Brevet FR2734637A1 — publié le 19961129

Dispositif d'inspection optique d'un fluide, notamment pour analyses hématologiques L'invention concerne l'inspection optique d'éléments en suspension dans un fluide gazeux ou liquide, et plus particulièrement la mise en forme des faisceaux lumineux utilisés dans les appareils de comptage hématologique et de cytomètrie en flux. Un appareil d'analyse hématologique distingue automatique- ment les cellules du sang selon la famille à laquelle elles appartiennent (principalement les leucocytes, ou globules blancs, et les hématies, ou globules rouges), ainsi que la variété dans cette famille (par exemple, parmi les leucocy- tes, distinguer les lymphocytes, les monocytes, les neutro- philes et les éosinophiles, et parmi les hématies, distin- guer les réticulocytes). Actuellement, il faut pour cela recourir soit à plusieurs dispositifs différents capables chacun d'effectuer une partie de l'analyse souhaitée, soit à un dispositif équipé de plusieurs chambres d'analyses mises en série. La Demande- resse commercialise ainsi un dispositif automatisé sous la référence "module 5DIFF", capable de différencier les différentes variétés de leucocytes, ainsi que d'effectuer certaines numérations. Un tel dispositif est décrit dans le Brevet français n 89 14120 de la Demanderesse. Il comprend: - une cuve de mesure comportant un passage obligé pour le fluide, - une source de lumière propre à délivrer de la lumière à des moyens optiques agencés pour illuminer le passage obligé selon des caractéristiques géométriques et spectrales choisies, et - de premiers moyens optoélectroniques pour collecter une partie au moins de la lumière obtenue après traversée du passage obligé et délivrer à une unité d'analyse des signaux ("premiers signaux") représentatifs d'informations ("premiè- res informations") véhiculées par cette lumière collectée. On entend par caractéristiques spectrales aussi bien l'intensité que la longueur d'onde du rayonnement émis par la source de lumière, et par caractéristiques géométriques la forme générale et la topologie de la zone illuminée. Par ailleurs, on entend par moyens optoélectroniques, l'optique de collection, laquelle comprend aussi bien des éléments purement optiques chargés de collecter de la lumière (par exemple un objectif de microscope), que des éléments électroniques de détection de type diode. Dans l'application hématologique, les premières informations sont par exemple relatives à la forme et à l'absorbance des cellules contenues dans le fluide. Elles sont obtenues à l'aide, par exemple, de mesures par transmission parfaite- ment connues de l'homme de l'art, et qu'il est inutile de décrire. Une des difficultés de ces mesures réside dans le fait que tous les éléments en suspension dans le fluide à inspecter, et qui traversent le passage obligé sous illumination, doivent recevoir une même intensité lumineuse en un même intervalle de temps. En d'autres termes, la répartition de lumière sur toute la surface définie par le passage obligé doit être uniforme. Cela nécessite une mise en forme préalable du faisceau délivré par la source de lumière et destiné à illuminer ledit passage obligé. A cause de cette source de lumière et des moyens optiques actuellement utilisés, de tels dispositifs présentent un certain nombre d'inconvénients, comme par exemple l'encom- brement, la complexité, les fourchettes d'incertitude relativement importantes qui entachent les résultats des mesures, ou l'impossibilité de différencier les sous- variétés d'une variété donnée. On reviendra plus loin, et dans le détail, sur ces inconvénients. En conséquence, un but de l'invention est de procurer un dispositif de mise en forme d'un faisceau lumineux en vue d'inspection optique d'éléments en suspension dans un fluide, qui ne présente pas les inconvénients des disposi- tifs de la technique antérieure, notamment en termes de rendement, d'encombrement, de complexité et de coût. Selon l'invention, les moyens optiques d'illumination com- prennent un premier élément optique diffractif destiné à la mise en forme du faisceau de lumière délivré par la source. Cet élément possède au moins une surface qui interagit avec la lumière issue de cette source, et présente un motif tridimensionnel prédéterminé en fonction d'une part des caractéristiques de ladite source et d'autre part des caractéristiques géométriques et spectrales choisies requises pour l'illumination du passage obligé. On entend par élément optique diffractif, un composant dont une face au moins présente un motif réalisant une structure capable de faire interférer de façon constructive, selon les lois de l'optique diffractive, les photons émis par une source de caractéristiques connues. Selon un aspect de l'invention, les caractéristiques géométriques et spectrales choisies, requises pour l'illu- mination du passage obligé, comprennent une illumination uniforme, à la longueur d'onde choisie, d'une surface sensiblement plane, fermée et de géométrie donnée. Il a été observé qu'en remplaçant une partie au moins des moyens optiques destinés dans la technique antérieure à mettre en forme la lumière émise par la source, par un unique élément optique diffractif de très faible encombre- ment et adapté spécifiquement, d'une part, à la source, et d'autre part, aux caractéristiques géométriques et spectra- les requises pour l'illumination du fluide à analyser, il est possible de réduire notablement l'encombrement du dispositif, et surtout d'améliorer très notablement la précision et la résolution des mesures. Aucune optique géométrique conventionnelle de faible encom- brement et de coût modéré ne peut permettre l'obtention d'une illumination vérifiant de telles caractéristiques. Selon une autre caractéristique de l'invention, la source de lumière est une source à rayonnement sensiblement monochro- matique dont la longueur d'onde d'émission est choisie de sorte qu'elle induise la fluorescence d'une partie au moins du fluide traversant le passage obligé. Par ailleurs, on prévoit de seconds moyens optoélectroniques destinés à collecter une partie au moins de la fluorescence émise par le fluide et à délivrer, à l'unité d'analyse, de seconds signaux représentatifs de secondes informations véhiculées par cette fluorescence collectée. Le fluide à inspecter est préalablement traité par un moyen cytochimique approprié. En fait, le traitement consiste à colorer spécifiquement certains composants de ce fluide au moyen d'un colorant fluorescent. En remplaçant la source de la technique antérieure, de type lampe, par une source monochromatique, comme par exemple une diode laser, il est possible d'adapter le dispositif au fluide à analyser afin que la longueur d'onde émise par cette source puisse provoquer la fluorescence des composants colorés en suspension dans ledit fluide. La coopération de la source monochromatique avec l'élément optique diffractif, qui est conçu pour travailler avec cette source particulière, renforce encore la qualité de l'illumi- nation, sur le plan de la définition de la surface illuminée et surtout de l'uniformité de l'intensité de l'illumination sur l'ensemble de l'aire de ladite surface. Bien entendu, cette source permet également d'effectuer d'autres mesures, comme par exemple les mesures par trans- mission et/ou de diffraction à différents angles. A cet effet, et selon encore une autre caractéristique de l'invention, le dispositif peut être équipé de troisièmes moyens optoélectroniques destinés à collecter une partie au moins de la lumière diffractée par le fluide et à délivrer, à l'unité d'analyse, de troisièmes signaux représentatifs de troisièmes informations véhiculées par cette lumière diffractée collectée. Le dispositif proposé permet donc d'intégrer une pluralité de techniques d'analyses différentes et non destructives, et notamment la technique d'analyse de la fluorescence, dans un volume plus restreint que dans les dispositifs de la technique antérieure. De plus, ces analyses peuvent être réalisées en même temps et avec un unique échantillon. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, le dispositif peut comprendre au moins un second élément optique diffractif dont l'une au moins des surfaces, qui interagissent avec la lumière obtenue après traversée du passage obligé, présente un second motif tridimensionnel prédéterminé en fonction d'une fonction de transfert fréquentielle et géométrique de l'un au moins des moyens optoélectroniques. Un tel second élément permet de supprimer tout ou partie des éléments optiques traditionnels, de type objectif de micros- cope ou lentille convergente, lesquels sont nécessaires à l'acheminement de la lumière transmise au niveau de chaque détecteur du dispositif. Désormais, un unique élément est capable de séparer plusieurs longueurs d'onde contenues dans un faisceau d'entrée pour former plusieurs faisceaux monochromatiques non colinéaires, et de focaliser chaque faisceau en un lieu donné prédéterminé avec une géométrie particulière. Très avantageusement, le premier motif tridimensionnel est un premier réseau diffractif gravé dans un substrat transpa- rent à la longueur d'onde d'émission, et le second motif tridimensionnel est un second réseau diffractif gravé dans un substrat transparent aux longueurs d'onde d'émission et de fluorescence. On pourrait envisager de réaliser les réseaux diffractifs par holographie classique, en figeant des franges d'interfé- rences dans une émulsion photosensible. Mais, de tels réseaux ne présentent pas toujours la stabilité temporelle voulue, et leur fabrication industrielle est plus difficile que celle d'un réseau diffractif gravé. De tels réseaux diffractifs gravés peuvent être réalisés par microlithographie, par exemple, par faisceau d'électrons ou ablation laser. Le substrat peut être choisi en fonction de la longueur d'onde d'émission et de la longueur d'onde de fluorescence de sorte qu'il soit le moins absorbant possi- ble, permettant ainsi de renforcer l'efficacité de diffrac- tion de l'élément optique diffractif. Selon un autre aspect de l'invention, les premier et second réseaux diffractifs sont de type numérique à modulation de relief, ladite modulation représentant une fonction prédé- terminée capable d'action diffractante cohérente sur la phase et/ou l'amplitude respectivement de la lumière émise par la source et de la lumière obtenue après traversée du passage obligé. Chaque fonction est déterminée à l'aide d'un calculateur, en prenant en compte les caractéristiques de la lumière entrante (source, ou faisceau transmis et fluorescence) et de la surface à illuminer (fluide, ou surface de détection du ou des détecteurs), puis transformée numériquement en éléments de base qui forment un réseau diffractif. Chaque élément possède une position donnée et une hauteur donnée, ce qui justifie l'appellation de réseau diffractif à modulation de relief. Selon une autre caractéristique de l'invention, chaque réseau diffractif possède une modulation de relief d'au moins deux niveaux, et de préférence seize niveaux. La modulation étant réalisée numériquement, la hauteur de chaque élément est codée de façon binaire. On peut donc associer un niveau à chaque hauteur. Le nombre de niveaux de modulation varie, en conséquence, selon les puissances de 2. Ce nombre ne peut donc prendre en principe que les valeurs 2, 4, 8, 16... L'efficacité de la diffraction de chaque réseau va dépendre du degré de similitude entre la fonction diffractante calculée et le motif tridimensionnel gravé. Ce degré de similitude dépend, quant à lui, du pas entre deux niveaux consécutifs, ou en d'autres termes du nombre de niveaux définissant l'amplitude maximum de la fonction diffractante. Plus le nombre de niveaux est important, plus l'efficacité de la diffraction est grande. Mais, on peut démontrer que cette efficacité croit rapidement jusqu'à environ 95%, lorsque l'intensité maximale de la fonction est convertie en 16 niveaux, puis elle tend très lentement vers une asymptote correspondant à 100% d'efficacité. Cependant, les coûts de fabrication d'un réseau à modulation de relief croissent de façon sensiblement exponentielle avec le nombre de niveaux. En conséquence, une modulation à plus de 16 niveaux entraî- nerait des coûts supplémentaires très important pour un gain d'efficacité très faible. Les éléments optiques diffractifs peuvent être du type dit de Fourier ou du type dit de Fresnel. Bien entendu, l'un peut être du type Fresnel tandis que l'autre est du type Fourier, ou inversement. On entend par optique de Fourier, un élément qui délivre un faisceau d'ondes dont les ordres +1 et -1 sont réels, ce qui autorise deux variantes. Une première variante dite "cen- trée" (ou en anglais "on axis") dans laquelle les deux ordres +1 et -1 se recouvrent sur l'axe optique de l'élé- ment. Une seconde variante dite "décentrée" (ou en anglais "off axis") dans laquelle les deux ordres +1 et -1 sont répartis symétriquement de part et d'autre de l'axe optique de l'élément, sans se recouvrir. La seconde variante permet certes d'obtenir un mode plus propre car en sélectionnant l'un des ordres +1 ou -1 désaxés on s'affranchît de l'ordre central résiduel 0, mais cela divise le rendement de diffraction par deux puisque l'énergie apportée par chaque ordre n'est plus sommée. Ce type d'élément délivre une image de l'objet en champ lointain, ce qui veut dire que l'image de l'objet est nette à l'infini. On entend par optique de Fresnel, un élément qui délivre un faisceau d'ondes dont l'ordre +1 est réel et l'ordre -1 est virtuel, ce qui n'autorise qu'une possibilité. Une telle optique est donc équivalente à une lentille en optique géométrique conventionnelle. Ce type d'élément délivre une image de l'objet en champ proche. Préférentiellement, le premier élément optique diffractif comprend une unique surface comportant un motif diffractant de type Fresnel à seize niveaux. Cette solution est préférée actuellement car, comme indiqué ci-dessus, l'optique de Fresnel délivre une image de l'objet en champ proche. Par conséquent, l'élément diffractif peut à lui seul réaliser à la fois une distribution uniforme de l'énergie contenue dans le faisceau incident, et focaliser cette énergie en un endroit donné, comme par exemple à la frontale d'un objectif, ou directement au niveau du passage obligé, sans qu'il soit nécessaire d'interposer une lentille de focalisation, ce qui est le cas pour les optiques de Fourier. Cela permet donc de réduire encore un peu plus l'encombrement du dispositif d'inspection. De façon également préférentielle, le second élément optique diffractif comprend une unique surface comportant un motif diffractant de type Fourier à seize niveaux. Cette solution est préférée actuellement car, comme indiqué ci-dessus, l'optique de Fourier délivre une image de l'objet en champ lointain et peut fonctionner en mode centré permettant ainsi de délivrer l'image nette du faisceau transmis et/ou de la fluorescence sur une surface de détection relativement éloignée, sans faire appel à d'autres éléments optiques, et de perdre un minimum de signal lumineux. Dans la description qui suit, faite à titre d'exemple, on se réfère aux dessins annexés, sur lesquels: - la figure 1 est un schéma illustrant un dispositif de la technique antérieure; - la figure 2 est un agrandissement d'une partie centrale de la cuve illustrée figure 1, illustrant la zone d'interaction entre le faisceau calibré d'analyse et le fluide; - la figure 3 est un schéma illustrant un dispositif selon l'invention dans un mode de réalisation simplifié; - les figures 4A et 4B illustrent respectivement une partie d'un élément optique diffractif vue en coupe transversale pour une modulation à 2 niveaux (A) et à 16 niveaux (B); - la figure 5 est un exemple d'image de réseau diffractif de type Fresnel à deux niveaux de phase; - la figure 6 est un schéma illustrant un dispositif selon l'invention dans un mode de réalisation préférentiel; et - la figure 7 est un exemple d'image de réseau diffractif de type Fourier à deux niveaux de phase. Les dessins annexés comportent de nombreux éléments de caractère certain, qu'il est difficile de définir complète- ment par le texte. En conséquence, ils font à ce titre partie intégrante de la description, et pourront contribuer à la définition de l'invention. On se réfère tout d'abord aux figures 1 et 2 pour décrire la technique antérieure. Une lampe 1, généralement en tungstène et de forte consomma- tion électrique, émet un rayonnement électromagnétique large bande que l'on filtre 2, puis met sous forme de faisceau F calibré à l'aide de lentilles 3 et 4 et d'un diaphragme 5, afin qu'il présente une section choisie, de forme généra- lement rectangulaire. Le faisceau calibré FC est ensuite dirigé vers un premier objectif de microscope 6 (x20) à la frontale duquel se forme l'image de la section rectangulaire qu'il présentait au niveau du diaphragme 5, et qui réduit cette image afin qu'elle présente des dimensions prédéterminées au niveau d'un passage obligé 15 d'une cuve de mesure 8 dont la description détaillée est donnée dans le Brevet français précité de la Demanderesse (n 89 14120). La cuve de mesure 8 comprend un conduit 9 qui canalise le fluide (du sang) et le délivre au niveau d'un orifice calibré 14 réalisé dans une paroi en saphir 13 et destiné à ne laisser passer qu'une cellule sanguine à la fois. Chaque cellule débouche alors dans une chambre de mesure 7 formant passage obligé et délimitée par une paroi 16 transparente à la lumière du faisceau calibré FC. La paroi 16 de la chambre présente une ouverture de sortie 17 en regard de l'orifice calibré 14 par laquelle les cellules analysées sont évacuées vers l'extérieur. Après traversée de la chambre de mesure 7, le faisceau cali- bré FC qui s'est transformé lors de l'interaction avec le sang pour devenir un faisceau transmis FT, débouche dans un second objectif de microscope 18 (x20), identique au premier 8, qui le met en forme et le dirige vers un cube séparateur 19 qui le réfléchit perpendiculairement vers une photodiode de collection 20. Le second objectif, le cube séparateur et la photodiode forment les premiers moyens optoélectroniques. On prévoit également une voie de mise au point des objec- tifs, sensiblement dans l'axe du faisceau transmis FT. Elle comprend un dépoli 21 permettant de former l'image superpo- sée du faisceau calibré FC au niveau de la chambre de mesure 7 et du fluide, et une lentille divergente 22 interposée entre le dépoli 21 et le cube séparateur 19 destiné à grossir l'image superposée précitée. La photodiode 20 mesure l'intensité du faisceau transmis FT, lequel est plus ou moins absorbé par les différentes variétés de cellules du sang avec lesquelles il interagit. Cette fluctuation de l'absorbance est due non seulement à leurs différents volumes, mais aussi à leur particularités internes, comme par exemple la présence ou non d'un noyau, ce qui est le cas des leucocytes. Cette mesure est transfor- mée en signaux qui sont adressés à une unité d'analyse 24, o ils sont corrélés à des signaux délivrés par un généra- teur de courant 23 connecté à la cuve de mesure 8, afin d'en déduire d'une part la variété à laquelle appartient la cellule passée au travers de l'orifice 14 à un instant donné, et d'autre part, par intégration sur une période donnée, le nombre de cellules appartenant à chaque variété détectée. Les techniques permettant les mesures par résistivité et par transmission sont parfaitement connues de l'homme de l'art et sont détaillées dans le Brevet français précité de la Demanderesse (n 89 14120). Il est maintenant fait référence à la figure 3 pour décrire un mode de réalisation simplifié de l'invention. Le dispositif proposé sur la figure 3 comprend une source de lumière monochromatique de très faible consommation électri- que et dont la longueur d'onde d'émission est choisie en fonction de la bande spectrale d'excitation du colorant fluorescent choisi pour colorer certains composants du fluide à analyser. De préférence, cette source est une diode laser. Mais, bien entendu, la source monochromatique peut être un laser, ou plus généralement une source dont la longueur d'onde et la puissance d'émission autorisent la fluorescence des compo- sants colorés à analyser. Dans l'exemple illustré, la source est une diode laser 31 délivrant un faisceau F1, de section droite sensiblement elliptique et dont l'énergie présente une répartition gaussienne, en direction d'un élément optique diffractif 32 sur lequel on reviendra ultérieurement. Cet élément 32 possède une surface avant 33, en regard de la diode active, qui agit sur le faisceau F1 délivré par cette diode 31 de sorte qu'il présente des caractéristiques géométriques et spectrales choisies au niveau de la cuve de mesure 8, laquelle est identique à celle décrite sur les figures 1 et 2. Dans l'exemple décrit, les caractéristiques géométriques portent sur la forme du faisceau, laquelle doit être rectangulaire, et sur les dimensions du rectangle, lequel doit mesurer 100 pm x 30 pm dans le passage obligé 15 de la cuve de mesure 8, afin de posséder des dimensions sensible- ment égales aux dimensions transversales du flux. Par ailleurs, les caractéristiques spectrales portent sur la répartition énergétique au niveau du passage obligé, laquelle doit être quasi-uniforme (de préférence avec des écarts inférieurs à 5%) sur l'ensemble du rectangle décrit ci-dessus, et sur la monochromaticité du faisceau, laquelle est assurée directement par la source. Bien entendu, dans d'autres applications, ou bien si la cuve n'est pas la même que celle décrite, la forme du faisceau au niveau du passage obligé pourra être différente d'un rectan- gle. Il en va de même des dimensions. Presque toutes les formes de faisceau peuvent être envisagées puisque l'élément diffractif est réalisé en fonction des caractéristiques de la source et des caractéristiques que doit présenter le faisceau au niveau du passage obligé dans la cuve de mesure. Dans le mode de réalisation illustré, l'élément diffractif 32 délivre en fait un faisceau de répartition énergétique uniforme et rectangulaire, mais de dimensions supérieures à celles décrites précédemment, au niveau de la frontale d'un premier objectif de microscope 6 (x20), lequel réduit les dimensions du faisceau rectangulaire de sorte qu'elles soient égales à celles requises au niveau du passage obligé (100 Mm x 30 Mm). Dans ce mode de réalisation, il y a donc coopération entre l'élément diffractif et le premier objectif pour délivrer le faisceau au niveau de la chambre de mesure 16. Mais, il est clair que l'on peut se passer d'une telle coopération, l'élément diffractif étant alors conçu pour délivrer le faisceau de caractéristiques choisies directement dans la chambre de mesure. Par ailleurs, dans l'exemple illustré, le faisceau F1 issu de la diode 31 est orienté perpendiculairement à l'axe optique d'analyse. En conséquence, pour atteindre le premier objectif 6, le faisceau F1 subit une réflexion à 90 sur une lame dichroïque 34 centrée sur l'axe optique d'analyse. Au delà du premier objectif, le faisceau suit le même chemin que dans le dispositif de la technique antérieure illustré sur les figures 1 à 2. Il traverse donc la chambre de mesure 16 de la cuve de mesure 8 dans laquelle se trouve le passage obligé 15 du sang 11. Il est alors transformé en un faisceau transmis FT par interaction avec le sang, puis pénètre dans un second objectif de microscope 18 (x20), identique au premier 8, qui le met en forme et le dirige vers un cube séparateur 19 qui le réfléchit perpendiculaire- ment vers une photodiode de collection 20. Cette photodiode est placée à une distance de l'axe de symétrie vertical de la chambre de mesure 7 égale à celle qui sépare l'élément diffractif 32 de ce même axe. Ainsi, les dimensions du faisceau transmis FT au niveau de la photodiode 20 sont sensiblement égales à celles que présente le faisceau en sortie de l'élément diffractif 32. Le second objectif 18, le cube séparateur 19 et la photodiode 20 forment les premiers moyens optoélectroniques. On peut prévoir également une voie de mise au point des objectifs, sensiblement identique à celle illustrée sur la figure 1 et décrite ci-avant. Bien entendu, le dispositif proposé comprend également, comme dans la technique antérieure décrite précédemment, un générateur de courant 23 connecté d'une part à la cuve de mesure 8 et d'autre part à une unité d'analyse 24, elle même connectée à la photodiode 20, ce qui lui permet de détermi- ner la variété de chaque cellule du sang analysé et le nombre de cellules appartenant à chaque variété détectée. Mais, le dispositif proposé comprend également de seconds moyens optoélectroniques pour collecter d'autres informa- tions dans la cuve de mesure. En effet, la longueur d'onde d'émission de la diode laser 31 est choisie afin d'induire la fluorescence de certaines sous-variétés de cellules contenues dans le sang à analyser et préalablement colorées par un colorant fluorescent approprié. Soumis à un rayonnement lumineux incident donné, le colorant contenu dans les cellules colorées absorbe ce rayonnement et réémet quasi-instantanément (10-8 s) et de façon isotrope un rayonnement de longueur d'onde supérieure au rayonnement incident. Cette réémission est appelée fluorescence. Il est donc possible de récupérer une partie de la fluores- cence, soit à 90 de l'axe optique d'analyse, soit parallè- lement à cet axe (épifluorescence). Le dispositif de la figure 3 illustre une mesure d'épifluorescence à 0 (fluo- rescence recueillie parallèlement à l'axe optiques dans la direction opposée au faisceau F1 issu de la diode 31). La fluorescence à collecter traverse le premier objectif 6, puis la lame dichroïque 34, et se dirige vers un filtre interférentiel 35 qui sélectionne la seule longueur d'onde de fluorescence des cellules fluorescentes, ce qui permet de rejeter toutes les autres longueurs d'onde parasites, comme par exemple celle de la diode laser. Puis, une fois filtrée, la fluorescence est collectée par un tube photomultiplica- teur 36 connecté à l'unité d'analyse 24. L'intensité mesurée par le tube 36, sur un intervalle de temps donné, est corrélée aux autres mesures par transmission et par résisti- vité, ce qui permet d'en déduire des informations sur certaines sousvariétés de cellules, et notamment sur leursnombres respectifs. Il est clair que l'on peut parfaitement intervertir les positionnement respectifs du tube photomultiplicateur et de la diode laser couplée à l'élément diffractif. De même, on peut réaliser le dispositif selon l'invention en logeant la diode laser, couplée à l'élément diffractif, parallèlement à l'axe optique d'analyse, et en plaçant les seconds moyens optoélectroniques de collection de la fluorescence (tube photomultiplicateur et filtre interférentiel) en regard de la cuve de mesure afin de collecter la fluorescence à 90 de cet axe optique d'analyse. On se réfère maintenant aux figures 4A, 4B et 5 pour décrire l'élément optique diffractif 32. Il comprend sur sa face avant 33, en regard de la diode laser 31, un motif tridimensionnel formé par juxtaposition d'éléments de base 37 sensiblement carrés, et de hauteur variable. Cette juxtaposition forme un réseau diffractif 38 à modulation de relief. La hauteur de chaque élément de base est obtenue par numérisation d'une fonction capable d'action diffractante cohérente sur la phase et/ou l'amplitude de la lumière émise par la source. Le calcul de la fonction diffractante peut être réalisé par des Etablissements comme le Laboratoire des Systèmes Photoniques de l'Ecole Nationale Supérieure de Physique de Strasbourg, laquelle procède également à la numérisation de cette fonction de sorte que l'on puisse piloter la machine destinée à réaliser le motif diffractant correspondant à ladite fonction. Ce calcul est réalisé à l'aide d'un logiciel de conception de systèmes optiques assistée par ordinateur. Connaissant les caractéristiques des ondes du faisceau F1 délivré par la diode laser 31, et les caractéristiques que les ondes du faisceau doivent présenter au niveau de la frontale de l'objectif 6, il est possible, en assimilant l'élément optique diffractif 32 à une matrice de transfert, et en utilisant un algorithme de calcul itératif capable de résoudre les équations de Maxwell, de calculer une fonction diffractante capable de transformer le faisceau issu de la diode en un faisceau d'analyse. Bien entendu, bien que l'algorithme soit itératif, il peut être nécessaire d'effec- tuer des approximations successives pour déterminer une fonction diffractante. Un certain nombre d'algorithmes peuvent être utilisés pour le calcul, comme par exemple ceux connus sous les noms: "algorithme de recuit simulé", "algorithme de Gerchberg- Saxton en champ proche", "algorithme de diffusion d'erreurs complexes", ou "algorithme de génétique basé sur la théorie de l'évolution de Darwin". Ces algorithmes prennent également en compte les caractéris- tiques du substrat dans lequel l'élément diffractif est réalisé, la technique de fabrication du réseau diffractant sur cet élément, et le type de ce réseau (Fourier ou Fresnel). Le réseau de Fresnel est préférable car, fournissant des images en champ proche, il ne nécessite pas l'utilisation d'une lentille convergente. Une fois la fonction diffractante calculée, il est néces- saire de la numériser, afin que l'on puisse la transformer en un fichier informatique représentatif d'un motif numéri- que formant réseau diffractif. Ce fichier est généralement sous la forme d'une matrice 1024 x 1024 éléments, chaque élément codant une partie du motif. Pour cela on associe une valeur binaire (ou un niveau) à la valeur de la fonction en un point donné. L'encodage étant binaire, sa précision dépend donc du pas existant entre deux valeurs consécutives. Pour obtenir un pas très petit, il est nécessaire que l'amplitude maximale de la fonction corres- ponde à un nombre de niveaux le plus important possible. Pour des raisons matérielles, il n'est pas possible de définir ici de manière exhaustive, sur 1024 x 1024 points, un réseau diffractif par exemple de type Fresnel à deux niveaux de phase. A défaut, une image à deux niveaux (noir et blanc) d'un exemple d'un tel réseau diffractif est illustré sur la figure 5. Comme on l'a expliqué dans l'introduction, au-delà de 16 niveaux le rendement de diffraction de l'élément optique augmente très lentement tandis que son coût de fabrication croît très rapidement. En conséquence, un élément optique diffractif à 16 niveaux, qui donne un rendement de diffraction d'environ 95%, est suffisant pour permettre l'obtention d'un faisceau d'analyse d'homogénéité constante à environ 5% près. On peut voir respectivement sur les figures 4A et 4B une coupe transversale d'un élément diffractif 32 dont les éléments de base 37 de son réseau diffractif 38 sont binaires (A) ou à 16 niveaux (B). L'action de l'élément diffractif 32 étant régie par les lois de la diffraction, chaque élément de base 37 possède des dimensions sensiblement égales ou inférieures à la longueur d'onde d'émission de la diode 31. En conséquence, pour réaliser ces éléments de base, il est indispensable d'utili- ser une technique dont la résolution est de l'ordre de la dizaine de nanomètres. Actuellement, la meilleure technique est la microlithographie, et plus particulièrement celle * utilisant un masque de chrome à "niveaux de gris binaires". Le masque de chrome est réalisé sous forme de niveaux de gris codés de façon binaire, à l'image d'un dégradé de gris réalisé par une imprimante de type laser. Ce masque est déposé au-dessus d'une couche de résist qui est elle-même déposée sur un substrat. Le masque est illuminé par une lumière ultra-violette, qui sous l'effet des différents niveaux dudit masque va provoquer l'impression du résist selon des doses variables. Le résist qui contient une image du relief à transférer est alors développé, ce qui révèle ledit relief. Puis, on effectue le transfert du relief du résist développé vers le substrat par usinage réactif ionique sélectif (plus connu en anglais sous l'acronyme RIBE). Chaque élément de base 37 est ainsi gravé dans un substrat 39, transparent à la longueur d'onde d'émission de la diode laser 31. Ce substrat est réalisé dans un matériau de type quartz ou BK7. Bien entendu, on peut prévoir de nombreux autres types de substrat. De même, les méthodes de fabrication ne se limitent pas à celle décrite cidessus. Toute autre méthode capable de réaliser un réseau diffractant du type décrit ci- avant pourra être envisagée. Il est maintenant fait référence à la figure 6 pour décrire un mode de réalisation préférentiel de l'invention. Le dispositif proposé sur la figure 6 comprend l'intégralité des éléments du dispositif de la figure 3, à l'exception de l'objectif de microscope 19 qui mettait en forme le faisceau transmis FT en aval de la cuve de mesure 8. Cet objectif est remplacé par un second élément optique diffractif 42, sur lequel on reviendra plus loin, qui reçoit sur sa face d'entrée 43 le faisceau transmis FT issu de la cuve 8, et le transforme en un faisceau transmis traité FTT et un faisceau diffracté traité FDT. Le dispositif comprend donc des premiers moyens optoélectro- niques 19 et 20, installés en aval de la cuve 8 et du second élément optique diffractif 42, pour effectuer des analyses par transmission en utilisant le faisceau transmis traité FTT, ainsi que des seconds moyens optoélectroniques 34-36 pour effectuer des analyses de fluorescence, ces seconds moyens étant également installés en amont de la cuve 8 afin de collecter l'épifluorescence. Bien entendu, le dispositif proposé comprend également, comme dans le mode de réalisation décrit précédemment, un générateur de courant 23 connecté à la cuve de mesure 8 et à l'unité d'analyse 24, ce qui lui permet d'effectuer les numérations des variétés de cellules détectées. Dans ce mode de réalisation, on prévoit également, en aval de la cuve 8 et du second élément optique diffractif 42, des troisièmes moyens optoélectroniques pour effectuer des analyses de diffraction à différents angles sur le faisceau diffracté traité FDT. Cette technique d'analyse, qui est bien connue de l'homme de l'art, permet d'obtenir des informations sur l'état de surface, la morphologie (forme) et le contenu de certains types de cellules, en fonction de l'angle de diffraction que présente le faisceau diffracté FD issu de l'interaction entre le fluide et une partie du faisceau de lumière F1 issu de la source. Ces troisièmes moyens optoélectroniques comprennent un détecteur 40 permettant de délivrer à l'unité d'analyse 24, à laquelle il est connecté, des signaux analogiques (mais ils peuvent être également numériques) représentatifs d'informations véhiculées par la lumière diffractée traitée FDT. Le détecteur 40 comprend, par exemple, une ou plusieurs galettes microcanaux, ou une pluralité de microcellules photo- électriques permettant de détecter précisément les coordonnées planaires d'un photon diffracté qui l'atteint. A réception d'un signal issu du détecteur 40, l'unité de traitement 24 est en mesure d'en déduire précisément l'angle de diffraction, et, en corrélant ce signal aux autres signaux issus des autres voies d'analyse (20, 36, 23), d'en déduire des informations sur la variété de cellule qui a provoqué cette diffraction. On peut prévoir également une voie permettant l'ajustement du positionnement du second élément optique en aval du cube 19, sensiblement identique à la voie de mise au point illustrée sur la figure 1 et décrite ci-avant. On se réfère maintenant aux figures 4A, 4B et 7 pour décrire le second élément optique diffractif 42. Cet élément est réalisé de la même façon que le premier élément optique diffractif 32, à savoir par gravure. Seul son motif diffractif tridimensionnel, et donc son réseau diffractif 38 à modulation de relief, est totalement différent du premier. En conséquence, ces différentes parties portent les mêmes références que ceux du premier élément, augmentées de 10. Néanmoins, dans un mode de réalisation différent de celui- ci, dans lequel la fluorescence serait recueillie en aval de la cuve (à 0 ), son substrat peut ne pas être identique à celui du premier élément, dans la mesure o il doit être transparent non seulement à la longueur d'onde de la lumière émise par la source, mais également à la longueur d'onde de fluorescence. Son motif tridimensionnel est formé par juxtaposition d'éléments de base 47 sensiblement carrés, et de hauteur variable, cette juxtaposition formant le réseau diffractif 48 à modulation de relief gravé sur la face avant 43, en regard de la cuve 8. Le calcul du motif tridimensionnel est également réalisé à l'aide du logiciel de conception de systèmes optiques assistée par ordinateur. L'élément optique est assimilé à une fonction de transfert entre les deux entrées constituées des faisceaux transmis FT et diffractés FD issus de la cuve 8 et les sorties constituées des voies d'analyse par transmission et par diffraction. En fait, il faut que la fonction de transfert permette la focalisation sans perte d'information, d'une part, du faisceau transmis sur la surface de détection de la photo- diode 20, et d'autre part, du faisceau diffracté sur la surface de détection du détecteur 40 de sorte qu'à un angle de diffraction donné en sortie de la cuve 8 corresponde un élément de détection sur ledit détecteur 40. Les paramètres de ce calcul sont donc, en entrée, la longueur d'onde (ou la fréquence) de la lumière source, la géométrie du faisceau transmis FT et la géométrie des faisceaux diffractés FD, et en sortie, la géométrie du faisceau transmis traité FTT au niveau de la surface de détection de la diode 20 et la géométrie du faisceau diffracté transmis FDT au niveau de la surface de détection du détecteur 40. Bien entendu, si le second élément optique diffractif devait également traiter la fluorescence, sa fonction de transfert devrait également prendre en compte, en entrée, la longueur d'onde et la répartition géométrique de la fluorescence, et en sortie, la géométrie du "faisceau" de fluorescence transmis au niveau du filtre interférentiel 35. Le réseau de Fourier est préférable pour ce second élément optique diffractif 42, car, d'une part, il permet lorsqu'il est en mode centré de limiter au maximum les pertes d'infor- mation, et d'autre part, fournissant des images en champ lointain, il permet de directement focaliser les faisceaux sur des détecteurs éloignés sans faire appel à une lentille convergente. Bien entendu, on pourrait envisager de graver un réseau de Fresnel, mais il faudrait alors coupler le second élément à une lentille convergente. De préférence, la modulation de relief du second réseau est à 16 niveaux, ce qui permet d'obtenir un rendement de diffraction d'environ 95%. Un tel rendement est rendu indispensable par le très faible nombre de photons diffrac- tés, par exemple. Pour des raisons matérielles, il n'est pas possible de définir ici de manière exhaustive, sur 1024 x 1024 points, un réseau diffractif par exemple de type Fourier à deux niveaux de phase. A défaut, une image à deux niveaux (noir et blanc) d'un exemple d'un tel réseau diffractif est illustrée sur la figure 7. Bien que l'invention ait été décrite en détail dans le cas des analyses hématologiques, elle peut servir à d'autres applications comparables, avec ou sans fluorescence, se trouvant dans le cadre des revendications ci-après. Ainsi, on pourrait envisager d'utiliser un dispositif selon l'invention équipé d'un premier et d'un second élément optique diffractif pour effectuer de la séparation de longueur d'onde. Par ailleurs, on a décrit un dispositif équipé d'un seul second élément optique diffractif, mais il est évident que l'on pourrait en envisager plusieurs disposés, par exemple, en parallèle en sortie d'un réseau de dispersion, ou d'un prisme dispersif, placé en sortie de la cuve de mesure, chaque second élément servant alors à traiter une longueur d'onde donnée. Revendications 1.- Dispositif d'inspection optique d'un fluide, notamment pour analyses hématologiques, du type comprenant: - une cuve de mesure (8) comportant un passage obligé (15) pour le fluide, - une source de lumière (31) propre à délivrer de la lumière (F1) à des moyens optiques (6, 32, 34) agencés pour illumi- ner le passage obligé selon des caractéristiques géométri- ques et spectrales choisies, - de premiers moyens optoélectroniques (18-20) pour collec- ter une partie au moins de la lumière (FT) obtenue après traversée du passage obligé et délivrer à une unité d'ana- lyse (24) de premiers signaux représentatifs de premières informations véhiculées par cette lumière collectée, caractérisé en ce que les moyens optiques comprennent un élément optique diffractif (32) dont l'une au moins des surfaces (33), qui interagissent avec la lumière (F1) délivrée par la source (31), présente un premier motif tridimensionnel prédéterminé en fonction d'une part des caractéristiques de ladite source et d'autre part des caractéristiques prédéfinies requises pour l'illumination du passage obligé (15). 2.- Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que la source de lumière (31) est une source à rayonnement sensiblement monochromatique dont la longueur d'onde d'émission est choisie de sorte qu'elle induise la fluores- cence d'une partie au moins du fluide traversant le passage obligé (15), et en ce qu'il comprend de seconds moyens optoélectroniques (34-36) destinés à collecter une partie au moins de la fluorescence émise par le fluide et à délivrer, à l'unité d'analyse (24), de seconds signaux représentatifs de secondes informations véhiculées par cette fluorescence collectée. 3.- Dispositif selon l'une des revendications 1 et 2, carac- térisé en ce qu'il comprend de troisièmes moyens optoélec- troniques (40) destinés à collecter une partie au moins de la lumière diffractée par le fluide et à délivrer, à l'unité d'analyse (24), de troisièmes signaux représentatifs de troisièmes informations véhiculées par cette lumière diffractée collectée. 4.- Dispositif selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend en outre au moins un second élément optique diffractif (42) dont l'une au moins des surfaces (43), qui interagissent avec la lumière (FT) obtenue après traversée du passage obligé, présente un second motif tridimensionnel prédéterminé en fonction d'une fonction de transfert fréquentielle et géométrique de l'un au moins des moyens optoélectroniques. 5.- Dispositif selon l'une des revendications 1 à 4, carac- térisé en ce que le premier motif tridimensionnel est un premier réseau diffractif (38) gravé dans un substrat (39) transparent à la longueur d'onde d'émission. 6.- Dispositif selon l'une des revendications 4 et 5, carac- térisé en ce que le second motif tridimensionnel est un second réseau diffractif (48) gravé dans un substrat (49) transparent aux longueurs d'onde d'émission et de fluores- cence. 7.- Dispositif selon l'une des revendications 5 et 6, caractérisé en ce que les premier et second réseaux diffrac- tifs (38,48) sont de type numérique à modulation de relief, ladite modulation représentant une fonction prédéterminée capable d'action diffractante cohérente sur la phase et/ou l'amplitude respectivement de la lumière (F1) émise par la source (31) et de la lumière (FT) obtenue après traversée du passage obligé. 8.- Dispositif selon la revendication 7, caractérisé en ce que les premier et second réseaux diffractifs possèdent chacun une modulation de relief d'au moins deux niveaux, et de préférence seize niveaux. 9.- Dispositif selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que les caractéristiques géométriques et spectrales choisies, requises pour l'illumination du passage obligé (15), comprennent une illumination uniforme, à la longueur d'onde choisie, d'une surface sensiblement plane, fermée et de géométrie donnée. 10.- Dispositif selon la revendication 9, caractérisé en ce que la surface illuminée est un rectangle. 11.- Dispositif selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le premier élément optique diffractif (32) est du type dit de Fourier. 12.- Dispositif selon l'une des revendications 4 à 10, caractérisé en ce que le second élément optique diffractif (42) est du type dit de Fourier. 13.- Dispositif selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le premier élément optique diffractif (32) est du type dit de Fresnel. 14.- Dispositif selon l'une des revendications 4 à 10, caractérisé en ce que le second élément optique diffractif (42) est du type dit de Fresnel. 15.- Dispositif selon la revendication 10, caractérisé en ce que le premier élément optique diffractif comprend une unique surface (33) comportant un motif diffractant de type Fresnel à seize niveaux. 16.- Dispositif selon l'une des revendications 12 et 15, caractérisé en ce que le second élément optique diffractif comprend une unique surface (43) comportant un motif diffractant de type Fourier à seize niveaux.