Brevet FR2709952A1 — publié le 19950324

_i - ' 2709952 La présente invention concerne la composition d'une solution hydro-alcoolique de glyccyrhizine extrait de la racine et des stolons non mondés et séchés de réglisse (glyccyrhiza glabra L) qui contient au minimum quatre pour cent d'acide glyccyrhizique sous forme de son sel d'amilnonium. I - ETUDE DU PRINCIPE ACTIF: GLYCCYPIIIZINE (PIL!AMIACOPF-,En) CHROMLiTOGiLRPIIIE Opérer par chromatographie sur couche mince (V.6.20. 2) en utilisant une pIaque recouverte de gel de silice GF254R. Solution à examiner (a). A 1,0 g de drogue pulvérisée (180), ajouter 20 ml de chloroforme R. Agitez pendant minutes, puis filtrez. Evaporez le filtrat à siccité. Dissolvez le résidu dans 2.00 ml d'un mélange à volumes égaux de chloroforme Ro et de méthanol R. Solution à examiner (b). A la drogue traitée par le chloroforme au cours de la préparation de la solution à examiner (a), ajoutez 30 ml d'acide sulfurique IN. Chauffez à reflux pendant 1 h. Laissez refroidir et agitez le mélange non filtré avec 2 fois 20 ml de chloro- forme R. Filtrez et évaporez à siccité. Dissolvez le résidu dans 2.00 ml d'un mélange à volumes égaux de chloroforme R et de méthanol R. 1 Solution témoin. Dissolver 10 mg d'acide glycyrrhétique dans 2.00 ml d'un mélange à volumes égaux de chloroforme R. et de méthanol R. Déposer séparément sur la plaque en bandes de 20 mm sur - 3 mm au maximum, 10 pl dessolutionfà examine r(b) et 20 p de solution témoin. Agitez 13 volumes d'éthanol R, 27 volumes d'ammoniaque à 1,7 pour cent m/v de NH3 et Co volumes d'acétate d'éthyle R. Après 5 mm, séparez et utilisez comme phase mobile la couche supérieure, même si elle est trouble. Développez un parcours de 15 cm. Laissez sécher la plaque à l'air pendant 5 min. Examinez les chromatogrammes en lumière ultraviolette à 254 nm. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner (b). Pulvériser ensuite de la solution d'aldéhyde - anisique R à raison de 10 ml pour une plaque de 200 mm de c8té. Chauffez à 100 - 105 'C pendant 10 min. Examiner à la lumière du jour. La bande correspondant à l'acide p -glycyrrhétique est colorée en bleu violet. Dans les - chromatogrammes obtenus avec la soltion à examiner (a) et (b) il apparait une ou deux bandes d'un R, voisin de 0.6 déjà visibles à la lumière du jour avant la pulvérisation mais qui, après celle-ci, virent au jaune orange. Il apparait également plusieurs autres bandes colorées en bleu violet. -La bande correspondant à l'acide P-glycyrrhétique dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner (b) doit avoir au moins les mêmes dimensions que la bande du chromatogramme obtenu avec la solution témoin. * présente une bande R (0,1) obtenu avec le témoin, non obtenu avec la solution à examiner (a). -3 - DOSAGE I - Opérez par chromatographie sur couche mince (V 6.20.2) en utilisant une plaque recouverte de gel de silice GF254R- Solution à examiner. Dans un ballon de 100 ml à fond rond, introduisez 1, 00 g de drogue pulvérisée (180). Ajoutez 25 mi _ d'acide chlorhydrique IN et 2,5 ml de dioxanne R. Plongez le ballon dans un bain-marie et chauffez à reflux pendant 2 h. Laissez refroidir et filtrez sur un papier durci d'un diamètre de 9 cm. Eliminez le filtrat. dincer le ballon et le filtre avec fois 20 ml d'eau, puis rejettez les eaux de lavage. Séchez - le ballon puis le filtre à 105 C pendant 20 min. Introduisez le filtre dans le ballon et ajouter 50 ml de chloroforme R. Plonger le ballon dans le bain marie et faire bouillir à reflux pendant 5 min. Filtrez la solution chloroformique chaude sur un papier filtre d'un diamètre de 9 cm dans un vase à préci- - piter. itépétez cette extraction à 2 reprises, dans les mêmes conditions, avec 25 ml de chloroforme R, en filtrant chaque fois la solution chloroformique chaude sur la même filtre. Introduisez ce filtre dans le ballon et agitez à nouveau, comme indiqué ci-dessus, avec 25 ml de chloroforme R. Filtrez la - solution chloroformique chaude sur un nouveau filtre d'un diamètre de 9 cm.. Rémissait les solutions chloroformiques dans un ballon de 50 ml et évaporez le liquide à siccité. Reprenez quantitativement le résidu avec un mélange à volumes égaux de chloroforme R et de méthanol R, puis introduisez cette solution - dans une fiole jaugée de 10 ml. lUincer le vase à précipiter avec 2 fois 10 ml de chloroforme R, puis évaporez le solvant jusqu'à un volume de 2 ml. Introduisez les 2 ml dans lait fiole jaugée et complétez à 10,0 ml avec un mélange à volumes égaux de chloroforme R et de mthanol il. -4 - 1 _ Solution témoin. Dans un ballon de 100 ml à fond rond, introduisezSO el A. glycyrrhizique SCR, ajoutez 25 ml d'acide chlorhydrique IN et 2,5 ml dioxanne R. Plongez le ballon dans un bain marie et chauffez à reflux pendant 2 heures, - puis opérez comme indiqué plus haut pour préparer la solution à examiner. La solution finale dans le mélange chloroforme-méthanol sert de solution témoin. Déposez quantitativement et séparément sur la plaque, en bandes de 20 mm sur 3 mm au maximum, 2 fois 60/JL de solution - à examiner et 2 fois 60 JL de solution témoin en ayant soin de n'effectuer aucun dépot sur une partie de la plaque. Agitez 13 volumes d'éthanol R, 27 volumes d'ammoniaque à 1,7 pour cent M/V de NH3 et 60 volumes d'acétate d'éthyle R; après 5 mm, séparer les couches et utilisez comme phase - mobile la couche supérieure, même si elle est trouble. Déve- loppez successivement à 2 reprises sur un parcours de 15 cm. Après chaque développement, laissez sécher la plaque à l'air. Examinez les chromatogrammes en lumière ultraviolette à 254 un et repérez les bandes d'acide P-glycyrrhétique obtenues - avec la solution à ex!niner et avec la solution témoin en les entourant d'un rectangle. Prelevez les surfaces localisées en grattant av-c précaution et introduisez l'adsorbant correspondant à ch:que bande séparément dans un ballon de ml à bouchon rodé. Dans chaque ballon, ajoutez 5 ml - d'éthanol Rt et agitez pendant 15 min. Filtrez respectivement chacune des solutions sur un petit filtre de verre fritté (16) en recueillant le filtrat dans un ballon jaugé de 10 ml. Rincez l'adsorbant sur le filtre et complétez à 10,0 ml avec de l'éthanol R. - Essai à blanc. Sur la partie de la planque exempte de dépot, indiquez la surface correspondant, en position et en diminu- d;ions, aux bandes repérées correspondant à l'acide B-glycyr- rhétique. Prélevez l'adsorb;nt en grattant la plaque et trai- tez-le comme décrit ci-dessus. -5- 1 Mesurez l'absorbance (V.6.19) de chaque solution à 250 nm, en utilisant comme liquide de compensation la solution de l'essai blanc. Calculez la teneur pour cent en acide glycyrrhisique à l'aide de l'expression: -A1 X M2 x C A2 X M1 A1 = absorbance de la solution à examiner, A2 = absorbance de la solution témoin, - C = teneur % en acide glycyrrhizique de la substance SCR, ml = masse de la prise d'essai en grammes, m2 = masse de l'acide glycyrrhizique SCR en grammes. - PROCEDE DL PRr.PAIUATION DU PRODUIT CONTENANT iA GLYCCYRHIZIN; La glvccyrhizine est dissoute à tiède dans une eau filrée et distillée sur résine, introduite dans une cuve inox ou enduite d'un produit neutre type brauthite, ou elle est mixée avec une solution aqueuse distillée de Cl Na. Le mélange des deux phases est miscible dans la troisième phase alcoolique d'huile de cade et acétone additionnée des terpènes (essences). Après brassage le produit est filtre par aspiration sur filtre "cuno" après passage préa!able sur un tami s. Enfin recueillir dans uu% cuve de rénartition et dis'osérd.ans des flacons verre cansulés immédiatement et maintenu à l'abri de la lumière. La formule arrêtée du i)roduit fini est la su.ivante: _ GYCCYtHIi:....... ............... 0,21 % _ TUILZ D C D..................... 0,078 c AO:?Oi.............................. O,J6:o LCOOL:TYLQU................... DTD: .. 54,00 o -JNC E L 7A.DI,..C............... 4,9 g o E SSi;'NCE DL.VAND............ 0, 3..DTD: DI' CIT-RON 0,36 __C 'DC x................ -,3 6 - ZES \C -:$!VL._.E:........................4...OO 0 III- PFI:::-[:-'r' DU PRINCIP2{ ACTIF: G].YCOCYIH,H:'[INE 7 - 1 - Le demandeur a mis en évidence l'effet biostimulant de la pousse du poil (ou du cheveu) au cours des essais cliniques suivants: Essais de toxicité. - Des patch test ont été pratiqué chez 30 patients dont 10 avaient déjà présentés des phénomènes de polysensibilisations diverses, (en particulier des eczémas vésiculeux aux détersifs ménagers, au ciment) mais dans ces cas, ces patch-tests ont été pratiqués en dehors de toutes poussées d'eczéma. - Les résultats de ces patch-tests ont été négatifs dans les 30 cas avec chacun des constituants et avec le produits fini. Essais cliniques proprements dits. Pratiqués en applications biquotidiennes pendant un minimum de 3 mois et en traitement d'entretien ensuite avec le produit - fini chez 50 patients qui présentaient une alopécie évolutive de l'apex respectant la nuque. 30 étaient des hommes dont 22 ont présenté après 3 mois environ une amélioration de la tenue et du volume de la chevelure, pour 18 d'entre eux une diminutionnette avec un arrêt de la chute (résultat apprécié avec un recul de - 6 mois à 1 an sous poursuite du traitement). d'entre eux étaient des femmes dont l'apécie avaiit été agravée ou déclenchée par des soins de la chevelure: après des shampooings, permanentes, décolorations, 16 d'entre elles ont présenté une nette amélioration de la tenue et du volume de la - chevelure après 3 mois environ et un arrêt total de la chute avec un recul de 6 mois à 1 an. "b " 2709952 R E V E N D I C( i I O N S 1 - Composition d'une solution hydro-alcoolique de glyccyrhizine dans son utilisation pour son activité biostimulante sur la pousse du cheveu. 2 - Compositions à usage thérapeutique ou cosmétique à visée biostinlulante de la pousse du cheveu (du poil) préparées selon la revendication 1.