Brevet FR2705347A1 — publié le 19941125

La présente invention, réalisée au Centre de Recherche Pierre Fabre, a pour objet de nouveaux composés chimiques, leur préparation et leur application en thérapeutique. Les composés de l'invention répondent à la formule générale 1: Es selon des procédés classiques décrits dans la littérature. Schéma de synthèse des composés de formule générale I Cil CI ci ci NCP-N '- ''c- 'ci H xN 2 3 4 fil a 4 S 1 oẢ, R, et n sont définis comme ci-dessus. La réacdtion entre l'hexachlorocyclotriphosphazène et l'anminoalcool s'effectue en milieu monophasique i une température comprisne entre - 10 C et las température de reflux du milieu réactionnel, dans un solvant tel que le tétrahydrofianne (THF), le toluine, l'acétonitrile ou l'éther éthylique en présence d'une base organique telle qu'une amine tertiaire. On obtient ainsi, après extraction du milieu réactionnel et purification, un composé de formule géérale 4 qui, par réaction avec l'a'zidine 1 i une température comprise entre -1O0 C et 50 C dans un solvant tel que le TF et enprésence dune base organique tele que la triéthylamine, domnne un composé de formule générale 1. Les analysa élémentaires et les spectres IR et RMN du proton et du phosphore confirment la structure des composés obtenus selon l'mvention. Les exemplaes suivants illustrent linvention sans toutefois en limiter la portée. EXLES Exemobe -. 4-(4.Cbbmzyl7,7,9,têtrachloro-7,7,9,99-têabydro-1-oza-4,6,8,1O-têtla- ).S,7,9-triphosph.spiro[4,5-déca-S,?7,9-tri.: _ (a O, A - CI2, R - 4- chloropkàyi). Dans un ballon tricol de SOO5nil, on introduit 18,54g (0,0533 mole) d'hexachloro- cyclotriphosphazte, lOOml de THF et 13,Sml (0,097 mole) de tiéthylamine. Sous agitation, on amène la température du milieu réactionnd i à 0 C puis on introduit, en 1 5mn, une solution composée de 9g (0,0485 mole) de N(4-Chlorobenzy)-2- éthanol et de 20ml de THF. L'agitation est maintenue 30mn i 0 C puis 24h i température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré. Le solvant est évaporée et le résidu cistallin es chromatographié par passage i travers une colonne de silice (95g) en éluant par un mélange constitué de cyclohexane, de chlorure de méthylène et d'acétate d'téthyle dans les proportions: 65/30/5. Le produit ainsi purifié est recristallisé à chaud dans 1 50ml d'hexane, filtré, rincé et séché sous vide i 30 C. On obtient ainsi 12,07g de composé 4 sous forme de cristaux blanc& Rendement: 54%. PF: 106 C. RMN 1H (CDCI3): 3,26 (mni, 2H, N*CH2-C); 4,05 (d, 2H, N-CH2-Ar, JPH - 9, 7Hz); 4,38 (n, 2I-, O-CH2-C); 7,35 (s, 4H, CH arom). Analyse % Calc C: 23,48 H: 2,19 N: 12,17 élémentaire: %Tr. C:23,73 H:2,15 N: 11,96 4-(4.Chlorobezyi).7,7,9,9-tet(l-aziridindyl)-7,7,9,9=tt'hydrol'-oxa4,6,8, 10- tétraaza-fXS,7,9-triphosphaspiro-[4,l-déca-S,7,9-triène: j (n - 0, A CH2, R 4- chlorophéyi). Dans un réacteur double enveloppe de 125m1, on introduit 3g (0,00579 mole) de composé 4, 60ml de THF et 7,3ml (0,052 mole) de triéthylamine. Le milieu réactionnrmel est maintenu à -10 C par circulation de saumure dans la double enveloppe. Sous agitation, une solution composée de 4,5ml (0,087 mole) d'aziridine et de 10ml de THF est introduite en 15mn dans le réacteur. L'agitation est maintenue lh i - 10 C puis 48h i température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré, le solvant est évaporée et le résidu cristallin est chromatographié par passage i travers une colonne de silice (25g) en éluant par un mélange constitué de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque dans les proportions: 97,5/2,25/0,25. Le produit ainsi purifié est recristallisé dans 1Omnd d' éther dUsopropylique, filtré, rincé et séché sous vide i 30 C. On obtient ainsi 3,2g de composé la sous forme de cristaux blancs, contenant: 0,095 mole d'éther diisopropylique et 0,148 mole de chloroforme. Rendement: 76%. PF: 72 C. RMN IH (CDCI3): 2,04 (m, 16H, N(CH2)2); 3,13 (m, 2H N-CH2-C); 4,05 (d,2H, N- CH2-Ar, JPH- 9,7Hz); 4,20 (mni, 21, O-CH2-C); 7,29 (d, 2HI, CH arom, JPH = 8,5 Hz); 7,41 (d, 2H, CH aronm, JPH - 8,5 Hz). Analyse %/ Calc C: 41,39 H: 5,39 N: 21,79 élémentaire: % Tr. C: 41,25 H: 5,38 N: 21,45 Exemoe 2 7-(4-Hezadcyloxybenzyi)-2,2,4,4-tdtrachloro-2,2,4,4-tétranhydro-7-osa1,3, ,11- tétruaza-2,4,6,5-triphosphaspiro-[SJ-undéca-1,3,5-triène: 4f (n - 1, A CH2, R, 4-headêqloxy-phé.pn. Dans un ballon tricol de 250ml, on introduit 5,03g (0,0145 mole) d'hexachloro- cyclotriphosphaznm 70ml de THF et 3,67ml (0,0026 mole) de triéthylamine. Sous agitation, on amne la température du milieu réactionnel i 0 C puis on introduit, en 25mn, une solution composée de 5,34g (0,013 mole) de N(4-Hexadécyloxybenzyl)-3- aminopropanol et de 40ml de THF. L'agitation et maintenue lOmn ià 0 C puis 24h ià température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré. Le solrant est évaporée et le résidu solide recristalisé da 50 ml d'un mélange composé d' éther disopropylique et d'acétate d'éthyle dam les proportion: 95/5. Les crisux sont filtrs, n et chés sous vide i C. On obtient ainsi 4,64g de composé 4f sous forme de cristux blancs Rendementg: 52%. PF: 79 C. RMN 1H (CDCI3): 0;88 (t, 3H, CH3); 1,26 0arge, 261, -(CH2)13)-; 1,78 (m, 2H, O-C- CH2-C4); 1,91 (quin, 2H O-C-CH2-C-N); 3,02 (m, 2H, N-CH2); 3,92 (m, 4H, O-CH2- C15 et N-CH2-arom); 4,40 (nk 2H, O-CH2-C-C-N); 6,87 (d, 2H, arom, JPH 8,59Hz); 7,28 (d, 2H, CH arom, JPH - 8,59Hz). Analyse % Calc C: 45,90 H: 6,67 N: 8,23 CI: 20, 84 élémentaire: % Tr. C: 46,0S H: 6,49 N: 8,26 CI: 20,70 7-(4-Hexadéyloxybenz1yl)-2,2,4,4-tétra-(1l-aziridiayl)-2,2,4,4tétrahydro-7-oxa- 1,3,S,11-tétraaza-2,4,6.5-triphosphaspiro-[,5]-und&:a-1,3,S-triéne: If (n - 1, A CH2, R - 4-hexadéylozy-phényi). Dans un réacteur double enveloppe de 125ml, on introduit 4g (0,00588 mole) de composé 4L 45mi de THF et 4,9ml (0,0353 mole) de triéthylamine. Le milieu réactionnel est maintenu à -10 C par ciculation de saumure dans la double enveloppe. Sous agitation, une solution composée de 2, 93mnl (0,0567 mole) d'aziuidine et de 1Smi de THF est introduite en mn dans le réacteur. L'agitation est maintenue lh i -10 C puis 72h i tempeérature ambiante. Le milieu réactionnel est filtré, le solvant est évaporée et le résidu cristallin est chromatographié par passage à travers une colomnne de silice (25g) en éluant par un mélange constitué de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque dans les proportions: 97,5/2, 25/ 0,25. Le produit ainsi purifié est recristall dans 15ml d' éther disopropylique, filtré, rincé et séché sous vide i 30 C. On obtient ainsi 2,56g de composé If sous forme de cristaux blancs. Rendement: 62/%. PF: 81 C. RMN IH (CDCI3) ': 0;88 (t, 3H, CH3); 1,26 (large, 26H, -(CH2)13)-; 1,77 (m, 4H, O-C- CH2- et O-C-CH2-C-N); 2,08 (d, 16h, N-(CH2)2); 2,94 (nm, 2H, N-CH2); 3, 93 (m, 4H, O-CH2-C15 et N-CH2-arom); 4,25 (m, 2H, O-CH2-C-C-N); 6,84 (d, 2H, arom, JPH 8,59Hz); 7,30 (d, 2H, CH arom, JPH - 8,59Hz). Analyse %Calc C: 57,77 H: 8,70 N: 15,85 élémentaire: % Tr. C: 57,41 H: 8,81 N: 15,65 ExemDle 3 7-(3.TrifluorométhylbenzyI)-2,2,4,4-tétrachloro-2,2,4,4-tétrahydro-7oxt-13,5,1 1- tétraaza -2,4,6S-triphosphaspiro-[5,51-undéca-1,3,5-triène: 4i (n - 1, A CH2, R - 3-trifluoromnéthylphényl). Dans un ballon tricol de 500mrl, on introduit 16,40g (0,047 mole) d'hexachloro- cyclotriphosphaz, lOOmrl de THF et 11,95ml (0,086 mole) de triéthylamine. Sous agitation, on amène la température du milieu réactionnel i 5 C puis on introduit, en 10mn, une solution composée de 10g (0,043 mole) de N(3-Trifluorométhylbenzyl)3- aminopropanol et de 20ml de THF. L'agitation est maintenue 10mn à 5 C puis 17h à température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré. Le solvant est évaporée et le résidu cristallin est chromatographié par passage à travers une colonne de silice (lOOg) en éluant par un mélange constitué de cyclohexane, de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle dans les proportions: 65/30/5. Le produit ainsi purifié est recristallisé i chaud dans 150ml d'hexane, filtré, rincé et séché sous vide à 30 C. On obtient ainsi 13,8g de composé 4i sous forme de cristaux blancs. Rendement: 63%. PF: 103 C. RMN 1H (CDCI3): 1,97 (quin, 2H, O-C-CH2-C-N); 3,09 (m, 2H, N-CH2. H = ) 13,74Hz); 4,38 (d, 2H, N-CH2-arom, JSPH - 9,40Hz); 4,45 (sext, 2H, O-CH2, JPH = 13,77Hz); 7,46 ià 7,62 (nm, 4H, arom). Analyse % Calc C: 26,01 H: 2,38 N: 11,03 Cl: 27,92 élémentaire: % Tr. C: 26,20 H: 2,37 N: 10,96 CI: 28,05 7-(3Trifluorométhylbenzyl)-2,2,4,4-tétra-(-aziridinyl)"2,2, 4,4-ttrabydro-7-o 1,3,5,11-titrnza-2,4,6 -triphosph spiro-[5,5]-undi:a1,3,j--triène: li (n 1, A - CH2, R - 3-trifluorométhylphényl). Dans un réacteur double enveloppe de 125ml, on introduit 6g (0,0118 mole) de composé 4L 60nml de THF et 9,87ml (0,0701 mole) de triéthylaniine. Le milieu réactionnel est maintenu à -15 C par circulation de saumure dans la double enveloppe. Sous agitation, une solution composée de 6,1ml (0,118 mole) d'aziridine et de 15mi de THF est introduite en lSmn dans le réacteur. L'agitation est maintenue lh à - 10 C puis 72h à température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré, le solvant est évaporée et le résidu cristallin est chromatographié par passage i travers une colonne de silice (35g) en éluant par un mélange constitué de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque dans les proportions: 97,5/2,25/ 0,25. Après évaporation de l'éluant le produit est cristallisé dans 30ml d'hexane. filtré puis séché avant d'être recristallisé dans 30ml d'un mélange composé dhmexa et d'acétate d'éthyle dans les proportions: 65/35. Après séchage sous vide i 30 C, on obtient ainsi 4,28g de composé li sous forme de cristaux blancs et contenant 0,32 mole d'hexane et 0,12 mole d'acétate d'éthyle. Rendement: 63%. PF: 133 C. RMN IH (CDC13): 1,84 (m, 2H, O-C-CH2-C-N); 2 à 2,15 (m, 16H, N-(CH2)2); 2,97 (sext, 2H, N-CH2); 4,05 (d, 2H, N-CH2-arom, JPH - 7,89Hz); 4,29 (sext, 2H, O-CH2); 7,40 i 7,68 (m, 4H, arom). Analyse %Calc C: 44,99 H: 5,89 N: 19,57 élémentaire: %Tr. C: 44,78 H: 5,94 N: 19,30 Le tableau 1 ci-aprés résume les principaux produits synthétisés qui illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. Tableau 1 _ Compaosé, a A R PF (Q la O CH2 4- CI phényl 72 lb O CH2 4-O(CH2)lSMe phényl 85 lc 1,CH2 4-O(CH2)3Me phényl 121 ld 1 CH2 4-O(CH2)7Me phény 71 le 1 CH2 4-O(CH2)10Me phényl 71 if I CH2 4- O(CH2)lSMe phényl 81 lg 1 CH2 3-Cl phényi 132 lh 1 CH2 4-CI phényl 118l li 1 CH2 3-CF3 phényl 133 l. j L 1 CH2 3-NO2 phényl 158 lk 1 CHMe 4- CI phényl 107 i 1 CH2 2-CI phényi 130 lm O CH2 4-NMe2 phényi 133 In 1 CH2 4-OH phéyi 170 lo I CH2 4-F phéi_ 90 1p 1 CH2 3-Me phényi 147 l Iq 1 CH2 3,4-diCl phnyt_ 135 ACTIVIIE PHARMACOLOGIQUE Les composés de l'invention ont été testés in vitro sur trois lignées cellulaires chimiosensibles: IT, J82 et T24, et leur variant respectif résistant à un mélange de trois cytotoxiques: un alkylant, un intercalant et un alcaloide de vinca. (tableau 2) La mise, au point de ces lignées a été décrite par O. Pauwels et R. Kiss dans Cytometry 12:388-397(1991). Le test MT réalisé sur ces lignées a été décrit par C. Etiévant et coll dans Anticancer Research Il1: 305-312 (1991). Lea résultats sont exprimés par: o le PIM: pourcentage d'inhibition moyen, o esm: écart standard à la moyenne, o S/R: rapport du PIM sensible au PIM résistantes, o nd* non déterminé si le PIM sensible est inférieur i 10. Tableau 2 Composé n Corncentraion Lignées sensibles Lignées résistantes S R microM PIM +/- esm PIM +/- esm 1 8,1 +/- 1,9 7,3 +/-2,5 nd lb 10 93,6 +/- 0,9 84,0+/-3,5 1,1 _________100 97,7+/-0,1 94,4+/-0,8 1 I 4,4+/-2,1 11,6+/-1,8 nd if 10 90,1 +/-2,0 60,1 +/- 20,5 1,5 97,3 +/-0,2 92,8 +/- 1,1 1 1 0,0 +/-0,0 1,4 +/- 1,1 nd lb 10 12,0 +/-2,2 2,2 +/- 1,8 5,5 48,4+/ 10,7 31,4+/. 1,5 1,5 Lea résultats du tableu 2 montnet l'activité cytotoxique des dérivés, tant sur les lignées cellulaires chimniosuibles que sur leur variant respectif chimiorésistant25 Compte teu de leurs propriétés pharmacologiques, les composés de lminvention peuvent être utis en thépie humaine dans le taitement de la pathologie cancéreuse. Les préprons phamaceutiques contenant ces principes actifs poeuvent étre rises en forme pour 'adminisation par voie orale, intraveineuse ou sous-cutanée. Revendications Nouveaux dérivés d'azridinospirooxaazaaulkcylcyclotriphosphazènes substitués corres- pondant à la formule générale 1: \/ A-R N,,.I I a, N1 n peut prendreles valeurs O ou 1; A repré e un ra l alkyl en C i àC4, liaire ou ramif; R représente un phyi substitué par un ou plusieurs substituants choisis parmi: un 2 groupe akyll en Cl i C6 linéaire ou ramifi, un atome dualogne, un groupe nitro, un groupe tu oméy un groupe dimhîylino, un groupe hydoxy ou un groupe alkoxy en C1 i C16. 2. Composé de fdile générale I selon la revendication 1, caractérisés par le fait qu'ils sont choisis pa: - 4{4-Chl, bmyz,7,7,9,9-tetra-( l -aziridinyl)7,7,9,9-tétahydro- 1 -oxa4,6, 8,10- tétrSA5a,7,9.pipoh -4,5]-déca-5,7,9ftièo - 4-(4-. d b nzyl)-7,7,9,9-tetra(1-a y-7,7,9,9-tmtr o--oxa- 4,6,8,10-t ua-5.S,7,9-triphosphupi[4,5]-déca-5,7,9-trio. - 7-(4-Butloxybe 2,2,4,4-té(1-'a(-idin).2,2,4,4-téthydr-7-oxa- 1,3,S,11-ténuz2,4,6>.s.triphosphspo5,5-undca-l,3,5-trii - 7-( a2,2, 4, 4-t(l-niriid 2,,4,4-t*Rrhy -7-oxa- 1,3,5, 1-.tétraaza.2,4,6a5-triphosphaspiro-5,5]lundéca1,3,5-triè.e 7-(4Undécyloxybenzy)-2,2,4,4-téta-(1-aziridinyl)-2,2,4,4-téttahydro7-oxa. 1,3,5,11 -tétraaza-2,4,65-triphosphaspiro-[5,5]-undéca- 1,3,5-trine. - 7-(4-Hexadcyloxybenzyl)-2,2,4,4-tétra-(l-aziridinyl)-2,2,4,4.tétrahydro-7-oxa. 1,3,5,1 1-tétraaza-2,4,6k5.triphosphaspiro-5,5]-undéra-1,3,5-trièmo - 7-(3-Chlorobnzy)-2,2,4,4-té(tra.-(I-azindinyt)-2,2,4,4-tt-ahydro-7-oxa1,3,5,I 1- tétraaza-2,4,6)5-triphosphaspiro-5,5]-undcab- 1,3,5-trime. - 7-(4-Chlorobenzyl)-2,2,4,4- tn1-(-aziridirny)-2,2,4,4-ttrahydro-7-ox-1, 3,S,1 1- tétraaza-2,4,6C'5-triphosphaspiro-[5,5]-undéca-1,3,5-triènm - 7-(3-Tridfluorombzyl)-2,2,4,4-tra-(1-'azrdi).2,2,4,4-tétahydro-7-oxa- 1,3,5,1 1-tétraam-2,4,6)5-triphosphaspiro-[5,5]-undca-1,3,5-trin. - 7-(3-Nitrobenzyl)-2,24,4-tétra-(l1-azirdinyl)-2,2,4,4-térahydro-7-oxa1,3,5,1 1- têtrazm-2,4,6S.-triphosphspiro(5,5]-und6ca-1,3,S-trir. - 7-(1-(4-Chlorophl)éthyl)-2,2,4,4-téta-(1-amidiyi).2,2,4,4-tRuaydro.7oxa- 1,3,5,1 1-téruza-2,4,6X5-triphosphaspiro[5,5]-undéca-1,3,5-trièm. - 7-(2-Chlorobenzy-2,2,4,4-tétra-(1-aziridiny)-2,2,4,4-t hydro-7-oxa-1,3, 5, I 1- tétruaza-2,4,65.-triphosphaspit-[5,5]-und6ca-1,3,5-trine. 2D - 4-(4-Dimé ainbenzyl)-7,7,9,9-tetra-(I-m' idiny)-7,7,9,9-tlbydro-1-oxa- 4,6,8, O1-téSAn).5,7,9-tiphosphapro-[4,S]-déca-5,7,9-trin. - 7-(4-H -o be)2,2,4,4-tm-(.azdind 22,4,4- tro-7-oxa- 1,3,5,1 1-tétaa.2,4,6>5-triphospaspio-[5,5]-undéca-1,3,5-i - 7.(4-Fuorob 2,2,4,4-tr(1-uaziridiny-2,2,4,4-térahydro-7-oxa-1,3,5, 1 l - tmaaa-2,4,65-iphosphasp-[5,5]-undéca-1,3,5-trinm - 7-(3-Mdhyleyl22,,4,4-tét'-(l-azidinyd-2,2,4,4-tahydr-7-oxa-1,3,5,1 l- té nza-2,4,6).5-ptaouHpiro(S5,5]-undéca-1l,3,S-tri i - 7-(3,4-Dkhrob y2,2,4,4-ttra-(1-azridiny-2,2,Z4,4-ttrnhydo-7-oxa- 1,3,5,1 1.térmua-2,4,65.-tiphosp haspi 5,5] ca1,3,5-trit- 3. Procédé de préparation de composés de formule générale 1 scion les revendications I et 2 caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule générale 4 avec l'aziridine en présence d'une base selon le schéma suivant: ci ci A-. A-R CI-. 1 r N 1N io 1 o n. A et R sont définis comme précédemment. 4. Procédé de préparation de composés selon la revendication 3, caractr"i en ce que la réaction entre un composé de formule ginérale 4 et raziridine s'effectue au sein d'un solvant tel que le téahydrofiunme en présence d'un excs d'azridine et éventuelleent en présence d'e base organique telle que la triithylamine, de préfirence i une température comprise entre -10 C et 50 C. 5. A titre de m dic nouveaux utiles, par exemple, en thérapeutique humaine dans le traitement de la pathologie cancéreus, les composés définis selon l'une des revendications 1 et 2. 6. Composition phma ique caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actifu moins un composé selon l'une des revendications 1 et 2, associé i un véhicule phamaceutque acceptabk