Brevet FR2729076A1 — publié le 19960712

La présente invention concerne une composition & usage topique, comprenant de manière générale une phase bio-compatible avec les parties superficielles du corps humain, dans laquelle est distribué ou réparti de manière homogène un agent nutritionnel desdites parties superficielles. Plus précisément, l'invention a pour objet une composition à usage topique, permettant de créer un environnement extra-cellulaire parfaitement adapté à l'épiderme. De manière générale, conformément à l'invention l'agent nutritionnel consiste en un milieu nutritif complexe, comprenant des composés à la fois biocompatibles, biomimétiques et biodisponibles au niveau cutané, à l'exclusion de tout extrait biologique d'origine animale, tel que sérum de veau foetal. Et le milieu nutritif complexe retenu selon l'invention a une composition adaptée pour permettre, en dehors de la phase dans laquelle ledit milieu est distribué, une culture in vitro viable d'un inoculum de kératinocyte épidermique humain avec au moins une prolifération clonale de ces derniers au premier passage. Par "biocompatible", on entend la propriété selon laquelle le composé présente une innocuité au niveau cutané. Par "biomimétique", on entend le fait que le composé est présent à l'état naturel dans la peau. Par "biodisponible", on entend la propriété selon laquelle le composé est assimilable par les kératinocytes épidermiques humains, aussi bien in vitro qu'in vivo. Par des essais de routine, l'homme de métier est à même de formuler un milieu nutritif complexe selon l'invention, en procédant en particulier avec ledit milieu à des cultures in vitro de kératinocytes, dont la croissance peut être observée, par exemple au microscope. A cet égard, les documents suivants ont déj décrits des milieux adaptés à des cultures in vitro de kératinocytes, dont la viabilité et la croissance peuvent être objectivées par les tests actuellement en vigueur, et être directement appréciées par observation sous microscope - Boyce ST, Ham RG, Calcium-regulated differentiation of normal human epidermal keratinocytes in defined clonal culture and serum-free serial culture, J. Invest. Dermatol. 1983; 81: 33S-40S - Boyce ST, Ham RG, Cultivation, frozen storage, and clonal growth of normal human epiderial keratinocytesin serum-free media, J. Tissue Culture Methods. 1985; 9: 83-93. En tant que de besoin, le contenu de ces publications est incorporé à la présente description. Le milieu nutritif complexe selon l'invention comprend des acides aminés, une ou plusieurs vitamines, un ou plusieurs facteurs de croissance cellulaire, et un ou plusieurs sels minéraux. L'ensemble des composés présents dans le milieu nutritif selon l'invention étant hydrosolubles, deux voies de formulation peuvent être mises en oeuvre 1) Phase continue aqueuse, contenant le milieu nutritif selon l'invention - sous forme de gel aqueux, à l'aide d'un polymere hydrosoluble non ionique du type polysaccharide ou éther de cellulose (polymères compatibles avec la forte charge ionique du milieu); - sous forme de système émulsionné (émulsion d'huile dans l'eau faisant appel à des tensio-actifs résistant aux fortes charges ioniques); - sous forme de sérum cosmétique. 2) Phase continue huileuse, la phase discontinue contenant le milieu nutritif selon l'invention - sous forme émulsionnée, étant entendu que la force ionique de la phase discontinue implique l'instabilité de l'émulsion ; il est cependant possible de formuler des phases lamellaire ou cylindrique présentant une meilleure stabilité, ou encore un système bi-phasique remis extemporanément en émulsion par simple agitation; - par encapsulation * dans une capsule rigide, du type polysaccharide, dispersée dans la phase lipidique, * dans une capsule molle, du type gélatine, dispersée dans la phase discontinue. L'utilisation de liposomes comme vecteur d'encapsulation est envisageable sous forme d'un gel liposomal en phase continue aqueuse. Une composition selon l'invention peut servir de base cosmétique. Son apport nutritionnel est notablement intéressant pour l'amélioration de la viabilité, le maintien de l'intégrité et l'équilibre des cellules cutanées superficielles. L'utilisation d'une telle composition nutritive permet de préserver durablement les qualités intrinsèques primaires de la peau, d'augmenter sa résistance aux agressions et de favoriser, le cas échéant, son retour a un état d'équilibre. De la même façon, l'utilisation d'un tel milieu sur une peau fragilisée (peaux irritées, desséchées, peaux sénescentes,...), permet de retrouver un état cutané satisfaisant tant en terme de trophicité que d'hydratation des couches superficielles de l'épiderme. De manière plus générale, une composition selon l'invention peut être incorporée dans toute préparation cosmétique, en tant que principe actif ou avec d'autres principes actifs, qu'elle est susceptible de potentialiser. Un milieu nutritif complexe selon l'invention recrée un environnement extra-cellulaire adapté, en fournissant - un apport nutritionnel optimisé, aussi bien en vitamines, oligo-éléments, qu'en acides aminés essentiels, - des facteurs de croissance cellulaire, visant & BR - et des caractéristiques de pH et d'osmolarité proches des conditions physiologiques. Les caractéristiques, applications et avantages de la présente invention sont exposés plus en détails dans les Exemples 1 et 2 et les figures 1 à 3 suivants. L'Exemple 1 donne un exemple de formulation d'une composition de l'invention. L'Exemple 2 met en évidence les propriétés d'une composition de l'invention par rapport à des milieux connus, à l'appui du dessin annexé dans lequel Fig 1 est une vue en coupe d'épidermes humains après 36 heures de culture dans un milieu commercial standard dénommé MCDB 153, Fig 2 est une vue en coupe d'épidermes humains après 36 heures de culture dans une solution saline tamponnée (PBS), solution saline équilibrée couramment utilisée en culture cellulaire, Fig 3 est une vue en coupe d'épidermes humains en culture dans le milieu nutritif de l'invention décrit & BR A : au bout de 12 heures B : au bout de 24 heures C : au bout de 36 heures Exemple 1: Formulation d'une composition de l'invention TABLEAU 1 Composants Concentration en mg/l. Acides aminés L-Alanine 9,2 L-Arginine HCL 421,4 L-Asparagine (anhydre) 14,2 Acide L-aspartique 4,0 L-Cystéine HCL. H20 42,0 Acide L-Glutamique 14,8 L-Glutamine 1754,4 Glycine 7,6 L-Histidine HCL. H20 50,0 L-Isoleucine 6,0 L-Leucine 131,2 L-Lysine HC1 54,0 L-Méthionine 13,5 L-Phénylalanine 10,0 L-Proline 34,6 L-Sérine 126,1 L-Thréonine 24,0 L-Tryptophane 9,3 L-Tyrosine 2 Na 2H20 11,7 L-Valine 70,3 Vitamines et facteurs de croissance cellulaire d-Biotine 0,02 Acide folique 0,80 Nicotinamide 0,04 D-Ca Pantothénate 0,30 Pyridoxine HC1 0,06 Riboflavine 0,04 Thiamine HC1 0,30 Vitamine B12 0,41 i-Inositol 18,0 Putrescine 2 HC1 0,20 Pyruvate de sodium 55,0 Thymidine 0,73 Adénine (HC1) 24,0 Acide DL-lipoïque 0,20 Composants inorganiques Chlorure de sodium 6800,0 KC1 112,0 Na2 HPO4 284,0 CuS04.5H20 0,003 Acétate de sodium 300,0 (anhydre) D-Glucose 1080,0 HEPES (pipérazine) 6600,0 Phosphoryléthanolamine 0,06768 Ethanolamine 0,04684 Sulfate de sodium 3,4 Bicarbonate de sodium 1160,0 FeS04.7H20 1,39 Mgcl2 6H20 120,0 CaC12.2H2O de 13,0 à 22,05 ZnSO4.7H2O 0,144 (NH4)6 MO7O24.4H2O 0,00120 Na2SiO3. 5H20 0,142 MnC12.4H20 0,00002 SnC12 . 2H20 0,00011 NH4 V03 0,00057 Exemple 2: La cytocompatibilité et les performances du milieu nutritif complexe décrit à l'Exemple 1 ont été testées sur des cultures de kératinocytes humains en monocouche, et sur des épidermes humains reconstitués in vitro. Le milieu nutritif selon l'Exemple 1 permet la culture de kératinocytes en monocouche dans des conditions optimales de viabilité, durant au moins 36 heures, sans que ne se manifeste le moindre effet cytotoxique. A l'inverse, une solution de survie classique telle que PBS (Phosphate Buffered Saline, solution saline équilibrée couramment utilisée en culture cellulaire) s'avère cytotoxique dès 12 heures d'incubation. Conformément à la Fig 3, le milieu nutritif selon l'exemple autorise une culture d'épidermes humains normaux reconstitués dans des conditions optimales de viabilité, sans manifestations cytotoxiques même après 36 heures (Fig 3C) de mise en contact. Les cultures présentaient des couches cellulaires basales, spineuses, granuleuses et cornées intactes, orthokératosiques, de stratification régulière et normale. En comparant la Fig 3C avec la Fig 1, cette dernière illustrant l'utilisation d'un milieu standard MCDB 153, commercialisé notamment par IRVINE SCIENTIFIC, on voit que les performances du milieu de l'invention sont aussi bonnes. Par contre, l'utilisation de PBS induit, conformément à Fig 2, l'apparition de kératinocytes en phase terminale de différenciation au niveau des assises basales et spineuses, avec des signes de nécrose plus ou moins prononcés, un détachement de l'épiderme de son support et une destructuration complète des différentes assises cellulaires. RIVINDICATIONS 1/ Composition à usage topique, comprenant une phase biocompatible avec les parties superficielles du corps humain, dans laquelle est distribué de manière homogène un agent nutritionnel desdites parties superficielles, caractérisée en ce que l'agent nutritionnel consiste en un milieu nutritif complexe, comprenant des composés à la fois biocompatibles, biomimétiques et biodisponibles au niveau cutané, & BR 2/ Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le milieu nutritif complexe comprend des acides aminés, au moins une vitamine, au moins un facteur de croissance cellulaire, et au moins un sel minéral. 3/ Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le milieu nutritif complexe a la composition suivante, la concentration des composants étant exprimée en mg/l Acides aminés L-Alanine 9,2 L-Arginine HCL 421,4 L-Asparagine (anhydre) 14,2 Acide L-aspartique 4,0 L-Cystéine HCL. H20 42,0 Acide L-Glutamique 14,8 L-Glutamine 1754,4 Glycine 7,6 L-Histidine HCL.H20 50,0 L-Isoleucine 6,0 L-Leucine 131,2 L-Lysine HC1 54,0 L-Méthionine 13,5 L-Phénylalanine 10,0 L-Proline 34,6 L-Sérine 126,1 L-Thréonine 24,0 L-Tryptophane 9,3 L-Tyrosine 2 Na 2H20 11,7 L-Valine 70,3 Vitamines et facteurs de croissance cellulaire d-Biotine 0,02 Acide folique 0,80 Nicotinamide 0,04 D-Ca Pantothénate 0,30 Pyridoxine HC1 0,06 Riboflavine 0,04 Thiamine HC1 0,30 Vitamine B12 0,41 i-Inositol 18,0 Putrescine 2 HC1 0,20 Pyruvate de sodium 55,0 Thymidine 0,73 Adénine (HC1) 24,0 Acide DL-lipoïque 0,20 Composants inorganiques Chlorure de sodium 6800,0 KC1 112,0 Na2 HPO4 284,0 CuS04.5H20 0,003 Acétate de sodium 300,0 (anhydre) D-Glucose 1080,0 HEPES (pipérazine) 6600,0 Phosphoryléthanolamine 0,06768 Ethanolamine 0,04684 Sulfate de sodium 3,4 Bicarbonate de sodium 1160,0 FeS04.7H20 1,39 MgC12.6H20 120,0 CaC12.2H20 de 13,0 à 22,05 ZnSO4.7H20 0,144 (NH4)6 M07024.4H20 0,00120 Na2SiO3. 5H20 0,142 MnC12.4H20 0,00002 SnC12.2H20 0,00011 NH4 V03 0,00057 4/ Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme biphasique, avec une phase continue aqueuse contenant le milieu nutritif complexe, et notamment sous forme de gel aqueux, ou d'émulsion d'huile dans l'eau. 5/ Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme biphasique, avec une phase continue huileuse, notamment sous forme d'émulsion, la phase discontinue contenant le milieu nutritif complexe. 6/ Base cosmétique comprenant une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3. 7/ Préparation cosmétique comprenant, notamment à titre de principe actif, une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5.