Brevet FR2705194A1 — publié le 19941125

La présente invention concerne un animal transgénique non-humain, et plus particulièrement une souris transgénique, en tant que modèle animal pour évaluer ou sélectionner des médicaments potentiels destinés à la prévention et au traitement des infections induites par des organismes pathogènes ayant développé un système de récepteurs spécifiques de la transferrine humaine pour capturer le fer nécessaire à leur croissance dans l'hôte infecté. Les protéines appartenant à la famille des transferrines (Tf) jouent un rôle essentiel dans le métabolisme du fer. Elles interviennent dans l'absorption du fer, son transport et sa redistribution dans les différentes cellules et protéines d'un organisme. Le fer est un des métaux les plus abondants chez les eucaryotes et il est nécessaire à la croissance cellulaire. Certaines protéines essentielles à la vie d'un organisme lient spécifiquement un ou plusieurs atomes de fer et cette liaison est nécessaire à leur fonction. C'est le cas notamment de l'hémoglobine. L'ensemble du fer plasmatique est virtuellement transporté par son transporteur plasmatique, la transferrine. La transferrine est codée par un gène unique. De nombreuses études tant in vitro qu'in vivo, ont établi la complexité de la régulation de ce gène. Des souris transgéniques dans lesquelles ont été injectés des gènes chimériques issus de la fusion de la région promotrice d'un gène de la transferrine et d'un gène reporteur dont le produit d'expression est facilement mesurable, ont permis de mettre en évidence une multitude d'éléments contrôlant de manière positive et négative, l'expression tissu-spécifique et la régulation de ce gène. Ces éléments permettent de moduler le niveau de transcription du gène transferrine en réponse à divers stimuli, comme la concentration plasmatique en fer et certaines hormones (Idzerza et al., Molecular and Cellular Biol., 1989, 9, 5154-5162 ; Adrian et al., J. Biol. Chenu, 1990, 265, 1334S13350). La transferrine humaine est synthétisée majoritairement dans le foie, puis secrétée dans la circulation sanguine. La transferrine est une glycoprotéine formée de deux domaines globulaires qui possèdent chacun un site de liaison au fer ferrique. Ainsi, on peut mettre en évidence dans la circulation sanguine, différents types de transferrine selon leur charge en fer. On peut détecter: - la transferrine sous forme diferrique dont chacun des domaines a lié un atome de fer, - la transferrine monoferrique dont l'un des domaines, soit le domaine N-terminal soit le C-terminaZ a lié un atome de fer, et - la transferrine dépourvue de fer, encore appelée apotransferrine. On suppose qu'il existe différents mécanismes par lesquels la transferrine peut transférer le fer aux protéines cellulaires liant spécifiquement le fer. Es dépendent entre autre du type cellulaire dans lequel le transfert a lieu et des conditions physiologiques. Un mécanisme particulièrement efficace, met en oeuvre un récepteur spécifique de la transferrine. Ce récepteur est présent à la surface de certains types de cellules. n présente une forte affinité pour la transferrine diferrique et des affinités progressivement plus faibles pour respectivement les transferrines monoferriques et l'apotransferrine. Après liaison au récepteur de la transferrine chargée en fer, le complexe est internalisé et passe dans des endosomes. L'acidification des endosomes contribue à la dissociation du fer et de la transferrine. Le processus de transfert du fer aux protéines cellulaires n'est pas connu. Les microorganismes, tout comme les cellules eucaryotes supérieures ont besoin de fer pour leur croissance. D'une manière générale, ils ont développé divers systèmes qui leur permettent de capturer le fer dans le milieu extérieur. Ainsi, la plupart des microorganismes produisent des sidérophores à cet effet. D'autres microorganismes ne produisent pas de sidérophores mais expriment à leur surface un récepteur spécifique de la transferrine qui leur permet de détourner et d'acquérir le fer lié à la transferrine. En particulier, des récepteurs spécifiques de la transferrine humaine ont été mis en évidence chez un certain nombre de microorganismes pathogènes de l'homme. On peut citer notamment les bactéries pathogènes Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Mycoplasma pneumoniae, Netsse,ia gonorrhoeae, Tnchomonas vaginales et Bordetella peflussis ou les protozoaires pathogènes des genres Tiypanosoma cruzi, Leishmania et Plasmodjunt. Ces microorganismes sont tous des pathogènes de l'homme responsables de maladies graves, comme par exemple des méningites souvent mortelles chez l'enfant, des pneumonies, des infections des voies génitales sexuellement transmissibles représentant une des causes-majeures de stérilité chez la femme, la coqueluche et des maladies telles que la leishmaniose et la malaria qui touchent plusieurs millions de personnes dans les régions tropicales et sub-tropicales. li existe déjà un modèle de souris infectables par Neisseria meningitidis (Hoîbein, Infect. Immun., 1981, 34, 120-125 ; Schryvers et Gonzales, Infect. Immun., 1989, 57, 2425-2429). D'une manière générale, on administre tout d'abord à une souris, du fer complexé à la transferrine humaine (Fe-Tf). Puis on injecte une quantité déterminée en nombre de CFU (colony forming unit) de Netsseda meningitidis. Cette dernière étape est désignée étape d'épreuve bactérienne. Les bactéries sont cultivées en condition de carence en fer, ces conditions induisent l'expression des récepteurs spécifiques de la transferrine humaine à la surface des bactéries. L'administration de Fe-Tf humaine permet la croissance des Neisserta dans la souris ainsi traitée. En effet, les récepteurs bactériens sont spécifiques de la transferrine humaine. Netsseria meningitidis ne peut capturer le fer lié à la transferrine endogène de souris puisque ses récepteurs ne peuvent lier la transferrine de souris. On suit l'évolution de l'infection bactérienne dans les souris en fonction du temps, par exemple par la mesure de la bactériémie sanguine (comptage du nombre de bactéries par ml de sang prélevé des souris) ou par l'observation de l'état physiologique des souris (mauvais état à mortalité). Holbein rapporte que la mortalité dépend directement de la quantité de Fe-Tf humaine administrée. Dans ses conditions expérimentales, il obtient une mortalité de 100% à partir de 17,5mg de Fe-Tf administrée par voie intrapéritonéale (IP). Schryvers et Gonzales recommandent une administration de 24mg de Fe-Tf préalablement à l'épreuve bactérienne. ll est possible d'injecter le fer dans la souris sous d'autres formes, par exemple sous forme de dextran de fer. Dans ces conditions, les Neisseria se trouveront en excès de fer, ne produiront pas les récepteurs bactériens spécifiques de la transferrine humaine et pourront capter le fer par un simple phénomène de perméabilité. Il sera alors impossible d'évaluer ou sélectionner des médicaments potentiels agissant au niveau du récepteur bactérien. Du fait de l'importance des pathologies induites par les microorganismes tels que ceux énoncés ci-dessus, il est nécessaire de disposer de modèles expérimentaux qui permettent d'identifier des médicaments à leur encontre et d'en évaluer l'efficacité. A l'aide de ces modèles, on pourra tester diverses -substances, notamment celles qui peuvent agir au niveau des récepteurs bactériens, et ainsi trouver des médicaments susceptibles d'induire une protection efficace et durable à l'encontre de ces microorganismes et de traiter les maladies qu'ils induisent. On a maintenant généré des lignées de souris transgéniques produisant la transferrine humaine et on a trouvé que ces lignées pouvaient être utilisées à titre de modèle animal pour évaluer ou sélectionner des médicaments potentiels, plus particulièrement des vaccins, destinés à la prévention ou au traitement d'une infection telle que la méningite, maladie induite entre autre par la bactérie Neirseria meningitidts. Ceci n'était pas acquis d'emblée puisqu'il y a d'une part, une incertitude sur la capacité de la transferrine humaine à charger le fer dans un organisme de souris, et d'autre part, un risque d'interférence avec la transferrine de souris pouvant provoquer une éventuelle toxicité. Enfin, les animaux transgéniques de la présente invention peuvent produire un taux de transferrine d'origine humaine proche de la concentration physiologique chez l'homme (aux environs de 1 à 2 mg/ml), ce qui permet de développer un modèle reproduisant les conditions physiologiques par rapport aux modèles de l'art antérieur, qui eux impliquent une administration de Fe Tf à des concentrations nettement supérieures, de l'ordre de 10 fois. D'autre part, il est important de noter qu'un tel modèle animal devrait être d'un emploi simplifié et d'un coût raisonnable en comparaison avec le modèle animal actuellement en usage jusqu'à ce jour, qui implique une injection d'une quantité importante de transferrine chargée en fer aux animaux. Par conséquent, l'invention a pour objet un animal transgénique non-humain dans le génome duquel est inséra un fragment d'ADN codant pour une transferrine d'origine humaine, notamment un précurseur d'une transferrine d'origine humaine, placé sous le contrôle des éléments nécessaires à son expression. Par éléments nécessaires au contrôle de l'expression d'un fragment d'ADN", on entend l'ensemble des éléments nécessaires à la transcription d'un fragment d'ADN en ARN et à la traduction de ce dernier en protéine. Parmi ceux-ci, la région promotrice revêt une importance particulière. En effet, selon un mode de réalisation avantageux, les éléments de contrôle utiles aux fins de la présente invention contiennent une région promotrice foiespécifique, c'est-à-dire capable de promouvoir avec efficacité l'expression d'un fragment d'ADN dans un nombre restreint de types cellulaires comprenant essentiellement les cellules hépatiques. En faisant usage d'une telle région promotrice, le fragment d'ADN pourrait être exprimé dans des cellules autres qu'hépatiques; mais alors il le serait à un moindre taux. A titre d'exemple de promoteur foie-spécifique, on peut notamment citer le promoteur du gène al-antitrypsine ou celui du gène transferrine. Afin de mettre en oeuvre un animal transgénique selon l'invention, il est particulièrement avantageux de choisir une région promotrice issue du genre ou de l'espèce d'animal que l'on veut obtenir sous forme transgénique. Ainsi, une souris transgénique sera réalisée en utilisant la région promotrice d'un gène murin, de préférence d'un gène de souris et notamment le promoteur foie-spécifique du gène transferrine de souris. Le fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine peut être: - De type génomique, tel que par exemple décrit par Schaeffer et al. (Gene, 1987, 56, 109-116) (17 exons séparés par 16 introns) ; il peut également s'agir d'un fragment similaire, modifié au niveau des introns, par exemple comportant une délétion partielle d'un ou plusieurs des 16 introns; - De type ADN complémentaire (ADNc), c'est-à-dire dépourvu d'intron tel que décrit par Yang et at (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, 81, 2752-2756); ou - De type minigène, c'est-à-dire mixte comprenant tout ou partie d'au moins un des 16 introns. Ce dernier type est plus particulièrement préféré. D'une manière tout à fait préférée, le fragment d'ADN de type minigène comprend le premier exon, le premier intron et les exons suivants (du 2iême au 17ime) sous forme d'ADNc. Selon un mode de réalisation avantageux, le fragment d'ADN est intégré dans le génome d'un animal transgénique selon l'invention, à l'extérieur du gène homologue codant pour la transferrine. Le précurseur pour lequel doit coder un fragment d'ADN utile aux fins de la présente invention, comprend essentiellement une transferrine d'origine humaine, sous forme mature, et un peptide signal fixé par liaison peptidique à l'extrémité NH2 de la transferrine. Un peptide signal comporte généralement une séquence d'acides aminés principalement hydrophobe et a pour fonction de promouvoir la sécrétion dans le sang de la transferrine sous forme mature. Une fois sa fonction remplie, le peptide signal est éliminé par clivage. Dans le contexte de la présente invention, n'importe quel peptide signal peut être utilisé ; mais on utilise de préférence le peptide signal homologue codé par le gène humain de la transferrine. Par "transferrine d'origine humaine", on entend une protéine ayant les caractéristiques suivantes: - Elle est capable de lier le fer; - Elle est capable de se lier au récepteur de la transferrine humaine; - Elle est capable de se lier au récepteur de la transferrine d'un micro organisme; - Elle possède une séquence d'acides aminés qui présente un degré d'homologie d'au moins 80%, de manière avantageuse d'au moins 90%, de manière préférée d'au moins 95% et de manière tout à fait préférée de 100%, avec la séquence de la transferrine humaine native telle que montrée dans l'identificateur de séquence SEQ ID NO:1, du résidu Valine en position 1 au résidu Proline en position 679. Selon un mode avantageux, le fragment d'ADN code pour un précurseur de la transferrine humaine dont la séquence d'acides aminés est telle que montrée dans l'identificateur de séquence SEQ ID NO:1, du résidu Méthionine en position -19 au résidu Proline en position 679. Enfin une transferrine d'origine humaine est de préférence capable d'être reconnue par des anticorps spécifiques de la transferrine humaine. Ceci peut être mis en évidence selon des méthodes de détection immunologiques connues de l'homme de l'art qui peuvent être mises en oeuvre avec des anticorps polyclonaux ou monoclonaux issus d'espèces variées et dirigés contre divers déterminants antigéniques de la transferrine humaine. A titre indicatif, une description détaillée d'un mode opératoire particulier d'un test ELISA est fournie ci-après (voir Exemple 2). Cette technique ELISA pourra notamment être mise en oeuvre pour évaluer la concentration sérique en transferrine d'origine humaine chez les animaux transgéniques selon l'invention. Selon un mode préféré de l'invention, un animal transgénique selon l'invention exprime une transferrine d'origine humaine à un taux sérique compris entre 0,1 et 5 mg/ml, de manière avantageuse 0,2 et 4 mg/ml et de manière préférée 0,3 et 3 mg/ml. Un animal transgénique selon l'invention est de préférence un mammifère non-humain, plus particulièrement un rongeur, notamment un murin et de préférence une souris. Par "animal transgénique selon l'invention", on entend un animal qui est transgénique pour un fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine. Un animal transgénique selon l'invention peut être un transgénique complet (le fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine est intégré dans le génome de toutes les cellules, somatiques et germinales, dudit animal ; ceci est par exemple le cas lorsque le fragment d'ADN est introduit dans un embryon au stade "une cellule") ou mosaïque (le fragment d'ADN est intégré dans le génome d'un certain pourcentage de cellules, mais pas dans toutes ; le pourcentage dépendra du nombre de cellules constituant l'embryon au moment de l'introduction du fragment d'ADN). Par ailleurs, l'invention propose également: (i) Un premier procédé de préparation d'un animal simple transgénique selon l'invention, selon lequel: - on introduit dans un embryon non-humain, un fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine, pour obtenir un embryon transgénique, - on transplante ledit embryon transgénique dans un animal femelle pseudo-gestante, - on permet audit embryon de se développer jusqu'à son terme, et - on sélectionne au moins un animal simple transgénique dans le génome duquel est intégré un allèle dudit fragment d'ADN; et (il) Un deuxième procédé de préparation d'un animal double transgénique selon l'invention, selon lequel: - on croise un animal mâle simple transgénique et un animal femelle simple transgénique, chacun obtenu par le premier procédé selon l'invention, et - on sélectionne au moins un descendant double transgénique dans le génome duquel sont intégrés deux allèles du fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine. Selon un mode préféré, les premier et deuxième procédés selon l'invention s'appliquent à la préparation de murins, plus particulièrement de souris, respectivement simple et double transgéniques. L'introduction du fragment d'ADN au sein d'un embryon ainsi que l'implantation de l'embryon transgénique chez une femelle pseudo-gestante peuvent être mis en oeuvre selon les méthodes conventionnellement en usage. D'une manière générale, un fragment d'ADN est introduit dans des cellules embryonnaires maintenues en culture ou dans un embryon comportant de préférence I à 8 cellules, de manière avantageuse 1 à 4 cellules et de manière préférée 1 cellule. Une méthode consiste à transfecter les cellules ou l'embryon par un virus recombinant, notamment un rétrovirus recombinant, dans le génome duquel est inséré le fragment d'ADN. Selon une autre méthode, on injecte le fragment d'ADN tel quel dans l'embryon. Un animal transgénique selon l'invention peut être aussi un descendant d'un animal directement obtenu par un des procédés décrit ci-avant. En d'autres termes, un animal transgénique selon l'invention inclut l'animal fondateur (Fg) d'une lignée transgénique ainsi que les descendants du fondateur de première génération (F1) et des générations suivantes (F2 et suivantes). Les descendants peuvent être obtenus par croisement d'un animal transgénique selon l'invention avec un animal de la même espèce non transgénique. Dans ce cas, environ la moitié des animaux issus de ce croisement comprendront un allèle du fragment d'ADN dans toutes leurs cellules germinales et somatiques, et par conséquent sont hétérozygotes. D'une manière alternative, les descendants peuvent également être obtenus par croisement avec un autre animal transgénique selon l'invention, d'une lignée identique ou différente. Un tel croisement donne environ 25 % d'animaux double transgéniques comportant deux allèles du fragment d'ADN. On s'attend à ce que le niveau d'expression du produit codé par le fragment d'ADN dans les animaux double transgéniques soit supérieur à celui observé chez des simple transgéniques. Les deux allèles peuvent être présents au niveau du même locus (double transgénique homozygote résultant au croisement de deux animaux transgéniques d'une même lignée). Ils peuvent également être situés en des loci différents du génome correspondant aux sites d'intégration du fragment d'ADN dans chacun des parents (double transgénique hétérozygote résultant du croisement de deux animaux transgéniques de lignées différentes). Un animal double transgénique, tel que dérivé par exemple du deuxième procédé selon l'invention, peut être notamment identifié par les techniques classiques du génie génétique connues de l'homme de l'art, par exemple la technique de Southern ou par croisement "retour". Un tel croisement entre un animal double transgénique homozygote et un animal non transgénique, doit donner lieu à 100% d'animaux simple transgéniques dans le génome desquels est intégré un allèle du fragment d'ADN. Compte tenu de ce qui précède, on précise qu'un animal selon l'invention peut donc être simple, double ou multi-transgénique pour le fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine. Un animal selon l'invention est avantageusement un double transgénique, préférentiellement homozygote. Enfin l'invention a pour objet: (i) L'usage d'un animal transgénique selon l'invention, à titre de modèle animal pour évaluer ou sélectionner un médicament potentiel destiné à la prévention ou au traitement d'une infection induite par un organisme pathogène possédant un récepteur capable de fixer une transferrine d'origine humaine; et (ii) Un procédé pour évaluer ou sélectionner un médicament potentiel destiné à la prévention ou au traitement d'une infection induite par un organisme pathogène possédant un récepteur capable de fixer une transferrine d'origine humaine, procédé selon lequel: a) on administre à un animal transgénique selon l'invention ledit médicament, avant pendant ou après l'administration d'une quantité déterminée dudit organisme pathogène, et b) on mesure l'évolution de l'infection pendant une période d'au moins 24 heures après l'étape a) pour évaluer l'activité et éventuellement sélectionner le médicament donnant les meilleurs résultats. L'invention concerne également les médicaments mis en oeuvre par le procédé précédent. Dans le contexte de la présente invention, un médicament potentiel peut être une substance de toute nature, chimique ou bien biologique telle qu'un anticorps ou un agent vaccinal; ce peut être aussi un mélange de substances. Un organisme pathogène possédant un récepteur capable de fixer une transferrine d'origine humaine peut être une bactérie pathogène telle que Ne isse na m eningitidis, Haemophilus influenzae, Mycoplasma pneum oniae, Neisseria gonorrhoeae, Tnchomonas vaginalis et Bordetella perfltstts ou un protozoaire pathogène du genre Tiypanosoma ceci, Leisfunania et Plasmodium. Dans le contexte de la présente invention, un organisme pathogène de choix est Neisseria meningitidis. Le médicament potentiel peut être administré à l'animal en dose unique ou répétées, plusieurs fois après un certain délai d'intervalle ; par n'importe quelle voie d'administration communément en usage ; de façon préalable, concomitante ou postérieure à l'étape d'épreuve par organisme pathogène. Lorsqu'il s'agit d'un agent utilisé à titre préventif, notamment un agent vaccinal, ce dernier sera administré de façon préalable à l'administration du microorganisme pathogène. Dans les autres cas, le médicament sera administré de façon préalable, concomitante ou postérieure à l'étape d'épreuve. L'étape d'épreuve s'effectue en administrant une quantité appropriée et préalablement déterminée d'un organisme pathogène, le plus souvent en dose unique et par n'importe quelle voie d'administration communément en usage. On préférera néanmoins, la voie sous-cutanée ou intrapéritonéale. La quantité à administrer doit être suffisante pour déclencher chez un animal contrôle (pas d'administration préalable de médicament), un état pathogène qui peut se signaler de différentes manières (poil hérissé, mobilité réduite, prostration, mort) ; elle dépend de divers facteurs tels que l'espèce animal ou l'organisme pathogène. Elle peut être déterminée selon les pratiques générales d'un homme du métier. Dans le cas d'une infection bactérienne, on recherchera par exemple, la dose minimale qui induit une bactériémie significative. A titre d'exemple, on indique qu'il convient d'administrer à une souris transgénique, par voie intrapéritonéale, une suspension de Neissena meningitidis titrant de 1.105 à 1.108 CFU, de manière avantageuse de 1.1fi à 5.107 CFU et de manière préférée, environ 1.107 CFU. Cette suspension sera obtenue de préférence par culture de la bactérie dans un milieu carencé en fer. Un procédé selon l'invention peut également comprendre une étape optionnelle, dite "étape de surcharge". On administre alors à l'animal une quantité réduite de transferrine humaine chargée en fer (Fe-Tf) préalablement ou de façon concomitante à l'étape d'épreuve. Cette administration peut avoir lieu en dose unique ou répétée plusieurs fois et peut se faire par n'importe quelle voie d'administration communément en usage, de préférence par voie intrapéritonéale ou intraveineuse. La quantité de Fe-Tf que l'on administre est de 0,5 à 6 mg, de manière avantageuse de 0,6 à 5 mg et de manière préférée de 1 à 4 mg. Un procédé selon l'invention destiné à l'évaluation d'un agent vaccinal bactérien peut être par exemple mis en oeuvre dans le cadre de l'expérience décrite ci-après en des termes généraux. Des animaux transgéniques selon l'invention sont répartis en plusieurs lots d'épreuve. Chaque animal d'un même lot reçoit une dose déterminée de ragent vaccinal à tester. La dose varie en fonction des lots. Un lot témoin positif est constitué en parallèle ; les animaux transgéniques de ce lot ne reçoivent pas le vaccin à tester. De même on peut constituer un lot témoin négatif avec des animaux de la même espèce non transgéniques qui ne reçoivent pas l'agent vaccinal à tester. Environ 15 à 20 jours après, les animaux de tous les lots reçoivent une dose déterminée de la bactérie. L'absence d'infection ou sa progression est enregistrée selon différents paramètres tels que la bactériémie et l'état physiologique des animaux. L'agent vaccinal est considéré comme protecteur lorsque la bactériémie mesurée chez les animaux transgéniques des lots d'épreuve est réduite de manière significative par rapport à celle mesurée chez les animaux transgéniques du lot témoin positif ; ou lorsque l'état physiologique des animaux des lots d'épreuve est notablement amélioré (se manifestant par exemple par un pourcentage de mortalité réduit) par rapport à celui des animaux du lot témoin positif. Chez les animaux du lot témoin négatif, les bactéries ne peuvent pas proliférer avec efficacité en raison de leur incapacité à s'approvisionner en fer. La bactériémie que l'on observe est faible (inférieure au nombre de cFU injecté), transitoire et suivie d'une phase de clearance rapide. L'infection n'a aucun effet en principe sur la survie de ces animaux. Bien évidemment, plus la bactériémie et l'état physiologique des animaux d'épreuve se rapproche de ce qui est observé dans le lot témoin négatif, plus l'agent vaccinal ou sa dose doit être considéré comme efficace. Dans un lot d'épreuve, une bacténémie est considérée comme élevée lorsque elle est supérieure d'au moins un facteur 100, 1000 ou 10 000 à celle observée dans le lot témoin négatif; ceci dans des conditions de mesure strictement parallèles. L'invention est illustrée ci-après et par référence à la figure suivante. La Figure 1 représente schématiquement la construction du fragment d'ADN codant pour le précurseur de la transferrine humaine en précisant les sites de restriction utilisés dans les étapes de clonage ; la région promotrice du gène murin de la transferrine (5'mTf) est indiquée par des pointillés ; l'exon 1 du gène humain de la transferrine est représenté par une zone hachurée l'intron 1 par une zone quadrillée ; la partie ADNc par une boîte blanche; et la région de terminaison de la transcription de SV40 par une boîte noire. La localisation des séquences correspondant aux oligonucléotides utilisés lors des étapes de construction est indiquée. EXEMPLE 1: Préparation du plasmide pTG2728 comportant un mini gène codant pour le précurseur de la transferrine humaine L'exemple a trait à la construction d'un plasmide comportant un minigène codant pour le précurseur de la transferrine humaine (hTf) placé sous le contrôle du promoteur du gène de la transferrine murine (mTf). (Figure 1) La partie promotrice est isolée du plasmide -3kb mTf-hGH (Idzerda et al., Mol. Cell. Biol., 1989, 9, 5154-5162), le fragment génomique comportant l'exon 1, l'intron 1 et une portion 5' de l'exon 2 du plasmide p7.3kb AT. Ce dernier résulte du clonage du fragment génomique comprenant les exons 1 et 2 du gène de la transferrine humaine issu du phage TfxA2 (Schaeffer et al, Gene, 1987, 109-116) dans le vecteur pAT153/PvuII/8 (Anson et al., EMBOJ., 1984, 1053-1060). La région ADNc provient du plasmide Tf23 (Park et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, 82, 3149-3153). L'ensemble des étapes de clonage mettant en oeuvre des plasmides bactériens est réalisé par passage dans la souche Escherichia coli (E. coli) 5K, alors que celles qui mettent en oeuvre des vecteurs dérivés du phage M13 sont réalisées par passage dans E. coli NM522. Un site B extrémités franches. I1 est ensuite digéré par BamHI. Le fragment généré comportant 3kb de région promotrice du gène mTf, et le fragment BgE- EcoRV isolé de pTG 2715 sont intégrés entre le site HindIII traité à la polymérase Klenow et le site EcoRV de pTG5919. Cette insertion détruit les sites Bgm et BamHt qui possèdent des extrémités compatibles. li en résulte le vecteur pTG2723. Le plasmide pTG5919 résulte de l'insertion du fragment Bgm de 0,15kb comportant la séquence de terminaison de transcription du virus SV40 (Simian virus 40), dans le site BamHI de p polyIII I* (Lathe et al., supra). Ce plasmide est issu de pTG173 (décrit dans la demande européenne 298 807) et comprend notamment la séquence de terminaison de SV40 mais se distingue de pTG173 au niveau des sites de restriction qui encadrent ladite séquence : respectivement en 5' un site Bgm et en 3' les sites Sali, PstI et BgE. Tout autre plasmide comportant la même séquence de terminaison et des sites de restriction adéquates pourrait être utilisé. Par ailleurs, un fragment s'étendant du codon 25 au site BamHI recouvrant les codons 90 et 91 (le codon +1 représente le premier acide aminé de la transferrine humaine mature) est généré par synthèse chimique. Les 6 oligonucléotides utilisés OTG3336à 3341 sont reportés dans les SEQ ID NO:4 à 9. L'oligonucléotide de la SEQ ID NO:4 contient en amont un site HindIII pour faciliter le clonage du fragment synthétique. Le fragment synthétique HindIII-BamHI ainsi constitué est sous-cloné dans le vecteur M13mpl9 donnant le vecteur M13TG1787 et sa séquence est vérifiée. La séquence ADNc en aval du site BamHI provient du clone Tf23. Ce dernier comprend la région codante de la transferrine humaine à partir du codon 98 et une séquence 3' non-codante de 138pb. Les séquences comprises entre le site BamHI et le codon 98 sont ajoutées par PCR. La réaction de PCR met en oeuvre l'amorce OTG3343 reportée dans la SEQ ID NO:10, l'amorce reverse OTG3344 de la SEQ ID NO:iî comprenant le site EcoRI interne de l'ADNc hTf et le clone Tf23 en tant que matrice. Le fragment PCR généré, après digestion par les enfermes Ban2HI et EcoRI, est introduit entre les mêmes sites de M13TG1787. La séquence du vecteur M13TG2713 en résultant est vérifiée. Le fragment BamHI-NdeI isolé de p7.3kb AT (comprenant la partie 3' de l'intron 1 et la partie 5' de l'exon 2) ainsi que le fragment NdeI-EcoRI isolé de M13TG2713 sont insérés dans le vecteur pTG2723 digéré par BamHI et EcoRI. n en résulte le plasmide pTG2726. La séquence ADNc codant pour la transferrine humaine est complétée en insérant le fragment EcoRI isolé de Tf23 dans le vecteur pTG2726. Le vecteur en résultant et présentant une orientation correcte du fragment EcoRI est désigné pTG2728. EXEMPLE 2: Souris transgéniques exprimant la transferrine humaine. A Obtention de souris simple transgéniques hétérozygotes Le plasmide pTG2728 est purifié sur gradient de chlorure de césium et digéré par NotI de manière à obtenir un fragment d'ADN comportant un minigène codant pour le précurseur de hTf sous le contrôle de 3kb de région promotrice du gène mTf. Le fragment NotI est purifié sur gradient de sucrose et injecté dans le pronucléus mâle d'un oeuf fertilisé de souris hybrides de 2ième génération issues du croisement d'une souris femelle C57/B16 avec un mâle. SJL selon la technique connue de l'homme du métier. Chaque oeuf est ensuite réimplanté dans l'utérins d'une souris pour que la gestation soit poursuivie. L'ADN des tissus de la queue des nouveau-nés est isolé de manière à vérifier l'intégration du transgène dans le génome de l'animal par analyse Southern (Southern, E, J. Mol. Biol., 1975, 98, 503). L'ADN génomique ainsi obtenu est digéré par Petizyme EcoRI et le mélange de digestion est séparé sur gel d'agarose 1%. Après transfert sur membrane Hybond N+ (Amersham), 1'ADN est hybridé en utilisant une sonde appropriée spécifique du gène hTf marquée à l'isotope 32P. La sonde est constituée par le fragment BamHIEcoRI de 0,6kb isolé de M13TG2713. Dans les conditions de stringence classiquement utilisées, on n'observe aucune hybridation croisée avec le gène endogène transferrine de souris. L'analyse des résultats montre que le transgène est intégré dans le génome de 12 souris sur les 86 analysées. Des lignées transgéniques sont établies à partir de 7 fondateurs. On génère des descendants hétérozygotes par croisement de chacun des fondateurs avec des souris hybrides non-transgéniques C57/Bl6 x SJL. La transmission aux descendants est également vérifiée par Southern. Le nombre de copies du transgène est stable d'une génération à l'autre, et on ne détecte aucun réarrangement. Du sang est prélevé sur les souris positives au test d'hybridation et le niveau d'expression de la transferrine humaine dans le sérum est déterminé par la méthode ELISA décrite ci-après. B. Détermination de la concentration sérique de transferrine humaine dans les souris transgéniques. 100;1 d'un anticorps polyclonal de chèvre anti-transferrine humaine (Sigma, référence T-6265) préalablement dilué 100 fois dans un tampon PBS (Na2 HPO4 0,008M, KH2PO4 0,002M, NaCl 0,15M, pH7,2), sont déposés au fond de chaque puit d'une plaque de microtitration de 96 puits (Nunc) et incubés à 4"C pendant 16h. Les anticorps non adsorbés sont éliminés par lavages extensifs avec un tampon PBS comprenant O,% de Tween 80. Les puits sont saturés par addition de 50,ut de BSA 2% dissoute dans un tampon PBS. Après 10mn, on ajoute 50S1 d'une solution PBS-Tween 4% et 100 1 de dilution deéchantillons de sérum prélevés d'une souris positive au test d'hybridation Les plaques sont incubées 2h à température ambiante, et lavées extensivement avec le tampon PBS-Tween 0,2%. On les incube ensuite 2 heures à température ambiante avec 100cul d'un anticorps de mouton anti-transferrine humaine couplé à la peroxydase (Binding Site Limited, référence PPO70) dilué 1000 fois dans un tampon PBS-Tween 0,2%. Après lavages extensifs dans les mêmes conditions que précédemment, l'activité enzymatique peroxydase est révélée par addition de 100A1 de la préparation suivante (Na2HPO4 0,066M, C6H807 0,035M, pH5, 0,04% d'orthophénylendiamine et 0,014% de peroxyde d'hydrogène). La réaction est stoppée par addition de 150,u1 d'une solution H2SO4 1M. L'absorbance est mesurée à 490nm. La quantité de transferrine d'origine humaine contenue dans le sérum des animaux transgéniques est établie en fonction d'une gamme d'étalonnage préparée comme suit: une solution de transferrine humaine purifiée (Sigma, référence T-3400) préparée à une concentration de 5X10-5 mg/ml est diluée de 2 en 2 dans du tampon PBS. L'absorbance est mesurée pour chacune des dilutions et la courbe d'étalonnage est établie (ng de transferrine humaine en fonction de l'absorbance). Le mode opératoire ci-dessus décrit permet de détecter jusqu'à îng de transferrine humaine. Le test est spécifique de la transferrine humaine et ne montre pas de réaction croisée avec de la transferrine de souris. Le niveau d'expression des animaux fondateurs (Fg) varie en moyenne et selon les lignées entre 0,16 et 0,40mg/ml. D'une manière générale, l'expression est légèrement augmentée chez les animaux de première génération (F1) et atteint 0,40 à 0,75mg/ml, reflétant le mosaïsme des fondateurs. Puis pour les lignées pour lesquelles les descendants de 2ième génération (F2) sont générés, le taux d'expression est relativement stable à l'exception d'une lignée. C. Etablissement de lignées-de souris double transgéniques homozygotes Les souris homozygotes sont générées en croisant des frères et des soeurs provenant d'une même lignée transgénique. On détermine les animaux homozygotes par Southern blot quantitatif effectué sur les tissus de queue prélevés des descendants dudit croisement. De plus, les homozygotes sont confirmés par croisement "retour" avec des souris hybrides non transgéniques, qui doit donner 100 to de descendants simples transgéniques. On a généré des souris homozygotes à partir de différentes lignées. Les homozygotes issus de la lignée 13 présentent un niveau d'expression de la transferrine humaine augmenté d'un facteur proche de 2 par rapport à celui des simple transgéniques parents. Les souris homozygotes de la lignée 13 produisent environ lmg/ml de transferrine humaine (la concentration sérique mesurée dans 4 animaux varie de 0,92 à 1,2mg/ml). EXEMPLE 3: Usage des souris transgéniques à titre de modèle animal pour l'infection de Netssena meningitidis. On utilise Ia souche Neissena meningitidis B16B6 à titre de souche d'épreuve. Les bactéries sont cultivées sur boîte de gélose Mueller-Hinton pendant 16 heures à 37"C sous 10% de CO2. Puis on réalise une culture en milieu liquide en mettant en suspension des colonies précédemment obtenues dans un milieu BMH (bouillon Mueller-Hinton) pH6,6, EDDA (Ethylènediamine-di O-hydroxyphényl-acetic acid, Sigma) 30 ,uM à une DO680 (densité optique mesurée à 680 mn) d'environ 0,2. Les bactéries sont ainsi cultivées en condition de carence de fer pendant 4 heures à 37"C sous agitation L'absorbance à 680nm est précisément mesurée. Elle se situe en général aux environs de 1. On ajuste la suspension à une concentration de 2.107 CFU/ml, sachant qu'une suspension de germes à 1.109 correspond à une densité optique mesurée à 680 mn de 0,5. La suspension est préparée dans un milieu tpTTG [eau physiologique tamponnée (Aguettant), Tryptone 1SYoo (DIFCO) et gélatine 1too (Bio-Mérieux)j. L'équivalence entre absorbance et nombre de CFU est vérifiée par numération sur milieu gélosée. La virulence de la souche est contrôlée à chaque expérimentation. Ce contrôle est effectué sur des groupes de 8 souris CD1 femelles (Charles River) âgées de 8 semaines et prétraitées à la Fe-Tf. On administre à ces souris par voie IP 0,5ml d'une solution de transferrine humaine à 48 mg/ml saturée en fer (Intergen, ref 4455-00, holoform, pureté environ 98%) quelques minutes avant l'épreuve bactérienne. Puis on leur injecte 0,5 ml de doses progressives de raison 10 de la suspension bactérienne (en général de 1.103 à 1.107 CFU/souris) par voie IP. La létalité est enregistrée pendant les 5 jours suivants. On détermine la dose létale 50 (DL50) de la suspension bactérienne, c'est à dire la dose de bactérie à laquelle 50% des animaux ainsi traités meurent. D'une manière générale la DL50 de la souche Neissena meningitidis B16B6 se situe aux environs de 5.104 CFU. Les souris sont réparties en différents groupes: (1) des souris non-transgéniques et non traitées à la Fe-Tf. Ce groupe qui comprend en général 5 souris, constitue le témoin négatif d'infection, (2) des souris non-transgéniques auxquelles on administre quelques minutes avant le challenge bactérien et par voie IP 24mg de Fe-Tf (comme indiqué dans le paragraphe précédent). Ce groupe qui comprend environ 5 souris correspond au modèle divulgué dans l'art antérieur et constitue le témoin positif d'infection, et (3) des souris transgéniques qui expriment une concentration sérique de hTf de 0,3 à 0,6mg/ml. (4) On peut également inclure, de manière facultative, un groupe supplémentaire constitué par des souris transgéniques, auxquelles on administre une quantité très réduite de Fe-Tf (1,3mg) par voie IP. On administre à l'ensemble des souris 0,5ml de la suspension bactérienne, soit environ 1.107 CFU/ml. L'administration est réalisée par voir IP et représente le temps 0 (t=0) de l'expérimentation. Des prises de sang sont effectuées au niveau du sinus rétro orbitaire à intervalle de temps régulier. L'échantillon est dilué immédiatement au 1/10 dans le milieu Les résultats peuvent être résumés de la façon suivante: Dans les souris non-transgéniques et non traitées à la Fe-Tf, on mesure une bactériémie transitoire inférieure au nombre de CPU injecté, qui régresse rapidement en fonction du temps. La bactériémie est non détectable ou très faible à partir de t=48h Tous les animaux de ce groupe survivent et ne présentent aucun signe de maladie. Les souris non-transgéniques traitées à la Fe-Tf (24mg/IP) présentent une bactériémie élevée très tôt après le challenge (dès t=4h) qui s'accentue encore au cours du temps. L'infection entraîne généralement la mort des animaux en moins de 48h. Les souris transgéniques (concentration plasmatique en hTf environ 0,5 mg/ml) présentent une bactériémie élevée avec un maximum à t=24h. Les animaux sont malades et la plupart se rétablissent progressivement alors que dans quelques cas, l'infection entraîne la mort par septicémie. SEQ ID NO:1 TYPE DE SEQUENCE: séquence polypeptidique LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 698 acides aminés TYPE DE MOLECULE : protéine ORIGINE DE LA MOLECULE: homme CARACIERISTIQUES : précurseur de la transferrine humaine. Met Arg Leu Ala Val Gly Ala Leu Leu Val Cys Ala Val Leu Gly -19 -15 -10 -5 Leu Cys Leu Ala Val Pro Asp Lys Thr Val Arg Trp Cys Ala Val 1 5 10 Ser Glu His Glu Ala Thr Lys Cys Gln Ser Phe Arg Asp His Met 15 20 25 Lys Ser Val Ile Pro Ser Asp Gly Pro Ser Val Ala Cys Val Lys 30 35 40 Lys Ala Ser Tyr Leu Asp Cys Ile Arg Ala Ile Ala Ala Asn Glu 45 50 55 Ala Asp Ala Val Thr Leu Asp Ala Gly Leu Val Tyr Asp Ala Tyr 60 65 70 Leu Ala Pro Asn Asn Leu Lys Pro Val Val Ala Glu Phe Tyr Gly 75 80 85 Ser Lys Glu Asp Pro Gln Thr Phe Tyr Tyr Ala Val Ala Val Val 90 95 100 Lys Lys Asp Ser Gly Phe Gln Met Asn Gln Leu Arg Gly Lys Lys 105 110 115 Ser Cys His Thr Gly Leu Gly Axg Ser Ala Gly Trp Asn Ile Pro 120 125 130 Ile Gly-Leu Leu Tyr Cys Asp Leu Pro Glu Pro Arg Lys Pro Leu 135 140 145 Glu Lys Ala Val Ala Asn Phe Phe Ser Gly Ser Cys Ala Pro Cys 150 155 160 Ala Asp Gly Thr Asp Phe Pro Gln Leu Cys Gln Leu Cys Pro Gly 165 170 175 Cys Gly Cys Ser Thr Leu Asn Gln Tyr Phe Gly Tyr Ser Gly Ala 180 185 190 Phe Lys Cys Leu Lys Asp Gly Ala Gly Asp Val Ala Phe Val Lys 195 200 205 His Ser Thr Ile Phe Glu Asn Leu Ala Asn Lys Ala Asp Arg Asp 210 215 220 Gln Tyr Glu Leu Leu Cys Leu Asp Asn Thr Arg Lys Pro Val Asp 225 230 235 Glu Tyr Lys Asp Cys His Leu Ala Gln Val Pro Ser His Thr Val 240 245 250 Val Ala Arg Ser Met Gly Gly Lys Glu Asp Leu Ile Trp Glu Leu 255 260 265 Leu Asn Gln Ala Gln Glu His Phe Gly Lys Asp Lys Ser Lys Glu 270 275 280 Phe Gln-Leu Phe Ser Ser Pro His Gly Lys Asp Leu Leu Phe Lys 285 290 295 Asp Ser Ala His Gly Phe Leu Lys Val Pro Pro Arg Met Asp Ala 300 305 310 Lys Met Tyr Leu Gly Tyr Glu Tyr Val Thr Ala Ile Arg Asn Leu 315 320 '325 Arg Glu Gly Thr Cys Pro Glu Ala Pro Thr Asp Glu Cys Lys Pro 330 335 340 Val Lys Trp Cys Ala Leu Ser His His Glu Arg Leu Lys Cys Asp 345 350 355 Glu Trp Ser Val Asn Ser Val Gly Lys Ile Glu Cys Val Ser Ala 360 365 370 Glu Thr Thr Glu Asp Cys Ile Ala Lys Ile Met Asn Gly Glu Ala 375 380 385 Asp Ala Met Ser Leu Asp Gly Gly Phe Val Tyr Ile Ala Gly Lys 390 395 400 Cys Gly Leu Val Pro Val Leu Ala Glu Asn Tyr Asn Lys Ser Asp 405 410 415 Asn Cys Glu Asp Thr Pro Glu Ala Gly Tyr Phe Ala Val Ala Val 420 425 430 Val Lys Lys Ser Ala Ser Asp Leu Thr Trp Asp Asn Leu Lys Gly 435 440 445 Lys Lys Ser Cys His Thr Ala Val Gly Arg Thr Ala Gly Trp Asn 450 455 460 Ile Pro Met Gly Leu Leu Tyr Asn Lys Ile Asn His Cys Arg Phe 465 470 475 Asp Glu Phe Phe Ser Glu Gly Cys Ala Pro Gly Ser Lys Lys Asp 480 485 490 Ser Ser Leu Cys Lys Leu Cys Met Gly Ser Gly Leu Asn Leu Cys 495 500 505 Glu Pro Asn Asn Lys Glu Gly Tyr Tyr Gly Tyr Thr Gly Ala Phe 510 515 520 Arg Cys Leu Val Glu Lys Gly Asp Val Ala Phe Val Lys His Gln 525 530 535 Thr Val Pro Gln Asn Thr Gly Gly Lys Asn Pro Asp Pro Trp Ala 540 545 550 Lys Asn Leu Asn Glu Lys-Asp Tpr Glu Leu Leu Cys Leu Asp Gly 555 560 565 Thr Arg Lys Pro Val Glu Glu Tyr Ala Asn Cys His Leu Ala Arg 570 575 580 Ala Pro Asn His Ala Val Val Thr Arg Lys Asp Lys Glu Ala Cys 585 590 595 Val His Lys Ile Leu Arg Gln Gln Gln His Leu Phe Gly Ser Asn 600 605 610 Val Thr Asp Cys Ser Gly Asn Phe Cys Leu Phe Arg Ser Glu Thr 615 620 625 Lys Asp Leu Leu Phe Arg Asp Asp Thr Val Cys Leu Ala Lys Leu 630 635 640 His Asp Arg Asn Thr Tyr Glu Lys Tyr Leu Gly Glu Glu Tyr Val 645 650 655 Lys Ala Val Gly Asn Leu Arg Lys Cys Ser Thr Ser Ser Leu Leu 660 665 670 Glu Ala Cys Thr Phe Arg Arg Pro 675 SEQIDN0:2 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 33 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN ANTI-SENS : non PROPRIETES : Oligonucléotide de mutagénèse par PCR (OTG 3320) pour introduire un site Bglll en amont du codon d'initiation de la traduction du gène de la transferrine humaine. GGGAAAAGAT CTCGGAAGAT GAGGCTCGCC GTG 33 SEQIDN0:3 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE 25 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN ANII-SENS: oui PROPRIETES : Oligonucléotide de mutagénèse par PCR (OTG 3321) dont la séquence est complémentaire à une séquence du vecteur M13 mp19. CACACAGGAA ACAGCTATGA CCATG 25 SEQIDNO:4 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 69 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN ANTI-SENS : non PROPRIETES : Oligonucléotide de synthèse (OTG 3336) participant à la reconstitution d'un fragment de l'ADNc de la transferrine humaine s'étendant du codon 25 au codon 91. AGCTTCATAT GAAAAGCGTC ATTCCATCCG ATGGTCCCAG 40 TGTTGCTTGT GTGAAGAAAG CCTCCTACC 69 SEQIDNO:5 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 69 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN ANTI-SENS : non PROPRIETES : Oligonucléotide de synthèse (OTG 3337) participant à la reconstitution d'un fragment de l'ADNc de la transferrine humaine s'étendant du codon 25 au codon 91. TTGATTGCAT CAGGGCCATT GCGGCAAACG AAGCGGATGC 40 TGTGACACTG GATGCAGGTT TGGTGTATG 69 SEQIDN0:6 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE: 62 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN A SENS: non PROPRIETES : Oligonucléotide de synthèse (OTG 3338) participant à la reconstitution d'un fragment de l'ADNc de la transferrine humaine s'étendant du codon 25 au codon 91. ATGCTTACTT GGCTCCCAAT AACCTGAAGC CTGTGGTGGC 40 AGAGTTCTAT GGGTCAAAAG AG 62 SEQIDN0:7 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE : 75 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN ANTI-SENS : oui PROPRIETES : Oligonucléotide de synthèse (OTG 3339) participant à la reconstitution d'un fragment d; l'ADNc de la transferrine humaine s'étendant du codon 25 au codon 91. GATCCTCTTT TGACCCATAG AACTCTGCCA CCACAGGCTT 40 CAGGTTATTG GGAGCCAAGT AAGCATCATA CACCA 75 SEQIDNO:8 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE : 68 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE: ADN ANTI-SENS : oui PROPRIETES : Oligonucléotide de synthèse (OTG 3340) participant à la reconstitution d'un fragment de l'ADNc de la transferrine humaine s'étendant du codon 25 au codon 91. AACCTGCATC CAGTGTCACA GCATCCGCTT CGTTTGCCGC 40 AATGGCCCTG ATGCAATCAA GGTAGGAG 68 SEQ ID N0:9 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE 57 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN ANTI-SENS : oui PROPRIETES : Oligonucléotide de synthèse (OTG 3341) participant à la reconstitution d'un fragment de l'ADNc de la transferrine humaine s'étendant du codon 25 au codon 91. GCTTTCTTCA CACAAGCAAC ACTGGGACCA TCGGATGGAA 40 TGACGCTTTT CATATGA 57 SEQ ID NO:10 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE 56 nucléotides NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN ANTI-SENS : non PROPRIETES : Oligonucléotide d'amorce de PCR (OTG 3343) participant à la reconstitution d'un fragment de l'ADNc de la transferrine humaine s'étendant du codon 90 au codon 98. GGGAAAGGAT CCACAGACTT TCTATTATGC TGTTGCTGTG 40 GTGAAGAAGG ATAGTG 56 SEQ ID N0:11 TYPE DE SEQUENCE: acide nucléique LONGUEUR DE LA SEQUENCE 30 nucléotides NOMBRE DE BRINS: simple CONFIGURATION: linéaire TYPE DE MOLECULE : ADN ANTI-SENS: oui PROPRIETES : Oligonucléotide de synthèse (OTG3344) participant à la reconstitution d'un fragment de I'ADNc de la transferrine humaine s'étendant du codon 25 au codon 91. TAGTTGGAAT TCTTTTGATT TGTCTTTGCC 30 Revendications 1. Un animal transgénique dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN codant pour une transferrine d'origine humaine, en particulier un précurseur d'une transferrine d'origine humaine, placé sous le contrôle des éléments nécessaires à son expression. 2. Un animal transgénique selon la revendication 1, dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine, placé sous le contrôle des éléments nécessaires à son expression; lesdits éléments comprenant une région promotrice foie-spécifique. 3. Un animal transgénique selon la revendication 2, dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine, placé sous le contrôle des éléments nécessaires à son expression; lesdits éléments comprenant une région promotrice foie-spécifique qui est celle du gène murin de la transferrine. 4. Un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 3, dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine, ledit fragment d'ADN étant de type minigène. 5. Un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 4, dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine ; ledit précurseur comprenant le peptide signal codé par le gène humain de la transferrine. 6. Un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 5, dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN codant pour un précurseur de la transferrine humaine ; ladite transferrine ayant la séquence d'acides aminés telle que montrée dans l'identificateur de séquence n" 1, du résidu Val en position 1 au résidu Pro en position 679. 7. Un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 6, dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN codant pour un précurseur de la transferrine humaine ; ledit précurseur ayant la séquence d'acides aminés telle que montrée dans l'identificateur de séquence n" 1, du résidu Met en position -19 au résidu Pro en position 679. 8; Un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 7, dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine, à l'extérieur du gène homologue codant pour la transferrine. 9. Un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 8, qui est de type rongeur. 10. Une souris transgénique selon la revendication 9. il. Un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 10, qui est simple transgénique pour le fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine. 12. Un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 10, qui est double transgénique pour le fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine. 13. Un procédé de préparation d'un animal simple transgénique selon la revendication 11, selon lequel: - on introduit dans un embryon non-humain, un fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine, pour obtenir un embryon transgénique, - on transplante ledit embryon transgénique dans un animal femelle pseudo-gestante, - on permet audit embryon transgénique de se développer jusqu'à son terme, et - on sélectionne au moins un animal simple transgénique dans le génome duquel est inséré un allèle dudit fragment d'ADN. 14. Un procédé d'obtention d'un animal double transgénique selon la revendication 12, selon lequel: - on croise un animal mâle simple transgénique et un animal femelle simple transgénique, chacun obtenu par le procédé selon la revendication 13, et - on sélectionne au moins un descendant double transgénique dans le génome duquel sont intégrés deux allèles du fragment d'ADN codant pour un précurseur d'une transferrine d'origine humaine. 15. A titre de modèle pour évaluer ou sélectionner un médicament potentiel destiné à prévenir ou traiter une infection induite par un organisme pathogène possédant un récepteur capable de fixer une transferrine d'origine humaine, un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 12 auquel on a administré une quantité déterminée dudit organisme pathogène. 16 A titre de modèle pour évaluer ou sélectionner un médicament potentiel destiné à prévenir ou traiter une infection induite par un organisme pathogène sélectionné parmi les bactéries pathogènes Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Mycoplasma pneumoniae, Neisseria gonoirh oea e, Trichomonas vaginales et Bordetella pertussis et les protozoaires pathogènes des genres Trypanosoma cruzi, Leishmania et Plasmodium, un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 12 auquel on a administré une quantité déterminée dudit organisme pathogène. 17. A titre de modèle pour évaluer ou sélection un médicament potentiel destiné à prévenir ou traiter une infection induite par Neisseria meningitidis, un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 12 auquel on a administré une quantité déterminée dudit organisme pathogène. 18. Un procédé pour évaluer ou sélectionner un médicament potentiel destiné à la prévention ou au traitement d'une infection induite par un organisme pathogène possédant un récepteur capable de fixer une transferrine d'origine humaine, selon lequel: a) on administre ledit médicament à un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 12, avant pendant ou après l'administration d'une quantité déterminée dudit organisme pathogène audit animal transgénique, et b) on suit l'évolution de l'infection pendant une période d'au moins 24 h après l'étape a), puis on évalue l'activité pour sélectionner le médicament donnant les meilleurs résultats. 19. Un procédé selon la revendication 18, selon lequel on administre à un animal transgénique selon l'une des revendications 1 à 12 une quantité d'au plus 6 mg de transferrine humaine chargée en fer, préalablement ou de façon concomitante à l'étape d'épreuve-a). 20. Médicament obtenu par la mise en oeuvre d'un procédé selon la revendication 18 ou 19.