Brevet FR2731276A1 — publié le 19960906

BANDELETTE, EN8EMBLE ET PROCEDE DE MESURE POUR ESTIMER LE NIVEAU D'UREE DANS LE LAIT, UTILISATION POUR LE8 RUMINANTS L'invention concerne une bandelette destinée à estimer le niveau d'urée dans le lait. Elle concerne aussi un ensemble de mesure destinée à cet effet. Elle concerne encore l'utilisation d'une telle bandelette et/ou d'un tel ensemble pour les ruminants et un procédé pour estimer le niveau d'urée dans le lait. L'utilisation de la teneur en urée du lait comme témoin de l'état nutritionnel des vaches laitières est séduisante pour des raisons physiologiques et pratiques. La composition du lait sur le plan azoté est bien connue et a fait l'objet de nombreux travaux et synthèses DE PETER E.V.., FERGUSON J.D. 1992. Nonprotein nitrogen and protein distribution in the milk of cows. J. Dairy Sci. 75 : 3192-3209 ; JOURNEE M., VERITE R. 1975. L'azote non protéique du lait : facteurs de variation. Le lait 543544 : 212-223 ; KEMPF M. 1986. Le taux d'urée du lait facteurs de variation et intérêts de sa mesure. Note bibliographique. Doc. ITEB ; LE DORE A. 1977. Les fractions azotées du lait de vache. Thèse de Doctorat de spécialité. Université des Sciences et Techniques du Languedoc ; REMOND B. 1985. Influence de l'alimentation sur la composition du lait de vache. 2. Taux protéique : facteurs généraux. Bull. Techn. CRZV Theix 62 : 53-67. La fraction azotée non protéique représente environ 5 % de l'azote total du lait. L'urée constitue en moyenne la moitié de cette fraction mais en explique la majeure partie des variations (coefficient de corrélation variant de 0,78 à 0,98) dans la mesure où les autres constituants non protéiques sont assez stables. Cette fraction ne présente aucun intérêt du point de vue technologie laitière. L'urée du lait provient pour l'essentiel de l'urée sanguine du fait de la bonne perméabilité des cellules de la mamelle ; les concentrations dans les deux milieux sont voisines et très bien corrélées (r = 0,80 à 0,98). Les facteurs de variations des teneurs en urée du lait tels que la race, le stade ou le rang de lactation, la saison, sont peu importants et non constants dans leurs effets. L'incidence des mammites se traduit par une augmentation des protéines solubles au détriment des caséines, mais l'azote non protéique parait peu affecté et sa relation avec le taux cellulaire du lait n'est pas systématique (DE PETER E.V.., FERGUSON J.D. 1992. Nonprotein nitrogen and protein distribution in the milk of cows. J. Dairy Sci. 75 : 3192-3209 ; LE DORE A. 1977. Les fractions azotées du lait de vache. Thèse de Doctorat de spécialité. Université des Sciences et Techniques du Languedoc). L'origine même de l'urée - synthèse hépatique à partir de l'ammoniaque absorbée au niveau du rumen explique que l'alimentation soit le principal facteur de variation de l'urée du lait. On a ainsi pu mettre en relation la teneur en urée du lait avec le niveau azoté global ou l'équilibre azote/énergie de la ration, l'excès d'azote digéré par rapport aux exportations dans le lait et le rapport entre les matières azotées fermentées dans le rumen et l'énergie utilisable pour la synthèse bactérienne (études sur chèvres). La seule connaissance de l'urée du lait ne permet pas cependant de conclure sur les valeurs absolues des apports azotés ou énergétiques mais plus sur leur rapport. Du fait de la variabilité individuelle (voire même dans un lot homogène : BRUNSCHWIG Ph., AUGEARD Ph. 1992. Acides aminés et taux protéique. Utilisation de la farine de poisson sur régime d'ensilage de maïs. Doc. Institut de l'Elevage nO 93021 ; CHENAIS F., ESPINASSE R. 1992. Modulation des apports azotés et énergétiques en début de lactation. Doc. Institut de l'Elevage nO 92091). Ce paramètre paraft ne pouvoir être utilisé que comme témoin de l'alimentation au niveau d'un troupeau. Sur le plan pratique, le prélèvement de lait est facile à réaliser, l'urée est stable assez longtemps dans le lait additionné de conservateur, ou réfrigéré ou congelé (MIETTINEN P.V.A., JWONEN R.O. 1990. Diurnal variations of serum and milk urea levels in dairy cows. Acta Agric. Scand. 40 : 289-296.) et le dosage en laboratoire est simple, rapide et peu onéreux. Un objet de la présente invention est de proposer un test semi-quantitatif pour estimer le niveau d'urée dans le lait. Un autre objet de la présente invention est de proposer un test permettant d'estimer rapidement et in situ le niveau d'urée dans le lait, en particulier des ruminants. A cet effet, l'invention concerne tout d'abord une bandelette en matière plastique destinée à estimer le niveau d'urée dans le lait, caractérisée en ce qu'elle comporte à l'une de ses extrémités un support imprégné de réactifs aptes à réagir quantitativement et proportionnellement avec l'urée présent dans le lait. Dans un mode de réalisation préférée de l'invention, les réactifs comprennent l'uréase et un indicateur coloré, l'uréase transformant l'urée en ammoniaque, la modification résultant du pH étant mesurée par le changement de couleur de l'indicateur coloré. L'indicateur coloré peut être par exemple du bleu de bromothymol. L'invention concerne également un procédé pour estimer le niveau d'urée dans le lait caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à - plonger la bandelette dans un échantillon de lait pendant cinq minutes exactement - secouer la bandelette pour éliminer le lait résiduel - comparer dans les quinze secondes la couleur de la bandelette avec une échelle de camaïeu. Essentiellement trois cas peuvent se présenter 1. Le niveau d'urée est faible La coloration est dans les jaunes. Il y a excès d'énergie par rapport aux protéines. Il est nécessaire d'augmenter la couverture protéique notamment en azote soluble. 2. Le niveau d'urée semble correct Il faut alors vérifier que les niveaux des apports énergétiques et protéiques sont suffisants en quantité afin d'extérioriser tout le potentiel génétique de l'animal. 3. Le niveau d'urée est éleve : La coloration est verte foncée, il y a excès de protéines par rapport à l'énergie de la ration ou des apports trop élevés de protéines solubles. Plusieurs possibilités : il faut augmenter les apports énergétiques et apporter des protéines protégées de la dégradation ruminale ou limiter la dégradabilité des protéines. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention seront bien compris à la lecture de la description qui suit faite au moyen d'un exemple cité à titre non limitatif. 1. MATERIEL ET METHODES 1.1 La bandelette La bandelette de la présente invention est constituée d'une bandelette plastique (8,5 X 0,5 cm) ayant à une des ses extrémités un support par exemple d'une longueur de 0,5 à lcm imprégné de réactifs. La mesure du taux d'urée fait appel à une réaction enzymatique dans laquelle l'uréase transforme l'urée en ammoniaque ; la déviation de pH résultante est mesurée par le changement de couleur de bromothymol. La couleur obtenue qui va du jaune orangé au vert foncé est comparée à une échelle de Camaïeu à 5 tons de couleurs correspondant à des teneurs de 0,05, 0,15, 0,20 à 0,25, 0,30 et 0,40 g d'urée par litre du lait. 1.2 Les échantillons de lait Les échantillons de lait provenaient des fermes expérimentales de Crécom (Côtes d'Armor) et de La Côte Saint-André (Isère). A Crécom, les vaches de race Prim'Holstein étaient en deuxième moitié de lactation et sur une pâture de graminées ; à La Côte St-André, les vaches de race Montbéliarde étaient alimentées à l'auge avec une ration à base d'ensilage de maïs ; elles étaient en début de lactation (45 jours en moyenne). A Crécom, un prélèvement était effectué sur un échantillon de lait individuel représentatif de deux traites consécutives, puis divisé en deux parties ; une était destinée aux analyses de laboratoire (taux et urée) et l'autre à la mesure avec la bandelette. Les prélèvements ont été faits sur 2 lots de 22 vaches en essai d'alimentation, ainsi que sur des vaches hors essai. A La Côte-St-André, des prélèvements séparés à la traite du soir et à la traite du matin suivant ont été faits sur 10 vaches. Les prélèvements pour la détermination des taux ont eu lieu aux mêmes dates dans le cadre du contrôle bi-hebdomadaire de routine. 1.3 Les mesures Les analyses en laboratoire ont été réalisées par deux laboratoires interprofessionnels laitiers selon la méthode de référence de dosage de l'urée. Conformément au procédé selon l'invention, la bandelette a été plongée dans l'échantillon de lait pendant 5 minutes exactement puis secouée pour éliminer le lait résiduel (et non rincée) ; la lecture a été réalisée dans les 15 secondes après la sortie. Deux mesures indépendantes ont été faites sur chaque échantillon, par la même personne pour chaque ferme. A Crécom, les mesures ont été faites sur le lait frais sans conservateur juste après la résiliation de la deuxième traite (celle du matin). A La Côte-St-André, les échantillons ont été congelés puis fractionnés en 2 parties après décongélation, une servant à l'analyse en laboratoire, l'autre aux 2 mesures avec la bandelette ; toutes les déterminations ont été faites dans la demijournée suivant la décongélation. Le double échantillonnage(dans les 2 fermes) a été réalisé de sorte que les produits présents sur la bandelette ne perturbent pas l'analyse de laboratoire. 1.4 Les enregistrements Pour chaque vache ont été notés, le régime alimentaire (fourrage et concentrés), le stade de lactation, le niveau de production (sur 24 heures à Crécom et par traite à La Côte St-André) et les taux butyreux et protéique de chaque prélèvement à La Côte St-André. 2. RéSULTATS ET DI8CU88ION Au total 176 échantillons ont été dosés, 96 en provenance de Crécom et 80 de La Côte St-André. 2.1 Concordance entre les deux mesures à la bandelette. Tableau 1 Concordance entre les deux mesures à la bandelette Crécom 1 ère mesure 0,20-0,25 0,30 0,35 0,40 Effectif 2ème mesure total 0,20-0,25 7 2 9 0,30 1 10 3 14 0,35 14 8 22 0,40 3 1 47 51 8 15 18 55 96 La Côte St André 1ère mesure 0,2o0,25 0,30 0,35 0,40 Effectif 2ème mesure total 0,20-0,25 11 3 14 0,30 6 24 2 32 0,35 4 11 2 17 0,40 2 5 10 17 17 33 18 12 80 Total 1ère mesure 0,20-0,25 0,30 0,35 0,40 Effectif 2ème mesure total 0,20-0.25 18 5 23 0,30 7 34 5 46 0,35 4 25 10 39 0,40 5 6 57 68 25 48 36 j 67 j 176 Différence entre les 2 mesures I 0 1 classe 2 classes Total Crécom 78 15 3 96 La Cdte St André 56 22 2 80 Total (nombre) 134 37 5 176 Différence entre les 2 mesures 0 1 classe 2 classes Total Crécom 81,3 15,6 3,1 100,0 La Cote St André 70,0 27,5 2,5 100,0 Total (%) 76,1 21,0 2,8 100,0 Les lectures ont été faites selon l'échelle de colorations proposée avec une classe intermédiaire entre les deux dernières, notée 0,35. Les résultats des deux séries de mesures (M1 et M2) pour les deux sites sont présentés dans le tableau 1. Sur l'ensemble des 176 échantillons, les deux mesures sont identiques dans 76 % des cas et différent d'une classe environ 1 fois sur cinq ; les écarts de deux classes sont rares (moins de 3 %) et n'apparaissent que pour les classes 0,30 et 0,40. La différence entre les deux sites dans la concordance des mesures traduit des différences d'interprétation entre les deux personnes ayant fait les lectures. La différence entre les deux mesures est tantôt positive tantôt négative (à Crécom la 2ème mesure est inférieure à la 1ère dans 13 cas et supérieure dans 5 ; à la Côte St-André, elle est inférieure dans 7 cas et supérieure dans 17) ce qui traduit une absence de dérive de la notation et confirme la stabilité de l'urée sur le court laps de temps séparant les deux analyses. Tous les échantillons étudiés se situent dans la partie moyenne à hauteur de la gamme étalon proposée ce qui n'a pas permis d'apprécier les colorations correspondant à de faibles teneurs en urée. Dans la zone testée, la précision de la lecture est au maximum d'une classe. 2.2 Relation entre la mesure à la bandelette et l'analyse de laboratoire Les résultats des analyses de laboratoire pour les quatre séries d'échantillons : première et deuxième séries à Crécom, traite du soir et traite du matin à La Côte St André sont présentés dans le tableau 2. Les teneurs moyennes des laits en urée sont plus élevées à Crécom qu'à La Côte St-André en particulier pour le premier prélèvement. Les valeurs supérieures à 0,50 g/l y sont nombreuses alors qu'elles sont rares sur le 2ème site. Globalement, les variations entre vaches sont importantes (coefficient de variation de l'ordre de 25 à 30 %) ce qui est souvent observé. Du fait de la bonne concordance entre les deux mesures effectuées avec la bandelette et pour éviter la création de demi-classe en faisant la moyenne des deux déterminations la valeur maximum a été retenue comme résultat de la mesure. Les valeurs d'urée, déterminées par analyse de laboratoire, pour les différentes classes de la bandelette sont rapportées dans le tableau 3. Pour la classe 0,30 g/l les valeurs moyennes de l'analyse sont très proches (0,353 et 0,327 pour les deux sites) ; les extrêmes vont de 0,23 à 0,51 mais la majorité des valeurs se situe entre 0,30 et 0,40 avec peu de valeurs au-delà. Dans la classe 0,35, les valeurs moyennes et les dispersions sont semblables dans les deux séries mais le résultat bandelette est nettement inférieur à la valeur analyse ; les valeurs s'étalent de 0,30 à 0,64 avec une forte fréquence entre 0,40 et 0,49. Pour la classe supérieure, les résultats sont plus variables et divergents mais ceci est logique dans la mesure où l'intensité de la coloration de la bandelette atteint rapidement un maximum alors que les teneurs en urée peuvent continuer à augmenter ; la valeur moyenne des résultats de laboratoire n'a donc pas beaucoup de signification. Dans cette classe, la majorité des valeurs se situe au-delà de 0,40 g/l. Les échantillons de la classe 0,20-0,25 sont moins nombreux. La moitié se situent à moins de 0,30 g/l mais on en trouve quelques uns à des valeurs élevées, à plus de 0,50, surtout dans un site avec toutes les valeurs à plus de 0,30. Aux environs de 0,30 g/l, il y a une bonne concordance entre les deux mesures ; au-delà; la bandelette sous-estime les teneurs réelles en urée. Les échantillons pour lesquels l'écart entre les valeurs laboratoire et bandelette est important ne se distinguent pas des autres sur les critères de quantité de lait produit ou de taux. 2.3 Relation entre les teneurs en urée du lait des traites du matin et du soir. Cette relation a été étudiée sur les deux séries de 40 échantillons prélevés dans une des fermes. Les résultats sont rapportés dans les tableaux 2 et 4. Les résultats moyens d'analyse de laboratoire sont peu différents entre les deux moments de prélèvement : 0,359 + 0,097 g/l avec des extrêmes de 0,23 et 0,60 pour la traite du soir et 0,381 + 0,097, 0,23 et 0,70 pour celle du matin.Le tendance observée ici à avoir des teneurs en urée plus Tableau 2 Teneurs en urée du lait déterminées par analyse de laboratoire Urée Crécom 1 Crécom 2 La Cote soir La Côte matin Total (girl) n % n % n % n % n % 1 2,3 3 7.5 1 2.5 5 2,8 0,25-0,29 1 2,3 9 22.5 5 12,5 1 S 8.5 0,30-0,34 6 13,6 8 20,0 8 20.0 22 12.5 0,35-0,39 4 7,7 7 15,9 9 22.5 10 25,0 30 17,0 0,40-0,44 8 15.4 7 15,9 4 10.0 10 25,0 29 16,5 0.45-0,49 11 21.2 5 11,4 2 5,0 4 10,0 22 12,5 0.50-0,54 13 25.0 6 13.6 2 5.0 21 11.9 0,55-0,59 9 17,3 4 9.1 1 2.5 14 8.0 0,60-0,64 5 9.6 5 11,4 2 5.0 12 6.8 > 0,64 2 3.8 2 4.5 2 5,0 6 3.4 Nombre 52 44 40 40 176 Moyenne 0,505 0,465 0.359 0,381 0.434 Ecart-type 0,079 0,132 0,097 0,098 0.118 Minimum 0,35 0,23 0.23 0.23 0,23 Maximum 0.66 0.95 0.60 0,70 0.95 Tableau 3 Teneur en urée du lait (g/l) par classe de valeur de la bandelette Valeur Nombre Valeur laboratoire (g/l) bandelette I movenne e.t. extrêmes 0.30-0.390.40-0.49 > 0.49 Crécom 96 0,20-0,2 7 0,427 0,093 0.30-0.56 3 2 2 0,30 13 0.353 0.069 0.23-0.51 2 9 1 1 0,35 17 0.477 0.084 0,35-0.64 2 9 6 0.40 59 0.526 0.096 0.36-0.95 3 19 37 La Côte St André 8 0 0.20-0,25 1 1 0.270 0.028 0,23-0,32 9 2 0,30 33 0.327 0,051 0,23-0.45 9 22 2 0,35 1 7 0,429 0.075 0.30-0.60 4 11 2 0.40 19 9 0.449 0.1 0 9 0.31-0.70 7 7 5 Total 176 0.20-0.25 1 8 0.331 0.099 0.23-0.56 9 5 2 2 0.30 46 0,334 0.057 0.23-0.51 11 31 3 i 0,35 34 0,453 0,082 0,30-0.64 0 6 20 8 0.40 78 0.507 0.104 0.31-0.95 0 10 26 42 élevées le matin que le soir n'est pas constante dans la bibliographie, dépendant de la chronologie entre les traites et les repas. Au niveau individuel, la relation entre les deux valeurs est moins précise. Le coefficient de corrélation entre les deux séries de 40 points n'est que de 0,60. Plus de la moitié (22/40) des valeurs du matin se situent dans une fourchette de + 0,05 g/l autour de la valeur du soit, mais le quart (10/40) s'en éloignent de plus de 0,10. Les écarts sont particulièrement importants pour les vaches ayant globalement une teneur en urée élevée. Les mesures à la bandelette confirment ces données : la moitié des résultats (20/40) sont dans la même classe le matin et le soit, et près d'un tiers (13/40) diffèrent d'une classe. Les valeurs du matin sont supérieures à celles du soir dans 13 cas et inférieures dans seulement 7. En assimilant la moyenne des valeurs à un résultat sur lait de mélange (ce qui n'est pas exact du fait de la non pondération par les volumes) il semble qu'une mesure au niveau d'un lot de vaches ou d'un troupeau puisse se faire indifféremment sur le lait de la traite du soir ou de celle du matin ; pour se mettre à l'abri de différences éventuelles entre les deux, il paraît souhaitable de préconiser de faire les mesures régulièrement sur la même traite. En revanche, pour une mesure individuelle le risque d'erreur est important avec une détermination sur une seule traite. Tableau 4 Relation entre les teneurs en urée aux traites du soir et du matin Résultats laboratoire Matin - soir (g/l) -0.10 *0.10 à -0,05 -0,05 à 0.05 0,05 à 0.10 > 0,10 I 22 7 6 Résultats bandelette Matin \ Soir 0,20-0,25 0.30 0,35 0,40 Total 0,20-0,25 4 4 0,30 5 10 1 16 0,35 1 2 4 2 9 0,40 1 i 3 6 11 7 17 8 8 40 2.4 Relations entre la production de lait, les taux et la teneur en urée Pour les traites individuelles du soir et du matin, la teneur en urée n'est pas liée au niveau de production. Les données de production et de composition du lait pour l'ensemble des prélèvements sont les suivantes Mesure Lait TB TB Urée kg g/kg g/l Crécom 96 19,8 37,3 32,6 0,487 La Côte St-André 40 32,3 40,5 29,2 0,372 TB : taux butyrique TB : taux protéique La seule corrélation significative est celle entre l'urée et le TB pour les données de La Côte St-André (r=0,387 ; p=0,014). Cette absence globale de relations est en accord avec la bibliographie. L'urée du lait étant influencée par les apports alimentaires azotés (en particulier rapidement dégradables) et le taux (ou la matière) protéique étant plus un reflet des apports énergétiques on peut proposer le schéma suivant de variation de la composition du lait en fonction du niveau alimentaire Niveau alimentaire Composition du lait Energie Azote Urée Mat.protéiqu Déficit Déficit Equilibre + - Excès ++ -- Equilibre Déficit Excès + Déficit -- + Excès Equilibre ~ + Excès = + Dans ces conditions, le rapport TB (ou MP) /urée (tableau 5) pourrait être un bon indicateur de l'équilibre énergie/azote de la ration. Les valeurs de ces rapports sont plus faibles à Crécom qu'à La Côte St-André du fait des fortes valeurs en urée, malgré des TB également élévés, à mettre en relation avec le stade de lactation différent entre les deux sites. Avant de pouvoir utiliser ce critère, il est indispensable de le valider dans différentes situations de bilans alimentaires connus précisément et individuellement. Dans le tableau 5, TB et MP signifie respectivement Taux protéique et Matière protéique. Tableau 5 TPIurx 0.3-0.4 0.4-0.5 0.5-0.6 0.6-0.7 0.7-0.8 0.8-0.9 09-1.0 1.0-1.1 1.1-1.2 1.2-1.3 Croco- 1 7 16 32 17 9 4 4 5 1 La 4 5 9 9 1 3 1 MP/urée 510 10-15 15-20 2025 2530 30-35 3540 CrJcom 19 45 23 7 2 L'utilisation de la bandelette et de l'ensemble de mesure conforme à la présente invention permet une lecture avec une précision de 1/2 (soit 0,05 g/l) sur les cinq de l'échelle de coloration proposée. Sur une série d'échantillons et pour des valeurs d'urée intermédiaires, de l'ordre de 0,3 g/l, il y a une bonne concordance entre la lecture à la bandelette et la valeur moyenne de l'analyse de laboratoire. Pour des valeurs élevées, la bandelette sous-estime la teneur réelle, une modification des plages de coloration permettrait sans doute de mieux distinguer ces valeurs. Les échantillons étudiés n'ont pas permis de tester les faibles teneurs en urée. Pour une même valeur de la bandelette, les résultats d'analyse sont variables, avec un écart-type de l'ordre de 0,06 à 0,10 g/l. Pour une utilisation collective au niveau d'un lot de vaches ou d'un troupeau, la mesure d'urée peut se faire sur le lait d'une seule traite, de préférence toujours la même pour limiter les variations ; au niveau individuel, les variations sont importantes d'une traite à l'autre. REVENDICATIONS 1. Bandelette en matière plastique destinée à estimer le niveau d'urée dans le lait, caractérisé en ce qu'elle comporte à l'une de ses extrémités un support imprégné de réactifs aptes à réagir quantativement et proportionnellement avec l'urée présent dans le lait. 2. Bandelette selon la revendication 1, caractérisé en ce que les réactifs comprennent l'uréase et un indicateur coloré, l'urée transformant l'urée en ammoniaque, la modification résultant du pH étant mesurée par le changement de couleur de l'indicateur coloré. 3. Bandelette selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'indicateur coloré est le bleu de bromothymol. 4. Bandelette selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'elle a une longueur d'environ 8,5 cm et une largeur d'environ 0,5 cm. 5. Ensemble de mesure pour estimer le niveau d'urée dans le lait, caractérisé en ce qu'il comprend une bandelette selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et une échelle de camaïeu à cinq tons de couleurs. 6. Ensemble de mesure selon la revendication 5, caractérisé en ce que les cinq tons correspondent à des niveaux de 0,05, 0,15, 0,20 à 0,25, 0,30 et 0,40 g d'urée par litre de lait. 7. Utilisation d'une bandelette selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 pour estimer le niveau d'urée dans le lait des ruminants tels que la vache, la brebis ou la chèvre. 8. Utilisation d'un ensemble de mesure selon la revendication 5 ou 6 pour estimer le niveau d'urée dans le lait des ruminants tels que la vache, la brebis ou la chèvre. 9. Procédé pour estimer le niveau d'urée dans le lait caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à: - plonger la bandelette dans un échantillon de lait pendant cinq minutes exactement - secouer la bandelette pour éliminer le lait résiduel ; - comparer dans les quinze secondes la couleur de la bandelette avec une échelle de camaïeu. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'échantillon de lait est préalablement stocké dans un endroit sec ou au congélateur.