Brevet FR2730811A1 — publié le 19960823

La présente invention a pour objet un procédé pour diagnostiquer un désordre capillaire et/ou suivre l'évolution d'un désordre capillaire et/ou mesurer l'efficacité d'un traitement appliqué pour combattre un désordre capillaire. Par désordres capillaires, on entend toute modification du follicule pileux pour quelque raison que ce soit (par exemple modification de l'expression de gènes, modification du métabolisme, modification structurelle du follicule pileux, présence d'agent exogène (virus, bactérie)), dont la conséquence est, ou pourra être, un dérèglement, même extrêmement mineur, du cycle normal de vie du follicule pileux et/ou de sa pigmentation. La demanderesse a découvert que certains désordres capillaires présentent une phase inflammatoire, cette phase inflammatoire résultant de la modification du niveau d'expression des médiateurs de l'inflammation. Aussi, après de nombreux travaux, la demanderesse a pu montrer qu'il est possible d'utiliser au moins un follicule pileux isolé pour diagnostiquer des désordres capillaires, et d'utiliser ce follicule pileux isolé pour l'évaluation des risques d'un sujet à subir lesdits désordres. II est également possible d'utiliser ce follicule pileux isolé pour suivre l'évolution desdits désordres capillaires et mesurer l'efficacité d'un traitement appliqué pour les combattre. L'invention a donc pour objet un procédé pour diagnostiquer un désordre capillaire et/ou suivre l'évolution d'un désordre capillaire et/ou mesurer l'efficacité d'un traitement appliqué pour combattre un désordre capillaire, caractérisé par le fait que l'on isole au moins un follicule pileux d'un sujet, que l'on incube ce follicule pileux dans un milieu de culture adéquat pendant un temps suffisant et que l'on dose au moins un médiateur de l'inflammation, lié au désordre capillaire Par follicule pileux, on entend, selon l'invention, cheveu ou poil. Le follicule pileux peut être intact, c'est à dire comporter toutes les parties reconnues par l'homme du métier comme le constituant (voir à ce titre Science des traitements capillaires , Charles Zviak, Masson éditeur, 1987).On citera par exemple, et de manière non limitative, parmi ces parties, la papille dermique, le bulbe pilaire, les gaines épithéliales, la glande sébacée. Mais bien entendu, I'invention ne se limite pas au follicule pileux intact et concerne également tout follicule pileux qui après isolement n'aurait conservé qu'une portion des parties le constituant. Un avantage de l'invention est qu'elle procure un modèle de diagnostic des désordres capillaires à la fois simple, rapide et efficace, ne faisant pas nécessairement intervenir d'étapes invasives. Dans les désordres capillaires, ceux qui entraînent généralement le plus de conséquences dommageables pour les sujets les subissant sont relatifs à l'état de la chevelure du sujet. Le procédé selon l'invention permet donc de diagnostiquer des désordres capillaires relatifs à l'état de la chevelure du sujet et préférentiellement l'état présent ou futur de celle-ci. Ainsi la présente invention permet de déterminer le traitement adéquat, ledit traitement étant prophylactique ou curatif, pour limiter, voire éliminer, ledit désordre capillaire. L'invention permet en outre de suivre l'évolution desdits désordres capillaires et de mesurer l'efficacité d'un traitement appliqué pour les combattre. Généralement, ces désordres ont pour conséquence soit une modification de la couleur des follicules pileux, soit une modification de la densité, de la quantité ou de la qualité de ceux-ci, conséquence par exemple d'un ralentissement, d'un arrêt de la croissance, d'une chute des follicules pileux ou d'une pousse exacerbée des follicules pileux. Préférentiellement, le procédé selon l'invention permet de diagnostiquer au moins un désordre capillaire et/ou de suivre l'évolution d'au moins un désordre capillaire et/ou de mesurer l'efficacité d'un traitement mis en oeuvre pour combattre au moins un désordre capillaire, ledit désordre étant relatif au ralentissement ou à l'arrêt de la croissance, à la chute ou à la coloration des follicules pileux. Si l'on s'en tient au ralentissement, à l'arrêt de la croissance ou à la chute des follicules pileux, la conséquence à terme pour le sujet est une alopécie plus ou moins prononcée, dont on sait qu'elle peut avoir des conséquences esthétiques, psychologiques et sociales pour le sujet atteint. Plus particulièrement, le procédé selon l'invention permet de diagnostiquer au moins un désordre capillaire et/ou de suivre l'évolution d'au moins un désordre capillaire et/ou de mesurer l'efficacité d'un traitement mis en oeuvre pour combattre au moins un désordre capillaire, ledit désordre étant relatif au ralentissement, à l'arrêt de la croissance ou à la chute des follicules pileux. Le procédé selon l'invention permet donc de diagnostiquer au moins un désordre capillaire et/ou de suivre l'évolution d'au moins un désordre capillaire et/ou de mesurer l'efficacité d'un traitement mis en oeuvre pour combattre l'alopécie. Le terme alopécie recouvre toute une famille d'atteintes du follicule pileux ayant pour conséquence, quelqu'en soit la raison, la perte définitive partielle ou générale des cheveux. On peut citer par exemple l'alopécie androgénétique, I'alopecia areata (la pelade), ou l'alopecia totalis, ou encore l'alopecia universalis. Sans vouloir se lier à une quelconque théorie de l'invention, il semble que certaines alopécies passent par au moins une phase inflammatoire Ainsi préférentiellement le procédé selon l'invention permet de diagnostiquer au moins une phase inflammatoire de l'alopécie et/ou de suivre l'évolution d'au moins une phase inflammatoire de l'alopécie et/ou de mesurer l'efficacité d'un traitement mis en oeuvre pour combattre au moins une phase inflammatoire de l'alopécie et donc d'évaluer ainsi le risque de développement et/ou d'évolution d'alopécie encouru par un sujet donné. La phase inflammatoire de l'alopécie se caractérise, entre autres, par une modification du niveau d'expression de médiateurs de l'inflammation. Le risque d'alopécie encouru par un sujet donné peut donc être évalué par le procédé selon l'invention en dosant au moins un des médiateurs de l'inflammation. Ainsi, avantageusement, dans le procédé selon l'invention on cherche à doser au moins un des médiateurs de l'inflammation. Parmi ces médiateurs, on peut citer les cytokines, dont en particulier l'interleukine 1-a, I'interleukine 1-ss, I'interleukine 6, les facteurs de nécrose tumorale-a et ss (TNF-a et ss), les chémokines comme l'interleukine 8 ou le facteur chimiotactique et activateur des monocytes (MCAF), ou encore d'autres facteurs chimiotactiques responsables du recrutement des cellules lymphocytaires, monocytaires, de Langerhans ou basophiles au niveau du site inflammatoire, tels que les leukotriènes B-4, ou encore d'autres facteurs impliqués dans la cascade inflammatoire, tels que l'acide arachidonique, ou les prostaglandines, dont en particulier les prostaglandines E2. La demanderesse a en effet trouvé que chez certains sujets, et en particulier chez ceux présentant un début d'alopécie, le taux des interleukines est modifié. Le taux d'interleukine 1-a et d'interleukine 8, et plus particulièrement le taux d'interleukine 1-a, est augmenté chez la plupart des sujets présentant un début d'alopécie. Préférentiellement, le médiateur de l'inflammation à doser dans le procédé selon l'invention est l'interleukine 1-a et l'interleukine 8, plus particulièrement le taux d'interleukine 1-a La demanderesse a également trouvé que chez certains sujets présentant une alopécie avancée le taux des prostaglandines E2 est plus élevé que chez d'autres, suggérant une implication de ce médiateur dans la progression de ce désordre. Ainsi un dosage précoce d'une quelconque variation du taux de prostaglandines E2 permet de pronostiquer une aggravation de l'alopécie. Il est alors possible de suggérer un traitement approprié. Ainsi, les prostaglandines E2 sont un autre médiateur de l'inflammation lié à un désordre capillaire que le procédé selon l'invention peut doser. Le follicule pileux utilisé dans le procédé selon l'invention peut être isolé par dissection, quelle que soit la technique de dissection utilisée, ou encore, ce qui constitue un mode préférentiel de l'invention, par épilation. La dissection peut être pratiquée selon les méthodes classiques connues comme par exemple celle décrite dans "Cultivation of Murine Hair Follicules as Organoïdes in a Collagen Matrix", (Journal of Investigative Dermatology, 89, n"4, (1987), 369-379), méthode par laquelle le follicule est isolé par digestion du derme par de la collagénase, ou comme celle décrite dans la demande de brevet EP A 0 434 319 ou encore celle décrite dans la publication de Williams et Stenn (Dakin Williams and Kurt.S.Stenn, Dev. Biol. 165, 469-479 (1994)), méthodes qui ne font intervenir que des moyens mécaniques. Ces méthodes pour isoler le follicule pileux sont utilisées selon l'invention quand l'intégrité du follicule pileux est absolument requise. Préférentiellement on utilise celle décrite dans la publication de Williams et Stenn. L'épilation consiste en une séparation brutale du follicule pileux et du derme, généralement réalisée par une traction plus ou moins forte exercée sur la tige pilaire du follicule. Le follicule ainsi épilé peut contenir toutes les parties constituant le follicule pileux, mais le plus souvent une portion de celles-ci disparaîtront lors de l'épilation. L'épilation pour isoler le follicule pileux est un mode opératoire particulièrement intéressant puisqu'il présente les avantages d'être non invasif et donc non traumatisant pour le sujet, et d'être simple et rapide de mise en oeuvre. Un avantage supplémentaire réside dans le fait que l'épilation peut-être pratiquée par le sujet lui-même et en n'importe quel lieu, ce qui n'ajoute pas pour le sujet de contrainte supplémentaire. Après isolement, le follicule pileux est placé dans un milieu de culture adéquat. Ce milieu qui est un milieu nutritif est au moins constitué des éléments nécessaires au maintien en survie du follicule pileux. Bien entendu il peut contenir tout autre élément nécessaire par exemple à la croissance du follicule pileux. On peut citer à titre d'exemple comme milieu de culture bien connu de l'homme du métier, le milieu MEM modifié Dulbecco, le milieu Williams E, le milieu F12, le milieu de HAM, ou encore le RPM11640, vendus par les sociétés Gibco-BRL, Biomed, Boehringer ou encore Sigma. Un des avantages de l'invention réside dans le fait qu'elle permet d'obtenir une image de l'état du follicule pileux à un instant donné. Ainsi, avec un temps d'incubation très court, a-t-on un reflet de cet état au moment de l'isolement. Mais de manière générale, le temps d'incubation est conditionné par le temps qu'il faut au follicule pileux pour métaboliser le médiateur de l'inflammation recherché. Ce temps d'incubation peut aller de quelques minutes à plusieurs jours. Ce temps d'incubation peut aller de quelques secondes à plusieurs jours. A titre indicatif, le temps d'incubation est généralement compris entre 5 secondes et 96 heures, et de préférence entre 12 et 24 heures. L'image de l'état du follicule pileux à un instant donné est ainsi représentée par le médiateur de l'inflammation que l'on recherche dans le procédé. Pour cela, le procédé selon l'invention comprend une étape de dosage du médiateur de l'inflammation recherché. Après incubation, ce dosage peut s'effectuer directement sur le milieu de culture pour un médiateur de l'inflammation excrété par la cellule, ou dans le follicule pileux pour un médiateur de l'inflammation non excrété. Ainsi, et plus particulièrement dans le cas où le médiateur de l'inflammation recherché n'est pas excrété, on peut envisager une étape supplémentaire avant le dosage, au cours de laquelle le follicule pileux est broyé, afin de rendre plus accessible le médiateur de l'inflammation à doser. Bien évidemment, quel que soit le mode de mise en oeuvre du procédé selon l'invention, toute méthode de dosage connue par l'homme du métier peut être utilisée. On peut, à titre d'exemple et sans limitation, citer les méthodes de dosage des protéines ou des acides nucléiques par colorimétrie, par électrophorèse, par transcriptase reverse et amplification par la technique des polymérisations en chaîne, la spectrométrie de masse, la chromatographie (en phase gazeuse ou sur plaque), méthodes immunologiques. Dans le cas où le procédé est utilisé pour doser une sous- ou une sur-expression du médiateur de l'inflammation, une étape de comparaison des résultats du dosage par rapport à au moins un témoin est réalisée après le dosage du médiateur de l'inflammation recherché. L'homme du métier détermine aisément, par habitude, la nature du témoin nécessaire dans la mise en oeuvre du procédé. Le témoin correspond au dosage du même médiateur de l'inflammation venant d'une incubation dans les mêmes conditions d'un follicule pileux isolé de manière identique, ce follicule provenant d'un individu ou d'une population d'individus. Un des intérêts du procédé selon l'invention est d'être utilisable afin de mesurer les risques encourus par un sujet, en particulier les risques à développer une alopécie ou à voir évoluer une alopécie existante, par le biais d'un des médiateurs inflammatoires, tels par exemple l'interleukine 1-a. Ainsi, la demanderesse a mis au point un procédé par lequel en dosant linterleukine 1-a sur un follicule pileux isolé maintenu au moins en survie, il est possible de classer les sujets étudiés en fonction de leur risque à développer une alopécie, ou à voir évoluer une alopécie existante. Selon l'invention, les sujets peuvent être alors classés en fonction de leur taux en médiateur de l'inflammation dosé. Lorsque l'on se trouve face à un désordre capillaire dont l'une des composantes est un phénomène inflammatoire, on cherche à appliquer le traitement le plus approprié qui soit, pour combattre ce désordre. On va donc chercher à appliquer un traitement dirigé contre les médiateurs de l'inflammation. Le procédé selon l'invention permet de suivre dans le temps l'efficacité du traitement appliqué, en dosant régulièrement en cours de traitement, le médiateur de l'inflammation lié au désordre capillaire que l'on veut combattre. Ainsi, un des objets de l'invention est la mise en oeuvre du procédé selon l'invention dans le but de suivre l'évolution d'un traitement appliqué pour combattre un désordre capillaire. On va maintenant donner à titre d'illustration des exemples qui ne sauraient limiter en aucune façon la portée de l'invention. Les trois exemples qui vont être décrits, montrent que parmi la population des alopéciques, certains individus présentent au niveau de leur follicule pileux un désordre de production de facteurs inflammatoires (Interleukine 1-a et prostaglandine). L'estimation de ce caractère inflammatoire par la mesure du taux d'lL1-a dans le follicule pileux est reproductible au cours du temps. En conséquence, I'identification précoce des individus présentant une hyperproduction de ces médiateurs inflammatoires dans leurs follicules épilés, permet de prédire en avance le risque à développer une alopécie et d'engager une stratégie thérapeutique visant à limiter le développement de l'alopécie. Exemple 1: Etude d'un groupe de sujets relative à l'évaluation de leur risque à développer une alopécie, ou à voir évoluer une alopécie existante. Classification des sujets en fonction de leur taux d'interleukine 1 a. Cinq cheveux provenant de donneurs alopéciques sont prélevés dans la zone du vertex. Ils sont immédiatement incubés dans du milieu William's E commercialisé par la société Gibco BRL (Bethesda, MD, USA), en présence d'antibiotiques (penicillin-G, 100 unités/ml; streptomycine-S, 100 pig/ml, amphotericine 250 ng/ml) à raison de 200 pLI de milieu par cheveu épilé. Au bout de 20 heures, les surnageants de culture sont collectés dans un microtube puis centrifugés 5 minutes à 14000 tours/minute (Centrifugeuse Eppendorff, modèle 5415C). Les surnageants sont ensuite collectés dans un tube propre et placés à 4 C. La concentration d'interleukine 1 alpha est ensuite évaluée à partir de 200 1ll de surnageant au moyen d'un KIT ELISA Biotrak RPN 2140 commercialisé par la société Amersham (Les Ulis, France) en suivant les instructions du fabriquant. Sujets, selon la IL1-&alpha; (pg/ml) classification de Norwood* Sujet n 1 21,7 II Sujet n 2 11,6 II Sujet n" 3 6 IV Sujet n 4 0 III Sujet n 5 6 III Sujet n 6 0 III Sujet n 7 0 IV Sujet n 8 35 II Sujet n 9 0 III Sujet n 10 0 III Sujet n 11 19,2 II Sujet n 12 13,3 11 Sujet n 13 7 III Sujet n 14 0 Vou VI Sujet n 15 10,4 11 * Type d'alopécie selon O'Tar T. Norwood, Male Pattern Baldness : Classification and Incidence, Southern Medical Journal, November 1975, Vol 68, N". 11. Ces résultats montrent une bonne corrélation entre la phase de l'alopécie selon Norwood et le taux d'lL1-a. Les sujets considérés selon Norwood comme étant en début d'alopécie (classe II) présentent bien un état inflammatoire accentué, ce que confirme leur taux élevé d'lL1 -a (sujets 1, 2, 8, 11, 12 et 15). Certains sujets qui selon Norwood ont une alopécie déjà avancée (classe III et IV) présentent encore un taux d'lL1-a moyen, ce qui peut s'expliquer par le fait qu'ils terminent la phase inflammatoire de l'alopécie (sujets 3, 5 et 13). Les autres sujets (4, 6, 7, 9, 10 et 14) présentent une alopécie développée (bien installée ou très avancée) et un taux faible ou nul d'lL1-a indiquant qu'ils se trouvent dans une phase postérieure à la phase inflammatoire. Ces résultats montrent que les sujets présentant un fort taux d'lL1-a (2 7pg/ml) peuvent être considérés comme présentant un risque fort à très fort de développer une alopécie ou de voir progresser leur alopécie. Les sujets ayant un taux d'lL1-a faible ou nul ( Exemple 2: Etude d'un groupe de sujets relative à leur risque d'être en phase inflammatoire de l'alopécie. Persistance d'un taux élevé d'interleukine 1 alpha au cours du temps. 3 sujets alopéciques présentant un risque fort à très fort de développer une alopécie selon les critères tels que définis dans l'exemple 1 (production d'lL-1 2 7 pg/ml) et 6 sujets alopéciques présentant un risque nul ou faible de développer à court terme une alopécie, ou se trouvant dans une phase évolutive avancée de l'alopécie (production d'lL-1 IL 1-a: pg/ml T=0 T=3mois Sujet A 9,9 12,7 Sujet B 8.6 16.9 Sujet C 9.8 13.0 Sujet D 5.2 7.3 Sujet E 4.0 8.6 Sujet F 7.0 4.6 Sujet G 1.0 1.5 Sujet H 2.1 2.7 Sujet I 1.7 1.2 On observe que pour les sujets A, B, C, G, H et I, la deuxième analyse révèle qu'ils se situent dans le même groupe à risque que celui révélé lors de la première analyse. Les sujets D et E présentent une évolution du risque d'alopécie. A T = 3 mois, ils sont désormais en phase inflammatoire de l'alopécie. Le sujet F présente une évolution du risque d'alopécie montrant qu'il a probablement dépassé la phase inflammatoire de l'alopécie. Exemple 3: Etude d'un groupe de sujets alopéciques, relative à leur risque de voir évoluer ou s'aggraver leur alopécie ; classification des sujets en fonction de leur taux de prostaglandine E2. Validation par rapport à une population de sujets non alopéciques. Cinq cheveux provenant de donneurs alopéciques sont prélevés dans la zone du vertex. Ils sont immédiatement incubés dans du milieu William's E commercialisé par la société Gibco BRL (Bethesda, MD, USA) en présence d'antibiotiques (penicillin-G, 100 unités/ml; streptomycine-S, 100 Rg/ml, amphotericine 250 ng/ml). Au bout de 20 heures, les épilats de chaque donneur alopécique (5 cheveux) sont collectés dans un microtube sous une atmosphère d'argon puis stockés à -80 C. Le jour du dosage, on rajoute 250 RI de méthanol dégazé dans chaque tube puis chaque échantillon est broyé mécaniquement (10 rotations ) au moyen d'un pilon (tissue grind pestle SZ 20) commercialisé par la société Kontes (Vineland, New Jersey 08360, USA). Le broyat est ensuite soniqué (20 impulsions d'une seconde à 50% d'amplitude) à l'aide d'un sonicateur "vibra cell 72434" commercialisé par la société Bioblock scientific, (Paris, France). Le broyat soniqué est ensuite centrifugé à 4"C pendant 10 min. à 14000 tours/minute (Centrifugeuse Eppendorff, modèle 5415C). Le surnageant est ensuite collecté dans un microtube propre et lyophilisé pendant une heure.Le Iyophiîisat est repris dans 60 FI de tampon phosphate pH 7.5 fourni dans le Kit Biotrak (RPN222 ) commercialisé par la société Amersham (les Ulis, France). 50 pLI de cette préparation sont ensuite évalués pour leur contenu en PGE2 au moyen du Kit Biotrak RPN222 selon les indications du fabriquant. Résultats: Quantité de PGE2 extraites chez différents donneurs volontaires alopéciques ou non: Donneur n" PGE2 (pg/5 épilats) alopéciques (lot 1) non alopéciques (lot 2) a 4,70 b 11,40 c 6,2 d 1,48 e 1,99 f 2,60 g 3,00 h 4,40 0,96 2,20 k 3,90 Des analyses statistiques ont été effectuées par comparaisons par comparaisons des moyennes par le calcul du t de Student (D.Schwartz/Méthodes statistiques à l'usage des médecins et des biologistes. Flammarion médecine et sciences 1989). On formule l'hypothèse nulle (HO) comme étant: Lot n01 Lot ne2), tenant compte du fait qu'il s'agit de valeurs non appariées. Selon Student pour le t calculé, il y a rejet de HO au seuil de p = 5%. Ici p = 0,0025. Conclusion : puisque HO est rejetée, on peut conclure au seuil de 5% que les deux lots diffèrent de façon significative, les résultats obtenus pour le lot 1 sont significativement supérieurs à ceux obtenus avec le lot 2. Ainsi, on peut conclure que les 3 sujets alopéciques dont le taux de PGE2 est significativement élevé ont une probabilité forte de voir leur alopécie s'aggraver. REVENDICATIONS 1. Procédé pour diagnostiquer un désordre capillaire d'un sujet et/ou pour suivre l'évolution d'un désordre capillaire et/ou mesurer l'efficacité d'un traitement appliqué pour combattre un désordre capillaire, caractérisé par le fait que l'on isole au moins un follicule pileux dudit sujet, que l'on incube ce follicule pileux dans un milieu de culture adéquat pendant un temps suffisant et que l'on dose au moins un médiateur de l'inflammation, lié au désordre capillaire. 2. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que le désordre capillaire est relatif à l'état de la chevelure du sujet. 3. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que le désordre capillaire est relatif à l'état présent ou futur de la chevelure du sujet. 4. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que le désordre est relatif à la croissance, à la chute ou à la coloration des follicules pileux. 5. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que le désordre est relatif à la croissance ou à la chute des follicules pileux. 6. Procédé selon la revendication précédente, pour mesurer les risques d'alopécie et/ou d'évolution de l'alopécie d'un sujet. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on dose au moins un médiateur choisi parmi les cytokines, dont en particulier l'interleukine 1-a, I'interleukine 1-, 'interleukine 6, les facteurs de nécrose tumorale-a et ss (TNF-a et ), les chémokines comme l'interleukine 8 ou le facteur chimiotactique et activateur des monocytes (MCAF), ou encore d'autres facteurs chimiotactiques responsables du recrutement des cellules Iymphocytaires, monocytaires, de Langerhans ou basophiles au niveau du site inflammatoire, tels que les leukotriènes B-4, ou encore d'autres facteurs impliqués dans la cascade inflammatoire, tels que l'acide arachidonique ou les prostaglandines, dont en particulier les prostaglandines E2. 8. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que l'on dose au moins un médiateur choisi parmi les interleukines. 9. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que l'on dose l'interleukine 1-a. 10. Procédé selon la revendication 7, caractérisé par le fait que l'on dose les prostaglandines. 11. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que l'on dose les prostaglandines E2. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on isole le follicule pileux par dissection. 13. Procédé l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait que l'on isole le follicule pileux par épilation. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le milieu de culture comprend au moins un élément nécessaire au maintien en survie du follicule pileux. 15. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que le milieu de culture comprend au moins un élément nécessaire à la croissance du follicule pileux. 16. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le temps d'incubation est compris entre 5 secondes et 96 heures 17. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que le temps d'incubation est compris entre 12 et 24 heures. 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on dose le médiateur de l'inflammation recherché directement dans le milieu de culture. 19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé par le fait que l'on dose le médiateur de l'inflammation recherché dans le follicule pileux. 20. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait qu'avant le dosage du médiateur de l'inflammation recherché on procède au broyage du follicule pileux. 21 . Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on réalise une étape de comparaison des résultats du dosage par rapport à au moins un témoin, après l'étape de dosage du médiateur de l'inflammation recherché.