Brevet FR2714067A1 — publié le 19950623

NOUVEAUX DERIVES DE CYCLODEXTRINES, UTILISABLES EN PARTICULIER POUR SOLUBILISER DES COMPOSES CHIMIQUES HYDROPHOBES TELS QUE DES MEDICAMENTS, ET LEUR PROCEDE DE PREPARATION. DESCRIPTION La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de cyclodextrines, utilisables en particulier pour solubiliser dans un milieu aqueux des composés chimiques hydrophobes, tels que des molécules pharmaceutiquement actives, par inclusion dans ces dérivés. Les cyclodextrines ou cyclomaltooligosaccharides sont des composés d'origine naturelle formés par l'enchaînement de 6, 7 ou 8 unités glucose liées en a-1,4. De nombreux travaux ont montré que ces cyclodextrines pouvaient former des complexes d'inclusion avec des molécules hydrophobes et permettre ainsi la solubilisation de ces molécules dans des milieux aqueux. De nombreuses applications ont été proposées pour tirer profit de ce phénomène, en particulier dans le domaine pharmaceutique, comme il est décrit par D. Duchêne dans l'ouvrage intitulé "Cyclodextrins and their industrial uses", chapitre 6, pages 213 à 257, Editions de Santé, 1987. Des compositions pharmaceutiques utilisant ces cyclodextrines ont d'ailleurs été commercialisées au Japon, en Italie et plus récemment en France, par exemple par Pierre Fabre Médicament pour le Brexins qui est un complexe d'inclusion du Piroxicam dans la Q-cyclodextrine. Parmi les cyclodextrines utilisables, la Q -cyclodextrine qui comporte 7 unités glucose, est a plus adaptée au niveau de la taille de sa cavité et la moins chère des trois, mais son utilisation pose certains problèmes, car elle est moins soluble que les autres cyclodextrines et présente un caractère hémolytique. Aussi, on a envisagé d'améliorer les propriétés de la ss-cyclodextrine en la modifiant chimiquement pour la rendre plus adaptée. Plusieurs solutions ont été envisaaées et ont conduit à l'utilisation de dérivés méthylés ou de dérivés hydroxyalkylés. Les dérivés méthylés sont beaucoup plus solubles que la cyclodextrine d'origine et ils possèdent de bonnes propriétés de solubilisation de composés organiques hydrophobes, enf particulier dans le cas de la 2,6-diméthyl-ss-cyclodextrine. Néanmoins, ces dérivés méthylés, outre qu'ils sont difficiles à obtenir à l'état pur, sont inutilisables pour des applications pharmaceutiques, en particulier pour les formes injectables, en raison de leur très fort caractère hémolytique. Les dérivés hydroxyalkylés, développés en particulier par Janssen, par exemple les hydroxypropyl-cyclodextrines présentent une très forte solubilité dans l'eau et sont peu hémolytiques. Toutefois, leur utilisation reste difficile en raison de leur extrême hétérogénéité chimique ; de plus, les substitutions peuvent limiter la formation de complexes d'inclusion par effet de gêne stérique, si bien qu'aucune application pharmaceutique n'a encore été mise au point avec ces dérivés. La présente invention a précisément pour objet de nouveaux dérivés de cyclodextrines, utilisables pour solubiliser des composés chimiques hydrophobes, qui pallient ces inconvénients. Ces nouveaux dérivés de cyclodextrines répondent à la formule dans laquelle R1 représente OH ou NH (CH2)pR2, R2 représente OH ou NHR3, R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, n est égal à 5,6 ou 7, et p est un nombre entier allant de 2 à 6, les p, R2 et R3 pouvant être différents lorsque un ou plusieurs des R1 représentent NH(CH2)p R2. Lorsque R2 représente NHR3 AVEC R3 étant un groupe alkyle, celui-ci est de préférence un groupe alkyle inférieur, ayant de 1 à 4 atomes de carbone. Dans ces dérivés, la présence d'un ou plusieurs groupes NH(CH2)p R2 permet de conférer aux dérivés une solubilité très améliorée par rapport à la cyclodextrine non modifiée, en particulier dans le cas où cette cyclodextrine est la Q-cyclodextrine, c'est-à-dire la cyclodextrine non modifiée avec n=6. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, le dérivé de cyclodextrine est un dérivé monosubstitué, c'est-à-dire que dans la formule I précitée, tous les R1 représentent OH. Un tel dérivé peut être préparé en faisant réagir un dérivé tosylé de formule dans laquelle R4 représente le groupe tosyle et n est égal à 5, 6 ou 7, avec un composé de formule NH2 (CH2)p R2 avec R2 ayant la signification donnée ci-dessus. Le dérivé tosylé de formule (II) peut être obtenu par exemple par le procédé décrit dans J.Am. Chem. Soc., 112, 1990, page 3860-3868. La réaction du dérivé tosylé avec le composé de formule NH2 (CH2)p R2 peut être effectuée simplement par dissolution du dérivé tosylé dans ce composé. Selon un second mode de réalisation de l'invention, le dérivé de cyclodextrine est un dérivé persubstitué, c'est-à-dire répondant à la formule I précitée dans laquelle tous les R1 représentent un groupe NH(CH2)p R2 avec p et R2 ayant les significations données ci-dessus. Ces dérivés persubstitués sont particulièrement intéressants, car la présence de plusieurs groupements NH (CH2)p R2 permet d'augmenter fortement la solubilité dans l'eau de ces dérivés. Ces dérivés peuvent être préparés à partir des dérivés periodés de cyclodextrines par réaction d'un dérivé iodé de cyclodextrine répondant à la formule dans laquelle n est égal à 5, 6 ou 7 avec au moins un composé de formule NH2(CH2)p R2 dans laquelle p et R2 ont les significations données ci-dessus. De préférence, dans ce second mode de réalisation de l'invention tous les R1 du dérivé de formule (I) sont identiques. Dans ce cas, on utilise un seul composé de formule NH2 (CH2)p R2 pour obtenir le dérivé persubstitué. Les dérivés de cyclodextrines décrits ci-dessus sont utilisables en particulier pour solubiliser en milieu aqueux des composés chimiques hydrophobes. Aussi, l'invention a également pour objet un procédé de solubilisation dans un milieu aqueux d'un composé chimique hydrophobe, qui consiste à combiner ce composé avec un dérivé de cyclodextrine répondant à la formule (I) précitée, pour former avec celui-ci un complexe d'inclusion soluble dans l'eau. L'utilisation dans ce procédé de dérivés répondant à la formule (I) précitée présente l'avantage d'améliorer la solubilité, la stabilité et la biodisponibilité, sous diverses formes d'adm ni strsti mn du composé hydrophobe, en particulier lorsqu'il s'agit de molécules pharmaceutiquement actives. De préférence dans l'invention, on utilise les dérivés mono ou persubstitués de la Q-cyclodextrine, c'est-à-dire que dans la formule I précitée,n est égal à 6. On peut toutefois aussi utiliser les dérivés de l'a-cyclodextrine (n=5) et les dérivés de la y-cyclodextrine (n=7). Les composés chimiques hydrophobes susceptibles d'être solubilisés dans des milieux aqueux au moyen de ces cyclodextrines peuvent être de différents types. A titre d'exemples de tels composés, on peut citer des produits cosmétiques, des vitamines, des molécules pharmaceutiquement actives telles que celles décrites par D. Duchêne dans l'ouvrage intitulé "Cyclodextrins and their industrial uses", chapitre 6, pages 213 à 257, Editions de Santé, 1987). De préférence dans l'invention, le composé chimique hydrophobe est une molécule pharmaceutiquement active. A titre d'exemples de telles molécules, on peut citer les stéroïdes, par exemple la prednisolone, les agents anti-épileptiques comme la carbamazépine, et les agents anti-cancéreux. L'invention concerne également les complexes d'inclusion des dérivés de cyclodextrines mentionnés ci-dessus avec un composé chimique, en particulier hydrophobe, tel qu'une molécule pharmaceutiquement active. Ces complexes d'inclusion peuvent être préparés par des procédés classiques, par exemple en ajoutant à une solution ou à une suspension du dérivé de cyclodextrine de formule (I) utilisé, une solution du composé dans un solvant organique approprié, par exemple l'acétone. On peut ensuite isoler le complexe d'inclusion ainsi formé par lyophilisation. L'invention a encore pour objet une composition pharmaceutique comprenant un complexe d'inclusion d'un dérivé de cyclodextrine de formule (I) et d'une molécule pharmaceutiqiuement active, avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Ces compositions pharmaceutiques qui peuvent être administrées par voie orale ou parentérale, sont par exemple des solutions, des poudres, des suspensions, etc., en particulier des solutions injectables. D'autres caractéristiques tet avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples suivants, donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif. Exemple 1 : Préparation du mono-6-éthanolamino-6-désoxy-cyclomaltoheptaose. Ce dérivé est le dérivé monosubstitué de formule I avec tous les R1 représentant OH, R2 représentant OH, p étant égal à 2 et n étant égal à 6. On prépare tout d'abord le dérivé tosylé de formule II avec n=6, en opérant de la façon suivante. 60 g de cyclomaltoheptaose (52,8 mmol) sont suspendus dans 500 ml d'eau distillée. On ajoute goutte à goutte 6,57 g (164 mmol) de soude caustique dissoute dans 20 ml d'eau sur 5 minutes avec forte agitation magnétique. A la solution limpide obtenue sont ajoutés 10,08 g (52,9 mmol) de chlorure de p-toluène sulfonyle (chlorure de tosyle) dans 30 ml d'acétonitrile goutte à goutte sur 10 minutes. Après 2 h d'agitation à température ambiante, le précipité formé est éliminé par filtration et le filtrat est conservé 48 h à 4"C. Le précipité est isolé par filtration sous vide, lavé par 50 ml d'eau glacée et recristallisé immédiatement dans l'eau bouillante. Après une nuit à 40C, le précipité est filtré et séché sous vide à 30 C. On obtient ainsi 7,5 g (12 i) d'un composé pur conforme aux spécifications. Dans un ballon, on dissout 2 g (1,55 mmol) de 6-tosyl-6-désoxycyclomaltoheptaose obtenu précédemment dans 8 ml d'éthanolamine pure. On laisse le mélange réactionnel sous agitation pendant 3 jours à la température ambiante, puis on ajoute le mélange réactionnel goutte à goutte à 200 ml d'éthanol absolu. On maintient la suspension pendant 3 jours à 0 C, puis on filtre le précipité sous vide, et on le lave à ltéthanol absolu puis à l'acétone. On redissout le solide obtenu dans de l'eau et on lyophilise. On obtient ainsi 1,1 g de 6-éthanolamino-6-désoxy-cyclomaltoheptaose, ce qui correspond à un rendement de 60 %. Les caractéristiques de ce composé sont les suivantes Chromatographie sur couches minces (Plaques de Silice Merck) Rf=0,60 dans le mélange NH40H 6 i/Ethanol/n-Butanol 5:5:1 (v:v), révélation par H2SO4 10 i. Spectrométrie de masse : Mode Electrospray:m/z=1178[M+H]+ RMN (500 MHz, solution à 10 mmol/l dans l'eau lourde) H-1:5,12 ppm, H-6a et H-6a':2,891 et 3,15 ppm NH-CH2:2,8 ppm, H-4a:3,50 ppm, CH20H:3,64 ppm, Autres protons de la cyclodextrine:3,6 à 3,8 et de 3,85 à 4,05 ppm. Analyse élémentaire C4nH5NO35, 3H20: C H N O CALCULS 42,89 6,63 1,14 49,34 TROUVEE 41, 6,55 1,18 48, 6 Solubilité dans l'eau (25"C) : 40 mmol/l sous forme de base libre, et 95 mmol/l sous forme de chlorhydrate. Exemple 2 : Préparation de l'heptakis-6-éthanolamino-6-désoxy-cyclomaltoheptaose. Ce dérivé est le dérivé de formule I dans laquelle tous les R1 représentent NH-CH2-CH2-OH, R2 représente OH, p est égal à 2 et n est égal à 6. On dissout dans 6 ml d'éthanolamine, 300 mg (0,157 mmol) d'heptakis (6-iodo-6-désoxy)cyclomaltoheoptaose et on maintient le mélange réactionnel sous agitation et sous atmosphère d'argon à la température ambiante pendant 18 heures. Après concentration sous vide à environ I ml, on verse la solutions goutte à goutte et sous forte agitation dans 200 ml d'acétone anhydre. On isole le précipité obtenu par filtration, on le lave par de l'acétone, puis on le sèche sous vide à 30"C. On redissout le résidu dans 2 ml d'eau, on filtre sur Millex GS (0,2 Vm) et on lyophilise. On obtient ainsi 0,177 g d' heptakis-6-éthanolamino-6-désoxy-cyclomaltoheptaose, ce qui correspond à un rendement de 78 %. Les caractéristiques de ce composé sont les suivantes Chromatographie sur couches minces de Silicagel Merck:Rf:0,65 dans le mélange NH40H 6 G/Ethanol/n-Butanol. RMN (solution dans l'eau 20 mmol/l) . Les spectres aussi bien en proton qu'en C13 indiquent une symétrie complète de la molécule et donc une persubstitution. RMN du proton : attribution par corrélation homonucléaire à deux quanta (500 MHz, 298K) 5,153 (H-i), 3,68 (H-2), 4,0 (H-3), 3,55 (H-4), 3,99 (H-S), 2,92 et 3,05 (H-6ab), 2,8 (NH-CH2-CH2-OH), 3,1 et 3,74 (NH-CH2-CH2-OH). RMN du Carbon 13 : attribution par corrélation C-H en deux dimensions : 102,6 (C-l), 5 (C-2), 74,0 (C-3), 83,9 (C-4), 71,5 (C-5), 50,3(C-6), 51,7 (NH-CH2-CH2-OH), 61, 1 (NH-CH2-CH2-OH). Solubilité dans l'eau (25"C). 140 mmol/l sous forme de base libre, et 350 mmol/l sous forme de chlorhydrate. Exemple 3 : Préparation d'un complexe d' heptakis-6-éthanolamino-6-désoxy-cyclomaltoheptaose et de prednisolone. La prednisolone répond à la formule suivante et elle a une très faible solubilité dans l'eau (0,25 mg/ml,à 25"C, soit 0,7 mmol/l). On dissout 10 umol de i 'heptakis-6-éthanolamino-6-désoxycyclomaltoheptaose (sous forme de chlorhydrate) préparé dans l'exemple 1, dans 1 ml d'eau pure (eau apyrogène pour injection) et on ajoute 5 umol de prednisolone sous forme d'une solution concentrée à 50 mmol/l dans l'acétone. On élimine l'acétone par passage d'azote pendant 10 min. et on lyophilise la solution. Le solide résiduel qui contient 10 umol du dérivé de cyclodextrine et 5 umol de prednisolone, est redissous dans le minimum d'eau à 25"C. Ce minimum correspond à 160 ul d'eau, ce qui indique une solubilité de 30 mmol/l de prednisolone dans l'eau, en présence de ce dérivé de cyclodextrine à une concentration de 60 mmol/l. Dans les mêmes conditions, la ss-cyclodextrine ne permet de solubiliser la prednisolone qu'à hauteur de 9 mmol/l. Ainsi, le dérivé persubstitué de la ss-cyclo- dextrine permet d'atteindre un résultat bien supérieur. Les dérivés de l'invention sont donc très intéressants, car ils sont beaucoup plus solubles dans l'eau que la ss-cyclodextrine dont la solubilité dans l'eau est de 15 mmol/l (18 g/l) à 250C, alors que le chlorhydrate du dérivé persubstitué a une solubilité de 350 mmol/l. Ils ont ainsi un fort pouvoir solubilisant pour de nombreux principes actifs. De plus, ils ont un très faible caractère hémolytique. En effet, les propriétés hémolytiques du dérivé obtenu dans l'exemple 1 ont été testées en mettant en contact 0,4 ml d'une suspension d'érythrocytes humains avec 4 ml de la solution du chlorhydrate à 5 mmol/l, à un pH de 7,4, pendant 30 minutes à 37 C. Dans ces conditions, on n'a observé aucune hémolyse alors que le taux d'hémolyse est de 50 i avec la Q-cyclodextrine dans les mêmes conditions. Enfin, ils sont faciles à obtenir, sous forme d'espèces chimiques uniques, parfaitement caractérisées, sans qu'il soit nécessaire de mettre en oeuvre des étapes de purification complexes. REVENDICATIONS 1. Dérivé de cyclodextrine répondant à la formule dans laquelle R1 représente OH ou NH(CH2)pR2, R2 représente OH ou NHR3, R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, n est égal à 5, 6 ou 7, et p est un nombre entier allant de 2 à 6, les p, R2 et R3 pouvant être différents lorsque un ou plusieurs des R1 représentent NH(CH2)pR2. 2. Dérivé selon la revendication 1, caractérisé en ce que tous les R1 représentent OH. 3. Dérivé selon la revendication 1, caractérisé en ce que tous les R1 représentent NH(CH2) pR2. 4. Dérivé selon la revendication 3, caractérisé en ce que tous les R1 sont identiques. 5. Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que R2 représente OH et p est égal à 2. 6. Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que n est égal à 6. 7. Procédé de préparation d'un dérivé de cyclodextrine selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé tosylé de cyclodextrine de formule dans laquelle R4 représente le groupe tosyle, et n est égal à 5, 6 ou 7, avec un composé de formule NH2(CH)2)pR2 avec R2 et p ayant les significations données dans la revendication 1. 8. Procédé de préparation d'un dérivé de cyclodextrine selon l'une quelconque des revendications 3 et 4, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé iodé de cyclodextrine de formule dans laquelle n est égal à 5, 6+ou 7 avec au moins un composé de formule NH2(CH2)pR2 dans laquelle R2 et p ont les significations données dans la revendication 1. 9. Procédé de solubilisation dans un milieu aqueux d'un composé chimique hydrophobe, caractérisé en ce qu'il consiste à combiner le composé chimique hydrophobe avec un dérivé de cyclodextrine selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour former avec celui-ci un complexe d'inclusion soluble dans l'eau. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que le composé hydrophobe est une molécule pharmaceutiquement active. 11. Complexe d'inclusion d'un dérivé de cyclodextrine selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 avec un composé chimique hydrophobe. 12. Complexe selon la revendication 11, caractérisé en ce que le composé chimique est une molécule pharmaceutiquement active. 13. Complexe selon la revendication 12, caractérisé en ce que la molécule pharmaceutiquement active est la prednisolone. 14. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un complexe d'inclusion d'un dérivé de cyclodextrine selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et d'une molécule pharmaceutiquement active, avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.