Brevet FR2727315A1 — publié le 19960531

UTILISATION D'UN DECAPEPTIDE A ACflVITE DE TYPE BENZODIAZEPINE POUR LA PREPARATION DE MEDICAMENTS ET DE COMPLEMENTS ALIMENTAIRES La présente invention est relative à l'utilisation d'un décapeptide de la caséine asl pour la préparation de médicaments et de compléments alimentaires. La caséine entière est un ensemble de protéines du lait qui a été largement étudié, par cxemplc par RIBADEAU-DUMAS (1). La caséine donnem, par chromatographie sur DEAE-cellulose, les principales hactiom qui sont dénommées respectivement: caséines y, caséine c, caséine À, caséine csl et io caséine a2. Les séqunces en acides aminés de ces caséines sont bien connues; en particulier celle de la caséine a%1 a été déterminée par MERCIER et ai. (2) et NAGAO et al. (3). On sait déjà que certains fragments pqeptidiques de ces différentes caséines ont des activités biologiques diveises et notamment des activités opiacées ou antiopiacées. Ainsi, les peptides 90-96, 90-95, 91-96 et 91-95 de la caséine asl ont une activité opiacée [ZIOUDROU et al. (4) et LOUKAS et al. (5)]. La demanderesse s'est intéressée à d'autres types d'activités de la caséine ctasl et des fagments de celle-ci, en particulier à l'activité de type baz- diazépine. Par 'activité de type benzodiazépine' on entend notamment les propriétés anticonvulsivantes et anxiolytiques. On a en effet trouvé par des tests in vitro sur le récepteur des benzodia- zépines et par des tests comportementaux in vivo chez le rat que le décapeptide défini ci-après et l'hydrolysat trypsique total le contenant ont des propriétés anticonvulsivantes et anxiolytiques intéressantes. Ainsi la présente invention a pour objet l'utilisation du décapeptide ayant la séquence aen acides aminés: Tyr-Leu-Gly-Tyr-Lcu-Glu-Gln-Leu-LTuArg 1 5 10 pour la préparation de médicaments à activité de type benzodiazépine, notamment pour le traitement des convulsions et de l'anxiété. L'invention a également pour objet les compositions pha contenant à titre d'ingrédient actif une quantité efficace dudit décapeptide en combinaison avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'invention concerne également les compléments alimentaires contenant à titre de principe actif ledit décapeptide ou l'hydrolysat trypsique total de la caséine as1 contenant ledit décapeptide ou une fraction de cet hydrolysat contenant ledit décapeptide. Ces compléments alimentaires conviennent pour supplémenter l'alimentation des personnes sujettes notamment aux convulsions ou à l'anxiété. Le décapeptide ayant la séquence en acides aminés ci-après: Tyr-L/u-Gly-Tyr-l.u-Glu-Gln-Leu-Leu-Arg 1 5 10 de masse moléculaire de 1 267 Da, correspond au peptide 91-100 de la caséine as%. Il peut être obtenu à partir de la caséine asl par hydrolyse enzymatique, en particulier à l'aide de la trypsine. Il peut être ensuite concentré ou isolé par chromatographie liquide haute performance (CLHP) en phase inverse, par chromatographie liquide haute performance d'échange d'anions ou par chromatographie de gel filtration de seuil 1 800 Da ou par centrifugation sur membrane et autres techniques de séparation sur membrane (micofiltration, ultra- filtration, etc.) Le décapeptide peut aussi être obtenu par synthèse pepdiq selon les procédés bien connus de l'homme de l'art, tels que ceux décrits par exemple par MERIF1EID (6). La caséine entière est obtenue à partir du lait par préc6ipitation acide et neutralisation à l'aide d'un alcali selon des procédés bien connus. Par exemple, on peut utiliser la méthode de NrISCHMANN et ai. (7). La caséine c1, utilisée comme produit de départ pour l'obtention de l'hydrolysat trypsique total et du décapeptide selon l'invention, peut être obtenue par les procédés classiques bien connus de l'homme du métier à partir du lait, de caséines entières, de caséinates et de concentrés de protéines totales du lait, obtenus par exemple selon les procédés décrits par THOMSON (8) et MAUBOIS (9). Par exemple, on peut préparer la caséine asl en mettant en oeuvre la méthode décrite par SANOGO et ai. (10). Cette méthode est une méthode de fractionnemaent sur DEAE-cellulose utilisant un gradient discontinu de chlorure de calcium comme éluant. Elle présente l'avantage de Of cr rapidement l'ensemble des caséines. Elle peut êtrec avantageusement mise en oeuvre avec, comme support échangeur d'anions, la DEAE--cellulose DE 52 [commercialisée par WHATMAN Ltd. Springfeld, Grande-Bretagne] qui est une résine pré-gonfIéc ne nécessitant 3s aucun pré--cycle acido-basique avant sa première utilisafion. En utilisant un autre type de résne DEAE-cellulose on peut éliminer en deux étapes seulement l'ensembló des caséines autres que la caséine a1 tout en augmentant la pureté et le rendement de la caséine as1 obtenue. Ainsi, on peut par exemple utiliser une résine sèche à la place d'mu résine pré-gonfdéc, telle que par exemple la DEAE--cellulose DE 23 [commercialisée par WHATMAN cité ci- dessus]. En utilisant une résine sèche et en suppimant lc cycle de pxétraitcment nécessaire pour obtenir une charge maximale, on limite l'cfficacité de la charge de la résine et donc la fixation du substrat sur celle-ci. Los médicaments utiles pour le traitement des convulsions ou de l'anxiété io préparés avec le décapeptide défini selon l'invention peuvent être administrés par différentes voics d'administation, par exemple par voie orale ou par voie parentérale. Pour une 'administration par voie orale, les compouition selon l'invention peuvent être sous forme de comprimés, gélules, poudres, granulés ou toute autre formei administrablc par voie orale. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent en outre contenir des véhicules pharmaceutiques acceptables couramment utilisés pour la préparation de formes orales. Pour l'administration par voie parentérale, on pourra utiliser des solutions salines isotoniques, des solutions injectables qui peuvent contenir des agents de 2o disprsion compatibles. L'hydrolysat trypsique total obtenu par action de la trypsine sur la caséine asl dans les conditions indiquées précédemment comprend de 5 à 6% en poids du peptide 91-100. Il peut êtr utilisé comme principe actif soit dans des compé alimentaires en combinaison avec des supports alimentaires de nature protéique ou glucidique, soit dans des produits alimentaires destiné à une alimentation parti- culière. L'invention va ête maintenant décrite plus en détail par les exemples ci- aprè non limitatifs. EXEMPLE 1 é on du nfi_'de 91-100 de la casé"aî..k. A - rpton de la caséine.,. g de caséinat de sodium ont été dissous dam 100 ml de tampon acétate 20 rM, pH = 6,6 contenant de l'urée 3,3 MN de rEDTA 35 mM et 0,1 % de 2mercaptoéthanol puis on a ajouté 20 g de résine DEAE-cclulose DE 23 équihlbté dans 150 ml du même tampon et on a agité le mélange résultant pendant environ min à 25 C. On a filtr sur bchner puis on a élué le rétcntat avec 2 fois 250 ml du tampon acétatc-uréc-EDTA Ccttc première filtration a permis d'éliminer une fraction FI contenant les caséines y, c ct [. On a cnsite ajouté 250 ml du tampon acétatc/urée contenant 35 mM dc CaCI2 et on a répété l'opération ci-dessus; on a ainsi pu éliminer une seconde fraction Fii qui contient la caséine as2. On a répété l'extraction ci-dessus en utilisant le tampon acftat/uréc contenant 70 mM de CaCI2 et on a isolé une fiaction Fil qui contient la caséine asl. A la fin de la p, la résie a été lavée avec le tampon initial et conservée à +4'C dans cette solution renfermant 0,2% d'azide de sodium. Ainsi stockée, la résine peut etre de nouveau utilisée directement, sans rén, pour une autre extraction. Les filtrats FI, F:, Fm, dialysés contre de l'eau ultra-pure puis lyophiés, ont été soumis à une électrophorèse en gel de polyacrylamidcurée afin de visualiser le fiactionnement. En absence de Caa2, les caséincs y, KC et ont été élués (FI). Ouant à la caséine as2, ellc est décrochée par une concentration en CaC2 de 35 mM (Fe). La troisièmc fraction (F]), éluée à une concentration en CaC12 égalc à 70 mM, conient les caséincs c%! et acso Cctte dernmicre n'est qu'une forie mineure de la caséine as diffcérant de la forme majeurc par la présence d'un groupement phosphate supplémenntairc cn position 41. Le dcgré de purctéc dce la caséinc Csl ainsi obtenue cst supérieur à 96 %. Ellec a été utilisée telic quc dans la suite du procédé sans étape de purification supplémentaire. B- ption & lb'hdrolvsat ày & la caséine asl L'hydrolyse trypsique de la caséine asl à la concentration de 0,2% (p/v) dans 25 ml de tampon NH3/HCOOH (57 mM/43 mM) pH = 8,5 à 37-C a été effectuée avec, comme enzyme, la trypsine paéatique bovine immobilisée sur billes d'agarose et traitée à la N- tosyl L-Phe chlorométhylcétoe ICK) (80 unités/ml de billes). On a choisi uneC concentration enzymatique égale 8,5 units Nac-benzoyl-L- arginine éthyl ester et un temps d'hydrolyse égal à une heure suivi d'une centrifugation à +40C pendant 5 min à 1800 g. Deux aliquotes enzymatiques ont été prélevés afin de réaliser deux hydrolyses en parallèle. Les surnageants provenant des hydrolyses, ccntrifus pour éliminer l'enzyme insoluble, ont été réunis. Neuf évapoMatio entrcup de lavages à l'eau ont été réalisées. Après la dernièrc évaporation, l'hydrolysat, débarrassé ainsi de la majeure partic de ses sels, a été repis dans un minum c'eau, lyophilisé et stocké à -30'C. C- Fractionement en CIP-phase einves en adient dactmoitile t sous conditions isocrriqm L'hydrolysat de caséine obtenu à l'étape B a été soumis à deux étapes de purification. Cl - prctio sur colonne C18 La premire étape de purification est un fractionnement de lhydrolysat trypsique de caséine asl en CLHP-phase inverse sur colonne C18 (Merck, Darmstadt, Allemagne) 250 x 4 mm, 100 A, S pm, en utilisant un gradienlt d'acétonitrile dans l'eau (en prsence de 0,1% d'acide trifluoroacéque ou TFA) allant dc 5% d'acétonitrile à 40% sur 70 minutes. Le pic s'éluant vers 61 min (environ 32% v/v d'acétoeitrile) et ontoeamm entre autrcs le peptide CNas1-(f91-100) a été colleUccté. L'acétonitrile ct le TA sont s évaporés sous pression r&luitc avant lyophilisation. C2 - purification sur colonne C4 Le pic précédemment collecté cst cnsuite purifié par CLHPphe inverse sur une colonne Delta Pak C4 150 x 3, 9 mm, 300 A, 5 ome (Waters, Midord, Royaumc-Uni) en conditions isocratiques d'acétonitrile 25% vhv dans l'eau en présence de 0,1% de TFA. Lc peptide CNasl-(91-100) s'élue à cnvion 10 min. il est collecté et lyophilisé. Le lyophilisat est repris dans l'eau et de nouveau lyophilié. La nature du pcptide est confirmée par spectrométrie de masse FAB. ('fst atom bombardment" ou bombardement électronique) (masse moléculaire détenminée : 1267,1 Da) ct par sa composition cn acides aminés déterminée par la méthode à la ninhydrine de HAMILTON et al. (11). Les profils d'élution sur colonnes C18 et C4 sont représectivnt sur les figures 1 et 2 sur lesquelles l'absorbance à 280 nm est portée cn ordonnées et le temps d'élution en abscisses. EXEMPL E 2: Obtention de fractions cnichics en _cmid-100) par différentes voies A- F aa l à yilc casly oaX1 mr iâ-m [ E vuC d'une pré-purification rapide de l'hydrolysat trypsique de caséine, on a réalisé un fractionnement grossier par centrifugation sur membrane ayant un seauil de coupure moyen de 2000 Da (AMICON YM1). 2 mg du produit obtenu à l'exemple 1 (étape B) dissous dan 1 ml deau ultra-pure sont placés dans un système de mi"oprtion Amicon de type MPS1. Le temps de centrifugation est de 40 ou 60 min pour un chap d'accélé n de 3900 g. Après écoulement du temps de ctrifugation, les deux systèmes de micro partition sont retirés de la centrifugeuse et les perméats et rétentats sot stocwés da des micro-tubes. Le contenu des différents mkro-tubs est ensuite lyophilisé. Le peptide CN S1-(f91-100) de faible masse moléculaire est pané à travers la membrane ct sc retrouve donc dans le pennmat. B- Fractionnementde l I de aséinec ac s1 Lchromatograhic e hbaug m 6ib m(MONO,Q. HR 5/5) L'utilisation d'une chaîn de comatoraph dc FPLC (Pbacia Uppsala, Suède) permet une séparation beaucoup plus fine des peptides mais sulemt à un niveau semi tif (injection de 1 à 2 mg d'hydrolysat trypsiquc de caséine asl). L'hydrolysat obtenu à l'exemple 1 (étapc B)) a été fractionné par un gradient S1 de 0 à 30% de B dans A pendant 45 min. puis de 30% à 100% dc B da A pondant min. (A: Tris-HC 20 mM pH 8,0, B: Tnris-Ha 20 mM pH 8,0 avec 350 mM de NaCI). Le peptide CN as1 -(f91-100) de faible masse moléculaire présentant un nombre faible d'acides aminés chargés a été élué au niveau dc la fraction correspondant au volume mort. C - Fractionnement de l'hydrolysat trypsique de caséine a_.l chromatogMaphic de gel filtration de scuil 1800 Da Cinq à dix milligrammes d'hydrolysat ont été déposés sur un lit de gel de Biogel P2 (Pharmacia, Uppsala, Suède) (diamèntre 1 cm, hauteur 40 cm) L'élution a été réalisée sous pression atmosphérique par de l'eau ultra-pure à un débit de 5 à 10 ml/h. Deux fractios (Fl et F2) ont ainsi été obtenues. La fraction F1 coteit les peptides exdus du gel (masse moléculaire supérieure à 1800 Da) et la fraction F2 contenant les peptides filtrés par le gel (dont le peptide CNasl--f91100)). TENSM PHARMACOILOGIOU FS A- TES1 IN VITRO SUR LE RECELUR DES BENZODIAZEINES L'cxpérience a été réalisée à l'aide d'un coffret commeialis par Dupont dc Nemours (NENQUEST TML Drug Discovery System, NED-002). La méthode est basée sur la competition entre un ligand radioactif du récepteur central des bnzodiazpines et une molécule à tester. Si la molécule a une affinité pour le récepteur, elle déplace le ligand marqué fixé au récepteur. Cc dpcmnt du ligand en fonction de la concentration en molécule à tester ajoutée permet de déterminer 1'IC50 de cette molécule c'est-à-dire la concentration qui permet d'obtenir 50% de l'effet maximum. Le ligand utilisé est le 3H-méthyl-fiunitraépm, une beaîmdia2ie qui posséde une forte spécificité pour le récepteur (Ki=1,2 nM) et une faible fixation aspécifique. On a incubé des préparations membranaires commercialcs des récepteurs centraux des benzodiazépines avec des concentations croissantes de l'échantillon à tester et une concentration fixe en radioligand. L'cubation dure une heure à +4'C. Cette température est volontairement choisie basse afin de limiter l'association/dissociation entre le réccptcur et le radioligand. Le fiunitraz4n a un temps de demi-association de 834 s à 0C et de 12 s à 35C (SPETH cLaL (12). Après une heure, le mélange a été passé sur filtre Whatman GF/B. Ces filtres retiennent les membranes et les ligandi (bnins, fragment(s) peptidique(s) de l'hydrolysat trypsique de caséine asl) qui y sont fixés. Après lavage, les filtres sont mis dans des flacons de comptage contenant du liquide à scintillation. L'émission de rayonnement p est comptée par un compteur à scintillation liquide. Si le ligand tritié est déplacé par la molécule testée, on observe une baisse du taux de radioactivité présente sur le filtre. Afin d'éliminer la radioactivité due à une liaison aspécifique et le ligand 2o tritié et le récepteur, un essai a été réalisé en incubant les membranes, le ligand tritié à la même concentration que celle utilisée pour les essais o est testée une molécule dont on veut déterminer l'IC. 50 et du Dlunitazépam non marqué à unec 500 fois en excès. La radioactivité résiduelle n'est domn due qu'à la fixation aspéci- fique puisqu'on suppose que tous les sites sont occupés par le fuitrazéam non marqué. On peut définir une valeur B égale au pourcentage de radioactivité fixée sur les récepteurs pour chaque concentration de molécule à tester par rapport à un csmi réalisé avec seulement le flunitrazépam marqué et les membranes (maximum de radioactivité). En portant le logarithme décimal de B/100-B en fonction du logarithme décimal de la concentration en molécul tester ajoutée, on peut déterminer lIC50 de cette molécule. Plus une IC50 est basse plus l'affinité de la molécule pour le récepteur est élevée. Pour l'hydrolysat trypsique total de caséine asl (non purifi4 la meilleurc IC50 vis-à-vis du récepteur central des benzodiazépines mi en évidnce à ce jour cst de 78 tiM. Pour le peptide CNasl -"91-100) purifié selon la méthode dcrite da l'exemple 1 étape C, lC50 est d'environ 88 uM. Ces tests ont été également réalisés avec le décapptide obtenu par synthèse pcptidique selon MERRIFOED (6). On a trouvé que lIC50 du peptide de synthèse est de 370,M contre 88 Mf pour le décapeptid d'oigine naturelle. Pour les fractions enrichies en pcptide CN S1-(f91- 100) selon les nids décrites dans l'exemple 2, l'activité a également été retrouvée. B - TE /N VVO CHEZ LE RAT WISTAR B1 Activité n1iante Le pentylènetétazole est une molécule agissant au niveau des canaux à chlorure du récepteur GABA A. En obstruant ce type de canal, il provoque des symptômes ressemblant à ceux de la acise d'épilepsie. Les molécules de type anti- épileptiques s'opposent à cet effet en réduisant les cons es dues à la présence du pentylènetétazole. Ces tests ont été réalisés dans la salle d'élevage pendant la phase d'obsmcit. La quantité d'hydrolysat trypsique de caséine as1 (D1) inct a été de 3 mg/ kg de rat. La voie d'injection utilisée était la voie intrapéritonale. L'hydrmlysat txypsique total a été mis en solution dans du diméthyl isosorbide 6ther à 25% dans l'eau; ce m6élange présente l'avantage d'être amphiphile. Le diméthyl isaobidc, miscible à l'eau, présente l'avantage de solubiliser des moléacules très hydropnobs. Trois paramètres ont été étudiés afin de décrire l'importance de la crise: - La sévérité de la crise qui s'6value d'après l'échelle de RACINE (13). Stade 0: aucune réponse compocmntale visible. Stade 1: immobilité accrue de l'animal. Stade 2: balancement de la tête et/ou mouvements cloniques de la mâchoire. Stade 3: stade 2 + redressement sur les pattes porieures. Stade 4: stade 3 + mouvements cloniques des pattes antrieures. Stade 5: crise complète. R ssement sur les pattes postrieures, clonus des pattes antérieures et de la face, perte de l'réquilibre. -La 1alen qui est le temps en secondes sparant l'injection du pentylènetéazole et l'apparition du premier signe de crise. - La duf: est le temps en secondes séparant le premier du dernmier signe de crise. Les résultats obtenus avec l'hydrolysat trypsique total figurent su les figures 3, 4 et 5 sur lesquelles on a indiqué respectivement: la sévérité (figure 3) la latence (figure 4) la durée (figure 5) Au niveau de la sévérité, les contrôles (C1) et (C2) effectués motent une relative constance, ce qui valide les observations réalisées avec l'hydrolysat. Avec la dose (3 mg/kg) d'hydrolysat trypsique injecté, on a noté une diminution accrue de la sévérité de la crise. Les moyennes passent de 3,53 + 0,40 à 2,13 + 0,47. L'analyse statistique au moyen du test de WILCOXON réalisée en prenant comme référence le contrôle antérieur au test de lhydrolysat donne, avec un Z=2,69, une tendance 0o significative (p phénomènc de répétition ou d'accoutumance. En cc qui concerne la latence, pour la dose 3 mg/kg, les méde panssent de 114 s, pour le contrôle anteérieur, à 277 s. Avec un Z = 2,17 (p pentylènetétrazolc du premier signe coml de crise. Pour la duréec, l'injection d'hydrolysat trypsiquc de caséinec as, à 3 mg/kg semble aller dans le sens d'une réduction de la durée de crise; néanmoins cette réduction (602 + 130 s. à 404: 123 s.) n'est pas significative (Z = 1,10). LaUbtance injectée a un effet protecteur, puisque le pentylènetéazole provoque des crises moins fortes, retardées et dont la durée semble baisser. L'effet est analogue à celui des substances qui potentialisent l'action GABAergiqu comme les benzoiaziE. B2 Activité anQiu Pour mesurer l'anxiété chez le rat, on a utilisé le test du labyrinthe en croix surélevé décrit par PELLOW cLL (14) basé sur la néophobie du rat. Le labyrinthe en croix comporte quatre branches de 50 cm de long et 10 cm de large. Les deux bras fermés sont entourés de murs de 25 cm de haut (Ie dessu restant ouvert pour l'observation) et l'ensemble est à 50 cm du sol. Le centre du labyrinthe communique avec les deux bras ouverts et les deux bras fermés. En lumière tamisée, moins un rat est anxieux, plus il aura tendance à explorer les bras ouverts ce qui ne corspond pas à son comportement naturel. Le nombre d'entrées effectuées par l'animal dans les bras ouverts, les bras fermés ainsi que le nombre d'entrées total sont des paramètres importants. Le temps passé dans chaque type de branches est également comptabilisé. D'autrs paramètres (22 au total) tels que le nombre de recdments, le nombre de toilettage (signes d'anxiété) ou la latence de la première entrée dam une branche ouverte ou fermée sont pris en compte. L'observation de l'animal après qu'il fut placé au centre du dispositif dure 5 min. l'ensemble de son comportm est filmé par caméra vidéo, procédure qui permet d'éviter les erreurs. On a observé 20 rats représentant le lot témoin, 20 rats recvant du diazépam (DZP) à 2 mg/kg comme contrôle positif et 20 mats traités avec l'hydrolysat trypsique de caséine a1s (H i 3 mg/kg (dose détmin par rpport à l'expériencc des convulsions). Le lot témoin (CIR) a reçu une injection intrapitonéale de solvant seul celui-ci est un mélange de gélatine et de mannitol (0,5%/5%) dissous dans de l'eau. Il permet de mettre en suspension le diazépam qui est insoluble dans les solvants classiquement injectables (eau, Naa 9 %o, éthanol 10 %). L'njcction chez les animaux de tous les lots s'effectue une demi-heure avant le passage dans le labyrinthe en croix. Pour démarrer l'expérience, le rat est placé au centre de l'appareillage. Les résultats obtenus sont reportés sur les figures 6, 7 et 8 sur lesquelles on a indiqué en fonction du type de traitement: - le pourcntag d'entrées dans les branches ouvertes (figure 6); - le nombre d'entrées effectuées dans les bras ouverts (BO) et les bras fermés (BF) (figure 7) - le temps passé dans les branches ouvertes (figure 8). Les rats traités au diazépam (DZP) effectuent 32,1 5,9% de leurs entres dans les branches ouvertes alors que les contrôles n'en effectuent que 15,1 3,0% (p ne varie pas significativement. Les rats traités au diazépam passent plus de temps dans les branches ouvertes (70,1+ 19,9 s; p statistiquement significative. il On peut donc conclure quc dans cc tcs en n'étudiant que ls paramètres majeurs, l'hydrolysat trypsique de caséine asl a une action comparable à celle du diaz4am mais avec un cffet moins nimportant; ceci n'est pas surpmant puisqu'il s'agit d'un hydrolysat brut. Références ht'lioswnttane (1) RIBADEAU-DUMAS, B., 1991, Physicochimic et biochimie des protéines du lait. Données récentes, Lait, IL 133-139. (2) MERCIER, J.C., GROSCLAUDE, F., and RIBADEAU-DUMAS, B., 1971, Structure primaire de la caséine asl bovine. Séquence complète, Eur. 1. Bochm., 27, 41-51. (3) NAGAO, M., MAKIn, M. SASAKI, R., and CHIBA, H., 1984, Isolation and sequence analysis of bovine Cs1-casein cDNA done, Agric. Biol. Chem.,, 1663-1667. (4) ZIOUDROU, C., S'REATY, RLA., and KLEEt, WA, 1979, Opioid peptides derived from food proteins: the exorphins, J. Biol. Chem., 25. 2446-2449. 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Compoditions phamacutiques, caractérisées en ce qu'elles continnent à titre de principe actif une quantité efficace du décapeptide ayant la séquence en acides aminés ci-après: Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu-Gln-LeuLcua-Arg 1 5 10 en combinaison avec un véhicule pharmactiquement acceptable. 3. Compléments alimentaires, c i en ce qu'ils contiennent une quantité efficace du décapeptidc ayant la séquence en acides aminés ci- après: Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Arg i 5 10 ou d'un hydrolysat trypsique total de caséine asl le contenant ou dune fraction de cet hydrolysat le contenant en combinaison avec des supports alimentaires de nature protéique ou glucidique. 4. Produits alimentaires destinés à une alimentation particulière contenant une quantité efficace du décapeptide ayant la structure en acides aminés ci-après: Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Arg 1 5 10 ou d'un hydrolysat trypsique total de caséine asl le contenant ou dune frtion de cet hydrolysat le contenant.