Brevet FR2707983A1 — publié le 19950127

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de l'acide lipoique et dihydrolipoïque, leur préparation et leur application en thérapeuti- que. L'enzyme acyl CoA: Cholestérol O-Acyl transférase (ACAT) joue un rôle clé dans l'évènement athéroscléreux: l'inhibition de l'ACAT réduit le taux de cholestérol dans le sérum et prévient l'accumulation de cholestérol dans le tissu artériel (D.R SLISKOVIC, A.D. WHITE. TIPS, 1991, 12, 194-199). En outre, les lipoprotéines de basse densité (LDL) sont, après oxydation, captées par les "Scavenger receptors" t- conduisent à la formation de la cellule spumeuse, point de départ de la plaque athéromateuse. (D. STEINBERG, et al. England. J. England. J. Med. 320,915-924, 1989). L'objet de la présente invention vise à obtenir de nouveaux dérivés hypocholestérolémiants et antioxydants pouvant agir à la fois sur la qualité et la quantité des LDL dans le but de réduire leur potentiel athérogène et leurs effets délétères à long terme sur la paroi vasculaire. Les composés de l'invention répondent à la formule générale I R. R R7 R1 R2 R4 [NRINH)X 0- H R. dans laquelle: - R1 et R2, identiques ou différents représentent indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C 1- C4, un radical acyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou forment ensemble une liaison S-S - R3, R4, R5, R6, R7 identiques ou différents représentent indépendamment les uns des autres, un atome d'hydrogène, un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C1-C5, un groupe hydroxyle, alcoxy linéaire ou ramifié en C l-C3 ou acyloxy linéaire ou ramifié en C1-C3, un halogène, en particulier le fluor, et au moins 2 de ces radicaux étant différents de l'atome d'hydrogène, - X peut prendre les valeurs 0 ou 1, et leurs sels thérapeutiquement acceptables. En outre, l'invention couvre aussi bien les racémates que les différents énantiomères ou leurs mélanges. Les composés de formule générale I peuvent être préparés selon le schéma de réaction suivant: 1. amides (X=O) R, R R? R3 iodure de 2-chloro 1-methyl pyridinium triethylamine toluène R, R R, RR O H R4 N R: S-S R, R R, RH R: SH SH 2. urées (X= 1) S-S HOOC"-v) DPPA / TEA Toluène R, R R7 Il + oN R4 NH2 R3 Toluène C RT0 S- R N R70 R. H H R3 NaBH4 EtOH R1 R R. R3 H H Pour l'obtention des amides: la réaction de l'aniline avec l'acide lipoique s'effectue en utilisant les méthodes classiques d'activation telles que, à titre d'exemple l'iodure de 2-chloro 1-methyl pyridinium en présence de triethylamine. Pour l'obtention des urées: 5. l'acide lipoique est transformé en isocyanate par traitement au diphenyl phosphoryl azide en présence de la triethylamine dans le toluène puis condensé sur l'aniline; la transformation des composés lipoïques en dérivés dihydrolipoï- ques est effectué par réduction à l'aide d'un agent tel que le borohydrure de sodium dans l'éthanol. Les dérivés pour lesquels R1 et/ou R2 sont différents d'un atome d'hydrogène ou d'une liaison S-S sont obtenus en faisant réagir le dérivé dihydrolipoique correspondant avec un radical R1 X et/ou R2 X, dans lequel R1 et R2 sont définis précédemment et X représente un groupe partant, de préférence CI, Br ou I. La réaction est effectuée dans un solvant approprié, notamment l'acétone, l'acétate d'éthyle ou la méthyl éthyl cétone, en présence d'une base appropriée, par exemple le carbonate de potassium ou une trialkylamine. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. Les analyses et les spectres RMN et IR confirment la strucutre des composés obtenus selon l'invention. Exemple 1 N-(2,6-diisopropyl)-phényl-alpha-lipoamide (composé 1) A une solution jaune de 6,18 g (0,03 mole) d'acide cc-lipoïque dans 90 ml de toluène, ajouter 10 ml (0,072 mole) de triéthylamine puis 9,18 g (0,036 mole) de iodure de 2-chloro-l-méthyl pyridinium. La suspension obtenue est agitée 20 minutes à température ambiante. Ajouter alors 6,2 ml (0,033 mole) de 2,6-diisopropylaniline et chauffer 2 heures à 80 . Laver à l'acide chlorhydrique N. à l'eau, au bicarbonate de sodium et à l'eau jusqu'à neutralité. Sécher, filtrer, évaporer sous vide. Reprendre le solide par un mélange 40/60 éther-hexane. Glacer I heure, filtrer, laver à l'hexane, sécher à 50 . P = 10,64 g de poudre crème F = 186 Rdt = 97 % Rf = 0,54 dans acétate d'éthyle-hexane 50/50. 2707983 Exemple 2 N-(2.,6-disopropyl)phényl-N'-4(1,.2-dithiolan-3-yl)butyl urée (composé 2) A une solution jaune de 2,06 g (0,01 mole) d'acide cc-lipoïque dans 30 ml de toluène, ajouter 1,46 mi (0,0105 mole) de triéthylamine et 2,16 g (0,01 mole) de diphénylphosphorylazide. Chauffer 1 h à 80 , formation quantitative d'isocyanate (réaction de Curtius). Ajouter 1,89 ml (0,01 mole) de 2,6-diisopropylaniline et chauffer encore 1 heure à 80 . Après refroidissement, diluer à l'acétate d'éthyle, laver à l'eau, à l'acide chlorhydrique N et à l'eau jusqu'à neutralité. Sécher, filtrer, évaporer sous vide. Reprendre le solide à l'éther, filtrer, laver et sécher à l'air. P = 2,9 g de cristaux crème F = 198- 199 C Rdt = 76 % - Rf = 0,22 dans acétate d'éthyle-hexane 50/50. Exemple 3 N--( 2,6-diisoproPyl) -phényl-6,8-dimercapto-octanamide (composé 5) A une suspension jaune pâle de 10,64 g (0,029 mole) du dérivé 1 dans 225 ml d'éthanol, ajouter lentement 1,1 g (0,029 mole) de borohydrure de sodium. Après 4 heures d'agitation à température ambiante, évaporer le solvant sous vide. Dissoudre le résidu dans l'acétate d'éthyle, laver à l'acide chlorhydrique N et à l'eau. Sécher, filtrer, concentrer à sec sous vide. Reprendre le solide à l'hexane, filtrer, laver et sécher à l'air. P = 9,2 g de cristaux blancs F = 89 Rdt = 86 % Rf = 0,22 dans acétate d'éthyle-hexane 30/70. Exemple 4 N-(2.,6-diisopropyl)phényl-N'-(5.7-diinercapto)heptyl urée (composé 6) A une suspension crème de 1.9 g (0.005 mole) de composé 2 dans 40 ml d'éthanol, ajouter progressivement 0,38 g (0.01 mole) de borohydrure de sodium et agiter 4 heures à température ambiante. Après concentration du milieu réactionnel sous vide, - le résidu est mis en suspension dans l'eau. Neutraliser par addition d'acide 6 2707983 chlorhydrique N et extraire à l'acétate d'éthyle (250 ml). Laver à l'eau, à l'eau salée. Sécher, filtrer, évaporer. Le solide obtenu est repris à l'éther, filtré, lavé et séché à l'air. P = 1,21 g de poudre blanche F = 173-174 Rdt = 63 % Rf = 0,48 dans acétate d'éthyle-hexane 50/50. Exemple 5 N-(2,6-diisopropyl)phényl-6-mercapto-8-acétylmercapto octanamide. (composé 9) Dissoudre 1,1 g (0,003 mole) du dérivé 5 dans 10 ml d'acétate d'éthyle. Ajouter 0,49 ml (0,0035 mole) de triéthylamine puis, goutte à goutte 0,23 ml (0,0033 mole) de chlorure d'acétyle dans 2 ml d'acétate d'éthyle en refroidissant vers 10 . Agiter 2 heures à température ambiante. Filtrer le chlorhydrate de triéthylamine formé (quantitatif), le laver à l'éther. Le filtrat est concentré sous vide pour donner une huile qui cristallise à 0 . Triturer dans un peu d'éther, filtrer, laver et sécher à l'air. P = 190 mg de poudre blanche F = 90 Rdt = 15 % Rf = 0,28 dans acétate d'éthyle-hexane 30/70. Exemple 6 N-(2.,6-diisopropyl)phényl-6. 8-diméthylmercapto bctanamide (composé 10) A une solution du dérivé 5 (300 mg, 8.10-4 mole) dans 10 ml de méthyl éthyl cétone, ajouter 169 mg (12.10-4 mole) de carbonate de potassium puis 0,08 ml (12.10-4 mole) d'iodure de méthyle et chauffer 4 heures à 50 . Après évaporation, reprendre le résidu à l'acétate d'éthyle, laver à l'eau, sécher, filtrer, concentrer. L'huile obtenue est purifiée par passage sur colonne de silice flash en éluant avec un mélange d'acétate d'éthyle-hexane 30-70. Après évaporation, reprendre le solide à l'hexane, filtrer et sécher. P = 140 mg de poudre blanche F = 84 Rdt = 43 % Rf = 0,59 dans acétate d'éthyle-hexane 50/50. Les tableaux 1 et II ci-après résument les principaux produits synthétisés qui illustrent l'invention sans en diminuer la portée. Tableau - I R4 R6s R7 0 R4 N>1(NH)X R3 composé n' x R3 R4 R5 R6 R7 PF ([C) 1 0 isopropyl H H H isopropyl 186C 2 1 isopropyl H H H isopropyl 198-199 C 3 0 F H F H H 80 C 4 0 CH3 CH3 OH CH3 H 123 0C Tableau - II Rs RR6A"INH)X(Hx/ R. composé n x R1 R2 R3 R4 R5 R6 R7 PF ( C) 0 H H isopropyl H H H isopropyl 89 C 6 1 H H isopropyl H H H isopropyl 173-174 C 7 0 H H F H F H H 53 C 8 0 H H CH3 CH3 OH CH3 H 110 C 9 0 H COCH3 isopropyl H H H isopropyl 900C 0 CH3 CH3 isopropyl H H H isopropyl 84 C Les composés de l'invention ont été soumis à des essais pharmacologiques qui ont montré leur intérêt potentiel dans le traitement de l'hypercholestérolémie et de la maladie athéromateuse. Les composés ont été étudiés pour leur effet inhibiteur de l'ACAT d'une part et de leur effet antioxydant d'autre part. 1 - Inhibition de l'ACAT. L'activité inhibitrice de 'ACAT (enzyme acyl CoA: cholestérol O acyltransférase) des composés à été évaluée in vitro en utilisant la technique de H. CHAUTAN et al. (Analytical Biochemistry 173, 436-439, 1988). Les activités, exprimées en concentrations inhibitrices 50 % (CI50), obtenues sur certains produits de l'invention sont reportées, à titre d'exemple, dans le tableau 3 suivant: composé n CI50 (9M) 1I 0,1 2 0,1 4 0,1 " 1 0,1 6 0, " 1 9 0,44 0,08 CI 976 0,77 2 - Activité antioxvdante. a) Péroxydation chimique. En présence de Fe3 + et d'ADP, l'acide dihydroxyfumarique subit une autooxydation qui génère des radicaux libres oxygénés. Ces derniers entrainent la péroxydation des lipides mitrosomiaux hépatiques. Cette péroxydation, effectuée sur des microsomes de foie de rat, est mesurée selon la technique à l'acide thiobarbiturique (formation de T. BARS) tel que décrite par S.Y.H. TSE et al. (Biochemical Pharmacology, Vol 42, n 3, 459- 464, 1991). b) Oxydation des LDL. Les LDL de lapins rendus hypercholestérolémiques par un régime enrichi en caséine sont oxydées par CuS04 4,5 /M. Après une période d'incubation de 6 heures, la péroxydation est évaluée par mesure des T.BARS par spectrophotométrie à 532 nanomètres. A titre d'exemple, le composé 5 de l'invention possède une concentration inhibitrice % inférieure à 10 gM de sur la péroxydation chimique et inférieure à 100 MM de sur l'oxydation des LDL de lapin. Les composés de l'invention sont des hypocholestérolémiants inhibiteurs d'ACAT et antioxydants qui peuvent être utilisés pour le traitement des maladies telles que l' hypercholestérolémie et l'athérosclérose. Les compositions pharmaceutiques peuvent être présentes sous la forme appropriée pour l'administration par voie orale, parentérale ou locale par exemple sous la forme de capsules, comprimés, granulés. gélules, solutés liquides, sirops ou suspensions 3 buvables et contenir les excipients appropriés. La posologie quotidienne peut aller de 10 à 2000 mg. Les compositions pharmaceutiques peuvent également comprendre le composé selon l'invention en association avec un autre principe actif. REVENDICATIONS 1) Nouveaux dérivés de l'acide lipoïque et dihydrolipoïque correspondant à la formule générale I. R R. R"' R1 R2 R R""HN'"(NH)x R3 dans laquelle: - R1 et R2, identiques ou différents représentent indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C1-C4, 20. un radical acyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou forment ensemble une liaison S-S, - R3, R4, Rs, R6, R7 identiques ou différents représentent indépendamment les uns des autres: un atome d'hydrogène, 25. un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C1-Cs un groupe hydroxyle, alcoxy linéaire ou ramifié en C1-C3 ou acyloxy linéaire ou ramifié en C1- C3 un halogène, en particulier le fluor, et au moins 2 de ces radicaux étant différents de l'hydrogène - X peut prendre les valeurs 0 ou 1, et leurs sels thérapeutiquement acceptables, les racémiques ainsi que les différents énantiomères ou leurs mélanges. 2) Composés de formule générale I selon la revendication 1, caractérisés par le fait qu'ils sont choisis parmi: N-(2,6-diisopropyl)-phénylalpha-lipoamide N-(2,4-difluoro)-phényl-alpha-lipoamide N-(2,3,5triméthyl-4-hydroxy)-phényl-alpha-lipoamide N-(2,6-diisopropyl)-phényê46,8-dimercapto-octanamide N-(2,4-difluoro)-phényl-6,8-dimercaptooctanamide N-(2,3,5-triméthyl-4-hydroxy)-phényl-6,8-dimercapto- octanamide N-(2,6-diisopropyl)-phényl-6-mercapto-8-acétyl mercapto- octanamLde N-(2,6-diisopropyl)-phényl-6,8-diméthyl mercapto-octanamide. 3) Procédé de préparation de composés selon les revendications 1 et 2 caractérisé en ce que l'on obtient les composés II par réaction d'une aniline convenablement substituée, sur l'acide lipoïque en présence d'iodure de 2-chloro 1-méthyl pyridinium. R4R7 0 R. R3 S-S 4) Procédé de préparation de composés selon les revendications 1 et 2 caractérisé en ce que l'on obtient les composés III par réaction d'une aniline convenablement substituée sur l'isocyanate de l'acide lipoïque dans le toluène à 80 C. RG Rs 0 S-S III R4 R3 ) Procédé de préparation de composés selon les revendications i et 2, caractérisé en ce que l'on obtient les composés I dans lesquels R1 = R2 = H par réduction des dérivés Il ou III correspondants par le borohydrure de sodium dans l'éthanol. 6) Procédé de préparation de composés selon les revendications 1 et 2 pour lesquels R1 et/ou R2 sont différents d'un atome d'hydrogène et d'une liaison S-S, caractérisé en ce que l'on fait réagir les composés obtenus selon la revendication 5 avec un radical R1X et/ou R2X pour lequel R1 et R2 sont définis dans la revendication 1 et X est un groupe partant, de préférence CI, Br ou I, dans un solvant approprié en présence d'une base appropriée. 7) A titre de médicaments nouveaux utiles par exemple, dans le traitement des maladies telles que l'hypercholestérolémie ou l'athérosclérose, les composés définis selon l'une des revendications 1 et 2. 8) Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un composé de l'une des revendications 1 et 2. 9) Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un composé de l'une des revendications 1 et 2 en association avec tout excipient approprié. 10) Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un composé de l'une des revendications 1 et 2 associé à un autre principe actif.