Brevet FR2712806A1 — publié le 19950602

La présente invention concerne une préparation cosmétique qui exerce un effet d'embellissement et d'éclaircissement de la peau. Plus particulièrement, la présente invention concerne une préparation cosmétique qui contient, comme ingrédient actif, un extrait végétal qui exerce un effet d'embellissement et d'éclaircissement de la peau dû à sa faculté d'empêcher la formation de mélanine. Par exposition prolongée au soleil, la peau fonce ou développe des taches ou éphélides. Il est considéré que ces phénomènes se manifestent en raison de la formation de mélanine qui est un pigment amorphe brun foncé. La théorie établie sur la formation de mélanine est la suivante lorsque la peau est soumise à des stimulations extérieures comme par les rayons ultraviolets, la tyrosinase (enzyme oxydant la tyrosine) qui est présente dans les mélanocytes cutanés est activée et la tyrosine, qui est un type des acides aminés constituant les protéines, est oxydée en formant de la mélanine. Il s'ensuit qu'on peut envisager un effet d'éclaircissement de la peau s'il est possible d'inhiber l'activité de tyrosinase qui prend part à la formation de mélanine, et il a donc été proposé d'incorporer un ingrédient inhibiteur d'activité de tyrosinase dans des préparations cosmétiques. Des préparations cosmétiques classiques qui ont un effet d'embellissement et d'éclaircissement de la peau sont décrites dans la publication de brevet japonais examinée NO 43 443/1980 intitulée "Beautifying and whitening cosmetic preparation" et la publication de brevet japonais examinée NO 974/1979 intitulée "Composition incorporating the extract of crude drugs" ; ces préparations cosmétiques renferment de l'acide ascorbique ou des dérivés de celui-ci. D'autres préparations qui sont connues pour leur effet d'embellissement et d'éclaircissement de la peau comprennent un médicament destiné à l'usage externe sur la peau qui renferme de l'arbutine (comme décrit dans la demande de brevet japonais publiée non examinée NO 16 906/1985), une préparation cosmétique décolorante qui renferme de l'acide kojique (publication de brevet japonais examinée NO 8100/1957), ainsi que des préparations cosmétiques qui sont extraites de constituants végétaux (par exemple selon la demande de brevet japonais publiée non examinée NO 2913/1988) ou de constituants animaux (par exemple selon la demande de brevet japonais publiée non examinée NO 8312/1988). Cependant, beaucoup de ces préparations cosmétiques classiques sont incapables d'exercer un effet satisfaisant d'embellissement et d'éclaircissement de la peau. En outre, leur stabilité au stockage est insuffisante et elles posent un problème d'innocuité pour la peau, en provoquant par exemple une irritation. La présente invention a été mise au point dans ces circonstances et a pour objectifs de fournir une préparation cosmétique qui exerce un excellent effet d'embellissement et d'éclaircissement de la peau et qui fasse preuve non seulement d'une stabilité suffisante au stockage, mais également d'une grande innocuité pour la peau. A la suite d'études approfondies effectuées pour atteindre ces objectifs, la Demanderesse a découvert que l'extrait de Chiranthodendron pentadactylon Larreat est efficace pour inhiber l'activité enzymatique de tyrosinase et pour empêcher la formation de mélanine dans les cellules de mélanome. La présente invention a été réalisée sur la base de cette découverte. La présente invention fournit donc une préparation cosmétique d'éclaircissement de la peau, qui contient l'extrait de Chiranthodendron pentadactylon Larreat, qui est originaire du Mexique. La préparation cosmétique de la présente invention peut être produite par le procédé suivant. Tout d'abord, le produit séché ou le produit séché et pulvérisé de Chiranthodendron pentadactylon Larreat, qui est une plante originaire du Mexique, est extrait avec un solvant approprié sous chauffage. Des exemples du solvant d'extraction comprennent des alcools (par exemple le méthanol, l'éthanol, le propanol et l'alcool isopropylique) et l'eau, qui peuvent être utilisés individuellement ou en mélanges. Un rendement élevé peut être obtenu si l'extraction est conduite à 500C pendant 1 heure avec une solution aqueuse d'alcool ayant une concentration alcoolique de 20 à 70 %. L'extrait liquide est ensuite séparé par filtration et concentré à sec par chauffage à 600C ou moins sous vide. L'extrait séché est recueilli et incorporé à une préparation cosmétique. L'extrait filtré peut être incorporé directement à une préparation cosmétique. La Demanderesse a confirmé par expérimentation que l'extrait ainsi préparé de Chiranthodendron pentadactylon Larreat possède une excellente aptitude à empêcher la formation de mélanine à des concentrations plus basse que celles de l'acide ascorbique utilisé jusqu'à présent. Des préparations cosmétiques ayant l'effet désiré d'embellissement et d'éclaircissement de la peau peuvent être produites en incorporant 0,01 à 5 % de cet extrait à titre d'ingrédient actif. Les exemples suivants sont fournis pour mieux illustrer la présente invention, mais ils ne doivent pas être considérés comme limitatifs. Exemple 1 Un exemple du procédé d'extraction de Chiranthodendron pentadactylon Larreat est décrit dans cet exemple. Le procédé commence par le broyage dans un mélangeur d'environ 100 g du produit séché de Chiranthodendron pentadactylon Larreat (parfois appelé ci-après la "plante mexicaine"), qui est une espèce végétale originaire du Mexique. La poudre broyée et 1 litre d'alcool éthylique à 50 % sont introduits dans un ballon et soumis à une extraction au reflux sous agitation à 500C pendant 1 heure. L'extrait liquide est filtré par aspiration et le filtrat est concentré sous vide à 500C dans un évaporateur. Le concentré est ensuite séché sous vide pour donner des cristaux bruns (extrait) en une quantité de 10 g. Exemple 2 Dans cet exemple, l'extrait de Chiranthodendron pentadactylon Larreat, qui a été préparé à l'Exemple 1, est évalué quant à sa capacité d'inhibition de l'activité de tyrosinase. Pour mesurer la capacité d'inhibition de l'activité de tyrosinase, la quantité de DOPA-chrome qui est produite à partir de DOPA sous l'action de tyrosinase est déterminée en mesurant l'absorbance à 475 nm. La mesure de la capacité d'inhibition de l'activité de tyrosinase implique l'utilisation des trois réactifs de réaction suivants (a) tampon succinate de sodium (100mM, pH 5,5) (b) tyrosinase de champignon (Sigma) en solution [ajustée à 270 unités/ml avec le tampon (a)) (c) L-DOPA (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) en solution [ajustée à 6mM avec le tampon (a)]. Tout d'abord, on introduit dans un tube à essai 1,8 ml du tampon (a) et 0,1 ml de la solution de tyrosinase (b) ; on introduit dans le tube à essai 0,1 ml d'une solution d'échantillon (c'est-à-dire une solution aqueuse de l'extrait préparé à l'Exemple 1) ayant une concentration de 2 % (poids/volume), 1 % (poids/volume) ou 0,5 % (poids/ volume), et le mélange est mis à incuber sur un bain d'eau thermostatique à 300C pendant 15 min. Ensuite, on introduit 1 ml de la solution de L-DOPA (c) dans le tube à essai et le tout est agité. Le tube à essai est ensuite placé dans une secoueuse à mouvement de va-et-vient dans une chambre thermostatique à 300C, le tube étant incliné à environ 450. Après 40 min d'agitation (150 va-et-vient par minute), l'absorbance à 475 nm est mesurée avec un spectrophotomètre et la valeur mesurée est désignée par "A". L'absorbance à 475 nm est mesurée en répétant les mêmes opérations que ci-dessus, mais en ajoutant le tampon (a) comme témoin à la place de la solution d'échantillon. La valeur d'absorbance mesurée est désignée par "B". L'absorbance à 475 nm est également mesurée en répétant les mêmes opérations que ci-dessus, mais en ajoutant le tampon (a) comme témoin à blanc à la place de la solution de L-DOPA. La valeur d'absorbance mesurée est désignée par "C". D'après les trois valeurs d'absorbance mesurées à 475 nm, le pourcentage d'inhibition de l'activité de tyrosinase est calculé par la formule suivante et les résultats sont présentés au Tableau 1 ci-dessous Pourcentage d'inhibition de l'activité de tyrosinase = (1-(A-C)/b) x 100 (%) TABLEAU i Inhibition de l'Activité de Tyrosinase Extrait de Chiranthodendron Pourcentage d'inhibition de pentadactylon Larreat l'activité de tyrosinase (%) Solution aqueuse à 2 % 75,7 (poids/volume > Solution aqueuse à 1 % (poids/volume) Solution aqueuse à 0,5 % 59,0 (poids/volume) Comme on peut le voir d'après le Tableau 1, l'extrait de Chiranthodendron pentadactylon Larreat peut inhiber autant que 59 % de l'activité de tyrosinase, même dans le cas d'une solution aqueuse à une concentration aussi faible que 0,5 %. Il est ainsi confirmé qu'il possède une remarquable capacité d'inhibition de l'activité de tyrosinase. Exemple 3 Dans cet exemple, l'extrait de Chiranthodendron pentadactylon Larreat qui a été préparé à l'Exemple 1 est évalué quant à sa faculté d'empêcher la formation de mélanine. Tout d'abord, des cellules B16 de mélanome de souris formatrices de mélanine (B16-FO, ATCC NO CRL-6322) sont cultivées dans du milieu essentiel minimum (MEM) de Eagle additionné de sérum foetal bovin à une concentration finale de 10 %. Chacun des puits d'une plaque à 6 puits (Falcon) est rempli avec 6 ml du MEM de Eagle contenant des cellules B16-FO à une concentration de 3 x 10 cellules/ml, puis la culture est conduite dans un incubateur à CO2 (5 % de CO2, 370C) pendant 5 jours. Le milieu est remplacé par 6 ml de MEM de Eagle frais contenant 0,03 % de théophylline (Sigma), et une quantité appropriée de la solution d'échantillon (c'est-àdire la solution aqueuse de l'extrait préparé à l'Exemple 1) est introduite dans chacun des puits, puis la culture est poursuivie pendant encore 3 jours. A la fin de la culture, on enlève le milieu de la solution de culture et l'on ajoute 1 ml de solution saline physiologique à chaque puits ensuite, les cellules adhérant au fond de chaque puits sont détachées par grattage pour être mises en suspension dans la solution saline physiologique. La suspension de cellules est ensuite introduite à la pipette dans un tube de microcentrifugeuse (capacité de 1,5 ml, Eppendorf) et centrifugée (1000 g, 15 min). Un autre essai est conduit à titre de témoin suivant le même mode opératoire, mais en ajoutant de l'eau stérilisée à la place de la solution d'échantillon. Pour établir des régions expérimentales permettant d'effectuer des comparaisons sur la décoloration des cellules, une solution aqueuse d'acide L-ascorbique à 2 % est ajoutée à la place de la solution d'échantillon à une concentration de (a) 60 Fl, (b) 150 pl ou (c) 300 pl, et un essai est conduit suivant le même mode opératoire que décrit ci-dessus. Dans l'étape suivante, le degré de décoloration des cellules dans les culots est estimé visuellement de façon comparative afin d'évaluer l'efficacité de la solution d'échantillon pour empêcher la formation de mélanine. Le degré de décoloration des cellules dans la région témoin (où de l'eau stérilisée a été ajoutée) est noté "-", tandis que le degré de décoloration des cellules dans la région comparative où de l'acide L-ascorbique a été ajouté est noté par les trois signes suivants : (a) "+", (b) "++" et (c) "+++". Une comparaison visuelle est effectuée pour déterminer si le degré de décoloration des cellules chargées de la solution d'échantillon correspond à "-", "+", "++" ou "+++", et l'efficacité de la solution d'échantillon pour empêcher la formation de mélanine est évaluée à ces quatre degrés. Les résultats sont présentés au Tableau 2 ci-dessous. TABLEAU 2 Empêchement de la Formation de Mélanine Concentration, Fg/ml 200 500 1000 Extrait de la plante ++ +++ mexicaine Acide L-ascorbique + ++ Comme on peut le voir d'après le Tableau 2, l'extrait de la plante mexicaine doit être utilisé à une concentration qui n'est que de 200 Fg/ml pour parvenir au même résultat que celui obtenu en utilisant l'acide L-ascorbique à une concentration de 500 Fg/ml. Il est donc confirmé que l'extrait peut empêcher la formation de mélanine à une concentration bien inférieure à celle de l'acide L-ascorbique. De plus, il ne se manifeste aucune cytotoxicité, même si l'extrait est utilisé à une concentration aussi élevée que 1000 Fg/ml. Exemple 4 Cet exemple donne la formule d'une préparation cosmétique d'éclaircissement de la peau, contenant l'extrait de la plante mexicaine Chiranthodendron pentadactylon Larreat qui a été préparé à l'Exemple 1. Ingrédient % en poids Extrait de la plante mexicaine 1,0 Glycérine 5,0 Monolaurate de polyoxyéthylène-sorbitanne 1,5 Éthanol 10,0 Parfum q.s. Antiseptique et antioxydant q.s. Pigment q.s. Eau purifiée le reste Exemple 5 L'extrait de la plante mexicaine, Chiranthodendron pentadactylon Larreat, qui est originaire du Mexique, est très efficace pour inhiber l'activité de tyrosinase et une préparation cosmétique qui renferme cet extrait possède une excellente aptitude à embellir et éclaircir la peau. L'extrait exerce l'excellent effet d'embellissement et d'éclaircissement de la peau même à faibles doses, et cette caractéristique, alliée à la faible cytotoxicité de l'extrait, assure une plus grande innocuité pour la peau. Exemple 6 L'aptitude de l'extrait de Chiranthodendron pentadactylon Larreat à inhiber la pigmentation est évaluée en l'appliquant à la peau du dos d'un cobaye. Le cobaye utilisé dans les expériences est un cobaye brun (mâle) appartenant à la lignée A-l et pesant 350 à 400 g au début de l'expérience. Tout d'abord, les poils du dos du cobaye sont enlevés avec une tondeuse, puis la région tondue est rasée proprement avec un rasoir. La région rasée est exposée à des rayons ultraviolets B (UV-B) à une intensité de 420 mJ/cm2. L'irradiation est effectuée de cette manière une fois par jour et répétée quatre fois en quatre jours. A partir du même jour, quatre divisions séparées ayant chacune une surface de 1,5 x 1,5 (cm2) sont repérées. L'une de ces quatre divisions repérées est enduite d'une solution à 5 % (poids/volume) de l'extrait de Chiranthodendron pentadactylon Larreat dans l'éthanol à 50 %. La deuxième division est enduite d'une solution à 10 % (poids/volume) de l'extrait de Chiranthodendron pentadactylon Larreat dans l'éthanol à 50 %. Les troisième et quatrième divisions sont enduites d'une solution aqueuse à 50 % d'éthanol (= éthanol à 50 %), qui ne contient pas l'extrait. L'application d'une solution d'échantillon à chaque division repérée est effectuée une fois par jour, jusqu'à un total de 14 fois en 14 jours, y compris le premier jour où la première exposition aux rayons UV-B est effectuée. Un jour après la dernière application de la solution d'échantillon, le degré de pigmentation dû à la mélanogenèse est évalué visuellement dans chacune des quatre divisions repérées, ainsi que dans la région non exposée de la peau du dos du cobaye. L'évaluation est effectuée par les critères suivants (a) partie non exposée 3 points (b) divisions enduites d'éthanol à 50 $.... 0 point Comme le montre le Tableau 3 ci-dessous, les solutions contenant l'extrait à 5 % et à 10 % inhibe fortement la pigmentation lorsqu'elles sont appliquées à la peau du dos du cobaye. Le degré d'inhibition de la mélanogenèse devient plus élevé à mesure que la concentration de l'extrait augmente, par exemple de 5 % à 10 %. TABLEAU 3 Degré d'inhibition du dépôt de mélanine Région non exposée 3 points Division enduite d'éthanol à 50 % 0 point Division enduite de solution 2 points d'extrait à 5 % Division enduite de solution 3 points d'extrait à 10 % Critères d'évaluation visuelle 3 points : attribués à la région non exposée (presque pas de pigmentation) 2 points : le dépôt de mélanine est fortement inhibé. 1 point : le dépôt de mélanine est appréciablement inhibé. 0 point : presque pas d'inhibition de la pigmentation. REVENDICATIONS 1. Préparation cosmétique pour l'éclaircissement de la peau, caractérisée en ce qu'elle contient l'extrait de la plante mexicaine, Chiranthodendron pentadactylon Larreat, qui est originaire du Mexique. 2. Préparation cosmétique pour l'éclaircissement de la peau selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit extrait de la plante mexicaine est contenu comme ingrédient actif à une concentration de 0,01 à 5 %.