Brevet FR2734266A1 — publié le 19961122

La présente invention concerne de nouvelles séquences peptidiques et nucléotidiques, et leur utilisation pharmaceutique. Plus particulièrement, I'invention concerne des peptides capables de se lier au domaine SH3 de la protéine GAP. Les produits des gênes ras, généralement désignés protéines p21, jouent un rôle clé dans le contrôle de la division cellulaire chez tous les organismes eucaryotes où ils ont été recherchés. Certaines modifications spécifiques de ces protéines leur font perdre leur contrôle normal et les conduisent à devenir oncogéniques. Ainsi, un grand nombre de tumeurs humaines ont été associées à la présence de gênes ras modifiés. De même, une surexpression de ces protéines p21 peut conduire à un dérèglement de la prolifération cellulaire. Globalement, les protéines p21 sont impliquées dans 30% des cancers humains. La compréhension du rôle exact de ces protéines p21 constitue donc un des objectifs cibles de la recherche dans le domaine de l'oncologie. Le modèle dont on dispose actuellement pour expliquer le fonctionnement des protéines p21 repose sur des analogies qu'elles partagent avec les protéines G de transduction. Il existe dans les cellules un équilibre entre les proteines p21 actives, liées à du GTP et les formes inactives, ayant fixé du GDP. Dans une cellule quiescente, où les p21 ne sont pas sollicitées, la majorité d'entre elles sont sous forme GDP. Lorsque la cellule est stimulée, le facteur d'échange des nucléotides, GEF, devient plus actif et facilite l'évacuation du GDP et son remplacement par du GTP. La protéine adopte alors une conformation active qui lui permet de reconnaître et de stimuler son effecteur, la protéine GAP "GTPase activating protein", vraisemblablement associée à d'autres protéines. Le complexe p21-GTP-GAP interagit vraisemblablement à son tour avec une ou d'autres protéine(s) permettant ainsi la transmission du signal qui entraîne une réponse biologique de la cellule. L'association de p21-GTP avec GAP déclenche simultanément l'hydrolyse du GTP et le retour de la p2 I vers la forme inactive. Dans le cas des protéines p21 oncogènes, la mutation qu'elles portent empêche le retour à l'état inactif. L'équilibre est dans ce dernier cas, déplacé vers la forme active de p2i. Cet équilibre complexe entre les formes active et inactive de p21 est contrôlé à la fois par des facteurs inhérents aux propriétés biochimiques des protéines p21 (affinité relative pour le GDP et le GTP, vitesse d'échange des nucléotides ...) et des facteurs externes modulant leur activité comme notamment la protéine GAP. La protéine GAP est une protéine cytosolique présente chez tous les organismes eucaryotes qui possède donc la faculté d'accélérer fortement l'hydrolyse du GTP, lié à la protéine p21 normale ( Trahey et Mc Cormick 1987). Elle possède deux domaines assurant des fonctions distinctes. Son extrémité carboxy-terminale porte l'activité catalytique qui fixe les protéines p21 et augmente leur activité GTPase. Sur son autre extrémité, en aval de la partie aminoterminale, se trouve une juxtaposition de domaines SH2 et SH3 qui sont susceptibles de participer à des interactions avec d'autres protéines. A l'heure actuelle, on connait deux protéines interagissant avec la protéine GAP. Il s'agit des protéines dénommées p62 et psi 90, respectivement de 62kDa et 190kDa. Ces deux protéines étant immunoprécipitées par des anticorps dirigés contre différents épitopes de GAP, forment à l'évidence un complexe spécifique avec GAP. On sait en particulier que c'est au niveau de la région SH2 que se fait l'interaction de la protéine p62 avec la protéine GAP. En ce qui concerne plus particulièrement le domaine SH3, sa présence dans diverses protéines comme les phospholipases Cy (P LC -y), la sous unité p85 de la phophatidyllinositol-3 kinase et la protéine grb-2, toutes impliquées au niveau de la transduction du signal p2 1 -Ras, laisse à penser que ce domaine est tout particulièrement important pour diriger les interactions protéine-protéine et donc nécessaire au fonctionnement de la protéine correspondante et/ou à sa localisation cellulaire. Dans le cas particulier de la protéine GAP, ce domaine SH3 pourrait donc également participer à la transduction du signal Ras. Il est clair que la compréhension du rôle exact de ce domaine SH3 serait particulièrement précieux sur le plan thérapeutique. La présente invention a précisément pour objectif de contribuer à l'élucidation de la contribution du domaine SH3 à la transduction du signal ras. La demanderesse a ainsi mis en évidence l'existence de protéines capables de s'associer à la protéine GAP via une liaison directe à son domaine SH3. Plus précisément, la présente invention résulte de l'identification, I'isolement et la caractérisation de protéines capables d'interagir avec le domaine SH3 de la protéine GAP. Elle résulte également de la caractérisation structurale de ces protéines par identification de séquences peptidiques correspondantes. Plus particulièrement, le polypeptide de l'invention comprend tout ou partie d'une séquence peptidique choisie parmi les séquences SEQ ID N"1, SEQ ID N"2, SEQ ID N"3, SEQ ID N"4 et les dérivés de celles-ci. Au sens de la présente invention, le terme dérivé désigne toute molécule obtenue par modification de nature génétique et/ou chimique du polypeptide selon l'invention et conservant l'activité recherchée. Par modification de nature génétique et/ou chimique, on doit entendre toute mutation, substitution, délétion, addition et/ou modification d'un ou plusieurs résidus. De tels dérivés peuvent être générés dans des buts différents, tels que notamment celui d'augmenter l'affinité du peptide pour son site d'interaction, celui d'améliorer ses niveaux de production, celui d'augmenter sa résistance à des protéases, celui d'augmenter son efficacité thérapeutique ou de réduire ses effets secondaires, ou celui de lui conférer de nouvelles propriétés pharmacocinétiques et/ou biologiques. Il peut également s'agir de fragments des séquences précitées de dérivés de celles-ci. De tels fragments peuvent être générés de différentes façons. En particulier, ils peuvent être synthétisés par voie chimique, sur la base de la séquence donnée dans la figure 1, en utilisant les synthétiseurs peptidiques connus de l'homme du métier. Ils peuvent également etre synthétisés par voie génétique, par expression dans un hôte cellulaire d'une séquence nucléotidique codant pour le peptide recherché. Dans ce cas, la séquence nucléotidique peut être préparée chimiquement en utilisant un synthétiseur d'oligonucléotides, sur la base de la séquence peptidique donnée dans la présente demande et du code génétique.La séquence nucléotidique peut également être préparée à partir de la séquence donnée dans la présente demande, par coupures enzymatiques, ligature, clonage, etc, selon les techniques connues de l'homme du métier, ou par criblage de banques d'ADN avec des sondes élaborées à partir de la SEQ ID N"1. Il s'agit plus particulièrement d'un polypeptide comprenant la SEQ ID N"1, SEQ ID N"2, SEQ ID N"3 et/ou SEQ ID N"4. De préférence, le polypeptide selon l'invention possède un poids moléculaire de l'ordre de 68kDa. Selon un mode particulier de l'invention, il s'agit d'un polypeptide d'origine humaine comprenant tout ou partie de la SEQ ID N"5, la SEQ ID N"9 ou de l'un de leurs dérivés tels que définis précédemment. Il s'agit plus particulièrement d'un polypeptide comprenant la SEQ ID N"5. Plus préférentiellement, il s'agit d'un polypeptide représenté par la SEQ ID N"9. De manière inattendue, cette protéine ne possède pas d'homologie avec une autre protéine p68 déjà identifiée comme se liant au domaine SH3 de Src. Elle n'est pas phosphorylée au niveau de ses motifs tyrosine dans les cellules en croissance ou à l'état de mitose. Un autre objet de l'invention réside dans des anticorps ou fragments d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux dirigés contre un polypeptide tel que défini ci-avant. De tels anticorps peuvent être générés par des méthodes connues de l'homme du métier. En particulier, ces anticorps peuvent être préparés par immunisation d'un animal contre un polypeptide dont la séquence est choisie parmi les SEQ 1DN0 1, SEQ ID N"2, SEQ ID N"3, SEQ ID N"4, SEQ ID N"5 et SEQ ID N"9 ou tout fragment ou dérivé de celles-ci, prélèvement du sang et isolement des anticorps. Ces anticorps peuvent également être générés par préparation d'hybridomes selon les techniques connues de l'homme de l'art. Les anticorps ou fragments d'anticorps de l'invention peuvent ainsi être utilisés pour réguler l'état d'activation du produit des gènes ras. Avantageusement, ils possèdent la faculté d'inhiber l'interaction entre la protéine GAP et un polypeptide selon l'invention. Par ailleurs, ces anticorps peuvent également être utilisés pour détecter et/ou doser un peptide selon l'invention dans des échantillons biologiques, et de ce fait, pour renseigner sur l'état d'activation du produit des gènes ras. L'invention s'étend également aux antagonistes à savoir tout peptide capable de bloquer l'interaction d'un polypeptide selon l'invention avec le domaine SH3 de la protéine GAP. De tels peptides peuvent être mis en évidence dans des tests de compétition (cf exemple 2-3) ou d'inhibition de l'activité ras. La présente invention permet donc de générer des polypeptides dérivés des séquences identifiées ci-dessus ainsi que des anticorps dirigés contre ces polypeptides ou des protéines correspondantes, présentant des propriétés biologiques interessantes en vue d'une utilisation pharmaceutique. L'invention fournit également des composés non peptidiques ou non exclusivement peptidiques utilisables pharmaceutiquement. II est en effet possible, à partir des motifs protéiques actifs décrits dans la présente demande, de réaliser des molécules inhibitrices de la voie de signalisation dépendante des protéines P21 non exclusivement peptidiques et compatibles avec une utilisation pharmaceutique. A cet égard, I'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide de l'invention tel que décrit ci avant pour la préparation de molécules non-peptidiques, ou non exclusivement peptidiques, actives pharmacologiquement, par détermination des éléments structuraux de ce polypeptide qui sont importants pour son activité et reproduction de ces éléments par des structures non-peptidiques ou non exclusivement peptidiques. L'invention a aussi pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant une ou plusieurs molécules ainsi préparées. La présente invention a également pour objet toute séquence d'acide nucléique codant pour un polypeptide capable de se lier au domaine SH3 de la protéine GAP. Plus préférentiellement, il s'agit d'une séquence comprenant (a) tout ou partie de la SEQ ID N"6 et/ou de la SEQ ID N"9 ou de leur brin complémentaire, (b) toute séquence hybridant avec une séquence (a) et codant pour un polypeptide capable de se lier au domaine SH3 de la protéine GAP, et (c) les séquences dérivées des séquences (a) et (b) en raison de la dégénérescence du code génétique. De préférence, elle comprend la séquence SEQ ID N"6 et plus préférentiellement, elle est représentée par la SEQ ID N"9. Les différentes séquences nucléotidiques de l'invention peuvent être d'origine artificielle ou non. Il peut s'agir de séquences génomiques, d'ADNc, d'ARN, de séquences hybrides ou de séquences synthétiques ou semi-synthétiques. Ces séquences peuvent être obtenues par exemple par criblage de banques d'ADN (banque d'ADNc, banque d'ADN génomique) au moyen de sondes élaborées sur la base de séquences présentées ci-avant. De telles banques peuvent être préparées à partir de cellules de différentes origines par des techniques classiques de biologie moléculaires connues de l'homme du métier. Les séquences nucléotidiques de l'invention peuvent également être préparées par synthèse chimique, notamment selon la méthode des phosphoramidites, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques. Ces séquences nucléotidiques selon l'invention sont utilisables dans le domaine pharmaceutique, soit pour la production des polypeptides de l'invention, soit pour la réalisation de séquences antisens utilisables dans le cadre d'une thérapie génique, soit encore pour la détection et - le diagnostic, par des expériences d'hybridation, de l'activité de la protéine GAP dans des échantillons biologiques ou pour l'isolement de séquences homologues à partir d'autres sources cellulaires. Pour la production des polypeptides de l'invention, les séquences nucléiques définies ci-dessus sont généralement placées sous le contrôle de signaux permettant leur expression dans un hôte cellulaire. Le choix de ces signaux (promoteurs, terminateurs, sequence "leader" de sécrétion, etc) peut varier en fonction de l'hôte cellulaire utilisé. Préférentiellement, ces séquences nucléotidiques de l'invention font partie d'un vecteur, qui peut être à réplication autonome ou intégratif. Plus particulièrement, des vecteurs à réplication autonome peuvent être préparés en utilisant des séquences à réplication autonome chez l'hôte choisi. S'agissant des vecteurs intégratifs, ceux-ci peuvent être préparés par exemple en utilisant des séquences homologues à certaines régions du génome de l'hôte, permettant, par recombinaison homologue, I'intégration du vecteur. Les hôtes cellulaires utilisables pour la production des polypeptides de l'invention sont aussi bien des hôtes eucaryotes que procaryotes. Parmi les hôtes eucaryotes qui conviennent, on peut citer les cellules animales, les levures, ou les champignons. En particulier, s'agissant de levures, on peut citer les levures du genre Saccharomyces, Kluyveromyces, Pichia, ScErwanniomyces, ou Hwiseiiula. S'agissant de cellules animales, on peut citer les cellules COS, CHO, C127, etc. Parmi les champignons, on peut citer plus particulièrement Aspergillus ssp. ou Trichoderma ssp. Comme hôtes procaryotes, on préfère utiliser les bactéries suivantes E.coli, Bacillus, ou Sfreptomyces. Les séquences d'acides nucléiques selon l'invention peuvent également servir à la réalisation d'acides nucléiques ante sens utilisables comme agents pharmaceutiques. L'inhibition de l'expression de certains oncogènes par des acides nucléiques antisens s'est avérée être une stratégie utile dans la compréhension du rôle de ces oncogènes et une voie particulièrement prometteuse dans la réalisation d'un traitement anticancéreux. Les oligonucléotides ante sens sont des oligonucléotides de petite taille, complémentaires du brin codant d'un gène donné, et de ce fait capables d'hybrider spécifiquement avec l'ARNm transcrit, inhibant sa traduction en protéine. De tels oligonucléotides peuvent être constitués par tout ou partie des séquences nucléiques définies ci-avant. Il s'agit généralement de séquences ou de fragments de séquences complémentaires de séquences codant pour des peptides selon l'invention.De tels oligonicléotides peuvent être obtenus à partir des séquences précitées, par fragmentation, etc, ou par synthèse chimique. L'invention concerne également, comme séquences nucléotidiques, les sondes nucléotidiques, synthétiques ou non, capables de s'hydrider avec les séquences nucléotidiques définies ci-avant qui codent pour un polypeptide de l'invention, ou avec l'ARNm correspondant. De telles sondes peuvent être utilisées in vitro comme outil de diagnostic. De telles sondes doivent être préalablement marquées, et pour cela différentes techniques sont connues de l'homme du métier. Les conditions d'hybridation dans lesquelles ces sondes peuvent être utilisées sont les conditions normales de stringence. Ces sondes peuvent également être utilisées pour la mise en évidence et l'isolement de séquences d'acides nucléiques homologues codant pour un polypeptide de l'invention, à partir d'autres sources cellulaires.A titre illustratif de ces sondes, on peut plus particulièrement mentionner les sondes représentées par les SEQ ID N"7 et SEQ ID N"8, qui sont utilisées en exemple 3 ci-après. L'invention a encore pour objet toute composition pharmaceutique comprenant comme principe actif au moins un polypeptide tel que défini ci-avant. Elle a aussi pour objet toute composition pharmaceutique comprenant comme principe actif au moins un anticorps et/ou un fragment d'anticorps tel que défini ciavant, ainsi que toute composition pharmaceutique comprenant comme principe actif au moins un oligonucléotide antisens tel que défini ci-avant. Par ailleurs, elle a aussi pour objet les compositions pharmaceutiques dans lesquelles les polypeptides, anticorps et oligonucléotides ante sens définis ci-avant sont associés entre-eux ou avec d'autres principes actifs. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être utilisées pour moduler l'activation des protéines p2 1 et de ce fait pour moduler la prolifération de certains types cellulaires. Plus particulièrement, ces compositions pharmaceutiques sont destinées au traitement de cancers. De nombreux cancers ont en effet été associés à la présence de protéines ras oncogéniques. Parmi les cancers renfermant le plus souvent des gènes ras mutés, on peut citer notamment les adénocarcinomes du pancréas, dont 90% ont un oncogène Ki-ras muté sur le douzième codon (Almoguera et coll., Cell 53 (1988) 549), les adénocarcinomes du colon et les cancers de la thyroïde (50%), ou les carcinomes du poumon et les leucémies myéloïdes (30%, Bos, J.L. Cancer Res. 49 (1989) 4682). L'invention a encore pour objet l'utilisation des molécules décrites ci-avant pour moduler l'activité des protéines p2 1. En particulier, I'invention concerne l'utilisation de ces molécules pour inhiber au moins partiellement l'activation des protéines p2 1. L'invention fournit également un procédé de détection de l'expression et/ou d'une surexpression de la protéine p68 dans un échantillon biologique. Un tel procédé comprend par exemple la mise en contact d'un tel échantillon avec un anticorps ou fragment d'anticorps selon l'invention, la révélation des complexes antigène-anticorps, et la comparaison des résultats obtenus avec un échantillon standard. Dans un tel procédé, I'anticorps peut être en suspension ou préalablement immobilisé sur un support. Ce procédé peut également comprendre la mise en contact de l'échantillon avec une sonde nucléotidique selon l'invention, la mise en évidence des hybrides obtenus, et la comparaison avec ceux obtenus dans le cas d'un échantillon standard. La présente invention peut être utilisée à plusieurs titres dans le domaine thérapeutique : les polypeptides, anticorps et séquences nucléotidiques de l'invention étant capables de moduler l'activité des gènes ras, ils permettent en effet d'intervenir dans le processus de développement des cancers. En raison de leur forte expression dans les cellules de muscles striés squelettique, ces peptides interviennent en outre vraisemblablement dans les pathologies liées à un défaut de signalisation comme le diabète par exemple. Un autre aspect de l'invention consiste à utiliser des séquences nucléotidiques ADN ou ARN capables d'interagir avec les polypeptides revendiqués. Ces séquences peuvent être préparées selon la méthode décrite dans la demande internationale WO 91/19813. L'invention peut également être utilisée dans le domaine du diagnostic et du typage de cancers. D'autres avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. MATERIEL ET METHODES Techniques générales de clonage Les méthodes classiquement utilisées en biologie moléculaire telles que les extractions préparatives d'ADN plasmidique, la centrifugation d'ADN plasmidique en gradient de chlorure de césium, I'électrophorèse sur gels d'agarose ou d'acrylamide, la purification de fragments d'ADN par électroélution, les extractions de protéines au phénol ou au phénol-chloroforme, la précipitation d'ADN en milieu salin par de l'éthanol ou de l'isopropanol, la transformation dans Escherichia coli, etc, sont bien connues de l'homme de métier et sont abondament décrites dans la littérature [Maniatis T. et al., "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982; Ausubel F.M. et al. (eds), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, 1987]. Les enzymes de restriction ont été fournies par New England Biolabs (Biolabs), Bethesda Research Laboratories (BRL) ou Amersham et sont utilisées selon les recommandations des fournisseurs. Le plasmide pGEX 2T est d'origine commerciale. L'amplification enzymatique de fragments d'ADN par la technique dite de PCR [Polymérase-catalyzed Chain Reaction, Saiki R.K. et al., Science 230 (1985) 13501354; Mullis K.B. et Faloona F.A., Meth. Enzym. 155 (1987) 335-350] est effectuée en utilisant un "DNA thermal cycler" (Perkin Elmer Cetus) selon les spécifications du fabricant. La vérification des séquences nucléotidiques est effectuée par la méthode développée par Sanger et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74 (1977) 5463-5467] en utilisant le kit distribué par Amersham. Pour les expériences d'hybridation, les conditions de stringence normales sont généralement les suivantes . hybridation 3 x SCC en présence de 5 x Denhart's à 65"C; lavage: 0,5 x SSC à 65 "C. EXEMPLE 1 Préparation des protéines de fusion Glutathion-S-transférase SH3 Les séquences d'ADN codant pour les domaines SH3 des protéines GAP (résidus 275 à 350) et c-Src (résidus 84 à 148) sont amplifiées par la technique de P.C.R. et clonées dans un vecteur d'expression pGEX2T entre les sites de restriction Bam HI et ECORI. Les bactéries ansi transformées sont cultivées, induites avec du IPTG (I-thio-B-D galactopyranoside) et lysées par sonication. Les protéines de fusion GST SH3 sont purifiées par chromatographie d'affinité sur billes d'agarose glutathion (Pharmacia LKB biotech) puis éluées avec 1 0mM de glutathion réduit. EXEMPLE 2 1 )Prép & tion des lysats cellulaires Des cellules ER22 (fibroblastes de hamster surexprimant le récepteur EGF humain) ou des cellules NIH 3T3 exprimant pp60 C-Src(F-527) sont cultivées sur milieu DMEM (Dubelcco's Modified Eagle Medium) enrichi avec 10% de sérum de veau foetal contenant l'antibiotique G41 8 (200zg/ml) et 2mM/1 de glutamine (5GBICO-BRL), à 37"C sous 5% en CO2. Dans chaque essais, les cellules ER22 sont cultivées dans des boites de 100mm jusqu'à confluence puis sans sérum pendant 1 8heures. De l'orthovanadate de sodium est ajouté à une concentration finale de 100M et l'incubation poursuivie pendant 30 minutes. L'EGF est ensuite ajouté directement au milieu pour une concentration finale de 80nM en 10 minutes et à 370C. Pour certains essais, les cellules mitotiques sont récupérées par traitement avec 0,4 > g de nocodazole (SIGMA) par ml pendant 18heures. Elles sont rapidement lavées avec un tampon salin à base de phosphate, refroidi dans la glace, puis solubilisées en 30 minutes à 4 C dans 1 ml de tampon de lyse, HNTG (50 mM d'Hepès, pH 7,5, 150 mM de NaCI, 1% de Triton x 100, 10% de Glycérol, 1 mM de MgC12 , 1 mM d'EGTA, en présence d'inhibiteurs de phosphatases (1 mM de Na3 VO4, 10 mM de Na4P2Ov, 10 mM de NaF) et d'inhibiteurs de protéases (1 pg/ml de leupeptine, 1 zg/ml d'inhibiteur de trypsine, 1 zg/ml de pepstatine A, 2 pg/ml d'aprotinine, 10 Hg/ml de benzamidine, 1 mM de phénylméthanesulfonyle fluorure, I llg/mlssg/ml d'antipaïne, 1 Zg/ml de chymostatine). Les lysats sont décantés par centrifugation à 15 000 tours/mn pendant 10 mn. La concentration en protéines est ensuite déterminée (Bio-rad micro-test). 2) Test de liaisons directes L'ensemble des lysats cellulaires (200 llg) et des protéines immunoprécipitées sont séparés sur gel de polyacrylamide à 7,5% de dodécyl sulfate de sodium (SDS-PAGE) puis transférés sur une membrane de difluorure de polyvinylidène (PVDF Millipore Corpo.). La liaison non spécifique au niveau des filtres est bloquée par 2% de lait écrémé dans du PBS contenant 0,05% de Tween 20, pendant 2 heures, à température ambiante. Les filtres sont incubés avec la protéine GST et des protéines GST-SH3 dans le tampon bloquant pendant 12H à 40C.Après avoir été lavées avec du PBS0,05% Tween 20, les protéines liées sont détectées par incubation successive avec un anticorps monoclonal anti-GST (0,25 llg/ml) (Hybridolab Pasteur Inst.), un anticorps anti-souris conjugué à une phosphatase alcaline et du sel 5 bromo-4 chloro-3 indolyphosphate toluidinium nitroblue tetrazolium (PROMEGA). 3)Test de compétition Des peptides synthétiques correspondant aux séquences (275-305), (299-326), (317326), (320-350) de GAP SH3 ou à la séquence putative de la dynamine (RRAPAVPPARPGS) se liant au domaine SH3 sont synthétisés sur un appareil Applied Biosystems 431 A, utilisant la chimie FMOC. La protéine p68 purifiée est isolée par électrophorèse sur gel de polyacrylamidedodécyl sulfate de sodium et transférée par électrophorèse sur membrane PVDF. Les membranes sont incubées avec des quantités croissantes en peptides. Le peptide Poly L-proline (SIGMA) est utilisé à 500 zM dans une réaction témoin. Après I H d'incubation, la protéine GST-GAP-SH3 (2pg/ml) est ajouté à chaque milieu réactionnel. Les filtrats sont sondés avec un anticorps monoclonal anti-GST comme décrit précédemment. 4!Immunoprécipitation et immunotransfert Les lysats cellulaires solubles (3 mg) sont décantés avec 50 Cll de protéine A sépharose CL-4B (Pharmacia Biotech) pendant 2 H à 4 "C. Les lysats cellulaires décantés sont incubés avec l'anticorps monoclonal antiphosphotyrosine (anticorps monoclonal 4G10 - Upstate Biotechnology Incorporated) pendant 4 H à 4 "C. Puis, 50 zl de protéine A Sépharose sont ajoutés au complexe et l'incubation est poursuivie toute une nuit à 40C. Les immunoprécipités sont lavés 3 fois avec un tampon HNTG et solubilisés dans un échantillon de tampon SDS (100 1ll). Les complexes sont ensuite séparés par SDS PAGE et transférés par électrophorèse sur des membranes PVDF. Les membranes sont incubées avec l'anticorps monoclonal phosphotyrosine dans du TBS (10 mM de Tris, pH 7,4, 150 mM de NaCI, 3% de sérum albumine bovin) et en outre incubées avec des seconds anticorps conjugués à une phosphatase alcaline. Des substrats pour la phosphatase alcaline sont ensuite ajoutés pour un développement approprié de la couleur. 5!Purification et analyse de la séquence Environ 5.109 cellules ER22 sont lysées dans 200 ml de tampon HNTG. Le lysat est centrifugé à 15 000 g pendant 15 min et dilué 5 fois dans un tampon HNG (50 mM d'Hepes, pH 7,5, 150 mM de NaCI, 10% de Glycérol, I mM d'EGTA, inhibiteurs de phosphatase et inhibiteurs de protéase). Le lysate est incubé toute une nuit avec 6 ml de S-Sépharose Fast flow équilibré dans le même tampon. Le complexe est transvasé sur colonne (2,5 x 1,3 cm - IBF). La colonne est lavée avec 10 fois son volume en tampon et les protéines liées sont ensuite éluées à une vitesse d'élution de 60 ml h-l, avec un gradient linéaire de 60 ml de 0 à I M de NaCI du même tampon.Les fractions possédant l'activité de liaison déterminée dans les conditions de l'exemple 2.2 (0,150,37 M NaCI) sont rassemblées, diluées 10 fois dans un tampon HNG et chargées sur Héparine-Sépharose CL-6B (3ml) (Pharmacia LKB), prééquilibrée avec le même tampon à une vitesse d'élution de 24 ml h-l. Après lavage avec le tampon HNG, la colonne est éluée avec un gradient de 24 ml, de 0 à I M de NaCI. Des fractions actives de la chromatographie S Fast Flow sont rassemblées, diluées 4 fois dans un tampon MES (100 mM de MES, ph 6,8, 1 mM de MgSO4, I mM d'EGTA) et transférées sur une colonne ATP d'agarose (3 ml) (Sigma N" A9264) prééquilibrée avec le tampon MES contenant 50 mM de NaCI à un débit d'élution de 6 ml.h-l.La colonne est ensuite lavée avec 20 ml de tampon MES contenant 50 mM de NaCI et éluée à 30 ml.h-l avec un gradient linéaire de 50 mM à 2 M NaCI dans le tampon MES. La protéine p68 élue entre 0.3 M et 0.4 M de NaCI. Les fractions actives sont rassemblées, dialysées avec 20 mM de NH4HCO3 pH 8,3 et concentrées. Les protéines amenées à sec, sont resuspendues dans un tampon SDS, séparées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Le gel est coloré avec du bleu de coomassie et la bande de poids moléculaire de 68kDA, correspondant à l'activité de liaison SH3 est recueillie. Elle est lavée pendant 1 heure avec les solutions suivantes: eau, eau/ méthanol (90/10), eau/CH3CN (80/20), eau/CH3CN (50/50). La bande de gel, contenant la protéine p68 purifiée, est ensuite divisée en petits fragments et séchée sous SPEED/VAC (SAVANT). On ajoute 400pal d'une solution contenant 25 mM Tris pH 8,5, I mM d'EDTA , 0,05% de SDS et 5pg d'endoprotéinase Lys-c (Boehringer Mannheim) et l'ensemble est incubé toute une nuit à 37"C. L'hydrolysat est injecté sur colonne HPLC en phase inverse (Vydac C18: 2,1 x 250mm). La colonne est éluée à 0,2mVmin avec un gradient linéaire de 0 à 35% B en 150 minutes. (A:H20 + TFA 0,07% et B: CH3CN + TFA 0,07%) et les pics d'élution observés à tr 113,7, 117,7 et 133,7 min sont recueillis et directement séquencés en utilisant un microséquenceur Applied Biosystems 477A.La séquence des peptides correspondants ainsi obtenus est présentée en SEQ ID N"1, SEQ ID N02, SEQ ID N"3 et SEQ ID N"4. Ces séquences ne présentent aucune homologie avec des protéines référencées dans les bases de données de protéines (PIR 33. Swiss-Prot 33 (intelligenetics)). Afin de déterminer si la protéine p68 est phosphorylée au niveau de la tyrosine dans les cellules mitotiques ou non synchrones, les protéines des lysats issus de cellules ER22 cultivées dans 10% de sérum de veau foétal ou de cellules traitées avec le nocodazole sont immunoprécipitées avec des anticorps anti-phosphotyrosine, transférées sur membrane et soit immunodétectées avec des anticorps anti-phosphotyrosine soit incubées avec soit GST-GAP-SH3 ou GST-Src-SH3, dans les conditions décrites en exemples 2.2 et 2.4. Comme témoin, les protéines des cellules NIH 3T3, transformées avec un allèle activé de c-Src (c-Src Y527F) sont testées dans les mêmes conditions que celles décrites pour les protéines ER22. Les résultats obtenus montrent que des protéines sont phosphorylées au niveau de la tyrosine, plus particulièrement dans la région 60-70kDa. Dans les cellules ER22 aucune liaison à une protéine phosphorylée p68 n'est détectée avec les sondes GST-GAP-SH3 ou GST-Src-SH3. Dans les cellules NIH3T3 (c-Src Y527F), la sonde GST-Src-SH3 se lie à une protéine de poids moléculaire de 68kDa phosphorylée en tyrosine alors que la sonde GST-GAP-SH3 n'interéagit avec aucune protéine. Afin de confirmer l'implication fonctionnelle de cette protéine dans la voie de signalisation ras, des expériences de compétition ont été réalisées dans les conditions décrites dans l'exemple 2.3. Les résultats obtenus montrent que les peptides dérivés de GAP capables de bloquer la rupture des vésicules germinales d'oeufs de xénope (GVBD) induite par ras, peptides (299-326) et (317-326) de GAPSH3 sont également capables de bloquer l'interaction entre la protéine p68 et GAP. Ces résultats confirment clairement que la capacité de bloquer l'activité de la protéine selon l'invention ou d'interférer avec son activité constitue une nouvelle approche particulièrement prometteuse pour le traitement du cancer. EXEMPLE 3 Isolement de la séquence SEQ ID N"6 humaine à partir d'une banque d'ADNc de placenta humain. On utilise à titre de sondes les SEQ ID N"7 et N08, établies à partir des séquences peptidiques SEQ ID N"1 et SEQ ID N"3. L'ADN de la banque Clonetech HL1008B a été préparé et utilisé dans une réaction de PCR. 30 cycles d'amplification ont été réalisés dans les conditions suivantes: dénaturation 1 min à 94"C, appariement 1 min entre 35 et 400C et élongation 1 min à 72"C. Cette réaction permet d'isoler un fragment d'ADN de 1,3kb dont une partie de la séquence est donnée en SEQ ID N"6. Une analyse en Northern Blot montre que l'ARN correspondant (3,3kb) est ubiquitaire et exprimé très fortement dans le muscle squelettique adulte. Exemple 4: Isolement de la séquence SEO ID N"9 codant pour la p68 humaine à partir d'une banque d'ADNc de placenta humain. On utilise les deux oligonucléotides inosine GTI ATG GAI AAI CCI TCC CCI CTI CTI GTI GG ( SEQ ID N"7) et GAA TCA TCG AAI ACI ACG AAI CCG AA (SEQ ID N"8) comme amorces pour l'amplication d'un ADNc dans une banque de placenta humain. La P.C.R. a été réalisée grâce à l'Amplitaq Perkin Elmer à une température d'annealing de 35"C suivie d'lmn d'extension à 72"C en présence de 10 % de formamide. Nous avons amplifié un fragment d'ADNc de 1164pb. Après un clonage direct en vecteur pMOSblue (Amersham) comportant des séquences -20 et inverse, le fragment a été séquencé grâce à des sondes fluorescentes. Ce fragment PCR a ensuite été utilisé comme sonde pour screener 106 phages d'une banque kgtll d'ADNc de placenta humain (Clontech).La sonde a été synthétisée par le système Rediprime d'Amersham et les filtres ont été incubés 16 heures dans le tampon d'hybridation (6X SSC, 5X Denhardt's, 100 llg/ml sperme de saumon, 0,25 % SDS) contenant la sonde à 45"C. Les filtres ont ensuite été lavés 1 heure à température ambiante et 20 mn à température d'hybridation en 2X SSC, 0,05 % SDS. Huit clones positifs ont été identifiés. Deux d'entres eux ont été purifiés et les ADNc ont été digéré par EcoRI pour ressortir les inserts. Ils ont été sous-clonés en M13mpl8/EcoRI pour être séquencés. Le séquençage a été réalisé sur les fragments issus d'une délétion progressive à l'exonucléase III de l'ADNc (Nested Deletion Kit, Pharmacia Biotech). Les différences de taille des fragments ont été analysées par amplification PCR entre les amorces -20 et reverse du vecteur M13 et différentes populations de taille ont été choisies pour subir le séquençage. L'assemblage des différentes séquences obtenues a permis la reconstitution de la phase ouverte entière de la P68. LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATION GENERALE: (i) DEPOSANT: (A) NOM: RHONE-POULENC RORER S.A. (B) RUE: 20, avenue Raymond ARON (C) VILLE: ANTONY (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 92165 (ii) TITRE DE L' INVENTION: PEPTIDE CAPABLE DE SE LIER AU DOMAINE SH3 DE LA PROTEINE GAP. (iii) NOMBRE DE SEQUENCES:9 (iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Tape (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0 Version #1.25 (OEB) (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 22 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: Protéine (vi) ORIGINE: HAMSTER (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: VM(E)KPSPLLVGREF(V)RQYI (-) (G,L) (3) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 15 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: Protéine (vi) ORIGINE: HAMSTER (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 2: (T,A) (-)EGD(D)RDNRL(L)GP (4) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 17 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: Protéine (vi) ORIGINE: HAMSTER (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3: LPNFGFVVFDDSEPVQK (5) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: Protéine (vi) ORIGINE: HAMSTER (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4: (S)A(T) PAPADVAPAQEDLR(-) F (6) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 5: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 68 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE:Protéine (vi) ORIGINE: HUMAIN (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5: REAGEQGDIEPRRMVRHPDSHQLFIGNLPHEVDKSELKDFFQSYGNVVE LRINSGPKLPNFAFVVFDD (7) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 6: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 6: (A) LONGUEUR:204 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Humain (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 6: 5' CGTGAGGCTGGTGAGCAAGGTGACATTGAACCCCGAAGAATGGTGAGACAC CCTGACAGTCACCAACTCTTCATTGGCAACCTGCCTCATGAAGTGGACAAATCA GAGCTTAAAGATTTCTTTCAAAGTTATGGAAACGTGGTGGAGTTGCGCATTAAC AGTGGTGGGAAATTACCCAATTTCGCCTTCGTCGTCTTCGATGAT 3' (8) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 7: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 7: (A) LONGUEUR:32 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Humain (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 7: 5V GTIATGGAIAAICCITCCCCICTICTIGTIGG 3' (9) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 8: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 8: (A) LONGUEUR:26 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Humain (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8: 5V GAATCATCGAAIACIACGAAICCGAA 3' (9) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 9: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 9: (A) LONGUEUR: 2089paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Humain (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO:9: gaattcgggcggggtttgtactatcctcggtgctgtggtgcagagctagttcctctccagctcagccgcgta 72 ggtttggacatatttactcttttccccccaggttgaattgaccaaagca ATG GTG ATG GAG AAG 136 M V M E K 5 CCT AGT CCC CTG CTG GTC GGG CGG GAA TTT GTG AGA CAG TAT TAC ACA CTG CTG 190 P S P L L V G R E F V R Q Y Y T L L 23 AAC CAG GCC CCA GAC ATG CTG CAT AGA TTT TAT GGA AAG AAC TCT TCT TAT GTC 244 N Q A P D M L H R F Y G K N S S Y V 41 CAT GGG GGA TTG GAT TCA AAT GGA AAG CCA GCA GAT GCA GTC TAC GGA CAG AAA 298 H G G L D 5 N G K P A O A V Y G Q K 59 GAA ATC CAC AGG AAA GTG ATG TCA CAA AAC TTC ACC AAC TGC CAC ACC AAG ATT 352 E I H R K V M S Q N F T N C H T K I 77 CGC CAT GTT GAT GCT CAT GCC ACG CTA AAT GAT GGT GTG GTA GTC CAG GTG ATG 406 R H V O A H A T L N O G V V V Q V M 95 GGG CTT CTC TCT AAC AAC AAC CAG GCT TTG AGG AGA TTC ATG CAA ACG TTT GTC 460 G L L S N N N Q A t R R F M Q T F V 113 CTT GCT CCT GAG GGG TCT GTT GCA AAT AAA TTC TAT GTT CAC AAT GAT ATC TTC 514 L A P E G S V A N K F Y V H N D I F 131 AGA TAC CAA GAT GAG GTC TTT GGT GGG TTT GTC ACT GAG CCT CAG GAG GAG TCT 568 R Y Q O E V F G G F V T E P Q E E S 149 GAA GAA GAA GTA GAG GAA CCT GAA GAA AGA CAG CAA ACA CCT GAG GTG GTA CCT 622 E E E V E E P E E R Q Q T P E V V P 167 GAT GAT TCT GGA ACT TTC TAT GAT CAG GCA GTT GTC AGT AAT GAC ATG GAA GAA 676 O O S G T F Y O Q A V V S N O M E E 185 CAT TTA GAG GAG CCT GTT GCT GAA CCA GAG CCT GAT CCT GAA CCA GAA CCA GAA 730 H L E E P V A E P E P O P E P E P E 203 CAA GAA CCT GTA TCT GAA ATC CAA GAG GAA AAG CCT GAG CCA GTA TTA GAA GAA 784 Q E P V S E I Q E E K P E P V t E E 221 ACT GCC CCT GAG GAT GCT CAG AAG AGT TCT TCT CCA GCA CCT GCA GAC ATA GCT 838 T A P E O A Q K S S S P A P A D I A 239 CAG ACA GTA CAG GAA GAC TTG AGG ACA TTT TCT TGG GCA TCT GTG ACC AGT AAG 892 Q T V Q E O t R T F S W A S V T S K 257 AAT CTT CCA CCC AGT GGA GCT GTT CCA GTT ACT GGG ATA CCA CCT CAT GTT GTT 946 N L P P S G A V P V T G I P P H V V 275 AAA GTA CCA GCT TCA CAG CCC CGT CCA GAG TCT AAG CCT GAA TCT CAG ATT CCA 1000 K V P A S Q P R P E S K P E S Q I P 293 CCA CAA AGA CCT CAG CGG GAT CAA AGA GTG CGA GAA CAA CGA ATA AAT ATT CCT 1054 P Q R P Q R O Q R V R E Q R I N I P 311 CCC CAA AGG GGA CCC AGA CCA ATC CGT GAG GCT GGT GAG CAA GGT GAC ATT GAA 1108 P Q R G P R P I R E A G E Q G O I E 329 CCC CGA AGA ATG GTG AGA CAC CCT GAC AGT CAC CAA CTC TTC ATT GGC AAC CTG 1162 P R R M V R H P O S H Q L F I G N L 347 CCT CAT GAA GTG GAC AAA TCA GAG CTT AAA GAT TTC TTT CAA AGT TAT GGA AAC 1216 P H E V O K S E t K O F F Q S Y G N 365 GTG GTG GAG TTG CGC ATT AAC AGT GGT GGG AAA TTA CCC AAT TTT GGT TTT GTT 1270 V V E L R I N S G G K t P N F G F V 383 GTG TTT GAT GAT TCT GAG CCT GTT CAG AAA GTC CTT AGC AAC AGG CCC ATC ATG 1324 V F D O S E P V Q K V L S N R P I M 401 TTC AGA GGT GAG GTC CGT CTG AAT GTC GAA GAG AAG AAG ACT CGA GCT GCC AGG 1378 F R G E V R t N V E E K K T R A A R 419 GAA GGC GAC CGA CGA GAT AAT CGC CTT CGG GGA CCT GGA GGC CCT CGA GGT GGG 1432 E G O R R O N R t R G P G G P R G G 437 CTG GGT GGT GGA ATG AGA GGC CCT CCC CGT GGA GGC ATG GTG CAG AAA CCA GGA 1486 L G G G M R G P P R G G M V Q K P G 455 TTT GGA GTG GGA AGG GGG CTT GCG CCA CGG CAG TAA tcttcatggatcttcatgcagcc 1545 F G V G R G L A P R Q * 467 atacaaaccctggttccaacagaatggtgaattttcgaoagcctttggtatcttggagtatgaccccagtct 1617 gttataaactgcttaagtttgtataattttactttttttgtgtgttaatggtgtgtgctccctctccctctc 1689 ttccctttcctgacctttagtctttcacttccaattttgtggaatgatattttaggaataacggacttttac 1761 ccgaattcgtaatcatggtcatagctgtttccgtgtgaaattgttatccgctcacaattccacacaacatac 1833 gagccggaagcataaagtgtaaagcctggggtgcctaatgagtgagctaactcacattaattgcgttgcgct 1905 cactgcccgctttccagtcgggaaacctgtcgtgccagcgcattaatgaatcggccaacgcgcggggagagg 1977 cggtttgcgtattgggcgccagggtggttttcttttcaccagtgagacgggcaacagctgattgcccttcac 2049 cgctggccctgagagagttgcagcaagcggtccacgctgg 2089 REVENDICATIONS 1. Polypeptide capable d'interagir avec le domaine SH3 de la protéine GAP. 2. Polypeptide selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend tout ou partie d'une séquence peptidique choisie parmi les séquences SEQ ID N01, SEQ ID N"2, SEQ ID N"3, SEQ ID N"4 et les dérivés de celles-ci. 3. Polypeptide selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce qu il comprend la SEQ ID N0 i, SEQ ID N02, SEQ ID N"3 et/ou SEQ ID N"4. 4. Polypeptide selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce qu'il possède un poids moléculaire de l'ordre de 68kDa. 5. Polypeptide selon la revendication I caractérisé en ce qu'il comprend tout ou partie de la séquence SEQ ID N05 SEQ ID N"9 ou d'un dérivé de celles-ci. 6. Polypeptide selon la revendication I ou 5 caractérisé en ce qu'il comprend la SEQ ID N"5. 7. Polypeptide selon la revendication 1, 5 ou 6 caractérisé en ce qu'il est représenté par la SEQ ID N"9. 8. Polypeptide selon l'une des revendications précédentes caractérisé en que ses motifs tyrosine ne se phosphorylent pas dans des cellules mitotiques ou en croissance. 9. Anticorps ou fragment d'anticorps dirigé contre un polypeptide selon l'une des revendications I à 8. 10. Anticorps ou fragment d'anticorps selon la revendication 9 caractérisé en ce qu'il est dirigé contre une séquence choisie parmi les séquences peptidiques présentées en SEQ ID N0l SEQ ID N 2, SEQ ID N"3 , SEQ ID N"4, SEQ ID N05 et SEQ ID N"9. I I. Anticorps ou fragment d'anticorps selon la revendication 9 ou 10 caractérisé en ce qu'il possède la faculté d'inhiber l'interaction entre la protéine GAP et un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 8. 12. Séquence nucléotidique codant pour un polypeptide tel que défini selon l'une des revendications I à 8. 13. Séquence nucléotidique selon la revendication 12 caractérisée en ce qu'elle comprend (a) tout ou partie de la séquence SEQ ID N"6 et/ou de la séquence SEQ 1DON09 ou de leur brin complémentaire, (b) toute séquence hybridant avec une séquence (a) et codant pour un polypeptide capable de se lier au domaine SH3 de la protéine GAP, et (c) les séquences dérivées des séquences (a) et (b) en raison de la dégénérescence du code génétique. 14. Séquence nucléotidique selon la revendication 12 ou 13 caractérisée en ce qu elle comprend la séquence SEQ ID N"6. 15. Séquence nucléotidique selon la revendication 12, 13 ou 14 caractérisée en ce qu'elle est réprésentée par la SEQ ID N"9. 16. Acide nucléique antisens capable d'inhiber au moins partiellement la production de polypeptides selon l'une des revendications I à 8. 17. Utilisation d'une séquence selon l'une des revendications 12 à 15 pour la détection de l'expression d'un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 8 ou pour la mise en évidence d'anomalies génétiques (mauvais épissage, polymorphisme, mutations ponctuelles, etc). 18. Utilisation d'un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 8 pour la réalisation d'un composé non peptidique ou non exclusivement peptidique capable d'interagir avec la protéine GAP, par détermination des éléments structuraux de ce polypeptide qui sont importants pour son activité et reproduction de ces éléments par des structures non peptidiques ou non exclusivement peptidiques. 19. Composition pharmaceutique comprenant comme principe actif au moins un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 8 et/ou un anticorps ou fragment d'anticorps selon la revendication 9 à 11 et/ou un acide nucléique antisens selon la revendication 16 et/ou un composé préparé selon la revendication 18. 20. Composition pharmaceutique selon la revendication 18 destinée à moduler l'activation des protéines p21. 21. Composition pharmaceutique selon la revendication 19 destinée au traitement des cancers. 22. Utilisation d'un anticorps ou fragment d'anticorps selon la revendication 9 à 11 et/ou d'une séquence nucléotidique selon la revendication 12 à 15 pour la détection de l'expression et/ou d'une surexpression d'un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 8 amplifié, muté ou réarrangé dans un échantillon biologique. 23. Utilisation d'un anticorps ou fragment d'anticorps selon l'une des revendications 9 à 11 et/ou d'une séquence nucléotidique selon l'une des revendications 12 à 15 pour le typage de cancers ou de maladies liées à des défauts de signalisation. 24. Utilisation d'une séquence nucléotidique ARN ou ADN capable d'interagir avec un polypeptide selon l'une des revendications I à 8 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement de cancers.