Brevet FR2722410A1 — publié le 19960119

PROCEDE DE STABILISATION DES ACIDES GRAS POLY INSATURES ET UTILISATION DE CES PRODUITS STABILISES EN THERAPEUTIQUE La présente invention se rapporte au domaine de la chimie pharmaceutique et plus particulièrement à celui de la chimie thérapeutique. Elle a plus particulièrement pour objet, un procédé de stabilisation des acides gras poly-insaturés en vue d'une utilisation thérapeutique sûre et prolongée. L'intérêt pour les acides poly-insaturés, notamment l'acide a ou l'acide y-linolénique (vitamine F), a été en croissant depuis quelques années en raison de leur position particulière dans les diverses synthèses biologiques. C'est ainsi que les acides gras poly-insaturés de la série 18:3 et surtout de la série 20:3 ont pu être considérés comme des précurseurs et des intermédiaires clés pour la formation de prostaglandines PGE 1 à la suite d' une série de réactions enzymatiques dues à des désaturases spécifiques et à des élongases. En effet, les prostaglandines et tout particulièrement les PGE 1, jouent un rôle de médiateur important dans la régulation de la pression artérielle dans la motricité et la contractibilité musculaire lisse et dans la protection contre les ulcères gastriques. Les espoirs d'utilisation de ces acides ne se sont pas réalisés d'une part en raison de la faible assimilation de ces dérivés mais surtout par suite de la facile oxydation des acides gras poly-insaturés sous l'influence de la lumière, du péroxyde d'hydrogène et en particulier de l'oxygène atmosphérique. En conséquence, les acides gras poly-insaturés comme les acides linoléniques, I'acide stéaridonique, I'acide eicosa pentaenoique ou l'acide dihomo, y-linolénique ou ses analogues synthétiques s'oxydent, s'hydroxylent ou se péroxydent facilement, conduisant à des métabolites peu ou pas actifs que l'organisme rejette ou excrète. C'est particulièrement le cas pour I' acide dihomo{-linolénique (acide cis 8, cis 11, cis 14-eicosatriénoïque), ses analogues synthétiques et pour I' acide arachidonique (acide cis 5, cis 8, cis 11, cis 14) eicosatétraénoïque. II est donc apparu nécessaire en vue de l'utilisation therapeutique, de disposer d'un moyen qui empêche l'oxydation de ces acides gras poly-insaturés ou de leurs esters si l'on désire les maintenir intacts chimiquement et surtout si l'on tient à conserver la possibilité de les voir se métaboliser dans l'organisme en prostaglandines. En effet, les produts de décomposition hydroxylés ou oxydés sont inactifs parce qu'ils ne sont pas résorbés dans le tube digestif ou parce qu'ils ne peuvent plus être transformés par les systèmes enzymatiques en acides gras homologues supérieurs. II importait donc de trouver un mode de stabilisation des acides gras poly-insaturés ou de leurs esters, qui leur permette de se conserver sans auto-oxydation et de pouvoir, ainsi, jouer un rôle de pro-drogue des prostaglandines. On sait que l'acide y-linolénique ou l'acide a-linolénique se transforment rapidement sous l'influence de désaturases spécifiques et d'élongases en acide dihomo y-linolénique, en acide stéaridonique puis en prostaglandines PGE dont les effets bénéfiques sur la cyto protection gastrique est reconnue. C'est cette transformation enzymatique qu'il est important de conserver intégralement. Cette stabilisation a pu être réalisée selon le procédé de l'invention en ce que l'on dissout l'acide gras poly-insaturé ou un de ses esters d'alcoyle inférieur dans un solvant organique, de préférence non hydroxylé puis que l'on l'ajoute cette solution à de I'(hydroxypropylméthyl) cellulose ou à une solution d'hydroxypropylméthyl cellulose dans un solvant inerte, puis on évapore, à sec, en atmosphère de gaz protecteur la solution ou la dispersion ainsi réalisée. L'acide gras insaturé se trouve ainsi inclus dans l'hydroxypropylméthyl cellulose et la poudre ainsi réalisée présente une grande stabilité à l'oxygène de l'air ainsi qu'à la lumière. Cette formulation est stable à température ambiante. Cette poudre peut être ensuite diluée par un véhicule ou un excipient inerte en vue de la réalisation d'une forme pharmaceutique telle que gélules, comprimés, dragées ou pilules. Le rapport pondéral acide gras insaturélhydroxypropylméthyl cellulose peut varier dans de larges proportions comme, par exemple, entre 0,1% et 10% mais de préférence entre 0,1% et 1%. La poudre peut contenir un acide gras poly-insaturé, mais elle pourra aussi contenir tout aussi avantageusement un ester d'alcoyle inférieur comme un ester de méthyle, d'éthyle, de propyle ou de glycéryle (mono, di ou triglycerides). Les essais effectués ont confirmé que la dispersion d'acide gras insaturé dans l'hydroxypropylméthyl cellulose présentait une stabilité de longue durée et, de ce fait, un des obstacles essentiels à l'utilisation thérapeutique de cet acide gras polyinsaturé se trouvait ainsi éliminé. Ceci paraît inattendu dans la mesure où d' autres dérivés de la cellulose comme la methylcellulose et l'ethylcellulose ne conduisent qu'à des protections partielles. L'invention trouve une utilisation particulière et avantageuse dans la stabilisation des analogues semi-synthétiques ou synthétiques de l'acide dihomo y-linolénique (acide cis 8, cis 11, cis 14 eicosa triénoique) décrits dans les publications D.A Van Dorp Rec. Trav. Chim. 94 (1975) 247-276 et L. HELINGA et al. J. of the Royal Netherlands Chemical Society 94 (1975) 26-29. Ces analogues substitués en position 2, 3, 4, 5, 18 ou 19 étaient difficiles à conserver et, de ce fait, leur étude pharmacologique n'avait pas encore pu être réalisée complètement en raison de leur facile oxydabilité. II semble bien que l'interposition de l'hydroxypropylméthyl cellulose entre les particules d'acide gras poly-insaturé ou de leurs esters, amène une disparition rapide et pratiquement complète de la capacité d'oxydation. Ainsi, il est possible de rétablir lors de l'administration d'anti-inflammatoires non stéroïdiens, la synthèse de prostaglandines à partir de précurseurs naturels ou synthétiques, en utilisant une autre voie de métabolisme que celle des prostaglandine oxydases ou synthétases. L'invention a également pour objet, la réalisation de nouvelles compositions pharmaceutiques contenant un acide gras poly-insaturé, incorporé à un polymère glycosidique, en particulier en association ou en mélange avec un excipient ou un véhicule inerte. Elle a en particulier pour objet de nouvelles compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles renferment un acide gras poly-insaturé ou un ester d'alcoyle de celui-ci, absorbé sur de I'(hydroxy propylmétyl) cellulose, en association ou en mélange avec un excipient ou un véhicule inerte, non toxique, pharmaceutiquement acceptable. Les préparations obtenues selon le procédé de l'invention conviennent donc pour empêcher certains effets nocifs résultant de la suppression de la synthèse de prostaglandines, ou pour traiter ou prévenir notamment les effets ulcérogènes des agents anti-inflammatoires. La posologie est du même ordre que celle des prostaglandines semi-synthétiques comme le Misoprostol mais, sans doute, en liaison avec la formation progressive ou limitée de PGE avec des effets secondaires bien plus atténués comme, par exemple, la survenue sensiblement plus faible de diarrhées. Les agents anti-inflammatoires administés sont soit des dérivés de l'acide salicylique tels que l'Aspirine, les amides de l'acide o.acétoxy benzoïque, soit des dérivés de l'acide anthranilique comme l'acide Niflumique ou ses esters, l'acide Tolfénamique, I'acide Méfénamique ou l'acide Flufénamique ou bien leurs esters, les acides indolyl acétiques comme l'lndométhacine, la sermétacine ou l'acémétacine; les acides phényl propioniques comme le Ketoprofène, le Pirprofène ou le Diclofénac ou bien encore les pyrazolones, comme la phénylbutazone ou I'oxyphénylbutazone, et les oxicams. C'est ainsi que l'administration simultanée de la combinaison selon l'invention, associée à de l'aspirine, du diclofénac ou du piroxicam, diminue notablement les effets secondaires chez les patients qui restent sous traitement par un antiinflammatoire non stéroïdien. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter: EXEMPLE I Dispersion à 10/oo d'acide dihomo y-linolénique Acide dihomo y-linolénique . 1 g Hydroxypropylméthyl cellulose 99 g L'acide dihomo y-linolénique est dissout dans 10 ml d'acétone à 0 sous atmosphère d'azote. La solution ainsi réalisée est mélangée progressivement à l'hydroxypropylméthyl cellulose tout en maintenant le flux d'azote. La pâte formée est recueillie et séchée sous vide à la température la plus basse possible. La poudre est recueillie puis mélangée à du lactose et du talc pour former 1000 comprimés renfermant 1 mg d'acide dihomo-linolénique. EXEMPLE Il Dispersion à 2% d'acide dihomo y-linolénique Acide dihomo y-linolénique . . 2 g Hydroxypropylméthyl cellulose 100 g Amidon de blé 125g Lactose 25g Stéarate de magnésium 5 g pour 1000 comprimés achevés au poids moyen de 0,255 g et renfermant 2 mg d'acide dihomot-linolénique par comprimé. L'acide dihomo y-linolénique est dissout dans 25 ml d'acétonitrile fraîchement redistillé sur anti-oxydant et déshydraté par séchage sur sulfate de magnésium, préalablement dégazé par barbottage d'azote. La solution organique ainsi obtenue est filtrée sous azote, ajoutée progressivement à l'hydroxypropylméthyl cellulose, séchée sous vide puis tamisée pour obtenir une poudre homogène. Le mélange ainsi formé est ajouté à son tour à l'amidon de blé. On y ajoute, ensuite, le lactose et finalement le stéarate de magnésium. Le mélange final est granulé, broyé puis tamisé au tamis 200. La poudre fine ainsi recueillie est compressée pour former des comprimés d'un poids moyen de 0,255 g. Les dispersions d'acide dihomo y-linolénique, préparés selon les exemples I et Il, se conservent pleinement. La perte après 2 ans de conservation à température ordinaire, est inférieure à 0,4%. On ne trouve pas trace de dérivé hydroxylé ou cétonique se trouvant normalement dans le produit d'aboutissement. La posologie unitaire s'échelonne entre 0,2 mg et 1 mg d'acide dihomo y-linolénique par prise d'essai. La posologie journalière chez l'homme s'échelonne entre 0,4 mg et 4 mg d'acide dihomo y-linolénique divisé ou réparti dans l'hydroxypropylméthyl cellulose. EXEMPLE III PREPARATION D'UN ADSORBAT D'ESTER METHYLIQUE D'ACIDE r LINOLENIQUE SUR DE L'HYDROXY PROPYLMETHYL CELLULOSE Introduction L'objectif est d'obtenir une dispersion à 1% (m/m) d'ester méthylique d'acide ylinolénique (abrégé en GLA) dans l'hydroxypropylméthyl cellulose (HPMC). Produits Le GLA a été conservé au réfrigérateur. Un spectre RMN à 400 MHz du proton confirme que le produit n'a subit aucune altération durant son transport. L'HPMC utilisée est le Méthocel E3Prem. (Dow Chemical). Mode opératoire On prélève, à l'aide d'une seringue, 0,05 g de GLA que l'on place dans un ballon rodé à fond rond. Le liquide est dilué à l'aide de 2 g d'acétone pour analyse, puis 5 g d'HPMC sont dispersés manuellement dans la solution. Le tout est mélangé 10 mn au Rotavapor, sous azote. On établit le vide et l'évaporation dure environ 10 mn (absence d'odeur d'acétone). Le produit récupéré est légèrement broyé dans un mortier, sous azote, afin d'éliminer les agglomérats. Finalement, la poudre (3,5 g) est mise sous azote dans un flacon à pénicilline et conservée à l'abri de la lumière au réfrigérateur. Les différents essais effectués sont tout à fait semblables (le lot récent est même plus pur), et confirment la structure du composé et sa stabilité. Les spectres RMN ciannexés montrent que les produits n'ont subi aucune altération au cours du temps. La figure 1 est le spectre du produit stabilisé, déterminé au moment de la préparation et la figure 2 est le spectre RMN du produit au bout de six semaines de conservation au réfrigérateur. Viellissement du produit initial La stabilité est étudiée sous forme initiale à température ambiante et sous agitation magnétique. On analyse le produit après dilution, dans l'acétone (1 à 2 mg dans 1 ml acétone), et on fait une détermination du produit par CPG. Les figures 3 et 4 fournissent les spectres RMN des produits séparés au moment de la prépration et après conservation. Les spectres sont identiques. REVENDICATIONS 1. Un procédé de stabilisation des acides gras poly-insaturés ou d'un de leurs esters d'alcoyle caractérisé en ce que l'on dissout l'acide gras poly-insaturé ou un de ses esters d'alcoyle inférieur dans un solvant organique, on ajoute cette solution à de l'hydroxypropylméthyl cellulose ou à une solution de celle-ci dans un solvant inerte, puis on évapore à sec, sous atmosphère de gaz protecteur, la solution ou la dispersion ainsi réalisée pour former une préparation pulvérulente. 2. Un procédé selon la revendication 1" dans lequel le solvant organique est un solvant non hydroxylé. 3. Un procédé selon la revendication 1" dans lequel le solvant organique non hydroxylé est l'acétonitrile ou I' acétone. 4. Nouvelles compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles renferment un acide gras poly-insaturé ou un de ses esters d'alcoyle inférieur adsorbé sur de l'hydroxypropylméthyl cellulose, associé ou mélangé à un excipient ou à un véhicule inerte, non-toxique, pharmaceutiquement-acceptable. 5. Une composition pharmaceutique selon la revendication 4" dans laquelle le rapport pondéral acide gras poly-insaturé/hydroxypropylméthyl cellulose varie entre 0,1 et 10%. 6. Une composition pharmaceutique selon la revendication 4" ou la revendication 5 dans laquelle la posologie unitaire s'échelonne entre 0,2 mg et 1 mg d'acide gras poly-insaturé. 7. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 6" dans laquelle l'acide gras poly-insaturé est l'acide stéaridonique. 8. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 6" dans laquelle l'acide gras poly-insaturé est l'acide a-linolénique. 9. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 6" dans laquelle l'acide gras poly-insaturé est l'acide dihomo y-linolénique. 10.Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 6 dans laquelle l'acide gras poly-insaturé est un analogue semi-synthétique ou synthétique de l'acide dihomo y-linolenique substitué en position 2,3,4,5,18 ou 19. 11.1Jne composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 100 dans laquelle l'ester d'alcoyle inférieur d'acide gras poly-insaturé est un glycéride d'acide gras. 12. Procédé de réalisation de compositions pharmaceutiques selon l'une des revendications 4 à 11" dans lequel la préparation pulvérulente d'acide gras poly insaturé ou d'un de ses esters d'alcoyle inférieur obtenue selon le procédé de la revendication 1", est diluée ou mélangée à un excipient ou un véhicule inerte, non-toxique, pharmaceutiquement-acceptable.