Brevet FR2707646A1 — publié le 19950120

La présente invention concerne un procédé d'extraction et de purification de saponines hémolytiques à partir d'un mélange saponosidique. Les mélanges saponosidiques du commerce comprennent environ une quarantaine de molécules saponosidiques, dont certaines seulement sont à action hémolytique, accompagnées d'impuretés polaires notamment des oses, des tanins, des sels et des molécules parasites diverses. Le pouvoir hémolytique de ces mélanges saponosidiques est faible et est affecté entre autres par la présence des oses qui faussent les résultats d'analyse. I1 est nécessaire pour obtenir un produit efficace dans sa fonction hémolytique d'isoler les saponines des impuretés polaires et apolaires. L'isolement des saponines triterpéniques a été traité dans l'ouvrage "Les Triterpénoides en physiologie végétale ou animale" de Messieurs BOITEAU, PASICH et RAKOTA RATSIMAMANGA. Cet ouvrage enseigne que pour l'extraction, on effectue la purification du mélange avec de l'éther de pétrole et que l'on utilise ensuite l'éthanol à 50% ou 90 % ou le méthanol. Les extraits obtenus sont ensuite concentrés par évaporation et introduits goutte à goutte dans l'éther éthylique refroidi ou l'acétone. Selon ce procédé, on lave la saponine précipitée dans l'éther jusqu'à trois fois ; puis on dissout la saponine ainsi purifiée dans l'eau avec addition de chloroforme, on soumet la solution à électrodialyse ; ensuite, on l'évapore et l'on dissout le résidu dans le méthanol pour précipiter la saponine finalement avec l'éther. I1 est évident que la technique d'extraction énoncée par cet ouvrage est une technique de Laboratoire sans application pratique pour l'extraction de saponines hémolytiques. D'une part, cette technique est complexe et couteuse ; d'autre part, elle fait appel à des produits, méthanol, éther, chloroforme qui laissent des traces dans les molécules de saponines et dont l'usage est interdit pour la production de produits à usage médicinal ou d'analyse. La présente invention vise à obvier à ces inconvénients en permettant la production de saponines hémolytiques exemptes d'impuretés. Le procédé selon l'invention consiste à plonger le mélange saponosidique dans un bain d'éthanol absolu, avec agitation, à là température de 40 à 60 celsius. Cela provoque la dissolution des saponines et l'isolement des impuretés polaires dont les oses. Le bain est ensuite soumis à une filtration rapide à chaud (40 à 60 ). A titre d'exemple, par filtration rapide, on entend une filtration d'un litre à la seconde. Le filtre utilisé peut être un filtre en verre fritté de porosité trois à cinq. Cette filtration sépare les saponines dissoutes des impuretés polaires. Le filtrat est ensuite précipité par refroidissement à une température pouvant aller jusqu'à moins 40 celsius. Le précipité est ensuite soumis à une filtration sur un filtre du même type de porosité 3 à 5 ; la solution est éliminée et le précipité est séché en évaporateur rotatif à basse pression ou à l'étuve sous vide ou lyophilisé ou toute autre forme de séchage à une température inférieure à 40 Celsius. Les essais réalisés ont montré que 10 grammes d'un mélange saponosidique du type Saponin Q/RS (RN - DAB 9) mélangés à 150 millilitres d'éthanol absolu permettaient d'obtenir jusqu'à 2 grammes de saponines hémolytiques. Les meilleurs résultats ont été obtenus à partir du mélange saponosidique de l'espèce Quillaja saponaria Molina ou Quillaja smegmadermos. REVENDICATIONS 1. Procédé d'extraction et de purification de saponines hémolytiques à partir d'un mélange saponosidique caractérisé en ce que - le mélange saponosidique est plongé dans un bain d'éthanol absolu à la température de 40 à 60 , ce qui provoque la dissolution des saponines et l'isolement des impuretés polaires dont les oses - le bain est soumis à une filtration rapide à chaud (40 à 60 ) pour séparer les impuretés polaires des saponines dissoutes - le filtrat est précipité par refroidissement à une température inférieure à 20 jusqu'à moins 40 celsius - il est procédé à une deuxième filtration ; - le précipité constitué par les saponines est séché en évaporateur rotatif à basse pression ou à l'étuve sous vide ou lyophilisé, ou toute autre forme de séchage à une température inférieure à 400 -Celsius. 2. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le bain et les filtrations successives s'effectuent à une température de 40 à 60 celsius. 3. Procéde selon la revendication 1 caractérisé en ce que les proportions sont de l'ordre de 10 kg de mélange saponosidique pour 150 litres d'éthanol. 4. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le mélange saponosidique de base est de l'espèce Quillaja saponaria Molina ou quillaja smegmadermos.