Brevet FR2725214A1 — publié le 19960405

TITRE : NOWEAUX COMPOSES UTILISABLES POUR LA PREPARATION D'AGENTS ANTI-INFECTIEUX. L'invention a pour objet de nouveaux composés utilisables pour la préparation d'agents anti-infectieux. On sait que la voie naturelle de défense de l'organisme vis-à-vis d'infections virales met en jeu les interférons, qui agissent au travers de différents médiateurs, dont le système 2-5A/RNase L. Le traitement des cellules par les interférons (désignés ci-après en abrégé par IFN) induit de nombreux gènes parmi lesquels ceux des 2-SA-synthétases. Ces enzymes, activées par de 1'ARN double brin (cellulaire ou viral), polymérisent 1'ATP en une série d'oligoadénylates à liaison phosphodiester 2'-5', appelés ci-après "2-5A". Ce 2-5A active, à des concentrations nanomolaires, une endoribonucléase latente la RNase L, qui possède notamment la propriété de cliver les ARNm au niveau des séquences UpNp (N=U ou A). Lors d'une infection virale, l'activation du système 2-5A/RNase L conduit à la dégradation sélective des ARNm viraux, ce qui entraîne une inhibition de la croissance virale. Cette sélectivité d'une enzyme, la RNase L n'ayant que peu de spécificité de séquence serait due à une activation localisée du système, activation qui aurait lieu au niveau des structures double brin virales comme la séquence TAR de HIV. Le système 2-5A/RNase L pourrait être impliqué dans d'autres situations comme la croissance et la différentiation cellulaire. Ceci via la dégradation de messagers dits instables et portant en 3' des séquences instabilisatrices AUUUA cibles potentielle de la RNase L (Shaw et Kamen, 1986, Cell, 46, 659-667). Le rôle du système 2-5A se trouve toutefois limité lors de l'infection par certains virus comme le virus de l'encéphalo-myocardite (EMCV), la vaccine, l'Herpès ou le HIV, ce qui diminue l'effet anti-viral des interférons. On conçoit donc l'intérêt de disposer de moyens permettant de lutter avec efficacité contre une infection par de tels virus. Les travaux des inventeurs dans ce domaine les ont conduits à mettre en évidence que la RNase L est inhibée par une protéine cellulaire. L'invention repose plus particulièrement sur la mise en évidence d'une part, d'un mécanisme de régulation de la RNase L par cette protéine cellulaire et d'autre part de l'induction de cette protéine cellulaire par des virus. L'invention offre ainsi une nouvelle approche particulièrement efficace et spécifique pour élaborer de nouvelles stratégies antivirales dans des situations pathologiques. L'invention a donc pour but de fournir, en tant que nouveaux produits chimiques, des séquences d'ADN capables de coder pour des polypeptides ayant des propriétés inhibitrices vis-à-vis de la RNase L, ainsi que les séquences anti-sens correspondantes, les séquences d'ARN correspondantes et les séquences d'ADNc. Elle vise également à fournir lesdits polypeptides, en tant que produits chimiques nouveaux, et un procédé pour les obtenir selon les techniques du génie génétique, de manière à disposer de ces produits en quantités suffisantes pour des applications biologiques, et sous forme purifiée. Selon encore un autre aspect, l'invention vise l'application de ces différents produits pour élaborer des compositions ou des produits à effet anti-viral ou permettant de renforcer l'effet des interférons. L'invention vise, en tant que nouveaux produits, les séquences de nucléotides, isolées de leur environnement naturel, capables de s'hybrider avec au moins un fragment de la séquence SEQ ID N" 1 ou SEQ ID N" 2 qui code pour un polypeptide capable d'inhiber la RNase L. La séquence SEQ ID N" 1 est donnée en fin de description, avec les autres séquences mentionnées dans le document appelé "Liste de séquences". Cette hybridation peut être réalisée dans des conditions stringentes, mais également dans des conditions relaxes. L'invention vise en particulier des séquences de nucléotides, isolées de leur environnement naturel, correspondant à au moins une partie des séquences SEQ ID N" 1 et SEQ ID N" 2, capable de coder pour un inhibiteur de RNase L. De telles séquences sont encore caractérisées en ce qu'elles sont capables de coder, mises en oeuvre selon les techniques classiques de 1'ADN recombinant, pour des polypeptides présentant une activité inhibitrice de la RNase L, comprenant au moins un enchaînement d'acides aminés dans la séquence SEQ ID N" 3. L'invention vise les séquences d'acides nucléiques correspondant au cadre ouvert de lecture allant de la position 118 à 1914 dans SEQ ID N" 1. Ces séquences sont encore caractérisées en ce qu'elles comprennent deux motifs du type boucle P. Entrent également dans le cadre de l'invention les séquences anti-sens correspondant aux séquences définies ci-dessus, les séquences d'ARN-m et leurs antisens, et les ADNc correspondants. Ces différentes séquences de nucléotides sont encore caractérisées en ce qu'elles sont dépourvues d'ADN de mammifères, d'agents infectieux, de prions et autres matériaux des produits naturels. Elle vise plus particulièrement les séquences d'acides nucléiques ci-dessus, insérées dans un vecteur d'expression pour des polypeptides présentant une activité inhibitrice de la RNase L. L'invention vise également, en tant que produits chimiques nouveaux, des polypeptides ayant un effet inhibiteur vis-à-vis de ribonucléase. Les polypeptides selon l'invention sont caractérisés en ce qu'ils possèdent une activité inhibitrice de la RNase L et sont constitués par un enchaînement d'acides aminés dans la séquence codée par SEQ ID N" 1 ou SEQ ID N" 2. Ces polypeptides sont encore caractérisés par un enchaînement d'acides aminés dans SEQ ID N" 3 ou dans SEQ ID N" 4. L'invention vise en particulier des polypeptides tels que définis ci-dessus possédant, dans leur enchaînement d'acides aminés une séquence homologue avec le motif CX2CX2CX3C:4Fe4S - ferredoxine et/ou un nombre élevé de groupes thiol et/ou un nombre élevé de motifs leucine. Le polypeptide correspondant au cadre ouvert de lecture dans la séquence SEQ ID N" 1 comprend 599 acides aminés, possède un poids moléculaire évalué à 67,515 kDa et un point isoélectrique estimé à 8,7. Les polypeptides de l'invention sont encore caractérisés en ce qu'ils sont tels qu'obtenus par expression, dans une cellule hôte appropriée, selon les techniques de l'ADN recombinant, d'un vecteur d'expression comportant une séquence d'ADN constituée par un enchaînement de nucléotides dans la séquence SEQ ID N" 1 ou SEQ ID N" 2, récupération du polypeptide exprimé et purification. Les polypeptides au sens de la présente invention sont de plusieurs types. Il peut s'agir de fragments ou dérivés obtenus par modification génétique et/ou chimique à partir des séquences SEQ ID N" 1 ou SEQ ID N" 2, ou des séquences SEQ ID N" 3 ou SEQ ID N" 4, dès lors qu'ils conservent au moins en partie l'activité d'inhiber la RNase L. Par modification de nature génétique et/ou chimique, on entend toute mutation, délétion, substitution, addition et/ou modification d'un ou plusieurs nucléotides. Ces modifications permettent, si on le souhaite, d'adapter les séquences définies ci-dessus à l'expression dans un type de vecteur ou d'hôte, de faciliter leur pénétration cellulaire ou d'augmenter l'activité d'inhibition. L'activité d'inhibition de ces polypeptides peut être mise en évidence selon différents protocoles décrits dans les exemples. D'une manière avantageuse, les polypeptides définis ci-dessus peuvent être obtenus sous une forme débarassée de tout contaminant et en quantité suffisante pour les applications biologiques décrites ci-après. Pour obtenir les polypeptides de l'invention, comme illustré par les exemples, on procède au criblage d'une banque d'ADNc à l'aide d'un 2-5A marqué, par exemple, par un élément radioactif ; on isole le gène recherché, puis on l'introduit dans un vecteur d'expression et on transfecte une cellule hôte avec ce vecteur. Après expression du polypeptide à activité inhibitrice de la RNase recherché, on récupère ce dernier après lyse des cellules, et on le soumet à au moins une étape de purification. Pour la production du polypeptide, on utilisera des systèmes procaryotes, comme les bactéries, ou eucaryotes, comme baculovirus, les cellules d'insectes et les levures, avantageusement tels que disponibles dans le commerce. Pour l'étape de purification, on peut utiliser des techniques de biochimie classique, par exemple l'isoélectrofocalisation et/ou on utilise des vecteurs également disponibles dans le commerce comportant des séquences permettant des purifications par affinité, anticorps ou nickel par exemple. L'invention vise également les vecteurs d'expression contenant au moins l'une des séquences de nucléotides définies ci-dessus soumises au contrôle d'un promoteur approprié, en particulier, les vecteurs correspondant à une partie au moins de SEQ ID N" 1 ou SEQ ID N" 2, ou leurs séquences anti-sens. Les cellules hôtes transfectées par ces vecteurs et qui comprennent les protéines recombinantes exprimées font également partie de l'invention. Les cellules utilisées pour les transfections correspondent avantageusement à celles mentionnées ci-dessus, disponibles dans le commerce. L'étude des propriétés des polypeptides définis ci-dessus a permis de mettre en évidence, comme déjà souligné, un effet inhibiteur de RNase L et, par voie de conséquence, de son activation dépendante de 2-5 A. Ces polypeptides se lient à la RNAse et inhibent son activité enzymatique (voir exemple 4, figure 5 et exemple 5, figure 6) On rappelle que la RNase L a tout d'abord été décrite comme un complexe moléculaire d'environ 200 kDa (Slattery et al, 1979, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 4778-4782). Mais son poids moléculaire varie avec les conditions d'analyse utilisées comme la concentration en protéines (Floyd-Smith et al, J. Biol. Chem. 257, 8584 8587), et l'origine des cellules (Bisbal et al, Eur. J. Biochem. 179, 595-602). Zhou et al (1993, Cell, 72, 753-765) ont publié le clonage d'une protéine de 80 KD appelée 2DR, qui lie le 2-5A et clive le poly(U) après traduction in vitre dans le lysat de réticulocyte de lapin, mais pas dans le lysat de germe de blé. Récemment, grâce à un anticorps monoclonal spécifique, les inventeurs ont caractérisé une protéine, liant le RNA, associée à la protéine de 80 KD liant le 25A. Les inventeurs ont donc proposé un modèle où la RNase L de haut poids moléculaire est en fait un complexe composé d'au moins deux protéines : la protéine liant le 2-5A (2-5ABP) et la protéine liant le RNA (RNABP) (Salehzada et al, 1993, J. Biol. Chem., 268, 7733-7740). Les polypeptides de l'invention s'associent spécifiquement à 2-5ABP et RNABP comme le montre leur coimmunoprécipitation avec l'anticorps monoclonal MAb3 (exemple 5, figure 6). Les essais effectués avec les polypeptides de l'invention, dont des exemples illustratifs sont donnés ci-après, ont montré qu'ils sont capables d'inhiber l'activité RNase L, aussi bien dans des extraits cellulaires (exemple 4, figure 5) que dans des cellules intactes (exemple 9, figure 10), ainsi que l'activité de liaison au 2-5A de la protéine 2DR exprimée dans un système acellulaire (exemple 4, figure 5). L'inhibition observée dépend du rapport entre la RNase L et le polypeptide et ne résulte pas d'une dégradation du 2-5A ou d'une modification stable de la RNase L. Ils ne sont pas régulés par les interférons mais sont associés à la RNase L et co-précipitent avec le complexe RNase L lorsqu'on les met en contact avec un anticorps monoclonal spécifique de la RNase L. Ils constituent donc des régulateurs du système 2-5A/RNase L, qui correspond à l'une des voies d'action des interférons dans les cellules de mammifères. Les polypeptides de l'invention sont avantageusement utilisés pour stabiliser les ARN dans des extraits cellulaires lors des techniques de biologiemoléculaire (exemple 8 figure 9). Plus particulièrement, l'invention vise l'utilisation des polypeptides définis ci-dessus comme agents cibles pour détecter des produits capables d'inhiber leur propre effet inhibiteur et permettant ainsi de réguler le fonctionnement du système 2-SA/RNase L, et par là d'augmenter l'action des interférons. L'invention vise donc un procédé de criblage de molécules ou substances pour détecter chez ces dernières une activité dirigée contre l'activité inhibitrice de la RNase L des polypeptides de l'invention. Ce procédé est caractérisé en ce qu'on met en contact un polypeptide de l'invention avec une molécule ou substance à tester, et on détecte la réactivation de la RNase L, à nouveau capable de lier le 2-5A, ou l'inhibition de son inhibiteur. Pour mettre en évidence l'activité de la RNase L, on procèdera avantageusement comme décrit dans l'exemple 4. Des produits capables d'inhiber l'activité inhibitrice vis-à-vis de la RNase L des polypeptides de l'invention sont constitués par des anticorps polyclonaux et monoclonaux. Ces anticorps sont également visés par l'invention en tant que produits nouveaux. Ces anticorps dirigés contre les polypeptides de l'invention sont préparés avantageusement selon les techniques classiques. Une autre application des polypeptides de l'invention consiste dans le développement de produits capables d'empêcher la production d'inhibiteurs de RNase L par des agents infectieux ou de neutraliser les inhibiteurs produits par ces agents. Des virus, comme EMCV, induisent en effet des inhibiteurs de RNase L, cette induction pouvant être inhibée par l'interféron lorsque l'action de ce dernier est capable de rétablir l'activité au système 2-SA/RNase L. Mais lorsque le système 2-5A/RNase se trouve déséquilibré, l'interféron ne peut plus exercer son effet anti-viral et l'infection virale progresse. L'invention fournit donc des moyens, avec les polypeptides définis ci-dessus, pour rechercher des produits actifs vis-à-vis des inhibiteurs de RNase L induits par les virus. L'invention vise particulièrement l'utilisation de séquences de nucléotides anti-sens définies plus haut pour transfecter des cellules de mammifères (voir exemple 9, figure 10 et exemple 11 figure 12 A à F). L'ADN anti-sens pourra être contenu dans différents vecteurs tels que des rétrovirus ou des virus recombinants modifiés pour être utilisables chez le mammifère en opérant selon les techniques classiques du génie génétique. La première étape consiste à obtenir des animaux transgéniques dans lesquels le gène de l'inhibiteur de la RNase L aura été rendu inactif, ou au contraire sera surexprimé. On opère, selon les techniques décrites dans "Manipulating the mouse embryo. A Laboratory Manual, Hogan B et al, Cold Spring Harbor Laboratory, 1986, Ed. Cold Spring Harbor. Par exemple 1'ADN pourra être microinjecté directement dans le pronucleus des oeufs fertilisés (voir Constantitini et Lacy, 1981, Nature, 294, pages 92 à 94). On pourra aussi infecter l'embryon avec un vecteur rétroviral (Jaenisch, 1976, Proc. Nat. Sc 1973, 1260-1264). Cette technique peut aussi permettre l'inactivation du gène (Jaenish et al, 1983, Cell, 32, 209-216). Une autre technique pour inactiver le gène pourra consister dans la microinjection d'un gène codant pour un ARN anti-sens (Izant et Weintraub, 1985, Science, 229-345-352). Ces animaux permettent l'étude de leur sensibilité à des virus induisant l'inhibiteur de la RNase L, comme 1'EMCV, en liaison ou non avec un traitement à 1'IFN. En effectuant des prélèvements chez l'animal, on détermine le taux de virus produit et, en comparant à des animaux témoins, on suit l'évolution de l'infection. Dans une autre étape, on réalise les expériences sur un autre modèle animal sensible à une infection équivalente au système HIV chez l'homme pour exprimer sélectivement un anti-sens de l'inhibiteur dans les cellules infectées par le virus. On procède soit par pilotage des virus ou rétrovirus en prenant pour cible le CD4, ou en obtenant une expression sélective de l'anti-sens dans les cellules infectées seulement, celui-ci étant sous le contrôle du promoteur naturel du gène de l'inhibiteur de la RNase L qui est induit par le virus lui-même. L'invention fournit ainsi les moyens d'étudier l'évolution d'une infection chez ces modèles animaux. Les vecteurs utilisés dans le modèle ci-dessus sont contenus dans des compositions pharmaceutiques en association avec un véhicule inerte. Ces compositions se présentent avantageusement sous forme de solution stérile, isotonique ou sont conservées sous forme lyophilisée. Ces solutions sont administrées sous forme de sprays par voie intra-nasale, ou par voie orale, intraveineuse ou intramusculaire. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont donnés dans les exemples qui suivent qui se rapportent aux polypeptides inhibiteurs de séquence SEQ ID N" 3 ou SEQ ID N" 4, appelés respectivement RLI et H2ABP. Dans ces exemples, il est fait référence aux figures 1 à 12, où - la figure 1 représente les constructions des ADNc codant pour les polypeptides selon l'invention, - la figure 2, la séquence de nuclétotides de l'ADNc du polypeptide RLI et la séquence d'acides aminés correspondante, - les figures 3A et 3B, les analyses par transfert Northern d'ARNm de cellules HeLa, traitées ou non par de l'interféron, hybridées avec différentes sondes, - les figures 4A à 4C, les autoradiographies après SDS-PAGE de produits de traduction de l'ADNc de RLI et du polypeptide 2DR dans deux système s de traduction différents, et les résultats de l'hybridation avec une sonde 2-5ApCp. - les figures 5A à 5C, les effets d'inhibition du RLI sur la RNase L dans un système de réticulocyte de lapin ou les cellules humaines Daudi ou Hela, - la figure 6, l'association grâce à l'immunoprécipitation par un anticorps monoclonal spécifique de la RNase L, de RLI associé à la 2DR ou la RNase L, - la figure 7, la stabilité du 2-5A en présence de RLI, - la figure 8, l'absence de dégradation ou de modification stable de la RNase L par RLI, - la figure 9, la stabilisation des ARN dans un extrait de réticulocyte en présence de RLI, - les figures lOA et lOB, la réponse à l'interféron des cellules transfectées par la construction sens de H2ABP inhibant la RNase L, - la figure 11, l'induction de l'ARNm de RLI par EMCV, - les figures 12A à 12C, l'activité de la RNase L lors de l'infection par EMCV de cellules HeLa transfectées par un vecteur vide, la construction sens H2ABP inhibant la RNase L ou la construction anti-sens de H2ABP inhibant RLI, en présence ou non d'interféron, - les figures 12 D,E,F, les mêmes cellules mais après infecion par VSV. On indique tout d'abord ci-après les produits et méthodes utilisées dans les exemples donnés pour illustrer l'invention. I - Produits et méthodes Cellules et extraits cellulaires On utilise des cellules Daudi humaines comme source d'ARNm compte tenu de leur niveau élevé en activité liant 2-5A. Ces cellules sont cultivées en suspension et maintenues dans un milieu RPMI 1640 supplémenté avec 10 % (v/v) de sérum de veau foetal, 60 UI/ml de pénicilline et 50 ug/ml de streptomycine. Les cellules HeLa sont mises en culture dans le même milieu avec de la glutamine 2 mM. Les cellules sont traitées avec de l'interféron a/ss humain (IFN a/p Hu en abrégé). Les extraits cellulaires sont préparés comme décrit par Salehzada et al dans J. Biol. Chem., 1993, 268, pages 7733 - 7740. En bref, les cellules sont remises en suspension dans 2 volumes de tampon hypotoniques, brisées dans un homogénéiseur et centrifugées à 10000 g. Isolement des clones d'ADNc La technique utilisée pour isoler les clones d'ADNc de RLI est donnée dans l'exemple 1. Pour l'ADNc de 2DR, on opère par PCR avec des amorces déterminées à partir de la séquence publiée par Zhou et al dans Cell, 1993, 72, 753-765. Radio-liaison de la RNase L et marquage radiocovalent sur affinité de la RNase L. On réalise l'essai de radio-liaison et le procédé de marquage covalent en utilisant, comme sources de RNase L, des extraits cellulaires S10, des lysats de réticulocyte de lapin ou des extraits de germes de blé (avec ou sans les différentes protéines traduites clonées). On utilise comme sonde de la 2-5A4-3'-t32P]pCp (3000 Ci/mmole) (voir Bayard et al, Biochemistry, 1986, 25, 3730-3736). Analyse de 1'ARN L'ARN cellulaire total est préparé en utilisant le procédé au chlorure de lithium - thiocyanate de guanidine selon la méthode de Cathala et al dans DNA, 1983, 4, 327-333. Les hybridations par transfert Northern (transfert passif d'acides nucléiques sur membranes) sont effectuées selon les techniques standards comme décrit par Sambrook et al dans Molecular Cloning : a laboratory manual, 1982 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New-York). Les sondes sont synthétisées par procédé multiamorce (kit Ready-to-go, Pharmacia). Après auto-radiographie, les ARNm sont quantifiés par analyse d'image à 11 aide du programme Bioimage sur une station d'analyse d'images Millipore (Sun Station). Chaque piste est normalisée avec la sonde GAPDH (glycéraldehyde-3-phosphate déhydrogénase). II Exemples Exemple I: ADNc de RLI (illustré par la figure 1) . Isolement des clones d'ADNc On établit une banque d'ADNc de cellules Daudi ZAP. On effectue un criblage avec 2-5A4-3'-[32P]pCp (3000 Ci/mmole), comme sonde radio-marquée, en utilisant la technique développée pour la renaturation de l'activité RNase L sur filtre. On imprègne des filtres de nitrocellulose de IPTG 10 mM, on les seche et on les applique sur des plaques de phage pendant 3 heures à 37"C. Les filtres sont alors rincés avec un tampon A saturé avec 5 % (v/v) de lait écrémé et soumis à nouveau à un rinçage avec le tampon A sans lait. On effectue ensuite une incubation durant environ 14 heures à 4"C dans le tampon A avec du 2-5A4-3'-[32P]pCp (5x105 dpm/filtre).La composition du tampon A est la suivante 10 mM Hepes, pH 7,5, 80 mM de KC1, 5 mM de Mg(OAc)2, 1 mM de EDTA, 5 % (v/v) de glycérol, 20 mM de p- mercaptoéthanol. Après lavage dans le tampon A, les filtres sont auto-radiographiés sur films. On isole ainsi un clone positif contenant une insertion de 2861 pb appelé H2ABP (figure 2). Cette insertion comporte un initiateur ATG en position 125 (voir figure 2). Il est traduit sous forme d'une protéine de 39 kDa dans un lysat de réticulocyte de lapin ou un extrait de germe de blé. Il présente un cadre ouvert de lecture à partir du premier nucléotide. On utilise une amorce interne déterminée à partir de la séquence de H2APB pour isoler par PCR ancrée un ADNc complet de 3568 pb codant pour la RLI (voir figure 1). En bref, on ajoute à une extrémité d'un ADNc de polydT des nucléotides dG avec une terminal transférase. Cet ADNc (0,5 ,ug) est amplifié par PCR (30 cycles) dans un volume final de 50 p1 en utilisant une amorce 5' polydC avec des sites Pstl et BamH1 (5'TTTCTGCAGGATCCCCCCCCCCCC) et une amorce interne (5' CACTTAGATCATGTTCCACCACAAT 3') comme illustré sur la figure 1. Ce fragment d'ADNc de 924 pb, désigné par PCR sur la figure 1, qui chevauche le clone H2ABP de 217 pb, est cloné dans le site BglII. L'ADNc complet de RLI contient 707 pb additionnelles du coté 5' de H2ABP. Analyse de la séquence de nucléotides (illustree par la figure 2) On effectue un séquençage de H2ABP dans pSK (pBluescript II SK, Stratagène) selon la méthode de séquençage au didéoxy nucléotide de Sanger (kit de séquençage T7, Pharmacia) après les délétions progressives 3'. Ces délétions sont engendrées par digestion de nucléase avec l'exonucléase III-S1, suivie d'un remplissage avec 1 > 'ADN de polymérise Klenow (Pharmacia). La séquence entière d'ADNc est séquence selon la méthode Sanger et des amorces internes. Cette séquence avec celle correspondante en acides aminés est représentée sur la figure 2. L'ADNc de RLI présente une région non codante 5' de 118 nucléotides, un cadre ouvert de lecture s'étendant jusqu'au nucléotide 1914 et une longue région 3' non traduite de 1654 pb. Le cadre ouvert de lecture code pour un polypeptide de 599 acides aminés, de poids moléculaire 67,515. Le codon ATG au début du cadre ouvert de lecture présente les caractéristiques d'un codon initiateur fort, c'est-à-dire une purine en position -3 et un G en position +4. L'ADNc de RLI contient deux sites de liaison répétés ATP/GTP ou motifs du type boucle P : l'un allant des résidus 110 à 117 et l'autre des résidus 379 à 386 (voir les rectangles vides dans la figure 2). Dans la région non codante 3', les séquences de signal de polyadénylation AATAAA sont soulignés et les séquences ATTTA pouvant correspondre à une instabilité sont soulignées de deux traits. Dans la séquence d'acides aminés, entre les acides aminés 55 et 66, on constate une homologie complète de RLI avec le motif CX2CX2CX3C: 4Fe4S Ferredoxine (voir rectangle avec carrés noirs sur la figure 2). On note également une répétition interne de 128 acides aminés avec une homologie de 53 % démarrant aux acides aminés 200 et 440. (ces parties sont soulignées en gras dans la figure) Les rectangles grisés correspondent à un site de phosphorylation potentiel PCK. RLI présente un nombre éleve de groupes thiol et se révèle très riche en résidus leucine. Son point isoélectrique estimé est de 8,7. Exemple : Régulation de l'expression de 1'ARNm de RLI par l'interféron (illustree sur la figure 3) Dans une première série d'expériences, on traite des cellules HeLa avec 103 U/ml de IFN a/p Hu pendant 2, 4, 6, 8, 10, 18 et 24 heures. L'ARN cytoplasmique total est extrait des cellules et analysé par transfert Northern. Les mêmes expériences sont réalisées sur des cellules HeLa non traitées. Les ARN (20 pg) sont fractionnés sur un gel d'agarose à 1,2% (p/v), et hybridés avec une sonde d'ADNc de RLI, avec une sonde humaine codant pour une protéine de 15 kDa induite par IFN, ou avec une sonde humaine GAPDH (glycéraldéhyde3-phosphate déhydrogénase). Le filtre est soumis à une autoradiographie pendant 5 h dans l'essai avec la sonde GAPDH et pendant 12 h dans les essais avec les autres sondes.Les résultats obtenus sont donnés sur la figure 3A. L'examen de cette figure montre que l'ADNc de RLI s'hybride avec deux ARNm cellulaires de 3,5 kb et de 2,8 kb dans les cellules HeLa. Le même résultat est obtenu dans des cellules Daudi et CEM. On constate qu'un traitement avec de l'interféron humain a/p, même à des concentrations élevées, ne régule pas les deux ARNm qui s'hybrident avec les clones de RLI. La durée du traitement à l'interféron n' entraîne pas de variation quantitative de ces ARNm. Les cellules répondent cependant normalement au traitement à l'interféron. En effet, en opérant selon les mêmes conditions, on induit une protéine de 15 kDa déjà décrite comme étant induite par un traitement à l'interféron (voir Blomstrom et al, J. Biol. Chem., 1986, 261, 8811-8816). Pour étudier les différences entre les ARNm de 2,8 et 3,5 pb, on a effectué une autre série d'expériences consistant en une analyse par transfert Northern de 1'ARN cytoplasmique total extrait des cellules HeLa. Les ARN (20 ug) ont été fractionnés sur gel d'agarose à 1,2 % (p/v) et hybridés avec deux sondes d'ADNc de RLI décrites dans la figure 1, à savoir une sonde de 762 pb (A dans figure 3B), spécifique de l'extrémité 5' de RLI, et une sonde de 764pb (B dans la figure 3B) représentant son extrémité 3'. On constate que la sonde A s'hybride avec les deux ARNm tandis que la sonde B s'hybride uniquement avec l'ARNm le plus long. Ces deux ARNm diffèrent donc dans leur région 3' non traduites. La similarité entre les tailles des deux ARNm naturels et celles des ADNc clonés correspond à une pure coïncidence. Exemple 3 : Synthèse in vitro de 1'ARNm codant pour RLI et 2DR et de ces polypeptides. (illustrée par le figure 4) Transcription des ADNc On effectue la transcription avec de la T3 polymérase en présence de m7G(5')ppp(5')G en opérant selon les prescriptions du fabricant (Promega). L'ARN est analyse et quantifié par électrophorèse sur des gels d'agarose 1,2 % (p/v) dans un tampon TBE (50 mM Tris pH 8;50 mM d'acide borique, 1 mM d'EDTA). L'ARN est extrait avec du phénol/ dichlorométhane (v/v) et précipité avec de l'éthanol, NaCl 250 mM. Traduction des ARNm On effectue la traduction in vitre en présence de méthionine 35S dans deux systèmes de traduction acellulaires, à savoir dans les lysats de réticulocyte de lapin (pistes 1 et 2 de la figure 4A) (avec ou sans microsomes pancréatiques de chien), où le système 2-S/RNase L est présent, ou dans des extraits de germe de blé (pistes 3 et 4), qui ne comporte pas ce système. On procède selon les prescriptions du fabricant (Promega). Les produits sont analysés par SDS-PAGE et autoradiographiés. Sur la figure 4A, on rapporte les résultats obtenus après traduction d'ADNc de RLI (pistes 2 et 4) et de 2DR (pistes 1 et 3). L'expression de l'ADNc complet de RLI dans des extraits de germe de blé ou de réticulocytes de lapin, conduit à un seul polypeptide de 68 kDa comme prévu (fig 4, pistes 2 et 4). La traduction de l'ADNc de 2DR donne un seul polypeptide de 80 kDa (figure 4A, pistes 1 et 3). Le niveau d'expression est légèrement plus faible dans l'extrait de germe de blé par rapport au lysat de réticulocytes pour les deux clones. On n'observe pas de modification posttraductionnelle de ces polypeptides lorsqu'ils sont traduits en présence de membranes de microsomes pancréatiques de chien). Dans une autre série d'expériences, on a analysé divers extraits par SDS-PAGE, transfert Western et hybridation avec l'anticorps MAb3, spécifique du complexe RNase L. Les autoradiographies obtenues sont données sur la figure 4B, la piste 1 correspond aux extraits de réticulocyte de lapin sans ARNm, la piste 2 à ces extraits après traduction de 2DR et la piste 3 après traduction de RLI, la piste 4 aux extraits de germe de blé sans ARNm, la piste 5 aux extraits après traduction de 2DR et la piste 6 après traduction de RLI. En comparant les pistes 1 d'une part et 2 et 3 d'autre part, on s'aperçoit que seul le polypeptide de 80 kDa (RNABP) est révélé dans l'extrait de réticulocyte soit avant soit après traduction (comparer la piste 1 aux pistes 2 et 3). De même l'anticorps monoclonal ne reconnaît aucune protéine dans l'extrait de germe de blé où le système 2-5A/RNase L n'existe pas et en conséquence RNABP est absente. Dans une troisième série d'essais, on dépose les produits de traduction de 2DR et de RLI sur des feuilles de nitrocellulose. On soumet les produits à une incubation avec la sonde 2-5ApCp, selon le protocole utilisé pour cribler la banque ZAP. On procède ensuite à des analyses par autoradiographie. Les autoradiographes sont donnés sur la figure 4C, où "O" correspond à une expérience dans le germe de blé ou dans le réticulocyte de lapin sans RNase L, 2DR ou RLI; "RLI" à des expériences avec 0,8 x 10-15 moles de RLI aussi bien dans les extraits de germe de blé que dans ceux de réticulocytes "2DR" à des expériences avec 1,3 x 10-15 moles de 2DR dans des extraits de germe de blé ou de réticulocyte. On constate une légère liaison de RLI à 2-5ApCp dans l'extrait de germe de blé. De manière surprenante on observe une diminution de la liaison de 2-5ApCp par la RNase L endogène lorsque RLI est exprime dans un lysat de réticulocyte de lapin. Une augmentation de la liaison de 2-5ApCp est en revanche clairement observée lorsque 2DR est exprimé dans les extraits de germe de blé ou ceux de réticulocytes de lapin (fig 4c). Cet exemple montre que RLI ne lie que faiblement le 2-5A, comparé à la 2DR. De plus, lorsque RLI et 2DR sont présents en même temps dans l'extrait de réticulocyte, on a une inhibition de la fixation du 2-5A par la 2DR (RNase L) endogène. Exemple : Mise en évidence de l'effet inhibiteur de RLI sans 1'ARNase L selon la dose. (illustrée par la figure 5) inhibition de la liaison de la RNase au 2-5 A. On rapporte ci-après trois séries d'expériences effectuées dans le cadre de cette étude. a) On réalise des traductions dans des extraits de réticulocytes ou de germe de blé d'ARNm codant pour la luciférase, RLI ou 2DR. Différentes concentrations des produits de traduction sont ajoutées aux extraits de réticulocytes ou de germe de blé, ainsi qu'à un extrait dans lequel l'ARNm de 2DR a déjà été exprimé. On établit donc différents rapports entre RLI (ou la luciférase), la RNase L endogène et 2DR exprimé in vitro. On étudie la liaison du 2-5 A à la RNase L de ces extraits dans des essais de radio-liaison ou de procédé de marquage covalent. Les résultats sont donnés sur la figure 5A exprimés en % de 2-5 ApCp lié (100 % correspondant à la liaison obtenue lorsque 2DR seule est exprimée). Sur cette figure, la courbe correspond à un extrait réticulocyte + luciférase ; à un extrait réticulocyte + RLI à un extrait réticulocyte + 2DR + RLI ; à un germe de blé + 2DR + RLI. L'expression de RLI dans les extraits de réticulocytes conduit à une diminution importante, dépendante de la dose, dans la radio-liaison et la liaison radio-covalente de la RNase L endogène à 2-5ApCp dans le lysat de réticulocyte (figure 5A; figure 5C, pistes 1 et 2). Comme on s'y attendait, l'expression de 2DR seul, dans les extraits de germe de blé ou de réticulocytes, augmente la liaison à 2-5ApCp dans les deux essais (figure 5A; figure 5C piste 3). La co-expression de RLI conduit à une inhibition de la liaison à 2-5ApCp par 2DR que l'on procède selon l'essai de radio-liaison ou l'essai radiocovalent (figure 5A; figure 5C pistes 3 et 5). On n'observe aucune inhibition de la RNase L endogène dans l'extrait de réticulocytes ou celui de 2DR exprimé, après addition d'une protéine sans rapport avec le processus étudié telle que la luciférase (figure 5A; figure 5C pistes 3 et 4) ce qui sert de témoin. Le même phénomène est observé avec d'autres extraits cellulaires. A titre d'exemple, l'addition de RLI à des extraits de cellules Daudi ou de cellules HeLa inhibe la liaison de la RNase L au 2-5ApCp (fig 5B). I1 est intéressant de noter que la traduction de RLI dans des extraits de germe de blé n'inhibe pas la liaison de 2DR au 2-5ApCp (fig 5A). Cette différence entre les deux systèmes de traduction pourrait refléter des différences dans les modifications post-traductionnelles de la protéine. L'inhibition de l'activité de 2DR sous l'effet de RLI ne résulte pas d'une compétition pour le 2-5A. En effet, l'inhibition de la liaison de 2DR au 2-5ApCp n'est pas modifiée lorsqu'on effectue l'expérience avec des concentrations croissantes de 2 SApCp dès lors que le rapport entre 2DR et RLI n'est pas modifié. On notera avec intérêt que le clone initial tronqué H2ABP présente les mêmes propriétés que le clone complet. I1 inhibe la liaison de la RNase L endogène, ou de la 2DR exprimée invitro, au 2-5ApCp. Cet exemple montre clairement que RLI inhibe la liaison de la RNase L au 2-5 A, et ce dans différents systèmes cellulaires. De plus, il apparaît que cette inhibition n'est pas due à une inhibition entre les deux protéines pour la fixation au 2-5A. On remarquera en outre que la figure 5A illustre que l'activation du complexe dépend de la stoechométrie entre RLI et la RNase L, ce qui présente un intérêt pour l'étude de l'implication de la RNase L dans les situations normales comme la croissance ou la différenciation, mais aussi dans des cas pathologiques tels que l'infection virale ou des cancers. Exemple 5 : Etude de l'association de RLI avec l'ARNase L ou 2 DR (illustration par la figure 6). Après traduction, en présence de méthionine 35S, des ARNm RLI et 2 DR dans des lysats de germe de blé ou de réticulocyte de lapin, on réalise une immunoprécipitation avec l'anticorps monoclonal MAb3. Pour l'immuno-précipitation, les extraits cellulaires ou les incubations des produits de traduction sont soumis à incubation durant 3 heures, à température ambiante, avec une dilution de 1/1000 de MAb3 ou d'un anticorps témoin. Les complexes RNase L-anticorps sont soumis à incubation durant environ 14 heures à 4"C avec de la protéine A-Sépharose (Pharmacia) et récupérés par centrifugation. Les billes sont lavées plusieurs fois avec un tampon Tris 10 mM (pH 7,4), 0,5 % (v/v) d'aprotinine, 1 % (v/v) de NP40, 2 mM d'EDTA, 150 mM de NaCl, et remises en suspension dans un volume de tampon Tris 300 mM (pH 8,9), 5 % (p/v) de SDS, 5 % (v/v) de p- mercaptoéthanol, 20 % v/v de glycérol. La protéine A-Sépharose est chauffée 5 min. à 95"C et les protéines immuno-précipitées sont analysées par SDS-PAGE 10 % (p/v). Le gel est séché et soumis à une autoradiographie. Les résultats sont donnés sur la figure 6. On constate que, pistes 2, 4 et 5, après traduction dans le réticulocyte, on a une immunoprécipitation des protéines, RLI piste 2, 2DR piste 4, ou co-immunoprécipitation des deux, piste 5. Cette immunoprécipitation se fait via l'association à la RNABP, protéine reconnue par l'anticorps et présente dans le lysat de réticulocyte. En revanche lorsque ces protéines sont traduites dans le germe de blé (pistes 1 et 3) d'où la RNABP est absente, on n'observe aucune immunoprécipitation. Grâce à l'utilisation d'un anticorps spécifique, on a bien démontré dans cet exemple que la protéine RLI s'associe bien à la protéine qu'il inhibe, la 2DR ou RNase L. Exemple : Stabilité du 2-5 ApCp (illustrée par la figure 7) Les extraits de réticulocyte sont complémentés ou non avec de l'ARNm de RLI ou de 2DR et soumis à incubation 1 heure à 30"C dans des conditions de traduction. On ajoute le 2-5 ApCp à ces extraits, puis on soumet l'ensemble à incubation à 4"C pendant 15 min. (comme pour la radio-liaison) ou à 37"C à différentes périodes de temps comme indiqué dans la figure 7. On ajoute un tampon contenant 50 % (v/v) de formamide, 1 % (v/v) de bleu de bromophénol et 1 % (v/v) de xylène cyanol. Les échantillons sont soumis à ébullition 3 min et centrifugés à 10000 g. Les surnageants sont chargés sur des gels de polyacrylamide à 20 % (p/v) contenant de l'urée 7 M. Les échantillons sont analysés par électrophorèse à 1100-1600 volts jusqu'à obtention d'une coloration de 15 cm à partir du bas du gel avec le bleu de bromophénol. Le gel humide est exposé à une pellicule Kodak. On n'observe aucune dégradation significative dans les extraits de réticulocyte + RLI, que ce soit à +4"C (comparer pistes 1 et 2) ou à 37"C (comparer pistes 4 à 9). Cet exemple montre que l'inhibition de la fixation du 2-5A n'est pas due à sa dégradation par RLI. Exemple 7 : Réactivation de la RNase L après sa séparation de RLI (illustré par la figure 8) On traduit l'ARNm de RLI dans un extrait de réticulocyte. On opère dans les mêmes conditions que celles illustrées par l'exemple 4 et la figure 5A ou C, mais la fixation de 2-5ApCp sur la RNase L est réalisée après que la RNase L ait été séparée de RLI par fractionnement en gel PAGE-SDS. En comparant les pistes 1 et 2, on constate que la quantité de RNase L est la même pour la piste 1 (réticulocyte seul) ou la piste 2 (réticulocyte + RLI). L'exemple montre donc que le RLI n'inhibe pas la RNase L par dégradation de cette dernière ou modification irréversible. Exemple 8 : Stabilisation des ARNm en présence de RLI (illustré par la figure 9) Les extraits de réticulocytes de lapin sont incubés 1 h à 30"C dans les conditions de traduction (1) sans ARNm ajoutés (retic), (2) en ajoutant l'ARNm de RLI (retic + RLI), (3) en ajoutant l'ARNm de 2DR (retic + 2 DR), (4) en ajoutant l'ARNm de 2DR et RLI (retic + 2DR + RLI). Puis du 2-5A4 est ajouté à 100 nm (+) ou non (-) et les extraits sont à nouveau incubés pour 30 min à 30"C. Les ARN sont isolés et analysés sur un gel d'agarose 1,2 % (p/v). Les ARN et leurs produits de dégradation sont quantifiés par analyse d'image. Cet exemple montre que, dans un extrait de réticulocyte, les ARN sont stabilisés en présence de RLI et ceci même en surexprimant la 2DR. Exemple9 : Activité du RLI dans les cellules intactes (illustré par la figure 10) Vecteurs d'expression et transfections L'ADNc humain H2ABP, qui code pour une forme active tronquée de RLI, est sous-cloné directionnellement dans pcDNARIneo (Invitrogen) en opérant selon les méthodes standard décrites par Sambrook et al dans la référence ci-dessus. H2ABP/pcDNAIneo ou le plasmide pcDNAneoI (chacun à raison de 7 pg) sont transfectés dans des cellules HeLa par co-précipitation avec du phosphate de calcium. Les transfectants stables sont choisis en cultivant les cellules en présence de 1 mg/ml de G418 (Gibco/BRL). On isole des clones individuels pour l'analyse de l'expression de l'ADNc transfecté. Le clone exprimant les plus hauts niveaux d'ADNc est choisi pour poursuivre les études Activité anti-virale des interférons. Les cellules pcDNAIneo ou H2ABP/pcDNAIneo sont ensemencées à raison de 105 cellules par puits. Ces cellules sont traitées 24 heures plus tard avec différentes dilutions d'IFN a/p Hu pendant 20 heures. Les cellules sont alors infectées avec le virus de la stomatite vésiculaire (VSV) ou celui de l'encéphalo-myocardite (EMCV) à une multiplicité d'infections (m.o.i.) de 1,0, pendant 1 heure à 37"C dans un milieu RPMI supplémenté avec du sérum de veau foetal à 5 % (v/v). On élimine les virus non adsorbés par 3 lavages avec du RPMI contenant 10 % de sérum de veau foetal (v/v). Les titres en virus sont déterminés 18 heures après comme décrit par Milhaud et al. Ann. Virol, 1983, 134 E 405-416. Cet exemple montre que la surexpression de RLI dans les cellules humaines HeLa inhibe une partie de l'effet anti-viral de l'interféron pour le virus EMCV et non de VSV (comparer figures 10A à 10B). Exemple 10 : Induction de l'ARNm de RLI par 1'EMCV (illustré par la figure 11) Les cellules HeLa sont infectées à une m.o.i. de 10 par EMCV ou VSV, après ou non traitement par IFN a/ss Hu à 1000 U/ml. Les ARN sont ensuite extraits de ces cellules à différents temps de post-infection, comme décrit dans la figure 11. Après analyse par Northern Blot de ces messagers en opérant comme indiqué ci-dessus et quantification, la figure 11 montre qu'on observe une induction de l'ARNm de RLI en infectant par EMCV et non par VSV et que cette induction est en partie reversée par un pré-traitement à l'interféron. Exemple 11 : Etude de l'inhibition de la RNase L dans des transfectants sens ou anti-sens de RLI dans des cellules humaines HeLa (illustrée par la figure 12A à F). Les cellules HeLa humaines ont été transfectées par les vecteurs d'expression pcDNAI neo (HeLa W4), H2ABP sens/pcDNAIneo (HeLa 7,3) et H2ABP antisens/pcDNAIneo (HeLa 8,2) selon la technique décrite dans l'exemple précédent. Chaque clone a été ensuite infecté par l'EMCV ou le VSV à une m.o.i. de 1 après ou non avoir été traité par IFN a/ss Hu à 1000 U/ml. En ce qui concerne l'infection par l'EMCV (figure 12A), on voit une inhibition de la liaison du 2 5A à la RNase L augmentant au cours de l'infection, reversée par l'interféron. Pour les cellules HeLa 7,3, exprimant plus de RLI, l'inhibition de la liaison du 2-5A est plus précoce et plus forte (figure 12B). Pour les cellules HeLa 8,2 exprimant l'antisens RLI, donc moins de RLI, on n'observe pas au cours de l'infection d'inhibition de la liaison du 2-5A à la RNase L. Les figures 12 D, E, F, montrent les mêmes transfectants infectés par la VSV, ce virus n'induisant pas l'inhibiteur (comme illustré par la figure l1 de l'exemple précédent), on n'observe pas de variation de la liaison de 2-5A à la RNase L au cours de l'infection. LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATION GENERALE: (i) DEPOSANT: (A) NOM: INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE (B) RUE: 101 rue de Tolbiac (C) VILLE: PARIS (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 75654 cedex 13 (A) NOM: CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (C.N.R.S) (B) RUE: 3 rue Michel Ange (C) VILLE: PARIS (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 75794 cedex 16 (ii) TITRE DE L' INVENTION: nouveaux composés utilisables pour la préparation d'agents anti-infectieux (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 6 (iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL:PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB) (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 3568 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: CDS (B) EMPLACEMENT: 118..1914 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: CCGGTCCTGA GACACGCTGT GTGGCTGAAA AGTGAAGGCA AGAGCTCATT TGGCCTCTGT 60 GCTCCCCTCC GCAAGGGATC GTTTCTCCAG AAGAGCTGGA TATTCTTTCG CCCAGTT 117 ATG GCA GAC AAG TTA ACG AGA ATT CGT ATT GTC AAC CAT GAC AAA TGT 165 AAA CCT AAG AAA TGT CGA CAG GAA TGC AAA AAC AGT TGT CCT GTA GTT 213 CGA ATG GGA AAA TTA TGC ATA GAG GTT ACA CCC CAG AGC AAA ATA GCA 261 TGG ATT TCC GAA ACT CTT TGT ATT GGT TGT GGT ATC TGT ATT AAG AAA 309 TGC CCC TTT GGC GCC TTA TCA ATT GTC AAT CTA CCA AGC AAC TTC GAA 357 AAA GAA ACC ACA CAT CGA TAT TGT GCC AAT GCC TTC AAA CTT CAC AGG 405 TTG CCT ATC CCT CGT CCA GGT GAA GTT TTC GGA TTA GTT GGA ACT AAT 453 GGT ATT GGA AAG TCA GCT GCT TTA AAA ATT TTA GCA GGA AAA CAA AAG 501 CCA AAC CTT GGA AAG TAC GAT GAT CCT CCT GAC TGG CAG GAG ATT TTC 549 ACT TAT TTC CGT GGA TCT GAA TTA CAA AAT TAC TTT ACA AAG ATT CTA 597 GAA GAT GAC CTA AAA CGC ATC ATC AAA CCT CAA TAT GTA CGC AGA TTC 645 CTA AGG CTG GCA AAG GGG ACA CTC GGA TCT ATT TTC GAC CGA AAA GAT 693 GAA ACA AAG ACA CAG GCA ATT GTA TCT CAG CAG CTT GAT TTA ACC CAC 741 CTA AAA GAA CGA AAT GTT GAA GAT CTT TCA GGA GGA GAG TTC CAG AGA 789 TTT CGT TGT CGT GTC GTT TGC ATA CAG AAA CGT GAT ATT TTC ATC TTT 837 GAT GAG CCT TCT AGT TAC CTA GAT CTG AAC CAG CGT TTA AAG CGT CGT 885 ATT ACT ATA CGA TCT CTA ATA AAT CCA GAT AGA TAT ATC ATT CTC CTC 933 GAA CAT GAT CTA AGT GTA TTA GAC TAT GTG TCC GAC TTC ATC TGC TCT 981 TTA TAT GGT GTA CCA AGC CGC TAT GGA GTT GTC ACT ATC CCT TTT AGT 1029 GTA AGA GAA CCC ATA AAC ATT TTT TTC GAT GGC TAT GTT CCA ACA GAA 1077 AAC TTC AGA TTC AGA GAT GCA TCA CTT GTT TTT AAA CTC CGT GAG ACA 1125 GCA AAT GAA GAA GAA GTT AAA AAG ATC TGT ATG TAT AAA TAT CCA GGA 1173 ATG AAG AAA AAA ATG GGA GAA TTT GAG CTA GCA ATT GTA CGT GGA GAG 1221 TTT ACA GAT TCT GAA ATT ATC GTC ATC GTC GGG GAA AAT GGA ACG GGT 1269 AAA ACG ACA TTT ATC AGA ATG CTT CGT GGA AGA CTT AAA CCT GAT GAA 1317 GGA GGA GAA GTA CCA GTT CTA AAT CTG AGT TAT AAC CCA CAG AAA ATT 1365 AGT CCC AAA TCA ACT GGA AGT GTT CCC CAG TTA CTA CAT GAA AAC ATA 1413 AGA GAT CGT TAT ACT CAC CCA CAA TTT CTC ACC GAT GTA ATG AAC CCT 1461 CTG CAA ATT GAA AAC ATC ATT GAT CAA GAG GTC CAG ACA TTA TCT GGT 1509 GGT GAA CTA CAG CGA GTA CGT TTA CGC CTT TGC TTG GGC AAA CCT GCT 1557 GAT GTC TAT TTA ATT GAT GAA CCA TCT GCA TAT TTG GAT TCT GAG CAA 1605 AGA CTG ATG GCA GCT CGA GTT GTC AAA CGT TTC ATA CTC CAT GCA AAA 1653 AAG ACA GCC TTT GTT GTG GAA CAT GAC TTC ATC ATG GCC ACC TAT CTA 1701 GCG GAT CGC GTC ATC GTT TTT GAT GGT GTT CCA TCT AAG AAC ACA GTT 1749 GCA AAC AGT CCT CAA ACC CTT TTG GCT GGC ATG AAT AAA TTT TTG TCT 1797 CAG CTT GAA ATT ACA TTC AGA AGA GAT CCA AAC AAC TAT AGG CCA CGA 1845 ATA AAC AAA CTT AAT TCA ATT AAG GAT GTA GAA CAA AAG AAG AGT GGA 1893 AAC TAC TTT TTC TTG GAT GAT TAGACTGACT CTGAGAATAT TGATAAGCCA 1944 TTTATTAAAA GGAGTATTTA CTAGAATTTT TTGTCATATA AAACTTGAAT CAGGATTTTA 2004 TGCCCCACAT ACTCTGGAAC TTGAAGTATA ATATACTTAA TATAACATAA AAAGCCAGTT 2064 GGGTTCTAAA TTGTAGTTGA AACACAGAAA ATGCCACTTT TCTGTTCCTG AAGAGGCTCT 2124 TTTGTGCATA ATATTCTAAA ATGAAGACAT TTCAAGCTAT ACAAATTACT TCCAAGTTTT 2184 CATGATGTAT GGGAAGATTT TCAGTAGGTG TATTATATTC ACGGTACCAA ATGCTGACCA 2244 GTGTTGCTCC ATTTTTTAAA TCTTGAAAAG GGTTTCTGTA CTTACCTGGT TTGCCAAGTA 2304 TGCCAGTGTA ATGAAACTGC CCTTATTTTA AAAGCCAGTC AAAGATTCCA CTGATTGACA 2364 TTTGATAAAT AAACATCAGG ATTATGTTTA TTGTTTGTTT TCAGTCTTTG CACTATATTA 2424 CCAGTATATG GTTTCCGAGG AAGATTATCT ACTGCAAAAC ACCACTGTTG GAAAAATAGG 2484 TATTTTTAAA TTGTTTTTAA TCCTTTTTTG GTGCTTTTAA ACATGTTTAA GCAAAAACCA 2544 ATTCAGTCCA TTCCCCGCAA AAAACCCCTA ACTTTACTCT GAACTTTTTT TGTTTTTGCA 2604 TTCCATGAGG TTCTGTATTC AGTCATTCTC TAGGTAATGT CATTTTTGTA CACATATATT 2664 TATATAATCA CTGATTGAGA TTTAGGAAAA AGCATTTCTA AAGAATATTT GCTTCCCTTA 2724 GAACTACAGA CTCGAAATCT TTAAAGATGG TGCCTAAGCA TCTATGTATT TTTTTTAAGT 2784 TCCACAGATT TTTCTGTTGG GCAGGCCAAG GATTATAAAC CACTTCCCTA AAGGCAACAT 2844 TAATGCAAAA GTCCCCAGAT GGCAATACAA AGTATCCCCT GGTACCACAT ATATTCATTT 2904 GTGAGTTTGG ATATAGAGCA CATTATCTAA ACCATTTTGT AGTTCCAAAA ACCCATCTAA 2964 ATTTCTTGAG TTCCTGAATT TTGAACAGGA TTACCTGGAG CCTGGAGCCA CTTTAAGTTG 3024 TACTTCTGAC TAAACTGGAA TTATGAGTGA GGAAGAGTGT TTACTAAATA AATGACTGGG 3084 GCAAGCAAAA TTGAGGAGGA AATTAGAAAC TGTTTGACAA ACTTTAAGAG CTACTTGAAA 3144 TAACAGAAGT CTTGATTAAT ATGCAAATAA TGGCTAGAAA GTATGGTTTA ACTGGACCCT 3204 ATTATGCCTT TTAAAAATAA TTTCAGTAAC CCATAAATAC ATGTTGTAAA AAATTCAAAT 3264 ATACAGAATG GAATAAAAAA ATGATCTCCC TTTATTACCC TCCCAAAGGT TACCAGCGTT 3324 TGAATTTAAT AATGTATATT CTTTCATGCT TTTTTCTGTG CACTTACCTA AGTGTGAATA 3384 TGTAAAGGGT TTGTTTTGTA TACAAATGGG ATTATACTAA AATAAGTAAT GCCTATTTTT 3444 AAGGATAGGT TAAATTTGTG AATGATCATT TCAAATATAT TGAATAAAAT AAGCAAAAGC 3504 TATTGTTATT TACTGATCCT GAAAAAAAAA a AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 3564 AAAA 3568 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2861 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: CDS (B) EMPLACEMENT: 2..1207 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 2: G GCA ATT GTA TGT CAO CAG CTT GAT TTA ACC CAC CTA AAA GAA CGA 46 AAT GTT GAA GAT CTT TCA GGA GGA GAG TTG CAG AGA TTT GCT TGT GCT 94 GTC GTT TGC ATA CAG AAA GCT GAT ATT TTC ATG TTT GAT GAG CCT TCT 142 AGT TAC CTA GAT GTC AAG CAG CGT TTA AAG GCT GCT ATT ACT ATA CGA 190 TCT CTA ATA AAT CCA GAT AGA TAT ATC ATT GTG GTG GAA CAT GAT CTA 238 AGT GTA TTA GAC TAT CTC TCC GAC TTC ATC TGC TGT TTA TAT GGT GTA 286 CCA AGC GCC TAT GGA GTT GTC ACT ATG CCT TTT AGT GTA AGA GAA GGC 334 ATA AAC ATT TTT TTG GAT GGC TAT GTT CCA ACA GAA AAC TTG AGA TTC 382 AGA GAT GCA TCA CTT GTT TTT AAA GTG GCT GAG ACA GCA AAT GAA GAA 430 GAA GTT AAA AAG ATG TGT ATG TAT AAA TAT CCA GGA ATG AAG AAA AAA 478 ATG GGA GAA TTT GAG CTA GCA ATT GTA GCT GGA GAG TTT ACA GAT TCT 526 GAA ATT ATG GTG ATG CTG GGG GAA AAT GGA ACG GGT AAA ACG ACA TTT 574 ATC AGA ATG CTT GCT GGA AGA CTT AAA CCT GAT GAA GGA GGA GAA GTA 622 CCA GTT CTA AAT GTC AGT TAT AAG CCA CAG AAA ATT AGT CCC AAA TCA 670 ACT GGA AGT GTT CGC CAG TTA CTA CAT GAA AAG ATA AGA GAT GCT TAT 718 ACT CAC CCA CAA TTT GTG ACC GAT GTA ATG AAG CCT CTG CAA ATT GAA 766 AAC ATC ATT GAT CAA GAG GTG CAG ACA TTA TCT GGT GGT GAA CTA CAG 814 CGA GTA CGT TTA CGC CTT TGC TTG GGC AAA CCT GCT GAT GTC TAT TTA 862 ATT GAT GAA CCA TCT GCA TAT TTG GAT TCT GAG CAA AGA CTG ATG GCA 910 GCT CGA GTT GTC AAA CGT TTC ATA CTC CAT GCA AAA AAG ACA GCC TTT 958 GTT GTG GAA CAT GAC TTC ATC ATG GCC ACC TAT CTA GCG GAT CGC GTC 1006 ATC GTT TTT GAT GGT GTT CCA TCT AAG AAC ACA GTT GCA AAC AGT CCT 1054 CAA ACC CTT TTG GCT GGC ATG AAT AAA TTT TTG TCT CAG CTT GAA ATT 1102 ACA TTC AGA AGA GAT CCA AAC AAC TAT AGG CCA CGA ATA AAC AAA CTT 1150 AAT TGA ATT AAG GAT GTA GAA CAA AAG AAG AGT GGA AAC TAC TTT TTC 1198 TTG GAT GAT TAGACTGACT CTGAGAATAT TGATAAGCCA TTTATTAAAA 1247 GGAGTATTTA CTAGAATTTT TTGTCATATA AAACTTGAAT CAGGATTTTA TGCCCCACAT 1307 ACTCTGGAAC TTGAAGTATA ATATACTTAA TATAACATAA AAAGCCAGTT GGGTTCTAAA 1367 TTGTAGTTGA AACACAGAAA ATGCCACTTT TCTGTTCCTG AAGAGGCTCT TTTGTGCATA 1427 ATATTCTAAA ATGAAGACAT TTCAAGCTAT ACAAATTACT TCCAAGTTTT CATGATGTAT 1487 GGGAAGATTT TCAGTAGGTG TATTATATTC ACGGTACCAA ATGCTGACCA GTGTTGCTCC 1547 ATTTTTTAAA TCTTGAAAAG GGTTTCTGTA CTTACCTGGT TTGCCAAGTA TGCCAGTGTA 1607 ATGAAACTGC CCTTATTTTA AAAGCCAGTC AAAGATTCCA CTGATTGACA TTTGATAAAT 1667 AAACATCAGG ATTATGTTTA TTGTTTGTTT TCAGTCTTTG CACTATATTA CCAGTATATG 1727 GTTTCCGAGG AAGATTATCT ACTGCAAAAC ACCACTGTTG GAAAAATAGG TATTTTTAAA 1787 TTGTTTTTAA TCCTTTTTTG GTGCTTTTAA ACATGTTTAA GCAAAAACCA ATTCAGTCCA 1847 TTCCCCGCAA AAAACCCCTA ACTTTACTCT GAACTTTTTT TGTTTTTGCA TTCCATGAGG 1907 TTCTGTATTC AGTCATTCTC TAGGTAATGT CATTTTTGTA CACATATATT TATATAATCA 1967 CTGATTGAGA TTTAGGAAAA AGCATTTCTA AAGAATATTT GCTTCCCTTA GAACTACAGA 2027 CTCGAAATCT TTAAAGATGG TGCCTAAGCA TCTATGTATT TTTTTTAAGT TCCACAGATT 2087 TTTCTGTTGG GCAGGCCAAG GATTATAAAC CACTTCCCTA AAGGCAACAT TAATGCAAAA 2147 GTCCCCAGAT GGCAATACAA AGTATCCCCT GGTACCACAT ATATTCATTT GTGAGTTTGG 2207 ATATAGAGGA CATTATCTAA ACCATTTTGT AGTTCCAAAA ACCCATCTAA ATTTCTTGAG 2267 TTCCTGAATT TTGAA QGGA TTACCTGGAG CCTGGAGCCA CTTTAAGTTG TACTTCTGAC 2327 TAAACTGGAA TTATGAGTGA GGAAGAGTGT TTACTAAATA AATGACTGGG GCAAGCAAAA 2387 TTGAGGAGGA AATTAGAAAC TGTTTGACAA ACTTTAAGAG CTACTTGAAA TAACAGAAGT 2447 CTTGATTAAT ATGCAAATAA TGGCTAGAAA GTATGGTTTA ACTGGACCCT ATTATGCCTT 2507 TTAAAAATAA TTTCAGTAAC CCATAAATAC ATGTTGTAAA AAATTCAAAT ATACAGAATG 2567 GAATAAAAAA ATGATCTCCC TTTATTACCC TCCCAAAGGT TACCAGCGTT TGAATTTAAT 2627 AATGTATATT CTTTGATGCT TTTTTCTGTG CACTTACCTA AGTGTGAATA TGTAAAGGGT 2687 TTGTTTTGTA TACAAATGGG ATTATACTAA AATAAGTAAT GCCTATTTTT AAGGATAGGT 2747 TAAATTTGTG AATGATCATT TCAAATATAT TGAATAAAAT AAGCAAAAGC TATTGTTATT 2807 TACTGATCCT GAAAAAAAAA AMAAAAAAAA ALAAAAAPSA AAAALAAASA AAAA 2861 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 599 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3: Met Ala Asp Lys Leu Thr Arg Ile Ala Ile Val Asn His Asp Lys Cys 1 5 10 15 Lys Pro Lys Lys Cys Arg Gln Glu Cys Lys Lys Ser Cys Pro Val Val 20 25 30 Arg Met Gly Lys Leu Cys Ile Glu Val Thr Pro Gln Ser Lys Ile Ala 35 40 45 Trp Ile Ser Glu Thr Leu Cys Ile Gly Cys Gly Ile Cys Ile Lys Lys 50 55 60 Cys Pro Phe Gly Ala Leu Ser Ile Val Asn Leu Pro Ser Asn Leu Glu 65 70 75 80 Lys Glu Thr Thr His Arg Tyr Cys Ala Asn Ala Phe Lys Leu His Arg 85 90 95 Leu Pro Ile Pro Arg Pro Gly Glu Val Leu Gly Leu Val Gly Thr Asn 100 105 110 Gly Ile Gly Lys Ser Ala Ala Leu Lys Ile Leu Ala Gly Lys Gln Lys 115 120 125 Pro Asn Leu Gly Lys Tyr Asp Asp Pro Pro Asp Trp Gln Glu Ile Leu 130 135 140 Thr Tyr Phe Arg Gly Ser Glu Leu Gln Asn Tyr Phe Thr Lys Ile Leu 145 150 155 160 Glu Asp Asp Leu Lys Ala Ile Ile Lys Pro Gln Tyr Val Ala Arg Phe 165 170 175 Leu Arg Leu Ala Lys Gly Thr Val Gly Ser Ile Leu Asp Arg Lys Asp 180 185 190 Glu Thr Lys Thr Gln Ala Ile Val Cys Gln Gln Leu Asp Leu Thr His 195 200 205 Leu Lys Glu Arg Asn Val Glu Asp Leu Ser Gly Gly Glu Leu Gln Arg 210 215 220 Phe Ala Cys Ala Val Val Cys Ile Gln Lys Ala Asp Ile Phe Met Phe 225 230 235 240 Asp Glu Pro Ser Ser Tyr Leu Asp Val Lys Gln Arg Leu Lys Ala Ala 245 250 255 Ile Thr Ile Arg Ser Leu Ile Asn Pro Asp Arg Tyr Ile Ile Val Val 260 265 270 Glu His Asp Leu Ser Val Leu Asp Tyr Leu Ser Asp Phe Ile Cys Cys 275 280 285 Leu Tyr Gly Val Pro Ser Ala Tyr Gly Val Val Thr Met Pro Phe Ser 290 295 300 Val Arg Glu Gly Ile Asn Ile Phe Leu Asp Gly Tyr Val Pro Thr Glu 305 310 315 320 Asn Leu Arg Phe Arg Asp Ala Ser Leu Val Phe Lys Val Ala Glu Thr 325 330 335 Ala Asn Glu Glu Glu Val Lys Lys Met Cys Met Tyr Lys Tyr Pro Gly 340 345 350 Met Lys Lys Lys Met Gly Glu Phe Glu Leu Ala Ile Val Ala Gly Glu 355 360 365 Phe Thr Asp Ser Glu Ile Met Val Met Leu Gly Glu Asn Gly Thr Gly 370 375 380 Lys Thr Thr Phe Ile Arg Met Leu Ala Gly Arg Leu Lys Pro Asp Glu 385 390 395 400 Gly Gly Glu Val Pro Val Leu Asn Val Ser Tyr Lys Pro Gln Lys Ile 405 410 415 Ser Pro Lys Ser Thr Gly Ser Val Arg Gln Leu Leu His Glu Lys Ile 420 425 430 Arg Asp Ala Tyr Thr His Pro Gln Phe Val Thr Asp Val Met Lys Pro 435 440 445 Leu Gln Ile Glu Asn Ile Ile Asp Gln Glu Val Gln Thr Leu Ser Gly 450 455 460 Gly Glu Leu Gln Arg Val Arg Leu Arg Leu Cys Leu Gly Lys Pro Ala 465 470 475 480 Asp Val Tyr Leu Ile Asp Glu Pro Ser Ala Tyr Leu Asp Ser Glu Gln 485 490 495 Arg Leu Met Ala Ala Arg Val Val Lys Arg Phe Ile Leu His Ala Lys 500 505 510 Lys Thr Ala Phe Val Val Glu His Asp Phe Ile Met Ala Thr Tyr Leu 515 520 525 Ala Asp Arg Val Ile Val Phe Asp Gly Val Pro Ser Lys Asn Thr Val 530 535 540 Ala Asn Ser Pro Gln Thr Leu Leu Ala Gly Met Asn Lys Phe Leu Ser 545 550 555 560 Gln Leu Glu Ile Thr Phe Arg Arg Asp Pro Asn Asn Tyr Arg Pro Arg 565 570 575 Ile Asn Lys Leu Asn Ser Ile Lys Asp Val Glu Gln Lys Lys Ser Gly 580 585 590 Asn Tyr Phe Phe Leu Asp Asp 595 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 402 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4: Ala Ile Val Cys Gln Gln Leu Asp Leu Thr His Leu Lys Glu Arg Asn 15 10 15 Val Glu Asp Leu Ser Gly Gly Glu Leu Gln Arg Phe Ala Cys Ala Val 20 25 30 Val Cys Ile Gln Lys Ala Asp Ile Phe Met Phe Asp Glu Pro Ser Ser 35 40 45 Tyr Leu Asp Val Lys Gln Arg Leu Lys Ala Ala Ile Thr Ile Arg Ser 50 55 60 Leu Ile Asn Pro Asp Arg Tyr Ile Ile Val Val Glu His Asp Leu Ser 65 70 75 80 Val Leu Asp Tyr Leu Ser Asp Phe Ile Cys Cys Leu Tyr Gly Val Pro 85 90 95 Ser Ala Tyr Gly Val Val Thr Met Pro Phe Ser Val Arg Glu Gly Ile 100 105 110 Asn Ile Phe Leu Asp Gly Tyr Val Pro Thr Glu Asn Leu Arg Phe Arg 115 120 125 Asp Ala Ser Leu Val Phe Lys Val Ala Glu Thr Ala Asn Glu Glu Glu 130 135 140 Val Lys Lys Met Cys Met Tyr Lys Tyr Pro Gly Met Lys Lys Lys Met 145 150 155 160 Gly Glu Phe Glu Leu Ala Ile Val Ala Gly Glu Phe Thr Asp Ser Glu 165 170 175 Ile Met Val Met Leu Gly Glu Asn Gly Thr Gly Lys Thr Thr Phe Ile 180 185 190 Arg Met Leu Ala Gly Arg Leu Lys Pro Asp Glu Gly Gly Glu Val Pro 195 200 205 Val Leu Asn Val Ser Tyr Lys Pro Gln Lys Ile Ser Pro Lys Ser Thr 210 215 220 Gly Ser Val Arg Gln Leu Leu His Glu Lys Ile Arg Asp Ala Tyr Thr 225 230 235 240 His Pro Gln Phe Val Thr Asp Val Met Lys Pro Leu Gln Ile Glu Asn 245 250 255 Ile Ile Asp Gln Glu Val Gln Thr Leu Ser Gly Gly Glu Leu Gln Arg 260 265 270 Val Arg Leu Arg Leu Cys Leu Gly Lys Pro Ala Asp Val Tyr Leu Ile 275 280 285 Asp Glu Pro Ser Ala Tyr Leu Asp Ser Glu Gln Arg Leu Met Ala Ala 290 295 300 Arg Val Val Lys Arg Phe Ile Leu His Ala Lys Lys Thr Ala Phe Val 305 310 315 320 Val Glu His Asp Phe Ile Met Ala Thr Tyr Leu Ala Asp Arg Val Ile 325 330 335 Val Phe Asp Gly Val Pro Ser Lys Asn Thr Val Ala Asn Ser Pro Gln 340 345 350 Thr Leu Leu Ala Gly Met Asn Lys Phe Leu Ser Gln Leu Glu Ile Thr 355 360 365 Phe Arg Arg Asp Pro Asn Asn Tyr Arg Pro Arg Ile Asn Lys Leu Asn 370 375 380 Ser Ile Lys Asp Val Glu Gln Lys Lys Ser Gly Asn Tyr Phe Phe Leu 385 390 395 400 Asp Asp REVENDICATIONS 1/ Séquences de nucléotides, isolées de leur environnement naturel, caractérisées en ce qu'elles sont capables de s'hybrider avec au moins un fragment de la séquence SEQ ID N" 1 ou SEQ ID N" 2 qui code pour un polypeptide capable d'inhiber la RNase L. 2/ Séquences de nucléotides, isolées de leur environnement naturel, caractérisées en ce qu'elles correspondent à au moins une partie des séquences SEQ ID N" 1 et SEQ ID N" 2, capables de coder pour un polypeptide inhibiteur de la RNase L. 3/ Séquences de nucléotides, isolées de leur environnement naturel, caractérisées en ce qu'elles sont capables de coder, mises en oeuvre selon les techniques classiques de 1'ADN recombinant, pour des polypeptides présentant une activité inhibitrice de la RNase L, comprenant au moins un enchaînement d'acides aminés dans la séquence SEQ ID N" 3. 4/ Séquence de nucléotides selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle correspond au cadre ouvert de lecture allant de la position 118 à 1914 dans SEQ ID N" 1. 5/ Séquence selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend deux motifs du type boucle P. 6/ Les séquences d'ARN-m correspondant aux séquences selon l'une des revendications 1 à 5. 7/ Les séquences anti-sens correspondant aux séquences selon l'une des revendications précédentes. 8/ Les ADNc correspondent aux séquences selon l'une des revendications 1 à 7. 9/ Séquences d'acides nucléiques selon l'une des revendications précédentes insérées dans un vecteur d'expression pour des polypeptides présentant une activité inhibitrice de la RNase L. 10/ Polypeptides, caractérisés en ce qu'ils possèdent une activité inhibitrice de la RNase L et sont constitués par un enchaînement d'acides aminés dans la séquence codée par SEQ ID N" 1 ou par SEQ N" 2. 11/ Polypeptides selon la revendication 10, caractérisés par un enchaînement d'acides aminés dans SEQ ID N" 3 ou dans SEQ ID N" 4. 12/ Polypeptides selon la revendication 10 ou 11, caractérisés en ce qu'ils possèdent dans leur enchaînement d'acides aminés une séquence homologue avec le motif CX2CX2CX3C:4Fe4S - ferredoxine et/ou un nombre élevé de groupes thiol et/ou un nombre élevé de motifs leucine. 13/ Polypeptide selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il correspond à la séquence d'acides aminés codée par le cadre ouvert de lecture dans la séquence SEQ ID N" 1, qu'il comprend 599 acides aminés, et qu'il possède un poids moléculaire évalué à 67,515 kDa et un point isoélectrique estimé à 8,7. 14/ Polypeptides selon l'une des revendications 10 à 13, caractérisés en ce qu'ils sont tels qu'obtenus par expression, dans une cellule hôte appropriée, selon les techniques de 1'ADN recombinant, d'un vecteur d'expression comportant une séquence d'ADN constituée par un enchaînement de nucléotides dans la séquence SEQ ID N" 1 ou SEQ ID N" 2, récupération du polypeptide exprimé et purification. 15/ Procédé d'obtention des polypeptides selon l'une des revendications 10 à 14, caractérisé en ce qu il comprend le criblage d'une banque d'ADNc à l'aide d'un 2 5A marqué par exemple par un élément radioactif, l'isolement de la séquence nucléique recherchée, son introduction dans un vecteur d'expression, la transfection d'une cellule hôte avec ce vecteur, puis après expression du polypeptide à activité inhibitrice de la RNase codé par ladite séquence nucléique, la récupération de ce dernier, après lyse des cellules, et sa purification. 16/ Vecteurs d'expression contenant au moins l'une des séquences de nucléotides selon l'une des revendications 1 à 8, soumises au contrôle d'un promoteur approprié. 17/ Cellules hôtes transfectées par les vecteurs selon la revendication 16 et qui comprennent les protéines recombinantes exprimées. 18/ Utilisation des polypeptides selon l'une des revendications 10 à 14 comme agents régulateurs du système 2-5A/RNase L. 19/ Utilisation des polypeptides selon l'une des revendications 10 à 14 comme agents cibles pour détecter des produits capables d'inhiber leur propre effet inhibiteur et permettant ainsi de réguler le fonctionnement du système 2-5A/RNase L, et par là d'augmenter l'action des interférons. 20/ Produits capables d'inhiber l'effet inhibiteur de RNase L des polypeptides selon l'une des revendications 10 à 14, caractérisés en ce qu'il s'agit des anticorps polyclonaux ou monoclonaux dirigés contre ces polypeptides. 21/ Procédé de criblage de molécules ou substances pour détecter chez ces dernières une activité dirigée contre l'activité inhibitrice de la RNase L des polypeptides selon l'une des revendications 10 à 14, caractérisé en ce qu on met en contact le polypeptide avec une molécule ou substance à tester, et qu'on détecte la réactivation de la RNase L, à nouveau capable de lier le 2-5A, ou l'inhibition de son inhibiteur. 22/ Utilisation des polypeptides selon l'une des revendications 10 à 14, pour rechercher des produits actifs vis-à-vis des inhibiteurs de RNase L induits par les virus, capables de les neutraliser. 23/ Utilisation des séquences de nucléotides anti-sens selon la revendication 7 pour transfecter des cellules de mammifères afin d'empêcher la production d'inhibiteurs de RNase L par des agents infectieux. 24/ Composition pharmaceutique contenant des vecteurs tels que rétrovirus ou virus recombinants modifiés pour être utilisables chez le mammifère, contenant une séquence de nucléotides anti-sens selon la revendication 7. 25/ Composition pharmaceutique contenant des vecteurs tels que rétrovirus ou virus recombinants, modifiés pour être utilisables chez le mammifère, contenant une séquence de nucléotides selon l'une des revendications 1 à 5, ces vecteurs étant en association avec un véhicule pharmaceutiquement inerte. 26/ Composition pharmaceutique contenant des vecteurs tels que rétrovirus ou virus recombinants, modifiés pour être utilisable chez le mammifère, contenant une sequence de nucléotides selon la revendication 6, ces vecteurs étant en association avec un véhicule pharmaceutiquement inerte. 27/ Composition pharmaceutique contenant des vecteurs tels que rétrovirus ou virus recombinants, modifiés pour être utilisable chez le mammifère, contenant une séquence de nucléotides selon la revendication 8, ces vecteurs étant en association avec un véhicule pharmaceutiquement inerte. 28/ Composition pharmaceutique contenant des vecteurs tels que rétrovirus ou virus recombinants, modifiés pour être utilisable chez le mammifère, contenant une séquence de nucléotides selon la revendication 9, ces vecteurs étant en association avec un vehicule pharmaceutiquement inerte. 29/ Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 24 à 28, caractérisée en ce qu'elle se presente sous forme d'une solution sterile, isotonique ou qu'elle est conservée sous forme lyophilisée.