Brevet FR2715302A1 — publié le 19950728

Association pharmaceutique antivirale appropriée pour le traitement des infections par le virus HIV et du sida La présente invention concerne une nouvelle association pharmaceutique à base d'une ellipticine et d' une acridine. L'ellipticine, ses dérivés et leurs procédés d'obtention sont décrits dans les brevets FR 2 152 374, 2 248 828 et 2308365. L'ellipticine (S,11-diméthyl-6H-pyrido[4,3-bjcarbazole) et ses dérivés (ci-après désignés par le terme "ellipticine") sont des composés qui présentent des propriétés oncostatiques intéressantes et qui sont utilisées comme agents antitumoraux ou anticancéreux [Oustrin et al., C.R. Acad. Sci., Ser. D, 1974, 2 (15), 1967-70; Le Men et al., Rev. Eur. Etud. Clin. Biol., 1970, 15 (5), 534-8 et Garcia-Giralt et al., Rev. Eur. Etud. Clin. Biol., 1970, 15 (5), 539-41]. Le brevet FR 2 152 374 décrit notamment l'utilisation de la méthoxy-9-ellipticine dans le traitement de la leucémie. Les ellipticines sont également connues comme agents intercalants : par exemple, la demande de brevet WO 91/07989 concerne une méthode pour inactiver le virus HIV en administrant à un patient un composé de formule A-X-Y dans laquelle A est un résidu d'antibiotique choisi parmi les anthracyclines, les mitomycines et les ellipticines, X est un dérivé du glutaraldéhyde ou de l'acide maléique et Y représente un résidu de protéine. L'acridine (10-azaanthracène) et ses dérivés (ci-après également désignés par le terme "acridine"), sont connus pour leurs propriétés antiseptiques (cf "The Merck Index, îOth Edition, abrégé N 119"). Parmi ces dérivés, on peut citer notamment: - la proflavine (3,6-diaminoacridine) de formule: ou - l'acriflavine, qui est un mélange de deux dérivés d'acridine : la 3,6diaminoacridine de formule (I) et le chlorure de 3,6-diamino-l0méthylacridinium, représenté par la formule suivante: La demanderesse a décrit, dans sa demande antérieure déposée en France sous le numéro 93 12619, l'utilisation de l'acriflavine pour la préparation de médicaments utiles dans le traitement de l'infection par le virus HIV et du sida. Poursuivant ses travaux de recherches dans le domaine des composés à activité antivirale, la demanderesse a maintenant trouvé que l'association pharmaceutique comprenant une ellipticine et une acridine, présentait des propriétés remarquables pour le traitement des affections virales. La présente invention concerne donc une nouvelle association pharmaceutique comprenant une ellipticine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, et une acridine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, qui possède de remarquables propriétés antivirales et peut être de ce fait utilisée pour le traitement des infections virales et plus particulièrement des infections par le virus HIV et pour le traitement du sida (syndrome de l'immunodéficienoe acquise). L'invention a également pour objet l'utilisation d'une ellipticine en combinaison avec une acridine pour la préparation d'un médicament pour le traitement des infections virales, notamment les infections par le virus MIV ou le traitement du sida. Parmi les ellipticines qui conviennent aux fins de l'invention, on peut citer notamment les ellipticines de formule (III): dans laquelle -R1 représente un atome d'hydrogène, un groupe hydroxyle ou alcoxy en C1-C4; -R2 représente un atome d'hydrogène, un groupc alkyle en C1-C4 ou rien et dans ce dernier cas l'atome d'azote n'est pas quatemisé; - X- représente un anion pharmaceutiquement acceptable tel que notamment un chlorure, bromure, iodure, sulfate, acétate, oxalate, malate, fumarate, succinate, lactate, méthanesulfonate ou benzènesulfonate. Les ellipticines préférées selon l'invention comprennent notamment: - l'ellipticine elle-même, de formule: - la méthoxy-9-ellipticine (5,11-dimcthyl-6H-9-méthoxy-pyrido[4,3- b]carbazole), de formule: - ou bien encore l'ellipticinium (acétate de 9-hydroxy-2,5,11-triméthyl-6H- pyrido[4,3-bjcarbazolium), de formule: Les sels pharmaceutiquement acceptables des ellipticines incluent notamment le chlorhydrate, le bromhydrate, le sulfate, l'acétate, l'oxalate, le malate, le fumarate, le succinate, le lactate, le méthanesulfonate ou le benzènesulfonate. L'ellipticine et ses dérivés peuvcnt être obtenus par exemple par l'un quelconque des procédés décrits dans les brevets FR 2 152 374, 2 248 828 ou 2 308365. Parmi les acridines appropriées aux fins de l'invention, on peut citer outre l'acridine elle-même, l'acriflavine et la proflavine sus-mentionnées, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Les sels pharmaceutiquement acceptables des acridines comprennent notamment le chlorhydrate, le bromhydrate, le méthanesulfonate, le maléate, le fumarate et le 2-naphtalènesulfonate. L'acridine, ses dérivés et leurs sels peuvent être obtenus par exemple selon une variante du procédé décrit par Yoshiharu et al. (Bull. Soc. Chem. Jap., 1988, 61(9), 3335). L'acriflavine est disponible commercialement (Welding Pharma France). Les travaux effectués par la demanderesse ont montré que l'association pharmaceutique selon l'invention inhibe complétement l'activité virale du virus de Friend chez la souris et que de plus elle permet d'atteindre une augmentation considérable de la durée de survie des souris infectées par ce virus. La leucémie de Friend est un des modèles murins qui permet l'étude in vivo de médicaments antiviraux. Il s'agit d'un état d'immunodéficience avec complication induite par un rétrovirus. La demanderesse a par ailleurs trouvé que l'association pharmaceutique selon l'invention était efficace sur des malades présentant un sida résistant à l'AZT (3'-azido-3'-désoxythymidine ou azidothymidine). La demanderesse a également trouvé qu'il était possible d'utiliser l'association pharmaceutique selon l'invention en combinaison avec de l'AzT. Les quantités d'ellipticine et d'acridine dans l'association pharmaceutique selon l'invention seront déterminées en fonction de l'état du patient. Ces quantités ne devront pas être toxiques. A titre indicatif, on précise ci-après la toxicité d'une des acridines et d'une des ellipticines susceptibles d'être contenues dans l'association pharmaceutique selon l'invention: a) la toxicité de l'acriflavine est de 550 mg/kg par voie orale, 39,5 mg/kg par voie sous-cutanée et de 22,5 mg/kg par voie intraveineuse, déterminée sur la souris de la souche SWISS. Elle est de 1200 mg/kg par voie orale, de 35 mg/kg par voie intrapéritonéale et de 35 mg/kg par voie intraveineuse, déterminée sur le rat de la souche WISTAR. En administration répétée de 90 jours, la dose maximale tolérée est de 100 mg/kg par voie orale, déterminée sur le rat WISTAR mâle et femelle. b) la toxicité de la méthoxy-9-ellipticine par voie sous cutanée est de 150 mg/kg, déterminée sur la souris de la souche SWISS. La dose maximale tolérée en administration répétée de 30 jours est de 40 mg/kg par voie sous cutanée, déterminée sur la souris de la souche F1 (BAT, x C57 BU6). Selon les modalités d'emploi thérapeutique souhaitées et en fonction des indications précises du traitement, de la gravité de la maladie et du poids du patient, les constituants de l'association pharmaceutique, objet de la présente invention seront conditionnés sous différents types de présentation. Ainsi, selon un premier type de présentation, l'ellipticine ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et l'acridine ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, se présentent dans des conditionnements distincts. Par exemple, chaque principe actif peut se présenter séparément sous forme de soluté injectable. Chaque flacon de soluté injectable contient des doses unitaires, par exemple des doses comprises entre 5 et 500 mg de principe actif dans un véhicule aqueux, isotonique ou stérile, qui contient des agents de dispersion et/ou des mouillants pharmacologiquement compatibles. Le conditionnement réalisé permettra une administration parentérale, par exemple une administration intraveineuse directe, ou l'introduction dans un dispositif de perfusion intraveineuse, ou bien encore une administration par un système d'implant permettant la perfusion sous-cutanée, tel que par exemple le système du port-card. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, l'un des principes actifs se présente sous forme de soluté injectable et l'autre principe actif se présente sous forme unitaire d'administration par voie orale. Dans ce cas, le flacon de soluté injectable peut contenir des doses unitaires, par exemple des doses allant de 5 à 500 mg de principe actif, dans un véhicule et un conditionnement analogues à ceux mentionnés ci-dessus, et la forme unitaire d'administration par voie orale contiendra de 5 à 200 mg de principe actif. Les formes unitaires d'administration par voie orale comprennent notamment les comprimés et les gélules entériques, dans lesquels le principe actif est mélangé avec un ou plusieurs véhicules pharmaceutiquement acceptables. A titre d'exemple de véhicule pharmaceutiquement acceptable, on peut citer notamment le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, les véhicules aqueux ou non, les dérivés paraffiniques, les glycols, les agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, et les conservateurs. Selon un second type de présentation, l'ellipticine ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et l'acridine ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, se présentent dans le même conditionnement, par exemple sous forme de soluté injectable. Les flacons contiennent par exemple des doses unitaires comprenant de 5 à 500 mg de chaque principe actif, dans un véhicule et un conditionnement analogues à ceux mentionnés ci-dessus. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, les deux principes actifs sont contenus dans une forme unitaire d'administration par voie orale. Les doses unitaires comprendront de 5 à 200 mg de chaque principe actif, dans une formulation galénique analogue à celle mentionnée ci-dessus. Les constituants de l'association pharmaceutique selon l'invention peuvent être utilisés en dosages journaliers ou hebdomadaires. A titre d'indication, les constituants dans un conditionnement injectable peuvent être administrés 1 à 3 fois/semaine à raison de 5 à 500 mg par prise; les constituants dans un conditionnement pour administration orale peuvent être administrés quotidiennement à raison de 5 à 400 mg par jour. L'efficacité de l'association pharmaceutique selon l'invention sur la virémie du virus de Friend a été évaluée. L'association pharmaceutique de l'invention a aussi été testée chez des malades présentant un sida résistant à l'AZT. Les résultats sont détaillés dans les exemples qui suivent, donnés à titre purement illustratif de la présente invention. EXEMPLE 1 Efficacité de l'association ellipticinium/acriflavine sur la virémie du virus de Friend a) préparation des échantillons et des animaux On a préparé des solutions d'ellipticinium (commercialisé par la société Pasteur vaccins) par dissolution dans de l'eau distillée. Les animaux utilisés sont des souris mâles de la souche DBA/2 âgées de 8 à 12 semaines. Ces animaux (9 par lot traité ou témoin) ont été gardés dans un environnement stérile, et ont été soumis à des cycles d'exposition à la lumière, puis à l'obscurité, de 12 heures chacun. Ils ont été traités au plus tard deux semaines après leur arrivée au laboratoire. b) protocole et résultats Le virus de Friend de la polycythémie (FV-P: polycythemia Friend virus) a été injecté par voie i.p. aux souris; la rate de ces animaux a été prélevée 8 jours après; on en a dissocié les cellules, qui ont ensuite été centrifugées. Le surnageant a été stocké dans l'azote liquide. Des aliquotes du sumageant ainsi obtenu, décongelé extemporanément, ont été diluées au 1/100 dans une solution saline. Ensuite, 0,2 ml de chaque dilution a été injecté à d'autres souris (9 par lot traité ou témoin; souris réceptrices principales) par le sinus rétroorbital. Le traitement avec l'association pharmaceutique ellipticinium/acriflavine a été administré par voie i.p. 1 heure après puis 1, 2, 5, 6 et 7 jours après. Le 8ème jour, 0,1 ml d'un pool de plasmas de 3 souris (3 pools par lot), pur ou dilué 10 ou 100 fois a été injecté par voie intraveineuse à un second lot de 2 souris de la souche DBA/2 (souris réceptrices secondaires). Le 16ème jour, ces souris ont été tuées; on a prélevé leurs rates, qu'on a placées dans une solution de Bouin, et la quantité de virus reçu par ces souris a été estimée par le nombre de foyers (SFFU : spleen focus forming units) formés dans la rate de ces animaux. On a comparé les résultats obtenus avec l'association ellipticinium/acriflavine à ceux obtenus avec l'AZT, avec l'ellipticinium ou l'acriflavine seuls et à ceux obtenus pour les souris témoins (non traitées). Les résultats sont rassemblés dans le tableau 1 ci-après. TABLEAU 1 composé injecté dose(mg/kg) dilution du plasma nb de foyers/rate aucun (témoin) - 1 2400 1:10 384 1:100 76 AZT 6 1 601 1:10 208 1:100 O ELP 0,5 1 125 1:10 27 1:100 4 ACF 9 1 595 1:10 183 1:100 35 ELP + ACF 0,5 + 9 1 0 1:10 O 1:100 O ELP : ellipticinium ACF: acriflavine AzT: azidothymidine Comme le montrent les résultats du tableau 1, le nombre de foyers présents dans la rate des souris non traitées est très elevé. Le traitement avec l'AZT réduit sensiblement l'activité virale dans le plasma des souris et inhibe cette activité virale pour une dilution 1:100 du plasma. Le traitement avec l'association pharmaceutique ellipticinium (0,5 mg/kg) / acriflavine (9 mg/kg) inhibe complètement l'activité virale dans le plasma des souris quelle que soit la dilution du plasma, ce qui est tout à fait surprenant au vu des résultats obtenus avec l'ellipticinium seul (0,5 mg/kg) et avec l'acriflavine seule (9 mg/kg). Des résultats comparables sont obtenus lorsqu'on utilise la méthoxy-9-ellipticine à la place de l'ellipticinium. EXEMPLE 2 Survie des animaux traités avec l'association ellipticinium/acriflavine. On a également noté la durée de prolongation de survie des animaux traités à l'AZT, à l'ELP, à l'ACF ou avec l'association pharmaceutique indiquée ci-dessus, par rapport aux animaux témOins. Les résultats sont rassemblés dans le Tableau 2 suivant: TABLEAU 2 Composé Dose (mg/kg) Jours d'administration Prolongation de survie par rapport aux témoins ours AZT 3 0,1,2,5,6,7 0 6 0,1,2,5,6,7 26 9 9 0,1,2,5,6,7 0 ELP 0,5 0,1,2,5,6,7 37 ACF 9 0,1,2,5,6,7 0 ELP + ACF 0,5 + 9 0,1,2,5,6,7 50 On observe que la prolongation de survie des animaux traités avec l'association pharmaceutique de l'invention est deux fois supérieure à celle obtenue avec les animaux traités à l'AzT. De même, on constate de manière surprenante que la prolongation de survie des animaux traités avec l'association pharmaceutique de l'invention est nettement supérieure à celle obtenue soit avec l'ELP seul, soit avec l'ACF seule. Des résultats comparables sont obtenus lorsqu'on utilise la méthoxy-9-ellipticine à la place de l'ellipticinium. EXEMPLE 3 Expérimentation clinique L'association pharmaceutique (ellipticinium + acriflavine) a été testée chez des malades présentant un sida résistant à l'AZT. Sur 4 malades testés, on note pour 1 malade une réduction significative et importante de l'antigénémie P24, sur 2 malades une stabilisation dc l'antigénémic P24, ct sur 1 maladc un état subfébrile nécéssitant l'interruption du traitement. L'antigénémic P24 (taux d'antigènes P24 dans le sang d'un patient, l'antigène P24 étant un antigène nucléocapsidique du virus HIV) a une valeur prédictive reconnue pour suivre l'évolution des infections par le virus HIV et l'évolution du sida. Son intensité reflète l'importance de la virémie. Elle donne aussi des indications sur la gravité des infections et sur leur réponse au traitement. Ces résultats permettent d'envisager l'utilisation de l'association pharmaceutique selon l'invention pour la préparation de médicaments utiles pour le traitement de sidas résistant à l' AZT. REVENDICATIONS 1. Association pharmaceutique antivirale, caractérisée en ce qu'elle comprend d'une part une ellipticine de formule: dans laquelle -R1 représente un atome d'hydrogène, un groupe hydroxyle ou alcoxy en C1-C4; -R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle en C1-C4 ou rien et dans ce dernier cas l'atome d'azote n'est pas quaternisé; - X- représente un anion pharmaceutiquement acceptable tel que notamment un chlorure, bromure, iodure, sulfate, acétate, oxalate, malate, fumarate, succinate, lactate, méthanesulfonate ou benzènesulfonate; et d'autre part, de l'acridine (lO-azaanthracène) ou un de ses dérivés. 2. Association pharmaceutique antivirale selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) et l'acridine ou un de ses dérivés sont dans des conditionnements distincts. 3. Association pharmaceutique antivirale selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) et l'acridine ou un de ses dérivés sont sous la forme de solutés injectables distincts. 4. Association pharmaceutique antivirale selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) est sous forme unitaire d'administration par voie orale et en ce que l'acridine ou un de ses dérivés est sous forme de soluté injectable. 5. Association pharmaceutique antivirale selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) est sous forme de soluté injectable et en ce que l'acridine ou un de scs dérivés est sous forme unitaire d'administration par voie oral c. 6. Association pharmaceutique antivirale selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) et l'acridine ou un de ses dérivés sont dans le même conditionnement. 7. Association pharmaceutique antivirale selon la revendication 6, caractérisée en ce que ledit conditionnement est une forme unitaire d'administration par voie orale ou parentérale. 8. Association pharmaceutique antivirale selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) et/ou l'acridine ou ses dérivés sont sous forme de sels pharmaceutiquement acceptables. 9. Association pharmaceutique antivirale selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) est choisie parmi l'ellipticine (5,11-diméthyl-6H-pyridol4,3-b]carbazole), l'ellipticinium (acétate de 9-hydroxy-2,5,1 1-triméthyl-6M-pyrido4,3-bjcarbazolium) et la méthoxy-9-ellipticine (5,11 -diméthyl-6H-9-méthoxy-pyrido[4,3-b]carbazole) et en ce que les dérivés de l'acridine sont choisis parmi la proflavine (3,6diaminoacridine) et l'acriflavine (mélange de chlorure de 3,6-diamino-l0méthylacridinium et de 3,6-diaminoacridine). 10. Association pharmaceutique antivirale selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle comprend de la méthoxy-9-ellipticine et de l'acriflavine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 11. Utilisation de lellipticine de formule: dans laquelle -R1 représente un atome d'hydrogène, un groupe hydroxyle ou alcoxy en C1-C4; -R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle en C1 -C4 ou rien et dans ce dernier cas l'atome d'azote n'est pas quaternise; - X- représente un anion pharmaceutiquement acceptable tel que notamment un chlorure, bromure, iodure, sulfate, acétate, oxalate, malate, fumarate, succinate, lactate, méthanesulfonate ou bcnzèncsulfonatc; en combinaison avec de l'acridine ou un de ses dérivés, pour la préparation d'un médicament utile pour le traitement des infections par le virus HIV et pour le traitement du sida. 12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que lellipticine de formule (III) et/ou l'acridine ou un de ses dérivés sont sous forme de sels pharmaceutiquement acceptables. 13. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) est choisie parmi lellipticine (5,11-diméthyl-6H-pyrido[4,3b]carbazole), l'ellipticinium (acétate de 9-hydroxy-2,5,11-triméthyl-6H- pyrido[4,3-b]carbazolium) et la méthoxy-9-ellipticine (5,11-diméthyl-6H-9méthoxy-pyrido[4,3-b]carbazole) ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, et en ce que lcs dérivés de l'acridine sont choisis parmi la proflavine (3,6-diaminoacridine) et l'acriflavine (mélange de chlorure de 3,6-diamino-l0méthylacridinium et de 3,6-diaminoacridine) ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 14. Utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce que l'ellipticine de formule (III) est l'ellipticine (5,1 1-diméthyl-6H-pyrido[4,3-b]carbazole) ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et en ce que le dérivé de l'acridine est l'acriflavine ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables.