Brevet FR2715028A1 — publié le 19950721

COMPOSITIONS POUR LA CONSERVATION D'ORGANES La présente invention a pour objet des compositions pour la conservation de matériaux biologiques, et plus particulièrement d'organes tels que le foie, l'intestin et le pancréas, notamment en vue de leur transplantation ultérieure. La transplantation des organes a bouleversé le pronostic de nombreuses maladies. Une étape critique est la phase de conservation de l'organe avant sa transplantation. Les deux principaux milieux de conservation d'organes actuellement utilisés sont le milieu UW (décrit notamment par D'Alessandro et al. (mars 1991), Arch. Pathol. Lab. Med., 115, 306-310), et, tout au moins en France, le milieu de Cochin (Boillot et al., (1991), La Presse Médicale, Q, n" 40, 20652068). Le milieu UW (Université du Wisconsin) est constitué des composants suivants: - lactobionate de K - sulfamethoxazole - phosphate monopotassique - triméthoprime (DCI) - MgSO4 - dexamethasone - raffinose - allopurinol - adénosine - hydroxyéthylamidon - glutathion - NaOH o pH 7, 4 - insuline - eau distillée déoxygénée Ce milieu est utilisé dans le cadre de la conservation d'organes, et plus particulièrement du foie, du rein et du pancréas, en vue de leur transplantation. La solution de Cochin représente une solution "UW simplifiée", et est utilisée pour la conservation du foie en vue de sa transplantation. La composition de la solution de Cochin est la suivante: - acide lactobionique - raffinose - hydroxyde de K - glutathion - phosphate monopotassique - NaOH o pH 7, 4 - MgS04 - eau distillée déoxygénée Depuis plusieurs années diverses équipes de chercheurs tentent d'améliorer les conditions de conservation des organes, en proposant d'autres solutions susceptibles d'être plus efficaces que les solutions UW et de Cochin susmentionnées. A ce titre, une solution constituée d'histidine, de tryptophane et de cétoglutarate (solution HTK) a été décrite comme possédant des propriétés d'amélioration de la microcirculation hépatique et de la réduction de l'adhérence leucocytaire endothéliale. Selon les auteurs de cet article, ces propriétés pourraient expliquer la meilleure conservation des organes observée avec les solutions HTK et UW, en comparaison avec la solution EC (Eurocollins) décrite dans l'article de Ploeg et al., (1988), Transplantation Proceedings, Vol. XX, N" 1, Suppl. 1, 935-938, cette solution EC étant constituée d'un mélange de glucose, de monosphate de potassium, de carbonate de sodium et de chlorure de potassium (Bühren et al. (1991), Transplantation Proceedings, 23, 643-644). Une comparaison entre une composition constituée d'histidine et de lactobionate (solution HL) avec la solution UW, dans le cadre de la conservation de foie de chien ou de rat pendant 48 heures, a également été décrite (Sumimoto et al. (1992), Transplantation, 54, 610-614). Selon les auteurs de cet article, la solution HL donne de meilleurs résultats dans le cadre de la conservation du foie de rat que la solution UW, mais pas dans le cadre de la conservation du foie de chien. L'alanine a également été décrite comme permettant d'améliorer les qualités de conservation d'organes de solutions classiques telles que la solution UW (Adam et al. (1993), J. Hepatol, 18, 566). Selon les auteurs de cet article, I'amélioration constatée résulterait de l'augmentation de la production d'ATP dans les tissus lorsque l'on ajoute l'alanine. Par ailleurs, il est connu que le foie isolé est sujet à une protéolyse susceptible de contribuer à la détérioration de son fonctionnement. A ce titre, le contrôle de la protéolyse dans le foie par les acides aminés, a fait l'objet de nombreuses études. Il a ainsi été déterminé, à l'aide de foies de rats isolés et perfusés, que douze acides aminés ne présenteraient aucune activité inhibitrice de cette protéolyse, tandis que Leu, Thr, Tyr, Gln, Pro, His, Trp et Met sont susceptibles de l'inhiber, la leucine étant l'inhibiteur le plus puissant (Poso et al. (1982), The Journal of Biotechnological Chemistry, EZ, 12114-12120). Un article plus récent décrit les acides aminés suivants: Leu, Tyr/Phe, Gln, Pro, Met, His et Trp, comme contribuant à la suppression de la protéolyse hépatique mesurée sur le foie de rat isolé (Mortimore et al. (1989), Diabetes/Metabolism Reviews, 5, 49-70). Un autre article, plus récent encore, décrit la démonstration de l'augmentation de l'activité des protéases du cytosol durant la conservation de foies de rats. Les propriétés antiprotéolytiques du glutathion sont mises en évidence, notamment par l'intermédiaire de son résidu glycine (Fergusson et al. (mars 1993), Transplantation, 55, 627-633). Selon les auteurs de cet article, les résultats obtenus démontreraient que la protéolyse contribue à dégrader le foie durant sa conservation. Toutefois, aucune solution au problème de la conservation des organes par le biais de l'inhibition de la protéolyse n'a été apportée jusqu'à ce jour. La présente invention a précisément pour but de fournir de nouvelles compositions pour la conservation des organes. Un autre but de la présente invention est de fournir de nouveaux procédés de conservation des organes, ainsi que des kits pour la mise en oeuvre de ces procédés. La présente invention découle de la découverte faite par les inventeurs, que l'utilisation d'acides aminés susceptibles d'inhiber expérimentalement la protéolyse observée sur le foie de rat isolé et perfusé, permet non seulement d'améliorer les conditions de conservation du foie en inhibant la protéolyse pendant la phase de conservation, mais également de restaurer, voire d'améliorer, le débit de perfusion du foie lors de la phase de perfusion après celle de conservation. La présente invention a pour objet l'utilisation de toute composition comprenant au moins un acide aminé, ou un mélange d'acides aminés, ces acides aminés étant choisis parmi ceux susceptibles de posséder une action antiprotéolytique sur le foie isolé et perfusé d'un mammifère humain ou non, pour la conservation de matériaux biologiques, notamment d'organes ou fragments d'organes, ou de tissus ou fragments de tissus, prélevés chez des mammifères, humains ou non, ou encore de cellules isolées à partir de ces organes ou tissus, notamment en vue de la transplantation temporaire ou définitive ultérieure de ces matériaux biologiques, à l'exclusion des compositions constituées d'un mélange d'histidine et de lactobionate, ou d'un mélange d'histidine, de tryptophane et de cétoglutarate, ou encore de la solution UW à laquelle est ajoutée de l'alanine. Parmi les matériaux biologiques susceptibles d'être conservés dans de telles conditions, on citera principalement les organes prélevés chez l'homme ou l'animal, notamment le foie, I'intestin et le pancréas, ou encore les cellules isolées à partir d'organes ou tissus biologiques, telles que les hépatocytes. De préférence, les compositions utilisées dans le cadre de la présente invention, comprennent au moins deux acides aminés jusqu'à environ huit acides aminés. Par acides aminés susceptibles de posséder une action antiprotéolytique sur le foie isolé et perfusé d'un mammifère humain ou animal, on entend notamment tout acide aminé, ou mélange d'acides aminés, susceptible: - de diminuer la quantité de valine libérée par un foie de rat dans le milieu de conservation contenant ces acides aminés antiprotéolytiques, en comparaison avec la quantité de valine libérée dans un milieu de conservation ne contenant pas lesdits acides aminés antiprotéolytiques, - de restaurer en tout ou partie le processus de captation de la valine par le foie de rat pendant la phase de perfusion de ce dernier avec un milieu contenant ces acides aminés antiprotéolytiques, en comparaison avec la quantité de valine captée lors de la phase de perfusion d'un foie de rat perfusé avec un milieu ne contenant pas lesdits acides aminés antiprotéolytiques. De préférence les acides aminés antiprotéolytiques selon l'invention, sont choisis parmi ceux susceptibles d'augmenter le débit de perfusion d'un foie de rat après la phase de conservation de ce foie dans un milieu de conservation selon l'invention, en comparaison au débit de perfusion mesuré sur un foie de rat après la phase de conservation de ce dernier dans un milieu de conservation ne contenant pas lesdits acides aminés antiprotéolytiques. Avantageusement, les acides aminés antiprotéolytiques selon l'invention, sont choisis parmi ceux susceptibles de restaurer, voire d'améliorer, le débit de perfusion d'un foie de rat après la phase de conservation de ce foie dans un milieu de conservation selon l'invention, en comparaison au débit de perfusion mesuré sur un foie de rat isolé n'ayant pas subi de phase de conservation. Des exemples de conditions dans lesquelles les mesures de libération et de captation de la valine, ainsi que du débit de perfusion susmentionnés, peuvent être effectuées sont indiqués dans la description détaillée, qui suit, de l'invention. L'invention vise plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de compositions comprenant, à titre de substance active, au moins un acide aminé choisi parmi l'alanine, la glutamine, l'histidine, la leucine, la méthionine, la phénylalanine, la proline et le tryptophane, pour la conservation des matériaux biologiques. De préférence, l'invention a pour objet l'utilisation susmentionnée de compositions comprenant au moins deux acides aminés choisis parmi ceux décrits ci-dessus. Des compositions préférées dans le cadre de l'utilisation selon l'invention, comprennent de la leucine et/ou de la glutamine, avantageusement, lorsque ces deux acides aminés sont présents dans ces compositions, dans des proportions en poids d'environ 10% à environ 40%, et d'environ 60% à environ 90% respectivement, par rapport au poids total de ces deux substances actives dans ces compositions. Avantageusement, les compositions susmentionnées comprennent environ 10% de leucine et environ 90% de glutamine. D'autres compositions préférées dans le cadre de l'utilisation selon l'invention, comprennent de la leucine et de l'alanine, avantageusement dans des proportions en poids d'environ 20% à environ 60%, et d'environ 40% à environ 80% respectivement, par rapport au poids total de ces deux substances actives dans ces compositions. Avantageusement, les compositions susmentionnées comprennent environ 50% de leucine et 50% d'alanine. Des compositions particulièrement préférées dans le cadre de l'utilisation selon l'invention, comprennent de la leucine, de l'alanine et de la glutamine, avantageusement dans des proportions en poids d'environ 10% à environ 30%, d'environ 10% à environ 50%, et d'environ 30% à environ 80% respectivement, par rapport au poids total de ces trois substances actives dans ces compositions. Avantageusement les compositions susmentionnées comprennent environ 30% de leucine, 30% d'alanine et 40% de glutamine. L'invention a également pour objet l'utilisation susmentionnée de compositions telles que décrites ci-dessus, et comprenant aussi de l'histidine, et/ou de la méthionine, et/ou de la phénylalanine, et/ou de la proline, et/ou du tryptophane. De préférence, les proportions d'histidine, de méthionine, de phénylalanine et de trytophane sont d'environ 2% à environ 10%, et avantageusement d'environ 4 à 5% pour chacun de ces acides aminés, par rapport au poids total d'acides aminés présents dans les compositions susmentionnées. Cette même proportion calculée pour la proline est de préférence d'environ 4% à environ 20%, avantageusement d'environ 9,5%. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de compositions dans lesquelles les pourcentages en poids de chacun des acides aminés, calculés par rapport au poids total des acides aminés présents dans ces compositions, sont les suivants: - alanine: environ 10% à environ 40%, avantageusement environ 20%, - glutamine: environ 20% à environ 60%, avantageusement environ 40%, - histidine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 4,5%, - leucine: environ 5% à environ 25%, avantageusement environ 12%, - méthionine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 4%, - phénylalanine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 5%, - proline: environ 4% à environ 20%, avantageusement environ 9,5%, - tryptophane: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 5%. Il est bien entendu que, d'une manière générale, les pourcentages des acides aminés dans les compositions susmentionnées, doivent être choisis de manière à ce que la somme de ces différents pourcentages soit égale à 100%. Avantageusement, le pH des compositions susmentionnées dans le cadre de l'utilisation selon l'invention est de 7,4. L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée de compositions telles que décrites ci-dessus, et comprenant aussi des constituants autres que des acides aminés, et qui sont utiles pour la préservation des matériaux biologiques. Parmi ces constituants autres que les acides aminés, susceptibles d'être présents dans les compositions utilisées dans le cadre de la présente invention, on citera principalement le raffinose, le lactobionate et le phosphate de potassium. Toujours parmi ces constituants autres que les acides aminés, on peut également citer le glutathion, le sulfate de magnésium, et l'hydroxyde de potassium. D'une manière générale, les pourcentages de chacun des acides aminés au sein des compositions de l'invention, par rapport au poids total des constituants autres que les acides aminés, et de substances actives, présents dans lesdites compositions, varient entre 0,01 % et 1 % . La présente invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation de compositions telles que décrites ci-dessus dans lesquelles les pourcentages en poids des substances actives et constituants autres que des acides aminés, par rapport au poids total de ces constituants et substances actives, sont respectivement les suivants: - alanine: 0,11% à 0,27 %, - glutamine: 0,22% à 0,54%, - histidine: 0,03% à 0,06%, - leucine: 0,06% à 0,16%, - méthionine: 0,02% à 0,06%, - phénylalanine: 0,03% à 0,08%, - proline: 0,05% à 0,13 %, - tryptophane: 0,03% à 0,07%, - raffinose: 27,13% à 27,36%, - lactobionate: 54,52% à 54,98%, - phosphate monopotassique (KH2P04): 5,17% à 5,22%, - glutathion: 1,40% à 1,41%, - MgSO4: 1,87% à 1,89%, - hydroxyde de potassium (KOH): 8,52% à 8,59%, étant entendu que la somme des pourcentages des substances actives et constituants susmentionnés, représente 100%. Selon un mode de réalisation de l'utilisation selon l'invention, les compositions susmentionnées se présentent sous forme de solutions. D'autres constituants, tels que l'hydroxyde de sodium, peuvent être ajoutés aux compositions susmentionnées de manière à ajuster le pH des susdites solutions à environ 7,4. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de compositions dans lesquelles les dosages des acides aminés et des constituants autres que ces derniers, sont les suivants: - Raffinose 30 mmol/l - Lactobionate 100 mmol/l - KH2PO4 25 mmol/l - Glutathion 3 mmol/l - MgSO4 5 mmol/l - KOH 100 mmol/l - Alanine 0,80 mmol/l à 2,00 mmol/l - Glutamine 0,98 mmol/l à 2,45 mmol/l - Histidine 0,11 mmol/l à 0,28 mmol/l - Leucine 0,32 mmol/l à 0,80 mmol/l - Méthionine 0,10 mmol/l à 0,25 mmol/l - Phénylalanine 0,12 mmol/l à 0,30 mmol/l - Proline 0,30 mmol/l à 0,70 mmol/l - Tryptophane 0,09 mmol/l à 0,23 mmol/l. - NaOH q.s.p. pH = 7,4 - Eau distillée q.s.p. 1 litre De telles compositions liquides (ou solutions) selon l'invention peuvent avantageusement être conservées entre -20 C et +250C. La quantité de solution nécessaire pour la conservation d'organes, varie entre environ 1 ml et environ 10 1, en fonction de la taille des matériaux biologiques à conserver. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, les compositions décrites ci-dessus sont présentées dans un kit (ou coffret), comprenant: - une ou plusieurs compositions d'acides aminés telles que décrites cidessus sous forme solide (ou poudres), ou un mélange de ces poudres, et/ou une ou plusieurs solutions concentrées d'une composition d'acides aminés telle que décrite ci-dessus, ou un mélange de ces solutions concentrées, - et, le cas échéant, une solution des constituants autres que lesdits acides aminés, telle que décrite ci-dessus, les poudres ou les solutions concentrées d'acides aminés étant, le cas échéant, mélangées à la solution des constituants autres que lesdits acides aminés, au moment de l'utilisation de la composition, ou diluées dans toute autre solution aqueuse appropriée, notamment de manière à ce que les dosages d'acides aminés, et le cas échéant des constituants autres que ces derniers, soient de l'ordre de grandeur des dosages indiqués ci-dessus pour les compositions sous forme de solutions de l'invention, ou encore sont diluées de la manière indiquée ci-dessous. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet des kits tels que décrits ci-dessus, et comprenant une poudre d'acides aminés dans laquelle les pourcentages en poids de chacun des acides aminés, calculés par rapport au poids total des acides aminés présents dans cette poudre, sont tels que décrits cidessus. A titre d'illustration, les quantités d'acides aminés dans la poudre susmentionnée, lorsque cette dernière doit être diluée dans 1000 ml de la solution des constituants autres que lesdits acides aminés, sont avantageusement les suivantes: - alanine 71,2 à 178,0 mg - glutamine 143,2 à 358,0 mg - histidine 17,0 à 42,5 mg - leucine 42,0 à 105,0 mg - méthionine 15,0 à 37,5 mg - phénylalanine 19,8 à 49,5 mg - proline 34,6 à 86,5 mg - tryptophane 18,4 à 46,0 mg L'invention a également pour objet des kits tels que décrits ci-dessus, et comprenant une solution concentrée d'acides aminés dans laquelle les pourcentages en poids de chacun des acides aminés, calculés par rapport au poids total des acides aminés présents dans cette poudre, sont tels que décrits cidessus. A titre d'illustration, les dosages de chacun des acides aminés dans 20 ml d'une solution concentrée telle que décrite ci-dessus, lorsque cette solution concentrée doit être diluée dans 1000 ml de la solution des constituants autres que lesdits acides aminés, sont les suivants: - alanine 3,56 à 8,90 g/l - glutamine 7,16 à 17,90 g/l - histidine 0,85 à 2,13 g/l - leucine 2,10 à 5,25 g/l - méthionine 0,75 à 1,88 g/l - phénylalanine 0,99 à 2,48 g/l - proline 1,73 à 4,33 g/l - tryptophane 0,92 à 2,30 g/l L'invention a également pour objet des kits tels que décrits ci-dessus, comprenant une solution de constituants autres que les acides aminés, dans laquelle le dosage de chacun de ces constituants sont les suivants: - Raffinose 30 mmol/l - Lactobionate 100 mmol/l - KH2PO4 25 mmol/l - Glutathion 3 mmol/l - MgSO4 5 mmol/l - KOH 100 mmol/l - NaOH q.s.p. pH = 7,4 - Eau distillée q.s.p. 1 litre L'invention a également pour objet les compositions susmentionnées, sous forme liquide ou solide, en tant que telles. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet les compositions susmentionnées, sous forme de poudre ou liquide, dans lesquelles les pourcentages en poids de chacun des acides aminés, calculés par rapport au poids total des acides aminés présents dans ces compositions, sont les suivants: - alanine: environ 10% à environ 40%, avantageusement environ 20%, - glutamine: environ 20% à environ 60%, avantageusement environ 40%, - histidine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 4,5%, - leucine: environ 5% à environ 25%, avantageusement environ 12%, - méthionine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 4%, - phénylalanine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 5%, - proline: environ 4% à environ 20%, avantageusement environ 9,5%, - tryptophane: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 5%, étant entendu que la somme des pourcentages des acides aminés susmentionnés représente 100%. L'invention concerne également les compositions susmentionnées comprenant aussi des constituants autres que les acides aminés, et qui sont utiles pour la préservation des matériaux biologiques, notamment le raffinose, et/ou le lactobionate, et/ou le phosphate de potassium, et/ou le glutathion, et/ou le sulfate de magnésium, et/ou l'hydroxyde de potassium, et/ou l'hydroxyde de sodium. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet, les compositions telles que décrites ci-dessus, dans lesquelles les pourcentages de chacun des acides aminés au sein des compositions de l'invention, par rapport au poids total des constituants autres que les acides aminés, et de substances actives, présents dans lesdites compositions, varient entre 0,01 % et 1 % . L'invention a plus particulièrement encore pour objet les compositions telles que décrites ci-dessus, dans lesquelles les pourcentages en poids des substances actives et des constituants autres que des acides aminés, par rapport au poids total de ces constituants et substances actives, sont respectivement les suivants: - alanine: 0,11% à 0,27%, - glutamine: 0,22% à 0,54%, - histidine: 0,03% à 0,06%, - leucine: 0,06% à 0,16%, - méthionine: 0,02% à 0,06%, - phénylalanine: 0,03% à 0,08%, - proline: 0,05% à 0,13%, - tryptophane: 0,03% à 0,07%, - raffinose: 27,13% à 27,36%, - lactobionate: 54,52% à 54,98%, - phosphate monopotassique (KH2PO4): 5,17% à 5,22%, - glutathion: 1,40% à 1,41%, - MgSO4: 1,87% à 1,89%, - hydroxyde de potassium (KOH): 8,52% à 8,59%, étant entendu que la somme des pourcentages des substances actives et constituants susmentionnés, représente 100%. Une composition particulièrement préférée dans le cadre de la présente invention, est celle constituée de: - Raffinose 30 mmol/l - Lactobionate 100 mmol/l - KH2PO4 25 mmol/l - Glutathion 3 mmol/l - MgSO4 5 mmol/l - KOH 100 mmol/l - Alanine 0,80 mmol/l à 2,00 mmol/l - Glutamine 0,98 mmol/l à 2,45 mmol/l - Histidine 0,11 mmol/l à 0,28 mmol/l - Leucine 0,32 mmol/l à 0,80 mmol/l - Méthionine 0,10 mmol/l à 0,25 mmol/l - Phénylalanine 0,12 mmol/l à 0,30 mmol/l - Proline 0,30 mmol/l à 0,70 mmol/l - Tryptophane 0,09 mmol/l à 0,23 mmol/l - NaOH q.s.p. pH = 7,4 - Eau distillée q.s.p. 1 litre L'invention vise également les procédés de préparation des compositions de l'invention, notamment par mélange des poudres d'acides aminés lorsque lesdites compositions se présentent sous forme solide, ou par mélange de poudres d'acides aminés, ou de solutions concentrées de ces acides aminés telles que décrites ci-dessus, avec une solution aqueuse appropriée, notamment avec une solution de constituants autres que des acides aminés choisie parmi celles décrites ci-dessus. L'invention a également pour objet, les matériaux biologiques d'origine humaine et animale, notamment des organes ou fragments d'organes, ou des tissus ou fragments de tissus, conservés dans une des compositions telles que décrites ci-dessus. A ce titre, l'invention vise plus particulièrement les organes d'origine humaine, notamment le foie, I'intestin ou le pancréas, conservés dans une des compositions telles que décrites ci-dessus. L'invention concerne également un procédé de conservation de matériaux biologiques, tels que décrits ci-dessus, caractérisé en ce que ces matériaux biologiques sont immergés dans une solution d'une composition choisie parmi celles décrites ci-dessus. Avantageusement, le procédé selon l'invention, permet de conserver les matériaux biologiques pendant environ 1 heure à 72 heures, avantageusement à une température comprise entre environ 0 C et environ 60C. L'invention sera davantage illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit de l'effet d'une composition selon l'invention sur la conservation de foie de rat, et sur la perfusion de ce foie. L'invention est également illustrée à l'aide de la figure 1 sur laquelle sont représentées les courbes représentant le débit de perfusion de foies de rats en fonction du temps; le débit de perfusion (exprimé en ml/min/g foie) est représenté en ordonnée; le temps exprimé en minutes est représenté en abscisse; la courbe représentée par des cercles espacés par des pointillés, correspond à la mesure du débit de perfusion de foies témoins non conservés, ou CO T (c'est à dire n'ayant pas subi de phase de conservation entre le moment ou ces foies ont été isolés, et le moment où ils ont été perfusés); la courbe représentée par des carrés blancs, correspond à la mesure du débit de perfusion de foies conservés 24 heures dans la solution de référence (solution de Cochin), ou CO 24; la courbe représentée par des carrés noirs, correspond à la mesure du débit de perfusion de foies conservés 24 heures dans la solution de l'invention, ou CO-AA 24. 1. METHODE DE PREPARATION DE LA SOLUTION DE CONSERVATION: La solution de référence employée est la solution de Cochin, additionnée ou non du mélange des acides aminés antiprotéolytiques utilisés à deux fois leur concentration portale moyenne chez le rat sain [Tableau I]. La solution de Cochin est une solution stérile distribuée par la Pharmacie Centrale des Hôpitaux de Paris. Une solution concentrée d'acides aminés (cent fois la concentration portale moyenne chez le rat sain) est préparée par dissolution des acides aminés (Sigma) dans de l'eau distillée. Cette solution concentrée est mélangée extemporanément à la solution de Cochin après filtration sur membrane Millex-GV 0,22ym (Millipore): 5 ml de solution concentrée dans 300 ml de solution de Cochin. 2. DESCRIPTION DES TESTS PHARMACOLOGIQUES: Les animaux utilisés sont des rats mâles Sprague-Dawley. 2.1 Protocole expérimental Prélèvement: Le foie est préparé selon la technique décrite par Ballet et coll. (J. Pharmacol. Exp. Ther., 1987, 240,303) avec canulation du cholédoque et de la veine porte. Rinçages avant conservation: Le foie est rincé par une solution de Ringer lactate, puis par la solution de conservation à +4"C et est excisé au cours de ces rinçages. Conservation: Le foie est immergé dans la solution de conservation et conservé à +4"C pendant 24 heures. Le milieu est ensuite récupéré pour le dosage des acides aminés (chromatographie sur colonne échangeuse d'ions selon les techniques décrites par Moore et al., (1958) Analytical Chemistry, 30, n" 7, 1185-1190, et par Moodie et al. (1989) Journal of High Resolution Chromatography, 12, 509516). Rinçages apres conservation: Après conservation, le foie est rincé à deux reprises: par du Ringer lactate à +4"C, pour chasser la solution de conservation contenue dans le greffon; puis par un tampon Krebs-Ringer contenant de l'albumine bovine et du glucose, à la température de +37"C, pour chasser la solution précédente et faire remonter le greffon en température. Perfusion: Le foie est ensuite perfusé par la veine porte, en recirculation, en enceinte thermostatée à +37"C pour une durée de 90 minutes, permettant l'évaluation de la viabilité de l'organe. Le liquide de perfusion est composé de 150 ml de tampon Krebs-Ringer contenant du glucose, de l'albumine bovine à la concentration de 30 g/l, et un mélange d' acides aminés (alanine, glutamine, histidine, leucine, méthionine, phénylalanine, proline, tryptophane) à deux fois leur concentration physiologique selon le protocole établi par De Bandt et coll. (J. Surg. Res., 1990, 49, 8-13). Après 30 minutes de perfusion, un mélange équilibré d'acides aminés est ajouté au perfusat. Les 30 premières minutes correspondent à la phase d'équilibration du modèle; la période entre 35 et 90 minutes constitue la phase d'étude. Des prélèvements du liquide de perfusion sont effectués en entrée et en sortie de foie, aux temps 3, 10, 20, 30, 35, 60 et 90 minutes de perfusion en vue du dosage des marqueurs biochimiques de viabilité et du calcul des flux d'acides aminés. Le débit de perfusion ainsi que le pH sont mesurés aux mêmes temps. Les flux (F) d'acides aminés au cours de la phase d'étude du modèle (35 à 90 minutes) sont calculés selon la formule suivante: (C2 x V2) - (C1 x V1) F = --------- (t2 - t1) x P tl: temps 35 minutes de perfusion (minutes). t2: temps 90 minutes de perfusion (minutes). C1: concentration en un acide aminé au temps tl dans le milieu de perfusion (nmol/ml). C2: concentration en un acide aminé au temps t2 dans le milieu de perfusion (nmol/ml). V1: volume du milieu de perfusion au temps tl (ml). V2: volume du milieu de perfusion au temps t2 (ml). P: poids de foie frais (g). Les flux sont exprimés en nmol/min/g foie. Les valeurs négatives expriment une captation des acides aminés par le foie. Les valeurs positives représentent une libération des acides aminés par le foie. L'ensemble de ce protocole est appliqué aux foies dits "conservés". Parallèlement, les foies dits "témoins" sont soumis à chacune de ces étapes, exceptées celle de conservation. 2.2 Résultats: Ils sont exprimés en moyenne f écarts standard à la moyenne. Pour comparer les groupes (n=5 par groupe), le test non paramétrique de MannWithney a été utilisé. Métabolisme des acides aminés: Les résultats présentés concernent la valine, acide aminé à chaîne ramifiée dont les flux sont le reflet du catabolisme protéique net, car cet acide aminé est peu métabolisé au niveau hépatique. Etude du milieu de conservation. Les quantités de valine libérées dans les milieux après 24 heures de conservation tendent à être plus faibles pour les foies conservés dans la solution de l'invention (Tableau II). Etude au cours de la perfusion: Entre 35 et 90 minutes de perfusion, les flux d'acides aminés sont exprimés en nmol/min/g foie. Les valeurs négatives représentent une captation. La captation de valine par les foies au cours de la perfusion est significativement diminuée après 24 heures de conservation dans le milieu de référence, par rapport aux témoins non conservés. Après 24 heures de conservation en présence de la solution de l'invention, cette diminution de captation est abolie (Tableau II). L'utilisation d'un milieu de conservation contenant des acides aminés conduit donc à diminuer la protéolyse observée dans un milieu de conservation simple. Débits de perfusion: Les foies conservés 24 heures en Cochin ont un débit de perfusion significativement diminué à t 3 minutes par rapport aux témoins non conservés. Après 24 heures de conservation en présence de la solution modifiée, les débits de perfusion ne sont plus significativement différents de ceux des témoins (voir figure 1). TABLEAU I: SOLUTIONS DE CONSERVATION Solution de référence Solution de l'invention Raffinose 30 mmol/l 30 mmol/l Lactobionate 100 mmol/l 100 mmol/l KH2Po4 25 mmol/l 25 mmol/l Glutathion 3 mmol/l 3 mmol/l MgSO4 5 mmol/l 5 mmol/l KOH 100 mmol/l 100 mmol/l Alanine - 0,80 mmol/l Glutamine - 0,98 mmol/l Histidine 0,11 mmol/l Leucine - 0,32 mmol/l Méthionine 0,10 mmol/l Phénylalanine 0,12 mmol/l Proline 0,30 mmol/l Tryptophane 0,09 mmol/l NaOH q.s.p. pH = 7,4 pH = 7,4 Eau distillée q.s.p. 1 litre 1 litre Tableau II Libération de valine Captation de valine au dans le milieu cours de la perfusion (ymol/g foie) nmol/min/g foie CO T -24,61 f 2,33 CO 24 0,18 i 0,03 -1,84 f 5,51* CO-AA 24 O,11 + 0,02 - 10,33 + 0,58 *p CO T = foies témoins non conservés. CO 24 = foies conservés 24 heures dans la solution de référence (milieu de Cochin) CO-AA 24 = foies conservés 24 heures dans la solution de l'invention (milieu de Cochin + acides aminés) REVENDICATIONS 1. Utilisation de compositions comprenant au moins un acide aminé, ou un mélange d'acides aminés, ces acides aminés étant choisis parmi ceux susceptibles de posséder une action antiprotéolytique sur le foie isolé et perfusé d'un mammifère humain ou non, pour la conservation de matériaux biologiques, notamment d'organes ou fragments d'organes, ou de tissus ou fragments de tissus, prélevés chez des mammifères, humains ou non, ou encore de cellules isolées à partir de ces organes ou tissus, notamment en vue de leur transplantation temporaire ou définitive, à l'exclusion des compositions constituées d'un mélange d'histidine et de lactobionate, ou d'un mélange d ' histidine, de tryptophane et de cétoglutarate, ou encore de la solution UW contenant de l'alanine. 2. Utilisation selon la revendication 1, pour la conservation d'organes prélevés chez l'homme ou l'animal, notamment le foie, I'intestin et le pancréas, ou pour la conservation de cellules isolées, telles que les hépatocytes. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que les compositions comprennent au moins un acide aminé choisi parmi l'alanine, la glutamine, l'histidine, la leucine, la méthionine, la phénylalanine, la proline et le tryptophane. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les compositions comprennent de la leucine et/ou de la glutamine, avantageusement, lorsque ces deux acides aminés sont présents dans ces compositions, dans des proportions en poids d'environ 10% à environ 40%, et d'environ 60% à environ 90% respectivement, par rapport au poids total de ces deux substances actives dans ces compositions. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les compositions comprennent de la leucine et de l'alanine, avantageusement dans des proportions en poids d'environ 20% à environ 60%, et d'environ 40% à environ 80% respectivement, par rapport au poids total de ces deux substances actives dans ces compositions. 6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les compositions comprennent de la leucine, de l'alanine et de la glutamine, avantageusement dans des proportions en poids d'environ 10% à environ 30%, d'environ 10% à environ 50%, et d'environ 30% à environ 80% respectivement, par rapport au poids total de ces trois substances actives dans ces compositions. 7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que les compositions comprennent aussi de l'histidine, de la méthionine, de la phénylalanine, de la proline et du tryptophane. 8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que les pourcentages en poids de chacun des acides aminés, calculés par rapport au poids total des acides aminés présents dans ces compositions, sont les suivants: - alanine: environ 10% à environ 40%, avantageusement environ 20%, - glutamine: environ 20% à environ 60%, avantageusement environ 40%, - histidine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 4,5%, - leucine: environ 5% à environ 25%, avantageusement environ 12%, - méthionine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 4%, - phénylalanine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 5%, - proline: environ 4% à environ 20%, avantageusement environ 9,5%, - tryptophane: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 5%, la somme des pourcentages des différents acides aminés faisant 100%. 9. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que les compositions comprennent des constituants autres que des acides aminés, et qui sont utiles pour la préservation des matériaux biologiques. 10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que les compositions comprennent à titre de constituants autres que les acides aminés, du raffmose, du lactobionate, et du phosphate de potassium. 11. Utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce que les compositions comprennent aussi à titre de constituants autres que les acides aminés, du glutathion, du sulfate de magnésium, et de l'hydroxyde de potassium. 12. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que les compositions se présentent sous forme de solutions, avantageusement choisies parmi celles dans lesquelles les dosages des acides aminés et des constituants autres que ces derniers, sont les suivants: - Raffinose 30 mmol/l - Lactobionate 100 mmol/l - KH2PO4 25 mmol/l - Glutathion 3 mmol/l - MgSO4 5 mmol/l - KOH 100 mmol/l - Alanine 0,80 mmol/l à 2,00 mmol/l - Glutamine 0,98 mmol/l à 2,45 mmol/l - Histidine 0,11 mmol/l à 0,28 mmol/l - Leucine 0,32 mmol/l à 0,80 mmol/l - Méthionine 0,10 mmol/l à 0,25 mmol/l - Phénylalanine 0,12 mmol/l à 0,30 mmol/l - Proline 0,30 mmol/l à 0,70 mmol/l - Tryptophane 0,09 mmol/l à 0,23 mmol/l - NaOH q.s.p. pH = 7,4 - Eau distillée q.s.p. 1 litre 13. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisée en ce que les compositions sont présentées à l'intérieur d'un kit (ou coffret), comprenant: - une ou plusieurs compositions d'acides aminés telles que définies dans l'une des revendications 1 à 8, sous forme solide (ou poudres), ou un mélange de ces poudres, et/ou une ou plusieurs solutions concentrées d'une composition d'acides aminés telle que définie dans l'une des revendications 1 à 8, ou un mélange de ces solutions concentrées, - et, le cas échéant, une solution des constituants autres que lesdits acides aminés, tels que définis dans l'une des revendications 9 à 11, les poudres ou les solutions concentrées d'acides aminés étant, le cas échéant, mélangées à la solution des constituants autres que lesdits acides aminés, au moment de l'utilisation de la composition, ou diluées dans toute autre solution aqueuse appropriée, de manière à ce que les dosages des acides aminés, et le cas échéant des constituants autres que ces derniers, soient de l'ordre de grandeur de ceux indiqués dans la revendication 12. 14. Composition d'acides aminés sous forme de poudre ou liquide, caractérisée en ce qu'elle comprend: - alanine: environ 10% à environ 40%, avantageusement environ 20%, - glutamine: environ 20% à environ 60%, avantageusement environ 40%, - histidine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 4,5%, - leucine: environ 5% à environ 25%, avantageusement environ 12%, - méthionine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 4%, - phénylalanine: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 5%, - proline: environ 4% à environ 20%, avantageusement environ 9,5%, - tryptophane: environ 2% à environ 10%, avantageusement environ 5%, la somme des pourcentages des différents acides aminés faisant 100%. 15. Composition selon la revendication 14, caractérisée en ce qu'elle comprend des constituants autres que les acides aminés, et qui sont utiles pour la préservation des matériaux biologiques, notamment du raffmose, et/ou du lactobionate, et/ou du phosphate de potassium, et/ou du glutathion, et/ou du sulfate de magnésium, et/ou de l'hydroxyde de potassium, et/ou de l'hydroxyde de sodium. 16. Composition selon la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle est constituée de: - Raffinose 30 mmol/l - Lactobionate 100 mmol/l - KH2PO4 25 mmol/l - Glutathion 3 mmol/l - MgSO4 5 mmol/l - KOH 100 mmol/l - Alanine 0,80 mmol/l à 2,00 mmol/l - Glutamine 0,98 mmol/l à 2,45 mmol/l - Histidine 0,11 mmol/l à 0,28 mmol/l - Leucine 0,32 mmol/l à 0,80 mmol/l - Méthionine 0,10 mmol/l à 0,25 mmol/l - Phénylalanine 0,12 mmol/l à 0,30 mmol/l - Proline 0,30 mmol/l à 0,70 mmol/l - Tryptophane 0,09 mmol/l à 0,23 mmol/l - NaOH q.s.p. pH = 7,4 - Eau distillée q.s.p. 1 litre 17. Matériaux biologiques d'origine humaine et animale, notamment des organes ou fragments d'organes, ou des tissus ou fragments de tissus ou encore des cellules isolées à partir de ces organes ou tissus, conservés dans une composition telle que définie dans l'une des revendications 1 à 16. 18. Matériaux biologiques selon la revendication 17, caractérisés en ce qu'il s'agit d'organes d'origine humaine ou animale, notamment le foie, I'intestin ou le pancréas, ou de cellules isolées à partir de ces organes, telles que les hépatocytes. 19. Procédé de conservation de matériaux biologiques, notamment d'organes ou fragments d'organes, ou de tissus ou fragments de tissus, prélevés chez des mammifères humains ou non, ou encore de cellules isolées à partir de ces organes ou tissus, caractérisé en ce que ces matériaux biologiques sont immergés dans une solution d'une composition telle que définie dans l'une des revendications 1 à 16. 20. Kit pour la mise en oeuvre d'un procédé selon la revendication 19, caractérisé en ce qu'il comprend: - une ou plusieurs compositions d'acides aminés telles que définies dans l'une des revendications 1 à 8, sous forme solide (ou poudres), ou un mélange de ces poudres, et/ou une ou plusieurs solutions concentrées d'une composition d'acides aminés telle que définie dans l'une des revendications 1 à 8, ou un mélange de ces solutions concentrées, - et, le cas échéant, une solution des constituants autres que lesdits acides aminés, tels que définis dans l'une des revendications 9 à 11.