Brevet FR2729959A1 — publié le 19960802

La présente invention concerne des lactylamines, leurs applications dans le domaine pharmaceutique et un procédé pour leur préparation. Selon la demande de brevet FR-A-2 661 413 au nom de la Demanderesse, il est décrit des N-alkyllactylamines dont la structure répond à la formule I: OH OH OH_ O CHOH - CH20H OH CH/ R1 OHH 0.CH\ CHOH-CHOH-CH2-N_ ni \ R2 dans laquelle R1 représente -(CH2)n-CH3, n étant compris entre O et 19, et R2 représente H. Les N-alkylactyllamines (appelées composés A1) révélées par cet art antérieur sont très stables en solution aqueuse et possèdent des propriétés tensioactives. Ce document décrit en outre un procédé pour préparer ces N-alkyllactylamines à partir de N- alkyllactosylamines que l'on soumet à une étape de réduction par action d'un hydrure métallique ou par réduction catalytique. Au début du document, sont évoquées des N-alkyl-N- acyl-lactylamines dont la structure répond à la formule I mentionnée cidessus, dans laquelle R1 a la même définition que précédemment, et R2 représente un groupement acyle ayant de 2 à 10 atomes de carbone. Néanmoins, l'enseignement de ce document est insuffisant pour permettre à l'homme du métier d'accéder à de tels composés. En effet, si les conditions de réaction de la réduction des N-alkylactylamines sont détaillées, celles30 conduisant à la réduction sélective du lactose et non du groupement acyle pour le cas des N-alkyl-N-acyl- lactylamines, sont absentes. Un premier objet de l'invention est une famille de composés dérivés des lactylamines dont la structure répond à la formule I, dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+y - R2 représente H ou CO-(CH2)m-CH3, m étant compris entre 5 et 16, à l'exclusion des composés dont la structure répond à la formule I dans laquelle R1 représente -(CH2)n-CH3 et R2 représente H. De manière totalement inattendue, la Demanderesse a découvert que les composés de la présente invention décrits ci-dessus, ainsi que les N- alkyllactylamines révélées par FR-A-2 661 413, constituent des analogues structuraux du galactosyl-céramide Gal-0l-Cer possédant la structure de formule II suivante: OH | OH O ^^OCH^CH NHCOCHOH-C22H45 OH 0--H-CHC NCHOH-CH=CH-C13H27 Ce glycosphingolipide a été identifié comme un site récepteur potentiel de la glycoprotéine externe d'enveloppe gpl20 du VIH, dans deux types cellulaires différents: les oligodendrocytes du cerveau (1) et les cellules épithéliales de la muqueuse intestinale (2). Ce comportement d'analogue strutural des composés précités est d'autant plus surprenant, que ledit site récepteur Gal-0l-Cer est très spécifique de la protéine gpl20, puisque cette dernière ne s'associe pas aux analogues glucosyl-céramides ou lactosyl-céramides. La Demanderesse a aussi découvert que les composés précités présentent une activité anti-Aspergillus fumigatus. L'infection par ce champignon engendre des mycoses systémiques, et se rencontre de plus en plus fréquemment en particulier chez les sujets immunodéprimés, notamment atteints du SIDA. Les propriétés anti-VIH des composés précités, ainsi que les propriétés anti-Aspergillus fumigatus, ont pu être mises en évidence au cours de tests spécifiques standardisés, abordés plus loin dans la description. Ainsi, l'invention concerne les applications d'un composé dont la structure répond à la formule I: OH OH /_ CHOH- CH20H O"OCH./ oR1 OH OH - CH CHOH\HOH-CH2-N R \ R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-C0O-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO- (CH2)m-CH3, m étant compris entre 5 et 16, ou les applications d'un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé, en tant que médicament ou introduit à titre de principe actif, dans une composition médicamenteuse ou prophylactique ou thérapeutique, ledit composé ou sel étant éventuellement associé à un autre principe actif, et étant combiné à un support pharmaceutiquement acceptable. Un autre objet de l'invention est un agent pour prévenir ou traiter une infection par le VIH comprenant un composé décrit ci-dessus ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé, et un agent pour prévenir ou traiter une infection par Aspergillus fumigatus. Par ailleurs, la Demanderesse a mis au point un procédé de préparation des composés de l'invention qui est doublement avantageux: d'une part la matière première est le lactose, un disaccharide peu coûteux et facilement isolé, et d'autre part le nombre d'étapes permettant d'accéder aux composés de l'invention à partir du lactose est très limité: - deux étapes seulement sont nécessaires pour obtenir un composé de formule I dans lequel R1 représente -(CH2)n-COO-X+ et R2 représente H, dénommé composé A2; - trois sont nécessaires pour obtenir un composé de formule I dans lequel R1 représente CH3-(CH2)n (composé BI) ou CH3-(CH2)nCOO-X+ (composé B2) et R2 représente CO- (CH2),-CH3. Pour synthétiser les composés A2, on met en réaction du lactose avec un amino-acide de formule III, NH2-(CH2)n-COOH, en présence d'une base, puis on réduit la N-acyl-lactosylamine obtenue. Les composés B1 et B2 peuvent être obtenus à partir des composés respectivement A1 et A2 que l'on met en réaction avec un agent acylant, conduisant à une acylation sélective des fonctions amines, sans réagir avec les groupements hydroxyle (3). Cet agent acylant répond à la formule IV, R2-CO-Z dans laquelle Z représente notamment: S N S L'étape de réduction de la N-acyl-lactosylamine en composé A2 conduit spécifiquement à la liaison Pl- glycosidique entre le galactose et la partie aminée indispensable à la reconnaissance par la protéine gpl20. Préférentiellement, cette étape de réduction est effectuée par le NaBH4. Les différents objets de l'invention sont à présent illustrés avec les Exemples 1 à 15 suivants. EXEMPLE 1: Synthèse de A2, avec R1=-(CH2)7-COO-NH4+ A une solution du àmino-acide NH2-(CH2)7-CO2H (5,5 mmoles) et de soude (5,5 mmoles) dans 100 ml de méthanol, sont ajoutées 5,5 mmoles de lactose dissoutes dans 40 ml d'eau. L'ensemble est mis sous agitation pendant 24 h à 40 C. 10 mmoles de NaBH4 sont ensuite additionnées au mélange. L'ensemble est mis sous agitation 4 h de plus à température ambiante. Après évaporation du solvant, le composé est purifié sur colonne de silice (éluant: CHCl3 = 1,25 / MeOH = 7 / ammoniaque = 1,75, en volume). Le composé A2 est ainsi obtenu avec un rendement de 30% sous forme d'une fine poudre blanche après lyophilisation. Il est caractérisé par RMN1H, 13C, spectrométrie de masse et microanalyse. EXEMPLE 2: Synthèse de B2(8,11), avec R1=-(CH2)7-COO-NH4+ et R2=-CO(CH2)10-CH3 A une solution de 1,77 mmole de composé A2, obtenu dans l'Exemple 2, dans 100 ml de DMF, sont ajoutées goutte à goutte 2,65 mmoles de réactif acylant, de formule IV: s CH3-(CH2)n-CO-N S avec n=10 \/ préparé aisément en deux étapes à partir de la mercaptothiazoline et le chlorure d'acide CllH23-COCl (7). Le mélange est laissé sous agitation pendant 5 jours à C. Apres évaporation le composé B2(8, 11) est purifié sur colonne de silice (éluant = CHCl3 / MeOH / NH4OH = 7/2,2/0,5, en volume). Le composé B2(8 11) est obtenu avec un rendement de 55% sous forme d'une poudre blanche après lyophilisation. Il est caractérisé par RMN1H, 13C, spectrométrie de masse et microanalyse. EXEMPLE 3: Synthèse de B1(12, 11), avec R1=-(CH2)11-CH3 et R2=-CO(CH2)1o-CH3 A une solution de 1 g de N-docécylaminodésoxy-l- lactitol précédemment décrit (6) dans 30 ml de DMF, on ajoute 0,589 g de réactif acylant, de formule IV: S CH3-(CH2)n-CO-N S avec n=10 Le mélange est chauffé sous agitation à 70 C pendant 6 jours. Le DMF est évaporé. Le résidu est purifié sur colonne de silice (éluant = CHCl3 / MeOH / NH4OH = 7/2,5/0,5, en volume). Le composé B1(12 11) est obtenu avec un rendement de 53% sous forme d'une poudre blanche après lyophilisation. Il est caractérisé par RMN1H, 13C, spectrométrie de masse et microanalyse. EXEMPLE 4: Synthèse de Bl(9g 17), avec Ri=-(CH2)8-CH3 et R2=-CO-(CH2)16CH3 On opère comme dans l'Exemple 3 à partir de 1 g de Nnonylaminodésoxy-l-lactitol et de 3,28 g du réactif acylant, dans la formule IV duquel n=16. Après traitement analogue à celui de l'Exemple 3, on récupère le composé B1(9 17) avec un rendement de 43% sous forme de poudre blanche. EXEMPLE 5: Synthèse de B1(g 11), avec Ri=-(CH2)8-CH3 et R2=-CO-(CH2)0loCH3 On opère comme dans l'Exemple 3 à partir de 1 g de Nnonylaminodésoxy-l-lactitol et de 0,64 g du réactif acylant, dans la formule IV duquel n=10. Après traitement analogue à celui de l'Exemple 3, on récupère le composé B1(9, 11) sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 63%. EXEMPLE 6: Synthèse de B1(9, 15)' avec Rl=-(CH2)8-CH3 et R2=-CO-(CH2)14CH3 On opère comme dans l'Exemple 3 à partir de 1 g de Nnonylaminodésoxy-l-lactitol et de 0,749 g du réactif acylant, dans la formule IV duquel n=14. Apres traitement analogue à celui de l'Exemple 3, on récupère le composé B1(9 15) sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 21%. EXEMPLE 7: Synthèse de B1(9 13), avec Ri=-(CH2)8-CH3 et R2=-CO-(CH2)12CH3 On opère comme dans l'Exemple 3 à partir de 4,98 g de Nnonylaminodésoxy-l-lactitol et de 2,75 g du réactif acylant, dans la formule IV duquel n=12. Apres traitement analogue à celui de l'Exemple 3, on récupère le composé Bl(9, 13) sous forme d'une poudre blanche avec un rendement de 51%. EXEMPLE 8: Synthèse de B1(9 8)' avec Ri=-(CH2)8-CH3 et R2=-CO- (CH2)7-CH3 A partir de 0,7 g de N-nonylaminodésoxy-l-lactitol et de 0, 463 g du réactif acylant, dans la formule IV duquel n=7, on opère comme dans l'Exemple 3, on récupère le composé Bl(9, 8) sous forme d'une poudre blanche avec un rendement de 15%. EXEMPLE 9: Synthèse de B1(6 6)' avec R1=-(CH2)5-CH3 et R2=-CO-(CH2)5-CH3 A partir de 0,4 g de N-hexylaminodésoxy-l-lactitol et de 0,20 g du réactif acylant, dans la formule IV duquel n=5, on opère comme dans l'Exemple 3, on récupère le composé B1(6 6) sous forme d'une poudre blanche avec un rendement de 20%. EXEMPLE 10: Les composés A (A1, A2) et B (B1, B2) sont testés du point de vue de leurs propriétés anti-VIH selon un protocole d'essai in vitro standardisé et complètement décrit dans les publications (5, 6), dont le contenu est incorporé par référence, à la présente description. La multiplication du VIH (souche BRU) dans les cellules CEM est évaluée par le nombre de syncytia formés après 4 jours d'infection, résultant de l'interaction entre la glycoprotéine gpl20 exprimée par les cellules (BRU) infectées par le VIH, et les lymphocytes T4 (CEM). Les composés testés sont ajoutés après l'adsorption du virus dans le milieu de culture aux concentrations finales 10-3M, 10- 4M, 10-5M, 10-6M et 10-7M. Les résultats sont exprimés par la concentration la plus faible de composés qui diminue la formation des syncytia d'au moins 50%. Cette concentration est appelée EC50. Elle doit être la plus basse possible. On détermine aussi la toxicité des composés testés. L'effet toxique sur les CEM non infectées est apprécié par une réaction colorimétrique basée sur la capacité des cellules vivantes à réduire le bromure de 3- (4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium en formazan après quatre jours d'incubation en présence de différentes concentrations des composés. Les résultats sont exprimés par la concentration la plus faible de composés qui provoque une inhibition d'au moins 50% de la formation de formazan. Cette concentration est appelée CC50. Les composés des familles A et B se révèlent au cours de ces tests, hautement actifs contre le VIH. Le N-dodécylaminodésoxyl-l-lactitol Al, dans la formule duquel Rl=(CH2)ll-CH3, et R2=H, présente une EC50 de 103 M et une CC50 de 7x103 LM, quand il est testé comme anti-VIH sur macrophage CEM-SS. EXEMPLE 11: Le N-nonylaminodésoxy-l-lactitol A1, dans la formtule duquel R1=(CH2)8-CH3, et R2=H, présente une EC50 de 1 pM et une CC50 de 40 M quand il est testé comme anti-VIH sur un macrophage CEM-SS. EXEMPLE 12: Le N-tétradécylaminodésoxy-l-lactitol Ai, dans la formule duquel R1=(CH2)13-CH3, et R2=H, présente une EC50 de 50 jM et une CC50 de 70 AM quand il est testé comme anti-VIH sur macrophage CEM-SS. EXEMPLE 13: Le N-hexadécylaminodésoxy-1-lactitol A1, dans la formule duquel R1=(CH2)15-CH3, et R2=H, présente une EC50 de 50 pM et une CC50 de 70 MM quand il est testé comme anti-VIH sur macrophage CEM-SS. EXEMPLE 14: Le composé B1(9, 15) synthétisé dans l'Exemple 6, présente une EC50 de 10 MM et une CC50 supérieure à 100 MM quand il est testé comme anti-VIH sur macrophage CEM-SS. EXEMPLE 15: Différents composés B1 ont été testés du point de vue de leurs propriétés anti-Aspergillus fumigatus, dans un essai in vitro standardisé, complètement décrit dans la publication (7) dont le contenu est incorporé, par référence, à la présente description. Dans cet essai, la croissance dudit champignon est indiquée par la consommation de glucose qui constitue la seule source de carbone métabolisable, et on mesure la concentration en composé testé nécessaire pour inhiber 50% (IC50), et 90% (IC90) de la croissance du champignon. Deux composés témoin sont utilisés, l'Itraconazole et l'Amphotéricine B, dont les propriétés anti-Aspergillus fumigatus sont connues et qui servent dans cet essai de référence. Les résultats sont présentés dans le Tableau I suivant: 1l TABLEAU I Composés IC90 IC90 IC50 IC50 mg/ml pmole/l mg/ml Mmole/1 Itraconazole 0.06 0.08 0. 003 0.004 Amphotéricine B 0.6 0.6 0.02 0.02 A1, n= 8 >100 >219,6 >100 >219,6 AI1, n = 11 >100 >195,4 >100 195.4 A1, n = 13 28.7 53.1 15.2 28.1 A1, n = 15 7.0 12.3 2.2 3.8 B(9,13) 18.0 26,5 5.0 7.4 B (9,15) 7.0 9.8 1,6 2.3 1.8 2.4 0,5 0,6 B(9,17) Ces résultats mettent notamment en évidence l'intérêt particulier du composé B(9g 17), dont l'activité est proche de celle de l'Amphotéricine B. REFERENCES (1) F. GONZALES-SCARANO et coll. Science, 1991, 253, 320 (2) J. FANTINI et coll. J. Virol 1992, 66, 4848 (3) I. RICO et coll. Synth. Comm., 1993, 23, 949 (4) J. FANTINI et coll. Medecine/Science, 1993, 9, 891 (5) R. PAUWELS, J. Virol, Methods, 1988, 20, 309 (6) D. SCHOLS, J. Gen. Virol, 1989, 70, 2397 (7) J.C. GARRIGUES, G. CADET DE FONTENAY, M.D. LINAS, M. LAGENTE et J.P. SEGUELA, Antimicrob. Agents Chemoth, 1994, 38, 2857 REVENDICATIONS 1/ Composés dont la structure répond à la formule I: OH OH OHH / CHOH-CH2OH OH O\. CH R1 \ CHOH-CHOH-CH2-N' \ R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO-(CH2)m-CH3, m étant compris entre 5 et 16, à l'exclusion des composés dont la structure répond à la formule I dans laquelle R1 représente -(CH2)n-CH3 et R2 représente H. 2/ Analogue d'un récepteur de la glycoprotéine externe d'enveloppe gpl20 de VIH, caractérisé en ce que sa structure répond à la formule I:20 OH OH OH H O CHOH - CH2OH OH 0--...CH/ /R1 \ CHOH-CHOH-CH2-N' \ R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO-(CH2)m- CH3, m étant compris entre 5 et 16. 3/ Médicament comprenant un composé dont la structure répond à la formule I: OH OH _OH _ CHOH - CH2OH OH)H O CHOH-CHOH-CH2-N R R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO-(CH2)m- CH3, m étant compris entre 5 et 16, ou comprenant un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé.20 4/ Utilisation en tant que médicament d'un composé dont la structure répond à la formule I: OH OH 0 CH CHOH - CH2OH OH -C O CH\/R1 OH H 0--..CHOCHOH-CHOF-CH2-NR \ R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO-(CH2)m- CH3, m étant compris entre 5 et 16, ou des sels pharmaceutiquement acceptables dudit composé. / Composition médicamenteuse prophylactique ou thérapeutique comprenant, à titre de principe actif, un composé dont la structure répond à la formule I: OH OH OH O 0 /CHOH-CH20 R1 OH _--C -CHN/ Ri CH\ CHOH-CHOH-CH2-N/ \ 2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO- (CH2)m-CH3, m étant compris entre 5 et 16, ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé, éventuellement associé à un autre principe actif, et combiné à un support pharmaceutiquement acceptable. 6/ Agent pour prévenir ou traiter une infection par le VIH-I comprenant un composé dont la structure répond à la formule I: OH OH OH0 CHOH - CH20H OH HCH/ _.R1 R)H -H CHOH-CHOH-CH2-N[ \ R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2) n-CH3 ou - (CH2) n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO-(CH2)m-CH3, m étant compris entre 5 et 16, ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé. 7/ Agent pour prévenir ou traiter une infection par Aspergillus fumigatus comprenant un composé dont la structure répond à la formule I: OH OH OH / CHOH - CH20H OHH - OCHCHOH-CHOH-CH2-N' \ R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO-(CH2)m-CH3, m étant compris entre 5 et 16, ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé. 8/ Utilisation d'un composé dont la structure répond à la formule I: OH OH OH_ H / CHOH-CH20H OHO/CH OH/ R1 O(-HC CHOH-CHOH-CH2-N'/ R2 dans laquelle: - R1 représente - (CH2) n-CH3 ou - (CH2) n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H ou CO(CH2)m-CH3, m étant compris entre 5 et 16, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable, pour préparer un médicament destiné à prévenir ou traiter une infection15 par le VIH-I. 9/ Procédé pour préparer des composés dont la structure répond à la formule I: OH OH OH / CHOH- CH2OH O H CH/ / R1 OH\ CHOCHO-CHOH-CH2-N- \R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, et X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente H caractérisé en ce qu'on met en réaction du lactose avec un amino-acide de formule III, NH2- (CH2)n-COOH, en présence d'une base, puis on réduit la N- acyl-lactosylamine obtenue. 10/ Procédé pour préparer des composés dont la structure répond à la formule I: OH OH -OH_ . O / CHOH - CH2OH OH _.CH\ O 'H \CHOH-CHOH-CH2-N1 R2 dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, et - R2 représente CO- (CH2)m-CH3, m étant compris entre 5 et 16, caractérisé en ce qu'on met en réaction le composé répondant à la formule OH OH 0_ CHOH - CH2OH OH O .CH. /R1 HH - H\ CHOH-CHOH-CH2-N, dans laquelle: - R1 représente -(CH2)n-CH3 ou -(CH2)n-COO-X+, n étant compris entre 5 et 15, X+ représentant un cation notamment choisi parmi H+, Na+, K+, NH4+, Li+, Mg2+, avec un agent acylant ayant la formule IV, R2-CO- Z, dans laquelle Z représente notamment S I.v -N S \/ et R2 représente CH3-(CH2)m-CO, m étant compris entre 5 et 16. 11/ Procédé selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce que l'étape de réduction est effectuée avec du NaBH4.