Brevet FR2729569A1 — publié le 19960726

La présente invention concerne la réversion de la résistance multiple aux drogues ou médicaments. Elle concerne plus particulièrement à titre illustratif, Mis sans que cela constitue une quelconque limitation, la réversion de la chimiorésistance de Plasmodium falciparua à la chloroquine et la réversion de la résistance multiple aux drogues en cancérologie, notamment dans le cas d'un traitement anticancéreux avec des produits de type anthracycline. L'invention concerne tout particulièrement une composition pharmaceutique pour l'inhibition, ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues. La résistance multiple aux drogues constitue une gêne dans de nombreux traitements ou dans la prévention d'états pathologiques et les moyens proposés jusqu'ici pour y remédier se sont avérés présenter dans tous les cas une toxicité trop élevée pour en permettre l'utilisation. Au surplus, on ne savait pas jusqu'à maintenant sur quelles bases rechercher un agent thérapeutique efficace pour la réversion de la résistance multiple aux drogues et les travaux allant dans ce sens entrepris dans le passé ont même été interrompus. Il existait donc un besoin pour pouvoir traiter efficacement les états de résistance multiple aux drogues chez les animaux, y compris 1 1homme, dans des conditions de non-toxicité ou de toxicité acceptable. On a maintenant trouvé de manière inattendue qu'une bis-phénéthylamine connue par ailleurs pour son efficacité dans le traitement des maladies cardiovasculaires et des perturbations de la circulation cérébrale peut être utilisée à des fins thérapeutiques dans la lutte contre la résistance multiple aux drogues. De plus, les mécanismes d'action décelés à ce propos permettent de proposer un moyen général efficace à cet égard et de fournir à l'homme du métier des éléments lui permettant de déterminer par de simples tests si un agent thérapeutique est à même d'être efficace dans l'application thérapeutique susdite. L'invention a ainsi pour premier objet une composition pharmaceutique utile pour l'inhibition, ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues, ladite composition comprenant une quantité efficace d'au moins un principe actif ou agent thérapeutique apte à agir sur les potentiels de membrane liés aux mouvements de Ca2+/Na+ transmembranaires et ceux liés au courant potassique, notamment en inhibant le canal potassique membranaire et le canal sodique membranaire, avec ou sans action parallèle sur le canal calcique membranaire, ledit agent étant en outre un agent antiarythmique de classe III et possédant un effet inotrope positif. On a en effet trouvé de manière inattendue selon l'invention qu'un composé agissant sur les potentiels de membrane liés aux mouvements de Ca2+/Na+ transmembranaires en les inhibant, notamment en inhibant le canal potassique membranaire et le canal sodique membranaire, avec ou sans action parallèle sur le canal calcique membranaire, peut donner une composition particulièrement efficace dans la lutte contre la résistance multiple aux drogues, en l'absence d'effets secondaires notables cliniquement toxiques. La composition pharmaceutique selon la présente invention comprend avantageusement, mais non limitativement, en tant que principe actif au moins un composé choisi parmi les bis-phénéthylamines, notamment de la N méthyl -N-bis (3,4 -diméthoxyphényléthyl) amine de formule générale I ou ses sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables. Le composé de formule I ci-dessus sera, à des fins de simplification, désigné dans la suite le plus souvent par la dénomination "YS 035". Pour plus de commodité, c'est à ce dernier composé qu'il sera fait référence dans la suite de la présente description, mais tout ce qui sera exposé à son propos peut être transposé par l'homme du métier, mutatis mutandis, à d'autres agents thérapeutiques qui s'avéreraient ou se révéleraient être des équivalents de celui-ci, sans que l'on sorte pour autant du cadre et de la portée de la présente invention. Rosemund, Külz et Buth, dans le brevet US 2006114, dans Ber. 72 B 18-28, 1939 et dans le brevet DE 617647, ont décrit la synthèse d'une série de bis-phénéthylamines possédant des propriétés analogues à celles de la papavérine et des propriétés spasmolytiques. Bien qu'ayant cité à ce propos la N-méthyl-N-bis(3,4-diméthoxyphényléthyl)amine, ils ne disposaient pas réellement de ce produit. En effet le composé cité sous ce nom, sans indication de structure, par ces auteurs était en réalité une autre molécule et son chlorhydrate ne correspondait en rien à celui de la N-méthyl-N-bis(3,4-diméthoxyphényléthyl)amine. Ce dernier composé a été présenté pour la première fois dans le document FR-A-2 541 113 avec un procédé pour son obtention et des indications d'application dans le traitement des maladies cardiovasculaires et des perturbations de la circulation cérébrale. Le représentant des bis-phénéthylamines susdit, désigné dans la suite du présent exposé par YS 035, a la structure indiquée plus haut par la formule I, confirmée par spectroscopie: Spectre H1 RMN (enregistré dans CDCl3, aec TMS comme référence interne). Les valeurs des déplacements chimiques des protons, exprimées en 4, étaient: 2,35 (s, 3H, N-CH3); 2,7 (s, 8H, N-(CH2-CH2)2); 3,8 (s, 12H, 4 (OCH3)); 6,7 s, 6H aromatiques). Le chlorhydrate du composé YS 035 présente un P.F. de 180-1850C. Analyse élémentaire pour C21H30N 41Cl (PM=395,93): Calculé (%): C = 63,70; H = 7,63; N = 3,54; Trouvé (): C = 63,42; H = 7,47; N = 3,39. La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique présentée et/ou conditionnée pour l'inhibitionn ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues, comprenant comme principe actif au moins un composé tel que défini plus haut et/ou un sel ou autre dérivé pharmacologiquement acceptable de celui-ci. Ladite composition est avantageusement sous forme de comprimés, tablettes ou pastilles, éventuellement éffervescents, ou encore de solutions ou suspensions buvables. Les formes galéniques de cette composition comportent en pratique par dose unitaire environ 120 mg à 240 mg de principe actif ou un équivalent pondéral, sur la base de l'effet pharmacologique visé, de tout équivalent de ce principe actif ou de leurs différents sels. L'homme du métier est à même de déterminer un tel équivalent pondéral en s'appuyant sur ses propres connaissances et sur des essais de routine. Selon une forme de mise en oeuvre préférée, la présente invention comprend l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un composé actif tel que défini plus haut. Plus avantageusement, ladite quantité efficace consiste en des doses journalières d'environ 240 mg à 360 mg du principe actif ou mélange de principes actifs ou d'une dose d'effet anti-réversion pharmacologiquement équivalent d'un composé équivalent. Ces doses peuvent, selon la voie d'administration employée, l'état du patient et le produit utilisé varier dans le temps et être administrées suivant une posologie comprenant une administration en une seule fois par jour, par semaine ou par mois. Ainsi une dose quotidienne telle que mentionnée ci-dessus peut être elle-même remplacée par toute autre dose d'administration du principe actif pour autant que l'effet pharmacologique obtenu soit sensiblement le même que celui procuré par une administration quotidienne. On préfère une administration par voie orale. Le principe actif ou agent thérapeutique peut être administré conjointement avec un support ou vecteur ou un diluant physiologiquement acceptable pour former ainsi une composition pharmaceutique complète prête à l'emploi. De telles compositions contiennent avantageusement plus de 80 96 en poids d'au moins un agent thérapeutique selon l'invention et peuvent être préparées par des techniques classiques permettant leur formulation dans des formes galéniques habituelles, par exemple des comprimés, des capsules, des gélules, des dragées, des poudres dispersables, des sirops, des élixirs, des suspensions ou des solutions, des gouttes, des nébulisations.Des diluants ou des charges pharmaceutiques appropriés comprennent par exemple l'eau, des alcools, des huiles ou des cires ou gommes naturelles ou durcies, des carbonates de calcium ou de sodium, du phosphate de calcium, du kaolin, du talc et du lactose, ainsi que des agents conservateurs appropriés, tels que par exemple de l'hydroxybenzoate de méthyle, des agents de mise en suspension, comme la méthyl cellulose, la gomme adragante et l'alginate de sodium, des agents mouillants, tels que la lécithine, le polyoxyéthylène stéarate et le maléate de polyoxyéthylène-sorbitan, des agents de granulation et/ou de désintégration tels que l'amidon et l'acide algénique, des agents de cohésion, tels que l'amidon, la gélatine et la gomme arabique, et des agents lubrifiants comme le stéarate de magnésium, l'acide stéarique et le talc.Les compositions sous forme de comprimé peuvent être revêtues par des techniques connues, afin que soient différées la désintégration du comprimé et l'absorption du principe actif dans le tractus gastro-intestinal et que soit ainsi procurée une action différée et/ou prolongée sur une longue période. L'homme du métier est apte à déterminer dans chaque d'espèce si un composé est ou non un équivalent tel que susdit rentrant dans le cadre de la présente invention en recourant à des essais de routine et en procédant si nécessaire de manière itérative, de préférence sur la base des indications et des propositions de méthodes fournies ci-après. L'invention est décrite plus en détail dans les exemples, donnés ci-après à titre purement illustratif, qui ne la limitent aucunement et dans lesquels, sauf mention contraire, les posologies du principe actif sont rapportées au poids corporel. Les essais pharmacologiques effectués et relatés plus loin sont, au moins pour partie, illustrés par les figures annexées, dans lesquelles: - Fig. 1 représente un graphe montrant la courbe de voltage de courant à l'état stable dans des conditions témoins (C) et en présence de 100 Cunol/l de composé YS 035 (100). - Fig. 2 représente sous forme de graphe l'activité in vitro de l'YS 035 sur une souche de P. falciparum résistante à la chloroquine. - Fig. 3 représente sous forme de graphe l'activité in vitro de lWYS 035 sur la résistance à la chloroquine. - Fig. 4 représente sous forme de graphe l'évolution de l'activité du composé YS 035, en fonction de sa concentration dans une association in vitro de l'YS 035 et de chloroquine, sur une souche de P. falciparum résistante à la chloroquine. - Fig. 5 représente sous forme de graphe l'effet de 1'YS 035, à des concentrations inférieures à toute activité propre, sur la CI50 de la chloroquine d'une souche de P. falciparum chloroquinorésistante. On a soumis le principe actif susdit à des études toxicologiques et à une série de tests pharmacotoxicologiques en le comparant aux médicaments connus portant les dénominations communes internationales Vérapamil, D 600, Nifédipine et Diltiazem. Etudes toxicologiques I - Toxicité aiguë: a) L'YS 035 a été administré, sous forme de chlorhydrate en solution à 1%, par voie intraveineuse chez 40 rats mâles et femelles. Les DL50 étaient les suivantes, 14 jours après une injection unique: - chez le rat mâle: 19,0 mg/kg (16,77-21,52) - chez le rat femelle: 24,4 mg/kg (21,15-28,12) b) chez 60 souris mâles et femelles, l'YS 035 a été administré sous forme de chlorhydrate par voie veineuse. Les DL50 étaient les suivantes, 14 jours après une injection unique: - chez la souris mâle : 36,1 mg/kg (32,7-39,8) - chez la souris femelle: 42,3 mg/kg (39,0-45,9) c) L'YS 035 a été administré per os sous forme de base chez 60 rats mâles et 60 rats femelles.Les DL50 étaient les suivantes, 14 jours après une administration unique: - chez le rat mâle : 217 mg/kg (179,6-264,4) - chez le rat femelle: 313 mg/kg (277,0-354,9) d) Chez 60 souris mâles et 60 souris femelles, 1'YS 035 a été administré par voie orale sous forme de base. Les DL50 étaient les suivantes, 14 jours après une administration unique: - chez la souris mâle : 253 mg/kg (218,0-295,2) - chez la souris femelle: 250 mg/kg (214,8-290,9) II - Toxicité subaiguë: Cette toxicité a été recherchée chez 20 rats mâles SD de souche CD, par voie orale. Ces rats ont reçu par voie orale en 5 jours des doses croissantes d'YS 035 (base), qui correspondaient respectivement à 44-66-99-148 et 220 mg/kg de poids corporel. Les animaux ont été sacrifiés 12 jours après la dernière administration. Il n'y a eu aucune mortalité spontanée. La plus forte dose (soit 222,75 mg/kg) ainsi administrée pendant 5 jours a induit entre 30 et 90 minutes après chaque administration des décharges cloniques et un pseudocoma (décubitus ventral). Aucun effet sur le poids corporel, ni sur la consommation de nourriture et d'eau n'a été observé. 12 jours après le dernier traitement, le nombre des globules touges et blancs et des plaquettes avait augmenté. Biologiquement et histologiquement on n'a pas constaté de modification des fonctions hépatocellulaires, ni de cytolyse. III - Toxicité subchronique (4 semaines d'administration par voie orale 7 jours/7): Cette étude a été réalisée sur 96 rats mâles et rats femelles SD de souche CD, âgés de 5 à 6 semaines et d'un poids moyen de 169 t 1,1 g pour les mâles et de 158 + 1,4 g pour les femelles. Chrez les mâles et les femelles 4 lots ont été constitués par répartition en groupes constitués au hasard: 1 lot témoin et 3 lots recevant respectivement 22,5 - 45 et 90 pour cent de la DL50 précédemment déterminée sur des sujets de même origine et de même sexe. Les résultats étaient les suivants: aucune mortalité; aucune modification du comportement; aucune modification significative du poids corporel; augmentation de la prise de nourriture chez les mâles; pas de modification hématologique; augmentation de la transaminase GP pour les deux sexes à la plus forte dose; altération de la fonction rénale au niveau des tubes contournés à la plus forte dose pour les deux sexes. L'examen histologique chez le mâle a montré l'existence, à la dose la plus forte, d'une dégénerescence graisseuse focalisée du foie, d'une hypertrophie de l'épithélium des cellules des tubes contournés dans un cas et d'une légère hyperchromatophilie des CA3 neurones dans 3 cas, et chez les femelles l'existence, à la dose la plus forte, l'existence d'une picnose des CA3 neurones dans un cas seulement. Il faut noter que les doses actives dans le traitement des atteintes ischémiques cérébrale ou cardiaque ont été dans la même espèce animale respectivement de 3 et 1,5 mg/kg par voie orale. IV. Etude de pharmacocinétique chez le rat: Cette étude a été faite chez le rat à jeun par voie intrapéritonéale (5 groupes de 3 rats, recevant 30 mg/kg d'YS 035 en suspension à 1 % dans de la gomme arabique) et par voie orale (5 groupes de 3 rats recevant 30 mg/kg d1YS 035 en solution à 1 % dans de la gomme arabique). Les sacrifices des animaux ont eu lieu 0,25 0,50 - 1 - 2 et 4 heures après administration I.P. et 0,5 - 1 - 2 - 4 et 8 heures après administration orale, respectivement. Sur un groupe de 3 rats gardés en cage métabolique, l'urine de 24 heures a été collectée et analysée. Par utilisation de techniques de traitement numérique des données (SAAM 27 - 27 paramètres), les cinétiques biexponentielles suivantes ont été obtenues pour l'administration I.P.: X(t) = 1,55e-3t + 0,97e-0,3t, où X est la concentration en Ag/ml et t le temps en heures. La demi-vie était de 2,3 heures. L'aire sous la courbe (ASC) était égale à 3,75 g/ml/h. La clairance totale (dose/ASC) était égale à 8 l/h/kg. X(O) étant égale à 2,52 pLg/ml, le volume de distribution était de 11,9 1/kg. Après administration orale de 30 mg/kg la cinétique plasmatique suivait une équation triexponentielle: X(t) = -8,03e-1,8t + 7,93e-2,0t + 0,1e-0,2t. Le pic plasmatique apparaissait à 30 minutes (0,343 g/ml). La valeur de 1'ASC était égale à 0,920 Ag/ml/h. La biodisponibilité du produit calculée au moyen du rapport ASCperos/ASCIp était égale à 24,5 %. Activité de l'YS 035 sur les mouvements transmembranaires de Ca2+et comDaraison avec Nifédiine et D 600 Il est généralement supposé et admis que les antagonistes du Ca2+ exercent leur action en réduisant l'entrée du Ca2 + à travers la membrane plasmique (Fleckenstein et al., 1972, Arzneim. Forsch. 22:22-33).Le composé YS 035 a donc été testé sur le transport du Ca2+ par différentes cellules. I1 a pu être montré une accumulation en fonction du temps du Ca2+ dans les cellulaires musculaires d'un embryon de poulet en l'absence et en présence du composé YS 035 et une réduction significative de cette accumulation sous l'effet d'une addition de 30 pM d'YS 035 dans le milieu d'incubation (R. Deana et al., Biochem. J., vol. 2:8-1984). Cet effet inhibiteur est observé pour des doses supérieures à 1 clam et est dose-dépendant entre 10 et 30 pM et n'est pas altéré à des concentrations supérieures à 50 D'autres antagonistes du Ca2+, comme la Nifédipine (à 10 RM) et le D 600, se sont avérés produire une inhibition similaire. On considère généralement que les mitochondries possèdent deux systèmes spécifiques différents de libération du Ca2+ respectivement sensibles et insensibles à l'inhibition produite par le Rouge de ruthénium. Il est connu que le Rouge de ruthénium inbibe la captation de Ca2+ par des mitochondries et que l'addition de ce colorant à une suspension de mitochondries provoque une libération de Ca2+ par celles-ci (Moore C.L., 1971, Biochem. Biophys. Res. Comm. 42:298-305; Rossi et al., 1973, Biochem. Biophys. Res. Comm. 50:846-852; Stucki et Inneichen, 1974, Eur. J. Biochem. 48:365-375). Le mécanisme de l'action du Rouge de ruthénium a fait l'objet de recherches de différents laboratoires.La sortie du Ca2+ de la mitochondrie lorsque le Rouge de ruthénium est ajouté pour inhiber la captation active peut être divisée en ses trois origines: a) une perméabilité passive non spécifique due à une atteinte membranaire et sensible à l'albumine et à 1'ADP (Harris et al., 1979, Biochem. J. 182:455-464); b) une modification rapide de Na+/Ca2 + particulièrement dans les tissus excitables (Crompton et al., 1977, Europ. J. Biochem. 79:549-558); c) une modification électroneurale de H+/Ca2+ (Fiskum et Lehninger, 1979, J. Biol. Chem. 254:6236-6239). Quoi qu'il en soit, la fuite du Ca2+ de la mitochnodrie provoquée par le Rouge de ruthénium est le résultat d'un blocage du cycle du Ca2+ à travers la membrane interne. Selon la méthodologie connue de l'homme du métier et décrite dans les publications susdites, on a pu établir que le composé YS 035 inhibe de façon radicale la libération lente de ca2+ induite par le Rouge de ruthénium an niveau des mitochondries cardiaques et de façon partielle la fuite rapide de Ca2+ due à l'addition de NaCl. Cet effet s'est avéré être dose-dépendant pour 1'YS 035. L'inhibition par le composé YS 035 de la libération de Ca2+ dépendante de Na+ est de type noncompétitif avec un Ki apparent de 28 pM. Il n'est pas possible actuellement d'établir si l'inhibition exercée par l'YS 035 à l'égard de la fuite en Ca2+ induite par le Rouge de ruthénium est un effet spécifique sur Ca2+/H+ ou une prévention non-spécifique de l'atteinte de la membrane mitochondriale. L'inhibition spécifique de la fuite en Ca2+ réglée par Na+/Ca2+ semble être pertinente pour les mitochondries cardiaques. La fuite de Ca2+ des mitochondries du foie provoquée par le Rouge de ruthénium est complètement bloquée par le composé YS 035, alors que celui-ci, en l'absence de Rouge de ruthénium, ne provoque aucune fuite de Ca2+. A l'inverse, la Nifédipine est capable par ellemême de provoquer une fuite de ca2+, probablement par effet de découplage. Quant au composé D 600 (autre antagoniste du Ca2+ et dérivé du Vérapamil) il ne provoque à lui seul aucune fuite mitochondriale de Ca2+ et n'exerce aucune inhibition sur l'action du Rouge de ruthénium (Deana et al., Biochem. J., supra). Le même auteur a également établi que le composé YS 035 n'affecte pas la libération mitochondriale de Ca2+ obtenue après addition dans le milieu de suspension des mitochondries de l'agent chélateur EGDTA ou par un découplant (carbonyl-cyanure de p-trifluoro-méthoxyphénylhydrazone) ou un inhibiteur de respiration (Antimycine A). Le composé YS 035 à des concentrations inférieures à 100 pM produit une légère modification des paramètres communs d'évaluation de la fonction mitochondriale, comme l'index respiratoire, le degré de synthèse d'ATP ou le potentiel de membrane. La Nifédipine produit quant à elle dès la concentration de 100 llM une chute de tous ces paramètres, ce qui est en corrélation avec son action de libération de Ca2+ liée à un dommage qui aboutit à un collapsus du potentiel de membrane. Les deux mécanismes qui contribuent à augmenter la concentration cytoplasmique en Ca2+, la captation de Ca2+ et la libération de celui-ci par les mitochondries, étant inhibés par lwYS 035, ce composé peut être considéré comme le type idéal d'antagoniste calcique. Une des propriétés remarquables du composé YS 035 est ainsi d'être un stabilisateur de membrane, par son action aussi bien sur des mécanismes de captation que d'extrusion du Ca2+, en particulier par la mitochondrie. Action de l'YS 035 sur les potentiels d'action lents du muscle Papillaire du cobave L'action de lzYS 035 a été ensuite analysée par des recherches sur les potentiels d'action lents du muscle papillaire isolé du cobaye après dépolarisation, par 27 AM/l de KC1 à approximativement -45 mV. L'augmentation maximale de la pente du potentiel lent, qui peut être utilisé comme une mesure d'entrée lente du courant calcique, restait virtuellement inchangée par l'YS 035 à des concentrations allant jusqu'à 30 cil/1 et une réduction marquée ne s'observait qu'à partir de 100 IlM/l. De plus, l'amplitude des potentiels d'action lents et la contractilité isométrique n'étaient réduits qu'aux plus fortes concentrations. La CE50 pour obtenir la réduction de Vmax a été calculée à une valeur de 1,6 x 10-4 M/l. Par comparaison, les valeurs de CE50 du Diltiazem et de la Nifédipine étaient de 2,0 x 10-6 M/1 et de 2,9 x 10-8 M/1. L'action inhibitrice de l'YS 035 n'est donc discernable qu'à des concentrations relativement fortes, mais est associée à une diminution de la durée du potentiel d'action lent qui est caractéristique des antagonistes du Ca2+. Ce même composé YS 035, à des concentrations de 1 à 10 RM/l, induit une prolongation marquée du potentiel d'action lent, associée à une augmentation de la contractilité isométrique.Le composé YS 035 montre à 100 uM/l une dépendance d'usage, qui ressemble à celle de la Nifédipine, en particulier en ce qui concerne la réduction de Vmax et de la contractilité. Action du composé YS 035 sur les Dotentiels d'action du muscle capillaire du cobave Sur le muscle papillaire à potentiel d'action de repos normal, le composé YS 035 s'est avéré augmenter, jusqu'à une concentration de 100 pM/l la durée du potentiel d'action, respectivement à 30 et 90 % de repolarisat ion. Pour une aumgentation de 30 % environ, les plus fortes valeurs ont été obtenues pour des concentrations de 2 à 10 CLAM. Tout comme pour une réponse lente, comme décrit plus haut, dans ce cas la prolongation du potentiel d'action est associée à une augmentation de la contractilité. L'YS 035 se comporte comme le P bloqueur qu'est le d-sotalol, un antiarythmique de classe III. A partir de 100 ,UM/l et au-delà l'YS 035 réduisait la Vmax à cause de son effet inhibiteur sur le canal sodique. Ces résultats montrent que jusqu'à 30 llM/l 1'YS 035 retarde de façon marquée la dépolarisation qui, à la concentration de 100 M/l, est marquée par un effet inhibiteur sur les canaux calcique et sodique. Action du composé YS 035 sur les Dotentiels d'action de l'oreillette rauche du cobave Pour des concentrations de 1 HM/l et audessus,l'YS 035 s'est avéré prolonger le potentiel d'action atrial. A la concentration de 10 M/l les durées des potentiels d'action respectivement à 30 et 90 % de repolarisation étaient augmentées d'environ 50 % et la contractilité s'est accrue parallèlement. A 100 AM/l les variations de la durée des potentiels d'action respectivement à 30 et 90 % de repolarisation s'est accrue de 274 et 235 % respectivement, par rapport aux valeurs témoins, mais en revanche la contractilité était abaissée à sa valeur de base. Action du composé YS 035 sur les potentiels d'action du muscle capillaire du cobaye, Dartiellement déPolarisé Sur le muscle papillaire dépolarisé à -72,6 mV en présence de 9 M/l de KCl, l'YS 035 exerce un effet inhibiteur sur le canal sodique, débutant à 1 M et atteignant 42,8 % des valeurs témoins à la concentration de 100 AM/l. On a pu établir que le délai de repolarisation atteint son pic à 10 AM/l, même avec une réduction du potentiel de membrane de repos. L'inhibition de flux sodique a été augmentée par la dépolarisation. L'action de l'YS 035 sur les potentiels d'action devenait plus forte à 10 pM/l et plus faible à 100 pM/l. Action du composé YS 035 sur les courants ioniques des fibres de Purkinde chez le mouton Cette action a été recherchée à l'aide d'un programme clamps. Des courbes de voltage ont été tracées, à l'état stable, chez des contrôles et en présence de 100 pM/l d'YS 035 (voir Fig. 1). La figure 1 annexée représente de telles courbes, le voltage étant porté en abscisses en mV, tandis que l'intensité ikl est portée en ordonnées en nA. L'intersection des courbes de voltage chez les contrôles et en présence d'YS 035 à -80 mV suggère que le composé YS 035 inhibe le courant ikl et réduit le courant externe (iout) mesuré dans des conditions stables. L'YS 035 réduit principalement les composants instantanés des potentiels étudiés de -5 à +45 mV.Cette inhibition est due aux ions potassium, ce qui explique le retard à la repolarisation. Le composé YS 035 s'est ainsi avéré être un inhibiteur puissant du courant potassique externe dans les préparations cardiaques, le courant instantané étant d'abord affecté. Cet effet débute à la concentration d'environ 1 AM/l et retarde la repolarisation. Cela correspond à la prolongation de la durée des potentiels d'action de l'oreillette gauche, du muscle papillaire et des fibres de Purkinje. Les effets de ce composé sur les canaux sodiques et calciques ne s'observent qu'à des concentrations égales ou supérieures à 100 AM/ l . L'inhibition du canal sodique peut également ête accrue par une augmentation de la vitesse d'impulsion ou une dépolarisation des membranes cellulaires. En ce qui concerne sa comparaison avec le Vérapamil et la Nifédipine, on doit souligner que lgYS 035 présente un effet antagoniste calcique extrêmement faible par comparaison aussi bien à celui du Vérapamil qu'à celui de la Nifédipine. Au mieux, ltYS 035, qui est un dérivé du Vérapamil, devait être considéré comme doté de propriétés anticalciques non négligeables en raison de ses faibles effets secondaires. De plus, le Vérapamil est un antiarythmique de classe IV déprimant la conduction auriculo-ventriculaire, alors que le composé YS 035 est un antiarythmique de classe III, répondant à cet égard au mécanisme d'action de la myodarone. Ce même mécanisme est mis en oeuvre avec un neuroleptique, comme par exemple la Melpérone ou la Trifluoropérazine. En ce qui concerne le composé YS 035, ce n'est donc pas la propriété anticalcique comme avec le Vérapamil qui est la propriété concernée dans l'effet thérapeutique recherché, mais l'effet membranaire Ca2+/Na+ dépendant et surtout K+ dépendant. Phénomène de résistance multiple aux drogues et activité de l'YS 035 En 1989, T.J. Lampidis et al., J. Cell. Pharmacol. 16-22, ont montré que le muscle cardiaque, un certain nombre de cellules cancéreuses et les cellules de la leucémie de Friend pouvaient accumuler des quantités relativement importantes d'anthracyclines et de colorants de charge positive. L'accumulation intracellulaire de ces composés à charge positive était corrélée avec l'existence de potentiels électronégatifs élevés de la membrane plasmique trouvés dans ces cellules et avec une réduction du taux de P-glycoprotéine. A l'inverse, pour une résistance multiple aux drogues (RMD) on doit trouver une moindre accumulation de composés à charge positive et des potentiels de membrane plus bas. Cela tend à montrer que la charge chimique joue un rôle important dans la sélection des fibres cardiaques intrinsèquement sensibles, des cellules cancéreuses, des cellules leucémiques de Friend et leur RMD intrinsèque ou acquise. T.J. Lampidis et al. ont été amenés à postuler que l'Adriamycine peut s'accumuler aussi bien dans les cellules cancéreuses à haut potentiel de membrane, comme le sont les cellules du muscle cardiaque.En d'autres termes, ils ont défini l'importance de la relation existant entre des potentiels de membrane électronégatifs et l'augmentation de l'attraction, puis de l'accumulation de composés à charge électrique positive dans des cellules sensibles et par comparaison dans des cellules présentant une RMD par le fait qu'elles acquéraient une résistance à l'Adriamycine. L'action du Vérapamil à cet égard est de restreindre l'efflux par modification de la perméabilité membranaire. Dans une publication (Proceedings of the American Association for Cancer Research, 1990, vol. 31:373, In vitro cardiac potencies of multidrug resistance modulators, T.J. Lampidis, D. Kolanias, H. Tapiero, J.N. Savaraj et J. Cahn ont relaté que, en utilisant un système vidéo décrit par T.J. Lampidis et al. (1989, J. of Cell. Pharmacol. 16-22) et en prenant comme substances de référence le Vérapamil (Vpl) et un neuroleptique, inhibiteur de Calmoduline, la Trifluopérazine (TFP) capable de réverser la RMD dans les cellules de la leucémie de Friend, avec étude de leur action sur la contractilité spontanée des myocytes en culture, ils obtenaient les résultats suivants en recherchant l'action comparée de l'YS 035:: - la dose d'YS 035 nécessaire (50.000 ng/ml) pour arrêter les battements des myocytes était 200 fois plus élevée que celle du Vpl (250 ng/ml) et 10 fois plus élevée que celle du TFP; - un effet chronotrope positif était toujours observé à 10 ng/ml d'YS 035, tandis qu'avec des doses aussi élevées que 20.000 ng/ml en traitement continu les battements des myocytes étaient toujours observés 24 heures plus tard; - la dose produisant un effet détectable sur la fonction cardiaque myocytaire était respectivement de 5 ng/ml pour le Vpl et de 750 ng/ml pour la TFP et celle nécessaire pour arrêter la contraction des myocytes était respectivement de 250 ng/ml pour le Vpl et de 5000 ng/ml pour la TFP. Cela montre clairement les différences fondamentales entre les composés ainsi comparés. A cet égard, il faut souligner que la méthode développée par T.J. Lampidis et al. était uniquement une méthode de triage, permettant seulement d'analyser comparativement des composés chimiques par une méthode in vitro n'autorisant pas à faire de différence significative entre - le Vérapamil qui est un antagoniste calcique puissant, antiarythmique de classe IV de toxicité certaine, - la Trifluopérazine, qui est un neuroleptique dont une propriété est un effet antiarythmique de classe III, comme la Melpérone, mais ayant une toxicité manifeste, et - le composé YS 035, faiblement anticalcique, pratiquement dépourvu de cytotoxicité, mais qui est en réalité un antiarythmique de classe III. On a pu établir selon la présente invention que le composé YS 035 est au contraire particulièrement intéressant, car il s'est avéré: être doté d'un effet membranaire s'exerçant principalement sur le canal potassique, être de type antiarythmique de classe III, et exercer un effet cardiaque inotrope positif. Un tel composé possède l'activité membranaire capable de modifier la perméabilité de membrane, d'augmenter les potentiels de membrane lorsqu'ils sont déprimés, et ce de façon remarquable sans qu'il apparaisse de cytotoxicité. Utilisations théraseutiaues de la réversion de la RMD Cette réversion présente un intérêt tout particulier dans deux domaines de la pathologie humaine, le paludisme et le cancer. Elle avait été pratiquement abandonnée en ce qui concerne les tentatives de lutte contre le paludisme, car les produits utilisés (Vérapamil, Imipramine et Cyprohéptadine) ont tous démontré la possibilité d'une réversion de la chloroquino-résistance, mais à des concentrations toxiques in vitro ou à des doses induisant des effets toxiques in vivo. Il en était de même pour la réversion de la résistance à des substances anti-cancéreuses. Il n'existait donc actuellement aucun moyen disponible apte à exercer dans ces types de pathologie hmmaine une réversion de la résistance aux médicaments sans effets secondaires cliniquement toxiques. Action de l'YS 035 sur la résistance multiple aux drogues en cancérologie Des essais appropriés utilisant les techniques publiées par H. Tapiero et al. (Molecular Basis for Selectivity and Effects of Anthracyclines in Drug Resistance Mechanisms and Reversal, Enrico Mihich éd., John Libbey - CIC Publishers, 19-21 juin 1989, pages 233243) ont permis de vérifier des études de survie cellulaire avec la Doxorubicine (ci-après en abrégé Dox) à l'égard d'une souche cellulaire de la leucémie myélogène humaine, et de mesurer la concentration intracellulaire de Dox comparativement aux potentiels de membrane pour des cellules normales et des cellules présentant une résistance multiple. Selon ces auteurs, un certain nombre de produits anticancéreux dérivés des anthracyclines dont fait partie la Doxorubicine, comme par exemple la Pirarubicine, la Fluoro-Doxorubicine, la MEJ 2303 et son métabolite Ml, la Morpholino-anthracyc 1 ine et lAclarubicine, qui répondent aux forailes ci-après, présentent à l'égard des cellules de la leucémie myélogène humaine susdites un comportement différent selon que ces cellules sont insensibles ou sensibles à la Doxorubicine (voir Tableau 1 ci-dessous). DOXORUBICINE (DOX) PIRARUBICINE (THP-DOX) FLUORO-DOXORUBICINE (MEJ 2303) MEJ 2303-M1 MORPHOLINO-ANTHRACYCLINE (KRN 8602) ACLARUBICINE (ACR) Tableau 1 : Accumulation d'anthracyclines dans les cellules de la leucémie myélogène humaine respectivement sensibles et résistantes à la Doxorubicine. Cellules sensibles Cellules/DOX Exposition [min] Exposition [min] 15 30 60 120 15 30 60 120 M M DOX 2,5 24,6 1,5 20,7 1,24 20,9 1,19 23,6 52 274 Pirarubicine 0,9 59,1 40 2754 0,9 47,6 12 630 0,9 47,6 3,7 146 0,6 43,2 3,4 81 MEJ 2303 4,1 11[9]* 33 45[17]* 3,8 11[13]* 28 53[32]* 3,5 15[17]* 22 63[631* 3,2 14[30]* 8,5 21[58]* ME 2303-M1 1,2 41,5 9,1 299 1,2 50,0 4,7 184 0,9 68,6 3,1 167 0,9 75,0 1,5 63 KRN 8602 3,5 240,9 4,0 322 2,2 163,3 2,9 246 1,5 72,2 1,5 121 1,2 49,5 1,2 98 Les cellules ont été exposées pendant la durée et à la concentration en drogue nécessaires pour induire une CI50. Elles ont ensuite été lavées, la drogue a été extraite avec du DMSO et analysée par HPLC. []*: Métabolisation intracellulaire de MEJ 2303 en M1. Cela confirme un fait bien connu du cancérologue qui prescrit des composés du groupe des anthracyclines comme agents anticancéreux, à savoir que le premier traitement déclenche un phénomène de RMD et qu'ainsi l'utilisation d'un autre produit de même origine peut se traduire par une nette toxicité cardiaque, résultant aussi de l'augmentation nécessaire de la posologie pour que l'effet anticancéreux se maintienne. Par ailleurs, les effets d'antiarythmie de classe III démontrés avec lWYS 035 sont à la base de la présente invention, alors que T. Lampidis et al. (Association for Cancer Research, vol. 31, p. 373, 1990) avaient mis sur le même plan le Vérapamil (un antiarythmique de classe IV, qui est un antagoniste calcique), la Trifluopérazine (un neuroleptique) et l2YS 035 (considéré comme dérivé du Vérapamil). Ces auteurs n'avaient pu expliquer, sur la base des connaissances de l'époque, l'activité différente de 1'YS 035, qui maintient à une concentration de 200 ng/ml, ou même de 20.000 ng/ml pendant 24 h en continu, ses effets sur les battements myocytaires pendant 24 heures sans toxicité, alors qu'on ne peut dépasser 5 ng/ml avec le Vérapamil, en raison de ses effets chronotrope et inotrope négatifs. Bien que l'on ne souhaite pas être lié par une quelconque théorie, on pense que c'est parce que lWYS 035 est un antiarythmique de classe III agissant sur les potentiels de membrane et les canaux potassiques qu'il exerce une action inotrope positive. L'invention concerne donc également une composition pharmaceutique comportant une combinaison avec un agent anticancéreux d'origine anthracyclinique d'un composé de formule I, ou de ses sels d'addition avec des acides pharmaceutiques acceptables, avec un agent anticancéreux d'origine anthracyclinique, dans des proportions que l'home du métier est à même de définir à convenance dans chaque cas d'espèce, utile pour inhiber ou éviter l'instauration d'une résistance multiple aux drogues et la toxicité cardiaque induite. Action de l'YS 035 sur la réversion de la résistance à la Doxorubicine Des essais appropriés ont été conduits pour rechercher la dose nécessaire pour que soit obtenu l'effet maximum de réversion de la RMD. Pour la doxorubicine (Dox) 20 Ag/ml d'YS 035 étaient nécessaires, contre 10 Ag/ml de Vpl et 1 Ag/ml de TFP. Au surplus, cette dose de 20 Rg/ml d'YS 035 réduisait de 40 fois la résistance à la Dox,alors que la dose de 10 Hg/ml de Vpl présentait l'inconvénient majeur de constituer le 1/40e de la dose capable d'arrêter le coeur, tandis que la TFP ne réduisait que de 4 fois la résistance à la Dox. Les résultats obtenus sont d'autant plus importants que la Doxorubicine est le prototype des agents anticancéreux qui sont du type anthracycline, capables de générer une RMD et de provoquer des troubles cardiaques, tout comme l'aclarubicine, l'épirubicine, la zorubicine, la pirarubicine et l'idarubicine à titre d'exemples. On peut estimer que l'efficacité et par conséquent l'intérêt du composé YS 035 et de ses équivalents, en particulier pour la réversion de la résistance multiple aux drogues in vivo à l'égard des produits anti-cancéreux, ont pour bases essentielles le faible niveau des effets secondaires cardiaques et une activité de modulateur de RMD très marquée. Action de l'YS 035 comme réverseur de la chimio-résistance de Plasmodium falciDarum à la chloroauine On a utilisé du sulfate de chloroquine, commercialisé par le Laboratoire Specia, ayant une masse moléculaire de 418 et appartenant à la classe des amino-4quinoléines. L'YS 035, quant à lui, est un dérivé de synthèse de la classe du Vérapamil. Sa formule chimique est C21H29NO4, correspondant à la N,N-bis-(3,4-diméthoxyphénéthyl)-N-méthylamine, de masse moléculaire 359,442. L'YS 035 est un inhibiteur faible de la pompe calcique, qui a été testé sur plusieurs types cellulaires. Les souches plasmodiales testées étaient des souches de P. falciparum, adaptées en culture in vitro continue et provenant de patients impaludés, pris en charge dans le Département des Maladies Infectieuses, Parasitaires, Tropicales et de Santé Publique du Groupe Hospitalier de la Pitié-Salpêtrière. Une souche, isolée en 1988 d'un patient ayant contracté le paludisme au Niger est restée sensible aux quatre antipaludiques que sont la chloroquine, la quinine, la Méfloquine et l'Halofantrine (P. Mirovsky et al., Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg., 84:511-515, 1989). Une autre souche, isolée en 1989 d'un patient souffrant d'un accès palustre à son retour du Bénin a été adaptée et maintenue en culture au laboratoire. La souche concernée était résistante à la chloroquine et sensible à la quinine, à la Méfloquine et la l'Halofantrine. Elle a conservé ce profil de façon stable depuis lors. Réverseurs de la chloroouino-résistance Après l'apparition de la résistance à la chloroquine (agent antipaludique le plus utilisé) dans les années 1960, plusieurs stratégies ont été adoptées pour contourner ce problème. Une souche chloroquino-résistante se caractérise par l'augmentation de l'afflux de la chloroquine hors du parasite résistant, ainsi que par la réversibilité de ce phénomène sous l'action de certaines molécules. C'est ainsi qu'ont été largement étudiées sur différentes souches de Plasmodium falciparum les propriétés synergiques des bloqueurs de la pompe calcique (principalement le Vérapamil) (Martin, S.K., Oduola, A.M.J. et Milhous, W.K., 1987, Reversion de la chloroquino-résistance dans Plasmodium falciparum par le Vérapamil, Science 235:889901), des antidépresseurs tricycliques (Imipramine) et des antihistaminiques (Cyproheptadine) (Bitonti, A.J., Sjoerdsma, A., McCann, P.D. et al., 1988, Réversion de la chloroquino-résistance chez P. falciparum par la desipramine, Science 242:1301-1303;Peters, W., Ekong, R, Robinson, B.L., Warhurst, D.C. et Pan X-Q, 1989, Drogues antihistaminiques réversant la chloroquinorésistance dans P. falciparum, Lancet II:334-335). L'application in vivo de ces propositions a montré que toutes ces substances ne seraient actives chez l'animal, y compris l'homme, qu'à des concentrations toxiques. Il en était résulté que les travaux sur les réverseurs de la chloroquino-résistance avaient été pratiquement abandonnés. On a alors trouvé de manière inattendue, comme exposé plus haut, que le composé YS 035 et tout équivalent fonctionnel de celui-ci, tel que par exemple un composé répondant à la définition d'activité indiquée plus haut en référence à l'objet de la présente invention, constitue un principe actif ou agent thérapeutique au contraire exceptionnellement efficace. Méthodes Test de chimiosensibilité in vitro Dans cette étude on a utilisé le microtest isotopique décrit par R.E. Desjardins et al., Antimicrob. Agents Chemother., 16:710-718, 1979. Ce microtest isotopique, qui est une application majeure du procédé de culture in vitro de P. falciparum mis au point par W. Trager et J.B. Jensen, Sciences, 193:673-675, 1976. I1 est fondé sur l'incorporation par les parasites de l'hypoxanthine marquée au tritium en présence de concentrations croissantes d'agents antipaludiques dans des plaques de microtitrage de 96 puits. Après 48 heures d'incubation dans une cloche à CO2 la culture a été stoppée. La radioactivité a ensuite été mesurée à l'aide d'un compteur de rayonnement bêta à scintillation liquide (modèle Beckman LS 1701). La représentation du nombre d'impulsions par minute en fonction de la concentration de l'agent antipaludique a abouti à une courbe sigmoïde. La concentration inhibant de moitié la croissance parasitaire (CIso) a été calculée par extrapolation sur la portion linéaire de cette courbe. Détermination de l'activité antipaludique propre à l'YS 035: Plusieurs gammes de concentrations de l'YS 035 ont été utilisées en présence des deux souches de P. falciparum mentionnées plus haut et testées selon la méthode isotopique précédemment décrite. Les résultats représentés sur la Fig. (2) donnent le pourcentage d'inhibition parasitaire en fonction de la concentration de 1'vs035. Cette étude a révélé une activité antipaludique propre de l'YS 035 à partir de 600 ng/ml. Une inhibition de 40 % de la croissance parasitaire a été obtenue avec une concentration en YS 035 de 4000 ng/ml (voir Fig. 2). Une réversion significative de la résistance in vitro à la chloroquine a été obtenue précisément à partir d'une concentration de 4000 ng/ml de lgYS 035, qui est comme on vient de le voir la concentration du même composé entraînant une inhibition de 40 % de la croissance parasitaire (voir Fig. 3). Egalement, lorsque le composé YS 035 est ajouté in vitro à de la chloroquine pour l'étude de ses effets sur une souche de P. falciparum résistante à la chloroquine (Fig. 4), on observe que la concentration inhibitrice 50 (CI50, en nmol/l) du composé YS 035 est de l'ordre de 3 g/ml. De plus, l'examen de la Fig. 5 montre l'effet de 1'YS 035, à des concentrations (en g/ml) inférieures à toute activité propre, sur la CI50 (en nmol/l) de la chloroquine d'une souche de P. falciparum chloroquinorésistante. Il apparaît vraisemblable que l'YS 035 possède une activité antipaludique propre pour une concentration inférieure à 1 pg/ml. Détermination de l'activité de lYS 035 en association avec la chloroauine Les souches susdites ont été mises en présence de concentrations croissantes de chloroquine. On a ensuite ajouté des concentrations fixes d'YS 035. Les résultats obtenus montrent un abaissement considérable de la CI50 de la chloroquine dans les divers cas étudiés. REVENDICATIONS 1. Composition pharmaceutique utile pour l'inhibition, ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace d'au moins un principe actif ou agent thérapeutique apte à agir sur les potentiels de membrane liés aux mouvements de Ca2+/Na+ transmembranaires et ceux liés au courant potassique en inhibant le canal potassique membranaire et le canal sodique membranaire, avec ou sans action parallèle sur le canal calcique membranaire, ledit agent thérapeutique étant en outre un agent antiarythmique de classe III et possédant un effet inotrope positif. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent thérapeutique est un composé antiarythmique de classe III à action inotrope positive. 3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit principe actif ou agent thérapeutique comprend au moins un composé choisi parmi les bis-phénéthylamines, notamment de la N-méthyl-Nbis(3,4-diméthoxyphényléthyl)amine de formule générale I ou ses sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle comprend une combinaison dudit principe actif ou agent thérapeutique et d'un agent anticancéreux de type anthracycline. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle est sous une forme administrable par voie orale et comporte par dose unitaire de 120 à 240 mg d'au moins un principe actif ou agent thérapeutique tel que défini plus haut. 6. Utilisation d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour l'obtention d'un médicament destiné à l'inhibition et/ou au taitement de la résistance multiple aux drogues. 7. Utilisation selon la revendication 6 pour l'obtention d'un médicament destiné à la réversion de la chimiorésistance de Plasmodium falciparum à la chloroquine. 8. Utilisation selon la revendication 6 pour l'obtention d'un médicament destiné à la réversion de la résistance multiple aux drogues en cancérologie. 9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que ladite composition thérapeutique comprend en outre un agent anticancéreux de type anthracycline.