Brevet FR2719480A1 — publié le 19951110

COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES DESTINÉES A PRÉVENIR ET/OU TRAITER L'EXPRESSION DU COMPORTENENT DE COUVAISON CHEZ LES OISEAUX ET PLUS PARTICULIÈREMENT CHEZ LA DINDE ET LEURS PROCÉDÉS DE PRÉPARATION. La présente invention concerne de nouvelles compositions pharmaceutiques destinées à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux et plus particulièrement chez la dinde. L'invention concerne aussi les procédés de préparation de ces compositions pharmaceutiques. La couvaison ou période d'incubation est l'une des phases majeures du cyle de reproduction naturelle des oiseaux. Pourtant, l'aptitude à la couvaison, loin d'être considérée comme une qualité des reproductrices est au contraire un facteur défavorable, depuis que la totalité des oeufs à couver est incubée artificiellement. Ce comportement de couvaison persiste encore chez plusieurs espèces d'oiseaux domestiques, notamment chez les poules, chez la cane et la dinde. I1 résulte de ce comportement une réduction notable du nombre d'oeufs incubables et donc un manque à gagner très significatif pour les éleveurs. L'observation et la compréhension de ce comportement ont permis d'élaborer les premières méthodes de lutte contre la couvaison au sein des élevages. Chez la dinde en élevage, les premières couveuses sont repérées après le pic de production, soit vers la quatrième semaine de ponte et, en l'absence d'actions préventives, leur nombre atteint un maximun vers la huitième semaine (1, 2, 3). Le passage de l'état de pondeuse à celui de couveuse est normalement associé à un arrêt de ponte et à une régression de l'appareil reproducteur (ovaire et oviducte) . Certaines modifications morphologiques (rapprochement des os pelviens, développement des plaques incubatrices) et du comportement (augmentation du temps passé sur le nid, défense du nid, plumage hérissé, vocalises, activité alimentaire réduite) sont alors observables. L'apparition simultanée de l'ensemble de ces modifications est toutefois exceptionnelle chez la dinde, c'est pourquoi le repérage précoce des couveuses est plus délicat dans cette espèce. L'hypothèse d'un contrôle humoral de l'expression de la couvaison a été émise dès 1927 (4). Une élévation des concentrations plasmatiques de prolactine étant associée à l'expression de ce comportement, cette hormone fut ensuite désignée comme en étant le facteur causal (5), mais ceci n'a encore jamais été formellement établi. Les études récentes, employant les techniques de dosages radioimmunologiques, ont confirmé que les concentrations plasmatiques de LH et des stéroïdes ovariens, oestradiol et progestérone, sont minimales durant la couvai son, alors que le taux plasmatique de prolactine est maximum (6). Plusieurs facteurs influençant l'expression de la couvaison ont cependant pu être déterminés. Des facteurs génétiques ont été identifiés après qu'il ait été observé que le pourcentage de dindes susceptibles d'extérioriser le comportement de couvaison au sein d'une population varie en fonction de la souche. L'expression de la couvaison, en tant que caractère quantitatif est contrôlée par plusieurs gènes et sa transmission implique à la fois des facteurs liés au sexe et autosomaux (7, 8). Une estimation indique que l'héritabilité de ce caractère chez la dinde est compris entre 0,30 et 0,40 (9). L'incidence de la couvaison dépend également de facteurs exogènes liés au milieu, et de facteurs endogènes liés à l'état physiologique. Les facteurs du milieu les plus fréquemment évoqués sont le mode d'élevage, la température et la lumière. L'intégration centrale de ces stimuli exogènes et des stimuli endogènes joue un rôle déterminant pour l'émergence de ce comportement. L'implication d'une ou plusieurs monoamines (dopamine, sérotonine) et de peptides hypothalamiques (TRH, VIP), dans la chaîne des mécanismes aboutissant à la couvaison, a également été envisagée (10, 11). I1 a été suggéré en outre, que les stéroïdes ovariens favorisent l'expression de la couvaison en stimulant la sécrétion de prolactine lors du passage de l'état de pondeuse à celui de couveuse. Sur la base de ces études, trois types de méthode de lutte contre la couvaison ont été plus particulièrement développés - la sélection, - les procédés physiques, - les traitements avec des drogues. L'application de programmes de sélection rigoureux associée à des techniques d'élevage sérieuses a permis de réduire le pourcentage de dindes exprimant la couvaison au sein des élevages. Toutefois, selon les souches, 10 à 70 % des dindes d'un troupeau expriment encore ce comportement durant le cycle de reproduction. Les éleveurs sont donc dans l'obligation de prendre des mesures préventives et curatives appropriées. Les procédés physiques peuvent précisément être envisagés tant à titre préventif que curatif. A titre préventif, on connait les propriétés inhibitrices d'un changement de l'environnement vis à vis de l'expression de la couvaison (13, 14, 15, 16) et celles-ci peuvent être utilisées pour définir des normes d'élevage minimisant l'expression de la couvaison. I1 est ainsi souhaitable de pas excéder une densité maximale de 2 dindes par mètre carré et de disposer d'un nombre de nid suffisant (1 pour 5 dindes), laquelle va limiter la ponte au sol qui favorise également la couvaison. I1 est par ailleurs important d'assurer un éclairage uniforme du poulailler y compris dans les nids, de contrôler la température notamment en disposant de locaux bien ventilés, d'effectuer une collecte fréquente des oeufs (10 à 20 fois par jour), de sortir les dindes des nids lors de ces collectes et d'interdire l'accès au nid durant la nuit. I1 existe à cet effet des nids équipés avec un système d'éjection automatique des animaux et de collecte des oeufs, permettant de diminuer la charge de travail de l'éleveur. Cependant les normes décrites ci-dessus ne previennent pas totalement l'expression de la couvaison. Les traitements à titre curatif utilisés par les professionnels reposent sur des modifications du milieu d'élevage. On peut citer parmi celles-ci, l'usage de fortes intensités lumineuses, de signaux sonores ou de stimulations électriques, mais la plus commune consiste à placer la dinde couveuse dans un milieu étranger, "la cage de découvaison". Le parquet collectif avec sol grillagé ou litière de sable et la cage individuelle en sont les variantes les plus fréquentes. La dinde y séjourne en général durant 3 à 6 jours et, dans tous les cas, y sera privé de nid. Ce type de traitement induit une diminution de la prolactinémie et est donc vraissemblablement efficace pour prévenir à court terme l'expression du comportement de couvaison (3) . Inversement, il est probable qu'il n'ait pas toujours l'effet escompté par les éleveurs, notamment chez les dindes qui pondent encore lorsqu'elles sont identifiées couveuses et par conséquent soumise au traitement. Le traitement d'une dinde à ce stade particulier induira chez elle une importante mobilisation des réserves corporelles qui occasionne ultérieurement un arrêt de ponte chez certains de ces animaux. Ce type de traitement risque donc d'occulter les capacités réelles de reproduction des dindes potentiellement les plus productives. I1 est donc impératif que le repérage des dindes couveuses soit effectué avec le plus grand soin afin d'éviter le traitement accidentel de dindes non couveuses, tout spécialement au début de la période de production. Ces traitements physiques ne sont donc pas vraiment satisfaisants et nécessitent en outre la mise en place d'installations dont le coût est important pour 1 'éleveur. I1 a été proposé, parallèlement à ces procédés physiques, des traitements pharmacolgiques de lutte contre la couvaison. Les drogues proposées sont essentiellement de trois types : celles possèdant une activité stéroïdogénique, celles stimulant la sécrétion de LH et celles inhibant la sécrétion de prolactine. Les premiers essais de traitements pharmacologiques consistant en l'administration de stéroïdes ou d'analogues avaient pour objet de compenser la décroissance des taux circulants de stéroïdes associées à la couvaison. Ce type de traitement induit le plus souvent une interruption de la couvaison, mais tend également à retarder le retour en ponte en raison du rétro-contrôle négatif qu'exercent les stéroïdes sur la sécrétion de LH. Ce type de drogues n'a donc pas été retenu. Le traitement avec des drogues stimulant la sécrétion de LH a pour but de compenser la décroissance de LH qui survient durant le couvaison. I1 a été montré que le citrate de clomiphène, une substance antioestrogénique, est actif pour interrompre la couvaison et stimuler le retour en ponte (17). Des résultats contradictoires concernant l'efficacité de cette substance ont toutefois été rapportés par plusieurs auteurs (18, 19). I1 a été notamment montré une décroissance des taux de LH après traitement, évolution qui est incompatible avec un rapide retour en ponte (20). I1 a également été observé que La LHRH est active pour stimuler la sécrétion de LH chez la dinde couveuse (21, 22, 23), mais l'injection répétée de LHRH induit une désensibilisation de l'hypophyse et ne stimule pas l'activité ovarienne chez la poule naine (18). A l'inverse, l'injection de gonadotrophines seriques de jument gravide (PMSG) stimule l'activité ovarienne chez la dinde couveuse mais n'induit ni l'interruption de la couvaison ni le retour en ponte (24). Les effets inhibiteurs ou stimulateurs de plusieurs monoamines (sérotonine, dopamine) et peptides hypothalamiques (TRH, VIP) sur la sécrétion de prolactine ont été mis en évidence chez la dinde (10, 11, 25) et l'utilisation de substances qui interfèrent dans leur processus de synthèse, libération et/ou mode d'action, pour contrôler la couvaison, a fait l'objet de diverses expériences. La bromocriptine, un analogue de la dopamine, qui inhibe la sécrétion de prolactine chez les mammifères, favorise l'expression de la couvaison chez la dinde (17). Inversement, le pimozide, qui bloque les récepteurs dopaminergiques, est efficace pour interrompre la couvaison et stimuler le retour en ponte (26). Ce résultat ne peut toutefois être obtenu que si la dinde est traitée durant la phase intermédiaire entre ponte et couvaison, ce qui implique un repérage précoce. I1 a en outre été observé que la sécrétion de prolactine est stimulée par la sérotonine (27, 11) et le PCPA, un inhibiteur de la synthèse de la sérotonine, et induit éventuellement l'interruption de la couvaison (28, 29). Les résultats positifs concernant la restauration de l'activité ovarienne (28) n'ont par contre pas été confirmé à ce jour. I1 a été en outre montré que l'administration intracérébrale de prolactine ovine retarde l'entrée en production d'une dinde immature et induit un comportement de nidification chez une dinde pondeuse en association avec une décroissance de la concentration plasmatique de prolactine (30). L'approche la plus récente consiste à utiliser des anticorps dirigés contre le VIP (31). L'injection de tels anticorps induit une décroissance de la concentration plasmatique de prolactine et l'interruption de la couvaison, mais induit parallèlement une réduction du taux de LH chez la poule naine, ce qui est préjudiciable à la ponte. Les résultats expérimentaux de ces différentes approches pharmacologiques ne sont donc pas suffisants pour envisager leur usage dans les élevages et, en conséquence, les procédés physiques demeurent le seul type de traitement dont l'éleveur puisse disposer. La compréhension des mécanismes hormonaux associés à l'expression du comportement de couvaison se sont accompagnés d'études fondamentales visant à caractériser ces molécules, notamment la prolactine (32, 33), et à identifier les gènes correpondants chez différentes expèces d'oiseaux. Ainsi, les gènes de la prolactine de poule (34, 35) et de dinde (36, 37) ont été identifiés, séquencés et clonés. I1 a notamment été proposé d'utiliser le vecteur d'expression pGEX-2T (38) pour produire la prolactine de dinde recombinante (39). Les Inventeurs ont mis à profit l'ensemble des connaissances académiques précédentes pour rechercher de nouveaux moyens permettant la conception et la fabrication de compositions pharmaceutiques aptent à prévenir et/ou traiter efficacement l'expression du comportement de couvai son chez les oiseaux et plus particulièrement chez la dinde, sans induire d'effet négatif sur la reproduction et le maintien ou la reprise de la ponte. Ce but est atteint grâce à des compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles comportent à titre d'agent actif, soit une molécule hybride constituée d'un groupe porteur et d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine, soit un micro-organisme exprimant à sa surface ou excrétant ladite molécule hybride, soit des anticorps dressés contre au moins un site antigénique de la prolactine. I1 a été mis en évidence par les Inventeurs que les anticorps dirigés contre la prolactine ou contre une forme modifiée ou une partie de celle-ci, sont capables de neutraliser la prolactine circulante et de réprimer l'expression du comportement de couvaison chez la dinde. En conséquence, la présente invention propose d'utiliser à titre d'agents actifs dans des compositions pharmaceutiques, soit les anticorps dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine, soit des molécules antigéniques reproduisant au moins un caractère immunogène de la prolactine et donc capables d'induire in vivo la production d'anticorps dirigés contre ladite prolactine. Les déterminants et sites antigéniques envisagés selon l'invention sont ceux portés par la séquence en acides aminés de la prolactine représentée dans la SEQ ID NO:1 de la liste de séquence en annexe. Dans les compositions pharmaceutique de l'invention, l'agent actif peut être avantageusement associé à un véhicule pharmaceutiquement acceptable connu de l'homme du métier. Un premier mode de réalisation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, destinée à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux, consiste à utiliser à titre d'agent actif, une molécule hybride constituée d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et un groupe porteur. La prolactine existant à l'état endogéne chez les oiseaux, il n'était pas possible d'induire chez ces espèces une réponse immunitaire en administrant à ces animaux la prolactine native ou une partie de celleci. Les Inventeurs ont donc conçu une molécule hybride constituée - d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine, et - d'un groupe porteur existant ou non à l'état endogène chez l'oiseau auquel sera administrée la composition pharmaceutique de l'invention. L'association de ce groupe porteur et de ladite protéine conduit à une molécule hybride qui n'existe pas dans l'organisme de l'oiseau, et en conséquence permet d'induire une réponse immunitaire dirigée notamment contre le ou les déterminants antigéniques de la prolactine portées par la protéine associée au groupe porteur. La présente invention a plus particulièrement pour support les techniques récentes de biologie moléculaire mises en oeuvre pour produire de la prolactine recombinante. Ces techniques reposent sur la construction d'acides nucléiques recombinants comprenant au moins la séquence d'ADN codant pour la prolactine, associée avec un promoteur et/ou un terminateur de transcription reconnu par les enzymes de la cellule hôte dans laquelle ledit acide nucléique recombinant est introduit. Cet acide nucléique recombinant est introduit dans une cellule hôte au moyen de vecteurs; le vecteur ainsi que les signaux de contrôle de l'expression de l'acide nucléique recombinant sont choisis en fonction de la cellule hôte, eucaryote ou procaryote, dans lequel il est placé. Le vecteur peut être un plasmide mais aussi un vecteur viral capable d'infecter la cellule hôte. Les techniques permettant le clonage et l'expression d'un acide nucléique recombinant dans différentes cellules hôtes sont connues de l'homme du métier; elles seront illustrées dans la description des exemples qui suit, étant entendu que d'autres vecteurs et cellules hôtes peuvent être utilisés. Ces techniques permettent de préparer une protéine identique à la séquence de la prolactine, mais aussi des dérivés ou des séquence incomplètes de celleci mais comprenant un ou plusieurs déterminants important de la prolactine pour l'induction d'une réponse immunitaire. La présente invention se propose d'utiliser ces techniques pour préparer une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine fusionnée à un groupe porteur suite à une manipulation génétique de 1'ADN recombinant correspondant. On connait dans l'art antérieur de tels manipulations visant à associer à la protéine recherchée un groupe porteur, la plupart du temps une autre protéine, de façon à favoriser une meilleur expression de la protéine dans la cellule hôte ou à provoquer son excrétion hors de la cellule ou encore de permettre la séparation et la purification de la protéine désirée. La molécule hybride ne constitue donc qu'un intermédiaire qui est ensuite clivée pour obtenir la protéine recherchée. Cette technique a été mise en oeuvre pour produire de la prolactine recombinante en utilisant à titre de groupe porteur la Glutathion S-transferase, ci après dénommée GST (39). . Dans cet exemple, 1'ADN codant pour la prolactine de dinde (tPRL) dont la séquence nucléotidique est représentée dans la SEQ ID NO:1 en annexe, a été introduit à l'aide d'enzymes de restriction appropriés dans le plasmide pGEX-2T (38) portant le gène codant la GST sous le contrôle d'un promoteur tac commercialisé par la Société Pharmacia. Le vecteur recombinant ainsi construit a été utilisé pour transformer des bactéries E. coli et leur faire exprimer la protéine de fusion GST-prolactine, laquelle était ensuite clivée pour produire la prolactine. La séquence de l'acide nucléique codant pour la protéine de fusion GST-tPRL'et la séquence en acides aminés de cette protéine sont représentées dans la SEQ ID NO:2 de la liste de séquence en annexe. L'homme du métier est à même de concevoir d'autres vecteurs compatibles avec l'introduction d'un acide nucléique codant pour une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine, tels que - le vecteur pUR mettant en oeuvre le gène codant pour la protéine lac Z (Ruther et Muller - Hill, 1993 EMBO J., 2:1791-1794); - le vecteur pATH mettant en oeuvre le gène codant pour la protéine trpE (Koerner et al., 1990 Methods in Enzymology, Genbank M32985); - les vecteurs pMAL-c2 ou pMAL-p2 mettant en oeuvre le gène codant pour la protéine MPB (New England Biolabs. Lauritzen et al., 1991 Protein Expression and Purification 2:372-378), et permettant de produire une molécule hybride susceptible d'induire chez l'oiseau une réponse immunitaire contre la prolactine. Une variante, pour la préparation des molécules hybrides utilisées dans les composition pharmaceutiques de l'invention, consiste à coupler chimiquement le groupe porteur avec la protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine. On connait à cet effet, notamment les kits permettant de coupler une protéine à un groupe porteur, comme la serum albumine bovine (BSA), l'ovalbumine, le Keyhole Limpet Hemocyanine (KLH) etc... L'invention a donc aussi pour objet les procédés de préparation des compositions phamaceutiques décrites ci-dessus. Un premier procédé consiste à préparer la molécule hybride constituant l'agent actif, par expression d'un acide nucléique recombinant codant pour une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et un groupe porteur, puis à éventuellement associer ledit agent actif à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Une forme particulière de mise en oeuvre du procédé précédent consiste à utiliser un acide nucléique recombinant codant pour une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et pour la GST. Ce procédé conduit à des compositions pharmaceutiques comportant à titre d'agent actif une protéine de fusion constituée d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et de la GST, telle que la GST-tPRL. Un second procédé de préparation de la composition pharmaceutique décrite ci-dessus, consiste à préparer la molécule hybride constituant l'agent actif, par couplage chimique d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine avec un groupe porteur, puis à éventuellement associer ledit agent actif à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Une forme particulière de mise en oeuvre du procédé précédent consiste à coupler chimiquement une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine avec un groupe porteur choisi parmi : la serum albumine bovine (BSA), l'ovalbumine le Keyhole Limpet Hemocyanine (KLH). Un deuxième mode de réalisation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, destinée à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux, consiste à utiliser à titre d'agent actif, un micro-organisme capable d'exprimer à sa surface ou d'excréter une molécule hybride constituée d'un groupe porteur et d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine. Ce mode de réalisation est basé sur la technique des acide nucléiques recombinants décrites précédemment. I1 est caractérisé par la mise en oeuvre, à titre d'agent actif, d'un micro-organisme transformé par au moins un acide nucléique recombinant codant pour une molécule hybride constituée d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et un groupe porteur hétérologue. Avantageusement, le groupe porteur est choisi de façon à permettre l'expression de la molécule hybride à la surface du micro-organisme, ou encore de façon à permettre la sécrétion de la molécule hybride hors du micro-organisme, afin d'induire une réponse immunitaire contre un déterminant antigénique de la prolactine chez l'oiseau auquel la composition de l'invention a été administrée. Une forme particulière de réalisation de la composition pharmaceutique précédente consiste à utiliser à titre de principe actif une bactérie ou un virus recombinant vivant transformé comme décrit cidessus. Les bactéries et les virus seront choisis parmi-ceux connus pour leur capacité à infecter les oiseaux et au sein de ceux-ci plus particulièrement ceux colonisant l'espèce à laquelle la composition pharmaceutique est administrée. On peut citer à titre d'exemples, les salmonelles, E. Col i, les mycoplasmes et différents virus. Un troisième mode de réalisation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, destinée à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux, consiste à utiliser à titre d'agent actif, des anticorps dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine. Ces anticorps peuvent être polyclonaux ou monoclonaux. Les techniques permettant la préparation d'anticorps monoclonaux ou polycolonaux dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine sont bien connues de l'homme du métier (Harlow et Lane; 1988, Antibodies, A laboratory Manual, 726 pages). Les anticorps polyclonaux sont préparés par immunisation en injectant à un animal, une quantité appropriée de prolactine, ou d'une forme modifiée ou d'une partie de celle-ci, préparée soit par extraction et purification d'un matériel biologique adéquat, soit par synthèse chimique à partir de la séquence en acides aminés de la prolactine, soit encore par expression de 1'ADN codant pour la prolactine dans un hôte. Les anticorps monoclonaux peuvent être produits par tout hybridome préparé selon les méthodes de fusion cellulaire entre des cellules spléniques, activées in vitro par la prolactine, ou une forme modifiée ou une partie de celle-ci, ou provenant d'un animal immunisé contre ladite protéine, et des cellules d'une lignée de cellules myélomateuses. Les anticorps entrant dans la formulation de des compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent être des anticorps dits hétérologues ou homologues. Les anticorps hétérologues sont préparés chez une espèce autre que l'oiseau, par exemple le lapin, le mouton et le cheval. Les anticorps homologues sont préparés chez l'espèces à laquelle est destinée la composition pharmaceutique de l'invention, à partir de la molécule hybride définie dans le premier mode de réalisation. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention pourront comprendre outre l'agent actif conforme à l'invention un autre constituant actif capable de renforcer la réponse immunitaire induite par ledit agent actif. On peut citer commes exemples de tels constiuants actifs accessoires les adjuvants traditionnellement utilisé dans la fabrication de vaccins. Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont sous forme administrable par exemple par injection et dans ce cas le véhicule pharmaceutiquement acceptable est aqueux. Le processus d'administration de ces compositions pharmaceutiques ainsi que les doses d'agent actif devront être adaptés au type d'oiseaux auquel elles sont administrées. Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont plus particulièrement destinées à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez la dinde. En effet, les performances de ponte obtenues dans cette espèce, environ 110 oeufs par dinde, sont faibles comparées à celles de l'espèce poule de souche ponte, en raison précisément de l'expression du comportement de couvaison. Mais ces compositions sont utiles également pour prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez d'autres oiseaux et notamment la poule (ponte oeuf de consommation et reproductrices chairs), le canard (barbarie, pékin, colvert, etc...), l'oie, le faisan. D'autres avantages et caractéristique de l'invention apparaîtront au cours de la description qui suit et qui se réfère à des exemples de préparation de compositions pharmaceutiques destinées à prévenir ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez la dinde, étant entendu que ces exemples ne sauraient constituer une limitation quelconque de l'objet de 1 'invention. I - PRODUCTION DE LA MOLÉCULE DE GST-PRL. La méthode de production de molécule de GST PRL est rapporté indirectement en tant que produit intermédiaire dans l'article de KARATZAS C.N. et al. (39 : KARATZAS C.N., GUEMENE D., ZADWORNY D.et KUHNLEIN U., 1993. Comp. Biochem. Physiol., 106B, 273-280) I1 s'agit d'une molécule n'existant pas à l'état naturel, bien que ces deux constituants existent eux à l'état endogène chez la dinde. II - COMPARAISON DE LA SEOUENCE DE LA PROLACTINE DE DINDE AVEC CELLES D'AUTRES HORMONES. La figure 1 en annexe représente la comparaison de la séquence de prolactine de dinde (tPRL) avec celles d'autres hormones de différentes espèces. Dans cette figure - Les résidus d'acides aminés conservés entre la tPRL et les autres hormones étudiées sont représentés par une étoile. - Les régions hautement homologues sont ombrées. - Les cinq domaines a, B, C, d et E ont été définis à partir des résidus invariablement conservés. - Les acides aminés marqués d'une flèche sont ceux hautement conservés chez toutes les protéines de prolactine de vertébré. - Les hélices I, II, II et IV ont été déduites de la comparaison des GH de porc et de dinde. - Les numéros correspondent aux acides aminés de la séquence de tPRL. - Les hormones comparées avec la tPRL sont les suivantes prolactine de poule (CHPRL) (Hanks et al., 1989) : 92 % d'homologie avec la prolactine de dinde ; prolactine de tortue de mer (STPRL) (Yasuda et al., 1990) : 84 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine humaine (HUPRL ; Cooke et al., 1981) : 70 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine de cheval (HOPRL ; Lehrman et al., 1988) : 79 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine d'éléphant (ELPRL ; Li et al., 1989) : 67 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine de chameau (CAPRL) : 78 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine d'ovin (OVPRL ; Adams et al., 1989) : 79 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine de porc (POPRL ; Kato et al., 1990) : 80 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine de bovin (BOPRL ; Sasavage et al., 1982) : 79 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine d'ailero prolactine de carpe (CAPRL ; Yasuda et al., 1987) : 34 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine de saumon (SAPRL ; Kuwana et al., 1988 ; Song et al., 1988) : 32 % d'homologie avec la prolactine de dinde; prolactine de tilapia-I (T1PRL) et de tilapia-II (T2PRL ; Yamagushi et al., 1988) respectivement 34 et 30 % d'homologie avec la prolactine de dinde; . hormone de croissance de dinde (TGH), . hormone lactogene de placenta bovin (BOVPL Schuler et Hurley, 1987), Cette comparaison de séquence a permis de mettre en évidence les points suivants - Six acides aminés de la séquence de la tPRL (la sérine en position 5, la glutamine en position 72, l'alanine en position 142, la phénylalanine en position 147 et l'acide aspartique en position 151) représentent des substitutions de résidus hautement conservés chez les autres vertébrés. La signification de ces substitutions nta pas été déterminée, mais celles-ci pourraient être importantes pour établir la spécificité biologique de la prolactine d'oiseaux. - La tPRL mature contient 6 cystéines, dont deux, localisés à l'extrémité N-terminale, ont été observées chez d'autres oiseaux, mammifères et amphibiens mais pas chez les teleosteens ou des hormones membres des familles de la GH et de la PL (Nicoll et al., 1986 ; Kawauchi et Yasuda, 1988 ; Kawauchi et al., 1990 ; Yamakawa et al., 1990). La fonction de la boucle entre les cystéines aux positions 4 et 11, dans les espèces supérieures par rapport aux poissons téléostéens n'est pas connue. I1 a été rapporté que la délétion de cette boucle disulphure dans la PRL ovine (oPRL) augmente son activité dans le dosage biologique de la vessie de poisson (Yamaguchi et al., 1988) . Cette supression est sans effet sur l'activité de l'oPRL dans les dosages biologiques de la glande mammaire ou de la glande du jabot de pigeon (Kawauchi et al., 1990). - La séquence de la tPRL contient trois résidus tryptophane, dont l'un, en position 91, est présent dans toutes les molécules de prolactine à l'exception de chez la souris. La prolactine de poule et de dinde contiennent un résidu tryptophane supplémentaire en position 114 qui est absent des autres prolactines de vertébré actuellement caractérisées (Yamakawa et al., 1990). - Les résidus d'acides aminés suivants cystéines en position 58, 174, 191, 199 et acide aspartique en position 178, sont invariablement conservés dans toutes les molécules de prolactine et d'hormone de croissance (Watahiki et al., 1989a ; Kawauchi et Yasuda, 1988), ainsi que dans les PRL-like et les lactogènes placentaires de bovins, de souris et de rat (Yamakawa et al., 1990). Ceci semble indiquer que ces résidus sont nécessaires au maintien de l'intégrité structurale de cette famille de gènes. Les résidus spécifiques de la prolactine seraient en conséquence indispensables à la structure de cette hormone et à sa fixation au récepteur. Cette étude de comparaison fournit des indications sur le choix des protéines comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine de dinde et susceptibles d'induire une réponse immunitaire dirigée contre celle-ci, lors de l'immunisation active ou passive définie ci-dessous. III - PROCÉDÉS D'IMMUNISATION DE LA DINDE. Les traitements décrits ci-après ont été de - une méthode préventive, dénommée immunisative active, qui est appliquée chez la dinde avant acquisition de la maturité sexuelle, c'est à dire durant la période d'élevage des animaux; - une ou plusieurs méthodes préventives et/ou curratives, dénommées immunisatives passives, qui sont appliquées durant la période de ponte. 1 - L'IMMUNISATION ACTIVE. L'immunisation active a consisté à induire une immunisation contre la prolactine, en injectant à la dinde la molécule hybride de GST-PRL produite chez E. coli conformément au procédé indiqué précédemment. Cette molécule hybride joue alors le rôle d'antigène et entraîne la production d'anticorps anti PRL lors de la réaction immunitaire contre la molécule de GST-PRL. a) Protocole expérimental. L'expérimentation a été réalisée chez des dindes élevées au sol (3 lots de 15 dindes) . La GST-PRL a été administrée par injection sous-cutanée au niveau du bréchet, en multisites. La dose utilisée a été de 100 Stg par dinde et par injection, diluée dans de l'adjuvant de Freund complet (AFC) pour la première injection puis de l'adjuvant incomplet (AFI) pour les injection suivantes. I1 a été effectué quatre injections souscutanées à une semaine d'intervalle à partir de 21 semaines d'age, puis des rappels en intraveineuse à 28, 33 et 37 semaines d'age. Le protocole précédent est expérimental et devra être adapté pour une mise en oeuvre systématique au sein d'élevages commerciaux. Parallèlement deux lots témoins ont été suivis, l'un traité selon le même protocole avec la seule GST et l'autre avec du sérum physiologique b) Résultats. - La présence d'anticorps anti-prolactine a été mise en évidence par des techniques de radioimmunologie chez les dindes traités et en aucun cas chez les dindes témoins. - Les dindes traitées ont commencé à pondre après photostimulation dans un délai similaire à celui des dindes témoin. Les dindes immunisés conservent donc leur aptitude à pondre et à se reproduire dans les mêmes délais que les dindes non immunisés. - Aucune des dindes traitées n'a exprimé la couvaison, alors que 20 à 30 % des dindes témoins l'ont exprimé. - Les dindes traitées ont pondu 4 et 5 oeufs de plus par dinde que les dindes témoins et ceci en dépit du fait qu'un second rappel de vaccination ait été effectué en deuxième semaine de ponte, ce qui a été préjudiciableà des performances de ponte optimales. - La présence d'anticorps anti-prolactine a été révélé dans les oeufs des dindes traitées, et n'a pas affecté le développement embryonnaire, l'éclosabilité, la viabilité et la croissance ultérieure des descendants. Un pic de la prolactine plasmatique étant associé à l'éclosion, il pouvait, en effet, être craint que la présence d'anticorps anti-prolactine soit préjudiciable à la descendance. 2 - L'immunisation passive de dindes. L'immunisation passive a consisté à traiter la dinde durant la période de ponte avec des anticorps qui peuvent être d'origine hétérologues ou homolgues. a) Production d'anticorps heterologues. Les anticorps hétérologues ont été préparés de manière classique en injectant à un lapin une quantité de50 à 100 Ag de prolactine purifiée. Un rappel a été effectué. trois semaines plus tard par intraveineuse et le sang a été prélevé dans un délai de 5 à 9 jours. Le sérum a été séparé aux fins d'injection chez la dinde. b) Production d'anticorps homologues. Les anticorps homologues ont été préparés en injectant à une dinde une quantité 100 Ftg par dinde et par injection de molécule GST-PRL purifié. Ces anticorps sont donc identiques à ceux induits lors de l'immunisation active décrit ci-dessus. L'obtention des anticorps peut être réalisée de deux façons - soit directement depuis le sang de l'animal après avoir séparé le sérum, - soit à partir des jaunes d'oeufs des dindes immunisées avec la molécule de GST-PRL comme décrit ci-dessus dans le procédé d'immunisation active. c) Protocole experimental. L'expérimentation a été réalisée également chez des dindes élevées au sol (2 lots de 15 dindes), avec des anticorps hétérologues. Le sérum de lapin contenant des anticorps anti-prolactine a été administré par injection intramusculaire, 3 fois par semaine, 4 semaines consécutives à partir de la cinquième semaine de ponte et aux doses de lml la première semaine puis de 0,5 ml (pure) . Les dindes du groupe témoin ont reçu selon le même protocole du sérum normal de lapin. d) Résultats. - Les dindes traitées n'ont pas exprimé la couvaison alors que dans le groupe témoin 45 9s des dindes l'ont exprimée. - Les dindes traitées ont pondu 8 oeufs de plus que les dindes du groupe témoin. e) Conclusions. Ce traitement a prévenu l'expression de la couvaison et a indirectement permis ltobtention de meilleures performances de ponte. I1 est plus avantageux pour cette immunisation passive, d'utiliser des anticorps homologues, lesquels sont plus facile et moins onéreux à obtenir à partir des oeufs de dindes immunisées avec la molécule de GST-PRL, qu'à partir de sérums d'animaux immunisés. La méthode la plus simple consistant alors à incorporer directement dans l'alimentation des dindes, le jaune des oeufs provenant de dindes immunisées avec la molécule de GST-PRL. RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES. 1) NIXEY C., 1978. In : La reproduction chez la dinde. ITAVI; Paris. 2) ETCHES R.J., MC NEILLY A.S. et DUKE C.E., 1979. Poulot. Sci., 58,963-970. 3) GUÉMENÉ D. et ETCHES R.J., 1990. Brit. Poult. Sci., 31, 847-857. 4) LIENHART R., 1927. C.R. Soc. Biol., 97, 1296-1297. 5) RIDDLE O., BATES R.W. et LAHR E.L., 1935. Am. J. Physiol., 111, 352. 6) HARVEY S. et BEDRAK E., 1984. Proc. 17th Poult. Sci. Symp., Ed. CUNNINIGHAM F.J., LAKE P.E et HEWITT T.D., Brit. Poult. Sci., 111-132. 7) MUELLER C.D., 1952. Poult. Sci., 31, 166170. 8) SAEKI Y., 1957. Poulot. Sci., 34, 378-383. 9) NESTOR K.E. 1972. Poult. Sci., 51, 86-92. 10) PROUDMAN J.A. et OPEL H., 1983. Poult. Sci. 62, 1484-1485. 11) HALL T.R., HARVEY S. et CHADWICK A., 1986. Gen. Comp. Endo., 62, 171-184. 12) EL HALAWANI M.E., SILSBY J.L. BEHNKE E.J. et FEHRER S.C. 1983. Biol. Reprod., 35, 59-67 13) BLAKELY R.M., ANDERSON R.W. et Mac GREGOR H.I., 1951 Poult. Sci., 30, 907. 14) SAEKI Y. et TANABE Y., 1955. Poulot. Sci., 34, 909-919. 15) NIXEY C., 1973. IVth Eur. Poult. Conf., London, 87-93. 16) NESTOR K.E. BACON W.N. et RENNER P.A., 1986. Poulot. Sci., 65, 1405-1409. 17) ROBINZON B., SHAFIR Z., PEREK M. et SNAPIR N., 1984. Poulot. Sci., 63, 2268-2270. 18) SHARP P.J., STERLING R.C., de MILTON L. et MILLAR R.P., 1986. Brit. Poult. Sci. 27, 129-135. 19) RENNER P.A. , NESTOR K.E., BACON W.N. et HAVENSTEIN G.B., 1987. Poult. Sci., 66, 558-560. 20) GUÉMENÉ D. et ETCHES R.J., 1989a. Rep. Nut. Dév., 29, 469-476. 21) EL HALAWANI M.E., FEHRER S.C.et SILSBY J.L. 1987, Biol. Reprod., 36, 884-889 22) GUÉMÉNÉ D. et WILLIAMS J.B., 1989. J. Endocrinol., 123, 85. 23) GUÉMENÉ D. et WILLIAMS J.B., 1992. Brit. Poult. Sci., 33, 153-163. 24) ZADWORNY D., 1985. Ph.D. Thesis, University of Guelph, 176p. 25) EL HALAWANI M.E., FEHRER S.C et HARGIS B.M et PORTER T., 1988. C.E.C Crit. Rev. in Poult. Biol., 1, 284-314. 26) MILLAM J.E., BURKE W.H., EL HALAWANI M.E. et OGREN L.A., 1980. Poult. Sci, 59, 1126-1131. 27) HARGIS B.M. et BURKE W.H., 1984. Gen. Comp. Endo., 55, 12. 28) EL HALAWANI M.E., SILSBY J.L. BEHNKE E.J. et FEHRER S.C. 1983. Biol. Reprod.,28,221-228 29) GUÉMENÉ D. et ETCHES R.J., 1989b. Poult. Sci., 68, 1592-1594. 30) YOUNGREN O.M., EL HALAWANI M.E., SILSBY J.L. et PHILLIPS R.E., 1991. Biol. Reprod., 44, 425-491. 31) SHARP P.J., STERLING R.C., TALBOT R.T. et HUSKINSON N.S., 1989. J Endocrinol., 122, 5-13. 32) CHENG K.W. et ETCHES R.J. 1981. J. Reprod. Fert., 62, 407-415. 33) CORCORAN D.H. et PROUDMAN J.A. 1991. Comp. Biochem. Physiol., 99B, 563-570. 34) HANKS M.C., TALBOT R.T. et SANG H.M. 1989. J. Mol. Endocr., 3, 15-21. 35) OHKUBO T., TANAKA M., NAKASHIMA K., SHIMADA K, SAITO N. et SATO K. 1993. Comp. Biochem. Physiol., 105A, 123-128. 36) KARATZAS C.N., ZADWORNY D.et KUHNLEIN U. 1990a. Nucl. Acids Res., 18, 3071. 37) KARATZAS C.N., ZADWORNY D.et KUHNLEIN U. 1990b. J. Poult. Sci. 69, 71. 38) SMITH D.B. et JOHNSON K.S. 1988. GENE, 67, 31-40. 39) KARATZAS C.N., GUEMENE D., ZADWORNY D.et KUHNLEIN U., 1993. Comp. Biochem. Physiol., 106B, 273280. LISTE DE SEOUENCES SEO ID NO:1 CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE A) LONGUEUR : 600 nucléotides et 199 acides aminés B) TYPE : acide nucléique et protéine correspondante C) NOMBRE DE BRIN : simple D) CONFIGURATION : linéaire CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE A) NOM/CLE : prolactine de dinde (tPRL) DESCRIPTION DE SEQUENCE TTG CCA ATC TGC TCC AGT GGA TCT GTC AAC TGC CAA GTT TCC CTT GGG 48 Leu Pro Ile Cys Ser Ser Gly Ser Val Asn Cys Gln Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 GAG CTT TTT GAT CGG GCA GTT AGA CTT TCA CAC TAC ATA CAC TTC CTC 96 Glu Leu Phe Asp Arg Ala Val Arg Leu Ser His Tyr Ile His Phe Leu 20 25 30 TCT TCA GAA ATT TTC AAT GAA TTT GAT GAA CGC TAT GCT CAG GGT CGG 144 Ser Ser Glu Ile Phe Asn Glu Phe Asp Glu Arg Tyr Ala Gln Gly Arg 35 40 45 GGT TTC ATT ACA AAA GCT GTT AAT GGC TGC CAC ACT TCC TCC TTA ACC 192 Gly Phe Ile Thr Lys Ala Val Asn Gly Cys His Thr Ser Ser Leu Thr 50 55 60 ACT CCT GAA GAT AAG GAG CAA ACT CAG CAG ATT CAT CAC GAA GAG CTA 240 Thr Pro Glu Asp Lys Glu Gln Thr Gln Gln Ile His His Glu Glu Leu 65 70 75 80 CTG AAT TTG ATA CTG GGA GTG CTG CGT TCC TGG AAT GAT CCC CTG ATC 288 Leu Asn Leu Ile Leu Gly Val Leu Arg Ser Trp Asn Asp Pro Leu Ile 85 90 95 CAT CTG GCC TCT GAA GTG CAA AGA ATC AAA GAA GCT CCA GAT ACC ATC 336 His Leu Ala Ser Glu Val Gln Arg Ile Lys Glu Ala Pro Asp Thr Ile 100 105 110 CTC TGG AAG GCT GTA GAG ATT GAG GAG CAA AAC AAG AGG CTT TTA GAA 384 Leu Trp Lys Ala Val Glu Ile Glu Glu Gln Asn Lys Arg Leu Leu Glu 115 120 125 GGA ATG GAG AAA ATC GTT GGG CGG ATT CAT TCT GGC GAT GCT GGA AAT 432 Gly Met Glu Lys Ile Val Gly Arg Ile His Ser Gly Asp Ala Gly Asn 130 135 140 GAA GTT TTC TCT CAG TGG GAC GGC CTT CCA TCC CTG CAA CTC GCT GAT 480 Glu Val Phe Ser Gln Trp Asp Gly Leu Pro Ser Leu Gln Leu Ala Asp 145 150 155 160 GAG GAC TCC AGA CTC TTT GCT TTT TAC AAC CTG CTG CAT TGC CTC CGC 528 Glu Asp Ser Arg Leu Phe Ala Phe Tyr Asn Leu Leu His Cys Leu Arg 165 170 175 AGA GAT TCC CAC AAA ATC GAC AAC TAT CTT AAA GTT TTG AAG TGC CGC 576 Arg Asp Ser His Lys Ile Asp Asn Tyr Leu Lys Val Leu Lys Cys Arg 180 185 190 CTA ATC CAT GAT AAC AAT TGC TAA 600 Leu Ile His Asp Asn Asn Cys * 195 199 SEO ID NO:2 CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE A) LONGUEUR : 1281 nucléotides et 426 acides aminés B) TYPE : acide nucléique et protéine correspondante C) NOMBRE DE BRIN : simple D) CONFIGURATION: linéaire CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE A) NOM/CLE : protéine de fusion GST-tPRL CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE A) NOM/CLE : GST B) EMPLACEMENT - du nucléotide : 1 - au nucléotide : 682 B) EMPLACEMENT - de l'acide aminé : 1 - à l'acide aminé : 227 CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE : A) NOM/CLE : tPRL B) EMPLACEMENT - du nucléotide : 683 - au nucléotide . 181 B) EMPLACEMENT - de l'acide aminé : 228 - à l'acide aminé 426 DESCRIPTION DE SEQUENCE ATG TCC CCT ATA CTA GGT TAT TGG AAA ATT AAG GGC CTT GTG CAA CCC 48 Met Ser Pro Ile Leu Gly Tyr Trp Lys Ile Lys Gly Leu Val Gln Pro 1 5 10 15 ACT CGA CTT CTT TTG GAA TAT CTT GAA GAA AAA TAT GAA GAG CAT TTG 96 Thr Arg Leu Leu Leu Glu Tyr Leu Glu Glu Lys Tyr Glu Glu His Leu 20 25 30 TAT GAG CGC GAT GAA GGT GAT AAA TGG CGA AAC AAA AAG TTT GAA TTG 144 Tyr Glu Arg Asp Glu Gly Asp Lys Trp Arg Asn Lys Lys Phe Glu Leu 35 40 45 GGT TTG GAG TTT CCC AAT CTT CCT TAT TAT ATT GAT GGT GAT GTT AAA 192 Gly Leu Glu Phe Pro Asn Leu Pro Tyr Tyr Ile Asp Gly Asp Val Lys 50 55 60 TTA AGA CAG TCT ATG GCC ATC ATA CGT TAT ATA GCT GAC AAG CAC AAC 240 Leu Thr Gln Ser Met Ala Ile Ile Arg Tyr Ile Ala Asp Lys His Asn 65 70 75 80 ATG TTG GGT GGT TGT CCA AAA GAG CGT GCA GAG ATT TCA ATG CTT GAA 288 Met Leu Gly Gly Cys Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ile Ser Met Leu Glu 85 90 95 GGA GCG GTT TTG GAT ATT AGA TAC GGT GTT TCG AGA ATT GCA TAT AGT 336 Gly Ala Val Leu Asp Ile Arg Tyr Gly Val Ser Arg Ile Ala Tyr Ser 100 105 110 AAA GAC TTT GAA ACT CTC AAA GTT GAT TTT CTT AGC AAG CTA CCT GAA 384 Lys Asp Phe Glu Thr Leu Lys Val Asp Phe Leu Ser Lys Leu Pro Glu 115 120 125 ATG CTG AAA ATG TTC GAA GAT CGT TTA TGT CAT AAA ACA TAT TTA AAT 432 Met Leu Lys Met Phe Glu Asp Arg Leu Cys His Lys Thr Tyr Leu Asn 130 135 140 GGT GAT CAT GTA ACC CAT CCT GAC TTC ATG TTG TAT GAC GCT CTT GAT 480 Gly Asp His Val Thr His Pro Asp Phe Met Leu Tyr Asp Ala Leu Asp 145 150 155 160 GTT GTT TTA TAC ATG GAC CCA ATG TGC CTG GAT GCG TTC CCA AAA TTA 528 Val Val Leu Tyr Met Asp Pro Met Cys Leu Asp Ala Phe Pro Lys Leu 165 170 175 GTT TGT TTT AAA AAA CGT ATT GAA GCT ATC CCA CAA ATT GAT AAG TAC 576 Val Cys Phe Lys Lys Arg Ile Glu Ala Ile Pro Gln Ile Asp Lys Tyr 180 185 190 TTG AAA TCC AGC AAG TAT ATA GCA TGG CCT TTG CAG GGC TGG CAA GCC 624 Leu Lys Ser Ser Lys Tyr Ile Ala Trp Pro Leu Gln Gly Trp Gln Ala 195 200 205 ACG TTT GGT GGT GGC GAC CAT CCT CCA AAA TCG GAT CTG GTT CCG CGT 672 Thr Phe Gly Gly Gly Asp His Pro Pro Lys Ser Asp Leu Val Pro Arg 210 215 220 GGA TCC TCC TTG CCA ATC TGC TCC AGT GGA TCT GTC AAC TGC CAA GTT 720 Gly Ser Ser Leu Pro Ile Cys Ser Ser Gly Ser Val Asn Cys Gln Val 225 230 235 240 TCC CTT GGG GAG CTT TTT GAT CGG GCA GTT AGA CTT TCA CAC TAC ATA 768 Ser Leu Gly Glu Leu Phe Asp Arg Ala Val Arg Leu Ser His Tyr Ile 245 250 255 CAC TTC CTC TCT TCA GAA ATT TTC AAT GAA TTT GAT GAA CGC TAT GCT 816 His Phe Leu Ser Ser Glu Ile Phe Asn Glu Phe Asp Glu Arg Tyr Ala 260 265 270 CAG GGT CGG GGT TTC ATT ACA AAA GCT GTT AAT GGC TGC CAC ACT TCC 864 Gln Gly Arg Gly Phe Ile Thr Lys Ala Val Asn Gly Cys His Thr Ser 275 280 285 TCC TTA ACC ACT CCT GAA GAT AAG GAG CAA ACT CAG CAG ATT CAT CAC 912 Ser Leu Thr Thr Pro Glu Asp Lys Glu Gln Thr Gln Gln Ile His His 290 295 300 GAA GAG CTA CTG AAT TTG ATA CTG GGA GTG CTG CGT TCC TGG AAT GAT 960 Glu Glu Leu Leu Asn Leu Ile Leu Gly Val Leu Arg Ser Trp Asn Asp 305 310 315 320 CCC CTG ATC CAT CTG GCC TCT GAA GTG CAA AGA ATC AAA GAA GCT CCA 1008 Pro Leu Ile His Leu Ala Ser Glu Val Gln Arg Ile Lys Glu Ala Pro 325 330 335 GAT ACC ATC CTC TGG AAG GCT GTA GAG ATT GAG GAG CAA AAC AAG AGG 1056 Asp Thr Ile Leu Trp Lys Ala Val Glu Ile Glu Glu Gln Asn Lys Arg 340 345 350 CTT TTA GAA GGA ATG GAG AAA ATC GTT GGG CGG ATT CAT TCT GGC GAT 1104 Leu Leu Glu Gly Met Glu Lys Ile Val Gly Arg Ile His Ser Gly Asp 355 360 365 GCT GGA AAT GAA GTT TTC TCT CAG TGG GAC GGC CTT CCA TCC CTG CAA 1152 Ala Gly Asn Glu Val Phe Ser Gln Trp Asp Gly Leu Pro Ser Leu Gln 370 375 380 CTC GCT GAT GAG GAC TCC AGA CTC TTT GCT TTT TAC AAC CTG CTG CAT 1200 Leu Ala Asp Glu Asp Ser Arg Leu Phe Ala Phe Tyr Asn Leu Leu His 385 390 395 400 TGC CTC CGC AGA GAT TCC CAC AAA ATC GAC AAC TAT CTT AAA GTT TTG 1248 Cys Leu Arg Arg Asp Ser His Lys Ile Asp Asn Tyr Leu Lys Val Leu 405 410 415 AAG TGC CGC CTA ATC CAT GAT AAC AAT TGC TAA 1281 Lys Cys Arg Leu Ile His Asp Asn Asn Cys * 420 426 REVENDICATIONS 1) Composition pharmaceutique destinée à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux et plus particulièrement chez la dinde, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif, soit une molécule hybride constituée d'un groupe porteur et d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine, soit un microorganisme exprimant à sa surface ou excrétant ladite molécule hybride, soit des anticorps dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine. 2) Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif, soit une molécule hybride constituée d'un groupe porteur et d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine de dinde dont la séquence en acides aminés est représentée dans la SEQ ID NO:1 de la liste de séquence en annexe, soit un micro-organisme exprimant à sa surface ou excrétant ladite molécule hybride. 3) Composition pharmaceutique selon la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif une molécule hybride constituée de de la protéine de fusion GST-tPRL dont la séquence en acides aminés est représentée dans la SEQ ID NO:2 de la liste de séquence en annexe, ou une forme modifiée ou une partie de celle-ci, ou un micro-organisme exprimant à sa surface ou excrétant ladite protéine de fusion GSTtPRL 4) Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif des anticorps dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine de dinde dont la séquence en acides aminés est représentée dans la SEQ ID NO:1 de la liste de séquence en annexe. 5) Composition pharmaceutique selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif des anticorps hétérologues dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine de dinde. 6) Composition pharmaceutique selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif des anticorps homologues dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine de dinde. 7) Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce l'agent actif est associé à un véhicule phamaceutiquement acceptable. 8) Composition pharmaceutique selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle est constituée de jaune d'oeuf d'un oiseau immunisé avec une molécule hybride constituée d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et d'un groupe porteur. 9) Procédé de préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux et plus particulièrement chez la dinde, comportant à titre d'agent actif une molécule hybride constituée d'un groupe porteur et d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine, selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ladite molécule hybride est produite par expression d'un acide nucléique recombinant codant pour une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et un groupe porteur, dans un hôte. 10) Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'acide nucléique recombinant code pour une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et pour la GST. 11) Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que l'acide nucléique recombinant est préparé par introduction d'un ADN codant pour une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine, à l'aide d'enzymes de restriction appropriés, dans un plasmide portant le gène codant la GST sous le contrôle d'un promoteur adéquat, et en ce que ledit vecteur est utilisé pour transformer des bactéries E. coli et leur faire exprimer la protéine de fusion constituée de la protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et de la GST. 12) Procédé de préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux et plus particulièrement chez la dinde, comportant à titre d'agent actif au moins une molécule hybride constituée d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et d'un groupe porteur, selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ladite molécule hybride est produite par couplage chimique d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine avec un groupe porteur. 13) Procédé de préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir et/ou à traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux et plus particulièrement chez la dinde, comportant à titre d'agent actif un micro-organisme capable d'exprimer à sa surface ou d'excréter une molécule hybride constituée d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et d'un groupe porteur, selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que ledit micro-organisme est produit par une manipulation génétique consistant à transformer un micro-organisme choisi parmi les bactéries et les virus connus pour leur capacité à infecter les oiseaux ceux, avec un acide nucléique recombinant codant pour une molécule hybride constituée d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et d'un groupe porteur, lequel est choisi de façon à permettre l'expression de la molécule hybride à la surface du micro-organisme ainsi transformé, ou encore de façon à permettre la sécrétion de la molécule hybride hors du micro-organisme ainsi transformé. 14) Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce quelle se présente sous forme administrable par injection et en ce que le véhicule pharmaceutiquement acceptable, si il est présent, est aqueux. 15) Utilisation d'un agent actif comprenant soit une molécule hybride constituée d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine et d'un groupe porteur, soit un microorganisme exprimant à sa surface ou excrétant ladite molécule hybride, soit des anticorps dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir et/ou traiter l'expression du comportement de couvaison chez les oiseaux et plus particulièrement chez la dinde. 16) Utilisation selon la revendication 15, caractérisé en ce que ladite molécule hybride est constituée d'un groupe porteur et d'une protéine comprenant au moins un déterminant antigénique de la prolactine de dinde dont la séquence en acides aminés est représentée dans la SEQ ID NO:1 de la liste de séquence en annexe. 17) Utilisation selon la revendication 15, caractérisée en ce que ladite molécule hybride est constituée de la protéine de fusion GST-tPRL dont la séquence en acides aminés est représentée dans la SEQ ID NO:2 de la liste de séquence en annexe, ou une forme modifiée ou une partie de celle-ci. 18) Utilisation selon la revendication 15, caractérisée en ce que lesdits anticorps sont dirigés contre au moins un site antigénique de la prolactine de dinde dont la séquence en acides aminés est représentée dans la SEQ ID NO:1 de la liste de séquence en annexe. 19) Utilisation selon la revendications 18, caractérisée lesdits anticorps sont de type hétérologues ou homologues.