Brevet FR2726188A1 — publié le 19960503

COMPOSITION GL YCOSAMINO GL YCANE/FA C TE UR DE CROISSANCE MEGACARYOCYTAIRE, UTILISA TION EN THERAPE U TIQ UE Domaine de l'invention La présente invention a trait à une composition renfermant un composant glycosaminoglycane (A) et un composant facteur de croissance mégacaryocytaire (B), en tant que produit industriel nouveau. Elle concerne également l'utilisation de cette composition en thérapeutique vis-à-vis des thrombopénies. Arrière-plan technologique On sait que l'on classe les thrombopénies selon les groupes (ou types) suivants. GROUPE I: Thrombopénies centrales par insuffisance médullaire. Les mégacaryocytes, qui sont à l'origine de la formation des plaquettes sanguines, produisent ici un nombre insuffisant de plaquettes en raison d'une anomalie quantitative ou qualitative. Voir à cet effet l'exposé de J.P. CAEN et S. BELLUCCI intitulé "Megakaryocyte involvement in platelet disorders" et présenté à Cancun en 1994 lors de l'assemblée plénière de l'international Society of Hematology. Le plus souvent l'insuffisance médullaire est GROUPE Ia : constitutionnelle, GROUPE Ib : due à un envahissement de la moelle par des cellules tu morales, ou GROUPE Ic : consécutive à un traitement chimiothérapeutique ou radiothérapeutique. GROUPE Il : Thrombopénies périphériques. Les plaquettes, qui sont normalement produites par la moelle osseuse, sont dans ce cas détruites de façon excessive à la périphérie par le système macrophagique. Les principales causes sont les suivantes. GROUPE IIa : on est en présence d'une activation exagérée de la coagulation qui entraîne une consommation (i.e. coagulation) intravasculaire disséminée (en abrégé CIVD ; en anglais: "disseminated intravascular coagulation" ou DIC) ; dans le cas d'une CIVD (qui peut être d'origine toxique, immunolo gique, bactérienne, fongique, virale, traumatique etc.) une quantité importante de plaquettes est consommée ce qui diminue le nombre de plaquettes présentes dans le sang; GROUPE IIb : après prise médicamenteuse, l'organisme produit des anticorps qui reconnaissent de façon croisée certains constituants plaquettaires ; les thrombopénies induites par l'héparine, qui sont exceptionnelles eu égard à leur fréquence, appartiennent à ce groupe les plaquettes recouvertes d'anticorps sont fragilisées et reconnues plus aisément par les macrophages qui les détruisent ; voir à cet effet l'article de M.C. BERNDT et al..Blood Reviews (1987), 1, pages 111-118. intitulé "Drug-mediated Thrombocytopenia" ; et, GROUPE IIc : I'organisme du patient produit lui-même de façon anormale des anticorps qui sont dirigés de façon autologue contre les constituants des plaquettes ; il s'agit ici de thrombopénies auto-immunes dont les seules manifestations cliniques sont des hémorragies essentiellement localisées au niveau cutané; le cas le plus fréquent est le purpura thrombopénique immun (ITP) ; voir à cet effet l'article de S. BELLUCCI, Baillière's Clinical Haemarology, (1989), 2 fiVo 3) , pages 695-718, intitulé "Autoimmune thrombocytopenias". Art antérieur Les thrombopénies du groupe I ont été généralement traitées dans le passé au moyen d'un stéroïde. principalement la prednisone ou des androgènes. Les thrombopénies du groupe IIa liées à une CIVD ont été en général traitées au moyen d'un agent anticoagulant, à savoir un glycosaminoglycane (GAG) antithrombotique tel qu'une substance héparinique, notamment l'héparine standard (Hep) dite "non-fragmentée" et ayant un poids moléculaire de l'ordre de 12000 daltons, une héparine de bas poids moléculaire (LMWH) dite "fragmentée" et ayant un poids moléculaire de l'ordre de 3000-5500 daltons, le dermatan sulfate ou le pentosane polysulfate. Quand on est en présence de thrombopénies du groupe IIb induites par Hep, le traitement thérapeutique classique consiste à administrer un agent anticoagulant différent de la drogue inductrice. Les thrombopénies induites par une substance héparinique peuvent être détectées de façon précoce par la méthode décrite dans la demande PCT publiée WO-A-92/02823 ou l'article de J. AMIRAL et al., Thromb. Haemost., (1992), 68 (No 1), pages 95-96. Les thrombopénies auto-immunes du groupe IIc ont été traitées dans le passé par la prednisone. Or il se trouve que dans de nombreux cas. les ITP sont résistants à la prednisone. On connaît de la demande PCT publiée WO-A-92/06178 une solution technique selon laquelle on produit des cellules hématopofétiques. principalement des mégacaryocytes (MK) et des plaquettes. par culture de cellules progénitrices (CFU-MK) humaines sur un milieu nutritif (plasma humain ou sérum foetal de veau) contenant un anticoagulant (héparine. citrate), dans des conditions inhibant la croissance des fibroblastes. L'héparine intervient de préférence à la concentration de 0.5-1.5 mg/ml (i.e. à une dose anticoagulante) pour empêcher la formation de fibroblastes. Un facteur de croissance tel que IL 1, IL 3. IL 6 ou Epo peut être utilisé pour remplacer le sérum (voir page 7 lignes 17-21). Un des buts poursuivis est la production de MK et de plaquettes utiles dans le traitement des thrombopénies (voir page 3 lignes 5-6 et page 16 lignes 9-27). Les modalités préconisées pour le traitement desdites thrombopénies comprennent plus précisément la réinjection de MK et/ou CFU-MK. le cas échéant avec des plaquettes, aux patients thrombopéniques (voir page 16 lignes 12-16). Plus récemment dans la demande PCT publiée WO-A-93/23059, la Demanderesse a proposé de traiter les thrombopénies des groupes I et surtout IIc au moyen d'un GAG antithrombotique ou non-antithrombotique, ledit GAG étant susceptible d'être administré à une faible dose. Ainsi selon WO A-93/23059, quand le GAG a des propriétés antithrombotiques. il est en particulier recommandé de le faire intervenir à une dose nettement inférieure à la dose anticoagulante. Le document WO-A-93/23059 précité fait état [voir exemple 3 (page 15), tableau VII (page 16) et résultats de la figure 1] d'essais in vitro sur la formation de colonies mégacaryocytaires avec des associations Hep/facteur de croissance mégacaryocytaire ou LMWH/facteur de croissance mégacaryo- cytaire où ledit facteur de croissance est le sérum d'aplasie porcine (AAS) [qui contient le ligand de c-MPL], IL 3, IL 6, G-CSF, GM-CSF ou Epo. Les résultats fournis enseignent que la mégacaryocytopoïese est seulement stimulée par Hep/AAS et LMWH/AAS in vitro, alors que Hep et LMWH en association avec un facteur de croissance mégacaryocytaire différent de AAS n'ont aucune influence bénéfique sur la mégacaryocytopoïese in vitro selon WO-A-93 /23059. I1 se trouve que AAS n'est pas un produit administrable à l'homme dès lors qu'il peut comporter des ingrédients susceptibles d'être néfastes, d'une part, et que sa production ne peut pas être standardisée aisément, d'autre part. But de lsinvendon ll existe un besoin en ce qui concerne une solution technique permettant de stimuler la mégacaryocytopoïese et par suite d'améliorer la formation de plaquettes in vivo dans le cas de thrombopénies, sans avoir à injecter des plaquettes aux patients. La nouvelle solution technique, que l'on se propose de fournir va à l'encontre de l'enseignement de l'art antérieur, en ce sens que, dans le cas de patients souffrant d'ITP, on va pouvoir administrer un GAG, notamment antithrombotique et déjà connu en tant qu'agent anticoagulant tel que Hep, pour fabriquer in vivo des plaquettes et empêcher les hémorragies spécifiques des thrombopénies du groupe IIc. De plus la nouvelle solution technique va à l'encontre de l'enseignement de WO-A-93/23059 qui n'incite pas l'homme du métier à utiliser in vivo une composition glycosaminoglycane/facteur de croissance mégacaryocytaire qui s'est révélée être in vitro soit inactive soit aussi active que le seul composant glycosaminoglycane, quand il s'agit de remédier à une insuffisance plaquettaire. Selon un premier aspect de l'invention, on se propose de fournir une nouvelle solution technique faisant appel à une composition qui soit supérieure à celle de l'enseignement du document WO-A-93/23059 précité dans le traitement des thrombopénies, notamment celles du groupe I et surtout celles du groupe IIc. Selon un second aspect de l'invention, on se propose de fournir une nouvelle utilisation thérapeutique vis-à-vis des thrombopénies au moyen de ladite composition. Objet de l'invention La nouvelle solution technique que l'on recommande selon la présente invention fait appel à une composition comprenant un composant GAG et un composant facteur de croissance mégacaryocytaire (F) pour le traitement in vivo des thrombopénies. Selon cette nouvelle solution technique, on préconise une composition thérapeutique caractérisée en ce qu'elle comprend, en association avec un excipient physiologiquement acceptable, un mélange de: (A) une substance choisie parmi l'ensemble constitué par les glycosaminoglycanes, leurs analogues et leurs mélanges, et (B) une substance choisie parmi l'ensemble constitué par les facteurs de croissance mégacaryocytaires et leurs mélanges. On préconise également l'utilisation d'un mélange stimulant la méga caryocytopoièse et comprenant: (A) une substance choisie parmi l'ensemble constitué par les glycosaminoglycanes, leurs analogues et leurs mélanges, et (B) une substance choisie parmi l'ensemble constitué par les facteurs de croissance mégacaryocytaires et leurs mélanges, pour la préparation d'un médicament destiné à une utilisation en thérapeutique vis-à-vis des thrombopénies. Abréviations Dans ce qui suit, on a utilisé par commodité les abréviations suivantes. AAS sérum d'anémie aplasique (en anglais : "aplastic anemia serum") AT m antithrombine ffi; CFU unité formant colonie (en anglais : "colony-forming unit") CFU-MK progéniteur mégacaryocytaire (en anglais : "megakaryocyte colony-forming unit"); CD coagulation intravasculaire disséminée (en anglais : "disseminated intravascular coagulation" ou "DIC") c-MPL équivalent cellulaire normal du virus de la leucémie myéloproliférative murine ; le facteur de croissance mégacaryo cytaire qui intervient selon l'invention est le ligand de c-MPL CS chondroïtine-4-sulfate et/ou chondroïtine-6-sulfate DS dermatan sulfate Epo érythropoiétine F facteur de croissance mégacaryocytaire FGF facteur de croissance de fibroblastes (en anglais: "fibroblast growth factor") ; on distingue parmi les FGFs les facteurs de croissance acide (aFGF) et basique (bFGF) GAG désigne ici tout glycosaminoglycane proprement dit ainsi que tout analogue de glycosaminoglycane; G-CSF facteur stimulant les colonies de granulocytes (en anglais "granulocyte colony-stimulating factor") GM-CSF facteur stimulant les colonies de granulocytes-macrophages (en anglais : "granulocyte-macrophage colony-stimulating factor") HC II cofacteur 2 de l'héparine (en anglais : "heparin cofactor II"); Hep héparine standard purifiée ayant un poids moléculaire moyen de l'ordre de 12 000 daltons et dite "héparine non-fractionnée" (le terme "non-fractionnée" étant utilisé dans la littérature pour distinguer Hep de LMWH), il s'agit d'un produit de référence utilisé en thérapeutique et dans les dosages biologiques ou immunologiques des facteurs de l'hémostase; IL cytokine appartenant à l'ensemble des interleukines IL 1 interleukine 1; IL 2 interleukine 2 IL 3 interleukine 3 IL 4 interleukine 4 IL 5 interleukine 5 IL 6 interleukine 6 IL 7 interleukine 7 IL 8 interleukine 8 IL 9 interleukine 9 IL 10 interleukine 10; IL 1 1 interleukine il;; IL 12 interleukine 12 IL 13 interleukine 13; ITP purpura thrombopénique idiopathique (en anglais : "idiopathic thrombocytopenic purpura") autres nomenclatures purpura thrombopénique immun (en anglais : "immune thrombocytopenic purpura") ou purpura thrombopénique auto-immun IU unité internationale ; pour l'activité antithrombotique ou anticoa gulante de Hep l'unité internationale est exprimée par rapport à la prothrombine (facteur II) et 1 IU correspond en général à 10 Ug de Hep ; pour les LMWH l'unité internationale est exprimée par rapport au facteur Xa et 1 IU (anti Xa) correspond en général à 10 yg de LMWH; LMWH héparine de bas poids moléculaire (en anglais : "low molecular weight heparin") ayant un poids moléculaire moyen de l'ordre de 3 000-5 500 daltons et dite "héparine fractionnée"; MEM milieu essentiel minimal aMEM MEM modifié: MK mégacaryocyte; pF4 facteur plaquettaire 4 (en anglais : "platelet factor 4"); SCF facteur de stimulation des progéniteurs médullaires (en anglais "stem-cell factor") SLE lupus érythémateux généralisé (en anglais systemic lupus erythematosous") ; il s'agit d'un ITP particulier que l'on rencontre chez la jeune femme TGF-ss facteur de croissance transformant en anglais " transforming growth factor ss"). Brève description du dessin Dans le dessin annexé, qui illustre l'invention, on a consigné un certain nombre de résultats d'essais qui ont été entrepris, à savoir la figure 1 relative à des essais comparatifs réalisés avec les ingrédients actifs des exemples 1 et 2 la figure 2 relative à des essais comparatifs réalisés avec les ingrédients actifs des exemples 3 et 4 : et, la figure 3 relative à des essais comparatifs réalisés avec les ingrédients actifs des exemples 5a-5d. Description détaillée de l'invention Par "composant glycosaminoglycane" ou GAG. on entendu ici une substance choisie parmi l'ensemble constitué par (i) les glycosaminoglycanes proprement dits, (ii) et leurs analogues tels que définis ci-après (ainsi que cela est le cas dans le document WO-A-93/23059 précité qui est introduit ici à titre de référence) et (iii) leurs mélanges. Les glycosaminoglycanes sont des substances polymères qui comprennent une répétition d'unités D-glucosamine et d'unités acide uronique (i.e. acide L-iduronique et/ou acide D-glucuronique), lesdites unités étant plus ou moins sulfatées. Ces substances sont antithrombotiques ou dépourvues d'effet antithrombotique. Les glycosaminoglycanes antithrombotiques comprennent (i) les substances hépariniques ayant un poids moléculaire moyen de l'ordre de 30 000 à 3 000 daltons. telles que Hep et LMWH, qui (a) fixent et activent AT III, et/ou (b) inhibent le facteur Xa, et (ii) les substances du type chondroïtine-sulfate qui activent HC II. En bref les glycosaminoglycanes antithrombotiques sont anticoagulants selon des mécanismes différents, leurs activités anticoagulantes étant plus ou moins intenses. Les substances hépariniques contiennent en général dans leur formule le fragment pentasaccharidique de structure I dans laquelle Y est S03- ou COCH3, et X est H ou S03-, ledit fragment pentasaccharidique étant le site spécifique de la fixation et de l'activation de AT III. Le fragment pentasaccharidique de structure I ci-dessus est celui qui est donné dans le Merck Index, 1 lé édition, 1989, page 735 (entrée No 4571, nHeparin 'D Les substances GAG qui activent HC Il comprennent les polymères du type acide chondroïtinesulfurique. tels que le dermatan sulfate (DS). Elles ont en général un poids moléculaire moyen de 10 000 à 90 000 daltons. Comme DS, elles comportent dans leur structure le motif unitaire répétitif disaccharidique de structure II: dans laquelle R1 est S03-, et R2 est H. Le motif unitaire disaccharidique de structure ll est celui qui figure, pour DS, dans le Merck Index, 11è édition, 1989, page 334 (entrée No 2217, "Chondroitin Sulfate ". Les substances GAG non-antithrombotiques comprennent notamment (i) les composés du type chondroitine-sulfate de structure m: dans laquelle (a) R1 = S03 et R2 = H, pour le chondroïtine-4-sulfate , et (b) R1 = H et R2 = SO3-, pour le chondroitine-6-sulfate ; et, (ii) la chondrosine et l'acide hyaluronique. Les analogues des glycosaminoglycanes comprennent des produits antithrombotiques et anticoagulants tels que (i) le pentosane sulfate qui répond à la structure répétitive IV : dans laquelle R est S03- , (ii) le dextrane sulfate, d'une part: et, des produits qui ne sont pas antithrombotiques ni anticoagulants, tels que (iii) I'acide alginique sulfaté, (iv) l'acide lactobionique sulfaté, (v) le polyvinyl sulfate, et (vi) le sucralfate qui présente la structure V suivante dans laquelle R est SO3[A12(OH)s], d'autre part. En pratique, le composant GAG selon l'invention sera avantageusement choisi parmi - les substances hépariniques ayant un poids moléculaire moyen de l'ordre de 3 000-30 000 daltons, notamment Hep, héparane sulfate et LMWH, - les chondroïtine-4-sulfate, chondroïtine-6-sulfate et dermatan sulfate (DS), - les substances choisies parmi l'ensemble constitué parmi le dextran sulfate, le pentosane polysulfate, I'acide alginique sulfaté, I'acide lactobionique sulfaté, le polyvinyl sulfate, le sucralfate, et - leurs mélanges. Le composant facteur de croissance mégacaryocytaire (F) est une substance qui intervient de façon " positive " c'est-à-dire qui stimule la mégacaryocytopoïese. Parmi les substances qui conviennent à cet effet, on peut mentionner notamment celles qui sont choisies parmi l'ensemble constitué par le facteur de croissance de fibroblastes (FGF), les interleukines 1 à 13 (IL1 à IL13), l'érythropoiétine (Epo), le facteur de stimulation des progéniteurs médullaires (SCF), le ligand de c-MPL, le facteur stimulant les colonies de granulocytes (G-CSF), le facteur stimulant les colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF) et leurs mélanges. Parmi celles-ci, on préfère plus particulièrement FGF, ses formes acide (aFGF) et basique (bFGF), SCF, ligand de c-MPL et leurs mélanges, les produits F les plus intéressants selon l'invention étant FGF, aFGF et bFGF. En particulier IL 3 et IL 6 stimulent la maturation des MK et des cellules progénitrices CFU-MK. En revanche FGF, aFGF, bFGF, SCF, stimulent la prolifération des MK et CFU-MK. ll existe d'autres facteurs qui interviennent dans les mécanismes de la mégacaryocytopoïèse en tant qu'inhibiteurs. n s'agit notamment de pF4 et TGF-B. Ces facteurs de croissance "négatifs" ne font pas partie du composant F selon l'invention. Dans la composition thérapeutique selon l'invention, le rapport pondéral R = composant GAG/composant F sera globalement compris entre 1/20 et 2000/1. De façon avantageuse on a intérêt de moduler ledit rapport pondéral en fonction des thrombopénies que l'on veut traiter. On a ainsi observé que pour avoir une synergie, il est important que: (a) R soit compris entre 1/20 et 500/1 pour les thrombopénies des groupes I et IIc, (ss) R soit compris entre 5/20 et 2000/1 pour les thrombopénies du groupe IIa, et (y) R soit compris entre 1/20 et 500/1 pour les thrombopénies du groupe IIb. De préférence, vis-à-vis des thrombopénies induites par Hep on recommande une association GAG/F dans laquelle GAG est une substance non-antithrombotique (par exemple le sucralfate) dès lors que LMWH peut provoquer, comme Hep, des thrombopénies. Si un effet anticoagulant est requis on administrera alors au patient de l'hirudine en plus de l'association GAG/F. La composition selon l'invention est utile vis-à-vis de toutes les thrombopénies. Elle est intéressante vis-à-vis des thrombopénies centrales par insuffisance médullaire du groupe I. d'une part et vis-à-vis des thrombopénies périphériques du groupe 11, d'autre part. Parmi les thrombopénies périphériques, elle est plus particulièrement efficace vis-à-vis des thrombopénies auto-immunes du groupe lIc, à savoir notamment dans le traitement des ITP, ainsi que celui des SLE qui sont des ITP immunologiques particuliers affectant les jeunes femmes. Eu égard à l'intervalle global 1/20 un apport de 10 à 500 pg/kg/j en composant GAG, et 1 à 200 yglkglj en composant F (PP) pour utilisation vis-à-vis des thrombopénies du groupe IIa, un apport de 50 à 2 000 ,ug/kg/j en composant GAG, et 1 à 200 Hg/kg/j en composant F ; et, (yy) pour utilisation vis-à-vis des thrombopénies du groupe IIb, un apport de 10 à 500 yg/kg/j en composant GAG, et 1 à 200 yg/kg/j en composant F. De préférence, on utilisera vis-à-vis de toutes les thrombopénies une dose de GAG inférieure ou égale à 300 Hg/kg/j. Cette dose de 300 ,ug/kg/j préférée selon l'invention est inférieure à la dose minimale anticoagulante (i.e. 500 yg/kg/j) du composant GAG antithrombotique, notamment Hep et LMWH. A toutes fins utiles il est rappelé que les doses usuelles de Hep sont de 2000 yg/kg/j dans le traitement curatif des thromboses veineuses, de 1000 yg/kglj dans le traitement des CIVD, et de 500 à 700 Hg/kg/j dans le traitement prophylactique des thromboses veineuses, et la dose usuelle de LMWH est de 1000 à 1500 yg/kg/j. La composition selon l'invention tient compte de la posologie précitée, elle pourra être présentée sous une forme unitaire pour une seule prise quotidienne, ou sous la forme de doses fractionnées pour plusieurs (2 à 3) prises quotidiennes. Le mode préféré d'administration de la composition selon l'invention est la voie injectable. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture qui va suivre de la description d'exemples de réalisation et d'essais comparatifs. Bien entendu l'ensemble de ces éléments n'est nullement limitatif mais est donné à titre d'illustration. Exemples 1 On a préparé des compositions injectables contenant, dans un véhicule liquide approprié pour l'administration de GAGs, un mélange de Hep et aFGF selon les concentrations suivantes Exemple la - Hep à la concentration de 10 ,ug/ml, - aFGF à la concentration de 1 yg/ml; Exemple lb - Hep à la concentration de 10 ,ug/ml, - aFGF à la concentration de 10 Hg/ml; Exemple lc - Hep à la concentration de 10 ,ug/ml, - aFGF à la concentration de 20 ,ug/ml; Exemple id - Hep à la concentration de 10 g/ml. - aFGF à la concentration de 50 yg/ml. Exemples 2 On a préparé des compositions injectables contenant. dans un véhicule liquide approprié pour l'administration de GAGs. un mélange de Hep et bFGF selon les concentrations suivantes Exemple 2a - Hep à la concentration de 10 g/ml, - bFGF à la concentration de 1 g/ml; Exemple 2b - Hep à la concentration de 10 Hg/ml. - bFGF à la concentration de 10 yg/ml; Exemple 2c - Hep à la concentration de 10 yg/ml, - bFGF à la concentration de 20 yg/ml; Exemple 2d - Hep à la concentration de 10 Hg/ml, - bFGF à la concentration de 50 ,ug/ml. Exemples 3 On a préparé des compositions injectables contenant dans un véhicule liquide approprié pour l'administration de GAGs. un mélange de LMWH (ENOXAPARINE ) et aFGF selon les concentrations suivantes Exemple 3a - LMWH à la concentration de 50 Hg/ml; - aFGF à la concentration de 1 g/ml ; Exemple 3b - LMWH à la concentration de 50 g/ml; - aFGF à la concentration de 20 Hg/ml. Exemples 4 On a préparé des compositions injectables contenant. dans un véhicule liquide approprié pour l'administration de GAGs, un mélange de LMWH (ENOXAPARINE ) et bFGF selon les concentrations suivantes Exemple 4a - LMWH à la concentration de 50 Hg/ml, - bFGF à la concentration de 1 g/ml; Exemple 4b - LMWH à la concentration de 50 Hg/ml - bFGF à la concentration de 20 Hg/ml. Exemples 5 On a préparé comme indiqué ci-dessus des compositions injectables contenant un composant GAG et un composant F dans un véhicule liquide approprié Exemple 5a - CS à la concentration de 50 g/ml, - GM-CSF à la concentration de 5 Hg/ml; Exemple 5b - CS à la concentration de 50 yg/ml. -GM-CSF à la concentration de 5 Hg/ml; Exemple 5c - Hep à la concentration de 10 yg/ml - SCF à la concentration de 5 g/ml ; Exemple 5d - Hep à la concentration de 10 yg/ml - GM-CSF à la concentration de 5 yg/ml; Exemple 5e - CS à la concentration de 50 yg/ml, - IL 6 à la concentration de 5 g/ml ; Exemple 5f -Hep à la concentration de 20 Hg/ml, - IL 6 à la concentration de 1 g/ml ; Exemple 5g - pentosane sulfate à la concentration de 50 ssg/ml, - ligand de c-MPL à la concentration de 10 g/ml ; Exemple 5h - sucralfate à la concentration de 100 Hg/ml, - Epo à la concentration de 20 g/ml ;; Exemple 5i - DS à la concentration de 50 Hg/ml, - Epo à la concentration de 20 yg/ml. Formation de colonies de mégacaryocytes Des souris mâles Balb/c (IFFA CREDO) agées de 8 semaines sont sacrifiées par élongation cervicale. Les cellules de la moelle osseuse sont prélevées des fémurs au moyen d'un milieu de base aMEM (EUROBIO) puis lavées deux fois par centrifugation (250 g; ; 10 minutes ; 22 C) dans aMEM. Les CFU-MK murins ont été testés au moyen d'un système en caillot plasmatique. En bref 2 x 105 cellules mononucléées de moelle sont cultivées sur boîtes de Pétri dans un volume total de I ml de milieu aMEM contenant 1 % d'albumine bovine sérique désionisée (SIGMA CHEMICAL Co.), 10 % de plasma bovin citraté (FLOW LABORATORY), 10-4M de 2-mercaptoéthanol, 0,34 mg de CaC12, 15 IU de pénicilline et 15 g de streptomycine. Dans ce milieu de culture on a également ajouté les mélanges GAG + F des exemples 1 à 4, les composants GAG seul ou F seul correspondants.Après 7 jours d'incubation à 37 C, les caillots ont été séchés avec du papier filtre, fixés avec 1 % de paraformaldéhyde, puis identifiés par coloration d'acétylcholinestérase un groupe d'au moins 3 MK constituant une colonie de MK. Les résultats consignés dans les figures 1 (moyenne de 3 essais par produit testé) et 2 (moyenne de 2 essais par produit testé) montrent que les mélanges Hep/aFGF des exemples la-ld, Hep/bFGF des exemples 2a-2d, LMWH/aFGF des exemples 3a-3b et LMWH/bFGF des exemples 4a-4b potentialisent de façon statistiquement significative la formation de colonies de mégacaryocytes par rapport à Hep ou LMWH, d'une part, et aFGF ou bFGF, d'autre part. Formation de colonies de CFU-MK Des cellules murines mononucléées de moelle osseuse à la concentration de 2 x 10-5 cellules/ml sont incubées en triple pendant 7 jours à 37"C avec 1 ml d'un milieu aMEM contenant 0,3 % d'agar (GIBCO), 10-4M de 2-mercaptoéthanol, 30 % de substitut de sérum et diverses doses de composant GAG et/ou composant F, afin de tester les mélanges des exemples 5a-5d par rapport aux composants desdits mélanges. Les résultats obtenus ont été consignés dans la figure 3 (moyenne de trois essais par produit testé) montrent que les mélanges CS/SCF (Ex 5a), CS/GM-CSF (Ex 5b), Hep/SCF (Ex 5c) et Hep/GM-CSF (Ex 5d) augmentent la formation de colonies de progéniteurs CFU-MK par rapport aux composants desdits mélanges respectifs. Essais cliniques Des essais cliniques ont été réalisés sur un ensemble de 30 patients adultes (17 femmes et 13 hommes, âgés de 18 à 60 ans) souffrant tous d'ITP et répartis au hasard en trois groupes de 10 personnes. On a procédé à la numération des MK, CFU-MK et plaquettes avant traitement. Le premier groupe (Gl) a été traité avec la prednisone (0,3 mg/kg/j) et a été utilisé en tant que groupe témoin. Le second groupe (G2) a été traité avec la même dose de prednisone (0,3 mg/kg/j) et par injection quotidienne sous-cutanée de 25 mg (i.e. 2500 IU) de Hep. Le troisième groupe (G3) a été traité avec la même dose de prednisone et par injection sous-cutanée quotidienne du mélange Hep + aFGF selon l'exemple la [10 mg (i.e. 1000 IU) de Hep + 1 mg de aFGF par jour]. Après I mois de traitement on a compté le nombre de MK, CFU-MK et plaquettes. Quand on considère la variation du nombre de MK, CFU-MK et plaquettes entre le début et la fin du traitement, on constate une amélioration statistiquement significative pour les groupes G2 et G3 par rapport au groupe témoin G 1. Par ailleurs, on a observé chez les patients les succès et échecs des traitements. Les résultats correspondants sont consignés dans le tableau I ci après. TABLEAU I TRAITEMENT DES ITP Groupe Nombre de succès Nombre d'échecs complets ou partiels G1 (témoin) 2 8 G2 7 3 G3 10 0 Les échecs des groupes G1 et G2 ont ensuite été soumis à un traitement comprenant, pendant I mois, I'injection quotidienne du mélange de l'exemple la (10 mg de Hep + 1 mg de aFGF) c'est-à-dire le traitement du groupe G3 sans prednisone. Pour ces 11 patients on a constaté 11 succès complets ou partiels. RE VENDICA TIONS 1. Composition thérapeutique caractérisée en ce qu'elle comprend, en association avec un excipient physiologiquement acceptable, un mélange de: (A) une substance choisie parmi l'ensemble constitué par les glycosaminoglycanes, leurs analogues et leurs mélanges, et (B) une substance choisie parmi l'ensemble constitué par les facteurs de croissance mégacaryocytaires et leurs mélanges. 2. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la substance (B) est choisie parmi l'ensemble constitué par le facteur de croissance de fibroblastes (FGF), les interleukines I à 13 (IL1 à IL13), l'érythropoïétine (Epo), le facteur de stimulation des progéniteurs médullaires (SCF), le ligand de c-MPL, le facteur stimulant les colories de granulocytes (G-CSF), le facteur stimulant les colonies de granulocytesmacrophages (GM-CSF) et leurs mélanges. 3. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la substance (B) est choisie parmi l'ensemble constitué par le facteur acide de croissance de fibroblastes (aFGF), le facteur basique de croissance de fibroblastes (bFGF) et leurs mélanges. 4. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la substance (A) est choisie parmi l'ensemble constitué par les substances hépariniques ayant un poids moléculaire compris entre 3000 et 30000 daltons. 5. Composition suivant la revendication 4, caractérisée en ce que la substance héparinique est choisie parmi l'ensemble constitué par l'héparine standard ayant un poids moléculaire de l'ordre de 12 000 daltons, les héparines fractionnées de bas poids moléculaire et leurs mélanges. 6. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la substance (A) est choisie parmi l'ensemble constitué par les chondroïtine-4sulfate, chondroïtine-6-sulfate, dermatan sulfate et leurs mélanges. 7. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la substance (A) est choisie parmi l'ensemble constitué par le dextran sulfate, le pentosane polysulfate, I'acide alginique sulfaté, I'acide lactobionique sulfaté, le polyvinyl sulfate, le sucralfate et leurs mélanges. 8. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient des quantités de substances A et B telles que le rapport pondéral R = A/B soit compris entre 1/20 et 2000/1. 9. Composition suivant la revendication 8, caractérisée en ce que ledit rapport pondéral R est compris entre 1/20 et 500/1. 10. Composition suivant la revendication 8, caractérisée en ce que ledit rapport pondéral R est compris entre 5/20 et 2000/1. 11. Utilisation d'un mélange stimulant la mégacaryocytopoïèse et comprenant: (A) une substance choisie parmi l'ensemble constitué par les glycosaminoglycanes, leurs analogues et leurs mélanges, et (B) une substance choisie parmi l'ensemble constitué par les facteurs de croissance mégacaryocytaires et leurs mélanges, pour la préparation d'un médicament destiné à une utilisation en thérapeutique vis-à-vis des thrombopénies. 12. Utilisation suivant la revendication 11, caractérisée en ce que ledit mélange des substances A et B est destiné aux thrombopénies centrales par insuffisance médullaire. 13. Utilisation suivant la revendication 11, caractérisée en ce que ledit mélange des substances A et B est destiné aux thrombopénies périphériques. 14. Utilisation suivant la revendication 13, caractérisée en ce que ledit mélange A/B est destiné aux thrombopénies auto-immunes telles que le purpura thrombopénique immun.