Brevet FR2735693A1 — publié le 19961227

La présente invention concerne de nouvelles applications thérapeutiques de N-cyclohexyl benzamides. Le syndrome de l'intestin irritable (SI I) est défini par la présence de douleurs abdominales, d'une défécation perturbée, associée ou non, et généralement de distensions abdominales. La multiplicité des symptomes ont amené à proposer une classification de cette pathologie en fonction de l'existence de constipation ou de diarrhées. La constipation observée dans certaines formes de Sll peut être traitée par des agents stimulants de la motricité intestinale et plus particulièrement colique. Les N-cyclohexyl benzamides décrits dans EP 0507 672 sont connus pour stimuler la motricité digestive et peuvent donc être proposés pour restaurer le transit colique des patients atteints de Sll à constipation prédominante. II a été montré que dans cette pathologie les patients se plaignant de douleurs abdominales présentent un seuil de sensibilité viscérale abaissé (Médecine/Sciences (1994), 10, 1107-15). Ce seuil peut être relevé par différents agents pharmacologiques tels que les agonistes kappa ou certains antagonistes 5-HT3 comme le granisetron (WO 94/01095). Ce dernier composé est par ailleurs connu pour diminuer la motricité rectale (Aliment. Pharmacol. Ther. (1993), 7 175-80) et d'autres antagonistes 5-HT3 tel que londansetron (Dig. Dis. Sci. (1990), 35, 477-80) sont connus pour ralentir le transit colique. Les N-cyclohexylbenzamides décrits dans EP 0507 672, contrairement à des composés tels que le granisetron, ne possèdent pas d'action vis-à-vis des récepteurs 5-HT3. La Demanderesse a maintenant découvert que certains composés décrits dans EP 0507 672 ont la propriété d'augmenter le seuil de perception d'une douleur d'origine viscérale. La Demanderesse a également découvert que ces mêmes composés possèdent une action anti-inflammatoire sur un modèle de colite ulcéreuse. Ces composés répondent à la formule générale dans laquelle R, est un radical alkyle linéaire, ramifié ou cyclisé en C,-C5 et R2 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle linéaire ou ramifié en C1-C5, un radical hydroxyle, un radical alkoxy en C,-C5 ou un radical hydroxyalkyle en C1-C2, et R3 représente un atome d'hydrogène ou R2 et R3 représentent tous les deux un radical alkyle en C1 -C5. Par la présence de deux centres asymétriques, la formule I englobe quatre stéréoisomères. Les composés utilisés dans l'invention possèdent la configuration absolue 2R, les composés préférés étant de configuration absolue 1 R, 2R. Les composés racémiques de configuration relative cis (qui sont des mélanges équimolaires des énantiomères 1 R, 2R et 1S, 2S) contiennent l'isomère actif et peuvent donc être utilisés dans l'invention. De même, les composés racémiques de configuration relative trans (qui sont des mélanges équimolaires des énantiomères 1S, 2R et 1 R, 2S) peuvent également être utilisés dans l'invention. Les composés particulièrement préférés sont ceux correspondant à la formule I où R, est un radical méthyle ou cyclopropylméthyle, R2 un radical méthyle et R3 est un atome d'hydrogène. Les composés de formule I peuvent être préparés par des méthodes de synthèse décrites dans EP 0507 672, en condensant les acides benzoïques de formule générale Il avec les diamines de formule générale III présentant la sétérochimie souhaitée Les diamines III racémiques de configuration relative cis sont préparées selon la voie de synthèse décrite dans EP 0507672 à partir de l'acide (cis) -2-trifluoroacétamido-cyclohexane carboxylique. La diamine 111 où R2 = H et R3 = CH3 de configuration absolue 1R,2R a également été décrite dans EP 0507672. La diamine III où R2 = H et R3 = CH3 de configuration absolue 1S,2R a été préparée à partir de l'aminoester IV (lui-même obtenu d'après la méthode décrite dans Tetrahedron Letters (1984), 25 25572560) selon la séquence de réactions suivantes La présente invention a donc pour objet l'utilisation des composés de formule I ou de leurs sels pharmaceutique ment acceptables pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des douleurs d'origine viscérale, notamment présentes chez les patients atteints de Sll. La présente invention a également pour objet l'utilisation des composés de formule I ou de leurs sels pharmaceutiquement acceptables pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des colites inflammatoires, telles que les rectocolites hémorragiques ou la maladie de Crohn. Les posologies chez l'homme par voie orale sont d'environ 1 mg à environ 200 mg par jour. Les résultats obtenus sur les tests qui mettent en évidence les propriétés pharmacologiques venant d'être énoncées sont donnés ciaprès. I - Activité sur les récepteurs SHT3 1) Affinité vis-à-vis des récepteurs L'affinité des composés pour les récepteurs 5-HT3 a été mesurée selon la méthode décrite dans Bioch. Pharmacol. (1990), 40, (7), 1541-1550, en utilisant des préparations membranaires de cellules NG 108-15 et le BRL 43694 tritié comme ligand spécifique. Les composés de formule I montrent de faibles affinités pour les récepteurs 5-HT3, supérieures au micromolaire. A titre comparatif le Ki de l'ondansetron est de 16 nM. 2) Réflexe de von Bezoid-Jarish In vivo, I'activité antagoniste 5- HT3 de produits a été évaluée en mesurant leur propriété à inhiber une bradycardie induite par la sérotonine selon la méthode décrite dans J. Pharm. & Exp. Therap. (1989), 248, 197-201. Aucun des composés de formule I n'antagonise la bradycardie jusqu'aux doses de 1 mg.kg i.v. . A titre comparatif l'ondanse tron antagonise la bradycardie avec une Cl50 d'environ 0,003 mg/kg i.v.. II - Sensibilité viscérale Le premier modèle consiste à observer chez le rat les contractures abdominales produites par une distension rectale appliquée sur une muqueuse préalablement irritée. Le nombre des contractures est proportionnel à l'intensité de la douleur ressentie. Un modèle similaire a été décrit dans Neurogastroenterol. and Mot. (1994), 6, 140 où il est montré que les produits diminuant la perception de la douleur chez l'homme diminue le nombre de contractures observées chez le rat. Mode opératoire Des rats mâles Sprague-Dawley de 180 g sont à jeun depuis 12 heures. Sous légère anesthésie au fluothane, une sonde intrarectale est introduite (5 cm de l'anus) et 1,5 ml d'acide acétique dilué à 1% sont injectés. L'acide s'écoule aussitôt par l'anus. Ce contact rapide de l'acide permet d'irriter la muqueuse (modèle de colite rectale). 1 h 30 après l'irritation, un ballonnet en latex (diamètre à vide 2 mm, longueur 1 cm) monté sur un cathéter en polyuréthane (diamètre int. 1 mm) est introduit dans le rectum (5 cm de l'anus) sous légère anesthésie au fluothane. Le cathéter est fixé à la base de la queue avec du ruban adhésif et protégé par une canne de verre. Le produit à tester est administré par gavage, puis le rat est introduit dans un cristallisoir recouvert d'une grille. Les extrémités libres de la canne et du cathéter sont passées au travers de la grille afin d'effectuer les dilatations. Une distension est réalisée 2h30 après l'irritation du rectum. Le ballon net est dilaté avec 1,5 ml d'eau distillée (pression intracolique égale à 60 mm Hg en moyenne). La dilatation est maintenue pendant 10 minutes au cours desquelles les contractures abdominales sont dénombrées. Le ballonnet est ensuite dégonflé en aspirant l'eau distillée. Résultats Ils sont exprimes par le nombre moyen de contractures observées sur cinq rats pendant les 10 minutes où ils subissent une distension. composé n' RI R2 R3 Sel configuration dose ( nb de mglkg p.o. contractures écart type placebo 5 = 23,8 + 1,6 1 CH3 CH3 H HCI R,R 0.3 3.4+2.1' CH3 OH H HCI cîs 0,3 9.2 9.2+5.3' CH3 CH2OH H HCI cîs 0.3 ~ 13,2 + 2.4' CH3 (CH3)2 CH3 HCI ds 0.3 10,6 + 4.2* 5 CH3 C-(CH3)3 H HCI cîs 0,3 10.6 i 3.8' 6 4 CH3 H base R,R 0,1 33i1,9' 0.3 73+26' 1 9.4 i 4,2' 7 -CH(CH3)2 CH3 H HCI cis 0,3 7.6 + 0,5 8 4 CH3 H base R.R 0,3 9,2 + 1,3 9 ~~~~~~~~ 4 CH3CH3 H base 1S,2R 0.3 6.3 i 3.5' * significativement différent du placebo à p lil - Activité anti-inflammatoire Un modèle de colite ulcéreuse induite chez le rat par une instillation intracolique d'acide trinitrobenzène sulfonique a déjà été décrit, par exemple dans Gut (1992), 33, 1498-1503. L'effet bénéfique d'un traitement sur l'évolution de cette colite peut être évalué d'une part par l'état de santé global de l'animal représenté par exemple par l'évolution pondérale et d'autre part par une étude histologique du colon en fin d'expérience. Mode opératoire Des rats mâles Sprague-Dawley (140-150 g) à jeun depuis la veille subissent, sous anesthésie générale (isoflurane), une irritation de la muqueuse du colon distal (7 cm de l'anus) avec 1 ml d'une solution aqueuse d'acide trinitrobenzène sulfonique (TNB) à 50 mg/ml. Le lendemain, les rats sont randomisés en deux groupes d'effectifs égaux (n = 7), puis ils reçoivent le traitement (placebo ou produit) par gavage, matin et soir. Les produits sont administrés à 1 mg/kg p.o, deux fois par jour. Le traitement est administré pendant les dix jours qui suivent l'irritation du colon. Les animaux sont pesés tous les matins de J5 à J10. Les animaux sont mis à jeun à J9 et euthanasiés à J10. les colons sont prélevés et examinés macroscopiquement puis histologiquement. Résultats A titre indicatif les résultats obtenus avec le composé 6 sont donnés. Evolution pondérale Nombre de jours après traitement Poids moyen des animaux au TNB sous placebo traités avec composé 6 5 130 + 8 153 + 15 6 139+18 177 + 23* 7 142 + 20 186 + 27* 8 147 + 23 194+34* 9 158 + 30 206+39* * significativement différent des placebo à p Analyse macroscopique des colons: La cotation de l'aspect macroscopique des colons a été réalisée comme suit: stades 0: aucune trace d'irritation 1 : muqueuse légèrement vasodilatée 2: muqueuse vasodilatée et adhérences 3 : muqueuse hémorragique, sclérosée et adhérences 4: muqueuse ulcérée, hémorragique et adhérences. Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-après et représentent le nombre d'animaux présentant les différents stades. Stades Nombre d'animaux Nombre d'animaux sous placebo sous composé 6 o o o 2 0 1 2 O 4 3 3 2 4 3 0 La gravité des lésions est significativement plus grande sous placebo que sous le produit de l'exemple 6 à p > 0,05. Le calcul statistique a été réalisé par un test de Chi2 en comparant la classe des stades 1 et 2 (effectif 0 sous placebo, 5 sous produit) à la classe des stades 3 et 4 (effectif 6 sous placebo, 2 sous produit). Analyse histologique: Des sections du colon sont fixées au formaldéhyde et inclus dans des blocs de paraffine. Des sections de 5 pm sont préparées, colorées à I'hémalun-éosine et évaluées en microscopie optique selon les cotations suivantes Stades 0 : absence de cellules inflammatoires 1 : quelques cellules inflammatoires sont présentes 2 : cellules inflammatoires en grand nombre 3 : présence massive de cellules inflammatoires avec augmentation de l'épaisseur de la couche concer née sans distorsion architecturale 4: présence massive de cellules inflammatoires avec augmentation de l'épaisseur de la couche concer née et distorsion architecturale (perte de l'aspect architectural normal). Le colon a été divisé en trois couches muqueuse, sousmuqueuse, musculeuse, chaque couche a été gradée selon les critères précédents. La somme des cotations attribuées à chaque sous-structure définit par animal un index tenant compte à la fois de l'afflux des cellules inflammatoires et de la distorsion architecturale. Nombre d'animaux Index Placebo 3 12 1 7 2 6 1 1 1 0 Un calcul statistique a été effectué par un test de Chi2 en comparant la classe regroupant les index 0 à 5 (effectif 0 sous placebo, 5 sous produit) à la classe regroupant les index 6 à 12 (effectif 6 sous placebo, 2 sous produit). L'état inflammatoire est significativement plus important sous placebo que sous composé 6. Le traitement par le composé 6 montre donc dans ce modèle que par rapport au placebo, les rats présentent une évolution pondérale significativement améliorée, que l'aspect lésionnel du colon est moins important, cette amélioration étant corrélée par une diminution de l'afflux des cellules inflammatoires. On donnera ci-après des exemples de préparation des composés de formule I. Composé 3: L'acide 4-amino 5-chloro-2-méthoxy benzoïque (2,92 g) et du N,N-carbonyldiimidazole (2,35 g) sont dissous dans 80 ml de THF. Après une heure d'agitation à température ambiante, la 2-(4-hydroxypipéridinométhyl)cyclohexamine (Eb:1600 C / 0,5 mm Hg) (3,45 9) est ajoutée au milieu réactionnel. Après 20 h d'agitation, le solvant est évaporé, le résidu repris par de l'eau et acidifié à pH 5. La phase aqueuse est extraite à l'acétate d'éthyle, alcalinisée à pH 10, puis extraite de nouveau à l'acétate d'éthyle. La dernière phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée sous vide. Le résidu obtenu est traité par une solution d'éther chlorhydrique et le chlorhydrate ainsi obtenu est cristallisé dans l'eau, puis récolté par filtration. Fusion : 145-216 C (dec.) - IR (C=O) 1635 cm-' (Kbr). Composé 8 Le composé 8 est obtenu selon le mode opératoire précédent à partir de l'acide-4-amino-5-chloro-2-cyclopentyloxy benzoïque et la (1 R,2R)2-(4-méthylpipéridinométhyl) cyclohexylamine. La base est purifiée par chromatographie sur silice (éluant CH2ClCH3CO2C2HCH3OH/; 80/15/5) puis cristallisée dans l'eau. Fusion : 173-175" C - IR (C=O) :1634 cm-' (CHCl3) [a]D = -52,6 (c=1, CH3OH). t = 200 C. Composé 9: Le composé 9 est obtenu de façon identique à partir de l'acide 4-amino-5-chloro-2-cyclopropylméthoxy benzoïque et de la (1 S,2R)2-(4-méthylpipéridinométhyl) cyclohexylamine. Le benzamide obtenu est purifié sous forme de base par chromatographie sur silice (éluant :CH2CI2/CH3CO2C2H5/CH3OH ; 80/15/5) et cristallisé dans l'éther éthylique. Fusion: 145-147 C - IR (C=O) 1635 cm-' (CHCI3) [a]D = +68,1 (c=1, CH3OH). t = 20 C. Acide (1 S,2S) 2-trifluoroacétamido-4-cyclohexène carboxylique (V1 L'aminoester IV (6,4 g) est traité par l'anhydride trifluoroacétique (17,6 ml) pendant 5 jours. Le milieu réactionnel est évaporé sous vide et le résidu est repris par une solution aqueuse de NaHCO3 5 %. La phase aqueuse est extraite par l'acétate d'éthyle, acidifiée, puis extraite par l'acétate d'éthyle. La dernière phase organique est séchée sur sulfate de sodium puis le solvant est évaporé sous vide pour fournir 2,4 g du produit V. [IR (C=O) = 1705 cm-1 (Kbr)j. (1 S,2S) 1 -trifluoroacétamido-2-(4-méthylpipéridino)car- bonyl cyclohex-4-ène (vil) Le composé obtenu à l'étape précédente (0,2 g), utilisé sans autre purification, et du carbonyldiimidazole (0,137 g) sont dissous dans du THF (5 ml). Après 2 h 30 d'agitation de la 4-méthylpipéridine (0,084 9) est ajoutée et le réaction est laissée 24 h. Le solvant est évaporé sous pression réduite et le résidu repris par du dichlorométhane. La phase organique est lavée par une solution aqueuse saturée en NaHCO3, séchée sur Na2S04 et évaporée sous vide. Le résidu est cristallisé dans l'éther de pétrole pour fournir 100 mg du produit attendu. Fusion: 169-170 C - IR(C=O) :1721,1623 cm-1 (CHCl3) [a]D -9,9" (c=1, CH3OH). T = 20 C. (1 S,2S) 1 -amino-2-(4-méthylpipéridino)carbonyl cyclohex 4-ène (VII) Le produit utilisé à l'etape précédente (1,3 g) est dissous dans I'éthanol (30 ml) puis traité par une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (0,33 g dans 10 ml d'eau) au reflux pendant 7 heures. Après neutralisation du milieu réactionnel par HCI 1N, les solvants sont chassés sous vide. Le résidu est repris par HCI 2N, la phase aqueuse extraite à l'éther éthylique, alcalinisée à pH 10 par NaOH 2N et extraite par l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur Na2SO4 et évaporée sous vide. Le produit (0,63 g) est obtenu sous forme d'huile et utilisé sans autre purification. (1S,2R)2-(4-méthylpipéridino)carbonyl cyclohexylamine (VIII) Le cyclohexène VI (0,57 9) est dissous dans du méthanol (50 ml) en présence de Pd/C à 10 % (50 mg) et d'HCI 3N (0,85 ml). Le milieu réactionnel est agité sous une légère pression d'hydrogène pendant 20 h. Le catalyseur est éliminé par filtration et le solvant est chassé sous vide. Le résidu est repris par une solution saturée de K2CO3 et la phase aqueuse extraite par l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur Na2SO4 puis évaporée sous vide pour fournir le dérivé réduit VIII (0,46 9) sous forme d'huile. [a], = +82,8 (c=1, CH3OH). T = 20' C IR (C=O) : 1616 cm-' (CHCI3). (1 S,2 R) 2- (4-méthylpipéridino)méthyl cyclohexylamine (IX) Le dérivé amide VIII (0,42 g) est dissous dans 10 ml de toluène puis traité à -60 C par l'hydrure de diisobutylaluminium (9,4 ml d'une solution 1 M dans le toluène) pendant 8 heures. Le milieu réactionnel est hydrolysé par addition d'HCI 2N. La phase aqueuse est séparée du toluène, lavée par le chloroforme, rendue alcaline par addition de NaOH 2N, puis extraite par le chloroforme. La phase organique est séchée sur Na2SO4 puis évaporée sous vide, pour fournir la diamine (0,25 9). [a]D = -12,1 (c=1, CH3OH). t = 20 C. REVENDICATIONS 1. Utilisation des composés de formule dans laquelle R, est un radical alkyle linéaire, ramifié ou cyclisé en C,-C5 et R2 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle linéaire ou ramifié en C1 -C5, un radical hydroxyle, un radical alkoxy en C,-C5 ou un radical hydroxyalkyle en C1-C2, et R3 représente un atome d'hydrogène ou R2 et R3 représentent tous les deux un radical alkyle en C,-C5, ces composés étant de configuration 2R, ainsi que des racémiques comprenant ces composés, et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des douleurs d'origine viscérale. 2. Utilisation des composés de formule dans laquelle R, est un radical alkyle linéaire, ramifié ou cyclisé en C1-C5 et R2 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle linéaire ou ramifié en C1-C5, un radical hydroxyle, un radical alkoxy en C1-C5 ou un radical hydroxyalkyle en C1-C2, et R3 représente un atome d'hydrogène ou R2 et R3 représentent tous les deux un radical alkyle en C1-C5, ces composés étant de configuration 2R, ainsi que des racémiques comprenant ces composés, et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des colites inflammatoires. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans laquelle on utilise un composé de formule I de configuration 1R, 2R. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle on utilise un composé de formule I dans laquelle R, est un radical méthyle ou cyclopropylméthyle, R2 est un radical méthyle et R3 est un atome d'hydrogène.