Brevet FR2732597A1 — publié le 19961011

L'invention concerne l'utilisation dans une composition en tant qu'activateur et/ou stabilisateur de cyclooxygénase d'au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6, un kit et une composition comprenant au moins un de ces dérivés et son utilisation. Par cyclooxygénase, il faut entendre dans la présente invention toute enzyme présentant une activité cyclooxygénase, cette enzyme pouvant présenter d'autres activités enzymatiques. L'activité cyclooxygénase peut se définir comme l'activité enzymatique qui transforme certains acides gras polyinsaturés en produits oxygénés cyclisés qui sont en fait des endoperoxydes hautement instables qui entrent par la suite dans des voies métaboliques subséquentes. La prostaglandine-endoperoxyde synthase (ou PGHS, EC 1.14.99.1) qui est une hémoprotéine est un exemple de ces enzymes présentant une telle activité. Elle intervient dans l'une des voies métaboliques des prostaglandines. On sait que certains acides gras polyinsaturés, en particulier ceux présentant 20 atomes de carbone, tels que l'acide arachidonique, I'acide dihomo-y-linolénique ou bien encore l'acide éicosapentaénoïque, peuvent être transformés in vivo, sous l'action de certaines enzymes spécifiques contenues dans les cellules vivantes en certains autres composés de type éicosanoïdes présents dans l'organisme. Ainsi, il est connu que les enzymes dites cyclooxygénases génèrent, à partir des différents acides gras mentionnés ci-dessus, des éicosanoïdes de type prostaglandines, et que les enzymes dites lipoxygénases sont, quant à elles, responsables de la formation des éicosanoïdes de type leukotriènes et autres acides acycliques hydroxylés à 20 atomes de carbone. L'implication de ces enzymes dans de nombreuses voies métaboliques et ainsi les conséquences que pourrait avoir un dérèglement de leur fonctionnement font que de nombreuses recherches ont été entreprises afin de mettre en évidence des 2 2732597 substances ayant la capacité soit d'augmenter soit de diminuer l'activité de ces enzymes. Dans le domaine des activateurs de cyclooxygénases, on connaît notamment les métabolites de l'acide arachidonique, le monoxyde d'azote et les composés donneurs de monoxyde d'azote, le stanozolol, les composés donneurs de glutathion, les ionophores calciques, les anthocyanosides, les bioflavonoïdes, les facteurs activateurs de plaquettes (PAF), les cytokines proinflammatoires, les endotoxines bactériennes. De même, on peut citer la 6-chloro-2,3-dihydroxy-1,4-naphtoquinone (CNDQ), qui o a la particularité d'être à la fois un inhibiteur des lipoxygénases et un stimulateur des cyclooxygénases (C.J. Bedord et ai., The Journal of Investigative Dermatology, 81:566-571, 1983). Cependant, la plupart de ces substances présente comme inconvénient majeur d'être à large spectre fonctionnel, ce qui entraîne qu'elles ne présentent pas en général de véritable spécificité pour la cyclooxygénase. A cet égard la littérature traitant de ce sujet montre une grande variété d'interprétation. Ces substances peuvent être également labiles ou leur activité dépendante de leur concentration, ce qui rend leur utilisation délicate. La demanderesse a donc cherché de nouveaux activateurs et/ou stabilisateurs de cyclooxygénase. De manière surprenante et inattendue après de longs travaux, la demanderesse a découvert que des dérivés de pyrimidine substitué en 6, et plus particulièrement les dérivés de pyrimidine 3-oxyde substitués en 6, présentent la propriété d'activer et/ou de stabiliser la cyclooxygénase. Cette propriété laisse suggérer que la cyclooxygénase est un des récepteurs de dérivés de pyrimidine substitué en 6 Cette découverte est à la base de la présente invention. Ainsi, l'invention a pour objet l'utilisation dans une composition en tant qu'activateur et/ou stabilisateur de cyclooxygénase d'au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6. 3 2732597 Avantageusement, ce dérivé est un dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6, en particulier le 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde ou "Minoxidil". La composition est plus particulièrement une composition cosmétique ou pharmaceutique. Préférentiellement, la composition pharmaceutique est une composition dermatologique. Le "Minoxidil" est connu pour ses effets anti-hypertenseur et pour sa capacité à favoriser la pousse des cheveux. Ces propriétés sont décrites dans US 4 596 812. Par ailleurs, il est connu de nombreux autres dérivés de pyrimidine substitués en 6. Parmi ceux-ci on peut notamment citer ceux décrits dans les demandes de brevet EP 353123, EP 356271, EP 408442, EP 522964, EP 420707, EP 459890, EP 519819C503 Parmi les dérivés de pyrimidine substitués en 6 utilisables selon l'invention, on peut plus particulièrement citer: le 2,4 diamino, 6 piperidino pyrimidine, le 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde, le 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, le 2, méthyl, 4 amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, le 2,4 diamino, 6 butyloxy pyrimidine 3oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde. Préférentiellement, on utilise selon l'invention: le 2,4-diamino 6piperidinopyrimidine 3-oxyde, le 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, le 2, méthyl, 4 amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, le 2, 4 diamino, 6 butyloxy pyrimidine 3-oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde. 4 2732597 Et plus préférentiellement encore, on utilise selon l'invention: le 2,4diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde, le 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde. Les quantités nécessaires pour activer et/ou stabiliser une cyclooxygénase sont bien entendu dépendantes de la nature du dérivé de pyrimidine substitués en 6 et de la nature de la cyclooxygénase en question. De manière générale, cette 0o concentration est supérieure ou égale à 1 nM, et de préférence supérieure à 1 pM. Afin de déterminer l'activité des dérivés de pyrimidine substitué en 6, la demanderesse a utilisé un procédé simple et rapide de mesure consistant à incuber dans un milieu adéquat une cyclooxygénase éventuellement purifiée et un de ses substrats, en présence d'un composé à tester, et à comparer les mesures réalisées avec les résultats de mesures identiques effectuées lors de l'incubation de la cyclooxygénase, éventuellement purifiée, avec un de ses substrats en l'absence du composé à tester. Comme indiqué précédement, I'activité enzymatique d'une cyclooxygénase se traduit par une consommation d'oxygène. Il est donc possible de suivre le déroulement de la réaction en cours par la mesure de la consommation en oxygène dans le milieu réactionnel et ainsi d'évaluer l'activité de l'enzyme par la mesure de la consommation en oxygène. En effet, on comprend aisément que la réaction impliquant de la part de la cyclooxygénase l'utilisation de molécules d'oxygène, I'augmentation ou la diminution de cette consommation sont le reflet de la variation de l'activité de l'enzyme. Toute méthode connue de mesure de la consommation en oxygène est bien entendu utilisable dans le procédé (voir par exemple Vanderkooi J. M. And Wilson D.F. (1986) "A new method for mesuring oxygen in biological systems" Adv. Exptl. Med. Biol. 200: 189-193.). 2732597 La demanderesse afin de pouvoir rapidement évaluer les propriétés activatrice et/ou stabilisatrice des dérivés de pyrimidine substitué en 6 a utilisé une méthode de mesure directe et en continu de la consommation d'oxygène à l'aide d'une électrode de Clark, (CLARK, L.C. , Jr. (1956). Trans. Am. Soc. Artificial Internal Organs, 2,41.), couplée à un système d'enregistrement. Tout système d'enregistrement permettant un calcul automatique ou non de la vitesse initiale de la réaction et de la durée pendant laquelle cette vitesse initiale est maintenue peut être utilisé dans ce procédé. io La procédure générale de mesure peut ainsi être résumée: Au temps T=0 du procédé, on introduit dans une cuve de mesure une solution tamponnée contenant une cyclooxygénase, puis on laisse l'ensemble se stabiliser pendant au moins une minute. Au temps T=1 minute, on ajoute une quantité appropriée de substrat de l'enzyme i5 et on enregistre la consommation en oxygène de la réaction. Cet enregistrement permet de déduire la vitesse initiale de la réaction et la durée pendant laquelle la vitesse initiale de la réaction est maintenue. En l'absence de toute substance autre que les ingrédients nécessaires à la réaction enzymatique, on peut ainsi déduire l'activité de base de l'enzyme. Ces données serviront de référence à l'étude des substances à tester. Lorsque l'on teste une substance ayant potentiellement une activité sur la cyclooxygénase, la variation de la pente dans un sens positif ou négatif par rapport aux résultats obtenus avec l'enzyme seule reflète soit l'activation soit l'inhibition de l'activité de l'enzyme. Ainsi, sachant que la cyclooxygénase a la particularité de s'autoinactiver (W. Smith and L. Marnett, Biochim. Biophy. Acta, 1083 (1991) 1-17), une variation de la durée pendant laquelle la vitesse initiale de la réaction est maintenue à son maximum traduit une stabilisation ou une déstabilisation de l'enzyme. 6 2732597 La cyclooxygénase est impliquée dans de nombreuses voies métaboliques. On peut citer entre autres, comme illustration le rôle joué par cette enzyme dans le métabolisme des prostaglandines. On sait également qu'un même substrat, un acide gras polyinsaturé par exemple, peut être utilisé par la cyclooxygénase et par d'autres enzymes du métabolisme. Il se crée alors généralement des situations de compétition entre enzymes vis-à-vis du même substrat. Souvent cela aboutit à des conséquences radicalement opposées. Dans le cas des acides gras polyinsaturés, selon la nature de l'enzyme avec laquelle ils auront réagi en premier, on aboutit à la formation de plusieurs métabolites différents. Par exemple, avec l'acide arachidonique comme substrat, i5 la cyclooxygénase et la 5-lipoxygénase conduisent respectivement à des prostaglandines et aux précurseurs des leukotriènes. Donc, dans certains cas, à partir du même substrat, le choix de telle ou telle enzyme, ou le fait de privilégier une voie métabolique particulière, par exemple en augmentant l'activité de telle ou telle enzyme et/ou en la stabilisant, aura pour effet non seulement de privilégier une voie métabolique particulière, mais également de défavoriser la voie métabolique opposée. C'est ce qu'il advient lorsque l'acide arachidonique est le substrat des cyclooxygénases et des lipoxygénases (voir par exemple Bedord C. J. et al., J.l.D, 81: 566-571, 1983, ou Williams K. I. dans "Nonsteroidal Anti-lnflammatory Drugs", Pharmacol. Skin. 2: 103-117, 1989, Karger Editeur). Ainsi, l'utilisation d'activateurs et/ou de stabilisateurs de cyclooxygénase peut favoriser la voie métabolique pour laquelle cette enzyme est impliquée au détriment de la voie opposée, c'est à dire celle des lipoxygénases. Dans la mesure o, dans certaines pathologies, il est reconnu que la voie des lipoxygénases est anormalement activée, il devient intéressant de pouvoir 7 2732597 chercher à corriger cet état de fait en cherchant à augmenter l'activité de la cyclooxygénase afin de diminuer par compétition l'activité de la lipoxygénase. Ainsi, I'invention a également pour objet l'utilisation d'au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6, et plus particulièrement un dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6, en tant qu'activateur et/ou stabilisateur de cyclooxygénase, dans la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement de pathologies liées soit à l'hyperactivité de la voie des lipoxygénases, soit simplement à un défaut de l'activité de la voie des cyclooxygénases ou encore io pour lesquelles il s'avère utile de favoriser la voie des cyclooxygénases pour déclencher et/ou accélérer un processus. Préférentiellement, le dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6 utilisé dans cette préparation est le 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde. A cet égard on peut citer le traitement d'affections dermatologiques comme, entre autres et sans limitation, I'érythème solaire, le prurit, I'eczéma, le psoriasis, I'érythème noueux, l'urticaire, la mastocytose systémique (de Lacharrière O. et col., "Anti-inflammatoires nonstéroïdiens et peau", Thérapeutique Dermatologique, L. Dubertret éditeur, Flammarion-Médecine-Sciences Paris, 1991, pp: 698-707). On peut également citer l'utilisation dans la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à favoriser l'hémostase pour le traitement de plaies ou des épistaxis ou dans la préparation d'une composition antivieillissement. La composition pharmaceutique peut être utilisée soit par voie locale, soit par voie systémique. Par voie systémique, on peut citer la voie parentérale ou préférentiellement la voie entérale, plus particulièrement la voie orale. 8 2732597 La composition peut également être une composition cosmétique, généralement utilisée par voie locale. Par voie locale, on préfère la voie topique, c'est à dire par application directe sur la peau, le cuir chevelu, les ongles ou les muqueuses. Quelque soit la forme de la composition, celle-ci peut comprendre en outre tout composé habituellement utilisé en cosmétique et/ou en pharmacie. 0o La composition selon l'invention est une composition physiologiquement acceptable. Elle peut être anhydre ou au contraire aqueuse. Lorsqu'elle est anhydre, elle contient moins de 1% d'eau. Elle peut être constituée d'un solvant ou d'un mélange de solvants choisi plus particulièrement parmi les alcools inférieurs en C2-C4 comme l'alcool éthylique, les alkylèneglycols comme le propylèneglycol, et les alkyléthers d'alkylèneglycols ou de dialkylèneglycols, dont les radicaux alkyle ou alkylène contiennent de 1 à 4 atomes de carbone. Lorsqu'elle est aqueuse, elle est constituée par de l'eau ou un mélange d'eau et d'un autre solvant physiologiquement acceptable, choisi notamment parmi les solvants organiques cités ci-dessus. Dans ce dernier cas, ces autres solvants, lorsqu'ils sont présents, représentent environ 5 à 95% en poids de la composition. La composition peut contenir d'autres adjuvants habituellement utilisés dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, tels que des agents tensioactifs, des agents émulsionnants, des agents épaississants ou gélifiants, des huiles, des agents conservateurs, des agents alcalinisants ou acidifiants bien connus dans l'état de la technique, des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les bactéricides, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités utilisées sont suffisantes pour obtenir la forme de présentation désirée, notamment de lotion plus ou moins épaissie, de gel, d'émulsion, ou de 9 2732597 crème. La composition peut éventuellement aussi être pressurisée en aérosol ou vaporisée à partir d'un flacon pompe. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, et par exemple de 0,01 % à 90 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans une phase grasse, dans une phase aqueuse et/ou dans des sphérules lipidiques. i0 Comme huiles utilisables dans l'invention, on peut citer les huiles minérales (huile de vaseline), les huiles végétales (fraction liquide du beurre de karité, huile de tournesol), les huiles animales (perhydrosqualène), les huiles de synthèse (huile de Purcellin), les huiles siliconées (cyclométhicone) et les huiles fluorées (perfluoropolyéthers). On peut aussi utiliser comme matières grasses des alcools gras, des acides gras (acide stéarique), des cires (paraffine, carnauba, cire d'abeilles). Comme émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60 et le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de TefoseR 63 par la société Gattefosse. Comme solvants utilisables dans l'invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l'éthanol et l'isopropanol, le propylène glycol. Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides tels que l'hydroxypropylcellulose, les gommes naturelles et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras comme les stéarates d'aluminium et la silice hydrophobe, ou encore l'éthylcellulose, le polyéthylène. 2732597 Comme actifs hydrophiles, on peut utiliser les protéines ou les hydrolysats de protéine, les acides aminés, les polyols, l'urée, I'allantoïne, les sucres et les dérivés de sucre, les vitamines hydrosolubles, I'amidon et des extraits végétaux, notamment ceux d'Aloe Vera. Comme actifs lipophiles, on peut utiliser le rétinol (vitamine A) et ses dérivés, le tocophérol (vitamine E) et ses dérivés, les acides gras essentiels, les acides gras polyinsaturés, les céramides, les huiles essentielles. 1o La composition peut contenir en outre des enzymes, comme en particulier une cyclooxygénase. Cette cyclooxygénase est purifiée ou produite par génie génétique, d'origine animale ou végétale. Les propriétés activatrice et/ou stabilisatrice des dérivés de pyrimidine substitué en 6 sont également intéressantes du fait du coût élevé de la cyclooxygénase, en particulier lorsque celle-ci est sous forme purifiée. Ainsi l'adjonction à l'enzyme d'au moins un de ces dérivés peut permettre, du fait de l'activation et/ou de la stabilisation qu'il engendre, de réduire la quantité d'enzyme utilisée. A cet égard, l'invention concerne aussi un kit comprenant au moins une cyclooxygénase, éventuellement sous une forme purifiée, et au moins un activateur et/ou stabilisateur de celle-ci. Cet activateur et/ou stabilisateur est un dérivé de pyrimidine substitué en 6 et en particulier un dérivé de pyrimidine 3- oxyde substitué en 6. Préférentiellement ce dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6 est du 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde. Les composés de ce kit peuvent être éventuellement conditionnés de manière séparée. L'invention concerne plus spécifiquement un kit comprenant en outre au moins un des substrats de la cyclooxygénase. 1il 2732597 Un tel kit peut être par exemple utilisé pour déterminer les effets inhibiteurs de cyclooxygénase d'une substance éventuellement active. Dans certain cas, il peut s'avérer nécessaire d'augmenter l'activité des cyclooxygénases endogènes. Ainsi la présente invention a également pour objet, une composition comprenant au moins un substrat de la cyclooxygénase et au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6 et plus particulièrement un dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6. Préférentiellement, ce dérivé est le 2,4-diamino 6piperidinopyrimidine 3- oxyde. Dans ce cas, le dérivé utilisé peut venir activer et/ou stabiliser une cyclooxygénase présente dans tout tissu, et plus particulièrement dans la peau. Une telle composition peut s'administrer par voie entérale, parentérale, mais de s5 préférence par voie topique. Préférentiellement, le substrat de la cyclooxygénase est un acide gras polyinsaturé et encore plus préférentiellement l'acide arachidonique. Cette composition peut comprendre en outre au moins de la cyclooxygénase. Cette dernière composition trouve plusieurs applications dans des domaines très divers comme la cosmétique, la pharmacie ou encore l'agroalimentaire. Elle s'avère très intéressante en tant que capteur d'oxygène. En effet, lors de la réaction entre la cyclooxygénase et son substrat il y a consommation d'oxygène. Cette consommation d'oxygène peut être accrue en ajoutant au mélange au moins un activateur et/ou stabilisateur de la cyclooxygénase. On peut donc utiliser une composition de ce type afin d'éliminer l'oxygène d'un environnement afin de préserver celui-ci de l'oxydation. L'invention a aussi comme objet l'utilisation comme capteur d'oxygène d'une composition comprenant au moins une cyclooxygénase, au moins un de ses 12 2732597 substrats et au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6 et plus particulièrement un dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6. Préférentiellement, ce dérivé est le 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde. Dans certaines utilisations particulières d'un tel capteur, il peut être nécessaire de prévoir d'isoler celui-ci de son environnement. C'est en particulier le cas lorsque l'on utilise le capteur ci-dessus décrit dans des secteurs comme l'agro-alimentaire ou la cosmétique. Il faut en effet avoir présent à l'esprit que la réaction enzymatique qui constitue l'élément central du capteur aboutit à la formation de io composés qu'il peut être nécessaire de ne pas mélanger à l'objet à préserver de l'oxygène. Il faut alors prévoir un conditionnement particulier permettant d'isoler physiquement le capteur d'oxygène ainsi défini du milieu à préserver de l'oxygène. Dans un mode particulier de l'invention, le capteur d'oxygène est isolé du produit contenu dans le conditionnement par une membrane perméable au gaz et imperméable aux liquides notamment ceux entrant dans la composition de l'émulsion selon l'invention. La membrane perméable au gaz peut être, par exemple, celle définie dans le document FR-A-2 671 055. Le capteur d'oxygène isolé par la membrane peut être, dans le dispositif de conditionnement, solidaire des parois ou non solidaire de ces parois et noyé dans la composition. Quelque soit la composition envisagée selon l'invention, l'homme du métier sait en adapter la concentration des divers composants, sachant que l'activité basale de l'enzyme peut varier de manière aléatoire selon le lot utilisé et que cette activité conditionne les quantités utilisées de substrat et/ou d'activateur et/ou de stabilisateur. 13 2732597 On va maintenant donner à titre d'illustration des exemples de mesures de l'activité cyclooxygénase en présence ou en l'absence de dérivés et en particulier de dérivés de pyrimidine, qui ne sauraient limiter en aucune façon la portée de l'invention. 14 2732597 EXEMPLES Exemple 1: Mesure du pouvoir activateur et/ou stabilisateur de dérivés de pyrimidine substitués en 6, à une concentration donnée. Principes généraux de mesure: On mesure la quantité d'oxygène nécessaire à l'oxydation de l'acide o0 arachidonique par l'activité cyclooxygénase de la prostaglandine-endoperoxyde synthase, en présence ou en absence du dérivé à tester. Les mesures de la consommation d'oxygène sont effectuées avec une électrode de Clark raccordée à un oxymétre YSI 5300 de marque Yellow Spring Instruments. Ces mesures sont effectuées en chambre ouverte sous agitation constante à la température de 37 C. Si l'on utilise un enregistreur graphique, la mesure de la consommation en oxygène se matérialise sous la forme d'une courbe, dont la pente maximale permet de déduire la vitesse initiale de la réaction, et à partir de laquelle il est possible de calculer la durée pendant laquelle la vitesse initiale de la réaction est maintenue. La courbe ainsi obtenue, en l'absence de toute substance autre que les ingrédients nécessaires à la réaction enzymatique, donne l'activité de base de l'enzyme. On peut déterminer dans ces conditions la vitesse initiale et la durée pendant laquelle cette vitesse est maintenue, dans une réaction ne comportant que l'enzyme et son substrat. Ces données serviront de référence à l'étude des dérivés à tester. La mesure de l'activité des dérivés à tester s'effectue dans les mêmes conditions, en ajoutant au milieu réactionnel le dérivé à tester. Ce sont la variation de la pente 2732597 et la variation de la durée pendant laquelle la vitesse maximale est maintenue qui permettent d'évaluer l'activité du dérivé à tester vis à vis de la cyclooxygénase. Préparation aux mesures: On prépare une solution de TRIS 0,1 M et d'EDTA 5 mM à pH = 8,00 (solution TE). Les mesures s'effectuent dans une solution tamponnée (Tampon TEA) composée io de 9 volumes de solution TE et 1 volume d'alcool à 20%. Le substrat est préparé sous la forme d'une solution mère d'arachidonate de potassium selon le protocole du fournisseur (Interchim, France). La solution ainsi obtenue titre à 46 mM en acide arachidonique. Elle peut être stockée à 4 C pour 24 heures. L'enzyme utilisée est de la prostaglandine-endoperoxyde synthase (PGHS), isolée de glandes séminales de mouton, vendue par la société Cayman Chemical sous la référence 60100. Les dérivés à tester sont préparés sous forme de solution mère titrant à 5 mM dans un mélange eau/alcool (80/20) et testés avec un même lot d'enzyme. Mesures: Activités de base de l'enzyme: A t = 0, on introduit dans la chambre de mesure 380 Il de tampon TEA préchauffé à 37 C, qu'on laisse s'équilibrer au moins une minute. A t = 1, on introduit 300 unités d'enzyme (PGHS). L'enregistrement est déclenché, et on laisse l'ensemble se stabiliser de nouveau pendant une minute. L'enregistrement obtenu donne le niveau de base de la réaction. 16 2732597 Au bout d'une minute supplémentaire, on introduit 10 pl de substrat et l'on enregistre la consommation en oxygène pendant 2 à 3 minutes. On détermine ainsi la vitesse initiale de la réaction et la durée pendant laquelle cette vitesse est maintenue. Ces données serviront de référence aux mesures de l'activité des dérivés à tester. Activités des dérivés à tester: l0 Les conditions d'expérimentation sont identiques aux précédentes, si ce n'est que le tampon TEA préchauffé à 37 C est remplacé par un tampon identique contenant le dérivé à tester à la concentration de 0,5 mM. Résultats: Ces résultats sont exprimés en % par rapport aux valeurs obtenues avec le témoin. Dérivés Activation Stabilisation Témoin +0% +0% 2,4 diamino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde +58% +14% 2, 4 diamino, 6 piperidino pyrimidine -14% +35% 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde. +171% +28% 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde +173% +17% 2, méthyl, 4 amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde + 24% 0% 2,4 diamino, 6 butyloxy pyrimidine 3- oxyde +13% 0% 2 amino, 4 propyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3- +117% 0% oxyde Indométhacinel -100% -100% 17 2732597 : le 1-(4-chlorobenzoyl) 5 methoxy, 2 methyl-1 H-indole 3 acide acétique ou indométhacine est un inhibiteur connu de l'activité cyclooxygénase. (H.P Rang/ M.M.Dale Pharmacology second édition 1991. Churchill Livingstone édition). Dans les conditions de l'expérience, on retrouve bien cet effet inhibiteur. Ces résultats montrent que des dérivés de pyrimidine substitués en 6 présentent des propriétés d'activateur et/ou de stabilisateur de la cyclooxygénase. Exemple 2: l0 Calcul de la concentration activatrice à 50% (AC 50), du 2,4- diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde pour l'activation de la Prostaglandine endoperoxyde synthase. 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde Activation ( IM) (% du témoin) 0 0 ,6 23 62,5 61 90 250 102 500 146 1000 181 Par calcul statistique (régression log-linéaire, le coefficient de corrélation étant de 0,98 et la significativité de liaison inférieure ou égale à 0,01), on trouve une AC 50 pour 40 gM pour le 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde. Exemple 3: Crème dermique On prépare une crème dermique par mélange des ingrédients suivants: 18 2732597 - 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde 0,5 g - Ceteareth 30 7 g Stéarate de glycéryle 2 g - Alcool cétylique 1,5 g - Polydiméthylsiloxane 1,5 g - Huile de paraffine 15 g - Glycérine codex pure 20 g - Conservateurs q.s. - Eau déminéralisée q.s.p. 100 g Exemple 4: Lotion dermique à pulvériser On prépare une lotion dermique à pulvériser par mélange des ingrédients suivants: - 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde 0,025 g - Ethanol 30 g - Eau déminéralisée q.s.p. 100 g Exemple 5: Solution injectable On prépare une solution injectable par voie intradermique par mélange des ingrédients suivants: - 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde 0,01 mg - Sérum physiologique (NaCI 9 g/H20 qsp 100 ml) q.s.p. 1 ml 19 2732597 REVENDICATIONS 1. Utilisation dans une composition comme activateur et/ou stabilisateur de cyclooxygénase d'au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est un dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6. 3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications I ou 2, caractérisée par le io fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est choisi parmi: 2, 4 diamino, 6 piperidino pyrimidine, 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3oxyde, 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, 2, méthyl, 4 amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, 2,4 diamino, 6 butyloxy pyrimidine 3oxyde, 2 amino, 4 propyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde. 4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est choisi parmi: le 2,4-diamino 6piperidinopyrimidine 3-oxyde, le 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que la composition est une composition cosmétique ou pharmaceutique. 6. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée par le fait que la composition pharmaceutique est une composition dermatologique. 2732597 7. Composition, caractérisée par le fait qu'elle comprend au moins un des substrats de la cyclooxygénase, et au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6. 8. Composition selon la revendication précédente, caractérisée par le fait que dérivé de pyrimidine substitué en 6 est un dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6. 9. Composition selon la revendication 7 ou 8, caractérisée par le fait que le dérivé io de pyrimidine substitué en 6 est choisi parmi: 2, 4 diamino, 6 piperidino pyrimidine, 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde, 2,4 dipropylamino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, i5 2, méthyl, 4 amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, 2,4 diamino, 6 butyloxy pyrimidine 3-oxyde, 2 amino, 4 propyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde. 10. Composition selon la revendication 9, caractérisée par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est choisi parmi: le 2,4- diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde, le 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisée par le fait qu'elle comprend au moins une cyclooxygénase. 12. Composition selon la revendication précédente, caractérisée par le fait que la cyclooxygénase est sous une forme purifiée. 13. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 11 ou 12 comme capteur d'oxygène. 21 2732597 14. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 7 à , pour activer et/ou stabiliser une cyclooxygénase endogène. 15. Utilisation d'au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6, dans la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement de pathologies liées soit à l'hyperactivité de la voie des lipoxygénases, soit à un défaut de l'activité de la voie des cyclooxygénases, soit pour lesquelles il s'avère utile de favoriser la voie des cyclooxygénases pour déclencher ou accélérer un i0 processus. 16. Utilisation selon la revendication précédente, dans la préparation d'un médicament destiné au traitement de l'érythème solaire, du prurit, de l'eczéma, du psoriasis, de l'érythème noueux, de l'urticaire, de la mastocytose systémique, destiné à favoriser l'hémostase, la cicatrisation, ou dans la préparation d'une composition anti-viellissement. 17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 15 ou 16, caractérisée par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est un dérivé de pyrimidine 3- oxyde substitué en 6. 18. Utilisation selon l'une des revendications 15 à 17, caractérisée par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est choisi parmi: 2, 4 diamino, 6 piperidino pyrimidine, 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde, 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, 2 amino, 4 propylamino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, 2, méthyl, 4 amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, 2,4 diamino, 6 butyloxy pyrimidine 3-oxyde, 2 amino, 4 propyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde. 22 2732597 19. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est choisi parmi: le 2,4diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde, le 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde. 20. Kit, caractérisé par le fait qu'il comprend au moins une cyclooxygénase et au moins un dérivé de pyrimidine substitué en 6. io 21. Kit selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est un dérivé de pyrimidine 3-oxyde substitué en 6. 22. Kit selon l'une des revendications 20 et 21, caractérisé par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est choisi parmi: 2, 4 diamino, 6 piperidino pyrimidine, 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde, 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, 2 amino, 4 propylamino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, 2, méthyl, 4 amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde, 2,4 diamino, 6 butyloxy pyrimidine 3-oxyde, 2 amino, 4 propyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde. 23. Kit selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que le dérivé de pyrimidine substitué en 6 est choisi parmi: le 2,4- diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde, le 2,4 dipropyl-amino, 6 diméthylamino pyrimidine 3-oxyde, le 2 amino, 4 propyl-amino, 6 piperidino pyrimidine 3-oxyde. 24. Kit selon l'une quelconque des revendications 20 à 23, caractérisé par le fait qu'il contient au moins un substrat de la cyclooxygénase. 23 2732597 25. Kit selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que la cyclooxygénase est sous une forme purifiée.