Brevet FR2717611A1 — publié le 19950922

La présente invention se situe dans le domaine général des essais et titrages biochimiques et des méthodes de. détection, en s'intéressant tout particulièrement aux procédés de marquage et à la détection des marqueurs. En particulier, l'invention concerne la détection de macromolécules impliquant des détecteurs luminescents ou phosphorescents stimulables et des revêtements protecteurs pour de tels détecteurs. L'invention concerne aussi un procédé d'enregistrement et de reproduction, par exemple par visualisation de l'image d'un rayonnement à déceler ou décelée. Un mode opératoire essentiel pour tous les laboratoires de biologie moléculaire réside dans la détection et dans la visualisation ou formation d'images de macromolécules. Cela sert dans les essais de détermination et des titrages de protéines, le séquençage de l'acide désoxyribonucléique (ADN), la cartographie des gènes et un certain nombre d'autres expériences et déterminations. Le procédé le plus couramment utilisé consiste à soumettre les molécules intéressantes à du marquage par une espèce radioactive, puis à en enregistrer l'image sur un film pour radiographie. Les films pour radiographie ont leurs limitations. La gamme dynamique d'un film typique pour radiographie est d'environ 50 fois, ce qui limite le degré auquel on peut obtenir des renseignements quantitatifs à partir du film. De même, de longues expositions sont en général nécessaires pour obtenir une image satisfaisante, en raison de la sensibilité limitée du film aux émissions de particules 3 utilisées dans la plupart des substances radioactives de marquage. En outre, de la variabilité est potentiellement introduite dans le développement du film,puisque ce développement exige un certain nombre d'étapes impliquant des solutions instables. Récemment, des méthodes électroniques de détection et d'enregistrement des émissions, comme celles utilisant des écrans luminescents ou phosphorescents (voir, par exemple, le brevet US-A-4 684 592 délivré à Matsuda et al, le brevet US-A- 4 788 434 délivré à Takahashi et al. et le brevet US-A- 4 801 806 délivré à Nakamura et al.) ont bénéficié d'une plus grande utilisation dans la détection et la visualisation de macromolécules et d'autres substances biologiques marquées. Ces procédés offrent plusieurs avantages par rapport aux méthodes de détection et d'enregistrement à l'aide de films pour radiographies. En premier lieu, les données et résultats obtenus grâce à la détection et à la visualisation d'un rayonnement émis peuvent être conservés ou mis en mémoire sur :C des milieux magnétiques ou optiques comme des disques durs d'ordinateurs, des disques souples et des "CD-ROM" [mémoire fixe ou morte sur disque compact ou disque audio numérique], ce qui offre une plus grande facilité de conservation en archives,car ces milieux sont bien moins volumineux et moins lourds que des films pour radiographies. En second lieu, des images emmagasinées ou mises en mémoire par voie électronique peuvent être analysées et "manipulées" à l'aide d'ordinateurs. Il existe actuellement plusieurs applications de logiciels dans le domaine public et commercial pour le traitement ou la ^C "manipulation" d'images enregistrées par voie électronique. Un tel programme du domaine public est "Image", disponible aux "National Institutes of Health" [Instituts (américains) nationaux de la santé]. En utilisant un tel logiciel, on peut analyser les informations contenues dans l'image enregistrée électroniquement et l'on peut ainsi obtenir un niveau bien plus élevé de détail que les informations disponibles dans une image de film de radiographie traditionnelle. Malheureusement, les écrans luminescents ou phosphorescents actuels souffrent de graves inconvénients. Un inconvénient consiste en ce que les matières luminescentes ou phosphorescentes sont facilement endommagées par des facteurs externes comme l'humidité et une abrasion physique. L'humidité et une grande humidité constituent des problèmes, car la réaction de l'eau avec les constituants d'une matière phosphorescente provoque une détérioration chimique de cette matière luminescente ou phosphorescente. Une abrasion physique constitue également un problème, car des échantillons provoquent fréquemment une contamination de la surface de l'écran qu'il faut ensuite nettoyer physiquement afin d'enlever le facteur contaminant. Des tentatives visant à résoudre ces problèmes ou à en limiter les effets Dnt inclus l'utilisation de revêtements protecteurs sur l'écran phosphorescent ou luminescent. Des exemples typiques de tels revêtements sont ceux décrits dans Ci le brevet US-A-4 684 592, qui décrit un revêtement polymère appliqué avec du solvant, qui est ensuite séché pour laisser un revêtement protecteur de 10 pm sur l'écran. On a obtenu d'autres revêtements aussi fins que 7,5 pm. Des écrans protecteurs revêtus de "Mylar" ont également servi. Sur l'écran luminescent ou phosphorescent, on applique typiquement le "Mylar" en une épaisseur aussi faible que 12,7 pm, à l'aide d'un adhésif ayant une épaisseur d'environ 25,4 pm. Malheureusement, ces revêtements sont bien trop épais pour permettre une détection sensible de marqueurs à faible 2 émission, comme 4C et 3H. Des écrans actuels comportant du "Mylar" et ayant 15 à 25,4 pm d'épaisseur d'adhésif peuvent diminuer la sensibilité à 3H de 21 000 à 730 000 fois et la sensibilité à14C de 3,3 à 5,0 fois. Un autre problème consiste en ce que les techniques actuelles de revêtement ne compensent pas les déformations de surface sur l'écran phosphorescent, c'est-à-dire les creux et les bosses, qui proviennent de la nature fortement particulaire de la matière luminescente ou phosphorescente. De façon générale, des revêtements sont déposés en de plus grandes quantités dans les creux de la surface de l'écran phosphorescent, en comparaison des bosses. La différence de profondeur de revêtement peut varier pour atteindre jusqu'à 10 à 20 pm quand on utilise des procédés traditionnels de revêtement. Une si grande disparité dans l'épaisseur du revêtement est inacceptable pour la visualisation d'un rayonnement provenant d'émetteurs très faibles comme 3H, pour lesquels une atténuation du signal allant jusqu'à 50 % se produit pour une épaisseur de revêtement de 1,0 pm seulement, car les régions comportant une plus faible épaisseur de revêtement vont être plus sensibles à des émissions que des régions ayant une plus grande épaisseur de revêtement. Ainsi, la fidélité de la visualisation d'émetteurs faibles par les écrans phosphorescents actuels est fortement dégradée par les présentes techniques de revêtement. Cependant, des marqueurs radioactifs à faible énergie continuent d'être intéressants en termes de diminution des risques à l'exposition et de la possibilité offerte pour des recherches supplémentaires. Ainsi, on a fortement besoin de fournir un revêtement protecteur qui protège la matière luminescente ou phosphorescente contre les dégâts externes, tout en permettant le maximum de sensibilité à des marqueurs émettant un faible niveau de rayonnement. Pour résumer l'invention, on pourrait indiquer que la présente invention fournit un écran phosphorescent ou luminescent pour visualisation, cet écran ayant une grande 2C sensibilité à la lumière et un faible rayonnement 3 et comprenant, dans l'ordre: un support; une couche luminescente ou phosphorescente contenant une matière phosphorescente stimulable; et un revêtement protecteur sensiblement continu, qui épouse essentiellement la surface de la matière phosphorescente stimulable. Dans une forme préférée de réalisation, le revêtement protecteur selon l'invention comprend un polymère de parylène éventuellement substitué, ayant la structure montrée ci-après: R1 R2 H2C CH2fn 4 R3 dans laquelle les symboles Ri à R4 sont choisis, indépendamment chacun, dans l'ensemble consistant en un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, aryle, hétéro-aryle, alcényle, cyano, alcoxyle, hydroxyle, aryloxyle, carboxyle, carboxyalkyle, carboxyaryle, halogéno, amino et nitro; et n vaut au moins 1 000 environ. Des revêtements préférés sont choisis dans l'ensemble consistant en du poly(1,4[diméthylbenzène), du poly(2-chloro- 1,4[diméthylbenzène) et du poly(1,5-dichloro-2,4- diméthylbenzène). Dans une forme préférée de réalisation, le KC revêtement protecteur a une épaisseur comprise entre 0,10 et environ 50 pm. Dans une autre forme préférée de réalisation, le revêtement a une épaisseur comprise entre environ 0,10 et 1 Pm. La présente invention inclut également un procédé d'enregistrement et de reproduction d'une image de rayonnement, ce procédé comprenant les étapes consistant à exposer une matière phosphorescente stimulable à des photons qui ont traversé le revêtement protecteur décrit ci-dessus; à exciter la matière phosphorescente ou luminescente stimulable, à l'aide d'une lumière ayant une longueur d'onde qui peut efficacement dégager l'énergie de rayonnement conservée dans la matière phosphorescente ou luminescente stimulable, à titre d'énergie lumineuse; et déceler la lumière. Des revêtements préférés sont choisis dans l'ensemble consistant en du poly(l,4- 2- diméthylbenzène), du poly(2-chloro-1,4-diméthylbenzène) et du poly(2,5-dichloro-1,4-diméthylbenzène). L'utilisation de l'écran luminescent ou phosphorescent de l'invention donne une image ayant un degré élevé de sensibilité, de contraste et de reproductibilité avec des temps d'exposition relativement courts. D'autres avantages de l'invention comprennent l'aptitude à déceler des substances émettant peu d'énergie ou émettant une faible quantité d'énergie, comme 14C et 3H. Ces substances sont à préférer à des substances émettant un plus fort rayonnement, aussi bien en des termes de sécurité des travailleurs que de l'aptitude à utiliser des méthodes de visualisation de type électronique dans la recherche biomédicale et dans des applications médicales. D'autres caractéristiques, avantages et formes préférées de réalisation de l'invention ressortiront de la description qui suit, faite en regard des dessins annexés sur lesquels: La figure 1 est une représentation d'un écran phosphorescent ou luminescent, construit selon la présente invention et comprenant une matière phosphorescente ou luminescente stimulable ainsi qu'un revêtement protecteur. La figure 2 illustre un procédé pour appliquer un revêtement protecteur selon l'invention à une matière phosphorescente ou luminescente stimulable. La figure 3 est une illustration de la détection de signaux provenant d'un échantillon marqué. La figure 4 est un diagramme d'un ensemble ou agencement de composants pour stimuler la matière réceptrice afin qu'elle émette des signaux correspondant à l'émission qu'elle a reçus et pour déceler les signaux et les convertir en une forme 0C lisible. On peut ainsi noter que la figure 1 constitue une représentation d'un écran 1 luminescent ou phosphorescent pour formation d'image (écran de visualisation) construit selon la présente invention. L'écran de visualisation comporte un support 3, une matière luminescente ou phosphorescente stimulable 5 et un revêtement protecteur 7 sensiblement continu et qui épouse la forme de la matière 5. Comme montré sur la figure 1, la matière luminescente ou phosphorescente stimulable repose au sommet du support et le 3C revêtement protecteur s'appuie et repose sur la matière phosphorescente ou luminescente stimulable, en protégeant cette matière phosphorescente ou luminescente contre les attaques externes physiques et chimiques. Le support et la matière phosphorescente ou luminescente stimulables ont le type et la configuration que l'on connait couramment en pratique, comme décrit dans les brevets US-A-4 684 592, US-A-4 788 434 et US-A- 4 801 806, auxquels on pourra se référer et qui seront décrits ci-après plus en détail. La présente invention propose un écran phosphorescent ou luminescent de visualisation, comportant un revêtement protecteur sensiblement continu épousant sensiblement la forme de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente stimulable. Par "épousant sensiblement la forme de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente stimulable", on entend indiquer ici que la surface du revêtement protecteur selon la présente invention (surface représentée en 8 sur la figure 1) suit sensiblement ou épouse sensiblement les contours de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente stimulable (surface indiquée en 9 sur la figure 1). On comprendra que le très fort degré de conformité entre les surfaces de la matière phosphorescente stimulable et du revêtement protecteur donne un revêtement protecteur ayant une épaisseur sensiblement uniforme sur la totalité de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente stimulable; et, donc, des effets d'atténuation exercés par le revêtement protecteur "à surface conforme" selon l'invention sont essentiellement identiques sur la totalité de la zone de visualisation et de formation d'image, ce qui donne une plus grande fidélité de la visualisation. 2- Le revêtement protecteur selon l'invention peut être formé à partir de matières capables d'être déposées sous la forme d'un revêtement sensiblement uniforme et épousant les contours de la matière sous-jacente (revêtement "conforme") au sommet de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente stimulable et qui n'atténue pas nettement un rayonnement P faible. De telles matières comprennent des polymères ou copolymères comme, sans que cette liste soit limitative, par exemple du para-xylylène, du polyéthylène (PE), du polytétrafluoréthylène (PTFE), des silicones, des uréthannes, des époxydes, etc. De même, les verres comportant des oxydes de silicium, comme ceux décrits par Brody dans Packing and Technology and Engineering 3(1):44-47 (1994), article auquel on pourra se référer, peuvent être déposés sous forme de revêtements "conformes" selon la présente invention. Dans une forme préférée de réalisation, le revêtement protecteur comprend un polymère déposé à l'aide d'un plasma, comme un parylène substitué tel que représenté par la formule suivante 1i C, R1R2 t H2CH CH2n 4 \R3 formule dans laquelle les symboles Ri à R4 sont choisis chacun, indépendamment l'un de l'autre, dans l'ensemble consistant en un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, aryle, hétéro-aryle, alcényle, cyano, alcoxyle, hydroxyle, aryloxyle, carboxyle, carboxyalkyle, carboxyaryle, halogéno, amino et nitro; et n vaut au moins 1 000 environ. De préférence, les substituants sont choisis de façon à éviter l'apparition d'un empêchement stérique entre des motifs monomères et de façon à demeurer inertes dans les conditions opératoires. De préférence, deux substituants sont constitués par des atomes d'hydrogène pour éviter un phénomène de gêne ou d'empêchement stérique. Tel qu'il sert ici, le terme "alkyle" désigne des chaînes carbonées substituées ou non substituées, ramifiées ou non ramifiées, contenant 1 à 6 atomes de carbone, par exemple un 3 groupe méthyle, éthyle, hexyle, isopropyle, 2-bromobutyle, 3-hydroxy-2-méthyl-pentyle, etc. "Aryle" et "hétéro-aryle" sont des termes désignant des noyaux carbocycliques ou hétérocycliques, substitués ou non substitués, qui contiennent au moins un système à noyau(x)arnatique(s),comme un groupe ou système phényle, naphtyle, nitrophényle, indolyle, benzofurannyle, thiényle, dibenzofurannyle, 3- méthyldibenzothiényle, etc. Le terme "alcényle" désigne un groupe alkyle contenant au moins une double liaison. Le terme "cyano" désigne le groupe -C-CN. Le terme "alcoxyle" désigne le groupe -OR, dans lequel R représente un groupe alkyle. Le terme "hydroxyle" désigne le groupe -OH. Le terme "aryloxy" désigne le groupe -OAr, dans lequel Ar est un groupe aryle. Le terme "carboxyle" désigne le groupe -CO2H. Le terme "carboxyalkyle" désigne le groupe CO2R dans lequel R est un groupe alkyle. Le terme "carboxylaryle" désigne le groupe -CO2Ar, dans lequel Ar est un groupe aryle. Le terme "halogène" désigne les atomes ou groupes F, Br, C1 et I. Le terme "amino" désigne le groupe -NR'R", dans lequel R' et R" peuvent représenter chacun, indépendamment, un groupe alkyle ou aryle. Le terme "nitro" désigne le groupe -NO2. Dans des formes préférées de réalisation, le revêtement protecteur comprend un polymère de parylène éventuellement substitué par de l'hydrogène ou par de l'halogène, et n vaut environ 5 000. Dans des formes encore plus préférées de 2C réalisation, les substituants sont éventuellement des atomes d'hydrogène ou de chlore. Des revêtements protecteurs spécialement préférés sont choisis dans l'ensemble consistant en du poly(1,4-diméthylbenzène), du poly(2-chloro-1,4- diméthylbenzène) et du poly(2,5-dichloro-1,4-diméthylbenzène). "Parylène" est le nom générique d'un polymère en pellicule thermoplastique à base de paraxylylène, ce produit est disponible dans le commerce sous la désignation de "Parylène N" (poly(1,4- diméthylbenzène)) chez Specialty Coating Systems, Indianapolis, Indiana (Etats-Unis d'Amérique). Des parylènes monochlorés et dichlorés (à substituants monochloro et dichloro) sont également disponibles dans le commerce sous la désignation de "Parylène C" (poly(2-chloro-l,4- diméthylbenzène)) et de "Parylène D" (poly(2,5-dichloro-l,4- diméthylbenzène)) provenant du même fournisseur. On dépose les polymères de parylène sur la surface de matière phosphorescente ou luminescente, en utilisant un appareillage semblable à celui présenté en 10 sur la figure 2, par un procédé de revêtement à l'aide d'un plasma, bien connu en pratique (voir, par exemple, les brevets US-A-3 246 627 et US-A-3 301 707 délivrés à Loeb et al.; US-A-3 600 216 délivré à Stewart; US-A-3 749 601 délivré à Tittle; US-A-4 950 365 délivré à Evans; et US-A-4 123 308 à délivré à Nowlin et al., auxquels on pourra se référer utilement). De façon typique, la 1C matière luminescente ou phosphorescente à appliquer en revêtement 5 est placée dans une chambre 11 de dépôt à structure et matériaux connus, qui est capable de supporter des pressions réduites. La chambre de dépôt est reliée à une pompe 13 à vide et à une chambre 15 de pyrolyse, tous deux couramment utilisés dans le dépôt de polymère à l'aide d'un plasma. La chambre de pyrolyse est reliée à son tour à un vaporiseur 17, qui est lui aussi du genre servant typiquement au dépôt de polymère à l'aide d'un plasma. Dans une opération typique de revêtement, du paraxyiylène 2C dimère solide est introduit dans la chambre de vaporisation et ce produit y est vaporisé à des températures d'environ 150 C et à des pressions d'environ 1,3 mbar (environ 133,3 Pa ou 1 torr) (dans le cas du "Parylène N"). Lors de sa vaporisation, le dimère gazeux est transféré vers la chambre de pyrolyse o il est chauffé jusqu'à environ 680 C sous une pression de 0,5 mbar environ (1/2 torr) pour provoquer une pyrolyse de la liaison du dimère, en créant ainsi des diradicaux de paraxylylène gazeux monomère. Les diradicaux de paraxylylène monomère sont ensuite transférés dans la chambre de dépôt o 3C ils se condensent à la surface de la matière phosphorescente ou luminescente, en se polymérisant lors de leur contact avec cette matière, pour former un revêtement de polymère sensiblement continu, épousant la forme du support et s'appliquant par-dessus le support en matière phosphorescente ou luminescente stimulable. La chambre de dépôt est typiquement maintenue à une température d'environ 25 C et à une pression d'environ 0,1 mbar (0,1 torr, 13,3 Pa). De façon générale, on obtient les meilleurs résultats avec une épaisseur de revêtement se situant entre environ 0,10 pm et environ 50 pm. Pour des applications impliquant la détection d'un rayonnement émis par des émetteurs forts, comme 32p et 125I, l'épaisseur préférée de revêtement se situe entre environ 25 pm et environ 50 pm, une épaisseur d'environ !0 35 pm étant particulièrement préférée. Pour des applications impliquant la détection d'un rayonnement provenant d'émetteurs faibles comme 3H et 14C, l'épaisseur préférée de revêtement se situe entre environ 0,1 pm et environ 10 pm. Une gamme que l'on préfère encore davantage pour ces applications se situe entre environ 0, 10 pm et environ 3 pm, et une gamme encore plus préférée se situe entre environ 1 pm et environ 3 pm, bien que, dans certains cas, par exemple lors de la détection d'une émission provenant de 3H, la gamme comprise entre environ 0,10 pm et environ 1 pm soit celle que l'on préfère le plus. 2C Le revêtement protecteur selon l'invention procure une couche protectrice sensiblement continue recouvrant la matière phosphorescente ou luminescente stimulable, ce revêtement épousant sensiblement la forme de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente. De préférence, le revêtement protecteur est essentiellement uniforme, c'est-à-dire sans trous d'épingle ni autres intervalles de la couverture de la surface, sur la totalité de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente à protéger. N'importe quelle matière luminescente ou phosphorescente 3C stimulable peut servir de concert avec le revêtement selon la présente invention. Le bon choix approprié dans chaque cas particulier va dépendre du marqueur, les matières phosphorescentes ou luminescentes étant choisies en vue de recevoir et de répondre à l'émission produite par le marqueur particulier. Les matières phosphorescentes ou luminescentes servant dans la pratique de la présente invention peuvent étre choisies dans la gamme complète des matières dont on sait qu'elles possèdent le pouvoir de phosphorescence ou de luminescence. En général, ce sont des matières qui absorbent la lumière et entrent alors dans un état excité puis qui subissent une relaxation pour revenir à l'état de départ tout en émettant de la lumière, laquelle a une intensité ou une fréquence différente ou se situe à une échelle différente de temps, ou iC associe les deux types de phénomènes. Des matières répondant à cette description comprennent des matières minérales naturelles, des composés biologiques et des matières préparées par synthèse et leurs mélanges. Des exemples sont représentés par exemple par des halogénophosphates de métaux comme !5 Ca5(PO4)3(F,Cl):Sb(III), Mn(II), Sr5(PO4)3(Cl):Eu(II), Srs(PO4)3(F,C1):Sb(III), Mn(II) et [SrEu(II)]5(P04)3C1; d'autres matières phosphorescentes activées par des terres rares comme Y203:Eu(III), SrB407:Eu(II), BaMg2All6027:Eu(II), Y(VO4):Eu(III), Y(VO4)PO4:Eu(III), Sr2P20- 7:Eu(II), 2C SrMgP207:Eu(II), Sr3(P04)2:Eu(II), Sr5Si4C16010:Eu(II), Ba2MgSi2O0-7:Eu(II), GdOS:Tb(III), LaOS:Tb(III), LaOBr:Tb(III), LaOBr:Tm(III) et Ba(F,C1)2:Eu(II); d'autres matières phosphorescentes ou luminescentes à hôte aluminate comme Ceo, 65Tbo,35MgAl1l1O9; des matières phosphorescentes et luminescentes à hôte silicate comme Zn2SiO4:Mn(II); et des matières phosphorescentes et luminescentes à hôte fluorure comme Y0, -79Yb0, 20Er0, 01F3, Lao, 86Ybo,12Ero,02F3 et Yo, 639Ybo, 35Tmo, 00oF3. Sont particulièrement intéressantes les matières 3G phosphorescentes et luminescentes qui demeurent à l'état excité jusqu'à relaxation par une stimulation externe. Elles comprennent un grand nombre de celles énumérées ci-dessus, plus d'autres. Des exemples préférés sont des sulfures et séléniures de métaux alcalino-terreux, dopés par du samarium et de l'europium ou de l'oxyde, du sulfure ou du fluorure de cérium, et contenant en outre un sel fusible comme du fluorure de lithium, du sulfate de baryum ou les deux jouant le rôle de fondant. Des listes et descriptions de telles matières se trouvent dans les brevets US-A-4 812 660 (14 mars 1989), US-A- 4 822 520 (18 avril 1989) et US-A-4 830 875 (16 mai 1989), brevets délivrés à Lindmayer, J. (Quantex Corporation), auxquels on pourra se référer. La stimulation qui libère l'énergie peut être sous forme de chaleur ou de rayonnement électromagnétique, comme de la lumière visible, des rayons X, :C un rayonnement ultraviolet et un rayonnement infrarouge, selon le type de la matière phosphorescente ou luminescente. Le substrat et les matières phosphorescentes et luminescentes seront choisies de manière à émettre et à absorber, respectivement, à la même longueur d'onde, en se complétant ainsi l'un l'autre en termes d'émission d'énergie et de réponse. L'énergie d'une émission unique aura généralement la forme d'une bande de longueurs d'onde, dont la largeur n'a pas une importance critique ou fondamentale dans le sens général. Dans certaines applications, comme décrit plus 2C en détail ci-après, les largeurs de bande étroitement définies vont jouer des rôles spécifiques. En ce qui concerne les longueurs d'onde des émissions, dans la plupart des applications envisagées pour la présente invention, on utilisera des émissions dont les longueurs d'onde de crête se 2 situent entre environ 350 nm et environ 700 nm, de préférence entre environ 400 nm et environ 600 nm. L'utilisation de matières phosphorescentes et luminescentes mixtes, avec un mélange correspondant de systèmes marqueurs/substrats, présente d'autres possibilités C d'utilisation accrue pour l'invention. Par exemple, le luminol, qui est un substrat chimioluminescent couramment disponible, émet de la lumière à 428 nm quand il est activé, et divers napthyldioxétanes isomères couramment disponibles émettent de la lumière à des longueurs d'onde variant entre 463 nm et 560 nm. Parmi les diverses matières phosphorescentes ou luminescentes disponibles chez Quantex Corporation (2 Research Court, Rockville, MD 20850, Etats-Unis d'Amérique), la matière phosphorescente ou luminescente appelée Q-16 va répondre à des longueurs d'onde de 470 nm mais pas au-delà, cependant que la matière phosphorescente appelée Q-42 va répondre à des longueurs d'onde allant jusqu'à environ 600 nm. Avec ces matières phosphorescentes ou luminescentes combinées sur un écran unique, ou n'importe quelle autre combinaison pouvant de façon similaire effectuer une discrimination ou une détection, on peut utiliser des systèmes à marqueurs/substrats multiples dont les longueurs d'onde correspondent à celles auxquelles les matières phosphorescentes ou luminescentes sont réceptives. Les marqueurs peuvent être sélectivement placés sur des groupes distincts, choisis au préalable, de macromolécules, et les substrats peuvent être combinés en un seul mélange à rôle de substrat. Puisque les matières phosphorescentes ou luminescentes vont elles-mêmes émettre de la lumière à des longueurs d'onde distinctes, on peut obtenir de diverses façons une C2 discrimination dans l'opération de lecture, selon le procédé particulier de lecture que l'on utilise. Quand on utilise de la détection d'infrarouges pour la lecture, par exemple, un tube photomultiplicateur peut distinguer entre les émissions de lumière par Q-16, qui sont vertes, et les émissions de 2_ lumière par Q-42, qui sont oranges, grâce à l'utilisation de filtres. L'utilisation de matières phosphorescentes ou luminescentes mixtes dans ces systèmes de combinaison et dans d'autres encore permet sans limitation d'effectuer diverses 3Ccomparaisons et discriminations ou distinctions. Par exemple, on peut effectuer la distinction entre des groupes particuliers ou distincts de macromolécules dans un échantillon unique ou bien effectuer une comparaison avec un étalon interne. D'autres possibilités apparaitront facilement à l'homme du métier. Le marqueur peut être n'importe quelle substance émettrice d'un rayonnement. Typiquement, un tel rayonnement aura la forme d'une radioactivité, mais le rayonnement peut aussi prendre la forme d'une lumière. Des marqueurs radioactifs préférés comprennent 3H, 14C 32p 33p 35S et 125I. Les marqueurs radioactifs que l'on préfère surtout sont ceux qui sont des substances émettrices d'un rayonnement P faible, comme les substances comportant 3H et 14C. Ces marqueurs radioactifs sont disponibles à l'échelle commerciale et peuvent être, à lC l'aide de méthodes bien connues en pratique, soumis à de la manutention ou manipulation et à une incorporation à des échantillons ou à une fixation sur des échantillons. Le marqueur peut également comprendre n'importe quelles matières tendant à produire une émission chimioluminescente par contact avec un substrat, ce qui comprend de larges variétés d'espèces connues dans l'art de la chimioluminescence. Le marqueur et le substrat peuvent, par exemple, être des corps qui réagissent et se combinent pour former un état excité qui dégénère spontanément à l'état primitif avec libération d'une émission fluorescente ou phosphorescente, ou bien des corps capables de réagir et qui se combinent pour former un intermédiaire, lequel se décompose spontanément en parvenant à un état excité qui subit ensuite la même conversion et dégage de l'énergie. En variante, la réaction peut être entièrement contenue dans le substrat. Le substrat peut, dans une telle réaction, être une espèce simple et la réaction peut être une conversion ou une décomposition entrainant une émission, ou bien le substrat peut être un mélange d'espèces qui participent à une réaction dont le résultat est une émission de lumière. Le procédé de l'invention peut servir de procédé de détection, de procédé de quantification ou peut jouer les deux rôles. Il peut servir dans des essais de détection ou dans des dosages et titrages ou dans d'autres déterminations dans diverses configurations et divers arrangements, qui apparaitront facilement à l'homme du métier. En général, l'invention est applicable à n'importe quel mode opératoire destiné à déceler ou à quantifier une macromolécule immobilisée ou une partie de macromolécule immobilisée. L'invention est particulièrement intéressante dans la visualisation des agencements et réseaux spatiaux de macromolécules, puisque l'opération peut être conduite d'une manière fournissant une information localisée. Une telle visualisation ou formation d'image est intéressante pour des réseaux spatiaux engendrés par divers modes opératoires de laboratoire, ce qui comprend C des électroferrogrammes, des chromatogrammes, des taches ponctuelles, divers transferts d'ADN et d'ARN, et n'importe quel autre agencement de soluté(s)ou d'espèces séparées. Le terme "immobilisé" sert dans le présent exposé à désigner la rétention d'une espèce ou d'une molécule dans un endroit fixe sur une surface ou matrice qui n'est pas du liquide, la rétention étant réalisée d'une manière perm.ettant à cette espèce de ne pas être délogée ou détachée par contact avec le substrat chimioluminescent en phase liquide. La surface ou la matrice non liquide peut être une plaque de gel cormme du gel de polyacrylamide ou de gélose ou agarose, une membrane pour formation de taches colorées comme de la nitrocellulose ou un dérivé de polyamide ou de "Nylon", ou une surface pleine ou solide comme du verre revêtu ou une plaque de matière plastique pour microtitrage. Le marquage sélectif de la macromolécule intéressante à l'aide du marqueur peut être réalisé de n'importe laquelle des diverses façons connues dans le domaine biochimique. La fixation peut être une liaison de covalence, une liaison du type par affinité, une interaction hydrophobe, une interaction 3C,de type hybridation ou n'importe quel autre moyen de fixation. La sélectivité peut être inhérente au moyen de fixation, comme dans le cas d'interaction de covalence, d'hydrophobie et d'hybridation, ou bien elle peut être le résultat d'une spécificité de liaison de type immunologique ou d'un autre comportement de liaison spécifique. Des interactions préférées sont des interactions d'hybridation comme l'utilisation de sondes d'ADN (acide désoxyribonucléique) ou d'ARN (acide ribonucléique), et des interactions de liaison spécifiques, comme des interactions antigène-anticorps et des interactions avidine-biotine. Dans ces interactions préférées, le marqueur est une substance émettant un rayonnement 3 faible,cette substance étant fixée à une macromolécule imobilisée. Cette dernière est ainsi C "marquée" par le marqueur, de manière sélective, c'est-à-dire à l'exclusion de la surface ou de la matrice elle-même et des autres macromolécules dépourvues des caractéristiques spécifiques de liaison impliquées dans l'attraction. La fixation est réalisée de la manière traditionnelle à l'aide d'une liaison de covalence. La présente invention peut utilement servir dans une large gamme d'essais, de titrages et de modes opératoires réalisés au laboratoire. Des exemples à noter sont représentés par des essais de détermination et de titrage de protéines, des 2C essais de détermination et de titrage d'anticorps, des modes opératoires de dépistage ou de criblage, des études par dilution, le séquençage de l'ADN et la cartographie des gènes. On comprendra que la sensibilité accrue à 3H fournie par les matières phosphorescentes ou luminescentes protégées par le revêtement selon l'invention va permettre une extension des techniques de double marquage à du triple marquage avec l'inclusion de -H (voir, par exemple, Harrington et autres, "Methods: A companion to Methods in Enzymology", 3:125-141 (1989); et Capps et autres: BioTechniques, 8(1):62-69 3C2 (1990)). D'autres applications apparaitront facilement à l'homme du métier. En revenant aux dessins, on voit que la figure 3 est une représentation d'un procédé d'enregistrement d'émissions sur une matière réceptrice, et que la figure 4 est un diagramme d'un agencement de composants pour stimuler la matière réceptrice afin qu'elle émette des signaux correspondant à l'émission qu'elle a reçue et déceler des signaux et les convertir pour les mettre en une forme lisible. La figure 3 montre un support 21 sur lequel sont immobilisées des espèces macromoléculaires 23. Comme indiqué ci-dessus, il peut s'agir d'une plaque de gel, d'une membrane filtrante ou d'une surface solide ou pleine, selon le type de mode opératoire que l'on effectue. Les espèces 0 macromoléculaires sont localisées à la surface du support en un réseau ou agencement plan distinct, et elles ont été marquées à l'aide de marqueurs 25. Comme indiqué dans la description générale ci-dessus, les marqueurs sont de préférence des émetteurs faibles de rayons A, comme 3H et 14C. Un écran 20 luminescent ou phosphorescent, comprenant une matière 27 phosphorescente ou luminescente stimulable, ayant des contours 28 de surface,écran protégé par un revêtement 29 qui épouse sensiblement la forme de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente, est placé directement au- 2C dessus du motif de l'immobilisation sur le support, et cet écran est maintenu dans cette position pendant une période de temps suffisante pour recevoir une quantité d'émission suffisante pour être décelable et montrer cependant le même agencement spatial que le motif immobilisé ou d'immobilisation sur le support. Dans ce cas illustratif, la matière phosphorescente ou luminescente est une matière qui fixe ou emprisonne l'énergie de l'émission et ne la libère ou ne la dégage qu'en cas de stimulation par une source externe comme de la lumière infrarouge. Une fois les matières phosphorescentes ou luminescentes suffisamment excitées, l'écran est retiré de la zone se trouvant au-dessus du support et il est placé dans le dispositif ou agencement optique représenté sur la figure 4. Pour permettre un balayage d'exploration complète dans les deux dimensions de l'écran, l'écran est placé sur un appareil 31 de translation qui assure la translation le long des axes des x et des y. Le composant 33 de l'appareil assurant la translation dans l'axe des x et le composant 35 de l'appareil assurant la translation dans l'axe des y sont entrainés par un dispositif de commande 37 de la translation selon les axes x et y. L'écran 20; contenant de la matière phosphorescente ou luminescente et qui est revêtuiest stimulé par de l'énergie lumineuse provenant d'un laser 39 à infrarouge comme, par 1C exemple, un laser de type ND:YAG (grenat yttrium-aluminium- néodyme (ND), émettant de la lumière à 1 064 nm. Le faisceau sortant du laser est collimaté par des lentilles 41 d'alignement ou de collimatage et il est dévié par un miroir 43 pour YAG. Ce faisceau est ensuite concentré ou focalisé sur l'écran 20 à matière phosphorescente ou luminescente par une lentille comme un objectif 45 pour microscope 20x (grossissant fois), commandé par une vis micrométrique 47 fonctionnant dans l'axe des Z. L'appareil 31 de translation provoque l'exploration de balayage, par le faisceau, de la totalité de 2 la surface de l'écran. L'énergie libérée par l'écran comportant une matière phosphorescente ou luminescente sous l'effet de la stimulation par l'infrarouge est déviée par un miroir froid 49 à travers un filtre 51 à passage court vers un tube photomultiplicateur 53 alimenté en énergie par une source 55 d'énergie à haute tension. Le signal provenant du tube photomultiplicateur 53 est dirigé vers un oscilloscope 57 et un voltmètre 59 de numérisation à grande vitesse. La lecture du voltmètre est transformée en une forme visuelle par un affichage 61 de graphique fonctionnant à l'aide d'un ordinateur 63. Cet affichage 61 de graphique permet une pleine lecture et la détermination de la présence, de l'emplacement et de la quantité de la macromolécule immobilisée sur la phase 21 de support apparaissant à la figure 3. Tous les composants présentés dans cette illustration peuvent être fournis par de l'équipement et des instruments traditionnels bien connus et largement utilisés dans des laboratoires de biologie moléculaire. On souligne une fois encore que cet agencement ne constitue qu'une simple illustration d'un procédé de mise en pratique de l'invention. D'autres possibilités apparaitront facilement à l'esprit de la personne cherchant à adapter de manière routinière le concept à un système particulier, à un environnement spécial ou à des C composants déjà disponibles. L'exemple suivant est offert à titre illustratif. Il n'est nullement destiné ni à définir ni à limiter l'invention. EXEMPLE Quatre écrans contenant de la matière phosphorescente ou luminescente sns revêtement ont été soumis à des essais de sensibilité et de résolution concernant 14C, de sensibilité à 3H et de résistance à une abrasion en surface, les examens étant effectués selon des modes opératoires courants (voir, par exemple, Electrophoresis, 11:355-360 (1990), article auquel on 2C pourra se référer utilement). Ces écrans ont été ensuite nettoyés à l'aide d'un courant de N2 sec désionisé, et revêtus par des dépôts à l'aide d'un plasma de "Parylene C" (poly(2- chloro-l,4-diméthylbenzène)) en des épaisseurs de 0,75 pm, 3,95 pm, 9,0 pm et 28 pm, en utilisant les modes opératoires décrits ci-dessus pour du revêtement par un plasma. Apres l'opération de revêtement, on n'a pas observé de dégradation de la matière phosphorescente. On a soumis chaque écran ainsi revêtu à des essais de détermination de sa sensibilité à 14C et de son pouvoir de 3C résolution de 14C, de sa sensibilité à 3H et de sa résistance à une abrasion de sa surface, les essais étant effectués selon des modes opératoires courants ou normalisés. Les résultats obtenus ont été comparés avec les sensibilités avant que les écrans soient revêtus par du "Parylene". Les résultats de cette comparaison sont présentés ci-après et ils sont en accord avec les estimations théoriques d'atténuation pour les épaisseurs indiquées. Ecran Epaisseur Atténuation Atténuation n de Parylene théorique de observée de (Pm) 3H 14C 3H 14C 11 0,75 -1,7X 1,05X -2,0X -1,0 X 2 3,95 -15,5X - 1,2X - -1,OX 3 9,0 w512x -1,5X 580X.1,4X 4 28,0 12, 7x108X -3,0X NA -4,0X 0 NA: essai non effectué. Le revêtement de 0,75 pm d'épaisseur a montré une excellente sensibilité au tritium et une bonne durabilité mécanique, avec le minimum possible de perte de rendement. Les écrans revêtus de "Parylene" ont été nettoyés à l'eau sans dégradation chimique de la matière phosphorescente ou luminescente. Par contraste, des écrans sans revêtement, nettoyés à l'eau, ont présenté une dégradation chimique produisant des quantités notables de H2S. Quatre écrans supplémentaires ont été revêtus de "Parylene C" à des épaisseurs de 0,44 mm et de 1,05mm et ils ont été soumis à des essais de sensibilité à 14C. Ces écrans ont montré une augmentation d'environ 1,5 fois de leur sensibilité à 14C et une augmentation de sensibilité d'environ fois à 3H, en comparaison avec des écrans protégés par 8 pm d'une pellicule de matière plastique, ce qui correspond approximativement à ce qui était attendu. On voit donc que l'invention offre un procédé d'enregistrement et de reproduction d'une image d'un rayonnement, ou un procédé de visualisation d'une radiation ou d'un rayonnement, ce procédé comprenant les étapes consistant a: (a) exposer à des photons une matière phosphorescence ou luminescente stimulable, matière présente dans un écran de visualisation ou de formation d'image; (b) exciter ladite matière phosphorescente luminescente stimulable, matière présente dans ledit écran de visualisation, la stimulation étant réalisée à l'aide d'une lumière ayant une longueur d'onde capable de dégager ou libérer efficacement l'énergie du rayonnement emmagasinée dans ladite matière phosphorescente ou luminescente stimulable, cette matière 0 jouant le rôle d'énergie lumineuse ou stimulante; et (c) déceler ladite lumière émise et qui permet une détection ou une quantification. On voit donc également que la présente invention fournit un revêtement protecteur, épousant la forme de l'écran qu'il protège, pour protéger des écrans de visualisation comportant de la matière phosphorescente ou luminescente, le revêtement permettant d'augmenter fortement la durabilité et la sensibilité des écrans. Ces revêtements protecteurs vont amplifier l'utilité et l'étendue et la largeur des moyens électroniques pour la visualisation, par des images, d'importantes données biochimiques et médicales, notamment. Il va de soi, que l'exposé ci-dessus a été présenté à titre illustratif et qu'il peut autoriser diverses variations, alternatives, substitutions, etc. sans que l'on sorte de l'esprit et du cadre ou de la portée de l'invention. REVENDICATIONS 1. Ecran de formation d'image, ou de visualisation, cet écran comportant une matière phosphorescente ou luminescente ayant une grande sensibilité à de la lumière et à un rayonnement D faible, écran caractérisé en ce qu'il comprend, dans l'ordre: (a) un support; (b) une couche de matière phosphorescente ou luminescente contenant une matière phosphorescente ou luminescente stimulable; et (c) un revêtement protecteur sensiblement continu, qui épouse sensiblement la forme de la surface de la matière phosphorescente ou luminescente stimulable. 2. Ecran de visualisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit revêtement protecteur comprend un polymère de parylène (ou paraxylylène) éventuellement substitué, ayant la formule de structure ci-après: R1 R2 H N- CH t- H2C C2 in 4 \R3 (dans laquelle le sens des symboles R1 à R4 est choisi pour chacun, indépendamment, dans l'ensemble consistant en un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, aryle, hétéro-aryle, alcényle, cyano, alcoxyle, hydroxyle, aryloxyle, carboxyle, carboxyalkyle, carboxyaryle, halogéno, amino et nitro; et n est un nombre valant au moins 1 000). 3. Ecran de visualisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que, dans la formule du polymère de paraxylylène, le sens des symboles R1 à R4 est choisi, indépendamment pour chacun, dans l'ensemble consistant en un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, éthyle ou cyano, un atome d'halogène et un groupe nitro. 4. Ecran de visualisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit revêtement protecteur est en du poly(1,4-diméthylbenzène). 5. Ecran de visualisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit revêtement protecteur est en du poly(2-chloro-1,4- diméthylbenzène). 6. Ecran de visualisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit revêtement protecteur est en du poly(2,5dichloro-1,4-diméthylbenzène). iC 7. Ecran de visualisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit revêtement protecteur a une épaisseur comprise entre environ 25 et environ 50 pm. 8. Ecran de visualisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit écran protecteur a une épaisseur comprise entre environ 0,10 et environ 10 pm. 9. Ecran de visualisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit revêtement protecteur est sensiblement uniforme. 10. Application de l'écran de visualisation selon l'une 2 quelconque des revendications précédentes à un procédé d'enregistrement et de reproduction d'une image d'un rayonnement, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comporte les étapes consistant à: (a) exposer à des photons une matière phosphorescente ou luminescente stimulable présente dans un écran de visualisation comportant une telle matière phosphorescente ou luminescente selon l'une quelconque des revendications précédentes; (b) exciter ladite matière phosphorescente ou luminescente stimulable, présente dans ledit écran de visualisation, à l'aide d'une lumière ayant une longueur d'onde capable efficacement de dégager ou libérer, sous forme d'énergie lumineuse, l'énergie de rayonnement emmagasinée dans ladite matière phosphorescente ou luminescente stimulable; et (c) déceler cette lumière émise.