Brevet FR2729082A1 — publié le 19960712

La présente invention est relative à une composition immunoréparatrice ainsi qu'à ses applications homéopathiques. L'immunosuppression est un état pathologique qui peut être soit spontané (carences immunitaires), soit provoqué par une irradiation, par l'administration d'immunosuppresseurs, qu'ils soient chimiques comme les antimétabolites (médicaments anti-cancéreux) ou biologiques comme des sérums antilymphocytaires ou par une immunodépression origine virale. Pour pallier cet état pathologique, l'administration de molécules, issues du système immunitaire, a été proposée. Parmi celles-ci, on peut citer certaines cytokines, et notamment l'interleukine 2 (IL-2) ou les hormones thymiques. Cependant, ces substances ont l'inconvénient soit d'être mal tolérées (IL-2), soit de présenter une action immunostimulante trop faible, pour une application thérapeutique efficace. En aucun cas ces substances ne présentent une fonction immunoréparatrice. La présente invention s'est, en conséquence, donner pour but de pourvoir à une composition immunoréparatrice qui réponde mieux aux besoins de la pratique, notamment en ce qu'elle est à la fois bien tolérée et présente effectivement une activité immunoréparatrice suffisante, pour une application thérapeutique efficace. La présente invention a pour objet une composition immunoréparatrice, caractérisée en ce qu'elle comprend en combinaison, en tant que substances actives, au moins un facteur de différenciation des lymphocytes B, au moins une cytokine et au moins une hormone thymique, à très hautes dilutions. On entend par composition immunoréparatrice, au sens de la présente invention, une composition capable de faire fonctionner un système immunitaire dont la fonction est interrompue. Au sens de la présente invention, les concentrations en substances actives sont définies par leur dilutions et le terme très haute dilution signifie dilution obtenue à partir d'une solution initiale de substance active, diluée avec dynamisation, un nombre suffisant de fois dans une solution de dilution, pour que la dilution en substance active soit au moins égale à environ 4 dilutions successives au moins au 1/5ème ou plus et notamment au 1/100ème ou même au 1/50000ème ; dans le cas où l'on réalise 4 dilutions successives au 1/100ème, la solution obtenue correspond, dans le système "Centésimale Hahnemannienne", à 4CH ; lesdites très hautes dilutions peuvent également être obtenues par tout autre procédé de dilutions successives avec dynamisation (agitation prolongée). Elles sont exprimées, ci-après, pour la plupart, dans le système CH, uniquement pour plus de commodité. De préférence, chacune desdites substances actives est présente dans ladite composition immunoréparatrice conforme à l'invention, sous la forme d'un ensemble desdites très hautes dilutions, par exemple comprises entre 4 dilutions successives avec dynamisation et 20 dilutions successives avec dynamisation, ou plus. De préférence, chacune desdites substances actives est présente dans ladite composition immunoréparatrice conforme à l'invention, sous la forme d'un ensemble de dilutions, comprises entre 15CH et 30CH, de préférence entre 15CH et 20CH ou tout autre ensemble de plusieurs dilutions conduisant à la même activité immunoréparatrice. Une dilution à 15CH correspond à 15 dilutions au centième à partir de la solution initiale de substance active et une dilution à 20CH correspond à 20 dilutions au centième, à partir de la solution initiale de substance active. La solution initiale de substance active subit des dilutions successives la première dilution de la solution initiale est obtenue par prélèvement d'une fraction ou de la totalité de la solution initiale et le mélange de l'échantillon prélevé dans une solution de dilution, suivi d'une dynamisation de ce mélange. la deuxième dilution de la solution initiale est obtenue par prélèvement d'une fraction ou de la totalité de la solution de la première dilution et le mélange de cet échantillon ainsi prélevé dans une solution de dilution, suivi d'une dynamisation de ce mélange, pour donner une solution de deuxième dilution et ainsi de suite jusqu'à l'obtention de la solution de la dernière dilution souhaitée. Conformément à l'invention, le facteur de différenciation des lymphocytes B est choisi parmi la bursine et la bursopoïétine (y compris la tuftsine (Thr Lys-Pro-Arg), provenant de la bursopoïétine) ou leurs fragments ; les hormones thymiques sont notamment sélectionnées parmi la thymuline, la thymopoïétine et ses dérivés, la thymosine et ses dérivés et le THF et ses dérivés ; la cytokine est de préférence de l'interleukine 3 (IL-3). De manière avantageuse, lesdites substances peuvent également être obtenues à partir extraits des organes correspondants (bourse de Fabricius, moelle, thymus). De manière préférée, la composition immunoréparatrice conforme à l'invention, comprend un ensemble de dilutions de 15CH à 20CH, à parties égales, de bursine, d'interleukine-3 et de thymuline (BIT). De manière inattendue, la composition conforme à l'invention présente, à ces dilutions, effectivement des propriétés immunoréparatrices, est particulièrement bien tolérée et est apte à être utilisée dans le traite ment de l'immunosuppression (ou immunodépression, y compris l'immunodépression d'origine virale), spontanée ou induite, telle que définie ci-dessus et en particulier dans l'immunosuppression induite par les irradiations, par les radiomimétiques chimiques et les anticancéreux. Egalement de manière inattendue, une telle composition permet une recolonisation de la moelle rouge après irradiation. De manière préférée, l'interleukine-3 est une interleukine de la même espèce que l'espèce à traiter. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé objet de la présente invention, avec référence aux dessins annexés, dans lesquels les figures 1 à 9 représentent les résultats d'expériences. I1 doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1 : Procédé de préparation d'une copposition conforme à 1invention (mélange BIT). La composition conforme à l'invention peut être réalisée - soit par mélange dans un rapport 1:1:1 (à parties égales) des trois substances actives, par exemple bursine, interleukine-3 humaine et thymuline, puis réalisation des dilutions successives à partir de la solution initiale contenant les 3 substances actives, - soit par préparation de 3 solutions initiales, correspondant chacune respectivement à la bursine, à 1'interleukine-3 et à la thymuline, puis réalisation de 3 séries de dilutions et mélange des ensembles de dilution obtenus à partir des 3 solutions initiales. * Matières premières - bursine, tripeptide de structure Lys-His-Gly (Néosystème, France), sous la forme d'une solution initiale à 2CH - thymuline, nonapeptide-Zn (Néosystème, France) sous la forme d'une solution initiale à 3ci ; - interleukine-3 de souris (Pepro Tech USA, à 1 Rg/ml), soit 1CH, - eau traitée par Milliporee qualité Mille Q Plus (eau Mille Q+). * Procédé de préparation proprement dit 1) Les différents produits sont ramenés à une dilution en 4CH - la bursine subit deux dilutions au 1/100 suivie de dynamisation (agitation sur Agitelec Type L à secousses verticales, 540 à 560 secousses/minute (Carteau & OTS, Bagnolet, France), pendant 2 minutes et 30 secondes) - la thymuline est diluée une fois au 1/100 avec dynamisation, dans les conditions exposées ci dessus - l'interleukine-3 est soumise à 3 dilutions successives au 1/100 avec dynamisation, dans les conditions exposées ci-dessus. 2) Les trois solutions en 4CH sont mélangées à parties égales et donnent une composition BIT 4CH. Les dilutions au 1/100 sont ensuite préparées avec dynamisation, dans les conditions exposées cidessus, jusqu'à la dilution en 20CH et donnent une gamme de dilutions BIT comprises entre 15CH et 20CH (15, 16, 17, 18, 19 et 20CH), à parties égales, qui sont conditionnées dans des flacons recouverts de papier d' aluminium. =KI1PXa 2 : Mise en valeur de l'activité X unorepara- trice de la composition conforme à 1'invention. Des souris Balb/C sont soumises à une irradiation corporelle totale (cobalt 60, émission y) de 7 gy calculés (soit 6,3 gy réels, évalués par une sonde), à un débit-dose de 1,68 gy/min. Ces souris sont traitées par différentes compositions 1) de l'eau de boisson additionnée de 1/100 d'eau Mille Q+ (lot contrôle, dénommé A), 2) une composition selon l'exemple 1, dénommée BIT, 3) de l'eau de boisson enrichie en eau Milles Q+, diluée sur elle-même dans les mêmes conditions que celles utilisées pour la préparation de la composition immunoréparatrice conforme à l'invention (lot témoin négatif, dénommé B), selon le même protocole, à savoir - début du traitement 2 jours avant l'irradiation et - traitement en continu après l'irradiation, et dans les mêmes conditions - soit l'eau de boisson, soit les dilutions de la composition selon l'exemple 1 ou de B mélangées dans l'eau de boisson à raison de 1/100 sans agitation particulière, sont données auxdites souris sous la forme de biberons.Les biberons sont changés tous les 4 jours. Les différents lots (contrôle ou A, témoin ou B et BIT) sont stockés dans des réfrigérateurs différents. L'évaluation se fait par dénombrement des survivants dans chaque lot et est obtenue à partir de 5 expériences différentes, réalisées dans les conditions suivantes Pour chaque expérience, les dilutions sont remontées à partir de la 14CH de la gamme BIT et préparées, comme précisé à l'exemple 1. L'administration est effectuée conformément au protocole exposé ci-dessus. Les résultats obtenus sont illustrés dans les Tableaux ci-après et aux figures 1 à 4. TABLEAU I Pourcentage de mortalité des souris à 30 jours A B BIT GM Bursine CSF* 1ère expérience 50 % 20 % 9 % lots de 11 souris 2ème expérience 90 % 82 % 10 % lots de 11 souris 3ème expérience 50 % 43 % 22 % 65 % lots de 14 souris 4ème expérience 100 % 86 % 58 % 100 % 84 % lots de 14 souris TABLEAU II Rapports comparés de mortalité des souris à 30 jours BIT/A BIT/B B/A GM Burs/B CSF/B 1ère expérience 0,18 0,45 0,4 2ème expérience 0,11 0,12 0,91 3ème expérience 0,44 0,51 0,86 1,51 4ème expérience 0,58 0,62 0,86 1,16 0,97 GM CSF = Granulocyte Macrophage - Colony Stimulating Factor de souris. TABLEAU III Résultats comparés des formules sanguines des souris survivantes (moyanne de deux échantillons) exprimés on pourcentage par rapport à des souris témoins non irradiées de même âge et de même lot. 2ème expérience J 6 J 15 J 39 A % neutrophiles 0,67 0 0,93 % lymphocytes 0,93 0 0,96 Mortalité 0 t 80 % 90 t B % neutrophiles 1,1 O 1,07 % lymphocytes 1,08 0 1,02 Mortalité 0 t 35 t 82 t BIT % neutrophiles 1,21 0 0,95 % lymphocytes 0,99 0 0,84 Mortalité 0 t 10 t 10 t 3ème expérience J 6 J 13 J 19 J 35 A % neutrophiles 1,41 0 1,19 1,34 % lymphocytes 0,44 0 0,49 0,60 Mortalité 0 t 22 t 50 t 50 % B % neutrophiles 1,51 0 1,78 2,0 % lymphocytes 0,5 0 0,35 0,25 Mortalité o t 15 t 43 t 43 t BIT % neutrophiles 1,61 0 1,0 0,67 % lymphocytes 0,40 0 0,74 1,02 Mortalité 0 t 7 t 22 t 22 t GM CSF % neutrophiles 1,68 0 1,27 1,41 % lymphocytes 0,49 0 0,54 0,62 Mortalité 0 t 15 t 65 t 65 % 4ème expérience J 0* J 6 J 13 J 22 A % neutrophiles 1,61 0 0 % lymphocytes 0,52 0 0 Mortalité o t 0 t 86 % 100 % B % neutrophiles 1,77 0 0 1,55 % lymphocytes 0,52 0 0 0,63 Mortalité 0 t 0 t 79 t 86 % BIT % neutrophiles 1,19 0 0 0,94 % lymphocytes 0,56 0 0 1,06 Mortalité 0 t o t 50 t 57 t GM CSF % neutrophiles 1,67 0 0 % lymphocytes 0,61 0 0 Mortalité 0 t 0 t 79 % 100 t Bursine % neutrophiles 1,67 0 0 1,42 % lymphocytes 0,60 0 0 0,75 Mortalité 0 t 0 t 69 t 84 t 4 4 h post irradiation. Le suivi hématologique des souris traitées montre un rétablissement des granulocytes neutrophiles et des lymphocytes comparables aux témoins non irradiés. Ceci est obtenu au bout de 35 jours dans l'expérience 3 et au bout de 22 jours dans l'expérience 4. La figure 1, qui comprend en abscisse le nombre de jours et en ordonnée le pourcentage de survie des souris irradiées, correspond à la première expérience réalisée sur un lot de 11 animaux et montre que les souris survivantes ont une durée de survie d'au moins 90 jours. La figure 2 illustre les résultats obtenus avec une deuxième expérience et comprend également en abscisse le nombre de jours et en ordonnée le pourcentage de survie de souris irradiées ; la courbe -O- correspond à (A) (eau) (MilliQ ; n = 11), la courbe -A- correspond à (B) (eau dyn ; n = 11), la courbe --- correspond à l'administration de la composition conforme à l'invention, après irradiation (BIT post-y) (n = 10), la courbe -À- correspond à l'administration de la composition conforme à l'invention durant l'irradiation (BIT pré-post-y) (n = 11). La troisième expérience est illustrée à la figure 3 ; elle a été réalisée sur un lot de 14 animaux et comprend en abscisse le nombre de jours et en ordonnée le nombre d'animaux survivants. La figure 4 illustre les résultats obtenus avec une quatrième expérience et comprend également en abscisse le nombre de jours après irradiation et en ordonnée le pourcentage de survie de souris irradiées la courbe -s- correspond à (A) (eau), la courbe --- correspond à (B), la courbe -O- correspond à GM-CSF, la courbe - correspond à l'administration de la composition conforme à l'invention, la courbe -s- correspond à l'administration de la bursine. Les résultats obtenus montrent la répétabilité des tests sur différents lots de souris (11 à 14 souris par lot) et montrent que dans les lots contrôle (A), on observe 50 à 100 % de mortalité, - dans les lots témoin négatif (B), on observe 50 à 90 % de mortalité, dans les lots comprenant la composition conforme à l'invention à haute dilution (BIT), on n'observe que 10 à 57 % de mortalité. En outre, les courbes de réponse prolifératives aux mitogènes des lymphocytes des souris traitées (BIT) avec B et A des expériences 1 et 3 montrent une réponse proliférative des lymphocytes T et B significativement plus importante chez les souris traitées par BIT sont illustrées aux figures 5 à 9. Dans ces figures 5 à 9, les courbes (-s-) illustrent les résultats obtenus avec une composition selon l'invention (BIT), les courbes (---) illustrent les résultats obtenus avec (B) et (-d-) illustrent les résultats obtenus avec (A). Ces différentes figures comprennent en ordonnée le nombre de cpm, et en abscisse, la concentration exprimée en Rg/ml en PHA (figures 5 et 8), en LPS (figures 6 et 9) et en ConA (figure 7), les figures 5 et 6 correspondant à la première expérience, les figures 7, 8 et 9 correspondant à la 3ème expérience. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée de la présente invention. REVENDICATIONS 1') Composition immunoréparatrice, caractérisée en ce qu'elle comprend en combinaison, en tant que substances actives, au moins un facteur de différenciation des lymphocytes B, au moins une cytokine et au moins une hormone thymique, à très hautes dilutions. 2') Composition immunoréparatrice selon la revendication 1, caractérisée en ce que la dilution en chaque substance active est au moins égale à environ 4 dilutions successives au moins au 1/5ème. 3') Composition immunoréparatrice selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que la dilution en chaque substance active est au moins égale à environ 4 dilutions successives, comprises entre 1/5ème et 1/100ème. 4') Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que chacune desdites substances actives est présente sous la forme d'un ensemble desdites très hautes dilutions. 5') Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que chacune desdites substances actives est présente sous la forme d'un ensemble desdites très hautes dilutions comprises entre 4 dilutions successives et 20 dilutions successives. 6') Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que chacune desdites substances actives est présente sous la forme d'un ensemble de dilutions, comprises entre 15 et 30 dilutions au 1/100ème, c'est-à-dire comprises entre 15 et 30CH (Centésimale Hahnemannienne), de préférence entre 15CH et 20cl. 7') Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le facteur de différenciation des lymphocytes B est choisi parmi la bursine, la bursopoïétine, un fragment de ces substances ou les extraits de bourse de Fabricius ; les hormones thymiques sont sélectionnées parmi la thymuline, la thy mopoïétine et ses dérivés, la thymosine et ses dérivés et le THF et ses dérivés ou les extraits de thymus et la cytokine est sélectionnée parmi l'interleukine 3 (IL-3) ou les extraits de moelle. 8') Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle comprend un ensemble de dilutions de 15CH à 20CH, à parties égales de bursine, d'interleukine-3 et de thymuline. 9 ) Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement de l'immunosuppression, y compris d'origine virale. 10') Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour l'obtention d'un médicament adjuvant des cancers.