Brevet FR2734280A1 — publié le 19961122

Récipient pour la culture de végétaux La présente invention concerne un récipient de culture pour la culture de tissus végétaux et elle est particulièrement utile pour la régénération in vitro et la multiplication en série de plantules. On sait actuellement utiliser des milieux de culture, aussi bien solides que liquides, pour une telle régénération in vitro et pour la multiplication en série de plantules. Toutefois, on a constaté que l'utilisation d'un milieu de culture liquide dans des processus conventionnels de régéné- ration in vitro de plantules est plus efficace, car elle facilite une plus grande absorption d'oxygène et de substan- ces nutritives par les cellules et les tissus, ce qui améliore les taux de production. On a constaté également que les récipients de culture connus dans ce domaine conviennent normalement davantage à l'utilisation avec un milieu de culture solide, car ils présentent certaines limitations intrinsèques dans leur structure pour permettre d'utiliser avantageusement un milieu de culture liquide. Pour la culture de tissus végétaux avec un milieu de culture liquide, il est essentiel que, pendant la culture, le tissu végétal soit à l'abri de toute contamination, soit en provenance de l'atmos- phère, soit résultant d'une manipulation incorrecte du tissu pendant les diverses étapes de la culture. En outre, dans l'utilisation d'un milieu de culture liquide, il est néces- saire de surveiller périodiquement le milieu de culture pour assurer une quantité appropriée de ce milieu liquide pour faciliter l'absorption correcte du milieu par le tissu en vue de sa culture. En outre, pour assurer un bon déroulement des diverses étapes de la culture du tissu, il est nécessaire de passer d'une formulation à une autre pendant le processus de culture. Pendant le changement des milieux de culture liquides, il est nécessaire que le tissu ne soit pas sujet à contamination. Les récipients de culture conventionnels actuellement utilisés dans ce domaine ne conviennent pas pour une culture de tissus végétaux utilisant un milieu de culture liquide. Un but de la présente invention est de procurer un récipient de culture pour une culture de tissus végétaux, que l'on peut avantageusement utiliser pour effectuer les différentes étapes de la culture de tissus végétaux avec un milieu de culture liquide en changeant le milieu dans le même récipient et en réduisant ainsi les risques de contamination. Selon la présente invention, il est procuré un récipient de culture comprenant: un récipient transparent ayant un couvercle monté de façon amovible; au moins un tube latéral ayant un capuchon monté de façon amovible et en communication avec la partie inférieure dudit récipient par au moins un passage; ledit tube latéral étant disposé en étant incliné par rapport à la paroi dudit récipient; au moins un flotteur disposé à l'intérieur de ce récipient et ayant un film support poreux pour supporter le tissu aux fins de culture. Le récipient de culture de la présente invention permet une culture de tissus sans soumettre ceux-ci à contamination. Le couvercle amovible du récipient empêche l'introduction de contaminants à l'intérieur du récipient pendant la culture. En outre, le tube latéral permet de surveiller les change- ments de milieux de culture liquides et/ou de maintenir un niveau prédéterminé particulier du milieu liquide dans le récipient et en introduisant ce milieu de culture liquide dans le récipient et en en retirant selon les besoins. La nécessité de transférer le tissu d'un récipient à un autre pour le soumettre aux différentes étapes de culture s'effec- tue également dans le même récipient en introduisant le milieu liquide approprié par le tube latéral dans le réci- pient pour chaque étape de culture. Le tube latéral est également équipé d'un capuchon amovible au niveau de son extrémité ouverte pour empêcher l'introduction de tout contaminant à l'intérieur du récipient à travers le tube. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la descrip- tion détaillée suivante, en liaison avec le dessin joint, sur lequel: - la figure 1 est une représentation schématique du récipient de culture selon la présente invention, montrant le récipient équipé de son couvercle et contenant le flotteur avec le film support poreux supporté à l'intérieur du flotteur; - la figure 2 est une vue en coupe du flotteur, montrant la collerette au voisinage de son extrémité inférieure pour supporter le film poreux; et - la figure 3 est une autre vue en coupe du récipient de culture complet prise selon la ligne A-A' de la figure 1, avec le couvercle monté sur le récipient. On se reporte maintenant à la figure 1, sur laquelle on voit un récipient de culture V comprenant un récipient CO qui peut être cylindrique ou avoir toute autre forme, et qui a un couvercle à vis Ca. Le récipient CO est équipé d'un tube latéral ST incliné par rapport à la paroi latérale WS du récipient CO. Un capuchon Cp est monté de façon amovible sur le tube latéral ST. Comme on le voit sur la figure 3, le capuchon Cp a une membrane faite dans tout matériau élastique ou perforable approprié de façon à pouvoir introduire ou retirer l'aiguille d'une seringue. Le tube latéral ST communique avec l'intérieur du récipient CO à travers des passages 01 et 02 prévus dans la paroi latérale WS. Les passages O1 et 02 sont disposés en étant espacés l'un de l'autre de telle sorte que le passage 01 permet d'introduire ou d'ajouter le milieu de culture dans le récipient CO ou d'en retirer sans enlever le couvercle Ca. Le passage 02 est disposé à une certaine hauteur au-dessus du passage 01 et supprime le vide à l'intérieur du tube latéral ST. Le récipient CO a un flotteur F qui peut également être cylin- drique ou avoir toute autre forme. La forme du récipient CO et celle du flotteur F n'ont pas d'importance. Le flotteur F a un film poreux PS. Dans une réalisation, le flotteur F a une collerette s'étendant radialement vers l'intérieur FL, comme on le voit sur la figure 2, laquelle collerette tient le film poreux PS. En variante, comme on le voit sur la figure 3, la collerette FL supporte le film poreux PS. Le tissu est placé sur le film poreux PS, qui permet en même temps l'absorption par le tissu de la substance nutritive dans le milieu liquide. Ainsi, le tissu à cultiver est placé sur le film poreux PS et le flotteur F est ensuite introduit à travers l'extrémité ouverte du récipient CO. Ensuite, le couvercle Ca ferme le récipient CO de façon à procurer au tissu une atmosphère dépourvue de contaminants. Le montage du couvercle Ca sur le récipient CO peut s'effectuer, soit au moyen de filets qui peuvent être continus ou discontinus, soit par montage à ajustage serré du couvercle Ca sur le récipient CO. Le milieu liquide exigé pour la culture des tissus est amené dans le récipient CO par le tube latéral ST et le passage O1. Dès que le milieu liquide occupe le récipient CO sous le flotteur F, ce dernier s'élève et flotte sur le milieu liquide. Le niveau du milieu liquide est maintenu à une limite supérieure maximale inférieure à la hauteur du deuxième passage 02. La transparence du récipient CO et du tube latéral ST facilite en outre la surveillance constante du niveau du milieu liquide dans le récipient CO Pendant la culture du tissu, le milieu liquide est absorbé par le tissu et, du fait d'une telle absorption du milieu liquide, le niveau du liquide descend. Une telle descente du niveau du milieu liquide dans le récipient CO est notée et le niveau est maintenu en introduisant un milieu liquide frais à travers le tube latéral ST. De même, pour effectuer les diverses étapes du processus de culture, s'il est essentiel de changer le milieu liquide, on peut effectivement utiliser le tube latéral ST pour évacuer le milieu liquide et/ou introduire le milieu liquide nécessaire pour la croissance du tissu végétal. Le tube latéral ST est équipé d'un capuchon monté de façon amovible Cp. Le capuchon Cp selon une réalisa- tion préférée a une membrane M en caoutchouc ou en tout matériau perforable pour faciliter l'évacuation du milieu de culture du récipient CO ou l'introduction d'un milieu de culture dans ce récipient CO à travers le tube latéral ST. Le capuchon amovible Cp peut être raccordé par filetage au tube latéral ou il peut être monté à ajustage serré sur l'extré- mité supérieure du tube latéral. Une fois le tissu supporté sur le film PS, et afin de maintenir une atmosphère dépourvue de contaminants à l'intérieur du récipient CO, l'introduc- tion, le réapprovisionnement ou l'enlèvement du milieu de culture s'effectue en perforant la membrane M avec l'aiguille d'une seringue. Comme on le voit sur les figures 2 et 3, le flotteur F comprend une paroi intérieure F1, espacée de la paroi extérieure F2 de façon à donner au flotteur F la résistance mécanique nécessaire. Le montage du couvercle Ca et du capuchon Cp peut se faire par des filetages continus et/ou discontinus pour empêcher l'entrée de contaminants dans le récipient de culture CO. De préférence, le couvercle Ca présente une surface inférieure inclinée radialement vers l'intérieur et vers le bas, comme on le voit sur la figure 3. Cette surface inclinée empêche toute contamination résultant de gouttelettes de condensation retenues le long du joint entre la paroi et le couvercle et/ou s'égouttant le long de la paroi du récipient. Il va sans dire que le récipient de culture et son tube latéral selon l'invention, lesquels sont représentés cylin- driques sur les figures jointes des réalisations préférées, peuvent avoir toute autre forme, et être triangulaires, circulaires, carrés, rectangulaires, ovales et polygonaux. Par ailleurs, la forme du flotteur et sa structure support perforée PS peuvent également varier en fonction de la forme du récipient. Le récipient et son tube latéral peuvent être choisis en tout matériau pouvant passer à l'autoclave et être stérilisés, transparents, semitransparents, composites métalliques non sujets à corrosion/non métalliques, tels que verre, matériaux polymères et acier inoxydable. Le flotteur peut avoir des parois latérales, soit pleines, soit creuses, et peut être obtenu en un matériau composite métallique/non métallique non sujet à corrosion, tel qu'acier inoxydable et matériau polymère. La structure support centrale peut être perforée, poreuse, moulée tissée et peut être choisie en tout matériau composite métallique/non métallique non sujet à corrosion, tel que laine de verre, matériau polymère ou acier inoxydable. La structure support peut être d'un seul tenant avec la matrice du flotteur ou peut être une structure indépendante adaptée pour être supportée sur la collerette s'étendant radialement vers l'intérieur du flotteur et/ou tout élément analogue prévu dans le flotteur pour le même but. Il est en outre possible d'effectuer des modifications évidentes du récipient de culture de l'invention décrit ci- dessus et la portée de l'invention doit être déterminée en conservant à l'esprit la possibilité de telles modifications évidentes de la description selon l'invention. On doit noter à cet égard que le récipient de culture de l'invention peut avoir plus d'un tube latéral au lieu du seul tube latéral décrit et représenté. Revendications 1. Récipient de culture (V), caractérisé en ce qu'il comprend: un récipient transparent (CO) ayant un couvercle (Ca) monté de façon amovible; au moins un tube latéral (ST) ayant un capuchon monté de façon amovible (Cp) et communiquant avec la partie inférieure du récipient par au moins un passage (O1); et un film support poreux (PS) pour supporter le tissu à cultiver. 2. Récipient de culture selon la revendication 1, caracté- risé en ce que la paroi latérale (WS) dudit récipient a une première ouverture (01), une deuxième ouverture (02) espacée de la première ouverture et à une certaine hauteur au-dessus de celle-ci, lesdites ouvertures (01, 02) communiquant avec le tube latéral (ST). 3. Récipient de culture selon la revendication 1, caracté- risé en ce que le flotteur (F) a une collerette s'étendant radialement vers l'intérieur (FL) coopérant avec le film support poreux (PS). 4. Récipient de culture selon la revendication 3, caracté- risé en ce que ledit film support (PS) est supporté sur ladite collerette (FL). 5. Récipient de culture selon la revendication 3, caracté- risé en ce que ledit film support est tenu sur ladite collerette. 6. Récipient de culture selon la revendication 1, caracté- risé en ce que ledit flotteur (F) comprend une paroi inté- rieure (F1) et une paroi extérieure (F2), ladite paroi intérieure étant espacée de ladite paroi extérieure. 7. Récipient de culture selon la revendication 1, caracté- risé en ce que le capuchon (Cp) du tube latéral a une membrane (M). 8. Récipient de culture selon la revendication 1, caracté- risé en ce que le couvercle (Ca) du récipient a une surface inclinée intérieurement vers le bas (SL).