Brevet FR2712771A1 — publié le 19950602

La présente invention concerne l'obtention de plantes Brassica oleracea présentant une stérilité mâle cytoplasmique (SMC). En particulier, l'invention concerne l'incorporation de SNC dans des plantes B. oleracea d'intérêt commercial. La stérilité male est importante dans la sélection des semences hybrides de B. oleracea car les plantes B. oleracea normales produisent des fleurs qui sont souvent & auto- pollinisation. Les lignées de plantes males stériles ne produisent pas de pollen viable et ne sont pas capables d'auto-pollinisation. L'élimination du pollen chez une plante parentale au cours d'un croisement assure aux phytogénéticiens l'obtention de semences hybrides de qualité uniforme. Dans le passé, les producteurs à l'échelle industrielle de semences hybrides ont utilisé des systèmes d'auto- incompatibilité nucléaire pour éviter l'auto-pollinisation durant la production de semences, cependant, de tels systèmes peuvent. conduire à des lots impurs de semences hybrides. D'autres inconvénients de ces systèmes résident dans le fait que c'est laborieux et que cela prend du temps. Les phytogénéticiens se sont tournés vers d'autres moyens d'introduction de la stérilité male dans les plantes L oleracea. Un système est décrit dans le brevet britannique GB 2 211 205, dans lequel des protoplastes de B.oleracea comprenant un noyau inactivé et comportant un cytoplasme d'Ogura à SMC sont fusionnés avec des protoplastes de B.oleracea comportant un noyau fonctionnel et des chloroplastes qui résistent au froid. Les cellules allogéniques ainsi obtenues ont été régénérées en plantes qui pourraient être ensuite utilisées dans la préparation d'autres plantes B.oleracea & stérilité mile cytoplasmique ayant un noyau de B.oleracea, des chloroplastes de B.oleracea et des mitochondries du cytoplasme d'Ogura à SMC utilisant des techniques in vitro et/ou des techniques de croisement. Ainsi, la stérilité male cytoplasmique a été transférée avec succès dans des variétés à intérêt commercial. Cependant, ce processus a des inconvénients. Les plantes obtenues grâce & l'invention de GB 2 211 205 présentent quelque bigarrures dans la feuille qui doivent être éliminées & l'aide d'étapes supplémentaires de reproduction. De plus, les nectaires des plantes de GB 2 211 205 ne sont généralement pas aussi bien développés que ceux des plantes B.oleracea contenant de la SMC non Ogura, et ce développement insuffisant peut conduire & un lot de graines en dessous de l'optimal chez ces plantes. Il existe un besoin d'obtenir une méthode alternative pour des plantes B.oleacea à SNC n'ayant pas les inconvénients résumés ci-dessus. Une source de SMC est celle de Brassica iuncea à SMC (SMCJ), Moutarde Brune, un produit amphidiploïde de parents monogénomiques, B. campestris et B. niera. Cette source de SMC est connue depuis un certain nombre d'années. On a aussi mentionné que le génome de B. naus a été transféré dans le cytoplasme de B. juncea (Mathias R. (1985) Z. Planzenzuchtig. : 371-374), produisant ainsi des plantes B. naus & SMCj. Toutefois, les plantes B. naus & SHCj n'ont pas été utilisées jusqu'ici dans la production industrielle de semences hybrides de _B. naPs, étant donné que la production de semences hybrides est gênée par le caractère partiellement allogame de cette espèce cultivée. De telles plantes n'ont pas d'utilisation connue jusqu'ici, dans ce qui concerne l'obtention de plantes B. oleraces soit en expérimental soit & des fins commerciales. On a maintenant trouvé que des plantes B. oleracea & SMC comprenant des mitochondries du cytoplasme à SMCJ n'ont pas les inconvénients observés avec les plantes à SMC ayant un cytoplasme d'Ogura. Un objet de la présente invention consiste & produire des plantes B. oleracea à SMC comprenant des mitochondries du cytoplasme & SMCJ. Par le terme "plante", on entend dans la présente demande la plante dans sa totalité ou une partie quelconque ou des parties quelconques de la plante. La partie de la plante peut être une partie susceptible de se reproduire, par exemple une bouture, ou une partie comestible. Les parties comestibles comprennen les parties habituellement vendues dans les rayonnages de produits frais des supermarchés et autres, ou qui sont vendues aux industries de conserves et/ou de conservation. Le terme SMCj tel qu'on l'utilise ci-après de réfère au cytoplasme provenant de Brassica Juncea comprenant des mitochondries de Brassica luncea qui, lorsqu'elles sont présentes dans les plantes Brassica oleracea, confèrent à celles-ci un stérilité male. Le terme matière végétale ou plante Brassica oleracea à SMCj tel qu'on l'utilise ci-après se réfère à une matière végétale ou plante Brassica oleracea comprenant un cytoplasme & SMcj.Il va de soi que de tels cytoplasmes à SMCJ comprennent également les chloroplastes de Brassica juncea. Le terme semence hybride tel qu'on l'utilise ci-après se réfère a des semences hybrides Fl et des graines dérivées de la matière végétale qui en dérive. La présente invention est particulièrement appropriée pour l'obtention de SMC dans les plantes Brassica oleracca suivantes: 1. Bra-sica oleracea L. convar. acephela (DC.) Alef. var. botrytis L. (chou-fleur) 2. Brassica oleracea L. convar. capitata (L.) Alef. var. alba DC (chou blanc) 3. Brassica oleracea L. convar. gemmifera DC (choux de Bruxelles) 4. Brassica oleracea L. convar. acephala (DC.) Alef. var. sabellica L. (chou frisé) 5. Brassica oleracea L. convar. capitata (L.) Alef. var. sabauda L. (chou frisé de Milan) 6. Brassica oleracea L. convar. capitata (L.) Alef. var. rubra DC (chou rouge) 7. Brassica oleracea L. convar. acephala (DC.) Alef. var. gongylodes (chou-navet) 8. Brassica oleracea L. convar. botrytis (L.) Alef. var. ithalica (brocoli) et plus particulièrement, dans le chou-fleur, le chou blanc, les choux de Bruxelles et le brocoli conformément à ci-dessus. Il est bien entendu que les types de Brassica auxquels on se réfère en 1 & 8 ci-dessus concernent des types de Brassica dans un sens générique. Par exemple, le numéro 8, Brassica oleracea L. convar. botrytis (L.) Alef. var. ithalica concerne des plants de brocoli qu'ils soient des choux fleurs d'hivers verts, ou un autre type de brocoli. Comme mode de réalisation supplémentaire de l'invention, il est fournit un procédé de préparation de plantes B. oleracea comprenant au moins la caractéristique de SMCj, o le procédé en question comprend les étapes suivantes: i) réalisation d'un croisement initial entre une plante Brassica contenant une SMCj et une plante B. oleracea; ii) prélèvement de matériel embryonnaire issu du dit croise- ment et régénération de plantes à partir de celui-ci; et iii) sélection des plantes régénérées et réalisation de rétrocroisements répétés sur les descendances sélectionnées de celles-ci jusqu'à ce que l'on obtienne des plantes B. oleracea présentant un lot de graines normal et une uniformité phénotypique au moins en ce qui concerne la caractéristique de stérilité male. Les espèces de plantes Brassica contenant une SMCj utilisées dans le croisement initial peuvent être toute espèce végétale de la famille des Brassicacées qui est susceptible d'être compatible avec une plante B. oleracea. C'est à dire qu'une plante contenant une SMCj, quand on la croise avec une plante B. oleracea. devrait donner naissance à une descendance viable à partir de laquelle on peut faire des sélections pour obtenir des plantes que l'on peut utiliser dans un programme d'amélioration pour l'obtention définitive de plantes l. oleracea contenant la SMCj. Comme exemples de plantes Brassica contenant la SMCj, on peut citer B. iunceq et B. nanus à SMCi. La plante Brassica à SMCj est la plante à fertilité femelle, à stérilité male (c'est à dire parent femelle) dans le croisement initial. La plante B. oleracea & croiser est la plante à fertilité femelle, à fertilité mAle (c'est & dire parent mile). Le partenaire végétal de croisement de B. oleracea peut-être toute plante choisie parmi n'importe quel type de plante importante sur le plan agronomique tel que le chou-fleur, le brocoli, le chou (rouge, blanc Ou vert), le chou-rave, les choux de Bruxelles et ainsi de suite. Le matériel embryonnaire peut comprendre l'embryon entier ou une partie de celui-ci, ou un matériel dérivé de celui-ci, (par exemple, un cal), du moment que l'on puisse le cultiver et le régénérer en une plante B. oleracea grâce aux techniques employées dans le domaine. Le matériel embryonnaire est typiquement un embryon entier isolé de l'enveloppe de la graine en utilisant des méthodes de libération d'embryons largement connues dans le domaine. Un exemple de techniques de libération d'embryon et de régénération de plantes B. oleracea est exposé brièvement ici (Exemple 1). Les descendances sélectionnées dans l'étape iii), qui présentent des caractéristiques souhaitées par le phytogénéticien, sont soumises & des rêtrocroisements répétés avec des plantes B. oleracea, présentant des caractéristiques similaires ou autres, intéressantes pour le phytogénéticien, jusqu'à ce qu' au moins la caractéristique de stérilité m&le soit uniformément incorporée dans la descendance des plantes B. oleracea. Ainsi, les plantes résultantes sont phénotypiquement uniformes, au moins pour ce qui concerne la caractéristique de stérilité mâle. Typiquement, la succession uniforme au moins de la caractéristique de stérilité mile cytoplasmique, nécessite au moins deux rétrocroisements. Le phytogénéticien effectue généralement environ 4 rétrocroisements, de préférence, au moins 6 rétrocroisements, selon le type de plante B. oleracea concerné. Le phytogénéticien va aussi rechercher un lot de graines normal dans les plantes B. oleracea obtenues, ce qui lui prouve que les plantes obtenues sont conformes au phénotype typique de E. o.eracea Un lot de graines normal signifie un lot de graines similaire à celui du partenaire de rétrocroisement parent, c'est & dire, le parent à fertilité femelle, et & fertilité mâle. Le phytogénéticien va également regarder d'autres caractéristiques à sélectionner dans les plantes B. oleracea & stérilité male obtenues et on peut s'attendre à une période de rétrocroisement plus longue pour sélectionner de façon stable de telles caractéristiques dans les plantes B. oleracea de l'invention. De telles caractéristiques peuvent comprendre, mais sans se limiter, par exemple, & la qualité de la pomme ou de l'inflorescence, et/ou l'autoprotection pour le chou-fleur, la qualité interne et/ou la couleur du chou rouge, l'aptitude à être sur pied pour les choux de Bruxelles, la résistance & la maladie, l'architecture de la plante, la précocité, et ainsi de suite. Suit maintenant une description générale de la façon dont on peut obtenir les plantes B oleracea de l'invention. On peut obtenir les plantes B. oleracea & SMCj par croisement B. napus à SMCj, en tant que parent femelle, avec B. oleracea comme parent male, puis réalisation de techniques de libération d'embryon sur des embryons en développement, régénération des plantes à partir des embryons sélectionnés, suivie par le rétrocroisement des plantes sélectionnées présentant des caractéristiques voulues avec des plantes E. oleracea comprenant des caractéristiques supplémentaires similaires et/ou souhaitables jusqu'à ce que l'on observe un lot de graines normal, typique d'une plante B. oleracea, c'est à dire un degré de ploïdie typique de B. oleracea. De préférence, la plante B. oleracea est diploïde, c'est à dire 2n=2x=18. De telles plantes B oleracea comprenant un lot de graines normal sont rétrocroisées & maintes reprises avec des plantes B. oleracea comprenant des caractéristiques additionnelles similaires et/ou voulues, au moins jusqu'au second rétrocroisement, de préférence au moins jusqu'au sixième rétrocroisement. Une fois la caractéristique de stérilité male incorporée uniformément dans une plante. oleracea, ladite plante ou une matière végétale issue de celle-ci, peut être à nouveau utilisée, par exemple, dans un rétrocroisement avec des plantes du même type ou peut être croisée avec différents types de plantes de B. oleracea, afin d'introduire la caractéristique de stérilité male dans d'autres types de plante B. oleracea. Par exemple, on peut croiser un brocoli à stérilité mâle issu d'un troisième rétrocroisement, ou d'un rétrocroissement supplémentaire, avec un chou- fleur et grâce à un rétrocroisement répété avec le chou-fleur, la stérilité male cytoplasmique peut être incorporée dans le chou- fleur. On peut obtenir de façon similaire des choux à SMCj (rouge, blanc et vert), des choux de Bruxelles, du chou-rave, du chou frisé et ainsi de suite. Les techniques de libération d'embryon et les techniques de croisement sont bien connues du phytogénéticien expérimenté. La descendance issue du croisement initial peut ainsi suivre un certain nombre de voies possibles y compris celles mentionnées ci-dessus, telles qu'il est résumé ci-après: 1) On peut la croiser avec le parent B. oleracea. Un tel croisement est un rétrocroisement et aurait pour effet d'enrichir les caractéristiques du parent B. oleracea dans la génération qui suit. 2) On peut la croiser avec une plante de la même espèce ou sous- espèce comne le parent B. oleracea. soit pour introduire de nouvelles caractéristiques soit pour affirmer la succession de certaines caractéristiques de ce groupe. 3) On peut la croiser avec une plante issue d'une espèce ou sous- espèce différente de l'espèce ou sous-espèce du parent B. oleracea. Un tel croisement aurait pour effet d'introduire des caractéristiques nouvelles supplémentaires. 4) On peut la croiser avec une plante qui est elle-même le produit d'un ou de plusieurs croisements. De tels programmes d'amélioration sont cumulatifs et recouvrent un certain nombre d'années, avec une sélection soignée qui s'effectue & chaque stade du programme. On notera que de tels programmes d'amélioration doivent être choisis de telle sorte qu'on obtient des B. oleracea qui contiennent les chloroplastes et les mitochondries de B.juntea et un noyau de B; Oleracea. Naturellement, le phytogénéticien comprendra que le matériel embryonnaire issu du croisement initial peut être obtenu grâce & des techniques de libération d'embryon et peut être régénéré en plantes, ou que des plantes peuvent être dérivées de semences résultant du croisement initial. De préférence, les plantes produits du croisement initial sont dérivées de matériel embryonnaire, étant donné que le nombre de plantes potentielles & partir desquelles on peut faire des sélections est élevé par rapport au nombre de sélections que l'on peut faire à partir de plantes qui ont poussé grâce aux plantations de graines et aux processus de sélection végétal classiques. La description ci-dessus décrit de manière générale la présente invention. Une compréhension plus complète de l'invention peut être acquise en se référant aux exemples suivants. Il est entendu que des exemples sont fournis ici uniquement pour illustrer l'invention, et ne doivent pas être interprétés en aucun cas comme limitant le cadre de l'invention. EEXBPLB 1: Technique de libération d'embryon Douze à quinze jours après le croisement d'un B naMi & SMCj (parent femelle) avec un B. oleracea (parent male), des ovaires présentant les signes de croissance, c'est à dire que le fruit commence & grossir et durcir et avoir une coloration verdâtre, sont récoltés et désinfectés par trempage dans de l'alcool à 70% pendant i minute, suivi d'une incubation des ovaires dans une solution de NaCl à 1% en poids pendant 10 minutes, puis rinçage a deux reprises dans de l'eau stérilisée, 5 minutes pour chaque rinçage. La graine en développement est alors retirée, sous un microscope à 2712771 dissection (faible grossissement) dans une cabine à flux d'air laminaire stérile, puis l'embryon est retiré de l'enveloppe de la graine. Des lots individuels de 15 & 30 embryons sont alors incubés, en contact avec 25 ml de milieu White A liquide, dans des erlenmeyers de 75 ml pendant 7 & 20 jours & environ 25oC, avec 16 heures de lumière par jour. Le milieu White A contient, par litre: 1 L d'eau filtrée ou distillée 0, 94 g d'un mélange de sel de base de White (disponible auprès de Sigma Chemicals, USA) g de saccharose 400 mg d'hydrolysat de caséine (disponible auprès de Sigma Chemicals, USA) le pH est ajusté & 5,8 0,2 avant autoclavage et addition dans les erlenmeyers. Lorsque les embryons sont 1,5 mm de long, après 7-20 jours, on transfère les embryons du milieu White A liquide vers un milieu White B solide dans des récipients de 75 ml, un embryon par récipient, pendant 14 à 21 jours, & 22 C avec 16 h de lumière/jour, c'est & dire jusqu'à la formation de cals. Le milieu White B solide contient par litre: 1 L d'eau filtrée ou distillée 0,94 g de mélange de sel de base de White (Sigma Chemicals, USA) g de saccharose le pH est ajusté à 5,8 0,2 avant l'addition de 8 g de gélose (disponible auprès de Merck, NL), puis autoclav6 dans les récipients avant l'addition des embryons. Après que la substance de cal d'enracinement apparaisse, les cals d'enracinement sont transférés du milieu White B solide vers un milieu O solide (1 par pot) puis laissée pendant 3 semaines à 22oC, 16 h de lumière/jours. Toutes les 3 il semaines, le milieu O est remplacé par un milieu O frais. Un nouveau matériel végétal supplémentaire apparalt après 28-60 jours. Le milieu O solide contient, par litre: 4,42 g/l MSMacroéléments (disponibles auprès de Duchefa BV, NL) 1,00 ml MSMicroéléments & partir d'l L de solution contenant: CoCl2.6H20 0,025 mg/l CuSO4-5H20 0,025 mg/l H3BO3 6,20.mg/l KI 0, 83 mg/l MnSO4.H20 16,90 mg/l Na2MoO4.2H20 0,25 mg/l ZnSO4.7H20 8,60 mg/l 1 ml MS-Vitamines (disponible auprès de Duchefa P.B) 1 ml FeNaEDTA (36,7 mg/ml) (FeNaEDTA disponible auprès de Sigma Chemicals, USA) g de saccharose 7 g de gélose (Merck, P.B) On sépare les pousses en développement des cals et on les place dans un milieu O, 4 à 5 pousses par pot, et on laisse pendant un certain temps. Après 10 jours, on observe des racines de longueur comprise entre i et 15 mm. Lorsque suffisamment de racines sont formées, on transplante les plantules dans le sol et on les maintient dans une serre sous un film plastique à une humidité relative élevée (HR: 90- %). Après une semaine, on enlève graduellement le film plastique et on expose les plantules à une HR plus faible d'environ 40 à 80%. La température de la serre n'est pas critique et peut varier dans l'intervalle de 15 & 25 C. Le taux moyen de survie, c'est & dire le développement en plantes des embryons libérés est d'environ 5 & environ 10%. EXEMLE 2: Production de plantes B. oleracea (brocoli), uniformes pour la caractéristique de SMGj. On se réfère au schéma de sélection 1. B.npj & SMCj (2n=2x -38 chromosomes - parent femelle), obtenu auprès de l'Institut d'agronomie et de reproduction végétale, Université Georg August, Gôttingen, Allemagne, est croisé avec B. oleracea var. ithalica (2n-2xl8 chromosomes - parent mâle), (cv Zaadunie BV). 12 plantes F1 sont obtenues grâce à la technique de libération d'embryon telle quelle est décrite dans l'exemple 1. Une plante F1 appelée sous la désignation interne N 7 (2n=2x-36 chromosomes) est sélectionnée et rétrocroisée avec un B. oleracea var. ithalica (2n = 2x = 18) puis laissée monter en graine. C'est le premier rétrocroisement ( BC1). 9 plantes sont obtenues (2n=2x=26-27 chromosomes). 1 plante issue de BC1, appelée sous la désignation interne 7-3, est sélectionnée et rétrocroisée avec B. oleracea var. ithalica, donnant lieu au second rétrocroisement (BC2). On fait pousser les semences issues de BC2, et les plantes sélectionnées sont rétrocroisées avec L oleracea var. ithalica, formant le troisième rétrocroisement (BC3). Les plantes du BC3 présente un lot de graines normal (2n =2x=18 chromosomes) pour des plantes B. oleracea. Les plantes BC3 sélectionnées sont à nouveau rétrocroisées avec L oleracea var. ithalica, conduisant & BC4 & partir duquel, les descendances sélectionnées sont de nouveau rétrocroisées, conduisant à BC5, puis la descendance sélectionnée & partir de celui-ci est encore rétrocroisée, conduisant & des plantes BC6. Les plantes de BC3 à BC6 présentent une uniformité en ce qui concerne la caractéristique de stérilité male cytoplasmique. Elles ont un lot de graines normal pour B. oleracea var. ithalica (brocoli), indiquant que ce sont de vraies plantes B. oleracea avec un nombre de chromosomes diploXdes normal (2n=2x=18). BXEMPLE 3: Production de B. oleracea var. botrytis (chou- fleur) uniforme pour la caractéristique de SMCJ. On fait référence au schéma de sélection 2. B. oleracea à SMCj var. ithalica (brocoli; 2n = 2x = 18 chromosomes parent femelle), obtenu selon l'exemple 2, est croisé avec 'B:Olerateavar.botrytis (chou-fleur; 2n = 2x =-18 chromosomes - parent - male). Une plante F1 désignée sous 920111 est sélectionnée et rétrocroisée avec un B. oleracea var. botrytis (2n = 2x = 18) et laissée monter en graine. C'est le premier rétrocroisement (BCl). 1 plante issue de cette population BC1, appelée sous la désignation interne 930131, est sélectionnée et rétrocroisée avec B. oleracea var. botrytis, produisant la population de second rétrocroisement (BC2). Les plantes L. oleracea var. botrytis de BC2 présentent un lot de graines normal (2n = 2x = 18 chromosomes) pour des plantes B. oleracea var. botrytis, et présentent une forme et une couleur normale de chou-fleur. Schma de &élection 1 B.napus à SMCj x B. oleracea var.ithalica (2n=2x=18) (2x=2n=--38) e.r.m. Plante N 7 x B. oleracea var.ithalica (2n=2x=36) (BC1) Plante N 7-3 x B. oleracea var.ithalica (2n=2x=26-27) (BC2) Plante N 7-3-1 x B. oleracea var.ithalica (BC3) Plante N 897311 x B. oleracea var.ithalica (2n=2x=18) Lot de graines normal (BC4) Plante N 900008 x B. oleracea var.ithalica (2n=2x=18) (BC5) Plante N 910007 x B. oleracea var.ithalica (2n-2x=18) (BC6) Plante N 920121 2n=2x=18 - Schéma de uél ction 2 F1 B. oleracea var.ithalica x B. oleracea var. botrytis (2n-2x-18; SMCj) (2n-2x-18) (chou-fleur) (BC1) Plante N 920111 x B. oleracea var.botrytis (2n-2x=18; SMCj) (2n-2x18) (chou-fleur) (BC2) Plante N0930131 x B. oleracea var.botrytis (2n=2x=18; SMCj) (2n=2x=18) (chou-fleur) I f Plantes (2n-2x-18) (chou- fleur; SMCj) REVENDICATIONS 1.- Plantes ou parties de plantes de B. oleracea à SMC comprenant des mitochondries du cytoplasme à SMCj. 2.- Plantes ou parties de plantes selon la reven- dication 1, dans lesquelles le cytoplasme a SMCj est dérivé d'une plante B. napus à SMCj. 3.- Plantes ou parties de plantes selon la reven- dication 1 ou la revendication 2 qui sont diploïdes. 4.- Plante ou partie de plante Brassica oleracea à SMC selon la revendication 1, qui est Brassica oleracea L. convar. acephela (DC) Alef. var. botrytis L. (chou-fleur). 5.- Plante ou partie de plante Brassica oleracea à SMC selon la revendication 1, qui est Brassica oleracea L. convar. capitata (L.) Alef. var. alba DC. (chou blanc). 6.- Plante ou partie de plante Brassica oleracea à SMC selon la revendication 1, qui est Brassica oleracea L. convar. gemmifera DC (choux de Bruxelles). 7.- Plante ou partie de plante Brassica oleracea à SMC selon la revendication 1, qui est Brassica oleracea L. convar. acephala (DC.) Alef. var. sabellica L. (chou frisé). 8.- Plante ou partie de plante Brassica oleracea à SMC selon la revendication 1, qui est Brassica oleracea L. convar. capitata (L.) Alef. var. sabauda L. (chou frisé de Milan). 9.- Plante ou partie de plante 'Brassica oleracea a SMC selon la revendication 1, qui est Brassica oleracea L. convar. capitata (L.) Alef. var. rubra DC. (chou rouge). 10.- Plante ou partie de plante Brassica oleracea à SMC selon la revendication 1, qui est Brassica oleracea L. convar. acephala (DC) Alef. var. gongylodes (chou-rave). 11.- Plante ou partie de plante Brassi ca oleracea à SMC'selon la revendication 1, qui est Brassica oleracea L. convar. botrytris (L.) Alef. var. ithalica (brocoli). 12.- Graines de plantes selon l'une quelconque des revendications 1 à Il1. 13.- Procédé de production de plantes'B. oleracea à SMCj comprenant les étapes suivantes: i) réalisation d'un croisement initial entre une plante Brassica contenant une SMCj et une plante B. oleracea ii) prelèvement de matériel embryonnaire résultant du croissement initial et régénération de plantes à partir de celui-ci; et iii) sélection des plantes régénérées résultant de ii) et réalisation de rétrocroisements répétés sur les descendances sélectionnees de celles-ci jusqu'a ce que l'on obtienne des plantes B. oleracea pré- sentant un lot de graines normal et une uniformité phénotypique au moins en ce qui concerne la carac- téristique de stériliteé mal'e.