Brevet FR2739868A1 — publié le 19970418

La présente invention est relative à des tissus ou organes présentant au moins une inhibition de l'adhésion plaquettaire et éventuellement une inhibition de l'agrégation plaquettaire, leur procédé de production et leurs applications. La présente invention est également relative à l'utilisation de mammifères et notamment de porcs, n'exprimant pas le facteur von Willebrand (vWF'), à la production desdits organes ou tissus, aptes à être greffés chez l'Homme et ayant la propriété d'atténuer ou inhiber le processus de rejet de xénogreffe. La transplantation d'organes a connu un essor considérable, en particulier au cours de la dernière décennie, notamment grâce aux progrès effectués tant en chirurgie que dans le domaine des immunosuppresseurs et constitue désormais une thérapie substitutive efficace pour les patients souffrant d'une défaillance viscérale. Cependant, le nombre d'organes disponibles diminue régulièrement, surtout depuis trois ans, alors même que le nombre de malades en attente de greffe augmente considérablement. Face à cette pénurie d'allogreffes (transplantation d'un organe de même espèce), l'utilisation d'organes d'autres espèces animales (xénogreffes) est l'objet d'intenses recherches. Le porc a été pressenti comme un donneur d'organes potentiel, en raison de sa disponibilité et de nombreuses similitudes physiologiques avec l'homme toutefois d'autres mammifères peuvent également être utilisés. La barrière immunitaire la plus importante, à laquelle les xénogreffes provenant d'espèces phylogénétiquement très éloignées (xénogreffes discordantes) doivent faire face, est celle du rejet hyperaigu. Par exemple, dans un modèle pré-clinique, utilisant les primates comme receveurs, une transplantation de rein de porc en l'absence de traitement est détruite en 30 minutes par un rejet hyperaigu (Bach FH et al., Transplt. Rev., 1992, 6, 1). Ces auteurs ont fourni les premiers éléments d'une caractérisation moléculaire des antigènes reconnus par les anticorps naturels xénoréactifs (XNA), de type IgM et IgG, sur les cellules endothéliales de porc ainsi qu'un nouveau modèle physiopathologique, qui présente l'activation de la cellule endothéliale comme le point de départ conduisant à la destruction des xénogreffes discordantes. Lesdits anticorps XNA reconnaissent des déterminants antigéniques sur les cellules endothéliales du rein. La fixation des XNA sur les cellules endothéliales active le complément, entraînant l'activation des cellules endothéliales et la formation de thrombi et de lésions vasculaires, aboutissant rapidement à la mort du greffon (Platt JL et al., Transplantation, 1991, 52, 937-947). Un certain nombre de travaux ont été réalisés, pour permettre d'améliorer la survie d'un greffon xénogénique et concernent plus particulièrement l'inhibition des acteurs du rejet hyperaigu précités inhibition du complément ou neutralisation des XNA. - inhibition du complément L'activation du complément est due à une incompatibilité d'espèce entre le système de complément du primate et les protéines régulatrices du complément, exprimées par le porc (Platt JL et al., 1991, précité). Pour inhiber l'activation du complément du receveur, il a été proposé de produire des porcs transgéniques exprimant des protéines régulatrices (CD55, CD59 ou CD46, par exemple) du complément du receveur (primate, homme notamment) (Demande internationale PCT WO 91/05855, au nom d'Imutran Limited ; Demande Internationale PCT WO 94/06903, au nom de DNX Biotherapeutics Inc. ; Demandes Internationales PCT WO 93/02188 et WO 95/04756, au nom d'Alexion Pharmaceuticals). Les premiers essais réalisés ont montré une prolongation de la fonctionnalité d'un greffon de porc transgénique (17 heures), par rapport à un greffon normal (30 minutes). Ce résultat premier peut être considéré comme à la fois important et décevant, car il montre les limites de l'inhibition du complément, pour éviter le rejet hyperaigu de xénogreffe. Plus récemment D. White (3rd Congress on Xenotransplantation, Boston, 27 septembre-l octobre 1995) a précisé que des coeurs de porcs transgéniques, exprimant la protéine régulatrice humaine CD55 ont été greffés chez des primates et la fonctionnalité de ces xénogreffes a été prolongée, chez certains receveurs, de plus de 60 jours, après la greffe (xénogreffe discordante fonctionnelle) ; ces résultats montrent toutefois que de telles modifications de l'organe donneur (expression d'au moins une protéine régulatrice humaine) ne sont pas suffisantes pour éviter complètement le rejet de xénogreffe. - neutralisation des anticorps XNA L'épitope majeur reconnu à la surface des cellules endothéliales par ces anticorps est dérivé de résidus a-galactosyles, présents sur les cellules de nombreux animaux inférieurs (dont le porc), mais absents chez l'homme ou la plupart des singes (Galili U. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84, 1369). Le blocage des XNA peut être réalisé en injectant des sucres de synthèse, apparentés à l'épitope (Cooper DK, Xeno, 1994, 2, 22) ou en utilisant des techniques d'immunoadsorption ex vivo, du plasma du primate. Les techniques d'immunoadsorption préférées sont notamment : la plasmaphérèse (Fischel RJ et al., Transplantation Proc., 1992, 24, 574-575), l'adsorption sur des colonnes d'anti-IgG et anti-IgM (Leventhal JR et al., Transplantation, 1995, 59, 294-300), des colonnes porteuses de déterminants Gal al-3 gal (Rieben et al., Xenotransplantation, 1995, 2, 98-106) et la perfusion d'organes de porc (Fischel RJ et al., précité).Alors que la plasmaphérèse et l'adsorption sur des colonnes d'anti IgG et anti-IgM éliminent la totalité des anticorps (naturels et induits) du receveur, ce qui peut être préjudiciable à ses possibilités de défense immunitaire, les colonnes de Gal al-3 Gal et surtout la perfusion d'organes apparaîssent comme un moyen efficace d'éliminer spécifiquement les anticorps naturels anti-espèces (Takada T et al., Transplantation, 1995, 59, 10 ; Wolf P et al.; Second International Congress on Xenotransplantation, Cambridge, England, 26-29 septembre 1993).Cette dernière technique, qui aurait l'avantage de dépléter d'autres xénoanticorps que ceux dirigés contre les seuls épitopes Gal 1-3 Gal, utilisant des organes isolés de porc, montre que le foie est un meilleur adsorbant que le rein (Wolf et al., 3rd International Congress on Xenotransplantation, Boston, USA, 1995). Toutefois les techniques de l'Art antérieur, que ce soit l'inhibition du complément ou l'élimination des anticorps XNA, ne permettent pas d'éviter la survenue d'un rejet de xénogreffe, intervenant après quelques jours ou quelques semaines et caractérisé par l'existence de thromboses, avec présence de thrombine et de fibrinogène et la margination des plaquettes sur l'endothélium, altéré et activé. En conséquence, le Demandeur s'est donné pour but de trouver une solution à ce problème du rejet des xénogreffes, qui répond mieux aux besoins de la pratique que l'approche préconisée dans l'Art antérieur : au lieu d'interagir seulement avec le système immunitaire (blocage des XNA) ou d'inhiber l'activation du complément, l'invention prévoit aussi d'intervenir sur l'étape finale qu'est la coagulation, par une inhibition de l'adhésion et de l'agrégation plaquettaire et d'associer cette intervention aux modifications proposées dans l'Art antérieur. La présente invention a pour objet des tissus ou organes, issus d'un animal donneur et aptes à servir de greffons, caractérisés en ce que lorsqu'ils sont mis en présence d'un receveur (primate humain ou non-humain), ils inhibent au moins l'adhésion plaquettaire et éventuellement l'agrégation plaquettaire dudit receveur, au niveau de leur endothélium ; de tels tissus ou organes atténuent, de manière significative, le rejet de xénogreffe, lors de leur utilisation dans une xénogreffe. Egalement de manière inattendue, de tels organes, notamment lorsqu'ils sont associés à d'autres modifications (inhibition du complément et/ou neutralisation des anticorps XNA), permettent de diminuer les lésions de rejet de xénogreffes discordantes. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'animal donneur est de préférence un porc. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, lesdits tissus ou organes, aptes à inhiber au moins l'adhésion plaquettaire du receveur humain, sont des tissus dépourvus de facteur von Willebrand (vWF') ; ils permettent, de manière inattendue, d'atténuer, de manière significative le rejet de xénogreffe et éventuellement, lorsque lesdits tissus présentent d'autres caractéristiques, comme précisé cidessus, de diminuer encore ledit rejet. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, lesdits tissus aptes à inhiber en outre l'agrégation plaquettaire du receveur humain, sont des tissus associés à un inhibiteur de la GpIIb-IIIa. Les Inventeurs ont montré qu'il est effectivement possible d'inhiber l'activation des plaquettes du receveur, en interagissant directement avec les récepteurs de la glycoprotéine Ib plaquettaire. En effet, en partant de l'hypothèse que l'adhésion des plaquettes de primate sur l'endothélium de porc devrait procéder des mêmes mécanismes que lors d'une lésion endothéliale expérimentale chez l'homme, les Inventeurs ont confirmé que le facteur von Willebrand (vWF), immobilisé dans les espaces sous-endothéliaux, libéré des granules plaquettaires, ou exprimé par la cellule endothéliale activée, interagit avec la glycoprotéine Ib (formation d'un pont entre les fibrilles collagène de la paroi vasculaire et les récepteurs de la glycoprotéine Ib (GpIb) plaquettaires). Cette fixation active l'intégrine GpIIb-IIIa (complexe glycoprotéique plaquettaire IIb et IIIa), lui permettant ensuite de fixer le facteur vW soluble.La fixation de facteur vW soluble sur le complexe GpIIb-IIIa a pour conséquence d'activer les plaquettes et d'augmenter l'affinité de ce récepteur pour le fibrinogène, son ligand électif. La présence de GpIIb-IIIa activée permet ensuite le processus d'agrégation plaquettaire. En effet, l'agrégation plaquettaire est activée par le fibrinogène, liant les plaquettes adjacentes, aux récepteurs du complexe GpIIb-IIIa. Une spécificité de ce système, dans la combinaison porc/primate a trait au fait que le facteur vW porcin circulant (donc non-immobilisé) semble capable d'activer directement la plaquette humaine au repos, en interagissant directement (et anormalement) avec GpIb. La présente invention a également pour objet un procédé de traitement ou d'adaptation d'un tissu ou organe, issu d'un animal donneur, apte à être greffé dans un animal receveur d'espèce différente de celle de l'animal donneur (xénogreffe), de préférence un receveur humain, et ayant la propriété d'atténuer ou inhiber le processus de rejet de xénogreffe, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend (i) une étape de préparation de tissus, issus d'animaux donneurs, aptes, lorsqu'ils sont mis en présence du receveur humain, à inhiber au moins l'adhésion plaquettaire et éventuellement l'agrégation plaquettaire dudit receveur humain, au niveau de l'endothélium desdits tissus ou organes, ledits tissus ayant éventuellement été soumis à d'autres modifications et, éventuellement (ii) une étape d'immunoabsorption. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux dudit procédé, lesdits animaux donneurs sont de préférence des porcs. Selon un autre mode de mise en oeuvre avantageux dudit procédé, lesdits tissus ou organes n'expriment pas le facteur von Willebrand. Selon un autre mode de mise en oeuvre avantageux. dudit procédé, lesdits tissus sont en outre modifiés pour inhiber l'agrégation plaquettaire de l'animal receveur au niveau de l'endothélium desdits tissus ou organes, de préférence au moyen de la présence d'un inhibiteur de la GpIIb-IIIa. L'étape d'immunoabsorption est de préférence mise en oeuvre par perfusion ex vivo d'organes provenant de l'animal donneur ou d'un animal du même type que l'animal donneur. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux de ladite étape d'immunoabsorption, ladite perfusion est une perfusion plasmatique d'organes provenant de l'animal donneur ou d'un animal du même type que l'animal donneur avec le plasma du receveur humain. Par exemple, dans le cas d'utilisation d'un foie de porc, ladite perfusion plasmatique est réalisée par la veine porte, grâce à l'interposition d'un module de plasmaphérèse, dans le circuit ex-vivo. En variante, le module de plasmaphérèse et/ou la perfusion ex vivo des organes de l'animal donneur sont remplacés par une colonne de chromatographie d'affinité. La présente invention a également pour objet l'utilisation de mammifères, présentant au moins des propriétés modifiées de l'adhésion et éventuellement de l'agrégation plaquettaire, à la production de tissus ou organes, aptes à être greffés chez l'homme et ayant la propriété d'atténuer ou inhiber le processus de rejet de xénogreffe. Conformément à l'invention, lesdits animaux sont de préférence des porcs, n'exprimant pas le facteur von Willebrand (vWF-). Selon un mode de réalisation avantageux desdits animaux, ils présentent en outre des modifications dans l'expression des protéines régulatrices du complément et/ou dans la neutralisation des anticorps XNA et/ou une autre caractéristique visant à diminuer le rejet de xénogreffes. En particulier, il existe, de manière inattendue, une synergie entre ces différentes modifications et notamment dans le cas de l'association phénotype vWF' et modifications obtenues par transgenèse (expression des protéines régulatrices du complément humain dans les organes à transplanter de l'animal donneur), pour diminuer et même éviter le rejet de xénogreffe. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre de la présente invention, ainsi qu'aux dessins annexés, dans lesquels - la figure 1 illustre le temps de survie d'une xénogreffe - la figure 2 représente l'évolution du taux sanguin d'urée après xénogreffe rénale (abscisse : nombre de jours ; ordonnée : taux sanguin d'urée en mmol/l) - la figure 3 représente l'évolution du taux sanguin de créatinine après xénogreffe rénale (abscisse nombre de jours ; ordonnée : taux de créatinine en pxnol/l - la figure 4 illustre l'évolution de la diurèse chez un primate transplanté avec un rein de porc v,,qF-'- (abscisse : nombre de jours ; ordonnée : diurèse en ml d'urine/24 h) - la figure 5 illustre l'évolution du taux de fibrinogène sanguin chez un primate avec un rein de porc vWF' (abscisse : temps ; ordonnée : fibrinogène en g/l) - la figure 6 illustre l'évolution du taux de TG sanguin chez un primate transplanté avec un rein de porc vWF-'- (abscisse : temps ; ordonnée : ssTG en ng/ml) - la figure 7 illustre l'évolution du taux de D-Dimères sanguin chez un primate transplanté avec un rein de porc vWF' (abscisse . temps ; ordonnée : Dimères en ng/ml). I1 doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. ExzMP i * Porcs déficients (homozygotes) en facteur Von Willebrand (vWF-/-) Les animaux incapables d'exprimer le facteur von Willebrand (VWF"- ) (homozygotes) ont été sélectionnés à partir de mutants récessifs (INRA). La mutation récessive vW a été pour la première fois observée aux Etats-Unis (EJW BOWIE et al., Hematology, 1989, 9, 305, Animal models for the study of factor VIII and von Willebrand factor). La maladie de Willebrand est une maladie constitutionnelle de l'hémostase, due à un déficit quantitatif ou qualitatif en facteur von Willebrand (vWF), protéine adhésive multimérique de très haut poids moléculaire, synthétisée par les cellules endothéliales et les mégacaryocytes. Chaque sous-unité est composée d'une chaîne de 2050 acides aminés et possède plusieurs domaines fonctionnels de liaison aux glycoprotéines de la membrane plaquettaire GP Ib, GP IIb-IIIa, au collagène, à l'héparine, aux sulfatides et au facteur VIII (FVIII). Le vWF est localisé dans les cellules endothéliales au niveau des corps de Weibel-Palade, dans le sous-endothélium, dans les granules plaquettaires, et circule dans le plasma sous forme de dimères, d'oligomères et de multimères de 500 à 10 000 kDaltons. Le vWF possède deux grandes fonctions, d'une part dans l'adhésion et l'agrégation des plaquettes, d'autre part dans le transport et la stabilisation du FVIII. La maladie de Willebrand porcine, dans sa forme homozygote, est très proche de la forme humaine sévère de type 3, caractérisée par une absence totale de WF (KM. BRINKOUS et al., Mayo Clin. Proc., 1992, 66, 733, vW factor and animal models: contribution of gene therapy, thrombotic thrombocytopenic purpura and coronary artery thrombosis). Cette lignée de porcs vWF-'- homozygotes a été obtenue à partir d'un croisement de 12 femelles de race Large White et de spermes provenant de 3 verrats américains provenant de l'élevage de la Mayo Clinic, atteints de maladie de Willebrand (Station INRA de Sélection porcine de Rouillé). La colonie est constituée de 25 % de porcs normaux, 25 % de porcs atteints de maladie de Willebrand homozygotes, 50 % de porcs atteints de maladie de Willebrand hétérozygotes. Les croisements se font entre animaux hétérozygotes Willebrand, de même groupe sanguin, préalablement testés pour les antigènes du système majeur d'histocompatibilité SLA (Swine Leucocyte Antigen) et présentant au moins un haplotype SLA commun afin d'obtenir d'une part des animaux normaux ou homozygotes Willebrand, d'autre part des animaux de même génotype SLA. Les 3 catégories de porcs, normaux, homozygotes Willebrand, hétérozygote Willebrand sont déterminées sur les résultats du temps de saignement, du taux de WF plasmatique et plaquettaire, déterminé par une méthode immunologique, de l'activité fonctionnelle du vWF plasmatique et plaquettaire et du taux de FVIII. * Prélèvement et préparation des organes Protocole chirurgical Les différentes phases expérimentales comportent - le prélèvement du foie et du rein du porc, - l'immunoabsorption des anticorps xénoréactifs du primate par perfusion du foie du porc par le plasma du primate dans un circuit ex vivo, incorporant un séparateur de plasma (Haemonetics), - la transplantation du rein de porc au primate, 1. Prélèvement du foie et du rein du porc : Les porcs d'un poids de 30 kg, à jeûn depuis la veille, sont soumis aux opérations suivantes. - anesthésie générale avec intubation endotrachéale et curarisation, - laparatomie xypho-pubienne, - dégagement de la partie distale de l'aorte et de la veine cave, mise en place d'une canule aortique et d'une canule de décharge cave, - dissection de la veine splénique au bord supérieur du pancréas, canulation de la veine splénique, - clampage de l'aorte thoracique, après incision de l'hémicoupole diaphragmatique gauche en avant du ligament coronaire gauche, - réfrigération des organes abdominaux par 2 litres d'Eurocollins à 40C, - prélèvement hépatique . section du cholédoque, au bord supérieur du deuxième duodénum, section de l'artère hépatique propre entre deux clips, allongement et section distale de la veine porte. Section de la veine cave inférieure sous diaphragmatique et soushépatique.Section des ligaments coronaires et triangulaires droits et gauches et dégagement du foie, - prélèvement du rein gauche avec collerette aortique et cave, section distale de l'uretère et conservation du péritoine pré-rénal qui permettra l'amarrage du greffon rénal implanté chez le primate, - restitution tégumentaire. 2. Immunoadsorption des anticorps xénoréactifs du primate Primate Macaca mulatta ou Babouin, 10 kg. Anesthésie générale et intubation endotrachéale. 2.1. Abord vasculaire - incision au cou, bord antérieur du sternocléido-mastoidien, - dégagement et canulation de la veine jugulaire et de l'artère carotide par des drains d'Argyle nO 10, extériorisés par contre-incision et reliés temporairement par un connecteur. 2.2. Mise en place du foie de porc dans la cassette - intubation de la veine porte par un tube de silicone muni d'une bague d'arrêt, - installation du foie dans le cassette, - purge au travers de la veine porte par 1 1 de Ringer-Lactate. 2.3. Réalisation du circuit plasmaphérèseperfusion du foie de porc. 2.4. Retrait du circuit plasmaphérèseperfusion du foie de porc Le cathéter carotidien est conservé pour monitoring de la pression artérielle sanglante. Le cathéter jugulaire est conservé en tant qu'abord vasculaire. 3. Transplantation rénale porc/primate - laparotomie médiane xyphopubienne, - abord aorte et veine cave inférieure sous rénales, - mise en place du greffon, - clampage veine cave inférieure, veinotomie et anastomose veineuse terminolatérale au prolène 6/0, - clampage aortique, artériotomie et anastomose artérielle termino latérale au prolène 7/0, - déclampage des anastomoses, - réimplantation urétérovésicale externe, - fixation du greffon rénal, - ligature des uretères propres, - biopsie du greffon histologie et immunohistologie, - fermeture sans drainage. * Groupes 3 groupes sont constitués - Groupe 1, porcs normaux de race Large-White n = 5 (greffe rénale porc/primate sans manipulation), - Groupe 2 porcs normaux (greffe rénale porc/primate, après immuno-adsorption des anticorps du receveur), - Groupe 3, porcs déficients en facteur Willebrand n = 5 (greffe rénale porc/primate, après immunoadsorption des anticorps du receveur). * Suivi des animaux Le suivi des animaux comprend un examen clinique biquotidien, le recueil de la diurèse, des examens biologiques sanguins et urinaires, et des biopsies du greffon. Les critères de rejet du greffon sont basés sur les paramètres suivants aspects macroscopique (infarcissement nécrotique de l'organe rejeté), histologie, fonction rénale, évaluée par le taux d'urée et de créatinine, et la diurèse (les uretères propres du singe étant ligaturés). * Matériel et méthodes des analyses - Biochimie (sanguine et urinaire) les analyses de biochimie sont réalisées sur un automate Kodak Ektachem 500 (Eastman Kodak, Rochester, USA) : créatinine, glycémie, urée, Na, K, Ca, Cl, TGO, TGP, bilirubine, protéine, albumine. - Hématologie (NFS) les numérations globulaires sont réalisées sur un automate d'hématologie Sysmex K100 (Merck-Clevenot, France), les formules leucocytaires étant contrôlées au microscope après coloration au May Grunwald Giemsa. - Immunologie les anticorps naturels de primate anti-porc sont dosés en ELISA sur cellules endothéliales primaires de porc selon la technique de PLATT et al. (Transplantation, 1990, 49, 1000-1001) . Ils peuvent également être dosés dans un test ELISA utilisant des antigènes porteurs de l'épitope a-galactosyl. Les fractions C3 et C4 du complément sont dosées en turbidimétrie sur le Turbox Analyser e de Merck à l'aide des kits Turbox > C3 et TurboxRY4 (Orion Diagnostica). - Histopathologie : trois types de traitement des biopsies sont réalisés 1) Microscopie optique : un fragment de tissu est fixé dans du formaldéhyde à 4 % et inclus dans de la paraffine. Des coupes de 5 Fm sont ensuite réalisées, colorées à l'hématoxyline/éosine, puis observées au microscope. Une coloration tri-chrome est parfois réalisée pour mettre en évidence la présence de thrombi fibrino-plaquettaires. 2) Immunofluorescence : un deuxième fragment de tissu est inclus dans du fixateur OCT (Miles, Elkhart, IN), congelé dans de l'isopenthane refroidi et conservé à -700C jusqu'à utilisation. Des coupes de 5 Cun sont ensuite réalisées, recueillies sur lame et séchées. Les anticorps suivants sont ensuite appliqués et incubés pendant 30 minutes : anti-IgG humain-FITC (Meloy), anti IgM humain-FITC (Meloy), anti-C3 humain-FITC (Behring), anti-Clq humain-FITC (Behring), anti-fibrogène-FITC (Behring), anti-C4 humain-FITC (Atlantic) , anti properdine/fact B humain (Atlantic) , anti-C5b-9 (Dako) , anti-CD41a (Immunotech) ' ces anticorps ne sont pas conjugués au FITC et sont, par conséquent, révélés par l'addition d'un conjugué FITC anti-IgG de souris (Jackson Laboratories). 3) Microscopie électronique un troisième fragment de tissu est fixé dans un tampon cacodylate 0,1 M contenant du glutaraldéhyde à 2,5 %, puis post-fixé dans du tétroxide d'osmium à 1 % et inclus dans de la résine epon. Des coupes semi-fines réalisées à l'aide d'un microtome Reichert OmU2 (Leica, Rueil-Malmaison, France) sont ensuite colorées au bleu de toluidine et utilisées pour sélectionner les régions à analyser ensuite en coupes ultra-minces. Les coupes ultra-minces sont ensuite colorées à l'acétate d'uranyle et au citrate de plomb, et examinées sous un microscope Elmiscop 102 (Siemens, Berlin, Allemagne). - Hémostase : Fibrinogène, TCA, marqueurs d'activation plaquettaire (PFA, TG), marqueur de l'activation de la coagulation (TAT), marqueur de fibrinolyse (D-Dimères). Le fibrinogène est dosé par la mesure du temps de coagulation de 200 pl de PPP dilués au dixième dans un tampon imidazole 25 mM, pH 7,2 avec 200 pl de thrombine bovine (Roche, Bâle, Suisse), 50 U/ml dans le tampon imidazole. La réaction est effectuée dans un coagulomètre KC 10 (Amelung, Lengo, RFA). La concentration plasmatique du fibrinogène de primate est déterminée en utilisant une courbe de calibration effectuée avec du fibrinogène humain purifié. Le temps de céphaline activée (TCA) mesure l'activation de la voie intrinsèque de la coagulation. Cette mesure est faite sur un coagulomètre KC 10. Le TCA est mesuré avec 500 Rl de plasma de primate préincubés à 370C avec 50 zl d'Actin#, une solution de céphaline et d'acide ellagique (Baxter, Dade division, Chicago II, USA) pendant 2 min. La coagulation est déclenchée par l'addition de 50 ml de CaCl2 0,02 M. Les marqueurs d'activation des plaquettes et de la coagulation (TAT, ssTG, PF4) et les D-Dimères sont dosés par des tests immuno-enzymatiques à l'aide des kits suivants : Enzygnost TAT des laboratoires Behring, Behringwerke AG (Marburg, Allemagne), Asserachrom ss-TG des laboratoires Diagnostica Stago (Asnières-sur-Seine, France), Asserachrom PFA des laboratoires Diagnostica Stago (Asnières-sur-Seine, France), Asserachrom D-Di des laboratoires Diagnostica Stago (Asnières-sur-Seine, France) * Résultats - Survie et fonction rénale, analyse histolo que : Les figures 1-3 illustrent les résultats obtenus. La figure 1 illustre le temps de survie d'une xénogreffe dans les 3 groupes (1, 2 et 3) et montre qu'il existe un retard significatif dans le rejet de greffe, dans le groupe 3. Le rejet est déclaré d'après l'observation macroscopique du greffon. L'analyse histologique confirme ce diagnostic avec l'observation d'hémorragie et de thrombi à J5 dans le groupe 3 alors que ces caractéristiques sont observées dès J1 dans le groupe 2. Chez de l'animal du groupe 3 la nécrose n'apparaît qu'au jour 3 (J3) et l'infiltration cellulaire au jour 5 (J5). L'immunohistologie révèle la fixation d'immunoglobulines et de complément sur le greffon essentiellement à partir de J5. Les figures 2, 3 et 4 illustrent l'état de la fonction rénale après xénogreffe, évaluée par les taux sanguins d'urée et de créatinine, ainsi que la production d'urine. On observe que la fonction du greffon est préservée jusqu'à J3 dans le groupe 3, alors qu'elle est déjà affectée à J2 dans le groupe 2. L'utilisation de porcs vWF-'- a permis de prolonger la survie des xénogreffes rénales de porc et de retarder l'apparition des thrombi fibrino-plaquettaires de 2+1 jours à 4-5 jours. De plus, la fonction des greffons vWF' est normale jusqu'à J3 alors qu'elle est déjà déficiente à J2 avec les porcs normaux. - Èxploration de l'hémostase Les temps de Quick (TP) et de céphaline active (TCA) explorent respectivement la voie extrinsèque et intrinsèque d'activation de la coagulation. Les résultats sont difficiles à interpréter en raison de lthémodilution. Le TP montre une baisse à J5 attribuable au rejet, après une baisse à T2 probablement due à l'hémodilution et une normalisation à J3. Les complexes thrombine/anti-thrombine III (TAT) révèlent une activation de la coagulation durant l'immunoadsorption des anticorps, qui se normalise ensuite. Le fibrinogène est augmenté à J3, probablement suite à des phénomènes inflammatoires, puis diminue à J5 en raison de sa consommation probable lors du rejet (figure 5). Les marqueurs d'activation des plaquettes (PF4, ssTG) augmentent après l'immunoadsorption et au moment du rejet (J5), après une normalisation à J1 et J3 (figure 6 pour BTG). Les D-dimères témoignent de la présence de fibrine stabilisée. Ils augmentent au cours de l'expérience, avec une amélioration de J1 à J3 (figure 7). Les marqueurs de l'hémostase confirment l'absence d'activation des plaquettes jusqu'à J3 et mettent en évidence une activation des plaquettes et de la coagulation au moment du rejet. Temps de prélèvement TO : avant toute manipulation T1 : après auto-transfusion T2 : après immunoadsorption T3 : après greffe J1 : 24 h après la greffe J3 : 3 jours après la greffe J5 : 5 jours après la greffe. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée de la présente invention. REVENDICATIONS 10) Tissus ou organes, issus d'un animal donneur et aptes à servir de greffons, caractérisés en ce qu'ils sont modifiés de telle sorte que lorsqu'ils sont mis en présence du primate receveur, humain ou nonhumain, ils inhibent au moins l'adhésion plaquettaire et éventuellement l'agrégation plaquettaire dudit receveur humain, au niveau de leur endothélium. 20) Tissus ou organes selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils sont issus du porc. 30) Tissus ou organes selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisés en ce que ce sont des tissus dépourvus de facteur von Willebrand et en ce qu'ils inhibent au moins l'adhésion plaquettaire du receveur humain. 40) Tissus ou organes selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que ce sont sont des tissus associés à un inhibiteur de la GpIIb-IIIa et en ce qu'ils inhibent en outre l'agrégation plaquettaire du receveur humain. 50) Procédé de traitement ou d'adaptation d'un tissu ou organe, issu d'un animal donneur, apte à être greffé dans un animal receveur d'espèce différente de celle de l'animal donneur (xénogreffe), de préférence un receveur humain, et ayant la propriété d'atténuer ou inhiber le processus de rejet de xénogreffe, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend (i) une étape de préparation de tissus, issus d'animaux donneurs, aptes, lorsqu'ils sont mis en présence du receveur humain, à inhiber au moins l'adhésion plaquettaire et éventuellement l'agrégation plaquettaire dudit receveur humain, au niveau de leur endothélium, ledits tissus ayant éventuellement été soumis à d'autres modifications et, éventuellement (ii) une étape d'immunoabsorption. 60) Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que lesdits animaux donneurs sont de préférence des porcs. 70) Procédé selon la revendication 5 ou la revendication 6, caractérisé en ce que lesdits tissus ou organes n'expriment pas le facteur von Willebrand. 80) Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que lesdits tissus sont en outre modifiés pour inhiber l'agrégation plaquettaire du receveur humain, de préférence au moyen de la présence d'un inhibiteur de la GpIIb-IIIa. 90) Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que l'étape d'immunoabsorption est mise en oeuvre par perfusion ex vivo d'organes provenant de l'animal donneur ou d'un animal du même type que l'animal donneur ou par chromatographie d'affinité. 100) Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que ladite perfusion est une perfusion plasmatique d'organes provenant de l'animal donneur ou d'un animal du même type que l'animal donneur avec le plasma du receveur humain.