Brevet FR2721611A1 — publié le 19951229

- 1 - 2721611 La présente invention concerne des dérivés peptidiques d'acide boronique, leur procédé de préparation, les compositions pharmaceutiques qui les contiennent ainsi que leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de trypsine-like serine proteases. L'une de ces serine proteases, la thrombine, est l'enzyme clé de la coagulation et joue un rôle central dans la pathologie des thromboses veineuses et artérielles comme l'ont montré F. Toti et coll. (Sang, Thrombose, Vaisseaux, 4, 483-494, 1992) et T.M. REILLY et coll. (Blood Coagulation and Fibrinolysis, 3,513-517, 1992). Les approches anti-thrombotiques sont plus efficaces et sans risque par rapport aux traitements actuels. Des inhibiteurs directs de la thrombine, actuellement en développement o10 clinique, présentent toute une série d'avantages sur l'héparine. Mais ces substances, l'hirudine et l'hirulog- 1 ont le désavantage de ne pas être actives par voie orale. D'autre part, il est connu que des peptides contenant la séquence (D)PhePro-Arg sont des inhibiteurs du site catalytique de la thrombine (C. KETTNER et coll., J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990). Des dérivés peptidiques de l'acide boronique, présentant une activité anti-thrombotique, ont déjà été décrits dans la littérature. C'est le cas plus particulièrement des composés décrits dans les brevets EP 293881 et EP 471651. M.A. HUSSAIN et coll. ont d'ailleurs démontré que l'acide Ac-(D)Phe-Pro-Arg boronique (DUP 714) est un inhibiteur de la thrombine (Peptides, 12, 1153-1154, 1991). Il était donc particulièrement intéressant de synthétiser de nouveaux inhibiteurs de serine proteases afin d'augmenter la puissance, la selectivité ainsi que l'activité par voie orale des composés déjà décrits dans la littérature. Plus spécifiquement, la présente invention concerne les composés de formule (I) OR4 RiNH--C--CO-A-CO--NH-CH-CB. (I) R, R', R3 dans laquelle: R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement acyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle, phénoxycarbonyle, 5-[(diméthyl)amino]naphtylsulfonyl, alkoxycarbonylméthyle ou carboxyméthyle, - 2 - 2721611 R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupement: - phényle, - benzyle (substitué ou non sur le noyau phényle par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupements alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, alkoxy (C1-C6) linéaire ou ramifié, hydroxy, amino, nitro ou carboxy), thiénylméthyle, - (pyridinyl)méthyle, - diphénylméthyle, - fluorényle, naphtylméthyle, - benzocyclobutyle, - (dicyclopropylméthyl)méthyle, indanyle, - ou, cycloalkyl (C3-C7) méthyle, R'2 représente un atome d'hydrogène ou un groupement benzyle ou bien R2 et R'2 représentent ensemble C6Hs-CH=, R3 représente un groupement: HN. /C - S - (CH2)m - RHN dans lequel: m représente 2, 3 ou 4, R représente un atome d'hydrogène, un groupement alkyle (C 1-C6) linéaire ou ramifié, amrnino ou nitro, R4 et R5 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, OR4 ou B forme un ester boronique de pinanediol, OR5 A représente l'un quelconque des groupements suivants: -N*-- H- dans lequel: A1 A1 représente avec les atomes d'azote et de carbone avec lesquels il est lié une structure cyclique choisie parmi les structures suivantes - perhydroindole, - 2-azabicyclo[2.2.2]octane, -3- 2721611 - 2-azabicyclo[3.3.0]octane, - 2-azabicyclo[2.2. l]heptane, perhydroisoindole, - indoline, - isoindoline, - perhydroquinoléine, perhydroisoquinoléine, - 1,2,3,4- tétrahydroquinoléine, 1,2,3,4-tétrahydroisoquinoléine, - thiazolidine éventuellement substituée par un ou plusieurs groupements alkyl (C 1-C6) linéaire ou ramifié, * -N-(CH2)- dans lequel: 1 2 A, n représente 1 ou 2. A2 représente un groupement alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, phényle, indanyle, cycloalkyle (C3-C7) (substitué ou non par un ou plusieurs groupements méthyle) cycloalkényle (C3-C7), bicyclo[2.l. 1]hexyl, bicyclo[2.2.1]heptyl ou un groupement: '"5' x Y dans lequel X et Y différents représentent un atome d'oxygène, de soufre, un groupement NH ou CH2, ou, -H leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. L'invention concerne également le procédé de préparation des dérivés de formule (I) caractérisé en ce que l'on fait réagir un amino-acide protégé de formule (II), dont on a éventuellement séparé les isomères par une technique classique de séparation R'l - NH- C- CO,H (I) R, R', dans laquelle: R'1 représente un groupement acyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (Ci1-C6) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle ou phénoxycarbonyle, -4- 2721611 R2 et R'2 ont la même signification que dans la formule (I), que l'on fait réagir selon la technique de couplage peptidique décrite par W. KONIG et R. GEIGER (Ber., 103, 788, 1970), avec un deuxième amino-acide protégé de formule (III) dont on a éventuellement séparé les isomères selon une technique classique de séparation, HA - CO,2CH2C6H5 (IIIm) dans laquelle A a la même signification que dans la formule (I), pour conduire au composé de formule (IV): R' -NH - C - CO - A - COCH2C6H5 (IV) R, R', dans laquelle R'1, R2, R'2 et A ont la même signification que précédemment, dont on déprotège la fonction acide par hydrogénation catalytique ou saponification, pour conduire au composé de formule (V): R', -NH-C-CO-A-CO,H (V) R2 R', dans laquelle R' l, R2, R'2 et A ont la même signification que précédemment, que l'on met en réaction avec du N- hydroxysuccinirmide en présence de 1,3-dicyclohexylcarbodiimide en milieu anhydre, pour conduire au composé de formule (VI): R' -NH - C - CO-A-CO,Suc (Vi) R, R', dans laquelle R'l, R2, R'2 et A ont la même signification que précédemment et Suc représente un radical succinimido, que l'on met en réaction en milieu basique avec un composé de formule (VII): O - R'4 H,N - C - B (Vi) ] O - R'i R'3 dans laquelle: R'3 représente le groupement Br-(CH2)m- dans lequel m a la même signification que dans la formule (I), R'4 et R'5 représente chacun un groupement alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, OR'4 ou B OR'1 forme un ester boronique de pinanediol, pour conduire au composé de formule (VIII): / OR'4 R',-NH-C-CO-A-CO-NH-CH-B (VIIIm) / \ [ OR' 5 R, R', R'3 dans laquelle R'1, R2, R'2, R'3, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment, que l'on fait réagir avec de la thiourée éventuellement substituée, pour conduire au composé de formule (I/a), cas particulier des composés de formule (I), -5- 2721611 OR'4 R' -NH-C-CO-A-CO-NH-CH-B X - / \ OR'5 (Ia) R, R', (CHa) 2 2 (ClH2)m S C HN NHR dans laquelle R'1, R2, R'2, A, R'4, R'5, R et m ont la même signification que précédemment, composé de formule (I/a) dont on déprotège, si on le souhaite, la fonction amine terminale et que l'on transforme, en milieu inerte, à l'aide de trichlorure de bore, en acide boronique de formule (I/b), cas particulier des composés de formule (I): OH R, -NH-C-CO-A-CO-NH-CH-BX (l/b) 1 OH R2 R', R3 dans laquelle R 1, R2, R'2, A et R3 ont la même signification que dans la formule (I), composé de formule (I/a) ou (I/b): - que l'on purifie éventuellement selon une technique classique de purification, - dont on sépare, si on le souhaite, les énantiomères selon une technique classique de séparation et que l'on transforme, le cas échéant, en ses sels d'addition à un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable. Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphonique, acétique, trifluoroacétique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique, maléique, citrique, ascorbique, méthane sulfonique, camphorique, oxalique, etc... Parmi les bases pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif, l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, le bicarbonate de sodium, etc... Les composés de formule (VII) peuvent être obtenus à partir du composé de formule (IX) obtenu selon le procédé décrit par M.W. RATHKE et coll. (J. Organomet.. Chem., 122, -149, 1976): CI ci OR' /CH- B (lX) Cl OR'5 dans laquelle R'4 et R'5 sont tels que définis plus haut, -6- 2721611 que l'on fait réagir sur un organomagnésien de formule (X) R'3MgCl (X) dans laquelle R'3 a la même signification que précédemment, pour conduire au composé de formule (XI): C1 ciB J _OR'4 CH- 4 (XI) SR' OR'5 dans laquelle R'3, R'4 et R'5 sont tels que définis précédemment, que l'on met en réaction avec le 1,1,1,3,3,3-hexaméthyldisilazane (HMDS) en présence de n-butyllithium pour conduire, après traitement en milieu acide, au composé de formule (VII). Le composé de formule (XI) peut également être obtenu selon le procédé décrit par D.S. MATTESON et coll. (Organometallics, 3, 1284-1288, 1984) et W. RATHKE et coll. (J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990). Les composés de la présente invention, outre le fait qu'ils soient nouveaux, présentent des propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes. Ce sont de puissants inhibiteurs de trypsine-like serine proteases qui présentent une importante selectivité vis-à-vis de la thrombine par rapport à d'autres serine proteases de la coagulation. Ils possèdent d'autre part une meilleure activité par voie orale que le composé de référence DUP 714. Ces propriétés les rendent donc utiles dans le traitement des angines stables ou non, des maladies d'origine thrombotique et/ou donnant lieu à des complications thrombotiques ainsi que dans le traitement ou la prévention de l'infarctus du myocarde et des thromboses veineuses ou artérielles. Ils peuvent également être utilisés en association thérapeutique avec un thrombolytique. L'invention s'étend aussi aux compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif au moins un composé de formule (I) avec un ou plusieurs excipients inertes, non toxiques et appropriés. Les compositions pharmaceutiques ainsi obtenues pourront être présentées sous diverses formes, les plus avantageuses étant les comprimés, les dragées, les gélules, suppositoires, suspensions buvables, etc... -7- 2721611 La posologie utile est adaptable selon la nature et la sévérité de l'affection, la voie d'administration ainsi que selon l'âge et le poids du patient. Cette posologie varie de 1 à 500 mg par jour en une ou plusieurs prises. Les exemples suivants illustrent l'invention mais ne la limitent en aucune façon. Les produits de départ utilisés sont des produits de départ connus ou préparés selon des modes opératoires connus. La préparation A conduit à un intermédiaire de synthèse utile dans la préparation des composés de l'invention. Préparation A: (R)-l-Amino-4-bromobutylboronate de (+)a-pinanediol, chlorhydrate Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit par C. KETTNER et coll. (J. Biol. Chem., 265 (30), 18289-18297, 1990) par réaction du bromure d'allyle sur le catécholborane, suivie d'une transestérification avec du (+)c-pinanediol puis d'une réaction d'homologation en présence de dichlorométhyllithium et enfin de la réaction avec de l'hexaméthyl-disilazane. Point de fusion: 160 C Pouvoir rotatoire: [L]D25 = + 16,5 (c = 1 %c, éthanol) Microanalyse élémentaire C% H% N% Ci % calculé 45,88 7,15 3,82 9,67 trouvé 45,82 7, 09 4,13 9,85 Les abréviations utilisées dans les exemples sont les suivantes Ac représente acétyl, Bz représente benzyl, Suc représente le groupement succinimido, (R)Phe représente le résidu (R)-phénylalanyl, Gly représente le résidu glycyl, Exemple 1: 1-(R)- { [Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo) butylboronate de (+)ox-pinanediol -8- 2721611 Stade A: Boc-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OBz En utilisant la technique de couplage peptidique (DCC/HOBT) décrite par W.KONIG et R.GEIGER (Ber., 103, 788, 1970) et le diméthylformarmide anhydre comme solvant, le produit attendu est préparé à partir de 73 mmoles de (N-cyclopentyl)Gly- OBz et de Boc-(R)Phe-OH et est purifié par chromatographie sur colonne de silice en utilisant comme éluant un mélange dichlorométhane/éthanol (97/3). Rendement: 76 % Stade B: H-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OBz Le produit obtenu au stade précédent est déprotégé par dissolution de 31 mmoles dans 150 ml d'acétate d'éthyle anhydre refroidi dans un bain eau- glace en réalisant un barbotage d'acide chlorhydrique gaz pendant une heure. Après retour à température ambiante et agitation pendant une heure, le mélange est évaporé. Le résidu est repris à l'éther et à nouveau évaporé. Rendement: 99 % Stade C: Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OBz 5 mmoles du composé obtenu au stade précédent dans un mélange contenant 10 ml de dioxane, 5 ml d'eau, 24 ml d'anhydride acétique et 25 mmoles de bicarbonate de sodium sont agitées pendant 3 heures à température ambiante. Après évaporation, le résidu est repris par un mélange eau/acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'eau, puis par une solution saturée de chlorure de sodium. Après séchage et évaporation, on obtient le produit attendu. Rendement: 89 % Stade D: Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OH mmoles du produit obtenu au stade précédent dans 25 ml de méthanol sont hydrogénées sous une pression d'hydrogène de 4 kg pendant 12 en présence de 150 mg de palladium/C à % anhydre. Après filtration du catalyseur, le produit attendu est obtenu après évaporation du solvant. Stade E: Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly-OSuc A 4,46 mmoles de Nhydroxysuccinimide dans 50 ml de dichlorométhane anhydre, sont ajoutées 4,46 mmoles du produit obtenu au stade précédent dans 20 ml de dichlorométhane -9- 2721611 anhydre puis 4,46 mmoles de dicyclohexylcarbodiimide dissous dans du dichlorométhane. L'ensemble est agité 12 heures à température ambiante. Après filtration de la dicyclohexylurée formée, le produit attendu est obtenu après évaporation. Stade F: I1-(R)- { [Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino}-4bromobutylboronate de (+)cx- pinanediol 4 mmoles du composé obtenu dans la préparation A dans 10 ml de dichlorométhane anhydre et 4 mmoles du composé obtenu au stade précédent sont placées sous atmosphère d'argon à -20 C. 56 ml de triéthylamine sont alors ajoutés goutte à goutte et l'ensemble est maintenu minutes à -20 C. Après retour à température ambiante, le mélange est agité une nuit sous atmosphère d'argon. Après reprise par de l'acétate d'éthyle, lavage à l'eau, au bicarbonate de sodium, à l'eau, à l'acide chlorhydrique 0,2N et enfin à l'eau, la phase organique est séchée et évaporée. Le produit attendu est obtenu après purification sur résine "Sephadex ". Rendement: 90 % Stade G: I -(R)- { [Ac-(R)Phe-(N-cyclopentyl)Gly]amino} 4-(isothiouréïdo) butylboronate de (+)oc-pinanediol 2,4 mmoles du composé obtenu au stade précédent et 7,3 mmoles de thiourée dans 6 ml d'éthanol sont agitées 60 heures à température ambiante. Après évaporation du solvant, le produit attendu est obtenu après purification par passage sur résine "Sephadex " en utilisant le méthanol comme éluant. Rendement: 85 % Exemple 2: Acide 1-(R)-{[Ac-(R)Phe-(Ncyclopentyl)Gly]amino}-4-(isothiouréido)butyl boronique, acétate 2 mmoles du composé obtenu dans l'exemple 1 dans 25 ml de dichlorométhane anhydre sont refroidies à -78 C sous atmosphère d'argon. 8 mmoles de trichlorure de bore sont alors additionnées goutte à goutte en 30 minutes. La température est amenée à 0 C et l'ensemble agité 30 minutes. 10 ml d'eau glacée sont alors ajoutés et après 15 minutes d'agitation, le mélange est amené à température ambiante. La phase organique est décantée, extraite par 10 ml d'un mélange eau/acide acétique (90/10). La phase aqueuse restante est lavée à l'éther et les phases aqueuses réunies sont évaporées. Le résidu est purifié sur Bio-gel en utilisant comme éluant un mélange eau/acide acétique (90/10) et conduit au produit attendu qui est lyophilisé. L'analyse physicochimique du produit est compatible avec la structure attendue. Spectre de masse: FAB+: [M+glycérol-2H20+H+]: m/z = 561 - 10- 2721611 Etude pharmacologique des composés de l'invention Exemple 3: Activité anticoagulante, mesure des temps de thrombine et de prothrombine chez l'homme En présence d'une quantité standard de thrombine ou de thromboplastine calcique, un plasma normal coagule en un temps défini et constant, appelé respectivement temps de thrombine (TT) et temps de prothrombine (TP). Au pli du coude, le sang veineux est recueilli dans une solution de citrate trisodique (0.109 M). Un plasma pauvre en plaquettes est obtenu par centrifugation des échantillons sanguins (3000 g, 15 minutes). Le temps de thrombine est réalisé avec le réactif Thrombin Prest (Stago) et le temps de prothrombine avec le réactif Néoplastine (Stago). Ils sont déterminés automatiquement en utilisant un coagulomètre ST4 (Stago). L'antagoniste ou le solvant (10 pl) est additionné au plasma (90 pil), puis incubé 2 minutes à 37 C. 100 pl de thrombine ou 200 pl de thromboplastine calcique sont ajoutés en déclenchant le chronomètre. Dans ces conditions, le TT obtenu dans le plasma témoin est de l'odre de 20 secondes chez l'homme, et le TP de l'ordre de 12 secondes. L'activité d'un inhibiteur est évaluée par sa capacité à prolonger ces temps par rapport au témoin. Dans ces conditions, les composés de l'invention permettent une prolongation du temps de thrombine et du temps de prothrombine de 50 fois et plus. L'effet des inhibiteurs est mesuré et la concentration qui multiplie par 2 le temps de coagulation (CTT2 pour le temps de thrombine et CTP2 pour le temps de prothrombine) est déterminée. Les résultats sont reproduits dans le tableau suivant: Produits CTP2 (aM) CTT2 (pM) Exemple 2 2.29 0.20 Réf.: DUP 714 2.63 0.18 Exemple 4: Inhibition de la thrombine et des sérines protéases de la coagulation et la fibrinolyse Pour évaluer in vitro l'activité inhibitrice des produits boro- Arginiques sur la thrombine humaine (Sigma, activité spécifique 3220 UNIH/mg), le fibrinogène humain purifié (6 pM, Enzyme Research Laboratories) a été ajouté à une quantité donnée de thrombine (0.7 nM) préalablement incubée avec ou sans l'inhibiteur à tester (20 C, 10 minutes). Pour évaluer in vitro la sélectivité de ces produits vis-à-vis de différentes sérines protéases de la fibrinolyse et la coagulation, le même protocole a été appliqué à la plasmine humaine purifiée (2 nM, Stago), à la protéine C activée humaine purifiée (2 nM, Stago), au facteur X activé humain purifié (2 nM, Calbiochem), à l'activateur tissulaire du plasminogène (2 nM, - 1 l - 2721611 Calbiochem), à l'urokinase humaine purifiée (2 nM, Choay), à la kallikreine plasmatique humaine purifiée (2 nM, Calbiochem) en utilisant pour substrats différents peptides paranitroanilidés: Arg-Gly-Arg-pNA (0.39 mM, S 2765, Kabi) pour le facteur Xa, bovine) puis distribués dans une microplaque en polystyrène sous un volume de 50 pl. La fibrine formée par la thrombine ou le paranitronilide libérée par l'action de la sérine protéase sont mesurés spectrophotométriquement à 405 nm après respectivement 5 ou minutes de réaction à 20 C. Le tableau ci-dessous donne la concentration de composé inhibant 50 % de l'activité enzymatique (CI50) en présence du produit de référence (DUP 714) et du composé de l'exemple 2 par rapport au contrôle sans produit. Les résultats démontrent que le composé de l'exemple 2 inhibe aussi puissamment la thrombine que le DUP 714 mais inhibe beaucoup moins les autres sérine-protéases de la coagulation et de la fibrinolyse que le DUP 714. Le composé de l'exemple 2 est donc un inhibiteur beaucoup plus sélectif de la thrombine que le DUP 714. Thrombine Plasmine tPA Urokinase FXa Kalli PCa Réf. DUP 714 0.55 24 5.3 22 81 6.8 15 Ex. 2 0.59 1038 108 2503 >100000 164 593 Exemple 5: Mesure de l'activité anti-coagulante ex vivo. Administration des produits par voie intraveineuse (i.v.) chez le rat Les rats OFA, à jeun ou non, sont anesthésiés au pentobarbital (60 mg/kg, i.p.). L'artère carotide et la veine jugulaire sont dégagées et cathétérisées. Les cathéters sont purgés avec du sérum physiologique citraté (1/40). Après installation des cathéters, un prélèvement de 1.5 cm3 de sang artériel est effectué sur citrate 0.109 M (1/9). - 30 minutes après, le produit à tester est administré sous un volume de 1 ml en i.v. - Des prélèvements artériels (1.5 ml) sont alors effectués à 1 minute 30, 5, 15, 30 et 60 minutes. - 12- 2721611 - A chaque prélèvement, 1.5 ml de sérum physiologique citraté est réinjecté à l'animal via la carotide. - Les tubes de sang sont centrifugés 5 minutes à 3000 g (préparation du plasma). - 100 pi de plasma sont incubés avec 100 pi de céphaline activée. Le temps d'apparition du phénomène de coagulation est mesuré, après addition de 100 pl de calcium. - Les composés de l'invention, testés à la dose de 0.25 mg/kg augmentent de façon durable le temps de céphaline activée (TCA). Les résultats sont reproduits dans le tableau suivant et montrent les indices d'augmentation du temps de coagulation. Temps (minutes) 1.5 5 15 30 60 Ex.2 2.6 1.8 1.2 1.2 1.1 Exemple 6: Mesure de l'activité anticoagulante ex vivo. Administration des produits par voie intraveineuse (i.v.) chez le chien. Les chiens à jeun sont anesthésiés au pentobarbital (30 mg/kg, i.v.). Une artère fémorale et une veine saphène sont dégagées et cathétérisées. Les chiens sont laissés en respiration libre. Les procédures de prélèvements sanguins sont identiques à celles décrites précédemment chez le rat dans l'exemple 5. Les composés de l'invention, testés à la dose de 0.5 mg/kg augmentent de façon durable le temps de céphaline activée (TCA). L'augmentation du TCA notée avec les composés de l'invention est toujours significative 60 minutes après leur administration et n'est pas accompagnée par une thrombopénie (voir tableau). Produit Temps Indice Variation du nombre (dose) (minutes) d'augmentation de plaquettes TCA (% du contrôle) 1.5 9.6 -3 Exemple 2 5 3.6 -2 (0.5 mg/kg) 15 1.9 O 1.4 0 1.1 0 Le DUP 714 à 0.25 mg/kg a provoqué une augmentation du TCA comparable à celle obtenue avec l'exemple 2 à 0.5 mg/kg. Cet effet du DUP 714 était accompagné d'une thrombopénie de %. Exemple 7: Mesure de l'activité anticoagulante ex vivo. - 13- 2721611 Administration des produits par voie orale chez le chien. Après prélèvement d'un échantillon de sang, les produits sont administrés par voie orale. A des temps définis après le traitement, le sang est prélevé par voie intraveineuse. Le plasma est préparé, les plaquettes sont comptées et le test de temps de thrombine est pratiqué. Le tableau démontre que le produit de l'exemple 2 à 2.5 mg/kg a provoqué des augmentations du TT sans modification du nombre de plaquettes. L'activité est durable (4 heures). Temps (heures) 0.5 1 2 4 Exemple 2 1.1 1.6 1.5 1. 1 Exemple 8: Composition pharmaceutique Formule de préparation pour 1000 comprimés dosés à 10 mg: Composé de l'exemple 2....................... ..................................................................10 g Hydroxypropylcellulose.................................................... .DTD: ........................................ 2 g Amidon de blé............. DTD: ......................................................................... DTD: ....................10 g Lactose........................................ DTD: ......................................................................... DTD: .... 100 g Stéarate de magnésium....................................... DTD: ....................................................... 3 g Talc...... DTD: ......................................................................... DTD: ............................................. 3 g..DTD: - 14- 2721611 REVENDICATIONS 1. Composés de formule (I): /OR4 R NH-C-CO-A-CO--NH-CH-B (I R/R'2 X OR5 dans laquelle: R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement acyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle, phénoxycarbonyle, 5-[(diméthyl)amino]naphtylsulfonyl, alkoxycarbonylméthyle ou carboxyméthyle, R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupement: - phényle, - benzyle (substitué ou non sur le noyau phényle par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupements alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, alkoxy (C1-C6) linéaire ou ramifié, hydroxy, amino, nitro ou carboxy), - thiénylméthyle, - (pyridinyl)méthyle, - diphénylméthyle, - fluorényle, - naphtylméthyle, - benzocyclobutyle, (dicyclopropylméthyl)méthyle, - indanyle, - ou, cycloalkyl (C3-C7)méthyle, R'2 représente un atome d'hydrogène ou un groupement benzyle ou bien R2 et R'2 représentent ensemble C6H5-CH=, R3 représente un groupement: HNs\ C - S- (CH2)m - RHN dans lequel: - 15- 2721611 m représente 2, 3 ou 4, R représente un atome d'hydrogène, un groupement alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, amino ou nitro, R4 et R5 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, OR4 ou B forme un ester boronique de pinanediol, NORs A représente l'un quelconque des groupements suivants: * --11H- dans lequel: AI A1 représente avec les atomes d'azote et de carbone avec lesquels il est lié une structure cyclique choisie parmi les structures suivantes perhydroindole, - 2-azabicyclo[2.2.2]octane, - 2-azabicyclo[3.3.0]octane, - 2-azabicyclo[2.2.1]heptane, - perhydroisoindole, - indoline, isoindoline, - perhydroquinoléine, - perhydroisoquinoléine, i1,2,3,4-tétrahydroquinoléine, - 1,2,3,4- tétrahydroisoquinoléine, thiazolidine éventuellement substituée par un ou plusieurs groupements alkyl (C1-C6) linéaire ou ramifié, * -N-(C-/)- dans lequel: A2 n représente 1 ou 2, A2 représente un groupement alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, phényle, indanyle, cycloalkyle (C3-C7) (substitué ou non par un ou plusieurs groupements méthyle) cycloalkényle (C3-C7), bicyclo[2.1.1]hexyl, bicyclo[2.2. 1]heptyl ou un groupement x( y dans lequel - X et Y différents représentent un atome d'oxygène, de soufre, un groupement NH ou CH2-, -16 - 2721611 *ou, -, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 2. Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R1 représente un groupement acétyl, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 3. Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R2 représente un groupement benzyl, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 4. Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle A représente un groupement - N- (CH)n - A2 tels que défini dans la revendication 1, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 5. Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R3 représente un groupement 3-(isothiouréïdo)propyle, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimières ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 6. Composé de formule (I) selon la revendication 1 qui est l'acide 1(R)-{[Ac-(R)Phe-(N- cyclopentyl)Gly]amino}-4-(isothiouréïdo)butyl boronique, Ac représentant acétyl, (R)Phe représentant (R)-phénylalanyl, Gly représentant glycyl, ses isomères ainsi que ses sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 7. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir un amino-acide protégé de formule (II), dont on a éventuellement séparé les isomères par une technique classique de séparation: R'l- NH-C C02H (-X) R2 R'2 dans laquelle: -17- 2721611 R'1 représente un groupement acyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C 1-C6) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle ou phénoxycarbonyle, et R2 et R'2 ont la même signification que dans la formule (I), que l'on fait réagir selon une technique de couplage peptidique avec un deuxième amino-acide protégé de formule (III) dont on a éventuellement séparé les isomères selon une technique classique de séparation, HA-CO2CH2C6H5 (III) dans laquelle A a la même signification que dans la formule (I), pour conduire au composé de formule (IV): R'l - NH -C - CO- A- CO2CH2C6H5 (IV) R2 R'2 dans laquelle R' 1, R2, R'2 et A ont la même signification que précédemment, dont on déprotège la fonction acide par hydrogénation catalytique ou saponification, pour conduire au composé de formule (V): R'l1 -NH-C-CO-A-CO2H (V) R2 R'2 dans laquelle R' 1, R2, R'2 et A ont la même signification que précédemment, que l'on met en réaction avec du N-hydroxysuccinimide en présence de 1,3-dicyclohexylcarbodiimide en milieu anhydre, pour conduire au composé de formule (VI) R' - NH - C - CO - A - CO2 - Suc (VD n2 R'2 dans laquelle R'1, R2, R'2 et A ont la même signification que précédemment et Suc représente un radical succinimido, que l'on met en réaction en milieu basique avec un composé de formule (VII): /0 - R'4 H2N - C- B \ (VI) I O - R'5 R'3 dans laquelle: R'3 représente le groupement Br-(CH2)m- dans lequel m a la même signification que dans la formule (I), R'4 et R'5 représente chacun un groupement alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, OR4 ou B forme un ester boronique de pinanediol, OR5 - 18- 2721611 pour conduire au composé de formule (VIII): R' -NH-C-CO-A-CO-NH-CH-B R (VIII) 1 OR' R2 R'2 R'3 dans laquelle R'1, R2, R'2, R'3, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment, que l'on fait réagir avec de la thiourée éventuellement substituée, pour conduire au composé de formule (I/a), cas particulier des composés de formule (I), / OR'4 R'1-NH-C-CO-A-CO-NH-CH-B R/ \OR'I (I/a) R2 R'2 (C H2). H/N NHR dans laquelle R'1, R2, R'2, A, R'4, R'5, R et m ont la même signification que précédemment, composé de formule (I/a) dont on déprotège, si on le souhaite, la fonction amine terminale et que l'on transforme, en milieu inerte, à l'aide de trichlorure de bore, en acide boronique de formule (I/b), cas particulier des composés de formule (I): OH R1-NH C-CO-A-CO-NHCH-B (b) OH (I/b) R,2 R' 2 B 3O R1 dans laquelle R1, R2, R'2, A et R3 ont la même signification que dans la formule (I), composé de formule (I/a) ou (I/b): - que l'on purifie éventuellement selon une technique classique de purification, - dont on sépare, si on le souhaite, les énantiomères selon une technique classique de séparation et que l'on transforme, le cas échéant, en ses sels d'addition à un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable. 8. Compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif au moins un composé selon l'une quelconques revendications 1 à 6, seul ou en combinaison avec un ou plusieurs véhicules inertes, non toxiques pharmaceutiquement acceptables. - 19- 2721611 9. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 8 utiles en tant qu'inhibiteurs de trypsine-like serine proteases. 10. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 8 utiles en tant qu'inhibiteurs de thrombine.