Brevet FR2726279A1 — publié le 19960503

La présente invention concerne une nouvelle particule de latex ou d'oxyde minéral glucosylée, un procédé de préparation d'une telle particule ainsi que l'application de la particules glucosylée comme agent de diagnostic ou de dosage biologique (immunologique, enzymatique, etc) ainsi qu'en biologie moléculaire ou en chromatographie d'affinité. Elle concerne également les acrylamidoglucosylés éventuellement N-alkyle utiles notamment dans la préparation desdites particules glucosylées. Les particules ou microsphères de latex sont utilisées depuis longtemps en tant que matériel de diagnostic médical et les microsphères de silice en chromatographie. Par exemple, les particules de latex sont utilisées dans les tests d'agglutination et servent à détecter la présence ou l'absence d'anticorps ou d'antigène. Concrètement, un anticorps ou un antigène est lié à la surface d'une particule de latex qui peut par la suite réagir avec le ou les antigène(s) ou anticorps correspondant(s) contenu(s) dans un fluide corporel par exemple, le sérum du sang, le liquide céphalorachidien (LCRI), l'urine, ou une préparation d'extrait tissulaire. Les méthodes de détection sont bien connues de l'homme du métier. Ces particules de polymère peuxvent être obtenues de facon classique, par exemple par la polymérisation en émulsion de styrène ou d'autres monomères vinyliques. On sait néanmoins que lorsqu'elles sont utilisées dans le diagnostic médical, par exemple dans les tests d'agglutination, ces particules présentent un caractère hydrophobe trop marque pour permettre un couplage avec des anticorps ou des antigènes sans perte d'activité ou de sensibilité. On a don(c recherché le moyen de contrôler plus efficacement l'équilibre du caractère hydrophobe et du caractère hydrophile à l'interface entre le polymère et l'eau. Afin de modifier cet équilibre, on a déjà proposé de coupler la surface de ces particules avec des groupements fonctionnels polaires avec ou sans groupe réactif. Une technique particulièrement intéressante consisterait à fonctionnaliser ces particules de latex avec des restes de carbohydrate du fait de la biocompatibilité de ces groupements et de leur intérêt dans les mécanismes de reconnaissance biologique faisant intervenir des glycoprotéines ou des glycolipides. Dans cette optique, M.T. Charreyre et al dans Colloid & Polym. Sci. 271:668-679 (1993) ont proposé de préparer des latex de polystyrène recouverts par des motifs disaccharidiques par un procédé de co(polymérisation) à partir d'une semence en présence d'un oligosaccharide terminé par un groupement hexyl-méthacrylate: le 6-(2- méthylpropenoyloxy)hexyl f-D-cellobioside (CHNIA). Ce composé présente cependant l'inconvénient de ne pas être stable chimiquement à pH acide (inférieur à 4), et de se dégrader alors par une réaction d'hydrolyse du groupement saccharide, conduisant à la génération d'un composé glucosidique libre dans le sérum du latex, promoteur de prolifération bactérienne. Par ailleurs, M.C. Davies et al (Langmuir 1993, 9, 1637-1645) ont proposé également de copolymériser en présence de styrène un acrylamido- thiogalactose qui est le 1-[[2-[[(N-acrylamidomethyl)amino]carbonyl]ethyl] thiol- p -D-galactopyranoside dont la synthèse est particulièrement délicate (étape de blocage des fonctions -OH du galactose modifié) et la stabilité à pli supérieur à 9 incertaine. Un des objets de la présente invention est de proposer de nouvelles particules de polymère ou d'oxyde minéral glucosylées qui soient très peu sensibles à l'hydrolyse. Un autre objet de la présente invention est de proposer des particules de latex ou de silice qui présentent des propriétés interfaciales, plus particulièrement dans leur interaction avec les protéines, qui soient améliorées et/ou modifiées par rapport à celles déjà obtenues dans l'art, notamment selon les deux publications précitées. Un objet de la présente invention est encore de proposer un nouveau procédé de préparation de particules de latex ou de silice fonctionnalisées avec des restes gucosyle. L'invention concerne en premier lieu une particule de latex ou d'oxyde minéral glucosylée, caractérisée en ce que au moins une chaine, à l'extrémité de laquelle est attaché un reste glucosyle, est fixée à la surface de ladite particule. Le terme "fixée" signifie que cette particule peut être obtenue soit par greffage sur une microsphère, soit par surpolymérisation à partir d'une semence. De préférence, la particule selon l'invention est obtenue par greffage. L'ensemble chaine/reste glucosyle est aussi appelé "chaine glucosylée'. Les microsphères de latex sont classiquement constituées de polymères obtenus par polymérisation de monomeres éthyléniquement insaturés et sont fonctionnalisées en surface par des fractions amine ou par des fonctions précurseurs des amines qui seront transformés ultérieurement. Il s'agit d'homopolymères ou de copolymères contenant des motifs dérivés de monomères vinylaromatiques, éthyléniques, éventuellement d'acides ou d'esters alcanoïques ou éthyléniques, une proportion de ces monomères étant fonctionnalisée par des radicaux chlorés permettant une transformation subséquente en fonction amine ou par des radicaux amine. Ce type de polymères est facilement accessible à tout homme de l'art et on se contentera d'en citer quelques uns ci-après, à titre non limitatif. Il peut s'agir de: - monomères éthyléniques de type isoprène, 1,3 butadiène, chlorure de vinylidène, acrylonitrile, - monomères vinylaromatiques comme le styrène, le bromostyrène, l'alphaméthylstyrène, l'éthylstyrène, le vinyltoluène, le chlorostyrène ou le chlorométhylstyrène ou le vinylnaphtalène, - acides, esters ou anhydrides alcénoïques commes les acides acrylique, méthacrylique, acrylates et méthacrylates d'alkyle dont le groupe alkyle possède 1 à 10 atomes de carbone, hydroxyalkylacrylates, les acrylamides, les esters d'acides éthyléniques à 4 ou 5 atomes de carbone ainsi que, - les monomères difonctionnels tels que le divinylbenzène O)u le diacrylate de 2,2-diméthyl-l,3-propylène et/ou d'autres monomères copolymérisables insolubles dans l'eau. Dans le cas o la particule comporte des radicaux amine en surface, une partie seulement des monomères porte des radicaux amine ou susceptibles d'être transformés en radicaux amine, comme les groupements chlorométhyle, dans une proportion de 1 à 25 % en poids par rapport à la totalité des monomères utilisés. Les monomères sont mis en oeuvre en mélange, ou de façon séquentielle dans des procédés à étapes multiples. Les particules de polymères peuvent être obtenues par la mise en oeuvre d'une quelconque technique de polymérisation comme la polymérisation en émulsion classique, en microémulsion, en suspension, en microsuspension, ou le cas échéant par polymérisation en milieu organique. Ces techniques familières à l'homme de l'art ne seront pas rappelées ici. Les particules selon l'invention sont hydrophobes et possèdent de préférence une taille généralement comprise entre 0,01 et 20 microns et de préférence inférieure à 5 microns. Elles sont calibrées, monodisperses et présentes dans le latex à raison d'une quantité variant entre 0,05 à 30 % en poids du poids total du latex, préférentiellement entre 0,1 et 10 %. Généralement, la densité surfacique de groupements fonctionnels par nanomètre carré de microsphère est compris entre environ 1 et environ a Les particules de latex peuvent êtrc magnétisables et dans ce cas, elles sont associées à des matériaux magnétisables comme ceci est par exemple décrit dans les brevets US 4 339 337, US 4 358 388, US 4 948 739. Parmi les matériaux pouvant constituer les parties magnétisables des microsphères, on peut citer la magnétite, l'hématite, le dioxyde de chrome, les oxydes mixtes yttrium-fer, les ferrites telles que les ferrites de manganèse, nickel, manganèse-zinc...., les alliages de cobalt, nickel, gadolinium, samarium-cobalt.... Les matériaux préférentiels sont généralement la magnétite et l'hématite. La quantité de matériaux magnétisables contenus dans les microsphères correspond à environ 0,5 à 70 %, de préférence à environ 15 à % du poids de la microsphère composite magnétisable. Du fait de la présence de la chaine qui fonctionne comme un "bras espaceur" les contraintes stériques et les possibilités de dénaturation des protéines dues à la proximité de la phase solide que représente la microsphère sont éliminées. De préférence, la chaine présente une longueur moyenne allant de S à 120 Angstrôms, avantageusement de 5 à 50 Angstrôms et plus avantageusement aux environ de 10 Angstrôms. De préférence, la chaine comporte de 4 à 80 atomes de carbone, avantageusement 3 à 20 atomes. Il s'agit généralement d'un radical divalent hydrocarboné, éventuellement substitué, comportant éventuellement dans la chaine principale un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi les atomes d'azote, d'oxygène, de soufre, de phosphore, un ou plusieurs des atomes de carbone pouvant appartenir à des groupes carbonyle ou dérivés (imine, oxime etc.) ou comportant un ou plusieurs cycles ou hétérocycles. Les substituants du radical divalent sont ceux qui ne produisent pas d'empêchement stérique tel que le greffage sur les radicaux fonctionnels de la microsphère deviendrait difficile voire impossible. Il s'agit donc de substituants de faible encombrement tels que les radicaux méthyle, amino, OH, etc. De même, ces substituants ou les hétéroatomes faisant partie de la chaîne elle-même ne devront pas interférer dans la réaction entre le reste glucosidique de cette chaîne et les radicaux fonctionnels. De façon générale, le nombre de chaînes glucosylées sur chaque microsphère de latex doit être suffisant pour permettre la mise en oeuvre d'un test de diagnostic. De préférence, la particule selon l'invention est telle qu'elle comporte en surface des radicaux fonctionnels amine dont au moins une partie participe à la structure de ladite chaine, cette dernière répondant à la formule: -(CH2)n- N - CH - CH - C - A - gluc I R1 R4 R3 O dans laquelle: R1 est un radical alkyle de C1 à C4 ou un atome d'hydrogène, R3, R4 identiques ou différents représentent un radical alkyle inférieur en C1 à C6 ou un atome d'hydrogène, A est la partie restante de ladite chaîne, n est un nombre entier de 1 à 10, gluc est le reste glucosyle, _ symbolyse la surface de la sphère. De préférence A est le radical -N-, R2 R2 étant un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de Cl à C14 ou aralkyle de C7 à C14, lesdits radicaux étant éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux carboxylate ou sulfonate terminaux ou pendants. Sur un plan pratique, le nombre de chaines glucosylées est une proportion plus ou moins importante de la quantité de radicaux fonctionnels amine présents sur la microsphère. Cette proportion varie avantageusement entre 10 et 99 % des radicaux fonctionnels amine présents à la surface de la microsphère, de préférence la proportion est supérieure à 40) % et plus préférentiellement supérieure à 80 %. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la microsphère de latex glucosylée est constituée de polymères obtenus par polymérisation de monomères insaturés éthyléniquement, présentant des radicaux fonctionnels amine en surface, caractérisée en ce que des restes glucosyle sont attachés à une partie des radicaux fonctionnels et en ce que ladite chaîne répond à la formule: / R1 /-CH2-N. - CHC - Cl- N - gluc 1 I il I R4 R3 O R2 dans laquelle Ri, R2, R3, R4 ont la même signification que précédemment. Le terme "attachés" signifie qu'un reste glucosyle est relié au radical amine par l'intermédiaire d'un segment divalent (en l'occurence H -CH -C- À- gluc). i q R4 R3 O R2 Selon une autre variante préférée, l'invention concerne une particule de silice modifiée en surface par des radicaux fonctionnels amine, caractérisée en ce qu'une partie des radicaux fonctionnels est reliée à un reste glucosyle et en ce que ladite chaine répond à la formule: (CH2)n- N - Cll - Cl - - N - gluc III 4 I I I Ii R1 R4 R3 0 R2 dans laquelle R1, R2, R3, R4, n, gluc, ont la même signification que précédemment. Les particules minérales selon l'invention sO()Ilnt préférentiellement des particules de silice. Les radicaux fonctionnels amine présents en surface des particules minérales sont préférentiellement des radicaux -(CH12)n-NIIR avec n compris entre 1 et 10, R étant un radical alkyle inférieur (C1-C6). Parmi les restes glucosyle convenant dans le cadre de la présente invention, on peut citer à titre indicatif les restes des sucres suivants glucose, galactose, galactopyranose, glycofuranose, fructose, fructopyranose. De préférence le reste glucosyle est le reste du glucose. Selon un mode de réalisation des microsphères de latex glucosylées o la chaîne glucosylée correspond à la formule 1, on surpolymérise un monomère acrylamidoglucosyle éventuellement N-alkyle et un monomère insaturé éthyléniquement de type acrylique sur une semence de polystyrène dans les conditions suivantes: - l'expression acrylamido englobe également les dérivés méthacrylamido. - par l'expression "monomère de type acrylique", on entend les acides, esters ou anhydrides alcénoïques commes les acides acrylique, méthacrylique, acrylates et méthacrylates d'alkyle dont le groupe alkyle possède 3 à 10 atomes de carbone, hydroxyalkylacrylates, les acrylamides, les esters d'acides éthyléniques à 4 ou 5 atomes de carbone. - le diamètre de la semence est submicronique, généralement entre 0,02 et 0,9 micromètres et la fraction massique de particule dans l'eau ('extrait sec") est comprise entre 0,1 et 20 %. - la surface des particules de semence est fonctionnalisée par des groupements sulfate qui proviennent essentiellement des émulsifiants sulfatés introduits à la synthèse (de l'ordre de 1,4 % par rapport aux monomères), - le taux de monomères acrylamidoglucosyle éventuellement N- alkyle, introduit est compris entre I et 25 % en poids par rapport au poids total de semence, de préférence 5 à 15 % en poids. Le taux de monomères de type acrylique est compris entre 5 et 30 %, avantageusement 15 à 25 %, les pourcentages étant donnés par rapport au poids sec de semence. De préférence, le monomère de type acrylique ou méthacrylique est un ester de l'acide acrylique ou méthacrylique. La polymérisation est effectuée de manière connue à une température appropriée de l'ordre de 60 à 7)0'C en présence de persulfate de potassium comme initiateur par exemple. On a noté que la surpolymérisation avec une semence de polystyrène, en présence de styrène (en remplacement du méthacrylate de méthyle) ne permettait pas la fixation du monomère acrylamidoglucosyle éventuellement N-alkyle à la surface des particules. Un autre mode de réalisation des particules selon l'invention, qu'elle soit modifiée par la chaîne divalente glucosylée de formule I ou une autre chaîne divalente de type 11, consiste à greffer sur une particule de latex ou de silice fonctionnalisée en surface par des radicaux amine primaire)u secondaire, une chaîne -glucosylée (x-acrylique par une réaction d'addition nucléophile de type Michael. En général, les radicaux fonctionnels amine primaire ou secondaire sont reliés à la particule de latex ou de silice par une chaine alkylène courte (Cl1-C5) de préférence méthylène pour le latex et butylène pour la silice. Le taux de greffage est évalué par spectrophotométrie UV sur le surnageant, par chromatographie sur couche mince du mélange polymère/monomère extrait ou par le test spécifique au mélange "phénol- acide sulfurique" décrit par Lee dans Anal. Biochem. 95, 260 (1979) La réaction du monomère sur les radicaux amine est effectuée à pli basique, aux environs de 9. En général, la quantité de radicaux fonctionnels amine doit être suffisante pour permettre d'obtenir un greffage conduisant à des particules utiles dans le domaine biologique, diagnostique ou chromatographie d'affinité. De façon non limitative dans le cas des latex, on peut indiquer que la quantité de radicaux fonctionnels amine est comprise entre 50 et 500()() microéquivalents par gramme de polymère. Cette réaction s'est révélée particulièrement appropriée dans tous les cas, mais avantageusement dans le cas o la chaine divalente glucosylée correspond à celle de formule Il. La réaction est conduite à température ambiante ou à 60 C sous agitation en atmosphère inerte, par exemple l'azote. Elle peut être suivie par spectrophotométrie UV sur la phase aqueuse et par chromatographie sur couche mince (CCMI) sur le N-alkvlacr'lamidoglucosyle et le polymère extrait. On a trouvé que les propriétés interfaciales des particules, et plus particulièrement leur interaction avec les protéines, dépendaient du taux et du mode d'introduction des restes glucosyle à leur surface (surpolymérisation du monomère acrylamidoglucosyle éventuellement Nalkyle en présence de méthacrylate de méthyle ou équivalent ou réaction de surface sur radicaux fonctionnels amine). La conformation des chaines de surface et la disposition des restes glucosyle n'est pas identique pour les deux procédés de fonctionnalisation et conduit donc à des microsphères de structure tridimensionnelle différente. L'invention a également pour objet les acrylamidoglucosyle éventuellement N-alkyle de formule IV R 0/ Cli =C- C IV I \ R3 N-gluc Rz dans laquelle R3, R4 identiques ou différents sont un radical alkyle en CI-C(, (ou un atome d'hydrogène, R2 est un radical alkyle en C 1-C14 ou aralkyle en C7- C14 éventuellement substitué ou un atome d'hydrogène, gluc est un radical glucosyle utile notamment dans la préparation des particules glucosylées. La préparation de ces composés est effectuée de manière simple, ne nécessitant pas d'étape de blocage des fonctions hydroxyles. La synthèse est réalisée en deux étapes à partir du composé glucosylé par action de l'alkylamine puis acryloylation de l'alkylglucosylamine en milieu aqueux par exemple selon l'équation ci- dessous NO b A Cette méthode permet d'isoler le monomère avec un rendement supérieur ou égal à 75 % environ. Le produit brut ainsi obtenu a environ une pureté de 90 %. Les impuretés présentes sont des composés di-acryloylés enl position variable sur le site glucosidique ce qui ne constitue pas un facteur limitant pour l'utilisation du monomère en copolymérisation ou pour la mise en oeuvre de réaction de surface. Le composé peut être purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice. La préparation des microsphères de latex fonctionnalisées en surface comportant des radicaux fonctionnels amine peut être effectuée en utilisant le procédé suivant - copolymérisation styrènechlorométhylstyrène (VBC) en émulsion ou en microémulsion, - réaction d'une alkylamine ou aralkylamine en excès sur les groupements chlorométhyles de surface en milieu tamponné basique (pli = 8,5) puis élimination de l'excès d'amine par dialyse. Selon le schéma suivant RINLIZ RiNH2 -CH2-Cl)CI12-NH-Ri pHl = 8,5 Le rendement d'une telle réaction est en général supérieur à 50) % Le greffage de l'acrylamidoglucosyle éventuellement N-alkyl sur ces microsphères aminées est effectué en additionnant ce composé progressivement à la suspension dc microsphère à un pll tamponné légèrement basique d'environ 8,5. Lc réactif est selon une variante introduit en défaut, l'avancement de la réaction étant simplement déterminé par la disparition du réactif en solution dosage par chromatographie couche mince (CMbl) et chromatographie liquide haute performance etc. La réaction peut être schématisée de la façon suivante %o,.,./"-o1 La préparation des particules de silice fonctionnalisées en surface comportant des radicaux fonctionnels amine peut être effectucée en utilisant le procédé suivant: - réaction d'un aminoalcool ou aminoaralcool en excès sur les groupements silanol de surface en milieu solvant hydroalcoolique. De préférence, l'amminoalcool est un 4-amino 1-butanol. Le rendement d'une telle réaction est en général supérieur à 5() %. Le greffage de l'acrylamidoglucosyle éventuellement N-allkyl sur ces microsphères aminées est effectué en additionnant ce composé progressivement à la suspension aqueuse de microspheres à un pll tamponné légèrement basique d'environ 8,5. Le réactif est selon une variante introduit en défaut, l'avancement de la réaction étant simplement déterminé par la disparition du réactif en solution: dosage par chromatographie couche mince (CIMM) et chromatographie liquide haute performance etc. La réaction peut être schématisée de la façon suivante: L'invention a enfin pour objet l'utilisation des particules glucosylées précédemment décrites comme agent de diagnostic ou de détection, ou comme phase stationnaire de chromatographie par affinité. Ces particules peuvent etre utilisées dans des domaines biologiqucs très variés. Ainsi, dans le diagnostiquc biomedical et plus particulièrement les tests de type EIA ou ELISA, les groupements glucosylés apportent une biocompatibilité avec les anticorps immobilisés à la surface des particules, pour lesquels le fragment Fc contient des résidus carbohydrates. Les exemples ci-après illustrent la présente invention. Exemple 1 -) Prréparation du N-octvlac(-rvlamidoglucosvle a) Svnthèse de la Noctvt!lucosvlamine A une solution de 40) g d'octy laminc (0,3 mol) dans 5() mnil de méthanol absolu, on ajoute 54 g de glucose (0,3 mol). Le mélange réactionnel est chauffé à 65 C pendant 27) min puis additionné de 5() ml d'éthanol à 95 chaud. L'octylglucosylamine qui précipite au refroidissement (précipitation totale après 2 heures) est filtrée sur buchner puis recristallisée dans l'éthanol absolu (1,5 1). blasse obtenue: 77,7 g Rendement: 89 % l'oint de fusion ( C) = 103-107. b) Svnthèse du N-octvlacrvlamidoAlucosvlamine (AC8) dans un mniélane eau/TI F A 25 g de N-octylglucosylamine en solution dans 400) ml d'eau et 400 ml de TI-F, on ajoute 33,6 g de carbonate de sodium en solution dans te minimum d'eau. Au mélange réactionnel refroidi à O)C, on ajoute 36 ml de chlorure d'acryloyle en 2 fois à 2 heures d'écart. Le mélange réactionnel est ensuite porté à 30 C pendant 4 heures. Après évaporation du TIIF sous pression réduite, la phase aqueuse est extraitc par 3 x 300 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques rassemblées sont ensuite lavées par 2 x 10()() ml d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium puis à l'eau. Après séchage sur sulfate de magnésium et évaporation de l'acétate d'éthyle, om isole 25,2 g de composé brut. Rendement: 85 % I.R. (nujol, n cm-l): 3500-320()0 (Il-O); 1650 (amide 1); 16 I() (C=C). Exemple 2 Svnthèse de la N-octvlacrvlamidoglucosvlamine "acrvlamidosucre" AC8 a) Synthèse de la N-octvlglucosvlamine 6 OH 7 8 9-14 15 HO NH-CH2-CH2-(CH2)5-CH3 H A une solution de 60 mmoles (7,7 g) d'octylamine dans 1() nil de méthanol, on ajoute 60) mmoles (1(),8 g) de glucose. le milieu réactionnel est chauffé à 60-65 C durant 15 min. I.' oclylgluc()osylamine brute précipite après addition de 10 ml d'éthanol à ')95 %. llle est filtrée et recristallisée 3 lois dans l'éthanol absolu. Masse obtenue: 12,8 g Rendement: 75 % Point de fusion ( C) = 104-1()(. 275 b) Synthèse de la N-oc(tvlacrvlamidosAluco()svlamine "acrvlamnlidosu(-re" AC8 dans le méthanol Il 12-16 17 6 OH CH2-CH2-(CH2)n-CH3 3() H O2O N HO 3. '2 NC-CH=CH2 n=' // O A 24 mmoles (7 g) d' octlIglucosylamine dans 100()() ml de méthanol à 30 C, on ajoute 62,5 mmoles ((,(3 g) de carbonate de sodium, 48 mmoles (3,9 ml) de chlorure d'acryloyle sont coulés à ()C en 5 minutes sur le milieu hétérogène. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation et température ambiante pendant 25 minutes. Après addition de 10() ml d'eau et évaporation du méthanol, l'acrylamido-sucre est extrait par 300) ml d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par une solution saturée de NalIC();, séchée sur NigSO4 et évaporée sous pression réduite. MNasse obtenue: 8,0 g Rendement: 95 % solide amorphe Exemple 3 Synthèse de la N-tétradécvlacrvlamidoglucosvlamine: 'acrvlamidosucre" AC14 a) Synthèse de la N-Tétradédcvlglucosvlamine 6 OH 0 7 8 9-19 20 HO NF-CH2-CH2-(CH2),I-CH3 H Le mélange d'une solution de 5() mmoles de tétradécylamine (1(),(5 g) dans 25 ml d'éthanol et d'une solution de 25 mmoles (4,5 g) de glucose dans 17,5 ml d'eau est laissé à température ambiante pendant 2 jours. l. e produit 2( qui cristallise est filtré et recristallisé trois Iois dans l''thanol absolu. Niasse obtenue: 5,25 g Rendement: 56 % Point de fusion ( C) = 10()9 C b) Svnthèse de la N-tétradéd\vla(crvlamidoglucosvlaniine: "acrvlamidosucre" dans le Til F A une solution de 13,7 mmoles (4 g) de tétradécylglucosylamine dans 190 ml de TIIF, on additionne une solution de 85 mmoles (9) g) de carbonate de sodium 25 ml d'eau. LUne solution de 26 mmoles (2,() ml) de chlorure d'acryloyle dans 20) ml de IIIF est additionnée goutte à goutte ) pendant une heure. Le TII est évaporé puis l'acrylamido-sucre est extrait avec 300 ml d'acétate d'éthy le. La phase organique est lavée avec une solution saturée de NAIICO3 séchée sur igS()4 et é'\aporée sous pression réduite. Masse obtenue: 3,99 g Rendement: 89 % Solide amorphe Point de fusion ( C) (décomposition) = 1 10"C. Exemple 4 Préparation de nanoparticules aminées - Composition de la microémulsion initiale: eau (75 %), SDS (8,3 %), 1- pentanol (9,2 %), styrène (6 %), VBC (1,5 %). - Polymérisation: initiateur persulfate d'ammonium- tétraméthyldiaminométhane, 25"C, 2 heures. L'étude par PCS de la suspension donne une taille des particules de 25 +/- 3 nm (très peu polydisperse). L'analyse élémentaire du polymère floculé est en accord avec une composition 80 % styrène-20% VBC: %C 85,24 (trouvé); 87,99 (calc)-% H 7,51 (trouvé); 7,38 (calc)-%Cl 4,34 (trouvé); 4,65 (calc). - Substitution de surface: à 50 g de suspension de nanoparticules de copolymère styrène-VBC diluée dans 280 ml de tampon HEPES (pHl=8,5), on ajoute 1 ml d'éthylamine (4,67 eq. par rapport au VBC initialement introduit). La suspension est agitée pendant 48 heures avant d'être dialysée pendant 1 heure afin d'éliminer l'éthylamine en excès (contrôle du pli; durée de la dialyse environ 1 h). L'analyse élémentaire N/CI du polymère floculé permet d'évaluer le taux de substitution à environ 50 %. Exemple 5 Greffage de groupement glucosidique sur les nanoparticules en suspension aqueuse On additionne le N-octylacrylamidoglucosyle (AC8) progressivement à la suspension de nanoparticules à pH tamponné à 8,5. L'avancement de la réaction est simplement déterminé par la disparition du réactif en solution: CCM, HPLC. Le taux de greffage exprimé par rapport aux groupements aminométhyles présents est de 76 %. FONCTIONNALISATION 1- Fonctionnalisation de particules de latex Estapor comportant des fonctions NH7 de surface Exemple 6 (CE3a) Excès de monomère dérivé de sucre AC8 à température ambiante A 10 ml de latex Estapor K K3-080, on ajoute 50 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 50 mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), 100 i1 de soude 1ON (concentration en soude dans le milieu réactionnel: 0,1N) puis 350 mg d'acrylamidosucre AC8 (10-3 mole, 5.5 eq/NH1). Le mélange réactionnel est laissé sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 68 h. La suspension stable obtenue est dialysée pour éliminer l'excès d'acrylamidosucre AC8. Le taux de fonctionnalisation est déterminé après floculation du polymère. Floculation: A 5 ml de suspension on ajoute 10 ml d'une solution saturée en sel (NaCI) et 10 ml d'une solution saturée en sulfate de magnésium (MNIgSO4). Le mélange est chauffé à 80 C pendant 1 h pour parfaire la floculation. Le polymère floculé est récupéré par filtration de la solution chaude puis lave abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. Le polymère ainsi isolé est séché à l'étuve à 60 C jusqu'à poids constant. Mise en évidence du greffage de sucre dans le polvmère floculé: La présence de sucre greffé dans le polymère est mise en évidence par le test spécifique "phénol-acide sulfurique". L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) du polymère met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre AC8 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié au polymère (Rf = 0). Exemple 7 (CE3f) Excès de monomère AC8 à chaud A 10 ml de latex Estapor;, K3-080, on ajoute 50 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 50 mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), 100 RI de soude 1ON (concentration en soude dans le milieu réactionnel: 0,1N) puis 350 mg d'acrylamidosucre AC8 (10-3 mole, 5.5 eq/NH,). Le mélange réactionnel est chauffé à 50 C sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 3,30 h. La suspension stable obtenue est dialysée pour éliminer l'excès d'acrylamidosucre AC8. Le taux de fonctionnalisation est déterminé après floculation du polymère. Floculation: A 5 ml de suspension on ajoute 10 ml d'une solution saturée en sel (NaCI) et 10 ml d'une solution saturée en sulfate de magnésium (MNIgSO4). Le mélange est chauffé à 80 C pendant 1 h pour parfaire la floculation. Le polymère floculé est récupéré par filtration de la solution chaude puis lavé abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. Le polymère ainsi isolé est séché à l'étuve à 60 C jusqu'à poids constant. Mise en évidence du greffage de sucre dans le polymère floculé: La présence de sucre greffé dans le polymère est mise en évidence par le test spécifique "phénol-acide sulfurique". L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) du polymère met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre AC8 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié au polymère (Rf = 0). Exemple 8 (CE6a) Quantité stoechiométrique de monomère AC8 à température ambiante A 10 ml de latex Estapor'.k K3-080, on ajoute 50 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 50 mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), 100 Fil de soude 10N (concentration en soude dans le milieu réactionnel: 0,1N) puis 52 mg d'acrylamidosucre AC8 (1.5 10-4 mole, 1 eq/NH2). Le mélange réactionnel est laissé sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 54 h. Le suivi de la réaction par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 8()/2()) met en évidence la disparition totale de l'acrylamidosucre AC8 (Rf = 0. 4). Le taux de fonctionnalisation est déterminé après floculation du polymère. Floculation: A 5 ml de suspension on ajoute 10 ml d'une solution saturée en sel (NaCI) et 10 ml d'une solution saturée en sulfate de magnésium (MNIgSO4). Le mélange est chauffé à 80 C pendant l h pour parfaire la floculation. Le polymère floculé est récupéré par filtration de la solution chaude puis lavé abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. Le polymère ainsi isolé est séché à l'étuve à 60 C jusqu'à poids constant. Mise en évidence de la présence de sucre greffé dans le polymère floculé: La présence de sucre greffé dans le polymère est mise en évidence par le test spécifique "phénol-acide sulfurique". L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) du polymère met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre AC8 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié au polymère (Rf = 0). Exemple 9 (CE6i) Quantité stoechiométrique de monomère AC8 à chaud A 30 g de latex EstaporcK K3-080, on ajoute 150 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 150 mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), 300 R1 de soude ION (concentration en soude dans le milieu réactionnel: 0,lN) puis 156 mg d'acrylamidosucre AC8 (4.5 10-4 mole, 1 eq/NH2). Le mélange réactionnel est chauffé à 58"C sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 3 h. Le suivi de la réaction par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) met en évidence la disparition totale de l'acrylamidosucre AC8 (Rf = 0.4). Le taux de fonctionnalisation est déterminé après floculation du polymère. Floculation: A 5 ml de suspension on ajoute 10 ml d'une solution saturée en sel (NaCI) et 10 ml d'une solution saturée en sulfate de magnésium (NIgSO4). Le mélange est chauffé à 80 C pendant 1 h pour parfaire la floculation. Le polymère floculé est récupéré par filtration de la solution chaude puis lavé abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. Le polymère ainsi isolé est séché à l'étuve à 60 C jusqu'à poids constant. Mise en évidence de la présence de sucre greffé dans le polvmère floculé: La présence de sucre greffé dans le polymère est mise en évidence par le test spécifique "phénol-acide sulfurique'. L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) du polymère met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre AC8 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié au polymère (Rf = 0). Exemple 10 (CE61) OQuantité stoechiométrique de monomère dérivé de sucre AC14 à chaud A 30 g de latex Estapor, K3-080, on ajoute 150 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 150 mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), 300 1l de soude I0N (concentration en soude dans le milieu réactionnel: 0,1N) puis 193 mg d'acrylamidosucre AC14 (4.5 10-4 mole, 1 eq/NH2). Le mélange réactionnel est chauffé à 58"C sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 5 h. Le suivi de la réaction par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) met en évidence la disparition totale de l'acrylamidosucre AC14 (Rf = 0.4). Le taux de fonctionnalisation est déterminé après floculation du polymère. Floculation: A S ml de suspension on ajoute 10 ml d'une solution saturée en sel (NaCl) et 10 ml d'une solution saturée en sulfate de magnésium (NigSO4). Le mélange est chauffé à 80 C pendant 1h pour parfaire la floculation. Le polymère floculé est récupéré par filtration de la solution chaude puis lavé abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. Le polymère ainsi isolé est séché à l'étuve à 60 C jusqu'à poids constant. Mise en évidence de la présence de sucre greffé dans le polvmère floculé: La présence de sucre greffé dans le polymère est mise en évidence par le test spécifique 'phénol-acide sulfurique". L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) du polymère met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre ACI4 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié au polymère (Rf = O). Exemple 11 (CE6m) Quantité stoechiométrique de monomère AC8 à chaud sans base ajoutée A 30 g de latex EstaporR K3-080, on ajoute 150 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 150 mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), puis 156 mg d'acrylamidosucre AC8 (4.5 10-4 mole, 1 eq/NIl,). Le mélange réactionnel est chauffé à 58 C sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 5 h. Le suivi de la réaction par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 8(0)/20) met en évidence la disparition totale de l'acrylamidosucre AC8 (Rf = 0. 4). Le taux de fonctionnalisation est déterminé après floculation du polymère. Floculation: A 5 ml de suspension on ajoute 10 ml d'une solution saturée en sel (NaCl) et 10 ml d'une solution saturée en sulfate de magnésium (NIgSO4). Le mélange est chauffé à 80 C pendant 1 h pour parfaire la floculation. Le polymère floculé est récupéré par filtration de la solution chaude puis lavé abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. Le polymère ainsi isolé est séché à l'étuve à 60 C jusqu'à poids constant. Mise en évidence de la présence de sucre greffé dans le polvmère floculé: La présence de sucre greffé dans le polymère est mise en évidence par le test spécifique "phénol-acide sulfurique". L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) du polymère met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre AC8 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié au polymère (Rf= O). 2 - Fonctionnalisation de particules de silice modifiée -(C1[2)4-NII, Analyse centésimale de la silice de départ: % C = 3,02; % N = 1,03; %Si = 41,75 % Exemple 12 (CLP23) Addition du monomère AC8(640) mg/300 mg) à chaud A 300 mg de la silice modifiée NH2, on ajoute 10 ml d'une solution aqueuse de soude IN, 50 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 50) mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), puis 640) mg d'acrylamidosucreAC8 (1.85 10-3 mole). Le mélange réactionnel est chauffé à 58'C sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 4 h. Le taux de fonctionnalisation est déterminé après séparation de la silice. Séparation de la silice modifiée: Le mélange réactionnel est neutralisé par addition d'acide chlorhydrique iN puis centrifugé. La silice ainsi isolée est lavée abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. La silice modifiée ainsi isolée est séchée à l'étuve à 60'C jusqu'à poids constant. * Mise en évidence de la présence de sucre greffé: La présence de sucre greffé sur la silice est mise en évidence par le test spécifique "phénolacide sulfurique'. L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) de la silice isolée met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre AC8 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié au polymère (Rf = O). Exemple 13 (CLP25) Addition du monomère AC8 (710 m2/100() ma) à chaud A 100 mg de la silice modifiée Nil2, on ajoute 10 ml d'une solution aqueuse de soude IN, 50 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 50) mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), puis 710 mg d'acrylamidosucre AC8 (2 10-3 mole). Le mélange réactionnel est chauffe à 58 C sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 20 h. Le suivi de la réaction par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) met en évidence la disparition totale de l'acrylamidosucre AC8 (Rf = 0.4). Le taux de fonctionnalisation est déterminé après séparation de la silice. Séparation de la silice modifiée: Le mélange réactionnel est neutralisé par addition d'acide chlorhydrique IN puis centrifugé. La silice ainsi isolée est lavée abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. La silice modifiée ainsi isolée est séchée à l'étuve à 60'C jusqu'à poids constant. Mise en évidence de la présence de sucre greffé: La présence de sucre greffé sur la silice est mise en évidence par le test spécifique "phénolacide sulfurique'. L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) de la silice isolée met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre AC8 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié au polymère (Rf = O). Exemple 14 (CLP26) Addition du monomère AC8 (710 mg/33() ma) à chaud A 330 mg de la silice modifiée NH2, on ajoute 10 ml d'une solution aqueuse de soude IN, 50 mg d'azoture de sodium NaN3 (bactéricide), 50) mg de nitrite de sodium NaNO2 (inhibiteur de polymérisation), puis 710) mg d'acrylamidosucre AC8 (2 10-3 mole). Le mélange réactionnel est chauffé à 58 C sous agitation douce (agitation magnétique) à l'abri de la lumière pendant 24 h. Le suivi de la réaction par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) met en évidence la disparition totale de l'acrylamidosucre AC8 (Rf = 0.4). Le taux de fonctionnalisation est déterminé après séparation de la silice. Séparation de la silice modifiée: Le mélange réactionnel est neutralisé par addition d'acide chlorhydrique IN puis centrifugé. La silice ainsi isolée est lavée abondamment à l'eau chaude pour éliminer l'excès de sels. La silice modifiée ainsi isolée est séchée à l'étuve à 60) C jusqu'à poids constant. Mise en évidence de la présence de sucre greffé: La présence de sucre greffc sur la silice est mise en évidence par le test spécifique 'phénolacide sulfurique". L'étude par chromatographie couche mince (éluant dichlorométhane/méthanol 80/20) de la silice isolée met en évidence l'absence de monomère acrylamidosucre AC8 libre (Rf = 0,4) et la présence de sucre lié à la silice (Rf = O). ETUDE DE LA STABILITE DES lATEX( MODIFIES 1 - à différents pH Les tests de stabilité ont été effectués sur une prise d'essai de 2 ml de suspension (CE6j, CE3f et CE61). Les mesures de plI ont été effectuées au moyen d'un pHmètre muni d'une électrode de verre. Le pHl des suspensions a été ajusté par addition d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 0.1 N. Les suspensions sont stables (examen visuel sur un intervalle de temps de 3 jours) dans une gamme de pH variant de 12 à 2. A pH 1, on observe une déstabilisation après 10 heures. Pour comparaison, on observe une déstabilisation immédiate de la suspension de latex de départ Estapor R K3-080 dès pl l = 3. 2 - en présence d'électrolytes Les tests de stabilité ont été effectués sur une prise d'essai de 2 ml de suspension. La stabilité des suspensions en présence de différents sels en concentration variable a été évaluée par examen visuel sur un intervalle de temps de 3 jours. Essais réalisés sur les suspensions CE6j, CE3f et CE6I. * Chlorure de sodium NaCI Les suspensions sont stables en solution saturée en NaCI (20() ml de solution aqueuse saturée en NaCI/2 ml de suspension). Pour comparaison, on observe une déstabilisation de la suspension de latex de départ Estapor R K3- dans les mêmes conditions. * Chlorure de calcium CaCI2 Les suspensions CE6j et CE61 obtenues en milieu NaOIl O,IN (pli de la suspension # 11) sont stables en présence de CaCI2 jusqu'à une concentration de 1 mol. 1-, La suspension CE3f est stable en présence de CaCI2 jusqu'à une concentration de 5.10-2 mol.l-l. La même suspension ramenée à pli 3 est stable à l'addition de CaCI2 jusqu'à une concentration de 1 mol. 1-1. Sulfate de magnésium MNSO_4 Les suspensions CEGj, CE3f et CE61 sont stables en présence de MgSO4 jusqu'à une concentration de 1 mol. 1-1. On observe une floculation irréversible pour des concentrations en NIgSO4 supérieures à 2 mol. 1-1. ADSORPTION DE PROTEINES SUR LES lATEX MODIFIFS Protocole: 1 g de suspension est dilué dans une solution aqueuse de protéine de concentration connue. La solution est laissée au repos pendant 14 heures. Le polymère est séparé par addition de sels (vide supra floculation des polymères modifiés) à température ambiante puis centrifugation. La proteine en excès dans le filtrat est dosée par la méthode colorimétrique au Bleu de Coomassie. Résultats: adsorption de l'albumine de sérum bovin BSA. La quantité de BSA adsorbée est supérieure à 500 mg par g de suspension (c'est-à-dire supérieure à 7 mg par mg de polymère "sec"). REVENDICATIONS 1. Particule de latex ou d'oxyde minéral, caractérisé en ce qu'au moins une chaîne, à l'extrémité de laquelle est attaché un reste glucosyle, est fixée à la surface de ladite particule. 2. Particule selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend (par unité de surface) de 0,4 à 50 chaines à laquelle est attaché un reste glucosyle (nm2). 3. Particule selon la revendication 2, caractérisée en ce que la chaîne a une longueur moyenne allant de 5 à 120 Angstrôms. 4. Particule selon la revendication 3, caractérisée en ce que la chaîne comporte de 6 à 80 atomes de carbone. 5. Particule selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle comporte en surface des radicaux fonctionnels amine dont au moins une partie participe à la structure de ladite chaine, cette dernière répondant à la formule :(CH2)n- N - CH - CHl - C - A - gluc I I i IIj R1 R4 R3 O dans laquelle R1 est un radical alkyle de CI àC4 ou un atome d'hydrogène, R3, R4 identiques ou différents représentent un radical alkyle inférieur Cenl C1 à C6 ou un atome d'hydrogène, A est la partie restante de ladite chaîne, n est un nombre entier de 1 à 10, gluc est le reste glucosyle, symbolyse la surface de la sphère. 6. Particule selon la revendication 5, caractérisée en ce que A est le radical -N-, R2 étant un atome d'hydrogène ou un radical alkyle R2 de C1 à C14 ou aralkyle de C7 à C14, lesdits radicaux étant éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux carboxylate ou sulfonate terminaux ou pendants. 7. Particule selon l'une des revendications 5 ou 6, caractérisée en ce que la proportion de radicaux amine modifiés est compris entre 10 et 99 %. & Particule de latex glucosyle, selon l'une des revendications 1 à 7, obtenus constituées de polymères obtenus par polymérisation de monomères éthyléniquement insaturés, présentant des radicaux fonctionnels amine en surface, caractérisée en ce qu'une partie des radicaux fonctionnels est reliée à un reste glucosyle et en ce que ladite chaine répond à la formule /Rl -CH2-Ns CH- CIHI- C- N- gluc 1 1 l l Il I R4 R3 0 R2 dans laquelle Ri, R2, R3, R4, gluc, ont la même signification que dans les revendications 5 et 6. 9. Particule de silice modifiée en surface par des radicaux fonctionnels amine, caractérisée en ce qu'une partie des radicaux fonctionnels est reliée à un reste glucosyle et en ce que ladite chaine répond à la formule: '-(CH2)n- N - CH - CHl - C - N-gluc III ji I I il I Ri R4 R3 0 R2 dans laquelle R1, R2, R3, R4, n, gluc, ont la même signification que dans les revendications 5 et6. 10. Particule selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le reste glucosyle est choisi parmi les restes des sucres suivants: glucose, galactose, galactopyranose, glyvcofuranose, fructose, fructopyranose. 11.Procédé de préparation d'une particule selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce qu'on greffe sur une microsphère de latex d'oxyde minéral fonctionnalisée en surface par des radicaux amine primaire ou secondaire, un acrylamidoglucosyle éventuellement N-alky\le par une addition de type Mlichael. 12. Procédé de préparation d'une particule de latex selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'on surpolymérise une semence de polystyrène, un monomère d'acrylamidoglucosyle éventuellement N-alkvle en présence d'une quantité appropriée de monomère de type acrylique. 13. Utilisation des microsphères selon l'une des revendications 1 à , en tant qu'agent de détection biologique. 14. Utilisation des microsphères selon l'une des revendications 1 à , en tant que phase stationnaire de chromatographie par affinité.