Brevet FR2717483A1 — publié le 19950922

La présente invention concerne un nouveau composé dérivé du D25. La présente invention concerne également un procédé de production de ce nouveau composé. La présente invention concerne également des préparations dudit composé notament sous forme de solutions aqueuses. La présente invention concerne également des compositions comportant ledit composé destinées à l'imagerie, au diagnostic ou à la thérapie notamment des foyers infectieux, inflammatoires et tumoraux. Il s'agit de compositions injectables en particulier administrables par voie intraveineuse. La présente invention concerne enfin des trousses de diagnostic comportant un colyophilisat dudit composé, d'un réactif de marquage et d'un excipient de stabilisation permettant de reconstituer une solution aqueuse qui, par simple mélange avec un élément de marquage, fournit des compositions selon l'invention dans lesquelles le dérivé délipidé et purifié du D25 est marqué par un élément détectable. Le produit dénommé D25 est un composé polysaccharidique extrait de protéoglycane membranaire bactérien. Le composé polysaccharidique a été à l'origine décrit dans les demandes de brevet n' 84 13844 et n 86 06765. Ce composé polysaccharidique D25 est préférentiellement isolé d'une souche capsulée sauvage et non pathogène de Klebsiella pneumoniae biotype A, déposée à la Collection Nationale de l'Institut Pasteur sous le numéro 145-I-IP. Cette molécule a été initialement exploitée pour ses propriétés immunostimulantes décrites dans les demandes de brevet en France n 84 13844 et n 86 06765. Dans la demande de brevet FR 89 03034, le composé D25 a été décrit comme presentant une affinité pour les macrophages et constituant un agent de vectorisation pour reconnaître et se fixer sur les foyers inflammatoires et tumoraux mobilisant des macrophages dans leur proche environnement. La demande de brevet en France n 89 03034 décrivait l'utilisation du D25 dans des compositions aérosol pour l'imagerie scintigraphique par inhalation après marquage par un traceur radioactif approprié, notamment le 99mTc. La molécule de D25 comportait une partie lipidique S qui était un élément essentiel pour lui permettre de franchir la barrière pulmonaire spontanément. Dans ces demandes de brevet antérieures, le D25 est décrit comme comportant d'une part une chaîne polysaccharidique linéaire constituée par répétition d'un motif monomérique de 10 sucres, et d'autre part une séquence de liaison unique, plus complexe à laquelle sont liées deux courtes chaînes peptidiques. L'unité monomérique répétitive de la chaîne polysaccharidique linéaire est décrite comme ne renfermant que du galactose sous forme pyrane et furane dans les proportions suivantes: 3 g Gal p, 3 a Gal p, 2 1 Gal f, et 2 a Gal f. La structure unique de liaison est fixée à l'extrémité de la chaîne polysaccharidique linéaire. Elle contient des résidus glucose, galactose, glucosamine, heptose et acide mannodéoxyoctulosonique. Les deux courtes chaînes peptidiques sont liées à cette structure. Tel qu'il est décrit dans ces demandes de brevet antérieures, le procédé de fabrication du D25 conduit en fait à un produit sur lequel sont greffés par des liaisons N-glycosidiques respectivement sur deux glucosamines situées en position terminale de la structure unique de liaison, deux acides l-hydroxymyristiques représentant environ 1,5% de la masse du D25. A ces acides -hydroxymyristiques sont associées sous forme estérifiée ou sous forme libre des traces d'acide gras en C16 (palmitique) représentant environ 0,5% de la masse du D25. C'est la présence de ces acides gras qui confère à la molécule le caractère amphiphile qui lui permet par voie aérosol de franchir la barrière pulmonaire en fusionnant avec le surfactant alvéolaire sans nécessiter la présence de liposomes ou sans nécessiter d'avoir recours à d'autres formes galéniques. Les acides gras libres en C16 remplissent le rôle d'excipient lipophile. La présence d'un pôle hydrophobe sur la molécule joue également un rôle essentiel dans l'interaction avec la membrane des monocytes et des macrophages pour permettre l'accès au récepteur du D25 et sa fixation sur ces cellules. La voie aérosol, bien qu'elle permette la mise en évidence de foyers pathologiques de taille millimétrique, a cependant l'inconvénient de rendre impossible l'exploration de certaines régions anatomiques qui se trouvent contaminées soit directement par l'administration du radio- aérosol (massif facial) soit par la présence inévitable du produit dans les voies digestives par suite de la déglutition ou de la clairance mucocilliaire pulmonaire. Cet inconvénient de la forme aérosol lié à la technique d'inhalation ne permet pas de réaliser une imagerie 'corps entier'. Par ailleurs, l'administration d'un radio-aérosol pose des problèmes pour l'utilisation à grande échelle d'une telle forme diagnostique, compte tenu des précautions qui doivent être prises pour éviter le risque de résultats faussement positifs liés à des contaminations cutanées par les patients eux-mêmes. C'est pour ces raisons que le développement d'une forme injectable a ensuite été recherché. Toutefois, le caractère fortement lipophile d'une extrémité de la molécule D25 entraîne, par les interactions hydrophobes auxquelles elle est soumise en milieu aqueux, la formation de micelles (ou "polymères") d'un poids moléculaire apparent supérieur à 150 KD. Ces formes "polymériques" sont en équilibre dans les solutions de D25 avec la forme monomérique de 34 KD et peuvent représenter jusqu'à 3096 en poids. Par voie aérosol, ces agrégats micellaires sont dissociés dans le surfactant alvéolaire et c'est la forme libre qui franchit alors la barrière pulmonaire. La distribution systémique permet une imagerie adéquate des foyers pathologiques inflammatoires, infectieux ou tumoraux mobilisant des macrophages. En revanche, par voie intraveineuse, ces micelles sont très rapidement captés par le système réticulo-endothélial du foie et de la rate o ils restent fixés. Ainsi, le brevet francais n 90 02957 présente des modifications réalisées sur le D25 pour réduire la présence de formes micellaires. Les modifications présentées dans ce brevet n 90 02957 concernent principalement l'élimination sélective d'acides gras estérifiés (en C16), non impliqués dans la reconnaissance spécifique des cellules cible, afin de réduire le caractère lipophile de la molécule et donc la formation de micelles. En fait, le dérivé du D25 décrit dans la demande de brevet FR 90 02957 comporte encore environ 2% de 'polymères' résidus de sorte que les compositions injectables ne peuvent l'être que par voie lymphatique. L'existence d'une population de macrophages présente dans les ganglions normaux et fortement accrue lors de l'inflammation ou de prolifération tumorale, a conduit en effet à mettre en oeuvre comme agent de ciblage pour ce type cellulaire le D25 délipidé par administration locorégionale, par voie lymphatique, permettant de ce fait une sensibilité maximale de la détection. Le D25 délipidé est injecté par voie sous-cutanée ou intra-lymphatique et se trouve pris en charge par le flux lymphatique puis concentré dans les ganglions pathologiques dont il permet la visualisation. La présence résiduelle de polymères dans la voie lymphatique ne pose pas de problème car l'effet filtrant des ganglions retient les 'polymères' dans le premier ganglion et seule la forme monomérique progresse au-delà vers les autres relais ganglionnaires puis vers la circulation systémique. La mise en oeuvre du D25 dans cette application par voie lymphatique pallie aux inconvénients des composés macromoléculaires tels que agents colloides ou nanoparticulaires utilisés antérieurement, qui conduisaient à un blocage au niveau des premiers ganglions pathologiques et à l'impossibilité d'accéder à toute la chaîne lymphatique. Par ailleurs, dans les deux brevets n 89 03094 et n 90 02957, le marquage du principe actif par un traceur radioactif tel que le 99mTc était obtenu extemporanément par l'intermédiaire d'étain stanneux (Sn2+) soit sous forme de chlorure (Sn C12), soit de fluorure (SnF2). Les conditions du marquage et le manque de stabilité de ce marquage du D25 sont d'autres raisons qui limitaient son utilisation par voie intraveineuse. Le D25 est un accepteur du 99mTc plus fort que SnF2, toutefois la formation de colloides d'étain liée à un excès de SnF2 est responsable de la présence de colloides d'étain marqués. Ceci n'est pas gênant pour une forme aérosol car le poumon fonctionne comme un filtre pour les colloides qui n'atteignent jamais la circulation systémique. En revanche, comme on l'a rappelé, dans le cas d'une administration intraveineuse, les colloides directement déversés dans le flux sanguin sont immédiatement piégés par le foie et la rate o ils persistent très longtemps. En outre, le manque de stabilité du marquage se traduit par un échange du Technetium avec des protéines sériques ou par une concentration par la glande thyroïde de Technetium libre. Ceci est totalement incompatible avec 'l'objectif d'imagerie corps entier' pour lequel on doit obtenir une diffusion homogène et rapide du produit dans l'organisme en évitant la fixation passive dans des organes tels que le foie et la thyroïde. Le but de la présente invention est de fournir une composition injectable par voie intraveineuse destinée à l'imagerie, au diagnostic ou à la thérapie, notamment des foyers infectieux, inflammatoires et tumoraux via le ciblage de macrophages. Le but de la présente invention est donc plus précisément d'obtenir une nouvelle préparation d'un composé D25 qui améliore la biodistribution dudit composé en évitant le piégeage hépato-splénique des formes micellaires et qui permette son marquage de façon stable in vivo, notamment par du 99m Tc. Pour ce faire, la présente invention a consisté non seulement à séparer la forme "polymérique' du D25 partiellement délipidé décrit dans le brevet FR 90 02957 pour ne conserver que la forme "monomérique', mais en outre à modifier la molécule et son environnement pour obtenir une préparation dans laquelle la forme "monomérique' est stabilisée pour éviter la formation spontanée des micelles, tout en conservant les propriétés de ciblage du composé D25. La présente invention a tout d'abord pour objet une préparation d'un composé polysaccharidique D25, délipidé et purifié, de poids moléculaire d'environ 34 KD, pouvant être obtenu par extraction à partir des protéoglycanes membranaires de Klebsiella pneumoniae, caractérisée en ce que ledit composé polysaccharidique est délipidé et purifié de sorte que ladite préparation ne comporte pas de formes micellaires dudit composé. Selon une autre caractéristique, la présente invention a pour objet une préparation d'un composé polysaccharidique D25, délipidé et purifié, de poids moléculaire d'environ 34 KD, pouvant être obtenu par extraction à partir de protéoglycanes membranaires de Klebsiella pneumoniae, caractérisée en ce que ledit composé est délipidé et purifié de sorte que ladite préparation ne comporte pas d'acides gras palmitiques et de peptides libres ou associés audit composé. On entend ici par "préparation' une solution aqueuse dudit composé, en particulier une solution injectable apyrogène ou un lyophilisat de celle-ci. La présente invention fournit également un nouveau dérivé du D25 qui est modifié chimiquement par délipidation et purification, ce qui permet d'éviter la 'polymérisation' du D25 en solution aqueuse par le biais de la réduction de son caractère hydrophobe sans toutefois l'éliminer complètement, pour ne pas détruire les propriétés du produit notamment quant à sa fixation spécifique sur les macrophages. La présente invention a donc également pour objet un composé polysaccharidique D25 délipidé et purifié, d'environ 34 KD, pouvant être obtenu par extraction à partir des protéoglycanes membranaires de Klebsiella pneumoniae, caractérisé en ce qu'il peut être représenté par la formule (I) suivante: O a HO PCO C: J CCO CH HCH2 CH-OH CH.OH I I (CH2) (CH2 10 rH3CH3 dans laquelle [PS] représente une chaîne polysaccharidique. L'analyse de la séquence de la chaine polysaccharidique a permis de préciser la séquence [PS] comme étant une chaîne polysaccharidique linéaire composée par l'alternance régulière des deux séquences disaccharidiques suivantes liées par des enchainements (1 -> 3) répétée environ 30 fois: -[-> 3) aD) Galp (1-> 3) S D Galf (1-] ->, --> 3)aD Galp (1 -> 3) S DGalp (1-]-> à l'extrémité de laquelle se trouve une structure unique de liaison constituée par 3 résidus glucose, 1 résidu galactose, 2 résidus heptose et 1 résidu acide mannodéoxyoctulosonique. Cette structure unique de liaison est attachée aux deux glucosamines terminales représentées dans la formule (I) sur chacune desquelles est lié un acide A-hydroxymyristique dans la liaison N-glycosidique. La formule hypothétique de cette structure unique de liaison est la suivante: [PS],PGlc p NH -, c p (Ga p Hep p,Hep p ,3 1,4 ' 1,3 1,3 1,5 Man Oc. A- I3,1 X( Glc p Il apparaît que ces deux acides gras fI-hydroxymyristiques, liés à la diglucosamine terminale par des liaisons amide, sont essentiels mais suffisants pour conférer la propriété de ciblage des macrophages et que l'absence des deux peptides associés et des acides gras palmitiques n'est pas nécessaire à cet égard. En outre, l'élimination quantitative des acides gras estérifiés en C16 et des peptides a permis de supprimer la très faible capacité d'activation du complément rémanent dans les formes antérieures du D25 délipidé. Ces propriétés immunostimulantes rémanentes indésirables pouvaient être gênantes chez les patients présentant des déficiences graves du système du complément. Enfin, l'élimination des peptides associés au composé D25 a permis de démasquer un groupe pyrophosphate terminal qui est responsable de la stabilité du marquage au technetium observé avec le composé selon la présente invention par rapport aux formes antérieures du D25. On a pu démontrer par élimination sélective de ce groupe pyrophosphate, qu'il n'était pas impliqué dans la reconnaissance spécifique des récepteurs cellulaires, mais responsable de la fixation à haute affmité du 99m Tc lors du marquage du composé. Même après délipidation, le composé selon la présente invention conserve deux acides gras 1%-hydroxymyristiques. De ce fait, il conserve un caractère amphiphile pouvant potentiellement induire en solution la formation de micelles. Il apparaît, toutefois, que la formation de ces micelles dépend de l'environnement ionique et que l'addition de sels à faible concentration permet de s'opposer définitivement à la formation de ces micelles en solution aqueuse. C'est pourquoi avantageusement, la préparation du composé selon la présente invention comporte un sel physiologiquement acceptable, à faible concentration molaire, de sorte que, sous forme de solution aqueuse, celle-ci présente une faible force ionique. D'autres sels que NaCl peuvent être utilisés mais NaCl apparaît tout à fait adapté car c'est le même sel qui est utilisé dans les opérations de marquage au technetium avant administration aussi bien pour assurer l'isoosmolarité que pour éluer le technétium du générateur. La fourchette de NaCl en termes de molarité peut être assez large puisqu'à 0,15 M (isoosmolarité), on n'observe toujours pas de micellisation. Dans un mode de réalisation particulier, la solution aqueuse selon la présente invention comporte un sel de NaCl à une concentration de lmM à 0,15 M. Le procédé de préparation de ce dérivé de D25 délipidé, tel qu'il est décrit dans la technique antérieure, est caractérisé en ce que: a) à partir de lysats bactériens d'une souche bactérienne gram négatif, on extrait le protéoglycane membranaire brut, b) on solubilise le protéoglycane brut de l'étape a) par hydrolyse alcaline, et on récupère le protéoglycane soluble qui se trouve dans la solution aqueuse, c) on isole un composé polysaccharidique et, si nécessaire, on élimine les protéines présentes dans la fraction isolée, d) on extrait les acides gras libres associés audit composé polysaccharidique à l'aide d'un solvant organique approprié. Parmi les bactéries gram négatif susceptibles d'être mises en oeuvre, on cite Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens et Escherichia coli; en particulier et de préférence, comme on l'a vu, Klebsiella pneumoniae qui fait l'objet d'un dépôt à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) sous le n 145-I-IP. Dans un mode de réalisation particulier du procédé décrit dans la technique antérieure, on effectue les étapes suivantes: a) à partir d'une souche bactérienne gram négatif, on extrait le protéoglycane membranaire brut. Ce protéoglycane brut est recueilli dans le surganeant obtenu après centrifugation des lysats bactériens; b) on solubilise le protéoglycane brut obtenu à l'étape a) par hydrolyse alcaline, en particulier avec un hydroxyl alcalin, de préférence la soude à molarité comprise entre 0,3 et 1 M, de préférence de 0,5 à 0,75 M à une température inférieure à 90 C, de préférence entre 50 et 60 C, par exemple 56 C, de préférence sous agitation, le traitement étant poursuivi pendant au moins 1 heure; c) après refroidissement, on neutralise la suspension par un acide, par exemple l'acide chlorhydrique et, si nécessaire, on effectue une hydrolyse enzymatique des protéines présentes dans la solution, en 21) particulier par action de protéinase; d) le composé polysaccharidique D25 est ensuite purifié par précipitation alcoolique et recueilli par exemple par centrifugation; e) les acides gras libres sont extraits à l'aide d'un solvant organique approprié, par exemple du chloroforme ou un mélange de chloroforme et de méthanol, par exemple le précipité du composé polysaccharidique D25 est dispersé dans le solvant organique sous agitation puis le solvant est éliminé, puis enfin le précipité est rincé par le même solvant; f) le précipité est repris dans l'eau, et la solution de D25 délipidé selon l'invention est clarifiée par centrifugation, puis le surnageant est recueilli et, enfin, g) on effectue une nouvelle hydrolyse alcaline, puis après refroidissement, on neutralise la suspension par un acide, par exemple l'acide chlorhydrique, et on ajoute à la solution du désoxycholate de sodium dans une proportion ne dépassant pas 0,5%, puis on précipite le composé polysaccharidique, et le précipité est repris dans l'eau, puis le composé D25 délipidé obtenu est isolé par fractionnement ou ultrafiltration. Le composé selon la présente invention a été obtenu par purification du composé D25 délipidé obtenu par le procédé ci- dessus, décrit dans la demande de brevet FR 90 02957, dans les conditions particulières suivantes. Le traitement au désoxycholate de l'étape g), qui était destiné à empêcher ou réduire la fraction micellaire de la solution obtenue après la dernière hydrolyse alcaline, a été remplacé par une étape de chromatographie HPLC de la solution obtenue après la deuxième hydrolyse alcaline dans des conditions faiblement salines particulières et avec un support chromatographique approprié, qui permettent d'une part d'exclure une fraction de masse apparente supérieure à 100 KD, correspondant à la formation de micelles ou agrégats, mais surtout, d'autre part, d'éviter les interactions hydrophobes avec le support chromatographique afin de pouvoir éluer à sa masse théorique d'environ 34 KD un composé polysaccharidique selon la présente invention. D'autres approches théoriquement possibles avaient été tentées pour éliminer le polymère tel que l'ultracentrifugation, le relarguage par des sels de cations divalents, ou l'ultrafiltration. Seule la chromatographie dans les conditions particulières mises en oeuvre a permis d'obtenir une solution de D25 sous forme 'monomérique' stable avec le dérivé délipidé et purifié selon la présente invention, auquel aucun acide gras en C16 et peptides ne se trouvent plus associés. Cette méthode présente en outre d'autres avantages. Tout d'abord, la chromatographie HPLC est plus facilement transposable à l'échelle industrielle. Par ailleurs, un des points critiques majeurs dans la production de substances injectables par voie intraveineuse chez l'homme est d'écarter toute contamination par des endotoxines dans le produit fini. Or, le D25 provient d'une bactérie gram négatif riche en LPS, c'est lui- même un analogue de LPS détoxifié et les réactifs (enzymes) et environnement du procédé de fabrication (locaux, matériels...) sont susceptibles d'introduire ce type de contaminants. A cet égard, la chromatographie telle qu'elle est mise en oeuvre dans le procédé selon la présente invention, notamment à la fin du procédé permet d'éliminer ces contaminants éventuels, en même temps que la forme 'polymérique'. 1! Un autre avantage d'une préparation du composé selon l'invention de faible force ionique est d'éviter les interactions avec le support chromatographique. L'augmentation de la concentration en sel engendre des interactions avec le support chromatographique qui empêchent l'élution du produit. Une préparation selon la présente invention comportant 20 mM de NaCI est particulièrement avantageuse pour plusieurs raisons: - Tout d'abord, c'est la concentration qui permet d'obtenir le meilleur pouvoir de résolution dans l'étape de chromatographie et donc, en application industrielle, de traiter des échantillons de taille maximale; - Ensuite, cette concentration en fonction du rendement industriel en composé selon l'invention et de l'étape suivante de fabrication du radiopharmaceutique correspondant permet d'obtenir directement la bonne concentration finale en NaCl dans le produit fini. Selon un autre aspect original de la présente invention, le produit injectable prêt à être marqué peut être présenté sous forme d'un seul colyophilisat d'un composé selon la présente invention, d'un réactif de marquage et d'un excipient de stabilisation. Ce colyophilisat permet de reconstituer une solution aqueuse qui est prête à être mélangée juste avant emploi directement avec l'élément de marquage proprement dit pour fournir une solution aqueuse dudit composé marqué par un élément détectable. Le produit sous forme lyophilisée est plus stable qu'en solution. La mise au point de la colyophilisation est un autre aspect essentiel et original de la présente invention. Le SnF2 est un réactif de marquage connu pour marquer des molécules au 99m Tc par sa capacité de réduire l'ion pertechnétate. Sa stabilité en milieu neutre le rend compatible avec le composé sleon la présente invention, ce qui n'est pas le cas du SnCl2 stable uniquement en milieu acide o le composé selon la présente invention est labile. C'est donc le SnF2 qui est retenu avantageusement pour marquer le composé au 99m Tc, mais dans des conditions limitantes pour empêcher ou limiter la formation de colloides d'étain. La présence d'acide ascorbique comme agent de stabilisation augmente la stabilité du complexe entre le 99m Tc au degré d'oxydation +V et les sites accepteurs faibles du composé selon la présente invention en réduisant simultanément la quantité de technetium échangeable. Les sites accepteurs faibles du D25 sont les groupes fonctionnels exposés sur le polysaccharide tels que des groupes hydroxyle. Selon une autre caractéristique, la trousse selon la présente invention est une trousse monoflacon pour préparer le produit prêt au marquage, ce qui présente de nombreux avantages par rapport à la présentation antérieure en deux flacons: - une commodité d'emploi avec une procédure de marquage simplifiée; - une plus grande sécurité avec moins de risques d'erreur; - une meilleure qualité du produit pour l'imagerie par voie intraveineuse. En effet, l'objectif de la voie intraveineuse est de réaliser une imagerie 'corps entier" en évitant l'irradiation inutile d'organes cibles tels que la thyroïde ou l'estomac (par du 99m Tc libre) et une fixation gênante, en particulier du foie, par captation de colloïdes d'étain marqués. Toutefois, l'excès d'étain forme spontanément des colloides qui vont se fixer dans le foie. Il convient donc de mettre en oeuvre la quantité de SnF2 strictement nécessaire au marquage. Cela est malheureusement incompatible avec une bonne stabilité du radiopharmaceutique et, avec le fait que non seulement la quantité absolue d'étain intervient, mais également la concentration instantanée au moment du marquage. Il existe donc une limite inférieure au-dessous de laquelle la qualité du marquage est profondément dégradée, conduisant à du technetium libre qui va ensuite se fixer dans la thyroïde et introduisant un bruit de fond par sa fraction liée à l'albumine qui réduit la spécificité et le contraste de l'image scintigraphique. Une présentation en deux flacons, pour respecter ces paramètres, oblige à utiliser une concentration d'étain supérieure à celle qui est strictement nécessaire (deux solutions à mélanger); de plus, elle augmente le nombre de manipulations au moment du marquage et le risque d'oxydation du Sn2+ au contact de l'air qui facilite la formation des colloides. La présentation en monoflacon permet donc de minimiser tous ces risques et de réduire au strict minimum la quantité de SnF2 à mettre en oeuvre. Toutes les opérations de marquage se déroulent ainsi à l'abri de l'air dans le même flacon sans transferts de solutions. Par ailleurs, l'expérience démontre également que la stabilité du produit fini est bien meilleure en colyophisat et permet donc de revendiquer une plus longue péremption. L'augmentation de la stabilité du marquage in vivo peut être liée au démasquage de groupes pyrophosphates. Cette stabilité de marquage in vivo du composé selon l'invention est en outre améliorée par la formulation en présence d'acide ascorbique, qui augmente la stabilité du complexe entre le 99m Tc réduit au degré d'oxydation + V, et les sites accepteurs du composé selon la présente invention (tels que le groupe pyrophosphate, mais aussi les autres groupes accepteurs). La présente invention a donc pour objet des compositions destinées à l'imagerie, au diagnostic ou à la thérapie caractérisées en ce qu'elles comportent le composé D25 partiellement délipidé selon l'invention. Dans un mode préférentiel de réalisation de l'invention, les compositions sont destinées à l'imagerie et au diagnostic ou la thérapie des foyers infectieux inflammatoires et tumoraux via le ciblage des macrophages. Les compositions selon l'invention peuvent être injectables par voie intraveineuse, mais aussi par voie lymphatique notamment sous- cutanée ou intrapleurale, ou administrables par voie aérosol. Lorsque les compositions sont destinées à l'imagerie et au diagnostic in vivo ou ex vivo, le composé polysaccharidique selon l'invention peut être marqué par un élément détectable tel qu'un élément radioactif, paramagnétique ou fluorescent. Ledit composé polysaccharidique peut également être détectable indirectement, c'est-à-dire qu'il peut être détecté via une substance elle- même marquée par un élément détectable tel que mentionné précédemment, ladite substance reconnaissant et se liant spécifiquement audit composé polysaccharidique. A titre de substance reconnaissant et se liant spécifiquement audit composé polysaccharidique purifié selon l'invention, on peut citer un anticorps dressé contre ledit composé. Les kits d'imagerie ou de diagnostic in vivo ou ex vivo selon l'invention comporteront donc soit le composé polysaccharidique D25 délipidé et purifié selon la présente invention et des moyens pour le marquer, soit le composé polysaccharidique D25 délipidé et purifié selon la présente invention et une substance reconnaissant ledit composé et des moyens pour marquer ladite substance. Un champ d'application du dérivé D25 délipidé et purifié selon la présente invention est l'imagerie scintigraphique ou la détection per opératoire lorsque cet agent est couplé à un isotope radioactif. Les radionucléides peuvent en effet être détectables par visualisation ou par comptage per opératoire par une sonde guidée manuellement. Il s'agit alors d'un diagnostic par comptage et non d'imagerie. On peut citer comme élément radioactif approprié selon l'invention, un radionucléitde détectable par scintigraphie tel que le technetium Tc 99m ou encore à titre non limitatif, l'iode 123 et l'indium 111. Le dérivé D25 délipidé et purifié selon la présente invention peut être également associé à un agent paramagnétique tel que le gadolinium, par exemple pour constituer un produit de contraste en imagerie par résonance magnétique (IRM). Plus précisément, les compositions injectables comportant du D25 délipidé et purifié selon la présente invention sont particulièrement appropriées pour l'imagerie, le diagnostic et la thérapie des foyers infectieux, inflammatoires et tumoraux des voies lymphatique via le ciblage des macrophages. Une application lymphoscintigraphique du composé selon l'invention concerne l'imagerie des ganglions médiastinaux. Les applications diagnostiques du composé selon l'invention via le ciblage des macrophages concernent notamment les pathologies inflammatoires suivantes: fibrose pulmonaire primitive, pneumoconiose, fibrose pulmonaire au cours des connectivites, sarcoidose, pneumopathie médicamenteuse, pneumopathie allergique, pneumocystose, asthme, rhumatisme articulaire inflammatoire, foyers infectieux profonds, maladies de système, greffes et implants (biomatériaux). Elles concernent aussi des pathologies tumorales suivantes, telles que la détection précoce de métastases via le ciblage des macrophages recrutés, et la détection spécifique précoce des métastases de mélanome par le ciblage de récepteurs spécifiques du composé selon l'invention exprimés sur ces cellules tel que le récepteur au galactose MAC-2, expression qui semble être correlée avec un facteur de gravité. On a en effet identifié de nouveaux récepteurs spécifiques exprimés sur les cellules de mélanome, impliquant un autre site de la molécule dans la liaison (chaîne polygalactose), le pôle hydrophobe restant pour sa part nécessaire pour l'interaction du composé avec la membrane cellulaire. Cette application, importante pour les indications spécifiques en cancérologie, n'avait pas été mise en évidence précédemment. Sur le ciblage du mélanome, le composé selon l'invention est particulièrement avantageux car il n'existe pas de produits concurrents ciblant spécifiquement les métastases de mélanomes. Les autres techniques d'imagerie donnent des informations anatomiques (RMN, tomodensitométrie X) mais non spécifiques et leur sensibilité est à ce jour insuffisante pour détecter les métastases de mélanome à un stade suffisamment précoce pour modifier le pronostic dramatique de ce cancer. La présente invention a donc en particulier pour objet des compositions destinées à l'imagerie et au diagnostic du mélanome et autres tumeurs exprimant le même récepteur, notamment le cancer du côlon. Enfin, compte tenu de ses caractéristiques permettant le ciblage des macrophages et des cellules de mélanomes, le composé selon l'invention peut être bien entendu utilisé à des fins thérapeutiques comme agent de vectorisation pour la radiothérapie ciblée, pour la vectorisation de substances cytotoxiques ou encore pour la vectorisation d'immunogène et/ou d'agents immunomodulateurs ou anti-inflammatoires. Enfin, le D25 délipidé et purifié selon l'invention pourra être également utilisé directement à titre de médicament, notamment compte tenu de ses propriétés anti-choc endotoxinique. D'autres applications thérapeutiques, liées aux propriétés de ciblage du composé selon l'invention sont appropriées. Dans certaines applications, le composé sera marqué par un élément radioactif. Ce sont, par exemple, des applications en radiothérapie pour l'irradiation localisée par un émetteur approprié de foyers pathologiques tumoraux fixant le composé marqué. La trop importante fixation hépatique du D25 par voie intraveineuse (seule possible pour ce type d'application) ne permettait pas de l'envisager. La présente invention a également pour objet des dérivés du composé D25 délipidé et purifié selon la présente invention et l'utilisation de ces dérivés dans les mêmes applications que celles mentionnées ci- dessus. Il s'agit des dérivés oxydés, les dérivés oxydés du composé D25 délipidé et purifié selon la présente invention s'entendant de composés dans lesquels les résidus galactofuranose (gal f) de la chaîne polysaccharidique linéaire ont été transformés en arabinose; et les dérivés de type amide, ester ou éther, ainsi que leurs sels et dérivés d'ammonium quaternaires. Les dérivés de type amide, ester ou éther, ainsi que les sels et dérivés d'ammonium quaternaire qui sont des dérivés d'hémisynthèse du D25, ont été décrits dans les demandes de brevet n 86 06765 et n 87 05690. Des dérivés oxydés du D25 dans lequel le résidu galactofuranose (Gal f) de la chaîne polysaccharidique linéaire du D25 a été transformé en arabinose, ont également été décrits dans la demande de brevet n 87 05690. Dans la description détaillée qui va suivre à la lumière de laquelle d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront, le composé D25 partiellement délipidé, qui a subi la purification complémentaire et la modification chimique selon la présente invention afin de le rendre compatible avec l'injection intraveineuse pour en éliminer complètement les propriétés pharmacologiques et en augmenter l'affinité par un radioisotope, notamment le Tc, est dénommé "JO01 '. La Figure 1 représente les résultats de la liaison du J001 FITC aux leucocytes humains. La Figure 2 représente les résultats à différentes doses de la liaison du J001-biotinylé sur les macrophages BAL et les monocytes de sang de 23 individus différents (valeurs moyennes). La Figure 3 représente la distribution cellulaire du J001-biotinylé par liaison sur les macrophages BAL et leucocytes de sang de volontaires sains (valeurs moyennes). Les Figures 4 à 6 représentent les liaisons du J00-1-biolinylé à différentes lignées de mélanomes. Exemple 1: procédé de fabrication du Drincidpe actif 1001 1) Obtention du lysat bactérien clarifié La biomasse de Klebsiella pneumoniae est obtenue par culture en fermenteur en milieu liquide, dans des conditions classiques. La seule contrainte spécifique étant le blocage de la croissance en fin de phase exponentielle par un brusque refroidissement à 4 C pour préserver les structures biologiques. La biomasse est séparée du milieu de culture par centrifugation continue à basse température et lavée par centrifugation. Le concentrat cellulaire est stocké au congélateur en attendant d'être traité. Le concentrat est décongelé dans un réacteur et mis en suspension dans du tampon tris-HCl (10 mM) pH 7,0 contenant Mg C12 (10 mM) et NaCI (15 mM) à 4 C pour avoir une concentration finale équivalente à 50 g de cellules sèches par litre de suspension. La production de lots industriels met en oeuvre l'équivalent de 1 à 3 kg de cellules sèches par opération. On ajoute ensuite 5 mg de DN ase par litre de suspension. Les cellules microbiennes sont alors désintégrées par passage en continu sur des broyeurs industriels de type APV - Manton Gaulin. Le lysat bactérien ainsi obtenu est soumis à une première clarification continue à 15.000 x g sur un séparateur Sharples à 4 C pour éliminer les cellules non broyées et les résidus de broyage. Le culot de centrifugation est éliminé et le surnageant recueilli, il constitue le lysat clarifié. 2) Isolement de la fraction membranaire Le lysat bactérien clarifié et acidifié à pH 4,2 + 0,2 par l'acide acétique est laissé au repos 30 minutes à + 4 C. Le précipité d'impuretés est éliminé par centrifugation continue à 15.000 x g sur séparateur Sharples. Le surganeant opalescent contenant la fraction membranaire est neutralisé par NaOH puis dialysé par ultrafiltration à volume constant contre de l'eau distillée sur une membrane coupant à 10.000 Daltons. Lorsque la résistivité atteint 1000 Q.cm-1, le volume est concentré pour atteindre 6 1 par kg d'équivalent en cellules sèches de départ. Après dosage par la réaction du biuret, le titre en protéines est ajusté à 10 mg/ml par dilution avec de l'eau distillée. La suspension membranaire de Klebsiella pneumoniae ainsi obtenue sera ensuite utilisée pour l'extraction et la purification du principe actif J001. 3) Procédé de préparation du principe actif J001 (pour obtenir une forme monomérique injectable) a) Première hydrolyse alcaline Cette étape est destinée à solubiliser les membranes pour permettre l'isolement du D25 brut et à hydrolyser la majeure partie des acides gras estérifiés. A la suspension membranaire obtenue précédemment, de l'hydroxyde de sodium concentré est ajouté lentement sous agitation jusqu'à atteindre une molarité de 0,5 M. La solution est ensuite portée à 56 C et maintenue pendant 1 heure sous agitation à cette température. Après un refroidissement rapide à température ambiante, la solution est neutralisée par l'acide chlorhydrique. b) Hydrolyse enzymatique Cette étape est destinée à éliminer les impuretés protéiques et à digérer les résidus de peptidoglycane subsistant après la première hydrolyse alcaline. A la solution neutralisée, on ajoute du tampon tris 10 mM et de 1'EDTA q.s.p. 1 mM. Le pH est ajusté à 7,5. On procède alors à une digestion enzymatique pendant deux heures à 37 C en présence de 400 mg/l de protéinase K et 100 mg/l de lysozyme. c) Isolement du D25 brut par précipitation alcoolique Le J001 brut est séparé par précipitation avec 2 volumes d'éthanol préalablement refroidi à -20 C. Après un repos de 30 min à +4 C, le précipité est recueilli par centrifugation sur Sharples. d) Délipidation Cette étape est destinée à extraire du D25 brut, les acides gras préalablement déestérifiés par la première hydrolyse alcaline. Le culot alcoolique est immédiatement dispersé à température ambiante au moyen d'un homogénéiseur (de type Turrax) dans un mélange chloroforme: méthanol (3:1) à raison de 1 pour 1 kg de cellules sèches de départ. (Tous les volumes indiqués sont donnés pour 1 kg de cellules sèches de biomasse). Le précipité est recueilli sur verre fritté n 3 o il est rincé par 500 ml du même mélange chloroforme: méthanol puis séché sous courant d'azote. Le résidu sec est dispersé dans 1500 ml d'eau distillé puis maintenu pendant une nuit sous agitation à 4 C. La solution de reprise du D25 délipidé est clarifiée par centrifugation à 30.000 x g pendant 60 minutes et le surnageant dialysé jusqu'à 5000 Q cm-' sur une membrane coupant à 10.000 daltons. Le volume est ajusté à 1500 ml par de l'eau distillée. e) Deuxième hydrolyse alcaline Elle a des objectifs multiples à ce stade: (1) désestérifier quantitativement les acides gras en C16 pouvant rester à ce stade de la purification du D25 délipidé, (2) éliminer les peptides associés, (3) éliminer les formes micellaires ayant pu se former après la délipidation, (4) détruire les endotoxines contaminantes ayant pu être introduites en cours de procédé notamment lors des digestions enzymatiques, (5) réduire au maximum le taux de polymères résiduels. Au dialysat précédent, on ajoute de l'hydroxyde de sodium concentré pour avoir une molarité finale de 0,5M. La solution est ensuite portée à 56 C et maintenue 1 heure sous agitation à cette température. Après un refroidissement rapide à température ambiante, la solution est neutralisée par l'acide chlorhydrique. f) Chromatographie de tamisage moléculaire Elle est pratiquée sous des conditions qui réduisent les interactions moléculaires pour empêcher la formation de micelles et sur un support chromatographique de porosité appropriée, cette étape de purification permet d'éliminer dans le pic d'exclusion, la totalité des formes polymériques résiduelles dans la préparation de J001. La solution neutralisée après la deuxième hydrolyse alcaline est équilibrée en NaCl 20 mM par dialyse sur une membrane coupant à 10.000 daltons. Lorsque l'équilibre ionique est atteint, le volume est concentré pour avoir une concentration finale en JOO1 de 20 à 30 mg/ml. cette solution constitue l'échantillon destiné à être déposé sur la colone de chromatographie. Les conditions de chromatographie sont les suivantes: Colonne industrielle en pyrex de 20 cm de diamètre moulée avec du gel Séphacryl S300 sur une hauteur de 60 cm et équilibrée en NaCl 20 mM en conditions stériles et apyrogènes. L'échantillon déposé représente de 3 à % du volume du gel. L'élution est conduite en NaCl 20 mM avec une détection continue en U.V. à 206 nm et indice de réfraction. Un système de pilotage automatique permet de collecter directmeent la forme monomérique du D25 délipidé après élution du pic de polymères à l'exclusion. Le rendement de cette étape de chromatographie est voisin de % en formes monomériques de J001. Le support utilisé dans cette étape (Séphacryl S300) n'a pas été retenu uniquement pour ses caractéristiques de séparation. Il présente également l'avantage de pouvoir être décontaminé par des traitements alcalins à haute concentration qui sont validés pour la destruction des endotoxines et également vis-à-vis des risques BSE Ce point est important en vue de l'utilisation chez l'homme au niveau des bonnes pratiques de fabrication. g) Stérilisation et stockage du principe actif JOO1 La fraction recueillie lors de la chromatographie est conservée en NaCl 20 mM pour éviter la formation ultérieure de micelles. Pour la même raison, elle ne subit pas d'étape intermédiaire de lyophilisation qui pourrait favoriser les agrégations moléculaires. Après stérilisation par filtration sur membrane 0,22 gm et prélèvement d'échantillons pour les contrôles de qualité, la solution est conservée congelée. La solution congelée, stérile et apyrogène telle qu'elle est obtenue est une solution de principe actif J001 qui sera utilisée pour la production d'un colyophilisat contenant tous les ingrédients permettant de reconstituer une solution aqueuse prête au marquage par un radioisotope ci-après dénommée "JO01C'. ExemDle 2: Préoaration du IOO1C 1) Stratégie de formulation du JOO1C (voie injectable) 1.1) Composition de base du I001C - J001 1,0 mg (principe actif) - SnF2 0,080 mg (réactif de marquage) - NaCI 1,0 mg (stabilisant monomères J001Y) - Acide ascorbique 0,50 mg (stabilisant du marquage au 99m Tc) Limites de variation des composants de la formule: - J001 0,1002,0 mg - SnF2 0,040- 0,1 mg - NaCl 0,50 - 2,0 mg - Acide ascorbique 0,20 0,80 mg 0,040 mg est un seuil critique pour le marquage car le SnF2 n'assure pas la stabilité du radiopharmaceutique en dessous de cette dose. A plus de 0,80 mg d'acide ascorbique, on observe une fixation de 99m Tc sur l'acide ascorbique. 1.1.1) Réactif de marquage SnF2 Le technétium obtenu à partir des générateurs commercialisés est sous forme chimique stable correspondant au pertechnétate de sodium. il doit être soumis à une réduction extemporanée pour permettre la formation d'un complexe avec les sites accepteurs du J001. La stratégie de réduction de l'anion pertechnétate par l'étain stanneux selon [LIN, M., S. (1975) - Labelling of proteins with 99m Tc Radiopharm. Int. Symp. 1974 (eds. Subramanian, Rhodes, Cooper et Saad p.p. 36-48). The Society of Nuclear Medicine, New York)] a été retenue. A ce stade, deux points importants doivent être pris en compte. Le choix d'un sel d'étain compatible avec les conditions de stabilité du JO01. Les conditions limites pour entraîner une formation minimale de colloides d'étain radiomarqués. SnC12 est le plus classiquement utilisé pour la réduction du TC04-, malheureusement pour éviter la formation d'hydroxyde, il doit être stabilisé en milieu chlorhydrique à pH d'être stable à pH neutre. C'est pourquoi il a été retenu. Les conditions limites sont fixées par des mesures physiques et biologiques de la qualité du marquage. Ont été utilisées comme méthodes d'investigation et de contrôle: la mesure de la pureté radiochimique par radiochromatographie couche mince sur papier et radio HPLC qui doit rester supérieure à 97% au moins 6 heures après le marquage. La chromatographie HPLC d'exclusion diffusion qui permet de contrôler la teneur en colloides. La granulométrie laser et la diffusion laser multiangulaire qui permettent d'analyser les distributions de particules présentes. L'étude in vivo de la biodistribution chez le rat et le lapin qui permet de mesurer le pourcentage de fixation hépatosplénique (seuils critiques) et la distribution du produit dans l'organisme. Les marges de variation déduites d'études systématiques montrent que quelle que soit la quantité de J001, la quantité minimale, critique, en SnF2 pour pouvoir assurer la réduction quantitative du Tc04- se situe vers S&g de SnF2 par flacon à l'instant du marquage. En présence de 1 mg de J001, il faut ajouter au moins 40 Fg de SnF2 pour assurer la pureté radiochimique stable à plus de 97% pendant 6 heures et 60 ag de SnF2 pour une stabilité du J001C pendant 2 à 3 ans. Les marges limites de variation du SnF2 sont donc: mini: 40 Ig - maxi: 100 Sag. L'optimum pour 1 mg de J001Y est de 80 mg de SnF2. 1.1.2) NaCl Du NaCl a été introduit dans la formulation pour assurer la stabilisation du J001 dans sa forme monomérique en réduisant les interactions moléculaires et la formation de micelles. D'autres composants tels que le glycocolle et le tampon phosphate ont été étudiés. le glycocolle est efficace pour réduire la formation de micelles de J001, mais il entraîne un marquage de l'acide ascorbique par du 99m Tc qui se traduit par des fixations non spécifiques au niveau du cerveau et des capsules surrénales. Le tampon phosphate n'est pas utilisable 'in vivo' car il entraîne une fixation osseuse du 99m Tc J001 non spécifique au niveau des métaphyses et des diaphyses. * Le NaCI à une concentration de 20 mM est déjà introduit dans la phase finale de purification du J001 pour empêcher la micellisation (soit 1,16 mg de NaCI/ml). Le marquage est effectué en sérum physiologique à 9 /- de NaCI. Une quantité de 1 mg de NaCI par flacon de J001C est optimale. 1.1.3) Acide ascorbique Différents agents réducteurs ont été expérimentés pour stabiliser le marquage du J001 Y in vitro puis in vivo afin de limiter l'échange de 99m Tc entre les sites accepteurs faibles du J001 et les protéines sanguines. En particulier, l'acide gentisique et l'acide ascorbique. Les radios HPLC, effectuées 30 minutes après injection du produit marqué, sur les sérums de rats et de lapins, ont montré que seul l'acide ascorbique est capable de réduire d'environ 5096 l'échange du 99m Tc. La dose d'acide ascorbique doit cependant rester inférieure à 0,80 mg pour éviter un marquage de l'excès au 99m Tc et une fixation non spécifique dans le cerveau et les capsules surrénales. La limite inférieure en acide ascorbique pour un flacon de JOO1C se situe vers 0,20 mg, seuil en- dessous duquel la stabilité du marquage "in vivo " est dégradée. 1.2) Quantité de Tc04 aiouté au 1001C Elle est normalement de 740 MBq (20 mCi) pour un examen chez l'homme mais peut être ajustée en fonction des objectifs de l'examen. Il s'agit d'une opération de routine, selon des procédures opératoires standard, qui est pratiquée dans tous les centres de médecine nucléaire au moment de l'examen (1/2 vie du 99m Tc = 6 heures). 1.3) Exemples d'études réalisées pour évaluer la formulation TOO1C Différentes études ont été réalisées pour valider le développement de la formulation du J001C. Les techniques mises en oeuvre permettent d'évaluer la stabilité du marquage par le 99m Tc in vitro et in vivo, la formulation de colloïdes ou d'agrégats et la distribution du produit dans l'organisme sain. a) Détermination de la pureté radiochimique 1 heure et 6 heures après le marquage par radiochromatographie sur papier. - Déterminées par radiochromatographie sur papier whatman en méthanol/ eau 80/20 v), la pureté radiochimique reste toujours supérieure à 97% pour la formulation retenue. b) Radio HPLC d'exclusion-diffusion sur colonne TSK 2000 en fonction des excipients de formulation pour contrôler la pureté radiochimique, la présence de 99m Tc libre ou fixé à l'acide ascorbique. - Les chromatogrammes obtenus démontrent clairement qu'en présence de glycocolle-phosphate, la pureté radiochimique est très insuffisante pour le pic correspondant au JOO1 (36,396) avec un transfert de 99m Tc sur l'acide ascorbique (54,8%) et la présence de 8,9% de 99m Tc libre. c) Radio HPLC d'exclusion-diffusion sur colonne TSK 2000 de sérums de rats 30 min. après injection intraveineuse du J001C avec ou sans acide ascorbique. - Des radiochromatogrammes de sérums de rats prélevés 30 minutes après l'injection intraveineuse du produit marqué sans ou avec acide ascorbique ont permis de démontrer le rôle bénéfique de l'acide ascorbique sur la stabilisation 'in vivo' du marquage au 99m Tc. En présence d'acide ascorbique, la fraction de 99m Tc libre ou échangeable avec les protéines sériques est considérablement réduite. 96 de la radioactivité totale Acide Echange sur ascorbique J001 albumine Tc 04- avec 68 26,7 5,3 sans 44,4 44,8 10,7 d) Etude de la biodistribution chez le rat. - La biodistribution chez l'animal sain est réalisée chez le rat Wistar mâle de 250 g (3 animaux par lot). Les mesures sont effectuées 30 minutes après l'injection intraveineuse du produit marqué avec ou sans acide ascorbique. Les organes cibles sont: le foie et la rate pour la fixation des colloides, l'estomac et la thyroïde pour détecter la fraction libre du 99m Tc dissociée in vivo, et le sang pour évaluer la fraction biodisponible pour le ciblage des macrophages. Un exemple des résultats obtenus est présenté dans le Tableau 1 ci- après: Tableau 1 % de la radioactivité totale injectée par JOO1C sans JOO1C avec organe acide ascorbique acide ascorbique Estomac...... 22,25....... 47,53 Dans tous les cas, la fixation au niveau du foie et de la thyroïde est insignifiante et reflète l'absence d'une quantité appréciable de 99m Tc libre. L'addition d'acide ascorbique a un effet bénéfique très net sur la réduction de la fixation hépato-splénique et l'aumentation de la fraction biodisponible dans le sang total. 2) Procédé de fabrication industrielle du J001C Cet exemple est donné pour la fabrication d'un lot industriel de la formulation de base (valeurs indiquées pour 1000 flacons de J001C). La qualité de l'environnement dans les zones de travail doit être adaptée à la fabrication de produits lyophilisés stériles et apyrogènes, en conformité avec les bonnes pratiques de fabrication. Toutes les précautions adéquates doivent être prises pour protéger l'étain stanneux de l'oxydation au cours des operations, en particulier par balayage des zones de travail au moyen de gaz inertes et dégazage préalable des solutions. lère étape: dissolution Dans un réacteur pyrex de S 1, on introduit 1000 ml d'eau pour préparation injectables (ppi) puis on met en bullage au moyen d'azote gaz stérilisé par filtration afin de dégazer le milieu sous agitation permanente. On dissout successivement en maintenant le bullage et l'agitation: 420 mg de NaCl puis 500 mg d'acide ascorbique et enfin 80 mg de SnF2. On maintient le bullage quelques minutes puis on place l'arrivée du gaz au-dessus de la surface afin d'avoir un balayage et non plus un bullage. Les propriétés amphiphatiques du J001 lors de son introduction sous bullage auraient pour conséquence une abondante production de mousse qui perturberait la suite des opérations. On introduit alors 500 ml d'une solution de J001 à 2 mg/ml de J001 avec du NaCl 20 mM préalablement dégazée sous vide. On poursuit l'agitation douce pour homogénéiser en maintenant le balayage d'azote. 2ème étape: filtration stérilisante La solution obtenue précédemment est immédiatement stérilisée par filtration sur membrane 0,22 Nm sous azote. L'intégrité du filtre doit être contrôlée après filtration. 3ème étape: répartition en flacons (en bloc stérile) Des flacons en verre de 15 ml, préalablement stérilisés sont disposés dans des plateaux de lyophylisation en acier inoxydable. De l'azote liquide est introduit dans les plateaux pour permettre une congélation instantanée et créer une atmosphère inerte. Les flacons sont purgés par injection d'azote ou de préférence d'argon (plus dense) préalablement à l'introduction de la solution. 2 ml de solution sont alors introduits dans chaque flacon et les bouchons cannelés mis en place sur les flacons. Les plateaux sont alors immédiatement transférés dans la cuve pré- refroidie du lyophilisateur. 4ème étape: lyophilisation Un point critique du procédé concerne particulièrement l'étape de lyophilisation du fait de la nature des composants et notamment de l'acide ascorbique. La congélation brutale en azote liquide garantit la stabilité ultérieure du produit mais elle ne permet pas de contrôler correctement les formes de cristallisation et entraîne une mauvaise lyophilisation du produit. Une optimisation spécifique a dû être réalisée montrant l'importance de respecter une étape préalable avant la mise sous vide. En effet, le maintien des flacons à une température constante voisine de -45 C pendant deux heures assure un équilibrage de la forme cristalline et permet une lyophilisation correcte en présence d'acide ascorbique. La lyophilisation est conduite ensuite dans des conditions habituelles prenant en considération les points eutectiques du mélange. En fin de lyophilisation, les flacons sont bouchés sous vide dans l'enceinte du lyophilisateur avant l'ouverture de ce dernier. Ils sont ensuite sertis et conservés à l'abri de la lumière. ExemDle 3: ProDriétés de ciblage des macronhales Le J001 a la capacité de se lier sélectivement aux monocytes et aux macrophages par l'intermédiaire de son extrémité lipophile. En effet, l'élimination sélective de cette partie de la molécule entraîne une perte totale des capacités de liaison. La capacité de liaison du J001 aux leucocytes de sang humain in vitro a été largement étudiée par cytofluorométrie, au moyen de dérivés fluorescents du J001 et d'anticorps spécifiques. Les résultats sont présentés sur la Figure 1. A des concentrations inférieures à 5 lig/ml, le J001 se lie spécifiquement aux monocytes humains. La liaison du J001 augmente avec la maturation en macrophages puis avec l'activation induite par des esters de phorbol ou l'interféron gamma. La spécificité de liaison a été confirmée par des essais de compétition avec le J001 non marqué. Les macrophages inflammatoires murins obtenus après injection de thioglycolate ont une capacité de fixation du J001 supérieure aux macrophages résidents. A 37 C, le J001 lié est très rapidement internalisé dans les cellules via ses récepteurs. Le rôle des antigènes de membrane comme récepteurs du J001 sur les monocytes a été exploré au moyen de J001 biotinylé en l'absence de sérum. Pour caractériser ces récepteurs, des études de liaison par compétition avec différents anticorps monoclonaux spécifiques des antigènes membranaires des monocytes ont été réalisées. La préincubation des cellules avec des anti-HIA de Classe I ou de Classe II, des anti-FRc gamma III (C16), anti-CD1lla, anti-CDllc, ou anti- chaine S de CD 11/CD 18 intégrines n'entraîne pas d'inhibition spécifique de la liaison du J001-biotinylé. Par contre, une inhibition significative est observée lorsque les cellules sont pré-incubées avec des anti CD14 ou des antiCDl lb (53% et 41% respectivement) avec une restriction épitopique précise du fait que tous les anticorps monoclonaux anti CD1 lb ou CD14 ne peuvent pas inhiber la fixation du J001. La combinaison des anticorps CDllb et CD14 entraîne une augmentation de l'inhibition à 7096. Les résultats sont présentés au Tableau 2 ci-après, qui représente l'inhibition de la liaison spécifique du JOO1 - biotinylé aux monocytes du sang humain par des anticorps monoclonaux. Au Taleau 2, "AMFI' correspond à la mesure de l'intensité moyenne de fluorescence corrigée du 'bruit de fond' ("Mean Fluorescence Intensity"). Tableau 2 Liaison Pourcentage Anticorps Antigène spécifique du d'inhibition de monoclonaux Membranaire JOOl-Biot la liaison A MFI spécifique Témoin milieu - 41,6 IOT 16 CDlla 42,8 0 Anti MAC-1 CDllb 24,4 41 OKM1" 38,3 8 Anti-Leu 1 5 41,0 1 Anti-Leu MS CD1llc 38,7 7 IOMc " 41,7 0 BLS CD18 38,1 8 GO.3 42,5 0 IOM2 ()CD14 19,4 53 BA.8 41,4 0 MAC-1 + IOM2 CDllb+CD14 11,8 72 3G8 CD16 42,9 O (RFcgamma III W6.32 42,9 0 HLA - Classe I BL2 41,2 1 HIA - Classe II Les résultats indiquent clairement que la liaison spécifique du J001 aux monocytes ne se fait pas par l'intermédiaire de la chaîne & CD1 /CD18 commune de la famille des molécules d'adhésion ni par la chaîne a de LFA- 1 puisque la liaison n'est pas inhibée par les anti CD1 la, anti CD 1 c et anti CD18. Cependant, la chaine a du CR3 (CD11b) et la molécule CD14 participent à la liaison du J001 aux monocytes. Afin de confirmer ces résultats, des études cliniques ont permis d'évaluer la liaison du J001 aux cellules dérivées de lavages brochoalvéolaires et du sang humain provenant de patients atteints de différentes pathologies inflammatoires pulmonaires. La liaison aux leucocytes humains a été étudiée par cytofluorométrie directe au moyen de J001 biotinylé à trois concentrations différentes, en présence d'un excès (x 10 fois) de J001 non marqué. Les résultats confirment que la liaison est concentration dépendante et totalement inhibée en présence d'un excès de J001 non marqué. Elle est plus intense sur les cellules de lavage bronchoalvéolaire que sur les monocytes moins différenciés. La liaison aux monocytes macrophages est toujours très supérieure à celle observée avec les autres types cellulaires. Les résultats sont présentés sur les Figures 2 et 3. ExemDle 4: Propriétés de ciblage des cellules de mélanome 1) Cellules et conditions de culture Huit lignées ou clones de mélanomes humains ont été utilisés. Trois lignées de cellules ont été isolées d'un ganglion lymphatique métastésé sur 3 patients (1, 2 et 3) comme décrit précédemment (Jacubovich et Dore, 1979). 2 et 3 ont un potentiel à développer des tumeurs élevé tandis que 1 a un potentiel très faible dans les souris nude (Berthier-Vergnes et al., 1985). Les clones 4, 5, 6, 7 et 8 étaient tous dérivés des 3 lignées de cellules. La lignée cellulaire 8 a un potentiel métastatique faible tandis que celui des 5 autres clones est élevé chez le rat nouveau né immuno- déprimé (Bailly et Dore, 1991). Ces cellules étaient cultivées en milieu modifié Mac Coy's (SIGMA, St. Qientin Fallavier, France), contenant 10% de sérum fétal de veau et éliminés avec un tampon de Trypsine PBS-EDTA-(1/5000). 2) Bibliographie - Jacubovich R. and Doré J.F. - Tumor associated antigens in culture medium of malignant melanoma cell strains - 1979 - Cancer Immunol. Immunother. 7, 59-64. - Berthier-Vergnes O. Portoukalian and Doré J.F. - Expression of cell surface glycoproteins in human melanoma cell lines with different tumorigenic properties - 1985 - Int. J. Cancer. - Bailly M. and Doré J.F. - Human tumor spontaneous metastasis in immunosuppressed newborn rats. Multiple selections of human melanoma metastatic clones and variants - 1991 - Int. J. Cancer 49, 750- 757. 3) Liaisons de JOO1 biotinyle aux cellules de mélanomes Origine des lignées: Laboratoire d'Immunologie et de Cancérologie Expérimentale, Dr. Doré, INSERM Réactifs: JO01 biotinylé selon procédure décrite dans Immunobiol., vol 186, p.183-198 (1992), Z. Hmama et col. J001 non biotinylé lot P242. Les conditions opératoires sont celles décrites dans la référence Z. Hmama et col. visée ci-dessus. Résultats en AIMF: (IMF nette i.e. bruit de fond déduit). Total: Liaison de J001 biotinylé en présence d'un excès de J001 non biotinylé 1. Spécifiaue: liaison totale - liaison spécifique. Les résultats sont présentés au Tableau des Figures 4 et 5 et sur la Figure 6. Les résultats présentés dans les Tableaux (Figures 4 et 5) et résumés graphiquement (Figure 6) indiquent clairement que le JOO1 se fixe spécifiquement aux lignées de mélanomes humains testées et cela de facon proportionnelle à la dose. Il est intéressant de noter que la lignée 8, qui présente un faible pouvoir métastasique fixe le JOO1 de façon beaucoup moins intense in vitro. ExemDle 5: Elimination des DroDrietés immuno-stimulantes Les propriétés immunostimulantes du D25 n'étaient pas souhaitables pour un produit de diagnostic scintigraphique. Classiquement, pour ce type de molécules, les activités immunostimulantes observées sont consécutives à la liaison aux récepteurs et généralement indissociables de cette liaison. L'originalité de l'optimisation de la molécule de J001 réside précisément dans le fait qu'on a éliminé complètement les propriétés pharmacologiques du D25, tout en préservant intacte la capacité de liaison aux cellules cibles. Ceci notamment au niveau du procédé de fabrication par un strict contrôle de l'élimination des acides gras estérifiés qui sont responsables des propriétés immunostimulantes, et des formes polymériques qui, à des concentrations élevées, peuvent entraîner une activation du complément. D'importantes études d'immunopharmacologie de sécurité ont été réalisées, comparant le J001 aux différentes fractions isolées de la membrane de K. pneumoniae. Ont été particulièrement étudiées, les propriétés du protéoglycane membranaire (PGM) qui sert de matière première à l'extraction du D25 (partiellement délipidé) avec celles du D25 proprement dit, puis celles du J001. La chaîne polysaccharidique du J001 (GC-APG) obtenue après hydrolyse sélective de l'extrémité lipophile responsable de la liaison aux récepteurs des cellules cibles a servi de témoin négatif dans ces études, son élimination entraînant une perte totale des capacités de liaison et d'activation cellulaire. Les propriétés d'activation du complément observées à forte concentration avec le D25 sont dues à la présence de résidus de formes polymériques de masse supérieure à 100 kDa. Leur élimination dans le procédé de purification du J001 par une étape sélective de chromatographie élimine complètement ces propriétés. Les propriétés immunostimulantes sont, elles, strictement dépendantes de la composition de l'extrémité lipophile de la molécule et, en particulier, de la présence d'acides gras estérifiés. Les conditions de fabrications optimisées pour le J001 permettent une élimination quantitative des acides gras tout en préservant intégralement les 2 acides gras -OH C14 liés par des liaisons amides et strictement nécessaires à la reconnaissance des récepteurs des cellules cibles, ainsi que les groupes phosphate et surtout pyrophosphate permettant le marquage stable au 99m Tc. Parmi les propriétés caractéristiques du protéoglycane membranaire, conservées dans le D25, il faut retenir - une activation polyclonale des lymphocytes B, - une absence d'activation des lymphocytes T, - une très forte activation des macrophages qui se traduit par un accroissement de leur métabolisme oxydatif et la libération de cytokines, telles que l'IL-l, le TNF-a, l'IFN-a,, l'IL-6... Ces cytokines sont des marqueurs caractéristiques de l'activation des macrophages et traduisent les potentialités pro-inflammatoires et immunostimulantes du D25. L'émination strictement contrôlée des acides gras estérifiés dans la préparation du JOO 1 permet d'éliminer totalement ces propriétés immunostimulantes que les seuls acides -OH-C14 liés par des liaisons amides à la diglucosamine terminale sont incapables d'induire. L'originalité du J001 obtenue dans ces conditions est qu'en dépit de la perte de toutes ses activités, il conserve toute sa capacité de liaison aux macrophages, ce qui n'est généralement pas le cas pour ce type de molécules d'origine bactérienne. 1) Mesure de la sécrétion de cytokines par les monocytes humains adhérents en culture Les monocytes humains adhérents sont cultivés pendant 24 heures en présence des produits à tester. La concentration de cytokines dans les surnageants est ensuite mesurée par technique ELISA. Les produits testés sont: - Milieu standard: - bruit de fond - GC-APG (chaine polysaccharidique du J001Y) témoin négatif - J001Y - D25 - PGM-p (matière première des D25 et J001) - Sm-Re LPS - témoin posifif (LPS de S-typhimurium Sigma) Tableau 3 2O Sécrétion de cytokines (ng/ml) Concen- Produit tration IL- 1 IL-6 TNFa testé finale - Milieu..... 0O... 1,1.. - GC-APG... 100... 4,2.... 2,5... - JOO1Y... 100.. - D25... 100..32,6... 40,2.... 1,9 -PGM-Kp... 100..47,0... 38,5.... 4,6 - Sm-Re- LPS.... 10.. 47,0... 40,4.... 6,8 Ces résultats démontrent la perte d'activité du J001 vis-à-vis de l'induction de cytokines par activation des monocytes humains comparativement au PGM-Kp et au D25. 2) Mesure de l'activation polyclonale des splénocytes de souris BALB/c Les splénocytes sont cultivés à 106 C/ml, en présence des produits à tester. La prolifération cellulaire est déterminée par mesure de l'incorporation de [3H]TdR pendant les dernières 24 heures d'une culture de 72 heures. Les sécrétions d'immunoglobines sont mesurées par ELISA après 6 jours de culture. Tous les produits sont testés à la concentration finale de 100 lag/ml. Résultats Tableau 4 Sécrétion d'Ig (ig/ml) Incorporation de Produit testé [3H]TdR-cpm x 10-3) IgM IgG IgA - Milieu 1,65 + 0,23 1,4 0,46 0,54 - GC-APG Non fait 1,1 0,45 0,61 - J001Y 1,35+0,29 1,0 0,40 0,51 - D25 7,67 +0,11 15,4 1,54 1,76 - PGM-Kp 29,30 + 0,65 46,1 5,61 6, Ces résultats confirment la perte d'activité du JOO1 par rapport au PGM-Kp (matière première) et au D25 vis-à-vis de l'activation polyclonale des lymphocytes B de souris. EXEMPLE 6: Application en imagerie du radiopharmaceutique JOO1C 1) Imagerie sur modèles expérimentaux de pathologie inflammatoire 1.1) Etude des potentialités scintigraphiques du JOOLC dans le modèle d'arthrite immunologique chez le lapin Néozélandais et le singe cynomolgus Ce modèle de pathologie expérimentale est induit selon Consden R. et col. "Production of chronic arthritis with ovalbumin' - Ann. Rheum. Dis. 1971, 30, 307-315' par une injection intra-articulaire d'ovalbumine chez des animaux préalablement sensibilisés vis-à-vis de cet antigène injecté par voie s.c., en présence d'adjuvant complet de Freund. Il permet d'obtenir une arthrite chronique localisée, sans oedéme associé important, et recrutant des cellules immunocompétentes dont de nombreux macrophages dès que l'inflammation est en phase chronique, soit 2 à 3 semaines après l'induction. Ce modèle offre la possibilité de disposer d'un foyer pathologique bien délimité au niveau du genou avec un territoire sain en situation controlatérale constituant une zone témoin pour chaque animal qui permet une détermination précise du rapport scintigraphique. Les scintigraphies ont été réalisées sur deux singes mâles de 4 et 6 kg et deux lapins mâles de 3-4 kg de la troisième à la sixième semaine suivant l'induction de l'arthrite. Trois heures après l'injection intraveineuse de 2 mCi (37 MBq) de 99mT Tc - JOO1C, correspondant à une dose de 0,050 à 0,200 mg de JOO1, les animaux anesthésiés au pentobarbital sodique sont soumis à une acquisition scintigraphique en incidence antérieure. La gamma caméra Orbiter 75 Siemens, équipée d'un collimateur parallèle à haute résolution, enregistre des images de 2 min dans une matrice de 128 x 128 pixels. Le traitement des données scintigraphiques et la quantification du rapport scintigraphique R selon la technique classique des régions d'intérêt sont réalisés sur un système informatique microdelta SIEMENS. Les images obtenues chez les singes montrent un foyer de fixation très intense au niveau du genou droit pathologique (Rapports scintigraphiques de 2,2) avec une imagerie positive du ganglion lymphatique de drainage. Le genou controlatéral sain ne présente aucune S activité significative au niveau articulaire. Trois heures après injection intraveineuse du J001C et un mois après induction de l'arthrite dans le genou droit, on note un contraste scintigraphique élevé (R = 2,2) au niveau de la lésion articulaire et une fixation très significative dans les ganglions de drainage de l'aire inguinale. Des résultats analogues sont obtenus chez les lapins arthritiques pour des préparations de JOO1C marquées avec des activités spécifiques allant de 370 à 2590 MBq/mg (10 à 70 mCi/mg) de JOO1, soit pour 74 MBq (2 mCi) injectées pour des doses de JOO1 de 200 à 290 Fg par animal Trois heures après injection intraveineuse du JOO1C et un mois après induction de l'arthrite dans le genou droit, on note un contraste scintigraphique élevé (R = 2,8) au niveau de la lésion articulaire. 2) Imagerie du mélanome 2.1) Modèle expérimental de mélanome humain greffé chez la souris nude Trois semaines après injection par voie sous- cutanée chez la souris nude de 5 x 105 cellules de la lignée de mélanome humain TW12 (Dr. J.F. Doré - Centre Léon Bérard - Lyon), au niveau de l'aire inguinale gauche, l'animal développe une tumeur de 6-8 mm de diamètre. A ce stade, il est soumis à une scintigraphie par le JOOlC administré par voie intraveineuse dans le sinus rétro-orbitaire. Trois heures après injection, l'imagerie à haute résolution montre une fixation significative du J001C dans le territoire tumoral, avec un contraste scintigraphique très significatif (R = 1,6). 2.2) Illustration d'un cas clinique de mélanome - Patient: FOR..TH (obs N 401), sexe masculin, 36 ans. - Mélanome thoracique postérieur droit de type nodulaire avec un indice de Breslow = 2,1 et un grade = IV (Clark). - Traitement: exérèses chirurgicales, puis deux cures de MUPHORAN - Récidive: diagnostic d'une récidive axilliaire droite. - Scintigraphie au J001C par voie injectable Protocole opératoire: 0,100 mg de JOO1Y marqués avec 74 MBq (2 mCi) de 99m Tc sont injectées; 10. Des acquisitions de 2 minutes sont pratiquées en incidences antérieures (FA) et postérieures (FP) à 1 heures après l'injection au moyen d'une gamma caméra équipée d'un collimateur parallèle à haute résolution avec une matrice de 128 x 128 Pixels. Résultats: On observe une hyperfixation dans le creux axilliaire droit correspondant à l'adénopathie cliniquement détectée, avec un index de fixation à 1 heure = 1,7, et un index de fixation à 2 heures = 2,5. Le curage ganglionnaire pratiqué le 10.12.91 révèle effectivement un ganglion métastatique de (3,5 x 2,5 x 1,5 cm). Exemvle 7: Propriétés anti-LPS du 1001 Le fait que le J001 conserve les propriétés de liaison du D25 et se lie aux macrophages sur des récepteurs en partie communs avec ceux du LPS (CD1llb - CD14) sans activité immunostimulante a incité à rechercher d'éventuelles propriétés thérapeutiques anti-LPS dans la protection contre le choc endotoxinique. Au vu des résultats obtenus 'in vitro', il semble que la simple compétition au niveau des récepteurs communs n'explique pas toute l'activité observée. Même s'il ne bloque pas complètement la liaison du LPS aux macrophages, le JOO1 parait avoir un effet de "signalisation post binding' qui se traduit par un blocage prolongé de la production du TNFa, marqueur caractéristique de l'activité du LPS. Propriétés antagonistes vis-à-vis des LPS 1. Monocvtes humains Sur des cultures de cellules mononucléées isolées et en l'absence de sérum, le J001 inhibe la production de TNF induite par les 5 types de LPS différents testés. 2. Lvmphocvtes spléniques de souris Le J001 induit une inhibition de la prolifération induite par les LPS. Cet effet est observé en ajoutant le J001 jusqu'à 24 heures après le LPS à la culture cellulaire. Le même effet a pu être observé, mais de façon moins systématique, sur un anticorps anti-IgM. REVENDICATIONS 1. Préparation d'un composé polysaccharidique D25 délipidé et purifié, de poids moléculaire d'environ 34 KD, pouvant être obtenu par extraction à partir des protéoglycanes membranaires de Klebsiella pneumoniae, caractérisée en ce que ledit composé polysaccharidique est délipidé et purifié de sorte que ladite préparation ne comporte pas de formes micellaires dudit composé. 2. Préparation d'un composé polysaccharidique D25 délipidé et purifié, de poids moléculaire d'environ 34 KD, pouvant être obtenu par extraction à partir de protéoglycanes membranaires de Klebsiella pneumoniae, caractérisée en ce que ledit composé est délipidé et purifié de sorte que ladite préparation ne comporte pas d'acide gras palmitique et de peptides libres ou associés audit composé. 3. Préparation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comporte un sel physiologiquement acceptable, à faible concentration molaire, de sorte que sous forme de solution aqueuse, elle présente une faible force ionique. 4. Préparation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comporte un sel de NaCl à une concentration de lmM à 0,15 M. 5. Préparation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comporte un sel de NaCl à une concentration d'environ 20 mM. 6. Composé polysaccharidique D25 délipidé et purifié, d'environ 34 KD, pouvant être obtenu par extraction à partir des protéoglycanes membranaires de Klebsiella pneumoniae, caractérisé en ce qu'il peut être représenté par la formule (I) suivante: [PSI o HO O CH 2 CH-CH O O CH 2 0 0 O 0HO /1 NH O- P CH H O O C=O H C=O I I CH2 CH2 I I (1) CH-OH CH.OH (CH2)10 H2 10 (CH2) 10 CtH3 CH3 dans laquelle [PS] représente une chaine polysaccharidique. 7. Composé polysaccharidique D25 de poids moléculaire d'environ 34 KD pourvant être extrait des protéoglycanes membranaires de Klebsiella pneumoniae, selon la revendication 6, caractérisé en ce que la chaîne polysaccharidique linéaire [PS] est composée par la répétition de l'alternance des deux séquences disaccharidiques suivantes liées par des enchaînements (1 -> 3): -[-> 3) aDGalp (1 -> 3) 1 D Galf (1-]->, --> 3) D Galp ( 1-> 3) D Galp (1-]-> et à l'extrémité de laquelle se trouve une structure unique de liaison constituée par 3 résidus glucose, 1 résidu galactose, 2 résidus heptose et 1 résidu acide mannodéoxyoctulosonique, ladite structure unique de liaison étant liée aux deux glucosamines terminales représentées sur la formule (I) sur chacune desquelles est lié un acide -hydroxymyristique par une liaison amide N-glycosidique. 8. Composition destinée à l'imagerie, au diagnostic ou à la thérapie, caractérisée en ce qu'elle comporte une préparation du composé délipidé et purifié selon l'une des revendications précédentes. 9. Composition selon la revendication 8, destinée à l'imagerie et au diagnostic des foyers infectieux, inflammatoires et tumoraux via le ciblage des macrophages. 10. Composition selon la revendication 8 destinée à l'imagerie et au diagnostic du mélanome et autres tumeurs exprimant le même récepteur, notamment le cancer du côlon. 11. Composition selon l'une des revendications 8 à 10 caractérisée en ce qu'elle est injectable par voie intraveineuse. 12. Composition selon l'une des revendications 8 à 10, caractérisée en ce qu'elle est injectable par voie lymphatique, notamment par voie sous-cutanée ou voie intrapleurale. 13. Composition selon l'une des revendications 8 à 10, caractérisée en ce qu'elle est administrable par voie aérosol. 14. Composition d'imagerie ou de diagnostic selon l'une des revendications 8 à 13, caractérisée en ce que le composé polysaccharidique est marqué par un élément détectable tel qu'un élément radioactif, paramagnétique ou fluorescent. 15. Composition selon l'une des revendications 13 et 14, caractérisée en ce que l'élément radioactif est un radionucléide détectable par scintigraphie. 16. Composition selon la revendication 15, caractérisée en ce que le radionucléide est le technétium 99m, l'iode 123, ou l'indium 111. 17. Utilisation du composé selon l'une des revendications 1 à 7 à titre de médicament. 18. Utilisation du composé selon la revendication 17 à titre de médicament dans la protection contre un choc endotoxinique. 19. Utilisation du composé selon l'une des revendications 1 à 7 à des fins thérapeutiques comme agent de vectorisation pour la radiothérapie ciblée, pour la vectorisation de substances cytotoxiques ou encore pour la vectorisation de substances immunogènes, ou anti- inflammatoires. 20. Trousse monoflacon destinée au marquage du composé en solution aqueuse selon l'une des revendications 1 à 7 comportantun colyophilisat dudit composé, d'un réactif de marquage et d'un excipient de stabilisation. 21. Trousse selon la revendication 19 destinée au marquage par le technetium, caractérisée en ce qu'elle comporte du fluorure d'étain (SnF2) comme réactif de marquage et de l'acide ascorbique comme excipient de stabilisation.