Brevet FR2708287A1 — publié le 19950203

La présente invention concerne un dispositif destiné à évaluer l'action d'un fluide sur une souche de microorganisme ou une enzyme, plus particulièrement un dispositif indicateur de stérilisation. La stérilisation et la désinfection sont des procédés extrêmement utilisés dans des domaines très divers. La stérilisation est notamment mise en oeuvre dans des établissements de soin tels que les hôpitaux, les cliniques, de façon à disposer d'instruments médicaux, de verrerie, de linge, de façon générale de tout matériel, totalement exempts de microorganisme afin de stopper la propagation des maladies infectieuses. Mais, la stérilisation est également utilisée dans l'industrie pharmaceutique pour le matériel médico-chirurgical tel que les sutures ou de façon générale un grand nombre d'objets à usage unique et également pour les médicaments pour lesquels une absence totale de microorganisme est nécessaire. La stérilisation est mise en oeuvre également de plus en plus souvent dans les industries agro-alimentaires afin de maîtriser la biocontamination de l'environnement, c'est le cas notamment des industries laitières. Il est également, dans ces mêmes domaines, d'usage courant d'utiliser la désinfection, mais il s'agit dans le cas d'établissements de soin par exemple, du traitement des surfaces, des linges, ceci pour diminuer la proportion des germes pathogènes afin de limiter l'incidence des infections. Dans l'industrie pharmaceutique et l'industrie agro-alimentaire on pratique également la désinfection afin de respecter les bonnes pratiques de fabrication; ce procédé tendant d'ailleurs à se répandre dans d'autres domaines comme par exemple les locaux des collectivités, les cabinets dentaires, les coiffeurs, etc. Les objets soumis à la stérilisation et à la désinfection peuvent être de nature excessivement variée, il peut s'agir aussi bien de verre, que de métaux ou de matières synthétiques, de mêmes les configurations géométriques peuvent être très variées, forme plate, creuse, lisse ou non. Actuellement, pour juger de l'efficacité d'une stérilisation, par exemple pour la chaleur humide, on utilise des moyens externes, il s'agit essentiellement de l'enregistrement de la température et de la pression ainsi que des durées de stérilisation. En fonction d'abaque on peut déterminer le couple temps/température permettant d'obtenir une stérilisation dans des conditions données. Toutefois, ce moyen peut se révéler insuffisant, c'est pourquoi dans la plupart des cas on prévoit également un dispositif interne permettant la mise en évidence de la stérilisation. Sous sa forme la plus simple, il s'agit d'un dispositif qui comporte des microorganismes sous une forme végétative ou de résistance, en particulier sous une forme sporulée, dont on contrôlera à la fin de la stérilisation qu'effectivement il ne reste plus de microorganismes ou de spores viables, ou du moins que le taux de microorganismes ou de spores viables restant est en dessous d'un certain seuil. On peut également utiliser une enzyme pour révéler l'efficacité de la stérilisation. Suivant le type de stérilisation appliqué, on utilisera des microorganismes connus pour leur résistance sous forme sporulée, par exemple pour la stérilisation par la chaleur humide on utilisera Bacillus stearothermophilus, pour la stérilisation par la chaleur sèche ou les gaz on utilisera Bacillus subtilis et pour la stérilisation par les rayonnements ionisants on utilisera Bacillus pumilus. Pour ce qui concerne les procédés de désinfection, seule cette seconde méthode est utilisable, en effet il n'existe pas d'abaques permettant de déterminer des conditions désinfectantes. La présente invention concerne plus particulièrement les dispositifs indicateurs comportant des microorganismes sous forme végétative ou sporulée ou d'enzymes, destinés à tester, de façon générale, l'action d'un fluide sur ledit microorganisme ou l'enzyme, en général afin de tester la stérilisation ou la désinfection d'une enceinte. Les dispositifs indicateurs de stérilisation comportent en général, d'une part un support sur lequel se trouvent placées les spores de la souche résistante qui pourront être amenées au contact du fluide de stérilisation et, d'autre part, un compartiment dans lequel se trouve un milieu permettant la culture du microorganisme sporulé et un agent de révélation qui se change de couleur en présence du microorganisme en culture. Le procédé de contrôle consiste donc à introduire le dispositif dans l'enceinte de stérilisation, les spores sont alors mises en contact avec le fluide de stérilisation, puis, à la fin de la stérilisation on introduit, en cassant une ampoule, le milieu de culture et l'agent de révélation au contact avec les spores, et au bout d'un temps déterminé on visualise une couleur dans le milieu si parmi les spores certaines d'entre elles étaient encore viables. Ce type d'appareillage est décrit par exemple dans le brevet Français 2 045 855. La plupart des dispositifs de la technique antérieure présentent un certain nombre d'inconvénients: - tout d'abord le support des spores est la plupart du temps en papier, or les matériaux à stériliser dans la pratique ne sont pratiquement jamais en papier mais en plastique, métal, caoutchouc, verre, etc.; - en général les supports ont une forme plate qui est sans rapport avec les conformations géométriques de la plupart des matériels à stériliser qui sont généralement de forme extrêmement variée; - enfin, le support absorbe, dans certains cas, facilement les agents stérilisants, ce qui entraîne une destruction plus facile des spores alors qu'en réalité les microorganismes contaminants le matériel à stériliser sont portés sur des surfaces non-absorbantes. Ainsi, certains des dispositifs suivant la facon dont ils sont mis en oeuvre peuvent conduire à des résultats faussement sécurisants. En outre, la plupart des dispositifs indicateurs biologiques actuellement proposés comportent le bris d'une ampoule en verre, ce qui n'est en général pas souhaitable, notamment car les petits morceaux de verre peuvent créer des microfissures du contenant extérieur, il y a donc un risque de contamination. Enfin, dans certains cas il peut être intéressant de pouvoir contrôler la stérilisation en cours d'opération sans avoir à intervenir directement dans l'enceinte de stérilisation, ceci n'est en général pas possible avec les dispositifs existant actuellement. C'est pourquoi la présente invention concerne un dispositif destiné à évaluer l'action d'un fluide sur une souche de microorganisme ou sur une enzyme, du type comportant: - un compartiment (1) permettant la mise en contact du fluide et de ladite souche ou l'enzyme et - un compartiment (2) permettant la mise en évidence de ladite souche ou de l'enzyme après mise en contact avec le fluide, à l'aide d'un milieu de révélation (15), caractérisé en ce qu'il est constitué d'un ensemble mobile pouvant présenter au moins deux configurations (8, 11) présentant, - dans une première configuration, un passage permettant la circulation du fluide à l'intérieur de l'ensemble et sa mise en contact avec la souche ou l'enzyme fixée sur un support (9) et - dans une seconde configuration, un moyen permettant la mise en contact du milieu de révélation avec le support sur lequel est fixée la souche ou l'enzyme et, éventuellement, des moyens permettant d'isoler le milieu de révélation contenant le support de l'atmosphère extérieure, et des moyens permettant l'observation des modifications éventuelles du milieu de révélation (18). De façon préférentielle, ce dispositif est un indicateur biologique de stérilisation et/ou de désinfection. Dans ces conditions, le fluide en cause est la vapeur d'eau, un gaz ou un liquide, mais également de façon très générale la chaleur sèche ou un rayonnement ionisant, même s'il ne s'agit pas à proprement parler d'un fluide. Pour ce qui concerne le milieu de révélation, il s'agit la plupart du temps d'un milieu permettant la culture de la souche à partir des spores ou de forme végétative comportant un révélateur mettant en évidence la présence de microorganismes viables. Enfin, les microorganismes seront la plupart du temps sous forme de spores. De façon préférée, le dispositif selon la présente invention comportera également des moyens permettant l'observation des modifications éventuelles du liquide de révélation. De façon générale, le dispositif selon l'invention sera constitué de deux compartiments mobiles l'un par rapport à l'autre, l'un des compartiments comportant le support (9) ainsi qu'au moins un orifice (14) permettant d'amener un fluide extérieur à l'intérieur au contact du support, et l'autre compartiment comportant le milieu de révélation, ledit compartiment étant agencé pour que le déplacement de l'un par rapport à l'autre amène le support de la souche (9) en contact avec le milieu de révélation et éventuellement en ce qu'un autre déplacement conduise à isoler le milieu de révélation contenant le support du milieu extérieur. Le déplacement des deux compartiments mobiles peut se faire aussi bien par translation que par rotation autour d'un axe. En général, le support de la souche est un élément mobile qui peut avoir une configuration quelconque destiné en particulier à permettre de représenter au mieux les surfaces qui devront être stérilisées au décontaminées à l'extérieur. Il peut s'agir notamment d'un support plan ou bien d'un support comportant des évidements ou des ondulations, mais dans la plupart des cas il s'agira plutôt d'un dispositif de forme tubulaire, de préférence ayant la forme d'un petit tube et ce support sera mobile entre une première position en contact avec le fluide et une seconde position en contact avec le milieu de révélation. Dans le mode préféré de réalisation, le dispositif est constitué de deux compartiments mobiles en rotation l'un par rapport à l'autre autour d'un axe et ayant deux surfaces en vis à vis perpendiculaires audit axe, le compartiment supérieur comporte un conduit tubulaire (6) sensiblement parallèle à l'axe de rotation débouchant à l'extérieur du compartiment par deux orifices, un support est placé dans ledit conduit tubulaire et le support repose sur la surface située en vis-à-vis du compartiment inférieur à la surface duquel débouche un conduit tubulaire en vis-à-vis du précédent et dont l'autre extrémité débouche à l'extérieur, on créé ainsi un canal qui traverse l'ensemble du dispositif parallèlement à l'axe et dont une partie est constituée par le support de la souche, le compartiment inférieur comporte, en outre, sur sa surface en vis-à- vis un orifice, la dimension de l'orifice étant telle que, par rotation des deux compartiments, le conduit tubulaire du compartiment supérieur soit amené en coïncidence de l'orifice et que le support tombe par cet orifice dans le milieu de révélation situé dans le compartiment inférieur, ainsi qu'en ramenant l'ensemble à sa position initiale, on isole le milieu contenant le support du milieu extérieur, le compartiment inférieur comportant, en outre, une ou deux fenêtres transparentes ou étant complètement transparent, permettant de voir la couleur du milieu de révélation. En plus, le compartiment inférieur peut comporter en plus du milieu de culture, dans la partie inférieure du conduit du fluide, un indicateur physico-chimique (permettant de voir l'effet d'une stérilisation en profondeur ou à distance sur un indicateur physico-chimique). De façon générale, le support du microorganisme sera constitué par une surface qui pourra être identique aux surfaces à stériliser et/ou à décontaminer, en pratique, notamment il pourra s'agir de surfaces métalliques, de surfaces en papier si cela est nécessaire, de surfaces en matière plastique, mais de préférence les surfaces seront en verre, en effet comme on le constatera dans les exemples qui suivent, l'utilisation d'un support en verre permet d'avoir des résultats qui sont les plus fiables. Les microorganismes sont de préférence présents sous leur forme la plus résistante, c'est-à-dire sous la forme de spores qui sont fixées sur le support de microorganisme par des techniques qui sont connues. Il est également possible d'utiliser des souches non-résistantes, par exemple une flore réelle ou même une enzyme ayant la même résistance que les spores de référence. Comme cela a été indiqué précédemment, dans sa forme préférée le support est constitué par un tube en verre à l'intérieur duquel ont été déposées des spores de microorganismes selon des méthodes qui seront décrites dans les exemples et le fluide sera amené à circuler à travers ce tube. Le milieu de révélation est de préférence constitué par un milieu de culture permettant la croissance des spores lorsque celles-ci sont encore viables, ledit milieu de culture comportant un indicateur, la plupart du temps coloré, dont la coloration change ou apparaît lors de la croissance des microorganismes, par exemple par modification du pH avec des produits du type du rouge de phénol ou des produits qui réagissent à l'oxydoréduction tels que par exemple le bleu de méthylène, il peut s'agir également de produits qui se colorent par mise en évidence d'une enzyme spécifique de la souche en cause, il s'agira dans la plupart des cas d'un substrat coloré de l'enzyme spécifique. Dans le mode préféré de l'invention, le support, après avoir été mis en contact avec le fluide à tester, va être amené à tomber dans le milieu de révélation et donc incuber en sa présence, toutefois il est nécessaire de pouvoir décrocher les spores fixées sur le support, pour ce faire on peut procéder de façon mécanique, notamment en ajoutant un élément d'agitation dans le milieu et/ou dans le tube, notamment une petite bille métallique qui va permettre par agitation de racler les spores, il est possible également de procéder à un passage aux ultrasons mais, comme cela apparaitra dans les exemples, la solution la plus rationnelle est d'introduire dans le milieu de révélation un agent tensioactif, tel que le Tween 80 par exemple, qui va permettre de décrocher facilement et complètement les microorganismes sous forme de spores, mais n'a aucune influence sur la viabilité des cellules. De préférence la lecture du résultat pourra se faire à travers une ou deux fenêtres en plastique transparent ou un compartiment inférieur totalement transparent, ou en tout autre matériau transparent, dans ce cas il est intéressant d'utiliser le verre comme support, ce qui permet d'avoir une plus grande épaisseur visible, alors qu'un support métallique sera au moins de ce point de vue moins efficace. L'un des intérêts du dispositif de l'invention est que, compte tenu du fait que le fluide à tester peut circuler dans une canalisation dans laquelle il est mis en contact avec le support portant les spores ou les microorganismes sous forme végétative ou une enzyme, on peut prévoir aux extrémités de cette canalisation deux ajutages sur lesquels on pourra venir fixer des tubes en matière appropriée, non poreuse, afin de pouvoir tester la stérilisation en profondeur ou la stérilisation à distance, c'est-à-dire que l'on peut tester l'état de la stérilisation d'un endroit dans lequel l'indicateur ne se trouve pas directement en plongeant les deux tubulures à l'endroit à tester et en plaçant le dispositif à l'extérieur, il est d'ailleurs possible de tester la stérilisation d'une enceinte en maintenant le dispositif selon l'invention à l'extérieur pour peu que l'on ait ajusté deux tubulures dans lesquelles circule l'atmosphère que l'on doit stériliser. Les exemples suivants sont plus particulièrement destinés à mettre en évidence d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention. Les exemples sont mis en oeuvre en utilisant un dispositif du type de celui représenté aux figures annexées sur lesquelles: - la figure i représente une coupe selon un plan passant par l'axe de rotation d'un dispositif selon l'invention en position de passage du fluide; - la figure 2 représente le même dispositif mais dans une autre position o le support de microorganisme est placé dans le milieu; - la figure 3 représente le dispositif après retour à la position initiale; - la figure 4 est une vue cavalière du dispositif des figures là3. La figure 1 représente un dispositif selon la présente invention selon une section par un plan passant par l'axe de rotation des deux compartiments l'un par rapport à l'autre. Ce dispositif est constitué de deux compartiments mobiles (1 et 2) reliés par une pièce de liaison (5), chacun des compartiments est constitué de carters identiques ou pas (3 et 4) dans lequel est placé un élément d'insertion qui, pour le compartiment supérieur, comporte un conduit tubulaire (6) sensiblement parallèle à l'axe de rotation, débouchant à l'extérieur par un orifice (7) et par un orifice (8) en vis- à-vis du compartiment inférieur. Le support (9) qui est sensiblement cylindrique et appliqué dans le conduit tubulaire (6) est revêtu sur sa partie intérieure de spores (10). Le support (9) repose sur la surface située en vis-à-vis du compartiment inférieur (12) à la surface de laquelle débouche un conduit tubulaire en vis-à-vis du précédent (11) et dont l'extrémité (13) débouche à l'extérieur. Le conduit tubulaire (11) peut contenir un indicateur physico- chimique Dans cette configuration on a ainsi constitué un canal qui traverse l'ensemble du dispositif parallèlement à l'axe et dont une partie est constituée par le support de la souche. Le compartiment inférieur comporte, en outre, un orifice (14) dont la dimension est telle qu'après rotation de 180 des deux compartiments (1 et 2) l'un par rapport à l'autre pour arriver à la configuration représentée à la figure 4, le conduit tubulaire (6) est amené en coïncidence avec ledit orifice et le support (9) tombe dans le milieu de révélation (15) situé dans un réservoir (20) du compartiment inférieur. Après une seconde rotation de 180 , on ramène les deux compartiments dans la position initiale représentée à la figure 3, mais le support (9) est alors placé dans le milieu de révélation (15) mais isolé de l'extérieur et peut alors être agité. Il convient de remarquer qu'afin d'éviter des contaminations extérieures, les orifices débouchant (7 et 13) comportent chacun un filtre (21 et 22). En outre, le canal tubulaire (11) est plus étroit à sa partie supérieure afin de permettre le blocage du support (9). Enfin, les extrémités du canal (7 et 13) sont pourvues d'ajutages tels que 16 et 17 afin de permettre l'adaptation de tubulures si cela est nécessaire afin de tester des stérilisations profondes ou afin de tester des atmosphères dans lesquelles on ne souhaite pas introduire le dispositif. La figure 4 représente une vue cavalière du dispositif selon la présente invention sur laquelle on distingue les deux compartiments 1 et 2 reliés par la pièce de liaison 5, l'un des conduits tubulaires débouchant avec son ajutage 16 ainsi que la fenêtre de lecture (18) transparente qui permet de voir les variations de couleurs du milieu de révélation 15. EXEMPLE 1 Les essais n'ont été réalisés qu'avec les spores de Bacillus stearothermophilus CIP 5281 = ATCC 7953 dans le cas de la stérilisation à la vapeur d'eau. 1) Préparation de la suspension de spores, concentration de la suspension et dénombrement microbien 1.1 Matériel - Bouillon pour la congélation de la souche (1) Extrait de viande de boeuf 3 g 10. Peptone trypsique de caséine 5 g Glycérol 150 g Eau distillée QSP 1000 1 - Bouillon de première mise en culture (2) Extrait de levure 2,5 g 15. Tryptone 5,0 g Glucose 1,0 g Eau distillée QSP 1000 1 - Gélose de sporuation répartie en fioles de Roux (3) Extrait de viande 10,0 g 20. Extrait de levure 2,0 g MnSO4, H20 0,04 g Agar 23,0 g Eau distillée QSP 1 OOO ml - 1.2 Préparation de la suspension de spores Ensemencement du bouillon (2) avec environ 106 spores provenant d'un bouillon congélation à - 20 C (1) dans lequel est conservé la souche de Bacillus stearothermophilus CIP 5281 - Incubation à 56 C pendant 24 heures. Transfert de 3 ml environ de cette culture dans une fiole de Roux contenant la gélose de sporulation. Faire subir à la fiole de Roux diverses inclinaisons de façon à ce que l'inoculum vienne en contact avec la totalité de la surface de la gélose; rejeter l'inoculum en excès - Incubation de la fiole à 56 C pendant 20 jours. ii Observation de l'état de la culture au microscope: observer les spores à la fuschine dilué ou au microscope à contraste de phase. Les cellules végétatives doivent être lysées et les spores sont colorées en rose très pâle. Si la sporulation n'a pas débuté, recommencer l'essai. Dans le cas o la sporulation a commencé, poursuivre l'incubation jusqu'à ce que les cellules végétatives soient lysées. Récupérer la culture solide avec de l'eau distillée stérile, en grattant au besoin la surface de la gélose. 1.3 Concentration de la suspension Répartir le liquide de récupération (coloré en jaune-brun) dans des tubes à centrifuger. Réaliser trois lavages successifs de 15 minutes chacun par centrifugation à 2 700 tours/minute: à chaque lavage, rejeter le surnageant et reprendre le culot dans 5 ou 10 ml d'eau distillée stérile. Transférer la dernière suspension (qui ne doit plus être colorée en jaune-brun) dans un flacon Pyrex à bouchon vissé. Chauffer minutes à 100 C pour éliminer les formes végétatives restant éventuelles. Conserver à + 4 C. Bien agiter la suspension avant chaque prélèvement, car les spores sédimentent au fond du flacon. 1.4 Dénombrement de la suspension de spores Dénombrement des spores après dilution convenable dans de l'eau distillée stérile, inclusion en gélose Mueller Hinton Agar (Diagnostic Pasteur, réf. 64884), 35 g/l, préparée extemporanément; incubation à 56 C. La suspension de spores doit titrer au minimum 107 spores/ml. Vérifier l'absence d'amas de spores ou de débris organiques volumineux par coloration à la fuschine diluée. 2) fixation des spores sur le support On a testé différents supports: - de configuration plane, le verre, l'acier inoxydable, le caoutchouc et le tissu, - de configuration cylindrique, le verre, l'acier inoxydable et le caoutchouc. Les dépôts ont été 100 [l de la suspension de spores à la surface des supports plans et dans la lumière des supports cylindriques et les spores sont séchées à 37 C. 3) Récupération des spores fixées sur les supports Après le dépôt de 100.I1 d'une suspension de spores calibrées sur les différents supports et séchage comme indiqué précédemment, le support est mis dans un volume défini d'eau distillée stérile. La mise en oeuvre de différentes méthodes permet de constater que l'utilisation de Tween 80 à 0,5 % avec agitation est suffisante pour pouvoir décoller la plus grande partie des spores alors que les autres méthodes se révèlent soit difficiles à mettre en oeuvre soit insuffisantes dans leurs résultats. La mise en oeuvre du dispositif tel que décrit précédemment avec différents types de support permet la détermination du temps de réduction décimale nommé DT à une température donnée. Cette réduction décimale est le temps nécessaire pour inactiver 90 % des microorganismes présents avant stérilisation, c'est-à-dire également le temps nécessaire pour réduire de 10 fois la valeur de la population microbienne initiale. Dans le cadre d'une stérilisation on détermine la Dl2loc des supports en papier, en verre, en acier inoxydable, en caoutchouc et en tissu de géométrie plane par exposition des supports dans le dispositif selon la présente invention à différents temps de stérilisation. On trouve les résultats suivants Dl2loc papier = 1,9 min D12loc verre = 2,3 min D121oc acier inoxydable = 2,4 min Dl2loc tissu = 2,3 min D121oc caoutchouc = 2,4 min Lorsqu'à la place des supports plans on prend des supports de géométrie cylindrique, en verre, en acier inoxydable et en caoutchouc, on trouve les résultats suivants: Dl2loc verre = 2,5 min Dl21C acier inoxydable = 2,4 min Dl2loc caoutchouc = 2,3 min En conclusion, on peut retenir dans le nouvel indicateur biologique des supports dont la nature et la configuration sont représentatifs des objets réellement soumis à la stérilisation, supports creux en verre, acier ou caoutchouc, mais il paraît approprié d'utiliser de préférence des supports cylindriques en verre qui donnent les temps de réduction décimale les plus importants et donc la plus grande sécurité sur le plan de la stérilisation. 4) Etude de la sensibilité La technique mise en oeuvre dans le dispositif selon la présente invention est une technique "tout ou rien". Pour tester la sensibilité du dispositif on utilise un milieu de culture constitué d'un bouillon de trypto-caséine-soja modifié par addition de Tween 80 à 0,5 %. On ajoute un rouge de phénol comme indicateur de pH. Cet indicateur de pH par acidification du milieu passe de la couleur rouge à la couleur jaune lorsque la culture est positive. On effectue des essais avec un nombre très réduit de spores qui ont conduit aux résultats suivants: - pour 30 essais avec 2 + 1 spores, environ 80 % de cultures positives en 24 h d'incubation, - pour 30 essais avec 5 + 1 spores, 100 % de cultures positives en 24 h d'incubation. Le seuil de sensibilité se situe donc à 5 + 1 spores. Ainsi cette technique permet de mesurer une dimution en logarithmes base 10 du nombre de spores après stérilisation, ce qui a pu être vérifié par les essais en situation réelle. Support cylindrique en verre portant 5.106 spores: - temps d'exposition 3 min: 100 % de réponses positives - temps d'exposition 6 min 100 % de réponses positives - temps d'exposition 9 min: 100 % de réponses positives - temps d'exposition 12 min: 90 % de réponses positives - temps d'exposition 15 min: O % de réponses positives Le dispositif selon la présente invention permet d'obtenir des résultats beaucoup plus satisfaisants que les indicateurs biologiques de la technique antérieure, notamment ceux décrits par exemple dans Technique Hospitalière n 493, Octobre 1986, p. 52-56. REVENDICATIONS 1) Dispositif destiné à évaluer l'action d'un fluide sur une souche de microorganisme ou une enzyme, du type comportant: - un compartiment (1) permettant la mise en contact du fluide et de ladite souche ou l'enzyme et - un compartiment (2) permettant la mise en évidence de ladite souche ou l'enzyme après mise en contact avec le fluide, à l'aide d'un milieu de révélation (15), caractérisé en ce qu'il est constitué d'un ensemble mobile pouvant présenter au moins deux configurations (8, 11) présentant, - dans une première configuration, un passage permettant la circulation du fluide à l'intérieur de l'ensemble et sa mise en contact avec la souche ou l'enzyme fixée sur un support (9) et - dans une seconde configuration, un moyen permettant la mise en contact du milieu de révélation avec le support sur lequel est fixée la souche ou l'enzyme et, éventuellement, des moyens permettant d'isoler le milieu de révélation contenant le support de l'atmosphère extérieure, et des moyens permettant l'observation des modifications éventuelles du milieu de révélation (18). 2) Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est constitué de deux compartiments mobiles l'un par rapport à l'autre, l'un des compartiments comportant le support (9) ainsi qu'au moins un orifice (14) permettant d'amener un fluide extérieur à l'intérieur au contact du support, et l'autre compartiment comportant le milieu de révélation, ledit compartiment étant agencé pour que le déplacement de l'un par rapport à l'autre amène le support de la souche (9) en contact avec le milieu de révélation et éventuellement en ce qu'un autre déplacement conduise à isoler le milieu de révélation contenant le support du milieu extérieur. 3) Dispositif selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que les deux compartiments sont mobiles en translation ou en rotation. 4) Dispositif selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le support de la souche est mobile entre une première position o il est en contact avec le fluide et une seconde position dans laquelle il est en contact avec le Iiquide de révélation. ) Dispositif selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le premier et le second compartiments sont susceptibles de tourner ou d'être déplacés en translation l'un par rapport à l'autre pour amener, après que le support ait été mis en contact avec le fluide extérieur dans une première position par rotation ou translation, ledit support en regard d'une ouverture ménagée dans le second compartiment contenant le milieu de révélation afin de pouvoir tomber dans ledit milieu de révélation. 6) Dispositif selon l'une des revendications 4 et 5, caractérisé en ce que, dans la première configuration, le premier compartiment comporte deux orifices mettant en contact l'intérieur du compartiment avec l'extérieur, en ce que dans le compartiment se trouve le support de facon à être en contact avec un fluide provenant de l'extérieur par les orifices (7, 8) et dans la seconde configuration le support est amené en regard d'un orifice ménagé dans le second compartiment (14) qui contient le milieu de révélation 15) et tombe dans ledit milieu de révélation, et en ce que lorsqu'on remet l'ensemble dans la première configuration, on isole le milieu de révélation contenant le support de l'atmosphère extérieure. 7) Dispositif selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le support de microorganisme (9) est de forme sensiblement tubulaire et que chacune des extrémités dudit tube est en contact avec les orifices du premier compartiment afin d'assurer le passage du fluide extérieur à l'intérieur dudit tube. 8) Dispositif selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est constitué de deux compartiments mobiles en rotation l'un par rapport à l'autre autour d'un axe et ayant deux surfaces en vis à vis perpendiculaires audit axe, le compartiment supérieur comporte un conduit tubulaire (6) sensiblement parallèle à l'axe de rotation débouchant à l'extérieur du compartiment par deux orifices, un support est placé dans ledit conduit tubulaire et le support repose sur la surface située en vis-à-vis du compartiment inférieur à la surface duquel débouche un conduit tubulaire en vis-à-vis du précédent et dont l'autre extrémité débouche à l'extérieur, on créé ainsi un canal qui traverse l'ensemble du dispositif parallèlement à l'axe et dont une partie est constituée par le support de la souche, le compartiment inférieur comporte, en outre, sur sa surface en vis-à-vis un orifice, la dimension de l'orifice étant telle que, par rotation des deux compartiments, le conduit tubulaire du compartiment supérieur soit amené en coïncidence de l'orifice et que le support tombe par cet orifice dans le milieu de révélation situé dans le compartiment inférieur, ainsi qu'en ramenant l'ensemble à sa position initiale, on isole le milieu contenant le support du milieu extérieur, le compartiment inférieur comportant, en outre, une fenêtre transparente permettant de voir la couleur du milieu de révélation. 9) Dispositif selon selon la revendication 8, caractérisé en ce que le milieu de révélation est contenu dans un élément tubulaire sensiblement parallèle à l'axe. ) Dispositif selon l'une des revendications 8 et 9, caractérisé en ce que les orifices débouchant à l'extérieur comportent un filtre (21, 22). 11) Dispositif selon l'une des revendications 8 à 10, caractérisé en ce que les orifices extérieurs comportent des ajutages (16, 17). 12) Dispositif selon l'une des revendications 8 à 11, caractérisé en ce que les deux compartiments sont constitués d'un carter ayant la même structure. 13) Dispositif selon l'une des revendications 8 à 12, caractérisé en ce qu'on dispose dans la partie inférieure du conduit du fluide un indicateur physico-chimique.