Brevet FR2713645A1 — publié le 19950616

La présente invention a trait à des polypeptides ayant une activité de récepteur aux mélanocortines, notamment l'hormone adrénocorticotrope (ACTH) et les hormones mélanotropes (MSH). Elle a également trait à des séquences de nucléotides, et notamment d'ADN, codant pour ces polypeptides ainsi qu'à des vecteurs contenant lesdites séquences et à des cellules transformées pour exprimer lesdites séquences et notamment les gènes codant pour les récepteurs contenant, ou constitués par, lesdits polypeptides, ces cellules permettant d'étudier l'activité d'agoniste ou antagoniste desdits récepteurs. L'invention a également trait à des sondes nucléotidiques susceptibles de se fixer par hybridation sur lesdites séquences ou lesdits gènes codant pour lesdits polypeptides et destinées au diagnostic d'affections se traduisant par une modification qualitative ou quantitative de la formation ou de l'activité desdits récepteurs, chez l'homme ou l'animal, et notamment d'affections cardiovasculaires, rénales, neurologiques, psychiatriques, gastro-entérologiques ou neuro-endocriniennes. L'invention a également trait à des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, humains ou non, dirigés contre lesdits polypeptides. Elle a également trait à des moyens de criblage de candidats médicaments, permettant notamment d'étudier l'affinité de substances candidates pour lesdits polypeptides. Enfin elle a trait à des médicaments, notamment pour le traitement des affections cardiovasculaires, rénales, psychiatriques, neurologiques, gastro- entérologiques ou neuro-endocriniennes, et contenant des substances ayant une affinité élevée pour lesdits polypeptides à activité de récepteur des mélanocortines ou encore des substances ayant une activité sur des cellules transfectées par lesdites séquences d'ADN codant pour lesdits polypeptides. Elle a également trait à des médicaments actifs sur l'un, certains, ou la totalité des récepteurs des mélanocortines déjà identifiés et/ou ceux décrits dans la présente invention et notamment à des médicaments agonistes ou antagonistes des hormones adrénocorticotrope et mélanotropes. L'hormone adrénocorticotrope est un des membres d'une famille de peptides opiomélanotropes dérivés d'un précurseur commun de haut poids moléculaire, la pro- opiomélanocortine (POMC). Ce précurseur est hydrolysé enzymatiquement pour donner l'ACTH, la 0-lipotropine (P-LPH) et une partie N-terminale. Ces trois peptides sont eux-mêmes hydrolisés, notamment dans le lobe intermédiaire de l'hypophyse, pour donner d'autres peptides actifs. Ainsi la région N-terminale donne la 7- MSH. L'ACTH est la source de l'hormone a-mélanotrope (a-MSH) et du peptide corticotrope du lobe intermédiaire (CLIP). La P-LPH peut être hydrolysée pour donner la P-endorphine et la y-LPH. Ces deux derniers peptides sont la source de 1-endorphine 1-27 et de R-MSH. L'homme adulte n'ayant pas de lobe intermédiaire de l'hypophyse, les taux plasmatiques d'a-MSH sont donc très faibles. De plus, la plus grande partie de la i-LPH reste inchangée, si bien que la R-LPH et l'ACTH sont les deux mélanocortines principales chez l'homme. Les activités biologiques des peptides dérivés de la proopiomélanocortine sont très variées. Le premier rôle de I'a-MSH et de la f-MSH est de réguler l'activité des mélanocytes et donc la pigmentation; l'ACTH et la P-LPH se montrent aussi de puissants stimulants de la pigmentation. Le premier rôle de l'ACTH est de réguler la synthèse de glucocorticoïdes et d'aldostérone dans la surrénale. Des effets de l'ACTH ont aussi été observés dans divers autres types cellulaires tels que les adipocytes, la glande lacrimale ou les lymphocytes. Les mélanocortines ont des activités nombreuses au niveau du système nerveux central ou périphérique: régulation de la production de CRH dans l'hypothalamus (Motta et coll., Endocrinology, 1965, 77: 392; Suda et coll., Endocrinology, 1986, 118: 459), effets sur les comportements d'évitement (Murphy et Miller, J. Comp. Physiol. Psychol., 1955, 48: 47), et de prise alimentaire (Sandmanet et coll., Experientia, 1969, 25: 1001; Garrud et coll., Physiol. Psychol. , 1974, 112: 109). Ces activités ne seraient pas provoquées de manière indirecte par une élévation de cortisol, mais dues à la stimulation de récepteurs cérébraux (Tatro, Brain Res., 1990, 536: 124 - 132). L'étude pharmacologique des réponses biologiques aux mélanocortines a indiqué qu'elles pouvaient résulter de l'interaction avec des récepteurs différents. Ainsi, certaines données pharmacologiques suggèrent que la synthèse des glucocorticoides et de l'aldostérone dans la surrénale pourraient être régulée par des récepteurs présentant des affinités différentes pour l'a-MSH (Vinson et coll., J. Steroid Blochem., 1983, 19: 537). L'ACTH et les MSH sont connues pour interagir avec des récepteurs couplés aux protéines G en activant l'adénylate cyclase. A ce jour, quatre récepteurs aux mélanocortines, dénommés MC-1 à MC-4, ont été clones. Le récepteur MC-1 est un récepteur à l'a-MSH exprimé dans les mélanocytes de souris et les mélanomes humains, mais pas dans d'autres tissus; le récepteur MC-2 est un récepteur à l'ACTH exprimé dans le cortex surrénalien (Mountjoy et coll., Science, 1992, 257, 1248- 1251) Le récepteur MC-3, qui présente des affinités très voisines pour les mélanocortines courtes (MSH) et pour I'ACTH, est exprimé dans le cerveau et le placenta, mais pas dans la surrénale ni dans les cellules provenant d'un mélanome (Gantz et coll., J. Biol. Chem., 1993, 268: 8246-8250). Le récepteur MC-4 est surtout exprimé dans le cerveau mais pas dans la surrénale, le placenta, ni les mélanocytes (Gantz et coll., J. Biol. Chem., 1993, 268: 15174-15179). L'invention des nouveaux polypeptides ci-dessus a permis de découvrir un nouveau récepteur pour les mélanocortines qui est désigné, ci-après, par MC-5. L'invention a pour objet de nouveaux polypeptides ayant une activité de récepteur aux mélanocortines MC-5 choisis dans le groupe des polypeptides formés par les ensembles 1 et 2 définis ci-après: - Ensemble 1 des polypeptides constitués par ou contenant la séquence de 325 acides aminés de rat, définie dans l'identificateur de séquence SEQ ID Ne! ou des fragments peptidiques de cette séquence, lesdits fragments étant tels que soit ils contiennent le ou les sites contenus dans ladite séquence de 325 acides aminés et dont la présence est nécessaire pour que le fragment soit capable de lier les mélanocortines ou leurs dérivés synthétiques, agonistes ou antagonistes, soit ils sont reconnus par des anticorps qui reconnaissent également ladite séquence de 325 acides aminés mais qui ne reconnaissent aucun des autres récepteurs MC-1, MC-2, MC-3 et MC-4, Ensemble 2 des polypeptides constitués par ou contenant la séquence humaine de 325 acides aminés, définie dans l'identificateur de séquence SEQ ID NM 3 ou des fragments peptidiques de ces polypeptides, lesdits fragments étant tels que soit ils contiennent le ou les sites contenus dans ladite séquence de 325 acides aminés et dont la présence est nécessaire pour que le fragment soit capable de lier les mélanocortines ou leurs dérivés synthétiques agonistes ou antagonistes, soit ils sont reconnus par des anticorps qui reconnaissent également ladite séquence de 325 acides aminés mais qui ne reconnaissent aucun des autres récepteurs MC-1, MC-2, MC-3 et MC-4. L'invention comprend également les polypeptides constitués par ou contenant les séquences homologues aux séquences SEQ ID N 1 et SEQ ID N' 3 présentant une homologie d'au moins l0 % avec lesdites séquences. De préférence, les polypeptides de l'ensemble 1 contiennent les sites faisant partie de ladite séquence de 325 acides aminés, dont la présence est nécessaire, quand les polypeptides exprimés par une cellule sont capables d'augmenter l'accumulation d'adénosyl 3', 5' monophosphate cyclique (AMP cyclique) lorsque ces polypeptides sont mis en présence de mélanocortines ou de leurs dérivés synthétiques agonistes selon une pharmacologie indiquée dans le Tableau I. On voit notamment que l'efficacité de l'a-MSH est égale à celle du fragment synthétique 1-24 de l'ACTH, supérieure à celles du norleu-Dphe a-MSH (NDP-aMSH) et de l'ACTH (1-39) et bien supérieure à celles des autres MSH alors que le fragment d'ACTH (4-10) est pratiquement inactif. Les polypeptides selon l'invention peuvent être utilisés en étant isolés, ou fixés sur des supports, d'une façon tout à fait classique, ou encore réunis à des séquences d'acides aminés sans relation avec les récepteurs MC-5. Ils peuvent être glycosylés ou non et comporter des ponts disulfures. La présente invention a également pour objet les acides nucléiques contenant ou constitués par les séquences de nucléotides codant pour un quelconque des polypeptides selon l'invention. Les acides nucléiques selon l'invention peuvent comprendre ou consister dans la séquence complète, c'est-à- dire le gène, codant pour le récepteur MC-S chez l'homme ou chez l'animal. Des acides nucléiques selon l'invention sont notamment des acides nucléiques comprenant ou constitués par les séquences SEQ ID N 1 ou N 3 ou des fragments de ces séquences. Parmi les acides nucléiques selon l'invention, des acides nucléiques particulièrement intéressants sont ceux constitués par les séquences s'étendant du nucléotide en position 253 à celui en position 1 227 dans l'identificateur SEQ ID N 1 et du nucléotide en position 184 à celui en position 1158 dans l'identificateur SEQ ID N' 3. Les acides nucléiques comprennent également les fragments codant pour les polypeptides plus courts définis précédemment. Outre les variations de séquences nucléotidiques que l'on peut observer lorsque l'on passe des séquences d'ADN de rat à l'ADN humain représentées sur les identificateurs SEQ ID N 1 et SEQ ID N 3, les acides nucléiques selon l'invention peuvent comporter les variations propres à la dégénérescence du code ainsi que des mutations localisées dans la mesure o les acides nucléiques variants s'hybrident avec les sondes susceptibles de s'hybrider, de façon spécifique, avec les séquences SEQ ID N' 1 ou SEQ ID N 3. Les acides nucléiques selon l'invention peuvent être obtenus par synthèse chimique classique d'acide nucléique, par réplication dans des vecteurs qui les contiennent ou par tout autre moyen, et notamment multiplication par le procédé dit PCR à partir d'une faible quantité d'acide nucléique selon l'invention. L'invention a également pour objet les vecteurs recombinants, utilisables pour le clonage ou pour l'expression des acides nucléiques, et contenant un acide nucléique selon l'invention, tels que des plasmides, phages ou virus contenant une ou plusieurs séquences selon l'invention en un site non essentiel pour la réplication. Les vecteurs selon l'invention peuvent contenir, le cas échéant, les éléments nécessaires pour l'expression dans un hôte cellulaire tels que promoteur, codon d'initiation, terminateur, séquence signal ou séquence d'ancrage ou tout autre élément utile à la régulation. L'invention a également pour objet les hôtes cellulaires transformés par un vecteur recombinant selon l'invention et susceptibles d'exprimer la séquence codante selon l'invention pour la synthèse d'un polypeptide selon l'invention. Ces hôtes peuvent être des procaryotes, tels que par exemple E. coli, ou eucaryotes, par exemple des cellules de levure telles que S. cerevisiae ou des cellules de mammifère, par exemple cellules CHO. L'invention a également pour objet les anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre un polypeptide selon l'invention. Ces anticorps monoclonaux ou polyclonaux sont obtenus par induction à partir d'un polypeptide selon l'invention et sont spécifiques des polypeptides selon l'invention, tout en étant susceptibles, ou non, de reconnaître d'autres récepteurs aux mélanocortines. L'obtention de ces anticorps peut s'effectuer de façon classique, soit par injection d'un polypeptide selon l'invention à un organisme et recueil du sérum avec éventuellement purification des anticorps spécifiques, soit pour les anticorps monoclonaux, par les techniques classiques de fusion cellulaire formant des hybridomes. Les anticorps selon l'invention sont utiles pour le diagnostic, par réaction anticorps-antigène mise en évidence à l'aide d'une technique de révélation classique, pour diagnostiquer des variations pathologiques de cellules exprimant le récepteur MC-5. L'invention a également pour objet les sondes nucléotidiques s'hybridant avec l'un des acides nucléiques selon l'invention ou avec leurs séquences complémentaires ou ARN correspondants, en étant spécifiques du récepteur MC-5, et qui ne s'hybrident pas avec les séquences nucléiques ou les ARN correspondants des autres récepteurs aux mélanocortines décrits ci-dessus. D'une façon en soi connue, on préfère que les sondes comportent au moins 10, et de préférence au moins 15 à 17 acides nucléiques. Les sondes selon l'invention sont utiles pour le diagnostic d'affections cardiovasculaires, rénales, neurologiques, psychiatriques, gastro-entérologiques ou neuro-endocriniennes liées à des anomalies qualitatives ou quantitatives du récepteur MC-5, y compris pour la recherche d'anomalies génétiques à ce niveau. Les sondes sont utilisées de façon classique en étant mises en contact, dans les conditions usuelles, avec des préparations présentant des acides nucléiques de cellules suspectées de présenter une anomalie définie ci-dessus. En particulier, les sondes peuvent être utilisées pour détecter une expression pathologique du récepteur MC-5 en révélant la présence de son ARN messager. Les sondes correspondant à la séquence inverse complémentaire des acides nucléiques ou d'un fragment de ces acides nucléiques selon l'invention, et constituées soit d'acides nucléiques naturels soit d'acides nucléiques chimiquement modifiés pour autant qu'elles s'hybrident avec la séquence selon l'invention, peuvent être utilisées comme sondes antisens pour bloquer l'expression du récepteur MC-5. Ces sondes antisens peuvent être utilisées comme médicaments dans le traitement d'affections cardiovasculaires et rénales, des troubles neurologiques et psychiatriques, des troubles gastro-entérologiques, notamment les troubles fonctionnels de l'intestin, troubles moteurs ou secrétoires et les dysfonctionnements de la surrénale. L'invention a également pour objet un procédé de criblage de médicaments destinés aux traitements de l'hypertension artérielle et d'autres affections cardiovasculaires, les troubles neurologiques et psychiatriques, les troubles gastro-entérologiques, notamment les troubles fonctionnels de l'intestin, troubles moteurs ou secrétoires et les dysfonctionnements de la surrénale. Le criblage d'un médicament peut notamment utiliser la détection de la capacité d'une molécule mélanocortine ou d'un dérivé synthétique à se comporter comme ligand vis-à-vis d'un polypeptide selon l'invention, et consiste, par exemple, à mettre en contact, dans un milieu convenable, la molécule mélanocortine ou un dérivé synthétique avec les membranes d'un hôte cellulaire transformé par un vecteur comprenant un insert codant pour le polypeptide et susceptible d'exprimer ledit polypeptide de façon à présenter à la surface membranaire un ou plusieurs sites spécifiques de ce polypeptide, de manière telle que la liaison spécifique du ligand candidat puisse être évaluée ou indirectement estimée, par exemple en détectant l'éventuel complexe ligand- polypeptide. Ce procédé peut également comprendre la mesure d'une réponse induite par la liaison avec la cellule, telle que par exemple la production d'AMP cyclique de façon à permettre de différencier les molécules mélanocortines ou leurs dérivés synthétiques qui se comportent comme antagonistes et celles qui se comportent comme agonistes, et même de définir le caractère relatif de ces dernières. Dans ce but de criblage, on peut également utiliser un procédé déterminant l'affinité d'un polypeptide de l'invention pour des ligands déterminés, dans lequel on cultive un hôte cellulaire transformé, conformément à l'invention, pour exprimer et présenter dans sa membrane le récepteur MC-5 ou un polypeptide correspondant, après quoi on met la culture cellulaire en contact avec le ligand déterminé et on vérifie s'il se forme une liaison spécifique entre les hôtes cellulaires et les ligands, notamment par des tests de radioliaison et de préférence, de mesure du taux de production ou de libération d'un indicateur convenable tel que AMP cyclique, ou ions intracellulaires, ces derniers tests permettant de distinguer et de définir les agonistes et leur caractère partiel ainsi que les antagonistes. Ce procédé permet également de déterminer les fragments polypeptidiques selon l'invention, par exemple ceux comportant une partie des séquences de 325 acides aminés SEQ ID N 1 ou de 325 acides aminés SEQ ID N' 3, et qui comprennent les sites opérationnels permettant la liaison et/ou l'induction des réponses cellulaires précitées. On peut également identifier ainsi des cellules ou tissus exprimant spontanément à leur surface membranaire un polypeptide selon l'invention, ces cellules ou tissus étant ensuite utilisables pour servir à la mise au point ou au criblage de médicaments ou de ligands interagissant avec les polypeptides selon l'invention. L'invention a également pour objet des médicaments contenant, dans une dose prévue pour être administrée, une quantité thérapeutiquement efficace d'une substance active, agoniste ou antagoniste, sur un polypeptide selon l'invention ayant une activité de récepteur MC-5 dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'invention a également pour objet des médicaments contenant, dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, une quantité efficace d'une substance active sur d'autres récepteurs des mélanocortines mais non active sur le récepteur MC-5. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante, faite à titre d'exemple non limitatif. Dans cette description, l'identificateur de séquence SEQ ID N 1 représente la séquence d'un fragment d'ADN de rat de 1 599 paires de bases, dont 325 codons, repérés sur la séquence, codant pour un polypeptide de 325 acides aminés constituant un récepteur des mélanocortines désigné par MC-5. L'identificateur de séquence SEQ ID N 3 représente la séquence d'un fragment d'ADN humain de 1262 paires de bases, dont 325 codons repérés sur la séquence, codant pour un polypeptide de 325 acides aminés constituant un récepteur MC-5 des mélanocortines. La figure 1 illustre la caractérisation des transcrits du gène du récepteur MC-5 dans plusieurs tissus de rat. Clonage des récepteurs MC-5 de rat et MC-5 humain 1. Clonage du récepteur MC-5 de rat On a criblé une banque d'ADN génomique de rat dans des conditions de stringence basse avec une sonde ADN marquée au 32p et correspondant à un fragment de la séquence nucléotidique codant pour le récepteur D3 de la dopamine (Sokoloff et al., Nature 1990, 347, 146-151). Dans ces conditions, un clone s'hybride fortement avec cette sonde. La séquence nucléotidique d'un fragment d'ADN (225 pb) du phage ainsi isolé montre que cet ADN comporte une séquence codant pour un peptide de 75 acides aminés codant une protéine présentant des homologies avec la famille des récepteurs des mélanocortines. Le fragment d'ADN de ce clone (nucléotide 810 au nucléotide 1038 de la séquence SEQ ID n' 1) est alors marqué au 32P, puis utilisé pour cribler une banque d'ADNc de striatum de rat dans le vecteur IZAP (Stratagene) dans des conditions de stringence élevée. Un clone est alors isolé puis le plasmide est excisé. Le plasmide obtenu (SLZ 82) est cultivé, purifié puis séquencé. L'insert obtenu (3 Kb) comprend la séquence nucléotidique 1 à 1 599 de la séquence SEQ ID N 1. 2. Clonage du récepteur MC-5 humain On a criblé une banque d'ADN génomique (Clontech) dans des conditions de stringence élevée avec une sonde ADN double brin marquée au 32p et correspondant aux nucléotides 812 à 1036 de la séquence nucléotidique du récepteur MC-5 de rat (SEQ ID N 1). Deux clones positifs ont été purifiés puis analysés par la technique de Southern et des fragments de restriction EcoRI-BamHl et Xba I ont été subclonés dans pGEM-4Z (Promega) puis séquences. La séquence obtenue (SEQ ID N 3) présente une homologie de près de 90 % avec la séquence du récepteur MC-5 de rat alors qu'elle est au plus de 64 % avec les autres récepteurs aux mélanocortines connus. 3. Expression du récepteur MC-5 de rat dans les cellules CHO La partie codante du récepteur MC-5 de rat a été amplifiée par PCR en utilisant les amorces nucléotidiques '-CT AAG CTT TTT CTT CCA GCG ATG AAC TCC (SEQ ID N 5) et '-CT GGA TCC ACC TAA TTG ACT GAG AGA TGA (SEQ ID N 6) en utilisant le plasmide SLZ 82 comme matrice selon la technique de Kawasaki et coll. (PCR Technology; éd. Erlich H.A., Stockholm Press, 1989). Le fragment obtenu (1050 bp) est purifié sur agarose puis digéré par les enzymes Hind III et Bam HI. Les vecteurs d'expression dérivent du plasmide pSV D2 (Giros, B. et al., Nature 342, 923-926, 1989). Le vecteur pour exprimer le récepteur MC-5 est obtenu en remplaçant le fragment de restriction HindIII- BglII de pSVD2 par un fragment de restriction HindIII-BamHI obtenu ci-dessus, conduisant au plasmide pSV MC-5. Ces constructions sont cultivées, puis purifiées sur gradient de chlorure de césium (Sambrook J. et al., Molecular cloning - a laboratory manual, C. Nolan, ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) et transfectées (Graham, F.L. et al., Virol. 52, 456-467, 1973) à des cellules d'ovaire de hamster chinois (CHO-K1), déficientes en dihydrofolate réductase. Les transfectants stables sont sélectionnés dans un milieu de culture (Dubelcco's Modified Eagle medium) sans hypoxanthine et sans thymidine. L'expression du récepteur MC-5 est mise en évidence par la liaison de la NDP-rMSH [tyr-125I] (Tatro et Reichlin, Endocrinology, 1987, 121: 1900) à des membranes de cellules transfectées. Les expériences de liaison sont effectuées dans un tampon Tris-HCl 50mM pH = 7.4 (volume total 400 Pl) contenant NaCI 120 mM, KCl 5 mM, MgCl2 2 mM, CaCI2 2 mM et du NDP-c MSH [tyr-125I] à une concentration de 0,1 à 0,2 nM. L'expression du récepteur MC-5 dans les cellules CHO transfectées est également mise en évidence par la capacité des mélanocortines à stimuler l'accumulation d'AMP cyclique dans ces cellules. Pour mesurer l'accumulation d'AMP cyclique, les cellules CHO transfectées sont cultivées sur plaques de 96 puits, lavées en milieu de Dulbecco modifié par Eagle (DMEM, Gibco BRL) puis mises en présence d'une mélanocortine ou d'un dérivé synthétique pendant 15 minutes à 37 C. L'AMP cyclique est extrait puis quantifié par dosage radioimmunologique (New England Nuclear). Les mélanocortines induisent une accumulation d'AMP cyclique égale à 4 à 5 fois la valeur du taux basal mesuré en absence de mélanocortine. Cette mesure permet de déterminer le caractère agoniste des mélanocortines pour le récepteur MC-5 et l'efficacité des mélanocortines ou de leurs dérivés synthétiques selon le Tableau I. TABLEAU I Efficacités des mélanocortines et de leurs dérivés synthétiques pour stimuler l'accumulation de l'AMP cyclique dans des cellules CHO exprimant le récepteur MC-5 de rat AGENT EC50 (nMN) ACTH (1-24) 0,46 a-MSH 0,59 NDP-a-MSH 1,0 ACTH (1-39) 6,0 f-MSH 12 i-MSH 46 Le tableau I indique clairement que le gène transfecté dans les cellules CHO code pour un récepteur aux mélanocortines comme l'indique la forte efficacité de l'a-MSH et de l'ACTH ainsi que leurs dérivés NDP- cMSH et ACTH (1-24). Cependant, la pharmacologie de ce récepteur MC-5 ne peut en aucun cas être confondue avec celle des récepteurs des mélanocortines déjà connus. Caractérisation des transcrits du gène du récepteur MC-5 dans plusieurs tissus de rat Des ARNs poly(A)+ sont préparées à partir de plusieurs tissus cérébraux ou périphériques de rat (Chirgwin et coll., Biochemistry 18, 5294-5299, 1979; Aviv et coll., Proc. Natl. Acad. Sci., 69, 1408-1412, 1972). Des échantillons (8 pg) sont dénaturés, soumis à électrophorèse sur agarose, transférés sur des membranes de nitrocellulose et hybridés en utilisant un fragment de 225 pb (nucléotides 810 à 1038 de la séquence SEQ ID ne 1) obtenu par amplification d'ADN à l'aide d'amorces oligonucléotidiques, puis marqué au 32p par la technique de "nick-translation". Ce fragment marqué est utilisé à raison de 5 x 106 dpm/ml.. Les membranes sont exposées pendant 15 jours à - 80'C avec des écrans amplificateurs. Chez le rat, un transcrit (4,0 kb) est observable dans la surrénale et l'estomac (Figure 1). L'expression des transcrits du récepteur MC-5 dans le cerveau de rat a aussi été étudié par la technique de PCR. On synthétise un ADNc monobrin en utilisant de la reverse transcriptase AMV (20 U, Boehringer), de l'ARN préparé par la technique de Chirgwin et coil. (Biochemistry, 1979, 18: 5294) et l'amorce A: 5'-CAT GAT CAT TAG GAT AAG GTG AAG (SEQ ID N 7) (400 mM). Cette matrice est ensuite amplifiée (Kawasaki et coll., "PCR technology"; éd. Erlich H.A., Stockholm Press, 1989) en utilisant l'amorce A et l'amorce 5'-ATC GAT CGT CTG CCT CAT CTC CAT (SEQ ID N 8) (75 mM chacune) pendant 35 cycles comme suit (94 C, 1 minute et 72 C, 1 minute) avec 5 U d'ADN polymérase Taq (Perkin Elmer Cetus). Une bande d'ADN de taille prévue 225 bp est visualisée avec du bromure d'éthydium et son identité avec un fragment du récepteur MC-5 est déterminée par hybridation avec une sonde constituée d'un mélange d'oligonucléotides '-CTT GAC ATG GTT CCG GGC CA (SEQ ID N 9) et 5'-CAG CAT GAA GGG TGC TAT (SEQ ID N 10) marqués au 32p par la terminale transférase. L'expression des transcrits a été aussi étudié par hybridation in situ en utilisant une sonde ARNc. Pour synthétiser la sonde ARN, on a utilisé le plasmide pGEM-4Z contenant le fragment comprenant la séquence SEQ ID N 1 entre les nucléotides 812 à 1036. Pour obtenir la sonde ARNc antisens, le plasmide a été linéarisé par EcoRI et cette matrice a été utilisée dans le kit "Riboprobe' GemIni Il" (Promega) avec la T7 RNA polymérase et de l'UTP 32P. Pour obtenir la sonde ARNc sens, le plasmide a été linéarisé par Hind III et utilisé avec la SP6 RNA polymérase. Ces sondes ont été hybridées sur des coupes de surrénale de rat selon la technique décrite par Bouthenet et coll. (Brain Res., 1991, 564: 203). Dans la surrénale, le récepteur MC- 5 n'est exprimé que dans la couche glomérulaire, lieu de synthèse de l'aldostérose. Le récepteur MC-2 est exprimé dans la couche fasciculaire, lieu de synthèse des glucocorticoïdes et, dans une moindre mesure, dans la couche glomérulaire (Mountjoy et coll., Science, 1992, 257: 1248). 19 2713645 I,TSTE DE SEQUENCES (l) INFORMATION GENERAl,E: (i) DEPOSANT: (A) NOM: INSTITUT NATIONAL DE IA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICAI,E (B) RUE: 101 rue de Tolbiar: (C) VILLE: PARIS CEDEX 13 (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAI,:L 75654 (ii) TITRE DE L' INVENTION: Polypel)tides à activité de récepteur aux mélanocortines, médicamemits les comprenant, séq(uences codant potiur eux, q.dfles, vecteurs et hlites les exprimant et application au criblage de médicaments. (]ii) NOMBRE DE SEQUENCES: 10 (iv) FORME LISIBILE PAR ORDINATEIIR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC rompatil)ble (C) SYSTEME D' EXPI,OITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB) (2) INFORMATION POUR I,A SEQ ID No: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) ILONGUEUR: 1599 paires de bases (B) TYPE: acide nucli(ltue (C) NOMBRE DE BRINS: doubhle (D) CONFIGURATION: lin.eaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQIJE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: SP(,lelîlr'.f inleo) i]dlique tit r(el)ttlr MC-5 d(le rat (ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONEILE: (A) NOI/CLE: CDS (B) EMPIACEMENT: 253..1227 SSI 0 SI 5I1 Sú elyV Il aIH 81I S1H S!H AI. biV na'I elV JAl &qd ai Jlui alI lAI OZL DD3D DDV DIV DIV DVD DVD DVI DDD DID DDDV, DVI L DIV DDV DIV DVI 0t1 5E1 UE ' SZI bD: dsV leA elv al I ele n'I n aq laS SAD la leS elV lea leA l:S ZL9 DDV DVY 91D DDD 1IVU DDD DU1 DID D9V DD1 DiV DD1 DD9 919 9L9 ID 0 ú OZI 1ll 011 11 sAD alI IBH laS dsV atid leA USV dsV alI S!H bIV leA ald 1t[l tZ9 IIV DDI DIV DIV DDJ. DVD DI DID DVV DV D DIV DVDD D9.1 111 DDV SOI 101 56 dsV elV aI leA lea S! H s A'I u.v USV a11:l lA.1 al _1 lti1:. L 1I ILLz 9LS DVD VD VIV D19 D91D DVD VVV W VV IVV VIv D1L DVI lVIV DDV DIV DDV 06 S8 08 nlD d-L elV usy jaS lasi iaS leA na'l oW dsV elV lea ely n'I -VaS 8Zs 9DVD DD9 33 DYVV DDI D1V DDV D19 DúD DIV DVD DDD DID DDD VID DDV SL UL 59 AI IEA 8tld atid.AI I'OH O.Ld 4S s! H Ia'I usiV sA'I usV sAl 1LA ali 08t D9DD it 111l Dll DVL Div IDD VDI DV 91D ')DVV 9VV DVV VVV 919 V1v 09 S' US5 St el A [D klI lea cAo!l ail tisV hitd nH'l noal tàs leA noa' AÀI na'I a4 t L3DD9 DDD DIV DID DID DIV DVV 9V D1L DI3D D'V D10 DID 1DD DD.DV C 0b SE 0E ni'l atld leA nli IVA -IV o11 AID lH dt;V IID sAD3 IV l8S JoS SAI >SE V1iD Dil 91 D 9VD 19 DDD llV D9D D1V DVD VVD D9 1 DD9 DD1 ID1 DVV SZ UC ST usV usV leA usv ulg AIÀ nOI'l all usv dsV ni OlaS eiV USV nliq.I. O0 9EE DVV IVV D1 IIV VVD VDD VID DJIV DVV DVD 9VD DD1 D30 DVV D1D DDV Ul! n1' dsy na'l na'l ail i 'I Sij -iaS;aoS 2aS usV loW 88Z lD IV9 01L Vil ID V D03 DVD 3ID1 Di D31 DVV D1V DD DVDDIIDIII tZ- IVDDDUVDDE19 VVDVVDD99V 9111DVV.LDV DV.I.D1DD. DVVV.VVVDD VDDDVVVV-D 081 IVDVU)VDII DII9DVIlDI DD0IIDIIVD VDDVIDD.I D 9111.991D VD9DDVL9DI OZI DilLVDDDVD DISDD.úIlI DVID19oVDID 'DVDVDL399 VDDVVVIDDV DVVVDITV 09 VDVDDOVDVD DVDDVDDllD VDVDV:>DUVD VIIIlIID9 9VVIIDVVVV 9900VDDV30 :I:ON aI 03S:3DNafI6MiS V'l a(I NOI-IdlHDSMû (IX) 99úT.ZZ OZ LZ>rI IDV-JIIIIIDI,,91DVDLV9V lDDDL,.DVV 9199190DD.1.; IiJ.. 0V, DD.iiV L9ET VDD.I.D-DD DIvI1 DDDDDI DDVDDD IIDDID.LVIVI DDIDDIDDID VDD DVDD Iú LOEI DVDDVVIDD DDDVDDVT91 VDDDD9DVDD9V DIDDVI1V WO DVDID. VID vDIDDDD1 S.,ZúE 0ZE lAI r.V AID na'I naI aq.j, sAD.1.41 bIV LZI DDIDIDDDDJ1 IDDVDVVVVL IVI DDV DDD ILD D1D DDV 19. IDV VDD s1 L01t SOc 0ú bIV eîîd AI SIH SADn sAD ail ail md sAqI O1d 1q. bIV bIV llW iluj OOZI 99 Dl 99) IVD 19D1 1D DIV DIV 0v V V1 VVIl DDV 99V D99D DIV DVD 00E S6Z 06Z 58Z ul9 IaS bIV na'l VlV.At zo [II na'l '-ld ds/V II lleA 1as USV SAD 1 EW ZSII VvD D9'V DDD DID DDD DVI D.V DID DDD IVD D1V D1D DD. iVV DD- V V UsZ SLZ OLZ alI na'l al n I 8aH tAT lH usV a Ald 1A. las 1H aq4d SAD elV sAD lAI t011 D. V D.D V.. IID DVI 1IV DVV I1I DVI lD1.1V 1. D91 IDD D9 T1 lvi. S9Z 09Z SSZ IlA usV UlD) OAd SAD aS ai1 liano lI n1' I aI llIH IaqI Ettd aqd O d Z 9501 DlD DVV W VD IDD DD1 E)DI D1V DLV VID DLV IID DVD II) D11 Dl1 DDD osz s vz o vz OSZ OtlZ0iZ 1aS d.JI SAD IVA ilI aLid al AEID naI naq laH 1 I41 na'I 1ql alI 1IV 8001 DDI 951 DD1 Dit9 iV Dl 11.LV UD9J DID D1D D0V DDV DID DDV D1V IDD SúZ O Z 5zz 5 AiD SA'I 1aW S PlV b1V Ul9 b.V leA laS USV l.AI bTV Old reS elV 096 19D DVV D1V DDV DDD 99V VVD 99V D919 lDI DVV DVi V0V D*DD DD01 1D9 OZZ SIZ UIZ SOZ elV ail bIV sAI lea SH t, UV bJV eIV nBa'l 'a' a4d laW SIH ali -.A. Z16 9DD V1V DDD 5WVV Dl9 IVD DVV 9DDD DDD9 1JD D1D DDIV DVD VIV iVI 0T ooZ 561 061 na'I aS 1 eA aWH aLld aLtid na' ' l ll:Jq a4d aqd aH.as ai nalI sA SAD 98 DID IDI D1E 1IV Dl DIl DLD 91DV DDV D11 Dl 91V DDI DIV DID D91 S81 08l SLI leA ali leA tAI sA'I -AiS IID EaL JAú A aul aiI alid lA a ci AI) sAD 918 D1)D DJ1V D1);V.L VV DDL VVU VI DOVI liV D1V D11 J9D D1V IDE D91 OLI.9l 091 aS a[I sAD a4d -"11 dl 4l alI SAD VIV ai aI [eA A JE) iaS b'V b1V 89L DDV V.IV DJ. 11i DDV 991 D1V D91i DD9 DIV 1IV úif 999 DDI DDD 9DV SP9ET ZZ I z SLI OLI S91 I[A ail AID sAD -as alI sAJD ald aJI. dzú al sAD eiV ail alI leA 091 551 051 5iv1 0ú AID ias FiV b.IV V -1t4 laiH alI SIH S!H iAI b V nl'I elv lAI a4d Okl SúI 0[ ail tTlj alI iAI D2V dsV leA elV alI ely na'I naq l aS SAD jaH *as ZI OZI 5it 11 1>11 S u elV IeA 1A laS a1l1 sAD a 1 lH iW S dsV atid leA usV dsV alI S!H SZ 011 oul 001 bV 1LA aliid 2.I. (IsV L1V a1l ULA ILA s!H SqI usv usv alI naI -.A.t 56 06 58 aiI aqj alI It.l iD dil 2[V uSV.aS lOa]i las!eA noq:aH dsV PIV 08 SL OL S9 OZ leA eiV na'I laoS AID leA aql ad al AI H d zaW s.lH rfa'I uSV sAI 09 OS 0S usV sAI leA alI ely AuI all ILA a'I à VlI usV hil n'Il na' aas leA na'l AID na'l iLI ra aid lea n lea el ai 1 I lI a AID 1aH dsV nllD sAD Sl 0E Sc O oc 9z 0 z òelV *aS as sAI usV usiV 1LA usV Ul AID naq alI usV dsV nlID îaS SI Ul S I e[V usV na'l J.qJ, Itaq dsV nial 1,'l îtlJ naq st i tas laS las usV îaw :Z:ON (iI 3S:ODl'nifaS V'I sG NOIldIBDSS3( (!X) 0l al!ôOl d sa3'IfD3l'IOw sa ad I (1!) d -1 LUt! I [:NOI.LVfDIaI.NOD (a) au!ule aproe;3dAl (l) sau!fme sa8p!.)e f SZ::lfflDNOq (V) :'DN3IlôSiS V'1 Va S3flOIISISIDVlD (!1 S Z:ON (lI 0BS VI flfOd NOIIVWHOANI (Z) 6651 1D DDIIDD9. DI D.II.D19.111 DD991DVIIV DDVIIVIVID DDD9DD919D9D LfSI DDVVVDV/VVED 1IVDI.DI'DDDV D.[DDD.DDúD DVVúVDEDúVD V/DDVIúTDD9D 19DVVID9DD L8ffl OVDIlDDI.DDI IVDDVDIII, D9VV. ú.L)DD1.9VDDD DDID1DIDDLD VDIDDIODD 9V9úT.Z: Phlie Ile Ile Tyr Tyr Glu Ser Lys Tyt Val Tle V.l Cys I.eu Ile Ser 185 19n Met Plie Plie Tlr Met Leu Phie Ple MePt Val Ser I,eu Tyr le His Met 200 205 Plie Leu Leu Ala Arg Asn flis Vl I, ys A'q Ile Ala Ala Ser Pro Arq 210 215 220 Tyr Asn Ser Val Arq Gin Arcq Ala Ser Mel Lys Gly Ala Ile Thr Leu 225 230 215 240 Thr Met Ieu Leu Gly Ile Phe Ile Val Cys Trp Ser Pro Plie Pbh,eu 245 250 255 His Leu Ile Leu Met Ile Ser Cys Pio Cmii Asn Val Tyr Cys Ala Cys 260 265 270 Plie Met Setr Tyr Plie Asn Met Tyr: T,eu Tlie Lel Ile Met Cys Asn Set 275 280 285 Val Ile Asp Pro I,eu Ile Tyr Ala lieu Arq er Gin Glu Met Arq Arq 290 295 30On Tlr Phe Lys Glu Ile Ile Cys Cys Hlis Gly Pie Arq Aig Thr Cys Tbr 305 310 315 320 Leu Leu Gly Arq Tyr 325 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERISTIQIJES DE LA SEQUIENCE: (A) IONGUEUR: 1262 pair:e:s le bases (B) TYPE: acide ntucléi(liUe (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQtIE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Sequence nuicleot idiqle du recepteur MC-5 huma i n 0l 5t[ 0 EI JlqZ lea.XAú blV dsV lea elyoi a ly nLe nI'I aléoS SAD eaH leS elV Z19 DDV D1D DV1 DDV 1VD 919 VDL) 11V DDD D1D VIl DDV DDL D1V 3DD VD9 z1 ozi JII leA leai S m 1I SAD ail 1 H {"S dIsV atId leA usv dsv alI 9rH b 0V t9s 91DE) DiD DI 1lVD DD1 2)V D1V 3DJ1 DVD ú.11 919 úV DV1 1lV DVD DD3 ULi SOi 00l leA ticd iel (SV elV all leA kaOl Sill sAql usv usv nraq rlq A, all 91S ID IL1l DDD DVD VED9 VLV 9ID9 V1D J; VD 9VV DVV DYV 3D3D V1D DV1 D1V S6 06 58 08 5Z liii ú11 1 l t D dJl elà:lAS.lS 1aN;l1S iLA ia'i]aW dsy elV eA 89V 3DV D1V DDV 9VD 991 DDD 19V D3.1 DIV DDV 919 D1D D11 DVD DDD D1D SiL UL 59 elkV r'l iS SAD 1e j alqd ald iAjI:laW Od aS SH ria'l usV sAl tiusV O0Z VDD D1D DDV DD1 D1D DAl D'Lú DVI 'DV DDD DD1 DVD 1DD DVV 1VV DW oz 09 bb OS S'i leA aili elv AiÀ [11 le A lia'I a1I USV ri1 ''I l n'I.laS 8ai leA ZLE 01VV D19D VIV DDD D009 V1V D1D D11 D1V DVV 9V 911. D1D D9V DIV D19 3 SV ut SE AI uajl:tlU ''Il ktld IeA iJ1 leIA i1V alI AID 'a{ dsV rid sAD Ol.d 1 tZE IDD UL'D I, V D1D 111 1D D DVD D.1.D.1DD IV DDD DIV D0D VY9 191 V3DD Os ', OZ aS laS 9sA'I usVi sA'l îlA usV ('d A1 -las na'l U9sV Ai[ n19.111 e[1V 9LZ VD1J. D. VV DVV VVv D19D IVV 'Di V1D VDI IID DVV D99 9V9 VDV DD9 s51 I 01 O usV r-, 'l1 USy nIal (ISV hI ai[d s ll Il aq s!H htld las las tiV aW 8ZZ lVV D1D DVV DID 1VD LU11 D1L 11v' DI.D DV1D 11 VDI DDI I VV D1V VD9 081 VDDIDIIIVI 0D1DVUVDV 9VVDDDlDD1 liVVV 319VDV 111191VDVV VVIIIVVDD919 oz[ 11,VD91111i D3DVV1DDtDIDE 99IDlllDL llDIDDD9 D91VIDD9VID1 19Di19191DJ 09 DDD9DYIlDI IDDDD31VDI iY191911DVD 91VDlDLDú DD1 9VDDD9D9V 91YDIDV9V S E:oN 1 (i ûS;iMîMfI.S V'l 21G NOI1dlaDS'4 (iX) 211 '-'{B[:.LN3H2DVqdWH (S) Sui:'ID/HO N (V) 3'I'[:NUEII. IG(I/ -41 1$ IúSITVD ( XI) 0lú dsv biV biv Old oaqd as S 8811 2IDLD9919D LDLDDLDDLD VVVDVD9VVI 1V9 99V VV DDD ILI D9DV Sl1E OIE SOc SAD elV a8l btV atld AI9 bI. V sAD sAD ali al[ nid sAl arld.iLq sAq Otil 1DDL DDD DIV DDV DJl 199D D19D DDL DDI IúV IIV 9V9 DVV 11I DDV DVV OOE 56Z 06Z biV jaH ni9 ulID aS iV iAZ elv JAL alI naq Oid dsV l&H leA aS Z601 99DDD DiV OV9 VVD D9V DDj DVI DDú9 JI VIV DLD LDD DV9 DIV 919 DDI S8Z 08Z SLZ usV sAD 1aH alI Ia'1 al! nfij IA aI usV bt lI d is!H las 11W arid bJV M01 IVV L91 D9V DIV DID VIV DID DV1I 9 V IVV D1L DVD IDI 9LV DLI D9D 5Z OLZ 59z 09Z las sAD AI nal usV Ul9 Old SAD JaS naq Wa1 na'I ql1 nal SIH nal 966 1DL DDL DVI DID DVV DVD IDD D9L IDI IID 91V Vil IDV DID IVD IID aiid a ld OJd e[V d.i sAD leA - $lI alId leA A[9 1 a' naq law qú jeA OZ 8k6 DU1 Dl 9DD2 DD DD DD91 919Du DV Ili 919 D9D 91DD 91D DIV DDV D19 SEZ OEZ SZZ ati le A elV AID UlD U O aaS - iq biv ulD bJv eiV -as as elV A1D 006 DDV D 19DDD DD9D D 9D DIV DDV DDV uD 9VDD 9D DDD9 D1 DD9V DDD DD999 OZZ SlZ 0UZ ST oId a'I elV elV alI b.V sAI leA S!H -il b'V 1V nal na'ia a4d IaW ZS8 DDD DID ID DDD 9D9 1V DD99D V DV Dt DVD IDV DD DDD9 9DD D1D Dll DIV SOZ uOZ 561 slH ail úAI naI ÀaS leA nIl b 'Il atld la'I lW elV alid atld lai las 1'08 DVD VIV DVI Di> lDI 91D 91D2 ID DU 91l DIV ID29 Dl D21 9LV DD1 OT 06l SBi 081 BiI naq SAD 11'l alII leA lAI "Itl 'aS nli9 I aS lAI nag alI at ld leA 9SL VDIY D2ID DD91 9D D1V DIt DVI DDV DDL VVD VDI DVI D9D D12 DLI D2 9 SLI OLI 591 091 aiI AiD sAD AD9 aqL sA2 alid elV d.il *Il A19 elV lI alI eV A ID B0L llV DD99 DD91 DD9D 9DV D91 Dl DD DI D1V D99 DD9 DlV DIV DDD9 999 551 051 Sti JaS bDJV b[V e IV ta il lal al 1 s!H l AI e[V naq 81V JAI atld alI 099 VDI DD9D 99V DDD DDV 91DV DIV DVD DYD DV DD DD DD9 DVI DIl DIV 979ú T Z z s/I OLI cJ91 leA ali AID SAD AID 1t. L. sAD aild IV diJl al AID elV ali al elv 091 SSI 0oSI St AID JaS b.zV bV elV A14.1 aW all S!H SIH IAú ely na'l elVI JA.L atd 0t1 SEI 0EoI alI LUL leA.AL biv d9v leA elV alI elV nl ina'I laS sAD IaH iaS SZl UZui 51sil Z UlV leA leA JUS alI sA;, ail laIH las (sV aEld lea LIsV CISV B}I SFH 011 SUI 001 bl le ad elV ds el a(all leA na'l slH sAil usV USV I'a' na'I 21A. 56 06 58 ai i.*1I ali til. ngid dl, elV {aS las aH.l2aS leA nal laW dsV elV oZ 08 SL UL 59 Ie'A 1[V la'I.iS SAD [ IA Olid illd Al loW cild 2a S!H 1la'I usV sA'j 09 SLa OS usV sA'I lea alI elV AID all le CA n' alI usV nhi na'I nlaI laS alI s v 0t v E SlT ea AID na, l -lq. naql ald ILA nlD lea elV alI AID laW disV nl SAD O1d JaS -aS sA'I usv sA' lA tJsV Oid AI9 iaaS inaq tIsV AID nl[D atlj. Si Ul S l elV usV iaql usV Ilaq dsV it'l atLid s[H na'lI S!H aLid lias /aS usV aW 0T :t:ON CI 035;. aDNa213nS V':4(1 NOI.dIDSSaU (!x) k" u lt)?{.*;31' D:JI3'lIUW 3C;dAl, (!!) ai.uIeau! [:NOIiVSi9IDINO3 (L]) au!me ap!oe:-'qdAL (') s auIule sap!ie SZE Hi]3lilDNO'I (V) :13DN3{llas V'I sa( S3nllúSIa3l. DZavD (!) ::oUl (I11 aS V' I afOd NOItVH1OINI (Z) Z9Z.IL LVDDIVDDVI 8tZ1 DDIDVDDDVI 9DDV199DDDD VVDVDVDVDD VVV DúVDID DVDD,11TD.1.DDD.L.1D V9ú'TZZ 9Z a'ub!91a:mau apD!De:3dAL (ifd) Saspq a[ sa!edl 6Z:uin3n9DNOI (V) :aDNaflC3S V'I au SanItSIasi3.DVaVD ( 1) :9:ON aU1 QS V'I aflOd NOIlvW/HOANI () 0ú 6Z DDLDVV9LV DJD9DDVúD.L.DI I1. .DVVLD :- ON il 03S:a.DN3flOS V'i 3C NOIldIDS3aq (lx) (IawuiJd) asa3ilItAs ap apljojaOnuobilo: a'lnD3'IO 3a 3dAl (.!) l! ail[!:NOIVldIlDIANOD ( u) aliduI!s:SNlIdt2( 'aaIHUN (D) sz /allb[elUlll i/[)!;3. ::ddAl (8) sasL(I al Sc!eÈ L 6Z:)u[Iqú1NO'I (V) :3DNM[IC3MS V'l 3a SMfIISI213LDVHVD (!) ::oN G(1 S V'I aflOd NiOIIHVaûONI (Z) SZú Oz lISV Db.V t)IV O-ld aLld UcE 51L 01[[ SOY als sAD V!y all biv alid AD bti.v sAD sAD o all id fl SA'I aqitd]qj oo00 6Z 06Z SA'I bIV iaW Illb uID -19 S l' J.V IJAI el/ V -AL oI l I l 'l o.:ld dIsV laW [LA eA s5z U8c bLZ IJS USV sAD lWH atl Io.l '' d itb'l AI laH UsV atid SIH J S 1WH a Id OLZ.9z 09Z b.I.li)S SAD; -1A.L tgà'l uSV il 1 4",d sALSD -l*S l'I l IaW lial.tIl. I1l'l SIH bbz Ub34 5vz 01 ief'l otld ltid (Id I[ (1 1I A S; I e'A 11[.L dIld I e'A A IL Ié'1 lla'l l:w.ltJLî UOZ 5LZ UtZ SZZ leA li, l eA e!IV AIP tglU IaNH *S - l& bl.V UlD fID y el'V -aS laS '1y O0F. SIZ 01Z AI19 -ld flé'I ejV LIV all b{1 SiA' ItA S[!H -'liL [)AV elev Ial na'I a id S0z OUO 561 laW 9IH all.IA.L Ila'1]1S leaA '1.l '1 tld IaWl:I '[V dtld 4aqd I&H 061 '.8l 081 J S il '1 A al (1z OA a' il leaA.AJ AIUL. S i 15 laS IAiL laI all btld GV9ETZZ LZ7 (C) NOMBRE DE RRTlqS: simpl1c (D) CONFIGURATION: lin,;,ire (ii) TYPE DE MOI,ECTILE: O liqoiu'16otlide de synthèse (primer) (xi) DESCRIPTION DE IA SEQUENiCE: SEQ ID NO: 6: CTGGATCCAC CTAATTGACT GAGAGATGA 29 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 7: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQIJUENCE: (A) LONGUEUR: 24 paires doe bases (B) TYPE: acide nuiciléiqis (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: Oliqgonuciléotide de synthèse (prim.er) (xi) DESCRIPTION DE IA SEQItENC:F. SEQ ID NO: 7: CATGATCATT AGGATAAGGT GAAG 24 (2) INFORMATION POUR I,A SEQ ID 110: 8: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQI1ENCE: (A) LONGUEIlR: 24 paires (le hasps (B) TYPE: acide niléicuie (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: I ileaire (ii) TYPE DE MOIECIJ,E: O iqontlciéot ide e synthèse (primer) (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCF.: SEQ ID NO: 8: ATCGATCGTC TGCCTCATCT CCAT 24 (2) INFORMATION POUR I,A SEQ ID NO: 9: (i) CARACTERISTIQUES DE IA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 20 p)aites de bars_.s (B) TYPE: acide nucléifque (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGIJRATION: lii.neaire (ii) TYPE DE MOIECULE: Ol iqonrtlclnt ide REVENDICATIONS 1. Nouveaux polypeptides ayant une activité de récepteur aux mélanocortines MC-5 choisis dans le groupe des polypeptides formés par les ensembles 1 et 2 définis ci-après: - Ensemble i des polypeptides constitués par ou contenant la séquence de 325 acides aminés de rat, définie dans l'identificateur de séquence SEQ ID N 1 ou des fragments peptidiques de cette séquence, lesdits fragments étant tels que soit ils contiennent le ou les sites contenus dans ladite séquence de 325 acides aminés et dont la présence est nécessaire pour que le fragment soit capable de lier les mélanocortines ou leurs dérivés synthétiques, agonistes ou antagonistes, soit ils sont reconnus par des anticorps qui reconnaissent également ladite séquence de 325 acides aminés mais qui ne reconnaissent aucun des autres récepteurs MC-1, MC-2, MC-3 et MC-4, Ensemble 2 des polypeptides constitués par ou contenant la séquence humaine de 325 acides aminés, définie dans l'identificateur de séquence SEQ ID Ne 3 ou des fragments peptidiques de ces polypeptides, lesdits fragments étant tels que 25. soit ils contiennent le ou les sites contenus dans ladite séquence de 325 acides aminés et dont la présence est nécessaire pour que le fragment soit capable de lier les mélanocortines ou leurs dérivés synthétiques agonistes ou antagonistes, 30. soit ils sont reconnus par des anticorps qui reconnaissent également ladite séquence de 325 acides aminés mais qui ne reconnaissent aucun des autres récepteurs MC-1, MC-2, MC-3 et MC-4. 2. Polypeptides de l'ensemble 1 de la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils contiennent les sites faisant partie de ladite séquence de 325 acides aminés, dont la présence est nécessaire, quand les polypeptides sont exprimés par une cellule, notamment CHO, en présence de mélanocortines ou de leur dérivés synthétiques agonistes pour que l'efficacité desdits agonistes corresponde à celle indiquée ci-dessous: AGENT EC50 (nM) ACTH (1-24) 0,46 a-MSH 0,59 NDP-u-MSH 1,0 ACTH (1-39) 6,0 P-MSH 12 v-MSH 46 3. Acides nucléiques contenant ou constitués par les séquences de nucléotides codant pour un quelconque des polypeptides selon la revendication 1. 4. Acides nucléiques consistant en ou comprenant la séquence complète codant pour le récepteur MC-5 chez l'homme ou chez l'animal. 5. Acides nucléiques comprenant ou constitués par les séquences SEQ ID N 1 ou N 3 ou des fragments de ces séquences. 6. Acide nucléique selon la revendication 5 constitué par la séquence s'étendant du nucléotide en position 253 à celui en position 1 227 dans l'identificateur SEQ ID N 1. 7. Acides nucléiques selon la revendication 5 constitués par la séquence s'étendant du nucléotide en position 184 à celui en position 1 158 dans l'identificateur SEQ ID N 3. 8. Vecteurs recombinants utilisables pour le clonage ou pour l'expression des acides nucléiques, et contenant un acide nucléique selon l'une des revendications 3 à 7. 9. Hôtes cellulaires transformés par un vecteur recombinant selon la revendication 8 et susceptibles d'exprimer la séquence codante pour la synthèse d'un polypeptide selon l'une des revendications 1 et 2. 10. Anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre un polypeptide selon l'une des revendications 1 et 2. 11. Sondes nucléotidiques s'hybridant avec l'un des acides nucléiques selon l'une des revendications 3 à 7 ou avec leurs séquences complémentaires ou ARN correspondants, en étant spécifiques du récepteur MC-5, et qui ne s'hybrident pas avec les séquences nucléiques ou les ARN correspondants des autres récepteurs aux mélanocortines. 12. Sondes selon la revendication 11 pour le diagnostic d'affections cardiovasculaires, rénales, neurologiques, psychiatriques, gastro-entérologiques ou neuro-endocriniennes liées à des anomalies qualitatives ou quantitatives du récepteur MC-5. 13. Sondes antisens comprenant ou constituées par la séquence inverse complémentaire ou un fragment des acides nucléiques selon l'une des revendications 3 à 7 et s'hybridant avec l'un desdits acides nucléiques, pour bloquer l'expression du récepteur MC-5. 14. Sondes selon la revendication 13 pour le traitement d'affections cardiovasculaires, rénales, neurologiques, psychiatriques, gastro-entérologiques, notamment les troubles fonctionnels de l'intestin, les troubles moteurs ou sécrétoires et les dysfonctionnements de la surrénale. 15. Procédé de criblage de médicaments destinés aux traitements d'affections cardiovasculaires notamment l'hypertension artérielle, les troubles neurologiques et psychiatriques, les troubles gastro-entérologiques, notamment troubles fonctionnels de l'intestin, troubles moteurs ou sécrétoires et les dysfonctionnements de la surrénale, dans lequel on met en contact, dans un milieu convenable, une molécule candidate avec les membranes d'un hôte cellulaire transformé par un vecteur comprenant un insert codant pour un polypeptide selon l'une des revendications 1 et 2 et susceptible d'exprimer ledit polypeptide de façon à présenter à la surface membranaire des sites spécifiques de ce polypeptide, l'éventuel complexe ligand-polypeptide qui se forme étant alors détecté. 16. Procédé de criblage de médicaments destinés aux traitements d'affections cardiovasculaires notamment de l'hypertension artérielle, les troubles neurologiques et psychiatriques, les troubles gastro-entérologiques, notamment troubles fonctionnels de l'intestin, troubles moteurs ou sécrétoires et les dysfonctionnements de la surrénale dans lequel on mesure une réponse induite par la liaison d'une molécule candidate avec une cellule, transformée par un vecteur comprenant un insert codant pour un polypeptide selon l'une des revendications 1 et 2 et susceptible d'exprimer ledit polypeptide de façon à présenter à la surface menbranaire un ou plusieurs sites spécifiques de ce polypeptide de telle manière que la mesure d'un signal tel que la production d'AMP cyclique permette de différencier les molécules mélanocortines ou leurs dérivés synthétiques qui se comportent comme antagonistes et celles qui se comportent comme agonistes. 17. Procédé de criblage de ligands marqués tels que ligands radioactifs ou fluorescents dans lequel on mesure la liaison spécifique de liqands candidats avec la membrane d'une cellule transformée par un vecteur comprenant un insert codant pour un polypeptide selon l'une des revendications 1 et 2 et susceptible d'exprimer ledit polypeptide de façon à exprimer à la surface membranaire un ou plusieurs sites spécifiques de ce polypeptide de manière telle que la liaison spécifique du ligand candidat puisse être évaluée ou indirectement estimée. 18. Procédé d'identification de tissus ou cellules exprimant spontanément à leur surface membranaire un polypeptide selon l'une des revendications 1 et 2 de telle manière que lesdits tissus ou cellule, puissent servir à la mise au point de médicaments ou ligands marqués selon les revendications 15 à 17. 19. Médicaments contenant, dans une dose prévue pour être administrée, une quantité thérapeutiquement efficace d'une substance active agoniste ou antagoniste, sur un polypeptide ayant une activité de récepteur MC-5 dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 20. Médicaments contenant, dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, une quantité efficace d'une substance active sur d'autres récepteurs des mélanocortines mais non active sur le récepteur MC-5.