Brevet FR2706295A1 — publié le 19941223

La présente invention concerne des composi- tions destinées à être appliquées sur la peau, comprenant de la Kalinine. La présente invention concerne également de telles compositions à base de Kalinine, à usage cosméti- que et pharmaceutique. La présente invention concerne encore un procédé pour s'opposer au vieillissement de la peau et l'utilisation de la Kalinine pour la fabrication d'une composition pharmaceutique pour application cutanée destinée à favoriser la cicatrisation de la peau. La peau est un organe constitué d'une surface externe ou épiderme qui repose sur une couche épaisse de tissu conjonctif fibro-élastique richement vascularisé appelé le derme. L'épiderme est relié au derme par l'intermédiaire d'une structure unique et complexe appelée membrane basale épidermique. La peau présente une dégradation, liée à l'âge, qui se manifeste par une perte d'élasticité des tissus. La peau peut également présenter des problèmes de cicatrisation après un traumatisme tel que les brûlures, la chirurgie, les escarres. La peau, organe de protection du corps humain contre le monde extérieur, est donc un organe crucial du corps humain. Il s'avérait important de mettre 'en évidence une façon d'améliorer les problèmes liés au vieillissement et à la cicatrisation de la peau. Les auteurs de la présente invention ont trouvé que des compositions, destinées à être appliquées sur la peau, à usage cosmétique et pharmaceutique, comprenant une quantité efficace de Kalinine, permet- taient de combattre le vieillissement de la peau et d'améliorer la cicatrisation de ladite peau. La Kalinine est une protéine présente dans certaines membranes basales, localisée dans la Lamina Lucida de la jonction dermo-épidermique. La Kalinine a été mise en évidence récemment (mémoire de Patricia ROUSSELLE, "La Kalinine: une nouvelle protéine de la jonction dermo-épidermique de la peau humaine", Uni- versité Claude Bernard Lyon I, Faculté de Pharmacie, 1993). La molécule de Kalinine purifiée à partir du milieu de culture de kératinocytes humains se présente sous deux formes différentes, une forme prépondérante de masse moléculaire de 400 kDa et une forme plus grande de 440 kDa. Les auteurs de la présente invention ont, après avoir effectué des tests d'efficacité, trouvé que des compositions à base de Kalinine, destinées à être appliquées sur la peau, pouvaient respectivement combat- tre les effets du vieillissement de la peau humaine et améliorer la cicatrisation de ladite peau. Ainsi, l'invention a pour objet une composi- tion destinée à être appliquée sur la peau, caractérisée en ce qu'elle renferme une quantité efficace de Kalinine dans un excipient. La Kalinine peut être obtenue à partir d'une culture de lignée de carcinome humain de la langue (lignée SCC25). La lignée épithéliale synthétise la kalinine et la dépose sur le support de plastique ou de verre. On purifie la Kalinine par chromatographie d'affinité (conditions décrites dans "Matériel et Méthodes"), de préférence en utilisant l'anticorps BM165 couplé à une résine activée au bromure de cyanogène (CNBr-activated Sepharose 4B; Pharmacia Fine Chemicals, U.S.A. ) à raison de 1 mg d'anticorps par ml de résine hydratée. Ce gel pouvant être conservé lyophilisé et réhydraté pour l'emploi, est placé dans une colonne de 15 ml de chromatographie. Les échantillons de protéine purifiée élués à partir de la chromatographie d'affinité sont concentrés (20X) par une précipitation par le sulfate d'ammonium (Sigma, Saint Louis, U.S.A.) à 33 % de saturation. L'analyse du matériel non réduit révèle sur un gel d'électrophorèse de polyacrylamide en gradient de 3 à 5 %, après coloration par le bleu de Coomassie, la présence d'un composant majoritaire de 400 KDa et d'un composant plus discret de migration plus lente de 440 KDa. Les échantillons de protéine purifiée, concentrée, sont lyophilisés. La composition destinée à être appliquée sur la peau est caractérisée en ce que le pourcentage d'utilisation de la Kalinine est de 0,05 à 10% en poids. La Kalinine est mélangée avec des excipients cosmétiques ou pharmaceutiques pour application cutanée pour préparer des crèmes, des gels ou des émulsions. Pour préparer les compositions cosmétiques, les composants sont mélangés aux excipients généralement employés dans la technique cosmétique tels que, par exemple, les matières grasses d'origine animale ou végétale, les huiles végétales, les acides gras, les alcools, les glycols polyalkyléniques, les cires, les hydrocarbures, les polyesters, et peuvent être associés à l'eau et à des agents gélifiants lorsqu'ils sont compatibles. Dans ces préparations, on peut ajouter d'autres ingrédients compatibles avec les composants, comme des agents conservateurs tels que les esters de l'acide 4-hydroxybenzoïque, des antioxydants, comme le butylhydroxytoluène ou les dérivés de la vitamine E, ou des parfums. Les acides gras utilisés comme adjuvants dans les compositions cosmétiques de la présente invention peuvent être saturés ou insaturés contenant de 1 à 22 atomes de carbone, non substitués ou substitués avec un groupe hydroxyle, sous forme libre ou d'un de leurs sels alcalins. La forme des compositions cosmétiques selon l'invention peut notamment être une crème dans laquelle les composants sont associés aux excipients couramment utilisés dans la cosmétologie, et compatibles avec lesdits composants, tels que la lanoline, ou ses dérivés. Les compositions cosmétiques de l'invention peuvent être également présentées sous forme de gel dans les excipients appropriés tels que les esters de cellu- lose, les polymères cycliques, les esters d'acides gras, par exemple le palmitate ou le stéarate d'octyle ou d'autres agents gélifiants. Les compositions cosmétiques suivant l'inven- tion peuvent aussi prendre la forme d'émulsions liquides dans lesquelles les composants sont dispersés. La forme des compositions cosmétiques suivant l'invention peut donc être une dispersion de la Kalinine dans un liquide contenant de l'eau, ainsi qu'un ou plusieurs agents tensioactifs. Ces émulsions jouissent d'une bonne stabilité et peuvent être conservées pendant le temps nécessaire pour l'utilisation à des températures comprises entre 0 et 60 C sans qu'il y ait sédimentation des constituants ou séparation de phases de façon irréversible. Les tensioactifs de la composition sont choisis parmi les agents de surface utilisables en cosmétologie. On peut indiquer à titre d'exemples non limitatifs: les esters de sorbitol et leurs dérivés polyoxyéthylénés, les huiles de ricin (hydrogénées ou non) polyoxyéthylénées, les copolymères séquencés oxyde d'éthylène/oxyde de propylène, les alcools gras et les stérols polyoxyéthylénés, le laurylsulfate de sodium, le dioctylsulfosuccinate de sodium, -les lécithines d'oeuf ou de soja, les huiles de silicones polyoxyéthylénées. La Kalinine des compositions de la présente invention peut être utilisée seule, encapsulée ou enrobée. - Les compositions cosmétiques de la présente invention sont destinées à ralentir le vieillissement de la peau humaine en maintenant une bonne adhésion de l'épiderme et du derme. L'invention a donc pour objet un procédé pour s'opposer au vieillissement de la peau, comprenant l'application sur la peau d'une quantité efficace de Kalinine dans une base cosmétique. L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique à usage topique comprenant à titre de principe actif une quantité efficace de Kalinine dans un excipient pharmaceutique. La composition pharma- ceutique comprend de préférence de 0,05 à 10% en poids de Kalinine. La composition pharmaceutique à usage topique est de préférence une crème, un gel, une émulsion liquide. La Kalinine, dans les compositions pharmaceu- tiques de la présente invention, peut être utilisée seule, encapsulée ou enrobée. Les compositions pharmaceutiques de la présente invention sont destinées à favoriser la cicatri- sation de la peau humaine en maintenant une bonne adhésion de l'épiderme et du derme. L'invention a donc pour objet l'utilisation de la Kalinine pour la fabrication d'une composition pharmaceutique pour application cutanée destinée à favoriser la cicatrisation de la peau. Des tests d'efficacité ont démontré l'effet des compositions de la présente invention, c'est-à-dire l'effet anti-âge et l'effet stimulateur de la cicatrisa- tion de la peau humaine. Les exemples suivants illustrent l'invention, sans toutefois la limiter: EXEMPLE 1: CREME DE SOINS Eau déminéralisée qsp 100 Triglycéride C8/C10 1 à 10 % Trilaurate glycérol 1 à 5 % Silicone 1 à 8 % Glucate SS 1 à 15 % Acide stéarique 1 à 10 % Alcool cétylique 1 à 8 % Acide polyacrylique 0,1 à 5 % Triéthanolamine 0,1 à 1 % Conservateurs 0,3 à 1 % Kalinine 0,05 à 10 % EXEMPLE 2: EMULSION FLUIDE Eau déminéralisée qsp Propylène glycol 1 à 3 % Glycérine 1 à 8 % PCA 0,05 à 1% L. Lysine 0,2 à 1% Na 4 EDTA 0,01 à 0,1 % Carbopol 941 0,01 à 2 % Stéaroxyldiméthicone 0,5 à 3 % Cocoate éthyl héxyl 5 à 8 % Huile minérale 1 à 15 % Arlacel 60 1 à 8 % Brij 58 0,1 à 1% Conservateurs 0,3 à 1 % Kalinine 0,05 à 10 % - e EXEMPLE 3: GEL Eau déminéralisée qsp Glycérine 5 à 20 % Na 4 EDTA 0,01 à 0,5 % Seppigel 305 Conservateur 0,3 à 1 % Kalinine 0,05 à 10 % REVENDICATIONS 1 - Composition destinée à être appliquée sur la peau, comprenant une quantité efficace de Kalinine dans un excipient. 2 - Composition selon la revendication 1, comprenant de 0,05 à 10 % en poids de Kalinine. 3 - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, à usage pharmaceutique, dans laquelle l'excipient est un excipient pour application cutanée. 4 Composition selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, à usage cosmétique, dans laquelle l'excipient est un excipient cosmétique. 5 - Procédé pour s'opposer au vieillissement de la peau, comprenant l'application sur la peau d'une quantité efficace de Kalinine dans une base cosmétique. 6 - Utilisation de la Kalinine pour la fabrication d'une composition pharmaceutique pour application cutanée destinée à favoriser la cicatrisation de la peau.