Brevet FR2714183A1 — publié le 19950623

La présente invention a essentiellement pour objet un dispositif d'élévation du niveau d'un liquide, dans un alvéole, puits ou analogue. Elle vise également une plaque à puits multiples pour la culture de cellules, la microtitration ou autre usage, équipée de ce dispositif. On utilise fréquemment en biologie, en particulier en biologie cellulaire, des plaques à alvéoles ou puits multiples destinés à contenir une ou des substances à analyser. Mais lorsqu'on veut mesurer la densité optique d'une substance en solution dans un liquide et contenue dans un puits, par exemple selon la méthode décrite par F. BURMEISTER et al., dans "Preprints of the XIVth IFSCC Congress, Barcelone, 1986, vol. I, il faut que la hauteur du liquide soit assez grande pour permettre une mesure de densité optique qui soit suffisamment précise, et donc fiable. En effet, la densité optique qui se mesure en éclairant un échantillon transparent ou translucide par un faisceau lumineux généralement monochromatique, est fonction de la longueur du trajet optique du faisceau lumineux, de la concentration de la substance dans la solution à mesurer et du coefficient d'absorption de la lumière propre à la substance, comme établi par la formule suivante Do = s C lo dans laquelle - Do est la densité optique. - E est le coefficient d'extinction molaire, dont la valeur dépend de la longueur d'onde de la lumière utilisée et de la nature de la substance dissoute. - C est la concentration de la substance dans la solution, et - 1, est la longueur du trajet optique dans l'échantillon de solution. Or, bien souvent, on se trouve en face d'échantillons de très faible volume et dont la hauteur dans le puits et par conséquent le trajet optique, est très petite, ce qui constribue à une imprécision notable de la mesure de densité optique. Cette imprécision devient encore beaucoup plus importante, donc beaucoup plus gênante dans le cas où la valeur du coéfficient d'extinction molaire de l'échantillon analysé est faible. Par ailleurs, l'augmentation de la hauteur de l'échantillon dans le puits par apport de liquide supplémentaire, ne constitue pas une solution au problème de l'amélioration de la précision des mesures, car cet apport a pour effet de diminuer la concentration de la substance du fait de la dilution réalisée. La présente invention a pour objet de résoudre les problèmes ci-dessus. A cet effet, elle a pour objet un dispositif d'élévation du niveau d'un liquide contenant une substance dissoute, dans un alvéole, puits ou analogue, caractérisé par un manchon à paroi d'épaisseur variable et ouvert à ses deux extrémités, qui est insérable dans ledit alvéole ou puits. Suivant une autre caractéristique de ce dispositif, le manchon est solidaire d'un élément comportant une pluralité de tels manchons. Cet élément peut être une barrette ou une platine. Il peut comporter des lignes d'entaillage entre les manchons pour permettre leur séparation de façon à n'utiliser qu'une partie de l'ensemble des manchons. L'invention vise encore une plaque à alvéoles ou puits multiples permettant par exemple la culture de cellules ou la microtitration d'échantillons, caractérisée en ce qu'elle est munie d'un dispositif répondant aux caractéristiques précédentes. Cette plaque peut être recouverte par une platine comportant sur une face autant de manchons que de puits dans la plaque. L'invention vise également l'utilisation du dispositif ou de la plaque ci-dessus pour la mesure de la densité optique d'une substance dissoute dans ce liquide. Elle vise plus particulièrement l'utilisation de ce dispositif pour le dosage de substances contenues dans un milieu de culture cellulaire, ces substances ayant été par exemple produites par des cellules en culture, ou bien ayant été libérées dans le milieu après solubilisation de cellules, celles-ci ayant éventuellement reçu un marquage immunologique. Mais d'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux dans la description détaillée qui suit et se réfère aux dessins annexés, donnés uniquement à titre d'exemple, et dans lesquels - la figure 1 est une vue en perspective d'un manchon inséré dans un puits - la figure 2 est une vue en perspective d'une barrette munie de tels manchons - la figure 3 est une vue en perspective similaire à la figure 2 mais montrant des manchons individuellement séparables de la barrette - la figure 4 est une vue en coupe de la barrette de la figure 2, passant par l'axe des manchons, et illustrée en position montée sur une rangée de puits ; et - la figure 5 est une vue en perspective partielle d'une plaque à puits multiples prête à recevoir une platine comportant sur une face des manchons suivant l'invention. En se reportant tout particulièrement à la figure 1, on voit qu'un dispositif selon l'invention est, d'une manière générale, constitué par un manchon 1 insérable dans un alvéole ou puits 2 ménagé dans un élément 3 et pouvant contenir un liquide dans lequel est dissoute une substance quelconque. Le manchon 1 est ouvert à ses deux extrémités pour permettre le passage du faisceau lumineux, et sa paroi 4 peut avoir une épaisseur variable, ce qui caractérise le calibre du manchon 1. Ainsi, comme on le comprend aisément, le manchon 1, une fois introduit dans le puits 2, réduira le volume de ce puits en fonction de l'épaisseur de la paroi 4 et permettra par conséquent la remontée du liquide dans le puits 2 de la hauteur désirée en fonction du calibre utilise. Le manchon 1, de même que l'élément 3 peuvent être en une matière quelconque telle que par exemple une matière plastique transparente à usage unique ou réutilisable d'une mesure à une autre après nettoyage. Ainsi, un faisceau lumineux traversant le puits et le liquide qu'il contient, de préférence selon une direction sensiblement parallèle à l'axe du puits qui est généralement sensiblement cylindrique, permettra une mesure de la densité optique de la substance dissoute dans le liquide dont la hauteur dans le puits sera suffisamment importante pour procurer la sensibilité, la précision et l'efficacité voulues de la mesure. Comme on le voit sur les figures 2 et 3, le manchon 1 peut être solidaire d'un support 5 comportant une pluralité de tels manchons faisant saillie d'un côté dudit support. Comme on le voit sur la figure 2, le support 5 peut être constitué par une barrette portant une pluralité de manchons 1 dont l'espacement correspondra à l'espacement entre les puits 2 d'une ligne de puits ménagée dans l'élément 3. Le support en forme de barrette 5 peut comporter des lignes d'entaillage 6 entre les manchons 1, ce qui permet aisément de les séparer les uns des autres pour les insérer dans tel ou tel puits ménagé dans l'élément 3. On a montré sur la figure 4, un ensemble linéaire de manchons 1 appartenant à une barrette 5, comme montré sur la figure 2, laquelle ligne de manchons est insérée dans les puits 2 d'espacement correspondant, ménagés dans l'élément 3. Les manchons 1 peuvent aussi être solidaires d'un support en forme de plaque ou de platine 7, comme on le voit bien sur la figure 5 où lesdits manchons 1 font saillie d'une même face de la platine 7. Cette platine 7 avec manchons associés pourra comporter autant de manchons 1 que d'alvéoles ou puits 2, prévus dans une plaque P à puits multiples permettant par exemple la culture de cellules, la microtitration d'échantillons, des opérations de dosage ou encore d'autres utilisations. Il va de soi que l'on peut utiliser des manchons 1 dans seulement certains puits 2 de la plaque P, par exemple à l'aide d'une barrette 5 avec manchons sécables ou insécables, comme on le voit sur les figures 2 et 3. Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée au mode de réalisation décrit et illustré qui n'a été donné qu'à titre d'exemple. C'est ainsi que la matière et l'épaisseur de paroi des manchons 1 peuvent être quelconques, de même que la position géométrique des manchons sur une platine, une barrette ou autre support quelconque. C'est dire que l'invention comprend tous les équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons si celles-ci sont effectuées suivant son esprit. REVENDICATIONS 1. Dispositif d'élévation du niveau d'un liquide contenant une substance dissoute, dans un alvéole, puits ou analogue (2), caractérisé par un manchon (1) à paroi (4) d'épaisseur variable et ouvert à ses deux extrémités, qui est insérable dans ledit alvéole ou puits (2). 2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que le manchon (1) est solidaire d'un support comportant une pluralité de tels manchons (1). 3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que le support précité est une barrette (5) ou une platine (7). 4. Dispositif selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en que le support précité comporte des lignes d'entaillage (6) entre les manchons (1) pour permettre leur séparation. 5. Plaque à alvéoles ou puits multiples (2) permettant par exemple la culture de cellules ou la microtitration d'échantillons, caractérisé en ce qu'elle est munie d'un dispositif selon l'une des revendications 1 à 4. 6. Plaque selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle est recouverte par une platine (7) comportant sur une face autant de manchons (1) que de puits (2) dans la plaque (P). 7. Utilisation du dispositif ou de la plaque selon l'une des revendications 1 à 6 pour la mesure de la densité optique d'une substance dissoute dans ce liquide. 8. Utilisation selon la revendication 7, pour le dosage de substances contenues dans un milieu de culture cellulaire.