Brevet FR2698375A1 — publié le 19940527

DISPOSITIF POUR LE TRANSPORT ET LE STOCKAGE DE LIQUIDES UTILISABLE, NOTAMMENT, POUR REALISER DES KITS POUR TESTS IN VITRE L'invention a pour objet un dispositif pour le transport et le stockage de milieux liquides, utilisable, notamment, pour réaliser des tests invitro. On sait que la demande pour les tests in vitre est en forte croissance. Par rapport aux études chez l'animal, ils présentent, en effet, de nombreux avantages tels que rapidité, simplicité, souplesse et moindre coût. I1 est toutefois nécessaire pour réaliser un test donné de disposer d'un matériel fonctionnel approprié, milieu liquide seul ou renfermant un matériau biologique ou biochimique. La réalisation de ces tests nécessite toutefois des produits, des équipements et du personnel qui ne sont pas aisément accessibles pour beaucoup d'utilisateurs. On conçoit donc l'intérêt que peuvent revêtir des dispositifs prêts à l'emploi. La difficulté avec ces dispositifs réside dans l'évacuation des bulles d'air du récipient renfermant le liquide, et le maintien, pendant son transport et jusqu'à son utilisation, de conditions étanches. L'invention apporte une solution à ce problème grâce à de nouveaux moyens de fermeture permettant d'une part d'éliminer toute bulle d'air du récipient renfermant un liquide et d'autre part de recouvrir de manière étanche le récipient une fois rempli. L'invention a donc pour but de fournir un dispositif comportant des moyens de fermeture de récipients ou cuvettes renfermant un milieu liquide, le cas échéant avec un matériel biologique ou biochimique, permettant d'effectuer le transport de ce milieu jusqu'à l'utilisateur qui pourra alors réaliser directement un test in vitre donné. Ce dispositif est caractérisé en ce qu'il est pourvu de moyens de fermeture comprenant une capsule avec une cavité interne comportant un évent, cette capsule formant un rebord destiné à s'appliquer contre le bord de la cuvette et, en vue du transport et du stockage, un élément de couverture scellé sur le rebord de la capsule et le bord de l'orifice de l'évent. On observera que, lorsqu'on enfonce la capsule dans la cuvette remplie de liquide, le trop-plein est évacué par l'évent en entraînant l'air de la cuvette et se déverse dans la cavité. Les conditions d'anaérobie ainsi obtenues sont maintenues en appliquant sur la capsule un élément de couverture dans des conditions assurant l'étanchéité requise. L'effet ventouse du couvercle sur le milieu de culture contribue également à assurer l'étanchéité. Selon une disposition préférée de l'invention l'évent occupe une position sensiblement centrale dans la cavité. Sa hauteur correspond à la profondeur de la cavité. L'élément de fermeture peut être ainsi aisément appliqué à la surface de la cuvette. Selon une autre disposition préférée, le fond de la capsule destiné à être en contact avec le liquide présente une forme concave, ce qui favorise l'évacuation des bulles d'air lorsque l'élément de fermeture est enfoncé dans le récipient. Selon encore une autre disposition préférée, la partie de la capsule destinée à être enfoncée dans la cuvette présente une forme générale conique, sa paroi formant un angle avec la paroi latérale de la cuvette. Cet angle et la hauteur de la partie destinée à être immergée dans le liquide sont tels que le volume de liquide déplacé facilite l'évacuation de l'air par l'évent. Un tel dispositif est particulièrement approprié pour le transport de liquides dans des plaques comportant une pluralité de puits. Un kit correspondant est caractérisé en ce qu'il comprend - au moins une plaque support avec une pluralité d'alvéoles ou puits, - des capsules pour chaque puits, telles que définies ci-dessus, - un élément de couverture étanche, recouvrant l'ensemble des capsules de la plaque, et scellé de manière à assurer l'étanchéité du dispositif. De manière avantageuse, ces kits comprennent en outre les réactifs nécessaires à la réalisation d'un test donné, ainsi que le cas échéant le protocole d'utilisation. Les puits de la plaque-support présentent de manière générale une forme cylindrique. Les capsules auront donc des formes et dimensions correspondantes. Ces capsules peuvent être distinctes les unes des autres ou, selon leur mode de fabrication, solidaires en formant une plaque. En vue du transport et du stockage, on applique un élément de couverture capable d'assurer l'étanchéité au niveau de l'évent et d'éviter des écoulements provenant du trop-plein. D'une manière avantageuse, l'application de cet élément assure, en une opération, la fermeture complète d'une pluralité de puits avec capsules. On a recours avantageusement à un élément sous forme de plaque ou de feuille , constitué par un matériau pouvant être contrecollé sur le rebord des capsules et le bord de l'évent. Il peut s'agir d'un matériau thermo-fusible ou possédant des propriétés adhésives. En variante, la plaque ou feuille présente une structure composite, comprenant un matériau support et un matériau permettant le contre-collage. Ces kits permettent un transport aisé des liquides sans précautions particulières, dans un sens quelconque, ctest-à-dire à l'endroit ou à l'envers. De plus le maintien de la stérilité peut être assuré pendant toutes les opérations, si nécessaire. Ils sont tout spécialement adaptés pour le transport et le stockage de milieux de culture renfermant du matériel biologique, tels que bactéries ou cellules, ou biochimique comme les microsomes et ce, dans des conditions anaérobies en maintenant le caractère fonctionnel du matériel. On remarquera que ces dispositifs sont prêts à l'emploi ce qui permet de généraliser la technique des tests in vitre en les mettant à portée de tout utilisateur. L'utilisation des dispositifs de l'invention sous forme de kits avec des plaques multipuits facilite en effet l'automatisation et permet donc de mettre pleinement à profit les possibilités offertes par les tests invitro. Les domaines d'application sont très variés. On citera en particulier la pharmacie, la bactériologie, la cosmétologie, le diagnostic, la biologie moléculaire, la toxicologie, le contrôle de l'environnement, de produits, des études de pollution et l'industrie agro-alimentaire. On notera également que le débouchage des puits au moment de l'utilisation est extrêmement aisé. Il suffit en effet soit de retirer la pellicule de couverture, soit de la percer, l'effet ventouse étant dans tous les cas évité. Un mode préféré de réalisation d'un kit selon l'invention, comportant une plaque de micropuits pour tests in vitro, est décrit ci-après en référence avec les figures 1 et 2 qui représentent respectivement une vue en coupe d'une partie d'une plaque de micropuits et une vue en perspective de dessus de la plaque. Le kit représenté sur ces figures comporte une plaque-support comprenant une pluralité de puits cylindriques (1), fermés chacun par une capsule désignée globalement par (2), de même diamètre que l'ouverture du puits. Cette capsule présente une cavité interne annulaire (3) avec un évent central (4). La face interne (5) de la capsule en contact avec le liquide du puits présente une forme concave. La partie supérieure de la capsule forme un rebord (6) s'appuyant contre le bord du puits. Une feuille (7) est scellée, par l'intermédiaire d'une pellicule plastique sur les capsules. On a représenté sur la figure un enlèvement partiel de la feuille. La figure 2 montre un kit avec une plaque de capsules (2) solidaires destinée à être emboîtée dans les puits cylindriques (1). La capsule et le matériau assurant le contrecollage sont réalisés à l'aide de produits non cytotoxiques, inertes vis-à-vis des produits transportés et résistant aux irradiations effectuées pour la stérilisation du dispositif. On citera par exemple des matériaux plastiques tels que les polyvinyles, les polystyrènes, les polycarbonates, les polyéthylènes, les polymères fluorés étant particulièrement appropriés, notamment le fluorure de polyvinylidène. Dans le cas de structures composites, la plaque ou feuille support est formée d'un matériau permettant une manipulation aisée par exemple d'un métal, tel que l'aluminium, ou un matériau plastique du type de ceux cités ci-dessus. En vue d'une utilisation mettant en jeu une culture cellulaire, on ensemence les puits du kit avec les cellules appropriees et, lorsque la croissance souhaitée est obtenue, on remplit le puits avec un milieu convenant pour la survie des cellules. Il apparaît approprié d'effectuer d'abord un remplissage partiel, puis de fermer les puits à l'aide des capsules définies ci-dessus et de poursuivre alors le remplissage par l'évent jusqu'à rasbord. Le trop-plein entraînant l'air de la cuvette est évacué dans la cavité entourant l'évent. Cette cavité renferme le cas échéant un matériau absorbant. En variante, on remplit le puits à ras-bord et on enfonce la capsule pour déplacer l'excédent de liquide et entraîner les bulles d'air, l'opération étant alors réalisée en une seule étape. On procède au contre-collage sur les capsules d' une feuille avec une pellicule adhésive ou thermofusible qu'on soumet à un traitement thermique de manière à sceller le plastique sur la capsule en fermant l'orifice de l'évent et en l'appliquant de manière hermétique sur le rebord de la capsule. Les dispositifs obtenus peuvent être transportés ou stockés aux températures requises selon la culture cellulaire, puis portés à la température nécessaire pour réaliser un test in vitre donné. REVENDICATIONS 1. Dispositif pour le transport et le stockage de liquides, comprenant au moins un récipient ou cuvette, caractérisé en ce qu'il est pourvu de moyens de fermeture comprenant une capsule (2) avec une cavité interne (3) de dimension correspondant à l'ouverture de la cuvette et comportant un évent (4), cette capsule formant un rebord (6) destiné à s'appliquer contre le bord de la cuvette, et, en vue du transport, un élément de couverture étanche (7) scellé sur le rebord de la capsule et le bord de l'orifice de l'évent. 2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'évent (4) occupe une position sensiblement centrale et que sa hauteur correspond à la profondeur de la cavité. 3. Dispositif selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le fond de la capsule (5) destiné à être en contact avec le liquide présente une forme concave. 4. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la partie de la capsule destinée à être enfoncée dans la cuvette présente une forme générale conique, sa paroi formant un angle avec la paroi latérale de la cuvette, cet angle et la hauteur de la partie destinée à être immergée dans le milieu de culture étant tels que le volume de liquide déplacé facilite l'évacuation de l'air par l'évent. 5. Dispositif ou kit pour le transport et le stockage de liquides sous forme de plaque comportant une pluralité de puits, caractérisé en ce qu'il comprend - au moins une plaque support avec une pluralité d'alvéoles ou puits (1), - des capsules (2) pour chaque puits, telles que définies dans l'une des revendications 1 à 4, - un élément de couverture étanche (7), recouvrant l'ensemble des capsules de la plaque, et scellé de manière à assurer l'étanchéité du système, ainsi que le cas échéant les réactifs nécessaires à la réalisation d'un test donné et le protocole d'utilisation. 6. Dispositif ou kit selon la revendication 5 caractérisé en ce qu'il renferme un milieu liquide seul ou contenant un matériel biologique tel que bactéries ou cellules, ou biochimique comme des microsomes.