thr Asn Asn Asn Gln Ala Asp Met 340 345 350 TAC GTG TAA ACACAGCTTT CCACCAATAT GTACTCTGTT TCAACTATGA 1105 Tyr Val * 355 ATACAAGTTT CTTTTATGGC AGTTGCACCA TGTGCCTAAT TCTGTCCATT CATTCTAAAA 1165 TTTTTGTATA AACATACATT CTGTTGGTTT GACAGGGACA AGAGGTCTTG CTTCTCTGCA 1225 GAAAAGAAAT ATTTTGAAAT CTTGGCTGAT TTGTTATTAA TAACCATAAA TGGAATATCT 1285 TAAAAAAAAA AAAAAAAAAA GAATTC 1311 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 355 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SLQUENCE: SEQ ID NO: 2: Met Met Glu Val Asn Ser Thr Cys Leu Asp Cys Arg Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 le Arg Thr Glu Gln Asp Ala Gln Asp Ser Ala Ser Gln Gly Leu Thr 20 25 30 Ser Ala Leu Ala Val Val Leu Ile Phe Thr Ile Val Val Asp Val Leu 35 40 45 Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Leu Arg Asn Lys Lys Leu Gln 50 55 60 Asn Ala Gly Asn Leu Phe Val Val Ser Leu Ser Ile Ala Asp Leu Val 65 70 75 80 Val Ala Val Tyr Pro Tyr Pro Val Ile Leu Ile Ala Ile Phe Gln Asn 85 90 95 Gly Trp Thr Leu Gly Asn Ile His Cys Gln Ile Ser Gly Phe Leu Met 100 105 110 Gly Leu Ser Val Ile Gly Ser Val Phe Asn Ile Thr Ala Ile Ala Ile 115 120 125 Asn Arg Tyr Cys Tyr Ile Cys His Ser Leu Arg Tyr Asp Lys Leu Tyr 130 135 140 Asn Gln Arg Ser Thr Trp Cys Tyr Leu Gly Leu Thr Trp Ile Leu Thr 145 150 155 160 Ile Ile Ala Ile Val Pro Asn Phe Phe Val Gly Ser Leu Gln Tyr Asp 165 170 @ 175 Pro Arg Ile Phe Ser Cys Thr Phe Ala Gln Thr Val S.r Ser Ser Tyr 180 185 190 Thr Ile Thr Val Val Val Val His Phe Ile Val Pro Leu Ser Val Val 195 200 205 Thr Phe Cys Tyr Leu Arg Ile Trp Val Leu Val Ile Gin Val Lys His 210 215 220 Arg Val Arg Gln Asp Phe Lys Gln Lys Leu Thr Gin Thr Asp Leu Arg 225 230 235 240 Asn Phe Leu Thr Met Phe Val Val Phe Val Leu Phe Ala Val Cys Trp 245 250 255 Ala Pro Leu Asn Phe Ile Gly Leu Ala Val Ala Ile Asn Pro Phe His 260 265 270 Val Ala Pro Lys Ile Pro Glu Trp Leu Phe Val Leu Ser Tyr Phe Met 275 280 285 Ala Tyr Phe Asn Ser Cys Leu Asn Ala Val Ile Tyr Gly Val Leu Asn 290 295 300 Gln Asn Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Arg Ile Leu Met Ser Leu Leu Thr 305 310 315 320 Pro Arg Leu Leu Phe Leu Asp Thr Ser Arg Gly Giy Thr Glu Gly Leu 325 330 335 Lys Ser Lys Pro Ser Pro Ala Val Thr Asn Asn Asn Gln Ala Asp Met 340 345 350 Tyr Val * 355 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1147 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc pour ARNm (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: CDS (B) EMPLACEMENT:1..1065 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 3: ATG ATG GAG GTG AAT AGC ACT TGC TTG GAT TGC AGG ACA CCT GGT ACC 48 Met Met Glu Val Asn Ser Thr Cys Leu Asp Cys Arg Thr Pro Gly Thr ATA CGA ACA GAG CAG GAT GCA CAG GAC AGC GCA TCT CAG GGA CTC ACC 96 Ile Arg Thr Glu Gln Asp Ala Gln Asp Ser Ala Ser Gln Gly Leu Thr TCT GCC CTG GCG GTG GTT CTT ATA TTC ACC ATT GTT GTG GAT GTC CTG 144 Ser Ala Leu Ala Val Val Leu Ile Phe Thr Ile Val Val Asp Val Leu GGC AAT ATA TTG GTC ATT TTG TCT GTC CTG AGG MC AAG AAG CTG CAG 192 Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Leu Arg Asn s Lys Leu Gln AAT GCT GGA AAT CTC TTT GTT GTC AGT TTG TCT ATT GCC GAT CTG GTT 240 Asn Ala Gly Asn Leu Phe Val Val Ser Leu Ser Ile Ala Asp Leu Val GTT GCT GTG TAT CCC TAT CCG GTA ATT CTC ATA GCT ATT TTC CAG AAT 288 Val Ala Val Tyr Pro Tyr Pro Val Ile Leu Ile Ala Ile Phe Gln Asn GGG TGG ACG CTT GGA AAT ATC CAT TGT CAG ATC AGT GGC TTC CTG ATG 336 Gly Trp Thr Leu Gly Asn Ile His Cys Gln Ile Ser Gly Phe Leu Met GGA CTC AGC GTT ATT GGA TCA GTC TTC AAC ATA ACA GCC ATA GCT ATC 384 Gly Leu Ser Val Ile Gly Ser Val Phe Asn Ile Thr Ala Ile Ala Ile AAC AGG TAT TGC TAC ATC TGC CAC AGC CTG AGA TAT GAC AAG CTT TAT 432 Asn Arg Tyr Cys Tyr Ile Cys His Ser Leu Arg Tyr Asp Lys Leu Tyr AAT CAA AGA AGC ACC TGG TGC TAC CTT GGC CTG ACA TGG ATA CTA ACT 480 Asn Gln Arg Ser Thr Trp Cys Tyr Leu Gly Leu Thr Trp Ile Leu Thr ATA ATT GCA ATC GTG CCA AAC TTT TTT GTT GGA TCA CTA CAG TAT GAC 528 Ile Ile Ala Ile Val Pro Asn Phe Phe Val Gly Ser Leu Gln Tyr Asp CCC AGG ATT TTT TCT TGC ACA TTT GCG CAG ACA GTG AGT TCC TCA TAC 576 Pro Arg Ile Phe Ser Cys 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ATA CTG ATG TTA TTG ACT 960 Gln Asn Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Arg Ile Leu Met Ser Leu Leu Thr CCA AGA CTG TTG TTT CTT GAC ACA TCT AGA GGA GGA ACT GAG GGA TTG 1008 Pro Arg Leu Leu Phe Leu Asp Thr Ser Arg Gly Gly Thr Glu Gly Leu AAA AGT AAG CCT TCG CCA GCT GTA ACC AAC AAC AAT CAA GCA GAT ATG 1056 Lys Ser Lys Pro Ser Pro Ala Val Thr Asn Asn Asn Gln Ala Asp Met TAC GTG TAA ACACAGCTTT CCACCAATAT GTACTCTGTT TCAACTATGA 1105 Tyr Val * ATACAAGTTT CTTTTATGGC AAAAAAAAAA AAAAAAGAAT TC , 1147 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 355 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 4: Met Met Glu Val Asn Ser Thr Cys Leu Asp Cys Arg Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ile Arg Thr Glu Gln Asp Ala Gln Asp Ser Ala Ser Gln Gly Leu Thr 20 25 30 Ser Ala Leu Ala Val Val Leu Ile Phe Thr Ile Val Val Asp Val Leu 35 40 Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Leu Arg Asn Lys Lys Leu Gln 50 55 60 Asn Ala Gly Asn Leu Phe Val Val Ser Leu Ser Ile Ala Asp Leu Val 65 70 75 80 Val Ala Val Tyr Pro Tyr Pro Val Ile Leu Ile Ala Ile Phe Gln Asn 85 90 95 Gly Trp Thr Leu Gly Asn Ile His Cys Gln Ile Ser Gly Phe Leu Met 100 105 110 Gly Leu Ser Val Ile Gly Ser Val Phe Asn Ile Thr Ala Ile Ala Ile 115 120 125 Asn Arg Tyr Cys Tyr Ile Cys His Ser Leu Arg Tyr Asp Lys Leu Tyr 130 135 140 Asn Gln Arg Ser Thr Trp Cys Tyr Leu Gly Leu Thr Trp Ile Leu Thr 145 150 155 160 Ile Ile Ala Ile Val Pro Asn Phe Phe Val Gly Ser Leu Gln Tyr Asp 165 170 175 Pro Arg Ile Phe Ser Cys Thr Phe Ala Gln Thr Val Ser Ser Ser Tyr 180 185 190 Thr Ile Thr Val Val Val Val His Phe Ile Val Pro Leu Ser Val Val 195 200 205 Thr Phe Cys Tyr Leu Arg Ile Trp Val Leu Val Ile Gln Val Lys His 210 215 220 Arg Val Arg Gln Asp Phe Lys Gln Lys Leu Thr Gln Thr Asp Leu Arg 225 230 235 240 Asn Phe Leu Thr Met Phe Val Val Phe Val Leu Phe Ala Val Cys Trp 245 250 255 Ala Pro Leu Asn Phe Ile Gly Leu Ala Val Ala Ile Asn Pro Phe His 260 265 270 Val Ala Pro Lys Ile Pro Glu Trp Leu Phe Val Leu Ser Tyr Phe Met 275 280 285 Ala Tyr Phe Asn Ser Cys Leu Asn Ala Val Ile Tyr Gly Val Leu Asn 290 295 300 Gln Asn Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Arg Ile Leu Met Ser Leu Leu Thr 305 310 315 320 Pro Arg Leu Leu Phe Leu Asp Thr Ser Arg Gly Gly Thr Glu Gly Leu 325 330 335 Lys Ser Lys Pro Ser Pro Ala Val Thr Asn Asn Asn Gln Ala Asp Met 340 345 350 Tyr Val * 355 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 5: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1312 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc pour ARNm (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: CDS (B) EMPLACEMENT:1..1065 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 5: ATG ATG GAG GTG AAT AGC ACT TGC TTG GAT TGC AGG ACA CCT GGT ACC 48 Met Met Glu Val Asn Ser Thr Cys Leu Asp Cys Arg Thr Pro Gly Thr ATA CGA ACA GAG CAG GAT GCA CAG GAC AGC GCA TCT CAG GGA CTC ACC 96 Ile Arg Thr Glu Gln Asp Ala Gln Asp Ser Ala Ser Gln Gly Leu Thr TCT GCC CTG GCG GTG GTT CTT ATA TTC ACC ATT GTT GTG GAT GTC CTG 144 Ser Ala Leu Ala Val Val Leu Ile Phe Thr Ile Val Val Asp Val Leu GGC AAT ATA TTG GTC ATT TTG TCT GTC CTG AGG AAC AAG AAG CTG CAG 192 Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Leu Arg Asn Lys Lys Leu Gln AAT GCT GGA AAT CTC TTT GTT GTC AGT TTG TCT ATT GCC GAT CTG GTT 240 Asn Ala Gly Asn Leu Phe Val Val Ser Leu Ser Ile Ala Asp Leu Val GTT GCT GTG TAT CCC TAT CCG GTA ATT CTC ATA GCT ATT TTC CAG AAT 288 Val Ala Val Tyr Pro Tyr Pro Val Ile Leu Ile Ala Ile Phe Gln Asn GGG TGG ACG CTT GGA AAT ATC CAT TGT CAG ATC AGT GGC TTC CTG ATG 336 Gly Trp Thr Leu Gly Asn Ile His Cys Gln Ile Ser Gly Phe Leu Met GGA CTC AGC GTT ATT GGA TCA GTC TTC AAC ATA ACA GCC ATA GCT ATC 384 Gly Leu Ser Val Ile Gly Ser Val Phe Asn Ile Thr Ala Ile Ala Ile AAC AGG TAT TGC TAC ATC TGC CAC AGC CTG AGA TAT GAC AAG CTT TTT 432 Asn Arg Tyr Cys Tyr Ile Cys His Ser Leu Arg Tyr Asp Lys Leu Phe AAT CAA AGA AGC ACC TGG TTC TAC CTT GGC CTG ACA TGG ATA CTA ACC 480 Asn Gln Arg Ser Thr Trp Phe Tyr Leu Gly Leu Thr Trp Ile Leu Thr ATA ATT GCC ATT GTG CCA AAC TTT TTT GTT GGA TCA CTA CAG TAT GAC 528 Ile Ile Ala Ile Val Pro Asn Phe Phe Val Gly Ser Leu Gln Tyr Asp CCC AGG ATT TTC TCT TGC ACA TTT GCG CAG ACC GTA AGT TCC TCA TAC 576 Pro Arg Ile Phe Ser Cys Thr Phe Ala Gln Thr Val Ser Ser Ser Tyr ACC ATA ACA GTA GTG GTA GTG CAT TTT ATA GTC CCT CTT AGT GTT GTG 624 Thr Ile Thr Val Val Val Val His Phe Ile Val Pro Leu Ser Val Val ACA TTC TGC TAC TTA AGA ATA TGG GTT TTA GTG ATC CAA GTC AAA CAC 672 Thr Phe Cys Tyr Leu Arg Ile Trp Val Leu Val île Gln Val Lys His AGA GTT AGA CAA GAC TTC AAG CAA AAG TTG ACA CCA ACA GAC TTG AGA 720 Arg Val Arg Gln Asp Phe Lys Gln Lys Leu Thr Pro Thr Asp Leu Arg AAT TTC TTG ACC ATG TTT GTG GTC TTT GTA CTT TTT GCC GTT TGC TGG 768 Asn Phe Leu Thr Met Phe Val Val Phe Val Leu Phe Ala Val Cys Trp GCA CCC TTG AAT TTT ATC GGC CTT GCT GTG GCC ATT AAC CCA CTC CAC 816 Ala Pro Leu Asn Phe Ile Gly Leu Ala Val Ala Ile Asn Pro Leu His GTG GCA CCA AAG ATT CCA GAG TGG TTG TTT GTG TTA AGC TAT TTC ATG 864 Val Ala Pro Lys Ile Pro Glu Trp Leu Phe Val Leu Ser Tyr Phe Met GCC TAT TTT AAC AGC TGT CTC AAT GCT GTC ATC TAC GGT CTG CTA AAT 912 Ala Tyr Phe Asn Ser Cys Leu Asn Ala Val Ile Tyr Gly Leu Leu Asn CAA AAC TTC CGC AAG GAA TAC AAA CGA ATA TTG ATG TCC TTA TGG ACT 960 Gln Asn Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Arg Ile Leu Met * Leu Trp Thr CCA AGA CTG TTG TTT CTT GAC ACA TCT AGA GGA GGA ACT GAG GGA TTG 1008 Pro Arg Leu Leu Phe Leu Asp Thr Ser Arg Gly Gly Thr Glu Gly Leu AAA AGT AAG CCT TCG CCA GCT GTA ACC AAC AAC AAT CAA GCA GAT ATG 1056 Lys Ser Lys Pro Ser Pro Ala Val Thr Asn Asn Asn Gln Ala Asp Met TAC GTG TAA ACACAGCTTT CCACCAATAT GTACTCTGTT TCAACTATGA 1105 Tyr Val * ATACAAGTTT CTTTTATGGC AGTTGCACCA TGTGCCTAAT TCTTT CATTCTAAAA 1165 TTTTTGTATA AACATACATT CTGTTGGTTT GACAGGGACA AGAGGTCTTG CTTCTCTGCA 1225 GAAAAGAAAT ATTTTGAAAT CTTGGCTGAT TTGTTATTAA TAACCATAAA TGGAATATCT 1285 TTAAAAAAA AAAAAAAAAA AGAATTC 1312 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 6: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 355 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE NOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6: Met Met Glu Val Asn Ser Thr Cys Leu Asp Cys Arg Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ile Arg Thr Glu Gln Asp Ala Gln Asp Ser Ala Ser Gln Gly Leu Tyr 20 25 30 Ser Ala Leu Ala Val Val Leu Ile Phe Thr île Val Val Asp Val Leu 35 40 45 Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Leu Arg Asn Lys Lys Leu Gln 50 55 60 Asn Ala Gly Asn Leu Phe Val Val Ser Leu Ser Ile Ala Asp Leu Val 65 70 75 80 Val Ala Val Tyr Pro Tyr Pro Val Ile Leu Ile Ala Ile Phe Gln Asn 85 90 95 Gly Trp Thr Leu Gly Asn Ile His Cys Gln Ile Ser Gly Phe Leu Met 100 105 110 Gly Leu Ser Val Ile Gly Ser Val Phe Asn Ile Thr Ala Ile Ala Ile 115 120 125 Asn Arg Tyr Cys Tyr Ile Cys His Ser Leu Arg Tyr Asp Lys Leu Phe 130 135 140 Asn Gln Arg Ser Thr Trp Phe Tyr Leu Gly Leu Thr Trp Ile Leu Thr 145 150 155 160 Ile Ile Ala Ile Val Pro Asn Phe Phe Val Gly Ser Leu Gin Tyr Asp 165 170 175 Pro Arg Ile Phe Ser Cys Thr Phe Ala Gln Thr Val Ser Ser Ser Tyr 180 185 190 Thr Ile Thr Val Val Val Val His Phe Ile Val Pro Leu Ser Val Val 195 200 205 Thr Phe Cys Tyr Leu Arg Ile Trp Val Leu Val Ile Gln Val Lys His 210 215 220 Arg Val Arg Gln Asp Phe Lys Gln Lys Leu Thr Pro Thr Asp Leu Arg 225 230 235 240 Asn Phe Leu Thr Met Phe Val Val Phe Val Leu Phe Ala Val Cys Trp 245 250 255 Ala Pro Leu Asn Phe Ile Gly Leu Ala Val Ala Ile Asn Pro Leu His 260 265 270 Val Ala Pro Lys Ile Pro Glu Trp Leu Phe Val Leu Ser Tyr Phe Met 275 280 285 Ala Tyr Phe Asn Ser Cys Leu Asn Ala Val Ile Tyr Gly Leu Leu Asn 290 295 300 Gln Asn Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Arg Ile Leu Met Ser Leu Trp Thr 305 310 315 320 Pro Arg Leu Leu Phe Leu Asp Thr Ser Arg Gly Gly Thr Glu Gly Leu 325 330 335 Lys Ser Lys Pro Ser Pro Ala Val Thr Asn Asn Asn Gin Ala Asp Met 340 345 350 Tyr Val * 355 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 7: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1147 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc pour ARNm (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: CDS (B) EMPLACEMENT:1..1065 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 7: ATG ATG GAG GTG AAT AGC ACT TGC TTG GAT TGC AGG ACA CCT GGT ACC 48 Met Met Glu Val Asn Ser Thr Cys Leu Asp Cys Arg Thr Pro Gly Thr ATA CGA ACA GAG CAG GAT GCA CAG GAC AGC GCA TCT CM GGA CTC ACC 96 Ile Arg Thr Glu Gln Asp Ala Gln Asp Ser Ala Ser Gln Gly Leu Thr TCT GCC CTG GCG GTG GTT CTT ATA TTC ACC ATT GTT GTG GAT GTC CTG 144 Ser Ala Leu Ala Val Val Leu Ile Phe Thr Ile Val Val Asp Val Leu GGC AAT ATA TTG GTC ATT TTG TCT GTC CTG AGG AAC AAG AAG CTG CAG 192 Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Leu Arg Asn Lys Lys Leu Gln AAT GCT GGA AAT CTC TTT GTT GTC AGT TTG TCT ATT GCC GAT CTG GTT 240 Asn Ala Gly Asn Leu Phe Val Val Ser Leu Ser Ile Ala Asp Leu Val GTT GCT GTG TAT CCC TAT CCG GTA ATT CTC ATA GCT ATT TTC CAG AAT 288 Val Ala Val Tyr Pro Tyr Pro Val Ile Leu Ile Ala Ile Phe Gln Asn GGG TGG ACG CTT GGA AAT ATC CAT TGT CAG ATC AGT GGC TTC CTG ATG 336 Gly Trp Thr Leu Gly Asn Ile His Cys Gln Ile Ser Gly Phe Leu Met GGA CTC AGC GTT ATT GGA TCA GTC TTC AAC ATA ACA GCC ATA GCT ATC 384 Gly Leu Ser Val Ile Gly Ser Val Phe Asn Ile Thr Ala Ile Ala Ile AAC AGG TAT TGC TAC ATC TGC CAC AGC CTG AGA TAT GAC AAC CTT TTT 432 Asn Arg Tyr Cys Tyr Ile Cys His Ser Leu Arg Tyr Asp Lys Leu Phe AAT CAA AGA AGC ACC TGG TTC TAC CTT GGC CTG ACA TGG ATA CTA ACC 480 Asn Gln Arg Ser Thr Trp Phe Tyr Leu Gly Leu Thr Trp Ile Leu Thr ATA ATT GCC ATT GTG CCA AAC TTT TTT GTT GGA TCA CTA CAG TAT GAC 528 Ile Ile Ala Ile Val Pro Asn Phe Phe Val Gly Ser Leu Gln Tyr Asp CCC AGG ATT TTC TCT TGC ACA TTT GCG CAG ACC GTA AGT TCC TCA TAC 576 Pro Arg Ile Phe Ser Cys Thr Phe Ala Gln Thr Val Ser Ser Ser Tyr ACC ATA ACA GTA GTG GTA GTG CAT TTT ATA GTC CCT CTT AGT GTT GTG 624 Thr Ile Thr Val Val Val Val His Phe Ile Val Pro Leu Ser Val Val ACA TTC TGC TAC TTA AGA ATA TGG GTT TTA GTG ATC CAA GTC AAA CAC 672 Thr Phe Cys Tyr Leu Arg Ile Trp Val Leu Val Ile Gln Val Lys His AGA GTT AGA CAA GAC TTC AAG CAA AAG TTG ACA CCA ACA GAC TTG AGA 720 Arg Val Arg Gln Asp Phe Lys Gln Lys Leu Thr Pro * Asp Leu Arg AAT TTC TTG ACC ATG TTT GTG GTC TTT GTA CTT TTT GCC GTT TGC TGG 768 Asn Phe Leu Thr Met Phe Val Val Phe Val Leu Phe Als Val Cys Trp GCA CCC TTG AAT TTT ATC GGC CTT GCT GTG GCC ATT AAC CCA CTC CAC 816 Ala Pro Leu Asn Phe Ile Gly Leu Ala Val Ala Ile Asn Pro Leu His GTG GCA CCA AAG ATT CCA GAG TGG TTG TTT GTG TTA AGC TAT TTC ATG 864 Val Ala Pro Lys Ile Pro Glu Trp Leu Phe Val Leu Ser Tyr Phe Met GCC TAT TTT AAC AGC TGT CTC AAT GCT GTC ATC TAC GGT CTG CTA AAT 912 Ala Tyr Phe Asn Ser Cys Leu Asn Ala Val Ile Tyr Gly Leu Leu Asn CAA AAC TTC CGC AAG GAA TAC AAA CGA ATA TTG ATG TCC TTA TGG ACT 960 Gln Asn Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Arg Ile Leu Met Ser Leu Trp Thr CCA AGA CTG TTG TTT CTT GAC ACA TCT AGA GGA GGA ACT GAG GGA TTG 1008 Pro Arg Leu Leu Phe Leu Asp Thr Ser Arg Gly Gly Thr Glu Gly Leu AAA AGT AAG CCT TCG CCA GCT GTA ACC AAC AAC AAT CAA GCA GAT ATG 1056 Lys Ser Lys Pro Ser Pro Ala Val Thr Asn Asn Asn Gln Ala Asp Met TAC GTG TAA ACACAGCTTT CCACCAATAT GTACTCTGTT TCAACTATGA 1105 Tyr Val * ATACAAGTTT CTTTTATGGC AAAAAAAAAA AAAAAAGAAT TC 1147 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 8: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 355 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 8: Met Met Glu Val Asn Ser Thr Cys Leu Asp Cys Arg Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ile Arg Thr Glu Gln Asp Ala Gln Asp Ser Ala Ser Gln Gly Leu Thr 20 25 30 Ser Ala Leu Ala Val Val Leu Ile Phe Thr Ile Val Val Asp Val Leu 35 40 Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Leu Arg Asn Lys Lys Leu Gln 50 55 60 Asn Ala Gly Asn Leu Phe Val Val Ser Leu Ser Ile Ala Asp Leu Val 65 70 75 80 Val Ala Val Tyr Pro Tyr Pro Val Ile Leu Ile Ala Ile Phe Gln Asn 85 90 95 Gly Trp Thr Leu Gly Asn Ile His Cys Gln Ile Ser Gly Phe Leu Met 100 105 110 Gly Leu Ser Val Ile Gly Ser Val Phe Asn Ile Thr Ala Ile Ala Ile 115 120 125 Asn Arg Tyr Cys Tyr Ile Cys His Ser Leu Arg Tyr Asp Lys Leu Phe 130 135 140 Asn Gln Arg Ser Thr Trp Phe Tyr Leu Gly Leu Thr Trp Ile Leu Thr 145 150 155 160 Ile Ile Ala Ile Val Pro Asn Phe Phe Val Gly Ser Leu Gln Tyr Asp 165 170 175 Pro Arg Ile Phe Ser Cys Thr Phe Ala Gln Thr Val Ser Ser Ser Tyr 180 185 190 Thr Ile Thr Val Val Val Val His Phe Ile Val Pro Leu Ser Val Val 195 200 Thr Phe Cys Tyr Leu Arg Ile Trp Val Leu Val Ile Gln Val Lys His 210 215 220 Arg Val Arg Gln Asp Phe Lys Gln Lys Leu Thr Pro Thr Asp Leu Arg 225 230 235 240 Asn Phe Leu Thr Met Phe Val Val Phe Val Leu Phe Ala Val Cys Trp 245 25G 255 Ala Pro Leu Asn Phe Ile Gly re la Val Ala Ile Asn Pro Leu His 260 ^55 270 Val Ala Pro Lys Ile Pro Glu Trp Leu Phe Val Leu Ser Tyr Phe Met 275 230 285 Ala Tyr Phe Asn Ser Cys Leu Asn Ala Val Ile Tyr Gly Leu Leu Asn 290 295 300 Gln Asn Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Arg Ile Leu Met Ser Leu Trp Thr 305 310 315 320 Pro Arg Leu Leu Phe Leu Asp Thr Ser Arg Gly Gly Thr Glu Gly Leu 325 330 335 Lys Ser Lys Pro Ser Pro Ala Val Thr Asn Asn Asn Gln Ala Asp Met 340 345 350 Tyr Val * 355 Revendications 1 ) Séquences nucléiques codant pour des récepteurs fonctionnels de la mélatonine de type MET 1 . & caractérisées en ce qu'elles sont sélectionnées parmi les séquences suivantes: SEQ ID N 1 SEQ ID N 3, SEQ ID N 5 ou SEQ ID N 7. 2 ) Fragments des séquences selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils sont sélectionnés dans le groupe qui comprend - une séquence constituée d'un segment de 230 paires de bases nucléotidiques, correspondant aux nucléotides 1057-1286 des SEQ ID N I ou SEQ ID N05 - une séquence constituée d'un segment de 69 paires de bases nucléotidiques, correspondant aux nucléotides 1057-1125 des SEQ ID N 3 ou SEQ ID N 7. 3 ) Sondes nucléotidiques, caractérisées en ce qu'elles s'hybrident avec les séquences nucléotîdiques selon la revendication 1 ou la revendication 2. 4 ) Protéine et/ou fragments de protéine, caractérisés en ce qu'ils sont codés par une séquence nucléotidique selon la revendication 1 ou la revendication 2 et en ce qu'ils présentent une activité de récepteur de la mélatonine de type MEL1 A fonctionnel. z ) Protéine selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle présente l'une quelconque des sequences suivantes. SEQ ID N 2 ou SEQ ID N 6. 6 ) Vecteur recombinant de clonage et/ou d'expression, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique selon la revendication 1 ou la revendication 2. 7 ) Vecteur selon la revendication 6. caractérisé en ce qu'il est constitué par un plasmide comprenant un promoteur RSV et la SEQ ID N 1. 8 ) Vecteur selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il a été déposé sous le n I-1583 en date du 7 juin 1995 auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par l'institut Pasteur. 9 ) Vecteur selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il est constitué par un plasmide comprenant un promoteur RSV et la SEQ ID N 5. 10 ) Vecteur selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il a été déposé sous le n" I-1584 en date du 7 juin 1995 auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par l'Institut Pasteur. 11") Cellule hôte appropriée, obtenue par transformation génétique, caractérisée en ce qu'elle est transiormee par un vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 6 à 10. 12") Cellule hote selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle est constituée par les cellules de la lignée L. 13 ) Processus d'expression d'une protéine selon la revendication 4 ou la revendication 5, caractérisé en ce que la cellule hôte, résultant de la transformation par un vecteur contenant une séquence nucléotidique selon la revendication 1 ou la revendication 2 codant pour une protéine ayant une activité de récepteur fonctionnel de la mélatonine de type MET 1 A, est cultivée de manière à produire et à transporter ladite protéine exprimée vers la membrane, de telle sorte que les séquences transmembranaires dudit récepteur soient exposées à la surface de la membrane de l'hôte cellulaire transformé. 14") Modèle d'étude des récepteurs de la mélatonine de type MEL1 A, caractérisé en ce qu il est constitué par des cellules hôtes selon la revendication 11 ou la revendication 12 c'est-à-dire exprimant un récepteur fonctionnel de la mélatonine de type MELi A à la surface de leur membrane cellulaire. 15 ) Procédé de détection de la capacité d'une substance à se comporter comme ligand vis-à-vis d'une protéine selon la revendication 4 ou la revendication 5, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend - la mise en contact de ladite substance avec une cellule hôte préalablement transformée par un vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, laquelle cellule hôte exprime ladite protéine (récepteur de la mélatonine), et laquelle mise en contact est réalisée dans des conditions permettant la formation d'une liaison entre l'un au moins des sites spécifiques et ladite substance et - la détection de la formation éventuelle d'un complexe de type ligand-protéine. 16 ) Procédé pour l'étude de l'affinité d'une protéine selon la revendication 4 ou la revendication 5 pour un ou plusieurs ligands déterminés, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend - la transformation d'une cellule hôte appropriée par un vecteur selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, - là culture de la cellule hôte transformée, dans des conditions permettant l'expression du récepteur de la mèlatonine de type MEL1 A, codé par la séquence nucléotidique, et le transfert du récepteur de la mélatonine exprimé vers la membrane de ladite cellule de sorte que les séquences transmembranaires du récepteur fonctionnel de la mélatonine soient exposées à la surface de la cellule hôte transformée;; - la mise en contact de ladite cellule avec les ligands déterminés et - la détection dune réaction affine entre ladite cellule transformée et lesdits ligands déterminés. 17 ) Kit pour la détection de l'affinité éventuelle d'un ligand pour une protéine selon la revendication 4 ou la revendication 5, lequel kit est caractérisé en ce qu'il comprend: - une culture de cellules hôtes transformées par un vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, - éventuellement. si nécessaire, des moyens physiques ou chimiques pour induire l'expression d'une protéine (récepteur de la mélatonine de type MELi A), codée par une séquence nucléotidique selon la revendication I ou la revendication 2, contenue dans un vecteur dont le promoteur est inductible, - un ou plusieurs ligands témoins ayant des affinités déterminées pour ladite protéine, et - des moyens physiques ou chimiques pour la caractérisation de l'activité biologique de la protéine exprimée.