Brevet FR2732604A1 — publié le 19961011

DERIVES ET CONJUGUES DU MDP PRESENTANT UNE ACTIVITE STIMULATRICE DE LA FONCTION HEMATOPOIETIQUE ET COMPOSITIONS LES CONTENANT. L'invention est relative à une composition pharmaceutique capable de stimuler la fonction hématopoïétique de manière à mobiliser et faire apparaître dans la circulation des taux extrêmement élevés de cellules souches provenant de la moelle osseuse. Cette invention permet de proposer: 1) des thérapies antimyélotoxiques nouvelles; 2) des procédés nouveaux de récolte de cellules souches de la moelle osseuse permettant de remplacer les biopsies de moelle en vue: a) de greffes autologues ou homologues, b) d'utilisation dans les techniques de thérapie génique. La dite composition pharmaceutique comprend au moins un dérivé de MDP de formule générale (I) ciaessous, et dont un exemple particulièrement performant pour l'objet de l'invention est le Muradimétide de formule Nachrlur-L-Ala-D-Glu-[OCH3)-OCH3 ou MDPA-diméthyl ester. Les muramyl peptides et leurs dérivés esters sont une famille de molécules qui ont été décrites dans de nombreuses publications et de nombreux brevets depuis la première description du N-Acétyl-Muramyl-L A,lanyl-D-isoGlutamine (MDP pour muramyl dipeptide). Brièvement, ils sont capables d'exercer une grande variété d'activités biologiques incluant une activité immuno-adjuvante, une activité antiinfectieuse, une activité antitumorale, une activité anti-allergique et une régulation de la sécrétion des cytokines. Cependant, un certain nombre de ces muramyl peptides, s'ils peuvent présenter des activités biologiques tout à fait prometteuses, présentent souvent des effets secondaires ou des inconvénients qui en empêchent leur utilisation à titre de médicament, notamment des effets toxiques ou une difficulté de formulation du fait de leur faible solubilité dans des solutions aqueuses. Ils présentent en outre une grande variabilité dans leur spectre d'action. Très récemment, il a été montré que les muramyl peptides diesters de formule générale (I) ci-dessous et en particulier le Muradimétide, possèdent la propriété particulière d'être immunostimulants ce qui présente à la fois des avantages d'efficacité, de formulation, et de non toxicité, cumul d'avantages qui n'avait pas été observé pour d'autres dérivés du MDP ; en particulier, un immunomodulateur actif par administration par voie externe, notamment par voie orale, par aérosol, peut permettre d'envisager une utilisation plus large et plus souple de cet immunostimulant ; I'avantage de bonne tolérance se retrouve également quand ce dérivé est administré par voie générale. L'essentiel des propriétés déjà décrites sur les dérivés de MDP sont liées à un renforcement du système immunitaire humoral ou cellulaire. De façon surprenante, la présente invention résulte de la découverte selon laquelle certains types de dérivés du MDP représentés par la formule (I), (Il), (III) en association le cas échéant avec un composé de formule (IV) ou les composés de formules (V) et (VI) sont capables d'augmenter le taux d'éléments figurés normaux et immatures du sang et en particulier de neutrophiles dans le sang circulant, notamment après administrations de doses d'AZT susceptibles de diminuer considérablement le taux des leucocytes circulants. En effet, après administration de la composition pharmaceutique on observe dans la circulation une augmentation de leucocytes normaux accompagnée d'une très forte augmentation de myelocyteslpromyelocytes suivie d'une augmentation des neutrophiles et plus tardivement des lymphocytes.De façon tout à fait remarquable, cet effet s'observe très fortement même après un traitement combiné faisant intervenir des doses hautement myelotoxiques d'AZT. Toutes les cellules sanguines dérivent de cellules souches communes dont l'origine est la moelle osseuse. Avant d'atteindre leur stade final de différenciation, ces cellules passent par différentes étapes: cellules souches pluripotentes pouvant se différencier soit en prolymphocytes T ou B, soit en cellules souches des lignées érythrocytaire, myélocytaire, granulocytaire et myélocaryocytaire. A ces différentes étapes intermédiaires, elles ne sont pas discernables morphologiquement et sont désignées par les termes promyelocyte/myelocyte pour les plus jeunes et métamyélocytes pour celles les plus proches de la différentiation. Dans la suite du texte, I'ensemble de ces cellules non différenciées sera désigné par CSH pour cellules souches hématopoïétiques . A l'état normal le taux des CSH est de l'ordre de 1% des cellules blanches présentes dans le sang. II est intéressant d'activer l'hématopoïèse et de mobiliser des CSH dans les trois cas suivants: 1) pour contrecarrer les effets myélotoxiques de certaines drogues afin de maintenir un taux normal de cellules sanguines (en particulier de neutrophiles), 2) pour remplacer des biopsies de moelle osseuse par la récolte de taux élevés de CSH dans le sang circulant en vue de greffe homologue ou autologue de cellules de moelle, 3) pour obtenir à partir du sang circulant un taux élevé de CSH afin de les utiliser comme vecteurs pour la réalisation de certaines thérapies géniques. 1) Traitement anti-myélotoxique. Certains traitements ou médicaments entraînent des effets myélotoxiques, tels les chimiothérapies du cancer ou du SIDA, des immunothérapies ou des radiothérapies, conduisant à un dysfonctionnement de la fonction hématopolétîque et augmentant ainsi dramatiquement les risques d'infections intercurrentes. La composition pharmaceutique de l'invention permet de s'opposer à la diminution des cellules du système immunitaire, résultant de cette myélotoxicité et en particulier des neutrophiles. En outre, certains traitements qui utilisent l'immunothérapie, notamment par les cytokines, peuvent également entraîner un effet cytotoxique pour lequel les compositions de l'invention peuvent jouer un rôle d'antagoniste. 2) Obtention de cellules permettant de pratiquer des greffes de moelle osseuse. Les traitements anticancéreux par chimiothérapie sévère ou par radiothérapie entraînent une destruction des cellules du sang et des cellules du système immunitaire. Dans ces cas, on reconstitue le système hématopolétique par greffe de cellules de la moelle osseuse. On pratique des greffes autologues quand le cancer affecte des cellules autres que celles de la moelle et dans ce cas les prélèvements se font chez le patient lui-même avant le traitement destructeur. On pratique des greffes homologues (ctest-à-dire en utilisant des cellules provenant d'un donneur compatible) quand les cellules de la moelle sont elles-mêmes cancéreuses. Dans les deux cas, il est extrêmement intéressant de pouvoir enrichir la moelle osseuse en cellules souches mais surtout de pouvoir en obtenir dans le sang circulant en nombre suffisamment élevé pour faciliter leur utilisation comme greffons. En effet à l'heure actuelle, I'utilisation du sang pour la préparation de greffons enrichis en CSH demande des prélèvements nombreux et importants et donc étalés sur une longue période; de plus il faut mettre en pratique une préparation pénible pour le malade et pour le donneur car l'enrichissement en CSH se fait par administration de cytokines coûteuses et parfois mal tolérées (GM-CSF) suivies de prélèvements sanguins nombreux et importants, I'ensemble de traitements nécessitant à chaque fois une hospitalisation. La composition pharmaceutique de l'invention permet d'obtenir le matériel nécessaire aux greffes de moelle chez des sujets ambulatoires et après quelques jours de traitement seulement, car elle elle est capable d'induire dans le sang, après environ 4 jours de traitement, une multiplication par 200 du nombre de CSH. 3) Obtention de cellules souches aisément purifiables utilisables pour la thérapie génique. L'utilisation de certaines formes de techniques de thérapie génique dépendra de la possibilité d'obtenir des CSH en grande quantité dans le sang circulant. Cette obtention est possible grâce à la composition pharmaceutique de l'invention permettant d'obtenir un pourcentage extrêmement important de CSH dans le sang, alors que ces cellules sont très difficiles à purifier à partir de la moelle osseuse. Les expériences précliniques et les essais cliniques de thérapie génique ont indiqué qu'il était nécessaire d'utiliser des cellules souches qui ont une longue durée de vie, un haut pouvoir d'expression et qui se répartissent dans tout l'organisme. II est très généralement admis que les CSH sont des vecteurs de gènes particulièrement intéressants soit pour contrecarrer des déficits immunitaires telle la maladie de Gaucher ou les cas de déficits immunitaires profonds (SCID pour Severe Combined Immune Deficiencies), soit pour s'opposer au développement de cancers tels que myélome, leucémie, cancer du sein ou de l'ovaire, etc..., soit pour induire une résistance aux maladies infectieuses particulièrement le SIDA. Pour répondre à ces objectifs, il est donc indispensable de disposer d'un nombre important de CSH aisément purifiables à partir du sang circulant par les techniques habituelles de séparation cellulaire et c'est justement ce que permet la composition de l'invention ou les médicaments la contenant. La composition de l'invention permet d'envisager le développement de l'utilisation des cellules du sang circulant pour reconstituer la fonction hématopoïétique après destruction cellulaire grâce à une multiplication, qui peut atteindre un facteur 200, du pourcentage de CSH circulantes, alors qu'en l'absence de traitement, on ne peut en déceler plus de 1%. La présente invention, qui résulte de cette découverte des nouvelles propriétés de certains dérivés du MDP, est relative à une nouvelle composition pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter l'effet myélotoxique de certains traitements ou maladies eVou stimuler la fonction hématopolétique caractérisée en ce qu'elle contient comme principe actif au moins un composé de la formule suivante (I): avec R = H ou CH3 X = L-ALa ou L-Thr Ra = NH2 ou 0(CH2)xH avec x = 1 à 4 Ry = OH (sauf si Ra = NH2) ou O(CH2)xH avecx = 1 à 4 ou la muroctasine de formule (II) suivante: NacOur-L.Ala-D-isoGln-NS stearoyl-L-Lys. ou le MTP-PE de formule (III) suivante: Nac-Mur-L-ALa-D-isoGln-L-alanyl-2 (1', 2'dipalmitoyl-snglycero-3'- phosphoryl)-ethylamide-mono-sodium) Un exemple particulièrement performant de composé répondant à la formule (I) est le Muradimétide de formule: Nac-Mur-L-Ala-D-Glu[OMe]-OMe. Cette composition permet de restaurer un taux normal ou supérieur à la normale des éléments figurés du sang, notamment les erythrocytes et les plaquettes. L'effet recherché de ces composés est obtenu dans une composition où le dosage des composés de formule (I), (II) ou (III) est tel qu'il permet une administration par voie orale à des doses de 0,1 à 5 mg par kg de poids corporel chez l'homme ou l'animal ou par voie générale dans laquelle le principe actif est dosé de telle façon qu'il permet une administration de 0,05 à 0, 5 mg par kg de poids et par dose. Les traitements par l'AZT présentent l'inconvénient de la myélotoxicité. De façon surprenante, I'administration conjointe d'un dérivé de formule (I) ou (II) ou (III) avec un dérivé de nucléoside de formule générale (IV) ciXessous conduit à une augmentation d'un facteur 10 à 300, et souvent autour de 200, du taux de CSH dans le sang et les compositions de l'invention contiennent de façon avantageuse, outre un dérivé de formule (I), (Il), (III), un dérivé de formule (IV). B étant une base purique ou pyrimidique R = H, N3, ou un halogène. Un exemple de ce dérivé, est le 3'-Azido-3'-desoxy-thymidine (AZT). L'association peut également se faire avec tous les nucleosides présentant des activités myélotoxiques et anti-rétrovirales similaires à celle de l'AZT et notamment des nucléosides contenant du ribose et non du desoxyribose. Aussi souvent que nous parlerons dans la suite de cette description de l'AZT l'homme du métier saura que dans des utilisations similaires d'autres nucléosides peuvent être utilisés et être considérés comme équivalents de l'AZT. Quand l'Ait est associé au dérivé du MDP dans une composition de l'invention, cette dernière en contient une quantité permettant son administration à une dose comprise entre 1 et 150 mg/kg par voie orale ou par voie générale, cette dose joumalière pouvant être administrée en une fois ou fractionnée. L'administration simultanée de dérivés de MDP de formule (I) (II) ou (III) avec un dérivé de formule (IV) peut être réalisée: - soit au sein d'un médicament contenant au moins ces deux composés, un tel médicament faisant partie de l'invention, - soit par l'administration simultanée de deux médicaments dont chacun contient un type de composé, administration simultanée signifiant que les composés peuvent exercer leurs effets pendant au moins une période de recouvrement, - soit par la réalisation de conjugués associant dans une même molécule les composés de formule (I) et (IV). Par administration simultanée il est bien entendu que l'administration peut être faite dans une même formulation par voie générale ou par voie orale ou au contraire dans deux formulations différentes et administrées dans un intervalle de temps suffisament réduit pour que les effets de l'un ou l'autre principe actif se fasse sentir simultanément. L'invention est également relative à des conjugués présentant un effet antimyelotoxique ou permettant de mobiliser les cellules souches hématopoïétiques dans le sang circulant caractérisé par l'une des formules suivantes: avec R = H ou CH3 Ra = NH2 ou 0(CH2)"H avec x = 1 à 4 X = L-Ala ou L-Thr x =0, ou 2 Y = un résidu d'acide aminé avec A étant un nucléoside comportant, en position 5', du résidu désoxyribose soit une fonction hydroxyle, soit une fonction amine, et en position 3' un hydrogène, un halogène ou un groupement azide. Un conjugué avantageux répondant à la formule (V) est celui où: R = CH3 X = L-Ala x = 1 Y = L-Ala R&alpha;=OCH3 Un autre conjugué de l'invention répond à la formule: dans lequel X = L-Ala ou L-Thr Y est un bras, tel qu'un acide dicarboxylique notamment un résidu succinyle, Z = OouNH, R = HouCH3. Ra et Ry ont la signification donnée dans la formule (I), avec A étant un nucléoside comportant, en position 5', du résidu désoxyribose soit une fonction hydroxyle, soit une fonction amine, et en position 3' un hydrogène, un halogène ou un groupement azide. Un conjugué avantageux répondant à la formule (Vl) est celui où: X = L-Ala R = CH3 Ra = OCH3etRy=OCH3 Y = COCH2)2-CO Z=O A est l'AZT. La présente invention est également relative aux compositions pharmaceutiques utilisables comme antagonistes des effets myélotoxiques de certains traitements ou médicaments caractérisée en ce qu'elle contient comme principe actif un conjugué de formule V ou VI en association avec un véhicule pharmaceutique acceptable pour une administration per os ou pour une administration par voie générale. Ces composés sont nouveaux et leurs procédés de synthèses font partie de l'invention. Pour synthétiser les composés de formule (V), les fonctions amines ou hydroxyles existant éventuellement dans le résidu de base purique ou pyrimidique d'un 2'-desoxyribonucleoside sont temporairement masquées par des groupements de protection temporaire ; la fonction en position 5' du dérivé nucléosidique peut être éventuellement transformée en fonction amine par l'intermédiaire d'un groupement mesyle modificable en un azide finalement hydrogénable en fonction amine; la fonction en position 3' du dérivé nucléoside peut être soit un hydrogène, un halogène ou un groupe azide, soit un groupe mesyle ultérieurement remplacable par des nucléophiles tels que azide ou halogène. La fonction hydroxyle ou amine en position 5' du dérivé nucléosidique est couplée notamment par une méthode aux anhydrides mixtes ou bien au carbodiimide en utilisant éventuellement certains additifs tels que l'imidazole, l'hydroxybenzotriazole ou encore le DMAP (Di-methylaminopyridine), à un dérivé de Muramyl-peptide de formule (I) dans laquelle Ry est un hydroxyle ou un résidu d'acide aminé. Si Ry est un résidu d'acide aminé, il est possibe d'effectuer d'abord le couplage du dérivé nucléosidique avec l'acide aminé protégé, puis le couplage après déprotection, à un dérivé muramyl-peptide de formule (I) dans laquelle la fonction y-carboxyle du résidu glutamyle est libre. En fin de procédure, pour obtenir les conjugués de type (V), les groupements de protection temporaires qui peuvent exister sont éliminés, et, éventuellement, le groupement mesyl en position 3' transformé en un azide ou un halogène. Un variante consiste à coupler (i) la fonction hydroxyle ou amine en position 5' du dérivé nucléosidique avec un acide aminé protégé, puis par étapes successives, selon des techniques utilisées en synthèse peptidique, (ii) un dérivé de l'acide D-glutamique convenablement protégé, (iii) un dérivé protégé de la L-alanine ou de la L-thréonine, (iv) un dérivé protégé de l'acide N acétylmuramique. En fin de procédure, pour obtenir les conjugués de type (V), les groupements de protection temporaires sont finalement éliminés et, éventuellement, le groupement mesyle en position 3' transformé en un azide ou en un halogène. Pour synthétiser un composé de formule (Vl), les fonctions amines ou hydroxyles existant éventuellement dans le résidu de base purique ou pyrimidique d'un 2'-désoxyribonucléoside sont temporairement masquées par des groupements de protection temporaire; la fonction en position 5' du dérivé nucléosidique peut être éventuellement transformée en fonction amine par l'intermédiaire d'un groupement mesyle modifiable en un azide finalement hydrogénable en fonction amine. La fonction en position 3' du dérivé nucléoside peut être soit un hydrogène, un halogène ou un groupe azide, soit un groupe mesyle ultérieurement remplacable par des nucléophiles tels que azide ou halogène. La fonction hydroxyle ou amine en position 5' du dérivé nucléosidique est couplée notamment par une méthode aux anhydrides mixtes ou bien au carbodiimide en utilisant éventuellement certains additifs tels que l'imidazole, I'hydroxybenzotriazole ou encore le DMAP, à un dérivé Muramyl-peptide de formule (Vl) dans laquelle: I'hydroxyle anomérique (cri) est ou non protégé temporairement, Zest NH ou O, Y est un résidu acide di-carboxylique, notamment un résidu succinyle. De tels dérivés Muramyl-peptides sont préparés à partir de dérivés Muramyl-peptides de formule (I), dont le mode de synthèse est désormais bien connu, avec l'hydroxyle anomérique (C1) protégé temporairement par un benzyl glycoside hydrogénolysable ou tout autre groupement adéquat, et les hydroxyles en position 4 et 5 protégés par des groupements benzylidènes hydrogénolysables ou isopropylidènes acidolysables. L'élimination de cette protection temporaire permet soit de libérer la fonction hydroxyle primaire (C6) et de la substituer par un groupe succinyle par exemple, soit de la transformer en fonction amine par l'intermédiaire d'un groupement mesyle modifiable en azide finalement hydrogénable en fonction amine. Cette fonction amine est alors substituée par un groupe succinyle par exemple. En fin de procédure pour aboutir aux conjugués de type (VI), les groupements de protection temporaires qui peuvent exister sont éliminés et, éventuellement, le groupement mesyle en position 3' transformé en un azide ou un halogène. La présente invention est également relative à l'utilisation d'un composé de formule (I), (II), (III) (V) ou (VI) dans la fabrication d'un médicament antagoniste des effets myélotoxiques de certains traitements ou médicaments ou permettant la stimulation de la fonction hématopoïétique dans la circulation générale seul ou en association avec un composé de formule (IV). Par association on entend que les deux composés sont administrés soit dans la même composition pharmaceutique, soit dans une composition différente, les deux compositions étant alors administrées à l'homme ou à l'animal dans un intervalle de temps tel que au moins une partie des effets de l'un et de l'autre composant se produisent simultanément. Dans certains cas il est nécessaire de disposer à un temps donné de très fortes concentrations de CHS dans le sang ; il est alors opportun de donner pendant un intervalle de temps court des doses d'AZT supérieures aux doses habituelles qui sont préconisées pour des administrations répétées sur de longues périodes; il est à noter en outre que les doses d'AZT administrées sont similaires et se situent dans les memes gammes que l'administration soit par voie parentérale, par voie orale ou par voie générale. Cette utilisation est caractérisée en ce que le composé de formule (I) est le Muradimétide de formule NacOur-L-Ala-D-Glu[OMe]-OMe, ou en ce que le dérivé de formule (II) est la muroctasine ou en ce que le dérivé de formule (III) est le MTP-PE. Le composé de formule (IV) est la 3'-Azido-3'-desoxy-thymidine (Ait) dans une utilisation préférée de l'invention. Dans l'utilisation des composés de l'invention, il peut être particulièrement avantageux de réaliser un conjugué associant les caractéristiques fonctionnelles des dérivés de MDP de formule (I) ou (II) ou (III) et des dérivés de nucléoside de formule (IV); I'invention, qui est relative aux composés de formule (V) ou (VI) est également relative à leur utilisation dans la fabrication d'un médicament ou d'une composition pharmaceutique utilisable comme antagoniste des effets myélotoxiques de certains traitements ou médicaments. Une telle utilisation est particulièrement recommandée pour contrecarrer les effets myélotoxiques de certaines chimiothérapies pour traiter le sida ou certains cancers. Une telle utilisation permet au médicament en question d'enrichir le sang circulant en cellules souches hématopoïétiques ; cet enrichissement est particulièrement avantageux soit lorsque l'on souhaite pratiquer des greffes de moelle osseuse, soit des autogreffes, soit des allogreffes, ou bien encore pour utiliser les CSH pour pratiquer des thérapies géniques, car comme il a été expliqué plus haut les cellules totipotentes que sont les CSH sont les meilleurs candidats pour une bonne expression d'un gène hétérologue après réinjection au patient par voie générale. Les exemples suivants sans caractère limitatif sont destinés à montrer l'effet tout à fait surprenant d'un des composés de la famille dans leur nouvelle utilisation. Ils sont effectués chez la souris, et illustrés par les tableaux 1, 2 et 3 qui sont placés dans le texte et par les figures 1 à 8 dont la signification est décrite ciXessous, illustrent sans ambiguïté l'effet particulier d'un des composants de la classe couverte par la formule (I) à savoir le Muradimétide, à la fois sur l'effet antimyélotoxique et sur la mobilisation des CSH dans la circulation sanguine, cet effet n'étant pas retrouvé chez d'autres dérivés de MDP comme le MDPA ni par des lymphokines utilisées habituellement pour stimuler les myélocytes tel le mGM-CSF. La figure 1 montre l'effet d'un traitement per os des souris avec du Muradimétide en association avec des doses d'Ait non myélotoxiques (5 mg par kg) (Fig 1A) ou myélotoxiques (40mg par kg) (Fig 1B) sur le changement des leucocytes circulants. La figure 2 représente le même type de courbe sur la numération des neutrophiles ; la figure 2A représente une expérience réalisée avec une dose non myélotoxique d'AZT (5 mg par kg) et la figure 2B avec une dose myélotoxique d'AZT (40 mg par kg). La figure 3 représente le meme type de courbe sur la numération des myelocytes. La figure 3A se rapporte à une dose non myelotoxique d'AZT (5mg/kg) et la figure 3B à une dose myelotoxique (40 mglkg). La figure 4 représente les effets comparés du Muradimétide et du mGM-CSF sur la numération des neutrophiles circulants après administration d'AZT. La figure 5 représente la même comparaison sur la numération des leucocytes circulants. La figure 6 représente la même comparaison sur la numération de monocytes circulants. La figure 7 représente la même comparaison sur la numération des myélocytes circulants. La figure 8 représente l'effet d'un traitement per os des souris avec du Muradimétide sur le changement de la numération myélocyte dans le sang circulant induite suite à une administration intra-veineuse d'AZT, deux dérivés de MDP étant comparés: le MDPA (Nac-Mur-L-ALa-D-Glu) et le Muradimétide. Exemple I - Activité du Muradimétide administré seul Le tableau 1 ci-dessous représente les numérations des leucocytes, neutrophiles, lymphocytes et myelocytes en fonction du temps après traitement par le Muradimétide seul administré à la dose de 25 mglkg. Le traitement est effectué pendant 4 jours consécutifs par injection intra Tableau 1 Effets de 4 jours de traitement consécutifs des souris par voie veineuse avec le Muradimétide (25 mgn Jour de la Nbre de Nbre de Nbre de Nbre de mesure Leucocytes Neutrophiles Lymphocytes Myélocytes x 105/ml) (x105/ml) (x 105/mol) (X 105ml) (x 104/ml) 50+14 11+3 38+12 7+6 2 52+12 10+3 41 +17 8+8 3 52+17 13+5 35+13 40+5* 4 52+15 12+4 34+8 72+27' 7 50+13 12+4 38+10 4+4 Moyenne + déviation standard (3 souris par groupe). * Significativement plus élevée que les valeurs au jour 0. Ce tableau indique clairement que le Muradimétide administré seul induit aux jours 3 et 4 une augmentation du nombre de myélocytes circulants qui est hautement significative. Exemple 2 - Effet d'un traitement par le Muradimétide sur l'augmentation du nombre de neutrophiles, leucocytes et myélocytes après un traitement par l'AZT. Le traitement par l'AZT seul induit classiquement une diminution du nombre des leucocytes et des neutrophiles circulants. Cette diminution est suivie par une reconstitution intervenant environ 4 à 7 jours après le début du traitement. Quand le Muradimétide a été administré par voie générale ou par la voie orale après un traitement par 40 mg/kg d'AZT, il n'y a pas de baisse du nombre de cellules et au contraire il y a une multiplication par au moins 1,5 du nombre de leucocytes et un triplement de celui des neutrophiles et cela dès après 4 jours. Les résultats sont représentés dans le tableau 2 ci-dessous. Des souris CDI mâles (5 par groupes) ont été injectées avec de l'Ait à la dose de 40 mg par kg aux jours 0 à 3. Le Muradimétide est administré les mêmes jours à la dose de 10 mg par kg en intraveineux ou de 50 mg par kg per os. Les comptages cellulaires sont réalisés au jour 0 (avant le traitement), et aux jours 3 et 4. Tableau 2 : Effet du traitement des souris par le Muradimétide par voie veineuse ou per os sur les modifications des comptages cellulaires induites par administration d'AZT (40 mg/kg) par voie veineuse: Traitement Jour de la Leucocytes Neutrophiles Myelocytes (jours 0-3) mesure (x 106xml (x106/ml) (x104/ml) eau physiologique O 5.9 + 1.5* 1.5 + 0.4 14 + 8 Muradimétide i.v; 6.0 + 3.4 2.0 + 1.3 5+7 (îOmgflcg) (NS) (NS) Muradimétide p.o 4.8 + 0.4 1.4 + 0.5 14 + 13 (so ma/Ka) (NS) (NS) (NS) eau physiologique 3 4.2 + 0.5* 1.0 + 0.2 2 + 4 Muradimétide i.v; 5.9+2.9 1.5 + 0.8 145 + 83 (10mg/kg) (NS) (NS) (0.0143)) Muradimétide p.o 6.1 # 1.4 1.6 # 0.5 123 # 55 (50 mg/Kg) (NS) (NS) (0.0090)) eau physiologique 4 5.3 + 1.0* 1.3 + 0.5 33 + 14 Muradimétide i.v; 7.6 + 1.6 4.6 + 1.5 117 + 46 (1 Omgfl (0.0143) (0.0143)) (NS) Muradimétide p.o 8.1+2.9 4.3 + 2.47 138 + 59 (50 mg/Kg) (NS) (0.0472) (0.0090) moyenne + déviation standard (5 souris par groupe) pas significativement différent du groupe traité par l'eau physiologique Le tableau 2 montre l'augmentation spectaculaire du pourcentage de myélocytes ou de promyélocytes en présence de Muradimétide quel qu'en soit le mode d'administration. Exemple 3 - Mobilisation des CSH après un traitement combine per os par l'AZT et le Muradimétide. Le tableau 3 ci-dessous indique l'effet d'un traitement per os des souris avec du Muradimétide avant, en même temps ou après l'AZT administré à 50 mg par kg, sur le nombre de myélocytes circulants testés 24 heures après 4 administrations quotidiennes. Tableau 3 Temps s du traitement o.o. ar AZT Muradimetide n = Nbre de myélocytes circulants p- (50mg/Kg) (25mg/Kg) (x 104/mol) Value Oh 5 6 + + Oh 5 17 + 15 NS Oh Oh 5 215 + 51 0.0090 Oh -4h 5 194 + 50 0.0090 -4h Oh 5 187 + 42 0.0090 Le nombre moyen de myélocytes circulant avant le traitement se situe entre 3 et 15 X 104 cellules par ml dans les 5 groupes. La NS signifie que la différence n'est pas significative. Ce tableau confirme que l'augmentation des myélocytes circulants est d'environ 200 quand il y a effet conjoint de l'AZT et du Muradimétide. Les deux constituants de la combinaison ont été administrés per os soit simultanément soit à des temps séparés. Exemple 4 - Effet d'un traitement per os des souris avec du Muradimétide en association avec des doses non myélotoxiques ou myélotoxiques d'AZT sur les changements des comptes de leucocytes et de neutrophiles circulants. Cet effet est indiqué sur les figures 1 et 2, les figures 1A et 2A représentant une dose non myélotoxique d'AZT et les figures 1B et 2B représentant une dose myélotoxique d'AZT. Dans cette expérience des souris Swiss femelles ont été injectées par voie intra-veineuse avec de l'AZT à la dose de 5 ou de 40 mg par kg aux jours 0, 1, 2 et 3. Sur chacun des 4 jours et 4 heures avant l'administration d'AZT, des groupes de souris constitués de 5 individus ont reçu per os soit du tampon soit du Muradimétide à la dose de 25 mg par kg. Les comptages cellulaires sont effectués aux jours 0, 1, 2, 3, 4 et 7. Les étoiles au-dessus des histogrammes indiquent que les résultats obtenus sont significativement différents des niveaux observés avant le traitement. La figure 3 représente la même expérience dans laquelle les myélocytes sont comptés. Dans ces trois figures 1, 2 et 3, il est clair que l'effet est maximum 4 jours après le début du traitement. Ceci s'explique aisément par le fait que les leucocytes et les neutrophiles ont tendance après cette stimulation à retrouver leur niveau normal, et pour ce qui concerne les myélocytes, le retour au niveau de base signifie que cette stimulation artificielle est tout à fait intéressante pour les cas cités ci-dessus (thérapie génique, greffe de moelle, autogreffe, etc... ). La disparition de cet effet est normale du fait que les CSH se différencient en cellules matures etlou s'installent dans les organes. Exemple 5 - Comparaison des effets du Muradimétide et du GM CSF. Lorsque les souris ayant reçues un traitement par l'AZT sont traitées par du GM-SCF dans les mêmes conditions que celles utilisées pour le Muradimétide, les comptages de leucocytes et de neutrophiles ne présentent pas d'augmentation contrairement à ce qui est observé lorsque la combinaison Ait-Muradîmétide est utilisée. Par contre, on observe une augmentation du nombre des monocytes. Les figures 4, 5, 6, et 7 indiquent l'effet d'un traitement des souris avec du Muradimétide ou avec du mGM CSF sur les changements respectivement dans les neutrophiles circulants, dans les leucocytes circulants ou dans les monocytes circulants ou dans les myélocytes circulants après une administration intraveineuse d'AZT. Les souris Swiss femelles ont été traitées par voie intra-veineuse avec 40 mg par kg d'Ait aux jours 0, 1, 2 et 3. Les groupes de souris (5 par groupe) reçoivent 4 heures avant l'AZT soit de l'eau physiologique, soit du Muradimétide à 25 mg par kg ou du mGM-CSF à 125 pg par kg par voie intraveineuse. Les comptages sont réalisés aux jours 0, 2, 3, 4 et 8. Les étoiles au-dessus des histogrammes indiquent qu'il existe une différence significative du comptage au regard des valeurs obtenues avant le traitement au jour 0. On voit donc que si le mGM-CSF est capable d'entraîner une augmentation du nombre de monocytes1 le Muradimétide a un effet nettement marqué sur les neutrophiles et les leucocytes. De plus le Muradimétide contrairement au GM-CSF induit une très forte élévation des CSH dans le sang. L'effet du Muradimétide comparé à celui du mGM-CSF est explicite sur la figure 7 qui montre clairement que le Muradimétide mobilise des CSH dans des conditions où le GM-CSF ne le fait pas. Exemple 6 - Comparaison de l'effet du Muradimétide avec un autre dérivé du MDP. Le dérivé utilisé pour mettre en évidence l'effet particulier du Muradimétide est le MDPA. La figure 8 indique l'effet sur des souris d'un traitement per os sur les changements de la numération de myélocyte induite suite à une administration intraveineuse d'AZT. Dans cette expérience, les souris swiss femelles ont été traitées de façon intraveineuse avec 40 mg par kg d'AZT aux jours 0,1, 2 et 3. Des groupes de 5 souris ont reçu aux mêmes quatre jours et 4 heures avant l'AZT soit de l'eau physiologique, soit du MDPA à la dose de 25 mg par kg ou du Muradimétide par voie orale à la dose de 25 mg par kg. Les comptages de myélocytes ont été réalisés aux jours 0, 2, 3, 4 et 8. Les étoiles au-dessus des histogrammes ont la même signification que dans les diagrammes précédents. II apparaît clairement que la propriété des dérivés de formule (I) et en particulier du Muradimétide n'est pas une propriété commune à tous les muramyl peptides. Ceci est particulièrement bien démontré par la comparaison avec le MDPA dont le Muradimétide est le dérivé diester. Exemple 7 - Synthèse de N-acetyl-muramyl-L-alanyl-Dglutaminyl asnéthyl ester y-L-alani ne 3'azido-3'-deoxythymidine (formule V). Cette synthèse comprend les étapes suivantes: a) Synthèse de Boc-L-alanine 3'-azido-3'-deoxythymidine (1). A 189mg (Immole) de Boc-L-alanine dissous dans 20 ml de dimethylformamide anhydre contenant 102 mg (Immole) de dimethylamino-pyridine sont ajoutés 206 mg (I mmole) de N-N' dicydohexylcarbodiimide. 267 mg (1mol) de 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT) sont ajoutés au mélange réactionnel qui est agité pendant 24 heures à la température ambiante. Après filtration du précipité de dicyclohexylurée, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le produit est finalement obtenu après purification sur colonne de gel de silice a-benzyl-N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamique di-methyl ester. b) synthèse de L-alanine 3'-azido-3'-deoxythymidine, chlorhydrate (2): A 260 mg (0,6 mmmole) de (1) sont dissous dans 2ml d'une solution 1N d'acide chlorhydrique dans l'acide acétique glacial. Après 30 minutes à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré à sec. Le résidu obtenu est repris dans de l'acétone et concentré à sec. Le processus est répété plusieurs fois et le résidu, desséché sous vide, est directement utilisé à l'étape suivante: 225mg (100%). c) synthèse de N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutaminyl a-méthyl ester y-Lalanine 3'-azido-3'-deox-thymidine(3) (formule V): A 507 mg (1 mole) de N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamine a-méthyl ester ( ) en solution dans 10 ml de dimethylformamide anhydre sont successivement ajoutés à -15 C 0,11 ml (1 mmole) de N-méthylmorpholine et 0,13 ml (1mmole) de chlorocarbonate d'isobutyle. Après 5 minutes sont ajoutés 225 mg (0,60 mmole) de (2) en solution dans 5 ml de diméthyl formamide refroidie à -15 C, contenant 0,11 ml de N-méthylmorpholine. Le mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à -15"c puis concentré sous vide.Le produit est finalement obtenu après purification sur colonne de Lichroprep RP18 (Merck) par élution dans un mélange d'éthanol et d'eau. (3) est finalement obtenu par Iyophilisation de sa solution aqueuse: 272 mg (60%). Exemple 8 - Synthèse de 64 > -(31-azido4'-deoxythymidine)-N- acetyî-muramyl-L-alanyl--D-giutamique diméthyl ester (formule VI). a) synthèse de a-benzyl-N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamique dixethyl ester (1): 1,4 g (2 mmole) de a-benzyl-4,6-OBzL-N-acetyl-muramyl-L-alanyl-Dglutamique di-methyl ester (.) sont traités à reflux en présence de 100 ml d'acide acétique aqueux à 560% jusqu'à dissolution complète. Le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le résidu obtenu est repris et concentrés successivement dans de l'eau, du toluène et du méthanol, puis désséché sous vide. (1) est purifié sur colonne de gel de silice par élution avec un mélange de chloroforme et de méthanol: 305 mg (50%). b) Synthèse de 6-0-succinyl-N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamique dimethyl ester (2): A 300 mg (1mmole) de (1) dissous dans 10 ml de pyridine anhydre. 44 mg (4 mmoles) d'anhydride succinique. Le mélange réactionnel est agité à température ordinaire pendant 4 jours, puis concentré sous vide. Le résidu obtenu est repris dans l'acétone et concentré plusieurs fois, puis desséché sous vide. Le produit obtenu (a-benzyl 64-succinyl-N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D- glutamique di-methyl ester) est dissous dans 15 ml d'acide acétique glacial et hydrogéné en 4 heures à la pression atmosphérique en présence de 100 mg de Pd 5 % sur charbon. Après filtration du cataluseurl le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le résidu obtenu est repris dans l'acétone et concentré plusieurs fois, puis déchessé sous vide. II est alors repris dans l'eau et purifié sur colonne d'AG1X2 (H+)(BIORAD) par élution avec un gradient en acide acétique aqueux. (2) est finalement obtenu par lyophilisation de sa solution aqueuse: 450 mg (70%). c) Synthèse de 6-0-(3'-azido3'-deoxythymidine)-N-acetyl-murnmyl-L- alanyl-D-glutamique di-méthyl ester (3) (formule Vil): A 320 mg (0,5 mmole) de (2) en solution dans 10 ml de dimethylformamide anhydre sont successivement ajoutés à -15 C 0,05 ml (0,5 mmole) de Nméthylmorpholine et 0,06 ml (0,5 mmole) de chlorocarbonate d'isobutyle. Après 5 minutes sont ajoutés 267 mg (1 mmole) de 3'-azido3'deoxythymidine (AZT). Le mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à 15"C puis concentré sous vide. Le produit est finalement obtenu après purification sur colonne de Lichroprep RP18 (Merck) par élution dans un mélange d'éthanol et d'eau. (3) est finalement obtenu par lyophilisation de sa solution aqueuse: 440 mg (50%). Les composés de formules (I), (II) et (III) d'une part en association ou non avec un dérivé de formule (IV), ou des nouveaux conjugués répondant aux formules (V) et (Vl) qui sont en fait des liaisons covalentes des composés de formule (I) avec des composés de formule (IV) offrent une nouvelle classe de médicaments présentant un spectre très large d'utilisation ; outre les exemples cités et revendiqués ils doivent pouvoir être utilisés dès que le rétablissement de la numération formulaire dans le sang est nécessaire ou lorsque pour une raison ou une autre l'accès aux myélocytes via la circulation sanguine est nécessaire. Les CSH sont des cellules totipotentes d'une importance extrême comme il est expliqué au début de cette description. Grâce à cette invention, leur accès par un simple prélèvement sanguin, soit à titre d'outils biologique, soit à titre thérapeutique, devient possible sans manipulations longues et douloureuses. REVENDICATIONS 1. Composition pharmaceutique destinée à stimuler la fonction hématopolétique chez l'homme caractérisée en ce qu'elle contient comme principe actif au moins un composé de formule: Ra = NH2 ou O(CH2)xH avec x = 1 à 4 = = OH (sauf si Ra= NH2) ou O(CH2)xH avec x = 1 à 4 ou la muroctasine de formule (II) suivante: Nac-Mur-L.Ala-DisoGln-Nz stearoyl-L-Lys. ou le MTP-PE de formule (III) suivante Nac-Mur-L-Ala-D-isoGln-L-alayl-2 (1',2'dipalmitoyl-sn-glycero-3'-phosphoryl) ethylamide mono-sodium 2. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que la stimulation de la fonction hématopoïétique permet de prévenir ou traiter l'effet myélotoxique de certains traitements ou maladies, ou d'enrichir le sang en cellules souches hématopolétiques ou les deux simultanément. 3. Composition pharmaceutique selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce que le composé répondant à la formule (I) est le muradimétide de formule: Nac-Mur-L-Ala-D-Glu[OMe]-OMe. 4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisée en ce que le dosage des composés de formule (I) ou (II) ou (III) est tel qu'il permet une administration par voie orale à des doses de 0,1 à 5 mg par kg de poids corporel chez l'homme. 5. Composition selon l'une des revendications 1 à 3 administrable à l'homme par voie générale caractérisée en ce que le principe actif est dosé de telle façon qu'il permet une administration de 0,05 à 0, 5 mg par kg de poids et par dose. 6. Composition selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisée en ce qu'elle contient en outre un dérivé de nucléoside de formule générale: avec B étant une base purique ou pyrimidique R = H,N3, ou un halogène. 7. Composition selon la revendication 6 caractérisée en ce que le dérivé de nucléoside est la 3'-Azido-3'-desoxy-thymidine (AZT) 8. Conjugué caractérisé par sa formule (V): dans laquelle R Hou CH3 Ra = NH2 ou 0(CH2)xH avec x = 1 à 4 X = L-Ala ou L-Thr x = 0, 1 ou 2 Y = un résidu d'acide aminé avec A étant un nucléoside comportant, en position 5', du résidu désoxyribose soit une fonction hydroxyle, soit une fonction amine, et en position 3' un hydrogène, un halogène ou un groupement azide. 9. Conjugué caractérisé par sa formule (VI): dans laquelle x = O ou 1 X = L-Ala ou L-Thr Y = est un bras, tel qu'un acide dicarboxylique notamment un résidu succinyle Z = estOouNH R = HouCH3 Ra et Ry ont la signification donnée dans la formule (I), avec A étant un nucléoside comportant, en position 5', du résidu désoxyribose soit une fonction hydroxyle, soit une fonction amine, et en position 3' un hydrogène, un halogène ou un groupement azide. 10. Conjugué selon la revendication 8 ou 9 caractérisé en ce que: X = L-Ala R =H Ra = OCH3etR=OCH3 Il. Conjugué selon l'une des revendications 8 ou 9 caractérisé en ce que A est l'AZT. 12. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient, à titre de principe actif, un conjugué selon l'une des revendications 8 à 11. 13. Composition pharmaceutique selon la revendication 12 caractérisée en ce qu'elle permet de contrecarrer les effets myélotoxiques de certains traitements ou médicaments tels les chimiothérapies du cancer ou du sida, les radiothérapies ou les immunothérapies. 14. Composition selon la revendication 12 ou 13 caractérisée en ce qu'elle permet de restaurer un taux normal ou supérieur à la normale des éléments figurés du sang, notamment les érythrocytes et les plaquettes. 15. Composition pharmaceutique selon la revendication 12 caractérisée en ce qu'elle permet d'enrichir le sang en cellules souches hématopoïétiques. 16. Procédé de synthèse d'un conjugué de formule (V) caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes: a) synthèse Boc-L-alanine 3'-azido-3'-deoxythymidine (1) à partir de Boc L-alanine et d'Ait,. b) synthèse de L-alanine 3'-azido-3'-deoxythymidine, chlorhydrate (2) à partir de (1), c) synthèse de N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutaminyl a-méthyl ester y-Lalanine 3'-azido-3'-deox-thymidine(3) par addition de de N-acetyl-muramyl L-alanyl-D-glutaminyl a-méthyl ester à (2). 17. Procédé de synthèse d'un conjugué de formule (VI) caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes: a) Obtention de a-benzyI-N-acetyl-murnmyl-L-aIanyl-Dlutamique dimethyl ester (1) à partir de a-benzyl-4,6-OBzL-N-acetyl-muramyl-L-alanyl- D-glutamique di-methyl ester, b) Obtention de 6-0-succinyl-N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamique dimethyl ester (2) par succinylation de (I), c) Synthèse de 64(3'-azido-3'-deoxythymidine)-N-acetyl-muramyl-L- alanyl-D-glutamique di-méthyl ester (3) en couplant à (2) de l'AZT. 18. Utilisation d'un composé de formule (I), (Il), (III), (V) ou (Vl) dans la fabrication d'un médicament antagoniste des effets myélotoxiques de certains traitements ou médicaments ou permettant la mobilisation des cellules souches hématopoïétiques dans la circulation générale seul ou en association avec un composé de formule (IV). 19. Utilisation selon la revendication 18 caractérisée en ce que le composé de formule (I) est le muradimétide de formule: Nac-Mur-L-Ala-D-Glu[OMe]-OMe. 20. Utilisation selon la revendication 19 caractérisée en ce que le dérivé de formule (III) est le MTP-PE. 21. Utilisation selon la revendication 20 caractérisée en ce que le dérivé de formule (II) est la muroctasine. 22. Utilisation selon l'une des revendications 18 à 21 caractérisée en ce que le composé de formule (IV) est le 3'-Azido-3'-desoxy-thymidine (AZT). 23. Utilisation selon l'une des revendications 18 à 22 caractérisée en ce que le médicament est destiné à contrecarrer les effets des chimiothérapies dans les cas de traitement de cancers ou de SIDA. 24. Utilisation selon l'une des revendications 18 à 22 caractérisée en ce que le médicament permet d'enrichir le sang circulant en cellules souches hématopoïétiques. 25. Utilisation selon l'une des revendications 18 à 22 caractérisée en ce que le médicament permet l'obtention de cellules souches dans le sang utilisables comme vecteurs pour transfecter des gènes hétérologues. 26. Utilisation selon l'une des revendications 18 à 22 caractérisée en ce que le médicament permet l'obtention de cellules souches dans le sang utilisable dans des greffes autologues ou homologues de moelle osseuse. 27. Utilisation selon l'une des revendications 18 à 26 caractérisée en ce que les composés sont associés dans une formulation à un composé de formule IV.