Brevet FR2741066A1 — publié le 19970516

La présente invention concerne de nouveaux composés apparentés à la famille des lipopolyamines, des compositions pharmaceutiques les contenant, leurs applications pour la transfection in vivo et/ou in vitro d'acides nucléiques et leur procédé de préparation. De nombreuses maladies génétiques sont associées à un défaut d'expression et/ou une expression anormale, c'est à dire déficiente ou excessive, d'un ou plusieurs acides nucléiques. La thérapie génique a pour principal objectif de corriger ce type d'anomalies génétiques par le biais de l'expression cellulaire in vivo ou in vitro de gènes clonés. Aujourd'hui, plusieurs méthodes sont proposées pour la délivrance intracellulaire de ce type d'information génétique. L'une d'entre elles, en particulier, repose sur l'emploi de vecteurs chimiques ou biochimiques. Les vecteurs synthétiques ont deux fonctions principales, compacter l'ADN à transfecter et promouvoir sa fixation cellulaire ainsi que son passage à travers la membrane plasmique et, le cas échéant, à travers les deux membranes nucléaires. Un progrés important a été accompli dans ce mode de transfection avec le développement d'une technologie basée sur l'emploi d'un lipide cationique. Il a ainsi été mis en évidence qu'un lipide cationique chargé positivement, le chlorure de N-[1-(2,3- dioleyloxy)propyl]-N,N,N-triméthylammonium (DOTMA), interférait, sous la forme de liposomes ou de petites vésicules, spontanément avec de l'ADN, qui est chargé négativement, pour former des complexes lipides-ADN, capables de fusionner avec les membranes cellulaires, et permettait ainsi la délivrance intracellulaire de l'ADN. Toutefois, bien que cette molécule soit efficace au niveau de la transfection, elle présente le désavantage d'être non biodégradable et de posséder un caractère toxique à l'égard des cellules. Depuis le DOTMA, d'autres lipides cationiques ont été développés sur ce modèle de structure groupe lipophile associé à un groupement amino via un bras dit "spacer" Parmi ceux-ci, on peut plus particulièrement citer ceux comprenant à titre de groupement lipophile deux acides gras ou un dérivé du cholestérol, et comportant, en outre, le cas échéant, à titre de groupement amino, un groupement d'ammonium quaternaire. Les DOTAP, DOBT ou le ChOTB peuvent notamment être cités à titre représentatifs de cette catégorie de lipides cationiques. D'autres composés, comme les DOSC et ChOSC, se caractérisent par la présence d'un groupement choline à la place du groupement d'ammonium quaternaire. En général, I'activité transfectante de ces composés demeure toutefois assez faible. Une autre catégorie de lipides cationiques, les lipopolyamines, a également été décrite. Au sens de la présente invention, le terme lipopolyamine désigne une molécule amphiphile comprenant au moins une région hydrophile polyamine associée par une région dite spacer à une région lipophile. La région polyamine des lipopolyamines, chargée cationiquement, est capable de s'associer de manière réversible avec l'acide nucléique, chargé négativement. Cette interaction compacte fortement l'acide nucléique. La région lipophile rend cette interaction ionique insensible au milieu externe, en recouvrant la particule nucléolipidique formée d'une pellicule lipidique.Dans ce type de composés, le groupement cationique peut être représenté par le radical L-Scarboxyspermine qui contient quatre groupements d'ammonium, deux primaires et deux secondaires. Les DOGS et DPPES en font notamment partie. Ces lipopolyamines sont tout particulièrement efficaces pour la transfection de cellules endocrines primaires. En fait, un agent de transfection synthétique idéal devrait présenter un haut niveau de transfection, et ce pour un large spectre de cellules, posséder une toxicité nulle ou à défaut une toxicité très minimisée aux doses d'utilisation, et enfin, être biodégradable pour s'affranchir de tout effet secondaire au niveau des cellules traitées. La présente invention a précisément pour objet de proposer de nouvelles lipopolyamines, originales de par leur fraction polyamine, et qui soient susceptibles d'être utilisés efficacement dans la transfection in vitro et ou in vivo de cellules et notamment pour la vectorisation d'acides nucléiques. La présente invention a pour premier objet des lipopolyamines, sous forme D, L ou LD et leurs sels caractérisées en ce qu'elles sont représentées par la formule générale I Dans laquelle R1, R2 et R3 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupement -(CH2)q-NRR' avec q pouvant varier entre 1, 2, 3, 4, 5 et 6 ceci de manière indépendante entre les différents groupements RI, R2 et R3, R et R' représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupement -(CH2)q-NH2 avec q défini comme précédemment, m, n et p représentent, indépendamment l'un de l'autre, un nombre entier pouvant varier entre 0 et 6 avec lorsque n est supérieur à 1, m pouvant prendre des valeurs différentes et R3 des significations différentes au sein de la formule générale I et R4 représente un groupement de formule générale II dans laquelle: R6 et R7 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un radical aliphatique, saturé ou non, en C10 à C22, u est un nombre entier choisi entre 0 et 1 et X représente un atome d'oxygène, de soufre ou un groupement amine monoalkylé ou non, Y représente un groupement carbonyle ou un groupement méthylène et R5 représente un atome d'hydrogène ou une chaine latérale d'acide aminé naturel, le cas échéant substituée. Ces nouveaux produits de formule générale (I) peuvent se présenter sous forme de sels non toxiques et pharmaceutiquement acceptables. Ces sels non toxiques comprennent les sels avec les acides minéraux (acides chlorhydrique, sulfurique, bromhydrique, phosphorique, nitrique) ou avec les acides organiques (acides acétique, propionique, succinique, maléique, hydroxymaléique, benzoïque, fumanque, méthanesulfonique ou oxalique) ou avec les bases minérales (soude, potasse, lithine, chaux) ou organiques (amines tertiaires comme la triéthylamine, la pipéridine, la benzylamine). A titre représentatif des composés selon l'invention on peut plus particulièrement citer les composés de sous-formules générales suivantes: dans lesquelles R4, R6 et R7 possèdent la définition précédente. Préférentiellement, R4 y représente un groupement N[ (CH2)17 CH3]2 et R6 et R7 un groupement (CH2),7 CH3. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, les composés revendiqués comprennent en outre un élément de ciblage permettant d'orienter le transfert de l'acide nucléique auquel ils sont associés. Cet élément de ciblage est de préférence incorporer, sur le composé de formule générale I, au niveau de la chaîne latérale d'acide aminé figurée par le substituant R5. Plus préférentiellement, I'élément de ciblage est lié, de manière covalente ou non covalente, au composé selon l'invention. Il peut s'agir d'un élément de ciblage extracellulaire, permettant d'orienter le transfert de l'acide nucléique vers certains types cellulaires ou certains tissus souhaités (cellules tumorales, cellules hépatiques, cellules hématopoiétiques, etc). A ce titre, il peut s'agir d'un ligand de récepteur cellulaire présent à la surface du type cellulaire ciblé comme par exemple un sucre, un folate, une transférrine, une insuline, une protéine asialo-orosomucoïde ou tout peptide bioactif reconnu par des récepteurs extracellulaires. Il peut également s'agir d'un élément de ciblage intracellulaire, permettant d'orienter le transfert de l'acide nucléique vers certains compartiments cellulaires privilégiés (mitochondries, noyau, etc) comme par exemple, une séquence signal de localisation nucléaire, (nls), qui privilégie l'accumulation de l'ADN transfecté au sein du noyau. Plus généralement, les éléments de ciblage susceptibles d'être mis en oeuvre dans le cadre de l'invention incluent les sucres, les peptides, les oligonucléotides ou les lipides. Préférentiellement, il s'agit de sucres et/ou peptides tels que des anticorps ou fragments d'anticorps, des ligands de récepteurs cellulaires ou des fragments de ceuxci, des récepteurs ou fragments de récepteurs, etc. En particulier, il peut s'agir de ligands de récepteurs de facteurs de croissance, de récepteurs de cytokines, de récepteurs de lectines cellulaires ou de récepteurs de protéines d'adhésion. On peut également citer le récepteur de la transferrine, des lipides HDL et des LDL. L'élément de ciblage peut également être un sucre permettant de cibler des lectines tels que les récepteurs asialoglycoprotéiques, ou encore un fragment Fab d'anticorps permettant de cibler le récepteur du fragment Fc des immunoglobulines. De la même façon, il est possible d'envisager l'association à un composé de formule générale I d'un agent marqueur de type biotine, rhodamine ou folate par exemple sur la chaine latérale d'acide aminé R5. A titre illustratif des lipopolyamines revendiquées, on peut plus particulièrement citer les composés suivants, décrits de manière plus détaillée dans les exemples ci-après: H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[CH2)18]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2CON[(CH2)18]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CH2)18]2 H2N(CH2)NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArg(Z)2N i 7-CH3 ]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COLys(rhodamine)N[(CH2) 1 7-CH3]2 N2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COLys(biotinyl)N[(CH2)17-CH3]2 { H2N(CH2)3 ) }2N(CH2)4N{ (CH2)3NH2 } (CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2) 1 7-CH3]2 {H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2CON[(CH2)17-CH3]2 {H2N(CH2)2 )2N(CH2)2NHCH2COGlyN[(CH2) 1 7-CH3]2 et {H2N(CH2)2}2N(CH2)2NHCH2CON[(CH2)17-CH3]2 Dans le cadre de la présente invention, il a en outre été développé une méthodologie originale en phase solide pour préparer des polyamines fonctionnalisées assymétriques dont dérivent les lipopolyamines selon l'invention. Classiquement, I'accès aux polyamines fonctionnalisées assymétriques est limité par la nécessité d'introduire sélectivement des modifications dans des polyamines symétriques linéaires ou branchées. Les différences chimiques entre les groupes aminés primaires et secondaires d'une polyamine requièrent une grande sélectivité pour effectuer des réactions telles que des alkylations, des additions de type Michael ou des acylations. De plus, la sélectivité imposée par de telles différences chimiques n'est pas compatible avec une alkylation sélective dans un groupe de plusieurs amines primaires et secondaires, comme on en rencontre dans les polyamines. La réponse classique à de telles restrictions est de construire les polyamines fonctionnalisées assymétriques à partir de blocs monomères portant d'un côté un groupe aminé susceptible d'être "polyaminé" et de l'autre coté la fonction asymétrique convenablement protégée. Cette approche nécessite donc une stratégie de synthèse fastidieuse en plusieurs étapes et en particulier une protection orthogonale des groupes fonctionnels. La méthode développée dans le cadre de la présente invention, a précisément pour objectif de s'affranchir des inconvénients rencontrés jusqu'alors avec ce type de synthèse. Elle a pour net avantage de conduire commodément et rapidement à des polyamines qui sont fonctionnalisées sélectivement sur un unique groupe aminé primaire par alkylation ou alkylation réductive des polyamines symétriques. Le principe du procédé revendiqué est fondé sur l'emploi d'une méthode de synthèse en phase solide pour favoriser une réaction bimoléculaire entre le réactif alkylant et la polyamine, ce qui évite la polyalkylation de celle-ci. Plus précisément, la présente invention se rapporte à un procédé caractérisé en ce qu'il met en oeuvre le couplage d'au moins une fraction lipidique à au moins une fraction polyamine assymétrique, ladite fraction polyamine ayant au préalable été obtenue par réaction bimoléculaire entre un agent alkylant lié covalemment à un support solide et une polyamine symétrique. Selon cette approche, le réactif alkylant est lié covalemment à un support polymère par estérification ou amidation. La polyamine symétrique réagit avec l'agent alkylant en phase solide par une réaction bimoléculaire qui mène à la polyamine asymétrique mono-fonctionnalisée attachée au support. Les amines libres du produit sont habituellement protégées en phase solide par des groupes protecteurs de type BOC ou Z, et finalement les produits sont clivés du support de phase solide. Ces acides polyaminés sont, comme il convient, couplés aux fractions lipidiques pour fournir les agents transfectants recherchés. Pour ce couplage, il est possiblede mettre en oeuvre des agents de couplage peptidique usuels comme BOP, Pybop, BopC1 et DCC par exemple. La méthodologie permet également d'assembler l'agent transfectant entier sur le support solide avec l'introduction éventuelle de peptides traceurs, de sucres, ou de sondes fluorescentes dans les molécules. Bien entendu, il s'avère possible de procéder à ce type de greffage sur la lipopolyamine libre. La faisabilité de la méthode a été démontrée par la synthèse de plusieurs acides polyaminés linéaires ou branchés assymétriques et fonctionnalisés. La présente invention a également pour objet toute application thérapeutique des lipopolyamines telles que décrites précédemment , soit directement, soit au sein de compositions pharmaceutiques. Comme explicité précédemment, les composés de formule générale I s'avèrent tout particulièrement intéressants pour la transfection in vitro et in vivo d'acides nucléiques. Ils compactent efficacement l'ADN et présentent avantageusement une toxicité très réduite. Pour obtenir un effet maximal des compositions de l'invention, les proportions respectives du composé de formule générale I et de l'acide nucléique sont de préférence déterminées de manière à ce que le rapport R, charges positives de la lipopolyamine considérée par charges négatives dudit acide nucléique soit optimal. Ce rapport optimal variant en particulier selon le mode d'utilisation à savoir in vivo ou in vitro et selon le type cellulaire à transfecter, il est optimisé au cas par cas. Cette optimisation relève de la compétence de l'homme de l'art. Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention, le polynucléotide peut être aussi bien un acide désoxyribonucléique qu'un acide ribonucléique. Il peut s'agir de séquences d'origine naturelle ou artificielle, et notamment d'ADN génomique, d'ADNc, d'ARNm, d'ARNt, d'ARNr, de séquences hybrides ou de séquences synthétiques ou semi-synthétiques d'oligonucléotides modifiés ou non. Ces acides nucléiques peuvent être d'origine humaine, animale, végétale, bactérienne, virale, etc. Ils peuvent etre obtenus par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par criblage de banques, par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques. Ils peuvent par ailleurs être incorporés dans des vecteurs, tels que des vecteurs plasmidiques. Concernant plus particulièrement les acides désoxyribonucléiques, ils peuvent être simple ou double brin de même que des oligonuléotides courts ou des séquences plus longues. Ces acides désoxyribonucléiques peuvent porter des gènes thérapeutiques, des séquences régulatrices de la transcription ou de la réplication, des séquences antisens modifiées ou non, des régions de liaison à d'autres composants cellulaires, etc. Au sens de l'invention, on entend par gène thérapeutique notamment tout gène codant pour un produit protéique ayant un effet thérapeutique. Le produit protéique ainsi codé peut être une protéine, un peptide, etc. Ce produit protéique peut être homologue vis-à-vis de la cellule cible (c'est-à-dire un produit qui est normalement exprimé dans la cellule cible lorsque celle-ci ne présente aucune pathologie). Dans ce cas, l'expression d'une protéine permet par exemple de pallier une expression insuffisante dans la cellule ou l'expression d'une protéine inactive ou faiblement active en raison d'une modification, ou encore de surexprimer ladite protéine. Le gène thérapeutique peut aussi coder pour un mutant d'une protéine cellulaire, ayant une stabilité accrue, une activité modifiée, etc. Le produit protéique peut également être hétérologue vis-à-vis de la cellule cible. Dans ce cas, une protéine exprimée peut par exemple compléter ou apporter une activité déficiente dans la cellule, lui permettant de lutter contre une pathologie, ou stimuler une réponse immunitaire. Parmi les produits thérapeutiques au sens de la présente invention, on peut citer plus particulièrement les enzymes, les dérivés sanguins, les hormones, les lymphokines interleukines, interférons, TNF, etc (FR 9203120), les facteurs de croissance, les neurotransmetteurs ou leurs précurseurs ou enzymes de synthèse, les facteurs trophiques BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, HARP/pléiotrophine, etc, les apolipoprotéines ApoAI, ApoAIV, ApoE, etc (FR 93 05125), la dystrophine ou une minidystrophine (FR 9111947), la protéine CFTR associée à la mucoviscidose, les gènes suppresseurs de tumeurs p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev, etc (FR 93 04745), les gènes codant pour des facteurs impliqués dans la coagulation Facteurs VII, VIII, IX, les gènes intervenant dans la réparation de l'ADN, les gènes suicides (thymidine kinase, cytosine déaminase), les gènes de l'hémogiobine ou d'autres transporteurs protéiques, les enzymes du métabolisme, catabolisme etc. L'acide nucléique thérapeutique peut également être un gène ou une séquence antisens, dont l'expression dans la cellule cible permet de contrôler l'expression de gènes ou la transcription d'ARNm cellulaires. De telles séquences peuvent, par exemple, être transcrites dans la cellule cible en ARN complémentaires d'ARNm cellulaires et bloquer ainsi leur traduction en protéine, selon la technique décrite dans le brevet EP 140 308. Les gènes thérapeutiques comprenent également les séquences codant pour des ribozymes, qui sont capables de détruire sélectivement des ARN cibles (EP 321 201). Comme indiqué plus haut, I'acide nucléique peut également comporter un ou plusieurs gènes codant pour un peptide antigénique, capable de générer chez l'homme ou l'animal une réponse immunitaire. Dans ce mode particulier de mise en oeuvre, I'invention permet donc la réalisation soit de vaccins soit de traitements immunothérapeutiques appliqués à l'homme ou à l'animal, notamment contre des microorganismes, des virus ou des cancers. Il peut s'agir notamment de peptides antigéniques spécifiques du virus d'Epstein Barr, du virus HIV, du virus de l'hépatite B (EP 185 573), du virus de la pseudo-rage, du "syncitia forming virus, d'autres virus ou encore spécifiques de tumeurs (EP 259 212). Préférentiellement, I'acide nucléique comprend également des séquences permettant l'expression du gène thérapeutique et/ou du gène codant pour le peptide antigénique dans la cellule ou l'organe désiré. Il peut s'agir des séquences qui sont naturellement responsables de l'expression du gène considéré lorsque ces séquences sont susceptibles de fonctionner dans la cellule infectée. Il peut également s'agir de séquences d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Notamment, il peut s'agir de séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus. A cet égard, on peut citer par exemple les promoteurs des gènes E 1 A, MLP, CMV, RSV, etc. En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, etc. Il peut aussi s'agir de promoteur, inductible ou répressible. Par ailleurs, I'acide nucléique peut également comporter, en particulier en amont du gène thérapeutique, une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé dans les voies de sécrétion de la cellule cible. Cette séquence signal peut être la séquence signal naturelle du produit thérapeutique, mais il peut également s'agir de toute autre séquence signal fonctionnelle, ou d'une séquence signal artificielle. L'acide nucléique peut également comporter une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé vers un compartiment particulier de la cellule. Dans un autre mode de mise en oeuvre, la présente invention concerne des compositions comprenant un acide nucléique, une lipopolyamine telle que revendiquée et un adjuvant capable de s'associer au complexe lipopolyamine/acide nucléique et d'en améliorer le pouvoir transfectant. La demanderesse a en effet montré que le pouvoir transfectant des lipopolyamines peut être de manière inattendue augmenté en présence de certains adjuvants (lipides, peptides ou protéines par exemple), capables de s associer au complexe lipopolyamine/acide nucléique. Dans cette optique, les compositions de l'invention peuvent comprendre comme adjuvant, un ou plusieurs lipides neutres. De telles compositions sont particulièrement avantageuses, notamment lorsque le rapport R est faible. La demanderesse a en effet montré que l'addition d'un lipide neutre permet d'améliorer la formation des particules nucléolipidiques et, de manière surprenante, de favoriser la pénétration de la particule dans la cellule en déstabilisant sa membrane. Plus préférentiellement, les lipides neutres utilisés dans le cadre de la présente invention sont des lipides à 2 chaînes grasses. De manière particulièrement avantageuse, on utilise des lipides naturels ou synthétiques, zwitterioniques ou dépourvus de charge ionique dans les conditions physiologique. Il peuvent être choisis plus particulièrement parmi la dioleoylphosphatidyléthanolamine (DOPE), I' oléoyl-palmitoylphosphatidyléthanolamine (POPE), les di-stéaroyl, -palmitoyl, -mirystoyl phosphatidyléthanolamines ainsi que leurs dérivé N-méthylés I à 3 fois; les phosphatidylglycérols, les diacylglycérols, les glycosyldiacylglycérols, les cérébrosides (tels que notamment les galactocérébrosides), les sphingolipides (tels que notamment les sphingomyélines) ou encore les asialogangliosides (tels que notamment les asialoGMl et GM2). Ces différents lipides peuvent etre obtenus soit par synthèse, soit par extraction à partir d'organes (exemple le cerveau) ou d'oeufs, par des techniques classiques bien connues de l'homme du métier. En particulier, I'extraction des lipides naturels peut être réalisée au moyen de solvants organiques (voir également Lehninger, Biochemistry). Très récemment, la demanderesse a démontré qu'il était également particulièrement avantageux d'employer à titre d'adjuvant, un composé intervenant ou non directement au niveau de la condensation dudit acide nucléique ( FR 95 01865). La présence d'un tel composé, au sein d'une composition transfectante à base d'une lipopolyamine, permettait de diminuer considérablement la quantité en cet agent, avec les conséquences bénéfiques qui en découlent sur le plan toxicologique, sans porter un préjudice quelconque à l'activité transfectante de ladite composition. Au contraire, celle-ci possède avantageusement un niveau de transfection supérieur. Par composé intervenant au niveau de la condensation de l'acide nucléique, on entend définir un composé compactant, directement ou non l'acide nucléique. Plus précisément, ce composé peut soit agir directement au niveau de l'acide nucléique à transfecter soit intervenir au niveau d'un composé annexe qui lui est directement impliqué dans la condensation de cet acide nucléique. De préférence, il agit directement au niveau de l'acide nucléique. Selon un mode de réalisation préféré, cet agent intervenant au niveau de la condensation de l'acides nucléique est constitué, en tout ou partie, de motifs peptidiques (KTPKKAKKP) et/ou (ATPAKKAA), le nombre des motifs pouvant varier entre 2 et 10. Dans la structure du composé selon l'invention, ces motifs peuvent être répétés de manière continue ou non. C'est ainsi qu'ils peuvent être séparés par des liens de nature biochimique, par exemple un ou plusieurs acides aminés ou de nature chimique. Un tel agent peut également dériver en tout ou partie d'une histone, d'une nucléoline, d'une protamine et/ou de l'un de leurs dérivés. Préférentiellement, les compositions de l'invention comprennent de 0,01 à 20 équivalents d'adjuvant pour un équivalent d'acides nucléiques en poids/poids et, plus préférentiellement, de 0,5 à 5. Les compositions selon l'invention peuvent être formulées en vue d'administrations par voie topique, cutanée, orale, rectale, vaginale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intraoculaire, transdermique, etc. De préférence, les compositions pharmaceutiques de l'invention contiennent un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable, notamment pour une injection directe au niveau de l'organe désiré, ou pour une administration par voie topique (sur peau et/ou muqueuse). Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables. Les doses d'acide nucléique utilisées pour l'injection ainsi que le nombre d'administrations peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée, du gène à exprimer, ou encore de la durée du traitement recherchée. En ce qui concerne plus particulièrement le mode d'administration, il peut s'agir soit d'une injection directe dans les tissus ou les voies circulatoires, soit d'un traitement de cellules en culture suivi de leur réimplantation in vivo, par injection ou greffe. La présente invention fournit ainsi une méthode particulièrement avantageuse pour le traitement de maladies, comprenant l'administration in vivo ou in vitro d'un acide nucléique apte à corriger ladite maladie associé à un composé de formule générale I dans les conditions définies ci-avant. Plus particulièrement, cette méthode est applicable aux maladies résultant d'une déficience en un produit protéique ou nucléique et l'acide nucléique administré code pour ledit produit protéique ou contient ledit produit nucléique. Elle s'étend à toute utilisation d'une lipopolyamine selon l'invention pour la transfection in vivo ou in vitro de cellules La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples et figures qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. FIGURES Figure (1!: Mesure de l'efficacité de transfection après traitement de cellules NIH 3T3 (cellules embryonnaires de souris - fibroblastes) par différents lipides cationiques. Figure (2) . Mesure de l'efficacité de transfection après traitement de cellules SMC lapin (culture primaire de cellules musculaires lisses d'aorte de lapin) par différents lipides cationiques. Figure (3) Mesure de l'efficacité de transfection après traitement de cellules 3LL (carcinome pulmonaire de Lewis) par différents lipides cationiques. Figure (4! Mesure de l'efficacité de transfection après traitement de cellules NIH 3T3 (cellules embryonnaires de souris - fibroblastes) par différents lipides cationiques. Figure (5) . Effet de la concentration en DOPE sur l'efficacité de transfection de cellules 3LL. Figure (6! Transfection de cellules NIH 3T3 avec des quantités variables d'ADN et un ratio nanomoles lipofectant/Clg d'ADN constant. ABREVIATIONS ET SYMBOLES AcOEt : Acétate d' éthyle BOC t-Butoxycarbonyl BOP: Benzotriazol-l-yloxytris (diméthylamino) phosphonium hexafluorophosphate DCC : Dicyclohexylcarbodiimide DCU: Dicyclohexylurée DMAP: 4-Diméthylaminopyridine DMF Diméthylformamide DMSO . Diméthyle sulfoxide DODA: Dioctadécylamine EP Ether de pétrole EtOH: Ethanol NEt3 : Triéthylamine Rf: Coefficient de rétention frontal TFA: Acide trifluoroacétique THF Tétrahydrofurane TMS . Tétraméthylsilane UV. Ultra-Violets SPPS: Solid Phase Peptide Synthesis CLHP: Chromatographie Liquide à Haute Pression Z: Berizyloxycarbonyl CIZ: p-Chlorobenzyloxycarbonyl A- MATERIELS ET METHODES POUR LES SYNTHESES CHIMIOUES 1 MATERIEL a) Composés - Les polyamines de départ sont disponibles commercialement, par exemple: spermidine, spermine, tris (2-aminoéthyle) amine, phénylène-diamine, diaminoéthane (propane, butane, pentan Pour une alkylation classique: I'acide bromoacétique, les acides o-halogéno carboxyliques. Pour une alkylation réductive: un acide o-aldéhyde-carboxylique, tel que l'acide glyoxalique, le semi-aldéhyde succinique,etc., ou un céto-acide tel que l'acide acétoacétique ou l'acide pyruvique, etc. - Les polymères utilisés sont des résines disponibles dans le commerce pour la synthèse peptidique en phase solide (synthèse de Merrifield), par exemple la résine d'OChiorotrityl chlorure, la résine HMP, qui fournissent des produits portant des fonctions acides libres ou une résine de type Rink. Les acides polyaminés peuvent être synthétisés directement sur un peptide présynthétisé sur la phase solide et portant une fonction bromo-alkyl ou un acide w-aldéhyde. - Les dioctadecylamine, triethylamine, trifluoroacetique, BOP, DMAP, chloroformate de benzyle de chez Aldrich.sont des produits commerciaux. Les solutions de NaCI et NaHCO3 sont saturées; la solution de KHSO4 est de 0.5 M b) Mesures Physiques. Les spectres de RMN Proton ont été enregistrés sur des spectrométres Bruker 400 et 600 MHZ. Les spectres de masse ont été réalisés sur un API MS/III. c) Techniques de chromatographie Les analyses CLHP sont réalisées sur un appareil Merck-Hitachi équipé d'un autosampler AS-2000A, de une pompe inteligent L-6200A et de un détecteur UV-vis L-4000 avec longueur d'onde réglable mise à 220 nm pour séparations analitiques et à 235nm pour séparations préparatives. Les colonnes pour les séparations analytiques sont des colonnes BU-300 aquapore Butyl 7m, 300 A 300x4.6 mm. de chez Perkin Elmer et pour les séparations préparatives des colonnes Biosil C18 HL 90-10 250x10 mm de chez Biorad. Les phases mobiles sont H2O (0.1 % TFA) et Acétonitrile (0.1% TFA). Le débit pour les analyses analytiques est réglé à 1 ml/min et pour les préparatives à 4 ml/min. Les chromatographies sur couche mince (CCM) ont été effectuées sur des plaques de gel de silice Merck de 0,2 mm d' épaisseur. .Les chromatographies sur colonne ont été effectuées sur gel de silice 60 Merck de granulométrie 0,063-0,200 mm. Elles sont révélées soit aux UV ( 254nm ), à la ninhydrine, en vaporisant (spray léger) une solution éthanolique de ninhydrine (40 mg / 100 ml EtOH) pour révéler les amines ou les amides en chauffant à 1 500C, à la fluorescamine, en vaporisant une solution (40 mg / 100 ml Acétone) pour révéler les amines primaires ou à 1' iode, en recouvrant la plaque de poudre d'iode. .Les chromatographies sur colonne ont été effectuées sur gel de silice 60 Merck de granulométrie 0,063-0,200 mm. d) Technique de synthèse en phase solide SPPS La synthèse en phase solide est réalisée dans un réacteur manuel de synthèse de peptides SPPS de fabrication artisanal et l'agitateur est un Flask Shaker modele AS6021. L'evolution de couplage des polyamines à la phase solide ainsi que l'evolution de la protection des polyamines dans la SPPS est suivie par le test de Kaiser [Kaiser, E., Colescolt, D.L., Bossinger, C.D. and Cook, P.I. Anal. Biochem. 34(2), 595 (1970)]. La resine utilisee dans les exemples pour la SPPS est la Chlorotrityl chlorure Resin de chez NOVABIOCHEM-Suisse. 2- MODE OPERATOIRE GENERAL a)-Synthèse de polyamines symétriques illustrée par la préparation de la (N,N N',N'-Tétraaminopropyl) 1-4-diamino butane: Dans un ballon tricol de 2 litres, on charge 147 gr de 1-4-diamino Butane et 1000 ml d'eau déminéralisée. La solution est soumise à une agitation magnétique. Par l'intermédiaire d'une ampoule isobare on charge 443 gr d'acrylonitril en 1 heure en conservant la température à 38 C" On monte ensuite un condensateur pour reflux et on porte la masse à 80 C" avec un bain-marie durant 1 heure. Le test fluorescamine s'avère négatif et l'excès d'acrylonitril est évaporé in vacuo à 40 C" On obtient deux phases. La phase organique inférieure est séparée, lavée par 300 ml d'eau et transvasée dans un ballon de 1000 ml. On ajoute 170 ml d'un mélange eau/méthanol (1:1 v/v). On laisse cristalliser la nuit. Le lendemain, les cristaux sont filtrés sur verre fritté de porosité 3 de 500 ml. L Le gâteau est lavé sur le verre fritté avec du méthanol (2x170 ml.) et de l'éther (2x150 ml.). Le produit est séché en plateau au dessicateur sous vide (26 mm) pendant une nuit. On obtient ainsi 461 gr du produit (rendement 93%). Le produit a été analysé par RMN et MS et les analyses sont compatibles. Le produit est hydrogéné sans autre purification. Dans un autoclave inox de I litre on charge 30 gr du polynitrile précédent (0.1 mol). On prépare en même temps dans un becher une solution de 140 ml d'éthanol (95%) et de 8 gr de NaOH (0.2 mol). Lorsque la soude est solubilisée, on charge cette solution dans l'autoclave. De l'azote est passé dans l'autoclave et on charge 8 ml de Nickel de Raney sur charbon. L'autoclave est fermé. La pression initiale d'hydrogénation est de 52 at. et elle descend à 28.5 en 5 heures à température ambiante. La suspension est filtrée sur papier, le filtre est lavé avec de l'méthanol (2x25 ml), les filtrats sont concentrés à sec in vacuo. L'huile est mélangée avec 30 ml d'eau et extraite par 100 ml de CH2Cl2. La phase organique est séchée sous MgSO4, filtrée puis évaporée in vacuo. On obtient une huile fluide jaunâtre (27 gr rendement 85 %). Le produit a été analysé par CCM (monotache), RMN et MS et les analyses étaient compatibles. Le produit est utilisé sans autre purification. b)- Méthode A: Ancrage de une fonction acide sur le support polymerique: De la résine Chiorotrityl chloride (5 gr. 1.2 mmol Cl/gr. resin) est chargée dans un réacteur SPPS, 50 ml de CH2C12 sont ajoutés et le mélange est agité pendant 5 mn. De l'acide bromoacétique (1.05 gr, 7 mmol) est ajouté, suivi de DIEA (0.95 ml., 7.5 mmol). Le réacteur est agité pendant deux heures à température ambiante. Le liquide est filtré et la résine est lavée avec CH2Cl2 et iPrOH (10x50) et MeOH (2x50ml). Enfin, la résine est séchée sous un courant d'azote. cE Méthode B: Réaction des polyamines avec la bromoacetyl-resine: La polyamine (10 excès molaires) est dissoute dans 50 ml CH2C12 et chargée dans le réacteur contenant le produit obtenu par la méthode A. Le réacteur est agité pendant 2 hr. à température ambiante. Le solvant est filtrée et la résine lavée avec CH2C12 et iPrOH (10x50 ml), le test de Kaiser est positif. d Protection des polyamino acides sur la résine: Méthode C: Les Di-tert-butyl dicarbonate (48 mmol) et DIEA (50 mmol) sont dissous dans CH2Cl2 (50 ml) et chargés dans le réacteur contenant le produit obtenu selon la méthode B. Le réacteur est agité pendant une nuit. Le lendemain le test de Kaiser est négatif. Le solvant est filtré et la résine est lavée alternativement avec CH2C12 et iPrOH (10x50 ml), MeOH (2x50 ml) et éther (2x50 ml). La résine est séchée sous une courant d'azote. Le test de Kaiser est toujours négatif. Méthode D: La résine obtenue par le méthode B (1.5 gr) est chargée dans un ballon et CH2C12 (20 ml) est ajouté, suivi par DEA (20 mmol). Le mélange est soumis à agitation magnétique et le chloroformate de benzyle (14 mmol) est ajouté goutte à goutte pendant 5 min. Le pH est maintenu à 11 par addition de DEA. Après une nuit, la résine est passée dans un réacteur SPPS, filtrée et lavée alternativement avec CH2Cl2 et iPrOH (10x20 ml) et éther (2x20 ml). La résine est séchée sous une courant d'azote. e)- Méthode E : Clivage des acides polyaminées protégées de la résine: Les résines obtenues par les méthodes C et D sont chargées dans un ballon de 250 ml équipé d'un barreau magnétique. Une solution composée de 50 ml CH2Cl2 et 25 ml CF3CH2OH est ajoutée et le mélange est agité pendant 2 hr. La solution est filtrée, la résine est lavée avec CH2Cl2 (2x10 ml) et les phase organiques ainsi obtenues sont rassemblées et évaporées in vacuo. Les produits sont ensuit purifiés par flash chromatographie sur SiO2 avec comme éluant CHCl3/MeOH (9:1). Les fractions contenant les produits sont identifiées par CCM. (Pour de plus amples détails voir les exemples çi-après.) f)- Méthode F: Couplage des acides aminées avec dilipidylamines: Boc-acide amine (10 mmol) et dilipidylamine C12-C22 (10 mmol) sont chargés dans un ballon de 250 ml. CHCl3 (100 ml) est ajouté et le mélange est agité jusqu'à dissolution complète. TEA (30 mmol) et BOP (33 mmol) sont ensuite ajoutés. Le pH est maintenu à 10 avec TEA et la réaction est agitée pendant 2 hr. Après l'achèvement de la réaction (CCM) le chloroforme est évaporé et le solide est repris dans de l'acétate d'éthyle (300 ml). La phase organique est lavée avec KHSOa (4x100 ml), NaHCO3 (4x100 ml), et NaCI (4x100 ml). La phase organique est séchée sous MgSO filtrée et évaporée in vacuo. Les produits sont analysés par CCM, NMR et MS et sont utilisés sans d'autres purifications. Les rendements sont de l'ordre de 90 %. g)- Couplage des acides polyamines protègés avec dilipidyl acides amides et clivage des groupements de protection Boc et Z Méthode G Le produit obtenue par le méthode F (9 mmol) est chargé dans un ballon équipé d'un barreau magnétique et du TFA froid (4 C ) est ajouté (30 ml). La solution est agitée pendant I hr. Le TFA est évaporé in vacuo. Le produit est dissous par l'addition de DMF (70 ml). On ajoute du TEA (30 mmol) puis de l'acide polyamine protégé obtenu par la méthode E (9 mmol). Le pH est ajusté à 10 et BOP (33 mmol) est ajouté. La solution est agitée pendant 2 hr. et suivie par CCM. Après l'achèvement du couplage (CCM), une solution de KHSO4 est ajoutée (700 ml) et le produit est extrait avec acétate d'éthyle (3x100 ml). La phase organique est lavée avec KHSOw (3x50), NaHCO.l (3x50) et NaCI (3x50 ml), séchée sous MgSOss, filtrée et évaporé in vacuo. Les produits sont analysés par RMN, CCM et MS et sont déprotégés sans purification préalable. Du TFA (50 ml) est ajouté au produit et la solution est agitée pendant 1.5 hr., le TFA est évaporé. Si le produit contient encore de groupements Z ou CIZ qui sont pas clivables au TFA le méthode H est suivie directement. Les produits finaux sont purifiés par CLHP semipréparative( voir exemples). Méthode H Les produits obtenus par le méthode G contenant des groupe Z ou ClZ sont chargés dans un ballon équipé d'un barreau magnétique et dissous dans 10 ml MeOH'gr produit. Les Pd/C (10 %, Igr/Gr produit) et formiate d'ammonium(l gr/gr produit) sont ajoutés à température ambiante. L'hydrogénation est suive par CLHP. Après 2 hr la réaction est finie, le mélange est filtré et le filtre lavé avec 10 ml MeOH. De l'eau double distillée est ajoutée et la solution est congelée et lyophilisée. Les produits finaux sont purifiés par CLHP préparative. B-MATERIEL ET METHODE POUR L'ETUDE BIOLOGIOUE: I PLASMIDES UTILISES POUR LE TRANSFERT DE GENES IN VITRO Le plasmide pCMV-LUC est une construction dérivée, soit du plasmide pGL2-Basic Vector (Promega), soit du plasmide pGL2-Control Vector (Promega) par insertion d'un fragment Mlu I-Hind III contenant le promoteur du Cytomegalovirus humain (CMV) extrait du plasmide vecteur pcDNA3 (Invitrogen). 2 PROTOCOLE DE PREPARATION DES SOLUTIONS UTILISEES POUR LA TRANSFECTION Les produits décrits dans l'invention sont mis en solution à 20 mM dans l'éthanol ou dans l'eau ,puis dilués dans l'eau en s'assurant que la concentration éthanolique finale est inférieure à 10%. Les solutions d'acide nucléique diluées en sérum physiologique (NaCI 0,15M) sont ajoutées aux solutions de lipofectant dans un rapport 1/1 (v/v). Après homogénéisation au vortex et incubation 15 minutes à température ambiante les solutions ADN/1ipofectant sont distribuées à 9% (v/v) final dans les puits ou les cellules ont été lavées par du milieu de croissance dépourvu de protéines (sérum) et remises en croissance en milieu dépourvu ou non de sérum. C MATERIEL POUR LES ESSAIS IN VIVO 1 MATERIELS a) Modèles experimentaux: - souris C57/BL 6 adultes ( > 8 semaines) femelles - tumeurs de type 3LL (Lewis Lung carcinoma) obtenues par passage de fragments de tumeur d'animal à animal, implantés sous la peau au niveau du flanc. b) Plasmides utilisés: pXL 2622: il dérive du pGL2 basic, (Promega) dans lequel le promoteur du cytomegalovirus (CMV) extrait de pCDNA3 (Invitrogen) a été inséré en amont du gène codant pour la luciférase. Ce plasmide est obtenu par le technique de précipitation au PEG (Ausubel), et stocké dans du Tris 10mM EDTA ImM pH 8 à 4 C à une concentration d'environ 10 g d'ADN par l. 2 PROTOCOLES Solutions injectées: L'ADN à transfecter est d'abord solubilisé dans le tampon, le peptide (KTPKKAKKP)2 SEQ ID N 1 est alors ajouté, et après 20 minutes une solution de lipides cationiques à forte concentration (20 ou 40 mM) est ajoutée au mélange. Après addition de tous les produits, le mélange contient, outre l'ADN ( en concentration finale de 0,5mg/ml), le peptide (0,75mg/ml) et le lipide cationique, NaCI 150mM, D-Glucose 5% et MES 5mM pH 6,2. L'injection est réalisée 20 à 30 minutes après la préparation de la solution. EXEMPLE 1: Synthèse de H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)18]2 (6) a- Synthèse de l'acide {Boc-[3-(Boc-{4-[Boc-(3-Boc-amino-propyl)-amino]- butyl}amino) propyl]-amino}-acétique (3) La résine obtenue selon la méthode A est mise à réagir avec la spermine selon les methodes B, C et E. Le produit protégé est purifie par chromatographie sur SiO2. Le rendement est de 40 %. CCM: Rs= 0.32 (CHCl3/MeOH, 9: 1) CLHP, Rt= 4,22 min, (H20/MeCN: 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100] Spectre de R M N 1 H (400 MHz, (CD3)2SO d6 avec ajout de quelques gouttes de CD3COOD d4, d en ppm) 1,40 (4 s, 36H C(CH3)3) , 1,46 (mt, 4H . CH2CH2 centraux du butyle) , 1,64 et 1,74 (2 mts, 2H chacun CH2 central des propyles) 2,96 (t, J = 7 Hz, 2H : CH2NCOO) , 3,15 (mt, 8H : CH2NCH2) ; 3,23 (t, J = 7,5 Hz, 2H : CH2NCOO);3,83 (s, 2H OCONCH2COO). MH+: 661 b- Synthèse de l'acide {Z-l3-(Z-{4-[Z-(3-Z-amino-propyl)-aminol-butyl}amino) propylJ-amino-acétique (4) La résine obtenue selon la méthode A est mise à réagir avec de la spermine selon les methodes B, C et D. Le produit protégé est purifié par chromatographie sur SiO2. Le rendement est de l'ordre de 20 %. CCM: RÈ 0,85 (CHC13/MeOH, 8:2) CLHP, Rt= 6.92 min, (H20/MeCN: 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100] Spectre de R M N 1 H (400 MHz, (CD3)2SO d6, à une température de 413K, d en ppm) : 1,49 (mt, 4H : CH2CH2 centraux du butyle); 1,74 et 1,81 (2 mts, 2H chacun CH2 central des propyles) , 3,07 (q, J= 7 Hz, 2H CH2NCOObenzyle) ; de 3,15 à 3,30 (mt, 8H CH2NCH2) , 3,33 (t, J = 7,5 Hz, 2H NCH2COO) ; 3,70 (s, 2H OCONCH2COO), 5,07 - 5,10 - 5,12 et 5,13 (4 s, 2H chacun . ArCH20CON), 6,65 (mf, 1H : NHCO) ; de 7,25 à 7,40 (mt, 20H H aromatiques). MH+: 797 c- Boc-Gly-dioctadecylamide. (5) Le Boc-Gly est couplé à la dioctadécylamine selon la methode F, rendement de 90 % CCM: Rf = 0.9 (CHCl3/MeOH, 9: 1) MH+= 679 Spectre de R M N 1 H (300 MHz, CDC13, d en ppm) 0,89 (t, J = 7 Hz, 6H: CH3), 1,29 (mt, 60H CH2 centraux des chaines grasses) , 1,49 (s, 9H C(CH3)3) ; 1,55 (mt, 4H:1 CH2 de chaque chaîne grasse), 3,15 et 3,33 (2 t, J = 7,5 Hz, 2H chacun : NCH2 des chaînes grasses) , 3,95 (d, J = 5 Hz, 2H . OCONCH2CON); 5,57 (mf, 1H CONH). d-H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)18]2 (6) Les produits (3) et (5) ou (4) et (5) sont couplés selon la méthode G. Les produits sont déprotégés comme décrit dans la méthode G pour le produit protégé Boc et méthode H pour le produit protégé Z. Le produit est purifié par CLHP semipréparative et les fractions analysées par CLHP. CLHP. Rt= 15.35 min, (H20/MeCN: 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100] BYK 2 053 Spectre de R M N 1 H (400 MHz, (CD3)2SO d6 avec ajout de quelques gouttes de CD3COOD d4, à une température de 300K, d en ppm): 0,83 (t, J = 7 Hz, 6H : CH3); 1,23 (mt, 60H . CH2 centraux des chaînes grasses) , 1,43 et 1,53 (2 mts, 2H chacun 1 CH2 de chaque chaîne grasse) , 1,63 (mt, 4H CH2CH2 centraux du butyle); 1,96 (mt, 4H . CH2 central des propyles) ; 2,93 - 3,00 et 3,22 (3 mts, 16H en totalité : NCH2); 3,83 (s, 2H . NCH2CON), 4,03 (s, 2H: CONCH2CON). MH+= 821 EXEMPLE 2: Synthèse de H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2CON[(CH2)18]2 (7) Le produit (3) est couplé avec la dioctadécylamine selon la méthode F et déprotégé selon la méthode G. Le produit est purifié par CLHP semipréparative et les fractions analysées par CLHP. CLHP. Rt= 15.2 min, (H20/MeCN: 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100] Spectre de R M N 1 H (400 MHz, dans un mélange 2/3 de CF3COOD et 1/3 de CD3COOD d4, d en ppm) 0,78 (t, J = 7 Hz, 6H CH3) , 1,20 (mt, 60H . CH2 centraux des chaînes grasses) , 1,52 (mt, 4H 1 CH2 de chaque chaîne grasse) ; 1,80 (mt, 4H CH2CH2 centraux du butyle) , 2,23 et 2,32 (2 mts, 2H chacun . CH2 central des propyles) , de 3,10 à 3,40 (3 mts, 16H en totalité NCH2) 4,15 (s, 2H NCH2CON). MH+= 764 EXEMPLE 3: Synthèse de H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CH2)18]2 (9) a-Boc-Arg(Z2)dioctadecylamide. (8) Le produit est synthétisé par couplage de BocArg(Z2) et de dioctadécylamine par la méthode F avec un rendement de 91 % CCM Rf= 0.9 (CHC13/MeOH, 9: 1) MH+= 1046 b-H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CH2)18]2 (9) Le produit (3) ou (4) est couplé au produit (8) par la méthode G et déprotégé par la méthode G (Boc) et/ou H (Z). Le produit final est purifié par CLHP semipréparative et les fractions analysées par CLILP analytique. CLHP, Rt= 13.83 min, (H20/MeCN: 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100] Spectre de R M N ' H (400 MHz, (CD3)SO d6, 6 en ppm) 0,90 (t, J = 7 Hz, 6H CH3); ; 1,28 (mt, 60H : CH2 des chaines grasses) , de 1,40 à 1,80 (mt, 12H : CH2), 1,93 (mt, 4H CH2 central des propyles) , de 2,80 à 3,10 (mt, 16H . NCH2 et NCH2 des chaines grasses) ; 3,42 (mt, 2H CH2N de l'amido) , 3,77 (mt, 2H :NCH2CON) 4,67 (mt, IH: NCHCON), de 6,80 à 7,50 (mf étalé, 2H: NH2), 7,78 - 7,92 - 8,80 et 9,03 (respectivement mt et 3mfs, respectivement 1H - 2H - 4H et 1H CONH - NH et NH2). MH+: 920 EXEMPLE 4: Synthèse de H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArg(Z)2N[(CH2)17 CH312 (10) Le produit (3) est couplé au produit (8) par la méthode G et les groupes Boc clivés par la même méthode. Le produit est purifié par CLHP semipréparative et les fractions analysées par CLHP analytique CLHP, Rt= 17.75 min, (H20/MeCN: 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100] Spectre de R M N I H (400 MHz, (CD3)2SO, d en ppm) 0,87 (t, J = 7 Hz, 6H CH3) , 1,25 (mt, 60H : CH2 centraux des chaînes grasses) , 1,40 et 1,57 (2 mts, 2H chacun 1 CH2 de chaque chaîne grasse), 1,65 (mt, 8H CH2CH2 centraux des butyles), 1,95 (mt, 4H CH2 central des propyles) , de 2,85 à 3,05 (mt, 14H en totalité : NCH2) , 3,23 (t, J = 7,5 Hz, 2H NCH2); 3,75 (s, 2H : NCH2CON) ; 3,85 et 3,95 (2 mts, 1H chacun CH2NC), 4,67 (mt, 1H CONCHCON); 5,07 et 5,25 (respectivement AB limite et s, J = 13,5 Hz, 2H chacun NCOOCH2Ar) ; de 7,25 à 7,45 (mt, 10H: H aromatiques) , 7,95 - 8,85 - 9,00 et 9,20 (4 mfs . H échangeables). MH+:1188 EXEMPLE 5: Synthèse de H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COLys(rhodamine)NI(CH2)17- CH3]2 (13) a- Boc-Lys(Z)dioctadecylamide (11) Le produit a ete synthétisé par couplage de BocLys(CIZ) avec le dioctadécylamine par la méthode F avec un rendement de 89 %. CCM, Rf= ,92 (CHC13/MeOH, 9:1) MH+: 918 b-BocHN(CH2)3NBoc(CH2)4NBoc(CH2)3NBocCH2COLys(CIZ)N[(CH2)17-CH3]2 (12) Le produit (3) est couplé au produit (11) par la méthode G (sans la déprotection du Boc). Spectre de R M N 1 H (400 MHz, (CD3)2SO d6, à une température de 423 K, d en ppm) 0,92 (t, J= 6,5 Hz, 6H CH3) , 1,32 (mt, 60H CH2 centraux des chaînes grasses); 1,44 (2 s, 36H en totalité C (CH3)3) , de 1,50 à 1,80 (mt, 16H :1 CH2 de chaque chaîne grasse - CH2CH2 centraux du butyle - CH2CH2CH2 et CH2 central du propyle) , 3,00 (q, J = 6,5 Hz, 2H OCONCH2) , 3,05 (q, J = 6,5 Hz, 2H CH2NCOO), de 3,15 à 3,40 (mt, 14H NCH2 des chaînes grasses - CH2NCH2 et CH2NCH2CH2N); 3,80 (s, 2H OCONCH2CON); 4,75 (mt, 1H CONCHCON), 5,15 (s, 2H: NCOOCH2Ar), 5,97 et 6,53 (2 mts, 1H chacun. OCONH et NHCOO) ; 7,08 (d, J = 7,5 Hz, IH: CONH) , de 7,30 à 7,50 (mts, 4H . H aromatiques). c-H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COLys(rhodamine)N I(CH2)î 7-CH3J 2 (13) Le groupement CIZ sur la lysine du produit (12) est clivé par la méthode H, le produit ainsi obtenu est séché in vacuo et repris dans de l'éther et rincé avec NaHCO3 et NaCI. L'éther est séché sur de MgSO4 et évaporé in vacuo. 77 mg (60 mdu produit déprotégés sont dissous dans 3 ml de MeOH, le DEA (64 iL ) est ajouté puis la tétramethyl rhodamine isothiocyanate (30 mg, 68 m); la solution est agitée pendant 17 hr et la reaction est suivie par CCM. Le lendemain la solution est concentrée à sec in vacuo. Le TFA (4ml) est ensuite ajouté et on laisse agiter pendant 1 hr. Le TFA est évaporé et le produit brut est purifié par CCLHP semipréparative avec un rendement final de 30 %. CCM Rf= 0.05 (MeOH) CLHP (semiprep.! Rt= 61,55 min. (H20/MeCN: 3 min [100/0], 3-45 min [0/100], 45140 min. [0/100]. MH+: 1335 EXEMPLE 6: Synthèse de H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COLys(biotinyl)N I(CH2)î 7- CH312 (14) Le produit (12) est déprotégé par la méthode H (271 mg, 0,21 mmol) et dissous dans du DMF (10 ml). le DIEA (0,11ml) est ajouté puis la biotine (56,4 mg, 0,23 mmol) et le BOP (102 mg, 0,23 mmol; le pH est maintenu à 10 (DWA) et la fin de la réaction est vérifiée par le test fluorescamine. Le produit est recupéré comme decrit dans la méthode F et déprotégé sans autre purification avec TFA (5 ml) pendant 1 hr. Le TFA est évaporé et le produit purifié par CHLP semipréparative avec un rendement de 50 %. CLHP, Rt=13.12 min, (H2O/MeCN: 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100] MH+: 1118 EXEMPLE 7 Synthèse de {H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2CoGlyNl(CH2)l7 CH312 (16) a- {BocNH(CH2)3}2N(CH2)Nt(CH2)3NHBoc} (CH2)3NBocCH2COOH (15) Le produit (1) est ancré sur le polymère par la méthode B, protégé par la méthode C et clivé de la résine par la méthode E. Le produit est purifié sur SiO2 avec un rendement de 35 %. CCM: Rr 0,2 (CHC13/MeOH, 8:2) Spectre de R M N I H (400 MHz, (CD3)2SO d6 avec ajout de quelques gouttes de CD3COOD d4, à une température de 433K, d en ppm) 1,42 (s, 36H : C(CH3)3) 1,56 (mt, 4H : CH2CH2 centraux du butyle) , de 1,65 et 1,85 (mt, 8H : CH2 central des propyles) ; 2,76 (mt, 12H: CH2N(CH2)2) ; 3,06 (t, J = 6,5 Hz, 6H: OCONCH2) ; 3,29 (mt, 2H : NCH2) ; 3,86 (s, 2H: OCONCH2COO). MH+= 775 b-{H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2 (16) Le produit (15) est couplé avec le produit (5) selon la méthode G. Le produit est déprotégé par méthode G et est purifié sur CLHP semipréparative, les fractions sont analysées par CLHP analytique et lyophilisées.Rendement de 55 %. CLHP (semiprep.): Rt= 38,72 min (H20/MeCN, 10 min[100/0], 10-45 min [0/100], 45-140 min [0/100] Spectre de R M N I H (400 MHz, (CD3)2SO d6, à une température de 386 K, d en ppm) 0,90 (t, J= 7 Hz, 6H CH3) , 1,30 (mt, 60H CH2 centraux des chaînes grasses) , 1,55 (mt, 4H . 1 CH2 de chaque chaîne grasse) , 1,65 (mt, 4H : CH2CH2 centraux du butyle), 1,97 (mt, 8H . CH2 central des propyles), de 2,80 à 3,05 - 3,06 et 3,28 (respectivement mt et 2 t, J = 7,5 Hz, 18H - 2H et 4H NCH2) , 3,80 (s, 2H NCH2CON) , 4,03 (d, J = 5,5 Hz, 2H CONCH2CON), de 6,00 à 9,00 (mf étalé NH2 et NH), 8,27 (mt, 1H. CONH). MH+: 935 EXEMPLE 8 Synthèse de: {H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2CON[(CH2)17-CH3]2 (17) Il est synthétisé comme le produit (7)en utilisant le produit (15) à la place du (3). Le produit est purifié par CLHP semipréparative et les fractions analysées par CLHP analytique et lyophilisées. CLHP (semiprep.): Rt= 38 min (H2O/MeCN, 10 min[100/0], 10-45 min [0/100], 45140 min [0/100] Spectre de R M N I H (400 MHz, (CD3)2SO d6 avec ajout de quelques gouttes de CD3COOD d4, d en ppm) 0,88 (t, J = 7 Hz, 6H CH3) , 1,29 (mt, 60H . CH2 centraux des chaînes grasses) , 1,52 (mt, 4H 1 CH2 de chaque chaîne grasse) , 1,68 (mt, 4H . CH2CH2 centraux du butyle) , de 1,90 à 2,10 (mt, 8H CH2 central des propyles) ; 2,90 - de 2,95 à 3,15 -3,18 et 3,15 (respectivement t - mt et 2 t larges, J = 7,5 Hz, 24H en totalité : NCH2) , 4,02 (s, 2H : NCH2CON). MH+= 878 EXEMPLE 9 Synthèse de {H2N(CH2)2}2N(CH2)2NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2 (19) a-{BocNH(CH2)2}2N(CH2)2NBocCH2COOH (18) Il est synthétisé comme le produit (15) en utilisant la tris(aminoehyl)amine à la place du produit (1). Rendement 29 %. CCM, Rf= 0,55 (CHC13/MeOH, 8:2) Spectre de R M N 1 H (400 MHz, (CD3)2SO d6 à une température de 393 K, d en ppm) : 1,44 (s, 27H: C(CH3)3); 2,58 (t, J = 6,5 Hz, 4H : CH2NCH2) ; 2,66 (t, J = 7 Hz, 2H : NCH2), 3,04 (q, J = 6,5 Hz, 4H OCONCH2) , 3,28 (t, J = 7 Hz, 2H OCONCH2); 3,76 (s, 2H: OCONCH2COO) ,6,06 (mf, 2H: CONH). MH+= 505 b-{H2N(CH2)2}2N(CH2)2NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2 (19) Il est synthétisé comme le produit (17) en utilisant (18) à la place de (15) avec un rendement de 65%. CLHP. Rt= 122 min, (H20/MeCN, 10 min[100/0], 10-45 min [0/100], 45-140 min [0llo0] Spectre de R M N I H (400 MHz, (CD3)2SO d6 avec ajout de quelques gouttes de CD3COOD d4, d en ppm) 0,87 (t, J = 7 Hz, 6H CH3), de 1,15 à 1,35 (mt, 60H: CH2 centraux des chaines grasses) , 1,45 et 1,55 (2 mts, 2H chacun I CH2 de chaque chaîne grasse); 2,64 (t, J = 5,5 Hz, 4H CH2NCH2) ; 2,75 (t, J = 6 Hz, 2H NCH2) ; 2,95 (t, J = 5,5 Hz, 4H NCH2) , 3,08 (t, J = 6 Hz, 2H : NCH2) ; 3, CLHP, Rt= 100,1 min, (H20/MeCN, 10 min[100/0], 10-45 min [0/100], 45-140 min [0/100] MH+= 708 EXEMPLE 11 Influence du rapport de charge (amines/phosphates! sur l'efficacité de transfection (7) RPR 12053JA. (6) RPR 120535A et (9) RPR 120531A Des échantillons de 1.105 cellules [NIH 3T3, 3LL ou SMClapin] en phase exponentielle de croissance sur 2 cm2 sont traités par des solutions lipofectant/pCMV LUC, présentant des rapports de charges variables, pendant 2 heures à 37 C sous 5% C02 ,chaque échantillon reçoit 2 llg d'acide nucléique. La recherche de l'expression du gène reporter est effectuée après addition de sérum de veau foetal à 8% final suivie d'une incubation de 40 heures dans l'étuve à CO2. L'activité luciférase est dosée par l'émission de lumière [RLU = relative light unit] en présence de luciférine, coenzyme A et ATP pendant 10 secondes et rapportée à 2000 cellules traitées. Les résultats obtenus sont reportés dans les figures (1), (2) et (3). De l'observation de ces figures, il ressort clairement que la présence d'une glycine dans le bras spacer entre la partie lipidique et la polyamine permet d'obtenir une meilleure efficacité de transfection pour des ratio nanomoles lipide cationique/,ug ADN faibles. EXEMPLE 12 Influence du rapport de charge (amines/phosphates! sur l'efficacité de transfection (20) RPR 120527A. (19) RPR 120528A, (17)RPR 120526A et (16) RPR 120525A. Des échantillons de 1.105 cellules NIH 3T3 en phase exponentielle de croissance sur 2 cm2 sont traités par des solutions lipofectant/pCMV-LUC, présentant des rapports de charges variables, pendant 2 heures à 37 C sous 5% Cl2 , chaque échantillon reçoit I pg d'acide nucléique. La recherche de l'expression du gène reporter est effectuée après addition de sérum de veau foetal à 8% final suivie d'une incubation de 40 heures dans l'étuve à CO2. L'activité luciférase est dosée dans le surnageant obtenu après lyse des cellules par l'émission de lumière [RLU = relative light unit] pendant 10 secondes et rapportée au mg de protéine. Les résultats obtenus sont reportés dans la figure (4). L'avantage de la présence du résidu glycine dans le bras spacer est encore mis en évidence dans cet exemple. EXEMPLE 13 Influence de la présence de DOPE dans le mélange lipofectant/ADN (9) RPR 12053 lA Selon le mème protocole que celui utilisé dans l'exemple 11 il est ajouté de la DOPE (Dioleoylphosphatidylethanolamine) au lipide cationique (9) RPR 120531A à des rapports molaires variables avant addition du DNA dans le mélange de transfection. L'activité luciférase est dosée dans le surnageant après lyse des cellules et rapportée au mg de protéine (figure 5). La présence de DOPE dans les mélanges lipofectants permet d'améliorer l'efficacité de transfection quand la concentration en (9) RPR 120531A est faible. EXEMPLE 14 Effet du sérum sur l'efficacité de transfection (6) RPR 120535A, (9) RPR 120531A et (10) RPR 121650A Des échantillons de 1.105 cellules [NIH 3T3 ou Hela] en phase exponentielle de croissance sur 2 cm2 sont traités par des solutions lipofectant/pCMV-LUC (3 nanomoles lipofectant/g ADN) en absence de sérum pendant 2 heures ou en présence de sérum dans le milieu de culture. Dans cet exemple chaque échantillon reçoit 2 g d'ADN. L'expression de la luciférase est recherchée dans le surnageant des lysats cellulaires, exprimée en RLU/10s. et rapportée au mg de protéine. De l'analyse des résultats, il ressort que la présence de sérum n'a pas d'effet notable sur la transfection. EXEMPLE 15 Influence de la concentration en acide nucléique dans les mélanges ADN/Iipofectant (20)RPR l20527A Dans les conditions décrites dans l'exemple 11 des échantillons de cellules NIH 3T3 sont transfectées dans des conditions ou les ratios nanomoles lipofectant/,ug d'ADN sont optimisés - voir exemple 12 - [ratio = 6 pour (20)RPR 120527A et (19)RPR 120528A - ratio = 3 pour (17)RPR 120526A et (16)RPR 120525A]. Les quantités d'ADN apportées à chaque échantillon varient de 0,5 à 2 ,ug. Les résultats sont reportés dans la figure 6. La transfection de 1.105 cellules en phase exponentielle de croissance avec 1 g d'ADN plasmidique semble un bon choix, en effet l'augmentation de la quantité d'ADN utilisé entraîne une augmentation de la concentration en lipide cationique au contact des cellules et donc des problèmes de toxicité dans certains cas. A plus faible concentration en ADN la proportionalité avec l'efficacité de transfection n'est plus obtenue. EXEMPLE 16 Essais de transfection in vivo avec des lipopolyamines selon l'invention. On procède à une injection d'une solution contenant une lipopolyamine selon l'invention, préparée comme décrit ci-dessus, dans la tumeur 7 jours apres implantation, la souris étant anesthésiée avec un mélange Kétamine + Xylazine. Deux jours après l'injection, on prélève du tissus tumoral, qui est pesé puis haché et broyé dans 500 l tampon de lyse (Promega Cell Lysis Buffer E153 A). Après centrifugation (20 000 g pendant 10 minutes), on prélève 10 l qui servent à l'évaluation de l'activité luciférase par mesure de l'émission lumineuse totale obtenue après mélange avec 50 Cll de réactif (Promega Luciferase Assay Substrate ) dans un luminomêtre Lumat LB 9501 (Berthold), intégration sur 10 secondes.L'activité résultante est exprimée en RLU (Relative Lights Units) estimés dans la totalité du surnageant de lyse tumorale, ou en RLU par g d'ADN injecté. le tableau I rend compte des résultats obtenus. Plasmide Peptide Lipide Cationique Résultat, RLU /tumeur n référence g/ [ADN] référence pept/ADN référence nmol/ g moyenne écart-type tumeur g/ l w/w ADN pXL2622 10 0,5 (KTPKKAKKP)2 1,5 (9) 3 679 258 414 286 9 pXL2622 10 0,5 (6) 395 433 219 333 10 pXL2622 10 0,5 (16) 67 994 82 527 8 pXL2622 10 0,5 (19) 59 209 54 375 9 TABLEAU I REVENDICATIONS 1. Lipopolyamine, sous forme D, L ou LD et ses sels, caractérisée en ce qu'elle est représentée par la formule générale I Dans laquelle R1, R2 et R3 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupement -(CH2)q-NRR' avec q pouvant varier entre 1, 2, 3, 4, 5 et 6 et ceci de manière indépendante entre les différents groupements R1, R2 et R3, R et R' représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle -(CH2)q-NH2 avec q défini comme précédemment m, n et p représentent, indépendamment l'un de l'autre, un nombre entier pouvant varier entre 0 et 6 avec lorsque n est supérieur à 1, m pouvant prendre des valeurs différentes et R3 des significations différentes au sein de la formule générale I et R4 représente un groupement de formule générale II dans laquelle: R6 et R7 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un radical aliphatique, saturé ou non, en C 10 à C22, u est un nombre entier choisi entre 0 et 1 et X représente un atome d'oxygène, de soufre ou un groupement amine monoalkylé ou non, Y représente un groupement carbonyle ou un groupement méthylène et R5 représente un atome d'hydrogène ou une chaine latérale d'acide aminé naturel, le cas échéant substituée. 2. Lipopolyamine selon la revendication I caractérisée en ce qu'elle est représentée par l'une des sous formules suivantes dans lesquelles R4, R6 et R7 sont définis comme en revendication 1 3. Lipopolyamine selon la revendication 2 caractérisée en ce que R4 y représente un groupement N[ (CH2)17 CH3]2 et R6 et R7 un groupement (CH2)17 CH3. 4. Lipopolyamine selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle est associée à un élément de ciblage extra ou intracellulaire. 5. Lipopolyamine selon la revendication 4 caractérisée en ce qu'elle incorpore l'élément de ciblage au niveau de la chaine latérale d'acide aminé figurée par le substituant R5. 6. Lipopolyamine selon la revendication 4 ou 5 caractérisée en ce qu'il s'agit d'un ligand de récepteur cellulaire présent à la surface du type cellulaire ciblé. 7. Lipopolyamine selon l'une des revendications 4 à 6 caractérisée en ce que cet élément ciblage est choisi parmi des sucres, des peptides tels que des anticorps ou fragments d'anticorps, des ligands de récepteurs cellulaires ou des fragments de ceuxci, des récepteurs ou fragments de récepteurs tels que des ligands de récepteurs de facteurs de croissance, de récepteurs de cytokines, de récepteurs de lectines cellulaires ou de récepteurs de protéines d'adhésion, de récepteur de la transferrine, des lipides HDL ou LDL et/ou des oligonucléotides. 8. Lipopolyamine selon l'une des revendications 4 ou 5 caractérisée en ce que cet élément de ciblage est représentée par une séquence signal de localisation nucléaire. 9. Lipopolyamine selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle est associée à un agent marqueur de type biotine, rhodamine ou folate au niveau de la chaine latérale d'acide aminé figurée par R5. 10. Lipopolyamine selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2) 1 8]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2CON[(CH2) 18]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CH2) 1 8]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArg(Z)2N[(CH2) 1 7-CH3]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COLys(rhodamine)N[(CH2) 1 7-CH3 ]2 H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COLys(biotinyl)N[(CH2) 17-CH3]2 {H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2 {H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2CON[(CH2)17-CH3]2 {H2N(CH2)2}2N(CH2)2NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2 {H2N(CH2)2}2N(CH2)2NHCH2CON[(CH2)17-CH3]2 11. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient au moins une lipopolyamine selon l'une des revendications 1 à 10 et au moins un acide nucléique. 12. Composition selon la revendication 11 caractérisée en ce que l'acide nucléique est un acide désoxyribonucléique. 13. Composition selon la revendication 11 caractérisée en ce que l'acide nucléique est un acide ribonucléique. 14. Composition selon la revendication 11, 12 ou 13 caractérisée en ce que l'acide nucléique est modifié chimiquement. 15. Composition selon l'une des revendications 11 à 14 caractérisée en ce que l'acide nucléique est un antisens. 16. Composition selon l'une des revendications 11 à 14 caractérisée en ce que l'acide nucléique comporte un gène thérapeutique. 17 Composition pharmaceutique comprenant un acide nucléique, une lipopolyamine selon l'une des revendications I à 6 et un adjuvant capable de s'associer au complexe lipopolyamine/acide nucléique et/ou d'améliorer son pouvoir transfectant. 18. Composition selon la revendication 17 caractérisée en ce que l'adjuvant est un ou plusieurs lipides neutres. 19. Composition selon la revendication 18 caractérisée en ce que le ou les lipides neutres sont choisis parmi les lipides synthétiques ou naturels, zwitterioniques ou dépourvus de charge ionique dans les conditions physiologiques. 20. Composition selon la revendication 19 caractérisée en ce que le ou les lipides neutres sont des lipides à 2 chaines grasses. 21. Composition selon la revendication 19 ou 20 caractérisée en ce que le ou les lipides neutres sont choisis parmi la dioléoylphosphatidyléthanolamine (DOPE), l'oléoyl-palmitoylphos-phatidyléthanolamine (POPE), le di-stéaroyl, -palmitoyl, mirystoyl phosphatidyléthanolamine ainsi que leurs dérivé N-méthylés I à 3 fois; les phosphatidylglycérols, les diacylglycérols, les glycosyldiacylglycérols, les cérébrosides (tels que notamment les galactocérébrosides), les sphingolipides (tels que notamment les sphingomyélines) et les asialogangliosides (tels que notamment les asialoGMI et GM2). 22. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 2lcaractérisée en ce que l'adjuvant est ou comprend un composé intervenant au niveau de la condensation dudit acide nucléique 23. Composition pharmaceutique selon la revendication 22 caractérisée en ce que ledit composé dérive en tout ou partie d'une histone, d'une nucléoline et/ou d'une protamine. 24. Composition pharmaceutique selon la revendication 22 caractérisée en ce que ledit composé est constitué en tout ou partie, de motifs peptidiques (KTPKKAKKP) et/ou (ATPAKKAA) répétés de manière continue ou non, le nombre des motifs pouvant varier entre 2 et 10. 25. Composition selon l'une des revendications 11 à 24 caractérisée en ce qu'elle comprend de 0,01 à 20 équivalents d'adjuvant pour un équivalent d'acide nucléique en poids/poids et, plus préférentiellement, de 0,5 à 5. 26. Composition selon l'une quelconque des revendications 11 à 25 caractérisée en ce qu'elle comprend un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable. 27. Composition selon l'une quelconque des revendications 11 à 25 caractérisée en ce qu'elle comprend un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une application sur la peau et/ou les muqueuses. 28. Utilisation d'une lipopolyamine selon l'une des revendications de I à 10 pour la transfection in vivo ou in vitro de cellules. 29. Procédé d'une lipopolyamine selon l'une des revendications I à 10 caractérisé en ce qu'il met en oeuvre le couplage d'au moins une fraction lipidique à au moins une fraction polyamine assymétrique, ladite fraction polyamine ayant au préalable été obtenue par réaction bimoléculaire entre un agent alkylant lié covalemment à un support solide et une polyamine symétrique. 30. Procédé selon la revendication 29 caractérisé en ce que le couplage de la fraction lipidique à la fraction polyamine assymétrique est effectuée au niveau du support solide auquel est fixée ladite fraction polyamine assymétrique et en ce que l'on récupère ladite lipopolyamine ainsi obtenue. 31. Procédé selon la revendication 30 caractérisé en ce qu'il met en outre en oeuvre l'introduction d'agents marqueurs, de sucres ou de sondes fluorescentes sur la lipopolyamine, fixée ou non sur le support solide.