Brevet FR2707494A1 — publié le 19950120

La présente invention concerne une nouvelle utilisation de dérivés de la béta-naphtoquinone ainsi que de leurs sels. Le brevet Spécial de Médicament 924 M décrit l'applica- tion à titre de médicaments de dérivés de la béta-naphtoqui- none. Selon ce brevet, ces dérivés sont présentés comme possédant des propriétés hémostatiques et des propriétés vitaminiques. On sait que l'endothélium. est constitué par une monocouche de cellules d'origine mésodermique qui tapisse l'intê- rieur de tout le système vasculaire. Il constitue donc l'interface entre le sang et les tissus avoisinants. Cette localisation lui confère un rôle majeur dans le maintien de l'intégrité vasculaire et sanguine. Le détachement de la monocouche de cellules endothé- liales non thrombogènes entraîne l'exposition du sous- endothélium thrombogène (adhésion plaquettaire et leucocy- taire). L'exposition du sous-endothélium est une situation pathologique qui se retrouve dans certaines interventions chirurgicales: embolectomies, angioplasties, endartériec-20 tomie et greffes de prothèses vasculaires ou dans certaines situations de pathologie médicale (athérosclérose, vascu- larites). Toutes ces situations ont un intérêt commun qui est la reconstitution rapide d'une surface endothéliale intacte et fonctionnelle. Il a été démontré récemment que les fac-25 teurs de croissance polypeptidiques (FGF: fibroblast growth factor; PDGF: platelet derived growth factor ou EGF: epidermal growth factor) jouent un rôle important dans la réparation de lésions vasculaires ou cutanées: ulcères, escarres et brûlures.30 En poursuivant ses études sur les dérivés de la bétanaphtoquinone précités, la demanderesse vient de trouver de façon tout à fait inattendue que ces derniers présentaient une remarquable activité permettant d'accélérer la proliféra- tion des cellules endothéliales et d'inhiber les NO synthases35 constitutive et induite. La présente demande a ainsi pour objet une nouvelle utilisation de dérivés de la béta-naphtoquinone de formule générale (I): -j/ tN-R () dans laquelle R représente un groupement de formule -NH-CO-NH2, ou un groupement de formule -NH-CO-CH3, ou un groupement hydroxyle, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement accepta- bles, pour la fabrication d'un médicament permettant d'accé- lérer la prolifération des cellules endothéliales et d'inhiber les NO synthases. 15 Les sels d'addition avec les acides minéraux ou organi- ques pharmaceutiquement acceptables peuvent être, par exem- ple, les sels formés avec les acides chlorhydrique, bromhy- drique, iodhydrique, nitrique, sulfurique, phosphorique, propionique, formique, benzoïque, maléique, fumarique, succi-20 nique, tartrique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspar- tique, alcanesulfoniques tels que les acides méthane- sulfoniques et arylsulfonique, tel que l'acide benzènesulfo- nique. Parmi les dérivés de la béta-naphtoquinone de formule générale (I), on retient notamment: - le produit de formule (I) dans laquelle R représente un groupement de formule -NH-CO-NH2, ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceu- tiquement acceptables,30 - le produit de formule (I) dans laquelle R représente un groupement de formule -NH-CO-CH3, ainsi que ses sels d'addi- tion avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutique- ment acceptables, - le produit de formule (I) dans laquelle R représente un groupement hydroxy, ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables. Parmi les produits préférés de l'invention, utilisés pour la fabrication d'un médicament permettant d'accélérer la prolifération des cellules endothéliales et d'inhiber les NO synthases, on retient tout particulièrement la 2-semicarba- zone de la 1,2-naphtoquinone plus connue sous la dénomination commune internationale de naftazone. Dans la partie expéri- 5 mentale, ce produit figure sous sa DCI (dénomination commune internationale). En raison de ces remarquables propriétés permettant d'accélérer la prolifération des cellules endothéliales et d'inhiber les NO synthases, illustrées plus loin dans la10 partie expérimentale, les dérivés de la béta-naphtoquinone de formule (I), tels que définis ci-dessus, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, peuvent être utilisés dans le domaine vasculaire, par exemple dans la prévention de l'hypotension15 du choc septique, de l'athérome, des resténoses artérielles (après angioplastie), dans la protection vasculaire, dans les greffes et les prothèses vasculaires, dans la protection cérébrale lors du "stroke", ou dans le traitement de la douleur, comme antioedémateux par diminution de la perméabi-20 lité capillaire, dans le traitement de la migraine par ferme- ture des shunts artérioveineux cérébraux, dans les processus pathologiques impliquant la micro-circulation (en ophtalmolo- gie, en diabétologie) comme dans les vascularités (en parti- culier médicamenteuses) et dans l'ensemble des processus de25 cicatrisation et réparation tissulaire. La dose usuelle, variable selon le produit utilisé, le sujet traité et l'affection en cause,peut être par exemple de 1 mg à 100 mg par jour, par voie orale ou par voie injecta- ble. Les compositions pharmaceutiques correspondantes peuvent être, par exemple, solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine, comme par exemple, les comprimés, simples ou dragéi- fiés, les gélules, les capsules, les granulés, les supposi-35 toires, les préparations injectables; elles sont préparées selon les méthodes usuelles. Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conser- 5 vateurs. Des procédés de préparation des dérivés de la béta- naphtoquinone de formule (I) ainsi que de leurs sels ont été décrits dans la littérature. On peut notamment citer les procédés décrits dans le brevet spécial de médicament 924M10 précité, ou dans le brevet français 2 103 504. Il va être donné maintenant à titre non limitatif des exemples de compositions pharmaceutiques pouvant être utili- sées dans la mise oeuvre de l'invention. EXEMPLE 1:15 On a préparé des comprimés répondant à la formule suivante: - Naftazone..... ........................... 10 mg - Excipient q.s.p. pour un comprimé terminé à 150 mg (détail de l'excipient: lactose, amidon, talc, stéarate de magnésium). EXEMPLE 2: On a préparé un soluté injectable répondant à la formule suivante: - Naftazone.................................. 5 mg Excipient aqueux stérile q.s.p............. 2 ml EXEMPLE 3: On a introduit 8,6 g de Naftazone dans 200 ml d'anhy- dride acétique. Apres 10 heures de chauffage à 140'C, puis refroidissement, filtration, extraction du précipité par le30 chloroforme, évaporation à sec, reprise par l'éthanol, pas- sage sur charbon actif, filtration et cristallisation lente,..DTD: on a obtenu 5,1 g de produit répondant à la formule (I) avec R = -NH- CO-CH3 (poudre microcristalline jaune ocre, F = 137- 138-C). ETUDE PHARMACOLOGIQUE I - Etude in vitro de la prolifération des cellules endothé- liales humaines de veine saphène Nous avons évalué les propriétés mitogéniques de la naftazone sur des cellules endothéliales humaines de veine saphène en culture dans des conditions standard. La naftazone, à des concentrations comprises entre -5 M et 10-7 M, accélère la prolifération de cellules endothéliales, ensemencées à faible densité, d'un facteur 2 au maximum en comparaison du témoin (sans naftazone). A confluence, la densité cellulaire reste légèrement augmentée (environ 20 %). Par contre, en présence de concen- trations optimales de sérum, la différence de densité cellu-10 laire entre le contrôle et les échantillons contenant la naftazone s'estompe. En conclusion, dans les conditions de l'essai, l'effet de la naftazone reste en général inférieur ou égal à celui induit par les FGFS mais, à confluence, la densité cellulaire15 en présence des facteurs FGFs est nettement supérieure à celle obtenue avec la naftazone, en comparaison du témoin. Il - Etude de l'inhibition de la NO synthase constitutive des cellules endothéliales vasculaires La naftazone a fait l'objet d'études réalisées sur anneaux (3 à 4 mm de long) d'aorte abdominale de rat CD (200-250 g, Charles River, France) et de veine fémorale de lapin NewZealand (2-2,5 kg, Charles River, France). Les anneaux sont placés en chambre d'organe (25 ml, Phymep, France) dans une solution de Krebs-Ringer. Cette solution est tonométrée en permanence par un mélange gazeux à % 02 - 5 % C02, à pH 7,40 et thermostatée à 37'C. La force isométrique développée par les anneaux est mesurée par des capteurs de tension (Phymep, France). Les anneaux sont amenés à leur point optimal de la relation tension-longueur par des stimulations répétées à l'aide de KCl 40 mM. Les études pharmacologiques sont réalisées après rinçages et une période d'équilibre de 45 minutes. Lorsque la réponse pharmacologique du vaisseau est étudiée sans endothélium, celui-ci est éli- miné par frottement de l'intérieur du vaisseau à l'aide d'une35 pince à dissection. L'absence d'endothélium est vérifiée par l'absence de relaxation du vaisseau induite par l'ACh 10-6 M après contraction à NAD 10-7 M. Les contractions sont expri- mées en % de la contraction maximale à KCl 60 mM, les relaxa- tions sont exprimées en % de la contraction à NAD 10-5 M ou PGF2C 10-7 M. Les propriétés pharmacologiques suivantes ont été observées: 1 - la naftazone (10-6 M - 10-4 M) augmente significativement le tonus basai des anneaux aortiques de rat et de veine fémorale de lapin. 2 - la naftazone (10-6 M - 10-4 M) potentialise les contrac- tions obtenues avec la NAD (10-9 M - 10-5 M) et avec la 5HT (10-9 M - 10-5 M) de façon significative et dose dépendante sur aorte de rat. Cette potentialisation disparait en l'absence d'endothélium. 3 - Sur anneaux aortiques contractés à la NAD (10-5 M), la naftazone (10-6 M - 10-4 M) inhibe de façon significative et dose dépendante la relaxation à l'ACh (10-9 M - 10-5 M). L'inhibition atteint 60 à 80 % pour la naftazone (10-5 M) pour une relaxation obtenue avec ACh (10-5 M). Cette inhibi- tion est comparable en cinétique, en amplitude, à celle obtenue avec le NàNitro-L-Arginine (10-6 M) (inhibiteur20 puissant des NO synthases). Sur des anneaux aortiques contractés à PGF2- (2.10-6 M) en présence d'Indométhacine (10-5 M) et de Kétanserine (10-5 M), la naftazone (10-6 M - 10-4 M) inhibe la relaxation obtenue avec 5HT (10-9 M - 10-5 M) de façon significative et dose dépendante (10-6 M - 10-4 M). 4 - Sur anneaux aortiques contractés à la NAD (10-7 M) ou à PGF2- (2. 10-6 M) en présence d'Indométhacine (10-5 M), la naftazone inhibe la relaxation obtenue avec le calcium iono- phore A23187 (10-9 M - 10-6 M), ceci de façon significative30 et dose dépendante (10-6 M - 10-4 M). - L'inhibition de la relaxation endothélium dépendante à l'ACh, à la 5HT et au A23187 obtenue avec la naftazone (10-5 M) est levée totalement par la L-Arginine (9.10-4 M). 6 - La naftazone (10-5 M) inhibe de façon significative l'hyporéactivité à la NAD (10-9 M - 10-5 M) obtenue après 3 heures d'incubation d'anneaux aortiques de rat en présence de Lipopolysaccharides E. coli 01lB4 (10 gm/ml). Cet effet est comparable à celui obtenu avec le Né-Nitro-L-Arginine (10-5 M). 7 - La naftazone (10-5 M) potentialise la contraction à la NAD (10-9 M 10-5 M) obtenue sur anneaux de veine fémorale de lapin et inhibe la relaxation à l'ACh (10-9 M - 10-5 M). En conclusion, l'augmentation du tonus basal, la poten- tialisation des effets vasoactifs de la Noradrénaline, de la Sérotonine, l'inhibition des relaxations endothélium dépen- dantes à l'Acétylcholine, la Sérotonine et au Calcium iono- phore A23187, la levée de l'inhibition des relaxations endo- thélium dépendantes par la L-Arginine, l'inhibition de l'hyporéactivité à la Noradrénaline induite par l'endotoxine bactérienne, font classer la naftazone comme inhibiteur de NO synthase constitutive et de NO synthase induite. REVENDICATIONS 1) Utilisation de dérivés de la béta-naphtoquinone de formule générale (I): (I) dans laquelle R représente un groupement de formule -NH-CO- NH2, ou un groupement de formule -NH-CO-CH3, ou un groupement hydroxyle, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement15 acceptables, pour la fabrication d'un médicament permettant d'accélérer la prolifération des cellules endothéliales et d'inhiber les NO synthases. 2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé de la béta- naphtoquinone est un produit de formule générale (I) dans laquelle R représente un groupement de formule -NH-CO-NH2, ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables. 3) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé de la béta-naphtoquinone est un produit de formule générale (I) dans laquelle R représente un groupement de formule -NH- CO-CH3, ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables. 4) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé de la béta- naphtoquinone est un produit de formule générale (I) dans laquelle R représente un groupement hydroxy, ainsi que ses sels d'addition avec les acides miné- raux ou organiques pharmaceutiquement acceptables. ) Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le dérivé de la béta-naphtoquinone est la 2-semicarba- zone de la 1,2-naphtoquinone.