Brevet FR2727864A1 — publié le 19960614

La présente invention a pour objet l'utilisation des ligands des sites de liaison périphérique pour les benzodiazépines (sites p) pour la préparation de médicaments utiles dans la prévention et le traitement des neuropathies périphériques. Dans le cadre de la recherche de composés pouvant favoriser la régénération des nerfs périphériques après lésion, on a trouvé que le 6-chloro-2-(4-chlorophényl)-8-méthoxy- N,N-dipropylimidazo[1,2-a]pyridine-3-acétamide, composé connu d'après le brevet EP 0 289371 pour sa forte affinité pour les récepteurs périphériques des benzodiazépines (sites p), induit une augmentation significative de la vitesse de régénération du nerf sciatique lésé chez le rat. Afin de déterminer le type de récepteur impliqué dans les effets neurotrophes de ce composé, l'effet propre d'un antagoniste des récepteurs périphériques des benzodiazépines, le N-méthyl-N-[1-(1méthylpropyl)]-l-(2-chlorophényl) isoquinoléine-3-carboxamide (PK 11195) ainsi que l'interaction entre les effets de ce composé et ceux du 6- chloro-2-(4-chlorophényl)-8-méthoxy-N,N-dipropylimidazo[1,2- a]pyridine-3-acétamide ont été étudiés. D'autre part, la densité des sites p dans le nerf sciatique a été déterminée. Les essais ont été réalisés de la façon suivante: Des rats adultes mâles de souche Sprague Dawley (Iffa Credo), pesant 200 g environ, sont anesthésiés par du pentobarbital sodique (60 mg/kg). La peau de la cuisse est alors désinfectée à l'alcool et incisée au niveau des biceps fémoraux, puis le nerf sciatique est mis à nu après avoir écarté les muscles Lateralis et le Biceps Femoris. La lésion du nerf sciatique est provoquée par congélation, lésion qui détruit les fibres du nerf sciatique au site de la lésion et dans tout le tronçon distal. Ce type de lésion conserve les gaines nerveuses et permet une régénération nerveuse dans des conditions reproductibles. 2 2727864 La lésion est effectuée sur 1 mm par 6 cycles de congélation- décongélation, à l'aide d'une cryode en cuivre, pré-refroidie dans de l'azote liquide, le point de la lésion étant repéré par une microsuture sur le périnèvre, au dessus de la trifurcation du nerf sciatique. La plaie est ensuite refermée et traitée par un antibiotique (EXOSEPTOPLIXO). a) Détermination de la densité des sites p dans le nerf sciatique La densité des sites p dans le nerf sciatique a été déterminée à l'aide de PK 11195 tritié. Les animaux sont séparés en 3 groupes: - témoins absolus - animaux opérés dont le nerf sciatique n'est pas lésé - animaux dont le nerf sciatique est lésé. Dix jours après la lésion, on effectue des prélèvements et on réalise des coupes d'une épaisseur de 10 Dm au niveau de la zone lésée. Ces coupes sont incubées en présence de lnM de 3H-PK 11195 dans du tampon Tris-HCl à 170 mM pendant 30 mn à 4 C, puis préparées pour la radioautographie. La densité des sites de liaison est déterminée par densitométrie, en comparaison avec des standards calibrés. On a trouvé que des récepteurs périphériques des benzodiazépines sont présents au niveau du nerf sciatique et que leur densité augmente considérablement dans le nerf sciatique des animaux lésés par rapport aux groupes des témoins absolus et des témoins opérés non lésés. b) Détermination de l'effet du 6-chloro-2-(4-chlorophényl)- 8-méthoxy-N,N-dipro ylimidazor1,2-alpyridine-3-acétamide (composé 1) et du PK 11195 (composé 2) sur la régénération du nerf sciatique. 3 2727864 Après lésion du nerf sciatique, les animaux sont répartis en 4 lots de 10 individus: - lot témoin traité par le véhicule (Tween 80 à 0,1%) administré 2 fois par jour, par voie intrapéritonéale - lot traité par le composé 1 administré 2 fois par jour par voie intrapéritonéale, à la dose de 1 mg/kg - lot traité par le composé 2 administré 2 fois par jour par voie intrapéritonéale, à la dose de 5 mg/kg - lot traité par les composés 1 et 2, co-administrés 2 fois par jour par voie intrapéritonéale, aux doses de 1 et 5 mg/kg respectivement. Huit jours après l'opération, les animaux sont légèrement anesthésiés et le nerf sciatique remis à nu, est soumis au "pinch test", test consistant à pincer légèrement le nerf à l'aide d'un forceps, en commençant par la région la plus distale du nerf et en remontant tous les 0,5 mm, jusqu'au point o l'on obtient une réponse réflexe, qui se manifeste par une contraction des muscles de la région postérieure de l'animal, indiquant la zone d'arrivée du front des fibres sensitives régénérées. Ce point est marqué par une microsuture, puis le nerf est prélevé et la distance entre le site de la lésion et la microsuture distale est mesurée sur papier millimétré, sous microscope opératoire. On a trouvé que le composé 1 augmentait de façon significative la régénération des fibres sensitives du nerf sciatique (augmentation de 10, 7% par rapport au groupe témoin) et que cette augmentation était antagonisée par l'administration simultanée du composé 2. Le composé 2 administré seul, n'a aucun effet sur la régénération du nerf sciatique. Les résultats obtenus montrent que l'activation des sites de liaison périphérique des benzodiazépines (sites p), favorise la régénération nerveuse. L'invention concerne donc l'utilisation des ligands des sites p pour la préparation de médicaments utiles dans la 4 2727864 prévention et le traitement des neuropathies périphériques. Parmi les ligands des sites p pouvant être utilisés selon l'invention, on peut citer plus particulièrement: - les composés du brevet EP 0289371, de formule (I) Y'2N x () 0e NR1R2 dans laquelle: X représente un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe C1_4 alkyle, C1-_4 alcoxy, trifluorométhyle, méthylthio, nitro ou amino, Y1 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe C1_4 alkyle, Y2 représente un groupe hydroxy ou C1_4 alcoxy, ou un groupe SR dans lequel R est un atome d'hydrogène ou un groupe C1_4 alkyle ou (4-alcoxyphényl)méthyle, et R1 et R2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, des atomes d'hydrogène ou des groupes C1_4 alkyle linéaire ou ramifié, et en particulier, le 6-chloro-2-(4-chlorophényl)-8-méthoxy- N,N-dipropylimidazo[1,2-a]pyridine-3-acétamide. - le 2-(4-fluorophényl)-N,N-dihexylindole-3-acétamide. - le 2-(4-fluorophényl)-l-[(2,3-diméthoxyphényl)méthyl]-N,N- dihexylindole-3-acétamide. - les énantiomères (+) et (-) du N,N-diéthyl2-phényl quinoléine-4-[2-(1-méthyl)éthyl]amide. - la 5-(4-chlorophényl)-l,3-dihydro-1-méthyl-2H-1,4- benzodiazepin-2-one. 2727864 - la 1-(2-chlorophényl)-3-carboxyisoquinoléine. Ces composés peuvent être utilisés dans la prévention et le traitement de neuropathies périphériques telles que neuropathies traumatiques ou ischémiques, neuropathies infectieuses, alcooliques, médicamenteuses ou génétiques, ainsi que dans les affections du motoneurone, telles que les amyotrophies spinales et la sclérose latérale amyotrophique. Ils peuvent également être utilisés dans le traitement des maladies neurodégénératives du système nerveux central caractérisées par la présence de densités élevées de sites p. Ils peuvent être présentés, en association avec des excipients, sous toute forme galénique convenant à une administration orale, parentérale ou locale, par exemple sous forme de comprimés, gélules, solutions buvables ou injectables ou patches, dosés pour permettre une administration journalière de 0,01 à 100 mg. 6 2727864 Revendications 1. Utilisation des ligands des sites de liaison périphérique pour les benzodiazépines (sites p) pour la préparation de médicaments utiles dans la prévention et le traitement des neuropathies périphériques. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le ligand des sites p est un composé de formule (I) 2 N x y_ (I) 0 NR1R2 dans laquelle: X représente un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe C1_4 alkyle, C1_4 alcoxy, trifluorométhyle, méthylthio, nitro ou amino, Y1 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe C1_4 alkyle, Y2 représente un groupe hydroxy ou C1_4 alcoxy, ou un groupe SR dans lequel R est un atome d'hydrogène ou un groupe C1_4 alkyle ou (4-alcoxyphényl)méthyle, et R1 et R2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, des atomes d'hydrogène ou des groupes C1_4 alkyle linéaire ou ramifié. 3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le ligand des sites p est le 6-chloro-2-(4chlorophényl)-8-méthoxy-N,N-dipropylimidazo [1,2-a]pyridine-3-acétamide. 4. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le ligand des sites p est le 2-(4-fluorophényl)-N,N- dihexylindole-3-acétamide, le 2-(4-fluorophényl)-l-[(2,3- diméthoxyphényl)méthyl]-N,N-dihexylindole-3-acétamide, 7 2727864 l'énantiomère (+) ou (-) du N,N-diéthyl-2-phénylquinoléine-4- [2-(1-méthyl)éthyl)]amide, la 5-(4-chlorophényl)-1,3-dihydro- 1-méthyl-2H-1,4-benzodiazepin-2-one ou la 1-(2-chlorophényl)- 3-carboxyisoquinoléine.