Brevet FR2745007A1 — publié le 19970822

La présente invention concerne la mise en évidence de gènes humains comportant des séquences à triplet répété CAG ou CTG, ainsi que l'utilisation de ces gènes dans le diagnostic et l'éventuel traitement de certaines maladies neurologiques héréditaires. L'expansion de séquences à triplet répété CAG ou CTC hautement polymorphiques et instables constitue une mutation impliquée dans au moins 6 maladies neurologiques héréditaires humaines (appelées "maladies à triplet répété"), notamment l'atrophie musculaire spinobulbaire (SBMA), la dystrophie myotonique (mi), l'ataxie cérébrospinale (SCAS) 1 et 3, l'atrophie dentato-rubro-pallydoluysiane (DRPLA) et la maladie d'Huntington (HD) (1). L'expansion des CAG/CTG (appelée également mutation dynamique) dans chacune de ces maladies est associée à un phénomène d'anticipation, la taille des répétitions étant souvent corrélée de façon inverse avec l'âge de la survenue et/ou de la sévérité des symptômes. L'expansion des répétitions CAG/CTG peut apparaître dans les régions non codantes (NID) ou codantes (par exemple SBMA et HD) des transcrits. Ces transcrits sont parfois exprimés dans les tissus autres que le cerveau et lorsqu'ils sont traduits conduisent à des produits de gènes plus grands portant un domaine polyglutamine anormalement allongé (2 à 4). La mise en évidence d'expansion CAG/CTG dans l'ADN génomique de patients et/ou l'anticipation dans les familles à risque a suggéré que les mutations dynamique sont impliquées dans SCA 2, SCA 4 et SCA 5, l'ataxie cérébrale dominante autosomale (ADCA de type 2) et la forme familiale du désordre affectif bipolaire (BPAD) ou la schizophrénie. L'autisme et la démence familiale qui montrent des variabilités dans l'âge de la survenue ou dans la sévérité des symptômes pourraient également être causés par des mutations dynamiques. Un assez grand nombre de maladies pourraient également avoir pour origine ou impliquer des mutations dynamiques - la maladie de Parkinson, - les paraplégies spastiques, - les ataxies cérébrospinale non répertoriées précédemment, - les cataractes zonulaires, - les tremblements incontrôlables, - les neuropathies amyloïdes familiales, - les arthrites granulomateuses familiales (maladie de Blau), - les microsomies hémifaciales, - certaines anémies et glaucomes, - les désordres obsessionnels. Ce qui précède démontre l'importance considérable des maladies à triplet répété et l'importance de leur diagnostic et de leur traitement. La présente invention repose sur une étude systématique des répétitions CAG/CTG (qui seront ci-après désignées par "[CAG]n", n étant le nombre de répétitions du triplet), cette étude ayant été réalisée avec des banques d'ADNc humains, celles-ci ayant subi un premier criblage général, puis les séquences retenues ayant été sélectionnées sur la base d'un certain nombre de critères permettant de s'assurer que les séquences en cause appartenaient à de nouveaux gènes humains et pouvaient, avec une grande probabilité, être impliquées dans des maladies à triplet répété. Enfin, les séquences sélectionnées ont fait l'objet d'une étude plus complète destinée à permettre leur localisation. Dans le cadre de la présente invention, deux ensembles d'ADNc provenant de cerveaux humains ont été étudiés pour analyser la présence de répétitions CAG en utilisant l'hybridation d'oligonucléotides sur des membranes à haute densité. Les deux librairies ont été obtenues à partir de ARNms à l'aide d'amorce oligo-dT, I'une des librairies étant constituée de clones d'ADNc de cerveau foetal (FB) et l'autre librairie étant constituée de clones d'ADNc normalisés de cerveau de nouveau-né (NIB). De plus, les ESTs humains dans les banques de données ont été analysés pour détecter la présence de triplets répétés dans les ADNc de tissus humains autres que le cerveau. De façon générale, la présente invention repose sur la mise en évidence de certaines séquences susceptibles d'être impliquées dans les maladies à triplet répété obtenues dans des conditions d'hybridation permettant de sélectionner des ADNc qui contiennent un nombre de séquences [CAG] supérieur à 9, lesquelles sont plus susceptibles d'être polymorphes dans une population normale. Les conditions complètes d'analyse et de sélection de ces différentes séquences ne seront pas détaillées ci-après, seuls seront fournis les éléments permettant de les localiser et de les réisoler grâce, notamment, aux amorces PCR qui seront décrites ci-après. Plus particulièrement, la présente invention concerne une séquence d'ADN transcrit riche en triplet répété CAG ou CTG correspondant aux séquences A à I du tableau, ainsi que leurs allèles normaux et mutés et les séquences complémentaires. Par "allèles normaux" on entend désigner les allèles tels qu'ils ont été isolés ou tels qu'il peuvent être isolés de prélèvements d'individus normaux, les "allèles mutés" étant les allèles des gènes portant les séquences [CAG]n anormalement répétées. Il est important de noter que, bien que certaines de ces séquences soient, totalement ou en partie, publiques, les séquences en cause sont pour la première fois identifiées comme faisant partie d'un gène pouvant présenter une mutation dynamique, lesdits gènes n'ayant, par ailleurs, en eux-mêmes jamais été décrits. Les séquences ainsi mises en évidence présentent, notamment pour sept d'entre elles, un pourcentage d'hétérozygotie (pourcentage HTZ) suffisamment important pour être impliquées très directement dans des maladies à triplet répété. Les séquences E et I qui présentent un très faible taux d'hétérozygotie (HTZ : 0,05) sont moins susceptibles d'être impliquées dans de telles maladies. Bien entendu, comme cela est mentionné précédemment, ces séquences sont identifiées dans le tableau et pourront, si besoin est, être réisolées en utilisant les amorces suivantes : SEQID 1 à 18, les amorces 1 à 18 correspondant, par paire, aux séquences A à I mentionnées précédemment. Les séquences ainsi mises en évidence peuvent, tout d'abord, être utilisées dans le cadre du diagnostic, et plus exactement d'un pronostic. En effet, comme un grand nombre de maladies ayant un support génétique, la mise en évidence de la présence d'une séquence présentant un nombre de répétitions anormal de triplet [CAG]n ne peut en elle-même assurer de la survenue de la maladie, mais doit être interprétée en fonction d'un ensemble d'autres informations pour permettre, soit un diagnostic très précoce, soit éventuellement une surveillance spécifique, surtout dans les familles à risque. Ce diagnostic peut être effectué en comparant la séquence d'ADN selon l'invention du patient avec une séquence normale pour détecter la présence de répétitions trinucléotidiques supplémentaires. Plus particulièrement, la présente invention concerne un procédé de mise en évidence des risques d'apparition d'une maladie à répétition trinucléotidique chez un patient, caractérisé en ce qu'on compare la séquence d'ADN selon la revendication 1 du dit patient à une séquence normale pour détecter la présence de répétitions trinucléotidiques supplémentaires. Bien entendu, il existe un grand nombre de méthodes qui permettent la mise en évidence de triplets surnuméraires par rapport à des séquences normales, par exemple il est possible de mettre en évidence des différences de poids moléculaires en utilisant des gels et une méthode de type RFLP. Mais, les méthodes les plus efficaces consistent à pratiquer préalablement à la mise en évidence des différences une opération d'amplification, par toute méthode appropriée, notamment la méthode dite "PCR", même si d'autres méthodes sont utilisables. Il n'est pas nécessaire ici de décrire en détail la méthode PCR, celle-ci permet d'amplifier de façon considérable une séquence spécifique comprise entre deux séquences appelées "amorces". Parmi les amorces utilisables dans le cadre des procédés selon I'invention, il faut citer les amorces des SEQID 1 à 18 qui constituent deux par deux des paires d'amorces pour chacune des séquences objet de l'invention. En utilisant les amorces décrites précédemment, on amplifie les séquences selon la présente invention et il est alors possible, par comparaison avec un échantillon normal et/ou étalon, de mettre en évidence la présence des triplets surnuméraires et donc la possibilité de survenue d'une maladie liée à ce type de mutation dynamique. Il est également intéressant de noter que ces maladies à mutation dynamique sont connues pour être d'autant plus sévères et survenir d'autant plus tôt qu'est important le nombre de répétitions. Dans ces conditions, la méthode diagnostic peut permettre, non seulement un bon pronostic de la survenue de la maladie, mais également d'évaluer le moment où cette maladie surviendra et/ou son éventuelle sévérité. La présente invention concerne également les gènes et leurs allèles qui portent, au moins en parties, ces séquences, lesdits gènes étant, bien entendu, impliqués directement dans la survenue de la maladie. Les gènes correspondant pourront être exprimés dans des cellules par des moyens connus afin de produire les protéines correspondantes. Il est possible d'envisager l'utilisation desdites protéines dans certains kits de diagnostic par exemple. De façon générale, ces protéines étant impliquées dans la maladie, on souhaitera en diminuer la quantité, soit en bloquant leur expression par des méthodes appropriées au niveau des gènes ou des éléments de régulation, soit en les fixant ou en les inactivant, par exemple en utilisant des protéines réceptrices jouant le rôle de leurres. La encore, ces protéines réceptrices ou inactivées pourront être générées in situ par expression des séquences d'ADN correspondantes. Il est également possible de prévoir la réalisation d'anticorps monoclonaux correspondant à ces protéines afin d'envisager le blocage desdites protéines lorsque cela est souhaité, I'ensemble de ces opérations pouvant être réalisé directement in vivo par exemple, en utilisant des techniques de thérapie génique, en particulier en utilisant des vecteurs qui porteront les séquences d'expression des gènes. On a mis en évidence le fait que les protéines présentant des domaines polyglutamines anormalement étendus avaient des propriétés d'aggrégation anormales, tant entre elles, qu'avec d'autres protéines (7, 8). Les aggrégats ainsi créés sont probablement impliqués dans la génèse des maladies à triplet répété, c'est pourquoi il est également possible de prévoir une thérapie dans laquelle les agents thérapeutiques viendraient empêcher l'aggrégation, soit en bloquant la molécule comme décrit précédemment, soit en se fixant à la molécule pour empêcher le rapprochement avec d'autres protéines. On peut, dans le cadre de la thérapie, prévoir d'utiliser des variants complets ou délétés de ces protéines, normales ou non (quant au domaine [CAG]n). Les séquences selon la présente invention peuvent être obtenues grâce aux informations figurant au tableau et aux références qui y sont données et en utilisant les séquences d'amorce qui sont décrites dans les identificateurs de séquence ci-joints. Les deux librairies utilisées sont - une première librairie (5) contenant 60 000 ADNc non normalisés de cerveau foetal humain (clones FB) (Laboratoire du Dr. Hans Lehrach, Max Plank Institute for Niolecular Genetics, Berlin, Allemagne) sous clonés dans le vecteur p-SPORT-l (Life Technologies, Inc., Gaithesburg, NIA, USA), et - la seconde librairie contient 40 128 ADNc normalisés de cerveau de nouveau-né (clones NIB) sous-clonés dans un vecteur lafmid (6) et qui est une partie des ressources du consortium IMAGE (Lasvrence Livermore Lab., Livermore, CA,) et du programme EST NIerck WU (Washington University, St-Louis, LO, USA). D'autre part, un certain nombre d'autres informations ont été recueillies en utilisant Genbank Database (NCBI Bethesda, NIA, USA). Les méthodes de sélection et d'analyse qui ont été mises en oeuvre ne font pas en elles-mêmes partie de la présente invention puisque l'invention a essentiellement pour objet les séquences ainsi obtenues et leur utilisation, notamment, dans des méthodes de diagnostic ou des méthodes de traitement thérapeutique. Dans la présente analyse, on a retenu, non seulement les séquences polymorphiques [CAG]n parfaites, mais également les séquences [CAG]n complexes, c'est-à-dire celles qui sont ponctuées par des insertions de triplets ; en effet cette présence de triplets insérés s'observe notamment dans le cas de SCA1, alors que tel n'est pas le cas pour SBNlA, NID et HD. L'étude présente a montré que le polymorphisme [CAG]n apparaît lorsque la séquence [CAG]n contient plus de 9 copies CAG (n > 9); c'est pourquoi, dans les sélections effectuées, les conditions de stringence sont assez élevées, ce qui a permis de sélectionner rapidement un grand nombre de séquences [CAG]n dans lesquelles n est supérieur à 9. D'ailleurs, les séquences [CAG]n dans lesquelles n est inférieur à 10 et qui ont pu être testées dans le cadre de la présente invention ont montré un polymorphisme nul. Par contre, il n'est pas possible de relever une corrélation directe entre la longueur des séquences [CAG]n et le degré de polymorphisme. D'autre part, les nouveaux clones sélectionnés à partir de librairies NIB sont distincts de ceux sélectionnés dans le groupe FB. Ceci est en accord avec le fait que le cerveau humain exprime un grand nombre de gènes distincts à des stades de développement différents. Enfin, des présentes observations il ressort que des séquences [CAG]n supérieures à 9 sont rares (1 pour 2 200 ) 1 pour 3 000) dans les ADNc humains représentatifs des régions 3' des ARNm. Bien que dans l'état actuel de la présente invention, les séquences qui constituent l'objet de l'invention n'aient pas été reliées directement à des affections neurologiques héréditaires, la présence d'extensions anormales CAG peut être reliée avec le risque de survenue d'une maladie neurologique, en particulier lorsqu'il y a une composante familiale. Sauf pour le clone 2.116 qui est localisé sur le chromosome 3p14 et peut-être impliqué dans ADCA Il, les autres séquences hautement polymorphiques [CAG]n décrites précédemment ne correspondent à aucun locus connu pour des maladies neurologiques héréditaires. Néanmoins, il existe un assez grand nombre de maladies neurologiques qui actuellement n'ont pas été localisées et trouveront probablement à être reliées avec les séquences selon la présente invention. Parmi les éléments additionnels qui ont été pris en compte pour étudier la pertinence des séquences retenues figure l'existence éventuelle d'un cadre de lecture ouvert (ORF) dans lequel les séquences [CAG]n codent pour une extension polyglutamine. Enfin, la présente étude suggère que la fréquence du polymorphisme [CAG]n est un événement rare dans les ADNc humains représentatifs des régions 3' des ARNm. TABLEAU [CAG]n polymorphiques : caractéristiques Clone Banque d'origine EST Fréquence Nbre d'allèles YAC(s) positif(s) Locali Nom d'origine du clone d'hétéro- (Nbre de sation d'ADNc zygotle répétitions) 2.116 "Fetal brain" (Lab. Dr. H. 872h9STS+,Alu probe A hybridation Lehrach, MPI/MolGen) aucune 0,875 9 (14-24) > 675f12,STS-,Alu target 3p14 (CAG)20 ICRFp507E07266 (Nom RLDB) 890d7,STS+,Alu probe PARFAIT 872h9,STS+,Alu probe 2.81 "Fetal brain" (Lab. Dr. H. B hybridation Lehrach, MPI/MolGen) aucune 0,578 3 (13-19) En cours de test (CTG)19 ICRFp507I05222 (Nom RLDB) COMPLEXE 2.119 "Fetal brain" (Lab. Dr. H. 767b11,STS+,Alu target 4p15 C hybridation Lehrach, MPI/MolGen) aucune 0,225 5 (23-28) 4q28.3 (CAG)28 ICRFp507j10268 (Nom RLDB) 968d9,STS+,Alu probe PARFAIT 2.46 hybrid. & "Fetal brain" (Lab. Dr. H. L10376 748e10,STS+,Alu probe banques de Lehrach. MPI/MolGen) [chr12] 12q13.3 données ICRFp507E06174 (Nom RLDB) 0,675 9 (8-18) > 970d8,STS+,Alu target D (CAG)10 > 970d10,STS+,Alu PARFAIT "Fetal brain" Stratagene T07007 target &num;936206 HFBEC27 (Nom Genbank) 756g5,STS+,Alu target 3p21 (chr3) 2.70 "Fetal brain" (Lab. Dr. H. E hybridation Lehrach, MPI/MolGen) aucune 0,05 2 (8-9) 926g5,STS+,Alu probe 19q13.43 (CAG)15 ICRFp507K24212 (Nom RLDB) COMPLEXE 1.8 hybrid. & "Normalized infant brain" 903c4,STS-,Alu target banques de (réseau IMAGE) R18580 0,90 15 (8-25) voisin de STS+ YACs 13q13.1-2 F données 30262 (Nom IMAGE) utilisé comme Alu (CAG)13 probes PARFAIT i.180 "Normalized breast 3NbHBst" R48249 852g6,STS+,Alu probe G banques de (réseau IMAGE) 4 (6-12) > 884f5,STS+,Alu probe 1q32-q41 données 153781 (Nom IMAGE) 0,675 > 891b4,STS+,Alu probe (CAG)12 PARFAIT "Normalized placenta Nb2HP" H25944 (réseau IMAGE) 162267 (Nom IMAGE) i.181 "Normalized fetal liver spleen" chr3,8,11 banques de (réseau IMAGE) T85390 0,575 2 (7,10) aucun (aucun H données 114128 (Nom IMAGE) YAC) (CAG)10 PARFAIT i.182 "Normalized breast chr5 banques de (3NbHBst" T49359 0,05 3 (9-12) aucun (aucun I données (réscau IMAGE) YAC) (CAG)12 67444 (Nom IMAGE) PARFAIT Colon : Nom du clone d'ADNc (nom CEPH) - Mode de sélection - Répétition 5'-3' EST : Homologies de séquence avec les EST dans Genbank : numéro d'accès des ESTs dans Genbank YAC(s) positif(s) . (Noms du CEPH) pour la séquence testée STS+/STS-: YAC positif/négatif pour d'autres STS(s) Alu target : YAC non utilisé comme sonde Alu Alu probe : YAC utilisé comme sonde Alu Localisation : Localisation de la séquence testée dans les chromosomes humains (déduction d'après les YACs positifs) LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATIONS GENERALES (i) DEPOSANT: (A) NOM: FONDATION JEAN DAUSSET - CENTRE D'ETUDE DU POLYMORPHISME HUMAIN (CEPH). (B) RUE: 27 Rue Juliette Dodu (C) VILLE : PARIS (D) PAYS: FRANCE (E) CODE POSTAL: 75010 (ii) TITRE DE L'INVENTION: DIAGNOSTIC DES NIALADIES A REPETITION TRINUCLEOTIDIQUE ET GENES IMPLIQUES DANS CES NIALADIES (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 18 (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: MACINTOSH APPLE (C) SYSTEME D'EXPLOITATION:MAC-OS SYSTEME 7 (D) LOGICIEL: WORDPERFECT (v) DONNEES DE LA DEMANDE ACTUELLE: NUMERO DE LA DEMANDE: (2) INFORNIATIONS POUR LA SEQID NO 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR:15 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN : simple (D) CONFIGURATION : linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.116 (C) ORIGINE: Max Plank Institute for Nlolecular Genetics Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE :ICRFp507E07266 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: CCAGCCTCAG GTAGC 15 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 22 nucléotides (B) TYPE : nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.116 (C) ORIGINE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE :ICRFp507E07266 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GTACTGAGGG CTlTITAGAT TC 22 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 3: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.119 (C) ORIGINE: Niax Plank Institute for Molecular Genetics, Laborator! of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE :ICRFp507J10268 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: TCATGCAGCA GAAAACAG 18 (2) INFORNIATIONS POUR LA SEQID NO A: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 nucléotides (B) TYPE : nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN : simple (D) CONFIGURATION : linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: (C) ORIGINE : Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE :ICRFp507J10268 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: AAAGGGGAGA CCAATTTG 18 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 5: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN : simple (D) CONFICURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE : bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.70 (C) ORIGINE: Niax Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINF:ICRFp507K24212 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GCACAGTCCT CACTAAAC 18 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 6: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.70 (C) ORIGINE: Niax Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE ICRFp507K24212 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GGACATTGGC TTCAACTTC 19 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 7: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 nucléotides (B) TYPE : nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE : bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.81 (C) ORIGINE: Niax Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE: ICRFpS0710522 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: CAGGTGCAGC GTCAAA 16 ) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 8: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN : simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE NIOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLéCULE. (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.81 (C) ORIGINE: Max Plank Institute for Molecular Genetics, Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE :ICRFp507I05222 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GGAGGAGGTG TCACAG 16 ) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 9: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 nucléotides (B) TYPE : nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: i.8 (C) ORIGINE: Réseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermove National Laboratories, Livermore, CA, USA. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE: 30262 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GATAAAAGGA AGGGAAAAG 19 (2) INFORNIATIONS POUR LA SEQ ID NO 10: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 17 nucléotides (B) TYPE : nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN : simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE fIOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE : bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: i.8 (C) ORIGINE: Réseau I.M.A.G.E., Lawrence Livemore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE: 30262 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GCAACACTCA GAAATGG 17 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 11: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: i.180 (C) ORIGINE: Réseau I.Nl.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE :153781 ou 162267 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: AAGTCAGAGT TACTCTTGC 19 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 12: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 17 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN : simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE NIOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: i.180 (C) ORIGINE: Réseau I. M.A.G. E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE: 153781 ou 162267 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GAGTGAAGTT CAGGAGG 17 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 13: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 nucléotides (B) TYPE : nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE NIOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: i.181 (C) ORIGINE: Réseau I.NI.A.G.fl, Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE: 114128 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GGACAAAGCT ACATGTCAG 19 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 14: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE NIOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA NIOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: i.181 (C) ORIGINE: Réseau l.Nl.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE: 114128 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GGTGAGTGTC CTTCTG 16 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 15: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 15 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA NIOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: i.182 (C) ORIGINE: Réseau I.Nl.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE: 67444 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: GGGCTAAGGG GAAAG 15 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 16: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 15 nucléotides (B) TYPE : nucléotide (C) NONIBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE hIOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA NIOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NONI DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: i.182 (C) ORIGINE: Réseau I.M.A.G.E., Lawrence Livermore National Laboratories, Livermore, CA, USA. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE: 67444 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: CTTGGTGGGC AAGTG 15 (2) INFORNIATIONS POUR LA SEQID NO 17: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NONIBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE : ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.46 (C) ORIGINE: Ma,x Plank Institute for molecular Genetics, Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE :ICRFp507E06174 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: TTTTTACTCG CGGCGGTG 18 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQID NO 18: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 25 nucléotides (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRIN: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) CARACTERISTIQUES DU CLONE CELLULAIRE PORTEUR DE LA MOLECULE: (A) TYPE DE CELLULE: bactérie (B) NOM DU CLONE D'ADNc CHEZ LE DEPOSANT: 2.46 (C) ORIGINE: Max Plank Institute for molecular Genetics, Laboratory of Dr Hans Lehrach, Berlin, Allemagne. (D) NOM DU CLONE DANS LA BANQUE D'ORIGINE :ICRFp507E06174 (iv) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: CAGGATAATC AAGAATGAAG TTAAG 25 REFERENCES 1. Whilhem, P.J. Dynamic mutations hit double figures. Nature Genet. 8, 213-215 (1994). 2. Trottier, Y. et al. Cellular localization of the Huntington's disease protein and discrimination of the normal and mutant form. Nature Genet. 10, 104-110 (1995). 3. Servadio, A. et al. Expression analysis of the ataxin-1 protein in tissues from normal and spinocerebellar ataxia type 1 individuals. Nature Genet. 10, 94-98 (1995). 4. Yazawa, I. et al. Abnormal gene product identified in hereditary dentato-rubralpallidoluysian atrophy (DRPLA) brain. Nature Genet. 10, 99-103 (1995). 5. Meier-Ewert, S., Ntaier, E., Ahmadi, A., Curtis, J. and Lebrach, H. An Automated approach to generating expressed sequence catalogues. Nature 361,375 (1993). 6. Soares, M.B., Bonaldo, M.F., Jelene, P., Su, L., Lawton, L & Efstratiadis, A. Construction and characterîzation of a normalized cDNA library. Proc. Nad. Acad. Sci. USA. 91,9228-9232 (1994). 7. Haad, D., Perry, M.J. and Haynes, L. Cellular transglutaminases in neural development. Int. J. Devl Neuroscience 11, 709-770 (1993). 8. Stott, K., Blackburn, J.M., Butler, P.J.G. & Perutz, NI. Incorporation of glutamine repeats makes protein oligomerize.Implications for neuro degenerative diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 6509-6513 (1995). REVENDICATIONS 1) Séquence d'ADN transcrit riche en triplet répété CAG ou CTG correspondant aux séquences A à I selon le tableau ainsi que leurs allèles normaux et mutés et les séquences complémentaires. 2) Séquence d'ADN, caractérisée en ce qu'elle porte au moins en partie une séquence selon la revendication 1. 3) Procédé de mise en évidence des risques d'apparition d'une maladie à répétition trinucléotidique chez un patient, caractérisé en ce qu'on compare la séquence d'ADN selon la revendication 1 dudit patient à une séquence normale pour détecter la présence de répétitions trinucléotidiques supplémentaires. 4) Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'on effectue une amplification de tout ou partie des séquences selon la revendication 1 et que l'on met en évidence dans le produit d'amplification la présence de répétitions trinucléotidiques supplémentaires. 5) Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'amplification des séquences est effectuée avec les amorces décrites SEQ ID 1 à 18 correspondant aux séquences A à I respectivement. 6) Cellule transformée exprimant tout ou partie d'un gène selon la revendication 2. 7) Protéine obtenue à partir d'une cellule transformée selon la revendication 6. 8) Protéine interagissant avec une protéine selon la revendication 7. 9) Anticorps monoclonal correspondant à une protéine selon l'une des revendications 7 ou 8. 10) Vecteur exprimant une protéine selon l'une des revendications 7 ou 8. 11) Utilisation thérapeutique d'une protéine selon l'une des revendications 7 ou 8, d'un anticorps selon la revendication 9 ou d'un vecteur selon la revendication 10.