Brevet FR2705234A1 — publié le 19941125

UTILISATION DE MOLECULES RECONNUES PAR DES AUTOANTICORPS DE SERUMS HUMAINS POUR LE DIAGNOSTIC OU LE TRAITEMENT DU SIDA La présente invention à pour objet l'utilisation de molécules reconnues par des autoanticorps contenus dans les sérums de patients porteurs de virus du type VIII (Virus de l'lmmunodéficience Humaine), pour la mise en oeuvre de méthodes de diagnostic in vitro de l'infection d'un individu par un virus de type VIII, ainsi que pour l'obtention de médicaments destinés au traitement du SIDA (Syndrome de l'hnmunoDéficience Acquise). L'invention concerne également ces molécules ainsi que les compositions pharmaceutiques les contenant. L'invention a également pour objet les méthodes de diagnostic in vitro susmentionnées, ainsi que les kits, contenant lesdites molécules, pour la mise en oeuvre de ces méthodes de diagnostic. I1 a déjà été démontré que les infections virales sont à l'origine de processus autoimmuns (Fujinami et al., 1988; Schattner et al., 1990). Les travaux de Gabbiani ont rapporté l'existence d'anticorps anti-muscle lisse spécifiques de l'actinie chez des patients infectés par le virus de l'hépatite (Gabbiani et al., 1973). D'autres auteurs ont noté la présence d'autoanticorps dirigés contre les filaments cytoplasmiques intermédiaires pouvant être induits par divers agents viraux comme le virus de la rougeole ou même celui de l'hépatite (Toh et al., 1979). Certains travaux viennent appuyer l'hypothèse autoimmune dans le cadre de la physiopathologie du SIDA. C'est ainsi que des autoanticorps de différentes spécificités : anti-phospholipides, anti-noyau ou même anti-collagène dénaturé (Grant et al., 1989) ont été mis en évidence dans les sérums de patients atteints de SIDA. Klaassen et al. (1990) ont décrit des autoanticorps anti-polynucléaires neutrophiles et anti-plaquettes très tôt lors d'infection par le virus VIH, dont la prévalence croît avec l'évolution de la maladie. D'autres auteurs ont insisté sur les similarités structurales (mimétisme moléculaire) existant entre la gp120 du VIII, le récepteur cellulaire CD4 et les antigènes d'histocompatibilité de classe II (CMH, Complexe Majeur d'Histocompatibilité). Ainsi les anticorps anti-gpl20 dirigés contre les régions homologues pourraient se comporter comme des anti-CMH, et participer ainsi au déficit immunitaire en bloquant certaines interactions nécessaires au bon fonctionnement du système immunitaire (Hoffmann, 1990; Kennedy, 1991; Kion et Hoffmann, 1991). Ainsi la production d'autoanticorps par un organisme infecté par un virus du type VIII reste très controversée, et les méthodes actuelles de diagnostic du SIDA procèdent par détection d'anticorps dirigés contre les virus du type VIII, à l'aide d'antigènes provenant de ces derniers. La présente invention a pour but de fournir de nouvelles méthodes de diagnostic in vitro du SIDA qui sont d'un prix de revient nettement moins élevé, pour une simplicité de mise en oeuvre et une fiabilité au moins égale à ceux des méthodes de diagnostic du SIDA actuellement sur le marché. Un autre but de la présente invention est de fournir des méthodes de diagnostic in vitro du SIDA qui permettent le suivi de l'évolution clinique d'un individu porteur apparemment sain d'un virus de type VIII, vers un état pathologique, ainsi que le suivi pathologique. L'invention a également pour but de fournir de nouveaux kits de diagnostic du SIDA, présentant d'excellentes conditions de conservation. L'invention a également pour but de fournir de nouveaux médicaments pour le traitement des états pathologiques liés à la déclaration du SIDA chez un individu, ou pour la prévention de l'apparition de ces états pathologiques chez les porteurs apparemment sains de virus du type VIH. La présente invention a pour objet l'utilisation d'une ou plusieurs molécules susceptibles d'être reconnues par des autoanticorps présents dans le sérum de patients porteurs de virus du type VIH, pour la mise en oeuvre de méthodes de diagnostic invitro de l'infection d'un individu par un virus du type VIII, ou pour l'obtention de médicaments destinés au traitement du SIDA. Avantageusement, les molécules utilisées dans le cadre de la présente invention sont susceptibles d'être reconnues par des autoanticorps dirigés contre des structures antigéniques lipidiques et/ou membranaires, et appartenant plus particulièrement à l'une des quatre catégories suivantes susceptibles de reconnaître les composés décrits cidessous: - les anticorps dirigés contre des acides gras à chaîne linéaire ou ramifiée, saturés ou insaturés, ces acides gras comprenant notamment 4 à 22 atomes de carbone, de préférence 12 à 18 atomes de carbone, et plus particulièrement les anticorps dirigés contre l'acide myristique, l'acide laurique, l'acide oléique ou l'acide palmitique; - les anticorps dirigés contre des composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, voire également dans le cytoplasme des cellules, ces composés intervenant, le cas échéant, en tant que métabolites dans la synthèse du cholestérol, et plus particulièrement contre des isoprénoïdes liés à une cystéine, notamment les isoprénoides de 6 à 20 atomes de carbone, tels que le farnésyl-cystéine, le géranyl-géranylcystéine, le mévalonate-cystéine et le dolicholcystéine; - les anticorps dirigés contre le cholestérol et ses dérivés, notamment contre le 7-déshydrocholestérol; - les anticorps dirigés contre la cystéine et ses dérivés, notamment ses dérivés de formule: R1S-R2-CH(NH2)-R3 dans laquelle R1 représente H, CH3 ou HO3, R2 représente une chaîne hydrocarbonée de 1 à 10 atomes de carbone, ramifiée ou non, saturée ou non, R3 représente H ou COOH. Par anticorps dirigés contre les composés susmentionnés, à savoir les acides gras, les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines cellulaires, le cholestérol et ses dérivés, et la cystéine et ses dérivés, cités cidessus, on entend les autoanticorps susceptibles de reconnaître ces composés lorsque ces derniers sont liés ou adsorbés à des polypeptides porteurs (tels que l'albumine sérique humaine) dans l'organisme des individus porteurs de virus du type VIH, la taille de ces polypeptides porteurs conférant à ces derniers la propriété d'être suffisamment antigéniques pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits autoanticorps. Ainsi la présente invention a pour objet les autoanticorps des quatre catégories décrites ci-dessus, et susceptibles d'être obtenus à partir de sérums de patients porteurs de virus de type VIII par chromatographie d'affinité à l'aide de supports sur lesquels sont greffés les composés susmentionnés. Les molécules utilisées dans le cadre de la présente invention sont: - soit des conjugués entre les composés reconnus par les autoanticorps susmentionnés et une molécule porteuse suffisamment antigénique pour permettre la reconnaissance desdits composés par ces autoanticorps, - soit des anti-idiotypes (ou anticorps de deuxième génération) dirigés contre les idiotypes (ou anticorps de première génération) eux-mêmes dirigés contre les conjugués susmentionnés. S'agissant des conjugués susmentionnés, la molécule porteuse est soit celle naturellement liée dans l'organisme auxdits composés reconnus par les autoanticorps susmentionnés, notamment l'albumine sérique humaine, soit une molécule porteuse choisie parmi l'albumine sérique bovine ou autres polypeptides porteurs, le cas échéant synthétiques, tels que la polyL-lysine. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet les conjugués entre, d'une part, une molécule choisie parmi les acides gras, les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, le cholestérol et ses dérivés, et la cystéine, tels que définis ci-dessus et, d'autre part, une molécule porteuse antigénique choisie notamment parmi l'albumine sérique bovine, ou autres polypeptides porteurs. Les méthodes de couplage entre lesdites molécules et la molécule porteuse, pour l'obtention de ces conjugués, sont notamment celles décrites dans Geffard et al., (1982). A titre illustratif, le couplage entre lesdites molécules et la molécule porteuse peut être effectuée entre une fonction amine de la molécule porteuse et une fonction carboxylique desdites molécules, ou à l'inverse, entre une fonction carboxylique de la molécule porteuse et une fonction amine desdites molécules. Avantageusement, dans le cas des acides gras, notamment l'acide myristique, l'acide palmitique, ainsi que dans le cas des isoprénoides liés à une cystéine, notamment de la farnésyl-cystéine, la liaison avec la molécule porteuse est effectuée entre une fonction amine de cette dernière et la fonction carboxylique des molécules susmentionnées Avantageusement, dans le cas de la cystéine et ses dérivés, la liaison avec la molécule porteuse se fait entre une fonction acide de cette dernière et la fonction amine de ces molécules. A titre d'exemple de dérivés de la cystéine conjugués à une molécule porteuse (protéine) dans le cadre de la présente invention, on peut citer: - la taurine anhydride succinique-protéine (TAS) de formule: HO3S-CH2 CH2-NH-CO-protéine, - la cystéine anhydride succinique-protéine (CAS) de formule: HS-CH2 CH(COOH)-NH-CO-protéine . Dans le cas du cholestérol et des ses dérivés, le couplage avec la molécule porteuse est avantageusement réalisé par l'intermédiaire du groupe hydroxyle du cholestérol. L'invention concerne également les anticorps polyclonaux ou monoclonaux susceptibles de reconnaître les conjugués susmentionnés. Avantageusement le cholestérol et ses dérivés sont adsorbés sur les protéines porteuses. Ces anticorps idiotypiques sont obtenus notamment de la manière suivante. S'agissant des anticorps polyclonaux, des animaux (lapins, souris, etc.) sont immunisés avec les conjugués susmentionnés, selon les méthodes d'immunisation classiques (notamment par mélange à de l'adjuvant complet de Freund, ou à de la gélose à 2 %). A titre illustratif les injections sous-cutanées des antigènes (à savoir des conjugués susmentionnés) aux animaux, sont faites toutes les deux à trois semaines, et les sérums des animaux sont prélevés dix jours après chaque série d'injection. Les titres, affinités et spécificités des sérums obtenus seront appréciés par des tests immunoenzymatiques spécifiques, notamment du type de ceux utilisés à l'heure actuelle pour tester les sérums de malades atteints du SIDA. Les sérums des animaux présentant de bonnes réponses immunes sont purifiés selon des techniques classiques, notamment par précipitation au sulfate d'ammonium suivie de séparations par chromatographies sur colonne échangeuse d'ions, ou par filtration sur gel. Les anticorps monoclonaux de première génération sont obtenus par prélèvement des lymphocytes spléniques sur les animaux précédemment immunisés et dont les sérums présentent une bonne réponse spécifique contre chacun des antigènes susmentionnés, ces lymphocytes spléniques étant ensuite hybridés avec une lignée de cellules myélomateuses appropriée, notamment avec la lignée SP20/Ag, selon les techniques d'hybridation classiques, telles que celle au PEG1500 (Chagnaud et al., 1987, 1989a). Les cellules hybrides sont réparties dans des puits de plaques. Après dix jours, le surnageant de chaque puits est testé pour sa capacité à reconnaître les antigènes susmentionnés, notamment à l'aide des techniques immunoenzymatiques utilisant les autoanticorps susmentionnés purifiés. La sélection des hybridomes producteurs d'immunoglobulines monoclonales dirigées contre chaque antigène (notamment contre les acides gras, le farnésyl-cystéine, le cholestérol et la cystéine et leurs dérivés, couplés à une molécule porteuse) est réalisée selon le protocole classiquement décrit dans Chagnaud et al., 1987, 1989b, 1992, 1993a, 1993b. L'invention concerne également les anticorps polyclonaux au monoclonaux de deuxième génération (ou anti-idiotypes), susceptibles de reconnaître les anticorps polyclonaux ou monoclonaux de première génération décrits ci-dessus, ou encore les autoanticorps présents dans les sérums des patients porteurs de virus du type VIII, et plus particulièrement les autoanticorps appartenant aux quatre catégories décrites ci-dessus. Ces anti-idiotypes polyclonaux et monoclonaux sont obtenus notamment selon les méthodes décrites ci-dessus pour l'obtention des idiotypes, ces méthodes étant réalisées en utilisant en tant qu'antigènes, soit les idiotypes polyclonaux ou monoclonaux susmentionnés, soit les autoanticorps tels qu'obtenus selon le procédé décrit ci-dessus à partir de sérums de patients porteurs de virus du type VIH. L'invention a également pour objet une méthode de diagnostic invitro de l'infection d'un individu par un virus du type VIH, cette méthode de diagnostic comprenant la succession d'étapes suivantes: - mise en présence d'un échantillon biologique, notamment du sérum, prélevé chez un patient avec les molécules susmentionnées susceptibles d'être reconnues par les autoanticorps présents dans les sérums de patients porteurs de virus du type VIH, ces molécules étant avantageusement sous forme de conjugués tels que décrits ci-dessus, ou de préférence avec des anti-idiotypes susmentionnés; - détection de la présence éventuelle d'anticorps reconnus par les conjugués ou les anti-idiotypes susmentionnés. Selon un aspect particulièrement avantageux de l'invention, la méthode de diagnostic in vitro permet le suivi de l'évolution de l'infection d'un individu porteur de virus du type VIII. Les inventeurs ont en effet mis en évidence que les doses des autoanticorps, notamment des autoanticorps des quatre catégories susmentionnées, dans les sérums des patients porteurs de virus du type VIII, reflètent l'état physiopathologique du patient et permettent de connaître le stade évolutif de la maladie chez ce dernier. En particulier, ces doses permettent de suivre l'évolution de l'état apparemment sain d'un individu porteur du virus du type VIII, vers l'état pathologique, et à l'intérieur même de ce dernier état, le suivi des différents stades d'évolution de cette pathologie. A ce titre, la présente invention a pour objet une méthode de diagnostic in vitro permettant le suivi évolutif vers le SIDA chez un individu porteur de virus de type VIH et caractérisée en ce qu'elle comprend une étape de dosage des autoanticorps présents dans l'échantillon biologique prélevé chez cet individu, ce dosage étant réalisé à l'aide des conjugués ou des anti-idiotypes susmentionnés. La méthode de diagnostic selon l'invention permet plus particulièrement de distinguer les différentes étapes de l'évolution de l'infection par un virus du type VIH, ces différentes étapes pouvant être classées de la manière suivante: I Primo-infection Séroconversion prouvée, symptomatique ou non II Sans symptômes cliniques IIA sujets sans anomalies biologiques 1113 sujets avec anomalies biologiques (anémie, leucopénie, lymphopénie ou lymphopénie T4, thrombopénie, hypergammaglobulinémie, anergie cutanée). m Syndrome lymphadénopathique chronique Présence, pendant au moins trois mois de ganglions, d'au moins 1 cm de diamètre dans au moins deux aires extra-inguinales. llIA sujets sans anomalies biologiques. EB sujets avec anomalies biologiques (anémie, leucopénie, lymphopénie ou lymphopénie T4, thrombopénie, hypergammaglobulinémie, anergie cutanée). IV Symptomatiques Le groupe IV est divisé en 5 sous-groupes A Signes généraux: Un ou plusieurs signes parmi lesquels: fièvre, durant plus d'un mois; amaigrissement non désiré de plus de 10% du poids corporel habituel; diarrhée durant plus d'un mois. B Signes neurologiques: B1 atteinte centrale (méningite, encéphalite, myélopathie). B2 neuropathie périphérique. C Infections opportunistes: C1: infections, parmi lesquelles: pneumocytose; cryptosporidiose; toxoplasmose cérébrale; isosporose; candidose oesophagienne; bronchique ou pulmonaire; cryptococcose; histoplasmose disséminée; coccidioldomycose disséminée; mycobactériose atypique; cytomégalovirose disséminée; herpès cutanéo-muqueux chronique; herpès-virose digestive, respiratoire ou disséminée; Ieucoencéphalite multifocale progressive. C2: autres infections, parmi lesquelles: leucoplasie "velue" de la cavité bucale; zona atteignant plusieurs zones; septicémie à salmonelles récidivante; tuberculose; candidose buccale; nocardiose. D Infections malignes: parmi lesquelles: sarcome de Kaposi, lymphome malin non hodgkinien, lymphome malin cérébral isolé. E Autres manifestations: parmi lesquelles: pneumopathie lymphoïde interstitielle chronique; manifestations ne pouvant être classées dans un des groupes précédents. Avantageusement, les méthodes de diagnostic invitro susmentionnées sont réalisées par détection et/ou dosage d'au moins deux catégories d'autoanticorps susceptibles de reconnaître des molécules différentes, notamment deux catégories d'anticorps choisis parmi les quatre catégories définies ci-dessus, cette détection étant elle-même réalisée à l'aide de molécules reconnues par ces autoanticorps et choisies parmi: - les conjugués susmentionnés entre d'une part les composés reconnus par ces autoanticorps, notamment les acides gras, et/ou les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, et/ou le cholestérol et ses dérivés et/ou la cystéine et ses dérivés, tels que définis cidessus, et, d'autre part, une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps, et/ou - les anti-idiotypes susceptibles de reconnaître les autoanticorps susmentionnés, notamment les anticorps des quatre catégories définies dessus. Les méthodes de diagnostic invitro selon l'invention sont plus particulièrement caractérisées en ce qu'elles comprennent successivement les étapes suivantes: - fixation des conjugués ou anti-idiotypes susmentionnés sur un support solide, notamment sur les parois de puits de plaques de microtitration; - addition de l'échantillon biologique sur le support solide; - rinçage du support solide; - addition d'anticorps marqués, notamment de manière radioactive ou enzymatique ou par fluorescence, susceptibles de reconnaître les complexes formés, lors de l'étape d'addition de l'échantillon biologique sur le support solide, entre les conjugués ou anti-idiotypes susmentionnés et les autoanticorps éventuellement présents dans l'échantillon biologique; - rinçage du support solide; - détection ou dosage des anticorps marqués susmentionnés. L'invention a également pour objet des compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins un des anti-idiotypes susmentionnés, et/ou au moins une molécule susceptible d'être reconnue par les autoanticorps susmentionnés, notamment une molécule choisie parmi les conjugués décrits ci-dessus entre une molécule porteuse et des acides gras, et/ou les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, et/ou le cholestérol et ses dérivés et/ou la cystéine et ses dérivés, tels que définis ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'invention vise plus particulièrement l'utilisation d'au moins un antiidiotype etlou d'au moins un conjugué susmentionnés, pour ltobtention de médicaments destinés au traitement des pathologies liées à l'infection d'un individu par un virus responsable du SIDA, ou à la prévention de l'évolution du stade apparemment sain d'un individu porteur de virus de type VIII, vers un stade pathologique caractéristique d'un SIDA déclaré. L'invention sera davantage illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit de l'obtention de conjugués et d'anti-idiotypes selon l'invention, et de leurs spécificités vis à vis des autoanticorps présents dans les sérums de patients porteurs de virus de type VIH. I - lNTRODUCTION Cette étude a porté sur trois molécules hydrophobes chimiquement définies, intervenant, soit comme antigène d'ancrage pour de nombreuses protéines cellulaires, soit comme constituant essentiel de la bicouche lipidique: 1. l'acide myristique: De nombreuses protéines comme les précurseurs de la capside de certains rétrovirus (Towler et al., 1988) et picornavirus (Kraüsich et al., 1990; Marc et al; 1990), la protéine VP2 du SV40 (Krauzewicz et al., 1990), les polypeptides M35 et M25 du virus de la vaccine (Franke et al., 1989), la tyrosine kinase p60 du virus responsable du sarcome de Rous (Buss et al., 1984) et d'autres enzymes subissent au cours de leur maturation co-translationnelle une myristoylation sur le résidu glycine N-terminal. Celle-ci leur permet ainsi de s'ancrer dans la bicouche lipidique et d'assurer leur fonction biologique. De plus, de nombreux travaux ont montré que les précurseurs polypeptides du VIII (pr55 gag, pr 190 gag-pol) ainsi que certaines protéines régulatrices (tat et nef) sont elles-memes myristoylées. In vitro, la perte de cette fonction empêcherait le virus de se répliquer et même de s'assembler (Tashiro et al., 1989; Bryant et Ratner, 1990; Bryant et al., 1991); 2. le farnésyl-cystéine: Plusieurs équipes ont montré que certaines protéines comme les p21 ras, la transducine subissent après leur synthèse l'addition d'un groupement isoprénoide de 15 atomes de carbone appelé farnésyl (Barracid et al., 1990; Fukada et al., 1990). Ainsi, le résidu farnésyl a été trouvé comme élément d'ancrage toujours lié à une cystéine C-terminale, facilitant l'ancrage des protéines dans les membranes cellulaires. 3. le cholestérol: Des travaux récents ont montré que l'entrée de virus à enveloppe utilise le cholestérol membranaire (Phalen et al., 1991). Les résultats rapportés ci-dessous illustrent pour la première fois la présence dans les sérums de malades d'autoanticorps circulants dirigés contre: - l'acide myristique conjugué (A.Myr c) et ses analogues structuraux; - le farnésyl-cystéine conjugué (Far-cyst c); - le cholestérol (CHO). II - RESULTATS OBTENUS a) DETECTION ET CARACTERISATION D'AUTOANTICORPS ANTI-ACIDES GRAS CONJUGUES DANS LES SERUMS DE PATIENTS INFECTES PAR LE VIH Dans la cellule, la myristoylation des protéines se fait par la formation d'une liaison amide stable entre l'acide myristique et le résidu glycine Nterminal (Heuckeroth et Gordon, 1988; Olson, 1988; Gordon et al., 1991). L'objet de cette étude a été de reproduire cette situation physiologique en couplant l'acide myristique (A Myr) aux groupements glycine de protéines porteuses non-spécifiques (sérum albumine bovine : SAB, sérum albumine humaine: SAH) dans le but d'identifier des autoanticorps spécifiquement dirigés contre cet épitope. Toutefois, les premières études ont montré que les résultats étaient identiques en utilisant un conjugué A Myr-glycine-porteur ou bien en couplant directement 1'A Myr sur les résidus NH2 libres de la protéine porteuse. Cette étude à donc été restreinte à l'utilisation de conjugués acide myristique-porteur. A l'aide de tests immunoenzymatiques (Geffard et al., 1985a et b) optimisés, prenant en compte le caractère hydrophobe de cette molécule, il a été trouvé: (i) des titres significativement élevés en auto anticorps sériques anti-A Myr conjugué (c) sur une large population (n=98) de patients infectés par le VIH; (ii) par ailleurs, nous avons noté que ces autoanticorps sont incapables de discriminer l'A Myr c, de l'acide palmitique conjugué (A Pal c) ou même de l'acide oléique conjugué (A Ole c). Toutefois ces immunoglobulines ne reconnaissent pas le conjugué choline glutaryl (C-AG c). Par conséquent et par souci de terminologie, ces autoanticorps sont désignés: "anti-acides gras conjugués". b) DETECTION ET CARACTERISATION D'AUTOANTICORPS ANTI-FARNESYLCYSTEINE CONJUGUE DANS LES SERUMS DE PATIENTS INFECTES PAR LE VIII Comme mentionné plus haut, le résidu farnésyl est toujours lié covalemment à une cystéine C-terminale. Il permet l'ancrage de certaines protéines essentiellement à activité GTPasique (Barracid et al., 1987; Fukada et al., 1990, Maltese et al., 1990). Le composé farnésyl-cystéine (Far-cyst) a été accroché sur des sérum albumine bovine et humaine. 1l a été trouvé par des tests immunoenzymatiques adaptés à ce type de conjugué: (i) sur une large population de malades infectés par le VIH (n=98), des taux statistiquement élevés en auto-anticorps anti-Far-cyst c circulants; (ii) parmi les molécules proches du Far-cyst susceptibles de présenter ce signal immunologique, on peut citer d'autres isoprénoides comme: - le géranyl-géranyl, isoprénoide à 20 atomes de carbone, décrit comme intervenant dans l'ancrage de certaines protéines cellulaires (Casey et al., 1991) et lié également à une cystéine dans les protéines; - le mévalonate, composé précédent la synthèse du farnésyl; - le dolichol, isoprénoide complexe. c) DETECTION ET CARACTERISATION D'AUTOANTICORPS ANTI-CHOLESTEROL "LIKE" DANS LES SERUMS DE PATIENTS INFECTES PAR LE VIII I1 a été trouvé dans les sérums de malades, selon un test immunoenzymatique décrit par Swartz et Alving (1988) mais modifié et adapté: (i) un titre statistiquement élevé en autoanticorps anticholestérol sur une large population de malades (n = 98); (il) ces autoanticorps dont le titre décroît en fonction de la dilution, discriminent parfaitement les divers analogues structuraux du cholestérol. lls ne reconnaissent que le cholestérol et le 7 déshydrocholestérol, alors que la vitamine D3, l'acétate de cholestéryl (estérification de la fonction hydroxyle en position 3 du cycle) et même le coprostane (5,-cholestane) ne sont pas du tout reconnus. Cette discrimination confère à ces immunoglobulines un caractère indéniable de spécificité. Ces autoanticorps sont désignés par anti-"cholestérol like". d) CONCLUSION Ces autoanticorps circulants sont dirigés contre des structures antigéniques bien définies, lipidiques et membranaires. Ils sont le résultat de la sollicitation du système immunitaire par différents mécanismes possibles: - mimétisme moléculaire: de nombreuses protéines virales et eucaryotes présentent ces antigènes d'ancrage, au moins en ce qui concerne les acides gras et le farnésyl-cystéine; - activation des lymphocytes T et B par les protéines virales du VIH qui sont capables de stimuler dans un second temps des cellules T autoréactives et la production d'autoanticorps (Fujinami, 1988; Schattner, 1990); - formation de complexes immuns incluant ces antigènes et induction de désordres variés par dépôt de ceux-ci sur différents tissus (par exemple le système nerveux central); - libération de cytokines en grande quantité pouvant être secondairement à l'origine de réponse autoimmune par présentation anormale de certains auto antigènes. La formation d'autoanticorps dans le SIDA résulte de l'induction d'un ou plusieurs de ces mécanismes. Mais, leur présence doit être très vraisemblablement corrélée avec les symptômes observés dans cette affection. m - SYNTHESE DES DIFFERENTS IMMUNOGENES UTILISES DANS LES TESTS IMMUNOENZYMATIQUES QUI SUIVENT a) SYNTHESE DES CONJUGUES ACIDES-GRAS Cinq mg d'haptène (acide myristique ou acide palmitique) sont dissouts dans 500 ,ul de méthanol anhydre contenant 5 ,t4l de triéthylamine anhydre (TEA, Merck), accepteur de protons. Un l de (14C) A. Pal (NEN), utilisé comme marqueur de la réaction de couplage, est ajouté au mélange. On laissse 30 minutes sous atmosphère sèche. On active cette solution avec 200 ils d'éthylchloroformate (ECF, Fluka) dilué au 1/16 dans du diméthylformamide (DMF, Prolabo) anhydre pendant 15 minutes à 4"C au sec. On rajoute 20 mg de protéines délipidées qui ont été préalablement dissoutes dans 2 ml de tampon phosphate 10-2M avec du sel CaC12 10-3 M et 20 ,ul de TEA anhydre. couplage. On active les COOH libres de la cystéine par addition de 200 4 d'ECF dilué au 1/16 dans du DMF anhydre pendant 15 minutes à 4"C. Puis, on rajoute une solution contenant 10 mg de protéines délipidées reprises dans 1 ml d'eau contenant 10 ,ul de TEA. La solution contenant le conjugué est purifiée par dialyse pendant 24 heures. La première dialyse est faite contre un mélange 1/3 de méthanol, 1/3 de DMF, et 1/3 de tampon phosphate 10-2M contenant du sel CaCl2 10-3 M. c) SYNTHESE DES CONJUGUES CYSTEINE OU TAURINE ANHYDRIDE SUCCINIQUE (i) synthèse des composés cystéine et taurine succinylés: 30 mg de cystéine ou taurine sont repris dans 1 ml H20 auquel sont ajoutés 10 mg d'anhydride succinique (AS). La réaction doit s'effectuer à pH neutre. Le mélange ainsi obtenu est mis à lyophiliser. (il) synthèse des conjugué cystéine-AS (CAS) et taurine-AS (TAS). Le protocole est exactement le même que celui employé pour l'activation des acides gras ou farnésyl-cystéine. Les dialyses sont seulement effectuées contre de l'eau. w - DEROULEMENT DES TESTS IMMUNOENZYMATIQUES UTILISES LORS DE CETTE ETUDE POUR LE DIAGNOSTIC IN VITRO DU SIDA SELON L'INVENTION a) TEST DE DETECTION D'AUTOANTICORPS ANTI-FARNESYL CYSTEINE CONJUGUE 1ère étape: Revêtement des plaques de microtitration (Nunc, Polysorb) par une solution contenant 10 g/ml de Far-cyst-SAB (SAB = Sérum Albumine Bovine) (puits expérimentaux) dissout dans un tampon carbonate de sodium (0,05M) contenant du CaCl2 10-3M pH 9,6 et par une solution contenant 10 ,L4g/ml de SAB (puits contrôles) toute la nuit à 40C sous agitation lente et régulière; Saturation des sites libres de fixation 1 heure à 37"C avec du phosphate salé (PS) SAB 1 g/l; 2 rinçages avec du tampon PS; 2ème étape: Application des sérums humains dilués au 1/1000 dans du tampon phosphate 10-2M, NaCl 0,15 M, et SAB 1 g/l pendant 2 heures à 37"C; 1 rinçage avec du tampon PS tween 0,5%; 3ème étape: Les anticorps secondaires marqués à la péroxydase (antiimmunoglobulines Ig humaines de type G ou M) sont dilués au 1/10000 dans du tampon PS tween - SAB 1 g/l et appliqués pendant 1 heure à 37"C sur les plaques; 3 rinçages avec du tampon PS tween; 4ème étape: Révélation des complexes antigène-anticorps humains-anti Ig humaines marquées par addition d'une solution de citrate (0,1 M) phosphate (0,1 M) contenant pour 20 ml, 1 mg d'orthophénilènediamine à 4% (OPD) et 20 4 d'H202 (30 volumes). Après 10 minutes à l'obscurité, la réaction est stoppée par ajout de 50 4 d'H2S04 4N dans tous les puits de la plaque. La densité optique est lue à 492 nm par un spectrophotomètre multiscan informatisé. La valeur expérimentale obtenue est celle mesurée sur les puits expérimentaux soustraite à celle lue sur les puits contrôles. b) TEST DE DETECTION D'AUTOANTICORPS ANTI-ACIDES GRAS CONJUGUES 1ère étape: Revêtement des plaques de microtitration (Nunc, Polysorb) par 50 g du conjugué acide gras-SAB dilué dans du tampon carbonate CaCl2 10-3 M pH 9,6 et d'une solution de SAB délipidée à la même concentration toute la nuit à 4"C; 2 rinçages avec du tampon phosphate salé CaCl2 (tp A); 2ème étape: Application des sérums humains dilués au 1/2500 dans du tampon PS CaCl2 SAB 1 g/l (tp B) pendant 2 heures à 37"C; 1 rinçage avec du tp A; 3ème étape: Application d'une dilution (1/5000) d'anticorps anti-Ig humaines G ou M conjugués à la péroxydase dans du tp B pendant une à 37"C; 3 rinçages avec du tp PS tween 0,5%; 4ème étape: Révélation des complexes antigène-anticorps anti-acide gras anti-Ig humaines par addition d'une solution de citrate (0,1 M) phosphate (0,1 M ; pH 5) contenant pour 20 ml de ce même tampon 125 yl d'OPD à 4 % et 2,5 4 H2O2 (30 volumes). Après 10 min à l'obscurité, la réaction a été stoppée par ajout de 50 4 d'H2SO4 4N dans tous les puits. La densité optique (DO), est lue à 492 nm sur un spectrophotomètre Dynatech informatisé. La valeur expérimentale obtenue est celle mesurée sur les puits recouverts par le conjugué acide gras - SAB soustraite de celle lue sur les puits recouvert de SAB seule. c) TEST DE DETECTION D'AUTOANTICORPS ANTI "CHOLESTEROL LIKE" (CHO) synthèse des conjugués 10 mg de CHO sont repris dans 500 4 de méthanol anhydre et 500 4 de DMF anhydre. Lorsque le cholestérol est solubilisé, on ajoute 20 mg de sérumalbumine bovine délipidée reprise dans 1 ml de tampon acétate de sodium 3M. On vortexe le mélange pendant environ 3 minutes. L'immunogène est purifié par dialyse, le premier bain est constitué d'un mélange v/v de méthanol, de DMF, et de phosphate 10-3M CaC12 10-3M. Deux autres bains sont faits avec du tampon phosphate CaCl2. On utilise le cholestérol tritié comme marqueur de la réaction d'absorption. Le rapport de couplage oscille entre 10 et 30. La concentration en protéines est déterminée par la méthode de Bradford. Optimisation du test immunoenzymatique 1ère étape: Revêtement des plaques de microtitration (Nunc, Maxisorp) par une solution à 10 ,ug/ml de cholestérol dissout dans de méthanol absolu. Les plaques sont placées toute une nuit à 37"C. 3 rinçages au tampon PS sont nécessaires. Les sites libres de fixation sont bloqués par addition de tampon PS SAB 5 g/l. 2ème étape: Application des sérums humains dilués au 1/200 dans du tampon PS SAB 5 g/l pendant 2 heures à 37"C; 3 rinçages avec du tampon PS tween 0,5%; 3ème étape. Application d'une dilution (1/10000) d'anticorps anti-Ig humaines G, M ou A conjugués à la péroxydase dans du tampon PS-SAB 5g/l pendant une heure à 37"C; 3 rinçages avec du tampon PS-tween 0,5%; 4ème étape. Révélation des complexes antigène-anticorps anticholestérol, anti-Ig humaines par addition d'une solution de citrate (0,1 M) phosphate (0,1 M ; pH 5) contenant pour 20 ml de ce même tampon îml d'OPD et 20 4 H202. Après 10 min à l'obscurité, la réaction a été stoppée par ajout de 50 4 d'H2S04 4N dans tous les puits. La densité optique (DO), est lue à 492 mn sur un spectrophotomètre Dynatech. Ce test immunenzymatique peut également être effectué comme suit: - revêtement de la plaque avec 50 sug de CHO, avec dans les puits de contrôle la SAB délipidée dans du tampon carbonate pH 9,6 et CaC12, la nuit à 4"C sous agitation, - 2 rinçages des plaques avec du tampon PS, dilution des sérums des malades au 1/1000 dans du tampon PS contenant de la SAB délipidée à 5 g/l, incubation 2 heures à 37"C, - 2 rinçages avec du tampon PS, - les anticorps marqués à la peroxydase sont dilués dans du tampon PS SAB 5g/l au 1/5000 et incubés 1 heure à 37"C, - 3 rinçages avec du tampon PS-tween 0,05%, - révélation des complexes secondaires avec pour 20 ml de citrate 5004 d'OPD (4g/100ml) et 10 l d'H202 30 Vol. V- ETUDE DES SIGNAUX ANTI-DERIVES SOUFflES CONJUGUES OBTENUS DANS LES SERUMS DE MALADES ATTEINTS DU SIDA a) DETECTION D'AUTOANTICORPS DIRIGES CONTRE LES CYSTEINE OU TAURINE CONJUGUEES L'étude a porté sur 55 sérums contrôlés et 86 sérums de patients infectés par le VIII (tous stades confondus). Le tableau suivant montre les valeurs moyennes et leur écart-type des densités optiques reflétant les titres en auto anticorps anti-cystéine conjuguée (CAS) et anti-taurine conjuguée (TAS) d'isotype G sur les différents groupes de malades par rapport à une population de sujets sains n TAS CAS significance Témoins 55 0,117+0,072 0,120,051 VIH pop 86 0,532+0,273 0,587+0,297 La répartition des densités optiques lues pour chaque patient infecté par le VIII et chaque sujet contrôle (Te) sur les conjugués taurine ou cystéine est représentée figure 1. b) ANALYSE STATISTIQUE DES RELATIONS EMSTANT ENTRE LES DIFFERENTS SIGNAUX IMMUNOLOGIQUES SELON LE STADE EVOLUTIF DE LA PATHOLOGIE Cette étude a porté sur 27 patients VIH positifs classés stade II, 17 patients VIH positif classés stade m, et 30 patients VIH positif classés stade IV. La détection d'autoanticorps sériques circulants, par des tests immunoenzymatiques adaptés, a été effectuée sur les antigènes suivants - Acide myristique conjugué (MYR) - Acide palmitique conjugué (PALM); - Farnésyl-cystéine conjugué (FAR); - Cholestérol (CHO); - Taurine AS c'est à dire taurine couplée par l'anhydride succinique (TAS); - Cystéine AS c'est à dire couplée par l'anhydride succinique (CAS). Tous les signaux détectés (correspondant à des densités optiques) ont été comparés entre eux comme le montrent les représentations graphiques ci-jointes. Un coefficient de corrélation (R) et une significance (Prob 1) analvse sur 27 patients classés stade ll corrélations R prob testées CHO/MYR 0,278 0,122 NS CHO/FAR 0,613 0,0001 S CHO/CAS 0,785 0,000 S CHO/TAS 0,713 0,000 S CHO/PALM 0,373 0,063 NS MYR/PALM 0,86 0,000 S MYR/TAS 0,447 0,022 S MYRUCAS 0,44 0,025 S MYR/FAR 0,626 0,0001 S FAR/CAS 0,87 0,000 S TAS/FAR 0,887 0,000 S TAS/CAS 0,98 0,000 S PALM/TAS 0,585 0,002 S PALM/CAS 0,608 0,000 S PALM/FAR 0,69 0,000 S Le test de corrélation est considéré comme statistiquement signatif lorsque la valeur critique prob - S : significatif - NS : non significatif 2) Analvse sur 17 patients classés stade m corrélations R prob testées CHO/MYR 0 1 NS CHO/FAR 0,4 0,1 NS CHO/CAS 0,619 0,008 S CHO/TAS 0,547 0,023 S CHOWALM 0,157 0,546 NS MYR/PALM 0,5 0,042 S MYR/TAS 0,233 0,367 NS MYR/CAS 0,281 0,161 NS MYR/FAR 0,461 0,065 NS FAR/CAS 0,64 0,006 S TAS/FAR 0,674 0,000 S TAS/CAS 0,98 0,000 S PALM/TAS 0,07 0,789 NS PALM/CAS 0,06 0,75 NS PALM/FAR 0,18 0,49 NS Le test de corrélation est considéré comme significatif lorsque la valeur critique prob - S : significatif - NS : non significatif 3! Analyse sur 30 patients classés stade IV corrélations R prob testées CHO/MYR 0,15 0,426 NS CHO/FAR 0,19 0,09 NS CHO/CAS 0,547 0,008 S CHO/TAS 0,594 0,000 S CHO/PALM 0,21 0,135 NS MYRIPALM 0,638 0,000 S MYR/TAS 0,228 0,137 S MYR/CAS 0,240 0,132 S MYR/FAR 0,608 0,000 S FAR/CAS 0,623 0,000 S TAS/FAR 0,574 0,001 S TAS/CAS 0,965 0,000 S PALM/TAS 0,327 0,02 S PALM/CAS 0,514 0,03 S PALM/FAR 0,748 0,000 S Le test de corrélation est considéré comme significatif lorsque la valeur critique prob - S : significatif - NS : non significatif Une réponse significative IgG est observée chez les malades atteints de SIDA quelque soit le stade de la maladie. REFERENCES - Barracid M., (1987); Ras genes, Ann Rev. Boch. 56, 779-827. - Barracid M, (1990); Ras oncogenes: their role in neoplasia. European Journal of clinical Investigation, Q, 225-235. - Brown M.J., Milano P.D., Lever D.C., Epstein V.W. and Poulter J, (1991); Anal. Chem. 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Utilisation d'une ou plusieurs molécules susceptibles d'être reconnues par des autoanticorps présents dans le sérum de patients porteurs de virus de type VIH, pour la mise en oeuvre de méthodes de diagnostic invitro de l'infection d'un individu par un virus du type VIH, ou pour l'obtention de médicaments destinés au traitement du SIDA. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ces autoanticorps sont dirigés contre des structures antigéniques lipidiques et/ou membranaires, et appartiennent plus particulièrement à l'une des quatre catégories suivantes d'anticorps dirigés contre les composés décrits cidessous: - les anticorps dirigés contre des acides gras à chaîne linéaire ou ramifiée, saturés ou insaturés, comprenant notamment 4 à 22 atomes de carbone, de préférence 12 à 18 atomes de carbone, et plus particulièrement les anticorps dirigés contre l'acide myristique, l'acide laurique, l'acide oléique ou l'acide palmitique; - les anticorps dirigés contre des composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, voire également dans le cytoplasme des cellules, ces composés intervenant, le cas échéant, en tant que métabolites dans la synthèse du cholestérol, et plus particulièrement contre des isoprénoides liés à une cystéine, notamment les isoprénoides de 6 à 20 atomes de carbone, tels que le farnésyl-cystéine, le géranyl-géranyl-cystéine, le mévalonate-cystéine et le dolichol-cystéine; - les anticorps dirigés contre le cholestérol et ses dérivés, notamment contre le 7-déshydrocholestérol; - les anticorps dirigés contre la cystéine et ses dérivés, notamment ses dérivés de formule: R1S-R2-CH(NH2)-R3 dans laquelle R1 représente H, CH3 ou HO3, R2 représente une chaîne hydrocarbonée de 1 à 10 atomes de carbone, ramifiée ou non, saturée ou non, R3 représente H ou COOH, ces anticorps étant susceptibles de reconnaître les composés susmentionnés lorsque ces derniers sont liés ou adsorbés à une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que les méthodes de diagnostic invitro de l'infection d'un individu par un virus du type VIII, sont réalisées par détection et/ou dosage d'au moins deux catégories d'autoanticorps susceptibles de reconnaître des molécules différentes, notamment deux catégories d'anticorps choisies parmi les quatre catégories définies dans la revendication 2, cette détection étant elle-même réalisée à l'aide de molécules reconnues par ces autoanticorps et choisies parmi: - les conjugués entre d'une part les composés reconnus par ces autoanticorps, notamment les acides gras, et/ou les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, et/ou le cholestérol et ses dérivés et/ou la cystéine et ses dérivés, tels que définis dans la revendication 2, et, d'autre part, une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps, et/ou - les anti-idiotypes susceptibles de reconnaître les autoanticorps susmentionnés, notamment les anticorps des quatre catégories définies dans la revendication 2. 4. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que les médicaments destinés au traitement du SIDA comprennent: - au moins un conjugué entre d'une part les composés reconnus par les autoanticorps présents dans les sérums des individus porteurs de virus du type VIH, notamment les acides gras, et/ou les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, et/ou le cholestérol et ses dérivés et/ou la cystéine et ses dérivés, tels que définis dans la revendication 2, et, d'autre part, une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps, et/ou - des anti-idiotypes susceptibles de reconnaître les autoanticorps susmentionnés, notamment les anticorps des quatre catégories définies dans la revendication 2. 5. Anticorps anti-acide gras caractérisés en ce qu'ils sont présents dans les sérums d'individus porteurs de virus du type VIH, ces anticorps étant dirigés contre des acides gras à chaîne linéaire ou ramifiée, saturés ou insaturés, comprenant notamment 4 à 22 atomes de carbone, et de préférence 12 à 18 atomes de carbone, et plus particulièrement les anticorps dirigés contre l'acide myristique, l'acide laurique, acide oléique ou l'acide palmitique, ces anticorps étant susceptibles de reconnaître les composés susmentionnés lorsque ces derniers sont liés ou adsorbés à une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps. 6. Anticorps caractérisés en ce qu'ils sont présents dans les sérums de patients porteurs de virus du type VIH, et en ce qu'ils sont dirigés contre des composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, voire également dans le cytoplasme des cellules, ces protéines intervenant, le cas échéant, en tant que métabolites dans la synthèse du cholestérol, et plus particulièrement les anticorps dirigés contre des isoprénoides liés à une cystéine, notamment les isoprénoides de 6 à 20 atomes de carbone, tels que le farnésyl-cystéine, le géranyl-géranyl-cystéine, le mévalonatecystéine et le dolichol-cystéine, ces anticorps étant susceptibles de reconnaître les composés susmentionnés lorsque ces derniers sont liés ou adsorbés à une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps. 7. Anticorps caractérisés en ce qu'ils sont présents dans le sérum de patients porteurs de virus du type VIH, et en ce qu'ils sont dirigés contre le cholestérol et ses dérivés, notamment contre le 7-déshydrocholestérol, ces anticorps étant susceptibles de reconnaître les composés susmentionnés lorsque ces derniers sont liés ou adsorbés à une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps. 8. Anticorps caractérisés en ce qu'ils sont présents dans le sérum de patients porteurs de virus du type VIH, et en ce qu'ils sont dirigés contre la cystéine et ses dérivés, notamment ses dérivés de formule R1S-R2-CH(NH2) R3 dans laquelle R1 représente H, CH3 ou HO3, R2 représente une chaîne hydrocarbonée de 1 à 10 atomes de carbone, ramifiée ou non, saturée ou non, R3 représente H ou COOH ces anticorps étant susceptibles de reconnaître les composés susmentionnés lorsque ces derniers sont liés ou adsorbés à une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps. 9. Conjugués entre, d'une part, une molécule choisie parmi les acides gras, et/ou les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, et/ou le cholestérol et ses dérivés et/ou la cystéine et ses dérrivés, tels que définis dans la revendication 2, et, d'autre part, une molécule porteuse antigénique choisie notamment parmi l'albumine sérique bovine. 10. Anticorps polyclonaux ou monoclonaux susceptibles de reconnaître les conjugués selon la revendication 9. 11. Anti-idiotypes polyclonaux ou monoclonaux susceptibles de reconnaître les anticorps selon l'une des revendications 5 à 8, et/ou les anticorps selon la revendication 10. 12. Méthode de diagnostic in vitro de l'infection d'un individu par un virus du type VIII, cette méthode de diagnostic comprenant la succession d'étapes suivantes: - mise en présence d'un échantillon biologique, notamment du sérum, prélevé chez un patient avec des conjugués selon la revendication 9, ou de préférence avec des anti-idiotypes selon la revendication 11; - détection de la présence éventuelle d'anticorps reconnus par les conjugués ou les anti-idiotypes susmentionnés. 13. Méthode de diagnostic in vitro selon la revendication 12, permettant le suivi de l'évolution du SIDA chez un individu porteur de virus du type VIII, caractérisée en ce qu'elle comprend une étape de dosage de la quantité d'autoanticorps présente dans l'échantillon biologique prélevé, ce dosage étant réalisé à l'aide de conjugués selon la revendication 9, ou d'anti-idiotypes selon la revendication 11. 14. Méthode de diagnostic in vitro selon la revendication 12 ou la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle est réalisée par détection et/ou dosage d'au moins deux catégories d'autoanticorps susceptibles de reconnaître des molécules différentes, notamment deux catégories d'anticorps choisies parmi les quatre catégories définies dans la revendication 2, à l'aide d'au moins deux conjugués ou anti-idiotypes différents susceptibles de reconnaître respectivement un anticorps appartenant à l'une de ces catégories. 15. Méthode de diagnostic in vitro selon l'une des revendications 12 à 14, caractérisée en ce qu'elle comprend successivement les étapes suivantes: - fixation des conjugués ou anti-idiotypes sur un support solide, notamment sur les parois de puits de plaques de microtitration; - addition de l'échantillon biologique sur le support solide; - rinçage du support solide; - addition d'anticorps marqués, notamment de manière radioactive ou enzymatique ou par fluorescence, susceptibles de reconnaître les complexes formés, lors de l'étape d'addition de l'échantillon biologique sur le support solide, entre les conjugués ou les anti-idiotypes susmentionnés et les anticorps anti-acide gras éventuellement présents dans l'échantillon biologique; - rinçage du support solide; - détection ou dosage des anticorps marqués susmentionnés. 16. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un des anti-idiotypes selon la revendication 10, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 17. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un conjugué entre d'une part les composés reconnus par les autoanticorps présents dans les sérums des individus porteurs de virus de type VIH, notamment les acides gras, et/ou les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, et/ou le cholestérol et ses dérivés et/ou la cystéine et ses dérivés, tels que définis dans la revendication 2, et, d'autre part, une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps. 18. Utilisation d'au moins un des anti-idiotypes selon la revendication 10, et/ou d'au moins un conjugué entre d'une part les composés reconnus par les autoanticorps présents dans les sérums des individus porteurs de virus de type VIH, notamment les acides gras, et/ou les composés impliqués dans le mécanisme d'ancrage des protéines aux membranes cellulaires, et/ou le cholestérol et ses dérivés et/ou la cystéine et ses dérivés, tels que définis dans la revendication 2, et, d'autre part, une molécule porteuse d'une taille suffisante pour permettre la reconnaissance de ces composés par lesdits anticorps, pour l'obtention de médicaments destinés au traitement des pathologies liées à l'infection d'un individu par un virus responsable du SIDA.