Brevet FR2704856A1 — publié le 19941110

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de la diméthylamino-3 acridine, leur préparation et leur application en thérapeutique. Les composés de l'invention répondent à la formule générale 1: dans laquelle: - R1 représente un atome d'hydrogène, un atome de chlore, un groupe diméthylamino, ou un groupe MeN(COMe)-. - R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou un groupe benzoyle. L'invention concerne également les sels des composés de formule générale d avec des acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables. L'acide employé peut être, à titre d'exemple non limitatif, l'acide p- toluènesulfonique, l'acide benzoïque, ou l'acide maléique. Les composés de formule générale i où R2 représente un atome d'hydrogène peuvent être préparés par la réaction d'un composé de formule générale 2 avec le formol, le paraformaldéhyde, ou le trioxane-1 ,3 ,5 en milieu acide selon le schéma 1 Schéma 1 où R1 est défini comme ci-dessus. La réaction entre un composé de formule générale 2 et le formol, le paraformaldéhyde, ou le trioxane-1,3,5 s'effectue, de préférence, à une température comprise entre 15"C et 40"C. L'acide employé peut être soit un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique, soit un acide organique tel que l'acide méthanesulfonique. On obtient ainsi un composé de formule générale J qui correspond à la formule générale 1 lorsque R2 représente un atome d'hydrogène. Les composés de formule générale d où R2 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou un groupe benzyle, peuvent être préparés par réaction d'un composé de formule générale 3 avec un alcool de formule générale R30H en présence d'un acide selon le schéma 2 Schéma 2 où - R1 est défini comme ci-dessus. - R3 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou un groupe benzyle. La réaction entre un composé de formule générale ss et un alcool R30H, de préférence employé en excès, s'effectue à une température comprise entre 0 C et 50"C. L'acide employé peut être soit un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique, soit un acide organique tel que l'acide méthanesulfonique. On obtient ainsi un composé de formule générale 4 qui correspond à la formule générale 1 lorsque R2 représente un groupe aikyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou un groupe benzyle. L'isolement et la purification du composé J n'est pas indispensable pour l'obtention du composé 4. Ainsi, on peut traiter le mélange réactionnel obtenu selon le schéma 1 par un alcool de formule générale R30H. Le milieu, étant acide, permet de transformer in site, le composé de formule générale a en composé de formule générale 4. Le produit de départ 2 où R1 représente un groupe diméthylamino est disponible dans le commerce (I'acridine orange). Le produit de départ 2 où R1 représente un atome d'hydrogène peut être préparé par des méthodes classiques à partir de la proflavine (O selon le schéma 3. Schéma 3 où le composé 10 est identique au composé de formule générale 2 lorsque R1 représente un atome d'hydrogène. Le produit de départ 2 où R1 représente un atome de chlore peut être préparé par des méthodes classiques selon le schéma 4. Schéma 4 où le composé 13 est identique au produit de formule générale 2, lorsque R1 représente un atome de chlore. Le produit de départ a où R1 représente un groupe MeN(COMe)- peut être préparé par l'alkylation du composé 6 selon le schéma 5. Schéma 5 où le composé 14 est identique au produit de formule générale a lorsque R1 représente un groupe MeN(COMe)-. Les exemples suivants de préparation des produits de formule générale 1, à partir des composés de formule générale 2 illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. Les analyses élEmentaires et les spectres IR et RMN confirment la structure des composés obtenus selon l'invention. Exemple 1u;}1ydroxyméthyl4 diméthylamino-3 acridine: composé la (R1 = R2 = H). A la solution de 1,25 g (6.10~3mole) de diméthylamino-3 acridine (2; R1 = H) et 11 ml d'HCl à 36 %, on ajoute 1,1 g (12,2.10-2mole) de trioxane et on maintient la suspension sous agitation à température ambiante pendant 16 heures. La solution obtenue est versée goutte à goutte dans un mélange de 35 ml de NH40H (c) et 50 g de glace et le précipité est extrait trois fois par le chlorure de méthylène. Les phases organiques sont lavées à veau, séchées (MgS04), filtrée et amenées à sec sous vide.Le produit est purifié par flash chromatographie sur gel de silice, (chloroforme, acétate d'éthyle, 92 / 8 ) puis salifié par l'acidep-toluènesulfonique et cristallisé dans le mélange éthanolacétate d'éthyle, pour donner 0,55 g (22 %) de hydroxyméthyi-4 diméthylamino-3 acridine sous forme de p-toluènesulfonate, PF: 177-1790C 1H RMN (CDC13) : 8 2,36 (s, 3H); 3,35 (s, 6H); 5,13 (s,2H); 6,1 (sb, 1H); 7,21-7,31(m, 3H); 7,49 (t,lH, J = 7,2 Hz); 7,76-8,01 (m, 5H); 8,77 (d, 1H, J = 8,7 H0; 8,88 (s, 1H); 13,85 (sb, 1H). C23H24N2O4S : 424, 52 Analyse élémentaire % Calc. C 65,07 H 5,70 N 6,60 % Tr. C 64,91 H 5,67 N 6,59 Exemple 2: Méthoxyméthyl-4 diméthylamino-3 acridine : composé 1b (R1 = H, R2 = Me). A la solution de 0,5 g (2,2.10-3mole) de diméthylamino-3 acridine (1; R = H) et 5 ml d'acide méthanesulfonique, on ajoute 0,5 g (5,55.10-3mole) de trioxane en solution dans 1 ml d'acide acétique. Après 1 h 30 d'agitation à température ambiante, on ajoute en refroidissant par un bain de glace, 3 ml de méthanol et on maintient la solution sous agitation à température ambiante pendant 16 heures. La solution est versée dans 15 ml de NH40H (c) et 50 g de glace, puis extraite deux fois par le chlorure de méthylène. Les phases organiques sont lavées à l'eau, séchées (MgSO4), filtrées et amenées à sec sous vide. Après purification par flash chromatographie sur alumine basique, (hexane, acétate d'éthyle, 90/10 ) puis salification par l'acidep-toluènesulfonique et cristallisatidn dans le mélange éthanol-acétate d'éthyle, on obtient 0,736 g (76 %) de méthoxyméthyl-4 diméthylamino-3 acridine sous forme de p-toluènesulfonate. PF: 178-180 C RMN (CDC13) : S 2,38 (s, 3H); 3,23 (s, 6H); 3,62 (s, 3H); 5,02 (s, 2H); 7,167,34 (m, 4H); 7,75 (t,lH, J = 7,8 H; 7,85 (d, 1H, J = 8,3 H; 7,95-8,00 (m, 3H); 8,78 (d,lH, J = 8,3 H); 9,05 (s, 1H); 13,66 (sb, 1H). C24H26N204S :438,46 Analyse élémentaire: % Calc. C 65,74 H 5,98 N 6,39 % Tr. C 65,91 H 5,88 N 6,46 Exemple 3: Hydroxyméthyl4 bis(diméthylamino)-3,6 acridine : composé le (Rl= Me2N, R2 = H) Dans un réacteur de un litre, on introduit 22,2 g (0,054 mole) d'acridine orange (composé monochlorhydrate, complexé par une demi-mole de chlorure de zinc et dont la pureté est de 90%), 300 ml d'acide chlorhydrique 6N et 40 ml de solution aqueuse de formaldéhyde à 37%. On agite le milieu réactionnel pendant 24 heures à 25"C. Ce milieu est versé lentement dans un mélange composé de 500 g de glace, de 350 mi d'ammoniaque à 32% et de 300 ml d'acétate d'éthyle.On filtre un insoluble marron, avant de décanter la phase organique puis d'extraire la phase aqueuse par 100 ml d'acétate d'éthyle. Les deux phases organiques sont rassemblées puis lavées deux fois par 70 mi d'eau, une fois par 70 mi de saumure puis séchées sur sulfate de magnésium. Après évaporation de l'acétate d'éthyle, le résidu cristallin est agité dans 100 ml d'éther diisopropylique, filtré, rincé puis séché sous vide à 30"C. On obtient ainsi 13,2 g (82 %) de dérivé le brut que l'on purifie par recristallisation dans 1' acétonitrile. PF: 114-116"C RMN 1H (DMSO): 6 2,86 (s, 6H, 3-N(CH3)2); 3,12 (s, 6H, 6-N(CH3)2); 5,15 (s, 2H, CH2-O); 5,95 (s, 1H, OH); 6,91 (d, 1H, 5-H); 7,33 (m, 2H, 2 et 7 H); 7,87 (m, 2H, 1 et 8 H); 8,67 (s, 1H, 9-H). C18H21N3O : 295, 386 Analyse élémentaire: %Calc. C 73,19 H 7,17 N 14,23 %Tr. C 72,89 H 7,16 N 14,21 îg du dérivé le (0,00338 mole) est dissous à 40"C dans 40 mi d'acétate d'éthyle puis cette solution ramenée à 20"C est additionnée lentement à une solution composée de 0,41 g d'acide benzolque (0,00338 mole) et de 10 ml d'acétate d'éthyle. Après 30 minutes d'agitation, les cnstaux sont filtrés, rincés puis séchés sous vide à 30"C. On obtient ainsi 0,95 g (66 %) de dérivé le sous forme de benzoate contenant 0,6 mole d'eau. PF: 131-1320C. C25H27N3 3, 0,6 H2O : 428,318 Analyse élémentaire: %Calc. C70,10 H 6,63 N 9,81 %Tr. C 69,81 H 6,48 N 9,80 Exemple 4 : Bis(diméthylamino-3 , 6) (méthyl-2-propyloxyméthyl)-4 acridine composé Xg (R1 = Me2N, R2 = Méthyl-2 propyl). Dans un réacteur de 50 ml et à OOC, on introduit 2,8 g (0,00947 mole) de dérivé le, 10 mi de méthyl-2 propanol-l et 4 ml d'acide méthanesulfonique. On agite le milieu réactionnel pendant 10 minutes avant de le verser lentement dans un mélange composé de 50 g de glace, de 50 ml d'ammoniaque à 32%, de 150 ml d'eau et de 200 ml d'acétate d'éthyle. La phase organique est décantée puis la phase aqueuse est extraite par 20 mi d'acétate d'éthyle. On lave la phase organique totale deux fois par 50 ml d'eau puis par 25 ml de saumure avant de la sécher sur sulfate de magnésium.Après évaporation de l'acétate d'éthyle, le résidu est chromatographié sur une colonne de florisil (70 g) en éluant par un mélange composé de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque à 32% dans les proportions: 97,5/2,25/0,25. Après évaporation des fractions pures, le résidu huileux, dissous dans 30 ml d'éther diéthylique est versé lentement dans une solution composée de 2 g d'acide benzoïque et de 50 mi d'éther diéthylique. Après une heure d'agitation, les cristaux sont filtrés, rincés puis séchés sous vide à 30"C. On obtient ainsi 2,25 g (40 9Si) de dérivé Ig sous forme de dibenzoate. PF: 102-103"C RMN 1H (DMSO): 6 0,90 (d, 6H, (CH3)2C, JHH=6,7Hz); 1,91 (m, 1H, CH); 2,97 (s, 6H, 3-N(CH3)2); 3,12 (s, 6H, 6-N(CH3)2); 3,43 (d, 2H, O CH2-C, JHH=6,6Hz); 5,12 (s, 2H, Ar-CH2-O); 6,92 (d, 1H, 5-H, JHH=2Hz); 7,33 (d, 2H, 2 et 7 H); 7,46 à 7,66 (m, 6H, 4H et 3-H acide benz & que); 7,85 à 7,97 (m, 6H, 1 et 8 H + 2-H acide benzoïque); 8,62 (s, 1H, 9-H); 11,5 à 14 (large, 2H, NH+). C36H41N305 : 595,740 Analyse élémentaire: %Calc. C 72,58 H 6,93 N 7,05 %Tr. C 72,33 H 6,94 N 7,06 Le tableau 1 ci-après résume les principaux produits synthetisés qui illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. Tableau 1 Composé R1 R2 Sel PF ( ) no. la H H p-toluènesulfonate 177-1 79 lb H Me p-toluènesuifonate 178-180 lc C1 H base 129-131 ld Cl Me p-toluènesulfonate 149-151 le M9N H benzoate 131-132 If M9N Me maléate 135-136 lg M9N méthyl-2 propyl benzoate 102-103 1h Me2N CH2Ph chlorhydrate 161-162 li MeN(COMe)- H base - 118-119 Les composés de l'invention ont été soumis à des essais pharmacologiques qui ont mis en évidence leur intérêt comme substances à activité thérapeutiques. Aussi, l'activité cytotoxique des produits a été évaluée utilisant le test MTT [T. Mosman, J. Immunol. Method, ÇE, 55 (1983)] sur différentes lignées cellulaires tumorales. Le test MTT est basé sur la capacité qu'ont les cellules vivantes de réduire, par l'action de leurs enzymes mitochondriales, un sel de tétrazolium jaune en un composé bleu violet, le formazan, mesurable par spectrophotométrie après dissolution dans le diméthylsulfoxide. La quantité de formazan formée (et par conséquent l'intensité de la coloration obtenue) est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes présentes dans le milieu de culture au moment de Pesai. Les lignées utilisées, d'origine humaine, sont commercialisées par l'American Type Cell Collection (ATCC), organisme de référence pour la fourniture de souches standardisées. Lignée code Origine ATCC A549 CCL185 poumon J82 HTB1 vessie T24 HTB4 vessie MCF7 HTB22 sein T47D HTB133 sein Le protocole expérimental utilisé est essentiellement celui décrit par C. Carmichael, W.G. De Graff, A.F. Gazdor, D. Minna, et B. Mitchell (Cancer Res., 47, 936 (1987)]. Les résultats sont exprimés sous forme d'un pourcentage d'inhibition de croissance par rapport aux contrôles. Le tableau 2 donne, à titre d'exemple, les résultats obtenus pour certains dérivés de l'invention à la concentration de 10-5 molaire. Tableau 2 Composé Pourcentage d'inhibition r lignée A549 182 T24 MCF7 T47D la 30 25 43 23 39 le 66 68 58 58 38 if 36 44 37 46 20 I 73 62 82 i 53 49 1h 78 70 75 66 58 L'activité des produits a été confirmée in vivo utilisant le modèle d'adénocarcinome MXT [C.S. Watson, D. Medina, J.H.Clark, CancerRes., 37, 3344 (1977); W.T. Bradner et C.A.Claridge, "Antineoplastic Agents", Wiley Interscience (1984); T.W. Redding et A.V. Schally, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, ssQ, 1459 (1983)1. Dans ce modèle, des souris de type B6D2F1 sont greffées par l'injection souscutanée d'un fragment tumoral d'environ 10 mm3 provenant d'une tumeur MXT. Les produits à tester sont administrés par voie i.p. à partir du 17 éme jour après la greffe. Le test MXT fournit deux types de résultats : l'effet exercé par la molécule étudiée sur la croissance tumorale et le temps de survie des animaux traités par rapport aux animaux contrôlés (T/C exprimé en pourcentage). Le tableau 3 donne, à titre d'exemple, les résultats obtenus pour l'un des dérivés de l'invention. Tableau 3 Test MXT in vivo pour le dérivé le NOMBRE JOURS T/C RTT (%) D'INJECTIONS N VOIE D'INJECTION su / SIG X APRES LA DOSE (mg/kg) GREFFE 3 X 10 10 IP J17, J19, J21 159 21/ns 3 X 20 10 IP J17, J19, J21 134 1/ns 3 X 40 10 IP J17,J19,J21 112 21/** 6 X 40 10 IP J17, J19, J21 93 27/** J24, J26, J28 Temps de survie médian des animaux traités TIC = ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ x 100 Temps de survie médian des animaux témoins N = Nombre d'animaux par groupe. RTT = Réduction de taille tumorale / SIG = signification statistique; ** = P Compte tenu de leurs propriétés pharmacologiques, les composés de l'invention peuvent être utilisés en thérapeutique humaine dans le traitement de la pathologie cancéreuse. Les préparations pharmaceutiques contenant ces principes actifs peuvent etre mises en forme pour l' administration par voie orale, intraveineuse ou sous cutanée. Revendications (1) Nouveaux dérivés de l'amino-3 acridine correspondant à la formule genérale 1: dans laquelle: R1 représente un atome d'hydrogène, un atome de chlore, un groupe diméthylamino, ou un groupe MeN(COMe)-; - R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou un groupe benzyle; ainsi que leurs sels avec des acides minéraux ou organiques thérapeutiquement acceptables. (2) Composés de formule générale 1 selon la revendication 1, caractérisés par le fait qu'ils sont choisis parmi: - Hydroxyméthyl4 diméthylamin > 3 acridine - Méthoxyméthyl diméthylamino-3 acridinc - Chloro-6 hydroxyméthyl-4 diméthylamino-3 acridine - Chlore-6 méthoxyméthyl4 diméthylamino-3 acridine - Hydroxyméthyl-4 bis(diméthylamino)-3,6 acridine - Méthoxyméthyl-4 bis(diméthylamino)-3 , 6 acridine - Bis(diméthylamino)-3 ,6 (méthyl-2-propyloxyméthyl)-4 acridine. - Benzyloxyméthyl-4 bis(d i méthylamino)-3 , 6 acridine - (N-Acétyl, N-méthylamino)-6 hdroxyméthyl4 diméthylamino-3 acridine (3) Procédé de préparation de composés selon les revendications 1 et 2, où R2 représente un atome d'hydrogène, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule générale 2 avec le formol, le trioxane-l,3,5, ou le paraformaldéhyde en milieu acide, selon le schéma: où - R1 est défini comme ci-dessus; - les composés de formule générale a correspondent aux composés de formule générale 1 lorsque R2 représente un atome d'hydrogène. (4) Procédé de préparation de composés selon la revendication 3, caracterisé en ce que la réaction entre un composé de formule générale 2 et le formol, ou le trioxane-1,3,5, ou le paraformaldéhyde s'effectue au sein d'un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique ou d'un acide organique tel que l'acide méthanesulfonique, de préférence à une température comprise entre 15"C et 400C. (5) Procédé de préparation de composés selon les revendications 1 et 2, où R2 représente un groupe aikyle linéaire ou ramifié en C1-C4 ou un groupe benzyle, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule générale a avec un alcool de formule générale R30H en présence d'un acide, selon le schéma: où R1 est défini comme ci-dessus; - R3 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou un groupe benzyle. (6) Procédé de préparation de composés selon la revendication 5, caracterisé en ce que fa réaction entre un composé de formule générale 3 et un alcool R30H, de préférence en excès, s'effectue en présence, soit d'un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique, soit d'un acide organique tel que l'acide méthanesulfonique, de préférence à une température comprise entre 0 C et 50"C. (7) A titre de médicaments nouveaux utiles, par exemple, en thérapeutique humaine dans le traitement de la pathologie cancéreuse, les composés définis selon l'une des revendications 1 et 2. (8) Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif au moins un composé selon l'une des revendications 1 et 2, associé à un véhicule pharmaceutique acceptable.