Brevet FR2700470A1 — publié le 19940722

La peau est le plus grand organe de l'organisme humain. Elle constitue la première barrière de défense contre les agressions chimiques, physiques, microbiennes externes. Outre sa fonction mécanique (membrane plus ou moins étanche), la peau renferme plusieurs catégories de cellules qui lui permettent de lutter contre ces agressions. On cite entre autres les kératocytes, les macrophages, les cellules de Langerhans, les mastocytes. Ces cellules modulent la réponse immunitaire, mais également la réponse inflammatoire de l'organisme. Alors que la peau saine n'a pas besoin d'une amélioration de son système de défense, la peau stressée, agressée, âgée, peut profiter d'un apport externe de stimulation. Un certain nombre de produits, surtout des polysaccharides extraits de champignons, de levures, de céréales, ont été proposés dans ce sens. Par ailleurs il est connu que certains microorganismes produisent des métabolites (qu'ils sécrètent ou non) ayant une activité immunostimulante plus ou moins spécifique. Certains médicaments sont basés sur l'utilisation de filtrats bactériens (BSKR, ProsymbioflorR) ou de germes pathogènes totaux inactivés (Immun BSG Pasteur FR, BiostimR). Ces produits sont destinés aux applications orales ou parentérales dans les thérapies anti-infectieuses. La peau est le lieu de résidence d'un certain nombre de microorganismes aérobies et anaérobies non pathogènes, ainsi que le lieu privilégié de contact initial avec des germes pathogènes. La fonction précise de la flore cutanée naturelle n'est pas encore bien établie. II semble que certains germes jouent le rôle d'inhibiteur compétitif par rapport à une colonisation de germes nocifs. L'objet de la présente invention est la découverte que certains microorganismes naturels de la flore cutanée possèdent une activité immunomodulatrice et immunostimulante par voie topique. Ces germes, appartenant aux familles des Propionibactéries, Brevibactéries et Corynebactéries (C lipophilicus, C. granulosum, C. mlnutlsslmum, B. épidermis, C. jeikeium, P. acnes, P. avidum) sont soit aérobies, soit anaérobies et résident de façon permanente en plus ou moins grande abondance sur la peau. Les recherches ont montré que les germes inactivés et/ou les parois de ces microorganismes, une fois vidés de leur cytoplasme, possédaient une activité immunomodulatrice ou immunostimulante. Selon le degré de pureté et de préparation (délipidation et fractionnement), cette activité est plus ou moins fortement exprimée. La mise en évidence du potentiel immunostimulant par voie topique est faite par la méthode dite "fenêtre cutanée".L'intérêt cosmétique d'une telle substance provient de l'absence totale de toxicité (flore résidante non pathogène) et de l'effet biologique qui se limite à la mobilisation et à l'activation des macrophages, y compris des cellules de Langerhans, sans augmenter le nombre de neutrophiles, de éosinophiles et autres médiateurs de l'inflammation. La peau est ainsi mieux protégée, plus apte à se défendre et à réparer ses tissus. De façon inattendue, la peau traitée par ces compositions cosmétiques renfermant une quantité suffisante de bactéries inactivées et/ou des parois bactériennes voit son aspect et son état s'améliorer: lissage, diminution de l'aspect luisant des peaux grasses, meilleure hydratation des peaux sèches, diminution des rougeurs et des irritations légères. L'obtention des bactéries inactivées et/ou des parois bactériennes qui sont l'objet de l'invention passe par l'isolement de la ou des souches, leur inoculation dans des milieux appropriés, et leur culture dans un milieu de fermentation contenant les sels minéraux, des vitamines, des extraits de levures et des peptones. Après la phase de croissance exponentielle des bactéries (optimisation de la biomasse), on filtre le milieu de culture. Les bactéries sont inactivées par autoclavage, recoltées, lavées, éventuellement délipidées par des procédés d'extraction par le chloroforme ou d'autres solvants ; pour obtenir les parois seules, les bactéries inactivées sont cassées et fragmentées par des processus mécaniques (sonication, French Press, billes de verre), puis concentrées par ultrafiltration et séchées. Ces étapes sont celles connues de l'homme de l'art spécialisé en microbiologie industrielle. Un exemple permet d'illustrer l'application cosmétique des bactéries inactivées et/ou des parois ainsi obtenues. Les bactéries inactivées et les parois séchées de Corynebacterium granulosum obtenues par le procédé décrit ci-haut sont dispersées dans des gels fluides de nature polyacrylique, à raison de 0.05 et 0.1 g/l respectivement. Le gel placebo est identique, mais ne contient pas de bactéries ni de parois bactériennes. 20 volontaires de sexe féminin et masculin, agés entre 25 et 58 ans ont été sélectionnés pour le test de la "fenêtre cutanée". Sur la face intérieure de l'avant bras on applique un morceau de film autoadhérant pour arracher les cellules desquamantes (methode dite du "stripping"). Sur la surface ainsi traitée est appliquée une faible quantité (1 mg/cm2) des gels actifs ou de placebo par un léger massage. Ensuite, on couvre la surface d'une lame en verre et on la fixe à l'aide de pansements adhésifs. La lame reste 24h apposée sur la peau. Après 24h on retire la lame, les cellules qui se sont déposées durant cette période sont observées après coloration à l'aide des techniques classiques de microscopie optique. On énumère les macrophages totaux et les macrophages "activés". Ce test simple montre que le nombre de macrophages attirés et "activés" est largement supérieur dans le cas des gels actifs (contenant les parois bactériennes) que dans le gel placebo. Ce rapport varie sensiblement d'une personne à l'autre, les différences des moyennes sont statistiquement hautement significatives (p Des résultats semblables sont obtenus avec des préparations contenant C. parvum et B. épidermis. Un test d'application d'un produit cosmétique fini, destiné aux soins de la peau, effectué sur 30 personnes de sexe féminin montre que certains aspects de la peau du visage s'améliorent avec une application répétée (3 semaines) d'une crème contenant les parois bactériennes à 0.1 mg/ml. Les peaux sont plus lisses, moins grasses, mieux hydratées que les peaux traitées à la crème placebo. Une augmentation de fermeté et de souplesse a été constatée également ainsi qu'une diminution des rougeurs et irritations légères. La contribution des bactéries inactivées et des parois bactériennes au bien être de la peau en général montre que ce genre de préparations peut être utilisée profitablement en toute application cosmétique: produits de soins, produits de traitements capillaires (cuir chevelu), produits solaires, pommades, produits de maquillage, produits de toilette (savons, gels, shampooings, laits, déodorants) sans limitation implicite. Les concentrations d'utilisation des bactéries inactivées et/ou des parois bactériennes vont de 0.001 g (matière sèche)/l à 10gon, préférentiellement de 0.01 g/I à lg/l. Toutes les formes galéniques sont également compatibles avec les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes: émulsions H/E, E/H, laits, lotions, gels, rouge-à-lèvres, poudres, pâtes, cette liste n'étant pas exhaustive. Les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes peuvent être encapsulées dans des vésicules comme les liposomes, les macro-, microou nano-capsules et les macro-, micro- ou nanoparticules. Elles peuvent être absorbées sur tout autre support cosmétique (poudre polymère, bentonites, talc, macromolécules biologiques comme le collagène, I'élastine, les glycosaminoglycanes, les polysaccharides et les acides nucléiques). Les utilisations cosmétiques recommandées préférentiellement pour les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes objets de ce brevet sont la stimulation et l'activation des macrophages épidermiques et dermiques et des cellules de Langerhans ainsi que l'amélioration de l'aspect et l'état général de la peau et du cuir chevelu. REVENDICATIONS: 1. Nouvelles compositions cosmétiques contenant des microorganismes inactivés et/ou des parois cellulaires entières ou fragmentées de ces microorganismes comme immunostimulateurs ou immunomodulateurs. 2. Nouvelles compositions cosmétiques selon la revendication 1 caractérisées en ce que les microorganismes sont des bactéries non pathogènes habituellement trouvées sur la peau humaine. 3. Nouvelles compositions cosmétiques selon les revendications 1 et 2 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes proviennent des souches Corynébactérium spp., Brévibactérium spp. ou Propionibactérium spp. 4. Nouvelles compositions cosmétiques selon les revendications 1 et 2 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes proviennent de Corynébactérium granulosum 5. Nouvelles compositions cosmétiques selon les revendications 1 et 2 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes proviennent de Corynébactérium parvum 6. Nouvelles compositions cosmétiques selon les revendications 1 et 2 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes proviennent de Brevibactérium épidermis 7. Nouvelles compositions cosmétiques selon l'une quelconque des revendications de 1 à 6 caractérisées en ce qu' elles contiennent des bactéries entières inactivées par autoclavage 8.Nouvelles compositions cosmétiques selon l'une quelconque des revendications de 1 à 6 caractérisées en ce que les parois bactériennes sont obtenues par délipidation à partir des bactéries inactivées entières, suivie ou non d'un cassage et d'une fragmentation par sonication ou French Press. 9. Nouvelles compositions cosmétiques selon l'une quelconque des revendications de 1 à 8 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes sont utilisées à des concentrations situées entre 0.001 g (matière sèche)/I et 10g/1, préférablement entre 0.01gel et lg/l. 10. Nouvelles compositions cosmétiques selon l'une quelconque des revendications de 1 à 9 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes sont utilisées dans des émulsions H/E ou E/H, des laits, des lotions, des gels, des rouge-à-lèvres, des produits de maquillage, des shampooings, des savons, des crèmes solaires, des pommades, des déodorants. 11. Nouvelles compositions cosmétiques selon l'une quelconque des revendications de 1 à 10 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes sont encapsulées dans des liposomes, des macro-, micro- ou nanocapsules, des macro-, micro ou nanoparticules, ou absorbées sur des supports cosmétiques comme le talc, les bentonites, les poudres polymères ou les macromolécules biologiques comme le collagène, I'élastine ou les glycosaminoglycanes, les polysaccharides ou les acides nucléiques. 12. Nouvelles compositions cosmétiques selon l'une quelconque des revendications de 1 à 11 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes sont utilisées pour stimuler la production des macrophages épidermiques , dermiques et des cellules de Langerhans épidermiques et pour les activer. 13. Nouvelles compositions cosmétiques selon l'une quelconque des revendications de 1 à 12 caractérisées en ce que les bactéries inactivées et/ou les parois bactériennes sont utilisées pour améliorer l'aspect et l'état général de la peau et du cuir chevelu.